(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
胃癌を患っていると疑われ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダー又は感受性のある患者として、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベルを有する患者を識別するためのインビトロ法であって、該方法は、
前記患者から得られた前記試料中のＨＥＲ２遺伝子の遺伝子増幅状態を評価する
工程を含み、
ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル、及びＨＥＲ２遺伝子の高い遺伝子増幅状態が反応する患者の指標であるか、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の前記モジュレーターに対する前記患者の感受性の指標である方法。
【請求項２】
ＨＥＲ２の前記タンパク質発現レベルが免疫組織化学的（ＩＨＣ）方法により決定されるか又はされた、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
生検試料において決定された、ＨＥＲ２の前記不確かなタンパク質発現レベルがＨＥＲ２（２＋）である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
切除試料において決定された、ＨＥＲ２の前記不確かなタンパク質発現レベルがＨＥＲ２（２＋）である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
ＨＥＲ２遺伝子の前記遺伝子増幅状態がインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）法によって検出される、請求項１から４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＨＥＲ２遺伝子の前記高増幅状態が、４を超えるＨＥＲ２遺伝子の平均遺伝子コピー数であるか、又は第１７染色体コピーあたり２以上のＨＥＲ２の平均遺伝子コピー数である、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１から６の何れかに記載の方法により識別される患者の一群のＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対する奏功率が少なくとも２０％である、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記試料が、胃組織切除、胃組織生検、転移病巣切除由来組織、及び循環性腫瘍細胞からなる群から選択される、請求項１から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記免疫組織化学的方法がＨｅｒｃｅｐｔＴｅｓｔＴＭアッセイにより実施される、請求項２から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記インサイツハイブリダイゼーションが蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、発色インサイツハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）及び銀インサイツハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ）からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＦＩＳＨ検査が「Ｉｎｆｏｒｍ（登録商標）」キット、「ＰａｔｈｖｙｓｉｏｎＴＭ」キット又は「ｐｈａｒｍＤｘＴＭ」キットからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＩＳＨ検査がＳＰｏＴ−Ｌｉｇｈｔ（登録商標）  ＨＥＲ２  ＣＩＳＨＴＭ及びＺｙｔｏＤｏｔ（登録商標）  ＳＰＥＣ  ＨＥＲ２プローブキットからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＳＩＳＨ検査はｕｌｔｒａＶｉｅｗＴＭ  ＳＩＳＨ検出キットと組み合わせた「ＩｎｆｏｒｍＴＭ」  ＨＥＲ２  ＤＮＡプローブである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記試料が抗転移、ネオアジュバント、又はアジュバント療法の前に得られる、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１から１４の何れか一項に記載の方法により識別される患者における胃癌の治療のための薬学的組成物の調製のためのＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターの使用。
【請求項１６】
ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の前記モジュレーターがＨＥＲの二量体化／シグナル伝達阻害剤、又はＨＥＲ分断阻害剤である、請求項１から１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＨＥＲの二量体化阻害剤がＨＥＲ２の二量体化阻害剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＨＥＲの二量体化阻害剤がＨＥＲのヘテロ二量体化又はＨＥＲのホモ二量体化を阻害する、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＨＥＲの二量体化阻害剤がＨＥＲ抗体である、請求項１６から１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＨＥＲ抗体がＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３からなる群から選択されるＨＥＲレセプターに結合する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体がＨＥＲ２に結合する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＨＥＲ２抗体がＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに結合する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体がＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩ、ＩＩとＩＩＩの間の接合部に結合する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＨＥＲ２抗体がペルツズマブである、請求項２０から２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＨＥＲ分断の阻害剤がＨＥＲ２分断阻害剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
ＨＥＲ分断の前記阻害剤がＨＥＲヘテロ二量体化又はＨＥＲホモ二量体化を阻害する、請求項１６又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＨＥＲ分断の前記阻害剤がＨＥＲ抗体である、請求項１６、２５及び２６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＨＥＲ抗体がＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３からなる群から選択されるＨＥＲレセプターに結合する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗体がＨＥＲ２に結合する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＨＥＲ２抗体がＨＥＲ２細胞外ドメインのサブドメインＩＶに結合する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＨＥＲ２抗体がハーセプチン／トラツズマブである、請求項２８から３０の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記胃癌が浸潤性胃癌である、請求項１から１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記胃癌が腸型腺癌、混合型腺癌、及びびまん型腺癌からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダー又は感受性のある患者を識別するための手段と方法に関する。また本願明細書において記載するものは、本発明の識別方法に従って決定され確定した患者群の治療に相当する方法であって、前記患者群は胃癌、特に浸潤性胃癌を患うか又は患いやすいと分かっているか又はその疑いがある。
【背景技術】
【０００２】
レセプターチロシンキナーゼのＨＥＲファミリーのメンバーは、細胞の増殖、分化及び生存の重要なメディエイターである。レセプターファミリーは、上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１またはＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２またはｐ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）及びＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）を含む４つの異なるメンバーを含む。ｅｒｂＢ１遺伝子によって、コード化されるＥＧＦＲは必然的にヒトの悪性腫瘍に関与している。特に、ＥＧＦＲの発現の増加が、乳房、膀胱、肺、頭、首、及び胃の癌、並びに神経膠芽腫に観察される。ＥＧＦＲレセプター発現の増加はしばしば同一腫瘍細胞によるＥＧＦＲリガンド、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）産生の増加に関連し、自己分泌刺激経路によるレセプター活性化をもたらす。Ｂａｓｅｌｇａ及びＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎ，Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６４：１２７−１５４（１９９４）。ＥＧＦＲ又はそのリガンドであるＴＧＦ−α及びＥＧＦに対するモノクロナール抗体が、そうした悪性腫瘍の治療における治療薬として評価されてきた。例えば、Ｂａｓｅｌｇａ及びＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎ，上記；Ｍａｓｕｉ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４４：１００２−１００７（１９８４）；及びＷｕ等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：１８９７−１９０５（１９９５）を参照。
【０００３】
ＨＥＲファミリーの２番目のメンバーであるｐ１８５ｎｅｕは当初、化学処理したラットの神経芽細胞腫由来の形質転換遺伝子の産物として同定された。ｎｅｕ遺伝子（別名ＨＥＲ２）のヒトホモログの増幅は、乳癌、及び卵巣癌に観察され、予後不良に関係する（Ｓｌａｍｏｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１７７−１８２（１９８７）；Ｓｌａｍｏｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：７０７−７１２（１９８９）；及び米国特許第４９６８６０３号明細書）。ＨＥＲ２の過剰発現は、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、大腸、甲状腺、膵臓および膀胱の癌腫を含む、他の癌腫にも観察される。特に、Ｋｉｎｇ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：９７４（１９８５）；Ｙｏｋｏｔａ等、Ｌａｎｃｅｔ：１：７６５−７６７（１９８６）；Ｆｕｋｕｓｈｉｇｅ等、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，６：９５５−９５８（１９８６）；Ｇｕｅｒｉｎ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓ．，３：２１−３１（１９８８）；Ｃｏｈｅｎ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，４：８１−８８（１９８９）；Ｙｏｎｅｍｕｒａ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５１：１０３４（１９９１）；Ｂｏｒｓｔ等、Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．，３８：３６４（１９９０）；Ｗｅｉｎｅｒ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５０：４２１−４２５（１９９０）；Ｋｅｒｎ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５０：５１８４（１９９０）；Ｐａｒｋ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，４９：６６０５（１９８９）；Ｚｈａｕ等、Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．，３：２５４−２５７（１９９０）；Ａａｓｌａｎｄ等、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５７：３５８−３６３（１９８８）；Ｗｉｌｌｉａｍｓ等、Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ ５９：４６−５２（１９９１）；及びＭｃＣａｎｎ等、Ｃａｎｃｅｒ，６５：８８−９２（１９９０）．ＨＥＲ２は前立腺癌に過剰発現し得る。（Ｇｕ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．９９：１８５−９（１９９６）；Ｒｏｓｓ等、Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．２８：８２７−３３（１９９７）；Ｒｏｓｓ等、Ｃａｎｃｅｒ ７９：２１６２−７０（１９９７）；及びＳａｄａｓｉｖａｎ等、Ｊ．Ｕｒｏｌ．１５０：１２６−３１（１９９３））を参照。ラットｐ１８５ｎｅｕ及びヒトＨＥＲ２タンパク質に対する抗体が記載されている。
【０００４】
Ｄｒｅｂｉｎとその同僚は、ラットｎｅｕ遺伝子産物ｐ１８５ｎｅｕに対する抗体を産生させた。例えば、Ｄｒｅｂｉｎ等、Ｃｅｌｌ ４１：６９５−７０６（１９８５）；Ｍｙｅｒｓ等、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１９８：２７７−２９０（１９９１）；及び国際公開第９４／２２４７８号パンフレットを参照。Ｄｒｅｂｉｎ等による“Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２：２７３−２７７（１９８８）”では、ｐ１８５ｎｅｕの２つの異なる領域に反応する抗体の混合物は、ヌードマウスに埋め込まれたｎｅｕ形質転換ＮＩＨ−３Ｔ３細胞に相乗的抗腫瘍効果をもたらすと報告している：１９８８年１０月２０日発行の米国特許第５８２４３１１号明細書も参照のこと。
【０００５】
Ｈｕｄｚｉａｋ等によるＭｏｌ. Ｃｅｌｌ. Ｂｉｏｌ. ９（３）：１１６５−１１７２（１９８９）は、ヒト乳房腫瘍細胞株ＳＫ−ＢＲ−３を用いて特徴付けられたＨＥＲ２抗体パネルの作製を記載している。抗体に曝露後の相対的なＳＫ−ＢＲ−３細胞増殖を、単分子膜のクリスタルバイオレット染色により７２時間後に決定した。本アッセイを使用して、最大の阻害は、細胞増殖を５６％阻害する４Ｄ５なる抗体により得られた。パネルの他の抗体は、本アッセイにおいてより少ない程度に細胞増殖を減少させた。抗体４Ｄ５は更に、ＴＮＦ−αの細胞毒効果に対してＨＥＲ２過剰発現乳房腫瘍細胞株を感作することが見いだされた；１９９７年１０月１４日に発行された米国特許第５６７７１７１号明細書を参照。Ｈｕｄｚｉａｋ等において議論されたＨＥＲ２抗体は更に、Ｆｅｎｄｌｙ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：１５５０−１５５８（１９９０）；Ｋｏｔｔｓ等、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ２６（３）：５９Ａ（１９９０）；Ｓａｒｕｐ等、Ｇｒｏｗｔｈ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ １：７２−８２（１９９１）；Ｓｈｅｐａｒｄ等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１（３）：１１７−１２７（１９９１）；Ｋｕｍａｒ等、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１（２）：９７９−９８６（１９９１）；Ｌｅｗｉｓ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３７：２５５−２６３（１９９３）；Ｐｉｅｔｒａｓ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ９：１８２９−１８３８（１９９４）；Ｖｉｔｅｔｔａ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５４：５３０１−５３０９（１９９４）；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２０）：１４６６１−１４６６５（１９９４）；Ｓｃｏｔｔ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１４３００−５（１９９１）；Ｄ’ｓｏｕｚａ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：７２０２−７２０６（１９９４）；Ｌｅｗｉｓ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５６：１４５７−１４６５（１９９６）；及びＳｃｈａｅｆｅｒ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１５：１３８５−１３９４（１９９７）において特徴付けられている。マウスＨＥＲ２抗体４Ｄ５（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ ＨＥＲ２、トラツズマブ又はハーセプチン（登録商標）；米国特許第５８２１３３７号明細書）の組換えヒト化バージョンは、広範な従前の抗癌治療を受け、ＨＥＲ２が過剰発現した転移性乳癌患者において臨床的に有効である（Ｂａｓｅｌｇａ等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：７３７−７４４（１９９６））。トラツズマブは腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現する転移乳癌の患者の治療のために、１９９８年９月２５日、食品医薬品局から販売承認を受け取った。
【０００６】
様々な性質を持つ他のＨＥＲ２抗体が、Ｔａｇｌｉａｂｕｅ等、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４７：９３３−９３７（１９９１）；ＭｃＫｅｎｚｉｅ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ４：５４３−５４８（１９８９）；Ｍａｉｅｒ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：５３６１−５３６９（１９９１）；Ｂａｃｕｓ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ３：３５０−３６２（１９９０）；Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉ等、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１−８６９５（１９９１）；Ｂａｃｕｓ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：２５８０−２５８９（１９９２）；Ｘｕ等、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５３：４０１−４０８（１９９３）；国際公開第９４／００１３６号パンフレット；Ｋａｓｐｒｚｙｋ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：２７７１−２７７６（１９９２）；Ｈａｎｃｏｃｋ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：４５７５−４５８０（１９９１）；Ｓｈａｗｖｅｒ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５４：１３６７−１３７３（１９９４）；Ａｒｔｅａｇａ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５４：３７５８−３７６５（１９９４）；Ｈａｒｗｅｒｔｈ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１５１６０−１５１６７（１９９２）；米国特許第５７８３１８６号明細書；及びＫｌａｐｐｅｒ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４：２０９９−２１０９（１９９７）に記載されている。
【０００７】
ホモロジースクリーニングは結果として２つの他のＨＥＲファミリーメンバーを同定した；ＨＥＲ３（米国特許第５１８３８８４号明細書、及び第５４８０９６８号明細書、並びにＫｒａｕｓ等、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８６：９１９３−９１９７（１９８９））及びＨＥＲ４（欧州特許第５９９２７４号明細書；Ｐｌｏｗｍａｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１７４６−１７５０（１９９３）；及びＰｌｏｗｍａｎ等、Ｎａｔｕｒｅ，３６６：４７３−４７５（１９９３））。これらのレセプターは両方とも少なくとも若干の乳癌細胞株で発現の増加を示した。ＨＥＲレセプターは一般的に細胞中に様々な組合わせで見つかり、ヘテロダイマー化は様々なＨＥＲリガンドに対する細胞応答の多様性を増加させると考えられている。（Ｅａｒｐ等、Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ３５：１１５−１３２（１９９５））。ＥＧＦＲは６つの異なるリガンドが結合する；上皮増殖因子（ＥＧＦ）、（トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）、アンフィレギュリン、ヘパリン結合上皮増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、ベータセルリン及びエピレギュリン（Ｇｒｏｅｎｅｎ等、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ １１：２３５−２５７（１９９４））。単一遺伝子の選択的スプライシングから得られたヘレグリンタンパク質のファミリーはＨＥＲ３及びＨＥＲ４に対するリガンドである。ヘレグリンファミリーはアルファ、ベータ、及びガンマヘレグリンを含む（（Ｈｏｌｍｅｓ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１２０５−１２１０（１９９２）；米国特許第５６４１８６９号明細書；及びＳｃｈａｅｆｅｒ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １５：１３８５−１３９４（１９９７））；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）、グリア細胞増殖因子（ＧＧＦ）；アセチルコリンレセプター誘導活性（ＡＲＩＡ）；及び感覚と運動ニューロン由来因子（ＳＭＤＦ）。レビューのために、Ｇｒｏｅｎｅｎ等、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ １１：２３５−２５７（１９９４）；Ｌｅｍｋｅ，Ｇ．Ｍｏｌｅｃ．＆Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７：２４７−２６２（１９９６）及びＬｅｅ等、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．４７：５１−８５（１９９５）を参照。最近、３つの更なるＨＥＲリガンドが同定された；ＨＥＲ３又はＨＥＲ４の何れかに結合すると報告されるニューレグリン−２（ＮＲＧ−２）（Ｃｈａｎｇ等、Ｎａｔｕｒｅ ３８７ ５０９−５１２（１９９７）；及びＣａｒｒａｗａｙ等、Ｎａｔｕｒｅ ３８７：５１２−５１６（１９９７））；ＨＥＲ４に結合するニューレグリン−３（Ｚｈａｎｇ等、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９４（１８）：９５６２−７（１９９７））；及びＨＥＲ４に結合するニューレグリン−４（Ｈａｒａｒｉ等、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １８：２６８１−８９（１９９９））。ＨＢ−ＥＧＦ、ベータセルシン、及びエピレギュリンもＨＥＲ４に結合する。
【０００８】
ＥＧＦとＴＧＦ−αはＨＥＲ２と結合しないが、ＥＧＦはＥＧＦＲを刺激しＨＥＲ２とヘテロダイマーを形成し、結果としてＥＧＦＲによるＨＥＲ２のリン酸基転移をもたらし、及びヘテロダイマーにおいて逆も真である；上記のＥａｒｐ等を参照。同様に、ＨＥＲ３がＨＥＲ２と共発現された場合、活性なシグナル伝達複合体が形成され、ＨＥＲ２に対する抗体がこの複合体を破壊することができる（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９（２０）：１４６６１−１４６６５（１９９４））。更に、ＨＥＲ２と共発現した場合に、ヘレグリン（ＨＲＧ）に対するＨＥＲ３の親和性が増加され高親和性状態となる。ＨＥＲ２−ＨＥＲ３タンパク質複合体に関して、Ｌｅｖｉ等、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １５：１３２９−１３４０（１９９５）；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：１４３１−１４３５（１９９５）；及びＬｅｗｉｓ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５６：１４５７−１４６５（１９９６）も参照のこと。ＨＥＲ３同様ＨＥＲ４はＨＥＲ２と活性なシグナル伝達複合体を形成する（Ｃａｒｒａｗａｙ及びＣａｎｔｌｅｙ，Ｃｅｌｌ ７８：５−８（１９９４））。ＨＥＲ抗体に係る特許公開は、米国特許第５６７７１７１号明細書、米国特許第５７２０９３７号明細書、米国特許第５７２０９５４号明細書、米国特許第５７２５８５６号明細書、米国特許第５７７０１９５号明細書、米国特許第５７７２９９７号明細書、米国特許第６１６５４６４号明細書、米国特許第６３８７３７１号明細書、米国特許第６３９９０６３号明細書、米国特許出願公開第２００２／０１９２２１１（Ａ１）号明細書、米国特許第６０１５５６７号明細書、米国特許第６３３３１６９号明細書、米国特許第４９６８６０３号明細書、米国特許第５８２１３３７号明細書、米国特許第６０５４２９７号明細書、米国特許第６４０７２１３号明細書、米国特許第６７１９９７１号明細書、米国特許第６８００７３８号明細書、米国特許出願公開第２００４／０２３６０７８（Ａ１）号明細書、米国特許第５６４８２３７号明細書、米国特許第６２６７９５８号明細書、米国特許第６６８５９４０号明細書、米国特許第６８２１５１５号明細書、国際公開第９８／１７７９７号明細書、米国特許第６１２７５２６号明細書、米国特許第６３３３３９８号明細書、米国特許第６７９７８１４号明細書、米国特許第６３３９１４２号明細書、米国特許第６４１７３３５号明細書、米国特許第６４８９４４７号明細書、国際公開第９９／３１１４０号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１４７８８４（Ａ１）号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３４（Ａ１）号明細書、米国特許出願公開第２００５／０００２９２８（Ａ１）号明細書、米国特許第６５７３０４３号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１５２９８７（Ａ１）号明細書、国際公開第９９／４８５２７号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／０１４１９９３（Ａ１）号明細書、国際公開第０１／００２４５号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／００８６９２４号明細書、米国特許出願公開第２００４／００１３６６７（Ａ１）号明細書、国際公開���００／６９４６０号パンフレット、国際公開第０１／００２３８号パンフレット、国際公開第０１／１５７３０号パンフレット、米国特許第６６２７１９６（Ｂ１）号明細書、米国特許第６６３２９７９（Ｂ１）号明細書、国際公開第０１／００２４４号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００９０６６２（Ａ１）号明細書、国際公開第０１／８９５６６号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００６４７８５号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１３４３４４号明細書、国際公開第０４／２４８６６号パンフレット、米国特許出願公開第２００４／００８２０４７号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１７５８４５（Ａ１）号明細書、国際公開第０３／０８７１３１号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０２２８６６３号明細書、国際公開第２００４／００８０９９（Ａ２）号パンフレット、米国特許出願公開第２００４／０１０６１６１号明細書、国際公開第２００４／０４８５２５号パンフレット、米国特許出願公開第２００４／０２５８６８５（Ａ１）号明細書、米国特許第５９８５５５３号明細書、米国特許第５７４７２６１号明細書、米国特許第４９３５３４１号明細書、米国特許第５４０１６３８号明細書、米国特許第５６０４１０７号明細書、国際公開第８７／０７６４６号パンフレット、国際公開第８９／１０４１２号パンフレット、国際公開第９１／０５２６４号パンフレット、欧州特許第４１２１１６（Ｂ１）号明細書、欧州特許第４９４１３５（Ｂ１）号明細書、米国特許第５８２４３１１号明細書、欧州特許第４４４１８１（Ｂ１）号明細書、欧州特許第１００６１９４（Ａ２）号明細書、米国特許出願公開第２００２／０１５５５２７（Ａ１）号明細書、国際公開第９１／０２０６２号パンフレット、米国特許第５５７１８９４号明細書、米国特許第５９３９５３１号明細書、欧州特許第５０２８１２（Ｂ１）号明細書、国際公開第９３／０３７４１号パンフレット、欧州特許第５５４４４１（Ｂ１）号明細書、欧州特許第６５６３６７（Ａ１）号明細書、米国特許第５２８８４７７号明細書、米国特許第５５１４５５４号明細書、米国特許第５５８７４５８号明細書、国際公開第９３／１２２２０号明細書、国際公開第９３／１６１８５号パンフレット、米国特許第５８７７３０５号明細書、国際公開第９３／２１３１９号パンフレット、国際公開第９３／２１２３２号パンフレット、米国特許第５８５６０８９号明細書、国際公開第９４／２２４７８号パンフレット、米国特許第５９１０４８６号明細書、米国特許第６０２８０５９号明細書、国際公開第９６／０７３２１号パンフレット、米国特許第５８０４３９６号明細書、米国特許第５８４６７４９号明細書、欧州特許第７１１５６５号明細書、国際公開第９６／１６６７３号パンフレット、米国特許第５７８３４０４号明細書、米国特許第５９７７３２２号明細書、米国特許第６５１２０９７号明細書、国際公開第９７／００２７１号パンフレット、米国特許第６２７０７６５号明細書、米国特許第６３９５２７２号明細書、米国特許第５８３７２４３号明細書、国際公開第９６／４０７８９号パンフレット、米国特許第５７８３１８６号明細書、米国特許第６４５８３５６号明細書、国際公開���９７／２０８５８号パンフレット、国際公開第９７／３８７３１号パンフレット、米国特許第６２１４３８８号明細書、米国特許第５９２５５１９号明細書、国際公開第９８／０２４６３号パンフレット、米国特許第５９２２８４５号明細書、国際公開第９８／１８４８９号パンフレット、国際公開第９８／３３９１４号パンフレット、米国特許第５９９４０７１号明細書、国際公開第９８／４５４７９号パンフレット米国特許第６３５８６８２（Ｂ１）号明細書、米国特許出願公開第２００３／００５９７９０号明細書、国際公開第９９／５５３６７号パンフレット、国際公開第０１／２００３３号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００７６６９５（Ａ１）号明細書、国際公開第００／７８３４７号パンフレット、国際公開第０１／０９１８７号パンフレット、国際公開第０１／２１１９２号パンフレット、国際公開第０１／３２１５５号パンフレット、国際公開第０１／５３３５４号パンフレット、国際公開第０１／５６６０４号パンフレット、国際公開第０１／７６６３０号パンフレット、国際公開第０２／０５７９１号パンフレット、国際公開第０２／１１６７７号パンフレット、米国特許第６５８２９１９号明細書、米国特許出願公開第２００２／０１９２６５２（Ａ１）号明細書、米国特許出願公開第２００３／０２１１５３０（Ａ１）号明細書、国際公開第０２／４４４１３号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／０１４２３２８号明細書、米国特許第６６０２６７０（Ｂ２）号明細書、国際公開第０２／４５６５３号パンフレット、国際公開第０２／０５５１０６号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１５２５７２号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１６５８４０号明細書、国際公開第０２／０８７６１９号パンフレット、国際公開第０３／００６５０９号パンフレット、国際公開第０３／０１２０７２号パンフレット、国際公開第０３／０２８６３８号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／００６８３１８号明細書、国際公開第０３／０４１７３６号パンフレット、欧州特許第１３５７１３２号明細書、米国特許出願公開第２００３／０２０２９７３号明細書、米国特許出願公開第２００４／０１３８１６０号明細書、米国特許第５７０５１５７号明細書、米国特許第６１２３９３９号明細書、欧州特許第６１６８１２（Ｂ１）号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１０３９７３号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１０８５４５号明細書、米国特許第６４０３６３０（Ｂ１）号明細書、国際公開第００／６１１４５号パンフレット、国際公開第００／６１１８５号パンフレット、米国特許第６３３３３４８（Ｂ１）号明細書、国際公開第０１／０５４２５号パンフレット、国際公開第０１／６４２４６号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／００２２９１８号明細書、米国特許出願公開第２００２／００５１７８５（Ａ１）号明細書、米国特許第６７６７５４１号明細書、国際公開第０１／７６５８６号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１４４２５２号明細書、国際公開第０１／８７３３６号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００３１５１５（Ａ１）号明細書、国際公開第０１／８７３３４号パンフレット���国際公開第０２／０５７９１号パンフレット、国際公開第０２／０９７５４号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１５７０９７号明細書、米国特許出願公開第２００２／００７６４０８号明細書、国際公開第０２／０５５１０６号パンフレット、国際公開第０２／０７０００８号パンフレット、国際公開第０２／０８９８４２号パンフレット及び国際公開第０３／８６４６７号パンフレットを含む。
【０００９】
ＨＥＲ２抗体トラスツズマブで治療を受けた乳癌患者は、ＨＲＥ２過剰発現／増幅に基づいた治療のために選択される；例えば、国際公開第９９／３１１４０号パンフレット（Ｐａｔｏｎ等）、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３４（Ａ１）号明細書（Ｈｅｌｌｍａｎｎ，Ｓ．）、及び米国特許出願公開第２００３／０１４７８８４号明細書（Ｐａｔｏｎ等）；並びに国際公開第０１／８９５６６号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００６４７８５号明細書、及び米国特許出願公開第２００３／０１３４３４４号明細書（Ｍａｓｓ等）を参照。
【００１０】
先行技術では、高ＨＥＲ２タンパク質発現レベル（例えば、ＩＨＣによるＨＥＲ２（３＋））に基づいたトラスツズマブ／ハーセプチン治療の乳癌患者の適格性に焦点が絞られた。しかし、そうした抗体治療に対する胃癌患者の適格性についてほとんど情報が得られていない。また、他の癌型、特に、かなり異なる病理組織学的パターンを示し、全般的に異なる病理に関わる胃癌に対して、抗体治療に応じるかもしれない乳癌患者のスクリーニング及び同定のために開発された評価システムと判断基準が適用可能かどうかの論争も当技術分野にて存在する。
【００１１】
免疫組織化学（ＩＨＣ）及び蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によるＨＥＲ２過剰発現及び増幅を検出する方法はまた米国特許出願公開第２００３／０１５２９８７号明細書、Ｃｏｈｅｎ等、に記載されている。
【００１２】
国際公開第２００４／０５３４９７号パンフレット及び米国特許出願公開第２００４／０２４８１５（Ａ１）号明細書（Ｂａｃｕｓ等）、並びに米国特許出願公開第２００３／０１９０６８９号明細書（ＣｒｏｓｂｙとＳｍｉｔｈ）は、トラスツズマブ治療への反応を決定すること又は予測することに言及する。米国特許出願公開第２００４／０１３２９７（Ａ１）号明細書（Ｂａｃｕｓ等）は、ＡＢＸ０３０３ ＥＧＦＲ抗体治療への反応を決定すること又は予測することと関係する。国際公開第２００４／００００９４号パンフレット（Ｂａｃｕｓ等）は、低分子であってＥＧＦＲ−ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤であるＧＷ５７２０１６に対する反応を決定することに関する。国際公開第２００４／０６３７０９号明細書、Ａｍｌｅｒ等は、ＥＧＦＲ阻害剤のエルロチニブＨＣｌに対する感受性を決定するためのバイオマーカー及び方法について言及している。米国特許出願公開第２００４／０２０９２９０号明細書（Ｃｏｂｌｅｉｇｈ等）は、乳癌予後の遺伝子発現マーカーに関係する。ペルツズマブ（本明細書で下記により詳しく記されるＨＥＲ２の二量体化阻害剤）で治療されるべき乳癌患者が、ＨＥＲ過剰発現／増幅、活性化又は二量体化に基づいた治療のために選択され得る。ペルツズマブ及びそれによる治療を要する患者の選択に関する特許公開は、国際公開第０１／００２４５号パンフレット（Ａｄａｍｓ等）；米国特許出願公開第２００３／００８６９２４号明細書（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．）；米国特許出願公開第２００４／００１３６６７（Ａ１）号明細書（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．）；並びに国際公開第２００４／００８０９９（Ａ２）号明細書、及び米国特許出願公開第２００４／０１０６１６１号明細書（Ｂｏｓｓｅｎｍａｉｅｒ等）を含む。
【００１３】
ペルツズマブ（以前は２Ｃ４）はＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）として知られた新型薬の第一号である。ペルツズマブはその二量体化ドメインでＨＥＲ２に結合し、それにより活性な二量体レセプター複合体形成能を阻害し、最終的に細胞増殖と分化をもたらす下流のシグナル伝達カスケードを遮断する；Ｆｒａｎｋｌｉｎ（２００４），Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ５，３１７−３２８を参照。ペルツズマブはＨＥＲ２の細胞外ドメインに対する完全ヒト化組換えモノクロナール抗体である。ヒト上皮細胞のＨＥＲ２へのペルツズマブの結合はＨＥＲ２がＨＥＲファミリーの他のメンバー（ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４を含む）と複合体を形成すること、及び恐らくＨＥＲ２ホモ二量体化もを阻む。複合体形成を遮断することで、ペルツズマブはＨＥＲ１、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４のリガンド（例えば、ＥＧＦ、ＴＧＦα、アンフィレギュリン、及びヘレグリン）により活性化された増殖促進効果と細胞生存シグナルを阻む。ペルツズマブの別名称は２Ｃ４である。ペルツズマブはヒトＩｇＧ１（κ）フレームワーク配列に基づいた完全ヒト化組換えモノクロナール抗体である。ペルツズマブの構造は２本の重鎖（４４９残基）と２本の軽鎖（２１４残基）からなる。トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））と比較すると、ペルツズマブは軽鎖に１２アミノ酸の相違、及びＩｇＧ１重鎖に２９アミノ酸の相違を有す。
【００１４】
ハーセプチンは、腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現するか又はＨＥＲ２遺伝子増幅を有する早期性並びに転移性の乳癌患者の治療のために広く用いられ、かつ当技術分野で知られている。当技術分野で、ハーセプチン／トラスツズマブによる乳癌患者の治療は、例えば、ＨＥＲ２陽性疾患を持つ患者に推奨され慣用されている。乳癌におけるＨＥＲ２陽性疾患は、免疫組織化学法、例えば、ＨＥＲ２（＋＋＋）又はＨＥＲ２遺伝子増幅（例えば、腫瘍細胞あたりＨＥＲ２遺伝子が４コピーより高いＨＥＲ２遺伝子コピー数）、又は両方により検出される高いＨＥＲ２（タンパク質）発現レベルが、乳房組織生検又は乳房組織の切除等の患者由来試料又は転移部位に由来する組織に見いだされる場合に存在する。
【００１５】
しかしながら、不確かな、又は高いＨＥＲ２タンパク質発現レベル、例えば、ＨＥＲ２（２＋）又はＨＥＲ２（３＋）を持つ胃癌患者がハーセプチンで首尾良く治療され得るか否か、及びＨＥＲ２の増幅状態が胃癌治療に対する感受性を示し得るか否かについては不明である。
【００１６】
従って、本発明の基礎となる技術的課題は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターによる胃癌の治療、特にトラスツズマブ／ハーセプチン等のＨＥＲ２抗体による治療に対して反応し得る、胃癌を患うか又は患いやすい、患者又は患者群の識別の手段と方法の提供である。
【００１７】
技術的課題は請求項に特徴付けられた実施態様の提供によって解決される。
【発明の概要】
【００１８】
従って、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダーとして、又は感受性のある患者として、胃癌を患っていることが疑われる患者を識別するためのインビトロ法に関し、該方法は、
（ａ）前記患者から試料を得て、
（ｂ）
（ｂ１）前記試料中のＨＥＲ２タンパク質発現レベル、及び
（ｂ２）前記試料中のＨＥＲ２遺伝子の遺伝子増幅状態、
を評価する
工程を含み、
ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル及びＨＥＲ２遺伝子の高い遺伝子増幅状態は、反応する患者の指標であるか、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の前記モジュレーターに対する前記患者の感受性の指標である方法である。
【００１９】
本発明の文脈では、ＨＥＲ２タンパク質発現レベルは免疫組織化学法で検出されることが好まれ、前記ＨＥＲ２遺伝子増幅状態は、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、発色インサイツハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）、又は銀インサイツハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ）等のインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）法で測定することが可能である。タンパク質発現アッセイ並びに遺伝子増幅の検出のために、対応するアッセイ法及びキットは当技術分野で良く知られている。
【００２０】
本発明は本明細書の下記の通り、例えばＩＨＣで決定されるＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル、すなわちＨＥＲ２（２＋）で特徴付けられる予期せぬ患者群、及びＨＥＲ２遺伝子の高増幅状態（例えば、腫瘍細胞あたり４より大きなＨＥＲ２遺伝子の平均コピー数、又は第１７番染色体コピーあたり（腫瘍細胞あたり）２以上のＨＥＲ２遺伝子の平均遺伝子コピー数）が、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ｅｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、特に、ハーセプチン／トラスツズマブの様なＨＥＲ２抗体による治療に反応することを驚くべきことに見いだしたため、上に定義した技術的課題を解決する。
【００２１】
本明細書で使用する「平均」なる用語は、例えばＨＥＲ２遺伝子の平均コピー数に関する文中で、調べるべき生物学試料の少なくとも２つの腫瘍細胞の腫瘍細胞あたりのＨＥＲ２遺伝子コピーの平均数、又は調べるべき生物学試料の少なくとも２つの腫瘍細胞における第１７染色体コピーあたりのＨＥＲ２遺伝子コピーの平均数に関する。
【００２２】
本発明では生物学試料中（例えば生検又は切除）のＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベルと、同時に生物学試料中（例えば生検又は切除）のＨＥＲ２遺伝子の高い増幅を持つ胃癌患者がＨＥＲ２抗体等による治療に対して反応することを驚くべきことに見いだした。予期せぬことに、これらの患者のＨＥＲ２／ｎｅｕ （ｅｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターによる治療に対する奏効率は、ＨＥＲ２遺伝子の高い増幅を有するがＩＨＣにおいて弱又は中程度の染色のみを有する胃癌患者と比較してはるかに高い；添付の実施例及び図、特に図２と３を参照。本発明に従って識別された新規の患者群は、高ＨＥＲ２遺伝子増幅で更に特徴付けられた低ＨＥＲ２タンパク質発現群（例えば、ＩＨＣによるＩＨＣ（０）又はＩＨＣ（１＋））と比較してＨＥＲ２モジュレーターによる治療に対してより良好な反応を示す。
【００２３】
当技術分野で、ＨＥＲ２モジュレーターで治療するためにいかにして胃癌患者を分類するかについて明確な推奨は無い。ＨＥＲ２タンパク質の発現が不確かであると評価される胃癌を患う患者から得られる試料は、ＩＳＨにより更に調査されるかどうかはわからない。当技術分野では、胃癌におけるＨＥＲ２過剰発現の発生率、及び／又は遺伝子増幅に関するデータがあるのみであり、ＨＥＲ２タンパク質レベルにもＨＥＲ２遺伝子レベルにも関連しないＨＥＲ２モジュレーターによる治療の利益に関して、ＨＥＲ２状態の予測可能性に関するデータは無い。それゆえ、先行技術では、ＨＥＲ２タンパク質発現が不確かか又は中間のレベルを示す試料における増幅状態の更なる検査を提案していない。ＨＥＲ２遺伝子増幅状態のＩＳＨ検査は胃癌患者に定期的には実施されない。先行技術は、癌患者におけるＨＥＲ２タンパク質の中間又は不確かな発現レベルを決定し見いだした後において、ＨＥＲ２遺伝子増幅状態の更なる検査を提案していない。
【００２４】
驚くべきことに、本明細書では、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル及びＨＥＲ２遺伝子の高遺伝子増幅を示す患者は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターにより首尾良く治療可能であることが見いだされた。更に、本発明に従って識別され治療を受けるべき患者／患者群は、ＨＥＲ２遺伝子の高い増幅を同時に有するＩＨＣ（不確かな評価、下の表を参照）により決定されるＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル（例えば、本明細書書で定義する“２＋”スコア、すなわちＨＥＲ２（２＋））で好ましくは特徴付けられる。添付の実施例に説明される通り、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル（例えば、ＩＨＣで決定されるＨＥＲ２（２＋））、及び本明細書で定義されるＨＥＲ２遺伝子の高増幅状態（例えば、４より大きいＨＥＲ２遺伝子のコピー数又は第１７染色体コピーあたり２以上のＨＥＲ２遺伝子のコピー数）を持つこの患者群は驚くべきことに、ＨＥＲ２タンパク質の低ＨＥＲ２発現レベル（例えば、本明細書で定義される“０”又は“１＋”スコア、すなわちＨＥＲ２（０）又はＨＥＲ２（１＋））及び高ＨＥＲ２遺伝子増幅を示す患者よりも反応が良く、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、特に、ハーセプチン／トラスツズマブに対して、高い感受性を示す。
【００２５】
他の態様の中で本発明に従った方法は、最初にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して患者試料を検査することは偽陽性をもたらし得るこという驚くべき知見に基づく。示した結果から分かる通り、不確かなＨＥＲ２タンパク質発現レベルが無い場合にＨＥＲ２遺伝子増幅を示す患者はハーセプチン／トラスツズマブにあまり反応しない。胃癌におけるこの知見は、乳癌においてはＨＥＲ２モジュレーターに対する反応がＩＨＣで検出されるＨＥＲ２タンパク質レベルとは独立に、ＨＥＲ２遺伝子増幅レベルと相関すると一般的に知られているため、もっと驚くべきことである。胃癌患者において、標準的治療（例えば、フルオロピリミジン/シスプラチン)と比較して、ＨＥＲ２モジュレーターに対するいっそう優れた反応は、先行技術にて確かに知られてない。更に、ＨＥＲ２遺伝子の増幅をも有する低発現ＨＥＲ２タンパク質群と比較して、ＨＥＲ２遺伝子の高増幅を示し、不確かにＨＥＲ２遺伝子を発現するサブグループの少なくとも同程度の又はより良好な反応は、胃癌治療における予期せぬ知見であった。
【００２６】
従って、本発明は一実施態様にて、胃癌を患っていることが疑われ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダー、又は感受性のある患者として、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現を有する患者を識別するためのインビトロ法に関し、該方法は、
（ａ）前記患者から試料を得て、
（ｂ）
前記試料中のＨＥＲ２遺伝子の遺伝子増幅状態、
を評価する
工程を含み、
ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル、及びＨＥＲ２遺伝子の高い遺伝子増幅状態は反応する患者の指標であるか、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の前記モジュレーターに対する前記患者の感受性の指標である方法である。
【００２７】
また添付の実施例に記録された通り、本明細書で定義されるＩＨＣにおける“ＨＥＲ２（２＋）”スコアと同時にＨＥＲ２遺伝子の増幅を有する患者／患者群のみならず、“３＋”ＩＨＣスコアを示す患者群も首尾良く治療することができ、かつＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、特にハーセプチン／トラスツズマブに反応し／高い感受性を示す。ＨＥＲ２タンパク質発現の高いレベルを有する本患者群（例えば、ＩＨＣ（３＋）はまたＨＥＲ２モジュレーターによる治療に対し反応し、遺伝子増幅状態に関係無く治療されるべきである。遺伝子増幅を示さないがＨＥＲ２タンパク質発現の高陽性（ＩＨＣ ３＋）が検査された患者でさえも、良好な反応を示す（図２及び３を参照）。
【００２８】
ＨＥＲ２ ＩＨＣ及びＨＥＲ２ ＩＳＨによる連続検査は、不確かなＨＥＲ２ ＩＳＨ結果である場合（例えば、ＩＨＣにより測定されるＨＥＲ２（２＋）等）、また本発明の好ましい実施態様を表わす。言い換えれば、本発明の方法は、第一工程において評価したＨＥＲ２タンパク質の発現レベルが不確実である場合にのみ（例えばＩＨＣでＨＥＲ２（２＋））、第一工程にてＨＥＲ２タンパク質発現レベルの評価後に、第二工程においてＨＥＲ２遺伝子の増幅状態の評価を含む。述べた通り、例えばＩＨＣで測定されるＨＥＲ２タンパク質の過剰発現、又は例えばＩＳＨ法で決定されるＨＥＲ２遺伝子増幅は 乳癌におけるＨＥＲ２モジュレーター治療のために同等に価値ある適格性基準を表わす。しかしながら驚くべきことに、このことは胃癌患者には当てはまらない。
【００２９】
従って、本発明は更なる実施態様にて、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダー又は感受性のある患者を識別するためのインビトロ法に関し、該方法は、
（ａ）胃癌を患うか又は患いやすい患者から試料を得て、
（ｂ）
（ｂ１）第一工程にてＨＥＲ２タンパク質の発現レベル、及び
（ｂ２）第一工程で評価したＨＥＲ２タンパク質の発現レベルが不確かである場合、第二工程において前記試料中のＨＥＲ２遺伝子の遺伝子増幅状態、
を評価する
工程を含み、
ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル、及びＨＥＲ２遺伝子の高い遺伝子増幅状態は反応する患者の指標であるか、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の前記モジュレーターに対する前記患者の感受性の指標である方法である。
【００３０】
ＨＥＲ２タンパク質又は遺伝子発現のレベルは、タンパク質か又は核酸レベルで評価可能である。ＨＥＲ２タンパク質発現レベルは、好ましくは「ＩＨＣ」（免疫組織化学）のような免疫組織学法を用いて評価される（本明細書の詳細を参照）。ＨＥＲ２遺伝子増幅は限定しないが、所与の試料細胞中の平均ＨＥＲ２遺伝子コピー数の決定、又はＨＥＲ２／ＣＥＰ１７の比率の決定を含む、当技術分野で知られた更なる方法で評価可能である。代表的方法の詳細は本発明で下に与えられる。
【００３１】
本発明に従って、ＨＥＲ２タンパク質の発現レベルは好ましくはＨＥＲ２タンパク質に対する抗体を採用する免疫組織化学法（ＩＨＣ）で測定され、一方生物学試料中のＨＥＲ２遺伝子増幅は、好ましくはＦＩＳＨ、ＣＩＳＨ又はＳＩＳＨのようなインサイツハイブリダイゼーション法（ＩＳＨ）で検出される。本明細書で記載する通り、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現を示す患者群（例えば、ＨＥＲ２（２＋））、及びＨＥＲ２遺伝子の高い遺伝子増幅状態（例えば、４より大きな（平均）コピー数等）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対して反応していると識別される。また本明細書ではＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現（例えば、ＨＥＲ２（２＋））及びＨＥＲ２遺伝子の高い遺伝子増幅状態（例えば、４より大きな（平均）コピー数等）を示す患者は、前記モジュレーターに感受性があることが想定されかつ好まれる。
【００３２】
当業者はＨＥＲ２タンパク質の発現レベルを決定するための標準検査、特に免疫組織化学検査を承知しているため、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現（例えば、ＨＥＲ２（２＋））、及びＨＥＲ２遺伝子の高増幅状態の患者は、ＨＥＲ２タンパク質が低発現（例えば、ＨＥＲ２（０）又はＨＥＲ２（１＋））である患者から容易に区別することができる。このことは不確かなＨＥＲ２タンパク質の発現レベルを示している大きな患者群のサブグループ、すなわち不確かなＨＥＲ２タンパク質の発現及びＨＥＲ２遺伝子の高い増幅状態を示している患者は、首尾良くＨＥＲ２抗体による治療を受けることが可能であることを意味する。本明細書の下段にさらに詳しく記載した通り、胃癌患者、特に不確かなＨＥＲ２タンパク質の発現レベルを示す浸潤性胃癌患者の成功した治療は、先端技術において記載も提案もされてない。逆に、当業者は患者がＨＥＲ２遺伝子の高い増幅状態を起こしている場合、不確かなＨＥＲ２タンパク質発現レベルを示す分離した患者群から外れた特定の個人はもっと首尾良く治療されることができることを信用しなかったであろう。
【００３３】
乳癌では様々な異なる患者を含めるアルゴリズムが、ＨＥＲ２タンパク質の発現レベル、ＨＥＲ２遺伝子増幅状態、又は両方（単独又は組合わせ）に基づいて知られており、一般的にＨＥＲ２の発現レベルが高いほど、乳癌患者が治療に反応する可能性が高いと信じられている。しかしながら胃癌は様々な態様において乳癌とは異なり、胃癌における適格性基準としてＨＥＲ２遺伝子の増幅状態の有用性について何も知られてない。
【００３４】
当技術分野で知られた乳癌の状況と対比して、本明細書に呈示した研究結果（図２及び３を参照）は、低いＨＥＲ２タンパク質発現（すなわちＨＥＲ２（０）又はＨＥＲ２（１＋））を有する患者は、たとえＨＥＲ２遺伝子が増幅されたとしてもＨＥＲ２モジュレーターによる治療から利益を得てないように見えるが、不確かなＨＥＲ２タンパク質（ＨＥＲ２（２＋））発現レベルとＨＥＲ２遺伝子得の高増幅を有する患者は、予期せぬことに首尾良く治療されることが可能であることを明確に示している。
【００３５】
本発明は不確かなＨＥＲ２タンパク質発現レベル（例えば、胃癌細胞／組織等の生物学試料中のＨＥＲ２タンパク質の免疫組織化学検出におけるＨＥＲ２（２＋））、及び生物学試料中のＨＥＲ２遺伝子の高増幅を示す胃癌患者、特に浸潤性胃癌患者はＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターで首尾良く治療可能であることを初めて記載する。特に有用なのは治療抗体、例えばハーセプチン／トラスツズマブ等のＨＥＲ２抗体である。本適用の方法で識別された患者群は、驚くべきことにＨＥＲ２治療に対して、ＨＥＲ２タンパク質発現の低いレベル（例えば、ＩＨＣによりＨＥＲ２（（０）又はＨＥＲ２（１＋））、及びＨＥＲ２遺伝子の高い増幅を示す患者における奏功率より高い奏功率を示した。結果として，ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベルを持つ患者のサブグループはＨＥＲ２／ｎｅｕ （ｅｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターにより首尾良く治療を受けることが可能であり、従ってこれらの患者の生存率と無増悪生存率は上昇する。本発明の知見は従って当該技術に対する大きな貢献を表わし、多くの胃癌患者、特に浸潤性胃癌患者に重要な利益を提供する。更に、本発明はＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル（ＨＥＲ２（２＋））及び高度に増幅したＨＥＲ２遺伝子を持つ患者の治療法、及び対応する手段と方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】２４カ国からのＴｏＧＡ試験由来の３８０７の腫瘍試料は、上記の表に記載の改良されたシステムを使用して、中央研究所においてＨＥＲ２の状態が評価された。このうち、５８４人の患者が研究に含まれていた。
【図２】ＨＥＲ２サブグループのハザード比（ＨＲ）及びＣＩ；全生存期間（ＯＳ）
【図３】ＨＥＲ２サブグループのハザード比（ＨＲ）及びＣＩ；無増悪生存期間（ＰＦＳ）
【発明を実施するための形態】
【００３７】
「ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターのレスポンダー」なる用語は本発明の文脈では、胃癌を患うか又は患いやすいことが疑われる被験者／患者がモジュレーターによる治療に反応を示すことを意味する。技術者は早速、モジュレーターによる治療を受ける人が反応を示すかどうか決定する立場にいるであろう。例えば、モジュレーターに対する反応は、胃癌腫瘍の減少、及び／又は増殖停止、及び／又は腫瘍の大きさの減少、転移形成の予防、又は転移の数又は大きさの減少等、胃癌の苦痛の減少に反映され得る。反応は、例えば、疾患進行までの期間延長における腫瘍の切除後の胃癌腫瘍又は転移の進行予防に、又は例えば抗転移又は腫瘍免疫賦活薬療法における腫瘍及び／又は転移の大きさの減少に反映されるのが望ましい。
【００３８】
同様に、「ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに感受性の患者」なる用語は本発明の文脈では、モジュレーターにより治療された場合、何らかの方法で陽性反応を示す患者を指す。患者のこの反応は、本明細書の上記に記載のレスポンダーと比較した場合にはあまり目立たない可能性がある。例えば、腫瘍増殖の減少は測定され得ないものの、患者は胃癌による苦しみが減る経験をし得る。モジュレーターに対する患者の反応はまたほんの一時的性質にすぎない可能性があり、すなわち腫瘍及び／又は転移の増殖は一時的にのみ減少するか又は停止する可能性がある。モジュレーターのレスポンダーはモジュレーターによる治療後に胃癌を患うことが無いのが望ましい。好ましくは、ＨＥＲ２モジュレーターで治療された胃癌腫瘍、及び／又は胃癌転移は、モジュレーターによるレスポンダーの治療を終了後１年以内に、また好ましくは治療終了後１５ヶ月、１８ヶ月、又は２年以内に再発しないであろう。
【００３９】
本明細書で使用する「胃癌」なる用語は、胃食道接合部（ＧＥＪ）癌を含む全ての型の胃癌を指す。好ましい一実施態様では、本発明の意味での胃癌は、手術不可能な癌、例えば、局所的に進行し、又は再発し、及び／又は胃又は胃食道接合部の転移癌に関する。
【００４０】
「抗転移」治療なる用語は、手術を行うことなく、手術不可能な腫瘍又は進行した腫瘍を患う患者の治療に関する。
【００４１】
熟練した技術者が完全に理解する通り、本発明によるＨＥＲ２タンパク質が不確かなサブグループにおけるＨＥＲ２遺伝子増幅の陽性検査は、良好な治療に１：１で変換可能ではない。これらの方法により、これらの陽性検査結果を示さない患者のサブグループと比較して、ＨＥＲ２シグナル伝達阻害剤による治療に対する反応の可能性が高い患者のサブグループが識別される。治療に対する反応の改善は、例えば、腫瘍の縮小、無増悪生存率（ＰＦＳ）、並びに全生存（ＯＳ）に対する奏功率に関して見られる。本発明の方法により識別された孤立した患者群のＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対する反応の改善は少なくとも１５％である。また好まれるのは、反応の改善は少なくとも１８％又は少なくとも２０％である。また好まれるのは、反応の改善は少なくとも２５％又は少なくとも３０％である。他の言葉では、陽性結果は、例えば、低ＨＥＲ２タンパク質（好ましくはＩＨＣで評価した）及び高ＨＥＲ２遺伝子増幅を示す患者と比較して、患者はＨＥＲ２シグナル伝達阻害剤による治療に反応する（＝影響を受けやすい）可能性（＝確率、見込み）が高いことを意味する（＝指標となる）。一実施態様では、反応の改善はより良好な奏功率に関する。他の実施態様では、反応の改善は例えば、図２又は３それぞれから明白であるように、ＰＦＳ又はＯＳに関する。
【００４２】
上述の通り、本明細書ではＨＥＲ２タンパク質の発現レベルは免疫組織化学法により検出されることが好ましい。そうした方法は当技術分野で良く知られており、対応する商用キットは容易に入手できる。本発明に従って使用され得る典型的なキットは、とりわけ、デンマークのダコ社により製造され流通したＨｅｒｃｅｐｔＴｅｓｔＴＭ、又は米国ツーソンのヴェンタナ社により製造され流通した ヴェンタナ ＰａｔｈｗａｙＴＭと称される検査である。好ましくはＨＥＲ２タンパク質の発現レベルはＨｅｒｃｅｐｔＴｅｓｔＴＭのプロトコールに従い提供される試薬を用いて評価される。当業者は、免疫組織化学法でＨＥＲ２タンパク質の発現レベルを決定するための更なる手段と方法を心得ているであろう；例えば、国際公開第２００５／１１７５５３号パンフレットを参照。従って、ＨＥＲ２タンパク質の発現レベルは、当業者により容易にかつ再現性良く過度の負担無し決定可能である。しかしながら、正確かつ再現性ある結果を確実にするために、検査は、検査手順の検証を請け負うことが可能な専門の研究室で行われるべきである。
【００４３】
胃癌におけるＨＥＲ２タンパク質の発現レベルは、低発現レベル、不確かな発現レベル及び高発現レベルに分類可能である。本発明の文脈の中では、胃癌を患っているか又は患いやすいと疑われた患者から得た試料は、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベルを示すことが好まれる。
【００４４】
最も好ましくは、不確かなタンパク質発現レベルはＨＥＲ２（２＋）である。更に、本明細書で使用する通り、低タンパク質発現レベルはＨＥＲ２（０／１＋）であり、及び高タンパク質発現レベルはＨＥＲ２（３＋）である。
【００４５】
異なる基準が切除試料及び生検試料に適用されるべきであることは新規で驚くべき知見である。
【００４６】
本発明の文脈の中では、生検試料と比較して異なるスコアリングシステムが切除試料に対して適用される。
【００４７】
本発明の一実施態様では、ＨＥＲ２の低い、不確かな、又は高いタンパク質発現レベル（例えば、それぞれＨＥＲ２（０／１＋）、ＨＥＲ２（２＋）又はＨＥＲ２（３＋））が切除試料において決定され、スコアリングは以下の表の基準に基づく。
【００４８】
0005705836.tif 000002
【００４９】
胃癌切除試料はまた、もし切除試料が腫瘍領域の１０％未満を覆う領域において高いタンパク質発現レベルでを示し（例えば、ＩＨＣによりＩＨＣ（３＋））、特にもし本試料中のＩＨＣ（３＋）クローンが凝集性である場合、陽性と見なされる。
【００５０】
本発明のその他の実施態様では、ＨＥＲ２の低い、不確かな、又は高いタンパク質発現レベル（例えば、それぞれＨＥＲ２（０／１＋）、ＨＥＲ２（２＋）又はＨＥＲ２（３＋））が生検試料において決定され、スコアリングは以下の表の基準に基づく。
【００５１】
0005705836.tif 000003
【００５２】
好ましくは生検試料は少なくとも５つの染色腫瘍又は細胞を含む。少なくとも５つの腫瘍細胞は好ましくは凝集性腫瘍細胞である。中間型又は不確実な染色は、弱から中程度に完全な基底外側の又は側部の膜状染色を持つ腫瘍細胞クラスターが生検試料に存在する場合に認められる。
【００５３】
本明細書で使用されるＨＥＲ２（＋）、ＨＥＲ２（＋＋）及びＨＥＲ２（＋＋＋）なる用語は、ＨＥＲ２（１＋）、ＨＥＲ２（２＋）及びＨＥＲ２（３＋）なる用語と等価である。本発明の文脈の中で用いた「低タンパク質発現レベル」は「０」又は「１＋」のスコア（本明細書上記の表による「陰性評価」）に対応し、「不確かなタンパク質発現レベル」は「２＋」のスコアに対応し、及び「高タンパク質発現レベル」は「３＋」のスコアに対応する。本明細書の上記に詳細を記載の通り、タンパク質発現レベルの評価（例えば、表に示したスコアリングシステム）は免疫組織化学的方法により得られた結果に基づく。標準として又は日常的に、ＨＥＲ−２の状態は、従って、ＦＤＡ承認の市販に入手可能な２つのキット、すなわち、ダコ ＨｅｒｃｅｐｔＴｅｓｔＴＭ及びヴェンタナ ＰａｔｈｗａｙＴＭのそれぞれのうち一つを用いた免疫組織化学法で実施される。これらは、半定量的アッセイであり、発現レベルを０（細胞あたり＜２０，０００レセプター、ＩＨＣ染色で可視的な発現無し）、１＋（細胞あたりおよそ１００，０００レセプター、部分的な膜染色、ＨＥＲ２を過剰発現する細胞は＜１０％）、２＋（細胞あたりおよそ５００，０００レセプター，薄いから中程度の完全性の膜染色、ＨＥＲ２を過剰発現する細胞は＞１０％）、及び３＋（細胞あたりおよそ２，０００，０００レセプター、強い完全なる膜染色、ＨＥＲ２を過剰発現する細胞は＞１０％）。
【００５４】
あるいは、ＨＥＲ２のタンパク質発現レベルの評価のための更なる方法は、例えば、ウエスターンブロット、ＥＬＩＳＡに基づく検出システム等に使用され得る。ＨＥＲ２タンパク質の不確かな又は高い発現レベルはこれらの技術により決定することができ、ＨＥＲ２タンパク質発現の不確かなレベルを持つと分類されたそれらの患者の生物学試料は更にＨＥＲ２遺伝子増幅のために分析され得る。
【００５５】
本明細書で指摘される通り、本発明の方法で識別され、かつ治療に感受性のある患者群は「不確かな」ＨＥＲ２タンパク質発現と、加えて高いＨＥＲ２遺伝子増幅により特徴付けされる。情報の完全性のために、「高い」ＨＥＲ２発現を有していると識別された患者群はまたＨＥＲ２シグナル伝達のモジュレーターによる治療に感受性があると述べても良い。
【００５６】
高いＨＥＲ２遺伝子増幅状態は、とりわけ４より大きいＨＥＲ２遺伝子の遺伝子コピー数、特に腫瘍細胞あたりＨＥＲ２遺伝子のコピー数が４より大きい平均ＨＥＲ２遺伝子コピー数（それらの検査システにおいては内部のセントロメア制御プローブ無しで）、又は（腫瘍細胞あたり）第１７番染色体コピーあたり２以上のＨＥＲ２遺伝子の平均遺伝子コピー数、言い換えれば、２より大きいＨＥＲ２／ＣＥＰ１７の比率（それらの検査システにおいては内部の第１７番染色体制御プローブを使用して）（腫瘍あたり）、に関する。高いＨＥＲ２遺伝子増幅状態は好ましくはまた，少なくとも５，６，７，８，又はそれ以上のＨＥＲ２遺伝子コピー数、又は少なくとも３，４，５，又は６のＨＥＲ２／ＣＥＰ１７比率に関する。ＨＥＲ２遺伝子コピー数５は、例えば、ＨＥＲ２遺伝子の２コピーの重複から（例えば、２つの染色体上の２つの遺伝子の重複、又はＨＥＲ２遺伝子のコピーを運搬する染色体の重複により）、及び同一染色体内のＨＥＲ２遺伝子の１コピーの更なる重複から起き得る。好ましくは、試料は腫瘍領域の１０％以上に広がる領域においてＨＥＲ２遺伝子の高増幅状態を示す。例えば、本明細書で定義される高増幅状態である細胞は、本発明に従って評価した腫瘍領域／細胞の１０％以上に広がる。高増幅状態であるこれらの腫瘍細胞はまた凝集性であり得る。
【００５７】
本発明の好ましい実施態様では、ＨＥＲ２遺伝子の増幅状態はインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）で評価される。好ましくは、インサイツハイブリダイゼーションは蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、発色インサイツハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）及び銀インサイツハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ）である。これらの方法は当業者に知られている。これらの方法の原理は標準的な教科書から導くことが可能である。インサイツハイブリダイゼーションによりＨＥＲ２の増幅状態を決定する市販のキットは容易に入手できる。本発明に従って用いられる好ましいＦＩＳＨ検査は、ヴェンタナ社の「Ｉｎｆｏｒｍ（登録商標）」キット、アボット社の「ＰａｔｈｖｙｓｉｏｎＴＭ」及びダコ社の「ｐｈａｒｍＤｘＴＭ」キットである。好ましいＣＩＳＨアッセイは、インビトロジェンのＳＰｏＴ−Ｌｉｇｈｔ（登録商標）ＨＥＲ２ ＣＩＳＨＴＭ、及びＺｙｔｏｖｉｓｉｏｎ社のＺｙｔｏＤｏｔ（登録商標）ＳＰＥＣ ＨＥＲ２ Ｐｒｏｂｅキットである。好ましいＳＩＳＨアッセイはヴェンタナ社のｕｌｔｒａＶｉｅｗＴＭ ＳＩＳＨ検出キットを組み合わせたヴェンタナ社の「ＩｎｆｏｒｍＴＭ」ＨＥＲ２ ＤＮＡプローブである。
【００５８】
ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路は当技術分野で良く知られており、当業者は一般的な知識と本明細書に提供された教えに基づいて、容易にそうしたモジュレーターを識別する立場にある。本発明に従って使用されるモジュレーターの非限定的実施例は、ハーセプチン／トラスツズマブ、又はペルツズマブ（国際公開第２００７／１４５８６２号パンフレットを参照）等の抗体、好ましくはモノクロナール又はヒト化抗体である。本発明に従った好ましい実施態様は、ハーセプチン／トラスツズマブを、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル（例えば、ＩＨＣによるＨＥＲ２（２＋））及び本明細書で定義されたＨＥＲ２遺伝子の高増幅により特徴付けられた胃癌患者のサブグループに投与することである。
【００５９】
本発明の好ましい実施態様では、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達のモジュレーターは、ＨＥＲ二量体化／シグナル伝達阻害剤、又はＨＥＲ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の分断の阻害剤である。
【００６０】
好ましくは、ＨＥＲ二量体化／シグナル伝達の阻害剤はＨＥＲ２の二量体化阻害剤である。本明細書でまた好まれるのは、ＨＥＲ二量体化阻害剤がＨＥＲヘテロ二量体化、ＨＥＲホモ二量体化、又は両方を阻害することである。
【００６１】
本発明の特に好ましい実施態様では、ＨＥＲ二量体化／シグナル伝達の阻害剤はＨＥＲ抗体である。ＨＥＲ抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３等のＨＥＲレセプターに結合し得る。好ましくは、抗体はＨＥＲ２に結合する。ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに結合し得て、及び／又はＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩ，ＩＩ，とＩＩＩの間の接合部に結合し得る。
【００６２】
本発明のその他の好ましい実施態様では、ＨＥＲ二量体化阻害剤はＨＥＲ２とＥＧＦＲ又はＨＥＲ３又はＨｅｒ４とのヘテロ二量体化を阻害する。更に好ましい実施態様では、本発明に従ってレセプターの二量体化／シグナル伝達を阻害することでＨＥＲ２シグナル伝達経路のモジュレーターとして用いられるＨＥＲ２抗体はペルツズマブである。
【００６３】
好ましくは、ＨＥＲ二量体化阻害剤は抗体であり、好ましくは抗体２Ｃ４である。本適用に渡って好ましいのは、「抗体２Ｃ４」、特にそのヒト化変異体であり（国際公開第０１／００２４５号パンフレット；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓｓ，ＶＡ、米国、によりＡＴＣＣ ＨＢ−１２６９７という型番で預けられたハイブリドーマ細胞株により作成）、ＨＥＲ２の細胞外ドメインの領域（例えば、ＨＥＲ２の残基約２２から残基約５８４の包括的な領域の任意の一以上の残基）に結合する。ヒト化２Ｃ４抗体の実施例が国際公開第０１／００２４５号パンフレットの実施例３に提供されている。ヒト化抗体２Ｃ４はペルツズマブとも言う。
【００６４】
好ましくは、ＨＥＲ分断の阻害剤はＨＥＲ２分断阻害剤である。本明細書においてはまたＨＥＲ分断阻害剤はＨＥＲのヘテロ二量体化又はＨＥＲのホモ二量体化を阻害することが好まれる。
【００６５】
本発明の特に好ましい実施態様は、ＨＥＲ分断阻害剤はＨＥＲ抗体である。ＨＥＲ抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３等のＨＥＲレセプターに結合し得る。好ましくは、抗体はＨＥＲ２に結合する。同様に好ましいのは、ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のサブソメインＩＶに結合する。
【００６６】
更に好ましい実施態様では、本発明に従ってＥＣＤ分断を阻害することでＨＥＲ２シグナル伝達経路のモジュレーターとして使用されるＨＥＲ２抗体はハーセプチン／トラスツズマブである。
【００６７】
本明細書の以下に指摘の通り、特に本明細書に提供された医学的使用及び方法において、ハーセプチン／トラスツズマブは、本明細書に記載の通りに上記に記載の方法で識別された胃癌の患者／患者群の治療のために、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の好ましいモジュレーターである。この新規な胃癌の患者／患者群は、インビトロ検査において、２つのバイオマーカーのＨＥＲ状態（ＨＥＲ２のタンパク質発現レベル及びＨＥＲ２の遺伝子増幅状態）を使用して、ＨＥＲ２の不確かなタンパク質発現レベル（ＨＥＲ２（２＋））、及びＨＥＲ２遺伝子の高増幅状態（例えば、４より大きいコピー数）を示す、それらの生物学試料／生検により特徴付けられる。「ＨＥＲ２の不確かな発現レベル」、及び「ＨＥＲ２遺伝子の高増幅状態」なる用語は、本明細書の上記に記載されている。ＨＥＲ２タンパク質発現レベル及びＨＥＲ２遺伝子数の前記半定量的評価は、正常組織試料、すなわち健常なコントロール試料を含み得る所与のコントロール試料に対し相関して確定され得る。そのようなコントロール試料は、例えば健常なボランティアから得る可能性があり、又はＨＥＲ２遺伝子増幅状態及びタンパク質発現レベルを評価されるべき患者由来の確定した明らかに健常なコントロール組織である。前記ＨＥＲ２の状態／レベルが試験されかつ評価されるべき生物学試料は、特に胃癌組織の生検、又は切除を通じて得られる組織試料であり得る。
【００６８】
本明細書で広義にかつ特異的に使用される「抗体」なる用語は、望まれる生物学的活性を示すかぎり、インタクトなモノクロナール抗体、ポリクロナール抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体、（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片に及ぶ。またヒト及びヒト化並びにＣＤＲ移植抗体が含まれる。
【００６９】
本明細書で使用される「モノクロナール抗体」なる用語は、実質的に同種抗体の集団から得た抗体を指し、すなわち少量存在する可能性のある恐らくは天然に存在する変異体を除いて、集団を構成する個々の抗体は同一である。モノクロナール抗体は単一の抗原性部位に対し高度に特異的である。更に、異なる決定因子（エピトーブ）に対する異なる抗体を含むポリクロナール抗体作製とは対照的に、各々のモノクロナール抗体は抗原の単一の決定因子に対する。それらの特異性に加え、モノクロナール抗体は、他の抗体で汚染されずに合成され得る点で有利である。修飾語句の「モノクロナール」は、実質的に同種な抗体集団から得ているため、抗体の特徴を意味し、任意の特定の方法による抗体の生産を必要とするものとして作製されるべきでない。例えば、本発明に従って用いられるべきモノクロナール抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒ，Ｇ．等、Ｎａｔｕｒｅ ２５６（１９７５）４９５により記載されたハイブリドーマ法、又は組換えＤＮＡ法（米国特許第４８１６５６７号明細書を参照）により作られ得る。「抗体断片」はインタクトな抗体の一部分を含む。本発明の文脈の中では、本明細書にて提供された手段と方法、及び本明細書に定義された新たに識別された胃癌患者群の治療において用いられるべきＨＥＲ２経路の抗体モジュレーターは、好ましくはヒト化、完全ヒトの、又はＣＤＲ移植抗体分子である。好ましい抗体はハーセプチン／トラスツズマブである。
【００７０】
「試料」なる用語は一般的に個体／患者から得た任意の生物学試料を意味するべきである。発明の方法は評価工程を含むのみとするように、試料を得る工程は本発明の方法において省略され得る。従って、本発明は一実施態様にて、胃癌を患うと疑われ、かつＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダー、又は感受性のある患者として、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベルを有する患者を識別するためのインビトロ法に関し、前記方法は試料中のＨＥＲ２遺伝子の遺伝子増幅状態の評価工程を含み、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル及びＨＥＲ２遺伝子の高増幅状態は反応する患者の指標であり、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の前記モジュレーターに対する前記患者の感受性の指標である。
【００７１】
「生検」及び「切除」なる用語は当業者に良く知られている。本発明の文脈の中では、生検試料は、針、ブラシ、スクレーパー、又はパンチを使用して患者から同一細胞又は組織（の部分）を除去して得た生物学試料である。実施例は吸引生検、ブラシ生検、コア生検、真空生検、コア針生検、針生検、又はパンチ生検である。切除試料は外科的切除、又はメス、ナイフ、はさみ、又は切断のために考案された他の器具を用いて、患者から臓器又は組織（の部分）の切りとりにより得た生物学試料である。実施例は、少なくとも原発腫瘍の一部を含む胃組織切除、及び転移巣の切除である。生物学試料はまた循環性腫瘍細胞をも含む。
【００７２】
本発明に従って、生物学試料は胃癌細胞及び非胃癌細胞（他の細胞）を含み得る。熟練した病理学者は正常な胃組織細胞から癌細胞を鑑別することができる。組織生検、切除、及び哺乳類の体液を得る方法は当技術分野で良く知られている。
【００７３】
本発明の一実施態様では、本明細書で定義され、不確かなＨＥＲ２タンパク質の発現レベル（ＨＥＲ２のレベル（ＨＥＲ２（２＋））、及びＨＥＲ２遺伝子の高い遺伝子増幅（例えば、核／腫瘍細胞あたり４を越えた平均遺伝子コピー数）を示す、生物学試料／生検によって特徴付けられる胃癌患者の新規なサブグループは、浸潤性胃癌、特に腸管型腺癌、混合型腺癌、又は散在型腺癌を患っている可能性があり得る。
【００７４】
本発明の一実施態様では、ＨＥＲ２レベル／状態に関して、本発明に従って検査されるべき前記患者の試料は、抗転移治療前に、すなわち、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターによる治療が開始される前に得られる。しかしながら、ネオアジュバント又はアジュバント療法、及び対応する試料の検査もまた予想される。
【００７５】
本発明の更なる実施態様では、胃癌患者（特に浸潤性胃癌）の治療方法が提供され、前記方法は、本明細書の以上に提供された方法で識別された患者、及びそのような治療を必要とする被験者にＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターを有効な量、投与する工程を含む。前記被験者は、本発明に従い、好ましくはヒトの被験者である。生物学試料、特に前記被験者／患者の胃の組織生検／切除はＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル、及びＨＥＲ２遺伝子の高い増幅／増幅レベルを有することを特徴とする。本明細書で文書化された通り、当業者は容易に、特に当技術分野で知られた免疫組織化学法により、前記生物学試料中の前記ＨＥＲ２タンパク質の発現レベルを決定する立場にある。同じことは、所与のＨＥＲ２増幅／増幅レベルの決定において準用する。ここで、以上に指摘の通り、好ましい（しかし限定しない）決定法は、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、発色インサイツハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）又は銀インサイツハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ）等のインサイツハイブリダイゼーションの技術である。本発明に従って治療されるべき患者は好ましくはヒトの患者であり、ＨＥＲ２タンパク質の前記発現レベル及びＨＥＲ２遺伝子の前記増幅状態がインビトロで決定される前記生物学試料は、本明細書で記載のヒト患者由来の生物学試料である。
【００７６】
再び、本発明の主旨は、驚くべきことに、胃癌を患い、ＨＥＲ２タンパク質発現の不確かな状態／レベル、及び高いＨＥＲ２遺伝子増幅のみを示す患者が首尾良くＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターで治療可能であるという事実に関する。前記モジュレーターは特にＨＥＲ２タンパク質に対する抗体分子を含む。この点において好ましい抗体分子はハーセプチン／トラスツズマブ及びペルツズマブ（特に国際公開第２００７／１４５８６２号パンフレットに記載の通り）である。
【００７７】
本明細書に定義されるＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル及び高いＨＥＲ２遺伝子増幅を示す患者において、本発明に従って使用されるべき他のＨＥＲ２シグナル伝達モジュレーター又はＨＥＲ２作用薬は、また経口チロシンキナーゼ阻害剤タイケルブ（トシル酸ラパチニブ）、ＨＫＩ２７２又はＢＩＢＷ２２９等のチロシンキナーゼ阻害剤を含む。
【００７８】
本明細書上記に定義された通り、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダー又は感受性のある患者を識別するための本発明によるインビトロ法に関する文脈にて、当業者は前記患者の生物学試料中において、どのような「ＨＥＲ２発現状態」が呈示されているか、既知の方法で容易に推測可能である。本明細書に定義されたＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターにより治療されるべき患者は、その生物学試料中に不確かなタンパク質発現レベル及びＨＥＲ２遺伝子の高増幅レベル／状態を示す。再び、ＨＥＲ２の「不確かなタンパク質発現レベル」は、本明細書上記に定義された通り免疫組織化学検査において２＋のスコア（「不確かな分類」、上の表を参照）に対応し、及び、胃癌を患うか又は患いやすいと疑われる前記患者から得た試料中において、高ＨＥＲ２遺伝子増幅は、腫瘍細胞あたりのＨＥＲ２遺伝子が４コピーを上回る平均ＨＥＲ２遺伝子コピー数（それらの検査システにおいては内部のセントロメア制御プローブ無しで）、又は、コピーあたり２を上回るＨＥＲ２／ＣＥＰ１７の比率（それらの検査システにおいては内部の第１７番染色体セントロメアコントロールプローブを使用して）に関する。
【００７９】
当業者はまたＨＥＲ２遺伝子の遺伝子増幅状態を容易に検出、及び／又は検証することが可能である。これはまた、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）又は明視野インサイツハイブリダイゼーション等のインサイツハイブリダイゼーションにより日常的に行われる。従って、ＨＥＲ２の遺伝子増幅状態が検査される場合、ＦＩＳＨ検査が日常的に使用され、その読み出しは平均ＨＥＲ２遺伝子コピー数、又は、前記ＨＥＲ２／ＣＥＰ１７の比率が、セントロメアプローブ（ＣＥＰ１７）により得られるシグナルに関連してＨＥＲ２シグナルを定める、いわゆるＨＥＲ２／ＣＥＰ１７の比率の決定を含み得る。本発明の文脈にて、本明細書に定義されたＨＥＲ２シグナル伝達経路のモジュレーターによる治療に接しやすい新しい患者群は、ＨＥＲ２の高い遺伝子増幅、及び不確かなＨＥＲ２タンパク質発現を示す胃癌患者である。
【００８０】
本発明に従って、好ましくはヒト胃癌患者を治療する方法が提供され、前記患者は、ＨＥＲ２タンパク質の発現レベルが不確かな場合、ＨＥＲ２タンパク質の発現レベル及びＨＥＲ２遺伝子増幅レベルが評価される。本発明に従って、ＨＥＲ２の「不確かなタンパク質発現レベル」（２＋のスコア、又は「不確かな分類」に対応する。上の表を参照）を示し、かつ「高いＨＥＲ２遺伝子増幅レベル」（好ましくは、本明細書に定義される、４より大きいコピー数、又は２より大きいＨＥＲ２／ＣＥＰ１７の比率）を示す、胃癌、また浸潤性胃癌を患うか又は患いやすいと疑われる患者は、本発明に従って明確な延命効果、無増悪期間の延長を示し、及び／又は本明細書に定義されたＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、特にハーセプチン／トラスツズマブで治療された場合、再発性の少ない胃癌を示すことが予測される。
【００８１】
本明細書に記載の医学的な使用及び方法は、本明細書に定義されたＨＥＲ２の「不確かなタンパク質発現状態」（本明細書の上記に定義された「低いタンパク質発現レベル」に対して）、及び本明細書に定義された「高いＨＥＲ２遺伝子増幅状態」、例えば腫瘍細胞あたり平均して４コピーを上回る）を有する患者に対して、本明細書に記載のＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、特にハーセプチン／トラスツズマブ等のＨＥＲ２に対する抗体の使用に関する。本発明の文脈にて、前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路、特に、好ましくはハーセプチン／トラスツズマブ等のＨＥＲ２に対する抗体は、転移抑制のアジュバント並びにネオアジュバント胃癌療法に用いられ得る。従って、前記「ＨＥＲ２モジュレーター」はそうした治療を必要とし、かつ癌組織の外科的処置／切除の前か、その間、その後に本明細書で定義されたバイオマーカー状態を有する患者に投与され得る。従って、本発明は転移抑制並びにネオアジュバント治療において、すなわち、本明細書で定義された胃癌患者群に対して、手術前並びにアジュバント療法において与えられる、本明細書で定義されたＨＥＲ２シグナル伝達経路のモジュレーター（ハーセプチン／トラスツズマブ等）による治療に有用である。再び、本明細書に与えられた手段と方法で（特にハーセプチン／トラスツズマブによる）治療されるべき本発明の患者群は胃癌患者であり、２つのバイオマーカー、すなわちＨＥＲ２タンパク質発現及びＨＥＲ２遺伝子増幅状態、が評価され、患者は「不確かな発現状態」（ＨＥＲ２（２＋））、及び高いＨＥＲ２遺伝子増幅状態（すなわち腫瘍細胞あたり４コピーを上回る、言い換えれば少なくとも５コピー）を有しているとして治療される。
【００８２】
本明細書に提供された医療並びに診断法（インビトロ）に従って、当業者は当技術分野で知られた手段と方法で、所与の試料中のＨＥＲ２増幅の状態／レベル、及びＨＥＲ２タンパク質の発現レベル／状態をとりわけ決定することができる。これらの方法はまた所与の試料を正常コントロール試料、すなわち癌性でなく、健常な（コントロール）個体又は非疾患組織にとりわけ由来する生物学試料との比較を含む。
【００８３】
従って、本発明は、本明細書に記載され定義した方法により識別される患者の胃癌治療に使用されるＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに関する。また、本発明の方法で識別される患者の胃癌治療のための薬学的組成物の調製のためのＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターの使用が予測される。
【００８４】
本明細書に与えられた医学的実施態様、すなわち方法及び使用に関する文脈にて、本明細書に定義される患者群（胃癌患者／浸潤性胃癌患者で、ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル（ＨＥＲ２（２＋））かつ同時に「高い」ＨＥＲ２遺伝子増幅状態を有する）に投与されるべきＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターは単一な抗腫瘍薬として投与され得る。しかしながら、とりわけ更なる医薬、特に抗癌薬を、例えば併用療法の形で投与することを含む共治療的アプローチと使用もまた予測される。そうした付加的治療は化学療法である可能性があり、シスプラチンと組み合わせたフルオロピリミジン、抗代謝剤（例えば、ゲムシタビン）、抗ホルモン化合物、チロシンキナーゼ阻害剤、ｒａｆ阻害剤、ｒａｓ阻害剤、２重チロシンキナーゼ阻害剤、タキソール、タキサン（パクリタキセル又はドセタキセル等）、ドキソルビシン又はエピルビシン又は等のアントラサイクリン、シスプラチン等の薬の投与を含み得る。また、ビノレルビンは本発明の共治療的アプローチに使用可能である。更に、特にハーセプチン／トラスツズマブによる共治療的アプローチはシクロホスファミド、メトトレキサート、又はフルオロウラシル（５−ＦＵとしても知られる）を個々に又はこれら３つの薬を含む組合わせ療法（「ＣＭＦ療法」）の形での投与を含み得る。ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターの組合わせ療法、特に、フルオロピリミジン及びシスプラチンを併用のハーセプチン／トラスツズマブはまた本発明の好ましい実施態様を表わす。
【００８５】
本明細書に与えられた好ましい治療のアプローチ、すなわちＨＥＲ２シグナル伝達のモジュレーターの使用はまた他の療法と組合わされ得る。そうした組合わせ療法は好ましくはまた化学療法剤の使用に依存し、又は（限定しないが）例えばベバシズマブ／アバスチン、又はスーテント（リンゴ酸スニチニブ−ＳＵ−１１２４８）等のＶＥＧＦ遮断薬の投与を含む血管新生阻害剤を含み得る。
【００８６】
当業者は、例えば主治医は、容易に本明細書に定義されたＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターを本明細書に定義された患者／患者群に投与する立場にある。そのような投与は、非経口経路、経口経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路又は経皮経路を含み得る。ハーセプチン／トラスツズマブの場合、好ましい投与経路は静脈内投与である。更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターは抗転移、ネオアジュバント又はアジュバント療法において投与され得る。ハーセプチン／トラスツズマブのそうした投与は、本明細書に定義される新規な胃癌患者（群）／浸潤性胃癌患者（患者群）において、とりわけ毎日、１日おきに、２日おきに、３日おきに、４日おきに、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、１ヶ月に１回、等の投与を含む。
【００８７】
再び、主治医は彼／彼女の専門職として経験に従ってＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターの投与計画を修飾、変更、又は修正し得る。本発明の特に好ましい実施態様では、胃癌患者又は患者群の治療のための方法が提供され、前記方法は、前記患者／患者群が生物学試料（特に生検又は切除）の評価において特徴付けられ、前記試料がＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル（ＨＥＲ２（２＋））、及び「高いＨＥＲ２遺伝子増幅状態」を示す前記患者／患者群に、ハーセプチン／トラスツズマブを投与することを含む。従って、本発明はまた、本明細書に開示されるバイオマーカーの状態（ＨＥＲ２タンパク質の不確かな発現レベル及び本明細書の上記に定義される「高いＨＥＲ２遺伝子増幅状態」）、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ （ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターに対するレスポンダー又は感受性のある患者のための本明細書に記載されるインビトロ法により識別された胃癌患者の治療のための薬学的組成物の調製におけるハーセプチン／トラスツズマブの使用を提供する。前記の胃癌患者／患者群はまた浸潤性胃癌を患う可能性がある。
【００８８】
本発明は以下の非限定的な図と実施例の参照により更に説明される。
【００８９】
方法
研究のデザイン
ＴｏＧＡ試験は、ＨＥＲ２陽性進行胃癌（ＧＣ）において、シスプラチン＋フルオロピリミジン単独に対して、シスプラチン＋フルオロピリミジン（カペシタビンまたは５−フルオロウラシル）と併用したトラスツズマブの安全性と有効性を調査するために設計された、無作為化、非盲検で、多施設における、第ＩＩＩ相臨床試験である。
【００９０】
患者
組み入れ基準：
−根治治療に適さない手術不能な、局所的に進行した、又は再発性の、及び／又は転移性の病変を持つ胃又は胃食道接合部（ＧＥＪ）における組織学的に確認された腺癌
−画像法技術（コンピュータ断層撮影又は磁気共鳴イメージング）を用いて評価された、固形がんの治療効果判定のためのガイドライン（ＲＥＣＩＳＴ）に従って測定可能な疾患、又は測定できない評価可能疾患−中央研究所により評価されたＨＥＲ２陽性腫瘍（原発腫瘍または転移）。ＩＨＣとＦＩＳＨの両方は、中央研究所内の全ての患者の試料（切除又は生検の何れか）において行われた。
【００９１】
−０、１又は２の東部共同腫瘍学グループのパフォーマンスステータス
【００９２】
−３ヶ月の平均余命
−一般的な組み入れ基準：−男性又は女性、１８才−署名付きインフォームドコンセント
【００９３】
評価
主要エンドポイントは全生存期間であり、二次エンドポイントは無増悪生存期間、全奏効率と反応の持続時間を含む。有効性評価の更なる情報については要約ＬＢＡ４５０９．１０ ＨＥＲ２検査を参照。
【００９４】
胃癌腫瘍試料をホルマリン固定しパラフィン包埋した。試料（切除又は生検の何れか）は、ＨＥＲ２の状態を決定するため、胃癌におけるＨＥＲ２検査の検証研究により推奨される通りに、ＩＨＣ（改良ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔＴＭ）及びＦＩＳＨ（ｐｈａｒｍＤｘＴＭ；ダコ）を両方使用して中央研究所で分析した。ＩＨＣ ＨＥＲ２スコアリングは以下の改良ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔＴＭパラメーターを使用した；染色強度、完全な／不完全な膜染色；染色された細胞の割合；ルーメン／その他の理由による不完全な膜染色。ＦＩＳＨ解析において、ＨＥＲ２陽性はＨＥＲ２：ＣＥＰ１７の比率が２以上として定義された。本研究においてＨＥＲ２陽性の結果はＩＨＣ３＋及び／又はＦＩＳＨ陽性と定義された。
【００９５】
結果
ＴｏＧＡ試験のＨＥＲ２−スクリーニングプロセスはこれで完了する。２４カ国から３８０７の腫瘍試料は、記載の改良されたシステムを使用して中央研究所において、ＨＥＲ２の状態が評価されている。これらのうち、３６６７のサンプルは評価が可能であり、８１０は２２．１％の全ＨＥＲ２陽性評価を与え、ＨＥＲ２陽性として定義されている。予想外に高い数値の事例は、ＦＩＳＨ陽性／ＩＨＣ０／１＋であることが判明し、これらは、治療群（図１）の間で無作為であった。乳癌のＨＥＲ２検査では、ほとんどのＩＨＣ ０／１＋の試料はＦＩＳＨ陰性であることがわかっているが、ＴｏＧＡ試験ではＩＨＣ ０／１＋／ＦＩＳＨ−陽性検体の頻度は、ＩＨＣ２＋／ＦＩＳＨ−陽性試料（それぞれ２５％対２８％）とほぼ同じ高さであった。ＩＨＣ３＋である場合のうち、５％はＦＩＳＨ陰性であることがわかった。
【００９６】
ＨＥＲ２陽性率は、ヨーロッパ（２３．６％）とアジア（２３．５％）の間で類似していた。ＨＥＲ２陽性率は、台湾の５．９％（Ｎ＝３４）から、オーストラリアの３２．８パーセント（Ｎ＝６１）まで、国の間で異なる。
【００９７】
ＨＥＲ２陽性は、腫瘍の部位によって異なり、胃癌よりも、ＧＥＪ（胃食道接合部）癌においてＨＥＲ２陽性率が高い（それぞれ３３．２パーセント対２０．９％；Ｐ＜０．００１）。
【００９８】
一般的には、ＧＥＪ：胃癌の最も高い比率を持つ国は、患者数が少ないものの平均以上のＨＥＲ２陽性率を有することがわかった。これらはフランス（比率０．５３；ＨＥＲ２陽性は２６．９％）、ドイツ（比率０．５３；ＨＥＲ２陽性は２３．７％）と英国（比率０．３３；ＨＥＲ２陽性は２５．８％）を含んでいた。同様に、組織学的サブタイプ（ローレン分類）に基づいて、ＨＥＲ２陽性で有意差（ｐ＜０．００１）があり、腸において３２．２％に対してびまん性／混在型癌において６．１／２０．４％であった。再び、腸：びまん性／混在型癌の比率の高い国は、英国（比率３．４；ＨＥＲ２陽性は２５．８％）、オーストラリア（比率２．６；ＨＥＲ２陽性は３２．８％）、日本（比率２．８；ＨＥＲ２陽性は２８．１％）及びポルトガル（比率３．３３；ＨＥＲ２陽性は２２．４％）等、高いＨＥＲ２陽性率を有していた。
【００９９】
ＴｏＧＡ試験は、進行した胃癌において見込みのある方法でＨＥＲ２陽性の発生率に関する情報を提供する最初の第ＩＩＩ相臨床試験である。ＴｏＧＡスクリーニングプログラムは、進行胃癌において以前に乳癌で観察された比率に匹敵する２２．１％のＨＥＲ２陽性率を観察した。データはまた、各国にわたり胃癌におけるＨＥＲ２陽性の変化が組織学的サブタイプと腫瘍部位の違いによって説明できることを示している。胃の腫瘍は乳房腫瘍よりはるかに異質である傾向があり、それ故に胃癌におけるＨＥＲ２検査は、乳癌におけるそれに対して異なる。ＴｏＧＡ試験の有効性に対するこのスクリーニングデータの比較は、本発明に開示されたように新たな治療アルゴリズムを導いている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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