(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化５】
0005779106.tif 000019
であって、ここでＡは、リジンまたはアルギニンの共役酸を表し；ＸおよびＹは、独立して、塩素または臭素を表す、化合物。
【請求項２】
前記Ａは、リジンであり、ＸおよびＹは、塩素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａは、ＢＨ＋を表し、Ｂは、リジンおよびアルギニンから選択されるアミンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｂはリジンである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項６】
前記組成物は、ヒト被験体への投与のために処方された液剤を含む、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記液剤は、０．１ｍｇ／ｍｌ〜２５０ｍｇ／ｍｌの前記化合物を含む、請求項６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記液剤は、２０〜１００ｍｇ／ｍｌの前記化合物を含む、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記組成物は、投与単位あたり２００ｍｇ〜１５００ｍｇの前記化合物を含む、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
４−ヒドロペルオキシイホスファミドアニオンおよびリジンの共役酸を含む、錯体。
【請求項１１】
請求項１０に記載の錯体および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、４−ヒドロペルオキシイホスファミドの１当量あたり、少なくとも２当量のリジンを含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記組成物は、治療上有効量の前記化合物を含む、腫瘍を有する被験体を処置することにおいて使用するための、請求項５〜９、１１または１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記被験体は、中枢神経系腫瘍、乳癌、骨癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌もしくは白血病を有する、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記化合物が、１０ｍｇ／ｍ２／日〜７００ｍｇ／ｍ２／日で前記被験体へ投与されることを特徴とする、請求項１３または１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
治療上有効な量の第２の化合物と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記第２の化合物は、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレーターもしくは架橋剤、ＤＮＡ合成インヒビター、ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ転写インヒビター、酵素インヒビター、遺伝子調節因子、酵素、抗体および脈管形成インヒビターから選択される、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、治療上有効な量の第３の化合物と組み合わせて投与されることを特徴とし、ここで該第３の化合物は、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレーターもしくは架橋剤、ＤＮＡ合成インヒビター、ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ転写インヒビター、酵素インヒビター、遺伝子調節因子、酵素、抗体および脈管形成インヒビターから選択される、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記中枢神経系腫瘍は、神経膠芽腫、星状細胞腫、希突起神経膠腫、もしくは上衣芽細胞腫を含む、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記中枢神経系腫瘍は、原発性脳腫瘍もしくは転移性脳腫瘍を含む、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物を含む凍結乾燥物。
【請求項２２】
ＸおよびＹはクロリドである、請求項２１に記載の凍結乾燥物。
【請求項２３】
前記Ａはリジンである、請求項２１に記載の凍結乾燥物。
【請求項２４】
賦形剤をさらに含む、請求項２１に記載の凍結乾燥物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
これは、２００９年２月２４日に出願された米国仮出願第６１／１５５，０７２号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
（分野）
この開示は、４−ヒドロペルオキシイホスファミドの錯体に関する。過増殖性障害を処置するための、薬学的組成物、およびこのような薬学的組成物を使用する方法も開示される。
【０００３】
（政府支援の謝辞）
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ助成金番号ＣＡ９４５６６の下、政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００４】
（背景）
シクロホスファミド（ＣＰＡ）は、癌の臨床的処置におけるアルキル化剤のなかで最も広く使用されている薬剤である。２種のコンジナーである、イホスファミド（ＩＦＯＳ，Ｈｏｌｏｘａｎ（登録商標））およびトロホスファミド（Ｔｒｏｆｏｓ，Ｉｘｏｔｅｎ（登録商標））はまた、臨床的に使用中である。ＣＰＡは、リンパ腫および乳癌の臨床的処置においてなお有利である一方で、ＩＦＯＳは、精巣癌および軟組織肉腫の臨床的処置において有効であり、ＩＣＥ（ＩＦＯＳ、カルボプラチン、エトポシド）レジメンにおいて乳癌の臨床的処置においても使用されている。ＣＰＡ耐性乳癌を有する患者は、ドキソルビシン−イソホスホルアミドマスタード（ＩＰＭ）ベースの処置に応答した。このことは、ＣＰＡとＩＰＭとの間に存在する交叉耐性のいくらかが欠如しているという可能性が存在し得ることを示す。さらに、肉腫、リンパ腫および小細胞肺癌の処置のためのＩＦＯＳでの臨床試験は、ＣＰＡとの交叉耐性の明らかな欠如を示した。
【０００５】
ＩＦＯＳは、肝臓ミクロソームによって開始される活性化経路によって、４−ＨＯ−ＩＦＯＳへと変換される。これは、オキサザホスホリン環の開環を自発的に受けて、アルド−ＩＦＯＳを生じ、これは、続いて、アクロレインを自発的に、そして／またはおそらく血清アルブミン触媒作用を介して除去し、活性な代謝産物であるＩＰＭを生成する。ＩＦＯＳは、特に、その代謝的脱クロロエチル化してクロロアセトアルデヒドを生成することにおいて、ＣＰＡとは異なる。ＣＰＡは、最小限のクロロアセトアルデヒドを生成する。アクロレインは、ＩＦＯＳおよびＣＰＡの両方で示された用量制限毒性（出血性膀胱炎および二次性腫瘍促進）に関連した。
【０００６】
上記ＩＦＯＳ（４−ヒドロペルオキシ  ＩＦＯＳ；４−ＨＯＯＩ）の４−ヒドロペルオキシドは、４−ヒドロキシル−ＩＦＯＳの予備活性化（ｐｒｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ）形態であり、ＩＦＯＳの初期肝臓代謝産物である。不運なことに、４−ＨＯＯＩは、不安定すぎて製造できず、かつヒト処置に使用できない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
本開示は、安定でありかつ処置に（例えば、哺乳動物被験体に）利用できる４−ＨＯＯＩの錯体を提供する。ＩＦＯＳとは異なって、４−ＨＯＯＩは、肝臓ミクロソーム活性化を必要とせず、癌細胞によって容易に吸収され、ＩＰＭおよびアクロレインをその場で放出し、全身循環中には放出されない。結果として、４−ＨＯＯＩは、ＩＦＯＳおよびＣＰＡと比較した場合、顕著な抗腫瘍活性と、低下した毒性を提供する。
【０００８】
本明細書で開示されるのは、以下の式：
【０００９】
【化１】
0005779106.tif 000002
の化合物であり、ここでＡは、塩基性アミノ酸、四級アンモニウム、脂肪族アンモニウム、複素環式アンモニウム、芳香族アンモニウム、置換型および非置換型のピリジニウム、グアニジニウム、およびアミジニウムの共役酸から選択されるアンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、独立して、脱離基を表す。特定の例において、上記錯体は、塩基性アミノ酸（例えば、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、もしくはこれらのうちの２種以上の組み合わせ）の共役酸を含む。１つの具体例において、上記錯体は、リジンの共役酸を含む。
【００１０】
一実施形態において、上記化合物のうちの１種以上を含む薬学的組成物が、開示される。いくつかの例において、上記組成物は、組み合わせ治療における使用について上記式によって記載されるものとは異なる１種以上の治療剤を含み得る。
【００１１】
上記開示される４−ＨＯＯＩ錯体を含む、凍結乾燥物および凍結乾燥物を生成するための方法もまた、本明細書で開示される。特定の実施形態において、上記方法は、４−ＨＯＯＩおよびアミン（例えば、リジンもしくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ））と、水とを接触させる工程、および得られた混合物を凍結乾燥する工程を包含する。特定の実施形態において、上記混合物および得られた凍結乾燥物は、賦形剤（例えば、マンニトール、無水ラクトース、スクロース、Ｄ（＋）−トレハロース、デキストラン  ４０もしくはポピドン（ＰＶＰ  Ｋ２４））を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、開示される４−ＨＯＯＩ錯体を使用して、過増殖性障害を有する哺乳動物被験体（例えば、ヒト被験体）を処置するための方法が開示される。いくつかの例において、上記過増殖性障害としては、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍（例えば、原発性もしくは転移性の脳腫瘍）（例えば、膠芽腫、星状細胞腫、もしくは上衣芽細胞腫）が挙げられる。他の例において、上記過増殖性障害は、乳癌、肺癌、卵巣癌、骨肉腫、もしくは白血病を含む。このような方法は、上記化合物のうちの１種以上、および上記の組成物を使用し得る。
【００１３】
驚くべきことに、４−ＨＯＯＩが、血液脳関門を効率的に通過しかつ通常の脳組織中で蓄積することなくＣＮＳ腫瘍中で濃縮することが分かった。４−ＨＯＯＩ（本明細書で開示される錯体を含む）がこのような腫瘍中で選択的に濃縮する驚くべき能力は、実質的に、正常組織が損傷を受けないようにすると同時に、標的組織中での薬物の高濃縮を達成し得る脳腫瘍および他のＣＮＳ腫瘍のための処置を提供する。この有利な治療指数は、別の方法で、選択性のより低い薬剤を用いて可能であるよりも高い使用されるべき薬物の用量を可能にする。
【００１４】
前述のおよび他の特徴は、添付の図面を参照しながら進められる以下の詳細な説明から寄り明らかになる。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
以下の式の化合物：
【化５】
0005779106.tif 000003
であって、ここでＡは、リジン、アルギニン、ヒスチジン、ホモリジン、ホモアルギニン、およびオルニチンから選択される塩基性アミノ酸；四級アンモニウム；脂肪族アンモニウム；複素環式アンモニウム；芳香族アンモニウム；置換型および非置換型のピリジニウム；グアニジニウム；ならびにアミジニウムの共役酸から選択されるアンモニウム種を表し；ＸおよびＹは、独立して、脱離基を表す、化合物。
（項目２）
Ａは、塩基性アミノ酸の共役酸である、項目１に記載の化合物。
（項目３）
上記塩基性アミノ酸は、リジンである、項目２に記載の化合物。
（項目４）
Ａは、ＢＨ＋を表し、Ｂは、塩基性アミノ酸、シクロヘキシルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロノナン、ジアザビシクロウンデセン、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、モノ−、ビス−もしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンから選択されるアミンである、項目１に記載の化合物。
（項目５）
Ｂは、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、およびこれらのうちの２種以上の組み合わせから選択される塩基性アミノ酸である、項目４に記載の化合物。
（項目６）
Ｂはリジンである、項目５に記載の化合物。
（項目７）
ＸおよびＹは、ハロゲンおよびスルホネートから独立して選択される、項目１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
（項目８）
ＸおよびＹは、ハロゲンである、項目７に記載の化合物。
（項目９）
ＸおよびＹは塩素である、項目８に記載の化合物。
（項目１０）
項目１〜９のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
（項目１１）
上記塩基性アミノ酸は、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、およびこれらのうちの２種以上の組み合わせから選択される、項目１０に記載の薬学的組成物。
（項目１２）
上記塩基性アミノ酸はリジンである、項目１１に記載の薬学的組成物。
（項目１３）
ＸおよびＹは、ハロゲンおよびスルホネートから独立して選択される、項目１２に記載の薬学的組成物。
（項目１４）
ＸおよびＹは、ハロゲンである、項目１３に記載の薬学的組成物。
（項目１５）
ＸおよびＹは、塩素である、項目１４に記載の薬学的組成物。
（項目１６）
上記組成物は、ヒト被験体への投与のために処方された液剤を含む、項目１０に記載の薬学的組成物。
（項目１７）
上記液剤は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの上記化合物を含む、項目１６に記載の薬学的組成物。
（項目１８）
上記液剤は、約２０〜約１００ｍｇ／ｍｌの上記化合物を含む、項目１７に記載の薬学的組成物。
（項目１９）
上記組成物は、投与単位あたり約２００ｍｇ〜約１５００ｍｇの上記化合物を含む、項目１７に記載の薬学的組成物。
（項目２０）
４−ヒドロペルオキシイホスファミドアニオンおよびアンモニウムカチオンを含む、錯体。
（項目２１）
第２のアミンもしくはアンモニウムカチオンをさらに含む、項目２０に記載の錯体。
（項目２２）
上記アンモニウムカチオンは、リジンもしくはトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミンの共役酸である、項目２１に記載の錯体。
（項目２３）
項目２０〜２２のいずれか１項に記載の錯体および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
（項目２４）
上記組成物は、４−ヒドロペルオキシイホスファミドの１当量あたり、少なくとも２当量のアミン塩基を含む、項目２３に記載の薬学的組成物。
（項目２５）
上記組成物は、治療上有効量の上記化合物を含む、腫瘍を有する被験体を処置することにおいて使用するための、項目１０に記載の薬学的組成物。
（項目２６）
上記被験体は、中枢神経系腫瘍、乳癌、骨癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌もしくは白血病を有する、項目２５に記載の使用。
（項目２７）
約１０ｍｇ／ｍ２／日〜約７００ｍｇ／ｍ２／日の上記化合物を上記被験体へ投与することを包含する、項目２５または２６に記載の使用。
（項目２８）
治療上有効な量の第２の化合物を上記被験体に投与することをさらに含む、項目２７に記載の使用。
（項目２９）
上記第２の化合物は、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレーターもしくは架橋剤、ＤＮＡ合成インヒビター、ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ転写インヒビター、酵素インヒビター、遺伝子調節因子、酵素、抗体および脈管形成インヒビターから選択される、項目２８に記載の使用。
（項目３０）
治療上有効な量の第３の化合物を上記被験体に投与することをさらに包含し、ここで該第３の化合物は、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレーターもしくは架橋剤、ＤＮＡ合成インヒビター、ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ転写インヒビター、酵素インヒビター、遺伝子調節因子、酵素、抗体および脈管形成インヒビターから選択される、項目２８に記載の使用。
（項目３１）
上記中枢神経系腫瘍は、神経膠芽腫、星状細胞腫、希突起神経膠腫、もしくは上衣芽細胞腫を含む、項目２６に記載の使用。
（項目３２）
上記中枢神経系腫瘍は、原発性脳腫瘍もしくは転移性脳腫瘍を含む、項目３１に記載の使用。
（項目３３）
以下の式の構造：
【化６】
0005779106.tif 000004
を有する、４−ヒドロペルオキシイホスファミドを含む凍結乾燥物であって、ここでＡは、塩基性アミノ酸、四級アンモニウム、脂肪族アンモニウム、複素環式アンモニウム、芳香族アンモニウム、置換型および非置換型のピリジニウム、グアニジニウム、およびアミジニウムの共役酸から選択されるアンモニウム種を表し；そしてＸおよびＹは、独立して脱離基を表す、凍結乾燥物。
（項目３４）
ＸおよびＹはクロリドである、項目３３に記載の凍結乾燥物。
（項目３５）
上記塩基性アミノ酸はリジンである、項目３２に記載の凍結乾燥物。
（項目３６）
賦形剤をさらに含む、項目３３に記載の凍結乾燥物。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、４−ＨＯＯＩの合成を示す模式図である。
【図２】図２は、水中でのＬ−リジン（上）、４−ＨＯＯＩ（中）、およびＬ−リジン・４−ＨＯＯＩ  ２：１（下）の、一連の１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）である。
【図３】図３は、４−ＨＯＯＩ・リジン錯体の一対の提唱される構造である。上は、１：１  ４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ錯体の提唱される構造であり；下は、１：２  ４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ錯体の提唱される構造である。
【図４】図４は、３０ｍｇ／ｋｇ  ４−ＨＯＯＩを静脈内投与したイヌについてのバイオアベイラビリティー曲線である。血漿４−ＨＯＯＩを、ＧＣ／ＭＳによってアッセイした。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（詳細な説明）
（Ｉ．略語）
４−ＨＯＯＩ：    ４−ヒドロペルオキシイホスファミド
ＡＣＲ：    アクロレイン
ＣＡＡ：    クロロアセトアルデヒド
ＣＰＡ：    シクロホスファミド
ＤＬＴ：    用量制限毒性
ＩＦＯＳ：    イホスファミド
ＩＰＭ：    イソホスホルアミドマスタード
ＬＴＳ：    長期生存
ＭＴＤ：    最大耐用量
（ＩＩ．用語）
別段示されなければ、技術用語は、従来の用法に従って使用される。以下の用語および方法の説明は、本開示をよりよく記載しかつ本開示を実施する当業者を導くために提供される。単数形「１つの、ある（ａ）」、「１つの、ある（ａｎ）」、および「この、その、上記（ｔｈｅ）」とは、別段文脈が別のことを明らかに指さなければ、１もしくは１より多い、に言及し得る。例えば、用語「細胞を含む」とは、単数の細胞もしくは複数の細胞を含み、語句「少なくとも１個の細胞を含む」に等価とみなされる。用語「もしくは、または、あるいは（ｏｒ）」は、別段文脈が別のことを明らかに示さなければ、示された二者択一の要素のうちの１つの要素、もしくは２つ以上の要素の組み合わせに言及する。本明細書で使用される場合、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」を意味する。従って、「ＡもしくはＢを含む」とは、さらなる要素を排除することなく、「Ａ、Ｂ、もしくはＡとＢを含む」を意味する。
【００１７】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、全ての目的のためのそれらの全体が参考として援用される。矛盾する場合、本明細書（用語の説明を含む）が優先する。本明細書に記載されるものに類似するもしくは等価な方法および材料が、開示される技術を実施もしくは試験するために使用され得るが、適切な方法および材料が、以下に記載される。上記材料、方法および実施例は、例示に過ぎず、限定するとは意図されない。
【００１８】
本開示の種々の実施形態の検討を容易にするために、特定の用語の以下の説明が、提供される：
４−ヒドロペルオキシイホスファミド（４−ＨＯＯＩ）：  以下の構造：
【００１９】
【化２】
0005779106.tif 000005
を有する化合物であって、ここでＸおよびＹは、独立して、脱離基（例えば、ハロゲンもしくはスルホネート）を表す。いくつかの例において、ＸおよびＹは、各々Ｃｌである。４−ＨＯＯＩは、４−ヒドロキシル−ＩＦＯＳの予備活性化形態であり、これは、ＩＦＯＳの初期肝臓代謝産物である。
【００２０】
脂肪族アミン：  式ＮＲ１Ｒ２Ｒ３の化合物であって、ここでＲ１〜３のうちの少なくとも１個は、脂肪族基であるもの。用語「非環式脂肪族アミン」とは、脂肪族アミンであって、ここで上記脂肪族基のうちの少なくとも１個が非環式であるものをいう。用語「複素環式アミン」とは、式ＮＲ１Ｒ２Ｒ３の化合物であって、ここでＲ１〜３のうちの少なくとも１個が、複素環式基であるか、またはＲ１、Ｒ２および／もしくはＲ３がそれらの共有する窒素原子と一緒になって、環を形成するものをいう。
【００２１】
アミノ酸：    天然アミノ酸および非天然アミノ酸（α−アミノ酸（キラルアミノ酸については、Ｄ立体異性体およびＬ立体異性体において）を含む）の両方をいう。塩基性アミノ酸残基の例としては、塩基性側鎖（例えば、アミノ基もしくはグアニジノ基）を有するものが挙げられる。塩基性アミノ酸残基としては、アルギニン、ヒスチジン、ホモアルギニン、リジン、ホモリジン、およびオルニチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
過増殖性障害：    制御されない、異常な細胞の増殖、局所的に拡がるかまたは血流およびリンパ系を通じて他の身体部分へ拡がる（例えば、転移する）罹患した細胞の能力、ならびに多くの特徴的な構造および／もしくは分子的特徴のうちのいずれかによって特徴付けられる多くの疾患のうちのいずれか。いくつかの例において、過増殖性障害は、腫瘍（例えば、良性腫瘍もしくは悪性腫瘍）を含む。
【００２３】
薬学的に受容可能なキャリア：    本開示において有用な薬学的に受容可能なキャリア（ビヒクル）は、従来どおりである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９５））は、１種以上の治療剤（例えば、開示される４−ＨＯＯＩ錯体のうちの１種以上）の薬学的送達に適した組成物および処方物を記載する。
【００２４】
一般に、上記キャリアの性質は、使用される特定の投与様式に依存する。例えば、非経口用処方物は、ビヒクルとしての薬学的にかつ生理学的に受容可能な流体（例えば、水、生理食塩水、平衡化塩類溶液、デキストロース水溶液、グリセロールなど）を含む注射用液体を含み得る。生物学的に中性なキャリアに加えて、投与されるべき薬学的組成物は、少量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤、およびＰＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸ナトリウムもしくはソルビタンモノラウレート、乳酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、およびトリエタノールアミンオレエート））を含み得る。
【００２５】
被験体：    生きている多細胞脊椎生物（ヒトおよび非ヒト哺乳動物を含むカテゴリー）。
【００２６】
治療上有効な量：    疾患の進行を予防するか、疾患の進行を遅らせるか、または疾患の退縮を引き起こすに十分である用量、または上記疾患（例えば、癌（例えば、中枢神経系の癌））によって引き起こされる症状を軽減し得る用量。
【００２７】
腫瘍：    悪性もしくは非悪性（良性）のいずれであってもよい、新生物。同じ組織タイプの腫瘍は、特定の器官（例えば、脳、乳房、肺、もしくは結腸）もしくは細胞タイプ（例えば、グリア細胞（例えば、星状細胞もしくは希突起神経膠細胞））に源を発する腫瘍である。腫瘍としては、最初の（原発性）腫瘍、再発腫瘍、および転移（二次性腫瘍）が挙げられる。腫瘍再発は、腫瘍を外科手術により、薬物により、もしくは他の処置によりいったん除去したか、または別の方法で腫瘍が消失した後、最初の（原発性）腫瘍と同じ部位（例えば、同じ器官もしくは組織）に、腫瘍が戻ることである。転移は、身体の１つの部分から別の部分への腫瘍の拡がりである。拡がった細胞から形成される腫瘍は、二次性腫瘍（もしくは転移性腫瘍）といわれ、上記最初の（原発性）腫瘍におけるもののような細胞を含む。原発性腫瘍もしくは転移のいずれかの再発があり得る。
【００２８】
（ＩＩＩ．４−ヒドロペルオキシイホスファミドの錯体）
本明細書で開示される化合物および組成物は、１当量以上の塩基とともに処方された４−ヒドロペルオキシイホスファミド（４−ＨＯＯＩ）を含む。４−ＨＯＯＩは、酸不安定性でかつ酸を形成するので、本開示の化合物は、より高い安定性および他の利点を提供する。合成、安定性およびバイオアベイラビリティーに関して、開示される処方物の利点は、本開示を考慮すれば、当業者に明らかである。
【００２９】
本明細書に開示される化合物は、４−ＨＯＯＩの錯体（例えば、１種以上のカチオンもしくは他の共役種（例えば、水素結合種）を含む）を含む。一実施形態において、上記カチオンは、アミン塩基の共役酸であり得るか、または四級アンモニウムカチオンであり得る。
【００３０】
いくつかの例において、開示される化合物は、４−ＨＯＯＩの錯体を含み、上記錯体は、以下の式：
【００３１】
【化３】
0005779106.tif 000006
を有する化合物を含み、ここでＡは、塩基性アミノ酸（例えば、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、もしくはオルニチン）、四級アンモニウム、脂肪族アミン、複素環式アミン、芳香族アミン、置換されたおよび置換されていないピリジン、グアニジン、ならびにアミジンの共役酸から選択されるアンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、独立して、脱離基を表す。いくつかの例において、ＸおよびＹは、独立して、ハロゲンである。特定の例において、ＸおよびＹは、同じであり、例えば、ＸおよびＹは、ともにＣｌである。
【００３２】
理論に束縛されないが、いくつかの実施形態において、開示される錯体は、アンモニウム種（例えば、塩基性アミノ酸）と、４−ＨＯＯＩとの水素結合を介して形成されると考えられる。しかし、いくつかの例において、開示される錯体は、４−ＨＯＯＩの塩であり得る。
【００３３】
適切なアンモニウム種としては、塩基（塩基性アミノ酸、脂肪族アミン、複素環式アミン、芳香族アミン、ピリミジン、グアニジンおよびアミジンが挙げられる）の共役酸が挙げられる（本明細書で使用される場合、アミンに言及する用語は、別段、遊離アミンが意図されることを文脈が明らかに示さなければ、それらの共役酸を含むことが理解されるべきである）。上記脂肪族アミンのうち、上記非環式脂肪族アミン、および環式および非環式のジアルキルアミンおよびトリアルキルアミンは、開示される化合物における使用に特に適している。さらに、四級アンモニウムは、使用され得る適切なアンモニウム種の例である。
【００３４】
特定の例において、上記錯体は、塩基性アミノ酸（例えば、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、もしくはこれらのうちの２種以上の組み合わせ）の共役酸を含む。１つの具体例において、上記錯体は、リジンの共役酸を含む。いくつかの例において、上記錯体は、１：１比のリジンおよび４−ＨＯＯＩを含む。他の例において、上記錯体は、２：１比のリジンおよび４−ＨＯＯＩを含む。いくつかの例において、上記錯体の融解点は、約２７５℃より高い。
【００３５】
本発明の化合物における使用に適切なアミン塩基（およびそれらの対応するアンモニウムイオン）のさらなる例としては、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロノナン、ジアザビシクロウンデセン、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、モノ−、ビス−もしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンが挙げられるが、これらに限定されない。別の適切なアミン塩基としては、シクロヘキシルアミンが挙げられる。
【００３６】
特定の例において、上記錯体（例えば、１：１比もしくは２：１比のリジンおよび４−ＨＯＯＩの錯体）は、少なくとも約８０％純粋、少なくとも約８５％純粋、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９７％純粋、少なくとも９８％純粋、もしくはさらに少なくとも９９％純粋である。いくつかの例において、ただ１種の不純物も、１重量％を超えない。いくつかの例において、純度は、上記組成物の全ての他の成分に対して測定される一方で、他の例においては（例えば、上記化合物が薬学的組成物もしくは凍結乾燥物混合物の一部である場合）、純度は、上記化合物の分解生成物もしくは上記化合物の製造の副生成物に対して測定され得、それによって、上記組成物に意図的に添加される他の成分を排除される。
【００３７】
いくつかの例において、Ａは、ＢＨ＋を表し、Ｂは、上記塩基性アミノ酸（例えば、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、もしくはオルニチン）、シクロヘキシルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロノナン、ジアザビシクロウンデセン、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、モノ−、ビス−もしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンから選択されるアミンである。
【００３８】
特定の実施形態において、上記に記載される錯体は、二級アミンもしくはアンモニウム基を含み得る。いくつかの例において、本明細書で開示される化合物は、４−ＨＯＯＩの各当量に対して１当量より多くのアミンを含む。このような実施形態は、非整数比のアミン  対  ４−ＨＯＯＩを有するものを含む。いくつかの例において、上記化合物は、２：１比、３：１比、もしくはより大きな比のアミン  対  ４−ＨＯＯＩを有する。いくつかの例において、開示される錯体は、４−ＨＯＯＩの１当量あたり２当量のアミン塩基（例えば、リジン）を含む。
【００３９】
他の例において、４−ＨＯＯＩ錯体を形成するために使用されるアミン塩基は、１個より多いアミノ基を含む；このような塩基は、多塩基性といわれ得る。より具体的には、使用され得る多塩基性アミノ酸の特定の例は、２個のアミノ基を有する；このような化合物は、「二塩基性」といわれ得る。例えば、１種の適切な二塩基性分子は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンであり、これは、２個の塩基性アミノ基を含む。一例において、本明細書で開示される化合物は、４−ＨＯＯＩおよび１当量の二塩基性アミンを含む。
【００４０】
いくつかの例において、開示される化合物は、１種以上の双極性イオン性塩基を含む。このような塩基の例としては、塩基性アミノ酸（これは、生理学的ｐＨにおいて双極性イオン性である）を含む。双極性イオン性塩基（アミノ酸を含む）の例は、水素結合ドナーおよび／もしくはアクセプターとして機能して、４−ＨＯＯＩを安定化し得るさらなる官能基を有する。
【００４１】
理論によって束縛されないが、開示される錯体は、水の存在下で４−ＨＯＯＩを安定化し、開環を妨げ、分解するＩＰＭを放出すると考えられる。いくつかの例において、上記化合物は、４−ＨＯＯＩ錯体であり、ここで上記錯体は、室温（例えば、約２２〜２５℃）において、水の存在下で、４−ＨＯＯＩ（例えば、遊離ペルオキシドとして）の同じ条件下で水の存在下での半減期より大きい半減期を有する。特定の例において、４−ＨＯＯＩ錯体は、水の存在下での４−ＨＯＯＩ自体が、より好ましくは、５倍以上である限り、２倍以上の水の存在下での半減期を有する。いくつかの例において、上記化合物は、４−ＨＯＯＩ錯体（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ）であり、ここで上記錯体は、少なくとも１５分間、３０分間、６０分間、９０分間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、もしくはこれ以上にわたって、水の存在下で室温において安定である。
【００４２】
本明細書で使用される場合、用語「安定な」とは、一定期間（例えば、少なくとも１日間、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、１０ヶ月、１年、もしくはこれ以上）後の上記４−ＨＯＯＩ錯体（例えば、凍結乾燥物）の純度は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、もしくはさらに少なくとも９９％の初期純度であることを意味し、上記純度は、以下の実施例１に記載されるように、例えば、ＨＰＬＣもしくはＧＣ−ＭＳによって決定され得る。
【００４３】
いくつかの例において、上記４−ＨＯＯＩ錯体は、有利な溶解度特性を有する。例えば、いくつかの例において、開示される４−ＨＯＯＩ錯体（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ錯体）は、４−ＨＯＯＩと少なくとも同程度に水性溶媒に溶解性である。他の例において、上記４−ＨＯＯＩ錯体は、４−ＨＯＯＩと比較して、水性溶媒中で改善された溶解度を有する。
【００４４】
本開示の一実施形態は、以下の式：
【００４５】
【化４】
0005779106.tif 000007
の抗過増殖薬剤に関する。
【００４６】
上記式を参照すると、Ｂは、各ｎに関して、独立して選択された塩基性分子であり得る。上記式の一例において、Ｂは、上記塩基性アミノ酸（例えば、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、もしくはオルニチン）、非環式脂肪族アミン、ジアルキルアミンおよびトリアルキルアミン、複素環式脂肪族アミン、芳香族アミン、置換されたおよび置換されていないピリミジン、環式および非環式のグアニジン、ならびに環式および非環式のアミジンから選択され得る。代表的には、ｎは、１〜約３であり、その結果、上記式は、異なる塩基性分子、または２個以上の同じ塩基性分子を含み得る。上記式を続いて参照すると、ＸおよびＹは、脱離基（例えば、ハロゲン（例えば、ＣｌもしくはＢｒ）またはスルホネート）である。当業者は、図示された構造が、酸を形成するプロトンを含み、よって、生理学的ｐＨにおいて、およびＢのような塩基の存在下で、その共役塩基として主に存在することを理解する。同様に、塩基性基であるＢは、生理学的ｐＨにおいて、および４−ＨＯＯＩの存在下で、その共役酸として主に存在する。本開示の例示的化合物は、表１に示される。
【００４７】
【表１】
0005779106.tif 000008
一実施形態において、本明細書で開示される化合物は、金属カチオン（例えば、アルカリ金属カチオン）を含む。このようなカチオンの例としては、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋およびＲｂ＋ならびにＣｓ＋が挙げられる。
【００４８】
（ＩＶ．組成物および方法）
本開示の別の局面は、被験体（例えば、哺乳動物被験体（例えば、ヒト））への投与のために調製されかつ治療上有効な量の本開示の化合物のうちの１種以上、もしくは開示される化合物のうちの１種以上の凍結乾燥物を含む、薬学的組成物（例えば、滅菌された薬学的組成物）を包含する。このような滅菌された組成物は、本明細書で開示される４−ＨＯＯＩ錯体の溶液を、滅菌抗菌フィルタに通すことによって調製され得る。
【００４９】
また、１当量以上の塩基とともに処方された４−ＨＯＯＩを含む凍結乾燥物が本明細書で開示される。４−ＨＯＯＩは、酸不安定性でかつ酸を形成するので、本開示の凍結乾燥物は、より大きな安定性および他の利点を提供する。合成、安定性およびバイオアベイラビリティーに関して、開示される処方物の利点は、本開示を考慮すれば、当業者に明らかである。１当量以上の塩基とともに処方された４−ＨＯＯＩのさらなる利点としては、水もしくた体液中での増大した溶解度が挙げられ得る。いくつかの例において、４−ＨＯＯＩを含む凍結乾燥物は、４−ＨＯＯＩと、少なくとも１当量のアミン塩基（例えば、塩基性アミノ酸、脂肪族アミン、複素環式アミン、芳香族アミン、置換されたおよび置換されていないピリミジン、グアニジン、もしくはアミジン）とを、水の存在下で接触させる工程、ならびに得られた混合物を凍結乾燥する工程によって、調製され得る。
【００５０】
特定の実施形態において、開示される凍結乾燥物は、１種以上の塩基を含む４−ＨＯＯＩの錯体である。いくつかの例において、上記塩基は、アミン塩基の共役酸であり得るか、または四級アンモニウムカチオンであり得る。４−ＨＯＯＩに適した塩基としては、塩基（塩基性アミノ酸（例えば、リジン、ホモリジン、アルギニン、ホモアルギニン、ヒスチジン、もしくはオルニチン）、脂肪族アミン、複素環式アミン、芳香族アミン、ピリミジン、グアニジンおよびアミジンを含む）の共役酸（本明細書で使用される場合、アミンに言及する用語は、別段、文脈が遊離塩基が意図されることを明らかに示さなければ、それらの共役酸を含むことが理解されるべきである）が挙げられる。上記脂肪族アミンのうち、上記非環式脂肪族アミン、ならびに環式および非環式のジアルキルアミンおよびトリアルキルアミンは、開示される化合物における使用に特に適している。さらに、四級アンモニウムは、使用され得る適切なアンモニウム種の例である。他の例において、このような凍結乾燥物は、賦形剤をさらに含み得る。適切な賦形剤としては、マンニトール、無水ラクトース、スクロース、Ｄ（＋）−トレハロース、デキストラン４０およびポピドン（ＰＶＰ  Ｋ２４）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
いくつかの例において、上記化合物および組成物（例えば、本明細書で開示される凍結乾燥物）は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、もしくはさらには少なくとも６ヶ月にわたって、室温で安定である。他の例において、上記錯体は、より低温で（例えば、約０℃〜約２０℃の間、約０℃〜約１０℃の間、もしくはさらに約２℃〜約８℃の間）、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、もしくはさらには少なくとも６ヶ月にわたって安定である。特定の実施形態において、上記凍結乾燥物は、４−ＨＯＯＩ錯体を含む。特定の例において、上記凍結乾燥物は、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓを含む。
【００５２】
さらなる例において、上記に記載される錯体は、二級アミンもしくはアンモニウム基を含み得る。一例において、本明細書で開示される凍結乾燥物は、４−ＨＯＯＩの各当量につき、１当量より多いアミンを含む。このような例としては、非整数比のアミン  対  ４−ＨＯＯＩを有するものが挙げられる。特定の実施形態において、上記凍結乾燥物は、２：１比もしくは３：１比のアミン  対  ４−ＨＯＯＩを有する。一例において、開示される錯体は、４−ＨＯＯＩの１当量あたり２当量のアミン塩基を含む。いくつかの例において、４−ＨＯＯＩ錯体を形成するために使用されるアミン塩基は、１個より多いアミノ基を含む；このような塩基は、「多塩基性」といわれ得る。より具体的には、使用され得る多塩基性塩基の特定の例は、２個のアミノ基を有する；このような化合物は、「二塩基性」といわれ得る。例えば、１つの適切な二塩基性分子は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンであり、これは、２個の塩基性アミノ基を含む。本明細書で開示される凍結乾燥物の特定の例は、４−ＨＯＯＩおよび１当量の二塩基性アミンを含む。
【００５３】
特定の例において、開示される４−ＨＯＯＩ錯体の凍結乾燥物は、４−ＨＯＯＩ自体の凍結乾燥調製物と比較して、再構成安定性を改善する。特定のこのような実施形態において、４−ＨＯＯＩの開示される錯体から（例えば、４−ＨＯＯＩおよびリジンから、必要に応じて、賦形剤（例えば、充填剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、マンニトール）を含む））調製され、水溶液（例えば、５％  塩化ナトリウム）中で再構成される凍結乾燥物は、少なくとも約３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、１４０分間、もしくはさらに少なくとも約１６０分間にわたって＞９０％の有効性を維持する。
【００５４】
いくつかの例において、４−ＨＯＯＩの錯体（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ）、もしくは４−ＨＯＯＩ錯体（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ）から調製される凍結乾燥物、および選択肢的な賦形剤（例えば、充填剤（例えば、マンニトール））を、水溶液中に溶解すると、室温において、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくはさらには少なくとも９９％の純度を、少なくとも約３０分間、６０分間、９０分間、３時間、もしくはさらには４．５時間以上にわたって維持する。具体例において、水溶液中に溶解された４−ＨＯＯＩ錯体は、室温において少なくとも約３時間にわたって少なくとも９７％純度を維持する。
【００５５】
他の例において、４−ＨＯＯＩの開示される錯体の凍結乾燥物は、例えば、遊離ペルオキシドとしての４−ＨＯＯＩ自体の凍結乾燥調製物より安定である。いくつかの例において、開示される錯体の上記凍結乾燥物は、４−ＨＯＯＩ自体の凍結乾燥調製物より、例えば、少なくとも２倍長い（例えば、少なくとも５倍長い）貯蔵寿命を有する。
【００５６】
上記のように、いくつかの例において、開示される凍結乾燥物は、賦形剤（例えば、充填剤（例えば、マンニトール））をさらに含む。いくつかの例において、上記凍結乾燥物は、マンニトール、無水ラクトース、スクロース、Ｄ（＋）−トレハロース、デキストラン４０、およびポピドン（ＰＶＰ  Ｋ２４）から選択される充填剤を含む。特定の例において、このような充填剤の添加は、上記充填剤の非存在下での上記凍結乾燥物処方物と比較して、上記凍結乾燥物の安定性を改善し得る。いくつかの例において、このような凍結乾燥物は、約−８０℃、約−７０℃、約−２０℃、もしくはさらには約５℃において、例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヵ月、９ヶ月、１年、もしくはさらには２年以上の期間にわたって、安定である。上記凍結乾燥物が充填剤（例えば、マンニトール）を含む例において、上記凍結乾燥物は、約１％〜約１０％、もしくは約１％〜約５％（ｗ／ｖ）の充填剤（例えば、マンニトール）を含み得る。
【００５７】
本明細書で開示される化合物は、経口的に、局所的に、経皮的に、非経口的に、吸入もしくはスプレーを介して投与され得る、従来の非毒性薬学的に受容可能なキャリア、補助剤およびビヒクルを含む投与単位処方物中で投与され得る。
【００５８】
代表的には、注射を介する、開示される４−ＨＯＯＩ錯体の非経口投与が、利用される。上記４−ＨＯＯＩ錯体は、当業者によって認識されるように、特定の疾患、被験体の状態、上記化合物の毒性、および他の要因に依存して、単一用量において、もしくは長期間に提供され得る。投与される上記化合物の治療上有効な量は、所望の効果および上記の要因に依存して変動し得る。
【００５９】
被験体に投与するための薬学的組成物は、キャリア、濃化剤、希釈剤、緩衝化剤、保存剤、界面活性剤などを、選択された分子に加えて含み得る。薬学的組成物はまた、１種以上のさらなる活性成分（例えば、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤など）を含み得る。薬学的処方物は、さらなる成分（例えば、キャリア）を含み得る。これら処方物に有用な上記薬学的に受容可能なキャリアは、従来どおりである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９５）は、本明細書で開示される化合物の薬学的送達のために適した組成物および処方物を記載している。
【００６０】
一般に、上記キャリアの性質は、使用される特定の投与様式に依存する。例えば、非経口処方物は、通常、ビヒクルとしての薬学的にかつ生理学的に受容可能な流体（例えば、水、生理食塩水、平衡化塩類溶液、液ストロース水溶液、グリセロールなど）を含む注射用流体を含む。固体組成物（例えば、散剤、丸剤、錠剤、もしくはカプセル剤の形態）については、従来の非毒性固体キャリアは、例えば、製薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、もしくはステアリン酸マグネシウムをふくみ得る。生物学的に中性なキャリアに加えて、投与されるべき薬学的組成物は、微量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤、およびｐＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸ナトリウムもしくはソルビタンモノラウレート））を含み得る。
【００６１】
いくつかの例において、開示される化合物は、経口投与形態（例えば、丸剤、錠剤、もしくはカプセル剤）として処方される。このような経口投与形態は、少なくとも１種の賦形剤、滑り剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、希釈剤、滑沢剤、および／もしくは崩壊剤を含む。いくつかの例において、適切な賦形剤、滑り剤、希釈剤、滑沢剤、および／もしくは崩壊剤としては、タルク、フュームド二酸化ケイ素、デンプン、ケイ酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラクトース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デキストロース、グルコース、スクロース、デンプン、デンプン誘導体、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ポリエチレングリコ−ル４０００、ポリエチレングリコール６０００、安息香酸ナトリウム、ライトミネラルオイル（ｌｉｇｈｔ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｏｉｌ）、水素化植物性油、ステアリン酸、グリセリルベヘネート、不溶性イオン交換樹脂、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロースナトリウム）、ガム（例えば、寒天、グアールガム、キサンタンガム）、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、およびクロスポピドンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６２】
いくつかの例において、上記経口投与形態は、本明細書で開示される化合物および少なくとも１種の賦形剤、滑り剤、希釈剤、滑沢剤、および／もしくは崩壊剤（例えば、吸湿性活性薬剤との処方に適した少なくとも１種の賦形剤、滑り剤、希釈剤、滑沢剤、および／もしくは崩壊剤）を含む。特定の例において、上記経口投与形態は、少なくとも１種の賦形剤、滑り剤、希釈剤、滑沢剤、および／もしくは崩壊剤（これらは、微結晶性セルロース、ラクトース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、二塩基性リン酸カルシウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびマンニトールから選択される）を含む。
【００６３】
一例において、開示される化合物は、哺乳動物被験体（例えば、ヒト被験体）への投与のために処方される。一例において、上記薬学的組成物は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約２０〜約１００ｍｇ／ｍｌ）の開示される４−ＨＯＯＩ錯体（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ）を含む。
【００６４】
特定の例において、開示される薬学的組成物は、単位投与形態へと処方される。例えば、このような単位投与形態は、投与単位あたり、約１００ｍｇ〜約１５００ｍｇ（例えば、約２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ）の開示される４−ＨＯＯＩ錯体（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ）を含み得る。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物が、注射され、そして／または移植された薬物デポー（例えば、マルチ小胞リポソーム（例えば、ＤｅｐｏＦｏａｍ（登録商標）におけるもの（Ｐａｃｉｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を含む））を介して送達されることが、具体的に企図される（例えば、Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎら，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏ．５０：２６１−２６４，１９９３；Ｋａｔｒｉら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８７：１３４１−１３４６，１９９８；Ｙｅら，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ６４：１５５−１６６，２０００；およびＨｏｗｅｌｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  ７：２１９−２２７，２００１を参照のこと）。
【００６６】
異常なもしくは病的な増殖活性または新生組織形成によって特徴付けられる状態を処置するための方法が開示され、上記方法は、上記開示される化合物および組成物のうちの１種以上を被験体に投与することによる。「新生組織形成」とは、異常なおよび制御されない細胞増殖のプロセスをいう。新生組織形成は、増殖性障害の一例である。新生組織形成の生成物は、新生物（腫瘍）であり、これは、過剰な細胞分裂から生じる組織の異常な増殖である。転移しない腫瘍は、「良性」といわれる。取り囲む組織に浸潤し、そして／または転移し得る腫瘍は、「悪性」といわれる。
【００６７】
開示される方法に従って処置され得る状態としては、異常な細胞増殖および／もしくは分化（例えば、癌および他の新生組織形成状態）によって特徴付けられるものが挙げられる。開示される化合物および組成物を使用して処置され得る増殖性障害の代表的な例は、以下に列挙される。
【００６８】
本明細書で開示される化合物および組成物を使用して処置され得る血液腫瘍の例としては、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）白血病、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病および骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病および赤白血病）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、および慢性リンパ性白血病）、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（進行の遅い形態および高悪性度の形態）、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常が挙げられる）が挙げられる。
【００６９】
開示される化合物および組成物を使用して処置され得る状態のさらなる例としては、固形腫瘍（例えば、肉腫および癌腫）（線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌種、リンパ系腫瘍、膵臓癌、乳癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌もしくは非小細胞肺癌）、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣癌、膀胱癌、黒色腫、および中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍（例えば、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭癌、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫および網膜芽腫）が挙げられる）が挙げられる。
【００７０】
いくつかの例において、本明細書で開示される化合物は、ＣＰＡもしくはＣＰＡ耐性腫瘍増殖に対するＩＦＯＳ単独より優れている。従って、本明細書で開示される方法の一局面は、ＣＰＡ耐性新生物状態を有する被験体を、本明細書で開示される４−ＨＯＯＩ錯体で処置する工程を包含する。
【００７１】
特定の例において、本明細書で開示される４−ＨＯＯＩ錯体は、中枢神経系腫瘍（例えば、神経膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、上衣芽細胞腫、もしくは他のＣＮＳ腫瘍）を有する被験体に投与される。上記ＣＮＳ腫瘍は、原発性腫瘍であってもよいし、転移性腫瘍であってもよい（乳癌、肺癌、黒色腫、もしくは他の癌の転移が挙げられるが、これらに限定されない）。いくつかの例において、開示される４−ＨＯＯＩ錯体は、血液脳関門を通過し得かつ上記ＣＮＳ中に蓄積し得る。特定の例において、４−ＨＯＯＩは、上記ＣＮＳ腫瘍中に蓄積するが、非腫瘍ＣＮＳ組織には蓄積しない。
【００７２】
上記方法の一例において、被験体は、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約２００ｍｇ／ｋｇ／日の開示される４−ＨＯＯＩ錯体（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ）を投与される。例えば、約０．５〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、約１〜約７．５ｍｇ／ｋｇ／日）の開示される化合物は、被験体に投与され得る。上記方法の別の実施形態において、被験体は、約１０〜約７００ｍｇ／ｍ２／日（例えば、約３０〜約５００ｍｇ／ｍ２／日もしくは約６０〜約２００ｍｇ／ｍ２／日）を投与される。例えば、約３０〜約２００ｍｇ／ｍ２／日（例えば、約４０〜約６０ｍｇ／ｍ２／日（例えば、約３０ｍｇ／ｍ２／日、４０ｍｇ／ｍ２／日、５０ｍｇ／ｍ２／日、６０ｍｇ／ｍ２／日、７０ｍｇ／ｍ２／日、８０ｍｇ／ｍ２／日、９０ｍｇ／ｍ２／日、１００ｍｇ／ｍ２／日、１１０ｍｇ／ｍ２／日、１２０ｍｇ／ｍ２／日、１３０ｍｇ／ｍ２／日、１４０ｍｇ／ｍ２／日、１５０ｍｇ／ｍ２／日、１６０ｍｇ／ｍ２／日、１７０ｍｇ／ｍ２／日、１８０ｍｇ／ｍ２／日、１９０ｍｇ／ｍ２／日、もしくは２００ｍｇ／ｍ２／日））の本明細書で開示される化合物（例えば、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ）が、被験体に投与される。
【００７３】
本明細書で開示される過増殖性障害（例えば、ＣＮＳ腫瘍）を処置するための方法のいくつかの例において、開示される化合物もしくは組成物は、複数回の１日の投与スケジュールで被験体に投与される。特定の例において、上記化合物は、少なくとも２日間に、および５日間以上の日数程度で、投与される。複数回の１日の投与スケジュールの一局面において、上記化合物もしくは組成物は、連続日で（例えば、２〜５日間連続日で）上記被験体に投与される。複数用量で投与される場合、各投与の間の期間は変動し得、処置されている被験体および処置されている癌のタイプに一部依存する。いくつかの例において、開示される化合物は、１日に１回、１週間に２回、１週間に１回、１ヶ月に２回、もしくは１ヶ月に１回投与される。複数用量で投与される場合、各投与の間の期間は変動し得、処置されている被験体および処置されている癌のタイプに一部依存する。当業者は、各被験体についての適切な投与スケジュールを決定し得る。
【００７４】
上記方法のいくつかの例において、開示される化合物もしくは組成物は、他の治療剤もしくは処置（例えば、さらなる抗癌治療剤もしくは放射線処置）の非存在下で被験体に投与される。
【００７５】
上記方法の他の例において、１種以上のさらなる治療剤もしくは処置は、本開示の化合物もしくは組成物に加えて、被験体に投与される。例えば、使用され得るさらなる治療剤としては、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレーターもしくは架橋剤、ＤＮＡ合成インヒビター、ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ転写インヒビター、抗体、酵素、酵素インヒビター、遺伝子調節因子、ならびに／または脈管形成インヒビターが挙げられる。  「微小管結合剤」とは、チューブリンと相互作用して、微小管系性を安定化もしくは不安定化し、それによって細胞分裂を阻害する薬剤をいう。本開示の４−ＨＯＯＩ錯体とともに使用され得る微小管結合剤の例としては、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン（ナベルビン）、エポチロン、コルヒチン、ドラスタチン  １５、ノコダゾール、ポドフィロトキシンおよびリゾキシンが挙げられるが、これらに限定されない。このような化合物のアナログおよび誘導体もまた使用され得、当業者に公知である。例えば、本発明の化合物へと組み込むための適切なエポチロンおよびエポチロンアナログは、国際公開番号ＷＯ  ２００４／０１８４７８（これは、本明細書に参考として援用される）に記載されている。タキソイド（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）は、本開示の化合物において治療剤として特に有用であると現在考えられている。パクリタキセルのアナログを含むさらなる有用なタキソイドの例は、米国特許第６，６１０，８６０号（Ｈｏｌｔｏｎ）、同第５，５３０，０２０号（Ｇｕｒｒａｍら）および同第５，９１２，２６４号（Ｗｉｔｔｍａｎら）によって教示される。これら特許の各々は、本明細書に参考として援用される。
【００７６】
適切なＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ転写調節因子としては、アクチノマイシン  Ｄ、ダウノルビシン、ドキソルビシンならびにこれらの誘導体およびアナログが挙げられるが、これらに限定されず、これらはまた、本開示の化合物と組み合わせて使用するのに適している。
【００７７】
開示される化合物とともに利用され得るＤＮＡインターカレーターおよび架橋剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシン  Ｃ）、ブレオマイシン、クロラムブシル、シクロホスファミド、ペンクロメジン、ならびにこれらの誘導体およびアナログが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
治療剤としての使用に適したＤＮＡ合成インヒビターとしては、メトトレキサート、５−フルオロ−５’−デオキシウリジン、５−フルオロウラシルおよびこれらのアナログが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
本開示の化合物と組み合わせて使用するのに適した酵素インヒビターの例としては、カンプトテシン、エトポシド、ホルメスタン、トリコスタチン、ならびにこれらの誘導体およびアナログが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８０】
遺伝子調節に影響を及ぼす本開示の化合物とともに使用するのに適した治療剤としては、１種以上の遺伝子の発現の増大もしくは低下を生じる薬剤（例えば、ラロキシフェン、５−アザシチジン、５−アザ−２’−デオキシシチジン、タモキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ミフェプリストン、ならびにこれらの誘導体およびアナログが挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられる。
【００８１】
用語「脈管形成インヒビター」は、生体分子（例えば、ペプチド、タンパク質、酵素、ポリサッカリド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、組換えベクター、および血管増殖を阻害するように機能する低分子）が挙げられるが、これらに限定されない分子を意味するために、本明細書で使用される。脈管形成は、特定の病的プロセス（例えば、糖尿病性網膜症、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、皮膚炎、乾癬、胃潰瘍、およびヒト固形腫瘍の大部分のタイプのような障害に関与するもの）に影響を及ぼす。
【００８２】
当該分野で公知の脈管形成インヒビターおよび適切な脈管形成インヒビターの例としては、アンジオスタチン  Ｋ１−３、スタウロスポリン、ゲニステイン、フマジリン、メドロキシプロゲステロン、スラミン、インターフェロン−α、メタロプロテイナーゼインヒビター、血小板因子  ４、ソマトスタチン、トロンボスポンジン、エンドスタチン、サリドマイド、ならびにこれらの誘導体およびアナログが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
上記の分類のうちの１種以上に該当してもよいし、しなくてもよい他の治療剤、特に、抗腫瘍剤はまた、本開示の化合物と組み合わせた投与に適切である。例示すると、このような薬剤としては、アドリアマイシン、アピゲニン、ラパマイシン、ゼブラリン、シメチジン、ならびにこれらの誘導体およびアナログが挙げられる。
【００８４】
本開示は、以下の非限定的実施例によって示される。
【実施例】
【００８５】
（実施例１：４−ＨＯＯＩ・リジン錯体の合成および特性）
本実施例は、４−ＨＯＯＩおよびそのリジン錯体の合成、ならびに上記化合物の物理的特性を記載する。
【００８６】
４−ＨＯＯＩを、図１に示されるように生成した。合成の全体的な収率は、裏付けのＮＭＲおよびＭＳデータとともに、４３％、ｍ．ｐ．１２３〜１２４℃であった。４−ＨＯＯＩは２−キラル中心を有するが、再結晶化の間に、４−ＨＯＯＩは、最も熱力学的に安定な配置に適合し、この配置は、赤道位における嵩高い置換基を有する椅子型である。
【００８７】
４−ＨＯＯＩは、白色粉末、ｍ．ｐ．１２３〜１２５℃であった。これは、４℃で乾燥させて貯蔵した場合に安定であった。上記物質は、水、生理食塩水、クロロホルム、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、エタノール、メタノール、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、およびジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解した。アッセイのためのストック溶液を、０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で、ＤＭＳＯ、ＤＭＡもしくはアセトニトリル中に調製し、−４℃で貯蔵した。
【００８８】
４−ＨＯＯＩ（５℃の１２５ｍＬの蒸留水中に０．５ｍｏｌ）を、Ｌ−リジン（０．５ｍｏｌを５℃の１５０ｍＬの蒸留水中に溶解）と混合した。上記溶液を、５℃において３０分間攪拌し、濾過し、得られた溶液を凍結乾燥した。凍結乾燥を、−７５℃に冷却した溶液とともに、標準的Ａｃｅガラスエバポレーティングシステムを使用して、３時間で完了させた。４−ＨＯＯＩは、Ｌ−リジンと安定な錯体を形成し、アルデヒド中間体と、Ｌ−リジンとの間の化学反応の証拠は示されなかった。上記１：１  ４−ＨＯＯＩ・リジン錯体は、白色粉末であり、  デトネーション（ｄｅｔｏｎａｔａｔｉｏｎ）なしでｄｅｃ．＞２７５℃であった。４−ＨＯＯＩおよび４−ＨＯＯＩ・リジンの安定性をモニターし、許容可能であった（表２）。イミン（シッフ塩基）もしくはヒドロキシルアミンを形成するための上記リジンと４−ＨＯＯＩとの反応は、観察されなかった（図２）。１：１  ４−ＨＯＯＩ：リジン比を、凍結乾燥研究の間に確認した。考えられる４−ＨＯＯＩ・リジン錯体の提唱された構造を、図３に示す。
【００８９】
ＨＰＬＣアッセイ：    クロマトグラフィー装置は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００送達ポンプと、２０μｌ  ループと、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００可変波長検出器およびＡｇｉｌｅｎｔ  ３３９５  積分記録計（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ  ｒｅｃｏｒｄｅｒ）を備えたＲｈｅｏｄｙｎｅ  ７１２５インジェクターとからなった。移動相は、最大１．５ｍｌ／分までの流速で０．９％  生理食塩水であった。上記カラムは、Ａｌｌｔｅｃｈ  Ｅｃｏｎｏｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ  Ｃ−１８であり、５μｍ充填、寸法４．６ｍｍ×３０ｃｍであった。上記アッセイは、内部標準としてＬ−リジンを含め、検出を、１９５ｎｍ波長であった。上記内部標準と、上記４−ＨＯＯＩとの間の分離能は、ベースラインを超えた。上記移動相としての０．９％  生理食塩水とともに、４−ＨＯＯＩは、９〜１１分のピーク面積８×１０６を生じ、３０％  アセトニトリル移動相とともに、ＩＦＯＳは、１４分において出現し、ピーク面積は、２２７×１０６であった。
【００９０】
ＧＣ／ＭＳアッセイ：    ４−ＨＯＯＩのストック溶液を、０．１ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＳＯ中に調製し、０℃で貯蔵した。４−ＨＯＯＩ（１００μｌのストック溶液）および１５０μｌのｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ−メチル−トリフルオロアセトアミド（ＴＢＤＭＦ）を、試験管中に一緒に添加した。次いで、上記混合物を、７０℃において５分間にわたって加熱し、次いで、室温で２時間にわたって静置し、−７０℃で後の標準物質としての使用のために凍結した。
【００９１】
ガラス製遠心分離管中に４−ＨＯＯＩを含む血漿１００μｌ（７５ｎｇ／ｍｌ）に、２ｍｌの冷ジクロロメタンを添加し、上記混合物を、１分間にわたってボルテックスした（タンパク質沈殿させるために）。次いで、上記管を、ドライアイス／アセトンバス中で凍結させ；上記ジクロロメタン層を除去し、真空中で乾燥するまでエバポレートした。その残渣を、３０μｌのＤＭＡ中に溶解し、５０μｌのＴＢＤＭＦを添加した。上記混合物を、７０℃において５分間にわたって加熱し、凍結するか、または質量分析器（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  ＭＳ  Ｅｎｇｉｎｅ）に連結したガスクロマトグラフに注入した（２μｌもしくは３μｌ）。上記カラムは、ＯＶ−１であり、オーブン温度は、注入時に１８０℃であり、これは、１ｍｌ／分のヘリウム流速で１０℃／分において２５０℃まで増大させた。上記純粋化合物のクロマトグラムは、１５分において特有のピークを有した。これらの条件下で、４−ＨＯＯＩ定量化を、ｔ−ブチルジメチルシリル誘導体化化合物の質量スペクトルに対応するフラグメント−周知のジメチル−ｔ−ブチル−Ｓｉ基（ｍ−１１４）の損失のｍ／ｚ＝４０６ａｍｕ（ｍ＝５２０−１１４）における選択されたイオンモニタリング（ＳＩＭ）によって行い得る。抽出効率は、８５％であった。
【００９２】
【表２】
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（実施例２：４−ＨＯＯＩの抗腫瘍活性）
本実施例は、インビトロモデルおよびインビボモデルを利用して、４−ＨＯＯＩの抗腫瘍活性を記載する。
【００９３】
４−ＨＯＯＩおよび４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓを、培養中の９Ｌラット神経膠腫細胞を使用して、インビトロで評価した。各化合物、また、イホスファミドについてのＩＣ５０を決定した（表３）。
【００９４】
【表３】
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４−ＨＯＯＩを、２０のヒト異種移植片腫瘍モデルに対してスクリーニングしたところ、乳癌異種移植片モデルおよび神経膠腫異種移植片モデル、ならびにマウス白血病において、ＩＦＯＳおよびＩＰＭと比較して、有意に改善された抗腫瘍活性を示した。４−ＨＯＯＩは、血液脳関門を横断したが、神経学的もしくは行動学的な毒性の証拠はなかった。ヒト乳癌細胞株ＭＸ−１およびＺＲ７５−１を、皮下（ＳＣ）移植した。ヒト神経膠芽腫細胞株Ｕ２５１を、頭蓋内（ＩＣ）移植し、Ｐ３８８  ＣＰＡ耐性マウス白血病細胞株を、腹腔内（ＩＰ）注射した。ＩＣ移植腫瘍細胞については、処置を、接種後５〜７日で開始した。ＳＣ腫瘍については、処置を、上記腫瘍芽触診できるようになったとき（接種後５〜１０日間）に、開始した。マウスを、５日間にわたって、１日１回、示された用量の薬物を腹腔内に処置した。４−ＨＯＯＩは、ＩＣ移植したＵ２５１神経膠芽腫に効いた（８４％  ＬＴＳ）（表４）。４−デメチルコレステリルオキシカルボニルペンクロメジン（ＤＭ−ＣＨＯＣ−ＰＥＮ）（これは、臨床試験中である）は、Ｕ２５１神経膠芽腫において５２％  ＬＴＳを生じたに過ぎず（Ｍｏｒｇａｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６４：８２９−８３５，２００９）、ビス−クロロニトロソウレア（ＢＣＮＵ）（これは、神経膠腫の処置の常套手段である）は、７２％  ＩＬＳを生じたに過ぎないことに注意すべきである。ＣＮＳ／行動毒性は、４−ＨＯＯＩについては示されなかった。
【００９５】
【表４】
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４−ＨＯＯＩを、多くのさらなる固形腫瘍異種移植片および白血病に対して試験した。４−ＨＯＯＩは、２５〜５０％  Ｔ／Ｃ  遅延値（表５および表６）を示して、マウスＬ１２１０およびＰ３８８  白血病およびマウス固形腫瘍（Ｌｅｗｉｓ肺癌、Ｒｉｄｇｗａｙ骨肉腫（ＲＯＳ）、および上衣芽細胞腫  ＥＰ３７を含む）に（そのＬＤ１０用量での処置の際に）効いた。
【００９６】
【表５】
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【００９７】
【表６】
0005779106.tif 000013
４−ＨＯＯＩおよび４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓの活性もまた、神経膠腫に対してインビボで評価した。ラット神経膠腫９Ｌ細胞（１０６細胞）を、雌性Ｈｓｄ：ＳＤラットの皮下に移植した。移植後８日で、４−ＨＯＯＩ、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ、もしくはＩＦＯＳを、腹腔内に１回投与した。テモゾロミド（ＴＭＺ）を、経口で３回、４日間空けて投与した。ラットを、５４日間にわたって追跡した。４−ＨＯＯＩおよび４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓはともに、動物の生存の長期化に有効であった（表７）。血尿は、４−ＨＯＯＩもしくは４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓで処置した動物においては認められなかったが、ＩＦＯＳで処置した動物においては認められた。４−ＨＯＯＩもしくは４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓで処置した動物においては、体重減少は認められず、上記２種の薬物組み合わせでの毒性は認められなかった。長期生存は、４−ＨＯＯＩより４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓで大きかった（１００％  対  ８９％）。
【００９８】
【表７】
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（実施例３：インビボ毒性学および薬理学）
本実施例は、ＬＤ１０値およびＬＤ５０値を決定し、クロロアセトアルデヒド（ＣＡＡ）およびアクロレイン（ＡＣＲ）の生成を評価するために使用したマウス、ラット、およびイヌにおける動物毒性学研究を記載する。
【００９９】
単一（１日）投与スケジュールを、最大耐用量（ＭＴＤ）の薬理学および１００ｍｇ／ｋｇ／日投与における４−ＨＯＯＩの毒性学に基づいて選択した（用量制限毒性（ＤＬＴ）およびマウス死滅（ＬＤ１０）は、２００ｍｇ／ｋｇで起こった）。ＩＶ投与したペルオキシドと関連した潜在的毒性（すなわち、痙攣、溶血、動脈ガス塞栓−肺損傷、および神経学的病理学）を記録することに、重きをおいた。
【０１００】
マウスＩＶ投与：    単一ＩＶマウス−投与研究から、２００／３８５ｍｇ／ｋｇのＬＤ１０／５０が計算された（両方の性；９５％  信頼限界で）。１００ｍｇ／ｋｇもしくは２００ｍｇ／ｋｇでの動物研究において、中枢神経系毒性は示されなかった。生命を脅かさない骨髄抑制は、単一ＩＶ用量の後の１００ｍｇ／ｋｇでのマウスにおいてＤＬＴであった。上記ＬＤ１０は、単一用量については２００ｍｇ／ｋｇであり、１日１回、５日間与えた単一用量については、１８０ｍｇ／ｋｇであった。投与範囲は、６０〜４００ｍｇ／ｋｇであった。痙攣も、ニューロパチーも、腎機能不全も死滅も、＜２００ｍｇ／ｋｇの用量では示されなかった。動物を、処置後１４日間モニターした。
【０１０１】
ラット投与：    ４−ＨＯＯＩでの神経−腫瘍学研究を行って、ラット神経行動学改変型Ｍｏｒｒｉｓ水迷路において、イホスファミドと比較して上記生成物を評価した。イホスファミドは、高用量で昏睡および神経浮腫を生じる。投与あたり３〜６頭のラットの群で、成体Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ雌性ラット（１６０〜１８０ｇ）に、単一用量のＩＦＯＳ（４００ｍｇ／ｋｇ）、４−ＨＯＯＩ（２００ｍｇ／ｋｇ）、もしくは４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ（３００ｍｇ／ｋｇ）を、ＩＰで処置し、水深８ｃｍのプール（３６×４８ｃｍ）中に落花生で覆った台を見いだすタイミングでモニターした。タイミング（各回で６）を、投与後１時間、２時間、３時間、および２０時間で測定して、学習および記憶をモニターした。記憶および学習の時間間隔において、コントロールと、４−ＨＯＯＩ、４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓとの間の有意差はなかった。上記ＩＦＯＳ処置動物は、動揺および振戦があったが、通常の学習行動パターンを示した。５日後、ＩＦＯＳで処置した全てのラットは、顕著な出血を伴う出血性膀胱炎を示し、骨髄評価から、汎血球減少症であることが明らかになった。４−ＨＯＯＩ処置動物および４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ処置動物は、出血性膀胱炎も、腎尿細管壊死も、骨髄消耗も明らかにならなかった。組織検査は、肉眼観察を確認するものであった。  １日静脈内投与での非齧歯類（イヌ）毒性学：    この研究は、１４日間の観察をしながら、単一静脈内投与後のビーグル犬における４−ＨＯＯＩの急性毒性学を評価した。この期間の間に、イヌを、１日目に投与して１時間後および４時間後に、２〜１４日目に１日２回、毒性の臨床的徴候について観察し、１５日目に剖検した。さらに、毎日処置前に体重を記録した。完全な肉眼／組織病理学、完全な血液化学、および血液学を、研究時に死につつある全ての動物、および研究完了時に剖検した全ての動物に対して評価した。およそのＬＤ１０／５０値を計算した。
【０１０２】
４−ＨＯＯＩを、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、および３０ｍｇ／ｋｇの上昇用量で対の雄性イヌに１回スローボーラス注射として投与した。薬物の投与の間は、動物をケタミンで麻酔した。採血し、血漿を分離し、−７０℃で保存した。完全な化学、血液学、および尿分析を、投与前、投与の３日後および１４日後に得た。３０ｍｇ／ｋｇを投与した１匹のイヌについてのバイオアベイラビリティーを、図４に示す。全体的に、イヌにおける薬物動態的値から、３０ｍｇ／ｋｇについて以下のプロフィールが明らかになった：  ＡＵＣ０−ｔ＝１．５３ｍｇ  時間／Ｌ；Ｔ１／２α＝０．９３時間；  Ｔ１／２β＝６．１時間；およびＣＬ＝１９．５Ｌ／時間（２区画モデル）。薬物動態は、線形であるようであった。そのＡＵＣは、１０ｍｇ／ｋｇ用量および３０ｍｇ／ｋｇ用量について線形であった。
【０１０３】
毎日試験を行い、終了の際にも行った。２０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇを投与した動物の全ては、悪化する肉体的な状態（食欲喪失および体重減少）に起因して、８日目までに安楽死を要した。骨髄および脾臓の消耗は、上記動物の死亡とおそらく関連した鍵となる器官であった。腎臓病理も腎系の病理も示されなかった。このことは、腎尿細管壊死が、ヒトにおいて用量制限であったＩＰＭに一致する。ＣＮＳ病理は示されなかった。１０ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇを投与した動物の全ては生存し、１５日間で、骨髄が改善しつつあったが、脾臓はなお消耗していた。１匹の１５ｍｇ／ｋｇを投与した動物は、小さな甲状腺を示した。この研究の結果および製菓に基づくと、ＬＤ１０は、１７．２４ｍｇ／ｋｇであると計算された一方で、ＬＤ５０は、１７．３２ｍｇ／ｋｇであると計算された。
【０１０４】
４−ＨＯＯＩ、ＣＡＡおよびＡＣＲの血漿レベル：    成体雌性Ｃ３Ｈマウスを、ＩＶ注射による単一薬剤としてのＣＰＡ（２５０ｍｇ／ｋｇ）、ＩＦＯＳ（４００ｍｇ／ｋｇ）もしくは４−ＨＯＯＩ（１００ｍｇ／ｋｇ）で処置し、採血し、４−ＨＯＯＩ、ＣＡＡ、およびＡＣＲについて測定した。各血漿サンプルのうちの半分を凍結乾燥して、ドライアイス／メタノール冷却トラップにおいてＡＣＲを集めた。上記凍結乾燥物を、ペンタフルオロフェニルヒドラジンで処理し、ＮａＣｌで飽和させ、酢酸エチルで抽出し、ＧＣ／ＭＳと、選択的イオンモニタリングもしくはＨＰＬＣ（４．４分，移動相  ７０％  アセトニトリル、２５４ｎｍ）によって測定した。クロロアセトアルデヒドについては、上記血漿サンプルのうちの他方の半分を、上記捕捉剤で直接処理し、同じ手順を、合成コントロールと比較して、使用した（６分）。
【０１０５】
４−ＨＯＯＩを、ＩＦＯＳとは対照的に、マウスにおいて、いかなる検出可能な血漿レベルのＣＡＡをも生成しなかった（表８）。上記イヌにおいて１２０分で微量のＣＡＡが認められた。ＩＦＯＳについて許容された最高の許容単一ＩＶ用量は、４００ｍｇ／ｋｇであり、４−ＨＯＯＩについては、１００ｍｇ／ｋｇであった。４−ＨＯＯＩ（１００ｍｇ／ｋｇ）を受けた動物から得られたアクロレイン血漿レベルを、表８に示す。ＡＣＲ血漿レベルは、マウスおよびイヌの両方において４−ＨＯＯＩに関して低かった。台形法を使用する、アクロレインについてのＡＵＣ値（０−１２０ｍｇ−分／ｍｌ）は、以下のとおりであった：ＣＰＡ：１５２０；ＩＦＯＳ：９６０；４−ＨＯＯＩ：５００。４−ＨＨＯＩを投与したマウス、イヌのいずれも、ＩＦＯＳ処置マウスとは対照的に、尿の出血性膀胱炎を示し、ここで、その病状は、投与後５日目に起こった。
【０１０６】
【表８】
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ＩＰＭおよびＩＦＯＳと比較した場合、４−ＨＯＯＩの実験的抗腫瘍活性は、４−ＨＯＯＩが、いくつかの腫瘍タイプに対して他の２種の薬剤より活性であり（表４〜６）、毒性が低く、次に、いかなる検出可能な血漿クロロアセトアルデヒドをも生成せず、少しのアクロレインを生成する（表８）ことを示唆した。４−ＨＯＯＩは、ＩＰＭのプロドラッグであるが、後者で認められるように、腎尿細管壊死を生じず、いくらかの腫瘍タイプに対してより活性である（表４）。
【０１０７】
（実施例４：４−ＨＯＯＩの中枢神経系蓄積）
雌性無胸腺ＮＣｒ−ｎｕ／ｎｕマウスに、Ｕ２５１神経膠腫細胞を頭蓋内移植し、コントロール（ｎ＝５）および処置：４−ＨＯＯＩ（ｎ＝５）もしくはＴＭＺ（ｎ＝５）に分けた。マウスに、神経膠腫細胞の接種後４日目に初めて、生理食塩水中の４−ＨＯＯＩ（１３５ｍｇ／ｋｇ／日）をＩＰで、２連続日にわたって毎日投与した。ＴＭＺ（１２０ｍｇ／ｋｇ×２日）を、経口胃管栄養法により投与した。各動物群の２回目の処置の４時間後に、それらを屠殺し、脳を無傷のまま取り出し、直ぐに液体窒素で凍結した。無傷のまま凍結した脳（約１．３ｇ）を、マウス脳ブロッカー（Ｋｏｐｆ，Ｔｕｊｕｎｇａ，ＣＡ）で、冠状面において３つの切片にスライスした。被包された神経膠腫を容易に同定し、外科用メスで正常脳から分離した。顕微鏡の「タッチフィンガープリント」技術を用いて、完全な分離を確認した。
【０１０８】
上記腫瘍組織を秤量し、プールし、５℃の１０ｍｌ  ０．６Ｍ  リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中でホモジナイズした。このプロセスを、正常（非腫瘍）脳組織について反復した。上記冷ホモジネートを、１０ｍｌ  クロロホルムで抽出し、その有機層を分離し、乾燥するまでエバポレートした。シリカゲルプレートでの分取用ＴＬＣ、続いて、ＨＰＬＣから、１００〜１２６ｎｇ／ｇ  神経膠腫組織の４−ＨＯＯＩ（Ｒｆ  ０．７４）が明らかになった。正常脳組織において同定された薬物はなかった。ＩＣ移植したＵ２５１細胞を有する（が、処置はしていない）上記５匹のコントロールマウスを、解剖および抽出モデルとして使用した。上記抽出アッセイを妨害し得た化合物も物質も、これらマウスにおいては示されなかった。このことは、４−ＨＯＯＩが、血液脳関門を横断し得、かつ腫瘍組織によって選択的に蓄積されることを示す。
【０１０９】
（実施例５：４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ  凍結乾燥物の調製）
Ｌ−リジン（非動物由来）を、冷水（２〜８℃）中に溶解し、固体物質全てが溶解するまで、攪拌しながら４−ＨＯＯＩをゆっくりと添加した（１：１比）。上記溶液を、０．２２ミクロン滅菌フィルタを通して濾過し、バイアル中に分与し（５００ｍｇ／バイアル）、−４５℃で直ぐに凍結乾燥させた。上記バイアルを、５℃において金属キャップ／ゴム中心で、窒素下で密封した。
【０１１０】
（実施例６：癌患者における臨床試験）
本実施例は、進行性の癌もしくは再発した癌での処置として、最大耐用量を決定し、あらゆる関連する毒性を評価することを含め、４−ＨＯＯＩを評価するための方法を記載する。
【０１１１】
凍結乾燥４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓ（臨床生成物）の製造：    凍結乾燥した滅菌４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓを、ＦＤＡ承認のｃ−ＧＭＰガイドラインの下で調製する。上記プロセスは、４−ＨＯＯＩ（２０ｇ）を０．９％  生理食塩水中に溶解する工程、および２２ｇ  Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を添加する工程、微生物フィルタを通して濾過する工程、および５℃において窒素下で閉じて、１バイアルあたり５００ｍｇの４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓを含むように、バイアル中で凍結乾燥する工程を包含する。上記生成物を、上記４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓが、使用直前に各バイアル中でその場で生理食塩水もしくは水中で再溶解し得るように調製した。
【０１１２】
患者選択：    組織学的に証明された、従来の治療に無反応性であるか、または有効な治療が存在しない固形悪性腫瘍を有する患者は、上記研究の候補であり、的確性の基準を満たすはずである。転移性ＣＮＳ病変および／もしくは神経膠芽腫を有する患者の登録が奨励される。実験および採血スケジュールは、表１１（以下）に概説される。全ての患者は、治験審査委員会が承認したインフォームド・コンセントに署名することが必要とされる。
【０１１３】
（Ａ．適格性基準）
包含基準：    患者は、上記研究に登録されるには、以下の基準のうちの全てを満たさねばならない：１）進行性の、切除不能の癌という組織学的証拠；２）７０以上のカルノフスキーパフォーマンスステイタス；３）この研究が本質的に調査であることを承知していることを示す、書面によるインフォームド・コンセント；４）安定な末梢ＣＢＣ：ＷＢＣ≧４０００ｍｍ３および血小板数≧１００，０００ｍｍ３；５）１４日以内に大きな手術をしていないこと；広範囲の放射線療法および／もしくは化学療法を２８日以内に受けていないこと；研究に参加する６週間内にニトロソウレア／マイトマイシンを受けていないこと；６）安定な肝機能および腎機能（ＡＳＴおよびＡＬＴが、それぞれ、＜２．５×ＵＬＮおよびクレアチニン＜１．５×ＵＬＮ）。
【０１１４】
排除基準：    以下の条件のうちのいずれかが、上記研究における登録から患者を排除する：１）白血病；２）活発な制御されない感染；３）制御されない肺／心血管疾患の何らかの証拠；４）神経精神障害の履歴；５）重篤な不安定糖尿病；６）凝固障害もしくは血栓塞栓病；７）上記患者が上記研究を完了できない（余命＜１０週間）か、または上記研究への最善の参加を妨害するかもしくは顕著なリスクを生じる任意の他の医学的状態；８）以下の産児制限法のうちの１つも使用していない妊娠している可能性のある女性：経口避妊薬、埋め込み式避妊薬、注射用避妊薬または禁断；９）コンドームを使用しない妊娠する可能性のある女性と性的関係を有する男性患者；１０）妊娠女性もしくは授乳中の女性。全ての患者もしくは法定代理人は、処置前に、委員会／連邦政府のガイダンスに従って、書面によるインフォームド・コンセントを与えねばならない。
【０１１５】
（Ｂ．研究設計−非盲検試験第Ｉ相）
単一用量スケジュールを、マウス毒性データによって裏付ける。本研究において、初期用量（用量レベル１）は、４０〜６０ｍｇ／ｍ２である。これは、マウス単一ＩＶ用量毒性研究からのＬＤ１０の約１／１０である（実施例３）。上記凍結乾燥した４−ＨＯＯＩ・Ｌｙｓは、５０ｍｌ  生理食塩水中で溶解し、１時間かけて注入する。処置を、３週間に１回反復する（ただし、実験値が受容可能である限り）。上記用量上昇／縮小規則は、用量制限毒性（ＤＬＴ）および「中程度」毒性の定義に基づく。小児は、初期注入のために病因に入院させる。
【０１１６】
用量制限毒素（ＤＬＴ）を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．０に従って等級付けする。ＤＬＴは、以下のように定義される：血液学的毒性：（ａ）少なくとも７日間続く白血球，グレードＩＶ（ＷＢＣ＜１０００／ｍｍ３）；好中球／顆粒球，グレードＩＶ（ＡＮＣ／ＡＧＣ＜５００／ｍｍ３）±発熱もしくはグレード３〜４の敗血症；（ｂ）少なくとも７日間続くか、もしくはグレード３〜４  出血と関連する任意の期間の血小板  １０，０００〜２５，０００／ｍｍ３、または任意の期間にわたる血小板＜１０，０００／ｍｍ３；（ｃ）輸液で処置され得なかった場合、ヘモグロビン，グレードＩＶ（＜６．５ｇ／ｄｌ）。非血液学的毒性：≧グレードＩＩＩ，（ａ）適切な制吐レジメンの非存在下での悪心および／もしくは嘔吐を除く；（ｂ）グレードＩＩ  脳症とＭＲＩとが相関する；（ｃ）全てのアナフィラキシー反応。全ての他のタイプの毒性は、毛髪喪失を除いて、それらがグレードＩＩＩ（ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  ｖ３．０）に達する場合に用量制限と考えられる。最大耐用量（ＭＴＤ）は、６名の患者のうちのわずか１名がＤＬＴを発生させた最高用量として定義される。
【０１１７】
上記第１相臨床試験は、標準的な３＋３設計を踏襲する。上記研究を、３―患者のコホート相に分け、次いで、標準的な３−６名の患者コホート相に分ける。初期の相の間に、コホートあたり３名の患者が参加し、各患者についての用量は、記載される最初の用量もしくは以前のレベルの用量＋１００％である。最初のＤＬＴが生じる場合、上記３−コホート患者数の用量を、最小６名の患者に拡大する。１／３が第１の過程のＤＬＴを経験する場合、最大さらに３名の患者を、同じ用量レベルで開始する。２名以上が第１の過程のＤＬＴを経験する場合、その用量ではさらなる患者を始めない。この研究設計を、表９および表１０にまとめる。
【０１１８】
【表９】
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【０１１９】
【表１０】
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患者が効力を評価するために適切な臨床試験を受けたとみなされるには、最低２過程が必要とされる。過程は、治療日数＋次の処置のための時間までに必要とされる観察として定義される。全ての患者を、毒性および応答について評価する（表１１）。処置の４回の過程後に、患者は、彼らが完全な寛解の状態になければ、全ての治療から離れるか、最小の残りの疾患を有するか、または上記プロトコルの開始以来、上記処置に少なくとも部分的に応答した。処置されながら部分的な寛解もしくは完全な寛解を経験している患者は、上記薬物を受け続け得、完全な腫瘍寛解を有するそれらの患者は、合計１年間にわたって、３週間毎に上記薬物を継続し得る。
【０１２０】
【表１１】
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個々の用量上昇を可能にする。あるレベルで始めた患者を、そのレベルで少なくとも２過程継続して、蓄積毒性を観察する。毒性がない場合、彼らは、研究全体が次のレベルへと移り次第、次の用量レベルへと移り得る。元の低い用量での第２のサイクルの要件からの除外は、そのときまでに上記研究施設が次のレベルで毒性がないことを示すデータを受け取った場合に許容され、以下のレベル（２レベル高い）へと移った。このことは、３名の以前に処置されなかった患者がより高い用量レベルで処置され、完全に評価可能であり、かつ毒性が示されなかった場合である。用量上昇は、上記研究がＤＬＴを確立した場合、個体が未だ毒性を経験しなかったとしても、ＭＡＤを超えては許容されない。
【０１２１】
個々の用量低下は、毒性の場合には必須である。用量は、以下のように、血液学的毒性以外の毒性に対して調節される：グレード０もしくは１−同用量；グレード２−所定の用量の３０％だけ低下；グレード３−所定の用量の５０％だけ低下および調査者は通知される；グレード４−調査者は診察してもらい、かつ薬物は中止せねばならない。
【０１２２】
反復過程は、以下の場合に３週間間隔で施される：ＷＢＣ≧４，０００ｍｍ３；血小板＞１００，０００ｍｍ３；化学的パラメーターは、処置前値に戻らねばならない。全ての患者は、毒性について評価される；初期の低用量で何らかが起これば、上昇は再度スケジュールが組み直される。
【０１２３】
患者が、疾患が強まっている、許容できない経験、または生命を脅かす副作用もしくは毒性を示す場合、彼らは、上記研究から外される。毒性および／もしくは許容できない副作用が示されず、応答が示される場合、上記患者は、治療に残り得、彼らが再発するかもしくは毒性になるまで、上昇処置スケジュールが考慮され得る。反復過程は、３週間間隔である。４回の処置過程後に、患者は、彼らが上記処置に応答しなかった場合に、全ての治療から離れる。
【０１２４】
患者は、以下のうちのいずれかが示される場合に、１回以上の化学療法過程後に、上記研究から外される：１）疾患が強まっている；２）定量的に許容できない毒性；３）生命を脅かす毒性および／もしくは４）プロトコル要件と適合し得ない患者。
【０１２５】
上記研究の間に遭遇した任意の有害事象は、ＣＴＣＡＥ  ｖ３．０等級付けシステム（０〜４）に従って評価される。全ての有害事象の期間および処置は、記録されるべきである。バイタルサイン、体重、血液学、ＣＭＰ、および尿検査を含む完全な検査は、有害事象が示される場合に行われる。
【０１２６】
全ての病変は記載され、登録時に、治療の間に２サイクル毎に、および研究の最後に、測定される。４−ＨＯＯＩが測定可能な病変のサイズの退縮を誘導する能力は、モニターされる（完全応答、少なくとも４週間にわたる全ての検出可能な病変の消失；部分的応答、上記指数病変の２本の垂直直径の積の合計の≧５０％低下および少なくとも４週間にわたって新たな病変なし；安定な疾患もしくは変化なし、少なくとも４週間にわたって≦５０％変化；進行性の疾患、病変サイズの＞２５％増大）。
【０１２７】
全ての患者は、以下を条件として、バイオアベイラビリティー研究のために有効である：１）彼らがこのような研究を承諾する；２）彼らが反復する血液サンプリングのために適切な静脈アクセスを有する；および３）彼らが処置後の複数回の薬物サンプリングに応じられ得る。１名〜２名の患者は、各用量レベルにおいて評価される。薬物動態研究については、１．５〜２ｍｌの血液（ヘパリンチューブ）を、各サンプルについてに集める。サンプルを直ぐに遠心分離して、血漿を分離し、直ぐに凍結する。ベースラインサンプル（−５分および０時間）を、薬物投与前に集める。次いで、サンプルを、処置の５分後、１５分後、３０分後、および６０分後に集め、次いで、薬物投与の２時間後、４時間後、８時間後、２４時間後、３６時間後、および４８時間後に集める。血液サンプルを、サンプリングの直後に、１０００ｇで１０分間にわたって室温で遠心分離し、血漿を取り出し、アッセイするまで−７０℃で保存する。４−ＨＯＯＩおよび同定された代謝産物についてのバイオアベイラビリティープロフィールパラメーターが決定される（ＡＵＣ、ＣＬ、Ｔｍａｘ、Ｖｄ、Ｔ１／２β、およびＣｍａｘを含む）。
【０１２８】
本開示の原理が適用され得る多くの考えられる実施形態に鑑みれば、例示される実施形態が、例に過ぎないことが認識されるべきであり、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。むしろ、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によって定義される。従って、本発明者は、本発明者の発明全てが、これら特許請求の範囲の範囲および趣旨内に入るとして特許請求する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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