(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化粧品または皮膚用有効成分の調製方法であって、参照番号ATCC15551でATCCに寄託された株である少なくとも1種の非光合成性かつ非子実形成性の糸状菌を、La Roche-Posay産の水およびVittel産の水から選択される少なくとも1種の硫黄不含鉱泉水および/または温泉水を含む培地において培養するステップを含む方法。
【請求項２】
(i) 参照番号ATCC15551でATCCに寄託された株であるベギアトア目の系列に属する少なくとも1種の細菌を、主な炭素源としての単糖類、並びにLa Roche-Posay産の水およびVittel産の水から選択される少なくとも1種の鉱泉水または温泉水を含む培地において培養し、次いで(ii)発酵後、前記細菌を培養培地から分離して細菌塊を回収する段階を含むことを特徴とする、請求項１に記載の化粧品または皮膚用有効成分の調製方法。
【請求項３】
発酵段階の終了の際に回収された細菌塊を、安定化処理に付すことを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
培養培地が、(i)浸透処理水または蒸留水および(ii)温泉水の混合物を(i)/(ii)1〜100の比で含むことを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に規定された少なくとも1種の硫黄不含温泉水または鉱泉水の、参照番号ATCC15551でATCCに寄託された株であるビトレオスチラ属の細菌の活性および/または成長を改善するための薬剤としての使用。
【請求項６】
生理学的に許容される培地において、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法によって得られる、参照番号ATCC15551でATCCに寄託された株であるビトレオスチラ属の少なくとも1種の細菌、または前記細菌の抽出物を含むことを特徴とする、化粧品または皮膚用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に化粧品または医薬分野で使用する改善された特性を微生物に付与する、微生物の新規な培養方法に関する。本発明はまた、これらの方法によって得られる細菌またはその抽出物の、特に化粧品または皮膚使用を有する組成物の調製における使用にも関する。
【０００２】
本発明は、Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (vol. 3、sections 22 and 23、9th edition、1989)の分類にしたがって定義される非光合成性かつ非子実形成性の糸状菌(中でも、ベギアトア目(Beggiatoales)の系列に属する細菌、さらにとりわけベギアトア(Beggiatoa)属、ビトレオスチラ(Vitreoscilla)属、フレキシトリックス(Flexithrix)属またはロイコトリックス(Leucothrix)属に属する細菌が挙げられ得る)の培養に特に関する。
【背景技術】
【０００３】
そのようなベギアトア科(Beggiatoaceae)の細菌の培養について、穏やかに撹拌された培地中の発酵槽での増殖による培養が出願FR2283223に記載されている。
【０００４】
出願WO94/02158には、ベギアトアまたはビトレオスチラ属の細菌のエンベロープからの免疫調節組成物の調製が教示されている。これらの細菌は、蒸留水および炭素源としての単糖類、特にグルコースを用いて調製された培地において培養される。
【０００５】
さらに、こうして得られた糸状菌、または画分は、例えば、EP681831における老化の兆候に対抗すること、またはEP761204における敏感肌を治療することについて記載された有利な特性を示す。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】FR2283223
【特許文献２】WO94/02158
【特許文献３】EP681831
【特許文献４】EP761204
【特許文献５】EP641557
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (vol. 3、sections 22 and 23、9th edition、1989)
【非特許文献２】Heller、Ann. Sci. Nat. Biol. Veg.、14、1〜223 (1953)
【非特許文献３】NorisおよびRibbons、Methods in Microbiology、Vol. 5B、Academic Press (1971)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そのような微生物を生成する改善された方法を見出す必要性が依然として存在する。
【０００９】
本発明に関連して、鉱泉水によって糸状菌を培養するための培地に従来的に存在する蒸留水の全部または一部を置換することにより、改善された特性を示す細菌塊を得ることを可能にすることが見出された。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
そのため、本発明の主題は、化粧品または皮膚用有効成分の調製方法であって、少なくとも1種の非光合成性かつ非子実形成性の糸状菌を、好ましくは硫黄不含である少なくとも1種の鉱泉水および/または温泉水を含む培地において培養するステップを含む方法である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
亜硫酸水は、硫黄循環の役割を果たす独立栄養代謝を有する細菌を一般的に含む。本発明による硫黄不含水は、そのような亜硫酸還元細菌を実質的に含まない。
【００１２】
上記のように、非光合成性の糸状菌は、特にベギアトア目の系列に属する細菌、より詳細にはベギアトア属、ビトレオスチラ属、フレキシトリックス属またはロイコトリックス属に属する細菌を含む。
【００１３】
本発明による方法は、ビトレオスチラ属に属する細菌、より詳細にはビトレオスチラ・フィリフォルミス(Vitreoscilla filiformis)種の細菌の培養に特に適する。
【００１４】
上のように定義し、幾つかは既に記載した細菌は、一般的に水中に生息しており、特に海水中または温泉水中において認められ得る。使用され得る細菌の中で、例えば以下のものを挙げることができる:
ビトレオスチラ・フィリフォルミス(ATCC 15551)
ビトレオスチラ・ベッジアトイデス(Vitreoscilla beggiatoides) (ATCC 43181)
ベギアトア・アルバ(Beggiatoa alba) (ATCC 33555)
フレキシトリックス・ドロセアエ(Flexithrix dorotheae) (ATCC 23163)
ロイコトリックス・ムコール(Leucothrix mucor) (ATCC 25107)
スフェロチルス・ナタンス(Sphaerotilus natans) (ATCC 13338)。
【００１５】
好ましくは、本発明による方法は、番号15551でATCCに寄託された株に相当する細菌の培養に適用される。
【００１６】
用語「温泉水」は、その治療能力または入浴使用のために使用される温水または冷水を意味することが理解される。本発明は、温泉水または鉱泉水を使用できる。一般に、鉱泉水は摂取に適するが、温泉水の場合は必ずしもそうではない。これらの各水は、とりわけ、溶解したミネラルおよび/または微量元素を含む。これらの水は、その中に存在する特定の微量元素およびミネラルによって、特定の治療目的で使用されることが知られている。
【００１７】
好ましくは、本発明による方法において、400mg/l以上の全ミネラル含量を示す温泉水および/または鉱泉水でできているものを使用する。
【００１８】
本発明において、用語「全ミネラル含量」は、温泉水または鉱泉水中に存在するアニオンおよびカチオンの合計濃度を意味することが理解される。本発明による使用の温泉水または鉱泉水において、全ミネラル含量は、一般に400〜900mg/lである。
【００１９】
本発明によって使用される温泉水および/または鉱泉水は、少なくとも700mg/lの全ミネラル含量、特に、少なくとも150mg/l、より好ましくは少なくとも360mg/lの炭酸塩および重炭酸塩の総濃度、ならびに特に2mg/lを超える炭酸ナトリウムおよび重炭酸ナトリウムの総濃度を有し得る。本発明による組成物に使用される水中の酸化ケイ素の濃度は、好ましくは少なくとも6mg/l、より好ましくは少なくとも9mg/lであり得る。
【００２０】
本発明に使用される温泉水または鉱泉水は、例えば、Vittel産の水、Vichy盆地産の水、Uriage産の水、La Roche-Posay産の水、La Bourboule産の水、Enghien-les-Bains産の水、Saint Gervais-les-Bains産の水、Neris-les-Bains産の水、Allevard-les-Bains産の水、Digne産の水、Maizieres産の水、Neyrac-les-Bains産の水、Lons-le-Saunier産の水、Eaux-Bonnes産の水、Rochefort産の水、Saint Christau産の水、Les Fumades産の水、およびTercis-les-Bains産の水から選択可能である。
【００２１】
有利には、硫黄不含水、例えば、Vittel産の水、亜硫酸水を除いたVichy盆地産の水、La Roche-Posay産の水、La Bourboule産の水、Enghien-les-Bains産の水、Neris-les-Bains産の水、Digne産の水、Maizieres産の水、Neyrac-les-Bains産の水、Lons-le-Saunier産の水、Rochefort産の水、Saint Christau産の水、およびTercis-les-Bains産の水から選択される。
【００２２】
これらの水の中で、360mg/lを超える炭酸塩または重炭酸塩の総濃度を示す水は、Vittel産の水、La Bourboule産の水、Les Fumades産の水、Enghien-les-Bains産の水、La Roche-Posay産の水、Vichy盆地産の水およびUriage産の水である。
【００２３】
これらの水の中で、150mg/l〜360mg/lの炭酸塩または重炭酸塩の濃度を示す水は、Digne産の水、Maizieres産の水、Rochefort産の水またはSaint Gervais-les-Bains産の水である。
【００２４】
これらの水の中で、少なくとも2mg/lの炭酸ナトリウムまたは重炭酸ナトリウムを含む水は、La Roche-Posay産の水、Vittel産の水、Vichy盆地産の水またはUriage産の水である。
【００２５】
少なくとも9mg/lの酸化ケイ素を含む水は、La Roche-Posay産の水、Vittel産の水、Vichy盆地産の水またはUriage産の水である。
【００２６】
本発明の実施に特に適する温泉水または鉱泉水は、100mg/l以上、実際には140mg/lのカルシウムイオン濃度を有する。
【００２７】
有利な実施形態によれば、温泉水または鉱泉水は、300mg/l以上の炭酸水素イオン濃度を有する。重炭酸塩としても知られている炭酸水素塩は、特に350mg/l以上の濃度で存在する。
【００２８】
有利な実施形態によれば、細菌は、少なくとも1種の温泉水を含む培地において培養される。後者は、特にVittel産の水、Vichy盆地産の水、Uriage産の水、La Roche-Posay産の水、La Bourboule産の水、またはEnghien-les-Bains産の水、特にVittel産の水、亜硫酸水を除いたVichy盆地産の水およびLa Roche-Posay産の水から選択可能である。
【００２９】
本発明による、特定の有利な結果を得られる水は、特に、La Roche-Posay産の水、およびVittel産の水、または同様の組成を有する水から選択される。
【００３０】
La Roche-Posay産の水は、同じ名前の泉から抽出され、重炭酸塩、カルシウム、ケイ酸塩およびセレニウムを含む水である。La Roche-Posay産の水は、およそ387mg/lの重炭酸イオン、およそ140mg/lのカルシウムイオンおよび少なくとも40mg/lの硫酸塩を一般に含む。
【００３１】
Vittel産の水は、カルシウムおよびミネラル塩(841mg/l)が豊富であり、特に202mg/lのカルシウム、402mg/lの重炭酸塩および336mg/lの硫酸塩を含む。
【００３２】
培養は、以下の培地において特に実施できる:
【００３３】
組成物                          濃度
自己消化酵母抽出物              0.5〜5g/l
ペプトン                        0.5〜5g/l
無水グルコース                  0.5〜7g/l
Heller微量元素                  0.5〜5ml/l
CaCl2・10H2O                  0.010〜0.200g/l
【００３４】
組成物を蒸留水および/または鉱泉水もしくは温泉水で1000mlにする。
【００３５】
使用され得るペプトンの中で、例えば、大豆パパインペプトンを挙げることができる。
【００３６】
この培地は、カタラーゼおよび硫化物を含まずに一般に使用される培地と区別される。Heller微量元素は、Hellerによって、Ann. Sci. Nat. Biol. Veg.、14、1〜223 (1953)に記載されている。それらは、細菌の培養のためではなくインビトロで培養される植物組織の栄養のためである、Hellerによって推奨される種々のミネラル元素の混合物である。
【００３７】
培養は、培養される細菌の種に適した適当な温度で実施できる。一般に、この温度は、株に依って18〜40℃である。培養培地のpHは、好ましくは5.5〜8である。
【００３８】
水1lあたりのHeller微量元素の組成は以下の通りである:
ZnSO4・7H2O                  1g
MnSO4・H2O                  0.076g
CuSO4・5H2O                0.003g
KI                            0.010g
H3BO3                        1g
AlCl3・6H2O                  0.050g
NiCl2・6H2O                  0.030g
【００３９】
前記温泉水または鉱泉水は、培養培地の水性相の全部または一部を置き換えることができる。これらは、したがって、水、特に、培養培地中に存在する蒸留水または浸透処理水との任意の割合での混合物として見出すことができる。
【００４０】
培地の全ての元素を混合した後、温泉水および/または鉱泉水を含む培養培地を好都合に滅菌する。この段階は、当業者に既知の方法、例えば濾過または加熱による滅菌によって実施する。
【００４１】
続いて培養培地に細菌を接種する。
【００４２】
したがって本発明の別の主題は、先に定義したように、微生物を培養する方法または化粧品もしくは皮膚用有効成分を調製する方法であって、培養培地が(i)浸透処理水または蒸留水および(ii)温泉水の混合物を(i)/(ii)1〜100、特に1〜50、とりわけ1〜25の比で含むことを特徴とする方法である。
【００４３】
驚くべきことに、本発明に関連して、温泉水および/または鉱泉水を相対的に少ない割合で培養培地に包含させることにより、微生物に、包含される水がもっぱら蒸留水および/または浸透処理水である培地において培養された微生物の特性とは異なる有利な特性を付与できることが見出された。
【００４４】
したがって、本発明の実施に適した培地では、温泉水または鉱泉水において、培地の調製のために導入される水の量は好ましくは少なくとも0.1%、特に0.1〜99.9%に相当する。良好な結果は、浸透処理水および/または蒸留水について、およそ1%または2%、例えば0.5〜20%、実際には0.5〜50%の温泉水濃度で得られるが、これらの濃度は、不都合無く増加させることができる。
【００４５】
既知の仕方では、方法は、特に細胞を培養培地から分離することによって細菌を培養の終わりに回収する少なくとも1段階を含む。
【００４６】
細菌を培養した後、バイオマスは、種々の既知の方法、例えば濾過によって、アルコール(エタノール、イソプロパノール、イソブタノール)を用いた凝固によって、スクレイプ予備層(デンプン、珪藻など)を有するシリンダでの乾燥によって、または凍結乾燥によって単離できる。例えば80℃における減圧下での予備濃縮は、この分離を改善する。
【００４７】
エンベロープを破裂させる操作は、例えば超音波の作用によって実施できる。加えて、抽出物は、アルコール、例えばエタノールまたはプロパノールを用いて調製できる。
【００４８】
リポ多糖類抽出物は、既知の方法にしたがって調製することもできる。例えば、NorisおよびRibbons、Methods in Microbiology、Vol. 5B、Academic Press (1971)を参照されたい。一般に使用される方法は、周知の「Westphal」方法(または関連する方法)であり、65℃でのフェノール/水混合物による抽出の実施にある。続いて抽出物を透析に付してフェノールを除去する。
【００４９】
本発明は、先に定義したように、化粧品または皮膚用有効成分の調製方法であって、(i)ベギアトア目の系列に属する少なくとも1種の細菌を、主な炭素源としての単糖類および少なくとも1種の鉱泉水または温泉水を含む培地において培養し、次いで(ii)発酵後、細菌を培養培地から分離して前記細菌塊を回収する段階を含むことを特徴とする方法に特に関する。
【００５０】
発酵段階の終了の際に回収された細菌は、特に安定化および/または抽出処理に付すことができる。これは、化粧品または皮膚用組成物の調製においてまたはその調製のために一般に用いられ得る、このようにして得られる糸状菌の抽出物である。それ自体が既知の仕方において、抽出物は、したがって、特に濾過またはオートクレーブによって滅菌できる。
【００５１】
用語「非光合成性の糸状菌の抽出物」は、前記細菌の培養からの上清、前記細菌の培養後に得られるバイオマス、またはバイオマスの処理によって得られる当該バイオマスの抽出物を同様に意味することが理解される。
【００５２】
本発明による抽出物を調製するために、前記細菌を本発明による方法によって培養することができ、次いで、得られるバイオマスから、例えば濾過、遠心分離、凝固および/または凍結乾燥によって分離できる。
【００５３】
したがって、培養後、細菌を遠心分離によって濃縮する。得られたバイオマスをオートクレーブ処理する。このバイオマスを、凍結乾燥して、凍結乾燥された抽出物と称されるものを構成できる。当業者に既知の任意の凍結乾燥方法を用いて、この抽出物を調製できる。
【００５４】
このバイオマスからの上清画分を無菌容器内に濾過して、懸濁した粒子を除去することもできる。この上清画分を無菌状態下で無菌容器内に静かに注いでもよい。本発明の特定の実施形態によれば、こうして得られた上清画分を化粧品または皮膚用有効成分として使用する。
【００５５】
驚くべきことに、本発明に関連して、少なくとも1種の温泉水または鉱泉水を含む、特に培養培地に存在する1〜100%の水を構成する培地における細菌の培養は、種々の発酵および単離段階の終了の際に得られる細菌に、温泉水および/または鉱泉水が補充されていないが浸透処理水または蒸留水のみを含む培地において培養された同じ細菌の特性とは異なる特定の特性を付与することが見出された。
【００５６】
本発明の別の態様によれば、鉱泉水または温泉水によって細菌を培養するための培地の水の全部または一部の置換により、細菌の成長率を増加させ、したがって生産高を改善できる。
【００５７】
生産高は、特に、制御された成長率および同一かつ制御された培養条件で少なくとも10%増加することができる。
【００５８】
したがって本発明の別の主題は、先に定義されるように、好ましくは硫黄不含である少なくとも1種の温泉水または鉱泉水の、ビトレオスチラ属の細菌、特にビトレオスチラ・フィリフォルミスの活性および/または成長を改善するための薬剤としての使用である。
【００５９】
本発明はまた、ベギアトア属またはビトレオスチラ属の細菌の成長および/または特性を改善する方法であって、温泉水および/または鉱泉水を培養培地に少なくとも1つの培養段階において添加することである方法にも関する。
【００６０】
上述のように、温泉水または鉱泉水は、好ましくは硫黄不含水であり、Vittel産の水、亜硫酸水を除くVichy盆地産の水およびLa Roche-Posay産の水から特に選択される。
【００６１】
本発明の別の主題は、先に定義されるように、非光合成性の糸状菌の培養に適した培養培地であり、前記培地中に存在する水は、少なくとも1%、特に1〜99.9%、好ましくは1〜25%の鉱泉水および/または温泉水を含む。
【００６２】
本発明の別の主題は、本発明による方法によって得られる細菌、特にビトレオスチラ・フィリフォルミス、およびその抽出物、ならびに組成物におけるその使用でもあり、細菌、その抽出物、または組成物は、皮膚および/または身体表面成長物の状態を改善するのに使用される。
【００６３】
本発明の別の主題は、したがって、組成物、特に化粧品または皮膚用組成物であって、生理学的に許容される培地において、上記方法によって得られるビトレオスチラ属の少なくとも1種の細菌、または後者の抽出物を含むことを特徴とする組成物である。
【００６４】
本発明によって使用される組成物は、化粧品および皮膚科学分野において考えられる用途、特に経口または局所用途に適した全ての形態で提供できる。
【００６５】
用語「局所」は、局所適用による皮膚または身体表面成長物への使用を意味することが好ましくは理解される。用語「皮膚」は、別途示さない限り、頭皮または粘膜も包含する。
【００６６】
したがって本発明による組成物は、体の任意の皮膚領域、毛髪、爪または粘膜に適用することができ、当業者によって任意の適切な製剤形態で与えられ得る。当該組成物は、特に、水性または油性の溶液または懸濁液、水中油または油中水または多重エマルジョン、シリコーンエマルジョン、マイクロエマルジョンまたはナノエマルジョン、水性または油性ゲル、または液体、ペースト状もしくは固形の無水生成物の形態で提供され得る。
【００６７】
皮膚への局所適用のために、組成物は、特に、ローションもしくは血清型の水性もしくは油性の溶液もしくは分散物、水性相における脂肪相の分散(O/W)もしくはその逆(W/O)によって得られる、ミルク型の液体もしくは半液体コンシステンシーとのエマルジョン、または、水性もしくは無水クリームもしくはゲル型のソフトコンシステンシー、他にはマイクロカプセルもしくは微粒子との懸濁液もしくはエマルジョン、あるいはイオンおよび/もしくは非イオン型の小胞分散物の形態を有し得る。組成物はまた、パッチまたは放出制御製剤の形態で存在することもできる。これらの組成物は通常の方法にしたがって調製される。
【００６８】
これらは、水性、アルコール性、または水性/アルコール性溶液の形態、あるいはクリーム、ゲル、エマルジョンまたはフォームの形態、あるいはまた加圧噴射剤も含むエアロゾル組成物の形態で毛髪に使用されてもよい。
【００６９】
組成物は、眼用に、滴の形態で提供することができ、また、経口摂取用に、カプセル、顆粒、ゲル、チューイングペースト、シロップまたは錠剤の形態で提供できる。
【００７０】
本発明による組成物の種々の構成物質の量は、検討されている、当該分野で従来的に使用される量である。
【００７１】
これらの組成物は、特に、顔、手、足、主に解剖学上のひだ、または体を洗う、保護する、処理する、またはケアするためのクリーム(例えば、デイクリーム、ナイトクリーム、メークアップ除去用クリーム、ファンデーションクリーム、またはサンクリーム)、皮膚または毛髪に静置されるマスク、リキッドファンデーション、メークアップ除去用ミルク、保護用またはケア用ボディミルク、サンミルク、ローション、皮膚をケアするためのゲルまたはフォーム、例えばクレンジングローション、サンローション、人工日焼けローション、入浴用組成物、殺菌剤を含む脱臭組成物、アフターシェーブゲルまたはローション、脱毛クリーム、虫刺され(insect stings or bites)に対応するための組成物、鎮痛組成物、またはある一定の皮膚病、例えば湿疹、酒さ、乾癬、苔癬もしくは重症の掻痒を治療するための組成物を構成する。
【００７２】
本発明による組成物はまた、クレンジングソープまたはバーを構成する固形調製物からなることもできる。
【００７３】
組成物はまた、加圧噴射剤も含むエアロゾル組成物の形態に詰めることもできる。
【００７４】
本発明による組成物は、ヘアケア組成物、特にシャンプー、ヘアセットローション、トリートメントローション、スタイリングクリームまたはゲル、染料組成物(特に酸化染料組成物)、任意選択的にはシャンプー染液の形態、ヘアリストラクチャリングローション、パーマネントウエーブ組成物(特にパーマネントウエーブの第1工程用組成物)、抜け毛に対抗するためのローションまたはゲル、抗寄生虫用シャンプーなどであってもよい。
【００７５】
組成物は、経口使用のためのもの、例えば歯磨き粉であってもよい。この場合、組成物は、経口使用のための組成物に従来的なアジュバントおよび添加剤、特に界面活性剤、増粘剤、保湿剤、研磨剤、例えばシリカ、種々の有効成分、例えばフッ化物、特にフッ化ナトリウム、および任意選択的に甘味剤、例えばサッカリンナトリウムを含んでよい。
【００７６】
組成物がエマルジョンであるとき、脂肪相の割合は、組成物の全重量に対して5重量%〜80重量%、好ましくは5重量%〜50重量%の範囲であり得る。エマルジョン形態で組成物において使用されるオイル、ワックス、乳化剤および共乳化剤は、化粧品分野で従来的に使用されるものから選択される。乳化剤および共乳化剤は、組成物の全重量に対して0.3重量%〜30重量%、好ましくは0.5重量%〜20重量%の範囲の割合で組成物中に存在する。加えて、エマルジョンは、脂質小胞を含んでよい。
【００７７】
組成物が油性溶液またはゲルであるとき、脂肪相は組成物の全重量の90%超を示し得る。
【００７８】
既知の仕方では、化粧品組成物は、化粧品分野で従来的なアジュバント、例えば親水性または親油性のゲル化剤、親水性または親油性の添加剤、防腐剤、抗酸化剤、溶剤、香料、充填剤、スクリーニング剤、匂い吸収剤および着色剤を含んでもよい。これらの種々のアジュバントの量は、化粧品分野で従来的に使用される量、例えば、組成物の全重量の0.01%〜10%である。これらのアジュバントは、性質に依って、脂肪相、水性相および/または脂質小球内に導入されてよい。
【００７９】
本発明で使用され得るオイルまたはワックスとして、鉱油(流動ワセリン)、植物油(シアバターの液体画分、ヒマワリ油)、動物油(ペルヒドロスクアレン)、合成油(ピュアセリンオイル)、シリコーン油またはワックス(シクロメチコン)およびフッ化油(パーフルオロポリエーテル)、蜜蝋、カルナウバ蝋またはパラフィン蝋を挙げることができる。これらのオイルに脂肪アルコールおよび脂肪酸(ステアリン酸)を添加できる。
【００８０】
本発明で使用され得る乳化剤として、例えば、ステアリン酸グリセリル、ポリソルベート60およびTefose(登録商標)63の名称でGattefosseによって販売されているPEG-6/PEG-32/ステアリン酸グリコール混合物を挙げることができる。
【００８１】
本発明で使用され得る溶剤として、低級アルコール、特にエタノールおよびイソプロパノール、またはプロピレングリコールを挙げることができる。
【００８２】
本発明で使用され得る親水性ゲル化剤として、カルボキシビニルポリマー(カルボマー)、アクリル共重合体、例えばアクリレート/アルキルアクリレート共重合体、ポリアクリルアミド、多糖類、例えばヒドロキシプロピルセルロース、天然ガムおよびクレイを挙げることができ、また、本発明で使用され得る親油性ゲル化剤として、修飾クレイ、例えばBentones(登録商標)、脂肪酸の金属塩、例えばステアリン酸アルミニウムおよび疎水性シリカ、エチルセルロースまたはポリエチレンを挙げることができる。
【００８３】
有利な実施形態において、本発明による組成物は、水中油(O/W)組成物、特に親油性有効成分を含む組成物である。そのような組成物は、出願EP641557に記載されるような、ラメラ液晶コーティングが施された油球に特に基づいている。化粧品または皮膚用組成物は、水性相に分散された、ラメラ液晶コーティングが施された油球から形成される水中油型のエマルジョンから構成され、それぞれの油球は、化粧学的または皮膚科学的に活性である少なくとも1種の親油性化合物を含み、少なくとも1種の親油性界面活性剤、少なくとも1種の親水性界面活性剤および少なくとも1種の脂肪酸から得られるモノラメラまたはオリゴラメラ層でそれぞれコーティングされており、コーティングされた油球は、500ナノメートル未満の平均直径を有し、水性相は塩基性剤を溶解状態で含む。
【００８４】
本発明による組成物がケラチン物質の美容的処理に使用されるとき、油性相に存在する有効成分は、例えば、メラニン調節剤、リポ調節剤、抗脂漏性剤、老化防止剤、UV放射に対抗する薬剤、角質溶解剤、抗菌剤、抗真菌剤、フケ防止剤、抜け毛に対抗する薬剤、毛髪染剤、ヘアブリーチまたはコンディショナーから選択される。
【００８５】
本発明に関連して使用され得る、皮膚および/または毛髪の処理のための有効成分の例として、以下の化合物を挙げることができる:D-α-トコフェロール、DL-α-トコフェロール、D-α-酢酸トコフェリル、DL-α-酢酸トコフェリル、パルミチン酸アスコルビル、ビタミンFグリセリド、ビタミンD類、特にビタミンD2、ビタミンD3、レチノール、レチニルエステル、パルミチン酸レチニル、プロピオン酸レチニル、β-カロチン、D-パンテノール、ファルネソール、酢酸ファルネシル、必須脂肪酸に富むホホバ油およびクロフサスグリ油、5-(n-オクタノイル)サリチル酸、サリチル酸、クエン酸、乳酸およびグリコール酸などのα-ヒドロキシ酸のアルキルエステル、アジア酸、マデカッソ酸、アジアチコシド、ツボクサ(Centella asiatica)の全抽出物、β-グリシルレチン酸、α-ビサボロール、セラミド、例えば2-オレオイルアミノ-1,3-オクタデカン、フィタントリオール、乳スフィンゴミエリン、多不飽和必須脂肪酸に富む海洋起源のリン脂質、エトキシキン、ローズマリーの抽出物、バルサム抽出物、ケルセチン、乾燥微小藻類の抽出物(AlgatecからのAlgoxan Red)、オクチルメトキシシンナメート(ParsolMCX、Givaudan-Roure)、ブチルメトキシジベンゾイルメタン(Parsol 1789、Givaudan-Roure)、オクチルトリアゾン(Uvinul T150、BASF)、黄色、茶色、黒色もしくは赤色酸化鉄、または酸化チタン、これらは、マイクロメートルまたはナノメートルの形態、あるいはコーティングされた形態であってよい。
【００８６】
本発明による組成物中に存在する、温泉水において培養されたバイオマスまたはその抽出物の量は、使用される抽出物のタイプに依って、所望の活性を得るために当業者によって調整されるであろう。表示すると、組成物中の量は、組成物の全重量に対して0.001%〜10重量%の間、好ましくは0.01%〜5重量%であり、特に、少なくとも0.1重量%であり得る。
【００８７】
本発明はまた、皮膚および/または身体表面成長物の状態を改善するための方法であって、先に定義するように温泉水または鉱泉水を含む培地において培養することによって得られる少なくとも1種の細菌、その抽出物の1種、またはそれらを含む組成物を皮膚および/または身体表面成長物に適用する方法も含む。
【００８８】
本発明の一態様によれば、本発明は、組成物、特に化粧品または皮膚用組成物の調製方法であって、先に定義するように温泉水または鉱泉水を含む培地において培養することによって得られる少なくとも1種の細菌、またはその抽出物の1種を、投与方法に適切な、少なくとも1種の生理学的に許容される培地およびアジュバントと混合する方法に関する。
【００８９】
本発明を以下の実施例により詳細に説明する。
【実施例１】
【００９０】
バイオマスの調製
培養培地の調製:
組成:
*酵母抽出物                          2g
*大豆パパインペプトン                2g
*グルコース                          2g
*Heller微量元素                      2ml
*CaCl2・2H2O                        66.21mg
*La Roche-Posay産の温泉水            1リットルについて適量
【００９１】
培地のpHを1モルのH3PO4溶液によって5.00に調整する。培地を滅菌オートクレーブによって121℃で30分間滅菌する。周囲温度まで冷却後、pHを1モルのKOH溶液の添加により7.20に再調整する。
【００９２】
培養:
番号15551でATCCに寄託されたビトレオスチラ・フィリフォルミスを1%で培地に接種した後、培養物を26℃、かつ100回転/分での軌道振とう下に置く。48時間の成長後、培養物を8000gで15分間遠心分離する。ペレットを回収し、次いで、121℃で30分間オートクレーブ処理する。このバイオマスは、評価試験に使用できる。
【実施例２】
【００９３】
温泉水を用いてまたは用いないで得られるバイオマスの効果の比較
この研究の目的は、浸透処理水によって再構成された培養培地において培養することによって得られたバイオマス(表では「バイオマス」と記録される)、La Roche-Posay産の温泉水によって再構成された培地において培養することによって得られたバイオマス(「バイオマスLRP」)、およびLa Roche-Posay産の温泉水(「温泉水LRP」)の、ヒトケラチノサイト培養物における差次的遺伝子発現への影響を判定しようとすることである。
【００９４】
バイオマスは、微生物(番号15551でATCCに寄託されたビトレオスチラ・フィリフォルミス)をLa Roche-Posay産の温泉水の存在下または非存在下で培養することによって得、2%の濃度で導入する。
【００９５】
【表１】
0005670181.tif 000002
【００９６】
これらの結果は、ケラチノサイト培養物上でのコルネオデスモシンおよびLEP16マーカーのRT-qPCRによる分析によって確認する。
【００９７】
ケラチノサイト培養物において、La Roche-Posay産の温泉水において培養されたバイオマスのみがコルネオデスモシンおよびLEP16の発現を刺激する。浸透処理水またはLa Roche-Posay産の温泉水で培養されたバイオマスは、ケラチノサイトについて、これらのマーカー遺伝子の発現に影響を及ぼさない。同時に、対照として使用されたMerck製の超純水も、検討される遺伝子の発現に影響を及ぼさない。
【実施例３】
【００９８】
La Roche-Posay産の水でのビトレオスチラ・フィリフォルミスの培養と浸透処理水でのビトレオスチラ・フィリフォルミスの培養との間の発現の差
ビトレオスチラ・フィリフォルミスバイオマスにおいて発現されるタンパク質を分離および視覚化するための手段として二次元電気泳動法を使用し、一方ではLa Roche-Posay産の水において培養し、他方では浸透処理水において培養した。
【００９９】
この分析方法は、「水平の」一次元目(これは等電点電気泳動またはIEFである)においてタンパク質をそのpHiの関数として分離することである。この分離は、IPGストリップとしても知られている、固定化されたpH勾配を含むゲルを介して起こる。続いてタンパク質を、「垂直」移動の二次元目において、その分子量の関数として分離する。結果は、2Dゲルのタンパク質が非常に豊富であることを示し、後者は、6kDa〜100kDaの間の分子量範囲に分布され、多数のタンパク質が酸性pH値の領域にある。画像の迅速な分析により、6個の異なるスポットが示され、一方では、La Roche-Posay産の水において培養されたバイオマスにおける2つのタンパク質の過剰発現であり、他方では、浸透処理水において培養されたバイオマスにおいてより発現されているように見られる4つのタンパク質である。
【０１００】
これらの結果は、La Roche-Posay産の水において培養されたバイオマスにおけるタンパク質の発現と比較して、浸透処理水において培養されたバイオマスにおけるタンパク質の発現のレベルに差が存在することを示す。
【実施例４】
【０１０１】
Vittel産の水を用いた成長の増加
10リットルの発酵槽における連続様式でのビトレオスチラ・フィリフォルミスの培養試験を、浸透処理水(対照試験)およびVittel産の鉱泉水(2%で)で部分的に再構成された培地から出発して実施した。連続培養方法による成長度を0.12h-1で固定し、培養条件は2つの試験で同一であった。バイオマスは、連続的に採取した培養物体積を遠心分離することによって濃縮した。600nmでの吸光度の測定により、培養物の成長を監視できる。得られたスラッジをオートクレーブによって121℃で30分間安定化させた。採取されたスラッジの固形分および量により、遠心分離された培養物体積から、対応する培養物の細胞濃度を(g/lで)求めることができる。
【０１０２】
試験の要約表:
【０１０３】
【表２】
0005670181.tif 000003
【０１０４】
結果:
浸透処理水によって再構成された培地における対照培養物と比較して、Vittel産の水の使用は、細菌の成長を改善し、細胞収率は13%増加する。
【実施例５】
【０１０５】
ビトレオスチラ・フィリフォルミス抽出物を含む組成物
【０１０６】
相A、B、CおよびDを調製し、続いて混合する:
【０１０７】
【表３】
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【０１０８】
このようにして得られた組成物は、朝および/または晩に、顔、首、手および/または体全体に適用できる。