(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式：
【化１】
0005694172.tif 000094
（式中、
Ｒaは、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ1〜6ハロアルキル、シクロアルキル、ＯＲe、およびＮ(Ｒe)2からなる群から選択されるか、あるいは、ＲaおよびＲ1またはＮＲeおよびＲ1のいずれかは、それらが結合する炭素原子と一緒に５員もしくは６員のシクロアルカノンまたはラクタム(窒素原子はアルキル基で置換されていてもよい)を形成し；
Ｒbは、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ1〜6ハロアルキル、シクロアルキル、ＯＲe、およびＮ(Ｒe)2からなる群から選択されるか、あるいは、ＲbおよびＲ6またはＮＲeおよびＲ6のいずれかは、それらが結合する炭素原子と一緒に５員もしくは６員のシクロアルカノンまたはラクタム(窒素原子はアルキル基で置換されていてもよい)を形成し；
Ｒcは、水素、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ1〜6ヒドロキシアルキル、およびシクロアルキルからなる群から選択されるか、または、ＲcおよびＲdは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい５員、６員、もしくは７員の脂肪族環を形成し；
Ｒdは、水素、Ｃ1〜6アルキル、およびシクロアルキルからなる群から選択されるか、または、ＲdおよびＲ7は、それらが結合する原子と一緒に５員もしくは６員の脂肪族環を形成し；
Ｒeは、独立に、水素、およびＣ1〜6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6は、独立に、水素、Ｃ1〜6アルキル、ハロ、およびＯＲeからなる群から選択され；
Ｒ7は、水素、およびＣ1〜6アルキルからなる群から選択され；かつ
ｎは、１、２、３、４または５である）
で表わされる化合物またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物。
【請求項２】
以下の構造式：
【化２】
0005694172.tif 000095
（式中、
Ｒaは、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜4ハロアルキル、Ｃ3〜5シクロアルキル、Ｎ(Ｒe)2、もしくはＯＲeであるか、またはＲaおよびＲ1は、それらが結合する炭素原子と一緒に５員もしくは６員のシクロアルカノンまたはラクタム(窒素原子はアルキル基で置換されていてもよい)を形成し；
Ｒbは、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜4ハロアルキル、Ｃ3〜5シクロアルキル、Ｎ(Ｒe)2、もしくはＯＲeであるか、またはＲbおよびＲ6は、それらが結合する炭素原子と一緒に５員もしくは６員の脂肪族炭素環式環または１つの窒素原子を含有する５員もしくは６員のシクロアルカノンまたはラクタム(窒素原子はアルキル基で置換されていてもよい)を形成し；
Ｒcは、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ3〜5シクロアルキル、またはＣ1〜3ヒドロキシアルキルであり；
Ｒdは、水素、Ｃ1〜4アルキル、もしくはＣ3〜5シクロアルキルであるか、またはＲdおよびＲ7は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する５員もしくは６員の脂肪族環を形成するか、またはＲcおよびＲdは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい６員もしくは７員の脂肪族環を形成し；
Ｒeは、独立に、水素またはＣ1〜3アルキルであり；
Ｒ1は、水素またはＣ1〜3アルキルであり；
Ｒ2は、水素、ヒドロキシ、またはＣ1〜3アルコキシであり；
Ｒ3およびＲ4は、独立に、水素またはＣ1〜3アルキルであり；
Ｒ5は、水素、ヒドロキシ、Ｃ1〜3アルコキシ、またはハロであり；
Ｒ6は、水素、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、またはハロであり；
Ｒ7は、水素またはＣ1〜3アルキルであり；かつ
ｎは、１、２、３、４または５である）
で表わされる請求項１記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物。
【請求項３】
以下の構造式：
【化３】
0005694172.tif 000096
（式中、
Ｒaは、メチル、エチル、ｎ-プロピル、シクロプロピル、ＮＨ(ＣＨ3)、もしくはＯＣＨ3であるか、またはＲaおよびＲ1は、それらが結合する炭素原子と一緒に５員のシクロアルカノンまたはラクタム(窒素原子はアルキル基で置換されていてもよい)を形成し；
Ｒbは、メチル、エチル、ｎ-プロピル、シクロプロピル、ＮＨ(ＣＨ3)、もしくはＯＣＨ3であるか、またはＲbおよびＲ6は、それらが結合する炭素原子と一緒に５員のシクロアルカノンまたはラクタム(窒素原子はアルキル基で置換されていてもよい)を形成し；
Ｒcは、メチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、シクロブチル、または２-ヒドロキシエチルであり；
Ｒdは、水素、メチル、エチル、もしくはシクロブチルであるか、またはＲdおよびＲ7は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する５員の脂肪族環を形成するか；またはＲcおよびＲdは、一緒になってモルホリノ部分；ピペリジニル部分；
【化４】
0005694172.tif 000097
部分、もしくは
【化５】
0005694172.tif 000098
部分を形成し；
Ｒ1は、水素であり；
Ｒ2は、水素、ヒドロキシ、またはメトキシであり；
Ｒ3およびＲ4は、水素であり；
Ｒ5は、水素、ヒドロキシ、メトキシ、またはフルオロであり；
Ｒ6は、水素、メチル、メトキシまたはフルオロであり；
Ｒ7は、水素であり；かつ
ｎは、１または２である）
で表わされる請求項１記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物。
【請求項４】
以下の構造式：
【化６】
0005694172.tif 000099
（式中、
Ｒfは、水素、およびＣ1〜6アルキルからなる群から選択されるか、またはＲfおよびＲgは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい５員、６員、もしくは７員の脂肪族環を形成し；
Ｒgは、水素、およびＣ1〜6アルキルからなる群から選択されるか、またはＲgおよびＲ8は、それらが結合する原子と一緒に５員もしくは６員の脂肪族環を形成し；
Ｒ8は、水素、およびＣ1〜6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、およびＲ14は、独立に、水素、Ｃ1〜6アルキル、ハロ、およびＣ1〜6アルコキシからなる群から選択され；
ｐは、０、１、２、３、４または５であるが、
ただし、ｐが２である場合、ＲfおよびＲgのうちの１つはエチルとは異なる）
で表わされる化合物またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物。
【請求項５】
以下の構造式：
【化７】
0005694172.tif 000100
（式中、
Ｒfは、Ｃ1〜6アルキルであり；
Ｒgは、水素もしくはＣ1〜4アルキルであるか、またはＲgおよびＲ7は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する５員もしくは６員の脂肪族環を形成し；
Ｒ9は、水素またはＣ1〜3アルキルであり；
Ｒ10は、水素、ヒドロキシ、またはＣ1〜3アルコキシであり；
Ｒ11およびＲ12は、独立に、水素またはＣ1〜3アルキルであり；
Ｒ13は、水素、ヒドロキシ、Ｃ1〜3アルコキシ、またはハロであり；
Ｒ14は、水素、Ｃ1〜3アルキル、またはＣ1〜3アルコキシであり；
Ｒ8は、水素またはＣ1〜3アルキルであり；かつ
ｐは、０、１、２、３、４または５であるが、
ただし、ｐが２である場合、ＲfおよびＲgのうちの１つはエチルとは異なる）
で表わされる請求項４記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物。
【請求項６】
以下の構造式：
【化８】
0005694172.tif 000101
（式中、
Ｒfは、メチルまたはエチルであり；
Ｒgは、水素もしくはメチルであるか、またはＲgおよびＲ8は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する５員の脂肪族環を形成し；
Ｒ8は、水素であり；かつ
ｐは、１または２である）
で表わされる請求項４記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物。
【請求項７】
Ｒaは、メチル、エチル、ＮＨ(ＣＨ3)、ＯＣＨ3であるか、またはＲ1と５員の脂肪族環を形成し、
Ｒbは、メチル、エチル、ＮＨ(ＣＨ3)、ＯＣＨ3であるか、またはＲ6と５員の脂肪族環を形成するか、またはＲ6と５員の窒素含有脂肪族環を形成し、かつ
Ｒdは、水素、メチル、エチルであるか、またはＲ7と５員の脂肪族環を形成する、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1は、水素であるか、またはＲaと5員の脂肪族環を形成し、
Ｒ2は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ3は、水素であり、
Ｒ4は、水素であり、
Ｒ5は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ6は、水素であるか、Ｒbと５員の脂肪族環を形成するか、またはＲbと５員の窒素含有脂肪族環を形成し、
Ｒ7は、水素であるかまたはＲdと５員環を形成し、かつ
ｎは、２または３である、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
Ｒfは、メチルまたはエチルであり、
Ｒgは、水素、メチル、エチルであるか、またはＲfおよびＲ8と５員の窒素含有脂肪族環を形成するか、またはＲ8は水素であり；
Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、およびＲ14は水素であり、
ｐは、２または３である、請求項４記載の化合物。
【請求項１０】
以下の構造式：
【化９】
0005694172.tif 000102
で表わされる化合物。
【請求項１１】
【化１０】
0005694172.tif 000103
【化１１】
0005694172.tif 000104
【化１２】
0005694172.tif 000105
【化１３】
0005694172.tif 000106
【化１４】
0005694172.tif 000107
【化１５】
0005694172.tif 000108
【化１６】
0005694172.tif 000109
からなる群から選択される化合物。
【請求項１２】
【化１７】
0005694172.tif 000110
【化１８】
0005694172.tif 000111
からなる群から選択される請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
以下の構造式：
【化１９】
0005694172.tif 000112
で表わされる化合物。
【請求項１４】
治療有効量の請求項１乃至１３のいずれかに記載の化合物または以下の構造式：
【化２０】
0005694172.tif 000113
で表わされる化合物１００を含む、ことを特徴とする癌を治療するための医薬組成物。
【請求項１５】
前記癌が、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結直腸癌、腎臓癌、肝癌、肺癌、小細胞性肺癌、非小細胞性肺癌、肺腺癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿生殖器癌、リンパ系の癌、直腸癌、咽頭癌、膵臓癌、膵外分泌癌、食道癌、胃癌、胆嚢癌、子宮頸癌、甲状腺癌、皮膚癌、扁平上皮癌、白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄球性白血病、前骨髄球性白血病、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、シュワン腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、濾胞性甲状腺癌、奇形癌腫、腎細胞癌、骨髄腫、骨髄球性白血病、リンパ芽球性白血病、神経膠芽腫、頭頸部癌、外陰癌、リンパ腫、卵嚢癌、脳腫瘍、固形腫瘍、悪性腫瘍、粘液性肉腫、円形細胞癌、局所的に進行した腫瘍、転移性癌、ヒト軟部肉腫、ユーイング肉腫、リンパ行性転移、頭頸部扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、口腔癌、血液細胞の悪性腫瘍、多発性骨髄腫、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、体液性リンパ腫、体腔性リンパ腫、胸腺リンパ腫肺癌、小細胞癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、副腎皮質の癌、ＡＣＴＨ産生腫瘍、非小細胞癌、腺管癌、胃腸癌、結腸直腸癌、結腸直腸の新生物に関連するポリープ、泌尿器の癌、原発性表在性膀胱腫瘍、膀胱の浸潤性移行上皮癌、筋肉浸潤性膀胱癌、原発性腹膜上皮新生物、子宮内膜癌、膣内癌、子宮癌、卵胞の固形腫瘍、男性生殖器の悪性腫瘍、陰茎癌、腎癌、脳癌、星状細胞脳腫瘍、中枢神経系における転移性腫瘍細胞浸潤、骨癌、骨腫、悪性黒色腫、ヒトの皮膚の角化細胞の腫瘍進行、扁平上皮細胞癌、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、腹水、悪性胸水、中皮腫、ウィルムス腫瘍、絨毛性新生物、血管外皮腫、カポジ肉腫、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される請求項１４記載の組成物。
【請求項１６】
化学療法剤、放射線療法、微小管作用薬、細胞分裂抑制剤、TNFポリペプチド、およびこれらの混合物のいずれかをさらに含む請求項１４または１５記載の組成物。
【請求項１７】
治療有効量の請求項１乃至１３のいずれかに記載の化合物または以下の構造式：
【化２１】
0005694172.tif 000114
で表わされる化合物１００を含む、ことを特徴とする炎症性疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項１８】
前記炎症性疾患が、関節リウマチ、乾癬、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、全身性紅斑性狼瘡(ＳＬＥ)、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】
免疫抑制薬をさらに含む請求項１７または１８記載の組成物。
【請求項２０】
微生物、原虫、または、ウイルスに起因する感染症を治療するための医薬組成物であって、治療有効量の請求項１乃至１３のいずれかに記載の化合物または以下の構造式：
【化２２】
0005694172.tif 000115
で表わされる化合物１００を含む、ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２１】
前記感染症が、マラリアである請求項２０記載の組成物。
【請求項２２】
アテローム性動脈硬化症、再狭窄、血管炎、腎炎、網膜症、腎臟病、増殖性皮膚障害、乾癬、ケロイド瘢痕、日光角化症、スティーブンス・ジョンソン症候群、全身型若年性慢性関節炎、骨粗鬆症、全身性エリテマトーデス、眼の過剰増殖性疾患、上皮の深行増殖、増殖性硝子体網膜症、糖尿病性網膜症、血管増殖性疾患、魚鱗癬、乳頭腫、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される疾患を治療するための医薬組成物であって、治療有効量の請求項１乃至１３のいずれかに記載の化合物または以下の構造式：
【化２３】
0005694172.tif 000116
で表わされる化合物１００を含む、ことを特徴とする医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、2008年10月6日出願の米国仮特許出願第61/102,913号の利益を主張する。この仮特許出願は、その全体を引用して本願明細書に援用する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、カルバゾール化合物、当該化合物を製造する方法、当該化合物を含有する医薬組成物、および治療薬としてのそれらの使用に関する。特に、本発明は、カルバゾール化合物、および癌の治療を含めた様々な治療領域におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
国民の高齢化に伴い、ヒトにおける癌の発生頻度は先進国世界で増大してきた。いくつかの種類の癌および診断時の病期については、罹患率および死亡率は、広範囲にわたる研究にもかかわらず、近年、著しい改善はなされてきていない。細胞死の誘導は、最も興味を惹く癌治療戦略のうちの１つである。腫瘍細胞において細胞死を誘導することができ、かつ／または化学療法および放射線療法を増強する薬剤を同定することが重要なニーズとなっている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、細胞死を誘導する化合物および組成物、ならびに治療を必要とする個体における癌および他の状態の治療におけるその化合物の治療用途に関する。本発明はまた、当該治療用化合物を製造する方法にも関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
より具体的には、本発明は、癌、炎症性疾患、微生物感染症、ウイルス感染症、および原虫感染症などの疾患および状態を治療する、化合物および方法に関する。当該化合物は、治療上有効量の構造式(I)の化合物を、必要とする個体に投与することを含む方法に有用である。
【０００６】
特に、本発明は構造式(I)を有するカルバゾール化合物：
【化１】
0005694172.tif 000002
（式中、Raは、水素、C1〜6アルキル、C1〜6ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ORe、N(Re)2、およびSReからなる群から選択されるか；あるいは、RaおよびR1またはNReおよびR1のいずれかは、それらが結合する炭素原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族の炭素環式環または複素環式環を形成し；
Rbは、水素、C1〜6アルキル、C1〜6ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ORe、N(Re)2、およびSReからなる群から選択されるか、あるいは、RbおよびR6またはNReおよびR6のいずれかはそれらが結合する炭素原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族炭素環式環または5員もしくは6員の脂肪族の炭素環式環または複素環式環を形成し；
Rcは、水素、C1〜6アルキル、C1〜6ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Reからなる群から選択されるか、またはRcおよびRdは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい5員、6員、もしくは7員の脂肪族環を形成し；
Rdは、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Reからなる群から選択されるか、またはRdおよびR7は、それらが結合する原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
Reは、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択されるか、または２つのRe基は、それらが結合する窒素と一緒になって5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、ORe、C(=O)Re、C(=O)ORe、OC(=O)Re、C(=O)N(Re)2、C(=O)NReSO2Re、N(Re)2、NReC(=O)Re、NReC(=O)N(Re)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRe、SORe、SO2R6、SO2N(Re)2、およびOSO2CF3からなる群から選択され；
R7は、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択され；かつ
nは0、1、2、3、4、または5である）
またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物に関する。
【０００７】
本発明はまた、構造式(II)を有するカルバゾール化合物：
【化２】
0005694172.tif 000003
（式中、Rfは、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Rhからなる群から選択されるか、またはRfおよびRgは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい5員、6員、もしくは7員の脂肪族環を形成し；
Rgは、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Rhからなる群から選択されるか、またはRgおよびR8は、それらが結合する原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
Rhは、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択されるか、または２つのRh基は、それらが結合する窒素と一緒になって5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
R8は、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択され；
R9、R10、R11、R12、R13、およびR14は、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、ORh、C(=O)Rh、C(=O)ORh、OC(=O)Rh、C(=O)N(Rh)2、C(=O)NRhSO2Rh、N(Rh)2、NReC(=O)Rh、NRhC(=O)N(Rh)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRh、SORh、SO2Rh、SO2N(Rh)2、およびOSO2CF3からなる群から選択され；
pは0、1、2、3、4、または5であるが、
ただしpが2である場合、RfおよびRgのうちの１つはエチルとは異なる）
またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物に関する。
【０００８】
本発明に従って治療することができる疾患または状態としては、例えば、癌、炎症、自己免疫疾患、微生物感染症、原虫感染症、ウイルス感染症、移植片対宿主病、HIV感染に関連する状態、または前癌細胞が挙げられる。治療することができる癌の形態としては、腎細胞癌、肉腫、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、骨髄腫、骨髄球性白血病およびリンパ芽球性白血病、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、またはHTLV感染によって引き起こされる癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【０００９】
ある実施形態では、当該化合物は一般構造式(Ia)：
【化３】
0005694172.tif 000004
（式中、Raは、C1〜3アルキル、C1〜4ハロアルキル、C3〜5シクロアルキル、N(Re)2、もしくはOReであるか、またはRaおよびR1は、それらが結合する炭素原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族炭素環式環を形成し；
Rbは、C1〜4アルキル、C1〜4ハロアルキル、C3〜5シクロアルキル、N(Re)2、もしくはOReであるか、またはRbおよびR6は、それらが結合する炭素原子と一緒に、5員もしくは6員の脂肪族炭素環式環または１つの窒素原子を含有する5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
Rcは、C1〜6アルキル、C3〜5シクロアルキル、またはC1〜3ヒドロキシアルキルであり；
Rdは、水素、C1〜4アルキル、もしくはC3〜5シクロアルキルであるか、またはRdおよびR7は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員もしくは6員の脂肪族環を形成するか、またはRcおよびRdは、一緒になって6員もしくは7員の酸素原子を含有していてもよい脂肪族環を形成し；
Reは、独立に、水素またはC1〜3アルキルであり；
R1は、水素またはC1〜3アルキルであり；
R2は、水素、ヒドロキシ、またはC1〜3アルコキシであり；
R3およびR4は、独立に、水素またはC1〜3アルキルであり；
R5は、水素、ヒドロキシ、C1〜3アルコキシ、またはハロであり；
R6は、水素、C1〜3アルキル、C1〜3アルコキシ、またはハロであり；
R7は、水素またはC1〜3アルキルであり；かつ
nは0、1、2、3、4、または5である）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００１０】
他の実施形態では、当該化合物は一般構造式(Ib)：
【化４】
0005694172.tif 000005
（式中、Raは、メチル、エチル、n-プロピル、シクロプロピル、NH(CH3)、もしくはOCH3であるか、またはRaおよびR1は、それらが結合する炭素原子と一緒に5員の脂肪族炭素環式環を形成し；
Rbは、メチル、エチル、n-プロピル、シクロプロピル、NH(CH3)、もしくはOCH3であるか、またはRbおよびR6は、それらが結合する炭素原子と一緒に5員の脂肪族炭素環式環または１つの窒素原子を含有する5員の脂肪族環を形成し；
Rcは、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、シクロブチル、または2-ヒドロキシエチルであり；
Rdは、水素、メチル、エチル、もしくはシクロブチルであるか、またはRdおよびR7は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員の脂肪族環を形成するか；または
RcおよびRdは、一緒になってモルホリノ部分；テトラヒドロフリル部分；ピペリジニル部分；
【化５】
0005694172.tif 000006
部分、もしくは
【化６】
0005694172.tif 000007
部分を形成し；
R1は、水素であり；
R2は、水素、ヒドロキシ、またはメトキシであり；
R3およびR4は、水素であり；
R5は、水素、ヒドロキシ、メトキシ、またはフルオロであり；
R6は、水素、メチル、メトキシまたはフルオロであり；
R7は、水素であり；かつ
nは1または2である）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００１１】
他の実施形態では、当該化合物は一般構造式(IIa)：
【化７】
0005694172.tif 000008
（式中、RfはC1〜6アルキルであり；
Rgは、水素もしくはC1〜4アルキルであるか、またはRgおよびR8は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
R9は、水素またはC1〜3アルキルであり；
R10は、水素、ヒドロキシ、またはC1〜3アルコキシであり；
R11およびR12は、独立に、水素またはC1〜3アルキルであり；
R13は、水素、ヒドロキシ、C1〜3アルコキシ、またはハロであり；
R14は、水素、C1〜3アルキル、またはC1〜3アルコキシであり；
R8は、水素またはC1〜3アルキルであり；かつ
pは0、1、2、3、4、または5であるが、
ただしpが2である場合、RfおよびRgのうちの１つはエチルとは異なる）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００１２】
さらなる他の実施形態では、当該化合物は構造式(IIb)：
【化８】
0005694172.tif 000009
（式中、Rfは、メチルまたはエチルであり；
Rgは、水素もしくはメチルであるか、またはRgおよびR8は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員の脂肪族環を形成し；
R8は、水素であり；かつ
pは1または2である）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００１３】
本発明の１つの態様は、状態または疾患を治療する方法であって、治療上有効量の１以上の、構造式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)、(IIa)、もしくは(IIb)の化合物、または１以上の構造式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)、(IIa)、もしくは(IIb)の化合物を含む組成物を、それを必要とする個体に投与することによる方法を提供することである。この組成物は、TNFファミリーポリペプチドの細胞死受容体活性化因子（death receptor activator）をさらに含んでいてもよい。この活性化因子は、NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L、CD27L/CD70、FasL/CD95、CD30L、TNF-β/LT-α、LT-β、およびTRAILのうちの１以上などのTNFポリペプチドであってよい。
【００１４】
本発明の別の態様は、１以上の構造式(I)または(II)の化合物を含む医薬組成物、および疾患または状態の治療的処置におけるその組成物の使用を提供することである。
【００１５】
本発明のさらに別の態様は、病状について化学療法的処置または放射線治療処置を受けている個体を治療する方法であって、化学療法剤、放射線治療薬、またはその両方と組み合わせて、構造式(I)および／または(II)の化合物をその個体に投与することを含む方法を提供することである。この方法によって治療される、非限定的な徴候は癌である。
【００１６】
本発明の上記の態様およびさらなる態様は、本発明の好ましい実施形態の以下の非限定的な詳細な説明から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１−ａ】本発明のカルバゾールについてのDMSO対照に対するNF-κB活性の倍数  対  濃度のプロットである；
【図１−ｂ】本発明のカルバゾールについての、p53活性化およびNF-κB阻害に対するEC50（μM）のプロットである；
【図２−ａ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｂ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｃ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｄ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｅ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｆ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｇ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｈ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｉ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｊ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図２−ｋ】本発明のカルバゾールで処理された種々の腫瘍細胞についての%細胞生存率  対  濃度（μM）のプロットである；
【図３】実施例7の化合物を使用したHCT116皮下（sc）異種移植モデルにおける腫瘍容積  対  処理の日数のプロットを含む；
【図４】活性カルバゾール化合物の3次元分析を示す図である；
【図５】不活性カルバゾール化合物の3次元分析を示す図である；
【図６】活性カルバゾール化合物、すなわち、実施例2の3次元構造を示す図である；
【図７】不活性カルバゾール化合物、すなわち、化合物200の3次元構造を示す図である；
【図８−ａ】対照溶媒で処置されたマウス（図8a）における、および実施例7の化合物で処置されたマウス（図8b）における個々の腫瘍成長についての腫瘍容積（mm3）  対  処置の日数のプロットを含む；
【図８−ｂ】対照溶媒で処置されたマウス（図8a）における、および実施例7の化合物で処置されたマウス（図8b）における個々の腫瘍成長についての腫瘍容積（mm3）  対  処置の日数のプロットを含む；
【図９−ａ】対照溶媒による場合、および実施例7の化合物による場合の腫瘍容積（mm3）  対  処置の日数のプロットを含む；
【図９−ｂ】対照溶媒による場合、および実施例7の化合物による場合の腫瘍容積（mm3）  対  処置の日数のプロットを含む；
【図９−ｃ】対照溶媒による場合、および実施例7の化合物による場合の腫瘍容積（mm3）  対  処置の日数のプロットを含む；
【図１０】対照溶媒で処置されたマウス（図10a）における、および実施例7の化合物で処置されたマウス（図10b）における個々のマウスの相対体重  対  細胞接種後の日数のプロットを含む；ならびに
【図１１】本発明のカルバゾール化合物が多数の種類の癌に対して有効な薬剤であるということを示す、13の癌株化細胞についての化合物100の濃度（μM）  対  相対的細胞生存のプロットを含む；
【図１２】熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）（菌株D10）に対する種々のカルバゾール化合物の抗寄生虫活性を示す棒グラフを含む；ならびに
【図１３−ａ】グラム陰性菌（図13a）およびグラム陽性菌（図13b）に対する種々のカルバゾール化合物の抗菌活性を示すプロットを含む。
【図１３−ｂ】グラム陰性菌（図13a）およびグラム陽性菌（図13b）に対する種々のカルバゾール化合物の抗菌活性を示すプロットを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本願明細書に開示される化合物、組成物、および方法に関しては、使用される専門用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのものであり、限定することは意図されていない。本願明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「a（１つの）」、「an（１つの）」および「the（その、当該）」は、文脈が明らかに複数の指示対象を含まないと示していない限り、複数の指示対象を含む。
【００１９】
本発明は、一般構造式(I)および(II)を有する化合物に関する。本願明細書に開示されるカルバゾール化合物は、癌、炎症性疾患、微生物感染症、ウイルス感染症、原虫感染症、または自己免疫疾患などの疾患および状態の治療において有用である。
【化９】
0005694172.tif 000010
（式中、Raは、水素、C1〜6アルキル、C1〜6ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ORe、N(Re)2、およびSReからなる群から選択されるか、またはRaおよびR1もしくはNReおよびR1のいずれかは、それらが結合する炭素原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族の炭素環式環または複素環式環を形成し；
Rbは、水素、C1〜6アルキル、C1〜6ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ORe、N(Re)2、およびSReからなる群から選択されるか、またはRbおよびR6もしくはNReおよびR6のいずれかは、それらが結合する炭素原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族炭素環式環または5員もしくは6員の脂肪族の炭素環式環または複素環式環を形成し；
Rcは、水素、C1〜6アルキル、C1〜6ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Reからなる群から選択されるか、またはRcおよびRdは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい5員、6員、もしくは7員の脂肪族環を形成し；
Rdは、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Reからなる群から選択されるか、またはRdおよびR7は、それらが結合する原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
Reは、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択されるか、または２つのRe基は、それらが結合する窒素と一緒になって5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、ORe、C(=O)Re、C(=O)ORe、OC(=O)Re、C(=O)N(Re)2、C(=O)NReSO2Re、N(Re)2、NReC(=O)Re、NReC(=O)N(Re)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRe、SORe、SO2Re、SO2N(Re)2、およびOSO2CF3からなる群から選択され；
R7は、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択され；かつ
nは0、1、2、3、4、または5である）
またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物。
【００２０】
好ましい実施形態では、当該化合物は一般構造式(Ia)：
【化１０】
0005694172.tif 000011
（式中、Raは、C1〜3アルキル、C1〜4ハロアルキル、C3〜5シクロアルキル、N(Re)2、もしくはOReであるか、またはRaおよびR1は、それらが結合する炭素原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族炭素環式環を形成し；
Rbは、C1〜4アルキル、C1〜4ハロアルキル、C3〜5シクロアルキル、N(Re)2もしくはOReであるか、またはRbおよびR6は、それらが結合する炭素原子と一緒に5員もしくは6員の脂肪族炭素環式環または１つの窒素原子を含有する5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
Rcは、C1〜6アルキル、C3〜5シクロアルキル、またはC1〜3ヒドロキシアルキルであり；
Rdは、水素、C1〜4アルキル、もしくはC3〜5シクロアルキルであるか、またはRdおよびR7は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員もしくは6員の脂肪族環を形成するか、またはRcおよびRdは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい6員もしくは7員の脂肪族環を形成し；
Reは、独立に、水素またはC1〜3アルキルであり；
R1は、水素またはC1〜3アルキルであり；
R2は、水素、ヒドロキシ、またはC1〜3アルコキシであり；
R3およびR4は、独立に水素またはC1〜3アルキルであり；
R5は、水素、ヒドロキシ、C1〜3アルコキシ、またはハロであり；
R6は、水素、C1〜3アルキル、C1〜3アルコキシ、またはハロであり；
R7は、水素またはC1〜3アルキルであり；かつ
nは0、1、2、3、4、または5である）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００２１】
より好ましい実施形態では、当該化合物は一般構造式(Ib)：
【化１１】
0005694172.tif 000012
（式中、Raは、メチル、エチル、n-プロピル、シクロプロピル、NH(CH3)、もしくはOCH3であるか、またはRaおよびR1は、それらが結合する炭素原子と一緒に5員の脂肪族炭素環式環を形成し；
Rbは、メチル、エチル、n-プロピル、シクロプロピル、NH(CH3)、もしくはOCH3であるか、またはRbおよびR6は、それらが結合する炭素原子と一緒に5員の脂肪族炭素環式環もしくは１つの窒素原子を含有する5員の脂肪族環を形成し；
Rcは、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、シクロブチル、または2-ヒドロキシエチルであり；
Rdは、水素、メチル、エチル、もしくはシクロブチルであるか、またはRdおよびR7は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員の脂肪族環を形成するか、またはRcおよびRdは、一緒になってモルホリノ部分、テトラヒドロフリル部分、ピペリジニル部分、または
【化１２】
0005694172.tif 000013
部分、
【化１３】
0005694172.tif 000014
部分を形成し；
R1は、水素であり；
R2は、水素、ヒドロキシ、またはメトキシであり；
R3およびR4は、水素であり；
R5は、水素、ヒドロキシ、メトキシ、またはフルオロであり；
R6は、水素、メチル、メトキシ、またはフルオロであり；
R7は、水素であり；かつ
nは1または2である）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００２２】
別の実施形態では、本発明はまた、構造式(II)を有するカルバゾール化合物：
【化１４】
0005694172.tif 000015
（式中、Rfは、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Rhからなる群から選択されるか、またはRfおよびRgは、一緒になって酸素原子を含有していてもよい5員、6員、もしくは7員の脂肪族環を形成し；
Rgは、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびC(=O)Rhからなる群から選択されるか、またはRgおよびRhは、それらが結合する原子と一緒に5員、6員、もしくは7員の脂肪族環を形成し；
Rhは、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択されるか、または２つのRh基は、それらが結合する窒素と一緒になって5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
R9、R10、R11、R12、R13、およびR14は、独立に、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロ、ORh、C(=O)Rh、C(=O)ORh、OC(=O)Rh、C(=O)N(Rh)2、C(=O)NRhSO2Rh、N(Rh)2、NRhC(=O)Rh、NRhC(=O)N(Rh)2、CN、NO2、CF3、OCF3、SRh、SORh、SO2Rh、SO2N(Rh)2、およびOSO2CF3からなる群から選択され；
R8は、水素、C1〜6アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールからなる群から選択され；かつ
pは0、1、2、3、4、または5であるが、
ただしpが2である場合、RfおよびRgのうちの１つはエチルとは異なる）
またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物に関する。
【００２３】
他の実施形態では、当該化合物は一般構造式(IIa)：
【化１５】
0005694172.tif 000016
（式中、RfはC1〜6アルキルであり；
Rgは、水素もしくはC1〜4アルキルであるか、またはRgおよびR8は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員もしくは6員の脂肪族環を形成し；
R9は、水素またはC1〜3アルキルであり；
R10は、水素、ヒドロキシ、またはC1〜3アルコキシであり；
R11およびR12は、独立に、水素またはC1〜3アルキルであり；
R13は、水素、ヒドロキシ、C1〜3アルコキシ、またはハロであり；
R14は、水素、C1〜3アルキル、またはC1〜3アルコキシであり；
R8は、水素またはC1〜3アルキルであり；かつ
pは0、1、2、3、4、または5であるが、
ただしpが2である場合、RfおよびRgのうちの１つはエチルとは異なる）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００２４】
さらなる他の実施形態では、当該化合物は構造式(IIb)：
【化１６】
0005694172.tif 000017
（式中、Rfは、メチルまたはエチルであり；
Rgは、水素もしくはメチルであるか、またはRgおよびR8は、それらが結合する原子と一緒に１つの窒素原子を含有する5員の脂肪族環を形成し；
R8は、水素であり；かつ
pは1または2である）
を有するか、またはその医薬的に許容できる塩もしくは水和物である。
【００２５】
本願明細書で使用する場合、用語「アルキル」は、示された数の炭素原子を含有する直鎖状および分枝状の炭化水素基、典型的にはメチル、エチル、および直鎖および分枝状のプロピルおよびブチル基を意味する。用語「シクロアルキル」は、示された数の炭素原子を含有する環状炭化水素基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、およびシクロペンチルとして定義される。
【００２６】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、酸素、窒素、および硫黄からなる群から選択される１以上のヘテロ原子を環構造の中に含有する単環式、二環式、および、三環式のシクロアルキル基を意味する。「ヘテロシクロアルキル」基はまた、その環に結合されたオキソ基(=O)を含有していてもよい。ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例としては、1,3-ジオキソラン、2-ピラゾリン、ピラゾリジン、ピロリジン、ピペラジン、ピロリン、2H-ピラン、4H-ピラン、モルホリン、チオホリン（thiopholine）、ピペリジン、1,4-ジチアン、および1,4-ジオキサンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
用語「ハロ」または「ハロゲン」はフッ素、臭素、塩素、およびヨウ素を意味する。
【００２８】
用語「ハロアルキル」は、１以上の、例えば、1〜3個のハロ置換基、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードのいずれか、またはこれらの組み合わせで置換されたアルキル基を意味する。同様に、「ハロシクロアルキル」は１以上のハロ置換基を有するシクロアルキル基として定義される。
【００２９】
用語「アリール」は、単独でまたは組み合わせて、単環式または多環式の芳香族基、好ましくは単環式または二環式の芳香族基、例えば、フェニルまたはナフチルを意味する。特段の記載がない限り、「アリール」基は、非置換であってもよいし、または例えば１以上の、特に1〜3個の、ハロ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、およびアルキルスルホニルで置換されていてもよい。例示的なアリール基としては、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、2-クロロフェニル、3-クロロフェニル、4-クロロフェニル、2-メチルフェニル、4-メトキシフェニル、3-トリフルオロメチルフェニル、4-ニトロフェニルなどが挙げられる。
【００３０】
用語「ヘテロアリール」は、１つまたは２つの芳香環を含有しかつ芳香族環の中に少なくとも１つの窒素、酸素、または硫黄原子を含有する単環式または二環式の環系を意味し、このヘテロアリールは、非置換であってもよいし、または例えば１以上の、特に1〜3個の、ハロ、アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、およびアルキルスルホニルのような置換基で置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、チエニル、フリル、ピリジル、オキサゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、トリアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル（imidizolyl）、ベンゾチアゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾニル（thiazonyl）、およびチアジアゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】
用語「アルキレン」は置換基を有するアルキル基を意味する。例えば、用語「C1〜3アルキレンアリール」は、1〜3個の炭素原子を含有しかつアリール基で置換されたアルキル基を指す。
【００３２】
用語「ヒドロキシ」は-OHを意味する。
【００３３】
用語「アルコキシ」は-OR（式中、Rはアルキルである）を意味する。
【００３４】
用語「アミノ」は-NH2を意味し、用語「アルキルアミノ」は-NR2（式中、少なくとも１つのRはアルキルであり、第2のRはアルキルまたは水素である）を意味する。
【００３５】
用語「アシルアミノ」はR(=O)N-（式中、Rはアルキルまたはアリールである）を意味する。
【００３６】
用語「アルキルチオ」は-SR（式中、Rはアルキルである）を意味する。
【００３７】
用語「ニトロ」は-NO2を意味する。
【００３８】
用語「トリフルオロメチル」は-CF3を意味する。
【００３９】
用語「トリフルオロメトキシ」は-OCF3を意味する。
【００４０】
用語「シアノ」は-CNを意味する。
【００４１】
用語「アルコキシアルキル」は、水素がアルコキシ基によって置き換えられているアルキル基を意味する。
【００４２】
用語「ヒドロキシアルキル」は、水素がヒドロキシ基によって置き換えられているアルキル基を意味する。
【００４３】
用語「アルキルスルフィニル」は、R-SO2-（式中、Rはアルキルである）を意味する。
【００４４】
用語「アルキルスルホニル」は、R-SO3-（式中、Rはアルキルである）を意味する。
【００４５】
用語「モルホリノ部分」は
【化１７】
0005694172.tif 000018
を意味する。
【００４６】
用語「テトラヒドロフリル部分」は
【化１８】
0005694172.tif 000019
を意味する。
【００４７】
用語「ピペリジニル部分」は、-OHまたは-CH2OH基で置換されていてもよい
【化１９】
0005694172.tif 000020
を意味する。
【００４８】
用語「有効量」および「治療上有効量」は、化合物または組成物に関して使用される場合、所望の結果を与えるために十分なその化合物または組成物の量を意味する。所望されるまたは必要とされる正確な量は、使用される特定の化合物または組成物、その投与方法などによって変わるであろう。従って、正確な「有効量」または「治療上有効量」を特定することはいつでも可能というわけではない。しかしながら、適切な有効量は、本開示によって情報を得た当業者が日常的な実験のみを使用して決定することができる。
【００４９】
用語「適切な」は、記載された目的のために本願明細書で提示される化合物または組成物と適合性である実体、例えば、部分、置換基、または化合物を意味する。記載された目的への適合性は、当業者が日常的な実験のみを使用して決定しうる。
【００５０】
用語「投与する」は、化合物または組成物の投薬量を記載するために使用される場合、当該化合物または組成物の単回投与または複数回投与を意味する。
【００５１】
「インビボ（in vivo）」は、動物またはヒトの内部などの生体内部を意味する。これに関して、状態もしくは疾患、またはそれらの症候を治療するために、薬剤が患者において治療的に使用されうる。この薬剤は、疾患、状態またはそれらに関連する症候の発生または再発を予防するための予防薬としても使用されうる。
【００５２】
「エキソビボ（ex vivo）」は、生体の外部を意味する。エキソビボ細胞集団の例としては、インビトロ（in vitro）細胞培養液、およびヒトまたは動物からの液体試料または組織試料などの生物試料が挙げられる。このような試料は、当該技術分野で周知の方法によって得ることができる。例示的な生体液試料としては、血液、脳脊髄液、尿、唾液が挙げられる。例示的な組織試料としては、腫瘍およびその生検が挙げられる。これに関して、本発明の化合物は、治療および実験の両方の多くの応用例に用いることができる。
【００５３】
用語「放射線増感剤」は、電磁放射線に対する細胞の感度を増大させるために、および／または電磁放射線で処置できる疾患の治療を促進するために治療上有効量でヒトまたは他の動物に投与される化合物を意味する。
【００５４】
用語「電磁放射線」および「放射線」は、10-20〜100メートルの波長を有する放射線を意味するが、これらに限定されない。
【００５５】
用語「細胞死」は、細胞の機能、増殖、および代謝が停止されるプロセスを意味する。
【００５６】
用語「癌治療」は、当該技術分野で公知の癌のためのいずれかの治療を意味し、これには化学療法および放射線療法が含まれるが、これらに限定されない。
【００５７】
用語「と（の）組み合わせ」は、本発明のカルバゾール化合物の投与およびいずれかのさらなる治療を記載するために使用される場合、そのさらなる治療に先だって、それと同時に、もしくはその後で、またはこれらの組み合わせで当該カルバゾール化合物が投与されうるということを意味する。
【００５８】
本願明細書で使用する場合、用語「治療する」、「治療すること」、「治療」などは、疾患もしくは状態および／またはそれに関連する症候を解消すること、低減させること、または改善することを指す。排除されるわけではないが、疾患または状態を治療することは、その疾患、状態、またはそれらに関連する症候が完全に解消されることを必要とするわけではない。本願明細書で使用する場合、用語「治療する」、「治療すること」、「治療」などは「予防的治療」を含んでもよく、この「予防的治療」は、疾患もしくは状態を再び発症することまたはその疾患もしくは状態の再発をしてはいないがそのリスクがあるかあるいはその可能性が高い患者において、疾患もしくは状態を再び発症すること、または以前に抑制された疾患もしくは状態の再発、の可能性を低下させることを指す。用語「治療する」および類義語は、本発明の化合物をこのような治療を必要とする個体に投与することを意図する。
【００５９】
本発明の意味の範囲内で、「治療」はまた、再発予防またはフェーズ予防（phase prophylaxis）、ならびに急性または慢性の兆候、症候および／もしくは機能不全の治療をも包含する。この治療は例えば、症候を抑制するように症候的に方向づけることができる。それは、短期間にわたってもたらされてもよく、中期にわたって方向づけられてもよく、または例えば維持療法の状況の中で長期の治療であってもよい。
【００６０】
用語「哺乳動物」としては、ヒト、伴侶動物（companion animal）（例えば、イヌ、ネコ、およびウマ）、動物園の動物（例えば、シマウマ、ゾウ、および大型のネコ科の動物）、食物源となる動物（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、およびヒツジ）、および研究用動物（例えば、ラット、マウス、ヤギ、およびモルモット）が挙げられる。
【００６１】
本発明は、一部は、一般構造式(I)および(II)のカルバゾール化合物を含む医薬組成物は、米国を指定国とする国際特許出願第PCT/US05/25884号（この内容を引用して本願明細書に援用する）に記載されているNF-κB媒介性の免疫応答および状態などのNF-κB活性を調節するために使用することができるという知見に関する。
【００６２】
構造式(I)のカルバゾール化合物の好ましい実施形態では、Raはメチル、エチル、NH(CH3)、OCH3であるか、またはR1と5員の脂肪族環を形成する。他の好ましい実施形態では、Rbはメチル、エチル、NH(CH3)、OCH3であるか、R6と5員の脂肪族環を形成するか、またはR6と5員の、窒素含有脂肪族環を形成する。別の好ましい実施形態では、Rdは水素、メチル、エチルであるか、またはR7と5員の脂肪族環を形成する。
【００６３】
好ましい実施形態では、R1は水素であるか、またはRaと5員の脂肪族環を形成する。他の好ましい実施形態では、R2は水素またはヒドロキシである。さらに他の好ましい実施形態では、R3は水素である。さらなる好ましい実施形態では、R4は水素である。なおさらなる好ましい実施形態では、R5は水素またはヒドロキシである。ある好ましい実施形態では、R6は水素であるか、Rbと5員の脂肪族環を形成するか、またはRbと5員の、窒素含有脂肪族環を形成する。好ましい実施形態では、R7は水素であるか、またはRdと5員環を形成する。なおさらなる好ましい実施形態では、nは2または3である。
【００６４】
構造式(II)のカルバゾール化合物の好ましい実施形態では、Rfはメチルまたはエチルであり、Rgは水素、メチル、エチルであるか、またはRfおよびR8と5員の、窒素含有脂肪族環を形成するか、またはR8は水素であり、R9、R10、R11、R12、R13、およびR14は水素である。なおさらなる実施形態では、pは2または3である。
【００６５】
様々な状態および疾患の治療において有用な２つのさらなるカルバゾール化合物は
【化２０】
0005694172.tif 000021
である。
【００６６】
本発明は、構造式(I)および(II)の化合物のすべての可能な立体異性体および位置異性体を包含する。本発明は、ラセミ化合物および光学活性な異性体の両方を包含する。構造式(I)または(II)の化合物が単一の鏡像異性体として所望される場合、それは、最終生成物の分割によるか、または異性体として純粋な出発物質から、もしくはキラル補助剤試薬の使用（例えば、Z．Maら, Tetrahedron: Asymmetry, 8(6), 883-888頁(1997)を参照のこと）からのいずれかからの立体特異的な合成によるかのいずれかによって得ることができる。最終生成物、中間体、または出発物質の分割は、当該技術分野で公知の適切な方法によって達成されうる。加えて、構造式(I)または(II)の化合物の互変異性体が可能である状況では、本発明は、当該化合物のすべての互変異性体を包含することが意図されている。
【００６７】
構造式(I)および(II)の化合物のプロドラッグもまた、本発明の方法において当該化合物として使用することができる。化合物が調合および／または投与に適した形態へと誘導体化され、次いでインビボで薬物として放出されるプロドラッグのアプローチが、その化合物の物理化学的特性を一過性に（例えば、生物可逆的に）変えるために成功裏に用いられてきたということが十分に確立されている（H. Bundgaard編, 「Design of Prodrugs」, Elsevier, Amsterdam, (1985); R. B. Silverman, 「The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action」、 Academic Press, San Diego, 第8章, (1992); K.M. Hillgrenら, Med. Res. Rev., 15, 83 (1995)を参照のこと）。
【００６８】
本発明の化合物は１以上の官能基を含有することができる。この官能基は、所望または必要に応じて、プロドラッグを与えるように修飾することができる。適切なプロドラッグとしては、例えば、アミドおよびエステルなどの酸誘導体が挙げられる。N-オキシドもプロドラッグとして使用することができるということも、当業者によって理解される。
【００６９】
本発明の化合物は、塩として存在することができる。本発明の化合物の医薬的に許容できる塩は、一般に本発明の方法において好ましい。本願明細書で使用する場合、用語「医薬的に許容できる塩」は、構造式(I)および(II)の化合物の塩または双性イオン形態を指す。式(I)および(II)の化合物の塩は、当該化合物の最終の単離および精製の際に、または別個にその化合物を適切な陽イオンを有する酸と反応させることにより製造することができる。構造式(I)および(II)の化合物の医薬的に許容できる塩は、医薬的に許容できる酸とともに形成される酸付加塩である。医薬的に許容できる塩を形成するために用いることができる酸の例としては硝酸、ホウ酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸などの無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸などの有機酸が挙げられる。本発明の化合物の塩の非限定的な例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、アスコルビン酸塩、イセチオン酸塩、サリチル酸塩、メタンスルホン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、炭酸水素塩、パラトルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンジスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびp-トルエンスルホン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、本発明の化合物に存在する利用可能なアミノ基は、塩化メチル、塩化エチル、塩化プロピル、および塩化ブチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化プロピル、および臭化ブチル、ならびにヨウ化メチル、ヨウ化エチル、ヨウ化プロピル、およびヨウ化ブチル；硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミル；塩化デシル、塩化ラウリル、塩化ミリスチル、および塩化ステリル、臭化デシル、臭化ラウリル、臭化ミリスチル、および臭化ステリル、ならびにヨウ化デシル、ヨウ化ラウリル、ヨウ化ミリスチル、およびヨウ化ステリル；ならびに臭化ベンジルおよび臭化フェネチルを用いて第四級化することができる。これらのことを踏まえると、本願明細書中に現れる本発明の化合物への言及は、いつでも、構造式(I)および／または(II)の化合物、ならびにその医薬的に許容できる塩、水和物、またはプロドラッグを包含することが意図されている。
【００７０】
構造式(I)および(II)の化合物はまた、治療的使用の方法における当該化合物の有益な特性を促進する補助剤部分に接合されてもよいしまたは連結されてもよい。このような接合体は、注目する特定の解剖学的部位または領域（例えば、腫瘍）への当該化合物の送達を高めることができ、標的細胞中での当該化合物の持続的な治療濃度を可能にすることができ、当該化合物の薬物動態特性および薬力学的特性を変えることができ、および／または当該化合物の治療指数または安全性プロファイル（safety profile）を改善することができる。適切な補助剤部分としては、例えば、アミノ酸、オリゴペプチド、またはポリペプチド、例えばモノクローナル抗体および他の遺伝子操作で得られた抗体などの抗体；ならびに標的の細胞または組織の中の受容体に対する天然または合成のリガンドが挙げられる。他の適切な補助剤としては、標的細胞による当該化合物の体内分布および／または取り込みを促進する脂肪酸または脂質部分が挙げられる（例えば、Bradleyら, Clin. Cancer Res. (2001) 7:3229を参照のこと）。
【００７１】
本発明の化合物はNF-κBの強力な阻害剤である。従って、式(I)および(II)の化合物は、治療における使用のために、特にNF-κBの阻害が有益であると考えられる様々な状態の治療のために興味深い。NF-κB阻害は特に興味を惹く標的である。なぜなら、このような阻害は、アポトーシス、抗菌性、抗原虫性、抗ウイルス性、および抗炎症性などの効果をもたらし、これらのすべては種々の病状の治療において有用だからである。それゆえ式(I)および(II)の化合物は、多くの障害、疾患、および状態の治療における有用性を有する。
【００７２】
本発明のカルバゾール化合物の効力は、当該化合物の、NF-κB活性を阻害するかまたはp53を活性化する能力を測定することによって決定される。p53の活性化は、典型的には用量反応性アッセイを使用して測定される。このアッセイでは、感受性のあるアッセイ系が、効果がまったく観察されないかまたは最小の効果しか観察されない濃度から、部分的な効果が観察されるより高い濃度を経て、最大の効果が観察される飽和濃度を含めたある範囲の濃度にわたって注目する化合物と接触される。理論上は、活性化因子化合物の用量反応効果のこのようなアッセイは、濃度の関数として活性化の程度を表すＳ字型曲線として記述することができる。この曲線はまた、理論上は、ベースラインとそのアッセイにおける最大活性との間の差の50%レベルであるレベルまで活性を増大させるために十分な濃度の点を通る。この濃度は、有効濃度（50%）またはEC50値として定義される。EC50値の決定は、従来の生化学的（非細胞性の）アッセイ技術または細胞ベースのアッセイ技術を使用して行われる。
【００７３】
活性化因子の有効性の比較は、比較のEC50値に対して与えられることが多く、より高いEC50はその試験化合物の効力が基準化合物より低いことを示し、より低いEC50はその化合物の効力が基準化合物より高いことを示す。本発明の化合物は、ルシフェラーゼレポーター（luciferase reporter）株化細胞アッセイにおいて予想外にも良好な効力、すなわち、p53活性化を示す。下記の細胞ベースのアッセイに供された本発明の化合物は、約1.35μM未満というp53活性化についてのEC50値を呈した。ある実施形態では、本発明の化合物は約1.0μM未満のEC50値を示した。他の実施形態では、本発明の化合物は、約0.75μM未満、約0.50μM、約0.30μM、約0.20μM未満、または0.05μM未満のIC50値を示した。
【００７４】
本発明のカルバゾール化合物のとりわけ重要な用途は、癌、炎症、自己免疫疾患、微生物感染症、原虫感染症、もしくはウイルス感染症、移植片対宿主病、HIV感染に関連する状態、または構成的に活性なNF-κBに対して後天的な依存性（acquired dependence）を有する前癌細胞の治療である。本発明に従って治療することができる種々の癌としては、腎細胞癌、肉腫、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、骨髄腫、骨髄球性白血病およびリンパ芽球性白血病、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、およびHTLV感染によって引き起こされる癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
それゆえ、式(I)および(II)の化合物は様々な状態および疾患の治療において有用であるということが想定される。従って、本発明は、このような状態および疾患の治療のための医薬の製造のための式(I)および(II)の化合物、もしくはそれらの医薬的に許容できる塩、またはいずれかの実体を含有する医薬組成物の使用に関する。
【００７６】
本発明の化合物は無溶媒の化学物質として治療的に投与することができるが、構造式(I)または(II)の化合物を医薬組成物または医薬製剤として投与することが好ましい。従って、本発明は、式(I)または(II)の化合物を、そのための医薬的に許容できる希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。また、式(I)または(II)の化合物をそのための医薬的に許容できる希釈剤または担体と混合することを含む、医薬組成物を製造する方法も提供される。
【００７７】
従って、本発明は、１以上の医薬的に許容できる担体ならびに、所望により、他の治療用および／または予防的成分と一緒に、構造式(I)または(II)の化合物、またはその医薬的に許容できる塩、プロドラッグ、もしくは水和物を含む医薬処方物をさらに提供する。この担体は、製剤の他の成分と適合性でありかつそのレシピエントに対して有害でないという意味で、「許容できる」。
【００７８】
本発明の製剤は、経口的に、非経口的に、経粘膜的に（例えば、舌下にまたは口腔内投与を介して）、局所的に、経皮的に、直腸に、または吸入を介して（例えば、鼻内または肺深部への吸入）などの、示された疾患の治療のための標準的な方法で投与することができる。非経口投与としては、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、および関節内が挙げられるが、これらに限定されない。非経口投与はまた、POWDERJECT（商標）（Powderject Pharmaceuticals, Plc、イングランド、オックスフォード）のような高圧技術を使用して成し遂げることができる。この組成物はインプラントの形態でも投与することができ、これによって組成物の徐放およびゆっくり制御された点滴静注が可能になる。
【００７９】
口腔内投与を含めた経口投与のために、当該組成物は、従来の方法で調合された錠剤またはトローチ剤の形態にあってもよい。例えば、経口投与用の錠剤およびカプセルは、結合剤（例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、デンプン漿、またはポリビニルピロリドン）、増量剤（例えば、乳糖、糖、微結晶性セルロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、またはソルビトール）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの従来の賦形剤を含有することができる。この錠剤は、当該技術分野で周知の方法に従って被覆されてもよい。
【００８０】
あるいは、本発明の化合物は、例えば水系または油性の懸濁剤、液剤、乳剤、シロップ、またはエリキシルなどの経口用液体調剤へと組み込まれてもよい。さらに、これらの化合物を含有する製剤は、使用前の水または他の適切な溶媒を用いた構成のための乾燥製品として提供することができる。このような液体調剤は従来の添加物、例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、および硬化食用脂などの懸濁剤；レシチン、ソルビタンモノオレエート、またはアラビアゴムなどの乳化剤；アーモンド油、分留ヤシ油、油状エステル、プロピレングリコール、およびエチルアルコールなどの非水系溶媒（食用油を含むことができる）；ならびにp-ヒドロキシ安息香酸メチルまたはp-ヒドロキシ安息香酸プロピルおよびソルビン酸などの防腐剤を含有することができる。
【００８１】
このような調剤はまた、例えばココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を含有する座薬として調合することもできる。吸入用組成物は、典型的には、乾燥粉末として投与することができる液剤、懸濁剤、もしくは乳剤の形態で、またはジクロロジフルオロメタンもしくはトリクロロフルオロメタンなどの従来の噴霧剤を使用したエアロゾルの形態で投与されてもよい。典型的な局所用製剤および経皮製剤は、従来の水系または非水系の溶媒を含むか（点眼薬、クリーム、軟膏剤、ローション剤、およびペーストなど）、または薬用の硬膏剤、貼剤、もしくは膜などの形態にある。
【００８２】
加えて、本発明の組成物は、注射または持続点滴による非経口投与用に調合することができる。注射用の製剤は、油性または水系の溶媒の中の懸濁剤、液剤、または乳剤の形態にあってもよく、懸濁剤、安定剤、および／または分散剤などの調合剤（formulation agent）を含有してもよい。あるいは、当該活性成分は、使用前の適切な溶媒（例えば、滅菌された、発熱物質を含まない水）を用いた構成のための粉末形態にあってもよい。
【００８３】
本発明の組成物はデポー剤としても調合できる。このような長く作用する製剤は、埋め込み（例えば、皮下にまたは筋肉内に）または筋肉注射によって投与することができる。従って、本発明の化合物は、適切な高分子物質または疎水性物質（例えば、許容できる油の中のエマルション）、イオン交換樹脂を用いて調合することができ、または難溶性の誘導体（例えば、難溶性の塩）として調合することができる。
【００８４】
当該組成物はまた、リポソーム調剤として調合することもできる。リポソーム調剤はリポソームを含むことができ、このリポソームは、注目する細胞または角質層に浸透して細胞膜と融合し、リポソームの内容物をその細胞の中へと送達することをもたらす。リポソームは、例えば米国特許第5,077,211号明細書、米国特許第4,621,023号明細書、および米国特許第4,508,703号明細書（各々、引用して本願明細書に援用する）に記載されている。
【００８５】
獣医学での使用のために、式(I)または(II)の化合物、または医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグは、通常の獣医学の実務に従って適切に許容できる製剤として投与される。獣医は、特定の動物に対して最も適切な投薬計画および投与経路を容易に決定することができる。本発明の化合物および方法によって治療できる動物としては、ペット、家畜、見世物用動物、および動物園の検査サンプルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８６】
合成方法
式(I)および(II)の化合物は、当該技術分野で公知のいずれかの適切な方法によって、または本発明の一部を形成する以下のプロセスによって製造することができる。特に、構造式(I)および(II)の化合物は、以下の合成スキームに従って製造することができる。
【００８７】
当該合成方法、実施例において、および本願明細書全体を通して、略語は以下の意味を有する：
【表１−ａ】
0005694172.tif 000022
【表１−ｂ】
0005694172.tif 000023
【００８８】
当然のことながら、構造式(I)および(II)の化合物を提供するために、合成有機化学の一般原理に従って保護基が利用できる。保護基形成試薬は、当業者にとっては周知であり、例えば、T. W. Greeneら、「Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition」, John Wiley and Sons, Inc., NY, N.Y.（1999)を参照のこと。これらの保護基は、必要なときに、当業者に公知の適切な塩基性条件、酸性条件、または水素化分解条件によって除去される。従って、本願明細書に具体的に例示されていない構造式(I)および(II)の化合物は、当業者によって製造されることができる。
【００８９】
加えて、式(I)および(II)の化合物は、他の式(I)および(II)の化合物へと変換することができる。従って、例えば、特定のR置換基は、別の適切に置換された式(I)または(II)の化合物を製造するために相互変換されうる。適切な相互変換の例としては、適切な手段による（例えば、SnCl2、またはパラジウム炭素のようなパラジウム触媒などの薬剤を使用する）ORaからヒドロキシへ、または標準的なアシル化条件またはスルホニル化条件を使用するアミノからアシルアミノもしくはスルホニルアミノなどの置換アミノへ、が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９０】
式(I)および(II)の化合物は、個々の立体異性体としてラセミ混合物として製造することができる。本発明の化合物の個々の立体異性体は、ラセミ混合物をその構成する立体異性体へと分離するための当該技術分野で公知の方法を使用する、例えば、Hypersilナフチル尿素などのキラルカラムでのHPLCを使用する、または立体異性体の塩の分離を使用する分割によってラセミ化合物から製造することができる。本発明の化合物は、適切な溶媒からの結晶化、または適切な溶媒のエバポレーションによって、溶媒分子を伴って単離することができる。
【００９１】
一般的合成手順
【化２１】
0005694172.tif 000024
カルバゾールのアルキル化のための一般的手順
カルバゾール1をDMFに溶解または懸濁させた。次いで、NaH（3当量）を加えた。この混合物を、発泡が止むまで5〜10分間にわたって室温で撹拌した。塩化物塩酸塩（1.3当量）を加え、この反応混合物を、2〜16時間にわたって50〜60℃に保った（TLCモニタリング；溶離液：出発のカルバゾールの存在について、CH2Cl2/酢酸エチル、1：1；生成物純度について、CHCl3／MeOH、9：1）。得られた混合物を水で希釈した。沈殿物が生成した場合、それを濾別し、風乾した。沈殿物が生成しない場合（表1）、その混合物を酢酸エチルで抽出した。抽出液をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションし、残渣をクロマトグラフィによって精製した（シリカゲル、CHCl3/MeOH）。生成物2aおよび2bの収率を表1に示す。
【００９２】
アルキル化されたカルバゾールのアシル化のための一般的手順
カルバゾール2をニトロベンゼンに溶解した。この溶液を氷浴中で冷却し、次いでAlCl3（5当量）およびAcCl（5当量）を加えた。この反応混合物を2〜16時間にわたって保持した（LC-MSモニタリング）。この反応混合物の試料をEt2Oで希釈し、このEt2Oを沈殿物からデカンテーションし、次いでMeOHに溶解した。得られた混合物を水で希釈し、Na2CO3で中和し、CHCl3で抽出した。抽出液をエバポレーションした。残渣を、短いシリカゲルカラム（CHCl3／MeOH）でのクロマトグラフィによってまず精製してニトロベンゼンを除去し、次いで、必要に応じて、シリカゲルカラムでまたはHPLCで精製した。生成物3aおよび3bの収率を表1に示す。
【００９３】
【化２２】
0005694172.tif 000025
3,6-ジアセチルカルバゾール（4）
カルバゾール1（16.9g、0.1mol）をニトロベンゼン（300mL）に溶解した。無水AlCl3（54.0g、0.4mol）を撹拌下で加え、氷浴を用いて冷却した。次いで、AcCl（55.5g、0.7mol）をゆっくり滴下した。この反応混合物を撹拌下で室温まで加温し、13時間にわたって保った。氷浴を用いて冷却しながら水（500mL）を少量ずつ加えた。冷却浴を取り除き、この混合物を、2時間にわたって還流させ、CHCl3で抽出した（3×150mL）。合わせた抽出液を、NaHCO3およびNaClの飽和溶液で連続的に洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。残渣を、カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、CHCl3／MeOH）によって精製し、12.5g（50%）の3,6-ジアセチルカルバゾール（4）を得た。
【００９４】
化合物4のアルキル化については、カルバゾールのアルキル化のための一般的手順を使用した。生成物3c〜fの収率を表1に示す。
【００９５】
【化２３】
0005694172.tif 000026
ブロモアルキルジアセチルカルバゾール5a〜cの製造
ジアセチルカルバゾール4をDMFに溶解し、次いでNaH（3当量）を加えた。この混合物を室温で10分間にわたって撹拌した。ジブロモアルカン（7当量）を加えた。この反応混合物を、1時間にわたって保った（5a 室温で；5b 40℃で；5c 20分間にわたって70℃で；TLCモニタリング、CH2Cl2／酢酸エチル、酢酸エチル 4：1）。次いでこの混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出液を水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。残渣を、カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、CHCl3）によって精製し、5a（21%）、5b（29%）、および5c（74%）を得た。
【００９６】
ブロモアルキルジアセチルカルバゾール5a〜cを用いるアミンのアルキル化
臭化物5をDMFに溶解し、次いでアミンを加えた（過剰、表3を参照）。この混合物を60℃で一晩中保った（TLCモニタリング、出発のカルバゾールの存在についてCH2Cl2／酢酸エチル、1：1；生成物純度についてCHCl3/MeOH、9：1）。この反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出液をNa2SO4で乾燥した。残渣を、カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、CHCl3／MeOH）によって精製した。生成物を、CH2Cl2およびMeOHの混合物に溶解した。4M HClジオキサン溶液を加え、この混合物をエバポレーションした。残渣をEt2Oで、そして必要に応じて、酢酸エチルまたはアセトンで粉にした。生成物6a〜hの収率を表3に示す。
【化２４】
0005694172.tif 000027
【００９７】
2のアシル化については、スキーム1に記載した手順と同様の手順を使用した。生成物7a〜dの収率を表4に示す。
【００９８】
【化２５】
0005694172.tif 000028
3,6-ビス(クロロプロピオニル)-9-N,N-ジエチルアミノエチルカルバゾール（8）
2mLのニトロベンゼン中の1-N,N-ジエチルアミノエチルカルバゾール（0.23g、0.86mmol）の溶液を氷浴の中で冷却した。AlCl3（0.57g、4.3mmol）および3-クロロプロピオニルクロリド（0.4mL、4.2mmol）を加えた。この反応混合物を一晩中撹拌し（LC-MSモニタリング）、HCl水溶液で希釈した。生成物をCHCl3で抽出し、濾液をエバポレーションした。残渣を短いシリカゲルカラムでのクロマトグラフィ（CHCl3／MeOH）によって素早く精製し、0.38g（91%）の化合物8をその塩酸塩として得た。
【００９９】
1,2,10,11-テトラヒドロ-6-N,N-ジメチルアミノエチル-6H-ジシクロペンタ[c,g]カルバゾール-3,9-ジオン（9）
化合物2（0.38g、0.79mmol）を、98% H2SO4（3mL）に溶解した。この反応混合物を95℃に加熱し、2.5時間にわたってこの温度に保ち（TLCモニタリング、CHCl3/MeOH、4：1）、氷の中へと注ぎ込んだ。得られた混合物を乾燥Na2CO3で中和し、CHCl3で抽出した。抽出液をエバポレーションし、残渣をカラムクロマトグラフィ（CHCl3／MeOH）によって精製した。得られた粗生成物（0.08g）をMeOHに溶解した。4M HClジオキサン溶液を加え、この混合物をエバポレーションした。残渣をMeOHの中に懸濁させ、この懸濁液を還流させた。（固体はこのプロセスでは溶解しなかった。）この懸濁液を冷却し、固体を濾別し、0.007g（2%）の化合物9を、その塩酸塩として得た。
【０１００】
【化２６】
0005694172.tif 000029
2-メチル-2'-ニトロ-1,1'-ビフェニル（10a）
2-メチルフェニルボロン酸（0.64g、4.7mmol）および2-ニトロヨードベンゼン（1.0g、4.0mmol）を、MeOH（20mL）および水（4mL）の混合物に溶解した。K2CO3（1.1g、8.0mmol）およびPd(OAc)2（0.018g、0.08mmol）を加えた。この反応混合物にアルゴンを流し、50℃に加熱し、この温度で一晩中保ち、セライトに通して濾過した。このセライトをMeOHで洗浄した。濾液をエバポレーションし、残渣を、精製せずにさらに使用した。
【０１０１】
4,4'-ジメトキシ-2-ニトロ-1,1'-ビフェニル（10h）
4-メトキシフェニルボロン酸（3.00g、19.7mmol）および4-クロロ-3-ニトロアニソール（3.69g、11.6mmol）を、ジオキサン（40mL）および水（10mL）の混合物に溶解した。K2CO3（5.44g、23.2mmol）およびPd(PPh3)4（1.14g、0.6mmol）を加えた。この反応混合物をアルゴン中で80℃に加熱し、この温度に一晩中保ち（TLCモニタリング：ヘキサン／酢酸エチル、4：1）、冷却し、セライトに通して濾過した。このセライトをCH2Cl2で洗浄し、濾液をエバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解し、この溶液をエバポレーションし、6.0gの粗製ビフェニル10hを得て、これを精製せずに環化した。
同様の手順を使用して、ビフェニル類10b〜gを得た。
【０１０２】
カルバゾールの合成のための一般的手順
粗製ビフェニル10を(EtO)3Pに溶解した。この反応混合物を、アルゴンの流れの中で約48時間にわたって125〜140℃に保ち（TLCモニタリング：ヘキサン／酢酸エチル、1：1）、水で希釈した。沈殿物を濾別し、Et2Oで洗浄した。沈殿物が生成しない場合、生成物を酢酸エチルで抽出し、抽出液をエバポレーションし、残渣を短いシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル）で精製した。生成物11a〜gの収率を表5に示す。
【０１０３】
2,7-ジメトキシ-9H-カルバゾール（11h）
この反応を、バイアルの中で実施した。粗製ビフェニル10h（6.0g）をP(OEt)3（36mL）に溶解した。このバイアルにアルゴンを流した。この反応混合物を90℃に加熱し、この温度に一晩中保ち、冷却した。結果として、カルバゾールが沈殿した。Et2O/CH2Cl2混合物を加えた。沈殿物を濾別し、CH2Cl2で洗浄した。濾液をエバポレーションした。P(OEt)3を再び加え、この混合物を、環化のために24時間放置した。沈殿物の生成が止むまでこれらの操作を繰り返すと、TLCにより、出発のビフェニルが消失したことが示された。合わせて2.9gの当該カルバゾールを得た（2工程について計算して65%。）。
【０１０４】
化合物11のアルキル化については、カルバゾールのアルキル化のための一般的手順を使用した。化合物12a〜iの収率を表1に示す。
【０１０５】
12のアシル化については、スキーム1について記載した手順と同様の手順を使用した。しかしながら、モノアセチル化のためには、AcClおよびAlCl3量を1.5当量に減少させた。化合物13a〜jの収率を表2に示す。
【０１０６】
【化２７】
0005694172.tif 000030
4,4,5,5-テトラメチル-2-(4-インダノン-1-イル)-[1,3,2]-ジオキソボロラン（14a X=CH2）
4-トリフルオロメチルスルホニルオキシ-1-インダノン（9.7g、34.6mmol）およびビス（ピナコラト）ジボロン（11.4g、45.0mmol）を、ジオキサン（100mL）に溶解した。AcOK（6.8g、69.2mmol）およびPd(dppf)2Cl2（1.3g、1.8mmol）を加えた。この反応混合物をアルゴンの流れの中で80℃に加熱し、この温度に一晩中保ち、冷却し、セライトに通して濾過した。濾液をエバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解し、短いシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、20%（質量）のビス（ピナコラト）ジボロンを含有する生成物9.5gを得た。この生成物を、さらなる精製なしに次の工程のために使用した。
【０１０７】
臭化物からボロン酸エステルを同様にして製造した。1当量のビス（ピナコラト）ジボロンを使用する場合、より純粋な生成物が得られた。
【０１０８】
4,4,5,5-テトラメチル-2-[4-(2-メチルイソインドリン-1-オン)-イル]-[1,3,2]-ジオキソボロラン（14b X=NMe）
4-ブロモ-2-メチルイソインドリン-1-オン（3.23g、14.3mmol）およびビス（ピナコラト）ジボロン（4.72g、18.6mmol）を、ジオキサン（60mL）に溶解した。AcOK（2.80g、28.6mmol）およびPd(dppf)2Cl2（0.5g、0.7mmol）を加えた。この反応混合物をアルゴンの流れの中で80℃に加熱し、この温度に一晩中保ち、冷却し、セライトに通して濾過した。濾液をエバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解し、短いシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、20%（質量）のビス（ピナコラト）ジボロンを含有する生成物4.2gを得た。この生成物をさらなる精製なしに次の工程のために使用した。
【０１０９】
ビフェニル15a（X=CH2、R=H）
4,4,5,5-テトラメチル-2-(4-インダノン-1-イル)-[1,3,2]-ジオキソボロラン（2.17g、8.4mmol）およびo-ニトロヨードベンゼン（2.70g、10.9mmol）を、ジオキサン（30mL）および水（5mL）の混合物に溶解した。K2CO3（2.30g、16.7mmol）およびPd(PPh3)4（0.48g、0.4mmol）を加えた。この反応混合物をアルゴンの流れの中で80℃に加熱し、24時間にわたってこの温度に保ち（TLCモニタリング：ヘキサン／酢酸エチル、4：1）、冷却し、セライトに通して濾過した。濾液をエバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解した。溶解しなかった沈殿物を濾別した。濾液を部分的にエバポレーションし、生成物を短いシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、PPh3Oを含有する生成物2.5gを得た。この生成物を、さらなる精製なしに環化させた。
【０１１０】
ビフェニル15b（X=CH2、R=OMe）
4,4,5,5-テトラメチル-2-(4-インダノン-1-イル)-[1,3,2]-ジオキソボロラン（1.20g、4.6mmol）およびo-ニトロヨードベンゼン（0.87g、4.6mmol）を、ジオキサン（10mL）および水（2mL）の混合物に溶解した。K2CO3（1.28g、9.2mmol）およびPd(PPh3)4（0.27g、0.2mmol）を加えた。この反応混合物をアルゴンの流れの中で80℃に加熱し、24時間にわたってこの温度に保ち（TLCモニタリング：ヘキサン／酢酸エチル、4：1）、冷却し、セライトに通して濾過した。濾液をエバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解した。溶解しなかった沈殿物を濾別した。濾液を部分的にエバポレーションし、生成物を短いシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、PPh3Oを含有する生成物1.25gを得た。この生成物をさらなる精製なしに環化した。
【０１１１】
ビフェニル15c（X=NMe、R=H）
4,4,5,5-テトラメチル-2-[4-(2-メチルイソインドリン-1-オン)-イル]-[1,3,2]-ジオキソボロラン（2.43g、8.9mmol）およびo-ニトロヨードベンゼン（2.44g、9.80mmol）を、ジオキサン（30mL）および水（6mL）の混合物に溶解した。K2CO3（2.50g、18.1mmol）およびPd(PPh3)4（0.51g、0.4mmol）を加えた。この反応混合物をアルゴンの流れの中で80℃に加熱し、24時間にわたってこの温度に保ち（TLCモニタリング：ヘキサン／酢酸エチル、4：1）、冷却し、セライトに通して濾過した。濾液をエバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解した。溶解しなかった沈殿物を濾別した。濾液を部分的にエバポレーションし、生成物を短いシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、PPh3Oを含有する生成物2.3gを得た。この生成物をさらなる精製なしに環化した。
【０１１２】
ビフェニル15d（X=NMe、R=OMe）
4,4,5,5-テトラメチル-2-[4-(2-メチルイソインドリン-1-オン)-イル]-[1,3,2]-ジオキソボロラン（0.97g、3.6mmol）および4-クロロ-3-ニトロアニソール（0.67g、3.6mmol）を、ジオキサン（10mL）および水（2mL）の混合物に溶解した。K2CO3（0.98g、7.2mmol）およびPd(PPh3)4（0.21g、0.2mmol）を加えた。この反応混合物をアルゴンの流れの中で80℃に加熱し、24時間にわたってこの温度に保ち（TLCモニタリング：ヘキサン／酢酸エチル、4：1）、冷却し、セライトに通して濾過した。濾液をエバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解した。溶解しなかった沈殿物を濾別した。濾液を部分的にエバポレーションし、生成物を短いシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、PPh3Oを含有する生成物0.76gを得た。この生成物をさらなる精製なしに環化した。
【０１１３】
カルバゾール16a（X=CH2、R=H）
この反応を、バイアルの中で実施した。4-(2-ニトロフェニル)インダノン-1（2.54g、10.0mmol）をP(OEt)3（8mL）に溶解した。このバイアルにアルゴンを流した。この反応混合物を90℃に加熱し、この温度に一晩中保ち、冷却した。結果として、カルバゾールが沈殿した。CH2Cl2を加えた。沈殿物を濾別し、CH2Cl2で洗浄した。この濾液をエバポレーションした。P(OEt)3（2mL）を再び加え、この混合物を環化のために24時間放置した。沈殿物の生成が止むまでこれらの操作を繰り返すと、TLCにより、出発のビフェニルが消失したことが示された。合わせて0.58gの当該カルバゾールを得た。
【０１１４】
カルバゾール16b（X=CH2、R=OMe）
この反応を、バイアルの中で実施した。4-(4-メトキシ-2-ニトロフェニル)-インダノン-1（1.25g、4.4mmol）をP(OEt)3（8mL）に溶解した。このバイアルにアルゴンを流した。この反応混合物を90℃に加熱し、この温度に一晩中保ち、冷却した。結果として、カルバゾールが沈殿した。CH2Cl2を加えた。沈殿物を濾別し、CH2Cl2で洗浄した。濾液をエバポレーションした。P(OEt)3（1mL）を再び加え、この混合物を環化のために24時間放置した。沈殿物の生成が止むまでこれらの操作を繰り返すと、TLCにより、出発のビフェニルが消失したことが示された。合わせて0.39gの当該カルバゾールを得た。
【０１１５】
カルバゾール16c（X=NMe、R=H）
この反応を、バイアルの中で実施した。4-(2-ニトロフェニル)-2-メチルイソインドリン-1-オン（2.29g、8.5mmol）をP(OEt)3（10mL）に溶解した。このバイアルにアルゴンを流した。この反応混合物を90℃に加熱し、この温度に一晩中保ち、冷却した。結果として、カルバゾールが沈殿した。CH2Cl2を加えた。沈殿物を濾別し、CH2Cl2で洗浄した。濾液をエバポレーションした。P(OEt)3（0.5mL）を再び加え、この混合物を環化のために24時間放置した。沈殿物の生成が止むまでこれらの操作を繰り返すと、TLCにより、出発のビフェニルが消失したことが示された。合わせて0.4gの当該カルバゾールを得た。
【０１１６】
カルバゾール16d（X=NMe、R=OMe）
この反応を、バイアルの中で実施した。4-(4-メトキシ-2-ニトロフェニル)-2-メチルイソインドリン-1-オン（0.76g、2.6mmol）をP(OEt)3（6mL）に溶解した。このバイアルにアルゴンを流した。この反応混合物を90℃に加熱し、この温度に一晩中保ち、冷却した。結果として、カルバゾールが沈殿した。CH2Cl2を加えた。沈殿物を濾別し、CH2Cl2で洗浄した。濾液をエバポレーションした。P(OEt)3（0.5mL）を再び加え、この混合物を環化のために24時間放置した。沈殿物の生成が止むまでこれらの操作を繰り返すと、TLCにより、出発のビフェニルが消失したことが示された。合わせて0.34gの当該カルバゾールを得た。
【０１１７】
16のアルキル化については、カルバゾールのアルキル化のための一般的手順を使用した。生成物17a〜fの収率を表1に示す。
【０１１８】
17のアシル化については、スキーム1について記載した手順と同様の手順を使用した。生成物18a〜dの収率を表2に示す。
【０１１９】
【化２８】
0005694172.tif 000031
ジメチル化のための一般的手順
メトキシ化合物をCH2Cl2に溶解した。この溶液を-40℃に冷却した。DCM中のBBr3の0.5M溶液（１つのメトキシ基について4当量）をアルゴンの流れの中で加えた。10分後、冷却浴を取り除いた。この反応混合物を室温まで加熱し、1時間にわたって保ち（TLCモニタリング、CHCl3／MeOH、4：1）、NaHCO3水溶液およびCH2Cl2の混合物の中へと注ぎ込んだ。有機層を分離し、水層をCH2Cl2でもう１回抽出した。合わせた抽出液をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションした。生成物をカラムクロマトグラフィ（CHCl3／MeOH）によって精製した。生成物19a〜hの収率を表6に示す。
【０１２０】
【化２９】
0005694172.tif 000032
2-ヒドロキシ-9-N,N-ジエチルアミノエチルカルバゾール（20）
2-メトキシ-9-N,N-ジエチルアミノエチルカルバゾール12gをCH2Cl2（10mL）に溶解した。この溶液を-40℃に冷却した。DCM中のBBr3の0.5M溶液（6mL、3.00mmol）をアルゴンの流れの中で加えた。結果として、橙色の懸濁液が生成した。この反応混合物を室温まで加熱し、1.5時間にわたって保ち、NaHCO3水溶液およびCH2Cl2の混合物の中へと注ぎ込んだ。有機層を分離し、水層をCH2Cl2でもう１回抽出した。合わせた抽出液をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションした。生成物をカラムクロマトグラフィ（CHCl3／MeOH）によって精製し、0.176g（92%）の生成物を得た。
【０１２１】
2-アセトキシ-9-N,N-ジエチルアミノエチルカルバゾール（21）
Ac2O（2mL）中の化合物20（0.176g、0.62mmol）の溶液を30分間にわたって還流させ、水の中へと注ぎ込んだ。得られた混合物をNaHCO3で中和し、酢酸エチルで抽出した。抽出液をエバポレーションし、0.16g（79%）の生成物を得た。
【０１２２】
3-アセチル-2-ヒドロキシ-9-N,N-ジエチルアミノエチルカルバゾール（22）
化合物21（0.16g、0.49mmol）をPhNO2（2mL）に溶解し、AlCl3（0.1g、0.75mmol）を加えた。この反応混合物をオイルバスの中で100℃に加熱し、2時間にわたってこの温度に保ち、水で希釈し、Na2CO3で中和し、HCl3で抽出した。抽出液をエバポレーションした。残渣を短いシリカゲルカラムでのクロマトグラフィ（CHCl3／MeOH）によって精製し、0.044g（28%）の化合物22を得た。
【表２−ａ】
0005694172.tif 000033
【表２−ｂ】
0005694172.tif 000034
【表２−ｃ】
0005694172.tif 000035
a DMFを含む。b 収率は正確ではない。粗製カルバゾールをこの製造のために使用した。塩酸塩を経由した精製。c塩酸塩を経由した精製。d 反応混合物を水で希釈した直後に結晶性の物質として単離した。
【表３−ａ】
0005694172.tif 000036
【表３−ｂ】
0005694172.tif 000037
【表３−ｃ】
0005694172.tif 000038
a HPLC精製後。b 出発化合物との混合物を単離し、分離せずにさらに使用した。
【表４−ａ】
0005694172.tif 000039
【表４−ｂ】
0005694172.tif 000040
【表５−ａ】
0005694172.tif 000041
【表５−ｂ】
0005694172.tif 000042
a HPLC精製後。
【表６−ａ】
0005694172.tif 000043
【表６−ｂ】
0005694172.tif 000044
a 結晶として沈殿した。b 生成物は（EtO)3POを含んでおり、精製せずに使用した。c 目的の位置異性体の収率だけを提示する。
【表７−ａ】
0005694172.tif 000045
【表７−ｂ】
0005694172.tif 000046
a HPLC精製後。b 混合物を用いた操作後に得て、HPLCによって分離した。c 塩酸塩を経由した精製。
【実施例】
【０１２３】
実施例1
【化３０】
0005694172.tif 000047
[3-(9H-カルバゾール-9-イル)プロピル]ジメチルアミン（30）
カルバゾール3.0g（18.0mmol）をDMF（20mL）に溶解した。次いで、パラフィン中60% NaH（2.5g、62.5mmol）を加え、この混合物を10分間撹拌した。2-N,N-ジメチルアミノプロピルクロリド3.0g（19.0mmol）を少しずつ加えると、その際に温度は45〜50℃へと上昇した。この反応混合物を2.5時間この温度に保った（TLCモニタリング、CHCl3／MeOH、9：1）。得られた物質を慎重に氷／水混合物の中へと注ぎ込み、酢酸エチルで抽出した。抽出液をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションし、化合物30（4.8g、100%）を茶色の流動性のある油状物として得た。
【０１２４】
1,1'-{9-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-9H-カルバゾール-3,6-ジイル}ビス(2-メチルプロパン-l-オン)（実施例1）
化合物30（0.25g、1.0mmol）をニトロベンゼン（5mL）に溶解した。AlCl3（0.6g、4.5mmol）、次いで塩化イソブチロイル（0.6mL、5.7mmol）を少しずつ加えた。この反応混合物を40分間撹拌した（LC／MSモニタリング）。得られた混合物を氷／水混合物の中へと注ぎ込み、CHCl3で抽出した。合わせた抽出液をエバポレーションし、残渣を短く密なシリカゲルカラムでのクロマトグラフィ（溶離液：CHCl3/MeOH 99：1→90：10）によって精製し、0.189g（47%）の生成物を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 1.20 (12H, d, J=6.7Hz); 1.90-1.97 (2H, m); 2.11 (6H, s); 2.18 (2H, t, J=6.7Hz); 3.91 (2H, 七重線, J=6.7Hz), 4.50 (2H, t, J=6.6Hz); 7.76 (2H, d, J=8.7Hz); 8.14 (2H, dd, J=8.7Hz, J=1.5Hz); 9.11 (2H, d, J=1.5Hz)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 392 [M+H]+。
【０１２５】
実施例2
【化３１】
0005694172.tif 000048
1,1'-(9H-カルバゾール-3,6-ジイル)ジエタノン（31）
カルバゾール（16.9g、0.1mol）をニトロベンゼン（300mL）に溶解した。無水AlCl3（54.0g、0.4mol）を氷浴の中で、撹拌下で加えた。次いでAcCl（55.5g、0.7mol）をゆっくり滴下した。この反応混合物を撹拌下で室温まで加温し、13時間保った。水（500mL）を、激しい泡立ちを避けるために氷浴の中で冷却しながら少量ずつ加えた。冷却浴を取り除き、冷却器を用いてこの混合物を2時間還流させた。生成物をクロロホルム（3×150mL）で抽出した。合わせた抽出液をNaHCO3およびNaClの飽和溶液で連続的に洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。残渣をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、CHCl3-MeOH）によって精製し、112.5g（50%）を得た。
【０１２６】
1,1'-{9-[2-(1-メチルピロリジン-2-イル)エチル]-9H-カルバゾール-3,6-ジイル}ジエタノン（実施例2、3c）
ジアセチル誘導体31（0.97g、3.86mmol）をDMF（7mL）に溶解した。NaH（0.54g、13.5mmol）を加え、この混合物を室温で3〜5分間撹拌した。2-(2-クロロエチル)-1-メチルピロリドン塩酸塩（1.07g、5.8mmol）を加えた。この反応混合物を60℃で24時間撹拌し（TLCモニタリング、CHCl3／MeOH、9：1）、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。抽出液をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションした。残渣をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、CHCl3／MeOH 99：1→90：10）によって精製し、0.90g（64%）の生成物を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 1.41-1.49 (1H, m); 1.54-1.73 (3H, m); 1.76-1.85 (1H, m); 1.97-2.13 (3H, m); 2.14 (3H, s); 2.70 (6H, s); 2.86-2.93 (1H, m); 4.46-4.50 (2H, m); 7.72 (2H, d, J=8.8Hz); 8.12 (2H, dd, J=8.8Hz, J=1.6Hz); 9.04 (2H, d, J=1.6Hz)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 363 [M+H]+。
【０１２７】
実施例3
【化３２】
0005694172.tif 000049
[2-(9H-カルバゾール-9-イル)エチル]ジエチルアミン（32）
カルバゾール（10.0g、59.8mmol）をDMF（60mL）に溶解した。次いで、パラフィン中60% NaH（7.2g、180.0mmol）を少しずつ加えた。この混合物を10分間撹拌した。2-N,N-ジエチルアミノエチルクロリド塩酸塩（10.5g、61.0mmol）を少しずつ加えると、その際に温度は50℃に上昇した。この反応混合物をこの温度に2.5時間保った（TLCモニタリング、ヘキサン／酢酸エチル 4：1）。得られた物質を慎重に氷／水混合物の中へと注ぎ込み、酢酸エチルで抽出した。抽出液をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションし、化合物1（16.0g、100%）を流動性のある茶色の油状物として得た。
【０１２８】
1,1'-{9-[2-(ジエチルアミノ)エチル]-9H-カルバゾール-3,6-ジイル}ビス(3-クロロプロパン-1-オン)塩酸塩（33）
ニトロベンゼン（150mL）中の化合物32（17.9g、67.3mmol）の溶液を氷浴中で冷却した。AlCl3（45.0g、337.1mmol）を少しずつ加えた。次いで3-クロロプロピオニルクロリド（32.4mL、336.7mmol）を10分間滴下した。この反応混合物を40分間撹拌し（LC/MSモニタリング）、氷と希HClとの混合物の中へと注ぎ込み、CHCl3で抽出した。抽出液をエバポレーションした。残渣を密で短いカラム（シリカゲル、CHCl3／MeOH 99：1→90：10）でのクロマトグラフィによって精製し、22.9g（76.3%）の塩酸塩33を得た。
【０１２９】
6-[2-(ジエチルアミノ)エチル-10,11-ジヒドロ-1H-ジシクロペンタ[c,g]カルバゾール-3,9(2H,6H)-ジオン塩酸塩（実施例3）
塩酸塩2（22.9g、51.3mmol）を、98% H2SO4（150mL）に溶解した。この溶液を80℃で4時間保ち（TLCモニタリング、CHCl3/MeOH 4：1）、氷の中へと注ぎ込んだ。得られた混合物をNa2CO3で中和し、CHCl3で抽出した。抽出液をエバポレーションした。残渣を、短く密なカラム（シリカゲル、CHCl3／MeOH 99：1→90：10）でのクロマトグラフィによって精製し、MeOHから再結晶し、0.562g（3%）の生成物を得た。この生成物をCH2Cl2に溶解し、HClジオキサン溶液を加え、この混合物を、乾固するまでエバポレーションした。残渣をエーテルで洗浄し、乾燥し、0.6358gの塩酸塩を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 1.26 (6H, t, J=7.4Hz); 2.77-2.80 (4H, m); 3.42-3.47 (2H, m); 3.23-3.34 (4H, m); 3.83-3.85 (4H, m); 5.88 (2H, t, J=7.8Hz); 7.84 (2H, d, J=8.6Hz); 7.97 (2H, d, J=8.6Hz); 10.75 (1H, br.s)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 375 [M+H]+。
【０１３０】
実施例4
【化３３】
0005694172.tif 000050
4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インダン-1-オン（34）
酢酸カリウム（17.8g、181.6mmol）およびPd(dppf)Cl2（3.3g、4.5mmol）を、ジオキサン（300mL）中の4-ブロモ-1-インダノン（19.3g、91.5mmol）およびビス（ピナコラト）ジボロン（23.2g、91.3mmol）の溶液に加えた。この混合物をアルゴン下で80℃に加熱し、この温度に16時間保ち、冷却し、セライトに通して濾過し、エバポレーションした。残渣をCH2Cl2に溶解した。シリカゲルを用いて短く密なカラム上でこの生成物を精製した（溶離液：ヘキサン-酢酸エチル 100：0→50：50）。34の収率：23.4g。ビス（ピナコラト）ジボロン（約7モル%）を含有するこの生成物を、さらなる精製なしに次の工程で使用した。
【０１３１】
4-(4-メトキシ-2-ニトロフェニル)インダン-1-オン（35）
炭酸カリウム（7.5g、54.3mmol）およびPd(PPh3)4（1.6g、1.4mmol）を、ジオキサン（80mL）および水（20mL）の混合物中の4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インダン-1-オン34（7.0g、27.1mmol）および4-クロロ-3-ニトロアニソール（5.1g、27.1mmol）の溶液に加えた。得られた混合物をアルゴン下で80℃に加熱し、この温度に16時間保ち（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、1：1）、冷却し、セライトに通して濾過し、エバポレーションし、CH2Cl2に溶解させた。次いでこの混合物を不溶部から濾別し、シリカゲルとともにエバポレーションし、シリカゲルを用いて短く密なカラム上で精製した（溶離液：ヘキサン-CH2Cl2 100：0→0：100、CH2Cl2-酢酸エチル 100：0→50：50）。35の収率：5.59g。この生成物をさらなる精製なしに次の工程で使用した。
【０１３２】
8-メトキシ-1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（36）
得られたビフェニル35（5.59g）を5つの部分に分割し（各1.11g）、次いでP(OEt)3（１つあたり7mL）を各部分に加えた。得られた混合物を、フラスコの中でアルゴンブローにさらし、90℃まで加熱し、この温度に３日間保ち、冷却した。カルバゾールが沈殿した。次いでこの反応混合物をエーテルで希釈し、沈殿物を濾別し、CH2Cl2で洗浄した。最初のビフェニルが濾液の中に残っている場合（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、1：1）、この濾液をエバポレーションし、P(OEt)3（１つあたり1mLを各フラスコの中へ）を加えた。この混合物を繰り返された環化に1日さらした。沈殿が止み、かつTLCデータが最初のビフェニルが存在しないことを示すまで、この手順を繰り返した。カルバゾール36の全収率：2.16g。
【０１３３】
6-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-8-メトキシ-1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（37）
化合物36（1.0g、3.98mmol）をCH2Cl2（10mL）の中に懸濁させ、NaH（0.75g、12.0mmol、3当量）を加えた。この混合物を室温で5〜10分間撹拌し、次いで3-ジメチルアミノ-1-プロピルクロリド塩酸塩（0.75g、4.74mmol、1.2当量）を加えた。この反応混合物を70℃に加熱し、この温度に2時間保った（TLCモニタリング、溶離液：CH2Cl2-酢酸エチル、1：1 −  最初のカルバゾールの存在、CHCl3-MeOH、9：1 −  生成物の純度）。得られた混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、エバポレーションし、シリカゲルを用いて短く密なカラム上で精製した（溶離液：CHCl3-MeOH 99：1→90：10）。37の収率：0.84g（63%）。
【０１３４】
9-アセチル-6-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-8-メトキシ-1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（38）
PhNO2（20mL）中の化合物37（0.84g、2.51mmol）の溶液を氷浴中で冷却した。次いでAlCl3（1.7g、12.7mmol、5当量）およびその後でAcCl（0.9mL、12.7mmol、5当量）を加えた。この混合物を40分間保ち（LC/MSモニタリング）、水で希釈し、Na2CO3で中和し、CHCl3で抽出し、エバポレーションした。この生成物を短く密なカラム上で精製した（溶離液：CHCl3-MeOH 99：1→90：10）。38の収率：0.658g（69%）。
【０１３５】
9-アセチル-6-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-8-ヒドロキシ-1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（実施例4；19c）
BBr3の0.5M溶液（16.5mL、5当量）をCH2Cl2（100mL）中の化合物38（0.658g、1.74mmol）の溶液にアルゴン下で滴下し、-40℃に冷却した。この混合物を10分間保ち、次いで冷却浴を取り除き、この混合物を室温まで加熱し、1〜2時間保った（TLCモニタリング、溶離液：CHCl3／NH3-MeOH、9：1）。得られた混合物をNaHCO3水溶液およびCH2Cl2の混合物に注ぎ込んだ。有機層を分離し、水層をCH2Cl2で抽出し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションし、混合物：CHCl3-MeOH-水、40：9：1に溶解させた。生成物を、上記混合物を溶離液として使用してシリカゲルカラムで精製した。実施例4の収率：0.258g（41%）。塩酸塩の製造のために、単離した生成物を、混合物：CH2Cl2-MeOHに溶解し、ジオキサン中のHClの溶液を加えた。得られた混合物を、乾固するまでエバポレーションし、残渣をエーテルで洗浄した。
【０１３６】
1H NMR スペクトル (DMSO-d6): δ 2.14-2.20 (2H, m); 2.70 (6H, d, J=4.9Hz); 2.78-2.81 (2H, m); 3.12-3.17 (2H, m); 3.60-3.62 (2H, m); 4.51 (2H, t, J=7.1Hz); 7.28 (1H, s); 7.73 (2H, s - 縮退したAB系); 8.55 (1H, s); 10.40 (1H, br. s); 12.76 (1H, s)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 364 [M+H]+。
【０１３７】
実施例5
【化３４】
0005694172.tif 000051
4,4'-ジメトキシ-2-ニトロビフェニル（39）
炭酸カリウム（9.10g、65.9mmol）およびPd(PPh3)4（1.90g、1.6mmol）を、ジオキサン（80mL）および水（20mL）の混合物の中の4-メトキシフェニルボロン酸（5.0g、32.9mmol）および4-クロロ-3-ニトロアニソール（6.17g、32.9mmol）の溶液に加えた。得られた混合物をアルゴン下で80℃に加熱し、この温度に16時間保ち（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、4：1）、冷却し、セライトに通して濾過した。生成物をCH2Cl2で洗浄した。残渣をCH2Cl2に溶解し、短く密なカラム上で精製した（溶離液：ヘキサン-CH2Cl2 100：0→0：100、CH2Cl2-酢酸エチル100：0→50：50）。1の収率：8.47g。
【０１３８】
2,7-ジメトキシ-9H-カルバゾール（40）
化合物39（8.47g）を8つの部分に分割した（各1.06g）。次いで、P(OEt)3（１つあたり7mL）を各部分に加えた。得られた混合物をアルゴンブローにさらし、90℃に加熱し、この温度に３日間保ち、冷却し、エーテルで希釈した。得られた沈殿物を濾過し、CH2Cl2で洗浄した。カルバゾール40の収率：3.33g。
【０１３９】
[3-(2,7-ジメトキシ-9H-カルバゾール-9-イル)プロピル]ジメチルアミン（40）
化合物40（0.7g、3.1mmol）をDMF（6mL）の中に懸濁させた。水素化ナトリウム（0.4g、10.0mmol）を加え、この混合物を室温で5〜10分間撹拌した。次いで3-ジメチルアミノ-1-プロピルクロリド塩酸塩（0.73g、4.6mmol）を加えた。得られた混合物を50〜60℃に加熱し、この温度に16時間保ち（TLCモニタリング、溶離液：CH2Cl2-酢酸エチル、1：1 −最初のカルバゾールの存在；CH2Cl2-MeOH、9：1 −生成物の純度）、水で希釈した。得られた白色沈殿物を放置して1時間沈降させ、濾別し、空気中で乾燥した。41の収率：0.96g（100%）。
【０１４０】
1,1'-{9-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2,7-ジメトキシ-9H-カルバゾール-3,6-ジイル}ジエタノン（42）
化合物41（0.96g、3.2mmol）をPhNO2（20mL）に溶解し、この溶液を氷浴上で冷却した。次いで、AcCl（1.1mL、15.4mmol）を加え、次いでAlCl3（2.1g、15.7mmol）を少しずつ加えた。得られた混合物を40分間保ち（LC/MSモニタリング）、水で希釈し、Na2CO3で中和し、CHCl3で抽出し、エバポレーションした。生成物を、シリカゲルを用いて短く密なカラム上で精製した。42の収率：0.787g（62%）。
【０１４１】
1,1'-{9-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2,7-ジヒドロキシ-9H-カルバゾール-3,6-ジイル}ジエタノン（実施例5；19b）
BBr3の0.5M溶液（22.5mL）を、CH2Cl2（90mL）中の化合物42（0.787g、1.99mmol）の溶液にアルゴン下で滴下し、-40℃に冷却した。10分後、冷却浴を取り除き、この混合物を室温まで加熱し、1〜2時間保った（TLCモニタリング、溶離液：クロロホルム-メタノール、4：1）。得られた混合物をソーダ水溶液およびCH2Cl2の混合物に注ぎ込んだ。有機層を分離した。水層をCH2Cl2で抽出し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションし、混合物CHCl3-MeOH-水、40：9：1に溶解させた。生成物をカラム上で精製した。実施例5の収率：0.379g（52%）。
【０１４２】
次いでこの生成物を、混合物CH2Cl2-MeOHに溶解した。ジオキサン中のHClの溶液を加えた。得られた溶液を、乾固するまでエバポレーションし、残渣をCH3CNおよびエーテルで洗浄した。上記生成物（0.379g）の塩基形態から0.339gの塩酸塩を単離した。
【０１４３】
1H NMR (DMSO-d6) δ: 2.09-2.13 (2H, m); 2.72 (6H, s); 2.77 (6H, s); 3.13-3.16 (2H, m); 4.34 (2H, t, J=7.1Hz); 7.13 (2H, s); 8.84 (2H, s); 10.17 (1H, br. s); 12.82 (2H, s)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 369 [M+H]+。
【０１４４】
実施例6
【化３５】
0005694172.tif 000052
4-(2-ニトロフェニル)インダン-1-オン（45）
炭酸カリウム（8.1g、58.7mmol）およびPd(PPh3)4（1.7g、1.5mmol）を、ジオキサン（80mL）および水（20mL）の混合物中の化合物44（7.51g、29.1mmol）および4-クロロ-3-ニトロベンゼン（4.6g、29.1mmol）の溶液に加えた。得られた混合物をアルゴン下で80℃に加熱し、この温度に16時間保ち（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、1：1）、冷却し、セライトに通して濾過し、エバポレーションした。得られた生成物をCH2Cl2に溶解し、不溶性の残渣を濾別した。得られた生成物をシリカゲルとともにエバポレーションし、短く密なカラム上で精製した（溶離液：ヘキサン-CH2Cl2  100：0→0：100、CH2Cl2-酢酸エチル  100：0→50：50）。化合物45（5.0g）を単離し、精製せずに次の工程で使用した。
【０１４５】
1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（46）
化合物45（5.0g）を5つの部分に分割した（各1.0g）。P(OEt)3（１つあたり7mL）を各部分に加えた。得られた生成物をフラスコの中でアルゴンブローにさらし、90℃に加熱し、この温度に３日間保ち、次いで冷却した。カルバゾール沈殿物をエーテルで希釈した。この沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄した。最初のビフェニルが濾液の中に存在する場合（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、1：1）、この濾液をエバポレーションし、次いでP(OEt)3を加え（各フラスコに1mL）、環化に１日さらした。沈殿が止み、かつTLCが最初のビフェニルが存在しないことを示すまで、この手順を繰り返した。カルバゾール46（2.7g）を得た。
【０１４６】
2-ニトロ-N-プロピルベンゼンスルホンアミド（49）
酢酸エチル（25mL）中の2-ニトロフェニルスルホクロリド（8g、36mmol）の溶液を、プロピルアミン（3mL、36.0mmol）、酢酸エチル（15mL）、Na2CO3（4g、37.7mmol）、および水（25mL）の混合物に室温で滴下した。得られた溶液を2時間撹拌した（TLCモニタリング、溶離液：CH2Cl2）。有機層を分離し、水、クエン酸溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。沈殿物は白色物質として結晶化し、これを、ヘキサンを用いて洗浄した。49の収率：（7.47g、85%）。
【０１４７】
N-(3-ブロモプロピル)-2-ニトロ-N-プロピルベンゼンスルホンアミド（50）
1,3-ジブロモプロパン（8.5mL、82.0mmol、10当量）を、DMF（20mL）中の化合物49（2.0g、8.2mmol）の溶液に加えた。次いでNaH（0.6g、15.0mmol）を少しずつ加えた。温度は50〜60℃へと上昇した。この温度で20分間この混合物を撹拌した（TLCモニタリング、溶離液：CH2Cl2）。次いで、この混合物を慎重に氷の中へと注ぎ込んだ。生成物を酢酸エチルで抽出し、抽出液をエバポレーションした。ヘキサンを用いて残渣を1,3-ジブロモプロパンから洗浄した。得られた生成物をCH2Cl2に溶解し、シリカゲルを用いて短く密なカラム上で精製した（溶離液：ヘキサン-CH2Cl2 100：0→0：100）。化合物50（1.87g、62%）を直ちに結晶化できる油状物として単離した。
【０１４８】
2-ニトロ-N-[3-(3-オキソ-2,3-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-6(1H)-イル)プロピル]-N-プロピルベンゼンスルホンアミド（47）
化合物46（0.538g、2.43mmol）および臭化物50（0.9g、2.46mmol）を、CH2Cl2（30mL）に溶解した。次いでNaH（0.15g、3.75mmol、1.5当量）を加えた。この反応混合物を20分間撹拌した（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、1：1）。次いで、この混合物を氷の上へと注ぎ込んだ。生成物を酢酸エチルで抽出し、抽出液をロータリーエバポレーターでエバポレーションした。CH2Cl2の残留分を高真空で除去した。メタノールを、固くなった沈殿物に加えた。生成物を粉にし、この沈殿物を濾別した。47の収率：0.638g（52%）。
【０１４９】
N-[3-(9-アセチル-3-オキソ-2,3-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-6(1H)-イル)プロピル]-2-ニトロ-N-プロピルベンゼンスルホンアミド（48）
化合物47（0.638g、1.26mmol）をPhNO2（7mL）に溶解した。この溶液を氷浴上で冷却し、AlCl3（0.67g、5.02mmol）、次いでAcCl（0.45mL、6.31mmol）を加えた。この混合物を40分間保ち（LC/MSモニタリング）、水で希釈した。生成物をCH2Cl2で抽出した。抽出液をエバポレーションした。残渣をエバポレーションし、生成物をセライトに通した（溶離液：CH2Cl2-酢酸エチル100：0→50：50）。48の収率：0.453g（66%）。
【０１５０】
9-アセチル-6-[3-(プロピルアミノ)プロピル]-1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（実施例6）
化合物48（0.496g、0.91mmol）をMeOH（10mL）およびCHCl3（15mL）の混合物の中に懸濁させた。この混合物を沸騰するまで加熱した。次いでCs2CO3（0.6g、1.82mmol）を加え、直ちにPhSH（0.2mL、1.96mmol）を注ぎ込んだ（この溶液は青色に変わった）。得られた溶液を2時間還流させた（TLCモニタリング、溶離液：CHCl3-MeOH、9：1）。この間に、この反応混合物は緑色に変わった。次いで、この混合物を乾固するまでエバポレーションした。クエン酸の希薄溶液を加えた。黄色の沈殿物を濾別し、エーテルで洗浄し、CH3CNに懸濁させ、還流させた。冷却後、ベージュ色の沈殿物を黄色の濾液から濾別し、次いでエーテルで洗浄した。得られた生成物（0.251g、76%）を単離した。塩基形態を塩酸塩へ変換するために、この生成物をCH2Cl2-メタノール混合物に溶解した。（生成物が完全に溶解するまで、この混合物を加えた。）次いで、ジオキサン中の塩酸の溶液を加えた。この溶液を乾固するまでエバポレーションした。得られた暗色の紅藤色の沈殿物をメタノールおよびアセトニトリルで洗浄した。塩酸塩としての実施例6の収率：0.118g。
【０１５１】
H1-NMR (400 MHz, DMSO-d6) スペクトル: δ 0.88 (3H, t, J=7.32Hz); 1.53-1.62 (2H, m); 2.13-2.20 (2H, m); 2.73 (2H, s); 2.80-2.83 (4H, m); 2.95-2.96 (2H, m); 3.65-3.68 (2H, m); 4.68 (2H, t, J=7.3Hz); 7.81 (1H, d, J=8.6Hz); 7.85 (1H, d, J=8.6Hz); 8.15 (1H, dd, J=8.6Hz, J=1.3Hz); 8.70 (1H, br. s); 8.71 (1H, d, J=1.3Hz)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z  362 [M+H]+。
【０１５２】
実施例7
【化３６】
0005694172.tif 000053
N-(2-ヒドロキシエチル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（54）
エタノールアミン（10mL、165mmol）を酢酸エチル（60mL）に溶解した。次いで、水（100mL）中のNa2CO3（22.7g、214.2mmol）の溶液を加えた。次いで、酢酸エチル（100mL）中の2-ニトロベンゼンスルホニルクロリド（35.0g、157.9mmol）の溶液を撹拌下で滴下した。得られた溶液を室温で2時間撹拌した（TLCモニタリング、溶離液：CH2Cl2）。有機層を分離し、水およびクエン酸の溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。54の収率：白色結晶として29.5g（73%）。
【０１５３】
メタンスルホン酸2-{[(2-ニトロフェニル)スルホニル]アミノ}エチル（55）
トリエチルアミン（20mL、144.6mmol）を、酢酸エチル（300mL）中の化合物54（29.5g、119.9mmol）の溶液に加えた。この混合物を氷浴中で10℃まで冷却した。次いで、酢酸エチル（50mL）中の塩化メシル（10.2mL、131.8mmol）の溶液を20℃以下の温度で滴下した。得られた溶液を室温で3時間撹拌した（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、4：1）。この反応混合物を濾過して、沈殿物  −  トリエチルアミン塩酸塩を除去した。濾液をNaHCO3水溶液、水で洗浄し、エバポレーションした。55の収率：結晶として32.2g（83%）。
【０１５４】
1-[(2-ニトロフェニル)スルホニル]アジリジン（56）
水（50mL）中のKOH（1.73g、31mmol）の溶液を、酢酸エチル（100mL）中の化合物55（10g、31mmol）の溶液に加えた。水層は、黄色に色づいた。この混合物を室温で1時間撹拌した（TLCモニタリング、溶離液：CH2Cl2-酢酸エチル、1：1）。必要に応じて、さらなる分量のKOH溶液（0.5当量）を加えた。有機層を分離し、水、クエン酸の溶液（pH 7まで）、再び水で徹底的に洗浄し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。56の収率：黄色の流動性のある油状物として6.6g（93%）。
【０１５５】
N-[2-(9H-カルバゾール-9-イル)エチル]-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（51）
カルバゾール（1.10g、6.59mmol）をCH3CN（40mL）に溶解した。次いでナトリウム水和物（0.33g、8.25mmol）を加え、この混合物を室温で15〜20分間撹拌した。次いで、CH3CN（30mL）中のアジリジン56（1.5g、7.89mmol）の溶液を一度に加えた。得られた混合物を1時間撹拌し（TLCモニタリング、溶離液：ヘキサン-酢酸エチル、1：1）、水の中へと注ぎ込み、HClを用いてpH 1まで酸性にし、室温で再び撹拌した。徐々に、橙色の生成物がこの濁った溶液から沈殿した。沈殿物を濾過し、MeOHおよびエーテルで洗浄した。51の収率：橙色の結晶として2.15g（83%）。
【０１５６】
N-[2-(3,6-ジアセチル-9H-カルバゾール-9-イル)エチル]-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（52）
化合物51（5.0g、12.7mmol）をPhNO2（30mL）に溶解した。この溶液を氷浴中で冷却した。次いでAlCl3（8.5g、63.7mmol）およびその後でAcCl（4.5mL、63.1mmol）を加えた。この混合物を40分間保ち（LC/MSモニタリング）、水で希釈し、クロロホルムで抽出し、エバポレーションした。生成物を、シリカゲルを用いた短く密なカラム上で精製した（溶離液：CH2Cl2-酢酸エチル 100：0→50：50）。エタノールおよび25%アンモニア水（4：1）の混合物を、残渣に加えた。得られた生成物を1.5〜2時間還流させた。熱い懸濁液を濾別した。生成物52をベージュ色の結晶として単離した（4.11g、68%）。
【０１５７】
1,1'-[9-(2-アミノエチル)-9H-カルバゾール-3,6-ジイル]ジエタノン（53）
CH3CN（150mL）およびメタノール（50mL）の混合物の中で、還流下で化合物52（4.11g、8.58mmol）を溶解させた。次いで、Cs2CO3（8.4g、25.78mmol）を加え、直ちにPhSH（2.6mL、25.48mmol）を注ぎ込んだ。得られた混合物を2.5時間還流させ（TLCモニタリング、溶離液：クロロホルム-メタノール、9：1）、乾固するまでエバポレーションした。次いで、水およびHClの溶液を加えた。結果として、すべての固体の生成物は溶解した。この酸性水溶液を、酢酸エチルが黄色にならなくなるまで酢酸エチルで抽出した。水層をNaHCO3の飽和溶液で中和し、CH2Cl2-MeOH混合物（4：1）で抽出し、抽出液をエバポレーションした。残渣をMeCNで洗い流し、エーテルで洗浄した。53の収率：ベージュ色の結晶として1.25g（50%）。
【０１５８】
1,1'-{9-[2-(イソプロピルアミノ)エチル-9H-カルバゾール-3,6-ジイル}ジエタノン（実施例7；6h）
アセトン（5mL、68.10mmol）を、CH2Cl2（50mL）中の化合物53（1.25g、4.25mmol）の溶液に加えた。次いでSTAB（3.0g、14.15mmol）を加えた。得られた混合物を室温で4.5時間撹拌し（TLCモニタリング、溶離液：CHCl3-MeOH、9：1）、次いでNaHCO3の水溶液の中へと注ぎ込んだ。有機層を分離した。水層をCH2Cl2で抽出した。生成物をNa2SO4で乾燥し、エバポレーションした。残渣をカラム上で精製した（溶離液：CHCl3-MeOH 99：1→90：10）。実施例7（1.04g、73%）を、直ちに結晶化する油状物として単離した。その塩酸塩の製造のために、この塩基をCH2Cl2に溶解した。次いで、ジオキサン中のHClの溶液を加えた。この混合物を乾固するまでエバポレーションした。生成物をエーテルで洗浄した。
【０１５９】
1H NMR (DMSO-d6) スペクトル: δ 1.25 (6H, d, J=6.6Hz); 2.72 (6H, s); 3.33-3.39 (3H, m); 4.87 (2H, t, J=7.3Hz); 7.92 (2H, d, J=8.7Hz); 8.17 (2H, dd, J=8.7Hz, J=1.6Hz); 9.01 (2H, d, J=1.6Hz); 9.24 (1H, br. s); 9.33 (1H, br. s)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 336 [M+H]+。
【０１６０】
実施例8
【化３７】
0005694172.tif 000054
化合物51の合成は、実施例7に記載した。
【０１６１】
N-{2-[3,6-ビス(3-クロロプロパノイル)-9H-カルバゾール-9-イル]エチル}-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（57）
化合物51（20.0g、50.6mmol）をPhNO2（130mL）に溶解し、この溶液を氷浴中で冷却した。次いでAlCl3（34.0g、254.7mmol）およびその後で、塩化3-クロロプロピオニル（25.0mL、259.8mmol）を加えた。この混合物を40分間保ち（LC/MSモニタリング）、希HClおよび氷の混合物の中に注ぎ込み、CHCl3で抽出し、16時間放置した。得られた麦わら色の沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄した。57の収率：18.47g（63%）。
【０１６２】
N-[2-(3,9-ジオキソ-1,2,3,9,10,11-ヘキサヒドロ-6H-ジシクロペンタ[c,g]カルバゾール-6-イル)エチル]-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（58）
硫酸（200mL）を40℃に加熱した。次いで、化合物57（18.47g、32.12mmol）を少しずつ加えた。この混合物を90℃に加熱し、この温度に1.5〜2時間保った（TLCモニタリング、溶離液：CH2Cl2-酢酸エチル、4：1）。得られた混合物を氷の上へと注ぎ込んだ。灰色の沈殿物を濾別し、CHCl3-MeOH（4：1）の混合物を用いてフィルター上で洗浄した。（フィルター上の）残りの沈殿物をDMFを用いて再結晶し、CH3CNおよびエーテルで洗浄した。純粋な58の収率：2.2g（14%）。
【０１６３】
6-(2-アミノエチル)-10,11-ジヒドロ-1H-ジシクロペンタ[c,g]カルバゾール-3,9(2H,6H)-ジオン（59）
化合物58（2.2g、4.38mmol）をクロロホルム（200mL）およびメタノール（200mL）の混合物の中に懸濁させた。次いでCs2CO3（4.3g、13.20mmol）および直ちにPhSH（1.3mL、12.74mmol）を加えた。この溶液を18時間還流させ（LC/MSモニタリング）、乾固するまでエバポレーションした。次いで、クエン酸の水溶液を加えた。得られた溶液をNaHCO3水溶液で中和した。沈殿物を濾別し、CH3CNおよびエーテルで洗浄した。単離した生成物を、精製せずに次の工程で使用した。
【０１６４】
6-[2-(イソプロピルアミノ)エチル]-10,11-ジヒドロ-1H-ジシクロペンタ[c,g]カルバゾール-3,9(2H,6H)-ジオン（実施例8）
粗製化合物59（1.69g）をCH2Cl2（200mL）の中に懸濁させた。次いでアセトン（4mL）およびSTAB（3.4g）を加えた。この混合物を24時間撹拌し（TLCモニタリング、溶離液：CHCl3-MeOH、9：1）、次いでNaHCO3水溶液の中へと注ぎ込んだ。次いで、もう１回分の分量のCH2Cl2およびMeOHを加えた。有機層を分離し、エバポレーションし、MeCNおよびエーテルで洗浄した。実施例8の収率：0.759g。塩酸塩の製造のために、単離した生成物をCH2Cl2およびMeOHの混合物の中に懸濁させ、次いでジオキサン中のHClの溶液を加えた。得られた混合物を乾固するまでエバポレーションし、エタノールを残渣に加えた。このエタノール溶液を還流させ、冷却し、沈殿物を濾別した。化合物 実施例8塩酸塩の収率：0.684g。1H-NMR (DMSO-D6) スペクトル: δ 1.24 (6H, d, J=6.6Hz); 2.77-2.79 (4H, m); 3.34-3.43 (3H, m); 3.81-3.84 (4H, m); 4.91 (2H, t, J=7.3Hz); 7.83 (2H, d, J=8.6Hz); 7.91 (2H, d, J=8.6Hz); 9.11 (2H, br. s)。ELSD: 100%, 
ESI-MS: m/z 360 [M+H] +。
【０１６５】
実施例9
【化３８】
0005694172.tif 000055
N-エチル-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（63）
酢酸エチル（250mL）中の2-ニトロベンゼンスルホニルクロリド（140g、361mmol）の溶液を、室温で70%エチルアミン水溶液（50mL、630mmol）、酢酸エチル（100mL）、Na2CO3（67g、632mmol）、および水（250mL）の混合物に滴下した。この反応混合物を4時間撹拌した（TLCモニタリング、CH2Cl2）。有機層を分離し、水、クエン酸の溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。残渣は白色の結晶性物質へと固化した。この物質をヘキサンで粉にし、濾別し、乾燥し、134g（92%）の生成物を得た。
【０１６６】
N-(3-ブロモプロピル)-N-エチル-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（64）
化合物63（7.8g、33.9mmol）をDMF（100mL）に溶解した。1,3-ジブロモプロパン（35mL、343.0mmol） 次いで少しずつNaH（2.7g、67.5mmol）を加えると、その際に温度は50〜60℃へと上昇した。この反応混合物をこの温度で1時間撹拌し（TLCモニタリング、CH2Cl2）、慎重に氷／水混合物の中へと注ぎ込み、酢酸エチルで抽出した。抽出液をエバポレーションした。残渣をヘキサンで洗浄し、1,3-ジブロモプロパンを除去した。化合物64（9.7g、82%）を粘性の高い黄色油状物として得た。
【０１６７】
N-[3-(9H-カルバゾール-9-イル)プロピル]-N-エチル-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（60）
カルバゾール（4.15g、24.8mmol）および臭化物64（9.7g、27.6mmol）を、DMF（30mL）に溶解した。NaH（2.0g、50.0mmol、2当量）を少しずつ加えると、その際に温度は60℃へと上昇した。この反応混合物を1時間撹拌し（TLCモニタリング、ヘキサン／酢酸エチル 3：2）、氷／水混合物の中へと注ぎ込み、酢酸エチルで抽出した。残渣をエーテルで粉にした。黄色の沈殿物を濾別し、乾燥し、6.65g（61%）の生成物を得た。
【０１６８】
N-{3-[3,6-ビス(3-クロロプロパノイル)-9H-カルバゾール-9-イル]プロピル}-N-エチル-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（61）
化合物63（6.65g、15.2mmol）をPhNO2（70mL）に溶解した。この溶液を氷浴中で冷却した。AlCl3（12.2g、91.4mmol）次いで2-クロロプロピオニルクロリド（8.8mL、91.4mmol）を加えた。この反応混合物を40分間保ち（LC/MSモニタリング）、水で希釈し、CH2Cl2で抽出した。抽出液をエバポレーションした。残渣を短く密なカラムでのクロマトグラフィ（溶離液：CH2Cl2／酢酸エチル 0：100→50：50）によって精製した。残渣をエーテルで粉にし、濾別し、乾燥し、7.60g（81%）の緑がかった結晶性の生成物を得た。
【０１６９】
N-[3-(3,9-ジオキソ-1,2,3,9,10,11-ヘキサヒドロ-6H-ジシクロペンタ[c,g]カルバゾール-6-イル)プロピル]-N-エチル-2-ニトロベンゼンスルホンアミド（62）
H2SO4（110mL）を40℃に加熱した。化合物61（7.6g、12.3mmol）を少しずつ加えた。この反応混合物を100℃に加熱し、この温度に2時間保ち（TLCモニタリング、CH2Cl2／酢酸エチル 4：1）、氷の中へと注ぎ込んだ。生成した灰色の沈殿物を濾別した。次いでCHCl3／MeOH 4：1（500mL）をフィルターに注ぎ込んだ。このフィルター上の固体を溶解させ、生成した溶液を分液漏斗の中へと移した。Na2CO3の水溶液を加えた。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。アセトニトリルを残渣に加えた。ベージュ色の沈殿物を濾別し、アセトニトリル、エーテルで洗浄し、乾燥し、1.56g（23%）のベージュ色の結晶性の生成物を得た。
【０１７０】
6-[3-(エチルアミノ)プロピル]-10,11-ジヒドロ-1H-ジシクロペンタ[c,g]カルバゾール-3,9(2H,6H)-ジオン（実施例9）
化合物62（1.56g、2.86mmol）をCHCl3（80mL）およびMeOH（80mL）の混合物の中に懸濁させた。Cs2CO3（2.8g、8.59mmol）、次いで直ちにPhSH（0.87mL、8.53mmol）を加えた。この反応混合物を6時間還流させ（TLCモニタリング、CHCl3/MeOH 9：1）、乾固するまでエバポレーションした。クエン酸水溶液を加えた。この溶液をNaHCO3の溶液で中和した。生成した沈殿物を濾別し、酢酸エチル、アセトニトリル、水、再びアセトニトリル、およびエーテルで洗浄し、0.75g（73%）の生成物を得た。この生成物をその塩酸塩へと変換した。4M HClジオキサン溶液とともにエバポレーションした後、残渣をMeOHで洗浄し、0.59gの塩酸塩を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 1.66 (3H, t, J=7.3Hz); 2.09-2.17 (2H, m); 2.73-2.77 (4H, m); 2.86-2.91 (2H, m); 2.95-3.10 (2H, m); 3.77-3.80 (4H, m); 4.70 (2H, t, J=7.3Hz); 7.80 (2H, d, J=8.6Hz); 7.89 (2H, d, J=8.6Hz); 8.83 (2H, br．s)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 360 [M+H]+。
【０１７１】
実施例10および11
【化３９】
0005694172.tif 000056
化合物46の合成は、実施例6に記載されている。
【０１７２】
6-[2-(1-メチルピロリジン-2-イル)エチル]-1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（65）
カルバゾール46（0.4g、1.81mmol）をCH2Cl2（7mL）に溶解し、次いでNaH（0.22g、5.50mmol）を加えた。この混合物を室温で5〜10分間撹拌し、2-(2-クロロエチル)-1-メチルピロリドン塩酸塩（0.4g、2.17mmol）を加えた。この混合物を60℃に加熱し、この温度に4時間保った（TLCモニタリング、溶離液：CHCl3-MeOH、9：1）。得られた混合物を水の中へと注ぎ込んだ。生成物を酢酸エチルで抽出し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションした。残渣をエーテルで粉にした。沈殿物を濾別した。65の収率：0.365g（61%） −  S-異性体および0.336g（55%） −  R-異性体。
【０１７３】
9-アセチル-6-[2-(1-メチルピロリジン-2-イル)エチル]-1,6-ジヒドロシクロペンタ[c]カルバゾール-3(2H)-オン（実施例10および11）
化合物65（0.336g、1.00mmol）をPhNO2（7mL）に溶解した。この溶液を氷浴中で冷却した。次いで、AlCl3（0.67g、5.02mmol）およびその後で、AcCl（0.36mL、5.04mmol）を加えた。得られた混合物を40分間保ち（LC/MSモニタリング）、水で希釈し、NaHCO3水溶液で中和し、CHCl3で抽出し、エバポレーションした。生成物を短く密なカラム上で精製した（溶離液：100：0→90：10）。生成物の収率：0.307g（82%） (R)；S-異性体を同様に得た（77%）。
【０１７４】
実施例10
1H-NMR (DMSO-D6) スペクトル: δ 1.69-1.79 (1H, m); 1.86-2.01 (2H, m); 2.07-2.24 (2H, m); 2.42-2.56 (1H, m); 2.73 (3H, s); 2.75 (3H, d, J=5.12Hz); 2.79-2.82 (2H, m); 2.96- 3.05 (1H, m); 3.36-3.43 (1H, m); 3.49-3.57 (1H, m); 3.64-3.67 (2H, m); 4.62-4.75 (2H, m); 7.80 (1H, d, J=8.6Hz); 7.87 (1H, d, J=8.6Hz); 7.96 (1H, d, J=8.6Hz); 8.19 (1H, dd, J=8.6Hz, J=1.5Hz); 8.70 (1H, d, J=1.5Hz); 10.63 (1H, br. s)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 374 [M+H]+。
【０１７５】
実施例11
1H-NMR (DMSO-D6) : δ 1.69-1.79 (1H, m); 1.86-2.01 (2H, m); 2.05-2.24 (2H, m); 2.40-2.46 (1H, m); 2.73 (3H, s); 2.75 (3H, d, J=5.12Hz); 2.79-2.82 (2H, m); 2.98-3.02 (1H, m); 3.36-3.43 (1H, m); 3.47-3.57 (1H, m); 3.63-3.66 (2H, m); 4.62-4.75 (2H, m); 7.80 (1H, d, J=8.6Hz); 7.87 (1H, d, J=8.6Hz); 7.96 (1H, d, J=8.8Hz); 8.18 (1H, dd, J=8.8Hz, J=1.4Hz); 8.69 (1H, d, J=1.4Hz); 10.72 (1H, br. s)。ELSD: 100%, ESI-MS: m/z 374 [M+H]+。
【０１７６】
実施例50の合成
【化４０】
0005694172.tif 000057
工程1．4-ヒドロキシインダン-1-オン（86）
クロマノン85（100g、0.68mol）を、150g NaClおよび500g AlCl3の混合物に150℃で滴下した。得られた混合物を180℃に加熱し、次いで8時間撹拌した。次いでこの混合物を室温まで冷却し、激しく撹拌しながら1kgの砕氷を加えた。均質化した後、この混合物を濾過し、1Lの冷水で洗浄し、乾燥し、約80g（80%）の4-ヒドロキシインダン-1-オン（86）を灰色固体として得た。
【０１７７】
工程2．トリフルオロメタンスルホン酸1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-4-イル（87）
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（152g、0.54mol）を、1LのCH2Cl2中の80gの化合物86および60gのNEt3の溶液に0℃で滴下した。得られた混合物を２時間還流させ、室温まで冷却し、濾過し、水（0.5L）、クエン酸水溶液（50g/0.5L）、ブライン（0.5L）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、エバポレーションし、約100g（67%）の化合物87を暗色の液体として得た。
【０１７８】
工程3．4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)インダン-1-オン（88）
脱気したトルエン（2L）中の酢酸カリウム（48g、0.5mol、1.5当量）、トリフラート87（100g、0.36mol、1.1当量）、ビス（ピナコロ）ジボラン（100g、0.38mol、1.2当量）、PPh3（5g、0.02mol、0.06当量）、およびPdCl2(PPh3)2（6.9g、0.01mol、0.03当量）からなる混合物をアルゴン雰囲気下で一晩中還流させた。得られた混合物を、乾固するまでエバポレーションし、EtOAc／ヘキサン 1／5によってクロマトグラフにかけて溶出させた。所望の生成物を含有する画分を集め、エバポレーションし、約50g（57%）の化合物88を薄黄色固体として得た。
【０１７９】
工程4．4-(2-ニトロフェニル)-インダン-1-オン（89）
速い流れのアルゴンの下で、脱気したトルエン（0.5L）、ボロラン88（10g、39mmol）、2-クロロ-1-ニトロベンゼン（6.3g、40mmol）、Pd(PPh3)4（3g、2.6mmol）および2M Na2CO3（200mL）を混合し、得られた混合物を一晩中還流させた。水（200mL）およびEtOAc（500mL）を加えた。水層を分離し、EtOAcで抽出し（2×500mL）、合わせた抽出液をNa2SO4で乾燥した。溶媒を減圧下でエバポレーションし、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン中の20% EtOAc）によって精製し、9g（91%）のビフェニル中間体89を黄色固体として得た。
【０１８０】
工程5．1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（90）
ビフェニル89（9g、35mmol）および亜リン酸トリエチルを密閉容器に加え、120℃で一晩中加熱した。室温まで冷却した後、この混合物を濾過し、4gの1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オンを得た。ジエチルエーテルを用いた沈殿により、さらなる2gの所望の生成物を得た。黄色粉末としての合わせた90の収率は77.5%であった。
【０１８１】
工程6．9-アセチル-1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（91）
1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン90（6g、27.1mmol）を乾燥CH2Cl2（100mL）の中に懸濁させた。氷浴上で撹拌しながら無水AlCl3（6g、45mmol）を加え、次いでAcCl（2.4mL、33.2mmol）を滴下した。この反応混合物を約5℃で24時間撹拌し、氷水の中へと注ぎ込んだ。沈殿した灰色の固体を濾別し、水（2×100mL）、アセトン（3×50mL）、ジエチルエーテル（3×50mL）で洗浄し、4g（56.3%）の9-アセチル-1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン91を得た。
【０１８２】
工程7．9-アセチル-1,2-ジヒドロ-6-(2-ブロモエチル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（92）
NaH（60%の2g、50mmol）を、乾燥DMF（100mL）中の化合物91（4g、15.2mmol）の懸濁液に加え、水素の発生が止むまでこの混合物を室温で約1時間撹拌した。1,2-ジブロモエタン（20g、106mmol）を窒素下で滴下した。この反応混合物を室温で30分間、次いで60℃で24時間撹拌し、氷水（300mL）の中へと注ぎ込んだ。沈殿した灰色の固体を濾別し、この粗生成物をカラムクロマトグラフィ（CHCl3）によって精製し、2gの出発物質および約1g（2.7mmol、変換された物質から35.5%）のアルキル化されたカルバゾール92をクリーム色の固体として得た。
【０１８３】
工程8．9-アセチル-1,2-ジヒドロ-6-(2-(2-プロピル)アミノエチル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン塩酸塩（実施例50）
臭化物92（1g、2.7mmol）および2-プロピルアミンを密閉容器に加え、180℃で一晩中加熱した。室温まで冷却した後、この混合物を乾固するまでエバポレーションし、残渣を100mLの炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液で処理し、濾過した。濾過ケーキをカラムクロマトグラフィ（CHCl3/MeOH 10／1）によって精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、乾固するまでエバポレーションし、40% HCl水溶液（10mL）で希釈し、乾固するまでエバポレーションし、トルエン（2×100mL）とともに再エバポレーションし、200mg（0.52mmol、19%）の9-アセチル-1,2-ジヒドロ-6-(2-(2-プロピル)アミノエチル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン塩酸塩（実施例50）を灰色固体として得た。
【０１８４】
1H-NMR (DMSO-d6): 1.23 d (6H), 2.74 s (3H), 2.83 m (2H), 3.67 m (2H), 4.87 m (2H), 7.85 dd (2H), 7.97 d (1H), 8.22 d (1H), 8.71 s (1H), 8.9-9.2 幅広いs (2H)。
【０１８５】
実施例51の合成
【化４１】
0005694172.tif 000058
工程1．9-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルバゾール（2b）
NaH（60%の14.4g、360mmol）を、乾燥DMF（200mL）中のカルバゾール1（20g、119.8mmol）の懸濁液にアルゴン下で少しずつ加えた。水素の発生が止むまでこの混合物を室温で約１時間撹拌した。3-ジメチルアミノプロピルクロリド塩酸塩（28g、180mmol）を室温で少しずつ加えた。この反応混合物を室温で20分間、次いで60℃で3時間撹拌し、冷水（500mL）の中へと注ぎ込んだ。生成物をEtOAcで抽出した（2×500mL）。この有機層を10% HCl（200mL）で逆抽出し、この酸性層をEtOAcで抽出し、未反応のカルバゾールを除去した。飽和アンモニア（200mL）を加え、生成物を再度EtOAcで抽出した。溶媒のエバポレーションにより、25g（99mmol、83%）の9-(2-ジメチルアミノプロピル)カルバゾール2bを茶色の油状物として得た。
【０１８６】
工程2．3,6-ジ(4-クロロプロパン-2-オン-イル)-9-(2-ジメチルアミノプロピル)カルバゾール（93）
9-(2-ジメチルアミノプロピル)カルバゾール2b（25g、99mmol）を、乾燥CH2Cl2（150mL）に溶解した。無水AlCl3（40g、300mmol）を撹拌しながらかつ氷浴の中で冷却しながら少しずつ加えた。内部温度を5℃より低く維持しながら、3-クロロ-プロピオニルクロリド（30mL、312mmol）を滴下した。この反応混合物をこの温度で一晩中撹拌し、砕氷の中へと注ぎ込み、CHCl3/MeOH 1／1（3×500mL）で抽出した。抽出液を乾固するまでエバポレーションし、得られた緑色の油状物をジエチルエーテル（2×250mL）で粉にし、20g（46mmol、47%）の3,6-ジ(3-クロロプロピオニル)-9-(2-ジメチルアミノプロピル)-カルバゾール93を灰色の粉末として得た。
【０１８７】
工程3．6-(3-ジメチルアミノプロピル)-1,2,10,11-テトラヒドロ-6H-ビス-(シクロペンタ[c]カルバゾール-3,9-ジオン（実施例51）
3,6-ジ-(3-クロロプロピオニル)-9-(2-ジメチルアミノプロピル)カルバゾール93（20g、46mmol）を、トリフルオロメタンスルホン酸（100g）に、撹拌しながら室温で少しずつ加え、この反応混合物を95℃まで一晩中加熱した。室温まで冷却した後、この反応混合物を氷水の中へと注ぎ込んだ。沈殿物を濾別し、飽和炭酸水素ナトリウムで処理し、再度濾別した。得られた濾過ケーキは、約80%の所望の生成物および20%の異性体を含有していた。メタノールからの１回の結晶化の後、沈殿物を4N HCl／ジオキサン（100mL）で処理し、乾固するまでエバポレーションし、EtOHから再結晶し、約2.8g（7.1mmol、15.4%）の95%の実施例51を白色固体として得た。
【０１８８】
LCMS: 100%; 1H-NMR (DMSO-d6) 95%: 2.18 m (2H), 2.71 s (6H), 2.78 m (4H), 3.15 m (2H), 3.83 m (4H), 4.68 m (2H), 7.85 dd (4H), 10.0 br s (1H)。
【０１８９】
実施例15および17の別の合成ならびに実施例20の合成
【化４２】
0005694172.tif 000059
特に注記しない限り、試薬および溶媒は、商業的供給業者から入手したまま使用した。プロトン核磁気共鳴スペクトルは、Bruker ARX 400分光計で400MHzにおいて得た。溶媒ピークを、プロトンスペクトルについての基準ピークとして使用した。反応の進行をTLCまたは／およびLC-MS分析によって制御した。
【０１９０】
9-(2-ジエチルアミノエチル)-カルバゾール（68）
NaH（60%の14.4g、360mmol、3当量）を、乾燥DMF（200mL）中のカルバゾール（1）（20g、119.8mmol、1当量）の懸濁液にアルゴン下で少しずつ加えた。この混合物を、水素の発生が止むまで室温で30分間撹拌した。2-ジエチルアミノエチルクロリド塩酸塩（31g、180mmol、1.5当量）を室温で少しずつ加えた。この反応混合物を室温で20分間、次いで60℃で3時間撹拌し（TLCモニタリング）、冷水（1L）の中へと注ぎ込んだ。生成物をEtOAcで抽出し（5×200mL）、有機層を10% HCl（400mL）で逆抽出し、酸性層をEtOAcで抽出し、未反応のカルバゾールを除去した。K2CO3を用いて水層のpHを約9に調整し、生成物をEtOAcで再度抽出した。溶媒のエバポレーションにより、29.5g（93%）の9-(2-ジエチルアミノエチル)カルバゾール（68）を茶色の油状物として得た。
【０１９１】
3,6-ジ(4-クロロプロパン-2-オン-イル)-9-(2-ジエチルアミノエチル)カルバゾール塩酸塩（69）
9-(2-ジエチルアミノエチル)カルバゾール（68）（17.9g、67.3mmol、1当量）を、乾燥ジクロロメタン（150mL）に溶解した。無水AlCl3（45g、337mmol、5当量）を、撹拌しながらかつ氷浴の中で冷却しながら少しずつ加えた。内部温度を5℃より低く維持しながら3-クロロ-プロピオニルクロリド（32.4mL、337mmol、5当量）を滴下した。この反応混合物をこの温度で15時間撹拌し、冷3% HClの中へと注ぎ込み（激しい泡立ちを回避するべきである）、CHCl3で抽出した（5×500mL）。抽出液をエバポレーションし、得られた緑色の油状物をジエチルエーテル（5×50mL）で粉にし、24g（74%）の3,6-ジ(3-クロロプロピオニル)-9-(2-ジエチルアミノエチル)-カルバゾール塩酸塩（69）を暗灰色の固体として得た。
【０１９２】
1H-NMR (DMSO-d6): 1.27 (t, 6H), 2.72 (q, 4H), 3.75 (m, 6H), 4.02 (m, 4H), 5.00 (t, 2H), 8.00 (d, 2H), 8.17 (d, 2H), 9.16 (s, 2H), 11.42 (s, 1H)。
【０１９３】
6-(3-ジエチルアミノエチル)-1,2,10,11-テトラヒドロ-6H-ビス-(シクロペンタ[c]カルバゾール-3,9-ジオン（70）
3,6-ジ-(3-クロロプロピオニル)-9-(2-ジエチルアミノエチル)カルバゾール塩酸塩（69）（5g、10.33mmol、1当量）を、トリフルオロメタンスルホン酸（50g、333mmol、32当量）に撹拌しながら室温で少しずつ加え、この反応混合物を95℃まで一晩中加熱した。室温まで冷却した後、この反応混合物を氷水の中へと注ぎ込んだ。10% NaOHを用いてこの水溶液のpHを9に調整し、生成物をEtOAc／THF＝3／1混合物で抽出した。溶媒をエバポレーションし、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（EtOAc中の10% EtOH）によって精製し、1.12g（29%）の純粋な中間体70を白色固体として得た。
【０１９４】
MS(ESI): m/z = 375.3 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.70 (t, 6H), 2.41 (q, 4H), 2.68 (m, 6H), 3.73 (m, 4H), 4.55 (t, 2H), 7.77 (s, 4H)。
【０１９５】
実施例15
中間体70（1.12g、2.99mmol、1当量）をCH2Cl2（20mL）に溶解し、エタノール中の10% HCl溶液（3.4g、93.15mmol、30当量）を加えると、大量の沈殿物の生成が引き起こされた。溶媒を減圧でエバポレーションし、残渣を熱MeOHで粉にし、1.17g（98%）の実施例15を灰白色の固体として得た。
【０１９６】
純度： 97.3%（HPLCによる）； MS(ESI): m/z = 375.3 [M-HCl+H]+；融点=312.1〜314.7℃。
【０１９７】
実施例17および20は、適切なクロロアミン、すなわち(CH3)2CH-NH-CH2CH2-Clまたは(C2H5)NHCH2CH2-Clを使用して、同一のプロセスによって製造される。
【０１９８】
実施例7（化合物6h）の別の合成
【化４３−ａ】
0005694172.tif 000060
【化４３−ｂ】
0005694172.tif 000061
実験
特に注記しない限り、試薬および溶媒は、商業的供給業者から入手したまま使用した。プロトン核磁気共鳴スペクトルは、Bruker ARX 400分光計で400MHzにおいて得た。溶媒ピークを、プロトンスペクトルについての基準ピークとして使用した。特に注記しない限り、TLCはシリカ上で行った。
【０１９９】
3,6-ジアセチルカルバゾール（4）
カルバゾール（20g、0.12mol、1当量）を、アルゴン下で無水CH2Cl2（300mL）の中に懸濁させ、得られた混合物を0℃まで冷却した。内部温度を約0℃に維持しながら、AlCl3（95.5g、0.72mol、6当量）をこの混合物に加え、次いで塩化アセチル（25.5mL、0.36mol、3当量）を滴下した。0℃で3時間撹拌した後、もう１回の分量の塩化アセチル（5mL、0.07mol、0.6当量）を加え、撹拌をさらに2時間続けた。
【０２００】
この反応混合物を、撹拌しながら氷の中へと注ぎ込んだ。固体を濾過によって集め、CH2Cl2、次いで水で洗浄し、真空オーブン中、50℃で乾燥した。カルバゾール4の収率16.3g（54%）。濾液および洗浄液を合わせ、CH2Cl2で抽出した（3×300mL）。CH2Cl2抽出液を飽和NaHCO3（1×300mL）およびブライン（1×300mL）で洗浄した。Na2SO4で乾燥した後、濾液を乾固するまでエバポレーションし、粗生成物を得て、この粗製物をさらに精製することなく使用した。
【０２０１】
MS(ESI): m/z = 252.0 [M+H]+。
【０２０２】
2-N-Boc-2-N-イソプロピルアミノエタノール（14）
(Boc)2O（50.8g、0.23mol、2当量）を、MeOH（200mL）中の2-N-イソプロピルアミノエタノール（72）（22.3mL、70%、0.136mol）の溶液に加えた。この反応混合物を常温で4時間撹拌し、次いで水（1.2L）で希釈し、生成物をEtOAc（4×400mL）で抽出した。合わせたEtOAc抽出液をブライン（1×400mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒をエバポレーションし、粗生成物をカラム（溶離液 ヘキサン：EtOAc 4：1から1：1へ）によって精製し、19.5g（収率70.5%）の純粋な73を粘性の高い油状物として得た。
【０２０３】
3-イソプロピル-2-オキサゾリジノン（74）
MsCl（8.5mL、0.109mol）を、-20℃に冷却した無水THF（200mL）中のアルコール（73）（18.5g、0.091mol）およびTEA（19mL、0.137mol）の溶液に激しく撹拌しながら滴下した。この反応液をゆっくりと常温まで（3時間）加温した。固体を濾過によって除去し、THF（20mL）で洗浄した。飽和Na2CO3（100mL）を濾液に加え、得られた混合物を常温で一晩中撹拌し、次いで水で希釈し（200mL）、EtOAc（3×200mL）で抽出した。合わせたEtOAc抽出液を1% HCl（1×200mL）、ブライン（1×200mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒をエバポレーションし、8.8g（収率75%）の環状カルバメート（74）を得て、これをさらに精製せずに使用した。
【０２０４】
MS(ESI): m/z = 130.1 [M+H]+。
【０２０５】
3,6-ジアセチル-9-(2-N-イソプロピルアミノエチル)-カルバゾール（71）
NMP（150mL）中の3,6-ジアセチルカルバゾール（4）（15.12g、0.06mol）、3-イソプロピル-2-オキサゾリジノン（74）（7.80g、0.06mol）、Cs2CO3（39.2g、0.12mol）、およびDBU（9mL、0.06mol）の混合物を190℃で24時間撹拌し、次いでH2O（500mL）の中へと注ぎ込み、EtOAc（3×300mL）で抽出した。合わせたEtOAc抽出液をブライン（2×200mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒をエバポレーションし、この粗生成物をカラムクロマトグラフィ（溶離液 - （5〜20%）MeOH（0.1%のNH3H2Oを含有する）／EtOAc）によって精製した。最初の画分は未反応の出発物質（約1.7g）を含有していた。純粋な画分を合わせ、溶媒を乾固するまでエバポレーションし、9.36g（NMRによると20%のEtOAcを含有していた）の純粋な（71）を得た。より純度が低い画分を合わせ、乾固するまでエバポレーションし、残渣をEtOAcで粉にし、さらに3.47gの純粋な生成物を得た。全収率 - 54.5%（EtOAcの量を差し引いた後）；（反応した出発物質に基づいて収率61.6%）。
【０２０６】
MS(ESI): m/z = 337.1 [M+H]+
【０２０７】
化合物6h
中間体（71）（3.47g、0.0103mol）をCH2Cl2（30mL）に溶解し、得られた溶液を約5℃に冷却した。10% HCl／EtOH溶液（5.6g、0.0153mol）を撹拌しながら滴下した。40分後、溶媒を真空下で除去し、残渣を高真空下、40℃で乾燥し、3.5g（収率93%）の6hを得た。同様に、71の他の回収分（9.36g、20% EtOAc）を6hに転化した。
【０２０８】
分析データ：純度：99.5%（HPLCによる）；MS(ESI): m/z = 337.3 [M-HCl+H]+；融点=292.7〜294.1℃
【０２０９】
実施例4の別の合成
【化４４】
0005694172.tif 000062
工程1．  Org. Lett., 2007, 9(15), 2915-2918頁に従ったジヒドロクマリン（75）の塩化アルミニウムにより誘導される再環化によって、4-ヒドロキシ-1-インダノン（76）を合成した。この反応を100gの（75）に対して実施し、85%収率で（76）を得た。
【０２１０】
工程2．  インダノン（76）を、CH2Cl2中のPyの存在下でのトリフルオロメタンスルホン酸無水物との反応、およびこれに続くフラッシュクロマトグラフィによって、90%収率でトリフラート（77）に転化した。
【０２１１】
工程3．  トリフラート（79）を、50gの4-メトキシ-2-ニトロフェノール（78）から出発して同様にして定量的収率で合成した。
【０２１２】
工程4および5．  Synthetic Communications, 2006, 36, 3809-3820頁からのビフェニル化合物のワンポット合成のための手順に従って、60gのトリフラート（77）から出発して中間体（81）を80%収率で得た。
【０２１３】
工程6．  1,2-ジクロロベンゼン中で過剰のトリフェニルホスフィンと加熱することによるビフェニル中間体（81）の環化を、最初、小スケールで実施し、エーテルを用いた反応混合物からの沈殿後に、予想されるカルバゾール（82）を約50%収率（最適化せず）で得た。同じ反応を42gの（81）までスケールアップし、27g（73%収率）の純粋な（82）を得た。
【０２１４】
工程7．  中間体（82）のアセチル化（27.8gスケール）を標準的な手順に従ってCH2Cl2中で実施し、26g（80%収率）の中間体（83）を得た。
【０２１５】
工程8．  EtOAc／THFの1：1混合物を用いた徹底的な抽出の後に、TLCによるベースライン不純物を含有する約68%収率の粗生成物（84）を得た。これを、さらに精製することなく、脱メチル化工程のために使用した。
【０２１６】
工程9．  （84）からのメチル基の除去は、Py*HCl／NMPの1：1混合物の中、190℃で10時間基質を加熱することにより成し遂げた。カラムクロマトグラフィによる精製後、7.8g（37%収率）の実施例4（遊離塩基）を得た。これを、EtOH中で10% HCl溶液で処理し、8.4gの純粋な実施例4を得た。
【０２１７】
実験
特に注記しない限り、試薬および溶媒は、商業的供給業者から入手したまま使用した。プロトン核磁気共鳴スペクトルは、Bruker ARX 400分光計で400MHzにおいて得た。溶媒ピークを、プロトンスペクトルについての基準ピークとして使用した。反応の進行をTLCまたは／およびLCMS分析によって制御した。
【０２１８】
4-ヒドロキシ-1-インダノン（76）
無水塩化アルミニウム（550g、4.135mol、4当量）および塩化ナトリウム（105g、1.795mol、2.7当量）を混合し、150℃まで加熱した。内部温度を150〜160℃の間に維持しながら、ジヒドロクマリン（75）（100g、675.7mol、1当量）をゆっくり加えた。添加後、温度を200℃に上昇させ、この反応混合物を1.5時間撹拌し、熱い間に、磁器製の皿の中へと注ぎ込んで冷却した。固化した物質を砕き、400mLの濃HClを含有する氷および水（4L）の激しく撹拌した混合物に加えた。得られた懸濁液を1時間撹拌し、濾過し、水で洗浄し、乾燥し、85g（85%）の粗製4-ヒドロキシ-1-インダノン（76）を灰色の固体として得た。これは、次の工程で使用するには十分に純粋であった。
【０２１９】
トリフルオロメタンスルホン酸1-オキソインダン-4-イルエステル（77）
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（72.3mL、429.7mmol、1.2当量）を、内部温度を5℃より低く維持しながら、乾燥CH2Cl2（450mL）およびピリジン（87mL、1074mmol、3当量）中の4-ヒドロキシ-1-インダノン（77）（53g、358.1mmol、1当量）の懸濁液に加えた。この反応混合物を室温まで加温し、撹拌を1時間続けた。CH2Cl2（300mL）および水（100mL）をこの反応混合物に加え、有機層を分離し、その後2% HCl溶液（3×100mL）、および飽和NaHCO3（2×100mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。CH2Cl2をエバポレーションし、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン中の5%〜10% EtOAc）によって精製し、90g（90%）の純粋な77を茶色の液体として得た。
【０２２０】
1H-NMR (DMSO-d6): 2.76 (t, 2H), 3.19 (t, 2H), 7.65 (dd, 1H), 7.94 (2d, 2H)。
【０２２１】
トリフルオロメタンスルホン酸4-メトキシ-2-ニトロフェニルエステル（78）
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（60mL、350mmol、1.2当量）を、内部温度を5℃より低く維持しながら、乾燥CH2Cl2（550mL）およびピリジン（72.5mL、897mmol、3当量）中の4-メトキシ-2-ニトロフェノール（78）（50.57g、298.9mmol、1当量）の溶液に加えた。この反応混合物を室温まで加温し、一晩中撹拌した。水（100mL）をこの反応混合物に加え、有機層を分離し、その後7% HCl溶液の溶液、次いで飽和NaHCO3で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。このCH2Cl2溶液をSiO2のパッドに通して濾過し、溶媒を真空中で除去し、89g（99%）の純粋なトリフラート79を淡黄色の液体として得た。
【０２２２】
1H-NMR (DMSO-d6): 3.92 (s, 3H), 7.49 (dd, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.81 (d, 1H)。
【０２２３】
4-(4-メトキシ-2-ニトロフェニル)-インダン-1-オン（81）
脱気したトルエン（2L）中の酢酸カリウム（29.44g、0.3mol、1.5当量）、トリフラート（77）（61.44g、0.22mol、1.1当量）、ビス（ピナコロ）ジボラン（60.94g、0.24mol、1.2当量）、PPh3（3.15g、0.012mol、0.06当量）、およびPdCl2(PPh3)2（4.21g、0.006mol、0.03当量）からなる混合物をアルゴン雰囲気下で一晩中還流させた。トリフラート（79）（60.24g、0.2mol、1当量）、Pd(PPh3)4（11.55g、0.01mol、0.05当量）、および2M Na2CO3（800mL）を、アルゴンの速い流れの下で同じフラスコに連続的に加え、得られた溶液を一晩中還流させた。水（200mL）およびEtOAc（500mL）を加え、水層を分離し、EtOAcで抽出し（2×500mL）、合わせた抽出液をNa2SO4で乾燥した。溶媒を減圧でエバポレーションし、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン中の20% EtOAc）によって精製し、44g（80%）のビフェニル中間体（81）を黄色固体として得た。
【０２２４】
8-メトキシ-1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（82）
o-ジクロロベンゼン（400mL）中の4-(4-メトキシ-2-ニトロフェニル)-インダン-1-オン（81）（42g、148.4mmol、1当量）およびトリフェニルホスフィン（116g、445mmol、3当量）の溶液を、激しく撹拌しながら4時間還流させ、次いで0℃まで冷却した。ジエチルエーテル（4L）を加え、沈殿物を濾別し、ジエチルエーテル（3×100mL）で洗浄し、乾燥し、17g（46%）の（82）を得た。濾液をエバポレーションし、残渣を冷MeOH（5×100ml）で洗浄し、さらに10g（27%）のカルバゾール（82）を得た。全収率27g（73%）。
【０２２５】
1H-NMR (DMSO-d6): 2.74 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 6.90 (d, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.97 (d, 1H), 11.79 (s, 1H)。
【０２２６】
9-アセチル-8-メトキシ-1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（83）
8-メトキシ-1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（82）（27.8g、110.8mmol、1当量）を乾燥ジクロロメタン（300mL）に溶解した。撹拌および冷却をしながら無水AlCl3（29.5g、221.5mmol、2当量）を少しずつ加え、次いでAcCl（24mL、332.4mmol、3当量）を滴下した。この反応混合物を約5℃で24時間撹拌し、氷水の中へと注ぎ込んだ（激しい泡立ちを回避するべきである）。沈殿した橙色の固体を濾別し、水（10×100mL）、CH2Cl2（3×50mL）、アセトン（3×50mL）で洗浄し、26g（80%）の9-アセチル-8-メトキシ-1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（83）を得た。
【０２２７】
9-アセチル-8-メトキシ-1,2-ジヒドロ-6-(3-ジメチルアミノプロピル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（84）
NaH（60%の6.88g、171.95mmol、2.5当量）を、乾燥CH2Cl2（300mL）中の9-アセチル-8-メトキシ-1,2-ジヒドロ-6H-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（83）（26g、68.78mmol、1当量）の懸濁液に加え、水素の発生が止むまでこの混合物を室温で20〜30分間撹拌した。3-ジメチルアミノプロピルクロリド塩酸塩（16.3g、103.16mmol、1.5当量）を窒素下で少しずつ加えた。この反応混合物を室温で30分間、次いで60℃で24時間撹拌し、氷水（4L）の中へと注ぎ込んだ。濃HClを用いてこの水溶液をpH約2まで酸性にし、未反応の出発物質をEtOAc／THF＝3／1混合物で抽出した。水層のpHを約9に調整した後、生成物を1：1 EtOAc：THF混合物（10×500mL）で抽出した。合わせた抽出液をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、溶媒をエバポレーションし、22g（68%）の、LC/MSによるとほぼ純粋な粗製カルバゾール（84）を得た。これを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０２２８】
1H-NMR (DMSO-d6): 1.88 (t, 2H), 2.13 (s, 6H), 2.16 (t, 2H), 2.62 (s, 3H), 2.75 (m, 2H), 3.47 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 4.52 (t, 2H), 7.32 (s, 2H), 7.65 (dd, 4H), 8.32 (s, 2H)。
【０２２９】
9-アセチル-8-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-6-(3-ジメチルアミノプロピル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン
NMP（150mL）中の9-アセチル-8-メトキシ-1,2-ジヒドロ-6-(3-ジメチルアミノプロピル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（84）（22g、58.2mmol、1当量）およびピリジン塩酸塩（134.4g、1164mmol、20当量）の溶液を10時間還流させた。この反応混合物を室温まで冷却し、10% K2CO3水溶液（3L）の中へと注ぎ込んだ。沈殿した暗緑色の固体を濾別し、水（5×100mL）で洗浄し、乾燥した。粗生成物をカラムクロマトグラフィによって精製し（溶離液 EtOAc中の10%〜20% MeOH）、7.81（37%）の純粋な9-アセチル-8-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-6-(3-ジメチルアミノプロピル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オンを淡黄色固体として得た。
【０２３０】
MS(ESI): m/z = 363.3 [M+H]+。
【０２３１】
NMR 1H (DMSO): 1.86 (t, 2H), 2.17 (s, 6H), 2.20 (t, 2H), 2.79 (m, 2H), 2.81 (s, 3H), 3.52 (m, 2H), 4.43 (t, 2H), 7.15 (s, 2H), 7.66 (dd, 4H), 8.50 (s, 2H), 12.71 (s, 1H)。
【０２３２】
実施例4
9-アセチル-8-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-6-(3-ジメチルアミノプロピル)-シクロペンタ[c]カルバゾール-3-オン（7.81g、21.46mmol、1当量）を、エタノール（200mL）の水（20mL）および10% HCl溶液（20mL）の混合物に溶解し、この均一溶液を乾固するまでエバポレーションした。残渣を真空中で一晩中乾燥し、8.47gの実施例4を灰色の固体として得た。
【０２３３】
純度： 99.2%（HPLCによる）; MS(ESI): m/z = 363.3 [M-HCl+H]+；融点=241.3℃（分解）; 1H-NMR (DMSO-d6): 2.15 t (2H), 2.68 s (3H), 2.69 s (3H), 2.80 m (2H), 2.82 s (3H), 3.11 m (2H), 3.55 m (2H), 4.53 t (2H), 7.29 s (2H), 7.73 dd (4H), 8.52 s (2H), 11.00 s (1H), 12.76 s (1H)。
【０２３４】
構造式(II)の化合物は、構造式(I)の化合物と同様に製造され、それらは例えば、以下のものが挙げられる：
【化４５】
0005694172.tif 000063
【０２３５】
本発明の化合物のさらなるカルバゾールは以下のものである：
【化４６】
0005694172.tif 000064
【０２３６】
本発明の方法において有用な化合物は、以下の構造を有する：
【化４７】
0005694172.tif 000065
【０２３７】
構造式(I)を有するさらなる例としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：
【化４８−ａ】
0005694172.tif 000066
【化４８−ｂ】
0005694172.tif 000067
【化４８−ｃ】
0005694172.tif 000068
【化４８−ｄ】
0005694172.tif 000069
【０２３８】
それゆえ、本発明の化合物は以下のものを含むが、これらに限定されない：
【化４９−ａ】
0005694172.tif 000070
【化４９−ｂ】
0005694172.tif 000071
【化４９−ｃ】
0005694172.tif 000072
【化４９−ｄ】
0005694172.tif 000073
【化４９−ｅ】
0005694172.tif 000074
【化４９−ｆ】
0005694172.tif 000075
【化４９−ｇ】
0005694172.tif 000076
【化４９−ｈ】
0005694172.tif 000077
【０２３９】
カルバゾール化合物の効力は、当該化合物の、p53を活性化する能力を測定することによって決定される。特に、p53応答性ルシフェラーゼレポーター株化細胞が、p53を活性化することができる化合物を同定するために使用される。p53の活性化は、p53活性をベースラインのp53活性を上回って50%増加させるために必要とされる当該化合物の有効濃度である、EC50値として報告される。
【０２４０】
EC50値の決定のためのp53活性化アッセイを以下のようにして行った：
【０２４１】
定義および用語
ConALuc：p53応答性ルシフェラーゼレポーター構築体
【０２４２】
DMSO：ジメチルスルホキシド
【０２４３】
FBS：ウシ胎仔血清
【０２４４】
装置
96穴ルミノメーター−フルオロスキャン（例えば、Fluoroscan、LabSystems,Inc）、設定−  プログラム、積算時間は0.1秒であり、PMT電圧は1000であり、遅延時間はゼロである。
【０２４５】
多チャネルピペット  50〜300μLの範囲
【０２４６】
96穴プレート
【０２４７】
物質
レポーター株化細胞：
【０２４８】
HT1080-L（ConALucレポーターを有するヒト線維肉腫細胞）
【０２４９】
RCC45ConALuc（ConALucレポーターを有するヒト腎細胞癌株化細胞）
【０２５０】
標準DMEM培地
【０２５１】
標準RPMI培地
【０２５２】
Pen/strep  100×
【０２５３】
トリプシン-EDTA 10×−滅菌PBS中で1×に希釈する
【０２５４】
PBS
【０２５５】
Bright-Glo ルシフェラーゼアッセイ系（Fisher PR-E2620）
【０２５６】
9-アミノアクリジン（9aa） 20mM DMSO溶液（Sigma A38401）、p53活性化因子（陽性対照）
【０２５７】
化合物100 20mM DMSO溶液（Chembridge）、p53活性化因子（陽性対照）
【０２５８】
DMSO（Fisher D128-500）（陰性対照）
方法
1．  2種類の標準細胞、HT1080-LまたはRCC45ConALuc細胞のいずれかを使用した。両方の株化細胞は、p53応答性ルシフェラーゼレポーター構築体を安定に発現する。
2．  HT1080-L細胞は10% FBSを含有するDMEM培地の中で増殖させた。RCC45ConALuc細胞は10% FBSを含有するRPMI培地の中で増殖させた（所望に応じてPen/Strepを1%の最終濃度まで加えてもよい）。両方の株化細胞は、加湿した培養器中、37℃で5% CO2を用いて増殖させた。通常の培養については、3〜4日ごとに（細胞が80〜90%コンフルエントであるときに）、両方の株化細胞を、HT1080-Lについては1：20、およびRCC45ConALuc細胞については1：5の比で1×トリプシン-EDTAを使用して分けた。
3．  実験の前日に、細胞を、37℃の培養器中、1×トリプシン／EDTA溶液の中で約5分間トリプシン処理し、96穴プレートにプレーティングする。HT1080-L細胞は、50μlの量の標準DMEM培地の中に1×104／ウェルの密度で播種した。RCC45ConALucは、標準RPMI培地の50μLの量の中に2×104／ウェルの密度で播種した。
4．  翌日、細胞が下記の表1にある最終の化学物質濃度で処理されるように、標準DMEM培地中での原液の希釈によって種々のカルバゾール化合物を製造した。原液は、DMSO中で作製した。典型的には、化学物質は20mM原液として作製した。しかしながら、この濃度は与えられた化合物の溶解性に依存し、それゆえ実際の原液濃度を実験の時に記録した（例えば、溶解性がより低い化合物は、5または10mMの原液濃度を有しうる）。
5．  各試験化合物は96穴プレートの2列を使用し、従って4つの化合物（例えば、W、X、Y、Z）を１つのプレートで同時に試験した。試験化合物に加えて、各プレートは、陽性対照および陰性対照を含んでいた。陽性対照として、9aaを3μMの用量で使用した。陰性対照として、DMSOを最終濃度0.1%で使用した。
【表８】
0005694172.tif 000078
1．  プレートに加えた化学物質の希釈物を標準DMEM中の2×濃度として作製し、対応するウェルに50μlの量で加えた。
2．  化学物質を、40μM（最高濃度、例えば20μMの2×）から出発した2倍の段階希釈によって標準DMEM中で希釈した。１つの株化細胞については、最小量は標準DMEM中の各濃度の化学物質の2×使用液125μLであった。
3．  各プレートに１つの濃度で加えられた陽性対照に加えて、化合物100またはスクリーニングの各段階で最も活性な化合物という陽性対照を全濃度範囲において各アッセイのラン（run）に加え、適正でかつロバストなアッセイの実施（ラン間のp53活性化の用量反応曲線の比較によって見積もられる）を確実にした。
4．化合物の添加から１６時間後、最高濃度の化合物を有するすべてのウェルを、毒性効果の存在について顕微鏡でチェックする。なぜなら、化合物によって引き起こされる細胞死があると、ルシフェラーゼ活性を検出することができない可能性があるからである。細胞毒性が明白な場合、同じ化合物の他の用量を毒性の存在についてチェックした。毒性効果を引き起こす最低用量を記録した。細胞毒性が3〜4の最低化合物用量で（ここで用いる用量スキームでは、0.3μM以下で）観察された場合、より低い濃度範囲で別個にその化合物を再試験し、少なくとも4つの2倍異なる用量の化合物が細胞毒性の兆候なしに試験されるようにした）。
5．  顕微鏡による検査の後、15μLのBright Gloルシフェラーゼアッセイシステムを各ウェルに加え、室温での5分間のインキュベーション後、そのプレートを、96穴プレートルミノメーター上で0.1秒の測定時間で読み取った。振盪工程を、測定前に含めた。
6．各化学物質の各濃度についてのルシフェラーゼ活性化の倍率を、各化学物質濃度での検出されたルシフェラーゼ活性を、同じプレート上でのDMSO対照に対するルシフェラーゼ活性の平均で割ることにより算出した。次いでこの倍率を化学物質濃度に対してプロットし、化合物が活性かどうかを決定した。データから、最大倍率活性化およびEmax（最大のp53活性化を引き起こす濃度）の両方を決定した。
7．  各化合物について、このアッセイをさらに2回繰り返す。3つのランが完了すると、生データを使用してEC50値を算出した。
【０２５９】
以下の場合は、アッセイは妥当でないと考えた：
二つ組間の差が、読み取り値の10%超に対して10%増加する；
DMSOで処理した細胞の死が観察される；
3倍未満の、陽性対照（化合物3a、0.4μM）で処理した細胞におけるルシフェラーゼ誘導  対  DMSOで処理した細胞のルシフェラーゼ活性；
陽性対照（例えば化合物100、0.03〜20μM）を用いたルシフェラーゼ誘導の用量依存的曲線を得ることができない。
【０２６０】
以下は、本発明の方法で有用な種々のカルバゾール化合物に対するEC50値の非限定的な例である：
【表９】
0005694172.tif 000079
【０２６１】
本発明の化合物および医薬組成物は、活性成分がその意図された目的を達成するための治療上有効量で投与されるものを包含する。「治療上有効量」は、所望の効果の達成をもたらす、本発明のカルバゾール化合物の量を指す。当該カルバゾール化合物の毒性および治療有効性は、例えばLD50（集団の50%に対して致死的な用量）およびED50（集団の50%において治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養液中または実験動物中での標準的な医薬的手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比が治療指数であり、これはLD50とED50とのの比として表される。高治療指数を呈する化合物は好ましい。このようなデータから得られたデータは、ヒトにおける使用のための投薬量範囲を策定する際に使用することができる。この投薬量は、毒性がほとんどないかまたはまったくないED50を含む、循環する化合物濃度の範囲内にあることが好ましい。この投薬量は、用いられる剤形、および利用される投与経路に応じてこの範囲内で変わりうる。治療上有効量の決定は、とりわけ本願明細書で提示される詳細な開示を踏まえると、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２６２】
治療における使用のために必要とされる構造式(I)または(II)のカルバゾール化合物の治療上有効量は、治療しようとする状態の性質、活性が所望される時間の長さ、ならびに患者の年齢および状態とともに変わり、最終的には主治医によって決定される。投薬量および間隔は、所望の治療効果を維持するのに十分な当該カルバゾール化合物の血漿濃度を与えるように、個々に調整することができる。所望の用量は、単回投与で、または適切な間隔で投与された複数回投与として、例えば１日あたり１、２、３、４またはこれより多くの部分用量（subdoses）として都合よく投与することができる。複数回投与は、多くの場合で所望され、または必要とされる。例えば、本発明のカルバゾール化合物は、以下の頻度で投与することができる：4日間隔で１日あたり１用量として送達される4用量（q4d×4）；3日間隔で１日あたり１用量として送達される4用量（q3d×4）；5日間隔で１日あたり送達される１用量（qd×5）；１週あたり１用量で3週間（qwk3）；2日の休みを伴う5回の毎日用量、およびもう5回の毎日用量（5／2／5）；または、状況に対して適切と決定されるいずれかの用量の投与計画。
【０２６３】
構造式(I)もしくは(II)のカルバゾール化合物を含有する組成物、またはそれを含有する組成物の投薬量は、約1ng/kg〜約200mg/kg、約1μg/kg〜約100mg/kg、または約1mg/kg〜約50mg/kgであってもよい。組成物の投薬量は、約1μg/kgを含めた（これに限定されない）いずれの投薬量にあってもよい。組成物の投薬量は、約1μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg、100μg/kg、125μg/kg、150μg/kg、175μg/kg、200μg/kg、225μg/kg、250μg/kg、275μg/kg、300μg/kg、325μg/kg、350μg/kg、375μg/kg、400μg/kg、425μg/kg、450μg/kg、475μg/kg、500μg/kg、525μg/kg、550μg/kg、575μg/kg、600μg/kg、625μg/kg、650μg/kg、675μg/kg、700μg/kg、725μg/kg、750μg/kg、775μg/kg、800μg/kg、825μg/kg、850μg/kg、875μg/kg、900μg/kg、925μg/kg、950μg/kg、975μg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、125mg/kg、150mg/kg、175mg/kg、または200mg/kgを含めた（これらに限定されない）いずれの投薬量にあってもよい。上記の投薬量は、平均の症例についての例示的なものであるが、より高投薬量または低投薬量でメリットを受ける個々の例が存在する可能性があり、そのような例は本発明の範囲内にある。
【０２６４】
他の治療法と組み合わせて投与された場合、本発明のカルバゾール化合物は、比較的より低投薬量で投与されてもよい。加えて、標的化剤の使用により、必要な投薬量を相対的に低くしてもよい。特定の化合物は、低毒性および高クリアランスを含めた（これらに限定されない）要因に起因して、相対的に高投薬量で投与されてもよい。
【０２６５】
ヒトでの使用のために、構造式(I)または(II)の化合物は単独で投与されうるが、一般に、意図された投与経路および標準的な薬務に関して選択される医薬担体との混合物で投与される。本発明による使用のための医薬組成物は、賦形剤を含む１以上の生理的に許容できる担体および式(I)または(II)の化合物の医薬調剤への加工を容易にする補助剤を使用して従来の様式で調合することができる。
【０２６６】
本発明のカルバゾール化合物は、化学療法および／または放射線療法などの他の抗癌治療と同時にまたは拍節的に投与することができる。用語「同時の」または「同時に」は、他の抗癌治療および当該カルバゾール化合物が互いに6時間、3時間またはこれより短時間以内に投与されるということを意味する。用語「拍節的に（metronomically）」は、その抗癌治療とは異なる時期かつ反復投与に対して所定頻度での他の抗癌治療、および／または当該抗癌治療計画の投与を意味する。
【０２６７】
当該カルバゾール化合物、または当該カルバゾール化合物を含有する組成物は、経口的に、非経口的に、舌下に、経皮的に、直腸に、経粘膜的に、局所的に、吸入を介して、口腔内投与を介して、またはこれらの組み合わせを含めた（これらに限定されない）いずれかの方法で投与することができる。非経口投与としては、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、および関節内が挙げられるが、これらに限定されない。当該カルバゾール化合物は、インプラントの形態で投与することもでき、このインプラントの形態は、化合物の徐放、およびゆっくり制御される静脈内注入を可能にする。
【０２６８】
本発明のカルバゾール化合物は、様々な疾患および状態を治療するするために使用することができる。例えば、本発明の化合物は、癌の治療において放射線および／または化学療法剤と組み合わせて使用することができる。例えば、当該カルバゾール化合物は、通例は代謝拮抗物質、例えば、メトトレキセートまたは5-フルオロウラシル（5-FU）を用いて処置される腫瘍の治療を高めるために使用することができる。
【０２６９】
本発明のカルバゾール化合物の使用により、癌細胞の部分的または完全な退行、すなわち、細胞集団からのこのような細胞の部分的または完全な消失を生じることができる。例えば、本発明の方法は、腫瘍成長の速度を遅くするため、腫瘍のサイズまたは数を減少させるため、または部分的もしくは完全な腫瘍の退行を誘導するために使用することができる。
【０２７０】
本発明のカルバゾール化合物は、疾患または状態をインビボで治療することを必要とする個体への投与によって、疾患または状態をインビボで治療するために使用することができる。この疾患または状態は癌であってもよい。様々な癌を治療することができ、その例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：膀胱癌（急速進行性（accelerated）膀胱癌および転移性（metastic）膀胱癌を含む）、乳癌、結腸癌（結直腸癌を含む）、腎臓癌、肝癌、肺癌（小細胞性肺癌および非小細胞性肺癌および肺腺癌を含む）、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿生殖器癌、リンパ系の癌、直腸癌、咽頭癌、膵臓癌（膵外分泌癌を含む）、食道癌、胃癌、胆嚢癌、子宮頸癌、甲状腺癌、腎臓癌、および皮膚癌（扁平上皮癌を含む）を含めた癌腫；白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、およびバーキットリンパ腫（Burketts lymphoma）を含めたリンパ系の造血器腫瘍、急性骨髄性白血病および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄球性白血病、および前骨髄球性白血病を含めた骨髄系の造血器腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、およびシュワン腫を含めた中枢神経系および末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫（rhabdomyoscarcoma）、および骨肉腫を含めた間葉系由来の腫瘍；ならびに黒色腫、色素性乾皮症（xenoderma pigmentosum）、角化棘細胞腫（keratoactanthoma）、精上皮腫、濾胞性甲状腺癌、奇形癌腫、腎細胞癌（RCC）、膵臓癌、骨髄腫、骨髄球性白血病およびリンパ芽球性白血病、神経芽細胞腫、および神経膠芽腫を含めた他の腫瘍。
【０２７１】
ヒト成人Tリンパ芽球性白血病（ATL）の原因因子である、HTLVのtaxによって誘導される形質転換は、RCCに関与する同じ分子標的を共有する可能性がある。例えば、NF-κBは、taxで形質転換された細胞の中で構成的に活性である。RCCと同様に、p53活性は、taxで形質転換された細胞の中でNF-κBの活性化を通して阻害され、p53阻害はp300の隔絶を伴わない。p53活性化の共通の機序に基づいて、当該組成物は、HTLVによって誘導される白血病を治療するためにも使用されうる。それらのp53の状態に関わらず、大多数のヒトの癌は、構成的に活性化過剰のNF-κBを有する。当該組成物はまた、トランス活性化NF-κB複合体をトランス抑制複合体へと再プログラム化することにより、NF-κBを阻害することができ、これは、そのp53状態に関わらず、いずれの腫瘍の治療に対しても使用することができる。当該組成物は、さらに、HIV感染を治療するために使用することができる。なぜなら、HIV LTRはNF-κB活性に強く依存するからである。
【０２７２】
当該組成物は、構成的NF-κB活性化によって引き起こされうる抗癌剤耐性を克服するためのアジュバント療法としても使用することができる。この抗癌剤は、本願明細書に記載されるように、化学療法剤または放射線であってもよい。
【０２７３】
本発明の１つの方法は、一本鎖または二本鎖DNAの切断をもたらすことができる、またはDNA複製または細胞増殖を遮断することができる化学療法剤と組み合わせた、治療上有効量の本発明のカルバゾール化合物の投与を含む。あるいは、本発明の方法は、癌細胞の増殖を阻害することにおいて活性を有する抗体、例えばハーセプチンの使用を含む治療と組み合わせた、治療上有効量の少なくとも１つの本発明のカルバゾール化合物の投与を含む。従って、癌、例えば、結直腸癌、頭頸部癌、膵臓癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、外陰癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、腎細胞癌、卵嚢癌、脳腫瘍、骨肉腫、および肺癌は、化学療法剤または抗体と組み合わせた本発明のカルバゾールの投与による高められた治療を受けやすい。
【０２７４】
本発明によって治療できる癌には、固形腫瘍、すなわち、癌腫および肉腫も含まれる。癌腫には、周囲の組織に浸潤して（infiltrate）（すなわち、侵入して（invade））転移を生じる上皮細胞由来の悪性新生物が含まれる。腺癌は、腺組織、または認識できる腺構造を形成する組織に由来する癌腫である。癌の別の幅広いカテゴリーには、細胞が胚性結合組織のような線維性物質または同種物質の中に包埋されている腫瘍である肉腫を含む。本発明はまた、白血病、リンパ腫、および典型的には腫瘤としては存在せず、脈管系またはリンパ細網系に分布している他の癌を含めた骨髄系またはリンパ系の癌の治療をも可能にする。
【０２７５】
本発明のカルバゾール化合物によって治療できる癌のさらなる形態としては、例えば、成人および小児の腫瘍学、固形腫瘍／悪性腫瘍の増殖、粘液性肉腫および円形細胞癌、局所的に進行した腫瘍、転移性癌、ヒト軟部肉腫（ユーイング肉腫を含む）、癌転移（リンパ行性転移を含む）、扁平上皮癌、特に頭頸部の扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、口腔癌、血液細胞の悪性腫瘍、（多発性骨髄腫を含む）、白血病（急性リンパ球性白血病、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、およびヘアリー細胞白血病を含む）、体液性リンパ腫（体腔性リンパ腫）、胸腺リンパ腫肺癌（thymic lymphoma lung cancer）（小細胞癌、皮膚T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫を含む）、副腎皮質の癌、ACTH産生腫瘍、非小細胞癌、乳癌（小細胞癌および腺管癌を含む）、胃腸癌（胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、および結腸直腸の新生物に関連するポリープを含む）、膵臓癌、肝癌、泌尿器の癌（原発性表在性膀胱腫瘍などの膀胱癌、膀胱の浸潤性移行上皮癌、および筋肉浸潤性膀胱癌を含む）、前立腺癌、女性生殖器の悪性腫瘍（卵巣癌、原発性腹膜上皮新生物、子宮頸癌、子宮内膜癌、膣内癌、外陰部の癌、子宮癌および卵胞の固形腫瘍を含む）、男性生殖器の悪性腫瘍（精巣癌および陰茎癌を含む）、腎癌（腎細胞癌を含む）、脳癌（内因性の脳腫瘍、神経芽細胞腫、星状細胞脳腫瘍、神経膠腫、および中枢神経系における転移性腫瘍細胞浸潤を含む）、骨癌（骨腫および骨肉腫を含む）、皮膚癌（悪性黒色腫、ヒトの皮膚の角化細胞の腫瘍進行、および扁平上皮細胞癌を含む）、甲状腺癌、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、腹水、悪性胸水、中皮腫、ウィルムス腫瘍、胆嚢癌、絨毛性新生物、血管外皮腫、およびカポジ肉腫が挙げられる。従って、本発明のカルバゾール化合物の投与は、治療計画を高めると予想される。
【０２７６】
本発明の化合物はまた、炎症性疾患の治療において薬物の有効性を増強しうる。本発明のカルバゾール化合物は、TNF、IL-1、IL-6、IL-8、および多くの他のものなどの炎症促進性のNF-κB標的の発現／分泌の抑制を伴うNF-κB応答の、強力な阻害剤である。それゆえ、本発明のカルバゾールによるNF-κBの阻害は、局所的なおよび全身性の炎症反応の抑制につながるであろう。本発明のカルバゾールと非常に類似した機序によって作用すると仮定されるキナクリンは、自己免疫疾患および慢性炎症の治療のための抗炎症薬として広く使用された。
【０２７７】
本発明の方法に適した化合物との併用療法から恩恵を受けうる疾患の例は、関節リウマチ、乾癬、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、および全身性紅斑性狼瘡（SLE）である。関節炎、ウェゲナー肉芽腫症、およびSLEの治療は、電離放射線、メトトレキセート、およびシクロホスファミドなどの免疫抑制療法の使用を伴うことが多い。このような治療は、典型的には直接的にまたは間接的にDNA損傷を誘導する。原因の免疫細胞内でのNF-κBの阻害および／またはp53の活性化により、その細胞は、これらの標準的な治療による制御に対する感受性がより高くなる。乾癬および白斑は、一般に、ソラレンと組み合わせて紫外放射線（UV）を用いて治療される。本発明のカルバゾール化合物は、UVおよびソラレンの殺効果を誘導し、この治療計画の治療指数を上昇させる。一般に、本発明の方法において有用なカルバゾール化合物は、現在使用される免疫抑制薬と組み合わせられるときに、炎症性疾患細胞の制御を増強する。
【０２７８】
上記の状態に加えて、本発明はまた、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、血管炎、腎炎、網膜症、腎臟病、増殖性皮膚障害、乾癬、ケロイド瘢痕、日光角化症、スティーブンス・ジョンソン症候群、関節リウマチ（RA）、全身型若年性慢性関節炎（JCA）、骨粗鬆症、全身性エリテマトーデス、眼の過剰増殖性疾患（上皮の深行増殖、増殖性硝子体網膜症（PVR）、糖尿病性網膜症（diabetic retropathy）を含む）、血管増殖性（Hemangio-proiferative）疾患、魚鱗癬、および乳頭腫などの状態（これらに限定されない）を治療する方法において使用することができる。
【０２７９】
本発明のカルバゾールはまた、例えば、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌（グラム陽性菌およびグラム陰性菌（Salmonella（サルモネラ菌）が挙げられる）に対する抗菌活性；抗原虫活性；および抗ウイルス活性を示す。
【０２８０】
当業者は理解するように、さらなる活性剤または補助剤を本願明細書に記載される方法において使用することができる。本願明細書において治療に言及することは、予防に、およびすでに罹患している疾患または症候の処置にも及ぶ。
【０２８１】
本発明は、エキソビボで細胞集団に適用することができる。例えば、本発明のカルバゾール化合物は、与えられた徴候、細胞の種類、患者、および他のパラメータについての本発明のカルバゾール化合物の投与の最適のスケジュールおよび／または投薬を決定するために、エキソビボで使用することができる。このような使用から収集された情報は、実験目的のために、またはインビボでの治療のためのプロトコルを決めるためにクリニックで使用することができる。本発明が適合する他のエキソビボでの使用は当業者には明らかである。
【０２８２】
本発明のカルバゾール化合物は、放射線と組み合わせて投与することもできる。電磁放射線を用いて治療できる疾患には、腫瘍性疾患、良性腫瘍および悪性腫瘍、ならびに癌性細胞が含まれる。
【０２８３】
本願明細書に列挙されていない他の疾患の電磁放射線処置も本発明によって企図される。本発明の好ましい実施形態は以下の電磁放射線を用いる：γ線（10-20〜10-13m）、X線（10-12〜10-9m）、紫外光（10nm〜400nm）、可視光（400nm〜700nm）、赤外線（700nm〜1mm）、およびマイクロ波放射線（1mm〜30cm）。
【０２８４】
多くの癌治療プロトコルは、現在、電磁放射線、例えば、X線によって活性化される放射線増感剤を用いる。X線で活性化される放射線増感剤の例としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：メトロニダゾール、ミソニダゾール、デスメチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンC、RSU 1069、SR 4233、EO9、RB 6145、ニコチンアミド、5-ブロモデオキシウリジン（BUdR）、5-ヨードデオキシウリジン（IUdR）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（FUdR）、ヒドロキシ尿素、シス-プラチン、ならびにそれらの治療上有効な類似体および誘導体。
【０２８５】
癌の光力学療法（PDT）は、感作薬の放射線活性化因子として可視光を用いる。光線力学的放射線増感剤の例としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ヘマトポルフィリン誘導体、PHOTOFRIN（登録商標）、ベンゾポルフィリン誘導体、NPe6、スズ エチオポルフィリン（SnET2）、フェオホルビド（pheoborbide）-a、バクテリオクロロフィル-a、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニン、ならびにそれらの治療上有効な類似体および誘導体。
【０２８６】
放射線増感剤は、本発明のカルバゾール化合物に加えて、治療上有効量の１以上の化合物と併用して投与することができ、このような化合物としては、標的細胞への放射線増感剤の取り込みを促進する化合物、治療薬、栄養素、および／もしくは酸素の標的細胞への流れを制御する化合物、付加的な放射線を用いてもしくは用いずに腫瘍に作用する化学療法剤、または癌もしくは他の疾患を治療するための他の治療上有効な化合物が挙げられるが、これらに限定されない。放射線増感剤と併用して使用することができるさらなる治療薬の例としては、5-フルオロウラシル（5-FU）、ロイコボリン、酸素、カルボジェン、赤血球輸血、ペルフルオロカーボン類（例えば、FLUOSOLW（登録商標）-DA）、2,3-DPG、BW12C、カルシウム拮抗薬、ペントキシフィリン、抗血管新生化合物、ヒドララジン、およびL-BSOが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８７】
化学療法剤は、アポトーシスを誘導するいずれの薬理学的な薬剤または化合物であってもよい。この薬理学的な薬剤または化合物は、例えば小有機分子、ペプチド、ポリペプチド、核酸、または抗体であってもよい。使用することができる化学療法剤としては、アルキル化剤、代謝拮抗物質、ホルモンおよびその拮抗薬、天然物およびその誘導体、放射性同位体、抗体、ならびに天然物、ならびにこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、本発明のカルバゾール化合物は、ドキソルビシンおよび他のアントラサイクリン類似体などの抗生物質、シクロホスファミドなどのナイトロジェンマスタード、5-フルオロウラシルなどのピリミジン類似体、シス-プラチン、ヒドロキシ尿素、タキソールならびにその天然および合成の誘導体などとともに投与することができる。別の例として、腫瘍がゴナドトロピン依存的細胞およびゴナドトロピン非依存的細胞を含む乳腺癌などの混合腫瘍の場合には、この化合物は、リュープロリドまたはゴセレリン（LH-RHの合成ペプチド類似体）と併用して投与することができる。他の抗悪性腫瘍プロトコルには、本願明細書において「補助的な抗悪性腫瘍様式」とも呼ばれる別の処置様式、例えば、外科手術または放射線とともに阻害剤化合物を使用することが含まれる。本発明で有用なさらなる化学療法剤としては、ホルモンおよびその拮抗薬、放射性同位体、抗体、天然物、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【０２８８】
本発明の方法のために有用な化学療法剤の例は以下の表に列挙されている。
【表１０−ａ】
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【表１０−ｂ】
0005694172.tif 000081
【表１０−ｃ】
0005694172.tif 000082
【０２８９】
放射線増感剤と併用して特に有用な化学療法剤の例としては、例えば、カンプトテシン、カルボプラチン、シス-プラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、インターフェロン（α、β、γ）、イリノテカン、ヒドロキシ尿素、クロラムブシル、5-フルオロウラシル（5-FU）、メトトレキセート、2-クロロアデンシン、フルダラビン、アザシチジン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、インターロイキン2、イリノテカン、ドセタキセル、パクリタキセル、トポテカン、CPT-11、アナストラゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン（reloxafine）、シクロホスファミド、イホスファミド、ドロロキサフィン（droloxafine）、ならびにそれらの治療上有効な類似体および誘導体が挙げられる。
【０２９０】
微小管作用薬（microtubule affecting agent）は細胞の有糸分裂に干渉し、そしてそれらの細胞傷害活性について当該技術分野で周知である。本発明で有用な微小管作用薬としては、アロコルヒチン（NSC 406042）、ハリコンドリンB（NSC 609395）、コルヒチン（NSC 757）、コルヒチン誘導体（例えば、NSC 33410）、ドラスタチン10（NSC 376128）、マイタンシン（NSC 153858）、リゾキシン（NSC 332598）、パクリタキセル（NSC 125973）、TAXOL（タキソール）（登録商標）誘導体（例えば、NSC 608832）、チオコルヒチン（NSC 361792）、トリチルシステイン（NSC 83265）、硫酸ビンブラスチン（NSC 49842）、硫酸ビンクリスチン（NSC 67574）、天然および合成のエポチロン（エポチロンA、エポチロンB、およびディスコデルモリド（Service, (1996) Science, 274：2009を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない）、エストラムスチン、ノコダゾール、MAP4などが挙げられるが、これらに限定されない。このような薬剤の例は、Bulinski (1997) J. Cell Sci. 110：3055 3064； Panda (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94：10560-10564； Muhlradt (1997) Cancer Res. 57：3344-3346； Nicolaou (1997) Nature 397：268-272； Vasquez (1997) Mol. Biol. Cell. 8：973-985；およびPanda (1996) J. Biol. Chem 271：29807-29812にも記載されている。
【０２９１】
使用されてもよい細胞分裂抑制剤としては、ホルモンおよびステロイド（合成類似体を含む）：17-α-エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチル-テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド（aminogluthimide）、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、リュープロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９２】
他の細胞分裂抑制剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤などの抗血管新生薬、および抗VEGF抗体などの他のVEGF阻害剤、ならびにZD6474およびSU668などの小分子である。抗Her2抗体もまた利用されてもよい。EGFR阻害剤はEKB-569（不可逆的阻害剤）である。EGFRに免疫特異的な抗体C225およびSrc阻害剤もまた挙げられる。
【０２９３】
アンドロゲン依存性癌腫を非増殖性にするCASODEX（ビカルタミド、Astra Zeneca）も細胞分裂抑制剤としての使用に適している。細胞分裂抑制剤のさらに別の例は、エストロゲン依存性乳癌の増殖または成長を阻害する抗エストロゲン剤TAMOXIFEN（タモキシフェン）（登録商標）である。細胞増殖性シグナルの伝達の阻害剤は細胞分裂抑制剤である。代表例としては、上皮性の成長因子阻害剤、Her-2阻害剤、MEK-1キナーゼ阻害剤、MAPKキナーゼ阻害剤、PI3阻害剤、Srcキナーゼ阻害剤、およびPDGF阻害剤が挙げられる。
【０２９４】
腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導するというその独特の能力に起因して、TNFファミリーのメンバーは潜在的な抗癌医薬品であると考えられる。しかしながら、多くの腫瘍細胞は、デスリガンドのアポトーシス促進性の酸から逃れ、これによりこれらの薬剤の使用はデスリガンドに感受性の癌へと減り、腫瘍が宿主の免疫応答を免れることが可能になる。NF-κBの阻害剤の使用は、腫瘍細胞をTNFポリペプチドなどのデスリガンドの死滅に対し感作するために使用されてもよい。
【０２９５】
TNFポリペプチドはリガンドのTNFスーパーファミリーのメンバーでありうる。TNFポリペプチドの代表例としては、NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L、CD27L/CD70、FasL/CD95、CD30L、TNF-β/LT-α、LT-β、およびTRAILが挙げられるが、これらに限定されない。TNFスーパーファミリーのメンバーは、免疫系の維持および機能にかかわり、かつアポトーシスを誘発することができる天然のタンパク質である。TNFポリペプチドはTRAILであってもよく、これは主に腫瘍においてアポトーシスを誘導するが、正常細胞においてはアポトーシスを誘導しない。これらのいわゆる「デスリガンド」の活性は、それらの細胞内部分の中に構造的に類似したデスドメインを含有するTNF受容体ファミリーのメンバーと結合することによって媒介されると考えられる。各デスリガンドに特異的なこれらの受容体のライゲーションは、カスパーゼ活性化を生じるいくつもの事象の活性化を誘発する。TNFポリペプチドによって結合されたTNF-R受容体の代表例としては、LNGFR/p75、CD40、CD137/4-1BB/ILA、TNFRI/p55/CD120a、TNFRII/p75/CD120b、CD134/OX40/ACT35、CD27、Fas/CD95/APO-1、CD30/Ki-1、LT-β R、DR3、DR4、DR5、DcR1/TRID、TR2、GITRおよびオステオプロテゲリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９６】
他の薬剤をTNFポリペプチドの代わりに使用することができるということも企図される。例えば、TNFポリペプチドの活性を模倣する抗体を使用することができる。このような抗体の代表例としては、FAS、TRAIL受容体、またはTNFRに対する作動薬抗体が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、対応する受容体を活性化することができるアプタマーおよび他の合成リガンドが使用されてもよい。
【０２９７】
患者の中の腫瘍が本発明のカルバゾール化合物によって治療することができるかどうかを診断することも可能である。腫瘍の試料はその患者から入手される。次いで腫瘍の細胞は、p53応答性lacZレポーターなどのp53レポーター系を用いて形質導入される。次いで、形質導入された細胞は、当該化合物とともにインキュベーションされる。対照を上回るp53媒介性シグナルの生成は、その腫瘍が当該カルバゾール化合物によって治療できるということを示す。
【０２９８】
図1aおよび1bは、TNFで処理した細胞において本発明のカルバゾールがNF-κB転写活性を阻害すること（図1a）、ならびにp53活性化およびNF-κB阻害に関する活性濃度（EC50値）の比較（図1b）を示すプロットである。
【０２９９】
本発明のカルバゾール化合物は、インビトロ（図2）およびインビボ（図3）において有意な抗癌特性を有する。図2は、異なる濃度の4つの本発明のカルバゾール化合物を用いて1時間処理した後の、p53状態が異なる腫瘍細胞に対する種々のカルバゾール化合物の効果を示す。細胞生存は、72時間でメチレンブルー染色によって評価した。それゆえ、本発明のカルバゾール化合物によるp53活性化は一次の死誘導シグナルではないかもしれず、むしろ構成的に活性なNF-κBの不活化によって引き起こされる細胞ストレスの種類を反映するかもしれないと理論付けられるが確信できるものではない。
【０３００】
試験した腫瘍細胞は、HCT116結腸腺癌p53 wt（図2a）、MDA-MB-231乳腺癌p53 mut（図2b）、DLDl結腸癌p53 wt（図2c）、A549肺腺癌p53 wt（図2d）、Caki1腎細胞癌p53 wt（図2e）、HT29結腸腺癌p53 mut（図2f）、H1299肺腺癌p53欠失（図2g）、MCF7乳腺癌p53 wt（図2h）、RCC45腎細胞癌p53 wt（図2i）、ACHN腎細胞癌（図2j）、およびHT1080肺線維肉腫（図2k）であった。図3で試験した腫瘍細胞はHCT116 sc異種移植モデルである。
【０３０１】
分析した本発明のカルバゾール化合物は、DNA損傷を誘導しなかった（表I）。それゆえ、本発明のカルバゾール化合物の細胞毒性は、癌細胞が正常細胞よりも感受性が高いNF-κB抑制を伴う、独特の種類の遺伝毒性でない細胞ストレスから生じるということが仮説化される。これは、本発明のカルバゾールが非常に有効な、新規なクラスの抗癌治療薬であるということを例証する。
【０３０２】
【表１１】
0005694172.tif 000083
【０３０３】
本発明の重要な特徴によれば、活性なカルバゾール分子および不活性なカルバゾール分子の配座異性体（コンホーマー）の三次元的な（3D）重ね合わせから、それらの活性に寄与する化合物の特徴が明らかになった。１つの重要な特徴はカルバゾールコアの平面性である。配座異性体の複数の三次元的な整列を比較して、すべての活性カルバゾール化合物において、カルバゾールコア領域は平面的であるということが見出された（図4）。不活性な化合物は平面的でもありうるしまたは非平面的でもありうる（図5）。分子構造にわたって同様の原子分布を有する化合物のさらなる構造研究から、カルバゾール環領域の平面性は当該カルバゾール化合物によるp53活性化の効力を決定する上で重要であるということが裏付けられた（図6および7）。活性なカルバゾール、すなわち実施例2、は図6に示されている。不活性なカルバゾール、すなわち化合物200、は図7に示されている。化合物200は構造式：
【化５０】
0005694172.tif 000084
を有する。
【０３０４】
p53を活性化することができるカルバゾール化合物が平面構造を有するという知見から、これらの化合物の作用機序はDNAインターカレーションを介して媒介されるという、まだ確信はない仮説が導かれた。p53活性化効力とカルバゾールコアの平面構造との間の相関はDNAをインターカレートする能力を反映しているということが仮定される。この仮説を検証するために、当該カルバゾール化合物がp53-DNA複合体（1TUP PDB構造）から採用された三次元的なDNA構造へとコンピューター上でインターカレートされた。最初のインターカレーションは以下のとおり行った。活性なカルバゾール分子、すなわち、化合物300が、その平面的な環領域が２つの重なる塩基対の間にかつそれらに平行に配置されるように、DNA構造の上に重ね合わされた。次いでインターカレートされた分子は、p53のArg280に接して置かれた。このArg280残基はp53-DNA相互作用のために極めて重要であると考えられる。M. Kitaynerら, Molecular Cell, 22, 741-753頁, 2006年６月を参照のこと。このような強引な重ね合わせは、その２つの構造の原子間のファンデルワールス相互作用に違背する。MOLOC分子力学ソフトウェアパッケージを使用して、三元的なDNA−カルバゾール類似体−p53複合体が、その複合されたDNA-分子構造においてファンデルワールスおよびねじれ角からの緊張状態を減少するように最適化された。最適化後、この活性分子の位置は、DNAの重なる塩基対に平行である環平面を有して、DNAの中の空洞に嵌め込まれた。この最適化手順の結果として、当該カルバゾール環置換基上に位置する水素結合受容体（HBA）は主溝（major groove）の中に配置され、当該カルバゾール窒素に結合された側鎖は狭くより小さい溝の中に配置された。化合物300についての構造式は、
【化５１】
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である。
【０３０５】
この研究の結果として、p53を活性化するカルバゾール化合物を収容するようにより良好に形作られた内部空洞を有するdsDNA断片が作製された。GOLDソフトウェアパッケージを使用して、既知のp53活性を有する様々なカルバゾール化合物上で分子ドッキングを行った。平均として、高活性な分子（p53活性化EC50＜130μM）はEC50> 130μMを有する分子よりもはるかに良好にこの空洞に嵌るということが実証された。非常に活性なカルバゾール化合物の配座異性体はこの空洞内部に一様に配置され、他方で嵌り込みの質は、弱いp53活性化効力を有するカルバゾール化合物の間では低下した。不活性分子の大多数は、非常に低い嵌り込みの質によって特徴付けられた。
【０３０６】
DNAのより小さい溝の中への当該カルバゾール窒素に結合された置換基の適正な配置は、良好なp53活性を達成するために重要でありうる。単純に、より小さい溝の中へ側鎖が嵌りこむことで、当該カルバゾール化合物の全体の嵌り込みが改善される。加えて、活性カルバゾール化合物の三次元的な重ね合わせの原子採決解析（atom voting analysis）は、側鎖の中の正に帯電したアミノ基は活性を達成するために重要であるということを示す。
【０３０７】
当該カルバゾール置換基上のHBA（水素結合）原子の位置、およびそれらの同一性（identity）はp53活性を達成するために重要である。HBA原子（すなわち、窒素）の低い質は、カルバゾール化合物の弱い活性につながる。カルバゾール置換基上のHBA原子の不存在は、化合物を不活性にする。すべての高活性な化合物は、回転していないカルバゾール置換基を有する。高活性な分子（EC50＜130nM）および活性分子（EC50 約1nM）をDNA空洞にドッキングさせることで、良好なHBA原子を具えた回転したカルバゾール置換基がDNA原子との水素結合を生成することができるということが実証される。対照的に、回転していないカルバゾール置換基はDNAと水素結合せず、これがそれらの高活性につながる。
【０３０８】
実施例7（化合物6h）の抗腫瘍活性は、以下のようにしてB16黒色腫同系（singenic）腫瘍モデルを使用して実証された。C57BL/6マウスに、腹部の２つの部位において皮内に5×104のマウスB16黒色腫細胞を接種した。腫瘍接種部位のうちの少なくとも１つが腫瘍（平均サイズ 約6mm3）を発生すると、処置を開始した。マウスを、0.5% メチルセルロース溶媒対照または30mg/kgの実施例7のいずれかを用いて（n＝5 マウス／処置群）、経口による胃管栄養法によって毎日、最長14日間処置した。腫瘍測定値をデジタル式のノギスによって、1〜2日ごとに集めた。個々の腫瘍に対する処置の効果を図8aおよび8bに提示する。実施例7処置群からの１匹のマウスを除いて、いずれの処置群についても全体的なマウス体重に対する効果は観察されなかった（<10%の変化）。9日目までに、実施例7処置群では、溶媒対照群と比較しておよそ3倍の腫瘍成長の減少があった（68% 成長抑制）。
【０３０９】
実施例7の抗腫瘍性活性を裏付けるために、当該カルバゾール化合物（30mg/kg）を、HCT116異種移植モデルを使用して、経口的に送達した。この試験では,胸腺欠損ヌードマウスに、5×106のHCT116腫瘍細胞を２つの部位へと接種した。90%の腫瘍が接種後７日目〜１１日目に現れた。0.5% メチルセルロース中の30mg/kgの実施例7の化合物または0.5% メチルセルロース溶媒対照を用いた経口による毎日の処置は、マウス１匹あたり少なくとも１つの腫瘍が20〜25mm3のサイズに到達したときに始めた。対照腫瘍が1000mm3に到達するまでマウスを処置した。処置の開始後、マウスを、全体的な状態、体重減少、および生存について、ならびに一日おきに測定した腫瘍のサイズに関してモニターした。
【表１２】
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【０３１０】
この試験では、群2の中のマウスの100%がこの実験を乗り切った。対照溶媒処置群1では体重減少は観察されなかったのに対し、群2では、実験の最後までに3匹のマウスが15〜20%体重を失った。群2の中のマウスの残りのものの体重は、もとの体重の95〜105%の範囲で変動した。群2のマウスの外観、活性、または行動においては、他の異常な兆候はまったく認められなかった。
【０３１１】
対照群1では、HCT116腫瘍は、より速く成長する腫瘍とよりゆっくりと成長する腫瘍との間の正常な偏差の範囲内で予想されるとおり、指数関数的に成長した。実施例7処置群2では、すべての腫瘍の成長は、溶媒対照処置群1と比較して遅れた。処置の開始から14日目に、処置した腫瘍の中には、最もゆっくりと成長した対照腫瘍のサイズ（530mm3）に達したものはなかった。腫瘍の平均的な成長では実施例7を用いた処置は、溶媒対照群1と比較して約3.5倍腫瘍成長を抑制した（73%の阻害）。重要なことに、１つの処置した腫瘍は完全に治癒し、剖検で、腫瘍の代わりに最小の結合組織のタイプの形成が見出されただけであった。いくつかの処置した腫瘍のサイズは、対照腫瘍よりもゆっくりと増大しただけでなく、減少もし、これは、実施例7の化合物を用いた処置の結果として腫瘍細胞死および腫瘍破壊を示す。この結果は、処置から最初の3〜5日間について観察され、その後、処置した腫瘍はゆっくり成長し続けた。
【０３１２】
この実験は、実施例7の化合物が、ヌードマウスにおいてHCT116皮下異種移植片腫瘍の成長に対して抑制効果を有するということを示す。成長抑制値は73%であり、これはNCI標準によって有意な抗癌活性（≧42%）と考えられる。上記の結果は、図3および8〜10に図示されている。
【０３１３】
図3は、実施例7の化合物および対照（MC）を用いたHCT116結腸癌異種移植片腫瘍の処理を示す腫瘍成長の平均曲線である。実施例7の化合物で処理した腫瘍は、実質的に減少した腫瘍容積を示す。腫瘍容積  対  処理の日数のグラフの中の棒は標準偏差を表す。図8は、マウスの中で対照溶媒を用いて（図8a）および実施例7の化合物を用いて（図8b）処置した個々の腫瘍の成長を示すプロットを含む。
【０３１４】
図9は、実施例7の化合物を用いて処置したマウスにおける、最大100mm3までの個々の腫瘍の成長を示す。図10は、腫瘍サイズは処置の最初の日のうちに減少したこと、および治癒した腫瘍を示す。
【０３１５】
図11は、上記のアッセイでp53を活性化するカルバゾール化合物、すなわち、化合物100が、実に様々な試験した癌細胞に対して有意な抗癌活性を呈するということを実証する。図11に提示した株化細胞の各々を、96穴プレートに播種した。翌日、細胞をある範囲の濃度の化合物100で処理した。処理を24時間行い、この時点で、化合物を満たした培地を化合物不含の培地で置き換え、溶媒対照（DMSO）のみを用いて処理した対照のウェルが単層に到達するまで（典型的には48時間以内）、細胞を成長させた。次いで細胞を固定し、50% メタノール中の0.5% メチレンブルーを用いて染色した。1% SDSを用いてこの染料を溶出し、吸光度を650nmで測定した。データは、650nmでの吸光度  対  化合物100の濃度として提示する。
【０３１６】
実施例7、15、および13の化合物は強力な抗癌活性を示した。これらの3つの化合物を使用する有効性試験では、胸腺欠損ヌードマウスに、Caki1ヒト腎細胞癌細胞の懸濁液を両脾腹に皮下接種した。マウスの中の少なくとも１つの腫瘍が20〜50mm3に到達すると、処置を開始した。マウスを、0.2% ヒドロキシメチルセルロース中で調合した30mg/kgの実施例7、5mg/kgの実施例15、または25mg/kgの実施例13のいずれかを用いて経口による胃管栄養法によって処置した。陽性対照として、１つの群を40mg/kg スニチニブ（腎細胞癌の治療のための承認薬）で処置した。5日処置あり／2日処置なしのスケジュールで4週間、処置を施した。処置が完了した後、腫瘍成長がどの程度急速に正常に戻るかを測定するために、マウスをさらに4週間モニターした。すべての3つの化合物は、溶媒対照と比較して有意な腫瘍増殖阻害を引き起こした（24日目（処置の最後） 実施例7  73%阻害、実施例15  50%阻害、実施例13  62%阻害）。実施例7および13および、より少ない程度ではあるが実施例15のこの抗腫瘍効果は、実質的にスニチニブ対照（42%）を上回っていた。興味深いことには、本発明の化合物のいずれを用いた処置が停止しても、腫瘍の短時間での再成長は生じなかった。対照的に、スニチニブ処置が終了すると直ちに腫瘍成長が生じ、40日目まで、腫瘍容積における有意差は、スニチニブ群と溶媒対照群との間では観察されなかった。
【０３１７】
要約すれば、すべての3つのカルバゾールは腫瘍増殖阻害を引き起こし、この阻害は処置が完了した後でさえも持続した。実施例7の効力の等級（大きさ）は実施例13以上であり、実施例13は実施例15よりも大きい。実施例7を用いた処置は、実施例13および15と比較しても見かけ上副作用を引き起こさなかった。最も重篤な副作用は実施例13に関して観察され、その際には2匹のマウスは短期間処置から外される必要があり、１匹のマウスは、早期の安楽死につながった体重減少が原因で永久に除外された。従って、実施例7は、この試験では「最も安全な」カルバゾールであるように思われる。実施例15は短期の10〜15%の体重減少を引き起こしただけであるため、この化合物はこの腫瘍モデルでは２番目に安全なものであった。この結果に基づいて、実施例7は、副作用がなく強力な抗腫瘍活性（70〜80%阻害）を有する好ましい化合物である。
【０３１８】
別の試験では、実施例7、15、および13の抗腫瘍活性および毒性を、ヒトHCT-8回盲腺癌異種移植片を有するヌードマウスにおいて、およびヒトHT-29結腸腺癌異種移植片を有するヌードマウスにおいて最大耐用量（MTD）で、評価した。同時のヒトHCT-8およびHT-29結腸異種移植片に対するMTDでの実施例7、15、および13の抗腫瘍有効性および毒性の比較も行った。
【０３１９】
上で示したように、実施例7、15、および13は、ヌードマウスまたはSCIDマウスにおける、種々のヒト腫瘍異種移植片（皮下）に対する抗腫瘍有効性を実証した（HCT-116、DLD1、Caki1およびMDA-MB-231腫瘍などであり、これらの腫瘍細胞を細胞懸濁液としてマウスへと接種した）。これらの3つの化合物のインビボでの抗腫瘍有効性および毒性を、約50mgの腫瘍片を移植することにより、ヌードマウスで確立したHCT-8（5-FUおよびイリノテカンなどの化学療法に対して比較的感受性が高い）およびHT-29（化学療法に比較的耐性である）異種移植片に対して、これらの3つの化合物の反復的なMTDにおいて評価した。この研究では、HCT-8およびHT29結腸癌腫瘍に対する3つのカルバゾールの抗腫瘍効果および毒性を、腫瘍サイズが150〜200mgに到達したとき（腫瘍移植後約7日）に始まる処置を用いて比較した。
【０３２０】
物質および方法
動物
8〜１２週齢の雌の胸腺欠損ヌードマウス（nu/nu、体重22〜25g）をHarlan Sprague Dawley Inc．（インディアナ州、インディアナポリス）から入手し、施設内で承認された動物プロトコルに従って水および餌を自由に与えて5匹のマウス／ケージで維持した。
【０３２１】
薬物
すべての3つの化合物は、実施例15については0.5mg/ml、実施例7については3mg/ml、および実施例13については2.5mg/mlの濃度で、0.2% ヒドロキシプロピルメチルセルロース中で調合した。
【０３２２】
腫瘍
ヒト回盲腺癌HCT-8および結腸腺癌HT-29異種移植片を使用した。これらの異種移植片は、最初に106個の培養細胞を皮下注射することにより確立し、そして腫瘍が1〜1.5gに達したときに約50mgの壊死していない腫瘍（2〜3片）を外套針によって継代腫瘍から移植することにより、腫瘍を数世代を継代させた。
【０３２３】
薬物用量およびスケジュール
すべての化合物を、実施例15：5mg/kg/日；実施例7：30mg/kg/日；および実施例13：25mg/kg/日を用いるMTDで、週あたり5日で4週間（5日／週×5）、または大きい腫瘍が原因でマウスを屠殺する必要があるまで、経口（p.o.）投与によって与えた。腫瘍が150〜200mgに到達した腫瘍移植から7日後に、処置を開始した。対照群のマウスは、溶媒（0.2% ヒドロキシプロピルメチルセルロース）を20gのマウス体重あたり200μl（処置群と同じ）で与えられた。5匹のマウスを各実験群のために使用し、10の腫瘍を用いた（左側および右側の脇腹に各々１つの腫瘍）。
【０３２４】
腫瘍の測定
腫瘍の２つの軸（mm）（L、最長軸；W、最短軸）を、ノギスを用いて測定した。腫瘍重量（mg）を、式：腫瘍重量＝1/2（L×W2）を使用して見積もった。腫瘍測定は、薬物処置と同時に毎日、治療後は週に3〜4回行った。
【０３２５】
最大耐用量（MTD）および毒性評価
MTDを、もとの体重の20%未満の体重減少を有したマウスにおいて薬物に関連する致死率を引き起こさない最高薬物用量として定義し、そして毒性は可逆的であった。薬物に誘導される毒性（体重減少、下痢、および致死率）の動力学を、処置後の最初の10日間については毎日、それ以降は2日ごとに測定した。
【０３２６】
抗腫瘍活性
抗腫瘍活性は、同じ時点で未処置の対照群（MTWCG）と比較した処置群の平均の腫瘍重量（MTWTG）である最大腫瘍増殖阻害（MTRI）によって評価した（MTRI＝MTWTG - MTWCG） ÷ MTWCG×100%）。腫瘍倍加時間（TDT）は、腫瘍がその最初の重量の２倍に到達するための平均時間として定義した。腫瘍反応（tumor response）は、腫瘍重量が最初の腫瘍サイズの少なくとも50%だけ減少したときの部分的腫瘍反応（PR）として表し、完全腫瘍反応（CR）は、腫瘍出現の最初の部位での触診の際に腫瘍を検出することができないこととして定義した。
【０３２７】
結果
（a）HCT-8異種移植片を有するヌードマウスにおける実施例15、7、および13の抗腫瘍活性および毒性。
【０３２８】
以下の表の中のデータは、１週あたり5日処置ありおよび2日処置なしで、HCT-8異種移植片を有するヌードマウスに経口投与された溶媒対照、実施例15、実施例7、および実施例13の抗腫瘍活性および毒性を示す。これらのデータは、実施例13および15はHCT-8異種移植片に対して35〜40%の阻害率で中程度の抗腫瘍活性を有し、かつ溶媒対照（倍加時間：4.8日）と比較してそれぞれ17%（実施例13）および57%（実施例15）だけ腫瘍成長を遅らせたということを示す。実施例13および15についての計画した4つの処置過程は、マウスを屠殺する必要がある大きい腫瘍容積が原因で完了しなかった。実施例7は、65.9%の阻害率および142%の腫瘍成長の遅れを有して、HCT-8異種移植片に対して実施例13および15よりもはるかにより活性であった。実施例7はPRまたはCRをまったく生成しなかった。毒性に関しては、溶媒は、個々のHCT-8腫瘍の動物群を１週あたり5日処置ありおよび2日処置なしで2〜4週間処置すると軽度の毒性をもたらした。
【０３２９】
【表１３】
0005694172.tif 000087
【０３３０】
MTRI：最大腫瘍増殖阻害；TDT：腫瘍倍加時間；PR：部分的腫瘍反応；CR：完全腫瘍反応；MWL：処置前体重の最大体重減少。対照群は0.2% ヒドロキシプロピルメチルセルロース（溶媒））を20gのマウス体重あたり200μlで与えられた。5匹のマウスを各実験群のために使用し、10の腫瘍を用いた（左側および右側の脇腹に）。
【０３３１】
（b）HT-29異種移植片を有するヌードマウスにおける実施例15、7、および13の抗腫瘍活性および毒性。
【０３３２】
以下の表の中のデータは、１週あたり5日処置ありおよび2日処置なしで、HT-29異種移植片（これは、HCT-8と比較して、ほとんどの化学療法剤に対してより耐性がある）を有するヌードマウスに経口投与された溶媒対照、実施例15、実施例7、および実施例13の抗腫瘍活性および毒性を示す。これらのデータは、すべての3つの化合物がHCT-8よりもこの腫瘍に対してより活性であったということを示す。同様に、実施例13は、48%の阻害率でこの3つの中では最も活性が低い化合物であり、腫瘍成長を50%だけ遅らせた（対照についての腫瘍倍加時間は7.8日であった）。実施例15は同様の腫瘍増殖阻害（58%）をもたらした一方で、これは、実施例7と比較して、腫瘍成長の遅延に対してはより小さい効果を有していた（遅延、76%  対  122%）。この3つの薬剤によってはPRもCRももたらされなかった。毒性に関しては、実施例7および13は、より少ない体重減少しかもたらさなかった。実施例7は、HCT-8実験と比較してHT-29実験ではより毒性が高く、18%体重減少および40%致死率であった。
【０３３３】
【表１４】
0005694172.tif 000088
【０３３４】
MTRI：最大腫瘍増殖阻害；TDT：腫瘍倍加時間；PR：部分的腫瘍反応；CR：完全腫瘍反応；MWL：処置前体重の最大体重減少。対照群は0.2% ヒドロキシプロピルメチルセルロース（溶媒））を20gのマウス体重あたり200μlで与えられた。5匹のマウスを各実験群のために使用し、10の腫瘍を用いた（左側および右側の脇腹に）。
【０３３５】
結論
結論として、実施例15および13は中程度の抗腫瘍活性を示すのに対し、実施例7はHCT-8およびHT-29異種移植片に対してより良好な抗腫瘍有効性を有していた；
【０３３６】
実施例15は、HT-29での研究においては、実施例7および15よりも毒性が高かった；
【０３３７】
ほとんどの他の化学療法剤への反応とは異なり、HT-29異種移植片は、HCT-8異種移植片に関して観察された反応と比較して、すべての3つのカルバゾールに対して感受性がより高かった；
【０３３８】
これらのデータは、実施例7はHCT-8およびHT-29異種移植片の両方に対して好ましい化合物であるということを示す。
【０３３９】
別の実験では、神経芽細胞腫のマウスのモデルにおける実施例7の抗腫瘍活性が実証された。N-myc（TH-MYCN）遺伝子導入マウスは、発生初期に神経外胚葉細胞で発現されるチロシンヒドロキシラーゼプロモーターの制御下のヒトN-myc腫瘍遺伝子を保有し、そのマウスはヒト神経芽細胞腫のマウス等価物を発症する。これらのマウスはいくつかの重要な特徴をヒト疾患と共有する優れたモデルであることが判明しており、その特徴としては、腫瘍およびその転移の部位、腫瘍の組織学、神経芽細胞腫関連マーカータンパク質に対する陽性染色、シナプスおよび神経分泌顆粒の存在、ヒト神経芽細胞腫で観察される領域とシンテニーの領域における染色体の増加および減少、ならびに発生する腫瘍において特異的なN-mycのコピー数の増幅が挙げられる。
【０３４０】
最新の化学療法は、多くの癌に対して生存率を劇的に改善した。しかしながら、神経芽細胞腫に対する臨床の現場での多剤耐性の発生は治療の失敗の主要原因の１つであり、多剤耐性を回避することは、莫大な臨床的可能性を有する。神経芽細胞腫にこれまで関与していなかった新規な経路を標的とする薬物は、治療プロトコルに対して新しい手段を提供することができるであろう。
【０３４１】
当該試験結果は、神経芽細胞腫のこのモデルにおいて実施例7の化合物が顕著な抗腫瘍活性を有するということを示したが、高用量はいくらかのマウスでは毒性があることが判明した。30mg/kgの実施例7で処置したマウスは、すぐにかつ予想外にも体重を減少させ（いくつかの例では一晩で2g）、そして脾臓が小さくなることおよび脱水の兆候を伴って死んで見つかった。治療を乗り切ったマウスは15〜47日間にわたる期間は腫瘍がなかったが、しかしながらすべてのマウスが同じスケジュールに従って処置されたわけではない。用量は体重減少に応じて変更された。これらの結果に基づくと、実施例7は、神経芽細胞腫のTH-MYCNモデルにおいて良好な有効性を呈する。
【０３４２】
最新の化学療法は、多くの癌に対して生存率を劇的に改善した。しかしながら、神経芽細胞腫に対する臨床の現場での多剤耐性の発生は治療の失敗の主要原因の１つであり、多剤耐性を回避することは、莫大な臨床的可能性を有する。神経芽細胞腫にこれまで関与していなかった新規な経路を標的とする薬物は、治療プロトコルに対して新しい手段を提供することができるであろう。
【０３４３】
実施例7の連日投与はまた、乳癌発生のMMTV-neu遺伝子導入マウスモデルにおいて腫瘍発生を予防する。
【０３４４】
乳癌（BC）は、この悪性腫瘍の高発生率および利用可能な治療の限られた成功が原因で、深刻な医療問題である。実質的な可能性を有するいくつかの特定の遺伝因子とともにこの疾患の家族歴は、個体をBCに罹りやすくする素因であるということが知られている。それゆえ、高BCリスク群出身の女性は、理論上は、予防的な抗BC治療から恩恵を受けることができる。本発明のカルバゾール化合物は、腫瘍成長の抑制につながる方向にいくつかの癌関連の細胞経路を調節することができる。実施例7の化合物は、治療用量（20〜25mg/kg）で投与されたときに、マウスにおいて重篤な副作用をまったく引き起こさない。実施例7は、Amesアッセイにおいて変異原性活性を示さなかった。この研究では、実施例7をマウスにおけるBCに対する予防薬として試験した。
【０３４５】
動物モデル：FVB菌株のバックグラウンドをもつMMTV-neu雌マウスは、エストロゲン刺激に対して応答性のMMTVプロモーター下の活性化されていないHer2癌原遺伝子を発現する。このマウスは、24週齢から始まる自然発症の乳房腫瘍を発症し、動物の70〜80%が、通常、10月齢までに腫瘍を発症する。この試験の目的は、（a）実施例7  対  溶媒対照（水）で処置したマウスにおいて腫瘍発生率を比較すること、および（b）実施例7  対  溶媒対照で処置したマウスの体重増加および全体的な外観を比較すること、であった。
【０３４６】
研究の設計：40匹の雌のマウスを、21日齢のときに繁殖親から引き離し、別々のケージ（4匹のマウス／ケージ）の中に入れた。このとき、マウスをラベルし、処置群または対照群に割り当てた（各々の中に20匹のマウス）。両方の群の体重を週に1回測定した。4週齢から始めて、処置群からのマウスには実施例7を含有する水を与えた。処置群および対照群における液体消費量を毎日見積もった。これらの測定値に基づいて、マウス体重１グラムあたりの液体消費量を算出し、飲料水中の実施例7の濃度を望ましい治療用量に調整した。実施例7の新しい溶液を毎週調製した。マウスを、乳腺の触診によって、腫瘍形成について週に1回モニターした。累積腫瘍サイズが1000mm3の容積に到達したときに、マウスを屠殺した。
【表１５】
0005694172.tif 000089
予備段階の結果：処置群からのマウスは、毎日20mg/kgの平均割合で実施例7を消費していた。ばらつきは、飲料水を介する薬物送達の限られた精度が原因である。体重分布または動物の外観の異常性において処置群と対照群との間で差異は観察されなかった。
【０３４７】
この実験の過程において、処置群および対照群の中でいくつかの自然死が発生した。それらの動物は腫瘍を有しておらずかつ死後の肉眼病変検査で明らかな異常は示されなかったため、死因ははっきりしなかった。実施例7の投与の開始から数週間経たないうちに死亡したマウスはなかった。試験中、3匹の対照マウスがそれぞれ約15週齢、41週齢および42週齢で死亡した。7匹のマウスが実施例7群において、12〜45週の異なる週齢（実験的処置の開始から7〜41週間）で死亡した。
【０３４８】
対照群および処置群において、それぞれ21匹および19匹のマウスが腫瘍適齢に到達した。それらのうちで、14匹（67%）の対照マウスおよび7匹（37%）の実施例7を与えられたマウスで腫瘍が発生した。
【０３４９】
この試験は、以下のことを示した：
（a）１日あたり約20mg/kgでの飲料水を用いた実施例7の慢性投与は、マウス体重の変化を引き起こさなかった；
（b）対照群に対する実施例7処置群のより高い死亡率、しかし差異は統計的に有意ではなく、長さおよび処置期間とマウスの死との間には相関はなかった；ならびに
（c）対照動物に対する、実施例7で処置したマウス間での腫瘍量のより低い割合。
【０３５０】
本発明のカルバゾール化合物はまた、抗寄生虫活性を示す。特に、マラリア原虫に対するカルバゾール化合物の効果を、Plasmodium falciparum（熱帯熱マラリア原虫）（菌株D10）を試験化合物の存在下または不存在下で、インビトロで培養することにより、試験した。（p53を活性化することに関して）活性なカルバゾール化合物および不活性なカルバゾール化合物を試験のために選択し、キナクリンも従来の抗マラリア薬として選択した。表3は、化合物の構造を、p53活性化アッセイにおけるそれらのEC50値と一緒にまとめる。
【表１６】
0005694172.tif 000090
【０３５１】
実施例2、化合物400、および実施例7は29、57、および143nMの濃度で試験した。化合物500、実施例18、およびキナクリンは143nMだけで試験した。
【０３５２】
各実験において、1000個の赤血球を顕微鏡により評価し、感染した細胞の数を測定した。対照実験（試験化合物を加えないか、またはPBSを加えた）では、感染した細胞の割合（％）は1.6%〜6.4%の間で変化した。この研究で決定された感染力低下指数（infectivity reduction indexes）を図12に示す。p53活性化アッセイの効力は、はっきりと、しかし間接的に、インビトロでのPlasmodium falciparum（熱帯熱マラリア原虫）の阻害と相関した。p53活性化アッセイにおいて活性な3つの化合物（実施例2、7、および18）は、キナクリンに匹敵する抗マラリア活性を実証した。p53活性化アッセイにおいて不活性な化合物（化合物400および500）は寄生虫血症の軽減を示さなかった。
【０３５３】
実施例7、13、および15の化合物は、抗原虫活性も示した。ヒトアフリカトリパノソーマ症（HAT）または「睡眠病」は、最も重要な、しかし同じく最もなおざりにされている、熱帯感染症の１つである。それは原虫、Trypanosoma brucei（ブルーストリパノソーマ）、によって引き起こされ、それはツェツェバエ（Glossina spp）の咬み付きを介してヒトへと伝染される。1960年代にほぼ撲滅されたが、HATは、ツェツェバエが生息するいくつかのサハラ以南の領域において流行病のスケールで再び現れた。世界保健機関によれば、現在、約500,000の人々がトリパノソーマを保有し、未治療のままにされると死亡するであろう。HATに関連する高死亡率は、少なくとも一部は、容易に投与することができる効果のある薬物がないことが原因である。
【０３５４】
HATを治療するために現在使用される薬物は、この分野で古く、毒性があり、そして投与が困難なものである。早期の疾患を治療するために使用されるスラミンおよびペンタミジンは、診療所で注射される必要がある。しかしながら、診療所へのアクセスはこの疾患が流行しているアフリカの農村地域では一般的ではない。さらに、多くの早期の患者は自分が感染していると気づいていないため、彼らは治療を求めていない。これは、リスクのある集団の検診が少ないこと、および早期のHAT症候の変わりやすい、間欠的な、そして比較的軽度な性質が原因である。明らかな症候が現れる時までに、患者はすでにその疾患の後期にあることが多い。後期のHATの治療は注射の際に文字通り患者を焼くヒ素剤であるメラルソプロールの注射を伴うため、後期のHATの治療はとりわけ困難である。この治療はとても苦痛であるため、多くの患者は治療を拒絶し、そして身体的に拘束されて強制的にその医薬を受け取らされるに違いない。さらに、メラルソプロールは、処置された患者の5〜20%の死をもたらす重大な有害な副作用を有する。これらの理由のため、そして薬物耐性の予想される問題のため、現在の旧式の医薬に取って代わるための新しい、経口用の生物が利用可能な薬物の供給経路を創出するという差し迫ったニーズがある。
【０３５５】
試験によって、実施例7、13、および15の化合物は、インビトロで顕著な抗T. brucei（ブルーストリパノソーマ）活性（低ナノモル濃度のIC50）を有するということが示された。予備段階のT. brucei不活化実験をインビトロで行った。T. bruceiの生活環には、ツェツェバエの「プロサイクリックな（procyclic）」発生段階、およびヒトにおける「血流」形態が含まれる。すべての研究は、この寄生虫の血流段階に関して行われた。なぜなら、それがこの疾患を引き起こす発生段階だからである。
【０３５６】
実施例7、13、および15の相対的な抗トリパノソーマ活性を評価するため、およびこの寄生虫の50%を殺す各化合物の濃度（IC50）を決定するために、T. bruceiをある範囲の化合物濃度に曝露した。従来の抗HAT薬物であるスラミンを陽性対照として使用した。
【０３５７】
血流T. bruceiを24穴（１つのウェルあたり500μLの培地）プレートに播種した（3×103個の細胞／mL）。当該化合物の濃度（実施例7については0〜200nM、実施例13については0〜20nM、および実施例15については0〜3nM）をこの細胞に加えた（二重の培養物）。対照の培養物には等しい量のDMSOを与えた。すべての3つの試験化合物はT. bruceiを完全に撲滅させた。なぜなら、当該薬物の存在下での48時間の培養後に寄生虫は検出されなかったからである。DMSO（溶媒）で処理した対照培養物には、3×106/mLの密度で寄生虫が含まれていた。
【０３５８】
殺トリパノソーマ活性は実施例7＜実施例13＜実施例15の順で増大し、IC50値はそれぞれ約43nM、約6〜11nM、および約0.5nMであった。スラミンのIC50は300nMよりも大きい。
【０３５９】
それゆえ、本発明の化合物は、殺トリパノソーマ薬としての開発に優れている。
【０３６０】
実施例15の化合物を異なる真菌株に対する活性について試験した。実施例15のインビトロ感受性試験を、31の臨床真菌株および実験真菌株（laboratory fungal strain）についてCLSI M27A3およびM38A2の方法によって行った。一般に、選択した株は、現在の抗真菌薬に対する異なる感受性パターンを示す。実施例15の評価については、8種のAspergillus spp.（アスペルギルス属菌種）、21種のCandida spp.（カンジダ属菌種）、1種のCryptococcus neoformans（クリプトコッカス・ネオフォルマンス）、および1種のDebaryomyces hansenii（デバリオマイセス・ハンセニイ）の菌株を試験した。
【０３６１】
Aspergillus spp.菌株：本研究全体を通して8種のAspergillus spp.菌株を使用した。6種のA. fumigatus（アスペルギルス・フミガーツス）、１種のA. flavus（黄色コウジ菌）および１種のA. terreus（アスペルギルス・テレウス）も使用した。A. fumigatus群は、2種のイトラコナゾール耐性菌株（RIT 13およびRIT5菌株）（1）、１種のトリアゾール交差耐性菌株（MUT1O）（2、3）、１種のエキノキャンディン交差耐性菌株（EMFRS678P）（4）、および2種の野生型の感受性分離株（R21およびATCC 13073）を含んでいた。「非fumigatus」菌株は、A. terreus分離株（生来、アンホテリシンBに対して感受性がより低い）（5）を除いて、すべての利用可能な抗真菌薬に感受性であった。
【０３６２】
Candida spp.菌株：20種のCandida spp.臨床分離株および１種の実験対照菌株（C. albicans（カンジダ・アルビカンス） SC5314）を本研究で使用した。本収集物には以下のものが含まれていた：
【０３６３】
5種のC. albicans分離株、2種の野生型菌株（SC5314およびATCC 36082）、１種のエキノキャンディン耐性分離株（M205）（6）、および２種のフルコナゾール耐性臨床分離株（3795および3184）（7）。
【０３６４】
3種のC. krusei（カンジダ・クルセイ）菌株、1種のATCC対照菌株（ATCC 6258 CLSI対照）、および2種の同質遺伝子的な臨床菌株（98および100）。100はエキノキャンディン交差耐性である（8、9）。
【０３６５】
2種のC. glabrata（カンジダ・グラブラタ）菌株、１種の野生型臨床菌株（3168）、および１種のエキノキャンディン交差耐性分離株（3830）（10）。
【０３６６】
2種のC. tropicalis（カンジダ・トロピカリス）菌株、１種のATCC対照菌株（ATCC 750）、および１種のエキノキャンディン交差耐性（T3）（11）。
【０３６７】
2種のC. dubliniensis（カンジダ・デュブリニエンシス）菌株、１種は野生型菌株（3949）であり他方はエキノキャンディン逆説的効果を有する（M204）。
【０３６８】
4種の生来的に減少したエキノキャンディン感受性のCandida spp.（12）：1種のC. orthopsilosis（カンジダ・オルトプシローシス）（981224）、1種のC. metapsilosis（カンジダ・メタプシローシス）（2006-113）、C. parapsilosis（カンジダ・パラプシローシス）（ATCC 22019 CLSI対照）、およびC. guilliermondii（カンジダ・ギリエルモンジィ）（ATCC6260）（13）。
【０３６９】
他のCandida spp.および属：1種のC. rugosa（カンジダ・ルゴサ）（M83）、1種のC. lipolytica（カンジダ・リポリチカ）（M159）、C. lusitaniae（カンジダ・ルシタニアエ）（200450）、1種のCryptococcus neoformans（499）、および1種のDebaryomyces hansenii。
【０３７０】
感受性試験：酵母（M27A3）（14）およびカビ（M38A2）（15）についてのCLSI標準化方法を使用して、実施例15インビトロ感受性試験を行った。MIC（最小阻害濃度）の読み取りは、24時間および48時間で行った。
【表１７−ａ】
0005694172.tif 000091
【表１７−ｂ】
0005694172.tif 000092
*2回の繰り返しの幾何平均（μM単位）。
a C. albicans等価物に対応するアミノ酸番号。
【０３７１】
Aspergillus spp.の実施例15感受性：A. flavusおよびA. terreus菌株は、A. fumigatus菌株よりも実施例15に対して感受性が高い（24時間でのMICの幾何平均、それぞれ0.40および1.59μM）。さらに、感受性菌株とアゾールまたはエキノキャンディン耐性菌株との間でMIC差はなかった（表1）。
【０３７２】
酵母の実施例15感受性：アゾール耐性もしくはエキノキャンディン耐性の分離株とアゾール感受性もしくはエキノキャンディン感受性の分離株との間で実施例15 MICの差はなかった。平均して、酵母のMICは、Aspergillus spp.のMICよりも8倍低かった（表1）。実施例15について得られたMICは、従来の抗真菌薬についてのMICに匹敵するか、またはそれらよりも良好である。アゾールおよびエキノキャンディン耐性菌株は実施例15に対して感受性が高い。
【０３７３】
Aspergillus fumigatus生存率に対する実施例15の効果：XTT生存率アッセイを使用した、A. fumigatusのAf293菌株に対する実施例15の抗真菌活性を評価した。この菌株は最もよく特徴付けられた菌株のうちの１つであり、しかもA. fumigatusゲノムを配列決定するために使用された菌株であったため、この菌株を選択した。XTT生存率アッセイは、電子結合剤としてのメナジオンの存在下でのテトラゾリウム塩（XTT）の還元に基づく。生存能力がある真菌の数とXTT還元の量（16）との間には関係がある。
【０３７４】
方法
XTTアッセイ（17）を実施することにおいてこれまでに記載されたものと同じ方法を使用した。クロラムフェニコールおよびゲンタマイシン（Becton Dickinson、メリーランド州）を含むサブローBHI傾斜培地にAf293分生子をプレーティングし、室温で7〜10日間インキュベーションし、10mLの、生理食塩水（NS）中の0.05% Tween 20でこの傾斜培地を洗浄することにより回収した。次いでこの分生子の懸濁液を100μmフィルターに通し、血球計でカウントし、2.0×106 CFU/mlに希釈した。次いで分生子をMOPS（モルホリンプロパンスルホン酸）緩衝化RPMI（pH 7.0）中で1：50に希釈した。DMSOに溶解した実施例15の原液を使用した。実施例15をMOPS緩衝化RPMI（pH 7.0）中で希釈した（DMSOの最終濃度：真菌懸濁液への添加の前に2%）。薬物を含有する培地を各ウェルに添加した後、上記分生子の懸濁液（100μl）を加えた（t＝0時間）。対照のウェルは、分生子、培地、および薬物を含まない溶媒を含有していた。ブランクのウェルは、分生子を含まず培地のみからなっていた。真菌を加えずに広い範囲の濃度の実施例15を使用した最初の実験で、実施例15試薬はXTTアッセイにおいて光学密度に影響を及ぼさないということが示された。プレートを37℃でインキュベーションし、基本的にはこれまでに記載された（16）ようにしたが少しの変更を加えて、XTTアッセイを24時間行った。XTT（Sigma Chemical、ミズーリ州、セントルイス）の原液をNSに溶解した（1mg/ml）。電子結合剤メナジオン（Sigma Chemical）の10mM溶液をアセトン中で調製し、次いでNS中で1：10に希釈した。4.0mlのXTTおよび0.5ml メナジオンからなる使用液を使用の直前に調製した。この混合溶液50マイクロリットルを各ウェルに加え、プレートを37℃で2時間インキュベーションした。この上清100マイクロリットルを新しいプレートに移し、Labsystems Multiskan Plusプレートリーダーを使用することによって450nmでの光学密度（OD450）を測定した。各ウェルの中のXTTおよびメナジオンの最終濃度は、それぞれ200μg/mlおよび25μMであった。
【０３７５】
実施例15は、Af293に対して抗真菌活性を有していた。IC50はおよそ2.5μMであった。ウェルの目視検査に基づくと、真菌の増殖の完全抑制は、12.5μMを超える実施例15の濃度で起こった。
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13．  D.S. Perlin, 2007, Drug Resist Update, 10:121-30。
【０３８９】
14．  Clinical Laboratory Standard Institute, C.L.S.L, 2008、第3版, 28（14)。
【０３９０】
15．  Clinical Laboratory Standard Institute, C.L.S.L, 2008, 第2版, 28(16)。
【０３９１】
16．  J. Meletiadisら, 2001, J Clin Microbiol, 39:3402-8。
【０３９２】
17．  Y.F. Brunら, 2007, Antimicrob Agents Chemother, 51(5): 1804-12。
【０３９３】
本発明のカルバゾール化合物は抗菌活性をも呈する。特に、グラム陽性（Bacillus subtilis（枯草菌））およびグラム陰性（DH5-α）細菌に対する本発明のカルバゾール化合物の効果を以下の手順によって測定し、それを図13aおよび13bにまとめた。
【０３９４】
グラム（-）およびグラム（+）細菌に対するカルバゾール化合物の効果を評価するためのインビトロ試験。
【０３９５】
装置
96穴プレートリーダー（例えば、Multiscan、LabSystems,Inc）
【０３９６】
多チャネルピペット 50〜300μLの範囲
【０３９７】
フィルターチップ
【０３９８】
96穴プレート（Corning Costar カタログ番号：3598）
【０３９９】
100mm ペトリ皿
【０４００】
滅菌した1μl白金耳（Fisher 22-170-209）
【０４０１】
14ml スナップキャップ付き丸底チューブ（Falcon 352059）
材料
【０４０２】
DH5-α（E. coli（大腸菌）グラム（-）細菌）
【０４０３】
Bacillus subtilis（枯草菌）（グラム（+）細菌）
【０４０４】
Difco LB Agar（BD 244510- DH5-α用）
【０４０５】
Difco LB Broth（BD 244610- DH5-α用）
【０４０６】
Difco Nutrient Broth（BD 233000- B. subtilis用）
【０４０７】
Difco Nutrient Agar（BD 212000- B. subtilis用）
【０４０８】
方法
試薬の調製
DH5-αを増殖させるためのプレートを調製するために、1リットルのMilliQ水あたり40gのDifco LB agarを混合する。液体設定物を加熱滅菌処理する。この溶液を含む容器が冷却されると、100mmペトリ皿の中へと注ぎ込み、蓋をわずかにずらして、寒天がゲル化するにつれての水分の蓄積を防止する。寒天の固化に先だって生成する気泡を破裂させる。4℃で保存する。
【０４０９】
DH5-αを増殖させるための培地を調製するために、1リットルのMilliQ水あたり25gのDifco LB brothを混合する。液体設定物を加熱滅菌処理して滅菌する。
【０４１０】
B. subtilisを増殖させるためのプレートを調製するために、1リットルのMilliQ水あたり23gのDifco nutrient agarを混合する。液体設定物を加熱滅菌処理する。この溶液を含む容器が冷却されると、100mmのペトリ皿の中へと注ぎ込み、蓋をわずかにずらして、寒天がゲル化するにつれての水分の蓄積を防止する。寒天の固化に先だって生成する気泡を破裂させる。4℃で保存する。
【０４１１】
B. subtilisを増殖させるための培地を調製するために、1リットルのMilliQ水あたり8gのDifco nutrient brothを混合する。液体設定物を加熱滅菌処理して滅菌する。
【０４１２】
細菌の調製
この細胞毒性アッセイの開始の2日前に、DH5-αおよびB. subtilisをグリセロール原液からの1mLの対応する培地に接種する。その日の間じゅう、振盪しながら37℃で増殖させる。
【０４１３】
滅菌した白金耳を使用して各細菌を適切な寒天プレート上で筋状にし、細菌培養器中、37℃で一晩増殖させる。
【０４１４】
滅菌した白金耳を使用して、細菌の１つのコロニーを採取し、14mlのスナップキャップ付きチューブの中で5mLの対応する培地に接種する。振盪しながら37℃で一晩（約16時間）増殖させる。
【０４１５】
翌日、細菌が指数関数的増殖にある（OD600nm＝0.4〜0.8）ことを確認するために、培養物についてOD600nmを測定する。
【０４１６】
細胞毒性アッセイ（1）
DH5-αおよびB. subtilisの培養物5mlを0.002のOD600nmまで希釈する。この0.002のOD600nmは、この実験のために十分な量（プレートの数に依存する）の中の約2×106個の細胞／mlに対応する。50μlをX個の96穴プレートの各ウェル（X＝所定の実験について必要とされるプレートの数）にプレーティングする。
【０４１７】
化合物は、表2に従って0.005〜50μMからの3倍希釈物としてプレートに加えることになろう。
【０４１８】
試験のための化学物質は、DH5-αおよびB. subtilis研究のために、それぞれLB BrothまたはNutrient Broth中の原液の希釈によって調製される。細胞は、下記のスキーム（表2）に提示される最終の化学物質の濃度で処理される。原液は、DMSO中で作製される。典型的には、化学物質は20mM原液として作製される。しかしながら、この濃度は、与えられた化学物質の溶解性に依存し、そして実際の原液濃度は、実験の時に記録される必要がある。
【表１８】
0005694172.tif 000093
【０４１９】
試験されるべき各ライブラリーの化学物質は１つの96穴プレートの2列を必要とし、従って4つの化学物質（例えばW、X、Y、Z）を１つのプレートで同時に試験することができる。試験化学物質に加えて、各プレートは陽性対照および陰性対照を含んでいるべきである。陽性対照として、アンピシリンを100μg/mlで使用する。陰性対照として、DMSOを、使用する試験化合物の最大量に等しい量で使用する（50μMについては約0.25% DMSO）。
【０４２０】
プレートに加えるべき化学物質の希釈物は、適切な細菌培地中で2×濃度として作製し、対応するウェルに50μlの量で加える。
【０４２１】
化学物質は、50μMから始まる3倍段階希釈によって適切な細菌培地中で希釈される（例えば最高濃度（例えば50μM）の2×=100μM）。1／3を使用して第1希釈を作製するために300μLの最高の2×濃度が必要とされ、200μlの培地がすべての後の希釈物のために用いられる。100μLの最高2×濃度は200μlの培地と混合され、次いで100μLの第1の希釈物は200μLの培地と混合され、次の希釈物が生成される。すべての10の2×用量が調製されるまで、このプロセスが繰り返される。
【０４２２】
各プレート上に１つの濃度で加えられる陽性対照に加えて、適正かつロバストなアッセイの実行（ラン間の用量反応曲線の比較によって見積もられる）を確実にするために、アンピシリンという陽性対照が全濃度範囲（3倍希釈物）において各アッセイのランに加えられる。
【０４２３】
細菌を含有する96穴プレートへのカルバゾール化合物の添加後、プレートを37℃の細菌培養器に48時間移しておく。インキュベーション後、96穴プレートの各ウェルについてOD600mmが測定されることになる。
【０４２４】
データ解析
試験化合物溶液の平均のOD600nmは、試験溶液の平均OD600nmをDMSO対照の平均のOD600nmで割り、そして100を掛けて% DMSO対照（すなわち% 細胞毒性）を生成することにより、DMSO対照の平均のOD600nmと比較する。この% DMSO対照は、化合物濃度に対してプロットされ、S字型の曲線が生成される。3つのランが完了した後、すべての3つのランについての生データはIC50の算出のために使用する。
【０４２５】
試験結果は、実施例15、7、4、12、13、17、および18のカルバゾール化合物ならびに化合物18c-lがある効力の範囲にわたってB. subtilisおよびHB 101 E. coliに対して抗菌作用を示すということを示した。グラム（+）細菌は本発明のカルバゾール化合物に対してより感受性が高いように見えた。加えて、当該カルバゾール化合物のうちのいくつか、例えば、実施例15および17は、アンピシリン対照よりも細菌に対して有効であった。それゆえ本発明のカルバゾール化合物は、明確な抗菌活性を示す。
【図１−ａ】
0005694172.tif 000117
【図１−ｂ】
0005694172.tif 000118
【図２−ａ】
0005694172.tif 000119
【図２−ｂ】
0005694172.tif 000120
【図２−ｃ】
0005694172.tif 000121
【図２−ｄ】
0005694172.tif 000122
【図２−ｅ】
0005694172.tif 000123
【図２−ｆ】
0005694172.tif 000124
【図２−ｇ】
0005694172.tif 000125
【図２−ｈ】
0005694172.tif 000126
【図２−ｉ】
0005694172.tif 000127
【図２−ｊ】
0005694172.tif 000128
【図２−ｋ】
0005694172.tif 000129
【図３】
0005694172.tif 000130
【図８−ａ】
0005694172.tif 000131
【図８−ｂ】
0005694172.tif 000132
【図９−ａ】
0005694172.tif 000133
【図９−ｂ】
0005694172.tif 000134
【図９−ｃ】
0005694172.tif 000135
【図１０】
0005694172.tif 000136
【図１１】
0005694172.tif 000137
【図１２】
0005694172.tif 000138
【図１３−ａ】
0005694172.tif 000139
【図１３−ｂ】
0005694172.tif 000140
【図４】
0005694172.tif 000141
【図５】
0005694172.tif 000142
【図６】
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【図７】
0005694172.tif 000144