(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−ジパルミトイルフォスファチジルコリンからなる陽イオン性のリポソーム内に、少なくとも、グリコサミノグリカンと、医薬品としての抗腫瘍剤と、を含む関節潤滑機能向上用リポソーム製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、関節軟骨損傷や変形性関節症の治療用のリポソーム製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリコサミノグリカン類は、アミノ糖とウロン酸とを含む基本骨格を有する直鎖の多糖類である。グリコサミノグリカン類は、脊椎動物の軟骨をはじめとする結合組織に広く分布しており、溶液に高い粘度を与える長い構造を有する負に荷電した分子である。これらのグリコサミノグリカン類としては、ヒアルロン酸、コンドロイチン（硫酸）、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸などが挙げられる。
【０００３】
これらのグリコサミノグリカン類のうち、例えばヒアルロン酸（以下、「ＨＡ」と略す場合もある）は、滑膜および関節液などの結合組織中に高濃度で存在する。ＨＡは、β−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミンと、β−Ｄ−グルクロン酸とが交互に結合した直鎖状の高分子多糖であり、その分子量は数百万〜１千万に及び、多様な状態で存在する。関節液は、関節の滑性に寄与しており、関節組織にＨＡを補充し、抗炎症性を与える。ＨＡは、間接液に流動的特性（粘度および弾性）を与えるため、関節の恒常性に重要な役割を有する。変形性関節症などの関節症の患者では、関節液中のＨＡの分子量及び濃度が低下することが知られている。
【０００４】
このため、関節疾患の治療として、ＨＡ溶液を疾患関節部位へ注入する方法が提案されている（例えば、特許文献１参照）。この方法は、ＨＡが関節液の粘度を補充し、関節液に滑性を与え、軟骨表面を保護するので、有効である。
【０００５】
一方、リン脂質は関節軟骨表面に存在し、軟骨表面を疎水性に保ち、関節軟骨間に関節液による流体潤滑膜を形成するので、境界潤滑改善効果を有する。例えば、Ｌ−α−ジパルミトイルホスファチジルコリンからなるリポソームとＨＡとを含む水溶液を用いて、靭帯切離による変形性関節症モデル家兎に対するリン脂質リポソームの関節腔内注入効果が評価されている（例えば、非特許文献１参照）。
【特許文献１】米国特許第５９１４３２２号
【非特許文献１】日本臨床バイオメカニクス学会誌，  Ｖｏｌ．１９，  １３１−１３５（１９９８）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、ＨＡは、生体内において、酵素により分解される、あるいはリンパによる除去過程を通して関節内から経時的に除去される。このため、特許文献１に記載されるような方法を用いた治療は、患者の関節に、１週間毎に３〜５回の注射をする必要があり、患者及び医師の負担の面からその低減が望まれている。
【０００７】
また、特許文献２に記載の潤滑組成物では、リポソームが、軟骨面を疎水性に保つことに寄与する。しかし、この場合であっても、ＨＡは、特許文献１に記載の方法と同様に分解または除去されるので、１週間毎に３〜５回の注射をする必要がある。
【０００８】
すなわち、本発明は、上記問題に鑑みなされたものであり、その目的は、グリコサミノグリカンの効果とリン脂質の効果を相乗的に発揮し、しかも長期間効果が持続するリポソーム製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、グリコサミノグリカンをリポソームに封入したリポソーム製剤を用いることで、関節潤滑機能が向上することを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下のとおりである。
【００１０】
本発明のリポソーム製剤は、リポソーム内に少なくともグリコサミノグリカン、抗腫瘍剤、抗生物質、抗炎症剤、抗リウマチ剤、ステロイド剤および局所麻酔薬から選択される薬剤を含むものである。例えば、グリコサミノグリカンは、負に荷電した分子であるので、リポソーム内に封入されるだけでなく、リポソームの外部と結合し、複雑なリポソーム−グリコサミノグリカン構造物を形成していると考えられる。この結果、グリコサミノグリカンの滑性改善効果とリン脂質の境界潤滑改善効果を相乗的に発揮し、関節潤滑機能が向上する。また、リポソーム内にグリコサミノグリカンを封入するので、グリコサミノグリカンが徐放され、長期間効果が持続する。このように使用する薬剤を選択することで、リポソームの効果と使用する薬剤の効果との相乗作用を得ることができる。
【００１１】
前記グリコサミノグリカンが、ヒアルロン酸であってもよい。また、前記リポソームが、α−ジパルミトイルフォスファチジルコリンであってもよい。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のリポソーム製剤は、使用する薬剤の効果とリン脂質の効果を相乗的に発揮し、しかも長期間効果が持続する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００１４】
［リポソームに封入することができる薬剤］
本発明で、リポソームに封入することができる薬剤は、関節疾患の治療で、関節内投与することができる薬剤であれば、特に制限はされない。例えば、非ペプチド性軟骨形成促進物質、ベンゾチオピラン、ベンソチエビン誘導体等の軟骨形成促進作用または骨形成促進作用を有する物質、ステロイド系ホルモン、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド剤、消炎鎮痛剤、抗リウマチ薬、抗菌剤、抗生物質、グリコサミノグリカン、抗腫瘍剤などを用いることができる。
【００１５】
これらの薬剤の中で、好ましい薬剤は、グリコサミノグリカン、抗腫瘍剤、抗生物質、抗炎症剤、抗リウマチ剤、ステロイド剤、局所麻酔薬であり、さらに好ましい薬剤は、グリコサミノグリカンである。
【００１６】
［グリコサミノグリカン］
本発明で使用するグリコサミノグリカンは、アミノ糖とウロン酸とを含む基本骨格を有する直鎖の多糖類であればよく、例えばヒアルロン酸、コンドロイチン（硫酸）、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸などが挙げられる。これらのグリコサミノグリカンの中で、好ましいのは関節液に含まれるヒアルロン酸である。
【００１７】
本発明に用いられるＨＡは、動物組織から抽出したものでも、また発酵法で製造したものでもよい。発酵法で使用する菌株は自然界から分離されるストレプトコッカス属等のＨＡ生産能を有する微生物、又は特開昭６３−１２３３９２号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−１００（微工研菌寄第９０２７号）、特開平２−２３４６８９号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−３００（微工研菌寄第２３１９号）のような高収率で安定にＨＡを生産する変異株が望ましい。上記の変異株を用いて培養、精製されたものが用いられる。本発明に用いられるＨＡの分子量は、約１×１０5〜約１×１０7ダルトンの範囲内のものが好ましい。また、上記範囲内の分子量をもつものであれば、より高分子量のものであっても、加水分解処理をして得た低分子量のものであってもよい。尚、本発明でいうＨＡは、そのアルカリ金属塩、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウムの塩をも包含する概念で使用される。
【００１８】
本発明のリポソーム製剤に用いるＨＡの濃度は、０．１〜１０質量％、好ましくは０．２〜８質量％である。
【００１９】
本発明のリポソーム製剤におけるリポソームは、脂質二重層膜構造を持つ小水胞体（ベシクル）となったものであれば特に限定されない。例えば、小さい一枚膜リポソーム〔スモール・ユニラメラ・ベシクル（ＳＵＶ）〕、多重層リポソーム〔マルチラメラ・ベシクル（ＭＬＶ）〕、大きな一枚膜リポソーム〔ラージ・ユニラメラ・ベシクル（ＬＵＶ）〕に加え、リバースエバポレーションベシクル（ＲＥＶ）；ステイブル・プルリラメラー・ベシクル（ＳＰＬＶ）、または特表平９−５０５３０１（ＷＯ９５／１３７９６号公報）記載の組成物，特表平１０−５０２６６７号公報（ＷＯ９６／０８２３５号公報）記載の多小胞リポソームもしくはマルチベシクル・リポソーム（Ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ）等が挙げられる。
【００２０】
本発明のリポソーム製剤において用いられる原料脂質としては、脂質二重層膜構造を形成するものであればどのようなものでもよく、例えば、スフィンゴミエリン、ガングリオシド等のセラミド類； ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール等のリン脂質およびそれらの水素添加物またはそれらの混合物；等を用いることができる。このようなリン脂質は、卵黄、大豆その他の動植物に由来する天然由来脂質（例、卵黄レシチン、大豆レシチン等）； 合成脂質； 例えばアシル基を切断した後に高純度の合成の飽和あるいは不飽和アシル基に置換することによって半合成的に製造した半合成脂質のいずれであっても、あるいはその混合物であってもよい
【００２１】
前記原料脂質において、好ましくはリン脂質が用いられる。前記リン脂質において、好ましくは、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジラウロイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジグリセロール（ＤＳＰＧ）等のホスファチジルグリセロール； またはジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤLＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）等のホスファチジルコリン等の少なくとも1種が用いられる。
【００２２】
本発明のリポソーム製剤は自体公知の方法で製造することができる。
【００２３】
本発明のリポソーム製剤には、製剤素材として添加できる溶剤、懸濁化剤、緩衝剤、界面活性剤、防腐剤、抗酸化剤を用いてもよい。
【実施例１】
【００２４】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものではない。
【００２５】
（ＨＡ溶液の調整）
１％質量のヒアルロン酸ナトリウム（生化学工業（株）製）を計りとり、５ｍＭのｐＨ７．２リン酸緩衝化生理的食塩水を加えて、ヒアルロン酸ナトリウム濃度が３ｍｇ／ｍｌになるように溶解した。
【００２６】
（リポソーム製剤の作成）
Ｌ−α−ＤＰＰＣ中空リポソームであるコートソームＥＬ  ＥＬ−０１−Ｃ（陽イオン性）、ＥＬ−０１−Ｎ（非イオン性）、ＥＬ−０１−Ａ（陰イオン性）（日本油脂（株）製）のそれぞれに上記ＨＡ溶液を２ｍｌずつ加え、浸透し、本発明のリポソーム製剤を得た（実施例１〜３）。
【００２７】
（関節潤滑機能評価）
上記実施例１〜３のリポソーム製剤と、比較例として濃度３ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸ナトリウム溶液（比較例１）とを用いて、以下のようにして、関節潤滑機能を評価した。
【００２８】
図１は、本発明のリポソーム製剤の関節潤滑機能を評価するための実験装置を示す概念図である。図１に示すように、ブタ膝関節軟骨からそれぞれ直径５ｍｍと８ｍｍとに円板状に切り出した関節軟骨を関節軟骨面が向かい合うように配置し、実施例１〜３のリポソーム製剤と比較例１のＨＡ溶液とを、それぞれ潤滑液として軟骨が浸漬するように満たし、回転数制御型レオメータ（ティー・エイ・インスツルメント（製）、ＡＲ−２０００）を用いて、関節軟骨面の摩擦係数を測定した。測定は、垂直応力０．４５−０．５４（ＭＰａ）、角速度０．２０−３．１９（ｒａｄ／ｓ）の範囲で行った。結果を表１、図２に示す。
【表１】
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【００２９】
表１から、本発明のリポソーム製剤は、摩擦係数が減少しており、潤滑機能が向上することがわかった。
【００３０】
また、図２から、コートソームＥＬ  ＥＬ−０１−Ｃ（陽イオン性）を用いたもの（実施例１）が、ＥＬ−０１−Ｎ（非イオン性）、ＥＬ−０１−Ａ（陰イオン性）を用いたもの（実施例２、３）より摩擦係数を最も減少させることがわかる。これは、ヒアルロン酸は負に荷電していることから、リポソーム表面に安定して結合しているので、リポソームが崩壊するまでに、表面に付着したヒアルロン酸が効果を発揮した可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、本発明のリポソーム製剤の関節潤滑機能を評価するための実験装置を示す概念図である。
【図２】図２は、本発明のリポソーム製剤を用いて関節軟骨面の摩擦係数を測定した結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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