(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤と、
少なくとも１つのアジュバントとを含んでいるワクチン組成物であって、
上記アジュバントが、次式（ＩＩＩ）
【化１】
0005809560.tif 000016
で表わされる化合物ＰＢＳ−９６であるか、または次式（ＩＶ）
【化２】
0005809560.tif 000017
で表わされる化合物ＰＢＳ−１４である、ワクチン組成物。
【請求項２】
前記インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤が、弱毒化されていない生きたインフルエンザウイルス、弱毒化された生きたインフルエンザウイルス、死滅したインフルエンザウイルス、不活性化されたインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスのサブユニット、インフルエンザウイルスから得られる組換え型ポリペプチド、インフルエンザウイルスから得られる組換え型タンパク質、インフルエンザウイルスから得られるｃＤＮＡ、および組換え型インフルエンザウイルスから得られるｃＤＮＡからなる群より選択される、請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項３】
前記インフルエンザウイルスのサブユニットが赤血球凝集素である、請求項２に記載のワクチン組成物。
【請求項４】
前記インフルエンザウイルスの宿主が、ヒト、ウマ、およびトリからなる群より選択される、請求項２または３に記載のワクチン組成物。
【請求項５】
前記インフルエンザウイルスが、Ｈ１Ｎ１株、Ｈ１Ｎ２株、Ｈ２Ｎ２株、Ｈ３Ｎ１株、Ｈ３Ｎ２株、Ｈ５Ｎ１株、およびＨ７Ｎ７株からなる群より選択される、請求項２〜４のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６】
前記インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤が、アジュバントを含有している、請求項１〜５のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項７】
インフルエンザ株に対する交差防御を誘起するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のワクチン組成物の、インフルエンザの予防または治療するよう意図された薬物を製造するための使用。
【請求項９】
インフルエンザがインフルエンザウイルスの第１の株に起因し、
前記インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤が、インフルエンザウイルスの第２の株の、弱毒化されていない生きたインフルエンザウイルス、弱毒化された生きたインフルエンザウイルス、死滅したインフルエンザウイルス、不活性化されたインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスのサブユニット、組換え型ポリペプチド、組換え型タンパク質、ｃＤＮＡ、または組換え型インフルエンザウイルスからなる群より選択される、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
インフルエンザ株に対する交差防御を誘起するための薬物を製造するための、請求項８または９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明はワクチン組成物に関し、特にインフルエンザに対して使用するワクチン組成物に関する。
【０００２】
ヒトインフルエンザおよびトリインフルエンザは、毎年季節になると大流行する汎発性流行病であり、死亡率も罹患率も高い。Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科に属する、エンベロープに包まれたＲＮＡウイルスであるインフルエンザウイルスの中でも、Ａ型インフルエンザウイルスがインフルエンザの主要な原因である。Ａ型インフルエンザウイルスは、その表面タンパク質（赤血球凝集素（Ｈ）およびノイラミニダーゼ（Ｎ））の抗原性によって、さらにサブタイプに分類することができる。現時点で１５種類のＨのサブタイプおよび９種類のＮのサブタイプが特定されている。これらのサブタイプの組合せは動物においては多数見られるが、ヒトの集団では、１９１８年以来、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｎ１、およびＮ２のみが安定した系列を確立している。
【０００３】
Ａ型インフルエンザは自然変異率が高く、抗原性を頻繁に変化させる。この抗原性の変化は、経時的に起きる漸進的な抗原ドリフト（つまり、ウイルスのポリメラーゼによってランダムな点変異が挿入され、対応するタンパク質のアミノ酸配列が変化してしまう。）、あるいは、抗原シフトとして知られる、別のウイルスのサブタイプとの急激な組換え（宿主が、異なる２つの株のインフルエンザウイルスに同時に感染する。）のいずれかによって発生する。
【０００４】
この疾患に対して使用される主な戦略は、不活性化ワクチンまたは弱毒化された生ワクチンのいずれかを用いたワクチン接種である。
【０００５】
季節性インフルエンザワクチンなどのインフルエンザに対しては、Ｆｌｕｚｏｎｅ（登録商標）、Ｖａｘｉｇｒｉｐ（登録商標）、Ｍｕｔａｇｒｉｐ（登録商標）、Ｉｍｏｖａｘ  Ｇｒｉｐｅ（登録商標）（以上、Ｓａｎｏｆｉ−Ｐａｓｔｅｕｒ社製）、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）、Ｇｒｉｐｏｖａｘ（登録商標）、ＦｌｕＬａｖａｌ（登録商標）（以上、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社製）、ＦｌｕＭｉｓｔ（登録商標）（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社製）、Ａｆｌｕｒｉａ（登録商標）（ＣＳＬ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、Ｂｅｇｒｉｖａｃ（登録商標）、Ｆｌｕａｄ（登録商標）、Ｆｌｕｖｉｒｉｎ（登録商標）、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）（以上、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社製）などの、さまざまな種類のワクチンが開発されている。インフルエンザワクチンには、例えばＣｅｌｖａｐａｎ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ社製）、Ｄａｒｏｎｒｉｘ（登録商標），Ｐａｎｄｅｍｒｉｘ（登録商標）、Ｐｒｅｐａｎｄｒｉｘ（登録商標）（以上、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ社製）、Ｆｏｃｅｔｒｉａ（登録商標）、Ｏｐｔａｆｌｕ（登録商標）（以上、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社製）、ＩＤｆｌｕ（登録商標）、Ｉｎｔａｎｚａ（登録商標）（以上、Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ社製）などの大流行性インフルエンザのワクチンもある。しかしながら、利用可能なワクチンが活性を有するのは短い期間、しかも特定の種類の株（赤血球凝集素）に限られる。耐性を有するウイルスの変異株が出現することや副作用が、インフルエンザウイルスの感染に対する予防策、特に、複数種のインフルエンザウイルス株の感染に対する同時予防策を改善する必要性を生んでいる。
【０００６】
驚くべきことではあるが、本発明者らは、ガラクトシルセラミドの誘導体をインフルエンザワクチン中でアジュバントとして使用すると、ワクチン組成物の効力が増加することを見いだした。具体的には、発明者らは、このような化合物がアイソタイプのスイッチングを増加させること（ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの産生量を増加させること）、また、期せずしてこの化合物が、インフルエンザエピトープに対する細胞傷害性のＴリンパ球の活性化、特にＴｈ１の活性化を誘起することを示した。これに対して、現在のインフルエンザワクチンは、主にＩｇＧの産生量を増加させる。
【０００７】
また、発明者らは、驚くべきことに、ガラクトシルセラミドの誘導体をインフルエンザワクチン中でアジュバントとして使用すると交差防御が誘起される、つまり、インフルエンザワクチンの製造に使用した株とは異なる感染性株に対するワクチン組成物の効力が増加することを示した。
【０００８】
したがって、本発明は、インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤と、ガラクトシルセラミドの誘導体である少なくとも１つのアジュバントと、を含んでいるワクチン組成物に関連する。少なくとも１つの薬剤は、任意にアジュバントを含んでいる。
【０００９】
本発明の文脈において、「ワクチン組成物」または「ワクチン」とは、被験体に投与されると、細胞性免疫応答および／または体液性免疫応答を誘起する組成物を指す。
【００１０】
本明細書において、「被験体」とは、例えば脊椎動物または哺乳動物、好ましくはヒトではない哺乳動物またはヒトなどの動物を指す。脊椎動物の例としては、トリおよび家禽、特にニワトリが挙げられる。ヒトではない哺乳動物の例としては、げっ歯類、ウマ、ブタ、および霊長類が挙げられる。被験体はヒトであることが最も好ましい。
【００１１】
本発明の文脈において、「インフルエンザ」とは、インフルエンザウイルスと呼ばれるＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科のＲＮＡウイルスによって引き起こされるトリおよび哺乳動物の感染症を指す。ヒトにおいて、この疾患に共通する症状は、悪寒および発熱、咽頭炎、筋痛、激しい頭痛、咳嗽、脱力感、および全身違和感である。症状が重い場合、インフルエンザは、特に子供および高齢者を死に至らしめる可能性のある肺炎を引き起こす。インフルエンザは、感染した哺乳動物から、咳またはくしゃみがウイルスを含んだエアロゾルを形成することによって空気を介して伝染し、感染したトリから、糞を介して伝染する。インフルエンザは唾液、鼻の分泌物、糞便、および血液によっても伝染する。これらの体液または汚染された面に接触することによっても、感染が起こり得る。
【００１２】
本発明の文脈において、「インフルエンザウイルス」とは、インフルエンザの原因となる病原体を指す。インフルエンザウイルスは、８つの一本鎖のマイナスＲＮＡのセグメント、からなる分節ゲノムを有する、エンベロープに包まれたＲＮＡウイルスであり、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科に属している。本発明に係るインフルエンザウイルスには、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、およびＣ型インフルエンザウイルスの３つのサブタイプが含まれる。これらのサブタイプは、ウイルスの２つの構造タンパク質（マトリックスタンパク質Ｍ２およびヌクレオプロテイン）における抗原の差異に基づいている。好ましくは、本発明に係るインフルエンザウイルスはＡ型インフルエンザウイルスである。より好ましくは、本インフルエンザウイルスは、Ｈ１Ｎ１株、Ｈ１Ｎ２株、Ｈ２Ｎ２株、Ｈ３Ｎ１株、Ｈ３Ｎ２株、Ｈ５Ｎ１株、およびＨ７Ｎ７株からなる群より選択される。さらに具体的には、インフルエンザには季節性のものまたは大流行性のものがあることは、当業者にとって周知である。季節性インフルエンザは、通常、世界保健機関が規定し、提案する株に起因している。現時点（２００９年）において、季節性インフルエンザを引き起こす流行中のインフルエンザ株は、特にＨ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、およびＢ型インフルエンザ株である。かつては、Ｈ２Ｎ２型インフルエンザ株も季節性インフルエンザの原因であった。２００８年までの大流行性インフルエンザは、例えばＨ１Ｎ１型またはＨ７Ｎ７型インフルエンザ株が原因であった。
【００１３】
本明細書にて使用される「予防活性を有する薬剤」とは、インフルエンザウイルスによる感染に対する免疫応答を誘起する傾向が高い、生命体の任意の化合物を指す。インフルエンザに対する使用に適切であり得る、予防活性を有する薬剤の例としては、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、糖鎖、糖タンパク質、インフルエンザウイルス全体（ｗｈｏｌｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ）、インフルエンザウイルスの分割物（ｓｐｌｉｔ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ）などが挙げられる。好ましくは、本発明に係るインフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤は、弱毒化されていない生きたインフルエンザウイルス；弱毒化された生きたインフルエンザウイルス；死滅したインフルエンザウイルス、不活性化されたインフルエンザウイルス；インフルエンザウイルス抗原（例えば、インフルエンザウイルスのサブユニット、インフルエンザウイルスから得られる組換え型ポリペプチドまたはインフルエンザウイルスから得られる組換え型タンパク質など）；およびインフルエンザウイルスまたは組換え型インフルエンザウイルスから得られるｃＤＮＡ、からなる群より選択される。
【００１４】
好ましくは、本発明に係るインフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤は、少なくとも１つのＡ型インフルエンザウイルス株と、少なくとも１つのＢ型インフルエンザウイルス株とを含んでおり、任意に別のＡ型インフルエンザウイルス株またはＣ型インフルエンザウイルス株を含んでいる。
【００１５】
本明細書において用いられるような「弱毒化されていない生きたインフルエンザウイルス」とは、８つの一本鎖のマイナスＲＮＡのセグメントからなる、分節ゲノムを有する、エンベロープに包まれた生きたＲＮＡウイルスを指し、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科に属する。
【００１６】
本明細書において用いられるような「弱毒化された生きたインフルエンザウイルス」とは、自然の状態では軽度の病原性を示す、生きたインフルエンザウイルス株を指す。弱毒化された生きたインフルエンザウイルスには、低温に適合し、温度感受性のあるインフルエンザ株が含まれる。弱毒化された生きたウイルスを得る方法は当業者にとって周知であり、例えば、発病性を失った変異体が得られるまでニワトリの卵において連続継代を繰り返す方法（Hilleman (2002) Vaccine 20:3068-3087）などがある。
【００１７】
本明細書において用いられるような「死滅したインフルエンザウイルス」または「不活性化されたインフルエンザウイルス」とは、公知の方法によって得られる死滅したインフルエンザウイルスを指す。公知の方法の中で最も一般的な方法は、ニワトリの受精卵においてウイルスを成長させ、これを精製した後、例えば界面活性剤によって処理することによって失活させる方法である。
【００１８】
本明細書において用いられるような「インフルエンザウイルスのサブユニット」とは、上記インフルエンザウイルスから得られる核酸、ポリペプチド、タンパク質、またはこれらの混合物を指す。特に、インフルエンザウイルスのサブユニットとは、赤血球凝集素、ノイラミニダーゼ、ヌクレオプロテイン、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１、ＮＳ２（ＮＥＰ）、ＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ１−Ｆ２、およびＰＢ２からなる群より選択される、インフルエンザウイルスのタンパク質である。好ましくは、本発明によれば、インフルエンザウイルスのサブユニットは赤血球凝集素および／またはノイラミニダーゼである。
【００１９】
好ましくは、本発明に係るインフルエンザウイルスは、動物、特に哺乳動物またはトリである宿主に由来する。より好ましくは、インフルエンザウイルスの宿主は、ヒト、ウマ、およびトリからなる群より選択される。
【００２０】
本発明の文脈において、「アジュバント」とは、予防活性を有する薬剤の免疫生成能を強化または修正する物質を指す。
【００２１】
本明細書において用いられるような「ガラクトシルセラミドの誘導体」という表現は、例えばα−ガラクトシルセラミドなどのガラクトシルセラミド、さらに具体的にはこれらの誘導体を指す。
【００２２】
好ましくは、本発明に係るガラクトシルセラミドの誘導体は、ＮＫＴ細胞を活性化するガラクトシルセラミドの誘導体である。本明細書において用いられるような「ＮＫＴ細胞を活性化するガラクトシルセラミドの誘導体」とは、（ｉ）ＣＤ１ｄによって提示される刺激抗原に接触すると、ＮＫＴ細胞によるＴｈ１サイトカインおよびＴｈ２サイトカイン（例えばＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、またはＴＮＦ−α）またはこれらのサイトカインの組合せの分泌を引き起こすガラクトシルセラミドの誘導体、（ｉｉ）ＣＤ６９などの活性化Ｔ細胞を対象とした細胞表面のマーカーの発現増加を引き起こすガラクトシルセラミドの誘導体、（ｉｉｉ）Ｂ細胞の活性化を引き起こすガラクトシルセラミドの誘導体、または（ｉｖ）ＮＫＴ細胞の表面においてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現低下を引き起こすガラクトシルセラミドの誘導体を指す。
【００２３】
好ましくは、本発明に係るアジュバントは、次式（Ｖ）：
【００２４】
【化１】
0005809560.tif 000002
【００２５】
で表わされる化合物である。
【００２６】
Ｒは酸素原子もしくは硫黄原子または−ＣＨ２−である。
【００２７】
Ｒ１は１〜１５０個の炭素原子を含んでいる飽和または不飽和の炭化水素鎖である。この炭化水素鎖は、任意に芳香族炭化水素鎖、直鎖状の炭化水素鎖または分岐鎖状の炭化水素鎖であり、アルキル鎖、アリール鎖、アラルキル鎖、アルケニル鎖、またはアラルケニル鎖などである。この炭化水素鎖は、ヘテロ原子またはヘテロ基を任意に１個以上含んでおり、１個以上のヒドロキシル基またはシクロプロピル（cyclopropryl）基で置換されていてもよい。ヘテロ原子またはヘテロ基は、Ｏ、Ｎ、Ｓまたはカルボニル基から選択されることが好ましい。
【００２８】
Ｒ２は、１〜１５０個の炭素原子を含んでいる飽和または不飽和の炭化水素鎖である。この炭化水素鎖は、任意に芳香族炭化水素鎖、直鎖状の炭化水素鎖または分岐鎖状の炭化水素鎖であり、アルキル鎖、アリール鎖、アラルキル鎖、アルケニル鎖、またはアラルケニル鎖などである。この炭化水素鎖は、ヘテロ原子またはヘテロ基を任意に１個以上含んでおり、１個以上のヒドロキシル基で置換されていてもよいし、１〜２０個の炭素原子を含んでいる飽和または不飽和の炭化水素鎖で置換されていてもよい。ヘテロ原子またはヘテロ基は、Ｏ、Ｎ、Ｓまたはカルボニル基から選択されることが好ましい。
【００２９】
Ｒ３は、水素原子であるか、あるいは、１〜１２０個の炭素原子を含んでいる飽和または不飽和の炭化水素鎖である。この炭化水素鎖は、任意に芳香族炭化水素鎖、直鎖状の炭化水素鎖または分岐鎖状の炭化水素鎖であり、アルキル鎖、アリール鎖、アラルキル鎖、アルケニル鎖、またはアラルケニル鎖などである。
【００３０】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、同一であっても異なっていてもよく、
（ｉ）ヒドロキシル基、
（ｉｉ）１〜１００個の炭素原子を含んでいる飽和または不飽和の炭化水素鎖であって、任意に芳香族炭化水素鎖、直鎖状の炭化水素鎖または分岐鎖状の炭化水素鎖であり、アルキル鎖、アリール鎖、アラルキル鎖、アルケニル鎖、またはアラルケニル鎖などであり、ヘテロ原子またはヘテロ基を任意に１個以上含んでおり、このヘテロ原子またはヘテロ基がＯ、Ｎ、Ｓまたはカルボニル基から選択されることが好ましい、炭化水素鎖、
（ｉｉｉ）アミノ基、硫酸基、リン酸基、またはカルボキシル基、あるいは、
（ｉｖ）１〜４個のヘキソースの鎖であって、アミノ基、硫酸基、リン酸基およびカルボキシル基から選択される１個以上の基で置換されていてもよく、酸素原子もしくは硫黄原子または−ＣＨ２−によってヘキソースが互いに連結されている、ヘキソースの鎖を表わす。
【００３１】
より好ましくは、本発明に係るアジュバントは、次式（ＶＩ）：
【００３２】
【化２】
0005809560.tif 000003
【００３３】
で表わされる化合物である。
【００３４】
Ｒ１は、
（ｉ）−（ＣＨ２）ＸＣＨ３（Ｘは１〜１００から選択される整数である。）、
（ｉｉ）−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３または−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＺＣＨ３（Ｘ、Ｙ、およびＺは独立して１〜１４から選択される整数である。）、または
（ｉｉｉ）次式（Ａ）：
【００３５】
【化３】
0005809560.tif 000004
【００３６】
で表わされる基である。
（Ｒ８はＨまたはＯＨであり、Ｒ２１は炭素数が１〜３０のアルキルである。この炭素数が１〜３０のアルキルは飽和または不飽和であるか、あるいは１個以上のシクロプロピル基を含んでいる。）。
【００３７】
Ｒ２は炭素数が３〜１００の直鎖状または分岐鎖状のアルキルである。
【００３８】
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ６は、同一であっても異なっていてもよく、以下の（ｉ）〜（ｖ）を表す：
（ｉ）−Ｏ−Ｒ２２（Ｒ２２は水素、炭素数が１〜６のアルキル、炭素数が６〜１２のアラルキル、または炭素数が１〜６のアシルである。）、
（ｉｉ）−ＮＲ２４−ＣＯ−ＣＨ３（Ｒ２４は水素、炭素数が１〜２０のアルキル、またはアリールである。炭素数が１〜２０のアルキルは、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルフェート、またはホスフェートで置換されていてもよい。アリールは、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルフェート、またはホスフェートで置換されていてもよい。）、
（ｉｉｉ）−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ４、−ＰＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、または次式（Ｂ）：
【００３９】
【化４】
0005809560.tif 000005
【００４０】
で表わされる基（Ｙは−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、およびＲ２０は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ４、−ＰＯ３Ｈ、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３、および−ＣＯＯＨから独立して選択されるか、あるいは、Ｒ２０は式（Ｂ）で表わされる基であって、その式（Ｂ）においてＹ、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、およびＲ２０は上記のように規定される。）、
（ｉｖ）Ｎ（Ｒ９）Ｒ１０、（Ｒ９は、
（ａ）水素、
（ｂ）−ＳＯ２Ｒ１１（Ｒ１１は、
ハロ；
ヒドロキシル；
ＯＲ１２；
ＯＲ１３；
アミノ；
ＮＨＲ１２；
Ｎ（Ｒ１２）２；
ＮＨＲ１３；
Ｎ（Ｒ１３）２；
アラルキロアミノ；
炭素数が１〜１２のアルキル（炭素数が１〜１２のアルキルは、ハロ、ヒドロキシル、オキソ、ニトロ、ＯＲ１２、ＯＲ１３、アシルオキシ、アミノ、ＮＨＲ１２、Ｎ（Ｒ１２）２、ＮＨＲ１３、Ｎ（Ｒ１３）２、アラルキルアミノ、メルカプト、チオアルコキシ、Ｓ（Ｏ）Ｒ１２、Ｓ（Ｏ）Ｒ１３、ＳＯ２Ｒ１２、ＳＯ２Ｒ１３、ＮＨＳＯ２Ｒ１２、ＮＨＳＯ２Ｒ１３、スルフェート、ホスフェート、シアノ、カルボキシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）２、０個〜３個のＲ１４を含有する炭素数が３〜１０のシクロアルキル、０個〜３個のＲ１４を含有する炭素数が３〜１０のヘテロシクリル、炭素数が２〜６のアルケニル、炭素数が２〜６のアルキニル、炭素数が５〜１０のシクロアルケニル、炭素数が５〜１０のヘテロシクロアルケニル、０個〜３個のＲ１５を含有する炭素数が６〜２０のアリール、または０個〜３個のＲ１５を含有するヘテロアリール、で置換されていてもよい。）；
炭素数が３〜１０のシクロアルキル、炭素数が３〜１０のヘテロシクリル、炭素数が５〜１０のシクロアルケニル、または炭素数が５〜１０のヘテロシクロアルケニル（炭素数が３〜１０のシクロアルキル、炭素数が３〜１０のヘテロシクリル、炭素数が５〜１０のシクロアルケニル、または炭素数が５〜１０のヘテロシクロアルケニルは、１個以上の、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、ＯＲ１２、ＯＲ１３、アシルオキシ、ニトロ、アミノ、ＮＨＲ１２、Ｎ（Ｒ１２）２、ＮＨＲ１３、Ｎ（Ｒ１３）２、アラルキルアミノ、メルカプト、チオアルコキシ、Ｓ（Ｏ）Ｒ１２、Ｓ（Ｏ）Ｒ１３、ＳＯ２Ｒ１２、ＳＯ２Ｒ１３、ＮＨＳＯ２Ｒ１２、ＮＨＳＯ２Ｒ１３、スルフェート、ホスフェート、シアノ、カルボキシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）２、アルキル、ハロアルキル、０個〜３個のＲ１４を含有する炭素数が３〜１０のシクロアルキル、０個〜３個のＲ１４を含有する炭素数が３〜１０のヘテロシクリル、炭素数が２〜６のアルケニル、炭素数が２〜６のアルキニル、炭素数が５〜１０のシクロアルケニル、炭素数が５〜１０のヘテロシクロアルケニル、０個〜３個のＲ１５を含有する炭素数が６〜２０のアリール、または０個〜３個のＲ１５を含有する炭素数が６〜２０のヘテロアリール、で置換されていてもよい。）；
炭素数が２〜６のアルケニル、炭素数が２〜６のアルキニル、アリール、またはヘテロアリール（炭素数が２〜６のアルケニル、炭素数が２〜６のアルキニル、アリール、またはヘテロアリールは、１個以上の、ハロ、ヒドロキシ、ＯＲ１２、ＯＲ１３、アシルオキシ、ニトロ、アミノ、ＮＨＲ１２、Ｎ（Ｒ１２）２、ＮＨＲ１３、Ｎ（Ｒ１３）２、アラルキルアミノ、メルカプト、チオアルコキシ、Ｓ（Ｏ）Ｒ１２、Ｓ（Ｏ）Ｒ１３、ＳＯ２Ｒ１２、ＳＯ２Ｒ１３、ＮＨＳＯ２Ｒ１２、ＮＨＳＯ２Ｒ１３、スルフェート、ホスフェート、シアノ、カルボキシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１２、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）２、アルキル、ハロアルキル、０個〜３個のＲ１４を含有する炭素数が３〜１０のシクロアルキル、０個〜３個のＲ１４を含有する炭素数が３〜１０のヘテロシクリル、炭素数が２〜６のアルケニル、炭素数が２〜６のアルキニル、炭素数が５〜１０のシクロアルケニル、炭素数が５〜１０のヘテロシクロアルケニル、０個〜３個のＲ１５を含有する炭素数が６〜２０のアリール、または０個〜３個のＲ１５を含有する炭素数が６〜２０のヘテロアリール、で置換されていてもよい。）；あるいは、
−Ｌ−Ａｒ（Ｌは存在しないか、あるいは、スペーサー部分であり、好ましくは任意に１個以上のカルボニル基が介在するアルキルである。Ａｒは置換されていてもよい芳香族基である。）である。）、
（ｃ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１（Ｒ１１は上記のように規定される。）、
（ｄ）−Ｃ（Ｒ１１）２（Ｒ１６）（Ｒ１１は上記のように規定され、Ｒ１６は水素であり、Ｒ１１またはＲ１６と、Ｒ１０とは一緒になって、それらが結合している炭素原子と窒素原子との間に二重結合を形成する。）であるか、あるいは、
（ｅ）Ｒ９およびＲ１０はＮと一緒になって、Ｒ１１で置換されていてもよい３個〜１０個の環原子の複素環を形成し、
Ｒ１０は水素または炭素数が１〜６のアルキルであるか、Ｒ１０とＲ１６とが一緒になって、それらが結合している炭素原子と窒素原子との間二重結合を形成するか、あるいはＲ１０とＲ９とが一緒になって、Ｒ１１で置換されていてもよい３個〜１０個の環原子からなるヘテロシクリルを形成し、
Ｒ１２は水素であるか、あるいはハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルフェート、またはホスフェートで置換されていてもよい炭素数が１〜２０のアルキルであり、
Ｒ１３は、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルフェート、またはホスフェートで置換されていてもよいアリールである。
【００４１】
各Ｒ１４は、互いに独立して、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルフェート、またはホスフェートであり、
各Ｒ１５は、互いに独立して、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルフェート、またはホスフェートであり、
Ｘは１〜１００である。）または、
（ｖ）単糖類またはオリゴ糖。
【００４２】
Ｒ５は、
（ｉ）−Ｏ−Ｒ２２（Ｒ２２は上記のように規定される。）、
（ｉｉ）−ＮＲ２４−ＣＯ−ＣＨ３（Ｒ２４は上記のように規定される。）、
（ｉｉｉ）−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｈ；−ＰＯ４、−ＰＯ３Ｈ、または−ＣＯＯＨ、または
（ｉｖ）−ＯＳＯ３−Ｎａ＋である。
【００４３】
Ｒ７は、
（ｉ）−ＣＨ（ＯＲ１８）Ｒ２、
（ｉｉ）−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）Ｒ２、または
（ｉｉｉ）炭素数が３〜１００の直鎖状または分岐鎖状アルキルである（Ｒ２は上記のように規定される。）。
【００４４】
Ｒ１８およびＲ２３は、互いに独立して、水素、炭素数が１〜６のアルキル、炭素数が６〜１２のアラルキル、または炭素数が１〜６のアシルである。
【００４５】
Ｒは−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−である。
【００４６】
さらに好ましくは、本発明に係るアジュバントは、次式（ＶＩＩ）：
【００４７】
【化５】
0005809560.tif 000006
【００４８】
で表わされる化合物である。
【００４９】
Ｒ１は、
ａ）−（ＣＨ２）ＸＣＨ３（Ｘは１〜１００から選択される整数）、または
ｂ）−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３または−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＺＣＨ３である。Ｘ、Ｙ、およびＺは独立して１〜１４から選択される整数である。
【００５０】
Ｒ２は炭素数が３〜１００の直鎖状または分岐鎖状アルキルである。
【００５１】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は互いに同一であっても異なっていてもよく、Ｒ３〜Ｒ６の少なくとも１個が−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３を表わしている場合に、それぞれ、−ＯＨまたは−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ３を表わす。
【００５２】
上記式（ＶＩ）および（ＶＩＩ）において、Ｒ１が−（ＣＨ２）ＸＣＨ３である場合、Ｘは１８〜２６から選択される整数であることが好ましく、２２〜２４から選択される整数であることがさらに好ましい。
【００５３】
Ｒ１が−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３または−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＺＣＨ３である場合、Ｘ、Ｙ、およびＺは、互い独立して５〜１４から選択される整数であることが好ましい。
【００５４】
Ｒ１が−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３である場合、Ｘ＋Ｙ≦２３であることが好ましく、１５≦Ｘ＋Ｙ≦２３であることがさらに好ましい。
【００５５】
Ｒ１が−（ＣＨ２）ＸＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＺＣＨ３である場合、Ｘ＋Ｙ＋Ｚ≦２１であることが好ましく、１３≦Ｘ＋Ｙ＋Ｚ≦２１であることがさらに好ましい。
【００５６】
また、好ましくは、式（ＶＩ）または（ＶＩＩ）において、Ｒ２は炭素数が１１〜１６の直鎖状または分岐鎖状のアルキルであり、さらに好ましくは、炭素数が１４〜１６の直鎖状または分岐鎖状のアルキルであり、より好ましくは、炭素数１４の直鎖状または分岐鎖状のアルキルである。
【００５７】
より好ましくは、本発明のガラクトシルセラミドの誘導体は、次式（Ｉ）：
【００５８】
【化６】
0005809560.tif 000007
【００５９】
で表わされるＮ−アセチルα−ガラクトピラノシル−脂質である。
【００６０】
Ｒ１およびＲ２は式（ＶＩＩ）に規定されているとおりである。
【００６１】
好適な実施形態において、本発明に係るアジュバントは、次式（ＩＩ）：
【００６２】
【化７】
0005809560.tif 000008
【００６３】
で表わされるＰＢＳ−５７と呼ばれる化合物である。
【００６４】
別の好適な実施形態において、本発明に係るアジュバントは、次式（ＩＩＩ）で表わされるＰＢＳ−９６と呼ばれる化合物である。
【００６５】
【化８】
0005809560.tif 000009
【００６６】
別の好適な実施形態において、本発明に係るアジュバントは、次式（ＩＶ）で表わされるＰＢＳ−１４と呼ばれる化合物である。
【００６７】
【化９】
0005809560.tif 000010
【００６８】
本発明に係るアジュバントが式（Ｉ）に対応する場合、アジュバントは、アミド部分に連結されたＰＥＧ−２０００部分をさらに含んでいてもよい。このような化合物は、例えば次式（ＶＩＩＩ）または（ＩＸ）で表わされる化合物である。
【００６９】
【化１０】
0005809560.tif 000011
【００７０】
【化１１】
0005809560.tif 000012
【００７１】
本明細書にて用いるような「アルキル」という用語は、直鎖であっても分岐鎖であってもよく、記載された個数の炭素数を有する炭化水素鎖を指す。例を挙げると、炭素数が３〜１００のアルキルとは、この基が３個〜１００個（３個も１００個も含む）の炭素原子を含んでいてもよいことを示している。「アリールアルキル」または「アラルキル」という用語は、アルキルの水素原子がアリール基で置換されたアルキル部分を指す。「アリールアルキル」または「アラルキル」の例としては、ベンジル基および９−フルオレニル基が挙げられる。
【００７２】
「アシル」という用語は、アルキルカルボニル置換基、シクロアルキルカルボニル置換基、アリールカルボニル置換基、ヘテロシクリルカルボニル置換基、またはヘテロアリールカルボニル置換基を指し、これらのいずれの置換基も、置換基でさらに置換されてもよい。
【００７３】
本明細書にて用いるような「シクロアルキル」という用語は、炭素数が３〜１２の飽和した環式、二環式、三環式、または多環式の炭化水素基を含み、置換可能な任意の環原子が置換基で置換されてもよい。シクロアルキル部分の例としは、シクロヘキシル、アダマンチルなどが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。
【００７４】
「アリール」という用語は、芳香族の単環式、二環式、または三環式の炭化水素環系を指し、置換可能な任意の環原子が置換基で置換されてもよい。アリール部の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルなどが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。
【００７５】
「ヘテロシクリル」という用語は、単環式の場合は１個〜３個のヘテロ原子を有し、二環式の場合は１個〜６個のヘテロ原子を有し、三環式の場合は１個〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族ではない、３員〜１０員の単環式、８員〜１２員の二環式、または１１員〜１４員の三環式の環系を指す。このヘテロ原子はＯ、Ｎ、またはＳから選択される。例えば、単環式の場合、炭素原子と、１個〜３個のＮ、Ｏ、またはＳであるヘテロ原子とを有し、二環式の場合、炭素原子と、１個〜６個のＮ、Ｏ、またはＳであるヘテロ原子とを有し、三環式の場合、炭素原子と、１個〜９個のＮ、Ｏ、またはＳであるヘテロ原子とを有する。なお、置換可能な任意の環原子が置換基で置換されてもよい。
【００７６】
「ヘテロアリール」という用語は、単環式の場合は１個〜３個のヘテロ原子を有し、二環式の場合は１個〜６個のヘテロ原子を有し、三環式の場合は１個〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族である、５員〜８員の単環式、８員〜１２員の二環式、または１１員〜１４員の三環式の環系を指す。このヘテロ原子はＯ、Ｎ、またはＳから選択される。例えば、単環式の場合、炭素原子と、１個〜３個のＮ、Ｏ、またはＳであるヘテロ原子とを有し、二環式の場合、炭素原子と、１個〜６個のＮ、Ｏ、またはＳであるヘテロ原子とを有し、三環式の場合、炭素原子と、１個〜９個のＮ、Ｏ、またはＳであるヘテロ原子とを有する。なお、置換可能な任意の環原子が置換基で置換されてもよい。
【００７７】
「オキソ」という用語は、炭素と結合するとカルボニルを形成し、窒素と結合すると窒素酸化物を形成し、硫黄と結合するとスルホキシドまたはスルホンを形成する酸素原子を指す。
【００７８】
「置換基」という用語は、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクリル基、アリール基、またはヘテロアリール基において、その基の任意の原子を「置換する」基を指す。適切な置換基としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アミノ、ＳＯ３Ｈ、スルフェート、ホスフェート、パーフルオロアルキル、パーフルオロアルコキシ、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、カルボキシル、オキソ、チオキソ、イミノ（アルキル、アリール、アラルキル）、Ｓ（Ｏ）ｎアルキル（ｎは０〜２である。）、Ｓ（Ｏ）ｎアリール（ｎは０〜２である。）、Ｓ（Ｏ）ｎヘテロアリール（ｎは０〜２である。）、Ｓ（Ｏ）ｎヘテロシクリル（ｎは０〜２である。）、アミン（モノ−、ジ−、アルキル、シクロアルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、およびこれらの組合せ）、エステル（アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル）、アミド（モノ−、ジ−、アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、およびこれらの組合せ）、スルホンアミド（モノ−、ジ−、アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、およびこれらの組合せ）、非置換型アリール、非置換型ヘテロアリール、非置換型ヘテロシクリル、および非置換型シクロアルキルなどが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。
【００７９】
本発明に係るアジュバントは、例えば懸濁液、マイクロエマルジョンまたはマクロエマルジョン、ミセル、（例えば蓄積注入のための）デポー製剤、特に局所投与および経皮投与に適した乾燥調合物、またはリポソームなどの、任意の適した形態で調合されてもよい。
【００８０】
さらにこのアジュバントは、例えば重合体（例えばＰＧＡ（ポリグリコール酸））またはシクロデキストリンと組み合わせることによって、徐放性調合物として調合されてもよい。
【００８１】
本発明に係るワクチン組成物は、ガラクトシルセラミドの誘導体であるアジュバントに加えて、１つ以上の別のアジュバントを含んでいてもよい。この別のアジュバントは、例えばＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）に対する依存性を有するアジュバントであっても、ＴＬＲに対する依存性を有しないアジュバントであってもよい。前者の例としては、Ａｍｐｌｉｇｅｎ（Ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｘ社）、ＡＳ０１、ＡＳ０２、ＡＳ０４（ＧＳＫ社）、ＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ）ＲＣ−５２９（Ｄｙｎａｖａｘ社）、Ｅ６０２０（エーザイ社／Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ社）、ＴＬＲ技術（ＶａｘＩｎｎａｔｅ社）、ＣｐＧオリゴヌクレオチド（特にＣｐＧ７９０９（ファイザー社））、ＩＳＳ（Ｄｙｎａｖａｘ社）、ＩＣ３１（Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ社）、フラゲリンなどがあげられる。後者の例としては、ミョウバン（例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）、ＡＳ０３（ＧＳＫ社）、ＭＦ５９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）、Ｐｒｏｖａｘ（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ社）、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（Ｓｅｐｐｉｃ  ＳＡ社、Ｂｉｏｖｅｎ社、Ｃａｎｃｅｒｖａｘ社）、ＴｉｔｅｒＭａｘ（ＣｙｔＲｘ社）、Ａｄｖａｘ（Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｐｔｙ社）、ＱＳ２１（Ｑｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａから得られる精製済みサポニン；Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ、ＧＳＫ社）、Ｑｕｉｌ  Ａ（Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＩＳＣＯＭ（サポニンおよび脂質の構造化された複合体）およびリポソームがあげられる。
【００８２】
実際には、インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤は、例えば認証済みのインフルエンザワクチンまたは開発中のインフルエンザワクチンなどの、インフルエンザワクチンそのものであってもよい。インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤がインフルエンザワクチンである場合、このインフルエンザワクチンはすでにアジュバントを含有している。例えばＦｌｕａｄ（登録商標）はＭＦ５９を含有し、Ｆｏｃｅｔｒｉａ（登録商標）はＭＦ５９Ｃ．１（スクアレン、ポリソルベート８０、およびソルビタントリオレアートの混合物）を含有し、Ｐａｎｄｅｍｒｉｘ（登録商標）は、スクアレン、ＤＬ−α−トコフェロール、およびポリソルベート８０からなるアジュバントであるＡＳ０３を含有している。
【００８３】
好ましくは、本発明に係るワクチン組成物は、少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアをさらに含んでいる。
【００８４】
「薬学的に受容可能なキャリア」という用語は、本発明の化合物とともに患者に投与されてもよく、本発明の化合物の薬理学的活性を喪失させず、薬学的に効果的な量の該化合物を送達するために十分な投与量で投与されても無毒なキャリアを指す。
【００８５】
本発明のワクチン組成物中において使用される薬学的に受容可能なキャリアおよび媒体としては、イオン交換体、アルミナ、アルミニウムステアレート、レシチン、自己乳化ドラッグ送達システム（ｓｅｌｆ−ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ；ＳＥＤＤＳ）（例えばｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコール１０００コハク酸）、医薬品の剤形において使用される界面活性物質（Ｔｗｅｅｎｓやその他の同様の高分子送達マトリクス（ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｍａｔｒｉｃｅｓ）など）、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、ホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的なグリセリド混合物などの緩衝物質、水、塩または電解質（例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩）、コロイド性シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系の物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレンとポリオキシプロピレンとのブロック重合体、ポリエチレングリコール、および羊毛脂肪などがあげられるが、これらの例に限定されるものではない。２−および３−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、またはその他の可溶性誘導体を含めた、α−、β−、およびγ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン、またはヒドロキシアルキルシクロデキストリンなどの化学的に修正された誘導体も、本発明に係る組成物の送達を改善するために、好適に使用されてもかまわない。
【００８６】
好ましくは、完全フロイントアジュバントもしくは不完全フロイントアジュバントまたは水酸化アルミニウムなどの別のアジュバントが、本発明に係るワクチン組成物中に少なくとも１つ含有される。
【００８７】
当業者が理解するように、ワクチンは、意図する投与経路と適合するように、適切に調合される。適した投与経路の例としては、非経口経路（例えば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与）、経口投与（例えば、頬側投与、吸入、点鼻、および肺噴霧（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｓｐｒａｙ））、皮内投与、経皮性投与（局所的投与）、経粘膜的投与、眼内投与、直腸内投与などが挙げられる。
【００８８】
本発明に係るワクチン組成物は、約０．０１μｇ／Ｋｇ〜約５０００μｇ／Ｋｇの範囲の投与量、あるいは約０．１μｇ／Ｋｇ〜約１０００μｇ／Ｋｇの範囲の投与量、あるいは約１μｇ／Ｋｇ〜約５００μｇ／Ｋｇの範囲の投与量で送達されてもよい。効果的な投与量は、投与経路や、他の薬剤と併用する可能性によって変更される。
【００８９】
本発明は、インフルエンザの予防または治療に用いる、上記のように規定されるワクチン組成物にも関する。
【００９０】
本明細書にて用いられるような、Ａ型インフルエンザの「防止」または「予防」とは、感染を防止すること、つまり、インフルエンザウイルスに感染しないようにすること、またはインフルエンザウイルスの拡大、つまり被験体の他の領域への拡大またはある被験体から別の被験体への拡大を防止することを指す。
【００９１】
本明細書にて用いられるような、Ａ型インフルエンザの「治療」とは、疾患の重症度を制限すること、回帰感染を防止すること（つまり不顕性感染または持続感染の再活性化を制限すること）、およびインフルエンザの症状を緩和することなどを指す。
【００９２】
好適な実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、上記において規定したようなインフルエンザウイルスの第１の株に起因するインフルエンザ、の治療において使用される。上記において規定したような、インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤は、上記において規定したようなインフルエンザウイルスの第２の株の、上記において規定したような、弱毒化されていない生きたインフルエンザウイルス、弱毒化された生きたインフルエンザウイルス、死滅したインフルエンザウイルス、不活性化されたインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスのサブユニット、組換え型ポリペプチド、組換え型タンパク質、ｃＤＮＡ、または組換え型インフルエンザウイルスからなる群より選択される。
【００９３】
本発明は、さらに、上記において規定したような、予防または治療に効果的な量のワクチン組成物を被験体に投与する工程を包含している、被験体においてインフルエンザを治療または予防する方法にも関する。
【００９４】
「予防または治療に効果的な量」とは、治療を受ける被験体に対して予防効果または治療効果を奏するワクチン組成物の量を指す。治療効果は客観的な効果（つまり、試験またはマーカーによって測定可能）であってもよいし、あるいは、主観的な結果であってもよい（つまり、被験体が効果の徴候を示したり、効果を知覚したりする）。上述のワクチン組成物の効果的な量は、約０．０１μｇ／Ｋｇ〜約５０００μｇ／Ｋｇの範囲、あるいは約０．１μｇ／Ｋｇ〜約１０００μｇ／Ｋｇの範囲、あるいは約１μｇ／Ｋｇ〜約５００μｇ／Ｋｇの範囲であってもよい。効果的な投与量は、他の薬剤と併用する可能性に加えて、投与経路によっても変更される。
【００９５】
好適な実施形態では、ワクチン組成物は、インフルエンザ株に対する交差防御を誘起するために使用されていてもよい。交差防御が達成されるのは、ワクチン組成物が上記において規定したようなインフルエンザウイルスの第１の株に起因するインフルエンザ感染を予防および／または治療する際に、上記において規定したようなインフルエンザに対する予防活性を有する上記の少なくとも１つの薬剤が、インフルエンザウイルスの第２の株の、上記において規定したような、弱毒化されていない生きたインフルエンザウイルス、弱毒化された生きたインフルエンザウイルス、死滅したインフルエンザウイルス、不活性化されたインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスのサブユニット、組換え型ポリペプチド、組換え型タンパク質、ｃＤＮＡ、または組換え型インフルエンザウイルスからなる群より選択されるときである。好ましくは、インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤は季節性インフルエンザ株から得られる薬剤であって、かつ、本発明に係るアジュバントの使用によって、このインフルエンザに対する予防活性を有する薬剤の中に存在しないインフルエンザ株に対しても効果的になる。例えば、インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ１Ｎ１型インフルエンザ株から得られる薬剤であって、かつ、Ｈ１Ｎ１型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染、ならびにＨ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、およびＨ７Ｎ７からなる群より選択されるインフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に対して効果的である。インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ１Ｎ２型インフルエンザ株から得られる薬剤であってもよく、かつ、Ｈ１Ｎ２型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染、ならびにＨ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、およびＨ７Ｎ７からなる群より選択されるインフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に効果的である。インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ２Ｎ２型インフルエンザ株から得られる薬剤であってもよく、かつ、Ｈ２Ｎ２型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染、ならびにＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、およびＨ７Ｎ７からなる群より選択されるインフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に効果的である。インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ３Ｎ１型インフルエンザ株から得られる薬剤であってもよく、かつ、Ｈ３Ｎ１型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染、ならびにＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、およびＨ７Ｎ７からなる群より選択されるインフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に効果的である。インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ３Ｎ２型インフルエンザ株から得られる薬剤であってもよく、かつ、Ｈ３Ｎ２型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染、ならびにＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ１、Ｈ５Ｎ１、およびＨ７Ｎ７からなる群より選択されるインフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に効果的である。インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ５Ｎ１型インフルエンザ株から得られる薬剤であってもよく、かつ、Ｈ５Ｎ１型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染、ならびにＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、およびＨ７Ｎ７からなる群より選択されるインフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に効果的である。インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ７Ｎ７型インフルエンザ株から得られる薬剤であってもよく、かつ、Ｈ７Ｎ７型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染、ならびにＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、およびＨ５Ｎ１からなる群より選択されるインフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に効果的である。通常、インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤はＨ１Ｎ１またはＨ３Ｎ２型インフルエンザ株から得られる薬剤であって、Ｈ１Ｎ１型インフルエンザ株またはＨ３Ｎ２型インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染およびＨ５Ｎ１型インフルエンザ株またはＨ３Ｎ８インフルエンザ株に起因するインフルエンザ感染の予防および／または治療に効果的である。
【００９６】
また、本発明に係るアジュバントは、インフルエンザに対する予防活性を有する少なくとも１つの薬剤の効率を増加させる性質を有する。特に、本発明に係るアジュバントを使用することによって、インフルエンザに対する予防活性を有する薬剤の投与量を減少させることが可能になる。例えば、インフルエンザに対する予防活性を有する薬剤と本発明に係るアジュバントとを含有する本発明に係るワクチンを１回分投与すれば、インフルエンザに対する予防活性を有する薬剤を含有するが、本発明に係るアジュバントを含有しないワクチンを２回分投与するのと同じ程度の効率的がある。同様に、インフルエンザに対する予防活性を有する薬剤と本発明に係るアジュバントとを含有する本発明に係るワクチンを１回分または２回分投与すれば、インフルエンザに対する予防活性を有する薬剤を含有するが、本発明に係るアジュバントを含有しないワクチンを３回分投与するのと同じ程度の効率的がある。本発明に係るアジュバントを使用することによって、インフルエンザに対する予防活性を有する薬剤の投与量を減少させることも可能になる。
【００９７】
本発明に係るアジュバントは、インフルエンザエピトープに対して、細胞傷害性のＴリンパ球を活性化する性質も有し、特にＴｈ１の応答を誘起する性質を有する。これとは対照的に、インフルエンザウイルスに対して予防活性を有する少なくとも１つの薬剤単独では、ＩｇＧの生成量が増加するだけである。
【００９８】
さらに、ワクチンの中で通常使用される、インフルエンザに対する予防活性を有する薬剤は、子供（つまり年齢が０歳から１８歳のヒト）および高齢者（つまり年齢が６５歳以上のヒト）において比較的効率が低いが、本発明に係るアジュバントを用いれば、インフルエンザに対する予防活性を有するこの薬剤の、子供および高齢者における効率が上昇する。
【００９９】
以下では、図面および実施例によって、本発明をさらに説明する。
【０１００】
〔図面の簡単な説明〕
図１は、インフルエンザウイルスを接種しなかったマウス（点線）、前もって免疫を付与せずにＨ３Ｎ８型インフルエンザウイルス株を接種したマウス（■）、インフルエンザワクチンであるＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▲）、および１μｇのＰＢＳ−５７と一緒にＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（◆）の、接種後の種々の日数における生存率を表わすグラフである。
【０１０１】
図２は、インフルエンザウイルスを接種しなかったマウス（点線）、前もって免疫を付与せずにＨ３Ｎ８型インフルエンザウイルス株を接種したマウス（■）、インフルエンザワクチンであるＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▼）、および１μｇのＰＢＳ−５７（◆）または１μｇのＰＢＳ−９６と一緒にＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（●）の、接種後の種々の日数における生存率（％）を表わすグラフである。
【０１０２】
図３は、インフルエンザウイルスを接種しなかったマウス（点線）、前もって免疫を付与せずにＨ３Ｎ８型インフルエンザウイルス株を接種したマウス（■）、インフルエンザワクチンであるＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▲）、１μｇのＰＢＳ−１４と一緒にＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（◆）、インフルエンザワクチンであるＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▽）、および１μｇのＰＢＳ−１４と一緒にＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（◇）の、接種後の種々の日数における生存率（％）を表わすグラフである。
【０１０３】
図４は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−１４アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ１のレベルを示している。実験は、マウス一匹当たり１μｇ、４μｇ、または９μｇのＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）ワクチンを用いて行った。
【０１０４】
図５は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−１４アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ２ａのレベルを示している。実験は、マウス一匹当たり１μｇ、４μｇ、または９μｇのＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）ワクチンを用いて行った。
【０１０５】
図６は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−１４アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ２ｂのレベルを示している。実験は、マウス一匹当たり１μｇ、４μｇ、または９μｇのＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）ワクチンを用いて行った。
【０１０６】
図７は、１μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、または１μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７／ＳもしくはＰＢＳ−５７／Ｌ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ；ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）のタイターを示している。ＡはＡ／Ｂｉｒｓｂａｎｅ／１０／２００７株の場合のＩＨＡのタイター、ＢはＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７株の場合のＩＨＡの滴タイター、ＣはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６株の場合のＩＨＡのタイターである。実験は、マウス一匹当たり１μｇ、４μｇ、または９μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンを用いて行った。
【０１０７】
図８は、４μｇもしくは８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、もしくはＰＢＳ−１４／Ｌ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）のタイターを示している。ＡはＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７株の場合のＩＨＡのタイター、ＢはＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７株の場合のＩＨＡのタイター、ＣはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６株の場合のＩＨＡのタイターである。実験は、マウス一匹当たり１μｇ、４μｇ、または９μｇのＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）ワクチンを用いて行った。
【０１０８】
図９は、４μｇもしくは８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、もしくはＰＢＳ−５７／Ｄ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム；／Ｄ：ＤＭＳＯ）と組み合わせて用いて免疫を１回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）のタイターを示している。ＡはＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７株の場合のＩＨＡのタイター、ＢはＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７株の場合のＩＨＡのタイター、ＣはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６株の場合のＩＨＡのタイターである。
【０１０９】
図１０は、４μｇ（左パネル）もしくは９μｇ（右パネル）のＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７と組み合わせて用いて免疫を付与したマウスの血液中における、五量体に特異的なＣＤ８＋  Ｔ細胞の応答を示している。Ｔ細胞の応答は、免疫を付与してから７日、１４日、または２１日後に観察した。
【０１１０】
図１１は、高病原性のＨ３Ｎ８型株インフルエンザを接種したモデルにおける、マウスの生存個体数を示している。マウスは、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）１／３０，０００と、ＰＢＳ−１４、ＰＢＳ−５７、またはＰＢＳ−９６リポソーム（それぞれ、１μｇ（Ａ）、１００ｎｇ（Ｂ）、または１０ｎｇ（Ｃ））とを用いて０日目にワクチン接種を行い、２１日目にＨ３Ｎ８を接種した。
【０１１１】
図１２は、高病原性のＨ３Ｎ８型株インフルエンザを接種したモデルにおける、マウスの生存個体数を示している。マウスは、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）１／３０，０００と、ＰＢＳ−１４、ＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−９６リポソーム、またはＰＢＳ−５７／Ｓ（ペグ化形態）（それぞれ、１μｇ（Ａ）、１００ｎｇ（Ｂ）、または１０ｎｇ（Ｃ））とを用いて０日目にワクチン接種を行い、２１日目にＨ３Ｎ８を接種した。
【０１１２】
図１３は、成人のＰＢＭＣ（ｎ＝１５）から開始して７日後のＮＫＴ細胞の増幅率を示している。
【０１１３】
図１４は、ＣＢＭＣ（臍帯血単核細胞；ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ）（ｎ＝２０）から開始して７日後のＮＫＴ細胞の増幅率を示している。
【０１１４】
図１５は、高齢者のＰＢＭＣから開始して７日後のＮＫＴ細胞の増幅率を示している。
【０１１５】
図１６は、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−９６、またはＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−５７を用いて免疫を付与した６０匹のサルのＰＢＭＣに対して実施した、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示している。
【０１１６】
図１７は、免疫を付与しなかった（コントロール）マウス、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）、ＰＢＳ−９６、またはＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−９６を用いて免疫を付与し、かつＨ５Ｎ１に感染させたマウス、および偽薬を用いて免疫を付与し、かつ感染させなかった（偽薬）マウスのうち、生存している個体数を表わすグラフを示している。
【０１１７】
図１８は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて、免疫を１回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ１のレベルを示している。実験は、マウス一匹当たり１μｇ、４μｇ、または９μｇのＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）ワクチンを用いて行った。
【０１１８】
図１９は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を１回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ２ｂのレベルを示している。実験は、マウス一匹当たり１μｇ、４μｇ、または９μｇのＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）ワクチンを用いて行った。
【０１１９】
図２０は、４μｇもしくは８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、もしくはＰＢＳ−５７／Ｄ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム；／Ｄ：ＤＭＳＯ）と組み合わせて用いて、免疫を１回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）のタイターを示している。ＡはＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７株の場合のＩＨＡのタイター、ＢはＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７株の場合のＩＨＡのタイター、ＣはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６株の場合のＩＨＡのタイターである。
【０１２０】
〔実施例〕
以下の実施例では、主に、Ｎ−アセチル糖脂質をワクチン組成物中において使用することによって得られる、インフルエンザウイルスに対する防御および交差防御の強化について記載する。
【０１２１】
〔実施例１：Ｎ−アセチル糖脂質のアジュバントによって誘起される、マウスの生存率の増加および交差防御の強化〕
【０１２２】
〔材料および方法〕
実験では、
・市販のヒト用ワクチンＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社より購入した。これは具体的にはＨ１Ｎ１Ａ型インフルエンザ株から得られるワクチンである。）と、
・市販のウマ用ワクチンＥｑｕｉ  Ｐｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）（Ｍｅｒｉａｌ社より購入した。これは、Ｈ３Ｎ８Ａ型インフルエンザ株から得られるワクチンである。）と、
の２つの異なるワクチンを使用した。
【０１２３】
使用前に、各ワクチンを０．５ｍＬずつＮａＣｌの０．９％溶液中にて１／１０，０００に希釈した。
【０１２４】
１ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ−５７のリポソーム調製物、１ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ−９６のリポソーム調製物、および１ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ−１４のリポソーム調製物を１００μＬずつ、ＮａＣｌの０．９％溶液中にて１／１０に希釈した。そして、この各希釈液１１０μＬずつを、それぞれのワクチン製剤４４０μＬに添加した。この結果、各ワクチン製剤５０μＬ中には、１μｇのＰＢＳ−５７、ＰＢＳ−９６、またはＰＢＳ−１４が含有されることになる。
【０１２５】
コントロールとしてのリポソーム調製物１００μＬを、ＮａＣｌの０．９％溶液中にて１／５に希釈した。そして、この希釈液１１０μＬを、各ワクチン製剤４４０μＬに添加した。
【０１２６】
Ｃ５７Ｂｌ／６株の３〜４週齢の離乳済み雌マウスを、９つの投与グループにランダムに割り振った。５日未満かけてマウスを順化させた後、以下の処理を行った。
・グループ１：接種しない（コントロール）
・グループ２：接種したが、治療しない
・グループ３：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ
・グループ４：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７
・グループ５：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−９６
・グループ６：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−１４
・グループ７：Ｐｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）のみ
・グループ８：Ｐｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７
・グループ９：Ｐｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−１４
パスツール研究所（パリ、フランス）から入手したウマのＨ３Ｎ８型ウイルス（Ａ／ウマの／２／Ｍｉａｍｉ／１／６３（ＡＴＣＣ−ＶＲ−３１７）を、ウイルス感染において使用した。インフルエンザを接種するための調製物１００μＬを動物に静脈注射した。
【０１２７】
以下の治療スキームを実施した。
・０日目に、上記ワクチン（コントロール、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）、またはＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標））を、一部のマウスには試験済みアジュバントとともに、残りのマウスには試験済みアジュバントを併用せずに、筋肉注射した。
・７日目に、Ｈ３Ｎ８型ウイルスをマウスに静脈注射した。
・２１日目〜２４日目（接種から１４日目〜１７日目）に、マウスの健康状態および体重をモニタリングし、生存率および罹患率を評価した。
【０１２８】
〔結果〕
接種から１０日目には、Ｈ３Ｎ８型ウイルス株を接種したが治療を行わなかったマウスの約６０％が、生存していた。
【０１２９】
接種から１５日目には、Ｐｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）ワクチン（Ｈ３Ｎ８型株から得られたワクチン）を用いて治療したマウスのうち、Ｐｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を単独で用いて治療したマウスはわずか８０％しか生存していなかったが、一方で、Ｐｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）とＰＢＳ−５７とを用いて治療したマウス、およびＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）とＰＢＳ−１４とを用いて治療したマウスは１００％が依然生存していた（図１および図３を参照）。
【０１３０】
このようにして、本発明者らは、Ｎ−アセチル糖脂質の使用がインフルエンザウイルスワクチンの効力を大幅に増加させることを実証した。
【０１３１】
接種から１５日目には、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチン（具体的にはＨ１Ｎ１株から得られるワクチン）を用いて治療したマウスのうち、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を単独で用いて治療したマウスはわずか６５％しか生存していなかったが、一方で、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）とＰＢＳ−９６とを用いて治療したマウス、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）とＰＢＳ−５７とを用いて治療したマウス、およびＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）とＰＢＳ−１４とを用いて治療したマウスは８０％が依然生存していた（図２および図３を参照）。
【０１３２】
このようにして、本発明者らは、Ｎ−アセチル糖脂質ＰＢＳ−５７、ＰＢＳ−９６およびＰＢＳ−１４の使用がインフルエンザウイルスワクチンの効力を増加させるだけではなく、このワクチンの製造に使用したインフルエンザ株とは異なるインフルエンザ株から、動物を防御することも可能にすることを実証した。
【０１３３】
〔実施例２：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンおよびＮ−アセチル糖脂質アジュバントを筋肉内投与した後の、マウスの血清中におけるＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの検出〕
０日目および２１日目に、マウスに対して、
・ＰＢＳ、
・１μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・１μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのペグ化形態のＰＢＳ−５７、リポソーム調製物（ＰＢＳ−５７／ＳまたはＰＢＳ−５７／Ｌ）、またはＰＢＳ−１４のリポソーム調製物（ＰＢＳ−１４／Ｌ）、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、またはＰＢＳ−１４／Ｌ、
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、あるいは
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、またはＰＢＳ−１４／Ｌ
を注入した。
【０１３４】
血清を４２日目に収集し、血清中のＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、およびＩｇＧ２ｂの含有量をＥＬＩＳＡによって分析した。結果を図４〜図６に示す。この分析によれば、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のレベルが増加しても、単独で投与された場合は、生成されるＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂのレベルが増加しない。これとは対照的に、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）をＰＢＳ−５７またはＰＢＳ−１４と組み合わせると、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）の投与量が最低レベルであっても、検出可能なＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの量は増加する。注目に値することは、ＰＢＳ−５７またはＰＢＳ−１４と組み合わせて用いるＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）の投与量を増加させても、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂのレベルがそれ以上には大して増加しなかったことである。
【０１３５】
〔実施例３：Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）を筋肉注射することによって免疫を２回付与したマウスの血清の、ＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）による試験〕
０日目および２１日目に、マウスに対して、
・ＮａＣｌ、
・１μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）のみ、
・１μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／Ｓ、または
・１μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／Ｌ
を筋肉注射した。
【０１３６】
Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンは、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７様株、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７様株、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６様株の混合物を含有している。
【０１３７】
血清を４２日目に収集し、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンの、３つの原型株（Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６）との反応性を、これらの各株についてＩＨＡのタイターを測定することによって分析した（図７参照）。
【０１３８】
Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンの接種によって誘起される、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７株およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６株に対するＩＨＡのタイターを、ＰＢＳ−５７は、溶液の形態であっても、あるいはリポソーム調製物の形態であっても大幅に増加させることがわかった（表１）。Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７株に対するＩＨＡのタイターも増加したが、あまり大きな増加ではなかった。
【０１３９】
【表１】
0005809560.tif 000013
【０１４０】
ＰＢＳ−１４およびＰＢＳ−９６についても同じ結果が得られた。
【０１４１】
〔実施例４：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を用いて免疫を２回付与したマウスの血清の、ＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）による試験〕
０日目および２１日目に、マウスに対して、
・何も投与しなかった（未処理のマウス）、
・ＰＢＳ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋リポソーム調製物（ＰＢＳ−５７／Ｌ）の形態の１μｇのＰＢＳ−５７またはリポソーム調製物（ＰＢＳ−１４／Ｌ）の形態のＰＢＳ−１４、または
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７（ペグ化形態（ＰＢＳ−５７／Ｓ））またはＰＢＳ−５７／ＬもしくはＰＢＳ−１４／Ｌ
を筋肉注射した。
【０１４２】
Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンは、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７様株、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７様株、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６様株の混合物を含有している。
【０１４３】
血清を４２日目に収集し、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンの、３つの原型株（Ｈ３Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７、Ｈ１Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６）との反応性を、これらの各株についてＩＨＡのタイターを測定することによって分析した（図８を参照）。
【０１４４】
ＰＢＳ−５７およびＰＢＳ−１４は、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いた場合と比較すると、ＩＨＡのタイターを増加させることがわかった（表２）。
【０１４５】
【表２】
0005809560.tif 000014
【０１４６】
ＰＢＳ−９６についても同じ結果が得られた。
【０１４７】
〔実施例５：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を用いて免疫を１回付与したマウスの血清の、ＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ；ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）による試験〕
０日目に、マウスに対して
・ＮａＣｌ、
・ＰＢＳ−５７／Ｄのみ、
・ＰＢＳ−５７／Ｌのみ、
・ＰＢＳ−５７／Ｓのみ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋リポソーム調製物（ＰＢＳ−５７／Ｌ）の形態、ペグ化形態（ＰＢＳ−５７／Ｓ）、またはＤＭＳＯ（ＰＢＳ−５７／Ｄ）の形態の１μｇのＰＢＳ−５７、または
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／Ｌ、ＰＢＳ−５７／Ｓ、またはＰＢＳ−５７／Ｄ
を筋肉注射した。
【０１４８】
血清を２１日目に収集し、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンの、３つの原型株（Ｈ３Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７、Ｈ１Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６）との反応性を、これらの各株についてＩＨＡのタイターを測定することによって分析した（図９を参照）。ＰＢＳ−５７およびＰＢＳ−１４は、１回投与した後にＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いた場合と比較すると、ＩＨＡのタイターを増加させた。
【０１４９】
【表３】
0005809560.tif 000015
【０１５０】
これらの結果は、アジュバントを使用することによって、季節性インフルエンザにおいて初回免疫／追加免疫のためのワクチン接種が避けられることを示している。
【０１５１】
〔実施例６：Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）およびＰＢＳ−５７を用いて免疫を付与されたマウスにおける特定のＴ細胞の活性化〕
マウスに、４μｇもしくは９μｇのＨＡ抗原を、ＰＢＳ−５７（１μｇ）と組み合わせて、または組み合わせずに筋肉注射することによって免疫を付与した。多量体ペプチド／クラスＩ複合体を用いた分析によって、Ｈ−２Ｋｂ  ＮＰ（ＡＳＮＥＮＭＥＴＭ；配列番号１）に特異的なＣＤ８＋  Ｔ細胞を、血液中で複数の時点でモニタリングした。
【０１５２】
Ｈ−２Ｋｂ  ＮＰに特異的なＣＤ８＋  Ｔ細胞の非常に激しい増殖が、予防接種を行った動物において、ＰＢＳ−５７を試験済みの投与量で用いて行った免疫付与から１４日目に見られた（図１０）。血液中におけるこれらの細胞の発生頻度は、初回の接種から２１日目には、１４日目と比較すると定常状態にあった。
【０１５３】
ＰＢＳ−１４およびＰＢＳ−９６についても、また、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）の替わりにＡｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）を用いても、同じ結果が得られた。
【０１５４】
〔実施例７：ワクチン接種を行い、インフルエンザを接種したモデル〕
発明者らは、実施例１において提示した研究と同様の研究を実施した。ただし、実施例１に比べて条件数は多く、かつ厳しい条件の下で行った。
【０１５５】
ａ）免疫を付与するプロトコール
０日目に、Ｂａｌｂ／ｃマウスに、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）１／３０，０００またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）１／３０，０００を、ＰＢＳ−１４／Ｌ、ＰＢＳ−５７−Ｌ、またはＰＢＳ−９６／Ｌと任意に組み合わせて、筋肉注射した。Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）およびＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）の濃度は、このインフルエンザワクチンを単独で投与した場合、モニタリング期間中に５０％の生存率が達成できるように選択した。
【０１５６】
２１日目に、麻酔下のマウスに、高病原性を有する（ウイルスを接種したが治療を行わなかったマウスのグループにおける生存率が０（％））Ｈ３Ｎ８型株を鼻腔内経路によって接種した。
【０１５７】
２１日目から３５日目に、マウスの健康状態および体重をモニタリングし、生存率および罹患率を決定した。
【０１５８】
ｂ）結果
Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）およびＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）について得られた結果を、図１１および図１２にそれぞれ図示した。Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で投与した場合と比較すると、アジュバントが接種に対する防御を強化したことが、生存しているマウスの個体数の増加によって実証されている。
【０１５９】
〔実施例８：インビトロにおけるｉＮＫＴの活性化〕
成人のＰＢＭＣおよびＣＢＭＣ（臍帯血単核細胞；ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ）を、刺激を与えずに放置するか、あるいは、ＩＬ−２を単独で用いて、またはＩＬ−２を１００ｎｇのα−ＧａｌＣｅｒ、ＰＢＳ−５７／Ｄ、またはＰＢＳ−５７／Ｌと（１０ｎｇ／ｍＬまたは１００ｎｇ／ｍＬで）組み合わせて用いて、インビトロにて培養した。
【０１６０】
培養から７日後に、ＰＢＭＣまたはＣＢＭＣから増幅されたＶβ１１／Ｖα２４＋細胞の割合（％）を評価することによって、ｉＮＫＴの活性化が確認された（図１３および図１４）。
【０１６１】
本発明者らは、成人のＰＢＭＣおよびＣＢＭＣのいずれにおいても、ＰＢＳ−５７の方が、α−ＧａｌＣｅｒよりも強力なｉＮＫＴの活性化を誘起することを実証した。
【０１６２】
高齢者のＰＢＭＣ、つまり年齢６５歳以上の成人のＰＢＭＣに対して、同じ実験を実施したところ、同様の結果が得られた（図１５）。
【０１６３】
〔実施例９：アジュバントで免疫を付与したサルのＰＢＭＣを対象としたＥＬＩＳＰＯＴ〕
〔材料および方法〕
〔動物〕
Ｎｏｖｅｐｒｉｍ倫理委員会の許可を得て、モーリシャス原産の、体重３．５ｋｇの若いカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を使用した。カニクイザルの各個体には、一頭ずつＩＤ番号を右大腿部の内側に刺青で彫り込んだ
〔免疫付与〕
Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）を、単独でまたは１０μｇ／ｋｇもしくは１００μｇ／ｋｇのＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−９６とともに、同側の筋肉領域に２回注射した。
〔試料の収集〕
免疫を付与してから０日後、２１日後、または４２日後に、採血を実施した。密度勾配精製法によって血液からＰＢＭＣを精製した。次いで、ＰＢＭＣを培養し、インフルエンザのＴ細胞エピトープまたはインフルエンザワクチンを用いて刺激して、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにおいてＩＦＮ−γの応答性を評価した。
【０１６４】
〔結果〕
本発明者らは、カニクイザルに対してＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−５７またはＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−９６を用いて免疫を付与した場合には、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）を単独で用いた場合と比較して、スポット数が増加することを示した（図１６）。
【０１６５】
〔実施例１０：季節性のＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−９６と併用した、マウスにおけるＨ５Ｎ１接種の研究〕
この研究では、試験対象のワクチン中に存在するインフルエンザ株とは異なるインフルエンザ株に対して交差防御を誘起するＰＢＳ−９６の効力を実証する。
【０１６６】
Ｂａｌｂ／ｃマウスに対して下記の１）〜５）のいずれかを用いて免疫を付与した。すなわち、
１）塩化ナトリウムの偽薬（感染しない）
２）Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）のみ（１／３０，０００）
３）ＰＢＳ−９６（１００ｎｇ）
４）Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−９６
５）ＮａＣｌ  Ｔ＋
また、このマウスには、Ｈ５Ｎ１ウイルス（Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ１１９４／０４株）  １０４  ＣＣＩＤ５０を鼻腔内に注射した。生存しているマウスの個体数を毎日確認した。
【０１６７】
本発明者らは、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）を用いて免疫を付与されたマウスは、感染から８日後にはほとんどすべて死亡したが、一方で、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−９６を用いて免疫を付与されたマウスの４１％が、感染から２０日後も依然として生存していることを示した（図１７）。
【０１６８】
〔実施例１１：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンおよびＮ−アセチル糖脂質のアジュバントを１回筋肉内投与した後の、マウスの血清中のＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂの検出〕
０日目に、マウスに対して、
・ＰＢＳ、
・１μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・１μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋ペグ化形態の１μｇのＰＢＳ−５７またはリポソーム調製物（ＰＢＳ−５７／ＳまたはＰＢＳ−５７／Ｌ）、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／ＳまたはＰＢＳ−５７／Ｌ、
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、または
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／ＳまたはＰＢＳ−５７／Ｌ
を注射した。
【０１６９】
血清を２１日目に収集し、血清中のＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂの含有量をＥＬＩＳＡによって分析した。結果を図１８および図１９に示す。この分析によれば、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のレベルが増加しても、単独で投与された場合は、生成されるＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂのレベルが増加しない。これとは対照的に、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）をＰＢＳ−５７と組み合わせると、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）の投与量が最低レベルであっても、検出可能なＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂの量は増加する。注目に値することは、ＰＢＳ−５７と組み合わせて用いるＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）の投与量を増加させても、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂのレベルがそれ以上には大して増加しなかったことである。
【０１７０】
ＰＢＳ−１４およびＰＢＳ−９６についても同様の結果が得られた。
【０１７１】
〔実施例１２：Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を用いて免疫を１回付与したマウスの血清の、ＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ；ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）による試験〕
０日目に、マウスに対して
・ＰＢＳ、
・ＤＭＳＯの形態の１μｇのＰＢＳ−５７（ＰＢＳ−５７／Ｄ）のみ、
・ペグ化形態（ＰＢＳ−５７／Ｓ）の１μｇのＰＢＳ−５７のみ、
・リポソーム調製物の形態の１μｇのＰＢＳ−５７（ＰＢＳ−５７／Ｌ）のみ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）のみ、
・４μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／Ｄ、ＰＢＳ−５７／Ｓ、またはＰＢＳ−５７／Ｌ、または
・８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）＋１μｇのＰＢＳ−５７／Ｄ、ＰＢＳ−５７／Ｓ、またはＰＢＳ−５７／Ｌ
を筋肉注射した。
【０１７２】
Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンは、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７様株、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７様株、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６様株の混合物を含有している。
【０１７３】
血清を２１日目に収集し、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンの、３つの原型株（Ｈ３Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／１０／２００７、Ｈ１Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６）との反応性を、これらの各株についてＩＨＡのタイターを測定することによって分析した（図２０を参照）。
【０１７４】
ＰＢＳ−５７は、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いた場合と比較すると、ＩＨＡのタイターを増加させることがわかった。
【０１７５】
ＰＢＳ−９６およびＰＢＳ−１４についても、また、Ａｇｇｒｉｐａｌ（登録商標）の替わりにＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）を用いても、同じ結果が得られた。
【図面の簡単な説明】
【０１７６】
【図１】図１は、インフルエンザウイルスを接種しなかったマウス（点線）、前もって免疫を付与せずにＨ３Ｎ８型インフルエンザウイルス株を接種したマウス（■）、インフルエンザワクチンであるＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▲）、および１μｇのＰＢＳ−５７と一緒にＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（◆）の、接種後の種々の日数における生存率を表わすグラフである。
【図２】図２は、インフルエンザウイルスを接種しなかったマウス（点線）、前もって免疫を付与せずにＨ３Ｎ８型インフルエンザウイルス株を接種したマウス（■）、インフルエンザワクチンであるＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▼）、および１μｇのＰＢＳ−５７（◆）または１μｇのＰＢＳ−９６と一緒にＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（●）の、接種後の種々の日数における生存率（％）を表わすグラフである。
【図３】図３は、インフルエンザウイルスを接種しなかったマウス（点線）、前もって免疫を付与せずにＨ３Ｎ８型インフルエンザウイルス株を接種したマウス（■）、インフルエンザワクチンであるＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▲）、１μｇのＰＢＳ−１４と一緒にＰｒｏｔｅｃ−Ｆｌｕ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（◆）、インフルエンザワクチンであるＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を単独で用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（▽）、および１μｇのＰＢＳ−１４と一緒にＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）を用いて免疫を付与した後に該インフルエンザウイルス株を接種したマウス（◇）の、接種後の種々の日数における生存率（％）を表わすグラフである。
【図４】図４は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−１４アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ１のレベルを示す図である。
【図５】図５は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−１４アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ２ａのレベルを示す図である。
【図６】図６は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７もしくはＰＢＳ−１４アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ２ｂのレベルを示す図である
【図７】図７は、１μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、または１μｇのＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７／ＳもしくはＰＢＳ−５７／Ｌ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）のタイターを示す図である。
【図８】図８は、４μｇもしくは８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、もしくはＰＢＳ−１４／Ｌ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を２回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）のタイターを示す図である。
【図９】図９は、４μｇもしくは８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、もしくはＰＢＳ−５７／Ｄ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム；／Ｄ：ＤＭＳＯ）と組み合わせて用いて免疫を１回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）のタイターを示す図である。
【図１０】図１０は、４μｇ（左パネル）もしくは９μｇ（右パネル）のＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７と組み合わせて用いて免疫を付与したマウスの血液中における、五量体に特異的なＣＤ８＋  Ｔ細胞の応答を示す図である。
【図１１】図１１は、高病原性のＨ３Ｎ８型株インフルエンザに感染させたモデルにおける、マウスの生存個体数を示す図である。
【図１２】図１２は、高病原性のＨ３Ｎ８型株インフルエンザに感染させたモデルにおける、マウスの生存個体数を示す図である。
【図１３】図１３は、成人のＰＢＭＣ（ｎ＝１５）から開始して７日後のＮＫＴ細胞の増幅率を示す図である。
【図１４】図１４は、ＣＢＭＣ（臍帯血単核細胞）（ｎ＝２０）から開始して７日後のＮＫＴ細胞の増幅率を示す図である。
【図１５】図１５は、高齢者のＰＢＭＣから開始して７日後のＮＫＴ細胞の増幅率を示す図である。
【図１６】図１６は、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−９６、またはＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−５７を用いて免疫を付与した６０匹のサルのＰＢＭＣに対して実施した、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す図である。
【図１７】図１７は、免疫を付与しなかった（コントロール）マウス、Ｆｌｕａｒｉｘ（登録商標）、ＰＢＳ−９６、またはＦｌｕａｒｉｘ（登録商標）＋ＰＢＳ−９６を用いて免疫を付与し、かつＨ５Ｎ１に感染させたマウス、および偽薬を用いて免疫を付与し、かつ感染させなかった（偽薬）マウスのうち、生存している個体数を表わすグラフである。
【図１８】図１８は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて、免疫を１回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ１のレベルを示す図である。
【図１９】図１９は、ＰＢＳを単独で用いて、Ａｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンをＰＢＳ−５７アジュバント（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム）と組み合わせて用いて免疫を１回付与した、マウスの血清中で検出されたＩｇＧ２ｂのレベルを示す図である。
【図２０】図２０は、４μｇもしくは８．９μｇのＡｇｒｉｐｐａｌ（登録商標）ワクチンを単独で用いて、またはＰＢＳ−５７／Ｓ、ＰＢＳ−５７／Ｌ、もしくはＰＢＳ−５７／Ｄ（／Ｓ：ペグ化形態；／Ｌ：リポソーム；／Ｄ：ＤＭＳＯ）と組み合わせて用いて、免疫を１回付与したマウスにおいて測定したＩＨＡ（間接的な赤血球凝集反応アッセイ）のタイターを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【配列表】
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