(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片であるＢ細胞除去剤を含有する、慢性疲労症候群及び筋痛性脳脊髄炎の治療のための医薬組成物。
【請求項２】
Ｂ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はＣＤ２０結合抗体断片が、モノクローナル抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｂ細胞除去剤がヒト化抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｂ細胞除去剤がＣＤ２０へ結合するＢ細胞除去性ＣＤ２０抗体断片である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
Ｂ細胞除去剤がヒト化抗体：リツキシマブ（Rituximab）、オファツムマブ（Ofatumumab）、オクレリズマブ（Ocrelizumab）、又はベルツズマブ（Veltuzumab）より選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
慢性疲労症候群／筋痛性脳脊髄炎の治療用の請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、ここでそのＢ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体の量は、投与量につき１０ｍｇ〜５０００ｍｇの範囲にある、前記除去剤。
【請求項７】
Ｂ細胞除去剤がＢ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片であって、５０〜２０００ｍｇ／ｍ２の前記抗体の単回治療有効投与量又は５０〜２０００ｍｇ／ｍ２の前記抗ＣＤ２０抗体又はその抗ＣＤ２０結合抗体断片の頻回治療有効投与量で対象へ投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
１又は２の注入により２週以内に２回投与することを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、第一の側面において、慢性疲労症候群及び筋痛性脳脊髄炎の治療用のＢ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片に関する。特に、本発明は、好ましくはヒト化されている抗ＣＤ２０モノクローナル抗体又はその断片の、慢性疲労症候群／筋痛性脳脊髄炎の前記疾患に罹患した被検者における治療への使用に関する。
【０００２】
さらなる側面において、本発明は、慢性疲労症候群／筋痛性脳脊髄炎のそれに罹患した被検者における治療のためのＢ細胞除去剤全般に関する。
【背景技術】
【０００３】
慢性疲労症候群
慢性疲労症候群（ＣＦＳ）は、連続して少なくとも６ヶ月存続して、職業、社会、又は個人的な活動の従前レベルの実質的な低下を伴う、説明不能で重篤な疲労を特徴とする。また、これらの患者は、短期記憶又は集中の障害、筋肉痛、関節炎の証拠がない関節痛、頭痛、睡眠障害、及び運動後の消耗といった持続性又は再発性の症状をしばしば体験する（Fukuda K, et al., 1994, Ann Intern Med 121 :953-9et al 1994）。多くの研究が血液検査や放射医学上の検討において微妙な変化を示してきたが、バイオマーカーも診断検査法も存在していない。
【０００４】
ＣＦＳの罹患率は全世界で少なくとも０．５％であると考えられていて、女性：男性の比は、３：１である（Wyller VB. 2007, Acta Neurol Scand Suppl 187:7-14）。
ＣＦＳの病因は、依然として不明である。様々な仮説には、免疫学、ウイルス学、神経内分泌学、及び心理学上の機序が含まれる。ＣＦＳの病理発生は多因子性であり、宿主と環境の両方の要因が関与すると推察されている（Devanur & Kerr 2006）。
【０００５】
現行のＣＦＳ研究の優先項目について記載している２００７年１１月の最新の概説では、この病理発生を解明することの逼迫した必要性が強調されている（Kerr JR et al., 2007, J Clin Pathol 60:113-6）。
【０００６】
ＣＦＳに罹患している多くの患者には、疲労の発症に先立つ急性ウイルス感染症の既往歴がある。研究データが免疫系活性化の証拠を示しているものの、その疾患機序は依然として知られていない。２００１年には、診断検査法を開発することと、より特異的な治療法の開発を導くことを目的として、ＣＦＳの分子機序を解明するための共同研究グループが結成された（Devanur LD, Kerr JR. 2006, J Clin Virol 37:139-50）。
【０００７】
いくつかの遺伝子発現研究がＣＦＳにおいて実施されてきて、免疫応答と防御機序の機能不全に準拠して、特異的であるが複雑な遺伝子の諸変化があることを示した。あるマイクロアレイ研究は、１６の遺伝子のＣＦＳにおける示差的な発現を示して、Ｔ細胞活性化とニューロン及びミトコンドリアの機能の障害を示唆した（Kaushik N, et. Al., 2005, J Clin Pathol 58:826-32）。エプシュタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）感染後にＣＦＳを発症した患者からと、疲労を発症しないＥＢＶ感染被検者からの末梢血単核細胞の全ＲＮＡの系列試料を使用した別のマイクロアレイ研究は、ミトコンドリア機能と細胞周期に影響を及ぼすいくつかの遺伝子が脱調節されていると結論した（Vernon SD, et. Al., 2006, BMC Infect Dis 6:15）。ＣＦＳにおける別の遺伝子発現研究は、膜輸送及びイオンチャネルに関与するいくつかの遺伝子が含まれる運動応答遺伝子の障害を示唆した（Whistler T, et. al., 2005, BMC Physiol 5:5）。最近、ＣＦＳにおける遺伝子ネットワークの分析は、臨床症状と重症度に差異がある７種の異なる遺伝子サブタイプを明らかにした（Kerr J, et. al., 2007, J Clin Pathol）。他のいくつかの研究は、ＣＦＳにおける全体的な遺伝子発現を取り扱ってきた（Fang H, et. al., 2006, Pharmacogenomics 7:429-40; 
Whistler T, et al., 2003, J Transl Med 1 :10）。この遺伝子発現データは、決定的ではないものの、ＣＦＳには様々な細胞機能を表徴する遺伝子発現障害があることを示唆して、この疾患には種々雑多な病理発生があることを示す可能性がある。
【０００８】
ＣＦＳ研究において流布している主題は、ウイルス感染症のような急性の外因刺激に続いて持続的な免疫脱調節があるというものである。ＣＦＳに関連していると報告された微小病原体は、エプシュタイン・バーウイルス（Lerner AM, et al., 2004, In Vivo 18:101-6）、エンテロウイルス（Chia JK, Chia AY. 2007, J Clin Pathol）、パルボウイルスＢ１９（Matano S, et al., 2003, Intern Med 42:903-5）、サイトメガロウイルス（Lerner AM, et al., 2002, In Vivo 16:153-9）、ヒトヘルペスウイルス６型（Chapenko S, et al., 2006, J Clin Virol 37 Suppl 1 :S47-51 ; Komaroff AL. 2006, J Clin Virol 37 Suppl 1 :S39-46）、クラミジア・ニューモニエ（Nicolson GL, et al., 2003, Apmis 111 :557-66）である。しかしながら、これらのデータには、一貫性がない（Soto NE, Straus SE., 2000, Herpes 7:46- 50）。
【０００９】
感染後の疲労症候群に関する最近の研究は、感染後迅速に回復した対照と比較して、１２ヶ月の期間にわたり、ex vivo サイトカイン産生の差異を見出さなかった（Vollmer-Conna U, et al., 2007, Clin Infect Dis 45:732-5）。他の研究は、活性化Ｔ細胞数の増加とサイトカインレベルの上昇によって実証されるような免疫活性化の証拠があるにもかかわらず、ＣＦＳ患者は、ＮＫ細胞の低い細胞傷害性と免疫グロブリンの不足を伴う、抑制された細胞免疫機能を有する場合があると主張している（Patarca R. 2001 , Ann N Y Acad Sci 933: 185-200）。
【００１０】
他の研究では、対照と比較して、多数の循環Ｂリンパ球があること、ＮＫ細胞サブセットが変化していること、接着分子の発現の増加も伴うことが報告された（Tirelli U, et al., 1994, Scand J Immunol 40:601-8）。一方、別の研究は、ＣＦＳ患者においてＣＤ５６＋ＮＫ細胞が低下していること、そしてＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔリンパ球が低下していることを示した（Racciatti D, et al., 2004, lnt J lmmunopathol Pharmacol 17:57- 62）。また、ＣＦＳ患者からのＴ細胞及びＮＫ細胞は、より低いレベルの細胞内顆粒タンパク質、ペルホリンを発現することが見出され、細胞傷害性に媒介する能力の低下を示唆した。
【００１１】
ある研究は、ＣＦＳ患者において、免疫機能に関連した血液検査（laboratory）マーカーのいくつかの異常を示した（Klimas NG, et al., 1990, J Clin Microbiol 28:1403-10）。最も一致した結果は、低いＮＫ細胞の細胞傷害性、さらにまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加、ＣＤ２０＋Ｂ細胞数の上昇、そしてＣＤ２０とＣＤ５を同時発現するＢ細胞サブセットの増加であった（Klimas et al 1990）。これらのデータは、ＣＦＳ患者におけるＮＫ細胞活性の顕著な減少に伴う、活性化ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球の増大を報告した研究によってある程度支持された（Barker E, et al., 1994. Clin Infect Dis 18 Suppl 1 :S136-41）。
【００１２】
ＣＦＳ患者と対照を比較した最近の研究は、in vitro でのマイトジェン刺激後のＴ細胞及びＮＫ細胞でＣＤ６９の発現が減少することを報告し、これらの細胞によって媒介される細胞性免疫の初期活性化における障害を示唆した（Mihaylova I, et al., 2007, Neuro Endocrinol Lett 28:477-83）。
【００１３】
しかしながら、ＣＦＳにおける免疫脱調節に関するデータは一致してなくて、ＣＦＳ患者のリンパ球サブセットをうつ病、多発性硬化症の患者と健常の対照のそれと比較した研究では、Ｔ、Ｂ、又はＮＫ細胞のサブセットに差異を見出さなかった（Robertson MJ, et al., 2005, Clin Exp Immunol 141 :326-32）。同様に、ＣＦＳの免疫学に関する概説は、この研究分野で実施された諸研究には多様な特質があって、免疫学的異常の一致したパターンは確認し得ないと結論付けた（Lyall M, et al., 2003, J Psychosom Res 55:79-90)。
【００１４】
ＣＦＳにおける免疫脱調節の仮説と並んで、この疾患の機序として、内因性の血管作用性神経ペプチドに対する自己免疫が提唱された（Staines DR., 2005, Med Hypotheses 64:539-42）が、科学的データに裏付けられてはいない。この著者はまた、線維筋痛症、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、及び小児突然死症候群の病因にも同様の機序があると示唆して、ホルモン、神経伝達物質、免疫調節物質、及び神経栄養因子（neutrophes）として作用する血管作用性神経ペプチドに対する自己免疫がこれら疾患の複雑な臨床像を説明する可能性があるとの仮説を唱えている。しかしながら、これら神経ペプチドに対する自己抗体は、ＣＦＳにおいて報告されていない。
【００１５】
ある研究は、循環性の抗筋肉及び抗ＣＮＳ抗体のＣＦＳ患者と対照における存在について検討したが、病原性の抗体は検出されなかった。ＣＦＳにおける抗核自己抗体に関する別の報告（Skowera A, et al., 2002, Clin Exp Immunol 129:354-8）は、関連性がないと結論付けたが、ニューロン特異抗原に共通した自己抗体及び抗体について検討した別の報告は、微小管関連タンパク質２及びｓｓＤＮＡに対する抗体がＣＦＳにおいてより高率であることを示した（Vernon SD, Reeves WC. 2005, J Autoimmune Dis 2:5）。ある単一の研究は、ムスカリン性コリン作動性受容体に対する自己抗体がＣＦＳ患者の亜集合に存在していることを示して（Tanaka S, et al., 2003, lnt J MoI Med 12:225-30）、ＣＦＳでは、対照に比較して、不溶性の細胞性抗原に対する自己抗体のより高いレベルが報告された（von Mikeecz A., et al., 1997, Arthritis Rheum 40: 295-305）。
【００１６】
しかしながら、病原性自己抗体の存在についても、Ｔリンパ球媒介性自己抗体についても、首尾一貫したデータを伴う直接的な証拠はない。動物モデルにおいて（推定）ヒト自己抗原に類似した抗原での免疫化によってＣＦＳ疾患を再現させた間接的な証拠もない。
【００１７】
ＣＦＳは、現行では、自己免疫疾患として定義されておらず、ＣＦＳの薬理学的治療のコクラン（Cochrane）レビューでの最新プロトコールも、その病因は不明であると述べている（Rawson KM, et al., 2007. Pharmacological treatments for chronic fatigue syndrome in adults. (Protocol) Cochrane Database of Systematic Reviews, Issue 4. Art. No.: CD006813「成人の慢性疲労症候群の薬理学的治療。（プロトコール）系統的レビューのコクランデータベース、第４号、項目番号：CD006813）。
【００１８】
他のＣＦＳ病理発生仮説は、血小板機能不全（Kennedy G, et al., 2006, Blood Coagul Fibrinolysis 17:89-92）、神経障害（Natelson BH1 et al., 2005, Clin Diagn Lab Immunol 12:52-5）、神経内分泌障害（Van Den Eede F, et al., 2007, Neuropsychobiology 55:112-20）、代謝性又は自律神経性の障害、イオンチャネル機能不全（Chaudhuri A, et al., 2000, Med Hypotheses 54:59-63）、亜鉛欠乏症（Maes M, et al., 2006, J Affect Disord 90:141-7）、毒素曝露又は過去の予防接種（Appel S, et al., 2007, Autoimmunity 40:48-53）である。他の仮説は、ＣＦＳ病理発生においてあり得る機序として、細胞内の免疫脱調節を伴う、運動に対する異常な応答に注目した（Nijs J, et al., 2004, Med Hypotheses 62:759-65）。また、ｎ−３及びｎ−６長鎖多価不飽和脂肪酸を合成する能力の感染後損傷もＣＦＳの病態生理において重要と提唱されてきた（Puri BK. 2007, J Clin Pathol 60:122-4）。
【００１９】
このように、最新ジャーナルでのＣＦＳに関する最近の概説は、この疾患が目下のところ原因不明であると述べている（Hampton T. 2006, Jama 296:2915; Hooper M. 2007, J Clin Pathol 60:466-71; Prins JB, et al., 2006, Lancet 367:346-55）。従って、ＣＦＳの病因及び病理発生について首尾一貫したピクチャーは描かれていない。
【００２０】
現行のＣＦＳ治療法
正確な病理発生に関する知識の不足と原因機序が知られていないために、ＣＦＳに対する現行の標準的な特定治療法はない。系統的な概説は、進取的な筋肉リハビリテーションを行動及び認知の治療と組み合わせることを重視した「生物心理社会モデル」とＣＦＳを結び付けるべきであると結論付けた（Maquet et al, 2006, Ann Readapt Med Phys 49:337-47, 418-27）
生物学的な仮説に基づいた療法を評価する研究がほとんど実施されてこなかった理由は、ＣＦＳの病因が知られていないためであろう。
【００２１】
多数の証拠がおそらくは外因性の刺激によって突然生じた免疫系の脱調節を示唆しているので、２つの研究により静脈内γ−グロブリンのＣＦＳへの使用が評価された。１つは、急性のパルボウイルスＢ１９感染後のＣＦＳ患者３名についての症例報告であった。５日間の静脈内免疫グロブリンで治療されて、臨床症状の改善とサイトカイン脱調節の解消を得た（Kerr et al , 2003., Clin Infect Dis 36:e100-6）。７１名の青年期ＣＦＳ患者を対象にした二重盲検、プラセボ対照の無作為化試験では、３回のγ−グロブリン注入を１ヶ月ごとに投与して、平均１８ヶ月で６ヶ月ごとのフォローアップ時に、γ−グロブリン治療群で機能改善があった。この試験の最初の６ヶ月では、プラセボ群とγ−グロブリン治療群の両方で改善が報告されてた（Rowe 1997, J Psychiatr Res 31 :133-47）。
【００２２】
抄録形式（Lamprecht 2001 , Meeting of the American association of chronic fatigue syndrome (AACFS)「米国慢性疲労症候群学会（ＡＡＣＦＳ）会議、シアトル」で報告されたパイロット試験では、６名のＣＦＳ患者にエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ［エンブレル］、即ち、ＴＮＦ媒介性の細胞性応答を阻害するように作用する可溶性の競合的ＴＮＦ受容体である、ヒト腫瘍壊死因子受容体、ｐ７５  Ｆｃ融合タンパク質）が投与されて、臨床上の有益性が報告された。
【００２３】
他の治療戦略の中では、バルガンシクロビルを使用して、長期持続性の疲労があって、エプシュタイン・バーウイルス又はヒトヘルペスウイルス６型に対する抗体力価が上昇している１２名の患者が治療されて、９名で症状の改善があったが、その効果が抗ウイルス効果によるのか又は免疫調節により媒介されたのかは不確実であった（Kogelnik AM,. 2006., J Clin Virol 37 Suppl 1 :S33-8）。免疫調節作用の特性がある抗生物質のアジスロマイシンでの治療は、９９名のＣＦＳ患者の５９％で改善をもたらした（Vermeulen & Scholte 2006, J Transl Med 4:34）。
【００２４】
現行のＣＦＳ研究の優先項目に関する最新の概説（Kerr et al 2007, J Clin Pathol 60:113-6）では、この疾患の分子病理発生の理解に注力する、有用なバイオマーカーを検証する、そして特定治療法の開発に役立つ新たな研究が奨励されている。この目的には、マイクロアレイを使用する遺伝子発現全体の分析が含まれる、様々な分子技術が利用可能で使用されてきた。
【００２５】
Ｂ細胞リンパ腫及び自己免疫におけるＢ細胞除去性抗体の例としてのリツキシマブ
リツキシマブ（Ｍａｂｔｈｅｒａ［マブセラ］、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））は、膜貫通分子、ＣＤ２０の細胞外部分中のエピトープに対して指向されたモノクローナル抗体である。この抗体は、断片抗原結合（Ｆａｂ）部分がマウスであり、Ｆｃ部分がヒトである、ヒト−マウスのキメラ抗体である。ＣＤ２０タンパク質は、Ｂリンパ球で発現されるが、幹細胞や成熟形質細胞では発現されない。ＣＤ２０はまた、大多数のＢ細胞リンパ腫で発現される。ＣＤ２０は、膜貫通カルシウム伝導と細胞周期進行の調節に関与している可能性があるが、正確な機能は知られていない（Janas et al 2005, Biochem Soc Symp:165-75）。リツキシマブのＣＤ２０への結合時には、そのＦｃ部分への補体の結合と補体カスケードの活性化を介して、そしてまた抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）の活性化を介して、免疫学的な細胞殺傷が媒介される（Glennie et al 2007, MoI Immunol 44:3823-37）。
【００２６】
リツキシマブ分子は、その結合後に内部化せず、形質膜から除かれないので、このモノクローナル抗体が細胞表面上に存続して、免疫学的攻撃を延長することが可能になる。
Ｂ細胞リンパ腫の治療におけるリツキシマブの役割は、にわかに注目されている。無痛性リンパ腫において、化学療法と組み合せてリツキシマブを使用する免疫化学療法、又はリツキシマブ単独療法は、今や現行の標準治療法であり、最も一般的なタイプの侵襲性Ｂ細胞リンパ腫（び慢性大細胞性Ｂ細胞リンパ腫）において、高齢者（Coiffier et al 2002, N Engl J Med 346:235-42）と若年患者（Pfreundschuh et al 2006, Lancet Oncol 7:379-91）の両方で、そしてまた最も一般的な無痛性リンパ腫（濾胞性リンパ腫）（Marcus et al 2005, Blood 105:1417-23）において全体生存率を改善してきた。濾胞性リンパ腫の選択された患者において、リツキシマブはまた、導入療法後の維持治療として３ヶ月ごとに２年間の注入で使用されて、全体生存率の改善を示している（van Oers et al 2006, Blood 108:3295-301）。
【００２７】
近年、リツキシマブは、自己免疫疾患においても有効な治療薬であることが証明されたが、ここではＢ細胞の除去が、例えば慢性関節リウマチにおける臨床改善としばしば関連している（Dass et al 2006, Expert Opin Pharmacother 7:2559-70）。リツキシマブが療法上の役割を有する様々な自己免疫疾患のリストが増えている（Sanz et al 2007, Front Biosci 12:2546-67）。将来のＢ細胞標的指向化とその除去のためには、特異的なＢ細胞サブセットに対する抗体の開発が重要であろう（Dorner & Lipsky 2007, Expert Opin Biol Ther 7:1287-99）。
【００２８】
リツキシマブ抗体は、ＣＤ２０抗原に対して指向された、遺伝子工学処理されたキメラのマウス／ヒトモノクローナル抗体である。リツキシマブは、米国特許第５，７３６，１３７号において「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれた抗体である。ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、再発性又は難治性で低グレード又は濾胞性のＣＤ２０陽性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の治療に適用されている。in vitro の作用機序研究は、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）がヒト補体へ結合して、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）によりリンパ様Ｂ細胞系を溶解することを実証した（Reff et al. Blood 83(2):435-445 (1994)）。追加的に言えば、それは、抗体依存性Ｔ細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）のアッセイにおいて有意な活性を有する。より最近、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、トリチウム化チミジン取込みアッセイにおいて抗増殖効果を有してアポトーシスを直接誘導するが、他の抗ＣＤ１９及びＣＤ２０抗体はそうでないことが示された（Maloney et al Blood 88(10):637a (1996)）。ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）と化学療法及び毒素とのシナジーも、実験的に観測されてきた。特に、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、薬剤抵抗性のヒトＢ細胞リンパ腫細胞系をドキソルビシン、ＣＤＤＰ、ＶＰ−１６、ジフテリア毒素、及びリシンの細胞傷害効果へ感作させる（Demidem et al Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals 12(3):177-186 (1997)）。in vivo の前臨床試験は、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）がカニクイザルの末梢血、リンパ節、骨髄より、おそらくは補体及び細胞媒介性のプロセスを介してＢ細胞を除去することを示した（Reff et al. Blood 83(2):435-445 (1994)）。ＣＤ２０抗体に関する特許及び特許公開公報には、米国特許第５，７７６，４５６号、５，７３６，１３７号、５，８４３，４３９号、６，３９９，０６１号、及び６，６８２，７３４号、並びに米国特許出願番号：ＵＳ２００２／０１９７２５５Ａ１、ＵＳ２００３／００２１７８１Ａ１、ＵＳ２００３／００８２１７２Ａ１、ＵＳ２００３／００９５９６３Ａ１、ＵＳ２００３／０１４７８８５Ａ１（Anderson et al)；米国特許第６，４５５，０４３Ｂ１号及びＷＯ００／０９１６０（Grillo-Lopez, A.）；ＷＯ００／２７４２８（Grillo-Lopez and White）；ＷＯ００／２７４３３（Grillo-Lopez and Leonard）；ＷＯ００／４４７８８（Braslawsky et al）；ＷＯ０１／１０４６２（Rastetter, W.）；ＷＯ０１／１０４６１（Rastetter and White)；ＷＯ０１／１０４６０（White and Grillo-Lopez）；ＵＳ２００１／００１８０４１  Ａ１、ＵＳ２００３／０１８０２９２Ａ１、ＷＯ０１／３４１９４（Hanna and Hariharan）；米国特許出願番号：ＵＳ２００２／０００６４０４及びＷＯ０２／０４０２１（Hanna and Hariharan）；米国特許出願番号：ＵＳ２００２／００１２６６５  Ａ１及びＷＯ０１／７４３８８（Hanna, N.）；米国特許出願番号：ＵＳ２００２／００５８０２９Ａ１（Hanna, N.）；米国特許出願番号：ＵＳ２００３／０１０３９７１Ａ１（Hariharan and Hanna）；米国特許出願番号：ＵＳ２００２／０００９４４４Ａ１及びＷＯ０１／８０８８４（Grillo-Lopez, A）；ＷＯ０１／９７８５８（White, C）；米国特許出願番号：ＵＳ２００２／０１２８４８８Ａ１及びＷＯ０２／３４７９０（Reff, M.）；ＷＯ０２／０６０９５５（Braslawsky et al.）；ＷＯ２／０９６９４８（Braslawsky et al.）；ＷＯ０２���０７９２５５（Reff and Davies）；米国特許第６，１７１，５８６Ｂ１及びＷＯ９８／５６４１８（Lam et al）；ＷＯ９８／５８９６４（Raju, S.）；ＷＯ９９／２２７６４（Raju, S.）；ＷＯ９９／５１６４２、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、米国特許第６，２４２，１９５Ｂ１号、米国特許第６，５２８，６２４Ｂ１号、及び米国特許第６，５３８，１２４号（Idusogie et al.）；ＷＯ００／４２０７２（Presta, L.）；ＷＯ００／６７７９６（Curd et al.）；ＷＯ０１／０３７３４（Grillo-Lopez et al.）；米国特許出願番号：ＵＳ２００２／０００４５８７Ａ１及びＷＯ０１／７７３４２（Miller and Presta）；米国特許出願番号：ＵＳ２００２／０１９７２５６（Grewal, L）；米国特許出願番号：ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１（Presta, L.）；米国特許第６，５６５，８２７Ｂ１号、６，０９０，３６５Ｂ１号、６，２８７，５３７Ｂ１号、６，０１５，５４２号、５，８４３，３９８号、及び５，５９５，７２１号（Kaminski et al）；米国特許第５，５００，３６２号、５，６７７，１８０号、５，７２１，１０８号、６，１２０，７６７号、６，６５２，８５２Ｂ１号（Robinson et al）；ＵＳ特許第６，４１０，３９１Ｂ１号（Raubitschek et al）；米国特許第６，２２４，８６６Ｂ１号及びＷＯ００／２０８６４（Barbera-Guillem, E.）；ＷＯ０１／１３９４５（Barbera-Guillem, E.）；ＷＯ００／６７７９５（Goldenberg）；ＵＳ特許出願番号：ＵＳ２００３／０１３３９３０Ａ１及びＷＯ００／７４７１８（Goldenberg and Hansen）；ＷＯ００／７６５４２（Golay et al.）；ＷＯ０１／７２３３３（Wolin and Rosenblatt）；米国特許第６，３６８，５９６Ｂ１号（Ghetie et al）；米国特許第６，３０６，３９３号及び米国特許出願番号：ＵＳ２００２／００４１８４７Ａ１（Goldenberg, D.）；米国特許出願番号：ＵＳ２００３／００２６８０１Ａ１（Weiner and Hartmann）；ＷＯ０２／１０２３１２（Engleman, E.）；ＵＳ特許出願番号：２００３／００６８６６４（Albitar et al.）；ＷＯ０３／００２６０７（Leung, S.)；ＷＯ０３／０４９６９４、ＵＳ２００２／０００９４２７Ａ１、及びＵＳ２００３／０１８５７９６Ａ１（Wolin et al）；ＷＯ０３／０６１６９４（Sing and Siegall）；ＵＳ２００３／０２１９８１８Ａ１（Bohen et al.）；ＵＳ２００３／０２１９４３３Ａ１及びＷＯ０３／０６８８２１（Hansen et al.）；ＵＳ２００３／０２１９８１８  Ａ１（Bohen et al.）；ＵＳ２００２／０１３６７１９Ａ１（Shenoy et al）；ＷＯ２００４／０３２８２８（Wahl et al.）が含まれ、このいずれも参照により本明細書に明確に組み込まれる。また、米国特許第５，８４９，８９８号及びＥＰ出願番号３３０，１９１（Seed et al）；米国特許第４，８６１，５７９号及びＥＰ３３２．８６５  Ａ２（Meyer and Weiss）；ＵＳＰ４，８６１，５７９（Meyer et al）；ＷＯ９５／０３７７０（Bhat et al）；ＵＳ２００３／０２１９４３３Ａ１（Hansen et al）も参照のこと。
【００２９】
リツキシマブの安全性プロフィール
Ｂ細胞リンパ腫の治療におけるリツキシマブの安全性プロフィールはよく知られていて、３７０，０００名の患者のデータベースからの経験に基づく（Kavanaugh 2006, J Rheumatol Suppl 77:18-23）。リンパ腫の治療では、主に最初の腫瘍負荷が高い患者において、サイトカイン放出によって引き起こされる、最初の注入の間の軽度〜中等度の反応が最も一般的な副作用である（Solal-Celigny 2006, Leuk Res 30 Suppl 1 :S16-21）。この注入の間には、リツキシマブ分子のタンパク質の性質により、アレルギー反応が見られる場合がある。
【００３０】
すべてのＢ細胞指向療法での懸念は、体液性免疫に対して予測される影響である。延長される治療では、そして特に（３週ごとにほぼ６〜８回のリツキシマブ注入を用いる導入療法後の）維持治療（即ち、３ヶ月ごとに２年間の注入）では、Ｂ細胞の除去がより顕著であり、ほとんどの患者は、低γ−グロブリン血症になるものである。しかしながら、低レベルの免疫グロブリンとＢ細胞の除去は、感染症の臨床リスクに対して重大な影響を及ぼさないようである。
【００３１】
リツキシマブの使用からの１つの潜在的で重篤な副作用は、間質性肺疾患の発症である。これは、潜在的には生命を脅かす合併症であるが、ごく稀であり、文献では１６症例しか報告されていない（Wagner et al 2007, Am J Hematol 82:916-9）。
【００３２】
慢性の自己免疫疾患におけるリツキシマブ治療に関連した安全性の課題は、臨床試験において不当に扱われていて（Edwards et al 2006, Best Pract Res Clin Rheumatol 20:915-28）、これまでのフォローアップではさほど十分な時間がない。故に、長期の安全性は、特にリツキシマブが年に１回又は２回、多年の間投与される場合、依然として明瞭にすべきことである。自己免疫疾患の患者では、リツキシマブ注入はしばしば２回（２〜３週離して）投与され、この連続注入が６〜１２ヶ月後に繰り返される場合がある。即ち、（短期間で）リンパ腫患者よりかなり少ない用量である。
【００３３】
今日、Ｂ細胞を除去することが可能な次世代の抗ＣＤ２０抗体が臨床試験において使用されていて、おそらくは今後数年以内に臨床現場で使用されよう。例えば、グラクソ・スミスクライン社の完全ヒト化抗ＣＤ２０抗体、オファツモマブ（Ofatumomab）は、現在、Ｂ細胞リンパ腫の再発について臨床試験中である。次世代の完全ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、さらにより強力なＢ細胞除去をもたらすと思われるので、Ｂ細胞リンパ腫の治療においてリツキシマブよりさらにより有効であるはずである。さらに、それらは、リツキシマブについて記載されるより少ない副作用を示すと推定されている。
【００３４】
慢性疲労症候群の治療には様々なレジメンが示唆されてきた。例えば、ＵＳ２００７／０２５３７５では、慢性疲労症候群に罹患している患者の治療のために複雑な治療計画が提供されている。前記レジメンは、とりわけ、ミルナシプランの投与を含む。
【００３５】
ＣＦＳ／ＭＥの未知の病因に照らして、ＣＦＳの有効な治療に有用な化合物への不断の要求がある。
【発明の概要】
【００３６】
本発明は、慢性疲労症候群の治療に適用可能な新規化合物を提供することを目的とする。特に、本発明者は、抗ＣＤ２０抗体のようなＢ細胞除去剤が慢性疲労症候群の治療に有用であることを見出している。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［１］慢性疲労症候群及び筋痛性脳脊髄炎の治療のためのＢ細胞除去剤。
［２］Ｂ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片である、［１］に記載のＢ細胞除去剤。
［３］モノクローナル抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片である、［２］に記載のＢ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はＣＤ２０結合抗体断片。
［４］ヒト化抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片である、［２］に記載のＢ細胞除去剤。
［５］ＣＤ２０へ結合するＢ細胞除去性ＣＤ２０抗体断片であり、好ましくは、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓＦｖからなる群より選択される抗原結合断片である、［２］に記載のＢ細胞除去剤。
［６］ヒト化抗体：リツキシマブ（Rituximab）、オファツムマブ（Ofatumumab）、オクレリズマブ（Ocrelizumab）、ＧＡ１０１、ＢＣＸ−３０１、ベルツズマブ（Veltuzumab）、又はＤＸＬ６２５より選択される、［１］〜［５］のいずれかに記載のＢ細胞除去剤。
［７］メトトレキサート、ＴＲＵ−０１５、又はＳＢＩ−０８７である、［１］に記載のＢ細胞除去剤。
［８］慢性疲労症候群／筋痛性脳脊髄炎の治療用の［１］〜［６］のいずれかに記載のＢ細胞除去剤であって、ここでそのＢ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体の量は、投与量につき１０ｍｇ〜５０００ｍｇの範囲にある、前記除去剤。
［９］Ｂ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片であって、５０〜２０００ｍｇ／ｍ２の前記抗体の単回治療有効投与量又は５０〜２０００ｍｇ／ｍ２の前記抗ＣＤ２０抗体又はその抗ＣＤ２０結合抗体断片の頻回治療有効投与量で被検者へ投与される、［１］〜［６］のいずれかに記載のＢ細胞除去剤。
［１０］慢性疲労症候群及び筋痛性脳脊髄炎を治療する方法であって、［１］〜［９］のいずれかに記載のＢ細胞除去剤をそれに罹患した被検者へ投与する工程を含んでなる、前記方法。
［１１］［１］〜［９］のいずれかに記載のＢ細胞除去剤の１又は２の注入剤を２週以内に２回投与する工程を含んでなる、慢性疲労症候群及び筋痛性脳脊髄炎を治療するための方法。
［１２］慢性疲労症候群又は筋痛性脳脊髄炎に罹患している被検者へＢ細胞除去性抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片のメトトレキサートとの組合せを同時的、分離的、又は連続的に投与することによる、［１０］又は［１１］に記載の慢性疲労症候群及び筋痛性脳脊髄炎を治療する方法。
［１３］［１］〜［９］のいずれかに記載のＢ細胞除去剤の、慢性疲労症候群又は筋痛性脳脊髄炎の治療への使用。
【００３７】
好ましくは、抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片は、モノクローナル抗体である。特に好ましくは、前記モノクローナル抗体は、ヒト被検者へ投与されるとき、ヒト化抗体である。本発明においては、その抗体が、例えば遺伝子工学によって組換え的に産生され得る抗体断片として存在してよいことも考慮される。
【００３８】
さらなる側面において、本発明は、慢性疲労症候群／筋痛性脳脊髄炎の治療の方法に関するが、前記方法は、Ｂ細胞除去剤、例えばＢ細胞除去性の抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片の治療有効量を前記疾患又は障害に罹患した被検者へ投与する工程を含んでなる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、１年の期間にわたる３名の患者のＣＦＳ症状の発現が、異なる治療介入、即ちリツキシマブ（登録商標）又はメトトレキサート（Ｍ）の効果を浮き彫りにすることを図示的に示す。ＣＦＳ症状の症状スコアは、０〜１０の範囲にあり、ここで０は無症状を意味して、一方１０は、きわめて重篤なＣＦＳの症状を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明は、慢性疲労症候群／筋痛性脳脊髄炎の治療用の、抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片のようなＢ細胞除去性の生物学的実体、又はＢ細胞除去活性を有する低分子のような化学的実体のいずれかのＢ細胞除去剤に関する。
【００４１】
本発明の文脈において、「慢性疲労症候群（ＣＦＳ）」及び「筋痛性脳脊髄炎（ＭＥ）」という用語は、同義的に使用される。
本明細書に使用されるように、「Ｂ細胞除去」又は「Ｂ細胞除去活性」という用語は、被検者の循環Ｂ細胞レベルを低下させる、化学的実体又は生物学的実体（例、抗体）のいずれかの実体の能力を意味する。Ｂ細胞除去は、例えば、細胞死を誘導するか又は増殖を抑制することによって達成してよい。
【００４２】
「ＣＤ２０」抗原又は「ＣＤ２０」は、ヒトの末梢血又はリンパ様器官に由来するＢ細胞の９０％より多くの表面に見出される、約３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は、正常Ｂ細胞並びに悪性Ｂ細胞の両方に存在しているが、幹細胞では発現されない。文献にあるＣＤ２０の他の名称には、「Ｂリンパ球限定抗原」と「Ｂｐ３５」が含まれる。ＣＤ２０抗原については、例えば、Clark  et al. Proc. Natl. Acad. Sd. (USA) 82:1766 (1985) に記載されている。ＣＤ２０という用語には、ヒト以外の種の同等分子も含まれる。最近、Ｔ細胞及びＮＫ細胞のサブセット上でのＣＤ２０の低レベル発現が報告された。
【００４３】
「Ｂ細胞」は、骨髄内部で成熟するリンパ球であり、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞、又はエフェクターＢ細胞（形質細胞）が含まれる。
より広義の意味において、本発明は、抗体又はその断片のＣＦＳの治療への使用だけでなく、Ｂ細胞除去活性を有するＣＤ２０分子アンタゴニスト全般のＣＦＳの治療への使用にも関する。
【００４４】
本明細書において相互交換可能的に使用される「アンタゴニスト」又は「Ｂ細胞除去剤」は、例えば、Ｂ細胞上のＣＤ２０のようなＢ細胞表面マーカーへの結合時に、Ｂ細胞を哺乳動物において破壊するか又は除去する、及び／又は、例えば、Ｂ細胞によって誘発される体液性応答を抑制又は予防することによって、１以上のＢ細胞機能に干渉する分子のことである。本発明によるアンタゴニスト又はＢ細胞除去剤は、それで治療された哺乳動物においてＢ細胞を除去する（即ち、循環Ｂ細胞レベルを低下させる）ことができる。そのような除去は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害、及び／又はＢ細胞死の誘導（例えば、アポトーシスを介する）のような様々な機序を介して達成されてよい。本発明の範囲内に含まれるアンタゴニストには、任意選択的に細胞傷害剤と共役するか又はそれへ縮合した、Ｂ細胞表面マーカーへ結合する、抗体、合成又はネイティブ配列のペプチド、及び低分子アンタゴニストが含まれる。好ましいアンタゴニストは、ＣＤ２０抗体又はＣＤ２０結合抗体断片である。さらに、既知のＢ細胞除去剤、メトトレキサートのような低分子アンタゴニストが好ましい。
【００４５】
Ｔ細胞又はＮＫ細胞のサブセットのような、Ｂ細胞以外の細胞がＣＤ２０抗原を発現する限りにおいて、これらの細胞も、ＣＤ２０を介して作用する薬剤であるＢ細胞除去剤で除去される。
【００４６】
「アポトーシスを誘導する」アンタゴニストは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞萎縮、小胞体の拡張、細胞断片化、及び／又は膜小胞（アポトーシス体と呼ばれる）の形成のように、標準アポトーシスアッセイによって決定される、例えばＢ細胞のプログラム化された細胞死を誘導するものである。
【００４７】
本明細書の「抗体」という用語は、最も広い意味で使用されて、具体的には、それらが所望の生物学的活性を明示する限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体より形成される多重特異性抗体（例、二重特異性抗体）、及び抗体断片が含まれる。
【００４８】
好ましい態様において、ＣＦＳの治療に有用な抗体は、Ｂ細胞除去性のＣＤ２０結合抗体断片である。
「ＣＤ２０結合抗体断片」は、その抗原結合領域を含む、インタクト抗体の一部を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖（linear）抗体；単鎖抗体分子；及び、抗体断片より形成される多重特異性抗体が含まれる。本発明の目的では、「インタクト抗体」は、重鎖及び軽鎖の可変ドメイン、並びにＦｃ領域を含んでなる抗体である。
【００４９】
「ネイティブ抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖へ連結するが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動する。それぞれの重鎖と軽鎖はまた、規則的な間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ１１）を有して、いくつかの定常ドメインがこれに続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ１）、そしてその他端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一定常ドメインと並列していて、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと並列している。軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間では、特別なアミノ酸残基がインターフェイスを形成すると考えられている。
【００５０】
「可変」という用語は、可変ドメインのある部分が抗体間の配列において広範囲に異なっていて、それぞれの特別な抗体のその特別な抗原への結合及び特異性に使用されるという事実に関連する。しかしながら、この可変性は、抗体の可変ドメイン全体で万遍に分布しているわけではない。それは、軽鎖と重鎖の両方の可変ドメインにおいて超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブな重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、主にβシート配置をとって、３つの超可変領域によって連結した４つのＦＲをそれぞれ含み、これはそのβシート構造を連結して、ある場合はその一部を形成するループを形成する。各鎖中の超可変領域は、ＦＲによってごく近傍にまとめられて、他の鎖由来の超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、Kabat et al「Sequences of proteins of Immunological Interest（免疫学的に興味深いタンパク質の配列）」第５版、米国国立衛生研究所、保健局、メリーランド州ベセスダ（1991）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体を抗原へ結合させることに直接は関与しないが、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）における抗体の参画のような、様々なエフェクター機能を発揮する。
【００５１】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、緊密に非共有連結した１つの重鎖と１つの軽鎖の可変ドメインのダイマーからなる。それぞれの可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用してＶＨ−ＶＬダイマーの表面上の抗原結合部位を画定するのは、この配置においてである。集合して、この６つの超可変領域は、抗体へ抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は、抗原に特異的な３つの超可変領域だけを含んでなるＦｖの半分）でも、結合部位全体よりは低いアフィニティーではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１以上のシステインが含まれる、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での少数の残基の付加によって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（複数）が少なくとも１つのフリーチオール基を担うＦａｂ’の表記法である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元来は、ヒンジシステインをその間に有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。あらゆる脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なる種類の１つへ帰属させることができる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依拠して、抗体は、異なるクラスへ帰属させることができる。インタクト抗体の５つの主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２へさらに分類される場合がある。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、α、δ、ε、γ、及びμとそれぞれ呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元配置はよく知られている。「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、ここでこれらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、抗原結合に望まれる構造をＦｖが形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨ及びＶＬドメインの間にさらに含む。ｓｃＦｖの概説については、「The Pharmacology of Monoclonal Antibodies（モノクローナル抗体の薬理学）」113巻、Rosenburg and Moore 監修、Springer-Verlag，ニューヨーク（1994）中、Pluckthun, 269-315 を参照のこと。
【００５２】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位がある小さな抗体断片を意味し、該断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−Ｖ１）において軽鎖可変ドメイン（Ｖ１）へ連結した重鎖可変ドメイン（Ｖ１１）を含む。同じ鎖上のこの２つのドメイン間での対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、これらのドメインは、別の鎖の相補ドメインと対合して２つの抗原結合部位を創出するように強いられる。ダイアボディについては、例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及び、Hollinger et al, Proc. Natl. Acad. Sd. USA, 90: 6444-6448 (1993) により詳しく記載されている。
【００５３】
本明細書に使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団より得られる抗体を意味する。即ち、この集団を含んでなる個別の抗体は、そのモノクローナル抗体の産生の間に生じ得る可能な変異体（このような変異体は、概して微量に存在する）を除けば、同一である、及び／又は同じエピトープへ結合する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向された異なる抗体が典型的には含まれるポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらに他の免疫グロブリンが混在していない点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の集団より得られるという抗体の特徴を示すのであって、ある特別な方法による抗体の産生を必要とするものと解釈してはならない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Kohler et al, Nature, 256: 495 (1975) によって初めて記載されたハイブリドーマ法によって作製しても、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製してもよい。「モノクローナル抗体」は、例えば、Clackson et al, Nature, 352: 624-628 (1991) 及び Marks et al, J. Mol Biol, 222: 581-597 (1991) に記載の技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。本明細書のモノクローナル抗体には、特に、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特別な種に由来するか又は特別な抗体クラス又はサブクラスに属する抗体中の対応配列に同一又は相同である一方で、その鎖（複数）の残りは別の種に由来するか又は別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体、並びにそのような抗体の断片中の対応配列に同一又は相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）が、それらが所望の生物学的活性を明示する限りにおいて含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison et al, Proc. Natl. Acad. Sd. USA, 81: 6851-6855(1984)）。本発明において興味深いキメラ抗体には、非ヒト霊長動物（例、ヒヒ、アカゲザル、カニクイザルのような旧世界ザル）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列を含んでなる、「霊長動物化」抗体が含まれる（米国特許第５，６９３，７８０号）。非ヒト（例、マウス）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分で、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、ここではレシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する、マウス、ラット、ウサギ又はヒト霊長動物のような非ヒト種の超可変領域（ドナー抗体）からの残基に置き換えられている。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでよい。これらの修飾は、抗体機能をさらに洗練させるためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むものであり、ここでは、超可変ループの全部又は実質的に全部が非ヒト免疫グロブリンのそれに対応して、ＦＲの全部又は実質的に全部が、上記のＦ���置換（複数）を除けば、ヒト免疫グロブリン配列のそれである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれを含んでもよい。さらなる詳細については、Jones  et al, Nature 321 :522-525 (1986); Riechmann et al, Nature 332:323- 329 (1988); 及び Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992) を参照のこと。「超可変領域」という用語は、本明細書において使用されるとき、抗原結合の主因となる抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌｌ）、５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７（Ｌ３）と重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）及び９５〜１０２（Ｈ３））；Kabat et al「Sequences of proteins of Immunological Interest（免疫学的に興味深いタンパク質の配列）」第５版、米国国立衛生研究所、保健局、メリーランド州ベセスダ（1991））及び／又は「超可変ループ」由来の残基（例、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、及び９１〜９６（Ｌ３）と重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）；Chothia and Lesk J. Mol .Biol. 196: 901-917 (1987)）を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるような超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。「裸の抗体」は、細胞傷害部分又は放射標識のような異種分子へ共役していない抗体（本明細書に定義されるような）である。ＣＤ２０抗原へ結合する抗体の例には：「Ｃ２Ｂ８」（「リツキシマブ」（「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」と今日呼ばれている）（米国特許第５，７３６，１３７号、参照により本明細書に明確に組み込まれる）；「Ｙ２Ｂ８」又は「イブリツモマブ・チウセキタン」と明記されるイットリウム−［９０］−標識２Ｂ８マウス抗体、ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（米国特許第５，７３６，１３７号、参照により本明細書に明確に組み込まれる）；「トシブモマブ」とも呼ばれるマウスＩｇＧ２ａ「ＢＩ」、１３１Ｉで標識して「１３１Ｉ−ＢＩ」抗体（ヨウ素１１３Ｉ−トシツモマブ、ＢＥＸＸＡＲＴＭを産生してもよい（米国特許第５，５９５，７２１号、参照により本明細書に明確に組み込まれる）；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Press et al. Blood 69(2): 584-591 (1987)）と、「フレームワークパッチ化」又はヒト化１Ｆ５が含まれるこれらの変異体（ＷＯ０３／００２６０７，Leung, S.；ＡＴＣＣ寄託番号：ＨＢ−９６４５０）；マウス２Ｈ７及びキメラ２Ｈ７抗体（米国特許第５，６７７，１８０号、参照により本明細書に明確に組み込まれる）；ヒト化２Ｈ７；オファツムマブ、ＣＤ２０  ｈｕＭａｘ−ＣＤ２０上の新規エピトープに対する完全ヒト化ＩｇＧ１（Genmab，デンマーク；ＷＯ２００４／０３５６０７）；ＡＭＥ−１３３（Applied Molecular Evolution）；Ａ２０抗体又はキメラ又はヒト化Ａ２０抗体（それぞれ、ｃＡ２０、ｈＡ２０）のようなその変異体（ＵＳ２００３／０２１９４３３，lmmunomedics）；並びに、International Leukocyte Typing Workshop より入手可能なモノクローナル抗体：Ｌ２７、Ｇ２８−２、９３−１Ｂ３、Ｂ−ＣＩ、又はＮＵ−Ｂ２（「Leukocyte Typing III（白血球タイプ決定法ＩＩＩ）」（McMichael，監修、440頁，オックスフォード大学出版局（1987）中 Valentine et al）が含まれる。さらに、好適な抗体は、例えば、オクレリズマブ（Ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ，Biogen Idec/Genentech/Roche の完全ヒト化ＣＤ２０抗体）、抗体ＧＡ１０１（Biogen Idec/Genentech/Roche の第三世代のヒト化抗ＣＤ２０抗体）である。さらに、Biolex Therapeutics のＢＬＸ−３０１（最適にグリコシル化されたヒト化抗ＣＤ２０）又は Immunomedics のベルツズマブ（Veltuzumab）（ｈＡ２０）、又は Inexus Biotechnology のＤＸＬ６２５もともにヒト化抗ＣＤ２０抗体であり、適している。
【００５４】
さらに、他のＢ細胞除去剤、特に、エプラツズマブ（Epratuzumab）のような抗ＣＤ２２抗体、又はＭＤＸ−１３４２のような抗ＣＤ１９ヒト化抗体もＣＦＳの治療に使用することができる。
【００５５】
本明細書の「リツキシマブ」又は「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」又は「マブセラ（mabthera）」という用語は、米国特許第５，７３６，１３７号（参照により本明細書に明確に組み込まれる）においてＣＤ２０抗原に対して指向されて「Ｃ２Ｂ８」と明記された、遺伝子工学処理によるキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体を意味して、ＣＤ２０へ結合する能力を保持するその断片も含まれる。純粋に本発明の目的で言えば、そして他に示さなければ、「ヒト化２Ｈ７」は、ヒトＣＤ２０へ結合するヒト化抗体又はその抗原結合断片を意味し、ここで該抗体は、霊長動物のＢ細胞を in vivo で除去するのに有効である。
【００５６】
Ｂ細胞除去剤又はアンタゴニスト、特に抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片の「有効量」という表現は、ＣＦＳを治療するのに有効であるＢ細胞除去剤又はアンタゴニストの量を意味する。例えば、抗ＣＤ２０抗体は、慢性疲労症候群／筋痛性脳脊髄炎の治療のために、投与量につき１０ｍｇ〜５０００ｍｇの範囲で投与される。例えば、投与量は、リツキシマブの１００〜１０００ｍｇ／ｍ２の範囲、特に、単回注入として５００ｍｇ／ｍ２であってよい。典型的には、メトトレキサートの投与量は、５ｍｇ〜３０ｍｇ／週の範囲にある。
【００５７】
１つの好ましい態様において、Ｂ細胞除去剤は、化学的実体、例えば低分子である。当該技術分野では、多様なＢ細胞除去剤が知られていて、例えば、既知のＢ細胞除去剤は、ＢＡＦＦ−アンタゴニストである。さらに、既知のＢ細胞除去剤には、ＢＲ３のアンタゴニスト、α４−インテグリンのアゴニスト、等が含まれる。例えば、メトトレキサートは、Ｂ細胞除去活性を示す葉酸の類似体である。他の有用なＢ細胞除去剤は、ＣＤ２０に対する低分子モジュラー免疫医薬品（small modular immunopharmaceuticals：ＳＭＩＰ）である。例えば、Ｂ細胞除去剤として作用するＳＭＩＰは、Trubion Pharmaceuticals のＴＲＵ−０１５又はＳＢＩ−０８７である。また、ＳＭＩＰは、強力なＢ細胞除去活性を有する、抗体より小さな単鎖ポリペプチドであり得る。
【００５８】
好ましい態様では、Ｂ細胞除去剤の生物学的実体を代表する抗ＣＤ２０抗体とＢ細胞除去剤の化学的実体を代表するメトトレキサートの組合せが慢性疲労症候群又は筋痛性脳脊髄炎を治療するのに有用である。これら実体の投与は、同時的、分離的、又は連続的に行ってよい。例えば、第一のレジメンでは抗体又はメトトレキサートのいずれか一方を被検者へ投与して、一方、第二のレジメンでは他の薬剤を投与する。
【００５９】
Ｂ細胞除去剤、アンタゴニスト、特に、抗ＣＤ２０抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片を含んでなる組成物は、十分な医療実践に一致したやり方で製剤化、投薬、及び投与される。この文脈での考慮要因には、治療される特別な疾患又は障害の段階、治療される特別な哺乳動物、個々の被検者の臨床症状、薬剤送達の部位、投与の方法、投与の計画、並びに医療実践者に知られた他の要因が含まれる。Ｂ細胞除去剤の有効量は、投与される抗体又は抗体断片と同様に、そのような考察によって支配される。一般的な提案として、投薬につき非経口的に投与されるアンタゴニストの有効量は、１以上の投薬で、被検者の身体の１平方メートル（ｍ２）につき約２０ｍｇ〜約１０，０００ｍｇの範囲であろう。インタクトな抗体の例示の投与レジメンには、３７５ｍｇ／ｍ２（毎週）ｘ４；１０００ｍｇｘ２（例えば、１日目と１５日目）；又は１グラムｘ３が含まれる。被検者への投与用の抗体は、前記抗体の単回治療有効投与量において、５０〜２０００ｍｇ／ｍ２であるか、又は５０〜２０００ｍｇ／ｍ２の前記抗体又はそのＣＤ２０結合抗体断片の頻回治療有効投与量である。しかしながら、上記に述べたように、抗体の上記提案量は、療法上の多数の考慮事項に依るものである。適正な用量及び計画を選択するときの重要因子は、上記に示したように、得られる結果である。Ｂ細胞除去剤アンタゴニストは、抗体と同じように、非経口、局所、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、及び／又は病巣内の投与が含まれる、あらゆる好適な手段によって投与される。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下の投与が含まれる。鞘内投与も考慮される。さらに、Ｂ細胞除去剤アンタゴニストは、抗体と同じように、好適にもパルス注入によって、例えば、減量させるアンタゴニストの用量で投与してよい。好ましくは、投薬は、静脈内注射によって与えられる。
【００６０】
このようなＢ細胞除去性アンタゴニストを産生する方法についてここで記載する。アンタゴニスト（複数）の産生又はそのスクリーニングに使用すべき抗原は、例えば、所望のエピトープを含有する、可溶型のＣＤ２０又はその一部であり得る。代替的に、又は追加的に、ＣＤ２０をその細胞表面で発現する細胞も、アンタゴニスト（複数）を産生するか又はそれをスクリーニングするのに使用することができる。アンタゴニストを産生するのに有用な他のＣＤ２０の形態は、当業者に明らかであろう。
【００６１】
好ましいアンタゴニストは抗体であるが、本発明では抗体以外のアンタゴニストも考慮される。例えば、アンタゴニストは、低分子アンタゴニストを含んでよい。低分子のライブラリーについてＣＤ２０に対してスクリーニングして、その抗原へ結合する低分子を同定することができる。あるいは、その低分子について、既知の技術によって、そのＢ細胞除去活性全般に関してスクリーニングしてよい。その低分子について、そのアンタゴニスト特性をさらにスクリーニングしてよい。アンタゴニストは、ラショナルデザイン又はファージディスプレイによって産生されるペプチドであってもよい（例えば、1998年8月13日公開のＷＯ９８／３５０３６を参照のこと）。１つの態様において、選択される分子は、抗体のＣＤＲに基づいて設計された「ＣＤＲ模倣体」又は抗体類似体であってよい。このようなペプチドは、それ自体が拮抗性であっても、該ペプチドは、該ペプチドの拮抗特性を加えるか又は高めるように、細胞傷害剤へ縮合させてもよい。本発明に準拠して使用する抗体アンタゴニストの産生の例示技術についての記載を以下に続ける。
【００６２】
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連抗原及びアジュバントの多数の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって動物において産生する。二機能性又は誘導化の薬剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した共役）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、又はＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ここでＲとＲ１は異なるアルキル基である）を使用して、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質（例、アオガイヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、又は大豆トリプシン阻害剤）へ関連抗原を共役させることが有用であり得る。
【００６３】
例えば、１００μｇ又は５μｇのタンパク質又は共役体（conjugate）（それぞれ、ウサギ又はマウスに対して）を３容量のフロイント完全アジュバントと組み合わせて、その溶液を多数の部位で皮内注射することによって、動物をその抗原、免疫原性コンジュゲート、又は誘導体に対して免疫化する。１ヶ月後に、フロイント完全アジュバント中の元の１／５〜１／１０量のペプチド又は共役体で、多数の部位での皮下注射によってその動物を追加免疫する。７〜１４日後にその動物を出血させて、血清について抗体力価を検定する。力価がプラトーに達するまで動物を追加免疫する。好ましくは、動物は同じ抗原の共役体で追加免疫するが、異なるタンパク質へ、及び／又は異なる架橋連結試薬を介して共役する。共役体はまた、組換え細胞培養においてタンパク縮合体として作製することができる。また、免疫応答を高めるために、ミョウバンのような凝集剤を好適にも使用する。
【００６４】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に均質な抗体の集団より得られる。即ち、この集団を含んでなる個別の抗体は、そのモノクローナル抗体の産生の間に生じる可能な変異体（このような変異体は、概して微量に存在する）を除けば、同一である、及び／又は同じエピトープへ結合する。このように、「モノクローナル」という修飾語は、別種の抗体又はポリクローナル抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。例えば、モノクローナル抗体は、Kohler et al, Nature, 256: 495 (1975) によって初めて記載されたハイブリドーマ法を使用して作製しても、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製してもよい。
【００６５】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣用の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子へ特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離されて配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離したならば、そのＤＮＡを発現ベクター中へ配置させてから、他のやり方では免疫グロブリンタンパク質を産生しない、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞へそれをトランスフェクトさせて、モノクローナル抗体の組換え宿主細胞中での合成を得ることができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌中での組換え発現に関する概説論文には、Skerra et al, Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) と Pluckthun, Immunol. Revs., 130:151-188 (1992) が含まれる。さらなる態様において、抗体又は抗体断片は、McCafferty et al, Nature, 348:552-554 (1990) に記載の技術を使用して産生される抗体ファージライブラリーより単離することができる。Clackson et al, Nature, 352:624-628 (1991) とMarks et al, J. MoI. Biol., 222:581-597 (1991) は、ファージライブラリーを使用する、マウス抗体とヒト抗体の単離についてそれぞれ記載する。後続の公表論文は、鎖シャフリング（Marks et al, Bio/Technology, 10:779-783 (1992)）、並びにきわめて大きなファージライブラリーを構築するための戦略としてのコンビナトリアル感染及び in vivo 組換え（Waterhouse et al, Nuc. Acids. Res., 21 :2265-2266 (1993)）による、高いアフィニティー（ｎＭ範囲）のヒト抗体の産生について記載する。このように、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離の伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する有効な代替法である。ＤＮＡはまた、例えば、ヒトの重鎖及び軽鎖定常ドメインのコーディング配列を相同マウス配列の代わりに置換すること（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison, et al, Proc. Natl Acad. ScL USA, 81 :6851 (1984)）によって、又は非免疫グロブリンポリペプチドのコーディング配列の全部又は一部を免疫グロブリンコーディング配列へ共有結合させることによって修飾してよい。典型的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、ある抗原への特異性を有する１つの抗原結合部位と異なる抗原への特異性を有する別の抗原結合部位を含んでなるキメラの二価抗体を創出するために、抗体の定常ドメインに置換されるか、又はそれらは、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに置換される。
【００６６】
（ｉｉｉ）ヒト化抗体
当該技術分野では、非ヒト抗体をヒト化する方法について記載されてきた。好ましくは、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源よりそれへ導入された１以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的には「インポート」可変ドメインより取られる「インポート」残基としばしば呼ばれる。ヒト化は、本質的には、Winter と共同研究者の方法（Jones  et al, Nature, 321 :522-525 (1986); Riechmann  et al, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen  et al., Science, 239:1534-1536 (1988)）に従って、超可変領域配列をヒト抗体の対応配列で置換することによって実施することができる。従って、そのような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、ここではインタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が非ヒト種由来の対応配列によって置換されていて、実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域残基とおそらくはいくつかのＦＲ残基が齧歯動物の抗体中の類似部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。ヒト化抗体を作製するときに使用すべき重鎖と軽鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を抑えるのにきわめて重要である。いわゆる「ベストフィット」法によって、齧歯動物の抗体の可変ドメイン配列を既知のヒト可変ドメイン配列の全体ライブラリーに対してスクリーニングする。次いで、齧歯動物の配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として受容する（Sims  et al, J. Immunol, 151 :2296 (1993); Chothia et al, J. MoI. Biol, 196:901 (1987)）。別の方法は、軽鎖又は重鎖の可変領域の特別な亜群のすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特別なフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用してよい（Carter  et al, Proc. Natl Acad. ScL USA, 89:4285 (1992); Presta et al, J. Immunol, 151 :2623 (1993)）。抗原への高い親和性と他の好ましい生物学的特質を保持して抗体をヒト化することがさらに重要である。この目標を達成するには、好ましい方法に従って、親配列とヒト化配列の三次元モデルを使用する、親配列と様々な概念上のヒト化産物の解析の方法によってヒト化抗体を製造する。三次元の免疫グロブリンモデルは、普通に入手可能であって、当業者に馴染みがある。選択される候補免疫グロブリン配列のあり得る三次元コンホメーション構造を図解及び図示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらディスプレイの視察によって、候補免疫グロブリン配列の機能における該残基のあり得る役割の分析、即ち、その抗原へ結合する候補免疫グロブリンの能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、標的抗原（複数）への親和性の増加といった所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント及びインポート配列よりＦＲ残基を選択して組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接的かつ最も実質的に関与する。
【００６７】
（ｉｖ）ヒト抗体
ヒト化に代わる方法として、ヒト抗体を産生することができる。例えば、免疫化のときに、内因性の免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体の完全レパートリーを産生することが可能となるトランスジェニック動物（例、マウス）を産出することが今や可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞系列の突然変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（Ｊ１１）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性の抗体産生の完全な阻害をもたらす。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイをそのような生殖細胞系列突然変異マウスに移すと、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生をもたらすものである。例えば、Jakobovits et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 90: 2551(1993); Jakobovits et al, Nature, 362: 255-258 (1993)；Bruggermann et al, Year in Immuno., 7:33 (1993)；及び、米国特許第５，５９１，６６９号、５，５８９，３６９号、及び５，５４５，８０７号を参照のこと。あるいは、ファージディスプレイ技術（McCafferty  et al, Nature 348:552-553 (1990)）を使用して、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーよりヒト抗体及び抗体断片を in vitro で産生することができる。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子を、ＭＩ３又はｆｄのような繊維状バクテリオファージのメジャー又はマイナーいずれかのコートタンパク質遺伝子へインフレームでクローニングして、このファージ粒子の表面に機能性の抗体断片として提示する。この繊維状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能特性に基づいた選択はまた、この特性を明示する抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。このように、このファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、多様なフォーマットにおいて実施することができるが、その概説については、例えば、Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993) を参照のこと。ファージディスプレイには、Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源を使用することができる。Clackson et al, Nature, 352:624-628 (1991) は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーより抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。Marks et al., J. MoI. Biol. 222:581-597 (1991), 又は Griffith et al, EMBOJ. 12:725-734 (1993) に記載の技術に本質的に従って、非免疫化ヒトドナーよりＶ遺伝子のレパートリーを構築して、多様なアレイの抗原（自己抗原が含まれる）に対する抗体を単離することができる。また、米国特許第５，５６５，３３２号及び５，５７３，９０５号を参照のこと。ヒト抗体はまた、in vitro 活性化Ｂ細胞によって産生してよい（米国特許第５，５６７，６１０号及び５，２２９，２７５号を参照のこと）。
【００６８】
（ｖ）抗体断片
抗体断片の産生には、様々な技術が開発されてきた。伝統的には、インタクト抗体のタンパク分解的な消化を介してこれらの断片を導いた（例えば、Morimoto  et al, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) 及び Brennan  et al, Science, 229:81 (1985) を参照のこと）。しかしながら、これらの断片は、今日では、組換え宿主細胞より直接産生することができる。例えば、抗体断片は、上記に考察した抗体ファージライブラリーより単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片を大腸菌（E. coli）より直接回収して、化学的にカップリングさせて、Ｆ（ａｂ’）２断片を生成することができる（Carter  et al, Bio/Technology 10:163-167 (1992)）。別のアプローチによれば、組換え宿主培養物よりＦ（ａｂ’）２断片を直接単離することができる。当業者には、抗体断片の産生のための他の技術が明らかであろう。他の態様において、選択される抗体は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；及び、米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。抗体断片は、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるような「線状抗体」であってもよい。そのような線状抗体断片は、単特異性又は二重特異性であってよい。
【００６９】
医薬製剤
本発明に拠って使用する抗体又は他のアンタゴニストのようなＢ細胞除去剤の治療用製剤は、所望の度合いの純度を有する抗体又はその断片を任意選択の医薬的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液剤の形態で保存用に調製する（「Remington's Pharmaceutical Sciences（レミントン製薬科学）」第16版、Osol, A. 監修（1980））。許容される担体、賦形剤、又は安定化剤は、利用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸のような緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンが含まれる抗酸化剤；保存剤（塩化アンモニウムオクタデシルジメチルベンジル；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールのような）；低分子量（約１０未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジンのようなアミノ酸；単糖、二糖、及び、グルコース、マンノース、又はデキストリンが含まれる他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート形成剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、又はソルビトールのような糖；ナトリウムのような塩形成性の対イオン；金属錯体（例、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又は、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤が含まれる。
【００７０】
例示の抗ＣＤ２０抗体製剤は、参照により本明細書に明確に組み込まれる、ＷＯ９８／５６４１８に記載されている。この公開公報は、４０ｍｇ／ｍＬ  リツキシマブ、２５ｍＭ  酢酸塩、１５０ｍＭ  トレハロース、０．９％  ベンジルアルコール、０．０２％  ポリソルベート２０をｐＨ５．０で含んでなり、２〜８℃で少なくとも２年間の貯蔵期間を有する、液体の多投与量製剤について記載する。興味深い別の抗ＣＤ２０製剤は、９．０ｍｇ／ｍＬ  塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬ  クエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０、及び注射用滅菌水（ｐＨ６．５）に１０ｍｇ／ｍＬ  リツキシマブを含む。皮下投与に適用される凍結乾燥製剤については、米国特許第６，２６７，９５８号（Andya et al）に記載されている。そのような凍結乾燥製剤は、好適な希釈剤で高いタンパク質濃度へ復元されて、その復元された製剤は、本発明で治療される哺乳動物へ皮下投与することができる。抗体又はアンタゴニストの結晶化した形態についても考慮される。例えば、ＵＳ２００２／０１３６７１９Ａ１を参照のこと。
【００７１】
有効成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によるか又は界面重合化によって製造されるマイクロカプセル剤、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル剤とポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル剤に、コロイド状の薬物送達系（例えば、リポソーム剤、アルブミンマイクロスフェア剤、ミクロエマルジョン、ナノ粒子剤、及びナノカプセル剤）に、又はマクロエマルジョンに捕捉されてよい。そのような技術は、「Remington's Pharmaceutical Sciences（レミントン製薬科学）」第16版、Osol, A. 監修（1980）に開示されている。持続放出調製物も調製してよい。持続放出調製物の好適な例には、アンタゴニストを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス剤が含まれ、該マトリックス剤は、成形品（例、フィルム剤）又はマイクロカプセル剤の形態である。持続放出マトリックス剤の例には、ポリエステル剤、ヒドロゲル剤（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸及びエチル−Ｌ−グルタメートの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸リュープロライドからなる注射用マイクロスフェア剤）のような分解性乳酸−グリコール酸共重合体、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。in vivo 投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。
【実施例】
【００７２】
ハウケランド（Haukeland）大学病院の腫瘍学及び医科物理学部門では、４３歳の安定したＣＦＳの女性患者（エプシュタイン・バーウイルス感染の後で、１９９７年に初診）において、細胞傷害性の化学療法の後で顕著な症状改善が観察された。彼女は、２００３年にホジキン病を発症して、化学療法と放射線で治療された。彼女は２００４年にリンパ腫を再発して、化学療法で治療された。予測に反して（ＣＦＳ患者は、一般に、どの種類の薬物及びストレスにも十分に耐えられない）、この患者は、この化学療法の間と後で、ＣＦＳ症状の顕著な減少を体験した。この変化は、リンパ腫の活性に関連したものと解釈されず、そしてその効果は、化学療法開始後ほぼ５ヶ月間続いてから、ＣＦＳ様症状が徐々に再発した。投与した化学療法剤には、細胞傷害効果に加えて、免疫調節効果もあった。ＣＦＳ症状に対する効果は、化学療法の間に投与された薬物、メトトレキサートにより主に媒介されると仮定されている。
【００７３】
我々の患者が癌化学療法の間と後で遭遇したことを理解する試みにおいてＣＦＳに関する文献を吟味すると、体験された、顕著であるが一過性の症状改善のあり得る説明と思われたのは、免疫系の修飾であるという結論が下された。ＣＦＳ患者において見られる慢性のＢ細胞活性化は、この症状とまた、中枢神経系と血液循環の改変のような報告された生理学的変化と、脳組織、脊髄神経根、又は心筋におけるリンパ球浸潤の報告に重要であるのかもしれない。
【００７４】
Ｂ細胞除去のあり得る作用形式は、Ｔ細胞系との相互作用（それにより炎症プロセスを変化させる）のようないくつかの部位で、そして血管作用性神経ペプチドのような、免疫ホメオスタシスにおいて重要な多面的プレーヤーのレベルに影響を及ぼすことにあり得る。
【００７５】
免疫調節性の細胞傷害療法後のＣＦＳ患者における疲労及び疼痛の予期せぬ改善とともに上記の既存データを考慮すれば、Ｂ細胞除去は、概念として、ＣＦＳの治療を可能にし得ると仮定される。
【００７６】
目下のところ、Ｂ細胞除去の達成は、モノクローナル抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブの使用によって最も容易に達成される。しかしながら、新世代の抗ＣＤ２０抗体も、推定されるより強力なＢ細胞除去の達成により、ＣＦＳ症状に対して少なくとも同様の効果を有すると考えられる。
【００７７】
パイロット患者１：
第一のパイロット患者として、上記の女性は、この手技の実験的な性質とそれに伴うリスクについて知らされた後で、リツキシマブ５００ｍｇ／ｍ２を単回注入として受けた。治療前、彼女は、顕著な疲労がある安定したＣＦＳを有して、戸外で働くことも家事をすることもできなかった。彼女は、外出には電動車椅子を使用した。注入後５週目と６週目の間に始まって、彼女は、疲労の著しい減少、筋肉痛の減少、皮膚の灼熱痛の減少、及び頭痛の低下、それに伴うオピオイド鎮痛薬の必要性の漸減といった、顕著な症状改善を体験した。疲労の低下により、彼女は長時間の散歩が可能になり、自らの趣味を再開して、家事をして子供たちの世話をすることができた。彼女はまた、集中する能力を維持する、認知機能の顕著な改善を報告して、再び読書をすることができて、例えばコンピュータ作業もできた。この一回目の注入後の効果は、リツキシマブ注入後１４週間まで続いてから低下して、ＣＦＳ症状が徐々に、完全にではないが再発した。
【００７８】
１回目のリツキシマブ注入から５ヶ月後、彼女は再び安定した、無力化させるＣＦＳ症状を有した。彼女は、新しい単回注入のリツキシマブを同じ投与量で受けた。６週後、彼女は、生活の質に対する重大な効果を伴う、すべてのＣＦＳ症状（疲労、疼痛、認知症状）からの漸次かつ重要な回復を再び体験した。２回目の注入（低用量の５００ｍｇ／ｍ２での単回注入として）の後で、治療効果は１６週まで続いてから、その後症状はゆっくりと、次第に悪化した。
【００７９】
そこで、二回目のリツキシマブ注入から１８週後より、経口の低用量メトトレキサートを毎週、７．５ｍｇ／週より始めて、その用量を次の２ヶ月間は１２．５ｍｇ／週へ増やすことを決定した。毎週のＭｔｘの開始から１２週後、彼女は再び漸次かつ中等度のＣＦＳ症状回復を体験している。彼女は現在Ｍｔｘを２２週間使用して、その改善が中等度で有意であるが、現下では、リツキシマブ治療後ほどは顕著でも迅速でもないと解釈している。しかしながら、彼女は依然としてその状態の漸次改善を体験している。このＣＦＳ症状の発現を図１に示す。
【００８０】
パイロット患者２：
彼は４２歳の男性であり、８年前のエプシュタイン・バー感染後にＣＦＳを発症した。彼には顕著な疲労があって、このことに遭遇して以来、どんな仕事もすることができなかった。彼は１日の大半を肘掛け椅子に座るように束縛された。軽い運動の後で、彼は、消耗、筋肉痛及び頭痛の増加という大問題を抱えた。彼にはまた、発熱感、発汗、及び下痢があった。彼には重篤な認知障害があった。かつては熟練したコンピュータ技師であったが、彼はコンピュータを使うことも、本の１〜２頁以上を文脈に沿って読むこともできなかった。
【００８１】
彼にリツキシマブ（５００ｍｇ／ｍ２）の単回注入を与えた。最初に改善した（注入後３週間で）症状は、長く続いていた下痢であった。注入後６週目から、彼は、疲労、疼痛、認知、及び自律神経性の症状において劇的に改善した顕著な反応を体験している。このとき、彼は、マニュアル作業を行って、コンピュータゲームと読書を楽しむことができた。比較的低い用量（単回注入：１０００ｍｇ）の後では、その効果は１２週まできわめて明瞭で、その後徐々に低下した。彼とその家族は、この臨床上の改善が有意なものであり、家族全体の生活の質に重大な影響を及ぼすと記述した。
【００８２】
１回目のリツキシマブ注入から５ヵ月後、彼は、今度は２回のリツキシマブ１０００ｍｇ注入、２週間隔で再治療された。１回目の治療に倣って、彼は初めに（３週後）下痢から回復し始めた。次いで、６週後には、認知症状の減少を報告して、それから数日後には、疲労が改善し始めた。
【００８３】
この２回のリツキシマブ注入は、注入から１６週後に明瞭なＣＦＳ症状改善を最も顕著にもたらした。その後、彼は、その症状のきわめて遅くて漸次の増加を体験している。しかしながら、注入から５ヵ月後、彼は依然として臨床反応を有している（彼は、依然として治療前の状態より良好である）（図１）。彼は、現在、毎週の経口低用量メトトレキサート治療を開始した。
【００８４】
パイロット患者３：
彼女は２２歳の学生であり、７年前の単球増加症の後でＣＦＳを発症している。当初、彼女には、頭痛が含まれる疼痛、認知障害、及び自律神経症状を伴う、顕著な疲労がある発病段階の臨床像があった。しかしながら、この４年間、彼女はいくらかの改善を体験したが、依然として顕著な疲労、過度の睡眠要求、及び軟便が残った。彼女には、中等度の認知障害と中等度の筋肉痛があった。
【００８５】
彼女にリツキシマブ（５００ｍｇ／ｍ２）の単回注入を与えた。この患者も、注入後３週間で軟便からの改善を体験した。注入から６週後、彼女は、筋肉痛のいくらかの改善に気づいた。この最初の５ヶ月で、彼女には疲労の軽度改善もあったが、一過性であり、他の患者より短い期間のものであった。
【００８６】
しかしながら、注入後６ヶ月目から、彼女は、すべてのＣＦＳ症状に対して、この７年間で体験したことのない高い機能レベルまでの重要な臨床反応を体験した。彼女は、フルタイムで勉学することを始めて、問題なく読書することができて、その短期記憶にも顕著な改善を認めた。この劇的な改善は、当時４．５ヶ月続いた。次いで、翌週から、彼女はＣＦＳ症状の漸次再発を体験した。彼女は、現在、リツキシマブの新たな注入（２回の注入、５００ｍｇ／ｍ２、２週間隔で投与）を受けている。
【００８７】
メトトレキサート（Ｍｔｘ）は、既知の（しかし十分には理解されていない）免疫調節特性のある治療薬剤である。慢性関節リウマチに対して週１回のスケジュールで経口投与すると、その薬物効果の１つが中等度のＢ細胞除去であり、それは、機序の上ではリツキシマブの効果に似ているが、さほど明瞭ではない（Edwards et al. NEJM, 2004．「Efficacy of B-Cell Targeting Therapy with Rituximab in Patients with Rheumatoid Arthritis（慢性関節リウマチ患者におけるリツキシマブでのＢ細胞標的指向療法の効果）」）。この３名のパイロット患者のうちの１人（患者１）について言えば、彼女はメトトレキサートでこの２２週間（毎週）治療されて、Ｍｔｘ開始後１０週目から始まる、ＣＦＳ症状に対する有意で中等度の臨床反応を有した。
【００８８】
結論すると、リツキシマブ治療後には３名のパイロット患者のうち３名で重要な臨床反応があり、うち２名では、２回目のリツキシマブ治療後にも繰り返される臨床反応が観察された。
【００８９】
３番目の患者は、リツキシマブ注入後６週目では、ＣＦＳ症状の限定された改善があった。しかしながら、注入後６〜１０．５ヶ月で、彼女には、今日まで続く（注入後１０．５ヶ月間）、すべてのＣＦＳ関連症状の重要な臨床反応があった。次いで、彼女は漸次の再発を有して、現在は新たなリツキシマブ治療を受けている（２回の注入、即ち、彼女の１回目のリツキシマブ治療後４７及び４９週目）。
【００９０】
３名の患者で全５回の治療は、顕著〜中等度の主症状改善をもたらした。これら３名の患者では、症状改善の動態（kinetics）がきわめて似ているが、さらに、患者３では、図１に示すように、重要な遅発性かつ長期持続性の反応がある。この間隔は、Ｂリンパ球によって産生され得るある種のタンパク質について知られる分解及び半減期と矛盾しない。リツキシマブ治療後の症状の再発現は、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）を介して、そして抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）によって媒介される、ＣＤ２０抗原指向性のＢ細胞溶解の後で幹細胞由来プレ形質細胞Ｂ細胞が成熟化することと矛盾しない。これらの未熟なＢ細胞では、タンパク質の産生、とりわけ抗体の産生が可能であることが示されている。
【図１】
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