(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の光損傷を予防及び治療するための医薬組成物であって、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス（ｓｏｌａｎｕｍ）属の植物からの水溶性抽出物を特徴とする医薬組成物であって、該皮膚の光損傷が、以下の症状：皮膚の菲薄化、皮膚萎縮、コラーゲン線維及び弾性線維の低減、弾力線維症、皮膚の弾性の低減、乾燥、しわの形成、皮膚の早期老化、血管の変化、色素の変化、面皰及び嚢胞の１つである、医薬組成物。
【請求項２】
前記水溶性抽出物が少なくとも６０重量％のソラマージン及びソラソニンを含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記水溶性抽出物が６０重量％〜９０重量％のソラマージン及びソラソニンを含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記皮膚の光損傷が以下の症状：皮膚萎縮、弾力線維症、皮膚の弾性の低減及び乾燥の１つを含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
経口剤形において適用される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
局所剤形において適用される、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１１年５月１２日出願の台湾出願第１００１１６６５９号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、ナス属の植物からの水溶性抽出物を含有する、炎症及び皮膚の光損傷を予防及び処置するための医薬組成物に関する。組成物は光防護効果も有し、化粧用組成物として用いることもできる。
【背景技術】
【０００３】
好気性生物においては、好気性呼吸において酸素が利用され、それによって活性酸素種（ＲＯＳ）及びフリーラジカルが生成される。紫外線（ＵＶ）、電離放射線、及びある種の薬物療法又は生体異物も、ＲＯＳ及びフリーラジカルの生成を刺激する。ＲＯＳ及びフリーラジカルは不安定であるため、細胞内の成分（例えば、ＤＮＡ、タンパク質、及び脂質など）と反応する可能性があり、それによって細胞及び組織に対して酸化的損傷をもたらす。
【０００４】
一般的に、生物体における抗酸化酵素は細胞及び組織を酸化的損傷から保護するための相互作用性のネットワークを形成する。酸化ストレスは、ＲＯＳ及びフリーラジカルが細胞又は組織の相互作用性のネットワークによって提供される抗酸化能力を超えた場合に形成する。酸化ストレスは炎症及び光損傷の病理過程において重要な役割を果たすことが報告されている（Ｓｉｍｏｎ  Ｒ．ら（２０１０年）、Ｆｒｅｅ  ｒａｄｉｃａｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４９巻、１６０３〜１６１６頁；Ａｆａｑ  Ｆ．ら（２００６年）、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａ  Ｄｅｍａｔｏｌｏｇｙ、１５巻、６７８〜６８４頁）。
【０００５】
炎症は、細胞又は組織の、病原及び外部のストレス性の刺激に対する防御反応である。炎症の間、損傷部位の細胞又は組織は、ＮＦ−ｋＢによって特定の遺伝子の発現を刺激し、引き続きケモカインの発現が増大し、それによって損傷部位に多核白血球、単球、マクロファージ、及び肥満細胞の蓄積がもたらされる（即ち、浸潤）。動員されたマクロファージは、病原体の表面上に発現されたリポ多糖（ＬＰＳ）によって活性化される。活性化されたマクロファージは炎症誘発性遺伝子（シクロオキシゲナーゼ−２遺伝子、ＣＯＸ−２、及び誘導性一酸化窒素合成酵素遺伝子ｉＮＯＳを含む）の発現を誘発して炎症反応を強化する。さらに、活性化されたマクロファージはＲＯＳ及びフリーラジカルを放出して病原体を死滅させる。しかし、炎症反応が長期化すると、ＲＯＳ及びフリーラジカルの過剰の蓄積により酸化ストレス及び損傷となり、それによって慢性の炎症がもたらされ、最終的に慢性疾患又は癌の可能性が助長される。
【０００６】
光損傷は、生物体の皮膚が紫外線（とりわけ、Ｂ紫外線、ＵＶ−Ｂ）に曝露された場合に生じ、それにより、皮膚の損傷となる。ＵＶ照射に曝露されると、皮膚細胞におけるＲＯＳ及びフリーラジカルの蓄積が加速し、皮膚細胞に対する酸化ストレスが増大し、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の発現を誘発し、それによって酸化的光損傷がもたらされる。酸化的光損傷の症状には、末梢血管拡張、表皮の非薄化、コラーゲン線維及び弾性線維の低減、乾燥、しわの形成、炎症細胞の浸潤、皮膚の早期老化、及び皮膚の病理学的変化が含まれる。
【０００７】
近年、植物由来の植物化学物質又は植物化学予防薬が、抗酸化性の、抗炎症性の性質を有し、光損傷を改善することが証明されている。植物化学物質の例には、緑茶ポリフェノール（ＧＴＰ）、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、ゲニステイン、リスベラトロール、クルクミン、アピゲニン、リコピンなどが含まれる（Ａｄｈａｍｉ  Ｖ．Ｍ．ら（２００８年）、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、８４巻、４８９〜５００頁）。植物化学物質は、望ましくない副作用がなく、臨床適用により安全であることが証明されており、医学研究の分野で注目を集めている。
【０００８】
ナス属の植物には、トゲハリナスビ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｕｎｄａｔｕｍ）と同義のソラナム・インカナムＬ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｉｎｃａｎｕｍ  Ｌ．）、ソラナム・インカナム・ルイズ及びパブ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｉｎｃａｎｕｍ  Ｒｕｉｚ．＆Ｐａｖ．）、ソラナム・コアグランス・フォルスカル（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ  Ｆｏｒｓｓｋａｌ；英語でビターアップル）、ソラナム・インディクム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）、イヌホオズキ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｎｉｇｒｕｍ）（中国語でロンクイ（Ｌｏｎｇ  ｋｕｉ）；英語でブラック・ナイトシェード（ｂｌａｃｋ  ｎｉｇｈｔｓｈａｄｅ））、ソラナム・カプシカストルム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｃａｐｓｉｃａｓｔｒｕｍ）（英語でフォールス・エルサレム・チェリー（ｆａｌｓｅ  ｊｅｒｕｓａｌｅｍ  ｃｈｅｒｒｙ））、ソラナム・キサントカルパム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｘａｎｔｈｏｃａｒｐｕｍ）、ナス（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｍｅｌｏｎｇｅｎａ）、ソラナム・コアグランス（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バレイショ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、ソラナム・ソドメウム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｓｏｄｏｍｅｕｍ）（オーストラリアにおけるソドムのリンゴ（ａｐｐｌｅ  ｏｆ  Ｓｏｄｏｍ））、ソラナム・ツブロサム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｂｕｒｏｓｕｍ）、ソラナム・アキュレアストルム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ａｃｕｌｅａｓｔｒｕｍ）、ロベイラ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｃａｒｐｕｍ）、ソラナム・カシナム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｋｈａｓｉａｎｕｍ）、ソラナム・スアベオレンズ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）、ソラナム・ウポロ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｕｐｏｒｏ）、ソラナム・アブチロイデス（Ｓｏｌａｎｕｍ  ａｂｕｔｉｌｏｉｄｅｓ）、ソラナム・コキネウム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｃｏｃｃｉｎｅｕｍ）、ソラナム・ウングイクラタム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｕｎｇｕｉｃｕｌａｔｕｍ）、ソラナム・ロブスツム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｒｏｂｕｓｔｕｍ）、ソラナム・アングイヴィ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ａｎｇｕｉｖｉ）、ソラナム・プラタニフォリウム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｐｌａｔａｎｉｆｏｌｉｕｍ）、ツノナス（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｍａｍｍｏｓｕｍ）などが含まれる。ナス属からステロイドアルカロイドを抽出することができ、通常ソラソニン及びソラマージンが含まれることが知られている。
【０００９】
本発明の発明者らに発行された米国特許第７，０７８，０６３Ｂ２号は、少なくとも６０重量％のソラソニン及びソラマージンを含むナス属の植物、とりわけソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物、並びに水溶性抽出物を調製するための方法を開示している。この特許はその全文が参照によって本明細書に組み入れられる。
【００１０】
前述の米国特許において、本発明者らは、水溶性抽出物が腫瘍／癌細胞（特に肝臓腫瘍細胞、肺癌細胞、及び乳癌細胞）の増殖を阻害することができることを見出した。本発明において、本発明者らは、意外にも、この水溶性抽出物は、炎症及び皮膚の光損傷を効果的に治癒させ、及び／又は予防することを見出した。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
そこで、第１の態様によると、本発明は、皮膚の光損傷を予防及び処置するための医薬組成物であって、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス属の植物からの水溶性抽出物を含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
第２の態様において、本発明は、皮膚の光損傷を予防及び処置するための方法であって、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス属の植物からの水溶性抽出物をこのような処置を必要とする対象に適用することを含む方法を提供する。
【００１３】
第３の態様において、本発明は、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス属の植物からの水溶性抽出物の、皮膚の光損傷を予防及び処置するための薬物の製造における使用に関する。
【００１４】
第４の態様において、本発明は、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス属の植物からの水溶性抽出物を含む化粧用組成物を提供する。
【００１５】
第５の態様において、本発明は、炎症を予防及び処置するための医薬組成物であって、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス属の植物からの水溶性抽出物を含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
第６の態様において、本発明は、炎症を予防及び処置するための方法であって、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス属の植物からの水溶性抽出物をこのような処置を必要とする対象に適用することを含む方法を提供する。
【００１７】
第７の態様において、本発明は、ソラマージン及びソラソニンを含む、ナス属の植物からの水溶性抽出物の、炎症を予防及び処置するための薬物の製造における使用に関する。
【００１８】
本発明の他の特徴及び利点は、添付の図面を参照にし、以下の本発明の好ましい実施形態の詳しい記載において明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＬＰＳ誘発性炎症反応後のＲＡＷ２６４．７細胞におけるＣＯＸ−２発現を示すウエスタンブロットを示す図である。正常コントロール群における細胞はＬＰＳ及びナス属の植物からの水溶性抽出物で処置せず、病理コントロール群における細胞はＬＰＳ１００ｎｇ／ｍＬで処置した。実験群１〜６は、ＬＰＳ１００ｎｇ／ｍＬとともに様々な濃度（０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、及び５μｇ／ｍＬ）の水溶性抽出物で処置した。
【図２】ＵＶ−Ｂ照射６週後の、正常コントロール群、病理コントロール群、並びに実験群１及び２各々におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚の経表皮水分喪失量（ＴＥＷＬ）を示す図である。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスには、ＵＶ−Ｂ照射及び水溶性抽出物を含めたいかなる処置も与えなかった。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群１において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液で処置した。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。
【図３】実験期間６０週後のＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚組織からの、ＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳの発現を示すウエスタンブロットを示す図である。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスには、ＵＶ−Ｂ照射及び水溶性抽出物を含めたいかなる処置も与えなかった。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。
【図４】最初のＵＶ−Ｂ照射後６０週の終わりの、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスからの背部皮膚組織上のＮＦ−ｋＢ発現の免疫組織化学を示す図である。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスには、ＵＶ−Ｂ照射及び水溶性抽出物を含めたいかなる処置も与えなかった。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。
【図５】６０週の実験期間の終わりの、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスからの背部皮膚組織のトルイジンブルー染色を示す図である。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスには、ＵＶ−Ｂ照射及び水溶性抽出物を含めたいかなる処置も与えなかった。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。矢印は浸潤した肥満細胞の場所を示す。
【図６】６０週の実験期間後の、正常コントロール群、病理コントロール群、及び実験群２におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚組織からの肥満細胞の平均数を示す棒グラフである。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスには、ＵＶ−Ｂ照射及び水溶性抽出物を含めたいかなる処置も与えなかった。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。「＊」は実験群２と正常コントロール群との間でｐ＜０．０５であったことを示している。「＊＊＊」は実験群２と病理コントロール群との間でｐ＜０．０１であったことを示している。「＃＃＃」は病理コントロール群と正常コントロール群との間でｐ＜０．００１であったことを示している。
【図７】６０週の実験期間の間の様々な時間点で形成されたＨＲＳ／Ｊマウスにおける腫瘍の平均数を示すプロットである。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射によって誘発される光損傷を有し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群１におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液で処置した。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。「＊」は実験群２と病理コントロール群との間でｐ＜０．０５であったことを示している。「＊＊」は実験群２と病理コントロール群との間でｐ＜０．０１であったことを示している。
【図８】６０週の実験期間の間の様々な時間点のＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおける腫瘍の平均サイズを示すプロットである。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射によって誘発された光損傷を有し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群１におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液で処置した。実験群２におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液で処置した。「＃」は実験群１と病理コントロール群との間でｐ＜０．０５であったことを示している。「＃＃」は実験群１と病理コントロール群との間でｐ＜０．０１であったことを示している。「＃＃＃」は実験群１と病理コントロール群との間でｐ＜０．００１であったことを示している。「＊＊」は実験群２と病理コントロール群との間でｐ＜０．０１であったことを示している。「＊＊＊」は実験群２と病理コントロール群との間でｐ＜０．００１であったことを示している。
【図９】６０週の実験期間後のＨＲＳ／Ｊ無毛マウスに対するピンチ試験における回復時間を示す棒グラフである。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスには、ＵＶ−Ｂ照射及び水溶性抽出物を含めたいかなる処置も与えなかった。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。「＊＊＊」は実験群２と病理コントロール群との間でｐ＜０．００１であったことを示している。「＃＃＃」は病理コントロール群と正常コントロール群との間でｐ＜０．００１であったことを示している。
【図１０】レゾルシン−フクシン溶液、ワイゲルト鉄ヘマトキシリン、及びヴァンギーソン溶液で染色した背部皮膚組織の弾性線維を示す画像である。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射によって誘発される光損傷を有し、水溶性抽出物で処置しなかった。実験群２において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。矢印は弾性線維の変性の位置を示す。
【図１１】実験期間にわたるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおける腫瘍の平均数を示す図である。トレチノイン群において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、ＡＩＲＯＬバニシングクリームで処置した。ソラナム・インカナムＬゲル群において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。
【図１２】実験期間にわたる経表皮水分喪失量（ＴＥＷＬ）を示すグラフである。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物で処置しなかった。トレチノイン群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射に曝露し、ＡＩＲＯＬバニシングクリームで処置した。ソラナム・インカナムＬゲル群において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。「＊」はトレチノイン群とソラナム・インカナムＬゲル群との間でｐ＜０．０５であったことを示している。
【図１３】実験期間にわたるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスからの背部皮膚の水分含量を示すグラフである。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはＵＶ−Ｂ照射によって誘発される光損傷を有し、水溶性抽出物で処置しなかった。トレチノイン群において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、ＡＩＲＯＬバニシングクリームで処置した。ソラナム・インカナムＬゲル群において、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをＵＶ−Ｂ照射に曝露し、水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルで処置した。「＊」はトレチノイン群とソラナム・インカナムＬゲル群との間でｐ＜０．０５であったことを示している。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
あらゆる先行技術の出版物を本明細書に参照する場合、このような参照は、台湾又はあらゆる他国において、出版物が当技術分野における共通の一般知識の一部分を形成することを承認することにならないことを理解されたい。
【００２１】
本明細書の目的では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の語は「それだけには限定されないが含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ことを意味し、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」の語、及びこれらの変形は対応する意味を有することが明らかに理解されよう。
【００２２】
別段の規定がなければ、本明細書で用いる技術用語及び科学用語は全て、本発明が属する技術分野における技術者が通常理解する意味を有する。当業者であれば、本発明を実践する上で用いることができる、本明細書に記載するものに類似し、又は同等である多くの方法及び材料を認識されよう。実際、本発明は、記載する方法及び材料に決して限定されない。明確にするために、本明細書において以下の定義を用いる。
【００２３】
本発明は、ナス属の植物からの水溶性抽出物を含む、炎症を予防及び処置するための医薬組成物を提供する。水溶性抽出物はソラマージン及びソラソニンを含む。水溶性抽出物がソラマージン及びソラソニンを少なくとも６０重量％含むのが好ましく、ソラマージン及びソラソニンを６０重量％〜９０重量％含むのがより好ましい。
【００２４】
水溶性抽出物を調製するためのプロセスは、米国特許第７，０７８，０６３Ｂ２号において開示されており、以下のステップ：
（ａ）水溶液が得られるように、ナス属の植物の植物材料を、ｐＨ値３〜５の酸性水溶液を用いた抽出処理にかけるステップと、
（ｂ）沈澱物が形成するように、ステップ（ａ）において得られた水溶液のｐＨ値を塩基でｐＨ８〜１０に調節するステップと、
（ｃ）乾燥生成物が得られるように、ステップ（ｂ）において形成した沈澱物を水で洗浄し、引き続き乾燥するステップと、
（ｄ）クロロホルム−アルコール混合液が形成するように、ステップ（ｃ）において得た乾燥生成物をクロロホルムと混合し、引き続き適切な量の１００％アルコールを加えるステップと、
（ｅ）クロロホルムベースの層と非クロロホルムベースの層とを含有する混合液が得られるように、ステップ（ｄ）において形成したクロロホルム−アルコールを、予め決定された水／アルコール比を有する水／アルコール溶液と混合するステップと、
（ｆ）ステップ（ｅ）において得た混合液からクロロホルムベースの層を除去し、引き続き適切な量の水を加えるステップと、
（ｇ）ステップ（ｆ）の得られた混合液から上清を得、引き続き上清を乾燥するステップ（得られた乾燥生成物を水中に直接溶解して黄色がかった澄明で透明な水溶液を形成することができる）とを含む。
【００２５】
ナス属の植物の水溶性抽出物が、ナス属の植物の少なくとも、果実、根、茎、及び葉から得られるのが好ましい。ナス属の植物は予備処理において刻まれている。本発明の好ましい一実施形態において、ステップ（ａ）において用いる植物材料は、ナス属の植物の果実である。
【００２６】
本発明者らは、ある種の因子が前述のプロセスを用いて得た水溶性抽出物におけるソラソニン及びソラマージンの含量及び比率に影響を及ぼし得ることを見出した。これらの因子には、ナス属の植物の種、及び抽出プロセスにおいて用いる植物の部分（単数又は複数）、並びに用いるアルコール及び塩基のタイプが含まれる。したがって、当業者であれば、好適な操作条件と組み合わせて、適切な植物の種を選択することによって、所望の水溶性抽出物を調製することができる。
【００２７】
水溶性抽出物が、ソラナム・インカナムＬ、ソラナム・インディクム、イヌホオズキ、ソラナム・カプシカストルム、ソラナム・キサントカルパム、ナス、ソラナム・コアグランス、バレイショ、ソラナム・ソドメウム、ソラナム・ツブロサム、ソラナム・アキュレアストルム、ロベイラ、ソラナム・カシナム、ソラナム・スアベオレンズ、ソラナム・ウポロ、ソラナム・アブチロイデス、ソラナム・コキネウム、ソラナム・ウングイクラタム、ソラナム・ロブスツム、ソラナム・アングイヴィ、ソラナム・プラタニフォリウム、及びツノナスからなる群から選択されるナス属の植物から得られるのが好ましい。本発明の好ましい一実施形態において、水溶性抽出物はソラナム・インカナムＬから得られる。
【００２８】
予備実験において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのデータは、ナス属からの水溶性抽出物はＬＰＳによって誘発される炎症反応を阻害することができることを示している。また、ＵＶ−Ｂ誘発性の炎症を有する無毛マウスをナス属からの水溶性抽出物で処置した後、肥満細胞の浸潤及び炎症反応の軽減とともに、その皮膚組織上のＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳの発現が顕著に低減することも証明されている。
【００２９】
したがって、本発明は、炎症を予防及び処置するための方法であって、水溶性抽出物又は医薬組成物をそのような処置を必要とする対象に適用することを含む方法を提供する。
【００３０】
本発明が提供する前述の医薬組成物の投与経路は、それだけには限定されないが、経口、局所、及び非経口の経路を含む。
【００３１】
本発明が提供する医薬組成物は、当業者にはよく知られている技術を用いて、経口剤形に調合することができる。経口剤形の例には、それだけには限定されないが、無菌の散剤、錠剤、トローチ剤、菓子錠剤、ペレット剤、カプセル剤、分散可能な散剤又は顆粒剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、スラリー剤などが含まれる。
【００３２】
本発明の医薬組成物は、薬物製造技術において広く用いられる薬学的に許容される担体をさらに含むことができる。
【００３３】
薬学的に許容される担体は、溶媒、バッファー、乳化剤、懸濁化剤、分解剤、崩壊剤、分散剤、結合剤、賦形剤、安定化剤、キレート化剤、保存剤、湿潤剤、滑沢剤、希釈剤、吸収遅延剤、リポソーム、甘味剤、香味剤、着色剤などを含めた１つ又は複数の試薬を含む。薬学的に許容される担体の選択及び量は、当業者の専門知識の範囲内である。
【００３４】
薬学的に許容される担体は、例えば、水、通常の食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、グルコース含有溶液、アルコール（例えば、エタノール、プロパンジオール、グリコール、マンニトールなど）を含有する水溶液、油（例えば、ピーナツ油、オリーブ油、ゴマ油、ヒマシ油、綿実油、ダイズ油など）、グリセロール、有機溶媒、及びリポソームを含めた１つ又は複数の試薬を含む。本発明の一実施形態において、溶媒は水である。
【００３５】
本発明による医薬組成物を、当業者にはよく知られている技術を用いて、それだけには限定されないが、外用剤、発泡錠剤、坐剤などを含む、局所投与に適する剤形に調合することができる。
【００３６】
本発明の好ましい一実施形態において、水溶性抽出物を、当技術分野においてよく知られており、一般的に用いられている基剤と混合することによって、本発明の医薬組成物をゲル形態の外用剤に調合する。
【００３７】
本発明において、適切な基剤は、１つ又は複数の以下の添加剤：水、アルコール、グリコール、炭化水素（例えば、ワセリン及び白色ワセリン）、ロウ（例えば、パラフィン及び黄ロウ）、保存剤、抗酸化剤、界面活性剤、吸収増強剤、安定化剤、ゲル化剤（例えば、ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、微結晶性セルロース、及びカルボキシメチルセルロース）、活性化剤、湿潤剤、匂い吸収剤、芳香剤、ｐＨ調節剤、キレート化剤、乳化剤、密封剤、軟化剤、増粘剤、可溶化剤、浸透増強剤、抗刺激剤、着色剤、並びに噴射剤を含むことができる。これらの添加剤の選択及び量は、当業者の専門知識の範囲内である。
【００３８】
本医薬組成物を投与する投与量及び頻度は以下の因子：処置する疾患の重症度、投与経路、並びに処置する対象の体重、年齢、身体状態、及び反応に応じて変化させることができる。例えば、本発明にしたがって局所投与するための医薬組成物の１日量は、病変面積１ｃｍ２あたり１０〜２０ｍｇ、１日あたり１回から６回であってよい。経口投与のための本医薬組成物の投与量は、１〜３０ｍｇ／ｋｇ、１日１回〜４回であってよい。
【００３９】
ナス属の植物からの水溶性抽出物は、無毛マウスに対するＵＶ−Ｂ誘発性の皮膚の光損傷によって誘発される皮膚の病理学的変化を軽減することが証明されている。さらに、これは皮膚の弾性及び日光弾力線維症を効果的に改善し、同時に水分保持能力を維持することができる。
【００４０】
したがって、本発明は、上記に記載した通り、ナス属の植物からの水溶性抽出物を含む、皮膚の光損傷を処置及び／又は予防するための医薬組成物を提供する。本発明はまた、前述の水溶性抽出物又は医薬組成物を、そのような処置を必要とする対象に適用することを含む、皮膚の光損傷を予防及び処置するための方法を提供する。
【００４１】
本発明において、「皮膚の光損傷」の語は、皮膚を太陽光又はＵＶ光線（特に、ＵＶ−Ｂ）に曝露することによって引き起こされる皮膚の損傷を示す。皮膚の光損傷には、それだけには限定されないが、皮膚の菲薄化、皮膚萎縮、コラーゲン線維及び弾性線維の低減、弾力線維症、皮膚の弾性の低減、乾燥、しわの形成、炎症細胞の浸潤、皮膚の早期老化、血管の変化（例えば、びまん性紅斑、斑状出血、又は毛細血管拡張）、色素の変化（例えば、黒子、そばかす、色素沈着低下、又は色素沈着過剰）、面皰、嚢胞、並びに皮膚の病理学的変化が含まれる。
【００４２】
本発明によると、投与経路、投与量、及び薬学的に許容される担体は、炎症を予防及び処置するための医薬組成物において用いられるものと同様である。本発明の好ましい一実施形態において、医薬組成物を、皮膚上に投与するための局所形態に調合する。
【００４３】
水溶性抽出物は皮膚の光損傷を予防／保護することから、水溶性抽出物を化粧用成分として用いて化粧用組成物を調製することができることが予想できる。
【００４４】
したがって、本発明は、上記に記載した通り、水溶性抽出物を含む、光防護効果を有する化粧用組成物を提供する。
【００４５】
本発明において、「光防護」の語は、太陽又は紫外線によって引き起こされる、有害な臨床効果、組織学的効果、及び免疫学的効果を阻止又は軽減することを示す。これらの効果には、急性反応（例えば、紅斑及び炎症）並びに慢性効果（例えば、弾力線維症及びしわの形成）が含まれる。
【００４６】
本発明によると、化粧用組成物は、化粧品製造技術において広く用いられている化粧用に許容される補助剤をさらに含む。
【００４７】
許容される補助剤は、溶媒、ゲル化剤、活性化剤、保存剤、抗酸化剤、スクリーニング剤、キレート化剤、界面活性剤、着色剤、増粘剤、充填剤、芳香剤、及び匂い吸収剤を含めた１つ又は複数の試薬を含む。これら添加剤の選択及び量は、当業者の専門知識の範囲内である。
【００４８】
本発明が提供する化粧用組成物は、当業者にはよく知られている技術を用いて、スキンケア製品、ヘアケア製品、又はメーキャップ製品の形態に調製することができる。この形態には、それだけには限定されないが、水溶液、エマルジョン、ゲル、軟膏、クリーム、マスク、パッチ、粉末、エアロゾル、スプレー、ローション、日焼け止め、及び他の身体清浄製品が含まれる。
【００４９】
本発明の化粧用組成物は、以下の薬剤：ホワイトニング剤、湿潤剤、殺菌剤、紫外線吸収剤、にきび抑制剤、鎮痒剤、過剰角質溶解防止剤、乾癬治療薬、老化防止剤、抗しわ剤、抗脂漏剤、セルフタニング剤、及び創傷治癒剤とともに用いることができる。これら薬剤の選択及び量は、当業者の専門知識の範囲内である。
【実施例】
【００５０】
実験材料
１．ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物及び水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液の調製
米国特許第７，０７８，０６３Ｂ２号の例１において開示されている手順に基づいてソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物を調製した。詳しくは、ソラナム・インカナムＬの熟した果実５００ｇをすりつぶし、引き続き純水１０００ｍｌを加えた。得られた混合水溶液に、９９．５％酢酸を滴下添加してｐＨ値を４．０に調節し、引き続き室温で１２時間振盪した。混合水溶液を遠心分離することによって上清を得、それに３３％ＮＨ４ＯＨ塩基性溶液を滴下添加して上清のｐＨ値を９．０に調節し、沈澱物を形成した。４５００ｒｐｍで遠心分離を行うことによって（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ａｖａｎｔｉ  Ｊ−２５、ＪＡ−１４  Ｒｏｔｏｒ）沈澱物を得、沈澱物を水で洗浄し、引き続き４５００ｒｐｍで遠心分離することによってその中に存在する残余の塩基性溶液を除去した。このようにして得た沈澱物を蒸留水中に懸濁し、凍結乾燥にかけて（Ｖｉｒｔｉｓ、Ｆｒｅｅｚｅｍｏｂｉｌｅ  １２ＥＳ）乾燥粉末５ｇを得た。
【００５１】
乾燥粉末２ｇを、試薬用クロロホルム５０ｍｌ中に溶解し、引き続き１００％メタノール４０ｍｌを加え、振盪して均一な懸濁液を形成した。４５００ｒｐｍで遠心分離し、又はろ過することによって上清を得た。メタノール：水（１：１）溶液７０ｍｌを上清に加え、十分に混和した。得られた混合液を１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。得られた上清を取り出し、それに蒸留水１２０ｍｌを加え、十分に振盪した。一方、上清は不透明になった。上清を１２０００ｒｐｍで１０分間さらに遠心分離して沈澱物を除去した。得られた上清を５５℃減圧下で減圧濃縮にかけてメタノールを除去し、引き続き凍結乾燥して水溶性抽出物の乾燥粉末を得た。
【００５２】
水溶性抽出物を滅菌水中に溶解して、以下に記載する実験においてさらに用いるためのソラナム・インカナムＬ溶液を得た。
【００５３】
２．水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルの調製
ゲル化剤として用いられたものであり、Ｌｕｂｒｉｚｏｌ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌ，Ｉｎｃ．、ＫＹ４０２５８、米国から市販されているｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ  ４ｇを純水５０ｇ中に溶解し、引き続きプロピレングリコール３０ｇ、及び「実験材料」の下の「１．ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物及び水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液の調製」のセクションから得た水溶性抽出物の乾燥粉末７ｇを逐次的に添加し、十分に混和した。混合液を５０℃〜６０℃の温度の加熱容器中２０分間加熱し、引き続き室温で冷却した。冷却した混合液にトリエンタノールアミン（ｔｒｉｅｎｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）を加えてｐＨを７．０±０．５に調節した。引き続き混合液の全重量が１００ｇに到達するまで水を加え、それによって水溶性抽出物７％（ｗ／ｗ）を含有するゲル（以降、ソラナム・インカナムＬゲルと呼ぶ）を得た。
【００５４】
３．動物モデル
ＨＲＳ／Ｊ無毛マウス（６〜８週齢、体重２０〜２２ｇ）を、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、米国）から購入した。マウスを１２時間／１２時間の明／暗サイクル、温度２１〜２２℃、及び湿度３０〜７０％の室内に維持した。食餌及び水は十分であり、マウスはいつでも摂取できた。動物実験は全て、アメリカ国立衛生研究所（ＮＩＨ）の実験動物のケア及び使用のためのガイド（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｏｆ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ））にしたがって行った。
【００５５】
全般的方法
１．タンパク質生成物の分析
本発明におけるタンパク質の分析に、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及びウエスタンブロットを用いた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブロット用の装置及び試薬は以下の通りである。
ａ．垂直式電気泳動システム（Ｈｏｅｆｅｒ  ＳＥ６０００、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に用いた。
ｂ．ポリビンビリデンジフルオリド（ｐｏｌｙｖｉｎｖｙｌｉｄｅｎｅ  ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ）膜（ＰＶＤＦ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及び半乾燥の吸い取り紙（Ｈｏｅｆｅｒ  ＴＥ７０Ｘ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をタンパク質の移動に用いた。
ｃ．ウエスタンブロット法において用いた１次抗体及び２次抗体を表１に列挙する。
ｄ．Ｉｍｍｏｂｉｌｉｏｎ  ＴＭ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  ＨＲＰ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＷＢＫＬＳ０５００）を用いた化学発光染色によってタンパク質を可視化し、引き続きオートラジオグラフィーフィルム（Ｋｏｄａｋ  Ｂｉｏｍａｘ、Ｋｏｄａｋ、カタログ番号１７８８２０７）上で検出した。
【表１】
0005744770.tif 000002
【００５６】
２．炎症及び光損傷の誘発
各ＨＲＳ／Ｊマウスの背部皮膚を、週３回１４週間ＵＶ−Ｂ照射に曝露して炎症反応及び光損傷を誘発した。ＵＶ−Ｂ照射は、６×８Ｗ  Ｔ−８Ｍ  ＵＶ−Ｂランプ（３１２ｎｍ）を装着したＢＬＸ−３１２紫外線架橋剤（ＢＩＯ−ＬＩＮＫ、Ｖｉｂｅｒ  Ｌｏｕｒｍａｔ、フランス）を用いて行った。各曝露に対するＵＶ−Ｂ照射の１回の線量、１週間のＵＶ−Ｂ線量（線量／週）、及び累積線量を表２に列挙する。
【表２】
0005744770.tif 000003
【００５７】
３．組織切片
組織（室温で収集）を、少なくとも１２時間、ＰＢＳ中４％パラホルアルデヒド（ｐａｒａｆｏｒａｌｄｅｈｙｄｅ）中で固定し、引き続きエタノールで脱水した。脱水した組織をパラフィン中に包埋し、スライスして縦方向の切片を得た。
【００５８】
４．統計分析
結果を、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として示す。統計上のデータ分析は全て、スチューデントのｔ検定（両側）によって行った。ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなす。
【００５９】
（例１）
ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物のｉｎ  ｖｉｔｒｏの抗炎症効果の評価
リポ多糖（ＬＰＳ）誘導性炎症に供したマウスマクロファージ細胞系ＲＡＷ２６４．７を用いて、ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物の抗炎症効果を決定した。
【００６０】
実験手順
ＲＡＷ２６４．７細胞（アメリカ培養細胞系統保存機関、ＡＴＣＣから購入、ＴＩＢ−７１）を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、及び４．５ｇ／Ｌグルコースを含む（ピルビン酸ナトリウムを含まない）ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ＨｙＣｌｏｎｅ  ＳＨ３００２２．０１、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ、米国）中、１×１０６細胞／ウエルの密度で接種し（６ウエルプレート）、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター中でインキュベートした。細胞を３群：正常コントロール群、病理コントロール群、並びに実験群（実験群１、２、３、４、５、及び６）に分割した。インキュベート７２時間後、病理コントロール群を、ＬＰＳ（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型０１１１：Ｂ４、Ｓｉｇｍａ）１００ｎｇ／ｍＬを含有する新鮮ＤＭＥＭ培地中のインキュベートに変更し、実験群をＬＰＳ１００ｎｇ／ｍＬ、並びに「実験材料」の下の「１．ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物及び水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液の調製」のセクションから得た水溶性抽出物の様々な濃度を含有する新鮮ＤＭＥＭ培地中でインキュベートした。実験群１、２、３、４、５、及び６に対する水溶性抽出物の濃度は、それぞれ０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、及び５μｇ／ｍＬであった。正常コントロール群は、１０％ＦＢＳ、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、及び４．５ｇ／Ｌグルコースを含む（ピルビン酸ナトリウムを含まない）ＤＭＥＭ中で依然としてインキュベートした。
【００６１】
インキュベート（３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター中）２４時間後、各ウエルの培地を除去し、引き続き１００μＬ  Ｔ−ＰＥＲ試薬（ＰＩＥＲＣＥより購入）を加え、混和して細胞混合液を得た。細胞混合液を遠心管中に配置し、５分間振盪し、引き続き３０分間氷上で冷却した。引き続き、細胞混合液を４℃、１４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、さらなる分析用のタンパク質試料として上清を回収した。
【００６２】
得られたタンパク質試料を、「全般的方法」の下の「１．タンパク質生成物の分析」のセクションに記載されている方法を用いて、ＣＯＸ−２ウエスタンブロット分析にかけた。内部コントロールとしてβ−アクチンを用いた。
【００６３】
結果
図１は、ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＣＯＸ−２発現を示すウエスタンブロットである。図１に示す通り、ＣＯＸ−２発現は、正常コントロール群と比べた場合、病理コントロール群において著しく増大し、ＲＡＷ２６４．７細胞においてＬＰＳによる炎症の誘発が上首尾であったことを示している。病理コントロール群と比べた場合、実験群１〜６においてＣＯＸ−２の発現の低下が観察され、発現の低下は、より高濃度の水溶性抽出物を加えた場合により明らかである。これらのデータは、ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＬＰＳ誘発性の炎症を阻害することができ、水溶性抽出物の抗炎症反応に対する効果は用量依存性であることを実証している。
【００６４】
（例２）
ソラナム・インカナムＬ溶液及びソラナム・インカナムＬゲルのＵＶ−Ｂ誘導性炎症を有する無毛マウスに対する治療効果の評価
実験手順
ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスを、正常コントロール群、病理コントロール群、並びに２つの実験群（即ち、実験群１及び２）（ｎ＝４／群）に無作為にグループ分けした。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスはいかなるＵＶ−Ｂ照射も与えなかった。病理コントロール群及び２つの実験群におけるマウスは、「全般的方法」の下の「２．炎症及び光損傷の誘発」のセクションに記載した通りの手順を用いて炎症を誘発した。
【００６５】
ＵＶ−Ｂ照射の開始から始めて、実験群１におけるＨＲＳ／Ｊマウスに、「実験材料」の下の「１．ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物及び水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液の調製」のセクションに記載されている通りに調製した、ソラナム・インカナムＬ溶液を経口投与した。これらのマウスに、１４週間（ｗｋ）の期間の間、１日１回（１５００ｍｇ／ｋｇ）、週７回、ソラナム・インカナムＬ溶液を投与し、６０週間連続して観察した（即ち、実験期間６０週）。実験群２における各ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスのＵＶ−Ｂ曝露した背部皮膚上に、「実験材料」の下の「２．水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルの調製」のセクションから得たソラナム・インカナムＬゲルを適用した。ゲルを、１４週間の期間の間、１日１回（投与量：１ｃｍ２あたりゲル１０〜２０ｍｇ）、週５回適用し、６０週間観察した。正常コントロール群及び病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスは、ソラナム・インカナムＬ溶液でもソラナム・インカナムＬゲルでも処置しなかった。
【００６６】
ＵＶ−Ｂ照射６週後、ＨＲＳ−Ｊ無毛マウスを、以下に列挙するアイテムＡ及びＢに対して分析した。さらに、背部皮膚組織を、６０週の実験期間後、外科はさみを用いて、正常コントロール群、病理コントロール群、及び実験群２におけるマウスから回収した。これらの組織を、以下に列挙するアイテムＣからＥに対して分析した。
【００６７】
Ａ．臨床徴候の診断
ＵＶ−Ｂ照射６週後、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスを、あらゆる炎症の徴候、例えば、掻痒、発赤などに対して観察した。
【００６８】
Ｂ．経表皮水分喪失量（ＴＥＷＬ）の分析
ＵＶ−Ｂ照射６週後、各群からの各ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚上で、蒸発計（Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ２０１Ｒ、Ｃｏｕｒａｇｅ＆Ｋｈａｚａｋａ、Ｃｏｌｏｇｎｅ、ドイツ）を用いてＴＥＷＬを評価した。
【００６９】
Ｃ．ＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳのウエスタンブロット分析
皮膚組織０．５ｇを、Ｔ−ＰＥＲ組織タンパク質抽出試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号７８５１０）に加え、引き続きホモジナイザー（Ｂｉｏｓｐｅｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓから購入）によって組織を破壊した。十分にホモジナイズした生成物を、４℃で１０時間、１５０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を、タンパク質分析用に回収した。
【００７０】
単離したタンパク質をさらに用いて、「全般的方法」の下の「１．タンパク質生成物の分析」のセクションにおいて記載した手順にしたがって、ウエスタンブロット分析によってＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳを検出した。ＧＡＰＤＨを内部コントロールとして用いた。
【００７１】
Ｄ．ＮＦ−ｋＢの免疫組織化学染色
皮膚組織を、「全般的方法」の下の「３．組織切片」のセクションにおいて記載した手順を用いて、厚さ６μｍに切断した。この組織切片に、１次抗体ウサギ抗ＮＦ−ｋＢモノクローナル抗体及びビオチンとコンジュゲートしたロバ抗ウサギＩｇＧ抗体（ＤａｒｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ）を用いて免疫組織化学染色を行った。染色した組織を１００倍から４００倍の倍率の下、光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５１、日本）下で検査し、デジタルカメラ（Ｏｌｙｍｐｕｓ、ＤＰ５０、日本）を用いて写真撮影した。
【００７２】
Ｅ．肥満細胞の組織化学染色
皮膚組織を、「全般的方法」の下の「３．組織切片」のセクションにおいて記載した手順を用いて、厚さ６μｍに切断した。この組織切片に、トルイジンブルー（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｔ３２６０）で組織化学染色を行った。染色した組織切片を１００倍から４００倍の倍率で、光学顕微鏡下で検査し、デジタルカメラ（Ｏｌｙｍｐｕｓ、ＤＰ５０、日本）で写真撮影した。組織切片５個を無作為に選択し、各組織切片において無作為に観察視野１０個を計数することによって、肥満細胞数の定量化を行った。データを、平均値±ＳＥＭ（ｐ＜０．０５を統計的に有意とする）として示す。
【００７３】
結果
Ａ．臨床徴候の診断
病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスは、正常コントロール群に比べて炎症の症状を示し、ＵＶ−Ｂ照射はＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおける炎症反応を上首尾に誘発したことを示唆していた。実験群１及び２は、病理コントロール群に比べた場合、炎症反応において有意な低減を示した。これらのデータは、ソラナム・インカナムＬ溶液及びソラナム・インカナムＬゲルには抗炎症効果があることを示唆している。
【００７４】
Ｂ．経表皮水分喪失量（ＴＥＷＬ）の分析
図２は、正常コントロール群、病理群、並びに実験群１及び２におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚のＴＥＷＬの結果を示すグラフである。病理群からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスは、正常コントロール群に比べてＴＥＷＬレベルの増大を示した。これは、ＵＶ−Ｂ照射はＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおいてＴＥＷＬを誘発し、角質層のバリア機能を損傷したことを示している。実験群１及び２からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスは、病理コントロール群に比べた場合ＴＥＷＬにおける著しい低下を示した。全体で、これらのデータは、ソラナム・インカナムＬ溶液及びソラナム・インカナムＬゲルが角質層の損傷及びＵＶ−Ｂ照射によって引き起こされる炎症を改善することができることを示唆している。
【００７５】
Ｃ．ＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳのウエスタンブロット分析
図３は、正常コントロール群、病理群、及び実験群２におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスからの背部皮膚のＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳのウエスタンブロット分析である。病理コントロール群からの皮膚組織は、正常コントロール群に比べてＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳの発現の増大を示し、ＵＶ−Ｂ照射はＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおける炎症反応を誘発することを示唆していた。病理コントロール群と比べた場合、実験群２において、ＮＦ−ｋＢ、ＣＯＸ−２、及びｉＮＯＳレベルの著しい低減が観察された。全体で、これらのデータは、ソラナム・インカナムＬゲルには抗炎症効果があることを示唆している。
【００７６】
Ｄ．ＮＦ−ｋＢの免疫組織化学染色
図４は、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスから得た背部皮膚組織に対するＮＦ−ｋＢ発現の免疫組織化学染色を示す。図４において示す通り、病理コントロール群は、正常コントロール群に比べてＮＦ−ｋＢにおける発現レベルの増大を示し、ＵＶ−Ｂ照射はＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおいて炎症反応を誘発することを示唆していた。ソラナム・インカナムＬゲルをＨＲＳ／Ｊ無毛マウスに適用すると、実験群２におけるように、ＮＦ−ｋＢの発現は、病理コントロール群に比べた場合、有意な低減を示した。全体で、これらのデータは、本発明のソラナム・インカナムＬゲルには抗炎症効果があることを示唆している。
【００７７】
Ｅ．肥満細胞の組織化学染色
図５は、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚組織から得た肥満細胞の組織化学染色を示す。図５において示す通り、トルイジンブルー染色は、病理コントロール群からの背部皮膚組織における広範囲にわたる肥満細胞の浸潤を明らかにしていた。この現象は、正常コントロール群において、見かけ上明白ではなかった。明らかに、肥満細胞の浸潤は、病理コントロール群に比べて、実験群２において著しく低減した。
【００７８】
正常コントロール群、病理群、及び実験群２の各々における肥満細胞数の比較を図６に示す。実験群２は、病理コントロール群に比べた場合、肥満細胞数の有意な低減を示した。これらのデータは、ソラナム・インカナムＬゲルは、ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおいてＵＶ−Ｂ照射によって誘発される炎症効果を改善することを示唆している。
【００７９】
（例３）
ＵＶ−Ｂ誘発性の光損傷を有する無毛マウスに対する、ソラナム・インカナムＬ溶液及びソラナム・インカナムＬゲルの治療効果の評価
実験手順
ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスを、正常コントロール群、病理コントロール群、並びに２つの実験群（即ち、実験群１及び２）に無作為にグループ分けした（ｎ＝４／群）。正常コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスには、いかなるＵＶ−Ｂ照射処置も与えなかった。「全般的方法」の下の「２．炎症及び光損傷の誘発」のセクションに記載した通り、病理コントロール群及び２つの実験群からのマウスに炎症を誘発した。
【００８０】
ＵＶ−Ｂ照射の開始から始めて、実験群１におけるＨＲＳ／Ｊマウスにソラナム・インカナムＬ溶液を経口投与したが、この溶液は「実験材料」の下の「１．ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物及び水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬ溶液の調製」のセクションにおいて記載した通りに調製した。これらのマウスに、ソラナム・インカナムＬ溶液を、１４週の期間の間、１日１回（１５００ｍｇ／ｋｇ）、週７回投与し、６０週間連続して観察した（即ち、実験期間６０週）。実験群２において、「実験材料」の下の「２．水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルの調製」のセクションにしたがって調製したソラナム・インカナムＬゲルを、ＵＶ−Ｂ照射を行ったマウスの背部皮膚に適用した。ゲルは、１４週の期間の間、１日１回（投与量：１ｃｍ２あたりゲル１０〜２０ｍｇ）、週５回適用し、６０週間観察した。正常コントロール群及び病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスは、ソラナム・インカナムＬ溶液でもソラナム・インカナムＬゲルでも処置しなかった。
【００８１】
６０週の実験期間の間の２６、３５、３８、４１、５２、５６、及び６０週の終わりに、病理コントロール群並びに実験群１及び２におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスからの背部皮膚に、アイテムＡ（以下を参照されたい）における分析を行った。さらに、６０週の実験期間の後、正常コントロール群、病理コントロール群、及び実験群２におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスから得た背部皮膚を、以下に記載するアイテムＢにおける分析を行った。病理コントロール群及び実験群２からのマウスの背部皮膚組織は、外科はさみを用いて得たものであり、以下に記載するアイテムＣにおける分析を行った。
【００８２】
Ａ．皮膚腫瘍の形成の分析
病理コントロール群並びに実験群１及び２からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚上の腫瘍数を、肉眼によって観察した。腫瘍サイズを、デジタルノギス（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ、ＮＴＤ１５Ｐ−６”ＣＸ）を用いて記録した。腫瘍数及び腫瘍体積に対するデータを、平均値±ＳＥＭとして示す（ｐ＜０．０５を統計的に有意とする）。
【００８３】
Ｂ．皮膚の弾性の評価
皮膚の弾性を、Ｋ．  Ｔｓｕｋａｈａｒａら（２００５年）、Ｂｉｏｌｏ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、２８巻（１２）、２３０２〜２３０７頁に言及されているピンチ試験を参照することによって評価した。簡潔に述べると、正常コントロール群、病理コントロール群、及び実験群２からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスをプラットホーム上に配置した。マウス身体の中心線の背部皮膚をできるだけ多く上向きにつまみ（マウスを持ち上げずに）、次いで離した。つまんだ皮膚がもとの状態に跳ね返る回復時間を測定した。
【００８４】
Ｃ．弾性線維の組織化学染色
６０週の実験期間の後、病理コントロール群及び実験群２におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスから得た皮膚組織を、「全般的方法」の下の「３．組織切片」のセクションにおいて記載した手順を用いて、厚さ６μｍに切断した。組織切片を、レゾルシン−フクシン溶液、ワイゲルト鉄ヘマトキシリン、及びヴァンギーソン溶液（全てＭｕｔｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄより購入）で染色した。染色した組織を、１００倍〜４００倍の倍率の光学顕微鏡下で観察し、デジタルカメラ（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＤＰ５０、日本）で記録した。
【００８５】
結果
Ａ．皮膚腫瘍形成の分析
６０週の実験期間の経過にわたる腫瘍数を図７に示す。６０週の実験期間の経過にわたる腫瘍サイズの測定を図８に示す。
【００８６】
図７及び図８に示す通り、３８週に、病理コントロール群からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚は、腫瘍の発達の加速を示した。それとは反対に、６０週の実験期間の間、実験群１及び２において腫瘍数及び腫瘍サイズのより緩慢な増大が観察された。これらのデータは、ソラナム・インカナムＬ溶液及びソラナム・インカナムＬゲルは、ＵＶ−Ｂ照射によって引き起こされる光損傷を改善し、光損傷によって引き起こされる皮膚の病理学的変化を軽減することができることを示唆している。
【００８７】
Ｂ．皮膚の弾性の評価
正常コントロール群、病理コントロール群、及び実験群２からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスに対して、６０週の実験期間の後、ピンチ試験を行った。図９に示す通り、病理コントロール群においてより長い回復時間が必要とされるので、病理コントロール群は、正常コントロール群に比べて弾性の低減を示し、ＵＶ−Ｂ曝露はＨＲＳ／Ｊ無毛マウスにおいて光損傷を誘発することを示唆していた。ソラナム・インカナムＬゲルを実験群２における無毛マウスの背部皮膚に適用すると、病理コントロール群に比べて皮膚の弾性が大幅に増大した。これらの実験からのデータは、ソラナム・インカナムＬゲルはＵＶ−Ｂによって引き起こされる光損傷を軽減し、皮膚の弾性を改善することができることを示唆している。
【００８８】
Ｃ．弾性線維の組織化学染色
図１０に示す通り、病理コントロール群において、弾性線維の変性の出現が著しく増大した。一方、実験群２における無毛マウスの背部皮膚にソラナム・インカナムＬゲルを適用すると、弾性線維の変性の出現は減少し、線維は長く、そのままであり続けた。これらの実験からのデータは、本発明のソラナム・インカナムＬゲルは、ＵＶ−Ｂ曝露によって引き起こされる光損傷を軽減し、太陽光の弾力線維症を改善することができることを示唆している。
【００８９】
全体で、上記の実験からのデータは、ソラナム・インカナムＬからの水溶性抽出物は光損傷を予防し、光損傷によって引き起こされる皮膚上の病理学的変化を改善することができることを支持している。
【００９０】
（例４）
ＵＶ−Ｂ誘発性光損傷の予防に対するソラナム・インカナムＬゲルとトレチノインとの効果の比較
実験手順
ＨＲＳ／Ｊ無毛マウスを、病理コントロール群、トレチノイン群、及びソラナム・インカナムＬゲル群に無作為にグループ化した（ｎ＝５／群）。各群からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスに対する光損傷の誘発を、「全般的方法」の下の「２．炎症及び光損傷の誘発」のセクションにしたがって行った。
【００９１】
ＵＶ−Ｂ照射の開始から始まり、トレチノイン群におけるＨＲＳ／ＪマウスにＡＩＲＯＬバニシングクリームを適用した（光損傷を処置するための従来の有効成分であるトレチノインを０．０５％含有する、局所投与量：１ｃｍ２あたりＡＩＲＯＬバニシングクリーム１０ｍｇから２０ｍｇ）。このクリームを、１４週間、１日１回、週５回適用し、３５週間連続して観察した（即ち、実験期間３５週）。ソラナム・インカナムＬゲル群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚に、「実験材料」の下の「２．水溶性抽出物を含有するソラナム・インカナムＬゲルの調製」のセクションから得たソラナム・インカナムＬゲルを適用した。このゲルを、１４週の期間の間、１日１回（投与量：１ｃｍ２あたりゲル１０〜２０ｍｇ）、週５回適用し、３５週間観察した。病理コントロール群におけるＨＲＳ／Ｊ無毛マウスは水溶性抽出物で処置しなかった。
【００９２】
トレチノイン群及びソラナム・インカナムＬゲル群からのマウスの背部皮膚上の腫瘍数を、例３のアイテムＡ（皮膚腫瘍形成の分析）において言及した方法に基づいて、０週（即ち、ＵＶ−Ｂ照射に対する曝露の前）、並びに３５週の実験期間の間の２、７、１２、１７、２２、２７、及び３２週の終わりに定量した。さらに、病理コントロール群、トレチノイン群、及びソラナム・インカナムＬゲル群からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスを、例２のアイテムＢ（経表皮水分喪失量の分析）において言及した通りに分析にかけ、０週、並びに３５週の実験期間の間の５、１０、１５、２０、２５、及び３０週の終わりにアイテムＡにしたがって分析にかけた。
【００９３】
Ａ．皮膚中の水分含量の試験
皮膚中の水分含量の決定を、蒸発計（Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ  ２０１Ｒ、Ｃｏｕｒａｇｅ＆Ｋｈａｚａｋａ、Ｃｏｌｏｇｎｅ、ドイツ）を用いて検査した。
【００９４】
（１）皮膚腫瘍形成の分析
図１１に示す通り、１７週目に、トレチノイン群は、平均腫瘍数における劇的な増大を示した。それとは反対に、ソラナム・インカナムＬゲル群からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスは、平均腫瘍数における緩慢な増大を示した。これらのデータは、本発明のソラナム・インカナムＬゲルは、トレチノイン群と比べた場合、ＵＶ−Ｂによって引き起こされる光損傷をより効果的に改善することができ、皮膚の病理学的変化を軽減することを示唆している。
【００９５】
（２）経表皮水分喪失量（ＴＥＷＬ）の評価
図１２に示す通り、３５週の実験期間の間、病理群及びトレチノイン群と比べると、ソラナム・インカナムＬゲル群におけるＴＥＷＬ率は低かった。詳しくは、３５週の実験期間の間の２０、２５、及び３０週の終わりに、病理コントロール群とソラナム・インカナムＬゲル群との間のＴＥＷＬに統計的な有意差が存在した（ｐ＜０．０５）。これらのデータは、本発明のソラナム・インカナムＬゲルは、ＵＶ−Ｂ照射によって引き起こされる光損傷を効果的に軽減し、光損傷によって引き起こされる角質層に対する損傷を改善することができることを示唆している。
【００９６】
（３）皮膚中の水分含量の評価
各群（病理コントロール群、トレチニオン（ｔｒｅｔｉｎｉｏｎ）群、及びソラナム・インカナムＬゲル群）からのＨＲＳ／Ｊ無毛マウスの背部皮膚における水分含量を、３５週の実験期間にわたって様々な時間点で決定した。図１３に示す通り、ソラナム・インカナムＬゲルで処置したマウスは、病理コントロール群及びトレチニオン群に比べた場合、より高い皮膚の水分含量を有していた。詳しくは、２５週の終わりに、ソラナム・インカナムＬゲルで処置したマウスは、病理群又はトレチノイン群に比べて統計的に有意な水分含量を示した。これらのデータは、本発明のソラナム・インカナムＬゲルは、ＵＶ−Ｂによって引き起こされる光損傷を軽減するのにより効果的であり、トレチニオン処置よりも皮膚の水分の喪失を改善することを示唆している。
【００９７】
全体で、本発明の水溶性抽出物は、光損傷の予防、光損傷によって引き起こされる病理学的変化の改善、及び水分保持能力の維持を、しばしば光損傷の処置及び予防に臨床的に用いられるもの（例えば、トレチニオン）よりも効果的に示すことが証明された。
【００９８】
本明細書において引用される全ての特許及び参考文献、並びにそれらに記載されている参照は、その全文が参照によって本明細書に組み入れられる。抵触の場合には、本明細書が、定義を含めて優勢であろう。
【００９９】
本発明を、最も実際的で好ましい実施形態とみなされるものに関連して記載してきたが、本発明は開示する実施形態に限定されず、最も幅広い解釈及び同等の取決めの精神及び範囲内に含まれる様々な取決めを網羅するものと理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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