(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
未精製のアルガトロバンを含有する反応塊を攪拌可能な残留物に濃縮する工程と、
未精製のアルガトロバンを含有する残留物を有機溶媒で溶解し、イソプロパノール及びノルマル−プロパノールから選択される結晶化用溶媒媒体で有機溶液を処理することによる結晶化によって、精製したアルガトロバンを分離する工程と、
先の工程で単離された精製アルガトロバンを、メタノール及び水の混合溶液から、脱色炭を加え、還流温度で加熱し、次いで炭素をろ過し、１１〜１７時間で還流温度から１５〜２５℃の温度に制御しながら冷却することにより、再結晶させることで、アルガトロバン一水和物を分離する工程と
を少なくとも備えることを特徴とするアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項２】
前記結晶化用溶媒媒体がイソプロパノールである、請求項１に記載のアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項３】
(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸から、メタノール／酢酸中で、未精製のアルガトロバンを調製する工程を更に備えることを特徴とする請求項１に記載のアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項４】
前記反応塊が、塩基の水溶液で処理され、その混合物自体のｐＨを７．０〜７．５間にすることを特徴とする請求項１に記載のアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項５】
前記塩基の溶液が、１０〜３０％の濃度で、水酸化ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びアンモニアから選択されることを特徴とする請求項４に記載のアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項６】
メタノール及び水からの結晶化又は再結晶化は、前記塊が、９０〜９５℃への加熱と、還流温度で１〜３時間の維持と、少なくとも１時間で７０〜７５℃への冷却及びこの温度で少なくとも１時間の維持と、２〜６時間で２０℃への冷却及びこの温度で少なくとも６時間の維持という温度勾配を受けることにより達成されることを特徴とする請求項１に記載のアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項７】
メチルアルコール及び水の混合溶媒媒体は、アルコールの濃度が１０〜２０％で、未精製又は精製アルガトロバンのグラム当たり５０ボリューム以下の量であることを特徴とする請求項１に記載のアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項８】
得られたアルガトロバン一水和物からなる結晶性沈殿物を乾燥させる工程を更に備えることを特徴とする請求項１に記載のアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに規定された工程を備えるアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載の方法に従ってアルガトロバン一水和物を調製する工程と、
水中に溶解させた後、２分以内で１０〜２０℃の温度まで素早く冷却することでそれを再結晶させる工程と
を少なくとも備えることを特徴とするアルガトロバン一水和物の調製方法。
【請求項１１】
１８３〜１８５℃の融点；
３３９９，１２７０，１１６０のＩ．Ｒ．スペクトル（ＫＢｒ）（ｃｍ−１）；
約１６０℃で吸熱が起こる示差走査熱量測定；
ＸＲＰＤ：ピーク番号１  角度（２θ）６．８００，相対強度（％）１００；ピーク番号２  角度（２θ）７．８４０，相対強度（％）１２；ピーク番号３  角度（２θ）９．８００，相対強度（％）１３；ピーク番号４  角度（２θ）１０．０２０，相対強度（％）１３；ピーク番号５  角度（２θ）１０．７００，相対強度（％）６；ピーク番号６  角度（２θ）１１．７８０，相対強度（％）５；ピーク番号７  角度（２θ）１３．０８０，相対強度（％）１２；ピーク番号８  角度（２θ）１３．５４０，相対強度（％）３２；ピーク番号９  角度（２θ）１４．５４０，相対強度（％）２１；ピーク番号１０  角度（２θ）１６．９００，相対強度（％）８；ピーク番号１１  角度（２θ）１７．５４０，相対強度（％）１８；ピーク番号１２  角度（２θ）１８．６４０，相対強度（％）１４；ピーク番号１３  角度（２θ）１９．０６０，相対強度（％）１３；ピーク番号１４  角度（２θ）１９．６２０，相対強度（％）１３；ピーク番号１５  角度（２θ）２０．０００，相対強度（％）２０；ピーク番号１６  角度（２θ）２１．４２０，相対強度（％）１６；ピーク番号１７  角度（２θ）２１．７８０，相対強度（％）２１；ピーク番号１８  角度（２θ）２２．６６０，相対強度（％）１５；ピーク番号１９  角度（２θ）２３．６８０，相対強度（％）１５；ピーク番号２０  角度（２θ）２４．０８０，相対強度（％）１６；ピーク番号２１  角度（２θ）２４．７４０，相対強度（％）２５；ピーク番号２２  角度（２θ）２５．３４０，相対強度（％）９；ピーク番号２３  角度（２θ）２６．４８０，相対強度（％）１０；ピーク番号２４  角度（２θ）２７．５８０，相対強度（％）１０；ピーク番号２５  角度（２θ）２８．２２０，相対強度（％）７；ピーク番号２６  角度（２θ）２９．１２０，相対強度（％）８；ピーク番号２７  角度（２θ）２９．７４０，相対強度（％）１１；ピーク番号２８  角度（２θ）３１．８２０，相対強度（％）９；ピーク番号２９  角度（２θ）３４．８４０，相対強度（％）７；ピーク番号３０  角度（２θ）４０．５８０，相対強度（％）６
によって特徴付けられる精製アルガトロバンであって、イソプロパノールで溶媒和された精製アルガトロバン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルガトロバン一水和物の調製方法に関するものである。前記方法は、アルガトロバンを、三つの異なる結晶形態で、即ちアルガトロバン一水和物、精製アルガトロバン及びアルガトロバン無水物の形態で得ることを可能にし、それぞれは、新規で特有の物理化学的特性を有している。また、本発明は、三つの異なる単離形態、即ちアルガトロバン一水和物、精製アルガトロバン及びアルガトロバン無水物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
米国特許第４，２０１，８６３（１９８０年５月６日）及びＥＰ  ８７４６（前述の米国特許の出願に基づく優先権を主張して１９７９年８月２２日に出願した）は、抗血栓作用を有するＮ２-アリールスルホニル-Ｌ-アルギニンアミドの薬物群と、それらを得るための方法を記載する。当然ながら、化合物４-メチル-１-[Ｎ２-(３-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-２-ピペリジンカルボン酸（アルガトロバン，異性体混合物）を記載する。記載された方法は、中間体ＮＧ-置換-Ｎ２-キノリンスルホニル-Ｌ-アルギニンアミドの合成を含み、該中間体から触媒水素化分解又は酸分解及び触媒水素化によって所望の上記化合物が得られる。水素化分解及び水素化反応に提供される一般的な条件は、ｉ）不活性溶媒（メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン又はジオキサン）；ｉｉ）触媒（ラネーニッケル、パラジウム、白金、ルテニウム、ロジウム）の存在；ｉｉｉ）１〜１００ｋｇ／ｃｍ２、好ましくは５〜５０ｋｇ／ｃｍ２の圧力の水素雰囲気；ｉｖ）０℃〜２００℃、好ましくは５０℃〜１５０℃の温度；ｖ）２時間〜１２０時間の反応温度である。次いで、得られた未精製の生成物を、粉砕、又はジエチルエーテル−テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル−メタノール若しくは水−メタノールからの再結晶、又はクロマトグラフィーにより精製する。この精製工程の例は与えられていない。特に、ＵＳ  ４，２１０，８６３及びＥＰ  ８７４６双方は、例１（Ｅ）において、アルガトロバン，異性体混合物の調製を記載する。この化合物は、Ｐｄ／Ｃの存在下、水素圧１０ｋｇ／ｃｍ２及び１００℃で８時間エタノール中において[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸を水素化することにより、非晶質形態で得られる。触媒は、エタノール溶液のろ過により除去され、次いで、更なる精製工程及び／又は再結晶工程を行わずに、該溶液を蒸発させる。実際、特許出願ＥＰ  ８７４６の場合と同様に問題になっている上記米国特許においては、化合物の多形形態について一切言及されておらず、得られる化合物について、以下の特性が報告されている：非晶質固体，Ｉ．Ｒ．（ＫＢｒ）（ｃｍ−１）３４００；１６２０；１４６０；１３８０；分子構成（％）：理論値Ｃ５４．３１；Ｈ７．１３；Ｎ１６．５２；実測値（％）Ｃ５４．０１；Ｈ６．９８；Ｎ１６．６１。
【０００３】
ＵＳ  ４，２５８，１９２（１９８１年３月２４日）（前述の特許出願ＵＳ  ４，２０１，８６３の一部継続）及び同一特許出願ＥＰ  ８７４６は、立体異性体及びその調製を記載し、薬剤において有効成分として使用されるアルガトロバン、即ち、立体異性体(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-(３-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-２-ピペリジンカルボン酸が含まれ、以下に示す特性を有する：融点（ｍ．ｐ．）１８８〜１９１℃；Ｉ．Ｒ．（ＫＢｒ）（ｃｍ−１）３４００，１６２０，１４６０，１３８０；分子構成（％）：理論値Ｃ５４．３１；Ｈ７．１３；Ｎ１６．５２；実測値（％）Ｃ５４．０５；Ｈ６．９４；Ｎ１６．６５。上記化合物は、ＵＳ  ４，２５８，１９２の例１（Ｅ）並びにＥＰ  ８７４６の例２（Ｅ）及び３のそれぞれにおいて与えられた記載に従って、酢酸の存在下、Ｐｄ／Ｃによる触媒作用を受け、エタノール中、(２Ｒ,４Ｒ)１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-２-ピペリジンカルボン酸を水素化することにより調製される。触媒を除去するためにその塊をろ過した後、溶媒を蒸発させ、残留物をクロロホルム中に懸濁させ、その溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液又は１Ｎの水酸化ナトリウム溶液で処理し、洗浄後、溶媒を蒸発させる。次いで、上記化合物をエタノールから再結晶する。この場合も同様に、一水和物多形形態の獲得については一切言及されていない。
【０００４】
前記多形形態は、代わりに、刊行物Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９８１，１０１，４４０−４４６において立体異性体の調製との関連で記載されている。（２Ｒ,４Ｒ）立体異性体の一水和物多形体は、エタノール／水からの再結晶により調製され、報告された特性は、ｍ．ｐ．１７６〜１８０℃；［α］Ｄ２７＋７６．１°（ｃ１，０．２Ｎ  ＨＣｌ）である。
【０００５】
次いで、ＵＳ  ５，９２５，７６０（１９９９年７月２０日）及びＥＰ  ０８２３４３０（１９９７年８月４日出願）は、新規の中間体Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-ＮＧ-ニトロ-Ｌ-アルギニンを用いてアルガトロバンを調製するための新規の方法を記載する。特に、上記特許は、アルガトロバンの結晶性一水和物の形態の調製について言及しており、日本国特許公報Ｈ０２−３１０５５（１９９０年）の例（Ｄ）及び（Ｅ）を振り返ってみて、総称的に、市販のアルガトロバン化合物のものと同一のＩ．Ｒ．スペクトルを参照する。引用する特許公報において関係のある例は、例（Ｅ）であるが、例（Ｄ）は、(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸の調製に関係する。この化合物は、Ｐｄ／Ｃの存在下での触媒による還元によってアルガトロバンを調製するための出発化合物を表す。次いで、得られた未精製のアルガトロバンは、クロロホルムによる抽出、飽和重炭酸ナトリウム溶液での処理、溶媒蒸発後のエタノール又は水中１５％アルコールからの再結晶により精製される。しかしながら、日本国特許は、得られるアルガトロバンの一水和物形態について一切言及が無く、該化合物について以下の特性を報告することに注意すべきである：ｍ．ｐ．１８８〜１９１℃；分子構成（理論値／実測値）（％）：Ｃ５４．３１／５４．０１；Ｈ７．１３／６．９８；Ｎ１６．５２／１６．６１；Ｉ．Ｒ．（ＫＢｒ）（ｃｍ−１）３４００；１６２０；１４６０；１３８０。これらの分析データは、報告の無い融点を除き、アルガトロバンの(２Ｒ,４Ｒ)-４メチル-１-[Ｎ２-(３Ｓ-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-２-ピペリジンカルボン酸及び(２Ｒ,４Ｒ)-４メチル-１-[Ｎ２-(３Ｒ-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-２-ピペリジンカルボン酸の異性体混合物が記載される引用特許文献において示されるものと同一であるが、アルガトロバンの一水和物形態を同定する唯一の文献である上記公報にて与えられた融点とは一致していない。
【０００６】
つい最近では、特許出願ＣＮ  １，９５１，９３７（出願日２００６年１１月１０日）は、アルガトロバンを、大量の水で（アルガトロバンのグラム当たり６０ボリュームより大きく最大で８０ボリュームまでの蒸留水で）８０〜１００℃の温度にて０．５〜１時間処理し、冷却による結晶化を行うことにより、水和アルガトロバンを調製するための方法を記載する。報告された水の含有量は、３．３〜３．８％の間であり、右旋性異性体Ｒの左旋性異性体Ｓに対する割合は、Ｒ：Ｓ＝６３〜６７：３７〜３３である。
【０００７】
アルガトロバンは、治療的使用の範囲が広い化合物であり、その理由については、容易に工業化され且つ経済的に都合のよい方法によって得られる薬剤的に許容できる品質の化合物を提供する必要性が依然として存在することにある。一水和物に関して、この形態は、無水物形態が不安定で且つ水和したり及び／又は湿ったりする傾向があるため、実用的な目的に好ましい。更に、それは、ジアステレオ異性体間での正確な割合が困難な場合のみで結晶化する。
【０００８】
従って、本発明の第一の主要な目的は、医薬品の調製に製剤品質の有効成分として使用できるアルガトロバン一水和物を調製するための方法を提供することである。更なる目的は、良好な収率で且つ非常に高い純度で得られるようにする合成及び精製方法により前記有効成分を得ることである。
【発明の概要】
【０００９】
先に示した目的のため、本発明に従うアルガトロバン一水和物の調製方法は、好ましくは触媒水素化及び水素化分解という既知の合成方法に従って化合物(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸から出発して、未精製のアルガトロバンを調製することと、次いで、それを精製し、その反応塊からメタノール／水溶媒中での制御された結晶化により一水和物として分離するように処理することとからなる。好ましくは、アルガトロバン一水和物は、精製アルガトロバンからなる中間体を分離し、次いでメタノール／水からの結晶化という上述の方法によって一水和物形態に変換されるように処理することで調製される。精製中間体の分離による調製は、この中間体が新規で特徴的な特性を示し、アルガトロバン一水和物を高純度で且つ正確なジアステレオ異性体比で得ることができるため、好適である。
【００１０】
その上、驚くべきことに、新規で特徴的な物理化学的特性を有するアルガトロバン無水物をアルガトロバン一水和物から続いて得ることができることを見出した。
【００１１】
それ故、第一の態様において、本発明は、アルガトロバン一水和物の調製に関し、随意的にはアルガトロバン無水物に関するものである。
【００１２】
従って、本発明は、
未精製のアルガトロバンを含有する濃縮した反応塊又は精製したアルガトロバンから、脱色炭を加え、その塊を還流温度で加熱し、次いで炭素をろ過し、１１〜１７時間で還流温度から１５〜２５℃の温度への制御された段階的な冷却を受けることによるメタノールと水とからなる溶媒媒体からの結晶化によって、アルガトロバン一水和物を分離する工程
を少なくとも備えるアルガトロバン一水和物の調製方法を提供する。
【００１３】
上記調製方法が未精製のアルガトロバンからである場合、本発明の第一の実施態様によれば、前記方法は、実質的に一つの連続工程にあるが、アルガトロバン一水和物を、結晶化によるアルガトロバン一水和物の分離前に、イソプロパノール及びノルマル−プロパノールから選択される結晶化用溶媒で未精製のアルガトロバンの有機溶液から結晶化することによって、精製アルガトロバンを単離するという二工程において調製することもできる。
【００１４】
この第二の実施態様によれば、アルガトロバン一水和物の調製方法は、
未精製のアルガトロバンを含有する反応塊を攪拌可能な残留物に濃縮する工程と；
未精製のアルガトロバンを含有する残留物を有機溶媒で溶解し、イソプロパノール及びノルマル−プロパノールから選択される結晶化用溶媒媒体で有機溶液を処理することによる結晶化によって、精製したアルガトロバンを分離する工程と；
先の工程で単離された精製アルガトロバンを、メタノール及び水の混合溶液から、脱色炭を加え、その塊を還流温度で加熱し、次いで炭素をろ過し、１１〜１７時間で還流温度から１５〜２５℃の温度への制御された段階的な冷却を受けることにより、再結晶させることで、アルガトロバン一水和物を分離する工程と
を少なくとも備える。
【００１５】
連続モードにより又は精製アルガトロバン中間体を分離することによる二工程において得られた、アルガトロバン一水和物からなる結晶性沈殿物は、窒素フロー又は真空下で、５０℃〜８０℃の温度にて少なくとも８時間乾燥されることができる。
【００１６】
得られたアルガトロバン一水和物が、２分以内で１５℃に素早く冷却することによる水からの再結晶を受けることにより、アルガトロバン無水物を得ることができ、新規な物理化学的特性を有することが示される。
【００１７】
よって、第二の態様において、本発明は、単離して得たアルガトロバンの単一形態に関し、従って、以下に記載し且つ請求項において報告する物理化学的特性を有するアルガトロバン一水和物、精製アルガトロバン及びアルガトロバン無水物に関するものである。
【００１８】
本発明により達成できる利点は、図面を参照しつつ、上記方法の特定の実施態様の詳細な説明と、それと共に得られる非制限的な例として与えられた化合物とから、当業者にとって明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】記載された方法に従い、メタノール及び水からなる溶媒からの結晶化により得た結晶質アルガトロバン一水和物の代表的なＩ．Ｒ．スペクトルを示す。
【図２】記載された方法に従い、メタノール及び水からなる溶媒からの結晶化により得たアルガトロバン一水和物の代表的なサンプルに関しての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を示す。
【図３】記載された方法に従い、メタノール及び水からなる溶媒からの結晶化により得たアルガトロバン一水和物の代表的なサンプルに関しての熱重量分析を示す。
【図４】記載された方法に従い、メタノール及び水からなる溶媒からの結晶化により得たアルガトロバン一水和物の回折法（ＸＲＰＤ）プロファイルを示す。
【図５】記載された方法によってアルガトロバン一水和物から得たアルガトロバン無水物の代表的なＩ．Ｒ．スペクトルを示す。
【図６】記載された方法によってアルガトロバン一水和物から得たアルガトロバン無水物の代表的なサンプルに関しての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を示す。
【図７】記載された方法によってアルガトロバン一水和物から得たアルガトロバン無水物の代表的なサンプルに関しての熱重量分析を示す。
【図８】記載された方法によってアルガトロバン一水和物から得たアルガトロバン無水物の回折法（ＸＲＰＤ）プロファイルを示す。
【図９】記載された方法により得た精製アルガトロバンの代表的なＩ．Ｒ．スペクトルを示す。
【図１０】記載された方法により得た精製アルガトロバンの代表的なサンプルに関しての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を示す。
【図１１】記載された方法により得た精製アルガトロバンの代表的なサンプルに関しての熱重量分析を示す。
【図１２】精製アルガトロバンの回折法（ＸＲＰＤ）プロファイルを示す。
【図１３】記載された方法により得たアルガトロバン無水物（２°ピーク）及び対応する一水和物（１°ピーク）のＤＳＣ間での比較を示す。
【図１４】記載された方法により得たアルガトロバン無水物（上方曲線）及び一水和物（下方曲線）の熱重量分析間での比較を示す。
【図１５】記載された方法により得た水和物、精製物及び無水物種のＸＲＰＤディフラクトグラム間での比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明のアルガトロバン一水和物の調製方法は、以下に示すスキームに由来する：
【化１】
0005696035.tif 000002
【００２１】
発明の概要において報告した工程を含む、本発明のアルガトロバン一水和物の調製方法においては、アルガトロバン一水和物を調製するための出発化合物は、ＵＳ  ４，２５８，１９２及びＥＰ  ８７４６において既に記載された(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリノスルフィル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸（ＩＩ）である。
【００２２】
本発明の目的のため、前記化合物（ＩＩ）は、酢酸の存在下、メタノールからなる溶媒中、炭素上のパラジウム（Ｐｄ／Ｃ）からなる触媒によって触媒作用を受ける水素化及び水素化分解にさらされ、ここで、二つの間でのｖ／ｖ比は１（酢酸）と４〜１６（アルコール）の間であり、出発化合物（ＩＩ）と酢酸のｗ／ｖでの割合は、０．５〜２．５である。水素化反応は、当業者に知られる方法によって水素雰囲気下で行われ、好ましくは６〜１２ｂａｒの圧力で、５０℃〜１００℃の温度で、６〜１８時間である。
【００２３】
連続モードプロセス
方法が連続モードである場合、室温に冷却した後、反応塊からＰｄ／Ｃ触媒を除去し、次いで、得られた塊を４０℃〜８０℃間の温度に加熱し、少なくとも半分の体積まで濃縮する。
【００２４】
このようにして得た混合物を、好ましくは水酸化ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びアンモニアから１０〜３０％の濃度で選ばれる塩基の水溶液で任意に処理することができ、該混合物自体のｐＨを７．０〜７．５にする。
【００２５】
このようにして得た溶液を水で希釈し、水及びメチルアルコールの混合物であって、メチルアルコールの濃度が１０〜２０％である混合物からなるアルガトロバン一水和物（Ｉ）結晶化用溶媒を得る。ＭｅｔＯＨ：水の結晶化用溶媒は、アルガトロバン（ＩＩＩ）のグラム当たり最大で５０ボリュームまでの量であり、好ましくは４０ボリューム以下であり、より好ましくは２５〜３５ボリュームからなり、ＭｅｔＯＨ：水の比は好ましくは１：７ｖ／ｖである。
【００２６】
その後、結晶化は、脱色炭を加え、その塊を還流温度にて加熱し、それを攪拌しながら１〜３時間維持し、次いで、炭素をろ過し、還流温度から１５〜２５℃、好ましくは２０℃にするように１１〜１７時間制御された冷却を行うことにより、達成される。特に、上記塊は、以下に示す温度勾配にさらされる：９０〜９５℃への加熱、還流温度にて１〜３時間、好ましくは２時間の維持、少なくとも１時間で７０〜７５℃への冷却及びこの温度で少なくとも１時間の維持、２〜６時間、好ましくは４時間で２０℃への冷却及びこの温度で少なくとも６時間の維持。形成する結晶性沈殿物は、後述する物理化学的特性を持つアルガトロバン一水和物（Ｉ）である。
【００２７】
この第一実施態様において以上に報告した全工程に関し、アルガトロバン一水和物の調製方法は、
メタノール／酢酸中で、(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸から未精製のアルガトロバンを調製する工程と；
その反応塊を少なくとも半分の体積まで濃縮する工程と；
任意には、その反応塊を、混合物自体のｐＨが７．０〜７．５になるように塩基の水溶液で処理する工程と；
メタノール：水の混合物であって、メチルアルコールの濃度が１０〜２０％である混合物からなる結晶化用溶媒媒体を形成し、その塊に炭素の添加と、還流温度での加熱とを受けさせ、次いで、それに炭素のろ過と、１１〜１７時間で還流温度から１５〜２５℃の温度への制御された段階的な冷却とを受けさせることにより、アルガトロバン一水和物を結晶化する工程と
を備える。
【００２８】
特に、制御された段階的な冷却は、以下の温度勾配である：９０〜９５℃への加熱と、還流温度にて１〜３時間の維持と、少なくとも１時間で７０〜７５℃への冷却及びこの温度で少なくとも１時間の維持と、２〜６時間で２０℃への冷却及びこの温度で少なくとも６時間の維持である。
【００２９】
窒素フロー又は真空下、５０℃〜８０℃の温度で、少なくとも８時間乾燥する工程を更に備えることができる。
【００３０】
精製アルガトロバン（ＩＶ）中間体の単離方法
合成反応を上述のように行い、水素化完了時に、室温に冷却して、その後、得られる塊からＰｄ／Ｃ触媒を除去する。次いで、前記塊を４０℃〜８０℃の温度に加熱し、少なくとも攪拌可能な残留物に濃縮する。
【００３１】
未精製のアルガトロバン（ＩＩＩ）を含有する残留物を、有機溶媒、好ましくはジクロロメタン中に溶解する。
【００３２】
このようにして得た混合物を、好ましくは水酸化ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びアンモニアから１０〜３０％の濃度で選ばれる塩基の水溶液で任意に処理することができ、混合物自体のｐＨを７．０〜７．５の間にする。任意には、過剰の場合、その後、有機相を水で洗浄することで又は真空下で、塩基を取り除く。
【００３３】
この場合、イソプロピルアルコール及びノルマル−プロピルアルコールから選択される結晶化用溶媒を、未精製のアルガトロバン（ＩＩＩ）を塩基で処理した後に得られた混合物に加える。好ましくは、本発明の目的のため、結晶化用溶媒は、イソプロピルアルコールであり；その混合物を溶媒還流温度に加熱し、塩素化した溶媒を蒸留により除去し、次いで０〜２０℃に冷却する。この工程では、精製アルガトロバン（ＩＶ）を得、行った分析から、それは、結晶化用アルコール、特にイソプロパノールで溶媒和されることが証明され、以下に記載する物理化学的特性を有する。
【００３４】
次いで、先に記載されるメタノール：水の混合物中で精製アルガトロバン（ＩＶ）を可溶化した後、先に記載されるアルガトロバン一水和物（Ｉ）を得るために、この結晶性沈殿物を処理する。
【００３５】
ノルマル−プロパノール又はイソプロパノールからの結晶化による精製アルガトロバンの分離は、アルガトロバン一水和物の収率及び純度、更には良好な生成物の加工性及びその方法の信頼性の観点から、より効果的な調製を可能にする。プロパノールアルコールが、エタノールに比べて、これらの側面について良好なためである。結晶性溶媒としてのエタノールは、わずかな体積誤差の場合でさえも、かなりの収率の低下を実際に起こす場合があり、ジアステレオ異性体比に関して否定的な結果の場合がある。これは、その後の結晶化において正確なジアステレオ異性体比を達成させる際に、より多くの困難をもたらすであろう。得られた溶媒和物は、ここに精製アルガトロバンとして示され、新規であり、それどころか、ジアステレオ異性体比に悪影響を与えることなく、その精製及び単離を非常に容易にするような結晶特性を示す。
【００３６】
この第二実施態様において以上に報告した全工程に関し、アルガトロバン一水和物の調製方法は、
メタノール／酢酸中で、(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸から未精製のアルガトロバンを調製する工程と；
任意には、その反応塊を、混合物自体のｐＨが７．０〜７．５になるように塩基の水溶液で処理する工程と；
未精製のアルガトロバンを含有する反応塊を攪拌可能な残留物に濃縮する工程と；
未精製のアルガトロバンを含有する残留物を有機溶媒で溶解し、イソプロパノール及びノルマル−プロパノールから選択される結晶化用溶媒で該有機溶液を処理することによる結晶化によって精製アルガトロバンを分離する工程と；
メタノール：水の混合物であって、メチルアルコールの濃度が１０〜２０％である混合物からなる溶媒媒体から、先の工程で単離した精製アルガトロバンを再結晶し、その塊に脱色炭の添加と、還流温度での加熱とを受けさせ、次いで、それに炭素のろ過と、１１〜１７時間で還流温度から１５〜２５℃の温度への制御された段階的な冷却とを受けさせることにより、アルガトロバン一水和物を分離する工程と
を備える。
【００３７】
特に、制御された段階的な冷却は、以下の温度勾配である：９０〜９５℃への加熱と、還流温度にて１〜３時間の維持と、少なくとも１時間で７０〜７５℃への冷却及びこの温度で少なくとも１時間の維持と、２〜６時間で２０℃への冷却及びこの温度で少なくとも６時間の維持である。
【００３８】
窒素フロー又は真空下、５０℃〜８０℃の温度で、少なくとも８時間乾燥する工程を更に備えることができる。
【００３９】
本発明に従うアルガトロバン一水和物の調製方法は、同一の目的を達成することが分かる。
【００４０】
実際、得られるアルガトロバンの収率は、連続工程又は二工程調製の場合で、６５％〜７０％であり；得られた化合物は、少なくとも９９％に等しいか又は９９％より高い純度、少なくとも３．４％のＫＦ、６５：３５±２の異性体比を示していた。
【００４１】
純度に関しては、本発明に従う方法によって得られるアルガトロバン一水和物は、あらゆる単一不純物が０．１％未満、好ましくは０．０３％より低い不純物プロファイルを有する。従って、アルガトロバン一水和物の純度は、少なくとも９９．０％に等しいか又は９９．０％より高く、好ましくは少なくとも９９．８％であるか又は９９．８％より高い。
【００４２】
任意には、アルガトロバン一水和物からアルガトロバン無水物（Ｖ）を得ることができ、これは、連続モード又は二つの異なる工程において、アルガトロバン一水和物（Ｉ）からなる得られた結晶性沈殿物を水中に再溶解し、該溶液を７５℃〜１００℃、好ましくは８０℃に加熱し、未溶解の残留物を除去し、次いで該溶液を１０℃〜２０℃に素早く、好ましくは１５℃に２分で冷却し、それを前記温度にて最大で１時間維持することによって得られる。
【００４３】
この方法で得たアルガトロバンは、無水物であり、後述する物理化学的特性を有する。
【００４４】
アルガトロバン一水和物の特徴付け
(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリルスルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸一水和物（Ｉ）の分析データを以下に与える：
実験式：  Ｃ２３Ｈ３８Ｎ６Ｏ６Ｓ；
分子量：  ５２６．６５；
分子構成：
Ｃ            Ｈ          Ｎ            Ｓ
計算値（％）：  ５４．４５    ７．２７    １５．９６    ６．０９
実測値（％）：  ５２．４６    ７．３０    １５．９５    ６．１１；
ＨＰＬＣによる純度：  ９９．０％〜９９．８％；
Ｉ．Ｒ．（ＫＢｒ）：  ３４１６、１２７２、１１５７ｃｍ−１。上記方法により得たアルガトロバン一水和物の代表的なＩ．Ｒ．スペクトルを図１に示す；
旋光度：  ［α］Ｄ２７＝＋７８（０．２Ｎ  ＨＣｌにおけるｃ＝１ｍｇ／ｍｌ）；
融点：  １７６〜１８２℃。融点はガラス毛細管を用いて決定された；
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）：  示差走査熱量測定は、穿孔アルミニウムるつぼを用いて行われた。アルガトロバン一水和物は、約１５０℃で吸熱事象を示す。図２は、典型的なＤＳＣプロファイルを与える。吸熱現象は、水分損失及びその後の化合物の融解を表す。水分損失は、図３の熱重量分析プロファイルによりはっきりと実証される。熱重量分析は、水分損失が８５〜１７７℃の温度で３．６８％であり、その値は３，４２％の理論値と完全に適合するため、その化合物が一水和物として現れることを示す。また、１７５℃より高い重量損失の高温度範囲は、含有される水の性質が結晶質タイプであることを示す；
Ｘ線回折法による分析：  アルガトロバン一水和物は、白色の結晶質固体として現れる。図４に示されるアルガトロバン一水和物に関連するピークは、以下、表１において集約される：
【００４５】
【表１】
0005696035.tif 000003
【００４６】
アルガトロバン無水物の特徴付け
(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリル)スルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸の無水物形態（Ｖ）での代表的なサンプルの記載を、対応する一水和物形態との比較として以下に与える：
分子式：  Ｃ２３Ｈ３６Ｎ６Ｏ５Ｓ；
分子量：  ５０８．６３；
融点：  分解とともに２２０℃；
Ｉ．Ｒ．（ＫＢｒ）：  ３４３２、１２６５、１１６４。上記方法により得たアルガトロバン無水物の代表的なＩ．Ｒ．スペクトルを図５に示す；
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）：  示差走査熱量測定及び熱重量分析は、アルガトロバン一水和物の分析に適用したものと同一の条件下で行われた。図６は、アルガトロバン無水物サンプルの代表的なＤＳＣ分析を与える。アルガトロバン無水物は、約２１５℃で吸熱事象を示す。吸熱現象は、化合物の融解に関係がある。熱重量分析を図７に示す。２５℃〜１４０℃の温度範囲内にて重量で約１％の損失は、わずかな量の吸収水の存在に起因する；
Ｘ線回折：  ＸＲＰＤ分析をアルガトロバン一水和物のために記載した手順に従って行った。以下に示す表２は、図８に示されるピークの集約を与える：
【００４７】
【表２】
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【００４８】
イソプロパノール中で溶媒和されたアルガトロバンの特徴付け
イソプロパノールで溶媒和された精製した(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリル)スルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸（ＩＶ）の分析データを以下に与える：
Ｉ．Ｒ．（ＫＢｒ）：  ３３９９、１２７０、１１６０ｃｍ−１。上記方法により得たｉＰｒＯＨで溶媒和されたアルガトロバンの代表的なＩ．Ｒ．スペクトルを図９に与える；
融点：  １８３〜１８５℃。融点測定は、ガラス毛細管を用いて行われた；
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）：  示差走査熱量測定は、穿孔アルミニウムるつぼを用いて行われた。イソプロパノールで溶媒和されたアルガトロバンは、約１６０℃に吸熱ピークを有する。図１０は、典型的なＤＳＣプロファイルを与える。吸熱事象は、溶媒損失と化合物の融解とを表す。溶媒損失は、図１１の熱重量分析プロファイルからはっきりと実証される。熱重量分析は、溶媒損失が９．０％であり、その値は一溶媒和物形態についての理論値１０．５５％と完全に適合するため、その化合物がイソプロパノールとの溶媒和物として現れることを示す。また、７０℃〜１７６℃の重量損失の高温度範囲は、含有される溶媒の性質が結晶質タイプであることを示す；
Ｘ線回折による分析：  イソプロパノールで溶媒和されたアルガトロバンは、白色の結晶質固体として現れる。図１２に示すイソプロパノールで溶媒和したアルガトロバンについて得られるピークは、以下、表３において集約される：
【００４９】
【表３】
0005696035.tif 000005
【００５０】
アルガトロバン一水和物、アルガトロバン無水物及び精製アルガトロバンの比較
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：比較により分かるように、アルガトロバン一水和物のＤＳＣプロファイルは、無水物について見られたプロファイルとかなり異なる。この点において、アルガトロバン一水和物は、約１６０℃に吸熱ピークを有するが、アルガトロバン無水物のものは約２２０℃に示される（図１３）。
【００５１】
熱重量分析（ＴＧＡ）：熱重量分析に関しては、アルガトロバン一水和物及び無水物の曲線間での実質的な差異が再び見られ、それぞれの重量損失が事実上異なることを示す（図１４）。
【００５２】
図１５は、アルガトロバン無水物、アルガトロバン一水和物及び精製アルガトロバンの回折法プロファイル間での比較を与える。重ね合わせることから明らかなように、三つの結晶構造は明らかに異なる。
【００５３】
本発明の合成方法の非制限的な説明のために以下に与える例は、上記方法を完全な形で形成する異なる工程に関し、先に報告したスキームを参照する。
【実施例】
【００５４】
実験パート
(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸（ＩＩ）からの精製アルガトロバン（ＩＶ）の合成例
例１：ＮａＯＨでの未精製アルガトロバンの処理及びイソプロパノールでの精製アルガトロバンの分離
１リットルのガラス製オートクレーブに、(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸６０ｇ、メタノール４８０ｍｌ、酢酸１２０ｍｌ及び５％炭素上のパラジウム（６０％湿潤）２０ｇを供給した。このようにして得た混合物を、激しく攪拌しながら、８５℃及び８．５ｂａｒの水素雰囲気にて８．５時間処理した。
【００５５】
次に、その塊を室温に冷却し、触媒をろ過により除去した。得られた溶液を減圧下で残留物に濃縮した。塩化メチレン６００ｍｌ、水３００ｍｌ、及び３０％水酸化ナトリウム水溶液７５ｍｌを、その得られた油状残留物に加え、残った酢酸を中和した（ｐＨ＝７．５）。
【００５６】
次いで、メタノール３０ｍｌを加え、その混合物をかき混ぜながら１時間維持した。水相を除去し、有機相を水３００ｍｌで２回洗浄した。良好な分離を達成するため、必要な量のメタノールを洗浄するたびに加えた。
【００５７】
次いで、このようにして得た塩化メチレン溶液（全溶液の３分の１）を、２-プロパノール１２０ｍｌを含有する５００ｍｌのジャケット付き反応器中に浸透させた。次に、その塊を加熱し、溶媒２００ｍｌを留去した。その後、溶液を２時間かけて０℃に冷却し、この温度で３時間維持した。
【００５８】
結晶化により得た固体をろ別し、真空下５０℃で１６時間乾燥させ、精製(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリルスルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸（ＩＶ）１６．０ｇを得た。収率＝８６％。
【００５９】
例２：ＮａＯＨでの未精製アルガトロバンの処理及びノルマルプロパノールからの結晶化
１リットルのガラス製オートクレーブに、(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸５０ｇ、メタノール３７５ｍｌ、酢酸９５ｍｌ及び５％炭素上のパラジウム（６０％湿潤）１６．４ｇを供給した。
【００６０】
このようにして得た混合物を、激しく攪拌しながら、８５℃及び８．５ｂａｒの水素雰囲気にて８時間処理した。
【００６１】
次に、その塊を室温に冷却し、触媒をろ過により除去した。得られた溶液を減圧下で残留物に濃縮した。
【００６２】
塩化メチレン５７０ｍｌをその得られた油状残留物に加え、その溶液を二つの部分に分けた。得られた溶液の半分をジャケット付きの１リットルガラス製反応器中に供給し、それに水１２０ｍｌを加えた。次いで、３０％水酸化ナトリウム溶液を加えることで、酢酸残留物を中和し、ｐＨ＝７．５に達した。有機相及び水相間で正味の分離を得るため、次にメタノール１２ｍｌを加えた。その混合物を攪拌しながら１時間維持し、次いで、水相を除去し、有機相を水１２０ｍｌで２回洗浄した。良好な分離を達成するため、必要な量のメタノールを洗浄するたびに加えた。
【００６３】
次いで、このようにして得た塩化メチレン溶液を、１-プロパノール１４０ｍｌを含有する５００ｍｌのジャケット付き反応器中に浸透させた。次に、その塊を５５℃に加熱し、存在するジクロロメタンを留去した。その後、溶液を２時間かけて０℃に冷却し、この温度で２時間維持した。
【００６４】
結晶化により得た固体をろ別し、真空下５０℃で１６時間乾燥させ、精製(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリルスルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸（ＩＶ）１７．０ｇを得た。収率＝７３％。
【００６５】
例３：中和無しでイソプロパノールからの結晶化による未精製アルガトロバンの処理
例２で得た化合物（ＩＩＩ）のジクロロメタン溶液の半分を、水１２０ｍｌ及びメタノール１２ｍｌの混合物で２回抽出した。
【００６６】
次いで、このようにして得た塩化メチレン溶液を、２-プロパノール１４０ｍｌを含有する５００ｍｌのジャケット付き反応器中に浸透させ、得られた塊を蒸留により濃縮した。
【００６７】
蒸留が完了したとき、温度は９０℃になり、その塊をかき混ぜながら１時間置いておき、２０℃に冷却し、最終的には０℃に冷却し、そこで、２時間維持した。
【００６８】
結晶化により得た固体をろ別し、真空下５０℃で１６時間乾燥させ、精製(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリルスルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸（ＩＶ）２１．５ｇを得た。収率＝９３％。
【００６９】
(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸（ＩＩ）からのアルガトロバン一水和物（Ｉ）の合成例
例４：一水和物形態を直接得るための未精製アルガトロバンのＮＨ３による処理
２５０ｍｌのガラス製オートクレーブに、(２Ｒ,４Ｒ)-１-[ＮＧ-ニトロ-Ｎ２-(３-メチル-８-キノリンスルホニル)-Ｌ-アルギニル]-４-メチル-２-ピペリジンカルボン酸（ＩＩ）２０ｇ、メタノール１６０ｍｌ、酢酸１０．４ｍｌ及び５％炭素上のパラジウム（５０％湿潤）５．６ｇを供給した。
【００７０】
このようにして得た混合物を、激しく攪拌しながら、８５℃及び９ｂａｒの水素雰囲気にて８時間処理した。
【００７１】
次いで、その塊を室温に冷却し、触媒をろ過により除去した。得られた溶液を大気圧で濃縮した。
【００７２】
溶媒６０ｍｌを蒸留した後、その溶液を０℃に冷却し、３０％アンモニアの水溶液１２ｍｌで中和した。
【００７３】
過剰のアンモニアを真空下で除去し、次いで、水７００ｍｌをその反応混合物に加えた。得られた溶液を還流（約９５℃）にて加熱し、攪拌しながらこの温度で１時間維持し、次いで、４時間かけて２０℃に冷却し、この温度で８時間維持した。
【００７４】
結晶性沈殿物をろ別し、８０℃、大気圧及び窒素フローにて８時間乾燥させ、アルガトロバン一水和物（Ｉ）１５．８ｇを得た（ＨＰＬＣ純度＝９９．８％；異性体比＝６３．８：３６．２；ＫＦ＝３．５％）。収率＝８２．４％。
【００７５】
精製アルガトロバン（ＩＶ）からアルガトロバン一水和物（Ｉ）を得るための結晶化例
例５：水３５ボリューム及びメタノール５．５ボリュームでの結晶化
ジャケット付きのスチール製反応器に、精製(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリルスルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸（ＩＶ）２２１８ｇ、メタノール１２１９２ｍｌ及び脱塩水７７６４７ｍｌを供給した。得られた混合物に、脱色炭６６．６ｇを加え、還流にて加熱し、この温度で窒素下にて１時間維持した。次いで、その炭素を高温条件下でろ過により除去した。
【００７６】
次いで、溶液を還流させて、この温度で２時間維持し、初期結晶化温度（７５℃）まで１時間かけて冷却し、この温度で１時間維持し、次いで、４．５時間かけて２０℃に冷却し、攪拌しながら６時間置いておいた。
【００７７】
結晶化により得た固体をろ別し、脱塩水２２１８ｍｌで洗浄し、減圧下５５℃で１２時間乾燥し、(２Ｒ,４Ｒ)-４-メチル-１-[Ｎ２-[(１,２,３,４-テトラヒドロ-３-メチル-８-キノリルスルホニル]-Ｌ-アルギニル]ピペコリン酸（Ｉ）水和物１９９８ｇを得た。（ＨＰＬＣ純度＝９９．９％；異性体比＝６３．２：３６．８；ＫＦ＝３．５％）。収率＝８７％。
【００７８】
アルガトロバン無水物（Ｖ）を得るための結晶化例
例６：水からの結晶化
ジャケット付きのガラス製反応器に、水１００ｍｌを供給し、８０℃にして；この温度でアルガトロバン一水和物０．８ｇを加えた。その塊をこの温度で１０分間攪拌しながら維持し、次いで、未溶解の残留物をろ過により除去した。母液を素早く（約２分で）１５℃まで冷却し、この温度で１時間維持した。得られた固体をろ過により分離し、８０℃及び大気圧にて窒素フロー下で１０分間乾燥させ、アルガトロバン無水物０．５ｇを得た（ＨＰＬＣ純度＝９９．９％；異性体比＝６０．６：３９．４；ＫＦ＝０．２６％）。収率６５％。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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