(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式で表される化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
【化１２】
0005686796.tif 000021
Ｒ１はＣ１−３脂肪族であり；
Ｒ２は水素、フルオロまたはメチルであり；
Ｒ３は水素、フルオロまたはメチルであり；
各Ｒ４は独立に水素またはフルオロであり；
Ｒ５は水素、クロロ、シクロプロピル、またはＣ１−４脂肪族であり、任意に１−３個のフッ素原子で置換されている、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ２はメチルであり、Ｒ３は水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１はメチルであり、Ｒ５は水素である、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ２は水素であり、Ｒ３はメチルである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ１はメチルであり、Ｒ５は水素である、請求項４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ２およびＲ３の各々はフルオロである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ１はメチルであり、Ｒ５は水素である、請求項６に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ４は水素である、請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｒ４はフルオロである、請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
以下の構造：
【化１３Ａ】
0005686796.tif 000022
で表される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
以下の構造：
【化１３Ｂ】
0005686796.tif 000023
で表される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
以下の構造：
【化１３Ｃ】
0005686796.tif 000024
で表される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容されるキャリア、補助剤またはビヒクルとを含む、医薬組成物。
【請求項１４】
化学療法剤または抗増殖剤、抗炎症薬、アテローム性動脈硬化症の治療剤、または肺線維症の治療剤を付加的に含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
患者の増殖性の障害を治療するか、またはその重症度を軽減するための医薬の調製における、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１６】
前記障害は転移性癌である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記障害は膠芽細胞腫；胃癌；または結腸癌、乳癌、前立腺癌、脳癌、肝癌、膵癌もしくは肺癌から選択される癌である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
前記障害は肝細胞癌である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
患者の増殖性の障害を治療するか、またはその重症度を軽減するための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、組成物。
【請求項２０】
前記障害は転移性癌である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記障害は膠芽細胞腫；胃癌；または結腸癌、乳癌、前立腺癌、脳癌、肝癌、膵癌もしくは肺癌から選択される癌である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記障害は肝細胞癌である、請求項１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はｃ−Ｍｅｔの選択的阻害剤に関する。本発明はまた、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤を含む薬学的に許容される組成物、および様々な増殖性障害を処置する際の組成物の使用方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
肝細胞増殖因子（ＨＧＦ：ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）は分散因子とも呼ばれ、有糸分裂誘発および細胞運動を誘導して形質転換および腫瘍の発生を促進する多機能増殖因子である。ＨＧＦはさらに様々なシグナル経路を介して細胞の運動および浸潤を刺激して転移も促進する。ＨＧＦが細胞効果を発現するには、その受容体ｃ−Ｍｅｔ、つまり受容体型チロシンキナーゼに結合しなければならない。ｃ−Ｍｅｔは、５０キロダルトン（ｋＤａ）のαサブユニットおよび１４５ｋＤａのα−サブユニットからなり、広く発現するヘテロ二量体タンパク質である（非特許文献１）。ｃ−Ｍｅｔはヒト癌にかなりの割合で過剰発現しており、原発腫瘍が転移する間に増幅される。ｃ−Ｍｅｔの過剰発現が関係している様々な癌には、胃腺癌、腎癌、小細胞肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、脳癌、肝癌、膵癌および乳癌があるが、これに限定されるものではない。ｃ−Ｍｅｔはさらにアテローム性動脈硬化症および肺線維症にも関与している。
【０００３】
したがって、ｃ−Ｍｅｔプロテインキナーゼ受容体の阻害剤として有用な化合物の開発が強く求められている。特に、好ましい化合物はｃ−Ｍｅｔ受容体に対して高親和性を有し、アンタゴニストとしての機能活性を示す一方、他のキナーゼ受容体に対してほとんど親和性を示さない化合物である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｍａｇｇｉｏｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１７３：１８３−１８６，１９９７
【非特許文献２】Ｄｅｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ３５（５）：１０６０−１０６３（２００７）
【非特許文献３】Ｓｃｉｐｔｕｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ６：７８０−７８９（２００５）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）
以下の式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
【化１２】
0005686796.tif 000002
Ｒ１はＣ１−３脂肪族であり；
Ｒ２は水素、フルオロまたはメチルであり；
Ｒ３は水素、フルオロまたはメチルであり；
各Ｒ４は独立に水素またはフルオロであり；
Ｒ５は水素、クロロ、シクロプロピル、またはＣ１−４脂肪族であり、任意に１−３フッ素原子で置換されている、化合物。
（項目２）
Ｒ２はメチルであり、Ｒ３は水素である、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ１はメチルであり、Ｒ５は水素である、項目２に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ２は水素であり、Ｒ３はメチルである、項目１に記載の化合物。
（項目５）
Ｒ１はメチルであり、Ｒ５は水素である、項目４に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ２およびＲ３の各々はフルオロである、項目１に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ１はメチルであり、Ｒ５は水素である、項目６に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ４は水素である、項目１から７のいずれか１項に記載の化合物。
（項目９）
Ｒ４はフルオロである、項目１から７のいずれか１項に記載の化合物。
（項目１０）
以下の構造：
【化１３】
0005686796.tif 000003
を有する、項目１に記載の化合物。
（項目１１）
項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容されるキャリア、補助剤またはビヒクルとを含む、医薬組成物。
（項目１２）
化学療法剤または抗増殖剤、抗炎症薬、アテローム性動脈硬化症の処置剤、または肺線維症の処置剤を付加的に含む、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
患者の増殖性の障害を処置するか、またはその重症度を軽減する方法であって、前記患者の前記増殖性の障害を処置するか、またはその重症度を軽減するために十分な量の、項目１に記載の化合物または前記化合物を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
（項目１４）
前記障害は転移性癌である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記障害は膠芽細胞腫；胃癌；または結腸癌、乳癌、前立腺癌、脳癌、肝癌、膵癌もしくは肺癌から選択される癌である、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
前記障害は肝細胞癌である、項目１３に記載の方法。
３−（キノリン−６−イル）メチル−Ｎ−（１Ｈ−ピロール−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−６−アミンは、ｃ−Ｍｅｔの阻害に有効であることが見出されている。
【０００６】
したがって、本発明は、以下の式を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とする：
【０００７】
【化１】
0005686796.tif 000004
ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、本明細書の他の箇所で定義されるとおりである。
【０００８】
本発明は、式Ｉの化合物と、薬学的に許容されるキャリア、補助剤またはビヒクルとを含む医薬組成物も提供する。加えて本発明は、患者の増殖性の疾患、状態または障害を処置するか、またはその重症度を軽減する方法であって、治療有効用量の式Ｉの化合物またはその医薬組成物を患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
定義および一般用語
本明細書で使用する場合、他に記載がない限り、以下の定義を適用するものとする。本発明における化学元素はＣＡＳ式の元素周期表およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．１９９４により特定される。さらに、有機化学の一般原理については、その内容全体を参照によって本明細書に援用する「Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９および「Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，ｅｄｓ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００１に記載されている。
【００１０】
本発明の化合物の説明
第１の態様では、本発明は以下の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を特徴とする：
【００１１】
【化２】
0005686796.tif 000005
ここで
Ｒ１はＣ１−３脂肪族であり；
Ｒ２は水素、フルオロまたはメチルであり；
Ｒ３は水素、フルオロまたはメチルであり；
各Ｒ４は独立に水素またはフルオロであり；
Ｒ５は水素、クロロ、シクロプロピル、またはＣ１−４脂肪族であり、任意に１−３フッ素原子で置換されている。
【００１２】
一実施形態では、Ｒ２はメチルであり、Ｒ３は水素である。別の実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ３はメチルである。
【００１３】
別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３の各々はフルオロである。
【００１４】
本発明の化合物の別の実施形態では、Ｒ４は水素である。
【００１５】
本発明の化合物の別の実施形態では、Ｒ１はメチルであり、Ｒ５は水素である。
【００１６】
さらなる実施形態では、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２およびＲ３の各々はフッ素であり、Ｒ４およびＲ５の各々は水素である。
【００１７】
別の実施形態では、化合物は塩酸塩である。
【００１８】
式Ｉの化合物は以下を含む：
【００１９】
【化３】
0005686796.tif 000006
【００２０】
【化４】
0005686796.tif 000007
別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容されるキャリア、補助剤またはビヒクルとを含む医薬組成物を特徴とする。一実施形態において、この組成物は付加的な化学療法剤または抗増殖剤、抗炎症薬、アテローム性動脈硬化症の処置剤、または肺線維症の処置剤を含む。
【００２１】
別の態様では、本発明は、患者の増殖性の障害を処置するか、またはその重症度を軽減する方法であって、前記患者の増殖性の障害を処置するか、またはその重症度を軽減するために十分な量の式Ｉの化合物を投与するステップを含む方法を特徴とする。一実施形態において、増殖性の障害は転移性癌である。別の実施形態において、増殖性の障害は膠芽細胞腫；肝細胞癌、胃癌；または結腸癌、乳癌、前立腺癌、脳腫瘍、肝癌、膵癌もしくは肺癌から選択される癌である。
【００２２】
別の実施形態において、増殖性の障害は転移性癌である。
【００２３】
本発明の化合物の組成物、製剤および投与
別の態様では、本発明は、化合物１またはその薬学的に許容される誘導体と、薬学的に許容されるキャリア、補助剤またはビヒクルとを含む組成物を提供する。一実施形態では、本発明の組成物中の化合物の量は、生物学的サンプルまたは患者のｃ−Ｍｅｔを測定可能な程度に阻害するのに有効な量である。好ましくは、本発明の組成物はそうした組成物を必要とする患者に投与できるように製剤化される。最も好ましくは、本発明の組成物は患者に経口投与できるように製剤化される。
【００２４】
「患者」という用語は、本明細書で使用する場合、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【００２５】
また、当然のことながら、化合物１は処置のための遊離型として存在しても、あるいは適切な場合、その薬学的に許容される誘導体として存在してもよい。本発明における薬学的に許容される誘導体としては、薬学的に許容されるプロドラッグ、塩、エステル、そのエステルの塩、または必要としている患者への投与時に本明細書で他に記載した化合物１に直接的または間接的になり得る他の任意の付加物もしくは誘導体、またはその代謝産物または残留物が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、適切な医学的判断に従い、過度の毒性、刺激、アレルギー反応および同種のものを回避しつつ、ヒトおよび下等動物の組織と接触して使用するのに好適な塩をいう。
【００２７】
薬学的に許容される塩は当該技術分野において周知である。たとえばＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、参照によって本明細書に援用するＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９，１９７７に薬学的に許容される塩について詳細に記載している。化合物１の薬学的に許容される塩としては、好適な無機酸および有機酸ならびに無機塩基および有機塩基から誘導されるものが挙げられる。薬学的に許容される無毒性の酸付加塩の例には塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸と形成されるアミノ基の塩、あるいは、イオン交換など当該技術分野において使用される他の方法を用いて形成されるアミノ基の塩がある。他の薬学的に許容される塩として、アジパート、アルギナート、アスコルバート、アスパルタート、ベンゼンスルホナート、ベンゾアート、ビスルファート、ボラート、ブチラート、カンホラート、ショウノウスルホナート、シトラート、シクロペンタンプロピオナート、ジグルコネート、ドデシルスルファート、エタンスルホナート、ホルマート、フマラート、グルコヘプトナート、グリセロホスファート、グルコネート、ヘミスルファート、ヘプタノアート、ヘキサノアート、ヒドロヨージド、２−ヒドロキシ−エタンスルホナート、ラクトビオネート、ラクタート、ラウラート、ラウリル硫酸、マラート、マレアート、マロナート、メタンスルホナート、２−ナフタレンスルホナート、ニコチナート、ニトラート、オレアート、オキサラート、パルミタート、パモアート、ペクチナート、ペルスルファート、３−フェニルプロピオナート、ホスファート、ピクラート、ピバラート、プロピオナート、ステアラート、スクシナート、スルファート、タルトラート、チオシアナート、ｐ−トルエンスルホナート、ウンデカノアート、吉草酸塩および同種のものが挙げられる。適切な塩基から誘導される塩として、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩およびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。
【００２８】
上記のような本発明の薬学的に許容される組成物は薬学的に許容されるキャリア、補助剤またはビヒクルをさらに含み、本明細書で使用する場合、薬学的に許容されるキャリア、補助剤またはビヒクルとして、所望の個々の剤形に適したあらゆる溶媒、希釈液または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、粘稠化剤または乳化剤、防腐剤、固体バインダー、滑沢剤および同種のものが挙げられる。それぞれの内容を参照によって本明細書に援用するＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ
Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５，ｅｄ．Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａおよびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８−１９９９，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋには、薬学的に許容される組成物の製剤化に使用される様々なキャリア、およびその調製に使用される公知の技法が開示されている。任意の従来型キャリア媒体は、望ましくない生物学的作用を起こすか、あるいは薬学的に許容される組成物の他の任意の成分（単数または複数）と有害な相互作用を起こすなどして、化合物１との相性が悪い場合を除き、その使用は、本発明の範囲内であることを意図している。
【００２９】
薬学的に許容されるキャリアとして働き得る材料の一部の例として、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、たとえばヒト血清アルブミン、緩衝物質、たとえばホスファート、グリシン、ソルビン酸もしくはソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、たとえば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリラート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、羊毛脂、糖、たとえばラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、たとえばコーンスターチおよびポテトスターチ；セルロースおよびその誘導体、たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末トラガント；モルト；ゼラチン；タルク；賦形剤、たとえばカカオバターおよび坐剤ワックス；油、たとえばピーナッツ油、綿実油；サフラワー油；ゴマ油；オリーブ油；トウモロコシ油および大豆油；グリコール；たとえばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコール；エステル、たとえばオレイン酸エチルおよびエチルラウラート；寒天；緩衝剤、たとえば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコールおよびリン酸塩緩衝溶液、さらに他の無毒で適合性がある滑沢剤、たとえばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムがあるが、これに限定されるものではない。製剤者の判断に従い、組成物にはさらに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味剤および香料、防腐剤および酸化防止剤が存在していてもよい。
【００３０】
本発明の組成物は、経口投与しても、非経口的に投与しても、噴霧吸入により投与しても、局所投与しても、直腸内投与しても、経鼻投与しても、頬粘膜投与しても、経膣投与しても、あるいは埋め込まれたリザーバーを介して投与してもよい。「非経口」という用語は、本明細書で使用する場合、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、関節内注射、滑液内注射、胸骨内注射、髄膜内注射、眼内注射、肝臓内注射、病巣内注射および頭蓋内注射または注入法を含む。好ましくは、組成物は経口投与、腹腔内投与または静脈内投与する。本発明の組成物の滅菌注射用形態は水性懸濁液でも、または油性懸濁液でもよい。こうした懸濁液は、当該技術分野において公知の技法に従い、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて調製すればよい。滅菌注射用調製物はまた、非経口的に許容可能な無毒の希釈剤または溶媒に溶かした滅菌注射用溶液または懸濁液、たとえば１，３−ブタンジオール溶液としてもよい。使用してもよい許容可能なビヒクルおよび溶媒には水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに溶媒または懸濁媒体として滅菌の不揮発性油が従来使用されている。
【００３１】
そのような場合には、合成のモノまたはジグリセリドを含めて任意の無菌性不揮発性油を使用することができる。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸、特にそのポリオキシエチル化したものは、注射剤の調製に有用であり、薬学的に許容される天然油、オリーブ油またはヒマシ油も同様である。これらの油性の、溶液または懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤または分散薬、たとえばカルボキシメチルセルロース、またはエマルジョンおよび懸濁液などの薬学的に許容される剤形の製剤に繁用される同様の分散剤をさらに含んでもよい。製剤においてはさらに、他の繁用される界面活性剤、たとえばＴｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ、および薬学的に許容される固体、液体または他の剤形の製造に一般に使用される他の乳化剤またはバイオアベイラビリティー向上剤を使用してもよい。
【００３２】
本発明の薬学的に許容される組成物は、以下に限定されるものではないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液または溶液など経口的に許容可能な任意の剤形で経口投与することができる。経口的に使用する錠剤の場合、繁用されるキャリアとしてラクトースおよびコーンスターチがある。さらに、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も添加するのが一般的である。カプセル形態で経口投与する場合、有用な希釈剤は、ラクトースおよび乾燥コーンスターチを含む。経口的に使用するのに水性懸濁液を必要とする場合、活性成分は乳化剤および懸濁化剤と組み合わせられる。必要に応じて、ある種の甘味料、香味剤または着色剤を加えてもよい。
【００３３】
あるいは、本発明の薬学的に許容される組成物は、直腸投与のための坐剤の形態で投与してもよい。坐剤形態は、この薬を、室温では固体だが、直腸の温度では液体になるため、直腸で融解して薬剤を放出する好適な非刺激性の賦形剤と混合して調製することができる。そうした材料としては、カカオバター、蜜蝋およびポリエチレングリコールがある。
【００３４】
本発明の薬学的に許容される組成物はまた、局所投与してもよく、特に処置の標的が眼、皮膚または下部腸管の疾患など局所塗布を利用しやすい領域または器官を含む場合にそうである。好適な局所製剤は、そうした領域または器官ごとに容易に調製される。
【００３５】
下部腸管の局所塗布は、直腸の坐剤製剤（上記を参照）を用いて行っても、または好適な浣腸剤製剤を用いて行ってもよい。また、局所経皮パッチを使用してもよい。
【００３６】
局所塗布の場合、薬学的に許容される組成物は、１種または複数種のキャリアに懸濁または溶解させた有効成分を含む好適な軟膏として製剤化してもよい。化合物１の局所投与のためのキャリアとしては、鉱油、流動ペトロラタム、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水があるが、これに限定されるものではない。あるいは、薬学的に許容される組成物は、１種または複数種の薬学的に許容されるキャリアに懸濁または溶解させた有効成分を含む好適なローションまたはクリームとして製剤化してもよい。好適なキャリアとしては、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水があるが、これに限定されるものではない。
【００３７】
眼に使用する場合、薬学的に許容される組成物は、たとえばｐＨ調整した等張の無菌生理食塩水または他の水溶液中の微粒子懸濁液として製剤化しても、あるいは好ましくは、塩化ベンジルアルコニウムなどの防腐剤を使用してあるいは使用せずに、ｐＨ調整した等張の無菌生理食塩水または他の水溶液に中の溶液として製剤化してもよい。あるいは、眼に使用する場合、薬学的に許容される組成物は、ペトロラタムなどの軟膏として製剤化してもよい。さらに、本発明の薬学的に許容される組成物は鼻エアロゾルまたは鼻吸入により投与してもよい。こうした組成物は、医薬製剤の技術分野において公知の技法により調製され、ベンジルアルコールまたは他の好適な防腐剤、バイオアベイラビリティーを高める吸収促進剤、フルオロカーボンおよび／または他の従来の可溶化剤または分散剤を用いて食塩水に溶かした溶液として調製してもよい。
【００３８】
最も好ましくは、本発明の薬学的に許容される組成物は経口投与用に製剤化される。
【００３９】
経口投与用の液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤があるが、これに限定されるものではない。液体剤形は活性化合物以外に、当該技術分野において繁用される不活性希釈剤、たとえば水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、たとえばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカルボナート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾアート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物をさらに含んでもよい。経口組成物は不活性希釈剤のほかに、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、香味剤および香料などの補助剤をさらに含んでもよい。
【００４０】
注射用調製物、たとえば注射用の滅菌水性または油性懸濁液は、従来技術に従い好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製剤化すればよい。また、注射用無菌調製物は、たとえば１，３−ブタンジオール中の溶液など、無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒に溶かした注射用滅菌溶液、懸濁液またはエマルジョンであってもよい。使用してもよい許容可能なビヒクルおよび溶媒には水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌の不揮発性油も溶媒または懸濁媒体として従来使用されている。このような場合には、合成のモノまたはジグリセリドを含む、任意の無菌性不揮発性油を使用することができる。さらに、注射剤の調製にはオレイン酸などの脂肪酸も使用される。
【００４１】
注射用製剤は、たとえば細菌捕集フィルターで濾過するか、あるいは滅菌水または他の注射用無菌媒体に溶解または分散できる無菌の固体組成物形態の滅菌剤を使用前に加えることにより滅菌してもよい。
【００４２】
化合物１の作用を延長させるには、皮下または筋肉内注射されたこの化合物の吸収を遅延させることが望ましい場合が多い。これは、水溶性に乏しい結晶材料またはアモルファス材料の液体懸濁液を使用することにより達成することができる。その後の化合物１の吸収速度は、その溶解速度により決まるが、溶解速度は、結晶の大きさおよび結晶形態によって異なる場合がある。あるいは、化合物１を油性ビヒクルに溶解または懸濁しても、非経口投与した化合物形態の吸収が遅延される。注射用のデポ剤形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に化合物１のマイクロカプセル化マトリックスを形成することにより製造される。化合物とポリマーとの比率および使用する個々のポリマーの性質に応じて、化合物の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。注射用デポ製剤はまた、体組織との適合性があるリポソームまたはマイクロエマルジョンに化合物１を封入することによっても調製される。
【００４３】
直腸投与または膣内投与用の組成物は好ましくは、周囲温度では固体だが、体温では液体であるため、直腸または膣腔で融解して活性化合物を放出するカカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ワックスなどの非刺激性の賦形剤またはキャリアなどの好適な非刺激性の賦形剤と化合物１を混合して調製することができる坐剤である。
【００４４】
経口投与用の固形剤形として、カプセル剤、錠剤、ピル、散剤および顆粒剤が挙げられる。こうした固形剤形では、活性化合物を、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１種の不活性な薬学的に許容される賦形剤またはキャリアおよび／またはａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸などの充填剤または増量剤、ｂ）たとえばカルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシアなどのバインダー、ｃ）グリセロールなどの保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリケートおよび炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶解遅延化剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進薬、ｇ）たとえばセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤ならびにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびこれらの混合物などの滑沢剤と混合する。カプセル剤、錠剤およびピルの場合、剤形は緩衝剤をさらに含んでもよい。
【００４５】
類似の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖のほか、高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用して軟および硬ゼラチンカプセル剤の充填剤として使用してもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、ピルおよび顆粒剤の固形剤形は、腸溶コーティングおよび医薬製剤技術分野でよく知られた他のコーティングなどコーティングおよびシェルにより調製してもよい。こうした固形剤形は任意に乳白剤を含んでもよく、さらに腸管のある部分に任意に遅延させて活性成分（単数または複数）のみを、または活性成分（単数または複数）を優先的に放出するような組成物でも構わない。使用してもよい封入組成物の例として、高分子物質およびワックスが挙げられる。類似の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖のほか、高分子量ポルエチレン（ｐｏｌｅｔｈｙｌｅｎｅ）グリコールなどのような賦形剤を使用して軟および硬ゼラチンカプセル剤の充填剤として使用してもよい。
【００４６】
また、活性化合物は、上述のような１種または複数種の賦形剤を使用したマイクロカプセル形態であってもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、ピルおよび顆粒剤の固形剤形は、腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび医薬製剤技術分野でよく知られた他のコーティングなどコーティングおよびシェルにより調製してもよい。こうした固形剤形では、活性化合物を、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１種の不活性希釈剤と混合してもよい。こうした剤形には、通常行われているように不活性希釈剤以外の追加物質、たとえばステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースのような打錠用滑沢剤および他の打錠用助剤をさらに含ませてもよい。カプセル剤、錠剤およびピルの場合、その剤形は緩衝剤をさらに含んでもよい。剤形は任意に乳白剤を含み、さらに腸管のある部分に任意に遅延させて活性成分（単数または複数）のみを、または活性成分（単数または複数）を優先的に放出するような組成物でも構わない。使用してもよい封入組成物の例として、高分子物質およびワックスが挙げられる。
【００４７】
化合物１の局所または経皮投与用の剤形として、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、散剤、溶液、噴霧剤、吸入剤またはパッチが挙げられる。有効成分は、滅菌条件下で薬学的に許容されるキャリア、および適宜、必要とされる任意の防腐剤または緩衝液と混合する。眼科用製剤、点耳剤および点眼薬も本発明の範囲内にあるものとして想定している。加えて、本発明は、化合物１の体内への送達を制御する別の利点を有する経皮パッチの使用も想定している。こうした剤形は、化合物１を適切な媒体に溶解または分散することにより製造することができる。また、皮膚を通過する化合物１の流れを促進するように吸収改善剤を使用してもよい。その速度は律速膜を設けるか、あるいは、化合物１をポリマーマトリックスまたはゲルに分散することにより制御することができる。
【００４８】
化合物１は好ましくは、投与のしやすさおよび投与量の均一性のため投薬単位剤形として製剤化される。「投薬単位剤形」という表現は、本明細書で使用する場合、処置対象の患者に適した薬の物理的に分離した単位をいう。一方、化合物１および化合物１を含む組成物の１日の総使用量は、適切な医学的判断に従い主治医により決定されることは言うまでもない。任意の個々の患者または生体の具体的な有効投与量は、処置される障害および障害の重症度；使用される個々の化合物の活性；使用される個々の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別および食事；投与期間、投与経路および使用される個々の化合物の排泄速度；処置の期間；使用される個々の化合物と組み合わせてあるいは同時に使用される薬剤、および医療技術分野でよく知られた同様の要因など様々な要因によって異なる。
【００４９】
単一剤形として組成物を製造する際にキャリア材料と組み合わせてもよい化合物１の量は、処置される宿主、個々の投与モードによって異なる。好ましくは、組成物は、その組成物を投与する患者に阻害剤が０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量で投与され得るように製剤化されるべきである。一例では、組成物は、化合物１の投与量が５〜３０ｍｇ／ｋｇ体重／日になるように製剤化される。一例では、組成物は、化合物１の投与量が５〜６０ｍｇ／ｋｇ体重／日になるように製剤化される。
【００５０】
本発明の組成物には、処置または予防の対象となる個々の状態または疾患に応じてその状態の処置または予防に通常投与される追加の治療薬がさらに存在していてもよい。本明細書で使用する場合、個々の疾患または状態の処置または予防に通常投与される追加の治療薬は、「処置される疾患または状態に適切であるもの」として知られている。以下に、追加の治療薬の例を記載する。
【００５１】
本発明の組成物中に存在する追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の作用薬として含む組成物において通常投与されると考えられる量以下である。好ましくは、本明細書に開示される組成物中の追加の治療薬の量は、その薬を唯一の治療上の作用薬として含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲である。
【００５２】
化合物１および化合物１を含む組成物の使用
一実施形態によれば、本発明は、生物学的サンプルのｃ−Ｍｅｔプロテインキナーゼ活性を阻害する方法であって、前記生物学的サンプルを化合物１または前記化合物を含む組成物と接触させるステップを含む方法に関する。「生物学的サンプル」という用語は、本明細書で使用する場合、生体外のサンプルを意味し、細胞培養物またはその抽出物；哺乳動物から採取される生検材料またはその抽出物；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙液もしく他の体液またはその抽出物があるが、これに限定されるものではない。生物学的サンプルのキナーゼ活性の阻害は、当業者に知られる様々な目的に有用である。そうした目的の例には、生物学的検体の保存および生物学的アッセイがあるが、これに限定されるものではない。一実施形態では、生物学的サンプルのキナーゼ活性を阻害する方法は、非治療的方法に限定される。
【００５３】
「ｃ−Ｍｅｔ」という用語は、「ｃ−ＭＥＴ」、「ｃＭｅｔ」、「ＭＥＴ」、「Ｍｅｔ」または当業者に知られる他の名称と同義である。
【００５４】
別の実施形態によれば、本発明は、患者のｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性を阻害する方法であって、前記患者に化合物１または前記化合物を含む組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００５５】
「ｃ−Ｍｅｔ関連疾患」または「ｃ−Ｍｅｔ関連状態」という用語は、本明細書で使用する場合、ｃ−Ｍｅｔが関与していることが知られている任意の病状または他の有害な状態を意味する。「ｃ−Ｍｅｔ関連疾患」または「ｃ−Ｍｅｔ関連状態」という用語は、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤を用いた処置により緩和される疾患または状態も意味する。そうした状態として、腎癌、胃癌、結腸癌、脳癌、乳癌、前立腺癌、肝癌、膵癌または肺癌、膠芽細胞腫、アテローム性動脈硬化症または肺線維症があるが、これに限定されるものではない。
【００５６】
一態様では、本発明は患者の増殖性障害を処置する方法（ｍｅｔｈｏｄ  ｔｒｅａｔｉｎｇ）であって、治療有効用量の化合物１または化合物１を含む組成物を患者に投与するステップを含む方法を特徴とする。
【００５７】
一実施形態によれば、増殖性障害は、たとえば腎癌、胃癌、結腸癌、脳癌、乳癌、肝癌、前立腺癌および肺癌または膠芽細胞腫などの癌である。
【００５８】
別の実施形態では、本発明は、処置または軽減を必要としている患者の肝細胞癌を処置またはその重症度を軽減する方法であって、前記患者に化合物１またはその組成物投与することを含む方法に関する。
【００５９】
別の実施形態では、増殖性障害は真性赤血球増加症、本態性血小板血症、慢性特発性骨髄線維症、骨髄線維症を伴う骨髄様化生、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ：ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性骨髄単球性白血病、慢性好酸球性白血病、好酸球増加症候群、全身性（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ）肥満細胞症、非定型ＣＭＬまたは若年性骨髄単球性白血病である。
【００６０】
別の実施形態では、増殖性障害はアテローム性動脈硬化症または肺線維症である。
【００６１】
本発明の別の態様は、腫瘍の転移の阻害を必要としている患者の腫瘍の転移を阻害する方法であって、前記患者に化合物１またはその組成物を投与することを含む方法に関する。
【００６２】
本発明の組成物には、処置される個々の状態または疾患に応じてその状態の処置に通常投与される追加の治療薬がさらに存在していてもよい。本明細書で使用する場合、個々の疾患または状態の処置に通常投与される追加の治療薬は、「処置される疾患または状態に適切であるもの」として知られている。
【００６３】
一実施形態では、増殖性疾患および癌を処置するために化学療法剤または他の抗増殖剤を化合物１と組み合わせてもよい。知られている化学療法剤の例としては、アルキル化剤、たとえばシクロホスファミド、ロムスチン、ブスルファンプロカルバジン、イホスファミド、アルトレタミン、メルファラン、リン酸エストラムスチン、ヘキサメチルメラミン、メクロレタミン、チオテパ、ストレプトゾシン、クロラムブシル、テモゾロミド、ダカルバジン、セムスチンまたはカルムスチンなど；白金製剤、たとえばシスプラチン、カルボプラチナム、オキサリプラチン、ＺＤ−０４７３（ＡｎｏｒＭＥＤ）、スピロプラチナム、ロバプラチン（Ａｅｔｅｒｎａ）、カルボキシフタラトプラチナム、サトラプラチン（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍａｔｔｈｅｙ）、テトラプラチンＢＢＲ−３４６４、（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、オルミプラチン（ｏｒｍｉｐｌａｔｉｎ）、ＳＭ−１１３５５（Ｓｕｍｉｔｏｍｏ）、イプロプラチンまたはＡＰ−５２８０（Ａｃｃｅｓｓ）など；代謝拮抗剤、たとえばアザシチジン、ｔｏｍｕｄｅｘ、ゲムシタビン、トリメトレキサート、カペシタビン、デオキシコホルマイシン、５−フルオロウラシル、フルダラビン、フロクスウリジン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン、ラルチトレキセド、６−メルカプトプリン、ヒドロキシ尿素、６−チオグアニン、デシタビン（ＳｕｐｅｒＧｅｎ）、シタラビン、クロファラビン（Ｂｉｏｅｎｖｉｓｉｏｎ）、２−フルオロデオキシシチジン、イロフルベン（ＭＧＩ  Ｐｈａｒｍａ）、メトトレキサート、ＤＭＤＣ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、イダトレキサート（ｉｄａｔｒｅｘａｔｅ）またはエチニルシチジン（Ｔａｉｈｏ）など；トポイソメラーゼ阻害剤、たとえばアムサクリン、ルビテカン（ＳｕｐｅｒＧｅｎ）、エピルビシン、メシル酸エキサテカン（Ｄａｉｉｃｈｉ）、エトポシド、キナメド（ｑｕｉｎａｍｅｄ）（ＣｈｅｍＧｅｎｅｘ）、テニポシド、ミトキサントロン、ギマテカン（Ｓｉｇｍａ−Ｔａｕ）、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ジフロモテカン（Ｂｅａｕｆｏｕｒ−Ｉｐｓｅｎ）、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン、ＴＡＳ−１０３（Ｔａｉｈｏ）、トポテカン、エルサミトルシン（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）、デキスラゾキサネト（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅｔ）（ＴｏｐｏＴａｒｇｅｔ）、Ｊ−１０７０８８（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ）、ピクサントロン（Ｎｏｖｕｓｐｈａｒｍａ）、ＢＮＰ−１３５０（ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｋ）、レベッカマイシンアナログ（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＣＫＤ−６０２（Ｃｈｏｎｇ  Ｋｕｎ  Ｄａｎｇ）、ＢＢＲ−３５７６（Ｎｏｖｕｓｐｈａｒｍａ）またはＫＷ−２１７０（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ）など；抗腫瘍抗生物質、たとえばダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、アモナフィド、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アゾナフィド、デオキシルビシン（ｄｅｏｘｙｒｕｂｉｃｉｎ）、アントラピラゾール、バルルビシン、オキサントラゾール、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ロソキサントロン、エピルビシン、ブレオマイシン、スルファート（ブレノキサン）、テラルビシン、ブレオマイシン酸、イダルビシン、ブレオマイシンＡ、ルビダゾン、ブレオマイシンＢ、プリカミシンプ（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎｐ）、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、ＭＥＮ−１０７５５（Ｍｅｎａｒｉｎｉ）、シアノモルホリノドキソルビシン、ＧＰＸ−１００（Ｇｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）またはミトキサントロン（ノバントロン）など、有糸分裂阻害薬、たとえばパクリタキセル、ＳＢ４０８０７５（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ドセタキセル、Ｅ７０１０（Ａｂｂｏｔｔ）、コルヒチン、ＰＧ−ＴＸＬ（Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ビンブラスチン、ＩＤＮ５１０９（Ｂａｙｅｒ）、ビンクリスチンＡ、１０５９７２（Ａｂｂｏｔｔ）、ビノレルビン、Ａ２０４１９７（Ａｂｂｏｔｔ）、ビンデシン、ＬＵ２２３６５１（ＢＡＳＦ）、ドラスタチン１０（ＮＣＩ）、Ｄ２４８５１（ＡＳＴＡＭｅｄｉｃａ）、リゾキシン（Ｆｕｊｉｓａｗａ）、ＥＲ−８６５２６（Ｅｉｓａｉ）、ミボブリン（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）、コンブレタスタチンＡ４（ＢＭＳ）、セマドスズ（ＢＡＳＦ）、イソホモハリコンドリン−Ｂ（ＰｈａｒｍａＭａｒ）、ＲＰＲ１０９８８１Ａ（Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＺＤ６１２６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＴＸＤ２５８（Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＰＥＧ−パクリタキセル（Ｅｎｚｏｎ、）エポチロンＢ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＺ１０９９２（Ａｓａｈｉ）、Ｔ９００６０７（Ｔｕｌａｒｉｋ）、ＩＤＮ−５１０９（Ｉｎｄｅｎａ）、Ｔ１３８０６７（Ｔｕｌａｒｉｋ）、ＡＶＬＢ（Ｐｒｅｓｃｉｅｎｔ  ＮｅｕｒｏＰｈａｒｍａ）、クリプトフィシン５２（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、アザエポチロンＢ（ＢＭＳ）、ビンフルニン（Ｆａｂｒｅ）、ＢＮＰ−７７８７（ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｋ）、アウリスタチンＰＥ（Ｔｅｉｋｏｋｕ  Ｈｏｒｍｏｎｅ）、ＣＡ−４プロドラッグ（ＯＸｉＧＥＮＥ）、ＢＭＳ２４７５５０（ＢＭＳ）、ドラスタチン−１０（ＮＩＨ）、ＢＭＳ１８４４７６（ＢＭＳ）、ＣＡ−４（ＯＸｉＧＥＮＥ）、ＢＭＳ１８８７９７（ＢＭＳ）またはタキソプレキシン（Ｐｒｏｔａｒｇａ）など；アロマターゼ阻害剤、たとえばアミノグルテチミド、エキセメスタン、レトロゾール、アタメスタン（ＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅｓ）、アナストラゾール、ＹＭ−５１１（Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ）またはホルメスタン；チミジル酸シンターゼ阻害剤、たとえばペメトレキセド（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ノラトレキセド（Ｅｘｉｍｉａｓ）、ＺＤ−９３３１（ＢＴＧ）またはＣｏＦａｃｔｏｒ（商標）（ＢｉｏＫｅｙｓ）など；ＤＮＡアンタゴニスト、たとえばトラベクテジン（ＰｈａｒｍａＭａｒ）、マホスファミド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、グルホスフアミド（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、アパジクオン（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アルブミン＋３２Ｐ（Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、Ｏ６ベンジルグアニン（Ｐａｌｉｇｅｎｔ）、チメクタシン（ＮｅｗＢｉｏｔｉｃｓ）またはエドトレオチド（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）など；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、たとえばアルグラビン（ＮｕＯｎｃｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｓ）、チピファルニブ（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ロナファーニブ（Ｓｃｈｅｒｉｎ���−Ｐｌｏｕｇｈ）、ペリリルアルコール（ＤＯＲ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ）またはＢＡＹ−４３−９００６（Ｂａｙｅｒ）など；ポンプ阻害剤、たとえばＣＢＴ−１（ＣＢＡ  Ｐｈａｒｍａ）、ゾスキダル三塩酸塩（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、タリキダル（Ｘｅｎｏｖａ）、ビリコダルジシトレート（Ｖｅｒｔｅｘ）またはＭＳ−２０９（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）など；ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、たとえばタセジナリン（Ｐｆｉｚｅｒ）、酪酸ピバロイルオキシメチル（Ｔｉｔａｎ）、ＳＡＨＡ（Ａｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａ）、デプシペプチド（Ｆｕｊｉｓａｗａ）またはＭＳ−２７５（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）など；メタロプロテイナーゼ阻害剤、たとえばネオバスタット（Ａｅｔｅｒｎａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＣＭＴ−３（ＣｏｌｌａＧｅｎｅｘ）、マリマスタット（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはＢＭＳ−２７５２９１（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）など；リボヌクレオシドレダクターゼ阻害剤、たとえばガリウムマルトレート（Ｔｉｔａｎ）、テザシタビン（Ａｖｅｎｔｉｓ）、トリアピン（Ｖｉｏｎ）またはジドックス（ｄｉｄｏｘ）（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈ）など；ＴＮＦαアゴニスト／アンタゴニスト、たとえばビルリジン（Ｌｏｒｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、レビミド（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＣＤＣ−３９４（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、エンタネルセプト（ｅｎｔａｎｅｒｃｅｐｔ）（Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．）、インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．）またはアダリムマブ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）など；エンドセリンＡ受容体アンタゴニスト、たとえばアトラセンタン（Ａｂｂｏｔｔ）ＹＭ−５９８（Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ）またはＺＤ−４０５４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）など；レチノイン酸受容体アゴニスト、たとえばフェンレチニド（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ）アリトレチノイン（Ｌｉｇａｎｄ）またはＬＧＤ−１５５０（Ｌｉｇａｎｄ）など；免疫調節剤、たとえばインターフェロンデキソソーム療法剤（Ａｎｏｓｙｓ）、オンコファージ（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ）、ペントリクス（ｐｅｎｔｒｉｘ）（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＧＭＫ（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ）、ＩＳＦ−１５４（Ｔｒａｇｅｎ）、腺癌ワクチン（Ｂｉｏｍｉｒａ）、癌ワクチン（Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ）、ＣＴＰ−３７（ＡＶＩ
ＢｉｏＰｈａｒｍａ）、ノレリン（ｎｏｒｅｌｉｎ）（Ｂｉｏｓｔａｒ）、ＩＲＸ−２（Ｉｍｍｕｎｏ−Ｒｘ）、ＢＬＰ−２５（Ｂｉｏｍｉｒａ）、ＰＥＰ−００５（Ｐｅｐｌｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＭＧＶ（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ）、シンクロバクスワクチン（ｓｙｎｃｈｒｏｖａｘ  ｖａｃｃｉｎｅｓ）（ＣＴＬ  Ｉｍｍｕｎｏ）、β−アレチン（Ｄｏｖｅｔａｉｌ）、メラノーマワクチン（ＣＴＬ  Ｉｍｍｕｎｏ）、ＣＬＬ療法剤（Ｖａｓｏｇｅｎ）またはｐ２１ＲＡＳワクチン（ＧｅｍＶａｘ）など；ホルモン剤および抗ホルモン剤、たとえばエストロゲン、プレドニゾン、結合型エストロゲン、メチルプレドニゾロン、エチニルエストラジオール、プレドニゾロン、クロルトリアニセン（ｃｈｌｏｒｔｒｉａｎｉｓｅｎ）、アミノグルテチミド、イデネストロール、ロイプロリド、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ゴセレリン、メドロキシプロゲステロン、ロイポレリン（ｌｅｕｐｏｒｅｌｉｎ）、テストステロン、ビカルタミド、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン、フルタミド、メチルテストステロン、オクトレオチド、ジエチルスチルベストロール、ニルタミド、メゲストロール、ミトタン、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、Ｐ−０４（Ｎｏｖｏｇｅｎ）、トレモフィン、２−メトキシエストラジオール（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、デキサメタゾンまたはアルゾキシフェン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）など；光線力学的療法剤、たとえばタラポルフィン（Ｌｉｇｈｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｐｄ−バクテリオフェオフォルバイド（Ｙｅｄａ）、セララックス（Ｔｈｅｒａｌｕｘ）（Ｔｈｅｒａｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ルテチウムテキサフィリン（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ）、モテキサフィンガドリニウム（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ）またはヒペリシンなど；およびチロシンキナーゼ阻害剤、たとえばイマチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、カハライドＦ（ｋａｈａｌｉｄｅ  Ｆ）（ＰｈａｒｍａＭａｒ）、レフルノミド（Ｓｕｇｅｎ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ＣＥＰ−７０１（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、ＺＤ１８３９（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＣＥＰ−７５１（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）、エルロチニブ（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ＭＬＮ５１８（Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）、カネルチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＫＣ４１２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、スクアラミン（Ｇｅｎａｅｒａ）、フェノキソジオール、ＳＵ５４１６（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＳＵ６６６８（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、Ｃ２２５（ＩｍＣｌｏｎｅ）、ＺＤ４１９０（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ｒｈｕ−Ｍａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＤＸ−Ｈ２１０（Ｍｅｄａｒｅｘ）、バタラニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、２Ｃ４（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＰＫＩ１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＧＷ２０１６（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＢＸ−ＥＧＦ（Ａｂｇｅｎｉｘ）、ＥＫＢ−５０９（Ｗｙｅｔｈ）、ＩＭＣ−１Ｃ１１（ＩｍＣｌｏｎｅ）またはＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）があるが、これに限定されるものではない。
【００６４】
さらなる実施形態において、追加の治療剤は、チトクロームＰ４５０３Ａ４（ＣＹＰ３Ａ４）によって９０％以上は代謝されない。
【００６５】
こうした追加薬は、複数投与療法の一部として化合物１を含む組成物と別に投与してもよい。あるいは、こうした薬は、単一の組成物において化合物１と混合して単一剤形の一部としてもよい。２つの作用薬を複数投与療法の一部として投与する場合、同時に投与しても、連続的に投与しても、あるいは相互に一定時間内に、通常５時間以内に投与してもよい。
【００６６】
単一剤形を製造するためにキャリア材料と組み合わせてもよい（上記のような追加の治療薬を含む組成物中の））化合物１および追加の治療薬を合わせた量は、処置される宿主および個々の投与モードによって異なる。好ましくは、本発明の組成物は、化合物１を０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量で投与できるように製剤化すべきである。一例では、組成物は、化合物１の投与量が５〜３０ｍｇ／ｋｇ体重／日になるように製剤化される。
【００６７】
追加の治療薬を含むこうした組成物の場合、その追加の治療薬および化合物１は、相乗的に作用することができる。したがって、そうした組成物中の追加の治療薬の量は、その治療薬しか使用しない単独療法に必要とされる量より少なくなる。こうした組成物の場合、追加の治療薬を０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量で投与することができる。一例では、組成物は、化合物１の投与量が５〜３０ｍｇ／ｋｇ体重／日になるように製剤化される。一例では、組成物は、化合物１の投与量が５〜６０ｍｇ／ｋｇ体重／日になるように製剤化される。
【００６８】
本発明の組成物中に存在する追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の作用薬として含む組成物において通常投与されると考えられる量以下になる。好ましくは、本明細書に開示される組成物中の追加の治療薬の量は、その薬を唯一の治療上の作用薬として含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲である。
【００６９】
化合物１またはその医薬組成物は組成物に組み込んで、プロテーゼ、人工弁、人工血管、ステントおよびカテーテルなどの埋め込み型医療装置をコーティングしてもよい。たとえば血管ステントは、再狭窄（傷害後に血管壁が狭くなること）に対処するために使用されている。しかしながら、ステントまたは他の埋め込み型装置を使用している患者には血餅の形成または血小板活性化のリスクがある。こうした望ましくない作用は、キナーゼ阻害剤を含む薬学的に許容される組成物で装置を予めコーティングすることにより予防または軽減することができる。好適なコーティング剤およびコーティングした埋め込み型装置の一般的な調製については米国特許第６，０９９，５６２号；同第５，８８６，０２６号；および同第５，３０４，１２１号に記載されている。コーティング剤は典型的には、生体適合性高分子材料、たとえばヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニルおよびこれらの混合物である。コーティング剤は任意に、フルオロシリコーン、多糖類（ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅｓ）、ポリエチレングリコール、リン脂質またはこれらの組み合わせといった好適なトップコートによりさらに被覆して組成物に放出制御特性を付与してもよい。化合物１でコーティングした埋め込み型装置は、本発明の別の実施形態である。
【００７０】
式Ｉの化合物の調製
本明細書に記載の本発明の理解を十分に深めるため、以下に例を示す。そうした例は説明のみを目的としたものであり、いかなる意味でも本発明を限定するものと解釈してはならないことを理解すべきである。
【００７１】
本明細書で使用する場合、他の略語、記号および用法は、科学文献に現在使用されているものと同じである。たとえば参照によってその全体を本明細書に援用するＪａｎｅｔ  Ｓ．Ｄｏｄｄ，ｅｄ．，Ｔｈｅ  ＡＣＳ  Ｓｔｙｌｅ  Ｇｕｉｄｅ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  Ａｕｔｈｏｒｓ  ａｎｄ  Ｅｄｉｔｏｒｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９９７を参照されたい。以下の定義は本明細書に使用する用語および略語を説明するものである：
ブライン        ＮａＣｌ飽和水溶液
ＢＳＡ          ウシ血清アルブミン
ＤＭＳＯ        ジメチルスルホキシド
ＥＳＭＳ        エレクトロスプレー質量分析法
ＥｔＯＡｃ      酢酸エチル
ＥｔＯＨ        エチルアルコール
ＨＰＬＣ        高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ        液体クロマトグラフィー−質量分析法
Ｍｅ            メチル
ＭｅＯＨ        メタノール
ＭＴＢＥ        メチルｔ−ブチルエーテル
Ｐｈ            フェニル
ＲＴ            室温
ＴＣＡ          トリクロロ酢酸
ＴＨＦ          テトラヒドロフラン
ＴＦＡ          トリフルオ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）
（実施例１）式ＩＩの化合物
化合物１００１および１００２は、Ｏｋｅａｎｏｓ  Ｔｅｃｈ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ（それぞれカタログ番号ＯＫ−Ｊ−０５０２４およびＯＫ−Ｊ−０５０２５）より購入した。
【００７２】
【化５】
0005686796.tif 000008
化合物１００４は、スキーム１に示されるとおりに調製された。したがってステップ１−ｉに示されるとおり、０℃にてＤＭＳＯ中のＮａＨ（鉱油中に６０％、８．４７ｇ、２１２ｍｍｏｌ）の懸濁液（２６０ｍＬ）に、ジエチル２−メチルマロネート（化合物１００５、２９．５ｇ、１６９．４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。混合物を０℃にて２時間撹拌し、３，４，５−トリフルオロニトロベンゼン（２５．０ｇ、１４１．２ｍｍｏｌ）を加えた。その結果得られた混合物を室温まで温めて１２時間撹拌した。この反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に注ぎ入れ、濾過によって沈殿を集めた。水で３回洗浄した後に得られたジエチル２−（２，６−ジフルオロ−４−ニトロフェニル）−２−メチルマロネート（化合物１００６［Ｒ＝ＣＨ３］、４４．５ｇ、９５％収率）を減圧下で乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【００７３】
ステップ１−ｉｉに示されるとおり、ＭｅＯＨ中のジエチル２−（２，６−ジフルオロ−４−ニトロ−フェニル）−２−メチルマロネート（４４．５ｇ、１３５ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下でＰｄ／Ｃ（１０％、４．０ｇ）を加えた。雰囲気をＨ２で置換し、混合物を５０ｐｓｉにて３日間水素化した。雰囲気を窒素で置換し、混合物を珪藻土で濾過し、減圧下で揮発物を除去した。その結果得られたジエチル２−（４−アミノ−２，６−ジフルオロフェニル）−２−メチルマロネート（化合物１００７［Ｒ＝ＣＨ３］、４０．５ｇ、９９％収率）を減圧下で乾燥し、そのまま次の反応に用いた。
【００７４】
ステップ１−ｉｉｉに示されるとおり、メタノール（２００ｍＬ）中のジエチル２−（４−アミノ−２，６−ジフルオロフェニル）−２−メチルマロネート（４０．０ｇ、１３２．８ｍｍｏｌ）の溶液に、６Ｍ  ＮａＯＨ（１１０．７ｍＬ、６６４．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃にて４時間加熱し、０℃に冷却し、濃ＨＣｌでｐＨ３が得られるまで酸性化した。混合物を室温まで温めて３時間撹拌した。その結果得られた沈殿を濾過によって集め、水で洗浄し、高真空下で５０℃にて２０時間乾燥して、２−（４−アミノ−２，６−ジフルオロフェニル）プロパン酸（化合物１００８［Ｒ＝ＣＨ３］、２２ｇ、８４％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（３００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１２．２５（ｂｒｓ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），５．５８（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）および１．２８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７５】
ステップ１−ｉｖに示されるとおり、２−（４−アミノ−２，６−ジフルオロフェニル）プロパン酸（１９．０ｇ、９４．４５ｍｍｏｌ）と、グリセロール（３５．８３ｇ、２８．４１ｍＬ、３８９．１ｍｍｏｌ）と、ニトロベンゼン（７．２０９ｇ、６．０２８ｍＬ、５８．５６ｍｍｏｌ）と、濃硫酸（３０．５７ｇ、１６．６１ｍＬ、３１１．７ｍｍｏｌ）との混合物を穏やかに加熱した。初期の活発な反応が休止した後に、混合物を１７０℃にて１６時間加熱した。冷却後、減圧下で揮発物を除去し、残渣をＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）に溶解し、１５０ｍＬの６Ｎ  ＮａＯＨを加え、混合物を１１０℃にて３時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物を濃ＨＣｌで酸性化してｐＨ３にした。その結果得られた暗色の沈殿を濾過によって集め、水で洗浄した。沈殿をエタノールに入れて、塩化チオニル（１１．２４ｇ、６．８９１ｍＬ、９４．４５ｍｍｏｌ）を注意深く滴下して加えた。添加が完了した後、混合物を５０℃にて２０時間加熱した。室温まで冷却した後、減圧下で揮発物を除去し、残渣を飽和ＮａＨＣＯ３およびＤＣＭの混合物に溶解した。層を分離し、水層をＤＣＭで抽出した。この合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で体積を減らし、中圧シリカゲルクロマトグラフィー（３６分間で０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから３０％）に供し、２−（５，７−ジフルオロキノリン−６−イル）プロパン酸メチル（１４．０ｇ、２ステップに対して５６％収率）を得た。このメチルエステル（５．０ｇ）をメタノール（３０ｍＬ）に入れ、得られた溶液をＮａＯＨ（６Ｍを１６．５８ｍＬ、９９．５０ｍｍｏｌ）で処理し、室温にて２０時間撹拌することによってけん化した。濃ＨＣｌによってｐＨ２まで注意深く酸性化した後、得られた沈殿を濾過によって集め、高真空下で乾燥することによって２−（５，７−ジフルオロキノリン−６−イル）プロパン酸を得、これをそのまま後の反応に用いた。化合物１００３は、化合物１００４の調製に用いられたのと同じ手順によって、ジエチル２−メチルマロネートをジエチルマロネートに置き換えることによって調製できる。
【００７６】
【化６】
0005686796.tif 000009
（実施例２）式ＩＩＩの化合物の調製
Ｒ２およびＲ３が水素またはメチルである式ＩＩＩの化合物は、スキーム２に示されるとおりに調製できる。したがってスキーム２のステップ２−ｉに示されるとおり、式ＩＩの適切に置換されたキノリン酢酸（２４８．５ｍｍｏｌ、１．０当量）および１，３−ジアミノチオ尿素（２７３．４ｍｍｏｌ、１．１当量）を、テトラメチレンスルホン（スルホラン、３８ｍＬ）および水（５７ｍＬ）の混合物に懸濁する。混合物にメタンスルホン酸（５４６．７ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えると、すべての固体が溶解する。反応混合物をゆっくり９０℃に温め、反応を９０℃にて４０時間加熱する。反応混合物を氷浴中で冷却して水（７５ｍＬ）を加え、続いてｐＨ８が得られるまで飽和重炭酸ナトリウム（５００ｍＬ）を注意深く加える。その結果得られる沈殿を真空濾過によって集め、水、飽和重炭酸ナトリウム、水、およびメチルｔ−ブチルエーテルでそれぞれ洗浄する。生成物を真空オーブン中で５５℃にて乾燥することによって、式ＩＩＩの化合物を得る。
【００７７】
【化７】
0005686796.tif 000010
（実施例３）５−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−４−（イミノトリフェニルホスホラノ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（化合物１０１１）の調製
Ｒ２およびＲ３の各々がフルオロであり、Ｒ４が水素である式ＩＩＩの化合物は、スキーム３に示されるとおりに調製できる。したがってステップ３−ｉに示されるとおり、ＤＭＳＯ（１５０ｍＬ）中の６−ヨードキノリン（１０．０ｇ、３９．２１ｍｍｏｌ、Ｈａｎｇｚｈｏｕ  Ｔｒｙｌｅａｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｃｈｉｎａより購入）および銅（ナノ粒子）（９．９６４ｇ、１５６．８ｍｍｏｌ）の混合物に、２−ブロモ−２，２−ジフルオロ−酢酸エチル（１０．３５ｇ、５０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃にて６時間加熱し、この間に混合物は赤色の銅懸濁液から暗赤色のほぼ均一な溶液になった。室温まで冷却した後、混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）および飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（４５０ｍＬ）で希釈した。３０分間撹拌した後、有機層を分離し、水で洗浄し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。減圧下で揮発物を除去することによって、粗生成物を赤色の液体として得た。中圧シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／酢酸エチル：２５分間で１００％から３０％）による精製によって、２，２−ジフルオロ−２−（キノリン−６−イル）酢酸エチル（化合物１００９、５１％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（３００．０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｄ９．０４−９．０３（ｍ，１Ｈ），８．２９−８．２１（ｍ，２Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．１，８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｑ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）および１．３４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７８】
スキーム３のステップ３−ｉｉに示されるとおり、化合物１００９（１０．０ｇ、３９．８０ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン（７．６５ｇ、７．５０ｍＬ、２３９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて１０分間撹拌した。混合物を２ＮのＨＣｌ溶液に注ぎ入れた後、水性混合物をＤＣＭで２回洗浄し、窒素ガスを溶液にバブリングしながらｐＨを８に調整した。その結果得られた水溶液をＤＣＭ（１０×）によって徹底的に抽出し、合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で揮発物を除去することで、２，２−ジフルオロ−２−（キノリン−６−イル）アセトヒドラジドを黄色い固体として得た（化合物１０１０、９１％収率）。この化合物を、さらに精製することなく直接用いた。
【００７９】
スキーム３のステップ３−ｉｉｉに示されるとおり、ＥｔＯＨ（７１ｍＬ）中の化合物１０１０（３．５５ｇ、１４．９７ｍｍｏｌ）を水酸化カリウム（９２４ｍｇ、１６．５ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を穏やかに温めて均一にした。二硫化炭素（１．３８ｇ、１．０９ｍＬ、１８．２ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を９０℃にて４時間撹拌し、この時に中間化合物５−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−チオールのナトリウム塩が形成された。この還流溶液にヒドラジン（４．８０ｇ、４．７０ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）を加え、続いて３Ａモレキュラーシーブス（３ｇ）を加えた。２時間還流した後、濾過によってシーブスを取り除き、ＥｔＯＨで洗浄した。合わせた有機物を氷浴中で０℃に冷却し、窒素雰囲気下でｐＨ６．５が得られるまで濃ＨＣｌで処理した。濾過によって沈殿を除去して濾液を４時間還流し、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを用いてあらゆる過剰な水を集めた。減圧下で揮発物を除去し、残渣を水に入れ、ｐＨを６．５に調整した。その結果得られた固体を濾過によって集め、水で洗浄し、乾燥して５−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−４−アミノ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（化合物１０１１、６１％収率）を生成した：１Ｈ  ＮＭＲ（３００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１４．２８（ｓ，１Ｈ），９．０３−９．０２（ｍ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄｄ，Ｊ＝１．９，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｑ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ）および５．６９（ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ。
【００８０】
【化８】
0005686796.tif 000011
（実施例４）式ＩＶの化合物
４−イソチオシアナト−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール（化合物１０１２）、４−イソチオシアナト−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール（化合物１０１３）、および１−エチル−４−イソチオシアナト−１Ｈ−ピラゾール（化合物１０１４）は、それぞれ１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン、１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン（Ｍａｔｒｉｘ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．より）、および１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン（Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓより）から、ピラゾールアミンを０℃にてピリジンの存在下でチオホスゲンと反応させることによって調製された。
【００８１】
【化９】
0005686796.tif 000012
（実施例５）式Ｉの化合物の調製
式Ｉの化合物は、スキーム５に示されるとおりに調製できる。スキーム５のステップ５−ｉに示されるとおり、式ＩＩＩの化合物（４５３．３ｍｍｏｌ、１．００当量）および式ＩＶの化合物をともにピリジンに入れたものを１１０℃にて１５時間加熱する。室温まで冷却した後、反応混合物を１ＮのＨＣｌ溶液に注ぎ入れ、濾過によって沈殿を集め、水で洗浄し、中圧シリカゲルクロマトグラフィーによって精製する。化合物のラセミ混合物の分離が望ましいときには、ＣｈｉｒａｌＰａｋ（登録商標）ＡＤ−Ｈカラム（２０ｍｍ×２５０ｍｍ、５ミクロンカラム）またはＣｈｉｒａｌＣｅｌ（登録商標）ＯＪ−Ｈカラム（２０ｍｍ×２５０ｍｍ、５ミクロンカラム）を用いた超臨界流体クロマトグラフィーによって、適切な流量で適切なＭｅＯＨ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ２比で溶出することによって、それぞれのエナンチオマーに分離してもよい。
【００８２】
【化１０】
0005686796.tif 000013
（実施例６）式Ｉの化合物の代替的な調製−  ３−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｂ］［１，３，４］チアジアゾ−ル−６−アミン（化合物３）の調製
式Ｉの化合物は、４−（イミノトリフェニルホスホラノ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオールとイソシアネートとを反応させることによっても調製できる。したがってスキーム６のステップ６−ｉに示されるとおり、メカニカルスターラーと、温度プローブと、温度表示と、窒素入口ラインと、冷却浴とを備えた、窒素パージされた２２Ｌの丸底フラスコの中に、６−ヨードキノリン（７５０ｇ、２．９４ｍｏｌ）を加えた。無水ＴＨＦ（５．２５Ｌ）を加えて、得られた溶液をｉＰｒＯＨ／ドライアイス浴を用いて−２７℃に冷却した。添加漏斗を介してｉ−ＰｒＭｇＣｌ・ＬｉＣｌ（２．４５Ｌ、ＴＨＦ中に１．３Ｍ、１．１当量）を１時間１７分にわたって加え、温度を−２６℃から−２９℃の間に維持した。次いで、温度を−２０℃から−２９℃の間に維持しながら反応混合物を２．５時間撹拌した。ｉＰｒＯＨ／ドライアイス浴を用いて褐色のスラリーを２５分間にわたって−５３℃に冷却し、添加漏斗を介してシュウ酸ジエチル（４６９ｇ、０．４４Ｌ、１．１当量）を１時間１５分にわたって加え、温度を−５１℃から−５３℃の間に維持した。その結果得られた暗色の溶液を一晩（約１８時間）室温まで温めて、芥子色のスラリーを生成した。水（４．５Ｌ）中の塩化アンモニウム（５００ｇ、９．３５ｍｏｌ、３．１８当量）の溶液を調製し、氷浴を用いて１０℃に冷却した。撹拌塩化アンモニウム溶液を含有する２２Ｌフラスコをわずかに減圧することによって、移動ラインを介して３７分間にわたって反応混合物を塩化アンモニウム溶液中に移した。移動が完了すると、氷浴を除去し、ＥｔＯＡｃ（３．７５Ｌ）を加えて撹拌を開始した。約１５分後に撹拌を停止して層を分離させた。水相（ｐＨ＝８）をＥｔＯＡｃ（３．７５Ｌ）で抽出した。２つの有機層を合わせてＮａＣｌ溶液（２．５Ｌの水中に１１２ｇ）で洗浄した。真空下で２５℃にて有機相を濃縮して油（７６３ｇ）を得、この油をシリカゲルクロマトグラフィー（７：１から１：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製した。純生成物を含む画分を合わせて真空下で濃縮することによって、エチル２−オキソ−２−（キノリン−６−イル）アセテートを褐色の油として得た（化合物１０１５、５０３ｇ、７４．５％収率）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．４０（ｔ，３Ｈ），４．５１（ｑ，２Ｈ），７．７１（ｄｄ，１Ｈ），８．２１（ｄ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，１Ｈ），８．７７（ｄｄ，１Ｈ），９．１１（ｄｄ，１Ｈ）。
【００８３】
スキーム６のステップ６−ｉｉに示されるとおり、メカニカルスターラーと、窒素入口と、温度プローブと、室温水浴とを備えた、１２Ｌの窒素パージされた丸底フラスコの中で、化合物１０１５（２８２ｇ、１．２３０ｍｏｌ）とＤＣＭ（２．８２Ｌ）とを合わせた。その結果得られた溶液に、添加漏斗を介してビス−（２−メトキシエチル）アミノサルファートリフルオリド（ＤｅｏｘｏＦｌｕｏｒ（商標）、６１５ｇ、０．５０Ｌ、２．２６当量）を４５分間にわたって加えた。シリンジを介して無水ＥｔＯＨ（１２．８ｇ、１５ｍＬ、０．２１当量）を３分間にわたって複数回に分けて加え、反応を周囲温度にて一晩撹拌した。工程間のサンプルを取り、後処理をし、反応の進行をモニターするために１Ｈ−ＮＭＲによって分析した。最初のエタノール添加後の典型的な出発材料対生成物のモル比は約２：３であった。したがって、観察される出発材料含有量が１０％未満になるまで、添加ごとに１０時間から２０時間の間隔を置いてシリンジを介して追加のＥｔＯＨ部分（１２．３ｇ、０．２当量）を順次加えた。重炭酸ナトリウム（８２７ｇ、８当量）を水（８．３Ｌ）に混合し、氷浴中で１３℃に冷却することによって、クエンチ溶液を調製した。撹拌重炭酸ナトリウム溶液を含有する２２Ｌフラスコを減圧することによって、移動ラインを介して０．５時間にわたって反応混合物を重炭酸ナトリウムクエンチ溶液中に移した。活発な気体放出が観察された。クエンチの間は温度を１０℃〜１３℃の間に維持し、その後は氷浴を取り除いて混合物を１２℃〜１５℃にて２時間撹拌した。ＤＣＭ層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１Ｌ）で抽出した。ＤＣＭ層を合わせ、真空下で２６℃にて濃縮することによって３４９ｇの粗製油を得、これをシリカクロマトグラフィー（７：１から４：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製した。純生成物を含む画分を合わせて濃縮することによって油を得、これを２×１８０ｍＬの無水ＥｔＯＨに入れ、回転蒸発によって濃縮することによって、エチル２，２−ジフルオロ−２−（キノリン−６−イル）アセテートを油として得た（化合物１００９、１６４ｇ、５３％収率）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．２４（ｔ，３Ｈ），４．３５（ｑ，２Ｈ），７．６７（ｄｄ，１Ｈ），７．９１（ｄｄ，１Ｈ），８．２０（ｄ，１Ｈ），８．３７（ｓ，１Ｈ），８．６０（ｄ，１Ｈ），９．０５（ｄｄ，１Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ−１０１．２。
【００８４】
スキーム６のステップ６−ｉｉｉに示されるとおり、撹拌バーおよび熱電対を備えた１Ｌの丸底フラスコに、化合物１００９（１６４ｇ、６３３．９ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＨ（３９８ｍＬ）を加えた。氷／水浴を用いて、この黄色い溶液を０℃に冷却した。内部温度を２０℃未満に維持しながら、反応混合物に水酸化ナトリウム（２Ｍ水溶液を５７０．５ｍＬ、１．１４１ｍｏｌ）を１時間にわたってゆっくりと加えた。氷／水浴を取り除き、混合物を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、黄色い固体を真空オーブン（５０℃、２０〜２５ｍｍＨｇ、Ｎ２スイープ）中で乾燥することによって、ナトリウム２，２−ジフルオロ−２−（キノリン−６−イル）アセテート（化合物１０１６、１５６．０ｇ、９９％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．５０−７．５５（ｄｄ，１Ｈ），７．９０−７．８５（ｄｄ，１Ｈ），８．１０−８．１５（ｄ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），８．４０−８．４５（ｄ，１Ｈ），８．９５−８．９０（ｄｄ，１Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ−９８．１５。
【００８５】
スキーム６のステップ６−ｉｖに示されるとおり、加熱マントルと、還流冷却器と、熱電対と、メカニカルスターラーとを備え、Ｎ２でパージされた３Ｌの丸底フラスコに、化合物１０１６（９８．６ｇ、３２６．４ｍｍｏｌ）と、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（１．６０７Ｌ）と、ピリジン（３８．７３ｇ、３９．６０ｍＬ、４８９．６ｍｍｏｌ）とを加えた。２−メチルテトラヒドロフラン（４１５．４ｇ、６５２．８ｍｍｏｌ）中の５０％プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））を１回で加え、１５〜２０℃の発熱を観察した。反応混合物を７０℃にて１時間加熱し、この時にチオカルボヒドラジン（５３．０３ｇ、４８９．６ｍｍｏｌ）を１回で加えた。反応混合物をさらに３時間撹拌し、次いで２−ＭｅＴＨＦ（２０７．７ｇ、３２６．４ｍｍｏｌ）中の５０％Ｔ３Ｐの追加部分を加えた後、７０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却した。別のフラスコにおいて、水（２．４１Ｌ）中の重炭酸ナトリウム（２１９．３ｇ、２．６１１ｍｏｌ）の溶液を氷／水浴を用いて冷却した。カニューレを介して反応混合物を４５分間にわたってクエンチ溶液にゆっくり加え、この時に生成物の起泡および沈殿が観察された。溶液を５℃にてｐＨ＝７でさらに１時間撹拌した。その結果得られた固体を吸引濾過によって集め、このケークを水（３．２Ｌ）およびＭＴＢＥ（３．２Ｌ）で洗浄した。白色の固体を真空オーブン（５０℃、２０〜２５ｍｍＨｇ）中で乾燥することによって、４−アミノ−５−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（化合物１０１１、５７ｇ、５８％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ５．７０−５．６５（ｓ，２Ｈ），７．５０−７．５５（ｄｄ，１Ｈ），７．９０−７．８５（ｄｄ，１Ｈ），８．１０−８．１５（ｄ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），８．４０−８．４５（ｄ，１Ｈ），８．９５−８．９０（ｄｄ，１Ｈ），１４．３−１４．２５（ｓ，１Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ−９２．５０。
【００８６】
スキーム６のステップ６−ｖに示されるとおり、窒素雰囲気下で、メカニカルスターラーと熱電対とを装備した５００ｍＬの丸底フラスコにおいて、トリフェニルホスフィン（１７．６６ｇ、６７．３５ｍｍｏｌ）と、１，１，１，２，２，２−ヘキサクロロエタン（１５．９４ｇ、６７．３５ｍｍｏｌ）と、化合物１０１１（１３．３７ｇ、４４．９０ｍｍｏｌ）とを合わせた。無水アセトニトリル（４６１．０ｍＬ）を加えた後に、撹拌混合物にＥｔ３Ｎ（１４．０９ｇ、１９．４１ｍＬ、１３９．２ｍｍｏｌ）を加え、その間の温度を２１．４〜２５．１℃の間に維持した。反応混合物は透明な溶液となり、次いで生成物が形成されるとスラリーになった（約２分以内）。次いで水（８０８．９ｍｇ、８０８．９μＬ、４４．９０ｍｍｏｌ）を加え、続いてＭｅＯＨ（１４．３９ｇ、１８．１９ｍＬ、４４９．０ｍｍｏｌ）を加えて、反応をさらに４５分間撹拌した。濾過によって固体を集め、そのケークをＣＨ３ＣＮ（１３２ｍＬ）で洗浄した。真空オーブン中で４５℃にて窒素ブリードによってケークを乾燥することによって、５−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−４−（イミノトリフェニルホスホラノ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（化合物１０１７、２５．５７ｇ、９８．８％収率）をベージュ色の固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．５１−７．４２（ｍ，６Ｈ），７．７０−７．５６（ｍ，１２Ｈ），８．１１（ｄ，１Ｈ），８．１６（ｍ，１Ｈ），８．４９（ｄｄ，１Ｈ），９；０３（ｄｄ，１Ｈ），１３．６４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ−９１．７７；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１９．７１。
【００８７】
スキーム６のステップ６−ｖｉに示されるとおり、オーバーヘッドスターラーと、熱電対と、還流冷却器と、窒素バブラ−とを装備した２Ｌの４つ口丸底フラスコに、１−メチルピラゾール−４−カルボン酸（２７．３３ｇ、２１６．７ｍｍｏｌ）を加えた。２０．１℃にてトルエン（６００ｍＬ）およびトリエチルアミン（３０．７０ｇ、４２．２９ｍＬ、３０３．４ｍｍｏｌ）を加え、温度上昇は観察されなかった。その結果得られた白色のスラリーは、１０３℃に加熱した後無色の溶液になった。ジフェニルホスホリルアジド（Ｄｉｐｈｅｎｙｌｐｈｓｏｐｈｏｒｙｌ  ａｚｉｄｅ：ＤＰＰＡ、６１．４８ｇ、４８．１４ｍＬ、２１６．７ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって加え、温度を１０３．１℃から１０７℃の間に保った。加熱を中断して室温まで冷却させた。その結果得られた４−イソシアナト−１−メチル−１Ｈ−ピラゾールを単離せずに、そこに室温で化合物１０１７（１２０ｇ、２１６．７ｍｍｏｌ）を１回で加えた。添加直後の分析的ＨＰＬＣ分析によって、出発材料から化合物３への転換が５１．２％であることが示された。２１６．７ｍｍｏｌの１−メチルピラゾール−４−カルボン酸から始めて、別のフラスコで上記のとおりに追加の４−イソシアナト−１−メチル−１Ｈ−ピラゾールを調製した。室温まで冷却後、この反応混合物をカニューレを介して第１の反応混合物に移した。ＨＰＬＣ分析によって、添加後の１００％転換が示された。反応混合物にＥｔＯＡｃ（２４０ｍＬ）を加えると、白色の沈殿が形成された。反応を３０分間撹拌し、吸引濾過によって固体を集めた。このケーク［（副生成物として１−（３−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｂ］［１，３，４］チアジアゾール−６−イル）−１，３−ビス（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）尿素（化合物１０１８）を含む）］をＥｔＯＡｃ（６００．０ｍＬ）で洗浄した。３５℃における回転蒸発によって真空中で濾液を濃縮して、２７２．４ｇの褐色の油を得た。この油を高真空下で乾燥し、カラムクロマトグラフィーによって精製し、８：１の比率のＳｉＯ２対粗製油を用いて、ＤＣＭ中１％から５％のＥｔＯＨのグラジエントで溶出することによって、３−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｂ］［１，３，４］チアジアゾ−ル−６−アミン（化合物３、１１１ｇ）を生成し、結晶化によってこれをさらに精製した。したがって、メカニカルスターラーと窒素バブラ−とを装備した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、この材料の３３．５ｇ部分を加えた。固体は橙−黄褐色であった。合計１３５ｍＬのＣＨ３ＣＮを加えて、濃いスラリーを得た。２．５時間後に、吸引濾過によって３時間後に固体を集めた。湿潤ケークをＣＨ３ＣＮ（６７ｍＬ）で洗浄して、１３．９ｇの湿潤固体を得た。１５．５時間にわたって真空乾燥（４３℃、２０〜２５Ｈｇ、Ｎ２スイープ）を行なうことによって、１０．２５ｇの純粋な化合物３（ＨＰＬＣ分析による＞９９．９％純度、＜０．１％ＰＰｈ３Ｏ）を得た。ＭｅＣＮ濾液を等量の水で処理した。固体が沈殿し、スラリー���２時間撹拌した。吸引濾過によって固体を集めた。湿潤ケークを３５ｍＬの水で洗浄した。ケークを乾燥（４３℃、２０〜２５Ｈｇ、Ｎ２スイープ）させて９．５ｇの固体材料を得、これを上記と同様にＣＨ３ＣＮで処理して、さらに４．７８ｇの純粋な化合物３（合計＝１５．０３ｇ、化合物１０１７からの総合収率５７．７％）を得た。尿素副生成物（化合物１０１８）をＮＨ３／ＭｅＯＨでアミノ分解して付加的な化合物３を回収することによって、収率をさらに上げることができる。
【００８８】
【化１１】
0005686796.tif 000014
化合物１〜８に対する分析データを表１に示す。
【００８９】
表１。式Ｉの化合物の物理的特徴付け
【００９０】
【表１−１】
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【００９１】
【表１−２】
0005686796.tif 000016
式Ｉの化合物の生物学的アッセイ
（実施例３）ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害アッセイ
標準的なラジオメトリックアッセイを用い、本発明の化合物についてｃ−Ｍｅｔキナーゼの阻害能力をスクリーニングした。簡単に説明すると、このキナーゼアッセイでは、３３Ｐ−ＡＴＰの末端３３Ｐ−ホスファートが基質ｐｏｌｙＥ４Ｙに取り込まれるのを調べる。アッセイは、１ウェル当たり１００μＬを最終容量として０．５ｎＭのｃ−Ｍｅｔ、１００ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％ＢＳＡ、１ｍＭのＤＴＴ、０．５ｍｇ／ｍＬのｐｏｌｙＥ４Ｙおよび３５μＭのＡＴＰを含む９６ウェルプレートで行った。これに合わせて本発明の化合物をＤＭＳＯに溶解させて１０ｍＭの初期原液を作製した。次いでＤＭＳＯの希釈系列を作製してアッセイの最終溶液を得た。ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ中の阻害剤の１．５μＬのアリコートを各ウェルに加え、続いて３３Ｐ−ＡＴＰを、最後にｃ−ＭｅｔおよびｐｏｌｙＥ４Ｙ（Ｓｉｇｍａから入手）を加えた。２０分後、反応を、４ｍＭのＡＴＰを含む５０μＬの３０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）でクエンチした。この反応混合物を０．６６ｍｍのＧＦフィルタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移し、５％ＴＣＡで３回洗浄した。５０μＬの高効率シンチラントＵｌｔｉｍａｔｅ  Ｇｏｌｄ（商標）（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の添加後、サンプルをＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）でカウントした。Ｋｉ値は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  Ｓｏｌｖｅｒマクロを使用して算出し、データを競合的強結合阻害の反応速度モデルにフィッティングさせた。化合物１から８の各々は、ｃ−Ｍｅｔの阻害に対するＫｉ値が２００ｎＭ未満であった。
【００９２】
（実施例４）Ｓｎｕ５胃癌細胞におけるｃ−Ｍｅｔ活性の阻害
式Ｉの化合物について、操作されたＳｎｕ５細胞株を用いてルシフェラーゼによるシグナルの阻害能力をさらにスクリーニングした。Ｓｎｕ５［アメリカンタイプカルチャーコレクションから入手（カタログ番号ＣＲＬ−５９７３）］は、常時活性型のｃ−Ｍｅｔを過剰発現することが知られているヒト胃癌である。この細胞株を、遺伝子コンストラクトを含むレトロウイルスｐＣＬＰＣＸによって形質導入した。遺伝子コンストラクトは６ｘＡＰ１プロモーター応答エレメント、およびＣ末端にＰＥＳＴ配列（ルシフェラーゼの半減期を短縮させるマウスオルニチンデカルボキシラーゼ由来のタンパク質分解シグナル）を持つルシフェラーゼ遺伝子からなる。常時活性型ｃ−Ｍｅｔは細胞経路（主にＭＡＰキナーゼ）を活性化し、その結果ルシフェラーゼ−ＰＥＳＴのＡＰ−１による転写および最終産物への翻訳が起こり、その活性はルシフェリン（Ｐｒｏｍｅｇａ社製のＳｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ。）の添加時に化学発光値として定量できる。残量発光量は、ｃ−Ｍｅｔの阻害と強く相関する。ピューロマイシンで新しい細胞株（Ｓｎｕ５−ＡＰ１−Ｌｕｃ−Ｐｅｓｔ）を選択して安定な細胞株を得た。この細胞を完全培地［１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ：ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ、Ｈｙｃｌｏｎｅ）およびペニシリン／ゲンタマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＩｓｃｏｖｅ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）］で増殖させた。本発明の化合物をＤＭＳＯに溶解させて１０ｍＭの初期原液を作製した。次いでＤＭＳＯの希釈系列を作製し、完全培地に移して１０×溶液を作製した。Ｓｎｕ５−ＡＰ１−Ｌｕｃ−Ｐｅｓｔ細胞をカウントし、２００，０００細胞／ｍＬ溶液になるように希釈した。細胞（９０μＬ）を９６ウェル黒透明底プレート（Ｃｏｓｔａｒ）の各ウェルに加えた。次いで１０μＬの１０×化合物溶液を三連で細胞に加えた。３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターでプレートをインキュベートした。６時間後、各ウェルに５０μＬのＳｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、プレートシェーカーに５分間載せて細胞が完全に溶解するようにした。プレートを１４５０Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。化合物１から８の各々は、Ｓｎｕ５胃癌細胞におけるｃ−Ｍｅｔ活性の阻害に対するＩＣ５０値が２００ｎＭ未満であった。
【００９３】
（実施例５）マウスモデルにおける腫瘍成長の阻害
化合物３について、重症複合免疫不全（ｓｅｖｅｒｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ：ＳＣＩＤ）マウスに皮下移植されたＳＮＵ−５胃癌細胞の腫瘍成長を阻害する能力を調べた。ＳＮＵ−５細胞（ＣＲＬ−５９７３、アメリカンタイプカルチャーコレクション、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）と、１００単位／ｍＬのペニシリンと、１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）と、２ｍＭのＬ−グルタミンとを補ったＩＳＣＯＶＥ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で培養した。移植前に細胞を４継代より少なく培養した。０日に、メスのＳＣＩＤマウス（Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤ，ＣＢ−１７，重量１７ｇから１９ｇのマウス、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡより入手）の右背側腋窩領域に、５×１０６個のＳＮＵ−５細胞を皮下的に（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ：ｓ．ｃ．）注射した。２５日に平均腫瘍体積が約３５８ｍｍ３に達したときに、処置を開始した。
【００９４】
化合物３を、３０％（ｗ／ｖ）プロピレングリコールおよび１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有するビヒクルに懸濁した均一な形で配合したものを、１日１回（ＱＤ）、合計１日量が３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ／日となるようにして１４日間経口的に（ｐ．ｏ．）投与した。処置の開始後２週間にわたって、腫瘍体積（楕円体式（長さ×幅２）／２を用いて算出、ここで長さおよび幅はそれぞれ腫瘍の最大寸法および最小寸法を表わす）を記録した。腫瘍移植の３８日後に研究を終了した。平均腫瘍体積を表２に示す。研究終了時の腫瘍重量を表３に示す。
【００９５】
表２。ＳＮＵ−５腫瘍体積＊
【００９６】
【表２】
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＊腫瘍体積測定値はｍｍ３単位であり、平均±標準誤差として報告される
表３。研究終了時のＳＮＵ−５腫瘍重量
【００９７】
【表３−１】
0005686796.tif 000018
【００９８】
【表３−２】
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表２および表３に示されるとおり、化合物３は、テストされた３つの用量レベルすべてにおいて有意かつ用量依存的な抗腫瘍活性を示した。腫瘍体積分析によって、３０ｍｇ／ｋｇ／日の用量は−２３．９％（Ｐ＜０．００１）の腫瘍退縮をもたらした。３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ／日のＶＲＴ−８４６１９８処置グループから回収した腫瘍は、ビヒクル対照グループから回収したものよりも有意に小さく、その重量減少パーセントはそれぞれ３４．５％、５９．３％および７３．５％であった（すべてＰ＜０．００２）。
（実施例６）
【００９９】
マウスモデルにおける腫瘍転移の阻害
化合物３について、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスの皮下移植腫瘍の肺への転移を阻害する能力を調べた。したがって、Ａ５４９細胞（Ａ５４９ＨＧＦ−ｌｍ１１１５、肝細胞増殖因子、ルシフェラーゼ、および緑色蛍光タンパク質によって形質移入）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）と、１００単位／ｍＬのペニシリンと、１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）と、２ｍＭのＬ−グルタミンとを補ったＲＰＭＩ１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で、移植前に４継代より少なく培養した。３−（ジフルオロ（キノリン−６−イル）メチル）−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｂ］［１，３，４］チアジアゾ−ル−６−アミン（化合物３）を、０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ８０（商標）を含有するビヒクルに溶解した均一な形で配合し、これを毎日新しく調製して、１０ｍＬ／ｋｇの投薬体積にて経口胃管栄養を介してマウスに投与した。
【０１００】
０日に、メスのＳＣＩＤマウスの右背側腋窩領域に、５×１０６個のＡ５４９ＨＧＦ細胞を皮下的に（ｓ．ｃ．）注射した。同じ日に処置を開始し、化合物３を１日１回（ＱＤ）、合計１日量が３０および６０ｍｇ／ｋｇ／日となるようにして２２日間経口投与（ｐ．ｏ．）した。処置開始後３週間にわたって、異所性腫瘍測定値を週２回記録した。化合物３は、ビヒクルのみを投与されたマウスにおける腫瘍細胞増殖に対して、３０または６０ｍｇ／ｋｇ／日を投与されたマウスに対する移植部位における初代のＡ５４９腫瘍細胞増殖に有意な変化をもたらさないことが見出された。
【０１０１】
化合物３の抗転移能力を評価するために、研究終了時にすべての動物の肺組織を回収して、ルシフェラーゼ発光によるエクスビボ定量化のために均質化によって溶解した。表４は研究終了時の肺組織中の腫瘍細胞含有量を示しており、そのデータから、ビヒクル対照（平均蛍光カウント２３５３１．５±８２７８．２ＳＥＭ、ｐ＜０．０２）に比べて、６０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物３で処理されたマウス（平均蛍光カウント６６７２．３±１９８６．１ＳＥＭ）において、化合物３が肺転移の形成を有意に阻害することが示される。
【０１０２】
表４。ビヒクルのみで処置された対照動物に対する、化合物３で処置されたＳＣＩＤマウスにおける均質化肺組織の発光
【０１０３】
【表４】
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本明細書に引用した刊行物および特許はすべて、参照によって援用するために各刊行物または特許を具体的に個々に示しているかのように参照によって本明細書に援用する。前述の発明について理解しやすいように図面および実施例によりある程度詳細に記載してきたが、本発明の本教示内容に照らして、添付の特許請求の範囲の精神または範囲を逸脱することなく、ある種の変更および修正をなし得ることが当業者には容易に明らかであろう。