(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト動物の外部寄生生物の寄生を抑制する方法であって、該動物に有効量のスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩を局所的に投与することを含む、方法。
【請求項２】
該動物がイヌまたはネコである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該投与が、２週間に１回以下で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該外部寄生生物が、ネコノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ  ｆｅｌｉｓ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
該有効量が、該動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜３５０ｍｇのスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
該投与が、スポットオン、プランジまたはスプレーディッピング、ハンドヘルドスプレーを用いるかもしくはレース中での噴射、またはバックラインスプレーとして、またはポアオンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
該投与が、月に１回以下で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
有効量のスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む、動物の外部寄生生物の寄生を局所的に抑制するための局所用形態の医薬製剤。
【請求項９】
該スピネトラムまたはその医薬的に許容される塩が、該製剤の重量で１〜４５％の量で該製剤に存在する、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
該有効量が、該動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜３５０ｍｇのスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩である、請求項９に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
該製剤が、スポットオン、プランジまたはスプレーディッピング、ハンドヘルドスプレーを用いるかもしくはレース中での噴射、またはバックラインスプレーとして、またはポアオン投与に適切である、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
単一用量またはパルス用量で２週間に１回以下で投与される、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
月に１回以下で投与される、請求項１２に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
該動物がイヌまたはネコである、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
シャンプー、コンディショナー、またはクリームリンスである、請求項８に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は外部寄生生物撲滅方法および製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ノミ、シラミ、クロバエ、カ、マダニ（ｔｉｃｋ）およびダニ（ｍｉｔｅ）などの外部寄生生物は、ヒトおよび同様に動物にとって問題となる。このような有害生物は、体重増加を減少させること、低い品質の皮、羊毛、および肉を生じること、ならびに一部の場合において死をもたらすことにより、家畜産業における生産性に重要な影響を与える。外部寄生生物はまた、ペットにおいて疾患および不快感を引き起こす。外部寄生生物は、ヒトの病原体となる細菌およびウイルスを保有することが知られている。外部寄生生物が引き起こす疾患としては、例えば、マラリア、リンパ管フィラリア症、トラコーマ、トリパノソーマ症、および河川盲目症が挙げられる。
【０００３】
外部寄生生物を抑制するための試みとして、殺虫剤および農薬の使用が挙げられている。例えば、天然由来の発酵産物である、スピノシンが、動物およびヒトにおける外部寄生生物撲滅薬として利用されている（Ｓｎｙｄｅｒ、特許文献１および特許文献２；Ｋａｓｓｅｂａｕｍら、特許文献３；ならびにＪａｎｓｓｅｎら、特許文献４）。
【０００４】
スピノシンの誘導体は農業用途に利用されている（ＤｅＡｍｉｃｉｓら、特許文献５）。スピネトラムは、２５〜９０％、好ましくは５０〜９０％の（２Ｒ，３ａＲ，５ａＲ，５ｂＳ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｒ，１６ａＳ，１６ｂＲ）−２−（６−デオキシ−３−Ｏ−エチル−２，４−ジ−Ｏ−メチル−アルファ−Ｌ−マンノピラノシルオキシ）−１３−［（２Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（ジメチルアミノ）テトラヒドロ−６−メチルピラン−２−イルオキシ］−９−エチル−２，３，３ａ，４，５，５ａ，５ｂ，６，９，１０，１１，１２，１３，１４，１６ａ，１６ｂ−ヘキサデカヒドロ−１４−メチル−１Ｈ−ａｓ−インダセノ［３，２−ｄ］オキサシクロドデシン−７，１５−ジオン（「ジヒドローＥｔ−Ｊ」と称される、以下の式Ｉ）、および１０〜７５％、好ましくは１０〜５０％の（２Ｒ，３ａＲ，５ａＳ，５ｂＳ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｒ，１６ａＳ，１６ｂＳ）−２−（６−デオキシ−３−Ｏ−エチル−２，４−ジ−Ｏ−メチル−アルファ−Ｌ−マンノピラノシルオキシ）−１３−［（２Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（ジメチルアミノ）テトラヒドロ−６−メチルピラン−２−イルオキシ］−９−エチル−２，３，３ａ，５ａ，５ｂ，６，９，１０，１１，１２，１３，１４，１６ａ，１６ｂ−テトラデカヒドロ−４，１４−ジメチル−１Ｈ−ａｓ−インダセノ［３，２−ｏ］オキサシクロドデシン−７，１５−ジオン（「Ｅｔ−Ｌ」と称される、以下の式ＩＩ）の混合物についての慣用名である（Ｐｏｄｈｏｒｅｚら、特許文献６）。
【化１】
0005738853.tif 000002
【化２】
0005738853.tif 000003
スピネトラムは、様々な農作物における広範囲の害虫の長期間の抑制を提供すると記載されている（非特許文献１）。スピネトラムは、ナシ状果の果実市場において殺虫剤としてニュージーランドにおいて登録されていることが報告されている（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第６，０６３，７７１号明細書
【特許文献２】米国特許第６，６６４，２３７号明細書
【特許文献３】米国特許第６，９３３，３１８号明細書
【特許文献４】米国特許第７，０３０，０９５号明細書
【特許文献５】米国特許第６，００１，９８１号明細書
【特許文献６】米国特許出願公開第２００８／０１０８８００Ａ１号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｄｏｗ  ＡｇｒｏＳｃｉｅｎｃｅｓ  Ｓｐｉｎｅｔｏｒａｍ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、２００６年１１月
【非特許文献２】「Ｄｏｗ  ＡｇｒｏＳｃｉｅｎｃｅｓ  Ｒｅｃｅｉｖｅｓ  Ｆｉｒｓｔ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｐｉｎｅｔｏｒａｍ  Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ」，Ｄｏｗ  ＡｇｒｏＳｃｉｅｎｃｅｓ  Ｎｅｗｓｒｏｏｍ，Ｃｏｒｐｏｒａｔｅ  Ｎｅｗｓ，２００７年，８月１０日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
スピノシンならびに他の殺虫剤および農薬の使用は有益であるが、代替または改良された製剤および方法が必要とされている。所望の製剤および方法は、代替治療を与えるだけでなく、現在の治療の少なくとも一部の限界も克服する。このような限界としては、毒性および安全性、有効性（効能および持続期間）、ならびに抵抗力の問題が挙げられる。また、殺虫剤および農薬の有益な使用に影響を与えることは、投与の様式および反復を含む、投与の障害となる。例えば、動物に投薬することは、多くの場合、不都合および／または困難であるため、有効性を維持しながら投与の頻度を減少させることが望まれる。本発明は、外部寄生生物の寄生に対処するための代替の任意選択物を与える、動物に使用するための外部寄生生物撲滅方法および製剤を包含する。さらに、それらは、現在の殺虫剤および農薬の使用における少なくとも一部の限界を克服し、特に、外部寄生生物の有効な長期間の安全な局所的抑制を提供する。本発明は優れた殺傷速度および残効性を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、有効量のスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩を、動物に局所投与することによって、動物の外部寄生生物の寄生を抑制する方法、ならびにスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を使用して外部寄生生物の寄生を局所的に抑制するための医薬製剤を提供する。本発明はまた、有効量のスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩を、イヌまたはネコに局所投与することによって該イヌまたはネコのノミ寄生を抑制するための方法を提供する。スピネトラムを使用する方法および製剤の別の態様は、外部寄生生物の寄生の長期間の局所的抑制を提供することにより、動物への投与の反復を、例えば１週間もしくは２週間に１回以下、または１ヶ月に１回以下に減少させる能力、および初期のノックダウン効果を提供する能力である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
宿主動物は、哺乳動物またはトリ（シチメンチョウ、ニワトリ）もしくはサカナなどの非哺乳動物であってもよい。宿主動物が哺乳動物である場合、その宿主動物は、ヒトまたは非ヒトの哺乳動物であってもよい。非ヒトの哺乳動物としては、畜産動物（ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ  ａｎｉｍａｌ）およびペット（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ａｎｉｍａｌ）などの家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）が挙げられる。畜産動物としては、ウシ、ラクダ、ブタ、ヒツジ、ヤギおよびウマが挙げられる。ペットとしては、ヒトと動物との絆の一部としてヒトと密接に関わって所有され、保持されている、イヌ、ウサギ、ネコ、および他のペットが挙げられる。ネコに関して、その動物は好ましくは、８週齢またはそれ以上である。
【００１０】
外部寄生生物としては、一般に動物に寄生または感染する、昆虫およびダニ目の害虫が挙げられ、さらに、それらの卵、幼虫、サナギ、若虫、および成虫期が挙げられる。このような害虫としては、ノミ、シラミ、カ、ダニ、マダニ、および吸血、噛むまたは不快なハエ種が挙げられる。特定の標的はハエであり、より特には、ネコノミ（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ  ｆｅｌｉｓ）である。ヒトジラミ（Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｈｕｍａｎｕｓ）およびケジラミ（Ｐｔｈｉｒｕｓ  ｐｕｂｉｓ）がヒトにおける２つの特定の標的である。
【００１１】
「抑制する」とは、動物宿主において、現在の寄生を改善もしくは取り除くか、または寄生を予防することをいう。
【００１２】
「局所的」とは、動物またはヒトの外表面領域に適用することと定義し、皮膚または髪を含む。これは、経皮適用などの重要な全身適用を含まない。
【００１３】
「有効量」とは、外部寄生生物を抑制するのに十分なスピネトラム、またはその塩の量をいい、外部寄生生物の寄生集団の測定可能な減少を引き起こすことを含む。この抑制は、供給すると、害虫の系に侵入するスピネトラムまたはそのコンジュゲートもしくは塩の結果であり得るか、あるいはスピネトラムまたはそのコンジュゲートもしくは塩の存在に起因する忌避剤の作用を介する結果であり得る。この方法におけるスピネトラムまたはその塩についての範囲は、動物の体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇより多くから１０００ｍｇ、望ましくは０．１ｍｇ〜５００ｍｇ、およびより望ましくは１０ｍｇ〜３５０ｍｇの範囲である。
【００１４】
例えば塩ならびに担体および成分などの製剤成分を指して本明細書に使用される場合、「薬学的に受容可能」とは、「獣医学的に受容可能」および「皮膚科学的に受容可能」を含み、従ってヒトおよび動物の両方の適用を含む。
【００１５】
医薬的に許容される塩、およびそれらを調製する一般的方法は当該技術分野において公知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）：Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ，１，１９７７年１月を参照のこと。塩の例としては、限定されないが、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、コール酸、パモン酸、粘液酸、グルタミン酸、ショウノウ酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ギ酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸などの有機酸および無機酸の両方との標準的な反応によって形成される塩が挙げられる。
【００１６】
用語「担体」は、製剤中の活性成分以外の任意の成分を示すために本明細書に使用される。担体の選択は、特定の投与様式、溶解性および安定性に対する担体の効果、ならびに投与形態の性質などの要因に大きく依存する。
【００１７】
スピネトラムおよびその塩は、局所投与のための医薬組成物として製剤化され得る。そのような医薬組成物およびそれらを作製するためのプロセスは当該技術分野において公知である。スピネトラムまたはその塩は、０％より多くから９０％、望ましくは０．１％〜５０％、およびより望ましくは１％〜４５％（全て重量パーセント）の量で製剤中に存在し得る。特定の製剤は、純粋な基本成分に基づいて約３９．６％のスピネトラムまたはその医薬的に許容される塩を含み、製剤の残りの部分は1またはそれ以上の担体が存在する。本発明の製剤はまた、酸化防止剤、緩衝剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤、保湿剤、混和剤、ＵＶ吸収化合物または光安定剤、粘性修飾剤、抗菌剤、他の活性剤、色素、香料、調整剤、脱臭剤および生理学的または皮膚科学的に受容可能な希釈剤、賦形剤または補助剤などの他の最適な成分を含んでもよい。このような薬剤は当該技術分野において公知である。このような任意の成分は、例えば、３０〜６５重量％、より標準的には４５〜６０重量％のベンジルアルコール；０〜１５重量％、より標準的には０〜１０重量％のＤｏｗａｎｏｌ  ＤＰＭ；および０〜２重量％、より標準的には０．１〜１．０重量％のブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）などの他の成分であってもよい。
【００１８】
スピネトラムまたはその塩の投与は、任意の適切な適用による局所投与であってもよい。化合物および製剤は、皮膚または髪に組成物を直接付けるか、または塗ることによって動物に局所投与されてもよい。製剤は、スポットオン（ｓｐｏｔ−ｏｎ）適用、プランジまたはスプレーディッピング、ハンドヘルドスプレーを用いるかもしくはレース（ｒａｃｅ）中での噴射、またはバックラインスプレーとして、またはポアオン（ｐｏｕｒ−ｏｎ）により適用されてもよい。投与は、例えば害虫による寄生および曝露の重度に応じて、毎日、週１回、週２回、または月１回、行われてもよい。月１回の投与が大部分の状況において通常好ましいが、一部の場合において、投与後の十分な残効性が５、６、７、８、もしくは９週またはそれ以上に延びることも理解されるべきである。一例として、Ｃ．ｆｅｌｉｓに関して、９０％以上の残効性が投与後９週より長く延び得る。
【００１９】
本発明に有用な製剤は皮膚または髪への局所適用に適切な製剤を含み、様々な製品タイプにすることができる。それらとしては、限定されないが、溶液、エアロゾル、ローション、クリーム、ゲル、スティック、軟膏、ペースト、クリームリンス、シャンプー、およびボディーソープが挙げられる。
【００２０】
スピネトラムを、局所活性を測定するためにインビトロおよびインビボでのバイオアッセイを用いて評価した。多くのアッセイにおいて、スピノサドを、コンパレータまたはヒストリカル陽性対照として使用し、一方、他の標準物（フィプロニル、ペルメトリン、イミダクロプリド）を利用した。スピネトラムは、技術的活性として、および製剤においての両方で使用した。
【実施例】
【００２１】
幼虫小包試験（Ｌａｒｖａｌ  Ｐａｃｋｅｔ  Ｔｅｓｔ）（ＬＰＴ）／マダニ
試験物質を２：１の比のトリクロロエチレン：オリーブオイル中で製剤化する。組織生検バッグを１ｍｌの製剤化した物質で満たし（１つの試験レベルにつきｎ＝３）、バッグを少なくとも２時間ドラフト下で乾燥させる。約５０〜１００匹の幼虫期のマダニを各バッグに入れ、そのバッグを、プラスチックディスプレイクリップを用いて密封し、２７℃および９５％相対湿度にて２４時間インキュベートする。次いでバッグを開き、生きている／死んでいるマダニを数える。非線形回帰を使用して、用量−死亡率の関係をモデル化し、同時対照（溶媒のみまたはフィプロニル）と比較して相対効果（ＬＤ５０）データを得る。
【００２２】
成体サシバエまたはイエバエのアッセイ（ＡＳＦ、ＡｈｓＦ）
このアッセイは実質的に、Ｗｈｉｔｅ，Ｗ．Ｈ．，Ｓ．Ｍ．Ｂａｕｅｒ，Ｘ．Ｚｈａｏら，Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｃｔｏｐａｒａｓｉｔｉｃｉｄｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ−ｃａｒｂａｍａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｐｅｒｍｅｔｈｒｉｎ  ａｎｄ  ａｍｉｔｒａｚ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｅｎｔｏｍｏｌ．４２，２０７−２１１（２００５）；およびＷｈｉｔｅ，Ｗ．Ｈ．，Ｃ．Ｍ．ＭｃＣｏｙ，Ｊ．Ａ．Ｍｅｙｅｒら，Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ  ａｎｄ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ  ａｍｏｎｇ  ｓｐｉｎｏｓａｄ−，ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ−，ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｍｙｌ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂａｉｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  Ｍｕｓｃａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ（Ｄｉｐｔｅｒａ：Ｍｕｓｃｉｄａｅ）  ｕｎｄｅｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｅｃｏｎ．Ｅｎｔｏｍｏｌ．１００，１５５−１６３（２００７）に記載されているように実施する。
【００２３】
試験物質を１０ｍＭにてＤＭＳＯ中で製剤化する。同様の溶媒中で２倍希釈して、１０個の試験レベルを得る。物質をウシ血清（サシバエ）または５％グルコース溶液（イエバエ）のいずれかで希釈して、２００〜０．３９μＭの所望の曝露濃度を得る。約３ｍｌの希釈した試験物質を試験管に入れ（１つの試験レベルにつきｎ＝３）、歯科用ウィックを使用して流体を吸収する。１つの歯科用ウィックを１００ｍｍのペトリ皿内部の低重量のボートに入れる。約１０匹の混合した性別の成体ハエを、二酸化炭素を用いて麻酔し、各皿内で計数する。皿を２７℃および５０〜７０％相対湿度でインキュベートする。ハエを麻酔から回復させ、化合物を浸した歯科用ウィックを供給する。２４時間後、生きている／死んでいるハエを数える。非線形回帰を使用して、用量−死亡率の関係をモデル化し、同時対照（溶媒のみまたはペルメトリン）と比較して相対効果（ＬＤ５０）データを得る。
【００２４】
ノミ接触アッセイ（ＦＣＡ）／ネコノミ
試験物質を、所望の曝露濃度にてアセトン中で製剤化し、２倍希釈を実施して全部で１０の試験レベルを得る。約０．０５ｍｌの製剤化した物質を、少量のイヌの毛を含有する試験管の底に分注する。アセトンをドラフト下で一晩蒸発させる。約１０匹の混合した性別の成体のネコノミを、二酸化炭素を用いて麻酔し、各管に分注する。管を、通気したプラスチックキャップを用いて密閉し、２７℃および７５〜８０％相対湿度にてインキュベートする。２４時間後、生きている／死んでいるノミを数える。非線形回帰を使用して、用量−死亡率の関係をモデル化し、同時対照（アセトンのみまたはフィプロニル）と比較して相対効果（ＬＤ５０）データを得る。
【００２５】
以下の表１は、スピネトラム（技術的）対標準物についてのインビトロでの特性の要約を示す。
【００２６】
【表１】
0005738853.tif 000004
【００２７】
スピノサドと比較して、スピネトラムは、成体のイエバエおよび成体のネコノミに対してインビトロにおいて著しく高い殺虫活性を示す（それぞれ、５．５および２．４倍以上の効果）。
【００２８】
ノックダウンおよび残効性試験ならびに処理したパネル上でイエバエを抑制するためのスピネトラムとＥｌｅｃｔｏｒ（登録商標）との比較
スピネトラム（１２０ｇ／Ｌの懸濁液濃度）およびスピノサド（２５ｇ／Ｌの懸濁液濃度、Ｅｌｅｃｔｏｒ）の試験物質濃度を、Ｅｌｅｃｔｏｒを用いてイエバエを抑制するためのラベルの推奨されている前提となるスプレー使用率に基づいて、０．０４％（スピネトラムのみ）または０．０８％（両方）のいずれかの所望の試験濃度まで蒸留水で希釈した。商業的なビルディング供給業者から得た１平方フットのパネルは、未処理の合板、コンクリートおよびシートメタルから構成された。合板およびコンクリート基板の両方の第２のセットを用意し、屋外用の等級のラテックスである白色のラテックス塗料を用いて塗った。希釈した物質を、流れ去る（ｒｕｎ−ｏｆｆ）時点までパネル上に噴霧した（パネル当たり約５秒）。全部で４つのパネルを、処置群（ｎ＝４）当たり試験した。イエバエを二酸化炭素を用いて麻酔し、パネル上に固定したプラスチック容器内に入れた。パネル当たり４つのサブの複製容器があり、各容器は１０匹の混合した性別の成体のハエ（パネル当たり４０匹）を含んだ。グルコースを浸した歯科用ウィックを、各カップの穴を通して固定し、ハエに食物および水の源を与えた。パネルは試験の間中、直立させたままにした。ハエの死亡および瀕死を、処置の適用後すぐに、曝露後、４、８、２４、４８および７２時間の間隔において評価し、１ヶ月間、週に１回ベースで再度評価した。
【００２９】
表２は、処置したパネル上でのイエバエ減少の幾何平均パーセントを示す。
【００３０】
【表２】
0005738853.tif 000005
【００３１】
スピネトラムは、シートメタルおよび未塗装のコンクリートパネル上において２分の１の適用率でＥｌｅｃｔｏｒと同等またはＥｌｅｃｔｏｒより優れていた。スピネトラムは、未塗装の合板におけるＥｌｅｃｔｏｒと比較して、同等の初期活性およびわずかに劣る残留効果を示した。
【００３２】
代理の動物バイオアッセイ／マダニ（Ａｍｂｌｙｏｍｍａ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）およびノミ
局所的曝露−試験物質を、所望の試験濃度、典型的に６％の活性成分またはそれ以下にてエタノールまたはアセトン中で製剤化する。２倍またはｌｏｇ希釈のいずれかをエタノール中で実施して、さらなる試験濃度（３．０、０．３、０．０３、および０．００３ｍｇ／ｃｍ３）を得る。マダニ封じ込め単位を、背面または成体のオスまたはメスのラットに付け、０．０５ｍｌの製剤化した試験物質を封じ込め単位の内側の表面領域に局所適用する。物質を一晩乾燥させ、その後、１０匹の食物を与えていないイヌダニの若虫を、各々の封じ込め単位に入れる。各々の試験濃度について、全部で５匹のラットを通常使用する。マダニを、４８時間、処置動物に付着させ、食物を与え、その後、封じ込め単位を開放し、生きている／死んでいるマダニを数える。ラットをマダニ寄生の時に成体のネコノミに同時寄生させ、同じ動物を用いて局所的殺虫活性についてデータを得る。エタノール中のスピネトラムは、スピノサドと同様のマダニの若虫に対する局所活性を示したが、アセトン中のスピノサドと比較して約５〜１０倍の効果を示した。
【００３３】
ウシの外部寄生生物撲滅試験（ＣＥＴ）／ノサシバエ（Ｈａｅｍａｔｏｂｉａ  ｉｒｒｉｔａｎｓ）および／または成体のマダニ（Ａｍｂｌｙｏｍｍａ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）
ウシを、環境を制御した部屋（部屋当たり１または２匹の動物）に収容し、その部屋はハエが逃げるのを防ぐために遮断されたドアおよび通気システムを有する。処置の適用後、規定数のノサシバエを各部屋に放つ（典型的に、経済的閾値において、またはそれ以上の動物当たり２００匹のハエ）。規定した期間の後、動物に残っているままである生きているノサシバエの数を数える。ノサシバエとマダニを組み合わせた実験を実施する場合、成体の一つ星ダニ（ｌｏｎｅ  ｓｔａｒ  ｔｉｃｋ）を、ウシの背面に接着させた外科用のメリヤス編みエンクロージャに入れる。ウシを、環境を制御した部屋内の改質したヘッドゲート内で抑える。ノサシバエは数えることができ、続いて、封じ込め単位内の死んだマダニの数を測定する。典型的に、動物当たり２つの封じ込め単位が存在し、処置群当たり少なくとも２匹の動物である。
【００３４】
Ａ）ウシにおける一つ星ダニ（Ａｍｂｌｙｏｍｍａ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）寄生に対するスピネトラムの単回投与効果試験およびＥｌｅｃｔｏｒとの比較
技術的スピネトラムを、Ｅｌｅｃｔｏｒに見出されるものと同じ製剤成分を用いて２５ｇ／Ｌのスピネトラム濃度として製剤化した。試験物質を、全身への局所的スプレーとして動物に適用した。処置群当たり合計で２匹の動物であり、各動物は３つの封じ込め単位内にマダニを保有した（動物当たりｎ＝３または処置群あたりｎ＝６）。濃縮物（２５ｇ／Ｌ）を水で希釈し、処置レベルはＥｌｅｃｔｏｒについての市販の割合と同等である（動物当たり０．５ｇＡＩ）。表３は、処置動物において示した曝露間隔後のマダニの減少の割合（±ＳＤ）を示し、表４は、ウシにおける成体の一つ星ダニに対するスピネトラムおよびＥｌｅｃｔｏｒについての殺傷速度の評価を示す。
【００３５】
【表３】
0005738853.tif 000006
【００３６】
【表４】
0005738853.tif 000007
【００３７】
スピネトラムは、０．５ｇ／動物の用量でウシに局所適用した場合、一つ星ダニ寄生の実験に対して、Ｅｌｅｃｔｏｒと同等の活性（効果および殺傷速度）を示した。
【００３８】
Ｂ）ポアオンまたは局所スプレーとしてウシに局所適用した場合のノサシバエに対するスピネトラムおよびＥｌｅｃｔｏｒの治療および残効性試験
上記のようにスピネトラム（１２０ｇ／Ｌ）、Ｅｌｅｃｔｏｒ（２５ｇ／Ｌのスピノサド）を使用した。試験物質を、全身への局所スプレーまたはそのままのポアオン（ｎｅａｔ  ｐｏｕｒ−ｏｎ）のいずれかとして動物に適用した。スピネトラムは、ポアオンとして適用する前に２５ｇ／Ｌまで水に希釈した。動物当たり１Ｌの全量で全身へのスプレーとしての適用のために両方の物質を０．０４％（４００ｐｐｍ）まで水に希釈した。処置群当たり全部で６匹の動物（ｎ＝６）および６匹の陰性対照動物が存在した。肉牛および乳牛を使用した。処置後、ノサシバエをウシを飼っている部屋に放った。チャレンジから２４時間後、生きているハエを数えた。表５は、スピネトラムポアオン（２ｍｇ／ｋｇ）またはスプレー（０．０４％ＡＩ）およびＥｌｅｃｔｏｒポアオン（２ｍｇ／ｋｇ）またはスプレー（０．０４％ＡＩ）を用いた寄生したウシの処置後のノサシバエ減少の割合の幾何平均を示す。
【００３９】
【表５】
0005738853.tif 000008
【００４０】
ポアオン（２ｍｇ／ｋｇ）または全身への局所スプレー（０．０４％ＡＩ）のいずれかとしてノサシバエに寄生したウシに適用した場合、スピネトラムおよびＥｌｅｃｔｏｒは同等の治療効果を与えた。
【００４１】
Ｃ）ウシにおけるＢｏｏｐｈｉｌｉｕｓ  ａｎｎｕｌａｔｕｓ寄生の処置のための局所適用したスピネトラムの効果試験およびスピノサドとの比較
技術的スピネトラムおよび技術的スピノサドの両方を、市販のＥｌｅｃｔｏｒと同様の２５ｇ／Ｌの懸濁液濃度の製剤として製剤化した。安定性アッセイ（ＨＰＬＣおよびＬＰＴバイオアッセイ）を、低い保存温度にて延長した期間（５週間）にわたる効果を確認するために実施した。処置の２１日前に、幼虫期のＢ．ａｎｎｕｌａｔｕｓのマダニをウシに予め寄生させ、処置の時点で、このマダニは非常に多くの数の全ての３つの生存期の存在を生じた。試験物質を０．０２５％（２５０ｐｐｍ）まで希釈し、動物当たり１０Ｌの体積でウシに全身への局所スプレーを適用した。処置群当たり全部で６匹の動物が存在した（ｎ＝６）。動物を周囲条件の温度および湿度下で、覆われた牛房に収容した。毎日、各牛房内の吸血し（ｅｎｇｏｒｇｅｄ）、分離した成体のメスのマダニを動物から回収した。卵塊を秤量し、生存能力を評価するために、卵を孵化するようにした。効果を、動物当たりのメスのマダニの合計数および繁殖の指標（ＩＦ）に関して測定した。表６は、子牛当たりのメスのマダニの平均数、全ての繁殖の指標（ＩＦ）およびＩＦの全抑制（±ＳＤ）で示されるように、Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓ  ａｎｎｕｌａｔｕｓを寄生させたウシに全身へのスプレーとして０．０２５％の活性成分（ＡＩ）で適用したスピノサドおよびスピネトラムの治療効果を示す。表７は、０．０２５％ＡＩにてスピノサドまたはスピネトラムで処置したウシから回収したＢ．ａｎｎｕｌａｔｕｓの異なる寄生生物の生存期（成体、若虫、幼虫）に対して得た治療効果（±ＳＤ）を示す。表８は、処置後１週間間隔で幼虫として寄生させたＢ．ａｎｎｕｌａｔｕｓのマダニに対して得た、残効性または平均のＩＦの抑制の割合（±ＳＤ）を示す。
【００４２】
【表６】
0005738853.tif 000009
【００４３】
平均は一般化線形モデル（ＧＬＭ）、１元配置分散分析（１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）により試験した。平均間の差（Ｐ＜０．０５）は、Ｔｕｋｅｙの全一対比較を用いて分離した。同じ列内の平均、その後の異なる文字はｐ＜０．０５レベルで有意であった。
【００４４】
【表７】
0005738853.tif 000010
【００４５】
平均は主な効果として寄生生物の生存期および処置群を用いて一般化線形モデル（ＧＬＭ）、２元配置分散分析（２−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）により試験した。ＮＳは有意性を示さない。
【００４６】
【表８】
0005738853.tif 000011
【００４７】
スピネトラムおよびスピノサドは、Ｂ．ａｎｎｕｌａｔｕｓに対して不十分な初期／ノックダウン活性を示したが、２週間を通して９６％より高く、４週間を通して８０％より高い幼虫の再寄生からの十分な防御を与えた（表８）。
【００４８】
ネコノミ寄生を抑制するための局所的スポットオンとしてのスピネトラムの第１の評価
研究を、ネコにおけるノミ（Ｃ．ｆｅｌｉｓ）を抑制するために局所適用した種々の用量のスピネトラムの安全性および効果を評価するために実施した。２０匹のネコを、各々５匹のネコの４つの群に割り当てた。
【００４９】
局所用溶液は以下の通りであった。
Ａ）５０／５０ｗ／ｗのエタノール／ミリスチン酸イソプロピルの媒体中の２０２ｍｇ／ｍｌ（理論的）スピネトラム
Ｂ）８７／１３ｗ／ｗのベンジルアルコール／Ｄｏｗａｎｏｌ  ＤＰＭ［ジ（プロピレングリコール）メチルエーテル］の媒体中の２０５ｍｇ／ｍｌ（理論的）スピネトラム
Ｃ）７５／２５ｗ／ｗのイソプロパノール／Ｄｏｗａｎｏｌ  ＤＰＭ［ジ（プロピレングリコール）メチルエーテル］の媒体中の１９８ｍｇ／ｍｌ（理論的）スピネトラム
【００５０】
媒体コントロールを使用した。上記の溶液は約２７ｍｇ／ｋｇの基準用量を対象とした。３つの処置群の各動物に、０日目に肩甲骨の間の皮膚に局所的スポットオンとして適用した溶液Ａ、Ｂ、またはＣを与えた。
【００５１】
−８、−１、５、１２、２８、３５、および４２日目に動物をノミに寄生させた。ノックダウン活性を処置の２４時間後に評価し、一方で、残効性を、５日目の再寄生で開始して再寄生の約４８時間後に評価した。
【００５２】
３つ全ての製剤は、１４日を通して１００％の残存抑制で１００％の治療的（初期）ノックダウンを与えた。残効性は、３つ全ての製剤について、少なくとも１か月間９５％より高く、１か月以上で９３％より高いままであった。製剤Ｂは、３７日を通して９９％の効果、４４日を通して９０％の効果である、最も長い期間の残存活性を示した。製剤ＡおよびＣは、３７日から４４日の間に時々９０％以下の効果に落ちた。４０〜５０ｍｇ／ｋｇの処置レベルは、ネコにおいて繰り返されるノミ寄生に対して６０日以上の残存抑制を与えると予想される。
【００５３】
ネコノミ寄生を抑制するための局所的スポットオンとしてのスピネトラムの第２の評価
研究を、ネコにおけるノミ（Ｃ．ｆｅｌｉｓ）を抑制するために局所適用した種々の用量のスピネトラムの安全性および効果を評価するために実施した。２８匹のネコを、各々４匹のネコの７つの群に割り当てた。
局所用溶液は以下の通りであった。
１）スピネトラム４２％ｗ／ｖ（２１０ｍｇのスピネトラム／０．５ｍｌ用量）
２）スピネトラム２０．５％ｗ／ｖ（２０５ｍｇのスピネトラム／１．０ｍｌ用量）
３）プラシーボ／媒体コントロール。
各製剤は、上記の製剤Ｂ（８７／１３ベンジルアルコール／Ｄｏｗａｎｏｌ  ＤＰＭ）に基づいて作製した。
【００５４】
群を以下のように０日目にスポットオン適用により局所的に処置した。
【００５５】
【表９】
0005738853.tif 000012
【００５６】
群７に３０日目に第２の適用を与えた。溶液は、１×の処置率でネコ当たり約２１０ｍｇ、０．８×の処置率でネコ当たり１６８ｍｇ、および１．２×の処置率でネコ当たり２５２ｍｇのスピネトラムを送達するために記載した用量体積で適用した。
【００５７】
−６、−１、７、１４、２１、２８、３５、４２、４９、５６、および６３日目に動物をノミに寄生させた。ノミの効果を、１日目の処置の約２４時間後、ならびに９、１６、２３、３０、３７、４４、５１、５８、および６５日目の寄生の約２４時間後に評価した。
【００５８】
スピネトラム溶液は、処置後２４時間以内で１００％の抑制を達成した。１×（２１０ｍｇ）用量の群は、溶液＃２について４４日を通して、および溶液＃１について６５日を通して１００％の抑制を示した。全てのスピネトラム処置（０．８×−１６８ｍｇ、１×−２１０ｍｇ、および１．２×−２５２ｍｇ）は、処置後６５日を通して９０％より高い効果を生じた。
【００５９】
ネコノミ寄生を抑制するための局所的スポットオンとしてのスピネトラムの第３の評価
研究を、ネコにおけるノミ（Ｃ．ｆｅｌｉｓ）を抑制するために局所的に適用したスピネトラムの殺傷速度の効果を評価するために実施した。３６匹のネコを均一に６つの群に割り当てた。１つの群は処置せず、媒体のない群であった。−８および−１日目の研究において、各ネコを、約１００匹の新しく現れた、約５０／５０のオス対メスのノミに分けた、餌を与えていない成体のノミ（Ｃ．ｆｅｌｉｓ）で寄生させた。使用した局所用溶液は、ベンジルアルコールおよびブチル化ヒドロキシトルエンを用いて、純粋な基本成分に基づいて、３９．６％ｗ／ｗ（２１０ｍｇのスピネトラム／０．５ｍｌ用量）のスピネトラムであった。研究の０日目に、皮膚レベルで頭の部分に適用することによって処置群に一度投与し、ノミの計数を以下のように実施した。
【００６０】
【表１０】
0005738853.tif 000013
【００６１】
処置の４時間後までに、生きているノミの数の６３．２％の減少が観測された。投与の８時間後までに、効果レベルは９４．６％まで上昇した。１２および２４時間の時点で効果は向上し続け、実質的に完全に抑制した（それぞれ９８．６％および１００％）。
【００６２】
処置の７日後、９０％以上のノミが、さらなる寄生の１時間以内に殺傷し、さらなる寄生の４、８、１２、および２４時間後において１００％の減少が観測された。
【００６３】
処置の２８日後において、８０．７％のノミの減少が、さらなる寄生の１時間後に観測され、４時間で９１．６％の減少、８時間で９８．５％の減少、１２および２４時間の両方で１００％の減少が観測された。
【００６４】
上記に示したように、スピネトラムは、優れた残効性および殺傷速度効果の両方を示す。