(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0005675799.tif 000004
［式中、
Ａ０はＬｙｓ又はＡｒｇであり；
Ａ５はＡｓｐ、Ｇｌｎ又はＧｌｕであり；
Ａ１５はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１８はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ−１はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はアミノ基であり；
Ｂ０はＡｓｐ、Ｇｌｕ又は化学結合であり；
Ｂ１はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＰｈｅであり；
Ｂ２はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＶａｌであり；
Ｂ３はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ４はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ｂ２９はＬｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３０はＴｈｒ又は化学結合であり；
Ｂ３１はＡｒｇ、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３２はＡｒｇ−アミド、Ｌｙｓ−アミド又はアミノ基であり、
ここでＡ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、及びＢ４を含む群のうち２つのアミノ酸残基は、同時に、互いに独立して、Ａｓｐ若しくはＧｌｕ、又はその
薬理学的に許容される塩である］
のインスリンアナログを含んでなり；そして
０.００１〜０.２ｍｇ／ｍｌの亜鉛、
０.１〜５.０ｍｇ／ｍｌの保存剤、及び
５.０〜１００ｍｇ／ｍｌの等張化剤
を含んでなり、そして
そのｐＨが５又はそれ以下である、水性医薬製剤。
【請求項２】
インスリンアナログが：
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０
），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ａｒｇ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ｌｙｓ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン
を含む群より選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
保存剤が、フェノール、ｍ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、及びパラベンを含む群より選択される、請求項１又は２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
保存剤が、ｍ−クレゾールを１〜３ｍｇ／ｍｌの濃度で含んでなる、請求項３に記載の医薬製剤。
【請求項５】
等張化剤が、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、及びグリセリンを含む群より選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項６】
等張化剤が、グリセリンを２０〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で含んでなる、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
ｐＨ２.５〜４.５の範囲のｐＨを有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項８】
ｐＨ３.０〜４.０の範囲のｐＨを有する、請求項７に記載の医薬製剤。
【請求項９】
インスリン、インスリンアナログ及び／又はインスリン誘導体が２４０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
亜鉛を０.０１又は０.０３又は０.０８ｍｇ／ｍｌの濃度で含んでなる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ１）若しくはそのアナログ若しくは誘導体、又はエキセンジン−３及び／若しくは−４若しくはそのアナログ若しくは誘導体をさらに含んでなる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
エキセンジン−４のアナログが、
Ｈ−ｄｅｓＰｒｏ36−エキセンジン−４−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ4−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ5−ＮＨ2、
ｄｅｓＰｒｏ36[Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）及び
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
又はその薬理学的に許容される塩
を含む群から選択される、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
ペプチドＬｙｓ6−ＮＨ2がエキセンジン−４のアナログのＣ末端に結合されている、請求項１２に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
エキセンジン−４のアナログが、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌ
ｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ａｓｐ28Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキ
センジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセン
ジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｍｅｔ（Ｏ）14  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
又はその薬理学的に許容される塩
を含む群より選択される、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
Ａｒｇ34，Ｌｙｓ26（Ｎε（γ−グルタミル（Ｎα−ヘキサデカノイル）））ＧＬＰ−１（７−３７）［リラグルチド］又はその薬理学的に許容される塩をさらに含んでなる、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
アミノ酸メチオニンを含んでなる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
最大で１０ｍｇ／ｍｌまでの濃度範囲でメチオニンを含んでなる、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項１８】
（ａ）構成成分を水溶液中に導入する工程、及び
（ｂ）ｐＨを調整する工程
を含んでなる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の製剤を製造するための方法。
【請求項１９】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の製剤から構成される、糖尿病を処置するための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、
０．００１〜０．２ｍｇ／ｍｌの亜鉛、
０．１〜５．０ｍｇ／ｍｌの保存剤、及び
５．０〜１００ｍｇ／ｍｌの等張化剤を含んでなり、そして
そのｐＨが５又はそれ以下である、インスリンアナログを備えた水性医薬製剤、並びにその調製、糖尿病を処置するための使用、及び糖尿病を処置するための薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界中で糖尿病に苦しむ人々の数が増加している。彼らの多くはいわゆるＩ型糖尿病であり、彼らにとって不十分な内分泌インスリン分泌の代替が唯一の現在可能な治療である。罹患した人々は、生涯、通常は一日に数回のインスリン注射に依存する。ＩＩ型糖尿病は、インスリンが常に欠乏しているわけではないという点でＩ型糖尿病と対照的であるが、多数の場合に、特に進行した段階において、インスリンでの処置が、必要な場合は経口抗糖尿病薬と組み合わせて、治療の最も有利な形態であると考えられる。
【０００３】
健常な個体において、膵臓によるインスリンの放出は血中グルコース濃度と厳密に結びついている。食後に起こるように、上昇した血中グルコースレベルは、インスリン分泌の対応した増加により迅速に釣り合いを取られる。空腹状態において、血漿インスリンレベルはインスリン感受性器官及び組織へのグルコースの連続的供給に十分であるベースライン値まで降下し、肝臓グルコース産生を夜間は低く維持する。外因性の、通常はインスリンの皮下投与による内因性インスリン分泌の代替は、一般的に、上記の血中グルコースの生理的調節の質には到底及ばない。しばしば、血中グルコースレベルが上方又は下方のいずれかに外れてしまう場合があり、そしてそれらの最も重篤な形態では、これらの場合が生命を脅かすかもしれない。しかし、さらに、長年にわたって上昇した血中グルコースレベルは、初期症状もなく、重大な健康上の危険性を引き起こす。米国における大規模なＤＣＣＴ研究（非特許文献１）は、慢性的に上昇した血中グルコースレベルが後期糖尿病合併症の発症の原因であるということを明確に示した。後期糖尿病合併症は、特定の状況で網膜症、腎症、又はニューロパシーとして顕在化する微小血管及び大血管の傷害であり、失明、腎不全、及び四肢の喪失に至り、そしてさらに、心血管障害の増加した危険性と関連がある。このことから、糖尿病の改善された治療は、血中グルコースを可能な限り生理学的範囲内に近く維持することを第一に目指さなければならないと推測され得る。強化されたインスリン治療という考え方にしたがえば、これは、速効性及び遅効性のインスリン製剤の、一日に数回の注射を用いて達成されるだろう。速効性製剤は、血中グルコースの食後の上昇の釣り合いをとるために食事時に投与される。遅効性基礎インスリンは、特に夜間に、低血糖を引き起こすことなく、インスリンの基礎供給を確実にするよう意図される。
【０００４】
インスリンは、５１個のアミノ酸から構成されるポリペプチドであり、２つのアミノ酸鎖に分けられる：２１個のアミノ酸を有するＡ鎖、及び３０個のアミノ酸を有するＢ鎖。これらの鎖は２つのジスルフィド架橋で一緒に連結されている。インスリン製剤は、糖尿病治療において長年使用されてきた。このような製剤は天然に存在するインスリンだけでなく、より最近では、インスリン誘導体及びインスリンアナログも使用する。
【０００５】
インスリンアナログは、天然に存在するインスリン（すなわち、ヒトインスリン又は動物インスリン）のアナログであり、これらは少なくとも１つの天然に存在するアミノ酸残基の他のアミノ酸での置換、及び／又は少なくとも１つのアミノ酸残基の付加／欠失により、対応する、他の点では同一の天然に存在するインスリンと異なる。問題のアミノ酸は、天然に存在しないアミノ酸であってもよい。
【０００６】
インスリン誘導体は、天然に存在するインスリン又はインスリンアナログの誘導体であり、これらは化学修飾により得られる。化学修飾は、例えば１つ又はそれ以上の確定された化学基の１つ又はそれ以上のアミノ酸への付加であり得る。一般的に言えば、インスリン誘導体及びインスリンアナログの活性は、ヒトインスリンと比較するといくらか変更されている。
【０００７】
作用の開始が加速されたインスリンアナログが特許文献１、特許文献２及び特許文献３に記載されている。特許文献４は、とりわけＢ２７及びＢ２８の置換に関する。特許文献３は、Ｂ２９位で異なるアミノ酸（好ましくはプロリンであるが、グルタミン酸ではない）を有するインスリンアナログを記載する。
【０００８】
特許文献２は、場合によりＢ３及び／又はＡ２１において修飾されていてもよい、Ｂ２８にリジン又はアルギニンを有するインスリンアナログを含む。
【０００９】
特許文献５は、Ｂ３におけるアスパラギン及びＡ５、Ａ１５、Ａ１８又はＡ２１の位置における少なくとも１つのさらなるアミノ酸の修飾により化学修飾から保護されたインスリンアナログを開示する。
【００１０】
一般的に言えば、インスリン誘導体及びインスリンアナログは、ヒトインスリンと比較すると、いくらか変更された作用を有する。
【００１１】
特許文献６は、Ｂ１〜Ｂ６位における少なくとも１つのアミノ酸がリジン又はアルギニンで置き換えられているインスリンアナログを記載する。特許文献６によれば、このようなインスリンは延長された効果を有する。遅延効果は、特許文献７に記載されるインスリンアナログによっても示される。強化されたインスリン治療の考え方は、基礎インスリンの初期投与によって血糖レベルの安定制御を目指すことにより健康に対する危険性を減らそうと試みる。一般的な基礎インスリンの一例は、Ｌａｎｔｕｓ（登録商標）薬（活性成分：インスリングラルギン＝Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）ヒトインスリン）である。一般的に言えば、新規な改善された基礎インスリンの開発における目的は、低血糖事象の数を最少にすることである。理想的な基礎インスリンは、少なくとも２４時間、各患者において安全に作用する。理想的には、インスリン効果の開始が遅延され、そしてかなり平坦な時間／活性プロフィールを有し、それにより、糖の短期供給不足の危険性を有意に最小化し、そしてあらかじめ食物を摂取しなくても投与を可能にする。基礎インスリンの供給は、インスリン活性が可能な限り長く一貫して続く場合に、すなわち一定した量のインスリンが身体に供給される場合に有効である。結果として、低血糖事象の危険性は低く、そして患者特異的で日特異的な変動性が最小化される。従って、理想的な基礎インスリンの薬物動態プロフィールは、作用の遅延された開始及び遅延された作用、すなわち長期持続し、一貫した作用により特徴づけられるべきである。
【００１２】
販売されている、インスリンの代用のための天然に存在するインスリンの製剤は、インスリンの起源（例えば、ウシ、ブタ、ヒトインスリン）及びそれらの組成も異なり、従って活性プロフィール（作用の開始及び持続期間）が影響され得る。異なるインスリン製品の組み合わせにより、非常に広範な種々の活性プロフィールのいずれかを得ること、そして大部分は生理的血糖値をもたらすことが可能である。最近では組み換えＤＮＡ技術によりこの種の修飾インスリンの製造が可能である。これらとしては、延長された作用持続期間を有するインスリングラルギン（Ｇｌｙ（Ａ２１）−Ａｒｇ（Ｂ３１）−Ａｒｇ（Ｂ３２）ヒトインスリン）が挙げられる。インスリングラルギンは、透明な酸性溶液の形態で注射され、そしてその溶解特性に基づいて、皮下組織の生理的ｐＨ範囲では安定なヘキサマー会合として沈殿する。インスリングラルギンは一日に一回注射され、そして他の長期活性インスリンと比較して、その平坦な血清プロフィール及び関連する夜間低血糖の危険性の減少に関して優れている（非特許文献２）。今までに記載された製剤と対照的に、作用の長期持続時間をもたらすインスリングラルギンの特定の製剤は、酸性ｐＨを有する透明溶液を特徴とする。しかし、具体的に酸性ｐＨにおいてインスリンは減少した安定性並びに熱的及び物理的機械的負荷下で凝集する増加した傾向を示し、これは濁り及び沈殿（粒子形成）の形態で現れ得る（非特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＥＰ  ０  ２１４  ８２６
【特許文献２】ＥＰ  ０  ３７５  ４３７
【特許文献３】ＥＰ  ０  ６７８  ５２２
【特許文献４】ＥＰ  ０  １２４  ８２６
【特許文献５】ＥＰ  ０  ４１９  ５０４
【特許文献６】ＷＯ  ９２／００３２１
【特許文献７】ＥＰ−Ａ  ０  ３６８  １８７
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｔｒｉａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｒｏｕｐ（１９９３），Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２９，９７７−９８６
【非特許文献２】Ｓｃｈｕｂｅｒｔ−Ｚｓｉｌａｖｅｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，２：１２５−１３０（２００１）
【非特許文献３】Ｂｒａｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈ．Ｓｃｉ  ８６：５１７−５２５（１９９７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従って、酸性範囲で可溶性であり、作用の遅延した開始及び作用の長期持続時間、すなわち非常に平坦で長期間持続し、かつ均一な活性プロフィールを有する、インスリンアナログのさらなる製剤を見出すことが本発明の目的であった。これは低血糖事象の危険性をさらに有意に最小化する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
驚くべきことに、インスリンアナログが以下を特徴とする場合に、このような製剤が記載された望ましい基本時間／活性プロフィールをもたらすということが見出された
・Ｂ鎖末端がアミド化塩基性アミノ酸残基、例えばリジン又はアルギニンアミドで構成される、すなわち、Ｂ鎖末端におけるアミド化塩基性アミノ酸残基において、末端アミノ酸のカルボキシル基はそのアミド化形態であり、かつ
・インスリンＡ鎖のＮ末端アミノ酸残基がリジン又はアルギニン残基であり、かつ
・アミノ酸位置Ａ８がヒスチジン残基で占められており、かつ
・アミノ酸位置Ａ２１がグリシン残基で占められており、かつ
・Ａ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、及びＢ４の各位置において、酸性アミノ酸による中性アミノ酸の２つの置換、負に荷電したアミノ酸残基の２つの付加、又は１つのこのような置換及び１つのこのような付加が存在し；そして
０．００１〜０．２ｍｇ／ｍｌの亜鉛、
０．１〜５．０ｍｇ／ｍｌの保存剤、及び
５．０〜１００ｍｇ／ｍｌの等張化剤を含んでなり、そして
５又はそれ以下のｐＨを有する。
【００１７】
従って本発明は、
式Ｉ
【化１】
0005675799.tif 000002
［式中、
Ａ０はＬｙｓ又はＡｒｇであり；
Ａ５はＡｓｐ、Ｇｌｎ又はＧｌｕであり；
Ａ１５はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ａ１８はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ−１はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はアミノ基であり；
Ｂ０はＡｓｐ、Ｇｌｕ又は化学結合であり；
Ｂ１はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＰｈｅであり；
Ｂ２はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＶａｌであり；
Ｂ３はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｓｎであり；
Ｂ４はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＧｌｎであり；
Ｂ２９はＬｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３０はＴｈｒ又は化学結合であり；
Ｂ３１はＡｒｇ、Ｌｙｓ又は化学結合であり；
Ｂ３２はＡｒｇ−アミド、Ｌｙｓ−アミド又はアミノ基であり、
ここでＡ５、Ａ１５、Ａ１８、Ｂ−１、Ｂ０、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、及びＢ４を含む群のうち２つのアミノ酸残基は、同時に、互いに独立して、Ａｓｐ若しくはＧｌｕ、又はその薬理学的に許容される塩である］のインスリンアナログを有し；そして
０．００１〜０．２ｍｇ／ｍｌの亜鉛、
０．１〜５．０ｍｇ／ｍｌの保存剤、及び
５．０〜１００ｍｇ／ｍｌの等張化剤を含んでなり、そして
そのｐＨが５又はそれ以下である、
水性医薬製剤を提供する。
【００１８】
本発明はさらに、インスリンアナログが：
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ４），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｕ（Ａ１５），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ｇｌｕ（Ｂ０），Ａｓｐ（Ｂ１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ｌｙｓ（Ｂ３２）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ａｒｇ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン、
Ａｒｇ（Ａ０），Ｈｉｓ（Ａ８），Ａｓｐ（Ａ１８），Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｓｐ（Ｂ３），Ａｒｇ（Ｂ３０），Ｌｙｓ（Ｂ３１）−ＮＨ2ヒトインスリン
を含む群より選択される上記の医薬製剤を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、保存剤がフェノール、ｍ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、及びパラベンを含む群より選択される、上記の医薬製剤を提供する。
【００２０】
本発明はさらに、等張化剤がマンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、及びグリセリンを含む群より選択される、上記の医薬製剤を提供する。
【００２１】
本発明はさらに、ｐＨ２．５〜４．５の範囲、好ましくはｐＨ３．０〜４．０の範囲、より好ましくはｐＨ３．７５付近のｐＨを有する、上記の医薬製剤を提供する。
【００２２】
本発明はさらに、インスリン、インスリンアナログ及び／又はインスリン誘導体が６０〜６０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で存在する、上記の医薬組成物を提供する。
【００２３】
本発明はさらに、グリセリンを２０〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で、好ましくは２５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む、上記の医薬製剤を提供する。
【００２４】
本発明はさらに、ｍ−クレゾールを１〜３ｍｇ／ｍｌの濃度で、好ましくは２ｍｇ／ｍｌの濃度で含む、上記の医薬製剤を提供する。
【００２５】
本発明はさらに、亜鉛を０．０１又は０．０３又は０．０８ｍｇ／ｍｌの濃度で含む、上記の医薬製剤を提供する。
【００２６】
本発明はさらに、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ１）若しくはそのアナログ若しくは誘導体、又はエキセンジン−３及び／若しくは−４若しくはそのアナログ若しくは誘導体をさらに含む、上記の医薬製剤を提供する。
【００２７】
本発明はさらに、エキセンジン−４をさらに含む上記の医薬製剤を提供する。
【００２８】
本発明はさらに、エキセンジン−４のアナログが
Ｈ−ｄｅｓＰｒｏ36−エキセンジン−４−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ4−ＮＨ2及び
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ5−ＮＨ2、
又はその薬理学的に許容される塩
を含む群より選択される、上記の医薬製剤を提供する。
【００２９】
本発明はさらに、エキセンジン−４のアナログが
ｄｅｓＰｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）及び
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）
又はその薬理学的に許容される塩
を含む群より選択される、上記の医薬製剤を提供する。
【００３０】
本発明はさらに、ペプチドＬｙｓ6−ＮＨ2がエキセンジン−４のアナログのＣ末端に結合されている、上記の医薬製剤を提供する。
【００３１】
本発明はさらに、エキセンジン−４のアナログが、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2
ｄｅｓ  Ａｓｐ28Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４
（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｍｅｔ（Ｏ）14  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
又はその薬理学的に許容される塩
を含む群より選択される、上記の医薬製剤を提供する。
【００３２】
本発明はさらに、Ａｒｇ34，Ｌｙｓ26（Ｎε（γ−グルタミル（Ｎα−ヘキサデカノイル）））ＧＬＰ−１（７−３７）［リラグルチド］又はその薬理学的に許容される塩をさらに含む、上記の医薬製剤を提供する。
【００３３】
本発明はさらに、アミノ酸メチオニンを、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌまで、特に好ましくは３ｍｇ／ｍｌまでの濃度範囲で含む、上記の医薬製剤を提供する。
【００３４】
本発明はさらに、
（ａ）構成成分を水溶液中に導入する工程、及び
（ｂ）ｐＨを調整する工程
を含む、上記の製剤を調製するための方法を提供する。
【００３５】
本発明はさらに、糖尿病を処置するための上記の製剤の使用を提供する。
【００３６】
本発明は、上記の製剤から構成される、糖尿病を処置するための薬剤を提供する。
【００３７】
本製剤はさらに、保存剤（例えばフェノール、クレゾール、パラベン）、等張化剤（例えばマンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、グリセリン）、緩衝物質、塩、酸、アルカリ及びさらなる添加物も含み得る。これらの物質は、それぞれ個別に、あるいは混合物として存在し得る。
【００３８】
グリセリン、デキストロース、ラクトース、ソルビトール、及びマンニトールは、典型的には医薬製剤中に１００〜２５０ｍＭの濃度で、ＮａＣｌは１５０ｍＭまでの濃度で存在する。例えばリン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、シトレート、アルギニン、グリシルグリシン、又はＴＲＩＳ（すなわち、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）緩衝剤のような緩衝物質、及び対応する塩も５〜２５０ｍＭの濃度、好ましくは１０〜１００ｍＭの濃度で存在し得る。さらなる添加剤には塩又はアルギニンが含まれ得る。
【００３９】
本発明はさらに、６０〜６０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度（これは０．３５〜７０ｍｇ／ｍｌ又は１０〜１０００単位／ｍｌの濃度にほぼ相当する）、好ましくは２４０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度（これは１．４〜３５ｍｇ／ｍｌ又は４０〜５００単位／ｍｌの濃度にほぼ相当する）でインスリンアナログを含み；
そして５〜２００μｇ／ｍｌ、好ましくは５〜１２０μｇ／ｍｌ、そしてより好ましくは２０〜７５μｇ／ｍｌの濃度で界面活性剤を含む、上記の医薬製剤を提供する。
【００４０】
本発明はさらに、グリセリン及び／若しくはマンニトールを１００〜２５０ｍＭの濃度で、並びに／又はＮａＣｌを好ましくは１５０ｍＭまでの濃度で含む、上述の医薬製剤を提供する。
【００４１】
本発明はさらに、緩衝物質を５〜２５０ｍＭの濃度で含む、上述の医薬製剤を提供する。
【００４２】
本発明はさらに、塩、例えばインスリンの放出を遅らせるもののようなさらなる添加物を含む医薬インスリン製剤を提供する。上記の処方を有するこの種の遅延放出インスリンの混合物もこれに含まれる。
【００４３】
本発明はさらに、この種の医薬製剤を製造する方法を提供する。糖尿病を処置するためのこのような製剤の使用も同様に本発明により提供される。本発明はさらに、インスリン、インスリンアナログ若しくはインスリン誘導体又はその製剤を製造する過程の間の安定化剤としての界面活性剤の使用又は添加を提供する。
【００４４】
実施例の番号を参照して以下に記載される詳細は、いかなる制限的効果も有すると意図されない。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】ラットにおける式Ｉの新規インスリンアナログの血糖低下効果を示す図である。
【図２】イヌにおける式Ｉの新規インスリンアナログの血糖低下効果を示す図である。
【図３】イヌにおけるＹＫＬ２０５の血糖低下効果を示す図である。
【図４】イヌにおけるＹＫＬ２０５の低血糖効果の亜鉛依存性を示す図である。
【実施例】
【００４６】
以下の実施例は、いかなる制限効果も有することなく、本発明の概念を説明することを意図される。
【００４７】
実施例１：  最適ｐＨの評価に関する研究
約２５％の注射用水を導入することにより溶液を調製した。続いて、ＳＡＲ１６１２７１及び塩化亜鉛ストック溶液を加えて撹拌した。１Ｍ  ＨＣｌを加えてｐＨ２のｐＨでＳＡＲ１６１２７１を溶解させた。この溶液を撹拌し、次いで１Ｍ  ＮａＯＨを加えてｐＨを３．７５（３．８）に調整した。注射用水を使用してバッチサイズの９０％にした。続いてこの溶液に撹拌しながらグリセリン８５％及びｍ−クレゾールを加えた。注射用水を使用して所望の最終重量にした。シリンジに取り付けられたフィルターを使用してこの溶液をろ過した。この溶液調製方法を使用して、以下のｐＨレベルに調整された製剤を製造した：ｐＨ  ３．０、３．２５、３．５、３．７５、４．０、及び４．５。３ヶ月の安定性研究をこれらの製剤を使用して行った。３．０、４．０、及び４．５のｐＨを有する製剤の２ヶ月の安定性研究結果を以下に示す。
【００４８】
【表１】
0005675799.tif 000003
【００４９】
これらの結果は、溶液のｐＨが酸性であるほど溶液が安定であることを示す。
【００５０】
実施例２：  等張化剤の選択に関する研究
実施例１に記載されるように溶液を調製した。２．５％グリセリン対０．８％ＮａＣｌを用いた２ヶ月の安定性研究の結果を以下に示す：
２．５％グリセリン
ＳＡＲ１６１２７１の量
２Ｍ＋５℃：３．５６ｍｇ／ｍｌ
２Ｍ＋２５℃：３．４６ｍｇ／ｍｌ
不純物
２Ｍ＋５℃：２．６％
２Ｍ＋２５℃：３．８％
高分子量タンパク質
２Ｍ＋５℃：０．２％
２Ｍ＋２５℃：０．４％
０．８％  ＮａＣｌ
ＳＡＲ１６１２７１の量
２Ｍ＋５℃：３．５２ｍｇ／ｍｌ
２Ｍ＋２５℃：３．４９ｍｇ／ｍｌ
不純物
２Ｍ＋５℃：２．７％
２Ｍ＋２５℃：４．８％
高分子量タンパク質
２Ｍ＋５℃：０．２％
２Ｍ＋２５℃：１．１％
【００５１】
この研究からの結果を使用して、２．５％の濃度でのグリセリンを等張化剤として選択した。製剤は等張化剤としての０．８％  ＮａＣｌと比較してより安定であった。さらに、不溶性の沈殿が製造の間にＮａＣｌを使用した場合に見られた。両方の物質についてオスモル濃度は２９０±３０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇであった。
【００５２】
実施例３：  保存剤の選択に関する研究
以下に記載される製剤を実施例１に記載されるように製造した。異なる保存剤を用いた製剤を微生物品質管理に渡し、ここでそれらは保存剤負荷試験（Ｐｈ．Ｅｕｒ．５．５  Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ  Ａ及びＵＳＰ  ２９に対応する）を受けた。
ｍ−クレゾール：１．５、１．８、２．１、及び２．７ｍｇ／ｍｌ
フェノール：２．７ｍｇ／ｍｌ
ｍ−クレゾール：１．５ｍｇ／ｍｌ及びフェノール：０．６ｍｇ／ｍｌ  ｌ
ベンジルアルコール：１５ｍｇ／ｍｌ
選択された保存剤はｍ−クレゾールであった。２ｍｇ／ｍｌの濃度を選択したが、１．５ｍｇ／ｍｌだけでも保存には十分だっただろう。それにもかかわらず、微生物学的安全性の面及び規定された仕様のためにより高いｍ−クレゾール濃度を選択した。さらに、処方（２．１ｍｇ／ｍｌのｍ−クレゾールは別として）を安定性（３ヶ月）に関して設計した。
【００５３】
実施例４：  アミド化インスリン誘導体の製剤
実施例４〜８は、最初にその製剤の準備も含めて、式Ｉのインスリンアナログの生物学的、薬理学的、及び物理化学的特性の決定（実施例４）、次いで対応する試験の実行（実施例５〜８）のためにのみ役立つ。化合物を含む溶液を以下のように調製した：本発明のインスリンアナログを８０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛として）を含む１ｍＭ塩酸中に標的濃度２４０±５μＭで溶解した。
【００５４】
溶解媒体として使用した組成は以下のとおりである：
ａ）１ｍＭ塩酸
ｂ）１ｍＭ塩酸、５μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として添加される）
ｃ）１ｍＭ塩酸、１０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として添加される）
ｄ）１ｍＭ塩酸、１５μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として添加される）
ｅ）１ｍＭ塩酸、３０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として添加される）
ｆ）１ｍＭ塩酸、８０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として添加される）
ｇ）１ｍＭ塩酸、１２０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛又は塩酸として添加される）
【００５５】
この目的のために、分子量及び標的濃度に基づいて必要とされる量よりも約３０％多い凍結乾燥した物質の量を最初に秤量した。その後、現存濃度を分析用ＨＰＬＣを用いて決定し、次いで８０μｇ／ｍｌ亜鉛を含む５ｍＭ塩酸を用いて、その溶液を標的濃度を達成するために必要とされる体積にした。必要な場合、ｐＨを３．５±０．１に再調整した。ＨＰＬＣによる最終分析で標的濃度２４０±５μＭを確認した後、完成した溶液を、０．２μｍフィルターアタッチメントを有するシリンジを使用して、セプタム及びクリンプキャップで密閉した滅菌バイアルに移した。本発明のインスリン誘導体の短期の単一試験については、例えば等張化剤、保存剤又は緩衝物質の添加に関して処方の最適化は行わなかった。
【００５６】
実施例５：  ラットにおける新規インスリンアナログの血糖減少作用の評価
選択された新規インスリンアナログの血糖低下効果を健常雄性正常血糖ウィスターラットにおいて試験した。雄性ラットに９ｎｍｏｌ／ｋｇの用量のインスリンアナログを皮下注射した。インスリンアナログの注射の直前及び注射後８時間までの規則的な間隔を空けて血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含有量を決定した。この実験は、本発明のインスリンアナログが有意に遅延された作用開始及びより長く均一な作用持続期間をもたらすということを明らかに示した（図１を参照）。
【００５７】
実施例６：  イヌにおける新規インスリンアナログの血糖減少作用の評価
選択された新規インスリンアナログの血糖低下効果を、健常雄性正常血糖ビーグルにおいて試験した。雄性動物に６ｎｍｏｌ／ｋｇの用量のインスリンアナログを皮下注射した。インスリンアナログの注射の直前及び注射後４８時間までの規則的な間隔を空けて血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含有量を決定した。この実験は、使用された本発明のインスリンアナログが有意に遅延された作用開始及びより長く均一な作用持続期間をもたらすということを明らかに示した（図２を参照）。
【００５８】
実施例７：  イヌにおける２倍増加した用量を用いた血糖減少作用の評価
選択された新規インスリンアナログの血糖低下効果を、健常雄性正常血糖ビーグルで試験した。雄性動物に６ｎｍｏｌ／ｋｇ及び１２ｎｍｏｌ／ｋｇの用量のインスリンアナログを皮下注射した。インスリンアナログの注射の直前及び注射の４８時間後までの規則的な間隔を空けて血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含有量を決定した。この実験は、使用された本発明のインスリンアナログが用量依存性効果を有するが、２倍増加した用量にもかかわらず効果プロフィールは平坦であり、すなわち顕著に低い点（底）は観察されないということを明らかに示した（図３を参照）。このことから、本発明のインスリンが、公知の遅延インスリンと比較して、有意に少ない低血糖事象をもたらすと推測され得る。
【００５９】
実施例８：  製剤中の異なる濃度の亜鉛を用いた、イヌにおける血糖減少効果の評価
これらの実験を実施例５に記載されるように行った。図４に結果を示す。従って、本発明のインスリンアナログの時間／活性曲線は、作用の急速な開始がゼロ又は低い亜鉛含有量で観察され、そして作用が２４時間にわたって持続するが、より高い亜鉛含有量では、作用の平坦な開始が観察され、そしてインスリンの効果は２４時間よりもずっと長く持続するように、同じ濃度のインスリンを含む製剤中の亜鉛の量に影響を受け得る。
【００６０】
実施例９：  アミド化インスリン誘導体の製剤
実施例９〜１１は、最初にその製剤の準備も含めて、式Ｉのインスリンアナログの生物学的、薬理学的、及び物理化学的特性の決定（実施例９）、次いで対応する試験の実行（実施例１０及び１１）のためにのみ役立つ。本発明のインスリンアナログを、８０μｇ／ｍｌ亜鉛（塩化亜鉛として）を含む１ｍＭ塩酸中に２４０±５μＭの標的濃度で溶解した。この目的のために、分子量及び標的濃度に基づいて必要とされる量よりも約３０％多い凍結乾燥した物質の量を最初に秤量した。その後、現存濃度を分析用ＨＰＬＣを用いて決定し、次いで８０μｇ／ｍｌ亜鉛を含む５ｍＭ塩酸を用いて、その溶液を標的濃度を達成するために必要とされる体積にした。必要な場合、ｐＨを３．５±０．１に再調整した。ＨＰＬＣによる最終分析で標的濃度２４０±５μＭを確認した後、完成した溶液を、０．２μｍフィルターアタッチメントを有するシリンジを使用して、セプタム及びクリンプキャップで密閉した滅菌バイアルに移した。本発明のインスリン誘導体の短期の単一試験については、例えば等張化剤、保存剤又は緩衝物質の添加に関して処方の最適化は行わなかった。
【００６１】
実施例１０：  ラットにおける新規インスリンアナログの血糖減少作用の評価
選択された新規インスリンアナログの血糖低下効果を健常雄性正常血糖ウィスターラットにおいて試験した。雄性ラットに９ｎｍｏｌ／ｋｇの用量のインスリンアナログを皮下注射した。インスリンアナログの注射の直前及び注射後８時間までの規則的な間隔を空けて血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含有量を決定した。この実験は、本発明のインスリンアナログが有意に遅延された作用開始及びより長く均一な作用持続期間をもたらすということを明らかに示した。
【００６２】
実施例１１：  イヌにおける新規インスリンアナログの血糖減少作用の評価
選択された新規インスリンアナログの血糖低下効果を、健常雄性正常血糖ビーグルにおいて試験した。雄性動物に６ｎｍｏｌ／ｋｇの用量のインスリンアナログを皮下注射した。インスリンアナログの注射の直前及び注射後４８時間までの規則的な間隔を空けて血液サンプルを動物から採取し、そしてそれらの血糖含有量を決定した。この実験は、本発明のインスリンアナログが作用の有意に遅延された平坦な開始及びより長く均一な作用持続期間をもたらすということを明らかに示した。
【図１】
0005675799.tif 000005
【図２】
0005675799.tif 000006
【図３】
0005675799.tif 000007
【図４】
0005675799.tif 000008
【配列表】
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