(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）であって、分葉状の核およびＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−／ＣＤ４８−／ＭＨＣ  Ｉ−／ＭＨＣ  ＩＩ−の特徴的な表面表現型を有し；ここで、ＤＣ．ｃｏｍがＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合、そのＤＣ．ｃｏｍは特徴的な樹状突起の形態を示すＤＣに分化し、好中球細胞および樹状細胞の両方の表現型を維持する、前記樹状細胞前駆体集団。
【請求項２】
表面マーカーＣＤ４８およびＧｒ−１を用いることにより同定される、請求項１に記載の単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）。
【請求項３】
ＣＤ４８−／ＭＨＣ  Ｉ−／ＭＨＣ  ＩＩ−／ＣＤ１ａ−／ＣＤ１ｄ−／ＣＤ１１ｃ−の特徴的な表面表現型を有する、単離されたヒト樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）。
【請求項４】
請求項３に記載の樹状細胞前駆体集団であって、ＤＣ．ｃｏｍがＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合に、そのＤＣ．ｃｏｍが特徴的な樹状突起の形態を示す樹状細胞（ＤＣ）に分化する、前記樹状細胞前駆体集団。
【請求項５】
ＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣ  ＩＩ＋／ＣＤ８６＋／ＤＥＣ２０５＋の表面表現型を有する顆粒球由来ＤＣ（ｇｒ−ＤＣ）を含む、請求項１に記載のＤＣ．ｃｏｍに由来する単離された樹状細胞集団。
【請求項６】
ｇｒ−ＤＣが、ＣＤ１１ｃ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５の発現に関してスクリーニングすることにより同定される、請求項５に記載の樹状細胞集団。
【請求項７】
ｇｒ−ＤＣが、インビトロまたはエキソビボ系において免疫応答を誘導するように抗原を提示することができる、ここで当該抗原は以下：外来性抗原、内因性抗原または自己抗原；インビトロまたはエキソビボ系において感染性病原体に対する免疫応答を誘導するように微生物抗原を提示することができる抗原；インビトロまたはエキソビボ系において腫瘍細胞に対する免疫応答を誘導するように腫瘍抗原を提示することができる抗原；インビトロまたはエキソビボ系においてウイルス病原体に対する免疫応答を誘導するようにウイルス抗原を提示することができる抗原；および、インビトロまたはエキソビボ系において免疫応答を誘導するように非微生物性外来性抗原を提示することができる抗原；の１またはそれ多くである、請求項５または６に記載の樹状細胞集団。
【請求項８】
ｇｒ−ＤＣがＬｙ６Ｇの表面発現、または好中球細胞および樹状細胞の両方の表面発現を示す、請求項５ないし７のいずれか１項に記載の樹状細胞集団。
【請求項９】
活性化された樹状細胞を得るための方法であって、以下：
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＤＣ．ｃｏｍ、およびＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣ  ＩＩ＋／ＣＤ８６＋／ＤＥＣ２０５＋の表面表現型を有するｇｒ−ＤＣの少なくとも一方を含む細胞の集団を提供する、および
細胞の少なくとも一部の成熟化を誘発するためにその集団の中の細胞の少なくとも一部を活性化させる、
を含む、前記方法。
【請求項１０】
少なくとも１個のＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣが、以下：少なくとも１種類のウイルスまたはその派生物；少なくとも１種類の細菌またはその派生物；少なくとも１種類の寄生生物；少なくとも１種類の菌類またはその派生物；少なくとも１種類のサイトカインまたは少なくとも１種類のリガンド；の１又はそれより多くにより活性化される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｔリンパ球を含む生物学的試料に対して実施される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
その試料が、自家血液を含む血液である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
その樹状細胞がヒトのものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
樹状細胞系を単離するためのインビトロの方法であって、以下：
対象から単離した血液試料を有効量のＧＭ−ＣＳＦを含む適切な培地の中で培養状態に置く、
単離した血液試料から、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＤＣ．ｃｏｍを生成する、
および
対象に特有の樹状細胞系を得るために、ＤＣ．ｃｏｍを連続的な細胞分裂により増殖させる；
を含む、前記方法。
【請求項１５】
生成されたＤＣ．ｃｏｍがＣＤ４８陰性／ＭＨＣクラスＩ陰性の表現型を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
樹状細胞へ方向付けされた請求項１〜４のいずれか１項に記載のＤＣ．ｃｏｍの拡張のための方法であって、単離されたＤＣ．ｃｏｍをＧＭ−ＣＳＦ中で培養する、および場合によりその培養物に骨髄（ＢＭ）フィーダー細胞を添加する工程を含む、前記方法。
【請求項１７】
哺乳類の前駆体樹状細胞から請求項５または６に記載の樹状細胞集団を生成するための方法であって、以下：
ｉ）哺乳類の血液試料から前駆体樹状細胞を含む細胞画分を用意する；
ｉｉ）次のことにより、工程（ｉ）の細胞画分の少なくとも１サブセットを単離する：
工程ｉ）からの集団を、ＣＤ４５．１＋である新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養する；
抗ＣＤ４５．２および抗ＣＤ４５．１抗体で分染することにより識別された請求項１に記載のＤＣ．ｃｏｍに由来する細胞を識別する；そして
ＣＤ４５．２＋細胞を１種類以上の示されたマーカーの表面発現に関して分析する；ならびに
ｉｉｉ）工程（ｉｉ）により得られた細胞を集める；
を含む、前記方法。
【請求項１８】
樹状細胞（ＤＣ）のＴ細胞との相互作用の作用因子を同定する方法であって、以下：
ｉ）請求項５または６に記載の樹状細胞集団をＴ細胞および試験薬剤と混合する、ならびに
ｉｉ）候補物質が樹状細胞集団のＴ細胞との相互作用を変化させるかどうかを決定する、
ここで、樹状細胞集団のＴ細胞との相互作用を変化させる試験薬剤は樹状細胞の相互作用の作用因子である；
を含む、前記方法。
【請求項１９】
試験薬剤が、樹状細胞集団のＴ細胞への結合における変化、および樹状細胞集団に仲介されるＴ細胞の活性化における変化、の１又はそれより多くにより同定される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
対象における炎症性の疾患を検出する、当該障害を発症するリスクを検出する、または当該障害の予後を検出する方法であって、以下：
対象からの検査試料においてＣＤ１１ｃ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５のマーカーのレベルを測定する、
ここで、検査試料におけるそのマーカーのレベルの、対照試料における対応するマーカーのレベルと比較した変化は、対象における当該障害の存在、または当該障害を発症するリスクの指標である、
を含む、前記方法。
【請求項２１】
炎症性障害を処置するための療法薬のための候補化合物に関するスクリーニングのためのキットであって、次のもの：ＣＤ１１ｃ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５のマーカーの試薬；ならびに、該マーカーを発現する細胞、を含む前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明者：Ａｋｉｒａ  Ｔａｋａｓｈｉｍａ，Ｈｉｒｏｎｏｒｉ  Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｓｈｕｏ  Ｇｅｎｇ
関連出願の相互参照および資金提供を受けた研究に関する記載
[00001]  本発明は、２００８年３月３日に出願された仮特許出願シリアル番号６１／０６７，８７０の利益を主張する。この発明は、国立関節炎、骨格筋、皮膚疾患研究所助成金番号５Ｒ０１ＡＲ０５３３５５−０３の下での政府支援によりなされた。政府はこの発明において一定の権利を有する。
【０００２】
[00002]  この発明は概して樹状細胞のある定義されたサブセットを作る、および使用する方法に、より詳細には、樹状細胞−ｇｒ−ＤＣのサブセットのインビトロでの生成の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
[00003]  この節で開示される背景技術が法律的に先行技術を構成するという自認は無い。
【０００４】
[00004]  樹状細胞（ＤＣ）は体内の事実上全ての組織にあるプロフェッショナル抗原提示細胞のファミリーである。ＤＣは感染性微生物、癌細胞、自己免疫疾患、移植片拒絶、移植片対宿主拒絶疾患、および他の有害である可能性がある抗原に対する先天性および適応免疫応答の両方の誘導において極めて重要な役割を果たしている。定常状態におけるＤＣは、自己抗原および無害な環境抗原に対する免疫寛容の維持において同様に重要な役割を果たしている。
【０００５】
[00005]  いくつかの表現型が異なるＤＣサブセットが文献において報告されており、これには単球由来ＤＣ、骨髄性ＤＣ、形質細胞様ＤＣ、およびリンパ球系ＤＣが含まれる(Shortman and Liu, 2002) (Villadangos and Schnorrer, 2007)。これらのＤＣサブセットが機能的特性および発生経路において互いに異なるのかどうかは、まだいくらかはっきりしないままである。実際、培養および組織においていくつかの異なる造血集団がＤＣを生じさせるのが示されている(Rossner et al, 2005) (Naik et al, 2007) (Randolph et al, 1999) (Fogg et al, 2006) (del Hoyo et al, 2002) (Larregina et al, 2001) (D'Amico and Wu, 2003) (Diao et al, 2006) (Onai et al, 2007) (O'Keeffe et al, 2003) (Naik et al, 2006) (Ginhoux et al, 2006) (Zuniga et al, 2004) (Bruno et al, 2001) (Wang et al, 2002) (Mende et al, 2006) (Diao et al, 2004) (Karsunky et al, 2003) (Iijima et al, 2007) (Welner et al, 2007) (Wu and Liu, 2007) (Wu and Dakic, 2004) (Shortman and Naik, 2007) (Naik, 2008) (Dakic and Wu, 2003))。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Shortman and Liu, 2002
【非特許文献２】Villadangos and Schnorrer, 2007
【非特許文献３】Rossner et al, 2005
【非特許文献４】Naik et al, 2007
【非特許文献５】Randolph et al, 1999
【非特許文献６】Fogg et al, 2006
【非特許文献７】del Hoyo et al, 2002
【非特許文献８】Larregina et al, 2001
【非特許文献９】D'Amico and Wu, 2003
【非特許文献１０】Diao et al, 2006
【非特許文献１１】Onai et al, 2007
【非特許文献１２】O'Keeffe et al, 2003
【非特許文献１３】Naik et al, 2006
【非特許文献１４】Ginhoux et al, 2006
【非特許文献１５】Zuniga et al, 2004
【非特許文献１６】Bruno et al, 2001
【非特許文献１７】Wang et al, 2002
【非特許文献１８】Mende et al, 2006
【非特許文献１９】Diao et al, 2004
【非特許文献２０】Karsunky et al, 2003
【非特許文献２１】Iijima et al, 2007
【非特許文献２２】Welner et al, 2007
【非特許文献２３】Wu and Liu, 2007
【非特許文献２４】Wu and Dakic, 2004
【非特許文献２５】Shortman and Naik, 2007
【非特許文献２６】Naik, 2008
【非特許文献２７】Dakic and Wu, 2003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
[00006]  最近の研究はＤＣに関するいくつかの前駆細胞集団を同定したが、ＤＣに関する直接の前駆体はまだ決定されていない。この発明はこれらの問題に取り組む。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
[00007]  第１観点において、本明細書において表面マーカーＣＤ４８およびＧｒ−１を用いることにより同定された単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）を提供する。
【０００９】
[00008]  別の観点において、本明細書においてＣＤ４８−／ＭＨＣ  Ｉ−／ＭＨＣ  ＩＩ−／ＣＤ１ａ−／ＣＤ１ｄ−／ＣＤ１１ｃ−の特徴的な表面表現型を有する単離されたヒト樹状細胞前駆体（ＤＣ．ｃｏｍ）を提供する。
【００１０】
[00009]  特定の態様において、ＤＣ．ｃｏｍ集団がＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合、そのＤＣ．ｃｏｍ集団は特徴的な樹状突起の形態を示す樹状細胞（ＤＣ）に分化する。
【００１１】
[00010]  別の観点において、本明細書においてＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−／Ｌｙ６Ｇ＋／ＣＤ４８−／ＭＨＣ  Ｉ−／ＭＨＣ  ＩＩ−の特徴的な表面表現型を有する単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）を提供する；ここで、ＤＣ．ｃｏｍ集団がＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合、そのＤＣ．ｃｏｍ集団は特徴的な樹状突起の形態を示すＤＣに分化する。特定の態様において、ＤＣ．ｃｏｍ集団がＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合、そのＤＣ．ｃｏｍ集団は特徴的な樹状突起の形態を示す樹状細胞（ＤＣ）に分化する。
【００１２】
[00011]  別の観点において、本明細書において次の内の１つ以上により特徴づけられる単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）を提供する：−表面表現型に基づいてＣＤ１１ｃ＋  ＤＣから識別できること；ここでＣＤ４８、およびＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子はそのＤＣ．ｃｏｍ集団において検出不能である、−表面表現型に基づいて他の樹状細胞前駆体から識別できること；ここでそのＤＣ．ｃｏｍ集団においてＬｙ６Ｇが検出可能である；−ＯＶＡタンパク質およびペプチドをＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞受容体トランスジェニックマウスから単離されたＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞に提示する能力により評価した際に、検出できる抗原提示能力を示さないこと；−分葉状の核および少数の細胞質顆粒の封入により特徴づけられる形態を有すること；−表面表現型、細胞の大きさ、粒状度（ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ）、および形態に関して均質であること；−ＢＭ培養においてＣＤｌｌｂ＋／ＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ−集団と比べて比較的限られた有糸分裂可能性を有すること；−好中球前駆細胞の“桿状核球（ｂａｎｄ  ｃｅｌｌ）”集団と似ていること；ならびに−前に同定されたＤＣ亜集団と異なるＤＣサブセット（ｇｒ−ＤＣ）に分化する能力を有すること。
【００１３】
[00012]  別の観点において、本明細書において顆粒球由来ＤＣ（ｇｒ−ＤＣ）を含むＤＣ．ｃｏｍに由来する単離された樹状細胞集団を提供する。
【００１４】
[00013]  特定の態様において、ｇｒ−ＤＣ細胞集団はＣＤ１１ｃ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５の発現に関してスクリーニングすることにより同定される。
【００１５】
[00014]  特定の態様において、ｇｒ−ＤＣ細胞集団はインビトロまたはエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）系において免疫応答を誘導するように抗原を提示することができる。
【００１６】
[00015]  特定の態様において、抗原は次の内の１種類以上である：外来性抗原、内因性抗原または自己抗原。
【００１７】
[00016]  特定の態様において、抗原はインビトロまたはエキソビボ系において感染性病原体に対する免疫応答を誘導するように微生物抗原を提示することができる。
【００１８】
[00017]  特定の態様において、抗原はインビトロまたはエキソビボ系において腫瘍細胞に対する免疫応答を誘導するように腫瘍抗原を提示することができる。
【００１９】
[00018]  特定の態様において、抗原はインビトロまたはエキソビボ系においてウイルス病原体に対する免疫応答を誘導するようにウイルス抗原を提示することができる。
【００２０】
[00019]  特定の態様において、抗原はインビトロまたはエキソビボ系において免疫応答を誘導するように非微生物性外来性抗原を提示することができる。
【００２１】
[00020]  特定の態様において、ｇｒ−ＤＣはＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方に対してＯＶＡ抗原を提示する。
【００２２】
[00021]  特定の態様において、ｇｒ−ＤＣはＬｙ６Ｇの表面発現を示す。
【００２３】
[00022]  第１観点において、本明細書において次のことを含む活性化された樹状細胞を得るための方法を提供する：ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの少なくとも一方を含む細胞の集団を提供し、細胞の少なくとも一部の成熟化を誘発するためにその集団の中の細胞の少なくとも一部を活性化させる。
【００２４】
[00023]  特定の態様において、少なくとも１個のＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣ細胞が次の内の１種類以上により活性化される：少なくとも１種類のウイルスまたはその派生物；少なくとも１種類の細菌またはその派生物；少なくとも１種類の寄生生物；少なくとも１種類の菌類またはその派生物；少なくとも１種類のサイトカインまたは少なくとも１種類のリガンド。
【００２５】
[00024]  特定の態様において、その方法はＴリンパ球を含むあらゆるタイプの生物学的試料に対して実施される。特定の態様において、その試料は血液である。特定の態様において、その試料は自家血液である。特定の態様において、その樹状細胞はヒトのものである。
【００２６】
[00025]  別の観点において、本明細書において次のことを含むＴリンパ球を活性化させるための方法を提供する：ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの少なくとも一方を含む細胞の集団を提供する；細胞の少なくとも一部の成熟化を誘発するためにその集団の中の細胞の少なくとも一部を活性化させる；および、Ｔリンパ球を樹状細胞に接触させる。
【００２７】
[00026]  別の観点において、本明細書において化合物をＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの少なくとも一方を含む細胞の集団と接触させ、細胞の活性化を検出する工程を含む、樹状細胞を活性化させる化合物を同定するための方法を提供する。
【００２８】
[00027]  別の観点において、本明細書において次のことを含む樹状細胞系を単離するためのインビトロの方法を提供する：対象から樹状細胞前駆体を単離する；単離した細胞を有効量のＧＭ−ＣＳＦを含む適切な培地の中で培養状態に置く（ｐｌａｃｉｎｇ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ）；細胞の顆粒球由来樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）への分化を誘導する；および、対象に特有の樹状細胞系を得るために、細胞を連続的な細胞分裂により増殖させる。特定の態様において、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、および好ましくは少なくとも１００回の細胞分裂の後に細胞を単離する。特定の態様において、その方法はさらに得られた樹状細胞系を様々な樹状細胞系または“クローン”を得るためにクローニングすることを含み、ここで“系のクローニング”はこの系の細胞の個別化、および単一の細胞から得られた遺伝的に同一の細胞を集めることを意味する。特定の態様において、その方法はさらに、興味のある表現型を有する少なくとも１種類のクローンを同定するために様々な樹状細胞系またはクローンの内の１種類を選択することを含む。特定の態様において、選択された細胞はＣＤ４８陰性／ＭＨＣクラスＩ陰性の表現型を有する。
【００２９】
[00028]  別の観点において、本明細書において記述された方法に従って得られた単離された細胞系を本明細書において提供する。
【００３０】
[00029]  別の観点において、本明細書において次のことを含む樹状細胞前駆体（ＤＣ．ｃｏｍ）系を単離するためのインビトロの方法を提供する：対象から樹状細胞前駆体を単離する；単離した細胞を有効量のＧＭ−ＣＳＦを含む適切な培地の中で培養状態に置き、単離した細胞からＤＣ前駆体細胞前駆体（ＤＣ．ｃｏｍ）系を生成し、対象に特有の樹状細胞系を得るために細胞を連続的な細胞分裂により増殖させる。特定の態様において、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、および好ましくは少なくとも１００回の細胞分裂の後に細胞を単離する。特定の態様において、その方法はさらに得られた樹状細胞系を様々な樹状細胞系または“クローン”を得るためにクローニングすることを含み、ここで“系のクローニング”はこの系の細胞の個別化、および単一の細胞から得られた遺伝的に同一の細胞を集めることを意味する。特定の態様において、その方法はさらに、興味のある表現型を有する少なくとも１種類のクローンを同定するために様々な樹状細胞系またはクローンの内の１種類を選択することを含む。特定の態様において、選択された細胞はＣＤ４８陰性／ＭＨＣクラスＩ陰性の表現型を有する。
【００３１】
[00030]  別の観点において、本明細書において次のことを含む樹状細胞を活性化させる化合物を同定するための方法を提供する：化合物をＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣ細胞系と接触させ、細胞系の活性化を検出する。
【００３２】
[00031]  別の観点において、感染性の、または微生物性の因子（細菌、ウイルス、寄生生物、菌類）、癌、移植片対宿主疾患、アレルギーおよび自己免疫疾患と関係する病理の少なくとも１タイプの処置における樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００３３】
[00032]  別の観点において、抗腫瘍免疫療法および細胞療法における樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣの使用を本明細書において提供し、ここでその樹状細胞系ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物は免疫療法薬剤である。
【００３４】
[00033]  別の観点において、癌の処置のための抗腫瘍免疫応答を促進する医薬組成物を製造するための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００３５】
[00034]  別の観点において、感染症の処置のための抗微生物応答を促進する医薬組成物を製造するための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００３６】
[00035]  別の観点において、ウイルス性疾患の処置のための抗ウイルス応答を促進する医薬組成物を製造するための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００３７】
[00036]  別の観点において、非微生物性外因性自己免疫疾患の処置のための応答を促進する医薬組成物を製造するための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００３８】
[00037]  別の観点において、移植片対宿主疾患の処置のための応答を促進する医薬組成物を製造するための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００３９】
[00038]  別の観点において、ＤＣが保護的な、または病原性の役割を果たしていることが既知である疾患におけるｇｒ−ＤＣの数および／または機能を検査するための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００４０】
[00039]  別の観点において、望まれる形の免疫応答を選択的に誘導するように設計された、カスタマイズされた細胞に基づく療法のための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００４１】
[00040]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣを活性化させるように設計された新しいクラスのワクチンアジュバントおよび配合物を開発するための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００４２】
[00041]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣの機能を選択的に増進または阻害する小さい化合物をスクリーニングするための樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用を本明細書において提供する。
【００４３】
[00042]  別の観点において、その集団が検出可能な抗原提示能力を示す；骨髄サプレッサー細胞機能を示す；外来分子を取り込むその能力において効率的である；ＣＤ４８、ＭＨＣ  Ｉ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ１１ｃの内の１種類以上の発現を獲得するかどうかを決定する工程を含む、樹状細胞へ方向付けされた（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ）前駆細胞集団（ＤＣ．ｃｏｍ）の同定のための方法を本明細書において提供する。
【００４４】
[00043]  別の観点において、樹状細胞前駆体集団を少なくともＣＤ４８およびＭＨＣクラスＩマーカーに関してスクリーニングする工程を含む、ＤＣ．ｃｏｍ集団の精製のための方法を本明細書において提供する。
【００４５】
[00044]  別の観点において、樹状細胞集団を少なくともＣ１１ｃ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５マーカーに関してスクリーニングする工程を含む、ｇｒ−ＤＣ集団の精製のための方法を本明細書において提供する。
【００４６】
[00045]  別の観点において、樹状細胞前駆体集団を少なくともＣＤ４８およびＭＨＣクラスＩマーカーに関してスクリーニングする工程を含む、桿状核球集団の精製のための方法を本明細書において提供する。
【００４７】
[00046]  別の観点において、単離されたＤＣ．ｃｏｍ細胞の集団をＧＭ−ＣＳＦ中で培養する、および場合によりその培養物に骨髄（ＢＭ）フィーダー細胞を添加する工程を含む、樹状細胞へ方向付けされた前駆細胞集団（ＤＣ．ｃｏｍ）の拡張のための方法を本明細書において提供する。
【００４８】
[00047]  別の観点において、次のことを含む、前駆体樹状細胞（ＤＣ．ｃｏｍ）を顆粒球樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）の表現型を示すように誘導するための方法を本明細書において提供する：ｉ）（ＣＤ４５．２＋である）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの骨髄（ＢＭ）培養物からＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高（Ｇｒ−１−ｈｉｇｈ）ＤＣ．ｃｏｍ集団を精製する、ｉｉ）工程ｉ）からの集団を、（ＣＤ４５．１＋である）Ｂ６／ＳＪＬマウスから新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養する；ｉｉｉ）抗ＣＤ４５．２および抗ＣＤ４５．１抗体で分染することにより識別されたＤＣ．ｃｏｍ集団に由来する細胞を識別する；ならびにｉｖ）ＣＤ４５．２＋細胞を１種類以上の示されたマーカーの表面発現に関して分析する。特定の態様において、ｇｒ−ＤＣ．ｃｏｍ細胞はＣＤ１１ｃ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＤＥＣ２０５の発現を獲得し、Ｌｙ６Ｇの表面発現を維持する。特定の態様において、細胞は蛍光活性化細胞選別ＦＡＣＳにより精製される。
【００４９】
[00048]  別の観点において、次のことを含む、哺乳類の前駆体樹状細胞から顆粒球樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）の表現型を有する細胞を生産するための方法を本明細書において提供する：ｉ）哺乳類の血液試料から前駆体樹状細胞を含む細胞画分を用意する；ｉｉ）次のことにより、工程（ｉ）の細胞画分の少なくとも１サブセットを単離する：工程ｉ）からの集団を、ＣＤ４５．１＋である新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養する；抗ＣＤ４５．２および抗ＣＤ４５．１抗体で分染することにより識別されたＤＣ．ｃｏｍ集団に由来する細胞を識別する；ならびにＣＤ４５．２＋細胞を１種類以上の示されたマーカーの表面発現に関して分析する；ならびにｉｉｉ）工程（ｉｉ）の接触させた細胞を集める。
【００５０】
[00049]  別の観点において、有効量のＤＣ．ｃｏｍに由来する組成物を投与することを含む、それを必要とする対象において炎症状態を改善するための方法を本明細書において提供する。
【００５１】
[00050]  別の観点において、ＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高−早期樹状細胞を有効量のＧＭ−ＣＳＦと接触させ、それによりその細胞の顆粒球由来樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）への分化を誘導することを含む方法を本明細書において提供し、ここでＬｙ６Ｇがｇｒ−ＤＣの表面上で発現しており、ｇｒ−ＤＣは少なくとも１種類の外来の抗原をＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞に提示する。特定の態様において、有効量はすくなくとも１０ｎｇ／ｍｌであり、その接触は少なくとも１日間である。
【００５２】
[00051]  別の観点において、次のことを含む、樹状細胞（ＤＣ）のＴ細胞との相互作用の作用因子を同定する方法を本明細書において提供する：ｉ）ＤＣ．ｃｏｍ集団をＴ細胞および試験薬剤と混合する、ならびにｉｉ）候補物質がＤＣ．ｃｏｍのＴ細胞との相互作用を変化させるかどうかを決定する、ここで、ＤＣ．ｃｏｍのＴ細胞との相互作用を変化させる試験薬剤は樹状細胞の相互作用の作用因子である。特定の態様において、ＤＣ．ｃｏｍ組成物は検出可能な標識に結合した精製されたＤＣ．ｃｏｍを含む。
【００５３】
[00052]  別の観点において、次のことを含む、樹状細胞（ＤＣ）のＴ細胞との相互作用の作用因子を同定する方法を本明細書において提供する：ｉ）ｇｒ−ＤＣ集団をＴ細胞および試験薬剤と混合する、ならびにｉｉ）候補物質がｇｒ−ＤＣのＴ細胞との相互作用を変化させるかどうかを決定する、ここで、ｇｒ−ＤＣのＴ細胞との相互作用を変化させる試験薬剤は樹状細胞の相互作用の作用因子である。特定の態様において、ｇｒ−ＤＣ組成物は検出可能な標識に結合した精製されたｇｒ−ＤＣを含む。
【００５４】
[00053]  別の観点において、試験薬剤をスクリーニングする方法を本明細書において提供し、ここでＤＣ．ｃｏｍ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤はＤＣ．ｃｏｍ組成物のＴ細胞への結合における変化により同定される。
【００５５】
[00054]  別の観点において、試験薬剤をスクリーニングする方法を本明細書において提供し、ここでＤＣ．ｃｏｍ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤はＤＣ．ｃｏｍに仲介されるＴ細胞の活性化における変化により同定される。
【００５６】
[00055]  別の観点において、試験薬剤をスクリーニングする方法を本明細書において提供し、ここでｇｒ−ＤＣ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤はｇｒ−ＤＣ組成物のＴ細胞への結合における変化により同定される。
【００５７】
[00056]  別の観点において、試験薬剤をスクリーニングする方法を本明細書において提供し、ここでｇｒ−ＤＣ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤はｇｒ−ＤＣに仲介されるＴ細胞の活性化における変化により同定される。
【００５８】
[00057]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣ、ならびにそれらの機能的変種（ｖａｒｉａｎｔ）の内の少なくとも１種類を含む細胞の集団を含む医薬組成物を本明細書において提供する。
【００５９】
[00058]  特定の態様において、その医薬組成物は感染症、癌に関連する疾患、炎症性の障害もしくは疾患、免疫に関連する障害もしくは疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の処置に有用である。
【００６０】
[00059]  別の観点において、対象において対象が次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を有するかどうか、もしくはそれを発現する危険にさらされているかどうかを診断する、予後を決定する、および／またはそれを処置する方法であって、次のことを含む方法を本明細書において提供する：対象からの試験試料においてＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定する、ここで、検査試料におけるそのマーカーのレベルの、対照試料における対応するマーカーのレベルと比較した変化は、対象がその障害を有すること、またはそれを発現する危険にさらされていることのどちらかを示している。特定の態様において、検査試料における少なくとも１種類のマーカーのレベルは、対照試料における対応するマーカーのレベルよりも低い。特定の態様において、検査試料における少なくとも１種類のマーカーのレベルは、対照試料における対応するマーカーのレベルよりも高い。特定の態様において、少なくとも１種類のマーカーは、正常な組織および／または細胞と冒された組織および／または細胞の間で相違して発現している。特定の態様において、試料は血液試料を含む。特定の態様において、試料は血清または血漿の血液試料の内の１種類以上を含む。
【００６１】
[00060]  別の観点において、正常な組織および／または細胞と冒された組織および／または細胞の間で相違して発現しておりＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣ細胞集団の内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含むマーカーを本明細書において提供する。
【００６２】
[00061]  別の観点において、次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を有する対象の予後を決定するための方法であって、対象からの試験試料において少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定する工程を含む方法を本明細書において提供し、ここでそのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する；ならびに、ここで：ｉ）そのマーカーは不都合な予後と関係している；およびｉｉ）検査試料における少なくとも１種類のマーカーのレベルの、対照試料における対応するマーカーのレベルと比較した変化は、不都合な予後を示している。
【００６３】
[00062]  別の観点において、次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を処置する方法であって、少なくとも１種類のマーカーが対象の冒された細胞において対照の細胞と比較して下方制御または上方制御される方法を本明細書において提供し、ここでそのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来し、その方法は次のことを含む：ｉ）その少なくとも１種類のマーカーが冒された細胞において下方制御される場合、対象における冒された細胞の増殖が阻害されるように、対象に有効量の少なくとも１種類の単離されたマーカー、もしくはその単離された変種もしくは生物学的に活性な断片を投与する；またはｉｉ）その少なくとも１種類のマーカーが冒された細胞において上方制御される場合、対象における冒された細胞の増殖が阻害されるように、対象にその少なくとも１種類のマーカーの発現を阻害するための有効量の少なくとも１種類の化合物を投与する。
【００６４】
[00063]  別の観点において、次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を処置する方法であって、少なくとも１種類のマーカーが対象の冒された細胞において対照の細胞と比較して下方制御または上方制御される方法を本明細書において提供し、ここでそのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来し、その方法は次のことを含む：（１）対象における冒された細胞の中の少なくとも１種類のマーカーの、対照の細胞と比較した量を決定する；および（２）次のことにより、冒された細胞の中で発現したマーカーの量を変化させる：（ｉ）冒された細胞の中で発現したマーカーの量が対照の細胞の中で発現したマーカーの量よりも少ない場合、対象に有効量の少なくとも１種類の単離されたマーカーを投与する；または（ｉｉ）冒された細胞の中で発現したマーカーの量が対照の細胞の中で発現したマーカーの量よりも大きい場合、対象に少なくとも１種類のマーカーの発現を阻害するための有効量の少なくとも１種類の化合物を投与する。
【００６５】
[00064]  別の観点において、少なくとも１種類の単離されたマーカーおよび医薬的に許容できるキャリヤーを含む医薬組成物を本明細書において提供し、ここでそのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する。特定の態様において、その少なくとも１種類の単離されたマーカーは、冒された細胞において対照の細胞と比較して下方制御されるマーカーと一致する。
【００６６】
[00065]  別の観点において、細胞に試験薬剤を与え、冒された細胞の中で減少した発現レベルと関係する少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定することを含む、抗炎症剤を同定する方法を本明細書において提供し、ここで冒された細胞の中のそのマーカーのレベルの、対照の細胞と比較した増大は、その試験薬剤が抗炎症癌剤（ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔ）であることを示している；ならびに、ここでそのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する。
【００６７】
[00066]  別の観点において、細胞に試験薬剤を与え、冒された細胞の中で増大した発現レベルと関係する少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定することを含む、抗炎症剤を同定する方法を本明細書において提供し、ここでその細胞の中のそのマーカーのレベルの、対照の細胞と比較した低下は、その試験薬剤が抗炎症剤であることを示しており、ここでそのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する。
【００６８】
[00067]  別の観点において、次のことを含む、炎症性障害を予防、診断および／または処置するための療法の有効性を評価する方法を本明細書において提供する：ｉ）動物にその有効性を評価している療法を受けさせる、およびｉｉ）試験している処置の、その障害の処置または予防における有効性のレベルを、少なくとも１種類のマーカーを評価することにより決定する、ここで、そのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する。
【００６９】
[00068]  特定の態様において、候補である療法薬は、次のものの内の１種類以上を含む：医薬組成物、栄養補強組成物、およびホメオパシー組成物。
【００７０】
[00069]  特定の態様において、その評価されている療法はヒトの対象における使用のためのものである。
【００７１】
[00070]  別の観点において、次のものを含む製品を本明細書において提供する：ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む炎症性障害のためのマーカーに結合する少なくとも１種類の捕捉試薬。
【００７２】
[00071]  別の観点において、炎症性障害を処置するための療法薬のための候補化合物に関するスクリーニングのためのキットを本明細書において提供し、ここでそのキットは次のものを含む：ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーの１種類以上の試薬；ならびに、少なくとも１種類のマーカーを発現する細胞。
【００７３】
[00072]  特定の態様において、そのマーカーの存在は少なくとも１種類のマーカーと特異的に結合する抗体または抗体断片を含む試薬を用いて検出される。
【００７４】
[00073]  別の観点において、炎症性障害または関係する疾患の応答シグナル伝達経路を妨げる薬剤の、個人においてその合併症を処置する、予防する、逆行させる、またはその重症度を制限するための医薬品の製造のための使用を本明細書において提供し、ここでその薬剤はＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む。
【００７５】
[00074]  別の観点において、対象に少なくとも１種類の炎症性応答カスケードを妨げる薬剤を投与することを含む、それを必要とする対象において炎症性障害または関係する合併症を処置する、予防する、逆行させる、またはその重症度を制限する方法を本明細書において提供し、ここでその薬剤はＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む。
【００７６】
[00075]  別の観点において、少なくとも１種類の炎症に関係する疾患の応答カスケードを妨げる薬剤の、対象において炎症に関連する合併症を処置する、予防する、逆行させる、またはその重症度を制限するための医薬品の製造のための使用を本明細書において提供し、ここでその薬剤はＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む。
【００７７】
[00076]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来するマーカーの内の１種類以上のアンチセンス阻害剤を含む組成物を本明細書において提供する。
【００７８】
[00077]  別の観点において、対象に療法上有効量の本明細書で記述した組成物を投与することを含む、それを必要とする対象を処置する方法を本明細書において提供する。特定の態様において、その組成物は予防的に投与される。特定の態様において、その組成物の投与は障害の１種類以上の症状の開始を遅延させる。特定の態様において、その組成物の投与は炎症性障害の発現を阻害する。特定の態様において、その組成物の投与は感染を阻害する。
【００７９】
[00078]  別の観点において、生物学的試料において障害の存在を検出するための方法を本明細書において提供し、その方法は次のことを含む：ｉ）その障害を含んでいる疑いのある生物学的試料をそれに関するマーカーにさらす、およびｉｉ）もしあるならば試料中のそのマーカーの存在または欠如を検出する；ここで、そのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する。特定の態様において、そのマーカーは検出可能な標識を含む。
【００８０】
[00079]  特定の態様において、その方法はさらに、対象からの生物学的試料の中のそのマーカーの量を正常な対象からの対応する生物学的試料の中のそのマーカーの量と比較することを含む。
【００８１】
[00080]  特定の態様において、その方法はさらに、異なる時点で対象から複数の生物学的試料を集め、それぞれの生物学的試料の中のそのマーカーの量を比較してそのマーカーの量が対象において時間の経過につれて増大している、または減少しているかどうかを決定することを含む。
【００８２】
[00081]  別の観点において、対象において炎症性障害を処置するための方法を本明細書において提供し、その方法は次のことを含む：それを必要とする対象に、療法上有効量のＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する炎症性受容体作動薬を投与する。特定の態様において、その受容体作動薬は、ＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣに由来するマーカーの内の１種類以上のアンチセンス阻害剤である。
【００８３】
[00082]  別の観点において、炎症性障害により冒された細胞の分化を誘導するのに有効な療法薬または療法薬の組み合わせを同定するためのインビトロの方法を本明細書において提供し、その方法は次の段階を含む：ｉ）冒された細胞の培養、ｉｉ）少なくとも１種類の化合物を工程ｉ）の培地に添加する、ｉｉｉ）少なくとも１種類のマーカーの、段階（ｉ）および（ｉｉ）の間の発現のレベルの進展を分析する、ならびにｉｖ）段階（ｉ）および（ｉｉ）の間のそのマーカーの発現のレベルの変化を誘導する化合物または化合物の組み合わせを同定する。特定の態様において、段階（ｉｉｉ）は少なくとも１種類のマーカーの発現のレベルの分析を含む。特定の態様において、段階（ｉｖ）は少なくとも１種類のマーカーの発現のレベルを調節する化合物または化合物の組み合わせの同定を含む。特定の態様において、段階（ｉｖ）は少なくとも１種類のマーカーの発現のレベルを低減させる化合物または化合物の組み合わせの同定を含む。
【００８４】
[00083]  特定の態様において、その化合物は炎症性障害の処置のための療法薬である。
【００８５】
[00084]  別の観点において、次のことを含む、炎症性障害を有する対象から冒された組織および／または細胞を分類するための方法を本明細書において提供する：試験細胞集団におけるＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する１種類以上のマーカーの発現を測定する、ここで、試験細胞集団の中の少なくとも１個の細胞は、１種類以上のそのマーカーを発現することができる；そのマーカー（単数又は複数）の発現を、それに関して分類が既知である少なくとも１個の細胞を含む参照細胞集団におけるそのマーカー（単数又は複数）の発現と比較する；ならびに、もし存在するならば、試験細胞集団および参照細胞集団における、その構成するグループから選択された１種類以上のマーカーの発現レベルにおける違いを同定し、それにより対象における炎症性障害を分類する。
【００８６】
[00085]  特定の態様において、試験細胞集団におけるそのマーカー（単数又は複数）の発現における、参照細胞集団と比較した違いは、その試験細胞集団が参照細胞集団からの細胞と異なる分類を有することを示す。
【００８７】
[00086]  特定の態様において、試験細胞集団におけるそのマーカー（単数又は複数）の、参照細胞集団と比較して類似した発現パターンは、その試験細胞集団が参照細胞集団からの細胞と同じ分類を有することを示す。
【００８８】
[00087]  特定の態様において、参照細胞集団は複数の細胞またはデータベースである。
【００８９】
[00088]  特定の態様において、参照細胞集団は次のものからなるグループから選択される：正常な組織からの細胞集団として分類される参照細胞集団、および冒された組織からの細胞集団として分類される参照細胞集団。
【００９０】
[00089]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍ集団を同定および精製するための、定義された表面表現型の使用を本明細書において提供する。
【００９１】
[00090]  別の観点において、桿状核球集団を同定および精製するための、定義された表面表現型の使用を本明細書において提供する。
【００９２】
[00091]  別の観点において、ｇｒ−ＤＣ集団を同定および精製するための、定義された表面表現型の使用を本明細書において提供する。
【００９３】
[00092]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍ集団を拡張するための、ＧＭ−ＣＳＦおよび場合により少なくとも１種類の他のサイトカインの使用を本明細書において提供する。
【００９４】
[00093]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍのｇｒ−ＤＣへの分化を促進するための、ＧＭ−ＣＳＦおよび場合により少なくとも１種類の他のサイトカインの使用を本明細書において提供する。
【００９５】
[00094]  別の観点において、ＣＤ４８、ＭＨＣ  Ｉ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ１１ｃの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、対象中の組織においてＤＣ．ｃｏｍを同定するための方法を本明細書において提供する。
【００９６】
[00095]  別の観点において、Ｌｙ６Ｇの発現に関してスクリーニングする工程を含む、対象中の組織において桿状核球を同定するための方法を本明細書において提供する。
【００９７】
[00096]  別の観点において、ＣＤ１１ｃ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５の内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、対象中の組織においてｇｒ−ＤＣを同定するための方法を本明細書において提供する。
【００９８】
[00097]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ＤＣ．ｃｏｍの拡張を促進または阻害する化合物を同定するための方法を本明細書において提供する。
【００９９】
[00098]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ＤＣ．ｃｏｍのｇｒ−ＤＣへの分化を促進または阻害する化合物を同定するための方法を本明細書において提供する。
【０１００】
[00099]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ＤＣ．ｃｏｍの遺伝子発現プロフィールおよび機能を試験するための方法を本明細書において提供する。
【０１０１】
[00100]  別の観点において、ｇｒ−ＤＣのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ｇｒ−ＤＣの遺伝子発現プロフィールおよび機能を試験するための方法を本明細書において提供する。
【０１０２】
[00101]  別の観点において、それを必要とする対象においてＤＣ．ｃｏｍを刺激する少なくとも１種類の化合物を含むワクチンを本明細書において提供する。
【０１０３】
[00102]  別の観点において、それを必要とする対象においてｇｒ−ＤＣを刺激する少なくとも１種類の化合物を含むワクチンを本明細書において提供する。
【０１０４】
[00103]  別の観点において、それを必要とする対象においてＤＣ．ｃｏｍを刺激する少なくとも１種類の化合物を含む免疫刺激療法組成物を本明細書において提供する。
【０１０５】
[00104]  別の観点において、それを必要とする対象においてｇｒ−ＤＣを刺激する少なくとも１種類の化合物を含む免疫刺激療法組成物を本明細書において提供する。
【０１０６】
[00105]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍの表現型、遺伝子プロフィール、または機能のマーカーとしての使用を本明細書において提供する。
【０１０７】
[00106]  別の観点において、ｇｒ−ＤＣの表現型、遺伝子プロフィール、または機能のマーカーとしての使用を本明細書において提供する。
【０１０８】
[00107]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣの定義された表面表現型の、標的を定めた（ｔａｒｇｅｔｅｄ）遺伝子送達のための使用を本明細書において提供する。
【０１０９】
[00108]  別の観点において、ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣの定義された表面表現型の、標的を定めた薬物送達のための使用を本明細書において提供する。
【０１１０】
[00109]  別の観点において、定義された表面のＤＣ．ｃｏｍ（ｔｈｅ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｔｈｅ  ＤＣ．ｃｏｍ）の、ＤＣに関する直接の前駆体としての使用を本明細書において提供する。
【０１１１】
[00110]  別の観点において、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス系統の、ＤＣ．ｃｏｍ集団を研究するためのモデルとしての使用を本明細書において提供する。
【０１１２】
[00111]  別の観点において、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス系統の、新薬の発見のための道具としての使用を本明細書において提供する。
【０１１３】
[00112]  本発明の他のシステム、方法、特徴、および利点は、下記の図面および詳細な記述の吟味により当業者には明らかであろう、または明らかになるであろう。全てのその追加のシステム、方法、特徴、および利点はこの記述の内に含まれること、本発明の範囲内に含まれること、および添付された特許請求の範囲により保護されることを意図する。
【０１１４】
[00113]  本特許または出願書類は、１個以上のカラーで作成された図面および／または１個以上の写真を含んでいてよい。カラーの図面および／または写真を有するこの特許または特許出願刊行物のコピーは、請求および必要な料金の支払いに応じて特許庁により提供されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】[00114]  図１．  ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス系統のためのコンストラクト：このコンストラクトはＩＬ−βプロモーター駆動ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス系統を生み出すために用いられた。
【図２】[00115]  図２．  ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスに由来するＤＣによるＤｓＲｅｄの発現：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスから生成したＣＤ１１ｃ＋  ＤＣ培養物を、示した濃度でのＬＰＳによる刺激の２４時間後のＤｓＲｅｄの発現に関して調べた。ＤＣはＬＰＳにより刺激するとＤｓＲｅｄ蛍光シグナルを示すことを特筆する。
【図３】[00116]  図３．  ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスからのＢＭ細胞培養物におけるＤｓＲｅｄ蛍光シグナルの検出：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックまたは野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスから単離された骨髄（ＢＭ）細胞を、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦの存在下で２日間培養し、次いでＤｓＲｅｄの発現に関して調べた。ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスから生成したＢＭ培養物のみがＬＰＳ刺激の非存在下においてさえもかなりのＤｓＲｅｄシグナルを示すことを特筆する。
【図４】[00117]  図４．  ＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄの発現に関する速度論：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックから単離されたＢＭ細胞を、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦの存在下で示した期間の間培養し、次いでＤｓＲｅｄの発現に関して調べた。示したデータは、１０６個の開始時のＢＭ細胞あたりのＤｓＲｅｄ陽性細胞の数である（３通りの培養物からの平均±ＳＤ）。開始時のＢＭ細胞集団においてはＤｓＲｅｄ＋の細胞がほとんど完全に存在しないことおよびそれに続く培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞の急速な増加を特筆する。
【図５Ａ】[00118]  図５Ａ−５Ｂ．  ＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞によるＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃの発現：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックから単離されたＢＭ細胞を、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦ、２００ｎｇ／ｍｌ  Ｆｌｔ３リガンド、または１０ｎｇ／ｍｌ  Ｍ−ＣＳＦの存在下または非存在下で示した期間の間培養し、次いでＤｓＲｅｄの発現に関して、さらにＣＤ１１ｂ（図５Ａ）およびＣＤ１１ｃ（図５Ｂ）の表面発現に関して調べた。ＧＭ−ＣＳＦはＢＭ培養の早期におけるＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋細胞の増加、さらに後期におけるＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋およびＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣの数の増大を促進することを特筆する。
【図５Ｂ】[00118]  図５Ａ−５Ｂ．  ＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞によるＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃの発現：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックから単離されたＢＭ細胞を、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦ、２００ｎｇ／ｍｌ  Ｆｌｔ３リガンド、または１０ｎｇ／ｍｌ  Ｍ−ＣＳＦの存在下または非存在下で示した期間の間培養し、次いでＤｓＲｅｄの発現に関して、さらにＣＤ１１ｂ（図５Ａ）およびＣＤ１１ｃ（図５Ｂ）の表面発現に関して調べた。ＧＭ−ＣＳＦはＢＭ培養の早期におけるＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋細胞の増加、さらに後期におけるＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋およびＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣの数の増大を促進することを特筆する。
【図６】[00119]  図６．  ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−集団の、ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣに分化する（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ）可能性：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）中のＣＤ１１ｂ＋細胞を、ＤｓＲｅｄの発現およびＣＤ１１ｃの表面発現に基づいて４種類の画分に選別した。それぞれの画分をＧＭ−ＣＳＦの存在下での培養に戻し、次いで示した時点におけるＤｓＲｅｄおよびＣＤ１１ｃの発現に関して調べた。０日目のプロフォールは、それぞれの選別された集団の純度を表す。ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−集団（“ＤＣ．ｃｏｍ”と表示した）は、ＧＭ−ＣＳＦがある培養状態に置かれるとＤＣマーカーＣＤ１１ｃを発現し始めることを特筆する。
【図７】[00120]  図７．  ＢＭ培養におけるＤＣ．ｃｏｍの出現に関する速度論：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックから単離されたＢＭ細胞を、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦの存在下で示した期間の間培養し、次いでＤＣ．ｃｏｍおよびＤＣ集団の数に関して調べた。示したデータは、１０６個の開始時のＢＭ細胞あたりのＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−のＤＣ．ｃｏｍ細胞（実線）、ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ＋のＤＣ（破線）、およびＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ＋のＤＣ（点線）の数である。培養における最初の２４時間以内のＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−の細胞の急速かつ深い（ｐｒｏｆｏｕｎｄ）増加を特筆する。
【図８】[00121]  図８．  ＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞の増加に対するサイトカインの差次的作用：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックから単離されたＢＭ細胞を、それぞれのサイトカイン（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で２日間培養し、次いで細胞の生存度およびＤｓＲｅｄ蛍光シグナルを示す細胞の％に関して調べた。選ばれたサイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦを含む）のみがＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞の増加を促進することを特筆する。
【図９】[00122]  図９．  ＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞のＧＭ−ＣＳＦに依存する増加に対するサイトカインの差次的作用：示したサイトカインのそれぞれを、ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）を補ったｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスからのＢＭ細胞培養物に、１０ｎｇ／ｍｌで添加した。２日後、試料を細胞の生存度およびＤｓＲｅｄ蛍光シグナルを示す細胞の％に関して調べた。選ばれたサイトカイン（インターフェロン−γを含む）のみがＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞のＧＭ−ＣＳＦに依存する増加を阻害することを特筆する。
【図１０】[00123]  図１０．  ＢＭ培養におけるＣＤ１１ｃ＋のＤＣの増加に対するサイトカインの差次的作用：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックから単離されたＢＭ細胞を、それぞれのサイトカイン（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で２日間培養し、次いで細胞の生存度およびＤＣマーカーＣＤ１１ｃを発現する細胞の％に関して調べた。示したデータは、３通りの培養物からの平均±ＳＤである（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。選ばれたサイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦを含む）のみがＢＭ培養におけるＤＣの増加を促進することを特筆する。
【図１１】[00124]  図１１．  ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−集団の形態学的な特徴：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）中のＣＤ１１ｂ＋細胞を、ＤｓＲｅｄの発現およびＣＤ１１ｃの表面発現に基づいて４種類の画分に選別した。それぞれの画分のサイトスピン（Ｃｙｔｏｓｐｉｎ）プレパラートを、ギームザ染色の後に細胞の形態に関して調べた（上のパネル）。それぞれの画分を、フローサイトメトリーにより細胞の大きさ（ＦＳＣ）および粒状度（ＳＳＣ）に関しても調べた。ＦＡＣＳで精製したＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−細胞（すなわちＤＣ．ｃｏｍ）は一様に特徴的な形態、比較的小さな細胞の大きさ（ＦＳＣ）、および限られた粒状度（ＳＳＣ）を示すことを特筆する。
【図１２】[00125]  図１２．  ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−集団の超微細構造の特徴：ＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−細胞を、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）からＦＡＣＳで精製した。次いで試料を電子顕微鏡の下で調べた。ＦＡＣＳで精製したＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−細胞（すなわちＤＣ．ｃｏｍ）は一様に短いプロセスおよび分葉状の核を示すことを特筆する。
【図１３】[00126]  図１３．  ＤＣ．ｃｏｍの有糸分裂可能性：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）中のＣＤ１１ｂ＋細胞を、ＢｒｄＵでの標識の１８時間後に、ＤｓＲｅｄの発現およびＣＤ１１ｃの表面発現に基づいて４種類の画分に選別した（上のパネル）。あるいは、選別した集団をＢｒｄＵの存在下でさらに１８時間培養した（下のパネル）。次いで試料をＢｒｄＵの取り込みおよびＤＮＡ含有量に関して（７−ＡＡＤ染色により）調べた。示した四角の中の細胞は、高い有糸分裂可能性を有する細胞を表す。ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−細胞（すなわちＤＣ．ｃｏｍ）の比較的限られた有糸分裂可能性を特筆する。
【図１４】[00127]  図１４．  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）中の、ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−であるＤＣ．ｃｏｍ画分および３種類の他の集団を、示した分子の表面発現に関して調べた。アイソタイプを合わせた対照のＩｇＧを用いた染色プロフィールを実線で示す。ＤＣ．ｃｏｍ集団はＭＨＣクラスＩ陰性、Ｇｒ−１陽性、Ｌｙ６Ｇ陽性、Ｌｙ６Ｃ陽性、およびＣＤ４８陰性を含む特徴的な表面表現型により定義することができることを特筆する。
【図１５】[00128]  図１５Ａ−１５Ｂ．  ＤＣ．ｃｏｍの抗原提示能力：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）中のＣＤ１１ｂ＋細胞を、ＤｓＲｅｄの発現およびＣＤ１１ｃの表面発現に基づいて４種類の画分に選別した。それぞれの画分をＯＶＡタンパク質またはＯＶＡペプチドを用いてパルス（ｐｕｌｓｅ）し、次いでＯＴ−Ｉトランスジェニックマウスから精製したＣＤ８  Ｔ細胞（図１５Ａ）またはＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウスから精製したＣＤ４  Ｔ細胞（図１５Ｂ）と共培養した。添加されたＤＣ．ｃｏｍまたは他の集団の数をＸ軸においてプロットする。丸は抗原パルスの無い対照の共培養物を示す。示したデータは、４日目における３Ｈ−チミジンの取り込み（３通りの培養物からの平均±ＳＤ）である。ＤＣ．ｃｏｍ集団は検出可能な抗原提示能力を示さず、一方で２種類のＤＣ集団（ＣＤ１１ｃ＋／ＤｓＲｅｄ＋細胞およびＣＤ１１ｃ＋／ＤｓＲｅｄ−細胞）はタンパク質およびペプチドの抗原をＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞の両方に効率的に提示することを特筆する。
【図１６】[00129]  図１６．  ＤＣ．ｃｏｍにおける骨髄由来サプレッサー細胞機能の欠如：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）中のＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−細胞を、ＤｓＲｅｄの発現に基づいて２種類の画分に選別した。ＤｓＲｅｄ＋の細胞（ＤＣ．ｃｏｍ）（黒丸）およびＤｓＲｅｄ−の細胞（白丸）を、ＯＴ−１トランスジェニックマウスから単離した脾臓細胞と共に、ＯＶＡタンパク質（左のパネル）またはＯＶＡペプチド（右のパネル）の存在下で共培養した。示したデータは、３日目における３Ｈ−チミジンの取り込み（３通りの培養物からの平均±ＳＤ）である。ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−／ＤｓＲｅｄ−の細胞は抗原特異的なＴ細胞の増殖を細胞数に依存する方式で阻害し、一方でＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−／ＤｓＲｅｄ＋の細胞（ＤＣ．ｃｏｍ）は骨髄由来サプレッサー細胞機能を示さないことを特筆する。
【図１７】[00130]  図１７．  ＤＣ．ｃｏｍのエンドサイトーシスの可能性：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（３日目）中のＣＤ１１ｂ＋細胞を、ＤｓＲｅｄの発現およびＣＤ１１ｃの表面発現に基づいて４種類の画分に選別した。それぞれの画分をＦＩＴＣコンジュゲートデキストランと共に１０分間保温した。示したデータは、ＦＩＴＣ−デキストランの取り込みに関するＦＡＣＳプロフィール（上のパネル）および３通りの試料からの中央値の蛍光強度の平均±ＳＤ（下のパネル）である。ＤＣ．ｃｏｍ集団は外来分子を取り込むそれらの能力において他の集団よりもはるかに効率的であることを特筆する。
【図１８】[00131]  図１８．  ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスのリンパ組織において同定されたＤｓＲｅｄ＋の細胞：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス（上）または野生型の対照のマウス（下）のＢＭ、末梢血、脾臓、およびリンパ節から新しく調製した細胞懸濁液を、ＤｓＲｅｄの発現（Ｘ軸）対粒状度（Ｙ軸）に関して調べた。全ての試験した組織においてＤｓＲｅｄ＋の細胞が存在するが、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスからのもののみであることを特筆する。
【図１９】[00132]  図１９．  リンパ組織におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞の同一性：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスのＢＭ、末梢血、脾臓、およびリンパ節から新しく調製した細胞懸濁液を、ＤｓＲｅｄの発現（Ｘ軸）対ＣＤ１１ｂまたはＣＤ１１ｃの表面発現（Ｙ軸）に関して調べた。ＣＤ１１ｂは組織常在性のＤｓＲｅｄ＋の細胞の大部分により発現されており、これは我々のＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞での発見と矛盾しないことを特筆する。
【図２０】[00133]  図２０．  ＢＭ中の常在性ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスから新しく調製した細胞懸濁液を、ＤｓＲｅｄの発現（Ｘ軸）対示した分子に関する表面発現（Ｙ軸）に関して調べた。ＢＭ常在性のＤｓＲｅｄ＋の集団はＢＭ培養物中で同定されたＤＣ．ｃｏｍと識別不能であることを特筆する。
【図２１】[00134]  図２１．  末梢血中の常在性ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスから新しく調製した末梢血試料を、ＤｓＲｅｄの発現（Ｘ軸）対示した分子に関する表面発現（Ｙ軸）に関して調べた。末梢血中のＤｓＲｅｄ＋の集団はＢＭ培養物中で同定されたＤＣ．ｃｏｍと識別不能であることを特筆する。
【図２２】[00135]  図２２．  リンパ節中の常在性ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの鼠径部リンパ節から新しく調製した細胞懸濁液を、ＤｓＲｅｄの発現（Ｘ軸）対示した分子に関する表面発現（Ｙ軸）に関して調べた。リンパ節中のＤｓＲｅｄ＋の集団はＢＭ培養物中で同定されたＤＣ．ｃｏｍと識別不能であることを特筆する。
【図２３】[00136]  図２３Ａ−２３Ｂ．  炎症条件下での皮膚におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞の出現：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスを、耳の皮膚におけるＤｓＲｅｄの発現に関して、オキサゾロン（ＯＸ）の局所的適用の後の異なる時点において共焦点顕微鏡により調べた（図２３Ａ）。野生型のマウスの耳の皮膚を、ＯＸの適用の２４時間後に調べた（図２３Ｂ）。ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの耳の皮膚を、ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）もしくは乳酸の局所的適用またはテープストリッピングの２４時間後に調べた（図２３Ｃ）。スケールバー：５０μｍ。ＤｓＲｅｄ＋の細胞は通常の健康な皮膚においても稀に見つかるが、それらは全ての試験した炎症条件下で急速に出現することを特筆する。
【図２４】[00137]  図２４．  炎症性皮膚病変において出現しているＤｓＲｅｄ＋の細胞の位置：ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスを、耳の皮膚におけるＤｓＲｅｄの発現に関して、局所的ＯＸ適用の２４時間後に共焦点顕微鏡により調べた。示したデータは、皮膚表面からの示した深度におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞のｚ軸局在（ｚ−ａｘｉｓ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）である。スケールバー：５０μｍ。表皮区画（０から３０μｍまでの範囲）においてわずかなＤｓＲｅｄ＋の細胞が見つかるが、ＤｓＲｅｄ＋の細胞の大部分は真皮区画（３０から７０μｍまでの範囲）において、毛嚢の周辺に優先的に位置している。皮膚の表面で観察される蛍光シグナルは、毛嚢および角質層（死んだケラチノサイト（ｋｅｒａｔｕｎｏｃｙｔｅｓ）で構成される最も外側の層）と関係する自己蛍光である。
【図２５】[00138]  図２５Ａ−２５Ｄ．  ＤｓＲｅｄの蛍光シグナルとＩＬ−βの産生の間の相関：野生型のマウスおよびｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスに、耳の皮膚において、ＯＸまたはビヒクルのみの局所的適用を受けさせた。耳の皮膚の試料におけるＩＬ−β  ｍＲＮＡの発現を、ＯＸまたはビヒクルのみの局所的適用の２４時間後に、リアルタイムＰＣＲにより調べた（図２５Ａ）。野生型のマウス（図２５Ｂ）およびｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス（図２５Ｃ）において、耳の皮膚におけるＯＸまたはビヒクルのみの適用の後の示した時点で、我々は耳の皮膚の抽出物中のＩＬ−βタンパク質のレベルをＥＬＩＳＡにより調べた。図２５Ｄにおいて、我々はＯＸで処理した（黒い記号）またはビヒクルで処理した（白い記号）野生型のマウス（三角）およびｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス（丸）からの皮膚の抽出物におけるＤｓＲｅｄの蛍光シグナルも測定した。示したデータはグループあたり３匹のマウスからの平均±ＳＤである（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。ＤｓＲｅｄの蛍光シグナルは組織中のＩＬ−βの産生とよく相関していることを特筆する。
【図２６】[00139]  図２６Ａ−２６Ｃ．  表皮区画において出現しているＤｓＲｅｄ＋の細胞の表面表現型：表皮細胞の懸濁液を、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの耳の皮膚から、局所的ＯＸ処理の後の示した時点において調製し、ＤｓＲｅｄの発現に関して調べた（図２６Ａ）。野生型のマウスまたはｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスからの表皮細胞の懸濁液を、ＤｓＲｅｄの発現およびＣＤ４５の発現に関しても調べた（図２６Ｂ）。上記の実験において、ＣＤ４５＋の白血球集団を示したマーカーの発現に関して調べた（図２６Ｃ）。ＯＸ処理が、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＧｒ−１＋であるＤｓＲｅｄ表皮細胞の数の時間に依存する増大を誘導することを特筆する。
【図２７】[00140]  図２７Ａ−２７Ｃ．  真皮区画において出現しているＤｓＲｅｄ＋の細胞の表面表現型：真皮細胞の懸濁液を、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの耳の皮膚から、局所的ＯＸ処理の後の示した時点において調製し、ＤｓＲｅｄの発現に関して調べた（図２７Ａ）。野生型のマウスまたはｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスからの真皮細胞の懸濁液を、ＤｓＲｅｄの発現およびＣＤ４５の発現に関しても調べた（図２７Ｂ）。上記の実験において、ＣＤ４５＋の白血球集団を示したマーカーの発現に関して調べた（図２７Ｃ）。ＯＸ処理が、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、およびＧｒ−１＋であるＤｓＲｅｄ真皮細胞の数の時間に依存する増大を誘導することを特筆する。
【図２８】[00141]  図２８．  野生型のマウスにおけるＤＣ．ｃｏｍの同定：野生型のＣ５７ＢＬ／６マウスから生成した、ＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物（１日目）を、Ｇｒ−１およびＣＤ４８の発現に関して調べた。次いでＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高集団を示した表面マーカーの発現に関して調べた。野生型のマウスにおいて同定されたＤＣ．ｃｏｍ集団は、元はｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスを用いて同定されたＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍ集団と識別不能であることを特筆する。
【図２９】[00142]  図２９Ａ−２９Ｂ．  野生型のマウスから精製したＤＣ．ｃｏｍ集団の形態学的な特徴：ＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高集団を、野生型のＣ５７ＢＬ／６マウスのＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物からＦＡＣＳ精製した。次いで試料をＨ＆Ｅ染色のために処理した。事実上全ての細胞が帯型の分葉状の核を示しており、従って、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスから精製したＤＣ．ｃｏｍ細胞に似ていることを特筆する。
【図３０】[00143]  図３０Ａ−３０Ｂ．  ＢＭフィーダー細胞と共培養している間のＤＣ．ｃｏｍの分化：ＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高ＤＣ．ｃｏｍ集団を、（ＣＤ４５．２＋である）Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＢＭ培養物からＦＡＣＳ精製し、次いで（ＣＤ４５．１＋である）Ｂ６／ＳＪＬマウスからの新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養した。ＤＣ．ｃｏｍ集団に由来する細胞は、抗ＣＤ４５．２および抗ＣＤ４５．１抗体で分染することによりフィーダーと識別することができる（図３０Ａ）。この系における６日間の共培養の後、ＣＤ４５．２＋細胞を示したマーカーの表面発現に関して分析した（図３０Ｂ）。ＤＣ．ｃｏｍ細胞がＣＤ１１ｃ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＤＥＣ２０５および他のＤＣマーカーを獲得する一方でＬｙ６Ｇの表面発現を維持していることを特筆する。
【図３１】[00144]  図３１Ａ−３１Ｂ．  ＤＣ．ｃｏｍ由来ＤＣの形態：ＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高ＤＣ．ｃｏｍ集団を、（ＣＤ４５．２＋である）Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＢＭ培養物からＦＡＣＳ精製し、次いで（ＣＤ４５．１＋である）Ｂ６／ＳＪＬマウスからの新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養した。この系における６日間の共培養の後、ＣＤ４５．２＋細胞をＦＡＣＳ精製し、Ｈ＆Ｅ染色のために処理した。細胞の大部分がＤＣの特徴的な形態を示している一方で少数の細胞が非常に多くの細胞質顆粒を示していることを特筆する。
【図３２】[00145]  図３２．  ｇｒ−ＤＣ対ｍｏ−ＤＣによるＬｙ６Ｇの差次的発現：野生型のマウスのＢＭから新しく単離したＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−／Ｌｙ６Ｇ−の単球を、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間培養した。ＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高ＤＣ．ｃｏｍ集団を、（ＣＤ４５．２＋である）Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＢＭ培養物からＦＡＣＳ精製し、（ＣＤ４５．１＋である）Ｂ６／ＳＪＬマウスからの新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養した。得られた単球由来ＤＣ（ｍｏ−ＤＣ）およびＤＣ．ｃｏｍ由来ＤＣ（すなわち、共培養物中のＣＤ４５．２＋細胞であり、“ｇｒ−ＤＣ”と表示する）を、次いでＬｙ６Ｇの表面発現に関して比較した（黒いヒストグラム）。白いヒストグラムは、アイソタイプを合わせた対照のＩｇＧを用いた染色パターンを示す。Ｌｙ６Ｇの発現は２種類のＤＣサブセットを識別するのに用いることができることを特筆する。
【図３３】[00146]  図３３．  ＤＣ．ｃｏｍ由来ＤＣの抗原提示能力：ＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高ＤＣ．ｃｏｍ集団を、（ＣＤ４５．２＋である）Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＢＭ培養物からＦＡＣＳ精製し、（ＣＤ４５．１＋である）Ｂ６／ＳＪＬマウスからの新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で６日間共培養した。ＣＤ４５．２＋細胞をＦＡＣＳ精製し、ＯＶＡタンパク質（左のパネル）またはＯＶＡペプチド（右のパネル）を用いてパルスし、次いでＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウスから精製したＣＤ４  Ｔ細胞（上のパネル）またはＯＴ−Ｉトランスジェニックマウスから精製したＣＤ８  Ｔ細胞（下のパネル）と共培養した。添加したｇｒ−ＤＣの数／ウェルをＸ軸においてプロットした。三角はｇｒ−ＤＣにＴ細胞を加えた抗原の非存在下での対照の共培養物を示す。丸はＴ細胞無しのｇｒ−ＤＣのみの対照培養物を示す。示したデータは、４日目における３Ｈ−チミジンの取り込み（３通りの培養物からの平均±ＳＤ）である。ＤＣ．ｃｏｍに由来するＤＣ（すなわちｇｒ−ＤＣ）はＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方に効率的にＯＶＡ抗原を提示することを特筆する。
【図３４】[00147]  図３４．  野生型のマウスの脾臓におけるＤＣ．ｃｏｍ集団の同定：野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスから新しく集めた粗精製の脾臓細胞を、ＣＤ４８陰性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞およびＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高細胞の存在に関して調べた。脾臓細胞はＤＣ．ｃｏｍの特徴的な表現型を示す小さい画分（０．５％）の細胞を含むことを特筆する。
【図３５】[00148]  図３５．  野生型のマウスの脾臓における顆粒球由来ＤＣの同定：野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスから新しく集めた粗精製の脾臓細胞を、ＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋／Ｌｙ６Ｇ＋細胞の存在に関して調べた。右下の角のパネルは、ＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋集団内のＬｙ６Ｇの発現を示す。ＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋脾臓ＤＣのかなりの割合（２．５％）が顆粒球由来ＤＣに関するマーカーであるＬｙ６Ｇを発現していることを特筆する。
【図３６】[00149]  図３６．  野生型のマウスのリンパ節における顆粒球由来ＤＣの不在：野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスから新しく単離した粗精製のリンパ節細胞を、ＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣクラスＩＩ＋／Ｌｙ６Ｇ＋細胞の発現に関して調べた。顆粒球由来ＤＣはリンパ節では定常状態においてほとんど検出できないことを特筆する。
【図３７】[00150]  図３７：  ヒト末梢血におけるＤＣ．ｃｏｍ集団の同定：ヒト末梢血試料を、ＣＤ４８およびＭＨＣクラスＩの発現に関して調べた。ＣＤ４８−およびＭＨＣクラスＩ−の二重陰性であり大きさの小さい集団は、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスにおいて同定されたマウスのＤＣ．ｃｏｍと識別不能な一様な表面表現型を示す。
【図３８】[00151]  図３８：  表１−  ＤＣ．ｃｏｍ細胞の数（×１０６）。ＩＬ−１β−ＤｓＲｅｄマウスから単離したＢＭ細胞を、ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）、Ｆｌｔ３Ｌ（２００ｎｇ／ｍｌ）、Ｍ−ＣＳＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）またはビヒクルのみと共に５日間培養した。ＤＣ．ｃｏｍの数を、２日ごとにフローサイトメトリーにより分析した。
【図３９】[00152]  図３９：  表２−  四（４）種類の集団の間でのＴｏｌｌ様受容体およびＣＣケモカイン受容体の相対的なｍＲＮＡ発現。ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）と共に３日間培養したＢＭ細胞を、ＣＤ１１ｃおよびＤｓＲｅｄの発現に基づいて４種類の画分にＦＡＣＳ精製した。精製の後、全ＲＮＡを抽出し、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを実行して示した遺伝子の相対的な発現レベルを調べた。ＤＣ．ｃｏｍ画分は独特の遺伝子発現プロフィールにより他の画分から識別可能であることを特筆する。
【図４０】[00001]  図４０：  表３−  四（４）種類の集団の間のサイトカインのプロフィール。ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）と共に３日間培養したＢＭ細胞を、ＣＤ１１ｃおよびＤｓＲｅｄの発現に基づいて４種類の画分にＦＡＣＳ精製した。精製の後、４種類の画分をリポ多糖（ＬＰＳ）（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＣｐＧ（１０００ｎＭ／ｍｌ）と共に、または刺激無しで、２４時間培養し、培養上清を示したサイトカインに関してＥｘｃｅｌｌ  Ａｒｒａｙ（商標）により調べた。
【図４１−１】[00002]  図４１Ａ−４１Ｃ：  表４Ａ−４Ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄由来サプレッサー細胞集団と比較した。ＤＣ．ｃｏｍは表面表現型において既知のＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄サプレッサー細胞集団のいずれとも識別可能であった。
【図４１−２】[00002]  図４１Ａ−４１Ｃ：  表４Ａ−４Ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄由来サプレッサー細胞集団と比較した。ＤＣ．ｃｏｍは表面表現型において既知のＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄サプレッサー細胞集団のいずれとも識別可能であった。
【図４１−３】[00002]  図４１Ａ−４１Ｃ：  表４Ａ−４Ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄由来サプレッサー細胞集団と比較した。ＤＣ．ｃｏｍは表面表現型において既知のＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄サプレッサー細胞集団のいずれとも識別可能であった。
【図４１−４】[00002]  図４１Ａ−４１Ｃ：  表４Ａ−４Ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄由来サプレッサー細胞集団と比較した。ＤＣ．ｃｏｍは表面表現型において既知のＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄サプレッサー細胞集団のいずれとも識別可能であった。
【図４１−５】[00002]  図４１Ａ−４１Ｃ：  表４Ａ−４Ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄由来サプレッサー細胞集団と比較した。ＤＣ．ｃｏｍは表面表現型において既知のＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄サプレッサー細胞集団のいずれとも識別可能であった。
【図４１−６】[00002]  図４１Ａ−４１Ｃ：  表４Ａ−４Ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄由来サプレッサー細胞集団と比較した。ＤＣ．ｃｏｍは表面表現型において既知のＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋骨髄サプレッサー細胞集団のいずれとも識別可能であった。
【図４２−１】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【図４２−２】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【図４２−３】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【図４２−４】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【図４２−５】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【図４２−６】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【図４２−７】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【図４２−８】[00003]  図４２Ａ−４２Ｄ：  表５Ａ−５Ｄ−  ＤＣ．ｃｏｍの表面表現型を、報告されているＤＣ前駆体と比較した。ＤＣ．ｃｏｍはいずれの他のＤＣ前駆体とも異なっている。
【発明を実施するための形態】
【０１１６】
[00004]  この開示全体を通して、様々な刊行物、特許および公開された特許明細書を、確認する引用により参照する。これらの刊行物、特許および公開された特許明細書の開示を、この発明が関係する技術の状態をより完全に記述するために、本明細書により本開示の中に援用する。
【０１１７】
[00005]  樹状細胞（ＤＣ）は主要な抗原提示細胞として機能し、それは感染性微生物、ウイルス、癌細胞、自己免疫疾患、移植片拒絶、移植片対宿主拒絶疾患、および他の有害である可能性がある抗原に対する先天性および適応免疫応答の両方の誘導において保護的な役割を果たしている。定常状態におけるＤＣは、自己抗原および無害な環境抗原に対する免疫寛容の維持において同様に重要な役割を果たしている。しかし、ＤＣの発生に関する経路はまだ比較的はっきりしないままである。
【０１１８】
[00006]  本明細書で記述するのは、ＤＣ．ｃｏｍと名付けたＤＣへ方向付けされた前駆体集団が以前に認められていなかったＤＣのサブセットへと分化する新しいＤＣ発生経路である。ＤＣ．ｃｏｍはマウスＩＬ−１βプロモーターの制御下でＤｓＲｅｄ遺伝子を発現するトランスジェニックマウス系統を用いて発見された。同じ集団は、特徴的な表面表現型、すなわちＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−／Ｌｙ６Ｇ＋／ＭＨＣ  Ｉ−／ＭＨＣ  ＩＩ−に基づいて、健康なマウスにおいて、および健康なヒトにおいても発見されている。
【０１１９】
[00007]  ＤＣ．ｃｏｍ集団をＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養した場合、それは特徴的な樹状突起の形態、ＤＣのマーカー（ＣＤ１１ｃ、ＤＥＣ２０５、ＣＤ８６、およびＭＨＣ  ＩＩ）ならびに外来のタンパク質およびペプチド抗原をＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方に提示する強力な能力を示すＤＣに分化する。
【０１２０】
[00008]  ＤＣ．ｃｏｍ集団に由来するＤＣは、一般に顆粒球のマーカーであると考えられているＬｙ６Ｇの表面発現により、単球から生じた従来型のＤＣと異なっている。実際、ＤＣ．ｃｏｍは、Ｌｙ６Ｇの独特の表面発現によってだけでなく光学および電子顕微鏡レベルの両方における形態学的特徴においても、好中球の直接の前駆体集団である“桿状核球”に似ている。
【０１２１】
[00009]  本明細書では、好中球前駆体が顆粒球由来ＤＣ（ｇｒ−ＤＣ）と名付けた独特のＤＣサブセットを生じさせる新規のＤＣ発生経路も記述する。
【０１２２】
[00010]  我々は、好中球前駆細胞集団（桿状核球として知られる）に似た独特のＤＣへ方向付けされた集団（ＤＣ．ｃｏｍと名付けられた）が以前に同定されたＤＣ亜集団のいずれとも異なるＤＣサブセット（ｇｒ−ＤＣと名付けられた）に分化する新規のＤＣ発生経路を同定した。本明細書において、我々はＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣ集団の同定、精製、拡張、および使用のための方法を記述する。
【０１２３】
[00011]  急速かつ深いＩＬ−１β  ｍＲＮＡの発現がＤＣの活性化の印であるという観察（Ｍｉｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  ２００５ｂ）に基づき、我々は最近、マウスＩＬ−１βプロモーターの制御下で黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）を発現する安定なＤＣ系ＸＳ１０６（図１）を設計することによりＤＣバイオセンサークローンを開発した。
【０１２４】
[00012]  得られたＸＳ１０６−ｐＩＬ１−ＹＦＰバイオセンサークローンは、ＬＰＳ、同様にＤＣ刺激シグナルを送達することが既知である他の薬物で刺激するとＹＦＰ蛍光シグナルを示す（Ｍｉｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  ２００５ａ）。このシステムの主な制限は長期ＤＣ系の使用であり、それは体内の本物のＤＣ集団と完全には等価ではない可能性がある。これを克服するため、我々は同じＩＬ−１βプロモーターの制御下でＤｓＲｅｄ遺伝子を発現するトランスジェニックマウス系統を構築した。次いで骨髄（ＢＭ）細胞を外来のＧＭ−ＣＳＦの存在下で５〜６日間培養することにより、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスからＤＣ培養物を生成した。ＸＳ１０６−ｐＩＬ１−ＹＦＰ  ＤＣバイオセンサークローンを用いた我々の観察を裏づけるように、６日目のＢＭ培養物中のＣＤ１１ｃ＋  ＤＣ集団はＬＰＳ処理に応答して著しく高いＤｓＲｅｄシグナルを示した（図２）。
【０１２５】
[00013]  強いＤｓＲｅｄの発現がＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物においてＬＰＳ刺激の非存在下でも検出可能になったという我々の発見は、全く予期されていなかった（図３）。時間速度論の実験は、ＢＭ培養物中のＤｓＲｅｄ＋の細胞の急速（２４〜４８時間以内）かつ際立った（＞２００倍）増加を明らかにした（図４）。
【０１２６】
[00014]  表面表現型の分析は、ＤｓＲｅｄ＋の細胞の圧倒的大部分（＞９５％）が、外来の顆粒球−マクロファージコロニー−刺激因子ＧＭ−ＣＳＦの存在下で、５日間の培養期間を通してＣＤ１１ｂ（骨髄細胞のマーカー）を発現することを明らかにした（図５Ａ）。それに対し、ＣＤ１１ｃ（最も信頼できるＤＣマーカー）は１日目においてＤｓＲｅｄ＋の細胞の約５０％において検出され、５日目においてＤｓＲｅｄ＋の集団の中のＣＤ１１ｃ＋の細胞の割合は９０％まで増大した（図５Ｂ）。
【０１２７】
[00015]  ＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋の集団内のＣＤ１１ｃの発現の観察されたタイムコースは、ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−の細胞がＣＤ１１ｃ＋  ＤＣの前駆体である可能性があることを示唆した。直接試験するため、我々は３日目のＢＭ培養物から、ＤｓＲｅｄおよびＣＤ１１ｃの発現に基づき、フローサイトメトリーを用いて４種類の異なる細胞集団を精製し、添加したＧＭ−ＣＳＦの存在下での培養にそれらを戻した（図６）。ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−の画分（ＤＣ．ｃｏｍと表示した）は、それに続く培養の３日以内に一様なＣＤ１１ｃの発現を獲得した。ＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ−の細胞の一部は、２４時間以内で早くもＤｓＲｅｄを発現し始めた。ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ＋およびＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ＋のＤＣ集団は両方ともＣＤ１１ｃの発現を維持していたが、ＤｓＲｅｄの発現は前者（または後者）の集団において検出不能（または検出可能）になった。これらの観察は、ＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−の集団がＤＣの直接の前駆体であることを示している。従って、我々はこのＤＣへ方向付けされた集団を“ＤＣ．ｃｏｍ”と名付けた。
【０１２８】
[00016]  ＢＭ細胞をＧＭ−ＣＳＦ存在下で培養した場合、ＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−  ＤＣ．ｃｏｍ細胞の数は最初の２４時間で劇的に（４０倍）増大する（図７）。それに対し、ＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣの数は培養の最初の６日間の間で次第に増大する。
【０１２９】
[00017]  ＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−／の細胞の出現は、ＢＭ培養条件に依存することが分かった（図５および図３８−表１）。ＢＭ細胞を、一般にＤＣの生存および増殖を促進することも既知であるＦｌｔ３リガンドまたはＭ−ＣＳＦの存在下で培養した場合、ごくわずかな数の細胞がＤＣ．ｃｏｍの表現型（ＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−）を示した。
【０１３０】
[00018]  我々は次に、６５種類の異なるサイトカインをＢＭ培養におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞の出現への作用に関してそれぞれ試験した（図８）。ＧＭ−ＣＳＦに加え、選ばれたサイトカインはＤｓＲｅｄ＋の細胞の出現または生成を支持するようであった。同じ６５種類のサイトカインをＧＭ−ＣＳＦと組み合わせて試験した場合、インターフェロンγを含む選ばれたサイトカインがＤｓＲｅｄ＋の細胞のＧＭ−ＣＳＦに依存する発生を阻害することが分かった（図９）。興味深いことに、（図１０）において、ＢＭ培養においてＤｓＲｅｄの発現を促進するものと同じサイトカイン（ＩＬ−３、ＩＬ−１８およびＩＬ−３３）が、ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣの発生も支持した。
【０１３１】
[00019]  これらのデータは、ＤＣ．ｃｏｍ集団の発生およびそのそれに続くＤＣへの分化が共にサイトカインにより制御されていることを実証している。同時に、そのデータは、類似のアッセイ系をＤＣ．ｃｏｍ細胞の生成および分化を増進および／または阻害する化合物を同定するのに用いることができることを示している。
【０１３２】
[00020]  ＤｓＲｅｄおよびＣＤ１１ｃの発現に基づき、我々はＧＭ−ＣＳＦを補ったＢＭ培養物から４種類のＣＤ１１ｂ＋集団を精製した。そのＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−のＤＣ．ｃｏｍ集団は、形態および細胞の大きさにおいてＣＤ１１ｃ＋  ＤＣ画分と異なっていた（図１１）。電子顕微鏡レベルで、ＤＣ．ｃｏｍ画分はさらに、分葉状の核および少数の細胞質顆粒の封入により特徴づけられる独特の形態を示した（図１２）。重要なことだが、ＤＣ．ｃｏｍ集団は表面表現型、細胞の大きさ、粒状度、および形態に関して極めて均質であり、これは我々の精製計画が効率的であることを示している。
【０１３３】
[00021]  我々は、上記の４種類の画分の有糸分裂可能性を、ＢｒｄＵの取り込みおよび７−ＡＡＤ染色により調べた（図１３）。ＤＣ．ｃｏｍ集団はＢＭ培養におけるＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ−集団と比べて比較的限られた有糸分裂可能性を示した。
【０１３４】
[00022]  ＤＣ．ｃｏｍ集団は、表面表現型に基づいてＣＤ１１ｃ＋  ＤＣと識別可能である（図１４）。ＤＣ上で比較的高レベルで発現しているＣＤ１１ｃ、ＣＤ４８、ならびにＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩの分子は、ＤＣ．ｃｏｍ集団において検出不能である。逆に、ＤＣ．ｃｏｍ集団のみが一様にＧｒ−１およびＬｙ６Ｇを高レベルで発現する。抗Ｇｒ−１抗体は２種類の異なる抗原Ｌｙ６ＧおよびＬｙ６Ｃを認識することも特筆すべきである。選ばれた単球およびＤＣサブセットがＬｙ６Ｃを発現することが示されているが、単球またはＤＣによるＬｙ６Ｇの発現の証拠を提供している報告は存在しない。従って、Ｌｙ６Ｇは一般に顆粒球の高度に特異的なマーカーであると考えられている。
【０１３５】
[00023]  ＤＣ．ｃｏｍ集団は、ＯＶＡタンパク質およびペプチドを（事実上全てのＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞がＯＶＡペプチドを認識する）ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞受容体トランスジェニックマウスから単離されたＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞に提示する能力により測定した際に、検出可能な抗原提示能力を示さなかった。それとは明らかに異なって、ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣおよびＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣは、ＯＶＡタンパク質およびペプチドをＣＤ８細胞（図１５Ａ）およびＣＤ４  Ｔ細胞（図１５Ｂ）の両方に提示する強い能力を示した。
【０１３６】
[00024]  ＤＣ．ｃｏｍ細胞によるＣＤ１１ｂおよびＧｒ−１の表面発現は、“骨髄由来サプレッサー細胞”として知られる最近同定された白血球集団へのそれらの機能的類似を示唆している可能性がある（Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ，  ２００７）（Ｍａｒｈａｂａ  ｅｔ  ａｌ，  ２００７）（Ｍａｋａｒｅｎｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ，  ２００６）（Ｇａｌｌｉｎａ  ｅｔ  ａｌ，  ２００６）（Ｂｕｎｔ  ｅｔ  ａｌ，  ２００６）（Ｓｉｎｈａ  ｅｔ  ａｌ，  ２００５）。重要なことだが、ＢＭ培養物からのＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ−画分はＯＴ−Ｉ  ＣＤ８  Ｔ細胞の抗原特異的増殖を阻害する能力を示したが、ＣＤ１１ｂ＋／ＤｓＲｅｄ＋／ＣＤ１１ｃ−画分は示さなかった。従って、新規に同定されたＤＣ．ｃｏｍ集団は骨髄由来サプレッサー細胞とは機能的に異なっている（図１６）。
【０１３７】
[00025]  ＧｅｎｅＣｈｉｐ分析は、遺伝子発現プロフィールに関する４種類の画分の間の際立った多様性を明らかにした。実際、リアルタイムＰＣＲ分析は、ＤＣ．ｃｏｍがＴｏｌｌ様受容体およびケモカイン受容体発現プロフィールにおいて他の集団と異なるというこれらの発見の一部を確かめた（図４０−表２）。
【０１３８】
[00026]  ＣＤ１１ｃ＋  ＤＣは、ＬＰＳまたはＣｐＧオリゴヌクレオチドによる刺激の後に、大量のサイトカイン、例えばＩＬ−６およびＴＮＦαを作り出した。それに対し、ＤＣ．ｃｏｍ画分はごく少量のこれらの炎症誘発性サイトカインを放出した。
【０１３９】
[00027]  ＤＣ．ｃｏｍ画分の最も際立った特徴は、標準的なＦＩＴＣ−デキストラン取り込みアッセイにより調べられるその強力な外来分子を内在化する能力である（図１７）。
【０１４０】
[00028]  ＢＭ培養物からのＤＣ．ｃｏｍ画分の単離に加え、我々は類似の集団をリンパ組織において同定することができることを決定した。ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスにおいて、ＤｓＲｅｄの発現がＢＭ、末梢血、脾臓、およびリンパ節を含む様々なリンパ組織において検出可能であった（図１８）。さらに、それらの組織常在性のＤｓＲｅｄ＋の細胞は事実上、細胞の大きさおよび表面の表現型に関して、元はＢＭ培養物中で同定されたＤＣ．ｃｏｍ集団と識別不能であった（図１９〜２２）。
【０１４１】
[00029]  リンパ組織中のＤＣ．ｃｏｍ細胞の存在を確かめたので、我々は次に上皮組織におけるそれらの存在を調べた。ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスの耳の皮膚において、定常状態ではＤｓＲｅｄの細胞は見つからなかった（図２３）。しかし、我々は感作性化学物質（オキサゾロンおよびＤＮＦＢ）または皮膚に刺激を与える化学物質（乳酸）の局所的適用の後のＤｓＲｅｄ＋の細胞の急速な出現を観察した。機械的処理（テープストリッピング）によって引き起こされる皮膚の炎症も、皮膚におけるＤｓＲｅｄ＋の細胞の出現を誘導した。従って、我々はＤｓＲｅｄ＋の細胞は上皮組織において炎症条件下でのみ出現すると結論付ける。
【０１４２】
[00030]  皮膚において、ＤｓＲｅｄ＋の細胞は主に真皮区画において、毛嚢の周辺で優先的に見つかった（図２４）。皮膚をモデル組織として用いて、我々はＤｓＲｅｄの蛍光シグナルがトランスジェニックマウスにおけるＩＬ−１βの産生と確かに相関していることも確かめた（図２５）。
【０１４３】
[00031]  これらのＤｓＲｅｄ＋の皮膚細胞のＦＡＣＳ分析は、それらの我々がＢＭ培養系において同定したＤＣ．ｃｏｍ集団との表現型の類似を明らかにした（図２６および図２７）。
【０１４４】
[00032]  我々は、野生型のマウスでＤｓＲｅｄの蛍光シグナルの非存在下においても類似の集団を同定することができることを決定した。我々は、ＤＣ．ｃｏｍ集団は２種類の表面マーカーＣＤ４８およびＧｒ−１（またはＬｙ６Ｇ）のみを用いることにより同定および精製できることを見出した。野生型のマウスからのＢＭ培養物中のＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高集団は、元はｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄマウス系を用いて同定されたＤＣ．ｃｏｍと同じ表現型を示した（図２８）。
【０１４５】
[00033]  さらに、野生型ＢＭ培養物から精製したＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高集団は、ＤＣ．ｃｏｍ細胞と同じ形態学的特徴を示した（図２９）。この集団のＨ＆Ｅ染色パターンは、好中球の直接の前駆体である“桿状核球”に関して報告されたＨ＆Ｅ染色パターンとほとんど識別不能であった。ＤＣ．ｃｏｍによる顆粒球マーカー（Ｌｙ６Ｇ）の表面発現はさらにＤＣ．ｃｏｍ集団が桿状核球または未成熟な顆粒球と密接に似ているという考えを支持する。
【０１４６】
[00034]  同じＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高集団は、ＣＤ１１ｃ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６、およびＤＥＣ２０５を発現するＤＣにも分化した（図３０）。重要なことだが、（ＤＣ．ｃｏｍが発現する）Ｌｙ６ＧはＤＣ．ｃｏｍに由来するそれらのＤＣの表面上に残っていた。さらに、そのＤＣ．ｃｏｍをＧＭ−ＣＳＦと共に培養した場合、細胞の大部分が特徴的な樹状突起の形態を発現し始めた（図３１）。一方で、少数の細胞が典型的な顆粒球に似た細胞に分化した。これらのデータは、ＤＣ．ｃｏｍが以前には認められていなかったＤＣのサブセットを生じさせることを示しており、我々はそれを顆粒球由来ＤＣまたはｇｒ−ＤＣと名付けた。
【０１４７】
[00035]  単球に由来する従来型のＤＣは検出可能なＬｙ６Ｇの発現を示さなかった（図３２）。それとは明らかに異なって、ＤＣ．ｃｏｍに由来するｇｒ−ＤＣは一様にＬｙ６Ｇを高レベルで発現していた。従って、Ｌｙ６Ｇはｇｒ−ＤＣサブセットを他のＤＣサブセットと識別する独特のマーカーとして用いることができる。
【０１４８】
[00036]  ＤＣ．ｃｏｍから生成したｇｒ−ＤＣ調製物は、外来の抗原をＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞の両方に提示する強い能力を示した（図３３）。
【０１４９】
[00037]  同じマーカー（すなわちＣＤ１１ｂ、ＣＤ４８、およびＧｒ−１）を用いて、我々は野生型マウスの脾臓においてＤＣ．ｃｏｍ集団を同定した（図３４）。
【０１５０】
[00038]  さらに、マーカーの別のセット（すなわちＣＤ１１ｃ、ＭＨＣクラスＩＩ、およびＬｙ６Ｇ）を用いて、我々は野生型マウスの脾臓においてｇｒ−ＤＣ集団を同定したが、リンパ節では同定できなかった（図３５および図３６）。
【０１５１】
[00039]  我々は、ヒト末梢血試料においても、細胞の大きさおよびＣＤ４８−／ＭＨＣクラスＩ−／ＣＤ１ａ−／ＣＤ１ｄ−／ＣＤ１ｃ−の表面表現型に基づいてＤＣ．ｃｏｍ集団を同定した（図３７）。マウスのＬｙ６Ｇに関するヒトの均等物は同定されていないが、上記のマーカーはヒトのＤＣ．ｃｏｍ集団の同定および精製を可能にするであろうことを述べておくべきである。
【０１５２】
[00040]  ＤＣ．ｃｏｍ集団は、文献で報告されているいずれの骨髄由来サプレッサー細胞集団（図４１Ａ−Ｃ  −  表４Ａ−Ｃ）およびいずれのＤＣ前駆体集団（図４２Ａ−Ｄ  −  表５Ａ−Ｄ）とも異なっている。
【０１５３】
[00041]  ＤＣ．ｃｏｍ集団は、桿状核球として既知である顆粒球の直接の前駆細胞と最も密接に似ている。
【０１５４】
[00042]  ＤＣ．ｃｏｍは（ｇｒ−ＤＣと名付けた）独特のＤＣサブセットに分化し、それはＬｙ６Ｇの高レベルでの独特の発現により他のＤＣサブセットと異なっている。
【０１５５】
[00043]  大量の試験試料を、それらのＤＣ．ｃｏｍ細胞の発生を促進または阻害する可能性に関してスクリーニングするための方法も、本発明の意図された範囲内にある。
【０１５６】
[00044]  加えて、これらの方法はＤＣ．ｃｏｍのｇｒ−ＤＣへの分化を促進または阻害する分子を同定するのに用いることができる。
【０１５７】
[00045]  本発明は下記の実施例においてさらに説明され、そこでは別途記載しない限り全ての部（ｐａｒｔｓ）および百分率は重量によるものであり、度はセ氏である。これらの実施例は、本発明の好ましい態様を示しているが、説明のためにのみ与えられていることは理解されるべきである。上記の議論およびこれらの実施例から、当業者はこの発明の本質的な特徴を確かめることができ、その精神および範囲から逸脱すること無く、本発明の様々な変更および修正を、それを様々な用途および条件に適応させるためになすことができる。この明細書において参照された特許および非特許文献を含む全ての刊行物を、特別に援用する。
【実施例】
【０１５８】
[00046]  実施例Ｉ
[00047]  材料および方法
[00048]  動物
[00049]  Ｃ５７ＢＬ／６、ＯＴ−Ｉ、およびＯＴ−ＩＩマウスは、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ，  Ｉｎｃ．（ニューヨーク州ジャーマンタウン）から得た。この試験における全ての動物は、トレド大学（オハイオ州トレド）において動物研究センターの施設の中で特定病原体除去条件で繁殖され、維持された。全ての動物実験は治験審査委員会により認可され、国立衛生研究所（メリーランド州ベテスダ）のガイドラインに従って実施された。
【０１５９】
[00050]  ＩＬ−１β−ＲＦＰマウスの生成
[00051]  非コードイントロン／エキソンを含む１．２ｋＢのウサギβグロブリン遺伝子を、ｐＳＧ−１発現ベクターをＢａｍＨＩおよびＸｈｏＩで消化することにより得た（参考文献１、２）。その断片をｐＢＫ−ＣＭＶ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、カリフォルニア州ラーホヤ）のＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ部位にサブクローニングして、プラスミドｐＢＫ−ＣＭＶ−ＳＧを生成した。赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）発現ベクターを生成するため、ｐＤｓＲｅｄ−Ｅｘｐｒｅｓｓ−ＤＲプラスミド（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州パロアルト）からプライマーセット５’−ＧＧＧＡＡＴＴＣＣＧＧＴＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＴＣ−３’［配列番号：１］および５’−ＧＧＡＧＡＴＣＴＡＣＡＣＡＴＴＧＡＴＣＣＴＡＧＣＡＧＡＡＧ−３’［配列番号：２］を用いてＰＣＲ断片を増幅し、続いてそれをＴＡクローニングベクターｐＣＲ４−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）にライゲーションし、次いでｐＢＫ−ＣＭＶ−ＳＧのＥｃｏＲＩおよびＢｇｌＩＩ部位の間にサブクローニングした。
【０１６０】
[00052]  得られたベクターｐＢＫ−ＣＭＶ−ＳＧ−Ｒｅｄは、βグロブリンイントロン／エキソン−ＲＦＰ融合遺伝子の上流にＣＭＶ最初期（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ）プロモーターを有していた。ＣＭＶプロモーター領域をＶｓｐＩおよびＮｈｅＩによる消化により除去した後、Ｋｌｅｎｏｗフラグメントを用いた両方の末端の平滑化およびセルフライゲーションを行った。次いでマウスＩＬ−１βプロモーターの４，１３８ｂｐのＢａｍＨＩ断片（参考文献３）をＢａｍＨＩ部位に挿入してプラスミドｐＢＫ−ＳＧ−ＩＬ−１β−Ｒｅｄを生成した。プラスミドｐＢＫ−ＳＧ−ＩＬ−１β−ＲｅｄをＳａｌＩおよびＮｏｔＩで消化してベクターの配列を排除し、導入遺伝子断片をＥｌｕｔｉｐ−Ｄ（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ＆  Ｓｃｈｕｅｌｌ、ニューハンプシャー州キーン）により精製した。ＤＮＡをＣ５７Ｂｌ／６マウスの受精卵の中にマイクロインジェクションした。３４匹のファウンダーが生まれ、プライマー５’−ＴＧＣＴＧＧＴＴＧＴＴＧＴＧＣＴＧＴＣＴＣＡＴＣ−Ｓ’［配列番号：３］および５’−ＣＡＣＧＴＡＣＡＣＣＴＴＧＧＡＧＣＣＧＴＡＣＴＧ−３’［配列番号：４］を用いたＰＣＲ分析により、それらの内の１０匹が導入遺伝子を有することが確かめられた。
【０１６１】
[00053]  細胞の単離およびインビトロでの培養
[00054]  腰椎穿刺によりヘパリン処理されたチューブの中に血液を集めた。Ｒｅｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｉｇｍａ−  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）を用いて赤血球（ＲＢＣ）を排除した後、フローサイトメトリー分析のためにｍＡｂを用いて染色した。器官の機械的な破砕（ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ）およびＲＢＣの溶解により脾臓およびリンパ節に関する単細胞懸濁液を調製した。完全ＲＰＭＩ１６４０（ｃＲＰＭＩ）；熱非働化１０％  ＦＢＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０ｍＭ非必須アミノ酸、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１０ｍＭピルビン酸ナトリウム、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび５０μＭ  ２−ＭＥ（Ｓｉｇｍａ−  Ａｌｄｒｉｃｈ）を補ったＲＰＭＩ１６４０（Ｃｅｌｌｇｒｏ、バージニア州ハーンドン）を用いて大腿骨をフラッシュする（ｆｌｕｓｈｉｎｇ）ことにより骨髄（ＢＭ）細胞を単離した。ＲＢＣを激減させた後、細胞（２×１０６細胞／ｍｌ）を６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、マサチューセッツ州ローウェル）において、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦ、１０ｎｇ／ｍｌ  Ｍ−ＣＳＦ（共にＲ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリスからのもの）、または２００ｎｇ／ｍｌ  ＦＬＴ−３Ｌ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  ＥＣ、ロンドン）を補ったｃＲＰＭＩ中で培養した。非付着細胞の移動により、および付着細胞の回収のための０．３％トリプシン／０．０２５％  ＥＤＴＡ（Ｃｅｌｌｇｒｏ）を用いた処理により、細胞を異なる時点で培養物から集めた。次いで細胞を非付着細胞画分と共にプールした。
【０１６２】
[00055]  フローサイトメトリー
[00056]  ｍＡｂと共に保温する前に、細胞を５μｇ／ｍｌ  ＣＤ１６／ＣＤ３２（２．４Ｇ２）抗ＦｃＲ  ｍＡｂ、１％正常ラット血清、１％正常ハムスター血清を補ったＦＡＣＳ染色緩衝液（２％  ＦＢＳおよび１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを含むハンクス液）を用いて４度で１５分間ブロッキングした。特筆しない限り、全てのｍＡｂはＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（カリフォルニア州パロアルト）から購入した。アイソタイプ対照に加え、次のｍＡｂを用いた：ＣＤ１ｄ（１Ｂ１）、ＣＤ４（Ｈ１２９．１９）、ＣＤ８α（５３−６．７）、ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）、ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３）、ＣＤ１９（１Ｄ３）、ＣＤ２４（Ｍ１／６９）、ＣＤ２５（７Ｄ４）、ＣＤ４０（３／２３）、ＣＤ４５ＲＡ（１４．８）、ＣＤ４８（ＨＭ４８−１）、ＣＤ４９ｂ（ＤＸ５）、ＣＤ８０（１６−１０Ａ１）、ＣＤ１７２ａ（Ｐ８４）、ＣＤ２０９（５Ｈ１０／ＣＩＲＥ）、ＣＤ２７５（ＨＫ５．３）、Ｈ−２Ｋｂ（ＡＦ６−８８．５）、Ｉａｂ（ＡＦ６−１２０．１）、Ｂ２２０（ＲＡ３−６Ｂ２）、Ｇｒ−１（ＲＢ６−８Ｃ５）、Ｌｙ６−Ｃ（ＡＬ−２１）、Ｌｙ６−Ｇ（１Ａ８）、Ｓｃａ−１（Ｄ７）、およびＬｙ８６（ＭＤ１４）、Ｆ４／８０（ＢＭ８）、ＣＤ３４（ＲＡＭ３４）、ＣＤ１３５（Ａ２Ｆ１０）、およびＰＤＣＡ−１（ＢＳＴ２）はｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（カリフォルニア州サンディエゴ）から得た。ＣＤ２０５（ＮＬＤＣ−１４５）およびＣＤ４９ａ（ＨＭａｌｐｈａｌ）はそれぞれＭｉｌｔｅｎｙｂｉｏｔｅｃ（カリフォルニア州オーバーン）およびＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（英国、オックスフォード）から購入した。死んだ細胞を分析から除外するため、最後の洗浄でヨウ化プロピジウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州サンディエゴ）またはＤＡＰＩ（Ｐｉｅｒｃｅ、イリノイ州ロックフォード）を添加し、死んだ細胞を分析から除外した。染色された細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒまたはＦＡＣＳＡｒｉａ（共にＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて獲得し、事象をＣｅｌｌＱｕｅｓｔ、ＦＡＣＳＤｉｖａ（共にＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、またはＷｅａｓｅｌ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ウォルター・アンド・イライザ・ホール医学研究所（Ｔｈｅ  Ｗａｌｔｅｒ  ａｎｄ  Ｅｌｉｚａ  Ｈａｌｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、オーストラリアメルボルン）を用いて分析した。
【０１６３】
[00057]  細胞の単離および培養
[00058]  細胞を、ｐＩＬ１β−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスまたは野生型のマウスから増殖させたＢＭ培養物から、ＦＡＣＳＡｒｉａを用いるフローサイトメトリーにより選別した。細胞をＦＡＣＳ染色緩衝液中で抗ＣＤ１１ｂ−ＡＰＣ−Ｃｙ７および抗ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ  ｍＡｂを用いて染色し、ＣＤ１１ｂＣＤ１１ｃＤｓＲｅｄ、ＣＤ１１ｂＣＤ１１ｃＤｓＲｅｄ、ＣＤ１１ｂＣＤ１１ｃＤｓＲｅｄ、およびＣＤ１１ｂＣＤ１１ｃＤｓＲｅｄ画分に選別した。あるいは、ＤＣ．ｃｏｍ集団をＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ４８−／Ｌｙ６Ｇ＋の表面表現型に基づいてＦＡＣＳ精製した。
【０１６４】
[00059]  選別した細胞画分を、ｃＲＰＭＩを用いて１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦの存在下で再度培養した後、フローサイトメトリー分析を行った。一部の実験において、ＤＣ．ｃｏｍ集団をＣＤ４５．２＋であるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢＭ培養物から精製し、次いでＣＤ４５．１＋であるＢ６／ＳＪＬマウスからの新しく単離されたＢＭ細胞と共培養した。ＤＣ．ｃｏｍに由来する細胞は、抗ＣＤ４５．２および抗ＣＤ４５．１抗体を用いた分染によりフィーダーから識別した。この共培養系において、ＤＣ．ｃｏｍ集団は生存可能であり、ＣＤ１１ｃ＋／ＭＨＣＩＩ＋  ＤＣに分化した。
【０１６５】
[00060]  表現型および機能の分析
[00061]  形態学的研究のため、選別された細胞（２×１０５細胞／スライド）からのサイトスピンプレパラートを、ギームザ溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で染色した。選別された細胞に関する増殖活性を、ＢｒｄＵ  Ｆｌｏｗ  Ｋｉｔ  （ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、製造者の説示に従って調べた。すなわち、細胞をＢｒｄＵと共に３７度で１８時間培養した後、固定および透過処理（ｐｅｒｍｉａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）を行った。細胞をフローサイトメトリー分析のためにＦＩＴＣコンジュゲート抗ＢｒｄＵ抗体を用いて７−ＡＡＤと組み合わせて染色した。抗体の取り込みの能力を試験するため、選別した細胞を、５マイクロｇ／ｍｌのＦＩＴＣコンジュゲートデキストラン（分子量７０，０００Ｄａ；Ｓｉｇｍａ）を用いて４℃または３７℃で１０分間保温し、広範囲にわたって洗浄し、次いでＦＡＣＳＣａｌｉｂｅｒを用いて細胞内のＦＩＴＣシグナルに関して調べた。
【０１６６】
[00062]  ＢＭ培養物から選別した細胞をオボアルブミン（ＯＶＡ）、ＯＶＡ３２３−３３９、またはＯＶＡ３２３−３３９ペプチドを用いて示した濃度で１時間パルスした後、Ｔ細胞と共培養した。ナイーブＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞を、それぞれＯＶＡ特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）−トランスジェニックＯＴ−ＩまたはＯＴ−ＩＩマウスの脾臓から、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋  Ｔ細胞のためのネガティブ単離キット（Ｄｙｎａｌ、ニューヨーク州レイクサクセス）を用いる免疫磁気細胞分離法により富ませた（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）。富ませたトランスジェニックＴＣＲを発現するＴ細胞の百分率を、抗ＣＤ４−ＡＰＣまたは抗ＣＤ８−ＡＰＣおよび抗Ｖα２−ＦＩＴＣ  ｍＡｂ（ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）を用いるフローサイトメトリーにより決定した（＞９０％）。
【０１６７】
[00063]  増殖アッセイに関して、２×１０４細胞／ウェルのナイーブＴ細胞を、９６−Ｕ−ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の中にまき、ｃＲＰＭＩ（２００μｌ／ウェル）中で異なる数のタンパク質またはペプチドでパルスしたＢＭ細胞集団と共に培養した。培養物を３７℃で７２時間維持した。細胞を１μＣｉの［３Ｈ］−チミジン（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、カリフォルニア州コスタメサ）で１６時間パルスすることにより増殖を分析した。培養の終了の時点で、細胞をグラスファイバーフィルター（Ｐａｃｋａｒｄ、コネチカット州メリデン）上に集め、放射活性をＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＴＸ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、コネチカット州シェルトン）において計数した。
【０１６８】
[00064]  統計分析
[00065]  データは平均±Ｓ．Ｄ．として表す。測定された変数の実験および対照グループの間の差を、分散分析法（ＡＮＯＶＡ）およびダネット検定を用いて行った用量応答の分析以外は、両側スチューデントｔ検定を用いて評価した。３個より多くのグループの間での比較は、スチューデント−ニューマン−クールズ（ＳＮＫ）多重比較検定により評価した。再現性を評価するため、それぞれの実験を少なくとも１回繰り返した。
【０１６９】
[00066]  皮膚におけるＤｓＲｅｄのシグナルの可視化
[00067]  病的状態を誘導するため、ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウスに１．２５％オキサゾロン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）またはビヒクル（アセトン／オリーブ油）のみの耳の上での局所的適用を受けさせた。一部の実験において、テープストリッピングにより耳の上で病的状態を誘導した。１日目において、耳全体の皮膚の試料を集めてＺｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ５１０  ＭＥＴＡ  ２Ｐ共焦点顕微鏡を用いてＤｓＲｅｄの発現を調べた。真皮表皮接合部において２種類の区画を分離した後、酵素処理により上皮細胞懸濁液および真皮細胞懸濁液を調製した。
【０１７０】
[00068]  用途の例およびそれらの定義
[00069]  本発明の実施は、別途示さない限り、当技術（ａｒｔ）の技術（ｓｋｉｌｌ）内の薬理学、化学、生化学、組み換えＤＮＡの技法および免疫学の一般的に用いられる方法を用いるであろう。その技法は文献において完全に説明されている。例えばHandbook of Experimental Immunology, VoIs. I-IV (D. M. WeirおよびC. C. Blackwell編集、Blackwell Scientific Publications); A. L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc.、最新の追加(current addition)); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第２版、1989); Methods In Enzymology (S. Colowick およびN. Kaplan編集、Academic Press, Inc.)を参照。
【０１７１】
[00070]  そういうものとして、本明細書における定義はさらなる説明のために提供されるのであって、制限するものとして解釈されるべきではない。
【０１７２】
[00071]  冠詞“ａ”および“ａｎ”は本明細書においてその冠詞の文法上の対象の１個を、または１個より多くを（すなわち少なくとも１個を）指すために用いられる。例として、“要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）”は１個の要素または１個より多くの要素を意味する。
【０１７３】
[00072]  “マーカー”および“バイオマーカー”は、組織または細胞におけるその発現の、正常または健康な組織または細胞におけるその発現レベルから変化したレベルが、障害および／または疾患の状態と関係している分子および／またはその機能的変種である。
【０１７４】
[00073]  マーカーの発現の“正常な”レベルは、障害および／または疾患の状態で苦しんでいないヒトの対象または患者の細胞中のそのマーカーの発現のレベルである。
【０１７５】
[00074]  マーカーの“過剰発現”または“発現のかなり高いレベル”は、発現を評価するために用いられるアッセイの標準誤差よりも大きい試験試料中の発現レベルを指し、特定の態様において、対照試料（例えば、そのマーカーが関係する障害および／または疾患の状態を有しない健康な対象からの試料）中のそのマーカーの発現レベル、および特定の態様においていくつかの対照試料中のそのマーカーの平均発現レベルの少なくとも２倍、および他の態様において、３、４、５または１０倍を指す。
【０１７６】
[00075]  マーカーの“発現のかなり低いレベル”は、対照試料（例えば、そのマーカーが関係する障害および／または疾患の状態を有しない健康な対象からの試料）中のそのマーカーの発現レベル、および特定の態様においていくつかの対照試料中のそのマーカーの平均発現レベルよりも少なくとも２倍、および特定の態様において３、４、５または１０倍低い試験試料中の発現レベルを指す。
【０１７７】
[00076]  用途の例
[00077]  本明細書において記述されている組成物、キットおよび方法は、とりわけ次の限定的で無い用途を有する：
対象が障害および／または疾患の状態で苦しんでいるかどうかを評価する；
対象における障害および／または疾患の状態の病期を評価する；
対象における障害および／または疾患の状態のグレードを評価する；
対象における障害および／または疾患の状態の性質を評価する；
対象において障害および／または疾患の状態が発現する可能性を評価する；
対象における障害および／または疾患の状態と関係する細胞の組織学的なタイプを評価する；
対象における障害および／または疾患の状態を処置するのに有用である抗体、抗体断片または抗体の誘導体を作製する；
対象の細胞における障害および／または疾患の状態の存在を評価する；
対象における障害および／または疾患の状態を阻害するための１種類以上の試験化合物の有効性を評価する；
対象における障害および／または疾患の状態を阻害するための療法の有効性を評価する；
対象における障害および／または疾患の状態の進行を監視する；
対象における障害および／または疾患の状態を阻害するための組成物または療法を選択する；
障害および／または疾患の状態で苦しんでいる対象を処置する；
対象における障害および／または疾患の状態を阻害する；
試験化合物の有害な可能性を評価する；および
それに関する危険にさらされている対象における障害および／または疾患の状態の開始を予防する。
【０１７８】
[00078]  スクリーニング法
[00079]  スクリーニング法も、本発明の意図された範囲内にある。ある限定的で無い例において、障害および／または疾患のための療法薬に関するスクリーニングの方法は、インビボまたはインビトロのどちらかで実施することができる。このスクリーニング法は、例えば次のことにより実行することができる：
候補化合物を動物の対象に投与する；
その動物の対象からの生物学的試料中の少なくとも１種類のマーカーの発現レベルを測定する；または
マーカーの発現レベルを、候補化合物がそれと接触していない対照中のマーカーの発現レベルと比較して増大または減少させる化合物を選択する。
【０１７９】
[00080]  さらに別の観点において、動物の対象を候補化合物と接触させ、その動物の対象に由来する生物学的試料中のそのマーカーの発現レベルに対するその化合物の作用を監視することにより、医薬のための候補化合物の、少なくとも１種類のマーカーの発現レベルに対する有効性を評価するための方法を、本明細書において提供する。その動物の対象に由来する生物学的試料中のそのマーカーの発現レベルにおける変化は、上記の試験法において用いられるものと同じ技法を用いて監視することができる。さらに、評価に基づいて、医薬のための候補化合物をスクリーニングにより選択することができる。
【０１８０】
[00081]  対象における障害および／または疾患の状態を処置する、または予防するために有用である療法薬のスクリーニングを可能にするために、動物モデルを作り出すことができる。従って、その方法は対象における障害および／または疾患の状態を処置する、または予防するための療法薬を同定するために有用である。その方法は、候補薬剤を本明細書において記述される方法により作られた動物モデルに投与すること、およびその動物モデルにおける、その候補薬剤が投与されていない対照の動物モデルと比較した、少なくとも１種類の応答を評価することを含む。もし症状において少なくとも１種類の応答が低減する、または開始において遅れるならば、その候補薬剤はその疾患を処置または予防するための薬剤である。
【０１８１】
[00082]  候補薬剤は、当技術で既に知られている薬理学的薬物であってよく、または何らかの薬理活性を有することが以前に知られていない薬剤であってよい。その薬剤は、天然に生じるもの、または実験室で設計されたものであってよい。それらは微生物、動物もしくは植物から単離されてよく、または組み替えで製造されてよく、またはいずれかの適切な化学的方法により合成されてよい。それらは小さい分子、核酸、タンパク質、ペプチドまたはペプチド模倣薬であってよい。特定の態様において、候補薬剤は５０ダルトンより大きい、および約２，５００ダルトンより小さい分子量を有する小さい有機化合物である。候補薬剤はタンパク質との構造的な相互作用に必要な官能基を含む。候補薬剤は次のものを含む生体分子の中にも見つかるが、それらに限定されない：ペプチド類、糖類、脂肪酸類、ステロイド類、プリン類、ピリミジン類、それらの誘導体、構造的類似体または組み合わせ。
【０１８２】
[00083]  候補薬剤は、合成または天然化合物のライブラリーを含む多種多様な源から得られる。例えば、多種多様な有機化合物および生体分子のランダムおよび方向づけられた合成のために利用できる、ランダム化されたオリゴヌクレオチドおよびオリゴペプチドの発現を含む非常に多くの手段が存在する。あるいは、細菌、菌類、植物および動物の抽出物の形の天然化合物のライブラリーが利用できる、または容易に製造される。加えて、天然の、または合成により製造されたライブラリーおよび化合物は、一般に用いられる化学的、物理的および生化学的手段により容易に修飾される。特定の態様において、候補薬剤は、コンビナトリアルライブラリー法（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｌｉｂｒａｒｙ  ｍｅｔｈｏｄ）の技術における非常に多くのアプローチのいずれかを用いて得ることができ、それは限定的で無い例：生物学的ライブラリー；空間的に位置を特定できる（ｓｐａｔｉａｌｌｙ  ａｄｄｒｅｓｓａｂｌｅ）平行固相または液相ライブラリー；デコンボリューション（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎ）を必要とする合成ライブラリー法；“１ビーズ１化合物（ｏｎｅ−ｂｅａｄ  ｏｎｅ−ｃｏｍｐｏｕｎｄ）“ライブラリー法；および親和性クロマトグラフィー選別を用いる合成ライブラリー法によるものを含む。
【０１８３】
[00084]  特定のさらなる態様において、特定の薬理学的薬剤は、方向づけられたまたはランダムな化学修飾、例えばアシル化、アルキル化、エステル化、アミド化等を受けて構造的類似体を生成してよい。
【０１８４】
[00085]  対象における障害および／または疾患の状態を処置するための療法薬を同定するためのものと同じ方法を、インビトロ試験から生成されたリード化合物／薬剤を実証するためにも用いることもできる。
【０１８５】
[00086]  候補薬剤は、対象の応答経路において１種類以上の障害および／または疾患の状態を上方または下方制御する薬剤であってよい。特定の態様において、候補薬剤はその経路に影響を与える拮抗薬であってよい。
【０１８６】
[00087]  障害および／または疾患の状態を処置するための方法
[00088]  障害および／または疾患の状態の応答を処置する、阻害する、緩和する、または逆行させるための方法も、本発明の意図された範囲内である。ある限定的で無い例において、シグナル伝達カスケードを妨げる薬剤が、それを必要とする個人、例えば、それに限定するわけではないが、その合併症がまだ明らかでは無い対象および既に少なくとも１種類のその応答を有する対象に投与される。
【０１８７】
[00089]  前者の例において、その処置はその応答の発生を予防する、および／またはそれらが起こる程度を低減するのに有用である。後者の例において、その処置はその応答が起こる程度を低減する、それらのさらなる発現を予防する、またはその応答を逆行させるのに有用である。
【０１８８】
[00090]  特定の態様において、応答カスケードを妨げる薬剤はその応答に特異的な抗体であってよい。
【０１８９】
[00091]  マーカー（Ｍａｒｋｅｒ（ｓ））の発現
[00092]  マーカーの発現は多くの方法で阻害することができ、それには限定的で無い例として、マーカー（ｍａｒｋｅｒ（ｓ））の転写、翻訳、または両方を阻害するために細胞に与えることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。あるいは、そのタンパク質の機能または活性を阻害するであろう細胞内抗体を生成するために、マーカータンパク質に特異的に結合する抗体、抗体の誘導体、または抗体断片をコードしており、適切なプロモーター／レギュレーター領域と操作可能な形で（ｏｐｅｒａｂｌｙ）連結されたポリヌクレオチドを、細胞に与えることができる。マーカーの発現および／または機能は、細胞をマーカータンパク質に特異的に結合する抗体、抗体の誘導体、または抗体断片を用いて処置することによっても阻害することができる。本明細書で記述されている方法を用いることで、特にそれらが細胞膜を横断することが可能であるのに十分に小さい分子を含む様々な分子を、マーカーの発現を阻害する、またはマーカータンパク質の機能を阻害する分子を同定するためにスクリーニングすることができる。そうして同定された化合物を、対象の障害および／または疾患の状態を阻害するために対象に与えることができる。
【０１９０】
[00093]  あらゆるマーカーまたはマーカーの組み合わせ、さらにそのマーカーと組み合わせたあらゆる特定のマーカーを、本明細書で記述されている組成物、キットおよび方法において用いてよい。一般に、標的細胞中のそのマーカーの発現のレベルと正常な細胞中の同じマーカーの発現のレベルの間の差が可能な限り大きいマーカーを用いるのが望ましい。この差はマーカーの発現を評価するための方法の検出の限界と同じくらい小さいことが可能であるが、その差は少なくとも評価方法の標準誤差よりも大きく、特定の態様において、正常な組織／細胞中の同じマーカーの発現のレベルの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、１００、５００、１０００倍またはそれより大きい差があるのが望ましい。
【０１９１】
[00094]  その組成物、キット、および方法は１種類以上のマーカーの発現レベルの差の検出に頼っているため、マーカーの発現のレベルは、正常な細胞および標的細胞の少なくとも一方において、発現を評価するために用いられる方法の最小検出限界よりもかなり大きいのが望ましい。
【０１９２】
[00095]  そのマーカーの内の１種類以上を用いる追加の対象試料の型にはまったスクリーニングにより、そのマーカーの内のいくつかは、対象における特定の障害および／または疾患の状態を含め、様々なタイプの細胞において過剰発現していることが実感されるであろうことが理解される。
【０１９３】
[00096]  加えて、より大きい数の対象試料がそのマーカーの発現に関して評価され、その試料を得た個々の対象の結果が相関している場合、マーカーの内のいくつかの変化した発現は対象における障害および／または疾患の状態と強く相関しており、他のマーカーの変化した発現は他の疾患と強く相関していることも確かめられるであろう。従って、その組成物、キット、および方法は、対象における障害および／または疾患の状態の病期、グレード、組織学的なタイプ、および性質の内の１種類以上を特徴づけるのに有用である。
【０１９４】
[00097]  その組成物、キット、および方法が対象における障害および／または疾患の状態の病期、グレード、組織学的なタイプ、および性質の内の１種類以上を特徴づけるために用いられる場合、そのマーカーまたはマーカーの１団（ｐａｎｅｌ）は、対応する病期、グレード、組織学的なタイプ、および性質の障害および／または疾患の状態で苦しむ少なくとも約２０％、および特定の態様において少なくとも約４０％、６０％、または８０％、および実質的に全ての対象において、陽性の結果が得られるように選択されるのが望ましい。本発明のマーカーまたはマーカーの１団は、（限定的で無い例において、８０％より大きいアッセイの特異性と合わせて）母集団に関して約１０％より大きい陽性的中率が得られるように選択することができる。
【０１９５】
[00098]  その組成物、キット、および方法において複数のマーカーが用いられる場合、対象試料中のそれぞれのマーカーの発現のレベルを、単一の反応混合物中で（すなわち、それぞれのマーカーに関して異なる蛍光プローブのような試薬を用いる）、またはそのマーカーの内の１種類以上に対応する別個の反応混合物中でのどちらかで、障害の無いおよび／または疾患の無い同じタイプの試料中のその複数のマーカーのそれぞれの正常な発現のレベルと比較することができる。
【０１９６】
[00099]  その組成物、キット、および方法の感度を最大化するため（すなわち、対象試料中のシステム起源（ｓｙｓｔｅｍ  ｏｒｉｇｉｎ）の細胞に起因すると考えられる妨害により）、それにおいて用いられるマーカーは、限られた組織分布を有する、例えば普通は非システム組織（ｎｏｎ−ｓｙｓｔｅｍ  ｔｉｓｓｕｅ）において発現していないマーカーであるのが望ましい。
【０１９７】
[000100]  その組成物、キット、および方法は、対象において障害および／または疾患の状態を発現する高められた危険性を有する対象および彼らの医学的アドバイザーに対して特別の有用性を有するであろうことが認められる。障害および／または疾患を発現する高められた危険性を有すると認められる対象には、例えばその障害または疾患の家族歴を有する対象が含まれる。
【０１９８】
[000101]  正常なヒトのシステム組織におけるマーカーの発現のレベルは、様々な方法により評価することができる。１態様において、この正常な発現のレベルは、正常に見えるシステム細胞の一部におけるそのマーカーの発現のレベルを評価することにより、およびこの正常な発現のレベルを異常であると疑われるシステム細胞の一部における発現のレベルと比較することにより評価される。交互に、および特に本明細書で記述される方法の型にはまった実行の結果としてさらなる情報が入手できるようになると、マーカーの正常な発現に関する集団平均値を用いることができる。他の態様において、マーカーの発現の“正常な”レベルは、苦しんでいない対象から得られた対象試料中の、対象における障害および／または疾患の状態の疑われる開始の前に対象から得られた対象試料からの、保管所に保管されている（ａｒｃｈｉｖｅｄ）対象試料、および同様のものからのマーカーの発現を評価することにより決定してよい。
【０１９９】
[000102]  本明細書において、試料（例えば、保管所に保管されている組織試料または対象から得られた試料）中の障害および／または疾患の状態の細胞の存在を評価するための組成物、キット、および方法も提供する。これらの組成物、キット、および方法は、必要であればその組成物、キット、および方法が対象試料以外の試料を用いる使用に適合されること以外は、上記の組成物、キット、および方法と実質的に同じである。例えば、用いられる試料がパラフィン処理された、保管所に保管されているヒト組織試料である場合、試料中のマーカーの発現のレベルを評価するために用いられる組成物中の、キットまたは方法中の化合物の比率を調節することが必要である可能性がある。
【０２００】
[000103]  キットおよび試薬
[000104]  キットは、マーカーの発現を特異的に検出するための少なくとも１種類の試薬、例えばプローブを含むあらゆる製品（例えばパッケージまたは入れ物）であることができる。そのキットは本発明の方法を実行するための単位として販売促進、流通、または販売されてよい。
【０２０１】
[000105]  そのキットは（例えば対象試料のような試料中の）標的細胞の存在を評価するのに有用である。そのキットは複数の試薬を含み、そのそれぞれがマーカーの核酸またはタンパク質と特異的に結合することができる。マーカータンパク質との結合に適した試薬には、抗体、抗体の誘導体、抗体断片、および同様のものが含まれる。マーカーの核酸（例えば、ゲノムＤＮＡ、ＭＲＮＡ、スプライシングされたＭＲＮＡ、ｃＤＮＡ、または同様のもの）との結合に適した試薬には、相補的な核酸が含まれる。例えば、核酸試薬は基質に固定された（標識された、または標識されていない）オリゴヌクレオチド、基質と結合していない標識されたオリゴヌクレオチド、ＰＣＲプライマーのペア、分子ビーコン（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｅａｃｏｎ）プローブ、および同様のものを含んでいてよい。
【０２０２】
[000106]  そのキットは場合により本明細書で記述した方法を実行するのに有用な追加の構成要素を含んでいてよい。例として、そのキットは相補的な核酸のアニーリングに、または抗体のそれが特異的に結合するタンパク質との結合に適した流体（例えばＳＳＣ緩衝液）、１種類以上の試料区画、方法の実行を記述した指導用の資料、正常なシステム細胞の試料、冒された細胞の試料、および同様のものを含んでいてよい。
【０２０３】
[000107]  抗体を生成する方法
[000108]  対象が障害および／または疾患の状態で苦しんでいるかどうかを評価するのに有用な抗体を生成する方法も、本発明の意図された範囲内である。ある限定的で無い例において、マーカータンパク質の全体または切片（ｓｅｇｍｅｎｔ）を含むタンパク質またはペプチドを（例えばそれが発現している細胞からの精製により、またはそのタンパク質またはペプチドをコードしている核酸のインビボもしくはインビトロでの転写および翻訳により）合成する、または単離する。脊椎動物、例えば哺乳類、例えばマウス、ラット、ウサギ、またはヒツジを、そのタンパク質またはペプチドを用いて免疫する。その脊椎動物は場合により（および好ましくは）、その脊椎動物がそのタンパク質またはペプチドに対して強い免疫応答を示すように、そのタンパク質またはペプチドで少なくともさらに１回免疫されてよい。様々な方法のいずれかを用いて、免疫した脊椎動物から脾細胞を単離し、不死化した細胞系と融合させてハイブリドーマを形成する。次いでこの方法で形成されたハイブリドーマを標準的な方法を用いてスクリーニングし、マーカータンパク質またはその断片と特異的に結合する抗体を産生する１種類以上のハイブリドーマを同定する。本明細書において、この方法により作られたハイブリドーマおよびそのハイブリドーマを用いて作られた抗体も提供する。
【０２０４】
[000109]  有効性を評価する方法
[000110]  標的細胞の阻害に関する試験化合物の有効性を評価する方法も、本発明の意図された範囲内である。ある限定的で無い例において、本明細書で記述されているように、マーカーの発現のレベルの差は対象の細胞の異常な状態と相関している。マーカーの内のいくつかの発現のレベルにおける変化はその細胞の異常な状態に起因するらしいことが認められているが、マーカーの内の他のものの発現のレベルにおける変化がそれらの細胞の異常な状態を誘発、維持および促進することも同様に認められている。従って、対象において障害および／または疾患の状態を阻害する化合物は、マーカーの内の１種類以上の発現のレベルをそのマーカーに関する正常な発現のレベル（すなわち、正常な細胞におけるそのマーカーに関する発現のレベル）により近いレベルへと変化させるであろう。
【０２０５】
[000111]  その方法は、第１の細胞試料中の、試験化合物の存在下で維持されているマーカーの発現と、第２の細胞試料中の、試験化合物の非存在下で維持されているマーカーの発現を比較することを含むことができる。試験化合物の存在下で有意に低減したマーカーの発現は、その試験化合物が障害または関連する疾患の状態を阻害することを示すものである。細胞の試料は、例えば、対象から得られた正常な細胞の単一の試料の一定部分、対象から得られた正常な細胞のプールされた試料、正常な細胞系の細胞、対象から得られた関連する疾患の細胞の単一の試料の一定部分、対象から得られた関連する標的細胞のプールされた試料、障害もしくは疾患細胞系の細胞、または同様のものであってよい。
【０２０６】
[000112]  １態様において、試料は対象から得られた冒された細胞であり、様々な炎症に関連する障害および／または疾患を阻害するのに有効であると信じられている複数の化合物を、対象における障害および／または疾患を最もよく阻害しそうである化合物を同定するために試験する。
【０２０７】
[000113]  この方法は同様に、対象における関連する障害および／または疾患を阻害するための療法の有効性を評価するために用いられてよい。この方法において、試料のペア（一方にその療法を施し、他方にはその療法を施さない）における１種類以上のマーカーの発現のレベルを評価する。試験化合物の有効性を評価する方法におけるように、もしその療法がマーカーの発現の有意により低いレベルを誘導すれば、その療法は障害および／または疾患を阻害するのに有効である。上記のように、選択された対象からの試料がこの方法において用いられた場合、対象における障害および／または疾患を阻害するのに最も有効でありそうである療法を選択するために、代わりの療法をインビトロで評価することができる。
【０２０８】
[000114]  本明細書において記述されているように、ヒトの細胞の異常な状態はマーカーの発現のレベルにおける変化と相関している。試験化合物の有害な可能性を評価するための方法も提供する。この方法は、試験化合物の存在下および非存在下でヒトの細胞の別の一定部分を維持することを含む。それぞれの一定部分におけるマーカーの発現を比較する。試験化合物の存在下で維持されている一定部分におけるマーカーの発現の、（試験化合物の非存在下で維持されている一定部分と比較して）有意により高いレベルは、その試験化合物が有害な可能性を有していることを示すものである。様々な試験化合物の相対的に有害である可能性は、関係のあるマーカーの発現のレベルの増進または阻害の程度を比較することにより、それに関して発現のレベルが増進もしくは阻害されるマーカーの数を比較することにより、または両方を比較することにより、評価することができる。様々な観点を、下記の小区分においてさらに詳細に記述する。
【０２０９】
[000115]  単離されたタンパク質および抗体
[000116]  マーカータンパク質またはその断片に対して向けられた抗体を生じさせるための免疫源としての使用に適した、単離されたマーカータンパク質およびその生物学的に活性な部分、さらにポリペプチド断片も、本発明の意図された範囲内である。
【０２１０】
[000117]  ある限定的で無い例において、未変性のマーカータンパク質を細胞または組織の源から標準的なタンパク質精製技法を用いる適切な精製スキームにより単離することができる。別の態様において、そのマーカータンパク質の全体または切片を含むタンパク質またはペプチドは、組み換えＤＮＡの技法により生成される。組み換えでの発現の代わりに、そのタンパク質またはペプチドは標準的なペプチド合成の技法を用いて化学的に合成することができる。
【０２１１】
[000118]  “単離された”もしくは“精製された”タンパク質またはそれらの生物学的に活性な部分は、そのタンパク質が由来する細胞もしくは組織の源からの細胞物質もしくは他の混入したタンパク質を実質的に含まない、または化学的に合成された場合に化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。“細胞物質を実質的に含まない”という用語は、そのタンパク質が、それからそれを単離した、または組み替えで生成した細胞の細胞構成要素から分離された、タンパク質の調製品を含む。従って、細胞物質を実質的に含まないタンパク質には、（乾燥重量により）約３０％、２０％、１０％、または５％未満の異種タンパク質（本明細書において“混入タンパク質”とも呼ばれる）を有するタンパク質の調製品が含まれる。
【０２１２】
[000119]  そのタンパク質またはその生物学的に活性な部分が組み換えで生成される場合、それは好ましくは培地も実質的に含まず、すなわち、培地はそのタンパク質調製品の体積の約２０％、１０％、または５％未満である。そのタンパク質が化学合成により生成される場合、それは好ましくは化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわち、それはそのタンパク質の合成に関わっている化学的前駆体または他の化学物質から分離されている。従って、そのタンパク質の調製品は、（乾燥重量により）約３０％、２０％、１０％、または５％未満の化学的前駆体または関心のあるポリペプチド以外の化合物を有する。
【０２１３】
[000120]  マーカータンパク質の生物学的に活性な部分には、マーカータンパク質のそのアミノ酸配列に十分に一致する、またはそれに由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドが含まれ、それは完全長のタンパク質よりも少ないアミノ酸を含み、対応する完全長のタンパク質の少なくとも１種類の活性を示す。典型的に、生物学的に活性な部分は、対応する完全長のタンパク質の少なくとも１種類の活性を有するドメインまたはモチーフを含む。マーカータンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば１０、２５、５０、１００またはより多くのアミノ酸長であるポリペプチドであることができる。さらに、そのマーカータンパク質の他の領域が削除された他の生物学的に活性な部分を、組み換えの技法により調製し、そのマーカータンパク質の未変性の形の機能的活性の１種類以上に関して評価することができる。特定の態様において、有用なタンパク質はこれらの配列の内の１種類と実質的に（例えば少なくとも４０％、および特定の態様において５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）同じであり、対応する天然に生じるマーカータンパク質の機能活性を保持しているが、天然の対立遺伝子の変化または変異生成によりアミノ酸配列が異なる。
【０２１４】
[000121]  加えて、マーカータンパク質の切片のライブラリーを、スクリーニングおよびそれに続く様々なマーカータンパク質またはその切片の選択のためのポリペプチドの多様な集団を生じさせるために用いることができる。
【０２１５】
[000122]  予測医学
[000123]  診断アッセイ、予後（ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ）アッセイ、薬理ゲノム学、および監視的臨床試験が予後（予測）目的で用いられ、それにより個人を予防的に処置する予測医学の分野における動物モデルおよびマーカーの使用も、本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、診断アッセイは、個人が特定の障害および／または疾患を発現する危険にさらされているかどうかを決定するために１種類以上のマーカータンパク質または核酸の発現のレベルを測定するのに用いられる。そのアッセイは予後または予測目的で用いられ、それにより障害および／または疾患の開始の前に個人を予防的に処置することができる。
【０２１６】
[000124]  別の観点において、その方法は少なくとも同じ個人の、その個人が彼の／彼女の発現パターンを変化させる化学物質または毒物にさらされたかどうかを調べるための定期的なスクリーニングに有用である。
【０２１７】
[000125]  さらに別の観点は、障害および／または疾患を阻害するため、またはいずれかの他の障害および／または疾患を処置もしくは予防するために投与される薬剤（例えば薬物または他の化合物）の、臨床試験におけるマーカーの発現または活性に対する影響を（例えば、その処置が有している可能性があるいずれかのシステム作用を理解するために）監視することに関する。
【０２１８】
[000126]  医薬組成物
[000127]  医薬組成物も本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、その化合物は、適切な医薬的キャリヤー中で、局所的に（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ，  ｌｏｃａｌｌｙ）、または全身に投与するための配合物中にあってよい。Ｅ．  Ｗ．  ＭａｒｔｉｎによるRemington's Pharmaceutical Sciences、第１５版(Mark Publishing Company, 1975)は、典型的なキャリヤーおよび調製の方法を開示している。その化合物は、細胞へのターゲッティングのために生分解性もしくは非生分解性ポリマーまたはタンパク質またはリポソームで形成された適切な生体適合性のマイクロカプセル、微粒子またはマイクロスフェア中に封入されていてもよい。そのシステムは当業者には周知であり、適切な核酸と共に使用するために最適化されてよい。
【０２１９】
[000128]  別の例として、その医薬組成物は、例えばSambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory,ニューヨーク；およびAusubel et al., 1994, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons,ニューヨークにおいて記述されている核酸の送達のための様々な方法で構成されることができる。その核酸送達システムは、望まれる核酸を、例として、および限定するものではなく、“裸の”核酸として“裸の”形で、または送達に適したビヒクル中に、例えば陽イオン性分子もしくはリポソームを形成する脂質との複合体中に配合されて、またはベクターの構成要素、もしくは医薬組成物の構成要素としてのいずれかで含む。その核酸送達システムは、細胞に直接、例えばそれを細胞と接触させることにより、または間接的に、例えばいずれかの生物学的プロセスの働きにより、のどちらかで与えることができる。
【０２２０】
[000129]  局所的投与のための配合物には、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体および粉末が含まれていてよい。一般に用いられる医薬的キャリヤー、水性、粉末もしくは油性基材、または増粘剤を、必要に応じて用いることができる。
【０２２１】
[000130]  例えば関節内（関節中で）、静脈内、筋内、皮内、腹膜内、および皮下経路によるような非経口投与に適した配合物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、およびその配合物を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含むことができる水性および非水性の等張の無菌の注射溶液、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、分散剤、安定剤、および保存剤を含むことができる水性および非水性の無菌の懸濁液、溶液または乳濁液が含まれる。注射のための配合物は単位剤形で、例えばアンプル中で、または多数回用量の入れ物中で、添加された保存剤と共に与えられてよい。当業者はその組成物を調製する、および配合するための様々なパラメーターを、過度の実験に頼ること無くすぐに決定することができる。化合物は単独で、または他の適切な構成要素との組み合わせで用いることができる。
【０２２２】
[000131]  一般に、化合物を投与する方法は当技術において周知である。特に、既に様々な療法に関して用いられている投与経路は、目下の用途における配合物と共に、好ましい投与経路を提供し、配合はもちろん個々の配合物、処置される対象の状態の重症度、および療法的有効性に必要な投与量のような因子に依存するであろう。本明細書で一般的に用いられる“有効量”は、その配合物が投与される対象において、その化合物を与えられない対等な対象と比較して、その障害の１種類以上の症状を処置する、その障害および／または疾患の１種類以上の症状の進行を逆行させる、その障害および／または疾患の１種類以上の症状の進行を止める、またはその障害および／または疾患の１種類以上の症状の発生を予防することが可能である量である。化合物の実際の有効量は、利用される具体的な化合物またはその組み合わせ、配合される個々の組成物、投与の方式、およびその個人の年齢、体重、状態、および処置される症状または状態の重症度に従って異なり得る。
【０２２３】
[000132]  当業者に既知のあらゆる許容できる方法を、配合物を対象に投与するために用いてよい。投与は処置される状態に依存して局所的（すなわち特定の部分、生理的システム、組織、器官、または細胞のタイプに対して）または全身に対してであってよい。
【０２２４】
[000133]  薬理ゲノム学
[000134]  薬理ゲノム学的マーカーも本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、“薬理ゲノム学的マーカー”はその発現レベルが対象における特定の臨床薬物応答または感受性と相関する客観的な生化学的マーカーである。薬理ゲノム学的マーカーの発現の存在または量は、対象の、より詳細には対象の腫瘍の、特定の薬物または特定のクラスの薬物を用いた療法に対する予測される応答と関係する。対象における１種類以上の薬理ゲノム学的マーカーの発現の存在または量を評価することにより、その対象に最も適した、またはより大きい程度の成功をもたらすと予測される薬物療法を選択することができる。
【０２２５】
[000135]  臨床試験の監視
[000136]  薬剤（例えば薬物の化合物）のマーカーの発現のレベルに対する影響を監視することも本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、その監視は基本的な薬物スクリーニングにおいてだけでなく臨床試験においても適用することができる。例えば、薬剤のマーカー発現に影響を与える有効性を、障害および／または疾患に関する処置を受けている対象の臨床試験において監視することができる。
【０２２６】
[000137]  ある限定的で無い態様において、本発明は、次の工程を含む、薬剤（例えば作動薬、拮抗薬、ペプチド模倣薬、タンパク質、ペプチド、核酸、小さい分子、または他の薬物の候補）を用いた対象の処置の有効性を監視するための方法を提供する：
その薬剤の投与の前に対象から投与前の試料を得る；
投与前の試料中の１種類以上の選択されたマーカーの発現のレベルを検出する；
対象から１種類以上の投与後の試料を得る；
投与後の試料中のマーカー（単数又は複数）の発現のレベルを検出する；
投与前の試料中のマーカー（単数又は複数）の発現のレベルを投与後の試料（単数）又は試料（複数）中のマーカー（単数又は複数）の発現のレベルと比較する；および
それに従ってその薬剤のその対象への投与を変更する。
【０２２７】
[000138]  例えば、処置の過程の間のマーカーの増大した発現は、効果的でない投薬量および投薬量を増大させるのが望ましいことを示している可能性がある。逆に、マーカーの減少した発現は、有効な処置および投薬量を変える必要が無いことを示している可能性がある。
【０２２８】
[000139]  電子機器で読むことのできる媒体、システム、アレイおよび同じものを用いる方法
[000140]  電子機器で読むことのできる媒体、システム、アレイおよび同じものを用いる方法も、本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、“電子機器で読むことのできる媒体”は、電子機器により直接読む、およびアクセスすることができるデータまたは情報を保管する、保持する、または含むあらゆる適切な媒体を指す。その媒体は次のものを含むことができるが、それらに限定されない：磁気記憶媒体、例えばフロッピー（登録商標）ディスク、ハードディスク記憶媒体、および磁気テープ；光学記憶媒体、例えばコンパクトディスク；電子的記憶媒体、例えばＲＡＭ、ＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭ、および同様のもの；ならびに一般的なハードディスクおよびこれらのカテゴリーの混成物、例えば磁気／光学記憶媒体。その媒体は、本明細書で記述したようなマーカーをその上に記録するために適合される、または設計される。
【０２２９】
[000141]  本明細書で用いられる用語“電子機器”は、データまたは情報を保管するために設計された、または適合されたあらゆる適切なコンピューティングもしくはプロセシング機器または他の装置を含むことを意図する。本発明での使用に適した電子機器の例には、スタンドアローンのコンピューティング機器；ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）、ワイドエリアネットワーク（ＷＡＮ）のインターネット、イントラネット、およびエクストラネットを含むネットワーク；電子的な器具、例えば個人用携帯情報端末（ＰＤＡ）、携帯電話、ページャーおよび同様のもの；ならびに局所型および分散型プロセシングシステムが含まれる。
【０２３０】
[000142]  本明細書で用いられる“記録した”は、電子機器で読むことのできる媒体上に情報を保管する、またはコードするためのプロセスを指す。当業者は、本明細書で記述されたマーカーを含む資料を作るために、情報を記録するためのあらゆる方法または媒体をすぐに採用することができる。
【０２３１】
[000143]  様々なソフトウェアプログラムおよびフォーマットを、本発明のマーカー情報を電子機器で読むことのできる媒体上に保管するために用いることができる。あらゆる数のデータプロセッサー構築フォーマット（例えばテキストファイルまたはデータベース）を、その上に記録されたマーカーを有する媒体を得る、または作り出すために用いてよい。そのマーカーを読むことのできる形で提供することにより、そのマーカー配列情報に様々な目的のために日常的にアクセスすることができる。例えば、当業者は、その読むことのできる形のヌクレオチドまたはアミノ酸配列を、標的配列または標的構造モチーフをデータ保管手段内に保管されている配列情報と比較するために用いることができる。特定の標的配列または標的モチーフと合う配列の断片または領域を同定するために検索手段が用いられる。
【０２３２】
[000144]  従って、本明細書において、対象が障害および／または疾患または障害および／または疾患に対する素因を有するかどうかを決定するための方法を実行するための指示を保持するための媒体も提供し、ここで、その方法は、マーカーの存在または欠如を決定する、ならびにそのマーカーの存在または欠如に基づいてその対象が障害および／または疾患またはそれに対する素因を有するかどうかを決定する、および／またはその障害および／または疾患またはその障害および／または疾患状態に対する素因のための個別の処置を推奨する工程を含む。
【０２３３】
[000145]  本明細書において、電子的システムおよび／またはネットワークにおいて対象がマーカーと関係する障害および／または疾患またはそれに対する素因を有するかどうかを決定するための方法も提供し、ここで、その方法は、マーカーの存在または欠如を決定する、ならびにそのマーカーの存在または欠如に基づいてその対象が特定の障害および／または疾患またはその障害および／または疾患に対する素因を有するかどうかを決定する、および／またはその疾患もしくは障害および／またはその障害および／または疾患状態に関するその素因のための個別の処置を推奨する工程を含む。その方法はさらに、その対象と関係する表現型の情報を受け取る、および／またはネットワークからその対象と関係する表現型の情報を獲得する工程を含んでいてよい。
【０２３４】
[000146]  本明細書において、対象がマーカーと関係する障害および／または疾患または障害および／または疾患に対する素因を有するかどうかを決定するためのネットワーク、方法も提供し、その方法は、そのマーカーと関係する情報を受け取る、その対象と関係する表現型の情報を受け取る、そのマーカーおよび／または障害および／または疾患に対応するネットワークからの情報を受け取る、ならびにその表現型の情報、マーカー、および獲得した情報の内の１種類以上に基づいて、対象が障害および／または疾患またはそれに対する素因を有するかどうかを決定する工程を含む。その方法はさらに、その障害および／または疾患またはそれに対する素因のための個別の処置を推奨する工程を含んでいてよい。
【０２３５】
[000147]  本明細書において、対象が障害および／または疾患またはそれに対する素因を有するかどうかを決定するためのビジネス手法も提供し、その方法は、そのマーカーと関係する情報を受け取る、その対象と関係する表現型の情報を受け取る、そのマーカーおよび／または障害および／または疾患に対応するネットワークからの情報を獲得する、ならびにその表現型の情報、マーカー、および獲得した情報の内の１種類以上に基づいて、対象が障害および／または疾患またはそれに対する素因を有するかどうかを決定する工程を含む。その方法はさらに、そのための個別の処置を推奨する工程を含んでいてよい。
【０２３６】
[000148]  本明細書において、アレイ中の１種類以上のマーカーの発現を分析するために用いることのできるアレイも提供する。１態様において、そのアレイは組織における発現を分析してそのアレイにおけるそのマーカーの組織特異性を確かめるために用いることができる。この方式で、約７０００種類以上までのマーカーを発現に関して同時に分析することができる。これは１種類以上の組織において特異的に発現している一連のマーカーを示す一覧表を開発することを可能にする。
【０２３７】
[000149]  その質的決定に加えて、本明細書においてその発現の定量を提供する。従って、組織特異性だけでなく、その組織における発現のレベルも確かめることができる。従って、マーカーをそれらの組織発現自体およびその組織における発現のレベルに基づいてグループ分けすることができる。これは例えば組織間（ｂｅｔｗｅｅｎ  ｏｒ  ａｍｏｎｇ）の発現の関係を確かめるのに有用である。従って、ある組織を撹乱させる（ｐｅｒｔｕｒｂｅｄ）ことができ、第２の組織での発現へのその作用を決定することができる。この状況において、ある細胞型の、生物学的刺激に応答した別の細胞型への作用を決定することができる。
【０２３８】
[000150]  その決定は、例えば細胞間相互作用の作用を発現のレベルで知るために有用である。もしある薬剤がある細胞型を処置するために療法的に投与されるが別の細胞型に望ましくない作用を有する場合、その方法はその望ましくない作用の分子的基礎を決定するためのアッセイを提供し、そうして相殺的薬剤を一緒に投与する、またはそうでなければその望ましくない作用を処置する機会を提供する。同様に、単一の細胞型内においてさえも、望ましくない生物学的作用を分子レベルで決定することができる。従って、薬剤の標的遺伝子以外の発現に対する作用を確かめ、相殺することができる。
【０２３９】
[000151]  別の態様において、そのアレイはそのアレイ中の１種類以上のマーカーの発言の時間経過を監視するために用いることができる。これは、本明細書で開示するように、様々な生物学的状況、例えば障害および／または疾患の発現、その進行、およびプロセス、例えばそれと関係する細胞のトランスフォーメーションにおいて起こり得る。
【０２４０】
[000152]  そのアレイは、同じ細胞内の、または異なる細胞内の、その発現または他のマーカーの発現の作用を確かめるためにも有用である。これは例えば、最終的な、または下流の標的を制御できない場合に、療法的介入のための代わりの分子標的の選択を提供する。
【０２４１】
[000153]  そのアレイは、正常な、および異常な細胞における１種類以上のマーカーの差異のある発現パターンを確かめるためにも有用である。これは診断または療法的介入のための分子標的として役立つことができるであろう一連のマーカーを提供する。
【０２４２】
[000154]  代用マーカー（Ｓｕｒｒｏｇａｔｅ  Ｍａｒｋｅｒｓ）
[000155]  代用マーカーも本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、そのマーカーは１種類以上の障害もしくは疾患状態に関する、またはそれに至る状態に関する代用マーカーとして役立つ可能性がある。“代用マーカー”は、障害および／または疾患の欠如もしくは存在と、または疾患および／または障害の進行と相関する客観的な生化学的マーカーであることができる。そのマーカーの存在または量は、その障害および／または疾患と無関係である。従って、これらのマーカーは処置の特定の過程が障害および／または疾患状態を減らすのに有効であるかどうかを示すのに役立つ可能性がある。代用マーカーは、障害および／または疾患状態の存在または程度を標準的な方法論を通して評価するのが難しい場合、または危険である可能性がある臨床的エンドポイントに到達する前に進行の評価が望まれる場合に特に有用である。
【０２４３】
[000156]  そのマーカーは薬力学的マーカーとしても有用である。本明細書で用いられる“薬力学的マーカー”は、薬物の作用と特異的に相関する客観的な生化学的マーカーである。薬力学的マーカーの存在または量は、そのためにその薬物が投与される障害および／または疾患状態と関係しない；従って、そのマーカーの存在または量は、対象におけるその薬物の存在または活性を示している。例えば、薬力学的マーカーは生物学的組織中のその薬物の濃度を示している可能性があり、その場合、そのマーカーはその組織においてその薬物のレベルに関係して発現される、もしくは転写される、または発現されない、もしくは転写されないかのどちらかである。この方式で、その薬物の分布または取り込みを薬力学的マーカーにより監視することができる。同様に、薬力学的マーカーの存在または量は、薬物の代謝産物の存在または量に関係している可能性があり、その結果、そのマーカーの存在または量はその薬物のインビボでの相対的な分解速度を示す。
【０２４４】
[000157]  薬力学的マーカーは、薬物の作用の検出の感度の増大において、特にその薬物が低い用量で投与される場合に、特に有用である。例え少量の薬物でも多数回のマーカー転写または発現を活性化するのに十分である可能性があるため、その増幅されたマーカーはその薬物自体よりも容易に検出できる量である可能性がある。また、そのマーカーはそのマーカー自体の性質のため、より容易に検出される可能性がある；例えば、本明細書で記述した方法を用いて、抗体をタンパク質マーカーに関する免疫に基づく検出システムにおいて用いることができ、またはｍＲＮＡマーカーを検出するためにマーカーに特異的な放射性標識したプローブを用いることができる。さらに、薬力学的マーカーの使用は、可能な直接的な観察の範囲を超えて、薬物処置による危険性の機構に基づく予測を提供することができる。
【０２４５】
[000158]  試験のためのプロトコル
[000159]  試験のためのプロトコルも本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、障害および／または疾患に関する試験の方法は、例えば対象からの生物学的試料中のそれぞれのマーカーの発現レベルを経時的に測定すること、およびそのレベルを対照の生物学的試料中のそのマーカーのレベルと比較することを含んでいてよい。
【０２４６】
[000160]  そのマーカーが本明細書で記述したマーカーの内の１種類であり、その発現レベルが異なって発現している（例えば、対照におけるそれよりも高い、または低い）場合、その対象は障害および／または疾患に冒されていると判定される。そのマーカーの発現レベルが許容できる範囲内に収まる場合、その対象はそれに犯されているとは考えにくい。
【０２４７】
[000161]  対照に関する基準値は、発現レベルを比較するために、対照におけるマーカーの発現レベルを測定することにより予め決められてよい。例えば、基準値は上述のマーカーの発現レベルに基づいて決めることができる；特定の態様において、許容できる範囲は基準値に基づいて±２Ｓ．Ｄ．と考えられる。一度基準値が決定されれば、試験法は対象からの生物学的試料中の発現レベルのみを測定することおよびその値を対照に関する決定された基準値と比較することにより実行されてよい。別の例において、マーカーの発現レベルはマーカーのｍＲＮＡへの転写、およびタンパク質への翻訳を含む。従って、障害および／または疾患に関する試験の１つの方法は、マーカー遺伝子に対応するｍＲＮＡの発現の強度またはマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質の発現レベルの比較に基づいて実行される。
【０２４８】
[000162]  障害および／または疾患に関する試験におけるマーカーの発現レベルの測定は、様々な分析法に従って実施することができる。例えば、これらの遺伝子にハイブリダイズする核酸をプローブとして用いるハイブリダイゼーションの技法、またはマーカー遺伝子にハイブリダイズするＤＮＡをプライマーとして用いる遺伝子増幅の技法を用いることができる。
【０２４９】
[000163]  試験のために用いられるプローブまたはプライマーは、マーカーのヌクレオチド配列に基づいて設計することができる。それぞれのマーカー遺伝子のヌクレオチド配列に関する識別番号を本明細書で記述する。
【０２５０】
[000164]  さらに、高等動物の遺伝子は一般に高頻度で多型性を伴うことが理解されるべきである。スプライシングのプロセスの間に互いに異なるアミノ酸配列を含むイソ型を生成する多くの分子も存在する。あるマーカーの活性に類似した活性を有する、障害および／または疾患と関係するあらゆるマーカーは、たとえそれが多型性またはイソ型であることによるヌクレオチド配列の違いを有していても、そのマーカーに含まれる。
【０２５１】
[000165]  そのマーカーはヒトに加えて他の種の同族体を含むことができることも理解されるべきである。従って、別途明記しない限り、“マーカー”という表現は、その種に特有のそのマーカーの同族体または個人の中に導入された外来のマーカーを指す。
【０２５２】
[000166]  “マーカーの同族体”は、ヒト以外の種に由来し、ストリンジェントな条件の下でプローブとしてヒトのマーカーにハイブリダイズすることができるマーカーを指すことも理解されるべきである。そのストリンジェントな条件は当業者には既知であり、当業者は同等のストリンジェンシーを生成するのに適した条件を実験的に、または経験的に選択することができる。例えば、マーカーのヌクレオチド配列またはマーカーのヌクレオチド配列の相補鎖に相補的なヌクレオチド配列を含み、少なくとも１５ヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを、プライマーまたはプローブとして用いることができる。このように、“相補鎖”は、二本鎖ＤＮＡの、他方の鎖に関しての一方の鎖を意味し、それはＡ：Ｔ（ＲＮＡに関してはＵ）およびＧ：Ｃ塩基対で構成される。加えて、“相補的”は少なくとも１５個の連続したヌクレオチドの領域に完全に相補的であるそれらだけでなく、ある例において少なくとも４０％、ある例において５０％、ある例において６０％、ある例において７０％、ある例において８０％、ある例において９０％、ある例において９５％、またはそれより高いヌクレオチド配列の相同性を有するそれらも意味する。ヌクレオチド配列間の相同性の程度は、アルゴリズム、ＢＬＡＳＴ等により決定することができる。そのポリヌクレオチドは、マーカーを検出するためのプローブとして、またはマーカーを増幅するためのプライマーとして有用である。プライマーとして用いられる場合、そのポリヌクレオチドは通常１５ｂｐ〜１００ｂｐ、およびある態様において１５ｂｐ〜３５ｂｐのヌクレオチドを含む。プローブとして用いられる場合、ＤＮＡはマーカー遺伝子（またはその相補鎖）の全体のヌクレオチド配列、または少なくとも１５ｂｐのヌクレオチドを有するその一部の配列を含む。プライマーとして用いられる場合、その３’領域はマーカー遺伝子に相補的でなくてはならないが、その５’領域は制限酵素認識配列またはタグにつながっていることができる。“ポリヌクレオチド”はＤＮＡまたはＲＮＡのどちらかであってよい。これらのポリヌクレオチドは、合成によるもの、または天然に生じたもののどちらかであってよい。また、ハイブリダイゼーションのためのプローブとして用いられるＤＮＡは通常は標識されている。当業者は、その標識法をすぐに理解することができる。本明細書において、用語“オリゴヌクレオチド”は比較的低い程度の重合を有するポリヌクレオチドを意味する。オリゴヌクレオチドはポリヌクレオチドに含まれる。
【０２５３】
[000167]  ハイブリダイゼーションの技法を用いた障害および／または疾患に関する試験は、例えばノーザンハイブリダイゼーション、ドットブロットハイブリダイゼーション、またはＤＮＡマイクロアレイの技法を用いて実行することができる。さらに、遺伝子増幅技法、例えばＲＴ−ＰＣＲ法を用いてよい。ＲＴ−ＰＣＲにおける増幅段階の間にＰＣＲ増幅監視法を用いることにより、マーカーの発現のより定量的な分析を得ることができる。
【０２５４】
[000168]  ＰＣＲ遺伝子増幅監視法において、検出標的（ＤＮＡまたはＲＮＡの逆転写物）は蛍光染料および蛍光を吸収するクエンチャーで標識されたプローブにハイブリダイズする。ＰＣＲが進行し、Ｔａｑポリメラーゼがその５’−３’エキソヌクレアーゼ活性によりプローブを分解すると、蛍光染料およびクエンチャーが互いから引き離され、蛍光が検出される。蛍光はリアルタイムで検出される。標的のコピー数が既知である標準試料を同時に測定することにより、ＰＣＲ増幅が線形であるサイクル数で、対象試料中の標的のコピー数を決定することができる。また、当業者はあらゆる適切な方法を用いてＰＣＲ増幅監視法を実施することができることを認識している。
【０２５５】
[000169]  障害および／または疾患に関する試験の方法は、マーカーによりコードされるタンパク質を検出することにより実施することもできる。以下、マーカーによりコードされるタンパク質を“マーカータンパク質”と記述する。その試験法に関して、例えば、それぞれのマーカータンパク質に結合する抗体を用いるウェスタンブロッティング法、免疫沈降法、およびＥＬＩＳＡ法を用いることができる。検出において用いられる、マーカータンパク質に結合する抗体は、あらゆる適切な技法により生成してよい。また、マーカータンパク質を検出するために、その抗体を適切に標識してよい。あるいは、その抗体を標識する代わりに、その抗体に特異的に結合する物質、例えばプロテインＡまたはプロテインＧを標識してそのマーカータンパク質を間接的に検出してよい。より具体的には、その検出法はＥＬＩＳＡ法を含むことができる。抗原として用いられるタンパク質またはその一部のペプチドを、例えばマーカーまたはその一部を発現ベクターの中に挿入し、そのコンストラクトを適切な宿主細胞の中に導入して形質転換体を生成し、その形質転換体を培養して組み換えタンパク質を発現させ、発現した組み換えタンパク質を培養物または培養上清から精製することにより得ることができる。あるいは、マーカーによりコードされるアミノ酸配列または完全長ｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列の一部を含むオリゴペプチドを化学的に合成して免疫源として用いる。
【０２５６】
[000170]  さらに、障害および／または疾患に関する試験は、生物学的試料中のマーカーの発現レベルに関してだけでなくマーカータンパク質の活性に関しても指数として用いて実行することができる。マーカータンパク質の活性は、そのタンパク質に本来備わっている生物学的活性を意味する。それぞれのタンパク質の活性を測定するために、様々な方法を用いることができる。
【０２５７】
[000171]  たとえ対象がその障害および／または疾患を示唆する症状にも関わらず型にはまった試験において障害および／または疾患に冒されていると診断されなかったとしても、その対象が障害および／または疾患を患っているか否かは本明細書で記述した方法に従う試験を実行することにより容易に決定することができる。
【０２５８】
[000172]  より具体的には、特定の態様において、そのマーカーが本明細書で記述したマーカーの内の１種類である場合、その症状が少なくとも障害および／または疾患に対する感受性を示唆する対象におけるそのマーカーの発現レベルの増大または減少は、その症状が主にそれにより引き起こされていることを示す。
【０２５９】
[000173]  加えて、その試験は対象において障害および／または疾患が改善しているかどうかを決定するのに有用である。言い換えると、本明細書で記述した方法は、それに関する処置の療法的効果を判定するために用いることができる。さらに、そのマーカーが本明細書で記述した遺伝子の内の１種類である場合、それに冒されていると診断された対象におけるそのマーカーの発現レベルの増大または減少は、その障害および／または疾患がより進行したことを意味する。
【０２６０】
[000174]  障害および／または疾患に対する重症度および／または感受性も、発現レベルにおける違いに基づいて決定されてよい。例えば、そのマーカーが本明細書で記述したマーカーの内の１種類である場合、そのマーカーの発現レベルの増大の程度は、障害および／または疾患の存在および／または重症度と相関している。
【０２６１】
[000175]  動物モデル
[000176]  １種類以上のマーカーまたはそのマーカーに機能的に均等なマーカーの発現レベルがその動物モデルにおいて高められた、障害および／または疾患に関する動物モデルも、本発明の意図される範囲内である。ある限定的で無い例において、本明細書で用いられる“機能的に均等なマーカー”は、一般にそのマーカーの既知の活性に類似の活性を有するマーカーである。
【０２６２】
[000177]  動物モデルは障害および／または疾患による生理的変化を検出するのに有用である。特定の態様において、動物モデルはマーカーの追加の機能を明らかにするのに、およびその標的がそのマーカーである薬物を評価するのに有用である。
【０２６３】
[000178]  動物モデルはカウンターパート遺伝子の発現レベルを制御する、またはカウンターパート遺伝子を投与することにより作り出すことができる。その方法は、遺伝子の発現レベルを制御することにより動物モデルを作り出すことを含むことができる。別の態様において、その方法は遺伝子によりコードされるタンパク質を投与すること、またはそのタンパク質に対する抗体を投与することにより動物モデルを作り出すことを含むことができる。特定の他の態様において、次いでそのマーカーを適切な方法を用いて測定することができるように、そのマーカーを過剰発現することができることも理解されるべきである。別の態様において、動物モデルはそのグループの遺伝子から選択された遺伝子を導入することにより、またはその遺伝子によりコードされるタンパク質を投与することにより作り出すことができる。別の態様において、そのグループの遺伝子から選択された遺伝子の発現またはその遺伝子によりコードされるタンパク質の活性を抑制することにより、障害および／または疾患を誘導することができる。アンチセンス核酸、リボザイム、またはＲＮＡｉを用いてその発現を抑制することができる。その活性を阻害する物質、例えば抗体を投与することにより、タンパク質の活性を効果的に制御することができる。
【０２６４】
[000179]  動物モデルは障害および／または疾患の基礎となる機構を解明するのに、およびスクリーニングにより得られた化合物の安全性を試験するのにも有用である。例えば、動物モデルが特定の障害および／または疾患の症状を発現している場合、または特定の障害および／または疾患にかかわる測定された値がその動物において変化している場合、その障害および／または疾患を緩和する活性を有する化合物を探索するためのスクリーニングシステムを構築することができる。
【０２６５】
[000180]  本明細書で用いられる表現“発現レベルの増大”は、次の内のいずれか１つを指す：外来遺伝子として導入されたマーカー遺伝子を人為的に発現させている場合；その対象動物に本来備わっているマーカー遺伝子の転写およびそのタンパク質への翻訳が増進されている場合；または翻訳産物であるタンパク質の加水分解が抑制されている場合。
【０２６６】
[000181]  本明細書で用いられる表現“発現レベルの減少”は、対象の動物のマーカーの転写およびそのタンパク質への翻訳が阻害されている状態、または翻訳産物であるタンパク質の加水分解が増進されている状態のどちらかを指す。遺伝子の発現レベルは、例えばＤＮＡチップ上のシグナル強度の違いにより決定することができる。さらに、翻訳産物−−タンパク質−−の活性は、正常な状態におけるそれと比較することにより決定することができる。
【０２６７】
[000182]  動物モデルは、例えばマーカー遺伝子が導入されており人為的に発現させている動物；マーカー遺伝子のノックアウト動物；およびマーカー遺伝子を別の遺伝子で置き換えたノックイン動物を含むトランスジェニック動物を含むことができることも、意図される範囲内である。その中にマーカー遺伝子のアンチセンス核酸、リボザイム、ＲＮＡｉ効果を有するポリヌクレオチド、またはデコイ核酸もしくはそのようなものとして機能するＤＮＡが導入されているトランスジェニック動物を、そのトランスジェニック動物として用いることができる。そのトランスジェニック動物は、例えば、マーカータンパク質の活性がその遺伝子のコード領域の中に変異（単数又は複数）を導入することにより増進もしくは抑制されている、またはそのアミノ酸配列が修正されて加水分解に耐性もしくは感受性になっている動物も含む。アミノ酸配列における変異には、置換、欠失、挿入、および付加が含まれる。
【０２６８】
[000183]  “対象”は、処置または療法のために選択されたヒトまたはヒトでは無い動物を意味する。“有すると疑われる対象”は、障害、疾患または病気の１種類以上の臨床指標を示す対象を意味する。
【０２６９】
[000184]  “予防する”または“予防”は、病気または障害および／または疾患の開始、発現または進行を、数週間、数ヶ月間、または数年間を含むある期間の間遅らせる、または未然に防ぐことを指す。“処置”または“処置する”は、障害および／または疾患の治療または改善のために用いられる１種類以上の特定の手順の適用を意味する。特定の態様において、その特定の手順は１種類以上の医薬的薬剤の投与である。
【０２７０】
[000185]  “改善”は、障害および／または疾患の少なくとも１種類の指標の重症度を低減することを意味する。特定の態様において、改善は障害および／または疾患の少なくとも１種類の指標の進行を遅らせる、または遅くすることを含む。指標の重症度は、当業者に既知の主観的または客観的な尺度により決定されてよい。
【０２７１】
[000186]  “それを必要とする対象”は、療法または処置を必要とすることが確認された対象を意味する。
【０２７２】
[000187]  “投与する”は、対象に医薬的薬剤または組成物を与えることを意味し、医学の専門化による投与および自己投与を含むがそれらに限定されない。
【０２７３】
[000188]  “機能を向上する”は、その変化が正常なパラメーターに向かって機能することを意味する。特定の態様において、機能は対象において見つかる分子を測定することにより評価される。
【０２７４】
[000189]  “変調（Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）”は、機能または活性の撹乱を意味する。特定の態様において、変調は遺伝子発現の増大を意味する。特定の態様において、変調は遺伝子発現の低下を意味する。
【０２７５】
[000190]  “発現”は、それにより遺伝子にコードされる情報が細胞内に存在して作動する構造に変換されるあらゆる機能を意味する。
【０２７６】
[000191]  本明細書で記述した方法および試薬は、好ましい態様を表すものであり、典型的なものであり、本発明の範囲に対する限定として意図するものではない。当業者はそれにおける修正および他の用途を思いつくであろう。これらの修正は本発明の精神の内に含まれ、特許請求の範囲により定められる。本明細書で開示される本発明に対して、本発明の範囲および精神から逸脱すること無く様々な置換および修正がなされてよいことも、当業者にはすぐに明らかであろう。
【０２７７】
[000192]  本発明は好ましい態様および任意の特徴により具体的に開示されたが、当業者は本明細書で開示されたその概念の修正および変形に頼ってよく、その修正および変形は添付した特許請求の範囲により定義されるこの発明の範囲内であると考えられることは理解されるべきである。
【０２７８】
[000193]  本明細書で引用される全ての特許、特許出願および参考文献をそのまま援用する。本発明は当業者にとってそれを作り使用するのに十分に詳細に記述され、例証されたが、様々な代替、修正および向上が本発明の精神および範囲から逸脱すること無く明らかであるはずである。加えて、個別の状況または材料を本発明の教えに適応させるために、その本質的な範囲から逸脱すること無く多くの修正がなされてよい。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］表面マーカーＣＤ４８およびＧｒ−１を用いることにより同定される、単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）。
［態様２］ＣＤ４８−／ＭＨＣ  Ｉ−／ＭＨＣ  ＩＩ−／ＣＤ１ａ−／ＣＤ１ｄ−／ＣＤ１１ｃ−の特徴的な表面表現型を有する、単離されたヒト樹状細胞前駆体（ＤＣ．ｃｏｍ）。
［態様３］態様２の細胞集団であって、ＤＣ．ｃｏｍ集団がＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合に、そのＤＣ．ｃｏｍ集団が特徴的な樹状突起の形態を示す樹状細胞（ＤＣ）に分化する、前記細胞集団。
［態様４］単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）であって、ＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１１ｃ−／Ｌｙ６Ｇ＋／ＣＤ４８−／ＭＨＣ  Ｉ−／ＭＨＣ  ＩＩ−の特徴的な表面表現型を有し；ここで、ＤＣ．ｃｏｍ集団がＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合、そのＤＣ．ｃｏｍ集団は特徴的な樹状突起の形態を示すＤＣに分化する、前記細胞集団。
［態様５］ＤＣ．ｃｏｍ集団がＧＭ−ＣＳＦの存在下で培養された場合にそのＤＣ．ｃｏｍ集団が特徴的な樹状突起の形態を示す樹状細胞（ＤＣ）に分化する、態様４の細胞集団。
［態様６］次の内の１つ以上：
−表面表現型に基づいてＣＤ１１ｃ＋  ＤＣから識別できること；ここで、ＣＤ４８、およびＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子はそのＤＣ．ｃｏｍ集団において検出不能である、
−表面表現型に基づいて他の樹状細胞前駆体から識別できること；ここで、Ｌｙ６ＧがそのＤＣ．ｃｏｍ集団において検出可能である；
−ＯＶＡタンパク質およびペプチドを、ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞受容体トランスジェニックマウスから単離されたＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞に提示する能力により評価した際に、検出できる抗原提示能力を示さないこと；
−分葉状の核および少数の細胞質顆粒の封入により特徴づけられる形態を有すること；
−表面表現型、細胞の大きさ、粒状度、および形態に関して均質であること；
−ＢＭ培養においてＣＤｌｌｂ＋／ＤｓＲｅｄ−／ＣＤ１１ｃ−集団と比べて比較的限られた有糸分裂可能性を有すること；
−好中球前駆細胞の“桿状核球”集団と似ていること；ならびに
−前に同定されたＤＣ亜集団とは別個のＤＣサブセット（ｇｒ−ＤＣ）に分化する能力を有すること；
により特徴づけられる、単離された樹状細胞前駆体集団（ＤＣ．ｃｏｍ）。
［態様７］顆粒球由来ＤＣ（ｇｒ−ＤＣ）を含む、ＤＣ．ｃｏｍに由来する単離された樹状細胞集団。
［態様８］ＣＤ１１ｃ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５の発現に関してスクリーニングすることにより同定される、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様９］インビトロまたはエキソビボ系において免疫応答を誘導するように抗原を提示することができる、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１０］抗原が外来性抗原、内因性抗原または自己抗原の内の１種類以上である、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１１］抗原がインビトロまたはエキソビボ系において感染性病原体に対する免疫応答を誘導するように微生物抗原を提示することができる、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１２］抗原がインビトロまたはエキソビボ系において腫瘍細胞に対する免疫応答を誘導するように腫瘍抗原を提示することができる、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１３］抗原がインビトロまたはエキソビボ系においてウイルス病原体に対する免疫応答を誘導するようにウイルス抗原を提示することができる、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１４］抗原がインビトロまたはエキソビボ系において免疫応答を誘導するように非微生物性外来性抗原を提示することができる、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１５］ｇｒ−ＤＣがＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方に対してＯＶＡ抗原を提示する、態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１６］ｇｒ−ＤＣがＬｙ６Ｇの表面発現を示す態様７のｇｒ−ＤＣ細胞集団。
［態様１７］活性化された樹状細胞を得るための方法であって、以下：
ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの少なくとも一方を含む細胞の集団を提供する、および
細胞の少なくとも一部の成熟化を誘発するためにその集団の中の細胞の少なくとも一部を活性化させる、
を含む、前記方法。
［態様１８］少なくとも１個のＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣ細胞が、以下：少なくとも１種類のウイルスまたはその派生物；少なくとも１種類の細菌またはその派生物；少なくとも１種類の寄生生物；少なくとも１種類の菌類またはその派生物；少なくとも１種類のサイトカインまたは少なくとも１種類のリガンド；の１又はそれより多くにより活性化される、態様１７の方法。
［態様１９］Ｔリンパ球を含むあらゆるタイプの生物学的試料に対して実施される、態様１７の方法。
［態様２０］その試料が血液である、態様１９の方法。
［態様２１］その試料が自家血液である、態様１８の方法。
［態様２２］その樹状細胞がヒトのものである、態様１７の方法。
［態様２３］Ｔリンパ球を活性化させるための方法であって、以下：
ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの少なくとも一方を含む細胞の集団を提供する；
細胞の少なくとも一部の成熟化を誘発するためにその集団の中の細胞の少なくとも一部を活性化させる；および、
Ｔリンパ球を樹状細胞と接触させる；
を含む、前記方法。
［態様２４］その樹状細胞がヒトのものである、態様２３の方法。
［態様２５］樹状細胞を活性化する化合物を同定するための方法であって、化合物をＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの少なくとも１つを含む細胞の集団と接触させ、そして細胞の活性化を検出する工程を含む、前記方法。
［態様２６］その樹状細胞がヒトのものである態様２５の方法。
［態様２７］樹状細胞系を単離するためのインビトロの方法であって、以下：
対象から樹状細胞前駆体を単離する；
単離した細胞を有効量のＧＭ−ＣＳＦを含む適切な培地の中で培養状態に置く；
細胞の顆粒球由来樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）への分化を誘導する；および
対象に特有の樹状細胞系を得るために、細胞を連続的な細胞分裂により増殖させる；
を含む、前記方法。
［態様２８］細胞が少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、および好ましくは少なくとも１００回の細胞分裂の後に単離される、態様２７の方法。
［態様２９］様々な樹状細胞系または“クローン”を得るために得られた樹状細胞系をクローニングすることをさらに含み、“系のクローニング”がこの系の細胞の個別化、および単一の細胞から得られた遺伝的に同一の細胞を集めることを意味する、態様２７の方法。
［態様３０］興味のある表現型を有する少なくとも１種類のクローンを同定するために、様々な樹状細胞系またはクローンの内の１種類を選択することをさらに含む、態様２９の方法。
［態様３１］選択された細胞がＣＤ４８陰性／ＭＨＣクラスＩ陰性の表現型を有する、態様２７の方法。
［態様３２］態様２７の方法に従って得られた単離された細胞系。
［態様３３］樹状細胞前駆体（ＤＣ．ｃｏｍ）系を単離するためのインビトロの方法であって、以下：
対象から樹状細胞前駆体を単離する；
単離した細胞を有効量のＧＭ−ＣＳＦを含む適切な培地の中で培養状態に置く、
単離した細胞からＤＣ前駆体細胞前駆体（ＤＣ．ｃｏｍ）系を生成する、および
対象に特有の樹状細胞系を得るために、細胞を連続的な細胞分裂により増殖させる；
を含む、前記方法。
［態様３４］細胞が少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、および好ましくは少なくとも１００回の細胞分裂の後に単離される、態様３３の方法。
［態様３５］様々な樹状細胞系または“クローン”を得るために得られた樹状細胞系をクローニングすることをさらに含み、“系のクローニング”がこの系の細胞の個別化、および単一の細胞から得られた遺伝的に同一の細胞を集めることを意味する、態様３３の方法。
［態様３６］さらに興味のある表現型を有する少なくとも１種類のクローンを同定するために様々な樹状細胞系またはクローンの内の１種類を選択することを含む、態様３５の方法。
［態様３７］選択された細胞がＣＤ４８陰性／ＭＨＣクラスＩ陰性の表現型を有する、態様３３の方法。
［態様３８] 樹状細胞を活性化する化合物を同定するための方法であって、以下：
化合物をＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣ細胞系と接触させる、および
細胞系の活性化を検出する；
を含む、前記方法。
［態様３９］感染性のまたは微生物性の因子（細菌、ウイルス、寄生生物、菌類）、癌、移植片対宿主疾患、アレルギーおよび自己免疫疾患と関係する病理の少なくとも１タイプの処置における、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４０] 抗腫瘍免疫療法および細胞療法における樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣの使用であって、その樹状細胞系ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物が免疫療法薬剤である、前記使用。
［態様４１］癌の処置のための抗腫瘍免疫応答を促進する医薬組成物を製造するための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４２] 感染症の処置のための抗微生物応答を促進する医薬組成物を製造するための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４３］ウイルス性疾患の処置のための抗ウイルス応答を促進する医薬組成物を製造するための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４４］非微生物性外因性自己免疫疾患の処置のための応答を促進する医薬組成物を製造するための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４５］移植片対宿主疾患の処置のための応答を促進する医薬組成物を製造するための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４６］ＤＣが保護的な、または病原性の役割を果たしていることが既知である疾患におけるｇｒ−ＤＣの数および／または機能を検査するための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４７］望まれる形の免疫応答を選択的に誘導するように設計された、カスタマイズされた細胞に基づく療法のための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４８］ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣを活性化するように設計された新しいクラスのワクチンアジュバントおよび配合物を開発するための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様４９］ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣの機能を選択的に増進または阻害する小さい化合物をスクリーニングするための、樹状細胞前駆体系ＤＣ．ｃｏｍおよび／または樹状細胞系ｇｒ−ＤＣ、またはその機能的派生物の使用。
［態様５０］樹状細胞へ方向付けされた前駆細胞集団（ＤＣ．ｃｏｍ）の同定のための方法であって、その集団が検出可能な抗原提示能力を示す；骨髄サプレッサー細胞機能を示す；外来分子を取り込むその能力において効率的である；ＣＤ４８、ＭＨＣ  Ｉ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ１１ｃの内の１種類以上の発現を獲得する；かどうかを決定する工程を含む、前記方法。
［態様５１］ＤＣ．ｃｏｍ集団の精製のための方法であって、樹状細胞前駆体集団を少なくともＣＤ４８およびＭＨＣクラスＩマーカーに関してスクリーニングする工程を含む、前記方法。
［態様５２］ｇｒ−ＤＣ集団の精製のための方法であって、樹状細胞集団を少なくともＣ１１ｃ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５マーカーに関してスクリーニングする工程を含む、前記方法。
［態様５３］桿状核球集団の精製のための方法であって、樹状細胞前駆体集団を少なくともＣＤ４８およびＭＨＣクラスＩマーカーに関してスクリーニングする工程を含む、前記方法。
［態様５４］樹状細胞へ方向付けされた前駆細胞集団（ＤＣ．ｃｏｍ）の拡張のための方法であって、単離されたＤＣ．ｃｏｍ細胞の集団をＧＭ−ＣＳＦ中で培養する、および場合によりその培養物に骨髄（ＢＭ）フィーダー細胞を添加する工程を含む、前記方法。
［態様５５］前駆体樹状細胞（ＤＣ．ｃｏｍ）を顆粒球樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）の表現型を示すように誘導するための方法であって、以下：
ｉ）（ＣＤ４５．２＋である）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの骨髄（ＢＭ）培養物からＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高ＤＣ．ｃｏｍ集団を精製する、
ｉｉ）工程ｉ）からの集団を、（ＣＤ４５．１＋である）Ｂ６／ＳＪＬマウスから新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養する；
ｉｉｉ）抗ＣＤ４５．２および抗ＣＤ４５．１抗体で分染することにより識別されたＤＣ．ｃｏｍ集団に由来する細胞を識別する；ならびに
ｉｖ）ＣＤ４５．２＋細胞を１種類以上の示されたマーカーの表面発現に関して分析する；
を含む、前記方法。
［態様５６］ｇｒ−ＤＣ．ｃｏｍ細胞がＣＤ１１ｃ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＤＥＣ２０５の発現を獲得し、Ｌｙ６Ｇの表面発現を維持する、態様５６の方法。
［態様５７］細胞が蛍光活性化細胞選別ＦＡＣＳにより精製される、態様５６の方法。
［態様５８］哺乳類の前駆体樹状細胞から顆粒球樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）の表現型を有する細胞を生成するための方法であって、以下：
ｉ）哺乳類の血液試料から前駆体樹状細胞を含む細胞画分を用意する；
ｉｉ）次のことにより、工程（ｉ）の細胞画分の少なくとも１サブセットを単離する：
工程ｉ）からの集団を、ＣＤ４５．１＋である新しく単離したＢＭ細胞とＧＭ−ＣＳＦの存在下で共培養する；
抗ＣＤ４５．２および抗ＣＤ４５．１抗体で分染することにより識別されたＤＣ．ｃｏｍ集団に由来する細胞を識別する；そして
ＣＤ４５．２＋細胞を１種類以上の示されたマーカーの表面発現に関して分析する；
ならびに
ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の接触させた細胞を集める；
を含む、前記方法。
［態様５９］細胞が蛍光活性化細胞選別ＦＡＣＳにより精製される、前記の態様の方法。
［態様６０］それを必要とする対象において炎症状態を改善するための方法であって、有効量のＤＣ．ｃｏｍに由来する組成物を投与することを含む、前記方法。
［態様６１］ＣＤ４８陰性／Ｇｒ−１高−早期樹状細胞を有効量のＧＭ−ＣＳＦと接触させ、それによりその細胞の顆粒球由来樹状細胞（ｇｒ−ＤＣ）への分化を誘導することを含む方法であって、ここでＬｙ６Ｇがｇｒ−ＤＣの表面上で発現しており、そしてここでｇｒ−ＤＣが少なくとも１種類の外来抗原をＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞に提示する、前記方法。
［態様６２］その有効量がすくなくとも１０ｎｇ／ｍｌであり、そしてその接触が少なくとも１日間である、前記の態様の方法。
［態様６３］樹状細胞（ＤＣ）のＴ細胞との相互作用の作用因子を同定する方法であって、以下：
ｉ）ＤＣ．ｃｏｍ集団をＴ細胞および試験薬剤と混合する、ならびに
ｉｉ）候補物質がＤＣ．ｃｏｍのＴ細胞との相互作用を変化させるかどうかを決定する、ここで、ＤＣ．ｃｏｍのＴ細胞との相互作用を変化させる試験薬剤は樹状細胞の相互作用の作用因子である；
を含む、前記方法。
［態様６４］ＤＣ．ｃｏｍ組成物が検出可能な標識に結合した精製されたＤＣ．ｃｏｍを含む、態様６３の方法。
［態様６５］樹状細胞（ＤＣ）のＴ細胞との相互作用の作用因子を同定する方法であって、以下：
ｉ）ｇｒ−ＤＣ集団をＴ細胞および試験薬剤と混合する、ならびに
ｉｉ）候補物質がｇｒ−ＤＣのＴ細胞との相互作用を変化させるかどうかを決定する、ここで、ｇｒ−ＤＣのＴ細胞との相互作用を変化させる試験薬剤は樹状細胞の相互作用の作用因子である；
を含む、前記方法。
［態様６６］ｇｒ−ＤＣ組成物が検出可能な標識に結合した精製されたｇｒ−ＤＣを含む、態様６５の方法。
［態様６７］試験薬剤をスクリーニングする方法であって、ＤＣ．ｃｏｍ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤が、ＤＣ．ｃｏｍ組成物のＴ細胞への結合における変化により同定される、前記方法。
［態様６８］試験薬剤をスクリーニングする方法であって、ＤＣ．ｃｏｍ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤が、ＤＣ．ｃｏｍに仲介されるＴ細胞の活性化における変化により同定される、前記方法。
［態様６９］試験薬剤をスクリーニングする方法であって、ｇｒ−ＤＣ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤が、ｇｒ−ＤＣ組成物のＴ細胞への結合における変化により同定される、前記方法。
［態様７０］試験薬剤をスクリーニングする方法であって、ｇｒ−ＤＣ組成物のＴ細胞との相互作用に影響を与える試験薬剤が、ｇｒ−ＤＣに仲介されるＴ細胞の活性化における変化により同定される、前記方法。
［態様７１］ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣ、ならびにそれらの機能的変種の内の少なくとも１種類を含む細胞の集団を含む医薬組成物。
［態様７２］感染症、癌に関連する疾患、炎症性の障害もしくは疾患、免疫に関連する障害もしくは疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の処置に有用である、態様７１の医薬組成物。
［態様７３］対象において対象が次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を有するかどうか、もしくはそれを発現する危険にさらされているかどうかを診断する、予後を決定する、および／またはそれを処置する方法であって、以下：
対象からの検査試料においてＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定する、
ここで、検査試料におけるそのマーカーのレベルの、対照試料における対応するマーカーのレベルと比較した変化は、対象がその障害を有すること、またはそれを発現する危険にさらされていることのどちらかを示す；
を含む、前記方法。
［態様７４］検査試料における少なくとも１種類のマーカーのレベルが対照試料における対応するマーカーのレベルよりも低い、態様７３の方法。
［態様７５］検査試料における少なくとも１種類のマーカーのレベルが対照試料における対応するマーカーのレベルよりも高い、態様７３の方法。
［態様７６］少なくとも１種類のマーカーが正常な組織および／または細胞と冒された組織および／または細胞の間で差次的に発現している、態様７３の方法。
［態様７７］試料が血液試料を含む、態様７３の方法。
［態様７８］試料が血清または血漿の血液試料の内の１種類以上を含む、態様７３の方法。
［態様７９］少なくとも１種類のマーカーを含むマーカーであって、正常な組織および／または細胞と冒された組織および／または細胞の間で相違して発現しており、ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣ細胞集団の内の１種類以上に由来する、前記マーカー。
［態様８０］次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を有する対象の予後を決定するための方法であって、対象からの検査試料において少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定する工程を含み、
ここで該マーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来し；そして  ここで：ｉ）そのマーカーが不都合な予後と関係している；およびｉｉ）検査試料における少なくとも１種類のマーカーのレベルの、対照試料における対応するマーカーのレベルと比較した変化が、不都合な予後を示している；
前記方法。
［態様８１］次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を処置する方法であって、少なくとも１種類のマーカーが対象の冒された細胞において対照の細胞と比較して下方制御または上方制御され、そのマーカーがＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来し、該方法は以下：
ｉ）その少なくとも１種類のマーカーが冒された細胞において下方制御される場合、対象における冒された細胞の増殖が阻害されるように、対象に有効量の少なくとも１種類の単離されたマーカー、もしくはその単離された変種もしくは生物学的に活性な断片を投与する；または
ｉｉ）その少なくとも１種類のマーカーが冒された細胞において上方制御される場合、対象における冒された細胞の増殖が阻害されるように、対象にその少なくとも１種類のマーカーの発現を阻害するための有効量の少なくとも１種類の化合物を投与する；
を含む、前記方法。
［態様８２］次の障害：感染症、癌に関連する疾患、炎症性の疾患、免疫に関連する疾患、自己免疫疾患、宿主対移植片拒絶疾患、過敏性反応、または同種移植片拒絶の内の１種類以上を処置する方法であって、少なくとも１種類のマーカーが対象の冒された細胞において対照の細胞と比較して下方制御または上方制御され、そのマーカーがＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来し、該方法は以下：
（１）対象における冒された細胞の中の少なくとも１種類のマーカーの、対照の細胞と比較した量を決定する；および
（２）次のことにより、冒された細胞の中で発現したマーカーの量を変化させる：
（ｉ）冒された細胞の中で発現したマーカーの量が対照の細胞の中で発現したマーカーの量よりも少ない場合、対象に有効量の少なくとも１種類の単離されたマーカーを投与する；または
（ｉｉ）冒された細胞の中で発現したマーカーの量が対照の細胞の中で発現したマーカーの量よりも大きい場合、対象に少なくとも１種類のマーカーの発現を阻害するための有効量の少なくとも１種類の化合物を投与する；
を含む、前記方法。
［態様８３］少なくとも１種類の単離されたマーカーおよび医薬的に許容できるキャリヤーを含む医薬組成物であって、そのマーカーがＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する医薬組成物。
［態様８４］少なくとも１種類の単離されたマーカーが冒された細胞において対照の細胞と比較して下方制御されるマーカーと一致する、態様８３の医薬組成物。
［態様８５］抗炎症剤を同定する方法であって、細胞に試験薬剤を与え、冒された細胞の中で減少した発現レベルと関係する少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定することを含み、
ここで、冒された細胞の中のそのマーカーのレベルの、対照の細胞と比較した増大が、その試験薬剤が抗炎症癌剤であることを示している；そして
ここで、そのマーカーがＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する；
前記方法。
［態様８６］抗炎症剤を同定する方法であって、細胞に試験薬剤を与え、冒された細胞の中で増大した発現レベルと関係する少なくとも１種類のマーカーのレベルを測定することを含み、
ここで、その細胞の中のそのマーカーのレベルの、対照の細胞と比較した低下が、その試験薬剤が抗炎症剤であることを示しており、そして
ここで、そのマーカーがＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する；
前記方法。
［態様８７］炎症性障害を予防、診断および／または処置するための療法の有効性を評価する方法であって、以下：
ｉ）動物にその有効性を評価している療法を受けさせる、および
ｉｉ）試験している処置の、その障害の処置または予防における有効性のレベルを、少なくとも１種類のマーカーを評価することにより決定する、
を含み、
ここで、そのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する、
前記方法。
［態様８８］候補である療法薬が次のものの内の１種類以上：医薬組成物、栄養補強組成物、およびホメオパシー組成物、を含む、態様８７の方法。
［態様８９］その評価されている療法がヒトの対象における使用のためのものである、態様８７の方法。
［態様９０］製品であって、次のもの：ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む炎症性障害に関するマーカーに結合する少なくとも１種類の捕捉試薬、を含む前記製品。
［態様９１］炎症性障害を処置するための療法薬のための候補化合物に関するスクリーニングのためのキットであって、次のもの：ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーの１種類以上の試薬；ならびに、少なくとも１種類のマーカーを発現する細胞、を含む前記キット。
［態様９２］そのマーカーの存在が少なくとも１種類のマーカーと特異的に結合する抗体または抗体断片を含む試薬を用いて検出される、態様９１のキット。
［態様９３］炎症性障害または関係する疾患の応答シグナル伝達経路を妨げる薬剤の、個体においてその合併症を処置する、予防する、逆行させる、またはその重症度を制限するための医薬品の製造のための使用であって、その薬剤がＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む、前記使用。
［態様９４］それを必要とする対象において炎症性障害または関係する合併症を処置する、予防する、逆行させる、またはその重症度を制限する方法であって、対象に少なくとも１種類の炎症性応答カスケードを妨げる薬剤を投与することを含み、ここで該薬剤はＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む、前記方法。
［態様９５］少なくとも１種類の炎症に関係する疾患の応答カスケードを妨げる薬剤の、対象において炎症に関連する合併症を処置する、予防する、逆行させる、またはその重症度を制限するための医薬品の製造のための使用であって、その薬剤がＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する少なくとも１種類のマーカーを含む、前記使用。
［態様９６］ＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来するマーカーの内の１種類以上のアンチセンス阻害剤を含む組成物。
［態様９７］対象に療法上有効量の態様９６の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象を処置する方法。
［態様９８］組成物が予防的に投与される、態様９７の方法。
［態様９９］組成物の投与が障害の１種類以上の症状の開始を遅延させる、態様９７の方法。
［態様１００］組成物の投与が炎症性障害の発現を阻害する、態様９７の方法。
［態様１０１］組成物の投与が感染を阻害する、態様９７の方法。
［態様１０２］生物学的試料において障害の存在を検出するための方法であって、以下：
ｉ）その障害を含んでいる疑いのある生物学的試料をそれに関するマーカーにさらす、および
ｉｉ）もしあるならば試料中のそのマーカーの存在または欠如を検出する、ここで、そのマーカーはＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する；
を含む、前記方法。
［態様１０３］マーカーが検出可能な標識を含む、態様１０２の方法。
［態様１０４］さらに、対象からの生物学的試料の中のそのマーカーの量を正常な対象からの対応する生物学的試料の中のマーカーの量と比較することを含む、態様１０２の方法。
［態様１０５］さらに、異なる時点で対象から複数の生物学的試料を集め、それぞれの生物学的試料の中のそのマーカーの量を比較してそのマーカーの量が対象において時間の経過につれて増大している、または減少しているかどうかを決定することを含む、態様１０２の方法。
［態様１０６］対象において炎症性障害を処置するための方法であって、以下：それを必要とする対象に、療法上有効量のＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する炎症性受容体作動薬を投与する、を含む前記方法。
［態様１０７］その受容体作動薬がＤＣ．ｃｏｍまたはｇｒ−ＤＣに由来するマーカーの内の１種類以上のアンチセンス阻害剤である、態様１０６の方法。
［態様１０８］炎症性障害により冒された細胞の分化を誘導するのに有効な療法薬または療法薬の組み合わせを同定するためのインビトロの方法であって、次の段階：
ｉ）冒された細胞を培養する、
ｉｉ）少なくとも１種類の化合物を工程ｉ）の培地に添加する、
ｉｉｉ）少なくとも１種類のマーカーの、段階（ｉ）および（ｉｉ）の間の発現のレベルの進展を分析する、ならびに
ｉｖ）段階（ｉ）および（ｉｉ）の間のそのマーカーの発現のレベルの変化を誘導する化合物または化合物の組み合わせを同定する、
を含む前記方法。
［態様１０９］段階（ｉｉｉ）が少なくとも１種類のマーカーの発現のレベルの分析を含む、態様１０８の方法。
［態様１１０］段階（ｉｖ）が少なくとも１種類のマーカーの発現のレベルを調節する化合物または化合物の組み合わせの同定を含む、態様１０８の方法。
［態様１１１］段階（ｉｖ）が少なくとも１種類のマーカーの発現のレベルを低減させる化合物または化合物の組み合わせの同定を含む、態様１０８の方法。
［態様１１２］その化合物が炎症性障害の処置のための療法薬である、態様１０８の方法。
［態様１１３］炎症性障害を有する対象から冒された組織および／または細胞を分類するための方法であって、以下：
試験細胞集団におけるＤＣ．ｃｏｍおよびｇｒ−ＤＣの内の１種類以上に由来する１種類以上のマーカーの発現を測定する、ここで、試験細胞集団の中の少なくとも１個の細胞は、１種類以上のそのマーカーを発現することができる；
そのマーカー（単数又は複数）の発現を、それに関して分類が既知である少なくとも１個の細胞を含む参照細胞集団におけるそのマーカー（単数又は複数）の発現と比較する；ならびに
もし存在するならば、試験細胞集団および参照細胞集団における、その構成するグループから選択された１種類以上のマーカーの発現レベルにおける違いを同定し、それにより対象における炎症性障害を分類する；
を含む前記方法。
［態様１１４］試験細胞集団におけるそのマーカー（単数又は複数）の発現における、参照細胞集団と比較した違いが、その試験細胞集団が参照細胞集団からの細胞と異なる分類を有することを示す、態様１１３の方法。
［態様１１５］試験細胞集団におけるそのマーカー（単数又は複数）の、参照細胞集団と比較して類似した発現パターンが、その試験細胞集団が参照細胞集団からの細胞と同じ分類を有することを示す、態様１１３の方法。
［態様１１６］参照細胞集団が複数の細胞またはデータベースである、態様１１３の方法。
［態様１１７］参照細胞集団が、次のもの：正常な組織からの細胞集団として分類される参照細胞集団、および冒された組織からの細胞集団として分類される参照細胞集団；からなる群より選択される、態様８３の方法。
［態様１１８］ＤＣ．ｃｏｍ集団を同定および精製するための、定義された表面表現型の使用。
［態様１１９］桿状核球集団を同定および精製するための、定義された表面表現型の使用。
［態様１２０］ｇｒ−ＤＣ集団を同定および精製するための、定義された表面表現型の使用。
［態様１２１］ＤＣ．ｃｏｍ集団を拡張するための、ＧＭ−ＣＳＦおよび場合により少なくとも１種類の他のサイトカインの使用。
［態様１２２］ＤＣ．ｃｏｍのｇｒ−ＤＣへの分化を促進するための、ＧＭ−ＣＳＦおよび場合により少なくとも１種類の他のサイトカインの使用。
［態様１２３］ＣＤ４８、ＭＨＣ  Ｉ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ１１ｃの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、対象中の組織においてＤＣ．ｃｏｍを同定するための方法。
［態様１２４］Ｌｙ６Ｇの発現に関してスクリーニングする工程を含む、対象中の組織において桿状核球を同定するための方法。
［態様１２５］ＣＤ１１ｃ、ＭＨＣ  ＩＩ、ＣＤ８６およびＤＥＣ２０５の内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、対象中の組織においてｇｒ−ＤＣを同定するための方法。
［態様１２６］ＤＣ．ｃｏｍのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ＤＣ．ｃｏｍの拡張を促進または阻害する化合物を同定するための方法。
［態様１２７］ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ＤＣ．ｃｏｍのｇｒ−ＤＣへの分化を促進または阻害する化合物を同定するための方法。
［態様１２８］ＤＣ．ｃｏｍのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ＤＣ．ｃｏｍの遺伝子発現プロフィールおよび機能を試験するための方法。
［態様１２９］ｇｒ−ＤＣのマーカーの内の１種類以上の発現に関してスクリーニングする工程を含む、ｇｒ−ＤＣの遺伝子発現プロフィールおよび機能を試験するための方法。
［態様１３０］それを必要とする対象においてＤＣ．ｃｏｍを刺激する少なくとも１種類の化合物を含むワクチン。
［態様１３１］それを必要とする対象においてｇｒ−ＤＣを刺激する少なくとも１種類の化合物を含むワクチン。
［態様１３２］それを必要とする対象においてＤＣ．ｃｏｍを刺激する少なくとも１種類の化合物を含む免疫刺激療法組成物。
［態様１３３］それを必要とする対象においてｇｒ−ＤＣを刺激する少なくとも１種類の化合物を含む免疫刺激療法組成物。
［態様１３４］ＤＣ．ｃｏｍの表現型、遺伝子プロフィール、または機能のマーカーとしての使用。
［態様１３５］ｇｒ−ＤＣの表現型、遺伝子プロフィール、または機能のマーカーとしての使用。
［態様１３６］ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣの定義された表面表現型の、標的を定めた遺伝子送達のための使用。
［態様１３７］ＤＣ．ｃｏｍおよび／またはｇｒ−ＤＣの定義された表面表現型の、標的を定めた薬物送達のための使用。
［態様１３８］定義された表面のＤＣ．ｃｏｍの、ＤＣに関する直接の前駆体としての使用。
［態様１３９］ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス系統の、ＤＣ．ｃｏｍ集団を研究するためのモデルとしての使用。
［態様１４０］ｐＩＬ１−ＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス系統の、新薬の発見のための道具としての使用。
【０２７９】
[000194]  参考文献
[000195]  本発明を明らかにするために、または本発明の実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書で用いられた刊行物および他の資料を本明細書に援用し、便宜のために下記の参考文献一覧において提供する。
【０２８０】
[000196]  本明細書で列挙された文書のいずれかの引用は、前述のもののいずれかが関係する先行技術であるという自認として意図するものでは無い。これらの文書の日付に関する全ての声明または内容に関する描写は、出願者に利用可能な情報に基づくものであり、これらの文書の日付または内容の正しさに関して自認を構成するものでは決して無い。
【０２８１】
【化１】
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【０２８２】
【化２】
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【０２８３】
【化３】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１３】
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【図２５】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１−１】
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【図４１−２】
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【図４１−３】
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【図４１−４】
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【図４１−５】
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【図４１−６】
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【図４２−１】
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【図４２−２】
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【図４２−３】
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【図４２−４】
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【図４２−５】
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【図４２−６】
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【図４２−７】
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【図４２−８】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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