(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
栗皮抽出物を有効成分として含み、前記栗皮は、栗の外皮（鬼皮）である、痒み症の緩和若しくは抑制用化粧料組成物。
【請求項２】
前記組成物は、炎症性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、肌荒れによる皮膚炎、あせも、爛れ、凍傷、接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、乾癬及び類乾癬からなる皮膚炎のいずれか一以上から誘発される痒み症を緩和若しくは抑制する、請求項１記載の痒み症の緩和若しくは抑制用化粧料組成物。
【請求項３】
前記組成物は、アトピー性皮膚炎から誘発される痒み症を緩和若しくは抑制する、請求項１記載の痒み症の緩和若しくは抑制用化粧料組成物。
【請求項４】
栗皮抽出物を有効成分として含み、前記栗皮は、栗の外皮（鬼皮）である、皮膚障壁機能改善用化粧料組成物。
【請求項５】
前記組成物は、アトピー性皮膚炎から由来する皮膚障壁損傷の緩和若しくは皮膚障壁の回復力改善のためのものである、請求項４記載の皮膚障壁機能改善用化粧料組成物。
【請求項６】
前記組成物は、皮膚保湿増進又は皮膚過角質化防止のためのものである、請求項４記載の皮膚障壁機能改善用化粧料組成物。
【請求項７】
栗皮抽出物を有効成分として含み、前記栗皮は、栗の外皮（鬼皮）である、免疫抑制用化粧料組成物。
【請求項８】
前記組成物は、アトピー疾患の予防又は治療のためのものである、請求項７記載の免疫抑制用化粧料組成物。
【請求項９】
前記組成物は、アトピーの治療のためのものである、請求項７記載の免疫抑制用化粧料組成物。
【請求項１０】
栗皮抽出物を有効成分として含み、前記栗皮は、栗の外皮（鬼皮）である、アトピー性皮膚炎の改善若しくは治療用化粧料組成物。
【請求項１１】
前記栗皮抽出物は、組成物の総重量を基準として０．００５〜８０重量％の含量で含まれる、請求項１〜１０のいずれか一項記載の化粧料組成物。
【請求項１２】
前記栗皮抽出物は、水、炭素数１〜４の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール及びこれらの混合溶媒から選択された一以上の溶媒を通じて抽出されたものである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の化粧料組成物。
【請求項１３】
前記栗皮抽出物は、水、メタノール、エタノール、ブタノール、１，３−ブチレングリコール及びこれらの混合物からなる群から選択された溶媒を通じて抽出されたものである、請求項１２記載の化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、栗皮抽出物を含む化粧料組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
痒みとは、掻きたいという欲求を誘発する不愉快な皮膚感覚と定義されており、痛み、触覚、冷たさ又は熱さといった生理的自己防御機序として、皮膚が外部からの有害な刺激にさらされたときに、これを認知させて皮膚を保護する役割をする。
【０００３】
痒み症は、多様な皮膚疾患又は全身疾患においてよく表われる共通した症状の一種であり、じんましんや様々な薬物の副作用による急性の痒み症は容易に治癒され得るが、胆道閉鎖や腎臓疾患又はアトピー疾患といった重症の慢性の痒み症は、その治療が非常に難しいというのが実情である。
【０００４】
痒みは、炎症や癌、代謝性疾患、感染、精神科的疾病、薬物投与又はストレス等、多様な原因によって誘発され、最近のいくつかの研究結果では、皮膚と末梢神経系及び中枢神経系の有機的連結が痒みを誘発させる刺激に対する反応や調節に深く関与していることを明らかにしている。
【０００５】
最近、特定の感覚神経細胞とそれらの受容体が痒みに特異的に反応するということが明らかになり、痒みがもはや痛みの下位様相ではなく、感覚神経系の個別的感覚として受け入れられるようになっており、互いに異なる痒み媒介物質とそれらの受容体が多様な痒み誘発疾患に関与するものと考えられている（Ｓｔｅｉｎｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  １２６，  ｐｐ１７０５−１７１８，  ２００６）。
【０００６】
これまでの痒み症研究のための実験においては主にヒスタミンが使用されてきたが、アトピーのような慢性の痒み症は、ヒスタミン依存的経路（ｐａｔｈｗａｙ）によってというよりは、神経性原因によるものであるという主張が提起されており、このことは、なぜ抗ヒスタミンがアトピー疾患の痒み症に効果的でないのかということを説明している（Ｓｔａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  １１，  ｐｐ１２−２４，  ２００２）。
【０００７】
また、第１世代抗ヒスタミン剤は、主に全身投与して使用するが、抗副交感作用があって鎮静作用を示し、第１世代抗ヒスタミン剤であるクロルフェニラミンは、局所投与時、アトピー性皮膚炎患者の痒みを抑制させることができないものと知られており（Ｍｕｎｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  ２０５，  ｐｐ４０−４５，  ２００２）、皮膚過敏反応の危険があるため、アトピー性皮膚炎への局所抗ヒスタミン剤の使用は勧奨されない。鎮静作用がない第２世代抗ヒスタミン剤であるエバスチンやターフェナジンは、シトクロム（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ）Ｐ４５０活性を阻害する薬物（ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ，  ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）と共に服用すると不整脈を引き起こすことがあり（Ｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ，  ４６，  ｐｐ１５９−１６３，  １９９６）、これと関連する副作用が起こる。
【０００８】
したがって、効率的でありながら、副作用が少なく安全な痒み症緩和剤、特に、アトピーのような慢性の痒み症に有効な緩和剤の開発に対する必要性が急がれている状況である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｓｔｅｉｎｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  １２６，  ｐｐ１７０５−１７１８，  ２００６
【非特許文献２】Ｓｔａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  １１，  ｐｐ１２−２４，  ２００２
【非特許文献３】Ｍｕｎｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  ２０５，  ｐｐ４０−４５，  ２００２
【非特許文献４】Ｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ，  ４６，  ｐｐ１５９−１６３，  １９９６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、本発明は、従来から要請されてきた技術的課題を解決することを目的とする。具体的に、本発明の一実施例に係る目的は、栗皮抽出物を含む痒み症の緩和若しくは抑制用化粧料組成物、及び免疫抑制用化粧料組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
このような目的により、本発明に係る一実施例は、従来の痒み症治療剤が有する副作用を減らしつつも、優れた痒み症の抑制又は緩和の効果がある栗皮抽出物を有効成分として含む痒み症の緩和若しくは抑制用化粧料組成物に関する。
【００１２】
本発明に係る一実施例は、栗皮抽出物を有効成分として含む皮膚障壁機能改善用化粧料組成物に関する。
本発明に係る一実施例は、栗皮抽出物を有効成分として含む免疫抑制用化粧料組成物に関する。
【００１３】
本発明に係る一実施例は、栗皮抽出物を有効成分として含むアトピー性皮膚炎の改善又は治療用化粧料組成物に関する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明に係る化粧料組成物は、栗皮抽出物を有効成分として含むことにより、痒みの刺激源であるタンパク分解酵素活性受容体−２（Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−２：ＰＡＲ−２）の活性の抑制を通じて優れた痒み症の緩和又は抑制を発揮することができ、また栗皮抽出物の免疫抑制活性を通じて痒み症を誘発する原因になり得る免疫過敏性反応を根本的に治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果（トリプシン処理）の測定結果を示したグラフである。
【図２】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果（ＳＬＩＧＫＶ処理）の測定結果を示したグラフである。
【図３】本発明の一実施例に係る、栗皮１，３−ブチレングリコール（ＢＧ）抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果（トリプシン、ＳＬＩＧＫＶ処理）の測定結果を示したグラフである。
【図４】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のＴＮＦ−α分泌減少効果を示したグラフである。
【図５】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のＩＬ−６分泌減少効果を示したグラフである。
【図６】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のＩＬ−１α分泌減少効果を示したグラフである。
【図７】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のＩＬ−８分泌減少効果を示したグラフである。
【図８】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のＧＭ−ＣＳＦ分泌減少効果を示したグラフである。
【図９】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＩＬ−６分泌減少効果を示したグラフである。
【図１０】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＩＬ−８分泌減少効果を示したグラフである。
【図１１】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＧＭ−ＣＳＦ分泌減少効果を示したグラフである。
【図１２】本発明の一実施例に係る、栗皮抽出物のアトピー性皮膚炎患者に対する痒み症抑制効果を示したグラフである。
【図１３】本発明の一実施例に係る、栗の内皮（渋皮）及び外皮（鬼皮）抽出物によるＰＡＲ−２活性抑制効果の測定結果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、栗皮抽出物を有効成分として含む痒み症の緩和若しくは抑制用化粧料組成物に関する。本出願の発明者らは、タンパク分解酵素活性受容体−２（ＰＡＲ−２）を痒み症治療のターゲットとして、栗皮抽出物によるＰＡＲ−２の活性抑制の程度を測定した結果、後述する実施例において立証されたところのように、試験管内で優れたＰＡＲ−２拮抗作用を見せたことを確認し、また、アトピー性皮膚炎を病んでいる患者らに対して痒み抑制効果を示すことを確認した。
【００１７】
前記痒み症は、掻痒症とも呼ばれ、このような痒み症の誘発原因又は形態は特に制限されないが、例えば、炎症性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、肌荒れによる皮膚炎、あせも、爛れ、凍傷、接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、乾癬及び類乾癬からなる皮膚炎のうち一以上から誘発されるものであってよい。
【００１８】
また、本発明は、栗皮抽出物を有効成分として含み、皮膚障壁機能改善効果を示す。これにより、皮膚障壁機能の低下によって発生する疾患又は痒みによって誘発された二次的な皮膚損傷を効果的に予防又は治療することができる。
【００１９】
前記組成物は、例えば、アトピー性皮膚炎から由来する痒みによって発生した２次的な皮膚損傷に対し、皮膚障壁損傷の緩和又は皮膚障壁の回復力改善に有意な効果を示し、これを通じ、有意に皮膚障壁を改善させることができる。
【００２０】
前記組成物は、特に、皮膚の保湿増進や皮膚の過角質化防止を通じて皮膚障壁を改善させることができ、後述する実施例を通じて立証されたところのように、本出願の発明者らは、無毛マウスにオキサゾロン（ｏｘａｚｏｌｏｎ）を処理したアレルギーモデルで実験を進行し、経皮水分損失量（ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｗａｔｅｒ  ｌｏｓｓ、ＴＥＷＬ）と皮膚の厚さを測定した結果、栗皮抽出物が効果的な皮膚の保湿増進又は過角質化防止効果を示すことを確認した。
【００２１】
さらに、本発明は、栗皮抽出物を有効成分として含む免疫抑制用化粧料組成物に関する。前記組成物は、例えば、アトピー、リウマチ性関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）又はクローン病の治療のための組成物であってよく、その中でも、免疫過敏性反応であるアトピー疾患の予防又は治療のための組成物であってよい。
【００２２】
アトピー疾患が皮膚の損傷等による急性段階から慢性疾患段階に発展するとき、免疫媒介物質の多様な分泌様相変化が観察されるが、アトピー疾患を患っている患者の損傷した皮膚において、多数のインターロイキンの濃度が増加することになる。また、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、アトピー性皮膚疾患患者の損傷した皮膚においてその分泌量が増加して、慢性炎症反応を引き起こすことが知られており、アトピー患者の免疫体系の不均衡を引き起こすようになる（Ｍａｔｓｕｂａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ５６６，  ｐｐ１９５−２００，  ２００４）。
【００２３】
これと関連し、本出願の発明者らは、栗皮抽出物が免疫過敏性反応と関連する腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の発現を有意に減少させることができることを確認したところ、栗皮抽出物は、免疫抑制用化粧料組成物の有効成分に適する。
【００２４】
特に、本発明は、栗皮抽出物を有効成分として含み、アトピー性皮膚炎の改善又は治療用化粧料組成物の有効成分に適する。
また、前記インターロイキン−６（ＩＬ−６）及びインターロイキン−８（ＩＬ−８）は、アトピー疾患において痒みを誘発する因子としても知られており、栗皮抽出物は、アトピー疾患由来の痒み症の予防及び治療のために効果的に使用され得る。
【００２５】
前記栗皮は、栗の木の実を覆っている濃褐色の皮を意味し、本明細書において使用される栗皮抽出物は、栗の内皮（渋皮）、外皮及びこれらの混合物からなる群から選択された一以上の抽出物を意味するものであってよい。栗皮としては、栗の内皮（渋皮）を使用することができ、栗の外皮（鬼皮）が使用されてもよいが、特に、栗の外皮（鬼皮）抽出物を処理した群において優れたＰＡＲ−２拮抗作用を見せることを確認した。
【００２６】
前記栗皮は、どのような種類の栗から由来する皮でも差し支えなく特に制限されないが、例えば、栗（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｃｒｅｎａｔａ  Ｓ．  ｅｔ  Ｚ．，  Ｃａｓｔａｎｅａ  ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ  Ｂｌ．，  Ｃａｓｔａｎｅａ  ｂｕｌｇａｒｉｓ）、 藥栗（Ｃａｓｔａｎｅａ  Ｂｕｎｇｅａｎａ  Ｂｌ）及び韓国グリ（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｃｒｅｎａｔａ  ｆｏｒ．  ｍｕｌｔｉｃａｒｐａ（Ｕｙｅｋｉ）Ｃｈｕｎｇ）からなる群から選択された一以上の栗の皮であってよい。
【００２７】
前記栗皮抽出物の抽出方法は特に制限されないが、例えば、水、炭素数１〜４の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール及びこれらの混合溶媒からなる群から選択された溶媒を通じて抽出されてよく、前記溶媒は、例えば、水、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ブタノール及びこれらの混合物からなる群から選択された一以上であってよく、好ましくは、前記栗皮抽出物は、１０〜１００％アルコール水溶液又は１０〜１００％１，３−ブチレングリコールから抽出されてよく、具体的に、栗皮２０〜９０％エタノール水溶液抽出物又は１０〜７０％１，３−ブチレングリコール抽出物であってよく、より具体的に、栗皮４０〜９０％エタノール水溶液抽出物又は１０〜５０％１，３−ブチレングリコール抽出物であってよく、さらに具体的に、栗皮６０〜９０％エタノール水溶液抽出物又は２０〜４０％１，３−ブチレングリコール抽出物であってよい。
【００２８】
前記組成物に含まれる栗皮抽出物の含量は特に制限されないが、組成物の総重量を基準として０．００５〜８０重量％の含量で含まれてよく、好ましくは、０．０１〜３０重量％で含まれてよい。前記栗皮抽出物の含量が少なすぎると効果が微々たるものとなり、多すぎると剤形の安定度が低くなり得る。
【００２９】
場合によって、痒み症の緩和又は抑制、及び免疫抑制のために栗皮抽出物と抗ヒスタミン、ステロイド、局所麻酔、免疫抑制剤のうち一又はそれ以上の物質との併用もまた可能である。
【００３０】
従来、アトピー性皮膚炎及び痒み症緩和のための技術は、抗ヒスタミン剤の服用やステロイド製剤を外用剤として塗布するものであったが、これらの製剤の場合、一時的な治療効果を見せても直ちに再発するという短所を有しており、さらに、これら薬物を服用した場合、中枢神経障害、消化器障害などの副作用が報告されている。副腎皮質ホルモンであるステロイド製剤は、強力な消炎作用と免疫抑制作用で効果が優れているが副作用もまた深刻であり、免疫抑制剤であるタクロリムス水和物軟膏がアトピー性皮膚炎の治療に有効なものと報告されているが、皮膚癌を誘発したり、皮膚損傷部位に多量に体内吸収されたときには、腎臓障害を誘発するおそれがあり、安全性の側面において長期的使用が難しいというのが実情である。
【００３１】
そこで、栗皮抽出物を有効成分として含む組成物と、抗ヒスタミン、ステロイド、局所麻酔、免疫抑制剤のうち一又はそれ以上を適切に併用する場合、痒み症の緩和又は抑制、及び免疫抑制等に副作用を伴うことなく、安全に大きな効果を示すことができる。
【００３２】
前記化粧料組成物は、剤形は特に限定されず、目的に応じて化粧品の剤形を適宜選択してよい。例えば、柔軟化粧水（スキンローション及びミルクローション）、栄養化粧水、エッセンス、栄養クリーム、マッサージクリーム、パック、ゲル、アイクリーム、アイエッセンス、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォータ、パウダー、ボディローション、ボディクリーム、ボディオイル、及びボディエッセンスからなる群から選択された一以上に剤形化することができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。
【００３３】
前記有効成分の投与量の決定は、当業者の水準にあり、組成物の１日投与用量は、投与しようとする対象の進行程度、発病時期、年齢、健康状態、合併症等の多様な要因によって異なるが、成人を基準にすると、一般的には、前記組成物１〜５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは３０〜２００ｍｇ／ｋｇを１日１〜２回に分割して投与することができ、前記投与量は、いかなる方法によっても本発明の範囲を限定するものではない。
【００３４】
以下、実施例を通じて本発明をさらに詳述するが、下記実施例は、本発明を例示するためのものであり、本発明のカテゴリがこれらにのみ限定されるものではない。
［実施例１］栗皮抽出物の製造
１−１）栗皮１，３−ブチレングリコール抽出物の製造
栗皮を、３０％１，３−ブチレングリコール（１，３−ｂｕｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）を利用して、室温で３日間浸出させた。続いて、２５０メッシュ、３μｍ、１μｍ、０．５μｍの大きさの濾過機で順次濾過した。その後、０〜４℃で３日間放置した後、０．５μｍ、０．３μｍ、０．２μｍの大きさの濾過機で順次濾過し、栗皮１，３−ブチレングリコール抽出物を得た。
【００３５】
１−２）栗皮エタノール抽出物の製造
栗皮を、７０％エタノールを利用して、室温で３日間浸出させた。続いて、２５０メッシュ、３μｍ、１μｍ、０．５μｍ、０．３μｍ、０．２μｍの大きさの濾過機で順次濾過した。その後、６０℃で溶液を濃縮させた後、３０℃で１８時間真空乾燥を実施し、栗皮エタノール抽出物を粉末形態で得た。
【００３６】
［試験例１］栗皮エタノール抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，トリプシン処理、ＨＥＫ：ヒト表皮角化細胞）
実験一日前、角質形成細胞（細胞株名：ＨａＣａＴ、入手先：ＡＴＣＣ）を９６ウェルプレートに４×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌとなるように分株した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。２４時間後、ＨＢＳＳ（Ｈａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）バッファーで９６ウェルプレートを２回洗浄後、反応バッファー（２μＭ  Ｆｌｕｏ−４−ＡＭ，  ２０％  ｐｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ，  ２．５ｍＭ  ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ）を細胞に入れた。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで３０分、室温で３０分間反応させた後、ＨＢＳＳバッファーで２回洗浄し、栗皮エタノール抽出物を細胞にそれぞれ１ｐｐｍ、２ｐｐｍ、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍ、３０ｐｐｍ及び５０ｐｐｍの濃度で処理した。１０分間反応させた後、２Ｕ／ｍｌトリプシンで処理し、８０秒間、細胞内Ｃａ２＋濃度変化を測定した。細胞内Ｃａ２＋濃度変化の測定は、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ，ＵＳＡ）を利用した。栗皮エタノール抽出物とトリプシン処理後、８０秒間フレックス（ｆｌｅｘ）を測定して得られた値の最小値と最大値の差を求めた後、その値をトリプシン処理時の最小値と最大値の差と比較して抑制率を求めた。
【００３７】
図１を参照すると、トリプシンによってＰＡＲ−２のＮ−末端でセリンシーケンスを切ってＰＡＲ−２が活性化されている場合、細胞内にカルシウムイオンが流入されるが、栗皮抽出物を処理した群の場合、ＰＡＲ−２活性化が抑制されて、カルシウムイオンの流入が顕著に減少することを確認することができる。
【００３８】
［試験例２］栗皮エタノール抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，ＳＬＩＧＫＶ処理、ＨＥＫ：ヒト表皮角化細胞）
実験一日前、角質形成細胞（細胞株名：ＨａＣａＴ、入手先：ＡＴＣＣ）を９６ウェルプレートに４×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌとなるように分株した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。２４時間後、ＨＢＳＳ（Ｈａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）バッファーで９６ウェルプレートを２回洗浄後、反応バッファー（２μＭ  Ｆｌｕｏ−４−ＡＭ，  ２０％  ｐｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ，  ２．５ｍＭ  ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ）を細胞に入れた。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで３０分、室温で３０分間反応させた後、ＨＢＳＳバッファーで２回洗浄し、栗皮エタノール抽出物を細胞にそれぞれ１ｐｐｍ、２ｐｐｍ、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍ、３０ｐｐｍ及び５０ｐｐｍの濃度で処理した。１０分間反応させた後、５μＭ  ＰＡＲ−ＡＰ（ＳＬＩＧＫＶ）を処理し、８０秒間、細胞内Ｃａ２＋濃度変化を測定した。細胞内Ｃａ２＋濃度変化の測定は、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ，ＵＳＡ）を利用した。栗皮エタノール抽出物と５μＭ  ＰＡＲ−ＡＰ（ＳＬＩＧＫＶ）処理後、８０秒間フレックス（ｆｌｅｘ）を測定して得られた値の最小値と最大値の差を求めた後、その値を５μＭ  ＰＡＲ−ＡＰ（ＳＬＩＧＫＶ）処理時の最小値と最大値の差と比較して抑制率を求めた。
【００３９】
図２を参照すると、活性化ペプチドであるＳＬＩＧＫＶ（Ｈｕｍａｎ）が直接的なリガンドとして作用してＰＡＲ−２が活性化されると、細胞内にカルシウムイオンが流入されるが、栗皮抽出物を処理した群の場合、ＰＡＲ−２活性化が抑制されてカルシウムイオンの流入が顕著に減少することを確認することができる。
【００４０】
［試験例３］栗皮１，３−ブチレングリコール（ＢＧ）抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，ＳＬＩＧＫＶ処理、ＨＥＫ：ヒト表皮角化細胞）
実験一日前、角質形成細胞（細胞株名：ＨａＣａＴ、入手先：ＡＴＣＣ）を９６ウェルプレートに４×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌとなるように分株した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。２４時間後、ＨＢＳＳ（Ｈａｎｋｓ’Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）バッファーで９６ウェルプレートを２回洗浄後、反応バッファー（２μＭ  Ｆｌｕｏ−４−ＡＭ，  ２０％  ｐｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ，  ２．５ｍＭ  ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ）を細胞に入れた。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで３０分、室温で３０分間反応させた後、ＨＢＳＳバッファーで２回洗浄し、栗皮１，３−ブチレングリコール（ＢＧ）抽出物を細胞にそれぞれ０．１ｗ／ｖ％、０．５ｗ／ｖ％及び１ｗ／ｖ％の濃度で処理した。１０分間反応させた後、２Ｕ／ｍｌトリプシン又は５μＭ  ＰＡＲ−ＡＰ（ＳＬＩＧＫＶ）を処理し、８０秒間、細胞内Ｃａ２＋濃度変化を測定した。細胞内Ｃａ２＋濃度変化の測定は、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ，ＵＳＡ）を利用した。栗皮１，３−ブチレングリコール（ＢＧ）抽出物と２Ｕ／ｍｌトリプシン又は５μＭ  ＰＡＲ−ＡＰ（ＳＬＩＧＫＶ）処理後、８０秒間フレックス（ｆｌｅｘ）を測定して得られた値の最小値と最大値の差を求めた後、その値を２Ｕ／ｍｌ  トリプシン又は５μＭ  ＰＡＲ−ＡＰ（ＳＬＩＧＫＶ）処理時の最小値と最大値の差と比較して抑制率を求めた。
【００４１】
図３を参照すると、トリプシン又はＰＡＲ−２活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）による細胞内カルシウムイオンの流入が、栗皮抽出物の濃度が高くなるにつれて顕著に減少することを確認することができる。
【００４２】
［試験例４］栗皮抽出物によるＴＮＦ−αの分泌減少
実験一日前、正常ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ、入手先：Ｌｏｎｚａ）を９６ウェルプレートに５×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌとなるように分株した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。２４時間後、ＰＢＳで細胞を２回洗い、セラムフリーＫＢＭ（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｂａｓｅｍｅｎｔ  ｍｅｄｉａ）に取り替えた。それぞれのウェルに栗皮を濃度別に処理し（１０，２５，５０ｐｐｍ）、３０分間反応させた後、ＰＧＳＡ（１０，５０ｐｐｍ）、ＬＰＳ（１ｐｐｍ）をそれぞれ処理した。２４時間、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養した後、培養液を取ってＴＮＦ−αに対するＥＬＩＳＡを行った。ＥＬＩＳＡは、製造会社（ＢＤ  ｓｃｉｅｎｃｅ）の実験方法を利用した。
【００４３】
図４を参照すると、栗皮がＰＧＳＡとＬＰＳにより増加したＴＮＦ−αの分泌を著しく減少させることを観察することができる。
［試験例５］栗皮抽出物によるＩＬ−６の分泌減少
ＩＬ−６に対するＥＬＩＳＡを行ったことを除けば、試験例４と実質的に同じ方法を利用した。
【００４４】
図５を参照すると、栗皮がＰＧＳＡとＬＰＳによって増加したＩＬ−６の分泌を懸隔に抑制させることを観察することができる。
［試験例６］栗皮抽出物によるＩＬ−１αの分泌減少
ＩＬ−１αに対するＥＬＩＳＡを行ったことを除けば、試験例４と実質的に同じ方法を利用した。
【００４５】
図６を参照すると、栗皮がＰＧＳＡとＬＰＳによって増加したＩＬ−１αの分泌量を濃度に応じて減少させることを観察することができる。
［試験例７］栗皮抽出物によるＩＬ−８の分泌減少
ＩＬ−８に対するＥＬＩＳＡを行ったことを除けば、試験例４と実質的に同じ方法を利用した。
【００４６】
図７を参照すると、栗皮がＰＧＳＡとＬＰＳによって増加したＩＬ−８の分泌を著しく減少させることを観察することができる。
［試験例８］栗皮抽出物によるＧＭ−ＣＳＦの分泌減少
ＧＭ−ＣＳＦに対するＥＬＩＳＡを行ったことを除けば、試験例４と実質的に同じ方法を利用した。
【００４７】
図８を参照すると、栗皮の濃度が増加するにつれて、ＰＧＳＡとＬＰＳによって分泌されるＧＭ−ＣＳＦの量が減少することを観察することができる。
［試験例９］栗皮抽出物のトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＩＬ−６の分泌抑制効果
実験一日前、正常ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ、入手先：Ｌｏｎｚａ）を９６ウェルプレートに５×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌとなるように分株した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。２４時間後、ＰＢＳで細胞を２回洗い、セラムフリーＫＢＭに取り替えた。それぞれのウェルに栗皮抽出物を濃度別に処理し（１０，５０ｐｐｍ）、３０分間反応させた後、トリプシン（１０ｎＭ）又はＰＡＲ−２活性化ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ，５０μＭ）をそれぞれ処理した。２４時間、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養した後、培養液を取ってＩＬ−６に対するＥＬＩＳＡを行った。ＥＬＩＳＡは、製造会社（ＢＤ  ｓｃｉｅｎｃｅ）の実験方法を利用した。
【００４８】
図９を参照すると、栗皮抽出物がトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＩＬ−６の分泌を濃度依存的に抑制することを観察することができる。
［試験例１０］栗皮抽出物のトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＩＬ−８の分泌抑制効果
ＩＬ−８に対するＥＬＩＳＡを行ったことを除けば、試験例９と実質的に同じ方法を利用した。
【００４９】
図１０を参照すると、栗皮抽出物がトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＩＬ−８の分泌を濃度依存的に抑制することを観察することができる。
［試験例１１］栗皮抽出物のトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＧＭ−ＣＳＦの分泌抑制効果
ＧＭ−ＣＳＦに対するＥＬＩＳＡを行ったことを除けば、試験例９と実質的に同じ方法を利用した。
【００５０】
図１１を参照すると、栗皮抽出物がトリプシンと活性ペプチド（ＳＬＩＧＫＶ）によるＧＭ−ＣＳＦの分泌を濃度依存的に抑制することを観察することができる。
［試験例１２］アトピー性皮膚炎患者に対する栗皮抽出物の痒み症抑制効果
約２週間、１０人のアトピー性皮膚炎患者を対象として栗皮抽出物（０．３％固形分濃度）を痒い部位に集中的に使用させた後、使用前と使用後の痒み程度を７点尺度のアンケート用紙にて測定し、痒み緩和効果を確認した。
【００５１】
図１２を参照すると、栗皮抽出物を２週間使用させた後、痒み程度が１点ずつ低くなったことを観察することができた。
［試験例１３］栗皮エタノール抽出物の皮膚保湿効果測定
約２週間、１０人のアトピー性皮膚炎患者を対象として栗皮抽出物（０．３％固形分濃度）を痒い部位に集中的に使用させた後、使用前と使用後の皮膚の潤い程度を７点尺度のアンケート用紙にて測定し、皮膚保湿効果を確認した。１０人の点数を確認した結果、平均６点であって、抽出物の塗布後に皮膚に潤いがあると応答し、優れた皮膚保湿効果を示すことを観察することができた。
【００５２】
［試験例１４］栗の外皮エタノール抽出物と栗の内皮エタノール抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果の比較（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，ＳＬＩＧＫＶ処理、ＨＥＫ：ヒト表皮角化細胞）
栗の外皮と内皮を分離して乾燥した後、実施例１−２）と同じ方法で栗の外皮抽出物を製造し、栗の内皮抽出物もまた、実施例１−２）と同じ方法で製造した。試験例２と同じ方法を使用して、栗の外皮エタノール抽出物と栗の内皮エタノール抽出物のＰＡＲ−２活性抑制効果を測定し、下記のテーブル６及び図１３に示した。
【００５３】
【表１】
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［試験例１５］栗の外皮エタノール抽出物と栗の内皮エタノール抽出物のＰＡＲ−２の活性抑制効果の比較（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，ＳＬＩＧＫＶ処理、ＨＥＫ：ヒト表皮角化細胞）
栗の外皮（鬼皮）と内皮（渋皮）抽出物の濃度を、下記テーブル７に示すように処理したことを除けば、試験例１４と同じ方法で、ＰＡＲ−２活性抑制効果を測定した。
【００５４】
【表２】
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以下では、本発明に係る組成物の剤形例を説明するが、化粧料組成物は様々な剤形に応用可能であり、このことは、本発明を限定しようとするものではなく、単に具体的に説明しようとするものである。
【００５５】
［剤形例１］柔軟化粧水（スキンローション）
下記テーブル１に記載された組成により、通常的な方法で柔軟化粧水を製造した。
【００５６】
【表３】
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［剤形例２］栄養化粧水（ミルクローション）
下記テーブル２に記載された組成により、通常的な方法で栄養化粧水を製造した。
【００５７】
【表４】
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［剤形例３］栄養クリーム
下記テーブル３に記載された組成により、通常的な方法で栄養クリームを製造した。
【００５８】
【表５】
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［剤形例４］マッサージクリーム
下記テーブル４に記載された組成により、通常的な方法でマッサージクリームを製造した。
【００５９】
【表６】
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［剤形例５］パック
下記テーブル５に記載された組成により、通常的な方法でパックを製造した。
【００６０】
【表７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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