(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
同一分子内にアルキレンオキシド基及び２個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＡと、同一分子内に常磁性を発現する部分及び１個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＢとを、該モノマーＡに対して５乃至２００モル％量の重合開始剤Ｃの存在下で重合させることにより得られる高分岐ポリマーであって、
前記モノマーＢが式［１］で表される化合物である、高分岐ポリマー。
【化１】
0005650993.tif 000007
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアルキル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ１３（ここでＲ１３は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又は炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表し、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ９及びＲ１２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアルキル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ１４（ここでＲ１４は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又はフェニル基（このフェニル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基、−ＣＯＯＲ１５（ここでＲ１５は、水素原子又は炭素原子数
１乃至６のアルキル基を表す。）、又はスルホ基で置換されていてもよい）を表し、Ｍは、マンガン（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩＩ）及び銅（ＩＩ）からなる群から選ばれる少なくとも１つを表す。なお、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０及びＲ１１の少なくとも１つは、炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表す。］
【請求項２】
前記モノマーＡがポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートである、請求項１に記載の高分岐ポリマー。
【請求項３】
前記モノマーＡに対して１乃至１００モル％量の前記モノマーＢを用いることにより得られる、請求項１又は請求項２に記載の高分岐ポリマー。
【請求項４】
前記モノマーＢが、マンガン（ＩＩＩ）プロトポルフィリン錯体である、請求項１乃至請求項３のうちいずれか一項に記載の高分岐ポリマー。
【請求項５】
同一分子内にアルキレンオキシド基及び２個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＡと、同一分子内に常磁性を発現する部分及び１個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＢとを、該モノマーＡに対して５乃至２００モル％量の重合開始剤Ｃの存在下で重合させることを特徴とする、常磁性を発現する部分を有する高分岐ポリマーの製造方法であって、
前記モノマーＢが式［１］で表される化合物である、製造方法。
【化２】
0005650993.tif 000008
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアルキル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ１３（ここでＲ１３は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又は炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表し、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ９及びＲ１２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアルキル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ１４（ここでＲ１４は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又はフェニル基（このフェニル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基、−ＣＯＯＲ１５（ここでＲ１５は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）、又はスルホ基で置換されていてもよい）を表し、Ｍは、常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子を表す。なお、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１０及びＲ１１の少なくとも１つは、炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表す。］
【請求項６】
前記モノマーＡがポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートであり、前記モノマーＢが、中心金属として常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子を有するところのプロトポルフィリン錯体である、請求項５に記載の高分岐ポリマーの製造方法。
【請求項７】
前記常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子がマンガン（ＩＩＩ）である、請求項５又
は請求項６に記載の高分岐ポリマーの製造方法。
【請求項８】
請求項１乃至請求項４のうちいずれか一項に記載の高分岐ポリマーを含むＭＲＩ造影剤。
【請求項９】
請求項１乃至請求項４のうちいずれか一項に記載の高分岐ポリマーを体内に投与することを特徴とする、ＭＲＩ造影方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、常磁性を有する新規な高分岐ポリマーと、そのＭＲＩ造影剤応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、臨床現場において使用されている磁気共鳴画像（ＭＲＩ）法とは、水のプロトンの信号を画像化する技術であり、生体内に存在するプロトンの位置情報と周囲のコントラストを２次元で濃淡表示する技術である。プロトンの位置情報は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）内の静磁場を意図的に歪める傾斜磁場を用いることによって得られ、コントラストは水や脂質などのプロトンのＮＭＲ情報として得られるスピン密度、緩和時間、拡散速度、化学シフト、位相などによって決定される。特に緩和時間は、観測されるスピンを含む水分子と周辺分子の間の相対的な配置や運動によって変化し、周囲の組織の状態をよく反映することから、種々の診断において広く用いられている。
このＭＲＩ法に用いられるＭＲＩ造影剤は、生体組織中の水の緩和時間を変化させることにより、その分布量が異なる組織間にコントラストを付加する。すなわち造影剤は水プロトンの緩和時間の変化を通し間接的に検出される。
【０００３】
上記ＭＲＩ造影剤としては、ガドリニウムやマンガンを含有するＴ1緩和造影剤や、酸
化鉄を用いたＴ2緩和造影剤が用いられており、これらの金属イオンと水プロトンの相互
作用により縦横の緩和が促進される。なお、これらの金属イオンは有毒である傾向があるため、生体組織が吸収する能力を低減させるために、実際には配位子によってキレート化されているものが使用される。しかしながら、このキレート化は金属イオンが有している緩和能力をも減少させ、造影剤としての効果を低減させることにもつながっている。そこで、分子サイズに応じた回転相関時間の増大による緩和能上昇効果（常磁性体緩和促進効果）を利用した造影剤（特許文献１）、超常磁性体の酸化鉄ナノ粒子をポリマーで複合化し平均粒子径が２６ｎｍ程度のガン細胞選択性を有する造影剤（非特許文献１）、ポリマー主鎖構造からスペーサーアームを付与した巨大分子造影剤（特許文献２）などが報告されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従来より広く使用されているＭＲＩ造影剤であるＧｄ−ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）錯体は、水溶性を示す低分子化合物であるため、血流に乗って臓器・組織に広く分布できる。
しかしながらＧｄ−ＤＴＰＡは脂溶性が低いために肝臓などの臓器にはほとんど取り込まれず、また低分子化合物であることから、ガン細胞の造影については感度が低く、ターゲット臓器及び疾患によっては造影に限界がある。
【０００５】
このように、これまで提案された造影剤にあっては、その緩和能力、生体安全性、ターゲット臓器及び疾患の全てにおいて満足できるものではなく、さらなる性能の向上が望まれていた。
本発明は、上記の事情に鑑みなされたものであって、すなわち、充分な緩和能力を持つとともに、金属イオンの解離がなく生体安全性に優れ、適度な水溶性及び脂溶性を有し、広い臓器分布及び臓器への取り込み効果を有することで、幅広いターゲット臓器及び疾患の造影が可能な、新規なＭＲＩ造影剤に使用可能な高分岐ポリマーの提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意検討した結果、ポリアルキレングリコ
ールジ（メタ）アクリル構造を主骨格とする高分岐ポリマーに常磁性を発現する部分を導入した高分岐ポリマーが、水溶性及び脂溶性のバランスに優れ、大きな常磁性体緩和促進効果を発現して高い緩和能を有する新規なＭＲＩ造影剤として有用であることを見いだし、本発明を完成させた。
【０００７】
すなわち、本発明は、第１観点として、同一分子内にアルキレンオキシド基及び２個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＡと、同一分子内に常磁性を発現する部分及び１個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＢとを、該モノマーＡに対して５乃至２００モル％量の重合開始剤Ｃの存在下で重合させることにより得られる高分岐ポリマーに関する。
第２観点として、前記モノマーＡがポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートである、第１観点に記載の高分岐ポリマーに関する。
第３観点として、前記モノマーＡに対して１乃至１００モル％量の前記モノマーＢを用いることにより得られる、第１観点又は第２観点に記載の高分岐ポリマーに関する。
第４観点として、前記モノマーＢの常磁性を発現する部分がキレート錯体である、第１観点乃至第３観点のうちいずれか一項に記載の高分岐ポリマーに関する。
第５観点として、前記キレート錯体がポルフィリン化合物を配位子とするキレート錯体である、第４観点に記載の高分岐ポリマーに関する。
第６観点として、前記モノマーＢが式［１］で表される化合物である、第１観点乃至第３観点のうちいずれか一項に記載の高分岐ポリマーに関する。
【化１】
0005650993.tif 000002
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアルキル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ13（ここでＲ13は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又は炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表し、Ｒ3、Ｒ6、Ｒ9及びＲ12は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアル
キル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ14（ここでＲ14は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又はフェニル基（このフェニル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基、−ＣＯＯＲ15（ここでＲ15は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）、又はスルホ基で置換されていてもよい）を表し、Ｍは、常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子を表す。なお、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ10及びＲ11の少なくとも１つは、炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表す。］
第７観点として、前記Ｍが、マンガン（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩＩ）及び銅（ＩＩ）からなる群から選ばれる少なくとも１つである、第６観点に記載の高分岐ポリマーに関する。
第８観点として、前記モノマーＢが、マンガン（ＩＩＩ）プロトポルフィリン錯体である、第７観点に記載の高分岐ポリマーに関する。
第９観点として、同一分子内にアルキレンオキシド基及び２個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＡと、同一分子内に常磁性を発現する部分及び１個以上のラジカ
ル重合性二重結合を有するモノマーＢとを、該モノマーＡに対して５乃至２００モル％量の重合開始剤Ｃの存在下で重合させることを特徴とする、常磁性を発現する部分を有する高分岐ポリマーの製造方法に関する。
第１０観点として、前記モノマーＡがポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートであり、前記モノマーＢが、中心金属として常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子を有するところのプロトポルフィリン錯体である、第９観点に記載の高分岐ポリマーの製造方法に関する。
第１１観点として、前記常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子がマンガン（ＩＩＩ）である、第１０観点に記載の高分岐ポリマーの製造方法に関する。
第１２観点として、第１観点乃至第８観点のうちいずれか一項に記載の高分岐ポリマーを含むＭＲＩ造影剤に関する。
第１３観点として、第１観点乃至第８観点のうちいずれか一項に記載の高分岐ポリマーを体内に投与することを特徴とする、ＭＲＩ造影方法に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の常磁性を有する高分岐ポリマーは、非イオン性の水溶性ポリマーであり、大きな常磁性体緩和促進効果により高い緩和能を有する新規なＭＲＩ用造影剤として利用可能である。
また、上記高分岐ポリマーを用いた本発明のＭＲＩ造影剤は、従来のＭＲＩ造影剤と同等以上の感度を有し、また幅広い臓器の造影が可能であり、特に従来のＭＲＩ造影剤であるＧｄ−ＤＴＰＡが苦手としていた肝臓の造影において、高いＭＲＩ造影効果が得られる。
さらに、本発明のＭＲＩ造影剤は、高分岐ポリマー粒子の大きさが５〜５００ｎｍ程度と従来のＭＲＩ造影剤と比べて比較的大きいため、ガン細胞に対する選択的な造影剤としての応用が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、実施例１で調製した化合物１及び高分岐ポリマー１、並びにプロトポルフィリンＩＸのＵＶスペクトルを示す図である。
【図２】図２は、ＭＲＩファントム画像撮影に用いた試料の配置を示す図である。
【図３】図３は、ＭＲＩ装置を用い、反復時間：Ｔｉを変化させて測定した、高分岐ポリマー含有生理食塩水（０．００１、０．０１、０．１、１．０、２．０ｍＭ）並びに対照物質（蒸留水、生理食塩水、Ｇｄ−ＤＴＰＡ１ｍＭ生理食塩水溶液）のファントムのＴ1強調画像である。
【図４】図４は、ＭＲＩ装置を用い、エコー時間：Ｔｅを変化させて測定した高分岐ポリマー含有生理食塩水（０．００１、０．０１、０．１、１．０、２．０ｍＭ）並びに対照物質（蒸留水、生理食塩水、Ｇｄ−ＤＴＰＡ１ｍＭ生理食塩水溶液）のファントムのＴ2強調画像である。
【図５】図５は、ＭＲＩ装置を用いて測定した、高分岐ポリマー１を投与したマウスのＴ１Ｗ１画像である。
【図６】図６は、高分岐ポリマー１投与群とコントロール群の、各臓器のマンガン量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、同一分子内にアルキレンオキシド基及び２個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＡと、同一分子内に常磁性を発現する部分及び１個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＢとを、該モノマーＡに対して５乃至２００モル％量の重合開始剤Ｃの存在下で重合させることにより得られる高分岐ポリマーである。また本発明の高分岐ポリマーは、いわゆる開始剤断片組込み型高分岐ポリマーであり、その末端に重合に使用した重合開始剤Ｃの断片を有している。
【００１１】
［モノマーＡ］
本発明で用いる同一分子内にアルキレンオキシド基及び２個以上のラジカル重合性二重結合を有するモノマーＡとしては、例えば同一分子内にアルキレンオキシド基と、ビニル基又は（メタ）アクリル基の何れか一方又は双方を２個以上有することが好ましく、アルキレンオキシド基を有するジビニル化合物又はジ（メタ）アクリレート化合物であることがより好ましい。特に好ましいものとして、アルキレンオキシド基を有するジ（メタ）アクリレート化合物、すなわちポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートが挙げられる。なお本発明では、（メタ）アクリレートとは、アクリレートとメタクリレートの両方をいう。例えばポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートとは、ポリアルキレングリコールジアクリレートとポリアルキレングリコールジメタクリレートの双方を表す。
上記ポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートとしては、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート等が挙げられ、中でもポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレートがより好ましい。
これらポリアルキレングリコールジ（メタ）アクリレートにおけるアルキレンオキシド基の付加モル数は、１乃至２００モル、好ましくは５乃至１００モル、より好ましくは１０乃至２０モルである。
【００１２】
［モノマーＢ］
本発明で用いる同一分子内に常磁性を発現する部分及び１個以上のラジカル重合性二重結合とを有するモノマーＢにおいて、常磁性を発現する部分としては、常磁性金属と、ジエチレントリアミン五酢酸誘導体やポルフィリン誘導体等の配位子とからなるキレート錯体、或いは、ニトロキシル基等の有機ラジカル構造を分子内に有する化合物（例えば特許文献３参照）などが挙げられる。
【００１３】
好ましくは、モノマーＢは下記式［１］で表される化合物である。
【化２】
0005650993.tif 000003
上記式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ10及びＲ11は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアルキル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ13（ここでＲ13は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又は炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表す。
Ｒ3、Ｒ6、Ｒ9及びＲ12は、それぞれ独立して、水素原子、炭素原子数１乃至６のアル
キル基（このアルキル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基又は−ＣＯＯＲ14（ここでＲ14は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）で置換されていてもよい）、又はフェニル基（このフェニル基は、ホルミル基、アミノ基、ヒドロキシル基、−ＣＯＯＲ15（ここでＲ15は、水素原子又は炭素原子数１乃至６のアルキル基を表す。）、又はスルホ基で置換されていてもよい）を表す。
またＭは、常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子を表す。
なお、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ10及びＲ11の少なくとも１つは、炭素原子数２乃至６のアルケニル基を表す。
【００１４】
ここで上記Ｒ1乃至Ｒ12の定義における炭素原子数１乃至６のアルキル基、並びにＲ13
乃至Ｒ15の定義における炭素原子数１乃６のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、シクロペンチル基、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
また、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ10及びＲ11の定義における炭素原子数２乃至６のアルケニル基としては、ビニル基、アリル基、３−ブテニル基、４−ペンテニル基、５−ヘキセニル基等が得られる。
【００１５】
したがって、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ10及びＲ11の具体例としては、水素原子、メチル基、ホルミルメチル基、カルボキシメチル基、エトキシカルボニルメチル基、アミノメチル基、ヒドロキシメチル基、エチル基、２−ホルミルエチル基、２−カルボキシエチル基、１−（メトキシカルボニル）エチル基、２−アミノエチル基、２−ヒドロキシエチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、３−アミノプロピル基、３−ヒドロキシプロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ビニル基、アリル基等が挙げられ、好ましくは水素原子、メチル基、カルボキシメチル基、エチル基、２−カルボキシエチル基、ビニル基が挙げられる。
また、Ｒ3、Ｒ6、Ｒ9及びＲ12の具体例としては、水素原子、メチル基、ホルミルメチ
ル基、カルボキシメチル基、エトキシカルボニルメチル基、アミノメチル基、ヒドロキシメチル基、エチル基、２−ホルミルエチル基、２−カルボキシエチル基、１−（メトキシカルボニル）エチル基、２−アミノエチル基、２−ヒドロキシエチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、３−アミノプロピル基、３−ヒドロキシプロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、フェニル基、ｏ−トルイル基、ｍ−トルイル基、ｐ−トルイル基、ｐ−ホルミルフェニル基、ｐ−カルボキシフェニル基、ｍ−エトキシカルボニルフェニル基、ｐ−アミノフェニル基、ｐ−ヒドロキシフェニル基、ｐ−スルホフェニル基等が挙げられ、好ましくは水素原子、メチル基、フェニル基、ｐ−カルボキシフェニル基、ｐ−スルホフェニル基が挙げられる。
【００１６】
上記式［１］におけるＭ（常磁性を有する原子価２乃至５の金属原子）は、具体的には、マグネシウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、バナジウム、クロム、マンガン、鉄、コバルト、ニッケル、銅、亜鉛、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、ルテニウム、ロジウム、パラジウム、銀、カドミウム、スズ、ハフニウム、タンタル、タングステン、レニウム、オスミウム、イリジウム、白金、金、水銀及び鉛からなる群から選択される原子価２の金属原子、又は酸素原子、ハロゲン原子、アシル基、ニトロ基又はシアノ基を対アニオンとして有してもよい原子価３乃至５の金属原子である。
【００１７】
２価の金属原子の具体例としては、マグネシウム（ＩＩ）、カルシウム（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、亜鉛（ＩＩ）、ルテニウム（ＩＩ）、パラジウム（ＩＩ）、スズ（ＩＩ）、オスミウム（ＩＩ）、イリジウム（ＩＩ）、白金（ＩＩ）、鉛（ＩＩ）等が挙げられ、好ましくは亜鉛（ＩＩ）、ルテニウム（ＩＩ）、パラジウム（ＩＩ）、スズ（ＩＩ）、オスミウム（ＩＩ）、イリジウム（ＩＩ）、白金（ＩＩ）が挙げられる。
３価の金属原子の具体例としては、アルミニウム（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩＩ）、ロジウム（ＩＩＩ）、インジウム（ＩＩＩ）、アンチモン（ＩＩＩ）、ビスマス（ＩＩＩ）等が挙げられ、好ましくはロジウム（ＩＩＩ）が挙げられる。
４価の金属原子の具体例としては、ゲルマニウム（ＩＶ）、スズ（ＩＶ）等が挙げられ、好ましくはスズ（ＩＶ）が挙げられる。
５価の金属原子の具体例としては、モリブデン（Ｖ）、アンチモン（Ｖ）、ビスマス（Ｖ）等が挙げられる。
これらの中でもＭは、マンガン（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩＩ）又は銅（ＩＩ）であることが好ましく、マンガン（ＩＩＩ）であることが最も好ましい。
【００１８】
Ｍが原子価３乃至５の金属原子の際に有していても良い対アニオンとしては、ハロゲン原子及びアシル基が好ましい。
また金属Ｍと対アニオンの好ましい組合せとしては、例えば、マンガン（ＩＩＩ）−ハロゲン原子、マンガン（ＩＩＩ）−アセチル基、鉄（ＩＩＩ）−ハロゲン原子、鉄（ＩＩＩ）−アセチル基、コバルト（ＩＩＩ）−ハロゲン原子、コバルト（ＩＩＩ）−アセチル基等が挙げられ、マンガン（ＩＩＩ）−ハロゲン原子、マンガン（ＩＩＩ）−アセチル基がより好ましい。
【００１９】
上記式［１］で表される化合物の中でも、モノマーＢはマンガン（ＩＩＩ）プロトポルフィリン錯体であることが最も好ましい。
【００２０】
上記モノマーＢは、前記モノマーＡに対して、１乃至１００モル％の量で使用され、好ましくは２乃至９０モル％、より好ましくは５乃至５０モル％の量で使用される。
【００２１】
［重合開始剤Ｃ］
本発明における重合開始剤Ｃとしては、好ましくはアゾ系重合開始剤が用いられる。
アゾ系重合開始剤としては、例えば以下の（１）〜（５）に示す化合物を挙げることができる。
（１）アゾニトリル化合物：
２，２’−アゾビスイソブチロニトリル、２，２’−アゾビス（２−メチルブチロニトリル）、２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）、１，１’−アゾビス（１−シクロヘキサンカルボニトリル）、２，２’−アゾビス（４−メトキシ−２，４−ジメチルバレロニトリル）、２−（カルバモイルアゾ）イソブチロニトリル等；
（２）アゾアミド化合物：
２，２’−アゾビス｛２−メチル−Ｎ−［１，１−ビス（ヒドロキシメチル）−２−ヒドロキシエチル］プロピオンアミド｝、２，２’−アゾビス｛２−メチル−Ｎ−［２−（１−ヒドロキシブチル）］プロピオンアミド｝、２，２’−アゾビス［２−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）プロピオンアミド］、２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−プロペニル）−２−メチルプロピオンアミド］、２，２’−アゾビス（Ｎ−ブチル−２−メチルプロピオンアミド）、２，２’−アゾビス（Ｎ−シクロヘキシル−２−メチルプロピオンアミド）等；
（３）環状アゾアミジン化合物：
２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］ジヒドロクロリド、２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］ジスルフェートジヒドレート、２，２’−アゾビス［２−［１−（２−ヒドロキシエチル）−２−イミダゾリン−２−イル］プロパン］ジヒドロクロリド、２，２'−アゾビス［２−（２−イミ
ダゾリン−２−イル）プロパン］、２，２'−アゾビス（１−イミノ−１−ピロリジノ−
２−メチルプロパン）ジヒドロクロリド等；
（４）アゾアミジン化合物：
２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）ジヒドロクロリド、２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］テトラヒドレート等；
（５）その他：
２，２’−アゾビスイソ酪酸ジメチル、４，４’−アゾビス−４−シアノバレリン酸、２，２’−アゾビス（２，４，４−トリメチルペンタン）、１，１’−アゾビス（１−アセトキシ−１−フェニルエタン）等。
【００２２】
得られる高分岐ポリマーへの水溶性付与の観点から、上記アゾ系重合開始剤の中でも好ましいものは、（１）アゾニトリル化合物、（２）アゾアミド化合物、（４）アゾアミジン化合物であり、特に２，２’−アゾビス（２−メチルブチロニトリル）が好ましい。
【００２３】
上記重合開始剤Ｃは、前記モノマーＡに対して、５乃至２００モル％の量で使用され、好ましくは２０乃至２００モル％、より好ましくは５０乃至２００モル％の量で使用される。
【００２４】
＜高分岐ポリマーの製造方法＞
本発明の高分岐ポリマーは、前述のモノマーＡとモノマーＢとを、モノマーＡに対して所定量の重合開始剤Ｃの存在下で重合させることにより得られ、該重合方法としては公知の方法、例えば溶液重合、分散重合、沈殿重合、及び塊状重合等が挙げられ、中でも溶液重合又は沈殿重合が好ましい。特に分子量制御の点から、有機溶媒中での溶液重合によって反応を実施することが好ましい。
【００２５】
このとき用いられる有機溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルベンゼン、テトラリン等の芳香族炭化水素系溶媒；ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタン、ミネラルスピリット、シクロヘキサン等の脂肪族又は脂環式炭化水素系溶媒；塩化メチル、臭化メチル、ヨウ化メチル、メチレンジクロライド、クロロホルム、四塩化炭素、トリクロロエチレン、パークロロエチレン、オルトジクロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル、メトキシブチルアセテート、メチルセロソルブアセテート、エチルセロソルブアセテート、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート等のエステル系又はエステルエーテル系溶媒；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、メチルセロソルブ、エチルセロソルブ、ブチルセロソルブ、プロピレングリコールモノメチルエーテル等のエーテル系溶媒；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジ−ｎ−ブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン系溶媒；メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、２−エチルヘキシルアルコール、ベンジルアルコール、エチレングリコール等のアルコール系溶媒；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド系溶媒；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒、Ｎ−メチル−２−ピロリドン等の複素環式化合物系溶媒、並びにこれらの２種以上の混合溶媒が挙げられる。
【００２６】
これらのうち好ましいのは、芳香族炭化水素系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、エーテル系溶媒、ケトン系溶媒、アルコール系溶媒、アミド系溶媒等であり、特に好ましいものはベンゼン、トルエン、キシレン、オルトジクロロベンゼン、酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン等であり、その中でもｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドンがより好ましい。
【００２７】
本発明の重合反応を有機溶剤の存在下で行う場合、前記モノマーＡに対する前記有機溶媒の質量は、通常５乃至１２０質量部であり、好ましくは１０乃至１１０質量部であり、
３０乃至１００質量部がより好ましい。
【００２８】
重合反応は常圧、加圧密閉下、又は減圧下で行われ、装置及び操作の簡便さから常圧下で行うのが好ましい。また、Ｎ2等の不活性ガス雰囲気下で行うのが好ましい。
重合温度は、反応混合物の沸点以下であれば任意であるが、重合効率と分子量調節の点から、好ましくは５０℃以上２００℃以下であり、さらに好ましくは８０℃以上１５０℃以下であり、８０℃以上１３０℃以下がより好ましい。
反応時間は、反応温度や、モノマーＡ、モノマーＢ及び重合開始剤Ｃの種類及び割合、重合溶媒種等によって変動するものであるため一概には規定できないが、好ましくは３０分以上７２０分以下、より好ましくは４０分以上５４０分以下である。
【００２９】
本発明の高分岐ポリマーのゲル浸透クロマトグラフィーによるポリスチレン換算で測定される重量平均分子量（Ｍｗ）は、１，０００乃至４００，０００、好ましくは２，０００乃至２００，０００である。
また該高分岐ポリマーの１次粒子の平均粒子径（動的光散乱法による）は、好ましくは１ｎｍ以上５００ｎｍ以下、さらに好ましくは５ｎｍ以上２００ｎｍ以下である。
【００３０】
［ＭＲＩ造影剤］
本発明の常磁性を有する高分岐ポリマーは、種々の分野への応用が期待されるが、中でも常磁性部位を高密度に担持できる性質や大きさから、高い常磁性体緩和促進効果とガン細胞選択性などを有することが期待され、ＭＲＩ造影剤として有用である。
すなわち、本発明の常磁性を有する高分岐ポリマーを含むＭＲＩ造影剤もまた本発明の対象である。
本発明のＭＲＩ造影剤は、通常注射用蒸留水、生理食塩水、リンゲル液等の溶媒に分散、懸濁又は溶解等の状態で用いられ、さらに必要に応じて、薬理学的に許容され得る担体、賦形剤等の添加剤を含めることができる。
本発明の上記ＭＲＩ造影剤は、細胞などに適用し得るほか、血管（静脈、動脈）内投与、経口投与、直腸内投与、腟内投与、リンパ管内投与、関節内投与等によって生体内に投与することができ、好ましくは、水剤、乳剤又は懸濁液等の形態で静脈内投与や経口投与によって投与する。
上記ＭＲＩ造影剤に含められ得る添加剤としては、その投与形態、投与経路等によっても異なるが、具体的には、注射剤の場合には緩衝剤、抗菌剤、安定化剤、溶解補助剤、賦形剤等が単独又は組み合わせて用いられ、経口投与剤（具体的には水剤、シロップ剤、乳剤、懸濁液等）の場合、着色剤、保存剤、安定化剤、懸濁化剤、乳化剤、粘稠剤、甘味剤、芳香剤等が単独又は組み合わせて用いられる。各種添加剤は、通常当分野で用いられるものが使用される。
【００３１】
本発明の上記ＭＲＩ造影剤は、従来のＭＲＩ用造影剤に準じて投与、造影することができる。また上記ＭＲＩ造影剤は、ヒト以外にも各種動物用の造影剤としても好適に用いることができ、その投与形態、投与経路、投与量等は対象となる動物の体重や状態によって適宜選択する。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例を挙げて、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
なお、実施例において、試料の調製及び物性の分析に用いた装置及び条件は、以下の通りである。
【００３３】
（１）ＧＰＣ（ゲル浸透クロマトグラフィー）
装置：東ソー（株）製  ＨＬＣ−８２２０ＧＰＣ
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  ＳＢ−８０３ＨＱ、ＳＢ−８０４ＨＱ
カラム温度：４０℃
溶媒：１０ｍＭ  ＬｉＢｒ添加ＤＭＦ
検出器：ＲＩ
（２）動的光散乱光度計（粒径測定）
装置：大塚電子（株）製  ＦＤＬＳ−３０００
（３）ＵＶ分光光度計（吸光度測定）
装置：（株）島津製作所製  ＵＶ−３６００
（４）ＭＲＩファントム試験／ＭＲＩ造影試験
装置：Ｖａｒｉａｎ社製  ＵＮＩＴＹ  ＩＮＯＶＡ  ４．７Ｔ
グラジエントコイル（１０ｇａｕｓｓ／ｃｍ）
Ｒａｐｉｄ社製、ラット＆マウス用ボリュームコイル（トランスミッション用）
ＭＲＩパルス系列（送受信用）
ａ）ｒ1測定（反転回復スピンエコー法）
ＴＲ／ＴＥ＝４０００／１０
ＦＯＶ  １０×５ｃｍ
Ｓｌｉｃｅ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ＝３ｍｍ
ＮＥＸ  １
回復時間（ＴＩ）＝０．０００１、０．００１、０．０２５、０．０１２、０．０６１、０．３、１．５秒
Ｓｃａｎ  Ｔｉｍｅ  ６０分
ｂ）ｒ2測定（スピンエコー法）
ＴＲ／ＴＥ＝４０００／可変
ＦＯＶ  １０×５ｃｍ
Ｓｌｉｃｅ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ＝３ｍｍ
ＮＥＸ  １
ＴＥ＝０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０８、０．１３、０．２秒
Ｓｃａｎ  Ｔｉｍｅ  ６０分
ｃ）２Ｄ−ＳＥＭＳ（Ｔ１Ｗ１）画像測定
マウス全身：
ＴＲ／ＴＥ＝３００／１５
ＦＯＶ  １２×６ｃｍ，Ｍａｔｒｉｘ  ２５６×１２８
ＮＥＸ  ６（ｓｃａｎ  ４分００秒）
Ｓａｇｉｔｔａｌ  ２ｍｍ×１３ｓｌｉｃｅｓ，  ｇａｐ  ０ｍｍ
マウス下腹部：
ＴＲ／ＴＥ＝３００／１５
ＦＯＶ  ４×４ｃｍ，  Ｍａｔｒｉｘ  ２５６×２５６
ＮＥＸ  ４（ｓｃａｎ  ５分２０秒）
Ｔｒａｎｓ  １．５ｍｍ×１１ｓｌｉｃｅｓ，  ｇａｐ  ０ｍｍ
（５）ＩＣＰ−ＭＳ（マンガン量分析）
装置：Ａｇｉｌｅｎｔ社製  ７５００ｃｓ
【００３４】
また、略記号は以下の意味を表す。
ＡＭＢＮ：２，２’−アゾビス（２−メチルブチロニトリル）
ＰＥＧＤＭＡ：ポリ（エチレングリコール）ジメタクリレート（アルドリッチ社製、Ｍｎ＝７５０）
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＩＰＥ：ジイソプロピルエーテル
【００３５】
［実施例１］常磁性を有する高分岐ポリマー１の合成
（手順１：化合物１の合成）
プロトポルフィリンＩＸ［アルドリッチ社製］５６３ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及び酢酸マンガン四水和物［和光純薬工業（株）製］２．４５ｇ（１０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ２０ｍＬに加え、３時間加熱撹拌した。ＵＶスペクトルにより反応の収束を確認した後、反応溶媒を留去し、残渣を水で洗浄することにより、下記式で表される化合物１を６５０ｍｇ得た（収率９６％）。得られた化合物１並びにプロトポルフィリンＩＸのＵＶスペクトルを図１に示す。
【００３６】
【化３】
0005650993.tif 000004
【００３７】
（手順２：高分岐ポリマー１の合成）
５００ｍＬの反応フラスコに、（手順１）に従って合成した化合物１  １．８２ｇ（２．７ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ２５０ｇを仕込み、攪拌しながら５分間窒素を流し込み、内温が１００℃になるまで加熱した。
別の２００ｍＬの反応フラスコに、ＰＥＧＤＭＡ２０．０ｇ（２７ｍｍｏｌ）、ＡＭＢＮ２．６０ｇ（１３．５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ２５ｇを仕込み、攪拌しながら５分間窒素を流し込み窒素置換を行った。
前述の５００ｍＬ反応フラスコ中の１００℃に加熱してある溶液中に、ＰＥＧＤＭＡ、及びＡＭＢＮが仕込まれた前記２００ｍＬの反応フラスコから、滴下ポンプを用いて、内容物を３０分間かけて滴下した。滴下終了後、そのまま１００℃で１時間熟成させた。
次に、この反応液を濃縮後、ＤＭＦ８０ｇに溶解させた。この溶液をＩＰＥ／ＤＭＦ混合液（質量比９：１）１，８００ｇに添加してポリマーを再沈殿させた。上澄み液をデカンテーションで除去し、得られた残渣を再度同様の操作によりに再沈殿させた。再度上澄み液をデカンテーションし、得られた残渣を水に加え、ＲＣ透析チューブ［スペクトラム・ラボラトリーズ社製、商品名；Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ、分画分子量；３．５ｋダルトン］を用いて７日間透析操作を行った。透析終了後、溶液を濃縮し得られた残渣を真空乾燥して、油状物の目的物（高分岐ポリマー１）を４．８ｇ得た。
【００３８】
得られた目的物のＧＰＣによるポリスチレン換算で測定される重量平均分子量Ｍｗは１２，２００、分散度：Ｍｗ（重量平均分子量）／Ｍｎ（数平均分子量）は２．１であった。また、該高分岐ポリマーの数平均粒子径は４．７ｎｍ、マンガン含有量は０．９０質量％であった。得られた高分岐ポリマー１のＵＶスペクトルを図１にあわせて示す。
【００３９】
［実施例２］急性毒性試験
＜評価方法＞
高分岐ポリマー１のマウスにおける静脈内投与による急性毒性試験を実施した。
試験には日本チャールス・リバー（株）より購入した投与時５．５週齢のＣｒｌｊ：ＣＤ１（ＩＣＲ）雄マウスを供試し、１群５匹とした。処理群は高分岐ポリマー１の質量が１０、２０及び４０ｍｇ／頭となるように設定した。また、溶媒は生理食塩水を使用し、０．１ｍＬ／頭の容量にて投与した。対照群には生理食塩水のみを投与した。投与後２日間にわたり死亡時期と症状の観察、体重測定を行い、血液生化学検査、臓器重量測定、肉眼病理検査及び組織病理検査を実施した。
＜結果＞
処理群、対象群の何れの群でも死亡は認められなかった。
処理群（投与群）では、投与３０分以内に自発運動の減少及び腹臥位が認められたが、投与１時間後には消失していた。同様に、投与３時間後及び６時間後には着色尿が認められたが、投与１日後には消失していた。
また、体重変化、臓器重量、血液生化学検査、肉眼病理検査については、何れの群でも著変は認められなかった。さらに、組織病理検査においても、何れの群でも検体投与に起因したと考えられる変化は認められなかった。
以上より、高分岐ポリマー１のマウスにおける静脈内投与による半数致死量：ＬＤ50は＞４０ｍｇ／頭であることが判明した。
【００４０】
［実施例３］ＭＲＩファントムによるＴ1及びＴ2緩和時間測定及びファントム画像
高分岐ポリマー１を、生理食塩水［（株）大塚製薬工場製、製品名：大塚生食注］にて０．００１、０．０１、０．１、１．０、２．０ｍＭにそれぞれ希釈した。調製した希釈液各々の０．９ｍＬを１．５ｍｌチューブに入れ、ＭＲＩ測定用ファントムとした。対照物質として、蒸留水、生理食塩水、及びＧｄ−ＤＴＰＡ［バイエル薬品（株）製、製品名：マグネビスト］１ｍＭ生理食塩水溶液（ＭＶ１と略記する）を用いた。なお図２に後述するＭＲＩファントム画像撮影（図３及び図４参照）における試料の配置を示した。
各濃度での高分岐ポリマー１のＴ1及びＴ2緩和時間測定データを表１（ａ）並びに表１（ｂ）に示す。
【００４１】
【表１】
0005650993.tif 000005
【００４２】
上記結果より、Ｔ1の緩和能：ｒ1（ｍＭ-1ｓ-1）（縦軸１/Ｔ1、横軸Ｔ1プロットの傾
き）及びＴ2の緩和能：ｒ2（ｍＭ-1ｓ-1）（縦軸１/Ｔ2、横軸Ｔ2プロットの傾き）を算
出したところ、ｒ1＝５．９３（標準偏差：２）、ｒ2＝２１．３（標準偏差：４）であった。
これは、現在市販のＭＲＩ造影剤であるＧｄ−ＤＴＰＡ（マグネビスト）の緩和能（ｒ1：約３〜４、ｒ2：約４〜５）と比較していずれも大きな値であり、本発明の高分岐ポリマー１がＭＲＩ造影剤として従来品よりも高感度であるとする結果となった。
【００４３】
また、各試料のＭＲＩファントム画像を図３及び図４に示す。図３は反復時間：Ｔｉを変化させて測定した各試料のＴ1強調画像、図４はエコー時間：Ｔｅを変化させて測定し
た各試料のＴ2強調画像である。
特に濃度１．０ｍＭの試料において、充分に臨床応用可能な程度の造影画像が得られた。
【００４４】
［実施例４］マウスを用いたＭＲＩ造影試験（全身）
酸素／笑気混合ガス（体積比３：１）にイソフルラン１乃至２体積％を混合した。この混合ガスをマウス（実施例２で使用したものと同種の雄マウス）に自発呼吸にて吸引させ、麻酔処置を行なった。続いて、マウス尾静脈より、実施例１で合成した高分岐ポリマー１の２２ｍＭ生理食塩水溶液０．１７５ｍＬ／頭を投与（高分岐ポリマー１換算で０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ）し、Ｔ１Ｗ１画像の測定を行なった。結果を図５に示す。図５に示すように、Ｔ１Ｗ１画像における全身信号強度変化より、投与直後から全身の臓器が造影され、中でも下腹部（肝臓、脾臓など）の強度変化が大きく、投与直後から明らかな造影効果が認められた。
【００４５】
［実施例５］マウスを用いたＭＲＩ造影試験（下腹部；肝臓、脾臓）
酸素／笑気混合ガス（体積比３：１）にイソフルラン１乃至２体積％を混合した。この混合ガスをマウス（実施例２で使用したものと同種の雄マウス）に自発呼吸にて吸引させ、麻酔処置を行なった。続いて、マウス尾静脈より、実施例１で合成した高分岐ポリマー１の２２ｍＭ生理食塩水溶液０．１７５ｍＬ／頭を投与（高分岐ポリマー１換算で０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ）し、Ｔ１Ｗ１画像の測定を行ない、肝臓及び脾臓での信号強度変化を測定した。また、対照例として、Ｇｄ−ＤＴＰＡ［バイエル薬品（株）製、製品名：マグネビスト］１ｍＭ生理食塩水溶液を２３．５倍希釈した溶液０．１７５ｍＬ／頭を投与（Ｇｄ−ＤＴＰＡ換算で０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ）し、同様に測定した。結果を表２に示す。
【００４６】
【表２】
0005650993.tif 000006
【００４７】
表２に示すように、Ｇｄ−ＤＴＰＡ投与マウスでは、脾臓においては、投与前の信号強度に対し、投与直後から信号強度の大幅な増強がみられたものの、特に肝臓において、小さな信号強度の上昇しかみられなかった。
これに対し、高分岐ポリマー１投与群においては、肝臓及び脾臓何れの造影においても、投与前の信号強度に対し、投与直後から信号強度の大幅な増強が認められた。
【００４８】
［実施例６］マウス各臓器への高分岐ポリマー１の取り込み確認試験
高分岐ポリマー１投与直後の臓器を取り出し、各臓器中のマンガン量を測定することで、高分岐ポリマー１の各臓器への取り込み量を測定した。
＜臓器の取り出し＞
試験には日本チャールス・リバー（株）より購入した投与時５．５週齢のＣｒｌｊ：ＣＤ１（ＩＣＲ）雄マウスを供試し、１群３匹とした。処理群は高分岐ポリマー１の質量が１６ｍｇ／頭となるように設定した。また、溶媒は生理食塩水を使用し、０．１７５ｍＬ／頭の容量にて尾静脈より投与した。対照群には生理食塩水のみを投与した。
投与１５分後、エーテル麻酔下で開腹し、腹大動脈より血液サンプルを採取した。腹大動脈より放血により致死させた後、直ちに各臓器（脳、肺、心臓、膵臓、肝臓、脾臓、腎
臓、膀胱、骨格筋（左大腿部）、脂肪組織（精巣周囲））を摘出した。摘出した各臓器は、速やかに生理食塩水で洗浄し、重量を測定した後、液体窒素中で急速凍結させた。また、先に採取した血液については、ヘパリンで抗凝固処理を行い、全血を凍結させた。
＜臓器中のマンガンの定量分析＞
石英皿に凍結保存した各臓器１０乃至５００ｍｇをホットプレート・電気炉（およそ５９０℃）で加熱分解した後、０．１Ｍ硝酸溶液４ｇで回収した。この溶液を適宜希釈し、ＩＣＰ−ＭＳを用いてマンガン量の測定を行った。
＜結果＞
結果を図６に示す。コントロール群に比べ、高分岐ポリマー１投与群では、各臓器でマンガン量が多くなっており、各臓器へ高分岐ポリマー１が取り込まれていることが示唆された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００４９】
【特許文献１】米国特許第４，８２２，５９４号明細書
【特許文献２】特表１９９７−５００３６５号公報
【特許文献３】国際公開第２００９／０５４４５５号パンフレット
【非特許文献】
【００５０】
【非特許文献１】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（４２），１２７３９−１２７４５
【図１】
0005650993.tif 000009
【図６】
0005650993.tif 000010
【図２】
0005650993.tif 000011
【図３】
0005650993.tif 000012
【図４】
0005650993.tif 000013
【図５】
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