(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；
６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；
６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；
１’−［（２−アミノ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）カルボニル］−１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；
Ｎ−エチル−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；
６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキサミド；
１−イソプロピル−１’−｛［２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボキサミド；
５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；
５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミドからなる群から選択される化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
構造
【化１】
0005657174.tif 000149
の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
構造
【化２】
0005657174.tif 000150
の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
構造
【化３】
0005657174.tif 000151
の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
構造
【化４】
0005657174.tif 000152
の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項６】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体とを含む医薬組成物。
【請求項７】
２型糖尿病または肝臓インスリン抵抗性を治療するための、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
２型糖尿病を治療するための、請求項６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（複数可）の阻害剤として作用する置換ピラゾロスピロケトン化合物、およびアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療する際のその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、ほとんどの種に見られる酵素のファミリーであり、アセチルＣｏＡからのマロニルＣｏＡの生成を触媒することによって脂肪酸の合成および代謝に関連している。哺乳動物では、ＡＣＣ酵素の２つのアイソフォームが確認されている。脂肪および肝臓などの脂質合成組織において高レベルで発現されるＡＣＣ１は、長鎖脂肪酸の生合成の最初の始動反応を制御する。アセチルＣｏＡは、カルボキシル化されてマロニルＣｏＡを形成していない場合、クレブス回路によって代謝される。肝臓ＡＣＣの微量構成成分であるが、心臓および骨格筋内で主要なアイソフォームであるＡＣＣ２は、ミトコンドリアのサイトゾル表面でマロニルＣｏＡの生成を触媒し、カルニチンパルミトイル転移酵素を阻害することにより、β酸化において利用される脂肪酸の量を調節する。したがって、ＡＣＣ阻害剤（ＡＣＣ−Ｉ）を長期間投与すると、脂肪酸利用を増大させ、新規脂肪酸合成の増大を防止することにより、高脂肪食または低脂肪食を摂取している肥満対象における肝臓および脂肪組織トリグリセリド（ＴＧ）貯蔵を激減させることもでき、体脂肪が選択的に減量される。
【０００３】
Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａらによって実施された研究は、ＡＣＣ２が脂肪酸酸化を制御する上で極めて重要な役割を果たすことを示唆しており、したがって、ＡＣＣ２は、肥満および肥満関連疾患、例えば２型糖尿病に対する療法の標的となると考えられる。Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａ，Ｌ．ら、「Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｍｕｔａｎｔ  ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ｆａｔ／ｈｉｇｈ−ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｄｉｅｔｓ」ＰＮＡＳ、１００（１８）１０２０７〜１０２１２（２００３）を参照のこと。Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｆａｔ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｏｔａｌ  ｅｎｅｒｇｙ  ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ，ｒｅｄｕｃｅｓ  ｆａｔ  ｍａｓｓ，ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」ＰＮＡＳ、１０４（４２）１６４８０〜１６４８５（２００７）も参照のこと。
【０００４】
肝臓への脂質の蓄積が肝臓のインスリン抵抗性を引き起こし、２型糖尿病の病因の一因となることは、ますます明白になってきている。Ｓａｌｖａｇｅらは、ＡＣＣ１とＡＣＣ２は、両方が肝細胞における脂肪酸化の調節に関与しているが、ラット肝臓における主要なアイソフォームであるＡＣＣ１が、脂肪酸合成の唯一の調節物質であることを実証している。さらに、Ｓａｌｖａｇｅらのモデルにおいて、両アイソフォームを合わせて減少させるには、肝臓マロニルＣｏＡレベルを著しく低下させ、摂食状況において脂肪酸化を増大させ、脂質蓄積を減少させ、ｉｎ  ｖｉｖｏでのインスリン作用を改善することが必要となる。したがって、肝臓ＡＣＣ１およびＡＣＣ２阻害剤が非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓インスリン抵抗性の治療に有用である可能性があることを示している。Ｓａｖａｇｅ，Ｄ．Ｂ．ら、「Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓ  １  ａｎｄ  ２」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ２７３００を参照のこと。Ｏｈ，Ｗら、「Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｆａｔ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ」ＰＮＡＳ、１０２（５）１３８４〜１３８９（２００５）も参照のこと。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
その結果、脂肪酸合成を阻害し、脂肪酸酸化を増大させることによって肥満および肥満関連疾患（ＮＡＦＬＤおよび２型糖尿病など）を治療するための、ＡＣＣ１および／またはＡＣＣ２阻害剤を含有する医薬が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の第１の実施形態は、式（Ｉ）の式Ａ化合物の構造
【０００７】
【化１】
0005657174.tif 000002
を有する化合物または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｇは、
【０００８】
【化２】
0005657174.tif 000003
であり、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり、Ｒ２は、インドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルであり、各Ｒ２基は、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、Ｌは、直接の結合または−Ｘ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレンであり、Ｘは、直接の結合、Ｏ、またはＳであり、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルであり、前記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルは、１個〜３個のフルオロまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシで置換されていてもよい］に関する。
【０００９】
本発明の第２の実施形態は、Ｒ２が、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ、または−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５で置換されているインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルである、第１の実施形態の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００１０】
本発明の第３の実施形態は、Ｒ２が、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５または−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５で置換されているインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルであり、Ｌが直接の結合である、第２の実施形態の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００１１】
本発明の第４の実施形態は、Ｒ１がイソプロピル、ｔ−ブチル、またはビシクル［１．１．１］ペンタニルである、第１の実施形態の化合物または薬学的に許容できるその塩である。本発明の第５の実施形態は、Ｒ３が水素である、前記実施形態のいずれかの化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００１２】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００１３】
【化３】
0005657174.tif 000004
である、第１の実施形態の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００１５】
【化４】
0005657174.tif 000005
である、第１の実施形態の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００１６】
本発明の別の実施形態は、Ｒ２が、
【００１７】
【化５】
0005657174.tif 000006
であり、各Ｒ２は、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５で置換されている、化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００１８】
本発明のさらに別の実施形態は、Ｒ２が、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＦ３、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２；−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、または−ＮＨＣ（ＣＨ３）３で置換されている、化合物もしくは前記実施形態または薬学的に許容できるその塩である。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００２０】
【化６】
0005657174.tif 000007
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり、Ｒ２がインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルであり、各Ｒ２基は、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３が水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、Ｌが直接の結合または−Ｘ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレンであり、Ｘが直接の結合、Ｏ、またはＳであり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルであり、前記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルは、１個〜３個のフルオロまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシで置換されていてもよい、化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００２２】
【化７】
0005657174.tif 000008
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり、Ｒ２がインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルであり、各Ｒ２基は、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３が水素であり、Ｌが直接の結合または−Ｘ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレンであり、Ｘが直接の結合、Ｏ、またはＳであり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルであり、前記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルは、１個〜３個のフルオロまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシで置換されていてもよい、化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００２３】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００２４】
【化８】
0005657174.tif 000009
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、
【００２５】
【化９】
0005657174.tif 000010
であり、各Ｒ２は、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、または（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシである１個の置換基で置換されており、Ｒ３が水素であり、Ｌが直接の結合または−Ｘ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレンであり、Ｘが直接の結合、Ｏ、またはＳであり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである、化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００２６】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００２７】
【化１０】
0005657174.tif 000011
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、
【００２８】
【化１１】
0005657174.tif 000012
であり、各Ｒ２は、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、または（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシである１個の置換基で置換されており、Ｌが直接の結合であり、Ｒ４およびＲ５が水素である、化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００２９】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００３０】
【化１２】
0005657174.tif 000013
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、
【００３１】
【化１３】
0005657174.tif 000014
であり、各Ｒ２は、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５または（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシである１個の置換基で置換されており、Ｌが直接の結合であり、Ｒ４およびＲ５が水素である、化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００３２】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００３３】
【化１４】
0005657174.tif 000015
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよい
【００３４】
【化１５】
0005657174.tif 000016
であり、Ｒ３が水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、Ｌが直接の結合であり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである、第１の実施形態の化合物である。
【００３５】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００３６】
【化１６】
0005657174.tif 000017
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシから選択される１個の置換基で置換されている
【００３７】
【化１７】
0005657174.tif 000018
であり、Ｒ３が水素である、第１の実施形態の化合物である。
【００３８】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００３９】
【化１８】
0005657174.tif 000019
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよい
【００４０】
【化１９】
0005657174.tif 000020
であり、Ｒ３が水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、Ｌが直接の結合であり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである、第１の実施形態の化合物である。
【００４１】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００４２】
【化２０】
0005657174.tif 000021
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５から選択される１個の置換基で置換されている
【００４３】
【化２１】
0005657174.tif 000022
であり、Ｒ３が水素であり、Ｌが直接の結合であり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ水素である、第１の実施形態の化合物である。
【００４４】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００４５】
【化２２】
0005657174.tif 000023
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよい
【００４６】
【化２３】
0005657174.tif 000024
であり、Ｒ３が水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、Ｌが直接の結合であり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである、第１の実施形態の化合物である。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、Ｇが
【００４８】
【化２４】
0005657174.tif 000025
であり、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、Ｒ２が、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５から選択される１個の置換基で置換されている
【００４９】
【化２５】
0005657174.tif 000026
であり、Ｒ３が水素であり、Ｌが直接の結合であり、Ｒ４およびＲ５がそれぞれ水素である、第１の実施形態の化合物である。
【００５０】
本発明の別の実施形態は、構造
【００５１】
【化２６】
0005657174.tif 000027
の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００５２】
本発明の別の実施形態は、構造
【００５３】
【化２７】
0005657174.tif 000028
の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００５４】
本発明の別の実施形態は、構造
【００５５】
【化２８】
0005657174.tif 000029
の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００５６】
本発明の別の実施形態は、６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；１’−［（２−アミノ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）カルボニル］−１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；Ｎ−エチル−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキサミド；１−イソプロピル−１’−｛［２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボキサミド；５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；１’−［（２−アミノ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）カルボニル］−２−ｔｅｒｔ−ブチル−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−エチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−｛［２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］カルボニル｝−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；６−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；６−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；５−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド；５−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；５−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；１−［（２−アミノ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）カルボニル］−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン；２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−｛［２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］カルボニル｝−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン；６−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド；および５−［（２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボキサミドからなる群から選択される化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００５７】
本発明のさらに別の実施形態は、６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル；１’−［（２−アミノキノリン−６−イル）カルボニル］−２−ｔｅｒｔ−ブチル−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−シクロプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−プロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−シクロブチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−オキセタン−３−イル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎシクロプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−エチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−プロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−シクロプロピル−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−シクロブチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−オキセタン−３−イル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−（２−メトキシエチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；５−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−エチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド；および６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−Ｎ−シクロプロピル−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミドからなる群から選択される化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００５８】
本発明の別の態様は、ある量の、実施形態のいずれかにおいて記載したとおりの式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体とを含む医薬組成物である。この組成物は、治療有効量の本発明の化合物を含むことが好ましい。この組成物は、少なくとも１種のさらなる薬剤も含有することができる。好ましい薬剤には、抗糖尿病剤および／または抗肥満剤が含まれる。
【００５９】
本発明のさらに別の態様には、哺乳動物においてアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によって媒介される疾患、状態または障害を治療するための方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトに、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその医薬組成物を投与するステップを含む方法がある。
【００６０】
アセチルＣｏＡカルボキシラーゼの阻害剤によって媒介される疾患、障害または状態には、ＩＩ型糖尿病および糖尿病関連疾患、例えば非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓インスリン抵抗性、高血糖、代謝症候群、耐糖能障害、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、肥満、異脂肪血症、高血圧、高インスリン血症およびインスリン抵抗性症候群が含まれる。好ましい疾患、障害または状態には、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓インスリン抵抗性、高血糖、耐糖能障害、肥満、およびインスリン抵抗性症候群が含まれる。ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓インスリン抵抗性、高血糖および肥満がより好ましい。ＩＩ型糖尿病が最も好ましい。
【００６１】
好ましい実施形態は、動物において２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療する（例えば、その進行または発症を遅延させる）ための方法であって、かかる治療を必要とする動物に治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００６２】
より好ましい実施形態は、ヒトにおいて２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療する、またはその進行もしくは発症を遅延させるための方法であって、かかる治療を必要とするヒトに治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００６３】
最も好ましい実施形態は、ヒトにおいて２型糖尿病を治療する、またはその進行もしくは発症を遅延させるための方法であって、かかる治療を必要とするヒトに治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００６４】
別の好ましい実施形態は、動物において肥満および肥満関連障害を治療するための方法であって、かかる治療を必要とする動物に治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００６５】
別の好ましい実施形態は、ヒトにおいて肥満および肥満関連障害を治療するための方法であって、かかる治療を必要とするヒトに治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００６６】
さらに別の好ましい実施形態は、動物において非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓インスリン抵抗性を治療するための方法であって、かかる治療を必要とする動物、特にヒトに、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００６７】
さらに別の好ましい実施形態は、ヒトにおいて非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓インスリン抵抗性を治療するための方法であって、かかる治療を必要とするヒトに治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００６８】
本発明の化合物は、他の薬剤（特に、本明細書の以下に記載の抗肥満および抗糖尿病剤）と併せて投与することができる。併用療法は、（ａ）本発明の化合物、本明細書に記載されている少なくとも１種のさらなる薬剤および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤もしくは担体を含む単一医薬組成物、または（ｂ）（ｉ）本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤もしくは担体を含む第１の組成物と、（ｉｉ）本明細書に記載されている少なくとも１種のさらなる薬剤および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤もしくは担体を含む第２の組成物とを含む２種の別々の医薬組成物として投与することができる。医薬組成物は、同時にまたは順次、いずれかの順序で投与することができる。
【００６９】
別の実施形態は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、本発明の化合物の使用である。
【００７０】
別の実施形態は、２型糖尿病、糖尿病関連障害、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓インスリン抵抗性である、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、本発明の化合物の使用である。
【００７１】
別の実施形態は、２型糖尿病である、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、本発明の化合物の使用である。
【００７２】
別の実施形態は、２型糖尿病、糖尿病関連障害、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓インスリン抵抗性である、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、実施例６、１４または２５の化合物の使用である。
【００７３】
別の実施形態は、２型糖尿病である、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、実施例６、１４または２５の化合物の使用である。
【００７４】
別の実施形態は、２型糖尿病である、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、実施例６の化合物の使用である。
【００７５】
別の実施形態は、２型糖尿病である、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、実施例１４の化合物の使用である。
【００７６】
別の実施形態は、２型糖尿病である、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための医薬の製造における、実施例２５の化合物の使用である。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
定義
「治療有効量」という表現は、（ｉ）特定の疾患、状態もしくは障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候を減弱、回復、もしくは排除する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候の発症を予防もしくは遅延する、本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩の量を表す。
【００７８】
「動物」という用語は、ヒト（男性または女性）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）、食物源の動物、動物園の動物、海生動物、鳥類および他の類似の動物種を意味する。「食用動物」は、ウシ、ブタ、ヒツジおよび家禽などの食物源の動物を意味する。
【００７９】
「薬学的に許容できる」という表現は、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分と、および／またはそれを用いて治療される哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合しなければならないことを示す。
【００８０】
「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、予防的な治療、すなわち、予防治療と待期治療の両方を包含する。
【００８１】
「モジュレートされた（ｍｏｄｕｌａｔｅｄ）」または「モジュレートすること（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」、または「モジュレートする（ｍｏｄｕｌａｔｅ（ｓ））」という用語は、本明細書では、特に指示がない限り、本発明の化合物によるアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）の阻害を意味する。
【００８２】
「媒介された（ｍｅｄｉａｔｅｄ）」または「媒介すること（ｍｅｄｉａｔｉｎｇ）」または「媒介する（ｍｅｄｉａｔｅ（ｓ））」という用語は、本明細書では、特に指示がない限り、（ｉ）特定の疾患、状態または障害の治療もしくは予防、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候の減弱、回復もしくは排除、または（ｉｉｉ）アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）を阻害することによる、本明細書に記載の特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候の発症の予防もしくは遅延を意味する。
【００８３】
「本発明の化合物」という用語は、（特に詳細に特定しない限り）式（Ｉ）の化合物および化合物のいずれかの薬学的に許容できる塩、ならびに全ての立体異性体（ジアステレオ異性体および鏡像異性体を含める）、互変異性体、配座異性体、および同位体標識化合物を意味する。本発明の化合物の水和物および溶媒和物は、本発明の組成物とみなされ、化合物は、それぞれ水または溶媒と関連している。
【００８４】
「（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル」および「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」という用語は、指定の数の炭素、すなわち、それぞれ１個〜６個または１個〜３個の炭素のアルキル基であり、直鎖状または分枝状のどちらでもよい。例えば、「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」という用語は、１個〜３個の炭素を有し、メチル、エチル、ｎ−プロピル、およびイソプロピルからなる。指定の数の炭素を有するアルコキシ基も、似たようにして命名される。
【００８５】
「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレン」という用語は、直鎖状または分枝状のどちらでもよい、１個〜３個の炭素のジラジカル（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル基である。「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレン」という用語の代表的な例として、限定はしないが、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ３）−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−が挙げられる。
【００８６】
「（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル」という用語は、３個〜７個の炭素原子を有するシクロアルキル基を表し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルからなり、またはビシクル［１．１．１．］ペンタニルなどのビシクロ環系でもよい。「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを表す。
【００８７】
「４〜７員ヘテロシクリル」という用語は、非芳香族４〜７員ヘテロ環のラジカルを表す。付着点は、炭素原子または窒素原子のどちらを介してもよい。これらの非限定的な例として、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、モルホリニル、アゼチジニル、ピロロジニル、ピペリジニル、ピペラジニルなどが挙げられる。
【００８８】
インドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルという用語は、以下に示す基のラジカルであり、付着点は、その基の炭素原子上にある。
【００８９】
【化２９】
0005657174.tif 000030
【００９０】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＮ１  ＡＣＣ阻害剤化合物である。
【００９１】
本発明の化合物は、特に本明細書に包含されている説明に照らして、化学分野でよく知られているものに類似したプロセスを含む合成経路によって合成することができる。出発材料は、一般にＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ウィスコンシン州Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ）などの商業供給源から入手可能であり、または当業者によく知られている方法を用いて容易に調製される（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６７〜１９９９編）、もしくは補遺を含めたＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ編（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースによっても入手可能である）に一般に記載されている方法によって調製される）。
【００９２】
例示のために、以下に示した反応スキームは、本発明の化合物ならびに重要な中間体を合成するための潜在的な経路を提供する。個々の反応ステップのより詳細な説明については、以下の実施例の項を参照のこと。他の合成経路を使用して本発明の化合物を合成することができることが当業者には認識されよう。特定の出発材料および試薬をスキームに示し、以下で論じているが、他の出発材料および試薬と容易に置き換えて、種々の誘導体および／または反応条件を得ることができる。さらに、後述の方法によって調製される化合物の多くは、当業者によく知られている従来の化学的手法を用いて本開示に照らしてさらに変更することができる。
【００９３】
本発明の化合物の調製では、中間体の遠隔官能基（ｒｅｍｏｔｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）（例えば、第一級または第二級アミン）の保護が必要なこともある。このような保護の必要性は、遠隔官能基の性質および調製方法の条件に応じて変わるものである。適当なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）がある。同様に、「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能基を遮断または保護するヒドロキシ基の置換基を意味する。適当なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）には、例えば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、パラメトキシベンジル、トリチル、などがある。このような保護の必要性は、当業者により容易に決定される。保護基およびそれらの使用の一般的な説明については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１を参照のこと。
【００９４】
以下の反応スキーム、すなわち反応スキームＩから反応スキームＩＩＩは、式（Ｉ）の化合物の調製に使用される代表的な手順を示すものである。これらの反応スキームが非限定的に解釈されるものであること、および式（Ｉ）の化合物の調製に、示した方法の妥当な変形形態を使用してしてもよいことを理解されたい。
【００９５】
反応スキームＩは、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり、Ｒ２がインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルであり、各Ｒ２基は、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３が水素であり、Ｌが直接の結合または−Ｘ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレンであり、Ｘが直接の結合、ＯまたはＳであり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルであり、前記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルは、１個〜３個のフルオロまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシで置換されていてもよい式（Ｉ）の化合物である、式Ｉａを有する本発明のＮ１  ＡＣＣ阻害剤化合物を得るのに使用できるであろう一般手順の概略を述べるものである。
【００９６】
【化３０】
0005657174.tif 000031
【００９７】
スキームＩによれば、ＶＩＩａの化合物は、式ＶＩＩＩａの化合物（Ｐｇは適切なアミン保護基である）を、適切な溶媒中にてトリス（ジメチルアミノ）メタンと反応させて生成することができる。反応は、トルエンなどの適切な溶媒中にて、還流温度などの高温で１〜２４時間実施して、式ＶＩＩａの化合物を得ることができる。式ＶＩａの化合物は、式ＶＩＩａの化合物を、エタノールなどの適切な溶媒中にて、適切なアルキルまたはシクロアルキルヒドラジン（Ｒ１ＮＨＮＨ２、例えば、ｔ−ブチルヒドラジン、イソプロピルヒドラジン、またはビシクル［１．１．１．］ペンタニルヒドラジン）と反応させて生成することができる。例えば、温度約２０℃〜約８０℃で約２〜２４時間、還流エタノール中にて、場合により炭酸カリウム（「Ｋ２ＣＯ３」）などの塩基の存在下、ＶＩＩａを適切なアルキルヒドラジン（Ｒ１ＮＨＮＨ２）と反応させて、所望の環化化合物を得ることにより、式ＶＩａの化合物を生成することができる。
【００９８】
式Ｖａの化合物は、式ＶＩａの化合物を、適切な溶媒中にて適切な臭素化試薬および水と反応させることにより、対応するヒドロキシ臭化物誘導体に変換して生成することができる。例えば、テトラヒドロフラン中にて式ＶＩａの化合物をＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）および水と室温で１時間反応させて、対応する式Ｖａのヒドロキシブロモ誘導体を得ることにより、式Ｖａの化合物を生成することができる。次いで、式Ｖａの化合物を適切な溶媒中にて適切な酸化剤で酸化させることにより、式ＩＶａの化合物を生成することができる。例えば、式Ｖａの化合物は、アセトン中にてジョーンズ試薬によって０℃〜室温で１５分〜４時間処理した後、抽出の後処理にかけて酸化させることができる。次いで、式ＩＶａの化合物は、テトラヒドロフランなどの適切な溶媒中にて塩化アンモニウム水溶液および亜鉛金属で通常は室温で１５分〜４時間処理して、脱臭素することができる。
【００９９】
次いで、どの保護基Ｐｇを用いたかに応じて決まる標準的方法を使用し、式ＩＩＩａの化合物を脱保護して、式ＩＩａの遊離スピロピペリジン誘導体を得ることができる。例えば、ＰｇがＢＯＣであるとき、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中、４Ｎ塩酸ジオキサン溶液またはトリフルオロ酢酸といった標準の強酸脱保護条件を使用して、ＢＯＣ基を除去することができる。ＰｇがＣｂｚであるとき、エタノール中でのパラジウム炭素での水素化を用いて、またはエタノールもしくは酢酸エチル中にて、パラジウム炭素存在下、ギ酸アンモニウムまたは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエンなどの水素供給源での処理を用いて、脱保護を実施することができる。
【０１００】
次いで、標準的方法を用い、式ＩＩａのスピロピペリジン誘導体をアシル化して、式Ｉａの化合物を得ることができる。例えば、次いで、所望のカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して、化合物（Ｉａ）を生成することができる。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩａ）とカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）は、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦ、ジメチルアセトアミド（「ＤＭＡ」）またはジクロロメタンなどの適当な溶媒中にて、ヒドロキシベンゾトリアゾール（「ＨＯＢｔ」）などの活性化剤の存在下または非存在下、またＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（「ＤＩＥＡ」）、トリエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリン（「ＮＭＭ」）などの適当な塩基の存在下、カルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）をＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（「ＨＡＴＵ」）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（「ＥＤＣ・ＨＣｌ」）などのペプチドカップリング試薬と接触させ、次いで活性化型カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体ＩＩａと接触させるなど、活性化型カルボン酸エステルを生成することによりカップリングさせて、式Ｉａの化合物を生成することができる。
【０１０１】
反応スキームＩＩは、Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルであり、Ｒ２がインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、キノリニル、またはベンゾイミダゾリルであり、各Ｒ２基は、シアノ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｌ−ＮＲ４Ｒ５、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、およびハロから独立して選択される１個〜２個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３が水素であり、Ｌが直接の結合または−Ｘ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキレンであり、Ｘが直接の結合、Ｏ、またはＳであり、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルであり、前記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、または４〜７員ヘテロシクリルは、１個〜３個のフルオロまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシで置換されていてもよい、式Ｉｂを有する本発明のＮ２  ＡＣＣ阻害剤化合物を得るのに使用できるであろう一般手順の概略を述べるものである。
【０１０２】
【化３１】
0005657174.tif 000032
【０１０３】
スキームＩＩによれば、式ＶＩＩｂの化合物を適切なヒドラジン誘導体Ｒ１−ＮＨＮＨ２と反応させると、式ＶＩｂの化合物が得られる。反応は通常、エタノールなどの適切な溶媒中にて、６０℃〜還流温度などの高温で約１〜４８時間実施して、式ＶＩｂの化合物を得る。用いるヒドラジン誘導体Ｒ１−ＮＨＮＨ２が、塩酸塩などの、その対応する酸付加塩の形態であるとき、生成する式ＶＩｂの化合物も塩として存在し得ることは認識されたい。式ＶＩｂの化合物は、塩形態として存在するとき、式Ｖｂの化合物に変換する前に、通常は、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中にて、炭酸水素ナトリウムなどの適切な塩基によって周囲温度で１５分〜４時間処理する。式Ｖｂの化合物は、まずオキシ塩化リンを０℃でジメチルホルムアミドと反応させ、次いで式ＶＩｂの化合物を加え、それを８０℃などの高温で１〜２４時間かけて環化することにより生成される。次いで、式Ｖｂの化合物を、テトラヒドロフランなどの適切な溶媒中で適切な臭素化剤およびメタノールと反応させることにより、対応する式ＩＶｂのメトキシブロモ誘導体に変換する。例えば、化合物Ｖｂを２０％メタノール／テトラヒドロフラン中にて周囲温度でＮ−ブロモスクシンイミドと３０分〜４時間反応させて、式ＩＶｂの化合物を得ることができる。式ＩＶｂの化合物をテトラヒドロフランなどの適切な溶媒中にてカリウムｔ−ブトキシドなどの適切な塩基で１５分〜２時間処理した後、２Ｎ塩酸などの適切な酸で酸性化すると、式ＩＩＩｂの化合物を得ることができる。式ＩＩＩｂの化合物を脱保護した後、反応スキームＩで以前に記載したようにして酸Ｒ２ＣＯ２Ｈとカップリングさせると、式Ｉｂの化合物が得られる。
【０１０４】
反応スキームＩＩＩは、Ｒ１およびＲ２が前述のとおりであり、Ｒ３がアルキル基である、式Ｉｃを有する本発明のＮ２  ＡＣＣ阻害剤化合物を得るのに使用できるであろう一般手順の概略を述べるものである。
【０１０５】
【化３２】
0005657174.tif 000033
【０１０６】
式ＩＩＩｃの化合物は、式ＩＶｃの臭化物と、アルキルもしくはアルケニルトリブチルスタンナン、例えば、メチルトリ−ｎブチルスタンナンもしくはビニルトリ−ｎブチルスタンナンもしくはアリルトリ−ｎブチルスタンナン、またはトリアルキルボロキシン、例えば、トリメチルボロキシンもしくはトリビニルボロキシンとの、パラジウムを触媒としたクロスカップリングを、エタノールもしくはｔ−アミルアルコールなどのプロトン性溶媒、またはテトラヒドロフランもしくはジメチルホルムアミドなどの非プロトン性溶媒中にて、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などのパラジウム触媒、または酢酸パラジウム（ＩＩ）と２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（「ＳＰｈｏｓ」）などのプレ触媒（ｐｒｅｃａｔａｌｙｓｔ）と配位子の組合せの存在下、また炭酸カリウムなどの塩基の存在下または非存在下、マイクロ波で加熱しながら、温度約２０℃〜約１００℃で約２時間〜約１８時間、または温度約１００℃〜約１５０℃で約５分〜約６０分間実施して形成することができる。Ｒ３基の導入にアルケニルトリアルキルスタンナンまたはアルケニルボロキシンを利用する場合、得られるオレフィンの還元は、エタノール中でのパラジウム炭素での水素化によって、またはエタノールもしくは酢酸エチル中、パラジウム炭素存在下での、ギ酸アンモニウムまたは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエンなどの水素供給源での処理によって実施することができる。
【０１０７】
次いで、どの保護基Ｐｇを用いたかに応じて決まる標準的方法を使用し、式ＩＩＩｃの化合物を脱保護して、式ＩＩｃの遊離スピロピペリジン誘導体を得ることができる。例えば、ＰｇがＢＯＣであるとき、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中、４Ｎ塩酸ジオキサン溶液またはトリフルオロ酢酸といった標準の強酸脱保護条件を使用して、ＢＯＣ基を除去することができる。ＰｇがＣｂｚであるとき、エタノール中でのパラジウム炭素での水素化を用いて、またはエタノールもしくは酢酸エチル中にて、パラジウム炭素存在下、ギ酸アンモニウムまたは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエンなどの水素供給源での処理を用いて、脱保護を実施することができる。
【０１０８】
次いで、式ＩＩｃのスピロピペリジン誘導体を、標準的方法を用いてアシル化して、式Ｉｃの化合物を得ることができる。例えば、次いで、所望のカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して、化合物Ｉｃを生成することができる。例えば、スピロピペリジン中間体ＩＩｃとカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）は、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦ、ＤＭＡまたはジクロロメタンなどの適当な溶媒中にて、ＨＯＢｔなどの活性化剤の存在下または非存在下、またＤＩＥＡ、トリエチルアミンまたはＮＭＭなどの適当な塩基の存在下、カルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）をＨＡＴＵまたはＥＤＣ・ＨＣｌなどのペプチドカップリング試薬と接触させ、次いで活性化型カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体ＩＩｃと接触させるなど、活性化型カルボン酸エステルを生成することによりカップリングさせて、式Ｉｃの化合物を生成することができる。同様の方法を用いて、対応するＮ１類似体（Ｒ１が、反応スキームＩＩＩに示されるように、ピラゾール環のＮ２上でなくＮ１上にある）を調製することができる。
【０１０９】
本発明の化合物は、それ自体でまたはその薬学的に許容できる塩の形態で単離し、使用することができる。本発明によれば、複数の塩基性窒素原子を有する化合物は、様々な当量（「ｅｑ．」）数の酸と塩を形成し得る。実施者には、そのような全ての塩が本発明の範囲内にあることは理解されよう。
【０１１０】
薬学的に許容できる塩は、本明細書で本発明の化合物に関して使用するとき、化合物の薬学的に許容できる無機および有機の塩を包含する。こうした塩は、化合物を最後に単離および精製する際に現場で調製してもよいし、またはその化合物を適当な有機酸もしくは無機酸と別途反応させ、そうして生成した塩を単離することにより調製してもよい。代表的な塩としては、限定はしないが、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ベシル酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、マロン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシル酸塩、ギ酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが挙げられる。代表的な塩として、アルカリ金属およびアルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを主体とするカチオン、ならびに、限定はしないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、エチルアンモニウムなどを含めた、非毒性のアンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンカチオンも挙げることができる。さらなる例については、例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６、１〜１９（１９７７）を参照のこと。
【０１１１】
本発明の化合物は、２種以上の結晶形で存在することができる。式（Ｉ）の化合物およびその塩の多形体（溶媒和物および水和物を含む）は、本発明の一部を構成し、異なる条件下における本発明の化合物の結晶化によって調製することができる。例えば、再結晶のための異なる溶媒または異なる溶媒混合物の使用、異なる温度における結晶化、結晶化中の超高速から超低速の範囲の種々の冷却モードなどである。多形体は、本発明の化合物の加熱または融解とそれに続く段階的または高速冷却によって得ることもできる。多形体の存在は、固体プローブ核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、赤外（ＩＲ）分光法、示差走査熱分析、粉末Ｘ線回折またはこのような他の技術によって決定することができる。
【０１１２】
本発明は、１個または複数の原子が、原子質量または質量数が自然界で普通に見られる原子質量または質量数と異なっている原子で置き換えられていることを除き、式（Ｉ）によって記載される化合物と同一である、同位体標識化合物も含む。本発明の化合物に組み込める同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、硫黄およびフッ素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、および１８Ｆがある。いくつかの本発明の同位体標識化合物、例えば３Ｈおよび１４Ｃなどの放射性同位体を組み込んでいるものは、薬物および／または基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム化（すなわち、３Ｈ）、および炭素−１４（すなわち、１４Ｃ）、同位体は、それらの調製の容易さおよび検出感度に関して特に好ましい。さらに、より重い同位体、例えば重水素（すなわち、２Ｈ）との置換は、より大きい代謝安定性の結果として生じるいくつかの治療的利点、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増大または必要投与量の低減をもたらす可能性があり、したがって、状況によっては好ましいこともある。本発明の同位体標識化合物は、同位体標識されていない試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識された試薬を使用することにより、以下のスキームおよび／または実施例に開示されている手順を実施することによって、一般に調製することができる。
【０１１３】
本発明の化合物は、立体中心を含んでいる場合もある。こうした化合物は、鏡像異性体の混合物として、または純粋な鏡像異性体として存在し得る。化合物が立体中心を含む場合、化合物は、当業者に知られている方法によって、例えば、例えば結晶化により分離できるジアステレオ異性体の塩を形成すること；例えば結晶化、ガス−液体もしくは液体クロマトグラフィーにより分離できる立体異性体の誘導体もしくは複合体を形成すること；一方の鏡像異性体を鏡像異性体特異的な試薬と選択的に反応させること、例えば酵素的エステル化；またはキラルな環境での、例えば、キラルな支持体、例えばキラルな配位子が結合しているシリカで、もしくはキラルな溶媒の存在下でのガス−液体もしくは液体クロマトグラフィーによって、純粋な鏡像異性体に分割することができる。所望の立体異性体を上述の分離手順の１つによって別の化学的実体に変換する場合、所望の鏡像異性体形態を遊離させるのにさらなるステップが必要となることは認識されよう。別法として、光学活性のある出発材料の使用、光学活性のある試薬、基質、触媒、もしくは溶媒を使用する不斉合成、または不斉変換による一方の立体異性体の他方への変換によって、特定の立体異性体を合成することもできる。
【０１１４】
本発明の化合物は、分離可能であり得る異なる安定な立体配座形態で存在することができる。例えば立体障害または環歪みのために不斉単結合における束縛回転を原因とするねじれ非対称があることにより、異なる配座の分離が可能となり得る。本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物の各配座異性体およびその混合物をさらに含む。
【０１１５】
本発明の化合物は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）（特に、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療するのに有用である。本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物である。本発明の化合物（そこに使用した組成物およびプロセスを含む）は、本明細書に記載の治療用途のための医薬の製造に使用することもできる。
【０１１６】
典型的な製剤は、本発明の化合物および担体、希釈剤または賦形剤を混合することによって調製する。適当な担体、希釈剤および賦形剤は、当業者によく知られており、炭水化物、蝋、水溶性および／または水膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水などの材料が含まれる。使用する特定の担体、希釈剤または賦形剤は、本発明の化合物を適用する手段および目的によって決まることになる。溶媒は、一般に哺乳動物に投与するのが安全と当業者によって認められた（ＧＲＡＳ）溶媒に基づいて選択される。一般に、安全な溶媒は、水などの非毒性水性溶媒および水に可溶性または混和性の他の非毒性溶媒である。適当な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、およびその混合物がある。製剤は、１種または複数のバッファー、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、平滑剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、酸化防止剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味料、芳香剤、矯味矯臭剤および薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）の洗練された体裁を与える、または医薬品の製造に役立つ（すなわち、医薬の調製に使用するための）他の既知の添加剤も含んでいてよい。
【０１１７】
製剤は、従来の溶解および混合手順を用いて調製することができる。例えば、原薬（すなわち、本発明の化合物または化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体または他の既知の複合体形成剤との複合体））を、上記の１種または複数の賦形剤の存在下で適当な溶媒に溶解させる。低水溶性化合物の溶解速度は、参照により本明細書に組み込む、Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．らによる「Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａ  ｐｏｏｒｌｙ  ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ｄｒｕｇ（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）ｂｙ  ａ  ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ」Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３９、７６９〜７７３（１９８７）、およびＥＰ０９０１７８６Ｂ１（ＵＳ２００２／００９４９４）に記載されているものなど、噴霧乾燥した分散体の使用によって高めることができる。本発明の化合物は、通常、容易に制御可能な薬物投与量を提供し、患者に洗練されかつ取り扱いやすい製品を与えるために、医薬剤形に製剤する。
【０１１８】
医薬組成物には、本発明の化合物の溶媒和物および水和物も含まれる。「溶媒和物」という用語は、式（Ｉ）で表される化合物（薬学的に許容できるその塩を含む）と１種または複数の溶媒分子との分子複合体を意味する。かかる溶媒分子は、レシピエントに対して無害であることが知られている、製薬分野で一般に使用されているもの、例えば、水、エタノール、エチレングリコールなどである。「水和物」という用語は、溶媒分子が水である複合体を意味する。溶媒和物および／または水和物は、結晶形で存在することが好ましい。メタノール、メチルｔ−ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸メチル、（Ｓ）−プロピレングリコール、（Ｒ）−プロピレングリコール、１，４−ブチン−ジオールなど、他の溶媒は、より望ましい溶媒和物の調製における中間溶媒和物として使用することができる。
【０１１９】
適用するための医薬組成物（または製剤）は、薬物を投与するために使用する方法に応じて種々の形に包装することができる。一般に、販売用の物品には、適切な形態の医薬製剤が入れられている容器が含まれる。適当な容器は、当業者によく知られており、ボトル（プラスチックおよびガラス）、サッシェ、アンプル、ビニール袋、金属シリンダーなどの材料が含まれる。容器は、包装の中身への不注意な接触を防ぐために改ざん防止セットも含んでいてよい。加えて、容器には、容器の中身について記載するラベルが付けられている。ラベルは、適切な警告も含んでいてよい。
【０１２０】
本発明は、動物においてアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療する方法であって、かかる治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物または有効量の本発明の化合物と薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、もしくは担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法をさらに提供する。この方法は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害が有益である疾患、状態および／または障害を治療するのに特に有用である。
【０１２１】
本発明の一態様は、肥満、および肥満関連障害（例えば、過体重、体重増加、または体重維持）の治療である。
【０１２２】
肥満および過体重は一般に肥満度指数（ＢＭＩ）によって定義され、これは全体脂肪と相関関係があり、疾患の相対危険度を推定する。ＢＭＩは、キログラム表示の体重を、メートル表示の身長の二乗で割って算出される（ｋｇ／ｍ２）。過体重は通常、ＢＭＩが２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２と定義され、肥満は通常、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２と定義される。例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ、Ｔｈｅ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９８−４０８３（１９９８）を参照のこと。
【０１２３】
本発明の別の態様は、１型（インスリン依存真性糖尿病、「ＩＤＤＭ」とも呼ばれる）および２型（非インスリン依存真性糖尿病、「ＮＩＤＤＭ」とも呼ばれる）糖尿病、耐糖能障害、インスリン抵抗性、高血糖、ならびに糖尿病性合併症（アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、発作、末梢血管疾患、腎症、高血圧、神経障害、および網膜症など）を含めた糖尿病または糖尿病関連障害を治療する（例えば、その進行または発症を遅延させる）ためのものである。
【０１２４】
本発明のさらに別の態様では、代謝症候群などの肥満同時罹患状態（ｏｂｅｓｉｔｙ  ｃｏ−ｍｏｒｂｉｄｉｔｉｅｓ）の治療である。代謝症候群には、異脂肪血症、高血圧、インスリン抵抗性、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、冠状動脈疾患および心不全などの疾患、状態または障害が含まれる。代謝症候群に関するより詳細な情報については、例えば、Ｚｉｍｍｅｔ，Ｐ．Ｚ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｐｅｒｈａｐｓ  ａｎ  Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃ  Ｍｙｓｔｅｒｙ  ｂｕｔ  Ｆａｒ  Ｆｒｏｍ  ａ  Ｍｙｔｈ  −  Ｗｈｅｒｅ  Ｄｏｅｓ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  Ｓｔａｎｄ？」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ＆  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、７（２）、（２００５）、およびＡｌｂｅｒｔｉ，Ｋ．Ｇ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  −  Ａ  Ｎｅｗ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ」、Ｌａｎｃｅｔ、３６６、１０５９〜６２（２００５）を参照のこと。本発明の化合物の投与は、薬物を含有しないビヒクル対照と比較して、血漿レプチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および／またはコレステロールの低下など少なくとも１種の心臓血管疾患危険因子で統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減をもたらすことが好ましい。本発明の化合物の投与は、グルコース血清レベルでも統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減をもたらし得る。
【０１２５】
本発明のさらに別の態様では、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓インスリン抵抗性の治療である。
【０１２６】
体重が約１００ｋｇの正常な成人ヒトの場合、体重１キログラム当たり約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲の投与量が通常十分であり、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇが好ましく、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇがより好ましい。しかしながら、治療対象の年齢および体重、意図される投与経路、投与される特定の化合物などによって、一般的な投与量範囲にいくらかの変動性が求められてもよい。特定の患者についての投与量範囲および最適投与量の決定は、本開示の利点を有する当業者の能力の十分に範囲内である。本発明の化合物は、徐放、制御放出、および遅延放出製剤に使用でき、その形態も当業者によく知られているということにも留意されたい。
【０１２７】
本発明の化合物は、本明細書に記載の疾患、状態および／または障害の治療のための他の薬剤と併用してもよい。したがって、本発明の化合物を他の薬剤と併せて投与することを含む治療の方法も提供している。本発明の化合物と併せて使用できる適当な薬剤には、抗肥満剤（食欲抑制薬を含む）、抗糖尿病剤、抗高血糖症剤、脂質低下剤、および抗高血圧剤がある。
【０１２８】
本発明の化合物と組み合わせることのできる適当な脂質低下剤としては、例えば、ＷＯ２０１１００５６１１の３０頁２０行〜３１頁３０行に記載のものが挙げられる。脂質低下剤には、胆汁酸捕捉剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、アシルコエンザイムＡ−コレステロールアシル転移酵素（ＡＣＡＴ）阻害剤、ＣＥＴＰ阻害剤、スクアレンシンセターゼ阻害剤、ＰＰＡＲａアゴニスト、ＦＸＲ受容体モジュレーター、ＬＸＲ受容体モジュレーター、リポタンパク質合成阻害剤、レンニンアンジオテンシン系阻害剤、ＰＰＡＲｄ部分アゴニスト、胆汁酸再吸収阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、トリグリセリド合成阻害剤、ミクロソームトリグリセリド輸送阻害剤、転写モジュレーター、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤、低密度リポタンパク質受容体誘導因子、血小板凝集阻害剤、５−ＬＯまたはＦＬＡＰ阻害剤、ナイアシン結合型クロム、および脂質消費に影響を及ぼす他の薬剤がある。
【０１２９】
本発明の化合物と組み合わせることのできる適当な抗高血圧剤としては、例えば、ＷＯ２０１１００５６１１の３１頁３１行〜３２頁１８行に記載のものが挙げられる。抗高血圧剤には、利尿薬、β−アドレナリン作用遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、中性エンドペプチダーゼ阻害剤、エンドセリンアンタゴニスト、血管拡張薬、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、α／βアドレナリン作用遮断薬、α１遮断薬、α２アゴニスト、アルドステロン阻害剤、鉱質コルチコイド受容体阻害剤、レニン阻害剤、およびアンジオポエチン−２結合剤がある。
【０１３０】
適当な抗糖尿病剤としては、ＷＯ２００９１４４５５４、ＷＯ２００３０７２１９７、ＷＯ２００９１４４５５５、およびＷＯ２００８０６５５０８に記載のものなどのアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ＷＯ０９０１６４６２またはＷＯ２０１００８６８２０に記載のものなどのジアシルグリセロールＯ−アシル転移酵素１（ＤＧＡＴ−１）阻害剤、ＡＺＤ７６８７またはＬＣＱ９０８、ジアシルグリセロールＯ−アシル転移酵素２（ＤＧＡＴ−２）阻害剤、モノアシルグリセロールＯ−アシル転移酵素阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）１０阻害剤、ＡＭＰＫ活性化因子、スルホニル尿素（例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネーゼ（ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミドおよびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害剤（例えば、テンダミスタット、トレスタチンおよびＡＬ−３６８８）、α−グルコシド加水分解酵素阻害剤（例えば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラディマイシンＱおよびサルボスタチン（ｓａｌｂｏｓｔａｔｉｎ））、ＰＰＡＲγアゴニスト（例えば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンおよびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γアゴニスト（例えば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアナイド（例えば、メトホルミン）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）モジュレーター、例えば、アゴニスト（例えば、エキセンディン３およびエキセンディン４）、リラグルチド、アルビグルチド、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、アルビグルチド、タスポグルチド、リキシセナチド、デュラグルチド（ｄｕｌａｇｌｕｔｉｄｅ）、セマグルチド（ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）、ＮＮ−９９２４、ＴＴＰ−０５４、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤（例えば、トロズスクェミン（ｔｒｏｄｕｓｑｕｅｍｉｎｅ）、ヒルチオサール（ｈｙｒｔｉｏｓａｌ）抽出物、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）で開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害剤（例えば、レスベラトロール、ＧＳＫ２２４５８４０またはＧＳＫ１８４０７２）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（例えば、ＷＯ２００５１１６０１４にあるもの、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、デュトグリプチン（ｄｕｔｏｇｌｉｐｔｉｎ）、リナグリプチンおよびサクサグリプチン）、インスリン分泌促進物質、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２アンタゴニスト、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、グルコキナーゼ活性化薬（ＧＫａ）、例えば、ＷＯ２０１０１０３４３７、ＷＯ２０１０１０３４３８、ＷＯ２０１００１３１６１、ＷＯ２００７１２２４８２に記載の��の、ＴＴＰ−３９９、ＴＴＰ−３５５、ＴＴＰ−５４７、ＡＺＤ１６５６、ＡＲＲＹ４０３、ＭＫ−０５９９、ＴＡＫ−３２９、ＡＺＤ５６５８またはＧＫＭ−００１、インスリン、インスリン様作用剤、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤（例えばＧＳＫ１３６２８８５）、ＶＰＡＣ２受容体アゴニスト、ＳＧＬＴ２阻害剤、例えば、ダパグリフロジン、カナグリフロジン、ＢＩ−１０７３３、トホグリフロジン（ＣＳＧ４５２）、ＡＳＰ−１９４１、ＴＨＲ１４７４、ＴＳ−０７１、ＩＳＩＳ３８８６２６およびＬＸ４２１１を含めた、Ｅ．Ｃ．Ｃｈａｏら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ９、５５１〜５５９（２０１０年７月）に記載のものならびにＷＯ２０１００２３５９４にあるもの、グルカゴン受容体モジュレーター、例えば、Ｄｅｍｏｎｇ，Ｄ．Ｅ．ら、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００８、４３、１１９〜１３７に記載のもの、ＧＰＲ１１９モジュレーター、特にアゴニスト、例えば、ＷＯ２０１０１４００９２、ＷＯ２０１０１２８４２５、ＷＯ２０１０１２８４１４、ＷＯ２０１０１０６４５７、Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００９、４４、１４９〜１７０に記載のもの（例えば、ＭＢＸ−２９８２、ＧＳＫ１２９２２６３、ＡＰＤ５９７およびＰＳＮ８２１）、ＦＧＦ２１誘導体または類似体、例えば、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  ２００９、１０（４）３５９〜３６４に記載のもの、ＴＧＲ５（ＧＰＢＡＲ１とも呼ばれる）受容体モジュレーター、特にアゴニスト、例えば、Ｚｈｏｎｇ，Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０、１０（４）、３８６〜３９６に記載のものおよびＩＮＴ７７７、ＧＰＲ４０アゴニスト、例えば、限定はしないがＴＡＫ−８７５を含めた、Ｍｅｄｉｎａ，Ｊ．Ｃ．、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、４３、７５〜８５に記載のもの、ＧＰＲ１２０モジュレーター、特にアゴニスト、高親和性ニコチン酸受容体（ＨＭ７４Ａ）活性化薬、ならびにＳＧＬＴ１阻害剤、例えば、ＧＳＫ１６１４２３５が挙げられる。本発明の化合物と組み合わせることのできる抗糖尿病剤のさらなる代表的なリストは、例えば、ＷＯ２０１１００５６１１の２８頁３５行〜３０頁１９行で見ることができる。好ましい抗糖尿病剤は、メトホルミンおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、デュトグリプチン、リナグリプチンおよびサクサグリプチン）である。他の抗糖尿病薬として、カルニチンパルミトイル転移酵素の阻害剤またはモジュレーター、フルクトース１，６−ジホスファターゼの阻害剤、アルドース還元酵素の阻害剤、鉱質コルチコイド受容体阻害剤、ＴＯＲＣ２の阻害剤、ＣＣＲ２および／またはＣＣＲ５の阻害剤、ＰＫＣアイソフォーム（例えば、ＰＫＣａ、ＰＫＣｂ、ＰＫＣｇ）の阻害剤、脂肪酸シンセターゼの阻害剤、セリンパルミトイル転移酵素の阻害剤、ＧＰＲ８１、ＧＰＲ��９、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ１０５、Ｋｖ１．３、レチノール結合タンパク質４、糖質コルチコイド受容体、ソマトスタチン受容体（例えば、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ５）のモジュレーター、ＰＤＨＫ２またはＰＤＨＫ４の阻害剤またはモジュレーター、ＭＡＰ４Ｋ４の阻害剤、ＩＬ１βを含めたＩＬ１ファミリーのモジュレーター、ＲＸＲαのモジュレーターを挙げることができる。加えて、適当な抗糖尿病剤には、Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｐ．Ａ．、Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｂ．、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔ、２０１０、２０（１２）、１６２７〜５１に列挙されている機序が含まれる。
【０１３１】
適当な抗肥満剤（その一部は、その上抗糖尿病剤としても作用し得る）としては、１１β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ステアロイルＣｏＡ不飽和化酵素１（ＳＣＤ−１）阻害剤、ＭＣＲ−４アゴニスト、コレシストキニンＡ（ＣＣＫ−Ａ）アゴニスト、モノアミン再取込み阻害剤（シブトラミンなど）、交感神経様作用薬、β３アドレナリン作用アゴニスト、ドーパミンアゴニスト（ブロモクリプチンなど）、メラノサイト刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃアゴニスト、メラニン凝集ホルモンアンタゴニスト、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタットなど）、食欲抑制剤（ボンベシンアゴニストなど）、ニューロペプチドＹアンタゴニスト（例えば、ベルネペリトなどのＮＰＹ  Ｙ５アンタゴニスト）、ＰＹＹ３−３６（その類似体を含める）、ＢＲＳ３モジュレーター、オピオイド受容体サブタイプの混合アンタゴニスト、甲状腺模倣剤（ｔｈｙｒｏｍｉｍｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、糖質コルチコイドアゴニストまたはアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド１アゴニスト、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（ニューヨーク州Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ）およびＰｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ（オハイオ州Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ）から入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）など）、ヒトアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、ヒスタミン３アンタゴニストまたは逆アゴニスト、ニューロメジンＵアゴニスト、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（例えば、ジルロタピド、ＪＴＴ１３０、ユシスタピド（Ｕｓｉｓｔａｐｉｄｅ）、ＳＬｘ４０９０などの消化管選択的ＭＴＰ阻害剤）、オピオイドアンタゴニスト、限定はしないがＧＳＫ１５２１４９８を含めたμオピオイド受容体モジュレーター、限定はしないがＺＧＮ−４３３を含めたＭｅｔＡｐ２阻害剤、グルカゴン、ＧＩＰ、およびＧＬＰ１受容体のうち２種以上において混合モジュレート活性を有する薬剤、例えば、ＭＡＲ−７０１またはＺＰ２９２９、ノルエピネフリントランスポーター阻害剤、カンナビノイド１受容体アンタゴニスト／逆アゴニスト、グレリンアゴニスト／アンタゴニスト、オキシントモジュリンおよび類似体、限定はしないがテソフェンシンなどのモノアミン取込み阻害剤、オレキシンアンタゴニスト、配合剤（ブプロピオン＋ゾニサミド、プラムリンチド＋メトレレプチン、ブプロピオン＋ナルトレキソン、フェンテルミン＋トピラメートなど）などが挙げられる。
【０１３２】
本発明の組み合わせた態様で使用するのに好ましい抗肥満剤には、消化管選択的ＭＴＰ阻害剤（例えば、ジルロタピド、ミトラタピドおよびインプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）およびＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａアゴニスト（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００５／１１６０３４または米国特許公開第２００５−０２６７１００Ａ１号に記載されているＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃアゴニスト（例えば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４アゴニスト（例えば、ＵＳ６，８１８，６５８に記載されている化合物）、リパーゼ阻害剤（例えば、セチリスタット）、ＰＹＹ３−３６（本明細書では「ＰＹＹ３−３６」にはペグ化ＰＹＹ３−３６、例えば、米国特許公開第２００６／０１７８５０１号に記載されているものなどの類似体が含まれる）、オピオイドアンタゴニスト（例えば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ番号１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、ブロモクリプチン、オルリスタット、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）およびシブトラミンがある。本発明の化合物および併用療法は、運動および堅実な食事と併せて投与することが好ましい。
【０１３３】
列挙した米国特許および刊行物（実施例において参考として示す全ての技術告示を含める）は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０１３４】
本明細書の以下に記載されている実施例は、例示的な目的のために過ぎない。本明細書において反映されている組成物、方法、および種々のパラメーターは、本発明の種々の態様および実施形態を例示するものに過ぎず、決して特許請求した発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０１３５】
以下で記載する化合物および中間体は、Ｃｈｅｍｄｒａｗ  Ｕｌｔｒａ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １１．０．１（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．、マサチューセッツ州Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）付属の命名法を使用して命名した。Ｃｈｅｍｄｒａｗ  Ｕｌｔｒａ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １１．０．１付属の命名法は、当業者によく知られており、Ｃｈｅｍｄｒａｗ  Ｕｌｔｒａ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １１．０．１付属の命名法は、一般に、有機化学の命名法に関するＩＵＰＡＣ（国際純正・応用化学連合）勧告およびＣＡＳ索引規則に適合すると考えられている。特に指摘がない限り、全ての反応物は、市販品として得た。本明細書の以下に引用した全ての参考文献は、参照により組み込まれている。
【０１３６】
フラッシュクロマトグラフィーは、Ｓｔｉｌｌら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９７８、４３、２９２３によって記載されている方法に従って行った。
【０１３７】
本明細書で論じている全てのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）精製は、ＫＰ−ＳＩＬシリカ（４０〜６３μＭ、６０オングストローム）を含有するＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰカラム（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を用いて行った。
【０１３８】
本明細書で論じている全てのＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）精製は、充填ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）シリカカラムを利用したＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ、ネブラスカ州Ｌｉｎｃｏｌｎ）を用いて行った。
【０１３９】
質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、 マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ分光計で記録した。特に指定のない限り、質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ分光計で記録した。
【０１４０】
プロトンＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシランから低磁場に百万分率で示され、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  ３００、４００または５００ＭＨｚ（メガヘルツ）分光計（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ）で記録した。ＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシラン（プロトンの場合）またはフルオロトリクロロメタン（フッ素の場合）から低磁場に百万分率で示される。
【０１４１】
ＨＰＬＣ保持時間は、次の方法を使用して測定した、方法Ａ：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  ｄＣ１８  ４．６×５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：０．０５％のＴＦＡ水溶液（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：０．０５％のＴＦＡアセトニトリル溶液（ｖ／ｖ）；勾配：Ａ９５％／Ｂ５％から４．０分で線形にＡ５％／Ｂ９５％、Ａ５％／Ｂ９５％で５．０分間保持；流量：２．０ｍＬ／分。
【０１４２】
以下に記載の調製は、以下の実施例で例示する化合物を合成する際に使用した。
【０１４３】
以下の出発材料は、対応する供給源から入手可能である。
６−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル−Ｉｎｄｏｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州Ｈｉｌｌｓｂｏｒｏｕｇｈ）
５−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル−Ｉｎｄｏｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州Ｈｉｌｌｓｂｏｒｏｕｇｈ）
６−ブロモ−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド−Ａｕｒｏｒａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ（米国カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）
メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート−Ａｎｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ（米国ニュージャージー州Ｎｏｒｔｈ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸−ＡＣＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州Ｍｅｔｕｃｈｅｎ）
メチル１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート−ＡＣＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州Ｍｅｔｕｃｈｅｎ）
メチル１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート−Ａｎｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ（米国ニュージャージー州Ｎｏｒｔｈ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）
５−（メトキシカルボニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸−Ｂｅｐｈａｒｍ  Ｌｔｄ．（中国上海）
メチル３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート−ＭｏｌＢｒｉｄｇｅ（米国ニュージャージー州Ｐｌａｉｎｓｂｏｒｏ）
エチル２−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート−Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｕｓｔｏｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．（米国カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）
５−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸−Ａｎｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ（米国ニュージャージー州Ｎｏｒｔｈ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）
６−メトキシキノリン−３−カルボン酸−ＢｉｏＢｌｏｃｋｓ，Ｉｎｃ．（米国カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）、Ａ．Ｈａｎｎａ−Ｅｌｉａｓら、Ａｕｓｔｒ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．２００９、６２、１５０〜１５６に記載のとおりに調製される
２−アミノキノリン−６−カルボン酸−Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ）
５−ブロモ−２−ニトロベンズアルデヒド−Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．（米国サウスカロライナ州Ｗｅｓｔ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ）
エチルキノリン−７−カルボキシレート−ＡＳＷ  ＭｅｄＣｈｅｍ，Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）
【０１４４】
中間体および出発材料の調製
中間体１：以下に示す１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンを以下のとおりに調製した。
【０１４５】
【化３３】
0005657174.tif 000034
ステップ１．  ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート
【０１４６】
【化３４】
0005657174.tif 000035
ｔｅｒｔ−ブチル４−ホルミルピペリジン−１−カルボキシレート（３７５ｇ、１．７６ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１８Ｌ）溶液に、メチルビニルケトン（１４６ｍＬ、１．７８ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を−５℃に冷却し、水酸化カリウムのエタノール溶液（３Ｎ、０．２４３Ｌ）を１０分かけて滴下した。反応混合物を室温に温め、１６時間撹拌した。シクロヘキサン（１０Ｌ）を加え、溶液を飽和塩化ナトリウム（３×１０Ｌ）で洗浄した。有機層を濃縮して油状物とした。この油状物を８０：２０のシクロヘキサン／酢酸エチル２Ｌに溶解させ、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過して、不溶性材料を除去した。濾液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（３０％の酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、生成物を油状物として得た。油状物をヘキサン中で摩砕して、表題化合物を無色の固体（１３１ｇ、２８％）として得た。
【０１４７】
ステップ２．  １−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（２５０ｇ）およびトリス（ジメチルアミノメタン）（３２５ｍＬ）をトルエン（１．９Ｌ）に溶かした溶液を、還流温度で４時間加熱した。混合物を蒸留し、最小撹拌体積に濃縮し（１１０℃）、次いでトルエン（１．９Ｌ）を加えた。反応液を再蒸留して最小撹拌体積とし、室温に冷却した。トルエン（１．８Ｌ）およびイソプロピルヒドラジン塩酸塩（１３５ｇ）を加え、溶液を５時間加熱還流した。反応液を室温に冷却し、クエン酸（１０％水溶液、２×１５０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄した。次いで有機層を蒸留して最小撹拌体積とした。メタノール（２Ｌ）を加え、蒸留して最小撹拌体積とした。これをメタノール（２Ｌ）で繰り返した。溶液をメタノール（２．５Ｌ）に再溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１７６ｇ）を１回で加えた。溶液を２３℃で２時間撹拌した。チオ硫酸ナトリウム水溶液（５ｗｔ％、０．５Ｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を蒸留（４５℃、２１０ｍｍＨｇ）によって約０．５Ｌに濃縮し、次いで２−メチルテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）を加えた。１５分間撹拌した後、水層を廃棄した。有機層を約０．２Ｌに濃縮し、テトラヒドロフラン（０．５Ｌ）を加えた。混合物に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのテトラヒドロフラン溶液（１．９Ｌ、１Ｍ溶液）を加えた。溶液を６０℃に加熱し、１時間撹拌した。室温に冷却した後、塩酸水溶液（１Ｎ、２．２Ｌ）を２０分かけて加えた。混合物を室温で２０分間撹拌し、次いで層を分離させた。水層を除去し、酢酸エチル（１．７５Ｌ）で逆抽出した。有機層を合わせて水（１Ｌ）で洗浄し、蒸留によって濃縮した（４Ｌの溶媒を除去した）。酢酸エチル（１．８Ｌ）を加え、溶液を最小撹拌体積に濃縮した。酢酸エチル（３Ｌ）およびメタノール（０．８Ｌ）を加え、溶液を０℃に冷却した。塩化アセチル（４０１ｍＬ）を２０分かけて滴下し、溶液を０℃で４時間撹拌した。窒素中での濾過によって沈殿を収集した。濾液を酢酸エチル（０．５Ｌ）で洗浄し、真空オーブンにおいて４０℃で乾燥させて、表題化合物をオフホワイト色の固体（２４１ｇ）として得た。+ESI(M+H) 248.4; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.43(s, 1H), 5.32-5.42(m, 1H), 3.15-3.25(m, 4H), 2.89(s, 2H),
2.64(s, 2H), 1.69-1.90(m, 4H), 1.37-1.45(m, 6H).
【０１４８】
中間体２：以下に示す２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩を以下のとおりに調製した。
【０１４９】
【化３５】
0005657174.tif 000036
ステップ１．  ベンジル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート
【０１５０】
【化３６】
0005657174.tif 000037
Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを装着した２Ｌ容３つ口フラスコに入ったベンジル４−ホルミルピペリジン−１−カルボキシレート（９０．０ｇ、３６４ｍｍｏｌ）のベンゼン（７００ｍＬ）溶液に、撹拌しながらｐ−トルエンスルホン酸（６．９２ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を７０℃に加熱し、３−ブテン−２−オン（６１．８ｍＬ、７５３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流温度で２４時間加熱して、放出された水をトラップに収集した。反応液を室温に冷却し、５００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた暗褐色の油状物を２００ｍＬのジクロロメタンに溶かし、ヘプタン２Ｌに続いて５０％の酢酸エチル／ヘプタン３Ｌ、次いで酢酸エチル３Ｌで溶離させながらシリカパッド（６００ｍＬのシリカ）で濾過した。不純でない生成物を含有する画分を合わせ、濃縮して、６８．１ｇの表題化合物を濃厚な褐色の油状物として得た。不純な生成物を含有する画分を合わせ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１０〜８０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、追加の２３．６ｇの表題化合物を濃厚な褐色の油状物として得た。９１．７ｇ（９４．１％）の合算収率が実現された。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.27-7.43(m, 5H), 6.79(d, J=10.3Hz, 1H), 5.95(d, J=10.3Hz, 1H),
5.13(s, 2H), 3.56-3.71(m, 2H), 3.39-3.55(m, 2H), 2.38-2.50(m, 2H), 1.96(t,
J=6.7Hz, 2H), 1.52-1.70(m, 4H).
【０１５１】
ステップ２．  （Ｅ）−ベンジル９−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート塩酸塩
【０１５２】
【化３７】
0005657174.tif 000038
ベンジル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（４．８９ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）をエタノール（６０ｍＬ）に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルヒドラジン塩酸塩（２．４４ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を還流温度で４時間加熱し、次いで６０℃で４８時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、減圧下で濃縮して黄褐色の油状物を得たが、これは、静置すると凝固して、６．６０ｇ（９９％）の表題化合物が黄褐色の固体として得られた。+ESI(M+H) 370.3; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.26-7.42(m, 5H), 6.46(d, J=10.0Hz, 1H), 6.26(br. s., 1H),
5.08-5.16(m, 2H), 3.43-3.58(m, 4H), 3.19(s, 2H), 1.78(s, 2H), 1.44-1.63(m, 4H),
1.17-1.30(m, 9H).
【０１５３】
ステップ３．  ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１５４】
【化３８】
0005657174.tif 000039
（Ｅ）−ベンジル９−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート塩酸塩（８．００ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解させ、炭酸水素ナトリウム（１．７０ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を３０分間撹拌し、次いで濾過し、減圧下で濃縮して、（Ｅ）−ベンジル９−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレートを得た。２５０ｍＬ容丸底フラスコにジメチルホルムアミド（８０ｍＬ）を装入し、０℃に冷却した。オキシ塩化リン（５．５１ｍＬ、５９．１ｍｍｏｌ）を２分かけて滴下し、溶液を０℃で３０分間撹拌した。この溶液に、ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中の（Ｅ）−ベンジル９−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレートを加え、反応液を８０℃で１８時間加熱した。反応液を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた油状物を酢酸エチル（５００ｍＬ）に溶解させ、ブライン（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。水層を追加の１００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０〜８０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、４．８９ｇ（６５％）の表題化合物を淡黄色の油状物として得た。+ESI(M+H) 380.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.25-7.36(m, 5H), 7.18(s, 1H), 6.57(d, J=10.0Hz, 1H), 5.86(d,
J=10.0Hz, 1H), 5.12(s, 2H), 3.51-3.69(m, 2H), 3.36-3.53(m, 2H), 2.58(s, 2H),
1.59-1.74(m, 2H), 1.52-1.58(m, 9H), 1.41-1.53(m, 2H).
【０１５５】
ステップ４．  ベンジル６−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−メトキシ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１５６】
【化３９】
0005657174.tif 000040
ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５６０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を２０％のメタノール／テトラヒドロフラン混合物（２５ｍＬ）に溶解させた。Ｎ−ブロモスクシンイミド（３１５ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。得られた油状物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）とに分配した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０〜８０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、５３８ｍｇ（７３％）の表題化合物を無色の油状物として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.27-7.43(m, 6H), 5.12(s, 2H), 4.74(d, J=2.7Hz, 1H), 4.41(d,
J=2.5Hz, 1H), 3.60-3.84(m, 2H), 3.54-3.61(m, 3H), 3.14-3.39(m, 2H), 2.59(s,
2H), 1.86(br. s., 1H), 1.69(br. s., 3H), 1.51-1.60(m, 9H).
【０１５７】
ステップ５．  ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１５８】
【化４０】
0005657174.tif 000041
ベンジル６−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−メトキシ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解させ、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６１ｍＬ、０．６１ｍｍｏｌ、１Ｍテトラヒドロフラン）で処理し、３０分間撹拌した。２Ｎ  ＨＣｌ水溶液（５ｍＬ）を加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで混合物を５０ｍＬの水で希釈し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０〜８０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、８６ｍｇ（７１％）の表題化合物を透明な油状物として得た。+ESI(M+H) 396.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.38(s, 1H), 7.27-7.35(m, 5H), 5.11(s, 2H), 3.48(t, J=5.8Hz, 4H),
2.71(s, 2H), 2.57(s, 2H), 1.57-1.66(m, 9H), 1.47-1.59(m, 4H).
【０１５９】
ステップ６．  ２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩
ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（４４１ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）をメタノール（１５ｍＬ）に溶解させ、ギ酸アンモニウム（２１７ｍｇ、３．３４ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（５０ｍｇ、１０％Ｐｄ、５０％Ｈ２Ｏ）で処理した。反応液を室温で２時間撹拌し、次いで濾過によって触媒を除去した。濾液を減圧下で濃縮した。得られた無色の固体を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶かし、０．５ＭのＨＣｌジエチルエーテル溶液（１ｍＬ）で処理した。混合物を３０分間撹拌し、減圧下で濃縮した。得られた無色の固体をヘプタン（２０ｍＬ）で摩砕して、２６５ｍｇ（８０％）の表題化合物を無色の固体として得た。+ESI(M+H) 262.1; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.74(s, 1H), 3.20(t, J=6.1Hz, 4H), 2.88(s, 2H), 2.64(s, 2H),
1.67-1.91(m, 4H), 1.55-1.63(m, 9H).
【０１６０】
中間体３：以下に示す２−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オンを以下のとおりに調製した。
【０１６１】
【化４１】
0005657174.tif 000042
ステップ１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレート
【０１６２】
【化４２】
0005657174.tif 000043
添加漏斗、ガス吸気口、および温度計を備えた１Ｌ容３つ口フラスコにおいて、トリス（２，２，６，６−テトラメチル−３，５−ヘプタンジオナト）マンガン（ＩＩＩ）（２８１ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）を２−プロパノール（１００ｍＬ）に溶解させた。溶液を窒素中で−１５℃に冷却した。アゾジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（８．１１ｇ、３４．５ｍｍｏｌ）およびフェニルシラン（２．９ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解させ、この得られる橙色の溶液を、内部温度を約−１０℃に保ちながら、上記の冷却した溶液に１０分かけて滴下した。反応混合物に、［１．１．１］プロペラン（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（２００１）、１２３（１５）、３４８４〜３４９２）の溶液（５０ｍＬ、２３ｍｍｏｌ、０．４６Ｍペンタン溶液）を−１５℃で１回で加えた。反応液を−１５℃で３０分間撹拌した。冷浴を取り外し、反応液を室温に温め、４時間撹拌した。反応液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（５〜２０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（６．３８ｇ、９３％）が透明な油状物として得られ、これは、静置すると凝固した。-ESI(M-H) 297.4; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 6.26(br. s., 1H), 2.37(s, 1H), 2.02(s, 6H), 1.45(s, 18H).
【０１６３】
ステップ２：ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イルヒドラジン塩酸塩
【０１６４】
【化４３】
0005657174.tif 000044
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレート（６．３８ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（２０ｍＬ）溶液に、４Ｎ塩酸１，４−ジオキサン溶液（５３．５ｍＬ、２１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１８時間撹拌した。反応液を濃縮し、固体をヘプタンで摩砕して、表題化合物（３．２４ｇ、８９％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2.42 (s, 1 H), 1.80 (s, 6 H).
【０１６５】
ステップ３：ベンジル２−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１６６】
【化４４】
0005657174.tif 000045
表題化合物は、ステップ２においてビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イルヒドラジン塩酸塩を使用して、中間体２のステップ１〜５に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 406.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.28-7.36(m, 5H), 7.27(s, 1H), 5.10(s, 2H), 3.44-3.50(m, 4H),
2.70(s, 2H), 2.62(s, 1H), 2.56(s, 2H), 2.31(s, 6H), 1.53(d, J=2.5Hz, 4H).
【０１６７】
ステップ４：２−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン
ベンジル２−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１０ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム炭素（１ｍｇ）および１−メチルシクロヘキサン−１，４−ジエン（０．１ｍＬ、０．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を８０℃に加熱し、２時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を濃縮して、表題化合物（１００ｍｇ、１００％）を油状物として得た。+ESI(M+H) 272.4; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.26(s, 1H), 2.82(dd, J=6.63, 4.49Hz, 4H), 2.69(s, 2H), 2.60(s,
1H), 2.56(s, 2H), 2.30(s, 6H), 1.47-1.55(m, 4H).
【０１６８】
中間体４：以下に示す１−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンを以下のとおりに調製した。
【０１６９】
【化４５】
0005657174.tif 000046
ステップ１．  ベンジル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート
【０１７０】
【化４６】
0005657174.tif 000047
ベンジル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（１５．２ｇ、５１ｍｍｏｌ）をトルエン（１８０ｍＬ）に溶解させ、トリス（ジメチルアミノ）メタン（２２．２ｇ、２７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を５時間加熱還流し、次いで室温に冷まし、終夜撹拌した。反応溶液を真空中で濃縮して、表題化合物（１８．０ｇ、１００％）を得た。+APCI+APCI(M+H) 354.6; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.49(s, 1H), 7.28-7.40(m, 5H), 6.59(d, J=10.16Hz, 1H), 6.01(d,
J=9.97Hz, 1H), 5.13(s, 2H), 3.52-3.66(m, 2H), 3.39-3.52(m, 2H), 3.07(s, 6H),
2.74(s, 2H), 1.58-1.73(m, 2H), 1.41-1.58(m, 2H).
【０１７１】
ステップ２．  ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１７２】
【化４７】
0005657174.tif 000048
ベンジル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（５９．２ｇ、１６７ｍｍｏｌ）をエタノール（８３５ｍＬ）に溶解させた。溶液に酢酸（２０ｍＬ、３４５ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルヒドラジン塩酸塩（２９．１ｇ、２３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１時間加熱還流した。反応液を室温に冷却し、濃縮して橙色の油状物とした。フラッシュカラムクロマトグラフィー（２０〜４０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（５０ｇ、７９％）が淡黄色の固体として得られた。+ESI(M+H) 380.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.26-7.40(m, 5H), 7.17(s, 1H), 6.66(d, J=9.95Hz, 1H), 5.77(d,
J=10.15Hz, 1H), 5.12(s, 2H), 3.38-3.64(m, 4H), 2.58(s, 2H), 1.60(s, 12H),
1.50(br. s., 1H).
【０１７３】
ステップ３．  ベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−ヒドロキシ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１７４】
【化４８】
0005657174.tif 000049
ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５０ｇ、１３２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１Ｌ）に溶解させた。反応液にＮ−ブロモスクシンイミド（２４．６ｇ、１３８ｍｍｏｌ）および水（２５０ｍＬ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。反応液を酢酸エチルと水とに分配した。相を分離し、有機相を水で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をジエチルエーテルから結晶化して、表題化合物（６０．７ｇ、９７％）をクリーム色の固体として得た。+ESI(M+H) 476.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3,δ): 7.28-7.36(m, 5H), 7.27(s, 1H), 5.23(t, J=4.68Hz, 1H), 5.12(s,
2H), 4.24(d, J=4.49Hz, 1H), 3.87(br. s., 2H), 3.12(br. s., 2H), 2.79(d,
J=16.00Hz, 2H), 2.59(d, J=15.80Hz, 2H), 1.95(br. s., 1H), 1.66(s, 11H), 1.58(br.
s., 1H).
【０１７５】
ステップ４．  ベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１７６】
【化４９】
0005657174.tif 000050
ベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−ヒドロキシ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５７．９ｇ、１２２ｍｍｏｌ）をアセトン（１Ｌ）に溶解させ、氷浴で０℃に冷却した。溶液にジョーンズ試薬（１２２ｍＬ）（Ｆｉｌｌｉｏｎ，Ｅ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００４、４６、１０９１〜１０９４）を加えた。氷浴を取り外し、反応液を室温に温め、４５分間撹拌した。ガス発生が止み、ｐＨが７に達するまで、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。得られる混合物を酢酸エチルですすぎながらＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過した。濾液の層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて水で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を酢酸エチル／ヘプタンから結晶化して、表題化合物（５０．４ｇ、８７％）を得た。+ESI(M+H) 474.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.32(d, J=9.38Hz, 6H), 5.11(s, 2H), 4.24(s, 1H), 3.58-3.84(m,
2H), 3.16-3.41(m, 2H), 2.67-2.91(m, 2H), 1.80(br. s., 1H), 1.61-1.76(m, 11H),
1.52-1.61(m, 1H).
【０１７７】
ステップ５．  ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１７８】
【化５０】
0005657174.tif 000051
ベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５０．４ｇ、１０６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（６００ｍＬ）溶液に、飽和塩化アンモニウム水溶液（６００ｍＬ）および亜鉛粉（２０．８ｇ、３１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３０分間撹拌した。反応液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過した。濾液の相を分離し、有機相を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して泡沫を得た。泡沫を酢酸エチル／ヘプタンで１回、ジエチルエーテルで１回摩砕して、表題化合物（４０．４ｇ、９６％）を白色の固体として得た。+ESI(M+H) 396.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.24-7.38(m, 6H), 5.11(s, 2H), 3.36-3.61(m, 4H), 2.74(s, 2H),
2.54(s, 2H), 1.64(s, 9H), 1.51(br. s., 4H).
【０１７９】
ステップ６．  １−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（４６．６ｇ、１１８ｍｍｏｌ）のエタノール（７３０ｍＬ）溶液を、１０％パラジウム炭素（９．４ｇ）に加えた。この混合物に、１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン（９０ｍＬ、７６９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を還流温度で２時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過した。濾液を真空中で濃縮して、灰色の固体を得た。固体を酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解させ、この溶液に４Ｍの塩酸１，４−ジオキサン溶液（３５ｍＬ）を加えた。得られる沈殿を濾過によって収集し、真空乾燥して、表題化合物（３４ｇ、９７％）を白色の固体として得た。+ESI(M+H) 262.5; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.34(s, 1H) 3.12-3.25(m, 4H) 2.90(s, 2H) 2.66(s, 2H) 1.67-1.85(m,
4H) 1.62(s, 9H).
【０１８０】
中間体５：以下に示す１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン塩酸塩を以下のとおりに調製した。
【０１８１】
【化５１】
0005657174.tif 000052
ステップ１：ベンジル１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１８２】
【化５２】
0005657174.tif 000053
ベンジル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（５４３ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）のトルエン（１５ｍＬ）溶液に、トリス（ジメチルアミノ）メタン（０．４７ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を加熱還流し、４時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られる黄色の油状物をトルエン（１５ｍＬ）に溶かし、ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イルヒドラジン塩酸塩（３１０ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱還流し、１８時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）および１Ｍクエン酸水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製すると、２種の位置異性体生成物が得られた。
ベンジル１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（３６５ｍｇ、５２％）：+APCI(M+H) 390.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.33-7.36(m, 5H), 7.22(s, 1H), 6.51(d, J=10.1Hz, 1H), 5.81(d,
J=9.9Hz, 1H), 5.12(s, 2H), 3.42-3.59(m, 4H), 2.59(s, 3H), 2.35(s, 6H),
1.43-1.68(m, 4H).
ベンジル２−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（８５ｍｇ、１２％）：+APCI(M+H) 390.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.33-7.36(m, 5H), 7.08(d, J=0.8Hz, 1H), 6.56(d, J=10.0Hz, 1H),
5.91(d, J=10.0Hz, 1H), 5.12(s, 2H), 3.40-3.62(m, 4H), 2.57(s, 3H), 2.26(s, 6H),
1.41-1.68(m, 4H).
【０１８３】
ステップ２：ベンジル１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
【０１８４】
【化５３】
0005657174.tif 000054
ベンジル１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（３４０ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を３：１のテトラヒドロフラン：水（１０ｍＬ）に溶かした溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１５５ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で４５分間撹拌した。反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）および飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られる油状物をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶かし、活性化４Ａ分子ふるい（５００ｍｇ）および過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム（１６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）で処理した。スラリーをアセトニトリル（５ｍＬ）中にてＮ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（２４３ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）で処理した。反応液を室温で２時間撹拌した。反応液をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濾液を濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（７〜６０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、透明な油状物を得た。油状物をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶かし、飽和塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）および亜鉛末（１７１ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で３０分間撹拌した。反応液を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（７〜６０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（１４８ｍｇ、４２％）が白色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.34(m, 6H), 5.13(s, 2H), 3.51(m, 4H), 2.75(s, 2H), 2.59(s, 1H),
2.54(s, 2H), 2.41(s, 6H), 1.56(m, 4H).
【０１８５】
ステップ３：１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン塩酸塩
表題化合物は、中間体４のステップ６に記載の方法と類似の方法によって調製した。
【０１８６】
中間体６：以下に示す３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０１８７】
【化５４】
0005657174.tif 000055
ステップ１．  メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０１８８】
【化５５】
0005657174.tif 000056
１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（３．００ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４６ｍＬ）溶液に、炭酸ナトリウム（２．０６ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）に続いてヨードメタン（２．７５ｇ、１．２１ｍＬ、１９．４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を半飽和炭酸水素ナトリウム中に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、褐色の油状物を得た。この残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１２〜１００％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを黄色の固体（２．９５ｇ、９０％）として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.40(br. s., 1H), 8.26(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.84(d, J=8.4Hz,
1H), 7.79(d, J=8.4Hz, 1H), 3.96(s, 3H).
【０１８９】
ステップ２．  メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０１９０】
【化５６】
0005657174.tif 000057
メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（８６５ｍｇ、４．９１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）溶液に、水酸化カリウム（８４０ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）に続いてヨウ素（１．５４ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。硫酸水素ナトリウム（５％水溶液３０ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（５〜６５％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを無色の固体（１．１６ｇ、７８％）として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.84(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.72(d, J=8.4Hz, 1H), 7.54(d, J=8.6Hz,
1H), 3.87(s, 3H).
【０１９１】
ステップ３．  メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０１９２】
【化５７】
0005657174.tif 000058
メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（３．０ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、亜鉛末（４００ｍｇ、６．１１ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（２．０ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体（１．１５ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）、およびヨウ化銅（Ｉ）（１．９０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ）をジメチルアセトアミド（５５ｍＬ）に混ぜた混合物を、１５分間窒素パージした。混合物を１２０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１００ｍＬ）ですすぎながらＣｅｌｉｔｅで濾過した。濾液に、飽和塩化アンモニウム水溶液と濃水酸化アンモニウムからなる溶液（飽和塩化アンモニウム水溶液にｐＨ＝８になるまで水酸化アンモニウムを加えて調製したもの）約４００ｍＬを加えた。混合物を１時間撹拌した。次いで層を分離した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣にメタノール（４０ｍＬ）を加え、混合物を終夜撹拌した。混合物を濾過し、固体を真空乾燥して、メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを黄褐色の固体（１．４７ｇ、７３％）として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.40(br. s., 1H), 8.25(s, 1H), 7.94(d, J=8.6Hz, 1H), 7.83(d,
J=8.4Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０１９３】
ステップ４．  ３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸
メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（２５４ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）をメタノール（１２ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、尿素過酸化水素（１．２２ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（１Ｍ水溶液１２．６ｍＬ、１２．６ｍｍｏｌ）に溶かした冷溶液を加えた。黄色の溶液を室温で終夜撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、メタノールを除去した。得られる残渣のｐＨを１Ｎ塩酸で約４に調整した。沈殿が生成した。混合物を濾過し、固体を乾燥させて、３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸を褐色の固体（８２ｍｇ、３２％）として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ):
13.84(s, 1H), 13.04(br. s., 1H), 8.20(d, J=8.4Hz, 1H), 8.13-8.16(m, 1H),
7.77(br. s., 1H), 7.74(dd, J=8.6, 1.4Hz, 1H), 7.38(br. s., 1H).
【０１９４】
中間体７：以下に示す３−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０１９５】
【化５８】
0005657174.tif 000059
ステップ１．  ３−シアノ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸エチルエステル
【０１９６】
【化５９】
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５００ｍＬ容Ｐａｒｒボトルに入った６−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（３２８ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のエタノール（５ｍＬ）溶液に、酢酸ナトリウム（３７０ｍｇ、４．４７ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体（２４２ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ）を加えた。反応容器を窒素パージし、３回排気し、次いで３０ｐｓｉの一酸化炭素で満たした。容器内の圧力を４５ｐｓｉに増大させながら、反応混合物を７０℃に加熱した。反応液を７０℃で２４時間かき混ぜた。反応混合物を室温に冷却した。混合物をエタノールですすぎながらＣｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、ジクロロメタンで希釈した。残存する固体を濾別し、濾液を濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（２０〜８０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、３−シアノ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸エチルエステル（１４２ｍｇ、４５％）を得た。-APCI(M-H) 213.4; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.50(br. s., 1H), 8.45(s, 1H), 8.16(s, 1H), 7.82(dd, J=8.4,
1.4Hz, 1H), 7.73(d, J=8.4Hz, 1H), 4.32(q, J=7.0Hz, 2H), 1.33(t, J=7.0Hz, 3H).
【０１９７】
ステップ２．  ３−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸
尿素過酸化水素（４５３ｍｇ、４．６７ｍｍｏｌ）を２．５Ｍ水酸化ナトリウム（１．１２ｍＬ、２．８０ｍｍｏｌ）に溶かした溶液に、０℃で３−シアノ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸エチルエステル（１００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）のメタノール（１．１２ｍＬ）懸濁液を加えた。懸濁液を室温に温め、終夜撹拌した。反応液を減圧下で濃縮した。水を加え、溶液を３Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝２に酸性化した。沈殿が生成した。反応混合物を室温で１分間撹拌し、次いで濾過して橙色の固体を得た。追加の尿素過酸化水素（４５３ｍｇ）の２．５Ｍ水酸化ナトリウム溶液およびメタノールを加え、混合物を２時間撹拌した。反応液を濃縮し、水で希釈し、ｐＨ＝３に酸性化し、濾過した。固体を水およびヘプタンで洗浄し、真空オーブンで乾燥させて、３−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸を固体（６６．５ｍｇ、７０％）として得た。-ESI(M-1) 203.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.45(br. s., 1H), 11.78(br. s., 1H), 8.83(d, J=1.6Hz, 1H),
8.09(d, J=2.9Hz, 1H), 7.73(dd, J=8.6, 1.8Hz, 1H), 7.51(br. s., 1H), 7.45(d,
J=8.4Hz, 1H), 6.89(br. s., 1H).
【０１９８】
中間体８：以下に示す３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０１９９】
【化６０】
0005657174.tif 000061
ステップ１．  メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０２００】
【化６１】
0005657174.tif 000062
１Ｌ容丸底フラスコにおいて、メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（３０．７ｇ、１０２ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（２０．３ｇ、１７３ｍｍｏｌ）、亜鉛末（４．０５ｇ、６１．９ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体（１２ｇ、１５ｍｍｏｌ）、およびヨウ化銅（Ｉ）（１９．７ｇ、１０３ｍｍｏｌ）を合わせた。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（５００ｍＬ）を加え、反応混合物を１０分間窒素パージした。反応液を１時間１２０℃に加熱した。反応液を室温に冷却し、酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、２０分間撹拌した。反応混合物を５００ｍＬの酢酸エチルですすぎながらＣｅｌｉｔｅプラグで濾過した。濾液を、飽和塩化アンモニウムと濃水酸化アンモニウムからなる溶液（２Ｌ）（塩化アンモニウムの飽和水溶液にｐＨ＝８になるまで水酸化アンモニウムを加えて調製したもの）に加え、二相性の溶液を１時間激しく撹拌した。得られるエマルションを小さなＣｅｌｉｔｅパッドで濾過した。層を分離し、各回得られるエマルションをＣｅｌｉｔｅで濾過しながら、水層を酢酸エチル（１．１Ｌ）でさらに２回抽出した。有機層を合わせて水（２×９００ｍＬ）およびブライン（９００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物にメタノール（１００ｍＬ）を加え、混合物を２０分間撹拌した。得られる沈殿を濾別し、メタノール（１０ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮して、表題化合物（１３．２ｇ、６５％）を固体として得た。-ESI(M-H) 200.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.43-8.45(m, 1H), 8.05(dd, J=8.8, 1.6Hz, 1H), 7.85(dd, J=8.9,
0.9Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０２０１】
ステップ２．  ３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（５０．０ｇ、２４９ｍｍｏｌ）のメタノール（１Ｌ）懸濁液を１０℃に冷却した。内部温度を２５℃未満に保ちながら、尿素過酸化水素（２４１ｇ、２．４９ｍｏｌ）を水酸化ナトリウム（２．５Ｎ  １Ｌ）および水（１００ｍＬ）に溶かした溶液を滴下した。滴下完了時に、氷浴を取り外し、反応液を室温で１６時間撹拌した。ＨＰＬＣによって少量の未反応出発材料が観測された。反応液を１５℃に冷却し、追加の尿素過酸化水素（５０ｇ）を少量ずつ加えた。激しい泡立ちが認められた。反応液をさらに２時間撹拌した。粗反応液を濾過して、存在する固体を除去し、濾液を濃縮してメタノールを除去した。残存する溶液を氷浴で冷却し、６Ｎ塩酸（４２０ｍＬ）を滴下して、ｐＨを４に調整した。溶液を２０分間撹拌し、得られる黄褐色の固体を濾過によって収集し、乾燥させて、５７．２ｇの粗生成物を得た。粗生成物にアセトニトリル（７００ｍＬ）およびジクロロメタン（７００ｍＬ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、１：１のアセトニトリル：ジクロロメタン（４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、表題化合物（３９．５ｇ、７７％）を黄褐色の固体として得た。+ESI(M+H) 206.1; 1H NMR(DMSO-d6, δ): 13.81(s, 1H), 12.85(br. s., 1H), 8.82(d, J=0.8Hz, 1H), 7.93(dd,
J=8.8, 1.6Hz, 1H), 7.79-7.85(m, 1H), 7.64(d, J=8.6Hz, 1H), 7.44(s, 1H).
【０２０２】
中間体９：以下に示す３−カルバモイル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２０３】
【化６２】
0005657174.tif 000063
ステップ１．  ベンジル１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート
【０２０４】
【化６３】
0005657174.tif 000064
１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸（１．３７ｇ、８．４５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５５ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（２．７９ｇ、８．５６ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（１．０５ｍＬ、８．６４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１７時間撹拌した。追加の炭酸セシウム（５００ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（０．１８６ｍＬ、１．５３ｍｍｏｌ）を加え、反応液をさらに４時間撹拌した。次いで反応を水で失活させ、酢酸エチルで希釈した。層を分離し、水層を酢酸エチルで３回抽出した。有機物を合わせて水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１００％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（１．４２ｇ、６７％）が得られた。+ESI(M+H) 253.3; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 11.68(br. s., 1H), 8.93(d, J=2.0Hz, 1H), 8.33(dd, J=2.0, 1.0Hz,
1H), 7.93(t, J=3.0Hz, 1H), 7.51(m, 2H), 7.41(m, 3H), 6.68(ddd, J=3.1, 2.0,
1.0Hz, 1H), 5.40(s, 2H).
【０２０５】
ステップ２．  ベンジル３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート
【０２０６】
【化６４】
0005657174.tif 000065
ベンジル１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（８３０ｍｇ、３．２９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１９ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６０９ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を徐々に室温に温め、週末にかけて撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、およびブラインで続けて洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１．０８ｇ、定量的）を得た。+ESI(M+1+H) 333.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.06(br. s., 1H), 8.99(d, J=1.8Hz, 1H), 8.37(d, J=2.0Hz, 1H),
8.14(d, J=2.9Hz, 1H), 7.52(m, 2H), 7.41(m, 3H), 5.41(s, 2H).
【０２０７】
ステップ３．  ３−カルバモイル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸
表題化合物は、ベンジル３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレートを使用して、中間体６のステップ３〜４に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 206.2; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.76(br. s., 1H), 8.92(d, J=1.6Hz, 1H), 8.54-8.64(m, 2H), 8.17(br.
s., 1H), 7.51(br. s., 1H).
【０２０８】
中間体１０：以下に示す３−カルバモイル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２０９】
【化６５】
0005657174.tif 000066
ステップ１．  メチル３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート
【０２１０】
【化６６】
0005657174.tif 000067
メチル１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート（２．９７ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（５．７９ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）中のヨウ素（３．９０ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を室温で２時間撹拌した。次いで反応混合物に水（１５０ｍＬ）を加え、その結果沈殿が形成した。亜硫酸水素ナトリウム（５．７９ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）溶液をゆっくりと加え、混合物を１時間撹拌した。得られる固体を濾過し、真空乾燥して、表題化合物（３．０７ｇ、７３％）を得た。+ESI(M+H) 303.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.53(br. s., 1H), 8.79(d, J=2.0Hz, 1H), 8.15(d, J=2.0Hz, 1H),
7.86(s, 1H), 3.88(s, 3H).
【０２１１】
ステップ２．  １−ｔｅｒｔ−ブチル５−メチル３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１，５−ジカルボキシレート
【０２１２】
【化６７】
0005657174.tif 000068
メチル３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート（７００ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に混ぜた混合物に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．２１ｍＬ、６．９５ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６０７ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）、および４−ジメチルアミノピリジン（２８ｍｇ、２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１６時間撹拌した。反応液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜５０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（７６０ｍｇ、８２％）が固体として得られた。+APCI(M+H) 403.3; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.93(d, J=2.0Hz, 1H), 8.16(d, J=2.0Hz, 1H), 8.14(s, 1H), 3.91(s,
3H), 1.59(s, 9H).
【０２１３】
ステップ３．  ３−カルバモイル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸
表題化合物は、１−ｔｅｒｔ−ブチル５−メチル３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１，５−ジカルボキシレートを使用して、中間体６のステップ３〜４に記載の方法と類似の方法によって調製した。-APCI (M-H) 204.4.
【０２１４】
中間体１１：以下に示す２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２１５】
【化６８】
0005657174.tif 000069
ステップ１．  メチル２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボキシレート
【０２１６】
【化６９】
0005657174.tif 000070
５−（メトキシカルボニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２．５０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液に、１，１−カルボニルジイミダゾール（３．７０ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）を加えた。黄色の懸濁液を２時間撹拌した。次いで濃水酸化アンモニウム（２０ｍＬ）を加え、混合物を室温で５時間撹拌した。淡緑色の懸濁液を濾過し、水および５ｍＬのメタノールで洗浄し、風乾して、メチル２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボキシレート（２．０４ｇ、８２％）を無色の固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 11.93(br. s., 1H), 8.32(d, J=1.2Hz, 1H), 8.06(br. s., 1H),
7.79(dd, J=8.6, 1.6Hz, 1H), 7.48(d, J=8.6Hz, 1H), 7.45(br. s., 1H), 7.27(s,
1H), 3.32(s, 3H).
【０２１７】
ステップ２．  ２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸
メチル２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボキシレート（３００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４．５ｍＬ）およびエチレングリコール（４．５ｍＬ）に懸濁させた懸濁液に、水酸化カリウム（３．１６ｇ、５６．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱還流し、２時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、水で希釈した。減圧下でテトラヒドロフランを除去した。固体を濾別し、濾液を濃塩酸でｐＨ４に酸性化した。得られる沈殿を濾過によって収集し、真空乾燥して、２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸（２３０ｍｇ、８２％）を得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.53(br. s., 1H), 11.88(br. s., 1H), 8.28(s, 1H), 8.04(br. s.,
1H), 7.77(d, J=8.6Hz, 1H), 7.46(m, J=8.6Hz, 2H), 7.25(s, 1H).
【０２１８】
中間体１２：以下に示す３−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２１９】
【化７０】
0005657174.tif 000071
ステップ１．  エチル３−シアノ−１Ｈ−インドール−５−カルボキシレート
【０２２０】
【化７１】
0005657174.tif 000072
５００ｍＬ容Ｐａｒｒボトルに入った５−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（２．６１ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）溶液に、酢酸ナトリウム（２．９０ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（１．９３ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素で３回排気および再充填した。次いで反応容器を２５ｐｓｉの一酸化炭素で加圧した。反応液を７０℃に加熱し、所望の温度に達したとき、容器の圧力を４０ｐｓｉに増大させた。反応液を７０℃で２４時間かき混ぜた。混合物をエタノールですすぎながらＣｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、次いでジクロロメタンで希釈した。混合物を濾過して、不溶性の固体を除去した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（２０〜８０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製した。得られる固体をジクロロメタンおよび少量のヘプタンで摩砕して、エチル３−シアノ−１Ｈ−インドール−５−カルボキシレート（１．０５ｇ、４１％）を得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.54(br. s., 1H), 8.41(d, J=2.7Hz, 1H), 8.25(d, J=1.6Hz, 1H),
7.89(dd, J=8.6, 1.6Hz, 1H), 7.66(dd, J=8.6, 0.6Hz, 1H), 4.34(q, J=7.0Hz, 2H),
1.35(t, J=7.1Hz, 3H).
【０２２１】
ステップ２．  ３−カルバモイル−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸
尿素過酸化水素（４．７４ｇ、４８．９ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウムからなる０℃の溶液（２．５Ｍ水溶液１１．７ｍＬ、２９．３ｍｍｏｌ）に、エチル３−シアノ−１Ｈ−インドール−５−カルボキシレート（１．０５ｇ、４．８９ｍｍｏｌ）のメタノール（１２ｍＬ）溶液を加えた。混合物を室温に温め、終夜撹拌した。追加の２．５Ｍ水酸化ナトリウム溶液２ｍＬを加え、反応液を４時間撹拌したままにした。混合物を濃縮し、６Ｍ塩酸を使用してｐＨ２に酸性化した。得られる沈殿を濾別し、６０℃で真空乾燥して、表題化合物（９１５ｍｇ、９２％）を得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.46(br. s., 1H), 11.84(s, 1H), 8.85(s, 1H), 8.12(d, J=2.5Hz,
1H), 7.75(dd, J=8.6, 1.6Hz, 1H), 7.50-7.63(m, 1H), 7.47(d, J=8.6Hz, 1H),
6.88(br. s., 1H).
【０２２２】
中間体１３：以下に示す２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２２３】
【化７２】
0005657174.tif 000073
ステップ１．  エチル２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボキシレート
【０２２４】
【化７３】
0005657174.tif 000074
表題化合物は、６−ブロモ−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミドを使用して、中間体１２のステップ１に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 233.2; 1H NMR(DMSO-d6, δ): 11.92(s, 1H), 8.07(s, 2H), 7.65-7.71(m, 1H), 7.57-7.63(m, 1H),
7.49(br. s., 1H), 7.17(dd, J=2.1, 1.0Hz, 1H), 4.30(q, J=7.1Hz, 2H), 1.31(t,
J=7.1Hz, 3H).
【０２２５】
ステップ２．  ２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸
エチル２−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボキシレート（３．３ｇ、１４ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（７１ｍＬ、７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１７時間撹拌した。次いで、６Ｎ塩酸水溶液を使用して反応液をｐＨ２〜３に酸性化した。得られる沈殿を濾過によって収集し、真空乾燥して、表題化合物（２．９７ｇ、１００％）を得た。-APCI (M-H) 203.4.
【０２２６】
中間体１４：以下に示す２−アミノ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２２７】
【化７４】
0005657174.tif 000075
３，４−ジアミノ安息香酸メチル（３．０ｇ、１８ｍｍｏｌ）を水（５０ｍＬ）に混ぜた混合物に、臭化シアンの溶液（５．０ｍＬ、５Ｍアセトニトリル溶液、２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。反応混合物にアンモニア水溶液（２０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、層を分離した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣に２Ｎ塩酸水溶液（１８ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を還流温度で終夜加熱した。反応液を濃縮して、表題化合物（２．９０ｇ、９７％）を得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.75(s, 2H), 7.84(s, 1H), 7.77(dd, J=1.2Hz, J=8.4Hz, 1H), 7.38(d,
J=8.4Hz, 1H).
【０２２８】
中間体１５：以下に示す３−（メチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２２９】
【化７５】
0005657174.tif 000076
ステップ１．  ５−ブロモ−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド
【０２３０】
【化７６】
0005657174.tif 000077
５−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（１．２ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）溶液に、メチルアミン（５ｍＬ、２Ｍテトラヒドロフラン溶液、１０ｍｍｏｌ）、１，（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．４ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１．２ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、およびＮ−メチルモルホリン（１．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。反応液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製すると、表題化合物（０．７１ｇ、５６％）が無色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.8(br. s., 1H), 8.41(m, 1H), 8.31(s, 1H), 7.60(d, J=8.8Hz, 1H),
7.51-7.54(m, 1H), 2.80(d, J=4.8Hz, 3H).
【０２３１】
ステップ２．  メチル３−（メチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０２３２】
【化７７】
0005657174.tif 000078
５−ブロモ−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド（７１０ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）の無水メタノール（２０ｍＬ）溶液に、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（４００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（５６５ｍｇ、５．６０ｍｍｏｌ）を加えた。反応容器を窒素で３回排気および再充填した。次いで容器を３０ｐｓｉの一酸化炭素で満たした。容器内の圧力を４５ｐｓｉに増大させながら、反応混合物を７０℃に加熱した。反応液を７０℃で２４時間かき混ぜた。反応混合物を室温に冷却し、メタノールですすぎながらＣｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製すると、表題化合物（４１０ｍｇ、６１％）が褐色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.9(s, 1H), 8.88(s, 1H), 8.49(d, J=4.8, 1H), 7.95-7.98(m, 1H),
7.68-7.70(m, 1H), 3.88(s, 3H), 2.82(d, J=4.8Hz, 3H).
【０２３３】
ステップ３．  ３−（メチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
メチル３−（メチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（４００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）に溶かした溶液に、水酸化リチウム一水和物（０．３６ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を６０℃に加熱し、終夜撹拌した。減圧下でメタノールを除去し、残存する残渣を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。得られる沈殿を濾過によって収集し、真空乾燥して、表題化合物（３５０ｍｇ、９４％）を黄色の固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.99(s, 1H), 8.85(s, 1H), 8.47-8.48(m, 1H), 7.94-7.96(m, 1H),
7.65-7.68(m, 1H), 2.82(d, J=4.4Hz, 3H).
【０２３４】
中間体１６：以下に示す３−（エチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２３５】
【化７８】
0005657174.tif 000079
ステップ１．  ５−ブロモ−Ｎ−エチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド
【０２３６】
【化７９】
0005657174.tif 000080
５−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（１．２ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、塩化オキサリル（１．２６ｇ、１０ｍｍｏｌ）および１滴のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加えた。混合物を窒素雰囲気中にて室温で終夜撹拌した。反応液を濃縮し、残渣をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させた。エチルアミン（１．１ｇ、２５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応液を室温で４時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、表題化合物（１．２７ｇ）を得た。+ESI (M+H+1) 270.9.
【０２３７】
ステップ２．  エチル３−（エチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０２３８】
【化８０】
0005657174.tif 000081
５−ブロモ−Ｎ−エチル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド（１．１ｇ、４．１ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（１．２４ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（３００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加えた。反応容器を窒素で３回排気および再充填した。容器を５０ｐｓｉの一酸化炭素で満たし、８０℃に加熱し、２４時間かき混ぜた。反応液を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を濃縮して褐色の残渣とした。残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、およびブラインで続けて洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（０．８８ｇ、８２％）を褐色の固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.87(s, 1H), 8.88(s, 1H), 8.54-8.57(m, 1H), 7.96-7.98(m, 1H), 7.68-7.70(m,
1H), 4.32-4.37(m, 2H), 3.33-3.37(m, 2H), 1.35(t, 3H), 1.22(t, 3H).
【０２３９】
ステップ３．  ３−（エチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
表題化合物は、中間体１５のステップ３に記載の方法と類似の方法によって調製した。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.83(s, 1H), 12.91(br. s., 1H), 8.86(s, 1H), 8.51-8.54(m, 1H),
7.95-7.97(m, 1H), 7.65-7.68(m, 1H), 3.30-3.36(m, 2H), 1.12-1.16(t, 3H).
【０２４０】
中間体１７：以下に示す３−（２，２，２−トリフルオロエチルカルバモイル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２４１】
【化８１】
0005657174.tif 000082
表題化合物は、ステップ１において２，２，２−トリフルロエチルアミンを使用して、中間体１６について記載した方法と類似の方法によって調製した。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 14.04(s, 1H), 13.0(br. s., 1H), 9.12-9.15(m, 1H), 8.83(s, 1H),
7.97-7.99(m, 1H), 7.69-7.72(m, 1H), 4.04-4.13(m, 2H).
【０２４２】
中間体１８：以下に示す２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２４３】
【化８２】
0005657174.tif 000083
ステップ１．  メチル２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボキシレート
【０２４４】
【化８３】
0005657174.tif 000084
３，４−ジアミノ安息香酸（１５ｇ、０．０９ｍｏｌ）とイソチオシアナトメタン（６．６ｇ、０．０９ｍｏｌ）の混合物をテトラヒドロフラン（９０ｍＬ）に溶解させた。反応液を還流温度で３時間加熱し、次いで濃縮した。残渣を氷水中に注いだ。得られる沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥して、メチル４−アミノ−３−（３−メチルチオウレイド）ベンゾエート（１２．０ｇ、５６％）を得た。
【０２４５】
固体（１２ｇ、０．０５ｍｏｌ）にエタノール（２００ｍＬ）に続いてヨウ化メチル（３５．５ｇ、０．２５ｍｏｌ）を加えた。反応液を加熱還流し、終夜撹拌した。反応液を濃縮し、残渣を水酸化アンモニウムで塩基性化した。固体を濾過によって収集し、水で洗浄した。カラムクロマトグラフィー（９〜２５％の酢酸エチル／石油エーテル）によって精製すると、表題化合物（２．９ｇ、２８％）が黄色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.37(s, 1H), 7.92-7.96(m, 1H), 7.51(d, J=8.4Hz, 1H), 3.93(s, 3H),
2.81(s, 3H).
【０２４６】
ステップ２．  ２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸
メチル２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボキシレート（２．９ｇ、１４ｍｍｏｌ）に３Ｎ塩酸水溶液（１４ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）を加え、反応液を還流温度で終夜撹拌した。反応液を濃縮して、表題化合物（２．４ｇ、９０％）を黄色の固体として得た。1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.96-8.00(m, 2H), 7.40(d, J=8.4Hz, 1H), 3.10(s, 3H).
【０２４７】
中間体１９：以下に示す３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２４８】
【化８４】
0005657174.tif 000085
ステップ１：  メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０２４９】
【化８５】
0005657174.tif 000086
１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（３．００ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４６ｍＬ）溶液に、炭酸ナトリウム（２．０６ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）に続いてヨードメタン（２．７５ｇ、１．２１ｍＬ、１９．４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を半飽和炭酸水素ナトリウム中に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、褐色の油状物を得た。この残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１２〜１００％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを黄色の固体（２．９５ｇ、９０％）として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.40(br. s., 1H), 8.26(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.84(d, J=8.4Hz,
1H), 7.79(d, J=8.4Hz, 1H), 3.96(s, 3H).
【０２５０】
ステップ２：メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０２５１】
【化８６】
0005657174.tif 000087
メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（８６５ｍｇ、４．９１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）溶液に、水酸化カリウム（８４０ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）に続いてヨウ素（１．５４ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。硫酸水素ナトリウム（５％水溶液３０ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（５〜６５％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを無色の固体（１．１６ｇ、７８％）として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.84(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.72(d, J=8.4Hz, 1H), 7.54(d, J=8.6Hz,
1H), 3.87(s, 3H).
【０２５２】
ステップ３：メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０２５３】
【化８７】
0005657174.tif 000088
メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（３．０ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、亜鉛末（４００ｍｇ、６．１１ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（２．０ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体（１．１５ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）、およびヨウ化銅（Ｉ）（１．９０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ）をジメチルアセトアミド（５５ｍＬ）に混ぜた混合物を、１５分間窒素パージした。混合物を１２０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１００ｍＬ）ですすぎながらＣｅｌｉｔｅで濾過した。濾液に飽和塩化アンモニウム水溶液と濃水酸化アンモニウムからなる溶液（塩化アンモニウムの飽和水溶液にｐＨ＝８になるまで水酸化アンモニウムを加えて調製したもの）約４００ｍＬを加えた。混合物を１時間撹拌した。次いで層を分離した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣にメタノール（４０ｍＬ）を加え、混合物を終夜撹拌した。混合物を濾過し、固体を真空乾燥して、メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを黄褐色の固体（１．４７ｇ、７３％）として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.40(br. s., 1H), 8.25(s, 1H), 7.94(d, J=8.6Hz, 1H), 7.83(d,
J=8.4Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０２５４】
ステップ４：３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸
メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（１．４７ｇ、７．３１ｍｍｏｌ）をメタノール（３６ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶かした溶液に、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（１６ｍＬ、３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を７２時間５０℃に加熱した。反応液を室温に冷却し、濃縮した。残渣を水で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨを４に調整した。得られる沈殿を濾別し、水ですすぎ、真空乾燥して、表題化合物（５００ｍｇ、３７％）を黄褐色の固体として得た。+ESI (M+H) 188.2.
【０２５５】
中間体２０：以下に示す３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２５６】
【化８８】
0005657174.tif 000089
ステップ１：メチル３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート
【０２５７】
【化８９】
0005657174.tif 000090
メチル１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（１．００ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（８９５ｍｇ、５．９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を徐々に室温に温め、終夜撹拌した。反応液を水（１２５ｍＬ）で希釈し、２０分間撹拌した。得られる固体を濾過によって収集し、水で洗浄し、真空乾燥して、表題化合物（１．１１ｇ、９３％）を橙色の粉末として得た。+ESI(M+H) 211.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 11.99(br. s., 1H), 8.92(d, J=2.0Hz, 1H), 8.31(d, J=1.8Hz, 1H),
8.08(d, J=3.1Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０２５８】
ステップ２：３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸
メチル３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（１．１０ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）に懸濁させ、６Ｎ塩酸水溶液（８．７ｍＬ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。次いで反応液を濃縮して、表題化合物（１．２ｇ、１００％）を得た。+ESI(M+H) 197.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.50(br. s., 1H), 8.92(d, J=1.6Hz, 1H), 8.46(br. s., 1H),
8.19(br. s., 1H).
【０２５９】
中間体２１：以下に示す３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２６０】
【化９０】
0005657174.tif 000091
メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（５００ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）をメタノール（１２ｍＬ）に溶解させ、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（３．７ｍＬ、７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮してメタノールを除去し、残渣を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。得られる黄色の沈殿を濾過によって収集し、水で洗浄し、真空オーブンで乾燥させて、表題化合物（４４５ｍｇ、９６％）を得た。-ESI(M-H) 186.4; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.17(br. s., 1H), 8.42(s, 1H), 8.05(dd, J=8.8, 1.6Hz, 1H),
7.83(d, 1H).
【０２６１】
中間体２２：以下に示す６−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエトキシ）キノリン−３−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２６２】
【化９１】
0005657174.tif 000092
ステップ１：２−クロロ−６−ヒドロキシキノリン−３−カルバルデヒド
【０２６３】
【化９２】
0005657174.tif 000093
２−クロロ−６−メトキシキノリン−３−カルバルデヒド（４．６４ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１３０ｍＬ）に混ぜた−７８℃の混合物に、三臭化ホウ素（４．０ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温に温め、４時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を慎重に加えて反応液を中和した。次いで混合物を２−メチルテトラヒドロフランで抽出した（３回）。有機物を合わせて濾過し、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で（３回）、ブラインで１回洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して黄色の固体とした。固体を２−メチルテトラヒドロフランに一部溶解させ、濾過した。濾液を濃縮して固体とし、再び２−メチルテトラヒドロフランに一部溶解させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（１０〜１００％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（２．６５ｇ、６１％）が淡黄色の固体として得られた。+ESI(M+H) 208.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.54(s, 1H), 8.59(s, 1H), 7.98(d, J=9.17Hz, 1H), 7.47(dd,
J=9.17, 2.73Hz, 1H), 7.25(d, J=2.93Hz, 1H), 5.57(br. s., 1H).
【０２６４】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−クロロ−３−ホルミルキノリン−６−イルオキシ）アセテート
【０２６５】
【化９３】
0005657174.tif 000094
２−クロロ−６−ヒドロキシキノリン−３−カルバルデヒド（２．３５ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（２．０ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３．１３ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液を水（１００ｍＬ）で希釈し、１時間撹拌した。得られる固体を濾過によって収集し、水で洗浄し、真空乾燥して、表題化合物（３．６２ｇ、９９％）をオフホワイト色の固体として得た。+ESI(M+H) 322.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.54(s, 1H), 8.60(s, 1H), 7.99(d, J=9.36Hz, 1H), 7.59(dd,
J=9.17, 2.93Hz, 1H), 7.11(d, J=2.73Hz, 1H), 4.65(s, 2H), 1.49(s, 9H).
【０２６６】
ステップ３：６−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエトキシ）−２−クロロキノリン−３−カルボン酸
【０２６７】
【化９４】
0005657174.tif 000095
ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−クロロ−３−ホルミルキノリン−６−イルオキシ）アセテート（３．６ｇ、１１ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（１５０ｍＬ）懸濁液に、２−メチル−２−ブテン（１４．９ｍＬ、１３３ｍｍｏｌ）と、亜塩素酸ナトリウム（８．２７ｇ、７３．１ｍｍｏｌ）およびリン酸二水素ナトリウム（８．１０ｇ、５８．７ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）溶液を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。真空中でｔｅｒｔ−ブタノールを除去した。混合物を水（６０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。得られる沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥して、表題化合物（３．７ｇ、１００％）を白色の固体として得た。+ESI(M+H) 338.1; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.69(s, 1H), 7.89(d, J=9.19Hz, 1H), 7.56(dd, J=9.19, 2.74Hz, 1H),
7.34(d, J=2.93Hz, 1H), 4.76(s, 2H), 1.49(s, 9H).
【０２６８】
ステップ４：６−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエトキシ）キノリン−３−カルボン酸
６−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエトキシ）−２−クロロキノリン−３−カルボン酸（１．２７ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）に、メタノール（１００ｍＬ）およびトリエチルアミン（４．５ｍＬ、３３ｍｍｏｌ）を加えた。１０％パラジウム炭素（３５０ｍｇ）を加え、反応液を１７ｐｓｉに水素加圧した。反応液を室温で３時間かき混ぜた。反応混合物をメタノールで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を濃縮して黄色の固体とした。固体を水で希釈し、混合物を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。固体を濾過によって収集し、水で洗浄し、真空乾燥して、表題化合物（９６０ｍｇ、８４％）を淡黄色の固体として得た。+ESI(M+H) 304.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 9.19(d, J=2.15Hz, 1H), 8.87(d, J=2.15Hz, 1H), 8.01(d, J=9.36Hz,
1H), 7.59(dd, J=9.27, 2.83Hz, 1H), 7.38(d, J=2.73Hz, 1H), 4.78(s, 2H), 1.49(s,
9H).
【０２６９】
中間体２３：以下に示す６−カルバモイルキノリン−３−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２７０】
【化９５】
0005657174.tif 000096
ステップ１：エチル６−ブロモキノリン−３−カルボキシレート
【０２７１】
【化９６】
0005657174.tif 000097
５−ブロモ−２−ニトロベンズアルデヒド（２ｇ、９ｍｍｏｌ）のエタノール（４６ｍＬ）溶液に、塩化スズ（ＩＩ）二水和物（７．９５ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）および３，３−ジエトキシプロピオン酸エチルエステル（４．２ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１６時間９０℃に加熱した。次いで反応液を室温に冷まし、終夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解させた。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液中に注いだ。得られるエマルションを酢酸エチルですすぎながらＣｅｌｉｔｅで濾過した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜５０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（１．４１ｇ、６０％）が固体として得られた。
【０２７２】
ステップ２：６−カルバモイルキノリン−３−カルボン酸
表題化合物は、エチル６−ブロモキノリン−３−カルボキシレートを使用して、中間体６のステップ３〜４に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 217.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.58(br. s., 1H), 9.34(d, J=2.1Hz, 1H), 8.97(d, J=2.1Hz, 1H),
8.67(d, J=2.0Hz, 1H), 8.25-8.31(m, 1H), 8.20(br. s., 1H), 8.09-8.14(m, 1H),
7.61(br. s., 1H).
【０２７３】
中間体２４：以下に示す７−ブロモ−６−メトキシキノリン−３−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２７４】
【化９７】
0005657174.tif 000098
ステップ１：１−ブロモ−２−メトキシ−４−メチル−５−ニトロベンゼン
【０２７５】
【化９８】
0005657174.tif 000099
４−メトキシ−２−メチル−１−ニトロベンゼン（２．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（８．５２ｇ、４７．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１．５時間１００℃に加熱した。反応液を室温に冷却し、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液で希釈した。混合物を酢酸エチルで抽出した（３回）。有機物を合わせて水、飽和チオ硫酸ナトリウム、およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜３０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、表題化合物（２．６ｇ、純度約４３％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.32(s, 1H), 6.74(s, 1H), 3.97(s, 3H), 2.63(s, 3H).
【０２７６】
ステップ２：４−ブロモ−５−メトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド
【０２７７】
【化９９】
0005657174.tif 000100
粗１−ブロモ−２−メトキシ−４−メチル−５−ニトロベンゼン（２．６ｇ、１１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解させ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（５ｍＬ、３８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１８時間１２０℃に加熱した。反応液を室温に冷却し、過ヨウ素酸ナトリウム（１２．２ｇ、５７．２ｍｍｏｌ）を水（２０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に懸濁させた０℃の懸濁液に、混合物を直接加えた。反応液を０℃で２時間撹拌し、次いで室温に温め、さらに６時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル、トルエン、および水ですすぎながら濾過した。濾液を酢酸エチルで抽出した（３回）。有機物を合わせて水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜５０％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（５５０ｍｇ、１９％）が淡黄色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.47(s, 1H), 8.41(s, 1H), 7.35(s, 1H), 4.05(s, 3H).
【０２７８】
ステップ３：エチル７−ブロモ−６−メトキシキノリン−３−カルボキシレート
【０２７９】
【化１００】
0005657174.tif 000101
４−ブロモ−５−メトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド（４７５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）のエタノール（１５ｍＬ）懸濁液に、塩化スズ（ＩＩ）二水和物（１．６５ｇ、７．３１ｍｍｏｌ）および３，３−ジエトキシプロピオン酸エチル（１．０ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を３時間９０℃に加熱した。ＬＣＭＳにより反応が不完全であることが示された。追加の塩化スズ（ＩＩ）二水和物（６００ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）および３，３−ジエトキシプロピオン酸エチル（０．３５ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を終夜加熱したままにした。ＬＣＭＳにより反応が不完全であることが示された。塩化スズ（ＩＩ）二水和物（２００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）および３，３−ジエトキシプロピオン酸エチル（０．１０ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を９０℃でさらに３時間加熱した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とに分配した。水層を濾過し、再び酢酸エチルで抽出した。有機物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１００％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、所望の生成物と不純物を含有した黄色の固体（４１０ｍｇ）を得た。この材料をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶かし、３，３−ジエトキシプロピオン酸エチル（０．１７ｍＬ、０．８７ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１２．０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を７５℃に加熱し、３時間撹拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とに分配した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した（２回）。有機物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜２５％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（２５６ｍｇ、４５％）が黄色の固体として得られた。+ESI (M+H+1) 313.3.
【０２８０】
ステップ４：７−ブロモ−６−メトキシキノリン−３−カルボン酸
エチル７−ブロモ−６−メトキシキノリン−３−カルボキシレート（２５０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液に、１Ｎ水酸化リチウム水溶液（１．６ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。反応液を濃縮し、残渣を水および１Ｎ水酸化リチウム水溶液（０．４ｍＬ）に溶かした。溶液を酢酸エチルで２回抽出した。次いで水層を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。得られる沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥して、表題化合物（１６５ｍｇ、７３％）をオフホワイト色の固体として得た。+ESI(M+H+1) 284.1; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 9.19(d, J=2.15Hz, 1H), 8.89(d, J=1.76Hz, 1H), 8.30(s, 1H),
7.53(s, 1H), 4.04(s, 3H).
【０２８１】
中間体２５：以下に示す２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２８２】
【化１０１】
0005657174.tif 000102
ステップ１：７−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド
【０２８３】
【化１０２】
0005657174.tif 000103
エチルキノリン−７−カルボキシレート（１．０２ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、過酢酸（２．１３ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ、酢酸中３２ｗｔ％）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。反応液を水とジクロロメタンとに分配した。層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した（４回）。有機物を合わせて水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。固体をヘプタンおよび酢酸エチルから数回濃縮し、次いで真空乾燥して、表題化合物（１．０１ｇ、９２％）を黄色の固体として得た。+ESI(M+H) 218.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 9.40(s, 1H), 8.65(d, J=6.05Hz, 1H), 8.27(dd, J=8.58, 1.56Hz, 1H),
7.95(d, J=8.39Hz, 1H), 7.82(d, J=8.58Hz, 1H), 7.42(dd, J=8.49, 6.15Hz, 1H),
4.47(q, J=7.02Hz, 2H), 1.45(t, J=7.1Hz, 3H).
【０２８４】
ステップ２：２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボン酸
７−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド（５００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルアミン（１．４６ｍＬ、１３．８ｍｍｏｌ）をトリフルオロメチルベンゼン（２５ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、内部反応温度を５℃未満に保ちながら、ｐ−トルエンスルホン酸無水物（１．９６ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応液を１時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、反応混合物を１５分間撹拌した。次いで相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した（２回）。有機物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製すると、４９９ｍｇの透明な油状物が得られ、これは、静置すると凝固した。この材料をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶かし、１Ｎ水酸化リチウム水溶液（３．６ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。反応液を濃縮し、残渣を水で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。得られる沈殿を濾別し、真空乾燥して、表題化合物（３３０ｍｇ、７５％）を淡黄色の粉末として得た。-ESI(M-H) 243.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.86(br. s., 1H), 8.02(d, J=1.56Hz, 1H), 7.81(d, J=9.03Hz, 1H),
7.57-7.65(m, 2H), 6.83(d, J=8.97Hz, 1H), 6.81(br. s., 1H), 1.46(s, 9H).
【０２８５】
中間体２６：以下に示す２−（メチルアミノ）キノリン−７−カルボン酸を以下のとおりに調製した。
【０２８６】
【化１０３】
0005657174.tif 000104
ステップ１：エチル２−（メチルアミノ）キノリン−７−カルボキシレート
【０２８７】
【化１０４】
0005657174.tif 000105
７−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド（１．６７ｇ、７．７０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８０ｍＬ）に溶かした−７０℃の溶液に、窒素雰囲気中でトリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．４３ｍＬ、８．４７ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７０℃で５分間撹拌した。次いでメチルアミンのテトラヒドロフラン溶液（２１ｍＬ、４２ｍｍｏｌ、２．０Ｍ）を−７０℃で滴下した。混合物を５分間撹拌し、次いで水（２０ｍＬ）で反応を失活させた。層を分離し、水層をジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製すると、表題化合物（７２０ｍｇ、４１％）が黄色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.42(s, 1H), 7.84-7.82(m, 2H), 7.63-7.61(m, 1H), 6.72-6.70(m,
1H), 4.92(br. s., 1H), 4.44-4.38(m, 2H), 3.12-3.11(m, 3H), 1.44-1.40(m, 3H).
【０２８８】
ステップ２：２−（メチルアミノ）キノリン−７−カルボン酸
表題化合物は、エチル２−（メチルアミノ）キノリン−７−カルボキシレートを使用して、中間体１３のステップ２に記載の方法と類似の方法によって調製した。1H NMR(400MHz, DMSO, δ): 8.08(s, 1H), 7.91-7.89(m, 1H), 7.71-7.62(m, 2H), 7.21(s, 1H),
6.85-6.83(m, 1H), 2.91-2.90(m, 3H).
【０２８９】
（実施例１）
６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド
【０２９０】
【化１０５】
0005657174.tif 000106
３−カルバモイル−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（３８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（８５μＬ、０．４９ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬのジメチルホルムアミドに混ぜた混合物を、室温で終夜撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、０．１Ｎ塩酸で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（１４．６ｍｇ、２８％）を得た。分析ＬＣＭＳ：+ESI (M+H) 434.1；保持時間２．２４分（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、５μＭカラム；４．０分かけて９５％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの線形勾配、５％の水／アセトニトリルで５．０分まで保持；０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤；流量２．０ｍＬ／分）（方法Ａ）。
【０２９１】
（実施例２）
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド
【０２９２】
【化１０６】
0005657174.tif 000107
１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（１６．８ｇ、５３．６ｍｍｏｌ）および３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（１０．０ｇ、４８．７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）に懸濁させた懸濁液に、トリエチルアミン（４０ｍＬ、２９０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌し、次いで５℃に冷却した。内部温度を５〜１０℃の間に保ちながら、１−プロパンホスホン酸環状無水物（６０ｍＬ、１００ｍｍｏｌ、５０ｗｔ％の酢酸エチル溶液）を２０分かけて滴下した。反応液を徐々に室温に温めながら終夜撹拌した。反応混合物を５℃の水７００ｍＬ中にゆっくりと注いだ。得られる沈殿を濾別し、乾燥させた。濾液に１０％のメタノール／酢酸エチル（１Ｌ）を加え、得られる沈殿を濾別し、乾燥させた。収集した固体を合わせ（８．９ｇ）、１３０℃でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３４ｍＬ）に溶解させた。溶液を１００℃に冷却し、メタノール（６５ｍＬ）を加えた。溶液をゆっくりと室温に冷ました。得られる沈殿を濾過によって収集し、乾燥させて、表題化合物（６．０ｇ、２８％）を得た。+ESI(M+H) 435.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.65(s, 1H), 8.15(s, 1H), 7.75(s, 1H), 7.60(d, J=8.6Hz, 1H),
7.29-7.47(m, 3H), 5.24(m, 1H), 3.32-3.79(m, 4H), 2.78(s, 2H), 2.59(s, 2H),
1.47(br. s., 4H), 1.32(d, J=6.7Hz, 6H).
【０２９３】
（実施例３）
６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
【０２９４】
【化１０７】
0005657174.tif 000108
１，（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２５２ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１９９ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶かした溶液に、３−カルバモイル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸（２１２ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４０分間撹拌した。次いで１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（３１２ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．４３４ｍＬ、３．１１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で１６時間撹拌した。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈し、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム、水、およびブラインで続けて洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１００％の２０％メタノール／ジクロロメタン溶液）によって精製すると、表題化合物（２５４ｍｇ、５７％）が得られた。+ESI(M+H) 435.5; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.57(d, J=1.8Hz, 1H), 8.26(s, 1H), 7.98(d, J=1.0Hz, 1H), 7.43(s,
1H), 5.38(m, 1H), 3.63(m, 4H), 2.90(s, 2H), 2.66(s, 2H), 1.66(m, 4H), 1.42(d,
J=6.6Hz, 6H).
【０２９５】
以下で表１に載せた化合物は、市販品として入手可能であるか、当業者によく知られている調製法を使用して調製されるか、または上述の経路によって調製される、適切な出発材料を使用して、上で実施例１〜３の化合物の合成について記載した手順と類似の手順を使用して調製した。以下で列挙する化合物は、最初に遊離塩基として単離されており、試験用に薬学的に許容できる塩に変換してもよい。
【０２９６】
【表１−１】
0005657174.tif 000109
【０２９７】
【表１−２】
0005657174.tif 000110
【０２９８】
（実施例１８）
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
【０２９９】
【化１０８】
0005657174.tif 000111
ステップ１．  メチル３−シアノ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート
【０３００】
【化１０９】
0005657174.tif 000112
メチル３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート（１．２８ｇ、５．０１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３４ｍＬ）と合わせた。この混合物に亜鉛末（１９５ｍｇ、２．９０ｍｍｏｌ）およびシアン化亜鉛（１．２０ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物に３０分間窒素をバブリングした。次いで１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（６１１ｍｇ、０．７４９ｍｍｏｌ）を加え、反応容器を密閉した。反応液を６５時間１２０℃に加熱した。反応液を２０％のメタノール／酢酸エチルで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を水で希釈し、分液漏斗に移した。相を分離し、有機物を再び水およびブラインで洗浄した。次いで有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜７５％の酢酸エチル／ヘプタン）によって精製すると、表題化合物（３９０ｍｇ、３９％）が得られた。+ESI (M+H) 203.1.
【０３０１】
ステップ２．  ５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル
【０３０２】
【化１１０】
0005657174.tif 000113
メチル３−シアノ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート（３９０ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解させた。１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１１ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で２２時間撹拌した。粗生成物を濃縮してメタノールを除去し、次いでジクロロメタンで１回洗浄した。水層を６Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝２に酸性化し、得られる固体を濾過によって収集した（１７２ｍｇ）。
【０３０３】
カルボン酸（１７０ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）に、４−ジメチルアミノピリジン（２７．６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、２−プロパンホスホン酸環状無水物（０．６５ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（３ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。次いでトリエチルアミン（０．５１ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）および１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（２９３ｍｇ、０．９１３ｍｍｏｌ）を加え、反応液を１７時間撹拌した。追加のトリエチルアミン（０．３０ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、反応液をさらに２４時間撹拌した。反応液を水で希釈し、層を分離した。水層をジクロロメタンで２回抽出した。有機物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（０〜１００％の１０％メタノールジクロロメタン溶液／ジクロロメタン）によって精製すると、表題化合物（１７７ｍｇ、４７％）が得られた。+ESI(M+H) 418.3; 1H NMR(500MHz, クロロホルム-d, δ): 13.59(br. s., 1H), 8.81(d, J=2.0Hz,
1H), 8.38(d, J=1.7Hz, 1H), 7.44(s, 1H), 5.40(m, 1H), 3.77-3.98(m, 2H),
3.44-3.63(m, 2H), 2.86(s, 2H), 2.66(s, 2H), 1.54-1.85(m, 4H), 1.47(d, J=6.6Hz,
6H).
【０３０４】
ステップ３．  ５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
尿素過酸化水素（５５２ｍｇ、５．７０ｍｍｏｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４．２４ｍＬ、４．２４ｍｍｏｌ）に溶かした０℃の溶液に、５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１７７ｍｇ、０．４２４ｍｍｏｌ）のメタノール（２ｍＬ）溶液を加えた。反応液を室温に温め、２２時間撹拌した。減圧下でメタノールを除去し、残渣を水および飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈した。混合物をジクロロメタンで抽出した（３回）。有機物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。逆相ＨＰＬＣによって精製すると、表題化合物が得られた。分析ＬＣＭＳ：+ESI (M+H) 436.2；保持時間２．１１分（方法Ａ）。
【０３０５】
（実施例１９）
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキサミド
【０３０６】
【化１１１】
0005657174.tif 000114
ステップ１．  エチル２−シアノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート
【０３０７】
【化１１２】
0005657174.tif 000115
表題化合物は、エチル２−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレートを使用して、実施例１８のステップ１に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 216.3; 1H NMR(400MHz, メタノール-d4, δ): 9.02(d, J=2.1Hz, 1H),
8.73(d, J=2.0Hz, 1H), 7.35(s, 1H), 4.41(q, J=7.2Hz, 2H), 1.40(t, J=7.1Hz, 3H).
【０３０８】
ステップ２．  ５−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボニトリル
【０３０９】
【化１１３】
0005657174.tif 000116
エチル２−シアノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシレート（３６ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）に、メタノール（１ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、および水（１ｍＬ）に続いて、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（０．１７ｍＬ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌し、次いで濃縮した。粗生成物を水に溶かし、１Ｎ塩酸水溶液を使用してｐＨを４に調整した。混合物を酢酸エチルで抽出した（３回）。有機物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、２−シアノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸を得た。次いで、２−シアノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸を使用して、実施例１に記載の方法と類似の方法によって表題化合物を調製した。-ESI (M-H) 415.1.
【０３１０】
ステップ３．  ５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキサミド
表題化合物は、実施例１８のステップ３に記載の方法と類似の方法によって調製した。分析ＬＣＭＳ：+ESI (M+H) 435.1；保持時間２．１７分（方法Ａ）。
【０３１１】
（実施例２０）
１−イソプロピル−１’−｛［２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン
【０３１２】
【化１１４】
0005657174.tif 000117
ステップ１．  １’−（３，４−ジアミノベンゾイル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
【０３１３】
【化１１５】
0005657174.tif 000118
表題化合物は、３，４−ジアミノ安息香酸を使用して、実施例３について記載した方法と類似の方法によって調製した。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 7.45(s, 1H), 6.60(s, 1H), 6.46(s, 1H), 5.76(s, 1H), 5.24-5.30(m,
1H), 4.78(s, 2H), 4.56(s, 2H), 3.35-3.55(m, 4H), 2.79(s, 2H), 2.59(s, 2H),
2.40-2.50(m, 1H), 1.42-1.46(m, 3H), 1.35(d, J=6.8Hz, 6H).
【０３１４】
ステップ２．  １−イソプロピル−１’−｛［２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン
１’−（３，４−ジアミノベンゾイル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（０．１ｇ、０．３ｍｍｏｌ）とイソチオシアナトメタン（１９ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の混合物をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解させた。反応液を加熱還流し、６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を冷水中に注いだ。溶液を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、１−（２−アミノ−４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）フェニル）−３−メチルチオ尿素（３７ｍｇ、２７％）を得た。
【０３１５】
粗生成物をエタノール（２ｍＬ）に溶解させ、ヨウ化メチル（１４７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を加熱還流し、終夜撹拌した。反応液を濃縮し、残渣を水酸化アンモニウムでｐＨ＝９に塩基性化した。混合物をジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。逆相ＨＰＬＣによって精製すると、表題化合物（２８ｍｇ、８３％）がオフホワイト色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.39(s, 1H), 7.13(s, 1H), 7.05-7.07(m, 1H), 6.99-7.01(m, 1H),
5.33-5.43(m, 1H), 3.44-3.89(m, 4H), 2.91(s, 3H), 2.86(s, 2H), 2.60(s, 2H),
1.50-1.80(m, 4H), 1.46(d, J=6.8Hz, 6H).
【０３１６】
（実施例２１）
５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボキサミド
【０３１７】
【化１１６】
0005657174.tif 000119
１’−（３，４−ジアミノベンゾイル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（５００ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）、２−クロロアセトアミド（２００ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、硫黄（２００ｍｇ、６．３ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１ｍＬ、７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に混ぜた混合物を、６５℃で終夜撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、水（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィーによって精製すると、表題化合物（２５２ｍｇ、４４％）が黄色の固体として得られた。1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.60-7.90(m, 2H), 7.30-7.50(m, 2H), 5.37-5.40(m, 1H),
3.40-4.00(m, 4H), 2.89(s, 2H), 2.65(s, 2H), 1.50-1.80(m, 4H), 1.42(d, J=6.4Hz,
6H).
【０３１８】
（実施例２２）
３−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシキノリン−７−カルボキサミド
【０３１９】
【化１１７】
0005657174.tif 000120
ステップ１：１’−（７−ブロモ−６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
【０３２０】
【化１１８】
0005657174.tif 000121
表題化合物は、７−ブロモ−６−メトキシキノリン−３−カルボン酸を使用して、実施例２について記載した方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H+1) 513.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.71(d, J=2.15Hz, 1H), 8.29(s, 1H), 8.05(d, J=2.15Hz, 1H),
7.32(s, 1H), 7.05(s, 1H), 5.25-5.37(m, 1H), 3.96(s, 3H), 3.65-3.91(m, 2H),
3.37-3.58(m, 2H), 2.77(s, 2H), 2.55(s, 2H), 1.59-1.73(m, 2H), 1.46-1.59(m, 2H),
1.39(d, J=6.44Hz, 6H).
【０３２１】
ステップ２：３−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシキノリン−７−カルボニトリル
【０３２２】
【化１１９】
0005657174.tif 000122
表題化合物は、１’−（７−ブロモ−６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンを使用して、中間体６について記載した方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 458.4; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.82(d, J=1.95Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.10(d, J=1.56Hz, 1H),
7.35(s, 1H), 7.14(s, 1H), 5.33(m, 1H), 4.02(s, 3H), 3.70-3.91(m, 2H),
3.36-3.54(m, 2H), 2.80(s, 2H), 2.58(s, 2H), 1.65-1.77(m, 2H), 1.51-1.62(m, 2H),
1.42(d, J=4.49Hz, 6H).
【０３２３】
ステップ３：３−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシキノリン−７−カルボキサミド
表題化合物は、３−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシキノリン−７−カルボニトリルを使用して、中間体６のステップ４に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 476.4; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.77(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.36(s, 1H), 7.55(s, 1H), 7.42(s, 1H),
5.31-5.43(m, 1H), 4.08(s, 3H), 3.84-4.00(m, 1H), 3.69-3.83(m, 1H), 3.48-3.58(m,
2H), 2.90(s, 2H), 2.65(br. s., 2H), 1.53-1.78(m, 4H), 1.35-1.45(m, 6H).
【０３２４】
（実施例２３）
６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル
【０３２５】
【化１２０】
0005657174.tif 000123
ステップ１：１’−（３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
【０３２６】
【化１２１】
0005657174.tif 000124
表題化合物は、３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸を使用して、実施例３について記載した方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H+1) 472.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 11.85(br. s., 1H), 8.39(d, J=1.8Hz, 1H), 7.93(s, 1H), 7.81(d,
J=1.8Hz, 1H), 7.43(s, 1H), 5.24(m, 1H), 3.68(m, 1H), 3.40(m, 3H), 2.79(s, 2H),
2.60(s, 2H), 1.49(m, 4H), 1.33(d, J=6.6Hz, 6H).
【０３２７】
ステップ２：６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル
１’−（３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（５００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、亜鉛末（７０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、およびシアン化亜鉛（１８７ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）からなる混合物に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（９ｍＬ）を加えた。反応バイアルにキャップをし、混合物に１５分間窒素ガスをバブリングした。その間、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（６８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、および亜鉛粉（７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１．５ｍＬ）に混ぜた混合物を１５分間８０℃に加熱して、赤みがかった褐色の溶液を得た。次いで、このパラジウム溶液をシリンジで基質混合物に加えた。反応液を１００℃に加熱し、３日間撹拌した。反応液を室温に冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。溶液をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物５０ｍｇを逆相ＨＰＬＣによる精製にかけて、表題化合物（２５．８ｍｇ）を得た。+ESI (M+H) 417.1；ＨＰＬＣ保持時間２．３２分（方法Ａ）。
【０３２８】
（実施例２４）
２−（｛３−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］キノリン−６−イル｝オキシ）アセトアミド
【０３２９】
【化１２２】
0005657174.tif 000125
ステップ１：２−（２−クロロ−３−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）キノリン−６−イルオキシ）アセトアミド
【０３３０】
【化１２３】
0005657174.tif 000126
６−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエトキシ）−２−クロロキノリン−３−カルボン酸と１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンを、実施例１について記載した方法と類似の方法によってカップリングさせて、ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−クロロ−３−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）キノリン−６−イルオキシ）アセテートを得た。この材料（３０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）をアンモニア（２ｍＬ、１０ｍｍｏｌ、７Ｍメタノール溶液）に懸濁させ、室温で１８時間撹拌した。反応液を濃縮して、表題化合物（２７ｍｇ、１００％）を得た。+ESI (M+H) 510.4.
【０３３１】
ステップ２：２−（｛３−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］キノリン−６−イル｝オキシ）アセトアミド
２−（２−クロロ−３−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）キノリン−６−イルオキシ）アセトアミド（２７ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）に、メタノール（１．５ｍＬ）および酢酸エチル（１．５ｍＬ）を加えた。次いで水酸化パラジウム（１５ｍｇ）を加え、反応液を４０ｐｓｉに水素加圧し、室温で２０時間かき混ぜた。反応混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、濃縮した。逆相ＨＰＬＣによって精製すると、表題化合物（２．１ｍｇ、８％）が得られた。+ESI (M+H) 476.2；ＨＰＬＣ保持時間２．１１分（方法Ａ）。
【０３３２】
（実施例２５）
１’−［（２−アミノキノリン−７−イル）カルボニル］−１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン
【０３３３】
【化１２４】
0005657174.tif 000127
ステップ１：１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン
【０３３４】
【化１２５】
0005657174.tif 000128
表題化合物は、２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボン酸を使用して、実施例３について記載した方法と類似の方法によって調製した。+APCI(M+H) 474.6; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.72(d, J=8.8Hz, 1H), 7.64(s, 1H), 7.55(d, J=8.2Hz, 1H), 7.36(s,
1H), 7.16(dd, J=8.1, 1.3Hz, 1H), 6.59(d, J=9.2Hz, 1H), 5.36(五重線, J=6.6Hz, 1H), 3.31-3.96(m, 4H), 2.79(s, 2H), 2.58(s, 2H),
1.55-1.75(m, 4H), 1.52(s, 9H), 1.44(d, J=6.4Hz, 6H).
【０３３５】
ステップ２：１’−［（２−アミノキノリン−７−イル）カルボニル］−１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オントリフルオロ酢酸塩
１’−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）に、トリフルオロ酢酸（０．９０ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を３時間７０℃に加熱し、次いで室温に冷却し、終夜撹拌したままにした。反応液を濃縮乾燥し、逆相ＨＰＬＣによって精製すると、表題化合物（４１ｍｇ、９３％）が得られた。+ESI(M+H) 418.2; 保持時間２．１１分（方法Ａ）。1H NMR(500MHz, CD3OD, δ)
8.36(d, J=9.27Hz, 1H), 7.97(d, J=8.05Hz, 1H), 7.66(s, 1H), 7.53(dd, J=8.17,
1.34Hz, 1H), 7.44(s, 1H), 7.12(d, J=9.27Hz, 1H), 5.39(五重線t, J=13.23, 6.68Hz, 1H), 3.91(br. s., 1H), 3.76(br. s., 1H),
3.46(br. s., 2H), 2.92(s, 2H), 2.67(d, J=7.81Hz, 2H), 1.74(br. s., 2H),
1.59(br. s., 2H), 1.43(br. s., 6H).
【０３３６】
以下で表２に載せた化合物は、市販品として入手可能であるか、当業者によく知られている調製法を使用して調製されるか、または上述の経路によって調製される、適切な出発材料を使用して、上で実施例１〜３の化合物の合成について記載した手順と類似の手順を使用して調製した。以下で列挙する化合物は、最初に遊離塩基として単離されており、試験用に薬学的に許容できる塩に変換してもよい。
【０３３７】
【表２】
0005657174.tif 000129
【０３３８】
以下で表３に載せた化合物は、市販品として入手可能であるか、当業者によく知られている調製法を使用して調製されるか、または上述の経路によって調製される、適切な出発材料を使用して、上で実施例１〜３の化合物の合成について記載した手順と類似の手順を使用して調製した。以下で列挙する化合物は、最初に遊離塩基として単離されており、試験用に薬学的に許容できる塩に変換してもよい。
【０３３９】
【表３−１】
0005657174.tif 000130
【０３４０】
【表３−２】
0005657174.tif 000131
【０３４１】
【表３−３】
0005657174.tif 000132
【０３４２】
（実施例４５）
６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
【０３４３】
【化１２６】
0005657174.tif 000133
ステップ１．  メチル３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート
【０３４４】
【化１２７】
0005657174.tif 000134
表題化合物は、メチル１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレートを使用して、中間体９のステップ２に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 257.1; 1H NMR(DMSO-d6, δ): 12.08(br. s., 1H), 8.92(d, J=1.8Hz, 1H), 8.30(d, J=2.0Hz, 1H),
8.10(d, J=2.9Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０３４５】
ステップ２．  ３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸塩酸塩
【０３４６】
【化１２８】
0005657174.tif 000135
メチル３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（２．９０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）溶液に、６Ｎ塩酸水溶液（１８．９ｍＬ、１１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を９０℃に加熱し、終夜撹拌した。反応液を室温に冷却し、濃縮乾燥して、表題化合物（２．７６ｇ、定量的）を得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.31(br. s., 1H), 8.91(d, J=1.8Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.14(d,
J=1.6Hz, 1H).
【０３４７】
ステップ３．  １’−（３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン
【０３４８】
【化１２９】
0005657174.tif 000136
３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸塩酸塩（２．７５ｇ、９．９１ｍｍｏｌ）および２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩（２．９５ｇ、９．９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶かした懸濁液に、トリエチルアミン（５．５２ｍＬ、３９．６ｍｍｏｌ）を加えた。次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）を加えた後、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．６１ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）および１，（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２．２８ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で６０時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１０％のメタノール／酢酸エチル）によって精製すると、表題化合物（３．３９ｇ、７１％）が淡褐色の固体として得られた。+ESI(M+1+H) 486.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.05(br. s., 1H), 8.57(d, J=1.8Hz, 1H), 7.87(d, J=1.8Hz, 1H),
7.61(d, J=2.7Hz, 1H), 7.44(s, 1H), 3.78(br. s., 2H), 3.51(br. s., 2H), 2.81(s,
2H), 2.65(s, 2H), 1.63(s, 13H).
【０３４９】
ステップ４．  ６−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−３−カルボキサミド
丸底フラスコに、１’−（３−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン（１．２５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（４５４ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）、亜鉛末（１６９ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、および最後にジメチルアセトアミド（２２ｍＬ）を装入した。混合物に５分間窒素をバブリングした。ヨウ化銅（Ｉ）（４９４ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン錯体（１８９ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を終夜１２０℃に加熱した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過した。濾液を炭酸水素ナトリウム（７％水溶液）およびブラインで洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで摩砕し、得られる橙色の粉末を濾別し、乾燥させた。
【０３５０】
粉末（５５０ｍｇ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に懸濁させ、濃硫酸（１ｍＬ）を加えた。反応液を３時間激しく撹拌し、次いで上層のジクロロメタン層をデカントし、脇に置いた。残存する褐色のシロップに５０ｇの氷を加え、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨを７に調整した。混合物を、以前に分離したジクロロメタン層と合わせ、分液漏斗に移した。相を分離し、水層をジクロロメタンで２回抽出した。有機物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１０％のメタノール／ジクロロメタン）によって精製すると、表題化合物（４２０ｍｇ、７３％）がオフホワイト色の固体として得られた。+ESI(M+H) 449.3; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.09(br. s., 1H), 8.49(d, J=1.8Hz, 1H), 8.24(s, 1H), 8.12(br.
s., 1H), 7.93(d, J=1.8Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.39(d, J=2.7Hz, 1H), 3.62(br. s.,
2H), 3.43(br. s., 2H), 2.79(s, 2H), 2.58(s, 2H), 1.53(s, 13H).
【０３５１】
（実施例４６）
２−（｛３−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］キノリン−６−イル｝オキシ）アセトアミド
【０３５２】
【化１３０】
0005657174.tif 000137
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）キノリン−６−イルオキシ）アセテート
【０３５３】
【化１３１】
0005657174.tif 000138
表題化合物は、６−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエトキシ）キノリン−３−カルボン酸および２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩を使用して、実施例３について記載した方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 547.3; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.77(d, J=2.0Hz, 1H), 8.10(d, J=1.6Hz, 1H), 8.06(d, J=9.2Hz, 1H),
7.50(dd, J=9.3, 2.8Hz 1H), 7.41(s, 1H), 7.02(d, J=2.7Hz, 1H), 4.64(s,
2H),3.68-3.93(m, 2H), 3.41-3.51(m, 2H), 2.78(s, 2H), 2.65(s, 2H), 1.53-1.76(m,
4H), 1.61(s, 9H), 1.49(s, 9H).
【０３５４】
ステップ２：２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）キノリン−６−イルオキシ）酢酸
【０３５５】
【化１３２】
0005657174.tif 000139
ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）キノリン−６−イルオキシ）アセテート（４７０ｍｇ、０．８６０ｍｍｏｌ）に、塩酸（１０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ、４Ｍ  １，４−ジオキサン溶液）を加えた。反応液を室温で１時間激しく撹拌した。反応液を濃縮した。残渣を数回酢酸エチルおよびヘプタンとの同時蒸発にかけ、次いで真空乾燥して、表題化合物（４２２ｍｇ、１００％）を得た。+ESI(M+H) 491.4; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.76(d, J=2.0Hz, 1H), 8.35(d, J=1.4Hz, 1H), 7.98(d, J=9.2Hz, 1H),
7.81(s, 1H), 7.52(dd, J=9.3, 2.8Hz, 1H), 7.42(d, J=2.9Hz, 1H), 4.82(s, 2H),
3.57-3.73(m, 2H), 3.34-3.50(m, 2H), 2.77(s, 2H), 2.56(s, 2H), 1.50(s, 9H),
1.44-1.58(m, 4H).
【０３５６】
ステップ３：２−（｛３−［（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］キノリン−６−イル｝オキシ）アセトアミド
２−（３−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）キノリン−６−イルオキシ）酢酸（２９０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６ｍＬ）懸濁液に、アンモニア（２．３６ｍＬ、１．１８ｍｍｏｌ、０．５Ｍ  １，４−ジオキサン溶液）および（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（２２５ｍｇ、０．５９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌した。反応液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１０％のメタノール／ジクロロメタン）によって精製した。得られる材料を酢酸エチルに溶解させ、水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（２８０ｍｇ、９７％）を得た。+ESI(M+H) 490.4; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.81(d, J=2.1Hz, 1H), 8.11(d, J=2.1Hz, 1H), 8.06(d, J=9.2Hz, 1H),
7.46(dd, J=9.3, 2.8Hz, 1H), 7.41(s, 1H), 7.11(d, J=2.7Hz, 1H), 6.54(br. s.,
1H), 5.66(br. s., 1H), 4.63(s, 2H), 3.68-3.96(m, 2H), 3.41-3.51(m, 2H), 2.78(s,
2H), 2.65(s, 2H), 1.66-1.76(m, 2H), 1.61(s, 9H), 1.50-1.60(m, 2H).
【０３５７】
（実施例４７）
１’−［（２−アミノキノリン−７−イル）カルボニル］−２−ｔｅｒｔ−ブチル−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン
【０３５８】
【化１３３】
0005657174.tif 000140
表題化合物は、２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩を使用して、実施例２５について記載した方法と類似の方法によって調製した。+ESI(M+H) 432.3; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.10(d, J=9.21Hz, 1H), 7.82(s, 1H), 7.76(dd, J=7.95Hz, 1H),
7.49(dd, 1H), 7.43(s, 1H), 6.87(d, J=9.33Hz, 1H), 3.95(m, 1H), 3.64(m, 1H),
3.26-3.46(m, 2H), 2.79(s, 2H), 2.66(s, 2H), 1.57-1.80(m, 4H), 1.61(s, 9H).
【０３５９】
（実施例４８）
２−ビシクロ［１．１．１］ペンタ−１−イル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−イルカルボニル）−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン
【０３６０】
【化１３４】
0005657174.tif 000141
表題化合物は、２−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オンおよび１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸を使用して、実施例１に記載の方法と類似の方法によって調製した。+ESI (M+H) 416.2；ＨＰＬＣ保持時間２．３２分（方法Ａ）。
【０３６１】
（実施例４９）
５−［（１−ビシクロ［１．１．１］ペンタ−１−イル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミド
【０３６２】
【化１３５】
0005657174.tif 000142
表題化合物は、１−（ビシクロ［１．１．１］ペンタン−１−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン塩酸塩および３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸を使用して、実施例２について記載した方法と類似の方法によって調製した。+APCI(M+H) 459.5; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.42(s, 1H), 7.50(s, 2H), 7.35(s, 1H), 6.93(br. s., 1H), 5.47(br.
s., 1H), 3.32-3.93(m, 4H), 2.79(s, 2H), 2.58(s, 2H), 2.56(s, 1H), 2.39(s, 6H),
1.45-1.76(m, 4H).
【０３６３】
表４に示す以下の化合物は、前述の実施例と似たようにして調製することができる。
【０３６４】
【表４−１】
0005657174.tif 000143
【０３６５】
【表４−２】
0005657174.tif 000144
【０３６６】
【表４−３】
0005657174.tif 000145
【０３６７】
薬理学的データ
生物学的プロトコル
動物、特に哺乳動物（例えば、ヒト）における疾患（例えば本明細書において詳述しているもの）の治療における本発明の化合物の有用性は、後述のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを含めた当業者に既知の従来のアッセイにおけるその活性によって実証することができる。かかるアッセイは、それによって本発明の化合物の活性が他の既知の化合物の活性と比較できる手段も提供する。
【０３６８】
ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の活性の直接的阻害
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、標準的な手順に準拠した方法によって実証した。例えば、式（Ｉ）の化合物についてのＡＣＣ活性の直接的阻害を、組換え型ヒトＡＣＣ１（ｒｈＡＣＣ１）および組換え型ヒトＡＣＣ２（ｒｈＡＣＣ２）の調製物を使用して決定した。アッセイで使用することのできる組換え型ヒトＡＣＣ１およびＡＣＣ２の代表的な配列を、本明細書では、それぞれ配列番号１および配列番号２として示す。
【０３６９】
［１］ｒｈＡＣＣ１の調製。完全長ヒトＡＣＣ１  ｃＤＮＡを含有する組換えバキュロウイルスに感染させた、２リットルのＳＦ９細胞を、氷冷溶解バッファー（２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、５ｍＭイミダゾール（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ニュージャージー州Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ）、２ｍＭ  ＴＣＥＰ（ＢｉｏＶｅｃｔｒａ、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｔｏｗｎ、カナダ）、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅヌクレアーゼ（１００００Ｕ／１００ｇの細胞ペースト、Ｎｏｖａｇｅｎ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）、ＥＤＴＡ非含有プロテアーゼ阻害剤カクテル（１錠／５０ｍＬ、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）に懸濁させた。細胞を３度の凍結解凍サイクルによって溶解し、４０，０００×ｇで４０分間遠心分離した（４℃）。上清をＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦ粗精製カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ）に直接かけ、２０カラム体積（ＣＶ）で０．５Ｍまでのイミダゾール勾配で溶離させた。ＡＣＣ１含有画分をプールし、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロールで１：５希釈し、ＣａｐｔｏＱ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラムに直接かけ、２０ＣＶで１ＭまでのＮａＣｌ勾配で溶離させた。λホスファターゼ（１００Ｕ／１０μＭ標的タンパク質、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、マサチューセッツ州Ｂｅｖｅｒｌｙ）と共に４℃で１４時間インキュベートすることにより、精製したＡＣＣ１からリン酸基を除去し、オカダ酸（最終濃度１μＭ、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を加えて、ホスファターゼを阻害した。精製したＡＣＣ１を、４℃で６時間の透析によって、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロール、０．５Ｍ  ＮａＣｌに交換した。アリコートを調製し、−８０℃で凍結させた。
【０３７０】
［２］ｒｈＡＣＣ１阻害の測定。Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）を製造者が５０μＭのＡＴＰ反応に推奨する条件を使用しながら使用して、Ｃｏｓｔａｒ  ＃３６７６（Ｃｏｓｔａｒ、マサチューセッツ州Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）３８４穴プレートにおいてｈＡＣＣ１をアッセイした。アッセイの最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチルＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰ、および１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３とした。通常、１０μｌの反応を２５℃で１２０分間実行し、１０μｌのＴｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ停止および検出バッファーを加え、合わせたものを室温でさらに１時間インキュベートした。データは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅリーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）において、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰゼネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）、および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用して取得した。
【０３７１】
［３］ｒｈＡＣＣ２の調製。精製した組換え型ヒトＡＣＣ２（ｈｒＡＣＣ２）を使用して、ヒトＡＣＣ２阻害を測定した。簡潔に述べると、ＡＣＣ２の完全長ＣｙｔｏｍａｘクローンをＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄから購入し、配列決定し、ＰＣＤＮＡ５  ＦＲＴ  ＴＯ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州Ｃａｒｌｓｂａｄ）にサブクローニングした。テトラサイクリン誘導によってＡＣＣ２をＣＨＯ細胞中で発現させ、１μｇ／ｍＬテトラサイクリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州Ｃａｒｌｓｂａｄ）を含む、グルタミン、ビオチン、ハイグロマイシンおよびブラストサイジンを含んだＤＭＥＭ／Ｆ１２  ５リットル中に回収した。次いでＡＣＣ２を含有するならし培地をＳｏｆｔｌｉｎｋ  Ｓｏｆｔ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ａｖｉｄｉｎカラム（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）に加え、５ｍＭビオチンで溶離した。４ｍｇのＡＣＣ２が０．０５ｍｇ／ｍＬ（Ａ２８０で求めた）の濃度で溶離し、推定純度は９５％（Ａ２８０で求めた）であった。精製したＡＣＣ２を５０ｍＭトリス、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＤＴＴ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、および５％グリセロール中で透析した。プールしたタンパク質を凍結し、解凍時に活性の損失なしに−８０℃で保管した。ＡＣＣ２活性の測定およびＡＣＣ２阻害の評価のために、試験化合物をＤＭＳＯ中に溶解し、最終ＤＭＳＯ濃度１％の５倍ストックとしてｒｈＡＣＣ２酵素に加えた。
【０３７２】
［４］ヒトＡＣＣ２阻害の測定。Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）を製造者が５０μＭのＡＴＰ反応に推奨する条件を使用しながら使用して、Ｃｏｓｔａｒ  ＃３６７６（Ｃｏｓｔａｒ、マサチューセッツ州Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）３８４穴プレートにおいてｈＡＣＣ２をアッセイした。アッセイの最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチルＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰ、および８ｍＭ  ＫＨＣＯ３とした。通常、１０μｌの反応を２５℃で５０分間実行し、１０μｌのＴｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ停止および検出バッファーを加え、合わせたものを室温でさらに１時間インキュベートした。データは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅリーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）において、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰゼネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）、および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用して取得した。
【０３７３】
上述の組換え型ｈＡＣＣ１および組換え型ｈＡＣＣ２  Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒアッセイを使用しての結果を、上記実施例で例示した式（Ｉ）の化合物について、以下の表に要約する。
【０３７４】
【表５−１】
0005657174.tif 000146
【０３７５】
【表５−２】
0005657174.tif 000147
【０３７６】
【表５−３】
0005657174.tif 000148
【０３７７】
配列番号１は、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで用いることのできる組換え型ヒトＡＣＣ１（配列番号１）の配列を示すものである。
ｈＡＣＣ１の配列
配列番号１：
ＭＡＨＨＨＨＨＨＤＥＶＤＤＥＰＳＰＬＡＱＰＬＥＬＮＱＨＳＲＦＩＩＧＳＶＳＥＤＮＳＥＤＥＩＳＮＬＶＫＬＤＬＬＥＫＥＧＳＬＳＰＡＳＶＧＳＤＴＬＳＤＬＧＩＳＳＬＱＤＧＬＡＬＨＩＲＳＳＭＳＧＬＨＬＶＫＱＧＲＤＲＫＫＩＤＳＱＲＤＦＴＶＡＳＰＡＥＦＶＴＲＦＧＧＮＫＶＩＥＫＶＬＩＡＮＮＧＩＡＡＶＫＣＭＲＳＩＲＲＷＳＹＥＭＦＲＮＥＲＡＩＲＦＶＶＭＶＴＰＥＤＬＫＡＮＡＥＹＩＫＭＡＤＨＹＶＰＶＰＧＧＰＮＮＮＮＹＡＮＶＥＬＩＬＤＩＡＫＲＩＰＶＱＡＶＷＡＧＷＧＨＡＳＥＮＰＫＬＰＥＬＬＬＫＮＧＩＡＦＭＧＰＰＳＱＡＭＷＡＬＧＤＫＩＡＳＳＩＶＡＱＴＡＧＩＰＴＬＰＷＳＧＳＧＬＲＶＤＷＱＥＮＤＦＳＫＲＩＬＮＶＰＱＥＬＹＥＫＧＹＶＫＤＶＤＤＧＬＱＡＡＥＥＶＧＹＰＶＭＩＫＡＳＥＧＧＧＧＫＧＩＲＫＶＮＮＡＤＤＦＰＮＬＦＲＱＶＱＡＥＶＰＧＳＰＩＦＶＭＲＬＡＫＱＳＲＨＬＥＶＱＩＬＡＤＱＹＧＮＡＩＳＬＦＧＲＤＣＳＶＱＲＲＨＱＫＩＩＥＥＡＰＡＴＩＡＴＰＡＶＦＥＨＭＥＱＣＡＶＫＬＡＫＭＶＧＹＶＳＡＧＴＶＥＹＬＹＳＱＤＧＳＦＹＦＬＥＬＮＰＲＬＱＶＥＨＰＣＴＥＭＶＡＤＶＮＬＰＡＡＱＬＱＩＡＭＧＩＰＬＹＲＩＫＤＩＲＭＭＹＧＶＳＰＷＧＤＳＰＩＤＦＥＤＳＡＨＶＰＣＰＲＧＨＶＩＡＡＲＩＴＳＥＮＰＤＥＧＦＫＰＳＳＧＴＶＱＥＬＮＦＲＳＮＫＮＶＷＧＹＦＳＶＡＡＡＧＧＬＨＥＦＡＤＳＱＦＧＨＣＦＳＷＧＥＮＲＥＥＡＩＳＮＭＶＶＡＬＫＥＬＳＩＲＧＤＦＲＴＴＶＥＹＬＩＫＬＬＥＴＥＳＦＱＭＮＲＩＤＴＧＷＬＤＲＬＩＡＥＫＶＱＡＥＲＰＤＴＭＬＧＶＶＣＧＡＬＨＶＡＤＶＳＬＲＮＳＶＳＮＦＬＨＳＬＥＲＧＱＶＬＰＡＨＴＬＬＮＴＶＤＶＥＬＩＹＥＧＶＫＹＶＬＫＶＴＲＱＳＰＮＳＹＶＶＩＭＮＧＳＣＶＥＶＤＶＨＲＬＳＤＧＧＬＬＬＳＹＤＧＳＳＹＴＴＹＭＫＥＥＶＤＲＹＲＩＴＩＧＮＫＴＣＶＦＥＫＥＮＤＰＳＶＭＲＳＰＳＡＧＫＬＩＱＹＩＶＥＤＧＧＨＶＦＡＧＱＣＹＡＥＩＥＶＭＫＭＶＭＴＬＴＡＶＥＳＧＣＩＨＹＶＫＲＰＧＡＡＬＤＰＧＣＶＬＡＫＭＱＬＤＮＰＳＫＶＱＱＡＥＬＨＴＧＳＬＰＲＩＱＳＴＡＬＲＧＥＫＬＨＲＶＦＨＹＶＬＤＮＬＶＮＶＭＮＧＹＣＬＰＤＰＦＦＳＳＫＶＫＤＷＶＥＲＬＭＫＴＬＲＤＰＳＬＰＬＬＥＬＱＤＩＭＴＳＶＳＧＲＩＰＰＮＶＥＫＳＩＫＫＥＭＡＱＹＡＳＮＩＴＳＶＬＣＱＦＰＳＱＱＩＡＮＩＬＤＳＨＡＡＴＬＮＲＫＳＥＲＥＶＦＦＭＮＴＱＳＩＶＱＬＶＱＲＹＲＳＧＩＲＧＨＭＫＡＶＶＭＤＬＬＲＱＹＬＲＶＥＴＱＦＱＮＧＨＹＤＫＣＶＦＡＬＲＥＥＮＫＳＤＭＮＴＶＬＮＹＩＦＳＨＡＱＶＴＫＫＮＬＬＶＴＭＬＩＤＱＬＣＧＲＤＰＴＬＴＤＥＬＬＮＩＬＴＥＬＴＱＬＳＫＴＴＮＡＫＶＡＬＲＡＲＱＶＬＩＡＳＨＬＰＳＹＥＬＲＨＮＱＶＥＳＩＦＬＳＡＩＤＭＹＧＨＱＦＣＩＥＮＬＱＫＬＩＬＳＥＴＳＩＦＤＶＬＰＮＦＦＹＨＳＮＱＶＶＲＭＡＡＬＥＶＹＶＲＲＡＹＩＡＹＥＬＮＳＶＱＨＲＱＬＫＤＮＴＣＶＶＥＦＱＦＭＬＰＴＳＨＰＮＲＧＮＩＰＴＬＮＲＭＳＦＳＳＮＬＮＨＹＧＭＴＨＶＡＳＶＳＤＶＬＬＤＮＳＦＴＰＰＣＱＲＭＧＧＭＶＳＦＲＴＦＥＤＦＶＲＩＦＤＥＶＭＧＣＦＳＤＳＰＰＱＳＰＴＦＰＥＡＧＨＴＳＬＹＤＥＤＫＶＰＲＤＥＰＩＨＩＬＮＶＡＩＫＴＤＣＤＩＥＤＤＲＬＡＡＭＦＲＥＦＴＱＱＮＫＡＴＬＶＤＨＧＩＲＲＬＴＦＬＶＡＱＫＤＦＲＫＱＶＮＹＥＶＤＲＲＦＨＲＥＦＰＫＦＦＴＦＲＡＲＤＫＦＥＥＤＲＩＹＲＨＬＥＰＡＬＡＦＱＬＥＬＮＲＭＲＮＦＤＬＴＡＩＰＣＡＮＨＫＭＨＬＹＬＧＡＡＫＶＥＶＧＴＥＶＴＤＹＲＦＦＶＲＡＩＩＲＨＳＤＬＶＴＫＥＡＳＦＥＹＬＱＮＥＧＥＲＬＬＬＥＡＭＤＥＬＥＶＡＦＮＮＴＮＶＲＴＤＣＮＨＩＦＬＮＦＶＰＴＶＩＭＤＰＳＫＩＥＥＳＶＲＳＭＶＭＲＹＧＳＲＬＷＫＬＲＶＬＱＡＥＬＫＩＮＩＲＬＴＰＴＧＫＡＩＰＩＲＬＦＬＴＮＥＳＧＹＹＬＤＩＳＬＹＫＥＶＴＤＳＲＴＡＱＩＭＦＱＡＹＧＤＫＱＧＰＬＨＧＭＬＩＮＴＰＹＶＴＫＤＬＬＱＳＫＲＦＱＡＱＳＬＧＴＴＹＩＹＤＩＰＥＭＦＲＱＳＬＩＫＬＷＥＳＭＳＴＱＡＦＬＰＳＰＰＬＰＳＤＭＬＴＹＴＥＬＶＬＤＤＱＧＱＬＶＨＭＮＲＬＰＧＧＮＥＩＧＭＶＡＷＫＭＴＦＫＳＰＥＹＰＥＧＲＤＩＩＶＩＧＮＤＩＴＹＲＩＧＳＦＧＰＱＥＤＬＬＦＬＲＡＳＥＬＡＲＡＥＧＩＰＲＩＹＶＳＡＮＳＧＡＲＩＧＬＡＥＥＩＲＨＭＦＨＶＡＷＶＤＰＥＤＰＹＫＧＹＲＹＬＹＬＴＰＱＤＹＫＲＶＳＡＬＮＳＶＨＣＥＨＶＥＤＥＧＥＳＲＹＫＩＴＤＩＩＧＫＥＥＧＩＧＰＥＮＬＲＧＳＧＭＩＡＧＥＳＳＬＡＹＮＥＩＩＴＩＳＬＶＴＣＲＡＩＧＩＧＡＹＬＶＲＬＧＱＲＴＩＱＶＥＮＳＨＬＩＬＴＧＡＧＡＬＮＫＶＬＧＲＥＶＹＴＳＮＮＱＬＧＧＩＱＩＭＨＮＮＧＶＴＨＣＴＶＣＤＤＦＥＧＶＦＴＶＬＨＷＬＳＹＭＰＫＳＶＨＳＳＶＰＬＬＮＳＫＤＰＩＤＲＩＩＥＦＶＰＴＫＴＰＹＤＰＲＷＭＬＡＧＲＰＨＰＴＱＫＧＱＷＬＳＧＦＦＤＹＧＳＦＳＥＩＭＱＰＷＡＱＴＶＶＶＧＲＡＲＬＧＧＩＰＶＧＶＶＡＶＥＴＲＴＶＥＬＳＩＰＡＤＰＡＮＬＤＳＥＡＫＩＩＱＱＡＧＱＶＷＦＰＤＳＡＦＫＴＹＱＡＩＫＤＦＮＲＥＧＬＰＬＭＶＦＡＮＷＲＧＦＳＧＧＭＫＤＭＹＤＱＶＬＫＦＧＡＹＩＶＤＧＬＲＥＣＣＱＰＶＬＶＹＩＰＰＱＡＥＬＲＧＧＳＷＶＶＩＤＳＳＩＮＰＲＨＭＥＭＹＡＤＲＥＳＲＧＳＶＬＥＰＥＧＴＶＥＩＫＦＲＲＫＤＬＶＫＴＭＲＲＶＤＰＶＹＩＨＬＡＥＲＬＧＴＰＥＬＳＴＡＥＲＫＥＬＥＮＫＬＫＥＲＥＥＦＬＩＰＩＹＨＱＶＡＶＱＦＡＤＬＨＤＴＰＧＲＭＱＥＫＧＶＩＳＤＩＬＤＷＫＴＳＲＴＦＦＹＷＲＬＲＲＬＬＬＥＤＬＶＫＫＫＩＨＮＡＮＰＥＬＴＤＧＱＩＱＡＭＬＲＲＷＦＶＥＶＥＧＴＶＫＡＹＶＷＤＮＮＫＤＬＡＥＷＬＥＫＱＬＴＥＥＤＧＶＨＳＶＩＥＥＮＩＫＣＩＳＲＤＹＶＬＫＱＩＲＳＬＶＱＡＮＰＥＶＡＭＤＳＩＩＨＭＴＱＨＩＳＰＴＱＲＡＥＶＩＲＩＬＳＴＭＤＳＰＳＴ
【０３７８】
配列番号２は、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで用いることのできる組換え型ヒトＡＣＣ２（配列番号２）の配列を示すものである。
ｈＡＣＣ２の配列
配列番号２：
ＭＶＬＬＬＣＬＳＣＬＩＦＳＣＬＴＦＳＷＬＫＩＷＧＫＭＴＤＳＫＰＩＴＫＳＫＳＥＡＮＬＩＰＳＱＥＰＦＰＡＳＤＮＳＧＥＴＰＱＲＮＧＥＧＨＴＬＰＫＴＰＳＱＡＥＰＡＳＨＫＧＰＫＤＡＧＲＲＲＮＳＬＰＰＳＨＱＫＰＰＲＮＰＬＳＳＳＤＡＡＰＳＰＥＬＱＡＮＧＴＧＴＱＧＬＥＡＴＤＴＮＧＬＳＳＳＡＲＰＱＧＱＱＡＧＳＰＳＫＥＤＫＫＱＡＮＩＫＲＱＬＭＴＮＦＩＬＧＳＦＤＤＹＳＳＤＥＤＳＶＡＧＳＳＲＥＳＴＲＫＧＳＲＡＳＬＧＡＬＳＬＥＡＹＬＴＴＧＥＡＥＴＲＶＰＴＭＲＰＳＭＳＧＬＨＬＶＫＲＧＲＥＨＫＫＬＤＬＨＲＤＦＴＶＡＳＰＡＥＦＶＴＲＦＧＧＤＲＶＩＥＫＶＬＩＡＮＮＧＩＡＡＶＫＣＭＲＳＩＲＲＷＡＹＥＭＦＲＮＥＲＡＩＲＦＶＶＭＶＴＰＥＤＬＫＡＮＡＥＹＩＫＭＡＤＨＹＶＰＶＰＧＧＰＮＮＮＮＹＡＮＶＥＬＩＶＤＩＡＫＲＩＰＶＱＡＶＷＡＧＷＧＨＡＳＥＮＰＫＬＰＥＬＬＣＫＮＧＶＡＦＬＧＰＰＳＥＡＭＷＡＬＧＤＫＩＡＳＴＶＶＡＱＴＬＱＶＰＴＬＰＷＳＧＳＧＬＴＶＥＷＴＥＤＤＬＱＱＧＫＲＩＳＶＰＥＤＶＹＤＫＧＣＶＫＤＶＤＥＧＬＥＡＡＥＲＩＧＦＰＬＭＩＫＡＳＥＧＧＧＧＫＧＩＲＫＡＥＳＡＥＤＦＰＩＬＦＲＱＶＱＳＥＩＰＧＳＰＩＦＬＭＫＬＡＱＨＡＲＨＬＥＶＱＩＬＡＤＱＹＧＮＡＶＳＬＦＧＲＤＣＳＩＱＲＲＨＱＫＩＶＥＥＡＰＡＴＩＡＰＬＡＩＦＥＦＭＥＱＣＡＩＲＬＡＫＴＶＧＹＶＳＡＧＴＶＥＹＬＹＳＱＤＧＳＦＨＦＬＥＬＮＰＲＬＱＶＥＨＰＣＴＥＭＩＡＤＶＮＬＰＡＡＱＬＱＩＡＭＧＶＰＬＨＲＬＫＤＩＲＬＬＹＧＥＳＰＷＧＶＴＰＩＳＦＥＴＰＳＮＰＰＬＡＲＧＨＶＩＡＡＲＩＴＳＥＮＰＤＥＧＦＫＰＳＳＧＴＶＱＥＬＮＦＲＳＳＫＮＶＷＧＹＦＳＶＡＡＴＧＧＬＨＥＦＡＤＳＱＦＧＨＣＦＳＷＧＥＮＲＥＥＡＩＳＮＭＶＶＡＬＫＥＬＳＩＲＧＤＦＲＴＴＶＥＹＬＩＮＬＬＥＴＥＳＦＱＮＮＤＩＤＴＧＷＬＤＹＬＩＡＥＫＶＱＡＥＫＰＤＩＭＬＧＶＶＣＧＡＬＮＶＡＤＡＭＦＲＴＣＭＴＤＦＬＨＳＬＥＲＧＱＶＬＰＡＤＳＬＬＮＬＶＤＶＥＬＩＹＧＧＶＫＹＩＬＫＶＡＲＱＳＬＴＭＦＶＬＩＭＮＧＣＨＩＥＩＤＡＨＲＬＮＤＧＧＬＬＬＳＹＮＧＮＳＹＴＴＹＭＫＥＥＶＤＳＹＲＩＴＩＧＮＫＴＣＶＦＥＫＥＮＤＰＴＶＬＲＳＰＳＡＧＫＬＴＱＹＴＶＥＤＧＧＨＶＥＡＧＳＳＹＡＥＭＥＶＭＫＭＩＭＴＬＮＶＱＥＲＧＲＶＫＹＩＫＲＰＧＡＶＬＥＡＧＣＶＶＡＲＬＥＬＤＤＰＳＫＶＨＰＡＥＰＦＴＧＥＬＰＡＱＱＴＬＰＩＬＧＥＫＬＨＱＶＦＨＳＶＬＥＮＬＴＮＶＭＳＧＦＣＬＰＥＰＶＦＳＩＫＬＫＥＷＶＱＫＬＭＭＴＬＲＨＰＳＬＰＬＬＥＬＱＥＩＭＴＳＶＡＧＲＩＰＡＰＶＥＫＳＶＲＲＶＭＡＱＹＡＳＮＩＴＳＶＬＣＱＦＰＳＱＱＩＡＴＩＬＤＣＨＡＡＴＬＱＲＫＡＤＲＥＶＦＦＩＮＴＱＳＩＶＱＬＶＱＲＹＲＳＧＩＲＧＹＭＫＴＶＶＬＤＬＬＲＲＹＬＲＶＥＨＨＦＱＱＡＨＹＤＫＣＶＩＮＬＲＥＱＦＫＰＤＭＳＱＶＬＤＣＩＦＳＨＡＱＶＡＫＫＮＱＬＶＩＭＬＩＤＥＬＣＧＰＤＰＳＬＳＤＥＬＩＳＩＬＮＥＬＴＱＬＳＫＳＥＨＣＫＶＡＬＲＡＲＱＩＬＩＡＳＨＬＰＳＹＥＬＲＨＮＱＶＥＳＩＦＬＳＡＩＤＭＹＧＨＱＦＣＰＥＮＬＫＫＬＩＬＳＥＴＴＩＦＤＶＬＰＴＦＦＹＨＡＮＫＶＶＣＭＡＳＬＥＶＹＶＲＲＧＹＩＡＹＥＬＮＳＬＱＨＲＱＬＰＤＧＴＣＶＶＥＦＱＦＭＬＰＳＳＨＰＮＲＭＴＶＰＩＳＩＴＮＰＤＬＬＲＨＳＴＥＬＦＭＤＳＧＦＳＰＬＣＱＲＭＧＡＭＶＡＦＲＲＦＥＤＦＴＲＮＦＤＥＶＩＳＣＦＡＮＶＰＫＤＴＰＬＦＳＥＡＲＴＳＬＹＳＥＤＤＣＫＳＬＲＥＥＰＩＨＩＬＮＶＳＩＱＣＡＤＨＬＥＤＥＡＬＶＰＩＬＲＴＦＶＱＳＫＫＮＩＬＶＤＹＧＬＲＲＩＴＦＬＩＡＱＥＫＥＦＰＫＦＦＴＦＲＡＲＤＥＦＡＥＤＲＩＹＲＨＬＥＰＡＬＡＦＱＬＥＬＮＲＭＲＮＦＤＬＴＡＶＰＣＡＮＨＫＭＨＬＹＬＧＡＡＫＶＫＥＧＶＥＶＴＤＨＲＦＦＩＲＡＩＩＲＨＳＤＬＩＴＫＥＡＳＦＥＹＬＱＮＥＧＥＲＬＬＬＥＡＭＤＥＬＥＶＡＦＮＮＴＳＶＲＴＤＣＮＨＩＦＬＮＦＶＰＴＶＩＭＤＰＦＫＩＥＥＳＶＲＹＭＶＭＲＹＧＳＲＬＷＫＬＲＶＬＱＡＥＶＫＩＮＩＲＱＴＴＴＧＳＡＶＰＩＲＬＦＩＴＮＥＳＧＹＹＬＤＩＳＬＹＫＥＶＴＤＳＲＳＧＮＩＭＦＨＳＦＧＮＫＱＧＰＱＨＧＭＬＩＮＴＰＹＶＴＫＤＬＬＱＡＫＲＦＱＡＱＴＬＧＴＴＹＩＹＤＦＰＥＭＦＲＱＡＬＦＫＬＷＧＳＰＤＫＹＰＫＤＩＬＴＹＴＥＬＶＬＤＳＱＧＱＬＶＥＭＮＲＬＰＧＧＮＥＶＧＭＶＡＦＫＭＲＦＫＴＱＥＹＰＥＧＲＤＶＩＶＩＧＮＤＩＴＦＲＩＧＳＦＧＰＧＥＤＬＬＹＬＲＡＳＥＭＡＲＡＥＧＩＰＫＩＹＶＡＡＮＳＧＡＲＩＧＭＡＥＥＩＫＨＭＦＨＶＡＷＶＤＰＥＤＰＨＫＧＦＫＹＬＹＬＴＰＱＤＹＴＲＩＳＳＬＮＳＶＨＣＫＨＩＥＥＧＧＥＳＲＹＭＩＴＤＩＩＧＫＤＤＧＬＧＶＥＮＬＲＧＳＧＭＩＡＧＥＳＳＬＡＹＥＥＩＶＴＩＳＬＶＴＣＲＡＩＧＩＧＡＹＬＶＲＬＧＱＲＶＩＱＶＥＮＳＨＩＩＬＴＧＡＳＡＬＮＫＶＬＧＲＥＶＹＴＳＮＮＱＬＧＧＶＱＩＭＨＹＮＧＶＳＨＩＴＶＰＤＤＦＥＧＶＹＴＩＬＥＷＬＳＹＭＰＫＤＮＨＳＰＶＰＩＩＴＰＴＤＰＩＤＲＥＩＥＦＬＰＳＲＡＰＹＤＰＲＷＭＬＡＧＲＰＨＰＴＬＫＧＴＷＱＳＧＦＦＤＨＧＳＦＫＥＩＭＡＰＷＡＱＴＶＶＴＧＲＡＲＬＧＧＩＰＶＧＶＩＡＶＥＴＲＴＶＥＶＡＶＰＡＤＰＡＮＬＤＳＥＡＫＩＩＱＱＡＧＱＶＷＦＰＤＳＡＹＫＴＡＱＡＩＫＤＦＮＲＥＫＬＰＬＭＩＦＡＮＷＲＧＦＳＧＧＭＫＤＭＹＤＱＶＬＫＦＧＡＹＩＶＤＧＬＲＱＹＫＱＰＩＬＩＹＩＰＰＹＡＥＬＲＧＧＳＷＶＶＩＤＡＴＩＮＰＬＣＩＥＭＹＡＤＫＥＳＲＧＧＶＬＥＰＥＧＴＶＥＩＫＦＲＫＫＤＬＩＫＳＭＲＲＩＤＰＡＹＫＫＬＭＥＱＬＧＥＰＤＬＳＤＫＤＲＫＤＬＥＧＲＬＫＡＲＥＤＬＬＬＰＩＹＨＱＶＡＶＱＦＡＤＦＨＤＴＰＧＲＭＬＥＫＧＶＩＳＤＩＬＥＷＫＴＡＲＴＦＬＹＷＲＬＲＲＬＬＬＥＤＱＶＫＱＥＩＬＱＡＳＧＥＬＳＨＶＨＩＱＳＭＬＲＲＷＦＶＥＴＥＧＡＶＫＡＹＬＷＤＮＮＱＶＶＶＱＷＬＥＱＨＷＱＡＧＤＧＰＲＳＴＩＲＥＮＩＴＹＬＫＨＤＳＶＬＫＴＩＲＧＬＶＥＥＮＰＥＶＡＶＤＣＶＩＹＬＳＱＨＩＳＰＡＥＲＡＱＶＶＨＬＬＳＴＭＤＳＰＡＳＴ
【０３７９】
実験動物におけるＡＣＣ阻害の急性ｉｎ  ｖｉｖｏ評価
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、治療した動物からの肝臓および筋肉組織のマロニルＣｏＡレベルを低減させるそれらの能力の評価によってｉｎ  ｖｉｖｏで確認することができる。
【０３８０】
実験動物におけるマロニルＣｏＡ生成阻害の測定は、以下の方法論を用いて決定することができる。
【０３８１】
この方法では、適宜の標準固形飼料および水で維持した雄スプレーグ−ドーリーラット（２２５〜２７５ｇ）を、研究する前に無作為化した。動物は、実験を開始する１８時間前に餌を与えるか、または絶食させた。明期に入って２時間後に、動物に５ｍＬ／ｋｇの体積（０．５％メチルセルロース、ビヒクル）または適切な化合物（ビヒクル中で調製）を経口投与した。ビヒクルを与えた対照は、ベースライン組織マロニルＣｏＡレベルを決定するために含め、一方絶食した動物は、マロニルＣｏＡレベルに対して絶食が与えた影響を決定するために含めた。化合物投与の１時間後、動物をＣＯ２で窒息させ、組織を取り出した。特に、血液を心臓穿刺によって収集し、ＥＤＴＡを含有するＢＤ  Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブ中に入れ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州）、混合し、氷上に置いた。血漿を用いて薬物暴露を決定した。肝臓および四頭筋を取り出し、直ちに凍結クランプし、金属箔で包み、液体窒素中で保管した。
【０３８２】
組織を液体Ｎ２中で微粉砕して、サンプリングにおける均一性を確保した。ＦａｓｔＰｒｅｐ  ＦＰ１２０（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、速度＝５．５、４５秒間）中のＬｙｓｉｎｇ  Ｍａｔｒｉｘ  Ａ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ＰＮ  ６９１０）に溶かした５倍体積の１０％トリカルボン酸を用いて組織（１５０〜２００ｍｇ）からマロニルＣｏＡを抽出した。１５０００×ｇで３０分間遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５４０２）した後にマロニルＣｏＡを含有する上清を細胞片から取り出した。分析が完了するまで試料を−８０Ｃで安定して凍結させた。
【０３８３】
肝臓および筋肉組織中のマロニルＣｏＡレベルの分析は、以下の方法論を用いて評価することができる。
【０３８４】
この方法は、以下の材料を利用した：Ｉｓｏｔｅｃ（米国オハイオ州Ｍｉａｍｉｓｂｕｒｇ）から購入したマロニルＣｏＡテトラリチウム塩およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡトリリチウム塩、過塩素酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ  ｎｏ．４１０２４１）、トリクロロ酢酸（ＡＣＲＯＳ、ｃａｔ  ｎｏ．４２１４５）、リン酸（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ｃａｔ  ｎｏ．０２６０−０１）、ギ酸アンモニウム（Ｆｌｕｋａ、ｃａｔ  ｎｏ．１７８４３）、メタノール（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ｃａｔ  ｎｏ．９０９３−３３）、および水（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、４２１８−０３）を使用して必要とする移動相を作製した。Ｓｔｒａｔａ−Ｘオンライン固相抽出カラム、２５μｍ、２０ｍｍ×２．０ｍｍ  Ｉ．Ｄ（ｃａｔ  ｎｏ．００Ｍ−Ｓ０３３−Ｂ０−ＣＢ）をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（米国カリフォルニア州Ｔｏｒｒａｎｃｅ）から得た。ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８逆相カラム、３．５μｍ、１００ｍｍ×３．０ｍｍ  Ｉ．Ｄ．（ｃａｔ  ｎｏ．１８６００２５４３）をＷａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）から購入した。
【０３８５】
この方法は、以下の装備を利用して行うことができる。Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００バイナリーポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００クォータナリーポンプおよび２個のＶａｌｃｏ  Ｃｈｅｍｉｎｅｒｔ  ６ポート２位置弁を用いた二次元クロマトグラフィー。１０℃で保ったＰｅｌｔｉｅｒ冷却スタックおよび２０μＬサンプリングループを備えたＬＥＡＰ  ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラーによって試料を導入した。オートサンプラーのためのニードル洗浄溶液は、Ｗａｓｈ  １が１０％トリクロロ酢酸水溶液（ｗ／ｖ）であり、Ｗａｓｈ  ２が９０：１０  メタノール：水である。ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｉｃｒｏ−ＬＣ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｏｖｅｎを用いて分析用カラム（Ｓｕｎｆｉｒｅ）を３５℃で保った。Ｔｕｒｂｏ  Ｉｏｎ  Ｓｐｒａｙを備えたＡＢＩ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ３０００三連四重極質量分析計で溶離液を分析した。
【０３８６】
オンライン固相抽出および逆相クロマトグラフィーに関して異なる勾配溶離条件を用いて同時に二次元クロマトグラフィーを行った。この方法の一般的な計画は、第１次元を試料クリーンアップおよび目的の分析物の捕捉のために利用し、続いて第１次元から第２次元上への溶離のために両方の次元を短時間連結するようなものであった。両次元を続いて切り離し、定量化のために第２次元から分析物を勾配溶離させ、同時に配列中の次の試料のために第１次元を調製した。両次元を短時間連結した場合、第１次元中の移動相の流れを第２次元上への分析物溶離のために逆流させて、最適ピーク幅、ピーク形状、および溶離時間を可能にする。
【０３８７】
ＨＰＬＣ系の第１次元は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｓｔｒａｔａ−Ｘオンライン固相抽出カラムと溶媒Ａが１００ｍＭ過塩素酸ナトリウム／０．１％（ｖ／ｖ）リン酸および溶媒Ｂがメタノールからなる移動相とを利用した。
【０３８８】
ＨＰＬＣ系の第２次元は、Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８逆相カラムと溶媒Ａが１００ｍＭギ酸アンモニウムおよび溶媒Ｂがメタノールからなる移動相とを利用した。勾配の初期条件を２分間保ち、この間に分析物を分析用カラムに移した。分析用で保持している間、オンラインＳＰＥカラムから分析物を溶離するのに初期条件は十分な強度であったことが重要であった。その後、洗浄および再平衡ステップの前に４．５分で７４．５％Ａまで勾配が直線的に上がった。
【０３８９】
質量分析は、ＨＰＬＣと連結すると、複雑なマトリックス中の分析物を定量的に測定する場合に高選択的および高感度な方法になり得るが、依然として干渉および抑制を受ける。二次元ＨＰＬＣを質量分析計と連結することによって、これらの干渉は著しく減少する。さらに、三連四重極質量分析計の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）特色を利用することによって、信号対雑音比が著しく改善した。
【０３９０】
このアッセイでは、質量分析計を、ＴｕｒｂｏｌｏｎＳｐｒａｙ電圧２２５０Ｖで陽イオンモードにおいて操作した。噴霧ガスを４５０℃まで加熱した。デクラスタリング電位（ＤＰ）、集束電位（ＦＰ）、および衝突エネルギー（ＣＥ）を、それぞれ６０、３４０、および４２Ｖに設定した。四重極１（Ｑ１）分解能をユニット分解能に設定し、四重極３（Ｑ３）を低に設定した。ＣＡＤガスを８に設定した。モニターしたＭＲＭ転移は、滞留時間２００ｍｓでのマロニルＣｏＡ：８５４．１→３４７．０ｍ／ｚ（Ｌ．Ｇａｏら（２００７）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８５３、３０３〜３１３）、およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ：８５７．１→３５０．０ｍ／ｚに関してであった。溶離液を、予想した分析物の溶離時間付近で質量分析計に分流させ、他の場合には、供給源の保存および器械使用の頑健性の改善を助けるために分流させて廃棄した。得られるクロマトグラムを、Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて積分した。マロニルＣｏＡの組織濃度を、１０％トリクロロ酢酸水溶液で調製した標準曲線から計算した。
【０３９１】
組織抽出物中のマロニルＣｏＡの定量化のための標準曲線を含む試料を１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）で調製し、０．０１〜１ｐｍｏｌ／μＬの範囲であった。マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（最終濃度０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を各標準曲線構成成分および試料に内部標準として加えた。
【０３９２】
アッセイ内品質対照を６個調製した；絶食させた動物から調製したプールした抽出物から３個、および餌を与えた動物から作製したプールから３個。これらは、０、０．１または０．３ｐｍｏｌ／μＬの１２Ｃ−マロニルＣｏＡならびにマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を加えた独立した試料として実行した。各アッセイ内品質対照は、水性組織抽出物を８５％含有し、残りの部分は内部標準（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）および１２Ｃ−マロニルＣｏＡにが寄与していた。アッセイ間対照を各実行に含めた；それらは１個の絶食させたおよび１個の餌を与えたプールした四頭筋の試料および／または１個の絶食させたおよび１個の餌を与えたプールした肝臓の試料で構成される。かかる全ての対照に、マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を加えている。
【０３９３】
限定はしないが、発行された特許、特許出願、学術論文を含めた、本出願で引用する全ての刊行物はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０３９４】
本発明について、開示した実施形態に即して上で述べてきたが、当業者なら、特定の詳細な実験が、本発明を例示するものにすぎないことは容易に認識されよう。本発明の真意から逸脱することなく、種々の変更を加えてもよいことは理解されたい。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【配列表】
0005657174000001.app