(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シナプス伝達の長期増強の機能障害により惹起されるか、またはその機能障害に伴う神経学的障害を治療または予防するための、胃抑制ポリペプチドのＮ−末端からの少なくとも１２個のアミノ酸残基を含むペプチド、またはそのアナログを含む医薬組成物であって、前記ペプチドアナログが、位置１でのアミノ酸置換または修飾；位置２でのアミノ酸置換または修飾；位置３でのアミノ酸置換または修飾；一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈのポリマー部分の結合による修飾；およびアシル基の付加による修飾からなる群より選択される一または複数のアミノ酸置換または修飾を含む：ただし、アナログはＴｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−４２）以外の化合物である、医薬組成物。
【請求項２】
ペプチドが配列番号１にて示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドのＮ−末端からの少なくとも１２個のアミノ酸残基を含むか、またはそのアナログである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
ペプチドアナログが、一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈ（ここで、ｎは１と２２の間の整数である）のポリマー部分の結合からなる、少なくとも１回のアミノ酸修飾を含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
各ポリマー部分がＬｙｓ（１６）、Ｌｙｓ（３０）、Ｌｙｓ（３２）、Ｌｙｓ（３３）およびＬｙｓ（３７）からなる群より選択されるリジン残基のアルファまたはイプシロンアミノ基に結合される、請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
ペプチドアナログが、Ｌｙｓ（１６）、Ｌｙｓ（３０）、Ｌｙｓ（３２）、Ｌｙｓ（３３）およびＬｙｓ（３７）からなる群より選択される少なくとも１つのリジン残基のイプシロンアミノ基での脂肪酸付加による修飾を含む、請求項１−４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
脂肪酸が、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１６パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基、およびＣ−２０アシル基からなる群より選択される、請求項５記載の医薬組成物。
【請求項７】
脂肪酸がＣ−１４ミリストイル基である、請求項５または６記載の医薬組成物。
【請求項８】
ペプチドまたはそのアナログがシナプス伝達のＬＴＰを強化する、請求項１−７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
ペプチドアナログがシナプス伝達のＬＴＰを強化し、該ペプチドアナログが：
（ａ）位置２でのＮ-末端糖化およびアミノ酸置換；
（ｂ）位置１でのアミノ酸修飾および位置２でのアミノ酸置換；
（ｃ）位置１でのアミノ酸修飾、または位置２でのアミノ酸置換、ただし該アナログはＴｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−４２）以外の化合物であり、ここでアミノ酸置換または修飾は、
ｉ．      位置１での糖化；
ｉｉ．    位置１でのアルキル化；
ｉｉｉ．  位置１でのアセチル化；
ｉｖ．    位置１でのアシル化；
ｖ．      位置１でのイソプロピル基の付加；
ｖｉ．    位置１でのピログルタミン酸の付加；
ｖｉｉ．  位置２でのＬ−アミノ酸による置換；
ｖｉｉｉ．位置２でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
ｉｘ．    位置２でのＤ−アミノ酸による置換；
ｘ．      Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
ｘｉ．    Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
ｘｉｉ．  位置２でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換；
からなる群より選択される；
（ｄ）一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈで表わされるポリマー部分の結合からなるアミノ酸修飾；および
（ｅ）アミノ酸残基のイプシロンアミノ基でのアシル基付加による修飾
を含む、請求項１−８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
位置２にてアミノ酸置換および位置１にてアミノ酸修飾があり、アミノ酸置換および／または修飾の各々が：
ｉ．      位置１での糖化；
ｉｉ．    位置１でのアルキル化；
ｉｉｉ．  位置１でのアセチル化；
ｉｖ．    位置１でのアシル化；
ｖ．      位置１でのイソプロピル基の付加；
ｖｉ．    位置１でのピログルタミン酸の付加；
ｖｉｉ．  位置２でのＤ−アミノ酸による置換；
ｖｉｉｉ．位置２でのＬ−アミノ酸による置換；
ｉｘ．    位置２でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
ｘ．      Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
ｘｉ．    Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
ｘｉｉ．  位置２でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換
からなる群より選択される、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
位置１でのアミノ酸修飾がＮ−末端アルファ−アミンでのアセチル化である、請求項９または１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ペプチドアナログが、１または複数の以下のアミノ酸置換：位置２でのプロリン、リジン、セリン、グリシン、Ｄ−アミノ酸、４−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）またはサルコシンによる置換を含む、請求項１−１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ペプチドアナログが、位置１でのアミノ酸修飾；位置２でのアミノ酸置換から選択される少なくとも１回のアミノ酸置換または修飾を含み、ここで該ペプチドアナログがさらに一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈ（ｎは１と２２の間の整数）のポリマー部分の結合；および／またはアミノ酸残基のイプシロンアミノ基でのアシル基付加による修飾を含む、請求項１−１２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
ペプチドアナログがシナプス伝達のＬＴＰを弱め、該ペプチドアナログが以下の置換を含む：
（ａ）位置１および３の各々でのアミノ酸置換；および
（ｂ）位置１および３の一方でのアミノ酸置換、ここで該アミノ酸置換は、
（ｉ）      位置１でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｉｉ）    位置１でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｉｉｉ）  位置３でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｉｖ）    位置３でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
（ｖ）      位置３でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｖｉ）    Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
（ｖｉｉ）  Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
（ｖｉｉｉ）位置１または３でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換；
からなる群より選択される、請求項１−７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
位置１および３の両方でアミノ酸置換があり、各々のアミノ酸置換が：
（ａ）位置１でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｂ）位置１でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｃ）位置３でのＤ−アミノ酸による置換；        
（ｄ）位置３でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｅ）位置１および／または３でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
（ｆ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
（ｇ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
（ｈ）位置１および／または３でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換；
からなる群より選択される、請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ペプチドアナログが、位置１および３の一方または両方でアミノ酸置換を含み、該ペプチドアナログがさらに、一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈ（ここで、ｎは１と２２の間の整数である）のポリマー部分の結合、およびアミノ酸残基のイプシロンアミノ基でのアシル基付加による修飾のいずれかまたは両方を含む、請求項１４または１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ペプチドアナログが、位置１および／または３で、プロリン、リジン、セリン、Ｄ−アミノ酸またはサルコシンによるアミノ酸置換を含む、請求項１４または１５記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ペプチドアナログがＧＩＰ（１−４２）のＮ−末端からの１５ないし３０個のアミノ酸のみからなる、請求項１−１７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１９】
神経学的障害が、認識機能に影響を及ぼす障害および機能不全性認識プロセスの群より選択される障害を含む、請求項１−１８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２０】
認識機能に影響を及ぼす障害が、認知症、発作、統合失調症、双極性障害、神経変性疾患、心的外傷後ストレス障害、癲癇、トゥレット症候群および幻覚を包含する、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
神経変性疾患が、アルツハイマー病（ＡＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ハンチントン病およびパーキンソン病より選択される、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２２】
機能不全性認識プロセスが、注意、計算、記憶、判断、洞察、学習および推論を包含する、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ペプチドまたはそのアナログが、
（ａ）配列番号１にて示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドのＮ−末端からの少なくとも１２個のアミノ酸残基を含むペプチドまたはそのアナログである；および
（ｂ）該アナログが以下からなる群より選択される１または複数のアミノ酸置換または修飾を含む
（ｉ）    位置１でのアセチル化によるアミノ酸修飾；
（ｉｉ）  位置１でのアラニンによるアミノ酸置換；
（ｉｉｉ）位置２でのＤ−アミノ酸によるアミノ酸置換；
（ｉｖ）  位置３でのプロリンによるアミノ酸置換；
（ｖ）    一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈ（ここで、ｎは１と２２の間の整数である）のポリマー部分の、Ｌｙｓ（１６）、Ｌｙｓ（３０）、Ｌｙｓ（３２）、Ｌｙｓ（３３）およびＬｙｓ（３７）からなる群より選択されるリジン残基のアルファまたはイプシロンアミノ基への結合からなる修飾；および
（ｖｉ）    Ｌｙｓ（１６）、Ｌｙｓ（３０）、Ｌｙｓ（３２）、Ｌｙｓ（３３）およびＬｙｓ（３７）からなる群より選択される少なくとも１つのリジン残基のイプシロンアミノ基での脂肪酸付加による修飾、ここで、該脂肪酸は、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１６パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基、およびＣ−２０アシル基からなる群より選択される、
ただし、該アナログはＴｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−４２）以外の化合物である、
請求項１記載の医薬組成物。
【請求項２４】
シナプス伝達の長期増強の機能障害により惹起されるか、またはその機能障害に伴う神経学的障害を治療または予防するための医薬の製造における、胃抑制ポリペプチドのＮ−末端からの少なくとも１２個のアミノ酸残基を含むペプチド、またはそのアナログの使用であって、前記ペプチドアナログが、位置１でのアミノ酸置換または修飾；位置２でのアミノ酸置換または修飾；位置３でのアミノ酸置換または修飾；一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈのポリマー部分の結合による修飾；およびアシル基の付加による修飾からなる群より選択される一または複数のアミノ酸置換または修飾を含む：ただし、アナログはＴｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−４２）以外の化合物である、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）はセクレチンファミリーのインクレチンホルモンである。該物質はそれが神経支配のイヌのビックル（Bickel）型ポーチからのヒスタミン誘発性胃酸分泌を阻害することが初めて分かったためにそのように名付けられた。しかしながら、その広い生理学的特性を解明するその後の研究により、ＧＩＰの生理学的濃縮物が膵臓ベータ細胞からのインスリン分泌の刺激能が確立された。かくして、該ホルモンはまた、「グルコース依存性インスリン分泌促進ポリペプチド」としても知られている。
【０００２】
ヒトＧＩＰは、その遺伝子が第１７染色体にあり、１０ｋｂに及ぶ、１５３アミノ酸先駆体のプロセッシングから由来の４２アミノ酸ペプチドである。インクレチンホルモンは栄養摂取に応じて放出され、グルコース誘発性インスリン応答を亢進するように作用する。ＧＩＰは腸Ｋ−細胞より放出され、その主たる役割はグルコース依存性インスリン分泌を調節することである。ＧＩＰはプロインスリン遺伝子転写および翻訳を刺激することもできる。さらには、ＧＩＰはベータ細胞マイトジェン因子として作用し、膵臓ベータ細胞の成長、分化および増殖を亢進する。ＧＩＰはまた、肝グルコース産生を阻害し、含脂肪細胞におけるグルコース輸送、脂肪酸合成およびリポ蛋白リパーゼ活性を刺激することも分かっている。
【０００３】
その膵島に対するインスリン分泌促進作用および周辺の細胞組織におけるグルコース低下作用により、ＧＩＰは、糖尿病、肥満および関連する代謝性障害を治療するための潜在的治療剤として魅力的な候補とされる。
【０００４】
神経可塑性は新たな神経連絡を絶え間なく形成することを含むプロセスであり、それは活動と経験に応じて脳が再構成される間に生じる。活動に依存するシナプス可塑性は成長の間にシナプス結合を変形するにおいて極めて重要な役割を果たす。しかしながら、成長の間に生じることはよく知られているが、そのプロセスは成人の脳の中心的な特徴でもある。ニューロン結合が可塑性を有することで、脳は経験に応じて絶え間なく成長することができ、ニューロンに対するトラウマまたはダメージの結果として生じる神経シグナル伝達の損傷を回避することもできる。
【０００５】
このプロセスの間に脳に起こると考えられる２つの型の修飾：１）特にシナプス領域におけるニューロンその物の形態学的変化；および２）ニューロン間でのシナプスの数の増加がある。シナプスシグナル伝達の効率は、これらの修飾のいずれか（または両方）に依存することが多い。実際、記憶形成および学習能力などのプロセスはニューロン間の結合の強化を可能とするシナプス効率における交代に依存するとの考えが広く受け入れられている。その上、特定のシナプスでのシナプス可塑性は、脳にて情報を記憶するのに必要かつ十分であると考えられる。
【０００６】
長期増強（ＬＴＰ）が、シナプス結合の強化を達成しうる、作用機序のモデルとして長きにわたって提案されている。高頻度で刺激することでシナプス伝達の効率が増加し続けることが広く証明されている。この知見に基づき、学習および記憶の少なくとも特定の形態を支持するシナプス変化は、ＬＴＰの発現に必要とされる変化と類似すると考えられる。
【０００７】
その上、ＬＴＰの損傷が認知機能の損傷と関係することが多いことも広く受け入れられている。この点、今日までの長年にわたる研究にて、老齢ラットにおける認知障害を報告している。特に老齢ラットは空間的情報のプロセッシングにて欠損を示すことが明らかにされた。噛歯動物の脳のＣＡ１領域のＬＴＰの欠損が、空間学習の能力における欠損と相関付けられた；損傷が重度の動物ではＬＴＰを維持しなかったのに対して、空間学習が相対的に損傷していない動物ではＬＴＰの維持が観察された。
【０００８】
したがって、認知障害は多くの神経障害の顕著な特徴である。例えば、加齢記憶損傷の徴候は、アルツハイマー病などの神経変性疾患の初期段階に関連する徴候と似ていることが多い。神経科学の分野における主たる目標は、明らかに、加齢、疾患に関連して、あるいはシナプス伝達の損傷をもたらす他の原因で、ＬＴＰが損傷している状況にてＬＴＰを維持することにある。
【０００９】
しかしながら、成熟ニューロンがまた、入力シナプスの強化を妨げる機構を有する可能性があるとする証拠もそろってきている。かかる恒常性制御は、ニューロンがその最適な活動の範囲内にあり、脳の可塑性を高く維持するのに不可欠な工程を確実に行うようにする。このことは、ＣＡ１領域の錐体細胞の各々が、シナプス伝達の活動依存性亢進の可能性と共に数千の興奮性入力を受ける、海馬にて明らかである。シナプス強化を制限する機構が無い場合は、生理学的バランスは危険に曝され、その結果、ＬＴＰプロセスはシャットダウンされ、結局のところ、情報を記憶する完全なニューロンサーキットの能力の軽減に至る。したがって、脱増強作用のプロセスもまた、ニューロン恒常性を制御すること、およびコーディネートされたシナプス伝達の強化の調節を確実にすること、における臨界的要素として作用する。脱増強作用は、今では、記憶から不必要な情報を除去するのに一の役割を果たすと考えられている。脱増強作用それ自体は、認知プロセスが過活動であることに伴う障害にて、潜在的に治療基準として作用しうる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本願発明の目的は、シナプス伝達のＬＴＰを増加（または維持）することにより、障害のこれらの型に関連する認知機能を予防、改善または逆転させることにある。その上、ＬＴＰの維持は認知プロセスの損傷の発症を遅らせることで神経疾患の予防に有用であり、神経変性により惹起される認知機能の減少だけでなく、トラウマまたは加齢による機能障害性認知プロセスの治療についても役立つことがわかった。また、異常興奮性型障害に付随した認知機能の変化を、シナプス伝達のＬＴＰの高レベルを減少させることで改善することも本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の第一の態様によれば、シナプス伝達の長期増強の機能不全により惹起されるか、またはその機能不全に伴う神経学的障害を治療または予防するための、胃抑制ポリペプチドのＮ-末端からの少なくとも１２個のアミノ酸残基を含むペプチドあるいはそのアナログの使用が提供される。
【００１２】
本発明の第二の態様によれば、シナプス伝達の長期増強の機能不全により惹起されるか、またはその機能不全に伴う神経学的障害を治療または予防するための医薬の製造における、胃抑制ポリペプチドのＮ-末端からの少なくとも１２個のアミノ酸残基を含むペプチドあるいはそのアナログの使用が提供される。
【００１３】
本発明のさらなる態様によれば、シナプス伝達の長期増強の機能不全により惹起されるか、またはその機能不全に伴う神経学的障害を治療する方法であって、シナプス伝達の長期増強の機能不全により惹起されるか、またはその機能不全に伴う神経学的障害を患っている対象に、胃抑制ポリペプチドのＮ-末端からの少なくとも１２個のアミノ酸残基を含むペプチドあるいはそのアナログの治療的に有効な量を投与することを含む方法が提供される。
【００１４】
「機能不全」なる語は、一のプロセスに異常な機能をもたらす障害を意味し、そのために該プロセスはもはや従来の機能パターンを遂行しない。プロセスの異常な機能は、ＬＴＰの損傷、増強を含む処理、ＬＴＰの増強、損傷を含む処理を包含する。
【００１５】
ヒトＧＩＰは、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列のポリペプチドを含む。本発明にて有用なペプチドは胃抑制ポリペプチドのＮ−末端から少なくとも１２個のアミノ酸残基を含む。所望により、該ペプチドはＧＩＰ（１−１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２）であってもよい。また、ペプチドアナログはＧＩＰ（１−１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２）のアナログである。
【００１６】
所望により、胃抑制ポリペプチドはヒトＧＩＰであってもよい。
該ペプチドは、所望により、ＧＩＰ（１−１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２）のアナログであってもよい。
【００１７】
所望により、ペプチドアナログは胃抑制ポリペプチドのＮ−末端より少なくとも１２個のアミノ酸を含み、さらには位置１でのアミノ酸置換または修飾；位置２でのアミノ酸置換または修飾；位置３でのアミノ酸置換または修飾；一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈのポリマー部分の結合による修飾；およびアシル基の添加による修飾からなる群より選択される一または複数のアミノ酸置換または修飾を含んでいてもよい：ただし、アナログはＴｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−４２）以外である。
【００１８】
位置１のアミノ酸修飾はＧＩＰ（１−４２）のＮ−末端糖化ではない。そのペプチドアナログが胃抑制ポリペプチドのＮ−末端からの１２−４１アミノ酸残基を含む場合、該ペプチドは、所望により、Ｔｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０または４１）でなくてもよい。ペプチドアナログが胃抑制ポリペプチドのＮ−末端からの１２−４２アミノ酸残基を含む場合、位置１のアミノ酸修飾はＮ−末端糖化ではない。ペプチドアナログが胃抑制ポリペプチドのＮ−末端からの１２−４１アミノ酸残基を含む場合、ペプチドアナログは、所望により、Ｔｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０または４１）でなくてもよい。ペプチドアナログが胃抑制ポリペプチドのＮ−末端からの１２−４２アミノ酸残基を含む場合、位置１のアミノ酸修飾はＮ−末端糖化ではない。
【００１９】
好ましくは、ペプチドアナログはジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）による分解に対して耐性である。
【００２０】
所望により、ペプチドアナログはさらに少なくとも１回のアミノ酸修飾を含んでいてもよく、該少なくとも１回のアミノ酸修飾は一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈ（ここで、ｎは１と約２２の間の整数である）のポリマー部分の結合を含む。
【００２１】
ポリマー部分の平均分子量は１０００Ｄａを上回らないことが望ましい。ポリマー部分の平均分子量は１０００Ｄａ未満であることが好ましい。
【００２２】
ｎは１と約１０の間の整数であることが好ましい。ｎは約２と約５の間の整数であることがさらに好ましい。
【００２３】
ポリマー部分は分岐構造であってもよい。分岐構造は少なくとも２個の線状構造のポリマー部分が結合してなっていてもよい。別に、分岐点は各ポリマー部分の構造内にあってもよい。また、ポリマー部分は線状構造を有する。
【００２４】
すべてのモノマーのうちいくつかのモノマーは水分子と結合しうる。ポリマー部分の結合は共有結合を介してなされうる。共有結合は安定な共有結合であってもよい。また、共有結合は可逆的であってもよい。共有結合は加水分解されうる。
【００２５】
当該または各ポリマー部分は、ペプチドアナログの隣接するＮ−末端アミノ酸と；ペプチドアナログの隣接するＣ−末端アミノ酸と；あるいは、限定されるものではないが、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニンおよびチロシンを含む群より選択される天然に存在するアミノ酸に結合しうる。
また、該ペプチドアナログはさらに、天然に存在するアミノ酸が、限定されるものではないが、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニンおよびチロシンを含む群より選択されるアミノ酸で置換されており；当該または各ポリマー部分が該または各置換アミノ酸に結合されている。当該または各ポリマー部分は隣接するＣ−末端アミノ酸に結合してもよい。さらに、該または各ポリマー部分はＣ−末端アミノ酸に結合してもよい。
【００２６】
該または各ポリマー部分はリジン残基に結合されていてもよい。該または各ポリマー部分はリジンのアルファまたはイプシロンアミノ基に結合されうる。リジン残基はＬｙｓ（１６）、Ｌｙｓ（３０）、Ｌｙｓ（３２）、Ｌｙｓ（３３）およびＬｙｓ（３７）からなる群より選択されうる。
【００２７】
全体を通して用いられる場合の「ミニ−ＰＥＧ」（または「ｍＰＥＧ」）なる語は、本明細書にて上記したように、ｎが１と約２２の間の整数であるところの、ポリエチレングリコールの結合ポリマーの同義語を意味する。
【００２８】
所望により、ペプチドアナログはさらに、アミノ酸残基のイプシロン基で、アシル残基付加、所望により脂肪酸付加により修飾されていてもよい。
【００２９】
所望により、ペプチドアナログはさらに、少なくとも１個のリジン残基のイプシロンアミノ基で、アシル残基の付加、所望により脂肪酸の付加により修飾されていてもよい。さらには所望により、リジン残基はＬｙｓ（１６）、Ｌｙｓ（３０）、Ｌｙｓ（３２）、Ｌｙｓ（３３）およびＬｙｓ（３７）からなる群より選択されてもよい。また、ペプチドアナログはさらに、天然に存在するアミノ酸が、限定されるものではないが、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニンおよびチロシンを含む群より選択されるアミノ酸で置換されていてもよく；アシル基付加による該または各修飾は、該または各置換アミノ酸に結合されている。
【００３０】
所望により、修飾は、限定されるものではないが、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１６パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基、およびＣ−２０アシル基からなる群より選択される脂肪酸を付加することからなっていてもよい。
【００３１】
該脂肪酸は飽和脂肪酸であってもよい。さらには、該脂肪酸はミリスチン酸であってもよい。ペプチドアナログはＬｙｓ（３７）ミリスチン酸ＧＩＰであることが好ましい。所望により、ペプチドアナログがシナプス伝達のＬＴＰを強化し、後記にてペプチドアナログアゴニストとして記載されてもよい。該ペプチドアゴニストは、所望により、ＧＩＰ（１−１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２）からなっていてもよい。所望により、該ペプチドアナログアゴニストは:
（ａ）位置２でのＮ-末端糖化およびアミノ酸置換；
（ｂ）位置１でのアミノ酸修飾および位置２でのアミノ酸置換；
（ｃ）位置１でのアミノ酸修飾、または位置２でのアミノ酸置換、ただし該アナログはＴｙｒ（１）グルシトールＧＩＰ（１−４２）ではなく、ここでアミノ酸置換または修飾は、
（ｉ）位置１での糖化；
（ｉｉ）位置１でのアルキル化；
（ｉｉｉ）位置１でのアセチル化；
（ｉｖ）位置１でのアシル化；
（ｖ）位置１でのイソプロピル基の付加；
（ｖｉ）位置１でのピログルタミン酸の付加；
（ｖｉｉ）位置２でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｖｉｉｉ）位置２でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
（ｉｘ）位置２でのＤ−アミノ酸、例えばＤ−Ａｌａ（２）ＧＩＰによる置換；
（ｘ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
（ｘｉ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
（ｘｉｉ）位置２でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換；
からなる群より選択され；
（ｄ）一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈで表わされるポリマー部分の結合からなるアミノ酸修飾；および
（ｅ）アミノ酸残基のイプシロンアミノ基での、アシル基付加、所望により脂肪酸付加による修飾
からなる。
【００３２】
位置２にてアミノ酸置換および位置１にてアミノ酸修飾がある場合、アミノ酸置換および/または修飾は、各々、所望により：
（ｉ）位置１での糖化；
（ｉｉ）位置１でのアルキル化；
（ｉｉｉ）位置１でのアセチル化；
（ｉｖ）位置１でのアシル化；
（ｖ）位置１でのイソプロピル基の付加；
（ｖｉ）位置１でのピログルタミン酸の付加；
（ｖｉｉ）位置２でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｖｉｉｉ）位置２でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｉｘ）位置２でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
（ｘ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
（ｘｉ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
（ｘｉｉ）位置２でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換
からなる群より選択されてもよい。
【００３３】
所望により、ペプチドアナログはさらに、一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈで示されるポリマー部分の結合を含むアミノ酸の修飾を；またはアミノ酸残基のイプシロンアミノ基でアシル基の付加、所望により脂肪酸の付加を；あるいは一般式：ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−Ｈで示されるポリマー部分の結合を含むアミノ酸の修飾、およびアミノ酸残基のイプシロンアミノ基でアシル基の付加、所望により脂肪酸の付加のいずれかを含んでもよい。
【００３４】
好ましくは、ペプチドアナログアゴニストは、位置１でアミノ酸修飾を含んでおり、ここで該アミノ酸修飾は、限定されるものではないが、アセチル化などのアシル化である。より好ましくは、該ペプチドアナログはＮ−末端近くでアシル化（所望によりアセチル化）されている。最も好ましくは、該ペプチドアナログはＮ−末端アルファ−アミンでアシル化（所望によりアセチル化）されている。所望により、ペプチドアナログアゴニストは位置１でアミノ酸修飾を含んでいてもよく、ここではそのアミノ酸修飾は糖化である。
【００３５】
所望により、ペプチドアナログアゴニストは位置１でＮ−アルキル化されたアミノ酸を含んでもよい。さらには所望により、ペプチドアナログは、位置１でＮ−末端イソプロピル基が付加されていてもよい。さらには所望により、ペプチドアナログは、位置１でＮ−末端ピログルタミン酸が付加されていてもよい。さらには所望により、ペプチドアナログはさらに、少なくとも１のリジン残基のイプシロンアミノ基で脂肪酸の付加による修飾、ならびに位置１および２の一方でまたはその両方でアミノ酸置換または修飾を含んでもよい。
【００３６】
所望により、ペプチドアナログアゴニストは、位置２にて、１または複数の以下のアミノ酸：プロリン、リジン、セリン、グリシン、Ｄ−アミノ酸、４−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）またはサルコシンでアミノ酸置換されていてもよい。
【００３７】
所望により、ペプチドアゴニストはＧＩＰまたはそのフラグメントであり、シナプス伝達を強化してもよい。
【００３８】
所望により、ペプチドアゴニストおよび/またはペプチドアナログアゴニストは、ＧＩＰ、［Ｎ−アセチル化］ＧＩＰ、［ｍＰＥＧ化（ｍＰＥＧｙｌａｔｅｄ）］ＧＩＰ、Ｄ−Ａｌａ（２）ＧＩＰまたは［Ｌｙｓ（３７）ミリスチン酸］ＧＩＰより選択されてもよい。
【００３９】
また別に、該ペプチドアナログはシナプス伝達のＬＴＰを弱め、後記するようにペプチドアナログアンタゴニストでもある。所望により、該ペプチドアナログアンタゴニストは：
（ａ）位置１および３の一方でのアミノ酸置換；
（ｂ）位置１および３の各々でのアミノ酸置換；
（ｃ）位置１および３の一方でのアミノ酸置換、ここで該アミノ酸置換は、
（ｉ）位置１でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｉｉ）位置１でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｉｉｉ）位置３でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｉｖ）位置３でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
（ｖ）位置３でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｖｉ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
（ｖｉｉ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
（ｖｉｉｉ）位置１または３でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換；
からなる群より選択されてもよい。
【００４０】
所望により、アミノ酸置換が位置１および３の両方でなされている場合、アミノ酸置換は、各々、以下の：
（ａ）位置１でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｂ）位置１でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｃ）位置３でのＤ−アミノ酸による置換；
（ｄ）位置３でのＬ−アミノ酸による置換；
（ｅ）位置１および/または３でのアミノイソ酪酸またはサルコシンによる置換；
（ｆ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合のψ［ＣＨ２ＮＨ］結合への変換；
（ｇ）Ａｌａ（２）−Ｇｌｕ（３）結合の安定した等価結合への変換；および
（ｈ）位置１および/または３でのベータ-アラニン、オメガ-アミノ酸、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸、オルニチン、シトルリン、ホモアルギニン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、システイン酸またはメチオニンスルホキシドによる置換；
からなる群より選択されてもよい。
【００４１】
所望により、ペプチドアナログアンタゴニストは、１または複数の以下のアミノ酸置換：位置１および/または３でのプロリン、リジン、セリン、Ｄ−アミノ酸またはサルコシンによる置換を含んでいてもよい。
【００４２】
所望により、ペプチドアナログアンタゴニストは、Ｐｒｏ（３）ＧＩＰまたはＡｌａ（１）ＧＩＰより選択されてもよい。
【００４３】
所望より、該ペプチドアゴニストまたはペプチドアナログアゴニストあるいはペプチドアナログアンタゴニストは、ＧＩＰ（１−４２）のＮ−末端からの１５ないし３０個のアミノ酸で構成されてもよい。また別に、該ペプチドアゴニストあるいはペプチドアナログアゴニストまたはアンタゴニストはＧＩＰ（１−４２）のＮ−末端からの少なくとも３０個のアミノ酸からなっていてもよい。
【００４４】
別に、あるいは付加的に、ペプチドアナログアゴニストまたはペプチドアナログアンタゴニストはさらに、少なくとも１個のリジン残基のイプシロンアミノ基で脂肪酸付加によって修飾されていてもよい。さらに所望により、リジン残基はＬｙｓ（１６）、Ｌｙｓ（３０）、Ｌｙｓ（３２）、Ｌｙｓ（３３）およびＬｙｓ（３７）からなる群より選択されてもよい。
【００４５】
所望により、該修飾は、限定されるものではないが、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１6パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基 およびＣ−２０アシル基からなる群より選択されてもよい。所望により、脂肪酸は飽和脂肪酸であってもよい。さらには、脂肪酸はミリスチン酸であってもよい。
【００４６】
神経障害は神経ネットワークに影響を及ぼす一群の障害を含む。神経ネットワークは中枢神経系（ＣＮＳ）；脊髄；および末梢神経系（ＰＮＳ）を含む。
【００４７】
好ましくは、一群の障害は、ニューロン間の電気化学的連絡の機能が障害を受けていることで特徴付けられる。電気化学的連絡はシナプスを介する化学的連絡；またはギャップジャンクションを介する電気的連絡を含みうる。
【００４８】
神経障害は、認識機能に影響を及ぼす障害；および機能不全性認識プロセスからなる群より選択される障害からなる。
【００４９】
認識機能に消極的に影響を及ぼす障害は、限定されるものではないが、認知症、発作、統合失調症、双極性障害および神経変性疾患を包含する。認識機能に積極的に影響を及ぼす障害は、限定されるものではないが、心的外傷後ストレス障害、癲癇、トゥレット症候群および幻覚を包含する。
【００５０】
神経変性障害は、限定されるものではないが、アルツハイマー病（ＡＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ハンチントン病およびパーキンソン病より選択される。
【００５１】
機能不全性認識プロセスは、限定されるものではないが、注意、計算、記憶、判断、洞察、学習および推論を包含する。
【００５２】
本願明細書において、本発明は、特定の方法、治療方法または操作に限定されず、それ自体が変化しうることが理解される。さらには、本明細書にて使用される用語は、特定の実施形態を記載するためのもので、限定されるものではない。
【００５３】
明細書全体を通して、「胃抑制ペプチド」（または「ＧＩＰ」）なる語は、全長ＧＩＰ、およびＧＩＰ（１−４２）と同意義である。好ましくは、該語はヒトＧＩＰをいう。
【００５４】
「ポリペプチド」なる語は、本明細書にて、ペプチドなる語と同意義に用いられる。
【００５５】
「対象」なる語は個体を意味する。好ましくは、対象は哺乳動物である。より好ましくは、対象はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
本発明の実施形態を添付した図面を用いて説明するが、それらは例示にすぎない：
【図１】ヒトＧＩＰ（１−４２）（配列番号１）およびＧＩＰのペプチドアナログ（配列番号２−４）のポリペプチド配列を示す。
【図２】ベータ−アミロイド（２５−３５）のシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図３】ヒトＧＩＰののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図４】Ｎ−ＡｃＧＩＰののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図５】Ｎ−ＡｃＧＩＰを投与し、ついでベータ−アミロイド（２５−３５）を投与することののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図６】Ｐｒｏ（３）ＧＩＰののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図７】Ａｌａ（１）ＧＩＰののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図８】［ｍＰＥＧ］ＧＩＰののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図９】Ｌｙｓ３７［ミリスチン酸］ＧＩＰののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【図１０】Ｄ−Ａｌａ（２）ＧＩＰののシナプス伝達の長期増強に対する効果を示す。
【００５７】
材料および方法
【００５８】
手術およびＬＴＰ誘発プロトコル
雄ウィスターラット（体重：２２０−２８０ｇ）を、すべての実験が終わるまで、ウレタン（カルバミン酸エチル、１．８ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔処理した。該動物は英国（ＵＫ）、ハーランより入手した。
【００５９】
カニューレ（２２ゲージ、０．７ｍｍ外径、１１ｍｍ長、ＵＫ、ケント州、ビラニー）を脳室内（ｉｃｖ）注射のために左脳半球（プレグマの前方１．５ｍｍ、正中線の側方０．５ｍｍおよび腹側３．５５ｍｍ）に挿入した。電極（ＵＫ、ケント州、ビラニー、テフロン被覆したタングステン）を、一方的に、正中線の後方３．４ｍｍおよび側方２．５ｍｍに、刺激電極をプレグマの後方４．２ｍｍおよび正中線の側方３．８ｍｍに挿入した。電極を、皮質および海馬の上層を通って、約１０ミリ秒の潜伏時間のある消極的な偏光性ＥＰＳＰ（興奮性シナプス後電位）が出現するまで、ＣＡ１領域中にゆっくりと下げた。ＥＰＳＰの記録をシャファー・コラテラル／交連経路の刺激に応答して右海馬脳半球のＣＡ１領域での放線状層より行った。
【００６０】
フィールドＥＰＳＰを、そのトリガー閾値が調整可能である、コンピューター処理される刺激および記録ユニット（英国、ＡＤＩインストルメント、Power Lab）上で記録した。トリガーされたユニットは定電流刺激単離ユニット（英国、Neurolog）を活性化させた。データ獲得システムを同時にトリガーさせ、すべての事象を記録させた。サンプリング速度はＥＰＳＰを２０ＫＨｚで記録することであった。
【００６１】
ＬＴＰを誘発する「強」高周波刺激（ＨＦＳ）プロトコルは、３トレインの２００刺激、刺激間隔５ミリ秒（２００Ｈｚ）、トレイン間隔２秒から構成された。この標準ＨＦＳはこれらの記録条件（Holscherら、１９９７）下で最大ＬＴＰを誘発することが明らかにされた。ＬＴＰを誘発する「弱」ＨＦＳプロトコルは１０トレインの１０刺激、刺激間隔５ミリ秒（２００Ｈｚ）から構成された。強ＨＦＳを用いてＬＴＰを害するペプチドの作用を試験し（ベータ−アミロイド）、弱ＨＦＳを用いてＬＴＰを促進するペプチドを試験した。ＬＴＰのこの形態において、対照群は最大速度で強化されず、ＬＴＰは経時的にゆっくりと崩壊しうる。
【００６２】
刺激強度は最大ＥＰＳＰの７０％であった。ＬＴＰを、薬物を注射する前の３０分間、およびＨＦＳを適用する前の６０分間にわたって記録したベースラインＥＰＳＰ傾斜の％として測定した。ベースラインを３０分間記録し、平均化した。この値をＥＰＳＰ傾斜の１００％とし、記録されるすべての値をこのベースライン値に対して標準化した。
【００６３】
すべての実験は、ＵＳ  Ｈｏｍｅ  Ｏｆｆｉｃｅレギュレーションにより使用許諾されており、「Principles of laboratory animal care」（ＮＩＨパブリケーションＮｏ．８６−２３、１９８５年改訂）に従った。
【００６４】
ペプチド
この試験に用いるベータアミロイド（２５−３５）およびこの試験に用いる他のペプチドを、標準固相Ｆｍｏｃプロトコルを用い、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｅｒ（Ｍｏｄｅｌ  ４３２Ａ）で合成した。ペプチドをＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ  ２０１０クロマトグラフィーシステムの逆相ＨＰＬＣを用いて純度を判断し、ペプチドをその後、以前に記載されるように、マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）を用いて特徴付けした（Genglerら、２００６；Holsherら、２００７）。ペプチドを乾燥形態にて貯蔵し、実験前に再蒸留水に溶かした。５μｌのペプチド溶液をｉｃｖ注射した。
【００６５】
統計
各群は６匹の動物から構成された。データを、反復測定二方向性ＡＮＯＶＡ、またはポスト−ｈｏｃテストとの反復測定三レベル二方向性ＡＮＯＶＡを用いて分析し、群間で選別した（米国、ＧｒａｐｈＰａｄ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，ＰＲＩＳＭ）。
【００６６】
実施例
当業者が発明の完全な開示または記載が得られるように、明細書に以下の実施例が記載されているものであり、該実施例は純粋に発明の例示を意図とするもので、発明の範囲を限定するものではない。
【００６７】
実施例１．ペプチド配列
ヒトＧＩＰ（１−４２）およびそのアナログのアミノ酸配列を図１に示す。アミノ酸は以下のように番号を付す。
配列番号１はヒトＧＩＰのアミノ酸配列を示す；
配列番号２はアナログＰｒｏ（３）ＧＩＰのアミノ酸配列を示す；
配列番号３はアナログＡｌａ（１）ＧＬＰ−１のアミノ酸配列を示す；および
配列番号４はアナログＤ−Ａｌａ（２）ＧＬＰ−１のアミノ酸配列を示す。
【００６８】
実施例２．ベータ−アミロイド（２５−３５）処理のインビボ効果
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）１０ナノモル（○）または１００ナノモル（◆）のベータ−アミロイド（βＡ）（２５−３５）のいずれかを脳内室（ｉｃｖ）注射した。ＨＦＳ（強プロトコル）を用いて注射した１５分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した（図２）。対照と比較して、１０ナノモルβＡ（２５−３５）の注射（ｉｃｖ）は長期増強（ＬＴＰ）を軽減した（二方向性ＡＮＯＶＡ；ｐ＜０．０１）。１００ナノモルβＡ（２５−３５）を注射した後に、ＬＴＰデベロップメントも害された（ｐ＜０．００５）。平均したＥＰＳＰをＨＦＳの５分前およびＨＦＳの１時間後に記録して示す。これらのＥＰＳＰは記録の質を証明するための例である。図示されるように、ＥＰＳＰは刺激後に明らかに変化しており、ノイズはかなり小さく、高品質である。目盛バーは横１０ミリ秒、縦１ｍＶである。一群すべてｎ＝６である。
【００６９】
これらの結果はＬＴＰに対するβＡ（２５−３５）の有害な作用を示す。
【００７０】
実施例３．ＧＩＰ処理のインビボ効果
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）または１５ナノモルのヒトＧＩＰ（１−４２）（◆）のいずれかをｉｃｖ注射した。ＨＦＳ（弱プロトコル）を用いて注射した３０分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した（図３）。対照と比較して、１５ナノモルのＧＩＰの注射（ｉｃｖ）は長期増強（ＬＴＰ）を増加させた（二方向性ＡＮＯＶＡ；ｐ＜０．０１）。因子間の相互作用は有意ではなかった。一群すべてｎ＝６であった。平均したＥＰＳＰをテタヌス（tetanus）の５分前およびテタヌスの１時間後に記録して示す。目盛バーは横１０ミリ秒、縦１ｍＶである。
【００７１】
これらの結果は、初めて、ヒトＧＩＰ（１−４２）がシナプス伝達に対して直接的かつ急性の調整作用を有し、ＬＴＰの誘発を強化しうることを示す。
【００７２】
実施例４．Ｎ−ＡｃＧＩＰ処理のインビボ効果
ここでは、Ｎ−ＡｃＧＩＰ（Ｎ−末端アセチル化ヒトＧＩＰ（１−４２））その物に対する作用をシナプス可塑性について試験した。Ｎ−ＡｃＧＩＰはアゴニストであるため、弱刺激を用いて最大下長期増強（ＬＴＰ）を誘発する必要があった。該化合物が何らかの促進作用を有すれば、対照と比較した場合に、ＬＴＰの増加が観察されるに違いない。雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）または１５ナノモルのＮ−ＡｃＧＩＰ（◆）のいずれかをｉｃｖ注射した。ＨＦＳ（弱プロトコル）を用いて注射した３０分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した（図４）。対照と比べて、１５ナノモルのＮ−ＡｃＧＩＰの注射（ｉｃｖ）は長期増強（ＬＴＰ）を強化した（二方向性ＡＮＯＶＡ；ｐ＜０．０１）。平均したＥＰＳＰをＨＦＳの５分前およびＨＦＳの１時間後に記録して示す。これらのＥＰＳＰは記録の質を証明するための例である。図示されるように、ＥＰＳＰは刺激後に明らかに変化しており、ノイズはかなり小さく、高品質である。目盛バーは横１０ミリ秒、縦１ｍＶである。一群すべてｎ＝６である。
【００７３】
これらの結果は、初めて、Ｎ−ＡｃＧＩＰがシナプス伝達に対して直接的かつ急性の調整作用を有し、ＬＴＰの誘発を強化しうることを示す。
【００７４】
実施例５．Ｎ−ＡｃＧＩＰおよびベータ−アミロイド（２５−３５）処理のインビボ効果
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）、１００ナノモルのβＡ（２５−３５）（◆）または１５ナノモルのＮ−ＡｃＧＩＰと１００ナノモルのβＡ（２５−３５）（○）の組み合わせのいずれかをｉｃｖ注射した。Ｎ−ＡｃＧＩＰの３０分後に、βＡ（２５−３５）を注射し、ＨＦＳ（弱プロトコル）を用いてβＡ（２５−３５）注射した１５分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した（図５）。この実験はＮ−ＡｃＧＩＰがＬＴＰのβＡ誘発性損傷を防止しうるかどうかを試験することであるため、強ＨＦＳプロトコルを用いて最大ＬＴＰを得た。したがって、ＬＴＰは既に最大レベルで誘発され、Ｎ−ＡｃＧＩＰによってさらに強化され得ないため（Ｎ−ＡｃＧＩＰ単独の作用については実施例４を参照のこと）、このプロトコルではＮ−ＡｃＧＩＰそれ自体については試験しなかった。１５ナノモルのＮ−ＡｃＧＩＰの注射（ｉｃｖ）はＬＴＰのβＡ（２５−３５）誘発性損傷を弱めた。３レベルのＡＮＯＶＡで、群間の全体的差異がわかった（ｐ＜０．００１）。２レベルの二方向性ＡＮＯＶＡは、βＡ（２５−３５）群と対照の間で違いを示した（ｐ＜０．００１）。２レベルのＡＮＯＶＡはＮ−ＡｃＧＩＰ群とβＡ（２５−３５）の組み合わせ群と、ベータ−アミロイド群との間で違いを示した（ｐ＜０．００１）。平均したＥＰＳＰをＨＦＳの５分前およびＨＦＳの１時間後に記録して示す。目盛バーは横１０ミリ秒、縦１ｍＶである。一群すべてｎ＝６である。
【００７５】
これらの結果はＮ−ＡｃＧＩＰがβＡ誘発のＬＴＰの損傷を防止しうることを示す。
【００７６】
実施例６．Ｐｒｏ（３）ＧＩＰ処置のインビボ作用
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）または１５ナノモルのＰｒｏ（３）ＧＩＰ（◆）をｉｃｖ注射した。Ｐｒｏ（３）ＧＩＰは位置３のＧｌｕがＬ−Ｐｒｏで置き換えられているヒトＧＩＰ（１−４２）である。ＨＦＳ（強プロトコル）を用いて注射した３０分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した（図６）。１５ナノモルのＰｒｏ（３）ＧＩＰの注射（ｉｃｖ）は、対照と比べて、長期増強（ＬＴＰ）を弱めた（二方向性ＡＮＯＶＡ；ｐ＜０．００１）。２レベルの二方向性反復測定ＡＮＯＶＡは、Ｐｒｏ（３）ＧＩＰ群と対照との間で違い（ＤＦ１，１０；Ｆ＝２１；ｐ＜０．００１）および経時的違いを示した（ＤＦ１，１１９；Ｆ＝１．９６；ｐ＜０．００５）。因子間の相互作用は有意ではなかった（図２ｃを参照のこと）。一群すべてｎ＝６である。平均したＥＰＳＰをＨＦＳの５分前およびＨＦＳの１時間後に記録して示す。目盛バーは横１０ミリ秒、縦１ｍＶである。すべての群はｎ＝６である。
【００７７】
これらの結果は、Ｐｒｏ（３）ＧＩＰがシナプス伝達に対して直接的かつ急性の調整作用を有し、ＬＴＰの誘発を弱めうることを示す。
【００７８】
実施例７．Ａｌａ（１）ＧＩＰでの処理のインビボ作用
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）または１５ナノモルのＡｌａ（１）ＧＩＰ（◆）のいずれかをｉｃｖ注射した。Ａｌａ（１）ＧＩＰは位置１のＴｙｒがＬ−Ａｌａで置き換えられているヒトＧＩＰ（１−４２）である。ＨＦＳ（強プロトコル）を用いて注射した３０分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した。１５ナノモルのＡｌａ（１）ＧＩＰの注射（ｉｃｖ）は、対照と比べて、長期増強（ＬＴＰ）を弱めた。二方向性反復測定ＡＮＯＶＡは、Ａｌａ（１）ＧＩＰ群と対照との間で違いを示した（ｐ＜０．００１）。すべての群はｎ＝６である。
【００７９】
これらの結果は、Ａｌａ（１）ＧＩＰがシナプス伝達に対して直接的かつ急性の調整作用を有し、ＬＴＰの誘発を弱めうることを示す。
【００８０】
実施例８．ＧＩＰ［ｍＰＥＧ］での処理のインビボ作用
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）または１５ナノモルのＧＩＰのＣ−末端ミニ−ＰＥＧ化（mini-PEGylation）により作製されるアナログである、ＧＩＰ［ｍＰＥＧ］（◆）のいずれかをｉｃｖ注射した。ここで、ＧＩＰ［ｍＰＥＧ］は一般式  ＨＯ−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ―Ｈ（式中、ｎは約３である）で示される結合したポリマー部分を有するヒトＧＩＰ（１−４２）である。ＨＦＳ（弱プロトコル）を用いて注射した３０分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した。１５ナノモルのＧＩＰ［ｍＰＥＧ］の注射（ｉｃｖ）は、対照と比べて、長期増強（ＬＴＰ）を強化した。二方向性反復測定ＡＮＯＶＡは、ＧＩＰ［ｍＰＥＧ］群と対照との間で違いを示した（ｐ＜０．００１）。すべての群はｎ＝６である。
【００８１】
これらの結果は、ＧＩＰ［ｍＰＥＧ］がシナプス伝達に対して直接的かつ急性の調整作用を有し、ＬＴＰの誘発を強化しうることを示す。
【００８２】
実施例９．  安定したＧＩＰアゴニスト、ＧＩＰ［Ｌｙｓ（３７）ミリスチン酸］での処理のインビボ作用
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）または１５ナノモルの、Ｌｙｓ（３７）のイプシロンアミノ基でのミリスチン酸付加による修飾によって作製されるアナログである、
ＧＩＰ［Ｌｙｓ（３７）］ミリスチン酸］（◆）のいずれかをｉｃｖ注射した。ＨＦＳ（弱プロトコル）を用いて注射した３０分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した。１５ナノモルのＧＩＰ［Ｌｙｓ（３７）ミリスチン酸］の注射（ｉｃｖ）は、対照と比べて、長期増強（ＬＴＰ）を強化した。二方向性反復測定ＡＮＯＶＡは、ＧＩＰ［Ｌｙｓ（３７）ミリスチン酸］群と対照との間で違いを示した（ｐ＜０．００１）。すべての群はｎ＝６である。
【００８３】
これらの結果は、ＧＩＰ［Ｌｙｓ（３７）ミリスチン酸］がシナプス伝達に対して直接的かつ急性の調整作用を有し、ＬＴＰの誘発を強化しうることを示す。
【００８４】
実施例１０．  Ｄ−Ａｌａ（２）ＧＩＰアゴニストでの処理のインビボ作用
雄のウィスターラットに、ビヒクル（対照）または１５ナノモルのＤ−Ａｌａ（２）ＧＩＰ（◆）のいずれかをｉｃｖ注射した。Ｄ−Ａｌａ（２）ＧＩＰは、位置２のＬ−ＡｌａがＤ−Ａｌａで置き換えられているヒトＧＩＰ（１−４２）である。ＨＦＳ（弱プロトコル）を用いて注射した３０分後にＬＴＰが誘発され、ＥＰＳＰの変化を評価し、グラフを作成してＬＴＰの変化を示した。１５ナノモルのＤ−Ａｌａ（２）ＧＩＰの注射（ｉｃｖ）は、対照と比べて、長期増強（ＬＴＰ）を強化した。二方向性反復測定ＡＮＯＶＡは、Ｄ−Ａｌａ（２）ＧＩＰ群と対照との間で違いを示した（ｐ＜０．００１）。すべての群はｎ＝６である。平均したＥＰＳＰをテタヌス（tetanus）の５分前およびの１時間後に記録して示す。目盛バーは横１０ミリ秒、縦１ｍＶである。
【００８５】
これらの結果は、Ｄ−Ａｌａ（２）ＧＩＰがシナプス伝達に対して直接的かつ急性の調整作用を有し、ＬＴＰの誘発を強化しうることを示す。
【００８６】
総合して、当該実験の結果もまた、シナプス可塑性に対する、ＧＩＰおよびそのアゴニストアナログの促進作用が、βＡ（２５−３５）フラグメントがＬＴＰに対して有する有害な作用を防止しうることを示す。ＧＩＰ受容体の活性化は、ＬＴＰを増加させるシナプスをプライムし、ベータ−アミロイドがシナプス可塑性に対して有する作用を防止または弱める作用機序を開始させるようである。いくつかの作用機序がこのことに関与し得た。理論により拘束されるものではないが、本発明者らは、ＧＩＰおよびそのアゴニストアナログは電位依存性カルシウムチャネル（ＶＤＣＣ）および他のイオンチャネル活性を変えることで作用することを前提とする。本発明者らはさらに、ＧＩＰによるニューロンでのｃＡＭＰレベルの調整が神経伝達物質の放出の増加に一の役割を果たし、そのことがＬＴＰの強化をもたらすことを示唆する。ＧＩＰおよびそのアゴニストアナログは、ＧＩＰが膵臓ベータ細胞におけるｃＡＭＰレベルを増大させる（Greenら、２００４）との同様に、ニューロンにおけるｃＡＭＰレベルを高める可能性がある。ｃＡＭＰレベルがニューロンにおける神経伝達物質ベシクルの放出を調整することが知られている。ＧＩＰ誘発のｃＡＭＰ増加は、おそらく、このようにベシクル放出を強化することができ、シナプス活性がベータ−アミロイドによる影響を受けるＶＤＣＣ活性（FreirおよびHerron、２００３）にそれほど依存しないようにしている。ＶＤＣＣ活性は、通常、Ｃａ２＋感受性ヌクレオチドシクラーゼを介してｃＡＭＰレベルを向上させるのに必要とされており、この工程はＧＩＰ／アゴニストアナログの作用により回避され得た。Ｃａ２＋チャネルの慢性的に高い活性化は、フリーラジカルの生成の増加のような神経障害性工程に至る（Holscher、２００５、１９９８）ため、ＧＩＰ受容体の活性化がベータ−アミロイドの作用を防止するとの観察により、ベータアミロイドの初期の変性作用が軽減され得ること、および神経変性に至る下流プロセスが防止され得ることが大いに期待できる。加えて、幹細胞増殖および神経再生の向上によりＧＩＰがニューロンに対して有する成長因子様作用は、ベータ−アミロイド活性およびプラーク誘発性グリオーシスにより誘発される長期損傷の防止または軽減を補助し得た（PerryおよびGreig、２００５；perryら、２００３）。
【００８７】
結論として、ＧＩＰおよびそのアゴニストペプチドアナログのこれらの特性は、対象の安定したＧＩＰアゴニストでの処理がＬＴＰの損傷により惹起される、あるいはそれに付随する神経学的障害の有効な予防処理でありうることを示唆する。さらには、ＧＩＰの安定したアンタゴニストペプチドの使用は、ＬＴＰの制限または軽減が求められる、過剰興奮性型神経学的障害の治療における魅力的な治療剤であり得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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