(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
濃度０．０４ｍｇ／ｍｌ水溶液において５００ｎｍでのＵＶ−ＶＩＳ吸収値が約０．１０から０．１６のゴマ抽出物を含む組成物であって、ゴマ抽出物が還元型メラニンを含む組成物。
【請求項２】
還元型メラニンの分子量が約２６４から約５４００ダルトンの間である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
還元型メラニンの炭素含量が約３５から約５７重量パーセントであり、水素含量が約５から約１０重量パーセントであり、窒素含量が約５から約１０重量パーセントである請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
還元型メラニンの硫黄含量が約１重量パーセント未満である請求項１−３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
還元型メラニンの赤外スペクトルが約３４００ｃｍ-1、約２９５０ｃｍ-1、約１６００から約１６５０ｃｍ-1、約１３８０から約１４００ｃｍ-1、約１２６０ｃｍ-1、および約１１７０ｃｍ-1において吸収バンドを示す請求項１−４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
還元型メラニンの分子量が約２６４から約２０００ダルトンの間である請求項１−５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
還元型メラニンの分子量が約４００から約１６００ダルトンの間である請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
充分な量の請求項１−７のいずれかに記載の組成物とビタミンとを混合する工程を含む、ビタミンの酸化を防止または減少させる方法。
【請求項９】
ビタミンがビタミンＣである請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＬＤＬに対して十分な量の請求項１−７のいずれかに記載の組成物を含む、ＬＤＬの酸化を減少または阻害するための医薬組成物。
【請求項１１】
治療上有効量の請求項１−７のいずれかに記載の組成物を含む、循環器疾患を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項１２】
循環器疾患がアテローム性動脈硬化症または冠動脈疾患である請求項１１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００８年７月２８日出願の「ゴマ種子由来色素」と題する米国特許出願第６１／０８３，９９４号（代理人整理番号ＯＭＣＡ−０２８／ＰＲＯＶ）（特許文献１）の米国特許法第１１９条（ｅ）項の利益を主張するものであり、その内容は全体が全ての目的で本願明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、一般的に主としてゴマ種子の殻から抽出される独特な物質に関する。
【背景技術】
【０００３】
メラニンは植物、動物および原生生物界に見られる化合物群であり、主として色素として役立つ。この色素群はアミノ酸であるチロシンの誘導体である。生物学的メラニンに最もよく見られる形態はユーメラニンで、ジヒドロキシインドール（ヒドロキノンとしても知られる）とジヒドロキシインドールカルボン酸との茶黒色の重合体である。メラニンによく見られる別の形態はフェオメラニンで、ベンゾチアジン単位からなる赤茶色の重合体であり、赤毛やそばかすの主原因である。メラニンの複雑な性質のため、様々なタイプのメラニンの正確な化学構造はまだ研究中である。
【０００４】
フェオメラニンやユーメラニンは両者共にヒトの皮膚や毛髪で発見されているが、ユーメラニンがヒトに最も豊富に存在するメラニンである。
【０００５】
ユーメラニン重合体は長い間ずっと、数多くの５，６−ジヒドロキシインドール（ＤＨＩ）と５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸（ＤＨＩＣＡ）が架橋した重合体からなると考えられてきた。しかしながら、ユーメラニンの分子構造の正確な姿がまだ確認できていない。ユーメラニンは毛髪と皮膚で発見され、毛髪を灰色、黒、黄色および茶色に着色する。
【０００６】
フェオメラニンもまた毛髪と皮膚で発見されているが、明るい色の肌のヒトにも暗い色の肌のヒトにも存在する。一般的に女性は男性よりもフェオメラニンを多く持つので、女性の皮膚は一般的に男性のそれよりも赤い。フェオメラニンはピンクないし赤の色合いを与えるので、特に赤毛の中に多量に発見されている。
【０００７】
メラニンは有効なラジカル補足剤と見なされる。
【０００８】
メラニンの欠損はパーキンソン病、アルツハイマー病、網膜色素変性症、色素性乾皮症、統合失調症および認知症を発症させ得る。
【０００９】
メラニンレベルの増加は毛色の黒色化の増加を助けることができるので、加齢による灰色の毛髪の量を減少させる。
【００１０】
従って、１つ以上の上記に特定された病気の治療を助ける、改良したメラニン様薬剤の必要性が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許出願第６１／０８３，９９４号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、驚くべきことに、本明細書で述べる様々な疾患や病気の組み合わせを治療するのに有用なゴマ抽出物とゴマ抽出物の調製方法とを提供する。このゴマ抽出物は、酸化しやすい他の材料、例えばコエンザイムＱ１０、ＤＨＡ、ビタミンＣなどのビタミンなどの安定化を助けるために使用可能な材料を提供する。
【００１３】
還元型メラニンは化学式（Ｉ）で表すことができる。
【化１】
0005750730.tif 000002
式中、ｍおよびｎで示す各単位のＸは、それぞれ、互いに独立して、ＣＯＯＨ基またはその塩、もしくは水素原子であり、
ｍおよびｎで示す各単位の各Ｙ１または各Ｙ２の少なくとも１つは、互いに独立して、ＮＨであり、他方はＣＨであり、ただし、Ｙ１とＹ２の両方が共にＮＨまたはＣＨであることはなく、
ｍおよびｎで示す各単位のＱ１およびＱ２は、それぞれ互いに独立して水酸基、水酸陰イオン基、水素原子、または＝Ｏ基であり、
ただし、還元型メラニン内にケトン官能基が存在する場合、水酸基のケトン官能基に対するモル比は５０パーセント、より特に６０パーセント、さらに特に７５パーセントより高く、特に少なくとも約８０パーセントであり、
【化２】
0005750730.tif 000003
はπ共役系を表し、
ｍは１から約４０であり、
ｎは１から約４０であり、
ｍ＋ｎ＝２から約４０、より特に３、４、５、６、７、などから約４０まで、およびその間のあらゆる範囲と整数であり、式中、個々の"ｍ"および個々の"ｎ"の単量体インドール単位はそれぞれ同一であっても異なっていてもよい。
【００１４】
一態様において、"ｍ"および"ｎ"の単量体単位は、還元型メラニンのオリゴマーまたはポリマーのオリゴマー／ポリマー構造全体に亘って任意である。これにはブロック材料と共にランダムなポリマー／オリゴマー材料が含まれる。
【００１５】
別の態様において、"ｍ"および"ｎ"の単量体単位は変動せず、２つの単量体単位からなるランダムなオリゴマー／ポリマーである。
【００１６】
さらに別の態様において、"ｍ"および"ｎ"の単量体単位は同一でもよく、例えばオリゴマーまたはポリマーの"ｍ"および"ｎ"の両方の部分において同じ単量体単位がオリゴマー化／ポリマー化される。
【００１７】
一態様において、Ｑ１、Ｑ２の少なくとも１つは水酸基であるか、あるいは酸素（＝Ｏ）を表す。
【００１８】
別の態様において、このゴマからのゴマ抽出物のＵＶ−ＶＩＳ吸収率は、水溶液濃度０．０４ｍｇ／ｍｌにおいて５００ｎｍでは約０．１から約０．１６である。
【００１９】
別の態様において、ｎは１でもよく、本明細書中に記載のある様々な苦痛の治療に有用で有り得る。ｎ＝１である場合、その（還元型メラニンのオリゴマー／ポリマー形態の基剤となり得る）単量体は次の化学式を有することができ、
【化３】
0005750730.tif 000004
分子量は１３３である。
【００２０】
本発明は、一態様において、還元型メラニンを含むゴマ抽出物を提供する。還元型メラニンの分子量は約２６４から約５４００ダルトンであり、還元型メラニンの炭素含量は約３５から約５７重量パーセントであり、還元型メラニンの水素含量は約５から約１０重量パーセントであり、窒素含量は約５から約１０重量パーセントである。還元型メラニンに酸素が存在している場合、その含量は約３３重量パーセントから約３７重量パーセントであり、還元型メラニンのカルボニルキノン含量に対する水酸基含量の比はモル基準で少なくとも５０パーセント（ケトンカルボニル基に対する水酸基）である。
【００２１】
一般的に、還元型メラニン色素は特にゴマ種子の殻や外皮に由来する。
【００２２】
一態様において、還元型メラニンの窒素含量は約５重量パーセントから約１０重量パーセントである。
【００２３】
別の一態様において、還元型メラニンの硫黄含量は約１重量パーセント未満である。
【００２４】
さらに別の一態様において、還元型メラニンの赤外スペクトルは約３４００ｃｍ−１（フェノール−ＯＨの伸縮振動）、約２９５０ｃｍ−１（脂肪族の伸縮振動）、約１６００から約１６５０ｃｍ−１（芳香族Ｃ＝Ｃ伸縮振動）、約１３８０から約１４００ｃｍ−１（フェノールＣ−ＯＨ、インドールおよびフェノールＮＨの伸縮振動）、約１２６０ｃｍ−１（フェノールＣＯＨ）および約１１７０ｃｍ−１（Ｃ＝Ｏ伸縮振動）に吸収バンドを示す。
【００２５】
さらに別の一態様において、還元型メラニンの分子量の範囲は約２６４から約２０００ダルトンの間である。
【００２６】
別の一態様において、還元型メラニンの分子量の範囲は約４００から約１６００ダルトンである。
【００２７】
本発明は、また、ゴマ抽出物の調製方法も提供する。この方法は、塩基性水溶液（ｐＨが約１０より上、例えば約１０から約１４の間および例えば約１２のｐＨ）と粉砕したゴマ種子とを昇温混合し、続いてその混合物を室温まで冷却することを含む。この結果として得られた混合物を濾過、水洗して、濾液を得る。この濾液と洗浄溶液を塩基性水溶液で処理し、ガスの発生が止んで還元型メラニン色素が形成されるまで還元剤を濾液に添加する。
【００２８】
本発明は、また、別のゴマ抽出物の調製方法も提供する。この方法は、塩基性水溶液（ｐＨが約１０より上、例えば約１０から約１４の間および例えば約１２のｐＨ）と粉砕したゴマ種子を室温あるいは室温より低い温度で混合することを含む。この混合物を濾過、水洗浄して、濾液を得る。この濾液を酸性水溶液で室温または室温より低い温度で処理して、約４より低いｐＨ、一般的には約１から約２までのｐＨにする。得られたゴマ抽出物を集める。
【００２９】
ゴマ抽出物は栄養補助剤として用いて、毛髪の色を濃くするのを助けたり、肝機能改善を助けたり、（眼の保護剤としての）眼中のルテイン増加を助けたり、網膜色素変性症または色素性乾皮症の軽減または改善を助けたりすることができる。また、抗酸化剤として脳内のフリーラジカルの濃度を下げることによって神経系の治療のためにも使用できる。また、神経系、脳および骨髄の健康、パーキンソン病やアルツハイマー病などの変性疾患、認知力の増強または維持、統合失調症および認知症に対しての栄養補助剤として、皮膚保護剤（紫外線保護、光保護剤）として、金属キレート化用にラジカル捕捉剤として、ＬＤＬの酸化を減少または阻害する方法として、アテローム性動脈硬化症や冠動脈疾患などの循環器疾患の治療方法として、潰瘍の治療または予防方法として、および抗酸化剤として用いることができる。
【００３０】
複数の実施例を開示するが、本発明の他の実施例は、次の詳細な説明から当業者には明らかであろう。後に明らかように、本発明はその精神と範囲から逸脱することなく様々な明白な態様において変更が可能である。従って、詳細な説明は、本質的に例示するものであって限定的なものではないと考えるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、実施例３の単離産物ＴＥＩ  Ｖ１のＦＴＩＲである。
【図２】図２は、実施例４の単離産物ＴＥＩ  Ｖ２のＦＴＩＲである。
【図３】図３は、実施例４の試料ＴＥＩ  Ｖ２のゲル浸透クロマトグラフィーによる分子量を示す。
【図４】図４は、ゴマ抽出物の存在下におけるＬＤＬ酸化を示す。
【図５】図５は、実施例１０の酸化された、未処理、および還元されたゴマ抽出物の様々な濃度における用量依存的な遅延時間変化を示す。
【図６】図６は、ゴマ抽出物（還元物または未処理物）によるアスコルビン酸分解防止をグラフで示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本明細書および請求項において、「を有する」および「を含む」という用語は非限定的な用語であり、「を含むが、．．．に限定しない」を意味すると解釈されるべきである。これらの用語は、より制限的な用語である「を本質的に含む」および「から成る」を包含する。
【００３３】
注意しなければならないことは、本明細書および添付の請求項で用いられる単数形の「１つ（ａおよびａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈に明らかにそうで無い旨を指示しない限り、複数の言及を含むことである。同様に、「１つ」、「１つ以上」および「少なくとも１つ」は本明細書において互換的に使用可能である。また、「を含む」、「を有する」、「ことを特徴とする」および「をもつ」という用語は互換的に使用可能であることにも注意すべきである。
【００３４】
定義なき場合、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野における通常の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。特に本明細書で述べられる全ての公表文献および特許は、本発明に関連して使用される可能性のある公表文献に報告されている化学薬品、器具、統計分析法、および手法の記述および開示を含む、その全部が全ての目的で参照によって本明細書に組み込まれる。本明細書に引用される全ての参照文献は、当分野における技術レベルの指標として捉えるべきである。本明細書では、先願発明によるこのような開示に対して本発明が特許を与えられる資格がないと認めると解釈すべきではない。
【００３５】
本明細書で用いる「被験者」とは哺乳類および非哺乳類を意味する。「哺乳類」とは哺乳綱の一員であれば何でも良い。これには、ヒト、チンパンジーや他の類人猿およびサル類などの非ヒト霊長類、牛、馬、羊、ヤギおよび豚などの家畜、ウサギ、犬、ネコなどの飼育動物、ラット、ネズミ、モルモットなどの齧歯類を含む実験用動物などが含まれるが、これらに限定されない。非哺乳類の例としては鳥などが挙げられるが、これに限定されない。「被験者」という用語は特定の年齢や性別を意味しない。
【００３６】
本明細書では、「投与すること」または「投与」は還元型メラニンを体の中に、好ましくは体循環へ導入するための如何なる手段をも含む。例えば、皮下、腹腔内、静脈内および筋肉内注射は勿論、経口、頬、舌下腺、肺、経皮、経粘膜などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
「担体」という用語は、本発明のゴマ抽出物を投与するのに利用できる液体または固体の如何なる物質も含むことを意図する。これには乳濁液、懸濁液、液体、および食品を含むことができ本明細書に記載される。
【００３８】
ゴマ抽出物は、薬学的に許容できる方法により治療上有効量を投与することができる。
【００３９】
「治療上有効量」という用語は、ある病気を治療するために被験者に投与する場合にその病気に対する治療を達成するのに充分な量の化合物という意味を意図する。「治療上有効量」は、化合物、治療中の病気の状態、重傷度あるいは治療される病気、被験者の年齢および相対的健康状態、投与の経路と形態、担当する医師または獣医の判断、および他の要因によって変化する。
【００４０】
本発明の目的として「治療すること」または「治療」とは、疾患、病気、または不調と闘うための患者の管理および看護を表す。これらの用語は、予防手段すなわち予防薬および緩和治療の両方を包含する。治療には、症状または合併症の発症を防ぐこと、症状または合併症を緩和すること、あるいは、疾患、病気または不調を取り除くために本発明の化合物を投与することが含まれる。
【００４１】
ある化合物が治療上有効な量を患者に投与される。ある化合物は単独または薬学的に許容できる組成物の一部として投与可能である。また、ある化合物または組成物は、例えばボーラス注射によって一度に投与しても、一連の錠剤などによって複数回に分けて投与してもよく、あるいは、例えば経皮的送達を用いて一定期間に渡ってほぼ一様に送達してもよい。さらに、化合物の投与量は時間とともに変更してもよい。速放製剤、徐放製剤、またはそれらの組み合わせを用いて化合物を投与してもよい。「徐放」という用語は、持続放出、遅延放出、およびそれらの組み合わせを含む。
【００４２】
「薬学的に許容できる」という用語は、連邦政府または州政府の監督官庁により認められていること、米国薬局方の目録に掲載されていること、あるいは、その他動物、特にヒトへの使用の薬種として一般的に認められていることを意味する。「担体」という用語は、治療を実施するのに使用される希釈剤、補助剤、賦形剤、または媒体を言う。このような医薬担体としては、水および油などの滅菌液が可能であり、油には、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油など、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶媒など、石油起源、動物起源、植物起源あるいは合成物起源の油が含まれる。適当な医薬品賦形剤としては、でんぷん、グルコース、ラクトース、蔗糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、要望に応じて、少量の保湿または乳化剤、あるいは酢酸塩やクエン酸塩やリン酸塩などのｐＨ緩衝剤を含んでもよい。ベンジルアルコールやメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸や亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、および塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの浸透圧調整剤もまた想定される。製剤は、アンプル、使い捨て注射器、あるいはガラスやプラスチック製の複数回使用バイアルに入れることができる。
【００４３】
これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳化液、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、継続放出製剤などの形をとることができる。組成物は、伝統的な結合剤とトリグリセリド、微結晶性セルロース、トラガカント・ゴムまたはゼラチンなどの担体とを用いて座薬として処方されてもよい。経口製剤としては、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含むことができる。適当な薬学的担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ著「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。このような組成物には、治療上有効な量の治療薬が好ましくは精製した形で適当な量の担体と共に含まれ、患者への適切な投与形態を提供することになる。製剤は投与の様式に適合させるべきである。
【００４４】
ある特定の不調や病気の治療に効果のある本発明のゴマ抽出物の量は、その不調や病気の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定されることになる。製剤において採用される正確な投与量は、投与の経路、およびその病気や不調の深刻さにも依存することになるので、医師の判断および各患者の環境に従って決定されるべきである。有効な投与量は、体外または動物モデル実験によるバイオアッセイまたはシステムから得られた用量反応曲線に基づき外挿してもよい。
【００４５】
上に列挙した投与量の投与は繰り返すことができる。１つの実施例においては、上に列挙した投与量は週に１から７回投与される。治療の継続期間は、患者の臨床的進行および治療に対する反応性に依存する。
【００４６】
本発明は、本発明の薬剤組成物の１つ以上の成分で満たした１つ以上の容器を有する薬剤パックまたはキットも提供する。このような容器に対して、薬剤または生物学製品の製造、使用、販売を管理する行政機関により規定された形式で注意書きを随意に付けることができる。この注意書きには、機関によるヒトへの投与の製造、使用、販売の承認を反映する。
【００４７】
「食物」または「食品」とは、被験者によって摂取されうる固体または液体の如何なる食用の物質をもいう。このような食品としては、焼いた食品、スナック食品（キャンディー、ガム、キャンディーバー、その他）、乳製品（アイスクリーム、ヨーグルト）および飲料（ソーダ、牛乳、コーヒー、茶、その他）および混合飲料などが挙げられる。
【００４８】
「メラニン」という用語は当該技術分野において知られており、Ｈｅｒｍａｎｎ社（１１５，Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ  Ｓａｉｎｔ−Ｇｅｒｍａｉｎ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）により１９６８年に出版されたＲ．Ａ．Ｎｉｃｏｌａｕｓ著「Ｍｅｌａｎｉｎｓ」と題された本（その内容は全てが参照によって本明細書に組み込まれる）に記載される高分子材料を含む。一般的に、メラニンはインドールとチロシンの酸化で生じる他の中間生成物とを含む不規則な光吸収高分子として認識されている。メラニンの基本的な構造単位は、通常、共有結合したインドールによって表される。メラニンの全体構造が知られていないことを強調しておく必要がある。ほとんどのメラニンはインドールを基にした混合ポリマーとみられるが、様々な量のその他のメラニン生合成経路でのインドール前駆体産物を含んでいる可能性がある。メラニンの分子量は、一般的に約１０，０００ダルトン以上である。代表的な構造を以下に示す。
【化４】
0005750730.tif 000005
【００４９】
「還元型メラニン」という用語は、メラニンを含有する物質、一般的には種子の殻や外皮を、メラニンのカルボニル（ケトン／オルソキノン）含量の大部分をヒドロキシル官能基に還元する条件下で処理したものを指す。一般的に、これは還元型メラニン内に残留するケトン官能基（もし残留していれば）に対する水酸基のモル比が５０パーセント、より特に６０パーセント、さらに特に７５パーセントより大きく、とりわけ少なくとも約８０パーセントであることを意味する。
【００５０】
一態様において、還元型メラニンは水酸基またはケトン官能基を欠く。
【００５１】
この還元型メラニンは以下の化学式（Ｉ）で示すことができる：
【化５】
0005750730.tif 000006
式中、ｍおよびｎで示す各単位のＸは、それぞれ、互いに独立して、ＣＯＯＨ基またはその塩、もしくは水素原子であり、
ｍおよびｎで示す各単位の各Ｙ１または各Ｙ２の少なくとも１つは、互いに独立して、ＮＨであり、他方はＣＨであり、ただし、Ｙ１とＹ２の両方が共にＮＨまたはＣＨであることはなく、
ｍおよびｎで示す各単位のＱ１およびＱ２は、それぞれ互いに独立して、水酸基、水酸陰イオン基、水素原子、または＝Ｏ基であり、
ただし、還元型メラニン内にケトン官能基が存在する場合、水酸基のケトン官能基に対するモル比は５０パーセント、より特に６０パーセント、さらに特に７５パーセントより高く、特に少なくとも約８０パーセントであり、
【化６】
0005750730.tif 000007
はπ共役系を表し、
ｍは１から約４０であり、
ｎは１から約４０であり、
ｍ＋ｎ＝２から約４０、より特に３、４、５、６、７、などから約４０まで、およびその間のあらゆる範囲と整数であり、式中、個々の"ｍ"および個々の"ｎ"の単量体単位はそれぞれ同一であっても異なっていてもよい。
【００５２】
一態様において、Ｑ１、Ｑ２の少なくとも１つは水酸基であるか、あるいは酸素（＝Ｏ）を表す。
【００５３】
ある態様においては、ｎは１でもよい。
【００５４】
ｎ＝１である場合、その（本明細書に論じられる本発明の還元型メラニンのオリゴマー／ポリマー形態の基剤となり得る）単量体は次のいずれかの化学式を有することができ、
【化７】
0005750730.tif 000008
その分子量は１３３である。
【００５５】
オリゴマー／ポリマーの単量体単位として可能なものには、本明細書中に記載のものと以下のものが含まれる：
【化８】
0005750730.tif 000009
式中のＸはＣＯＯＨ、その塩、または水素原子である。
【００５６】
還元型メラニン色素は本明細書に記載されるある特定の単量体単位のホモポリマーまたはオリゴマーであってもよいことは理解されるはずである。あるいは、還元型メラニン色素のオリゴマーまたはポリマーは本明細書に記載される単量体単位を２つ以上含むこともできる。
【００５７】
還元型メラニン色素のオリゴマー／ポリマーの末端にある両インドール端は、他の単量体単位と結合するためには、それぞれ別の場所において水素原子で終端していなければならなかったことも理解されるはずである。
【００５８】
色素は、活性成分として、ポリマーまたはオリゴマー物質を有する。ポリマーまたはオリゴマーはインドール物質であり、４−および７−位で連結可能である。物質のインドール部分の５−または６−位は水酸基、水酸陰イオン基、水素原子（Ｈ）または＝Ｏ（ケトン官能基のカルボニル基として）と単独に置換可能であり、インドール部分の２−位は−ＣＯＯＨまたはその塩または水素原子のいずれかと置換可能である。インドールの観点から、物質は少なくとも部分的にπ共役系を有する。
【００５９】
本発明のポリマーまたはオリゴマーにおいて、水酸基のモル含量は出発メラニン原料よりも高い。一般的に、還元型メラニン中にケトン官能基がもし存在していれば、そのケトン官能基に対する水酸基のモル比は５０パーセント、より特に６０パーセント、さらに特に７５パーセントより大きく、とりわけ少なくとも約８０パーセントである。
【００６０】
本発明のポリマーまたはオリゴマーにおいて、物質の各単量体単位はインドール化合物である。これらの繰り返し単位（インドール化合物）は、同じであっても異なっていてもよい。本発明の単量体単位は、任意に下の構造のいずれでもよい。
【化９】
0005750730.tif 000010
【００６１】
例えば、一態様において、ポリマーまたはオリゴマーは下に示す共役系（上で述べた各単量体単位の含有物を示す）によって表すことができる。
【化１０】
0005750730.tif 000011
式中、ＸはＣＯＯＨ、その塩、または水素原子である。
【００６２】
さらに、本発明のポリマーまたはオリゴマーはいくつかの独立した共役部分を有するポリマーであってもよい。この種の複合ポリマーも同じ機能を有する。
【００６３】
本発明のポリマーまたはオリゴマーはエステル、エーテル、アルキル基などの追加的な基を含んでもよい。
【００６４】
さらに、２つのインドール単位の間の炭素−炭素結合はアルキル鎖などによって置換可能である。
【００６５】
別の一態様においては、還元型メラニン物質は化学式（ＩＩ）によって表すことができ：
【化１１】
0005750730.tif 000012
式中、ＸはＣＯＯＨまたはその塩あるいは水素原子のいずれかであることができ、
Ｙ１またはＹ２の少なくとも一方はＮＨであり、他方はＣＨであり、ただし、Ｙ１とＹ２の両方がともにＮＨまたはＣＨであることはなく、
Ｑ１およびＱ２はそれぞれ互いに独立して、水酸基、水酸陰イオン基、水素原子、または＝Ｏ基であり、
ただし、還元型メラニン中にケトン官能基がもし存在していれば、そのケトン官能基に対する水酸基のモル比は５０パーセント、より特に６０パーセント、さらに特に７５パーセントより大きく、とりわけ少なくとも約１００パーセントであり、
【化１２】
0005750730.tif 000013
はπ共役系を示し、
ｎは少なくとも２から約４０、より特に約３、４、５、６、７、などから約４０まで、およびその間のあらゆる範囲と整数である。
【００６６】
このようなオリゴマーまたはポリマー中の単量体のインドール単位は同じでも異なっていてもよいことは理解されるはずである。
【００６７】
別の一態様においては、ゴマ抽出物は０．０４ｍｇ／ｍｌよりも低い水溶液濃度において５００ｎｍでの吸収率が約０．１から約０．１６であるＵＶ−ＶＩＳスペクトルを有することを特徴とすることができる。
【００６８】
還元型メラニン色素は約２６４から約５４００ダルトンの間、より特に約２６４から約２０００ダルトンの間、さらに特に約４００と約１６００ダルトンの間、より特に約２６４と約１６００ダルトンの間、より特に約５３２と約１０６４ダルトンの間、および約２６４から約５４００ダルトンの間のあらゆる範囲の分子量を有する。
【００６９】
還元型メラニン色素は還元型メラニンの元素組成を特徴としてもよい。還元型メラニンの炭素含量は約３５重量パーセントから約５７重量パーセントの間、還元型メラニンの水素含量は約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間、窒素含量は約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間である。還元型メラニンに酸素がもし存在していれば、その含量は約３３重量パーセントから約３７重量パーセントの間である。
【００７０】
一態様において、還元型メラニンに窒素がもし存在すれば、その含量は約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間である。
【００７１】
別の一態様において、還元型メラニンに硫黄がもし存在すれば、その含量は約１重量パーセントよりも少ない。
【００７２】
本発明において有用である黒ゴマ種子は、植物Ｓｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍから得られる種子である。一般的に、還元型メラニン色素は特にメラニンを含むゴマ種子の種殻や種皮に由来する。あるいは、ゴマ植物の小枝、樹皮、枝、葉、および／または根を、出発材料メラニンを得るのに用いてもよい。黒ゴマ種子の種殻または種皮は、還元型メラニンを提供するのに用いる望ましいメラニンが最も豊富である。
【００７３】
一態様において、本発明の還元型メラニンは約３４００ｃｍ−１（フェノール−ＯＨの伸縮振動）、約２９５０ｃｍ−１（脂肪族の伸縮振動）、約１６００から約１６５０ｃｍ−１（芳香族Ｃ＝Ｃの伸縮振動）、約１３８０から約１４００ｃｍ−１（フェノールＣ−ＯＨ、インドールとフェノールＮＨの伸縮振動）、約１２６０ｃｍ−１（フェノールＣＯＨ）および約１１７０ｃｍ−１（Ｃ＝Ｏ伸縮振動）に特徴的な吸収バンドを示す赤外スペクトルを有する。
【００７４】
本発明のゴマ抽出物は、次の用途を１つ以上含む本明細書中に記載の多くの用途を持つ。還元型メラニンは植物性食品の一成分などの栄養補助剤として使用可能である。還元型メラニンはアイスクリームやヨーグルトなどの食品や飲料の一成分として食品産業で利用可能である。
【００７５】
本発明のゴマ抽出物は、ルテイン、コエンザイムＱ１０またはＤＨＬＡ、ＤＨＡ、ビタミンＣなどのビタミン、ホスホリルコリン、その他を酸化や分解から保護するために使用可能である。
【００７６】
本発明のゴマ抽出物は、毛髪の黒色化などの為の毛髪補助剤および／または栄養補助食品／機能性食品として使用可能である。還元型メラニンの長期間の摂取は個人のヘアケアに対する有効な手段であると考えられる。
【００７７】
本発明のゴマ抽出物は、目の保護に使用できる。還元型メラニンの使用は眼中のルテイン濃度の維持を助け、支持療法として目の健康や視力ケアに好ましい効果をもたらすことができる。従って、この物質はそのような病気の治療や予防に使用できる。
【００７８】
本発明のゴマ抽出物は、脳組織内のフリーラジカル濃度を低下させるなど、神経系の病気に対して有用である。このことは、抗酸化剤および／または神経、脳、骨髄の健康用栄養補助食品と見なし得る。従って、この物質はそのような病気の治療や防止に使用できる。
【００７９】
本発明のゴマ抽出物は、パーキンソン病、アルツハイマー病、認知の増強または維持など、神経系の変性疾患の治療や予防に対して有用となり得る。
【００８０】
本発明のゴマ抽出物は、ＵＶ防護剤および光防護剤など、皮膚保護剤として使用できる。
【００８１】
本発明のゴマ抽出物は、アスピリン（アセチルサリチル酸）などのサリチル酸またはサリチル酸塩の誘導体、サリチル酸ナトリウムなどのアスピリンまたはサリチル酸の誘導体などと組み合わせて、サリチル酸またはサリチル酸塩の誘導体の投与に起因する潰瘍からの痛みを防いだり緩和するのに使用できる。ヤナギ樹皮抽出物はサリチル酸の誘導体と見なすことができるので、本発明のゴマ抽出物と組み合わせて使用可能である。
【００８２】
本発明はゴマ抽出物の調製方法も提供する。この方法は、塩基性水溶液と粉砕したゴマ種子を高温で混合したのち、得られた混合物を室温まで冷却することを含む。この結果として得られた混合物を濾過、水洗して、濾液を得る。濾液を酸性水溶液で処理し、ガスの発生が止んでゴマ抽出物が形成されるまで濾液に還元剤を添加する。
【００８３】
塩基性水溶液の塩基の濃度は約０．５重量パーセントから約２重量パーセントの間である。適当な塩基としては、アミン、水酸化カリウムや水酸化ナトリウムなどの各種金属水酸化物などが挙げられる。一般的に、塩基性水溶液のゴマ種子に対する比率は重量比で約５：１であり、一般的に最初の工程の昇温温度は約４０℃から約８０℃の間、例えば６０℃である。混合物は、一般的に約０．５時間から約５時間の間、例えば３時間加熱する。
【００８４】
上記工程で処理した濾液は、還元剤の添加前に撹拌（例えば、かき回したり超音波処理したりなど）される。適当な還元剤としては、ジヒドロリポ酸、水素化ホウ素ナトリウム、またはその他の−ＳＨ基を有する還元剤がある。還元剤は、約１０℃から約３５℃の間の温度、より具体的には約２５℃で濾液に添加される。
【００８５】
本発明は、別の還元型メラニン色素（メラニン抽出物）の調整法も提供する。この方法は、室温以下で塩基性水溶液と粉砕したゴマ種子とを混合することを含む。混合物を濾過、水洗して、濾液を得る。濾液は、室温以下で酸性水溶液で処理してｐＨを約７未満から約１の間にする。得られた還元型メラニン色素を集める。
【００８６】
工程中の塩基性水溶液の塩基濃度は約０．５重量パーセントから約２重量パーセントの間（ｐＨは約１０よりも高く、例えば約１０と約１４の間および例えば約１２）である。適当な塩基としては、アミン、水酸化カリウムや水酸化ナトリウムなどの各種金属水酸化物がある。一般的に、塩基性水溶液のゴマ種子に対する比率は重量比で約５：１であり、一般的に混合物の温度は約３５℃未満、例えば２５℃に維持する。工程ａ）の混合物は、約０．５時間から約４８時間の間、例えば約２４時間、混合される。
【００８７】
酸性水溶液は、酢酸、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸など、有機酸または鉱酸のいずれでも良く、酸は約１５容量％である。濾過の温度は、酸性水溶液の添加中および添加後に約３５℃未満、例えば２５℃に維持する。一般的に、そのｐＨは７未満、具体的にはｐＨ約１に下げる。
【００８８】
結果として得られた還元型メラニン色素は、濾過や遠心分離など様々な方法により集めることができる。
【００８９】
以下の実施例は本質的に例示であり、決して制限するものと見なされるべきではない。
【実施例１】
【００９０】
水酸化ナトリウム５ｇを脱イオン水５００ｍｌに溶解し、次に粉砕した黒ゴマ種子１００ｇに加えた。その混合物を撹拌し、６０℃に加熱した。その反応混合物を６０℃で３時間維持し、次に室温まで冷却した。黒色混合物を濾過し、濾過ケーキを脱イオン水１００ｍｌで洗浄した。濾液と洗浄溶液を酸性水溶液（ｐＨ約１）で処理した。その溶液を温度２５℃で１０分間超音波処理した。水素化ホウ素カリウムを２５℃以下の反応温度に保ちながらゆっくりと添加した。その混合液を約２５分間、ガスの発生が止むまで放置しておいた。水素化ホウ素カリウムはＤＨＬＡなどの他の還元剤で置換できる。水素化ホウ素カリウムは水洗によって除去できる。ＤＨＬＡはエタノールで生成物を洗浄することによって除去できる。この試料を、後述するＵＶ−ＶＩＳ吸収によるゴマ色素の判定における実施例１の生成物と称する。
【実施例２】
【００９１】
水酸化ナトリウム５ｇを脱イオン水５００ｍｌに溶解し、室温まで冷却し、次に粉砕した黒ゴマ種子１００ｇを加えた。反応混合物の温度は２５℃未満に維持し、２４時間撹拌して濾過した。濾過ケーキを脱イオン水１００ｍｌで洗浄した。濾液と洗浄溶液を１５％塩酸塩溶液と混合して酸性化し、反応混合物の温度を２５℃未満に維持しながら、最終的なｐＨを約１．０とした。この懸濁液を遠心分離して固形物を脱イオン水３０ｍｌで洗浄した。その固体物質を減圧乾燥して黒色還元ゴマ色素約１ｇを生成した。（その紫外線吸収係数は出発物質よりも低く、水ミセル中でルテインを保護することが可能であることが分かった。）この試料を、後述するＵＶ−ＶＩＳ吸収によるゴマ色素の判定における実施例２の生成物と称する。
【実施例３】
【００９２】
（ＴＥＩ  ＶＩ）
水酸化ナトリウム５ｇを脱イオン水５００ｍｌに溶解し、室温まで冷却して、次に粉砕した黒ゴマ種子１００ｇを加えた。反応混合物の温度は２５℃未満に維持し、２４時間撹拌して濾過した。濾過ケーキを脱イオン水１００ｍｌで洗浄した。濾液を１５％塩酸塩溶液と混合して酸性化し、反応混合物の温度を２５℃未満に維持しながら、最終的なｐＨを約１．０とした。この懸濁液を遠心分離して固形物を脱イオン水３０ｍｌで洗浄した。この生成物を集めて減圧乾燥し（−０．０９５ＭＰａ、６０℃、４時間）、続いてＰ２Ｏ５上で乾燥した。この乾燥色素を石油エーテルで洗い、再び乾燥させた。還元型メラニン色素の収率は、最初の出発物質を基準として約５％であった。この試料を、後述するＵＶ−ＶＩＳ吸収によるゴマ色素の判定における実施例３の生成物とした。
図１は単離生成物ＴＥＩ  Ｖ１のＦＴＩＲである。
【実施例４】
【００９３】
（ＴＥＩ  Ｖ２）
粉砕した黒ゴマ種子１０ｇを５０ｍｌの２０％グリセリン水溶液および０．９％ＮａＯＨで懸濁した。その混合物を２４時間撹拌し、濾過して、石油エーテルで洗浄した。この濾液と洗浄液を１５％塩酸塩溶液で酸性化し、反応混合物の温度を２５℃未満に維持しながら、最終的なｐＨを約１．０とした。この懸濁液を遠心分離して固形物を脱イオン水３０ｍｌで洗浄した。この生成物を集めて減圧乾燥し（−０．０９５ＭＰａ、６０℃、４時間）、続いてＰ２Ｏ５上で乾燥した。還元型メラニン色素の収率は、最初の出発物質を基準として約３％であった。この試料を、後述するＵＶ−ＶＩＳ吸収によるゴマ色素の判定における実施例４の生成物と称する。
図２は単離生成物ＴＥＩ  Ｖ２のＦＴＩＲである。
図３は試料ＴＥＩ  Ｖ２のゲル浸透クロマトグラフィーによる分子量を表す。
【実施例５】
【００９４】
本実施例は、還元型ゴマ色素がルテインを分解から保護することを示す。
１０ｍｌ容量フラスコ中で、ルテイン１０ｍｇをテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）５．０ｍｌに溶解し、その後無水エタノールで容量まで満たした。
小ビーカーにＴｗｅｅｎ−８０を０．５ｇおよび脱イオン水を１５ｇ添加した。この溶液を均質になるまで撹拌し、次に還元ゴマメラニン２ｍｇを添加した（実施例１）。この混合物を溶液が透明になるまで超音波処理した。
上記のルテイン溶液１．０ｍｌを小ビーカーに加え、ルテインを溶解するために軽く振った。小ビーカーから液体１．０ｍｌを１０ｍｌ容量フラスコに移して脱イオン水で容量まで満たした。
ブランク試料を、還元ゴマ色素溶液を添加せずに上記の通りに調製した。
ルテイン／還元ゴマ試料とブランク試料を両方３７℃の水浴中に置き、１５Ｗランプで３時間露光した。４４６ｎｍでの吸収率をＵＶ−ＶＩＳ分光光度計で測定して、分解速度を判定した。
【００９５】
【表１】
0005750730.tif 000014
【実施例６】
【００９６】
次の実施例は、還元型ゴマ色素がＤＨＡを分解から保護できることを示す。
ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）２５ｍｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２５ｍｌに溶解した。還元ゴマ色素（実施例１）１ｍｇとアルギニン１ｍｇを脱イオン水１０ｍｌに溶解した。ＤＨＡ溶液５ｍｌをゴマ色素溶液１ｍｌと１％Ｈ２Ｏ２１ｍｌと共に小キュベットに入れた。
ブランク試料を、還元ゴマ色素溶液を添加せずに上記の通りに調製した。
この２つのキュベットを１６時間密封した。試料を取り出し、ガス相クロマトグラフィーで分析してＤＨＡの残存率を判定した。
試料中のＤＨＡの残存率を下の表に示す。
【表２】
0005750730.tif 000015
【実施例７】
【００９７】
次の実施例は、還元型ゴマ色素がホスホリルコリン（ＰＣ）を分解から保護できることを示す。
ホスホリルコリン（ＰＣ）２５ｍｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２５ｍｌに溶解した。還元ゴマ色素（実施例１）１ｍｇとアルギニン１ｍｇを脱イオン水１０ｍｌに溶解した。ＰＣ溶液５ｍｌを還元ゴマ色素溶液１ｍｌと１％過酸化水素１ｍｌと共に小キュベットに入れた。
ブランク試料を還元ゴマ色素溶液を添加せずに上記の通りに調製した。
この２つのキュベットを１６時間密封放置した。試料をＨＰＬＣ−ＥＬＳＤで分析してＰＣの残存率を判定した。
試料中のホスホリルコリンの残存率を下の表に示す。
【表３】
0005750730.tif 000016
【実施例８】
【００９８】
次の実施例は、還元型ゴマ色素がコエンザイムＱ１０とＤＨＬＡ（ジヒドロリポ酸）の組み合わせを保護できることを示す。
ＤＨＬＡがコエンザイムＱ１０を保護できることが発見されており、このことはオーストリア特許ＡＴ５０４１４８Ａ１、米国仮出願６０／８８６，３９５、米国実用特許１１／８４３，９３５およびＰＣＴ／ＩＢ２００７／００３６２３に記載され、その内容は全体が本明細書に組み込まれる。
驚くべき事に、還元ゴマ色素はＤＨＬＡのコエンザイムＱ１０を保護する効果を著しく増加できることが分かった。
【００９９】
小フラスコに脱イオン水１０ｍｌ、エタノール３０ｍｌおよびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１０ｍｌを入れた。コエンザイムＱ１０を３ｍｇとジヒドロリポ酸（ＤＨＬＡ）５ｍｇとをその溶液に加え、超音波処理してコエンザイムＱ１０を完全に溶解した。
【０１００】
還元ゴマ色素（実施例１）５ｍｇと水酸化カリウム３ｍｇを脱イオン水５ｍｌに加えた。ゴマ色素溶液１ｍｌをコエンザイムＱ１０溶液に加えた。この溶液を５分間超音波処理してＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ１１００）を用いて、還元型コエンザイムＱ１０の非還元型コエンザイムＱ１０に対する比率を分析した。
【０１０１】
ブランク試料を還元ゴマ色素を添加せずに上記の通りに調製した。
【０１０２】
試料中の還元型コエンザイムＱ１０の比率を下の表に示す。
【表４】
0005750730.tif 000017
本実施例におけるＤＨＬＡはビタミンＣなどのような他の還元剤で置き換えることができる。
【実施例９】
【０１０３】
ＵＶ−ＶＩＳ吸収を用いたゴマ色素の判定
試料の精製
色素試料２ｇをクロロホルム５０ｍｌ、アセトン５０ｍｌおよびエタノール５０ｍｌで順に抽出した。その試料を室温で減圧乾燥した。ゴマ色素１ｇを水酸化ナトリウム１．０ｇと脱イオン水３０ｍｌに溶かした。クロロホルム約２５ｍｌとｎ−ブタノール５ｍｌをその混合物に添加し、得られた混合物を十分に振盪し、次に遠心分離して下層を分離し、濾過した。この水層を１％水酸化ナトリウム溶液で洗浄した。全ての濾液を混合し、ＨＣｌでｐＨ値を３に調整した。この物質を濾過し、濾液のｐＨが約６になるまで得られたケーキを脱イオン水で洗浄した。この固体ケーキを減圧乾燥して精製色素を得た。
この全工程は温度管理をして行った。液体温度が２５℃を越えることは許さず、不活性ガスを用いて反応を行うのに最良であることが分かった。
【０１０４】
方法
ゴマ色素２０ｍｇと水酸化ナトリウム１．０ｇを１００ｍｌ容量フラスコ内で溶解した。この混合物を１０分間超音波処理し、このフラスコを脱イオン水で容量まで満たした。試料２ｍｌを１０ｍｌ容量フラスコに移し、脱イオン水で容量まで満たした。最終溶液のＵＶ−ＶＩＳ吸収を５００ｎｍで測定した。
【０１０５】
結果
【表５】
0005750730.tif 000018
【０１０６】
適用効果
【表６】
0005750730.tif 000019
条件は実施例５におけるものと同一であった。
【実施例１０】
【０１０７】
ＬＤＬの酸化に対するゴマ抽出物の効果
ヒトＬＤＬを新鮮なヒト血液から超遠心分離によって得て、続いて４℃の暗所で２４時間かけてＰＢＳ（ｐＨ７．４）１０ｍＭで透析した。ＬＤＬを異なる量のゴマ色素（ｐＨ７．４のＰＢＳに超音波処理により溶解した）（それぞれ０，１０，５０，１００，２５０，５００μｇ／ｍＬ）と混合した。ゴマ抽出物は付録１で与えられた方法によって得られ、酸化と還元は付録１の記載通りに行った。反応はＣｕＳＯ４（１０μＭ）溶液を添加することによって開始され、試料はその後３７℃で３時間保温静置された。共役ジエンの形成はＵＶ／ＶＩＳ分光光度計を用いて２３４ｎｍで測定した。
【０１０８】
データ評価はジエン形成の増加勾配の比較により行った。最も急な勾配（すなわち、抗酸化剤の添加が無い場合）を１００％と設定した。結果は、相対％±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）として示されている。
【０１０９】
ジエン形成の開始までの遅延時間は、得られた速度曲線から推定した。結果は、分単位で示されている。
【０１１０】
形成したジエンのプラトー濃度はモル吸光係数２９５００Ｍ−１ｃｍ−１を用いて得られた。結果は、形成ジエンμｍｏｌ／ＬＤＬタンパクｍｇとして示されている。
【０１１１】
図４に見られるように、未処理または還元したゴマ色素はＬＤＬ酸化を阻害するが、酸化ゴマ色素はほぼ効果が無いことを示した。
【０１１２】
図５に見られるように、ＬＤＬ酸化開始までの遅延時間は還元色素に対する用量依存性を示す。未処理の色素は１００μｇ／ｍｌ辺りで飽和効果を示したが、酸化色素はほとんど効果を示さなかった。
【０１１３】
還元型ゴマ色素の有効性は、試験した全ての濃度において未処理色素よりも著しく強かった。
【０１１４】
還元型ゴマ色素はＬＤＬ酸化の強力な阻害剤であり、生体内で動脈硬化症（酸化ＬＤＬのプラーク形成）に対する予防薬として働くかもしれない。
【０１１５】
付録１
色素試料の調製
およそ３０ｇのゴマ種子を細かく粉砕し、およそ２５％（ｍ／ｍ）ＨＣＬ中で１時間煮沸した。その後、残渣を濾過により集めて１０５℃で乾燥した。乾燥残渣をＳｏｘｈｅｌｔ抽出器で３時間（石油エーテル１５０ｍｌにて）抽出し、油脂を除去した。
【０１１６】
その後この残渣を７５℃で２時間乾燥した（残渣は約２０ｇ）。この残渣にＮａＨ２ＰＯ４０．５０ｇとＥＤＴＡ０．２ｇを加えることにより、タンパク質分解を受けさせた。この混合物に水を加えて２００ｍｌにし、そのｐＨを７．４に調整した。その次に、トリプシン（１１０．０００ＩＵ／ｍｇ）１００ｍｇを添加し、混合物を室温で１２時間撹拌した。
【０１１７】
次にこの混合物のｐＨをＨＣｌで３．０以下に調整し、さらに４時間撹拌し、沈殿物を遠心分離（５０００ｇで３０分間）によって集めた。
【０１１８】
沈殿物を次に２００ｍｌの水／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ＝１０．５）の中に懸濁し、室温で２時間撹拌した。その懸濁液を次に濾過して不溶性物質を除去した。濾液を（ＨＣｌで）ｐＨ２．０−２．５に酸性化させ、室温で４時間撹拌した。沈殿物を濾過によって集めた。その沈殿物を０．０１Ｍ  ＨＣｌで数回、温水で１回洗浄した。この残渣を集めて６０℃で一晩乾燥し、続いてＰ２Ｏ５上で保管して僅かに残った水を除去した。集められた試料を測定し７２５ｍｇであった。
【０１１９】
分光光度計による評価に基づいて、その試料はイカ墨メラニン標準物と比較してメラニンを３３％含んでいた。メラニンはモンゴウイカ（Ｓｅｐｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の墨袋から単離されたもの（イカ墨メラニン）が天然ユーメラニンの標準物質として提案されている。Ｍ２６４９（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）は市販品である。
【０１２０】
ゴマ色素の還元
ゴマ色素は先に述べた工程（Ｈｏｒａｋ＆Ｇｉｌｌｅｔｔｅ，１９７１）に従い、Ｔｉ３＋で処理して還元した。ゴマ色素１００ｍｇを水に懸濁したものを、シュウ酸ナトリウム０．１Ｍと硫酸１Ｍを含む溶液２０ｍｌと混合した。次に、ＴｉＣｌ３を希釈硫酸（容量比で１：１０）に溶解してＴｉＣｌ３濃度を８０ｍＭとした液を５ｍｌ添加した。この混合物を１２０分間保温静置し、還元した色素を遠心により分離した。沈殿物を希釈硫酸と水で洗浄した。最後に、還元色素をミリＱ水に対して２４時間透析した。還元試料を蒸留水中に懸濁し、ＮａＯＨを０．１Ｍ滴下して加えてｐＨを７．５に調整した。このようにして得られた溶液をＮａｌｇｅｎｅ０．４５−ｍｍシリンジフィルターで濾過した。全ての操作はＮ２の下で行った。
【０１２１】
還元試料は実施例１０と図４および図５において「還元色素」と呼ばれる。
【０１２２】
形成したジエンのプラトー量は表１〜３に示すような結果が得られた。
【０１２３】
【表７】
0005750730.tif 000020
【０１２４】
【表８】
0005750730.tif 000021
【０１２５】
【表９】
0005750730.tif 000022
【０１２６】
上に述べたように、還元色素の効果は未処理色素のそれよりも強く、一方で、酸化色素は全く効果を示さなかった。
【０１２７】
色素の酸化
色素の特性に対する酸化／還元の効果をさらに確認するために、ゴマ色素に酸化を施した。
【０１２８】
ゴマ色素１００ｍｇを水２０ｍｌに溶解し、ＮａＯＨでｐＨ＝１１．０にした。この溶液に空気を送るポンプに接続した密封小瓶の中にこの溶液を入れて４０℃で２４時間撹拌した。さらに、Ｈ２Ｏ２溶液（３％ｍ／ｍ）１ｍｌを３回に分けて添加した。最後に、ＨＣｌによるｐＨ＝２．０への酸性化、遠心分離および濾過による収集によって酸化生成物を集めた。温水で十分に洗浄した後、酸化色素をミリＱ水に対して２４時間透析した。酸化した試料を蒸留水で懸濁し、０．１ＭＮａＯＨを滴下してｐＨを７．５に調整した。この様にして得られた溶液をＮａｌｇｅｎｅ０．４５−ｍｍシリンジフィルターで濾過した。
【０１２９】
酸化試料は実施例１０と図４および５において「酸化色素」と呼ばれる。
【０１３０】
アスコルビン酸（ビタミンＣ）の酸化分解
アスコルビン酸５ｍｇを０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ＝７．５に溶解し、最終容量を１０ｍｌにした。ゴマ色素（未処理試料または上記実施例４の還元試料）２ｍｇをアスコルビン酸溶液に加えて超音波処理によって溶解した。
【０１３１】
選択した時点（最大９６時間まで）で、試料０．５ｍｌを取り出し、リン酸（ｐＨ＝２．５）で１：１０に希釈した。色素を含む試料を遠心法により清澄にし、アスコルビン酸測定用に調整したＨＰＬＣシステムに注入した。
【０１３２】
図６に示すように、還元型ゴマ色素はアスコルビン酸を分解から保護する。さらに、還元ゴマ色素は未処理のゴマ色素よりも有効である。
【０１３３】
還元ゴマ抽出物はアスコルビン酸に対して安定剤として働く。生体内でゴマ色素はビタミンＣの安定性を増加させたりリサイクルさせたりすることによりビタミンＣを節約する効果を発揮する可能性がある。
【０１３４】
次の１から７９までの連続番号で列挙したパラグラフは、本発明の多様な態様を提示する。１つの実施例において、最初のパラグラフ（１）で、本発明は、還元型メラニンを有する色素を提供する。この色素において、還元型メラニンの分子量は約２６４から約５４００ダルトンの間であり、還元型メラニンの炭素含量は約４９重量パーセントから約５７重量パーセントの間であり、還元型メラニンの水素含量は約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であり、還元型メラニンの酸素含量は約３３重量パーセントから約３７重量パーセントの間であり、還元型メラニンのカルボニルキノン基に対する水酸基の割合はモル基準で少なくとも５０パーセントである。
【０１３５】
２．還元型メラニンが種殻または種皮由来であるパラグラフ１の色素。
【０１３６】
３．種殻または種皮がゴマ種子由来のものであるパラグラフ１または２の色素。
【０１３７】
４．還元型メラニンの窒素含量が約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であるパラグラフ１から３のいずれかの色素。
【０１３８】
５．還元型メラニンの硫黄含量が約１重量パーセント未満であるパラグラフ１から４のいずれかの色素。
【０１３９】
６．還元型メラニンの赤外スペクトルが約３４００ｃｍ−１、約２９５０ｃｍ−１、約１６００から約１６５０ｃｍ−１、約１３８０から約１４００ｃｍ−１、約１２６０ｃｍ−１および約１１７０ｃｍ−１に吸収バンドを示すパラグラフ１から５のいずれかの色素。
【０１４０】
７．カルボニル基含量に対する水酸基含量のモルパーセント比が少なくとも６０パーセントであるパラグラフ１から６のいずれかの色素。
【０１４１】
８．還元型メラニンの分子量の範囲が約２６４から約２０００ダルトンの間であるパラグラフ１から７のいずれかの色素。
【０１４２】
９．還元型メラニンの分子量の範囲が約４００から約１６００ダルトンの間であるパラグラフ１から８のいずれかの色素。
【０１４３】
１０．ａ）塩基性水溶液と粉砕したゴマ種子を高温で混合し、続いて黒色混合物を室温まで冷却する工程と、
ｂ）混合物を濾過し、水で洗浄して濾液を得る工程と、
ｃ）濾液を酸性水溶液で処理する工程と、
ｄ）ガス発生が止まって還元型メラニン色素が形成されるまで濾液に還元剤を添加する工程と、
からなる還元型メラニン色素の調製方法。
【０１４４】
１１．工程ａ）の塩基性水溶液の塩基濃度は約０．５重量パーセントから約２重量パーセントの間であるパラグラフ１０の方法。
【０１４５】
１２．塩基は水酸化ナトリウムであるパラグラフ１０または１１いずれかの方法。
【０１４６】
１３．ゴマ種子に対する塩基性水溶液の比は重量基準で約５：１であるパラグラフ１０から１２のいずれかの方法。
【０１４７】
１４．工程ａ）の高温温度は約４０℃から約８０℃の間であるパラグラフ１０から１３のいずれかの方法。
【０１４８】
１５．温度が６０℃であるパラグラフ１４の方法。
【０１４９】
１６．混合物が約０．５時間から約５時間の間加熱されるパラグラフ１０から１５のいずれかの方法。
【０１５０】
１７．混合物が約３時間加熱されるパラグラフ１６の方法。
【０１５１】
１８．工程ｃ）で処理される濾液が還元剤の添加前に撹拌されるパラグラフ１０から１７のいずれかの方法。
【０１５２】
１９．還元剤が約１０℃から約３５℃の間の温度で工程ｄ）の濾液に添加されるパラグラフ１０から１８のいずれかの方法。
【０１５３】
２０．濾液の温度が約２５℃であるパラグラフ１９の方法。
【０１５４】
２１．還元型メラニン色素が還元型メラニンを含み、還元型メラニンの分子量は約２６４から約５４００ダルトンの間であり、還元型メラニンの炭素含量は約４９重量パーセントから約５７重量パーセントの間であり、還元型メラニンの水素含量は約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であり、還元型メラニンの酸素含量は約３３重量パーセントから約３７重量パーセントの間であり、還元型メラニンのカルボニルキノン基に対する水酸基の割合はモル基準で少なくとも５０パーセントであるパラグラフ１０から２０のいずれかの方法。
【０１５５】
２２．還元型メラニンの窒素含量が約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であるパラグラフ１０から２１のいずれかの方法。
【０１５６】
２３．還元型メラニンの硫黄含量が約１重量パーセント未満であるパラグラフ１０から２２のいずれかの方法。
【０１５７】
２４．還元型メラニンの赤外スペクトルが約３４００ｃｍ−１、約２９５０ｃｍ−１、約１６００から約１６５０ｃｍ−１、約１３８０から約１４００ｃｍ−１、約１２６０ｃｍ−１および約１１７０ｃｍ−１に吸収バンドを示すパラグラフ１０から２３のいずれかの方法。
【０１５８】
２５．カルボニル基含量に対する水酸基含量のモルパーセント比が少なくとも６０パーセントであるパラグラフ１０から２４のいずれかの方法。
【０１５９】
２６．還元型メラニンの分子量の範囲が約２６４から約２０００ダルトンの間であるパラグラフ１０から２５のいずれかの方法。
【０１６０】
２７．還元型メラニンの分子量の範囲が約４００から約１６００ダルトンの間であるパラグラフ１０から２６のいずれかの方法。
【０１６１】
２８．ａ）塩基性水溶液と粉砕したゴマ種子を室温以下で混合する工程と、
ｂ）混合物を濾過し、水で洗浄して濾液を得る工程と、
ｃ）濾液を酸性水溶液で室温以下で処理し、ｐＨを約１から約７未満の間にする工程と、
ｄ）還元型メラニン色素を集める工程と、
からなる還元型メラニン色素の調製方法。
【０１６２】
２９．工程ａ）の塩基性水溶液の塩基濃度が約０．５重量パーセントから約２重量パーセントの間であるパラグラフ２８の方法。
【０１６３】
３０．塩基が水酸化ナトリウムであるパラグラフ２８または２９いずれかの方法。
【０１６４】
３１．ゴマ種子に対する塩基性水溶液の比が重量基準で約５：１であるパラグラフ２８から３０のいずれかの方法。
【０１６５】
３２．工程ａ）の混合物の温度が約３５℃未満に維持されるパラグラフ２８から３１のいずれかの方法。
【０１６６】
３３．工程ａ）の混合物が約５時間から約４８時間の間混合されるパラグラフ２８あるいは３２のいずれかの方法。
【０１６７】
３４．混合物が２４時間混合されるパラグラフ３３の方法。
【０１６８】
３５．工程ｃ）の酸性水溶液が約１５容量％の酸であるパラグラフ２８から３４のいずれかの方法。
【０１６９】
３６．工程ｃ）の酸が塩酸であるパラグラフ２８から３５のいずれかの方法。
【０１７０】
３７．工程ｃ）の濾液の温度が約１０℃から約２５℃の間に維持されるパラグラフ２８から３６のいずれかの方法。
【０１７１】
３８．工程ｃ）の濾液の温度が約２５℃に維持されるパラグラフ３７の方法。
【０１７２】
３９．工程ｃ）の濾液のｐＨが約１であるパラグラフ２８から３８のいずれかの方法。
【０１７３】
４０．還元型メラニン色素が遠心分離により集められるパラグラフ２８から３９のいずれかの方法。
【０１７４】
４１．還元型メラニン色素が還元型メラニンを含み、還元型メラニンの分子量が約２６４から約５４００ダルトンの間であり、還元型メラニンの炭素含量が約４９重量パーセントから約５７重量パーセントの間であり、還元型メラニンの水素含量が約５重量パーセントから約１０重量パーセントであり、還元型メラニンの酸素含量が約３３重量パーセントから約３７重量パーセントの間であり、還元型メラニンのカルボニルキノン基に対する水酸基の割合がモル基準で少なくとも５０パーセントであるパラグラフ２８から４０のいずれかの方法。
【０１７５】
４２．還元型メラニンの窒素含量が約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であるパラグラフ２８から４１のいずれかの方法。
【０１７６】
４３．還元型メラニンの硫黄含量が約１重量パーセント未満であるパラグラフ２８から４２のいずれかの方法。
【０１７７】
４４．還元型メラニンの赤外スペクトルが約３４００ｃｍ−１、約２９５０ｃｍ−１、約１６００から約１６５０ｃｍ−１、約１３８０から約１４００ｃｍ−１、約１２６０ｃｍ−１および約１１７０ｃｍ−１に吸収バンドを示すパラグラフ２８から４３のいずれかの方法。
【０１７８】
４５．カルボニル基含量に対する水酸基含量のモルパーセント比が少なくとも６０パーセントであるパラグラフ２８から４４のいずれかの方法。
【０１７９】
４６．還元型メラニンの分子量の範囲が約２６４から約２０００ダルトンの間であるパラグラフ２８から４５のいずれかの方法。
【０１８０】
４７．還元型メラニンの分子量の範囲は約４００から約１６００ダルトンの間であるパラグラフ２８から４６のいずれかの方法。
【０１８１】
４８．次の化学式を含む色素であって、
【化１３】
0005750730.tif 000023
式中、ｍおよびｎで示す各単位のＸは、それぞれ、互いに独立して、ＣＯＯＨ基またはその塩、もしくは水素原子であり、式中、ｍおよびｎで示す各単位の各Ｙ１または各Ｙ２の少なくとも１つは、互いに独立して、ＮＨであり、他方はＣＨであり、ただしＹ１とＹ２の両方が共にＮＨまたはＣＨであることはなく、
式中、ｍおよびｎで示す各単位のＱ１およびＱ２は、それぞれ互いに独立して水酸基、水酸陰イオン基、水素原子、または＝Ｏ基であり、
還元型メラニン内のケトン官能基に対する水酸基のモル比は５０パーセントより大きく、
式中、
【化１４】
0005750730.tif 000024
はπ共役系を表し、
式中、ｍは１から約４０であり、
式中、ｎは１から約４０であり、
式中、ｍ＋ｎは２から約４０であり、
式中の各単量体単位であるｍとｎは同一であっても異なっていてもよい。
【０１８２】
４９．還元型メラニンの窒素含量が約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であるパラグラフ４８の色素。
【０１８３】
５０．還元型メラニンの硫黄含量が約１重量パーセント未満であるパラグラフ４８または４９いずれかの色素。
【０１８４】
５１．色素の赤外スペクトルが約３４００ｃｍ−１、約２９５０ｃｍ−１、約１６００から約１６５０ｃｍ−１、約１３８０から約１４００ｃｍ−１、約１２６０ｃｍ−１および約１１７０ｃｍ−１に吸収バンドを示すパラグラフ４８から５０のいずれかの色素。
【０１８５】
５２．カルボニル基含量に対する水酸基含量のモルパーセント比が少なくとも６０パーセントであるパラグラフ４８から５１のいずれかの色素。
【０１８６】
５３．色素の分子量の範囲が約２６４から約２０００ダルトンの間であるパラグラフ４８から５２のいずれかの色素。
【０１８７】
５４．色素の分子量の範囲が約４００から約１６００ダルトンの間であるパラグラフ４８から５３のいずれかの方法。
【０１８８】
５５．色素がパラグラフ４８から５４のいずれかを含むパラグラフ１０の方法。
【０１８９】
５６．色素がパラグラフ４８から５４のいずれかを含むパラグラフ２８の方法。
【０１９０】
５７．ｎ＝１であるパラグラフ４８の色素。
【０１９１】
５８．少なくとも２つの異なる単量体単位が以下のものから選択されるパラグラフ４８の色素。
【化１５】
0005750730.tif 000025
【０１９２】
５９．１つの単量体単位が以下のものから選択されるパラグラフ４８の色素。
【化１６】
0005750730.tif 000026
【０１９３】
６０．眼中のルテイン濃度を維持または増加させることと、視力を維持させることと、生理学的状態においてフリーラジカルを減少させることと、神経、脳、または骨髄の健康促進を助けることと、パーキンソン病やアルツハイマー病を含む神経系の変性疾患のためと、ＵＶ保護など皮膚保護のためとのうち、１つ以上の病気を治療または予防する方法。
【０１９４】
６１．パラグラフ１から９、または４８から５４、または５７から５９のいずれかと担体とを含む植物性食品栄養補助剤。
【０１９５】
６２．食用物質または消費可能な液体とパラグラフ１から９、または４８から５４、または５７から５９の何れかの色素とを含む食品または飲料。
【０１９６】
６３．食品がアイスクリームまたはヨーグルトであるパラグラフ６２の食品。
【０１９７】
６４．ルテイン、ＤＨＬＡと組み合わせたコエンザイムＱ１０、ＤＨＡ、またはホスホリルコリンのいずれかの物質を、請求項１から９または４８から５４または５７から５９のいずれかの色素で処理する工程からなる、物質の分解を防止または軽減する方法。
【０１９８】
６５．パラグラフ１から９、または４８から５４、または５７から５９の何れかの色素と許容可能な担体を含む毛髪を黒色化するための毛髪栄養補助剤。
【０１９９】
６６．パラグラフ１から９、または４８から５４、または５７から５９の何れかの色素を提供することによって被験者の認知を増強または維持する方法。
【０２００】
６７．水溶液の濃度が０．０４ｍｇ／ｍｌの時に５００ｎｍで約０．１０から約０．１６のＵＶ−ＶＩＳ吸収値をもつゴマ抽出物を含む組成物。
【０２０１】
６８．還元型メラニンの分子量が約２６４から約５４００ダルトンの間であるパラグラフ６７に記載の組成物。
【０２０２】
６９．還元型メラニンの炭素含量が約３５重量パーセントから約５７重量パーセントの間であり、水素含量が約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であり、窒素含量が約５重量パーセントから約１０重量パーセントの間であるパラグラフ６７または６８いずれかに記載の組成物。
【０２０３】
７０．還元型メラニンの硫黄含量が約１重量パーセント未満であるパラグラフ６７から６９のいずれかに記載の組成物。
【０２０４】
７１．還元型メラニンの赤外スペクトルが約３４００ｃｍ−１、約２９５０ｃｍ−１、約１６００から約１６５０ｃｍ−１、約１３８０から約１４００ｃｍ−１、約１２６０ｃｍ−１および約１１７０ｃｍ−１に吸収バンドを示すパラグラフ６７から７０のいずれかに記載の組成物。
【０２０５】
７２．還元型メラニンの分子量が約２６４から約２０００ダルトンの間であるパラグラフ６７と６９から７１のいずれかに記載の組成物。
【０２０６】
７３．還元型メラニンの分子量が約４００から約１６００ダルトンの間である、パラグラフ６７と６９から７１のいずれかに記載の組成物。
【０２０７】
７４．充分な量のパラグラフ６７から７３の組成物のいずれかとビタミンとを混合する工程を含むビタミンの酸化を防止または減少させる方法。
【０２０８】
７５．ビタミンがビタミンＣであるパラグラフ７４の方法。
【０２０９】
７６．ＬＤＬの酸化の減少または阻害を必要とする被験者に、ＬＤＬに対して十分な量のパラグラフ６７から７３の組成物のいずれかを与えてＬＤＬの酸化を減少または阻害することを含む、ＬＤＬの酸化を減少または阻害する方法。
【０２１０】
７７．循環器疾患の治療または予防を必要とする被験者に、治療上有効量のパラグラフ６７から７３のいずれかの組成物を与えて循環器疾患を治療または予防することを含む、循環器疾患を治療または予防する方法。
【０２１１】
７８．循環器疾患がアテローム性動脈硬化症または冠動脈疾患であるパラグラフ７７の方法。
【０２１２】
７９．潰瘍の治療または予防を必要とする被験者に、治療効果のある十分な量のパラグラフ６７から７３の組成物のいずれかを与えて潰瘍の治療または予防をすることを含む、潰瘍の治療または予防の方法。
【０２１３】
本発明は、好適な実施例を参照して説明してきたが、当業者ならば、本発明の精神と範囲から逸脱すること無く形態と詳細において変更可能なことは認識されるであろう。本明細書を通じて引用した全ての参照文献は従来技術にあるものも含めて、その全体が本明細書に組み込まれる。当業者ならば、特にここに述べられた本発明の具体的な実施例と同等な多くの例を日常的な実験を用いて認識または確認できるであろう。このような同等例は以下の特許請求の範囲の範囲に含まれると考えられる。
【図１】
0005750730.tif 000027
【図２】
0005750730.tif 000028
【図３】
0005750730.tif 000029
【図４】
0005750730.tif 000030
【図５】
0005750730.tif 000031
【図６】
0005750730.tif 000032