(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲンノショウコの熱水抽出物を含有するセラミド産生促進剤。
【請求項２】
ゲンノショウコの熱水抽出物を含有する扁平上皮癌の治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジオウ及びゲンノショウコ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有するセラミド産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
セラミドは、スフィンゴ脂質の一種であり、スフィンゴシンと脂肪酸がアミド結合した化合物群の総称である。セラミドは、細胞膜において高濃度で存在することが知られている。又、セラミドは、角質細胞間脂質の構成成分の一種であり、角化の過程において細胞外に分泌され、皮膚のバリア機能や水分保持能に重要な役割を果たしている。更に、セラミドは、シグナル伝達物質として、細胞の増殖、分化及びアポトーシス等を制御することが知られている。これらのことから、セラミドの産生を促進する物質には、細胞の増殖抑制、分化誘導及びアポトーシスの誘導効果等が期待でき、これらの異常に起因する疾患に対する治療効果が期待できると考えられる。
【０００３】
セラミドとの関連性が高い皮膚疾患として、例えば、扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等が挙げられる。
【０００４】
扁平上皮癌は、上皮性の悪性腫瘍の一種であり、表皮角化細胞が悪性化し、過増殖して生じる。これまでに、セラミドの誘導体であるグリコシルセラミドが、扁平上皮癌を減少させることが知られている（非特許文献１）。そのメカニズムとしては、セラミドが、癌細胞におけるアポトーシスを誘導し、癌細胞の増殖を抑制することが挙げられる（非特許文献２）。更に、セラミド誘導体を含有することを特徴とする癌転移抑制剤（特許文献１）、悪性腫瘍の治療を目的としたセラミド産生促進剤（特許文献２）、抗腫瘍活性物質としてのセラミドを含有することを特徴とするリポソーム（特許文献３）等が開示されている。以上から、皮膚における扁平上皮癌の増殖や転移の抑制には、セラミドの産生促進が不可欠である。
【０００５】
乾癬は、慢性の皮膚角化疾患であり、遺伝的素因が影響すると考えられている。病変部位においては、非病変部位と比べて表皮角化細胞の増殖が亢進しており、バリア機能の低下やセラミド量の減少が見られる（非特許文献３）。又、乾癬の治療や予防を目的とした、ゲンクワニン、ツバキ科植物及びシソ科植物等由来の有効成分を含有することを特徴とするセラミド産生促進剤（特許文献４〜６）等が開示されている。
【０００６】
アトピー性皮膚炎は、痒みを伴う慢性の皮膚疾患であり、アレルギー体質の人の罹患が多く見られる。アトピー性皮膚炎患者の皮膚においては、健常皮膚と比べてセラミド量が減少していることが知られており（非特許文献４）、角質層におけるセラミドの不足がアトピー性皮膚炎の一要因として考えられている。又、アトピー性皮膚炎の治療を目的としたセラミド含有組成物（特許文献７）や、セラミドを供給するスフィンゴ糖脂質やα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール類を有効成分とすることを特徴とするアトピー性皮膚炎治療剤（特許文献８〜９）等が開示されている。
【０００７】
これらのことから、皮膚におけるセラミドの産生を促進することによって、扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等の皮膚疾患を治療及び予防することが可能である。
【０００８】
又、本発明におけるジオウ及びゲンノショウコ抽出物に関し、ジオウ抽出物は血流促進効果（特許文献１０）を、ゲンノショウコ抽出物は活性酸素消去効果（特許文献１１）をそれぞれ有することが知られている。しかしながら、ジオウ及びゲンノショウコ抽出物のセラミド産生促進効果については報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平１１−３４３２４９
【特許文献２】特開２０１０−７０４９９
【特許文献３】特開平９−１１０７２２
【特許文献４】特開２００４−１６１６４８
【特許文献５】特開２００４−１８９６８３
【特許文献６】特開２００４−２１０７４３
【特許文献７】特開２０００−１１９１７８
【特許文献８】特開２００３−２３１６４０
【特許文献９】特開２００９−１６１５６４
【特許文献１０】特開２００６−２０６５１３
【特許文献１１】特開２００３−３００８５８
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】藤原  和典，日本耳鼻咽喉科学会会報，１１３：３４３，２０１０
【非特許文献２】Ｄａｖｉｄ  Ｅ，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ，５：２００−２０８，２００６
【非特許文献３】Ｃｈｏ  Ｙ，Ｊ  Ｋｏｒｅａｎ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ，１９：８５９−８６３，２００４
【非特許文献４】芋川  玄爾，油化学，４４：７５１−７６６，１９９５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、高いセラミド産生促進効果を有するセラミド産生促進剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者等は、鋭意検討を重ねた結果、ジオウ及びゲンノショウコ抽出物に優れたセラミド産生促進効果を発見し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
本発明は、ジオウ及びゲンノショウコ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有するセラミド産生促進剤である。
【００１４】
本発明は、ジオウ及びゲンノショウコ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する扁平上皮癌の治療薬である。
【００１５】
本発明は、ジオウ及びゲンノショウコ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有する乾癬の治療薬である。
【００１６】
本発明は、ジオウ及びゲンノショウコ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有するアトピー性皮膚炎の治療薬である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のジオウ及びゲンノショウコ抽出物は、表皮角化細胞内におけるセラミドの産生を促進することによって、角質細胞間脂質におけるセラミド量を増加させ、セラミドとの関連性が高い扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等の皮膚疾患を治療及び予防することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明に用いるジオウは、ゴマノハグサ科ジオウ属に属し、学名：Ｒｅｈｍａｎｎｉａ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａ（Ｇｅａｒｔｈ.）Ｌｉｂｏｓｃｈの植物である。中国原産の多年草であり、その根茎を乾燥させたもの（生薬名：地黄）等を用いることができる。
【００１９】
本発明に用いるゲンノショウコは、フウロソウ科フウロソウ属に属し、学名：Ｇｅｒａｎｉｕｍ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉの植物である。日本各地を始め、朝鮮半島や中国大陸に自生する多年草であり、根、茎、葉及び花等を乾燥させたものを用いることができる。
【００２０】
本発明のジオウ及びゲンノショウコの抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温又は低温で抽出したものであっても良い。
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。
【００２１】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭等の処理をして用いても良い。さらには、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良いし、カラム精製等を行って有効成分を濃縮したり、単離してから用いても良い。
【００２２】
本発明のジオウ及びゲンノショウコ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有するセラミド産生促進剤を扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎の治療及び予防目的で用いるには、通常全身的又は局所的に経口投与や外用により投与される。投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常成人１人当たり１回に１ｍｇ〜５０００ｍｇ、好ましくは５ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは２０ｍｇ〜２００ｍｇの範囲で１日１回から数回投与される。投与量は種々の条件で変動するので、上記投与範囲より少ない量で十分な場合もあるし、範囲を超えて投与する必要のある場合もある。
【００２３】
本発明の経口投与によるセラミド産生促進剤としては、例えば、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げられる。上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、香料、保存剤、溶解補助剤、溶剤等を用いることができる。具体的には、乳糖、ショ糖、ソルビット、マンニット、澱粉、沈降性炭酸カルシウム、重質酸化マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、セルロース又はその誘導体、アミロペクチン、ポリビニルアルコール、ゼラチン、水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、カカオ脂、ラウリン脂、ワセリン、パラフィン、高級アルコール等である。
【００２４】
本発明の外用によるセラミド産生促進剤としては、例えばクリーム、軟膏、パップ剤等が挙げられる。上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００２５】
本発明に用いる上記抽出物の配合量は、本発明のセラミド産生促進剤に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜５０重量％、より好ましくは０．０１％〜１０重量％の配合が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。５０重量％を超えて配合した場合、効果の増強はみられにくく不経済である。又、配合の方法については、予め加えておいても、製造途中で加えても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００２６】
本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２７】
製造例１  ジオウの熱水抽出物
地黄１００ｇに精製水２Lを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してジオウの熱水抽出物を９．２ｇ得た。
【００２８】
製造例２  ジオウのエタノール抽出物
地黄１００ｇにエタノール２Lを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ジオウのエタノール抽出物を１６．８ｇ得た。
【００２９】
製造例３  ジオウの５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
地黄２０ｇに精製水２００ｍL及び１，３−ブチレングリコール２００ｍLを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、ジオウの５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を３６０ｇ得た。
【００３０】
製造例４  ゲンノショウコの熱水抽出物
ゲンノショウコの根及び茎の乾燥物５０ｇに精製水１Lを加え、１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してゲンノショウコの熱水抽出物を４．６ｇ得た。
【００３１】
製造例５  ゲンノショウコのエタノール抽出物
ゲンノショウコの葉及び茎の乾燥物５０ｇにエタノール１Lを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ゲンノショウコのエタノール抽出物を８．６ｇ得た。
【００３２】
製造例６  ゲンノショウコの５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
ゲンノショウコの葉及び花の乾燥物２０ｇに精製水２００ｍL及び１，３−ブチレングリコール２００ｍLを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、ゲンノショウコの５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を３３０ｇ得た。
【実施例２】
【００３３】
処方例１  飲料
処方                                                              配合量（ｇ）
１．ジオウの熱水抽出物（製造例１）                                    ０．３
２．クエン酸                                                          ０．７
３．果糖ブドウ糖液糖                                                ６０．０
４．香料                                                              ０．１
５．精製水                                                          ３８．９
［製造方法］成分５に成分１〜４を加え、攪拌溶解して濾過し、加熱殺菌後、ガラス瓶に充填した。
【００３４】
処方例２  錠剤
処方                                                              配合量（ｇ）
１．ゲンノショウコのエタノール抽出物（製造例５）                      ５．０
２．トウモロコシデンプン                                            １０．０
３．精製白糖                                                        ２０．０
４．カルボキシメチルセルロースカルシウム                            １０．０
５．微結晶セルロース                                                ４０．０
６．ポリビニルピロリドン                                              ５．０
７．タルク                                                          １０．０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加え、常法により顆粒化した。これに滑沢剤として成分７を加えて混合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠した。
【００３５】
処方例３  カプセル剤
処方                                                              配合量（ｇ）
１．ジオウのエタノール抽出物（製造例２）                              ２．０
２．微結晶セルロース                                                ６０．０
３．トウモロコシデンプン                                            １８．０
４．乳糖                                                            １８．０
５．ポリビニルピロリドン                                              ２．０
［製造方法］成分１〜５を混合して顆粒化した後、２号硬カプセルに２５０ｍｇ充填してカプセル剤を得た。
【００３６】
処方例４  クリーム
処方                                                              配合量（ｇ）
１．ゲンノショウコの熱水抽出物（製造例４）                            ０．１
２．スクワラン                                                        ５．５
３．オリーブ油                                                        ３．０
４．ステアリン酸                                                      ２．０
５．ミツロウ                                                          ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                      ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）                  ３．０
８．ベヘニルアルコール                                                １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                        ２．５
１０．香料                                                              ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール                                        ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル                                          ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                          ０．２
１４．精製水                                                          ６８．０５
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却してクリームを得た。
【００３７】
処方例５  軟膏
処方                                                              配合量（ｇ）
１．ジオウの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
（製造例３）                                              ０．０１
２．ゲンノショウコの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
（製造例６）                                              ０．５
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）                  ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン                                      １０．０
５．流動パラフィン                                                    ５．０
６．セタノール                                                        ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル                                          ０．１
８．プロピレングリコール                                            １０．０
９．精製水                                                          ６６．３９
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とした。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とした。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して軟膏を得た。
【実施例３】
【００３８】
実験例１  セラミド産生促進試験
ヒト表皮ケラチノサイト由来細胞株であるＨａＣａＴ細胞を６０ｍｍディッシュに１×１０５個播種し、４日間培養した。その後、試料を最終濃度が１、１０及び１００μｇ／ｍＬになるように添加し、更に２４時間培養した。次に、細胞をＰＢＳ（−）にて３回洗浄した後、ラバーポリスマンにて集め、凍結乾燥させた。クロロホルム：メタノール（２：１）１ｍＬにて細胞から脂質を抽出し、その中のセラミド量をＫｉｓｉｃ等の蛍光法（Ｋｉｓｉｃ  Ａ．  ａｎｄ  Ｒａｐｐｏｒｔ  Ｍ．Ｍ.，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １５  １７９−１８０  （１９７４））により測定した。即ち、脂質を３Ｎ塩酸０．１５ｍＬにて１００℃で２時間加水分解し、デシケーター中で乾燥、塩酸除去した後、酢酸エチル２ｍＬと０．１Ｎ酢酸緩衝液（ｐＨ３．７）１．２５ｍＬを加え、よく攪拌した。次に、フルオレスカミン溶液（フルオレスカミン  ７ｍｇ／２５ｍＬ  アセトン）０．２５ｍＬを加え、よく攪拌した後、遠心分離し、酢酸エチル層の蛍光強度をＥｘ４１０ｎｍ、Ｅｍ４９０ｎｍにて測定した。以下の式により、セラミド産生促進率を求めた。
セラミド産生促進率（％）＝（試料添加した場合のセラミド産生量／コントロールのセラミド産生量）×１００
【００３９】
これらの実験結果を表１に示した。その結果、ジオウ及びゲンノショウコの抽出物は、コントロールと比較して優れたセラミド産生促進効果を示した。
【００４０】
【表１】
0005649995.tif 000002
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のジオウ及びゲンノショウコ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の抽出物を含有するセラミド産生促進剤は、優れたセラミド産生促進効果を示す。このセラミド産生促進剤は、セラミドの産生を促進することにより、セラミドとの関連性が高い扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等の皮膚疾患を治療及び予防することができる。