(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
併用製剤として又は交替で投与される治療剤の組み合わせを含んでなる哺乳動物における造血器腫瘍の治療のための医薬であって、治療剤の組み合わせが、式Ｉａ：
0005709766.tif 000063
を有する４-(２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン又はその立体異性体、幾何異性体、互変異性体又は薬学的に許容可能な塩の治療有効量と、デキサメタゾン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、メルファラン、レナリドミド、及びラパマイシンから選択される一又は複数の化学療法剤の治療有効量とを含む、医薬。
【請求項２】
化学療法剤がデキサメタゾンである請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
化学療法剤がドキソルビシンである請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
化学療法剤がビンクリスチンである請求項１に記載の医薬。
【請求項５】
化学療法剤がメルファランである請求項１に記載の医薬。
【請求項６】
化学療法剤がレナリドミドである請求項１に記載の医薬。
【請求項７】
化学療法剤がラパマイシンである請求項１に記載の医薬。
【請求項８】
治療剤の組み合わせが、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾンを含む請求項１に記載の医薬。
【請求項９】
式Ｉａの化合物の薬学的に許容可能な塩が、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸及びグルタミン酸で形成される塩から選択される請求項１から８の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１０】
式Ｉａを有する化合物の治療有効量と、化学療法剤の治療有効量が、併用製剤として投与される請求項１から９の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１１】
式Ｉａを有する化合物の治療有効量と、化学療法剤の治療有効量が、哺乳動物に交替で投与される請求項１から９の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１２】
哺乳動物に化学療法剤が投与され、その後式Ｉａの化合物が投与される請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
治療剤の組み合わせが、式Ｉａを有する化合物の治療有効量を毎日２回から３週毎に１回の範囲で投与し、化学療法剤の治療有効量を毎日２回から３週毎に１回の範囲で投与する投与レジメンによって投与される請求項１１に記載の医薬。
【請求項１４】
投与レジメンが一又は複数回、繰り返される請求項１３に記載の医薬。
【請求項１５】
併用治療剤の投与が相乗効果を生じる請求項１から１４の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１６】
造血器腫瘍が非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ、及びＭＣＬから選択される請求項１から１５の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１７】
式Ｉａの化合物及び化学療法剤がそれぞれ単位投薬形態当たり１ｍｇから１０００ｍｇの量で投与される請求項１から１６の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１８】
式Ｉａの化合物及び化学療法剤が１：５０から５０：１の重量比で投与される請求項１から１７の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１９】
哺乳動物における造血器腫瘍をデキサメタゾン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、メルファラン、レナリドミド、及びラパマイシンから選択される一又は複数の化学療法剤の治療有効量と組み合わせて治療するための医薬であって、式Ｉａ：
0005709766.tif 000064
を有する４-(２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン又はその立体異性体、幾何異性体、互変異性体又は薬学的に許容可能な塩の治療有効量を含む、医薬。
【請求項２０】
式Ｉａ：
0005709766.tif 000065
の化合物又はその立体異性体、幾何異性体、互変異性体又は薬学的に許容可能な塩；デキサメタゾン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、メルファラン、レナリドミド、及びラパマイシンから選択される化学療法剤；及び一又は複数の薬学的に許容可能な担体、流動促進剤、希釈剤又は賦形剤を含有する薬学的製剤。
【請求項２１】
式Ｉａの化合物の薬学的に許容可能な塩が、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸及びグルタミン酸で形成される塩から選択される請求項２０に記載の薬学的製剤。
【請求項２２】
二酸化ケイ素、粉末セルロース、微結晶セルロース、金属ステアレート、アルミノケイ酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、コーンスターチ、炭酸マグネシウム、アスベスト非含有タルク、ステアロウェット（ｓｔｅａｒｏｗｅｔ）Ｃ、スターチ、スターチ１５００、ラウリル硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、及びそれらの組み合わせから選択される薬学的に許容可能な流動促進剤を含有する請求項２０又は２１に記載の薬学的製剤。
【請求項２３】
式Ｉａの化合物と化学療法剤が、それぞれ単位投薬形態当たり１ｍｇから１０００ｍｇの量を含む請求項２０から２２の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２４】
非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ、及びＭＣＬから選択される造血器腫瘍の治療方法における使用のための請求項２０から２３の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２５】
非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ、及びＭＣＬから選択される造血器腫瘍の治療のための医薬の製造における請求項１から１８の何れか一項に記載の治療剤の組み合わせの使用。
【請求項２６】
請求項１から１８の何れか一項に記載の医薬の製造における、式Ｉａ：
0005709766.tif 000066
を有する４-(２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン又はその立体異性体、幾何異性体、互変異性体又は薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２７】
ａ）請求項１から１８の何れか一項に記載の治療剤の組み合わせ；及び
ｂ）使用のための説明書
を含む、造血器腫瘍を治療するための製造品。
【請求項２８】
式Ｉａ：
0005709766.tif 000067
を有する化合物又はその立体異性体、幾何異性体、互変異性体又は薬学的に許容可能な塩と、デキサメタゾン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、メルファラン、レナリドミド、及びラパマイシンから選択される化学療法剤とを、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ、及びＭＣＬから選択される造血器腫瘍の治療における別個の、同時の、又は逐次的な使用のための併用製剤として含む製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願とのクロスリファレンス）
米国特許法施行規則第３７条１．５３（ｂ）に基づき出願されたこの非仮出願は、出典明示により全体が援用される２００９年３月１２日出願の米国仮出願第６１／１５９６２２号について米国特許法第１１９条第（ｅ）項の下の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、一般には、造血器腫瘍に対して活性を持つ化合物の薬学的組合わせに関し、ＰＩ３キナーゼ又はｍＴＯＲ活性を阻害する化合物を含む。本発明はまた哺乳動物又は哺乳動物細胞のインビトロ、インサイツ、及びインビボでの診断又は治療のために該化合物を使用する方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
血液の細胞性成分、例えば白血球、リンパ球、ナチュラルキラー細胞、形質細胞、及び骨髄系細胞、例えば好中球及び単球が生成されるプロセスである造血発生中に生成される細胞に関与する癌は造血器腫瘍と呼ばれる。血液及びリンパ組織中に見出すことができ、免疫応答に重要であるリンパ球はリンパ球の２つの主要なクラスに分類される：それぞれ体液性及び細胞性免疫を媒介するＢリンパ球（Ｂ細胞）及びＴリンパ球（Ｔ細胞）である。Ｂ細胞は、（Ｔ細胞により支配される細胞媒介性免疫反応に対して）体液性免疫反応において大きな役割を演ずるリンパ球である。Ｂ細胞の主要な機能は抗原に対して抗体を生産し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の役割を演じ、抗原との相互関係によって活性化された後に最終的にメモリーＢ細胞へと発達することである。Ｂ細胞は適応免疫系の必須の構成要素である。Ｂ細胞は骨髄内で成熟し、骨髄を離れてその細胞表面に抗原結合抗体を発現する。ナイーブＢ細胞が、その膜結合抗体が特異的な抗原に初めて遭遇すると、細胞は素早く分裂し始め、その子孫がメモリーＢ細胞及び「形質細胞」と呼ばれるエフェクター細胞に分化する。メモリーＢ細胞はその寿命が長く、元の親細胞と同じ特異性を持つ膜結合抗体を発現し続ける。形質細胞は膜結合抗体を産生しないが、代わりに抗体を、分泌されうる形態で産生する。分泌される抗体は体液性免疫の主要なエフェクター分子である。
【０００４】
非ホジキンリンパ腫は、ホジキンリンパ腫以外の何れのリンパ腫も含む造血器腫瘍の多様な群である。リンパ腫は、白血球の一種であるリンパ球から派生する癌のタイプである。非ホジキンリンパ腫の多くのサブタイプが記載されている；これらは一般にその攻撃性によって分類される。攻撃性が低い非ホジキンリンパ腫は長年にわたって存在する慢性疾患でありうる一方、攻撃性がより高い非ホジキンリンパ腫は治療しないと直ぐに致命的となりうる。非ホジキンリンパ腫は、化学療法、モノクローナル抗体、免疫療法、放射線療法及び造血幹細胞移植の併用により治療される。
【０００５】
リンパ腫は、リンパ球（脊椎動物の免疫系における白血球のあるタイプ）及びリンパ節に由来する腫瘍の一タイプであり、リンパ節の腫張（腫瘍）を呈する。リンパ腫は、リンパ球にまた由来するが固形腫瘍を形成しないリンパ性白血病に密接に関係している。多くのタイプのリンパ腫が存在しており、よって、リンパ腫は血液系腫瘍と呼ばれる造血器腫瘍の大きなグループの一部である。
【０００６】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、骨髄系列の発達に関係づけられる造血幹細胞の悪性のクローン障害の異種群を含む。しばしば増殖及びアポトーシスの調節解除と合併している正常な血球分化のブロックが存在する。これは正常な造血発生の進行性機能不全を生じ、結果として貧血、好中球減少症及び血小板減少症を生じさせる。ＡＭＬは全成人白血病の約８０％を占め、その全発生率は過去１５から２０年にわたって変化がないかないしはゆっくりと増加している。ＡＭＬの予後は、全５年生存率が１５から３０％と不良なままであるが、骨髄異形成症候群から発生したＡＭＬの患者又は６０歳を越える患者は５年生存率が１０％未満と更に予後が不良である（Smith M.等 (2004) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 50:197-222）。ＡＭＬ患者のための標準的な治療法は、主にシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）と例えばダウノルビシン又はイダルビシンのようなアントラサイクリン抗生物質から構成される高投与量の化学療法である。通常、ＡＭＬは初回化学療法に応答するが、殆どの患者で疾患再発が生じる。ＡＭＬ治療の結果は、強化された治療方策に耐えうる若い患者においては改善しているが、年齢が６０歳を越える個体での結果では限定的な変化しかない。ＡＭＬに使用される標準的な化学療法剤に対する許容可能な毒性の限界に達している。従って、ＡＭＬのための新しく、合理的に設計され、毒性が最小で、効果的な治療法に対する重大で未だ満たされていない必要性が残っている（Fathi A.T.及びKarp J.E. (2009) Curr. Oncol. Rep. 11:346-352；Stapnes等(2009) Expert Opin. Investig. Drugs 18:433-455）。
【０００７】
投与レジメンにおいて同時又は逐次投与される抗癌の薬学的治療を組合わせることは今や癌治療では一般的である。成功した併用療法は、単剤治療、つまり、一つの薬剤に限定された薬学的治療に対して改善され相乗効果すらある効果をもたらす（Ouchi等 (2006) Cancer Chemother. Pharmacol. 57:693-702；Higgins等 (2004) Anti-Cancer Drugs 15:503-512）。前臨床研究は、乳癌治療のためのカペシタビン及びタキサンのような抗癌の薬学的併用治療剤の臨床段階での相乗効果を予測する基礎となっている（Sawada等 (1998) Clin. Cancer Res. 4:1013-1019）。併用療法の所定の投与量及び計画は、効果を損なうことなく安全性を改善し得る（O’Shaughnessy等 (2006) Clin. Breast Cancer Apr 7(1):42-50）。インビトロでの相乗効果は、臨床段階での相乗効果と相関している（Steinbach等 (2003) Clin. Inf. Dis. Oct 1:37 Suppl 3:S188-224）。
【０００８】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、リンパ腫の重要な生存及び増殖シグナルに対する主要なシグナル伝達ノードであり、ホスファターゼＰＴＥＮの活性に反する。ＰＩ３Ｋ経路はリンパ腫の悪性度の高いタイプにおいて調節不全となる（Abubaker (2007) Leukemia 21:2368-2370）。ＤＬＢＣＬ（びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫）癌の８％がＰＩ３ＣＡ（ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ触媒サブユニットα）のミスセンス変異を有しており、３７％が免疫組織化学試験によってＰＴＥＮ陰性である。
【０００９】
ホスファチジルイノシトールは、細胞膜において見出され、細胞内シグナル伝達に関与する多くのリン脂質の一つである。３’−リン酸化ホスホイノシチドを介した細胞シグナル伝達は、様々な細胞性プロセス、例えば、悪性の形質転換、増殖因子シグナル伝達、炎症、及び免疫に関与している（Rameh等(1999) J. Biol Chem, 274:8347-8350）。これらのリン酸化シグナル伝達産物の生産に関与する酵素であるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ又はＰＩ３Ｋとも称される）は、ウイルス性腫瘍性タンパク質関連活性体及びホスファチジルイノシトール（ＰＩ）及びイノシトール環の３'-ヒドロキシルでのそのリン酸化誘導体をリン酸化する増殖因子レセプターチロシンキナーゼとして元々は同定された（Panayotou等(1992) Trends Cell Biol 2:358-60）。ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、イノシトール環の３-ヒドロキシル残基において脂質をリン酸化する脂質キナーゼである（Whitman等(1988) Nature, 332:664）。ＰＩ３-キナーゼによって生成される３-リン酸化リン脂質（ＰＩＰ３）は、Ａｋｔ及びＰＤＫ１，ホスホイノシチド依存性キナーゼ-１のように、キナーゼに脂質結合ドメイン（プレクストリン相同(ＰＨ)領域を含む）を補充する第二メッセンジャーとして作用する（Vivanco等(2002) Nature Rev. Cancer 2:489；Phillips等(1998) Cancer 83:41）。
【００１０】
ＰＩ３キナーゼファミリーは、構造的相同性によって細分類された少なくとも１５種の異なる酵素を含み、配列相同性及び酵素触媒反応によって形成される生成物に基づいて３つのクラスに分けられる。クラスＩのＰＩ３キナーゼは、２つのサブユニット：１１０ｋｄの触媒サブユニット及び８５ｋｄの調節サブユニットからなる。調節サブユニットはＳＨ２ドメインを含有し、チロシンキナーゼ活性を有する増殖因子受容体又は癌遺伝子産物によりリン酸化されたチロシン残基に結合し、それによってその脂質基質をリン酸化するｐ１１０触媒サブユニットのＰＩ３Ｋ活性を誘導する。クラスＩのＰＩ３キナーゼは、サイトカイン、インテグリン、増殖因子及び免疫レセプターの下流の重要なシグナル伝達事象に関与しており、これは、この経路の制御が細胞増殖及び発癌の調節等の重要な治療効果をもたらし得ることを示唆する。クラスＩのＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトール-４-リン酸、及びホスファチジルイノシトール-４，５-二リン酸（ＰＩＰ２）をリン酸化し、ホスファチジルイノシトール-３-リン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトール-３，４-二リン酸、及びホスファチジルイノシトール-３，４，５-三リン酸をそれぞれ生成することができる。クラスＩＩのＰＩ３Ｋは、ＰＩ及びホスファチジルイノシトール-４-リン酸をリン酸化する。クラスＩＩＩのＰＩ３Ｋは、ＰＩのみをリン酸化することができる。癌における鍵となるＰＩ３キナーゼアイソフォームはクラスＩのＰＩ３キナーゼで、１１０αにおいて再発性遺伝子変異によって示されるｐ１１０αである（Samuels等 (2004) Science 304:554）。（米国特許第５８２４４９号；米国特許第５８４６８２４号；米国特許第６２７４３２７号）。他のアイソフォームは癌において重要であり得、また心血管系及び免疫炎症疾患にも関係している（Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396；Patel等 (2004) Proc. Am. Assoc. of Cancer Res. (Abstract LB-247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA；Ahmadi K及びWaterfield MD (2004) “Phosphoinositide 3-Kinase: Function and Mechanisms” Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D編) Elsevier/Academic Press）。ｐ１１０αの発癌性変異は、結腸、乳房、脳、肝臓、卵巣、胃、肺及び頭頸部固形腫瘍においても有意な頻度で見出されている。ＰＴＥＮ異常は、神経膠芽腫、メラノーマ、前立腺、子宮内膜、卵巣、乳房、肺、頭頸部、肝細胞、及び甲状腺の癌に見出される。
【００１１】
ＰＩ３キナーゼはｐ８５及びｐ１１０サブユニットからなるヘテロ二量体である（Otsu等(1991) Cell 65:91-104；Hiles等(1992) Cell 70:419-29）。それぞれ別々の１１０ｋＤａ触媒サブユニット及び調節サブユニットからなるＰＩ３Ｋα（アルファ）、β（ベータ）、δ（デルタ）、及びω（ガンマ）と称される４種の異なるクラスＩのＰＩ３Ｋが同定されている。触媒サブユニットの３つ、つまり、ｐ１１０α、ｐ１１０β及びｐ１１０δはそれぞれ同じ調節サブユニットｐ８５と相互作用する一方；ｐ１１０γは別々の調節サブユニットｐ１０１と相互作用する。ヒト細胞及び組織におけるこれらのＰＩ３Ｋの各々の発現パターンは別々である。ＰＩ３Ｋα、β、及びδサブタイプの各々において、ｐ８５サブユニットが、標的タンパク質において、そのＳＨ２ドメインの（適切な配列構成中に存在する）リン酸化チロシン残基との相互作用によってＰＩ３キナーゼを形質膜に局在化させる作用をする（Rameh等(1995) Cell, 83:821-30；Volinia等(1992) Oncogene, 7:789-93）。
【００１２】
ＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔ／ＰＴＥＮ経路は、かかる薬剤が細胞増殖を阻害し、癌細胞の生存及び化学療法抵抗性をもたらす間質細胞からのシグナルを抑圧し、アポトーシスの抑制を逆転させ、癌細胞の細胞傷害剤に対する本来的な耐性を克服するので、癌薬剤開発のための魅力的な標的である。ＰＩ３キナーゼ阻害剤は報告されている（Yaguchi等 (2006) Jour. of the Nat. Cancer Inst. 98(8):545-556；米国特許第７１７３０２９号；米国特許第７０３７９１５号；米国特許第６６０８０５６号；米国特許第６６０８０５３号；米国特許第６８３８４５７号；米国特許第６７７０６４１号；米国特許第６６５３３２０号；米国特許第６４０３５８８号；国際公開第２００６／０４６０３１号；国際公開第２００６／０４６０３５号；国際公開第２００６／０４６０４０号；国際公開第２００７／０４２８０６号；国際公開第２００７／０４２８１０号；国際公開第２００４／０１７９５０号；米国特許出願公開第２００４／０９２５６１号；国際公開第２００４／００７４９１号；国際公開第２００４／００６９１６号；国際公開第２００３／０３７８８６号；米国特許出願公開第２００３／１４９０７４号；国際公開第２００３／０３５６１８号；国際公開第２００３／０３４９９７号；米国特許出願公開第２００３／１５８２１２号；欧州特許出願公開１４１７９７６号；米国特許出願公開第２００４／０５３９４６号；日本国特許出願第２００１２４７４７７号；日本国特許第０８１７５９９０号；日本国特許第０８１７６０７０）。ワートマニンアナログは、哺乳動物においてＰＩ３キナーゼ活性を有する（米国特許第６７０３４１４号；国際出願公開第９７／１５６５８号）。
【００１３】
式Ｉのチエノピリミジン化合物は、ｐ１１０α結合性、ＰＩ３キナーゼ阻害活性を有し、癌細胞の増殖を阻害する（米国特許出願公開第２００８／０２０７６１１号；米国特許出願公開第２００８／００３９４５９；米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号；米国特許出願公開第２００８／００７６７５８号；米国特許出願公開第２００８／０２４２６６５号；米国特許出願公開第２００８／０２６９２１０号）。
0005709766.tif 000002
【００１４】
例示的な式Ｉの化合物であるＧＤＣ−０９４１（ＣＡＳ登録番号９５７０５４‐３０‐７，ジェネンテック社）は、有望な薬物動態及び医薬特性を有する選択的で経口的に生物が利用可能なＰＩ３Ｋ阻害剤である（Folkes等(2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532；米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号；Belvin等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 15, Abstract 4004；Folkes等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-146；Friedman等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-110）。例示的な式Ｉの化合物ＧＤＣ−０９４１は、固形腫瘍細胞株に対して所定の化学療法剤との併用下でインビトロ及びインビボで相乗的な活性を示す（米国特許出願番号第１２／２０８２２７号, Belvin等"Combinations Of Phosphoinositide 3-Kinase Inhibitor Compound And Chemotherapeutic Agents, And Methods Of Use", 2008年9月10日出願）。
【発明の概要】
【００１５】
本発明は、一般的に、造血器腫瘍の増殖を阻害するためにモノクローナル抗体剤又は化学療法剤と組合わせて投与される、抗癌活性を有し、より詳細にはＰＩ３キナーゼ又はｍＴＯＲ阻害活性を有する式Ｉのチエノピリミジン化合物に関する。式Ｉの化合物と化学療法剤との所定の組合わせはインビトロ及びインビボにおける造血癌細胞の増殖阻害において相乗効果を示す。本発明の組合わせ及び方法は造血器腫瘍の治療に有用でありうる。組成物は哺乳動物における腫瘍増殖を阻害し得、ヒト癌患者の治療に有用でありうる。
【００１６】
一態様では、本発明は、哺乳動物への併用製剤又は交替療法として併用治療剤を投与することを含む造血器腫瘍の治療方法を含み、ここで併用治療剤は、式Ｉを有する化合物の治療に有効な量と、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン及びシタラビンから選択される化学療法剤の治療に有効な量を含む。
0005709766.tif 000003
【００１７】
本発明はまた哺乳動物細胞、生物又は造血器腫瘍に関連した病理症状のインビトロ、インサイツ及びインビボ診断又は治療のための併用治療剤の使用方法にも関する。
【００１８】
本発明の一態様は、ＧＤＣ−０９４１（ジェネンテック社）としても知られ、式Ｉを有する４-(２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン（米国特許出願２００８／００７６７６８号；米国特許出願２００８／０２０７６１１号；Folkes等 (2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532）と、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン、及びシタラビンから選択される化学療法剤の治療的に有効な量を含む併用治療剤を提供する。
0005709766.tif 000004
【００１９】
本発明の一態様は、式Ｉｂを有する(Ｓ)-１-(４-((２-(２-アミノピリミジン-５-イル)-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メチル)ピペラジン-１-イル)-２-ヒドロキシプロパン-１-オン（米国特許出願公開第２００８／０２４２６６５号）及びデキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン、及びシタラビンから選択される化学療法剤の治療的に有効な量を含む併用治療剤を提供する。
0005709766.tif 000005
【００２０】
式Ｉの化合物はその全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、代謝産物及び薬学的に許容可能な塩を含む。所定の式Ｉの化合物は、薬物様の物理化学的及び薬物動態学的性質を持つ強力なＰＩ３Ｋ阻害剤である。所定の式Ｉの化合物はクラスＩｂよりもクラスＩａ ＰＩ３Ｋに対して、特にＰ１１０αサブタイプに対して選択性を示す。式Ｉａ及びＩｂの化合物は経口的に生物が利用可能であり、複数のヒト癌モデルにおいて単剤抗腫瘍活性を有する。
【００２１】
本発明の薬学的組成物及び併用治療剤は、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン、及びシタラビンから選択される化学療法剤を含む。
【００２２】
本発明の薬学的組成物は薬学的に許容可能な担体が更に含みうる。
【００２３】
本発明の他の態様は、ＰＩ３キナーゼにより調節される造血器腫瘍を治療する方法であって、式Ｉの化合物及び化学療法剤の有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。式Ｉの化合物及び化学療法剤は、薬学的組成物として併用されて投与されるために同時処方され得、又はそれらは併用治療剤として交互に別個に（経時的に、継続的に）投与されうる。
【００２４】
本発明の他の態様は、造血器腫瘍の治療の方法において、式Ｉの化合物及び化学療法剤の有効量を、かかる治療を必要としている哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【００２５】
更なる態様では、本発明は、哺乳動物においてＰＩ３キナーゼにより調節される造血器腫瘍疾患又は症状を治療するために発明の薬学的組成物を使用する方法を提供する。
【００２６】
本発明の更なる態様は、哺乳動物においてＰＩ３キナーゼにより調節される造血器腫瘍疾患又は症状を治療するための医薬の製造における本発明の薬学的組成物の使用である。
【００２７】
本発明の他の態様は、式Ｉの化合物、化学療法剤、容器、及び場合によっては造血器腫瘍のための治療を指示するパッケージ挿入物又はラベルラベルを含む製造品又はキットを含む。
【００２８】
本発明の他の態様は、式Ｉの化合物と、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン、及びシタラビンから選択される化学療法剤を含む；造血器腫瘍の治療において別個、同時、又は連続的な使用のための併用調製物としての製品である。
【００２９】
本発明の他の態様は、癌治療のために組合わせて使用される化合物を決定する方法であって、ａ）式Ｉの化合物及び化学療法剤を含む併用治療剤を、一又は複数の変異が伴う造血器腫瘍細胞株にインビトロで投与し、ｂ）相乗又は非相乗効果を測定することを含んでなる方法を含む。
【００３０】
本発明の他の態様は、造血器腫瘍を有する哺乳動物を治療的に処置する方法において、哺乳動物に併用治療剤の治療的に有効な量を投与することを含み、それによって造血器腫瘍、例えば非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ及びＭＣＬの効果的な治療的処置がなされる方法である。一実施態様では、併用治療剤はＰＩ３Ｋの一又は複数のアイソフォームを阻害する。一実施態様では、併用治療剤はｍＴＯＲを阻害する。
【００３１】
一態様では、本発明は、非ホジキンリンパ腫の増殖を阻害する方法において、非ホジキンリンパ腫の患者へ併用治療剤を投与することを含み、それによってリンパ腫の増殖が阻害される方法を提供する。
【００３２】
一態様では、本発明は、非ホジキンリンパ腫の増殖を阻害する方法において、リンパ腫細胞、又はリンパ腫に存在し、及び／又は隣接する細胞に併用治療剤を投与することを含み、それによってリンパ腫の増殖の阻害がされる方法を提供する。一実施態様では、上記細胞は非ホジキンリンパ腫細胞ではなく (例えば、Ｔ又はＢ細胞ではない）、例えば上記細胞は間質細胞でありうる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）処理（右カラム）及び未処理（左カラム）細胞ＤｏＨＨ２、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＯＰＭ２及びＵ２６６のフローサイトメトリーにより測定した薬力学的（ＰＤ）マーカーの減少を示す。細胞をインビトロにおいて５μＭのＧＤＣ−０９４１で４時間処理した。
【図２】図２は、５μＭのＧＤＣ−０９４１でインビトロで４時間処理した細胞株においてＳＤＳ-ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びウエスタンブロットによって測定した細胞ＤｏＨＨ２、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＯＰＭ２、及びＵ２６６における薬力学的（ＰＤ）マーカーｐ−ＡＫＴ、ｐ−Ｓ６ＲＰ、ｐ−Ｂａｄ及びβアクチンの減少を示す。
【図３】図３は、Ｂ−ＮＨＬ細胞株ＤｏＨＨ２に対するＰＩ３Ｋ単剤阻害剤である式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、及びデキサメタゾン（Ｄｅｘ）及びドキソルビシン（Ｄｏｘ）との併用による効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Cell-Titer Glo, Promega）では、様々な阻害剤濃度（過去に（大まかに）決定したＩＣ５０の１０−５から１０の相対単位）の式Ｉａ、デキサメタゾン、ドキソルビシン及び式Ｉａとデキサメタゾンの併用；及び式Ｉａとドキソルビシンの併用に対して生存細胞を測定した。
【図４】図４は、式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、ＧＤＣ−０４６４及びＬＹ２９４００２の様々な濃度（１０−５から１０μモル濃度）に対して生存細胞を測定するインビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Cell-Titer Glo(登録商標),Promega Corp.,Madison,WI）による患者ＮＨＬ６００−Ａ８７６細胞由来の原発性濾胞性リンパ腫細胞に対するＰＩ３Ｋ単剤阻害剤の効果を示す。
【図５】図５は、患者ＮＨＬ６４０−Ａ０５５由来の原発性びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞に対するＰＩ３Ｋ単剤阻害剤の式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、及びドキソルビシンとの併用の効果を示す。細胞生存率は、様々な濃度（１０−５から２０μモル濃度）の式Ｉａ、ドキソルビシン、及び式Ｉａとドキソルビシンの組合わせに対するインビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Cell-Titer Glo（登録商標））によって測定した。
【図６】図６は、様々な濃度（１０−５から１０μモル濃度）の式Ｉａ、デキサメタゾン、及び式Ｉａとデキサメタゾンの併用に対するインビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Cell-Titer Glo（登録商標））による多発性骨髄腫ＯＰＭ２細胞に対するＰＩ３Ｋ単剤阻害剤の式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、及びデキサメタゾンとの併用の効果を示す。
【図７】図７は、０日目にビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、ＣＨＯＰ、及び７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａと５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ及びＣＨＯＰの組合わせを投与されたＷＳＵ−ＤＬＣＬ２リンパ腫腫瘍異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２０日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには、一回ＣＨＯＰを０日目に開始して投与し、リツキシマブを０、７、及び１４日目に投与する一方、式Ｉａは２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ＣＨＯＰレジメン：シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）。シクロホスファミド、ドキソルビシン及びビンクリスチンを０日目に一回投与し、プレドニゾンを０、１、２、３及び４日目に投与した。
【図８】図８は、０日目にビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、ＣＨＯＰ、及び７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａと５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブの組合わせ、及び７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａとＣＨＯＰの組合わせを投与したＤｏＨＨ−２リンパ腫腫瘍異種片を有する１０匹のマウスのコホートにおける３５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには、リツキシマブを０、７及び１４日目（ｑｗｋ×３）に静脈内投与し、ＣＨＯＰを１日目から開始する一方、式Ｉａは２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ＣＨＯＰレジメン：シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）。シクロホスファミド、ドキソルビシン及びビンクリスチンを０日目に一回投与し、プレドニゾンを０、１、２、３及び４日目に投与した。
【図９】図９は、０日目にビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、ＣＨＯＰ、及び７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａとＣＨＯＰの組合わせ、７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａと３０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド、７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａと２．４７ｍｇ／ｋｇのドキソルビシン、７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａと０．３８ｍｇ／ｋｇのビンクリスチン、及び７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａと０．１５ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンの組合わせを投与したＤｏＨＨ２リンパ腫腫瘍異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２７日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには、０日目にＣＨＯＰを、０日目にシクロホスファミド、０日目にドキソルビシンを、０日目にビンクリスチンを、０−４日目に毎日プレドニゾンを投与する一方、式Ｉａを２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ＣＨＯＰの組成レジメン：シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）。
【図１０】図１０は、０日目にビヒクル（０．５％のメチルセルロース：ＤＩＤ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、ＣＨＯＰ、及び７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａとＣＨＯＰの組合わせを投与したＢＪＡＢリンパ腫腫瘍異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには、ＣＨＯＰを０日目から一回投与する一方、式Ｉａ及びビヒクルを２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ＣＨＯＰレジメン：シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）。シクロホスファミド、ドキソルビシン及びビンクリスチンは０日目に一回投与し、プレドニゾンは０、１、２、３及び４日目に投与した。
【図１１】図１１は、０日目にビヒクル（０．５％のメチルセルロース：ＤＩＤ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、及び７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａと５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブの組合わせを投与したＢＪＡＢリンパ腫腫瘍異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには、リツキシマブを０、７、及び１４日目に投与する一方、式Ｉａ及びビヒクルを２１日間毎日、経口栄養によって投与した（ｐｏ、ｑｄ×２１）。
【図１２】図１２は、０日目にビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％のメチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、及び単剤治療：７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１、１ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ、２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド、及び１０ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンを投与したＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式ＩａのＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日経口投与した。ボルテゾミブは、０、３、７、１０及び１７日目に静脈内投与した。レナリドミドは２１日間毎日、腹腔内投与した。デキサメタゾンは０、１、２、３、４、７、８、９及び１０日目に経口投与した。
【図１３】図１３は、０日目にビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、単剤治療：７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）；０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）；２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５日間投与／２日間休薬／５日間投与／２日間休薬／５日間投与）；３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５日間投与／２日間休薬／５日間投与）；及び以下の組み合わせ：７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）；７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５／２／５／２／５）；及び７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）を投与した多発性骨髄腫ＯＰＭ−２細胞異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２４日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式ＩａのＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ボルテゾミブは０、３、７、１０、１４及び１７日目に静脈内投与した。レナリドミドは０−４日目、７−１１日目、１４−１８日目に腹腔内注射によって投与した。デキサメタゾンは０−４日目及び７−１１日目に経口投与した。
【図１４】図１４は、０日目にビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、１ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×２．５）、２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、ｑｄ×２１）、及び１０ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５日間投与／２日間休薬／５日間投与）を投与した多発性骨髄腫ＭＭ１．ｓ細胞異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２７日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式ＩａのＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ボルテゾミブは０、３、７、１０及び１４日間静脈内投与した。レナリドミドは２１日間毎日、腹腔内注射によって投与した。デキサメタゾンは０−４日目及び７−１１日目に経口投与した。
【図１５】図１５は、０日目にビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、単剤治療：７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、０．ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）、及び３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）；及び以下の併用：７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）；及び７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）を投与した多発性骨髄腫ＭＭ１．ｓ細胞異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける４０日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式ＩａのＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ボルテゾミブは０、３、７、１０、１４及び１７日目に静脈内投与した。デキサメタゾンは０−４日目、及び７−１１日目に経口投与した。
【図１６】図１６は、０日目にビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）単剤治療：７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）、２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５／２／５／２／５）及び３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）；及び以下の併用：７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）；７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５／２／５／２／５）；及び７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×１４）と３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）を投与した多発性骨髄腫Ｈ９２９細胞異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける３３日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式ＩａのＧＤＣ−０９４１は、デキサメタゾンと併用される場合には１４日間投与された以外は、２１日間毎日、経口栄養によって投与した。ボルテゾミブは０、３、７、１０、１４及び１７日目に静脈内投与した。レナリドミドは０−４、７−１１及び１４−１８日目に腹腔内注射によって投与した。デキサメタゾンは０−４日目及び７−１１日目に経口投与した。
【図１７】図１７は、０日目にビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗｋ×３）、７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、１００ｍｇ／ｋｇ式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄｘ２１）、２．５ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×２１）、４ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×２１）；及び以下の組み合わせ：６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗｋ×３）と７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）；及び６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗｋ×３）と２．５ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×２１）を投与したＤｏＨＨ２リンパ腫腫瘍異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける３３日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式ＩａのＧＤＣ−０９４１及び式Ｉｂはそれぞれ２１日間毎日、経口栄養によって投与された。ラパマイシンは０、７及び１４日目に静脈内投与した。
【図１８】図１８は、０日目にビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗｋ×３）、６０ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、１ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×２１）；及び以下の組み合わせ：６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗｋ×３）と６０ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×１８）；及び６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗｋ×３）と１ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×１８）を投与したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２リンパ腫腫瘍異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートにおける２１日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
定義
本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、「含有する」、「含有してなる」、「含む」及び「含んでなる」なる語は、述べられた特徴、整数、成分、又は工程の存在を特定する意図のものであるが、一又は複数の他の特徴、整数、成分、工程、又はその群の存在又は付加を排除するものではない。
【００３５】
「治療する」及び「治療」なる用語は、治癒的処置と、目的が例えば癌の増殖、発症又は広がりのような望まれない生理学的変化又は疾患を防止し又は遅延させる（少なくする）ことである予防的又は防止的手段の双方を意味する。治療を必要とする者は、既に疾患を持つ者並びに疾患になりやすい者又は疾患が防止されるべき者を含む。この発明の目的では、有益な又は所望の臨床結果は、限定するものではないが、検出可能であれ検出不可能であれ、徴候の軽減、疾患の程度の低減、疾患の安定化（つまり悪化しない）状態、疾患進行の遅延又は緩徐化、疾患状態の回復又は緩和、及び寛解（部分的であろうと完全であろうと）を含む。「治療」は、治療を受けない場合に予想される生存率と比較して生存を延長することをまた意味しうる。治療を必要とする者は、既に症状又は疾患を持つ者並びに症状又は疾患になりやすい者又は症状又は疾患が防止されるべき者を含む。
【００３６】
被験者又は哺乳動物は、本発明の方法に従い、治療的有効量の併用治療剤を受容した後ならば、非ホジキンリンパ腫のような造血器腫瘍に対して成功裏に「治療され」、患者は、（ｉ）癌細胞数の低減又は癌細胞の不在における観察可能な及び／又は測定可能な減少；（ｉｉ）腫瘍サイズの低減；軟部組織又は骨中への癌の広がりを含む、周辺器官への癌細胞の浸潤の阻害（つまり、ある程度の遅延化、好ましくは停止）；（ｉｉｉ）腫瘍転移の阻害（つまり、ある程度の遅延化、好ましくは停止）；（ｉｖ）腫瘍増殖の、ある程度の阻害；又は（ｖ）特定の癌に関連する一又は複数の徴候のある程度の軽減で、罹患率及び死亡率の低減、及び生活の質の改善を含むものの、一又は複数を示す。併用治療剤が増殖を防止し、及び／又は存在する癌細胞を死滅させうる程度まで、それは細胞分裂阻害性及び／又は細胞毒性でありうる。これらの徴候又は症状の減少はまた患者によって感じられうる。疾患における成功裏の治療及び改善を評価するための上記パラメーターは、医師にはなじみの常套的手順により、容易に測定可能である。癌治療法にとって、有効性は、例えば無増悪時間（ＴＴＰ）及び／又は奏功率（ＲＲ）を評価することによって測定することができる。転移は病期診断試験、及び骨スキャン、及びカルシウムレベル及び骨への広がりを測定するための他の酵素についての試験により測定することができる。また、ＣＴスキャンは、領域内の骨盤及びリンパ節への広がりを調べるために使用することができる。胸部Ｘ線及び既知の方法による肝臓酵素レベルの測定は、それぞれ肺及び肝臓への転移を調べるために使用することができる。
【００３７】
「造血器腫瘍」なる用語は、例えば白血球、リンパ球、ナチュラルキラー細胞、形質細胞及び骨髄系細胞、例えば好中球及び単球のような細胞に関係する造血中に生じる癌又は過剰増殖疾患を意味する。造血器腫瘍は、表１，国際疾病分類（ＩＣＤ−Ｏ）の形態コードを伴うヒト造血器腫瘍のＷＨＯ分類；造血器及びリンパ系組織の腫瘍（Jaffe E.S., Harris N.L., Stein H., Vardiman J.W. (Eds.) (2001): World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of Hematopoietic and Lymphoid Tissues. IARC Press:Lyon）に列挙された疾患を含む。状態は、悪性腫瘍を／３で、悪性度が低いか又は不明確な病巣のものを／１で表した。
【００３８】
表１
I.       慢性骨髄増殖性疾患
慢性骨髄性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８７５／３
慢性好中球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９９６３／３
慢性好酸球性白血病／好酸球増加症候群−ＩＣＤ−Ｏ９９６４／３
真性多血症−ＩＣＤ−Ｏ９９５０／３
慢性特発性骨髄線維症−ＩＣＤ−Ｏ９９６１／３
本態性血小板血症−ＩＣＤ−Ｏ９９６２／３
分類不可能型慢性骨髄増殖性疾患−ＩＣＤ−Ｏ９９７５／３
II.      骨髄異形成／骨髄増殖性疾患
慢性骨髄単球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９９８０／３
非定型慢性骨髄性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８７６／３
若年性骨髄単球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９９４６／３
分類不可能型骨髄異形成／骨髄増殖性疾患−ＩＣＤ−Ｏ９９７５／３
III.      骨髄異形成症候群
不応性貧血−ＩＣＤ−Ｏ９９８０／３
環状鉄芽球を伴う不応性貧血−ＩＣＤ−Ｏ９９８２／３
複数系統の異形成を伴う不応性血球減少症−ＩＣＤ−Ｏ９９８５／３
芽球増加を伴う不応性貧血−ＩＣＤ−Ｏ９９８３／３
単独ｄｅｌ(５ｑ)染色体異常を伴う骨髄異形成症候群−ＩＣＤ−Ｏ９９８６／３
分類不可能型骨髄異形成症候群９９８９／３
IV.      急性骨髄性白血病
特異的染色体異常を伴う急性髄性白血病
t(8;21)(q22;q22)を持つＡＭＬ、ＡＭＬ１／ＥＴＯ−ＩＣＤ−Ｏ９８９６／３
inv(16)(p13q22)又はt(16;16)(p13;q22)を持つＡＭＬ、ＣＢＦｂ／ＭＹＨ１１−ＩＣＤ−Ｏ９８７１／３
急性前骨髄球性白血病（t(15;17)(q22;q12)を持つＡＭＬ、ＰＭＬ−ＲＡＲａ及び変異体）−ＩＣＤ−Ｏ９８６６／３
11q23(ＭＬＬ)を持つＡＭＬ−ＩＣＤ−Ｏ９８９７／３
多系列の異形成を伴う急性骨髄性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８９５／３
治療関連急性骨髄性白血病／骨髄異形成症候群−ＩＣＤ−Ｏ９９２０／３
他に分類できない急性骨髄性白血病
最未分化型急性骨髄性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８７２／３
未分化型急性骨髄性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８７３／３
分化型急性骨髄性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８７４／３
急性骨髄単球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８６７／３
急性単芽球性／単球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８９１／３
急性純粋赤白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８４０／３
急性巨核芽球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９９１０／３
急性好塩基球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８７０／３
骨髄線維症を伴う急性汎骨髄症−ＩＣＤ−Ｏ９９３１／３
顆粒球性肉腫−ＩＣＤ−Ｏ９９３０／３
系統特定が困難な急性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８０５／３
V.      Ｂ細胞性腫瘍
前駆造血器腫瘍
前駆Ｂリンパ芽球性白血病／−ＩＣＤ−Ｏ９８３５／３
リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７２８／３
成熟造血器腫瘍
慢性リンパ球性白血病／−ＩＣＤ−Ｏ９８２３／３
小リンパ球性リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６７０／３
造血性前リンパ球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８３３／３
リンパ形質細胞性リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６７１／３
脾発性辺縁帯リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６８９／３
ヘアリー細胞白血病−ＩＣＤ−Ｏ９９４０／３
形質細胞性骨髄腫−ＩＣＤ−Ｏ９７３２／３
骨孤立性形質細胞腫−ＩＣＤ−Ｏ９７３１／３
節外性形質細胞腫ＩＣＤ−Ｏ９７３４／３
節外性濾胞辺縁帯リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫）（ＭＡＬＴリンパ腫）        −ＩＣＤ−Ｏ９６９９／３
節性濾胞辺縁帯リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６９９／３
濾胞性リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６９０／３
マントル細胞リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６７３／３
びまん性大細胞型造血性リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６８０／３
縦隔（胸腺）大細胞型リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６７９／３
血管内大細胞型造血性リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６８０／３
原発性浸出液リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６７８／３
バーキットリンパ腫／−ＩＣＤ−Ｏ９６８７／３
白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８２６／３
不確定な悪性度の造血性増殖
リンパ腫様肉芽腫症−ＩＣＤ−Ｏ９７６６／１
移植後多形リンパ増殖性疾患−ＩＣＤ−Ｏ９９７０／１
VI.     Ｔ細胞及びＮＫ細胞性腫瘍
前駆Ｔ細胞腫瘍
前駆Ｔリンパ芽球性白血病／−  ＩＣＤ−Ｏ９８３７／３
リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７２９／３
芽球型ＮＫ細胞リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７２７／３
成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞腫瘍
Ｔ細胞性前リンパ球性白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８３４／３
Ｔ細胞性大型顆粒性リンパ球白血病−ＩＣＤ−Ｏ９８３１／３
侵攻性ＮＫ細胞白血病−ＩＣＤ−Ｏ９９４８／３
成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９８２７／３
節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７１９／３
腸症型Ｔ細胞リンパ腫−ＩＣＤ−０９７１７／３
肝脾Ｔ細胞性リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７１６／３
皮下蜂窩織炎様Ｔ細胞リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７０８／３
菌状息肉腫−ＩＣＤ−Ｏ９７００／３
セザリー症候群−ＩＣＤ−Ｏ９７０１／３
原発性皮膚型未分化大細胞リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７１８／３
非特異型末梢性Ｔ細胞リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７０２／３
血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７０５／３
未分化大細胞型リンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９７１４／３
悪性の可能性をもつＴ細胞増殖
リンパ丘疹症−ＩＣＤ−Ｏ９７１８／１
VII.     ホジキンリンパ腫
結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６５９／３
古典的ホジキンリンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６５０／３
結節硬化型ホジキンリンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６６３／３
リンパ球豊富型ホジキンリンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６５１／３
混合細胞型ホジキンリンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６５２／３
リンパ球減少型ホジキンリンパ腫−ＩＣＤ−Ｏ９６５３／３
VIII.    組織球腫瘍および樹状細胞腫瘍
マクロファージ／組織球肉腫
組織球性肉腫−ＩＣＤ−Ｏ９７５５／３
樹状細胞腫瘍
ランゲルハンス細胞組織球症−ＩＣＤ−Ｏ９７５１／１
ランゲルハンス細胞肉腫−ＩＣＤ−Ｏ９７５６／３
指状嵌入樹状細胞肉腫／腫瘍−ＩＣＤ−Ｏ９７５７／３／１
濾胞樹状細胞肉腫／腫瘍−ＩＣＤ−Ｏ９７５８／３／１
他に特定できない樹状細胞肉腫−ＩＣＤ−Ｏ９７５７／３
IX.     肥満細胞症
皮膚肥満細胞症
無痛性全身性肥満細胞症−ＩＣＤ−Ｏ９７４１／１
関連するクローン血液学的非肥満細胞系統疾患を伴う全身性肥満細胞症−ＩＣＤ−Ｏ９７４１／３
侵襲性全身性肥満細胞症−ＩＣＤ−Ｏ９７４１／３
肥満細胞白血病−ＩＣＤ−Ｏ９７４２／３
肥満細胞肉腫−ＩＣＤ−Ｏ９７４０／３
真皮外肥満細胞腫−ＩＣＤ−Ｏ９７４０／１
【００３９】
「Ｂ細胞」は、骨髄内で成熟するリンパ球であり、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞、又はエフェクターＢ細胞（形質細胞）を含む。ここでのＢ細胞は正常な又は非悪性のＢ細胞である。
【００４０】
ここでの「抗体」なる用語は最も広義に使用され、特にモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及びそれらが所望の生物活性を示す限り抗体断片を包含する。
【００４１】
「治療的に有効な量」なる語句は、（ｉ）特定の疾病、症状、又は疾患を治療し又は予防し、（ｉｉ）特定の疾病、症状、又は疾患の一又は複数の徴候を減弱にし、寛解させ、又は除き、又は（ｉｉｉ）ここに記載された特定の疾病、症状、又は疾患の一又は複数の徴候の発症を予防し又は遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。癌の場合、薬剤の治療的に有効な量は、癌細胞の数を減少させ；腫瘍サイズを減少させ；周辺器官への癌細胞の浸潤を阻害し（つまり、ある程度まで遅くさせ、好ましくは停止させ）；腫瘍転移を阻害し（つまり、ある程度まで遅くさせ、好ましくは停止させ）；腫瘍増殖をある程度まで阻害し；及び／又は癌に伴う徴候の一又は複数をある程度軽減しうる。薬剤が増殖を防止し、及び／又は存在する癌細胞を死滅させうる程度まで、それは、無増悪期間（ＴＴＰ）及び／又は奏功率（ＲＲ）によって測定して、細胞分裂阻害性及び／又は細胞傷害性でありうる。
【００４２】
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には調節されない細胞増殖により特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を意味する。「腫瘍」は一又は複数の癌性細胞を含む。癌の例には、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、骨髄腫、及び白血病又はリンパ性腫瘍が含まれる。このような癌のより特定な例には、扁平上皮細胞癌(例えば上皮扁平細胞癌)、肺癌、例えば小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「ＮＳＣＬＣ」)、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ又はｓｔｏｍａｃｈ）、例えば胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝腫瘍、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌(kidney又はｒｅｎａｌ）、前立腺癌、陰門癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、並びに頭頸部癌が含まれる。
【００４３】
「慢性」投与とは、初期の治療効果(活性)を長期間にわたって維持するようにするために、急性態様とは異なり連続的な態様での薬剤の投与を意味する。「間欠」投与とは、中断無く連続的になされるのではなく、むしろ性質が周期的になされる治療である。
【００４４】
癌の治療、その症状の軽減の目的のための「哺乳動物」は、ヒト、家畜、及び農場飼育動物、及び動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む哺乳動物と分類される任意の動物を意味する。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【００４５】
一又は複数の更なる治療剤「と組合わせての（との併用）」投与は同時（同時発生）及び任意の順序での連続的（交互）投与を含む。
【００４６】
「化学療法剤」は、作用機序に関わりなく、癌の治療に有用な生物学的（大分子）又は化学的（小分子）化合物である。化学療法剤のクラスは、限定しないが、アルキル化剤、代謝拮抗薬、紡錘体毒植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼインヒビター、タンパク質、抗体、腫瘍親和性感光色素、及びキナーゼ阻害剤を含む。化学療法剤は、「標的療法」及び非標的の一般的な化学療法で使用される化合物を含む。
【００４７】
化学療法剤の例は、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン、及びシタラビンを含む。
【００４８】
化学療法剤の例はまたエルロチニブ（タルセバ（登録商標）、Genentech/OSI Pharm.）、ドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Sanofi-Aventis）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標）、Lilly）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、Pfizer）、シスプラチン（シス−ジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、Bristol-Myers Squibb Oncology）、テモゾロミド（４-メチル-５-オキソ-２,３,４,６,８-ペンタアザビシクロ[４.３.０]ノナ-２,７,９-トリエン-９-カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、テモダール（TEMODAR）（登録商標）、テモダール（TEMODAL）（登録商標）、Schering Plough）、タモキシフェン（(Ｚ)-２-[４-(１,２-ジフェニルブタ-１-エニル)フェノキシ]-Ｎ,Ｎ-ジメチル-エタンアミン、ノルバデックス（登録商標）、ISTUBAL（登録商標）、VALODEX（登録商標））、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ、ラパマイシン、及びラパチニブ（タイケルブ（登録商標）、Glaxo SmithKline）を含む。
【００４９】
化学療法剤の更なる例には、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標）、Sanofi）、ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標）、Millennium Pharm.）、スーテント（サニチニブ（登録商標）、ＳＵ１１２４８、Pfizer）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Novartis）、メシル酸イマチニブ（グリベック（登録商標）、Novartis）、ＸＬ−５１８（ＭＥＫ阻害剤、Exelixis、国際公開第２００７／０４４５１５号）、ＡＲＲＹ−８８６（ＭＥＫ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Array BioPharma、Astra Zeneca）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Semafore Pharmaceuticals）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Novartis）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Exelixis）、ＡＢＴ−８６９（ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦファミリーレセプターチロシンキナーゼの多標的阻害剤、Abbott Laboratories及びGenentech）、ＡＢＴ−２６３（Ｂｃｌ−２／Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、Abbott Laboratories及びGenentech）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Novartis）、フルベストラント（ファスロデックス（登録商標）、AstraZeneca）、ロイコボリン（フォリン酸）、ロナファルニブ（SARASAR（商標）、ＳＣＨ６６３３６、Schering Plough）、ソラフェニブ（ネクサバール（登録商標）、ＢＡＹ４３−９００６、Bayer Labs）、ゲフィニチブ（イレッサ（登録商標）、AstraZeneca）、イリノテカン（カンプトサー（登録商標）、ＣＰＴ−１１、Pfizer）、ティピファニブ（ザーネストラ（商標）、Johnson & Johnson）、カペシタビン（ゼローダ（登録商標）、Roche）、アブラキサン（商標）（クレモフォア・フリー）、パクリタキセルのアルブミン遺伝子操作ナノ粒子製剤（American Pharmaceutical Partners、Schaumberg、Il）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ZACTIMA（登録商標）、AstraZeneca）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Sugen）、テムシロリムス（TORISEL（登録商標）、ワイス）、パゾパニブ（GlaxoSmithKline）、カンフォスアミド（テルサイタ（TELCYTA）（登録商標）、Telik）、チオテパ及びシクロホスファミド（シトキサン（CYTOXAN）（登録商標）、ネオサール（NEOSAR）（登録商標））；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、イムプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミン及びメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロメラミン；アセトゲニン（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎ）（特に、ブラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；カンプトテシン（例えば合成アナログのトポテカン）；ブリオスタチン（ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ）；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）及びビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成アナログを含む）；クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；ドゥオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成アナロ���ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、リケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１、ディネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、ディネマイシンＡ；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルチノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えば、メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー、例えば、フロリン（ｆｒｏｌｉｎｉｃ）酸；アセグラトン；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフオルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（例えば、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）及びアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ））；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２、２’、２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特にＴ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ Ａ）及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「アラ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ナベルビン（登録商標）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ゼローダ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；並びに上記の任意のものの薬学的に許容可能な塩、酸及び誘導体が挙げられる。
【００５０】
また「化学療法剤」の定義に含まれるのは、（ｉ）腫瘍へのホルモン作用を調節又は阻害する作用をする抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン剤及び選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（SERM）、例えばタモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストン、及びフェアストン（登録商標）（クエン酸トレミフェン）；（ｉｉ）副腎においてエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４(５)-イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、アロマシン（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、フォルメスタン、ファドロゾール、RIVISOR（登録商標）（ボロゾール）、フェマーラ（登録商標）（レトロゾール；Novartis）、及びアリミデックス（登録商標）（アナストロゾール；AstraZeneca）；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン剤、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン（１,３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害剤、例えばＭＥＫ阻害剤（国際公開２００７／０４４５１５号）；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与しているシグナル伝達経路における遺伝子（例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ及びＨ−Ｒａｓなど）の発現を阻害するもの、例えばオブリメルセン（ゲナセンス（登録商標）、Genta Inc.）；（ｖｉｉ）リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えばアンギオザイム（ANGIOZYME）（登録商標））及びＨＥＲ２発現阻害剤；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えばアロベクチン（登録商標）、 ロイベクチン（登録商標）、及びVAXID（登録商標）；プロリュウキン（登録商標）ｒＩＬ−２；トポイソメラーゼ１阻害剤（ルートテカン（登録商標）など）；アバレリックス（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）血管形成阻害剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Genentech）；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸及び誘導体である。
【００５１】
「化学療法剤」の定義にまた含まれるものは、治療用抗体、例えばアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標），ジェネンテック）；セツキシマブ（アービタックス（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ベクティビックス（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（リツキサン（登録商標）、ジェネンテック／バイオジェン社）、ペルツズマブ（オムニターグ（OMNITARG（商標））、２Ｃ４、ジェネンテック）、トラスツズマブ（ハーセプチン、ジェネンテック）、トシツモマブ（Bexxar、Corixia）、及び抗体薬剤コンジュゲート、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（登録商標）、ワイス）である。
【００５２】
本発明のＰＩ３Ｋ阻害剤と併用される化学療法剤として治療上の潜在性を有するヒト化モノクローナル抗体は、アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガミシン、イノツズマブオゾガミシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌバビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、トクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、及びビシリズマブを含む。
【００５３】
「哺乳動物」なる用語は、限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、モルモット、サル、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、及びヒツジ、及び家禽類を含む。
【００５４】
ここで使用される「アルキル」なる用語は、１〜１２個の炭素原子の飽和した直鎖もしくは分枝鎖の一価炭化水素基を意味し、ここで、アルキル基は、以下に記載の一又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。アルキル基の例は、限定されないが、メチル(Ｍｅ、-ＣＨ３)、エチル(Ｅｔ、-ＣＨ２ＣＨ３)、１-プロピル(ｎ-Ｐｒ、ｎ-プロピル、-ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３)、２-プロピル(ｉ-Ｐｒ、ｉ-プロピル、-ＣＨ(ＣＨ３)２)、１-ブチル(ｎ-Ｂｕ、ｎ-ブチル、-ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３)、２-メチル-１-プロピル(ｉ-Ｂｕ、ｉ-ブチル、-ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２)、２-ブチル(ｓ-Ｂｕ、ｓ-ブチル、-ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ３)、２-メチル-２-プロピル(ｔ-Ｂｕ、ｔ-ブチル、-Ｃ(ＣＨ３)３)、１-ペンチル(ｎ-ペンチル、-ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３)、２-ペンチル(-ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３)、３-ペンチル(-ＣＨ(ＣＨ２ＣＨ３)２)、２-メチル-２-ブチル(-Ｃ(ＣＨ３)２ＣＨ２ＣＨ３)、３-メチル-２-ブチル(-ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)２)、３-メチル-１-ブチル(-ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２)、２-メチル-１-ブチル(-ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ３)、１-ヘキシル(-ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３)、２-ヘキシル(-ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３)、３-ヘキシル(-ＣＨ(ＣＨ２ＣＨ３)(ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３))、２-メチル-２-ペンチル(-Ｃ(ＣＨ３)２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３)、３-メチル-２-ペンチル(-ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ３)、４-メチル-２-ペンチル(-ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２)、３-メチル-３-ペンチル(-Ｃ(ＣＨ３)(ＣＨ２ＣＨ３)２)、２-メチル-３-ペンチル(-ＣＨ(ＣＨ２ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)２)、２,３-ジメチル-２-ブチル(-Ｃ(ＣＨ３)２ＣＨ(ＣＨ３)２)、３,３-ジメチル-２-ブチル(-ＣＨ(ＣＨ３)Ｃ(ＣＨ３)３、１-ヘプチル及び１-オクチル等を含む。
【００５５】
「アルケニル」なる用語は、少なくとも一の不飽和部位、つまり炭素−炭素ｓｐ２二重結合を有する２から８の炭素原子の直鎖状又は分枝鎖状の一価炭化水素を意味し、ここで、アルケニル基はここに記載の一又は複数の置換基で独立して置換されていてもよく、「シス」及び「トランス」配向、又は「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。例には、限定されないが、エチレニル又はビニル(-ＣＨ＝ＣＨ２)、アリル(-ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２)等が含まれる。
【００５６】
「アルキニル」なる用語は、少なくとも一の不飽和部位、つまり炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する２から１２の炭素原子の直鎖状又は分岐鎖状の一価炭化水素を意味し、ここで、アルキニル基は記載される一又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。限定しないが、例には、エチニル(-Ｃ≡ＣＨ)、プロピニル(プロパルギル、-ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ)等が含まれる。
【００５７】
「炭素環」、「カルボシクリル」、「炭素環式環」及び「シクロアルキル」なる用語は、３から１２の炭素原子を単環式環として、又は７から１２の炭素原子を二環式環として有する一価の非芳香族の飽和又は部分的に不飽和の環を意味する。７から１２の原子を有する二環式炭素環は、例えばビシクロ[４，５]、[５，５]、[５，６]又は[６，６]系として配置され得、９又は１０の環原子を有する二環式炭素環は、ビシクロ[５，６]又は[６，６]系として、又はビシクロ[２．２．１]ヘプタン、ビシクロ[２．２．２]オクタン及びビシクロ[３．２．２]ノナンのような架橋系として配置されうる。単環式炭素環の例には、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１-シクロペンタ-１-エニル、１-シクロペンタ-２-エニル、１-シクロペンタ-３-エニル、シクロヘキシル、１-シクロヘキサ-１-エニル、１-シクロヘキサ-２-エニル、１-シクロヘキサ-３-エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシル等々が含まれる。
【００５８】
「複素環」、「ヘテロシクリル」及び「複素環式環」なる用語は、ここでは交換可能に使用され、少なくとも一の環原子が、窒素、酸素、リン及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、一又は複数の環原子が、例えば酸素（＝Ｏ)、メルカプト、又はアミノ等で置換されていてもよい、３から２０の環原子の飽和又は部分的不飽和（つまり、環内に一又は複数の二重及び／又は三重結合を有する）炭素環式基を意味する。複素環は、３から７の環員（２から６の炭素原子とＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１から４のヘテロ原子）を有する単環、又は７から１０の環員（４から９の炭素原子とＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１から６のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ[４，５]、[５，５]、[５，６]、又は[６，６]系でありうる。複素環は、Paquette, Leo A．;"Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968)、特に１、３、４、６、７、及び９章；"The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs"(John Wiley & Sons, New York, 1950 to present)、特に１３、１４、１６、１９、及び２８巻；及びJ. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566に記載されている。「複素環」なる用語にはヘテロシクロアルコキシが含まれる。「ヘテロシクリル」はまた複素環基が飽和、部分的不飽和環、又は芳香族炭素環又は複素環式環に縮合した基を含む。複素環式環の例には、限定されないが、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２-ピロリニル、３-ピロリニル、インドリニル、２Ｈ-ピラニル、４Ｈ-ピラニル、ジオキサニル、１,３-ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３-アザビシクロ[３．１．０]ヘキサニル、３-アザビシクロ[４．１．０]ヘプタニル、及びアザビシクロ[２．２．２]ヘキサニル、３Ｈ-インドリルキノジリニル及びＮ-ピリジルウレアが含まれる。スピロ部分がまたこの定義の範囲内に含まれる。２個の環炭素原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されている複素環基の例は、ピリミジノイル及び１,１-ジオキソ-チオモルホリニルである。ここでの複素環基は場合によってはここに記載された一又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。
【００５９】
「アリール」は、親芳香環系の単一炭素原子から一つの水素原子を取り除くことによって誘導される６−２０の炭素原子の一価芳香族炭化水素基を意味する。幾つかのアリール基は「Ａｒ」として例示構造において表される。アリールは飽和、部分的不飽和環、又は芳香族炭素環又は複素環式環に縮合した芳香環を含む二環式基を含む。典型的なアリール基には、限定されないが、ベンゼンから誘導された基（フェニル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル、インデニル、インダニル、１,２-ジヒドロナフタレン、１,２,３,４-テトラヒドロナフチル等々が含まれる。アリール基は場合によってはここに記載された一又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。
【００６０】
「ヘテロアリール」なる用語は、５、６又は７員環の一価芳香族基を意味し、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される一又は複数のヘテロ原子を含む５−２０の原子の縮合環系（その少なくとも一つが芳香族）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば２-ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル(例えば４-ヒドロキシピリミジニルを含む)、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルが含まれる。ヘテロアリール基は場合によってはここに記載された一又は複数の置換基で置換されていてもよい。
【００６１】
複素環又はヘテロアリール基は、それが可能である場合、ピラゾロ[３,４-ｂ]ピリジンに、炭素で結合（炭素結合）しても、又は窒素で結合（窒素結合）してもよい。例を挙げると、限定するものではないが、炭素結合した複素環又はヘテロアリールは、ピリジンの２位、３位、４位、５位、又は６位、ピリダジンの３位、４位、５位、又は６位、ピリミジンの２位、４位、５位、又は６位、ピラジンの２位、３位、５位、又は６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール又はテトラヒドロピロールの２位、３位、４位、又は５位、オキサゾール、イミダゾール又はチアゾールの２位、４位、又は５位、イソオキサゾール、ピラゾール、又はイソチアゾールの３位、４位、又は５位、アジリジンの２位又は３位、アゼチジンの２位、３位、又は４位、キノリンの２位、３位、４位、５位、６位、７位、又は８位、あるいはイソキノリンの１位、３位、４位、５位、６位、７位、又は８位で結合する。
【００６２】
例を挙げると、限定するものではないが、窒素が結合した複素環又はヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２-ピロリン、３-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２-イミダゾリン、３-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２-ピラゾリン、３-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ-インダゾールの１位、イソインドール又はイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール又はβ-カルボリンの９位で結合する。
【００６３】
「炭素結合型単環式へテロアリール」は、独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される１、２、３又は４の環ヘテロ原子を含む５又は６員環の未置換又は置換された単環式へテロアリール基を意味する。炭素結合単環式ヘテロアリールは、単環式ヘテロアリールＲ３基の何れかの炭素原子において式Ｉのピリミジン環のＣ２位に結合される。炭素結合型単環式ヘテロアリール基は、限定しないが、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、３-イソキサゾリル、４-イソキサゾリル、５-イソキサゾリル、２-イミダゾリル、４-イミダゾリル、３-ピラゾリル、４-ピラゾリル、２-ピロリル、３-ピロリル、２-チアゾリル、４-チアゾリル、５-チアゾリル、３-ピリダジニル、４-ピリダジニル、５-ピリダジニル、２-ピリミジニル、５-ピリミジニル、６-ピリミジニル、２-ピラジニル、２-オキサゾリル、４-オキサゾリル、５-オキサゾリル、２-フラニル、３-フラニル、２-チエニル、３-チエニル、３-トリアゾリル、１-トリアゾリル、５-テトラゾリル、１-テトラゾリル、及び２-テトラゾリルを含む。炭素結合単環式ヘテロアリールは場合によってはここに記載の一又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。
【００６４】
窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される一又は複数のヘテロ原子を含む「炭素結合型縮合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロシクリル」及び「炭素結合型縮合二環式Ｃ１−Ｃ２０ヘテロアリール」は、その芳香族性のみが異なり、一緒に縮合した２環を有し、つまり共通の結合を共有している。炭素結合型縮合二環式ヘテロシクリル及びヘテロアリール基は、縮合二環式Ｃ３−Ｃ２０ヘテロシクリル又は縮合二環式Ｃ１−Ｃ２０ヘテロアリール基Ｒ３基の何れかの炭素原子において式Ｉに係るピリミジン環のＣ２位に結合している。炭素結合型縮合二環式ヘテロシクリル及びヘテロアリール基は、限定しないが、１Ｈ-インダゾール、１Ｈ-インドール、インドリン-２-オン、１-(インドリン-１-イル)エタノン、１Ｈ-ベンゾ[ｄ][１,２,３]トリアゾール、１Ｈ-ピラゾロ[３,４-ｂ]ピリジン、１Ｈ-ピラゾロ[３,４-ｄ]ピリミジン、１Ｈ-ベンゾ[ｄ]イミダゾール、１Ｈ-ベンゾ[ｄ]イミダゾール-２(３Ｈ)-オン、１Ｈ-ピラゾロ[３,４-ｃ]ピリジン、１Ｈ-ピロロ[２,３-ｃ]ピリジン、３Ｈ-イミダゾ[４,５-ｃ]ピリジン、７Ｈ-ピロロ[２,３-ｄ]ピリミジン、７Ｈ-プリン、１Ｈ-ピラゾロ[４,３-ｄ]ピリミジン、５Ｈ-ピロロ[３,２-ｄ]ピリミジン、２-アミノ-１Ｈ-プリン-６(９Ｈ)-オン、キノリン、キナゾリン、キノキサリン、イソキノリン、イソキノリン-１(２Ｈ)-オン、３,４-ジヒドロイソキノリン-１(２Ｈ)-オン、３,４-ジヒドロキノリン-２(１Ｈ)-オン、キナゾリン-２(１Ｈ)-オン、キノキサリン-２(１Ｈ)-オン、１,８-ナフチリジン、ピリド[３,４-ｄ]ピリミジン、及びピリド[３,２-ｂ]ピラジンが含まれる。縮合二環式複素環及び縮合二環式ヘテロアリールは、場合によってはここに記載された一又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい
【００６５】
アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、縮合二環式Ｃ４-Ｃ２０ヘテロシクリル、及び縮合二環式Ｃ１-Ｃ２０ヘテロアリールが場合によっては置換されていてもよい置換基は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ３、-ＮＯ２、オキソ、Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＮＲ１０Ｒ１１、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＯＲ１０、-ＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１１、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０、＝ＮＲ１２、ＯＲ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＯＳ(Ｏ)２(ＯＲ１０)、-ＯＰ(＝Ｙ)(ＯＲ１０)(ＯＲ１１)、-ＯＰ(ＯＲ１０)(ＯＲ１１)、ＳＲ１０、-Ｓ(Ｏ)Ｒ１０、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ１０Ｒ１１、-Ｓ(Ｏ)(ＯＲ１０)、-Ｓ(Ｏ)２(ＯＲ１０)、-ＳＣ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＳＣ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-ＳＣ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、置換されていてもよいＣ１-Ｃ１２アルキル、置換されていてもよいＣ２-Ｃ８アルケニル、置換されていてもよいＣ２-Ｃ８アルキニル、置換されていてもよいＣ３-Ｃ１２カルボシクリル、置換されていてもよいＣ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、置換されていてもよいＣ６-Ｃ２０アリール、置換されていてもよいＣ１-Ｃ２０ヘテロアリール、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｔ-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｏ)(ＣＲ１４Ｒ１５)ＮＲ１０Ｒ１１、及び(ＣＲ４Ｒ５)ｔ-ＮＲ１０Ｒ１１が含まれる。
【００６６】
「代謝産物」は、所定の化合物又はその塩の体内で代謝によって生産される産物である。化合物の代謝産物は、当該分野で知られた常套的な技術を使用して同定することができ、その活性はここに記載されたもののような試験を使用して決定される。かかる産物は、投与された化合物の例えば酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド、エステル化、エステル分解、酵素切断等々から生じうる。従って、本発明は、本発明の化合物をその代謝産物を生じせしめるのに十分な時間の間、哺乳動物と接触させることを含む方法によって生産される化合物を含む本発明の化合物の代謝産物を含む。
【００６７】
「パッケージ挿入物」なる用語は、効能、使用法、用量、投与、禁忌及び／又はかかる治療用製品の使用に関する注意についての情報を含む、治療用製品の市販パッケージに常套的に含まれる指示書（説明書）を意味するために使用される。
【００６８】
ここで使用される「薬学的に許容可能な塩」なる語句は、本発明の化合物の薬学的に許容可能な有機又は無機塩を意味する。例示的な塩には、限定されるものではないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸ホスフェート、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸シトレート、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシレート」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ-トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（つまり、１,１’-メチレン-ビス(２-ヒドロキシ-３-ナフトエート)）塩が含まれる。薬学的に許容可能な塩は、アセテートイオン、スクシネートイオン又は他の対イオンのような他の分子を含みうる。対イオンは親化合物上の電荷を安定化する任意の有機又は無機部分でありうる。更に、薬学的に許容可能な塩は、その構造中に一を越える荷電原子を有しうる。複数の荷電原子が薬学的に許容可能な塩の一部である場合は、複数の対イオンを有しうる。よって、薬学的に許容可能な塩は一又は複数の荷電原子及び／又は一又は複数の対イオンを有しうる。
【００６９】
本発明の化合物が塩基である場合、所望の薬学的に許容可能な塩は、当該分野で利用できる任意の適切な方法、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸等のような無機酸で、又は例えば酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸、例えばグルクロン酸又はガラクツロン酸、αヒドロキシ酸、例えばクエン酸又は酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸又はケイ皮酸、スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸又はエタンスルホン酸等のような有機酸での遊離塩基の処理によって調製することができる。塩基性の薬学的化合物から薬学的に有用な又は許容可能な塩を形成するのに適していると一般に考えられる酸は、例えば、P. Stahl等, Camille G.(編) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH；S. Berge等, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1 19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 217；Anderson等, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第１８版, (1995) Mack Publishing Co., Easton PA；及びThe Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C.のウェブサイト)に記載されている。これらの開示は出典明示によりここに援用する。
【００７０】
本発明の化合物が酸である場合、所望の薬学的に許容可能な塩は、任意の適切な方法、例えば無機又は有機塩基、例えばアミン（第１級、第２級又は第３級）、アルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物等での遊離酸の処理によって調製することができる。適切な塩を例証する例には、限定されないが、アミノ酸、例えばグリシン及びアルギニン、アンモニア、第１級、第２級、及び第３級アミン、及び環状アミン、例えばピペリジン、モルホリン及びピペラジンから誘導される有機塩、及びナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム及びリチウムから誘導される無機塩が含まれる。
【００７１】
「薬学的に許容可能な」なる語句は、物質又は組成物が、製剤を構成する他の成分、及び／又はそれで治療されている哺乳動物と、化学的に及び／又は毒物学的に適合性がなければならないことを示している。
【００７２】
ここで使用される「相乗的」なる用語は、二以上の単剤の相加効果よりも効果的な治療薬の組合わせを意味する。式Ｉの化合物と一又は複数の化学療法剤との間の相乗的な相互作用の決定は、ここに記載されたアッセイから得られる結果に基づくことができる。これらのアッセイの結果は、コンビネーションインデックス（Combination Index）を得るためにＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙコンビネーション法及びＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアでの用量効果分析を使用して分析する（Chou及びTalalay, Trends Pharmacol. Sci. 4:450-454; Chou, T.C. (2006) Pharmacological Reviews 68(3):621-681；Chou及びTalalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55）。本発明によって提供される組合わせを数種のアッセイ系において評価したが、データは、抗癌剤間の相乗効果、相加効果、及び拮抗作用を定量化するための標準的プログラムを利用して解析することができる。用いられる例示的なプログラムは、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙにより、"New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy," Academic Press, 1987, 2章に記載されている。０．８未満のコンビネーションインデックス値は相乗効果を示し、１．２より大きい値は拮抗作用を示し、０．８から１．２の値は相加効果を示す。併用療法は、併せて使用される活性成分が化合物を別個に使用して得られる効果の合計よりも大きい場合に「相乗効果」をもたらし、「相乗的」、つまり効果が達成されることが分かる。相乗効果は、活性成分が、（１）同時処方され、組み合わされた単位投薬製剤として同時に投与又は送達され；（２）別個の製剤として交互に又は並行して送達される場合；又は（３）ある種の他のレジメンによって、達成することができる。交替療法で送達される場合、相乗効果は、化合物が、例えば別個のシリンジによる異なった注射によって逐次的に投与され又は送達されるときに達成できる。一般に、交替療法の間、各活性成分の有効用量が逐次的、つまり連続的に投与される一方、併用療法では二又はそれ以上の活性成分の有効用量が併せて投与される。
【００７３】
ここで用いられる「担体」は、用いられる服用量及び濃度でそれらに曝露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である薬学的に許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤を含む。生理学的に許容可能な担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容可能な担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸のバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；疎水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）を含む。
【００７４】
「治療的に有効な量」なる用語は、被験者又は哺乳動物の疾患又は疾病を「治療」するのに効果的な併用治療剤の量を指す。癌の場合、治療的に有効な量のアンタゴニストは、癌細胞の数を減じ；腫瘍の大きさを減じ；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害（すなわち、ある程度まで減速、好ましくは停止）し；腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度まで減速及び好ましくは停止）し；腫瘍増殖をある程度まで阻害し；及び／又は癌に関連する一又は複数の症状をある程度まで緩和しうる。「治療する」のここでの定義を参照のこと。アンタゴニストが、存在する癌細胞の増殖を防ぎ及び／又は死滅させるという点で、それは、細胞分裂停止及び／又は細胞障害性でありうる。
【００７５】
併用治療剤の「増殖阻害量」は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞の増殖をインビトロ又はインビボで阻害できる量である。腫瘍細胞増殖を阻害する目的での併用治療剤の「増殖阻害量」は、経験的にまた常套的な形で決定することができる。
【００７６】
併用治療剤の「細胞傷害性量」は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞のインビトロ又はインビボでの破壊を可能にする量である。
【００７７】
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には、調節されない細胞数の増大（通常細胞増殖と呼ばれる）を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか記述し、その細胞数の増大は、細胞増殖の異常な増大、細胞死の異常な減少、又は細胞増殖と細胞死の量のアンバランスに起因し得る。癌の例には、これらに限定されるものではないが、造血性癌又は血液関連の癌、例えばリンパ腫、白血病、骨髄腫又はリンパ様悪性腫瘍、並びに、脾臓の癌及びリンパ節の癌が含まれる。
【００７８】
「過剰増殖」なる用語は、ある程度の異常な細胞増殖を伴う疾患を意味する。一実施態様では、細胞増殖性疾患は癌である。
【００７９】
ここで用いられる「腫瘍」は、悪性又は良性に関わらず、全ての腫瘍形成細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を意味する。「癌」、「癌性」、「細胞増殖疾患」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」という用語は、ここでは互いに排他的なものではない。
【００８０】
ここで使用される「非ホジキンリンパ腫」又は「ＮＨＬ」なる用語は、ホジキンリンパ腫以外のリンパ系の癌を意味する。一般に、ホジキンリンパ腫にはリードシュテルンベルク細胞が存在し、非ホジキンリンパ腫には前記細胞が不在であることにより、ホジキンリンパ腫は非ホジキンリンパ腫と区別することができる。ここで使用される該用語に含まれる非ホジキンリンパ腫の例は、当該分野で知られている分類方式、例えばColor Atlas of Clinical Hematology第３版; A. Victor Hoffbrand及びJohn E. Pettit（編）（Harcourt Publishers Limited 2000)(特に図11.57、11.58及び／又は11.59参照）に記載の改訂版European-American Lymphoma (REAL)スキームに従って当業者（例えば腫瘍学者又は病理学者）によって同定されうる任意のものを含む。より特定の例としては、限定するものではないが、再発性又は不応性ＮＨＬ、前線低悪性度ＮＨＬ、第ＩＩＩ／ＩＶ期ＮＨＬ、化学療法に抵抗性のＮＨＬ、前駆体Ｂリンパ芽球性白血病及び／又はリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病及び／又は前リンパ球性白血病及び／又は小リンパ球性リンパ腫、造血性前リンパ球性白血病、免疫細胞腫及び／又はリンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾発性辺縁帯リンパ腫、節外性濾胞辺縁帯リンパ腫−ＭＡＬＴリンパ腫、節性濾胞辺縁帯リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞腫及び／又は形質細胞骨髄腫、低悪性度／濾胞性リンパ腫、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、濾胞中心性リンパ腫（濾胞性）、中悪性度拡散性ＮＨＬ、広汎性大Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度ＮＨＬ（高悪性度前線ＮＨＬ及び高悪性度再発性ＮＨＬを含む）、自己幹細胞移植後の又は自己肝細胞移植に抵抗性のＮＨＬ再発、原発性縦隔大Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出液リンパ腫、高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度非切断小細胞性ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、バーキットリンパ腫、前駆体（辺縁帯）Ｔ細胞リンパ芽球性白血病及び／又はリンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫及び／又は白血病、Ｔ細胞慢性リンパ球性白血病及び／又は前リンパ球性白血病、大顆粒リンパ球性白血病、菌状息肉腫及び／又はセザリー症候群、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞（鼻腔型）リンパ腫、超疾患型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪組織炎様Ｔ細胞リンパ腫、皮膚（皮膚性）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血管動原体リンパ腫、腸Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞（特に断らない限り）リンパ腫及び血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫が挙げられる。
【００８１】
よって、非ホジキンリンパ腫には、造血性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、悪性リンパ腫、悪性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、及び粘膜関連リンパ組織リンパ腫が含まれる。
【００８２】
式Ｉ化合物
本発明は、構造：
0005709766.tif 000006
を有する式Ｉの化合物、又はその立体異性体、幾何異性体、互変異性体又は薬学的に許容可能な塩を含む併用治療剤を含み、
上式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｍＮＲ１０Ｒ１１、-Ｃ(Ｒ１４Ｒ１５)ｎＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＮＲ１２Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｍＯＲ１０、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＳ(Ｏ)２Ｒ１０、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＳ(Ｏ)２ＮＲ１０Ｒ１１、-Ｃ(ＯＲ１０)Ｒ１１Ｒ１４、-Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１２ＯＲ１０、-Ｃ(＝Ｏ)ＮＲ１２Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｏ)ＮＲ１２(ＣＲ１４Ｒ１５)ｍＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＯ２、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１１、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１１、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＲ１２Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-ＮＲ１２ＳＯ２ＮＲ１０Ｒ１１、-ＳＲ１０、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ１０Ｒ１１、-ＳＣ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＳＣ(＝Ｙ)ＯＲ１０、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、Ｃ６-Ｃ２０アリール、及びＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ３、-ＮＯ２、-Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｍＮＲ１０Ｒ１１、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＯＲ１０、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｔ-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｏ)(ＣＲ１４Ｒ１５)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０、ＯＲ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＯＳ(Ｏ)２(ＯＲ１０)、-ＯＰ(＝Ｙ)(ＯＲ１０)(ＯＲ１１)-ＯＰ(ＯＲ１０)(ＯＲ１１)、ＳＲ１０、-Ｓ(Ｏ)Ｒ１０、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ１０Ｒ１１、-Ｓ(Ｏ)(ＯＲ１０)、-Ｓ(Ｏ)２(ＯＲ１０)、-ＳＣ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＳＣ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-ＳＣ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、Ｃ６-Ｃ２０アリール、及びＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３は、炭素結合単環ヘテロアリール、炭素縮合二環式Ｃ３-Ｃ２０ヘテロシクリル、又は炭素結合縮合二環式Ｃ１-Ｃ２０ヘテロアリールであり、ここで単環式ヘテロアリール、縮合二環式Ｃ３-Ｃ２０ヘテロシクリル、及び縮合二環式Ｃ１-Ｃ２０ヘテロアリールは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、-ＣＮ、-ＮＲ１０Ｒ１１、-ＯＲ１０、-Ｃ(Ｏ)Ｒ１０、-ＮＲ１０Ｃ(Ｏ)Ｒ１１、-Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｒ１１)２、-ＮＲ１０Ｃ(Ｏ)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＲ１２Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｏ)ＯＲ１０、-Ｃ(＝Ｏ)ＮＲ１０Ｒ１１Ｃ１-Ｃ１２アルキル及び(Ｃ１-Ｃ１２アルキル)-ＯＲ１０から選択される一又は複数の基で置換されていてもよく；
Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、独立してＨ、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、Ｃ６-Ｃ２０アリール、又はＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールであり、
又はＲ１０及びＲ１１は、それらと結合する窒素と共に、オキソ、(ＣＨ２)ｍＯＲ１２、ＮＲ１２Ｒ１２、ＣＦ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２Ｒ１２、Ｃ(＝Ｏ)Ｒ１２、ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１２、ＮＲ１２Ｓ(Ｏ)２Ｒ１２、Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１２Ｒ１２、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、Ｃ６-Ｃ２０アリール及びＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよいＣ２-Ｃ２０複素環式環を形成し；
Ｒ１４及びＲ１５は、独立してＨ、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、又は-(ＣＨ２)ｎ-アリールから選択され、
又はＲ１４及びＲ１５は、それらが結合する原子と共に、飽和又は部分的に不飽和なＣ３-Ｃ１２炭素環式環を形成し；
ここで、上記アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＣＦ３、-ＮＯ２、オキソ、Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＮＲ１０Ｒ１１、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｎＯＲ１０、-ＮＲ１０Ｒ１１、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＯＲ１１、-ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｍＮＲ１２ＳＯ２Ｒ１０、＝ＮＲ１２、ＯＲ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-ＯＣ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、-ＯＳ(Ｏ)２(ＯＲ１０)、-ＯＰ(＝Ｙ)(ＯＲ１０)(ＯＲ１１)、-ＯＰ(ＯＲ１０)(ＯＲ１１)、-ＳＲ１０、-Ｓ(Ｏ)Ｒ１０、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ１０、-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ１０Ｒ１１、-Ｓ(Ｏ)(ＯＲ１０)、-Ｓ(Ｏ)２(ＯＲ１０)、-ＳＣ(＝Ｙ)Ｒ１０、-ＳＣ(＝Ｙ)ＯＲ１０、-ＳＣ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、Ｃ６-Ｃ２０アリール、及びＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよく；
Ｙは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１２であり；
ｍは、０、１、２、３、４、５又は６であり；及び
ｎは１、２、３、４、５又は６である。
【００８３】
式Ｉの化合物の例示的実施態様は、Ｒ１は-(ＣＲ１４Ｒ１５)ｍＮＲ１０Ｒ１１であり、ここでｍは１であり、Ｒ１０及びＲ１１は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよいＣ３-Ｃ２０複素環式環を形成する。Ｃ３−Ｃ２０複素環式環は、場合によってはＮＲ１０Ｒ１１、ＣＦ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２Ｒ１０、Ｃ(＝Ｏ)Ｒ１０、ＮＲ１２Ｃ(＝Ｙ)Ｒ１１、ＮＲ１２Ｓ(Ｏ)２Ｒ１１、Ｃ(＝Ｙ)ＮＲ１０Ｒ１１及びＣ１-Ｃ１２アルキルから選択される一又は複数の基で置換されていてもよい、ピペラジニルでありうる。
【００８４】
式Ｉの化合物の例示的実施態様では、Ｒ１がＨではないものを含む。
【００８５】
式Ｉの化合物の例示的実施態様では、Ｒ２が、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ３-Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、Ｃ６-Ｃ２０アリール又はＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールであるものを含む。Ｃ１-Ｃ２０ヘテロアリールは、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、３-イソキサゾリル、４-イソキサゾリル、５-イソキサゾリル、２-イミダゾリル、４-イミダゾリル、３-ピラゾリル、４-ピラゾリル、２-ピロリル、３-ピロリル、２-チアゾリル、４-チアゾリル、５-チアゾリル、３-ピリダジニル、４-ピリダジニル、５-ピリダジニル、２-ピリミジニル、５-ピリミジニル、６-ピリミジニル、２-ピラジニル、２-オキサゾリル、４-オキサゾリル、５-オキサゾリル、２-フラニル、３-フラニル、２-チエニル、３-チエニル、３-トリアゾリル、１-トリアゾリル、５-テトラゾリル、１-テトラゾリル及び２-テトラゾリルから選択される単環式ヘテロアリール基でありうる。
【００８６】
式Ｉの化合物の例示的実施態様では、Ｒ３が２-アミノピリミジン-５-イルであるものを含む。
【００８７】
式Ｉの化合物の例示的実施態様では、Ｒ３が１Ｈ-インダゾール、１Ｈ-インドール、インドリン-２-オン、１-(インドリン-１-イル)エタノン、１Ｈ-ベンゾ[ｄ][１,２,３]チアゾール、１Ｈ-ピラゾロ[３,４-ｂ]ピリジン、１Ｈ-ピラゾロ[３,４-ｄ]ピリミジン、１Ｈ-ベンゾ[ｄ]イミダゾ-ル、１Ｈ-ベンゾ[ｄ]イミダゾール-２(３Ｈ)-オン、１Ｈ-ピラゾロ[３,４-ｃ]ピリジン、１Ｈ-ピロロ[２,３-ｃ]ピリジン、３Ｈ-イミダゾ[４,５-ｃ]ピリジン、７Ｈ-ピロロ[２,３-ｄ]ピリミジン、７Ｈ-プリン、１Ｈ-ピラゾロ[４,３-ｄ]ピリミジン、５Ｈ-ピロロ[３、２-ｄ]ピリミジン、２-アミノ-１Ｈ-プリン-６(９Ｈ)-オン、キノリン、キナゾリン、キノキサリン、イソキノリン、イソキノリン-１(２Ｈ)-オン、３,４-ジヒドロイソキノリン-１(２Ｈ)-オン、３,４-ジヒドロキノリン-２(１Ｈ)-オン、キナゾリン-２(１Ｈ)-オン、キノキサリン-２(１Ｈ)-オン、１,８-ナフチリジン、ピリド[３,４-ｄ]ピリミジン及びピリド[３,２-ｂ]ピラジンから選択される二環式ヘテロアリール基であるものを含む。
【００８８】
式Ｉの化合物の例示的実施態様では、Ｒ３が１Ｈ-インダゾール-４-イルであるものを含む。
【００８９】
例示的な式Ｉの化合物は、４-(２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリンと称され；ＣＡＳ登録番号が９５７０５４‐３０‐７であり；米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号に記載され請求され；Folkes等(2008)Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532； Belvin等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 15, Abstract 4004；Folkes等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-146；Friedman等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-110に記載されており；式Ｉａ：
0005709766.tif 000007
を有している。
【００９０】
他の例示的な式Ｉの化合物は、(Ｓ)-１-(４-((２-(２-アミノピリミジン-５-イル)-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メチル)ピペラジン-１-イル)-２-ヒドロキシプロパン-１-オンと称され；米国特許出願公開第２００８／０２４２６６５号に記載され請求され；式Ｉｂ：
0005709766.tif 000008
を有している。
【００９１】
式Ｉの化合物の調製
式Ｉの化合物は、化学分野においてよく知られているものに類似した方法を含む合成経路によって合成することができる。出発材料は、一般にＡｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Milwaukee WI）などの商業的供給元から入手可能であるか、又は当業者によく知られた方法を使用して容易に調製される（例えば、Louis F. Fieser及びMary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, N.Y.(1967-1999版)、又はBeilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl.版 Springer-Verlag, Berlin, 追補を含む(またバイルシュタインオンラインデータベースから入手可能である)）。
【００９２】
式Ｉの化合物は、他のチオフェン及びピリミジン（米国特許第６６０８０５３号；米国特許第６４９２３８３号；米国特許第６２３２３２０号；米国特許第６１８７７７７号；米国特許第３７６３１５６号；米国特許第３６６１９０８号；米国特許第３４７５４２９号；米国特許第５０７５３０５号；米国特許出願公開第２００３／２２０３６５号；英国特許出願公開第１３９３１６１号；国際公開第９３／１３６６４号）；及びComprehensive Heterocyclic Chemistry, Editors Katritzky及びRees, Pergamon Press, 1984に記載されている他の複素環を調製するため手順を使用して調製しうる。
【００９３】
式Ｉの化合物は、常法によって、薬学的に許容可能な塩に転換することができ、塩は遊離塩基化合物に転換することができる。式Ｉの化合物は、溶解性、溶解、吸湿性、及び薬物動態などの所望の特性に応じて、遊離塩基として又は薬学的に許容可能な塩として治療的に有効でありうる。薬学的に許容可能な塩の例としては、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸及びリン酸；また有機酸、例えばメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸及びグルタミン酸との塩が挙げられる。塩は、メシル酸塩、塩酸塩、リン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩又は硫酸塩でもよい。塩は、モノ塩又はビス塩でもよい。例えば、メシル酸塩は、モノメシル酸塩またはビスメシル酸塩でもよい。
【００９４】
式Ｉの化合物及び塩はまた水和物又は溶媒和物として存在してもよい。
【００９５】
中間体の官能基（例えば、第一級又は第二級アミン）の保護は、式Ｉの化合物の調製において必要な場合がある。このような保護の必要性は、遠位の官能基の性質及び調製方法の条件に応じて変わるであろう。適切なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。このような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。保護基及びそれらの使用の一般的説明については、T.W.Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991を参照のこと。
【００９６】
例証のために、スキーム１から７は、本発明の化合物並びに重要な中間体を調製するための一般的方法を示す。個々の反応工程の更なる詳細な説明は、以下の実施例のセクションを参照のこと。当業者であれば、他の合成経路も本発明の化合物を合成するために使用しうることが分かるであろう。特定の出発物質及び試薬がスキームに示され、以下で検討されているが、他の出発物質及び試薬に容易に置換して、様々な誘導体及び／又は反応条件を提供することができる。また、以下に記載の方法によって調製される化合物の多くは、当業者によく知られている常套的な化学を使用し、この開示を考慮して更に変更することができる。
【００９７】
0005709766.tif 000009
スキーム１
スキーム１は、２-カルボキシエステル，３-アミノチオフェン試薬５１からチエノピリミジン中間体５３の調製をする一般的方法を示しており、ここで、ＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、又はＩであり；Ｒ１、Ｒ２、及びＲ１０は、式Ｉの化合物、その前駆体又はプロドラッグに対して定義された通りである。
【００９８】
0005709766.tif 000010
スキーム２
スキーム２は、塩基性条件下、有機溶媒中においてビス-ハロチエノピリミジン中間体５４の４-ハロゲン化物をモルホリンで選択的に置換して、２-ハロ，４-モルホリノチエノピリミジン化合物５５を調製する一般的な方法を示し、ここで、ＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、又はＩであり；Ｒ１及びＲ２は式Ｉの化合物、又はその前駆体又はプロドラッグに対して定義された通りである。
【００９９】
0005709766.tif 000011
スキーム３
スキーム３は、２-ハロ，４-モルホリノ，６-ヒドロゲノチエノピリミジン化合物５６の６位を誘導体化する一般的方法を示し、ここで、Ｒ１はＨである。５６をリチウム化試薬で処理して６位のプロトンを取り除き、続いてＺがハロゲン、ＮＨＳエステル、カルボキシレート又はジアルキルアミノ等の離脱基であるアシル化試薬Ｒ１０Ｃ(Ｏ)Ｚを加えて、２-ハロ，４-モルホリノ，６-アシルチエノピリミジン化合物５７を得、ここで、ＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、又はＩであり；Ｒ２及びＲ１０は式Ｉの化合物、又はその前駆体又はプロドラッグに対して定義された通りである。６-ホルミル化合物(Ｒ１０＝Ｈ)を調製するＲ１０Ｃ(Ｏ)Ｚの例はＮ,Ｎ’-ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)である。
【０１００】
0005709766.tif 000012
スキーム４
スキーム４は、単環式ヘテロアリール、縮合二環式ヘテロシクリル又は縮合二環式ヘテロアリールボロネート酸(Ｒ１５＝Ｈ)又はエステル(Ｒ１５＝アルキル)試薬で２-ハロピリミジン中間体５８を鈴木式カップリングし、式Ｉの２位が置換された(Ｈｙ)、４-モルホリノチエノピリミジン化合物５９とする一般的方法を示し、ここで、ＨａｌはＣｌ、Ｂｒ、又はＩであり；Ｒ１及びＲ２は式Ｉの化合物、又はその前駆体又はプロドラッグに対して定義された通りである。鈴木反応の概説については、Miyaura等(1995) Chem. Rev. 95:2457-2483；Suzuki, A. (1999) J. Organomet. Chem. 576:147-168；Suzuki, A. Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions, Diederich, F., Stang, P.J.編, VCH, Weinheim, DE (1998), pp 49-97を参照のこと。パラジウム触媒は、典型的には鈴木式クロスカップリングに使用される任意のもの、例えばＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２、Ｐｄ(ＰＰｈ３)４、Ｐｄ(ＯＡｃ)２、ＰｄＣｌ２(ｄｐｐｆ)-ＤＣＭ、Ｐｄ２(ｄｂａ)３／Ｐｔ-Ｂｕ)３）でありうる（Owens等(2003) Bioorganic & Med. Chem. Letters 13:4143-4145；Molander等(2002)Organic Letters 4(11):1867-1870；米国特許第６４４８４３３号）。
【０１０１】
0005709766.tif 000013
スキーム５
スキーム５は、化合物６３のアルキニル化誘導体を調製するため使用されうる、アルキン６１の一般的合成方法を示す。プロパルギルアミン６１は、適切な塩基（Ｃｓ２ＣＯ３等）の存在下、式Ｒ１０Ｒ１１ＮＨ（該式中、Ｒ１０及びＲ１１はＨ、アルキル、アリール及びヘテロアリールから独立して選択され、又はＲ１０及びＲ１１はそれらが結合する窒素と共に複素環式環を形成する）のアミンと臭化プロパルギル６０を反応させることによって調製されうる。アルキニルアミン及び関連する合成法の概説については、Booker-Milburn, K.I., Comprehensive Organic Functional Group Transformations(1995), 2:1039-1074；及びViehe,H.G.,(1967)Angew. Chem., Int. Ed. Eng., 6(9):767-778を参照のこと。アルキン６１は、続いて、薗頭カップリングを介して中間体６２（Ｘ２＝ブロモ又はヨード）と反応させられて、化合物６３が得られ、ここで、Ｒ２及びＲ３は式Ｉの化合物、又はその前駆体又はプロドラッグに対して定義された通りである。
【０１０２】
0005709766.tif 000014
スキーム６
スキーム６は、化合物６６のアルキニル化誘導体を調製するため使用されうる、アルキン６５の一般的合成方法を示す。ｇｅｍ−ジアルキルプロパルギルアミン類６５はZaragoza等(2004) J. Med. Chem.,47:2833に記載される方法を用いて調製されうる。スキーム６に従って、ｇｅｍ−ジアルキル塩化物６４（Ｒ１４及びＲ１５は独立してメチル，エチル又は他のアルキル基である）を、ＣｕＣｌ及び適切な塩基（例えば、ＴＥＡ等）の存在下で、式Ｒ１０Ｒ１１ＮＨ（該式中、Ｒ１０及びＲ１１はＨ、アルキル、アリール及びヘテロアリールから独立して選択され、又はＲ１０及びＲ１１はそれらが結合する窒素原子と共に複素環式環を形成する）のアミンと反応させてアルキン６５を得ることができる。アルキン６５は中間体６２（薗頭カップリングを介して）と反応させて化合物６６を得ることができ、ここで、Ｒ２及びＲ３は式Ｉの化合物、又はその前駆体又はプロドラッグに対して定義された通りである。
【０１０３】
0005709766.tif 000015
スキーム７
スキーム７は、化合物６９のアルキニル化誘導体を調製するために使用することができるアルキン６８の合成のための一般的スキームを示す。ブタ-３-イン-１-アミン類６８（ここで、Ｒ１４及びＲ１５は独立してＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリールであるか、又はＲ１４及びＲ１５はそれらが結合する炭素原子と共に炭素環式又は複素環式環を形成する）は、Olomucki M.等(1960)Ann.Chim.5:845に記載のプロトコールを使用して、式Ｒ１０Ｒ１１ＮＨ（該式中、Ｒ１０及びＲ１１はＨ、アルキル、アリール及びヘテロアリールから独立して選択されるか、又はＲ１０及びＲ１１はそれらが結合する窒素と共に複素環式環を形成する）のアミンとのアルキン６７（ＬＧ＝トシレート又は他の離脱基）の反応から調製することができる。続いてアルキンをスキーム５及び６に対して提供した記述に従って薗頭カップリングを介して中間体６２と反応させ、それぞれ化合物６９を得ることができ、ここで、Ｒ２及びＲ３は式Ｉの化合物、又はその前駆体又はプロドラッグに対して定義された通りである。
【０１０４】
式Ｉのチエノピリミジン化合物の薬学的に許容可能な塩は常套的な技術を用いて調製することができる。典型的には、その方法は、上述の式Ｉのチエノピリミジンを適切な溶媒中において適切な酸で処理することを含む。
【０１０５】
上述の本発明の方法では、アミノ化工程及びＰｄ媒介クロスカップリング工程の双方を一般的な条件下で行う。パラジウム触媒は鈴木式クロスカップリングに典型的に使用される任意のもの、例えばＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２でありうる。還元試薬は、典型的には、ＮａＢＨ(ＯＡｃ)３、ＮａＢＨ４又はＮａＣＮＢＨ４のようなホウ化水素である。
【０１０６】
化学療法剤
ある種の化学療法剤は、式Ｉの化合物との組み合わせで、インビトロ及びインビボでの細胞増殖の阻害において驚くべきまた予期しない性質を示した。そのような化学療法剤は、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン、及びシタラビンを含む。
【０１０７】
デキサメタゾンは、抗炎症及び免疫抑制活性を持つ強力なグルココルチコイドステロイドホルモンである。腫瘍学においては、デキサメタゾンは化学療法を受けている癌患者に投与され、抗腫瘍治療のある種の副作用を相殺する。デキサメタゾンは、オンダンセトロンのような５ＨＴ３レセプターアンタゴニストの制吐作用を増強する。デキサメタゾンはまたある種の造血器腫瘍、特に多発性骨髄腫の治療において使用され、ここで、デキサメタゾンは単独で又はサリドマイド（ｔｈａｌ−ｄｅｘ）と共に又はアドリアマイシン（ドキソルビシン）及びビンクリスチン（ＶＡＤ）との組合わせと共に投与される。脳腫瘍（原発性又は転移性）において、デキサメタゾンは、脳構造を最終的には圧迫することとなる浮腫の発生に対抗するために使用される。デキサメタゾンは、(８Ｓ,９Ｒ,１０Ｓ,１１Ｓ,１３Ｓ,１４Ｓ,１６Ｒ,１７Ｒ)-９-フルオロ-１１,１７-ジヒドロキシ-１７-(２-ヒドロキシアセチル)-１０,１３,１６-トリメチル- ６,７,８,１１,１２,１４,１５,１６- オクタヒドロシクロペンタ[ａ]フェナントレン- ３-オン（ＣＡＳ登録番号５０−０２−２）であり、構造：
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を持つ。
【０１０８】
チオテパ（テスパ（ｔｅｓｐａ）、チオホスファミド、テスパミン、ｔｓｐａ、チフォシル（ｔｉｆｏｓｙｌ）、チオプレックス（登録商標)）は、乳癌、卵巣癌、及び膀胱癌の治療に使用されるアルキル化化学療法剤である（Maanen等(2000) Cancer Treat Rev 26(4):257-68, 米国特許第２６７０３４７号）。骨髄移植の前処置にもまた使用される。チオテパは、Ｎ,Ｎ’Ｎ’-トリエチレンチオホスホラミド、ホスフィノチオイリジントリサジリジン、又は１,１’,１’’-ホスホロチオイルトリアジリジン（ＣＡＳ登録番号５２−２４−４）であり、構造：
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を持つ。
【０１０９】
ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、ヒドロキシルダウノルビシン）は、１９６０年代から化学療法で広く使用されているＤＮＡ相互作用薬である。アントラサイクリン系の抗生物質であり、ＤＮＡにまたインターカレートするダウノマイシンに構造的に関連している。ドキソルビシンは広い範囲の癌の治療によく使用される。ドキソルビシンは、(８Ｓ,１０Ｓ)-１０-(４-アミノ-５-ヒドロキシ-６-メチル-テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-２-イルオキシ)-６,８,１１-トリヒドロキシ-８-(２-ヒドロキシアセチル)-１-メトキシ-７,８,９,１０-テトラヒドロテトラセン-５,１２-ジオン(ＣＡＳ登録番号２３２１４-９２-８)であり、構造：
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を持つ。
【０１１０】
ビンクリスチン（２２-オキソビンカロイコブラスチン；ロイコクリスチン（leurocristine）、ＶＣＲ、ＬＣＲ硫酸塩型：ビンクリスチン硫酸塩、キョークリスチン、オンコビン（リリー（登録商標））、ビンコシド、ビンクレックス（vincrex））はニチニチソウ(Madagascar periwinkle)Catharanthus roseusで、以前はVinca rosea由来のビンカアルカロイドである（Johnson等 (1963) Cancer Res. 23:1390-1427；Neuss等 (1964) J. Am. Chem. Soc. 86:1440）。半合成誘導体ビンデシン及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））と共に、ビンクリスチンは、チューブリンに結合し、細胞が分裂する際に染色体を移動させるのに必要な紡錘体を細胞が生産することを妨げることによって、分裂中期の有糸分裂を阻害する。ビンクリスチンは、白血病、リンパ腫、乳癌及び肺癌を含む幾つかの種類の癌の治療剤として投与される化学療法薬である。ビンクリスチン（ロイコクリスチン、ＶＣＲ）は小児白血病及び非ホジキンリンパ腫の治療に最も効果的であり、ビンブラスチン（ビンカロイコブラスチン、ＶＬＢ）はホジキン病を治療するのに使用される。ビンクリスチン（ＣＡＳ番号５７−２２−７）は、構造：
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を持つ。
【０１１１】
リツキシマブ（リツキサン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ；マブセラ（登録商標）、ロッシュ、レディタクス（登録商標）、ＣＡＳ登録番号１７４７２２−３１−７）は、ＣＤ２０抗原に対して産生される遺伝子操作型キメラマウス／ヒトモノクローナル抗体である。リツキシマブは米国特許第５７３６１３７号において「Ｃ２Ｄ８」と呼ばれている抗体である。リツキシマブは、再発性もしくは難治性の低悪性度又は濾胞性の、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞ＮＨＬの患者の治療に適応する。リツキシマブは細胞表面ＣＤ−２０に結合し、Ｂ細胞枯渇を生じさせる（Cartron等(2002)Blood99:754-758；Idusogie等(2000)J. Immunol.164:4178-4184；Grillo-Lopez AJ,等(1999)Semin Oncol;26:66-73；米国特許第５７３６１３７号）。リツキサン（米国特許第５６７７１８０号；米国特許第５７３６１３７号）は造血器腫瘍において最も広く使用されているモノクローナル抗体であり、広汎な臨床実務で樹立されている。リツキサンは、再発性もしくは難治性の低悪性度又は濾胞性ＣＤ２０陽性Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）で１９９７年に最初にＦＤＡ医薬品承認を受けた。また、欧州連合においては１９９８年６月に商品名マブセラ（登録商標）という名前で承認された。２００６年２月、リツキサンはメトトレキセートとの併用で、一又は複数のＴＮＦアンタゴニスト治療に対しては不十分な応答を有していた中程度から重症の関節リウマチの成人患者における徴候及び症状を減少させるためのＦＤＡ承認も受けた。リツキシマブ抗体（Ｃ２Ｂ８とも命名）のアミノ酸配列及びチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）中での組換え発現を介したその生産の例示的な方法は米国特許第７３６１３７号に開示されている。
【０１１２】
シクロホスファミド（シトキサン、ネオサー（Ｎｅｏｓａｒ）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ、シクロホスファン、Ｂ−５１８、シクロブラスチン、シクロスチン、エンドキサン、プロシトックス、センドキサン、サイトフォスファン）は、様々なタイプの癌やある種の自己免疫疾患に使用されるオキサゾフォリン群由来のナイトロジェンマスタードアルキル化剤である（"A Review of cyclophosphamide",D.L.Hill(1975)Charles C. Thomas, Springfield,340pp;IARC Monographs(1975)9:135-156；Fraiser等(1991)Drugs 42:781-795;Colvin,OmM.(1999) Curr. Pharmaceut. Design 5:555-560）。シクロホスファミドは、肝臓中でプロドラッグから化学療法活性を持つ活性形態に転換される。シクロホスファミドの主な使用法は、リンパ腫、幾つか型の白血病、及び幾つかの固形腫瘍の治療における他の化学療法剤との併用である（Shanafelt等(2007)Cancer 109(11):2291-8；Brock N(1996)Cancer 78(3):542-7）。これは、細胞増殖を遅くさせ又は停止させることにより、また様々な疾患に対する免疫系応答を減少させることにより、作用する化学療法剤である。
【０１１３】
シクロホスファミドは、水和物形態を含む、Ｎ,Ｎ-ビス(２-クロロエチル)-１,３,２-オキサザホスフィナン-２-アミン２-オキシド、Ｎ,Ｎ-ビス(２-クロロエチル)テトラヒドロ-２Ｈ-１,３,２-オキサザホスホリン-２-アミン-２-オキシド；１-ビス(２-クロロエチル)アミノ-１-オキソ-２-アザ-５-オキサホスホリジン一水和物；ビス(２-クロロエチル)-ホスファミドサイクリックプロパノールアミドエステル；又はＮ,Ｎ-ビス(β-クロロエチル)-Ｎ’,Ｏ-プロピレンリン酸エステルジアミド（カタログ番号５０−１８−０）であり、構造：
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を持つ。
【０１１４】
プレドニゾン（メチコルテン、ステラプレド（Sterapred）、ステラプレドＤＳ（Sterapred DS）、レトロコルチンコルチン、コリソン、コルタンシル、ダコルチン（Dacortin）デコルチン、デルタコルテン（Deltacortene）、デルタコルトン（Deltacortone）、デルタソン（Deltasone）、ジアドレソン、エンコルトン、ホスタコルチン、メチコルテン、オラソン、レクトデルト、ソン（Sone）又はウルトラコルテン）は合成副腎皮質ステロイド薬である（米国特許第２８９７２１６号；米国特許第２８３７４６４号；米国特許第３１３４７１８号；米国特許第２５７９４７９号）。プレドニゾンは、肝臓中でプロドラッグから１１−ヒドロキシルアナログのプレドニゾロン(ＣＡＳ登録番号５０−２４−８）に転換され、主にグルココルチコイド効果を持つ。プレドニゾンは経口的に又は注射によって投与されうる。プレドニゾンは特に免疫抑制剤として効果的であり、自己免疫疾患、炎症性疾患（例えば重篤な喘息、アレルギー、ポイズンアイビー皮膚炎、ループス、関節リウマチ、及びクローン病、及び臓器移植の拒絶反応の予防と治療）の治療に用いられる。プレドニゾンは、急性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、及び多発性骨髄腫を含む癌の治療に用いられる。プレドニゾンは、１７-ヒドロキシ-１７-(２-ヒドロキシアセチル)-１０,１３-ジメチル-７,８,９,１０,１２,１３,１４,１５,１６,１７-デカヒドロ-６Ｈ-シクロペンタ[ａ]フェナントレン-３,１１-ジオン；又は１７,２１-ジヒドロキシプレグナ-１,４-ジエン-３,１１,２０-トリオン；１,４-プレグナジエン-１７α、２１-ジオール-３,１１,２０-トリオン；(ＣＡＳ番号５３-０３-２)であり、構造：
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を持つ。
【０１１５】
メルファラン（Ｌ−フェニルアラニンマスタード；アラニンナイトロジェンマスタード；Ｌ−ＰＡＭ；メルファラン；Ｌ−サルコリシン；ＮＳＣ−８８０６；ＣＢ−３０２５；ＡＬＫＥＲＡＮＲ(登録商標)（グラクソ・スミスクライン）；サルコクロリン）は、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤タイプの化学療法剤である（米国特許第３０３２５８４号；米国特許第３０３２５８５号）。メルファランは、多発性骨髄腫、卵巣癌及びメラノーマを治療するために主に使用される（IARC Monographs(1975)9:167-180；Furner等(1980)Cancer Treat. Rep.64:559-574）。メルファランは、２-アミノ-３-[４-[ビス(２-クロロエチル)アミノ]フェニル]-プロパン酸；４-[ビス(２-クロロエチル)アミノ]-Ｌ-フェニルアラニン；又はｐ-ジ(２-クロロエチル)アミノ-Ｌ-フェニルアラニン（ＣＡＳ登録番号１４８−８２−３）であり、構造：
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を持つ。
【０１１６】
レナリドミド（レブリミド(登録商標)、ＣＣ５０１３、レビミド、Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｉｎｃ．）はサリドマイドの誘導体で、炎症障害及び癌の両方を治療するために２００４年に紹介された（米国特許第５６３５５１７号、米国特許第６２８１２３０号）。直接的な抗腫瘍効果、腫瘍細胞に対する微小環境サポートの阻害、及び免疫調節の役割を含む複数の作用機序がある。インビトロでは、レナリドミドは、骨髄間質細胞のサポートの阻害によって、抗アンギオテンシン及び抗破骨細胞活性化効果によって、及び免疫調節活性によって、腫瘍細胞アポトーシスを直接的又間接的に誘導する。レナリドミドは、サリドマイドが受け入れられている治療様式である多発性骨髄腫の治療剤として最初は意図されていたが、骨髄異形成症候群として知られている血液疾患のクラスにおいても効能を示した（Richardson等(2002) Blood 100:3063；Bartlett等(2004)Nature Rev.4:314-322；Mitsiades等(2004) Curr. Opin. Invest.Drugs 5:635-647；Armoiry等 (2008) J of Clin Pharmacy&Therapeutics 33:219-226；List等(2005)N. Engl. Jour. Med. 352:549-57）。レナリドミドは、３-(４-アミノ-１-オキソイソインドリン-２-イル)ピペリジン-２,６-ジオン；３-(４-アミノ-１,３-ジヒドロ-１-オキソ-２Ｈ-イソインドール-２-イル)-２,６-ピペリジンジオン；１-オキソ-２-(２,６-ジオキソピペリジン-３-イル)-４-アミノイソインドリン（ＣＡＳ登録番号１９１７３２−７２−６）であり、構造：
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を持つ。
【０１１７】
ボルテゾミブ（ＭＧ−３４１、ＰＳ−３４１、ベルケイド（登録商標）、Millenium Pharm.）は、再発性多発性骨髄腫及びマントル細胞リンパ腫の治療のために米国で承認されたボロン酸プロテアソーム阻害剤である（国際公開第９６／１３２６６号；米国特許第５７８０４５４号；米国特許第６０８３９０３号；米国特許第６２９７２１７号；米国特許第６６１７３１７号；米国特許第６７１３４４６号；米国特許第６７４７１５０号；米国特許第６９５８３１９号；米国特許第７１１９０８０号）。ボルテゾミブ中のホウ素原子は、２６Ｓプロテアソームの触媒部位に高い親和性及び特異性でもって結合する。正常細胞では、プロテアソームは、ユビキチニル化タンパク質の分解によりタンパク質の発現及び機能を調節し、また異常な又はミスフォールドタンパク質の細胞を浄化する（Adams等(2004)Cancer Invest22(2):304-11；Bonvini (2007). Leukemia 21(4):838-42）。ボルテゾミブは、[(１Ｒ)-３-メチル-１-({(２Ｓ)-３-フェニル-２-[(ピラジン-２-イルカルボニル)アミノ]プロパノイル}アミノ)ブチル]ボロン酸；(Ｒ)-３-メチル-１-((Ｓ)-３-フェニル-２-(ピラジン-２-カルボキサミド)プロパンアミド)ブチルボロン酸；又は[(１Ｒ)-３-メチル-１-[[(２Ｓ)-１-オキソ-３-フェニル-２-[(ピラジニルカルボニル)アミノ]プロピル]アミノ]ブチル]-ボロン酸（ＣＡＳ登録番号１７９３２４−６９−７）であり、構造：
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を持つ。
【０１１８】
ラパマイシン（シロリムス、ラパミューン（登録商標））は、臓器移植における拒絶反応の防止するために使用される免疫抑制剤で、特に腎臓移植に有用である。ラパマイシンは、ラパ・ヌイと呼ばれる島（イースター島として、より知られている島）の土壌サンプルにおいて細菌ストレプトマイセス・ハイグロスコピカスが産生したマクロライド系抗生物質である（Pritchard DI (2005).Drug Discovery Today 10(10):688-691）。ラパマイシンは、インターロイキン２（ＩＬ−２）に対する応答を阻害し、それにより、Ｔ及び造血系の活性化を阻害する。ラパマイシンの作用機序は細胞質ゾルタンパク質のＦＫ結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）に結合することである。ラパマイシン−ＦＫＢＰ１２複合体は、ｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣ１）に直接結合することによりラパマイシン（ｍＴＯＲ）経路の哺乳動物標的を阻害する。ｍＴＯＲはまたＦＲＡＰ（ＦＫＢＰ−ラパマイシン関連タンパク質）又はＲＡＦＴ（ラパマイシン及びＦＫＢＰ標的(rapamycin and FKBP target)）とも呼ばれる。ラパマイシンアナログ（「Ｒａｐａｌｏｇｓ」）は、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９、ワイス）、エベロリムス（ＲＡＤ００１、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、デフォロリムス（ＡＰ２３５７３、ＭＫ−８６６９、アリアド、メルク）が含まれる。ラパマイシンは、(３Ｓ,６Ｒ,７Ｅ,９Ｒ,１０Ｒ,１２Ｒ,１４Ｓ,１５Ｅ,１７Ｅ,１９Ｅ,２１Ｓ,２３Ｓ,２６Ｒ,２７Ｒ,３４ａＳ)-９,１０,１２,１３,１４,２１,２２,２３,２４,２５,２６,２７,３２,３３,３４,３４ａ-へキサデカヒドロ-９,２７-ジヒドロキシ-３-[(１Ｒ)-２-[(１Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)-４-ヒドロキシ-３-メトキシシクロヘキシル]-１-メチルエチル]-１０,２１-ジメトキシ-６,８,１２,１４,２０,２６-ヘキサメチル-２３,２７-エポキシ-３Ｈ-ピリド[２,１-ｃ][１,４]-オキサアザシクロヘントリコンチン-１,５,１１,２８,２９(４Ｈ,６Ｈ,３１Ｈ)-ペントン（ＣＡＳ登録番号５３１２３−８８−９）であり、構造：
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を持つ。
【０１１９】
シタラビン（シトシンアラビノシド、アラＣ、シトサールＵ（登録商標）、アップジョン）は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及びＮＨＬを含む造血器腫瘍の治療に主として使用される（米国特許第３１１６２８２号；Shen等(1965)J. Org. Chem. 835)；Capizzi,R.L. (1996)Invest. New Drugs 14:249-256;Grant S. (1998)Adv. Cancer Res. 72:197-233）。シタラビンは、４-アミノ-１-((２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ,５Ｒ)-３,４-ジヒドロキシ-５-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン-２-イル)ピリミジン-２(１Ｈ)-オン；４-アミノ-１-β-Ｄ-アラビノフラノシル-２(１Ｈ)-ピリミジノン；１-β-Ｄ-アラビノフラノシルシトシン；（ＣＡＳ登録番号１４７−９４−４）であり、構造：
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を持つ。
【０１２０】
ＣＨＯＰは、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾン／プレドニゾロンを含む非ホジキンリンパ腫の治療に使用される化学療法レジメンの頭文字である（Fisher等(1993) N Engl J Med 328(14):1002-6）。ＣＨＯＰはよく４週間サイクルで投与される。一般的なレジメンは少なくとも６サイクルである。
【０１２１】
生物学的評価
ある種の式Ｉの化合物は、ＰＩ３キナーゼアイソフォームに特異的に結合し、腫瘍細胞の増殖を阻害する（米国特許出願公開第２００８／０２０７６１１号；米国特許出願公開第２００８／００３９４５９号；米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号；米国特許出願公開第２００８／００７６７５８号；米国特許出願公開第２００８／０２４２６６５号；米国特許出願公開第２００８／０２６９２１０号）。ある種の例示的な式Ｉの化合物は、１０ｎＭ未満のＰＩ３Ｋ結合活性ＩＣ５０値を有する。ある種の式Ｉの化合物は１００ｎＭ未満の腫瘍細胞ベース活性ＥＣ５０値を有する。
【０１２２】
ここに記載される式Ｉの化合物と化学療法剤のある種の例示的併用治療剤を、腫瘍細胞に対するインビトロ活性についてアッセイした（実施例１５）。ある種の式Ｉの化合物は、１マイクロモル未満のＩＣ５０でｐ１１０αアイソフォームに結合し、マウス異種移植モデルにおいて単剤でのインビボ腫瘍増殖阻害を示す。従って、式Ｉの化合物は、単剤として、又は一又は複数の化学療法剤との併用療法において、異常な細胞増殖、機能又は挙動から生じる疾患又は障害を治療するために使用することができる。
【０１２３】
ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＢＲＡＦ及びＰＩＫ３ＣＡにおける変異は、癌細胞において増殖及び抗アポトーシスシグナル伝達を媒介する主要経路の二つを活性化する。而して、変異の存在は特定の腫瘍内の所定の経路に対する病理学的な活性化及び依存性のサインとなりうるから、これらの遺伝子中の変異は、これらの経路内の鍵となるノードを阻害する標的薬剤のための比較診断試験を構成するかもしれない。由来の多様な組織の細胞株の大きなパネルにおけるこれら遺伝子及び他のものに対する変異状態は、ＭＥＫ及びＰＩ３キナーゼの選択的阻害剤に対する応答と相関を生じうる。加えて、変異の検出は、少量の不均一な固定された腫瘍組織からなる臨床試料で実施され得、これは、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＢＲＡＦ及びＰＩ３キナーゼ中の最も多い置換に対してアレル特異的Ｔａｑｍａｎアッセイを使用して分析されうる。
【０１２４】
図１は、式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）で処置した（右カラム）及び未処置（左カラム）の細胞ＤｏＨＨ２（リンパ腫細胞）、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２（リンパ腫細胞）、ＯＰＭ２（多発性骨髄腫細胞）、及びＵ２６６（多発性骨髄腫細胞）のＦＡＣＳフローサイトメトリーにより測定された薬力学（ＰＤ）マーカーの減少を示している。実施例１８は、ＧＤＣ−０９４１処置後のホスホ−ＡＫＴ（ｐ−Ａｋｔ）及びｐ−Ｓ６リボソームタンパク質（ｐ−Ｓ６ＲＰ）の細胞内検出のためのＦＡＣＳプロトコールを提供する。細胞は５μＭのＧＤＣ−０９４１を用いてインビトロで４時間処置した。細胞株の３つが、高レベルのｐ−ＡＫＴによって証明される通り、ＰＩ３Ｋ経路活性化の証拠を示し、４つ全てが、未処置細胞（左カラム）での高レベルのホスホＳ６リボソームタンパク質シグナルによって証明される通り、遠位経路活性化の証拠を示す。右カラムでは、ＧＤＣ−０９４１で処置された細胞がｐ−ＡＫＴシグナルを消失させ、ｐ−Ｓ６ＲＰシグナルを減少又は消失させた。ｐＳ６ｒｐに対する残りのシグナルは、ＰＩ３Ｋ活性が部分的にこのリン酸化事象の原因であるというモデルと一致する。まとめると、これらのデータは、ＰＩ３ｋ経路がこれらの細胞タイプにおいて活性化され、ＧＤＣ−０９４１がインタクトな細胞中のＰＩ３ｋ経路に対して強力な阻害活性を有していることを示している。
【０１２５】
図２は、５μＭのＧＤＣ−０９４１を用いてインビトロで４時間、処置された細胞株中でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びウエスタンブロットにより測定した細胞ＤｏＨＨ２、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＯＰＭ２及びＵ２６６における薬力学的（ＰＤ）マーカーｐ−ＡＫＴ、ｐ−Ｓ６ＲＰ、ｐ−Ｂａｄの減少を示す。実施例１７は、ＧＤＣ−０９４１処置後のＢ細胞及び骨髄腫細胞株のｐ−Ａｋｔ、ｐ−ＢＡＤ及びｐ−Ｓ６リボソームタンパク質のウェスタンブロットによる検出のためのプロトコールを示す。細胞を示されたように処置し、ライセートをウェスタンブロット法により分析する。βアクチンブロット法は、各レーンにおよそ等しいライセートの負荷を示す。細胞株の３種は、高いレベルのｐ−ＡＫＴにより証明されるようにＰＩ３Ｋ経路の活性化の証拠を示し、４種全てが未処置細胞における高いレベルのｐ−Ｓ６ＲＰシグナルにより証明されるように遠位の経路活性化の証拠を示す。ｐ−ＡＫＴ及びｐ−Ｓ６ＲＰ双方のシグナルはＧＤＣ−０９４１処置により有意に減弱され（存在する場合）、ＰＩ３Ｋ経路がこれらの細胞内で活性化されており、ＧＤＣ−０９４１がインタクトな細胞内の経路に有意な阻害性活性を有していることを示している。両ＰＤマーカーのレベルは同じ順番に従っており、図１及び図２間でよく相関している。
【０１２６】
吸収、分布、代謝、及び排出（ＡＤＭＥ）の薬力学的及び薬物動態的な性質を、Ｃａｃｏ−２透過性、肝クリアランス、チトクロムＰ４５０阻害、チトクロムＰ４５０誘導、血漿タンパク質結合、ｈＥＲＧチャネル遮断を含むアッセイにより、ある種の例示的化合物に対して測定した。
【０１２７】
本発明は、癌の治療のために組合わせて使用される化合物を決定する方法であって、ａ）式Ｉを有する化合物及び化学療法剤の併用治療剤をインビトロ腫瘍細胞株に投与し、ｂ）相乗又は非相乗効果を測定することを含む方法を含む。
【０１２８】
インビトロ細胞増殖アッセイ
式Ｉの例示的化合物の細胞傷害性又は細胞分裂阻害活性を、細胞培養培地中に増殖する哺乳動物腫瘍細胞株を樹立し、式Ｉの化合物を加え、細胞を約６時間から約５日間の期間培養し；細胞生存率を測定することにより、測定した（実施例１５）。細胞ベースインビトロアッセイは、生存率、つまり、増殖（ＩＣ５０）、細胞傷害性（ＥＣ５０）、及びアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定するために使用した。
【０１２９】
式Ｉの化合物と化学療法剤の組合わせのインビトロでの効力は、実施例１５の細胞増殖アッセイ；Ｐｒｏｍｅｇａ社，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩから商業的に入手可能なＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイによって測定した。この均一アッセイ法は、鞘翅目ルシフェラーゼの組換え発現（米国特許第５５８３０２４号；米国特許第５６７４７１３号；米国特許第５７００６７０号）に基づき、代謝的に活性な細胞の指標であるＡＴＰの存在を定量することに基づき（Crouch等(1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88;米国特許第６６０２６７７号）、培養中の生細胞の数を判定する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは９６又は３８４ウェル形式で実施し、自動化高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）（Cree等(1995) AntiCancer Drugs6:398-404）に受け入れられるものとした。均一アッセイの手順は、血清補填培地で培養された細胞へ単一試薬（CellTiter-Glo（登録商標）試薬）を直接的に添加することを含む。細胞の洗浄、培地の除去、及び複数回のピペット操作工程は必要とされない。該システムは、試薬を加え、混合した後、１０分で３８４ウェル形式中のわずか１５細胞／ウェルを検出する。
【０１３０】
均一「ミックス添加手段（add-mix-measure）」形式は、存在するＡＴＰの量に比例した細胞溶解及び発光シグナルの生成を生じる。ＡＴＰの量は培地中に存在する細胞の数に直接的に比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ-Ｇｌｏ（登録商標）は、ルシフェラーゼ反応により生成される「グロータイプ」の発光シグナルを生成し、これは、使用される細胞タイプ及び培地に応じて、一般に５時間より長い半減期を有する。生細胞は相対発光単位（ＲＬＵ）に反映される。基質のカブトムシルシフェリンは、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱カルボキシル化され、ＡＴＰからＡＭＰへの転換と光子の発生を同時に伴う。延長された半減期は、試薬注射器を使用する必要性を排除し、複数プレートの連続又はバッチモードのプロセシングに対して柔軟性をもたらす。この細胞増殖アッセイは、例えば９６又は３８４ウェル形式のような様々な複数ウェル形式で使用することができる。発光出力は、経時的に測定される相対発光単位（ＲＬＵ）として提供される。
【０１３１】
式Ｉの例示的化合物及び化学療法剤との組合わせの抗増殖効果は、図３から６における腫瘍細胞株に対するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ-Ｇｌｏ（登録商標）アッセイによって測定した（実施例１５）。試験された化合物及び併用剤に対してＥＣ５０値を樹立した。インビトロ細胞効力活性の範囲は、約１００ｎＭから約１０μＭまでであった。
【０１３２】
特定の細胞に対する式Ｉの化合物及び化学療法剤の個々に測定されたＥＣ５０値を併用ＥＣ５０値と比較する。コンビネーションインデックス（ＣＩ）スコアはＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法（Chou, T. and Talalay, P. (1984) Adv. Enzyme Regul. 22:27-55）により計算する。０．８未満のＣＩは相乗効果を示す。０．８から１．２の間のＣＩは相加効果を示す。１．２を越えるＣＩはアンタゴニスト作用を示す。相乗効果の強さはＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙに従って評価される。図４から６における所定の併用治療剤は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び多発性骨髄腫を含む腫瘍タイプの細胞株でのインビトロ細胞増殖アッセイにおいて驚くべき予期しなかった相乗的な性質を示す。他の組合わせは相乗作用を示さず；相加作用又はアンタゴニスト作用のみを示すだけである。所定の組合わせは一又は複数の腫瘍タイプでは相乗的であるが、他のものについてはそうではない。インビトロ細胞増殖アッセイで証明される相乗効果は、限定しないが、ヒト患者のリンパ腫及び多発性骨髄腫を含む造血性癌の治療において対応する相乗効果を予想する根拠を提供する。
【０１３３】
図３は、Ｂ−ＮＨＬ細胞系列ＤｏＨＨ２に対するＰＩ３Ｋ単一剤阻害剤の式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）及びデキサメタゾン（Ｄｅｘ）とキソルビシン（Ｄｏｘ）との組合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Cell-Titer Glo, Promega）は、様々な阻害剤濃度に対して生存細胞を測定した（１０−５から１０の相対単位の以前に（およそ）決定されたＩＣ５０、式Ｉａ、デキサメタゾン、ドキソルビシン及び式Ｉａとデキサメタゾンの組合わせ；式Ｉａとドキソルビシンの組み合わせ）。阻害剤の最も高い濃度における細胞死滅の度合いはある薬剤と他の薬剤との間で様々であった。ドキソルビシンの場合では、ＧＤＣ−０９４１の添加は用量応答曲線の左への僅かなシフトを引き起こし、これは併用療法への細胞の感受性の増加を示している。〜０．７５のコンビネーションインデックス（ＣＩ）がこの組合わせに対して計算され、これは、相加性又は相乗性を示している。デキサメタゾン単剤の相対的に不能な活性は高いＩＣ５０値並びに該アッセイにおけるシグナル減少の弱い度合いに反映され、おそらく細胞分裂阻害効果又はほんの弱い細胞傷害活性の証拠となる。しかしながら、ＧＤＣ−０９４１との組合わせでは、驚くべきことに、用量応答曲線の左方向への顕著なシフトが全濃度で得られた。ＩＣ５０点で計算したＣＩ値は〜３．０であり、これは試験した薬剤間では滅多にない、予想できず、予期されない強い相乗性を示している。
【０１３４】
式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）は、表２によれば、多くのＢリンパ腫細胞株に細胞傷害性であり、単剤として強いアポトーシスを誘導する。
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【０１３５】
表２におけるデータは、ＧＤＣ−０９４１が臨床的に達成可能な用量で、広範囲に細胞傷害性でありリンパ腫細胞株に対して強力であることを示している。
【０１３６】
図２におけるもののような実験は、更なる細胞株及びチオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びデキサメタゾンとのＧＤＣ−０９４１の組合わせにまで拡張した。コンビネーションインデックス（ＣＩ）値は、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの方法（表３）により計算した。併用された場合にＧＤＣ−０９４１がこれらの他の薬剤をアンタゴナイズしたことを示すＣＩ値＞１を見出すことは何れの場合にもなかった。一般に、ＧＤＣ−０９４１はこれらの他の薬剤と良好に組合わされ、少なくとも相加性を示す。デキサメタゾンとの組合わせに対しては、およそ０．３又はそれ以下の驚くべき非常に有意なＣＩ値が、試験された全ての細胞株で得られた。
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【０１３７】
図４は、様々な濃度（１０−５から１０μモル濃度）の式Ｉａ、ＧＤＣ−０４６４、及びＬＹ２９４００２に対して生存細胞を測定するインビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Cell-Titer Glo（商標登録）、Promega Corp., Madison, WI）によって決定された患者ＮＨＬ６００由来の原発性濾胞性リンパ腫細胞に対するＰＩ３Ｋ単剤阻害剤の効果を示す。細胞株傷害性のデータはこれらの化合物の効力をよく過大評価するととられるので、データは、式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）が原発性ヒト癌細胞に対して驚くべきかつ予期しない程の強さを有していることを示している。ＧＤＣ−０４６４（ジェネンテック社）は強力なチエノピリミジンＰＩ３Ｋ阻害剤である（米国特許出願公開第２００８／００７６７５８号）。ＬＹ２９４００２（イーライリリー社，ＣＡＳ登録番号１５４４４７−３６−６）もまたＰＩ３キナーゼの強力な阻害剤である（国際公開第２００３／０３５０９９号）。
【０１３８】
図５は、患者ＮＨＬ６４０−Ａ０５５由来の原発性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞に対するＰＩ３Ｋ単剤阻害剤、式Ｉａ（ＧＤＣ−９４１）、及びドキソルビシンとの組合わせの効果を示す。細胞生存率は、インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Cell-Titer Glo（商標登録））によって、様々な濃度（１０−５から２０μモル濃度）の式Ｉａ、ドキソルビシン、及び式Ｉａとドキソルビシンの組合わせに対して測定した。アントラサイクリン類は殆どの化学療法レジメンの骨格であり、よって高い活性の化合物であると考えられる。これらの結果は、インビトロでのこの原発性腫瘍試料では、ＧＤＣ−０９４１がドキソルビシンよりも有意に強力であり、インビトロで細胞株から得られた結果と驚く程対照的に、その組合わせが単剤ＧＤＣ−０９４１より有意に良好ではなかったことを示している。
【０１３９】
図６は、様々な薬剤濃度（その以前決定したＩＣ５０値の関数として表現した、つまり「１」＝ＩＣ５０応答を生じる［薬剤］）の式Ｉａ、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）及び固定比での式Ｉａとデキサメタゾンの組合わせに対して生存細胞を測定するインビトロ細胞増殖アッセイ（Cell-Titer Glo（登録商標））による、多発性骨髄腫ＯＰＭ２に対する、ＰＩ３Ｋ単剤阻害剤の式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、及びデキサメタゾンとの組合わせの効果を示す。相対的に弱いデキサメタゾンへの応答は、効力と応答の度合いの双方の点で、ＧＤＣ−０９４１との組合わせに大きく亢進され、二薬剤間の強い相乗性を示している０．４５のＣＩ値が得られている。表４は、式Ｉａ化合物（ＧＤＣ−０９４１）及びデキサメタゾン（Ｄｅｘ）、ドキソルビシン（Ｄｏｘ）、メルファラン、レナリドミド、及びボルテゾミブから選択される化学療法剤の併用治療剤による、様々な多発性骨髄腫細胞株の治療のＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法により計算されたコンビネーションインデックスを示している。所定の組合わせは相乗性（ＣＩ＜０．８）、相加性（０．８−１．２）、又はアンタゴニスト作用（＞１．２）を示している。これらのデータは、ＧＤＣ−０９４１が全ての化学療法剤と等しく良好には併用されないことを示している。ＧＤＣ−０９４１及びボルテゾミブから得られたＣＩは一般に０．８かそれ以上の範囲である一方、ＧＤＣ−０９４１とデキサメタゾンで得られるＣＩ値はそれより低く、試験した細胞株にわたって相乗的な応答とより支配的な応答の双方を示している。
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【０１４０】
表５は、式Ｉａ化合物ＧＤＣ−０９４１及び化学療法剤ビンクリスチンの併用治療剤による様々なリンパ腫細胞株のＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法により計算されたコンビネーションインデックスを示す。ある種の組合わせは相乗性（ＣＩ＜０．８）、相加性（０．８−１．２）、又はアンタゴニスト作用（＞１．２）を示している。データは、ＧＤＣ−０９４１が特にＢＪＡＢ、ＷＳＵ−ＤＨＬ４及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２においてビンクリスチンとかなり好ましく併用されることを示している。ＣＩ値は、用量応答曲線の異なる３点、ＥＤ５０、ＥＤ７５及びＥＤ９０で示されており、類似のＣＩ値が用量応答曲線上のこれらの異なった点で得られるという事実は、データが強力で、全応答曲線がシフトして薬剤の併用の場合に増加した生物学的応答を生じることを示している。
【０１４１】
表６は、式Ｉａ化合物（ＧＤＣ−０９４１）及びデキサメタゾンの併用治療剤による、増殖因子ＩＬ６及びＩＧＦ−１の存在下又は非存在下における様々な造血器腫瘍細胞株の治療のＣｈｏｕ＆Ｔａｌａｌａｙの方法により計算されたコンビネーションインデックスを示す。ある種の組合わせは、相乗性（ＣＩ＜０．８）、相加性（０．８−１．２）又はアンタゴニスト作用（＞１．２）を示している。データは、ＧＤＣ−０９４１がデキサメタゾンとかなり好ましく併用されることを示している。ＣＩ値は、用量応答曲線の異なる３点、ＥＤ５０、ＥＤ７５及びＥＤ９０で示されており、類似のＣＩ値が用量応答曲線上のこれらの異なった点で得られるという事実は、データが強力で、全応答曲線がシフトして薬剤の併用の場合に増加した生物学的応答を生じることを示している。ＭＭ１．ｓ細胞はデキサメタゾンに感受性であることが知られており、ＧＤＣ−０９４１と併用する場合明らかな相乗性を示した。この細胞株の変異体ＭＭ１．ｒはデキサメタゾン耐性であることが知られており、この性質に一致して、全体的には低いＣＩ値が観察された。サイトカインＩＬ−６及びＩＧＦ−１は多発性骨髄腫の骨髄微小環境のおける主要な増殖因子であり、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達経路を介したシグナルの媒介に関与する。増殖因子ＩＬ−６及びＩＧＦ−１は一般に化学療法抵抗性をもたらすと考えられ、各細胞株において、サイトカインの添加はコンビネーションインデックス値を増加させた。
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【０１４２】
表７は、式Ｉａ化合物（ＧＤＣ−０９４１）とレナリドミドの併用治療剤による、増殖因子ＩＬ６及びＩＧＦ−１の存在下又は非存在下における様々な造血器腫瘍細胞株の治療のＣｈｏｕ＆Ｔａｌａｌａｙの方法により計算されたコンビネーションインデックスを示す。ある種の組合わせは、相乗性（ＣＩ＜０．８）、相加性（０．８−１．２）又はアンタゴニスト作用（＞１．２）を示している。データは、ＧＤＣ−０９４１がレナリドミドとかなり好ましく併用されることを示している。ＣＩ値は、用量応答曲線の異なる３点、ＥＤ５０、ＥＤ７５及びＥＤ９０で示されており、類似のＣＩ値が用量応答曲線上のこれらの異なった点で得られるという事実は、データが強力で、全応答曲線がシフトして薬剤の併用の場合に増加した生物学的応答を生じることを示している。増殖因子ＩＬ−６及びＩＧＦ−１は一般に化学療法抵抗性をもたらすと考えられ、各細胞株において、サイトカインの添加はコンビネーションインデックス値を増加させた。
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【０１４３】
ＯＰＭ２及びＨ９２９を含む多発性骨髄腫及びＡＭＬ細胞株における、単剤の図Ｉａ及び図Ｉｂの化合物、及び（ｉ）図Ｉａの化合物（ＧＤＣ−０９４１）とラパマイシン、及び（ｉｉ）図Ｉｂの化合物とラパマイシンの組合わせに対するアポトーシス応答をアネキシンＶ−ＦＡＣＳ分析によって測定した。絶対ＩＣ５０を測定するためのスクリーニング条件は：１日目−１０％のＦＢＳを含む培地中の３８４ウェルプレートに１００００細胞／ウェルで細胞を播種し；２日目−細胞へ示した化合物のセットアップを投与することからなる。ラパマイシンを図Ｉａ又は図Ｉｂの化合物と組合わせて使用した場合、培地中のラパマイシン濃度は０．１ｕＭとした：５日目−Ｃｅｌｌｔｉｔｅｒ-Ｇｌｏアッセイ。測定したアポトーシス集団は、（ｉ）及び（ｉｉ）の併用での相乗性を証明した。
【０１４４】
ＡＭＬ患者由来の芽細胞において、式ＩａのＧＤＣ−０９４１と化学療法剤シタラビン又はダウノルビシンの併用は、単剤ＧＤＣ−０９４１と比べて向上した抗白血病活性と、また向上したアポトーシス効果を示し、各々３０％及び２２％のみの生細胞が残存した。
【０１４５】
インビボでの腫瘍異種移植片の有効性
本発明の併用の有効性は、齧歯類に癌細胞の同種移植片又は異種移植片を移植し、腫瘍を持つ動物を併用剤によって治療することによってインビボで測定しうる。細胞株、腫瘍細胞における所定の変異の存在又は不存在、式Ｉの化合物及び化学療法剤の投与シーケンス、投与レジメン、及び他の要因に依存して、様々な結果が予想される。対象マウスを薬物（薬物群）又はコントロール（ビヒクル）で処置し、数週間又はそれ以上にわたりモニターし、腫瘍倍加までの時間、殺細胞の対数値、及び腫瘍阻害を測定した（実施例１６）。
【０１４６】
図７は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、ＣＨＯＰ、及び式Ｉａ７３ｍｇ／ｋｇとリツキシマブ５ｍｇ／ｋｇの組合わせ、式Ｉａ７３ｍｇ／ｋｇとＣＨＯＰの組合わせを０日目に投与した、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２リンパ腫腫瘍異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける２０日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには０日目に開始してＣＨＯＰを投与し、０、７、及び１４日目にリツキシマブを投与する一方、式Ｉａは２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ＣＨＯＰレジメン：シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）。シクロホスファミド、ドキソルビシン及びビンクリスチンは０日目に一回投与し、プレドニゾンは０、１、２、３及び４日目に投与した。このモデルにおいて、ＧＤＣ−０９４１及びＣＨＯＰベースの併用化学療法は中程度の活性のみであった。リツキシマブ治療は、ビヒクルと比して有意に差異があった（コントロール・ダネット検定によりｐ＜０．０１）。ＧＤＣ−０９４１とリツキシマブの組合わせはＧＤＣ−０９４１より有意に良好であったが、リツキシマブ単独とは対数順位分析による差異はなかった。ＧＤＣ−０９４１とＣＨＯＰの組合わせは何れの薬剤単独と比較しても有意な改善をもたらした。
【０１４７】
図８は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ中０．２％のＴｗｅｅｎ８０）、７３ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、ＣＨＯＰ及び式Ｉａ７３ｍｇ／ｋｇとリツキシマブ５ｍｇ／ｋｇの組合わせ、及び式Ｉａ１００ｍｇ／ｋｇとＣＨＯＰの組合わせを０日目に投与した、ＤｏＨＨ−２腫瘍異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける３４日にわたる平均腫瘍体積を示す。マウスにはリツキシマブを０、７及び１４日目（ｑｗｋ×３）に静脈内投与し、ＣＨＯＰを１日目に開始する一方、式Ｉａは２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ＣＨＯＰレジメン：シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）。シクロホスファミド、ドキソルビシン及びビンクリスチンは０日目に一回投与し、プレドニゾンは０、１、２、３及び４日目に投与した。ＣＨＯＰ化学療法又はＧＤＣ−０９４１単剤療法コホートはビヒクルとは有意に異なっていた。リツキシマブ単独療法は比較的より効果的であり、治療中に２例の部分奏功と４例の完全奏功を生じた。ＧＤＣ−０９４１はリツキシマブ活性を有意にはアンタゴナイズしなかったが、更なる抗腫瘍活性をもたらさなかった。これに対して、ＣＨＯＰ化学療法とのＧＤＣ−０９４１の組合わせは何れの単剤の活性に対しても非常に顕著な利益の増加をもたらし、２例の部分奏功と２例の完全奏功を生じた。
【０１４８】
図９は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、ＣＨＯＰ、及び式Ｉａ７５ｍｇ／ｋｇとＣＨＯＰの組合わせ、式Ｉａ７５ｍｇ／ｋｇとシクロホスファミド３０ｍｇ／ｋｇの組合わせ、式Ｉａ７５ｍｇ／ｋｇとドキソルビシン２．４７ｍｇ／ｋｇの組合わせ、式Ｉａ７５ｍｇ／ｋｇとビンクリスチン０．３８ｍｇ／ｋｇの組合わせ、及び式Ｉａ７５ｍｇ／ｋｇとプレドニゾン０．１５ｍｇ／ｋｇの組合わせを０日目に投与した、ＤｏＨＨ−２腫瘍異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける２７日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには、０日目にＣＨＯＰを、０日目にシクロホスファミドを、０日目にドキソルビシンを、０日目にビンクリスチンを、０−４日目に毎日プレドニゾンを投与する一方、式Ｉａは２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ＣＨＯＰ成分レジメンは、シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄｘ１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）であった。この実験は図８の結果を確認し拡張し、ＧＤＣ−０９４１及びＣＨＯＰがモデルにおいて各々類似した中程度に過ぎない活性を有していることを示している。前のように、ＧＤＣ−０９４１はＣＨＯＰと組合わさると抗腫瘍活性の非常に顕著な増加を生じせしめる。驚くべきことに、これはインビトロ実験からは予想できなかったので、ＧＤＣ−０９４１及びＣＨＯＰ間で留意される相乗性の本質的に全てがただＧＤＣ−０９４１とビンクリスチンの組合わせに起因している可能性がある一方、ＧＤＣ−０９４１と対にして試験したＣＨＯＰの他の３つの成分は増加した効力を示さなかった。
【０１４９】
図１０は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７３ｍｇ／ｋｇ式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、ＣＨＯＰ、及び式Ｉａ７３ｍｇ／ｋｇとＣＨＯＰの組合わせを０日目に投与した、ＢＪＡＢリンパ腫腫瘍異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスには、０日目にＣＨＯＰを投与する一方、式Ｉａとビヒクルは２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ＣＨＯＰレジメン：シクロホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ドキソルビシン（２．４７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、ビンクリスチン（０．３７５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、プレドニゾン（０．１５ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ｑｄ×５）。シクロホスファミド、ドキソルビシン及びビンクリスチンは０日目に一回投与し、プレドニゾンは０、１、２、３及び４日目に投与した。これらのデータは、ＢＪＡＢリンパ腫モデルにおいては、ＧＤＣ−０９４１又はＣＨＯＰ化学療法は中程度の活性しか有さないこと、及び併用は統計的有意性に達する群はないが、活性を増加させたことを示している。
【０１５０】
図１１は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、７５ｍｇ／ｋｇの式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）、５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ及び式Ｉａ７５ｍｇ／ｋｇと５ｍｇ／ｋｇリツキシマブの組合わせを０日目に投与した、ＢＪＡＢリンパ腫腫瘍異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。マウスにリツキシマブを０、７及び１４日目に投与する一方、式Ｉａとビヒクルを２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。図１０におけるように、単剤ＧＤＣ−０９４１はこのＢＪＡＢリンパ腫モデルにおいては中程度の活性しか有していなかった。リツキシマブの活性は単剤ＧＤＣ−０９４１と比して中程度であり、ＧＤＣ−０９４１との併用より更に増加しなかった。この実験では、全ての群は、対数順位分析によりビヒクルより有意に差異がある。
【０１５１】
図１２は、ビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、及び単剤治療：７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）１ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）、２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、ｑｄ×２１）及び１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５日間投与／２日間休薬／４日間投与）を０日目に投与した、ＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける２２日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式１ａのＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ボルテゾミブは０、３、７、１０、１４及び１７日目に静脈内投与した。レナリドミドは２１日間毎日、腹腔内注射により投与した。デキサメタゾンは０から４日目及び７から１０日目に経口的に投与した。この実験により、ＧＤＣ−０９４１の単剤活性は、レナリドミド又はデキサメタゾン単剤による治療と同様であり、これはボルテゾミブの効能の方が上回っていることが確証された。ボルテゾミブ単剤治療は、この実験においては、３例の部分奏功となった。
【０１５２】
図１３は、ビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、単剤治療：７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）；０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）；２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５日間投与／２日間休薬／５日間投与／２日間休薬／５日間投与）；及び３ｍｇ／ｋｇデキサメタゾン（ｐｏ、５日間投与／２日間休薬／５日間投与）；及び：７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）の組合わせ；７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５／２／５／２／５）の組合わせ；及び７３ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）の組合わせを０日目に投与した、多発性骨髄腫ＯＰＭ−２細胞異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける２４日にわたる平均腫瘍体積を示す。式１ａのＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ボルテゾミブは０、３、７、１０、１４及び１７日目に静脈内投与した。レナリドミドは０から４日目、７から１１日目、及び１４から１８日目に腹腔内注射により投与した。デキサメタゾンは０から４日目及び７から１１日目に経口投与した。この実験におけるボルテゾミブの減少させた用量は、ビヒクルのものと差異のない無症候性の応答を生じた。単剤ＧＤＣ−０９４１、レナリドミド、又はデキサメタゾンで治療したコホートは、デキサメタゾンへのＧＤＣ−０９４１の追加は抗腫瘍活性を増加させる傾向にあったが、識別不能で中程度の腫瘍活性を有していた。この結果は先のインビトロ細胞株の実験から予想したものであるが、文献で刊行された先の研究から予想できなかった。
【０１５３】
図３はＢ−ＮＨＬ細胞系列ＤｏＨＨ２におけるＰＩ３Ｋシグナル阻害剤、式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）及びデキサメタゾン（Ｄｅｘ）とキソルビシン（Ｄｏｘ）の組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ、Ｐｒｏｍｅｇａ）では、様々な阻害剤の濃度（１０−５から１０の相関単位である以前（およそ）決定したＩＣ５０、式Ｉａ、デキサメタゾン、ドキソルビシン及び式Ｉａとデキサメタゾンの組み合わせ；式Ｉａとドキソルビシンの組み合わせ）に対する生存細胞を測定した。
１つの薬剤から他の薬剤と様々な阻害剤の最も高い濃度における細胞死の程度を記録した。ドキソルビシンの場合では、ＧＤＣ−０９４１の添加により用量依存曲線は控えめに左にシフトし、これは併用療法によって細胞の感受性が増加したことを指し示す。この組み合わせから計算された組み合わせ指数（ＣＩ）〜０．７５は、相加的又は相乗的であることを指し示す。デキサメタゾン単剤は相対的に活性が不能であり、これは高いＩＣ５０値、並びにアッセイのシグナルの減少程度が小さいところに反映され、おそらく細胞分裂阻害効果又は弱い細胞毒性活性のみ示すと考えられる。
しかしながら、ＧＤＣ−０９４１との組み合わせでは、全濃度から得られた用量依存曲線の左シフトは驚くべきことに、有意に大きかった。ＩＣ５０で計算したＣＩ値は〜０．３であり、これは試験した薬剤の間では滅多になく、予想、予期しない程強く相乗的であることを示す。表２に従うと、式Ｉａ（ＧＤＣ−０９４１）は多くのＢリンパ腫細胞株に細胞毒性であり、単剤で強くアポトーシスを誘導する。
0005709766.tif 000033
【０１５４】
図１５は、ビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、単剤治療：７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）及び３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）；及び７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と０．５ｍｇ／ｋｇボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）の組合わせ；７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）の組合わせを０日目に投与した、多発性骨髄腫ＭＭ１．ｓ細胞異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける４０日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式１ａＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ボルテゾミブは、０、３、７、１０、１４及び１７日目に静脈内投与した。デキサメタゾンは、０から４日目、７から１１日目に経口投与した。ＭＭ１．ｓモデルは、これら単剤及び併用治療に一つの例外を除いて比較的不応性であり；インビトロ実験と一致して、ＧＤＣ−０９４１とデキサメタゾンの併用は単剤成分に比して優れた活性を有していた。驚いたことにまた予期せぬことに、ＧＤＣ−０９４１＋デキサメタゾンのコホートが併用薬治療されている間は、腫瘍が退縮し、７例の部分奏功を生じた。この実験における他の群は奏効を生じなかった。デキサメタゾン治療を１１日目に中止した場合、腫瘍の退縮が止まり、継続されたＧＤＣ−０９４１と一致して、ある速度で成長した。これらのデータは、デキサメタゾンとＧＤＣ−０９４１の組合わせの予期されない効果を明らかに示している。
【０１５５】
図１６は、ビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２１）（０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）単剤治療：７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、２×／ｗｋ×３）、２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５／２／５／２／５）及び３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）；及び７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と０．５ｍｇ／ｋｇのボルテゾミブ（ｉｖ、ｑｄ×３）の組合わせ；７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）と２５ｍｇ／ｋｇのレナリドミド（ｉｐ、５／２／５／２／５）の組合わせ；７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×１４）と３ｍｇ／ｋｇデキサメタゾン（ｐｏ、５／２／５）の組合わせを０日目に投与した、多発性骨髄腫ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞異種移植片を持つ１０匹のマウスのコホートにおける３３日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。式１ａＧＤＣ−０９４１は２１日間毎日、経口的に経管栄養投与した。ボルテゾミブは０、３、７、１０、１４及び１７日目に静脈内投与した。レナリドミドは０から４日目、７から１１日目及び１４から１８日目に腹腔内注射により投与した。デキサメタゾンは０から４日目、７から１１日目に経口的に投与した。Ｈ９２９モデルにおいて、併用群におけるＧＤＣ−０９４１の追加は単剤ボルテゾミブ、レナリドミド及びデキサメタゾンの中程度の活性を有意に増加させた。
【０１５６】
図１７は、ビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２０））０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）；単剤治療：７５ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２０）、２．５ｍｇ／ｋｇ又は４ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×２０）、６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗ×３）；又は併用治療：７５ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２０）＋６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗ×３）又は２．５ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×２０）＋６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｗ×３）を０日目に投与した、予め樹立されたＤｏＨＨ２ヒトリンパ腫細胞株異種移植片を有する一群当たり１０匹のマウスの実験的コホートに対して４０日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ラパマイシンは腫瘍増殖に対して殆ど効果がないか又は有意な効果を示さなかったが、単剤治療においては、腫瘍増殖の用量関連阻害を示す一方、双方の組合わせは腫瘍増殖の有意に亢進された抑制を示した。
【０１５７】
図１８は、ビヒクル（ｐｏ、ｑｄ×２０））０．５％メチルセルロース：ＤＩ水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）；単剤治療：６０ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×２１）、１ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×２１）、６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｄ×２１）；又は併用療法：６０ｍｇ／ｋｇの式ＩａのＧＤＣ−０９４１（ｐｏ、ｑｄ×１８）＋６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｄ×１８）、又は１ｍｇ／ｋｇの式Ｉｂ（ｐｏ、ｑｄ×１８）＋６ｍｇ／ｋｇのラパマイシン（ｉｐ、ｑｄ×１８）の併用を０日目に投与した、予め樹立されたＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ヒトリンパ腫細胞株異種移植片を有する一群当たり１０匹のマウスの実験的コホートにおける２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。単剤治療は腫瘍増殖に殆ど効果は示さない一方、併用治療は腫瘍増殖の有意に亢進された抑制を示す。
【０１５８】
薬学的組成物
本発明の薬学的組成物又は製剤は、式Ｉの化合物、化学療法剤、及び一又は複数の薬学的に許容可能な担体、流動促進剤、希釈剤又は賦形剤の組合わせを含む。
【０１５９】
本発明の式Ｉの化合物及び化学療法剤は、非溶媒和形態並びに水、エタノール等の薬学的に許容可能な溶媒との溶媒和形態で存在し得、本発明は溶媒和形態及び非溶媒和形態の双方を包含することが意図される。
【０１６０】
本発明の式Ｉの化合物及び化学療法剤はまた異なった互変異性体形態で存在し得、そのような全形態が本発明の範囲内に包含される。「互変異性体」又は「互変異性形態」なる用語は、低いエネルギー障壁を介して相互に転換可能である異なるエネルギーの構造異性体を意味する。例えば、プロトン互変異性体（プロトン移行互変異性体としても知られている）は、プロトンの移動を介する相互変換、例えば、ケト−エノール異性及びイミン−エナミン異性を包含する。原子価互変異性体は、結合電子の幾つかの再編成による相互変換を包含する。
【０１６１】
薬学的組成物は、任意の薬学的に不活性な賦形剤、希釈剤、担体、又は流動促進剤と共に、式Ｉの化合物及びここに記載される更なる薬剤のリストから選択される化学療法剤を含む一を越える（例えば二の）薬学的に活性な薬剤からなるバルク組成物及び個々の投薬単位の双方を包含する。バルク組成物及びそれぞれの個々の投薬単位は前述の薬学的に活性な薬剤の固定量を含みうる。バルク組成物は個々の投薬単位にまだ形成されていない材料である。例示的投薬単位は、錠剤、丸薬、カプセル等の経口投薬単位である。同様に、薬学的組成物を投与することにより患者を治療する方法もまたバルク組成物及び個々の投薬単位の投与を包含する。
【０１６２】
薬学的組成物は、ここに記載されたものと同一であるが、一又は複数の原子が天然に通常見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子によって置き換えられている本発明の同位体標識された化合物をまた包含する。特定された任意の特定の原子又は元素の全ての同位体が本発明の化合物及びその用途の範囲にあると考えられる。本発明の化合物に導入することができる例示的な同位体は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、及びヨウ素の同位体、例えば２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ及び１２５Ｉを含む。本発明のある種の同位体標識された化合物（例えば３Ｈ及び１４Ｃで標識されたもの）は化合物及び／又は基質組織分布アッセイにおいて有用である。三重水素（３Ｈ）及び炭素−１４（１４Ｃ）同位体は、その調製及び検出性の容易性のために有用である。更に、重水素（２Ｈ）のようなより重い同位体との置換は、より大なる代謝安定性から生じる所定の治療的利点（例えば、増加したインビボ半減期又は減少した必要な投薬量）をもたらし得、よってある状況下では好ましい場合がある。陽電子放出同位体、例えば１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、及び１８Ｆは、基質レセプター占有率を調べるための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。本発明の同位体標識された化合物は、一般に、非同位体標識試薬を同位体標識試薬に置換することによって、ここでのスキーム及び／又は実施例に開示されたものと類似な手順に従って調製することができる。
【０１６３】
式Ｉの化合物及び化学療法剤は、ヒトを含む哺乳動物の過剰増殖性疾患の治療的処置（予防的処置を含む）のための併用治療において使用するために標準的な医療実務に従って製剤化される。本発明は一又は複数の薬学的に許容可能な担体、流動促進剤、希釈剤、添加剤、又は賦形剤と関係させて、式Ｉの化合物を含んでなる薬学的組成物を提供する。
【０１６４】
適切な担体、希釈剤、及び賦形剤は、当業者によく知られており、炭水化物、ロウ、水溶性及び／又は膨張性のポリマー、親水性又は疎水性の物質、ゼラチン、油、溶媒、水等を含む。使用される特定の担体、希釈剤又は賦形剤は、本発明の化合物が適用される手段及び目的に依存するであろう。溶媒は、一般的には、哺乳類に投与した際に安全(ＧＲＡＳ)であると当業者に認識されている溶媒に基づき選択される。一般に、安全な溶媒は無毒の水性溶媒、例えば水、及び水に溶解又は混和する無毒の他の溶媒である。適切な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール(例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００)、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、クレモホール（例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ ＥＬ（登録商標），ＢＡＳＦ）及びその混合物が含まれる。また製剤は、一又は複数のバッファー、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、滑剤、乳化剤、懸濁剤、保存料、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色料、甘味料、香料、フレーバー剤及び薬物（すなわち、本発明の化合物又はその薬学的組成物）を見栄え良く提供するための又は薬学的製品（すなわち、医薬）の製造を補助する他の既知の添加剤を含みうる。
【０１６５】
製剤は、常套的な溶解及び混合手順を使用して調製することができる。例えば、バルク薬剤物質（すなわち、本発明の化合物又は該化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体又は他の既知の錯化剤との複合体）を、上述の賦形剤の一又は複数の存在下で適切な溶媒に溶解させる。本発明の化合物は、典型的には薬学的投与形態に処方され、薬剤の投与量の制御が容易になり、患者が処方レジメンを遵守することを可能にする。
【０１６６】
適用される薬学的組成物（又は製剤）は、薬剤の投与に使用される方法に応じて、様々な形で包装されうる。一般に、流通用の物品は、適切な形態の薬学的製剤をそこに収容した容器を含む。適切な容器は当業者によく知られており、ビン（プラスチック及びガラス）、サシェ（小袋）、アンプル、プラスチック袋、金属製シリンダー等の材料を含む。また容器は、包装の内容物への軽率な接近を防止するための、不正開封防止が施されたアセンブリを含みうる。また、容器には、容器の内容物を記載するラベルがそこに付着される。またラベルは適切な警告を含むこともできる。
【０１６７】
本発明の化合物の薬学的製剤は、投与の様々な経路及びタイプに対して調製されうる。例えば、所望の度合いの純度を有する式Ｉの化合物を、凍結乾燥製剤、粉砕粉末、又は水溶液の形態で、薬学的に許容可能な希釈剤、担体、賦形剤又は安定剤と混合する（Remington's Pharmaceutical Sciences (1995)第１８版, Mack Publ. Co., Easton, PA）。製剤化は、生理学的に許容可能な担体、つまり用いられる用量及び濃度でレシピエントに非毒性である担体と、適切なｐＨ、所望の度合いの純度で室温で混合することにより、なされうる。製剤のｐＨは特定の用途及び化合物の濃度に主として依存するが、約３から約８の範囲とできる。
【０１６８】
薬学的製剤は好ましくは滅菌される。特に、インビボ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。このような滅菌は、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
【０１６９】
薬学的製剤は、通常は、固形組成物、凍結乾燥製剤又は水溶液として保存することができる。
【０１７０】
本発明の薬学的製剤は、良好な医療行為と一致した様式、つまり、投与量、濃度、スケジュール、経過、ビヒクル及び経路で、用量決定され投与されるであろう。ここで考慮される要因には、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医師に既知の他の要因が含まれる。投与される化合物の「治療的に有効な量」は、このような考慮に支配され、凝固因子媒介性疾患を防止し、軽減し、又は治療するのに必要な最小量である。このような量は、好ましくはホストに毒性であるか又はホストを出血に対して有意により感受性にする量以下である。
【０１７１】
経口的又は非経口的に投与される式Ｉの化合物の初回の薬学的に有効な量は、約０．０１−１０００ｍｇ／ｋｇの範囲、つまり１日当たり患者の体重の約０．１から２０ｍｇ／ｋｇであり、典型的な化合物の初回の投与量は０．３から１５ｍｇ／ｋｇの範囲である。式Ｉの化合物の用量及び投与される化学療法剤の用量は、それぞれ単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇ、又は単位投薬形態当たり約１０ｍｇから約１００ｍｇである。式Ｉの化合物及び化学療法剤の用量は、約１：５０から約５０：１の重量比、又は約１：１０から約１０：１の重量比で投与されうる。
【０１７２】
許容可能な希釈剤、担体、賦形剤及び安定剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに非毒性であり、ホスフェート、シトレート、及び他の有機酸のようなバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存料（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３-ペンタノール；及びｍ-クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ-タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ ＥＬ（登録商標）、プルロニクス（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ）（商標）、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。活性な薬学的成分は、コロイド性の薬剤送達系（例えば、リポソーム類、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマイクロエマルションで各々、例えば、コアセルべーション技術又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン-マイクロカプセル及びポリ-(メチルメタクリレート)マイクロカプセル類に捕捉されうる。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 18版, (1995) Mack Publ. Co., Easton, PAに開示されている。
【０１７３】
式Ｉの化合物の徐放性製剤を調製することができる。徐放性製剤の適切な例は、式Ｉの化合物を含む疎水性固体ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリクスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ(２-ヒドロキシエチル-メタクリレート)、又はポリ(ビニルアルコール)）、ポリ乳酸（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ-グルタミン酸及びγ-エチル-Ｌ-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ(商標)（乳酸-グリコール酸コポリマー及び酢酸リュープロリドからなる注射可能なミクロスフィア）及びポリ-Ｄ(-)３-ヒドロキシ酪酸が含まれる。
【０１７４】
薬学的製剤はここに詳細に記載する投与経路に適したものを含む。製剤は簡便には単位投薬形態で提供され得、薬学の分野でよく知られている方法の何れかによって調製することができる。一般に技術及び製剤化は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18版 (1995)Mack Publishing Co., Easton, PAに見出される。かかる方法は、活性成分を、一又は複数の補助成分を構成する担体と一緒にする工程を含む。一般に、製剤は、活性成分を、液状担体又は細かに分断された固形担体又はその双方と均一かつ密に混合し、ついで必要ならば生成物を成形することにより、調製される。
【０１７５】
経口投与に適した式Ｉの化合物及び／又は化学療法剤の製剤は、それぞれが予め決められた量の式Ｉの化合物及び／又は化学療法剤を含む、例えば、丸薬、硬又は軟、例えばゼラチンカプセル、薬包（カシェ）、トローチ、ロゼンジ、水性又は油性の懸濁液、分散性粉末又は顆粒、エマルション、シロップ又はエリキシル剤のような別々の単位として調製されうる。式Ｉの化合物の量及び化学療法剤の量は、併用製剤として丸薬、カプセル、溶液又は懸濁液に製剤化されうる。別法では、式Ｉの化合物及び化学療法剤は、交替投与による丸薬、カプセル、溶液又は懸濁液に別個に製剤化されうる。
【０１７６】
製剤は、薬学的組成物の製造のために当該分野で知られている任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、口に合う調製物を提供するために、甘味料、香味料、着色料及び保存剤を含む一又は複数の薬剤を含みうる。圧縮錠は、場合によってはバインダー、潤滑剤、不活性希釈剤、保存料、界面活性又は分散剤と混合せしめて、粉末又は顆粒のような自由に流動する形態で活性成分を適切な機械で圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は不活性な液体希釈剤で湿潤させた粉末化活性成分の混合物を適切な機械で成形することによって製造することができる。錠剤は場合によっては被覆し又は切り込み線を入れ、場合によっては活性成分の遅延又は制御放出をもたらすように製剤化される。
【０１７７】
本発明の薬学的製剤の錠剤賦形剤は、錠剤を構成する粉末化薬剤のバルク体積を増加させるフィラー（又は希釈剤）；摂取されるときに錠剤を小さな断片へ、理想的には個々の薬剤粒子へ分解させて、薬剤の素早い溶解及び吸収を促進する崩壊剤；顆粒及び錠剤が必要とされる機械的強度で形成され得、圧縮された後に錠剤を保持し、包装、輸送、及び通常の取り扱い中にその成分粉末に分解することを防ぐ結合剤（バインダー）；製造中において錠剤を構成する粉体の流動性を改善する流動促進剤；製造中において錠剤をプレスするのに使用される装置に錠剤化粉末が付着しないようにする滑沢剤（それらは、最終錠剤が装置から排出されるに応じて、プレスを通過するときの粉末ミックスの流れを改善し、摩擦及び破壊を最小にする）；流動促進剤と類似した機能を持ち、製造中において錠剤の形状を打ち抜くために使用される機械と錠剤を構成する粉末との間の付着を減少させる抗付着剤；錠剤に好ましい味覚を与えたり又は不快な味をマスクするために錠剤に導入されるフレーバー（香味料）、及び識別及び患者のコンプライアンスを助ける着色料を含みうる。
【０１７８】
錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容可能な賦形剤と混合せしめられて活性成分を含む錠剤が許容可能である。これらの賦形剤は、例えば不活性な希釈剤、例えば炭酸カルシウム又はナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はナトリウム；顆粒化及び崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、又はアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチン又はアカシア；及び潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクでありうる。錠剤は非被覆でもよく、あるいは胃腸管中での崩壊と吸着を遅延させるマイクロカプセル化を含む既知の方法によって被覆されてもよく、それによって長時間にわたる持続作用がもたらされる。例えば、時間遅延物質、例えばモノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルを単独で又はロウと共に用いることができる。
【０１７９】
眼又は他の外部組織、例えば口及び皮膚の治療に対しては、製剤は、好ましくは、例えば０．０７５から２０％ｗ／ｗの量で活性成分を含む局所用軟膏又はクリームとして適用される。軟膏に製剤される場合、活性成分はパラフィン系又は水混和性軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、活性成分は水中油クリーム基剤を用いてクリームに製剤化することができる。
【０１８０】
クリーム基剤の水性相は多価アルコール、すなわち、例えばプロピレングリコール、ブタン１,３-ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）及びその混合物のような二以上のヒドロキシル基を有するアルコールを含みうる。局所用製剤は、望ましくは、皮膚又は他の患部領域を通しての活性成分の吸収又は浸透を向上させる化合物を含みうる。そのような皮膚浸透向上剤の例はジメチルスルホキシド及び関連アナログを含む。
【０１８１】
本発明のエマルションの油性相は、脂肪又は油との、又は脂肪及び油の双方との少なくとも一の乳化剤の混合物を含む、既知の成分から既知の方法で構成することができる。好ましくは、親水性乳化剤が、安定化剤として作用する親油性乳化剤と共に含有せしめられる。併せて、安定化剤と共に又は安定化剤を伴わないで乳化剤が乳化ロウを構成し、油及び脂肪と共にロウが、クリーム製剤の油性分散相を形成する乳化軟膏基剤を構成する。本発明の製剤に使用するのに適した乳化剤及びエマルション安定化剤は、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標））６０、スパン（Ｓｐａｎ（登録商標））８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノ-ステアリン酸グリセリル及びラウリル硫酸ナトリウムを含む。
【０１８２】
本発明の薬学的製剤の水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合せしめられて活性物質を含む。そのような賦形剤には、懸濁剤、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、クロスカルメローゼ、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアカシアガム、及び分散又は湿潤剤、例えば天然に生じるホスファチド（例えばレシチン）、脂肪酸とのアルキレンオキシドの縮合産物（例えばポリオキシエチレンステアレート）、長鎖脂肪族アルコールとのエチレンオキシドの縮合産物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとのエチレンオキシドの縮合産物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）が含まれる。水性懸濁液はまた一又は複数の保存料、例えばエチル又はｎ-プロピルｐ-ヒドロキシ-ベンゾエート、一又は複数の着色剤、一又は複数の香味剤及び一又は複数の甘味料、例えばスクロース又はサッカリンを含みうる。
【０１８３】
薬物学的組成物は滅菌された注射用調製物の形態、例えば滅菌注射用水性又は油性懸濁液でありうる。この懸濁液は上に述べた好適な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて既知の技術に従って製剤化することができる。滅菌された注射用製剤はまた１,３-ブタン-ジオール溶液又は凍結乾燥粉末から調製したもののように、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒中の溶液又は懸濁液でありうる。用いることができる許容可能なビヒクル及び溶媒は水、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム溶液である。また、滅菌固定化油を溶媒又は懸濁媒質として常套的に用いることができる。この目的に対して、合成モノ-又はジグリセリドを含む任意のブランドの固定化油を用いることができる。また、オレイン酸のような脂肪酸も同様に注射剤の調製に使用することができる。
【０１８４】
単一投薬形態をつくるために担体物質と組合わせられうる活性成分の量は、治療される宿主と特定の投与態様に応じて変わる。例えば、ヒトへの経口投与を意図した時間放出製剤は、全組成物の約５から約９５％（重量：重量）と変わりうる適切で簡便な量の担体物質と共に配合されるおよそ１から１０００ｍｇの活性物質を含みうる。薬物学的組成物は投与のために容易に測定可能な量をもたらすよう調製することができる。例えば、静脈点滴のための水溶液は、約３０ｍＬ／時の割合で適切な体積の点滴が生じうるようにするために溶液１ミリリットル当たり約３から５００μｇの活性成分を含みうる。
【０１８５】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、バッファー、静菌剤及び意図したレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含みうる水性及び非水性滅菌注射用溶液；及び懸濁剤及び増粘剤を含みうる水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。
【０１８６】
眼への局所投与に適した製剤には、好適な担体、特に活性成分のための水性溶媒に活性成分が溶解又は懸濁させられた点眼液がまた含まれる。活性成分はそのような製剤中に好ましくは約０．５から２０％ｗ／ｗ、例えば約０．５から１０％、例えば約１．５％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【０１８７】
口への局所投与に適した製剤には、香味基剤、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアのような不活性基剤に活性成分を含むパスティユ；及び適切な液体担体に活性成分を含むうがい薬が含まれる。
【０１８８】
直腸投与のための製剤は、例えばカカオバター又はサリチレートを含む適切な基剤を用いて座薬として提供することができる。
【０１８９】
肺内又は経鼻投与に適した製剤は、例えば０．１から５００ミクロン（例えば０．５、１、３０ミクロン、３５ミクロン等のような増分ミクロンで０．１から５００ミクロンの範囲の粒子径を含む）の範囲の粒子径を有し、これが鼻経路を通る迅速な吸入又は肺胞嚢に達するように口からの吸入によって投与される。好適な製剤には、活性成分の水性又は油性溶液が含まれる。エアゾール又は乾燥粉末投与に適した製剤は常法によって調製することができ、以下に記載されるような疾患の治療又は予防にこれまで使用されている化合物のような他の治療剤と共に送達できる。
【０１９０】
膣投与に適した製剤は、活性成分に加えて、当該分野で適切であることが知られているような担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレー製剤として提供することができる。
【０１９１】
製剤は、単位用量又は複数用量容器、例えば密封されたアンプル及びバイアルに包装することができ、使用直前に注射用の滅菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）条件で保存することができる。即時混合注射溶液及び懸濁液は既に記載された種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好適な単位投薬製剤は、活性成分の、上に記載されたような毎日の投薬又は毎日の部分用量単位、又はその適切な画分を含むものである。
【０１９２】
本発明は更に獣医学的担体と共に上述の少なくとも一の活性成分を含有する獣医学的組成物を提供する。獣医学的担体は組成物を投与する目的に有用な物質であり、不活性な又は獣医学分野で許容され活性成分と相容性がある固形、液体又は気体物質でありうる。これらの獣医学的な組成物は非経口的、経口的又は任意の他の所望の経路によって投与することができる。
【０１９３】
併用療法
式Ｉの化合物は、前悪性及び非腫瘍性又は非悪性の過剰増殖性疾患と共に、造血器腫瘍の治療のためのある種の化学療法剤と組合わせて使用されうる。ある実施態様では、式Ｉの化合物は、薬学的な併用製剤中に、又は併用療法としての投与レジメンにおいて、抗過剰増殖能を持つか又は造血器腫瘍の治療に有用な化学療法剤と組合わせられる。薬学的な併用製剤又は投与レジメンの化学療法剤は、好ましくは式Ｉの化合物に相補的な活性を持ち、互い悪影響を及ぼすことはない。併用治療剤のそのような化合物は意図される目的に効果的である量で投与されうる。一実施態様では、この発明の薬学的製剤は式Ｉの化合物と明細書にここに記載されるような化学療法剤を含有する。他の実施態様では、併用治療剤は、投与レジメンによる投与であり、ここで式Ｉの化合物の治療的に有効な量が毎日２回から３週毎に１回（ｑ３ｗｋ）の範囲で投与され、治療的に有効な量の化学療法剤が、別に、交互に、毎日２回から３週毎に１回の範囲で投与される。
【０１９４】
本発明の併用治療剤は、式Ｉの化合物と、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン、及びシタラビンから選択される化学療法剤を、過剰増殖性疾患の治療に、別個に、同時に又は逐次に使用されるための併用調製物として、含む製品を含む。
【０１９５】
併用療法は同時又は逐次のレジメンとして投与されうる。逐次的に投与される場合、併用薬は二回以上の投与で投与されうる。併用投与には、別個の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する同時投与、及び何れかの順での逐次投与が含まれ、そこでは、好ましくは、両方の（又は全ての）活性剤が同時にその生物学的活性を作用させる時間がある。
【０１９６】
上記の同時投与薬剤の任意のものに対する適切な投薬量は現在使用されているものであり、新たに同定された薬剤と他の化学療法剤又は治療の併用作用（相乗作用）のために、例えば、治療係数を増加させ又は毒性又は他の副作用又は事象を緩和させるように、低下させうる。
【０１９７】
抗癌療法の特定の実施態様では、併用治療剤は、アジュバント療法として手術療法及び放射線療法が組合わせられうる。本発明に係る併用療法は、少なくとも一種の式Ｉの化合物の投与と一又は複数の他の癌治療法又は様式を含む。式Ｉの化合物及び化学療法剤の量及び投与の相対的なタイミングは、所望される併用治療効果を達成するために選択される。
【０１９８】
薬学的組成物の投与
本発明の併用治療剤は治療される症状に適した任意の経路によって投与されうる。好適な経路には、経口、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、吸入、皮内、くも膜下腔内及び硬膜外、及び注入法を含む）、経皮、直腸、経鼻、局所（頬側及び舌下を含む）、膣、腹腔内、肺内及び鼻腔内が含まれる。局所投与は、経皮パッチ又はイオン導入装置のような経皮投与の使用をまた含みうる。薬剤の製剤化は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18版, (1995) Mack Publishing Co., Easton, PAで検討されている。薬剤製剤の他の例は、Liberman, H. A.及びLachman, L.編, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Vol 3, 2版, New York, NYにも見出すことができる。局所的な免疫抑制処置のために、化合物は、移植前に、移植片とインヒビターとをかん流又は接触させることを含む、病巣内投与により投与することができる。好ましい経路は例えばレシピエントの状態に応じて変わりうることは理解される。化合物が経口投与される場合、化合物は、丸薬、カプセル剤、錠剤等として薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と共に製剤化することができる。化合物が非経口的に投与される場合、化合物は、以下に詳述されるように、薬学的に許容可能な非経口ビヒクルと共に単位投薬注射可能形態で製剤化することができる。
【０１９９】
ヒト患者を処置するための用量は、約１０ｍｇから約１０００ｍｇの式Ｉの化合物、例えば約１００ｍｇから約３００ｍｇの化合物の範囲とすることができる。特定の化合物の吸収、分布、代謝、及び排出を含む、薬物動態（ＰＫ）及び薬力学的特性（ＰＤ）に応じて、１日に１回（ＱＩＤ)、１日に２回(ＢＩＤ)、又はより頻繁に投与されうる。また、毒性要因が、投薬量及び投与投薬レジメンに影響を与える場合がある。経口的に投与される場合、丸薬、カプセル剤又は錠剤は、一日２回、毎日又はより少ない頻度、例えば毎週、又は２又は３週毎に１回、特定の期間、摂取されうる。レジメンは多くの治療サイクルの間、繰り返されうる。
【０２００】
治療方法
（１）式Ｉの化合物及び（２）化学療法剤の併用治療剤は、限定しないが、ＰＩ３キナーゼ経路の活性化により特徴づけられるものを含む疾患、症状及び／又は障害の治療に有用である。従って、この発明の他の態様は、ＰＩ３を含む脂質キナーゼを阻害することによって治療されうる疾患又は症状を治療する方法を含む。一実施態様では、造血器腫瘍の治療方法は、哺乳動物に併用製剤として又は交互に併用治療剤を投与することを含み、ここで、併用治療剤は、式Ｉを有する化合物の治療的に有効な量と、デキサメタゾン、チオテパ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、リツキシマブ、シクロホスファミド、プレドニゾン、メルファラン、レナリドミド、ボルテゾミブ、ラパマイシン及びシタラビンから選択される一又は複数の化学療法剤の治療的に有効な量とを含む。（１）式Ｉ又はＩＩの化合物及び（２）化学療法剤の併用治療剤は、前悪性及び非腫瘍性又は非悪性の過剰増殖性疾患と共に、腫瘍、癌、新生物組織を含む、過剰増殖疾患又は障害の治療に用いることができる。一実施態様では、ヒト患者は、併用治療剤及び薬学的に許容可能な担体、アジュバンド、又はビヒクルで治療され、ここで、上記併用治療剤の式Ｉの化合物又はその代謝産物はＰＩ３キナーゼ活性を検出可能に阻害する量で存在する。
【０２０１】
造血器腫瘍には、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ、ＭＣＬが含まれる。
【０２０２】
この発明の他の態様は、疾患又は症状に罹患している哺乳動物、例えばヒトにおける、ここに記載の疾患又は症状の治療に使用するための薬学的組成物又は併用治療剤を提供する。また提供されるのは、そのような疾患に罹患している哺乳動物、例えばヒト等の温血動物における、ここに記載の疾患及び症状の治療のための医薬の調製における薬学的組成物の使用である。
【０２０３】
式Ｉの化合物の代謝産物
また本発明の範囲に入るものは、ここに記載される式Ｉの化合物のインビボ代謝産物である。かかる産物は、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド、エステル化、エステル分解、酵素分解等から生じうる。従って、本発明は、その代謝産物を生じさせるのに十分な時間、この発明の化合物を哺乳動物に接触させることを含む方法によって生産される化合物を含む、式Ｉの化合物の代謝産物を含む。
【０２０４】
代謝産物は、典型的には本発明の化合物の放射標識（例えば、１４Ｃ又は３Ｈ）同位体を調製し、それを、例えばラット、マウス、モルモット、サルのような動物、又はヒトに（例えば約０．５ｍｇ／ｋｇを越える）検出可能な用量で非経口的に投与し、十分な時間をかけて代謝を生じさせ（典型的には約３０秒から３０時間）、尿、血液又は他の生物学的試料からその転換産物を単離することによって同定される。これらの産物は、標識されているので容易に単離される（他のものは代謝産物中で生存するエピトープに結合可能な抗体の使用によって単離される）。代謝産物の構造は、常套的な方法、例えばＭＳ、ＬＣ／ＭＳ又はＮＭＲ分析で決定される。一般に、代謝産物の分析は当業者によく知られた一般的な薬剤代謝研究と同じ方法でなされる。代謝産物は、それらがインビボで別に見出されない限り、本発明の化合物の治療用投薬の診断アッセイにおいて有用である。
【０２０５】
製造品
本発明の他の実施態様では、上述の疾病及び疾患の治療に有用な式Ｉの化合物を含む製造品、又は「キット」が提供される。一実施態様では、キットは、式Ｉの化合物を含む容器を含む。キットは、容器上又は容器に付随して、ラベル又はパッケージ挿入物を更に含みうる。「パッケージ挿入物」という用語は、適応症、用法、用量、投与法、禁忌及び／又はこのような治療製品の使用に関する警告についての情報を含む、治療製品の商業的パッケージ中に常套的に含められる指示書を指すために使用される。適切な容器には、例えば、ビン、バイアル、シリンジ、ブリスターパック等が含まれる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されうる。容器は、症状を治療するのに有効な式Ｉの化合物又はその製剤を収容し得、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルでありうる）。組成物中の少なくとも一種の活性剤は式Ｉの化合物である。ラベル又はパッケージ挿入物は、組成物が癌のような選択した症状の治療のために使用されることを示している。一実施態様では、ラベル又はパッケージ挿入物は、式Ｉの化合物を含む組成物が、異常な細胞増殖から生じる疾患を治療するために使用することができることを示している。ラベル又はパッケージ挿入物はまた組成物が他の疾患を治療するのに使用されうることも示しうる。あるいは、又は付加的に、製造品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液等の薬学的に許容可能なバッファーを含む第２の容器を更に含みうる。それは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含みうる。
【０２０６】
キットは、式Ｉの化合物と、存在する場合は第二の薬学的製剤の投与のための指示書を更に含みうる。例えば、キットが、式Ｉの化合物を含む第一の組成物と第二の薬学的製剤を含む場合、キットは、それを必要としている患者への第一及び第二の薬学的組成物の同時、逐次又は別個の投与のための指示書を更に含みうる。
【０２０７】
他の実施態様では、キットは、錠剤又はカプセル剤等の式Ｉの化合物の固形経口形態の送達に適している。このようなキットは、好ましくは多くの単位投薬量を含む。このようなキットは、それらの意図した使用の順に配された投薬量を有するカードを含みうる。このようなキットの一例は「ブリスターパック」である。ブリスターパックは、包装産業においてよく知られており、薬学的単位投薬形態の包装に広く使用されている。所望される場合は、例えば数字、文字、又は他のマークの形態で、又は該用量が投与されうる治療スケジュールにおける日を指定するカレンダー挿入物を用いて、記憶補助を提供することができる。
【０２０８】
一実施態様によれば、キットは、（ａ）その中に式Ｉの化合物を含む第一の容器と；場合によっては（ｂ）その中に第二の薬学的製剤を含む第二の容器を含んでいてもよく、ここで、第二の薬学的製剤は、抗過剰増殖活性を有する第二の化合物を含む。あるいは、又は加えて、キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液のような薬学的に許容可能なバッファーを含む第三の容器を更に含みうる。それは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的にかつ使用者の観点から望ましい他の材料を更に含みうる。
【０２０９】
キットが式Ｉの組成物と第二の治療剤、つまり化学療法剤を含む場合、キットは、別々の組成物を収容するための容器、例えば分割されたビン又は分割されたホイルパケット等を含みうるが、別々の組成物がまた単一の分割されていない容器に収容されてもよい。典型的には、キットは、別個の成分の投与のための指示書を含む。別々の成分が異なる投薬形態（例えば、経口及び非経口）で好ましくは投与され、異なる投与間隔で投与される場合、又は組合せの個々の成分の用量設定が処方医師によって望まれる場合に、キット形態は特に有利である。
【０２１０】
一般的調製手順
一般的手順Ａ−１  鈴木カップリング：
0005709766.tif 000034
【０２１１】
鈴木タイプのカップリング反応は、ピリミジン環の２位に縮合二環式複素環又はヘテロアリールを結合させるのに有用である（スキーム４参照）。一般的に、置換２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン５を約１．５当量の４-(４,４,５,５-テトラメチル-１,３,２-ジオキサボロラン-２-イル)１Ｈ-インダゾール７と組合わせ、１モル濃度の水溶液としての３当量の炭酸ナトリウムと等体積のアセトニトリルに溶解させうる。中間体７は、出典明示によりここに援用される米国特許出願公開第２００８／００３９４５９号；米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号；米国特許出願公開第２００８／００７６７５８号；米国特許出願公開第２００８／０２０７６１１号に従って調製した。触媒量又はそれ以上の低価数のパラジウム試薬、例えばビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(ＩＩ)ジクロライドを加える。様々なボロン酸又はボロン酸エステルを、示したインダゾールボロン酸エステルの代わりに使用することができる。また別法では、イミダゾールの窒素を、例えばテトラヒドロピラニル基を用いて保護することができる。ある場合には、水性層のｐＨを調節するために炭酸ナトリウムの代わりに酢酸カリウムを使用した。ついで、反応を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ（Ｂｉｏｔａｇｅ社）において加圧下で、１０分から３０分間、約１４０−１５０℃に加熱した。内容物を酢酸エチル又は他の有機溶媒で抽出する。有機層の蒸発後、生成物８をシリカで又は逆相ＨＰＬＣによって精製することができる。
【０２１２】
一般的手順Ａ−２  鈴木カップリング：
0005709766.tif 000035
鈴木タイプカップリング反応は、ピリミジン環の２位に単環式ヘテロアリールを結合させるのに有用である（スキーム４参照）。一般的に、置換２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン５を１．５当量の５-(４,４,５,５-テトラメチル-１,３,２-ジオキサボロラン-２-イル)ピリミジン-２-アミン７ａと組合わせて、１モル濃度の水溶液としての３当量の炭酸ナトリウム又は炭酸カリウムと等体積のアセトニトリルに溶解させうる。中間体７ａは、出典明示によりここに援用される米国特許出願公開第２００８／０２６９２１０号；米国特許出願公開第２００８／０２４２６６５号に従って調製した。触媒量又はそれ以上の低価数のパラジウム試薬、例えばビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(ＩＩ)ジクロライドを加える。様々なボロン酸又はボロン酸エステルを、示したピナコールボロン酸エステルの代わりに使用することができる。また別法では、ピリミジン-２-アミンの窒素を、例えばテトラヒドロピラニル基を用いて保護することができる。ある場合には、水性層のｐＨを調節するために炭酸ナトリウムの代わりに酢酸カリウムを使用した。ついで、反応を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒマイクロ波反応器（Ｂｉｏｔａｇｅ社）において加圧下で、１０分から３０分間、約１００−１５０℃に加熱した。内容物を酢酸エチル又は他の有機溶媒で抽出する。有機層の蒸発後、生成物８ａをシリカで又は逆相ＨＰＬＣによって精製することができる。
【０２１３】
一般的手順Ｂ  アミドカップリング：
0005709766.tif 000036
２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルボン酸１３を、ＤＭＦ中の１．５当量のＨＡＴＵ、３当量のアルキルアミン及び３当量のＤＩＰＥＡでおよそ０．１Ｍ濃度まで処理する。反応を完了するまで攪拌し、飽和重炭酸塩溶液と共に酢酸エチル中で一回で抽出する。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗中間体を得る。この中間体を逆相ＨＰＬＣを介して精製して生成物１５を得る。
【０２１４】
一般的手順Ｂ−１  アミドカップリング：
0005709766.tif 000037
４-モルホリノ-２-(ピリジン-３-イル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルボン酸１３ａをＤＭＦ中の１．５当量のＨＡＴＵ、３当量のアルキルアミン（Ｒ-ＮＨ２）及び３当量のＤＩＰＥＡでおよそ０．１Ｍ濃度まで処理する。反応を完了するまで攪拌し、飽和重炭酸塩溶液と共に酢酸エチル中で一回で抽出する。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗中間体を得る。この中間体を逆相ＨＰＬＣを介して精製して生成物１５ａを得る。
【０２１５】
一般的手順Ｂ−２  アミドカップリング：
0005709766.tif 000038
２-クロロ-４-モルホリノ-６-((ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジンをＤＭＦ中の１．５当量のＨＡＴＵのようなカップリング試薬、約３当量のカルボン酸（ＲＣＯ２Ｈ）及び過剰のＤＩＰＥＡのようなアミン塩基でおよそ０．１Ｍ濃度まで処理する。反応を完了するまで攪拌し、飽和重炭酸塩溶液と共に酢酸エチル中で一回で抽出する。有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗中間体を得る。
【０２１６】
一般的手順Ｂ−３  還元的アミノ化：
0005709766.tif 000039
２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒドをジクロロエタン中０．２Ｍ濃度まで溶解させる。この溶液に１．５から２．０当量の第一級又は第二級アミン（Ｒ２ＮＨ）、約１０当量のトリメチルオルトギ酸塩、及び約１当量の酢酸を加える。混合物を２から６時間攪拌した後、１．５当量のナトリウムトリアセトキシボロヒドリドを加える。１２から１６時間攪拌後、反応物を飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ、酢酸エチルで数回抽出して、還元的アミノ化中間体を得、これをシリカゲルで精製するか、又は粗物質のまま次の反応で使用する。
【０２１７】
一般的手順Ｃ  スルホンアミドの形成：
0005709766.tif 000040
塩化２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-スルホニル１７をＤＣＭ中に懸濁させた後、約２当量のアミン（ＨＮＲ２）及び約３当量のＤＩＰＥＡのようなアミン塩基を加える。反応を完了するまでＬＣＭＳによりモニターする。粗反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和塩化アンモニウムで抽出し、酢酸エチルで一回逆抽出する。有機層を組合せ、濃縮乾固させた。粗スルホンアミド中間体１８を次の鈴木カップリングにおいて直接使用する。
【０２１８】
一般的手順Ｄ  アルコール合成
0005709766.tif 000041
２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン４をＴＨＦ中０．２モル濃度まで懸濁させ、ドライアイス／アセトニトリル浴中で−５０℃まで冷却した後、ヘキサン中の２当量の２．５ＭのｎＢｕＬｉを加える。１５分後に３．０モル当量の環状又は非環状ケトン（Ｒ２Ｃ（＝Ｏ）を溶液に加える。反応物を−５０℃で約１時間攪拌し続け、ついで殆どの場合、０℃になるようにした。ＴＬＣ又は質量分析によって反応が完了したところで、飽和塩化アンモニウム溶液中にクエンチし、ＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機層を濃縮し、粗混合物として使用するか、又はシリカで精製し、あるいは生成物１２を最小量のアセトニトリルに溶解させ、濾過して、残っている出発物質４を除去することができる。
【０２１９】
一般的手順Ｅ  ｔ-ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）基の除去
0005709766.tif 000042
ジオキサン中の１０当量以上の４ＮのＨＣｌを、共溶媒としてジクロロメタンを伴うか伴わないで、出発物質を加える（上に示した一般的スキームを、しかし同様のスカフォールドで用いる）。４０℃までの数時間の加熱が、Ｂｏｃ基を除去するために時折必要となる。反応物を濃縮乾固させ、次の反応に粗物質のまま使用することができる。
【０２２０】
一般的手順Ｆ  ワンポットでの鈴木カップリング反応
0005709766.tif 000043
１ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液（３当量）及びアセトニトリル（３当量）中の２-クロロ-６-ヨード-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン１９（１当量）、フェニルボロン酸又はヘテロ環ボロン酸（Ｒ１−Ｂ(ＯＨ)２、１．１当量）及びビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（ＩＩ）ジクロライド（０．１当量）を密封マイクロ波反応器中で１０分から４０分１００℃まで加熱して５を得た。完了時に、４-(４,４,５,５-テトラメチル-１,３,２-ジオキサボロラン-２-イル)-１Ｈ-インダゾール７（１．３当量）及びビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（ＩＩ）ジクロライド（０．１当量）を同じポットに加えた。反応混合物を密封マイクロ波反応器中で１０分から４０分１５０℃に加熱した。混合物を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。混合有機層を濃縮して粗物質８を得た。
【０２２１】
一般的手順Ｇ  アミドカップリング反応
0005709766.tif 000044
ジクロロメタン中の２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-アミン２２（１当量）、酸塩化物（約２当量）及びトリエチルアミン（２当量）を攪拌した。反応を完了するまでＬＣ／ＭＳでモニターした。混合物を蒸発させて粗アミド２３を得、これを精製せずに次の工程で直接使用した。
【０２２２】
一般的手順Ｈ  アセトアミド、ベンズアミジン、及びスルホンアミドの調製
0005709766.tif 000045
０℃に冷却したＤＣＭ中の１-(２-クロロ-４-モルホリノチエノ[２,３-ｄ]ピリミジン-６-イル)-Ｎ-メチルメタンアミンの０．２５から０．４０Ｍ溶液に１．５当量のＴＥＡを加え、続いてＤＣＭに希釈した１．０から１．５当量のアルキル又はアリール−酸塩化物又は塩化スルホニルを滴下して加えた。反応を雰囲気温度で攪拌し、ＬＣＭＳによって完了をモニターする。完了後、反応体積をＤＣＭで増加させ、希重炭酸ナトリウム水溶液を溶液に加える。有機及び水性層を分離する。最後に、有機層をブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させる。乾燥させた有機溶液を真空濃縮させ、生成物を必要に応じてシリカクロマトグラフィーで精製する。
【０２２３】
一般的手順Ｉ  ベンゼンアミンに対するアミドカップリング反応
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ＤＭＦ中の３-(２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)ベンゼンアミン２４（１当量）、カルボン酸（１．５当量）、１-ヒドロキシ-７-アザベンゾチアゾール（０．２当量）、Ｏ-(７-アザベンゾトリアゾール-１-イル)-(Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、１．５当量、及びＮ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（２．５当量）を室温で攪拌した。反応を完了までＬＣ／ＭＳによってモニターした。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム及びブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させてアミド生成物２５を得た。
【０２２４】
一般的手順Ｊ  ６-ヨード置換及び２-鈴木カップリング
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ＤＭＦ（１．００ｍＬ）中の２-クロロ-６-ヨード-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン１９（０．０５ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液に適切なアニリン（２００ｍｏｌ％）、Ｃｓ２ＣＯ３（５０ｍｏｌ％）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（５ｍｏｌ％）、及びＸＡＮＴＰＨＯＳ(キサントフォス)（１０ｍｏｌ％）を加えた。反応物をＢｉｏｔａｇｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｒマイクロ波反応器中で加圧下で１１０℃まで３０分間加熱した。生じた溶液を真空下で濃縮して、２６を得、その後一般的手順Ａに従った。
【０２２５】
一般的手順Ｋ  ６-アミノアルキルアシル化及び２-鈴木カップリング
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ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中の(２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メタンアミン２７（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液にＥｔ３Ｎ（８４μＬ、０．６ｍｍｏｌ）及び適切な酸塩化物又はそのＨＣｌ塩（０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１８から４８時間室温で攪拌した後、水でクエンチした。水性層をＥｔＯＡｃで抽出した。組合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。２-クロロ粗生成物をボロネート試薬７及びパラジウム触媒と一般的手順Ａに従ってカップリングさせて２８を得、これを逆相ＨＰＬＣ精製によって精製した。
【０２２６】
別法では、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の(２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メタンアミン２７（１１１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液に２,６-ルチジン（４８．２μＬ、０．４１ｍｍｏｌ）及び適切な酸塩化物又はそのＨＣｌ塩（０．３９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１８から７２時間室温で攪拌した後、水でクエンチした。水性層をＥｔＯＡｃで抽出した。組合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。２-クロロ粗生成物をボロネート試薬７及びパラジウム触媒と一般的手順Ａに従ってカップリングさせて２８を得、これを逆相ＨＰＬＣ精製によって精製した。
【０２２７】
一般的手順Ｌ  フルオロピリジン上のアミン置換
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Ｎ-メチルピロリジン(〜０．１Ｍ)中の２-クロロ-６-(６-フルオロピリジン-３-イル)-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン、約４当量の第一級又は第２級アミン（Ｒ＝Ｈ、Ｃ１-Ｃ１２アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２-Ｃ２０ヘテロシクリル、Ｃ６-Ｃ２０アリール又はＣ１-Ｃ２０ヘテロアリール）、及び約２当量のジイソプロピルエチルアミンの混合物を、密封マイクロ波反応器で１０〜４０分、約１３０−１４０℃に加熱した後、高真空下で揮発分を除去した。粗混合物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して中間体２-クロロ-６-(６-アミノピリジン-３-イル)-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジンを得、これを、一般的手順Ａに従って、単環式ヘテロアリール、縮合二環式複素環又はヘテロアリールボロネート試薬と鈴木カップリングさせることができる。
【０２２８】
本発明を例証するために、次の実施例を含める。しかしながら、これらの実施例は発明を限定するものではなく、発明を実施する方法を単に示唆するものであることが理解されなければならない。当業者には、記載された化学反応を、多くの本発明の他のＰＩ３Ｋ阻害剤を調製するために容易に適応させることができることが分かり、この発明の化合物を調製するための代替方法も本発明の範囲に入ると見なされる。例えば、本発明に係る非例示化合物の合成は、例えば干渉基を適切に保護し、記載したもの以外の当該分野で知られた他の適切な試薬を利用し、及び／又は反応条件の常套的な改変を行うことによって、当業者に明らかな改変によって成功裏に実施されうる。あるいは、ここに開示され又は当該分野で知られている他の反応も本発明の他の化合物の調製のための利用性を有していることが認識されるであろう。
【０２２９】
実施例１  ２,４-ジクロロ-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン３
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【０２３０】
３-アミノ-２-チオフェンカルボン酸メチル１（１３．４８ｇ、８５．８５ｍｍｏｌ）と尿素（２９．７５ｇ、５当量）の混合物を１９０℃で２時間加熱した。熱い反応混合物を水酸化ナトリウム溶液に注ぎ、不溶性物質を濾過により取り除いた。混合物をついで酸性化し（ＨＣｌ、２Ｎ）、１Ｈ-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-２,４-ジオン２を白色沈殿物として得、これを濾過により集め、空気乾燥させた（９．４９ｇ、６６％）。１Ｈ ＮＭＲ４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），１１．６０−１１．１０（２Ｈ，ｂｒ ｓ）。
【０２３１】
１Ｈ-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-２,４-ジオン２（９．４９ｇ、５６．４９ｍｍｏｌ）及びオキシ塩化リン（１５０ｍＬ）の混合物を還流下で６時間加熱した。反応混合物をついで冷却し、氷／水に激しく攪拌しながら注ぎ、沈殿物を得た。混合物をついで濾過し、２,４-ジクロロ-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン３を白色固体として得た（８．６８ｇ、７５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），８．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）。
【０２３２】
実施例２  ２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン４
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２,４-ジクロロ-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン３（８．６８ｇ、４２．３４ｍｍｏｌ）、モルホリン（８．１１ｍＬ、２．２当量）及びＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）の混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物をついで濾過し、水及びＭｅＯＨで洗浄し、２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン４を白色固体として得た（１１．０４ｇ、１００％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）３．７４（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），３．９０（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），７．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）。
【０２３３】
実施例３  ２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１０
0005709766.tif 000052
−７８℃の無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）中の２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン４（１．７５ｇ、６．８５ｍｍｏｌ）の懸濁液にヘキサン（３．３ｍＬ、１．２当量）中のｎ-ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）の２．５Ｍ溶液を加えた。１時間攪拌した後、無水ＤＭＦ（７９６μＬ、１．５当量）を加えた。反応混合物を１時間−７８℃で攪拌し、ついでゆっくりと室温まで温めた。更に室温で２時間経過した後に、反応混合物を氷／水に注ぎ、黄色沈殿物を得た。これを濾過により集め、空気乾燥して２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１０（１．５０ｇ、７７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）３．７６（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．９），３．９５（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．９），８．２８（１Ｈ，ｓ），１０．２０（１Ｈ，ｓ）。
【０２３４】
実施例４  ２-クロロ-６-ヨード-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン４１
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−７８℃のＴＨＦ（６０ｍＬ）中の２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン３９（３．０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ；２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジンの合成手順に従って調製するが、３-アミノ-４-メチル-チオフェン-２-カルボン酸エチルエステルから出発した）の溶液にｎ−ＢｕＬｉ（８．９ｍＬ、Ｅｔ２Ｏ中２．５Ｍ）を加えた。得られたスラリーを−４０℃まで温め、５０分攪拌した。反応混合物をついで−７８℃まで冷却し、ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のＩ２（５．６ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。溶液を室温まで温め、５時間攪拌した。反応を、水を加えることによりクエンチした。有機層を分離し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。組合わせた有機物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、２-クロロ-６-ヨード-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン４１（３．８ｇ、８４％収率）を得た。
【０２３５】
実施例５  ４-(２-クロロ-６-(ピペラジン-１-イルメチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン３０
0005709766.tif 000054
２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１０(３．５ｇ)、１-ＢＯＣ-ピペラジン（２．７６ｇ）及びオルトギ酸トリメチル（４．０５ｍＬ）の混合物を１,２-ジクロロエタン（３００ｍＬ）中で１時間室温で攪拌した。これにナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３．９２ｇ）を加え、反応混合物を２４時間室温で攪拌した。混合物をついでブラインでクエンチし、ジクロロメタンで抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、真空下で溶媒を除去した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィーを使用して精製して、４-(２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イルメチル)-ピペラジン-１-カルボン酸ｔｅｒｔ-ブチルエステル（３．４ｇ）を得た。ジクロロメタン／メタノール中のＨＣｌで処理して、４-(２-クロロ-６-(ピペラジン-１-イルメチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン３０を得た。
【０２３６】
実施例６  (２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)-Ｎ-メチルメタンアミン３５
0005709766.tif 000055
２-クロロ-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１０（２．０ｇ）を５０ｍＬのトルエン及び５０ｍＬのＴＨＦに溶解させ、続いてＨ２Ｏ中の２０ｍＬの４０％メチルアミンを加えた。反応混合物をＮ２下、室温で２４時間攪拌した。溶媒を真空下で除去し、残留物を５０ｍＬのメタノール及び５０ｍＬのＴＨＦに溶解させ、ＮａＢＨ４を滴下して加えた。この反応混合物をＮ２下室温で２４時間攪拌し、完全な反応をＬＣＭＳで確認した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ）で精製して、１．１２ｇの３５（収率５３％）を得た。ＭＳ（Ｑ１）３００（Ｍ＋）。
【０２３７】
実施例７  (２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)-Ｎ-メチルメタンアミン３７
0005709766.tif 000056
２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ-[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド３６を２０ｍＬのトルエン及び２０ｍＬのＴＨＦに溶解させ、続いて１５ｍＬのＨ２Ｏ中の４０％メチルアミンを加え、反応物を２４時間攪拌した。反応混合物を真空下で濃縮させ、残留物を３０ｍＬのメタノール及び３０ｍＬのＴＨＦに溶解させ、続いてＮａＢＨ４を加えた。反応物を室温で少なくとも２４時間攪拌し、生成物の形成をＬＣＭＳによって確認した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、２．５３ｇの(２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)-Ｎ-メチルメタンアミン３７（収率７０％）を得た。ＭＳ（Ｑ１）３１４（Ｍ）＋
【０２３８】
実施例８  ４-(２-クロロ-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン３１
0005709766.tif 000057
ジクロロメタン中のＮ-ＢＯＣ-ピペラジン及び塩化メタンスルホニルとトリエチルアミンの反応により４-メタンスルホニル-ピペラジン-１-カルボン酸ｔｅｒｔ-ブチルエステルを得た。ＢＯＣ保護基の切断をジクロロメタン中のＨＣｌ（２Ｍ）用いて行い、１-メタンスルホニル-ピペラジンＨＣｌ塩を得た。
２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１０（１．００ｇ）、１-メタンスルホニル-ピペラジン（７５０ｍｇ）及びオルトギ酸トリメチル（３．８０ｍＬ）の混合物を１,２-ジクロロエタン（３０ｍＬ）中で６時間室温で攪拌した。これにナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（９００ｍｇ）を加え、反応混合物を２４時間室温で攪拌した。混合物をついでブラインでクエンチし、ジクロロメタンで抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、溶媒を真空下で除去した。残留物を熱い酢酸エチルで倍散して、４-(２-クロロ-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン３１を白色固体として得た（１．０１ｇ）。
【０２３９】
実施例９  ４-(４,４,５,５-テトラメチル-[１,３,２]ジオキサボロラン-２-イル)-１Ｈ-インダゾール７−経路１
0005709766.tif 000058
中間体７を、出典明示によりここに援用する米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号；米国特許出願公開第２００８／００７６７５８号；国際公開第２００６／０４６０３１号の方法に従って調製した。
【０２４０】
実施例１０  １-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-２-イル)-４-(４,４,５,５-テトラメチル-１,３,２-ジオキサボラン-２-イル)-１Ｈ-インダゾール４０
0005709766.tif 000059
中間体４０を、出典明示によりここに援用する米国特許出願公開第２００８／００３９４５９号；米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号；米国特許出願公開第２００８／００７６７５８号；米国特許出願公開第２００８／０２０７６１１号の方法に従って調製した。
【０２４１】
実施例１１  ２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１１
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２-クロロ-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１０（１００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、４-(４,４,５,５-テトラメチル-[１,３,２]ジオキサボロラン-２-イル)-１Ｈ-インダゾール（７０）（９５ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１１２ｍｇ）の混合物をトルエン（２．５ｍＬ）、エタノール（１．５ｍＬ）及び水（０．７ｍＬ）に懸濁させた。これにビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）塩化物（１３．５ｍｇ）を加え、反応容器にアルゴンを流した。反応混合物をマイクロ波で１時間１２０℃に加熱し、ついでＤＣＭ及び水の間で分配し、有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。生じた残留物を、フラッシュクロマトグラフィーを使用して精製し、２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-４-モルホリン-４-イル-チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド１１（９７ｍｇ）を得た。
【０２４２】
実施例１２  ４-(２-(１Ｈ-インダゾール-４-イル)-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン（式Ｉａ、ＧＤＣ−０９４１）：
0005709766.tif 000061
実施例４からの４-(２-クロロ-６-((４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-４-イル)モルホリン３１（２．００ｇ）、４-(４,４,５,５-テトラメチル-[１,３,２]ジオキサボラン-２-イル)-１Ｈ-インダゾール７（２．２６ｇ）、トルエン（２４ｍＬ）、エタノール（１２ｍＬ）、水（６ｍＬ）、炭酸ナトリウム（１．７２ｇ）及びＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２（３２５ｍｇ）の混合物をマイクロ波で１３０℃に９０分加熱した（出典明示によりここに援用される米国特許出願公開第２００８／００７６７６８号；国際公開第２００６／０４６０３１号）。
反応混合物を冷却し、クロロホルムで希釈し、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、溶媒を真空下で除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル、続いて５％の酢酸エチル／メエタノール）を使用して精製し、ついでエーテルで倍散して式Ｉａの化合物、ＧＤＣ−０９４１（１．４ｇ）を得た。ＭＳデータ：（ＥＳＩ＋）：ＭＨ＋５１４。ＮＭＲデータ：（ＣＤＣｌ３）：２．６７−２．７１（４Ｈ，ｍ），２．８１（３Ｈ，ｓ），３．２９−３．３３（４Ｈ，ｍ），３．８９（２Ｈ，ｓ），３．８９−３．９３（４Ｈ，ｍ），４．０８−４．１２（４Ｈ，ｍ），７．４１（１Ｈ，ｓ），７．５１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２），７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３），８．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５），９．０２（１Ｈ，ｓ），１０．１０（１Ｈ，ｂｒ）
【０２４３】
実施例１３  (Ｓ)-１-(４-((２-(２-アミノピリミジン-５-イル)-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メチル)ピペラジン-１-イル)-２-ヒドロキシプロパン-１-オン（式Ｉｂ）：
0005709766.tif 000062
２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-カルバルデヒド３６（４９５ｍｇ）をＢｏｃ-ピペラジンと一般的手順Ｂ−３を介して反応させ、４-((２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メチル)ピペラジン-１-カルボン酸ｔｅｒｔ-ブチルを得た。
４-((２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メチル)ピペラジン-１-カルボン酸ｔｅｒｔ-ブチル（７７７ｍｇ）を一般的手順Ｅに供し、２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノ-６-((ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジンのＨＣｌ塩を得た。２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノ-６-((ピペラジン-１-イル)メチル)チエノ[３,２-ｄ]ピリミジンのＨＣｌ塩（５９０ｍｇ）を一般的手順Ｂ−２を介して乳酸と反応させ、(Ｓ)-１-(４-((２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メチル)ピペラジン-１-イル)-２-ヒドロキシプロパン-１-オンを得た。
(Ｓ)-１-(４-((２-クロロ-７-メチル-４-モルホリノチエノ[３,２-ｄ]ピリミジン-６-イル)メチル)ピペラジン-１-イル)-２-ヒドロキシプロパン-１-オン（６０ｍｇ）を５０ｍｇの５-(４,４,５,５-テトラメチル-１,３,２-ジオキサボラン-２-イル)ピリミジン-２-アミンと一般的手順Ａ−２を介して反応させ、１０ｍｇの式Ｉｂ（出典明示により援用される米国特許出願公開第２００８／０２４２６６５号)を得た。ＭＳ（Ｑ１）４９９．３（Ｍ）＋。
【０２４４】
実施例１４  ｐ１１０α(アルファ)ＰＩ３Ｋ結合アッセイ
結合アッセイ：  最初の偏光実験を、アナリストＨＴ９６−３８４（Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA.）で実施した。蛍光偏光親和性測定のための試料を、偏光バッファー（１０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）、５０ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０５％のＣｈａｐｓ、及び１ｍＭのＤＴＴ）中の２０μｇ／ｍＬの最終濃度で開始するｐ１１０αＰＩ３Ｋの１：３段階希釈物（Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA）を、１０ｍＭの最終濃度のＰＩＰ２（Echelon-Inc, Salt Lake City, UT）に加えることによって調製した。室温での３０分のインキュベーション時間後、それぞれ１００ｎＭ及び５ｎＭの最終濃度のＧＲＰ-１及びＰＩＰ３-ＴＡＭＲＡプローブを加えることによって反応を止めた。３８４ウェルのブラック低容量プロキシプレート（PerkinElmer, Wellesley, MA）中のローダミンフルオロフォア（λｅｘ＝５３０ｎｍ；λｅｍ＝５９０ｎｍ）について標準的なカットオフフィルターで読み取る。蛍光偏光値をタンパク質濃度の関数としてプロットし、ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈソフトウェア（Synergy software, Reading, PA）を使用してデータを４パラメータ式にフィットさせることによってＥＣ５０値を得た。この実験はまた阻害剤での続く競合実験において使用する適切なタンパク質濃度を確立する。
【０２４５】
ＰＩＰ２（１０ｍＭの最終濃度）と組合わせた０．０４ｍｇ／ｍＬのｐ１１０αＰＩ３Ｋ（最終濃度）を、偏光バッファー中の２５ｍＭの最終濃度のＡＴＰ（Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA）中のアンタゴニストの１：３段階希釈物を含むウェルに加えることによって、阻害剤のＩＣ５０値を決定した。室温で３０分のインキュベーション時間後、それぞれ１００ｎＭ及び５ｎＭの最終濃度のＧＲＰ−１及びＰＩＰ３−ＴＡＭＲＡプローブ（Echelon-Inc, Salt Lake City, UT.）を加えることによって反応を止めた。３８４ウェルのブラック低容量プロキシプレート（PerkinElmer, Wellesley, MA）中のローダミンフルオロフォア（λｅｘ＝５３０ｎｍ；λｅｍ＝５９０ｎｍ）について標準的なカットオフフィルターで読み取る。蛍光偏光値をアンタゴニスト濃度の関数としてプロットし、Ａｓｓａｙ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェア（MDL, San Ramon, CA.）でデータを４パラメータ式にフィットすることによってＩＣ５０値を得た。
【０２４６】
別法では、精製した組換え酵素及びＡＴＰを１μＭの濃度で使用した放射測定アッセイにおいてＰＩ３Ｋの阻害を決定した。化合物を１００％のＤＭＳＯで段階希釈した。キナーゼ反応物を室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳを添加することによって反応を終わらせた。続いて、ＩＣ５０値を、シグモイド用量応答曲線の当てはめ（可変勾配）を使用して決定した。
【０２４７】
実施例１５  インビトロ細胞増殖アッセイ
式Ｉ又はＩＩの化合物の効能を、次のプロトコル（Mendoza等(2002) Cancer Res. 62:5485-5488）を用いた細胞増殖アッセイによって測定した。試薬及びプロトコールを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒ-Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは商業的に入手可能である（Promega Corp.,Madison,WI,Technical Bulletin TB288）。該アッセイは、化合物が細胞に入り、細胞増殖を阻害する能力を評価する。該アッセイの原理は、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬の添加が細胞溶解及びルシフェラーゼ反応を介した発光シグナルの生成を生じる均質アッセイにおいて存在するＡＴＰを定量することにより、存在する生細胞の数を定量することに基づく。発光シグナルは存在するＡＴＰの量に比例する。
【０２４８】
手順：１日目−細胞プレート（３８４ウェル、ブラック、透明な底部、マイクロクリア，Ｆａｌｃｏｎ＃３５３９６２の蓋を伴うＴＣプレート）に播種し、細胞を収集し、３日間のアッセイで１ウェル５４μＬ当たり１０００の細胞を３８４ウェル細胞プレートに播種する。細胞培養培地：ＲＰＭＩ又はＤＭＥＭ高グルコース、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭＬ-グルタミン、Ｐ／Ｓ。３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートＯ／Ｎ。
【０２４９】
２日目−細胞、化合物希釈液、ＤＭＳＯプレート（段階１：２、９ポイント）に薬剤を加え、９６ウェルプレートの二番目のカラム中の１０ｍＭで２０ｕｌの化合物を加える。Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎを使用して全９ポイントに対してプレートにわたって段階１：２を実施する（１０μｌ＋２０μｌの１００％ＤＭＳＯ）。Ｎｕｎｃ製の培地プレート９６ウェル円錐底ポリプロピレンプレート（カタログ番号２４９９４６）（１：５０希釈）。１４７μｌの培地を全てのウェルに加える。ＤＭＳＯプレート中の各ウェルから３μｌのＤＭＳＯ＋化合物を、Ｒａｐｉｄプレートを使用して培地プレート上の各対応ウェルに移す。二剤併用試験では、ＤＭＳＯプレート中の各ウェルからの１．５μｌのＤＭＳＯ＋化合物一剤を、Ｒａｐｉｄプレートを使用して培地プレート上の各対応ウェルに移す。ついで、他の薬剤１．５ｕｌを培地に移す。
【０２５０】
細胞、細胞プレート（１：１０希釈）に薬剤を加え、６μｌの培地＋化合物を細胞（既に５４μｌの培地が細胞上にある）に直接加える。あまり頻繁に開けないインキュベーター中で３日間３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。
【０２５１】
５日目−プレートを展開し、室温でＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏバッファーを解凍。細胞プレートを３７℃から移し、約３０分間、室温まで平衡にする。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ基質にＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏバッファーを加える（ビンからビンへ）。３０μｌのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ カタログ番号Ｇ７５７２）を細胞の各ウェルに加える。プレート振盪機に約３０分間配する。発光をアナリストＨＴプレートリーダー（１ウェル当たり０．５秒）で読み取る。
【０２５２】
細胞生存アッセイ及び併用アッセイ：  細胞を３８４ウェルプレート中に１０００から２０００細胞／ウェルで１６時間播種した。２日目に、９６ウェルプレートにおいてＤＭＳＯ中で９回の段階１：２化合物希釈を作製した。化合物を更にラピッドプレートロボット（Zymark Corp., Hopkinton, MA）を用いて増殖培地中に希釈した。希釈した化合物をついで３８４ウェル細胞プレート中の四組のウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。４日後、生存細胞の相対数を、製造業者の説明書に従いＣｅｌｌ-Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Promega）を使用して発光を測定し、Ｗａｌｌａｃ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌリーダー（PerkinElmer,Foster City）で読み取った。ＥＣ５０値をＰｒｉｓｍ４．０ソフトウェア（GraphPad, San Diego）を用いて計算した。併用アッセイにおける薬剤は４×ＥＣ５０濃度で開始して用量決定した。薬剤のＥＣ５０が＞２．５μＭの場合、使用した最高濃度は１０μＭであった。ＰＩ３Ｋ阻害剤及び化学療法剤は全てのアッセイにおいて同時に又は４時間あけて（交互に）加えた。
【０２５３】
更なる例示的なインビトロ細胞増殖アッセイは次の工程を含む：
１．培地中に約１０４の細胞を含む細胞培養物（細胞株及び腫瘍タイプについては図１Ａ−Ｃを参照)の１００μｌのアリコートを、３８４ウェルの不透明な壁部のプレートの各ウェルに沈着させた。
２．培地を含み細胞を含まないコントロールウェルを調製した。
３．化合物を実験ウェルに加え、３−５日間インキュベートした。
４．プレートをおよそ３０分間室温に平衡化した。
５．各ウェル中に存在する細胞培養培地の体積に等しい体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ-Ｇｌｏ試薬を加えた。
６．内容物をオービタルシェーカーで２分間混合し、細胞溶解を誘発した。
７．プレートを室温で１０分間インキュベートし、発光シグナルを安定化させた。
８．発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光単位としてグラフで報告した。
９．コンビネーションインデックスを得るために、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェア（Biosoft, Cambridge, UK）と共にＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの組合わせ法及び用量効果解析法を使用して分析する。
【０２５４】
別法では、細胞を９６ウェルプレートに最適密度で播き、試験化合物の存在下で４日間インキュベートした。続いて、アラマーブルー（商標）をアッセイ培地に加え、細胞を６時間インキュベートした後、５４４ｎｍの励起、５９０ｎｍの発光で読み取った。シグモイド用量反応曲線フィッティングを使用してＥＣ５０値を計算した。
【０２５５】
別法では、増殖／生存率を薬物治療から４８時間後にＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ ｇｌｏ試薬（Promega Inc., Madison, WI）を用いて分析した。ＤＭＳＯ処置を全ての生存率アッセイにおいてコントロールとして使用した。ＩＣ５０値を、ＸＬフィットソフトウェア（IDBS, Alameda, CA）を使用して計算した。
【０２５６】
ＡＭＬ細胞株ＡＰ−１０６０、ＥＯＬ−１、ＦＫＨ−１、ＧＦ−Ｄ８、ＨＥＬ、ＨＬ−６０、ＨＮＴ−３４、Ｋａｓｕｍｉ−１、ＫＧ−１、ＭＥ−１、ＭＬ−２、ＭＯＬＭ−１３、ＭＯＬＭ−１６、ＭＶ４−１１、ＮＯＭＯ−１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２、ＯＣＩ−ＡＭＬ３、ＯＣＩ−ＡＭＬ５、ＯＣＩ−Ｍ１、ＯＣＩ−Ｍ２、ＰＬ−２１、ＳＥＴ−２、ＳＩＧ−Ｍ５、ＳＫＭ−１、ＴＨＰ−１、ＵＫＥ−１及びＵＴ−７をＡＴＣＣ又はＤＳＭＺの何れかから取得した。細胞を１０％熱失活ＦＢＳ（Sigman-Aldrich）及び２ｍｏｌ／ＬのＬグルタミンを用いてＲＰＭＩ１６４０培地中に維持した。ウェスタンブロットのための抗体は、Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓから得たｐ１１０δ抗体を除いて、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した。阻害剤ＧＤＣ−０９４１はＧｅｎｅｎｔｅｃｈで合成した。ラパマイシン、Ａｒａ−Ｃ、及びダウノルビシンはＳｉｇｍａから購入した。全ての化合物はＤＭＳＯ中の原液として調製し、使用時にアッセイバッファーで希釈した。芽細胞はＡＭＬ患者の末梢血又は骨髄試料からＦｉｃｏｌｌ分離によって単離した。ＰＢＳ中での洗浄後、単離細胞を、１０％ＦＢＳ及び示したサイトカインカクテル（各々１０ｎｇ／ｍＬのＩＧＦ−１、ＳＣＦ、ＧＭＣＳＦ及びＩＬ−３）を含むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。
【０２５７】
ヒト多発性骨髄腫細胞株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC, Manassas, VA）から全て入手し、また先の研究で述べた（）。細胞は、１０％ウシ胎仔血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、２ｍＭのＬ-グルタミン及び１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地（Life Technology, Grand Island, NY）中、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。
【０２５８】
実施例１６  インビボマウス腫瘍異種移植片の効能
マウス：  雌の重篤な複合免疫不全マウス（Fox Chase SCIDR, C.B-17/IcrHsd, Harlan）は実験の０日目に８から９週齢で、１５．１から２１．４グラムのＢＷ範囲を有していた。動物を水（逆浸透、１ｐｐｍＣｌ）及び１８．０％粗タンパク質、５．０％粗脂肪、及び５．０％粗繊維からなるＮＩＨ３１ 改変・照射Ｌａｂ Ｄｉｅｔ（登録商標）を自由に与えた。マウスは、１２時間の照明周期、２１−２２℃（７０−７２ｏＦ）及び４０−６０％の湿度で、静止マイクロアイソレーター中、照射したＡＬＰＨＡ−Ｄｒｉ（登録商標）ｂｅｄ−ｏ’ｃｏｂｓ（登録商標）実験動物敷料の上でマウスを飼育した。ＰＲＣは、束縛された状態、畜産、手術手順、餌及び液体調節、動物管理に関する実験動物の管理と使用に関する指針（Guide for Care and Use of Laboratory Animals）の推奨を特に遵守している。ＰＲＣの動物ケア・使用プログラムは、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）によって認可されているものであり、実験動物の管理と使用に対する承認された標準の遵守を保障する。
【０２５９】
腫瘍移植：  異種移植を癌細胞で開始した。細胞を、１０％のウシ胎仔血清、２ｍＭのグルタミン、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン硫酸塩及び２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。細胞を、対数増殖中に収集し、５×１０７細胞／ｍＬの濃度でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。腫瘍移植の日に、各試験マウスの右腹側部に皮下的に１×１０＾７細胞（０．２ｍＬ）を移植し、腫瘍増殖を平均サイズが１００から１５０ｍｍ３の標的範囲に近づくところをモニターした。腫瘍移植から２１日目を実験の０日目として、マウスを、それぞれ７５−１７２ｍｍ３の範囲の個々の腫瘍体積と１２０−１２１ｍｍ３の群平均腫瘍サイズを持つ１０匹のマウスからなる四群に分けて配した（付録Ａ参照）。体積は式：
腫瘍体積（ｍｍ３）＝（ｗ２×ｌ）／２
ここで、ｗ＝腫瘍の幅、ｌ＝腫瘍の長さ（単位ｍｍ）
を使用して計算した。腫瘍重量は、１ｍｇが腫瘍体積１ｍｍ３に相当すると仮定して推定することができる。
【０２６０】
治療薬剤：  式Ｉａの化合物（ＧＤＣ−０９４１、ジェネンテック社）は、７３％の活性成分を含む塩形態の乾燥粉末として供給され、これを光から保護して室温で保存した。薬剤用量は毎週０．５％のメチルセルロース：脱イオン水（ＭＣ／Ｔｗ８０、「ビヒクル」）中の０．２％のＴｗｅｅｎ８０で調製し、４℃で保存した。７３％の活性剤を含む塩形態をＧ−０３３８２９用量の製剤において計上した。リツキシマブ（注射用リツキサン（登録商標）１０ｍｇ／ｍＬ、ジェネンテック、ロット番号Ｍ７９９０１）は臨床薬剤として購入した。リツキシマブの用量は無菌の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）を用いて原液のアリコートを希釈することによって各投薬日に調製した。全用量は、体重２０グラム当たり０．２ｍＬの体積（１０ｍＬ／ｋｇ）で述べられたｍｇ／ｋｇ投薬量を送達するように処方した。
【０２６１】
治療：  全用量は個々の動物の体重に合わせ、各図に示した経路で与えた。
【０２６２】
エンドポイント：  ノギスを使用して腫瘍を週に二回測定した。マウスを個々にモニターし、その腫瘍が１５００ｍｍ３の体積に達するか又は４９日目の実験の終わりかどちらか早い方で各マウスを安楽死させた。しかし、コントロール腫瘍の自己限定的な増殖のため、エンドポイントを分析のための１０００ｍｍ３まで減じた。各マウスに対するエンドポイントまでの時間（ＴＴＥ）は次の式から計算した：
ＴＴＥ（日数）＝［ｌｏｇ１０（エンドポイント体積，ｍｍ３）−ｂ］／ｍ
ここで、ｂは切片であり、ｍは対数変換した腫瘍増殖データセットの線形回帰によって得られる直線の勾配を表す。データセットは、実験のエンドポイント体積を超えた最初の観測値と、エンドポイント体積の到達点を越えた直後の３連続観測値とからなる。エンドポイントに達しない動物には実験最終日に等しいＴＴＥ値をあてがう。事故（ＮＴＲａ）又は原因不明（ＮＴＲｕ）のためにＮＴＲ（非処置関連）死に分類される動物は、ＴＴＥ計算（及び全ての更なる解析）から除外する。ＴＲ（治療関連）死又はＮＴＲｍ（転移による非治療関連死）として分類される動物には死亡の日と等しいＴＴＥ値をあてがう。治療成績は、腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）により評価したが、これは、コントロール群と比較した処置群におけるエンドポイントまでの時間の中央値の増加（ＴＴＥ）と定義される：
ＴＧＤ＝Ｔ−Ｃ
日数で表されるか又はコントロール群のＴＴＥ中央値の割合として表す：
％ＴＧＤ＝（Ｔ−Ｃ）／Ｃ×１００
ここで、Ｔ＝治療群のＴＴＥ中央値、Ｃ＝コントロール群のＴＴＥ中央値（群１）である。治療は動物における腫瘍の部分奏効（ＰＲ）又は完全奏効（ＣＲ）を生じうる。部分奏効では、腫瘍体積は、実験の過程中の３連続測定に対して１日目の体積の５０％以下であり、これらの３測定の一又は複数に対して１３．５ｍｍ３以上である。ＣＲ奏功では、腫瘍体積は実験の過程中の３連続測定に対して１３．５ｍｍ３未満である。実験終了時にＣＲ奏功の動物は無腫瘍生存体（ＴＦＳ）と更に分類される。動物を退縮応答についてモニターした。
【０２６３】
毒性：  動物は実験の最初の５日間は毎日体重測定し、その後、週に二回測定した。マウスは、何らかの有害な、治療関連の副作用の明白な徴候について頻繁に観察し、観察されたときに毒性の臨床症状を記録した。許容可能な毒性は、実験中２０％未満の群平均体重（ＢＷ）減少で、１０匹の処置動物の中で治療関連（ＴＲ）死が１匹を越えないものとして定義される。より多い毒性を生じる投薬レジメンは最大耐量（ＭＴＤ）を越えると考えられる。死は、臨床症状及び／又は剖検により証明されて、治療の副作用に起因するならばＴＲと分類され、あるいは投薬期間内の又は最終投薬の１０日以内の原因不明のものもまたＴＲと分類されうる。死が治療の副作用に関連していたという証拠がないならばＮＴＲと分類される。
【０２６４】
実施例１７  Ｂ細胞及び骨髄腫細胞株のＧＤＣ−０９４１処置後のｐ−Ａｋｔ、ｐ−ＢＡＤ及びｐ−Ｓ６リボソームタンパク質の検出のためのウェスタンブロット法
材料：  電気泳動のための全試薬及びブロッティングバッファー原液はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手した。
Ｂ細胞株（ＤｏＨＨ２及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２）及び骨髄腫細胞株（ＯＰＭ２及びＵ２６６）はＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ及びグルタミンの存在下でＲＰＭＩ−１６４０／１０％ＦＢＳ中に維持した。
【０２６５】
プロトコール：
１．  各細胞株の１０７細胞を各細胞株について２皿の１０ｃｍペトリ皿の１０ｍＬ培地に播種する。
２．  ５ｕＬの１０ｍＭ ＧＤＣ−０９４１ストック（ＤＭＳＯ中）を１０ｍＬの培地の一つの皿に最終５ｕＭ薬剤となるように加え、５ｕＬのＤＭＳＯを他の皿にコントロールとして加える。
３．  ３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに細胞を４時間維持した後、収集する。
４．  ９ｍＬの培養物（９×１０６細胞と等価）を１５ｍＬのコニカルチューブに収集し、ペレットにし、１×ＳＤＳ試料バッファーを用いて細胞可溶化物を作製する。ＦＡＣＳのために各条件の他の１ｍＬ（１×１０６細胞と等価）を５ｍＬのＦＡＣＳチューブ（ＢＤ）に移す。
５．  細胞を冷ＰＢＳで一回洗浄する。
６．  タンパク質試料のＯＤを測定し、ＮｕＰＡＧＥ電気泳動系試薬を用いてそれぞれ２０ｕｇを負荷するように試料を調製する。
７．  電気泳動のための各タンパク質試料を、適切な量のＮｕＰＡＧＥ ＬＤＳ試料バッファー及び還元剤と混合し、７０℃の熱を１０分間かける。
８．  １０ｕＬのＳｅｅＢｌｕｅ Ｐｌｕｓ２事前染色標準及び２０ｕｇの各試料を４−１２％のＮｕＰＡＧＥ Ｎｏｒｖｅｘビス-トリスゲルに負荷し、ＭＥＳ-ＳＤＳバッファーを用いて抗酸化剤の存在下で走査する（ＸＣｅｌｌ ＳｕｒｅＬｏｃｋ Ｍｉｎｉ-Ｃｅｌｌ装置で１時間１３５ボルト）。
９．  ゲルを、ｉＢｌｏｔ装置を使用してブロッティング膜に移す。
１０．  １×ＴＢＳＴバッファーで一回洗浄する。
１１．  ２０ｍＬの１×ＴＢＳＴ５％の脱脂乳を用いて膜を２時間ブロックする。
１２．  １×ＴＢＳＴバッファーで三回洗浄する。
１３．  ４℃で一晩、適度な希釈度で、１０ｍＬの１×ＴＢＳＴ５％ＢＳＡ及び一次抗体（ｐ−Ａｋｔ、クローン１９３Ｈ１２、ｐ−ＢＡＤ、クローン１８５Ｄ１０及びｐ−Ｓ６ＲＰ、クローンＤ５７．２．２Ｄ、βアクチン、クローン１３Ｅ５、Cell Signaling）中で膜をインキュベートする。ｐ−Ａｋｔ及びｐ−６ＳＲＰ及びβアクチンウサギ抗体を同じ膜を加え、他を各々別個の膜に加える（複数のゲルは先に作製される）。
１４．  １×ＴＢＳＴバッファーで三回洗浄する。
１５．  １０ｍＬの１×ＴＢＳＴバッファー／５％脱脂乳中、室温で２時間、適切な希釈度でＨＲＰ結合ヤギ抗ウサギ抗体と共にインキュベートする。
１６．  １×ＴＢＳＴバッファーで三回洗浄する。
１７．  膜を３ｍＬのＬｕｍｉＧＬＯと共に３分間インキュベートし、過剰な溶液を排出し、Ｘ線フィルムに露光する。
【０２６６】
別法では、各条件に対して１０×１０６細胞を１０ｃｍ２プレートに播き、細胞を、ＧＤＣ−０９４１、デキサメタゾン、又はレナリドミドを用いて、又は併用して処置した。ＤＭＳＯ処置をコントロールとして使用した。細胞を冷ＰＢＳで一回洗浄し、１×細胞溶解バッファーで可溶化した（Cell Signaling Technology, Beverly, MA）。同量のタンパク質をＮｕｐａｇｅビス-トリスゲル（Invitrogen, Carlsbad, CA）を使用して分離した。抗ホスホＡｋｔ（セリン４７３）、抗ＰＴＥＮ、抗ホスホＢＡＤ（セリン１３６）、抗ホスホＦｏＸＯ１／３ａ、Ｂｉｍ、切断型カスパーゼ９、切断型カスパーゼ３、ｐ２７及び切断型ＰＡＲＰ抗体（Cell Signaling Technology, Beverly, MA）を使用してウェスタンブロット分析を実施した。全ＡＫＴ、全ＢＡＤ、全Ｆｏｘｏ３ａ及びβアクチン（シグマ）レベルをコントロールとして使用した。
【０２６７】
実施例１８  ＧＤＣ−０９４１処置後のｐ−Ａｋｔ及びｐ−Ｓ６リボソームタンパク質の細胞内検出のためのＦＡＣＳプロトコール
Ｂ細胞株（ＤｏＨＨ２及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２）及び骨髄腫細胞株（ＯＰＭ２及びＵ２６６）をＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ及びグルタミンの存在下でＲＰＭＩ-１６４０／１０％ＦＢＳ中に維持した。
プロトコール：
１．  各細胞株の１０７細胞を各細胞株について２皿の１０ｃｍペトリ皿の１０ｍＬ培地に播種する。
２．  ５ｕＬの１０ｍＭ ＧＤＣ−０９４１ストック（ＤＭＳＯ中）を１０ｍＬの培地の一つの皿に最終５ｕＭ薬剤となるように加え、５ｕＬのＤＭＳＯを他の皿にコントロールとして加える。
３．  ３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに細胞を４時間維持した後、収集する。
４．  各条件の１ｍＬ（１０６細胞に等価）を５ｍＬのＦＡＣＳチューブ（ＢＤ）に移し、５分間１２００ｒｐｍで遠心した後、固定化する（ウェスタンのために他の９ｍＬ培養物−９×１０６細胞を１５ｍＬコニカルチューブに収集する）。
５．  上清を吸引し、細胞を室温でＦｉｘ／Ｐｅｒｍ培地Ａ（カタログ番号ＧＡＳ００１Ｓ−１００）を用いて１５分間固定する。
６．  ＰＢＳ／２％ＦＢＳで細胞を１回洗浄する。
７．  上清を吸引し、Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍ培地Ｂ（カタログ番号ＧＡＳ００２Ｓ−１００）を用いて室温で１５分間、細胞を透過処理する。
８．  ＰＢＳ／２％ＦＢＳで細胞を１回洗浄する。
９．  ３００ｕＬのＰＢＳ／２％のＢＳＡと共に細胞を再懸濁し、各々１００ｕＬの３つのチューブに分ける（一つはアイソタイプ-ウサギＩｇＧ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−６４７、一つはｐ−Ａｋｔ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−６４７クローン１９３Ｈ１２及び一つはｐ−Ｓ６ＲＰ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−６４７クローンＤ５７．２．２Ｅで、全てのウサギ抗体はCell Signalingから入手）。
１０．  ５０ｎｇの各Ａｂを対応チューブに添加し、室温で３０分間インキュベートする。
１１．  ＰＢＳ／２％ＦＢＳで１回洗浄する。
１２．  細胞を３００ｕＬのＰＢＳ／２％ＢＳＡで再懸濁させ、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔプログラムを用いてＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ）上にデータを得る。
１３．  ＦｌｏｗＪｏプログラムを使用してデータを分析し、ヒストグラムでデータを表す。
【０２６８】
実施例１９  ＧＤＣ−０９４１処置後のアポトーシス及び生存細胞の定量的蛍光を測定するためのＦＡＣＳプロトコール
アポトーシス及び生存細胞を、蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）アッセイに若干の修正を加えたものを使用して定量的蛍光解析により測定した（Munugalavadla等(2008)Mol. Cell Biol. 28(23):7182-7198）。様々な多発性骨髄腫細胞株（１×１０６）をＤＭＳＯ又は様々な濃度の図ＩａのＧＤＣ−０９４１で２４時間処置し、ついで細胞を製造者の説明書に従いＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ−ＡＰＣ／ＰＩキット（BD Biosciences, San Jose, CA）を用いて染色し、フローサイトメトリーで分析した。原発性多発性骨髄腫患者の試料の場合、２百万の核形成ＢＭ細胞を、６ウェルプレートにおいて、２％熱失活ウシ増殖血清（Hyclone, Waltham, MA）及び２ｎｇ／ｍｌの組換え型ＩＬ６（R&D Systems Inc., Minneapolis, MN）を補填した２ｍｌのａｄｖａｎｃｅｄ−ＲＰＭＩ（Invitrogen, Carlsbad, CA）中に播種した。細胞をビヒクル（ＤＭＳＯ）、１μＭ又は１０μＭのＧＤＣ−０９４１で７２時間処置し、ついでフローサイトメトリーにより分析して、薬剤誘導アポトーシスを評価した。次の試薬を使用した：ＣＤ４５ＲＡ−ＦＩＴＣ、ＣＤ３８−ＡＰＣ及びヨウ化プロピジウム（全てBD Pharmingen, San Jose, CAから入手した）。データはＣｙａｎＡＤＰ機器（Dako Cytomation）で獲得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Tree Star）を使用して解析した。生存形質細胞はＣＤ３８ｈｉＣＤ４５ＲＡ−及びＰＩ−として同定した。
【０２６９】
実施例２０  細胞周期分析
細胞周期分析をＣｌｉｃｋ−ｉＴ（商標）Ｅｄｕサイトメトリーアッセイキット（Invitrogen, Carlsbad, CA）を製造者の説明書に従って使用して、行った。蛍光はＢＤ ＬＳＲ−ＩＩで測定し、データを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Becton Dickinson）を使用して分析した。
【０２７０】
実施例２１  Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイを使用する原発性ＭＭ骨髄単核細胞におけるｐＡＫＴ測定
ＭＭドナー由来の骨髄単核細胞（ＢＭ-ＭＮＣ）を、１０％ＦＢＳを補填した１０ｍＬのＲＰＭＩ中で一晩培養した。インキュベーション後、細胞を増殖培地で１回洗浄し、１ｍＬの培地に再懸濁させた。各ドナーでは、細胞を５００ｍＬのアリコートに分け、１ｍＭのＤＭＳＯ又はＧＤＣ−０９４１の何れかで３７℃で１時間処理した。処理後、細胞ペレットを５分間１２００ｒｐｍで収集し、ペレットを冷ＰＢＳで１回洗浄した。細胞ペレットを６０ｍｌの１×Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（MSD, Gaithersburg, Maryland）細胞溶解バッファーで再懸濁し、ライセートを４℃、１４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって清澄化させた。清澄化した細胞ライセートを、ＭＳＤキットを若干の修正を加えて製造者の説明に従って使用して、ホスホＡｋｔ（Ｓｅｒ４７３）及び全Ａｋｔを評価した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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