(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ザクロの種子を、子葉が現れるまで暗所で発芽させること；
（ｂ）新芽を光にさらし、その結果、露光された新芽を得ること；
（ｃ）前記露光された新芽を暗所でインキュベーションすること；および
（ｄ）前記新芽を収穫し、それにより、ザクロ新芽を製造すること
を含む、子葉を含むザクロ新芽を製造する方法。
【請求項２】
（ａ）が６日間〜１３日間行われ、（ｂ）が３０分間〜８時間行われ、（ｃ）が２４時間〜４８時間行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載される方法に従って製造されるザクロ新芽。
【請求項４】
請求項３に記載されるザクロ新芽またはその調製物を含む食品製造物または飼料製造物。
【請求項５】
前記光は日光、２８０ｎｍ〜４００ｎｍの波長範囲の紫外光、および放射照度が少なくとも３０Ｗ／ｍ２である３８０ｎｍ〜７５０ｎｍの波長範囲の人工光からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ゼリー、ソース、シロップ、レリッシュ、ワイン、シリアル、フレーク、バー、スナック、スプレッド、ペースト、ディップ、細粉物、ポリッジ、飲料物、輸液、浸出液、チンキ剤、抽出物および果汁からなる群から選択される、請求項４に記載の食品製造物または飼料製造物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、ザクロの新芽、および、ザクロの新芽に由来する調製物に関連し、より具体的には、特に限定されないが、それらの使用に関連する。
【背景技術】
【０００２】
ザクロ（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ  Ｌ．）は世界中で広く栽培されており、その可食部がこれまで、食品産業においてだけでなく、伝統的薬において広範囲に使用されている。例えば中国人は、ザクロを、抗菌用途、抗炎症用途および止血用途での伝統的製造物として使用している。機能性食品産業では、ザクロはスーパーフルーツの新規なカテゴリーに含まれる。したがって、ザクロは、引きつけるような味覚とともに、格段に優れた栄養的豊かさおよび抗酸化特性を含む。
【０００３】
ザクロ果実の可食部（総果実重量の約５０％）は、８０％の果汁に富む果肉と、２０％の真の種子とを含む果汁に富む種子（仮種皮）から構成される。新鮮なザクロ果汁は、糖（すなわち、フルクトースおよびグルコース）、有機酸（例えば、クエン酸、リンゴ酸、シュウ酸および酒石酸など）、カルシウム、アミノ酸（主にグルタミン酸およびアスパラギン酸）、ペクチン、アスコルビン酸および可溶性ポリフェノール［主に、アントシアニン類（例えば、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３，５−ジグルコシドおよびデルフィンジン−３−グルコシドなど）、カテキン類および他のフラボノイド類、没食子酸およびエラグ酸およびそれらの誘導体］を含有する。実際、仮種皮のみから得られる果汁は微量のエラグタンニンのみを含有するだけであるが、皮を含む果実全体から得られる果汁はエラグタンニンが豊富である［Ｇｉｌら、Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ（２０００）  ４８：４５８１〜４５８９］。ザクロの種子は、脂質、タンパク質、粗繊維、ペクチンおよび糖の豊富な供給源である。そのうえ、ザクロの種子は、ステロイドエストロゲンのエストロン、イソフラボンフィトエストロゲンのゲニステインおよびダイゼイン、ならびに、フィトエストロゲン性のクメストロールを含有する［Ｋａｓａｉら、Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｓｃｉ  Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ（２００６）  ５２（５）：３８３〜８；米国特許第６，３６１，８０７号］。ザクロの皮はフェノール系化合物の豊富な供給源であるが、ザクロの皮は非常に渋い。
【０００４】
ザクロ果実の種々の部分からの抽出物は、果汁からの抽出物［Ｇｉｌら、上掲；Ａｖｉｒａｍら、Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ（２００７）  ７１：１０６２〜１０７６］、種子からの抽出物［Ｗａｎｇら、Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ（２００４）  ６７：２０９６〜２０９８］および皮からの抽出物［Ｓｉｎｇｈら、Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ（２００２）  ５０：８１〜８６］を含めて、強い抗酸化活性を示すことが以前から示されている。さらに、ザクロの樹皮は、エラグタンニンおよびガロタンニンが非常に多いことが示されている［Ｔａｎａｋａら、Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ（１９８６）  ３４：６５６〜６６３］。
【０００５】
米国特許第６，９７７，０８９号は、アテローム性動脈硬化、動脈関連状態の処置のために、また、患者における脳卒中または心臓発作の発生を低下させるために、ザクロ果実全体（内側および外側の皮ならびに種子を含む）からのザクロ抽出物を開示する。
【０００６】
米国特許第６，８００，２９２号は、皮膚科学的障害を処置するための、果樹抽出物（例えば、ザクロ）を含む皮膚科学的薬剤を開示する。この抽出物は、果実、果実の表皮もしくは外皮、種子、樹皮、葉、根または茎から得ることができる。
【０００７】
米国特許第６，８１８，２３４号は、鎮痛および消炎のために有用な１つ以上の果実抽出物（例えば、ザクロ）を含有する食品サプリメントを開示する。米国特許第６，８１８，２３４号によれば、この食品サプリメントは、溶液（例えば、果汁）を限外ろ過膜に通し、その後、逆浸透膜に通すことを含むプロセスによって植物から抽出される。
【０００８】
さらなる関連技術がｈｔｔｐ：／／ｃｃｎｅ．ｍｏｆｃｏｍ．ｇｏｖ．ｃｎ／２０６５７３／ｐ１２７０８４３．ｈｔｍｌに列挙される。
【発明の開示】
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態の１つの態様によれば、ザクロ新芽調製物が提供される。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態の１つの態様によれば、ザクロ新芽調製物を製造する方法が提供され、この場合、この方法は、（ａ）ザクロ新芽を提供すること；および（ｂ）ザクロ新芽を加工し、それにより、ザクロ新芽調製物を製造することを含む。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態の１つの態様によれば、ザクロ新芽を製造する方法が提供され、この場合、この方法は、（ａ）ザクロの種子を、新芽が現れるまで暗所で発芽させること；（ｂ）新芽を光にさらし、その結果、露光された新芽を得ること；（ｃ）露光された新芽を暗所でインキュベーションすること；および（ｄ）ザクロ新芽を収穫し、それにより、ザクロ新芽を製造することを含む。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、（ａ）が６日間〜１３日間行われ、（ｂ）が３０分間〜８時間行われ、（ｃ）が２４時間〜４８時間行われる。
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態の１つの態様によれば、請求項４に記載される方法に従って製造されるザクロ新芽が提供される。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態の１つの態様によれば、３０μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量よりも高い抗酸化活性を含むザクロ新芽が提供される。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態の１つの態様によれば、請求項１、６または７に記載されるザクロ調製物またはザクロ新芽を含む食品製造物または飼料製造物が提供される。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、調製物の抗酸化活性が３０μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量よりも高い。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、提供することが、請求項４に記載される方法に従って行われる。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗酸化活性が少なくとも５０μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量である。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗酸化活性が少なくとも７０μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量である。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の調製物または新芽は親水性抗酸化物質を含む。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、親水性抗酸化物質の活性が少なくとも７０μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量である。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、親水性抗酸化物質はビタミンＣを含む。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ビタミンＣの含有量が少なくとも０．３ｍｇ／ｇ新鮮重量である。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、親水性抗酸化物質はフェノール系化合物を含む。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、フェノール系化合物は没食子酸を含む。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、没食子酸の含有量が少なくとも１６ｍｇ／ｇ乾燥重量である。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、フェノール系化合物はプニカラギン類を含む。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、プニカラギン類の含有量が少なくとも４ｍｇ／ｇ乾燥重量である。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、フェノール系化合物はフラボノイド類を含む。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、フラボノイド類の含有量が少なくとも１９ｍｇ／ｇ乾燥重量である。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、フェノール系化合物はエラグ酸を含む。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、エラグ酸の含有量が少なくとも２３ｍｇ／ｇ乾燥重量である。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の調製物または新芽は親油性抗酸化物質を含む。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、親油性抗酸化物質の活性が少なくとも０．６μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量である。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、親油性抗酸化物質はビタミンＥを含む。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ビタミンＥの含有量が少なくとも０．４０ｍｇ／ｇ新鮮重量である。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、親油性抗酸化物質はカロテノイド類を含む。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、光は日光を含む。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、光は２８０ｎｍ〜４００ｎｍの波長範囲の紫外光を含む。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、光は、放射照度が少なくとも３０Ｗ／ｍ２である３８０ｎｍ〜７５０ｎｍの波長範囲の人工光を含む。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の調製物は顆粒化形態である。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の調製物は粉末形態である。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の調製物はペースト形態である。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の調製物は液体形態である。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ホモジネート化によって加工が行われる。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ホモジネート化が有機酸の存在下で行われる。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、有機酸は食品用有機酸である。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、食品用有機酸はクエン酸である。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、クエン酸は０．１％〜０．２％の濃度である。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、乾燥によって加工が行われる。
【００５１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、浸透脱水によって乾燥が行われる。
【００５２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、凍結乾燥によって乾燥が行われる。
【００５３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、真空乾燥によって乾燥が行われる。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の食品製造物または飼料製造物は、ゼリー、ソース、シロップ、レリッシュ、ワイン、シリアル、フレーク、バー、スナック、スプレッド、ペースト、ディップ、細粉物、ポリッジ、飲料物、輸液、浸出液、チンキ剤、抽出物および果汁からなる群から選択される。
【００５５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の食品製造物または飼料製造物は、乾燥新芽、新鮮新芽、冷凍新芽、焼き新芽、煮込み新芽、油で揚げられた新芽、押出し成形された新芽、すりつぶされた新芽、マリネにされた新芽、および、ピクルスにされた新芽からなる群から選択される。
【００５６】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的用語および／または科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および材料と類似または同等である方法および材料を本発明の実施形態の実施または試験において使用することができるが、例示的な方法および／または材料が下記に記載される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
本明細書では本発明のいくつかの実施形態を単に例示し添付の図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の実施形態を例示考察することだけを目的としていることを強調するものである。この点について、図面について行う説明によって、本発明の実施形態を実施する方法は当業者には明らかになるであろう。
【図１Ａ−Ｆ】図１Ａ〜図１Ｆは、本教示の食品調製物がザクロ果実から作製される例示的なプロセスを例示するフローチャートである。このプロセスは１ｋｇの新鮮なザクロ果実から始まり（図１Ａ）、その新鮮な果汁を抽出することができる（図１Ｂ）。約５０ｇの種子を、皮および廃棄物からの分離（図１Ｄ）によって果汁抽出残渣から得ることができる（図１Ｃ）。次いで、これらの５０ｇの種子を発芽させ（これは、例えば、本明細書中下記の材料および方法の節において記載される）、約１５０ｇのザクロ新芽を作製する（図１Ｅ）。その後、食品調製物が、例えば、凍結乾燥もしくは浸透脱水によって、または、新芽全体もしくは子葉のみのホモジネート化によってこのザクロ新芽から製造される（図１Ｆ）。注目すべきことに、乾燥により、およそ２０ｇ〜３０ｇの乾燥物が得られ、浸透脱水により、およそ３０ｇ〜３５ｇの乾燥物が得られ、一方、ホモジネート化により、およそ１５０ｇのザクロ全体由来のホモジネート、または、およそ５０ｇの子葉由来のホモジネートが得られる。重要なことに、これらの新芽調製物は、同じ果実から得られるザクロ果汁に加えて得られる（＋符号によって示される）。
【図１Ｇ−Ｉ】図１Ｇ〜図１Ｉは、本教示のいくつかの実施形態と比較される、（例えば、背景の節において記載される）従来の方法によるザクロ果汁の作製を比較するフローチャートである。図１Ｇは、果汁を果実全体または仮種皮から絞ることによってザクロ果汁を製造するための従来法を示す。このザクロ果汁は、水溶性の抗酸化物質が豊富であるが、親油性の抗酸化物質（例えば、ビタミンＥ）を全く有しない；図１Ｈは、種子抽出物（種子油）がザクロ果汁に加えられる別の従来法を示す。この添加により、果汁は親油性の抗酸化物質が富化されるが、総抗酸化活性に対する大きな影響はなく、また、苦い味覚が果汁に加わることがある；図１Ｉは、本教示のいくつかの実施形態による方法を示す。例えば、ザクロ新芽調製物をザクロ果汁に加えることにより、果汁は、親油性抗酸化物質が富化され、総抗酸化活性が２倍になる。
【図２】図２Ａ〜図２Ｂは、ザクロ新芽の出現を示す画像である。図２Ａは、子葉、胚軸（胚の茎）および幼根（胚の根）を含むザクロ新芽を示す。図２Ｂは、多孔性パーライト基体におけるザクロ新芽の成長を示す。
【図３】ブロッコリー、アルファルファおよびダイズに由来する他の市販されている生育新芽と比較されるザクロ新芽の抗酸化活性を示す棒グラフである。すべての新芽を同じ生育条件のもとで成長させた。
【図４】図４Ａ〜図４Ｃは、ザクロ新芽に対する成長段階および照明条件の影響を示す図である。図４Ａは、種子から新芽までの異なる成長段階におけるザクロ新芽の抗酸化活性を示す線グラフである。さらに、グラフは、新芽の抗酸化活性に対する照明の影響を例示する。図４Ｂ〜図４Ｃは、ザクロ新芽の出現を、暗所で終始成長させた場合（図４Ｂ）、または、日光に３時間さらすこと、その後、暗所でさらに２４時間成長させた場合（図４Ｃ）において示す画像である。
【図５】図５Ａ〜図５Ｊは、親油性抗酸化物質および親水性抗酸化物質を、それらの活性を測定するためのザクロ新芽またはザクロ新芽調製物から抽出するために使用されたプロセスを概略的に示すフローチャートである。図５Ａ〜図５Ｂは、酢酸塩緩衝液（ｐＨ４．３）においてホモジネート化された新鮮なザクロ新芽を示す；図５Ｃは、３回の連続する一連のアセトンによるホモジネートの抽出／脱水（それぞれの工程の後で、遠心分離および上清の回収が行われる）を示す；図５Ｄは、３回の抽出からのアセトン−水の上清画分をプールすることを示す；図５Ｅは、脱水されたペレットをヘキサンで３回抽出することを示し、上清を回収してプールした；図５Ｆは、微量の親油性化合物を、ヘキサンとの分配によって、プールされたアセトン−水抽出物から抽出することを示す；図５Ｇ〜図５Ｈは、微量の親水性化合物を抽出するために水との別の分配に供される、この操作から得られた非極性画分を示す；図５Ｉ〜図５Ｊは、得られた２つのサンプル、すなわち、親水性画分（水／アセトン抽出物、図５Ｉ）および親油性画分（ヘキサン抽出物、図５Ｊ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、ザクロの新芽、および、ザクロの新芽に由来する調製物に関連し、より具体的には、特に限定されないが、それらの使用に関連する。
【００５９】
本発明の原理および操作は、図面および添付された説明を参照してより良く理解することができる。
【００６０】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示されるまたは実施例によって例示される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は、他の実施形態が可能であり、または様々な方法で実施または実行される。また、本明細書中で用いられる表現および用語は説明のためであり、従って限定として見なされるべきではないことを理解しなければならない。
【００６１】
本発明を実施に移しているとき、本発明者らは、ザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物が、渋さまたは苦さを伴うことなく、抗酸化活性の格段に高い供給源を含むことを発見している。この抗酸化活性は親水性抗酸化物質および親油性抗酸化物質の両方を含み、ザクロの果実または種子、ブロッコリーの新芽、アルファルファの新芽、ダイズの新芽、イチゴおよびアボカドの果実の抗酸化活性よりも著しく高い。従って、ザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物は、高い栄養価を含む食品製造物、飼料製造物および／または食品添加物として役立ち得る。
【００６２】
本明細書中下記で、また、下記の実施例の節で示されるように、本発明者らは、暗所、明所、暗所サイクル（図４Ａ）で生育させられる本発明のザクロ新芽（図２Ａ〜図２Ｂ）がおよそ７５μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量の総抗酸化活性を含むことを示している。この抗酸化活性は、ブロッコリー、ダイズおよびアルファルファの新芽の抗酸化活性の１０倍であり（図３）、イチゴ果実の抗酸化活性の３倍〜４倍であり（表２、本明細書中下記）、アボカド果実よりも著しく高い（表２、本明細書中下記）。本発明の様々なザクロ新芽の抗酸化活性は親水性成分（例えば、ビタミンＣ、フェノール系化合物）および親油性成分（例えば、ビタミンＥ、カロテノイド類）を含み、これらのザクロ新芽から得られる調製物は抗酸化物質の豊富な供給源を提供する。ザクロ新芽調製物は、ビタミンＣおよびビタミンＥ、フェノール系化合物（これには、没食子酸、エラグ酸、プニカラギン類、フラボノイド類が含まれる）を含めて、親水性抗酸化物質および親油性抗酸化物質の両方を含むことが示された（本明細書中下記の表１〜表３、および、図１Ａ〜図１Ｉを参照のこと）。これらの発見のすべてが、食品製造物、飼料製造物および／または栄養補助食品として使用されるザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物の使用を実質的なものにしている。
【００６３】
従って、本発明の１つの態様によれば、ザクロ新芽調製物を製造する方法が提供され、この場合、この方法は、ザクロ新芽を提供すること、および、そのザクロ新芽を加工し、それにより、ザクロ新芽調製物を製造することを含む。
【００６４】
本明細書中で使用される用語「ザクロ」は、プニカ・グラナツム（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ）と交換可能に使用される。
【００６５】
本明細書中で使用される用語「ザクロ新芽」は、発芽中の種子から、少なくとも２枚の葉（すなわち、子葉）を有する幼植物体にまでおよぶザクロ植物の成長段階を示す。本教示によるザクロ新芽は、少なくとも１対の子葉、胚軸（胚の茎）および幼根（胚の根）、または、新芽全体を含む。
【００６６】
本明細書中で使用される語句「ザクロ新芽調製物」は、植物膜の少なくとも何らかの破壊が存在する、ザクロ新芽に由来する組成物を示す。
【００６７】
ザクロ新芽は下記のように製造することができる。本方法は、ザクロの種子を、新芽が現れるまで暗所で発芽させること；その新芽を光にさらし、その結果、光にさらされた新芽を得ること；光にさらされた新芽を暗所でインキュベーションすること；および、そのザクロ新芽を収穫し、それにより、ザクロ新芽を製造することを含む。
【００６８】
ザクロの種子は、例えば、ｗｗｗ．ｔｈｏｍｐｓｏｎ−ｍｏｒｇａｎ．ｃｏｍ、ｈｔｔｐ：／／ｓｅｅｄｒａｃｋ．ｃｏｍから市販されている。
【００６９】
あるいは、ザクロの種子を、仮種皮だけまたはザクロ果実全体のどちらかから得ることができる。仮種皮が、皮を分離した後でザクロから得られ、その後、（下記で詳しく記載されるように、また、図１Ａ〜図１Ｄに記載されるように）、仮種皮が、果汁を得るために取り出され、種子が、残留する果肉残渣から分離される。種子が、ザクロ果実全体から得られることになる場合、果実全体（皮を含む）が、典型的には、果汁を抽出するために最初に圧搾され、その後、種子が、残留する果肉残渣を含む全ザクロ廃棄物から分離される。
【００７０】
次いで、種子は、果汁を含む残留果肉物からの分離によってきれいにされ、種皮が、例えば、アルカリ消化（例えば、２０％のアルカリ溶液、例えば、ＮａＯＨまたはＫＯＨなど）を使用して薄くされ、種子が、部分的に消化された果肉から、粗い表面に対して擦ることによって機械的に分離される。そのようなプロセスは、種子が（種子の発芽能に影響を及ぼし得る）４０℃を超えて加熱されることを防止するために、低温条件下（例えば、氷中）で行われることが得策である。発芽のための種子を中和し、得るために、硫酸を使用することができ、その後、水による洗浄が行われる。種子は、さらなる重量変化が観測されなくなるまで（重量測定精度、５０ｇの種子サンプルあたり±０．１ｇ）、典型的には２日間〜３日間、約２２℃〜２８℃で大気中で乾燥することができる。これらの種子は、発芽のために使用可能な状態であり、１年間〜２年間に至るまで約４℃で貯蔵することができる。
【００７１】
次いで、種子は、子葉を伴った新芽が現れるまで暗所において、（本明細書中下記の実施例の節の実施例１で詳しく記載されるように）制御された温度および湿度で、空気の利用を可能にする、（詳しくは本明細書中下記で記載されるように）生育培地に浸された固体担体に（例えば、１ｃｍ２あたり４個〜５個の種子の密度で）播かれる。典型的には、子葉を伴った新芽が、６日〜２１日の範囲、６日〜１８日の範囲、または、６日〜１３日の範囲で現れる。１つの例示的な実施形態において、この範囲は６日〜１８日を含む。
【００７２】
ザクロ新芽を発芽させるための１つの好適な生育培地は典型的には、水（例えば、水道水）を単に含有するだけである。水道水の地域特性に依存して、水のさらなる精製が、水から塩分を除くために、および／または、塩素、有機残渣もしくは他の混入物を除くために要求される場合がある。例示的な実施形態において、水は微生物混入物を含まない。
【００７３】
典型的には、ザクロ新芽は、空気の利用を提供する非栄養性の固体担体において、例えば、水が供給されたスポンジ、スポンジ様物体、寒天、網、ペーパータオル、吸取紙、バーミキュライト、パーライトなどにおいて発芽し続ける。さらに、非栄養性の固体担体は、例えば、オランダ国特許第１００１５７０号に記載されるなどのパッド、シートまたは粒子の形態で適用され得るセルロースを含むことができる。
【００７４】
ザクロ新芽の発芽は典型的には、１５℃〜３５℃の範囲の温度、２０℃〜３０℃の範囲の温度、または、２２℃〜２７℃の範囲の温度で行われる。そのうえ、ザクロの種子は、少なくとも７０％の高湿度、少なくとも８０％の高湿度、少なくとも９０％の高湿度、または、少なくとも１００％の高湿度で発芽される。１つの例示的な実施形態において、湿度は少なくとも９０％である。発芽は好適には、本明細書中に開示されるような制御された温度および湿度を有する発芽用の小部屋または発芽室において行われる。発芽は、巻いた子葉が種皮から現れる新芽の段階まで行われ、典型的には、種皮が新芽から落ちるまで行われる。
【００７５】
発芽後、ザクロ新芽は光にさらされ、その結果、露光された新芽が得られる。用いることができる例示的な光のｎｍ範囲には、２８０ｎｍ〜７５０ｎｍが含まれ、これは、日光、人工光または紫外光に対応する。例えば、ザクロ新芽を、日中の任意の時間において、また、任意の天候条件のもとで、日光が届く任意の場所（すなわち、室内または屋外）に置くことができる。同様に、ザクロ新芽は、例えば、かすかな室内光または薄暗い光を含めて、人工光にさらすことができ、例えば、波長が３８０ｎｍ〜７５０ｎｍにおよび、放射照度が少なくとも２０Ｗ／ｃｍ２、少なくとも３０Ｗ／ｃｍ２、少なくとも４０Ｗ／ｃｍ２、または、少なくとも５０Ｗ／ｃｍ２である人工光にさらすことができる。さらに、ザクロ新芽は、波長が２８０ｎｍ〜４００ｎｍにおよぶ紫外光、または、波長が２８０ｎｍ〜３１５ｎｍにおよぶ紫外光（すなわち、ＵＶ−Ｂ）、または、波長が３１５ｎｍ〜４００ｎｍにおよぶ紫外光（すなわち、ＵＶ−Ａ）にさらすことができる。１つの例示的な実施形態によれば、新芽は、約１０℃を超える温度で光にさらされる。
【００７６】
本教示によれば、ザクロ新芽は、少なくとも２０分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、または、少なくとも８時間、光にさらされる。
【００７７】
露光後、ザクロ新芽は、（本明細書中下記で詳しく記載される）最大の抗酸化活性を有するザクロ新芽を得るように、暗所でさらにインキュベーションされる。そのようなインキュベーションは、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも３６時間、または、少なくとも４８時間、行うことができる。
【００７８】
ザクロ新芽が発芽し、成長すると、ザクロ新芽が収穫される。ザクロ新芽の収穫は、新芽全体（子葉、胚軸および幼根を含む）を集めることによる基体からの分離によって行われる。あるいは、ザクロ新芽の一部を切り取ることができる（例えば、子葉、子葉と胚軸、など）。ザクロ新芽の収穫は、切断、引抜き、摘み取りまたはもぎ取り（これらに限定されない）を含めて、当該分野で知られているいずれかの方法を使用して行うことができる。ザクロ新芽を収穫する前に、新芽の成長が、例えば、ザクロ新芽を約４℃に約７日間にわたって冷却することによって停止させられ得ることが理解される。さらに、ザクロ新芽を収穫した後で、収穫物は、（本明細書中下記でさらに詳しく記載されるように）消費または加工の前の冷却された環境で維持することができる。
【００７９】
本明細書中上記で述べられたように、ザクロ新芽が手元に得られた後、新芽はそのままで使用することができ、または、抗酸化物質が豊富な調製物を製造するためにさらに加工することができる。
【００８０】
本明細書中で使用されるように、用語「抗酸化物質」は、酸化反応を阻害、防止、低下、または、改善することができる物質の一群をいう。例示的な抗酸化物質には、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＥ、ビタミンＡ、Ｂ群ビタミン（例えば、ビタミンＢ６）、フラボノイド類、セレンおよびカロテノイド類（例えば、β−カロテン）が含まれる。
【００８１】
本明細書中で使用されるように、語句「抗酸化活性」は、フリーラジカル（例えば、生理学的環境で見出されるフリーラジカルなど）を中和する作用をいう。
【００８２】
ザクロ新芽は、本明細書中上記で記載されたように、その全体を加工することができる。あるいは、ザクロ新芽の、抗酸化物質が多い部分を加工することができる（例えば、子葉など）。新芽は典型的には、例えば、乾燥、ホモジネート化、破砕または抽出を行うことによって加工することができる。新芽を加工するための様々な方法が当該分野では広く知られており（例えば、米国特許第６，６８６，５１７号、米国特許第５，７２５，８９５号、国際公開ＷＯ２００４／０４３８８６（これらは参照によって本明細書中に組み込まれる）を参照のこと）、これらは同様に、本発明のザクロ新芽に適用することができる。
【００８３】
従って、本教示によれば、ザクロ新芽を乾燥することができる。当該分野で知られているいずれかの乾燥プロセスを、新芽を乾燥するために使用することができ、例えば、浸透脱水、凍結乾燥、不活性ガス乾燥、空気乾燥または真空乾燥などを使用することができる。
【００８４】
例えば、ザクロ新芽は、バイオマスが重量で５％未満の水分を含有するまで、ザクロ新芽を市販の空気乾燥機に入れることによって約５０℃で空気乾燥することができる。あるいは、凍結乾燥を、例えば、オイルの酸敗化のために、空気乾燥に対して感受性である新芽のために使用することができる。新芽は、バイオマスが重量で５％未満の水分を含有するまで、新芽を真空乾燥機に入れることによって凍結乾燥することができ、また、真空下で凍結されて乾燥することができる。
【００８５】
乾燥された新芽は、バルク固体物としてさらなる加工のために貯蔵されるか、または、所望されるメッシュサイズの粉末に粉砕することによって顆粒化形態もしくは粉末形態にさらに加工される。
【００８６】
あるいは、ザクロ新芽をホモジネート化することができる。当該分野で知られている方法はどれも、ザクロ新芽をホモジネート化するために用いることができる。例えば、新芽を、（液体の緩衝液を何ら加えることなく）そのままの状態でホモジネート化することができ、または、例えば、プロテアーゼ阻害剤を含む場合があるホモジネート化緩衝液が補充されてホモジネート化することができ（例えば、国際公開ＷＯ２００４／０４３８８６を参照のこと）、または、チンキ剤を形成するために等体積のエタノールを加えてホモジネート化することができる。任意のタイプのホモジナイザーを使用することができ、例えば、ブリンクマン・ポリトロン・ホモジナイザー（例えば、米国特許第５９６８５６７号を参照のこと）を使用することができる。
【００８７】
本教示の例示的な実施形態では、食品用有機酸（例えば、クエン酸）が、ザクロ新芽のホモジネート化を達成するために、約０．５％〜３％の濃度または約１％〜２％の濃度で加えられる。本教示ではまた、５０ｍＭの濃度での酢酸塩緩衝液（ｐＨ４．３）におけるホモジネート化が適用される。他の食品用有機酸、例えば、酢酸、乳酸、リンゴ酸、リン酸、塩酸、アスコルビン酸などもまた、本教示に従って加えることができる。
【００８８】
得られたホモジネート化物は、典型的には液体形態またはペースト形態であり、得られたホモジネート化物から特定のタンパク質および／または分画物（例えば、親油性抗酸化物質または親水性抗酸化物質）を抽出および／または精製するためにさらに使用することができる。親水性分画物および親油性分画物を抽出するために当該分野で知られている方法はどれも適用することができる。例えば、アセトンおよびヘキサンを使用する段階的抽出と、水溶性部分および水不溶性部分の繰り返される分配とを用いる方法（これは本明細書中下記の実施例の節で詳しく記載される）を使用することができる。同様に、タンパク質を抽出するために当該分野で知られている通常の条件および技術はどれも適用することができる（例えば、抽出、沈殿化）。
【００８９】
抽出はまた、例えば、極性有機溶媒または非極性有機溶媒を使用することなどによって行うことができる。
【００９０】
本明細書中上記で言及されたように、また、下記の実施例の節で詳しく示されるように、ザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物は、高い栄養価を提供し、特に、抗酸化活性の豊富な供給源である。
【００９１】
ザクロ新芽は、抗酸化活性を、１グラムの新鮮重量の新芽物あたり少なくとも２０μＭトロロックス当量（ＴＥ）、少なくとも３０μＭ  ＴＥ、少なくとも４０μＭ  ＴＥ、少なくとも５０μＭ  ＴＥ、少なくとも６０μＭ  ＴＥ、少なくとも７０μＭ  ＴＥ、または、少なくとも８０μＭ  ＴＥのレベルで含むことが理解される。同様に、ザクロ新芽調製物は、抗酸化活性を、１グラムの新鮮重量の新芽物あたり少なくとも２０μＭ  ＴＥ、少なくとも３０μＭ  ＴＥ、少なくとも４０μＭ  ＴＥ、少なくとも５０μＭ  ＴＥ、少なくとも６０μＭ  ＴＥ、少なくとも７０μＭ  ＴＥ、または、少なくとも８０μＭ  ＴＥのレベルで含む。
【００９２】
本発明の具体的な実施形態によれば、ザクロ新芽およびザクロ新芽調製物は親水性抗酸化物質および親油性抗酸化物質の両方を含む。
【００９３】
本明細書中で使用されるように、用語「親水性抗酸化物質」は、油性媒体よりも水性媒体において大きい溶解度を有する抗酸化化合物をいう。例示的な親水性抗酸化物質には、ビタミンＣおよびフェノール系化合物（これには、没食子酸、エラグ酸、プニカラギン類およびフラボノイド類が含まれる）が含まれる。
【００９４】
本明細書中で使用されるように、用語「親油性抗酸化物質」は、水性媒体よりも油性媒体において大きい溶解度を有する抗酸化化合物をいう。例示的な親油性抗酸化物質には、ビタミンＥファミリーおよびカロテノイド類が含まれる。
【００９５】
具体的な実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物における親水性抗酸化物質の活性は、１グラムの新鮮重量あたり少なくとも３０μＭ  ＴＥ、少なくとも５０μＭ  ＴＥ、少なくとも７０μＭ  ＴＥ、少なくとも９０μＭ  ＴＥ、少なくとも１１０μＭ  ＴＥ、少なくとも１３０μＭ  ＴＥ、少なくとも１５０μＭ  ＴＥ、または、少なくとも２００μＭ  ＴＥを含む。
【００９６】
本発明の親水性抗酸化物質はビタミンＣ（アスコルビン酸）を含む。本発明のいくつかの実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物におけるビタミンＣの含有量は、１グラムの新鮮重量あたり少なくとも０．１ｍｇ、少なくとも０．２ｍｇ、少なくとも０．３ｍｇ、少なくとも０．４ｍｇ、または、少なくとも０．５ｍｇを含む。
【００９７】
本発明の親水性抗酸化物質はさらに、没食子酸、エラグ酸、プニカラギンＡおよびプニカラギンＢ（エラグタンニン）、ならびに、フラボノイド類（遊離型および結合型）をはじめとするフェノール系化合物を含む。
【００９８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物における総フェノール系化合物の含有量は、１グラムの新鮮重量あたり少なくとも７の没食子酸当量（ＧＡＥ）、少なくとも８のＧＡＥ、少なくとも９のＧＡＥ、少なくとも１０のＧＡＥ、少なくとも２０のＧＡＥ、少なくとも３０のＧＡＥ、少なくとも４０のＧＡＥ、または、少なくとも６０のＧＡＥを含む。
【００９９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物における没食子酸の含有量は、１グラムの乾燥重量あたり少なくとも１２ｍｇ、少なくとも１４ｍｇ、少なくとも１６ｍｇ、少なくとも１８ｍｇ、または、少なくとも２０ｍｇを含む。
【０１００】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物におけるプニカラギン類の含有量は、１グラムの乾燥重量あたり少なくとも１ｍｇ、少なくとも２ｍｇ、少なくとも３ｍｇ、少なくとも４ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、または、少なくとも６ｍｇを含む。
【０１０１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物におけるフラボノイド類の含有量は、１グラムの乾燥重量あたり少なくとも１５ｍｇ、少なくとも１７ｍｇ、少なくとも１９ｍｇ、少なくとも２１ｍｇ、または、少なくとも２３ｍｇを含む。
【０１０２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物におけるエラグ酸の含有量は、１グラムの乾燥重量あたり少なくとも１７ｍｇ、少なくとも１９ｍｇ、少なくとも２１ｍｇ、少なくとも２３ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、または、少なくとも２７ｍｇを含む。
【０１０３】
１つのさらなる実施形態によれば、ザクロ新芽およびザクロ調製物は親油性抗酸化物質を含む。ザクロ新芽またはザクロ調製物における親油性抗酸化物質の活性は、１グラムの新鮮重量あたり少なくとも０．１μＭ  ＴＥ、少なくとも０．２μＭ  ＴＥ、少なくとも０．４μＭ  ＴＥ、少なくとも０．６μＭ  ＴＥ、少なくとも０．８μＭ  ＴＥ、または、少なくとも２．０μＭ  ＴＥを含む。
【０１０４】
本発明の親油性抗酸化物質はビタミンＥを含む。本発明のいくつかの実施形態によれば、ザクロ新芽またはザクロ調製物におけるビタミンＥの含有量は、１グラムの新鮮重量あたり少なくとも０．１ｍｇ、少なくとも０．２ｍｇ、少なくとも０．３ｍｇ、少なくとも０．４ｍｇ、または、少なくとも０．５ｍｇを含む。
【０１０５】
本発明の親油性抗酸化物質はさらにカロテノイド類を含む。
【０１０６】
本教示によれば、理論にとらわれることはないが、抗酸化物質の種々のレベルおよび活性が種々のザクロ新芽調製物において存在することが理解される。従って、親水性抗酸化物質および親油性抗酸化物質の最大レベルが、乾燥された調製物において、特に、凍結乾燥された調製物において示される。さらに、子葉のホモジネートが、新芽全体のホモジネートと比較して、親水性抗酸化活性および親油性抗酸化活性のより大きいレベルを示す。
【０１０７】
抗酸化性レベルは、当該分野で知られているいずれかの方法を使用して求めることができ、そのような方法には、本明細書中下記の実施例１で記載されるようなＴＥＡＣ（トロロックス当量抗酸化能）、ＴＲＡＰ（総ラジカル捕捉抗酸化パラメーター）およびＦＲＡＰ（第二鉄還元抗酸化力）が含まれる（例えば、Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉら、Ｊ  Ｎｕｔｒ．（２００３）  １３３：２８１２〜２８１９を参照のこと）。これらの抗酸化性レベルは、ザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物に存在する抗酸化物質の総レベルに関連する。親水性化合物および親油性化合物についての抗酸化性レベルを求めるための方法には、ＴＥＡＣ法およびＯＲＡＣ（酸素ラジカル吸収能）法が含まれる［例えば、Ｈｕａｎｇら、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．（２００２）  ５０：１８１５〜１８２１を参照のこと］。
【０１０８】
ザクロ新芽およびザクロ調製物は、オイル（少なくとも３％ｗ／ｗ、少なくとも５％ｗ／ｗ、少なくとも７％ｗ／ｗ、少なくとも９％ｗ／ｗ、少なくとも１０％ｗ／ｗ、少なくとも１５％ｗ／ｗ、少なくとも２０％ｗ／ｗ、または、少なくとも３０％ｗ／ｗ）をさらに含み、また、栄養繊維（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｆｉｂｅｒ）をさらに含むことが理解される。
【０１０９】
本発明のさらなる態様において、ザクロ新芽またはザクロ由来の調製物は食品製造物または飼料製造物に含まれる（例えば、乾燥物、液体、ペースト）。食品製造物または飼料製造物は、本発明のザクロ新芽もしくはその一部分、または、これらの新芽から作製される調製物を含有する何らかの摂取可能な調製物である。従って、本発明の新芽または調製物は、ヒト（または動物）が消費するために好適である。すなわち、本発明の新芽または調製物は食用に適する。本発明の飼料製造物はさらに、動物が消費するために適合化された飲料物を含む。
【０１１０】
ヒトが消費するために、新芽は典型的には土壌を含まない。本明細書中上記で記載されたように、ザクロ新芽は典型的には、土壌で生育させるのではなく、水が補充された固体担体（例えば、スポンジ）で生育させる。従って、通常、そのような新芽は、食用に適さない土壌を除くために洗浄される必要がない。新芽が粒子状の固体担体（例えば、土壌、バーミキュライト、パーライトまたはセルロースなど）で生育される場合、洗浄することが、ヒトが消費するために好適な新芽を達成するために要求され得る。
【０１１１】
そのようなザクロ新芽は、輸送および販売のための好適な容器に詰めることができる。典型的には、そのような容器は、濡れたパットを底に含有し、時には保存剤を含有するプラスチック製の箱または瓶である。輸送のために、光にさらされることを制限し、一方で、機械的保護バリアを提供する容器を使用することができる。販売のためには、光が通り抜けることを可能にし、また、機械的保護バリアを提供する容器が使用される場合がある。容器は典型的には、複数のそのような新芽を含有し、この場合、新芽は好ましくは、消費できる状態にある。容器は、１ｃｍ２あたり少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、または、少なくとも８個、または、少なくとも１０個のザクロ新芽を含有することができる。本発明のザクロ新芽を含有する食品製造物は、多様なタイプの容器（例えば、とりわけ、瓶、袋および箱など）で貯蔵および輸送することができる。
【０１１２】
ザクロ新芽はそのままで消費され得ることが理解される。これらの新芽は、引きつけるような味覚を有しており、そのまま食することができ、あるいは、フレッシュサラダ、飲物またはサンドイッチを作るために使用することができる。あるいは、新芽は、消費する前に乾燥、加熱調理、煮ること、冷凍、焼くこと、煮込むこと、油で揚げること、押出し成形、すりつぶし、マリネ、凍結乾燥、または、ピクルスにすることができる。
【０１１３】
同様に、ザクロ新芽調製物は、そのままで（例えば、スプレッドとして）消費することができ、あるいは、既存の食品製造物または新しい食品製造物に加えることができる。ザクロ食品製造物を含む例示的な食品製造物には、パン、ゼリー、ソース、シロップ、レリッシュ、ワイン、茶、スープ、シリアル、フレーク、バー、スナック、スプレッド、ペースト、ディップ、細粉物、ポリッジ、飲料物、カクテル、輸液、浸出液、チンキ剤、抽出物、チューインガム、チョコレート、デザート、アイスクリームおよび果汁が含まれるが、これらに限定されない。様々な方法が、そのような製造物を食品に添加または配合するために当業者には知られている。例えば、
ｗｗｗ．ｐａｌｖｅｌｕ．ｆｉ／ｅｖｉ／ｆｉｌｅｓ／５５＿５１９＿４７０．ｐｄｆ
を参照のこと。
【０１１４】
本発明のザクロ新芽は、飼料製造物としてそのまま使用することができ、あるいは、消費のために飼料製造物と配合され得るか、または、飼料製造物と混合され得ることが理解される。ザクロ新芽またはザクロ調製物を含む例示的な飼料製造物には、穀粒、シリアル（例えば、オートムギ（例えば、ブラックオート）、オオムギ、コムギ、ライムギ、モロコシ、トウモロコシなど）、野菜、マメ科植物（特に、ダイズ）、根菜およびキャベツ、または、生草（例えば、牧草または干し草など）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１５】
本明細書中上記で述べられたように、本発明のザクロ新芽およびザクロ調製物は無味であるか、または、特有の味を有しないかのどちらかであり、料理もしくはレシピに対する味不活性な補助物として都合良く使用することができ、または、時には、新しい風味をレシピおよび料理に加えるために使用することができる。そのうえ、本発明のザクロ新芽調製物は、食品の栄養価を親水性抗酸化物質および親油性抗酸化物質の組合せにより高めるための食品添加物として使用することができる。
【０１１６】
本発明の食品製造物または飼料製造物はまた、さらなる添加物（例えば、甘味剤、風味剤、着色剤、保存剤、栄養添加物（例えば、ビタミンおよびミネラルなど）、香辛料、アミノ酸（すなわち、必須アミノ酸）、乳化剤、ｐＨ制御剤（例えば、酸味剤など）、親水コロイド、消泡剤および離型剤、粉改良剤または粉補強剤、ふくらまし粉または膨張剤、凝集剤、ガスおよびキレート化剤など）を含むことができ、それらの有用性および効果が当該分野では広く知られている。Ｍｅｒｒｉａｎｉ−Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ  Ｃｏｌｌｅｇｉａｔｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（第１０版、１９９３年）を参照のこと。
【０１１７】
本発明の抽出物または化合物を含む組成物はさらに、１つ以上の消費可能なキャリアを使用する栄養補助食品として投与するために製剤化することができる。「消費可能なキャリア」は、本明細書中では、任意の食品、食品成分または食品添加物として、または、ヒト使用のためであれ、もしくは動物使用のためであれ、経口投与のための活性な薬剤の錠剤化、カプセル化または他の製剤化のために利用される任意の賦形剤として定義される。様々な具体的な添加物が当業者には広く知られており、様々なところに、例えば、米国薬局方などに列挙される。栄養補助食品については、抽出物を、当該分野では常套的な方法に従って混合することができる。栄養補助食品を、液体、粉末または固体ピルの形態（これらに限定されない）を含めて、様々な形態で調製することができる。
【０１１８】
本発明のザクロ新芽およびザクロ調製物は全体的な健康のために消費することができるが、酸化ストレスに関連する状態（例えば、アテローム性動脈硬化、糖尿病、ガン、心臓血管疾患、肝臓疾患など）の影響を受けやすい対象者にとって、また、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病など）を発症する危険性がある個体にとって特に好都合であり得る。
【０１１９】
本出願から成熟する特許の存続期間の期間中には、多くの関連する抗酸化剤が開発されることが予想され、抗酸化剤の用語の範囲は、すべてのそのような新しい技術を先験的に包含することが意図される。
【０１２０】
本明細書で使用する場合、用語「約」は±１０％を示す。
【０１２１】
用語「含む／備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、およびそれらの同根語は、「含むが、それらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味する。
【０１２２】
用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、「含み、それらに限定される（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味する。
【０１２３】
表現「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、さらなる成分、工程および／または部分が、主張される組成物、方法または構造の基本的かつ新規な特徴を実質的に変化させない場合にだけ、組成物、方法または構造がさらなる成分、工程および／または部分を含み得ることを意味する。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、単数形態（「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」）は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数の参照物を包含する。例えば、用語「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または用語「少なくとも１つの化合物」は、その混合物を含めて、複数の化合物を包含し得る。
【０１２５】
本開示を通して、本発明の様々な態様が範囲形式で提示され得る。範囲形式での記載は単に便宜上および簡潔化のためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈すべきでないことを理解しなければならない。従って、範囲の記載は、具体的に開示された可能なすべての部分範囲、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値を有すると見なさなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、具体的に開示された部分範囲（例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など）、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値（例えば、１、２、３、４、５および６）を有すると見なさなければならない。このことは、範囲の広さにかかわらず、適用される。
【０１２６】
数値範囲が本明細書で示される場合には常に、示された範囲に含まれる任意の言及された数字（分数または整数）を含むことが意味される。第１の示された数字および第２の示された数字「の範囲である／の間の範囲」という表現、および、第１の示された数字「から」第２の示された数「まで及ぶ／までの範囲」という表現は、交換可能に使用され、第１の示された数字と、第２の示された数字と、その間のすべての分数および整数とを含むことが意味される。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、用語「方法」は、与えられたタスクを達成するための様式、手段、技術および手順を意味し、限定されないが、化学、薬理学、生物学、生物化学、および医学の分野の当業者に知られているかまたはその当業者が既知の様式、手段、技術および手順から容易に開発する方式、手段、技術および手順を含んでいる。
【０１２８】
明確にするため別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴が、単一の実施形態に組み合わせて提供されることもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするため単一の実施形態で説明されている本発明の各種の特徴は別個にまたは適切なサブコンビネーションで、あるいは本発明の他の記載される実施形態において好適なように提供することもできる。種々の実施形態の文脈において記載される特定の特徴は、その実施形態がそれらの要素なしに動作不能である場合を除いては、それらの実施形態の不可欠な特徴であると見なされるべきではない。
【０１２９】
本明細書中上記に描かれるような、および、下記の請求項の節において特許請求されるような本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、実験的裏付けが下記の実施例において見出される。
【実施例】
【０１３０】
次に下記の実施例が参照されるが、下記の実施例は、上記の説明と一緒に、本発明を非限定様式で例示する。
【０１３１】
（実施例１）
抗酸化物質の格段に優れた供給源としてのザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物
材料および実験手法
ザクロ新芽を得る方法および抗酸化性食品調製物をザクロ新芽から調製する方法
【０１３２】
下記の工程を、抗酸化性調製物をザクロ新芽から製造するために行った：
およそ５０ｇのザクロ種子を１ｋｇの新鮮なザクロ果実から得た。
【０１３３】
ザクロ種子を、アルカリ消化を使用する果汁含有果肉残渣物からの分離によってきれいにした。すなわち、１０ｍｌの２０％アルカリ溶液（ＮａＯＨまたはＫＯＨ）を、果肉物および種子を含む果汁絞り後のおよそ７０ｇの残渣に加えた。種子の発芽能に影響を及ぼし得る４０℃を超えて塊が加熱されることを防止するために、その塊を（氷浴で保たれた容器において）冷却条件のもとで十分に混合し、その後、種子を、部分的に消化された果肉から、粗い表面に対して擦ることによって機械的に分離した。硫酸（５Ｎ）を中和のためにその塊に加え、得られた種子を水で洗浄した。全てが一緒になって、アルカリ消化および機械的皮剥離により、種皮の薄化がもたらされた。
【０１３４】
この種子は、使用まで、すなわち、１年〜２年に至るまで約４℃で貯蔵された。
【０１３５】
種子を、水道水を染み込ませた多孔性のスポンジ様基体において、巻いた子葉が種皮から現れる新芽の段階まで、典型的には、種皮が新芽から落ちるまで暗所において２２℃〜２７℃で発芽させた。
【０１３６】
次いで、新芽を、３時間〜５時間、明るい日光、かすかな室内光、または、長波長の紫外線照射にさらした。
【０１３７】
新芽を、さらに約２４時間〜４８時間、暗所において１８℃〜２１℃でインキュベーションした。
【０１３８】
子葉を（抗酸化性の調製物を製造するために、別々に、胚軸の上部分と一緒に、または、新芽全体に含まれて）収穫することを、下記の方法の１つをさらに用いて、基体からの分離および／または新芽からの切り取りによって行った。
【０１３９】
半液体のペースト様ホモジネートを得るための、食品用有機酸（クエン酸）を０．２％ｗ／ｗの濃度で加えることによる収穫物全体のホモジネート化。
【０１４０】
乾燥を、粉末にさらに粉砕されるか、または、顆粒として残される顆粒化された乾燥物を得るために、真空乾燥、凍結乾燥または浸透脱水によって、収穫された新芽組織との直接的な空気接触を伴うことなく行った。
【０１４１】
総抗酸化活性の測定
ＴＥＡＣ（トロロックス当量抗酸化能）アッセイ
この方法は、先に記載されたように行われ［Ｖｉｎｏｋｕｒ，Ｙ．およびＲｏｄｏｖ，Ｖ．（２００６）．Ａｃｔａ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ  ７０９：５３〜６０］、抗酸化性分子が長寿命のＡＢＴＳ・＋（特徴的な吸収を７３４ｎｍに有する青緑色の発色団）を消去する能力に基づいており、この能力がトロロックス（水溶性のビタミンＥアナログ）の能力と比較された。事前に形成されたラジカルカチオンに抗酸化物質を加えることにより、このラジカルカチオンがＡＢＴＳに還元され、これにより、脱色が測定される。ＡＢＴＳ・＋ラジカルカチオンを生成させるための反応混合物は、０．１％の硫酸により酸性化されたエタノール中に０．１５ｍＭの２，２’−アジノ−ビス−（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）および０．０７５ｍＭのラジカル開始剤２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）を含有した。脱色試験を、１０μＬの試験サンプルを１ｍＬのＡＢＴＳ・＋の酸性化エタノール溶液に加えることによってプラスチック製キュベットにおいて行い、室温での１５分のインキュベーションの後で７３４ｎｍにおける光学的濃度として、ブランクサンプルとの比較で測定した。６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸（トロロックス、ビタミンＥの水溶性誘導体）の１ｍＭ溶液を、１ｇの新鮮重量あたりのトロロックスのμＭの単位でトロロックス当量抗酸化能（ＴＥＡＣ）として表した。
【０１４２】
親油性抗酸化活性および親水性抗酸化活性の測定
この手法が、先に記載されたように行われた［Ｖｉｎｏｋｕｒ，Ｙ．およびＲｏｄｏｖ，Ｖ．（２００６）．Ａｃｔａ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ、７０９：５３〜６０］。簡単に記載すると、ＴＥＡＣアッセイの前に、親水性画分および親油性画分を、予備的な乾燥を行うことなく、（図５Ａ〜図５Ｊに詳しく示されるように）ザクロ新芽から抽出した。この手法は、酢酸塩緩衝液、アセトンおよびヘキサンによる新芽の段階的抽出、ならびに、水溶性部分および水不溶性部分の繰り返される分配に基づいていた。最初に、新鮮なザクロ新芽を酢酸塩緩衝液（ｐＨ４．３）においてホモジネート化し、ホモジネートを、３回の連続する一連のアセトンにより抽出／脱水した（それぞれの工程の後で、遠心分離および上清の回収が行われた）。３回の抽出から得られるアセトン−水の上清画分をプールした。アセトン抽出後、脱水されたペレットをヘキサンで３回抽出し、それぞれの上清を集め、プールした。微量の親油性化合物を、ヘキサンとの分配によって、プールされたアセトン−水抽出物から抽出した。この操作から得られる非極性画分を、微量の親水性化合物を抽出するために水との別の分配に供した。分画物をプールした後、親水性画分（アセトン／水抽出物）および親油性画分（ヘキサン抽出物）の２つのサンプルを得た。分配段階まで、１つの新芽サンプルについての抽出工程のすべてが１本の遠心分離用試験管で行われた。分配には、サンプルあたり２本の試験管が必要であった。
【０１４３】
結果
本発明の教示を使用して、１キログラムのザクロ果実につき、約５０ｇの種子が得られ、この種子を使用して、約１５０ｇのザクロ新芽が作製され、このザクロ新芽は、収穫したとき、約１５０ｇのホモジネートの食品調製物または２０グラム〜３０グラムの乾燥された食品調製物をもたらした（図１Ａ〜図１Ｆを参照のこと）。表１（下記）に示されるように、得られた調製物（ホモジネートタイプまたは乾燥されたタイプ）は、親水性抗酸化物質およびフェノール系化合物が、新鮮なザクロ果実の可食部と比較して、または、ザクロ種子と比較して、５０倍に至るまで富化された。これらの調製物はまた、ザクロ果汁の総抗酸化活性を少なくとも２倍高め（図１Ｇ〜図１Ｉを参照のこと）、また、ザクロ果汁と比較して、親水性抗酸化物質、親油性抗酸化物質およびフェノール系化合物の著しくより高いレベルを有した。
【０１４４】
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【０１４５】
本教示に従って作製されたザクロ新芽（図２Ａ〜図２Ｂ）はまた、抗酸化活性が非常に高まることが見出された。新鮮なザクロ新芽の総抗酸化活性はおよそ７５μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量であり、これは、ブロッコリー、ダイズおよびアルファルファの新芽の総抗酸化活性の１０倍〜３０倍であった（図３）。そのうえ、新鮮なザクロ新芽の抗酸化活性はイチゴ果実（ヒトの食事における豊富な抗酸化物質供給源の１つ）の抗酸化活性の３倍〜４倍であった（表２、下記）。ザクロ新芽の総抗酸化活性は他の栄養製造物の総抗酸化活性よりも著しく高く、例えば、オートムギの朝食用シリアル（３．１μＭ  ＴＥ／ｇ）、小麦ふすまタブレット（４．７μＭ  ＴＥ／ｇ）、シバムギタブレット（９．０μＭ  ＴＥ／ｇ）、トマトソース（１．４μＭ  ＴＥ／ｇ）、白ごま（皮を取った後、４．４μＭ  ＴＥ／ｇ）およびヒヨコマメ（２．３μＭ  ＴＥ／ｇ）などよりも著しく高かった。まとめると、本発明のザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物は非常に高い抗酸化活性を含む。
【０１４６】
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【０１４７】
実施例２
ザクロ新芽における抗酸化物質のレベルが成長段階および照明によって影響される
材料および実験手法
ザクロ新芽を得る方法および抗酸化性食品調製物をザクロ新芽から調製する方法
実施例１（上記）に記載される通り。
【０１４８】
抗酸化活性の測定
実施例１（上記）に記載される通り。
【０１４９】
結果
ザクロ新芽の抗酸化活性が、種子から新芽までの成長の経過を通じて変化する。未発芽のザクロ種子は約１０μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量の抗酸化活性を含んでいた（図４Ａ）。抗酸化物質のレベルが種子発芽の早期段階（発根）では低下したが、その後、特に子葉の展開により、約３０μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量に至るまで増大した。新芽が暗所に置かれたままであった場合、抗酸化物質のさらなる蓄積が遅くなるが、照明下では、抗酸化物質のレベルが増大し続け（図４Ａ）、その後、色が、短期間の露光を行い、その後、暗所でインキュベーションした後では緑黄色から赤色に変化し（図４Ｂ〜図４Ｃ）、または、連続した露光の後では緑色に変化した（データは示されず）。
【０１５０】
抗酸化物質の蓄積速度が光の強度に依存した（図４Ａ）。５時間の日光照明が、抗酸化活性における大きな増大（およそ７５μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量、図４Ａ）をザクロ新芽において誘導するために十分であった。同様に、波長が３６５ｎｍの紫外光（ＵＶ−Ａ）または３１２ｎｍの紫外光（ＵＶ−Ｂ）に（光の強度に依存して）３０分間〜３時間さらすことにより、ザクロ新芽における抗酸化物質の蓄積が高まった（データは示されず）。かすかな室内光にさらすこともまた、抗酸化活性における増大（およそ４５μＭ  ＴＥ／ｇ新鮮重量、図４Ａ）を誘導するために十分であった。
【０１５１】
ザクロ新芽の高い抗酸化活性は主として、新芽の子葉に起因していた。ザクロ新芽の使用のための最適な成長段階は、若い子葉を有する新芽であった。しかしながら、抗酸化活性のレベルが新芽成長のより進んだ段階（真の葉の形成）では低下しなかった（データは示されず）。それにもかかわらず、成長のより進んだ段階では、新芽は、食感の変化（特にその木質化に関連づけられる組織荒れ）のために、加工にはあまり適していなかった（データは示されず）。
【０１５２】
実施例３
ザクロ新芽およびザクロ新芽由来の抽出物における活性成分
材料および実験手法
ザクロ新芽を得る方法および抗酸化性食品調製物をザクロ新芽から調製する方法
実施例１（上記）に記載される通り。
【０１５３】
ＨＰＬＣ分析
ＨＰＬＣ装置：フォトダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）と、カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ（２５０ｘ４．６ｍｍ、４μｍ粒子サイズ）とを有するＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ。流速：１．０ｍＬ／分。移動相Ａ：Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水における１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル。移動相プログラム：１８分かけて５％Ｂから１５％Ｂへ、その後、２分かけて６５％Ｂに増大する；５分かけて５％Ｂに戻し、５分間の再平衡化。温度：３０℃、注入体積：１０μＬ、２６０ｎｍでのＵＶ検出。
【０１５４】
結果
表２（本明細書中上記）に詳しく記載されるように、ザクロ新芽に存在する抗酸化物質は、主として親水性抗酸化物質（ＨＡＯＸ）であることが見出された。親水性化合物はアスコルビン酸（ビタミンＣ）およびフェノール系化合物（例えば、没食子酸、エラグ酸、フラボノイドグリコシドおよびプニカラギン類など、表３（下記）を参照のこと）を含んでいた。ＨＰＬＣ分析では、フェノール系画分の主要部分がエラグ酸によって表されることが示された（およそ２３ｍｇ／ｇ乾燥重量、表３（下記）を参照のこと）。これらのフェノール系化合物はそれらの高い生物学的利用能について広く知られており、また、抗菌活性を含む。
【０１５５】
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【０１５６】
親水性抗酸化物質のほかに、ザクロ新芽はまた、親油性抗酸化物質（ＬＡＯＸ）が多いことが見出された（本明細書中上記の表２を参照のこと）。ザクロ新芽における親油性抗酸化物質含有量は、アボカド果実の親油性抗酸化物質含有量に近いか、または、アボカド果実の親油性抗酸化物質含有量よりも高いことが見出され、また、ビタミンＥ（トコフェロール類）およびカロテノイド類を含むことが見出された。
【０１５７】
ザクロ新芽をホモジネート化または乾燥のどちらかによって加工することにより、抗酸化物質の豊富な供給源である調製物がもたらされた。親水性抗酸化物質、親油性抗酸化物質、ザクロオイルおよびフェノール類の最高の供給源が、ザクロ種子を凍結乾燥するプロセスによって記録された（本明細書中上記の表１を参照のこと）。しかしながら、（子葉だけまたは新芽全体の）浸透脱水、ホモジネート化もまた、新鮮なザクロ果実との比較において、または、未発芽の種子との比較において、高いレベルの抗酸化物質およびオイルをもたらした（本明細書中上記の表１を参照のこと）。従って、ザクロ新芽または子葉単独は、天然の親水性抗酸化物質および親油性抗酸化物質の両方が多い食品調製物に役立ち得る。
【０１５８】
まとめると、ザクロ新芽およびザクロ新芽由来の調製物の健康価値が、特に、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、フェノール系化合物（例えば、没食子酸、エラグ酸、プニカラギン類およびフラボノイド類）、ビタミンＥ（トコフェロール類）、カロテノイド類および栄養繊維に関係づけられる。
【０１５９】
本発明はその特定の実施態様によって説明してきたが、多くの別法、変更および変形があることは当業者には明らかであることは明白である。従って、本発明は、本願の請求項の精神と広い範囲の中に入るこのような別法、変更および変形すべてを包含するものである。
【０１６０】
本明細書で挙げた刊行物、特許および特許出願はすべて、個々の刊行物、特許および特許出願が各々あたかも具体的にかつ個々に引用提示されているのと同程度に、全体を本明細書に援用するものである。さらに、本願で引用または確認したことは本発明の先行技術として利用できるという自白とみなすべきではない。節の見出しが使用されている程度まで、それらは必ずしも限定であると解釈されるべきではない。
【図１Ａ−Ｆ】
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【図１Ｇ−Ｉ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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