(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｖ）：
【化１】
0005830015.tif 000057
［式中、
Ｌ１およびＬ３は−Ｏ−であり；
Ｌ２およびＬ４は−ＮＨ−であり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、同一であるかまたは異なり、独立して、Ｃ１０−１２アルキルであり；そして、
Ｒ２およびＲ４は、同一であるかまたは異なり、独立して、Ｃ８−１０アルキルである］
を有するＧＬＡ化合物、または、その医薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
ＧＬＡ化合物が以下の構造（ＩＸ）：
【化２】
0005830015.tif 000058
（ＩＸ）
を有する、請求項１に記載のＧＬＡ化合物、または、その医薬的に許容し得る塩。
【請求項３】
抗原または抗原をコードする組換え発現ベクターと共に請求項１または請求項２に記載の化合物を含むワクチン組成物。
【請求項４】
組換え発現コンストラクトがウイルスベクターである、請求項３に記載のワクチン組成物。
【請求項５】
ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ポックスウイルスベクターおよびレトロウイルスベクターからなる群から選択される、請求項４に記載のワクチン組成物。
【請求項６】
対象において抗原特異的免疫反応を誘起または増強するためのワクチンの製造における、請求項１または請求項２に記載の化合物の使用。
【請求項７】
請求項１または請求項２に記載の化合物および医薬的に許容し得る担体または補助剤を含む医薬組成物。
【請求項８】
対象において非特異的免疫反応を刺激するための医薬の製造における、請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２００９年６月５日出願の米国仮出願番号６１／１８４,７０３に３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１１９（ｅ）の利益を主張し、この仮出願の全体を、出典明示により本明細書の一部とする。
【０００２】
本発明の背景
本発明の分野
本発明は、医薬およびワクチンの組成物の分野に関する。より具体的には、本明細書に記載の実施態様は、医薬およびワクチンの組成物、並びに、関連する予防および治療方法に関し、該組成物は、本明細書に記載のグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）を含む。
【背景技術】
【０００３】
関連技術の説明
高等生物の免疫系は、外来物質（または「非自己」）物質を、馴染みのある、または、「自己」成分と区別し、外来物質は免疫反応を誘起するが、「自己」成分は無視または耐容されると特徴付けられてきた。免疫反応は、伝統的には、形質細胞として知られる分化したＢリンパ球により抗原に特異的な抗体が産生される体液性反応、または、様々なタイプのＴリンパ球が数々のメカニズムにより抗原を排除する、細胞媒介反応のいずれかに特徴付けられてきた。例えば、特異的抗原を認識できるＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、サイトカインなどの可溶性メディエーターを放出することにより応答し、免疫反応に参加する免疫系のさらなる細胞をリクルートする。また、特異的抗原認識もできるＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞は、抗原を有する細胞または粒子に結合し、これを破壊または損傷することにより応答し得る。免疫学の分野では、通常は宿主において所望の免疫反応を誘導するために、様々な処方によってある種のワクチンを提供することが知られている。
【０００４】
ワクチンの宿主への投与を通して特異的免疫反応を誘起するためのいくつかの戦略には、熱で殺された、または生きている、弱毒化されたウイルス、細菌またはある種の真核生物の病原体などの感染性病原体による免疫化；免疫反応が望まれる抗原をコードする遺伝子物質の発現を導くことができる非病原性の感染性物質による免疫化；および、特定の病原体から、その病原体に対する免疫を誘導するために単離された免疫原（タンパク質など）を含むサブユニットワクチンによる免疫化が含まれる（例えば、Liu, 1998 Nature Medicine 4(5 suppl.):515 参照）。ある種の抗原には、これらのアプローチのいずれも特に有効ではなかった１またはそれ以上のタイプの望まれる免疫があり得、これには、ヒト免疫不全ウイルスまたは他の感染性病原体、癌、自己免疫疾患または他の臨床症状に対して免疫学的に宿主を保護するのに有効なワクチンの開発が含まれる。
【０００５】
腸内細菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）は免疫系の強力な刺激因子であることが長きにわたり知られてきたが、アジュバントにおけるその使用はその毒性作用により縮小されてきた。還元末端グルコサミンからコアの炭水化物基およびリン酸塩の除去により産生されるＬＰＳの非毒性誘導体、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）が、Ribi et al (1986, Immunology and Immunopharmacology of Bacterial Endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, p407-419) により記載された。
【０００６】
さらなる解毒版のＭＰＬは、二糖主鎖の３位からのアシル鎖の除去で得られ、３−Ｏ−デアシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）と呼ばれる。ＧＢ２１２２２０４Ｂに教示の方法でそれを精製し、製造することができ、その文献は、ジホスホリルリピドＡおよびその３−Ｏ−デアシル化変異形の製造も開示している。例えば、３Ｄ−ＭＰＬは、直径０.２μｍ未満の小さい粒子サイズを有する乳液の形態で製造され、その製造方法は、ＷＯ９４／２１２９２に開示されている。モノホスホリルリピドＡおよび表面活性物質を含む水性製剤は、ＷＯ９８４３６７０Ａ２に記載された。
【０００７】
アジュバントの組合せにおいて製剤化されるべき細菌のリポ多糖類に由来するアジュバントは、細菌の供給源から精製され、加工され得るか、または、それらは合成であり得る。例えば、精製されたモノホスホリルリピドＡは、Ribi et at 1986（既出）に記載されており、サルモネラ属の種に由来する３−Ｏ−デアシル化モノホスホリルまたはジホスホリルリピドＡは、ＧＢ２２２０２１１および米国特許第４,９１２,０９４号に記載されている。３Ｄ−ＭＰＬおよびβ（１−６）グルコサミン二糖類並びに他の精製および合成リポ多糖類が記載された（ＷＯ９８／０１１３９；米国特許第６,００５,０９９号およびＥＰ０７２９４７３Ｂ１, Hilgers et al., 1986 Int. Arch. Allergy Immunol., 79(4):392-6; Hilgers et at., 1987, Immunology, 60(1); 141-6; およびＥＰ０５４９０７４Ｂ１）。３Ｄ−ＭＰＬと、シャボンノキ（Quillaja Saponaria molina）の樹皮に由来するサポニンアジュバントの組合せは、ＥＰ０７６１２３１Ｂに記載された。ＷＯ９５／１７２１０は、免疫賦活薬ＱＳ２１と共に製剤化され、場合により３Ｄ−ＭＰＬを含む、スクアレン、α−トコフェロールおよびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（TWEEN（商標）-80）をベースとするアジュバント乳液系を開示している。このような組合せの利便性にも拘わらず、天然産物由来のアジュバントの使用は、高い製造コスト、ロット毎の非一貫性、大規模製造に伴う困難、および、所定の調製物の組合せ的製造における不純物の存在に関する不確かさを伴う。
【０００８】
従って、改良されたワクチン、特に、高純度の化学的に定義されたアジュバント成分を有利に含有し、ロット毎の一貫性を示し、望まれないか、または構造的に定義されない混入物を導入せずに工業的規模で効率的に製造できるワクチンに対する要望がある。本発明は、そのようなワクチンの組成物および方法を提供し、他の関連する利点を与えるものである。
【発明の概要】
【０００９】
発明の簡単な概要
本発明は、そのいくつかの態様において、ある種の合成グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）を免疫調節物質またはアジュバントとして有利に用いる、化合物、組成物および方法を対象とする。従って、本明細書に記載の本発明のある態様によると、下記式（Ｉ）：
【化１】
0005830015.tif 000002
に従う構造を有するＧＬＡ化合物またはその医薬的に許容し得る塩が提供され、ここで、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９、Ｌ１０、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、本明細書で定義する通りである。
【００１０】
本発明のＧＬＡ化合物は、特異的または非特異的免疫反応の誘導が望まれる幅広い治療的適用に有用である。例えば、本発明のある種の態様では、本明細書に記載の１種またはそれ以上のＧＬＡ化合物を抗原と組み合わせて含むワクチン組成物が提供される。そのようなワクチン組成物は、それを必要としている対象において抗原特異的免疫反応を刺激する方法において、有利に使用し得る。本発明の他の態様では、本明細書に記載の１種またはそれ以上のＧＬＡ化合物を含む医薬組成物が提供され、ここで、組成物は実質的に抗原を欠く。そのような医薬組成物は、それを必要としている対象において非特異的免疫反応を刺激する方法において、例えば、感染、季節性鼻炎などの処置において、有利に使用し得る。
【００１１】
本発明のこれらおよび他の態様は、下記の詳細な説明および添付の図面を参照して明らかになるであろう。加えて、様々な参考文献が本明細書に記載され、それは、本発明のより詳細なある種の態様を記載しており、従って、出典明示により全体を本明細書の一部とする。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
図面のいくつかの観点の簡単な説明
【図１】図１は、抗原およびＧＬＡを含む本発明の組成物によるマウスのワクチン接種の後に、インビボで誘導されたＩＦＮ−γサイトカイン産生を立証する。
【図２】図２Ａ−２Ｆは、抗原およびＧＬＡを含む本発明の組成物によるマウスのワクチン接種の後に、インビボで誘導された抗体反応を示す。
【図３】図３は、様々な濃度の例示的な本発明のＧＬＡ化合物（化合物ＩＸ）で観察されたＮＦ−ｋＢ増強を示す。
【図４】図４Ａ−４Ｄは、様々な濃度の例示的な本発明のＧＬＡ化合物（化合物ＩＸ）での免疫賦活性サイトカイン（ＭＩＰ−１ｂおよびＴＮＦａ）の誘導を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の詳細な説明
モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および他の関連アジュバントは、それの作用を、少なくとも部分的に、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストとして作用することにより媒介すると知られている。本発明のグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）化合物は、ＴＬＲ受容体刺激に関連する３Ｄ構造研究に基づいて合理的に設計された。より具体的には、本発明によると、本発明のＧＬＡ化合物のアシル鎖の長さを、化合物の三次元構造で「平坦な」底を達成するように選択的に定義することにより、ＴＬＲ受容体の結合部位内で適合の改善が達成され得、それにより、ＴＬＲ刺激の増強および免疫賦活特性の増強をもたらす。加えて、本発明のＧＬＡ化合物の溶解性（例えば、水性溶液中）は、短縮されたアシル鎖長のために有利に改善され、それにより、効率的かつ効果的な化合物の製剤化を促進する。さらに、分子の底面に沿って分子を三次元的に「平坦に」するようにアシル鎖長を合わせるので、化合物を、ベシクル、例えばリポソーム製剤に、より効果的に組み込むことができる。
【００１４】
またさらに、本発明の化合物は、有利な効能対毒性のプロフィールを提供する。例えば、本発明の化合物は、所望の活性（例えば、アジュバント活性）のレベルを達成するために、幅広く比較的高い用量範囲で使用し得るが、それでもヒト細胞およびヒト患者に対して実質的に非毒性のままであり、このことは、例えば、ヒト細胞からある範囲の濃度にわたって産生される腫瘍壊死因子のレベルにより評価され、それは、リポ多糖類などの他のより毒性のあるＴＬＲ４アゴニストとは異なり、急速に上昇し横ばいになる。この細胞をベースとするアッセイは、ヒトの薬理において有害作用に関与するＣ反応性タンパク質などの低免疫マーカーを予測するものであるべきである。本発明の化合物の好ましい効能対毒性のプロフィールは、例えば、サイトカインへの耐性が低いことがある小児への投与の際に、または、様々なＴＬＲアゴニズムへの応答性を有する人々について、より同一水準の応答が、より一貫した臨床的成果に結びつく大集団を対象とする製剤において、化合物を使用するときに、特に重要であり得る。同様に、活性医薬成分の範囲を耐性レベルに対して厳格に制御する必要がない場合、標的用量がより寛大になり、製造が簡潔になるので、規制の承認は簡潔になるであろう。
【００１５】
従って、本発明は、その多くの実施態様において、本明細書に記載の合成ＧＬＡ化合物を含む化合物、ワクチン組成物、アジュバント組成物、医薬組成物並びに関連する製剤および方法を提供する。ＧＬＡ化合物は合成免疫調節物質であり、先行技術のアジュバントに対して、特に、天然産物のアジュバントに対して有利なことに、実質的に均一な形態で製造できる。さらに、本発明のＧＬＡ化合物は、天然産物由来のアジュバントと異なり、大規模合成の化学的製造法で効率的かつ経済的に製造できる。定義された出発物質から化学的に合成され、化学的に定義された生成物を得る合成アジュバントは、定性的かつ定量的なバッチ毎の一貫性を示すので、本発明のＧＬＡ化合物は、製品の品質管理の改善を含む利益を与える。
【００１６】
本明細書に記載の通り、ＧＬＡ化合物、組成物およびそれらの使用方法は、いくつかの実施態様において、免疫賦活性（例えば、非特異的免疫賦活性）のための医薬的に許容し得る担体または補助剤を伴うＧＬＡ自体の使用を含み、対象へのＧＬＡの投与が、対象における免疫反応（例えば、抗原特異的反応）の誘起または増強が望ましい１種またはそれ以上の抗原の対象への投与から全面的に独立して、かつ／または、時間的および／または空間的に分離している「アジュバント投与（adjuvanting）」を含む。他の実施態様は、ワクチンによる免疫反応の誘起または増強が望まれる１種または複数の抗原も含むワクチン組成物中でのＧＬＡの使用を含む。
【００１７】
本明細書に記載の通り、これらのワクチン組成物は、ある種の関連する実施態様において、また、１種またはそれ以上のｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、および／または、共アジュバント、イミダゾキノリン免疫反応変更因子およびダブルステムループ免疫変更因子（ｄＳＬＩＭ）の１種またはそれ以上を、１種または複数含み得る。他の関連する実施態様では、本発明で提供されるワクチン組成物は、ＧＬＡ、および、対象における免疫反応（例えば、抗原特異的反応）の誘起または増強が望まれる抗原をコードする核酸配列に作動可能に連結したプロモーターを各々含む１種またはそれ以上の組換え発現コンストラクトを含み得る。
【００１８】
ＧＬＡ
上記の通り、ＧＬＡは化学的に合成されるアジュバントであるので、実質的に均一な形態で製造できる。これは、ＧＬＡ分子に関して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、またさらに好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％純粋であるＧＬＡ調製物を表す。
【００１９】
本発明のＧＬＡ化合物は、下記式（Ｉ）：
【化２】
0005830015.tif 000003
を有するか、または、その医薬的に許容し得る塩であり、ここで：
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５およびＬ６は、同一であるかまたは異なり、独立して、−Ｏ−、−ＮＨ−または−（ＣＨ２）−であり；
Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９およびＬ１０は、同一であるかまたは異なり、独立して、存在しないか、または、−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｙ１は酸の官能基であり；
Ｙ２およびＹ３は、同一であるかまたは異なり、独立して、−ＯＨ、−ＳＨまたは酸の官能基であり；
Ｙ４は、−ＯＨまたは−ＳＨであり；
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、同一であるかまたは異なり、独立して、Ｃ８−１３アルキルであり；そして、
Ｒ２およびＲ４は、同一であるかまたは異なり、独立して、Ｃ６−１１アルキルである。
【００２０】
本明細書で使用するとき、上記の用語は下記の意味を有する：
「アルキル」は、１個ないし２０個の炭素原子を含み、ある種の好ましい実施態様では１１個ないし２０個の炭素原子を含む、直鎖または分枝鎖、非環式または環式、不飽和または飽和の脂肪族炭化水素を意味する。代表的な飽和直鎖アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどを含み、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシルなどを含み；一方、飽和分枝鎖アルキルは、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルなどを含む。代表的な飽和環式アルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含み；一方、不飽和環式アルキルは、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどを含む。環式アルキルは、本明細書で「ホモ環（homocycle）」または「ホモ環式環（homocyclic ring）」とも呼ばれる。不飽和アルキルは、隣接する炭素原子間に少なくとも１個の二重または三重結合を含む（各々、「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれる）。代表的な直鎖および分枝鎖のアルケニルは、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２,３−ジメチル−２−ブテニルなどを含み；一方、代表的な直鎖および分枝鎖のアルキニルは、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニルなどを含む。
「Ｃ８−１３アルキル」および「Ｃ６−１１アルキル」は、各々８−１３個または６−１１個の炭素原子を含む上記で定義したアルキルを意味する。
【００２１】
「酸の官能基」は、水性媒体中でプロトンを与えることができる官能基を意味する（即ち、ブレンステッド−ローリー酸）。プロトンを与えた後、酸の官能基は負荷電の種になる（即ち、酸の官能基の共役塩基）。酸の官能基の例は、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２（リン酸塩）、−ＯＳ（＝Ｏ）（ＯＨ）２（硫酸塩）、−ＯＳ（ＯＨ）２（亜硫酸塩）、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ（カルボン酸塩）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ（アスパラギン酸塩）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ（コハク酸塩）および−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２（カルボキシメチルリン酸塩）を含むがこれらに限定されない。
【００２２】
より特定の実施態様では、本発明は、Ｌ５およびＬ６が両方とも−Ｏ−であり、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９およびＬ１０が各々−Ｃ（＝Ｏ）−である式（Ｉ）のＧＬＡ化合物、および、下記の式（ＩＩ）：
【化３】
0005830015.tif 000004
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
【００２３】
より特定の実施態様では、本発明は、式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が各々Ｃｘアルキルであり、ここで、ｘは一定であり、８−１３の整数から選択され、Ｒ２およびＲ４が両方ともＣｘ−２アルキルである式（ＩＩ）のＧＬＡ化合物、および、下記の式（ＩＩＩ）：
【化４】
0005830015.tif 000005
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
他のより特定の実施態様では、本発明は、ｘが１０−１２の整数から選択される式（ＩＩＩ）のＧＬＡ化合物を提供する。
【００２４】
他のより特定の実施態様では、本発明は、ｘが１１である式（ＩＩＩ）のＧＬＡ化合物、および、下記の構造（ＩＶ）：
【化５】
0005830015.tif 000006
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
【００２５】
また他の特定の実施態様では、本発明は、Ｙ１が−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２であり、Ｙ２、Ｙ３およびＹ４が各々−ＯＨである式（ＩＩ）のＧＬＡ化合物、および、下記の式（Ｖ）：
【化６】
0005830015.tif 000007
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
【００２６】
他の特定の実施態様では、本発明は、Ｌ１およびＬ３が両方とも−Ｏ−であり、Ｌ２およびＬ４が両方とも−ＮＨ−である式（ＩＩ）のＧＬＡ化合物、および、下記の式（ＶＩ）：
【化７】
0005830015.tif 000008
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
【００２７】
またより特定の実施態様では、本発明は、Ｙ１が−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２であり、Ｙ２、Ｙ３およびＹ４が各々−ＯＨであり、Ｌ１およびＬ３が両方とも−Ｏ−であり、Ｌ２およびＬ４が両方とも−ＮＨ−である式（ＩＩ）のＧＬＡ化合物、および、下記の式（ＶＩＩ）：
【化８】
0005830015.tif 000009
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
【００２８】
また他の特定の実施態様では、本発明は、Ｙ１が−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２であり、Ｙ２、Ｙ３およびＹ４が各々−ＯＨであり、Ｌ１およびＬ３が両方とも−Ｏ−であり、Ｌ２およびＬ４が両方とも−ＮＨ−であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が各々Ｃｘアルキルであり、ここで、ｘは一定であり、８−１３の整数から選択され、Ｒ２およびＲ４が両方ともＣｘ−２アルキルである式（ＩＩ）のＧＬＡ化合物、および、下記の式（ＶＩＩＩ）：
【化９】
0005830015.tif 000010
（ＶＩＩＩ）
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
【００２９】
より特定の式（ＶＩＩＩ）の実施態様では、ｘは１１であり、本発明は、下記の構造（ＩＸ）：
【化１０】
0005830015.tif 000011
（ＩＸ）
を有するＧＬＡ化合物を提供する。
【００３０】
ＧＬＡ化合物
上記の通り、本発明はＧＬＡ化合物を提供する。本発明のＧＬＡ化合物は、実施例でより詳細に記載する方法を含む、既知の有機合成技法により製造し得る。一般に、構造（Ｉ）のＧＬＡ化合物は、下記の合成スキームにより製造し得、すべての置換基は、断りのない限り上記定義の通りである。
反応スキーム１
【化１１】
0005830015.tif 000012
【００３１】
代表的なＧＬＡ化合物の糖主鎖は、一般的に反応スキーム１に従って製造でき、ここで、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７、Ｇ８、Ｇ９およびＧ１０は、同一であるかまたは異なり、独立して、適切な保護基または水素である。（ｉ）などの適切な糖は、購入できるか、または、当業者に知られている方法に従って製造できる。次いで、糖（ｉ）の官能基を、当業者に知られている方法を使用して完全に保護し、（ｉｉ）を得ることができる。これに関して、当業者は、糖官能基の選択的脱保護を可能にする適切な直交性の保護基戦略を用い得ることを認識するであろう。適する保護基は、シリルエーテル類、ベンジルエーテル類、アリルオキシカルボニル、アセタール類、Ｆｍｏｃ、アジドなどを含むがこれらに限定されない。Ｇ１の脱保護は遊離アルコール（ｉｉｉ）をもたらし、次いで、適切なカップリング条件、例えばＣＣｌ３ＣＮ／ＮａＨを使用して、これを保護された糖（ｉｖ）とカップリングし、所望の糖主鎖（ｖ）を得ることができる。
【００３２】
反応スキーム２
【化１２】
0005830015.tif 000013
【００３３】
Ｌ５およびＬ６が両方とも−Ｏ−であり、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９およびＬ１０が各々−Ｃ（＝Ｏ）−である代表的なＧＬＡ化合物の尾部は、一般的に、反応スキーム２に従って製造でき、ここで、Ｇ１１は適切な保護基を表す。構造（ｖｉ）の酸化合物は、購入できるか、または、当業者に知られている方法に従って製造できる。（ｖｉ）の適切な反応剤、例えばマロン酸水素メチルとの反応により、ケトエステル（ｖｉｉ）を得る。（ｖｉｉ）の還元により、アルコール（ｖｉｉｉ）を得る。当業者は、実施例で例示する通り、適切な条件下で（ｖｉｉ）のケト基を立体特異的に還元し得ることを認識するであろう。（ｖｉｉｉ）の鹸化により、酸（ｉｘ）を得、続いて、これを保護し、（ｘ）を得ることができる。（ｘ）を酸塩化物（ｘｉ）で処理し、（ｘｉｉ）を得、これを脱保護すると、（ｘｉｉｉ）を得る。下記の反応スキーム３に示す通り、化合物（ｉｘ）および（ｘｉｉｉ）は、両方とも、当業者に知られている方法により適当に保護された酸塩化物誘導体に変換し得、ＧＬＡ化合物の糖主鎖に結合させ得る。反応スキーム２はＲ１およびＲ２を含むＧＬＡ化合物の尾部の合成を描写するが、他のアルキル基を含む他の尾部（例えば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６）も、同様の方法により製造し得ることを理解すべきである。異なるＬ５、Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９およびＬ１０基を有する他の尾部も、同様の方法により製造し得る。
【００３４】
反応スキーム３
【化１３】
0005830015.tif 000014
【００３５】
代表的なＧＬＡ化合物は、一般的に、反応スキーム３に従って製造でき、ここで、Ｇ１２およびＧ１３は、同一であるかまたは異なり、独立して、適切な保護基を表す。（ｖ）のＧ５保護基の除去、続いて酸塩化物（ｘｉｖ）との反応により、（ｘｖ）を製造する。同様に、（ｘｖ）からのＧ８保護基の除去、続いて酸塩化物（ｘｖｉ）との反応により、（ｘｖｉｉ）を得る。（ｘｖｉｉ）の脱保護および酸塩化物（ｘｖｉｉｉ）との反応により、（ｘｉｘ）を得る。次いで、Ｇ９の除去および（ｘｘ）との反応は、保護されたＧＬＡ化合物（ｘｘｉ）をもたらす。（ｘｘｉ）の全体的な脱保護は、構造（ＩＩ）の化合物をもたらす。反応スキーム３は構造（ＩＩ）の化合物の合成を描写するが、当業者は、同様の方法を構造（Ｉ）の任意の化合物の製造に用い得ることを認識するであろう。加えて、当業者は、適切な保護基の選択により、最終の脱保護は所望の化合物をもたらすことも認識するであろう。
【００３６】
本発明の化合物は、一般的に、遊離塩基または遊離酸として利用し得る。あるいは、本発明の化合物は、酸または塩基付加塩の形態で使用し得る。本発明の遊離アミノ化合物の酸付加塩は、当分野で周知の方法により製造し得、有機酸および無機酸から形成させ得る。適する有機酸には、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸およびベンゼンスルホン酸が含まれる。適する無機酸には、塩酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸が含まれる。
【００３７】
同様に、本発明の酸化合物の塩基付加塩は、当分野で周知の方法により製造し得、有機塩基および無機塩基から形成させ得る。適する有機塩基には、トリエチルアミンおよびピリジンが含まれるが、これらに限定されない。適する無機塩基には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムおよびアンモニアが含まれるが、これらに限定されない。従って、構造（Ｉ）の「医薬的に許容し得る塩」の用語は、任意かつすべての許容し得る塩の形態を包含することを意図する。
【００３８】
加えて、プロドラッグも、本発明の関連に含まれる。プロドラッグは、患者に投与されると、構造（Ｉ）の化合物をインビボで放出する任意の共有結合した担体である。プロドラッグは、一般的に、日常的な操作またはインビボで修飾が切り離されると親化合物をもたらすように、官能基を修飾することにより製造する。プロドラッグには、例えば、ヒドロキシ、アミンまたはスルフヒドリル基が任意の基に結合しており、患者に投与されると切り離されてヒドロキシ、アミンまたはスルフヒドリル基を形成する本発明の化合物が含まれる。従って、代表的なプロドラッグの例には、構造（Ｉ）の化合物のアルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸および安息香酸誘導体が含まれる（しかし、これらに限定されない）。さらに、カルボン酸（ＣＯＯＨ）の場合、メチルエステル類、エチルエステル類などのエステルを用い得る。
【００３９】
立体異性体に関して、構造（Ｉ）の化合物はキラル中心を有し得、ラセミ体、ラセミ混合物として、そして、個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在し得る。すべてのそのような異性体は、それらの混合物を含めて、本発明に包含される。さらに、構造（Ｉ）の化合物の結晶形のいくつかは、多形として存在し得、これらは本発明に包含される。加えて、構造（Ｉ）の化合物のいくつかは、水または他の有機溶媒と溶媒和物も形成し得る。そのような溶媒和物は、同様に本発明の範囲に包含される。
【００４０】
抗原
ＧＬＡを用いる本明細書に記載のワクチン組成物および方法のある種の実施態様で使用するための抗原は、対象における免疫反応性の誘起または増強が望まれる任意の標的エピトープ、分子（生体分子を含む）、分子複合体（生体分子を含有する分子複合体を含む）、細胞内集合体、細胞または組織であり得る。頻繁に、抗原の用語は、関心のあるポリペプチド抗原を表す。しかしながら、抗原は、本明細書で使用するとき、関心のあるポリペプチド抗原をコードする組換えコンストラクト（例えば、発現コンストラクト）も表し得る。ある種の好ましい実施態様では、抗原は、感染、癌、自己免疫疾患、アレルギー、喘息または抗原特異的免疫反応の刺激が望ましいか、または有利である他の状態と関連する感染性病原体および／またはエピトープ、生体分子、細胞または組織であり得るか、または、これらに由来し得るか、または、これらと免疫学的に交差反応性であり得る。
【００４１】
好ましくは、そしてある種の実施態様では、本発明のワクチン製剤は、ヒトまたは他の哺乳動物の病原体に対して免疫反応を誘起できる抗原または抗原組成物を含有し、その抗原または抗原組成物は、ウイルスに由来する組成物、例えばＨＩＶ−１由来（ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０またはｇｐ１６０など）、ヒトヘルペスウイルス、例えばｇＤまたはその誘導体、または、最初期タンパク質、例えばＨＳＶ１またはＨＳＶ２のＩＣＰ２７、サイトメガロウイルス（（特にヒト）（例えば、ｇＢまたはその誘導体）、ロタウイルス（弱毒生ウイルスを含む）、エプスタイン・バーウイルス（例えばｇｐ３５０またはその誘導体）、水痘帯状疱疹ウイルス（例えば、ｇｐＩ、ＩＩおよびＩＥ６３）、または、Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原またはその誘導体）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびＥ型肝炎ウイルスなどの肝炎ウイルス由来、または、パラミクソウイルスなどの他のウイルス性病原体由来：呼吸器多核体ウイルス（例えば、ＦおよびＧタンパク質またはその誘導体）、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８など）、フラビウイルス（例えば、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）またはインフルエンザウイルス（生きている、または不活性化されたウイルス全体、分割したインフルエンザウイルス、卵またはＭＤＣＫ細胞で増殖させたもの、または、インフルエンザのビロソーム全体（Gluck, Vaccine, 1992, 10, 915-920 に記載）、または、その精製または組換えタンパク質、例えば、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡまたはＭタンパク質、またはこれらの組合せ）を含み得る。
【００４２】
ある種の他の好ましい実施態様では、本発明のワクチン製剤は、ヒトまたは他の哺乳動物の病原体に対して免疫反応を誘起できる抗原または抗原組成物を含有し、その抗原または抗原組成物は、１種またはそれ以上の細菌性病原体、例えば、淋菌（N. gonorrhea）および髄膜炎菌（N. meningitidis）を含むナイセリア属の種（例えば、莢膜の多糖類およびそのコンジュゲート、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドヘシン）；化膿性連鎖球菌（S. pyogenes）（例えば、Ｍタンパク質またはその断片、Ｃ５Ａプロテアーゼ、リポテイコ酸）、ストレプトコッカス・アガラクチア（S. agalactiae）、ミュータンス菌（S. mutans）：軟性下疳菌（H. ducreyi）；カタル球菌（Branhamella catarrhalis）としても知られる、M. カタラーリス（catarrhalis）を含むモラクセラ属の種（例えば、高および低分子量アドヘシンおよびインベイシン）；百日咳菌（B. pertussis）（例えば、パータクチン、百日咳毒素またはその誘導体、線維状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、線毛）、B. パラパータシス（parapertussis）およびB. ブロンキセプチカ（bronchiseptica）を含むボルデテラ属の種；結核菌（M. tuberculosis）（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、ＢまたはＣ）、M. ボビス（bovis）、らい菌（M. leprae）、M. アビウム（avium）、ヨーネ菌（M. paratuberculosis）、M. スメグマチス（smegmatis）を含むマイコバクテリウム属の種；L. ニューモフィラ（pneumophila）を含むレジオネラ属の種；毒素原性大腸菌（enterotoxic E. coli）(例えば、定着因子、易熱性毒素またはその誘導体、耐熱性毒素またはその誘導体）、腸管出血性大腸菌（enterohemorragic E. coli）、腸管病原性大腸菌（enteropathogenic E. coli）（例えば、志賀毒素様毒素またはその誘導体）を含むエシェリキア属の種；コレラ菌（V. cholera）を含むビブリオ属の種（例えば、コレラ毒素またはその誘導体）；S. ソネイ（sonnei）、志賀赤痢菌（S. dysenteriae）、S. フレックスネリ（flexnerii）を含むシゲラ属の種；エンテロコリチカ菌（Y. enterocolitica）（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、ペスト菌（Y. pestis）、Y. シュードツベルクローシス（pseudotuberculosis）を含むエルシニア属の種；ジェジュニ菌（C. jejuni）（例えば、毒素、アドへシンおよびインベイシン）およびC. コリ（coli）を含むカンピロバクター属の種；チフス菌（S. typhi）、パラチフス菌（S. paratyphi）、S. コレレスイス（choleraesuis）、腸炎菌（S. enteritidis）を含むサルモネラ属の種；L. モノサイトゲネス（monocytogenes）を含むリステリア属の種；ピロリ菌（H. pylori）（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素）を含むヘリコバクター属の種；緑膿菌（P. aeruginosa）を含むシュードモナス属の種；黄色ブドウ球菌（S. aureus）、表皮ブドウ球菌（S. epidermidis）を含むスタフィロコッカス属の種；フェカリス菌（E. faecalis）、フェシウム菌（E. faecium）を含むエンテロコッカス属の種；C. テタニ（tetani）（例えば、破傷風毒素およびその誘導体）、C. ボツリヌム（botulinum）（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）、C. ディフィシル（difficile）（例えば、クロストリジウム毒素ＡまたはＢおよびその誘導体）を含むクロストリジウム属の種；炭疽菌（B. anthracis）（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）を含むバチルス属の種；ジフテリア菌（C. diphtheriae）（例えば、ジフテリア毒素およびその誘導体）を含むコリネバクテリウム属の種；ライム病菌（B. burgdorferi）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、B. ガリニ（garinii）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、B. アフゼリ（afzelii）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、B. アンデルソニ（andersonii）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、B. ヘルムシ（hermsii）を含むボレリア属の種；E. エクイ（equi）を含むエーリキア属の種およびヒト顆粒球エーリキア症の物質；R. リケッチイ（rickettsii）を含むリケッチア属の種；トラコーマクラミジア（C. trachomatis）（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、肺炎クラミジア（C. pneumoniae）（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、オウム病クラミジア（C. psittaci）を含むクラミジア属の種；L. インターロガンス（interrogans）を含むレプトスピラ属の種；梅毒トレポネーマ（T. pallidum）（例えば、微量外膜タンパク質（rare outer membrane proteins））、T. デンティコラ（denticola）、T. ヒオディセンテリア（hyodysenteriae）を含むトレポネーマ属の種；または他の細菌性病原体に由来する組成物を含み得る。
【００４３】
ある種の他の好ましい実施態様では、本発明のワクチン製剤は、ヒトまたは他の哺乳動物の病原体に対して免疫反応を誘起できる抗原または抗原組成物を含有し、その抗原または抗原組成物は、１種またはそれ以上の寄生生物、例えば、熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）を含むプラスモジウム属の種；トキソプラズマ原虫（T. gondii）（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）を含むトキソプラズマ属の種；赤痢アメーバ（E. histolytica）を含むエントアメーバ属の種；ネズミバベシア（B. microti）を含むバベシア属の種；クルーズトリパノソーマ（T. cruzi）を含むトリパノソーマ属の種；ランブル鞭毛虫（G. lamblia）を含むジアルジア属の種；森林型熱帯リーシュマニア（L. major）を含むリーシュマニア属の種；P. カリニ（carinii）を含むニューモシスチス属の種；腟トリコモナス（T. vaginalis）を含むトリコモナス属の種；または、哺乳動物に感染できる蠕虫類、例えば：（ｉ）線虫症（蟯虫（Enterobius vermicularis）、回虫（Ascaris lumbricoides）、鞭虫（Trichuris trichuria）、アメリカ鉤虫（Necator americanus）、ズビニ鉤虫（Ancylostoma duodenale）、バンクロフト糸状虫（Wuchereria bancrofti）、マレー糸状虫（Brugia malayi）、回旋糸状虫（Onchocerca volvulus）、メジナ虫（Dracanculus medinensis）、旋毛虫（Trichinella spiralis）および糞線虫（Strongyloides stercoralis）を含むが、これらに限定されない）；（ｉｉ）吸虫症（マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）、ビルハルツ住血吸虫（Schistosoma haematobium）、日本住血吸虫（Schistosoma japonicum）、メコン住血吸虫（Schistosoma mekongi）、肝吸虫（Opisthorchis sinensis）、肺吸虫（Paragonimus sp）、肝蛭（Fasciola hepatica）、ファスキオラ・マンガ（Fasciola magna）、ファスキオラ・ギガンチカ（Fasciola gigantica）を含むが、これらに限定されない）；および（ｉｉｉ）条虫症（無鉤条虫（Taenia saginata）および有鉤条虫（Taenia solium）を含むが、これらに限定されない）に由来する組成物を含み得る（例えば、John, D.T. and Petri, W.A., Markell and Voge's Medical Parasitology-9th Ed., 2006, WB Saunders, Philadelphia; Bowman, D.D., Georgis' Parasitology for Veterinarians-8th Ed., 2002, WB Saunders, Philadelphia 参照）。従って、ある種の実施態様は、シストソーマ属の種、マンソン住血吸虫、ビルハルツ住血吸虫、および／または、日本住血吸虫に由来する抗原、または、酵母、例えば、C. アルビカンス（albicans）を含むカンジダ属の種；C. ネオフォルマンス（neoformans）を含むクリプトコッカス属の種に由来する抗原を含むワクチン組成物を企図し得る。
【００４４】
他の好ましい結核菌の特異的抗原は、例えば、Ｔｈ Ｒａ１２、Ｔｂ Ｈ９、Ｔｂ Ｒａ３５、Ｔｂ３８−１、Ｅｒｄ１４、ＤＰＶ、ＭＴＩ、ＭＳＬ、ｍＴＴＣ２およびｈＴＣＣ１である（ＷＯ９９／５１７４８）。結核菌のタンパク質は、少なくとも２個、好ましくは３個の結核菌のポリペプチドが大型タンパク質に融合している融合タンパク質およびその変異体も含む。好ましい融合体は、Ｒａ１２−ＴｂＨ９−Ｒａ３５、Ｅｒｄ１４−ＤＰＶ−ＭＴＩ、ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ、Ｅｒｄ１４ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ−ｍＴＣＣ２、Ｅｒｄ１４−ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ、ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ−ｍＴＣＣ２、ＴｂＨ９−ＤＰＶ−ＭＴＩを含む（ＷＯ９９１５１７４８）。
【００４５】
ある種の好ましいクラミジア属の抗原は、例えば、高分子量タンパク質（High Molecular Weight Protein）（ＨＷＭＰ）（ＷＯ９９／１７７４１）、ＯＲＦ３（ＥＰ３６６４１２）、ＣＴ６２２、ＣＴ６１０、ｐｍｐＤ、ＵＶＥＢおよび推定膜タンパク質（putative membrane proteins）（Ｐｍｐｓ）を含む。ワクチン製剤の他のクラミジア属の抗原は、ＷＯ９９１２８４７５に記載の群から選択できる。好ましい細菌のワクチンは、肺炎球菌（S. pneumoniae）を含むストレプトコッカス属の種（例えば、莢膜の多糖類およびそのコンジュゲート、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ＰｄＢ、ストレプトリジン、コリン結合タンパク質）およびタンパク質抗原のニューモリシン（Biochem Biophys Acta, 1989, 67, 1007; Rubins et al., Microbial Pathogenesis, 25, 337-342）、および、その変異体の解毒誘導体（ＷＯ９０／０６９５１；ＷＯ９９／０３８８４）に由来する抗原を含む。他の好ましい細菌のワクチンは、インフルエンザ菌（H. influenzae）Ｂ型（例えばＰＲＰおよびそのコンジュゲート）、莢膜非保有のインフルエンザ菌を含むヘモフィルス属の種に由来する抗原、例えばＯＭＰ２６、高分子量アドへシン、Ｐ５、Ｐ６、タンパク質Ｄおよびリポタンパク質Ｄおよびフィンブリンおよびフィンブリン由来ペプチド（米国特許第５,８４３,４６４号）またはその多コピー変異体もしくは融合タンパク質を含む。
【００４６】
Ｂ型肝炎表面抗原の誘導体は、当分野で周知であり、とりわけ、欧州特許出願ＥＰ−Ａ４１４３７４；ＥＰ−Ａ−０３０４５７８およびＥＰ１９８４７４に記載のＰｒｅＳ１、Ｐａｒｓ２Ｓ抗原を含む。ある好ましい態様では、本発明のワクチン製剤は、ＨＩＶ−１抗原、ｇｐ１２０、特にＣＨＯ細胞で発現されたものを含む。さらなる実施態様では、本発明のワクチン製剤は、上記定義のｇＤ２ｔを含む。
【００４７】
本発明の好ましい実施態様では、特許請求するアジュバントを含有するワクチンは、陰部疣贅の原因と考えられているヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（ＨＰＶ６またはＨＰＶ１１およびその他）、および、子宮頚癌の原因であるＨＰＶウイルス（ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８およびその他）に由来する抗原を含む。特に好ましい形態の陰部疣贅の予防または治療用ワクチンは、Ｌ１粒子またはカプソメア、および、ＨＰＶ６およびＨＰＶ１１タンパク質のＥ６、Ｅ７、Ｌ１およびＬ２から選択される１種またはそれ以上の抗原を含む融合タンパク質を含む。ある種の好ましい融合タンパク質の形態は、ＷＯ９６／２６２７７に開示のＬ２Ｅ７およびＧＢ９７１７９５３.５（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５２８５）に開示のタンパク質Ｄ（１／３）−Ｅ７を含む。好ましいＨＰＶ子宮頸感染または癌の予防または治療用ワクチン組成物は、ＨＰＶ１６または１８抗原を含み得る。例えば、Ｌ１またはＬ２抗原の単量体、または、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）と共に与えられるＬ１またはＬ２抗原、ＶＬＰまたはカプソメア構造中に単独で与えられるＬ１単独のタンパク質である。そのような抗原、ウイルス様粒子およびカプソメアは、それら自体知られている。例えば、ＷＯ９４／００１５２、ＷＯ９４／２０１３７、ＷＯ９４／０５７９２およびＷＯ９３／０２１８４参照。
【００４８】
さらなる初期タンパク質は、単独で、または融合タンパク質として含まれ得、例えば、Ｅ７、Ｅ２または好ましくはＦ５であり；特に好ましい実施態様は、Ｌ１Ｅ７融合タンパク質を含むＶＬＰを含む（ＷＯ９６／１１２７２）。特に好ましいＨＰＶ１６抗原は、初期タンパク質Ｅ６またはＦ７を、ＨＰＶ１６由来のタンパク質Ｄ−Ｅ６またはＥ７融合体を形成するタンパク質Ｄ担体との融合体、またはそれらの組合せ；または、Ｅ６またはＥ７のＬ２との組合せを含む（ＷＯ９６／２６２７７）。あるいは、ＨＰＶ１６または１８の初期タンパク質Ｅ６およびＥ７は、単一の分子、好ましくはタンパク質Ｄ−Ｅ６／Ｅ７融合体中に与えられ得る。そのようなワクチンは、場合により、ＨＰＶ１８由来のＥ６およびＥ７タンパク質の一方または両方を、好ましくはタンパク質Ｄ−Ｅ６またはタンパク質Ｄ−Ｅ７融合タンパク質またはタンパク質ＤＥ６／Ｅ７融合タンパク質の形態で含有し得る。本発明のワクチンは、さらに、他のＨＰＶ株由来の、好ましくは株ＨＰＶ３１または３３由来の抗原を含み得る。
【００４９】
本発明のワクチンは、さらに、マラリアを引き起こす寄生生物に由来する抗原を含む。例えば、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodia falciparum）からの好ましい抗原は、ＲＴＳ,ＳおよびＴＲＡＰを含む。ＲＴＳは、Ｂ型肝炎表面抗原のｐｒｅＳ２部分の４個のアミノ酸を介してＢ型肝炎ウイルスの表面（Ｓ）抗原に連結している、熱帯熱マラリア原虫のスポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質の実質的にすべてのＣ末端部分を含むハイブリッドタンパク質である。その完全な構造は、英国特許出願番号９１２４３９０.７の優先権を主張する国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ９２／０２５９１（ＷＯ９３／１０１５２として公開）に開示されている。酵母で発現されると、ＲＴＳはリポタンパク質粒子として産生され、ＨＢＶのＳ抗原と同時発現されると、ＲＴＳ,Ｓとして知られる混合粒子を産生する。
【００５０】
ＴＲＡＰ抗原は、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＧＢ８９／００８９５（ＷＯ９０／０１４９６として公開）に記載されている。好ましい本発明の実施態様は、抗原性調製物が、ＲＴＳ,ＳおよびＴＲＡＰ抗原の組合せを含むマラリアワクチンである。多段階のマラリアワクチンの成分の候補であると見込まれる他のマラリア原虫の抗原は、熱帯熱マラリア原虫のＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、シクエストリン（Sequestrin）、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰ１、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７１２５、Ｐｆｓ１６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０およびプラスモジウム属の種におけるこれらの類似体である。
【００５１】
従って、本明細書に開示するある種の実施態様は、例えば結核菌またはらい菌または他のマイコバクテリウム属などのアクチノバクテリア；サルモネラ属、ナイセリア属、ボレリア属、クラミジア属またはボルデテラ属のメンバーなどの細菌；単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、肝炎ウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、呼吸器多核体ウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）およびサイトメガロウイルスなどのウイルス；ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２などのＨＩＶ；C.アルビカンス、C. グラブラタ（glabrata）、C. クルセイ（krusei）、C. ルシタニアエ（lusitaniae）、C. トロピカリス（tropicalis）およびC. パラプローシス（parapsilosis）などのカンジダ属の種を含む、アスペルギルス属、ブラストミセス属、コクシジオイデス属およびニューモシスチス属または酵母などの真菌；原生動物などの寄生生物、例えば、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫（P. vivax）、四日熱マラリア原虫（P. malariae）および卵形マラリア原虫（P. ovale）を含むプラスモジウム属の種；またはアカントアメーバ属、赤痢アメーバ、アンギオストロンギルス属、マンソン住血吸虫、ビルハルツ住血吸虫、日本住血吸虫、クリプトスポリジウム属、アンシロストーマ属、赤痢アメーバ、大腸アメーバ（Entamoeba coli）、エントアメーバ・ディスパー（Entamoeba dispar）、エントアメーバ・ハルトマンニ（Entamoeba hartmanni）、エントアメーバ・ポレキ（Entamoeba polecki）、バンクロフト糸状虫、ジアルジア属およびリーシュマニア属の１種またはそれ以上などの他の寄生生物を含む、細菌、ウイルスまたは真菌などの少なくとも１種の感染性病原体に由来する抗原を企図する。
【００５２】
例えば、ボレリア属の種に由来する抗原を含むＧＬＡ含有ワクチンの実施態様では、抗原は、核酸、病原体に由来する抗原または抗原調製物、組換え的に産生されたタンパク質またはペプチドおよびキメラの融合タンパク質を含み得る。そのような抗原の１つはＯｓｐＡである。ＯｓｐＡは、宿主細胞におけるその生合成のために脂質付加された形態にある完全長成熟タンパク質（Ｌｉｐｏ−ＯｓｐＡ）であり得るか、または、非脂質付加誘導体であり得る。そのような非脂質付加誘導体は、インフルエンザウイルスの非構造タンパク質（ＮＳ１）の最初の８１個のＮ末端アミノ酸および完全なＯｓｐＡタンパク質を有する非脂質付加ＮＳ１−ＯｓｐＡ融合タンパク質を含み、そして、もう一つのＭＤＰ−ＯｓｐＡは、３個の追加的Ｎ末端アミノ酸を有するＯｓｐＡの非脂質付加形態である。
【００５３】
本明細書に記載の感染性病原体による感染を有するか、有するリスクがあると疑われる対象を同定するための組成物および方法は、当分野で知られている。
【００５４】
例えば、細菌の結核菌は、結核（ＴＢ）を引き起こす。この細菌は通常は肺を攻撃するが、腎臓、脊椎および脳も攻撃できる。適正に処置されなければ、ＴＢ疾患は、致死的であり得る。この疾患は、感染した人がくしゃみまたは咳をすると、一人の人から他人に空気中で広がる。２００３年には、１４,０００を超えるＴＢの症例が合衆国で報告された。
【００５５】
結核は、一般的に長期の抗生物質治療の使用により制御できるが、そのような処置は、疾患の拡散を防止するには十分ではなく、起こり得る抗生物質耐性株の選択に関する懸念が存在する。感染した個体は、いくらかの期間にわたり、無症状であるが伝染性であり得る。加えて、処置計画に伴う服薬遵守は決定的であるが、患者の行動を監視するのは困難である。いくらかの患者は処置の過程を完遂せず、このことは、効果のない処置および薬剤耐性の発展を導き得る（例えば、米国特許第７,０８７,７１３号）。
【００５６】
現在、生きている細菌によるワクチン接種が、結核に対する保護的免疫を誘導するのに最も有効な方法である。この目的で用いられる最も一般的なマイコバクテリアは、マイコバクテリウム・ボビスの非病原性株であるカルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）である。しかしながら、ＢＣＧの安全性と有効性は論争の源であり、合衆国などのいくつかの国は、公衆にワクチン接種していない。診断は、一般的に皮膚の試験を使用して行われ、それは、ツベルクリンＰＰＤ（タンパク質精製した誘導体）への皮内曝露を伴う。抗原特異的Ｔ細胞の反応は、注射の４８ ７２時間後までに注射部位に測定可能な硬結をもたらし、そのことが、マイコバクテリアの抗原への曝露を示す。しかしながら、感受性および特異性はこの試験の問題であり、ＢＣＧでワクチン接種された個体は、感染した個体と区別できない（例えば、米国特許第７,０８７,７１３号）。
【００５７】
マクロファージは結核菌免疫の主要なエフェクターとして作用すると示されてきたが、Ｔ細胞は、そのような免疫の支配的な誘導因子である。結核菌感染に対する保護におけるＴ細胞の必須の役割は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染に伴うＣＤ４Ｔ細胞の枯渇による、ＡＩＤＳ患者における結核菌の頻発により例示説明される。マイコバクテリア反応性のＣＤ４Ｔ細胞は、ガンマ−インターフェロン（ＩＦＮ−ガンマ）の強力な生産者であると示され、次いで、マウスでマクロファージの抗マイコバクテリア作用を誘発すると示された。ヒトにおけるＩＦＮ−ガンマの役割はあまりはっきりしていないが、研究は、１,２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３が、単独で、または、ＩＦＮ−ガンマもしくは腫瘍壊死因子−アルファと共に、ヒトマクロファージを活性化し、結核菌の感染を阻害すると示した。さらに、ＩＦＮ−ガンマがヒトマクロファージを刺激し、１,２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３を作ると知られている。同様に、ＩＬ−１２は、結核菌感染に対する耐性の刺激において役割を果たすと示された。結核菌感染の免疫学を概観するには、Chan and Kaufmann, in Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control, Bloom (ed.), ASM Press. Washington, D.C. (1994) を参照せよ。
【００５８】
結核を診断するための、または、結核に対する保護的免疫を誘導するための既存の化合物および方法は、１種またはそれ以上のマイコバクテリアのタンパク質の少なくとも１つの免疫原性部分を含むポリペプチド、およびそのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子の使用を含む。そのようなポリペプチドまたはＤＮＡ配列を含む診断キットおよび適する検出試薬は、患者および生物学的サンプルにおけるマイコバクテリア感染の検出に使用し得る。そのようなポリペプチドに対する抗体も提供されている。加えて、そのような化合物は、マイコバクテリア感染に対する免疫化のために、ワクチンおよび／または医薬組成物に製剤化し得る（米国特許第６,９４９,２４６号および第６,５５５,６５３号）。
【００５９】
マラリアは、世界の大部分で１９６０年代に排除されたが、この疾患は依然として存続し、既存の薬物に耐性のある、疾患の新しい系統が現れている。マラリアは、９０を超える国で主要な公衆衛生問題である。マラリアの９割はサハラ以南のアフリカで起こる。世界の人口の３分の１以上がリスクにあり、毎年３億５千万ないし５億人がマラリアに感染する。４５００万人の妊婦が、この年にマラリアにかかるリスクにある。既に感染した個体のうち、１００万人以上の感染者が、予防可能な疾患により毎年死亡する。これらの死亡者の大部分は、アフリカの子供である。
【００６０】
マラリアは、通常、感染したメスのハマダラカ属の蚊に人が噛まれるときに伝染する。伝染するには、その蚊は、既にマラリアに感染した人から血を吸うことにより、感染していなければならない。マラリアは、寄生生物に起因し、この疾患の臨床的症状には、発熱およびインフルエンザ様の病気、例えば、悪寒、頭痛、筋肉痛および疲労が含まれる。これらの症状は、悪心、嘔吐および下痢を伴い得る。マラリアは、赤血球の喪失のために、貧血および黄疸も引き起こし得る。あるタイプのマラリア、熱帯熱マラリア原虫による感染は、迅速に処置されなければ、腎不全、てんかん、精神錯乱、昏睡および死亡を引き起こし得る。
【００６１】
個体におけるマラリアのインビトロの診断方法は知られており、個体から採取した組織または体液を分子またはポリペプチド組成物と接触させることを含み、該分子またはポリペプチド組成物は、熱帯熱マラリア原虫の感染活性から得られるタンパク質の１つまたはそれ以上のＴエピトープの全部または一部を有する１つまたはそれ以上のペプチド配列を含み、接触は、該組成物と組織または体液中に存在し得る抗体との間でインビトロの免疫反応が起こり、形成された抗原−抗体複合体のインビトロ検出を可能にする条件下で行う（例えば、米国特許第７,０８７,２３１号参照）。
【００６２】
組換え熱帯熱マラリア原虫（３Ｄ７）ＡＭＡ−１外部ドメインの発現および精製は、記載された。過去の方法は、天然分子のフォールディングとジスルフィド架橋を保持する、高度に精製されたタンパク質を産生した。組換えＡＭＡ−１は、診断試薬として、また、抗体産生において、そして、マラリアを予防するワクチンとして単独で、またはその一部として使用するためのタンパク質として、有用である。（米国特許第７,０２９,６８５号）
【００６３】
感受性の哺乳動物の宿主の血漿に感染後に分泌されるタンパク質またはタンパク質の断片である、種特異的な三日熱マラリア原虫のマラリアペプチド抗原をコードするポリヌクレオチド、並びに、これらの抗原に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体が、当分野で記載された。ペプチド抗原、モノクローナル抗体および／またはポリクローナル抗体は、マラリアを診断するために、また、三日熱マラリア原虫が感染の原因の種であるか否かを判定するために使用されるアッセイで利用される（米国特許第６,７０６,８７２号）。また、感受性の哺乳動物の宿主の血漿に感染後に分泌されるタンパク質またはタンパク質の断片である、種特異的な三日熱マラリア原虫のマラリアペプチド抗原、並びに、これらの抗原に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体も報告された。ペプチド抗原、モノクローナル抗体および／またはポリクローナル抗体は、マラリアを診断するために、また、三日熱マラリア原虫が感染の原因の種であるか否かを判定するために使用されるアッセイで利用される（例えば、米国特許第６,２３１,８６１号参照）。
【００６４】
組換え熱帯熱マラリア原虫（３Ｄ７）ＡＭＡ−１外部ドメインは、天然分子のフォールディングとジスルフィド架橋を保持する、高度に精製されたタンパク質を産生する方法によっても発現された。組換えＡＭＡ−１は、診断試薬として、抗体産生において使用するために、そしてワクチンとして、有用である（米国特許第７,０６０,２７６号）。同様に知られているのは、天然分子のフォールディングとジスルフィド架橋を保持する組換え熱帯熱マラリア原虫（３Ｄ７）ＭＳＰ−１４２の発現および精製である。組換えＭＳＰ−１４２は、診断試薬として、抗体産生において使用するために、そしてワクチンとして、有用である（米国特許第６,８５５,３２２号）。
【００６５】
従って、ヒトのマラリア感染を検出し、マラリア感染性の病原体に感染を有するか、または有するリスクにあると疑われる対象を同定するための診断方法は、これらおよび関連する開示により知られている。特に、例えば、血液サンプルを、３−アセチルピリジンアデニンジヌクレオチド（ＡＰＡＤ）、基質（例えば、乳酸塩または乳酸）およびバッファーを含有する試薬と合わせる。この試薬は、マラリア寄生生物により産生される独特の解糖酵素の存在を検出するように設計されている。この酵素は、原虫性乳酸脱水素酵素（ＰＬＤＨ）として知られている。ＰＬＤＨは、上記の試薬を使用して、宿主のＬＤＨと容易に区別される。試薬と寄生された血液サンプルの組合せは、ＡＰＡＤの減少をもたらす。しかしながら、ＡＰＡＤは、宿主ＬＤＨによって減少しない。次いで、ＡＰＡＤの減少は、分光的、蛍光定量的、電気泳動的または比色定量的分析を含む様々な技法により検出され得る。前述の方法におけるＡＰＡＤの減少の検出は、マラリア感染のポジティブな指標を提供する（例えば、米国特許第５,１２４,１４１号）。マラリア診断の他の方法論では、熱帯熱マラリア原虫抗原ＧＬＵＲＰに由来する特徴的なアミノ酸配列を含むポリペプチドが、そのポリペプチドに対して生成されたか、またはそれに反応性である特異的抗体により、試験サンプル中に認識される。（米国特許第５,２３１,１６８号）
【００６６】
リーシュマニア症は、インド亜大陸、アフリカおよびラテンアメリカで頻繁に流行する広範な寄生虫症であり、世界保健機構のワクチン開発の優先事項である。様々な疾患の複合物として、リーシュマニア属の寄生生物は、内部の器官の致死的な感染並びに深刻な皮膚病を引き起こす。リーシュマニア症の最も破滅的な形態の１つは、鼻および口の醜い感染である。リーシュマニア症の症例数は増加しており、現在多くの地域で制御不能である。リーシュマニア症は、また、いくつかの先進国でも、特に南ヨーロッパでＨＩＶ感染の結果として増えている。利用可能な薬物は毒性であり、高価であり、長期にわたる毎日の注射を必要とする。
【００６７】
リーシュマニア属は、免疫系のマクロファージまたは白血球細胞に生息する原生動物の寄生生物である。この寄生生物は、小型吸血昆虫（スナバエ）の噛みつきにより伝染し、それらはこの惑星の広大な地域に生息するので、制御し難い。
【００６８】
内臓リーシュマニア症は、この疾患の３つの症状のうち、最も危険である。約５００,０００件の内蔵型（カラアザールまたは「致命的病気」）の新しい症例が毎年生じると見積もられている。２億人を超える人々が、現在、内臓リーシュマニア症にかかるリスクにある。内臓リーシュマニア症の症例の９０パーセント以上が、インド、バングラディシュ、スーダン、ブラジルおよびネパールで生じる。死亡の殆どは子供で生じる。皮膚型の者は、しばしば、永久に外見を損なわれる。
【００６９】
リーシュマニア属の感染は診断し難く、典型的には、組織生検標本の病理組織学的分析を必要とする。しかしながら、いくつかの血清学的および免疫学的診断アッセイが開発された。（米国特許第７,００８,７７４号；Senaldi et al., (1996) J. Immunol. Methods 193:9 5; Zijlstra, et al., (1997) Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 91:671 673;  Badaro, et al., (1996) J. Inf. Dis. 173:758 761; Choudhary, S., et al., (1992) J. Comm. Dis. 24:32 36; Badaro, R., et al., (1986) Am. J. Trop. Med. Hyg. 35:72 78; Choudhary, A., et al., (1990) Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 84:363 366; and Reed, S. G., et al., (1990) Am. J. Trop. Med. Hyg. 43:632 639)。前鞭毛虫は、代謝産物を培養培地に放出し、条件培地を産生する。これらの代謝産物は、宿主にとって免疫原性である。Schnur, L. F., et al., (1972) Isrl. J. Med. Sci. 8:932 942; Sergeiev, V. P., et al., (1969) Med. Parasitol. 38:208 212; El-On, J., et al., (1979) Exper. Parasitol. 47:254 269; and Bray, R. S., et al., (1966) Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 60:605 609；米国特許第６,８４６,６４８号、米国特許第５,９１２,１６６号；米国特許第５,７１９,２６３号；米国特許第５,４１１,８６５号参照）。
【００７０】
世界中で約４千万人の人々が、ＡＩＤＳを引き起こすウイルスであるＨＩＶに感染している。約３百万人の人々が毎年この疾患により死亡し、彼らの９５パーセントが発展途上世界にいる。毎年、５百万人近い人々がＨＩＶに感染する。現在、サハラ以南のアフリカが最高の疾患の負担を有するが、それは急速にインド、中国およびロシアなどの他の国々に広がっている。流行は少数者集団で最も急速に広がっている。合衆国では、９５０,０００件を超えるＡＩＤＳの症例が１９８１年から報告されてきた。ＡＩＤＳは、最も生産的な年齢の人々を襲う。女性は、生物学的理由および社会的理由の両方で、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの高いリスクを有する。
【００７１】
ＡＩＤＳは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に起因し、それは、身体の免疫系の細胞を殺し、損ない、感染およびある種の癌と闘う身体の能力を次第に破壊する。ＨＩＶは、感染した相手と保護されない性交を行うことにより、最も一般的に拡散する。この問題の最も確固たる解決は、ウイルスの拡散を防ぐことである。安全で有効な入手可能なＨＩＶワクチンの作成は、この目標を達成する１つの方法である。世界中で、有効な予防を利用できるのは、ＨＩＶ感染の高いリスクにある人の５人に１人より少ない。
【００７２】
ＨＩＶ感染の診断方法は知られており、ウイルス培養、患者の試料からの決定的な核酸配列のＰＣＲ、および、患者の血清中の抗ＨＩＶ抗体の存在についての抗体試験によるものを含む（例えば、米国特許第６,９７９,５３５号、第６,５４４,７２８号、第６,３１６,１８３号、第６,２６１,７６２号、第４,７４３,５４０号参照）。
【００７３】
本明細書に開示のある種の他の実施態様によると、ワクチン組成物および関連する製剤および使用方法は、癌細胞に由来する抗原を含み得、癌の免疫療法的処置に有用であり得る。例えば、アジュバント製剤には、前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、腎臓癌または黒色腫用のものなどの腫瘍拒絶抗原に用途があり得る。例示的な癌または癌細胞由来の抗原には、ＭＡＧＥ１、３およびＭＡＧＥ４または他のＭＡＧＥ抗原、例えば、ＷＯ９９／４０１８８に開示のもの、ＰＲＡＭＥ、ＢＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹＥｏｓ１としても知られている）、ＳＡＧＥおよびＨＡＧＥ（ＷＯ９９／５３０６１）またはＧＡＧＥ（Robbins and Kawakami, 1996 Current Opinions in Immunology 8, pps 628-636; Van den Eynde et al., International Journal of Clinical & Laboratory Research (1997 & 1998); Correale et al. (1997), Journal of the National Cancer Institute 89, p. 293）が含まれる。これらの非限定的な癌抗原の例は、黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱癌などの幅広い腫瘍のタイプで発現される。例えば、米国特許第６,５４４,５１８号参照。
【００７４】
この度開示されるある種の実施態様に従ってＧＬＡと共に使用するのに適する他の腫瘍特異的抗原には、腫瘍特異的または腫瘍関連ガングリオシド、例えば、ＧＭ２およびＧＭ３またはタンパク質を有するそれらのコンジュゲートが含まれるがこれらに限定されない；または、抗癌免疫反応を誘起または増強するためのＧＬＡワクチン組成物において使用するための抗原は、多くの癌の処置に有用な、自己ペプチドホルモン、例えば、全長のゴナドトロピンホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ、ＷＯ９５／２０６００）（短い１０アミノ酸長のペプチド）であり得る。他の実施態様では、前立腺抗原、例えば、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＰＳＣＡ（例えば、Proc. Nat. Acad. Sci. USA 95(4) 1735-1740 1998）、ＰＳＭＡ、または、好ましい実施態様ではプロスターゼ（Prostase）として知られる抗原が使用される。（例えば、Nelson, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1999) 96: 3114-3119; Ferguson, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999. 96, 3114-3119；ＷＯ９８／１２３０２；米国特許第５,９５５,３０６号；ＷＯ９８／２０１１７；米国特許第５,８４０,８７１号および第５,７８６,１４８号；ＷＯ００／０４１４９）。他の前立腺特異的抗原は、ＷＯ９８／１３７４１８およびＷＯ／００４１４９から知られている。他のものは、ＳＴＥＡＰである（PNAS 96 14523 14528 7-12 1999）。
【００７５】
本発明に関して有用な他の腫瘍関連抗原には、Ｐｌｕ−１（J Biol. Chem 274 (22) 15633 -15645, 1999）、ＨＡＳＨ−１、ＨａｓＨ−２、Ｃｒｉｐｔｏ（Salomon et al Bioessays 199, 21:61-70, U.S. Pat. No. 5,654,140）およびＣｒｉｐｔｉｎ（米国特許第５,９８１,２１５号）が含まれる。加えて、ワクチンに特に関連が深い抗原は、また、チロシナーゼおよびサバイビンを含む。
【００７６】
本明細書で開示される癌抗原を含むＧＬＡ含有ワクチン組成物に関する実施態様は、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ発現または他の癌特異的または癌関連抗原などの腫瘍関連抗原の発現を特徴とする癌に対して有用である。
【００７７】
癌を有するか、または有するリスクにあると疑われる対象における癌の診断は、広範な当分野で受け入れられた方法論のいずれかを伴い得、それは、臨床像、癌の進行度、癌の種類および他の要因を含む様々な要因によって変動し得る。癌の診断の例には、患者の試料（例えば、血液、皮膚生検、他の組織生検、外科手術標本など）の病理組織学的、組織細胞化学的、免疫組織細胞化学的および免疫病理組織学的検査、定義された遺伝子（例えば、核酸）マーカーのＰＣＲ試験、循環している癌関連抗原またはそのような抗原を有する細胞についての、または、定義された特異性の抗体についての血清学的試験、または、当業者に周知の他の方法論が含まれる。例えば、米国特許第６,７３４,１７２号；第６,７７０,４４５号；第６,８９３,８２０号；第６,９７９,７３０号；第７,０６０,８０２号；第７,０３０,２３２号；第６,９３３,１２３号；第６,６８２,９０１号；第６,５８７,７９２号；第６,５１２,１０２号；第７,０７８,１８０号；第７,０７０,９３１号；ＪＰ５−３２８９７５； Waslylyk et al., 1993 Eur. J Bioch. 211(7):18 参照。
【００７８】
本発明のある種の実施態様に従うワクチン組成物および方法は、自己免疫疾患の予防または治療にも使用し得、それは、宿主または対象の免疫系が、「自己」の組織、細胞、生体分子（例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、プロテオリピド、脂質、糖脂質、核酸、例えばＲＮＡおよびＤＮＡ、オリゴ糖、多糖、プロテオグリカン、グリコサミノグリカンなど、および、対象の細胞および組織の他の分子成分）またはエピトープ（例えば、特異的な免疫学的に定義される認識構造、例えば、抗体の可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはＴ細胞受容体ＣＤＲにより認識されるもの）に向けられる免疫反応を有害に媒介する疾患、症状または障害を含む。
【００７９】
従って、自己免疫疾患は、細胞または抗体と関連する異常な免疫反応を特徴とし、それは、いずれの場合でも、正常な自己組織に対するものである。哺乳動物の自己免疫疾患は、一般的に２つの異なるカテゴリーの一方に分類できる：細胞に媒介される疾患（即ち、Ｔ細胞）または抗体に媒介される障害。細胞に媒介される自己免疫疾患の非限定的な例には、多発性硬化症、関節リウマチ、橋本甲状腺炎、１型糖尿病（若年発症糖尿病）および自己免疫性網膜ぶどう膜炎が含まれる。抗体に媒介される自己免疫障害には、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（またはＳＬＥ）、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性喘息、クリオグロブリン血症、血栓性血小板減少性紫斑病、原発性硬化性胆管炎および悪性貧血が含まれるが、これらに限定されない。関連する抗原：全身性エリテマトーデスは、低分子リボ核タンパク（ｓｎＲＮＰ）である；グレーブス病は、サイロトロピン受容体、サイログロブリンおよび甲状腺上皮細胞の他の成分である（Akamizu et al., 1996; Kellerman et al., 1995; Raju et al., 1997; and Texier et al., 1992）；天疱瘡は、カドヘリン様天疱瘡抗原、例えば、デスモグレイン３および他の接着分子である（Memar et al., 1996: Stanley, 1995; Plott et al., 1994; and Hashimoto, 1993）；そして、血栓性血小板減少性紫斑病は、血小板の抗原である。（例えば、米国特許第６,９２９,７９６号；Gorski et al. (Eds.), Autoimmunity, 2001, Kluwer Academic Publishers, Norwell, MA; Radbruch and Lipsky, P.E. (Eds.) Current Concepts in Autoimmunity and Chronic Inflammation (Curr. Top. Microbiol. and Immunol.) 2001, Springer, NY.参照）
【００８０】
自己免疫は、１型糖尿病、多発性硬化症、ループス、関節リウマチ、強皮症および甲状腺疾患を含む８０種を超える異なる疾患において役割を果たす。罹患率の活発な定量的評価は、殆どの自己免疫性疾患について行われていない。１９９０年代の後期に行われた最新の研究は、自己免疫疾患は合衆国で第３番目に多い主要な疾病であり；そして、最も多い自己免疫疾患は、８５０万人を超えるアメリカ人を冒していることを明らかにしている。現在のこの疾患の罹患率の見積りは、合衆国の人口の５ないし８パーセントの範囲にある。殆どの自己免疫疾患は、偏って女性を冒す。女性は、自己免疫疾患にかかる可能性が男性よりも２.７倍高い。女性は、より自己免疫疾患に罹りやすい；男性は、女性よりも高いレベルのナチュラルキラー細胞活性を有すると思われる。（Jacobsen et al, Clinical Immunology and Immunopathology, 84:223-243, 1997.）
【００８１】
自己免疫疾患は、免疫系が自己組織を非自己と錯誤し、不適当な攻撃を開始するときに生じる。身体は、様々な方法で自己免疫疾患に冒され得、例えば、腸（クローン病）および脳（多発性硬化症）を含む。自己抗体が自己細胞または自己組織を攻撃し、それらの機能を損ない、その結果、自己免疫疾患を引き起こすこと、および、自己抗体が、自己免疫疾患の実際の発症（例えば、臨床徴候および症状の出現）に先立ち、患者の血清中に検出され得ることが知られている。従って、自己抗体の検出は、自己免疫疾患の存在または発症リスクの早期の発見または認識を可能にする。これらの知見に基づき、様々な自己抗原に対する自己抗体が発見され、自己抗原に対する自己抗体は臨床試験で測定されてきた（例えば、米国特許第６,９１９,２１０号、第６,５９６,５０１号、第７,０１２,１３４号、第６,９１９,０７８号）。一方、他の自己免疫の診断は、関連する代謝物（例えば、米国特許第４,６５９,６５９号）または免疫反応性（例えば、米国特許第４,６１４,７２２号および第５,１４７,７８５号、第４,４２０,５５８号、第５,２９８,３９６号、第５,１６２,９９０号、第４,４２０,４６１号、第４,５９５,６５４号、第５,８４６,７５８号、第６,６６０,４８７号）の検出を含み得る。
【００８２】
ある種の実施態様では、本発明の組成物は、腎臓透析の対象、化学療法および／または放射線療法の対象、臓器移植患者などを含む、高齢者および／または免疫抑制者の処置において特に適用可能である。そのような個体は、一般的に、ワクチンに対する免疫反応の減少を示し、従って、本発明の組成物の使用は、これらの対象で達成される免疫反応を増強させ得る。
【００８３】
他の実施態様では、本発明の組成物で使用される抗原は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの症状の予防および処置用の、細菌感染（例えば、肺炎球菌）に起因するか、またはそれにより悪化するものなどの呼吸器疾患に関連する抗原を含む。ＣＯＰＤは、慢性気管支炎および／または肺気腫の患者における不可逆的または部分的に可逆的な気道閉塞の存在により、生理学的に定義される（Am J Respir Crit Care Med. 1995 Nov;152(5 Pt 2):S77-121）。ＣＯＰＤの悪化は、しばしば細菌（例えば、肺炎球菌）感染に起因する（Clin Microbiol Rev. 2001 Apr;14(2):336-63）。特定の実施態様では、本発明の組成物は、本明細書に記載のＧＬＡアジュバントを、肺炎球菌ワクチン Prevnar（登録商標）（Wyeth）と組み合わせて含む。
【００８４】
また他の実施態様では、本明細書に記載のＧＬＡを含む本発明の組成物は、アレルギー症状の処置に使用される。例えば、特定の実施態様では、組成物は、アレルギーの減感作療法において使用される。そのような療法は、徐々に増加する用量の、ある人がアレルギーである物質による免疫系の刺激を含み、ここで、その物質はＧＬＡを含む組成物中に製剤化されている。特別な実施態様では、組成物は、食物、花粉、ダニ、ネコまたは刺す昆虫（例えば、ミツバチ、スズメバチ（hornets）、スズメバチ（yellow jackets）、スズメバチ（wasps）、アリバチ（velvet ants）、ヒアリ（fire ants））に対するアレルギーの処置に使用される。
【００８５】
ＴＬＲ
本明細書に記載の通り、本発明のある種の実施態様は、医薬組成物を含むワクチン組成物および免疫アジュバント組成物を企図し、それは、本発明のＧＬＡ化合物に加えて、１種またはそれ以上のＴｏｌｌ様受容体アゴニスト（ＴＬＲアゴニスト）を含む。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、多数の感染性病原体の中または上に存在し得るものなどの様々な保存された微生物の分子構造について宿主細胞に早期の認識能力を与える自然免疫系の細胞表面膜貫通型受容体を含む。（例えば、Armant et al., 2002 Genome Biol. 3(8):reviews3011.1-3011.6; Fearon et al., 1996 Science 272:50; Medzhitov et al., 1997 Curr. Opin. Immunol. 9:4; Luster 2002 Curr. Opin. Immunol. 14:129; Lien et al. 2003 Nat. Immunol. 4:1162; Medzhitov, 2001 Nat. Rev. Immunol. 1:135; Takeda et al., 2003 Ann Rev Immunol. 21:335; Takeda et al. 2005 Int. Immunol. 17:1; Kaisho et al., 2004 Microbes Infect. 6:1388; Datta et al., 2003 J. Immunol. 170:4102)。
【００８６】
自然免疫系を介する免疫反応の開始を強化するＴＬＲに媒介されるシグナル伝達の誘導は、細胞表面のＴＬＲに結合するＴＬＲアゴニストにより実行され得る。例えば、リポ多糖類（ＬＰＳ）は、ＴＬＲ２またはＴＬＲ４を介するＴＬＲアゴニストであり得る（Tsan et al., 2004 J. Leuk. Biol. 76:514; Tsan et al., 2004 Am. J. Physiol. Cell Physiol. 286:C739; Lin et al., 2005 Shock 24:206)；ポリ（イノシン−シチジン）（ｐｏｌｙＩ：Ｃ）は、ＴＬＲ３を介するＴＬＲアゴニストであり得る（Salem et al., 2006 Vaccine 24:5119)；ＣｐＧ配列（非メチル化シトシン−グアノシンを含有するオリゴデオキシヌクレオチドまたは「ＣｐＧ」ジヌクレオチドモチーフ、例えば、ＣｐＧ７９０９、Cooper et al., 2005 AIDS 19:1473; CpG 10101 Bayes et al. Methods Find Exp Clin Pharmacol 27:193; Vollmer et al. Expert Opinion on Biological Therapy 5:673; Vollmer et al., 2004 Antimicrob. Agents Chemother. 48:2314; Deng et al., 2004 J. Immunol. 173:5148）は、ＴＬＲ９を介するＴＬＲアゴニストであり得る（Andaloussi et a., 2006 Glia 54:526; Chen et al., 2006 J. Immunol. 177:2373）；ペプチドグリカンは、ＴＬＲ２および／またはＴＬＲ６アゴニストであり得る（Soboll et al., 2006 Biol. Reprod. 75:131; Nakao et al., 2005 J. Immunol. 174:1566）；３Ｍ００３（４−アミノ−２−（エトキシメチル）−α,α−ジメチル−６,７,８,９−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］キノリン−１−エタノール水和物、分子量３１８Ｄａ、3M Pharmaceuticals, St. Paul, MNより、関連化合物３Ｍ００１および３Ｍ００２の供給源でもある；Gorden et al., 2005 J. Immunol. 174:1259）は、ＴＬＲ７アゴニスト（Johansen 2005 Clin. Exp. Allerg. 35:1591）および／またはＴＬＲ８アゴニスト（Johansen 2005）であり得る；フラゲリンは、ＴＬＲ５アゴニストであり得る（Feuillet et al., 2006 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 103:12487)；そして、Ｃ型肝炎抗原は、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ９を介してＴＬＲアゴニストとして作用し得る（Lee et al., 2006 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 103:1828; Horsmans et al., 2005 Hepatol. 42:724）。他のＴＬＲアゴニストは知られており（例えば、Schirmbeck et al., 2003 J. Immunol. 171:5198）、本明細書に記載の実施態様のいずれかに従って使用し得る。
【００８７】
例えば、そして背景として（例えば、米国特許第６,５４４,５１８号参照）、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（「ＣｐＧ」）を含有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、全身および粘膜の経路で投与されると、アジュバントであると知られている（ＷＯ９６／０２５５５、ＥＰ４６８５２０、Davis et al., J. Immunol, 1998. 160(2):870-876; McCluskie and Davis, J. Immunol., 1998, 161(9):4463-6）。ＣｐＧは、ＤＮＡ中に存在するシトシン−グアノシンジヌクレオチドモチーフの略号である。免疫刺激におけるＣＧモチーフの中心的役割は、Krieg, Nature 374, p546 1995により解明された。詳細な分析は、ＣＧモチーフはある種の配列の文脈中に存在しなければならず、そのような配列は細菌のＤＮＡ中で一般的であるが、脊椎動物のＤＮＡにはまれであることを示した。免疫賦活性配列は、しばしば、プリン、プリン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジンであるが（ここで、ジヌクレオチドＣＧモチーフはメチル化されていない）、他の非メチル化ＣｐＧ配列が免疫賦活性であると知られており、本発明のある種の実施態様で使用され得る。ＣｐＧは、ワクチンに製剤化されるとき、自由溶液中で遊離抗原と共に投与され得るか（ＷＯ９６／０２５５５；McCluskie and Davis, 前出)、または、抗原に共有結合するか（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／１６２４７）、または、水酸化アルミニウムなどの担体と共に製剤化される（例えば、Davis et al. 前出, Brazolot-Millan et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8）。
【００８８】
本発明のアジュバントまたはワクチンで使用するのに好ましいオリゴヌクレオチドは、好ましくは、少なくとも３個、より好ましくは少なくとも６個またはそれ以上のヌクレオチドで隔てられている２個またはそれ以上のジヌクレオチドＣｐＧモチーフを含む。本発明のオリゴヌクレオチドは、典型的にはデオキシヌクレオチドである。好ましい実施態様では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間はホスホロジチオエート、または、より好ましくはホスホロチオエート結合であるが、雑多なヌクレオチド間結合を有するオリゴヌクレオチドを含め、ホスホジエステルおよび他のヌクレオチド間結合が本発明の範囲内にある。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドまたはホスホロジチオエートの製造方法は、米国特許第５,６６６,１５３号、第５,２７８,３０２号およびＷＯ９５／２６２０４に記載されている。
【００８９】
好ましいオリゴヌクレオチドの例は、以下の刊行物に開示される配列を有する；本明細書で開示されるある種の実施態様について、配列は、好ましくはホスホロチオエートで改変されたヌクレオチド間結合を含む：
CPG 7909:  Cooper et al., "CPG 7909 adjuvant improves hepatitis B virus vaccine seroprotection in antiretroviral-treated HIV-infected adults."  AIDS, 2005 Sep 23;19(14):1473-9.
CpG 10101: Bayes et al., "Gateways to clinical trials." Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol. 2005 Apr;27(3):193-219.
Vollmer J., "Progress in drug development of immunostimulatory CpG oligodeoxynucleotide ligands for TLR9."  Expert Opinion on Biological Therapy. 2005 May;  5(5): 673-682
【００９０】
代替的なＣｐＧオリゴヌクレオチドは、上記の刊行物に記載の好ましい配列の変異体を含み得、それは、重要ではないヌクレオチド配列の置換、挿入、欠失および／または付加を有する点で異なる。本発明のある種の実施態様で利用されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、当分野で知られるいかなる方法により合成してもよい（例えば、ＥＰ４６８５２０）。好都合には、そのようなオリゴヌクレオチドは、自動合成機を利用して合成し得る。オリゴヌクレオチドは、典型的には、デオキシヌクレオチドである。好ましい実施態様では、オリゴヌクレオチド中のヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート、または、より好ましくはホスホロチオエート結合であるが、ホスホジエステルも本発明で企図する実施態様の範囲内にある。異なるヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドも企図され、例えば、混合されたホスホロチオエートとホスホジエステルである。オリゴヌクレオチドを安定化する他のヌクレオチド間結合も使用し得る。
【００９１】
コアジュバント（co-adjuvant）
本発明で提供されるある種の実施態様は、ＧＬＡ化合物に加えて、アジュバント活性を有するがＧＬＡ以外のものである組成物の成分を表す少なくとも１種のコアジュバントを含有する、医薬組成物を含むワクチン組成物および免疫アジュバント組成物を含む。そのようなアジュバント活性を有するコアジュバントは、ヒト（例えば、ヒトの患者）、非ヒト霊長類、哺乳動物または認識された免疫系を有する他の高等真核生物などの対象に投与されると、免疫反応の強度および／または寿命を変更（即ち、統計的に有意な増加または減少、そして、ある種の好ましい実施態様では、増強または増加）できる組成物を含む（例えば、Powell and Newman, "Vaccine design - The Subunit and Adjuvant Approach", 1995, Plenum Press, New York 参照）。本明細書に開示のある種の実施態様では、ＧＬＡおよび所望の抗原、および、場合により１種またはそれ以上のコアジュバントは、ＧＬＡと同時に投与され得るか、または、その投与において時間および／または空間的に離れていてもよい（例えば、異なる解剖学的部位で）所望の抗原に対する免疫反応を変更し得る、例えば誘起または増強し得るが、ある種の本発明の実施態様は、そのように限定されることを意図せず、従って、特定の抗原を含まないが、ＴＬＲアゴニスト、コアジュバント、イミダゾキノリン免疫反応変更因子、および、ダブルステムループ免疫変更因子（ｄＳＬＩＭ）の１種またはそれ以上を含んでもよい組成物におけるＧＬＡの投与も企図する。
【００９２】
従って、そして上記の通り、コアジュバントは、サポニン類並びにＱＳ２１およびＱＳ２１模倣物を含むサポニン模倣物（例えば、米国特許第５,０５７,５４０号；ＥＰ０３６２２７９Ｂ１；ＷＯ９５／１７２１０）、ミョウバン、トマチンなどの植物アルカロイド類、サポニン、ポリソルベート８０、Ｓｐａｎ８５およびステアリルチロシンなど（しかしこれらに限定されない）の界面活性剤、１種またはそれ以上のサイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＦＮ−ガンマ）、イミダゾキノリン免疫反応変更因子、および、ダブルステムループ免疫変更因子（ｄＳＬＩＭ、例えば、Weeratna et al., 2005 Vaccine 23:5263）などのアジュバント作用を有するＧＬＡ以外の組成物を含む。
【００９３】
サポニン類を含む界面活性剤は、例えば、米国特許第６,５４４,５１８号；Lacaille-Dubois, M and Wagner H. (1996 Phytomedicine 2:363-386)、米国特許第５,０５７,５４０号、Kensil, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55およびＥＰ０３６２２７９Ｂ１で教示されている。免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）と呼ばれる、Quil A（サポニン）の画分を含む粒子性の構造は、溶血性であり、ワクチンの製造に使用されてきた（Morein, B., ＥＰ０１０９９４２Ｂ１）。これらの構造は、アジュバント活性を有すると報告された（ＥＰ０１０９９４２Ｂ１；ＷＯ９６／１１７１１）。溶血性サポニンのＱＳ２１およびＱＳ１７（Quil AのＨＰＬＣ精製した画分）は、強力な全身性アジュバントとして記載され、それらの製造方法は、米国特許第５,０５７,５４０号およびＥＰ０３６２２７９Ｂ１に開示されている。全身性ワクチンの強力なアジュバントとして作用するＱＳ７（Quil-Aの非溶血性画分）の使用も、これらの参考文献に記載されている。ＱＳ２１の使用は、さらに、Kensil et al. (1991. J. Immunology 146:431-437）に記載されている。ＱＳ２１とポリソルベートまたはシクロデキストリンの組合せも知られている（ＷＯ９９／１０００８）。ＱＳ２１およびＱＳ７などのQuil Aの画分を含む粒子性のアジュバントの系は、ＷＯ９６／３３７３９およびＷＯ９６／１１７１１に記載されている。全身性ワクチン接種研究で使用された他のサポニン類には、カスミソウ属およびサボンソウ属などの他の植物種に由来するものが含まれる（Bomford et al., Vaccine, 10(9):572-577, 1992)。
【００９４】
エスチンは、本明細書に開示の実施態様のアジュバント組成物において使用するための、サポニンに関連する他の界面活性剤である。エスチンは、マロニエ、セイヨウトチノキ（Aesculus hippocastanum）の種子に生じるサポニンの混合物として、Merck index（第１２版：登録３７３７）に記載されている。クロマトグラフィーおよび精製による（Fiedler, Arzneimittel-Forsch. 4, 213 (1953)）、そして、イオン交換樹脂による（Erbring et al., U.S. Pat. No. 3,238,190）その単離が記載されている。エスチンの画分（アエスチン（aescin）としても知られる）が精製され、生物学的に活性であると示された（Yoshikawa M, et al. (Chem Pharm Bull (Tokyo) 1996 August;44(8): 1454-1464))。ジギトニンはもう１つの界面活性剤であり、これもMerck index（第１２版、登録３２０４）にサポニンとして記載されており、ジキタリス（Digitalis purpurea）の種子に由来し、Gisvold et al., J. Am. Pharm.Assoc., 1934, 23, 664; and Rubenstroth-Bauer, Physiol. Chem., 1955, 301, 621 に記載の方法に従って精製される。
【００９５】
（登録商標）
本明細書に開示のある種の実施態様に従って使用するための他のコアジュバントには、ブロックコポリマーまたは生物分解性ポリマーが含まれ、これは、関連分野の当業者に周知の重合体の化合物のクラスを表す。ＧＬＡワクチン組成物またはＧＬＡ免疫アジュバントに含まれ得るブロックコポリマーまたは生物分解性ポリマーの例には、Pluronic（登録商標） L121 (BASF Corp., Mount Olive, NJ; see, e.g., Yeh et al., 1996 Pharm. Res. 13:1693; 米国特許第５,５６５,２０９号）、ＣＲＬ１００５（例えば、Triozzi et al., 1997 Clin Canc. Res. 3:2355）、乳酸−グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ−（Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）、およびpolyI:Cが含まれる。(例えば、Powell and Newman, "Vaccine design - The Subunit and Adjuvant Approach", 1995, Plenum Press, New York 参照）
【００９６】
ある種の実施態様は、油を含むＧＬＡワクチンおよびＧＬＡ免疫アジュバントを企図し、それは、いくつかのそのような実施態様において、コアジュバント活性に貢献し得、他のそのような実施態様において、医薬的に許容し得る担体または補助剤を付加的または代替的に提供し得る。如何なる数の適する油も知られており、本開示に基づくワクチン組成物および免疫アジュバント組成物に含めるために選択し得る。そのような油の例には、例示的に、限定ではなく、スクアレン、スクアラン、ミネラルオイル、オリーブ油、コレステロールおよびマンニド（mannide）モノオレエートが含まれる。
【００９７】
イミダゾキノリン免疫反応変更因子などの免疫反応変更因子も当分野で知られており、本明細書に開示するある種の実施態様にコアジュバントとして含まれ得る。ある種の好ましいイミダゾキノリン免疫反応変更因子には、非限定的な例として、レシキモド（resiquimod）（R848）、イミキモドおよびガルジキモド（gardiquimod）が含まれる（Hemmi et al., 2002 Nat. Immunol. 3:196; Gibson et al., 2002 Cell. Immunol. 218:74; Gorden et al., 2005 J. Immunol. 174:1259）；これらおよび他のイミダゾキノリン免疫反応変更因子は、適当な条件下で、本明細書に記載のＴＬＲアゴニスト活性も有し得る。他の免疫反応変更因子は、核酸をベースとするダブルステムループ免疫変更因子（ｄＳＬＩＭ）である。本明細書に開示するある種の実施態様における使用を企図されるｄＳＬＩＭの具体例は、Schmidt et al., 2006 Allergy 61:56; Weihrauch et al. 2005 Clin Cancer Res. 11(16):5993-6001; Modern Biopharmaceuticals, J. Knaeblein (Editor), John Wiley & Sons, December 6, 2005.（dSLIM は183〜200に議論されている）に、そして、Mologen AG (Berlin, FRG: [オンラインで8/18/06にhttp://www.mologen.com/English/04.20-dSLIM.shtmlで取得] から見出すことができる。
【００９８】
先にも述べた通り、本明細書に記載のＧＬＡと共に使用するためのあるタイプのコアジュバントは、アルミニウムのコアジュバントであり得、それは、一般的に「ミョウバン」と呼ばれる。ミョウバンのコアジュバントは、以下のものをベースとする：アルミニウムオキシ−ヒドロキシド；アルミニウムヒドロキシホスホネート；または、様々な専売の塩。ミョウバンのコアジュバントを使用するワクチンには、破傷風の株、ＨＰＶ、Ａ型肝炎、不活化ポリオウイルスおよび本明細書に記載の他の抗原のワクチンが含まれ得る。ミョウバンのコアジュバントは、良好な安全記録を有し、抗体応答を高め、抗原を安定化し、大規模な製造が比較的簡単であるので、有利である。(Edelman 2002 Mol. Biotechnol. 21:129-148; Edelman, R. 1980 Rev. Infect. Dis. 2:370-383.)
【００９９】
効果的な免疫刺激のためにＧＬＡと組み合わせ得る他のコアジュバントには、サポニン類およびＱＳ２１を含むサポニン模倣物、および、同様の効果を与え、本明細書でＱＳ２１模倣物と呼ばれる構造的に関連する化合物が含まれる。ＱＳ２１は、好ましいコアジュバントとして認識されてきた。ＱＳ２１は、シャボンノキの樹皮に由来するＨＰＬＣ精製した非毒性画分を含み得る。ＱＳ２１の製造は、米国特許第５,０５７,５４０号に開示されている。（米国特許第６,９３６,２５５号、第７,０２９,６７８号および第６,９３２,９７２号も参照）
【０１００】
ＧＬＡは、また、ある種の実施態様では、例えば Iscotec (Stockholm, Sweden) および CSL Ltd. (Parkville, Victoria, Australia) から購入できるサポニン由来のISCOMATRIX（登録商標）を含む、ISCOMS として知られる「免疫刺激複合体」（例えば、米国特許第６,８６９,６０７号、第６,８４６,４８９号、第６,０２７,７３２号、第４,９８１,６８４号）と組み合わせ得る。
【０１０１】
組換え発現コンストラクト
本明細書に開示のある種の実施態様によると、ＧＬＡワクチン組成物は、抗原をコードする核酸配列に作動可能に連結したプロモーターを含む少なくとも１種の組換え発現コンストラクトを含み得る。ある種のさらなる実施態様では、組換え発現コンストラクトは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルスまたはレトロウイルスベクターなどのウイルスベクター中に存在する。本明細書で提供されるポリペプチド抗原の発現用のそのような発現コンストラクトおよびベクターを製造および使用するための組成物および方法は当分野で知られており、例えば、Ausubel et al. (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology, 2006 John Wiley & Sons, NY による。組換え発現コンストラクトの非限定的な例は、一般的に、例えば、米国特許第６,８４４,１９２号；第７,０３７,７１２号；第７,０５２,９０４号；第７,００１,７７０号；第６,１０６,８２４号；第５,６９３,５３１号；第６,６１３,８９２号；第６,８７５,６１０号；第７,０６７,３１０号；第６,２１８,１８６号；第６,７８３,９８１号；第７,０５２,９０４号；第６,７８３,９８１号；第６,７３４,１７２号；第６,７１３,０６８号；第５,７９５,５７７号および第６,７７０,４４５号などに見出され、それらの教示は、本明細書で開示するある種の実施態様において使用するために、本明細書で提供されるポリペプチド抗原の発現に適合させることができる。
【０１０２】
免疫反応
従って、本発明は、免疫反応を開始できる宿主における免疫反応を変更（即ち、統計的に有意な増加または減少、例えば、当業者に周知の適当な対照に対して）するための組成物を提供する。当業者に知られている通り、免疫反応は、宿主の免疫状態のいかなる能動的な変更でもあり得、それは、宿主の免疫状態の維持および／または調節に関与する１種またはそれ以上の組織、器官、細胞または分子の構造または機能におけるいかなる変更も含み得る。典型的には、免疫反応は、可溶性免疫グロブリンまたは抗体；サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、ホルモン、増殖因子などの可溶性メディエーター、並びに、他の可溶性小型ペプチド、炭水化物、ヌクレオチドおよび／または脂質メディエーター；免疫系の細胞の機能または構造的特性の変化により測定される細胞の活性化状態の変化、例えば細胞増殖、運動性の変化、特別な遺伝子発現または細胞溶解的挙動などの特別な活動の誘導；表面抗原発現プロフィールの変化またはアポトーシス（プログラムされた細胞死）の開始を含む、免疫系の細胞による細胞の分化；または、免疫反応の存在を検出し得る他の基準のインビボまたはインビトロの測定を含むがこれらに限定されない、様々な周知のパラメーターのいずれによっても検出し得る。
【０１０３】
免疫反応は、しばしば、例えば、宿主の免疫系の細胞および組織による、分子および細胞レベルでの自己構造と非自己構造の識別と認識され得るが、本発明はそのように限定されるべきではない。例えば、免疫反応は、免疫系の成分の典型的な調節などの数々の正常な状態に伴い得るか、または、自己免疫および変性疾患で観察される不適当な自己免疫反応などの病的状態で存在し得る、自己分子、細胞または組織の免疫認識に由来する免疫系の状態の変化も含み得る。他の例として、特定の免疫系の活動（例えば、抗体および／またはサイトカインの産生、または、細胞に媒介される免疫の活性化）の上方調節による誘導に加えて、免疫反応は、検出可能な免疫の抑制、減弱または任意の他の下方調節も含み得、それは、選択された抗原、抗原投与の経路、特異的耐性の誘導または他の要因の結果であり得る。
【０１０４】
本発明のワクチンによる免疫反応の誘導の測定は、当業者が容易に知ることができる周知の免疫学的アッセイのいずれによっても確立し得る。そのようなアッセイには、可溶性抗体；サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、ホルモン、増殖因子などの可溶性メディエーター、並びに、他の可溶性小型ペプチド、炭水化物、ヌクレオチドおよび／または脂質メディエーター；免疫系の細胞の機能または構造的特性の変化により測定される細胞の活性化状態の変化、例えば細胞増殖、運動性の変化、特別な遺伝子発現または細胞溶解的挙動などの特別な活動の誘導；表面抗原発現プロフィールの変化またはアポトーシス（プログラムされた細胞死）の開始を含む、免疫系の細胞による細胞の分化のインビボまたはインビトロの測定が含まれるが、これらに限定されない。これらおよび類似のアッセイの実施手順は、幅広く知られており、例えば、Lefkovits (Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques, 1998; Current Protocols in Immunologyも参照; 例えば、Weir, Handbook of Experimental Immunology, 1986 Blackwell Scientific, Boston, MA; Mishell and Shigii (eds.) Selected Methods in Cellular Immunology, 1979 Freeman Publishing, San Francisco, CA; Green and Reed, 1998 Science 281:1309 およびその引用文献も参照）に見出し得る。
【０１０５】
抗原反応性Ｔ細胞の増殖の検出は、様々な既知技法により達成し得る。例えば、Ｔ細胞増殖は、ＤＮＡ合成速度の測定により検出でき、抗原特異性は、候補の抗原反応性Ｔ細胞が曝露される刺激（例えば、特異的な所望の抗原または対照抗原にパルスされた抗原提示細胞）を制御することにより測定できる。増殖するように刺激されたＴ細胞は、ＤＮＡ合成速度の上昇を示す。ＤＮＡ合成速度を測定する典型的な方法は、例えば、新しく合成されるＤＮＡに組み込まれるヌクレオシド前駆体であるトリチウム標識チミジンによる、Ｔ細胞のパルス標識培養による。組み込まれたトリチウム標識チミジンの量は、液体シンチレーション分光光度計を使用して測定できる。Ｔ細胞増殖を検出する他の方法には、インターロイキン−２（ＩＬ−２）産生、Ｃａ２＋流動または３−（４,５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２,５−ジフェニル−テトラゾリウムなどの染料の取り込みの増加を測定することが含まれる。あるいは、リンホカイン（例えば、インターフェロン−ガンマ）の合成を測定できるか、または、特定の抗原に応答できるＴ細胞の相対数を定量し得る。
【０１０６】
抗原特異的抗体の産生の検出は、本発明によるワクチンで処置された宿主からのサンプル（例えば、免疫グロブリンを含有する血清、血漿または血液などのサンプル）を、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、平衡透析、または、ウエスタンブロットを含む固相免疫ブロットなどのインビトロの方法論を使用してアッセイすることにより達成し得る。好ましい実施態様では、ＥＬＩＳＡアッセイは、例えば、アッセイの感受性を高めるために、その抗原に特異的な固相のモノクローナル抗体による標的抗原の抗原捕捉固定をさらに含み得る。可溶性メディエーター（例えば、サイトカイン、ケモカイン、リンホカイン、プロスタグランジンなど）の生成も、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により、例えば、業者（例えば、Sigma, St. Louis, MO; see also R & D Systems 2006 Catalog, R & D Systems, Minneapolis, MN）から容易に入手できる方法、器具および試薬を使用して、容易に測定し得る。
【０１０７】
当分野で周知の日常的なアッセイを使用して、他の免疫学的パラメーターをいくつでもモニターし得る。これらには、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ、二次的インビトロ抗体応答、十分に確立されたマーカー抗原系を使用する様々な末梢血またはリンパ様単核細胞の亜集団の流動免疫細胞蛍光測定法（flow immunocytofluorimetric analysis）、免疫組織化学または他の関連するアッセイが含まれ得る。これらおよび他のアッセイは、例えば、Rose et al. (Eds.), Manual of Clinical Laboratory Immunology, 5th Ed., 1997 American Society of Microbiology, Washington, DC に見出し得る。
【０１０８】
従って、本発明で提供されるワクチンおよびアジュバント組成物は、宿主において、ＴＨ１−型Ｔリンパ球反応、ＴＨ２−型Ｔリンパ球反応、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）反応、抗体反応、サイトカイン反応、リンホカイン反応、ケモカイン反応および炎症反応から選択される少なくとも１つの免疫反応を誘起または増強できると企図される。ある種の実施態様では、免疫反応は、１種または複数のサイトカインの産生（ここで、サイトカインは、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）から選択される）、１種または複数のインターロイキンの産生（ここで、インターロイキンは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８およびＩＬ−２３から選択される）、１種または複数のケモカインの産生（ここで、ケモカインは、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＣＣＬ４およびＣＣＬ５から選択される）、および、記憶Ｔ細胞反応、記憶Ｂ細胞反応、エフェクターＴ細胞反応、細胞傷害性Ｔ細胞反応およびエフェクターＢ細胞反応から選択されるリンパ球の反応の少なくとも１つを含み得る。例えば、ＷＯ９４／００１５３；ＷＯ９５／１７２０９；ＷＯ９６／０２５５５；Ｕ.Ｓ.６,６９２,７５２；Ｕ.Ｓ.７,０８４,２５６；Ｕ.Ｓ.６,９７７,０７３；Ｕ.Ｓ.６,７４９,８５６；Ｕ.Ｓ.６,７３３,７６３；Ｕ.Ｓ.６,７９７,２７６；Ｕ.Ｓ.６,７５２,９９５；Ｕ.Ｓ.６,０５７,４２７；Ｕ.Ｓ.６,４７２,５１５；Ｕ.Ｓ.６,３０９,８４７；Ｕ.Ｓ.６,９６９,７０４；Ｕ.Ｓ.６,１２０,７６９；Ｕ.Ｓ.５,９９３,８００；Ｕ.Ｓ.５,５９５,８８８；Smith et al., 1987 J Biol Chem. 262:6951; Kriegler et al., 1988 Cell 53:45 53;Beutler et al., 1986 Nature 320:584；Ｕ.Ｓ.６,９９１,７９１；Ｕ.Ｓ.６,６５４,４６２；Ｕ.Ｓ.６,３７５,９４４参照。
【０１０９】
医薬組成物
医薬組成物は、一般的に、少なくとも１種の本発明のＧＬＡ化合物を含み、例えば、抗原、ＴＬＲアゴニスト、コアジュバント（場合により、サイトカイン、イミダゾキノリン免疫反応変更因子、および／または、ｄＳＬＩＭを含む）、および／または、組換え発現コンストラクトから選択される１種またはそれ以上の本発明で提供される成分を、医薬的に許容し得る担体、補助剤または希釈剤と組み合わせて、さらに含み得る。
【０１１０】
従って、ある種の態様では、本発明は、ＧＬＡ「単剤療法」に引き付けられ、ここで、本明細書に記載のＧＬＡは、実質的に他の抗原を欠く組成物に製剤化され、疾患または他の状態を処置または予防する目的で、例えば、生物による感染を処置する目的で、季節性鼻炎を処置する目的で、免疫反応、例えば、非特異的免疫反応を刺激するために、対象に投与される。ある実施態様では、例えば、本発明の組成物および方法は、対象の免疫反応を刺激するためにＧＬＡ化合物を用いる。他の実施態様では、ＧＬＡは、スプレーの形態であり、場合によりキットで提供される。
【０１１１】
ＧＬＡは、好ましくは、適する乳剤に製剤化され得る。ある特定の実施態様では、例えば、実質的に他の抗原を欠く適当な乳剤中に本発明のＧＬＡ化合物を含む組成物が提供される。
【０１１２】
ある種の他の実施態様では、医薬組成物は、ＧＬＡおよび抗原の両方を含み、医薬的に許容し得る担体、補助剤または希釈剤と組み合わせて、ＴＬＲアゴニスト、コアジュバント（例えば、サイトカイン、イミダゾキノリン免疫反応変更因子、および／または、ｄＳＬＩＭを含む）など、および／または、組換え発現コンストラクトから選択される１種またはそれ以上の本明細書で提供される成分をさらに含み得るワクチン組成物である。
【０１１３】
例示的な担体は、用いる投与量および濃度で受容者に非毒性である。ＧＬＡプラス核酸をベースとするワクチン、または、ＧＬＡプラス抗原を含むワクチンには、典型的には、皮内、皮下、筋肉内または静脈内の経路により、または、他の経路により、約０.００１μｇ／体重ｋｇないし約１００ｍｇ／体重ｋｇが一般的に投与される。
【０１１４】
より特定の実施態様では、投与量は、約０.００１μｇ／ｋｇないし約１ｍｇ／ｋｇである。他の特定の実施態様では、投与量は、約０.００１ないし約５０μｇ／ｋｇである。他の特定の実施態様では、投与量は、約０.００１ないし約１５μｇ／ｋｇである。
【０１１５】
他の特定の実施態様では、投与されるＧＬＡの量は、約０.０１μｇ／投与ないし約５ｍｇ／投与である。他の特定の実施態様では、投与されるＧＬＡの量は、約０.１μｇ／投与ないし約１ｍｇ／投与である。他の特定の実施態様では、投与されるＧＬＡの量は、約０.１μｇ／投与ないし約１００μｇ／投与である。他の特定の実施態様では、投与されるＧＬＡは、約０.１μｇ／投与ないし約１０μｇ／投与である。
【０１１６】
投与の回数および頻度が宿主の反応によって決まることは、当業者に明らかである。治療的使用のための「医薬的に許容し得る担体」は、医薬分野で周知であり、例えば、Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro edit. 1985) に記載されている。例えば、生理的ｐＨの無菌塩水およびリン酸緩衝塩水を使用し得る。保存料、安定化剤、染料および香味料を医薬組成物に提供し得る。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルを保存料として添加し得る。同文献、１４４９。加えて、抗酸化剤および懸濁化剤を使用し得る。同文献。
【０１１７】
「医薬的に許容し得る塩」は、本発明の化合物と有機または無機酸（酸付加塩）または有機または無機塩基（塩基付加塩）の組合せに由来する、本発明の化合物の塩を表す。本発明の組成物は、遊離塩基または塩の形態のいずれでも使用し得、両方の形態が本発明の範囲内にあるとみなされる。
【０１１８】
医薬組成物は、組成物が患者に投与されることを可能にするいかなる形態でもあり得る。例えば、組成物は、固体、液体または気体（エアロゾル）の形態であり得る。典型的な投与経路には、限定せずに、経口、局所、非経腸（例えば、舌下または頬側）、舌下、直腸、膣および鼻腔内（例えば、スプレーとして）が含まれる。本明細書で使用する非経腸の用語は、イオントフォレーシス（例えば、Ｕ.Ｓ.７,０３３,５９８；７,０１８,３４５；６,９７０,７３９）、ソノフォレーシス（例えば、Ｕ.Ｓ.４,７８０,２１２；４,７６７,４０２；４,９４８,５８７；５,６１８,２７５；５,６５６,０１６；５,７２２,３９７；６,３２２,５３２；６,０１８,６７８）、熱（例えば、Ｕ.Ｓ.５,８８５,２１１；６,６８５,６９９）、受動的経皮（例えば、Ｕ.Ｓ.３,５９８,１２２；３,５９８,１２３；４,２８６,５９２；４,３１４,５５７；４,３７９,４５４；４,５６８,３４３；５,４６４,３８７；英国特許明細書第２２３２８９２号；Ｕ.Ｓ.６,８７１,４７７；６,９７４,５８８；６,６７６,９６１）、マイクロニードル（例えば、Ｕ.Ｓ.６,９０８,４５３；５,４５７,０４１；５,５９１,１３９；６,０３３,９２８）投与、並びに、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内、空洞内、髄腔内、尿道口内（intrameatal）、尿道内注射または点滴技法を含む。特定の実施態様では、本明細書に記載の組成物（ワクチンおよび医薬組成物を含む）を、イオントフォレーシス、マイクロキャビテーション、ソノフォレーシスまたはマイクロニードルから選択される技法により、皮内に投与する。
【０１１９】
医薬組成物は、その中に含まれる有効成分が、患者への組成物の投与の際に生物が利用可能であるように製剤化する。患者に投与される組成物は、１またはそれ以上の投与単位をとり得、例えば、錠剤は、単一の投与単位であり得、エアロゾル形態の１種またはそれ以上の本発明の化合物の容器は、複数の投与単位を保持し得る。
【０１２０】
経口投与には、補助剤および／または結合剤が存在し得る。例は、スクロース、カオリン、グリセリン、スターチ、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースおよびエチルセルロールである。着色料および／または香味料が存在し得る。被覆殻を用い得る。
【０１２１】
組成物は、液体の形態、例えば、エリキシル剤、シロップ剤、液剤、乳剤または懸濁剤であり得る。液体は、２つの例として、経口投与用または注射による送達用であり得る。経口投与を意図する場合、好ましい組成物は、１種またはそれ以上の甘味料、保存料、染料／着色料および香味増強剤を含有する。注射による投与を意図する組成物には、１種またはそれ以上の表面活性物質、保存料、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、バッファー、安定化剤および等張化剤が含まれ得る。
【０１２２】
本発明で使用する液体の医薬組成物は、液剤、懸濁剤または他の形態のいずれであっても、以下の担体または補助剤の１種またはそれ以上を含み得る：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、塩水、好ましくは生理塩水、リンガー液、等張塩化ナトリウム、固定油、例えば、スクアレン、スクアラン、ミネラルオイル、マンニドモノオレエート、コレステロール、および／または、溶媒または懸濁媒として役立ち得る合成モノまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート化剤、例えば、エチレンジアミンテトラ酢酸；バッファー、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩および浸透圧を調節するための物質、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロース。非経腸製剤は、アンプル、使い捨てシリンジまたはガラスまたはプラスチック製の複数回投与用バイアルに封入され得る。注射可能な医薬組成物は、好ましくは無菌である。
【０１２３】
特定の実施態様では、本発明の医薬またはワクチン組成物は、０.２μｍ未満の安定な水性懸濁液を含み、リン脂質、脂肪酸、表面活性物質、界面活性剤、サポニン類、フッ素化（fluorodated）脂質などからなる群から選択される少なくとも１種の成分をさらに含む。
他の実施態様では、本発明の組成物は、エアロゾル化できるように製剤化される。
【０１２４】
ワクチンまたは医薬組成物に、アルミニウム塩、油中水乳液、生物分解性油媒体、水中油乳液、生物分解性マイクロカプセルおよびリポソームを含むがこれらに限定されない送達用媒体などの他の成分を含めるのが望ましいこともある。そのような媒体で使用するためのさらなる免疫賦活性物質（コアジュバント）の例も先に記載されており、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニン−Ｄ−イソグルタミン（ＭＤＰ）、グルカン、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ガンマインターフェロンおよびＩＬ−１２を含み得る。
【０１２５】
当業者に知られている任意の適する担体を本発明の医薬組成物で用い得るが、担体のタイプは、投与様式により、そして、持続放出が望まれるか否かにより、変動する。皮下注射などの非経腸投与には、担体は、好ましくは、水、塩水、アルコール、脂肪、ワックスまたはバッファーを含む。経口投与には、上記の担体のいずれかまたは固体担体、例えば、マンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、タルク、セルロール、グルコース、スクロースおよび炭酸マグネシウムを用い得る。生物分解性ミクロスフェア（例えば、ポリ乳酸ガラクチド）も本発明の医薬組成物用の担体として用い得る。適する生物分解性ミクロスフェアは、例えば、米国特許第４,８９７,２６８号および第５,０７５,１０９号に開示されている。これに関して、ミクロスフェアは、約２５ミクロンより大きいのが好ましい。
【０１２６】
医薬組成物（ＧＬＡワクチンおよびＧＬＡ免疫アジュバントを含む）は、バッファーなどの希釈剤、アスコルビン酸などの抗酸化剤、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストリンを含む炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、グルタチオンおよび他の安定化剤および補助剤も含み得る。中性に緩衝化された塩水または非特異的血清アルブミンと混合された塩水は、例示的な適当な希釈剤である。好ましくは、製品は、適当な補助溶液（例えば、スクロース）を希釈剤として使用して、凍結乾燥剤として製剤化され得る。
【０１２７】
上記の通り、ある種の実施態様では、本発明は、所望の抗原をコードする核酸分子を送達できる組成物を含む。そのような組成物は、組換えウイルスベクター（例えば、レトロウイルス（ＷＯ９０／０７９３６、ＷＯ９１／０２８０５、ＷＯ９３／２５２３４、ＷＯ９３／２５６９８およびＷＯ９４／０３６２２参照）、アデノウイルス（Berkner, Biotechniques 6:616-627, 1988; Li et al., Hum. Gene Ther. 4:403-409, 1993; Vincent et al., Nat. Genet. 5:130-134, 1993; およびKolls et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:215-219, 1994参照）、ポックスウイルス（米国特許第４,７６９,３３０号；米国特許第５,０１７,４８７号；およびＷＯ８９／０１９７３参照））、ポリカチオン性分子と複合体化した組換え発現コンストラクトの核酸分子（ＷＯ９３／０３７０９参照）、および、リポソームと会合した核酸（Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7851, 1987参照）を含む。ある種の実施態様では、ＤＮＡは、殺された、または、不活性化されたアデノウイルスに結合していてもよい（Curiel et al., Hum. Gene Ther. 3:147-154, 1992; Cotton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:6094, 1992参照）。他の適する組成物は、ＤＮＡ−リガンド（例えば、Wu et al., J. Biol. Chem. 264:16985-16987, 1989）および脂質−ＤＮＡの組合せ（Felgner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7413-7417, 1989参照）を含む。
【０１２８】
直接的なインビボの手法に加え、細胞を宿主から取り出し、改変し、同一または他の宿主動物に入れるエクスビボの手法を使用し得る。エクスビボの文脈で、抗原をコードする核酸分子の組織細胞への導入に、上記の組成物のいずれも利用できることが明らかである。ウイルス的、物理的および化学的な取り込み方法のプロトコールは、当分野で周知である。
【０１２９】
従って、本発明は、宿主、患者または細胞培養物において、免疫反応を増強または誘起するのに有用である。本明細書で使用される用語「患者」は、任意の温血動物、好ましくはヒトを表す。患者は、感染症、癌、例えば乳癌、または自己免疫疾患に苦しんでいてもよく、正常（即ち、検出可能な疾患および／または感染がない）であってもよい。「細胞培養物」は、免疫適格性の細胞または単離された免疫系の細胞（Ｔ細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞および樹状細胞を含むがこれらに限定されない）を含む任意の調製物である。そのような細胞は、当業者に周知の様々な技法のいずれかにより単離し得る（例えば、フィコール・ハイパック密度遠心分離）。細胞は、癌に苦しむ患者から単離されたものでもよく（しかし、その必要はない）、処置後に患者に再導入されてもよい。
【０１３０】
ある種の実施態様では、非経腸または経口投与のいずれかを意図する液体組成物は、適当な投与量が得られる量のＧＬＡワクチン組成物を含有すべきである。典型的には、この量は、組成物中の抗原の少なくとも０.０１重量％である。経口投与を意図する場合、この量は、組成物の重量の０.１ないし約７０％で変動し得る。好ましい経口組成物は、抗原の約４％ないし約５０％を含有する。好ましい組成物および製剤は、非経腸投与単位が活性組成物の重量の０.０１ないし１％を含有するように製造する。
【０１３１】
医薬組成物は局所投与を意図し得、その場合、担体は適切に溶液、乳液、軟膏またはゲル基剤を含み得る。基剤は、例えば、以下の１種またはそれ以上を含み得る：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、ミネラルオイル、水およびアルコールなどの希釈剤、並びに、乳化剤および安定化剤。増粘剤は、局所投与用の医薬組成物中に存在し得る。経皮投与を意図するならば、組成物は、経皮パッチまたはイオントフォレーシス装置を含み得る。局所用製剤は、約０.１ないし約１０％ｗ／ｖ（重量／単位体積）の濃度の抗原（例えば、ＧＬＡ−抗原ワクチン組成物）またはＧＬＡ（例えば、免疫アジュバント組成物；ＧＬＡは、Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, ALから入手できる；例えば、製品番号６９９８００）を含有し得る。
【０１３２】
組成物は、例えば、直腸内で融解し、薬物を放出する坐剤の形態で、直腸投与を意図され得る。直腸投与用の組成物は、適する非刺激性補助剤として、油性基剤を含有し得る。そのような基剤には、ラノリン、カカオバターおよびポリエチレングリコールが限定せずに含まれる。本発明の方法では、ワクチン組成物／アジュバントは、挿入物、ビーズ、時限放出製剤、パッチまたは即時放出製剤の使用を通して投与され得る。
【０１３３】
ある種の実施態様で企図されるのは、また、本明細書に記載のＧＬＡワクチン組成物および／またはＧＬＡ免疫アジュバント組成物を含むキットであり、それは、１個またはそれ以上の容器中に提供され得る。ある実施態様では、ＧＬＡワクチン組成物および／またはＧＬＡ免疫アジュバント組成物の全成分は、単一の容器中に一緒に存在するが、本発明の実施態様は、そのように限定されることを意図せず、例えば、その中でＧＬＡ免疫アジュバント組成物が抗原成分と分離し接触していない、２個またはそれ以上の容器も企図する。非限定的な理論により、いくつかの場合では、ＧＬＡ免疫アジュバント組成物のみの投与が有利に実施されると考えられるが、一方、他の場合では、そのような投与は、時間的および／または空間的に（例えば、異なる解剖学的部位で）抗原の投与から有利に分離していてよく、また他の場合では、対象への投与は、本明細書に記載の抗原とＧＬＡの両方を、場合により本明細書に記載の他の成分と共に含有するＧＬＡワクチン組成物で有利に実施される。
【０１３４】
そのようなキットの実施態様による容器は、任意の適するコンテナ、容器、バイアル、アンプル、チューブ、カップ、箱、瓶、フラスコ、ジャー、ディッシュ、単一ウェルまたは複数ウェルの器具のウェル、リザーバー、タンクなど、または、本明細書に開示の組成物を入れ、保存し、かつ／または、輸送し、そして、内容物を取り出すために組成物に接近し得る他の装置であり得る。典型的には、そのような容器は、意図する用途に適合し、そこからの含まれる内容物の回収が容易に達成できる材料でできている。そのような容器の好ましい例には、ガラスおよび／またはプラスチックの、密閉された、または再密閉可能なチューブおよびアンプルが含まれ、これには、ニードルおよびシリンジを使用する内容物の取り出しに適合するゴムの隔壁または他の密閉手段を有するものが含まれる。そのような容器は、例えば、ガラス製または化学的に適合するプラスチックまたは樹脂製であり得、それは、容器からの物質の効率的な回収を可能にし、かつ／または、例えば紫外線または極端な温度などの分解条件から、または、微生物汚染を含む望まれない汚染から物質を保護する材料でできているか、または、それで被覆されていてよい。容器は、好ましくは、無菌であるか、または滅菌可能であり、本明細書に記載のワクチン組成物および／または免疫アジュバント組成物および／または抗原および／または組換え発現コンストラクトなどを懸濁または溶解するのに使用され得るような、いかなる担体、補助剤、溶媒、媒体などとも適合する材料でできている。
【０１３５】
乳液系も本発明の組成物の製剤化に使用し得る。例えば、多くの単相または多相の乳液系が記載されてきた。水中油乳液アジュバントは、それ自体、アジュバント組成物（ＥＰ０３９９８４３Ｂ）として有用であると示唆され、また、水中油乳液と他の活性物質との組合せは、ワクチン用のアジュバントとして記載されてきた（ＷＯ９５／１７２１０；ＷＯ９８／５６４１４；ＷＯ９９／１２５６５；ＷＯ９９／１１２４１）。油中水乳液（米国特許第５,４２２,１０９号；ＥＰ０４８０９８２Ｂ２）および水中油中水乳液（米国特許第５.４２４,０６７号；ＥＰ０４８０９８１Ｂ）などの他の油性乳液アジュバントが記載されてきた。本発明で使用するための油性乳液アジュバントは、天然または合成であり得、無機または有機であり得る。無機および有機の油の例は、当業者に容易に理解できる。
【０１３６】
特定の実施態様では、本発明の組成物は水中油の乳液を含み、ＧＬＡは油相に組み込まれている。他の実施態様では、本発明の組成物は水中油の乳液を含み、ＧＬＡは油相に組み込まれており、本明細書に記載のコアジュバント、ＴＬＲアゴニストなどのさらなる成分が存在する。
【０１３７】
任意の水中油組成物がヒトの投与に適するためには、乳液系の油相は、好ましくは、代謝可能な油を含む。代謝可能な油という用語の意味は、当分野で周知である。代謝可能は、「代謝により変形され得る」と定義できる（Dorland's illustrated Medical Dictionary, W. B. Saunders Company, 25th edition (1974))。油は、受容者に毒性ではなく、代謝により変形され得る、任意の植物油、魚油、動物油または合成油であり得る。種実（ピーナッツ油など）、種子および穀物は、植物油の一般的な供給源である。合成油も本発明の一部であり、NEOBEE（登録商標）などの購入できる油を含み得る。
【０１３８】
スクアレン（２,６,１０,１５,１９,２３−ヘキサメチル−２,６,１０,１４,１８,２２−テトラコサヘキサエン）は、例えば、鮫肝油に大量に、オリーブ油、小麦胚芽油、米糠油および酵母に少量で見出される不飽和油であり、本発明で使用するのに特に好ましい油である。スクアレンは、コレステロールの生合成における中間体であるという事実のおかげで、代謝可能な油である（Merck index, 第１０版、登録番号８６１９）。特に好ましい油乳液は、水中油乳液であり、特に、水中スクアレン乳液である。加えて、最も好ましい本発明の油乳液アジュバントは抗酸化剤を含み、それは、好ましくは油のアルファ.−トコフェロール（ビタミンＥ、ＥＰ０３８２２７１Ｂ１）である。ＷＯ９５／１７２１０およびＷＯ９９／１１２４１は、スクアレン、アルファ−トコフェロールおよびＴＷＥＥＮ（登録商標）８０を基剤とし、場合により免疫刺激剤ＱＳ２１および／または３Ｄ−ＭＰＬ（上記で議論した）と共に製剤化された乳液アジュバントを開示している。ＷＯ９９／１２５６５は、ステロールを油相に添加することによる、これらのスクアレン乳液の改良を開示している。加えて、乳液を安定化するために、トリカプリリン（Ｃ２７Ｈ５００６）などのトリグリセリドを油相に添加し得る（ＷＯ９８／５６４１４）。
【０１３９】
安定な水中油乳液内に見出される油滴の大きさは、好ましくは１ミクロン未満であり、光子相関分光法により測定して、実質的に直径３０−６００ｎｍ、好ましくは実質的に直径約３０−５００ｎｍ、最も好ましくは実質的に直径１５０−５００ｎｍ、特に直径約１５０ｎｍの範囲にあり得る。これに関して、８０％の数の油滴が好ましい範囲にあるべきであり、より好ましくは９０％より多く、最も好ましくは９５％より多い数の油滴が所定のサイズの範囲内にある。本発明の油乳液中に存在する成分の量は、慣習的に２ないし１０％のスクアレンなどの油；および、存在する場合、２ないし１０％のアルファトコフェロール；および、０.３ないし３％の表面活性物質、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートの範囲にある。好ましくは、油：アルファトコフェロールの比は、より安定な乳液をもたらすので、等しいか、１未満である。Ｓｐａｎ８５も、約１％のレベルで存在し得る。いくつかの場合では、本発明のワクチンがさらに安定化剤を含有するのが有利であり得る。
【０１４０】
水中油乳液の製造方法は、当業者に周知である。一般的に、その方法は、油相をＰＢＳ／ＴＷＥＥＮ８０（登録商標）溶液などの表面活性物質と混合し、続いてホモジナイザーを使用してホモジナイズすることを含む。例えば、混合物を１回、２回またはそれ以上の回数、シリンジ針に通すことを含む方法は、少量の液体をホモジナイズするのに適当である。同等に、マイクロフルイダイザー（microfluidizer）(M110Sマイクロフルイディクス機、最大５０回の通過、最大圧入力６ｂａｒで２分間（出力圧約８５０ｂａｒ））での乳化方法を、より少量または多量の乳液の製造に適合させ得る。この適合化は、必要な直径の油滴の調製が達成されるまで、得られた乳液を測定することを含む、日常的な実験により達成し得る。
【０１４１】
以下の実施例は、例示として与えられ、限定するものではない。
【実施例】
【０１４２】
実施例
実施例１
２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシド（２）
【化１４】
0005830015.tif 000015
ナトリウムアジド（２.７８ｇ、４２.７ｍｍｏｌ）を水（７ｍＬ）およびトルエン（７ｍＬ）に溶解した。混合物を激しい撹拌下で０℃に冷却した。無水トリフリン酸（４.５７ｍＬ、２７.２ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、混合物を３０分間０℃で撹拌した。温度は１０℃に上昇し、二相混合物を２時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を、気体の放出が止まるまで、滴下して添加した。２つの相を分離し、水層をトルエンで抽出した（２×７ｍＬ）。合わせた有機層を後続のジアゾ転移反応に使用した。
【０１４３】
グルコースアミン１（２.０４ｇ、９.４５ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム（３.２１ｇ、３８.２２ｍｍｏｌ）、硫酸銅（ＩＩ）五水和物（９０.５ｍｇ、０.３６２ｍｍｏｌ）を水（１２.３ｍＬ）に溶解した。上記で製造したトリフリン酸アジド原液（２１ｍＬ）を添加し、続いてメタノール（８１ｍＬ）を添加し、均一な系を得た。青色の混合物を室温で激しく撹拌した。アミンの完全な消費は、ＴＬＣ（ニンヒドリン染色）によりモニターされ、混合物の青色から緑色への色の変化によっても示される。温度を厳密に２５℃より低く維持したロータリーエバポレーターにより溶媒を真空で除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から４０％へのメタノール／ジクロロメタンの５０分のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物２（１.９３ｇ、９９％）を無色の液体として得た。1H NMR (300 MHz, CD3OD) (ジアステレオマー１／１の混合物) δ 5.18 (d, J = 3.4 Hz, 0.5H), 4.51 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 3.89-3.63 (m, 3H), 3.32-3.26 (m, 2H), 3.11-3.06 (m, 1H).
【０１４４】
実施例２
２−アジド−２−デオキシ−４,６−Ｏ−ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド（３）
【化１５】
0005830015.tif 000016
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の化合物２（２.００ｇ、９.７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１.６５ｇ、１０.８ｍｍｏｌ）およびカンファースルホン酸（９０ｍｇ）を添加した。フラスコを真空システムに連結し、混合物を５０℃で、油浴中で加熱した。３時間後、ロータリーエバポレーターを使用して混合物を濃縮した。残渣をジエチルエーテル（５０ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（２ｍＬ）に、続いて飽和重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）に再溶解した。水層をジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去した後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から１００％への酢酸エチル／ヘキサンの５０分のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物３（２.５８ｇ、９０％）を無色液体として得た。1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.49-7.32 (m, 5H), 5.58 (s, 1H), 4.64 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.25-341 (m, 5H), 3.23-3.20 (m, 1H).
【０１４５】
実施例３
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−２−アジド−４,６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（４）
【化１６】
0005830015.tif 000017
ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（８２０ｍｇ、５.４４ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の化合物３（１.４５ｇ、４.９４ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（７６８ｍｇ、１１.３ｍｍｏｌ）の混合物に０℃で添加した。溶液を終夜撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）を添加し、混合物をジエチルエーテル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（80 g RediSep カラム、０％から７０％への酢酸エチル／ヘキサンの４０分間のグラジエントで、６０ｍＬ／分で溶離）で精製し、生成物４（１.５ｇ、７４％）を無色固体として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.46-7.43 (m, 2H), 7.35-7.32 (m, 3H), 5.48 (s, 1H), 4.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 10.2, 5.0 Hz, 1H), 3.73 (t, J = 10.2 Hz, 1H), 3.56-3.51 (m, 2H), 3.31-3.28 (m, 2H), 2.72 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.14 (s, 3H), 0.13 (s, 3H).
【０１４６】
実施例４
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−２−アジド−４,６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシド（５）
【化１７】
0005830015.tif 000018
ジクロロメタン（ＤＣＭ）（５０ｍＬ）中の化合物４（１.５０ｇ、３.６８ｍｍｏｌ）およびテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）（０.７８ｍＬ、５.２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でアリルクロロホルメート（０.７８ｍＬ、７.３ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。混合物を室温に温まらせ、混合物を室温で１０時間撹拌した。混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（80 g RediSep カラム、０％から５０％への酢酸エチル／ヘキサンの４０分のグラジエントで、６０ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物５（１.５７ｇ、８７％）を無色固体として得た。Rf  = 0.40 (ヘキサン/酢酸エチル, 3/1, v/v).  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.44-7.41 (m, 2H), 7.35-7.32 (m, 3H), 5.98-5.85 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.38-5.22 (m, 2H), 4.88 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 4.72-4.64 (m, 3H), 4.32-4.27 (m, 1H), 3.81-3.65 (m, 2H), 3.50-3.42 (m, 2H), 0.94 (s, 9H) , 0.18 (s, 3H) , 0.17 (s, 3H).
【０１４７】
実施例５
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−２−アジド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシド（６）
【化１８】
0005830015.tif 000019
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の化合物５（３２０ｍｇ、０.６５１ｍｍｏｌ）およびモレキュラー・シーブ（４Å、２００ｍｇ）の懸濁液を室温で１時間撹拌し、次いでＮａＣＮＢＨ３（２４６ｍｇ、３.９１ｍｍｏｌ）を添加した。塩化水素の溶液（２Ｍ、ジエチルエーテル中）を、混合物が酸性になるまで（約５ｍＬ、ｐＨ＝５）、この混合物に滴下して添加した。さらに０.５時間撹拌した後、反応混合物を固体ＮａＨＣＯ３でクエンチし、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（40 g RediSep カラム、０％から１００％への酢酸エチル／ヘキサンの４０分間のグラジエントで、４０ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物６（２７３ｍｇ、８５％）を無色固体として得た。Rf  = 0.42 (ヘキサン/酢酸エチル, 4/1, v/v).  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.34 (m, 5H), 5.99-5.89 (m, 1H), 5.40-5.26 (m, 2H), 4.67-4.56 (m, 5H), 3.72-3.70 (m, 3H), 3.48-3.46 (m, 2H), 3.37 (dd, J = 9.6, 8.4 Hz, 1H), 3.01 (幅広い s, 1H), 0.94 (s, 9H), 0.17 (s, 6H).
【０１４８】
実施例６
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−２−アジド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−Ｄ−グルコピラノシド（７）
【化１９】
0005830015.tif 000020
化合物６（５.４７ｇ、１１.１ｍｍｏｌ）および１Ｈ−テトラゾール（３重量％、アセトニトリル中、３５.５ｍｍｏｌ、１０４ｍＬ）の溶液を、Ｎ,Ｎ−ジエチル−１,５−ジヒドロ−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−アミン（５.３ｇ、２２ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した後、それを−２０℃に冷却し、さらに１０分間その温度で撹拌し、次いでｍＣＰＢＡ（８.４０ｇ、５０−５５重量％、２４.４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を−２０℃で２０分間撹拌し、真空で濃縮した。残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）に再溶解し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）で洗浄した。水層をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から１００％への酢酸エチル／ヘキサンの６０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物７（４.８５ｇ、６５％）を淡黄色油状物として得た。Rf  = 0.40 (ヘキサン/酢酸エチル, 1/1, v/v).  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.35-7.18 (m, 9H), 5.98-5.85 (m, 1H), 5.41-5.05 (m, 6H), 4.64 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.58-4.52 (m, 6H), 3.83 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.72-3.61 (m, 2H), 3.41 (dd, J = 10.5, 7.4 Hz, 1H), 0.92 (s, 9H), 0.16 (s, 3H), 0.15 (s, 3H).
【０１４９】
実施例７
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−（９−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ）−Ｄ−グルコピラノシド（８）
【化２０】
0005830015.tif 000021
酢酸（０.３０ｍＬ、５.２ｍｍｏｌ）を、撹拌したＤＣＭ（１５ｍＬ）中の７（７００ｍｇ、１.０４ｍｍｏｌ）および亜鉛粉末（６７６ｍｇ、１０.４ｍｍｏｌ）の懸濁液に滴下して添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌し、その後、それを酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した。固体を濾過により除去し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×４０ｍＬ）および塩水（２×４０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濾液を真空で濃縮し、粗製の中間体のアミンを淡黄色油状物として得た。Ｒｆ＝０.２１（ヘキサン／酢酸エチル、１／１、ｖ／ｖ）。９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（Ｆｍｏｃ−Ｃｌ）（３２３ｍｇ、１.２５ｍｍｏｌ）を、撹拌したＤＣＭ（１５ｍＬ）中の粗製アミンおよびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（０.２２ｍＬ、１.３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を温め、室温で５時間撹拌し、その後、それをＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈し、塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（40 g RediSep カラム、０％から１００％への酢酸エチル／ヘキサンの３０分間のグラジエントで、４０ｍＬ／分で溶離）で精製し、生成物８（３３７ｍｇ、２工程で７３％）を白色固体として得た。  Rf  = 0.54 (ヘキサン/酢酸エチル, 1/1, v/v).  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.78-7.20 (m, 17H), 5.92-5.82 (m, 1H), 5.49-5.16 (m, 8H), 4.69-4.06 (m, 5H), 4.49-4.28 (m, 2H), 3.88-3.61 (m, 3H), 3.60-3.51 (m, 2H), 3.32 (幅広い s, 1H), 0.94 (s, 9H), 0.14 (s, 3H), 0.10 (s, 3H).
【０１５０】
実施例８
３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−（９−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ）−Ｄ−グルコピラノシド（９）
【化２１】
0005830015.tif 000022
フッ化水素／ピリジン（６ｍＬ、０.２ｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の８（６.００ｇ、６.８８ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に滴下して添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、その後、それをジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×４０ｍＬ）および塩水（２×４０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から８０％への酢酸エチル／ヘキサンの６０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）で精製し、生成物９（４.３４ｇ、８３％）を淡黄色油状物として得た。 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.75-7.20 (m, 17H), 5.92-5.82 (m, 1H), 5.27-5.06 (m, 9H), 4.59-4.55 (m, 5H), 4.41-4.39 (m, 1H), 4.25-4.01 (m, 5H), 3.85-3.65 (m, 2H).
【０１５１】
実施例９
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−ドデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１１）
【化２２】
0005830015.tif 000023
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の１０（下記の製造を参照）（３５０ｍｇ、０.１７２ｍｍｏｌ）、亜鉛（１.３ｇ、２１ｍｍｏｌ）および酢酸（０.７０ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温で１２時間撹拌した。混合物をジエチルエーテルで希釈した。固体を濾過により除去し、残渣をジエチルエーテル（２×１０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×１５ｍＬ）および塩水（２×１５ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を真空で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（12 g RediSep カラム、０％から６０％への酢酸エチル／ヘキサンの３５分間のグラジエントで、３０ｍＬ／分で溶離）で精製し、生成物１１（２２０ｍｇ、６４％）を淡黄色のシロップとして得た。Rf  = 0.29 (ヘキサン/酢酸エチル, 5/2, v/v).  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.37-7.24 (m, 20H), 6.20 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.59 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 5.31 (m, 1H), 5.12-4.97 (m, 6H), 4.62-4.44 (m, 7H), 4.05-3.24 (m, 9H), 2.68-2.12 (m, 9H), 1.64-1.59 (m, 13H), 1.27 (幅広い m, 95H), 0.94 (m, 25H), 0.13 (s, 6H).  HRMS (m/z) (pos) C117H193N2O20PSiについての計算値 2005.37; 実測値2006.3729 [M + H]+.
【０１５２】
実施例１０
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−ドデカノイル］−２−［（Ｒ）−３−４−メトキシベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１２）
【化２３】
0005830015.tif 000024
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のアミン１１（９３ｍｇ、０.０４６ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（２１ｍｇ、０.２７ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−３−（４−メトキシベンジルオキシ）テトラデカノイルクロリド（下記の製造を参照、化合物３５）（４０ｍｇ、０.１２ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１ｍｇ）を室温で添加し、混合物を終夜撹拌した。混合物を分液漏斗に移し、ジエチルエーテル（２０ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）で希釈した。水層をジエチルエーテル（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（12 g RediSep カラム、０％から８０％への酢酸エチル／ヘキサンの３５分間のグラジエントで、３０ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物１２（８１ｍｇ、７４％）を無色液体として得た。  Rf  = 0.34 (ヘキサン/酢酸エチル, 3/2, v/v).  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.34-7.20 (m, 20H), 6.89-6.86 (m, 4H), 6.15 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 5.57-5.55 (m, 1H), 5.31-4.99 (m, 8H), 4.57-4.44 (m, 11H), 4.06-3.33 (m, 15H), 2.63-2.57 (m, 5H), 2.33-2.27 (m, 9H), 1.57 (m, 8H), 1.27 (幅広い m, 112H), 0.88-0.82 (m, 27H), 0.08 (s, 3H), 0.04 (s, 3H).  HRMS (m/z) (pos) C139H227N2O23PSiの計算値 2351.62; 実測値, 2352.6343 [M + H]+.
【０１５３】
実施例１１
脂質Ａ（１３ａ）
【化２４】
0005830015.tif 000025
無水ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１２（１０ｍｇ、０.００４２ｍｍｏｌ）およびＰｄ−黒（１５.０ｍｇ）の懸濁液をＨ２（５０ｐｓｉ）雰囲気下、室温で３０時間振盪した。触媒を濾過により除去した。残渣をＴＨＦ（２×１ｍＬ）で洗浄した。溶液を−４０℃に冷却し、メタノール中のアンモニア（０.１ｍＬ、７Ｍ）で中和し、加熱せずに真空で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（12 g RediSep カラム、クロロホルム／メタノール／水８／２／０.１で、３０分間溶離、３０ｍＬ／分）により精製し、１３ａ（４ｍｇ、５４％）を無色の薄膜として得た。生成物を水およびメタノール（ｖ／ｖ、１／１、２ｍＬ）に再溶解し、凍結乾燥し、生成物１３ａを白色粉末として得た。  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.00-5.00 (m, 1H), 4.50-3.50 (m, 2H), 3.00-2.00 (m, 3H), 2.00-1.00 (m, 50H), 0.81 (m, 18H). MS (マルチモード、neg) C96H181N2O22Pについての計算値 1745.28; 実測値 1745.0 [M - H]-.
【０１５４】
実施例１２
脂質Ａ（１３ｂ）
【化２５】
0005830015.tif 000026
無水ＴＨＦ（１２ｍＬ）中の１２（２７ｍｇ、０.０１１ｍｍｏｌ）およびＰｄ−黒（４１.０ｍｇ）の懸濁液を、Ｈ２（５０ｐｓｉ）雰囲気下、室温で３０時間振盪した。触媒を濾過により除去した。残渣をＴＨＦ（２×３ｍＬ）で洗浄した。溶液をトリエチルアミン（ＴＥＡ）（０.１ｍＬ）で中和し、加熱せずに真空で濃縮した。合わせた濾液を真空で濃縮し、シリカのクロマトグラフィー（12 g RediSep カラム、クロロホルム／メタノール／水８／２／０.１で３０分間溶離、３０ｍＬ／分）により精製し、１３ｂ（５ｍｇ、２５％）を無色薄膜として得た。生成物を水およびメタノール（ｖ／ｖ、１／１、２ｍＬ）に再溶解し、凍結乾燥し、生成物１３ｂを白色粉末として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 5.17 (幅広い, 2H), 4.23-3.62 (m, 5H), 3.11-3.07 (q, J = 2.8 Hz, 2H), 2.51-2.12 (m, 6H), 1.56-1.00 (m, 69H), 0.92-0.84 (m, 18H).  MS (マルチモード, neg) C96H181N2O22Pについての計算値1745.28; 実測値 1744.1 [M - H]-.
【０１５５】
実施例１３
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−［３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−（９−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１５）
【化２６】
0005830015.tif 000027
化合物９（８９ｍｇ、０.１２ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解した。トリクロロアセトニトリル（１.０ｍＬ）、続いて水素化ナトリウム（１.０ｍｇ、６０％、ミネラルオイル中）を添加した。１５分後、ＴＬＣは９の存在を示したので、さらなる量の水素化ナトリウム（１ｍｇ、６０％、ミネラルオイル中）を添加した。１５分後、ＴＬＣは反応が完了したことを示した。混合物を真空下で濃縮し、Ｅｔ３Ｎで予め処理したＳｉＯ２カラムに載せ、５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶離し、トリクロロアセトイミデート中間体（７６.９ｍｇ、７１％）を得、それをさらに精製せずに使用した。ＤＣＭ（５.０ｍＬ）中のトリクロロアセトイミデート（７６.９ｍｇ、０.０８５２ｍｍｏｌ）、アクセプター１４（下記の製造を参照）（５２.３４ｍｇ、０.１２７７ｍｍｏｌ）およびモレキュラー・シーブ（４Å、５００ｍｇ）の懸濁液を室温で１時間撹拌した。混合物を冷却し（−６０℃）、ＴＭＳＯＴｆ（１.５４μＬ、０.０８５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、それを固体ＮａＨＣＯ３でクエンチした。固体を濾過により除去し、濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、２：１（ｖ／ｖ））により精製し、１５（５５ｍｇ、４０％）を無色固体として得た。  1H NMR (500 MHz, CD3COCD3) δ 7.86-7.22 (m, 22H), 6.98 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.85 (m, 1H), 5.41 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 5.38-5.21 (m, 3H), 5.10-5.02 (m, 3H), 4.91 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 4.72-4.46 (m, 7H), 4.23-4.15 (m, 4H), 3.93-3.80 (m, 4H), 3.69-3.66 (m, 1H), 3.54 (br s, 3H), 3.20 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H), 0.95 (s, 9H), 0.17 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, CD3COCD3) δ 207.00, 156.61, 155.51, 145.22, 144.82, 142.06, 142.01, 139.98, 139.57, 136.68, 136.62, 133.02, 132.94, 129.85, 129.83, 129.15, 129.05, 128.95, 128.91, 128.82, 128.61, 128.49, 128.41, 128.21, 128.17, 128.0, 127.92, 126.19, 126.09, 125.98, 120.79, 118.60, 118.52, 101.41, 97.57, 78.78, 78.10, 76.84, 75.98, 75.88, 75.43, 75.30, 75.17, 74.70, 74.07, 70.63, 69.76, 69.64, 69.27, 69.15, 69.10, 69.02, 68.97, 67.73, 67.17, 57.29, 54.94, 26.11, 18.51; HR MS (m/z) C59H69N4O16PSi [M + H]+ についての計算値1149.4293; 実測値, 1149.4238.
【０１５６】
実施例１４
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１６）
【化２７】
0005830015.tif 000028
１,８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン（２２０μＬ、１.４７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１５（８００ｍｇ、０.６９６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後それを真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール、１００：１から１００：３へ（ｖ／ｖ））により精製し、遊離アミン（６４８ｍｇ、９９％）を無色シロップとして得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.17 (m, 14H), 5.96-5.88 (m, 1H), 5.40-5.06 (m, 7H), 4.84-4.50 (m, 9H), 4.21 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 4.15-4.11 (m, 1H), 3.82 (m, 1H), 3.79-3.42 (m, 5H), 3.34-3.19 (m, 2H), 2.96-2.90 (m, 1H), 2.34 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.13 (s, 6H).  HRMS (m/z) C44H59N4O14PSi [M + H]+ についての計算値927.3613; 実測値 927.3569. 
【０１５７】
Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２３０ｍｇ、１.１１ｍｍｏｌ）を、撹拌したＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（Ｒ）−３−ドデカノイル−テトラデカン酸（下記の製造を参照、化合物４０）（３８１ｍｇ、０.８１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を１０分間撹拌した後、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の遊離アミン（６４８ｍｇ、０.６９９ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌をさらに１２時間継続した。不溶性物質を濾過により除去し、残渣をＤＣＭ（２×２ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、２：１（ｖ／ｖ））により精製し、１６（４５０ｍｇ、４７％）を白色固体として得た。  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.35-7.17 (m, 14H), 5.94-5.86 (m, 2H), 5.47 (t, J = 9.0, 10.5 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.34 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.24 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 5.13-4.97 (m, 6H), 4.75 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.66-4.49 (m, 7H), 4.00 (d, J = 17.0 Hz, 2H), 3.83 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.75-3.56 (m, 4H), 3.49-3.36 (m, 5H), 3.20 (m, 1H), 2.42-2.17 (m, 4H), 1.93 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.70 (m, 2H), 1.23 (br s, 36H), 0.92 (s, 9H), 0.89-0.86 (m, 6H), 0.14 (s, 6H); HRMS (m/z) C72H111N4O17PSi [M + H]+ についての計算値1363.7529; 実測値 1363.7487.
【０１５８】
実施例１５
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１７）
【化２８】
0005830015.tif 000029
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の（Ｒ）−３−ベンジルオキシテトラデカン酸（下記の製造を参照、化合物３３）（１２０ｍｇ、０.５４０ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１７１ｍｇ、０.８３０ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１０分間撹拌し、次いでＤＣＭ（５ｍＬ）中のジサッカライド１６（４５１ｍｇ、０.３３１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２５ｍｇ、０.２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、その後、固体を濾過により除去した。残渣をＤＣＭ（２×４ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１（ｖ／ｖ））により精製し、１７（５４０ｍｇ、９７％）を白色固体として得た。Rf = 0.41 (ヘキサン/酢酸エチル, 2:1(v/v)).  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.33-7.15 (m, 19H), 5.94-5.85 (m, 2H), 5.47(t, J = 9.5 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.10-4.95 (m, 7H), 4.62-4.43 (m, 10H), 4.0-3.96 (m, 3H), 3.90-3.81 (m, 2H), 3.74-3.67 (m, 3H), 3.56-3.42 (m, 6H), 3.33-3.27 (m, 1H), 2.60-2.21 (m, 6H), 1.24 (br s, 54H), 0.91 (s, 9H), 0.87-0.84 (m, 9H), 0.14 (s, 6H). HRMS (m/z) C93H143N4O19PSi [M + H]+ についての計算値 1679.9931; 実測値 1679.9934.
【０１５９】
実施例１６
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１８）
【化２９】
0005830015.tif 000030
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２２８ｍｇ、０.１９８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の１７（１.６６ｇ、０.９８０ｍｍｏｌ）、ｎ−ＢｕＮＨ２（０.１９ｍＬ、１.９７ｍｍｏｌ）およびＨＣＯＯＨ（７４.５μＬ、１.９８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を室温で２０分間撹拌し、それをＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈し、水（４０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×４０ｍＬ）および塩水（４０ｍＬ）で連続的に洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：３（ｖ／ｖ））により精製し、化合物１８（１.４３ｇ、９１％）を得た。 Rf = 0.5 (ヘキサン/酢酸エチル, 1:1 (v/v)).  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.33-7.11 (m, 19H), 6.2 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.46 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 5.04-4.90 (m, 9H), 4.55-4.38 (m, 8H), 3.92 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.84-3.76 (m, 1H), 3.75-3.7 (m, 4H), 3.53-3.44 (m, 2H),  3.43-3.32 (m, 2H), 3.25-3.20 (m, 1H), 2.61-2.10 (m, 12H), 1.23 (br s, 54H), 0.90 (s, 9H), 0.88-0.84 (m, 9H), 0.12 (s, 6H).  HRMS (m/z) C89H139N4O17PSi [M + H]+ についての計算値1595.972; 実測値 1595.9713.
【０１６０】
実施例１７
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−（Ｐ−メトキシ）ベンジルオキシテトラデカノイル］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１９）
【化３０】
0005830015.tif 000031
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の（Ｒ）−３−（ｐ−メトキシ）ベンジルオキシ−テトラデカン酸（下記の製造を参照、化合物３４、４２４ｍｇ、１.１６ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３６９ｍｇ、１.７９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で１０分間撹拌し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のアルコール１８（１.４３ｇ、０.８９６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５４.７２ｍｇ、０.４４７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をさらに１４時間撹拌し、その後、固体を濾過により除去し、ＤＣＭ（２×５ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１（ｖ／ｖ））により精製し、１９（１.１５ｇ、６６％）を白色固体として得た。 Rf = 0.46 (ヘキサン/酢酸エチル, 2:1 (v/v)).  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.38-6.79 (m, 23H), 5.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.55 (t, J  = 9.5 Hz, 1H), 5.20-4.88 (m, 8H), 4.66-4.47 (m, 12H), 4.33 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.0-3.66 (m, 12H), 3.61-3.40 (m, 5H),  3.36-3.27 (m, 3H), 2.67 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.60-2.22 (m, 6H), 1.27 (br s, 72H), 0.93 (s, 9H), 0.92-0.87 (m, 12H), 0.16 (s, 6H).  HRMS (m/z) C111H173N4O20PSi [M + H]+ についての計算値1942.2228; 実測値 1942.2289.
【０１６１】
実施例１８
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシ−テトラデカノイル］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１０）
【化３１】
0005830015.tif 000032
ＤＣＭおよびＨ２Ｏの混合物（１１ｍＬ、１０：１（ｖ／ｖ））中の１９（１.１５ｇ、０.５９２ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液を、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）（２０２ｍｇ、０.８９０ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後、それをＤＣＭで希釈した。混合物を塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、３：１（ｖ／ｖ））により精製し、アルコールを無色シロップ（１.０１ｇ、９４％）として得た。Ｒｆ＝０.５０（ヘキサン／酢酸エチル、５：３（ｖ／ｖ））。塩化ミリストイル（０.７４ｍＬ、２.７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のアルコール（１.０１ｇ、０.５５４ｍｍｏｌ）およびピリジン（０.３５ｍＬ、４.３３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、それをＤＣＭで希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×４０ｍＬ）および塩水（４０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１（ｖ／ｖ））により精製し、１０（６８０ｍｇ、５７％）を白色固体として得た。  Rf = 0.46 (ヘキサン/酢酸エチル, 5:2 (v/v)).  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.37-7.24 (m, 19H), 6.23 (d,  J = 7.5 Hz, 1H), 5.58 (t, J1 = J2 = 9.5 Hz, 1H), 5.32-5.27 (m, 1H), 5.16-4.99 (m, 6H),  4.78-4.44 (m, 7H), 4.03 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.99-3.20 (m, 10H), 2.65-2.21 (m, 10H), 1.61-1.51 (m, 10H), 1.27 (br s, 94H), 1.21 (br s, 25H), 0.12 (s, 6H).
【０１６２】
実施例１９
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２０）
【化３２】
0005830015.tif 000033
化合物１５（１.２３ｇ、１.０７ｍｍｏｌ）を、化合物１６（実施例１４）の合成と同様に、（ＤＣＣ、４３０ｍｇ、２.０８ｍｍｏｌ）、必要な脂質（化合物４０、実施例３６、６３０ｍｇ、１.５９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１６１ｍｇ、１.５９ｍｍｏｌ）を使用してアシル化し、２０（１.０５ｇ、８１％）を無色油状物として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.35-7.17 (m, 14H), 5.91-5.86 (m, 2H), 5.47 (t, J = 9.0, 10.5 Hz, 1H), 5.34 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.24 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 5.10-4.98 (m, 8H), 4.75 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.66-4.49 (m, 8H), 4.00 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 3.83 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 3.75-3.69 (m, 2H), 3.49-3.36 (m, 4H), 3.20 (m, 1H), 2.40-2.26 (m, 4H), 1.24 (br s, 32H), 0.92 (s, 9H), 0.89-0.86 (m, 6H), 0.14 (s, 6H); MS (マルチモード, pos) m/z = 1307 [M + H]+.
【０１６３】
実施例２０
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛３−Ｏ−アリルオキシカルボニル−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２１）
【化３３】
0005830015.tif 000034
化合物２０（１.４３ｇ、１.１８ｍｍｏｌ）を、化合物１７（実施例１５）の合成と同様に、（ＤＣＣ、４５３ｍｇ、２.２０ｍｍｏｌ）、必要な脂質（４７７ｍｇ、１.４３ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（６７ｍｇ、０.５４８ｍｍｏｌ）を使用してアシル化し、２１（１.６０ｇ、８３％）を無色油状物として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.33-7.15 (m, 19H), 5.94-5.85 (m, 2H), 5.48 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 5.34 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.12-4.96 (m, 7H), 4.63-4.46 (m, 11H), 3.97 (d,  J = 10.5 Hz, 1H), 3.89-3.85 (m, 2H), 3.74-3.68 (m, 3H), 3.55-3.52 (m, 2H), 3.47-3.41 (m, 1H), 3.28 (m, 1H), 2.61-2.22 (m, 8H), 1.59-1.52 (m, 6H), 1.98 (m, 2H), 1.23 (br s, 44H), 0.90 (s, 9H), 0.88-0.84 (m, 9H), 0.12 (s, 6H); MS (マルチモード, pos) m/z =  1625 [M + H]+.
【０１６４】
実施例２１
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２２）
【化３４】
0005830015.tif 000035
化合物２１（１.６０ｇ、０.９８５ｍｍｏｌ）を、化合物１８（実施例１６）の合成と同様に反応させた。従って、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２２７ｍｇ、０.１９６ｍｍｏｌ）、ギ酸（７４μＬ,１.９７ｍｍｏｌ）およびｎ−ブチルアミン（１４４ｍｇ、１.９７ｍｍｏｌ）から、２２（１.２５ｇ、８２％）を黄色固体として得た。  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.33-7.15 (m, 19H), 6.20 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.38-4.95 (m, 6H), 4.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.60-4.46 (m, 10H), 3.97-3.71 (m, 8H), 3.68-3.48 (m, 5H), 3.31-3.27 (m, 3H), 2.62-2.55 (m, 2H), 2.50-2.42 (m, 3H), 2.40-2.22 (m, 5H), 1.23 (br s, 44H), 0.90 (s, 9H), 0.88-0.84 (m, 9H), 0.12 (s, 6H); MS (マルチモード, pos) m/z = 1539 [M+H]+.
【０１６５】
実施例２２
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−（Ｐ−メトキシ）ベンジルオキシテトラデカノイル］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２３）
【化３５】
0005830015.tif 000036
化合物２２（１.２５ｇ、０.８１１ｍｍｏｌ）を、化合物１９（実施例１７）の合成と同様に、（ＤＣＣ、３３５ｍｇ、１.６２ｍｍｏｌ）、必要な脂質（化合物３４、実施例３２、３８６ｍｇ、１.０６ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（５０ｍｇ、０.４１ｍｍｏｌ）を使用してアシル化し、２３（４４０ｍｇ、２９％）を無色油状物として得た。  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.38-6.79 (m, 23H), 5.71 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.55 (t, J  = 9.5 Hz, 1H), 5.06-4.85 (m, 9H), 4.66-4.45 (m, 12H), 3.97 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 3.90-3.69 (m, 9H), 3.60-3.55 (m, 3H),  3.37-3.29 (m, 2H), 2.65 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 2.61-2.55 (m, 1H), 2.48-2.42 (m, 1H), 2.35-2.21 (m, 3H), 2.11-2.05 (m, 1H),1.62-1.59 (m, 8H), 1.27 (br s, 62H), 0.93 (s, 9H), 0.92-0.87 (m, 12H), 0.16 (s, 6H); MS (マルチモード, pos) m/z = 1886[M+H]+.
【０１６６】
実施例２３
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイル］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２４）
【化３６】
0005830015.tif 000037
化合物２３（４４６ｍｇ、０.２３６ｍｍｏｌ）を、まず、ＤＤＱ（８０ｍｇ、０.３５ｍｍｏｌ）を使用して、ターゲットＡの中間体１０の手順に従って脱保護した。この中間体（３４３ｍｇ、０.１９４ｍｍｏｌ）を、次いで、ターゲットＡの化合物１０の合成と同様に、塩化デカノイル（１８５ｍｇ、０.９７０ｍｍｏｌ）およびピリジン（１２３ｍｇ、１.５５ｍｍｏｌ）を使用してアシル化し、２４（３４３ｍｇ、７６％）を無色油状物として得た。  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.22 (m, 14H), 6.15 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.54 (t, J  = 9.5 Hz, 1H), 5.28-5.24 (m, 1H), 5.14-4.96 (m, 8H),  4.60-4.45 (m, 10H), 3.99 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.90-3.85 (m, 1H), 3.80-3.65 (m, 4H), 3.55 (m, 3H), 3.46-3.39 (m, 1H), 3.32-3.27 (m, 1H), 2.66-2.53 (m, 3H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.35-2.18 (m, 7H), 1.61-1.51 (m, 10H), 1.26 (br s, 78H), 0.95 (s, 9H), 0.92-0.90 (m, 15H), 0.19 (s, 3H), 0.18 (s, 3H).
【０１６７】
実施例２４
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−６−Ｏ−｛６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイル］−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシテトラデカノイル］−２−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２５）
【化３７】
0005830015.tif 000038
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２４（２９６ｍｇ、０.１５４ｍｍｏｌ）、亜鉛（１００ｍｇ、１.５２ｍｍｏｌ）および酢酸（５３μＬ、０.９３ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温で１２時間撹拌し、その後、それを酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈した。固体を濾過により除去し、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および塩水（２００ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過した。濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、２.５：１（ｖ／ｖ））により精製し、アミンを淡黄色シロップ（２４５ｍｇ、８４％）として得た。  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.22 (m, 14H), 6.15 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.54 (t, J  = 9.5 Hz, 1H), 5.29-5.23 (m, 1H), 5.13-4.93 (m, 8H),  4.62-4.30 (m, 9H), 4.00 (d, J  = 10.5 Hz, 1H), 3.88-3.65 (m, 6H), 3.56-3.53 (m, 2H), 3.46-3.41 (m, 1H), 2.66-2.58 (m, 4H), 2.54-2.45 (m, 2H), 2.35-2.17 (m, 7H), 1.64-1.42 (m, 12H), 1.26 (br s, 78H), 0.87 (s, 24H), 0.13 (s, 6H).
【０１６８】
アミンを、撹拌したＤＣＭ（５.０ｍＬ）中の（Ｒ）−３−ベンジルオキシテトラデカノイルクロリド（２２８ｍｇ、０.６４６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１５.７９ｍｇ、０.１２９２ｍｍｏｌ）およびピリジン（８３μＬ、１.０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を１４時間撹拌した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３／塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４下で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルＴＬＣクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、３.５：１（ｖ／ｖ））により精製し、２５（４５０ｍｇ、＞１００％）を白色固体として得た。  Rf = 0.54 (ヘキサン/酢酸エチル, 2:1 (v/v)).  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.22 (m, 19H), 6.14-6.10 (m, 2H), 5.57 (t, J  = 9.5 Hz, 1H), 5.29-5.24 (m, 1H), 5.13-4.93 (m, 7H),  4.61-4.41 (m, 10H), 4.00 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.89-3.79 (m, 8H), 3.72-3.66 (m, 4H), 3.57-3.35 (m, 3H), 2.73-2.57 (m, 10H), 2.39-2.15 (m, 10H), 1.71-1.64 (m, 7H), 1.26 (br s, 93H), 0.88 (s, 24H), 0.83 (s, 9H).
【０１６９】
実施例２５
６−Ｏ−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−４−Ｏ−（１,５−ジヒドロ−３−オキソ−３λ５−３Ｈ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピン−３−イル）−２−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−デカノイルオキシ−テトラデカノイル］−β−Ｄ−グルコピラノシル−４−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイル］−２−［（Ｒ）−３−ベンジルオキシ−テトラデカノイルアミノ］−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノース（２６）
【化３８】
0005830015.tif 000039
フッ化水素／ピリジン（１.１２ｍＬ、４３.１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の２５（４５０ｍｇ、０.２０４ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に滴下して添加した。反応混合物を室温で１４時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×８０ｍＬ）および塩水で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過した。濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、３：１から４：３へ（ｖ／ｖ））により精製し、２６（１８０ｍｇ、４２％）を白色固体として得た。  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.19 (m, 19H), 6.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.57-5.48 (m, 2H), 5.40 (t, J  = 9.5 Hz, 1H), 5.28-5.21 (m, 1H), 5.14-4.96 (m, 8H), 4.68-4.41 (m, 12H), 4.23-4.19 (m, 1H), 4.13-4.06 (m, 1H), 3.94-3.66 (m, 9H), 3.38-3.28 (m, 2H), 2.67-2.58 (m, 3H), 2.44-2.20 (m, 11H), 1.58 (br s, 12H), 1.26 (br s, 93H), 0.91-0.81 (m, 18H).
【０１７０】
実施例２６
（３Ｒ）−（（２Ｒ,３Ｓ,４Ｒ,５Ｓ）−３−（（Ｒ）−３−（デカノイルオキシ）テトラデカンアミド）−２−（（（３Ｓ,４Ｒ,５Ｓ）−３,６−ジヒドロキシ−５−（（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカンアミド）−４−（（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メトキシ）−６−（ヒドロキシメチル）−５−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）３−（デカノイルオキシ）テトラデカノエート（ＩＸ）
【化３９】
0005830015.tif 000040
化合物２６（１８０ｍｇ、０.０８５８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解した。パラジウム黒（０.２２５ｇ）を混合物に添加し、５０ｐｓｉ水素雰囲気下で終夜水素化した。混合物を珪藻土層で濾過した。濾液を−４０℃に冷却し、メタノール（１.８ｍＬ、４Ｍ）中のアンモニアの溶液を添加した。混合物を真空下で加熱せずに濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、クロロホルム／メタノール／水８０：２０：１（ｖ／ｖ）の混合物で溶離し、所望の化合物（ＩＸ）（１０２ｍｇ、７３％）を得た。ＴＬＣおよび１ＨＮＭＲによる分析は、グリースおよびかすかな近いランニングスポット（ＴＬＣ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＭＡ中、４：１）の存在を示した。残渣をクロマトグラフィー（12 g RediSep カラム、均一溶媒のＣＨ２Ｃｌ２で５カラム体積（ＣＶｓ）のグラジエント、２５％ＣＭＡまでのグラジエントで１０ＣＶｓ、均一溶媒で１０ＣＶｓ、１００％ＣＭＡまでのグラジエントで１０ＣＶｓ、１００％ＣＭＡの均一溶媒で１０ＣＶｓ、２０ｍＬ／分で溶離）に付し、所望の生成物（５７ｍｇ、２５％）を得た。合わせて濃縮した画分のＴＬＣ分析は、依然として、所望の生成物のすぐ上に非常に少量の不純物の流れを示した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２個の連続した12 g RediSep カラム、上記と同じグラジエント）で再精製し、メタノール／水／クロロホルムに溶解し、凍結乾燥した後で、ＴＬＣにより純粋な所望の生成物８.９ｍｇおよびわずかに純粋でない生成物１１.９ｍｇを得た。オフホワイト固体として、総収量（２０.８ｍｇ、１４％）。Rf = 0.40 CMA.  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 5.40-5.30 (br s, 2H), 4.10-4.00 (m, 4H), 3.70-3.60 (m, 4H), 2.83-2.76 (m, 1H), 2.75-2.20 (m, 13H), 2.10-1.90 (幅広い, 9H), 1.40-1.00 (幅広い, 106H), 0.90-0.70 (幅広い, 18H).  MS (マルチモード, Neg) m/z = 1632 [M - H]-. 
【０１７１】
実施例２７
メチル３−オキソテトラデカノエート（２９）
【化４０】
0005830015.tif 000041
１,４−ジオキサン（１００ｍＬ）中のマグネシウムエトキシド（１０.８２ｇ、９４.６１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、１,４−ジオキサン（１００ｍＬ）中のマロン酸水素メチル（２５.０ｇ、１８９ｍｍｏｌ）を添加した。得られたスラリーを終夜撹拌した。混合物を真空で濃縮した。別のフラスコで、ラウリン酸（２８、２０.８５ｇ、１０４.１ｍｍｏｌ）を１,４−ジオキサン（５０ｍＬ）に溶解し、１,４−ジオキサン（１５０ｍＬ）中のＣＤＩ（１６.８８ｇ、１０４.１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で添加した。得られた溶液を終夜撹拌した。次いで、混合物をマロン酸メチルマグネシウムのフラスコに移した。得られた懸濁液を終夜還流した。混合物を真空で濃縮した。残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）に再溶解し、シリカプラグ（１０ｇ）で濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（360 g RediSep カラム、０％から３０％への酢酸エチル／ヘキサンの８０分間のグラジエントで、１００ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物２９（１７ｇ、６１％）を淡黄色シロップとして得た。
【０１７２】
実施例２８
（Ｒ）−メチル３−ヒドロキシテトラデカノエート（３０）
【化４１】
0005830015.tif 000042
メタノール（１２０ｍＬ）中のメチル３−オキソテトラデカノエート（２９、２９.０ｇ、１１３ｍｍｏｌ）のスラリーを、３００ｍＬの高圧リアクターのガラススリーブ中で、Ｎ２で１０分間パージした。ジクロロ−Ｒ−２,２'−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１'−ビナフチルルテニウム（８９７ｍｇ、１.１０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＰａｒｒ５５００シリーズコンパクトリアクターに入れた。リアクターをＨ２（６０ｐｓｉ）で満たし、３回換気した。リアクターをＨ２（６０ｐｓｉ）で満たし、撹拌し（１２００ｒｐｍ）、５０℃に２０時間加熱した。リアクターを室温に冷却し、得られた橙色溶液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から４０％への酢酸エチル／ヘキサンの６０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）で精製し、生成物３０（２８.５ｇ、収率９７％）を白色固体として得た。
【０１７３】
実施例２９
（Ｒ）−メチル３−（ベンジルオキシ）テトラデカノエート（３１）
【化４２】
0005830015.tif 000043
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物３０（２.８ｇ、１０.８３ｍｍｏｌ）およびベンジルトリクロロアセトイミデート（３.４ｇ、１４ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸（０.２４ｍＬ、２.７ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。得られた混合物を０℃で６時間撹拌し、室温に温めた。混合物をＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）の飽和溶液および水（３００ｍＬ）で洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（80 g RediSep カラム、０％から３０％への酢酸エチル／ヘキサンの６０分間のグラジエントで、６０ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物３１（１.２ｇ、３２％）を無色液体として得た。  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.30-7.05 (m, 5H), 4.51 (s, 2H), 3.90-3.80 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.58-2.45 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.50-1.20 (m, 18H), 0.85 (t, J = 5.8 Hz, 3H).
【０１７４】
実施例３０
（Ｒ）−３−（ベンジルオキシ）テトラデカン酸（３３）
【化４３】
0005830015.tif 000044
エステル３１（１.３ｇ、３.７３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／ＭｅＯＨ／ＣＨ３ＣＮ混合物（ｖ／ｖ／ｖ、１／１／１、９０ｍＬ）に溶解した。水（３０ｍＬ）中の溶液としての水酸化リチウム一水和物（２３５ｍｇ、５.６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜撹拌した。溶媒の量を真空で約３０ｍＬに減らした。残った水溶液を１Ｍ塩酸に添加し、ｐＨを３に下げた。水層をジエチルエーテル（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（40 g RediSep カラム、０％から５０％への酢酸エチル／ヘキサンの４０分間のグラジエントで、４０ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物３３（９９０ｍｇ、７９％）を無色液体として得た。  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.30-7.05 (m, 5H), 4.51 (s, 2H), 3.90-3.80 (m, 1H), 2.58-2.45 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.50-1.20 (m, 18H), 0.85 (t, J = 5.8 Hz, 3H).
【０１７５】
実施例３１
（Ｒ）−メチル３−（４−メトキシベンジルオキシ）テトラデカノエート（３２）
【化４４】
0005830015.tif 000045
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物３０（３.５０ｇ、１２.９ｍｍｏｌ）および４−メトキシベンジルトリクロロアセトイミデート（４.６５ｇ、１７.３ｍｍｏｌ）の溶液に、カンファースルホン酸（４５０ｍｇ、１.９２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を終夜室温で撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）の飽和溶液および水（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から３０％への酢酸エチル／ヘキサンの７０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物３２（４.０１ｇ、８１％）を無色液体として得た。
【０１７６】
実施例３２
（Ｒ）−３−（４−メトキシベンジルオキシ）テトラデカン酸（３４）
【化４５】
0005830015.tif 000046
エステル３２（４.０１ｇ、１０.４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／ＭｅＯＨ／ＣＨ３ＣＮ混合物（ｖ／ｖ／ｖ、１／１／１、９０ｍＬ）に溶解した。水（３０ｍＬ）中の溶液としての水酸化リチウム一水和物（８７４ｍｇ、２０.８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜撹拌した。溶媒の量を真空で約３０ｍＬに減らした。残った水溶液に塩酸（１Ｍ）を添加し、ｐＨを３に下げた。水層をジエチルエーテル（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から５０％への酢酸エチル／ヘキサンの６０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物３４（３.３７ｇ、８９％）を無色液体として得た。  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.22 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 4.46 (s, 2H), 3.81 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.65-2.49 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.50-1.20 (m, 18 H), 0.85 (t, J = 5.8 Hz, 3H).
【０１７７】
実施例３３
（Ｒ）−３−（４−メトキシベンジルオキシ）テトラデカノイルクロリド（３５）
【化４６】
0005830015.tif 000047
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の酸３４（５００ｍｇ、１.３７ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１００ｍｇ、１.３７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を−１０℃に冷却した。ＤＣＭ（５ｍＬ）中の塩化オキサリル（１７４ｍｇ、１.３７ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。溶液を１時間かけて室温に温まらせた。ＴＬＣ分析が酸が存在しないことを示した後、混合物を真空で濃縮し、さらに精製せずに使用した。
【０１７８】
実施例３４
（Ｒ）−２−オキソ−２−フェニルエチル３−ヒドロキシテトラデカノエート（３７）
【化４７】
0005830015.tif 000048
酢酸エチル（５００ｍＬ）中の（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカン酸（３６、下記の製造を参照）（９.５５ｇ、３９.１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５.９０ｇ、５８.６ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ブロモアセトフェノン（７.９０ｇ、３９.１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を室温で１４時間撹拌した。沈殿を濾過により除去し、濾液を真空で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から３０％への酢酸エチル／ヘキサンの５０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物３７（１０.２ｇ、収率７２％）を白色固体として得た。
【０１７９】
実施例３５
（Ｒ）−２−オキソ−２−フェニルエチル−３−デカノイルオキシテトラデカノエート（３９）
【化４８】
0005830015.tif 000049
０℃のＤＣＭ（１００ｍＬ）中の３７（４.８０ｇ、１３.２ｍｍｏｌ）およびピリジン（２.１０ｇ、２６.５ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化デカノイル（３８,２.８ｇ、４.８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１４時間撹拌し、混合物の温度を室温に上昇させた。混合物をＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）および塩水（１００ｍＬ）の飽和溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から４０％への酢酸エチル／ヘキサンの５０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物３９（６.６８ｇ、９７％）を無色液体として得た。
【０１８０】
実施例３６
（Ｒ）−３−（デカノイルオキシ）テトラデカン酸（４０）
【化４９】
0005830015.tif 000050
エステル３９（１０.１５ｇ、２０.７７ｍｍｏｌ）を酢酸（１００ｍＬ）に溶解した。亜鉛（１５.５ｇ、２３７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流に４時間加熱した。酢酸を真空下で除去し、残渣をトルエンと共沸させ、乾燥させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（120 g RediSep カラム、０％から６０％への酢酸エチル／ヘキサンの５０分間のグラジエントで、８５ｍＬ／分で溶離）により精製し、生成物４０（７.２ｇ、８９％）を無色液体として得た。  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.23-5.19 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 2H), 2.34-2.25 (m, 2H), 1.65-1.58 (m, 2H), 1.28-1.20 (m, 32H), 0.85 (m, 6H). 
【０１８１】
実施例３７
（Ｒ）−メチル３−ヒドロキシテトラデカノエート（３９）
【化５０】
0005830015.tif 000051
３００ｍＬの高圧リアクターのガラススリーブ中の、メタノール（３０ｍＬ）中のメチル３−オキソテトラデカノエート（４１、５.２７ｇ、２０.６ｍｍｏｌ）のスラリーに、Ｎ２で１０分間通気した。ジクロロ−Ｒ−２,２'−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１'−ビナフチルルテニウム（１４２ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＰａｒｒ５５００シリーズコンパクトリアクターに入れた。リアクターをＨ２（６０ｐｓｉ）で満たし、３回換気した。次いで、リアクターを最後の分量のＨ２（６０ｐｓｉ）で満たし、撹拌し（６００ｒｐｍ）、５０℃に２０時間加熱した。次いで、リアクターを室温に冷却し、混合物を真空で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、０％から５０％への酢酸エチル／ヘキサンのグラジエントで溶離し、４２（３.９７ｇ、７４％）をオフホワイト色固体として得た。  1H NMR (CDCl3) δ 4.00-3.98 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.82 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 2.62-2.30 (m, 2H), 1.54-1.39 (m, 3H), 1.27 (br s, 17H),  (m, 20H), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
【０１８２】
実施例３８
（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカン酸（３６）
【化５１】
0005830015.tif 000052
水酸化リチウム一水和物（１.９８ｇ、４７.２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（６６ｍＬ）および水（６６ｍＬ）中の（Ｒ）−メチル３−ヒドロキシテトラデカノエート（４２、８.１７ｇ、３１.５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で２時間撹拌した。次いで、混合物をジエチルエーテル（１Ｌ）で希釈し、ｐＨを塩酸溶液（１Ｎ）で約３に調節した。次いで、溶液をジエチルエーテル（２００ｍＬ）で抽出し、有機画分を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。Ｎａ２ＳＯ４を濾過により除去し、濾液を真空で濃縮し、（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカン酸（３６、７.５９ｇ、９８％）をオフホワイト色固体として得た。  1H NMR (CDCl3) δ 3.99-3.94 (m, 1H), 2.45-2.39 (m, 2H), 1.47 (br s, 3H), 1.29 (br s, 17H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
【０１８３】
実施例３９
（Ｒ）−２−オキソ−２−フェニルエチル−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノエート（４６）
【化５２】
0005830015.tif 000053
塩化ミリストイル（４５、８.８３ｇ、３５.８ｍｍｏｌ）を、ピリジン（４０ｍＬ）中の（Ｒ）−２−オキソ−２−フェニルエチル３−ヒドロキシテトラデカノエート（３７、実施例３４に従い製造、１０.８ｇ、２９.８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を室温で１４時間撹拌した。次いで、混合物を真空で濃縮し、残ったピリジンを、残渣をトルエン（１００ｍＬ）に溶解し、真空で濃縮することにより除去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、０％から２０％への酢酸エチル／ヘキサンのグラジエントで溶離し、４６（１６.３１ｇ、８３％）を無色油状物として得た。  1H NMR (CDCl3) δ 7.90 (m, 2H), 7.64-7.57 (m, 1H), 7.50-7.45 (m, 2H), 5.33 (s, 2H), 5.31-5.27 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 2H), 2.33-2.26 (t, J = 4.5 Hz, 2H), 1.65-1.58 (m, 2H), 1.31-1.21 (m, 40 H), 0.85 (t, J = 10.0 Hz, 6H).
【０１８４】
実施例４０
（Ｒ）−３−（テトラデカノイルオキシ）テトラデカン酸（４７）
【化５３】
0005830015.tif 000054
亜鉛粉末（２４.４２ｇ、３７３.３ｍｍｏｌ）を、酢酸（１５０ｍＬ）中の４６（１６.２８ｇ、２８.４２ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。次いで、混合物を還流（１１５℃）に３時間加熱した。次いで、混合物を真空で濃縮し、残ったピリジンを、残渣をトルエン（１００ｍＬ）に溶解し、真空で濃縮することにより除去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし、０％から３０％への酢酸エチル／ヘキサンのグラジエントで溶離し、（Ｒ）−ベンジル３−（テトラデカノイルオキシ）テトラデカン酸（４７、１１.１４ｇ、収率８６％）を無色油状物として得た。  1H NMR (CDCl3) δ 5.29-5.18 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 2H), 2.34-2.25 (m, 2H), 1.65-1.58 (m, 3H), 1.28-1.20 (m, 40 H), 0.85 (m, 6H).  
【０１８５】
実施例４１
ＴＥＲＴ−ブチルジメチルシリル−２−アジド−４−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（４７）
【化５４】
0005830015.tif 000055
化合物４（実施例３により製造、１.３２ｇ、３.３６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１８.１ｍＬ、１８.１ｍｍｏｌ）中のＢＨ３（１Ｍ）の溶液に溶解した。混合物を０℃で５分間撹拌し、ジブチルボロントリフレート（dibutyl boron triflate）（１Ｍ、ＤＣＭ中、３.６２ｍＬ、３.６２ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、反応混合物を０℃でさらに１時間撹拌した。続いて、Ｈ２ガスの放出が止まるまで、トリエチルアミン（０.５ｍＬ）およびメタノール（約０.５ｍＬ）を添加した。溶媒を真空で蒸発させ、残渣をメタノール（３×５０ｍＬ）と共に蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、８：１（ｖ／ｖ））により精製し、１４（０.６７ｇ、４９％）を無色油状物として得た。  Rf = 0.40 (ヘキサン/酢酸エチル、3:1 (v/v)).  1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.32-7.31 (m, 5H), 4.81 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.70 (dd, 1H, J = 12.0, 1.5 Hz, 1H), 3.49-3.43 (m, 2H), 3.33 (br s, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 0.92 (s, 9H), 0.14 (s, 6H).
【０１８６】
実施例４２
インビボでのＴＨ１型免疫反応の誘導
この実施例は、下記の構造（ＩＸ）を有する例示的な本発明のＧＬＡ化合物について、インビボでのＴｈ１型免疫賦活活性を立証する：
【化５５】
0005830015.tif 000056
【０１８７】
ＩＤ８３と呼ばれる結核菌抗原ポリペプチドを含有するワクチンにおいて、化合物ＩＸを使用した。標準的な免疫学的方法論および試薬を用いた (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY)。マウス（１群当たり４匹のＣ５７ＢＬ／６）を、水中のＩＤ８３抗原（免疫化１回当たり、８μｇ／動物）、安定な乳液媒体中に製剤化されたＩＤ８３抗原（免疫化１回当たり、８μｇ／動物）、または、（ｉ）ＧＬＡ−ＳＥ（免疫化１回当たり、１０μｇ／動物）もしくは（ｉｉ）化合物ＩＸ（免疫化１回当たり、１０μｇ／動物）を含有する安定な乳液中に製剤化されたＩＤ８３抗原（免疫化１回当たり、８μｇ／動物）により、３週間の間隔で３回免疫した。
【０１８８】
各注射の１週間後に、マウスを出血させ、抗原特異的抗体（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｃ）の応答を評価した。最後の免疫化の３週間後、マウスを殺し、脾臓を回収し、インビトロの抗原刺激に対するＴ細胞依存的ＩＦＮ−γサイトカイン応答を、ＥＬＩＳＰＯＴにより、公開された方法（同文献）に従って分析した。ＩＦＮ−γサイトカイン応答は、結核菌感染に対するＴＨ１保護的表現型と関連付けられてきた。
【０１８９】
図１は、化合物ＩＸ１０μｇの安定な乳液（ＳＥ）で製剤化したＩＤ８３抗原およびＩＤ８３成分の抗原（Ｒｖ２６０８、Ｒｖ１８１３およびＲｖ３６２０）を使用する３回目の免疫化の３週間後にマウスで誘導された抗ＩＤ８３ ＩＦＮ−γサイトカイン生成のＥＬＩＳＰＯＴデータを、ＧＬＡ−ＳＥ、ＳＥまたは水で製剤化したＩＤ８３と比較して示す。各群における脾細胞１００万個当たりのＩＦＮ−γ分泌細胞の平均およびＳＥＭを示す。この実施例で使用する「ＧＬＡ−ＳＥ」は、同時所有の米国特許公開番号２００８０１３１４６６に記載の化合物（Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６はＣ１１直鎖アルキルであり；Ｒ２およびＲ４はＣ１３直鎖アルキルである）の安定な乳液を表す。
【０１９０】
すべての動物は、強力な細胞活性化因子および分裂促進因子であるＣｏｎＡに同等に応答した。ＩＤ８３＋化合物ＩＸのワクチン接種は、強いＩＤ８３抗原特異的サイトカイン応答を誘導したが、そのような応答はＩＤ８３＋水またはＩＤ８３＋ＳＥの対照群では殆どまたは全く観察されなかった。同等のレベルのＩＦＮ−γ分泌細胞が、ＩＤ８３成分の抗原、Ｒｖ２６０８、Ｒｖ１８１３およびＲｖ３６２０による再刺激の際に、ＩＤ８３＋化合物ＩＸまたはＩＤ８３＋ＧＬＡ−ＳＥで免疫化したマウスから精製した脾細胞で誘起された。
【０１９１】
結論として、結核菌ワクチン抗原候補ＩＤ８３を含む安定な油製剤中の化合物ＩＸは、保護的ＴＨ１表現型に関連する細胞型（Ｔ細胞）の抗原特異的免疫反応を優勢に誘導した。
【０１９２】
実施例４３
インビボでのＴＨ１およびＴＨ２型免疫反応の誘導
この実施例は、ＩＤ８３と呼ばれる結核菌抗原を含有するワクチンにおいて、化合物ＩＸのインビボでのＴｈ１およびＴｈ２型免疫賦活活性を立証する。標準的な免疫学的方法論および試薬を用いた (Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY)。
【０１９３】
マウス（１群当たり４匹のＣ５７ＢＬ／６）を、単独で使用されるか、または、化合物ＩＸ（免疫化１回当たり、１０μｇ／動物）を含有する安定な乳液中に製剤化されたＩＤ８３抗原（免疫化１回当たり、８μｇ／動物）により、３週間の間隔で３回免疫した。各免疫化の１週間後に動物を出血させることにより血清を回収し、ＩＤ８３に特異的なＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｃ抗体の血清レベルを、ＥＬＩＳＡにより、公開された方法（同文献）に従って調べた。ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ｃ抗体アイソタイプのいずれかが優勢であることは、ＴＨ２またはＴＨ１応答と各々関連する。結核菌感染に対する保護には、ＴＨ１応答が必要であることが立証されてきた。
【０１９４】
図２に示す通り、水中のＩＤ８３によるワクチン接種は、抗原特異的ＩｇＧ１抗体を優勢に誘導した。対照的に、ＩＤ８３＋ＳＥ、ＩＤ８３＋化合物ＩＸ−ＳＥまたはＩＤ８３＋ＧＬＡ−ＳＥのワクチン接種は、より高いＩｇＧ２ｃ抗体力価を誘導し、表現型を混合型のＩｇＧ１：ＩｇＧ２ｃ抗原特異的抗体応答に変換した。
【０１９５】
実施例４４
ヒト細胞におけるＴＬＲ４依存的免疫疫賦の誘導
この実施例は、ヒト細胞における化合物ＩＸの免疫賦活活性を立証する。１）ＴＬＲ４、ＭＤ−２およびＣＤ１４または２）ＴＬＲ２およびＴＬＲ６をコードする発現ベクターを有するＨＥＫ２９３細胞（InvivoGen）を使用して化合物ＩＸをインビトロで試験し、化合物の活性およびＴＬＲ４への依存性を明確にし、ＴＬＲ２の活性化を除外した。ＴＬＲシグナル伝達経路の活性化の際に増殖培地にアルカリホスファターゼが分泌されるように、これらのＨＥＫ２９３細胞株を、さらにＮＦ−ｋＢレポーターベクターｐＮｉｆｔｙ−２で安定に形質移入した。形質移入された細胞株を、５ｘ１０４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播き、化合物ＩＸおよび他のアジュバントの連続希釈物を含有する培地で培養して１６−２４時間刺激した。分泌されたアルカリホスファターゼの活性を、QUANTIBlue（登録商標）アッセイ（InvivoGen）を使用してこの培養培地中で測定した。ＰＢＳの負の対照を上回るＮＦ−ｋＢの増強としてデータを測定した。このアッセイを使用して、化合物ＩＸは、０.１μｇ／ｍｌという低濃度で、２倍を超えるＮＦ−ｋＢの増強を示した（図３）。これらの実験の結果は、ＴＬＲ２の誘導と関連するとは考えられない化合物ＩＸの明確なＴＬＲ４アゴニスト活性を立証した。化合物ＩＸは、ＭＤ２およびＴＬＲ４の報告された原子構造の構造的検討に基づいて設計された。そのため、それが結合し、商業的に承認されたＴＬＲ４アゴニスト（ＭＰＬ（登録商標））のものと同様のプロフィールを誘起するという事実は、驚異的かつ予想外の結果である。より具体的には、化合物ＩＸのプロフィールは、サイトカインレベルが負の副作用が生じる点まで上昇すると予想される前に、濃度が上昇するにつれて急速に、有利に一定になる。従って、化合物ＩＸおよび他の本発明の例示的化合物は、幅広い濃度範囲にわたって安全に投与できると予想され、このことは、患者間の臨床的成果の再現性および成人および小児で変動する用量での安全性の観点で非常に望ましい。これに関して、化合物ＩＸの低いサイトカイン活性は驚異的かつ望ましい結果であり、それは臨床用の製剤におけるその安全な使用をさらに助長する。
【０１９６】
実施例４５
ヒト血液細胞における免疫賦活性サイトカインの誘導
この実施例では、ヒト白血球細胞を化合物ＩＸで刺激し、免疫賦活性サイトカインの誘導を検出するためにＥＬＩＳＡアッセイを実施した。化合物ＩＸおよび他のアジュバントの連続希釈（１：５）を、リン酸緩衝塩水で、９６ウェルプレート中、全部で７個の希釈物になるよう実施した。２人の異なるドナーから新しく採取したヒト血液１００μｌを混合し、アジュバント希釈物１００μｌと共にインキュベートした。２０時間のインキュベーションに続き、プレートを遠心分離し、上清（約７０μｌ）を回収し、赤血球細胞を除き、標準的な生化学的手順を使用してＭＩＰ−１−αおよびＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡを実施するまで、−２０℃で保存した。これらの実験の結果は、化合物ＩＸが初代ヒト血液細胞で免疫賦活活性を有することをさらに裏付けた（図４）。加えて、これらの初代ドナーの結果は、ヒト細胞株で見られる結果に類似し、これらの重要な知見を、この化合物の可能な用量範囲および安全性プロフィールに関して拡大する。
【０１９７】
本明細書で言及され、かつ／または、出願データシートに挙げられたすべての上記の米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は、出典明示により全体を本明細書の一部とする。
【０１９８】
前述の内容から、本発明の特定の実施態様を例示目的で本明細書に記載したが、本発明の精神と範囲から逸脱せずに、様々な変形を実施し得ることが理解されるであろう。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲以外によっては限定されない。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
0005830015.tif 000061
【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
0005830015.tif 000063
【図２Ｅ】
0005830015.tif 000064
【図２Ｆ】
0005830015.tif 000065
【図３】
0005830015.tif 000066
【図４ＡＢ】
0005830015.tif 000067
【図４ＣＤ】
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