(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウサギに、総量０．０３〜０．０５ｍLのn-ヘプタノール溶液を２〜４回に分けて点眼し、n-ヘプタノール溶液点眼後、２〜４回強制瞬目させ、次いで１〜３分閉眼させて、角結膜上皮が剥離した角結膜障害モデルウサギを作製すること、および該モデルウサギの眼に被験薬剤を点眼投与して該被験薬剤の角膜組織回復効果を評価することを特徴とする、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効な薬剤のスクリーニング方法。
【請求項２】
n-ヘプタノール溶液がn-ヘプタノールとエタノールの混合溶液である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
n-ヘプタノールとエタノールの比率が９：１から７：３である、請求項２記載の方法。
【請求項４】
該比率が８：２である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
該モデルウサギの眼に被験薬剤を１日２回投与し、角結膜の状態を、ｎ−ヘプタノールの点眼投与の前日；ｎ−ヘプタノールの点眼投与後；１日目以降毎日１回目の被験薬剤点眼投与前；被験薬剤点眼投与３、４、および５日目の２回目の点眼投与後；および最終点眼投与日の翌日に、色素染色により観察する、ここで、０日目はｎ−ヘプタノール処置日であり、かつ被験薬剤の投与開始日である、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
色素がフルオレセインである、請求項５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、国際ドライアイ研究会（International Dry Eye WorkShop（ＤＥＷＳ））2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効な薬剤のスクリーニング方法、および該薬剤を含む医薬組成物を提供する。さらに本発明は、前記薬剤を用いて国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/また角結膜障害を処置する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
国際ドライアイ研究会2007年報告は、世界中のドライアイ専門家70名によって現在のドライアイに関する知見を統括的にまとめたもので、各分科会から定義・分類、発症機序、診断・観察、管理・治療などの各項目について詳細な報告がなされている。この報告は、The Ocular Surface(APRIL 2007, VOL 5, NO.2 pp. 65-204)（非特許文献１、本文献は引用によって本明細書に含まれる）に掲載され、ウェブサイト（www.tearfilm.org）で閲覧可能である。【０００３】
国際ドライアイ研究会2007年報告は、ドライアイについて次のように定義している（「ドライアイ疾患の定義および分類」(75-92頁)の項参照）。
「ドライアイは、涙液と眼表面の多因子的な疾患であり、その結果として眼表面の潜在的な障害とともに、不快感、視覚障害、涙液層の不安定性などの症状を生じる。それは涙液層の浸透圧の上昇と眼表面の炎症を伴う。」【０００４】
上記定義のとおり、ドライアイは多因子的な疾患であるため、その状態や症状により対処法も異なってくる。国際ドライアイ研究会2007年報告では、ドライアイ重症度を4段階に分類し（「ドライアイ疾患の管理と治療」(163-178頁)およびTable 2(173頁)参照）、各重症度に対応した推奨される治療法を提示している（「ドライアイ疾患の管理と治療」の項およびTable 4(174頁)参照）。【０００５】
国際ドライアイ研究会2007年報告において、ドライアイ重症度１および２に推奨される薬剤はいくつか存在するが、ドライアイ重症度３以上のドライアイ、特に角結膜などの眼表面障害に推奨される薬剤は血清のみである。しかも、血清とは、患者自身の血液から得られたもの（いわゆる自己血清）であり、これを適宜希釈して点眼投与しなければならない。【０００６】
現状では、国際ドライアイ研究会2007年報告で分類されたドライアイ重症度３以上に対する有効な薬剤は実質的に存在しない。従って、国際ドライアイ研究会2007年報告の分類、特にドライアイ重症度３以上の分類に則したドライアイ、特に角結膜などの眼表面障害を発現する動物モデルを確立すること、この動物モデルを薬剤のスクリーニングに用いることによって、国際ドライアイ研究会2007年報告で分類されたドライアイ重症度３以上のドライアイ、特に角結膜などの眼表面障害に対する有効な医薬組成物を提供することが望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】The Ocular Surface(APRIL 2007, VOL 5, NO.2 pp. 65-204)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効な薬剤のスクリーニング方法を提供することを目的とする。本発明はまた、かかるドライアイおよび/または角結膜障害の処置のための医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本出願は以下の通りである。
（１）ウサギにn-ヘプタノール溶液を点眼して角結膜上皮が剥離した角結膜障害モデルウサギを作製すること、および該モデルウサギの眼に被験薬剤を点眼投与して該被験薬剤の角膜組織回復効果を評価することを特徴とする、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効な薬剤のスクリーニング方法。
（２）（１）記載のスクリーニング方法によって得られた薬剤を含む、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害の処置のための医薬組成物。
（３）該薬剤がヒト由来アルブミンである、（２）記載の医薬組成物。
（４）ヒト由来アルブミンを有効成分とする、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害の処置のための医薬組成物。
（５）ヒト由来アルブミンがヒト血清アルブミンである、（４）記載の医薬組成物。
（６）（１）記載のスクリーニング方法によって得られた薬剤の有効量を、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害を有する患者へ投与することを含む、ドライアイおよび／または角結膜障害処置方法。
（７）ヒト由来アルブミンの有効量を、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害を有する患者へ投与することを含む、ドライアイおよび／または角結膜障害処置方法。
（８）（１）記載のスクリーニング方法によって得られた薬剤の、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害の処置のための医薬組成物の製造のための使用。
（９）ヒト由来アルブミンのドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害の処置のための医薬組成物の製造のための使用。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効な薬剤のスクリーニング方法を提供することが可能となった。本発明のスクリーニング方法で角膜組織回復効果が確認された薬剤は、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害の処置に有用である。さらに本発明により、前記薬剤を用いて国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害を処置する方法を提供することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
国際ドライアイ研究会2007年報告（The Ocular Surface(APRIL 2007, VOL 5, NO.2) pp65-204）において、ドライアイ重症度は以下のとおり分類される（「ドライアイ疾患の管理と治療」(163-178頁)、Table 2（表２）(173頁）。
【表１】
0005809979.tif 000002
本明細書並びに請求の範囲における「国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害」とは、上記分類に定義されるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/またはこれと同じ徴候または症状のいずれかを示す角結膜障害を意味する。
本明細書並びに請求の範囲における「約」という語は数値とともに用いる場合、＋／−３０％および＋／−２０％、好ましくは＋／−１０％の意味である。
【００１２】
本発明のスクリーニング方法に用いる角結膜障害モデルウサギは、ウサギにn-ヘプタノール溶液を点眼することで作製される。一般的には、ウサギに筋肉内注射による麻酔を施した後、点眼により眼局所麻酔を施し、次いで片眼ずつにn-ヘプタノール溶液を角膜、球結膜に行き渡るように点眼し、強制瞬目させることにより、作製することができる。
【００１３】
使用するウサギの種類は特に限定されないが、ニュージーランドホワイト種、日本白色種、ダッチ種などを使用することができ、特にニュージーランドホワイト種が好ましい。筋肉内注射による麻酔としては、ケタミン、キシラジン、メデトミジンなどが使用できるが、ケタミンとキシラジンの併用が好ましい。眼局所麻酔としては、オキシブプロカイン、リドカイン、ブピバカインなどが使用できるが、オキシブプロカインが好ましい。
点眼するn-ヘプタノール溶液とはｎ−ヘプタノール単独あるいはｎ−ヘプタノールとエタノールとの混合溶液である。親水性を向上させ眼表面になじみやすくし、障害を与えやすくする理由から、ｎ−ヘプタノールとエタノールの混合溶液が好ましい。n-ヘプタノールとエタノールの比率は約９：１から約７：３、好ましくは約８：２である。n-ヘプタノール溶液の点眼量は、総量（約０．０１〜約０．１ｍL、好ましくは約０．０３〜約０．０５ｍL）で、角膜、球結膜に行き渡りやすいように数回（２〜4回）に分けて点眼するのが好ましい。
n-ヘプタノール溶液点眼後、強制瞬目（１〜５回、好ましくは２〜４回）させ、次いで数分程度（約０．５〜約５分、好ましくは約１〜約３分）閉眼させると、角結膜上皮が剥離する。本発明によって安定した角結膜障害モデルを作製することができる。
【００１４】
本発明の角結膜障害モデルウサギを用いて被験薬剤の角膜組織回復効果を評価することで、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効な薬剤をスクリーニングすることが可能となる。
【００１５】
本発明のスクリーニング方法において、被験薬剤の点眼投与回数は特に限定的ではなく、通常１日１〜６回程度であるが、角膜組織回復効果に対する被験薬剤の力価を評価するためには１日点眼回数は少ない方がよく、通常１日２回程度が好ましい。被験薬剤の投与期間は、試験の実施時期、使用するウサギの種類などにより異なる場合もあるが、通常は点眼開始から１０日間で評価可能である。
【００１６】
被験薬剤の角膜組織回復効果を評価する一般的手順は以下の通りである。すなわち、n-ヘプタノール溶液の点眼前後、毎日１回目の被験薬剤点眼投与前、被験薬剤投与３、４および５日目の２回目の点眼投与後および最終点眼投与日の翌日に、それぞれ色素染色により角結膜の状態を観察する。用いる染色色素としては、フルオレセイン、ローズベンガル、リサミングリーンがあげられるが、フルオレセインが好ましい。角膜の染色状態の観察および写真撮影を行い、角膜部分の障害度合をスコア化する。高い染色スコアは角膜障害の度合が大きいことを示し、低い染色スコアは角膜障害の度合が小さいことを示す。
【００１７】
スコア化については従来から知られている手法を用いることができる。例えば、角膜を５区画（中央、上、耳側、鼻側、下）に分け、各区画の染色度３点満点でスコア化し、その合計点（１５点満点）で評価する。染色度は、無染色が０点、一部染色が１点、３分の２程度までの染色が２点、全面に染色している場合は３点とする。
【００１８】
本発明において、被験薬剤の角膜組織回復効果は、角結膜の観察時点毎に角膜障害度合の染色スコアについて被験薬剤点眼眼と生理食塩水点眼眼との間で有意差検定を行い、危険率５％未満の場合を有意と判定する。有意差検定に用いる手法は、適宜所望の手法を選択すればよく、例えば、Paired Student’s t-testなどが例示される。
【００１９】
国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度１、２および３に推奨される薬剤について、本発明の角結膜障害モデルウサギを用いて角膜組織回復効果を確認すると、ドライアイ重症度１で推奨されている粘性成分を含む薬剤（ヒアレイン（登録商標）ミニ点眼液0.3％：参天製薬（日本）：日本承認）や電解質を含む薬剤（Cationorm（登録商標）：Novagali Pharma（フランス）：EU承認）およびドライアイ重症度２で推奨されている抗炎症成分を含む薬剤（Restasis（登録商標）：Allergan（米国）：米国承認）では有意な角膜組織回復効果は認められず、ドライアイ重症度３で推奨される血清（ヒトプール血清：コージンバイオ（日本））では有意な角膜組織回復効果が認められた。したがって、本発明の角結膜障害モデルウサギを用いて角膜組織回復効果を評価する方法は、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効な薬剤のスクリーニング方法として有効であることが理解される。
【００２０】
さらに、本発明のスクリーニング方法により、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３に推奨される薬剤（血清）と同様に、ヒト由来アルブミンが本発明の角結膜障害モデルウサギにおいて有意に角膜組織回復効果を発現することが示された。よって、ヒト由来アルブミンが、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置に有効であることが理解される。
【００２１】
本発明に用いられるヒト由来アルブミンとしては、例えばヒト血清アルブミンが好適である。ヒト血清アルブミンとしては、医療用に通常使用される純度にまで精製されたものであれば、本発明においては特に問題なく使用できる。具体的には電気泳動法で分析した場合にその80％以上がアルブミンであるものが好ましい。また、ウイルス等の不活性化のため、加熱処理したものが好ましい。医薬品として市販されているヒト血清アルブミンが特に好適に用いられる。 遺伝子組換え技術によって微生物により産生されるヒト血清アルブミンもまた、本発明に好適に用いられる。遺伝子組換え技術に従う製造法は、当業者によく知られている。簡単に説明すると、ヒト血清アルブミンをコードする遺伝子を含むベクターを作製し、このベクターを宿主細胞に導入して形質転換させる。そして、目的とするタンパク質を産生する形質転換細胞を選出し、選出した形質転換細胞を培養して、その培養上清あるいは細胞からヒト血清アルブミンを単離、精製する。宿主細胞としては、タンパク質の産生のために当業者に通常用いられる酵母、大腸菌等が例示される。酵母としては、クルイベロミセス属酵母、サッカロマイセス属酵母もしくはピキア属酵母が好ましく、具体的には、クルイベロミセス・ラクチス(Kluyveromyces laactis)、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)もしくはピキア・パストリス（Pichia pastoris）が使用され、特にクルイベロミセス・ラクチスＣＢＳ２３６０株、サッカロマイセス・セレビシエＡＨ２２株（a,his 4,leu 2,can 1）、ピキア・パストリスＧＴＳ１１５株（his 4）等が好適に用いられる。
【００２２】
本発明において、「処置」なる用語には、症状の予防、治療、症状の軽減、症状の減退、進行停止等、症状のあらゆる管理が含まれる。
【００２３】
本発明の医薬組成物の製剤形態は、眼局所投与のための製剤であればよく、特に点眼用剤が好ましい。
【００２４】
本発明の医薬組成物を点眼用剤として製剤する場合、有効成分がヒト由来アルブミンであれば、本発明の組成物はヒト由来アルブミンを約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌ（０．１〜１００ｗｔ／ｖ％）、より好ましくは約１０ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌ（１〜１００ｗｔ／ｖ％）、さらに好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ〜２５０ｍｇ／ｍｌ（１〜２５ｗｔ／ｖ％）含有し、さらに所望により薬学上許容される希釈剤を含有する。
【００２５】
本発明において用いられる「薬学上許容される希釈剤」には、眼科用製剤に用いられ、当業者に知られているあらゆる希釈剤が含まれ、水、生理的食塩水、人口涙液等が例示される。本発明の組成物はさらに、通常の眼科用製剤に使用し得る各種の成分、例えば安定化剤、殺菌剤、緩衝剤、等張化剤、キレート剤、pH調節剤、界面活性剤等を含んでもよい。点眼用製剤の場合、製剤のpHは５〜８に調整するのが好ましい。
【００２６】
本発明の医薬組成物は、１回の投与につき約１〜約１００μｌ/眼、好ましくは約１０〜約５０μｌ/眼、より好ましくは約３０〜５０μｌ/眼を点眼すればよい。
【００２７】
別の観点において、本発明は、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害の処置のための医薬組成物の製造のためのヒト由来アルブミンの使用についても提供する。
【００２８】
さらに別の観点において本発明は、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害に対する処置を必要とする対象に対して有効量のヒト由来アルブミンを投与することを含む、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３以上のドライアイおよび/または角結膜障害の処置方法を提供する。
【００２９】
本発明のこれらの方法において、ヒト由来アルブミンの「有効量」としては、所望の処置のために必要な量であって、患者の症状、年齢、性別、体重、食餌、併用する他の医薬およびその他医学分野の当業者に認識されている様々な要因に応じた最適量を選択すべきである。また、この有効量は、ヒト由来アルブミンの種類や活性によっても異なる。本発明のこれらの方法において、具体的には上記本発明の医薬組成物を１回の投与につき約１〜約１００μｌ眼、好ましくは約１０〜５０μl/眼、より好ましくは約３０〜５０μl/眼の量、１日につき約１〜約２０回、特に１日に１〜１０回投与することが例示されるが、これに限定されるものではない。
【００３０】
本発明で用いられる医薬組成物はまた、本発明の効果を阻害しない限り、他の薬学的に活性な化合物と同時投与することができる。「同時投与」は、他の薬学的に活性な化合物を、本発明の医薬組成物の投与前に、同時に（例えば、同一の製剤中または別の製剤中で）、または投与後に投与することを意味する。例えば、人工涙液、硫酸多糖類（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸等）、シクロスポリン、グルタチオン、フラビンアデニンヌクレオチドナトリウム、コルチコステロイド、テトラサイクリン、ビタミンＡ（レチノール）およびその誘導体（パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールなどのビタミンＡのエステル類等）、細胞成長因子（肝細胞成長因子（HGF）、上皮成長因子（EGF）、線維芽細胞成長因子（FGF）、インシュリン様成長因子（IGF）、神経成長因子（NGF）、血小板由来成長因子（PDGF）、形質転換成長因子（TGF-αおよびTGF-β）、角質細胞成長因子（KGF）等）等を同時投与することができる。
【００３１】
以下、本発明を試験例により、さらに詳細に説明するが、これは本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００３２】
試験例１
（角結膜障害モデルの作製方法）
ウサギ（std:NZW）にケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（４ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射による麻酔後、０．４％オキシブプロカイン（2滴/眼）の点眼により眼局所麻酔を施した。ウサギを横臥位にし、片眼ずつ、用時に調製したn-ヘプタノール溶液（n-ヘプタノール：エタノール＝８：２）０．０４ｍｌ（０．０１ｍｌを４回）を角膜、球結膜に行き渡るように点眼した後、３回強制瞬目させ、３回目の強制瞬目では２分間閉眼させることにより角結膜障害モデルを作製した。【００３３】
（被験薬剤の投与）
角結膜障害作製日から、血清あるいは０．３％ヒアルロン酸ナトリウム製剤をそれぞれ１日２回、１０日間反復点眼した。各被験薬剤点眼眼の対側眼には生理食塩水を同様に点眼した。１回の点眼容量は、いずれも５０μl／眼とした。
血清については、ヒトプール血清（コージンバイオ株式会社(日本)）を濾過滅菌（MILLEX GV、PVDF、０．２２μｍ、MILLIPORE）したものを、ドライアイ治療を目的に用いられる自己血清療法における血清点眼液の調製方法に準じ、生理食塩液で５倍希釈して用いた。
０．３％ヒアルロン酸ナトリウム製剤は、ヒアレイン（登録商標）ミニ点眼液０．３％（参天製薬株式会社（日本））を用いた。【００３４】
（試験群）
【表２】
0005809979.tif 000003
体重の層別無作為化により群分けを行った。【００３５】
（角膜障害の評価）
角結膜の状態の観察を、n-ヘプタノール処置前（初回投与前日）、処置直後、各投与日の１回目の点眼前、投与３、４および５日目の２回目の点眼後、ならびに最終投与日の翌日に行った。
１％フルオレセイン２μlを点眼し、その２分後にデジタルマイクロスコープ（VHX-900、株式会社キーエンス（日本））を用い、発光部にはコバルトブルーフィルター（FUJI FILTER BPB45）を、レンズ手前にはイエローフィルター（FUJI FILTER SC52）を装着し、角結膜の染色状態の写真撮影および観察を行い、角膜の障害の程度をスコア化した。スコア化は、角膜を５区画（中央、上、耳側、鼻側、下）に分け、各区画のフルオレセイン染色度を３点満点とし、その合計点（１５点満点）で評価した。染色度は、無染色が０点、一部染色が１点、３分の２程度までの染色の場合は２点、全面に染色している場合は３点とした。
なお、１％フルオレセインは、フルオレセインナトリウム塩を生理食塩液に溶解させて調製した。
【００３６】
（結果）
n-ヘプタノール処置後の角膜のフルオレセイン染色スコアを表３に示した。なお、n-ヘプタノール処置前における角膜のフルオレセイン染色スコアは、すべての個体について０点であった。
表３に示すように、血清点眼では、障害処置後４日目において、点眼に対し有意な角膜上皮回復効果がみられた（ｐ＜０．０５）。
一方、０．３％ヒアルロン酸ナトリウムの点眼では、角膜上皮回復効果はみられなかった。【００３７】
【表３】
0005809979.tif 000004
【００３８】
試験例２
（試験方法）
角結膜障害モデルの作製方法、被験薬剤の投与、角膜障害の評価は試験例１と同様に行った。
被験薬剤には、０．０５％シクロスポリン製剤あるいは陽イオン乳剤を用いた。０．０５％シクロスポリン製剤は、Restasis（登録商標）（Allergan, Inc.（米国））を用いた。陽イオン乳剤は、Cationorm（登録商標）（Novagali Pharma SA（フランス））を用いた。【００３９】
（試験群）
【表４】
0005809979.tif 000005
体重の層別無作為化により群分けを行った。【００４０】
（結果）
n-ヘプタノール処置後の角膜のフルオレセイン染色スコアを表５に示した。なお、n-ヘプタノール処置前における角膜のフルオレセイン染色スコアは、すべての個体について０点であった。
表５に示すように、０．０５％シクロスポリン、陽イオン乳剤の点眼では、いずれにおいても角膜上皮回復効果はみられなかった。【００４１】
試験例１および２の結果から、本願のモデルウサギを用いた評価系において、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度１および２で推奨される薬剤では角膜組織回復効果が認められず、ドライアイ重症度３で推奨される薬剤（血清）でのみ角膜組織回復効果が認められることが確認された。本発明の角結膜障害モデルウサギは、国際ドライアイ研究会2007年報告の分類、特にドライアイ重症度３以上の分類に則したドライアイ、特に角結膜などの眼表面障害を発現する動物モデルとして有用であることが理解される。【００４２】
【表５】
0005809979.tif 000006
【００４３】
試験例３
（試験方法）
角結膜障害モデルの作製方法、被験薬剤の投与、角膜障害の評価は試験例１と同様に行った。
被験薬剤には、１０％ nHSAを用いた。
１０％ nHSAについては、献血アルブミン-Wf（２５％ヒト血清アルブミン製剤、田辺三菱製薬株式会社）を、生理食塩液とほぼ等張となるように塩化ナトリウム溶液で希釈して用いた。【００４４】
（試験群）
【表６】
0005809979.tif 000007
【００４５】
（結果）
n-ヘプタノール処置後の角膜のフルオレセイン染色スコアを表７に示した。なお、n-ヘプタノール処置前における角膜のフルオレセイン染色スコアは、すべての個体について０点であった。
表７に示すように、１０％ nHSAの点眼により、障害処置後４、４．５、５、５．５、６および１０日目における角膜のフルオレセイン染色スコアは、生理食塩液点眼に対し有意に低値を示し、角膜上皮回復効果がみられた（４、５、５．５、６、１０日目：ｐ＜０．０５、４．５日目：ｐ＜０．０１）。【００４６】
以上の結果から、ヒト血清アルブミンは、国際ドライアイ研究会2007年報告におけるドライアイ重症度３で推奨される血清（試験例１）と同等以上の角膜組織回復効果を有することが理解される。【００４７】
【表７】
0005809979.tif 000008