(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１）高麗人参の実から種子を除去して得られた果肉と果皮を乾燥する段階と、
２）上記段階１）の乾燥物に水またはエタノールを加えて還流抽出した後、濾過して減圧濃縮する段階と、
を含み得られた高麗人参の実抽出物を有効成分として含有する抗炎症用皮膚外用剤組成物。
【請求項２】
上記皮膚外用剤組成物は、化粧料であることを特徴とする請求項１に記載の抗炎症用皮膚外用剤組成物。
【請求項３】
上記化粧料は、柔軟化粧水、収斂化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、アイエッセンス、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、パウダー、ボディーローション、ボディークリーム、ボディーオイル及びボディーエッセンスよりなる群から選択される剤形を有するものであることを特徴とする請求項２に記載の抗炎症用皮膚外用剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高麗人参の実抽出物を含有する皮膚外用剤組成物に関し、より詳細には、高麗人参の地上部のうち独特の成分と組成を有する“高麗人参の実から種子を除去して得られた果肉と果皮の抽出物”を有効成分として含有することによって、皮膚においてコラーゲンの生成を促進し、ＭＭＰ−１抑制効果を示すと共に、抗酸化効果とＤＮＡ損傷保護効果による皮膚老化抑制及びしわ改善効果を有する皮膚外用剤組成物に関する。
【０００２】
また、本発明は、メラニンの生成を抑制し、紫外線による色素沈着を改善する効果による皮膚美白効果、皮膚角質形成細胞の分化を正常誘導し維持させることによって、皮膚乾燥症状とアトピー症状を改善させる効果、及び皮脂分泌を調節し、抗炎症効果によるにきび及び皮膚トラブル改善効果を有し、皮膚の末梢血液循環を改善させることによって、血色を良くして、皮膚をきれいで且つ透明にする高麗人参の実抽出物を有効成分として含有する皮膚外用剤組成物に関する。
【０００３】
また、本発明は、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（Carnitine Palmitoyl Transferase-1：ＣＰＴ−１）遺伝子の発現を増加させ、脂肪酸の酸化においてミトコンドリアの中に脂肪酸を運搬する役目をし、脂肪の燃焼を促進する高麗人参の実抽出物を有効成分として含有する肥満予防及び改善用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００４】
高麗人参（Panax ginseng C. A. Meyer）は、五加皮科人参属に属する植物であって、韓国、中国及び日本国などで２，０００余年前から使用されてきた生薬であり、経験的に疾病を予防し、寿命を延長させる目的に使用されてきた。今まで知られた高麗人参の効能及び効果は、中枢神経系に対する作用、抗発癌作用、抗癌活性、免疫機能調節作用、抗糖尿作用、肝機能亢進効能、心血管障害改善、抗動脈硬化作用、血圧調節作用、更年期障害改善、骨粗鬆症に及ぶ効果、抗ストレス及び抗疲労作用、抗酸化活性及び老化抑制効能などがある（最新高麗人参「成分及び効能編」、韓国人参煙草研究院, 56-112, 1996）。
【０００５】
高麗人参の代表的生理活性成分であるジンセノサイド（ginsenoside）は、高麗人参の地上部及び地下部に均一に分布されており、特に高麗人参の根、高麗人参の葉及び高麗人参の実など部位によってジンセノサイドの含量だけでなく、組成も異なるものと知られている（Attele AS et al, Biochem Pharmacol, 58;1685-1693, 1999）。特に、高麗人参の実は、高麗人参の根と異なるジンセノサイドの成分と含量に基づいて抗糖尿効能において高麗高麗人参の根より優れた結果を示すものと報告された（Dey L. et al., Phytomedicine, 10; 600-605, 2003）。
【０００６】
最近、天然化粧品に対する消費者の関心が増大すると共に、漢方素材を活用する様々な化粧品の市販に伴なって、高麗人参も化粧品の重要な皮膚効能を有する植物素材として研究されているが、そのほとんどは、高麗人参の根を利用した抽出物または高麗人参の根のジンセノサイド成分と高麗人参の多糖体を活用したものに過ぎず、高麗人参の実の成分による皮膚老化抑制としわ改善効能に関するものは全くない実情である。
【０００７】
また、高麗人参の実は、昔から高麗人参よりも珍しく認められるものであって、種子の獲得を目的に選別されて収獲されてきた。高麗人参の実は、高麗人参の栽培期間中に４年根（4-year-old ginseng plants）に限って１回だけ採種し、３年根から採種すれば、種子が小さすぎるので、良い苗参を生産しにくいため、５年根以上から採種すれば、種子が充実で良いが、高麗人参の根の肥大発育を抑制すると共に、組職が緻密でないため、紅参を製造するとき、紅参の品質が大きく低下する。また、採種の回数を栽培期間中に２回以上に採種すれば、数量及び紅参の品質が大きく低下する（最新高麗人参「栽培編」、韓国人参煙草研究院, 130-131, 1996）。
【０００８】
米国特許登録第６, ５２４, ６２６号においては、高麗人参の実の汁を凍結乾燥して、化粧料の組成物に使用しており、高麗人参の実の汁と他の天然物を複合的に使用することによって、これらが保湿と皮膚柔軟効果を示すと記載しているが、これは、本発明による高麗人参の実抽出物が示す皮膚老化抑制効能及びしわ改善効能としての化粧品用途とは明確に区分されるものである。
【０００９】
ヒトの皮膚は、年をとるにしたがって様々な内的及び外的要因によって変化する。すなわち、内的には、新陳代謝を調節する各種ホルモンの分泌が減少し、免疫細胞の機能と細胞の活性が低下して、生体に必要な免疫タンパク質及び生体構成タンパク質の生合成が減少するようになり、外的には、オゾン層の破壊によって太陽光線のうち地表に到逹する紫外線の含量が増加し、環境汚染がさらに深刻化されていて、自由ラジカル及び活性有害酸素などが増加することによって、皮膚の厚さが減少し、しわが増加し、弾力が減少すると共に、皮膚の血色も悪くなり、皮膚トラブルがしきりに発生し、染みやそばかす及び斑点が増加するなど様々な変化を起こす。
【００１０】
老化が進行されるほど皮膚を構成する物質であるコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸及び糖蛋白質の含有量及び配列が変化したり、減少する症状が現われ、自由ラジカル及び活性有害酸素による酸化的ストレスを受ける。また、老化が進行されるか、または紫外線によって、皮膚を構成する大部分の細胞では、炎症を起こすと知られている伝染症性サイトカインを生成する酵素であるシクロオキシゲナーゼ−２（Cox-2, cyclooxygenase）の生合成が増加し、これらの炎症性因子によって皮膚組織を分解する酵素であるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ；Matrix metalloproteinase）の生合成が増加し、ｉＮＯＳ（inducible nitric oxide synthase）によるＮＯ（nitric oxide）の生成が増加するものと知られている。すなわち、自然的に進行される内因性老化による細胞活性の減少及び微細炎症によって基質物質の生合成が減少し、様々な有害環境によるストレスの増加及び太陽光線による活性酸素種の増加のような外的要因によって分解及び変成が加速化されて、皮膚基質が破壊され、薄くなることによって、皮膚老化の諸症状が現われる。したがって、このような老化の現象を防止し、改善させることができる活性成分について多くの研究が行われているのが現実である。
【００１１】
ヒトの皮膚色を決定するにあたって、多様な要因が関与するが、それらのうちメラニン色素を作るメラノサイトの活動性、血管の分布、皮膚の厚さ及びカロチノイドとビリルビンなどのヒト内外の色素含有有無などの要因が重要である。
【００１２】
これらのうち特に最も重要な要因は、ヒト内のメラノサイトでチロシナーゼなどのいろいろな酵素が作用して生成されるメラニンという黒色色素である。このメラニン色素の形成には、遺伝的要因、ホルモン分泌、ストレスなどと関連された生理的要因及び紫外線の照射などのような環境的要因などが影響を及ぼす。
【００１３】
身体皮膚のメラニン細胞で生成されるメラニン色素は、黒い色素とタンパク質の複合体形態を有するフェノール系高分子物質であって、太陽から照射される紫外線を遮断して、真皮以下の皮膚器官を保護すると同時に、皮膚生体内で生じた自由ラジカルなどを制御するなど皮膚内タンパク質と遺伝子を保護する有用な役目を担当する。
【００１４】
このように皮膚内・外部のストレス的刺激によって生じたメラニンは、ストレスが消えても、皮膚角質化を通じて外部に排出される前までは消えない安定した物質である。しかし、メラニンが必要以上に多く生成されれば、染み、そばかす及び斑点などのような過色素沈着症を誘発し、美容上、良くない結果をもたらす。
【００１５】
近年、東洋圏の女性は、白魚のように白くて且つきれいな皮膚を選好し、これを美の重要な基準にしているので、過色素沈着に対する治療及び美容上の問題を解決しようとする要求が増加している。
【００１６】
このような要求に応じて、従来、アスコルビン酸、コウジ酸、アルブチン、ヒドロキノン、グルタチオンまたはこれらの誘導体、またはチロシナーゼ阻害活性を有する物質を化粧料や医薬品に配合して使用してきたが、これらの不十分な美白効果、皮膚に対する安全性問題、化粧料への配合時に現われる剤形及び安定性の問題などに起因してその使用が制限されている。
【００１７】
皮膚のうち最外郭に位置する表皮の最も重要な機能は、外部からの多様な刺激（化学物質、大気汚染物質、乾燥した環境、紫外線などの物理的及び化学的刺激因子）に対する防御と皮膚を通じた体内水分の過度な発散を防止する保護機能であり、このような保護機能は、角質形成細胞で構成された角質層が正常に形成されている場合のみに、その機能を維持することができる。表皮のうち最も外側に存在する角質層（Stratum corneum, horney layer）は、角質形成細胞から形成され、分化が完結された角質細胞とそれを取り囲む脂質層とで構成されている（J. Invest. Dermatol.1983;80:44-49）．角質細胞は、表皮の最下層で持続的に増殖する基底細胞が段階的に形態及び機能上の変化を経験し、皮膚の表面まで上昇した特徴的な細胞であり、一定の期間が経過すれば、古い角質細胞は、皮膚から脱落され、新しい角質細胞がその機能を代行するが、このような繰り返し的な一連の変化過程を「表皮細胞の分化」または「角化」と呼ぶ。角化過程中に角質形成細胞は、天然保湿因子（Natural Moisturizing Factor；ＮＭＦ）と細胞間脂肪質（セラマイド、コレステロール、脂肪酸）を生成しながら角質層を形成し、角質層が堅固性と柔軟性を有するようにして、皮膚障壁としての機能を保有するようにする。
【００１８】
しかし、このような角質層は、過度な洗顔や入浴などの生活習慣的要因、乾燥した大気、汚染物質などの環境的な要因及びアトピー性皮膚や老人性皮膚のような内因性疾患などによってその機能が容易に損失され、実際に現代に入ってさらに増加した様々な要因に起因して、最近になって、皮膚の乾燥症状及びこれによる諸障害を訴える人々が徐々に増加している傾向にある。したがって、適切な皮膚水分を維持するために外部から水分を供給するか、または、体内からの水分損失を防止するための研究が多く進行されてきており、実際に水分保有能力がある様々な種類の保湿剤が開発されており、主に化粧品領域において多く使用されている。
【００１９】
しかし、生活環境の中にヒトに対する危害要因が次第に増加し、老令人口が急激に増加するに伴なって、角質層の生成−脱落速度が遅くなり、角質形成細胞の脂質合成能力が低下したり、表皮で正常な細胞の分裂、成熟及び分化が円滑に行われないため、角質層の保湿因子と脂質の量が減少して、正常な角質層の機能を維持しない状態、すなわち皮膚障壁機能が破壊された状態の皮膚を持っているヒトが次第に増加する傾向にある。
【００２０】
このような非正常的な表皮細胞の分裂や分化によって、皮膚は、皮膚乾燥症、アトピー及び乾癬などの多様な皮膚疾患を誘発し、このような諸疾患は、自体的に水分保有機能のみを有する通常的な保湿剤によりその症状を若干緩和させることはできるが、根本的な治癒を期待することは難しいのが実情である。
【００２１】
一般的に、頭皮及び顔を含む皮膚において皮脂は、皮膚の保湿維持や微生物の侵入を防止する役目を担当するが、皮脂が過剰に分泌されれば、脱毛が促進され、にきびが悪くなり、にきびによる毛穴の拡大が促進され、脂漏性皮膚炎が発生するなど様々な疾患が誘発する。
【００２２】
このような皮脂の過分泌は、いろいろな原因によって発生するが、それらのうち最も重要なことは、皮脂腺の活性において皮脂の分泌を促進するに関与するホルモンの１つであるジヒドロテストステロン（dihydrotestosterone：ＤＨＴ）の量によって皮脂腺細胞が活性化し、皮脂が過分泌される。すなわち、脱毛においては、細胞内でテストステロン（testosterone：Ｔ）が５−アルファ−リダクターゼタイプ２によって男性ホルモンの１つであるジヒドロテストステロンに転換されると同時に、細胞質内にある受容体タンパク質と結合して液内に入って脱毛を誘発するが、皮膚や皮脂腺では、テストステロンが５−アルファ−リダクターゼタイプ１によってジヒドロテストステロンに転換され、皮脂腺細胞を活性化して分化が促進されることによって、皮脂腺内の皮脂を過分泌し、にきびを誘発する（J. Invest Dermatol 105:209-214 Diane etc）。
【００２３】
単純な皮脂の過分泌以外に発生する皮膚トラブルであるにきび、脱毛などは、皮膚の微細な炎症反応によってさらに悪くなる。にきびの発生過程を見れば、過度な皮脂か毛嚢に蓄積されて、にきび菌が活性化され、炎症が誘発される。
【００２４】
優れた抗酸化効果とともに抗炎症効果を有していて、細胞炎症反応のプロスタグランジン生成、特にプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の生成を抑制し、ｉＮＯＳによる伝染症因子であるＮＯ（nitri coxide）の生成を抑制し、皮脂の過分泌によるにきびのような皮膚トラブルを緩和させることができる。
【００２５】
しかし、このように皮膚に安全な天然素材であって、皮脂の分泌を根本的な原因を通じて減少させると同時に、炎症作用を緩和する原料は、多くないのが実情である。
【００２６】
一方、肥満は、遺伝的原因または生活習慣上の原因によってエネルギー攝取と消費が均衡を失い、過剰のエネルギーが脂肪に蓄積され、体脂肪が非正常的に多くなり、代謝異常が誘発される状態を称する。肥満は、肉食を主食とする西欧のみならず、韓国でも深刻な健康問題であり、心理的及び社会的に個人を萎縮させると共に、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、心臓疾患、糖尿病などの危険を増加させる主な原因として作用する。現代人の約３０〜４０％が肥満症を有していると知られており、先進国の場合、全体国民医療費の２〜７％が過体重及び肥満によって発生している。韓国の場合、保健医療体系の内外部で出費された肥満の社会経済的費用は、１９９８年基準で約１兆１７億ウォン、２００５年には、約１兆８千億ウォンに増加し、現在の肥満増加率が維持される場合、社会経済的費用負担が持続的に増加するものと予想される。
【００２７】
韓国の２００５年国民健康栄養調査結果によれば、肥満有病率（２０歳以上）は、全体３１．８％、男性３５．２％、女性２８．３％であった。これは、１９９８年及び２００１年と比較すれば、徐々に増加する傾向にあり、これは、食事習慣の西欧化（脂肪質のエネルギー比率２０％以上を占める）、酒類消費の増加、朝食を欠かすなどの生活習慣変化が重要な要因として認識されている（韓国食品医薬品安定庁、２００５年国民健康栄養調査、栄養調査部門、「韓国の国民は、何を、どのくらい、どのような方法で食べるか？」）。
【００２８】
肥満を治療して予防する方法は、多くの国において活発に多角的な側面で研究されているが、食べ物の攝取量を抑制し、エネルギー消費を低減する食事療法（食事制限治療、低エネルギー式療法、超低エネルギー式療法、断食療法）、運動を通じてエネルギーを発散させる運動療法、精神療法（行動修正療法、認知行動療法）、エネルギー代謝促進剤、食欲抑制剤、消化吸収抑制剤などを利用する薬物療法、臓器の一部を切除するか、脂肪吸入術のような手術療法などが現在知られており、これらのうち食事療法と運動療法は、肥満治療の基本となっている。また、肥満の食事療法においては、低エネルギー式にし、タンパク質の必要量を確保し、脂肪質は、超低必要量にし、その残りを糖質にし、できれば、低ＧＩ糖質食品を選択した方が良いと判断している。
【００２９】
既存の特許出願の頻度を見れば、糖類の吸収を抑制するための発明（消化調節）、体内に蓄積された体脂肪の代謝を調節するための発明（体脂肪合成抑制）、脂肪吸収抑制、食欲調節の順であり、これらのうち糖類の吸収を抑制するための発明（消化調節）の事例として、特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０１／３１８６０；GINSENG BERRY EXTRACTS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FROM GINSENG BERRY FOR THE TREATMENT OF TYPE 2 DIABETES AND OBESITYがある。しかし、糖類の吸収を抑制する方法は、中断した場合、さらに体重が増加するヨーヨー現象が現われる副作用があるので、体重減少を促進する効果的な方法が切実に要求されている。
【００３０】
したがって、肥満の原因として作用するいろいろな疾患を考慮してみれば、単純な体重の減量よりは、体脂肪の減少がさらに重要であることが明白である。摂取された脂肪の蓄積を阻害し、燃焼を活性化させることができる方法の模索が好ましいところ、脂肪酸のβ−酸化を増加させることができる方法の探索は、肥満治療の立派なターゲットになることができる。それらのうち、脂肪酸のβ−酸化の反応速度を決定する主要酵素であるＣＰＴ−１の発現を調節することによって、脂肪酸代謝を促進することができる（McCarty, Medical Hypotheses 57(3):324-336, 2001）。
【００３１】
このように、体脂肪減少の効果に優れており、体重減少にも効果がある新しい天然素材開発が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３２】
【特許文献１】米国特許登録第６,５２４,６２６号
【非特許文献】
【００３３】
【非特許文献１】最新高麗人参「成分及び効能編」、韓国人参煙草研究院, 56-112, 1996
【非特許文献２】Attele AS et al, Biochem Pharmacol, 58;1685-1693, 1999
【非特許文献３】Dey L. et al., Phytomedicine, 10; 600-605, 2003
【非特許文献４】最新高麗人参「栽培編」、韓国人参煙草研究院, 130-131, 1996
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３４】
これより、本発明者らは、高麗人参の地上部である高麗人参の実から種子を除去して得られた果肉と果皮の抽出物（以下、単に「実抽出物」という。）を利用して皮膚効能を有する化粧品を研究したところ、高麗人参の実抽出物が一般的な高麗人参及び紅参とは異なる成分及び組成による皮膚効能があることを知見し、本発明を完成するに至った。
【００３５】
また、本発明者らは、高麗人参の地下部である高麗人参の根以外に、地上部である高麗人参の実を利用して脂肪酸の酸化作用において速度制限酵素であるＣＰＴ−１遺伝子の発現を増加させる天然素材を探すために研究を重ねたところ、高麗人参の実抽出物が一般的な高麗人参及び紅参と異なる成分及び組成による体脂肪減少効能があることを知見し、本発明を完成するに至った。
【００３６】
したがって、本発明の目的は、高麗人参の実から抗酸化効果、コラーゲン生成促進及びＭＭＰ−１抑制効果を有する高麗人参の実抽出物を製造し、これを有効成分として含有する皮膚老化抑制及びしわ改善用皮膚外用剤組成物を提供することにある。
【００３７】
本発明の他の目的は、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、メラニンの生成抑制及び色素沈着改善による皮膚美白用皮膚外用剤組成物を提供することにある。
【００３８】
本発明のさらに他の目的は、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、表皮角質形成細胞の正常な分化を誘導し維持させる皮膚保湿効果とアトピー症状改善効果を有する皮膚保湿用またはアトピー症状改善用皮膚外用剤組成物を提供することにある。
【００３９】
本発明のさらに他の目的は、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、皮脂調節効果及び抗炎症効果、すなわち炎症因子の生成を抑制して、にきびを含む皮膚トラブルを改善させることができる抗炎症用皮膚外用剤組成物を提供することにある。
【００４０】
本発明のさらに他の目的は、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、皮膚の毛細血管を拡張させ、血行促進効果を示し、皮膚をきれいで且つ透明にする皮膚血色改善用皮膚外用剤組成物を提供することにある。
【００４１】
本発明のさらに他の目的は、脂肪酸の酸化作用において速度制限酵素であるＣＰＴ−１遺伝子の発現を増加させることによって、体脂肪の分解代謝を促進させて、肥満を予防し、肥満状態を改善させることができる健康機能食品組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００４２】
上記目的を達成するために、本発明では、有効成分として高麗人参の実抽出物を含有する皮膚老化抑制及びしわ改善用皮膚外用剤組成物を提供する。
【００４３】
また、本発明では、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、メラニンの生成抑制及び色素沈着改善による皮膚美白効果を示す皮膚美白用皮膚外用剤組成物を提供する。
【００４４】
また、本発明では、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、表皮角質形成細胞の正常分化と維持による皮膚保湿効果とアトピー症状改善効果を示す皮膚保湿用またはアトピー症状改善用皮膚外用剤組成物を提供する。
【００４５】
また、本発明では、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、皮脂調節効果と炎症反応調節によるにきび及び皮膚トラブル改善効果を有する抗炎症用皮膚外用剤組成物を提供する。
【００４６】
また、本発明では、上記高麗人参の実抽出物を有効成分として含有することによって、末梢血液循環を促進して皮膚血行を改善させて、血色を良くする皮膚血色改善用皮膚外用剤組成物を提供する。
【００４７】
また、本発明では、高麗人参の実抽出物を有効成分として含有する肥満予防及び改善用食品組成物を提供する。
【００４８】
また、本発明では、高麗人参の実抽出物を有効成分として含有する脂肪細胞内の中性脂肪分解促進用食品組成物を提供する。
【発明の効果】
【００４９】
本発明では、高麗人参の地上部のうち高麗人参の根と異なる成分と組成を有する高麗人参の実抽出物を有効成分として含有させることによって、皮膚老化抑制効果、皮膚しわ改善効果、皮膚美白効果、皮膚保湿及びアトピー症状改善効果、にきび及び皮膚トラブル改善効果及び皮膚血色改善効果を有する皮膚外用剤組成物を提供することができる。
【００５０】
また、本発明による肥満予防及び改善用食品組成物は、脂肪酸分解経路の核心酵素であるＬ−カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（ＣＰＴ−１）遺伝子の発現を増加させ、脂肪酸の酸化においてミトコンドリアの中に脂肪酸を運搬する役目をし、脂肪の燃焼を促進するので、肥満抑制と肥満予防効果に優れる。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】実施例１の高麗人参の実抽出物と比較例１の高麗人参抽出物のジンセノサイド成分を分析したグラフである。
【図２】試験物質の活性酸素除去活性を示すグラフである。
【図３】実施例１の高麗人参の実抽出物のコラーゲン生成量を測定したグラフである。
【図４】実施例１の高麗人参の実抽出物のＭＭＰ−１生合成阻害効果を測定したグラフである。
【図５】実施例１の高麗人参の実抽出物と紅参抽出物の一酸化窒素阻害効果を比較したグラフである。
【図６】実施例１の高麗人参の実抽出物によるＮＯの生成量を示すグラフである。
【図７】紅参抽出物によるＮＯの生成量を示すグラフである。
【図８】実施例１の高麗人参の実抽出物と比較例３の紅参抽出物の脂肪分解効果を示すグラフである。
【図９】高脂肪食餌群と一緒に高麗人参の実抽出物または紅参抽出物を８週間摂取したときの体重変化を示すグラフである。
【図１０】高脂肪食餌群と一緒に高麗人参の実抽出物または紅参抽出物を８週間摂取した後に摘出した副睾丸脂肪の重さを示すグラフである。
【図１１】高脂肪食餌群と一緒に高麗人参の実抽出物または紅参抽出物を８週間摂取した後に肝でのＣＰＴ−１発現程度を示すＲＴ−ＰＣＲ結果である。
【図１２】図１１の結果を濃度測定（densitometry）で定量した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
以下、本発明をより詳しく説明する。
本発明に使用する高麗人参の実抽出物は、種子を分離して除去した高麗人参の実の果肉と果皮を日光乾燥または熱風乾燥した後、水またはエタノールで抽出して製造したものである。すなわち、下記段階を経て製造することができるが、これらに限定されるものではない：
１）高麗人参の実の果肉と果皮を乾燥する段階；及び
２）上記段階１）の乾燥物に水またはエタノールを加えて還流抽出した後、濾過して減圧濃縮する段階。
【００５３】
本発明において、上記高麗人参の実抽出物は、皮膚外用剤組成物の形態によって組成物の全体重量に対して０．００１〜５０重量％で混合することができる。高麗人参の実抽出物は、０．００１重量％以上混合することが効果を考慮したときに好ましく、５０重量％以下を混合することが皮膚外用剤の剤形化を考慮したときに好ましい数値である。
【００５４】
本発明による化粧品の外形は、化粧学的または皮膚科学的に許容可能な媒質または基剤を含有する。これは、局所適用に適合なすべての剤形であって、例えば、溶液、ゲル、固体、ペースト、水相に油相を分散させて得たエマルジョン、懸濁液、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、微細顆粒球、またはイオン型（リポソーム）及び非イオン型の小胞分散剤の形態で、またはクリーム、スキン、ローション、パウダー、軟膏、スプレイまたはコンシルスチックの形態で提供されることができる。これらの組成物は、当該分野における通常の方法によって製造されることができる。また、本発明による組成物は、フォームの形態で、または圧縮された推進剤をさらに含有するエアロゾール組成物の形態で使用されることもできる。
【００５５】
本発明の化粧品は、脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤、ゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型または非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性または親油性活性剤、脂質小胞または化粧品に通常的に使用される任意の他の成分のような化粧学または皮膚科学分野に通常的に使用される補助剤を含有することができる。上記補助剤は、化粧学または皮膚科学分野において一般的に使用される量で導入する。
【００５６】
本発明の高麗人参の実抽出物を含有する皮膚外用剤は、その剤形において特に限定されるものではなく、例えば、柔軟化粧水、収斂化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、アイエッセンス、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、パウダー、ボディーローション、ボディークリーム、ボディーオイル及びボディーエッセンスなどの化粧料に剤形化されることができる。
【００５７】
肥満は、摂取した栄養の不均衡に起因して消費しない熱量が体内に蓄積されたり、エネルギー代謝の不均衡に起因して腸内酵素による脂肪分解能の低下、体脂肪分解酵素であるレプチンの分泌低下、体内に蓄積された脂肪の燃焼に関与するアドレナリン受容体の欠陥、及び遺伝的素因と体質によって体脂肪が蓄積されて発生する。
【００５８】
脂肪の構成成分である脂肪酸は、細胞内に入って、β−酸化、ＴＣＡサイクル及び酸化的リン酸化反応を行い、多量の酸素を使用してＡＴＰを生産し、エネルギーとして利用しやすい形態になる。しかし、脂肪酸は、大きい分子なので、単独でミトコンドリア膜を通過することが可能ではない。血中で細胞基質（cytosol）に入る長鎖脂肪酸は、直接ミトコンドリアの膜を通過しないが、次のような一連の３つの酵素反応が進行すれば、ミトコンドリアの内部に入ることができる。
【００５９】
（１）細胞基質に存在する長鎖脂肪酸は、ミトコンドリア外膜に存在するアシル−ＣｏＡ合成酵素によって脂肪酸カルボキシル基と助酵素Ａのチオール基との間にチオールエステル結合が形成される。このように生成された脂肪アシル−ＣｏＡは、アセチル−ＣｏＡのように高エネルギー物質の特性を有する。
【００６０】
（２）ミトコンドリア外膜で形成された脂肪アシル−ＣｏＡエステルは、内部のミトコンドリア膜を通過することができない。脂肪酸をミトコンドリア内に移動させるためにミトコンドリア内膜の外表面に存在するＣＰＴ−１がＣｏ−Ａからカルニチンに脂肪アシル基のエステル交換を触媒する。このように生成された脂肪アシル−カルニチンエステルは、アシル−カルニチン／カルニチン運搬体を通過して、促進拡散によって内部ミトコンドリア膜からマトリックスに移動する。
【００６１】
（３）脂肪アシル−カルニチンは、カルニチンアシルトランスフェラーゼIIによって触媒され、脂肪アシル−ＣｏＡに転換される。
【００６２】
このような３つの段階を経て入た脂肪酸は、β−酸化によりアセチル−ＣｏＡに転換され、これは、クエン酸サイクルを経て最終産物である電子とＣＯ２に転換され、ここで発生した電子は、さらに呼吸鎖過程を経てＡＰＴを生産する（Lehninger et al., Principles of Biochemistry:479-505, 1993）。
【００６３】
本発明において使用される高麗人参の実抽出物は、上記脂肪分解代謝を促進するためにＣＴＰ−１遺伝子の発現を増加させる役目をする。
【００６４】
本発明による肥満予防及び改善用食品組成物は、健康食品の形態によって高麗人参の実抽出物を組成物の全体重量に対して０．０１〜１００重量％で混合することができる。
【００６５】
本発明による高麗人参の実抽出物を含有する肥満予防及び改善用食品組成物は、脂肪酸分解経路で核心酵素として作用するカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（Carnitine Palmitoyl Transferase-1；ＣＰＴ−１）遺伝子の発現を増加させる。
【００６６】
また、本発明による高麗人参の実抽出物を含有する食品組成物は、脂肪酸の酸化においてミトコンドリアに脂肪酸を運搬する役目をし、中性脂肪の燃焼を促進する。
【００６７】
以下、実施例及び試験例により本発明の構成及び効果をさらに具体的に説明する。しかし、これらの実験例及び実施例は、本発明に対する理解を助けるために例示の目的だけで提供されるものであって、本発明の範疇及び範囲が下記実施例によって制限されるものではない。
【００６８】
［実施例１］高麗人参の実抽出物の製造
１）高麗人参の実の前処理：生の高麗人参の実を収穫して種子を分離して除去した後、高麗人参の実の果肉と果皮を日光乾燥または熱風乾燥を通じて高麗人参の実の乾燥原料を製造した。
【００６９】
２）高麗人参の実抽出物の製造：高麗人参の実乾燥物１ｋｇに水３Ｌを加えて還流抽出し、濾過した後、４０〜４５℃で減圧濃縮して、３００ｇの高麗人参の実抽出物を得た。
【００７０】
［比較例１］高麗人参の根抽出物の製造
上記実施例１において高麗人参の実の代わりに同量の高麗人参の根を使用したことを除いて実施例１と同一の方法で製造した。
【００７１】
［比較例２］白参抽出物の製造
高麗人参の実抽出物と効能を比較するために白参抽出物を製造した。白参または白参粉末１ｋｇに水または酒精３Ｌを加えて、還流抽出を３回行った後、通常の方法で濾過過程を経た後、減圧濃縮して、約２５０ｇの白参抽出物を得た。
【００７２】
［比較例３］紅参抽出物の製造
高麗人参の実抽出物と効能を比較するために紅参抽出物を製造した。紅参（水分含量１４％）または紅参粉末１ｋｇに水または酒精３Ｌを加えて、還流抽出を３回行った後、通常の方法で濾過過程を経た後、減圧濃縮して、約２５０ｇの紅参抽出物を得た。
【００７３】
［試験例１］高麗人参の実抽出物の成分比較
＜高麗人参の実と高麗人参の根のジンセノサイド（高麗人参サポニン(ginseng saponins)）成分分析＞
実施例１及び比較例１でそれぞれ高麗人参の実と高麗人参の根抽出物を製造した後、これら抽出物にエーテルを処理して脂溶性成分を除去した後、ブタノール（ＢｕＯＨ）で粗サポニンを抽出、濃縮して、ＨＰＬＣを用いたジンセノサイド成分分析を行い、その結果を図１及び表１に示す。
【００７４】
【表１】
0005734648.tif 000002
【００７５】
実施例１で製造した高麗人参の実抽出物は、粗サポニン含量において比較例１で製造した高麗人参の根抽出物の約２倍含量を有し、ジンセノサイドをＰＤ（Protopanaxadiol）系−“ジンセノサイドＲｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ及びＲｄ”及びＰＴ（Protopanaxatriol）系−“ジンセノサイドＲｅ、Ｒｇ１及びＲｇ２”の比率で区分したとき、それぞれ０．７３と３．２３であって、その組成において高麗人参の実と高麗人参の根は明らかな差異及び特徴を示す。
【００７６】
＜高麗人参の実抽出物のミネラル成分分析＞
実施例１で製造した高麗人参の実抽出物が高麗人参と異なる‘果実’としての特徴を有することを区分するために、ビタミンを含めたミネラル成分分析を行い、その結果を下記表２に示す。
【００７７】
【表２】
0005734648.tif 000003
【００７８】
以上のように、本発明に使用する高麗人参の実の成分的特性は、高麗人参の根より多い高麗人参サポニンを含有すると同時に、サポニン組成の性質が正反対であり、また高麗人参の根と異なって、実としてビタミンとミネラル１６種の含量に富むことを確認することができ、これに基づいて皮膚効能に対する下記実験を行った。
【００７９】
［試験例２］皮膚老化抑制及びしわ改善効果
１）高麗人参の実抽出物の抗酸化効果
紫外線（ＵＶ）の照射によって細胞で発生する活性酸素（ＲＯＳ；Reactive oxygen species）を除去する能力を比較する実験を通じて抗酸化効果を調査した。陽性対照群として一般的に抗酸化効果を比較するのに使用するトロロクス（trolox）を使用し、これを白参及び紅参抽出物と比較した（図２）。また、試験物質を処理しない群を対照群として使用した。
【００８０】
図２の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、ヒトＨａＣａＴ角質形成細胞単層培養システム（human HaCaT keratinocytes monolayer culture system）において対照群に比べてＵＶによって生成された活性酸素を有意的に消去する効果を示す。これは、抗酸化物質の活性指標として使用されるトロロクスと類似な程度の優れた活性であり、有意的な消去活性がない白参、紅参抽出物と対照される結果である。すなわち、本発明の実施例１による高麗人参の実抽出物は、皮膚老化の原因になる活性酸素を有意的に消去することによって、しわ生成、弾力低下及び色素沈着などを予防する効果を有することができることを確認した。
【００８１】
２）単細胞ゲル電気泳動（Single cell gel electrophoresis; SCGE, Cometassay）によるＤＮＡ酸化的損傷に対する抑制活性
ヒトの正常線維芽細胞を２４ｈｒ培養した後、実施例１の高麗人参の実抽出物とビタミンＥをそれぞれ濃度別に処理し、１２ｈｒ後に陽性対照群であるＨ２Ｏ２（最終濃度１０−３Ｍ）を処理した後、電気泳動法で染色した結果を蛍光顕微鏡で観察した。この際、イメージ分析機であるＫＯＭＥＴ ３．１（Kinetic Imaging, England）を使用して２５個の各細胞でＤＮＡ切断の結果として現われたテール（ｔａｉｌ）の長さ（μｍ）を分析し、その結果を下記表３に示す。
【００８２】
【表３】
0005734648.tif 000004
【００８３】
上記表３の結果から、細胞ゲル電気泳動による実施例１の高麗人参の実抽出物は、有意性ある酸化的ＤＮＡ損傷抑制活性を示し、これにより、本発明による高麗人参の実抽出物がヒドロキシルラジカル（・ＯＨ）によるＤＮＡシングルストレンドブレーキを抑制するＤＮＡ酸化的損傷抑制剤として作用することを確認することができた。
【００８４】
３）Ｉ型プロコラーゲン分析
ヒト線維芽細胞を１０５個の濃度で１２ウェル培養プレートで培養した後、実施例１の高麗人参の実抽出物１ｐｐｍ及び１０ｐｐｍを含む培地に交替した。培養３日目に、細胞を収穫して、ＥＬＩＳＡ方法で生成されたＩ型プロコラーゲンの量を定量した。その結果は、実施例１の高麗人参の実抽出物を含まない対照群を１００にして測定した値との比較値として算出し、陽性対照群としてＴＧＦ−ｂを使用した。また、高麗人参の根抽出物として白参及び紅参抽出物と比較した。
【００８５】
ヒト正常線維芽細胞の単層培養システムにおいて実施例１の高麗人参の実抽出物は、対照群に比べてＩ型プロコラーゲンの生成を顕著に促進させる効果を示す。すなわち、実施例１の高麗人参の実抽出物は、ヒトの皮膚の老化によって発生するコラーゲン生成量の減少現象を抑制することができ、しわ改善効果を示す（図３）。
【００８６】
４）ＭＭＰ−１発現抑制分析
ヒト線維芽細胞を１０５個の濃度で１２ウェル培養プレートで培養した後、紫外線Ｂを４０ｍＪ／ｃｍ２で照射した後、実施例１の高麗人参の実抽出物１ｐｐｍ及び１０ｐｐｍを含む培地に交替した。培養２日目に細胞を収穫して、ＥＬＩＳＡ方法で生成されたＭＭＰ−１（matrix metalloproteinase Ｉ）の量を定量した。その結果は、試験物質を含まない紫外線対照群を１００にして測定した値との比較値として算出し、陽性対照群としてＴＧＦ−ｂを使用した。また、高麗人参の根抽出物として白参及び紅参抽出物と比較した。
【００８７】
ヒト正常線維芽細胞の単層培養システムにおいて本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、ＵＶＢ ４０ｍＪ／ｃｍ２によって誘導されるＭＭＰ−１の発現を有意的に抑制した。したがって、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、内的老化または外的環境要因によって発生する皮膚組職分解酵素であるＭＭＰ−１の生合成を阻害して、皮膚老化を抑制し、しわ改善に効果があることを確認した（図４）。
【００８８】
５）紫外線によるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の生合成抑制効果
ヒト線維芽細胞を１０５個の濃度で１２ウェル培養プレートで培養した後、紫外線Ａを１５Ｊ／ｃｍ２で照射した後、実施例１の高麗人参の実抽出物及び比較例１の高麗人参の根抽出物をそれぞれ０．１ｐｐｍ、１ｐｐｍ及び１０ｐｐｍ含む培地に交替した。培養２日目に、細胞を収穫して、ウェストンブロット方法を使用して生成されたシクロオキシゲナーゼ−２（cyclooxygenase-2、COX-2）の量を定量した。試験物質を含まない紫外線対照群を１００にして濃度計で測定した値との比較値として算出し、その結果を下記表４に示す。
【００８９】
【表４】
0005734648.tif 000005
【００９０】
上記表４の結果から、実施例１の高麗人参の実抽出物は、紫外線によるシクロオキシゲナーゼ−２の生合成を濃度依存的に減少させ、ＣＯＸ−２の産物であるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）による皮膚組職分解を防止することを確認することができた。
【００９１】
６）紫外線による腫瘍怪死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の生合成抑制効果
ヒト角質形成細胞を１０５個の濃度で１２ウェル培養プレートで培養した後、紫外線Ｂを３０ｍＪ／ｃｍ２で照射した後、実施例１の高麗人参の実抽出物及び比較例１の高麗人参の根抽出物をそれぞれ０．１ｐｐｍ、１ｐｐｍ及び１０ｐｐｍ含む培地に交替した。培養６〜２４時間後に細胞を収穫して、ＥＬＩＳＡ（Pharmingen 555212）方法を使用して生成された腫瘍怪死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の量を定量し、試験物質を処理しない紫外線対照群を１００にして測定した値との比較値として算出した結果を下記表５に示す。
【００９２】
【表５】
0005734648.tif 000006
【００９３】
上記表５の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物が紫外線による腫瘍怪死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の生合成を濃度依存的に減少させ、腫瘍怪死因子アルファの生合成によって発生する皮膚老化をあらかじめ防止することができることを確認した。
【００９４】
７）ヒト皮膚を対象とする皮膚しわ改善効果
３０〜５０歳の顔面しわがある試験対象者４０名に対して、下記表６に記載された組成を有する実施例１の高麗人参の実抽出物を含有する実施例２及び含有しない比較例２の栄養クリームを製造した後、これらの皮膚しわ改善効果を比較評価した（単位：重量％）。
【００９５】
【表６】
0005734648.tif 000007
【００９６】
被検者の顔面の左部には実施例２を、右部には比較例２を３ヶ月間使用した。クリーム使用以前の顔面両方部の皮膚状態を測定した後、クリーム使用３ヶ月後に同一部位を再測定して、皮膚しわの変化を測定した。２４℃、相対湿度４０％の恒温恒湿室で目の尾部位のしわをレプルリカで取ってビシオメタシステム（Visiometer system；Ｃ＋Ｋ社）で皮膚しわを測定した。皮膚しわの変化量は、下記数式１によって計算した。
【数１】
0005734648.tif 000008
【００９７】
上記数式１によって計算した結果、比較例２を使用した部位の皮膚しわは、６．５±４％（平均±標準偏差）の減少値を示すが、実施例２を使用した部位の皮膚しわは、３９±１１％の減少値を示し、優れた皮膚しわ改善効果を示す。
【００９８】
８）ヒトの皮膚弾力改善効果
上記表６の組成で製造した実施例２及び比較例２の皮膚弾力改善効果を測定した。３０歳以上の女性４０名を対象にして２個のグループに分けて、各グループに上記実施例２及び比較例２の栄養クリームを毎日２回ずつ１２週間顔面に塗布した後、皮膚弾力測定器（Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany）を利用して皮膚弾力を測定し、その結果を下記表７に示す。表７の結果値は、皮膚弾力測定器の皮膚粘弾性の性質を意味する。
【００９９】
【表７】
0005734648.tif 000009
【０１００】
上記表７の結果から明らかなように、実施例１の高麗人参の実抽出物が含有された実施例２の栄養クリームを使用した場合、約１５０％の皮膚弾力増進効果を示す。
【０１０１】
［試験例３］皮膚美白効果
１）ねずみの色素細胞を利用したメラニンの生成抑制効果
実施例１の高麗人参の実抽出物のメラニンの生成抑制効果を調べるためにねずみの色素細胞を利用した。
【０１０２】
まず、Ｃ５７ＢＬ／６マウス来由のねずみ色素細胞（Mel-Ab cell）（Dooley, T. P. et al, Skinpharmacol, 7, pp 188-200）をＤＭＥＭ（Dulbeccos modified Eagles media）に１０％牛胎仔血清、１００ｎＭ  ２−Ｏ−テトラカノイルホルボル−１３−アセテート及び１ｎＭコレラ毒素を添加した培地で３７℃、５％ＣＯ２の条件で培養した。培養したＭｅｌ−Ａｂ細胞を０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、２４ウェル培養プレートに１０５細胞／ウェルの濃度で細胞を培養した後、二日目から３日連続して１ｐｐｍ及び１０ｐｐｍの高麗人参の実抽出物を加えて培養した。この際、紅参抽出物とヒドロキノンは、陽性対照群として使用した。次に、培養液を除去し、ＰＢＳで洗浄した後、１Ｎ水酸化ナトリウムで細胞を溶解して、４００ｎｍで吸光度を測定した後、下記数式２によってメラニンの生成抑制率を計算し、その結果を下記表８に示す（Ｄｏｏｌｅｙの方法）。
【数２】
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【０１０３】
【表８】
0005734648.tif 000011
【０１０４】
上記表８に示すように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、紅参抽出物より優れたメラニンの生成抑制率を示し、ヒドロキノンと類似の程度のメラニンの生成抑制率を示すことを確認した。これより、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物が優れた美白効果を示すことを確認することができた。
【０１０５】
２）ヒト皮膚に対する美白効果
実施例１の高麗人参の実抽出物のヒト皮膚に対する美白効果を調べるために下記のような実験を行った。
【０１０６】
まず、元気な１２名の男性を対象にして被検者の上膊部位に直径１．５ｃｍの穴があいた不透明テープを付着した後、各被検者の最小紅斑量（Minimal Erythema Dose）の約１．５〜２倍の紫外線（ＵＶＢ）を照射して、皮膚の黒化を誘導した。
【０１０７】
上記紫外線の照射後、試験物質である実施例１の高麗人参の実抽出物とヒドロキノンをそれぞれ塗布し、１ヶ所は何も塗布せずに、１０週間状態変化を観察した。１週間の単位で皮膚の色を色差計ＣＲ２００２（日本国、ミノルタ社）で測定した。
【０１０８】
次に、上記各試験物質の塗布開始時点と塗布完了時点での皮膚色の差異（△Ｌ＊）を下記数式３によって計算し、その結果を下記表９に示した。一方、美白効果は、試料塗布部位と対照群部位の△Ｌ＊の比較として判定するが、△Ｌ＊値が２程度の場合は、沈着された色素の美白化が明らかな場合であり、約１．５以上なら美白効果があると判定することができる。
【数３】
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【０１０９】
【表９】
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【０１１０】
上記表９に示すように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、ヒドロキノンと類似の程度の皮膚色の明るさを示すことを確認した。これは、上記高麗人参の実抽出物が紫外線によって生成された色素沈着を改善して、皮膚色を明るくするからである。
【０１１１】
［試験例４］皮膚保湿及びアトピー症状改善効果
１）ヒト角質形成細胞の分化誘導
角質形成細胞及びヒト皮膚細胞株（ＨａＣａＴ）の分化時に生成されるＣＥ（Cornified Envelop）の量を測定し、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物の細胞分化促進効果を調べた。
【０１１２】
一次培養したヒトの角質形成細胞を培養用フラスコに入れて底部に付着させた後、下記表１０に記載された試験物質を濃度別に培養液に添加し、細胞が底部面積の７０〜８０％程度成長するまで５日間培養した。この細胞を収獲して、ＰＢＳ（phosphate buffered saline）で洗浄した後、２％ＳＤＳ（Sodium Dodecyl Sulfate）と２０ｍＭ濃度のＤＴＴ（Dithiothreitol）を含有する１０ｍＭ濃度のトリス−塩酸緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４）１ｍＬを加えてソニケイション、ボイリング、遠心分離した沈殿物をさらにＰＢＳ  １ｍＬに懸濁させて、３４０ｎｍでの吸光度を測定した。これとは別に、上記ソニケイション後の溶液の一部を取ってタンパク質の含量を測定し、細胞分化程度の評価時に基準にした。低カルシウム（０．０３ｍＭ）処理群と高カルシウム（１．２ｍＭ）処理群をそれぞれ陰性／陽性対照群にして、低カルシウム濃度に試験物質を添加して行った試験結果を下記表１０に示す。
【０１１３】
【表１０】
0005734648.tif 000014
【０１１４】
上記表１０の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、角質形成細胞の分化を促進することを確認することができた。
【０１１５】
２）ヒト皮膚細胞株のトランスグルタミナーゼの発現効果
ヒトの皮膚細胞株を９６ウェル培養プレートに各ウェル当たり５×１０４個を入れて２４時間付着させた。付着させた皮膚細胞株に試験物質を処理した後、２日が経過した後、培地を除去し、−２０℃冷蔵庫に保管した。凍結−解凍を２回繰り返して物質処理した細胞を破壊させた後、−２０℃に保管したアセトン：エタノール（１：１、ｖ／ｖ）を処理して、４℃で３０分間放置して細胞を固定させた。その後、室温に放置して有機溶媒が蒸発されるようにし、ブロッキング（１％牛血清アルブミン）、トランスグルタミネイズ抗体（primary antibody）、ＨＲＰアンチ−マウス抗体（secondary）を行い、発色は、ＯＰＤ（o-phennyldiamine）を添加して行った。発現量は、４９０ｎｍで吸光度を測定し、補正は、６３０ｎｍでバックグラウンドを測定して行った。低カルシウム（０．０３ｍＭ）処理群と高カルシウム（１．２ｍＭ）処理群をそれぞれ陰性／陽性対照群として使用し、低カルシウム濃度に試験物質を添加して実施した結果を下記表１１に示す。
【０１１６】
【表１１】
0005734648.tif 000015
【０１１７】
上記表１１の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、対照群に比べて約２倍程度の増加を示し、対照群よりも多量が発現されることが分かった。したがって、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物がトランスグルタミネイズの発現を向上させることが分かった。
【０１１８】
３）ヒト皮膚で表皮脂質（全体セラマイド）生成量増加効果
実施例１の高麗人参の実抽出物が実際ヒト皮膚での脂質合成増加に及ぶ効果を評価するために、Ｃａｒｂｏｐｏｌ ＥＴＤ ２０２０  ０．５％、ＴＥＡ  ０．４５％、試験物質５％、及び脱イオン化された水で１００を合わせて使用した。１２名の成人男女を対象にして下腕に５０ｍ：ポリプロピレンコルニカルチューブの直径に相当分の領域を表示した後、毎日２回ずつ対照群と実施例１の高麗人参の実抽出物を２０μＬずつ塗布しながら被検者を２群に分けて３日目と１１日目に生成脂質量を下記のような方法で脂質を抽出して分析した。下腕を水道水を利用して洗浄した後、スコッチ８１０マジックテープ（登録商標）（Scotch 810 Magic tape）で１回テープストリッピングした後、切断した５０ｍＬポリプロピレンコルニカルチューブを保存所（reservoir）として使用して１ｍＬのシクロヘキサン／エタノール（４：１）を添加した後、約１分間攪拌した後、これを新しいチューブに移し、さらに１ｍＬのシクロヘキサン／エタノール（１：１）を前述のような方法で処理した後、チューブに集めた。その後、これを５０℃で窒素ガスを利用して乾燥させた後、５００μＬのクロロホルム／メタノール（２：１）に溶解した後、各試験物質をＣＡＭＡＧ社の自動化ＴＬＣサンプラー−４を利用してシリカゲルＴＬＣ（Thin Layer chromatography）板に点滴し、ＡＭＤ（Automated Multiple Development）を利用して下記表１２のような組成比の展開溶媒で展開した。
【０１１９】
【表１２】
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【０１２０】
ＴＬＣ板を展開させた後、ＴＬＣスキャナ−ＩＩ（ＣＡＭＡＧ社：densitometer）を利用して５７０ｎｍ波長で各バンドのサイズを測定した。無処理群のセラマイド生成量を１００％に換算した各処理群のセラマイド生成量は、下記表１３に示す。
【０１２１】
【表１３】
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【０１２２】
上記表１３に示されたように、実施例１の高麗人参の実抽出物の処理３日後に、陰性対照群（無処理群／ビヒクル）に対して約５乃至８％程度の増加状態を示し、陽性対照群（グリセリン）よりは６％程度の増加を示した。また、１１日後には、脂質生成能が陰性対照群に比べて約１６％程度、陽性対照群に比べて約２２％程度優れたものと現われた。これは、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物によるセラマイド増加を立証するものである。
【０１２３】
４）人体での皮膚保湿力増加
皮膚乾燥症を示す５０〜６０代の成人男女５０名を２個のグループに分けて、各グループに実施例２と比較例２を毎日２回ずつ４週間顔面に塗布した。塗布開始前と、塗布後１週、２週、４週経過した時点及び塗布を中止してから２週経過（総６週経過）後に恒温、恒湿条件（２４℃、相対湿度４０％）でコルネオメータで皮膚水分量を測定し、その結果を下記表１４に示す。試験結果は、試験開始直前に測定したコルネオメータ値を基準にして一定期間処理した後の測定値の増加分を百分率で表示したものである。
【０１２４】
【表１４】
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【０１２５】
コルネオメータは、表皮の電気伝導度値を測定して、皮膚に存在する水分量を測定する皮膚水分測定器である。上記表１４から明らかなように、実施例１の高麗人参の実抽出物が含有された実施例２の物質を塗布した群では、比較例２を塗布した対照群に比べて皮膚水分量がさらに増加した。また、実施例２の栄養クリームの塗布を中止してから２週後（総６週経過）に皮膚水分を測定した数値が１〜２週経過後の数値と類似に現われ、実施例２を塗布しなくても、一定期間本発明による高麗人参の実抽出物の塗布による皮膚水分が持続的に維持されることが分かった。
【０１２６】
５）アトピー性皮膚炎改善効果
アトピー症状改善効果を次のように測定した。アトピー症状（かゆみ、ただれまたはひどい乾燥症）で診断を受けるか、目視による観察でアトピー類似症状を示す１０〜５０代の５０名を対象にして２グループに分けて、それぞれ実施例２と比較例２を提供し、アトピー症状を示す部位に毎日２回ずつ１２週間塗布するようにした。効能評価は、１２週処理後、アンケートの調査を通じて改善程度を本人が主観的に判断するようにした。アンケートでは、アトピー性皮膚炎の症状を“かゆみ”、“乾燥”、“角質発生”、“頭垢”、“紅斑”、“腫れ上がり”、“皮膚割れ”及び“粘液と湿疹”などに分けて、上記症状がある場合、それぞれの症状に対して改善程度を評価した後、これを平均して、アトピー症状改善効果を個人別に評価し、その結果を下記表１５に示す。
【０１２７】
【表１５】
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【０１２８】
表１５から明らかなように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物が含有された剤形を塗布した処理群が対照群より全般的にアトピー症状がさらに改善したことが分かる。
【０１２９】
［試験例５］にきび及び皮膚トラブル緩和
１）皮脂調節効果：５−アルファ−リダクターゼ活性抑制効果
成熟したＳＤ（Sproque-Dawley）雄性ラット（生まれ後７〜８週）をジエチルエーテルで致死させた後、腹部前立腺を剥離し、結合組織を除去し、緩衝液（０．３２Ｍスクロース、０．１ｍｍジチオスレイトール及び２０ｍＭ酢酸ナトリウム）を添加して細く切った後、粉砕機で懸濁化した。懸濁液は、遠心分離して上層液を取って、５−アルファ−リダクターゼを部分精製し、この酵素の活性度抑制実験を行った。
【０１３０】
上記で得た上層液の一部を取って、０．２Ｍ一塩基酸と０．２Ｍ二塩基酸が入っている緩衝液に入れた後、同位元素である３Ｈが付いている基質（テストステロン）と一緒に反応させて、生成物であるジヒドロテストステロンの生成量を測定した。
【０１３１】
反応溶液は、１ｍＭジチオスレイトール、４０ｍＭナトリウムフォスフェート（ｐＨ６．５）、５０μＭ  ＮＡＤＰＨ、［１、２、６、７−３Ｈ］テストステロン／テストステロン（２．２×１０９モル）及び酵素懸濁液（０．８ｍｇ）タンパク質を５６５μＬ含む。
【０１３２】
実施例１の高麗人参の実抽出物を１０％エタノールに溶解し、一反応当たり１００μｇ／１０％エタノール１０μＬ状態で加え、対照群としては、同一の体積の溶媒を、陽性対照群としてリボフラビンを使用した。
【０１３３】
反応は、酵素懸濁液を付加すると同時に開始し、３７℃で３０分間進行させた後、１ｍＬのエチルアセテートを加えて抽出し、１００μＬのエチルアセテート相をシリカプラスチックシートカイゼルゲル６０ Ｆ ２５４上で、展開溶媒系は、アセテート−シクロヘキサン（１：１）で展開した。
【０１３４】
プラスチックシートを空気乾燥した後、同位元素の量を測定するためにＶＡＳシステムを使用したが、乾燥したプラスチックシートとＸ線フィルムを一緒にＶＡＳカセットに入れて１週間後にフィルムに残っているテストステロンとジヒドロテストステロンの同位元素量を測定し、それぞれの阻害率に対する結果を下記表１６に示す。
【０１３５】
【表１６】
0005734648.tif 000020
【０１３６】
上記表１６から、高麗人参の実抽出物は、５−アルファリダクターゼ抑制効果があることが分かった。
【０１３７】
２）脂質合成抑制効果
脂質合成に必要な炭素元素の取り込み（uptake）程度を定量し、脂質合成阻害程度を評価する方法で皮脂腺での脂質合成程度を評価した。
【０１３８】
すなわち、皮脂腺が多いハムスター耳組職を生検して、Ｃ１４がラベルされた培地で６時間放射能測定器で対照群と試験物質を比較定量し、阻害程度を評価した。試験物質は、ハムスターの右側耳組職を利用し、培地に試験物質溶液０．０１％を加えて使用し、対照群は、ハムスターの左側耳組職を利用し、培地に生理食塩水０．０１％を加えて使用し、その結果を下記表１７に示す。
【０１３９】
一方、表１７で、阻害率は、下記数式４によって計算したものであり、その値は、４匹のハムスターに対する平均値である。
【数４】
0005734648.tif 000021
【０１４０】
【表１７】
0005734648.tif 000022
【０１４１】
上記表１７の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物が脂質生合成抑制効果があることが分かる。
【０１４２】
３）コメド（comedos）減少効果
コメド減少効果を確認するために、本発明に使用された実施例１の高麗人参の実抽出物を１，３−ブチレングリコールに溶解させて１％溶液になるようにした後、兎を用いた臨床実験用試験物質として使用した。
【０１４３】
白色の兎の耳にコメド誘発物質（comedo inducer）である５０％オレイン酸／パラフィンオイル０．２ｍＬを午前に塗布し、耳掻きで擦った。一日に二度の割合で塗布することを１月間、すなわち午前に５０％オレイン酸／パラフィンオイルを塗布し、午後には試験物質を塗布し、全体実験期間の一ヶ月間塗布した。コメドは、約１０日前後から発生するが、実施例１の高麗人参の実抽出物を０．２ｍＬずつ午後に塗布した結果、２週後からは漸次にコメドの数及びサイズが減少した。
【０１４４】
各組職を生検して角質をむき出した後、コメドのサイズを顕微鏡の下で測定し、その結果を下記表１８に示す。
【表１８】
0005734648.tif 000023
【０１４５】
上記表１８の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物で処理した兎のコメドが顕著に減少することが分かった。すなわち、実施例１の高麗人参の実抽出物によって皮脂が減少し、結果的に皮膚過角質化を減少させて、コメドが減少したと考えられる。
【０１４６】
４）皮脂分泌抑制効果
脂性皮膚緩和効果を測定するために、２０〜４５歳の女性で油性肌を有する２０名の額部分に実施例２（高麗人参の実抽出物含有）を朝夕に１日２回塗布し、同じく他の１０名には比較例２を朝夕に１日に２回塗布して使用するようにした。その後、１週間後、２週間後、３週間後及び４週間後に皮膚油分測定器（Sebumeter SM 810）を利用して皮膚の皮脂分泌量を測定した。実験は、２０℃、相対湿度２０％で行われ、測定結果は表１９に示す。結果は、被検者１０名の平均値で示す。測定値が２２０以上であれば脂性皮膚を示し、１００乃至２２０の間の値は正常皮膚を示す。
【０１４７】
【表１９】
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【０１４８】
上記表１９の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物を含有する実施例２の栄養クリームが過多な皮脂分泌を抑制する効果を示し、皮脂調節効果があることを確認することができた。
【０１４９】
５）抗炎症効果：プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）生成抑制効果
本発明による高麗人参の実抽出物のプロスタグランジンＥ２生成抑制効果を調べるために、下記のような方法で実験した（参考文献：Jeffrey, K.H. , Anglea, S.W., Zoe, S., and Rhia C. M. Intracellular Measurement of Prostaglandin E2:Effect of Anti-inflammatory Drugs on Cyclooxygenase Activity and Prostanoid Expression, Analytical Biochemistry, 1999, 271, 18-28）。
【０１５０】
まず、ヒトの表皮組職から分離した線維芽細胞 をＣＯ２培養器で２４時間培養した後、ＦＢＳ（fetal bovine serum）が含まれない培地に交替し、２時間培養した後、実施例１の高麗人参の実抽出物に蒸留水を混合して、それぞれ１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬの濃度で準備して処理した後、３７℃、５％（ｖ／ｖ）のＣＯ２培養器で２時間培養した。
【０１５１】
次に、プロスタグランジンＥ２刺激源としてカルシウムイオフォアＡ２３１８７とアラキドン酸を５０μｍの濃度で５分間処理した後、細胞を溶血させ、ＥＬＩＳＡ読み取り機４５０ｎｍで吸光度を測定して、プロスタグランジンＥ２を定量し、その結果を下記表２０に示す。この際、下記表２０に記載した抑制率は、アラキドン酸の処理時に、実施例１の高麗人参の実抽出物で処理しない皮膚線維芽細胞と実施例１の高麗人参の実抽出物で処理した線維芽細胞のプロスタグランジンＥ２生成量の差異を基準にして計算し、５回繰り返して平均値を求めた。
【０１５２】
【表２０】
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【０１５３】
上記表２０の結果から、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、刺激源によるプロスタグランジンＥ２の生成を抑制することができることを確認することができた。
【０１５４】
６）抗炎症効果：ＬＰＳ（Lipopolysaccharide）で誘導されたシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の生合成抑制効果
ヒトの線維芽細胞を１０５個の濃度で１２ウェル培養プレートで培養した後、ＬＰＳでした処理した。その後、実施例１の高麗人参の実抽出物を１ｐｐｍ、１０ｐｐｍ及び１００ｐｐｍを含む培地に交替した。培養２日目に細胞を収穫して、ウェスタンブロット方法を使用して生成されたシクロオキシゲナーゼ−２（ｃｙclooxygenase-2；ＣＯＸ−２）の量を定量した。対照群を１００にして濃度計で測定した値との比較値を下記表２１に示す。この際、対照群は、実施例１の高麗人参の実抽出物を処理せずに培養した無処理群である。
【０１５５】
【表２１】
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【０１５６】
上記表２１の結果から明らかなように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、炎症反応誘発因子であるＬＰＳで誘導されたシクロオキシゲナーゼ−２の生合成を濃度依存的に減少させて炎症反応を抑制することによって、皮膚トラブルを緩和させることができる効能を示す。
【０１５７】
７）抗炎症効果：ＬＰＳ（Lipopolysaccharide）で誘導された腫瘍怪死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の生合成抑制効果
ヒト角質形成細胞を１０５個の濃度で１２ウェル培養プレートに培養し、ＬＰＳで処理した。その後、実施例１の高麗人参の実抽出物１ｐｐ、１０ｐｐｍ及び１００ｐｐｍを含む培地に交替した。６−２４時間培養した後に細胞を収穫して、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ５５５２１２）方法を使用して生成された腫瘍怪死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の量を定量した。対照群を１００にして測定した値との比較値を表２２に示す。この時対照群は、実施例１の高麗人参の実抽出物を処理せずに培養した無処理群である。
【０１５８】
【表２２】
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【０１５９】
上記表２２の結果から分かるように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、炎症誘発因子ＬＰＳによる腫瘍怪死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の生合成を濃度依存的に減少させて、これにより発生することができる炎症反応を抑制し、皮膚トラブルの改善に寄与することができた。
【０１６０】
８）大食細胞（macrophages）に対してＬＰＳで誘導させたＮＯ（酸化窒素）抑制効果
本発明による高麗人参の実抽出物の抗炎症効果を調べるために、大食細胞に対してＬＰＳで誘導させたＮＯ（酸化窒素）抑制実験を行った。
１０％濃度の血清を添加した培地で５％ＣＯ２条件の下に大食細胞（ｒａｗ ２６４．７ ｃｅｌｌ）を培養した。９６ウェル培養プレートで２×１０５個の濃度で成長するようにし、ＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）で刺激した後、実施例１の高麗人参の実抽出物と紅参抽出物をそれぞれ処理して、３７℃で１時間保管した後、ＮＯ生成程度を測定し、ＬＰＳで誘導させたＮＯを阻害する効果を比較した。ＮＯ生成量の測定は、Ｇｒｉｅｓｓ反応法（Minghetti,  L. et al.,  1991,  Glia 19.152-160）を利用し、その結果を図５に示す。
【０１６１】
図５の結果から明らかなように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、炎症誘発因子（Cytokine）としてのＮＯ生成を効果的に抑制し、その効果が紅参抽出物より顕著に優れていた。したがって、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、炎症反応調節による皮膚トラブルによる損傷傷を治癒し、しわ生成を抑制する効果に寄与するものと期待される。
【０１６２】
９）にきび及び皮膚トラブル改善効果
実験に参加した人員は、平常時ににきびを含めた皮膚トラブルがひどい女性１０名であり、恒温恒湿室で顔をせっけんで水洗した後、３０分間適応させ、にきび個数及び炎症が同伴された個数を比較して、皮膚トラブル程度を測定した。
【０１６３】
上記被試験者に実施例２及び比較例２の栄養クリームをそれぞれ４週間使用するようにした後、にきび及び皮膚トラブル程度を比較し、その結果を下記表２３に示す。
【０１６４】
【表２３】
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【０１６５】
上記表２３の結果から明らかなように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物を含む実施例２を４週間塗布した結果、既存のにきび個数の減少及び炎症同伴トラブルの改善効果が現われた。
【０１６６】
［試験例６］皮膚血色改善効果
１）高麗人参の実抽出物のＨＵＶＥＣ（Humanum bilical vein endothelial cell）でのＮＯ生成能
ヒトの血管内皮細胞には、ｅＮＯＳ（endothelial nitric oxide synthase）が存在し、その活性が増加するものであって、ＮＯ（酸化窒素）を生成させて血管を拡張させ、血行を促進する役目をする。ヒトの血管内皮細胞を培養した後、高麗人参の実抽出物（図６）と一般紅参抽出物（図７）を培地に処理して生成されるＮＯの量を比較した。すなわち、血管内皮細胞は、ゼラチンコーティングされた２４ウェル培養プレートで２．５×１０４細胞／ウェルの密度で付着させた後、成長培地で２４時間培養した。血管内皮細胞は、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物と、紅参抽出物を処理した群と、無処理群を１２時間前処理した。内皮細胞は、３７℃でＦＢＳ無しＭ１９９培地に１０μｍｏｌ／Ｌ  ＤＡＦ−ＦＭジアセテート（diacetate;Molecular Probe, OR）で３０分間処理した。血管内皮細胞は、ＦＢＳ無しＭ１９９培地で３回洗浄した後、平行板フローチャンバ（parallel plate flow chamber）に入れ、水銀ランプから分離した光で刺激した。刺激（Excitation）波長は、４８８ｎｍであり、ＮＯが結合されたＤＡＦは、５１５ｎｍで蛍光を示す。写真は、共焦点レーザー顕微鏡（Atto Bioscience, USA）で取り、蛍光の明るさは、イメージ−プロプラスｖ４．５ソフトウェア（Media Cybernetics, SanDiego, CA, USA）で分析し、無処理群に対する蛍光の強度としてＮＯ生成程度を比較した。
【０１６７】
図６及び図７の結果から明らかなように、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、無処理群に対して５００〜１３００％のＮＯ生成程度を示し、一般紅参抽出物は、１００〜２００％のＮＯ生成程度を示す（同一の濃度比較５０〜１００μｇ／ｍＬ）。したがって、本発明による実施例１の高麗人参の実抽出物は、紅参抽出物に比べて顕著に優れた血管内皮細胞でのＮＯ生成能を示す。実施例１の高麗人参の実抽出物の上記のような優れたＮＯ（酸化窒素）生成能は、毛細血管を拡張させ、血液循環を促進させることによって、皮膚に営養分を円滑に供給し、皮膚老化を抑制させ、皮膚の血色を改善させることができる効能に寄与する。
【０１６８】
２）ヒト皮膚（顔）の血色改善効果
本発明の高麗人参の実抽出物を含有する組成物に対して皮膚での血液循環促進効果を評価するために、ＬＤＰＩ（Laser Doppler Perfusion Imager）を利用して皮膚での血液循環程度を測定した。ＬＤＰＩは、皮膚での血液循環を測定する機器として広く知られており、現在も使用されている機器であって、皮膚の毛細血管で血液の速度及び量だけでなく、小動脈と小静脈での流れまで測定することができる非常に敏感な機器である。
【０１６９】
恒温恒湿室で顔をせっけんで水洗した後、３０分間適応させ、ＬＤＰＩと皮膚温度測定器具であるＩＲ（Infrad）カメラを利用して初期値を測定した。実験に参加した人員は、平常時に手足が冷たい女性２０名であり、ＬＤＰＩで額の下の部分の初期血流量を測定し、ＩＲカメラを利用して額、目の下及び頬の皮膚温度初期値を測定した。
【０１７０】
実施例２を１週間被試験者に使用するようにした後、血流量と皮膚温度を初期測定値と比較し、その結果を下記表２４及び表２５に示す。
【０１７１】
【表２４】
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【０１７２】
【表２５】
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【０１７３】
上記のように、本発明による高麗人参の実抽出物を含有する実施例２を使用した結果、被試験者の顔で末梢血液循環改善効果によって血色が改善することを確認することができ、これは、窮極的に本発明による高麗人参の実抽出物を含有する場合、皮膚の営養分を効果的に伝達し、皮膚老化を抑制し、遅延させるのに寄与することができることを示唆する。
【０１７４】
［参考例１］副睾丸脂肪組職の分離
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（以下、ＳＤという）系雄性白色ねずみの副睾丸脂肪組職を分離した後、はさみで細く切断し、０．１％コラゲナーゼ（in DMEM without phenol red）を加えた。その後、３７℃で２時間培養した後、濾過して、脂肪細胞を得た。
【０１７５】
［試験例７］雄性ＳＤねずみの脂肪細胞内の中性脂肪分解促進効能評価
雄性ＳＤ白色ねずみの脂肪細胞内の中性脂肪分解促進効能を評価するために、上記参考例１の方法で分離した脂肪細胞を利用して実験を行った。
【０１７６】
脂肪細胞に脂肪酸無し０．５％牛血清アルブミン（bovine serum albumin；ＢＡＳ）を含む無色のＤＭＥＭ（Dulbecos modified eagles medium）を添加した後、それぞれ実験に使用した。グリセロールの定量は、米国シグマ社（St. Louis, Mo, U.S.A）から購入したＧＰＯ−ｔｒｉｎｄｅｒキットを利用した発色反応法で行い、ＥＬＩＳＡ  ｒｅａｄｅｒを利用して５４０ｎｍで吸光度を測定した。
【０１７７】
対照群は、試験物質や比較物質を添加しない培地のみを使用し、実施例１の高麗人参の実抽出物と比較例３の紅参抽出物をそれぞれ１０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ及び２００ｐｐｍずつ添加した。脂肪は、加水分解されれば、脂肪酸とグリセロールに分解されるので、脂肪分解程度は、脂肪細胞から培養液中に遊離されたグリセロールの濃度を測定することによって判断し、その結果値は、対照群を１００にしたとき、その他の値を換算して求めた。その結果を図８に示す。
【０１７８】
図８から明らかなように、高麗人参の実抽出物を各濃度別に処理したとき、脂肪酸分解効果は、対照群より高麗人参の実抽出物を１０ｐｐｍ処理した群は約１．３倍、１００ｐｐｍ処理した群は約３倍、２００ｐｐｍ処理した群は約３．３倍程度脂肪分解効果が高く現われた。また、高麗人参の実抽出物を処理した場合が紅参抽出物を処理した場合よりも高い脂肪分解効果の結果を示す。
【０１７９】
［試験例８］動物の脂質代謝に及ぶ効果
本発明の組成物が高脂肪食餌で誘導された肥満動物の脂質代謝に及ぶ影響を調査するために、雄性ＳＤ白色ねずみをモデルに選定して実験した。
【０１８０】
高脂肪食餌で誘導される肥満に対して高麗人参の実抽出物がどのように影響を及ぼすかを調べるために、６週齢のねずみを一週間適応させ、実験群当たり１０匹ずつ完全に任意に配置した。実験群は、下記表２６のように、正常脂肪食餌群、高脂肪食餌群、高脂肪食餌群＋高麗人参の実抽出物０．５％添加、高脂肪食餌群＋高麗人参の実抽出物１％添加、高脂肪食餌群＋高麗人参の実抽出物１．５％添加する群に分け、対照群である紅参抽出物を添加する食餌群の場合も、上記と同様に群を分けた。
【０１８１】
【表２６】
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【０１８２】
実験食餌は、８週間給与し、実験食餌は、下記表２７の成分に基づいて調剤した。この際、実験食餌は、ＡＩＮ−９３Ｇ精製飼料を基本にして脂肪が全体熱量の３６％に調整された高脂肪食餌（食餌のうち１８％）で調剤し、正常脂肪食餌は、脂肪が全体熱量の１７％となるようにした（食餌のうち７％）。
【０１８３】
【表２７】
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【０１８４】
実験食餌給与期間中に週当り３回ずつ食餌摂取量と体重を測定し、実験食餌給与期間終了後に最終的に体重を測定した。実験食餌による体重変化の結果は、表２８及び図９に示す。
【０１８５】
【表２８】
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【０１８６】
表２８から明らかなように、実験開始前には、各実験群の体重の差異はなく、食餌摂取量も群間の有意的差異はなかった。しかし、図９に示されたように、食餌摂取後、体重変化量を確認した結果、正常食餌群の場合、４０８．２±２０．１であり、対照群である高脂肪食餌群は５５７．２±１７．５であって、正常食餌群より体重が増加した。これより、高麗人参の実抽出物食餌群０．５％、１．０％、１．５％の体重は、それぞれ５１２．３±２０．４、４７５．２±１０．７、４２０．９±１６．８であって、高麗人参の実抽出物食餌群では体重増加が有意的に含量によって小さく現われることが分かった（Ｐ０．０５）。また、紅参抽出物食餌群０．５％、１．０％、１．５％の体重は、それぞれ５３９．７±１５．２、５０２．１±１６．８、４６５．１±１７．２であって、体重増加が高脂肪食餌群より小さく現われたが、紅参抽出物食餌群より高麗人参の実抽出物食餌群において体重増加がさらに小さく現われた。これから、高麗人参の実抽出物が紅参抽出物より体重増加防止にさらに効果的であり、高麗人参の実抽出物が肥満予防及び改善に役立つことができることが分かる。
【０１８７】
［試験例９］副睾丸脂肪重さの測定
上記試験例８の実験群１〜８に対して８週間の食餌が終わった後、犠牲して副睾丸脂肪を摘出した。摘出された副睾丸脂肪は、生理食塩水で洗浄した後、濾過紙上で軽く水分を除去し、重さを測定し、結果は図１０に示す。
【０１８８】
図１０の結果から、実験期間に高麗人参の実抽出物を取った食餌群は、高脂肪食餌のみをした食餌群に比べて副睾丸脂肪の重さが小さく現われ、濃度別に、有意的に重さが小さく現われ、紅参抽出物より高麗人参の実抽出物の体脂肪量の増加抑制効果があることが分かる。
【０１８９】
［試験例１０］ＣＰＴ−１に対する発現測定
上記試験例８の実験群２〜８に対して８週間の食餌が終わった後、犠牲して肝を摘出した。摘出した肝組織を均質化させた後、フェノールとグアニジイソチオシアネートの混合溶液からなるトリゾール（TRIZOL、Life Technologies社, grand Island, NYU, USA）を使用してＲＮＡを抽出した。このように得られた全体ＲＮＡからＣＰＴ−１ｍＲＮＡの発現程度をＲＴ−ＰＣＲで測定し、これを濃度測定で定量し、図１１及び図１２に示す。
【０１９０】
図１２から確認することができるように、高脂肪食餌群に比べて高麗人参の実抽出物を取った食餌群においてＣＰＴ−１発現が増加し、写真濃度が高く現われ、高麗人参の実抽出物の濃度に比例して有意的に増加する傾向を示すことが分かる。
【０１９１】
以下、上記組成物の剤形例を説明するが、これは、本発明を限定しようとするものではなく、ただ具体的に説明するためのものである。
【０１９２】
［剤形例１］柔軟化粧水（スキンローション）
【０１９３】
【表２９】
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【０１９４】
［剤形例２］栄養化粧水（ミルクローション）
【０１９５】
【表３０】
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【０１９６】
［剤形例３］マッサージクリーム
【０１９７】
【表３１】
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【０１９８】
［剤形例４］パック
【０１９９】
【表３２】
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【０２００】
［剤形例５］注射剤
実施例１の高麗人参の実抽出物５０ｍｇ、適量の注射用滅菌蒸留水、適量のｐＨ調節剤を混合し、通常の注射剤の製造方法によって１アンプル当たり（２ｍＬ）上記の成分含量で製造した。
【０２０１】
［剤形例６］液剤
実施例１の高麗人参の実抽出物１００ｍｇ、異性化糖１０ｇ、マンニトル５ｇ、適量の精製水を混合し、通常の液剤の製造方法によって精製水にそれぞれの成分を加えて溶解させ、レモン香料を適量加えた後、上記の成分を混合した後、精製水を加えて全体を１００ｍＬに調節した後、茶色の瓶に充填して滅菌させて液剤を製造した。
【０２０２】
［剤形例７］軟質カプセル剤
実施例１の高麗人参の実抽出物５０ｍｇ、Ｌ−カルニチン８０〜１４０ｍｇ、大豆油１８０ｍｇ、パム油２ｍｇ、植物性硬化油８ｍｇ、蜜蝋４ｍｇ及びレシチン６ｍｇを混合し、通常の方法によって１カプセル当たり４００ｍｇずつ充填して軟質カプセルを製造した。
【０２０３】
［剤形例８］錠剤
実施例１の高麗人参の実抽出物５０ｍｇ、ガラクトオリゴ糖２００ｍｇ、乳糖６０ｍｇ及び麦芽糖１４０ｍｇを混合し、流動層乾燥器を利用して顆粒した後、糖エステル６ｍｇを添加し、打錠機で打錠して錠剤を製造した。
【０２０４】
［剤形例９］顆粒剤
実施例１の高麗人参の実抽出物５０ｍｇ、無水結晶葡萄糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層顆粒機を使用して顆粒に成形した後、袋に充填した。
【０２０５】
［剤形例１０］ドリンク剤
実施例１の高麗人参の実抽出物５０ｍｇ、葡萄糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ及び液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍＬを加えて各瓶に２００ｍＬずつ充填した。瓶に充填した後、１３０℃で４〜５秒間殺菌して飲み物を製造した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１２】
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【図６】
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【図７】
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【図１１】
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