(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化合物からなる群より選ばれることを特徴とする化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
ＣＰＴ１：９−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）オキシム−１０−［（４’−ピペリジノピペリジン）カルボニルオキシ］−カンプトテシン、
ＣＰＴ２：９−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）オキシム−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン、
ＣＰＴ３：９−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）オキシム−１０−フルオロ−カンプトテシン、
ＣＰＴ７：９−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）オキシム−カンプトテシン、
ＣＰＴ８：９−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）オキシム−１０−アセトキシ−カンプトテシン。
【請求項２】
前記塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、アスコルビン酸塩、リンゴ酸塩、メタンスルホン酸塩、および、ｐ−トルエンスルホン酸塩から選ばれる請求項１の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
治療有効用量の請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および通常の薬用補助材料を含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項４】
前記薬物組成物が、経口投与型または注射剤型に調製されることを特徴とする請求項３に記載の薬物組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の腫瘍性疾患の治療用薬物の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍薬物化合物に関し、さらに具体的には、新規な化学構造および効果的な抗腫瘍活性を有するカンプトテシン誘導体およびそれらの調製並びに応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、癌腫瘍は人々の生命と健康を害する深刻な疾患の１つであり、世界保健機関（ＷＨＯ）の統計資料によると、全世界で癌腫瘍は毎年約１６００万人が発症し、約６００万人が死亡し、既に心血管疾患に次ぐ人類の２番目の死亡原因となっている。現在、全世界で市場に出ている抗腫瘍薬物は合計７０種類以上であり、毎年新薬が１〜２種類発表されるという速度で発展している。しかしながら、わが国は抗腫瘍薬物の研究開発においてはまだ初期段階にあり、経済的または供給に関する問題を原因として、多くの腫瘍患者は最先端の薬物治療を受けることができていない。そのため、独自の知的財産権を有する革新的な抗腫瘍薬物の開発は国の経済建設と健康医療の構築において重要な意味を持っている。カンプトテシン（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，ＣＰＴ）は、ヌマミズキ科植物のカンレンボクから分離されるアルカロイドである。その作用の目的は、ＤＮＡトポイソメラーＩを阻害することである。カンプトテシンは選択性が悪いため、血尿や骨髄抑制が生じ、適用が制限されていた。
【０００３】
構造の改造がなされた部分合成カンプトテシン誘導体は、選択性が向上し、毒性が低減し、治療効果が向上した。現在、国内外で市場に出ているカンプトテシン系薬物には、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、トポテカン（Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、１０−ヒドロキシカンプトテシン、および２００４年に市場に出たベロテカン（ＣＫＤ−６０２）がある。既に臨床研究が行われたものとしては、ＮＰ−１３５０（Ｋａｒｅｎｉｔｅｃｉｎ）、ジャイマテカン（Ｇｉｍａｔｅｃａｎ）、キミテカン（Ｃｈｉｍｍｉｔｅｃａｎ）などがある。
【０００４】
イリノテカンは構造修飾が最も成功したカンプトテシン誘導体であり、広域スペクトルの抗癌作用を有し、４０年にわたり５−フルオロウラシルに次いで、転移性結腸直腸癌の治療における第一線の薬物として用いられ、肺癌、卵巣癌、乳癌、胃癌および膵臓癌の治療にも用いられている。トポテカンは最も劣ったものの１つであり、前臨床評価ではほとんどの腫瘍に作用効果がなく、臨床使用の面でも化学療法に最も敏感な小細胞肺癌にしか用いられず、しかも寛解時間が比較的短いため、作用面で劣る。
【０００５】
カンプトテシンは５環性アルカロイドであり、Ｃ−７、９−１２、２０位においていずれも多種類にわたる構造修飾の改造が可能である。Ｃ−７、９位において構造修飾を行うことにより高効率・低毒性の化合物を得ることが可能であり、例えば、イリノテカンがＣ−７位にエチル基を導入し、ジャイマテカンがＣ−７に(Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシ)メチルオキシムを導入する場合、該基は脂溶性を有し、血液脳関門を透過することができ、ジャイマテカンは現在神経膠腫の治療に対する臨床試験が行われている。ジャイマテカンは、Ｃ−９位にプロペニル基を導入しても比較的良好な抗腫瘍作用を有する。しかし、９位にジメチルアミノメチル基を導入したトポテカンの場合は、薬効の増加も毒性の低下もなく、その上１０−０Ｈ−ＣＰＴよりも毒性が増加したが、ただ水溶性は増加した。そのため、７−９位に対応する基を導入し、化合物の活性が改善可能かどうかは導入する基の性質によって決まる。
【化１】
0005755796.tif 000002
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の発明者は、カンプトテシン類の抗腫瘍薬物に対してより体系的に研究を行い、長期的な実験とスクリーニングを通じて、Ｃ−９位にオキシムまたは他のヘテロＮ原子を含むオレフィン化合物を導入するとともに、Ｃ−１０またはＣ−１１位にヒドロキシ基などの官能基の誘導体［発明の内容中の構造式（１）］を導入して得られる新規な構造の化合物が良好な抗腫瘍活性を有することを発見し、そのｉｎ  ｖｉｖｏで抗腫瘍作用が明らかに向上し、現在選択性が最も優れたカンプトテシン類の新規な化合物の１つである。したがって、この種類の化合物は、抗腫瘍薬物の開発において将来性を有することを明らかに示している。この種類の化合物はまだ国内外で報告されたことがなく、新規な構造の化合物の発明に属する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、１．抗腫瘍活性を有する新規なカンプトテシン誘導体、２．この種類の化合物とそれらの薬物組成物、および３．腫瘍の治療におけるこの種類の化合物および調製の組み合わせの応用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ヒト膵臓癌ＢＸ−ＰＣ−３に対するＣＰＴ１の抗腫瘍作用
【図２】ヒト結腸癌ＨＴ−２９に対するＣＰＴ１の抗腫瘍作用
【図３】ヒト非小細胞肺癌Ａ５４９に対するＣＰＴ１の抗腫瘍作用
【発明を実施するための形態】
【０００９】
１．新規なカンプトテシン誘導体の基本的な化学構造は下記のとおりである：
【化２】
0005755796.tif 000003
（構造式において、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アシル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アシル基、Ｃ6−Ｃ18の炭素芳香環、Ｃ6−Ｃ18の、ハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ニトロ基（ＮＯ2）、ヒドロキシ基（ＯＨ）、アミノ基（ＮＨ2）、シアノ基（ＣＮ）の置換基を含有する炭素芳香環、ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ）を含有する芳香環を表す。
Ｘは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ6を表す。ここで、Ｒ6は、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アシル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アシル基を表す。
Ｒ2は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基を表す。
Ｒ3とＲ3’は、同一または異なるＨ、Ｆ、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基を表す。
Ｒ4は、Ｃ１０位およびＣ１１位の同一または異なるＨ、ハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ニトロ基（ＮＯ2）、ヒドロキシ基（ＯＨ）、アミノ基（ＮＨ2）、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アルキル基、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アシル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状アシル基、Ｃ１０位またはＣ１１位のＯＲ7を表す。ここで、Ｒ7は、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状カルボニル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状カルボニル基、Ｎ原子を含有するＣ1−Ｃ20の直鎖、分岐、もしくは環状カルボニル基、天然もしくは非天然のアミノ酸を含有し、およびそれからなるポリペプチドＣの末端のカルボニル基を表す。
Ｒ5は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状カルボニル基、Ｆで置換されるＣ1−Ｃ10の直鎖、分岐、もしくは環状カルボニル基、Ｎ原子を含有するＣ1−Ｃ20の直鎖、分岐、もしくは環状カルボニル基、天然もしくは非天然のアミノ酸を含有し、およびそれからなるポリペプチドのＣ末端のカルボニル基を表す。）。
【００１０】
上記化合物の薬用可能な塩の特徴は、（４’−ピペリジノピペリジン）カルボニルオキシがアルカリ性のアミノ基、天然もしくは非天然のアミノ酸のアミノ基と薬用の無機酸または有機酸から形成された塩を有し、これらの塩は、薬物を水溶性にすることができる。例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、アスコルビン酸塩、リンゴ酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩などがある。
【００１１】
本発明は、特に下記の化合物（ＣＰＴ１〜ＣＰＴ１０）を優先して選択している：
ＣＰＴ１：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−１０−［（４’−ピペリジノピペリジン）カルボニルオキシ］−カンプトテシン、
ＣＰＴ２：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン、
ＣＰＴ３：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−１０−フルオロ−カンプトテシン、
ＣＰＴ４：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−１０−フェニルアラニンカルボニルオキシ−カンプトテシン、
ＣＰＴ５：９−メトキシエチルオキシム−１０−［（４’−ピペリジノピペリジン）カルボニルオキシ］−カンプトテシン、
ＣＰＴ６：９−アミノフェニルヒドラゾン−１０−［（４’−ピペリジノピペリジン）カルボニルオキシ］−カンプトテシン、
ＣＰＴ７：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−カンプトテシン、
ＣＰＴ８：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−１０−カルボニルオキシ−カンプトテシン、
ＣＰＴ９：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−１０−［（４’−ピペリジノピペリジン）カルボニルオキシ］−２０−フェニルアラニンカルボニルオキシ−カンプトテシン、
ＣＰＴ１０：９−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルオキシム−２０−フェニルアラニンカルボニルオキシ−カンプトテシン。
【化３】
0005755796.tif 000004
【００１２】
本発明は、さらに以下の図で示すような本発明の代表的な化合物の調製方法をさらに提供する。
【００１３】
【化４】
0005755796.tif 000005
【００１４】
２．この種類の化合物およびそれらの薬物組成物
本発明は、さらに本発明の有効用量の化合物からなる薬物組成物を含む。前記薬物組成物は経口投与および注射投与に適用される：
経口投与薬の剤形は、錠剤、カプセル剤、経口投与液、顆粒剤、懸濁剤などであってもよい。経口投与薬の剤形に用いられる薬用補助材料は通常の補助材料であり、希釈剤、調味剤、溶解補助剤、滑剤、懸濁化剤、結合剤、膨張剤などが含まれる：
注射剤は、注射液、粉末注射剤、凍結乾燥粉末、リポソームなどであってもよい。注射剤に用いられる薬用補助材料は通常の補助材料であり、溶媒、希釈剤、溶解補助剤、ｐＨ調整剤などが含まれる：
有効用量とは、患者に対して有益な作用を生み出す治療の作用用量であり、その用量は投与経路、投与計画によって異なる。
【００１５】
３．腫瘍の治療におけるこの種類の化合物および調製の組合せの応用
（１）．新規なカンプトテシン誘導体のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの生物活性
ＭＴＴ法を用いて、ＣＰＴ１−ＣＰＴ１０、イリノテカン活性物質（ＳＮ−３８）、ジャイマテカンおよびトポテカンのｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡ５４９（非小細胞肺癌）、ＨＴ−２９（結腸癌），ＯＶ−３（卵巣癌）、Ｕ８７（神経膠腫）、ＢＸ−ＰＣ３（膵臓癌）細胞株に対する阻害作用を測定した。結果によると、ＣＰＴ１−１０において、ＣＰＴ１、ＣＰＴ４、ＣＰＴ５、ＣＰＴ６、ＣＰＴ９、ＣＰＴ１０はプロドラッグであり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは明らかな活性がない（表に記載せず）。ＣＰＴ２、ＣＰＴ３、ＣＰＴ７、ＣＰＴ８には明らかな細胞毒性がある。
【００１６】
ＣＰＴ２、ＣＰＴ３、ＣＰＴ７、ＣＰＴ８、ジャイマテカン、ＳＮ−３８、トポテカンの上記の５種類の細胞株に対する作用の強弱については、強いものから順に、Ｕ８７、ＢＸ−ＰＣ３、ＨＴ−２９、ＯＶ−３、Ａ５４９である。上記の化合物のＵ８７、ＢＸ−ＰＣ３、ＨＴ−２９、ＯＶ−３、Ａ５４９に対する５０％細胞増殖阻害平均濃度（ｎＭ）はそれぞれ、ＣＰＴ７（３．３）、ＣＰＴ３（７．１）、ジャイマテカン（２．７）、ＣＰＴ２（９．１）、ＳＮ−３８（１０．５）、ＣＰＴ８（１２．９）、トポテカン（１９．７）である。（表１を参照）。
【００１７】
（２）．新規なカンプトテシン誘導体の人体移植腫瘍における治療作用
新規なカンプトテシン誘導体のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍作用を正確に評価するためには、等毒性の状況下で抗腫瘍作用を比較する必要があり、試験では全て最大耐量（ＭＴＤ）を用いて行い、その結果、各薬物の等毒性用量（体重の減少がいずれも１５％程度であった）は、ＣＰＴ１が５５ｍｇ／ｋｇ、ｑ２ｄｘ４、イリノテカンが５５ｍｇ／ｋｇ、ｑ２ｄｘ４、ジャイマテカンがｌｍｇ／ｋｇ、ｑ２ｄｘ４、トポテカンが１２ｍｇ／ｋｇ、ｑ２ｄｘ４であった。ＣＰ１は、ＣＰＴ２−１０より比較的良好な水溶性および安定性を示した。よって、ＣＰＴ１は複数の移植腫瘍に良好な治療作用があることは明らかである。
【００１８】
以下、実施例を通じて本発明をさらに説明するものが、本発明に対して制限するものではない。
【００１９】
実施例１：ＣＰＴ１の具体的な調製方法：
Ａ．１０−アリロキシカンプトテシンの合成
アルゴン風船が装着された５００ｍＬの二口フラスコの中に１０−ヒドロキシカンプトテシン１０．０ｇ（２７．５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ２００ｍＬを入れ、固体が全て溶解するまで攪拌し、さらに炭酸カリウム５．６ｇ（４．０ｍｍｏｌ）とアリルブロミド２．６ｍＬ（３ｍｍｏｌ）を順に入れ、アルゴンの保護下で、常温で８ｈ反応させる。反応が完了した後、２５０ｍＬの氷水に注ぎ、希塩酸でｐＨ＝５になるように調整し、黄色固体が析出され、ろ過し、１００ｍＬ＊３の水でろ過ケーキを洗い、１００ｍＬのジエチルエーテルで洗い、乾燥させ、９．８ｇ（２４．２ｍｍｏｌ）の薄黄色粉末が得られ、収率は８８．２％である。
【００２０】
1Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣ１3）：  δ  ８．２１（ｓ，  １Ｈ）、  ８．１２（ｄ，  １Ｈ）、  ７．６２（ｓ，  １Ｈ）、  ７．４８（ｄ，  １Ｈ）、  ７．１４（ｓ，  １Ｈ）、  ６．１１（ｍ，  １Ｈ）、  ５．７３（ｄ，  １Ｈ）、  ５．５０（ｄｄ，  １Ｈ）、  ５．４７（ｄｄ，  １Ｈ）、  ５．３０（ｍ，  １Ｈ）、  ５．２５（ｓ，  ２Ｈ）、  ４．７１（ｄ，  ２Ｈ）、  ３．８８（ｓ，  １Ｈ）、  １．７６（ｍ，  ２Ｈ）、  １．０３（ｔ，  ３Ｈ）。
【００２１】
Ｂ．９−アリル−１０−ヒドロキシカンプトテシンの合成
還流冷却器およびアルゴン風船が装着された１０００ｍＬの二口フラスコの中に１０−アリロキシカンプトテシン９．８ｇ（２４．２ｍｍｏｌ）および氷酢酸５００ｍＬを入れ、アルゴンの保護下で３日間加熱還流する。減圧蒸発乾固し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離し、ジクロロメタン：メタノール＝３０：１（ｖ／ｖ）で溶出し、黄褐色粉末６．４ｇ（１５．８ｍｍｏｌ）が得られ、収率は６５．３％である。
【００２２】
1Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳ０−ｄ６）：  δ  １０．１９（ｓ，  １Ｈ）、  ８．６１（ｓ，  １Ｈ）、  ７．９５（ｄ，  １Ｈ）、  ７．５３（ｄ，  １Ｈ）、  ７．２６（ｓ，  １Ｈ）、  ６．４５（ｓ，  １Ｈ）、  ６．１０（ｍ，  １Ｈ）、  ５．４０（ｓ，  ２Ｈ）、  ５．２３（ｓ，  ２Ｈ）、  ４．９８（ｍ，  ２Ｈ）、  ３．７８（ｄ，  ２Ｈ）、  １．８５（ｍ，  ２Ｈ）、  ０．８８（ｔ，  ３Ｈ）。
【００２３】
Ｃ．２−（１０ヒドロキシカンプトテシン−９−）アセトアルデヒドの合成
５００ｍＬの二口フラスコの中に９−アリル−１０−ヒドロキシカンプトテシン６．４ｇ（１５．８ｍｍｏｌ）、ジオキサン２５０ｍＬ、および水８０ｍＬを入れ、固体が全て溶解するまで攪拌し、さらに四酸化オスミウム０．０４０ｇ（０．１５８ｍｍｏｌ）を入れ、室温で３０分間攪拌した後、１時間以内に過ヨウ素酸ナトリウム１６．８ｇ（７９．０ｍｍｏｌ）を数回に分けて入れる。１６ｈ後反応が停止した後、Ｎａ2Ｓ2Ｏ3１８．０ｇを入れて３０間分攪拌し、その後反応生成物を５００ｍＬの水中に注ぎ、希塩酸でpＨ＝５に調整し、クロロホルムで抽出（５００ｍＬ＊６）して、クロロホルム層を合併し、飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、Ｎａ2Ｓ2Ｏ4をろ過除去した後、溶媒を減圧蒸発除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離し、溶離剤はクロロホルム：アセトン＝１０：１（ｖ／ｖ）であり、淡黄色粉末３．１ｇ（７．６ｍｍｏｌ）が得られ、収率は４８．１％である。
【００２４】
1Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳ０−ｄ６）：  δ  ９．７９（ｓ，  １Ｈ）、  ８．６８（ｄ，  １Η）、  ７．８８（ｄ，  １Ｈ）、  ７．８２（ｄ，  １Ｈ）、  ７．３８（ｓ，  １Ｈ）、  ６．４７（ｓ，  １Ｈ）、  ５．４１（ｓ，  ２Ｈ）、  ５．３６（ｓ，  ２Ｈ）、  ５．２３（ｓ，  ２Ｈ）、  ４．３２（ｓ，  ２Ｈ）、  １．８８（ｍ，  ２Ｈ）、  ０．８７（ｔ，  ３Ｈ）。
【００２５】
Ｄ．２−（１０ヒドロキシカンプトテシン−９−）ｔｅｒｔ−ブタノールアミンオキシムの合成
還流冷却器およびアルゴン風船が装着された２５０ｍＬの二口フラスコに２−（１０ヒドロキシカンプトテシン−９−）アセトアルデヒド３．ｌｇ（７．６ｍｍｏｌ）、エタノール２０ｍＬ、ｔｅｒｔ−ブタノールアミン塩酸塩１．９ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）、およびピリジン２０ｍＬを入れ、アルゴンの保護下で、９０℃で１５ｈ攪拌し、反応が完了した後、溶媒を減圧蒸発除去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離し、溶離剤はジクロロメタン：メタノール＝３０：１（ｖ／ｖ）であり、淡黄色粉末２．ｌｇ（４．ｌｍｍｏｌ）が得られ、収率は５３．９％である。
【００２６】
1Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．８８（ｔ，  Ｈ３−Ｅ  ＋  Ｈ３−Ｚ）,  １．２８（ｓ，  ｔ−Ｂｕ  Ｚ）,  １．４１  （ｓ，  ｔ−Ｂｕ  Ｅ）,  １．８０−１．９０（ｍ，  Ｈ２−Ｅ  ＋  Ｈ２−Ｚ）,  ４．３２（ｓ，  ２Ｈ）、  ５．１０−５．４０（ｍ，  Ｈ２−Ｅ  ＋  Ｈ２−Ｚ）、  ６．５３（ｓ，  ＯＨ）、７．２５−７．５０  （ｍ，  Ｈ−Ｅ  ＋  Ｈ−Ｚ）、  ７．７０（ｄ，  Ｈ−Ｅ）,  ８．０５  （ｄ，  Ｈ−Ｅ  ＋  Ｈ−Ｚ）、  ８．２５（ｓ，  Ｚ）、  ９．０（ｓ，  Ｅ）,  １０．３５（ｓ，  １Ｈ）。
【００２７】
Ｅ．１０−（（４’−ピペリジノピペリジン）カルボニルオキシ）−９−ｔｅｒｔ−ブタノールアミンオキシムエチルカンプトテシンの合成
ピペリジノピペリジンクロロギ酸アミド１．５ｇ（６．５ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、２−（１０ヒドロキシカンプトテシン−９−）ｔｅｒｔ−ブタノールアミンオキシム２．ｌｇ（４．４ｍｍｏｌ）を３０ｍＬの無水ピリジン中に溶解して、氷浴中に前記ジクロロメタン溶液を加え、室温で１６ｈ攪拌し、反応が完了した後、溶媒を減圧蒸発除去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離し、２．ｌｇの黄色固体が得られ、収率は７０．１％である。
【００２８】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣ１3）：  δ８．７８（ｓ，  Ｅ）、  ８．６１（ｓ，  Ｚ）、８．１３（ｄ，  １Η）、  ７．６６（ｄ，  １Ｈ）、  ７．５８（ｄｄ，  １Ｈ，）、  ７．３７（ｔ，  Ｅ）、  ６．６８（ｔ，  Ｚ）、  ５．７４（ｄ，  １Ｈ，）、  ５．２９（ｄ，  １Ｈ）、  ５．２６（ｓ，  ２Ｈ）、  ４．４３（ｂｒ，  １Ｈ）、  ４．３２（ｄ，  １Ｈ，）、  ４．１１（ｄ，  Ｚ）、  ３．９３（ｄ，  Ｅ）、  ３．１（ｔ，  １Ｈ）、  ２．９５（ｔ，  １Ｈ）、  ２．５７（ｂｒ，  ４Ｈ）、  １．９５（ｂｒ，  ２Ｈ)  １．８３（ｍ，  ２Ｈ）、  １．６３（ｂｒ，  ４Ｈ）、  １．４７（ｂｒ，  ２Ｈ）、  １．２７（ｓ，  Ｅ）、  １．２５（ｓ，  Ｚ）、  １．０３（ｔ，  ３Ｈ）。
【００２９】
実施例２：ＣＰＴ２−１０の調製
調製方法は実施例１と同様であるが、使用する原料は、それらの各置換基に対応する化合物である。
【００３０】
実施例３：ＣＰＴ１を含有する錠剤の調製
処方  ＣＰＴ１                              ５０グラム
微結晶性セルロース                    １００グラム
乳糖                                  １００グラム
澱粉                                  ８グラム
ステアリン酸マグネシウム              ３０グラム
酸メチルセルロースナトリウム          １グラム
を造粒して１０００錠（５０ｍｇ／錠）にタブレット成形する。
【００３１】
実施例４：ＣＰＴ１を含有するカプセルの調製
処方  ＣＰＴ１                              ５０グラム
微結晶性セルロース                    ２００グラム
澱粉                                  ２５０グラム
を均一に混合して１０００粒にカプセル化し、含有量は５０ｍｇ／粒である。
【００３２】
実施例５：ＣＰＴ２、ＣＰＴ３錠剤およびカプセルの調製
実施例３および実施例４と同様である。
【００３３】
実施例６：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞に対する殺傷作用
ＭＴＴ法を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞の毒性を測定し、良好な状態の細胞を取り、細胞懸濁液を作製する。細胞懸濁液を取って９６オリフィス板に２００ｕｌ／ホールで植え付け、恒温のＣＯ2培養器の中に置き、２４時間培養する。被験薬物を２０ｕｌ／ホールで加え、４８時間培養する。ＭＴＴを９６オリフィス板に２０ｕｌ／ホールで加え、培養器の中で４時間反応させ、上澄液を吸収除去し、ＤＭＳ０を２０ｕｌ／ホールで加え、酵素免疫測定により波長が５７０ｎｍの箇所で各ホールの吸光値を測定し、細胞の殺傷作用を算出する。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
Ａ５４９：非小細胞肺癌、ＨＴ−２９：結腸癌、ＯＶ−３：卵巣癌、Ｕ８７：神経膠腫、ＢＸ−ＰＣ３：膵臓癌
以上の化合物のＵ８７、ＢＸ−ＰＣ３、ＨＴ−２９、ＯＶ−３、Ａ５４９に対する５０％細胞増殖阻害平均濃度（ｎＭ）はそれぞれ、ＣＰＴ７（３．３）、ＣＰＴ３（７．１）、ジャイマテカン（２．７）、ＣＰＴ２（９．１）、ＳＮ−３８（１０．５）、ＣＰＴ８（１２．９）、トポテカン（１９．７）である。
【００３６】
実施例７  ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍作用
実験方法：ヌードマウス、メス。移植腫瘍：増殖が旺盛な腫瘍組織を取り、無菌ハサミで小片に切断し、一匹ごとに５０ｍｇの腫瘍組織を植え付ける。腫瘍移植後６〜１０日目から治療を開始し、この時の腫瘍重さは３００ｍｇ程度であった。一日おきにヌードマウスの体重および腫瘍体積を測定した。被験移植腫瘍は、ヒト乳癌（ＭＸ−１）、ヒト非小細胞肺癌（Ａ５４９）、ヒト卵巣癌（ＳＫ−ＯＶ３）、ヒト結腸癌（ＨＴ２９）、ヒト膵臓癌（ＢＸ−ＰＣ−３）である。
Ａ：腫瘍増殖抑制率（％）＝（対照群の腫瘍体積−治療群の体積）／対照群の体積×１００％。
Ｂ：腫瘍消失：実験後の６０日目に、腫瘍の存在が肉眼的に観察できない。
【００３７】
【表２】
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【００３８】
投与方法：２日毎に一回、計４回、投与経路：尾静脈注射。＃は治療後１６日目であり、腫瘍消失の観察時間は６０日間である。投与用量は、試験後に確定された、体重が１２〜１５％減少した等毒性用量である。Ｔ．Ｓ：腫瘍体積。
【００３９】
【表３】
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【００４０】
投与方法：２日毎に一回、計４回、投与経路：尾静脈注射。＃は治療後１６日目である。投与用量は、試験後に確定された、体重が１２〜１５％減少した等毒性用量である。Ｔ．Ｓ：腫瘍体積。
【００４１】
【表４】
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【００４２】
投与方法：植え付け後２日目から投与し、２日毎に１回、計４回、投与経路：尾静脈注射。マウスに２×１０5の細胞を植え付け、マウスは植え付け後に脳内腫瘍により死亡した。＃：ＣＰＴ１はイリノテカン、ジャイマテカンに比べ、生存時間が明らかに増加しており、Ｐ＜０．０５である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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