(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0005738267.tif 000011
［式中、
【化２】
0005738267.tif 000012
なる記号は、単結合又は二重結合である；
Ｙは、３位の
【化３】
0005738267.tif 000013
が二重結合である際は、酸素又はグアニジノイミノである；
Ｙは、３位の
【化４】
0005738267.tif 000014
が単結合である際は、ヒドロキシ、ＯＲ４、又はＳＲ４であり、α又はβ配置を有してよ
い；
Ｒは、非置換又は置換された３−フリル又は４−ピリダジニル基である；
Ｒ１は、水素；メチル；又はＯＨ若しくはＮＲ５Ｒ６によって置換されたエチル若しくはｎ−プロピルである；
Ｒ２は、水素であるか、又はＲ３とともにオキシラン環の結合である；
Ｒ３は、水素であるか、又はＲ２とともにオキシラン環の結合である；
Ｒ４は、水素；メチル；又は第四級アンモニウム基、１以上のＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、ホルミル、アミジノ、グアニジノイミノ、若しくはＮＲ８Ｒ９及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ６アルケニル、若しくはＣ２−Ｃ６アシルである；
Ｒ５、Ｒ６は、独立に、水素；メチル；又は１つのＮＲ１０Ｒ１１若しくはＮＲ１０Ｒ１１及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ６アルキルであるか、又はＲ５及びＲ６が、窒素原子とともに、非置換若しくは置換された、飽和若しくは不飽和のペンタ−若しくはヘキサ−モノ複素環（場合によって、酸素、硫黄、若しくは窒素から選択される他の複素原子を含有する）を形成する；
Ｒ７は、水素、メチル、又は１以上のＮＲ１０Ｒ１１若しくはＮＲ１０Ｒ１１及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ４アルキルである；
Ｒ８、Ｒ９は、独立に、水素；メチル；又は１以上のＮＲ１０Ｒ１１若しくはＮＲ１０Ｒ１１及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ６アルキル若しくはＣ３−Ｃ６アルケニルであるか、又はＲ８及びＲ９が、窒素原子とともに、非置換若しくは置換された、飽和若しくは不飽和のペンタ−若しくはヘキサ−モノ複素環（場合によって、酸素、硫黄、若しくは窒素から選択される他の複素原子を含有する）を形成するか、又はＲ８が水素であり、かつ、Ｒ９がアミジノであるか；又はＮＲ８Ｒ９がプロパルギルアミノである；
Ｒ１０、Ｒ１１は、独立に、水素若しくはＣ１−Ｃ６アルキルであるか、又はＲ１０及びＲ１１が、窒素原子とともに、飽和若しくは不飽和のペンタ−若しくはヘキサ−モノ複素環を形成する］
の化合物を含む、タンパク尿、糸球体硬化、及び腎不全の予防及び／又は治療のための医薬組成物。
【請求項２】
前記式（Ｉ）の化合物が、
１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β，１７−α−トリオール;
３−β−（２−ヒドロキシエトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−アミノエトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−アミノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−メチルアミノエトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（１−イミダゾリル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（２−イミダゾリン−２−イル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（２−アミジノ）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−グアニジノエトキシ）−１７−β−（３−フリル）５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−グアニジノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２，３−ジアミノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１７−β−（３−フリル）−１７−α−メトキシ−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
１７−β−（３−フリル）−１７−α−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
１７−β−（３−フリル）−１７−α−（３−アミノプロポキシ）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−１７−α−メトキシ−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
３−β，１７−α−ビス（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
３−β，１７−α−ビス（３−アミノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
１４−β，１７−α−ジヒドロキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−オン;
３−グアニジノイミノ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β，１７−α−トリオール;
３−β−（２−ヒドロキシエトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−アミノプロポキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１７−β−（４−ピリダジニル）−１７−α−（３−アミノプロポキシ）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−１７−α−メトキシ−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−１７−α−（３−アミノプロポキシ）−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
１４−β，１７−α−ジヒドロキシ−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−３−オン;
３−グアニジノイミノ−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−ヒドロキシエトキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（３−アミノプロポキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−１７−α−メトキシ−１４−β，１５−β−エポキシ−５−β−アンドロスタン;
１７−α−ヒドロキシ−１７−β−（３−フリル）−１４−β，１５−β−エポキシ−５−β−アンドロスタン−３−オン;
３−グアニジノイミノ−１７−β−（３−フリル）−１４−β，１５−β−エポキシ−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１７−α−ジオール;並びに
上述の３−β誘導体の３α誘導体、及び対応する３α及び３−βチオ誘導体（Ｙ＝ＳＲ４）
からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
好ましい化合物が１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β，１７−α−トリオールである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
投与される前記化合物の用量が１日あたり０．０５ｍｇから２０ｍｇである、請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
投与される前記化合物の用量が０．５ｍｇから１５ｍｇである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
投与される前記化合物の用量が５ｍｇから１０ｍｇである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
単回投与計画で投与されるための、請求項４から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
複数回投与計画で投与されるための、請求項４から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、鞘内、脳室内、経皮、経皮膚、皮下、腹腔内、鼻内、腸内、局所、舌下、又は直腸への投与用である、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛋白尿、糸球体硬化、及び腎不全の予防及び／又は治療のための医薬の製造のための有用な薬剤としての、１７−β−（３−フリル）及び（４−ピリダジニル）−５−β，１４−β−アンドロスタン誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク尿なる用語は、タンパク質及び尿に由来し、尿中の過剰な血清タンパク質の存在を意味する。タンパク尿は腎（腎臓）損傷の兆候である可能性がある。血清タンパク質は容易に尿から再吸収されるため、過剰なタンパク質の存在は、吸収が不十分であるか又は濾過に障害があることのいずれかを示す。
【０００３】
タンパク尿は、以下の疾患：
ネフローゼ症候群（すなわち、腎実質性腎不全）；腎臓の中毒性病変；膠原血管病（例えば、全身性エリテマトーデス）；糸球体疾患、例えば、膜性糸球体腎炎、巣状分節状糸球体腎炎；激しい運動；ストレス；糖尿病；薬物（例えば、ＮＳＡＩＤ、ニコチン、ペニシラミン、金及び他の重金属、ＡＣＥ阻害剤、抗生物質、アヘン剤、特にヘロイン）；感染症（例えば、ＨＩＶ、梅毒、肝炎、連鎖球菌感染後感染）；アミノ酸尿；高血圧性腎硬化：間質性腎炎、及び糸球体硬化
の特徴である可能性がある。
【０００４】
糸球体硬化は、腎臓の小血管、糸球体、血液から尿を濾過する腎臓内の機能ユニットの瘢痕化を示す一般的な用語である。糸球体硬化を有する多数の患者は、腎臓が完全に機能しなくなるまで、次第に悪化する。この疾患は、末期腎臓疾患又はＥＳＲＤと称される。ＥＳＲＤを有する患者は、透析（血液透析又は腹膜透析）を受けて血液を浄化するか、又は移植によって新しい腎臓を得なければならない。
【０００５】
腎臓の糸球体は、タンパク質の血漿限外濾過を制御するのに非常に特化した構造である。この制御を確実なものにする具体的な細胞ユニットは有足細胞であり、その機能障害は尿（タンパク尿）のタンパク質の大量の損失に関する。有足細胞の機能は、厳密に、アクチン細胞骨格を調節する特定のタンパク質の制御化にあることがよく知られている。そのような有足細胞タンパク質をコードする遺伝子への変異が、糸球体膜障壁の変化と関連し、かつ、結果として大量のタンパク尿及び腎臓損傷と関連することが知られている。こうした有足細胞タンパク質のうち、ネフリンは、スリット細孔膜の基本的な構成成分であり、Ｓｒｃファミリーキナーゼに属するチロシンキナーゼであるＦｙｎによって媒介されるシグナル伝達経路の活性化を介する細胞骨格動態を調節する（Trends MoI Med. 2007; 13: 396-403）。
【０００６】
アデュシンは、全ての細胞のアクチン−スペクトリン動態の制御に関する細胞骨格タンパク質である。アデュシン遺伝子の多型は、高血圧及び腎不全の進行と関連することが示されている。
【０００７】
実験データによって、α及びβアデュシンが糸球体で発現しており、それらの多型が幾つかの有足細胞タンパク質の発現変化、タンパク尿、及び血圧から独立した動物モデルにおける腎臓損傷の進行に関与していることが示されている（J Hypertension 2003, 21 (Suppl. 4) , abs 4C.4）。
【０００８】
詳細には、正常血圧である、βアデュシン変異体のノックアウトマウスは、対照マウスと比較して、有足細胞タンパク質、例えば、ネフリン、シナプトポジン、α−アクチニン、Ｆｙｎ、及びＺＯ−１の発現増大並びに尿タンパク質の低減を示し（図１）、このことは、血圧調節から独立した糸球体透過性の制御におけるβアデュシンの果たし得る役割を示す。
【０００９】
親の高血圧であるＭＨＳ株（Ｑ５２９Ｒ）に由来するβアデュシン遺伝子変異体を正常血圧であるＭＮＳ背景に遺伝子移入した（BBRC 2004; 324: 562-568）、正常血圧であるコンジェニックのＮＢラットでは、ＭＨＳ株に由来する変異αアデュシンとともに野生型βアデュシンバリアントを有する正常血圧のコンジェニックＮＡ株と比較して、培養した有足細胞で測定した幾つかの有足細胞タンパク質（ネフリン、α−アクチニン、ポドシン、及びＺＯ−１）の発現が低減していることが認められ（図２）、成体ラットの免疫蛍光データ（図３参照）によって示される大量のタンパク尿及び腎臓損傷と関連していた。したがって、これらの発見は、血圧から独立しており、かつ、α変異体バリアントによって調節される、腎機能に対するβアデュシン変異体の病理学的な役割を示す。
【００１０】
ヒト疾患の動物モデルで得られた実験データの妥当性は、αアデュシン変異バリアント（Ｔｒｐ）との相互作用においてβアデュシン変異（ＣＴ＋ＴＴ）を有する際に、ＩｇＡ腎症を有する患者は末期腎不全に向かってより速く進行することを示す、最近の臨床的発見によって支持されている（図４）。
【００１１】
内因性のウアバイン（ＥＯ）は、異なる複数のメカニズム、主に腎臓のＮａ処理の制御によって血圧を調節することができる新規ホルモンとして広く認識されている。ＥＯの高い循環レベルは、高血圧と関連することが認められている。
【００１２】
１７−（３−フリル）及び（４−ピリダジニル）−５−β，１４−β−アンドロスタン誘導体は既知の化合物である。
【００１３】
ＥＰ０５８３５７８Ｂ１は、本願の特許請求の範囲に記載のβ−アンドロスタン誘導体、その製造方法、並びに心不全及び高血圧などの心臓血管疾患の治療のためのそれらの使用を開示している。
【００１４】
ＥＰ０５９０２７１Ｂ１は、１７−アリール及び１７−へテロシクリル−５−α，１４−β−アンドロスタン、アンドロステン、及びアンドロスタジエン誘導体、それらの製造方法、並びに心不全及び高血圧などの心臓血管疾患の治療のためのそれらの使用を開示している。
【００１５】
ＥＰ０５９０２７２Ｂ１は、１７−アリール及び１７−ヘテロシクリル−５−β，１４−β−アンドロスタン誘導体、並びに心不全及び高血圧などの心臓血管疾患の治療のためのそれらの使用を開示している。
【００１６】
ＷＯ２００８１４８８１２は、１７−β−（３−フリル）及び（４−ピリダジニル）−５−β，１４−β−アンドロスタン誘導体、並びに血管形成又は動脈内膜切除後の再狭窄及び器官の線維症による疾患の治療のためのそれらの使用を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】Trends MoI Med. 2007; 13: 396-403
【特許文献２】J Hypertension 2003, 21 (Suppl. 4) , abs 4C.4
【特許文献３】BBRC 2004; 324: 562-568
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】ＥＰ０５８３５７８Ｂ１
【非特許文献２】ＥＰ０５９０２７１Ｂ１
【非特許文献３】ＥＰ０５９０２７２Ｂ１
【非特許文献４】ＷＯ２００８１４８８１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
上述の文献のいずれにおいても、５β，１４β−アンドロスタン誘導体のタンパク尿、糸球体硬化、及び腎不全の予防及び／又は治療のための使用は開示されていない。
【００２０】
ここで、本発明に係る１７−β−（３−フリル）及び（４−ピリダジニル）−５−β，１４−β−アンドロスタン誘導体は、タンパク尿、糸球体硬化、及び腎不全の予防及び治療に有用な薬剤であることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
したがって、本発明の１つの主題は、式（Ｉ）：
【化１】
0005738267.tif 000002
［式中、
【化２】
0005738267.tif 000003
なる記号は、単結合又は二重結合である；
Ｙは、３位の
【化３】
0005738267.tif 000004
が二重結合である際は、酸素又はグアニジノイミノである；
Ｙは、３位の
【化４】
0005738267.tif 000005
が単結合である際は、ヒドロキシ、ＯＲ４、又はＳＲ４であり、α又はβ配置を有してよい；
Ｒは、非置換又は置換された３−フリル又は４−ピリダジニル基である；
Ｒ１は、水素；メチル；又はＯＨ若しくはＮＲ５Ｒ６によって置換されたエチル若しくはｎ−プロピルである；
Ｒ２は、水素であるか、又はＲ３とともにオキシラン環の結合である；
Ｒ３は、水素であるか、又はＲ２とともにオキシラン環の結合である；
Ｒ４は、水素；メチル；又は第四級アンモニウム基、１以上のＯＲ７、ＮＲ８Ｒ９、ホルミル、アミジノ、グアニジノイミノ、若しくはＮＲ８Ｒ９及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ６アルケニル、若しくはＣ２−Ｃ６アシルである；
Ｒ５、Ｒ６は、独立に、水素；メチル；又は１つのＮＲ１０Ｒ１１若しくはＮＲ１０Ｒ１１及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ６アルキルであるか、又はＲ５及びＲ６が、窒素原子とともに、非置換若しくは置換された、飽和若しくは不飽和のペンタ−若しくはヘキサ−モノ複素環（場合によって、酸素、硫黄、若しくは窒素から選択される他の複素原子を含有する）を形成する；
Ｒ７は、水素、メチル、又は１以上のＮＲ１０Ｒ１１若しくはＮＲ１０Ｒ１１及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ４アルキルである；
Ｒ８、Ｒ９は、独立に、水素；メチル；又は１以上のＮＲ１０Ｒ１１若しくはＮＲ１０Ｒ１１及びヒドロキシによって置換されているか若しくは非置換のＣ２−Ｃ６アルキル若しくはＣ３−Ｃ６アルケニルであるか、又はＲ８及びＲ９が、窒素原子とともに、非置換若しくは置換された、飽和若しくは不飽和のペンタ−若しくはヘキサ−モノ複素環（場合によって、酸素、硫黄、若しくは窒素から選択される他の複素原子を含有する）を形成するか、又はＲ８が水素であり、かつ、Ｒ９がアミジノであるか；又はＮＲ８Ｒ９がプロパルギルアミノである；
Ｒ１０、Ｒ１１は、独立に、水素若しくはＣ１−Ｃ６アルキルであるか、又はＲ１０及びＲ１１が、窒素原子とともに、飽和若しくは不飽和のペンタ−若しくはヘキサ−モノ複素環を形成する］
の化合物である。
【００２２】
本発明には、基剤の生物学的活性を保持しており、かつ、既知の製薬学的に許容される酸、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、リンゴ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、メタンスルホン酸、又は安息香酸に由来する、（Ｉ）の製薬学的に許容される塩も含まれる。
【００２３】
前記アルキル及びアルケニル基は、分枝鎖又は直鎖の基であってよい。
【００２４】
前記Ｃ１−Ｃ６アルキル基は、好ましくは、Ｃ１−Ｃ４アルキル基であり、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルである。
【００２５】
前記Ｃ２−６アルキル基は、好ましくは、Ｃ２−４アルキル基であり、例えば、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルである。
【００２６】
前記Ｃ３−６アルケニル基は、好ましくは、Ｃ３−４アルケニル基であり、例えば、２−プロペニル、２−ブテニルである。
【００２７】
前記Ｃ２−Ｃ６アシルは、好ましくは、Ｃ２−４アシル基であり、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリルである。
【００２８】
前記第四級アンモニウム基は、好ましくは、トリメチルアンモニウム基、Ｎ−メチルピロリジニウム基、又はＮ−メチルピペリジニウム基である。
【００２９】
前記ＯＲ７基は、好ましくは、ヒドロキシ、２−アミノエトキシ、３−アミノプロポキシ、２−ジメチルアミノエトキシ、２−ジエチルアミノエトキシ、３−ジメチルアミノプロポキシ、３−アミノ−２−ヒドロキシプロポキシ、２，３−ジアミノプロポキシ、２−（１−ピロリジニル）エトキシ、３−（１−ピロリジニル）プロポキシである。
【００３０】
前記ＮＲ５Ｒ６基は、好ましくは、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニル、モルホリノ、ピペラジニル、１−イミダゾリル、２−アミノエチルアミノ、３−アミノプロピルアミノである。
【００３１】
前記ＮＲ８Ｒ９基は、好ましくは、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソ−プロピルアミノ、アリルアミノ、プロパルギルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニル、モルホリノ、ピペラジニル、１−イミダゾリル、１−グアニジノ、２−アミノエチルアミノ、３−アミノプロピルアミノ、２−（１−ピロリジニル）エチルアミノ、３−（１−ピロリジニル）プロピルアミノ、３−アミノ−２−ヒドロキシプロピルアミノ、３−（１−ピロリジニル）２−ヒドロキシプロピルアミノ、２，３−ジアミノプロピルアミノ、（２−（１−ピロリジニル）エチル）メチルアミノである。
【００３２】
本発明に係る特定の化合物の好ましい例は、抗タンパク尿薬として使用するための、
１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β，１７−α−トリオール;
３−β−（２−ヒドロキシエトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−アミノエトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−アミノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−メチルアミノエトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（１−イミダゾリル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（２−イミダゾリン−２−イル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（２−アミジノ）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−グアニジノエトキシ）−１７−β−（３−フリル）５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−グアニジノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２，３−ジアミノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１７−β−（３−フリル）−１７−α−メトキシ−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
１７−β−（３−フリル）−１７−α−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
１７−β−（３−フリル）−１７−α−（３−アミノプロポキシ）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−１７−α−メトキシ−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
３−β，１７−α−ビス（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
３−β，１７−α−ビス（３−アミノプロポキシ）−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
１４−β，１７−α−ジヒドロキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−オン;
３−グアニジノイミノ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β，１７−α−トリオール;
３−β−（２−ヒドロキシエトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−アミノプロポキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
３−β−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１７−β−（４−ピリダジニル）−１７−α−（３−アミノプロポキシ）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β−ジオール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−１７−α−メトキシ−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（４−ピリダジニル）−１７−α−（３−アミノプロポキシ）−５−β−アンドロスタン−１４−β−オール;
１４−β，１７−α−ジヒドロキシ−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−３−オン;
３−グアニジノイミノ−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−１４−β，１７−α−ジオール;
１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１７−α−ジオール;
３−β−（２−ヒドロキシエトキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（３−アミノプロポキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（３−（１−ピロリジニル）プロポキシ）−１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
３−β−（２−（１−ピロリジニル）エトキシ）−１７−β−（３−フリル）−１７−α−メトキシ−１４−β，１５−β−エポキシ−５−β−アンドロスタン;
１７−α−ヒドロキシ−１７−β−（３−フリル）−１４−β，１５−β−エポキシ−５−β−アンドロスタン−３−オン;
３−グアニジノイミノ−１７−β−（３−フリル）−１４−β，１５−β−エポキシ−５−β−アンドロスタン−１７−α−オール;
１４−β，１５−β−エポキシ−１７−β−（４−ピリダジニル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１７−α−ジオール;並びに
上述の３−β誘導体の３α誘導体、及び対応する３α及び３−βチオ誘導体（Ｙ＝Ｓ）である。
【００３３】
本発明に係る特定の化合物の最も好ましい例は、１７−β−（３−フリル）−５−β−アンドロスタン−３−β，１４−β，１７−α−トリオールであり、以下においては、「ロスタフロキシン」又は「ＰＳＴ２２３８」と称する。
【００３４】
本発明のさらなる主題は、抗糸球体硬化薬として使用するための式（Ｉ）の化合物である。
【００３５】
本発明のさらなる主題は、抗腎不全薬として使用するための式（Ｉ）の化合物である。
【００３６】
本発明のさらなる主題は、タンパク尿、糸球体硬化、及び腎不全の予防又は治療のための医薬の製造のための、式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００３７】
本発明のさらなる主題は、式（Ｉ）の化合物の治療上有効量を投与する工程を含む、タンパク尿、糸球体硬化、又は腎不全に罹患した哺乳動物の治療方法である。本明細書で使用する用語「治療上有効量」は、標的とする病気又は疾患を治療又は改善するために必要な治療剤の量、又は検出可能な治療効果を示すために必要な治療剤の量である。
【００３８】
任意の化合物に関して、治療上有効量は、細胞培養アッセイ又は動物モデル、通常はマウス、ウサギ、イヌ、又はブタのいずれかにおいて最初に見積もることができる。
【００３９】
前記動物モデルを使用して、適当な濃度範囲及び投与経路を決定してもよい。そのような情報は、次いで、ヒトに投与するための有用な投与量及び経路の決定に使用することができる。
【００４０】
ヒトの対象に対する正確な有効量は、疾患状態の重度、対象の一般的な健康、対象の年齢、体重、及び性別、食事、投与時間及び頻度、併用薬、反応感度、及び治療に対する耐性／反応に依存する。この量は、ルーチンな実験によって決定されてよく、臨床医の判断の内にあってよい。一般的には、１日あたりの有効量は、０．０５ｍｇから２０ｍｇ、好ましくは０．５ｍｇから１５ｍｇ、最も好ましくは５ｍｇから１０ｍｇであろう。
【００４１】
投与処置は、医師の判断によって、単回投与計画又は複数回投与計画であってよい。
【００４２】
組成物は、患者に個別に投与されてよく、又は他の薬剤、薬物、又はホルモンと併用して投与してよい。
【００４３】
医薬は、治療剤の投与のための、製薬学的に許容される担体も含有してよい。そのような担体は、抗体並びに他のポリペプチド、遺伝子、及び他の治療剤、例えば、リポソームを含むが、前記担体は、それ自体で、組成物を接種する個体に有害な抗体の産生を誘導せず、過度の毒性なしで投与され得る。
【００４４】
適切な担体は、大きく、ゆっくりと代謝される高分子、例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、アミノ酸ポリマー、アミノ酸コポリマー、及び不活性ウイルス粒子であってよい。
【００４５】
製薬学的に許容される担体の詳細な議論が、Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., N. J.1991)で得られる。
【００４６】
治療用組成物中の製薬学的に許容される担体は、追加で、液体、例えば、水、生理食塩水、グリセロール、及びエタノールを含有してよい。加えて、補助的な物質、例えば、湿潤剤又は乳化剤及びｐＨ干渉物質などが、そのような組成物中に存在してよい。そのような担体は、患者による摂取のために、医薬組成物を錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、及び懸濁剤などに製剤化することを可能にする。
【００４７】
一度製剤化されると、本発明の組成物は、対象に直接投与することができる。治療対象は動物であってよく、特にヒトの対象を治療することができる。
【００４８】
本発明の医薬は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、鞘内、脳室内、経皮若しくは経皮膚適用、皮下、腹腔内、鼻内、腸内、局所、舌下、直腸への手段、又は外科手術後の疾患組織への局所的な投与を含むが、それらに限らない、任意の数の経路で投与されてよい。本発明の化合物は、制御放出マトリックスに組み込まれたステントに適用（コーティング）してもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１は、野生型（ＷＴ）の対照と比較した、βアデュシンのノックアウト（ＫＯ）を行ったマウスにおける尿のタンパク質排出（ｍｇ／６ｈ）のレベルを表わす。オスのマウスは１１月齢であり、尿のタンパク質排出は、代謝ケージに入れた各マウスから６時間にわたって回収した尿で測定した。データは、１５ＷＴ及び１９ＫＯマウスの平均±標準誤差である。統計分析は、スチューデントのｔ試験で実施した。図は、６時間の尿のタンパク質排出が、ＷＴマウスと比較して、βアデュシンのＫＯマウスにおいて顕著に低減（３０％）していたことを示す。
【図２】図２は、コンジェニックのＮＢ及びＮＡ株に由来する新生児（１０日齢未満）のラットから得られた培養有足細胞で発現している有足細胞タンパク質（ネフリン、α−アクチニン、ＺＯ−１、ポドシン、α−アデュシン、及びアクチン）の量を表わす。有足細胞タンパク質は、適当な抗体を用いてウエスタンブロットによって有足細胞抽出物で定量した（棒グラフの上の代表的なトレースを参照のこと）。データは、各株について、４から２４時間の範囲で幾つかの実験の平均±標準誤差として記載している。統計分析は、スチューデントのｔ試験で実施した。図は、ハウスキーパータンパク質であるアクチンは同様あるのに対し、ネフリン、α−アクチニン、ＺＯ−１、ポドシン、及びα−アデュシンの量が、野生型のバリアントを有するＮＡ対照と比較して、β−アデュシン変異体を有するＮＢ正常血圧ラットに由来する有足細胞において堅著に低減することを示す。
【図３】図３は、野生型のバリアントを有するＮＡ対照と比較した、β−アデュシン変異体を有するＮＢ正常血圧ラットに由来する腎糸球体において免疫蛍光によって検出可能な幾つかの有足細胞タンパク質（ネフリン、シナプトポジン、α−アクチニン、ＺＯ−１、Ｆｙｎ、及びビメンチン）の発現を表わす。図は、ＮＡラットと比較してＮＢではこれらのタンパク質の発現が劇的に低減するが、有足細胞体に局在するマイクロフィラメントであるビメンチンは２つの株で正常に発現することを示す。
【図４】図４は、α−アデュシン（ＡＤＤ１，Ｇｌｙ４６０Ｔｙｒ）及びβ−アデュシン（ＡＤＤ２，Ｃ３９９Ｔ）遺伝子型によって４つの群に細分されたＩｇＡ腎症の患者の経時的な糸球体濾過速度（ＧＦＲ）（ｍｌ．分−１．年−１）の低下として評価した腎不全の進行を示す。速度低下に対する２つの遺伝子の間の相互作用が顕著に認められた。
【図５】図５は、コンジェニックＮＢ株由来の新生児（１０日齢未満）ラットから得られ、ロスタフロキシン１０−９Ｍとともに又はそれ無しで５日間インキュベートした培養有足細胞で発現した有足細胞タンパク質（ネフリン、ＺＯ−１、ポドシン、α−アデュシン、シナプトポジン、及びアクチン）の量を示す。有足細胞タンパク質は、適当な抗体を用いてウエスタンブロットによって有足細胞抽出物で定量した。データは、幾つかの実験の平均±標準誤差として記載している。統計分析は、スチューデントのｔ試験によって実施した。図は、ネフリン、ＺＯ−１、ポドシン、α−アデュシン、及びシナプトポジンの量が、１０−９Ｍのロスタフロキシンの存在下で培養した有足細胞において増大しているが、アクチンは増大しないことを示す。
【図６】図６は、対照の生理食塩水を注入したラット又はロスタフロキシン１００μｇ／ｋｇ／日で八週間にわたって経口処理したＯＳラットと比較した、ウアバイン（ＯＳ）を長期間注入したラット及び媒体で処理したラットの最大血圧（ＳＢＰ）、尿のタンパク質排出、腎皮質由来のネフリンの量を表わす。データは、各群について八匹のラットの平均±標準誤差として記載している。統計分析は、スチューデントのｔ試験によって実施した。図は、ロスタフロキシンがＳＢＰ及び尿のタンパク質排出を顕著に低減するが、ＯＳラットのネフリン発現を増大し、かくして、ウアバインの腎臓に対する効果をアンタゴナイズすることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
以下の非限定的な実施例によって、本発明をさらに説明する。
【００５１】
（実施例１）
有足細胞タンパク質の損失を妨げる本発明の化合物の活性を試験するために、βアデュシン変異を有するコンジェニックのＮＢラット（Tripodi G. et at Effect of Addl gene transfer on blood pressure in reciprocal congenic strains of Milan rats. BBRC 2004; 324: 562-568）を使用した。前記ＮＢラットは、非高血圧ラットであり、Prassis Research Institute, Sigma- tau, Italyで得られる。
【００５２】
有足細胞単離及び培養に７から１０日齢のＮＢラットを使用した。ＮＢラット由来の有足細胞を、１０−９Ｍでロスタフロキシンとともに（ＮＢ ｎ＝５）又はなしで（ＮＢ対照、ｎ＝４）、５日間にわたってインキュベートした。インキュベートの５日目の終わりに、ウエスタンブロットによって有足細胞タンパク質を定量した。ウエスタンブロットによる定量は、各有足細胞マーカーについて２から３回繰り返した。表１Ａ及び１Ｂは、繰り返しの値の平均として、各条件について分析した有足細胞サンプルの最終的な数を示す（ＮＢ対照、ｎ＝４；ＮＢ＋ロスタフロキシン、ｎ＝５）。デンシトメトリー分析は、任意単位において光学密度として定量した。
【００５３】
有足細胞単離及び培養有足細胞中のタンパク質定量
ふるい及びさらなる手作業の精製によって、糸球体をＮＢ腎臓から単離した。次いで、３７℃で５％ＣＯ２雰囲気下において、コラーゲンタイプＩＶ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で事前にコーティングした培養フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）に糸球体を播種した。４から５日目に、有足細胞の増殖が始まり、８日目までに糸球体をトリプシン−ＥＤＴＡを使用して剥ぎ取った。光学顕微鏡を用いた検査によって９０％超の純度であった２代継代の有足細胞をフラスコ及びチャンバースライドに播種した。有足細胞タンパク質定量（１０μｇタンパク質／レーン）を、ネフリン、ポドシン、ＺＯ−１、アデュシン、シナプトポジン、及びアクチンに対する特異的な抗体を使用してウエスタンブロット技術によって実施した。
【００５４】
得られた結果を、表１Ａ、１Ｂ、及び図５に記載する。
【表１Ａ】
0005738267.tif 000006
【表１Ｂ】
0005738267.tif 000007
【００５５】
得られた結果は、本発明の化合物が、βアデュシン変異によって誘導された有足細胞タンパク質の損失に対してアンタゴナイズすることができ、かくして、糸球体濾過障壁の正常な機能に有利に働き、かつ、正常血圧の実験モデルにおけるタンパク尿を低減することができることを示す。
【００５６】
（実施例２）
タンパク尿及び腎臓の糸球体タンパク質損失を妨げる本発明の化合物の活性を試験するために、長期間にわたってウアバイン（ＯＳラット）又は生理食塩水（対照ラット）を注入したラットを使用した。
【００５７】
２つの群の２月齢のＯＳラット（各々、ｎ＝８）を、媒体（メトセル０．５％）又はロスタフロキシン（１００μｇ／ｋｇ）を８週間にわたって強制飼養によって経口処理した。生理食塩水を注入したラットの１つの群は対照として使用した。この期間の後に、最大血圧及び尿のタンパク質排出を３つの群で測定した。次いで、３つの群の動物を屠殺して、ウエスタンブロットによって腎皮質ミクロソームのネフリン定量を実施した。
【００５８】
ウアバイン注入
１００から１１０ｇの体重の三週齢のオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ，ＩＮ）に、浸透圧ミニポンプを皮下に移植し、１５μｇ／ｋｇ／日のウアバイン（ＯＳラット、ｎ＝１６）を１４週間にわたって放出させるか、又は滅菌生理食塩水（ＣＳラット、ｎ＝８）を放出させた（Ferrari P. et al. J. Pharmacol Exp. Ther. 1998; 285: 83-94）。ウアバイン注入から６週間目に、ＯＳラットを２つの群にランダムに割り当てた（各々、ｎ＝８）。第一の群（ＯＳ処理）は、０．５％ ｗ／ｖメトセルに懸濁したロスタフロキシンを経口で１００μｇ／ｋｇ／日摂取し、第二の群（対照）は媒体のみを接種した。最大血圧（ＳＢＰ）及び心拍（ＨＲ）を、Ｔａｉｌ−Ｃｕｆｆプレチスモグラフィー（ＢＰ Ｒｅｃｏｒｄｅｒ, Ｕ. Ｂａｓｉｌｅ, Ｉｔａｌｙ）によって意識のあるラットで毎週測定した。
【００５９】
尿のパラメータの測定のための生化学アッセイ
処理の１２週目に、意識のあるＯＳ及び対照ラットで尿のパラメータを測定した。ラットは個々の代謝ケージに入れて、一日間順応させた。２４時間の尿の回収を午前９時に開始した。尿の回収の間に、ラットは自由に水及び食料を入手できた。遠心分離（２０分間、４５００ｒｐｍ；Ｖａｒｉｆｕｇｅ ３．２ ＲＳ，Ｈａｅｒｅｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＡＨＳＩ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）の後に、ラットの尿を尿の容量（ｍｌ）について分析し、Ｍｅｔｔｌｅｒ精密てんびんで尿の容器を秤量することによって定量し、尿のｐＨ（ｐＨＭ８３，Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ）を測定し、及び全尿タンパク質排出（ｍｇ／２４ｈ）を標準的なトータルプロテインキット（Ｓｅｎｔｉｎｅｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）を用いて測定した。次いで、三つの群の動物を屠殺し、腎皮質ミクロソームを各ラットから調製し、スリット隔膜の重要なタンパク質であるネフリンをウエスタンブロットで定量した。サンプルをＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、ブロットし、特異的な一次抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ社製抗ネフリン；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製抗アクチン）とともに４度で一晩にわたってインキュベートし、その後に蛍光二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ）とともに１時間にわたってインキュベートし、次いで、Ｏｄｙｓｓｅｙ Ｉｎｆｒａｒｅｄ Ｉｍａｇｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ−ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって分析及び定量した。ネフリン定量は、任意単位である光学密度として表わしている。
【００６０】
得られた結果は、以下の表２Ａ、２Ｂ、２Ｃ，及び図６に記載する。
【表２Ａ】
0005738267.tif 000008
【表２Ｂ】
0005738267.tif 000009
【表２Ｃ】
0005738267.tif 000010
【００６１】
得られた結果は、本発明の化合物が、血圧、尿のタンパク質排出、及び糸球体タンパク質損失に対するウアバインの病理学的効果に対してアンタゴナイズし、かくして、血圧を低下し、糸球体ネフリン発現を回復し、かつ、タンパク尿を低減することができることを示す。
【図１】
0005738267.tif 000015
【図２】
0005738267.tif 000016
【図３】
0005738267.tif 000017
【図４】
0005738267.tif 000018
【図５】
0005738267.tif 000019
【図６】
0005738267.tif 000020