(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨関節症、副鼻腔炎およびざ瘡からなる群より選択される状態に伴う少なくとも１つの症状を低減するための、ベタレインを含む経口投与用医薬組成物。
【請求項２】
状態が骨関節症である、請求項１の医薬組成物。
【請求項３】
状態が副鼻腔炎である、請求項１の医薬組成物。
【請求項４】
状態がざ瘡である、請求項１の医薬組成物。
【請求項５】
ベタレインが赤ビートから調製される、請求項１の医薬組成物。
【請求項６】
ベタレインが、少なくとも２重量％の濃度の総ベタレインを含む固体調製物として含まれる、請求項１の医薬組成物。
【請求項７】
固体調製物が、少なくとも２重量％の総ベタレイン濃度およびベタレインと糖の比が少なくとも０．３で化学的に異なる複数のベタレインを含む、請求項６の医薬組成物。
【請求項８】
固体調製物が、少なくとも１０重量％の総ベタレイン濃度の化学的に異なる複数のベタレインを含み、少なくとも１．０のベタレインと糖の比を有する、請求項６の医薬組成物。
【請求項９】
総１日摂取量が１０ｍｇから５０ｍｇの総ベタレインを提供するように対象に投与される、請求項１の医薬組成物。
【請求項１０】
１０００ｍｇ未満の１日用量において１０から２５０ｍｇの総ベタレインを提供するように製剤された、請求項１の医薬組成物。
【請求項１１】
骨関節症に伴う少なくとも１つの症状を低減するのに有効な投与量のベタレインを含む、骨関節症を治療するための医薬組成物。
【請求項１２】
ベタレインの総１日摂取量が１０ｍｇから５０ｍｇであるように製剤された、請求項１１の医薬組成物。
【請求項１３】
ベタレインが、植物材料から単離された調製物に存在し、ならびに前記調製物が、少なくとも１．０のベタレインと糖の比を有する、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１４】
骨関節症、副鼻腔炎およびざ瘡からなる群より選択される状態の治療のための経口投与用医薬組成物の製造における、ベタレイン含有調製物の使用。
【請求項１５】
ベタレイン含有調製物が、少なくとも５重量％のベタレイン濃度を有する乾燥調製物である、請求項１４の使用。
【請求項１６】
ベタレインが、１投与単位あたり少なくとも１５ｍｇの量で調製物に含まれる、請求項１４の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、両方とも参照により本明細書に組み込まれている、出願者の２００８年７月３０日に出願した出願番号第６１／０８４８７９号の米国仮出願および２００８年１２月２３日に出願した出願番号第６１／１４０５４１号の米国仮出願の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
発明の分野は、ヒトの状態を治療する組成物および方法であり、特に、骨関節症、ざ瘡、アレルギー状態、副鼻腔炎および接触皮膚炎の治療のためのベタレイン含有組成物に関する。本明細書において考慮される組成物および方法も、非カフェイン刺激剤としてのベタレイン含有組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
骨関節症（ＯＡ）は、極めて一般的な状態であり、米国の人口の約８０％が６５歳までにはＸ線によるＯＡの証拠を有すると予想される。骨関節症は、罹患した関節に隣接する組織の疼痛および腫脹を頻繁に伴う関節軟骨の損失により特徴付けられ、次に多くの場合にその関節に関連する筋肉の局所性または領域性の萎縮を引き起こす。ＯＡは同一の基礎原因を有さないが、ＯＡは、一次または変形性ＯＡとも呼ばれ、一方、二次ＯＡは、多様な障害または疾患（例えば、糖尿病、局所傷害または感染、関節不安定症など）により典型的に誘起される。対照的に、リウマチ様関節炎（ＲＡ）は、免疫系が罹患関節を攻撃し、著しい炎症をもたらし、続いて組織変性をもたらす、慢性で全身性の自己免疫障害である。
【０００４】
異なる病因に起因して、ＲＡおよびＯＡは、異なる治療手法を有する。例えば、ＲＡは、シクロスポリン、メトトレキセートまたはペニシラミンによって典型的に治療され、より重篤な場合では、ＴＮＦ−アルファまたはＩＬ−１ブロッカーによって治療される。炎症を低減するために、グルココルチコイドおよび／または非ステロイド性抗炎症薬を投与することができる。一方、ＯＡは、理学療法、体重管理および／または多様な栄養補給剤によって多くの場合に治療される。補給剤のうち、メチルスルホニルメタン、グルコサミンおよび／またはコンドロイチン硫酸は、補給剤として大きな注目を集めている。最近、多様な植物由来補給剤がＯＡの治療において記載された。例えば、ＷＯ  ０５／０５３７１０は、多様な植物材料からのグルコサミンの製造における乾燥方法の使用を教示する。別の例では、骨関節症の治療用の植物抽出物が、米国特許出願２００７／０１９６５２７に記載されているように、モリンダ・シトリフォリア（Ｍｏｒｉｎｄａ  ｃｉｔｒｉｆｏｌｉａ）から調製される。
【０００５】
最近の入手可能な栄養飲料（例えば、Ｒｅｄ  Ｂｕｌｌ（商標）、Ｒｏｃｋｓｔａｒ（商標）、Ｊａｖａ  Ｍｏｎｓｔｅｒ（商標）など）は、有意な量のカフェインおよび他のメチルキサンチン、選択されたビタミンＢ（例えば、Ｂ３、Ｂ６、Ｂ１２）、ならびに小分子エフェクター（例えば、タウリン、クレアチン、マルトデキストリン、グルクロノラクトンなど）、また多様な薬草抽出物／調合剤（例えば、ガラナ、チョウセンニンジン、イチョウ、マテチャノキなど）を典型的に含む。加えて、現在市販されている栄養飲料のうちの少なくとも幾つかも、相当量の糖を含む。
【０００６】
そのような栄養飲料の刺激効果の大部分は、カフェイン由来であり、カフェインは一杯分平均８オンスに約８０ｍｇの量で存在する。８０ｍｇの用量のカフェインは、平均的な消費者にとって一般に問題ではないが、複数杯の栄養飲料は、望ましくない、幾つかの場合では危険でもある副作用を生じる傾向がある。例えば、２５０ｍｇを超えるカフェイン用量は、神経過敏、被刺激性、不眠、排尿の増加、不整脈、胃刺激、さらには骨量減少を生じる傾向がある。残念なことに、全身からカフェインを排除することは、「不快な体験」または脱力感を典型的にもたらし、大量のカフェインレベルの急激な低下は、さらには発作と関連している。
【０００７】
大量のカフェイン摂取に関連する問題の少なくとも幾つかを克服するために、多量のビタミンＢ、アミノ酸（チロシン、フェニルアラニン）、タウリン、グルクロノラクトンおよびほんの少量のカフェインを含む他の栄養飲料（例えば、５  Ｈｏｕｒ  Ｅｎｅｒｇｙ）が、現在市販されている。そのような栄養飲料は、カフェイン排除の際の自覚的不快感を典型的には回避するが、ナイアシン紅潮および不眠を含む他の副作用に、多くの場合遭遇する。更に、高用量のビタミンＢ投与の長期的効果は、一般に知られていない。
【０００８】
赤ビートは、長い間、多様な栄養素、特に糖およびベタイン（すなわち、トリメチルグリシン）の一般的な供給源となってきた。赤ビートから得られる更なる有用な化合物にはベタレインが含まれ、ベタレインは、赤色から紫色のベタシアニン（例えば、アマランチン、イソアマランチンなど）および典型的には黄色のベタキサンチン（例えば、ブルガキサンチン）の化学的に多様な群を表し、ベタレインには、医薬品用および食品用着色剤として、ならびに酸化防止剤としての使用が見出されている。例えば、ベタレインは、酸化防止剤として報告されており（例えば、Ｊ．Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００１年１１月；４９（１１）：５１７８−８５を参照すること。）、このことは、ＬＤＬコレステロール酸化の防止に特に関連性を有しうる（例えば、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｒｅｓ．２００３年６月；３７（６）：６８９−９６を参照すること。）。最近では、出願者の同時係属国際出願ＷＯ  ０８／０９４７０５に記載されているように、ベタレイン組成物は、血清トリグリセリド濃度の低減、ＮＦ−ｋＢの阻害およびＳＩＲＴの刺激において効果的であることも見出された。更に、赤ビート繊維は、総コレステロールおよびトリグリセリドレベルを低減すること、同時に、ＨＤＬコレステロールを増加することを含む、摂取されたときに多数の望ましい特性を有することが報告されている。
【０００９】
しかし、赤ビートおよび赤ビート抽出物の多数の利点にもかかわらず、赤ビートは、ＯＡ、多様なアレルギー状態またはアレルギーに関連する状態および活力欠如を治療する活性化合物を含有するとは報告されていない。赤ビート抽出物の問題を複雑にしているのは、特に赤ビート調製物が乾燥形態である場合、それらの製造および分配には問題が多いことである。幾つかある困難のうち、凍結乾燥ビート液汁から調製したベタレインは、多くの場合、塊状であり、極めて吸湿性がある。したがって、そのような調製物は、特に比較的少量を分配する場合、計量し、アリコートにすることが難しいことで有名である。さらに悪いことには、現在知られている乾燥ベタレイン調製物の大部分は、約１重量％（総ベタレイン）のベタレイン濃度に限定されており、抽出または他の方法によりベタレイン濃度を増加するほぼ全ての試みも、吸湿性および集塊の増加をもたらす。あるいは、赤ビート抽出物が液体形態である場合、そのような抽出物は、多くの場合、極めて不安定であり、急速に分解する傾向がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第０５／０５３７１０号
【特許文献２】米国特許出願公開第２００７／０１９６５２７号明細書
【特許文献３】国際公開第０８／０９４７０５号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｊ．Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００１年１１月；４９（１１）：５１７８−８５
【非特許文献２】Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｒｅｓ．２００３年６月；３７（６）：６８９−９６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、赤ビート調製物の多数の組成物および方法が当該技術において知られているが、それらの全てまたはほぼ全てが欠点を被っている。したがって、赤ビート調製物の改善された組成物および方法を提供する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
本発明は、ビート由来組成物およびそのような組成物が多様な状態、特に、骨関節症、ざ瘡、接触皮膚炎、副鼻腔炎および／またはアレルギーに関連する状態の治療に使用される方法を対象とする。より好ましくは、考慮される組成物および方法は、ベタレインが豊富であり、未加工ビート液汁と比較して糖含有量が低減している。
【００１４】
本発明の主題の一つの好ましい態様において、ヒト消費用の生成物を提供する方法は、ヒト消費用の生成物に一定量のベタレインを提供するまたは含める工程を含み、ここで上記量は、生成物が推奨投与量およびスケジュールで摂取される場合、骨関節症、副鼻腔炎、接触皮膚炎、ざ瘡、アレルギー状態、覚醒状態の低減、体力の低減、身体持久力の低減および気分障害の少なくとも１つに伴う少なくとも１つの症状を低減するのに有効である。更なる工程において、次に人は、状態に伴う少なくとも１つの症状を低減するために、生成物を推奨投与量およびスケジュールで経口投与するように指示される。最も典型的には、指示は、症状の低減に有効であるのは上記量のベタレインであることをヒトに更に知らせる。
【００１５】
本発明の主題に限定されることなく、上記量のベタレインが、赤ビートから調製されること、および／またはベタレインの量が、少なくとも２重量％、より典型的には少なくとも１０重量％の濃度の総ベタレインを含む固体調製物として生成物に含まれることが、一般に好ましい。固体調製物が、少なくとも０．３のベタレインと糖の比、より典型的には少なくとも１．０を有することも、一般に好ましい。投与量およびスケジュールは、組成物の総１日摂取量が１０ｍｇから５０ｍｇの総ベタレインを提供するように選択されることが、なお更に一般に好ましい。したがって、特に考慮される態様において、生成物は栄養補給剤として配合され、補給剤は、補給剤が１０００ｍｇ未満の重量を有する１日量において、１０から２５０ｍｇの総ベタレインを提供するように配合される。
【００１６】
したがって、本発明の主題の別の好ましい態様において、骨関節症の治療方法は、骨関節症に伴う少なくとも１つの症状を低減するのに有効な投与量およびスケジュールでベタレインを、それを必要とするヒトに投与する工程を含む。最も好ましくは、投与量およびスケジュールは、ベタレインの総１日摂取量が１０ｍｇから５０ｍｇであるように選択され、所望であれば、ベタレインは植物材料から単離された組成物に存在し、組成物は、少なくとも１．０のベタレインと糖の比を有する。
【００１７】
本発明の主題のなお更に好ましい態様において、栄養補助刺激剤を提供する方法は、栄養補助刺激剤が推奨投与量およびスケジュールで摂取される場合、覚醒状態、体力、身体持久力および気分の少なくとも１つを増加するのに有効な量でベタレインを栄養補助刺激剤に提供する工程を有し、別の工程では、人は、覚醒状態、体力、身体持久力および気分の少なくとも１つを増加するために、推奨投与量およびスケジュールで刺激剤を経口投与するように指示される。投与量およびスケジュールは、刺激剤の総１日摂取量が、１０ｍｇから５０ｍｇのベタレインを提供するようにおよび／またはベタレインが、植物材料から単離され、ベタレインと糖の比が少なくとも１．０である組成物における刺激剤に添加されるように選択されることが、一般に好ましい。
【００１８】
したがって、異なる視点から見ると、ベタレイン含有調製物の使用は、骨関節症、副鼻腔炎、接触皮膚炎、ざ瘡、アレルギー状態、覚醒状態の低減、体力の低減、身体持久力の低減および／または気分障害の治療のための経口投与組成物の製造において考慮される。特に好ましい態様において、ベタレイン含有調製物は、少なくとも５重量％のベタレイン濃度を有する乾燥調製物であるおよび／またはベタレインは、１投与単位あたり少なくとも１５ｍｇの量で調製物に含まれる。
【００１９】
本発明の多様な目的、特徴、態様および利点は、以下の本発明の好ましい実施態様の詳細な記載によって明らかとなる。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（詳細な記述）
本発明者たちは、ベタレイン含有調製物、特に多様な赤ビート調製物が、特定の状態、特に、骨関節症、副鼻腔炎、接触皮膚炎、ざ瘡、アレルギー状態、喘息、覚醒状態の低減、体力の低減、身体持久力の低減および／または気分障害に伴う１つ以上の症状を低減するのに適していることを発見した。
【００２１】
最も好ましくは、本発明の主題の組成物および方法は、総ベタレインの１日投与量の１０ｍｇから２５０ｍｇが達成されるように経口投与される。本明細書に考慮される組成物の好ましい投与は、特定のスケジュールまたは投与量に限定されないが、組成物は、好ましくは１日１回および１日３回の経口投与を使用して、少なくとも３日間、より典型的には少なくとも２週間、最も典型的には少なくとも１か月間にわたって投与されることが、一般に好ましい。
【００２２】
一つの例示的な好ましい態様において、ビート調製物は、少なくとも２重量％、より典型的には少なくとも５−１０重量％のベタレインの濃度で乾燥物質を生成する抽出方法において、赤ビート液汁から調製されることが考慮される（例えば、下記の実施例および実験のセクションを参照すること。）。特に好ましい組成物は、参照により本明細書に組み込まれている、出願者の国際特許出願ＷＯ  ０８／０９４７０５（出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０８／０１４１８）に記載されており、それによって既知である。次にそのような調製物は、経口投与用のカプセルに、カプセル１個あたり約１００ｍｇの総調製物で充填され、１日に３回で少なくとも３週間にわたって経口投与される。
【００２３】
例えば、ベタレイン含有組成物は、参照として本明細書に組み込まれている、ＷＯ  ２００８／０９４７０５に実質的に記載されているプロトコールに従って調製された。簡潔には、乾燥基準で約０．６重量％の総ベタレイン含有量を有する市販のビート液汁（約６５ブリックス；ＳＶＺ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから得た）を濾過して、粒子を除去し、濾液を、更に改質することなくクロマトグラフィーに使用した。濾液を、疎水的に変性されたスチレン樹脂（ＶＤＦ  ＦｕｔｕｒｅｃｅｕｔｉｃａｌｓからＲｅｓｉｎ  ＨＳＴ−２２６として市販されている。）が充填されたカラムの中を、１−２０層容量で装填して、１時間あたり１−５０層容量で通過させた。通過画分を廃棄し、ベタレインを、僅かに塩基性のｐＨで穏緩衝液を使用して樹脂から溶出した（例えば、水中０．１−０．２Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ８．２から８．４、温度１１０°Ｆ（約４３℃）または水中０．１−０．２Ｍの炭酸アンモニウム、ｐＨ７．０から９．０の範囲、同じ温度）。このようにして得られた溶出液を、更に改質することなく凍結乾燥して、乾燥生成物にした。このプロトコールに従って調製された試料は、下記の表１に提示された典型的な含有物を有した。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
このように調製された組成物は、ケルダールおよびフォリン・シオカルテユにより測定して、比較的高い窒素含有量を有したことに留意するべきである。留意すべきは、全ての窒素が、ベタイン（トリメチルグリシン）、アミノ酸（大体は、遊離アミノ酸と１つ以上のベタレインに共有結合したアミノ酸との混合物）、遊離アンモニウムイオンとアンモニウムイオンの対、また、アンモニア化化合物（特に、アミン化ベタレイン）の形態で存在したことである。比較的穏やかで急速な単離方法に起因して、そのように単離されたベタレインは比較的大きな画分のカルボキシル化ベタレインを有することも考慮され（例えば、総ベタレインの少なくとも５０ｍｏｌ％、より典型的には、少なくとも８０ｍｏｌ％、最も典型的には少なくとも９０ｍｏｌ％であり、１７−ジカルボキシ形態は、総ベタレインの１０ｍｏｌ％未満、より典型的には５ｍｏｌ％未満、最も典型的には３ｍｏｌ％未満）、これらの全てまたは少なくとも一部は観察された活性に寄与しうる。
【００２６】
なお更に考慮される態様において、ベタレイン含有組成物の多数の代替的な調製物が適切であると考えられ、総ベタレイン濃度が少なくとも２重量％、より好ましくは少なくとも５重量％、さらにより好ましくは少なくとも１０重量％、最も好ましくは少なくとも２０重量％であり、典型的にはベタレインと糖の比が少なくとも０．３、より好ましくは少なくとも１．０、最も好ましくは少なくとも２．０であるものを含むことが理解されるべきである。更に、ベタレイン含有組成物は、相当高濃度で水に容易に、実質的に完全に溶解することが、一般に好ましい（典型的には５０−１００ｍｇ／ｍｌで、少なくとも９０％−９８％）。なお更には、ベタレイン含有組成物が乾燥調製物であることが一般に好ましいが、ゲルおよび液体調製物も本明細書における使用に適していると考えられることが理解されるべきである。そのような調製物を、更に加工して、特定のｐＨ、粘稠度または非ベタレイン成分の濃度を得ることができる。本発明の主題になお更なる態様において、ベタレイン含有組成物におけるベタレインは、ほぼ天然の組成を有する（すなわち、個々のベタレインが、単離する前の組成物と比較して少なくとも１０％過小または過大である。）。
【００２７】
したがって、ベタレイン組成物を生成する多数の他の方法も、適切であると考えられ、微粉砕ビート根または根剥皮、根細胞懸濁液培養、ツナサボテンの実、さらには選択された高等菌を含む、多様な材料を出発材料として使用することができる。例えば、比較的低い収量が許容される場合、ＷＯ  ９８／２６７９２は、根パルプからベタレイン抽出物を調製する多様な方法を記載し、一方、ＵＳ  ２００３／００３６５６５に記載されているように、凍結乾燥ビートが出発材料として使用され、続いて凍結乾燥ビートは、粉砕され、溶媒抽出され、架橋デキストランクロマトグラフィーに付されて、特定のベタレイン画分を生じる。あるいは、ビート液汁濃縮物を乾燥噴霧して、約０．４重量％のベタレインを含む粉末にすることができる。
【００２８】
他の既知の方法において（例えば、米国特許第４，２３８，５１８号または英国特許１，５５９，２７５に記載されているように）、安定化ベタニジン抽出物は、イオン交換クロマトグラフィーを使用して調製され、一方、Ｇａｒｉｎらは、ビート根抽出物が非イオン樹脂を使用するクロマトグラフィーに非常に低いｐＨで付されて濃縮溶出液を生成する方法を、米国特許第４，４０９，２５４号に記載している。更なる適切な方法および生成物が米国特許第４，０２７，０４２号に記載されており、ここでは、ビート液汁またはビートパルプが酵母発酵、続く処理に付される。
【００２９】
あるいは、赤ビート液汁以外の多数の原材料または出発材料も適切であると考えられ、特に考慮される材料には、未加工赤ビート根またはその一部分（例えば、固体、細断またはペーストの形態）、赤ビート加工排水ならびに赤ビート根細胞培養および培養上澄みが含まれることに留意すべきである。なお更に考慮される態様において、適切な出発材料には、天然の（または組み換え的に生成した）顔料としてベタレインを含む植物材料も含まれうる。したがって、ベタレイン含有植物には、ナデシコ目および選択された担子菌類ならびに多様なサボテン（例えば、ヒラウチワサボテンの実および関連する植物）において見出されるものも含まれる。したがって、出発材料の種類に応じて、ベタレインの正確な組成は著しく異なってもよいことが理解されるべきである。加えて、本発明の主題の組成物は、１つ以上の個別に単離されたまたは合成されたベタレインを、単独または補充成分として含むこともできることが理解されるべきである。しかし、調製物におけるベタレインは、天然またはほぼ天然（すなわち、それぞれのベタレインの差が天然組成と比較して１０％未満）の相対的割合を有するベタレインの複合混合物であることが、一般に好ましい。
【００３０】
本発明の主題の典型的な例において、ベタレイン含有調製物は、少なくとも４．０重量％、より典型的には少なくとも１０．０重量％、さらにより典型的には少なくとも１５．０重量％、最も典型的には少なくとも２０．０重量％の総ベタレイン濃度を有する。本発明の主題のベタレイン調製物の化学組成物は、複数の化学的に異なるベタレインを含む複合組成物であることに留意すべきである。したがって、複合調製物は、ベタキサンチンおよびベタシアニンの両方を含む。最も好ましくは、本明細書に存在するベタレイン調製物は、ほぼ天然の組成を有する（すなわち、元々赤ビートに存在する単独のベタシアニンまたはベタキサンチンで、天然の組成に対して３０％を超えて［より典型的には、１５−２０％を超えて］濃縮または希釈されているものはない。）。ベタレインおよび複合組成物の分析は、Ｃｏｒｋｅら（Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｓｃｉ．２００５年１０月；４３（９）：４５４−６０）またはＰｏｕｒｒａｔら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ５３（１）、２９４−２９５）により記載されたように実施することができる。したがって、典型的な調製物は、少なくとも１０個、より典型的には少なくとも２０個、最も典型的には少なくとも２５個の化学的に異なるベタレインを含む。したがって、多様な使用において、大部分の市販ベタレイン含有調製物（例えば、液汁、液汁濃縮物、粉末）も適していると考えられるが、これらの調製物の有意に多い全体量が必要となりうる（多くの場合において、糖の食事摂取量が増加する。）ことに留意するべきである。
【００３１】
特定の供給源材料および使用される溶媒に応じて、考慮される組成物におけるベタレインと糖の比は、少なくとも０．３、より典型的には少なくとも０．５、さらにより典型的には少なくとも１．０、最も典型的には少なくとも２．０であることに留意するべきである。異なる視点から見ると、最も好ましい調製物は、ベタレインと糖の比の１．０から５．０、さらにより典型的には２．５から４．５を有する。考慮される組成物における残存糖に関して、化学的性質が異なっていることならびに出発材料および処理によって左右されることを認識するべきである。しかし、含まれる最も典型的な残存糖は、単、オリゴおよび／または多糖類、糖アルコールならびにペクチンであることができる。したがって、オリゴおよび／または多糖濃度が低減される場合、酵素または発酵過程を使用して、そのような低減を達成できることを理解するべきである。代替的にまたは追加的に、残留単糖類を、限外濾過、分子ふるいおよび／または酵素変換を含む、当該技術において既知の多様な方法を使用して、除去することができる。
【００３２】
１日用量で投与されるビート調製物の量に関して、調製物の量は、１ｍｇから数百グラム（またはそれ以上）であることが、一般に好ましい。しかし、本発明の主題に限定されることなく、調製物は、状態の少なくとも１つの症状を低減するために有効なベタレインの１日量を提供することが求められる量で典型的に投与されることに留意するべきである。典型的には、有効用量は、約１ｍｇから約１０００ｍｇの範囲、より典型的には約１０ｍｇから約５００ｍｇの範囲、最も典型的には約２５ｍｇから約２５０ｍｇの範囲である。
【００３３】
本発明の主題の調製物は、多数の方法で配合されうる固体ベタレイン含有調製物であることが、更に考慮される。例えば、適切な製剤には、調製物が一次成分である経口製剤（例えば、錠剤、カプセル剤、糖衣錠、即時混合製剤など）または調製物が食用担体（例えば、バー、スナック、菓子など）に配置されている製剤が含まれる。あるいは、ベタレイン含有調製物は、液体が栄養学的に許容される担体に混合または封入されている液体製剤であることもできる。例えば、適切な液体製剤には、飲用剤、シロップ剤、ゼラチン封入液体抽出剤、油浸剤、軟質ゲル剤、カプセル剤用被覆および液体チンキ剤が含まれうる。更に、特に単一のベタレインが活性成分として使用される場合、ベタレインは、経口または非経口投与用の薬学的に許容される製剤に配合されうることが考慮される。そのような場合において、特に適切な製剤には、経口製剤、局所製剤および注射用製剤が含まれる。
【００３４】
加えて、投与に考慮される製剤／組成物は、ＯＡの症状または他の状態の症状を低減することが知られているまたは報告されている第２化合物を含むこともできることを理解するべきである。例えば、特に適切な第２化合物には、グルコサミン、メチルスルホニルメタンおよびコンドロイチン硫酸が含まれ、ここで調製物は、栄養補給剤として提供される。一方、調製物が医薬組成物として提供される場合、第２化合物は、非ステロイド性抗炎症薬、ＣＯＸインヒビターなどであることができる。したがって、考慮される組成物には、単一のベタレインまたは複数の化学的に異なるベタレインが、ＯＡの症状を低減することが知られているまたは報告されている別の化合物と場合により組み合わされて、経口投与可能な化合物として配合されているものが特に含まれる。例えばそのような組成物は、１つ以上のビタミン、ミネラルもしくは薬草調製物と場合により更に組み合わされた錠剤またはカプセル剤として、またはベタレインで強化された食用生産物として、配合されうる。例えば、そのような生産物は、スナック、バー、キャンディー、飲料などであることができる。
【００３５】
したがって、考慮される組成物の投与は、約１−２５０ｍｇ、最も好ましくは１０から１００ｍｇの１つ以上のベタレインを含有する１日投与量を使用する、好ましくは経口である。活力および敏捷性における改善は、大部分の場合、３日間の連続投与後に観察され、一方、骨関節症および他の状態における改善は、約１週間後に典型的に観察される。大部分の場合において、投与は、典型的には１用量あたり１０から２５０ｍｇの量で、典型的には１日に１回から１日に４回（またはそれ以上）である。したがって、特に好ましい投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ（最も好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ）体重である。長期投与が一般に好ましいが、投与は少なくとも３日間、より典型的には少なくとも１週間、さらにより典型的には少なくとも１か月、最も典型的には１か月から６か月にわたって延長できることが理解されるべきである。興味深いことに、考慮される組成物の使用停止は、栄養飲料において通常見られる退薬症状とは関連しなかった。
【実施例】
【００３６】
実験および実施例
抽出の例示的方法
【００３７】
選択肢１：抽出は、乾燥基準で約０．６重量％の総ベタレイン含有量を有する市販のビート液汁（約６５ブリックス；ＳＶＺ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから得た）により始めた。液汁を濾過して粒子を除去し、濾液を更に改質することなくクロマトグラフィーに使用した。カラムを、疎水的に変性されたシリカ樹脂（ＶＤＦ  Ｆｕｔｕｒｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｍｏｍｅｎｃｅ、ＩＬ６０９５４からＲｅｓｉｎ  ＨＳＩ−５６４として市販されている。）で充填し、濾過液汁を１−２０層容量で装填して、１時間あたり１−５０層容量でカラムを通過させた。通過画分を廃棄し、ベタレインを、僅かに塩基性のｐＨで穏緩衝液を使用して樹脂から溶出した（例えば、水中０．１−０．２Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ８．２から８．４、温度１１０°Ｆ（約４３℃）または水中０．１−０．２Ｍの炭酸アンモニウム、ｐＨ７．０から９．０の範囲、同じ温度）。このようにして得られた溶出液を、更に改質することなく凍結乾燥して、乾燥生成物にした。生成物の定量分析は、約１５重量％の総ベタレイン含有量と６重量％の総糖および約８重量％の残留含水量を明らかにした。次に乾燥生成物を、回転羽根粉砕器を使用して粉砕して、粉末生成物を形成し、粉末生成物は６０メッシュのふるいを通過した。９０％を超える、より典型的には９５％を超える自由流動乾燥生成物は、０．１ｍｇ／ｍｌから１５ｍｇ／ｍｌの濃度、より典型的には１０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度、より典型的には５０ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの濃度（幾つかの場合にではより多く、例えば、１００ｍｇ／ｍｌから２００ｍｌ／ｍｌ）で２分未満以内に溶解した。さらにより際立っていることは、生成物は、７５°Ｆ（約２４℃）および５０％の相対湿度で少なくとも２週間の保存において、組成、自由流動性または他のパラメーターに観察可能な変化が何もなく、大型粒子に凝集または集塊することなく安定していた。事実、特定の条件下での２週間（それ以上）の保存の後、実質的に同じ量（＞９０％）の乾燥粉末が、同じメッシュ径のメッシュふるいを通過した。
【００３８】
選択肢２：抽出は、乾燥基準で約０．６重量％の総ベタレイン含有量を有する市販のビート液汁（約６５ブリックス；ＳＶＺ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから得た）により、上記に記載されたように始めた。液汁を濾過して粒子を除去し、濾液を更に改質することなくクロマトグラフィーに使用した。カラムを、疎水的に変性されたスチレン樹脂（ＶＤＦ  ＦｕｔｕｒｅｃｅｕｔｉｃａｌｓからＲｅｓｉｎ  ＨＳＴ−２２６として市販されている。）で充填し、濾過液汁を１−２０層容量で装填して、１時間あたり１−５０層容量でカラムを通過させた。通過画分を廃棄し、ベタレインを、僅かに塩基性のｐＨで穏緩衝液を使用して樹脂から溶出した（例えば、水中０．１−０．２Ｍの酢酸アンモニウム、ｐＨ８．２から８．４、温度１１０°Ｆ（約４３℃）または水中０．１−０．２Ｍの炭酸アンモニウム、ｐＨ７．０から９．０の範囲、同じ温度）。上記に記載されているように乾燥することなく、このようにして得られた溶出液を、担体としての水溶性多糖と（例えば、約３０重量％のマルトデキストリン最終濃度に）混合し、噴霧乾燥して、約１０重量％のベタレインと４５重量％の総糖含有量、約５重量％の残留含水量を有する乾燥生成物にした。噴霧乾燥生成物の平均粒径は、（６０メッシュふるいを通過した）約１５０ミクロンであった。９０％を超える、より典型的には９５％を超える自由流動乾燥生成物は、０．１ｍｇ／ｍｌから１５ｍｇ／ｍｌの濃度、より典型的には１０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度、より典型的には５０ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの濃度（幾つかの場合にではより多く、例えば、１００ｍｇ／ｍｌから２００ｍｌ／ｍｌ）で２分未満以内に溶解した。上記と同様に、生成物は、７５°Ｆ（約２４℃）および５０％の相対湿度で少なくとも２週間の保存において、組成、自由流動性または他のパラメーターに観察可能な変化が何もなく、大型粒子に凝集または集塊することなく安定していた。ここでも、特定の条件下での２週間（それ以上）の保存の後、実質的に同じ量（＞９０％）の乾燥粉末が、同じメッシュ径のメッシュふるいを通過した。
【００３９】
分析試験
【００４０】
ベタレイン豊富赤ビート抽出物（ＲＢＥ）を、上記の選択肢１および２に記載されている方法に従って調製した。
【００４１】
近似分析。ＲＢＥの含水量を、ＵＳＰの乾燥減量（ＬＯＤ）法に従って決定した。試料を真空オーブンにより７０℃で７時間加熱した。総タンパク質含有量を、ブラッドフォード法に基づいて決定した。利用可能な炭水化物を、粗タンパク質、粗脂質、灰および水分の合計を１００％のＤＭから差し引くことにより計算した。灰分を、電気炉ＡＯＡＣ９２３．０３（ＡＯＡＣ、２００５）により５５０℃で試料を発火させることにより決定した。
【００４２】
無機質分析。１．２ｇの試料試験部分を、５００℃±５０℃で８時間乾燥灰化し、ＨＮＯ３で処理した。得られた灰を濃塩酸（５％）で処理し、乾燥し、塩酸溶液に再溶解した（１６）。各元素（Ａｌ、Ｂａ、Ｂ、Ｃａ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｋ、Ｍｇ、Ｍｎ、Ｎａ、Ｚｎ）の量を、誘導結合プラズマ原子分光分析（ＩＣＡＰ−６１  Ｅ−Ｔｒａｃｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｊａｒｒｅｌｌ−Ａｓｈ）を使用して、標準溶液からの各元素の発光に対して未知の試料の発光を比較することよって決定した。使用した標準溶液は、全て、Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ（Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｂｕｒｇ、ＶＡ−ＵＳＡ）から得て、分析試薬等級であった。
【００４３】
糖分析。糖（スクロース、グルコース、フルクトース、マルトース、ラクトースおよびガラクトース）を、時々かき回しながら２４時間放置して、８０％エタノールにより、正確に計量した試料から抽出した。アリコートを不活性ガスにより乾燥し、フェニル−β−Ｄ−グルコシドを内部標準として含有するピリジン中ヒドロキシルアミン塩酸塩の溶液で再構成した。得られたオキシムを、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）処理によりシリル誘導体に変換し、続いて、水素炎イオン化検出器を使用するガスクロマトグラフィーにより分析した。
【００４４】
総食物繊維分析。総食物繊維（ＴＤＦ）の決定は、以下の方法に基づいた。複製試料を、熱安定性α−アミラーゼと共に約１００℃で煮沸して、ゲル化を生じ、次に、リン酸緩衝液中の酵素により消化させて、デンプンおよび一部のタンパク質を分解した。エタノールを各試料に加えて、あらゆる可溶性繊維を沈殿させた。試料を濾過し、残渣をエタノールおよびアセトンですすいで、デンプンおよびタンパク質分解産物ならびに水分を除去した。タンパク質含有量を、複製の一方において決定し、灰分を他方において決定した。試料中の総食物繊維を、タンパク質および灰値を調整した後に計算した。
【００４５】
アミノ酸分析。ＲＢＥの試料を塩酸（ＨＣｌ）で加水分解し、トリプトファンを除く全てのアミノ酸をｐＨ２．２に調整した。トリプトファン試料を、水酸化ナトリウムで加水分解し、ｐＨ５．２に調整した。個別のアミノ酸を、自動アミノ酸分析器を使用して比較することによって決定した。
【００４６】
脂肪酸プロフィール分析。脂肪および脂肪酸を、（２３）に基づいた加水分解法によりＲＢＥ試料から抽出した。焦性没食子酸を加えて、分析の間の脂肪酸の酸化分解を最小限にした。トリグリセリド、トリウンデカノイン（Ｃ１１：０）を内部標準として加えた。脂肪をエーテルの中に抽出し、次にメタノール中のＢＦ３を使用してメチル化し、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）にした。ＦＡＭＥを、Ｃ１１：０内部標準に対するキャピラリーガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により、定量測定した。総脂肪を、トリグリセリド等価物として表される個別の脂肪酸の合計として計算した。飽和および単不飽和脂肪を、それぞれの脂肪酸の合計として計算した。
【００４７】
ビタミン分析。ＲＢＥ試料におけるビタミンＣを抽出し、酸化させ、ｏ−フェニレンジアミンと反応させて、蛍光体を生成した。ビタミンＣ含有量は、既知の標準の蛍光を試料抽出物の蛍光と比較することにより決定した。ベータカロテン分析は、ＨＰＬＣ法により実施した。
【００４８】
総ベタレイン定量。ベタレインの定量は、ＵＶ−ＶＩＳ分光光度計Ｓｈｉｍａｄｚｕ  １６５０  ＰＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｋｙｏｔｏ、Ｊａｐａｎ）を使用するＮｉｌｓｓｏｎの分光光度複数成分法により実施した。顔料濃度（すなわち、ベタシアニンおよびベタキサンチン）の決定は、ベタニンおよびブルガキサンチン−Ｉそれぞれの観点から計算した。総顔料含有量（ベタレイン）は、ベタシアニン成分およびベタキサンチン成分の合計として表した。顔料含有量の計算は、ベタニンでは吸光率値Ａ１％１１２０、ブルガキサンチン−Ｉでは７５０に基づいていた。
【００４９】
ベタレインプロフィール分析。２０ｍｇのＲＢＥを、１ｍｌの水と共に、２ｍｌのガラスバイアルにより中性ガス下で１０分間振とうした。試料を遠心分離し、上澄みを、精製することなく、ＬＣ−ＤＡＤまたはＬＣ−ＭＳにより直接分析した。ＵＶＤ３４０Ｕ、Ｇｙｎｋｏｔｅｋ  ＨＰＬＣポンプシリーズＰ５８０およびサーモスタットを備えたＧｙｎｋｏｔｅｋ  ＨＰＬＣシステム、（Ｇｙｎｋｏｔｅｋ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ、Ｈ．Ｉ．Ａｍｂａｃｈｔ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）をクロマトグラフ分析に使用した。分析カラムは、Ｌｕｎａ  Ｃ−１８（２）２５０×ｍｍ  Ｉ．Ｄ．、５μｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）であった。以下の勾配系を分析物の分離に使用した：Ｂ中３％のＡを０分；Ｂ中１６％のＡを１７分間への勾配；Ｂ中５０％のＡを３０分間への勾配（Ａ  アセトニトリル；Ｂ  水中２％ギ酸）。注入容量は１０μＬであり、０．５ｍＬ／分の流速を適用した。検出は、それぞれ５３３、５０５および４８０ｎｍのＵＶ−Ｖｉｓ検出器またはＤＡＤ（ダイオードアレイ検出）系によりλ＝５３８ｎｍで一般に実施した（２７）。カラムをサーモスタットで３５℃に調節した。陽イオンエレクトロスプレー質量スペクトルを、ＨＰＬＣ勾配系１に適用されるＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒポンプに連結しているＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ質量分析計（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）により、エレクトロスプレー電圧４．５ｋＶ、毛管２５０℃およびシースガス：Ｎ２で記録した。ＭＳを制御し、総イオンクロマトグラムおよび質量スペクトルを、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ  Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウエア（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して記録した。
【００５０】
臨床試験の記載および設計
【００５１】
この試験は、臨床的有効度試験ではなく開放型臨床発見のために設計された。第１の目標は、ＲＢＥが骨関節症状態に関連する疼痛および疲労を改善しうるかを確認することであった。この試験の第２の目標は、最小有効量（ＭＥＤ）を同定することであった。したがって、本発明者は、３つの時点（１、５、１０日目）を有する複数固定用量型試験を用いた。１実験群あたり８人の被験者であった。各群を、１００ｍｇ（群１）、７０ｍｇ（群２）または３５ｍｇ（群３）により１日あたり２回治療した。全ての参加者は、食事を食べる３０分前にＲＢＥカプセル剤を１つ摂取するように求められた。
【００５２】
この試験の被験者は、骨関節症を有すると以前診断され、関節痛、制限された関節柔軟性ならびに慢性疼痛および関節の問題に起因する活力涸渇の感覚などのＯＡの症状特性を報告している人々の群から無作為に選択された。本発明者は、症状を定量化する手段として、１、５および１０日目にマッギール疼痛スコア系および活力スコア系質問表を使用した。
【００５３】
被験者の募集、治療、１、５および１０日目の血液採取、マッギールおよび活力スコア試験、ならびに血液化学は、Ｎｕｔｒａ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ、Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）において実施した。収集した血清中のヒトサイトカインおよびケモカインの測定は、Ｑｕｅｎｓｙｓ、Ｉｎｃ．により調査業務として提供された。ＡＯＰＰ試験は、市販のキット（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｃ、ＵＳＡ）を使用して、ＦｕｔｕｒｅＣｅｕｔｉｃａｌの研究室における治療の１日後および１０日後に被験者から収集した血清により実施した。
【００５４】
接触皮膚炎、湿疹、ざ瘡および副鼻腔炎における、ＯＡに使用されることが考慮される化合物による志願者の治療は、１００ｍｇの上記組成物の１日２回の投与により実施され、自覚的評価を下記に示す。
【００５５】
結果
【００５６】
ＲＢＥの栄養組成。赤ビート（ベータ・ブルガリスＬ．（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｌ．））は、食品として一般的に消費され、ＦｕｔｕｒｅＣｅｕｔｉｃａｌｓのＲＢＥは、この物質から得た特別に加工した抽出物である。下記の表２において、ＲＢＥは、他の既知の濃縮技術により製造された４つの異なる赤ビート産物と簡潔に比較される。本発明者の製造方法によって、ＲＢＥ物質では、糖が涸渇し、総ベタレインが２４％まで豊富になっている。ＲＢＥについての更なる詳細な基本的な化学情報を表３に表す。
【００５７】
【表２】
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【００５８】
【表３】
0005684124.tif 000004
【００５９】
ベタレイン組成物。ＲＢＥ試料を、クロマトグラフ分析して、基本的なベタレインプロフィールを得た（表４；ａλｍａｘで測定した注入試料あたりのピーク領域。顔料シグナル間の相対比較の方位データ）。化合物のプロフィールは精製過程の際に変化する可能性があるため、いくらかの顔料分解が起こりうる可能性によって、試料を、水による抽出の後、直接分析することにした。極めて豊富な基本的化合物のみを表４に提示した。
【００６０】
【表４】
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【００６１】
ベタニン／イソベタニン１／１’の最高ピーク以外に、ベータ・ブルガリスＬ．の根から頻繁に検出されているネオベタニン３の突出したピークもクロマトグラムにおいて観察された。ベタシアニン含有試料における過剰量の３の存在は、試料加工の際のベタニン分解の原因であると何回も考えられているが、この試験では、前濃縮係数がベタニン／イソベタニンと同様であり（データ示されず）、３の存在は、ベタニンの脱水素化よりもむしろその豊富化によりもたらされたことを示唆している。この効果は調査中である。興味深いことに、ベタニン／イソベタニン１／１’の両方のジアステレオマーの濃度は同様であり、抽出濃縮の全過程におけるエピマー化の可能性を示している。主要な顔料１／１’は、分光光度的に測定した総ベタレイン含有量（２４．６％）の主な原因である。
【００６２】
クロマトグラムおよび質量イオン追跡の更なる調査は、既知の１７−デカルボキシル化ベタニン２／２’が濃縮抽出物に低レベルで存在することを明らかにした。出発材料との比較において、これらの豊富化係数は、ベタニンの場合よりもはるかに高く（データ示されず）、このことは、明らかにベタニン分解過程によってもたらされた可能性がある。２／２’の存在は、ベタニン溶液の加熱の際の脱カルボキシル化の原因であると頻繁に考えられているが（２７、３１−３３）、室温での分解を排除することはできない。
【００６３】
【化１】
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【００６４】
マッギール試験を使用して測定した疼痛感覚に対するＲＢＥの効果。この試験は、ベタレイン豊富食物等級物質ＲＢＥが、骨関節症に罹患している人において疼痛性および腫脹性の関節に関連する不快感を低減しうるという、出願者の仮説を確認するために実施された。収集した結果は、全ての被験者が、マッギール質問表を使用して測定すると、用量依存的に疼痛レベルが低減されたと報告したことを示す。詳細なデータを表５に提示する。これらのデータから、ＲＢＥによる治療は、マッギールの感覚部門において有意な改善もたらしたことがはっきりと分かる。
【００６５】
【表５】
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【００６６】
より少ない改善が感情の局面において観察され、質問表の評価部門では、効果が何も観察されなかった。この傾向から、７０ｍｇのＲＢＥによる治療は、感覚部門で評価して疼痛に４１％の低減をもたらしたが、この実験群についてのマッギール質問表の総スコアは、１０日後に３３％の低減を生じた。７０ｍｇのＲＢＥによる５日間の治療は、疼痛の３３％低減（総マッギールスコア）を既にもたらしていることに留意することも、興味深い。ＲＢＥによる治療は、（ＮＳＡＩＤＳのような鎮痛剤と同様の急性の効果ではないが）中程度の急速な効果をもたらすことができる。試験参加者の出口面接は、疼痛における最初の自覚的改善は、治療の３日後に認知されたことを明らかにした。この観察は、３日目の時点を任意の将来のＲＢＥ臨床効能試験プロトコールに含めて、ＯＡ疼痛関連状態の改善に対する急速な活性および効果を追跡するべきであることを強く示唆している。
【００６７】
血液化学分析。標準血清生化学的分析を、１日目および１０日目に収集した各血清により実施した。異常な変化は、あらゆるパラメーターにおいて注目されなかった。全てのパラメーターは、正常な範囲内であった（データ示されず）。
【００６８】
自覚的活力試験。マッギール質問表と平行して、全ての参加者は、体力評価（設問１）、覚醒状態（設問２）、身体持久力評価（設問３）および気分評価（設問４）に関する４つの設問に答えるように求められた。全ての設問に対する評価を１−４の評価に分けた。このアンケート（活力スコアとして本明細書に記載されている。）は、１、５および１０日目に実施した。最高数は、感覚評価の一般的な上昇レベルを示した。
【００６９】
この質問表の全ての詳細なデータを表６に表す。これらのデータは、全ての参加者が、ＲＢＥによる治療後、覚醒状態、体力、持久力および気分の用量依存的な増加の感覚を報告したことを示す。７０ｍｇの治療は、１日目に１２２％の改善をもたらし（表６）、一方、用量１００ｍｇのＲＢＥによる治療は、８１％の改善をもたらし、７０ｍｇのより低い用量による治療が最適であることを示した。したがって、マッギールデータを分析したときに留意するべきであるように、７０ｍｇの用量は、表６に提示されたパラメーターの改善に最も強力であると思われる。また、最低用量の３５ｍｇも、治療の１０日後に、７４％までの有意な活力スコアの増加をなおもたらした。比較すると、同じ用量のマッギールデータでは、僅か１１％の改善しかもたらさなかった。これは、ＲＢＥの主な効果が、３５ｍｇの低い用量が活力スコアに７４％までの改善をもたらすので、活力、気分、持久力および認識力の感覚を調節することであることを示しうる。これらの結果は、活力スコアがマッギール疼痛スコアを補足する追加的な自覚的パラメーターとしてのみ追跡されたので、多少予想外であった。
【００７０】
【表６】
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【００７１】
活力およびマッギールスコアにより収集されたデータは、ＲＢＥが、ＯＡに関連する状態に軽減を実際にもたらしうることを示す。この文書の始めの記述された作業仮説によると、ベタレインは、活性化好中球から放出された次亜塩素酸によるタンパク質の塩素化に対する阻害効果に起因して、ＯＡ状態を改善することができる。この仮説は、１）ベタレインは、活性化好中球から生じる次亜塩素酸の量を低減することができる；ならびに２）塩素化タンパク質は、骨関節症および関連する状態の発症に寄与しうる、という２つの理論的根拠に基づいている。
【００７２】
この仮説を調べ始める前に、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＡＯＰＰ）の血清レベルを、市販のキット（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｃ．、＃ＳＴＡ３１８）を使用して測定した。このアッセイは、クロラミンまたは次亜塩素酸により修飾された血清タンパク質を測定する。詳細な収集データを表７にまとめる。データは、各実験群において１日目にＡＯＰＰのベースラインで有意に広い範囲（最大および最小）を示す。興味深いことに、この範囲は、治療の１０日後に各群において有意に低減された。得られた合計データは、群１、２および３のそれぞれにおいて３６．３、４７．６および３０．９％の低減を示す。しかし、１日目のＡＯＰＰ値の広い範囲に起因して、標準は比較的高い。したがって、これらの結果は、指示的なものおよび血清ＡＯＰＰレベルの上昇したＯＡ被験者に対する更なる臨床調査を正当化するものとしてのみ本明細書において表される。
【００７３】
【表７】
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【００７４】
ＡＯＰＰは、炎症促進性因子としておよび単球からのＴＮＦアルファの放出のインデューサーとして知られている。  したがって、ＲＢＥによる治療が血中ＴＮＦアルファレベルの低減をもたらしうるかを確認することは、理にかなっていた。ベタレインの可能な作用を更に調査するために、ＲＢＥで治療した志願者の血清を、Ｑｙｎｓｙｓ  Ｉｎｃ．により提供されたサイトカインおよびケモカインアレイに付した。収集されたデータは、治療前には、２４人のうち１０人の参加者のみが、Ｅｌｉｓａアッセイの１ｐｇ／ｍＬの検出限界を超えたＴＮＦアルファを有することが見出されたことを示した。しかし、ＲＢＥによる治療は、治療の１０日後にこれらの１０人の被験者にＴＮＦアルファの低減を引き起こした（表８）。同じ血清を、他のサイトカインおよびケモカインのレベルの変化について追加的に試験した。このスクリーニングは、ＲＢＥによる治療が、治療の１０日後にＩＬ６の血清レベル、ＧＲＯアルファおよびＲＡＮＴＥＳレベルを低減したことを示すデータを生じた。（表８）。Ｈ
【００７５】
【表８】
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【００７６】
これらのデータは、ＲＢＥがＴＮＦアルファ、ＩＬ−６、ＲＡＮＴＥＳおよびＧＲＯアルファの血中レベルに好ましい効果を有しうることを示す。１ｐｇ／ｍＬを超えるＴＮＦアルファの血清レベルを示す１群あたりの比較的限定された数の参加者に起因して、表８のデータは、確定的ではなく指示的なものとして表される。ここでは、ＲＢＥの効果は、ＴＮＦアルファ血中レベルの＞１ｐｇ／ｍＬを有する被験者における選択されたサイトカインおよびケモカインの血中レベルに対したものが示される。他の全てのサイトカインおよびケモカインは、ｐｇ／ｍＬ濃度で表される。列の上側の数字は、１日目に測定されたペプチドのレベルを表し、下側の数字は１０日目である。ＤＯＤ１＝１日目に対する１０日目のペプチドのレベルの変化であり、変化％で表される。
【００７７】
１ｐｇ／ｍＬ未満のＴＮＦアルファの初期血清レベルを有する被験者も、マッギールスコアの低減および活力の改善を報告したことに留意するべきである。この観察は、ＲＢＥが、マッギールおよび活力スコアをＯＡ被験者においてＴＮＦアルファ非依存的に改善しうることを示唆する。選択されたサイトカインおよびケモカインの血中レベルの測定は、ＴＮＦアルファ、ＩＬ−６、ＧＲＯアルファおよびＲＡＮＴＥＳが、治療の１０日後に低減する可能性を示した。ＡＯＰＰの初期血中レベルが、治療の１０日間にわたって低減したことも観察され、ＲＢＥに存在するベタレインがヒト被験者において次亜塩素酸の有害な影響を低減しうることを確認した。
【００７８】
副鼻腔炎、接触皮膚炎およびざ瘡試験を、７０ｍｇのベタレイン組成物の１日投与量を使用して、ＯＡについて上記に報告されているようにベタレイン組成物の投与により実施した。全ての被験者は、自覚的な結果を棒目盛で報告し、測定値を取り出して、当該技術に知られているように反応をデジタル化した。
【００７９】
副鼻腔炎の治療について、下記の表９は、多様な提示パラメーターによる例示的な結果を示す。
【００８０】
【表９】
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【００８１】
湿疹および接触皮膚の治療について、下記の表１０は、多様な提示パラメーターによる例示的な結果を示す。
【００８２】
【表１０】
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【００８３】
ざ瘡の治療について、下記の表１１は、多様な提示パラメーターによる例示的な結果を示す。
【００８４】
【表１１】
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【００８５】
このように、ベタレイン含有組成物を使用した多様な状態の治療についての特定の実施態様および適用が開示されてきた。しかし、これらの既に記載されているものの他にはるかに多くの変更が、本明細書の本発明の概念から逸脱することなく可能であることが当業者には明白であるべきである。したがって、本発明の主題は、添付の請求項の精神以外には限定されるべきではない。更に、明細書および請求項の両方を解釈するに際し、全ての用語は、内容と一致して可能な限り広く解釈されるべきである。特に、用語「含む」および「含んでいる」は、成分、構成成分または工程を非排他的に参照するように解釈されるべきであり、このことは、参照された成分、構成成分または工程が、明確に参照されていない他の成分、構成成分または工程と共に存在しうることまたは利用されうることまたは組み合わされうることを示す。