(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
0005805215.tif 000052
（式中、Ｒ１はクロロまたはメチルであり、
Ｒ２は、メチル、エチル、イソプロピル、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、またはメチルチオであり、
Ｒ３は、水素またはメトキシである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ３が水素である請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ１がクロロである、請求項１または請求項２に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン酸二塩酸塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
【請求項７】
少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤と、選択的セロトニン再取り込み阻害剤と共に、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は二重活性Ｈ１逆アゴニスト／５−ＨＴ２Ａアンタゴニストとしての置換［（５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒスタミンは、少なくとも４個の異なるＧタンパク質共役受容体、Ｈ１−Ｈ４受容体とのその相互作用により種々の生理学的プロセスにおいて重要な役割を果たす。ＣＮＳにおいて、Ｈ１受容体は睡眠調節サイクルにおいて主要な役割を果たし、Ｈ１アンタゴニスト／逆アゴニストは眠気を誘発することが知られている。
【０００３】
同様に、セロトニンは、少なくとも１４個の異なるＧタンパク質共役受容体とのその相互作用により種々の生理学的プロセスにおいて重要な役割を果たす。ＣＮＳにおいて、５−ＨＴ２Ａ受容体の調節は睡眠調節サイクルにおいて主要な役割を果たし、５−ＨＴ２Ａアンタゴニストは、不眠症を患う患者において徐波睡眠および睡眠維持を改善することが示されている。
【０００４】
Ｈ１または５−ＨＴ２Ａ逆アゴニストまたはアンタゴニスト活性を有する化合物（例えばそれぞれドキセピンおよびトラゾドン）が不眠症の治療に使用されており、動物睡眠研究において有意な薬理作用を示している。しかしながら、選択的二重活性Ｈ１／５−ＨＴ２Ａ逆アゴニスト／アンタゴニストが現在、市販されている、
【０００５】
特許文献１は、抗精神病薬および神経弛緩薬として使用するための特定の置換４−（５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジニル化合物を記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第４，１９２，８０３号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、Ｈ１受容体に対する高い逆アゴニスト効力および５−ＨＴ２Ａ受容体に対する高いアンタゴニスト効力を有する、置換（５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸化合物のファミリーを提供する。本発明の特定の化合物はまた、Ｈ１および５−ＨＴ２Ａ受容体について、特に他のヒスタミン受容体、セロトニン受容体および他の生理学的に関連する受容体に対して、特に５−ＨＴ２Ｃ受容体、ＧＡＢＡＡ受容体、ムスカリン性受容体、ドーパミン作動性受容体、アドレナリン受容体、およびｈＥＲＧチャネルに対して選択性がある。特定の化合物もまた、それらが、不十分な睡眠維持により特徴付けられる睡眠障害の治療に有用であり得ることが動物モデルにより実証される。このように、本発明の化合物は、例えば慢性もしくは一過性の一次性不眠症、または慢性もしくは一過性の二次不眠症、あるいはそれらの両方のような不眠症の治療などの不十分な睡眠潜時もしくは不十分な睡眠維持またはその両方により特徴付けられる睡眠障害の治療に有用であると考えられる。二次不眠症の例としては、限定されないが、抑鬱障害（例えば大鬱病性障害、気分変調、および／または気分循環症）と関連する不眠症、不安障害（例えば全般性不安障害および／または社会恐怖症）と関連する不眠症、疼痛（例えば炎症性関節炎または変形性関節症と関連するような線維筋痛症、慢性骨痛または関節痛、あるいは糖尿病性神経障害に伴う疼痛）と関連する不眠症、アレルギー反応（例えばアレルギー性喘息、掻痒、鼻炎、鬱血など）と関連する不眠症、肺または気道障害（例えば閉塞性睡眠時無呼吸、気道過敏症など）と関連する不眠症、精神疾患、認知症、および／または神経変性疾患と関連する不眠症、ならびに／あるいは概日リズム睡眠障害（例えば交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害、および非２４時間睡眠・覚醒症候群など）と関連する不眠症が挙げられる。
【０００８】
さらに、本発明の特定の化合物は、選択的セロトニン再取り込み阻害剤と同時投与した場合、ノンレム睡眠（ＮＲＥＭ睡眠）および睡眠維持に対するそれらの効果の相乗作用を実証する。
【０００９】
本発明は、式Ｉの化合物：
【化１】
0005805215.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、クロロまたはメチルであり、
Ｒ２は、メチル、エチル、イソプロピル、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、またはメチルチオであり、
Ｒ３は、水素またはメトキシである）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１０】
本発明の別の態様において、少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物が提供される。さらに、本発明のこの態様は、例えば長時間の睡眠潜時もしくは不十分な睡眠維持またはその両方により特徴付けられる不眠症など、例えば一次性不眠症、時差ぼけ、交代勤務睡眠障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害、および／または非２４時間睡眠・覚醒障害などの不眠症を治療するように適用される医薬組成物であって、１種以上の薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤と共に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
本発明のこの態様のさらなる実施形態は、少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤と、必要に応じて他の治療成分と共に、式Ｉに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。本発明のこの態様のなおさらなる実施形態において、医薬組成物はさらに、例えばシタロプラム、パロキセチン、フルオキセチンおよび／またはフルボキセチン（ｆｌｕｖｏｘｅｔｉｎｅ）などのセロトニン再取り込み阻害剤である第２の治療成分を含む。
【００１２】
本発明はまた、哺乳動物における例えば一次性不眠症、時差ぼけ、交代勤務睡眠障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害、および／または非２４時間睡眠・覚醒障害などの長時間の睡眠潜時もしくは不十分な睡眠維持またはその両方により特徴付けられる不眠症などの不眠症を治療する方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与する工程を含む、方法を提供する。本発明のこの態様の別の実施形態において、その方法はさらに、同時、別々または連続の組み合わせで、例えばシタロプラム、パロキセチン、フルオキセチンおよび／またはフルボキセチンなどのセロトニン再取り込み阻害剤である第２に治療剤を投与する工程を含む。これらの治療する方法の１つの特定の実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【００１３】
本発明はまた、治療に使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。この態様において、本発明は、不眠症の治療に使用するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらなる実施形態において、不眠症は、例えば一次性不眠症、時差ぼけ、交代勤務睡眠障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害、および／または非２４時間睡眠・覚醒障害などの長時間の睡眠潜時もしくは不十分な睡眠維持またはその両方により特徴付けられる。この態様の別の実施形態において、本発明は、不眠の治療において、例えばシタロプラム、パロキセチン、フルオキセチンおよび／またはフルボキセチンなどのセロトニン再取り込み阻害剤と共に同時、別々または連続の組み合わせで、使用するための式Ｉに係る化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。本発明のこの態様の１つの特定の実施形態は、哺乳動物、特にヒトにおける使用である。
【００１４】
本発明の別の態様は、例えば一次性不眠症、時差ぼけ、交代勤務睡眠障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害、および／または非２４時間睡眠・覚醒障害などの例えば長時間の睡眠潜時もしくは不十分な睡眠維持またはその両方により特徴付けられる一次性不眠症などの不眠症を治療するための医薬の製造における、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明のこの態様の別の実施形態は、例えば、一次性不眠症、時差ぼけ、交代勤務睡眠障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害、および／または非２４時間睡眠・覚醒障害などの例えば長時間の睡眠潜時および／もしくは不十分な睡眠維持により特徴付けられる不眠症などの不眠症を治療するための医薬の製造における、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、ならびに例えばシタロプラム、パロキセチン、フルオキセチンおよび／またはフルボキセチンなどのセロトニン再取り込み阻害剤である第２の治療剤の使用を提供する。
【００１５】
明確にするために、三環構造の以下の番号付けを本出願全体にわたって使用する：
【化２】
0005805215.tif 000003
【００１６】
本発明の化合物は、塩基性および酸性部分を有し、したがって、多くの有機および無機酸および塩基と反応して薬学的に許容可能な塩を形成する。本発明の化合物の各々の薬学的に許容可能な塩は本出願の範囲内であると意図される。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、生物に対して実質的に非毒性である本発明の化合物の任意の塩を指す。そのような塩は、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）に記載されているものを含み、それらは当業者に公知である。
【００１７】
本発明の化合物の好ましいクラスは以下である化合物である：
１）Ｒ３が水素であり、
２）Ｒ３がメトキシであり、
３）Ｒ１がクロロであり、
４）Ｒ１がメチルであり、
５）Ｒ１がクロロであり、Ｒ３が水素であり、
６）Ｒ１がメチルであり、Ｒ３が水素であり、
７）Ｒ２がメチル、エチル、またはイソプロピルであり、
８）Ｒ２がメチルであり、
９）Ｒ２がクロロまたはブロモであり、
１０）Ｒ２がクロロであり、
１１）Ｒ２がトリフルオロメチルであり、
１２）Ｒ２がメチルチオである。
【００１８】
さらなる好ましい化合物は、他の置換基の好ましい選択と共に所与の置換基（複数も含む）についての上記の好ましい選択を組み合わせたものであることは理解されるだろう。そのような組み合わせの例としては、限定されないが、以下の好ましい化合物のクラスが挙げられる：
１３）Ｒ３が水素（好ましいクラス１）である好ましいクラス７〜１２（Ｒ２についての好ましい選択である）のいずれか１つの好ましい化合物、
１４）Ｒ１がクロロであり、Ｒ３が水素（好ましいクラス５）である好ましいクラス７〜１２（Ｒ２についての好ましい選択である）のいずれか１つの好ましい化合物、
１５）Ｒ３がメトキシ（好ましいクラス２）である好ましいクラス８の好ましい化合物。
【００１９】
特定の好ましい化合物は、それらの遊離塩基およびそれらの薬学的に許容可能な塩を含む、実施例に記載されるものである。
【００２０】
１つの特定の好ましい化合物は、３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸、またはその薬学的に許容可能な塩（すなわち実施例１の化合物およびその薬学的に許容可能な塩）である。
【００２１】
本明細書で使用される略語は以下のように定義される：
「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを意味する。
「ＤＣＧ  ＩＶ」は（２Ｓ，２’Ｒ，３’Ｒ）−２−（２’，３’−ジカルボキシシクロプロピル）グリシンを意味する。
「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味する。
「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を意味する。
「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを意味する。
「ＤＰＢＳ」はダルベッコリン酸緩衝生理食塩水を意味する。
「ＤＳＣ」は示差走査熱量計を意味する。
「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味する。
「ＧＣ」はガスクロマトグラフィーを意味する。
「ＨＢＳＳ」はハンクス緩衝塩溶液を意味する。
「ＨＥＰＥＳ」は４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を意味する。
「ＨＰＬＣ」は高圧液体クロマトグラフィーを意味する。
「ｈｒ．」または「ｈ」は時間を意味する。
「ＩＢＭＸ」は３−イソブチル−１−メチルキサンチンを意味する。
「ＩＣ５０」は５０％の最大阻害が達成される濃度を意味する。
「ｉ．ｖ．」は静脈または静脈内を意味する。
「ｉ．ｐ．」は腹腔内を意味する。
「ＬＣ−ＭＳ」はＨＰＬＣ−質量分析を意味する。
「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味する。
「ｍＦＳＴ」はマウス強制水泳試験；抗鬱作用についての動物モデルを意味する。
「ｍｉｎ．」または「ｍ」は分を意味する。
「ｍｐ」は融点を意味する。
「ＭＳ」は質量分析を意味する。
「ＭＳ（ＥＳ＋）」はエレクトロスプレーイオン化を使用する質量分析を意味する。
「ＭＴＢＥ」はメチルｔ−ブチルエーテルを意味する。
「ＮＭＲ」は核磁気共鳴を意味する。
「ｐ．ｏ．」は経口または口からを意味する。
「ＳＣＸ−２」はＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｕｔｅ  Ｆｌａｓｈ  ＳＣＸ−２（登録商標）強陽イオン交換カラムを意味する。
「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
一般化学
本発明の化合物は、当該技術分野において周知で、理解されている一般的な方法によって以下の合成スキームに従って調製できる。これらのスキームの工程についての適切な反応条件は当該技術分野において周知であり、溶媒および共試薬の適切な置換は当業者の範囲内である。同様に、必要および所望される場合、合成中間体が種々の周知の技術により単離または精製でき、高い頻度で、ほとんどまたは全く精製せずに後の合成工程において種々の中間体を直接使用できることは当業者により理解されるだろう。さらに、当業者は、一部の状況において、部分が導入される順序は重要でないことを理解するだろう。本発明の化合物を生成するために必要とされる工程の特定の順序は、熟練した化学者により十分に理解されるように合成される特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的傾向に依存する。他に示さない限り、全ての置換基は、以前に定義された通りであり、全ての試薬は当該技術分野において周知であり、理解される。
【００２３】
一般に、式Ｉの化合物は、Ｐｇが適切なカルボキシル保護基である式ＩＩの化合物から調製できる（スキーム１）。より具体的には、ＰｇがＣ１−Ｃ３アルキル基である式ＩＩの化合物は、イソプロピルアルコールなどの有機共溶媒中の水酸化ナトリウム水溶液などの適切な脱保護剤と反応して、酸での中和後、式Ｉの化合物を生成する。
【化３】
0005805215.tif 000004
【００２４】
一般に、式ＩＩの化合物は式ＩＩＩの化合物または式ＩＶの化合物から調製できる（スキーム２）。より具体的には、式ＩＩＩの化合物はメトキシベンゼンまたはジクロロメタンなどの適切な溶媒中で塩化ホスホリルと反応して、塩化イミノ中間体を生成する。塩化イミノは単離されるか、または炭酸カリウムなどの適切な塩基の存在下でＰｇ−２，２−ジメチル−３−ピペラジン−１−イルプロパノエートと直接反応して、式ＩＩの化合物を生成できる。反応はアセトニトリルなどの適切な溶媒中で実施される。あるいは、塩化イミノは炭酸セシウムなどの適切な塩基の存在下でピペラジンと反応して、式ＩＶの化合物を生成できる。反応はアセトニトリルなどの適切な溶媒中で実施される。式ＩＶの化合物は、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドなどの適切な還元剤の存在下でＰｇ−２，２−ジメチル−３−オキソプロパノエートでアルキル化されて、式ＩＩの化合物を生成する。反応は典型的にジクロロメタンなどの溶媒中で実施される。
【化４】
0005805215.tif 000005
【００２５】
式ＩＩＩの化合物は、Ｒ４がメチルまたはエチルである式Ｖの化合物から調製できる（スキーム３）。より具体的には、式Ｖの化合物は、アリールニトロ基を対応するアニリンに還元するのに適切な薬剤と反応する。適切な還元剤としては、白金などの遷移金属触媒の存在下での水素；酢酸中の鉄；および塩酸中の二塩化スズが挙げられる。対応するアニリンは、最初に単離されるか、または環化条件下で直接反応して、式ＩＩＩの化合物を生成できる。環化は塩酸などの酸またはカリウムｔ−ブトキシドなどの塩基の存在下で実施される。Ｒ４がメチルまたはエチルである式Ｖの化合物は調製例に記載されるように調製できるか、または構造的に類似した化合物を生成するための化学分野において公知の手順により調製できる。
【化５】
0005805215.tif 000006
【００２６】
以下に例示する調製例および実施例において、試薬は種々の商業的供給源から得た。溶媒は一般に減圧下で除去（蒸発）する。一部の手順において、示した収率は、蒸発または濾過により単離される生成物についての代表的な粗収率であり、それをさらに精製せずに直接使用する。
【００２７】
調製例１
メチル２，２−ジメチル−３−オキソ−プロパノエートの合成
０℃にて、メチル３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロパノエート（３３ｇ、２５０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）に懸濁したデス・マーチンペルヨージナン（１０６ｇ、２５０ｍｍｏｌ）に加え、室温にて１８時間攪拌する。反応混合物をセライトベッドにより濾過し、濾過物を濃縮する。濃縮した濾過物をペンタン（２×２００ｍＬ）で洗浄する。ペンタン層を分離し、真空中で濃縮して、メチル２，２−ジメチル−３−オキソ−プロパノエート（３１．９３ｇ、定量的）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ９．５９（ｓ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），１．２６（ｓ，６Ｈ）。
【００２８】
調製例２
ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−メトキシ−２，２−ジメチル−３−オキソプロピル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
【化６】
0005805215.tif 000007
室温にて２０分間、ＤＣＭ（５００ｍＬ）中のメチル２，２−ジメチル−３−オキソ−プロパノエート（３０．８８ｇ、２３７．３１ｍｍｏｌｅ）およびｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（３４．００ｇ、１８２．５５ｍｍｏｌｅ）の溶液を攪拌する。０．５時間にわたって、酢酸（２当量）；２０．９２ｍＬ、３６５．０９ｍｍｏｌｅ）、続いてナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．４当量；５４．１７ｇ、２５５．５６ｍｍｏｌｅ）を加え、得られた混合物を室温にて一晩攪拌する。注意深く水（２５０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３００ｍＬ）と共に分離漏斗に混合物を移す。得られた有機層をブラインで洗浄する。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−メトキシ−２，２−ジメチル−３−オキソプロピル）ピペラジン−１−カルボキシレートを得る（５８ｇ、１００％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０１．２（Ｍ＋１）。
【００２９】
調製例３
メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエートジヒドロクロリドの合成
【化７】
0005805215.tif 000008
イソプロピルアルコール（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−メトキシ−２，２−ジメチル−３−オキソプロピル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５８．０ｇ、１９３．０８ｍｍｏｌｅ）の溶液に、１５分にわたって塩化水素の４Ｍのジオキサン溶液（（４当量）；１９３．０８ｍＬ、７７２．３１ｍｍｏｌｅ）を加え、ガス発生および微細析出物を観察する。５５℃にて３時間加熱して、白色の沈殿物を得る。１０℃に冷やし、濾過により白色固体を回収し、さらなるイソプロピルアルコール（３０ｍＬ）、次いでＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で洗浄する。４５℃にて１時間、真空オーブン中で乾燥させて、メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエートジヒドロクロリド（３１ｇ、５９％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：＝２０１．１（Ｍ＋１）。
【００３０】
調製例４
メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエート塩酸塩の合成
【化８】
0005805215.tif 000009
水（２５０ｍＬ）にメチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエートジヒドロクロリド（１１２．０ｇ、４０９．９５ｍｍｏｌｅ）を溶解する。固体の炭酸水素ナトリウムを加えて、ｐＨ４の水層を得て、ジエチルエーテル（３００ｍＬ）中の１０％のＤＣＭの溶液中で混合物を抽出して、          いくらかの暗い固体を除去すると、いくらか着色する。有機層を捨てる。２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を用いて水相をｐＨ８に塩基性化し、次いで固体の塩化ナトリウムで飽和する。クロロホルム中の１０％のイソプロパノール溶液中で抽出する。さらに２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ８を維持する。クロロホルム中の１０％のイソプロパノール溶液中で抽出を繰り返す。８５％の予想される物質が回収されるまで抽出プロセスを継続する。ブラインでクロロホルム溶液中のイソプロパノールを洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエート塩酸塩（８２．１ｇ、％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０１．１（Ｍ＋１）。
【００３１】
調製例５
メチル４−エテニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化９】
0005805215.tif 000010
１０分間窒素でパージすることによって、１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）の混合物中のメチル４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（２．０ｇ、９．８ｍｍｏｌｅ）、トリエテニルボロキシンピリジン（１．３当量；３．１ｇ、１２．７ｍｍｏｌｅ）、および炭酸カリウム（３当量；４．１ｇ、２９．４ｍｍｏｌｅ）の溶液を脱気する。トリス（ジベンジリデンアセトニル）ビス−パラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）（０．０１当量；０．０９２５ｇ、９８．０μｍｏｌｅ）および１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン（ｄｔｂｐｆ）（０．０３当量；０．０８５３ｇ、２９４．１μｍｏｌｅ）を加え、９５℃にて３時間加熱する。次いで室温まで冷やし、水（５０ｍＬ）と１：１のヘキサン／ジエチルエーテル（１００ｍＬ）の混合物との間で分ける。有機層を水（２×５０ｍＬ）、次いでブラインで洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、麦わら色の油状物（１．５ｇ）としてメチル４−エテニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートを得る。さらに精製せずに使用する。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３），δ：８．９０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．０２（１Ｈ，ｍ），６．９５（１Ｈ，ｍ），６．５６（１Ｈ，ｑ）５．４８（１Ｈ，ｄｄ），５．０５（１Ｈ，ｄｄ），３．８６（３Ｈ，ｓ）。
【００３２】
調製例６
メチル４−エチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化１０】
0005805215.tif 000011
５００ｍＬのＰａｒｒボトルに、エタノール（２５ｍＬ）中の炭（０．２ｇ）上の５％パラジウムの混合物を入れ、メチル４−エテニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（１．４ｇ、９．３ｍｍｏｌｅ）を加える。２０６．８ｋＰａにて３時間、水素添加して、ＬＣ−ＭＳにより完全な変換を得る。セライトで濾過し、蒸発させて、油状物を得る。イソ−ヘキサン／酢酸エチル（１００：０〜７５：２５）と共にシリカゲルパッドを通過させて、淡黄色の油状物（１．１２ｇ）として標題化合物を得る。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３），δ：８．８７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．７３−６．７８（２Ｈ，ｍ），３．８３（３Ｈ，ｓ），２．５０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）および１．１９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）。
【００３３】
調製例７
メチル４−（プロパ−１−エン−２−イル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化１１】
0005805215.tif 000012
メチル４−ヨード−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（１．５ｇ、５．９８ｍｍｏｌｅ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（プロパ−１−エン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（３．０１ｇ、１７．９８ｍｍｏｌｅ）１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン（ｄｔｂｐｆ）（０．３ｇ、０．０６ｍｍｏｌｅ）、トリス（ジベンジリデンアセトニル）ビス−パラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）（０．３ｇ、０．０６ｍｍｏｌｅ）、リン酸三カリウム（２．５４ｇ、１１．９５ｍｍｏｌｅ）およびメタノール（１２ｍＬ）を混合する。１４０℃にて３０分間、マイクロ波中で密閉管中の混合物を加熱する。反応混合物を冷却し、濾過し、メタノールで洗浄焼結し、減圧下で濾過物を蒸発させ、イソヘキサン／ジクロロメタン（勾配溶離、１００：０〜０：１００）で溶出するシリカ上でクロマトグラフする。生成物を含有する画分を蒸発させて、メチル４−（プロパ−１−エン−２−イル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（０．６７９ｇ、６８．７９％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６６．１（Ｍ＋１）。
【００３４】
調製例８
エチル３−メトキシ−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化１２】
0005805215.tif 000013
硫酸ジメチル（３ｍＬ、３．９９ｇ、３１．６３ｍｍｏｌｅ）を、３−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（３．５ｇ、２０．６９ｍｍｏｌｅ）および２Ｍの水酸化ナトリウム（７５ｍＬ、１５００ｍｍｏｌｅｓ）の混合物に加え、室温にて３０分間、反応混合物を激しく攪拌する（水冷却浴を適用した）。生じた沈殿物を回収し、水で洗浄する。十分な硫酸ジメチル（３ｍＬ、３．９９ｇ、３１．６３ｍｍｏｌｅ）を濾過物に加え、３０分間攪拌する。生じた沈殿物を回収し、水で洗浄する。十分な硫酸ジメチル（３ｍＬ、３．９９ｇ、３１．６３ｍｍｏｌｅ）を濾過物に加え、１時間攪拌する。単離した沈殿物を合わせ、５０℃にて３０分間、真空オーブン中で乾燥させて、エチル３−メトキシ−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（３．２２１ｇ、８４．９８％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８４．０９（Ｍ＋１）。
【００３５】
調製例９
エチル１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化１３】
0005805215.tif 000014
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の２−（ブロモメチル）−４−クロロ−１−ニトロ−ベンゼン（２５．０２ｇ、９９．８８ｍｍｏｌｅ）の溶液を激しく攪拌し、これにＤＣＭ（２００ｍＬ）中のエチル４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（１５ｇ、９７．９２ｍｍｏｌｅ）の溶液を加える。次いで３０−水和テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヒドロキシド（０．５０８ｇ）を加え、外部氷浴を使用して５℃で窒素下で攪拌混合物を冷却する。２５％の水酸化ナトリウム（２００ｍＬ）水溶液を１５分にわたって滴下して加え、内部温度が１０℃まで上昇することを観察する。攪拌し、室温まで加温する。室温にて３．５時間攪拌する。さらに５０％の水酸化ナトリウム（２０ｍＬ）を加え、さらに１時間室温にて攪拌する。攪拌を停止し、層を分離する。分離漏斗に移し、有機層を１Ｎの塩酸（２００ｍＬ）で洗浄し、指示紙を使用してこの層のｐＨが酸性になるのを観察する。次に有機層を水（６００ｍＬ）、次いでブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、最後にＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。混合物を濾過し、４０℃にて真空中で溶媒を除去して、橙色の油状物を得る。イソ−ヘキサン／酢酸エチル（１０〜２０％で溶出する勾配）と共にシリカゲルパッドを通過させることにより精製して、黄色の油状物（３３ｇ、定量的）としてエチル１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートを得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２２．９８（Ｍ＋１）。
【００３６】
調製例９の代替
エチル１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
攪拌しながら窒素雰囲気下で、炭酸セシウム（９６ｇ、２９５ｍｍｏｌｅ）を、ＤＭＦ（２４０ｍＬ）中のエチル４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（３０ｇ、１９６ｍｍｏｌｅ）の溶液に加え、反応混合物を４０℃〜４５℃で１時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、ＤＭＦ（１２０ｍＬ）中の２−（ブロモメチル）−４−クロロ−１−ニトロ−ベンゼン（５４ｇ、２１６ｍｍｏｌｅ）の溶液を滴下して加える。得られた懸濁液を１．５時間〜２．０時間攪拌し、固体を濾過し、濾過ケーキをＤＭＦ（４５ｍＬ）でリンスする。固体を無菌の反応容器に移し、水（２００ｍＬ）を加え、１時間〜２時間攪拌しながら、懸濁液を１０℃〜１５℃に冷却する。懸濁液を濾過し、水（７５ｍＬ）でリンスし、固体を別の反応容器に移す。エタノール（１２５ｍＬ）を加え、５℃〜１０℃にて１時間〜２時間、懸濁液を攪拌する。固体を濾過し、濾過ケーキをエタノール（２０ｍＬ）でリンスし、減圧下で５０℃未満にてオーブン中で固体を乾燥させて、エチル１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートを黄色の固体（５４ｇ、９４．１％純度、７３．３％収率）として得る。
【００３７】
調製例１０
エチルエチル４−ブロモ−１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化１４】
0005805215.tif 000015
６０％の鉱油を懸濁した水素化ナトリウム（１．２当量；１．１ｇ、２７．５２ｍｍｏｌｅ）を少量のイソ−ヘキサン（×２）で洗浄する。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１５ｍＬ）に懸濁し、氷浴中で冷却する。エチル４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（５．０ｇ、２２．９３ｍｍｏｌｅ）を１５分にわたって少しずつ加え、添加の間のガス発生を少なくする。室温にて１５分間攪拌し、茶色の溶液を得る。２−（ブロモメチル）−４−クロロ−１−ニトロ−ベンゼン（１．１５当量；６．６１ｇ、２６．３７ｍｍｏｌｅ）を１５分にわたって少しずつ加え、得られた紫色の溶液を室温にて２．５時間攪拌する。氷浴中で冷却し、水（１０ｍＬ）でクエンチする。１Ｍの塩酸（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）との間で分ける。有機層を水（２×１００ｍＬ）、次いでブラインで洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、活性炭で脱色する。セライトで濾過し、蒸発させて、エチルエチル４−ブロモ−１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートを橙色の油状物（９．１ｇ、定量的）として得る。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１２（１Ｈ，ｄ），７．４０（１Ｈ，ｄｄ），７．０７（１Ｈ，ｄ），６．９２（１Ｈ，ｄ），６．５３（１Ｈ，ｄ），５．８７（２Ｈ，ｓ），４．１７（２Ｈ，ｑ），１．２５（３Ｈ，ｔ）。
【００３８】
以下の化合物を実質的に調製例１０の方法によって調製する。
【００３９】
【表１−１】
0005805215.tif 000016
【表１−２】
0005805215.tif 000017
【００４０】
調製例２２
エチル１−（２−アミノ−５−クロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化１５】
0005805215.tif 000018
５％の白金（Ｓ）／炭（２．５ｇ）、およびエチル１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（１６．０ｇ、４９．５７ｍｍｏｌｅ）を５００ｍＬのＰａｒｒボトルに入れる。エタノール（２００ｍＬ）次いで臭化亜鉛（０．２２当量；２．４６ｇ、１０．９１ｍｍｏｌｅ）を加え、２７５．８ｋＰａにて水素下に混合物を置き、室温にて一晩、水素添加し、部分的に水素化された中間体の形成をモニターする。Ｐａｒｒボトルを取り除き、水浴中で穏やかに加熱して、結晶化物質を溶解し、セライトで濾過する。同様の実施からの濾過物と合わせ、蒸発させて、エチル１−（２−アミノ−５−クロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートをオフホワイトの固体として得る。高真空下に置き、残留エタノールを除去して、物質（３５ｇ、定量的）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９３．１（Ｍ＋１）。
【００４１】
調製例２２の代替
エチル１−（２−アミノ−５−クロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
窒素下で反応容器中に、ＴＨＦ（８００ｍＬ）中のエチル１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（１００．０ｇ、３１０ｍｍｏｌｅ）の溶液を入れ、室温にて攪拌しながら臭化亜鉛（０．２２当量；１５．４ｇ、６８．４ｍｍｏｌｅ）を加える。ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の５％の白金（Ｓ）／炭（１３．３ｇ）のスラリーを入れ、３８０ｋＰａにて水素下に容器を置く。室温にて３０時間〜４０時間水素添加し、部分的に水素化した中間体の形成をモニターし、珪藻土で濾過する。ＴＨＦ（３００ｍＬ）を用いてフィルターをリンスし、４０℃以下で濾過物を濃縮して、約２００ｍＬの体積を得る。ＤＣＭ（２５０ｍＬ）を加え、４０℃以下で溶液を濃縮して、約２００ｍＬの体積を得、さらにＤＣＭ（６００ｍＬ）を加える。このプロセスを必要に応じて繰り返して、望ましくないレベルのＴＨＦを反応混合物から除去する。水（５００ｍＬ）を入れ、層を分離し、有機層を水（３００ｍＬ）、続いて２５％の塩化ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）で洗浄する。４０℃で溶液を濃縮し、約２００ｍＬの体積を得、ヘプタン（４００ｍＬ）を加え、４０℃以下で溶液を濃縮し、約２００ｍＬの体積を得る。ヘプタン（４００ｍＬ）を加え、２〜３時間攪拌しながら、反応混合物を４０〜４５℃で加熱する。反応混合物を５〜１０℃に冷却し、この温度で１〜２時間攪拌を継続する。得られた固体を濾過し、減圧下で５０℃未満にてオーブン中で乾燥させて、エチル１−（２−アミノ−５−クロロベンジル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（８１．４ｇ、９５．８％純度、８５．９％収率）を黄色の固体として得る。
【００４２】
以下の化合物を実質的に調製例２２の方法によって調製する。
【００４３】
【表２】
0005805215.tif 000019
【００４４】
調製例２６
エチル１−（２−アミノ−５−クロロベンジル）−４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートの合成
【化１６】
0005805215.tif 000020
７０℃にて、酢酸（６０．００ｍＬ）中のエチル４−ブロモ−１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（９．１ｇ、２３．４８ｍｍｏｌｅ）の十分に攪拌した溶液に、０．５時間にわたって、鉄（５当量；６．５６ｇ、１１７．３８ｍｍｏｌｅ）を少しずつ加える。添加の途中で、発熱を観測し、油浴を取り除いて８５℃の温度を維持する。発熱が消散するにつれて反応混合物はより厚くなり、鉄の残りを加えることができる。８５℃にて０．５時間攪拌する。室温にて冷却し、水（２００ｍＬ）上に注ぐ。クロロホルム（２×２００ｍＬ）中で抽出する。有機層を合わせ、水（２×１００ｍＬ）、次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、橙色の油状物（７．７ｇ、９２％収率）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５８．９８（Ｍ＋１）。
【００４５】
以下の化合物を実質的に調製例２６の方法によって調製する。
【００４６】
【表３】
0005805215.tif 000021
【００４７】
調製例３２
７−クロロ−２−メチル−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オンの合成
【化１７】
0005805215.tif 000022
ジメチルスルホキシド（１２０ｍＬ）中のエチル１−［（２−アミノ−５−クロロ−フェニル）メチル］−４−メチル−ピロール−２−カルボキシレート（３５ｇ、１１９．５５ｍｍｏｌｅ）の溶液に、１０分にわたってカリウムｔ−ブトキシド（１４．７６ｇ、１３１．５ｍｍｏｌｅ）を加える。８０℃（油浴温度）にて１時間加熱する。冷却し、次いで水（４００ｍＬ）上に注ぐ。得られた茶色の粉末状の固体を濾過により回収し、水で十分に洗浄する。焼結により可能な限り乾燥させて吸引し、次いでディッシュに移し、五酸化リン上で一晩、５５℃にて真空オーブン中で乾燥させて、７−クロロ−２−メチル−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（２２ｇ、９１％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４７．１（Ｍ＋１）。
【００４８】
調製例３２の代替
７−クロロ−２−メチル−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オンの合成
ジメチルスルホキシド（６０ｍＬ）中のエチル１−［（２−アミノ−５−クロロ−フェニル）メチル］−４−メチル−ピロール−２−カルボキシレート（２０ｇ、６８．３ｍｍｏｌｅ）の溶液に、ＤＭＳＯ（４０ｍＬ）中のカリウムｔ−ブトキシド（８．４ｇ、７４．９ｍｍｏｌｅ）を加え、反応混合物を７５〜８０℃で１〜２時間攪拌する。水（２００ｍＬ）をゆっくりと加え、室温に冷却し、１〜２時間攪拌する。固体を濾過し、濾過ケーキを水（７５ｍＬ）で洗浄し、固体を無菌の反応容器に移す。ＴＨＦ（１００ｍＬ）を加え、固体が溶解するまで反応混合物を３０〜３５℃に加熱する。ＤＣＭ（３５０ｍＬ）を加え、３０〜３５℃にて１〜２時間攪拌を継続する。１Ｎの塩酸（２５０ｍＬ）を加え、３０〜３５℃にて１〜２時間攪拌を継続する。層を分離し、有機層を１Ｎの塩酸（２５０ｍＬ）、続いて２５％の塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、溶液を５０℃以下で濃縮し、約２５ｍＬの体積を得る。エタノール（５０ｍＬ）を加え、５０℃以下で溶液を濃縮し、約２５ｍＬの体積を得、さらにエタノール（５０ｍＬ）を加える。５０℃以下で溶液を濃縮し、約２５ｍＬの体積を得、反応混合物を４０〜５０℃で加熱し、１〜２時間攪拌する。２〜３時間攪拌しながら反応混合物を５〜１０℃に冷却し、得られた固体を濾過する。濾過ケーキをエタノール（２５ｍＬ）でリンスし、減圧下で５０℃未満にてオーブン中で乾燥させて、７−クロロ−２−メチル−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オンをオフホワイトの固体（１４．９ｇ、９９．９％純度、８８．５％収率）として得る。
【００４９】
以下の化合物を実質的に調製例３２の方法によって調製する。
【００５０】
【表４−１】
0005805215.tif 000023
【表４−２】
0005805215.tif 000024
【００５１】
調製例４３
７−クロロ−２−（トリフルオロメチル）−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オンの代替合成
【化１８】
0005805215.tif 000025
５０℃にて、５Ｍの塩酸（２０ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）中の二塩化スズ（３当量；３．０２ｇ、１５．７７ｍｍｏｌ）を、エチル１−（５−クロロ−２−ニトロベンジル）−４−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（１当量；１．９８ｇ、５．２６ｍｍｏｌｅ）およびエタノール（１００ｍＬ）に加える。一晩、次いでさらに２６時間加熱し、真空中で大部分のエタノールを取り除き、得られた溶液を水で希釈し、得られた沈殿物を濾過により回収し、水で十分に洗浄し、４０℃にて真空中で乾燥させる。固体をシリカ上で吸収し、ＤＣＭ／メタノール（５：９５）で溶出するクロマトグラフにかけて、非環化アミノエステル（０．２６０ｇ）および７−クロロ−２−（トリフルオロメチル）−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（０．６１３ｇ）を得る。５Ｍの塩酸（１０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）の混合物中で８０時間、非環化エステルを加熱する。真空中でエタノールを除去し、得られた沈殿した固体を濾過により回収し、水で洗浄して、７−クロロ−２−（トリフルオロメチル）−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（０．１７ｇ）を得る。以前の７−クロロ−２−（トリフルオロメチル）−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オンと合わせて、（０．７９４ｇ、５０％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３００．９９（Ｍ＋１）。
【００５２】
以下の化合物を実質的に調製例４３の方法によって調製する。
【００５３】
【表５】
0005805215.tif 000026
【００５４】
調製例４５
７，１１−ジクロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンの合成
【化１９】
0005805215.tif 000027
７０℃にて、メトキシベンゼン（２５０ｍＬ）中の７−クロロ−２−メチル−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（４０．６ｇ、１６４．５８ｍｍｏｌｅ）の懸濁液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（２．８当量；５８．５９ｍＬ、４６０．８ｍｍｏｌｅ）を一度に、続いて塩化ホスホリル（２．３当量（モル濃度）；３５．１８ｍＬ、３７８．５２ｍｍｏｌｅ）を２０分にわたって加え、添加により発熱を抑制する。得られた暗い溶液を９０℃にて１．５時間加熱する。さらなる塩化ホスホリル（０．３３当量；５．０５ｍＬ、５４．３１ｍｍｏｌｅ）を加え、混合物を９０℃にてさらに１時間加熱して、完全な変換を得る。蒸発させてほぼ乾燥させ、残渣を水（５００ｍＬ）と酢酸エチル（２×５００ｍＬ）との間に分ける。有機層を合わせ、水（５００ｍＬ）次いでブラインで洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、シリカ上で蒸発させる。イソ−ヘキサン／酢酸エチル（５〜２５％の勾配溶離）と共にシリカゲルパッドを通過させる。生成物画分を合わせ、少量の溶媒まで蒸発させる。イソ−ヘキサン（１５０ｍＬ）を加え、得られた黄色の粉末を濾過により回収して、７，１１−ジクロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（３４．０ｇ、７８％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６５．１（Ｍ＋１）。
【００５５】
代替の合成：
Ｎ２雰囲気下で、塩化ホスホリル（１２４ｇ、８１９ｍｍｏｌ）を、７−クロロ−２−メチル−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（１００ｇ、４０５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（１３８ｇ、１．１４ｍｏｌ）およびアニソール（５５０ｍＬ）の混合物に加える。８０〜８５℃まで加熱し、４時間〜６時間攪拌する。７５℃以下に温度を維持しながら、全体で１．５容量〜２．５容量まで濃縮する。１５〜２５℃まで冷却する。ジクロロメタン（６００ｍＬ）を滴下して加え、１時間攪拌する。１０℃〜３５℃に温度を維持しながら、得られた混合物を水（６００ｍＬ）に加える。１時間攪拌し、次いで層を分離する。水層をジクロロメタン（６００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を１．０ＮのＨＣｌ（６００ｇ）、続いて７％のＮａＨＣＯ３（６００ｇ）で洗浄する。有機層を珪藻土（２０ｇ〜３０ｇ）およびシリカゲル（６０ｇ〜１００ｇ）で濾過する。４５℃以下に温度を維持しながら、得られた濾過物を全体で１．５容量〜２．５容量まで濃縮する。ヘプタン（２７０ｇ〜４１０ｇ）を加え、４５℃以下に温度を維持しながら、得られた濾過物を全体で１．５容量〜２．５容量まで濃縮する。ヘプタン（１５０ｇ〜２１０ｇ）を加え、５℃〜１０℃に冷却し、２時間〜３時間攪拌する。濾過し、ヘプタンで濾過ケーキをリンスし、４５℃以下にて真空下で乾燥させて、淡黄色の固体（９０％〜９５％収率）として標題化合物を得る。
【００５６】
以下の化合物を実質的に調製例４５の方法によって調製する。
【００５７】
【表６】
0005805215.tif 000028
【００５８】
調製例５０
メチル３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパンの合成
【化２０】
0005805215.tif 000029
塩化ホスホリル（１．４７ｍＬ、２．４３ｇ、１５．８５ｍｍｏｌｅ）を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の７−クロロ−２−メチル−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（１．１１７ｇ、４．５３ｍｍｏｌｅ）に加え、室温にて週末にわたって攪拌する。氷水を反応混合物に加え、次いでＤＣＭを加え、水層を分離し、ＤＣＭ層を水および炭酸水素ナトリウムで洗浄する。ＭｇＳＯ４でＤＣＭ溶液を乾燥させ、濾過し、真空中で溶媒を蒸発させて、７，１１−ジクロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（１．１６７ｇ）を得る。
【００５９】
メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエート二塩酸塩（１．６１ｇ、５．８９ｍｍｏｌｅ）を水に溶解し、２つのＳＣＸ−２（１０ｇ）カートリッジに負荷する。カートリッジをメタノールで洗浄し、メタノール中の２Ｍのアンモニアで溶出する。真空中で濃縮し、次いで得られた油状物をアセトニトリル（４０ｍＬ）に溶解する。７，１１−ジクロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（１．１６７ｇ、４．４ｍｍｏｌｅ）をアセトニトリル溶液に加える。アセトニトリル溶液を分け、２つのマイクロ波管に入れ、炭酸カリウム（０．８９ｇ、６．７９ｍｍｏｌｅ）を各マイクロ波管に加え、加熱し、マイクロ波中で３．５時間、１４０℃にて加熱する。反応混合物を冷却し、濾過し、焼結により回収した固体をアセトニトリルで洗浄し、次いで真空中で濾過物を濃縮し、メタノールを加え、次いで蒸発乾固する。十分なメタノールで処理し、得られた沈殿物を回収し、沈殿物をメタノールで洗浄して、メチル３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートを結晶固体（１．１ｇ）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２９．１８（Ｍ＋１）。
【００６０】
メチル３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートの代替の合成
アセトニトリル（３００ｍＬ）中の７，１１−ジクロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（３４．０ｇ、１２８．２３ｍｍｏｌｅ）の懸濁液に、メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）−プロピオネート塩酸塩（２．１当量；６３．７５ｇ、２６９．２９ｍｍｏｌｅ）および炭酸カリウム（４当量；７０．８９ｇ、５１２．９３ｍｍｏｌｅ）を加える。混合物を環流にて一晩加熱する。蒸発乾固する。残渣を水（５００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）との間に分ける。有機層を合わせ、水（５００ｍＬ）次いでブラインで洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、茶色の油状物まで蒸発させる。イソ−ヘキサン（約１５０ｍＬ）および調製例５０の種晶を加える。２時間にわたって結晶化し、次いでフラスコを冷蔵庫に移し、静置させる。得られた重い結晶固体を濾過により回収し、冷イソ−ヘキサンで洗浄する。真空オーブン中で４０℃にて１時間乾燥させ、メチル３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエート（５３．６ｇ、９７％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２９．１８（Ｍ＋１）。
【００６１】
メチル３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートの第２の代替の合成
７，１１−ジクロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（１０．０ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）、メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）−プロピオネート二塩酸塩（１９．４ｇ、７１．０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルアミン（２２．９ｇ、２２６ｍｍｏｌ）、およびアセトニトリル（８０ｇ）の混合物を、８０℃〜８５℃にて２２時間〜２６時間加熱する。水（８０ｇ）を滴下して加える。４０分攪拌し、層を分離する。水層を酢酸エチル（６０ｇ〜８０ｇ）で抽出する。合わせた有機層を２５％の塩化ナトリウム水溶液（２×４０ｇ）で洗浄する。５０℃以下に温度を維持しながら、有機層を全体で１．５容量および３．５容量まで濃縮する。４０℃〜５０℃にてヘプタン（４１ｇ〜５５ｇ）を加え、２時間〜３時間攪拌する。温度を５０℃以下に維持しながら、全体で１．５容量〜３．０容量まで濃縮する。０℃〜１０℃に冷却し、２時間〜３時間攪拌する。濾過し、濾過ケーキをヘプタン（３．０ｇ〜１０．０ｇ）で洗浄し、６０℃以下にて真空下で乾燥させて、標題化合物（１６．０ｇ、９４．７％ｗ／ｗ％アッセイ、９４％収率）を淡黄色の固体として得る。
【００６２】
調製例５１
メチル３−［４−（２，７−ジクロロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートの合成
【化２１】
0005805215.tif 000030
塩化ホスホリル（５当量；４．３６ｍＬ、７．１９ｇ、４６．８９ｍｍｏｌｅ）を、クロロホルム（８０ｍＬ）中の２，７−ジクロロ−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（１当量；２．５０５ｇ、９．３８ｍｍｏｌｅ）に加え、加熱し、５０℃にて一晩攪拌する。反応溶液をデカントし、真空中で油状物まで蒸発させる。油状物をＤＣＭに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄する。ＤＣＭ溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、２，７，１１−トリクロロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンをクリーム色の固体として得る。並行して、メタノールに溶解することによりメチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエート塩酸塩（０．８３７ｇ、３．５４ｍｍｏｌｅ）を脱塩し、メタノール溶液をＳＣＸ−２カラム（１０ｇ）に加え、メタノールで洗浄し、次いでメタノール溶液中の２．５Ｍのアンモニアで溶出し、メタノールアンモニア画分を蒸発させて、メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエート（０．６６５ｇ）を油状物として得る。この油状物を２，７，１１−トリクロロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（０．５０５ｇ、１．７７ｍｍｏｌｅ）、炭酸カリウム（０．７３３ｇ、５．３１ｍｍｏｌｅ）およびアセトニトリル（２０ｍＬ）と混合し、環流で一晩加熱する。反応混合物を室温まで冷却し、濾過し、焼結物をＥｔＯＡｃで洗浄し、次いで真空中で濾過物を固体まで蒸発させる。メタノール／ＤＣＭ（勾配溶離２：９８〜８：９２）で溶出するシリカ上でクロマトグラフにかける。生成物を含有する画分を蒸発させて、メチル３−［４−（２，７−ジクロロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエート（０．６９ｇ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４９．１３／４５１．０７（Ｍ＋１）。
【００６３】
以下の化合物を実質的に調製例５１の方法によって調製する。
【００６４】
【表７−１】
0005805215.tif 000031
【表７−２】
0005805215.tif 000032
【００６５】
調製例６０
メチル２，２−ジメチル−３−［４−（７−メチル−２−（メチルスルファニル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−プロパノエートの合成
【化２２】
0005805215.tif 000033
メチル１−（５−メチル−２−ニトロベンジル）−４−（メチルスルファニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート（３．４９ｍｍｏｌｅ；１．１２ｇ）を酢酸（１５ｍＬ）で処理し、次いで鉄の粉末（１０．５ｍｍｏｌｅ；５８５ｍｇ）で処理し、次いで８０℃にて油浴中でゆっくり加熱する。数時間後、油浴温度を９０℃まで増加させる。次いで反応物を６０℃にて２日間置いておく。次いで濃縮乾固して、酢酸を除去し、次いでＥｔＯＡｃで処理し、橙色が消えるまで、十分なＥｔＯＡｃと共にシリカパッドで洗浄する。赤色の溶出液を乾燥するまで濃縮し、次いでメタノールで処理し、次いで再濃縮し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、塩化ホスホリル（１．０ｍＬ）で処理する。反応物を５０℃にて油浴中で一晩加熱する。次いで反応物を室温まで冷却し、氷で処理し、次いで水で２回、次いでＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、タールまで濃縮する。それと同時に、メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）−プロパノエート二塩酸塩（１．６０ｇ、５．８６ｍｍｏｌｅ）を水に溶解し、次いでＳＣＸ−２カートリッジ（２×１０ｇ）に負荷し、メタノールで洗浄し、次いでメタノール中のアンモニアで溶出する。塩基性を濃縮して、油状物まで乾燥させる。次いでこの油状物をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解し、タールおよび炭酸カリウム（１．０ｇ）の混合物に加え、次いで環流で加熱する。２時間後、反応物を１４０℃で２時間、マイクロ波を照射する。次いで反応物を濾過し、アセトニトリルおよびアセトンで抽出する。母液を合わせ、シリカ上で乾燥するまで濃縮し、次いでフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇ）（ヘキサン中の１０〜５０％ＥｔＯＡｃ）により精製する。透明な生成物を含有する画分を取り、合わせ、濃縮して、メチル２，２−ジメチル−３−［４−（７−メチル−２−（メチルスルファニル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−プロパノエート（４１８ｍｇ；２７％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４１．１８（Ｍ＋１）。
【００６６】
調製例６１
７−クロロ−２−（メチルスルファニル）−１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンの合成
【化２３】
0005805215.tif 000034
塩化スルホリル（５当量；２．２１ｍＬ、３．６４ｇ、２３．７６ｍｍｏｌｅ）を、クロロホルム（２０ｍＬ）中の７−クロロ−２−（メチルスルファニル）−５，１０−ジヒドロ−１１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−オン（１．３８ｇ、４．７５ｍｍｏｌｅ）に加え、加熱し、４５℃にて２時間攪拌する。反応物の温度を６０℃まで上昇させ、さらに２時間攪拌する。真空中でクロロホルムを除去し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）に残渣を溶解し、飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）で洗浄する。ＤＣＭ層を相分離フリットで濾過し、真空中で溶媒を蒸発させて、粘性油状物を得る。アセトニトリル（１０ｍＬ）に油状物を溶解し、炭酸セシウム（３当量；４．６５ｇ、１４．２６ｍｍｏｌｅ）を加える。この混合物に、乾燥アセトニトリル（１０ｍＬ）中のピペラジン（１０当量；４．０９ｇ、４７．５２ｍｍｏｌｅ）を加え、加熱し、減圧下で一晩、混合物を攪拌する。反応混合物を冷却し、飽和塩化アンモニウム溶液（１００ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）中に抽出する。有機層を合わせ、水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で溶媒を蒸発させて、７−クロロ−２−（メチルスルファニル）−１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（１．０ｇ、６０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４７．１３（Ｍ＋１）。
【００６７】
調製例６２
メチル３−［４−（７−クロロ−２−（メチルスルファニル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートの合成
【化２４】
0005805215.tif 000035
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のメチル２，２−ジメチル−３−オキソ−プロパノエート（０．９２８ｇ、７．１３ｍｍｏｌｅ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の７−クロロ−２−（メチルスルファニル）−１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（１．０ｇ、２．８５ｍｍｏｌｅ）に加え、窒素下で室温にて３０分間、攪拌する。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３当量；１．８９ｇ、８．５６ｍｍｏｌｅ）を反応混合物に加え、窒素下で室温にて攪拌する。メタノールを加え、ＳＣＸ−２カラムに適用し、メタノールで洗浄し、メタノール中の２Ｍのアンモニアで溶出する。メタノール溶液を蒸発させて、メチル３−［４−（７−クロロ−２−（メチルスルファニル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエート（１．２３ｇ、８４％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６１．１２（Ｍ＋１）。
【００６８】
調製例６３
メチル２，２−ジメチル−３−｛４−［７−メチル−２−（プロパン−２−イル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパノエートの合成
【化２５】
0005805215.tif 000036
メタノール（１５ｍＬ）中でメチル３−［４−（２−ブロモ−７−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエート（１．００当量；６００．００ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌｅ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（プロパ−１−エン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（３．００当量；６３８．９３ｍｇ、３．８０ｍｍｏｌｅ）を混合する。１．０９ｗｔ％のトリス（ジベンジリデンアセトニル）ビス−パラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、１．１６ｗｔ％の１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン（ｄｔｂｐｆ）および９７．７５ｗｔ％のリン酸三カリウム（１．０６ｇ）の予め混合した混合物を加え、１４０℃にて２５分間マイクロ波中で加熱する。反応混合物をセライトで濾過し、メタノールで２５ｍＬ容積に希釈する。５０℃にて１０％のＰｄ／Ｃ触媒カートリッジを使用してＨ−Ｃｕｂｅ（登録商標）フロー水素化機（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒ）を介して１ｍＬ／分にて通過させることによってメタノール溶液を水素化する。真空中で溶媒を蒸発させて、メチル２，２−ジメチル−３−｛４−［７−メチル−２−（プロパン−２−イル）−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル］ピペラジン−１−イル｝プロパノエートを得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３７．２８（Ｍ＋１）。
【００６９】
調製例６４
メチル３−［４−（２−エチル−７−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートの合成
【化２６】
0005805215.tif 000037
メタノール（１５ｍＬ）中のメチル３−［４−（２−ブロモ−７−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエート（１．００当量；６２０．００ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌｅ）、トリエテニルボロキシンピリジン（１．５当量；４７２．７９ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌｅ）を混合する。１．０９ｗｔ％のトリス（ジベンジリデンアセトニル）ビス−パラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、１．１６ｗｔ％の１，１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン（ｄｔｂｐｆ）および９７．７５ｗｔ％のリン酸三カリウム（１．１０ｇ）の予め混合した混合物を混合し、２５分間１４０℃にてマイクロ波中で加熱する。反応混合物をセライトで濾過し、メタノールで２５ｍＬ容積に希釈する。５０℃にて１０％のＰｄ／Ｃ触媒カートリッジを使用してＨ−Ｃｕｂｅ（登録商標）フロー水素化機を介して１ｍＬ／分にて通過させることによってメタノール溶液を水素化する。真空中で溶媒を蒸発させて、メチル３−［４−（２−エチル−７−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートを得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２３．１８（Ｍ＋１）。
【実施例】
【００７０】
実施例１
３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸の合成
【化２７】
0005805215.tif 000038
イソプロピルアルコール（１５０ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）の混合物中のメチル３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエート（２８．０ｇ、６５．２７ｍｍｏｌｅ）の懸濁液に、水酸化ナトリウム（３当量；７．８３ｇ、１９５．８２ｍｍｏｌｅ）を加え、７０℃にて４時間加熱して、透明な溶液を得る。７０℃にてさらに１時間加熱し、次いでわずかに冷却する。さらなる５Ｍの塩酸を加えて、６．５から７のｐＨを得る。溶媒の体積を半分まで減少させ、次いで冷蔵庫で０．５時間、フラスコを冷蔵する。得られた白色固体を濾過により回収し、五酸化リン上で４０℃にて真空オーブン中で一晩乾燥させて、３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸（２６．５ｇ、９８％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１５．３（Ｍ＋１）。ＤＳＣ融点＝２４６．５℃（開始）。
【００７１】
以下の化合物を実質的に実施例１の方法によって調製する。
【００７２】
【表８−１】
0005805215.tif 000039
【表８−２】
0005805215.tif 000040
【００７３】
実施例１３
３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸二塩酸塩の合成
【化２８】
0005805215.tif 000041
６０℃にてイソプロピルアルコール（２５０ｍＬ）中の３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸（２４．２５ｇ、５８．４４ｍｍｏｌｅ）の懸濁液に、１０分にわたって、塩化水素の４Ｍのジオキサン溶液（２．４当量；３５．０７ｍＬ、１４０．２６ｍｍｏｌｅ）を加えて、透明な溶液を得る。わずかに冷却し、次いでオフホワイトの固体まで蒸発させる。少量のジエチルエーテルで粉砕し、粉末状のクローム色の固体を濾過により回収する。４０℃にて一晩、真空オーブン中で乾燥させる。微粉に研磨して、６０℃にて６時間、真空オーブン中で乾燥させる。１Ｈ  ＮＭＲにより残留イソプロピルアルコールのレベルをモニターする。温エタノール（３５０ｍＬ）に溶解し、蒸発乾固する。エタノール（５０ｍＬ）で粉砕し、再び蒸発乾固する。乾燥ジエチルエーテル（２００ｍＬ）で粉砕し、得られた固体を濾過により回収する。５０℃にて真空オーブン中で６時間乾燥させて、３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸二塩酸塩（２６．９ｇ、９４％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１５．２（Ｍ＋１）。
【００７４】
以下の化合物を実質的に実施例１３の方法によって調製する。
【００７５】
【表９−１】
0005805215.tif 000042
【表９−２】
0005805215.tif 000043
【００７６】
実施例２５
３−［４−（２−クロロ−７−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸二塩酸塩の合成
【化２９】
0005805215.tif 000044
メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）−プロパノエート二塩酸塩（１．４９ｇ、５．４７ｍｍｏｌｅ）を水に溶解し、ＳＣＸ２カラム上で吸収する。カラムをメタノールで洗浄し、メチル２，２−ジメチル−３−ピペラジン−１−イル−プロパノエートをメタノール中の２Ｍのアンモニアで溶出する。真空中でメタノールを除去し、メチル２，２−ジメチル−３−（ピペラジン−１−イル）プロパノエートをアセトニトリル（１２ｍＬ）に加える。２，１１−ジクロロ−７−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（０．８５ｇ、３．２２ｍｍｏｌｅ）および重炭酸ナトリウム（０．４０５ｇ、４．８３ｍｍｏｌｅ）をアセトニトリル溶液に加える。１４０℃にて３０分間、マイクロ波中で加熱し、攪拌する。室温まで冷却し、シリカ上で反応混合物を吸収し、クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／イソヘキサン０：１００％〜１００：０％を用いる勾配溶離）により精製する。生成物を含有する画分を回収し、真空中で溶媒を蒸発させて、残渣をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム（０．２３５ｇ、９．６５ｍｍｏｌｅ）を加える。１４０℃にて１２．５分間、マイクロ波中でメタノール溶液を加熱し、攪拌する。室温まで冷却し、酢酸で酸性化し、次いで減圧下で溶媒を蒸発させる。残渣を過剰な２ＭのＨＣｌ（水溶液）に溶解し、次いで蒸発乾固する。残渣を水に溶解し、マクロ多孔性ポリスチレン炭酸水素塩（ＰＬ−ＨＣＯ３）樹脂上で固定する。樹脂を水で洗浄し、２ＭのＨＣｌ（水溶液）で樹脂から溶出する。溶液を蒸発乾固して、３−［４−（２−クロロ−７−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸二塩酸塩（０．１７７ｇ；１１．２８％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１５．１８（Ｍ＋１）。
【００７７】
以下の化合物を実質的に実施例２５の方法によって調製する。
【００７８】
【表１０】
0005805215.tif 000045
【００７９】
実施例２９
ナトリウム３−［４−（７−クロロ−２−エチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエートの合成
【化３０】
0005805215.tif 000046
３−［４−（７−クロロ−２−エチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸二塩酸塩（２０１ｍｇ、４００μｍｏｌｅ）を水およびメタノール（５ｍＬ）に溶解し、次いでＳＣＸ−２カートリッジ（２ｇ）上に負荷する。メタノールで洗浄し、次いでメタノール中のアンモニアで溶出する。塩基性溶液を濃縮乾固して、３−［４−（７−クロロ−２−エチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸（１６０ｍｇ、３７３μｍｏｌｅ）を得る。次いで２Ｎの水酸化ナトリウム（１８７μＬ、３７３μｍｏｌｅ）および水（３ｍＬ）で処理して溶液にする。次いで凍結乾燥して、ナトリウム３−［４−（７−クロロ−２−エチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパノエート（１６４ｍｇ、９８％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２９．１８（Ｍ＋１）。
【００８０】
実施例３０
３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸ジ−メタンスルホネートの合成
【化３１】
0005805215.tif 000047
３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸（０．１０６ｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（５ｍＬ）を加えて、スラリーを形成する。メタンスルホン酸（０．０５０ｍｌ、０．０７５ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を攪拌スラリー（１０００ｒｐｍ）に加え、白色固体が沈殿するまで、得られた溶液を６０℃にて攪拌する。このスラリーを冷却し、濾過により固体を単離して、３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸ジ−メタンスルホネート（０．１５ｇ）を得る。
【００８１】
文献データ（Ｍｏｒａｉｒｔｙ  ＳＲ，Ｈｅｄｌｅｙ  Ｌ，Ｆｌｏｒｅｓ  Ｊ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｒ，Ｋｉｌｄｕｆｆ  ＴＳ．（２００８）  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ５−ＨＴ２Ａ  ａｎｄ  ５−ＨＴ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｓｌｅｅｐ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｓｌｅｅｐ  ３１，３４−４４．；ならびにＢａｒｂｉｅｒ，Ａ．Ｊ．，およびＢｒａｄｂｕｒｙ，Ｍ．Ｊ．，Ｈｉｓｔａｍｉｎｅｒｇｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｓｌｅｅｐ−Ｗａｋｅ  Ｃｙｃｌｅｓ：Ｒｅｃｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｆｏｒ  Ｓｌｅｅｐ  ａｎｄ  Ｗａｋｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，ＣＮＳ  ＆  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，ｖｏｌ  ６，ｐｇ．３１−４３（２００７））および非臨床動物研究において生成されたデータは、不眠症の処置および抑鬱障害、不安障害、疼痛、アレルギー、肺もしくは気道疾患、精神疾患、認知症、および／または神経変性疾患および／または概日リズム睡眠障害などの他の障害と関連する不眠症の対症療法において二重活性Ｈ１逆アゴニスト／５−ＨＴ２Ａアンタゴニストについての役割を支持する。特に、特定の二重活性Ｈ１逆アゴニスト／５−ＨＴ２Ａアンタゴニストが、不均衡もしくは臨床的に関連する自発運動の抑制、ＲＥＭ睡眠の減少、または睡眠過剰を有さずにＥＥＧモニターされた齧歯動物を使用して全睡眠時間を増加するのに効果的であることが見出される。
【００８２】
本化合物の特徴をさらに実証するために、化合物は以下のインビトロおよびインビボアッセイにおいて実施され得る：
インビトロ結合および活性アッセイ：
Ｈ１競合結合アッセイ
［３Ｈ］ピリラミン結合実験をＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）９６ウェルフォーマットにおいて実施する。このアッセイに使用した膜は、組換えＨ１受容体（ヒト）を安定に発現するＨＥＫ−２９３細胞から調製する。ＷＧＡ  ＰＶＴ  ＳＰＡビーズ（１ｍｇ／ウェル、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（ＭＡ、ＵＳＡ）ＲＰＮＱ０００１）および３μｇの膜の混合物を、３．５ｎＭの［３Ｈ］−ピリルアミンおよび種々の濃度の試験化合物（１０点濃度反応曲線）を含有するアッセイ緩衝液（６７ｍＭのＴｒｉｓ；ｐＨ７．６）に添加することによりインキュベーションを開始する。１０μＭのトリプロリジンの存在下で非特異的結合を測定する。試料を室温（２２℃）にて４時間インキュベートし、次いでＭｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘで読み取る。
【００８３】
５−ＨＴ２Ａ競合結合アッセイ
［３Ｈ］−ケタンセリン結合実験をＳＰＡ９６ウェルフォーマットにおいて実施する。このアッセイに使用した膜は、組換え５−ＨＴ２Ａ受容体（ヒト）を安定に発現するＡＶ−１２細胞から調製する。ＷＧＡ  ＹＳｉ  ＳＰＡビーズ（１ｍｇ／ウェル、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（ＭＡ，ＵＳＡ），ＲＰＮＱ００１１）および２μｇの膜の混合物を、３．１ｎＭの［３Ｈ］−ケタンセリンおよび種々の濃度の試験化合物（１０点濃度反応曲線）を含有するアッセイ緩衝液（６７ｍＭのＴｒｉｓ、０．５ｍＭのＥＤＴＡ；ｐＨ７．６）に添加することによってインキュベーションを開始する。２０μＭの１−（１−ナフチル）ピペラジンの存在下で非特異的結合を測定する。試料を室温（２２℃）にて４時間インキュベートし、次いでＭｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘで読み取る。
【００８４】
５−ＨＴ２Ｃ競合結合アッセイ
［１２５Ｉ］−（±）ＤＯＩ結合実験をＳＰＡ９６ウェルフォーマットにおいて実施する。このアッセイに使用した膜は、組換え５−ＨＴ２Ｃ受容体（ヒト）を安定に発現するＡＶ−１２細胞から調製する。ＷＧＡ  ＰＶＴ  ＳＰＡビーズ（０．５ｍｇ／ウェル、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（ＭＡ、ＵＳＡ）、ＲＰＮＱ０００１）および２．５μｇの膜の混合物を、０．２ｎＭの［［１２５Ｉ］−（±）ＤＯＩおよび種々の濃度の試験化合物（１０点濃度反応曲線）を含有するアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、１０μＭのパーギリン、０．１％のアスコルビン酸、ｐＨ７．４）に添加することによってインキュベーションを開始する。２０μＭの１−（１−ナフチル）ピペラジンの存在下で非特異的結合を測定する。室温（２２℃）にて４時間、試料をインキュベートし、次いでＭｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘで読み取る。
【００８５】
結合データアッセイ
放射性リガンド結合の５０％阻害（ＩＣ５０）を生じる競合相手の濃度を得るために４−パラメータロジスティック非線形方程式を使用して曲線を評価する。式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋Ｌ／Ｋｄ）（式中、Ｌはこの実験に使用した放射線リガンドの濃度に等しく、Ｋｄは、標準飽和分析法または相同競合実験から測定した受容体に対する放射線リガンドの平衡解離定数と等しい）に従って平衡解離定数（Ｋｉ）を算出する。ｎの値を示す、Ｋｉについて報告した値は、幾何平均±標準誤差（ＳＥＭ）として示し、ｎにより示される複製数の決定を有する。式ＧｅｏＭｅａｎ＝１０＾（平均（ｌｏｇＫｉ１＋ｌｏｇＫｉ２＋．．．ｌｏｇＫｉｎ）／ｓｑｒｔ  ｎ）により幾何平均を算出する。
【００８６】
初代神経培養物中の天然受容体を使用するＧＡＢＡＡ拮抗作用
９６ウェルフォーマットＦＬＩＰＲ（登録商標）システム（Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ（登録商標）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ））を使用してカルシウム流出をモニタリングすることによって天然ＧＡＢＡＡ受容体に対する化合物の活性を評価する。つまり、皮膚の胚の神経細胞をＥ１８ラット胚から解離し、黒壁の透明底のポリ−Ｄ−リジンでコーティングした９６ウェルＦＬＩＰＲ（登録商標）プレート中に最適密度で播種する。細胞にカルシウム感受性色素（Ｆｌｕｏ４−ＡＭ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を負荷した後、低塩化物（グルコン酸塩と置き換えた塩化物）を含有する溶液中に細胞を漬ける。これらの条件下で、ＧＡＢＡＡ受容体の活性により、（化学勾配の方向において）塩化物イオンの流出が生じ、それにより、膜の脱分極およびその結果として電位依存性カルシウムチャネル（ＶＧＣＣ）の活性化が生じる。ＶＧＣＣによるカルシウム流出を記録し、ＦＬＩＰＲ（登録商標）システムを使用してオフラインで分析する。アッセイの薬理学的検証のために、濃度反応曲線（ＣＲＣ）を、標準的なアゴニスト（ＧＡＢＡ）および標準的なアンタゴニスト（ガバジン）について記録する。１０μＭ（ＥＣ９０ＧＡＢＡ反応に等しい）において一定濃度のアゴニストＧＡＢＡに対するＣＲＣ様式においていずれかの作用を決定する。
【００８７】
方法：
化合物の存在および非存在下でアゴニストＧＡＢＡに対するピーク蛍光反応を比較することにより１０点用量反応曲線を使用して化合物の拮抗作用を定量する。アッセイウィンドウを、その所定のＥＣ９０濃度においてＧＡＢＡにより得た最大反応マイナスガバジンの完全な阻害濃度（５０μＭ）により得た反応として定義する。アッセイウィンドウのパーセントとして拮抗作用を算出する。４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（Ｐｒｉｓｍ  Ｇｒａｐｈｐａｄ（登録商標）３．０１）を使用して相対的ＩＣ５０値として全てのデータを算出する。全ての化合物についての拮抗効力を、各アッセイ試行において３つの複製を用いてガバジンと比較する。
【００８８】
例示した化合物または例示したその塩を実質的に上記のように試験し、Ｈ１および５−ＨＴ２Ａ受容体に対する高親和性ならびに５−ＨＴ２Ｃ受容体に対する選択性を有することを見出す。例示した化合物についてのＨ１および５−ＨＴ２Ａ受容体についてのＫｉは、それぞれ、１００ｎＭおよび２００ｎＭ未満であることを見出すのに対して、５−ＨＴ２Ｃ受容体についてのＫｉは１０００ｎＭ超であることを見出す。
【００８９】
さらに、本発明の化合物は、限定されないが、ｈＥＲＧチャネル、他のセロトニン受容体（具体的には、５−ＨＴ１Ａ、５−ＨＴ１Ｂ、５−ＨＴ１Ｄ、５−ＨＴ１Ｅ、５−ＨＴ１Ｆ受容体、５ＨＴ２Ｂ受容体においてアゴニスト活性を欠く、５−ＨＴ２Ｃ、５−ＨＴ４、５−ＨＴ５、５−ＨＴ６、および５−ＨＴ７受容体）、ムスカリン性受容体、ドーパミン作動性受容体（具体的には、Ｄ１、Ｄ２、およびＤ３）、ＧＡＢＡＡ受容体、アドレナリン受容体などの他の生理学的に重要な受容体およびモノアミン輸送体についての周知の方法による結合アッセイおよび機能活性アッセイにおいて試験できる。特定の例示した化合物をこれらの受容体において試験し、有意な活性を欠いていることが示される。
【００９０】
実施例１および１３の化合物を実質的に上記のように試験し、表１に示すような活性プロファイルを有することを見出す。
【００９１】
【表１１】
0005805215.tif 000048
【００９２】
したがって、本発明の化合物の生理学的に関連する用量は、インビボにおいてＨ１および５−ＨＴ２Ａ受容体の十分な阻害を提供するが、他の生理学的に関連する受容体と実質的に相互作用しないと考えられ、それ故、的外れの活性と関連する望ましくない作用を回避しながら所望の薬理を提供すると考えられる。このような望ましくない作用としては、限定されないが、以下：突発的な体重増加の治療と関連する５−ＨＴ２Ｃ拮抗活性、弁膜症と関連する５−ＨＴ２Ｂ拮抗活性、ＱＴ延長と関連するｈＥＲＧチャネル調節、および発作活動と関連するＧＡＢＡＡ活性が挙げられる。さらに、睡眠／覚醒生理の妨げは、ドーパミン受容体、他のセロトニン受容体、アドレナリン受容体、およびモノアミン輸送体に対する選択性により回避される。
【００９３】
５−ＨＴ２Ａ受容体占有：受容体占有をアッセイして、インビボでの５−ＨＴ２Ａ受容体との相互作用の程度を実証する。手短に述べると、３時間の実験プロトコルを開始するまで、約２３０〜２８０グラムの体重のオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）に自由に食物および水を与える。１ｍｇ／ｋｇのケタンセリン（非選択５−ＨＴ２Ａアンタゴニスト）を陽性対照として使用してアッセイ妥当性を確立する。試験化合物または対照を、２０％のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンからなるビヒクル中で強制経口投与により投与する。ＭＤＬ  １００９０７（（Ｒ）−（＋）−α−（２，３−ジメトキシフェニル）−１−［２−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−ピペリジンメタノール）、選択的５−ＨＴ２Ａアンタゴニストをトレーサーとして使用する。ＭＤＬ  １００９０７を、５μｌの希釈乳酸（１ｍｇ／ｍｌ）と共に水に懸濁し、生理食塩水で６μｇ／ｍｌに希釈し、１ｍＬ／ｋｇの体積で側部尾静脈を介して静脈内に投与して、３μｇ／ｋｇのトレーサー用量を得る。ラットに、試験化合物、ケタンセリン、またはビヒクル（Ｎ＝４）を投与し、続いて１時間後、静脈内に３μｇ／ｋｇ用量のＭＤＬ  １００９０７を投与する。トレーサー投与の時間に受容体占有（ＲＯ）が測定されることが考慮される。トレーサー投与の１５分後、ラットを頸椎脱臼により屠殺する。血漿試料を採取し、前頭皮質および小脳の試料を除去する。ＭＤＬ  １００９０７トレーサーのレベルを各皮質および小脳試料中で測定する。非常に低いレベルの受容体（小脳）を有するかまたは有さない領域により正規化された全結合（前頭皮質）を表す高受容体密度の領域を利用する十分に確立された比率法を使用してＲＯを算出する。ｎｕｌｌ領域と称される、この領域は、リガンドプローブの非特異的結合を表す。小脳に対する皮質におけるトレーサーレベルのビヒクル比は０％占有を表す。１の比は１００％占有を表し、ＭＤＬ  １００９０７トレーサーの５−ＨＴ２Ａ受容体に対する全ての特異的結合が遮断される場合に達成される。試験化合物で前処置された群由来の小脳トレーサーに対する皮膚の中間体比を、５−ＨＴ２ＡＲＯの割合を測定するためにビヒクル処置した動物におけるトレーサーレベルの比（０％占有）と、１の比（１００％占有）との間で線形補間する。
【００９４】
ＭＤＬ  １００９０７分析：皮質および小脳試料を秤量し、氷上の円錐形遠心分離管に置く。０．１％ギ酸を含有するアセトニトリルの４種の体積（ｗ／ｖ）を各管に加える。次いで試料を均質化し、１４，０００ＲＰＭ（２１，９２０×ｇ）にて１６分間、遠心分離する。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析のためにＨＰＬＣ注射バイアルに１００〜９００μＬの滅菌水を加えることによって上清を希釈する。Ａｇｉｌｅｎｔモデル１２００ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）およびＡＰＩ４０００質量分析計を使用してＭＤＬ  １００９０７の分析を実施する。クロマトグラフ分離は、全体で０．１％のギ酸含有量を有する水中の６０％のアセトニトリルからなる移動相を用いて２．１×５０ｍｍのＣ１８カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ品番号９７１７００−９０７）で行う。ＭＤＬ  １００９０７の検出は、３７４．２対１２３．０の質量対電荷比（ｍ／ｚ）を有するイオン遷移を生じるように前駆体をモニタリングすることにより達成される。処置していないラット由来の脳組織試料に既知の量の検体を添加し、上記のように処理することにより標準物を調製する。
【００９５】
統計的方法：各研究についての曲線を、ＪＭＰ（登録商標）バージョン８．０（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ，Ｃａｒｙ  ＮＣ）を使用して０％にて底固定を有する４パラメーターロジスティック関数に適合し、絶対ＥＤ５０をソフトウェアにより算出する。平均、標準誤差および９５％信頼区間として値を得る。実施例１３の化合物を実質的に上記のように試験し、０．２７ｍｇ／ｋｇ（ＳＥ＝０．０６９、９５％ＣＩ＝０．１６−０．４８ｍｇ／ｋｇ）のＥＣ５０で高い５−ＨＴ２Ａ受容体占有を達成することを見出す。
【００９６】
ヒスタミンＨ１受容体占有：インビボでのＨ１受容体との相互作用の程度を実証するためにＨ１ＲＯをアッセイする。手短に述べると、約２３０〜２８０グラムの体重のオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に、３時間の実験プロトコルを開始するまで、自由に食物および水を与える。３−［４−（８−フルオロジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］オキサゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸二塩酸塩を陽性対照として使用し、ドキセピンをトレーサーとして使用する。試験化合物および対照を、２０％のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンからなるビヒクル中で強制経口投与により投与する。生理食塩水で２μｇ／ｍｌに希釈した滅菌水（１００μｇ／ｍｌ）にドキセピンを溶解し、側部尾静脈を介して０．５ｍＬ／ｋｇの体積で静脈内に投与して１μｇ／ｋｇのトレーサー用量を得る。ラットに試験化合物、１５ｍｇ／ｋｇの陽性対照、またはビヒクルを投与し、続いて１時間後にドキセピン（Ｎ＝４）の「トレーサー」用量を静脈内に投与する。トレーサー投与の時間にＲＯが測定されることが考慮される。トレーサー投与の４０分後、ラットを頸椎脱臼により屠殺する。血清試料を回収し、前頭皮質を除去する。ドキセピントレーサーのレベルを各皮質試料において測定する。ビヒクル条件（０％占有）および陽性対照条件（１００％占有）下で組織内のトレーサーレベルの比較を使用してＲＯを算出する。Ｈ１受容体に対するトレーサーの特異的結合の完全な遮断を示すように３０分の前処置を予め決定して、１５ｍｇ／ｋｇの陽性対照を静脈内に投与した。試験化合物の用量を用いたさらなる処置群を、ビヒクルと陽性対照群との間で線形補間してＨ１ＲＯのパーセントを算出する。
【００９７】
ドキセピン分析：皮膚試料を秤量し、氷上の円錐形遠心分離管に入れる。０．１％のギ酸を含有するアセトニトリルの４種の体積（ｗ／ｖ）を各管に加える。試料を均質化し、１４，０００ＲＰＭ（２１，９２０×ｇ）を使用して１６分間、遠心分離する。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析のためにＨＰＬＣ注射バイアル中で１００〜９００μＬの滅菌水で上清を希釈する。Ａｇｉｌｅｎｔモデル１２００ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）およびＡＰＩ４０００質量分析計を使用してドキセピンのＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を実施した。クロマトグラフ分離は、２．１×５０ｍｍのＣ１８カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ品番号９７１７００−９０７）および全体で０．１％のギ酸含有量を有する水中の１０％アセトニトリル（ＡＣＮ）の開始条件、１分後−１０％ＡＣＮ、２分−９０％ＡＣＮ、２．９分−９０％ＡＣＮ、３．１分−１０％ＡＣＮ、５．５分−停止からなる勾配法を使用する移動相を利用した。ドキセピンの検出は、２８０対１０７．１の質量対電荷比（ｍ／ｚ）を有するイオン遷移を生じるように前駆体をモニタリングすることにより達成した。処置していないラット由来の脳組織試料に既知の量の検体を添加し、上記のように処理することにより標準物を調製する。
【００９８】
統計的方法：Ｐｒｉｓｍ（登録商標）バージョン３．０２（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して曲線を４パラメータロジスティック（どれも一定に保っていない）に適合し、相対ＥＤ５０をソフトウェアにより算出する。平均±標準誤差として値を得る。実施例１３の化合物を実質的に上記のように試験し、０．３ｍｇ／ｋｇのＥＣ５０を有する高いＨ１ＲＯを達成することを見出す。
【００９９】
Ｈ１逆アゴニスト：本発明の化合物の逆アゴニストの性質を決定するために、ヒト組換えＨ１受容体（ＨＥＫ２９３／ｈｍ  Ｈ１クローンＲ−４０）でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞中のミオ−イノシトール１リン酸（Ｉｐ１）のレベルに対するそれらの効果を測定する。手短に述べると、ＨＥＫ２９３／ｈｍ  Ｈ１細胞（クローンＲ−４０）を約９０％コンフルエンシー（３：１のＤＭＥＭ／Ｆ１２、５％のＦＢＳ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、Ｇ４１８  ５００μｇ／ｍｌ、１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ／グルタミン）まで増殖させ、１×トリプシン／ＥＤＴＡ（ＰＡＡ  Ｐａｓｃｈｉｎｇ，Ａｕｓｔｒｉａ  Ｌ１１−００３）を使用してアッセイの日に収集する。３５μｌの細胞（３００Ｋ）を、刺激緩衝液（ＮａＣｌ  １４６ｍＭ、ＣａＣｌ２  １ｍＭ、ＫＣｌ  ４．２ｍＭ、ＭｇＣｌ２  ０．５ｍＭ、グルコース５．５ｍＭ、ＨＥＰＥＳ  １０ｍＭおよびＬｉＣｌ  ５０ｍＭ）入りの９６Ｗハーフエリア白色固形底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＵＫ３６８８）中に播種する。試験化合物を１ｍＭにて１００％ＤＭＳＯ中に最初に溶解し、１００％ＤＭＳＯ中で滅菌希釈（半対数）して、１０点用量反応曲線（Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＵＫ）を得る。これらをさらに、Ｃｙｂｉｗｅｌｌ（ＣｉＢｉＯ  Ｊｅｎａ，独国）を使用して刺激緩衝液中で２倍の最終アッセイ濃度まで希釈し、３５μｌをアッセイプレート（１０μＭの最大最終濃度）中の細胞に加える。ＨＴＲＦ  ＩＰ１検出キット試薬（ＣｉｓＢｉｏ  ６２Ｐ１ＡＰＥＣ）を各々１５μｌ添加する前に、細胞プラス化合物を３７℃／５％ＣＯ２にて１時間３０分インキュベートする。ＩＰ１累積（Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を測定する前に、室温にてさらに１時間、細胞プレートをインキュベートする。アッセイの日における標準的なＩＰ１曲線試行から外挿によってＩＰ１累積（ｎＭ）を算出する。４−パラメーター曲線適合（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ３．０２）を使用してＥＣ５０値を算出する。負の効果値を、正の対照トリペレナミン（１０μＭ，Ｓｉｇｍａ，ＵＫ  Ｐ５５１４）に対して表す。本発明の代表的な化合物を実質的に上記のようにアッセイし、Ｈ１受容体における逆アゴニストであることを見出す。化合物１３を上記のように実質的に試験し、５３．９±３７ｎＭのＩＣ５０で構成活性（１２６±６％）を完全に抑制することを見出す。
【０１００】
ＤＯＩにより誘発される頭を横に振る活動の抑制：本発明の化合物のインビボでの５−ＨＴ２Ａ受容体アンタゴニスト活性を、５−ＨＴ２Ａ受容体アゴニスト２，５−ジメトキシ−４−ヨードアンフェタミン（ＤＯＩ）により誘発される頭を横に振る活動を遮断するそれらの能力により実証する（例えば、Ｂａｒｔｏｓｚｙｋ  ＧＤ，ｖａｎ  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  Ｃ，Ｂｏｔｔｃｈｅｒ  Ｈ，Ｓｅｙｆｒｉｅｄ  ＣＡ．ＥＭＤ  ２８１０１４，ａ  ｎｅｗ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ５−ＨＴ２Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００３  ４７３：２２９−２３０を参照のこと）。手短に述べると、オスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（２０〜２５ｇ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を標準的な収容条件内に収容する（大きなＩＶＣケージ内に３２匹のマウス、０７．００〜１９．００の明期、一定温度（１９〜２３℃）および湿度（５０％＋／−１０）、食物および水を自由に与える）。１０ｍｇ／ｋｇにてビヒクル（０．２５％のメチルセルロース）、ＤＯＩ（生理食塩水中に３ｍｇ／ｋｇ）または試験化合物プラスＤＯＩ（生理食塩水中に３ｍｇ／ｋｇ）のいずれかをマウスにＰＯで与える。ビヒクルおよびＤＯＩ＋ビヒクル（ｎ＝８）と共に、各化合物についてｎ＝４で１回の実験当たり４つの群で試験化合物を個々に評価する。試験化合物の６０分の前処理の時間の後、マウスに、ビヒクル（生理食塩水）または３ｍｇ／ｋｇのＤＯＩのいずれかを皮下投与により与え、次いで透明なパースペックス観察チャンバに入れる。ＤＯＩまたはビヒクル投与の５分後、各々の個々のマウスにより示される、視覚的にスコア付けした頭を横に振った数を１５分間計数する。ＡＮＯＶＡおよびｐｏｓｔ−ｈｏｃダネット検定を使用してデータを分析する。例示した化合物を実質的に上記のように試験し、１０ｍｇ／ｋｇにて、ＤＯＩにより誘発される頭を横に振る反応を９０％より多く阻害することを見出す。実施例１３の化合物を実質的に上記のように試験し、１０ｍｇ／ｋｇにて、ＤＯＩにより誘発される頭を横に振る反応を１００％阻害することを見出す。
【０１０１】
ラットにおける睡眠および行動モニタリング：
本発明の代表的な化合物を、睡眠の量を増加させるか、または睡眠の中断を減少させるか、ＲＥＭ睡眠の阻害、覚醒運動障害、および／もしくは反跳不眠などの望ましくない効果のいずれも有さない、それらの能力についてラットにおいて試験する。試験動物を、脳電図（ＥＥＧ）、筋電図（ＥＭＧ）、および運動により連続してモニターして、累積的な非ＲＥＭ睡眠、累積的な全睡眠、平均睡眠不快時間、最も長い睡眠不快時間、反跳不眠、ＲＥＭ睡眠阻害および覚醒状態の間の自発運動を測定する。このような研究についての方法は当該技術分野において公知である（例えば、Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｓｅｉｄｅｌ  ＷＦ．Ｍｏｄａｆｉｎｉｌ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｗａｋｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｉｎｔｅｎｓｉｆｙｉｎｇ  ｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｒ  ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ  ｒｅｂｏｕｎｄ  ｈｙｐｅｒｓｏｍｎｏｌｅｎｃｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １９９７；２８３：７５７−７６９；ｖａｎ  Ｇｅｌｄｅｒ  ＲＮ，Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｄｅｍｅｎｔ  ＷＣ．Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｓｃｏｒｉｎｇ：ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｉｃｒｏｃｏｍｐｕｔｅｒ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｍｉｃｅ．Ｓｌｅｅｐ  １９９１，１４：４８−５５；およびＧｒｏｓｓ  ＢＡ，Ｗａｌｓｈ  ＣＭ，Ｔｕｒａｋｈｉａ  ＡＡ，Ｂｏｏｔｈ  Ｖ，Ｍａｓｈｏｕｒ  ＧＡ，Ｐｏｅ  ＧＲ．Ｏｐｅｎ−ｓｏｕｒｃｅ  ｌｏｇｉｃ−ｂａｓｅｄ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｕｓｉｎｇ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｃｏｒｄｉｎｇｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００９；１８４（１）：１０−８に記載されている方法を参照のこと）。研究は以下のように行う。
【０１０２】
動物準備：成体のオスのＷｉｓｔａｒラット（手術時に約２７０〜３００ｇ）を、以下のようにＥＥＧ、ＥＭＧ、および運動の習慣的な記録のために外科的に適合する：ＥＥＧ記録のための４つのステンレス鋼ネジ（２つの前頭骨［ブレグマから３．９ｍｍ前方、および±２．０ｍｍ中外側］および２つの後頭骨［ブレグマから６．４ｍｍ後部、±５．５ｍｍ中外側］）からなる頭蓋インプラントおよびＥＭＧ記録のための２つのテフロン（登録商標）でコーティングしたステンレス鋼ワイヤ（背頸部台形筋肉の下に配置する）を用いてラットを外科的に準備する。手術前に全てのリードを小型のコネクタ（Ｍｉｃｒｏｔｅｃｈ，Ｂｏｏｔｈｗｙｎ，ＰＡ）にはんだ付けする。インプラントアセンブリをステンレス鋼ＥＥＧ記録ネジ、インプラントコネクタと頭蓋骨との間に適用されるシアノアクリレート、および歯科用アクリルの組み合わせにより頭蓋骨に固定する。自発運動を、腹部内に外科的に配置した小型送信機（Ｍｉｎｉｍｉｔｔｅｒ  ＰＤＴ４０００Ｇ，Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ，Ｂｅｎｄ，ＯＲ）を介してモニターする。少なくとも３週間、回復させる。
【０１０３】
環境記録：十分な垂直の上部空間を可能にするために、挿入したポリカーボネートフィルター−トップライザーで修飾されたマイクロアイソレーターケージ内に各ラットを個々に収容する。最小限に動作を制限するフレキシブルなケーブルを、ケージ上部に取り付けられた整流子に一端で接続し、動物の頭蓋インプラントに他端で接続する。各ケージを、ステンレス鋼睡眠−覚醒記録チャンバの別の通気した区画内に置く。食物および水を自由に取らせ、周囲温度を約２３±１℃に維持する。蛍光灯を使用して２４時間の明−暗サイクル（ＬＤ１２：１２）を研究の間中、維持する。相対湿度を約５０％に平均化する。各処置の前後に少なくとも３０分間、動物を平静にしておく。
【０１０４】
研究設計および投与：ビヒクル（プラセボ、水中にメチルセルロース１５センチポアズ０．２５％）または試験化合物の１つの投与レベルを、ラットが同じ処置を２回受けないように、およびラットがいずれか１つの研究において８回の処置のうち２回より多くを受けないように、１ｍＬ／ｋｇにて擬似−無作為的（ｐｓｅｕｄｏ−ｒａｎｄｏｍｌｙ）に経口投与する。約１分間、各ラットをそのケージから除き、秤量し、処置する。少なくとも６日の「ウォッシュアウト」期間を先行して、続いて各処置を行う。
【０１０５】
データ収集：睡眠および覚醒状態の区別は自動化できる（例えば、Ｖａｎ  Ｇｅｌｄｅｒら，１９９１（上記）；Ｅｄｇａｒら，１９９７（上記）；Ｗｉｎｒｏｗ  ＣＪら，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１０；５８（１）：１８５−９４．；およびＧｒｏｓｓら，２００９（上記））。ＥＥＧを増幅させ、フィルター処理し（Ｘ１０，０００、帯域通過１〜３０Ｈｚ）、ＥＭＧを増幅させ、積分し（帯域通過１０〜１００Ｈｚ、ＲＭＳ積分）、および非特異的自発運動（ＬＭＡ）を同時にモニターする。非ＲＥＭ睡眠、ＲＥＭ睡眠、覚醒状態、またはシータ優性覚醒状態として１０秒の時間で覚醒状態を分類する。自発運動（ＬＭＡ）を、カウント毎分として記録し、商業的に利用可能なテレメトリレシーバ（ＥＲ４０００，Ｍｉｎｉｍｉｔｔｅｒ，Ｂｅｎｄ，ＯＲ）により検出する。
【０１０６】
統計的分析。少なくとも１つの転帰を有する全ての動物は要約した結果に含まれる（例えば、我々は、テレメトリデータは有用であるが、ＥＥＧデータは有用ではない、動物処置からの適切なデータを含む）。処置後の観察期間を各転帰に適した投与後の間隔に分け、投与時間を時間＝０の開始と定義し、各期間にわたる平均時間または累積値のいずれかをコンピュータ計算することにより観察期間において転帰をまとめる（各転帰の正確な定義について表１の凡例を参照のこと）。睡眠不快を、変動を安定化するためにログスケールで分析し、全ての他の変量を均等目盛りで分析する。因子として処置群および処置日付、共変量として対応する処置前間隔、２４時間前を使用した共分散の分析により、各期間における各転帰を分析する。調整した平均およびビヒクル平均からの変化ならびにそれらの対応する標準誤差を各処置群についてまとめる。ログスケールで分析される転帰を逆変換して、幾何平均および平均比からビヒクル結果を報告する。
【０１０７】
実施例１３〜２８の化合物を実質的に上記のように試験する。実施例１３、１５、１６、１８および１９の化合物は、３ｍｇ／ｋｇにて顕著な反跳不眠、ＲＥＭ睡眠阻害または運動強度（ＬＭＩ）の阻害を有さず、累積ＮＲＥＭ睡眠時間および累積全睡眠時間を有意に増加することを見出す。実施例１３の化合物を上記のように実質的に試験し、表２に示すように睡眠プロファイルおよび自発運動強度を有することを見出す。
【０１０８】
【表１２】
0005805215.tif 000049
【０１０９】
表２．転帰統計：略語：Ｎ＝試料サイズ；Ａｄｊ．平均＝ビヒクル対照に対して調整した群平均値；ＳＥ＝標準誤差；ＬＣＬ＝低い９５％信頼限界、ＮＲＥＭ＝非ＲＥＭ、すなわちＲＥＭ睡眠以外の全ての睡眠。
【０１１０】
定義および単位−平均はビヒクル対照からの調整した差である：
累積睡眠：処置後最初の６時間にわたる（分）（「全睡眠」はＮＲＥＭ睡眠＋ＲＥＭ睡眠を示す）。
平均睡眠不快：処置後最初の６時間にわたる時間平均化した睡眠不快の平均をビヒクル対照に対してｎ倍増加として表す。
最も長い睡眠不快：処置後最初の６時間における最も長い睡眠不快をビヒクル対照に対してｎ倍増加として表す。
反跳不眠：処置後の期間、すなわち第７回、第８回および第９回の明期の最初の３時間の間のＮＲＥＭ＋ＲＥＭ睡眠の累積分。
ＲＥＭ阻害：処置後、最初の１２時間の間のＲＥＭ睡眠の累積分。
自発運動（ＬＭＡ）強度：処置前の最初の６時間にわたって平均化した、ＥＥＧにより定義した覚醒状態のＬＭＡカウント毎分として表す。
【０１１１】
有効性の決定。４つの有効性変数の各々についての閾値有効性を、ログ（用量）に対する処置後６時間の間、ビヒクル対照に対する各変数の増加をプロットすることにより算出する。各変数についての閾値有効性は、定義した有効性閾値；さらなる累積した非ＲＥＭ睡眠の＋３０分、さらなる累積した全睡眠の＋２５分、平均睡眠不快時間の１．７５倍の増加、および最も長い睡眠不快時間の１．５倍の増加を与える用量である。実施例１３の化合物は表３に示した閾値有効用量を有することを見出す。
【０１１２】
【表１３】
0005805215.tif 000050
【０１１３】
望ましくない効果の決定。各々の「望ましくない効果」の転帰変数（定義について表４の凡例を参照のこと）をログ（用量）に対してプロットする。
【０１１４】
ＲＥＭ阻害についての閾値を−１０分のＲＥＭ睡眠の累積減少として定義する。反跳不眠についての閾値を−２０分として定義する。低いＬＭＩについての閾値を、ＥＥＧにより定義される覚醒状態の−５自発運動カウント毎分として定義する。顕著な望ましくない効果を、平均有効用量におけるまたはそれ以上の全ての用量について、より低い信頼限界が閾値以下である場合に生じると定義する。例示した化合物について、ＲＥＭ阻害、反跳不眠、またはＬＭＩの減少の望ましくない発生を、少なくとも１０ｍｇ／Ｋｇ以下の用量にて観察する（負の値はＲＥＭ阻害、反跳睡眠および低いＬＭＩのそれぞれを示す）。
【０１１５】
いかなる製剤も直接有さずに本発明の方法に利用される化合物を投与することは可能であるが、化合物は、通常、活性成分として、式Ｉの少なくとも１つの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩と、少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤とを含む医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、経口、舌下、鼻、皮下、静脈内および筋肉内を含む種々の経路により投与されてもよい。そのような医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ），ｅｄ．，第２１版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｃｏ．，２００５）を参照のこと。
【０１１６】
組成物は好ましくは単位投薬形態で製剤化され、各用量は、約０．１〜６０ｍｇ、より通常には約１〜約３０ｍｇ、例えば約２〜約１０ｍｇの活性成分を含有する。「単位投薬形態」という用語は、ヒト被験体および他の哺乳動物への単一の投薬に適した物理的に別の単位を指し、各単位は、少なくとも１種の適切な薬学的に許容可能な担体、希釈剤、および／または賦形剤と関連して所望の治療効果を生じるように計算される所定量の活性材料を含有する。
【０１１７】
式Ｉの化合物は、通常、広範囲の投薬範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの投薬は、通常、約０．００２〜約１．０ｍｇ／ｋｇ体重、より通常、約０．０１５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．０３〜０．１５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。一部の例において、上述の範囲の下限値以下の投薬レベルが十分に適切であってもよく、一方で他の場合において、有害な副作用を全く生じずにさらに多い投与量が利用されてもよく、したがって、上記の投薬範囲は本発明の範囲を限定することを決して意図しない。実際に投与される化合物の量は、治療される病態、選択される投与経路、投与される実際の化合物（複数も含む）、個々の患者の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連状況を考慮して医師により決定されることは理解されるであろう。  以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  以下の式の化合物
【化３２】
0005805215.tif 000051
（式中、Ｒ１はクロロまたはメチルであり、
Ｒ２は、メチル、エチル、イソプロピル、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、またはメチルチオであり、
Ｒ３は、水素またはメトキシである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
［２］  Ｒ３が水素である［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
［３］  Ｒ１がクロロである、［１］または［２］に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
［４］  ３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸である、［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
［５］  ３−［４−（７−クロロ−２−メチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１１−イル）ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン酸二塩酸塩である、［１］に記載の化合物。
［６］  少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて、［１］〜［５］のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
［７］  哺乳動物における不眠症を治療する方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に有効量の［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法。
［８］  前記哺乳動物がヒトである、［７］に記載の方法。
［９］  前記不眠症が、睡眠開始もしくは睡眠維持またはその両方における困難性により特徴付けられる、［７］に記載の方法。
［１０］  前記哺乳動物がヒトである、［９］に記載の方法。
［１１］  治療に使用するための［１］〜［５］のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、化合物。
［１２］  不眠症の治療に使用するための［１］〜［５］のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
［１３］  不眠症が睡眠開始もしくは睡眠維持またはその両方における困難性により特徴付けられる、不眠症の治療に使用するための［１］〜［５］のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
［１４］  ヒトにおける［１２］または［１３］に記載の使用のための化合物。
［１５］  不眠症を治療するための医薬の製造における［１］〜［５］のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
［１６］  哺乳動物において、不眠症が睡眠開始もしくは睡眠維持またはその両方における困難性により特徴付けられる不眠症を治療するための医薬の製造における［１］〜［５］のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
［１７］  少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤と、必要に応じて他の治療成分と共に、［１］〜［５］のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
［１８］  前記他の治療成分が選択的セロトニン再取り込み阻害剤を含む、［１７］に記載の医薬組成物。