(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における脱毛を治療するための組成物であって、
該組成物が繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含み、前記対象は、脱毛領域の表皮を破壊する処置を受けており、かつ該組成物が、前記対象の脱毛領域における表皮が破壊された後、新たな毛包が形成する直前及び／または最中に前記対象に投与されることを特徴とする組成物。
【請求項２】
対象における脱毛を治療するための組成物であって、
繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含み、前記対象は、脱毛領域の表皮を破壊する処置を受けており、かつ該組成物が、前記対象の脱毛領域における表皮が破壊された後、新たな毛包が形成する直前及び／または最中に前記対象に投与されることを特徴とする組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の組成物であって、
前記脱毛がアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）に起因することを特徴とする組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の組成物であって、
前記ＡＧＡが男性型脱毛症であることを特徴とする組成物。
【請求項５】
請求項３に記載の組成物であって、
前記ＡＧＡが女性型脱毛症であることを特徴とする組成物。
【請求項６】
請求項１または２に記載の組成物であって、
前記脱毛が皮膚損傷に起因することを特徴とする組成物。
【請求項７】
請求項１または２に記載の組成物であって、
前記脱毛が前記対象の頭皮または眉に存在することを特徴とする組成物。
【請求項８】
請求項１または２に記載の組成物であって、
前記脱毛が前記対象の瘢痕化皮膚組織に存在することを特徴とする組成物。
【請求項９】
請求項１ないし８のいずれか一項に記載の組成物であって、
該組成物の投与が、表皮破壊の３〜１２日後に行われることを特徴とする組成物。
【請求項１０】
請求項１ないし９のいずれか一項に記載の組成物であって、
表皮破壊が、前記脱毛領域または変性皮膚疾患領域を物理的若しくは化学的刺激に曝すことにより行われることを特徴とする組成物。
【請求項１１】
請求項１ないし９のいずれか一項に記載の組成物であって、
表皮破壊が、前記脱毛領域または変性皮膚疾患領域を放射線に曝すことにより行われることを特徴とする組成物。
【請求項１２】
請求項１ないし１１のいずれか一項に記載の組成物であって、
該組成物の投与が、局所投与により行われることを特徴とする組成物。
【請求項１３】
請求項１ないし１１のいずれか一項に記載の組成物であって、
該組成物の投与が、表皮下投与により行われることを特徴とする組成物。
【請求項１４】
請求項２に記載の組成物であって、
前記ＷｎｔポリペプチドがＷｎｔ７ポリペプチドであることを特徴とする組成物。
【請求項１５】
対象における脱毛を治療するための組成物であって、
該組成物がソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含み、かつ該組成物が、前記対象の脱毛領域における表皮が破壊された後、新たな毛包が形成する直前及び／または最中に前記対象に投与されることを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（米国政府の権益の記載）
本発明の全体または一部は、米国国立衛生研究所（National Institutes of Health）により認可された認可番号ＮＩＨ／ＮＩＡＭＳ ＡＲ４６８３７の下で、米国政府の支援を受けてなされたものである。米国政府は、本発明に対する一定の権利を有し得る。
【０００２】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００８年１１月１２日付で出願された米国仮出願第６１／１１４，０２８号の優先権を主張する。該米国仮出願の全体は、この引用により本明細書に組み込まれるものとする。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、脱毛の治療あるいは毛包の再生のための医薬組成物及び方法に関する。具体的には、本発明は、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド、及び脱毛の治療あるいは毛包の再生のための繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドの投与に関する。
【背景技術】
【０００４】
毛包再生は、出生後の、新しい毛包（ＨＦ）の生成と定義される。人間は、ＨＦを完全に備えて生まれてくるが、はげ頭症の初期においては、ＨＦの大きさ及び成長特性が変化し、はげ頭症の末期または恒久的な瘢痕化（瘢痕性）脱毛症においては、ＨＦは最終的には退化し消失する。そのため、一般的なはげ頭症、並びにあまり一般的ではない脱毛症（例えば、円板状紅斑性狼瘡、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬、及び他の瘢痕性脱毛症）の治療においては、新しいＨＦを形成することが望ましい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】CA. Ramsden Gd., Quantitative Drug Design, Chapter 17.2, F. Choplin Pergamon Press (1992)
【非特許文献２】Maniatis, et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, 1990)
【非特許文献３】Ausubel, et al., 1994, Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, 1996)
【非特許文献４】Methods in Enzymology, Vol. 1-317, Academic Press
【非特許文献５】Ausubel F. M. et al.,(eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1989)
【非特許文献６】Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、対象の脱毛を治療するための、対象の変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための、対象のアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療するための、新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）を形成するための、あるいは既存のＨＦの大きさを増大させるための方法であって、表皮を破壊するかまたはＷｎｔを投与するステップと、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドまたはソニック・ヘッジホッグ遺伝子シグナル伝達を上方制御する別の化合物を対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【０００７】
したがって、一実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に対して投与するステップとを含む方法を提供する。
【０００８】
一実施形態では、前記脱毛はアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）に起因する。一実施形態では、前記ＡＧＡは男性型脱毛症である。他の実施形態では、前記ＡＧＡは女性型脱毛症である。一実施形態では、前記脱毛は皮膚損傷に起因する。一実施形態では、前記脱毛は前記対象の頭皮または眉に存在する。一実施形態では、前記脱毛は前記対象の瘢痕化皮膚組織に存在する。一実施形態では、前記投与するステップは、前記破壊するステップの３〜１２日後に行われる。一実施形態では、前記破壊するステップは、前記脱毛領域を物理的若しくは化学的刺激に曝すことにより行われる。一実施形態では、前記破壊するステップは、前記脱毛領域を放射線に曝すことにより行われる。一実施形態では、前記投与するステップは局所投与により行われる。一実施形態では、前記投与するステップは表皮下投与により行われる。
【０００９】
他の実施形態では、本発明は、脱毛を有する対象の真皮に毛包を形成するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００１０】
他の実施形態では、本発明は、脱毛を有する対象の真皮における毛包の大きさを増大させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００１１】
他の実施形態では、本発明は、脱毛を有する対象の皮膚における毛包形成を増加させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００１２】
他の実施形態では、本発明は、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための方法であって、（ａ）前記対象の変性皮膚疾患領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００１３】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の前記ＡＧＡの領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００１４】
他の実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００１５】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮に毛包を形成するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００１６】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮における毛包の大きさを増加させるための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００１７】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚における毛包形成を増加させるための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００１９】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００２０】
他の実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（sonic hedgehog：ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００２１】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮に毛包を形成するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００２２】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮における毛包の大きさを増大させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００２３】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚における毛包形成を増加させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００２４】
他の実施形態では、本発明は、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための方法であって、（ａ）前記対象の変性皮膚疾患領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００２５】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００２６】
本発明の他の特徴及び利点は以下の詳細な説明、実施例及び図面により明らかになるであろう。なお、以下の詳細な説明及び具体的な実施例は本発明の好適な実施形態を示すが、例示のみを目的とするものであり、当業者には、以下の詳細な説明から、本発明の精神及び趣旨の範囲内での様々な変更及び改変が明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】ＦＧＦ９は、かさぶた剥離（ＳＤ）後１日目に、毛包再生の誘導期間中に発現される。再生表皮におけるＦＧＦ９ ｍＲＮＡ発現の対照ｍＲＮＡ発現ｑ−ＰＣＲに対してのＦＧＦ９ ｍＲＮＡの比率が示されている。
【図２】再生表皮のγδＴＣＲ免疫染色（ＳＤ７，ホールマウント）（×２００）及びＳＤ１サンプル（凍結切片）のＦＧＦ９免疫染色（×４００）。
【図３】ＳＤ１サンプルに対する再生表皮のγδＴＣＲ及びＦＧＦ９免疫染色。
【図４】Ｅ１４胎児皮膚のγδＴＣＲ及びＦＧＦ９免疫染色。
【図５】Ｅ１４．５マウス胎児の全溶解液（レーン１及び２）及び遺伝子組換えｈＦＧＦ９（＋）に対する抗ＦＧＦ９中和抗体の特異性。
【図６】３週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける抗ＦＧＦ９中和実験。（Ａ）処理スケジュールであって、かさぶた剥離後（ＳＤ）１−ＳＤ４日目に５０μｌの１０μｇ／ｍｌ抗ＦＧＦ９またはＩｇＧ２ａアイソタイプ対照が表皮下注射され、ＳＤ５に組織をサンプリングした。（Ｂ）（Ａ）に記載の処理プロトコルを用いてマウスに抗ＦＧＦ９またはＩｇＧ２ａ対照を注射した後の毛包数。（Ｃ）注射部位を示す図。
【図７】様々な毛包発生段階における抗ＦＧＦ９処理したマウスと対照との毛包数の比較（「Paus R, et al. J Invest Dermatol 1999」に記載）。
【図８】各サンプル当たり３つの異なる領域における１ｍｍ２当たりの毛芽数を数える方法を示すモデル。
【図９】胎児の皮膚外植片培養物（Ｅ１３．５）における３日間にわたるｒｈＦＧＦ９処理。培養物を、１０、２０または４０ｎｇ／ｍＬのｒｈＦＧＦ９または対照緩衝液で３日間処理し、図８に記載されているように毛芽数／ｍｍ２を評価した。平均±標準偏差。＊：Ｐ＜０．０５，＊＊：Ｐ＜０．０１，対照と比較して。毛芽数に関する陽性対照としてＥＤＡ−Ａｌ（５０ｎｇ／ｍｌ）を用いた。
【図１０】対照及びｒｈＦＧＦ９（１０、２０、４０ｎｇ／ｍｌ）処理した胎児の皮膚外植片における真皮のアルカリホスファターゼ染色を示す免疫組織化学染色。
【図１１】胎児の皮膚外植片培養物（Ｅ１３．５）における３日間にわたる抗ＦＧＦ９中和抗体処理。培養物を、１０、２０または４０μｇ／ｍＬの抗ＦＧＦ９中和抗体または対照で３日間処理し、図８に記載されているように毛芽数／ｍｍ２を評価した。
【図１２】対照及び抗ＦＧＦ９（１０、２０、４０ｎｇ／ｍｌ）処理した皮膚外植片における表皮のＫ１７染色を示す免疫組織化学染色。
【図１３】対照及び抗ＦＧＦ９（１０、２０、４０ｎｇ／ｍｌ）処理した胎児の皮膚外植片における真皮のアルカリホスファターゼ染色を示す免疫組織化学染色。
【図１４】ｑＰＣＲによる胎児の毛包発生ソニック・ヘッジホグ（Ｓｈｈ）、Ｐｔｃｈｌ及びＰｔｃｈ２のマーカに対するｒｈＦＧＦ９（１０、２０、４０ｎｇ／ｍｌ）を用いた２４時間処理の効果。
【図１５】ｑＰＣＲによる胎児の毛包発生ＧＩｉ１及びＧＩｉ２のマーカに対するｒｈＦＧＦ９（１０、２０、４０ｎｇ／ｍｌ）を用いた２４時間処理の効果。
【図１６】ＦＧＦ９は、ＨＦＮ開始中に発現され、ＨＦＮにとって重要である。（Ａ）ＦＧＦ９は、かさぶた剥離（ＳＤ）を伴う再上皮化後１日目及び３日目に、毛包形成前に再生表皮において高発現され、５日目に基底レベルまで減少する。再生表皮におけるＦＧＦ９ ｍＲＮＡ発現の比率を、０日目の非創傷表皮のレベルと比較した。＊：Ｐ＜０．０５，＊＊：Ｐ＜０．０１，平均±標準偏差。（Ｂ）３週齢のマウスにおける創傷後のＨＦＮに対するＦＧＦ９中和の効果。抗ＦＧＦ９中和抗体で処理したマウスの再生毛包の数は、対照と比較して著しく減少した。＊＊：Ｐ＜０．０５。（Ｂ）毛包の発達段階の定量。抗ＦＧＦ９処理したマウスにおける毛包は、毛包成熟の遅延を示していた。それぞれ再上皮化後５日目の、（Ｃ−Ｅ）ＫＲＴ１７タンパク質に対して染色されたホールマウント毛包再生アッセイ、及び（Ｆ−Ｈ）分離された表皮及び真皮におけるアルカリホスファターゼ活性。Ｋ１４ｒｔＴＡ；ＴＲＥ−Ｆｇｆ９−ＩＲＥＳ−ｅＧｆｐマウスにおけるＦＧＦ９の過剰発現は、創傷後１７日目に毛包数の増加をもたらした。スケールバー，１ｍｍ。
【図１７】ＦＧＦ９は、活性化されたＤＥＴＣによって発現される。（Ａ）ＦＧＦ９及びγδＴＣＲに対する二重免疫染色。再上皮化後の、再配置されたγδＴＣＲ陽性ＤＥＴＣにおけるＦＧＦ９発現。点線，ベースメントメンブレン。スケールバー，５０μｍ。（Ｂ）ＦＧＦ９遺伝子発現は、ｍＩＬ−２及び抗ＣＤ３による活性化後、単離されたＤＥＴＣにおいて高度に上方制御される。
【図１８】ＴＣＲｄ−／−マウスにおける毛包再生は著しく損なわれる。（Ａ−Ｄ）ホールマウント表皮及び真皮のサンプルを処理し、再上皮化後５日目にＫＲＴ１７タンパク質及び（Ｅ−Ｈ）アルカリホスファターゼ活性を検出した。８週齢及び４０週齢のマウスにおいて、毛包形成は著しく妨げられた。スケールバー，１ｍｍ。＊：Ｐ＜０．０５，平均±標準誤差。
【図１９】対照及び抗ＦＧＦ９抗体処理した創傷におけるＨＦの発達段階。
【図２０】対照マウスと比較した、２日間のドキシサイクリン処理中のＫ１４ｒｔＴＡ；ＴＲＥ−Ｆｇｆ９−ＩＲＥＳ−ｅＧｆｐマウスにおけるＦＧＦ９発現。
【図２１】ＤＥＴＣにおけるＦＧＦ９発現。（Ａ）ＦＧＦ９は基底上層の樹状細胞において高発現された。ＩＬ−２培養なし（Ｂ）またはあり（Ｃ）の野生型マウスから採取した耳表皮のＦＧＦ９及びγδＴＣＲのホールマウント二重免疫染色。
【図２２】対照ＦＧＦ９flox/floxマウスと比較したＦＧＦ９flox/flox；Ｌｃｋ−ＣｒｅマウスにおけるＦＧＦ９発現。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、脱毛を治療するためのあるいは毛包を再生するための医薬組成物及び方法に関する。具体的には、本発明は、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド、及び、脱毛を治療するためまたは毛包を再生するための繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドの投与に関する。
【００２９】
本発明は、対象の脱毛を治療するための、対象の変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための、対象のアンドロゲン性脱毛症（androgenetic alopecia：ＡＧＡ）を治療するための、新しい毛包（hair follicle：ＨＦ）を形成するための、あるいは既存のＨＦの大きさを増大させるための方法であって、表皮を破壊するかまたはＷｎｔを投与するステップと、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドまたはソニック・ヘッジホッグ遺伝子シグナル伝達を上方制御する別の化合物を対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００３０】
一実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法、新しい毛包（ＨＦ）を形成するための方法、ＨＦの大きさを増大させるための方法、アンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法、脱毛症の進行を止めるための方法、脱毛症を回復に向かわせるための方法、または脱毛するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９中和抗体を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００３１】
他の実施形態では、本発明の組成物または方法は、人間の皮膚に使用される。他の実施形態では、本発明の組成物または方法は、発毛が望まれない領域に使用される。他の実施形態では、前記領域は顔である。他の実施形態では、前記領域はビキニ領域である。他の実施形態では、前記領域は脚である。他の実施形態では、前記領域は腕である。他の実施形態では、前記領域は胸である。
【００３２】
一実施形態では、本発明の方法は、ＦＧＦ９、ＳＨＨ、Ｗｎｔまたは本発明に使用される他の組成物の阻害剤を対象に接触させるステップを含む。本発明の方法及び組成物に使用される「阻害剤」は、他の実施形態では、標的のタンパク質または生物学的因子と結合する抗体である。他の実施形態では、前記阻害剤は、薬理学的阻害剤である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他の種類の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００３３】
一実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００３４】
一実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００３５】
他の実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００３６】
他の実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（sonic hedgehog：ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００３７】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の前記ＡＧＡの領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００３８】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００３９】
他の実施形態では、本発明は、対象の頭皮のアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグを上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００４０】
他の実施形態では、本発明は、脱毛を有する対象の真皮に毛包を形成するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００４１】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮に毛包を形成するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００４２】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮に毛包を形成するための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００４３】
他の実施形態では、本発明は、脱毛を有する対象の真皮における毛包の大きさを増大させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００４４】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮における毛包の大きさを増加させるための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００４５】
他の実施形態では、本発明は、対象の真皮における毛包の大きさを増大させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００４６】
他の実施形態では、本発明は、脱毛を有する対象の皮膚における毛包形成を増加させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００４７】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚における毛包形成を増加させるための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００４８】
他の実施形態では、本発明は、対象の皮膚における毛包形成を増加させるための方法であって、（ａ）前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００４９】
他の実施形態では、本発明は、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための方法であって、（ａ）前記対象の変性皮膚疾患領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００５０】
他の実施形態では、本発明は、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド及びＷｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００５１】
他の実施形態では、本発明は、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための方法であって、（ａ）前記対象の変性皮膚疾患領域の表皮を破壊するステップと、（ｂ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を上方制御する化合物または因子を含んでいる組成物を前記対象に投与するステップとを含む方法を提供する。
【００５２】
一実施形態では、本発明の方法は、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止する。一実施形態では、変性皮膚疾患は、過角化症、色素過剰、色素脱失、委縮化、またはそれらの組み合わせである。一実施形態では、変性皮膚疾患は、局所性皮膚石灰沈着症、膠様稗粒腫、皮膚変性、老年性皮膚疾患ＮＯＳ、または皮下石灰化である。
【００５３】
他の実施形態では、変性皮膚疾患は環状肉芽腫である。一実施形態では、変性皮膚疾患は、一実施形態では環状肉芽腫の最も一般的な形態であり、他の実施形態では赤色または黄色の小さくて硬い突起（結節または丘疹）が皮膚上にリング状に並んで現れることを特徴とする局所性の環状肉芽腫である。一実施形態では、前記病変の大きさは、１〜５ｃｍである。一実施形態では、最も一般的な患部には、足、手及び指が含まれる。他の実施形態では、前記変性皮膚疾患は、全身型または散在型の、線状、穿孔性または皮下性の環状肉芽腫である。一実施形態では、環状肉芽腫に関連する病斑は、治療しなくても消え（自然寛解）、再び現れる。
【００５４】
他の実施形態では、本発明の方法は、皮膚の乾燥、皮膚の荒れ、乾燥線の形成、皮脂腺による水分補給の減少、あるいは機械的応力に対する感受性（割れる傾向にある）の増大の予防及び治療に適している。また、本発明の方法は、光線皮膚症、老人性乾皮症の症状、光による老化、あるいは皮膚の結合組織（コラーゲン及びエラスチン繊維、あるいはグルコサミノグリカン／ヒアルロナン）の分解に関連する他の変性状態の治療に適している。「光による老化」は、光、特に紫外線放射によってもたらされる皮膚のしわ、乾燥及び弾力低下を意味する。
【００５５】
本発明による組成物のさらなる適用分野は、次に挙げるものの治療及び予防、並びにエラスチン及びグリコサミノグリカンの分解である。年齢及び／または紫外線で誘発されたコラーゲン変性；表皮細胞層及び真皮細胞層、結合組織の構成要素、釘脚（rete pegs）及び毛細血管、及び／または皮膚付属器の弾力低下及び委縮化などの変性皮膚疾患；環境的に引き起こされる皮膚及び皮膚付属器のネガティブな変化（例えば、紫外線放射、喫煙、スモッグ、活性酸素種、遊離基などによって引き起こされる）；欠陥性（deficitary）、過敏性または機能減退性の皮膚疾患、あるいは欠陥性）、過敏性または機能減退性の皮膚付属器疾患；皮膚厚さの減少；皮膚のたるみ及び／または皮膚の疲労感；経表皮水分損失及び皮膚の通常の水分含有量の変化；健康な皮膚のエネルギー代謝の変化；皮膚上に現れる、皮膚における通常の細胞間連結からの逸脱（例えば、しわ）；通常の線維芽細胞及び角化細胞増殖の変化；通常の線維芽細胞及び角化細胞分化の変化；多形性の放射線皮膚疾患、白斑；創傷治療疾患；通常のコラーゲン、ヒアルロン酸、エラスチン及びグリコサミノグリカンの恒常性の障害；皮膚におけるタンパク質分解酵素（例えば、メタロプロテイナーゼ）の活性化増大。
【００５６】
他の実施形態では、本発明は、脱毛を治療するための、毛包を形成するための、毛包の大きさを増大させるための、毛包形成を増加させるための、変性皮膚疾患を治療、抑制または抑止するための、あるいはアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を治療するための方法であって、次のステップの任意の組み合わせを含む方法を提供する。（ａ）対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップ；（ｂ）繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを前記対象に投与するステップ；（ｃ）Ｗｎｔポリペプチドを前記対象に投与するステップ；（ｄ）ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）、Ｐｔｃｈ１、Ｐｔｃｈ２、Ｇｌｉ１、Ｇｌｉ２またはそれらの組み合わせを前記対象に投与するステップ。
【００５７】
他の実施形態では、本発明は、除毛するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９中和抗体を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、前記抗体は１０μｇ／ｍＬの濃度で投与される。一実施形態では、前記除毛は、前記対象の脚、腕、脇、恥部、背中、顔、鼻または耳に行われる。一実施形態では、該方法は、前記投与ステップの前に除毛領域の表皮を破壊するステップをさらに含む。一実施形態では、前記投与ステップは、前記破壊するステップの３〜１２日後に行われる。一実施形態では、前記破壊するステップは、脱毛領域を物理的刺激、化学的刺激または光学的刺激に曝すことにより行われる。一実施形態では、前記光学的刺激は放射線である。一実施形態では、前記投与ステップは局所投与である。他の実施形態では、前記投与ステップは表皮下投与である。
【００５８】
他の実施形態では、本発明は、脱毛症を回復に向かわせるための方法であって、禿げているまたは禿げかかった対象に対して、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を投与するステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、脱毛症の進行を止めるための方法であって、禿げているまたは禿げかかった対象に対して、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を投与するステップを含む。
【００５９】
他の実施形態では、本発明は、対象の創傷を治療するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、対象の負傷を治療するための方法であって、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６０】
ＦＧＦ９
【００６１】
一実施形態では、本発明の方法は、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチドを含んでいる組成物を単独であるいは１以上の追加の化合物と共に投与するステップを含む。一実施形態では、ＦＧＦ９は、Ｆｇｆ−９、ＦＧＦ−９、繊維芽細胞増殖因子‐９、ＧＡＦ、グリア活性化因子、グリア活性化因子前駆体、またはＨＢＧＦ−９を指す。一実施形態では、本発明の方法に使用されるＦＧＦ−９タンパク質は、次の配列を有する。
【００６２】
ＩＦＰＮＧＴＩＱＧＴＲＫＤＨＳＲＦＧＩＬＥＦＩＳＩＡＶＧＬＶＳＩＲＧＶＤＳＧＬＹＬＧＭＮＥＫＧＥＬＹＧＳＥＫＬＴＱＥＣＶＦＲＥＱＦＥＥＮＷＹＮＴＹＳＳＮＬＹＫＨＶＤＴＧＲＲＹＹＶＡＬＮＫＤＧＴＰＲＥＧＴＲＴＫＲＨＱＫＦＴＨＦＬＰＲＰＶＤＰＤＫＶＰＥＬＹＫＤＩＬＳＱＳ（遺伝子バンクアクセス番号：ＢＡＡ０３５７２；配列ＩＤ番号：１）。他の実施形態では、ＦＧＦ９タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：Ｐ３１３７１、ＢＡＦ８３４８１、ＮＰ＿００２００１、ＣＡＣ１７６９２、ＥＡＸ０８３１６、ＡＡＩ０３９８０、ＡＡＩ０３９７９、ＡＡＴ７４６２４またはＡＡＨ６９６９２に記載されている配列を有する。他の実施形態では、ＦＧＦ９タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＬ１３９３７８．１５、ＡＹ６８２０９４．１またはＣＨ４７１０７５．１に記載されている配列を有するゲノム核酸分子によってコードされているか、あるいは、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＫ２９０７９２．１、ＢＣ０６９６９２．１、ＢＣ１０３９７８．１、ＢＣ１０３９７９．１、ＣＲ７４６５０３．１またはＤ１４８３８．１．に記載されている配列を有するｍＲＮＡ分子によってコードされている。他の実施形態では、ＦＧＦ９タンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、ＦＧＦ９タンパク質の相同体が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００６３】
一実施形態では、組み換え型ヒトＦＧＦ９の投与により、ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）遺伝子発現のレベルが増加する（図１４）。
【００６４】
ＳＨＨ
【００６５】
一実施形態では、本発明の方法は、ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）ペプチドを含んでいる組成物を単独であるいは１以上の追加の化合物と共に投与するステップを含む。他の実施形態では、本発明の方法は、ＳＨＨ発現を増加させる化合物または因子を投与するステップを含む。一実施形態では、ＳＨＨは、ＴＰＴ；ＨＨＧ１；ＨＬＰ３；ＨＰＥ３；ＳＭＭＣＩ；ＴＰＴＰＳ；またはＭＣＯＰＣＢ５を指す。一実施形態では、本発明の方法に使用されるＳＨＨタンパク質は、次の配列を有する。
【００６６】
ＭＬＬＬＡＲＣＬＬＬＶＬＶＳＳＬＬＶＣＳＧＬＡＣＧＰＧＲＧＦＧＫＲＲＨＰＫＫＬＴＰＬＡＹＫＱＦＴＰＮＶＡＥＫＴＬＧＡＳＧＲＹＥＧＫＩＳＲＮＳＥＲＦＫＥＬＴＰＮＹＮＰＤＩＩＦＫＤＥＥＮＴＧＡＤＲＬＭＴＱＲＣＫＤＫＬＮＡＬＡＩＳＶＭＮＱＷＰＧＶＫＬＲＶＴＥＧＷＤＥＤＧＨＨＳＥＥＳＬＨＹＥＧＲＡＶＤＩＴＴＳＤＲＤＲＳＫＹＧＭＬＡＲＬＡＶＥＡＧＦＤＷＶＹＹＥＳＫＡＨＩＨＣＳＶＫＡＥＮＳＶＡＡＫＳＧＧＣＦＰＧＳＡＴＶＨＬＥＱＧＧＴＫＬＶＫＤＬＳＰＧＤＲＶＬＡＡＤＤＱＧＲＬＬＹＳＤＦＬＴＦＬＤＲＤＤＧＡＫＫＶＦＹＶＩＥＴＲＥＰＲＥＲＬＬＬＴＡＡＨＬＬＦＶＡＰＨＮＤＳＡＴＧＥＰＥＡＳＳＧＳＧＰＰＳＧＧＡＬＧＰＲＡＬＦＡＳＲＶＲＰＧＱＲＶＹＶＶＡＥＲＤＧＤＲＲＬＬＰＡＡＶＨＳＶＴＬＳＥＥＡＡＧＡＹＡＰＬＴＡＱＧＴＩＬＩＮＲＶＬＡＳＣＹＡＶＩＥＥＨＳＷＡＨＲＡＦＡＰＦＲＬＡＨＡＬＬＡＡＬＡＰＡＲＴＤＲＧＧＤＳＧＧＧＤＲＧＧＧＧＧＲＶＡＬＴＡＰＧＡＡＤＡＰＧＡＧＡＴＡＧＩＨＷＹＳＱＬＬＹＱＩＧＴＷＬＬＤＳＥＡＬＨＰＬＧＭＡＶＫＳＳ（遺伝子バンクアクセス番号：Ｑ１５４６５．１；配列ＩＤ番号：２）。他の実施形態では、ＳＨＨタンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＢＡＡ３４６８９．１；ＡＡＢ６７６０４．１；ＡＡＳ０１９９０．１；ＡＡＱ８７８７９．１；ＥＡＬ２３９１３．１；ＥＡＸ０４５４３．１；ＡＡＡ６２１７９．１；またはＡＡＩ１１９２６．１．に記載されている配列を有する。他の実施形態では、ＳＨＨタンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＢ０２０４１０．１；ＡＣ００２４８４．１；ＡＣ０７８８３４．５；ＡＹ４２２１９５．１；ＣＨ２３６９５４．１；ＣＨ４７１１４９．１；ＡＹ９２７４５０．１；Ｌ３８５１８．１；またはＢＣ１１１９２５．１．に記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、ＳＨＨタンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、ＳＨＨタンパク質の相同体が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００６７】
一実施形態では、ＳＨＨは、スムースンド（ＳＭＯ）タンパク質と協働して標的遺伝子の転写を活性化させる機能を果たすパッチされた（ＰＴＣ）受容体に結合される。ＳＨＨを欠くときは、ＰＴＣは、ＳＭＯの構造的シグナル達活性を抑制する。他の実施形態では、ＳＨＨは、Ｇｌｉ癌遺伝子も調節する。他の実施形態では、ＳＨＨは、成長中の様々なパターンニングイベントに必須の細胞間信号である；腹側細胞を含む脊索により生成された信号は神経管及び体節に入り、成長中の肢芽の前後方向軸をパターニングするための信号を二極化させる。他の実施形態では、ＳＨＨは、フロアープレート及び運動ニューロンの両方の誘導活性を示す。
【００６８】
他の実施形態では、組み換え型ヒトＦＧＦ９の投与により、一実施形態ではヒト遺伝子である、パッチされた相同体１（ショウジョウバエ）（Ｐｔｃｈ１；図１４）のレベルが増加する（図１４）。一実施形態では、Ｐｔｃｈ１は、パッチされた遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。一実施形態では、Ｐｔｃｈ１はソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）に対する受容体であり、一実施形態では、胚構造の形成及び腫瘍形成に関与する分泌された分子である。一実施形態では、Ｐｔｃｈ１は、腫瘍抑制因子としての役割を果たす。一実施形態では、Ｐｔｃｈ１の変異体は、母斑性基底細胞癌症候群、食道扁平上皮癌、毛包上皮腫、膀胱の移行細胞癌、及び全前脳症に関連付けられてきた。一実施形態では、Ｐｔｃｈ１の選択的スプライシングにより、別々のイソ型をコードする複数の転写変異体を作成することができる。
【００６９】
Ｐｔｃｈ１
【００７０】
一実施形態では、本発明の方法は、Ｐｔｃｈ１ポリペピチドを含んでいる組成物を単独でまたは１以上の追加の化合物と共に投与するステップを含む。他の実施形態では、本発明の方法は、Ｐｔｃｈ１発現を増加させる化合物または因子を含んでいる組成物を投与するステップを含む。一実施形態では、Ｐｔｃｈ１は、ＰＴＣ；ＢＣＮＳ；ＨＰＥ７；ＰＴＣｌ；ＰＴＣＨ；ＮＢＣＣＳ；ＰＴＣＨ１１；ＦＬＪ２６７４６；またはＦＬＪ４２６０２を指す。一実施形態では、本発明の方法に使用されるＰｔｃｈ１タンパク質は、次の配列を有する。
【００７１】
ＭＡＳＡＧＮＡＡＥＰＱＤＲＧＧＧＧＳＧＣＩＧＡＰＧＲＰＡＧＧＧＲＲＲＲＴＧＧＬＲＲＡＡＡＰＤＲＤＹＬＨＲＰＳＹＣＤＡＡＦＡＬＥＱＩＳＫＧＫＡＴＧＲＫＡＰＬＷＬＲＡＫＦＱＲＬＬＦＫＬＧＣＹＩＱＫＮＣＧＫＦＬＶＶＧＬＬＩＦＧＡＦＡＶＧＬＫＡＡＮＬＥＴＮＶＥＥＬＷＶＥＶＧＧＲＶＳＲＥＬＮＹＴＲＱＫＩＧＥＥＡＭＦＮＰＱＬＭＩＱＴＰＫＥＥＧＡＮＶＬＴＴＥＡＬＬＱＨＬＤＳＡＬＱＡＳＲＶＨＶＹＭＹＮＲＱＷＫＬＥＨＬＣＹＫＳＧＥＬＩＴＥＴＧＹＭＤＱＩＩＥＹＬＹＰＣＬＩＴＴＰＬＤＣＦＷＥＧＡＫＬＱＳＧＴＡＹＬＬＧＫＰＰＬＲＷＴＮＦＤＰＬＥＦＬＥＥＬＫＫＩＮＹＱＶＤＳＷＥＥＭＬＮＫＡＥＶＧＨＧＹＭＤＲＰＣＬＮＰＡＤＰＤＣＰＡＴＡＰＮＫＮＳＴＫＰＬＤＭＡＬＶＬＮＧＧＣＨＧＬＳＲＫＹＭＨＷＱＥＥＬＩＶＧＧＴＶＫＮＳＴＧＫＬＶＳＡＨＡＬＱＴＭＦＱＬＭＴＰＫＱＭＹＥＨＦＫＧＹＥＹＶＳＨＩＮＷＮＥＤＫＡＡＡＩＬＥＡＷＱＲＴＹＶＥＶＶＨＱＳＶＡＱＮＳＴＱＫＶＬＳＦＴＴＴＴＬＤＤＩＬＫＳＦＳＤＶＳＶＩＲＶＡＳＧＹＬＬＭＬＡＹＡＣＬＴＭＬＲＷＤＣＳＫＳＱＧＡＶＧＬＡＧＶＬＬＶＡＬＳＶＡＡＧＬＧＬＣＳＬＩＧＩＳＦＮＡＡＴＴＱＶＬＰＦＬＡＬＧＶＧＶＤＤＶＦＬＬＡＨＡＦＳＥＴＧＱＮＫＲＩＰＦＥＤＲＴＧＥＣＬＫＲＴＧＡＳＶＡＬＴＳＩＳＮＶＴＡＦＦＭＡＡＬＩＰＩＰＡＬＲＡＦＳＬＱＡＡＶＶＶＶＦＮＦＡＭＶＬＬＩＦＰＡＩＬＳＭＤＬＹＲＲＥＤＲＲＬＤＩＦＣＣＦＴＳＰＣＶＳＲＶＩＱＶＥＰＱＡＹＴＤＴＨＤＮＴＲＹＳＰＰＰＰＹＳＳＨＳＦＡＨＥＴＱＩＴＭＱＳＴＶＱＬＲＴＥＹＤＰＨＴＨＶＹＹＴＴＡＥＰＲＳＥＩＳＶＱＰＶＴＶＴＱＤＴＬＳＣＱＳＰＥＳＴＳＳＴＲＤＬＬＳＱＦＳＤＳＳＬＨＣＬＥＰＰＣＴＫＷＴＬＳＳＦＡＥＫＨＹＡＰＦＬＬＫＰＫＡＫＶＶＶＩＦＬＦＬＧＬＬＧＶＳＬＹＧＴＴＲＶＲＤＧＬＤＬＴＤＩＶＰＲＥＴＲＥＹＤＦＩＡＡＱＦＫＹＦＳＦ?ＮＭＹＩＶＴＱＫＡＤＹＰＮＩＱＨＬＬＹＤＬＨＲＳＦＳＮＶＫＹＶＭＬＥＥＮＫＱＬＰＫＭＷＬＨＹＦＲＤＷＬＱＧＬＱＤＡＦＤＳＤＷＥＴＧＫＩＭＰＮＮＹＫＮＧＳＤＤＧＶＬＡＹＫＬＬＶＱＴＧＳＲＤＫＰＩＤＩＳＱＬＴＫＱＲＬＶＤＡＤＧＩＩＮＰＳＡＦＹＩＹＬＴＡＷＶＳＮＤＰＶＡＹＡＡＳＱＡＮＩＲＰＨＲＰＥＷＶＨＤＫＡＤＹＭＰＥＴＲＬＲＩＰＡＡＥＰＩＥＹＡＱＦＰＦＹＬＮＧＬＲＤＴＳＤＦＶＥＡＩＥＫＶＲＴＩＣＳＮＹＴＳＬＧＬＳＳＹＰＮＧＹＰＦＬＦＷＥＱＹＩＧＬＲＨＷＬＬＬＦＳＶＶＬＡＣＴＦＬＶＣＡＶＦＬＬＮＰＷＴＡＧＩＩＶＭＶＬＡＬＭＴＶＥＬＦＧＭＭＧＬＩＧＩＫＬＳＡＶＰＶＶＩＬＩＡＳＶＧＩＧＶＥＦＴＶＨＶＡＬＡＦＬＴＡＩＧＤＫＮＲＲＡＶＬＡＬＥＨＭＦＡＰＶＬＤＧＡＶＳＴＬＬＧＶＬＭＬＡＧＳＥＦＤＦＩＶＲＹＦＦＡＶＬＡＩＬＴＩＬＧＶＬＮＧＬＶＬＬＰＶＬＬＳＦＦＧＰＹＰＥＶＳＰＡＮＧＬＮＲＬＰＴＰＳＰＥＰＰＰＳＶＶＲＦＡＭＰＰＧＨＴＨＳＧＳＤＳＳＤＳＥＹＳＳＱＴＴＶＳＧＬＳＥＥＬＲＨＹＥＡＱＱＧＡＧＧＰＡＨＱＶＩＶＥＡＴＥＮＰＶＦＡＨＳＴＶＶＨＰＥＳＲＨＨＰＰＳＮＰＲＱＱＰＨＬＤＳＧＳＬＰＰＧＲＱＧＱＱＰＲＲＤＰＰＲＥＧＬＷＰＰＰＹＲＰＲＲＤＡＦＥＩＳＴＥＧＨＳＧＰＳＮＲＡＲＷＧＰＲＧＡＲＳＨＮＰＲＮＰＡＳＴＡＭＧＳＳＶＰＧＹＣＱ��ＩＴＴＶＴＡＳＡＳＶＴＶＡＶＨＰＰＰＶＰＧＰＧＲＮＰＲＧＧＬＣＰＧＹＰＥＴＤＨＧＬＦＥＤＰＨＶＰＦＨＶＲＣＥＲＲＤＳＫＶＥＶＩＥＬＱＤＶＥＣＥＥＲＰＲＧＳＳＳＮ（遺伝子バンクアクセス番号：Ｑ１３６３５．２；配列ＩＤ番号：３）。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ１タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＣＡＨ７３８１７．１；ＣＡＨ７３８１８．１；ＣＡＨ７３８１９．１；ＡＡＲ２１２３８．１；ＡＡＲ２１２３９．１；ＡＡＲ２１２４０．１；ＥＡＷ９２６３１．１；ＥＡＷ９２６３２．１；ＢＡＤ７４１８４．１；ＢＡＤ７４１８５．１；ＢＡＤ７４１８６．１；ＢＡＤ７４１８７．１；ＢＡＤ７４１８８．１；ＢＡＤ９２７３２．１；ＢＡＦ４７７１１．１；ＢＡＥ４５３００．１；ＢＡＥ４５３０２．１；ＢＡＥ４５３０４．１；ＢＡＦ４７７１２．１；ＢＡＣ８５８９３．１；ＡＡＨ４３５４２．１；ＡＡＣ５０４９６．１；ＡＡＣ５０５５０．１；またはＡＡＩ５２９２０．１．に記載されている配列を有する。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ１タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＬ１６１７２９．２７；ＡＹ３９５７５８．１；ＡＹ３９５７６８．１；ＡＹ３９５７７２．１；ＣＨ４７１１７４．１；ＡＢ１８９４３６．１；ＡＢ１８９４３７．１；ＡＢ１８９４３８．１；ＡＢ１８９４３９．１；ＡＢ１８９４４０．１；ＡＢ２０９４９５．１；ＡＢ２１２８２７．１；ＡＢ２１２８２８．１；ＡＢ２１４５００．１；ＡＢ２３３４２２．１；ＡＢ２３３４２４．１；ＡＢ２３９３２９．１；ＡＩ３５８８８０．１；ＡＩ４９４４４２．１；ＡＫ１２４５９３．１；ＡＫ１３０２５６．１；ＢＣ０４３５４２．１；ＢＦ１９５３５２．１；ＢＭ９７４１１９．１；ＢＸ１１７０４１．１；ＣＲ７４４００４．１；ＤＢ０９３６４４．１；Ｕ４３１４８．１；Ｕ５９４６４．１；またはＢＣ１５２９１９．１に記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ１タンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ１タンパク質の相同体が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００７２】
他の実施形態では、組み換え型ヒトＦＧＦ９の投与により、一実施形態ではヒト遺伝子である、パッチされた相同体２（ショウジョウバエ）（Ｐｔｃｈ２；図１４）のレベルが増加する。
【００７３】
Ｐｔｃｈ２
【００７４】
一実施形態では、本発明の方法は、Ｐｔｃｈ２ポリペピチドを含んでいる組成物を単独でまたは１以上の追加の化合物と共に投与するステップを含む。他の実施形態では、本発明の方法は、Ｐｔｃｈ２発現を増加させる化合物または因子を含んでいる組成物を投与するステップを含む。一実施形態では、Ｐｔｃｈ２は、パッチされた遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。一実施形態では、パッチされたタンパク質はソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）に対する受容体であり、一実施形態では、胚構造の形成及び腫瘍形成に関与する分泌された分子である。一実施形態では、Ｐｔｃｈ２は、髄芽種または基底細胞癌において変異する。このことは、Ｐｔｃｈ２は、特定の腫瘍を成長させる役割を果たすことを示唆している。選択的転写変異体について説明したが、それらの生物学的機能は決定されてはいない。一実施形態では、本発明の方法に使用されるＰｔｃｈ２ポリペピチドは、次の配列を有する。
【００７５】
ＦＤＦＩＶＲＹＦＦＡＡＬＴＶＬＴＬＬＧＬＬＨＧＬＶＬＬＰＶＬＬＳＩＬＧＰＰＰＥＶＩＱＭＹＫＥＳＰＥＩＬＳＰＰＡＰＱＧＧＧＬＲＶＧＳＬＱＶＮＩＳＹＷＫＥＬＬＷＣＱＤＬＲＰＥＥＩ（遺伝子バンクアクセス番号：Ｑ５ＪＲ９７；配列ＩＤ番号：４）。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ２タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＣＡＬ２３１２７．１；ＣＡＩ１３０００．１；ＡＡＲ０５４４７．１；ＥＡＸ０７０１７．１；ＡＡＤ２５９５３．１；ＡＡＣ７９８４７．１；ＡＡＤ１７２６０．１；ＡＡＱ８８９１９．１；ＡＡＱ８９３７５．１；またはＡＡＩ５２９１２．１．に記載されている配列を有する。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ２タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＬ１３６３８０．２２；ＡＬ５９２１６６．１６；ＡＹ４３８６６４．１；ＣＨ４７１０５９．２；ＡＦ０８７６５１．１；ＡＦ０９１５０１．１；ＡＦ１１９５６９．１；ＡＫ３０７１６８．１；ＡＹ３５８５５５．１；ＡＹ３５９０１６．１；またはＢＣ１５２９１１．１に記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ２タンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、Ｐｔｃｈ２タンパク質の相同体が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００７６】
ＧＬＩ１
【００７７】
一実施形態では、本発明の方法は、グリオーマ関連癌遺伝子相同体１（亜鉛フィンガータンパク質）（ＧＬＩ１）ポリペプチドを含んでいる組成物を単独でまたは１以上の追加の化合物と共に投与するステップを含む。一実施形態では、ＧＬＩ１は、亜鉛フィンガータンパク質のクルッペルファミリーのメンバーをコードする。他の実施形態では、本発明の方法は、ＧＬＩ１の発現を増加させる化合物または因子を含んでいる組成物を投与するステップを含む。一実施形態では、本発明の方法に使用されるＧＬＩ１ポリペピチドは、次の配列を有する。
【００７８】
ＦＮＳＭＴＰＰＰＩＳＳＹＧＥＰＣＣＬＲＰＬＰＳＱＧＡＰＳＶＧＴＥＧＬＳＧＰＰＦＣＨＱＡＮＬＭＳＧＰＨＳＹＧＰＡＲＥＴＮＳＣＴＥＧＰＬＦＳＳＰＲＳＡＶＫＬＴＫＫＲＡＬＳＩＳＰＬＳＤＡＳＬＤＬＱＴＶＩＲＴＳＰＳＳＬＶＡＦＩＮＳＲＣＴＳＰＧＧＳＹＧＨＬＳＩＧＴＭＳＰＳＬＧＦＰＡＱＭＮＨＱＫＧＰＳＰＳＦＧＶＱＰＣＧＰＨＤＳＡＲＧＧＭＩＰＨＰＱＳＲＧＰＦＰＴＣＱＬＫＳＥＬＤＭＬＶＧＫＣＲＥＥＰＬＥＧＤＭＳＳＰＮＳＴＧＩＱＤＰＬＬＧＭＬＤＧＲＥＤＬＥＲＥＥＫＲＥＰＥＳＶＹＥＴＤＣＲＷＤＧＣＳＱＥＦＤＳＱＥＱＬＶＨＨＩＮＳＥＨＩＨＧＥＲＫＥＦＶＣＨＷＧＧＣＳＲＥＬＲＰＦＫＡＱＹＭＬＶＶＨＭＲＲＨＴＧＥＫＰＨＫＣＴＦＥＧＣＲＫＳＹＳＲＬＥＮＬＫＴＨＬＲＳＨＴＧＥＫＰＹＭＣＥＨＥＧＣＳＫＡＦＳＮＡＳＤＲＡＫＨＱＮＲＴＨＳＮＥＫＰＹＶＣＫＬＰＧＣＴＫＲＹＴＤＰＳＳＬＲＫＨＶＫＴＶＨＧＰＤＡＨＶＴＫＲＨＲＧＤＧＰＬＰＲＡＰＳＩＳＴＶＥＰＫＲＥＲＥＧＧＰＩＲＥＥＳＲＬＴＶＰＥＧＡＭＫＰＱＰＳＰＧＡＱＳＳＣＳＳＤＨＳＰＡＧＳＡＡＮＴＤＳＧＶＥＭＴＧＮＡＧＧＳＴＥＤＬＳＳＬＤＥＧＰＣＩＡＧＴＧＬＳＴＬＲＲＬＥＮＬＲＬＤＱＬＨＱＬＲＰＩＧＴＲＧＬＫＬＰＳＬＳＨＴＧＴＴＶＳＲＲＶＧＰＰＶＳＬＥＲＲＳＳＳＳＳＳＩＳＳＡＹＴＶＳＲＲＳＳＬＡＳＰＦＰＰＧＳＰＰＥＮＧＡＳＳＬＰＧＬＭＰＡＱＨＹＬＬＲＡＲＹＡＳＡＲＧＧＧＴＳＰＴＡＡＳＳＬＤＲＩＧＧＬＰＭＰＰＷＲＳＲＡＥＹＰＧＹＮＰＮＡＧＶＴＲＲＡＳＤＰＡＱＡＡＤＲＰＡＰＡＲＶＱＲＦＫＳＬＧＣＶＨＴＰＰＴＶＡＧＧＧＱＮＦＤＰＹＬＰＴＳＶＹＳＰＱＰＰＳＩＴＥＮＡＡＭＤＡＲＧＬＱＥＥＰＥＶＧＴＳＭＶＧＳＧＬＮＰＹＭＤＦＰＰＴＤＴＬＧＹＧＧＰＥＧＡＡＡＥＰＹＧＡＲＧＰＧＳＬＰＬＧＰＧＰＰＴＮＹＧＰＮＰＣＰＱＱＡＳＹＰＤＰＴＱＥＴＷＧＥＦＰＳＨＳＧＬＹＰＧＰＫＡＬＧＧＴＹＳＱＣＰＲＬＥＨＹＧＱＶＱＶＫＰＥＱＧＣＰＶＧＳＤＳＴＧＬＡＰＣＬＮＡＨＰＳＥＧＰＰＨＰＱＰＬＦＳＨＹＰＱＰＳＰＰＱＹＬＱＳＧＰＹＴＱＰＰＰＤＹＬＰＳＥＰＲＰＣＬＤＦＤＳＰＴＨＳＴＧＱＬＫＡＱＬＶＣＮＹＶＱＳＱＱＥＬＬＷＥＧＧＧＲＥＤＡＰＡＱＥＰＳＹＱＳＰＫＦＬＧＧＳＱＶＳＰＳＲＡＫＡＰＶＮＴＹＧＰＧＦＧＰＮＬＰＮＨＫＳＧＳＹＰＴＰＳＰＣＨＥＮＦＶＶＧＡＮＲＡＳＨＲＡＡＡＰＰＲＬＬＰＰＬＰＴＣＹＧＰＬＫＶＧＧＴＮＰＳＣＧＨＰＥＶＧＲＬＧＧＧＰＡＬＹＰＰＰＥＧＱＶＣＮＰＬＤＳＬＤＬＤＮＴＱＬＤＦＶＡＩＬＤＥＰＱＧＬＳＰＰＰＳＨＤＱＲＧＳＳＧＨＴＰＰＰＳＧＰＰＮＭＡＶＧＮＭＳＶＬＬＲＳＬＰＧＥＴＥＦＬＮＳＳＡ（遺伝子バンクアクセス番号：Ｐ０８１５１；配列ＩＤ番号：５）。他の実施形態では、ＧＬＩ１タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＡＭ１３３９１．１；ＥＡＷ９７０１３．１；ＢＡＧ６０２１９．１；ＡＡＨ１３０００．１；またはＣＡＡ３０２９７．１．に記載されている配列を有する。他の実施形態では、ＧＬＩ１タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＣ０２２５０６．３８；ＡＦ３１６５７３．１；ＣＨ４７１０５４．１；ＡＫ２９７８９９．１；ＢＣ０１３０００．２；またはＸ０７３８４．１に記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、ＧＬＩ１タンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、ＧＬＩ１タンパク質の相同体が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００７９】
ＧＬＩ２
【００８０】
一実施形態では、本発明の方法は、グリオーマ関連癌遺伝子相同体２（亜鉛フィンガータンパク質）（ＧＬＩ２）ポリペプチドを含んでいる組成物を単独でまたは１以上の追加の化合物と共に投与するステップを含む。他の実施形態では、本発明の方法は、ＧＬＩ２の発現を増加させる化合物または因子を含んでいる組成物を投与するステップを含む。一実施形態では、ＧＬＩ２は、ＨＰＥ９；ＴＨＰｌ；またはＴＨＰ２を指す。一実施形態では。ＧＬＩ２は、ＧＬＩファミリーのサブクラスであるＣ２Ｈ２型亜鉛フィンガータンパク質に属するタンパク質をコードする。このサブクラスのメンバーは、亜鉛フィンガーモチーフを通じてＤＮＡを結合する転写因子に特徴付けられる。前記モチーフは、保存されたＨ−Ｃリンクを含む。ＧＬＩファミリーフィンガータンパク質は、ソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）のシグナル伝達の伝達物質であり、胚性癌腫細胞の有力な癌細胞に関与する。この遺伝子によってコードされたタンパク質は、細胞質に局在し、パッチされたショウジョウバエ相同体（ＰＣＴＨ）遺伝子発現を活性化する。また、胚形成中に役割も果たすと考えられている。コードされたタンパク質は、いくつかの表現型のグレイグ多合指症候群、パリスター・ホール症候群、軸前多趾症ＩＶ型、軸前多趾症Ａ１及びＢ型に関連する。一実施形態では、本発明の方法に使用されるＧＬＩ２ポリペピチドは、次の配列を有する。
【００８１】
ＭＡＬＴＳＩＮＡＴＰＴＱＬＳＳＳＳＮＣＬＳＤＴＮＱＮＫＱＳＳＥＳＡＶＳＳＴＶＮＰＶＡＩＨＫＲＳＫＶＫＴＥＰＥＧＬＲＰＡＳＰＬＡＬＴＱＧＱＶＬＤＴＡＨＶＧＶＰＦＰＳＰＱＥＱＬＡＤＬＫＥＤＬＤＲＤＤＣＫＱＥＡＥＶＶＩＹＥＴＮＣＨＷＥＤＣＴＫＥＹＤＴＱＥＱＬＶＨＨＩＮＮＥＨＩＨＧＥＫＫＥＦＶＣＲＷＱＡＣＴＲＥＱＫＰＦＫＡＱＹＭＬＶＶＨＭＲＲＨＴＧＥＫＰＨＫＣＴＦＥＧＣＳＫＡＹＳＲＬＥＮＬＫＴＨＬＲＳＨＴＧＥＫＰＹＶＣＥＨＥＧＣＮＫＡＦＳＮＡＳＤＲＡＫＨＱＮＲＴＨＳＮＥＫＰＹＩＣＫＩＰＧＣＴＫＲＹＴＤＰＳＳＬＲＫＨＶＫＴＶＨＧＰＤＡＨＶＴＫＫＱＲＮＤＶＨＬＲＴＰＬＬＫＥＮＧＤＳＥＡＧＴＥＰＧＧＰＥＳＴＥＡＳＳＴＳＱＡＶＥＤＣＬＨＶＲＡＩＫＴＥＳＳＧＬＣＱＳＳＰＧＡＱＳＳＣＳＳＥＰＳＰＬＧＳＡＰＮＮＤＳＧＶＥＭＰＧＴＧＰＧＳＬＧＤＬＴＡＬＤＤＴＰＰＧＡＤＴＳＡＬＡＡＰＳＡＧＧＬＱＬＲＫＨＭＴＴＭＨＲＦＥＱＬＫＫＥＫＬＫＳＬＫＤＳＣＳＷＡＧＰＴＰＨＴＲＮＴＫＬＰＰＬＰＧＳＧＳＩＬＥＮＦＳＧＳＧＧＧＧＰＡＧＬＬＰＮＰＲＬＳＥＬＳＡＳＥＶＴＭＬＳＱＬＱＥＲＲＤＳＳＴＳＴＶＳＳＡＹＴＶＳＲＲＳＳＧＩＳＰＹＦＳＳＲＲＳＳＥＡＳＰＬＧＡＧＲＰＨＮＡＳＳＡＤＳＹＤＰＩＳＴＤＡＳＲＲＳＳＥＡＳＱＣＳＧＧＳＧＬＬＮＬＴＰＡＱＱＹＳＬＲＡＫＹＡＡＡＴＧＧＰＰＰＴＰＬＰＧＬＥＲＭＳＬＲＴＲＬＡＬＬＤＡＡＥＧＴＬＰＡＧＣＰＲＰＬＧＰＲＲＧＳＤＧＰＴＹＧＨＧＨＡＧＡＡＰＡＦＰＨＥＡＰＧＧＧＴＲＲＡＳＤＰＶＲＲＰＤＡＬＳＬＰＲＶＱＲＦＨＳＴＨＮＶＮＰＧＰＬＰＰＣＡＤＲＲＧＬＲＬＱＳＨＰＳＴＤＧＧＬＡＲＧＡＹＳＰＲＰＰＳＩＳＥＮＶＡＭＥＡＶＡＡＧＶＤＧＡＧＰＥＡＤＬＧＬＰＥＤＤＬＶＬＰＤＤＶＶＱＹＩＫＡＨＡＳＧＡＬＤＥＧＴＧＱＶＹＰＴＥＳＴＧＦＳＤＮＰＲＬＰＳＰＧＬＨＧＱＲＲＭＶＡＡＤＳＮＶＧＰＳＡＰＭＬＧＧＣＱＬＧＦＧＡＰＳＳＬＮＫＮＮＭＰＶＱＷＮＥＶＳＳＧＴＶＤＳＬＡＳＱＶＫＰＰＰＦＰＱＧＮＬＡＶＶＱＱＫＰＡＦＧＱＹＰＧＹＳＰＱＧＬＱＡＳＰＧＧＬＤＳＴＱＰＨＬＱＰＲＳＧＡＰＳＱＧＩＰＲＶＮＹＭＱＱＬＲＱＰＶＡＧＳＱＣＰＧＭＴＴＴＭＳＰＨＡＣＹＧＱＶＨＰＱＬＳＰＳＴＩＳＧＡＬＮＱＦＰＱＳＣＳＮＭＰＡＫＰＧＨＬＧＨＰＱＱＴＥＶＡＰＤＰＴＴＭＧＮＲＨＲＥＬＧＶＰＮＳＡＬＡＧＶＰＰＰＨＰＶＱＳＹＰＱＱＳＨＨＬＡＡＳＭＳＱＥＧＹＨＱＶＰＳＬＬＰＡＲＱＰＧＦＭＥＰＱＴＧＰＭＧＶＡＴＡＧＦＧＬＶＱＰＲＰＰＬＥＰＳＰＴＧＲＨＲＧＶＲＡＶＱＱＱＬＡＹＡＲＡＴＧＨＡＭＡＡＭＰＳＳＱＥＴＡＥＡＶＰＫＧＡＭＧＮＭＧＳＶＰＰＱＰＰＰＱＤＡＧＧＡＰＤＨＳＭＬＹＹＹＧＱＩＨＭＹＥＱＤＧＧＬＥＮＬＧＳＣＱＶＭＲＳＱＰＰＱＰＱＡＣＱＤＳＩＱＰＱＰＬＰＳＰＧＶＮＱＶＳＳＴＶＤＳＱＬＬＥＡＰＱＩＤＦＤＡＩＭＤＤＧＤＨＳＳＬＦＳＧＡＬＳＰＳＬＬＨＳＬＳＱＮＳＳＲＬＴＴＰＲＮＳＬＴＬＰＳＩＰＡＧＩＳＮＭＡＶＧＤＭＳＳＭＬＴＳＬＡＥＥＳＫＦＬＮＭＭＴ（遺伝子バンクアクセス番号：Ｐ１００７０；配列ＩＤ番号：６）。他の実施形態では、ＧＬＩ２タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＡＡ３５８９８．１；ＢＡＡ２５６６５．１；ＢＡＡ２５６６６．１；ＢＡＡ２５６６７．１；ＢＡＡ２５６６８．１；ＢＡＤ９２５９１．１；ＢＡＧ６１８７５．１；ＡＡＳ７２８８９．１；ＡＡＳ７２８９０．１；ＡＡＳ７２８９１．１；ＡＡＩ１１４１１．１；ＢＡＡ０３５６８．１；ＢＡＡ０３５６９．１；ＡＡＹ５８３１５．１；ＡＡＹ５８３１６．１；ＡＡＹ５８３１７．１；またはＡＡＹ８７１６５．１．に記載されている配列を有する。他の実施形態では、ＧＬＩ２タンパク質は、遺伝子バンクアクセス番号：ＡＣ０１６７６４．８；ＡＣ０１７０３３．５（６０６６４．１８１８８７）；Ｍ２０６７２．１；Ｍ２０６７３．１；ＡＢ００７２９５．１；ＡＢ００７２９６．１；ＡＢ００７２９７．１；ＡＢ００７２９８．１；ＡＢ２０９３５４．１；ＡＪ７０７５８３．１；ＡＫ３０００７１．１；ＡＹ４９３７３７．１；ＡＹ４９３７３８．１；ＡＹ４９３７３９．１；ＢＣ１１１４１０．１；Ｄ１４８２７．１；Ｄ１４８２８．１；ＤＱ００４３９６．１；ＤＱ００４３９７．１；ＤＱ００４３９８．１；またはＤＱ０８６８１４．１に記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、ＧＬＩ２タンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、ＧＬＩ２タンパク質の相同体が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００８２】
Ｗｎｔ
【００８３】
一実施形態では、本発明の方法は、Ｗｎｔポリペプチドを含んでいる組成物を投与するステップを含む。本発明の方法に使用されるＷｎｔポリペプチドは、一実施形態では、次の配列を有する。
【００８４】
ＭＮＲＫＡＲＲＣＬＧＨＬＦＬＳＬＧＭＶＹＬＲＩＧＧＦＳＳＶＶＡＬＧＡＳＩＩＣＮＫＩＰＧＬＡＰＲＱＲＡＩＣＱＳＲＰＤＡＩＩＶＩＧＥＧＳＱＭＧＬＤＥＣＱＦＱＦＲＮＧＲＷＮＣＳＡＬＧＥＲＴＶＦＧＫＥＬＫＶＧＳＲＥＡＡＦＴＹＡＩＩＡＡＧＶＡＨＡＩＴＡＡＣＴＱＧＮＬＳＤＣＧＣＤＫＥＫＱＧＱＹＨＲＤＥＧＷＫＷＧＧＣＳＡＤＩＲＹＧＩＧＦＡＫＶＦＶＤＡＲＥＩＫＱＮＡＲＴＬＭＮＬＨＮＮＥＡＧＲＫＩＬＥＥＮＭＫＬＥＣＫＣＨＧＶＳＧＳＣＴＴＫＴＣＷＴＴＬＰＱＦＲＥＬＧＹＶＬＫＤＫＹＮＥＡＶＨＶＥＰＶＲＡＳＲＮＫＲＰＴＦＬＫＩＫＫＰＬＳＹＲＫＰＭＤＴＤＬＶＹＩＥＫＳＰＮＹＣＥＥＤＰＶＴＧＳＶＧＴＱＧＲＡＣＮＫＴＡＰＱＡＳＧＣＤＬＭＣＣＧＲＧＹＮＴＨＱＹＡＲＶＷＱＣＮＣＫＦＨＷＣＣＹＶＫＣＮＴＣＳＥＲＴＥＭＹＴＣＫ（遺伝子バンクアクセス番号：ＢＣ００８８１１；配列ＩＤ番号：７）。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、遺伝子バンクアクセス番号：ＮＭ＿００４６２５、Ｄ８３１７５、Ｕ５３４７６またはＮＰ＿００４６１６に記載されている配列を有する。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ７タンパク質である。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ７ａポリペプチドである。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ１ポリペプチドである。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ３ポリペプチドである。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ１０タンパク質である。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ１０ａタンパク質である。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、Ｗｎｔ１０ｂタンパク質である。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、上記の遺伝子バンク登録番号の１つに記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドの生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、Ｗｎｔ７タンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。他の実施形態では、Ｗｎｔ７ａタンパク質の生物活性断片が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００８５】
他の実施形態では、本発明の方法は、一実施形態ではＮ−Ｓｈｈ（分解産物）、Ｎ−Ｓｈｈ−ＣｈｏｌであるＳＨＨシグナル伝達経路の１以上のメンバーを刺激する。前記メンバーは、一実施形態ではＰｔｃｈ１及びＰｔｃｈ２を抑制し、一実施形態ではスムースンドタンパク質を抑止し、一実施形態ではＧＬＩ１を刺激し、一実施形態では他の遺伝子（一実施形態ではＧＬＩ−１、ＰＴＣ１、ＨＮＦ３β）、ＧＬＩ−２及びＧＬＩ−３の転写を促進し、一実施形態では他の遺伝子の転写を抑制する。したがって、一実施形態では、ＦＧＦ９の活性化によるＳＨＨの増加は、スムースンドタンパク質上のパッチされたタンパク質の持続的抑制を軽減する。また、ＧＬＩ−１のレベルの増加は、遺伝子転写の促進をもたらす。
【００８６】
他の実施形態では、本発明の方法は、一実施形態では、フリズルド（Frizzled）、ＳＦＲＰ、ディシブルド（Dishevelled：Ｄｓｈ）、ＴＣＦ、ＬＲＰ、ＡＰＣ、β−カテニン、クシン（Axin）、ディックコプフ（Dickkopf）、ＧＳＫ３、ネイキッド（Naked）、ポーキュパイン（Porcupine）またはＦＲＡＴ／ＧＢＰである、Ｗｎｔシグナル伝達経路の１以上のメンバーを刺激する。
【００８７】
他の実施形態では、Ｗｎｔ経路は、ヘッジホッグ経路の前に刺激される。他の実施形態では、前記２つの経路は、重複方法（overlapping fashion）で刺激される。他の実施形態では、前記２つの経路は、同時に刺激される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００８８】
他の実施形態では、本発明の転写物及びタンパク質の相同体及び変異体は、本発明の方法において投与される。他の実施形態では、本発明の転写物及びタンパク質の相同体及び変異体は、本発明の方法において標的にされる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００８９】
「相同」、「相同性」等の用語は、タンパク質やペプチドに関する場合、一実施形態では、最大割合の相同を達成するために配列を整列させ必要に応じて間隙を導入した後の、候補配列におけるアミノ酸残余が対応する天然ポリペプチドのアミノ酸残余と一致する割合を意味する（配列同一性の一部としての同類置換は考慮しない）。前記整列のための方法及びコンピュータプログラムは、当該技術分野では公知である。
【００９０】
他の実施形態では、「相同」なる用語は、核酸配列に関する場合、同様に、候補配列におけるヌクレオチドが対応する天然核酸配列のヌクレオチドと一致する割合を示す。
【００９１】
他の実施形態では、「相同」は、７０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、７５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８２％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、８７％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９０％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９２％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９５％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９７％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９８％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、９９％以上の一致を意味する。他の実施形態では、「相同」は、１００％以上の一致を意味する。
【００９２】
本明細書中に記載された任意のアミノ酸配列に対するタンパク質及び／またはペプチドの相同は、一実施形態では、イムノブロット解析、または、任意のソフトウェア・パッケージを使用して行うアミノ酸配列のコンピュータアルゴリズム分析などの当該技術分野で公知の確立した手法によって測定される。前記ソフトウェア・パッケージとしては、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、ＭＰｓｒｃｈ、またはＳｃａｎｐｓパッケージなどがあり、スミス‐ウォーターマン（Smith‐Waterman）アルゴリズム、あるいはグローバル／ローカルまたはブロックアライメントなどを使用することができる。相同測定の各方法は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００９３】
一実施形態では、「ペプチド」なる用語は、天然型ペプチド（分解産物、合成ペプチド、組み換え型ペプチドなど）と、ペプチド類似体であるペプトイド及びセミペプトイドなどの模倣ペプチド（通常は、合成によって作られたペプチド）を含む。ペプチド類似体は、例えば、ペプチドが体内でより安定したり、細菌細胞により容易に貫通したりすることができるように修飾されている場合がある。このような修飾には、これらに限定しないが、Ｎ末端修飾、Ｃ末端修飾、ペプチド結合修飾、バックボーン修飾、及び残基修飾が含まれる。前記ペプチド結合修飾には、これらに限定しないが、ＣＨ２−ＮＨ、ＣＨ２−Ｓ、ＣＨ２−Ｓ＝Ｏ、Ｏ＝Ｃ−ＮＨ、ＣＨ２−Ｏ、ＣＨ２−ＣＨ２、Ｓ＝Ｃ−ＮＨ、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＦ＝ＣＨが含まれる。模倣ペプチド化合物を作成する方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、非特許文献１に記載されている（非特許文献１の全体の内容は、この参照により本明細書に組み込まれるものとする）。
【００９４】
ペプチド内のペプチド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）は、例えば、Ｎ−メチル化結合（−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−）、エステル結合（−Ｃ（Ｒ）Ｈ−Ｃ−Ｏ−Ｏ−Ｃ（Ｒ）−Ｎ−）、ケトメチレン結合（−ＣＯ−ＣＨ２−）、α−アザ結合（−ＮＨ−Ｎ（Ｒ）−ＣＯ−）（ただし、Ｒは任意のアルキルであり、例えばメチルである）、カルバ結合（−ＣＨ２−ＮＨ−）、ヒドロキシエチレン結合（−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−）、チオアミド結合（−ＣＳ−ＮＨ−）、オレフィン性二重結合（−ＣＨ＝ＣＨ−）、レトロアミド結合（−ＮＨ−ＣＯ−）、ペプチド誘導体（−Ｎ（Ｒ）−ＣＨ２−ＣＯ−）（ただし、Ｒは、炭素原子上に天然に存在する「通常の」側鎖である）によって置換することができる。
【００９５】
これらの修飾は、ペプチド鎖に沿った任意の結合部において発生することができ、同時に複数（２〜３）発生することさえある。
【００９６】
天然の芳香族アミノ酸、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ及びＰｈｅは、例えばＴＩＣ、ナフチルアラニン（Ｎｏｌ）、Ｐｈｅの環状メチル化誘導体、Ｐｈｅのハロゲン化誘導体、またはｏ−メチル−Ｔｙｒなどの人工の非天然酸に置換され得る。
【００９７】
上記に加えて、本発明のペプチドは、１以上の修飾されたアミノ酸、または１以上の非アミノ酸モノマー（例えば、脂肪酸、複合炭水化物など）も含み得る。
【００９８】
ここで使用される「アミノ酸」なる用語は、２０個の自然発生的アミノ酸と、他の異常アミノ酸を含むと理解されたい。前記自然発生的アミノ酸は、多くの場合は翻訳後にインビボで修飾され、例えば、ヒドロキシプロリン、ホスホセリン、及びホスホスレオニンが含まれる。前記異常アミノ酸は、これらに限定しないが、２−アミノアジピン酸、ヒドロキシリジン、イソデスモシン、ノルバリン、ノルロイシン、及びオルニチンを含む。さらに、「アミノ酸」なる用語は、Ｄ−アミノ酸とＬ−アミノ酸の両方を含む。
【００９９】
他の実施形態では、当該技術分野で公知の自然発生的アミノ酸及び非従来的なまたは修飾されたアミノ酸を本発明に使用することができる。
【０１００】
他の実施形態では、本発明は、本発明の方法を実施するのに適した道具及び／または化合物を含んでいるキットを提供する。
【０１０１】
他の実施形態では、本発明は、表皮破壊に適した道具、及び、ＳＨＨの発現を上方制御する化合物または因子を送達するための手段を含んでいる装置を提供する。
【０１０２】
本発明には、単離された核酸を投与するステップを含む方法が含まれることを理解されたい。単離された核酸は、一実施形態では、本発明のポリペプチドをコードしているベクターまたはプラスミドであり、それらは、一実施形態では、繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド、ＳＨＨ、Ｗｎｔ、Ｐｔｃｈｌ、Ｐｔｃｈ２、Ｇｌｉ１またはＧｌｉ２、あるいはそれらのベクターを含む組成物である。
【０１０３】
一実施形態では、本発明の方法に使用するための、本発明のポリペプチドをコードしている単離された核酸が提供される。
【０１０４】
一実施形態では、「単離された核酸」は、自然に存在する状態でそれを挟む配列から分離された核酸セグメントまたは断片を指し、例えば、通常は前記断片に隣接する配列（例えば自然に存在するゲノム中で前記断片に隣接する配列）が除去されたＤＮＡ断片を指す。また、この用語は、核酸に自然に付随する他の成分、例えば細胞中で自然に付随するＲＮＡまたはＤＮＡまたはタンパク質から実質的に精製された核酸配列にも適用される。したがって、この用語は、例えば、ベクターに組み込まれた、自律的に複製するプラスミド若しくはウイルスに組み込まれた、または原核若しくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれた、あるいは他の配列から独立して別個の分子として存在する（例えば、ｃＤＮＡまたはＰＣＲ若しくは制限酵素消化により生成されたゲノム若しくはｃＤＮＡ断片として）組換えＤＮＡを含む。また、この用語は、さらなるポリペプチド配列をコードしているハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡも含む。
【０１０５】
一実施形態では、本発明は、本発明の単離された核酸またはベクターを含んでいる細胞を提供する。
【０１０６】
本発明の２つのポリヌクレオチドは機能的に連結されている。例えば、一実施形態では、ＦＧＦ９及びＷｎｔをコードしているポリヌクレオチドが機能的に連結されている。一実施形態では、「機能的に連結されている」とは、一本鎖または二本鎖の核酸部分に、２つのポリヌクレオチドが、互いに発現するような様態で配列されることを意味する。一例としては、遺伝子のコード領域に機能的に連結されたプロモータは、前記コード領域の転写を促進することができる。
【０１０７】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、プロモータ／制御配列を含んでいる。一実施形態では、プロモータ／制御配列は、細胞内で所望のタンパク質の発現を促進するように、所望のタンパク質をコードしている配列の５´端部に位置される。つまり、所望のタンパク質をコードしている核酸とそのプロモータ／制御配列は、「トランス遺伝子」を含んでいる。
【０１０８】
一実施形態では、「プロモータ／制御配列」なる用語は、プロモータ／制御配列に機能的に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を意味する。ある場合では、この配列はコアプロモータ配列であり、他の場合では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要とされる別の制御要素を含み得る。プロモータ／制御配列は、例えば、組織特異的な様態で遺伝子産物を発現させるものであり得る。一実施形態では、本発明に使用されるプロモータは、構成的または誘導的であり得る。他の実施形態では、本発明に使用されるプロモータは、組織特異的であり得る。そのようなプロモータは当該技術分野では公知である。
【０１０９】
他の実施形態では、本発明は、本発明のポリペプチドの投与用の送達媒体を提供する。そのような送達媒体の例は、当該技術分野では公知であり、例えば、本発明のポリペプチドを発現するように遺伝子操作された組み換え型ウイルスまたは細菌などがある。一実施形態では、前記ウイルスまたは細菌は弱毒化されている。一実施形態では、本発明に使用されるウイルスには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなどが含まれる。一実施形態では、前記ウイルスは、任意の公知の血清型またはサブクループのものである。
【０１１０】
一実施形態では、治療剤をコードする外因性核酸断片を標的細胞及び／または組織へ導入するために、当該技術分野で知られているように、ウイルスベクター、プラスミドベクター、線状ＤＮＡなどの様々なベクターのいずれか１つを本発明の方法に使用することができる。これらのベクターは、例えば、感染、形質導入、トランスフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、微粒子銃遺伝子送達、（カチオン性リポソームを使用する代わりに）融合性及びアニオン性リポソームを使用するリポソーム遺伝子送達、直接注入、受容体媒介取込み、マグネトポレーション、超音波、またはこれらの任意の組み合せ、あるいは当該技術分野で公知の他の技術を使用して挿入することができる（さらなる詳細については、例えば、非特許文献４〜６または他の標準実験マニュアルを参照されたい）。目的の配列をコードするポリヌクレオチド断片は、哺乳動物細胞への形質導入及び形質導入された細胞内での組換え産物の発現誘導に適した発現ベクター系の中へ連結させることができる。前記外因性核酸断片の導入は、前記ベクターを微小器官の近傍へ導入することによって達成される。上記に記載の技術または当該技術分野で公知の技術のいずれかを用いて、前記外因性核酸断片が前記細胞に組み込むことにより、前記核酸断片によってコードされた治療物質の生成及び／または分泌速度を定量化することができる。一実施形態では、「外因性」なる用語は、外部に由来する物質、例えば、細胞または組織の外部に由来する核酸を指す。
【０１１１】
一実施形態では、本発明の方法に使用されるベクターは非免疫原性の遺伝子導入剤であり、例えば、非ウイルスベクター（ＤＮＡプラスミド、ミニサークルＤＮＡなど）、「ガットレス（gutless）」、すなわち内存性遺伝子を有さないウイルスベクター（一実施形態では欠失に起因し、他の実施形態では、遺伝子発現を妨げる遺伝子における挿入、置換または欠失に起因する）、ヘルパー依存型アデノウイルス（ＨＤＡｄ）ベクター、またはアデノ関連ウイルスＡＡＶ（一実施形態では一本鎖であり、他の実施形態では二本鎖である）などである。他の実施形態では、前記製剤は、組換え遺伝子発現が微小器官による遺伝子産物の毒性の欠如または免疫媒介拒絶をもたらすように選択される。一実施形態では、前記ベクターはウイルス由来であり、他の実施形態では、前記ベクターはプラスミドである。一実施形態では、ウイルス由来ベクターはアデノウイルス（一実施形態では、ヘルパー依存型アデノウイルスである）に由来し、一方、他の実施形態では、ウイルス由来ベクターはアデノウイルス関連ベクターに由来する。
【０１１２】
一実施形態では、「ベクター」または「発現ベクター」なる用語は、核酸配列を細胞に導入して複製するために、前記核酸配列がその中へ挿入され得る担体分子を指す。一実施形態では、核酸分子は、ある場合には、その後、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドに翻訳されるＲＮＡへ転写される。他の場合では、ＲＮＡ配列は、例えば、アンチセンス分子またはリボザイムの生成においては翻訳されない。一実施形態では、発現ベクターは種々の「制御配列」を含むことができる。前記制御配列は、特定の宿主生物体において作動可能に連結されるコード配列の、転写及び場合により翻訳のために必要な核酸配列を指す。他の実施形態では、ベクターには、複製起点がさらに含まれる。一実施形態では、前記ベクターは、一実施形態では、原核細胞及び真核細胞の両方において増殖することができるシャトルベクターであり得る。あるいは、他の実施形態では、前記ベクターは、選択された生物のゲノムに容易に統合することができるように構築され得る。前記ベクターは、他の実施形態では、例えば、プラスミド、バクミド、ファージミド、コスミド、ファージ、ウイルス、または人工染色体であり得る。一実施形態では、前記ベクターはウイルスベクターであり、一実施形態では、バクテリオファージ、哺乳動物ウイルスまたは植物ウイルスであり得る。
【０１１３】
他の実施形態では、ウイルスベクターは、ワクシニアウイルス、レンチウイルス、ポリオウイルス、肝炎ウイルス、サイトメガロウイルス、シミアンウイルスまたは単純ヘルペスウイルスなどのウイルスに由来する。
【０１１４】
本発明の特定の実施形態では、核酸配列を含んでいるベクターは、裸の組み換え型ＤＮＡまたはプラスミドを含む。前記構築物の導入は、物理的または化学的に細胞膜を透過性にする任意の方法によって行われ得る。一実施形態では、前記ベクターは、ミニサークルＤＮＡであり、一実施形態では、細菌の複製起源も抗生物質抵抗性マーカーも持たない非ウイルス性遺伝子導入のための超らせんＤＮＡ分子である。
【０１１５】
標準的な組み換え技術を用いたベクターの構築は、当該技術分野では公知である（非特許文献２及び３を参照されたい。両文献は、この参照により本明細書に組み込まれるものとする）。
【０１１６】
一実施形態では、本発明の組成物は、上記の物質を含む。一方、他の実施形態では、本発明の組成物は、実質的に上述の物質から構成される。一方、他の実施形態では、本発明の組成物は、上記の物質から構成される。一部の実施形態では、「含む」なる用語は、ヒト繊維芽細胞増殖因子‐９ポリペプチド、ＳＨＨ，Ｗｎｔなどの上述の活性物質、並びに、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、軟化剤、安定剤などの製薬業界では公知の他の活性物質を含有することを意味する。一部の実施形態では、「実質的に構成する」なる表現は、上記の活性成分だけを有効成分として含むが、上記の活性成分の治療効果に直接的には関与しない安定化や保存のために他の化合物も含み得る組成物を指す。一部の実施形態では、「実質的に構成する」なる表現は、活性成分の放出を容易にするための構成要素を指す。一部の実施形態では、「構成する」なる用語は、活性成分及び薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含有する組成物を指す。
【０１１７】
一実施形態では、本発明の方法は、脱毛を治療、抑制または抑止する。一実施形態では、本発明の方法は、脱毛を有する対象において、毛包を形成するか、または毛包の大きさを増大させる。一実施形態では、脱毛は、アンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）に起因する。他の実施形態では、脱毛は、男性型脱毛症に起因する。他の実施形態では、脱毛は、女性型脱毛症に起因する。他の実施形態では、脱毛は、皮膚損傷が原因である。
【０１１８】
他の実施形態では、本発明の方法は、対象の疾病または疾患を治療、抑制または抑止する。一実施形態では、対象は、はげを含む疾病または疾患を有している。他の実施形態では、対象は、禿げを含む疾病または疾患を有してはいない。他の実施形態では、前記疾病または疾患は、アンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）である。他の実施形態では、前記疾病または疾患は、男性型脱毛症である。他の実施形態では、前記疾病または疾患は、女性型脱毛症である。他の実施形態では、前記疾病または疾患は、円板状紅斑性狼瘡である。他の実施形態では、前記疾病または疾患は、先天性乏毛症である。他の実施形態では、前記疾病または疾患は、毛孔性扁平苔癬である。
【０１１９】
他の実施形態では、前記疾病または疾患は、瘢痕化（他の実施形態では、瘢痕性）脱毛症であり、一実施形態では、頭皮領域の瘢痕化に起因する脱毛である。一実施形態では、瘢痕性脱毛症は、一般的に頭皮の頂部に生じ、主に女性に発生する。この症状は、アフリカ系アメリカ人の女性にしばしば生じ、頭毛をきつく編み続ける「コーン巻き」に関連すると考えられている。瘢痕化脱毛症の形態は、毛包の炎症とその後の瘢痕化に関連して、閉経後の女性にも生じる。他の実施形態では、前記疾病または疾患は、当該技術分野で公知の他の禿げを含む疾病または疾患である。
【０１２０】
他の実施形態では、本発明は、円形脱毛症を治療するための方法を提供する。前記円形脱毛症は、一実施形態では、広範囲に渡って薄くなり残った髪が「島状」になる斑状の脱毛を引き起こす自己免疫疾患である。
【０１２１】
他の実施形態では、本発明は、一実施形態では髪の毛を抜く強迫神経症である抜毛癖を治療するための方法を提供する。抜毛症の人は特定領域の髪の毛を集中的に抜く傾向があるので、抜毛癖に起因する脱毛は一般的に斑状である。
【０１２２】
他の実施形態では、本発明は、三角形脱毛症を治療するための方法を提供する。三角形脱毛症は、一実施形態では側頭部の抜毛症であり、場合によっては子供の頃から始まる。この脱毛症は、完全に行われるか、またはわずかの細い髪の毛だけが残る。
【０１２３】
他の実施形態では、本発明は、休止期脱毛症を治療するための方法を提供する。休止期脱毛症は、一実施形態では、頭毛の大部分が「抜け」段階に移行したときに生じる一般的な種類の脱毛症である。休止期脱毛症は、ホルモン、栄養、薬剤またはストレスに関連して生じる。
【０１２４】
他の実施形態では、本発明は、成長期脱毛症を治療するための方法を提供する。成長期脱毛症は、一実施形態では、金髪の人物において主に発生する症状であり、頭毛が毛包内にゆるく座っており、くしを通したとき引っ張ったときに容易に抜けてしまう。
【０１２５】
他の実施形態では、本発明は、頭部白癬を治療するための方法を提供する。頭部白癬は一実施形態では真菌感染症によって引き起こされ、一実施形態では、斑状の落屑に特徴付けられ、広がって髪の毛の破壊、頭皮の発赤、腫れ及び出血をもたらす。
【０１２６】
他の実施形態では、本発明は、特定の状態（癌、甲状腺疾患、食事中のタンパク質不足、血清中鉄値）または特定の環境刺激（化学療法、放射線治療）に関連する脱毛を治療するための方法を提供する。
【０１２７】
他の実施形態では、本発明は、はげに関連する疾病、疾患または症状を治療するための方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、変性皮膚疾患に関連する疾病、疾患または症状を治療するための方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、脱毛症に関連する疾病、疾患または病状を治療するための方法を提供する。各疾病、疾患または症状は、本発明の別個の形態を示す。
【０１２８】
一実施形態では、「治療」は、上述したような標的病態または疾患の予防または軽減を目的とした治療処置または予防措置を意味する。したがって、一実施形態では、治療は、疾病、疾患、病状またはそれらの組み合わせに関連する症状に対しての、直接的な影響、治癒、抑制、抑止、予防、重症度の低減、発病の遅延、症状の軽減を含む。したがって、一実施形態では、「治療」は、とりわけ、進行の遅延、寛解の促進、寛解の誘導、寛解の増大、迅速な回復、他の治療に対する効果の増大または抵抗の低減、あるいはそれらの組み合わせを意味する。一実施形態では、「予防」は、とりわけ、症状の発症遅延、再発の防止、再発の回数または頻度の減少、病状発生間の潜伏期間の長期化、或いはそれらの組み合わせを意味する。一実施形態では、「抑制」または「抑止」は、とりわけ、症状の重症度の低減、現在の症状の重症度の低減、症状の回数の減少、症状の発生率の低減、症状潜伏の低減、症状の改善、二次的症状の減少、二次的感染の減少、またはそれらの組み合わせを意味する。
【０１２９】
一実施形態では、症状は一次的である。一方、他の実施形態では、症状は二次的である。一実施形態では、「一次的」は、脱毛症の直接的な結果である症状を意味する。一方、一実施形態では、「二次的」は、一次的要因に由来するまたは一次的要因の結果として生じた症状を意味する。一実施形態では、本発明に使用する化合物及び株は、脱毛症に関連する一次的若しくは二次的な症状または二次的な合併症（一実施形態では脂漏性皮膚炎）を治療する。
【０１３０】
他の実施形態では、「症状」は、脱毛症の発現であり得、脱毛、禿げ、側頭部の脱毛、斑状の脱毛、変性皮膚疾患またはそれらの組み合わせであり得る。
【０１３１】
脱毛症及び／または変性皮膚疾患の存在及び重症度を測定する方法は、当該技術分野では公知である。各方法は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１３２】
一実施形態では、本発明の方法は、脱毛を有する対象を治療するためのものである。一実施形態では、脱毛は、対象の頭皮において存在する。他の実施形態では、脱毛は、対象の眉において存在する。他の実施形態では、脱毛は、対象の瘢痕化皮膚組織において存在する。瘢痕化皮膚組織は、一実施形態では、対象の頭皮、眉、腕または脚に存在し得る。他の実施形態では、皮膚における他の有毛領域が、本発明の方法により治療される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１３３】
一実施形態では、本発明の方法は、前記投与ステップの前に、脱毛領域の表皮を破壊するステップを含む。他の実施形態では、上皮が破壊される。
【０１３４】
本発明の方法及び組成物の他の実施形態では、第１のステップ（例えば表皮の破壊）は、第２のステップ（例えば、活性化合物、因子、細胞などの添加）の３〜１２日前に行われる。他の実施形態では、前記時間間隔は４〜１２日である。他の実施形態では、前記時間間隔は５〜１２日である。他の実施形態では、前記時間間隔は４〜１１日である。他の実施形態では、前記時間間隔は６〜１１日である。他の実施形態では、前記時間間隔は６〜１０日である。他の実施形態では、前記時間間隔は６〜９日である。他の実施形態では、前記時間間隔は６〜８日である。他の実施形態では、前記時間間隔は７〜８日である。他の実施形態では、前記時間間隔は５〜１１日である。他の実施形態では、前記時間間隔は５〜１０日である。他の実施形態では、前記時間間隔は７〜１０日である。他の実施形態では、前記時間間隔は約１週間である。他の実施形態では、本発明の方法に使用される前記組成物は、一実施形態では表皮破壊後の３〜１２日後である、治癒のための痂皮形成の開始時に適用される。一実施形態では、本発明の方法に使用される前記組成物は、かさぶたを剥がした１日後に適用され、他の実施形態ではかさぶたを剥がした２日後に、他の実施形態ではかさぶたを剥がした３日後に、他の実施形態ではかさぶたを剥がした４日後に、他の実施形態ではかさぶたを剥がした５日後に、他の実施形態ではかさぶたを剥がした６日後に、他の実施形態ではかさぶたを剥がした７日後に適用される。他の実施形態では、本発明の方法に使用される前記組成物は、かさぶたを剥がした１〜４日後に投与される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１３５】
一実施形態では、前記破壊するステップは、脱毛領域を物理的、化学的若しくは光学的刺激に曝すことにより行われる。一実施形態では、前記光学的刺激は放射線である。
【０１３６】
本発明の方法における表皮を破壊するステップは、他の実施形態では、対象の皮膚領域を剥離することにより行われる。他の実施形態では、「剥離する（abrading）」なる用語は、表皮を剥離する行為を意味する。他の実施形態では、「剥離する」なる用語は、こすることを意味する。他の実施形態では、「剥離する」なる用語は、摩擦によってすり減らすことを意味する。一実施形態では、表皮剥離は、ここで使用される条件下で、新たにＨＦ再生を引き起こす。他の実施形態では、表皮層が破壊される。
【０１３７】
一実施形態では、「剥離（abrasion）」は、皮膚に対する表面的な損傷からなる創傷を意味する。他の実施形態では、「剥離」は、頭皮または皮膚における皮膚が除去された領域を意味する。他の実施形態では、「剥離」は、頭皮または皮膚における表皮及び真皮が除去された領域を意味する。「剥離する」及び「剥離」の各定義は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１３８】
一実施形態では、本明細書中で説明されるように、使用される条件下で、本発明の方法による表皮破壊は、対象とする皮膚領域を、毛包が再生される胚期様状態（embryonic-like state）に変換する。他の実施形態では、前記変換後に、対象とする皮膚領域の新しいＨＦの数及び大きさを操作することが可能な機会が得られる。他の実施形態では、前記機会の間に、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物または因子を投与することによって、より大きい及びより多数のＨＦの再生を引き起こすことができる。一実施形態では、剥離された皮膚におけるＨＦの形態は、胚期のＨＦの形態と類似しており、発現したマーカーも同様に類似している。
【０１３９】
他の実施形態では、本発明の方法における切除創傷は、手術道具を使用して作成される。一実施形態では、前記手術道具は、皮膚生検パンチである。他の実施形態では、前記切除創傷は、冷凍処理または冷凍損傷（cryoinjury）によって作成される。冷凍処理または冷凍損傷を用いることは当該技術分野では公知であり、例えば、皮膚専門医によって皮膚を傷つけるのに使用される。一実施形態では、冷凍処理または冷凍損傷は、水膨れを形成する。他の実施形態では、前記水脹れは、再上皮化領域に薬剤あるいは細胞を導入ための「チャンバー（chamber）」として使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１４０】
他の実施形態では、本発明の方法における表皮破壊は、目標の皮膚領域から真皮組織をさらに除去する。他の実施形態では、表皮破壊は、目標の皮膚領域から真皮組織を除去しない。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１４１】
表皮または表皮層の「破壊」は、他の実施形態では、表皮または表皮層の一部を除去することを意味する。他の実施形態では、破壊なる用語は、表皮または表皮層の無傷部分を破壊することを意味する。他の実施形態では、破壊なる用語は、表皮または表皮層を穿孔することを意味する。他の実施形態では、表皮層の一部だけを除去する。他の実施形態では、表皮層全体を除去する。他の実施形態では、破壊なる用語は、表皮または表皮層を剥離することを意味する。他の実施形態では、破壊なる用語は、表皮または表皮層に創傷を形成することを意味する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１４２】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、サンドペーパーを含む道具によって行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、レーザーによって行われる。他の実施形態では、前記レーザーは、フラクセルレーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、ＣＯ２レーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、エキシマレーザーである。他の実施形態では、前記レーザーは、経上皮損傷の誘導が可能な他の種類のレーザーである。他の実施形態では、前記表皮破壊は、フェルトホイールを使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、手術道具を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、当該技術分野で公知の他の表皮破壊が可能な道具を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、マイクロ皮膚剥離装置を使用して行われる。他の実施形態では、前記表皮破壊は、熱傷処置を含む。
【０１４３】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、前記表皮の毛包の破壊と、前記表皮の毛包間領域の破壊とを含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、前記表皮の毛包の破壊を含むが、前記表皮の毛包間領域の破壊は含まない。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１４４】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、光線ベースの方法を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、可視光線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、赤外線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、紫外線の照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、常用電圧照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、Ｘ線照射を含む。他の実施形態では、前記表皮破壊は、当該技術分野で公知の他の種類の照射を含む。
【０１４５】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、機械的手段を用いて行われる。他の実施形態では、「機械的手段」は、剥離形成を指す。他の実施形態では、前記用語は、創傷形成を指す。他の実施形態では、前記用語は、超音波を指す。他の実施形態では、前記用語は、無線周波数を指す。他の実施形態では、前記用語は、ａｂ電気処理、または電流の使用を指す。他の実施形態では、前記用語は、エレクトロポレーションを指す。他の実施形態では、前記用語は、切除を指す。他の実施形態では、前記用語は、テープストリッピングを指す。他の実施形態では、前記用語は、マイクロ皮膚剥離を指す。他の実施形態では、前記用語は、ピール（peel）の使用を指す。他の実施形態では、前記用語は、当該技術分野で公知の他の種類の機械的手段を指す。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１４６】
他の実施形態では、前記表皮破壊は、化学薬品による処理を含む。他の実施形態では、前記化学薬品は、フェノールである。他の実施形態では、前記化学薬品は、トリクロロ酢酸である。他の実施形態では、前記化学薬品は、アスコルビン酸である。他の実施形態では、前記化学薬品は、当該技術分野で公知の他の化学薬品である。
【０１４７】
他の実施形態では、表皮外傷が、本発明の方法に用いられる。
【０１４８】
表皮崩壊、剥離及び外傷の各種類は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１４９】
一実施形態では、「ＷＩＨＮ」は、上皮層の破壊によって引き起こされたＨＦ再生を意味する。他の実施形態では、この用語は、剥離によって引き起こされたＨＦ再生を意味する。他の実施形態では、この用語は、創傷形成によって引き起こされたＨＦ再生を意味する。他の実施形態では、この用語は、上皮層を破壊した後、中立表皮細胞のＨＦ細胞への分化を促進する化合物または因子を投与することによって引き起こされたＨＦ再生を意味する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５０】
他の実施形態では、本発明の方法の表皮の破壊は、少なくとも約１〜１．５ｃｍの幅の剥離を形成する。他の実施形態では、前記剥離の幅は少なくとも約１ｃｍである。他の実施形態では、前記剥離の幅は少なくとも約１．５ｃｍである。他の実施形態では、前記剥離の幅は少なくとも約２ｃｍである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５１】
他の実施形態では、本発明の方法の切除創傷は、手術で縫合されない。他の実施形態では、前記切除創傷は、二次的治癒によって治癒される。他の実施形態では、前記目標とする皮膚領域は、表皮破壊の後、絆創膏または包帯と接触されない。他の実施形態では、前記目標とする皮膚領域は、表皮破壊の後、軟膏と接触されない。他の実施形態では、前記目標とする皮膚領域は、治癒を促進するために剥離または創傷形成に通常使用される物質、デバイス、軟膏などと接触させない状態で、一定期間に渡って治癒させる。他の実施形態では、前記目標とする皮膚領域は、剥離または創傷の感染を防止するために、剥離または創傷形成に通常使用される物質、デバイス、軟膏などと接触させない状態で、一定期間に渡って治癒させる。他の実施形態では、「一定期間」は、表皮破壊の治癒に要する時間である。他の実施形態では、前記一定期間は、２日〜３週間の任意の時間長さまたは範囲の期間である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５２】
一実施形態では、「後（following）」は、約２日後を意味する。一実施形態では、「後」は、約３日後を意味する。一実施形態では、「後」は、約４日後を意味する。一実施形態では、「後」は、約５日後を意味する。一実施形態では、「後」は、約７日後を意味する。一実施形態では、「後」は、約１０日後を意味する。一実施形態では、「後」は、約２週間後を意味する。一実施形態では、「後」は、約３週間後を意味する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５３】
他の実施形態では、本発明の方法は、皮膚における発毛すなわち毛包形成が所望される領域を除毛するステップをさらに含む。一実施形態では、前記除毛するステップは、前記表皮破壊ステップの前に行われる。
【０１５４】
他の実施形態では、除毛は、脱毛（epilation）である。他の実施形態では、除毛は、ワックス脱毛するステップを含む。他の実施形態では、除毛は、プラッキング（plucking）するステップを含む。他の実施形態では、除毛は、研磨材の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、レーザーの使用を含む。他の実施形態では、除毛は、電気分解の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、機械装置の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、チオグリコール酸の使用を含む。他の実施形態では、除毛は、当該技術分野で公知の他の除毛または脱毛方法の使用を含む。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５５】
他の実施形態では、前記追加的ステップ（除毛またはレチノイドの投与）は、表皮を破壊するステップの前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、表皮を破壊するステップの後、かつ本発明の化合物または因子を添加する前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、分化を促進する化合物または因子の添加と同時に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、分化を促進する化合物または因子を添加した後に行われる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５６】
他の実施形態では、本発明の方法は、対象とする皮膚領域に、局所レチノイドを投与するステップをさらに含む。一実施形態では、前記局所レチノイドは、対象とする皮膚領域における休止中（休止期）のＨＦを成長期に誘導する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５７】
他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約２日〜約３週間前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約２日前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約３日前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約４日前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約１週間前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約１０日前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約２週間前に行われる。他の実施形態では、前記追加的ステップは、前記剥離ステップの約３週間前に行われる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１５８】
一実施形態では、本発明の方法は、アンドロゲンのアンタゴニストまたはアンドロゲン受容体のアンタゴニストを投与するステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明の方法は、５α還元酵素ＩＩ型阻害剤を投与するステップをさらに含む。
【０１５９】
他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、抗アンドロゲン化合物を接触させるステップをさらに含む。一実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、フィナステライドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、フルリジル（Fluridil）（登録商標）である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、デュタステライドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、スピロノラクトンである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、酢酸シプロテロンである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、ビカルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、フルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、ニルタミドである。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、アンドロゲン受容体の阻害剤である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物は、当該技術分野で公知の他の抗アンドロゲン化合物である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６０】
他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、エストロゲン化合物を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、エストロゲン受容体アゴニストを接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、エストロゲン類似体を接触させるステップをさらに含む。一実施形態では、前記エストロゲン類似体は、エストラジオールである。他の実施形態では、前記エストロゲン類似体は、１７βエストラジオールである。他の実施形態では、前記エストロゲン類似体は、１７αエストラジオールである。他の実施形態では、前記エストロゲン類似体は、ＺＹＣ３である。他の実施形態では、前記抗アンドロゲン化合物、エストロゲン受容体アゴニスト、またはエストロゲン類似体は、当該技術分野で公知の他の抗アンドロゲン化合物、エストロゲン受容体アゴニスト、またはエストロゲン類似体である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６１】
他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、ＥＧＦタンパク質の阻害剤を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、ＥＧＦＲの阻害剤を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、ＥＧＦタンパク質またはＥＧＦＲの発現を減少させる化合物を接触させるステップをさらに含む。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６２】
他の実施形態では、ＥＧＦまたはＥＧＦ受容体の阻害剤は、パニツムマブ（panitumumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＡＧ１４７８である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ニモツズマブ（nimotuzumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＥＧＦまたはＥＧＦＲと結合する抗体である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＨｕＭａｘ ＥＧＦＲ（登録商標）（Genmab, Copenhagen, Denmark）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、セツキシマブ（cetuximab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＩＭＣ １１Ｆ８である。他の実施形態では、前記阻害剤は、マツズマブ（matuzumab）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＳＣ １００である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＡＬＴ １１０である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＰＸ １０３２である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＢＭＳ ５９９６２６である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＭＤＸ ２１４である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＰＸ １０４１である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他のＥＧＦまたはＥＧＦ受容体の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６３】
他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、ＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性を阻害する阻害剤を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記阻害剤は、ゲフィチニブ（gefitinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、エルロチニブ（erlotinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、カナーニチブ（canertinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、レフルノミド（leflunomide）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、Ａ７７ １７２６である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ペリニチブ（pelitinib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＺＤ １８３９である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＣＬ ３８７７８５である。他の実施形態では、前記阻害剤は、ＥＫＩ ７８５である。他の実施形態では、前記阻害剤は、バンデタニブ（vandetanib）である。他の実施形態では、前記阻害剤は、当該技術分野で公知の他のＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性の阻害剤である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６４】
他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、ＥＧＦまたはＥＧＦ受容体のアンタゴニストを接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ポテト（ＰＣＩ）タンパク質またはその相同体、断片若しくは類似体に由来するカルボキシペプチダーゼ阻害剤である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、スプラウティ（Sprouty）タンパク質またはその相同体、断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、アルゴス（Argos）タンパク質またはその相同体、断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、レフティ（lefty）タンパク質またはその相同体、断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦまたはＥＧＦＲを識別する抗体またはその断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦまたはＥＧＦＲと結合してその活性を減少させる小分子阻害剤である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＣＲＭ１９７である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＩＭＣ−Ｃ２２５（ImClone Systems, New York, NY）である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、当該技術分野で公知の他のＥＧＦまたはＥＧＦＲのアンタゴニストである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６５】
他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ポテト（ＰＣＩ）タンパク質由来のカルボキシペプチダーゼ阻害剤またはその相同体、断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、スプラウティ（Sprouty）タンパク質またはその相同体、断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、アルゴス（Argos）タンパク質またはその相同体、断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、レフティ（lefty）タンパク質またはその相同体、断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦまたはＥＧＦＲを識別する抗体またはその断片若しくは類似体である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＥＧＦまたはＥＧＦＲと結合してその活性を減少させる小分子阻害剤である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＣＲＭ１９７である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、ＩＭＣ−Ｃ２２５（ImClone Systems, New York, NY）である。他の実施形態では、前記ＥＧＦまたはＥＧＦＲアンタゴニストは、当該技術分野で公知の他のＥＧＦまたはＥＧＦＲのアンタゴニストである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６６】
本発明の方法及び組成物の前記ＥＧＦＲは、他の実施形態では、次の配列を有する。
【０１６７】
ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲＡＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭＲＲＲＨＩＶＲＫＲＴＬＲＲＬＬＱＥＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＴＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧＦＦＳＳＰＳＴＳＲＴＰＬＬＳＳＬＳＡＴＳＮＮＳＴＶＡＣＩＤＲＮＧＬＱＳＣＰＩＫＥＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰＴＧＡＬＴＥＤＳＩＤＤＴＦＬＰＶＰＥＹＩＮＱＳＶＰＫＲＰＡＧＳＶＱＮＰＶＹＨＮＱＰＬＮＰＡＰＳＲＤＰＨＹＱＤＰＨＳＴＡＶＧＮＰＥＹＬＮＴＶＱＰＴＣＶＮＳＴＦＤＳＰＡＨＷＡＱＫＧＳＨＱＩＳＬＤＮＰＤＹＱＱＤＦＦＰＫＥＡＫＰＮＧＩＦＫＧＳＴＡＥＮＡＥＹＬＲＶＡＰＱＳＳＥＦＩＧＡ（遺伝子バンクアクセス番号：ＮＭ＿００５２２８；配列ＩＤ番号：８）。他の実施形態では、ＥＧＦＲは、遺伝子バンク登録番号：ＮＭ＿２０１２８２、ＮＭ＿２０１２８３、ＮＭ＿２０１２８４、ＢＣ０９４７６１、ＡＦ２８８７３８、ＡＹ５８８２４６、ＡＹ５７３０６１、Ｘ１７０５４、ＡＦ１２５２５３、Ｕ４８７２２、Ｋ０３１９３及びＡＹ６９８０２４に記載されている配列から選択された配列を有する。他の実施形態では、ＥＧＦＲは、上記の遺伝子バンク登録番号の１つに記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、ＥＧＦＲの生物活性断片が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１６８】
本発明の方法及び組成物の前記ＥＧＦは、他の実施形態では、次の配列を有する。
【０１６９】
ＭＬＬＴＬＩＩＬＬＰＶＶＳＫＦＳＦＶＳＬＳＡＰＱＨＷＳＣＰＥＧＴＬＡＧＮＧＮＳＴＣＶＧＰＡＰＦＬＩＦＳＨＧＮＳＩＦＲＩＤＴＥＧＴＮＹＥＱＬＶＶＤＡＧＶＳＶＩＭＤＦＨＹＮＥＫＲＩＹＷＶＤＬＥＲＱＬＬＱＲＶＦＬＮＧＳＲＱＥＲＶＣＮＩＥＫＮＶＳＧＭＡＩＮＷＩＮＥＥＶＩＷＳＮＱＱＥＧｎＴＶＴＤＭＫＧＮＮＳＨＩＬＬＳＡＬＫＹＰＡＮＶＡＶＤＰＶＥＲＦＩＦＷＳＳＥＶＡＧＳＬＹＲＡＤＬＤＧＶＧＶＫＡＬＬＥＴＳＥＫＩＴＡＶＳＬＤＶＬＤＫＲＬＦＷＩＱＹＮＲＥＧＳＮＳＬＩＣＳＣＤＹＤＧＧＳＶＨＩＳＫＨＰＴＱＨＮＬＦＡＭＳＬＦＧＤＲＩＦＹＳＴＷＫＭＫＴＩＷＩＡＮＫＨＴＧＫＤＭＶＲＩＮＬＨＳＳＦＶＰＬＧＥＬＫＶＶＨＰＬＡＱＰＫＡＥＤＤＴＷＥＰＥＱＫＬＣＫＬＲＫＧＮＣＳＳＴＶＣＧＱＤＬＱＳＨＬＣＭＣＡＥＧＹＡＬＳＲＤＲＫＹＣＥＤＶＮＥＣＡＦＷＮＨＧＣＴＬＧＣＫＮＴＰＧＳＹＹＣＴＣＰＶＧＦＶＬＬＰＤＧＫＲＣＨＱＬＶＳＣＰＲＮＶＳＥＣＳＨＤＣＶＬＴＳＥＧＰＬＣＦＣＰＥＧＳＶＬＥＲＤＧＫＴＣＳＧＣＳＳＰＤＮＧＧＣＳＱＬＣＶＰＬＳＰＶＳＷＥＣＤＣＦＰＧＹＤＬＱＬＤＥＫＳＣＡＡＳＧＰＱＰＦＬＬＦＡＮＳＱＤＩＲＨＭＨＦＤＧＴＤＹＧＴＬＬＳＱＱＭＧＭＶＹＡＬＤＨＤＰＶＥＮＫＩＹＦＡＨＴＡＬＫＷＩＥＲＡＮＭＤＧＳＱＲＥＲＬＩＥＥＧＶＤＶＰＥＧＬＡＶＤＷＩＧＲＲＦＹＷＴＤＲＧＫＳＬＩＧＲＳＤＬＮＧＫＲＳＫＩＩＴＫＥＮＩＳＱＰＲＧＩＡＶＨＰＭＡＫＲＬＦＷＴＤＴＧＩＮＰＲＩＥＳＳＳＬＱＧＬＧＲＬＶＩＡＳＳＤＬＩＷＰＳＧＩＴＩＤＦＬＴＤＫＬＹＷＣＤＡＫＱＳＶＩＥＭＡＮＬＤＧＳＫＲＲＲＬＴＱＮＤＶＧＨＰＦＡＶＡＶＦＥＤＹＶＷＦＳＤＷＡＭＰＳＶＩＲＶＮＫＲＴＧＫＤＲＶＲＬＱＧＳＭＬＫＰＳＳＬＶＶＶＨＰＬＡＫＰＧＡＤＰＣＬＹＱＮＧＧＣＥＨＩＣＫＫＲＬＧＴＡＷＣＳＣＲＥＧＦＭＫＡＳＤＧＫＴＣＬＡＬＤＧＨＱＬＬＡＧＧＥＶＤＬＫＮＱＶＴＰＬＤＩＬＳＫＴＲＶＳＥＤＮＩＴＥＳＱＨＭＬＶＡＥＩＭＶＳＤＱＤＤＣＡＰＶＧＣＳＭＹＡＲＣＩＳＥＧＥＤＡＴＣＱＣＬＫＧＦＡＧＤＧＫＬＣＳＤＩＤＥＣＥＭＧＶＰＶＣＰＰＡＳＳＫＣＩＮＴＥＧＧＹＶＣＲＣＳＥＧＹＱＧＤＧＩＨＣＬＤＩＤＥＣＱＬＧＶＨＳＣＧＥＮＡＳＣＴＮＴＥＧＧＹＴＣＭＣＡＧＲＬＳＥＰＧＬＩＣＰＤＳＴＰＰＰＨＬＲＥＤＤＨＨＹＳＶＲＮＳＤＳＥＣＰＬＳＨＤＧＹＣＬＨＤＧＶＣＭＹＩＥＡＬＤＫＹＡＣＮＣＶＶＧＹＩＧＥＲＣＱＹＲＤＬＫＷＷＥＬＲＨＡＧＨＧＱＱＱＫＶＩＶＶＡＶＣＶＶＶＬＶＭＬＬＬＬＳＬＷＧＡＨＹＹＲＴＱＫＬＬＳＫＮＰＫＮＰＹＥＥＳＳＲＤＶＲＳＲＲＰＡＤＴＥＤＧＭＳＳＣＰＱＰＷＦＶＶＩＫＥＨＱＤＬＫＮＧＧＱＰＶＡＧＥＤＧＱＡＡＤＧＳＭＱＰＴＳＷＲＱＥＰＱＬＣＧＭＧＴＥＱＧＣＷＩＰＶＳＳＤＫＧＳＣＰＱＶＭＥＲＳＦＨＭＰＳＹＧＴＱＴＬＥＧＧＶＥＫＰＨＳＬＬＳＡＮＰＬＷＱＱＲＡＬＤＰＰＨＱＭＥＬＴＱ（遺伝子バンクアクセス番号：ＮＭ＿００１９６３；配列ＩＤ番号：９）。他の実施形態では、ＥＧＦは、遺伝子バンク登録番号：ＢＣ０９３７３１、ＡＹ５４８７６２及びＸ０４５７１に記載されている配列から選択された配列を有する。他の実施形態では、ＥＧＦは、上記の遺伝子バンク登録番号の１つに記載されている配列を有する核酸分子によってコードされている。他の実施形態では、ＥＧＦの生物活性断片が本発明の方法に使用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１７０】
他の実施形態では、本発明の方法は、目標の皮膚領域に、ヘッジホッグタンパク質を接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、目標の皮膚領域に、ヘッジホッグタンパク質をコードするヌクレオチドを接触させるステップをさらに含む。他の実施形態では、目標の皮膚領域に、ヘッジホッグタンパク質の活性剤を接触させるステップをさらに含む。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１７１】
一実施形態では、本発明の方法は、５α還元酵素ＩＩ型阻害剤を投与するステップをさらに含む。５α還元酵素ＩＩ型阻害剤は、一実施形態ではフィナステライドであり、他の実施形態ではツロステライド（turosteride）である。
【０１７２】
他の実施形態では、本発明の方法は、還元酵素阻害剤を投与するステップをさらに含む。還元酵素阻害剤は、一実施形態ではＦＣＥ二重阻害剤（一実施形態では、ＦＣＥ ２８２６０；ＦＣＥ ２８１７５またはＦＣＥ ２７８３７）であり、他の実施形態ではＭＫ阻害剤（一実施形態ではＭＫ ０４３４、ＭＫ ０９６３またはＭＫ ３８６）であり、他の実施形態ではＦＫ非ステロイド性阻害剤（一実施形態ではＦＫ １４３）であり、他の実施形態ではＬＹ非ステロイド性阻害剤（一実施形態ではＬＹ １９１７０４）であり、他の実施形態ではＳＫ＆Ｆ阻害剤（一実施形態ではＳＫ＆Ｆ １０５６５７）である。
【０１７３】
他の実施形態では、本発明の方法は、追加の組成物を投与するステップをさらに含む。一実施形態では、前記組成物は、デュタステライド（Dutasteride）（Avodart（登録商標）、ＧＩ１９８７４５）、ファイナステライド（Finasteride）（Propecia（登録商標）、Proscar（登録商標））、ツロステライド、アゼライン酸、硫酸亜鉛、ＣＳ ８９１またはそれらの組み合わせである。
【０１７４】
他の実施形態では、本発明の方法は、抗アンドロゲン剤を投与するステップをさらに含む。一実施形態では、前記抗アンドロゲン剤は、スピロノラクトン（Spironolactone）（Aldactone（登録商標））、フルタミド（Spironolactone）（Euflex（登録商標）、Eulexin（登録商標））、カソデックス、イノコテロン、ＲＵアンチアンドロゲン、ＴＺＰ−４２３８、Ｗｉｎ ４９５９６、フルリジル（Eucapil（登録商標））またはそれらの組み合わせである。
【０１７５】
他の実施形態では、本発明の方法は、カリウムチャンネル開口剤（K+ Channel Opener）を投与するステップをさらに含む。一実施形態では、前記カリウムチャンネル開口剤は、ミノシジル（Rogaine（登録商標））、ジアゾキシド、クロマカリム、ピナシジルまたはそれらの組み合わせである。
【０１７６】
他の実施形態では、本発明の方法は、血管拡張剤を投与するステップをさらに含む。一実施形態では、前記血管拡張剤は、ミノシジル（Rogaine（登録商標））である。
【０１７７】
他の実施形態では、本発明の方法は、エストロゲン遮断剤（estrogen blocker）を投与するステップをさらに含む。前記エストロゲン遮断剤は、一実施形態では、ＩＣＩエストロゲン遮断剤である。
【０１７８】
本発明の方法の対象は、一実施形態ではヒトである。他の実施形態では、前記対象は齧歯動物であり、一実施形態ではマウス、他の実施形態ではラットである。他の実施形態では、前記対象は哺乳類である。他の実施形態では、前記対象は脊髄動物である。他の実施形態では、前記対象は、ネコ、イヌ、ヒツジまたはウシである。他の実施形態では、前記対象はオスである。他の実施形態では、前記対象はメスである。他の実施形態では、前記対象は、当該技術分野では公知の他の対象である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１７９】
他の実施形態では、前記対象は大人である。一実施形態では、「大人」は、約１８歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、約２０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、約２５歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、約３０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、約３５歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、約４０歳以上を意味する。他の実施形態では、「大人」は、約４５歳以上を意味する。
【０１８０】
他の実施形態では、前記対象は高齢者である。他の実施形態では、「高齢者」は、約４５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、約５０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、約５５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、約６０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、約６５歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、約７０歳以上を意味する。他の実施形態では、「高齢者」は、約７５歳以上を意味する。
【０１８１】
他の実施形態では、前記第１の対象は、あるいは適用される場合は前記第１の対象と前記第２の対象の両方は実験動物である。他の実施形態では、前記対象はマウスである。他の実施形態では、前記対象はラットである。他の実施形態では、前記対象はアレチネズミ（gerbil）である。他の実施形態では、前記対象はハムスターである。他の実施形態では、前記対象はテンジクネズミ（guinea pig）である。他の実施形態では、前記対象は、ウサギである。他の実施形態では、前記対象はブタである。他の実施形態では、前記対象はイヌである。他の実施形態では、前記対象はネコである。他の実施形態では、前記対象は霊長類である。他の実施形態では、前記対象は、当該技術分野で公知の他の実験動物である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１８２】
一実施形態では、前記対象に、ＦＧＦ９（他の実施形態ではＦＧＦ９を含む組成物）を接触させる。他の実施形態では、ＦＧＦ９またはＦＧＦ９を含む組成物が対象に投与される。
【０１８３】
ここで用いられる「接触」なる用語は、一実施形態では、頭皮や眉などに、化合物、因子、細胞などを接触させることを意味する。他の実施形態では、この用語は、化合物、因子、細胞などを、目標の皮膚領域に埋め込むことを意味する。他の実施形態では、この用語は、化合物、因子、細胞などを、目標の皮膚領域に注入することを意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で公知の他の種類の接触を意味する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１８４】
他の実施形態では、本発明の方法における接触させるステップは、化合物、ＲＮＡ、タンパク質などを目標の皮膚領域に直接的に接触させることを含む。他の実施形態では、本発明の方法における接触させるステップは、化合物、ＲＮＡ、タンパク質などを対象の他の部位または組織に接触させた後、生物学的過程によって目標の皮膚領域へ移送するという間接的な接触を含む。前記生物学的過程としては、例えば、液体（血液、リンパ液、間質液など）内での循環、拡散、または能動輸送などがある。各可能な形態は、本発明の異なる実施形態に相当する。
【０１８５】
一実施形態では、他の繊繊維芽細胞増殖因子を、本発明の方法に用いることができる。一実施形態では、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０またはそれらの組み合わせを本発明の方法に用いることができる。一実施形態では、ＦＧＦ１〜ＦＧＦ１０の全てが、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）に結合する。一実施形態では、ＦＧＦ１は酸性繊維芽細胞増殖因子として知られており、ＦＧＦ２は塩基性繊維芽細胞増殖因子として知られている。
【０１８６】
他の実施形態では、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３またはＦＧＦ１４を本発明の方法に用いることができる。一実施形態では、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３またはＦＧＦ１４は、ＦＧＦ相同因子１〜４（ＦＨＦ１〜ＦＨＦ４）として知られており、他の実施形態では、ＦＧＦに対して明確な機能的差異を有する。一実施形態では、これらの因子は、非常に似ている配列相同性を有しており、一実施形態では、ＦＧＦＲに結合し、ＦＧＦとは無関係の細胞内プロセスに関与する。一実施形態では、このグループは、「ｉＦＧＦ」としても知られている。
【０１８７】
他の実施形態では、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２またはＦＧＦ２３を本発明の方法に用いることができる。一実施形態では、ＦＧＦ１５／ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１及びＦＧＦ２３は、局所性ではなく全身性の効果を有する。
【０１８８】
（医薬組成物）
【０１８９】
他の実施形態では、本発明の方法は、ＦＧＦ９またはＳＨＨの上方制御剤及び／またはその類似体、誘導体、異性体、代謝物、薬学的に許容される塩、医薬品、水和物、Ｎ酸化物、またはそれらの任意の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含んでいる医薬組成物を投与するステップを含む。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１９０】
ＦＧＦ９またはＳＨＨの上方制御剤を含んでいる前記医薬組成物は、他の実施形態では、例えば、局所的、非経口、側癌的（paracanceraly）、経粘膜的、経皮的、経筋肉的、経静脈的、経皮的、経皮下的、経表皮的、経腹膜的、経脳室的、経細動脈的、経脈管的、経膣的、経直腸的または経腫瘍的などの当業者に周知の方法によって対象に投与することができる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。一実施形態では、投薬計画は、熟練した臨床医によって、治療する疾患の正確な性質、疾患の重症度、患者の年齢及び全身的な身体状態、体重、及び個々の患者の反応に基づいて決定される。
【０１９１】
他の実施形態では、前記医薬組成物は経口投与される。そのため、前記医薬組成物は、経口投与に適した形態、すなわち固形及び液体製剤として製剤化される。適切な固形経口製剤としては、例えば、タブレット、カプセル、ピル、顆粒、ペレットなどがある。適切な液体経口製剤としては、例えば、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液、油などがある。本発明の一実施形態では、ＦＧＦ９または本明細書中に示した他のポリペプチドの組成物は、カプセルの形態に製剤化される。他の実施形態では、本発明の組成物は、ＦＧＦ９または本明細書中に示した他のポリペプチドに加えて不活性担体または希釈剤を含むか、あるいは硬ゲル化カプセルの形態に製剤化される。
【０１９２】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、身体表面に局所的に投与され、そのため、局所投与に適した形態に製剤化されている。適切な局所製剤としては、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、滴剤、ペースト、パウダー、エアロゾルスプレー、スポンジ若しくは綿棒に含ませたシロップ若しくは軟膏、水性液体若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液、水中油エマルジョン、または油中水エマルジョンなどがある。投与が容易であるため、クリーム、ローションまたは軟膏は最も有利な局所投与単位形を示し、この場合、前記医薬組成物には液体の薬学的担体が用いられる。これらのクリーム、ローションまたは軟膏は、他の皮膚の洗浄若しくはケア用組成物と共に使用するために、リンスオフ製品（水で洗い流せる製品）かまたはリーブオン製品（皮膚上にそのままにしておくことができる製品）として作製される。好適な実施形態では、前記医薬組成物は、例えばゲルなどの高濃度の形態のリンスオフ製品として投与され、その後、皮膚への刺激を避けるために低濃度のリーブオン製品が投与される。本発明の医薬組成物を組み込んだ製剤を容易に作製することができるこれらの各形態は、当業者には良く理解できるであろう。一実施形態では、ＦＧＦ９の投与に徐放パッチが使用される。局所投与するためには、ＦＧＦ９組成物またはその生理学的に許容される派生物（例えば、塩、エステル、Ｎ酸化物など）が作製され、薬品担体を用いてまたは用いることなく、生理学的に認容されている希釈液中の溶液、懸濁液または乳濁液として塗布される。
【０１９３】
軟膏製剤は、使用される基剤（賦形剤）の種類に応じて、脂肪／油型軟膏、乳化軟膏、水溶性軟膏、及び懸濁化軟膏に大別される。軟膏は、例えば、脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、パラフィン、ワックス、樹脂、プラスチック、グリコール、高級アルコール、グリセロール、水、乳化剤、懸濁化剤、または、希釈剤、担体または賦形剤としての他の適切な添加物を含有し得る。軟膏の製造は、例えば、本発明の化合物を適切な希釈剤、担体または賦形剤に添加した後に互いに混合させ、均一な混合物を作製することを含む。
【０１９４】
非経口投与の場合、入手可能な滅菌溶液、特に油性または水性の溶液、並びに、懸濁液、乳濁液またはインプラント（座薬や浣腸剤など）などが特に好適である。アンプルは従来の単位剤形である。前記座薬は、本明細書中で説明した任意の物質を含有し得る。
【０１９５】
吸入投与の場合、適切な担体の存在下で混合し、エアロゾル化または噴霧化させた前記組成物の溶液または懸濁液が好適である。前記エアロゾルは、本明細書中で説明した任意の物質を含有し得る。
【０１９６】
経腸的投与の場合、タブレット、糖衣錠、液体、ドロップまたはカプセルが特に好適である。一実施形態では、経腸的投与用にシロップ剤、エリキシル剤などを使用する場合は、甘味賦形剤が用いられる。
【０１９７】
液体製剤の場合、薬学的に許容される担体としては、他の実施形態では、水性若しくは非水性の溶液、懸濁液、乳濁液、または油がある。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及び注入可能な有機エステル（オレイン酸エチルなど）がある。水性担体としては、他の実施形態では、水、アルコール性／水性溶液、乳濁液、または生理食塩水、緩衝化媒体を含む懸濁液がある。油の例としては、石油、動物性油、植物性油、または合成油がある（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、オリーブ油、ひまわり油、魚肝油）。
【０１９８】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、ペレットの皮下埋め込みにより投与される。他の実施形態では、前記ペレットは、長期間に渡るＦＧＦ９の制御放出を提供する。
【０１９９】
一実施形態では、前記医薬組成物は、制御放出組成物、すなわち投与後にＦＧＦ９組成物が長期間に渡って放出される組成物である。制御すなわち持続放出組成物は、他の実施形態では、脂溶性デポー剤（例えば、脂肪酸、ワックス、油）である。他の実施形態では、前記医薬組成物は、即時放出組成物、すなわち投与後にＦＧＦ９組成物が即座に放出される組成物である。持続放出または指定放出組成物を製剤化することができる。例えば、リポソームまたは前記活性化合物を、差動的に分解可能なコーティング、例えば、マイクロカプセル化や多層コーティングなどで保護したものである。また、新たな化合物を凍結乾燥させ、得られた凍結乾燥物を、例えば、注射用製品の調製のために使用することも可能である。
【０２００】
一実施形態では、本発明の組成物は、薬学的に許容可能なものである。一実施形態では、「薬学的に許容可能な」なる用語は、安全であり、かつ本発明に使用される有効量の少なくとも１つの化合物の所望の投与経路に適切な送達を提供するいかなる製剤をも指す。該用語は緩衝製剤の使用も指し、この場合、ｐＨは、化合物の安定性及び投与経路に従って、ｐＨ４．０からｐＨ９．０の範囲の特定の所望の値に維持される。
【０２０１】
一実施形態では、本発明の方法において使用されるＦＧＦ９またはＳＨＨの上方制御剤は、単独であるいは或る組成物内で投与することができる。別の実施形態では、従来の賦形剤、すなわち、活性化合物と有害に反応しない、非経口的、経腸的（例えば、経口的）、または局所適用に好適な薬学的に許容可能な有機または無機担体物質と混合させた、ＦＧＦ９またはＳＨＨの上方制御剤を含む組成物を使用することができる。一実施形態では、好適な薬学的に許容可能な担体には、これらに限定されないが、水、食塩水、アルコール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、炭水化物（ラクトース、アミロース、デンプンなど）、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、白色パラフィン、グリセロール、アルギン酸、ヒアルロン酸、コラーゲン、香油、脂肪酸モノグリセリド及びジグリセリド、ペンタエリトリトール脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが含まれる。他の実施形態では、前記医薬調製物は滅菌することができ、所望に応じて、活性化合物と有害に反応しない、助剤（例えば、滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝剤、着色剤、香味剤及び／または芳香剤など）と混合させることができる。他の実施形態では、これらは、所望する場合、例えば、ビタミンといった他の活性薬剤と組み合わせることもできる。
【０２０２】
一実施形態では、本発明の治療用組成物は、ＦＧＦ９組成物と、脱毛症などの皮膚疾患の予防または治療に有効な１以上の追加の化合物とを含む。一実施形態では、前記追加の化合物は、保湿剤または皮膚軟化剤であり、一実施形態では、ワセリン、白色ワセリン、硬化植物油、親水性ワセリン、パンテノール、月見草油、オメガ−３魚油、オメガ−６魚油、リノール酸、亜麻油、セラミド、ルリヂサ油（リノール酸）トコフェロール（ビタミンＥ）、リノール酸トコフェロール、ジメチコーン、グリセリンまたはそれらの組み合わせである。一実施形態では、保湿剤は、皮膚が他の投与された化合物、とりわけ、本発明に用いられる化合物を吸収する能力を向上させる。他の実施形態では、保湿剤は、皮膚が乾燥したりひび割れたりすることを最小限に抑えるかまたは予防し、遊離基を生成する環境因子に対する皮膚の感受性を低下させ、それにより、皮膚に対する追加的なダメージを防止する。
【０２０３】
他の実施形態では、前記追加の化合物は、局所性ステロイド（一実施形態ではヒドロコルチゾンであり、一実施形態では１％のヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、フルオシノロンアセトニド、ハルシノニド、プロピオン酸ハロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾンまたはトリアムシノロン・アセトニドあるいはそれらの組み合わせ）、経口ステロイド、局所性免疫刺激剤（とりわけ、タクロリムス、ピメクロリムス、アスコマイシン、シクロスポリンまたはそれらの組み合わせ）、抗ヒスタミン剤（一実施形態では、ヒドロキシジンまたは塩酸ジフェンヒドラミン）、ケトチフェン、ドクサピン、一実施形態では、アメビブ（アレファセプト）、エンブレル、ヒュミラ、ラプティバ、レミケードまたはそれらの組み合わせを含む生物製剤、あるいはそれらの組み合わせを含む。他の実施形態では、前記追加の化合物は抗生物質であり、一実施形態では、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、クロキサシリン、セファレキシン、ペニシリン、クリンダマイシンまたはそれらの組み合わせである。他の実施形態では、前記追加の化合物は、メトトレキサート、タール、コールタール、アントラリン、ドボネックス、サリチル酸、タゾラック、湿潤剤、アロエ、ソリアタン、アキュタン、ハイドラ、ミコフェノール酸モフェチル、スルファサラジン、６−チオグアニンまたはそれらの組み合わせである。他の実施形態では、前記追加の化合物は、一実施形態ではヘルペス性湿疹の患者に特に有効であるアシクロビルを含む。一実施形態では、脂漏性皮膚炎を治療するための追加の化合物は、亜鉛ピリチオン、硫化セレン、硫黄、タールシャンプー、フルオシノロンアセトニド溶液、トリアムシノロンアセトニド溶液、ケトコナゾールクリームまたはそれらの組み合わせを含む。
【０２０４】
他の実施形態では、前記追加の化合物は抗炎症薬であり、一実施形態では、アリピリン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセンまたはそれらの組み合わせを含む。他の実施形態では、前記追加の化合物は、プロスタグランジンまたはプロスタグランジン阻害剤であり、一実施形態では、ＰＧＤ２の阻害剤である。
【０２０５】
他の実施形態では、前記追加の化合物はエクスフォリアントであり、一実施形態では、酵素的エクスフォリアントまたはモノ若しくはポリヒドロキシ酸である。一実施形態では、前記エクスフォリアントは、アルファ−ヒドロキシ酸、ベータ−ヒドロキシ酸、タンニン酸、グリコール酸、乳酸、クエン酸、サリチル酸またはそれらの組み合わせを含む。他の実施形態では、前記追加の化合物は、鎮痛剤または麻酔剤であり、他の実施形態では、前記追加の化合物は、アロエゲル、アロエ、甘草エキス、パイルウォート（pilewort）、カナダ柳の根、亜鉛、アラントインまたはそれらの組み合わせである。他の実施形態では、前記追加の化合物は、抗酸化剤である。
【０２０６】
ある実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、１０ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、２０ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、４０ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、８０ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、５ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、３ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、１ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、１〜５０ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。他の実施形態では、線維芽細胞増殖因子９タンパク質が、１〜１５ｎｇ／ｍＬの濃度で投与される。各投与量は、別個の実施形態に相当する。
【０２０７】
一般的に、上述した目的に用いられる投与量は様々であり得るが、所望の効果を発揮するための有効量で用いられる。ここで使用される「薬学的な有効量」なる用語は、患者の症状を軽減するかまたは他の所望の表現形をもたらすための、ＦＧＦ９または本発明に使用される他の組成物の量を指す。上述の目的のいずれかに用いられる前記投与量は、一般的に、身体体重の１〜１０００ｍｇ／ｋｇであり得、一日当たり１〜４回投与されるか、あるいは持続的静脈注入によって投与される。一実施形態では、上述した疾患のための単回投与または分割投与における局所的な１日用量の範囲は、約１ｍｇ〜２０，０００ｍｇ、より好ましくは約２，０００ｍｇ〜１６，０００ｍｇ、最も好ましくは約６，０００ｍｇ〜１０，０００ｍｇの活性成分（すなわち、賦形剤及び担体を除く量）である。前記組成物が局所にまたは眼球内に投与される場合、前記組成物は一般的に、０．１〜約１０ｗ／ｖの範囲の濃度で１日あたり１〜４回投与される。一実施形態では、本発明の方法に使用される前記組成物は、１日２回局所的に投与される。
【０２０８】
本発明の一実施形態では、前記化合物の濃度は、治療する疾患の性質、患者の状態、投与経路、及び前記組成物の個々の忍容性などの様々な因子に左右される。
【０２０９】
一実施形態では、前記投与ステップは、局所投与により行われる。他の実施形態では、前記投与ステップは、皮下投与により行われる。
【０２１０】
一実施形態では、本発明の方法の一部として投与される前記化合物は、全身的に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、局所的に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、表皮下に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、皮下に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、経皮的に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、剥離部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、創傷が誘導された部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、脱毛部位に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、創傷治癒中に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、ＨＦ再生の前に投与される。他の実施形態では、前記化合物は、ＨＦ再生中に投与される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０２１１】
一実施形態では、前記投与経路は、脱毛症の影響を受けた器官または系に向けられる。例えば、化合物は、脱毛症などの皮膚疾患を治療するために局所的に投与される。他の実施形態では、投与経路は、脱毛症の影響を受けた器官または系以外の器官または系に向けられる。例えば、化合物は、脱毛症などの皮膚疾患を治療するために、非経口で投与される。このようにして、本発明は、ＦＧＦ９または本発明に使用される他の組成物を、上記に列挙した経路のいずれかを用いて投与するのに好適な様々な投与形態で提供する。
【０２１２】
一実施形態では、化合物を試験する本発明の方法は、統計的に有意なサンプルが試験されるまで、複数の対象を用いて繰り返される。
【０２１３】
一実施形態では、ＦＧＦ９は、胚組織における毛芽形成を増加させるが、毛芽形成に必須ではない。一実施形態では、ＦＧＦ９は、表皮破壊後の成体組織における毛包形成及び／または大きさ増大に必須である。
【０２１４】
一実施形態では、胚毛芽形成のためのまたは創傷誘導性の毛包再生のためのシグナル伝達経路は、１以上の構成要素を共有する。他の実施形態では、胚毛芽形成のためのまたは創傷誘導性の毛包再生のためのシグナル伝達経路は、同一ではない。したがって、一実施形態では、ＦＧＦ９は、ＷＩＨＦにおける毛包形成に必須であるが、ＥＤ１３．５中は必須ではない。
【０２１５】
他の実施形態では、発毛信号のためのシグナル伝達経路は、身体の互いに異なる部分において互いに異なる。したがって、一実施形態では、胚毛芽形成及び創傷誘導性の毛包再生は、それらの各々の成長段階及び身体における位置の違いに起因して、それらのＦＧＦに対する依存に応じて互いに異なる。
【０２１６】
一実施形態では、ＦＧＦ９と創傷治癒との組み合わせは、発毛促進剤としての効果を高める。一実施形態では、ＦＧＦのみの適用により、表皮肥厚が引き起こされる。
【０２１７】
他の実施形態では、本発明は、対象の脱毛を治療するためまたは毛包を再生させるための方法であって、前記対象の脱毛領域の表皮を破壊するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、該方法は、ガンマ・デルタＴ細胞を創傷表皮に補充するステップをさらに含む。例示的な方法では、該方法は、サイトカインを介してガンマ・デルタＴ細胞を創傷表皮に補充するステップをさらに含む。
【実施例】
【０２１８】
実験の詳細
【０２１９】
＜除毛及び表皮剥離＞
【０２２０】
背部を毛刈りしてNair（Carter-Wallace, New York, NY）で除毛する前のマウスに、ペントバルビタールナトリウムを注射して麻酔した。その後、「Argyris T, J Invest Dermatol, 75: 360-362, 1980」に開示されているようにして、回転フェルトホイールを使用して表皮を除去した。７０％エタノールで洗浄して白熱ランプ下で乾燥させた後、Dremel Moto-tool（Racine, WI）上に設置されたフェルトホイールで、毛包間表皮の（１．５ｃｍ）２ｃｍの領域における基底層及び基底上層を慎重に剥離して除去した。剥離後、皮膚はつやがあり滑らかで、出血は見られなかった。１日後、剥離した領域はフィブリンのかさぶたで覆われていた。かさぶたは３〜７日後に剥がれ落ち、新たに再生された表皮が露出した。毛包間表皮が完全に除去されているかどうかを顕微鏡で確認するために、表皮剥離の直後に対照マウス群を屠殺した。
【０２２１】
＜穿孔創及び切除創の形成＞
【０２２２】
２１日齢のマウスの背部を、実施例１で説明するようにして除毛し、アルコールで消毒し、続いて１％ヨード溶液で消毒した。皮膚生検パンチを使用して、筋膜までの（筋膜は穿通しない）直径４ｍｍの穿孔創を形成した。切除創は、全層に渡っており、その直径は１ｃｍであった。先端の尖った手術用ハサミを使用して皮膚及び皮筋を切除した。
【０２２３】
＜免疫組織化学＞
【０２２４】
皮膚サンプルを、ＰＢＳ緩衝１０％ホルマリンで固定した。厚さ６ミクロンのパラフィン切片を切断し、（該当する場合は）抗体で染色した。
【０２２５】
＜ホールマウント及び免疫蛍光法＞
【０２２６】
新鮮な皮膚をＥＤＴＡ（２０ｍＭ ＰＢＳ）を使用して３７℃で一晩培養し、その後、表皮及び真皮を分離することでＨＦのホールマウント（whole mount）を得た。次に、表皮を室温（ＲＴ）で１０分間、１０％ホルマリンで固定した。真皮を室温で一晩、アセトン固定した。ＰＢＳで洗浄した後に、免疫組織化学の抗体でホールマウントを染色し（図１２に模式的に示す）、Leica共焦点顕微鏡を使用して撮像した。
【０２２７】
＜統計＞
【０２２８】
毛包数は、平均±標準偏差で表す。Excelのスチューデント両側ｔ検定機能を用いてＰ値を計算した。
【０２２９】
＜胎児マウスの皮膚の培養プロトコル＞
【０２３０】
以下の材料、すなわち、センターウェルディッシュ（Fisher 08-772-12）；金属グリッド（Goodfellow 688-485-21）；ニトロセルロースフィルタ（Millipore AABP04700）；培地：ＤＭＥＭ＋５％ＦＢＳ＋１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを用いた。
【０２３１】
妊娠１３．５日目のタイミング妊娠（timed pregnant）母マウス（Charles-River）を発注した。２ｍｌ培地／ディッシュを備えるセンターウェルディッシュを用意した。センターウェル内に金属グリッドをセットした。培地が３７℃まで温められるようにディッシュをインキュベータへ格納した。ニトロセルロースフィルタを複数の矩形に切断し、熱板上のｄＨ２Ｏビーカーに入れた。水を沸騰させて、その後、フィルタを１０分間煮沸消毒した。
【０２３２】
２枚の無菌ＰＢＳ添加ペトリディッシュを準備した。母マウスを安楽死させ、嚢に入っている胎児を解剖して取り出した。胎児を１枚のペトリディッシュ内に載置した。胎児を嚢から解剖して取り出し、無菌ＰＢＳを含んでいる別の無菌の添加ペトリディッシュ内に載置した。胎児のディッシュを氷上に載置した。無菌ＰＢＳを含んでいる無菌のペトリディッシュ中で、手術用顕微鏡下で、胎児から背部の皮膚を解剖して取り出した。
【０２３３】
定規を使用して胎児の頭殿長をチェックし、Ｅ１３．５段階（〜１０−１０．３ｍｍ）にあることを確認した。ミクロ解剖用ハサミを使用して、胎児の頭を取り除いた。より小さなミクロ解剖用ハサミを使用して、体肢上で背部の両側に沿って切開した。尾部の前方で背部を横断する第３の切開を行った。先端の尖ったDumontピンセットを使用して、尾部から頭に向かって皮膚を剥がした。皮膚を、ニトロセルロースフィルタの黒い面に、できるだけ平らに置いた。皮膚が液体と空気の界面にくるように、ニトロセルロースフィルタを金属グリッド上に載置した。ディッシュを３７℃で培養した。全ての皮膚を解剖したとき、化合物を培地に加え（必要であれば）、インキュベータに戻した。皮膚を最長で３日間培養した。プラコードが、Ｅ１４．５に形成され始めた。
【０２３４】
実施例１：毛芽形成の前期に発現されるＦＧＦ９
【０２３５】
再生された表皮におけるＦＧＦ９ ｍＲＮＡ発現を、定量的リアルタイムＰＣＲによって評価した。ＦＧＦ９は、毛包が形成されたかさぶた剥離後５日目と比較して、かさぶた剥離（scab detachment：ＳＤ。再上皮化時に起こる）後１日目の毛包再生の最初期段階前に、より高いレベルで発現された（図１）。皮膚γδＴ細胞（γδＴＣ受容体に対する抗体を用いて免疫染色によって検出される）はＳＤ７までに再上皮化された表皮を再配置し（図２の左の図）、これらの細胞はＳＤ１にＦＧＦ９タンパク質を発現する（表皮における赤い樹状細胞，図２の右の図及び図３）。
【０２３６】
このように、ＦＧＦ９は、分化中ではなく毛芽形成前（未分化期間中）に選択的に発現された。皮膚γδＴ細胞は、ＦＧＦ９のソースであるように見え、このことは、炎症細胞が創傷誘導性毛包再生（Wound-induced hair follicle neogenesis：ＷＩＨＮ）に関与し得ることを示唆している。
【０２３７】
実施例２：胎生１４日目（Ｅ１４）の皮膚において発現されるＦＧＦ９
【０２３８】
ＦＧＦ９（赤色染色）は、胎生１４日目（Ｅ１４）の皮膚においてγδＴＣ（緑色染色）によって発現される（図４）。
【０２３９】
実施例３：ＦＧＦ９は創傷誘導性毛包再生（ＷＩＨＮ）に関与する
【０２４０】
成体マウスにおける抗ＦＧＦ９中和実験
【０２４１】
３週齢（成体）のＣ５７ＢＬ／６マウスに、上記したような創傷モデルを適用した。その後、ＳＤ１−ＳＤ４日目に、マウスに、５０μｌの１０μｇ／ｍｌの抗ＦＧＦ９またはＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を表皮下注射した。ＳＤ５に、組織サンプルを採取し、分析した。
【０２４２】
免疫ブロットを用いて、抗ＦＧＦ９中和抗体の特異性を確認した。マウスＦＧＦ９は、１９８ｂｐを有し、ヒトＦＧＦ９との９９％以上の相同性を有している（アミノ酸が１つしか違っていない）。ＦＧＦ９は、単量体形（２５−２７ｋｄ）及び二量体形の両者に存在する。免疫ブロットは、Ｅ１４．５マウス胎児の全細胞溶解液及び遺伝子組換えｈＦＧＦ９を含む対照サンプルにおいて、２６Ｋｄ単量体形及び５２Ｋｄ二量体形の両者が存在することを示していた（図５）。
【０２４３】
抗ＦＧＦ９抗体を注射されたマウスは、ＳＤ５に、ＩｇＧ２ａ対照と比べると、毛包数がかなり少なかった（図６）。それゆえ、ＦＧＦ９は、創傷誘導性毛包再生に関与している。
【０２４４】
毛包の発達段階を、「Paus R et al., J Invest Dermatol 1999」に記載されているようにして定量化した。抗ＦＧＦ９処理群において、成熟毛包は減少し、未成熟毛包は増加した（図７）。
【０２４５】
実施例４：ＦＧＦ９は胎児の皮膚発生に関与する
【０２４６】
予定妊娠Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＥ１３．５に屠殺し、胎児の背部全体の皮膚を解剖した。Ｅ１３．５の皮膚を、金属グリッドを有するろ紙上で３日間浮遊させた状態で培養した。
【０２４７】
胎児の皮膚での毛包再生におけるＦＧＦ９の役割を究明するために、胎児の皮膚外植片培養を、遺伝子組換えヒト（ｒｈ）ＦＧＦ９（対照：１０、２０または４０ｎｇ／ｍＬ）によって、あるいは抗ＦＧＦ９中和抗体（対照：１０、２０または４０μｇ／ｍＬ）またはＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（１０、２０、４０μｇ／ｍＬ）によって、３日間処理した。真皮免疫染色にはアルカリホスファターゼ（ＡＰ）を用い（図１０）、表皮免疫染色にはＫ１７を用いた（図１２）。
【０２４８】
１サンプル当たり３つの別々の領域で毛芽数を数え、１ｍｍ２当たりで評価した（図８）。２４時間のｒｈＦＧＦ９処理後に、Ｓｈｈ、Ｐｔｃｈｌ、Ｐｔｃｈ２、ＧＩｉ１及びＧｌｉ２に対するｑ−ＰＣＲを行った。
【０２４９】
＜リアルタイムＰＣＲプロトコル＞
【０２５０】
次の材料を使用した。RNeasy（登録商標）線維組織ミニキット（Qiagen，74704）；大容量（High capacity）ｃＤＮＡ逆転写キット（Applied Biosystems，P/N 4368814）；Taqman（登録商標）Fast universal PCR master mix（2X）（Applied Biosystems，P/N 4352042）；Applied Biosystems StepOne（商標）リアルタイムＰＣＲシステム（Applied Biosystems，P/N 4376373）；Micro Amp（商標）４８ウェル光学用粘着フィルム（Applied Biosystems, P/N 4375928）；MicroAmp（商標）４８ウェル反応プレート（Applied Biosystems, P/N 4375816）。
【０２５１】
下記のＰＣＲプライマーを使用した（Applied Biosystems, Taqman（登録商標）遺伝子発現アッセイ）。
【０２５２】
【表１】
0005723780.tif 000002
【０２５３】
＜培養した胎児の皮膚サンプルを用いたｑ−ＰＣＲのためのプロトコル＞
【０２５４】
胎児の皮膚培養：Ｅ１３．５のタイミング妊娠Ｂ５７ＢＬ／６メスマウス（Charles-River）をＣＯ２チャンバ内で安楽死させた。胎児を解剖して取り出し、氷上の無菌冷ＰＢＳに入れた。
【０２５５】
準備：ミリポア社のニトロセルロースメンブレン（０．５×１．０ｃｍ２）；オートクレーブ金属グリッド；培養ディッシュ（Falconセンターウェル器官培養ディッシュ，35-3037）；５％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ（１×ペニシリン／ストレプトマイシン，必ずしもＦＢＳを不活性化させる必要はない）。
【０２５６】
個々の培養ディッシュ上に、２．５ｍＬの培地を加え、金属網及びニトロセルロースメンブレンをセットした。胎児の背部皮膚を解剖した。頭及び臀部領域を切除した。解剖は、側腹部を貫いて尾頭方向に行った。解剖した背部皮膚を（真皮側を下にして）ミリポア社のメンブレン上に載せた。各濃度に必要とされるサンプルを３つ作製した。皮膚サンプルを５％ＣＯ２中で３７℃で２４時間培養した。
【０２５７】
ＲＮＡの単離及びｃＤＮＡの作製
【０２５８】
皮膚サンプルを２０ｍＭのＥＤＴＡ中で１０分間培養した。解剖顕微鏡下で先端の尖ったピンセットを使用して表皮と真皮をそれぞれ分離した。
【０２５９】
ホモジナイザーを使用してサンプルをバラバラにし、RNeasy（登録商標）線維組織ミニキット（Qiagen, 74704）を使用してメーカーの情報に従って全ＲＮＡを抽出した。
【０２６０】
ＲＮＡ濃度を分光光度計によって測定し、その後、サーマルサイクラー内のプログラムとともに大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Applied Biosystems，P/N 4368814）を使用して１μｇの全ＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。
【０２６１】
リアルタイムＰＣＲ
【０２６２】
ＰＣＲ実行プログラムをセットアップし、StepOneソフトウェアを使用して比較Ｃｔ（ΔΔＣｔ）法により反応プレート配置を決めた。標的遺伝子及びβアクチン内在性対照の反応混合物を合わせて３つ作製した。ｃＤＮＡテンプレートを原液から最終的に２μｌ中に３０−５０ｎｇの全ｃＤＮＡ量まで希釈した。
【０２６３】
反応混合物成分
【０２６４】
【数１】
0005723780.tif 000003
【０２６５】
２．反応プレートを作製する：４８ウェル反応プレートに２０μｌ／ウェルの反応体積を加える。プレートは、光学用粘着フィルムで密封する。
【０２６６】
３．プレートをStepOne機器に装填し、プログラミングされた反応を開始する。
【０２６７】
４．StepOneソフトウェアを使用して結果を分析し、遺伝子発現の相対的定量データを得る。
【０２６８】
胎児の皮膚外植片培養（Ｅ１３．５）の真皮における３日間にわたるｒｈＦＧＦ９処理の効果は投与量依存的であり、１０ｎｇ／ｍＬ及び２０ｎｇ／ｍｌの投与量は毛芽数／ｍｍ２の増加をもたらすが、４０ｎｇ／ｍＬの投与量は毛芽数／ｍｍ２の減少をもたらした（図９〜図１０）。その一方で、胎児の皮膚外植片培養（Ｅ１３．５；図１１〜図１３）の表皮または真皮における３日間にわたる抗ＦＧＦ９中和抗体処理の識別可能な効果はなかった。
【０２６９】
Ｅ１３．５胎児の皮膚外植片培養を１０ｎｇ／ｍＬのｒｈＦＧＦ９で２４時間処理した結果、ソニック・ヘッジホグ（sonic hedgehog：Ｓｈｈ）、Ｐｔｃｈｌ、Ｐｔｃｈ２及びＧＩｉ１を含む胎児の毛包発生のマーカが、特に表皮において増加した（図１４〜図１５）。
【０２７０】
線維芽細胞増殖因子９は、治癒後に創傷に注射されると、毛包形成を増加させる。これは、新たな毛包が形成する直前及び最中である。ＦＧＦ９は、培養物に外植された胎児のマウス皮膚を用いることによって、毛包発生中にも毛包形成を増加させる。これらの発見は、創傷は表皮を外因性因子に応答する「受容可能」状態に変換するという考えをサポートする。
【０２７１】
実施例５：基底ケラチノサイトにおけるＦＧＦ９の過剰発現
【０２７２】
機能獲得型変異体ＴＲＥ−ｆｇｆ９−ＩＲＥＳ−ｅＧｆｐ；Ｋ５−ｒｔＴＡ（ｘＰｔｃｈｌ−ＬａｃＺレポーター）（「White et al., Development 133, 1507-1517, 2006」；「Diamond, et al. (2000) J. Invest. Dermatol. 115,788 -794」，両文献は引用を以て本明細書の一部となす）を用いて、毛再生段階における早期ＦＧＦ９発現が毛包発生を増進することを立証し、ＦＧＦ９がＳｈｈシグナリングの上流にあることを確認する。
【０２７３】
実施例６：γδＴ細胞におけるＦＧＦ９発現の欠損
【０２７４】
γδＴ細胞におけるＦＧＦ９発現の欠損は、Ｔ細胞標的Ｌｃｋ−Ｃｒｅプロモータを用いてＦＧＦ９を選択的に欠損させるために、機能欠失型変異体ＦＧＦ９ flox/flox；Ｌｃｋ−Ｃｒｅを用いて達成される。Ｌｃｋ−Ｃｒｅは、二重陰性段階での胸腺細胞発生の早期に先ず発現されるＬｃｋ（リンパ球タンパク質チロシンキナーゼ）遺伝子の近位プロモータを用いる。Ｔ細胞が完全に成熟した後、この導入遺伝子の発現レベルは約１０倍低下する。この特定のマウス遺伝子は、胸腺における高度な導入遺伝子の発現を示しており、ほぼ全ての初期胸腺細胞においてｌｏｘＰ標的配列に隣接する遺伝子の選択的な欠損をもたらすことが分かっており、それゆえ、二重陰性段階から始まるＴ細胞系列における特定の遺伝子の欠損に用いられる。ホモ接合Ｌｃｋ−Ｃｒｅマウス系統を、ｌｏｘＰが導入されたＦＧＦ９を含む系統と交雑させるので、Ｔ細胞系列においてＦＧＦ９が欠損した子孫が得られる。対照動物は、ゲノムＤＮＡ尾部サンプル中におけるｌｏｘＰが導入された遺伝子の有無で分類することによって、同腹仔集団において得られる。このシステムについては、「Lee et al., Immunity Nov 2001:15(5) 763-74」により詳細に記載されており、該文献は引用を以て本明細書の一部となす。
【０２７５】
実施例７：Ｋ１７−ＥＧＦＰレポーターマウス
【０２７６】
新たに発生している毛芽の周りのＦＧＦ９産生γδＴ細胞の蓄積を確認するために、Ｋ１７−ｅＧＦＰレポーターマウス（「Bianchi et al., MoI Cell Biol., 2005 August; 25(16): 7249- 7259」、引用を以て本明細書の一部となす）を用いる。
【０２７７】
実施例８：ＦＧＦ９は表皮γδＴ細胞を介して毛包再生を仲介する
【０２７８】
創傷治癒中の毛包再生に関与する分子メカニズムを理解することは、除毛及び他の皮膚疾患のための新たな治療法を開発する機会をもたらす。ここで、線維芽細胞増殖因子９（Ｆｇｆ９）が成体マウスの創傷後の毛包形成を調節することがはっきりと示されている。新たに形成された創傷表皮におけるＦｇｆ９の強制過剰発現は、ネオジェニック（neogenic）毛包数の２〜３倍の増加をもたらす。注目すべきことには、正常マウスの創傷治癒中に、表皮に存在するγδＴ細胞が、Ｆｇｆ９のための主なソースとして働く。Ｌｃｋ−Ｃｒｅ；ｌｏｘＰが導入されたｆｇｆ９トランスジェニックマウスを用いたＴ細胞におけるＦｇｆ９遺伝子の特異的欠損は、創傷後の毛包再生の顕著な減少をもたらす。同様に、γδＴ細胞欠損マウスは、毛包再生の重度障害を示す。全体的に見て、これらの発見は、ヒトと比べのマウスにおける毛包再生のロバスト性を説明し、免疫系と組織再生の重要な関係を浮き彫りにする。
【０２７９】
材料及び方法：
【０２８０】
マウス及び創傷。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Jackson laboratory）背部皮膚の全層切除（ＦＴＥ）を、前述したように（１）、ケタミン／ジラジン（zylazine）麻酔下で行った。特に指定のない限り、全ての実験に対して３週齢のマウスを用い、１ｘ１ｃｍ２ＦＴＥを行った。妊娠１３．５日目のタイミング妊娠Ｃ５７ＢＬ／６メスマウス（Charles-River）を、胎児の皮膚外植片培養に利用した。ドキシサイクリン感受性トランス活性化因子を内部に持つＫ１４−ｒｔＴＡマウスを、ＴＲＥ−Ｆｇｆ−ＩＲＥＳ−ｅＧｆｐマウスと交配させた。完全な再上皮化の後、Ｋ１４−ｒｔＴＡ及びＫ１４ｒｔＴＡ／ＴＲＥ−Ｆｇｆ９の両マウスにDox入りの餌（Bio-SERV）を４日間与えた。γδＴ細胞におけるＦＧＦ９発現の欠損は、リンパ球タンパク質チロシンキナーゼ（ｌｃｋ）のＴ細胞を標的とした近位プロモータを有するＬｃｋ−Ｃｒｅマウス（Jackson Laboratory）と交配させたＦｇｆ９ flox/floxマウスを用いて達成した。Jackson LaboratoryからγδＴ細胞ヌルマウス（Ｔｃｒｄ−／−）を購入した。全ての動物プロトコルは、ペンシルバニア大学のＩＡＣＵＣによって承認されたものである。
【０２８１】
ホールマウント毛包再生アッセイ。再上皮化後５日目に、治癒した皮膚を採取した。表皮ＫＲＴ１７免疫染色（１：５０００，P. Coulombe）のためのホールマウント毛包再生アッセイ及び真皮ＮＢＴ／ＢＣＩＰ培養を行い、前述したように創傷領域内の新たな毛芽及び頭髪毛乳頭を同定した。
【０２８２】
リアルタイムＰＣＲ。背部の皮膚はそれぞれ、再上皮化（ＳＤ）後のかさぶた剥離後０日目のサンプルまたは１日目、３日目及び５日目の創傷皮膚であった。４℃ディスパーゼで一晩、または３７℃、２０ｍＭのＥＤＴＡで３０分間の培養によって、表皮を真皮から分離した。RNeasyミニキット（Qiagen）を使用してＲＮＡを単離し、その後、大容量ｃＤＮＡキット（Applied Biosystems）を使用して１μｇの全ＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。Taqman遺伝子発現アッセイのｆｇｆ９を含む全てのプライマーセットは、Applied Biosystemsから購入したものである。反応を３回行い、内部対照としてβアクチンを用いて、相対的な発現レベルを標準化した。結果を、StepOneプログラムを使用して分析した。
【０２８３】
免疫染色。創傷後の再上皮化された皮膚をＯＣＴ（Tissue-Tek）に包理して凍結した。８μｍ凍結切片上でＦＧＦ９（１：２００；Ｒ＆Ｄシステムズ）及びγδＴＣＲ（１：１００；ＧＬ３，BD Bioscience）に対する染色を行った。ＢｒｄＵ（１：５００；Harlan-Seralab）に対する抗体を用いた免疫組織化学を、前述したように行った。パルスチェイス実験のために、サンプル作製の２時間前にＢｒｄＵ（Sigma）を投与した。
【０２８４】
ＤＥＴＣの単離及び細胞の活性化。Ｃ５７ＢＬ／６マウスから表皮細胞懸濁液を作製し、２０Ｕ／ｍｌの遺伝子組換えマウスＩＬ−２（ｍＩＬ−２）を含む完全ＤＭＥＭ中で３７℃で一晩培養し、前述したように表面受容体を再発現させた。ＰＥ−γδＴＣＲ（GL3, Abeam）及びアロフィコシアニン−Thyl.2（BD Bioscience）染色によるＦＡＣＳ選別によって、ＤＥＴＣを単離した。単離したＤＥＴＣは、ＲＰＭＩ−１６４０培地に、１０％ＦＣＳ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕのペニシリン、１００μｇのストレプトマイシン、１ｍＭのグルタミン、１００μＭの可欠アミノ酸、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５０μＭの２−メルカプトエタノール及び２０Ｕ／ｍｌのｍＩＬ−２を補充したものの中で培養した。細胞刺激のために、ＦＣＳ及びｍＩＬ−２を含まない無成長因子培地中で細胞を４時間収集し、その後、上述の培地に抗ＣＤ３ε（１０μｇ／ｍｌ，eBioscience）を補充したものの中で３７℃で４、２４及び４８時間培養した。氷冷ＰＢＳを加えることによって刺激を停止し、サンプルを氷上に載置した。上清を取り除き、溶解バッファを用いて細胞を採取した。遺伝子発現cells-to CT キット（Applied Biosystems）を使用してＲＮＡ単離及びそれに続くｃＤＮＡ産生を行った。
【０２８５】
ホールマウント表皮γδＴ細胞染色。８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスから耳を切り取り、前述したように表皮シートを分離した。表皮シートを、上記した無成長因子培地中または２０Ｕ／ｍｌのｍＩＬ−２を含む完全培地中で、３７℃で一晩培養した。その後、表皮をＰＢＳ中で洗浄し、−２０℃で２０分間、氷冷アセトンで固定した。上記したγδＴＣＲ及びＦＧＦ９の一次抗体を４℃で一晩培養した。次の朝、シートを二次抗体で１時間培養し、シリコンコートされたスライド上にマウントした。
【０２８６】
インビトロ胎児皮膚培養。Ｅ１３．５の胎児を嚢から解剖して取り出し、頭殿長をチェックして正確な発育年齢を確認した。背部の皮膚を解剖し、その後、前述したように最長で３日間培養した。遺伝子組換えヒトＦＧＦ９（０−２０ｎｇ／ｍｌ，Ｒ＆Ｄシステムズ）またはＥＤＡｌ（５０ｎｇ／ｍｌ，Ｒ＆Ｄシステムズ）を陽性対照として培地に加えた。さらに、ＦＧＦ９中和実験を抗ＦＧＦ９抗体培養（０−４０μｇ／ｍｌ；ＭＡＢ２７３，Ｒ＆Ｄシステムズ）と平行させた。皮膚サンプルを３７℃で５分間２０ｍＭのＥＤＴＡ中で培養することによって、表皮と真皮の分離を行った。組織を均質化し、ＲＮＡを単離するかまたは上述したようなホールマウントアッセイのために収集した。各サンプルの３つの異なる領域における１ｍｍ２当たりの毛包数を数え、平均値を計算した。
【０２８７】
成体マウスにおける中和実験。かさぶた剥離によって示される表皮の再上皮化は、ＦＴＥ後１０〜１２日で完了した。完全な再上皮化後１日目に、５０μｌの抗ＦＧＦ９中和抗体またはＩｇＧアイソタイプ対照（ＭＡＢ００３）を、１０μｇ／ｍｌで、４日間連続で毎日表皮の真下に注射した。その後、５日目に組織を収集し、２０ｍＭのＥＤＴＡ溶液を用いて表皮及び真皮を分離し、それぞれＫＲＴ１７免疫染色及びアルカリホスファターゼ活性検出のために処理した。再生毛包の数を、表皮内の密度に対して特徴付けた。上述のように毛包の発達段階を定量化した。
【０２８８】
インビボ共焦点顕微鏡法。毛包再生の動的プロセスを追跡するために、新たに形成された毛包の数の変化を、インビボ共焦点顕微鏡法（Vivascope 1500, Lucid）を用いて定量化した。簡単に説明すれば、治癒した皮膚の周辺部位を毛刈りし、ケタミン／ジラジン麻酔下で粘着性窓（adhesive window）（Lucid）及び超音波伝達ジェル（Parker laboratory）を適用した。新たな毛包を可視化し、その数を表皮と真皮の結合部の真下の位置で数えることができた。再上皮化後２日目とその後２週間にわたって３日毎に数を測定した。
【０２８９】
＜結果＞
【０２９０】
創傷後、毛包再生前に、Ｆｇｆ９発現は顕著に増加する：創傷後の毛包再生に関与する分子現象を明らかにするために、本願発明者は、再上皮化直後（かさぶた剥離「ＳＤ」後１日目及び３日目）から毛包再生の開始（ＳＤ５）までの創傷表皮における遺伝子発現を比較した。マイクロアレイ分析は、毛包胚形成前に線維芽細胞増殖因子９（Ｆｇｆ９）が顕著に（４．２倍）上方制御されたことを示していた。本願発明者はさらに、再上皮化された表皮におけるＦｇｆ９遺伝子発現の変化を毛包再生時頃に定量的ＲＴ−ＰＣＲによって分析した（図１６Ａ）。Ｆｇｆ９遺伝子発現は、再上皮化後、毛包再生の初期段階まで顕著に増加し、毛包再生の初期段階で発現は劇減した。これらの結果は、毛包再生の直前、おそらく細胞が毛包系列に関わっているときに、新たに形成された表皮において、ＦＧＦ９が上方制御されることを示している。
【０２９１】
Ｆｇｆの阻害は、毛包再生を減少させる。Ｆｇｆ９は、肺、腎臓及び生殖腺発育における既知の役割を有する分泌リガンドであるが、これまでは毛包の発生または再生に関係してはいなかった。それにもかかわらず、皮膚のＦｇｆ９に対する主受容体Ｆｇｒ３ｂが、表皮において発現され、創傷後の再生皮膚において上方制御される。創傷後の毛包再生におけるＦｇｆ９の重要性に対処するために、本願発明者は、４日間毎日、Ｆｇｆ９中和抗体を再上皮化された皮膚に注射した（図１６ｂ，表２）。抗Ｆｇｆ９抗体で処理した創傷は、対照と比較して、新たな毛包形成の顕著な減少を示していた。抗ＦＧＦ９で処理した創傷に形成しなかった毛包は、発生の発達段階にあった（図１９）。
【０２９２】
新たな表皮におけるＦｇｆの強制過剰発現は、毛包形成を増加させる。Ｆｇｆ９を阻止することにより毛包再生が阻害されたので、本願発明者は、創傷におけるＦｇｆ９のレベルの増加が創傷後の毛包再生を促進することになるか否かの答えを探した。本願発明者は、ドキシサイクリン誘導性トランスジェニックマウス（Ｋ１４ｒｔＴＡｘ ＴＲＥ−Ｆｇｆ９−ＩＲＥＳ−ｅＧｆｐ）を用いて、創傷再上皮化後に表皮へのＦｇｆ９発現を誘導的に標的にした。ＳＤ１からＳＤ４までのドキシサイクリンの投与は、ドキシサイクリンで処理した対照マウスと比較して、Ｆｇｆ９発現を１５０倍に増加させた（図２０）。再上皮化後４日間にわたる表皮へのＦｇｆ９のこの標的過剰発現は、対照と比較して、毛包数の著しい増加をもたらした（図１６ｃ，表２）。
【０２９３】
【表２】
0005723780.tif 000004
【０２９４】
Ｆｇｆ９発現は、γδＴ細胞に限局化する。正常マウスの再上皮化された皮膚においてＦｇｆ９のソースを同定するために、ＨＦＮ前に、治癒した皮膚の組織切片を免疫染色した。驚いたことに、本願発明者は、γδＴ細胞受容体を有している表皮Ｔ細胞（ＤＥＴＣ）は、表皮を再配置するものであるが、Ｆｇｆ９を発現することを発見した。ＤＥＴＣは、ケラチノサイトまたは他の上皮常在物からの寄与がほとんどまたは全くない状態で、表皮におけるＦｇｆ９の主なソースであるように見える（図１７Ａ）。ＦＡＣＳによって単離された基底ケラチノサイト（α６インテグリン陽性）からの以前の遺伝子発現データは、Ｆｇｆ９発現がないことを示していた（NAT BIOTech paper）。さらにＦｇｆ９の起源を確認するために、本願発明者は、非創傷耳表皮をｍＩＬ−２で処理し、免疫蛍光法によってＦｇｆ９発現のためのホールマウントプレパラートを分析した。ＩＬ２誘導性ＤＥＴＣは抗ＦＧＦ９抗体で濃く染色されたが、隣接するケラチノサイトは背景染色を呈した（図２１）。
【０２９５】
ＦＧＦ９が皮膚のＤＥＴＣによって恒常的に発現されるかまたは刺激後に上方制御されるかを判定するため、前述したように皮膚から細胞選別によってＤＥＴＣを単離し、抗ＣＤ３及びＩＬ２によりインビトロで培養した（havren ref）。ＦＧＦ９ ｍＲＮＡレベルは、４時間以内に１０倍以上増加し、続いて、２４時間以内にベースラインレベルまで減少した（図１７Ｂ）。この急速な上方制御は、創傷治癒中にＤＥＴＣによって分泌されることが知られている２つの因子であるＦＧＦ７及びＦＧＦ１０の発現に必要な、ずっと長い４８時間の誘導期間と対照をなし、特徴的な転写制御機構を示す。
【０２９６】
ＤＥＴＣは、毛包再生に不可欠である。Ｆｇｆ９は毛包再生を仲介し、ＤＥＴＣは再上皮化された表皮におけるＦｇｆ９の主なソースであるように見えるので、本願発明者は、活性化されたＤＥＴＣが、再上皮化中に創傷を再配置し、ＦＧＦ９を分泌して毛包再生を誘発すると仮定する。毛包再生におけるＤＥＴＣの役割をより明確に定義するために、本願発明者は、これらの細胞を発生しないＴｃｒｄ−／−マウスの研究を行った。
【０２９７】
本願発明者は、８週齢または２４〜４０週齢の年齢をマッチングした野生型マウス及びＴｃｒｄ−／−マウスに創傷を形成し、毛包再生を定量化した。既報の通り、ＴＣＲｄ−／−マウスは、創傷閉鎖の僅かな遅延を示していたが（データ提示なし）、毛包再生が著しく減少した。ＦＧＦ９レベルの定量化は、Ｔｃｒｄ−／−マウスにおいてＦＧＦ９が一貫して極僅かであることを示していた。
【０２９８】
図１８に示すように、８週齢及び４０週齢の−／−マウスは、ＨＦＮの深刻な欠陥を示し、ｗｔマウスと比較してＨＦ数が８０％以上減少した（図１８Ａ，Ｂ，表２）。このように、−／−マウスにおけるＨＦ数の減少は、応答動態の遅延よりもむしろ毛包再生の真の欠陥を反映する。
【０２９９】
上記の発見は、創傷後のＤＥＴＣの活性化がＦＧＦ９の産生及びそれに続く毛包再生をもたらすという仮説を支持するものであった。それにもかかわらず、ＤＥＴＣがＦＧＦ９の産生以外の毛包再生に関与し得るという懸念に対処するために、特にＴ細胞（ＤＥＴＣを含む）においてＦＧＦ９遺伝子が欠損している変異（Ｌｃｋ−Ｃｒｅ×Ｆｇｆ９flox/flox）マウスの創傷後の毛包再生を分析した。定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析は、これらのマウスが皮膚において低い恒常的レベルのＦＧＦ９を発現することを示していた（図２２）。創傷に関する研究は、これらの変異（Ｌｃｋ−Ｃｒｅ×Ｆｇｆ９flox/flox）マウスの創傷後の毛包数が、ＴＣＲｄ−／−動物で観察された毛包数に比べて劇減したことを示していた（図１８Ｅ，表２）。
【０３００】
まとめると、上述した結果は、ＤＥＴＣが、ＦＧＦ９の産生を通してＨＦ再生に寄与する不可欠な免疫寄与因子であることを示していた。
【０３０１】
要約すれば、本願発明者は、ＤＥＴＣがＦＧＦ９のソースであることを発見した。さらに、これらの発見は、より多岐にわたる細胞及び分子現象は、厳密に言うと胎児発達の反復発生ではなく、創傷後のＨＦＮに関係していることを示しており、ＤＥＴＣを含む後天免疫系が組織再生に関与するであろうというさらなる証拠を提供する。
【０３０２】
ＦＧＦ９及びＤＥＴＣは、創傷後のＨＦＮに不可欠である。再上皮化表皮におけるＦＧＦ９の過剰発現は、毛包形成の増加をもたらした。これらの結果は、創傷治癒中または再上皮化後のＦＧＦ９発現の操作が、除毛のための新たな治療法を開発するための有用な手法であり得ることを示している。
【０３０３】
本明細書では本発明について特定の実施形態を参照しながら説明してきたが、これらの実施形態は、本発明の原理及び応用例の単なる例示でしかないことを理解されたい。従って、例示的な実施形態に対して数多くの変更形態をなすことができること、及び添付の特許請求の範囲によって画定される本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなしに他の構成を考案し得ることを理解されたい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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