(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子、及び、添加材料の均質なブレンドを含む乾燥粉末であり、
前記添加材料は、１０〜５００μｍの平均粒子サイズを有し、フィブリノーゲンを含む前記第１マイクロ粒子及びトロンビンを含む前記第２マイクロ粒子とは別の離散粒子の形態で存在し、
組成物は、１０〜８０％ｗ／ｗの前記添加材料を含むフィブリンシーラント。
【請求項２】
前記添加材料は、中空性材料または多孔質材料を含む請求項１に記載のフィブリンシーラント。
【請求項３】
前記添加材料は、生体適合性があり吸水性の材料を含む請求項１に記載のフィブリンシーラント。
【請求項４】
前記添加材料は、生体適合性があり水膨潤性の材料を含む請求項１に記載のフィブリンシーラント。
【請求項５】
前記添加材料は、生体適合性があり非水溶性の材料を含む請求項１に記載のフィブリンシーラント。
【請求項６】
前記第１マイクロ粒子は、０．５〜２０％ｗ／ｗのフィブリノーゲンを含む請求項１〜５のいずれか一項に記載のフィブリンシーラント。
【請求項７】
前記第２マイクロ粒子は、２５〜１０００ＩＵ／ｇのトロンビンを含む請求項１〜６のいずれか一項に記載のフィブリンシーラント。
【請求項８】
前記添加材料は、ポリサッカライドを含む請求項１〜７のいずれか一項に記載のフィブリンシーラント。
【請求項９】
前記添加材料は、シリカを含む請求項１〜７のいずれか一項に記載のフィブリンシーラント。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のフィブリンシーラントを創傷に投与する段階を含む、動物（人間を除く）の創傷を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は乾燥粉末形態のフィブリンシーラントに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＷＯ９７／４４０１５（特許文献１）には、フィブリノーゲンおよびトロンビンのマイクロ粒子に基づく乾燥粉末フィブリンシーラントが記載される。これらのマイクロ粒子組成物のさらに最適化された処方は同時係属出願ＵＳ１２／６３６７１８に記載され、これは参照として本明細書に援用される。この米国出願の例において、構成要素はトレハロースとフィブリノーゲンおよびトレハロースとトロンビンの噴霧乾燥によって調製される。各々の製品の粒子の直径のサイズの大多数は、最大で５０μｍである。これらの構成要素の混合物であるフィブリンシーラントは、使いやすく安定した効果的な局所止血剤である。製品は再構成なしに直ちに使用することができる。血液等の液体との接触に際して、露出された活性トロンビンは、露出されたフィブリノーゲンを不溶性フィブリンポリマーに転換する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開ＷＯ９７／４４０１５号明細書
【発明の概要】
【０００４】
本発明の第１の態様において、ＷＯ９７／４４１０５に記載される一般的なタイプの新規のフィブリンシーラント組成物が提供され、同時係属出願ＵＳ１２／６３６７１８においてさらに最適化され、それは加えて添加材料をさらに含む。
【０００５】
本発明の第２の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含むフィブリンシーラント組成物が提供される。
【０００６】
本発明の第３の態様において、フィブリノーゲンおよび安定化賦形剤を含む第１マイクロ粒子、トロンビンおよび安定化賦形剤を含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含むフィブリンシーラント組成物が提供される。特に好ましい安定化賦形剤はトレハロースである。
【０００７】
本発明の第４の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含み、添加材料が多孔質材料および／または可溶性材料を含むフィブリンシーラント組成物が提供される。
【０００８】
本発明の第５の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含み、添加材料が中空性材料および／または可溶性材料を含むフィブリンシーラント組成物が提供される。
【０００９】
本発明の第６の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含み、添加材料は生体適合性があり吸水性がある材料を含むフィブリンシーラント組成物が提供される。
【００１０】
本発明の第７の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含み、添加材料は生体適合性があり水膨潤性の材料を含むフィブリンシーラント組成物が提供される。
【００１１】
本発明の第８の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含み、添加材料が、ナノ粒子、ナノ繊維、繊維、粒子、顆粒、粉末、ビーズ、マイクロビーズ、マイクロスフェア、マイクロカプセルまたはマイクロ粒子の形態であるフィブリンシーラント組成物が提供される。
【００１２】
本発明の第９の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含み、添加材料がポリサッカライドを含むフィブリンシーラント組成物が提供される。
【００１３】
本発明の第１０の態様において、フィブリノーゲンを含む第１マイクロ粒子、トロンビンを含む第２マイクロ粒子の混合物、およびさらに添加材料を含み、添加材料がシリカを含むフィブリンシーラント組成物が提供される。
【００１４】
第１１の態様において、本発明は、本発明に記載の組成物を含む自由流動性粉末を提供する。
【００１５】
第１２の態様において、本発明は、本発明に記載の組成物を含む容器を提供する。
【００１６】
第１３の態様において、本発明は、本発明に記載の組成物を含むキット、または本発明に記載の容器を、任意で分注装置と共に提供する。
【００１７】
第１４の態様において、本発明のフィブリンシーラント組成物の効果的な量を投与する工程を含む、出血の治療方法が提供される。
【００１８】
第１５の態様において、本発明は、創傷療法および外科的修復等の、病態の予防、治療および／または緩和のための医薬品の製造における本発明の組成物の使用を提供する。
【００１９】
添加材料は担体または希釈剤として作用することができ、粉末流動および湿潤性を促進することができる。また、出血創傷の液体の吸収を増加させ、それによって局所的な組織液を減少させることができるので、創傷における凝固因子の相対的な濃度を増加させることができる。したがって、本発明は、これらの目的のいずれかを達成する本明細書において記載される添加剤のいずれかの使用を提供する。
これによって、フィブリンシーラントの実効性が増加する。本発明は、さらに低いフィブリノーゲンレベルで有効性を有するフィブリンシーラント製品を提供する。
【００２０】
それぞれのフィブリノーゲン含有可溶性マイクロ粒子およびトロンビン含有可溶性マイクロ粒子を、安定した乾燥形態において、ともに処方してブレンドすることができる。所望されるならば、続いてこの処方を活性化して、創傷療法および外科的修復に有用なフィブリンシーラントを生ずることができる。
【００２１】
本発明の組成物は、優れた流動特性および改良された湿潤性を達成し、改良された効果的な活性部位への送達、ならびに送達システムにおいてではなくその部位のみでの溶解を達成するという主要目的を満たすことができる。
【００２２】
フィブリノーゲンおよびトロンビンはヒトドナーからの血液から単離されるか、または培養細胞または遺伝子導入の動物もしくは植物において組換えＤＮＡ技術によって作製することができる。
【００２３】
フィブリノーゲンまたはトロンビンは全体であっても活性フラグメントであっても良い。フィブリノーゲンを含有するマイクロ粒子中のフィブリノーゲンの含有量は約０．１〜５０％ｗ／ｗであり、約０．５〜２０％ｗ／ｗや５〜１０％ｗ／ｗ、または約６．５％ｗ／ｗであることが好ましい。トロンビンを含有するマイクロ粒子中のトロンビンの含有量は約１０〜２００００ＩＵ／ｇであり、約２５〜１０００ＩＵ／ｇ、または１００〜５００ＩＵ／ｇ、または約２７０ＩＵ／ｇであることが好ましい。
【００２４】
活性含有マイクロ粒子および／または添加材料は、マイクロカプセルの事例等において、固体または中空状であってもよい。例えば、ＷＯ９２／１８１６４、ＷＯ９６／０９８１４、ＷＯ９６／１８３８８またはＷＯ９７／４４０１５に記載されているように、フィブリノーゲンまたはトロンビンを含むマイクロ粒子は、当該技術分野において公知の方法によって調製することができる。これらの噴霧乾燥プロセスおよび関連する粒子操作プロセスにより、定義されたサイズ分布（例えば直径最大５０μｍ）を持つ可溶性タンパク質マイクロカプセルの生産が可能になる。例えば、それらの文献に記載されているように、マイクロ粒子は再現性良く生産することができ、例えば（体積で）９０％以上がサイズで最大３０μｍ、例えば、１０〜２０μｍとなる。これらの粒子の易流動性凝集体は、当業者によって認識されるように、対抗流に対する噴霧乾燥器中の気流構成を調節することよって、または「強制的一次凝集」の設定に複数の噴霧機を配置することによって、その場で（ｉｎ  ｓｉｔｕ）作製できる。かかる凝集体は、直径、５０〜１０００μｍまたは１００〜５００μｍまたは１２５〜２５０μｍであり得る。ＷＯ０３／０３７３０３に記載されているように、それぞれのフィブリノーゲン含有可溶性マイクロ粒子およびトロンビン含有可溶性マイクロ粒子は、マルチノズル噴霧機の使用によって、噴霧乾燥装置内で、ともに処方してブレンドすることができる。
【００２５】
乾燥粉末処方の調製の好ましい方法は噴霧乾燥を含むが、乾燥粉末処方の調製に他の乾燥技術を使用できる。好適な方法は当該技術分野において公知であり、流動層乾燥および凍結乾燥、そして続いて行なわれるマイクロ化、または噴霧凍結乾燥を含む。必要であるかまたは所望されるならば、マイクロ粒子は当該技術分野において公知の技術を使用して滅菌できる。
【００２６】
本発明のマイクロ粒子は、噴霧乾燥によって調製されることが好ましい。一般的には、微粒化プロセスの間に圧縮空気を利用する２つの液体ノズルが使用され、これは中空性マイクロ粒子の生産をもたらす。Ｎｉｒｏ  Ｍｏｂｉｌｅ  Ｍｉｎｏｒ噴霧乾燥器上でこの微粒化システムを使用して製造することができるマイクロ粒子の最大の粒子サイズ（Ｘ５０、Ｓｙｍｐａｔｅｃによって測定されるものとして）は、〜３０μｍである。本発明のマイクロ粒子のＸ５０値は５〜５０μｍが好ましく、１０〜２０μｍが最も好ましい。
【００２７】
次いで、固体または中空性のフィブリノーゲン含有マイクロ粒子は、均質なブレンドを生成する任意の順序で、固体または中空性のトロンビン含有マイクロ粒子および本明細書において記載されるような添加材料とブレンドされる。かかるブレンドは、低剪断性もしくは高剪断性のブレンド、または当業者に公知の他の技術を使用して行なうことができる。
【００２８】
本発明の第１または第２マイクロ粒子は、サッカライドのみと共に、活性成分（すなわちフィブリノーゲンまたはトロンビン）の溶液を噴霧乾燥することによって調製できる。代替手法として、活性成分が粒子へと組み込まれたマイクロ粒子を生ずるようにフィブリノーゲンまたはトロンビンおよび別の壁形成材料が処方され噴霧乾燥される、共噴霧乾燥がある。
【００２９】
フィブリノーゲンまたはトロンビンは全体であっても活性フラグメントであっても良い。フラグメントは公知であり、Ｃｏｌｌｅｒ他，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８９：５４６−５５５  （１９９２）を参照されたい。フィブリノーゲン原材料は凍結溶液であってもよいが、噴霧乾燥の前に再構成を必要とする冷凍乾燥粉末が使用されてもよい。
【００３０】
好適な他のタンパク質は、天然に存在するものであるか、または培養細胞または遺伝子導入の動物もしくは植物において組換えＤＮＡ技術によって作製することができる。フィブリノーゲンまたはトロンビンは全体であっても活性フラグメントであっても良い。様々な実施例が示されるＷＯ９２／１８１６４に記載されているように、それらは「壁形成材料」として機能することができる。好ましい材料はＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）である。例えば、フィブリノーゲンは、単独でまたはＨＳＡ等の賦形剤の様々な量（例えば１：１、１：３、３：１のフィブリノーゲン：ＨＳＡ比）およびトレハロースの存在下において噴霧乾燥される。ＨＳＡの代替物は、ツイーン２０、ツイーン８０、ポロキサマー４０７またはポロキサマー１８８等の界面活性剤が好ましい。
【００３１】
カルシウムイオンは、例えば塩化カルシウムとして、トロンビンフィードストック中に組み込むことができる。あるいは、塩化カルシウムは加工後にマイクロ粒子へ添加できる。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態において、添加材料は、フィブリノーゲンおよびトロンビンを含むマイクロ粒子とは個別の離散粒子の形態で存在する。したがって、添加材料は、ナノ粒子、ナノ繊維、繊維、粒子、顆粒、粉末、ビーズ、マイクロビーズ、マイクロスフェア、マイクロカプセルまたはマイクロ粒子の形態であり得る。
【００３３】
本発明の特定の実施形態において、本発明において使用される添加材料は、１０〜１０００μｍもしくは１００〜５００μｍもしくは１２５〜２５０μｍ、または場合によっては、例えば１０〜４０μｍの平均粒子サイズを有する。添加物は１つの材料で構成されてもよいし、または材料の混合物であってもよい。かかる添加材料は、活性材料（フィブリノーゲンおよびトロンビン）のための担体および／または希釈剤として作用することができる。
【００３４】
上の段落において設定されたオーダーの粒子サイズを有する粒子の形態で存在できる添加材料は、生体適合性があり吸水性および／または水膨潤性のある材料、ポリサッカライド、多孔質および／または可溶性の材料、中空性および／または可溶性の材料のような添加物である。
【００３５】
かかる事例において、添加材料を、組成物の重量で約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはその間の任意の範囲もしくは値で含んでもよい。
【００３６】
一般的には、かかる事例において、組成物は、少なくとも１％、または少なくとも５％または少なくとも１０％ｗ／ｗの添加材料、および最大６０％、最大７０％または最大８０％の添加材料を含む。したがって、添加物は、組成物の１％（または５％または１０％）〜８０％、または１％（または５％または１０％）〜７０％、または１％（または５％または１０％）〜６０％ｗ／ｗのレベルで存在することができる。
【００３７】
本発明の他の実施形態において、添加材料は一般的には約１０ｎｍ〜１０μｍの平均粒子サイズを有し、１つの材料で構成されてもよいし、または材料の混合物であってもよい。
【００３８】
上の段落において設定されたオーダーの粒子サイズを有する粒子の形態で使用できる添加材料は、シリカ、詳細には親水性ヒュームドシリカを含む。
【００３９】
かかる事例において、添加材料を、組成物の重量で、約０．００１％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはその間の任意の範囲もしくは値で含んでもよい。
【００４０】
一般的には、かかる事例において、組成物は、少なくとも０．００１％、または少なくとも０．０１％、または少なくとも０．０５％ｗ／ｗの添加材料、および重量で最大０．１％、最大０．５％、または最大約１もしくは２％の添加材料を含む。したがって、添加物は、組成物の０．００１％（または０．０１％または０．０５％）〜１％、または０．００１％（または０．０１％または０．０５％）〜０．５％、または０．００１％（または０．０１％または０．０５％）〜０．１％ｗ／ｗのレベルで存在することができる。
【００４１】
本発明の他の実施形態において、添加材料は固体の可溶性材料ではない。
【００４２】
様々な材料は、流動性および湿潤性などの促進のための生体適合性があり吸水性および／または水膨潤性のある添加材料としての使用に好適である。該材料は不溶性であるか、または非常に緩慢に可溶化されることが好ましい。かかる材料は、デキストランポリマー（例えば、異なる粒子サイズで入手可能なセファデックス）、ヘタスターチを含むスターチ、プルラン誘導体、ヒアルロン酸およびそのエステル、微結晶性セルロース等のセルロース製品（アビセルレンジ）、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、マイクロファインセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ならびに架橋ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の他の材料を含み、単独でまたは混和物で使用できる。さらに、担体として作用する好適な添加材料は、好ましくは分子量約１０００を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；好ましくは平均分子量約５００００を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；一般的に平均分子量約４００００を有するポリ（アクリル酸）、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリ（メチルビニルエーテル−コ−無水マレイン酸）、ポリ（酸化エチレン）、およびデキストランである。本発明のマイクロ粒子は、必要であるかまたは所望されるならば滅菌することができる。滅菌処理、電子線照射、γ−照射およびエチレンオキシドは、好適な技術の例である。
【００４３】
本発明の特定の実施形態において、添加材料はシリカ（好ましくは親水性シリカ）である。かかるシリカは、コロイドシリカ、ヒュームドシリカ、破砕シリカ、沈殿シリカ、またはその混合物であり得る。好適なヒュームドシリカの例は、Ａｅｒｏｓｉｌ（登録商標）９０、１３０、１５０、２００、３００、３８０、Ｒ２０２、Ｒ８０５、Ｒ８１２、Ｒ９７２、Ｒ９７４（Ｄｅｇｕｓｓａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、リッジフィールドパーク、ニュージャージー）、ならびにＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ（登録商標）ＴＳ−７２０およびＭ−５（Ｃａｂｏｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、タスコラ、イリノイ）を含むが、これらに限定されない。一般的には、Ａｅｒｏｓｉｌ（登録商標）２００、Ａｅｒｏｓｉｌ（登録商標）Ｒ９７４、ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ（登録商標）ＴＳ−７２０、および他の製造業者からの他の一般的に同等のヒュームドシリカの製品が、好ましい。親水性ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）コロイドシリカが錠剤崩壊および活性成分放出の率を増加させることが公知である。コロイドシリカは、錠剤の内部へと（例えば消化液からの）水分を引き付ける「芯」として作用する。さらに、親水性ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）２００コロイドシリカにより「コーティングされた」錠剤成分は、より容易に湿潤してより迅速に膨潤する（崩壊剤）か、またはより迅速に溶解する（活性成分）。かかる特性は、本発明の粉末フィブリンシーラントの湿潤性および溶解性を促進する。さらに、かかるシリカは流動促進剤として作用することが公知であり、したがってかかる密着性マイクロ微粒子の流動性、充填性および送達性を促進する。さらに、かかるコロイドシリカは血液凝固のための公知の活性化因子であり、したがってフィブリノーゲンおよびトロンビン構成要素と相乗的に作用する（Ｍａｒｇｏｌｉｓ、「Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｓｉｌｉｃａ  ｏｎ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」、Ａｕｓｔ．  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｂｉｏｌ．，  ３９，  ｐｐ．  ２４９−２５８  （１９６１）を参照されたい）。
【００４４】
組成物は、約０．００１〜５％ｗ／ｗ、約０．０１〜２％ｗ／ｗ、または約０．０１〜０．５％ｗ／ｗのシリカを含むことができる。シリカは、フィブリノーゲン含有構成要素に単純にブレンドし、次いでトロンビン含有構成要素をそれへ添加し、さらにブレンドすることができるか、またはその逆も行うことができる。シリカは、最終工程として、プレブレンドされた第１マイクロ粒子および第２マイクロ粒子にブレンドされることが、最も好ましい、好適なブレンド装置は当業者に公知である。
【００４５】
さらなる実施形態において、本明細書において定義されるように、シリカはさらなる担体および／または添加材料と組み合わせて存在してもよい。
【００４６】
本発明の他の実施形態において、添加物は、織り込まれた繊維状の、例えばソルビトールおよび／またはマンニトールの結晶であり、非常に多孔質で可溶性が非常に高い。かかる材料は、名称ＰＡＲＴＥＣＫ  ＳＩおよびＰＡＲＴＥＣＫ  Ｍ（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ、ダルムシュタット、ドイツ）で販売される。これらのグレードは高い吸着力を有し、したがって、適用する粉末ベッドを介して血液を浸透させること、および、したがって、粉末界面のみでの凝固を回避することによって、ダスティングを減少させて、乾燥粉末フィブリンシーラントの湿潤性、可溶性およびパフォーマンスを促進する新規の粉末を生産する本発明の乾燥粉末フィブリンシーラント粉末組成物とのブレンドに好適である。
【００４７】
添加材料は単一の構成要素としてまたは組み合わせで本発明の組成物中に存在することができ、そして添加材料は、フィードストック中に存在するか、もしくはともにブレンドする前に噴霧乾燥したトロンビンまたはフィブリノーゲン構成要素のいずれかに添加するか、または最終ブレンドに添加してさらなるブレンドを行うことができる。かかるブレンドは、低剪断性または高剪断性のブレンド、メカノケミカルボンディング、ハイブリダイゼーションまたは当業者に公知の他の技術を使用して行なうことができる。
【００４８】
本発明のフィブリンシーラント中のマイクロ粒子の構成要素は、好ましくは水溶性であり、マイクロ粒子は好ましくは好適な溶液の噴霧乾燥によって得られるが、得ることができるマイクロ粒子は、自由流動性を有し、離散的であり、実質的に乾燥し、または無水性であり、残留水分含量は好ましくは約８％ｗ／ｗまたは約５％ｗ／ｗ未満であり、最も好ましくは約３％ｗ／ｗ未満である。これは、例えば創傷部位で液体と接触することによって湿潤するまで、本発明によるフィブリンシーラントの化合物が活性化されないことを意味する。それゆえ、異なるマイクロ粒子の個別の適用が意図されるが、活性成分は乾燥混合物として送達することができる。活性含有マイクロ粒子は、トラップしたタンパク質を安定させるように、好ましくは室温（例えば２５℃）で非晶性またはガラス形態であり、加えてこのように急速な可溶性状態において活性を示す。好ましくは、示差走査熱量測定法または改変された示差走査熱量測定法によって測定されるように、活性含有マイクロ粒子組成物は、約２５℃、または約３０℃、または約４０℃、または約５０℃以上のガラス転移温度を示す。添加材料も、急速に可溶性状態となるように室温（例えば２５℃）で非晶性またはガラス形態である。好ましくは、示差走査熱量測定法または改変された示差走査熱量測定法によって測定されるように、添加材料は約２５℃、または約３０℃、または約４０℃、または約５０℃以上のガラス転移温度を示す。組成物は、活性における重大な損失なしに、例えば３か月または６か月を超える延長期間、周囲温度または室温（例えば２５℃）で、かかるガラス質の組成物により保存することができる。
【００４９】
添加材料も、結晶状態または非晶性状態であり、自由流動性を有し、離散的であり、実質的に無水性であり、残留水分含量は好ましくは５％ｗ／ｗ未満、最も好ましくは３％ｗ／ｗ未満である。
【００５０】
大きな表面積に対する適用が必要とされる場合、乾燥粉末フィブリンシーラント製品は特に価値がある。これは、肝臓および脾臓等の様々な器官に対する外傷の手術および修復を含む。また、これは、熱傷患者のための皮膚移植、特に、皮膚表皮性シートがインビトロで培養されて、次いで創傷部位に移される場合、さらに有用である。後者で示すフィブリンシーラントの使用は、広範囲熱傷のある患者において特に効果的であり、皮膚移植のための生体適合性固定源を提供する。それは局所潰瘍の治療においても好適である。
【００５１】
フィブリンシーラント粉末組成物は、外科的介入における使用のために、同時係属出願ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０５１７１４（特願２０１１−５４０２２０、参照として本明細書に援用される）の粉末送達装置を使用して適用することができる。
【００５２】
粉末組成物の別の提示では、粉末は可溶性材料のサッシェまたはパウチ内に含有される。湿った組織（創傷または手術部位のように）上にパウチが置かれる場合、パウチの材料は溶解してパウチの内部から粉末を放出する。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】本発明の有用性を示す肝臓スカロップ損傷モデルの写真である。（ａ）は、作製した損傷を示し、（ｂ）は、適用されている実施例１の本発明の粉末を示し、（ｃ）は、ガーゼにより圧力を３０秒かけた後の粉末を覆うバイクリルシートを示す。
【図２】実施例２において使用される、改変されたボイデンチャンバー装置の概略図である。
【図３Ａ】実施例２において使用したボイデンチャンバー配列の「時間＝０」の写真である。
【図３Ｂ】同上の「時間＝２０分」の写真である。
【図３Ｃ】同上の「時間＝４５分」の写真である。
【図３Ｄ】同上の「時間＝７６分」の写真である。
【図３Ｅ】同上の「時間＝１０６分」の写真である。
【図３Ｆ】同上の「時間＝１７５分」の写真である。
【図３Ｇ】同上の「時間＝２３８分」の写真である。
【図３Ｈ】同上の「時間＝４８時間」の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
本発明はここで以下の実施例を単なる例として参照して記載する。
【実施例１】
【００５５】
同時係属出願ＵＳ１２／６３６７１８において記載されるように、乾燥粉末フィブリンシーラントを調製した。簡潔には、フィブリノーゲン（ＺＬＢ、マールブルク、ドイツ）およびトレハロース（Ｐｆａｎｓｔｉｅｈｌ、ウォーキーガン、イリノイ、アメリカ）の中空性球状微粒子を調製した。粒子中のフィブリノーゲンの濃度は１２％ｗ／ｗである。
【００５６】
トロンビン（ＳＮＢＴＳ、グラスゴー、スコットランド）およびトレハロースを噴霧乾燥して、中空性粒子を得た。
【００５７】
トロンビンは１グラムの粒子あたり１０００ＩＵの濃度で存在した。該粒子を１：１比でブレンドし、６％ｗ／ｗ濃度のフィブリノーゲンを有し、５００ＩＵ／ｇの粉末を得た。この混合物は参照粉末と称される。
【００５８】
本発明の混合物を調製するために、参照粉末を、液体吸収性粒子（セファデックスＧ２００スーパーファイン、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ウプサラ、スウェーデン）と１：１ｗ／ｗでさらに混合した。セファデックスＧ２００スーパーファインは１０〜４０μｍのサイズを有した乾燥したビーズ形状である。明確には、生じた粉末は、３％ｗ／ｗのフィブリノーゲン、２５０ＩＵ／グラムのトロンビン、および５０％ｗ／ｗのセファデックスＧ２００粒子からなる。この混合物は本発明の粉末と称される。
【００５９】
（有効性試験）
外傷出血は、高い圧力での動脈損傷から大量の毛細血管出血の範囲に及ぶ異なる形態で現われるので、利用可能な止血剤有効性試験のための普遍的な動物モデルはない。大動物モデル（ブタ）はヒトの状況のための唯一の代表的なモデルである（Ｐｕｓａｔｅｒｉ他  （２００３年）  Ｊ．  Ｔｒａｕｍａ  ５５（３），  ５１８−５２６）。選択した動物モデルにおいて、本発明の粉末製品は、市場のまたは開発段階の外傷適用に使用の可能性のある他の製品と比較される。制御されない重篤な出血を誘導して肝臓に外傷をシミュレートするために、外科用はさみを用いて４×５ｃｍの幅および１．５〜２ｃｍの深さのピースを肝臓（ｎ＝２）から切り取ることによって、ブタの肝臓に肝臓スカロップ損傷を行った。この手順の間に切断された静脈または動脈のどれも結束せず、損傷が作製される〜１５分前に、標準用量のヘパリンを動物に投与した。
【００６０】
１つの損傷は、６グラムの参照粉末材料を創傷上に注いで、パラフィルムにより覆い、その後３０秒間圧力をかける、「標準」プロトコルを使用して治療された。パラフィルム除去の間に粉末の実質的な一部が同様に除去され、１．５〜２グラムの追加を創傷に適用し、標準的外科手術のガーゼにより圧力をかけた。出血は２〜３分以内にかなり減速したが、完全止血を得るには〜５分かかった。第２のスカロップ損傷は、吸収力は増加しているが半分のフィブリノーゲンおよびトロンビンの量のみを含有する、６グラムの本発明の粉末により治療された。次いで、粉末を１片の生体分解性バイクリル（Ｖｉｃｒｙｌ）シート（エチコン）により覆い、ガーゼを使用して３０秒間圧力をかけた。ガーゼは容易に除去することができ、プラグの乱れを防止するために創傷上にバイクリルシートを残した。出血は観察されず、完全止血は１〜１．５分以内に達成された（図１も参照）。セファデックス単独では、動物の重篤な出血を止めることができなかった。
【００６１】
この実験は、本発明の粉末の長所が参照粉末を上回ることを明瞭に実証する。重篤な出血創傷上に等しい量のこれらの粉末を適用すると、本発明の粉末については１．５分以内に完全止血をもたらすが、参照粉末は追加の粉末を添加した後でのみ５分で出血を止めることができた。本発明の粉末は、参照粉末と比較して、２分の１の濃度のフィブリノーゲンおよびトロンビンのみを含有するので、これは驚くべきことである。参照粉末と比較してフィブリノーゲンおよびトロンビンの濃度が低いことは、本発明の粉末の価格が有意に低下することも示唆する。
【実施例２】
【００６２】
本発明のさらなる組成物を調製するために、実施例１による参照粉末ファブリンシーラント（「ＦＣ」）は、旋回振盪機を３０秒間使用するか、または（量が多い場合には）Ｔｕｒｂｕｌａ低剪断性ブレンダーを１０分間使用して、変動量の添加材料とさらに混合して、自由流動性粉末を生産する。以下の添加材料を選択し、参照粉末とブレンドし、次いで試験管内での（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）湿潤性について評価した。
【００６３】
１．可溶性で中空性のマイクロ粒子−ガラス質の噴霧乾燥したトレハロースマトリックス中に１５％ｗ／ｗのアルブミンを含む（「Ａｌｂ」）
２．ヒュームドシリカ−Ａｅｒｏｓｉｌ  ２００（「Ａｅｒ」）
３．ポリサッカライド−ヘタスターチ（凍結乾燥したＶｏｌｕｖｅｎ）（「Ｖｏｌ」）
４．多孔質で可溶性の添加物−Ｐａｒｔｅｃｋ  ＳＩ  １５０および４００（「Ｐａｒｔ  ＳＩ  １５０」および「Ｐａｒｔ  ＳＩ  ４００」）
５．多孔質で膨潤可能な不溶性の添加物−セファデックス２００Ｇスーパーファイン（「Ｓｅｐ  ２００Ｇ」）
【００６４】
改変したボイデンチャンバーを使用して、新規の試験管内での（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）湿潤性分析を開発した。ボイデンチャンバーとは、本質的にはマイクロポア膜によって分離された、培地で満たされた２つのコンパートメントからなるチャンバーである（図２を参照）。通常の使用において、上部コンパートメント中に細胞を置き、走化性薬剤が存在する下部コンパートメントの中へ膜の孔を介して移動させる。本試験（湿潤性解析）については、下部チャンバーを周囲温度の青色素溶液により満たし、試験粉末を上部チャンバーの中に満した。
【００６５】
２４のかかるチャンバーは４行×６列で配列され、試験粉末の作用の研究に使用され、試験粉末は表１において設定された様式で設置した（表１は各々のチャンバー中の粉末の全重量、および各々の中の添加物の割合を明記する）。行Ｂは行Ａの二重測定であり、行Ｄは行Ｃの二重測定であることが理解できる。
【表１】
0005820807.tif 000002
【００６６】
粉末積載チャンバーを、青色素溶液を含有する下部チャンバーの中へ低下させ、計時をスタートさせた。観察の要約を以下の表２に示す。
表２の（ａ）は、「青色素がチャンバーの底部（フィルター側）から粉末に侵入することが見られる時間」を示す。（ｂ）は、「青色素の最初の兆候が粉末の上部表面で観察される時間」を示す。（ｃ）は、「全表面が青色である」時間を示す。
【表２】
0005820807.tif 000003
【００６７】
解析の間に気付いた他の観察は以下の通り。
ａ．Ａｅｒｏｓｉｌ  ０．０１％については、二重測定の両方とも粉末塊とチャンバーの壁との間に大きな青色の液滴を有する（目視可能な時間＝２００分、側面から）；
ｂ．Ｐａｒｔｅｃｋ  １０％については、二重測定の１つにも粉末塊とチャンバーの壁との間に青色の液滴を有する（目視可能な時間＝２００分、側面から）。
ｃ．５０％セファデックスはその初期体積の最大〜５倍膨潤する。
ｄ．１０％セファデックスはその初期体積の最大〜２倍膨潤する。
ｅ．以下のものについては「時間＝２００分」で観察される体積減少があった。
・５０％ＳＤアルブミン
・５０％Ｐａｒｔｅｃｋ  ＳＩ４００
・５０％Ｐａｒｔｅｃｋ  ＳＩ１５０
【００６８】
表１に示すように配置したボイデンチャンバー配列の様々な時点での写真を図３Ａ〜図３Ｈに示す。
【００６９】
図に示すように、多孔質で膨潤性の材料（セファデックス）、同様に中空性があり可溶性のある添加材料（噴霧乾燥したアルブミン：トレハロース）、または多孔質で可溶性のある大きな微粒子の添加材料（Ｐａｒｔｅｃｋ  ＳＩ  ４００）が存在すると、参照材料の水分取り込みが非常に促進される。実際、参照材料は、あまり青色素溶液を吸収しなかったようなので、この分析において不十分な作用であった。非常に低いレベルでシリカが存在することは、凝固プロセスとの相互作用に起因して、生体内ではよりよく作用するかもしれないが、この分析においては、湿潤性を大幅に促進するようではなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
0005820807.tif 000007
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
0005820807.tif 000010
【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図３Ｈ】
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