(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ−バリンを有効成分とする、アンチ−１−アミノ−３−フルオロシクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ）の排泄促進剤。
【請求項２】
経口投与用である、請求項１に記載の排泄促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制するための組成物に関し、より詳しくは、特定の天然アミノ酸を有効成分とする、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制するための組成物に関する。また、本発明は、Ｌ−バリンを有効成分とする、前記腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進する作用を有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、薬物の薬理効果は、その薬物の標的となる受容体や酵素に対する親和性のほか、患者の体内における曝露量のみならず、曝露時間に影響されることが知られている。従って、薬物の曝露時間が長過ぎると患者に過剰な薬理効果がもたらされ、副作用が生じるおそれがあるため、薬物を有効に利用するためには体内動態の制御が必要となる。
【０００３】
また、薬物は生体内に投与された際に、投与部位から血液中への移行、各臓器等への移行、代謝を経て、最終的に胆汁又は尿に排泄される。このため、薬物の体内動態の制御には、尿への排泄、すなわち、腎臓における薬物等の分泌や再吸収が重要な要素となる。そして、これら分泌及び再吸収を担っているのは、腎臓の尿細管上皮の血管側（側底膜側）と刷子縁側（頭頂膜側）に発現しており、多種多様な物質の輸送を支配する多くのトランスポーターである。そこで、薬物等の体内動態の制御等を目的として、これらトランスポーターの基質特異性、機能、並びにその制御について解析が進められているが、未だ十分に解明はなされていない。
【０００４】
一方、診断を目的として生体内に投与される薬物の一種に、アンチ−１−アミノ−３−フルオロシクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ）がある。このａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣは、PET診断においてよく用いられている１１−炭素（１１Ｃ）等の放射性同位体と比較して半減期の長い１８−フッ素（１８Ｆ）等の放射性同位体をその標識に利用することができるため、診断が行われる現地での粒子加速器による作製は必要としない。また解像度も高く、さらに単・線量のみ又は比較的少ない線量だけを発生させることができるため、特に前立腺癌や脳腫瘍の診断に適用できると期待されている（特許文献１〜２）。また、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣについては、十分な試験も行われており、高い安全性を有していることも確認されている。
【０００５】
しかしながら、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣをより広範な臨床用途に適用するためには、比較的半減期の長い放射性同位体で標識されて使用されるケースも想定される。この場合、放射線による生体への影響を低減させるためにａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの適切な体内動態の制御を行うための技術、特に、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄の促進を行うための物質の開発が必要となる。しかしながら、今のところ、そのような物質は実用化されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００７−２４６５３５号公報
【特許文献２】特表２００８−５４６７８３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記従来技術の有する課題に鑑みてなされたものであり、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制するための組成物、ひいては腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進する作用を有する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ及び腎臓上皮細胞を用いた輸送試験によるスクリーニングを通して、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣは腎臓トランスポーターを介して刷子縁側から血管側に輸送（再吸収）されていることを明らかにし、さらに、天然アミノ酸の中で、Ｌ−バリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン及びＬ−アスパラギン酸は、前記腎臓トランスポーターの輸送能を抑制する作用を有していることを見出した。また、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣを投与したラットにおける、各種天然アミノ酸による排泄促進作用を調べたところ、Ｌ−バリンの投与によって、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣのラット体内からの排泄が顕著に促進されることを見出した。さらに、この顕著な排泄促進効果は、Ｌ−バリンの腹腔内投与のみならず、Ｌ−バリンの経口投与においても達成されることをも見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
従って、本発明は、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制するため、ひいては、前記腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進するための、特定のアミノ酸の利用に関し、より詳しくは、以下の発明を提供するものである。
（１）Ｌ−バリンを有効成分とする、アンチ−１−アミノ−３−フルオロシクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ）の排泄促進剤。
（２）経口投与用である、（１）に記載の排泄促進剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制し、ひいては該腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】腎臓上皮細胞を用いた輸送試験の概要を示す図である。
【図２】腎臓上皮細胞を用いた輸送試験における、各種化合物等添加による腎臓トランスポーターの輸送能への影響を示すグラフである。
【図３】２４時間絶食させ、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣを投与し、その投与直後に各種天然アミノ酸を腹腔内投与したラットにおける、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄率を示すプロット図である。
【図４】２４時間絶食させ、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣを投与し、その１時間後にＬ−バリンを腹腔内投与したラットにおける、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄率を示すプロット図である。
【図５】ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの投与１日前から、低たん白飼料中のＬ−バリン配合率を２０％高くした飼料（＋２０％Ｌ−バリン）を給餌したラットにおける、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄率を示すプロット図である。
【図６】ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの投与直後から、低たん白飼料中のＬ−バリン配合率を２０％高くした飼料（＋２０％Ｌ−バリン）を給餌したラットにおける、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄率を示すプロット図である。
【図７】２４時間絶食させ、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣを投与し、その投与直後から低たん白飼料中のＬ−バリン配合率を２０％高くした飼料（＋２０％Ｌ−バリン）を給餌したラットにおける、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄率を示すプロット図である。
【図８】低たん白飼料中のＬ−バリン配合率を２０％高くした飼料（＋２０％Ｌ−バリン）の摂餌量と、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄率との相関を示す、プロット図及びグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、Ｌ−バリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン及びＬ−アスパラギン酸からなる群より選択される少なくとも１のアミノ酸を有効成分とする、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制するための組成物を提供する。
【００１３】
本発明において、「腎臓トランスポーター」とは、腎臓に存在する細胞膜表面上に発現しているトランスポーターを意味する。腎臓トランスポーターとしては、有機カチオントランスポーター（例えば、ＯＣＴ２、ＯＣＴＮ１、ＯＣＴＮ２、ＭＡＴＥ１、ＭＡＴＥ２−Ｋ）、有機アニオントランスポーター（例えば、ＯＡＴ１、ＯＡＴ３）、ＡＢＣトランスポーター（例えば、Ｐ−ｇｐ、ＭＲＰ２、ＢＣＲＰ）、ペプチドトランスポーター（例えば、ＰＥＰＴ１、ＰＥＰＴ２）、アミノ酸トランスポーター等が知られているが、本発明において輸送能を抑制するための標的となる主要な腎臓トランスポーターはアミノ酸トランスポーターである。アミノ酸トランスポーターとしては、Ｎａ＋依存性中性アミノ酸輸送系：システムＡ（例えば、ＡＴＡ１、ＡＴＡ２）、システムＧ（例えば、ＧＬＹＴ）、システムＢ０、システムＡＳＣ（例えば、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２）、システムＮ（例えば、ＮＡＴ１）、システムβ（例えば、Ｔａｕｔ）、システムＢ０、＋（例えば、ＡＴＢ０、＋）、システムｙ＋Ｌ（例えば、ｙ＋ＬＡＴ１／４Ｆ２ｈｃ、ｙ＋ＬＡＴ２／４Ｆ２ｈｃ）、Ｎａ＋非依存性中性アミノ酸輸送系：システムＬ（例えば、ＬＡＴ１／４Ｆ２ｈｃ、ＬＡＴ２／４Ｆ２ｈｃ）、システムＴ（例えば、ＴＡＴ１）、システムｂ０、＋（例えば、ＢＡＴ１／ｒＢＡＴ）、システムａｓｃ（例えば、Ａｓｃ−１／４Ｆ２ｈｃ）、Ｎａ＋依存性塩基性アミノ酸輸送系：システムＢ０、＋（例えば、ＡＴＢ０、＋）、Ｎａ＋非依存性塩基性アミノ酸輸送系：システムｙ＋（例えば、ＣＡＴ１、ＣＡＴ２、ＣＡＴ３、ＣＡＴ４）、システムｂ０、＋（例えば、ＢＡＴ１／ｒＢＡＴ）、システムｙ＋Ｌ（例えば、ｙ＋ＬＡＴ１／４Ｆ２ｈｃ、ｙ＋ＬＡＴ２／４Ｆ２ｈｃ）、Ｎａ＋依存性酸性アミノ酸輸送系：システムＸ−Ａ、Ｇ（例えば、ＥＡＡＣ１、ＧＬＴ−１，ＧＬＡＳＴ、ＥＡＡＴ４、ＥＡＡＴ５）、Ｎａ＋非依存性酸性アミノ酸輸送系：システムＸ−Ｃ（例えば、ｘＣＴ／４Ｆ２ｈｃ）が知られている。
【００１４】
本発明において「腎臓トランスポーターの輸送能の抑制」とは、いずれの腎臓トランスポーターによるかを問わず、腎臓トランスポーター全体として評価した場合における輸送能の抑制を意味する。ここで「輸送能の抑制」には、輸送能の完全な抑制（阻害）のみならず、部分的な抑制も含まれる。そして、かかる抑制は、後述の実施例１に示す通り、Ｌ−バリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン及びＬ−アスパラギン酸からなる群より選択される少なくとも１のアミノ酸によって達成することができる。また、本発明の腎臓トランスポーターの輸送能を抑制するための組成物としては、後述の実施例１に示す通り、腎臓上皮細胞の物質輸送において、透過率及び細胞内蓄積率共により強く抑制することができるという観点から、Ｌ−バリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン及びＬ−グルタミンからなる群より選択される少なくとも１のアミノ酸を有効成分とすることが好ましい。
【００１５】
本発明は、Ｌ−バリンを有効成分とし、かつ、前記腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進する作用を有する、組成物を提供する。
【００１６】
本発明における、「前記腎臓トランスポーターによって輸送される分子」は、前記腎臓トランスポーターによって輸送される基質であればよく、例えば、診断や治療を目的として投与される薬物が挙げられる。
【００１７】
本発明における腎臓トランスポーターによって輸送される分子の好ましい例としては、ハロゲン化炭素四員環を有するアミノ酸が挙げられ、より好ましい例としては、アンチ−１−アミノ−３−フルオロシクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ）またはその類縁体が挙げられる。かかる類縁体としては、例えば、アンチ−１−アミノ−３−クロロシクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＣｌＡＣＢＣ）、アンチ−１−アミノ−３−ヨードシクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＩＡＣＢＣ）、アンチ−１−アミノ−３−フルオロメチル−シクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＦＭＡＣＢＣ）、アンチ−１−アミノ−３−ブロモシクロブタン−１−カルボン酸（ａｎｔｉ−ＢｒＡＣＢＣ）が挙げられ、さらに、これらの立体配座異性体（例えば、ｓｙｎ−ＦＡＣＢＣ、ｓｙｎ−ＣｌＡＣＢＣ、ｓｙｎ−ＩＡＣＢＣ、ｓｙｎ−ＦＭＡＣＢＣ、ｓｙｎ−ＢｒＡＣＢＣ）も挙げられる。
【００１８】
また、ハロゲン化炭素四員環を有するアミノ酸は、体内用放射性診断薬として適用される場合には、例えば、１８−フッ素（１８Ｆ）、１２３−ヨウ素（１２３Ｉ）、１２５−ヨウ素（１２５Ｉ）、１３１−ヨウ素（１３１Ｉ）、７５−臭素（７５Ｂｒ）、７６−臭素（７６Ｂｒ）、７７−臭素（７７Ｂｒ）、８２−臭素（８２Ｂｒ）、２１０−アスタチン（２１０Ａｔ）、２１１−アスタチン（２１１Ａｔ）、１４−炭素（１４Ｃ）、１１−炭素（１１Ｃ）、１５−酸素（１５Ｏ）、３２−リン（３２Ｐ）、５９−鉄（５９Ｆｅ）、６７−銅（６７Ｃｕ）、６７−ガリウム（６７Ｇａ）、８１ｍ−クリプトン（８１ｍＫｒ）、８１−ルビジウム（８１Ｒｂ）、８９−ストロンチウム（８９Ｓｒ）、９０−イットリウム（９０Ｙ）、９９ｍ−テクネチウム（９９ｍＴｃ）、１１１−インジウム（１１１Ｉｎ）、１３３−キセノン（１３３Ｘｅ）、１１７ｍ−サマリウム（１１７ｍＳｍ）、１５３−サマリウム（１５３Ｓｍ）、１８６−レニウム（１８６Ｒｅ）、１８８−レニウム（１８８Ｒｅ）、２０１−タリウム（２０１Ｔｌ）、２１２−ビスマス（２１２Ｂｉ）及び２１３−ビスマス（２１３Ｂｉ）等の放射性同位体で標識される。放射性同位体で標識された化合物の中では、診断が行われる現地での粒子加速器による作製は必要とせず、また解像度も高く、さらに単・線量のみ又は比較的少ない線量だけを発生させることができるという観点から、［１８Ｆ］フッ素化炭素四員環を有するアミノ酸が好ましく、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣがより好ましい。なお、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ及びその類縁体の合成、並びにこれら化合物の放射性同位体による標識は、当業者であれば特許文献１や特許文献２等の記載に従って適宜実施することができる。
【００１９】
本発明の組成物は、例えば、診断や治療のための医薬組成物、飲食品、または試薬として用いることができる。本発明の組成物は、例えば、腎臓トランスポーターの輸送能の抑制、または、腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄の促進を行うために、診断又は治療に際して用いられる医薬組成物である。また、本発明の組成物は、例えば、腎臓トランスポーターの輸送能の抑制、または、腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄の促進を行う作用を有する飲食品（動物用飼料を含む）である。また、本発明の組成物は、例えば、研究目的（例えば、インビトロやインビボの実験）で、腎臓トランスポーターの輸送能の抑制、または、腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄の促進を行うための試薬である。
【００２０】
後述の実施例において示す通り、本発明の組成物は、経口用組成物としても非経口用組成物（例えば、腹腔内投与用組成物）としても有効に用いることができるが、投与対象への負担が少なく、絶食を必要とせず、腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄促進がより効果的に達成されるという観点から、本発明の組成物は、経口用組成物として用いることが好ましい。
【００２１】
本発明における組成物は、公知の製剤学的方法により製剤化することができる。例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、液剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、トローチ剤、舌下剤、咀嚼剤、バッカル剤、ペースト剤、シロップ剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、塗布剤、軟膏剤、硬膏剤、パップ剤、経皮吸収型製剤、ローション剤、吸引剤、エアゾール剤、注射剤、坐剤などとして、経口的または非経口的に使用することができる。
【００２２】
これら製剤化においては、薬理学上もしくは飲食品として許容される担体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、溶剤、基剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、芳香剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤、希釈剤、等張化剤、無痛化剤、増量剤、崩壊剤、緩衝剤、コーティング剤、滑沢剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等と適宜組み合わせることができる。
【００２３】
本発明の組成物を飲食品として用いる場合、当該飲食品は、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、病者用食品、食品添加物、あるいは動物用飼料であり得る。本発明の飲食品は、上記のような組成物として摂取することができる他、種々の飲食品として摂取することもできる。飲食品の具体例としては、食用油、ドレッシング、マヨネーズ、マーガリンなどの油分を含む製品；スープ類、乳飲料、清涼飲料水、茶飲料、アルコール飲料、ドリンク剤、ゼリー状飲料、機能性飲料等の液状食品；飯類、麺類、パン類等の炭水化物含有食品；ハム、ソーセージ等の畜産加工食品；かまぼこ、干物、塩辛等の水産加工食品；漬物等の野菜加工食品；ゼリー、ヨーグルト等の半固形状食品；みそ、発酵飲料等の発酵食品；洋菓子類、和菓子類、キャンディー類、ガム類、グミ、冷菓、氷菓等の各種菓子類；カレー、あんかけ、中華スープ等のレトルト製品；インスタントスープ，インスタントみそ汁等のインスタント食品や電子レンジ対応食品等が挙げられる。さらには、粉末、穎粒、錠剤、カプセル剤、液状、ペースト状またはゼリー状に調製された健康飲食品も挙げられる。
【００２４】
本発明の組成物は、ヒトを含む動物を対象として使用することができるが、ヒト以外の動物としては特に制限はなく、種々の家畜、家禽、ペット、実験用動物などを対象とすることができる。具体的には、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、カモ、ダチョウ、アヒル、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、マウス、ラット、サルなどが挙げられるが、これらに制限されない。
【００２５】
本発明における飲食品の製造は、当該技術分野に公知の製造技術により実施することができる。当該飲食品においては、他の機能性食品と組み合わせることによって、多機能性の飲食品としてもよい。
【００２６】
本発明の組成物を投与または摂取する場合、その投与量または摂取量は、対象の年齢、体重、症状、健康状態、組成物の種類（医薬品、飲食品など）などに応じて、適宜選択されるが、ヒト（成人）を対象とした経口投与の場合、前記腎臓トランスポーターによって輸送される分子を投与してから１日経過する迄に、１〜４００ｇのＬ−バリンを含む本発明の組成物を１回若しくは数回に分けて投与することが好ましい。また、ヒト（成人）を対象とした点滴投与の場合、前記腎臓トランスポーターによって輸送される分子を投与してから１日経過する迄に、１〜１００ｇのＬ−バリンを含む本発明の組成物を１〜３時間かけて持続投与することが好ましい。
【００２７】
本発明の組成物の製品（医薬品、飲食品、試薬）またはその説明書は、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制するため、又は前記腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進するために用いられる旨の表示を付したものであり得る。ここで「製品または説明書に表示を付した」とは、製品の本体、容器、包装などに表示を付したこと、あるいは製品の情報を開示する説明書、添付文書、宣伝物、その他の印刷物などに表示を付したことを意味する。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２９】
（実施例１）
＜腎臓上皮細胞を用いた輸送試験＞
透過性メンブレン上に腎臓の上皮細胞を播種すると、極性をもった細胞単層膜が得られることが知られており、生体内での物質輸送を反映する有用なモデルとして利用されている（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｍ．ら、Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１０年、３１巻、１４１〜１４６ページ  参照）。そこで、この輸送モデルを用いて、腎臓の上皮細胞の細胞膜上に存するトランスポーターの輸送能を抑制するための物質のスクリーニングを行った。
【００３０】
すなわち、先ずＬＬＣ−ＰＫ１細胞（ブタ腎臓近位尿細管由来の上皮細胞）を透過性メンブレン（トランスウェル（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ）、ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ社製、型番：３５３４９２）上に播種した。そして、播種後４〜７日目に経内皮電気抵抗値が３００Ω／ｃｍ２を示すものを選択した。次に、図１に示す通り、腎臓上皮細胞単層膜の両側（刷子縁側：頭頂膜側（ａｐｉｃａｌ）及び血管側：側底膜側（ｂａｓｏｌａｔｅｒａｌ））をＮａ緩衝液（ｐＨ７．４〜７．６）で満たした。Ｎａ緩衝液の組成は、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、８ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、０．９ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び５．６ｍＭ  Ｄ−グルコースである。また、下記にて示す「Ｎａ−」条件下においては、Ｎａ緩衝液の代わりにコリン（Ｃｈｏｌｉｎｅ）緩衝液（ｐＨ７．４〜７．６）で、腎臓上皮細胞単層膜の両側を満たした。コリン緩衝液の組成は、１３７ｍＭ  塩化コリン（Ｃｈｏｌｉｎｅ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、８ｍＭ  Ｋ２ＨＰＯ４、１．５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、０．９ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び５．６ｍＭ  Ｄ−グルコースである。
【００３１】
そして、刷子縁側の緩衝液に、ａｎｔｉ−［１４Ｃ］ＦＡＣＢＣをその濃度が１０μＭになるように添加し、またトリチウム（３Ｈ）標識したマンニトールを１μＣｉ／Ｌになるように添加し、さらに下記に示す化合物を各々の濃度が１ｍＭになるように添加し、下記にて特に断りがない限り、大気圧下、３７℃で各化合物を添加してから、１２０分間培養した後、刷子縁側の緩衝溶液中の放射能（１４Ｃ量）、血管側の緩衝溶液中の放射能（１４Ｃ量）及び細胞内の放射能（１４Ｃ量）を液体シンチレーションカウンタを用いて測定した。なお、ａｎｔｉ−［１４Ｃ］ＦＡＣＢＣは、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの炭素一つを１４Ｃにて標識した化合物である。また、マンニトールは尿細管から再吸収されない物質であるため、各実験系における陰性対照として用いた。なお、この結果については図示しないが、各実験系においてマンニトールの再吸収は生じていないことは確認された。次いで、得られた各測定値を基に、下記式にて「透過率」及び「細胞内蓄積率」を算出した。なお、「血管側の緩衝溶液中の放射能」は、刷子縁側の細胞膜及び血管側の細胞膜を通過したａｎｔｉ−［１４Ｃ］ＦＡＣＢＣの量、すなわち「透過量」を示す。また、「細胞内の放射能」は、刷子縁側の細胞膜は通過したが、血管側の細胞膜は通過しなかったａｎｔｉ−［１４Ｃ］ＦＡＣＢＣの量、すなわち「細胞内蓄積量」を示す。
【００３２】
透過率（％）＝（血管側の緩衝溶液中の放射能）／（血管側の緩衝溶液中の放射能＋刷子縁膜側の緩衝溶液中の放射能＋細胞内の放射能）×１００
細胞内蓄積率（％）＝（細胞内の放射能）／（血管側の緩衝溶液中の放射能＋刷子縁膜側の緩衝溶液中の放射能＋細胞内の放射能）×１００
そして、下記に示す「コントロール」における透過率及び細胞内蓄積率を１００とした際の比率を導き出した。得られた結果を図２に示す。
【００３３】
なお図２中、「コントロール」は、刷子縁側のＮａ緩衝液に１０μＭ  ａｎｔｉ−［１４Ｃ］ＦＡＣＢＣのみを添加した際の、大気圧下、３７℃における結果を示す。「４℃」は、「コントロール」における温度の条件を３７℃の代わりに４℃にした際の、トランスポーターが機能しない条件下における結果を示す。「Ｎａ−」は、刷子縁側のコリン緩衝液に１０μＭ  ａｎｔｉ−［１４Ｃ］ＦＡＣＢＣのみを添加した際の、大気圧下、３７℃における結果を、すなわちＮａと共役して機能するトランスポーターが機能しない条件下における結果を示す。「ＢＣＨ」は、システムＬトランスポーターの特異的阻害剤である、２‐アミノビシクロ［２．２．１］ヘプタン‐２‐カルボン酸（ＢＣＨ）を添加した際の、システムＬトランスポーターが機能しない条件下における結果を示す。「ＭｅＡＩＢ」は、システムＡトランスポーターの特異的阻害剤である、メチルアミノイソブタン酸（ＭｅＡＩＢ）を添加した際の、システムＡトランスポーターが機能しない条件下における結果を示す。そして、「Ｔｈｒ」、「Ｉｌｅ」、「Ｇｌｎ」、「Ａｒｇ」、「Ａｓｐ」及び「Ｖａｌ」は、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸及びＬ−バリンを各々添加した際の結果を示す。また、図２に示したＰ値は、統計解析ソフト（ＳＡＳ前臨床パッケージ  Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）を用いて、パラメトリックＤｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定にて解析した結果に基づく。
【００３４】
図２に示した結果から明らかなように、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣは腎臓の上皮細胞の細胞膜上に存するトランスポーターを介して、刷子縁側から血管側に輸送（再吸収）されていることが明らかになった（図２中「４℃」  参照）。また、Ｌ−アルギニン又はＬ−アスパラギン酸を添加した際の結果は、コントロールと比して細胞内蓄積率は有意に低く、これらアミノ酸は腎臓トランスポーターによるａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの再吸収を抑制できることが明らかになった。さらに、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−グルタミン又はＬ−バリンを添加した際の結果は、コントロールよりも透過率及び細胞内蓄積率は共に有意に低かったため、これらアミノ酸も腎臓トランスポーターによるａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの再吸収を抑制できることが明らかになった。従って、Ｌ−スレオニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸及びＬ−バリンは、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制できることが明らかになった。
【００３５】
（実施例２）
＜各種アミノ酸のラット腹腔内投与実験＞
実施例１に示した通り、Ｌ−バリン等のアミノ酸は、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制し、腎臓トランスポーターによって輸送される分子（例えば、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ）の再吸収を抑制する作用を有していることが明らかになった。そこで、Ｌ−バリン等のアミノ酸が、インビトロでの実験系のみならず、生体内においても腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進する作用を有しているかどうかを検証した。
【００３６】
すなわち、先ず、２４時間絶食させたラット（ＳＤラット、雄、６週齢）にａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを１匹あたり１８．５ＭＢｑ（検定時）／０．２ｍＬになるよう、尾静脈内に投与した。次いで、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣの投与直後に、各種天然アミノ酸（Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−リシン）を１匹あたり４００ｍｇになるように調製した生理食塩溶液を前記ラットの腹腔内に投与した。そして、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを投与直後から投与してから１６時間までに排泄された尿、糞及び残全身の放射能（１８Ｆから放出されるガンマ線の計数率（ｃｐｍ））をシングルチャネルアナライザを用いて測定した。次いで、得られた各測定値を基に、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣ投与後１６時間までの累積尿中放射能排泄率を算出した。得られた結果を図３に示す。
【００３７】
なお、累積尿中放射能排泄率は、前記測定値を用いて下記の通りに算出した。
累積尿中放射能排泄率（％）＝尿中放射能／（尿中放射能＋糞中放射能＋残全身の放射能）×１００。
【００３８】
また図３中、「コントロール」は、アミノ酸を含有しない生理食塩液のみをａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣの投与直後にラットの腹腔内に投与した結果を示す（図４においても同様）。また、横軸の括弧内（ｎ＝  ）の数値は各々のアミノ酸を投与したラットの試験数を示す（以下、図４〜７においても同様とする）。さらに、図３に示したＰ値は、統計解析ソフト（ＳＡＳ前臨床パッケージ  Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）を用いて、パラメトリックＤｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定にて解析した結果に基づく。
【００３９】
図３に示した結果から明らかなように、Ｌ−バリンを腹腔内投与したラットは、コントロールと比して有意にａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄が亢進されていた（Ｐ＜０．０００１）。しかしながら、その他のアミノ酸を腹腔内投与したラットは、コントロールにおける排泄率と有意に変わらない（又は低い）ものであった。
【００４０】
なお、実施例１において、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制し、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの再吸収を抑制する作用を有していることが示されたＬ−イソロイシンが、実施例２においてａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄を促進できなかった理由については、以下のように推察する。すなわち、腹腔内投与されたアミノ酸は、腹膜から吸収されて血中に移行した後、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの腎臓における再吸収を抑制する。この際、腹膜からの吸収率がアミノ酸によっては乏しいもの（例えば、Ｌ−イソロイシン）もあるため、血中への移行率が低くなってしまい、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの再吸収に対する抑制効果が見られなかったと推察する。
【００４１】
（実施例３）
＜Ｌ−バリンのラット腹腔内投与実験２＞
Ｌ−バリンの腹腔内投与をａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを投与直後からａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを投与してから１時間後にした以外は、実施例２と同様にして、ラットの尿中の累積放射能の排泄率を評価した。得られた結果を図４に示す。なお、図４に示したＰ値は、統計解析ソフト（ＳＡＳ前臨床パッケージ  Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）を用いて、ｔ検定にて解析した結果に基づく。
【００４２】
図４に示した結果から明らかなように、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを投与してから１時間後にＬ−バリンを腹腔内投与したラットも、コントロールと比して有意にａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄が亢進されていた（Ｐ＜０．１）。
【００４３】
（実施例４）
＜Ｌ−バリンのラットへの経口投与実験１＞
前述の通り、Ｌ−バリンを腹腔内に投与することによって、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄が促進されることが明らかになった、しかしながら、投与対象が特にヒトとなると、腹腔内投与方法は適用しにくいため、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄促進におけるＬ−バリンの経口投与の有効性を検証した。
【００４４】
すなわち、先ず、ラット（ＳＤラット、雄、６週齢）にａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣの投与１日前から、低たん白飼料（日本農産工業株式会社製、ラボＭＲストック）中のＬ−バリン配合率を２０％高くした飼料（Ｌ−バリン配合率：２０．７９％、以下、「＋２０％Ｌ−バリン」とも称する）を給餌した。次いで、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを１匹あたり１８．５ＭＢｑ（検定時）／０．２ｍＬになるよう、尾静脈内に投与した。そして、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを投与してから１６時間までに排泄された尿、糞及び残全身の放射能を測定した。次いで、得られた各測定値を基に、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣ投与後１６時間までの累積尿中放射能排泄率を算出した。得られた結果を図５に示す。なお図５中、「コントロール」は、前記低たん白飼料を給餌し続けたラットにおける結果を示す。また、図５に示したＰ値は、統計解析ソフト（ＳＡＳ前臨床パッケージ  Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）を用いて、Ｗｅｌｃｈ検定にて解析した結果に基づく。
【００４５】
図５に示した結果から明らかなように、＋２０％Ｌ−バリンをａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ投与１日前から給餌したラットにおいてはａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄が、コントロールと比して顕著に亢進されていた（Ｐ＜０．０１）。従って、Ｌ−バリンによるａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄促進は、腹腔内投与のみならず、経口投与でも奏することができることが明らかになった。
【００４６】
（実施例５）
＜Ｌ−バリンのラットへの経口投与実験２＞
実施例４に示した通り、＋２０％Ｌ−バリンをａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣ投与１日前から給餌したラットにおいて、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄は著しく促進された。しかしながら、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを用いた画像診断の際に、Ｌ−バリンをａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣの投与前から摂取させてしまうと、Ｌ−バリン摂取に伴い、臓器、組織、腫瘍への放射能分布の挙動が変化し、画像診断の結果に影響を及ぼす可能性が考えられる。そこで、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣを投与した後から、Ｌ−バリン高配合飼料を給餌した場合のａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣの排泄促進効果を評価した。
【００４７】
すなわち、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣの投与直後から、＋２０％Ｌ−バリンを給餌し、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣを投与直後から投与してから２４時間までに排泄された尿、糞及び残全身の放射能を測定した。次いで、得られた各測定値に基づき、ａｎｔｉ−［１８Ｆ］ＦＡＣＢＣ投与後２４時間までの累積尿中放射能排泄率を算出した。得られた結果を図６に示す。なお、図６に示したＰ値は、統計解析ソフト（ＳＡＳ前臨床パッケージ  Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）を用いて、ｔ検定にて解析した結果に基づく。また図６中、「コントロール」は、前記低たん白飼料を給餌し続けたラットにおける結果を示す。
【００４８】
図６に示した結果から明らかなように、＋２０％Ｌ−バリンをａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ投与直後から給餌したラットにおいてもａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄は、コントロールと比して顕著に亢進されていた（Ｐ＜０．００１）。
【００４９】
（実施例６）
＜Ｌ−バリンのラットへの経口投与実験３＞
次に、Ｌ−バリン経口投与によるａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄促進効果への絶食の影響を評価した。すなわち、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの投与２４時間前まで前記低たん白飼料をラットに給餌し、その後ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ投与まで絶食させ、該投与直後から＋２０％Ｌ−バリンを給餌した以外は、実施例５と同様にして、ラットの尿中の累積放射能の排泄率を評価した。得られた結果を図７に示す。なお図７中、「コントロール」は、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ投与直後から＋２０％Ｌ−バリンではなく、前記低たん白飼料を給餌したラットにおける結果を示す。また、図７に示した結果は、統計解析ソフト（ＳＡＳ前臨床パッケージ  Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）を用いて、ｔ検定にて解析した。
【００５０】
図７に示す通り、絶食後及びａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣ投与直後から＋２０％Ｌ−バリンを給餌したラットにおいて、ａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄は、コントロールと比して亢進されているものはあるものの、バラツキの多い結果となった。また、統計解析の結果からは、コントロールと比して有意差は認められなかった。さらに、図６に示した結果と比較して明らかなように、絶食によって、Ｌ−バリン経口投与によるａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄促進効果は低くなった。この理由については、以下のように推察する。すなわち、図８に示す通り、絶食させたラットにおいては、＋２０％Ｌ−バリンの摂餌量にバラツキがあったため、Ｌ−バリン経口投与によるａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄促進効果は低くなったと推察する。従って、図８に示した結果から明らかなように、Ｌ−バリン経口投与によるａｎｔｉ−ＦＡＣＢＣの排泄は、Ｌ−バリンの摂取量に応じて促進されることが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
以上説明したように、本発明によれば、腎臓トランスポーターの輸送能を抑制し、該腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進することが可能となる。
【００５２】
したがって、本発明の組成物は、治療及び診断を目的として投与された薬物の排泄促進剤として有用であり、特に半減期の長い放射性同位体で標識された体内用放射性診断薬を適用する画像診断において有用である。さらに、本発明の組成物は経口投与においても顕著に腎臓トランスポーターによって輸送される分子の生体からの排泄を促進することができるため、患者の負担の少ない画像診断においても有効に用いられる。
【符号の説明】
【００５３】
１…腎臓近位尿細管由来の上皮細胞、２…緩衝液、３…透過性メンブレン。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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