(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト上皮のサンプル中のヒト角化細胞の表皮分化の状態を決定するための方法であって、前記角化細胞中のｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現レベルを決定し、選択されたｍｉＲＮＡの発現レベルを、好ましくは同一の株又は同一の集団から得る、培養下の未分化角化細胞又は分化表皮角化細胞中で選択されたｍｉＲＮＡの発現の平均レベルと比較することを含む、方法。
【請求項２】
ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現のレベルが、培養中の未分化角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの発現の平均レベルよりも統計的に大きい場合、前記角化細胞は分化されたと考慮される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現のレベルが、分化した表皮角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの発現の平均レベルよりも統計的に大きい場合、前記角化細胞は未分化であると考慮される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ヒト上皮のサンプル中に存在する表皮分化の差異を評価する方法であって、前記上皮の角化細胞の２層間で、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現のレベルを比較することを含む、方法。
【請求項５】
２層間の表皮分化の差異が、１．３よりも大きい因子で、一方の層におけるｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現が他方よりも大きいことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
２層間の表皮分化の差異が、１．３よりも大きい因子で、一方の層におけるｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現が他方よりも大きいことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記サンプルを「再構築皮膚」型培養上皮から得る、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
上皮治療の効能を決定するための方法であって、治療の前後で、前記上皮の角化細胞中のｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１つの発現レベルを比較することを含む、方法。
【請求項９】
前記治療が、放射線の適用によるか又は機械的効果の適用による、局所適用又は分子の注射からなる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
上皮中の前記ｍｉＲＮＡの少なくとも１つの発現レベルの修正を引き起こす場合、前記治療は効果的であると考慮される、請求項８又は請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
上皮中の表皮分化プロセスのモジュレータをスクリーニングするための方法であって、スクリーニングするモジュレータの適用前後に、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法を用いて、前記上皮中の角化細胞の表皮分化の状態を評価することを含む、方法。
【請求項１２】
前記モジュレータが、天然抽出物、複合体製剤、ＤＮＡ分子、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ阻害剤、ａｎｔａｇｏｍｉｒ又は照射を用いた計測システムから得る化学成分である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
上皮中の前記ｍｉＲＮＡの少なくとも２つの発現レベルの修正を引き起こす場合、モジュレータが同定される、請求項１１又は請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項４から７のいずれか一項に記載の方法を用いて、基底層と角質層の間の表皮中に存在する表皮分化の差異を決定し；
それを、基底層と角質層の間の同一の型の正常表皮に存在する表皮分化の平均差異と比較することを含む、表皮の状態を評価するための方法。
【請求項１５】
角化細胞の表皮分化の状態を決定するための、ヒト上皮サンプル中の角化細胞における、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現アッセイの使用。
【請求項１６】
ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現をアッセイするための手段と前記ｍｉＲＮＡの発現の参照レベルを提供する情報を含む、ヒト角化細胞の分化の状態を決定するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧品の分野に関連し、皮膚に関する。より一般的には、皮膚の表皮分化の状態の特徴付けと表皮分化に関連する疾患、病気又は病状の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
表皮は、環境と負荷に対する保護障壁として機能する多層上皮である。それは主として表皮の最深層で増殖し、次いで分化を開始し、表皮の深部から表面に移動する角化細胞からなる。表皮の表面において、角質細胞として知られる最も分化した角化細胞は、高度に保護的な角質層を構成する。このように、表皮は、基底層の中に置かれる細胞増殖のシートと、また、結果として高分化保護構造である角質層を形成する、中間層における細胞分化シートの双方である。完全な周期は約２０日間である。そのプログラムは、逐次的、協調的な様式で、連続的に活性化し次いで阻害した多数の特定の遺伝子の発現に対応する。そのプログラムは、多数の転写因子、酵素、脂質及び構造タンパク質を含む。多数の増殖因子、カルシウム、ビタミンＡ及びＤ３誘導体は、角化細胞増殖と分化の重要なレギュレータである。特定の生理学的又は病理学的状態、及び皮膚の表面に対する又は血液循環を介した特定の負荷でさえ、一時的に空間的に調整された表皮分化のプロセスの脱制御につながる。
【０００３】
表皮分化プログラムの修正に関する皮膚病において、乾癬、アトピー性皮膚炎、座瘡、魚鱗癬、ネザートン症候群、毛孔性紅色粃糠疹、毛状角化症、ダリエー病、掌蹠角皮症及び汗孔角化症のように遺伝的であってもなくてもよい［１４−１５］、多くの疾患が観察されている。
【０００４】
表皮分化の修正に関連する更なる生理学的状況の例は、最終分化における例外を伴う年齢、及び障壁機能の減少［１７］、上皮の恒常性の修正の段階によって特徴付けられる瘢痕化（過剰増殖、移動、再上皮化及び最終分化の復元）、及び加齢又は冬期乾燥（乾燥皮膚、扁平蓄積過程）［１８］である。
【０００５】
言及され得る［１９］表皮分化プロセスの障害を引き起こす外部因子による摂動の例は、太陽ＵＶ照射、熱、剥離剤、落屑剤、脱脂剤、又は機械的負荷への露出である。
【０００６】
わずかな障害の場合、皮膚軟化剤と角質溶解薬が好ましい。このような治療は、増殖／分化のバランスに作用しないが、患者の病変を正常にすることを意図し、それらは通常不安定な効果のみを有する。
【０００７】
更に深刻な障害については、角化細胞の増殖と分化を制御し得るレチノイン酸とその誘導体ビタミンＤ３が数年間使用されている。幾つかの場合、メトトレキサートとシクロスポリンがまた好ましい。このような治療の全ては主要な副作用を有し、患者にとって非常に負担となる。
【０００８】
皮膚の表皮分化又は「再構築皮膚」の培養上皮の状態を特徴付けるためか又は表皮分化プロセスを調節し得る分子の評価を可能にするためのに、以下の技術ツールが現在利用可能である：
表皮分化の段階の形態的分析と生化学的マーカー（免疫組織化学）。この技術は、非常に一般的に（局所組織学）、又はマーカーによるマーカー（免疫組織化学）によって、分化における既知のタンパク質主働筋を、分析するためだけに使用され得る。肌の状態のシグネチャーを産生し得る。それは扱いにくく、調査におけるマーカーに特異的な抗体のような利用可能な特定のツールを有する必要とするが、必ずしもそうではない。更に、即時定量的な技術ではない；
トランスクリプトーム解析：この方法は健常又は疾患粗スキーの分子シグネチャーを得るために広く使用される。この技術は、サンプルのｍＲＮＡ転写物の発現解析に基づく。それは、１２０００遺伝子までを含み得るＤＮＡチップを使用し、非常に一般的であり得る。しかし、それは、特に高価な装置（アフィメトリクス（商標）システム）を必要とし、幾つかの欠点があるが、何よりもしばしば扱いが困難で、高性能のバイオインフォマティクスサービスによって処理しなければならない非常に膨大な量のデータを生じる；
プロテオーム解析：これは、組織に存在する全てのタンパク質の一般的な位置の広範囲の画像を提供する。それは複数の二次元電気泳動ゲル技術を使用し、したがって、非常に実行しづらい。更に、タンパク質の正確な同定は、補足の工程を必要とし、特殊技術と操作の専門性を要する非常に高価な装置を必要とする。
【０００９】
このように、皮膚の表皮分化と培養上皮の状態を速やかに簡便に特徴付けることができる方法が必要である。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、表皮分化の状態を特徴付けるために使用され得るだけでなく、前記分化の状態の脱制御に関連する疾患の種々の治療を構想するために使用し得る、表皮分化のマイクロＲＮＡシグネチャーの存在を完全に予想外に明らかにしている。
【００１１】
１９９３年に発見されが、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉に含まれる短い内在性ＲＮＡである：それらはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を標的化し得、それらを分解し、その翻訳を阻害する。このようなマイクロＲＮＡは従って細胞における非常に重要な制御機能を担っている。更に、それらは、調節分子の最も豊富なクラスの１つを形成する。それらの起源は内在性であり、ゲノムにコードされたｐｒｉ−ｍｉＲＮＡに由来する。今日までに、約７００個のヒトマイクロＲＮＡが同定されている。それらの機能と標的は全てが明らかにされ、報告されているわけではない。
【００１２】
それらは種々の細胞型路の調節に決定的な役割を果たし、ヒトの病理に含まれ得る。マイクロＲＮＡは、発生、分化、増殖及びアポトーシスにおいて不可欠の役割を担う（総説については、［１］と［３］を参照されたい）。例として、ヒトにおいて、ｍｉＲ−１７−５ｐとｍｉＲ−２０は、増殖のレギュレータである［４］；ｍｉＲ−２２３は、下流旧形成に含まれる［５］。
【００１３】
ｍｉＲＮＡ発現の脱制御は、ヒト病理に寄与し得る。腫瘍サプレッサーとして、特定のｍｉＲＮＡは機能し；他は癌遺伝子として機能する。
【００１４】
現在皮膚、より好ましくはヒトの皮膚におけるｍｉＲＮＡの研究は非常に少ない。
【００１５】
動物の皮膚においては、発現したｍｉＲＮＡは、マウスにおいてクローン化されている。それらは、表皮と毛皮の形態に重要な役割を果たす［８］。より最近では、ｍｉＲＡＮはヤギとヒツジにおける毛皮成長に含まれることが示されている［１０］。非常に最近では、マウスの皮膚において、ｍｉＲＮＡのｍｉＲ２０３は、細胞増殖能を減少することにより、表皮分化の誘導に重要な役割を果たすことが判明している［１１］。
【００１６】
ヒトにおいて、ｍｉＲＮＡの発現は、正常皮膚において研究され、乾癬の皮膚と湿疹の皮膚と比較されている。ｍｉＲＮＡのｍｉＲ２０３は、皮膚で高度に発現しており（他の組織と比較して）、角化細胞によってのみである。乾癬の皮膚で過剰発現しているｍｉＲＮＡの１つとして判明している［１２］。
【００１７】
最終的に、ヒトにおいて、特定のｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ−２２１とｍｉＲ−２２２）がメラノーマ進行の調節に含まれることが示されている［１３］。
【００１８】
幾つかのｍｉＲＮＡについて、数十の標的遺伝子が存在することを想定して、本発明者は、
分化のマーカーとしてｍｉＲＮＡを使用すること。メッセンジャーＲＮＡと比較してそれらは非常に少数であることは、ｍｉＲＮＡプロファイルが、慣例的な一般的なトランスクリプトーム方法よりもより単純、迅速及び安価に、位置について、又は組織について得ることができる；
表皮分化の障害に関連する良性又は深刻な疾患の治療の目的でモジュレータを同定するための表皮分化のｍｉＲＮＡ分子シグネチャーの使用。「モジュレータ」なる用語は、化学物質又は天然抽出物、複合体製剤、ｓｉＲＮＡ、ａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡ阻害剤由来の物質だけでなく、光、皮膚における機械的効果、又は注射を用いた計測システムを意味する；
表皮分化又は増殖の疾患の美容又は治療的処置の目的でｍｉＲＮＡ又は前記ｍｉＲＮＡのモジュレータの使用；
表皮分化の美容又は治療的処置の効果を評価するための前記ｍｉＲＮＡシグネチャーの使用；
正常又は病的上皮の診断を実施するための表皮分化のｍｉＲＮＡ分子シグネチャーの使用
を提案する。
【００１９】
この目的のため、発明者は特定の同定されたｍｉＲＮＡの発現のアッセイを用いることを提案する。
【００２０】
驚くべきことに、上皮角化細胞中のｍｉＲＮＡの発現の系統的解析により、本発明者は表皮分化過程により、角質層の形成の結果となった場合、ヒトｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ−１４１、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１８２、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｍｉＲ−４２５、ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｍｉＲ−９２ｂは、既知の表皮分化マーカーを発現せず、角質細胞を形成しない増殖性の未分化角化細胞と比較して分化表皮の角化細胞で過剰発現している。これらの１０個のｍｉＲＮＡは従って角化細胞分化の分子シグネチャーを表す。
【００２１】
対照的に、高度未分化増殖性の角化細胞では、ヒトｍｉＲＮＡのｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−２２２、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−６６３、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｃが、分化表皮と比較して未分化角化細胞において過剰発現している。これらの９個のｍｉＲＮＡは、対照的に著しい増殖に関連する表皮の分化の状態を表す。
【００２２】
このように、本発明は、特に表皮分化の状態を評価又は特定するための、生理学的又は病理学的分化障害の新規な診断ツールとして、表皮分化の欠陥を訂正するための標的として又は上皮分化調節剤を評価するためのバイオマーカー及びスクリーニングツールとしての、表皮分化の前記ｍｉＲＮＡシグネチャーと前記シグネチャーの種々の使用に関する。本発明はまた治療的及び化粧品適用における、特に組成物形態の前記シグネチャーのｍｉＲＮＡ、又は前記ｍｉＲＮＡのモジュレータの使用に関する。
【００２３】
より具体的には、本発明の文脈では、下の用語は以下の意味を有する：
マイクロＲＮＡ（又はマイクロＲｎＡ又はｍｉＲＮＡ）：マイクロＲＮＡは、約２０から２５ヌクレオチド長、より一般的には２１から２４ヌクレオチドの一本差ＲＮＡである。ｍｉＲＮＡは遺伝子からｍＲＮＡ転写後に作用するリプレッサーであり：実際、メッセンジャーＲＮＡと対になって、タンパク質への翻訳を阻害又は抑制する。
【００２４】
ｍｉＲＮＡの産生は転写及び転写後調節の厳格な制御下にある。ｍｉＲＮＡの遺伝子はＲＮＡポリメラーゼＩＩによって「プリｍｉＲＮＡ」として知られる長い第一転写物又は前駆体の形態として転写される。前駆体ｍｉＲＮＡは、クラス２ＲＮＡアーゼＩＩ（Ｄｒｏｓｈａ）によって細胞核中で酵素で切断され「プレｍｉＲＮＡ」を形成する。「プレｍｉＲＮＡ」は、約７０ヌクレオチド長のＲＮＡであり、配列の前半と後半の間の塩基対によって不完全なステムループに折りたたまれる。プレｍｉＲＮＡは次いで別のヌクレアーゼ（Ｄｉｃｅｒ）とＴＲＢＰ（トランス活性化応答ＲＮＡ結合タンパク質）とＡｇｏ２（Ａｒｇｏｎａｕｔｅ２）を含むＲＩＳＣ複合体（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体）に結合する細胞質へ輸送される。結合の際、タンパク質Ａｇｏ２は、ｍｉＲｎＡ前駆体の３’末端を切断し、これにより成熟ｍｉＲＮＡ二本鎖を生成する。ｍｉＲＮＡの標的ｍＲＮＡの特定の鎖のみが複合体中で維持される（熱動力学的反応）；他方の鎖は除去され、分解される。
標的ｍｉＲＮＡは次いでＲＩＳＣ複合体に搭載され、分解される。
【００２５】
翻訳抑制は動物細胞で最も観察されるサイレンシング経路であり、近年の研究はｍｉＲＮＡが標的ＲＮＡの量にまた影響を及ぼすことを示す。
【００２６】
ｈｓａ−ｍｉＲｘｘ：これはヒトで同定されるｍｉＲＮＡの命名である（ｈｓａはホモサピエンスを意味する）。既知ｍｉＲＮＡの全てについての配列は、ｍｉＲＢａｓｅ又はマイクロＲＮＡｄｂのようなベースに記録されており、それらはその固有のアクセス番号（ｘｘ）によって同定される。下のリストにおいて、ｈｓａ−ｍｉＲｘｘの番号は、成熟ｍｉＲＮＡ配列を言及するために使用される。
【００２７】
特に下のｍｉＲＮＡは以下の配列を有する：
ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＡＡＣＡＣＵＧＵＣＵＧＧＵＡＡＡＧＡＵＧＧ（配列番号Ｎ°１）
ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＣＡＧＵＧＣＡＣＵＡＣＡＧＡＡＣＵＵＵＧＵ（配列番号Ｎ°２）
ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＵＵＧＧＣＡＡＵＧＧＵＡＧＡＡＣＵＣＡＣＡＣＵ（配列番号Ｎ°３）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４：成熟ｍｉＲＮＡ：ＣＡＡＧＵＣＡＣＵＡＧＵＧＧＵＵＣＣＧＵＵ（配列番号Ｎ°４）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ（ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ−１及びｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ−２）：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＵＣＡＡＧＵＡＡＵＣＣＡＧＧＡＵＡＧＧＣＵ（配列番号Ｎ°５）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＵＣＡＡＧＵＡＡＵＵＣＡＧＧＡＵＡＧＧＵ（配列番号Ｎ°６）
ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＵＡＵＣＡＧＡＡＵＣＵＣＣＡＧＧＧＧＵＡＣ（配列番号Ｎ°７）
ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５：成熟ｍｉＲＮＡ：ＡＡＵＧＡＣＡＣＧＡＵＣＡＣＵＣＣＣＧＵＵＧＡ（配列番号Ｎ°８）
ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＧＣＡＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣＡＵＡＵＡＣＡＣ（配列番号Ｎ°９）
ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＡＵＵＧＣＡＣＵＣＧＵＣＣＣＧＧＣＣＵＣＣ（配列番号Ｎ°１０）
ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＧＡＧＧＵＡＧＵＡＧＵＵＵＧＵＧＣＵＧＵＵ（配列番号Ｎ°１１）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２２：成熟ｍｉＲＮＡ：ＡＡＧＣＵＧＣＣＡＧＵＵＧＡＡＧＡＡＣＵＧＵ（配列番号Ｎ°１２）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１：成熟ｍｉＲＮＡ：ＡＧＣＵＡＣＡＵＵＧＵＣＵＧＣＵＧＧＧＵＵＵＣ（配列番号Ｎ°１３）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２：成熟ｍｉＲＮＡ：ＡＧＣＵＡＣＡＵＣＵＧＧＣＵＡＣＵＧＧＧＵ（配列番号Ｎ°１４）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＡＧＣＡＣＣＡＵＣＵＧＡＡＡＵＣＧＧＵＵＡ（配列番号Ｎ°１５）
ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＡＧＣＡＣＣＡＵＵＵＧＡＡＡＵＣＡＧＵＧＵＵ（配列番号Ｎ°１６）
ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３：成熟ｍｉＲＮＡ：ＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＣＣＧＣＧＧＧＡＣＣＧＣ（配列番号Ｎ°１７）
ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＧＵＡＡＡＣＡＵＣＣＵＣＧＡＣＵＧＧＡＡＧ（配列番号Ｎ°１８）
ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ：成熟ｍｉＲＮＡ：ＵＧＵＡＡＡＣＡＵＣＣＵＡＣＡＣＵＣＵＣＡＧＣ（配列番号Ｎ°１９）
【００２８】
「ｈｓａ」なる接頭辞は、時折本明細書の文脈で省略されている。しかし、上に記載の１９個の同一のｍｉＲＮＡを指定する。
【００２９】
表皮分化（角質化又は角化）：ヒト皮膚の連続再生を提供する表皮の現象。表皮分化は表皮分化の種々の段階を通過する、無核角膜細胞又は角質細胞への表皮の幹細胞の変形をを提供する全ての分子、生化学及び形態的現象を扱う。
【００３０】
前記最終分化は環境に対する効果的な障壁を有する組織を提供する角質層のような特別な構造の構築を可能にする。表皮分化の間、上皮の最深層の角化細胞は、分割して２つの同一の娘細胞を生じ、形態的及び生化学的修飾を受ける間に、一方は他方がより上層である分化層に移動する間その場に残る。
【００３１】
未分化（Non-differentiated）角化細胞（又は未分化（undifferentiated）角化細胞）、又は基底角化細胞（又は基底層）：有糸分裂活性を有する、ケラチンＫ５とＫ１４を発現する角化細胞
【００３２】
分化角化細胞：有糸分裂活性をもはや有さず、特にケラチンＫ１とＫ１０の誘導により最終分化を開始している角化細胞。
【００３３】
Ａｎｔａｇｏｍｉｒ：これは新しいクラスの化学的に合成されたオリゴヌクレオチドである。それらは内在性ｍｉＲＮＡの作用を不活化するために使用される。ａｎｔａｇｏｍｉｒはＡｇｏ２による切断を阻害するための一以上の塩基修飾を伴う標的ｍｉＲＮＡに完全に相補的な短い合成ＲＮＡである（ａｎｔａｇｏｍｉｒがより分解に耐性であるために、別の修飾もまたさらに導入される）。
【００３４】
Ａｎｔａｇｏｍｉｒは頻繁に特定のｍｉＲＮＡの活性を構造的に阻害するために使用される。多数のａｎｔａｇｏｍｉｒが報告されている。全てのｍｉＲＮＡはａｎｔａｇｏｍｉｒによって特異的に阻害することが可能である。
【００３５】
必要とされる唯一の情報は、前記ｍｉＲＮＡの活性を阻害することが可能なａｎｔａｇｏｍｉｒを産生するための標的ｍｉＲＮＡの配列の配列である。
【００３６】
他のｍｉＲＮＡ阻害剤の例は、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｕｏｎ）又はキアゲンのｍｉＳｃｉｒｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明は上皮分化のｍｉＲＮＡシグネチャー、したがって、増殖と分化のバランスを表すシグネチャーに関する。
【００３８】
第一の態様では、より具体的には、本発明はヒト上皮のサンプル中のヒト角化細胞の表皮分化の状態を決定する方法に関する。このような方法は好ましくは前記角化細胞中の少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現レベルを決定するための工程を有する。
【００３９】
本発明にしたがって、ｍｉＲＮＡは、発明者によって同定された以下のｍｉＲＮＡ、すなわち、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される。これらの１９個のｍｉＲＡＮは、本発明において、マイクロＲＮＡ又はｍｉＲＮＡと称する。
【００４０】
選択されたｍｉＲＮＡの発現レベルは、未分化角質細胞、好ましくは培養下の未分化角化細胞、又は分化表皮角化細胞における前記ｍｉＲＮＡの平均発現レベルと比較される。
【００４１】
ｍｉＲＮＡを検出及び定量するための多数の方法があり、当業者によく知られている。実施例３は、最も使用されている技術を詳述する。
【００４２】
好ましくは、方法は、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも２個の異なるｍｉＲＮＡのレベルを決定し、それら２個のレベルを、未分化角質細胞、特に培養下の未分化角化細胞中、又は分化表皮角化細胞中の対応する２個の選択したｍｉＲＮＡの平均レベルと比較することを含む。
【００４３】
その代わりに、方法は、本発明の１９個のｍｉＲＮＡのうち幾つか、例えば、少なくとも３若しくは５個、又は更に８、１０、１５個の発現レベルを決定するか、又は本発明の１９個のｍｉＲＮＡの発現レベルを決定さえし、そのように決定したレベルを、例えば、培養下の未分化角化細胞中、又は分化した角化細胞中の対応するｍｉＲＮＡ発現の平均レベルと比較することを含み得る。
【００４４】
「未分化角化細胞、特に培養下の未分化角化細胞中、又は分化表皮角化細胞中のｍｉＲＮＡの平均発現レベル」なる用語は、好ましくは培養下の未分化角化細胞数を代表するか、又は分化表皮角化細胞数を代表する、少なくとも５個の異なる角化細胞中で決定される平均の発現レベルに対応する、この型の細胞において一般的に観察される発現レベルを意味する。好ましくは、それは、少なくとも１０個の測定、又は更に２０又は１００個の異なる測定のの平均である。
【００４５】
好ましくは、培養下の未分化角化細胞又は問題となっている分化表皮角化細胞は、調査下の角化細胞として、同一の株又は同一の集団に由来する角化細胞である。
【００４６】
上述の方法を実施する文脈において、調査下の角化細胞は、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも１個の発現レベルが、未分化角化細胞、例えば、培養したの未分化角化細胞における前記ｍｉＲＮＡの発現の平均レベルよりも大きい場合、分化した又は分化を受けていると考慮される。
【００４７】
「統計的により大きい」なる用語は、観察された差異は、統計的な観点から有意であり、特に標準偏差よりも大きい。値は、２点間の差異が測定において存在する不確かさよりも大きい場合、他方よりも統計的に大きいとされる。
【００４８】
好ましくは、上限レベルは、平均レベルよりも少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％大きい。特に好ましい実施態様にしたがって、選択したｍｉＲＮＡの発現レベルは、少なくとも前記ｍｉＲＮＡの平均レベルの１．５倍に等しく、好ましくは選択したｍｉＲＮＡの平均レベルの２倍以上である。
【００４９】
好ましくは、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも１個の発現レベルは、統計的に前記ｍｉＲＮＡの平均発現レベルを得るために使用されている培養下の未分化角化細胞の全てにおける前記ｍｉＲＮＡの発現レベルの何れよりも大きい。
【００５０】
本発明の方法の好ましい実施態様に従って、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される少なくとも２個のｍｉＲＮＡの平均レベルは、未分化角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの平均発現レベルよりも大きい。好ましくは、これは、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂからなるリストからのｍｉＲＮＡの少なくとも３個、又は更に５又は８個、又は更に全ての場合である。
【００５１】
その代わりに、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも１個の発現レベルが、分化表皮角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの発現レベルと実質的に同一である場合、調査している角化細胞は分化した又は分化を受けているとまた結論づけてもよい。好ましくは、これは、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも２個、又は更に３、５、８又は全ての場合である。
【００５２】
「実質的に同一レベル」なる用語は、例えば、前記ｍｉＲＮＡの発現レベルの測定における不確かさよりも少ないような、観察されるレベルの差異が統計的に有意でないことを意味する。
【００５３】
対照的に、本発明の方法を実施する文脈では、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも１個の発現レベルが、分化表皮角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの平均発現レベルよりも統計的に大きい場合、調査している角化細胞は、未分化又はわずかに分化している状態の角化細胞であると考慮される。
【００５４】
好ましい実施態様では、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも２個のｍｉＲＮＡの平均レベルは、分化表皮角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの平均発現レベルよりも大きい。好ましくは、これは、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃからなるリストからのｍｉＲＮＡの少なくとも３個、又は更に５又は８個、更に全ての場合である。
【００５５】
その代わりに、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの発現レベルが、未分化表皮角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの発現レベルと同一である場合、調査している角化細胞は、未分化（undifferentiated）とも呼ばれる未分化（non-differentiated）状態であるか、又はわずかに分化している状態と結論づけてもよい。好ましくは、これは、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも２個、又は更に３、５、８個又は全ての場合である。
【００５６】
本発明はまたヒト上皮のサンプル中に存在する表皮分化の差異を評価する方法に関する。前記方法を用いて、前記サンプルの分化状態を特徴付けることが可能であり、従って、例えば、正常なヒト上皮について正常な分化であるか、又は病理の特性を示すか決定することが可能である。
【００５７】
本発明の方法に従って、前記上皮の角化細胞の２層の間に存在する表皮分化の差異、すなわち、表皮分化に関しこれらの２層に存在する差異を決定することが可能であり、したがって、前記上皮の別の層よりも分化した状態であるか、又は逆により増殖性の状態であるかどうかを定義することが可能である。
【００５８】
表皮分化の差異を評価するための発明の方法は、前記上皮中の角化細胞の２層間の、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの発現レベルを比較するための工程を含む。
【００５９】
実際に、上で定義する通り、本発明者は、高度に分化された角化細胞、及び未分化角化細胞中の本発明のｍｉＲＮＡと称されるこれらの１９個のｍｉＲＮＡ中に存在する発現レベルの主要な差異を明らかにしている。これらのｍｉＲＮＡの発現レベルの差異の研究は従って調査している上皮の角化細胞の別の層と比較して層の表皮分化のレベルの間に差異が存在することを意味する。
【００６０】
２層間の幾つかのｍｉＲＮＡの発現レベルの差異を確立することができるが、本発明のｍｉＲＮＡの少なくとも１個について、他方と比較して一方の層で有意な発現レベルの差異が存在するとすぐに、表皮分化の差異が明らかとなる。
【００６１】
本発明に従って、特に、他方と比較して一方の層におけるｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも１個のより大きな発現により、２層間の表皮分化の差異が特徴付けられる。前記の選択されたｍｉＲＮＡの発現の差異は、この差異が統計的観点から有意であるような桁数でなければならない。
【００６２】
好ましくは、選択されたｍｉＲＮＡの発現レベルの差異は、１．３倍又は、より好ましくは、１．５倍以上、又はさらに２倍以上である。
【００６３】
本発明の好ましい実施態様では、上皮の２層間の表皮分化の差異は、他方と比較して一方の層で、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから構成されるリストから選択される少なくとも２個の異なるｍｉＲＮＡの、好ましくは少なくとも３倍、又はさらに少なくとも５、又は８倍大きな発現、又はこのリストの１０個のｍｉＲＮＡの更に大きな発現によって特徴付けられる。他の層と比較した一方の層におけるｍｉＲＮＡの発現レベルの差異は、必ずしもリストのｍｉＲＮＡの全てについて同一の倍数ではない。
【００６４】
本方法に従って、２層間の表皮分化の差異は、他方と比較した一方の層におけるｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡのより大きな発現によってまた特徴づけられてもよい。再び、言及される発現レベルは、統計的観点から有意である差異を意味する。
【００６５】
好ましくは、選択されるｍｉＲＮＡの発現レベルの差異は、１．３倍以上、好ましくは１．５倍以上、更に好ましくは２倍以上である。
【００６６】
本発明の好ましい実施態様では、上皮の２層間の表皮分化の差異は、他方と比較して一方の層で、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから構成されるリストから選択される少なくとも２個の異なるｍｉＲＮＡの、好ましくは少なくとも３倍、又はさらに少なくとも５、又は８倍大きな発現、又はこのリストの９個のｍｉＲＮＡの更に大きな発現によって特徴付けられる。他の層と比較した一方の層におけるｍｉＲＮＡの発現レベルの差異は、必ずしもリストのｍｉＲＮＡの全てについて同一の倍数ではない。
【００６７】
本発明の文脈では、問題の皮膚又は表皮の上皮サンプルは、異なる供給源からのものであり得る；例えば、「再構築皮膚」型の再構築上皮のような培養下の上皮からのものか、又は、例えば、生検からのような、個体から得たサンプルからのものであり得る。前記サンプルは従ってヒト皮膚由来のものであり得る。
【００６８】
本発明のｍｉＲＮＡの少なくとも１個の発現レベルの比較は、調査している上皮サンプルの２層の間で実施され得る。ヒト皮膚のサンプルの場合、角化細胞の２個の対立した層、例えば、基底層の角化細胞と上皮の角質層の角化細胞の間で、好ましくは実施される。この点から、近年の研究は角質細胞がｍｉＲＮＡを産生又は含むことを示す。
【００６９】
発現レベルの比較は、例えば、分化の種々の段階をまた強調するために、非常に近接した場所のサンプルの２層の間でまた実施され得る。
【００７０】
本発明はまた上述の特性付け方法の種々の適用に関し、従って、特に、生理学的又は病理学的分化障害の診断ツールとして、表皮分化の欠損を訂正する標的として又は表皮分化モジュレータ剤を試験するためのスクリーニングツールとしての、本発明者によって強調されるｍｉＲＮＡシグネチャーの種々の使用に関する。
【００７１】
第二の態様では、本発明は、上皮で実施される治療効果の決定方法に関する。このような方法は、治療前後の、上皮の表皮分化のｍｉＲＮＡシグネチャーの比較を含む。このように、治療前後の、前記上皮の角化細胞中でｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの発現レベルの比較を含む。 
【００７２】
本発明者は、表皮で起きる表皮分化のプロセス中のこれらの１９個のｍｉＲＮＡの発現レベルの変化を実際に発見している。前記ｍｉＲＮＡの少なくとも１個のレベルの修正は、したがって、試験治療に応答する分化状態の修正を代表する。もう一度、発現レベルの修正は、統計的観点から有意であり、従って、十分かつ再生可能な強度であり、調査している上皮の代表的な角化細胞の相当数で観察されることを意味する。
【００７３】
その代わりに、本発明の文脈において上皮に適用される治療効果の決定方法は、また試験治療前後で、上皮の表皮分化の差異の比較を含み得る。従って、方法の変化に従って、治療前に上皮の２層間に存在する表皮分化の差異と得られた結果を治療後の同一の２層間に存在する表皮分化の差異と比較する。このように、この試験治療が、例えば、２層間の分化状態の差異を減少することにより、すなわち、２層間の本発明のｍｉＲＮＡの発現のレベルの差異を減少することによるか又は表皮分化の差異を減少することにより、２層間に存在する差異を修正するかしないか決定される。
【００７４】
この方法による試験治療は、任意の治療からなり得る。好ましくは、適用又は好ましくは皮下的な注射による分子の局所適用に関する。適用される分子は単純な化学成分又は異なる成分の組み合わせ又は会合であり得、有効成分、天然分子、タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、精油、天然抽出物からの化学成分、複合体製剤、ＤＮＡ分子、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ阻害剤、特にａｎｔａｇｏｍｉｒ等に関連し得る。
【００７５】
本発明の試験治療の文脈で特に好ましい特定の分子は、ＲＮＡ、特にｍｉＲＮＡ、又はｍｉＲＮＡ、又は特にａｎｔａｇｏｍｉｒのような天然ｍｉＲＮＡの発現を修正する分子である。
【００７６】
例えば、可視、ＵＶ、ＩＲ又はＸ線のような波長によらない電磁放射の適用にまた関する。本発明の治療はまた種々の機械的効果の適用を含む。
【００７７】
本発明の方法は、調査している上皮中で本発明のｍｉＲＮＡの少なくとも１個の発現レベルの修正を引き起こす場合に、効果的であると考慮される。好ましくは、前記治療は、上皮中の前記ｍｉＲＮＡの少なくとも２個又は更に少なくとも５個の発現レベルの修正を引き起こす場合に効果的であると考慮される。前記治療は本発明の少なくとも１０、１５個又は更に１９個のｍｉＲＮＡの発現レベルの修正を引き起こし得る。本発明のｍｉＲＮＡの発現レベルの補正は、必ずしもｍｉＲＮＡの全てについて同程度ではない。
【００７８】
好ましくは、本発明の文脈では、試験治療は、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの発現レベルの修正を、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの上とは逆方向の発現レベルの修正を伴って引き起こす場合に、効果的であると考慮され得る。このように、本発明の文脈における効果的な治療は、例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの発現レベルの増加と、同時にｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの発現レベルの減少をまた引き起こし得る。
【００７９】
本願の治療効果の決定方法を用いて、薬剤、特に美容製品、例えば、化粧品組成物の、皮膚の表皮分化の状態に対する作用に関して、有益作用の定量がまた可能になる。上記のインビトロ決定方法は、実際に皮膚の角化細胞の増殖又は分化の状態に対する効果を有する薬剤として定量され得る産物を決定するための試験プロトコルにおいて使用され得る。
【００８０】
更に、この試験を用いて、本発明に記載の決定方法を用いた製品を用いて得た結果を全面に出すことによって、消費者に製品を宣伝することが可能になる。表皮分化の状態に対する効果の評価は、本発明のｍｉＲＮＡの発現の研究に基づくであろう。このように、本発明はまた上記の決定方法によって構成される試験プロトコルにおける効果を示すことによって製品を勧めるために使用し得る方法を提供する。このように、本発明はまた上記の通り実施される少なくとも１個の試験によって示される前記製品の効果、作用又は性質の決定で構成される美容製品の促進のための方法に関する。
【００８１】
このような製品は、任意の伝達経路を用いて促進され得る。それは、販売場所によって直接販売係によって、又はラジオ及びテレビによって、特に宣伝の文脈で、実施され得る。それはまた印刷メディアを介して又は特に広報目的のための任意の他の書類（見本）によってなされる得る。インターネットを介してか、又は任意の他の適切なコンピュータネットワークを介してまた促進され得る。それはまた、製品、特に、容器又は付随し得る任意の他の説明書に直接なされ得る。
【００８２】
第３の態様では、本発明はまた表皮分化プロセスにおける作用について分子をスクリーニングするための種々の方法に関する。
【００８３】
特に、本発明は、スクリーニングされるモジュレータの適用前後で、前記上皮中の角化細胞の表皮分化の状態を評価することを含む、上皮中の表皮分化プロセスのモジュレータをスクリーニングするための方法に関する。
【００８４】
このようなスクリーニングプロセスは、例えば、培養下のサンプル又は上皮のサンプルで、インビボ、又はエクスビボ、又はインビトロで実施され得る。
【００８５】
前記上皮における角化細胞の表皮分化の状態の評価は、本発明の第１の態様に記載の方法の１つを用いて実施される。
【００８６】
上記の通り、ここで言及される上皮は、培養下の上皮、例えば、「再構築皮膚」型の再構築上皮、又は例えば生検の間のヒトから得られるサンプルであり得る。
【００８７】
その代わりに、本発明はまた、スクリーニングされるモジュレータの適用前後の、前記上皮の表皮分化の差異の評価を含む、上皮の表皮分化プロセスのモジュレータのスクリーニング方法に関する。
【００８８】
前記上皮の角化細胞の表皮分化の差異の評価は、本発明の第１の態様に記載の方法の１つを用いて実施される。
【００８９】
問題となっているモジュレータは、例えば、天然抽出物由来であるか又は合成される任意の化学成分であり得、それは、複合体製剤、ＤＮＡ分子、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又は例えば、ａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡ阻害剤であり得る。明らかに、このリストは包括的ではない。
【００９０】
その代わりに、モジュレータは、電磁放射、好ましくは、可視、ＵＶ、ＩＲ又はＸ照射を用いた計測システム、又は機械的効果を用いたシステムであり得る。
【００９１】
第４の態様では、本発明はまた本発明によって発見されるｍｉＲＮＡシグネチャーの使用による、表皮の状態を診断する方法に関する。このような診断方法は、基底層と角質層の間の前記表皮に存在する上皮分化の差異を決定し、基底層と角質層の間の同一の型の正常表皮中に存在する表皮分化の平均差異の比較を含む。
【００９２】
表皮分化の差異の決定は、好ましくは本発明の第１の態様に記載の種々の方法を用いて実施される。好ましくはそれは診断される皮膚の表皮のサンプル上で実施される。
【００９３】
同一型の正常表皮に存在する基底層と角質層の間の表皮分化の平均差異は、正常で、診断される表皮のものである、皮膚の同一の型を有する検体からの幾つかの表皮サンプルで実施される種々の測定の平均値に一致する。「同一型」なる用語は、同等の年齢、民族及び同一色を意味する。それは、表皮の病変又は障害がない「正常」又は「健康」な状態に対応する平均値である。
【００９４】
この診断方法によって、診断される皮膚のｍｉＲＮＡプロファイルが作成され、比較することにより、早期老化、紫外線老化又は太陽放射によって引き起こされる損傷、ストレスによって引き起こされる老化又は損傷、座瘡又は任意の他の生理学的又は病理学的疾患。
【００９５】
別の態様では、本願は前記角化細胞の表皮分化の状態を決定するためのヒト上皮のサンプル中の角化細胞中のｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡの少なくとも１個の発現のアッセイの使用にまた関する。
【００９６】
本発明者は、実際にこのアッセイが表皮分化のｍｉＲＮＡシグネチャーへの接近を提供する。
【００９７】
特に好ましい使用では、本発明の１９個のｍｉＲＮＡのうちの少なくとも２個、好ましくは、少なくとも５、８、１０、１２又は１５個の別のｍｉＲＮＡがアッセイされる。例えば、本発明の１９個のｍｉＲＮＡのアッセイを、試験される角化細胞の表皮分化の状態の決定のために使用し得る。
【００９８】
更に別の態様では、本願は、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡ、及び／又は前記ｍｉＲＮＡの発現の少なくとも１個のモジュレータ、及びより具体的にはａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡの阻害剤の種々の美容及び治療的使用に関する。
【００９９】
実際に、肌の表皮分化プロセスにおける前記ｍｉＲＮＡの重要性のために、角化細胞中のそれらのレベルの調節は、例えば、角質層更新プロセスを減速又は加速するために、それを減速することによるか、又は逆に加速することにより、表皮分化に影響を与え得る。角化細胞中での本発明のｍｉＲＮＡのレベルの調節は、より好ましくは、ｍｉＲＮＡの内在性の異常調節を校正するためにｍｉＲＮＡを使用することによって、特に角化細胞中の量を増加するために、本発明のｍｉＲＮＡの１つ又は別のものを導入することによって実施される。調節はまた、角化細胞中のレベルを低減するために本発明のｍｉＲＮＡの１個を標的化する、例えば、ａｎｔａｇｏｍｉｒのような、前記ｍｉＲＮＡのモジュレータを導入することによって、好ましくは、少なくとも１個のｍｉＲＮＡ阻害剤を導入することによって実施され得る。特に本発明の文脈で想定され得る他のｍｉＲＮＡ阻害剤は、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）及びＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１００】
好ましい実施態様では、本発明は本発明の１９個のｍｉＲＮＡから選択されるｍｉＲＮＡ、又は表皮分化プログラム皮膚病を治療するための治療的な使用のための、前記ｍｉＲＮＡを標的化する、前記ｍｉＲＮＡのモジュレータ、特にａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡ阻害剤に関連するに関する。関連する病理は、好ましくは表皮分化における異常を発生させる病理である。
【０１０１】
より具体的には、本発明の文脈において考慮される病理は、乾癬、アトピー性皮膚炎、座瘡、魚鱗癬、ネザートン症候群、毛孔性紅色粃糠疹、毛状角化症、ダリエー病、掌蹠角皮症及び汗孔角化症である。
【０１０２】
好ましくは、本発明は、上述の治療適用のための本発明の少なくとも２個、更に３個、好ましくは、少なくとも５、１０、１５又は等しく１９個のｍｉＲＮＡ、又はｍｉＲＮＡの阻害剤、特にこれらのｍｉＲＮＡの少なくとも幾つかのａｎｔａｇｏｍｉｒを含む組成物に関する。
【０１０３】
本発明の治療適用に関し、所望の治療効果が、治療される皮膚の表皮分化の状態の増加からなる場合、好ましい実施態様では、本発明は、治療における使用のための、好ましくは、表皮分化プログラムに関連する皮膚病を治療するための、特に、乾癬、アトピー性皮膚炎、座瘡、魚鱗癬、ネザートン症候群、毛孔性紅色粃糠疹、毛状角化症、ダリエー病、掌蹠角皮症及び汗孔角化症を治療するための、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡを含む組成物に関する。本発明はまた前記病理の治療における使用のための、上記のｍｉＲＮＡに加えて又はの代わりのｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡを標的化する、ａｎｔａｇｏｍｉｒのような、少なくとも１個のｍｉＲＮＡの阻害剤を含む組成物に関する。本発明の文脈においてより具体的に予想されるｍｉＲＮＡの他の阻害剤は、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）とＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１０４】
ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂからなるリストからの少なくとも２個のｍｉＲＮＡ、好ましくは少なくとも５、８又は等しく１０個のｍｉＲＮＡが選択され得る。
【０１０５】
最終分化の刺激を必要とする状況について、言及される治療適用についての組成物又は製品は従って：
少なくとも１個、好ましくは少なくとも２、３、５又は全てのｍｉＲＮＡ  ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、又はそれらの発現の増加を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータ；及び／又は場合によって、
ｍｉＲＮＡ  ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃの１つを標的化する、例えば、ａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡの阻害剤、又はそれらの発現の抑制を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータを含む。
【０１０６】
本発明の文脈で想定されるｍｉＲＮＡのより具体的な阻害剤は、ａｎｔａｇｏｍｉｒ、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）  マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）及びＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１０７】
対照的に、所望の治療効果が、別の実施で、例えば、表皮分化を遅延するためか、又は治療される皮膚の角化細胞の増殖能を促進するための場合、本発明は好ましくは表皮分化プログラムに関連する皮膚病を治療するため、特に、乾癬、アトピー性皮膚炎、座瘡、魚鱗癬、ネザートン症候群、毛孔性紅色粃糠疹、毛状角化症、ダリエー病、掌蹠角皮症及び汗孔角化症を治療するための治療的使用のための、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡを含む組成物に関する。本発明はまた引用されるｍｉＲＮＡに加えて又はその代わりに、例えば、ａｎｔａｇｏｍｉｒのような、前記病理の治療における使用のための、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択されるｍｉＲＮＡを標的化するｍｉＲＮＡの少なくとも１個の阻害剤を含む組成物に関する。
【０１０８】
ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃからなるリストからの少なくとも２個のｍｉＲＮＡ、好ましくは少なくとも４、７又は等しく９個のｍｉＲＮＡが選択され得る。
【０１０９】
最終分化の減少を必要とする状況について、言及される治療適用についての組成物又は製品は従って：
少なくとも１個、好ましくは少なくとも２、３、５又は全てのｍｉＲＮＡ  ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ、又はそれらの発現の増加を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータ；及び／又は場合によって、
ｍｉＲＮＡ  ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂの１つを標的化する、例えば、ａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡの阻害剤、又はそれらの発現の抑制を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータを含む。
【０１１０】
本発明の文脈でより具体的に想定されるｍｉＲＮＡの阻害剤は、ａｎｔａｇｏｍｉｒ、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）及びＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１１１】
好ましくは、治療的使用のための本発明に記載の組成物は、局所適用又は摂取のための薬学的に許容可能な担体と処方される。
【０１１２】
本発明はまたｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡ、又は前記ｍｉＲＮＡのモジュレータ、好ましくは、非病理的ヒト皮膚への化粧品適用のための、前記ｍｉＲＮＡの１個を標的化する、ａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡの阻害剤の使用を想定する。
【０１１３】
治療又は化粧品使用のための言及される種々の使用は、好ましくは、ｍｉＲＮＡ又は、前記ｍｉＲＮＡ、又は前記ｍｉＲＮＡの阻害剤、例えば、ａｎｔａｇｏｍｉｒを含む組成物を含むの組成物の局所適用を含む。その小さいサイズから、ｍｉＲＮＡとその阻害剤は、角化細胞の膜を通過し、処置される角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの質を量を修正することができる。更に、その物理化学的性質から、それらは、皮膚の深層に到達し得、従って表皮に対する作用を制限することはあり得ない。
【０１１４】
ｍｉＲＮＡとその阻害剤、特に、ａｎｔａｇｏｍｉｒの安定性は、その作用が一時的であることを示し、従って、本発明は治療される皮膚に対する更新された適用を含む治療又は化粧品における使用を想定する。
【０１１５】
この理由から、本発明は特にｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡ及び／又はこれらのｍｉＲＮＡの１個の発現のモジュレータ、好ましくは、例えば、これらのｍｉＲＮＡの１個を標的化するａｎｔａｇｏｍｉｒのようなｍｉＲＮＡの阻害剤の個体の皮膚への局所適用を含む生理学的、非病理学的美容状況における表皮分化に関連する疾患の治療方法を想定する。
【０１１６】
前記方法の好ましい態様に従って、ｍｉＲＮＡは、治療される皮膚の角化細胞の表皮分化の状態を増加するために、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択される。
【０１１７】
少なくとも２個のｍｉＲＮＡ、好ましくは少なくとも５、８又は等しく１０個のｍｉＲＮＡが、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２３及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂからなるリストから選択され得る。
【０１１８】
その代わりに又は更に、少なくとも１個、又は更に幾つかの１又は複数のｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択されるｍｉＲＮＡを標的化するｍｉＲＮＡの阻害剤が選択され得る。本発明の文脈でより具体的に想定されるｍｉＲＮＡの阻害剤は、ａｎｔａｇｏｍｉｒ、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）及びＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１１９】
対照的に、所望の効果が、別の態様に記載の、例えば、表皮分化を遅延するためか、又は治療される皮膚の角化細胞の増殖能を促進するための場合、本発明は前記ｍｉＲＮＡがｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される治療方法に関する。
【０１２０】
少なくとも２個のｍｉＲＮＡ、好ましくは少なくとも４、７又は等しく９個のｍｉＲＮＡが、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃからなるリストから選択され得る。
【０１２１】
その代わりに又は更に、少なくとも１個、又は更に幾つかの１又は複数のｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２３及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂから選択されるｍｉＲＮＡを標的化するｍｉＲＮＡの阻害剤が選択され得る。本発明の文脈でより具体的に想定されるｍｉＲＮＡの阻害剤は、ａｎｔａｇｏｍｉｒ、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）及びＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１２２】
美容状況の表皮分化の疾患は、年齢、皮膚日射病、瘢痕化、皮膚乾燥若しくは硬化、又は、特に剥離剤、落屑剤、又は脱脂剤による化学物質負荷、又は機械的負荷を含む生理学的状態に関連する。これらの疾患は、病理学的ではなく、その治療は治療的処置ではなく、単に化粧目的のための治療であると考慮され、このような疾患の治療は皮膚の見た目と個体の利便性を改善することを基本的に目的としている。
【０１２３】
より具体的には、年齢に関連する疾患は、生活年齢に関連する表皮分化の修正からなる。実際に、加齢の過程において、表皮は表皮分化プロセスと機能的な角質層の形成に影響を及ぼす多くの変化を行う。特定の観察は、より限られた数の基底上層の表皮の菲薄化とクローン化可能細胞、したがってまた表皮の回転数の減少を伴う増殖区画の減少である。若年の、正常皮膚においては観察されないケラチン１６と１７の発現を伴い、ケラチン発現プロファイルのような慣例的な分化マーカーは修正される。ケラチンＫ１とＫ１５並びにの網膜核層の主要成分の量は減少する。トランスグルタミナーゼ１の量は年齢に伴いまた減少する。障壁機能は、浸透性の増加と共に変化する。
【０１２４】
皮膚日射病に関連する疾患、又は「光老化」は、日光への慢性照射を伴う表皮分化における修正まで及ぶ。光老化皮膚は、特になめし革に似ている外見とより顕著な皺によって特徴付けられる；この皮膚はまたケラチンＫ６、Ｋ１６、Ｋ１７の過剰発現とフィラグリンとトランスグルタミナーゼの減少を伴って表皮レベルにおいてまた修正される。これらの変化は、皺の形成と関連している。角質層の形成に含まれるＳＰＲＲタンパク質は、またＵＶによって変化する。太陽への急性照射が障壁機能と上皮のホメオスタシスに影響する表皮の修正の結果になることがまた知られている。
【０１２５】
瘢痕化に関連する疾患は、瘢痕化と修復のプロセスを伴う表皮分化の修正に及ぶ。負傷後に起きる再上皮化の間、上皮タンパク質の全ての発現パターンを修正する。完全な修復は３つのフェーズ、初期移動フェーズ、次いで増殖フェーズ及び最終的には分化フェーズで起きる。増殖フェーズは創傷を含み、従って、正常な状態で、機能的な角質層を再生するために使用され得る、角化細胞の層化及び分化のプレイヤーを含む上皮の新規形態形成のプロセスに続く。
【０１２６】
乾燥又は乾燥症に関連する疾患は、原理的には、乾燥皮膚が、表皮の油脂含量の減少と角質層の変化によって基本的には特徴付けられるという事実に起因するものである。ケラチン１と１０は減少し、角化細胞Ｋ６とＫ１４は増加する。フィラグリンの発現レベルは、インボルクリンのように、不安定である。
【０１２７】
特に、剥離剤、落屑剤又は脱脂剤による、化学物質負荷と機械的負荷は、表皮ホメオスタシスに対する修正のための要因であり、角質層によって提供される障壁機能の変化を誘導する。正常な表皮分化のプロセスは、表皮のホメオスタシスと正常な障壁機能を再構築し得る。
【０１２８】
好ましくは局所的な、本発明の少なくとも１個、好ましくは少なくとも２個のｍｉＲＮＡ、又は前記ｍｉＲＮＡの特定の阻害剤の適用に際し、化粧品適用のための、種々の上述の非病理的疾患の治療が可能である。
【０１２９】
このように、本発明はまた皮膚の外見、その粒子、その輝度、その欠陥又はその微小起伏を訂正又は改善するための本発明のｍｉＲＮＡの１つの発現のための、本発明のｍｉＲＮＡの少なくとも１個を含むか又は実際に本発明のｍｉＲＮＡの１個の発現のための、少なくとも１個のモジュレータを含む化粧品組成物又は製品に関する。本発明のｍｉＲＮＡの１個の発現のモジュレータは、前記ｍｉＲＮＡの１個の発現の増加又は抑制を引き起こす有効成分である。ｍｉＲＮＡの１個の発現を調節する前記有効成分は、例えば、上述のスクリーニング方法によって同定されるか、又はそれは本発明のｍｉＲＮＡのａｎｔａｇｏｍｉｒである。
【０１３０】
問題となっている美容製品又は組成物は、任意の生薬形態であってもよく、例えば、局所投与のための、牛乳、クリーム、ゲル、スプレー又は石鹸に処方され得るか、又は経口で消化され得る形態であり得る。
【０１３１】
特に、それは種々の活性成分の組み合わせ、例えば、本発明の少なくとも２個のｍｉＲＮＡ、又は本発明のｍｉＲＮＡと本発明のｍｉＲＮＡのモジュレータ、又は本発明の２個のｍｉＲＮＡモジュレータの組み合わせであり得る。それはまた活性成分と機器、特に、機械的、光、又は電気又は電磁気的処理型の機械の組み合わせであり得る。
【０１３２】
本発明は特に、分化の障害と老化皮膚の皮革様外観に関連する表面欠陥を減少するための「老化防止」製品として知られている美容製品を想定する。本発明のｍｉＲＮＡ又は前記ｍｉＲＮＡのモジュレータによる、増殖と上皮分化のバランスの修正によって幾らかの品質を修復するために、太陽に暴露される老化皮膚のための特定の美容製品がまた想定される。
【０１３３】
日光への急性照射によって誘導される分化の修正を相殺するための美容アフターサン製品にまた関する。表皮分化と角化細胞落屑を刺激することによる着色障害の制御が可能な製品は、着色障害の原因となる過剰メラニンをより速やかに除去するためにまた想定される。
【０１３４】
他の美容製品はまた、加湿効果を有し、また表皮分化の最終工程を調節する、乾燥肌のために特別に製造された製品である。瘢痕の皮膚修復過程の改善のための修復製品がまた本発明の文脈で想定される。特定の手順（剥離後、レーザー後等）の文脈又は汚染、家庭用品等のような、日常における、惹起皮膚のための製品を処方することがまた可能である。
【０１３５】
障壁機能と角質層を増加するための、最終分化の刺激を必要とする状況において、本発明の意味における化粧品組成物又は製品は：
少なくとも１個、好ましくは少なくとも２、３、５又は全てのｍｉＲＮＡ  ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、又はそれらの発現の増加を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータ；及び／又は場合によって、
ｍｉＲＮＡ  ｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃの阻害剤、又はそれらの発現の抑制を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータを含む。本発明の文脈でより具体的に想定されるｍｉＲＮＡの阻害剤は、ａｎｔａｇｏｍｉｒ、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）及びＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１３６】
最終分化の減少と角質層の形成を減少を必要とする状況において、本発明の意味における化粧品組成物又は製品は：
少なくとも１個、好ましくは少なくとも２、３、５又は全てのｍｉＲＮＡ  ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ、又はそれらの発現の増加を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータ；及び／又は場合によって、
ｍｉＲＮＡ  ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５及びｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂの阻害剤、又はそれらの発現の抑制を引き起こすこれらのｍｉＲＮＡのモジュレータを含む。本発明の文脈でより具体的に想定されるｍｉＲＮＡの阻害剤は、ａｎｔａｇｏｍｉｒ、ｍｉＲＣＵＲＹ  ＬＮＡ（商標）マイクロＲＮＡノックダウンプローブ（Ｅｘｉｑｏｎ）及びＱｉａｇｅｎのｍｉＳｃｒｉｐｔ  ｍｉＲＮＡ阻害剤である。
【０１３７】
本発明はまたｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃから選択される少なくとも１個のｍｉＲＮＡの発現をアッセイするための手段と前記ｍｉＲＮＡの参照レベルを提供する情報を含む、ヒト角化細胞の分化状態を決定するためのキットに関する。
【０１３８】
本発明の文脈における特に好ましいキットは、参照レベルが培養下の非分化角化細胞における前記ｍｉＲＮＡの発現の平均レベルである。
【０１３９】
その代わりに、本発明に記載のキットは、分化表皮角化細胞中の前記ｍｉＲＮＡの発現の平均レベルに対応する参照レベルで使用され得る。
【０１４０】
本発明の一又は他の態様についてより具体的に記載される種々の好ましい実施はまた本発明の他の態様に適用される。特に、本発明の方法、プロセス、キット、組成物及び使用によって記載される通り、それは常に本発明の１９個のｍｉＲＮＡのリストから選択される少なくとも２個のｍｉＲＮＡ、好ましくは、少なくとも３、５、９、１０、１５又は更に１９個の本発明のｍｉＲＮＡ、即ち、ｈｓａ−ｍｉＲ−４５５−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４８ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２４、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２６ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ｂ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２１、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２２、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６６３、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ａ及びｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃの発現レベルを決定することが好ましい。
【実施例】
【０１４１】
材料と方法
ヒト角化細胞の単一層培養
正常ヒト表皮角化細胞は乳房形成に由来し、マイトマイシン処理したスイス３Ｔ３繊維芽細胞の栄養層で、Rheinwald及びGreenの方法を用いて慣例的に培養した。
【０１４２】
再構築皮膚
角質層と生存等量真皮を伴う層化分化表皮を含むインビトロで再構築した皮膚は、正常ヒト角化細胞と正常ヒト皮膚繊維芽細胞と共に産生された。
【０１４３】
簡潔には、同等の真皮はウシコラーゲンＩと１００万個のヒト皮膚繊維芽細胞と共に産生された。正常の角化細胞を、５０００００個の角化細胞の量で、格子の縮小後に播き、慣用的な培地で７日間培養した。培養物を次いで出現フェーズのスクリーン上に搭載した（気相液相界面、７日間）。
【０１４４】
この期間の終点で、皮膚の形態は、正常のヒト皮膚に非常に類似していた。次いでそれを毛管上昇によって培養した皮膚下の培地を維持しながら種々の実験のために使用し得る。
【０１４５】
角化細胞からの全ＲＮＡの抽出
細胞分解：
単一層培養における角化細胞は、ＴｒｉＲｅａｇｅｎｔバッファーにおける培養皿において分解された。
再構築皮膚からの再構築表皮は、ピンセットを用いて同等の上皮から分離された。この表皮はＴｒｉＲｅａｇｅｎｔ分解バッファーにおけるガラスホモジナイザーにおいて手動で砕いた。
【０１４６】
全ＲＮＡの抽出
全ＲＮＡをグアニジンイソチオシアネート溶液ついでフェノール／クロロホルム混合物を用いた抽出の慣例的な技術を用いて抽出した。
【０１４７】
μＰａｒａｆｌｏ（商標）「ＭｉＲＨｕｍａｎ１０．０」チップ上のｍｉＲＮＡハイブリダイゼーション
短鎖ＲＮＡを全ＲＮＡ（マイクロコンフィルター、ミリポア）から抽出し、ポリＡ末端を有する３’末端で延長した。蛍光ラベル化オリゴヌクレオチドを、ポリＡ末端に付着させた。短鎖ラベル化ＲＮＡを次いでμＰａｒａｆｌｏ（商標）「ＭｉＲＨｕｍａｎ１０．０」チップ（Ａｔａｃｔｉｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  ＬＣ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でハイブリダイズさせた。それらは、ｍｉＲＢａｓｅ１０．０（７１１個の成熟ｍｉＲＮＡ）において記録されるヒトｍｉＲＮＡの全ての相補的な配列を含んでいた。配列は、チップ上で５回沈着させた。蛍光を定量し、シグナルを正規化した。蛍光の量はサンプル中の各ｍｉＲＮＡの発現レベルを反映していた。
【０１４８】
統計的解析
各ｍｉＲＮＡの発現は、スチューデントのｔ検定（ｐ＜０．０５）を用いて、「培養角化細胞」サンプルと「再構築表皮角化細胞」の間で統計的に比較した。
【０１４９】
実施例１：非分化単層培養角化細胞と比較した分化再構築表皮角化細胞における過剰発現した１０個のｍｉＲＮＡのリスト
【０１５０】
乳房形成のヒト原発性正常ヒト角化細胞の３個の株を試験（ＰＨ２０２、ＰＨ６４及びＰＨ６３）において使用した。単層培養角化細胞、即ち、非分化角化細胞（２Ｄ）、同時に３個の角化細胞（３Ｄ）を伴う再構築表皮サンプルにおける全ての既知のヒトｍｉＲＮＡの発現を定量した。
【０１５１】
各ｍｉＲＮＡの発現を、確立ｐを提供するスチューデントのｔ検定を用いて培養下の「角化細胞」と「再構築表皮角化細胞」サンプルの間で統計的に比較した。表１で引用される各ｍｉＲＮＡは、試験される各細胞株について、非分化角化細胞と比較した表皮における統計的により大きなレベル（ｐ＜０．０５）を有した。発現比３Ｄ／２Ｄを各株について得た。例えば、ｍｉＲ−１４１は、平均して単層培養角化細胞よりも再構築表皮の角化細胞において２．３倍より豊富であった。
【０１５２】
0005830465.tif 000002
表１：単層培養（２Ｄ）、すなわち、非分化の角化細胞と比較した再構築表皮（３Ｄ）、すなわち、分化した角化細胞中で過剰発現したｍｉＲＮＡ。
【０１５３】
実施例２：分化再構築表皮角化細胞と比較した単層培養における非分化角化細胞中で過剰発現した９個のｍｉＲＮＡのリスト。
【０１５４】
乳房形成の原発性正常ヒト角化細胞の３個の株を、本研究に使用した（ＰＨ２０２、ＰＨ６４及びＰＨ６３）。既知のｍｉＲＮＡの全ての発現を、単層として培養した角化細胞、すなわち、非分化角化細胞中及び同時にこれらの同一の角化細胞を伴う再構築表皮で定量した。各ｍｉＲＮＡの発現は、確率ｐを生成するスチューデントのｔ検定を用いて「培養角化細胞」サンプルと「再構築表皮角化細胞」サンプルの間で統計的に比較した。この表で引用した各ｍｉＲＮＡは、調査した各細胞株について、再構築表皮角化細胞と比較して非分化角化細胞中で統計的により大きなレベルを有した（ｐ＜０．０５）。発現比２Ｄ／３Ｄを各株について得た。例として、ｍｉＲ−２９ｂは、平均して、再構築表皮角化細胞中よりも単層培養角化細胞において、６．７倍より豊富であった。
【０１５５】
0005830465.tif 000003
表２：再構築表皮（３Ｄ）、即ち、分化角化細胞と比較した単層培養（２Ｄ）、即ち、非分化において過剰発現しているｍｉＲＮＡ。
【０１５６】
実施例３：ｍｉＲＮＡを検出する方法。
ノザンブロット
この慣例的な技術は定性的及び定量的である。それは、１つの実験の間に幾つかのｍｉＲＮＡを解析することができる。この方法は、５から５０μｇの全ＲＮＡの使用を要する。
【０１５７】
ＲＴ  Ｑ−ＰＣＲ
この方法は、ｍｉＲＮＡの前駆体を調査することができ、成熟ｍｉＲＮＡを調査するために適用されている。それは商業的な方法であり（アプライド  バイオシステムズ  タックマン  マイクロＲＮＡ  アッセイ）幾つかの文献で記述されている［２３］。
【０１５８】
ｍｉＲＮＡマイクロアッセイ
この方法は、慣例的なｍＲＮＡのマイクロアレイのもののように、サンプルのｍｉＲＮＡの相補的なｃＤＮＡの蛍光ラベル、及び既知のｍｉＲＮＡ配列が置かれているスライド上のこれらのラベル化したｃＤＮＡのハイブリダイゼーションに基づく［２５］。
【０１５９】
幾つかの著者によれば、ｍｉＲＢａｓｅ由来のｍｉＲＮＡの新規の配列を規則的に統合する場合、このｍｉＲＮＡマイクロアレイ技術は、ｍｉＲＮＡの全体の発現プロファイルの解析のための選択肢となる方法であるはずである。
【０１６０】
更に、本発明としての幾つかの状況において、ｍｉＲＮＡの発現プロファイルは、メッセンジャーＲＮＡの発現プロファイルよりも有益である。
【０１６１】
ｍｉＲＮＡのインサイツハイブリダイゼーション
この技術は、慣例的な結合方法を使用することで、短鎖ＲＮＡが長鎖ＲＮＡより拡散し、ハイブリダイゼーションと洗浄過程において紛失するため、慣例的なｍＲＮＡのインサイツハイブリダイゼーションよりも困難である。この問題を克服するために技術は開発されており；更に、ｍｉＲＮＡプローブは、商業的に利用可能である（Ｅｘｉｑｏｎ、デンマーク）［２７］。
【０１６２】
ｍｉＲＮＡレポーター導入遺伝子
この技術では、ＧＦＰ又はＬａｃＺレポーター遺伝子は、ｍｉＲＮＡの相補的な３’ＵＴＲ部分を含むプロモーターのコントロール下に置かれた。
【０１６３】
参考文献
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