(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺癌の治療に用いるための、ｍＴＯＲ阻害剤と抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体とを組み合わせた医薬であって、ここで、ｍＴＯＲ阻害剤が、リダフォロリムスであり、そして抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体が、配列番号８のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖及び配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含むものであり、そしてここで、
リダフォロリムスは、１０ｍｇないし２０ｍｇの用量で週５回経口投与されるためのものであり、
抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回又は２週間に１回静脈内投与されるためのものである、組み合わせ医薬。
【請求項２】
肺癌治療用の、ｍＴＯＲ阻害剤であるリダフォロリムスを含む医薬であって、リダフォロリムスは、１０ｍｇないし２０ｍｇの用量で週５回経口投与される医薬であり、
且つ、前記医薬は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体である、配列番号８のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖及び配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含む医薬と組み合わせて使用されるためのものであり、そして、前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回又は２週間に１回静脈内投与される医薬である、医薬。
【請求項３】
肺癌治療用の、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体である配列番号８のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖及び配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含む医薬であって、前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回又は２週間に１回静脈内投与される医薬であり、
且つ、前記医薬は、ｍＴＯＲ阻害剤であるリダフォロリムスを含む医薬と組み合わせて使用されるためのものであり、そして、前記リダフォロリムスは、１０ｍｇないし２０ｍｇの用量で週５回経口投与される医薬である、医薬。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）シグナリング経路は、多くの様々なタイプのヒトの悪性腫瘍において、癌細胞の増殖及び生存に重要である。グランビル（Ｇｒａｎｖｉｌｌｅ  ＣＡ）ら著、「Ｈａｎｄｉｃａｐｐｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｒａｃｅ  ｔｏ  Ｄｅｖｅｌｏｐ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ  ４−Ｋｉｎａｓｅ／Ａｋｔ／Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  Ｒａｐａｍａｙｃｉｎ  Ｐａｔｈｗａｙ（ホスホイノシチド−４−キナーゼ／Ａｋｔ／哺乳類ラパマイシン経路標的タンパク質の阻害剤開発競争のハンディキャッピング）、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ」、２００６年、第１２巻、第３号、ｐ．６７９−８９参照。この経路は、上皮成長因子受容体及びインスリン様成長因子受容体などの、リガンド受容体相互作用からの上流のインプットを受け、哺乳類のラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）などの、下流のエフェクターを介してシグナリングする。ｍＴＯＲは、細胞周期進行及び多くの他の重要な細胞増殖プロセスにとり決定的なタンパク質の産生を調節する、極めて重要な下流エフェクター分子である。アブラハム（Ａｂｒａｈａｍ  ＲＴ）及びギボンス（Ｇｉｂｂｏｎｓ，ＪＪ）著、「Ｔｈｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ：ｔｗｉｓｔｓ  ａｎｄ  ｔｕｒｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｏａｄ  ｔｏ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ（哺乳類のラパマイシンシグナリング経路標的タンパク質：癌療法への道における紆余曲折）、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ」、２００７年、第１３巻、第１１号、ｐ．３１０９−１４参照。
【０００２】
ＰＩ３キナーゼ軸（ＰＩ３  Ｋｉｎａｓｅ  ａｘｉｓ）の調節異常は、ヒトの癌に共通しており、それらは、過活動性の成長因子受容体シグナリング、ＰＩ３Ｋの突然変異の活性化、ＰＴＥＮ腫瘍抑制因子の機能喪失、及びｍＴＯＲキナーゼ活性の活性化をもたらす他のいくつかのメカニズムに起因する。臨床的には、ＰＩ３Ｋ軸の首尾よい薬理学的阻害は、ＰＩ３キナーゼの、上流の成長因子受容体と、下流エフェクター（例えばｍＴＯＲ）とにフォーカスされてきた。現在、ｍＴＯＲ阻害剤が、進行性悪性腫瘍の患者に臨床上の利益を与え得ることを示す実質的な臨床的証拠がある。
【０００３】
インスリン受容体ファミリーのチロシンキナーゼ受容体である、インスリン様成長因子１型受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）は、細胞増殖、分化に関与し、多くのタイプの癌において、悪性細胞の形質転換及び維持に重要な役割を果たす。バセルガ（Ｂａｓｅｒｇａ，Ｒ）ら著、「Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖｉｅｗ：Ｔｈｅ  ＩＧＦ−１Ｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ（ミニレビュー：癌生物学におけるＩＧＦ−１Ｒ受容体）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ」、２００３年、第１０７巻、ｐ．８７３−７７参照。ＩＧＦ−１Ｒ及びそのリガンドＩＧＦ−２は、多くのタイプの進行癌において過剰発現され、リガンド刺激による受容体シグナリングが、癌細胞の増殖をインビトロにおいて促進する。重要なことに、ＩＧＦ−１Ｒシグナリングは、ＰＩ３Ｋ軸に密に関連している。ＩＧＦ−１Ｒ阻害は、強力な抗癌効果を前臨床研究において示しており、現在いくつかのＩＧＦ−１Ｒ阻害剤が臨床開発中である。
【０００４】
ｍＴＯＲとＩＧＦ−１Ｒ阻害剤との組合せは、ＰＩ３Ｋ軸における上流及び下流の双方の分子標的を阻害することにより、相乗効果を提供し得る。ｍＴＯＲの阻害は、Ａｋｔ発癌遺伝子を活性化するフィードバックループの活性化につながり得るものであり、このことは、インビトロの及びｍＴＯＲ阻害剤を処置された患者から採取された腫瘍生検からの腫瘍細胞において、ホスホ−Ａｋｔのレベルの上昇として具現化する。サン（Ｓｕｎ，Ｓ−Ｙ）ら著、「Ｐｒｉｏｒｉｔｙ  Ｒｅｐｏｒｔ：Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｋｔ  ａｎｄ  ｅＩＦ４Ｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｂｙ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（プライオリティレポート：ラパマイシン媒介性哺乳類ラパマイシン標的タンパク質阻害によるＡｋｔ及びｅＩＦ４Ｅ生存経路の活性化）、ＣＡＮＣＥＲ  ＲＥＳ」、２００５年、第６５巻、第１６号、ｐ．７０５２−５８；及びガードナー（Ｇａｒｄｎｅｒ，Ｈ）ら著、「Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｄａｉｌｙ  ｏｒａｌ  ＲＡＤ００１（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）ｐｌｕｓ  ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ  ｏｒ  ｐｌａｃｅｂｏ  ｐｌｕｓ  ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ  ａｓ  ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ（エストロゲン受容体陽性乳癌患者のためのネオアジュバント療法としての、ＲＡＤ００１（エベロリムス）プラスレトロゾール、又はプラセボプラスレトロゾールの、毎日の経口投与に関する第ＩＩ相無作為化二重盲検試験のバイオマーカー分析）、Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ（サンアントニオ乳癌シンポジウム）」、２００７年、１２月１３−１６日、Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ、ＴＸ、参照。このフィードバックループは、ＩＧＦ−１Ｒ及びインスリン受容体基質を介したシグナリングを含み得るものであり、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤によって阻害される。結果として、前臨床試験は、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤とｍＴＯＲ阻害剤との組合せが、相加的又は相乗的な抗腫瘍活性をインビトロでもたらすことを示してきた。最近、２つのグループが独自に、ヒト肉腫の異種移植モデルで、ラパマイシンと抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体とを組合せた結果を報告した。クルマシェヴァ（Ｋｕｒｍａｓｈｅｖａ  ＲＴ）ら、ポスター：「Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＰ−７５１８７１，ａ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ＩＧＦ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ｓａｒｃｏｍａｓ（ＣＰ−７５１８７１（ＩＧＦ−１受容体に対するヒトモノクローナル抗体）とラパマイシンとの併用は小児肉腫由来の異種移植に高度に有効な療法をもたらす）」、ＥＯＲＴＣ  ２００７、及びダルコ（Ｄａｒｋｏ，ＩＡ）ら著、要約：「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  Ｉ（ＩＧＦ−１Ｒ）  ａｎｄ  ｍＴＯＲ  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｓａｒｃｏｍａ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌｓ（肉腫異種移植モデルにおけるインスリン様成長因子１型受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）とｍＴＯＲ経路遮断との併用の評価）」、ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ（ＡＡＣＲ年回）、２００７年、ｐ．４７６０を参照。これらの研究の１つにおいては、確立されたユーイング及び骨肉腫異種移植片の完全な抑制が観察されたが、別の研究では、併用することで少なくとも相加的な利益を伴う強力な抗腫瘍活性が観察された。
【発明の概要】
【０００５】
発明の要旨
本発明は、非小細胞肺癌、乳癌、結腸直腸癌、軟部組織又は骨肉腫、及び子宮内膜癌からなる群より選択される癌を、ｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を用いて治療する方法であって、ここで、ｍＴＯＲ阻害剤が、リダフォロリムス、エベロリムス、テムシロリムス、ラパマイシン類似体、又はそれらの組合せであり、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体が、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、フィギツムマブ、シクスツムマブ、ＳＨＣ７１７４５４、ロシュ（Ｒｏｃｈｅ）Ｒ１５０７、ＥＭ１６４、又はアムジェン（Ａｍｇｅｎ）ＡＭＧ４７９である方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】リダフォロリムス＋ＭＫ−０６４６の併用による発癌性ＰＩ３Ｋシグナリングの改善されたターゲティングを示す図である。ＭＫ−０６４６＆リダフォロリムスによる併用療法は、ＰＩ３Ｋ経路の阻害を増大し、癌細胞増殖を阻止する。（Ａ）ネガティブフィードバックループを説明するＰＩ３キナーゼシグナリング経路；（Ｂ）ｍＴＯＲ阻害が患者の腫瘍でＡｋｔ−Ｐの上昇をもたらすことを示す公表データ；（Ｃ）インビトロのＨ２１２２細胞におけるリダフォロリムス（１０ｎＭ）、ＭＫ−０６４６（１０ｕｇ／ｍｌ）、又はそれらの組合せに応答した経路シグナリング；（Ｄ）Ｃに用いた濃度で示した処置で２４時間処理された細胞における、細胞周期分布及び細胞死を示すＦＡＣＳプロフィールデータ。
【図２】リダフォロリムス＆ＭＫ−０６４６の併用がインビトロの効果を増大することを示す図である。肺癌細胞系を、軟寒天中で、ＭＫ−０６４６若しくはリダフォロリムス又はそれらの組合せの存在下で培養した。軟寒天コロニー形成は、蛍光色素（ＬａｖａＣｅｌｌ）を用いて定量化し、コロニーの面積及び数は、画像入力及び解析プラットフォーム（Ｉｓｏｃｙｔｅ）を使用して計数した。Ａ）９６ウエルプレートにおける相対コロニー面積がプロットされている。併用は、Ａ５４９＆Ｈ２１２２細胞系において、有意に増殖阻害を増強した（ｐ＜０．０２）。Ｐ−ＲＴＫアレイにより測定されるＲＴＫの活性化状態、及びＫＲＡＳにおいて活性化する突然変異を下に示す。Ｂ）９ＮＳＣＬＣ細胞系における、リダフォロリムス（１０ｎＭ）若しくはＭＫ−０６４６（１０ｕｇ／ｍｌ）又はそれらの組合せのいずれかに応答した相対的軟寒天コロニー形成がプロットされている。細胞系は、ＫＲＡＳ中の活性化突然変異に基づき分類した。
【図３】突然変異体−ＫＲＡＳ異種移植腫瘍におけるリダフォロリムス＆ＭＫ−０６４６併用の抗腫瘍活性を示す図である。ＭＫ−０６４６＆リダフォロリムスによる併用処置は、Ａ５４９異種移植片増殖の阻止において有効である。有意な腫瘍増殖阻害が、多様な濃度のＭＫ−０６４６＆リダフォロリムスを併用した併用処置群で、二元配置分散（２ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）分析により評価した場合に観察された。
【図４】リダフォロリムスと併用した高濃度のＭＫ−０６４６により統計的に低減された腫瘍重量を示す図である。マウスに、ＭＫ−０６４６（２０ｍｐｋ）を単独で又はリダフォロリムス（０．１ｍｐｋ）と併用でのいずれかにより、３週間にわたり投薬処置した。腫瘍重量（上記参照）は、リダフォロリムスと併用した、より高用量のＭＫ−０６４６で、統計的に小さく、腫瘍の退縮が強調された。
【図５】Ａ５４９異種移植片モデルがエルロチニブ処置に抵抗性であることを示す図である。ビヒクルに比較して、エルロチニブ処置群では何ら有意な増殖阻害が観察されなかった。
【図６】ＩＧＦ１受容体シグナル伝達を示す図である。ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩＫ３ＣＡ）経路及びＲＡＳ経路を標的とするスクリーニングヒットが、それぞれ赤又は青で囲まれている。
【図７】コロニーアッセイによるヒットの検証により、ＰＩ３Ｋ経路のレギュレータを標的とするｓｈＲＮＡがＭＫ−０６４６の効力に強く影響を及ぼすことを実証している図である。コロニー数（Ａ）及びコロニー面積（Ｂ）は、アルファ・イメージャー（Ａｌｐｈａ  Ｉｍａｇｅｒ）でプレートをスキャンすることにより測定した。ＭＫ−０６４６の上位３つの強力なエンハンサーは、ＰＩ３Ｋ経路のエフェクター（赤色で強調）をサイレンスさせたｓｈＲＮＡであり、一方ＰＴＥＮを標的とするｓｈＲＮＡは、薬剤に対する抵抗性を伝達した。
【図８】ＨＴ２９結腸癌細胞におけるＰＴＥＮの安定なサイレンシングが、ＭＫ−０６４６に対する抵抗性を伝達することを示す図である。ＰＴＥＮ又はＣＳＫ又はＭＡＰ３Ｋを標的とする種々のｓｈＲＮＡを発現する安定なＨＴ２９細胞を生成し、ＭＫ−０６４６に対する感受性をコロニー形成アッセイにおいて試験した。ＰＴＥＮのサイレンシングにより、ＭＫ−０６４６による増殖阻害の低減が示された。
【図９】ＰＩ３Ｋのサイレンシングは、ＰＴＥＮ欠失ＨＴ２９細胞をＭＫ−０６４６の効果に対し再感受性化するが、ＰＤＰＫ１又はＭＥＬＫは再感受性化しないことを示す図である。ＰＴＥＮのＲＮＡｉ媒介ノックダウンは、ＭＫ−０６４６媒介増殖阻害に対し抵抗性を付与する（図７＆８参照）。ＰＴＥＮノックダウン細胞の増殖は、ＭＫ−０６４６＆ＰＩ３Ｋ  ＲＮＡｉによる、ＩＧＦ−１Ｒ及びＰＩＫ３ＣＡの併用阻害により阻止し得る。
【図１０】ＰＩ３Ｋ及びＲａｓ経路キナーゼが、ＭＫ−０６４６エンハンサースクリーンからの上位のコンセンサスヒットのうちで傑出していることを示す図である。ＰＩ３Ｋ及びＲａｓ経路の標準的な及び推定上のキナーゼレギュレータが、各々赤及び青で強調されている。定量的ＰＣＲ分析を行なって、標的サイレンシング効率を評価した。ヒットの確認は、図７及び８に記載した通りのコロニー形成アッセイ又は短期間の増殖アッセイを用いて実施した。
【図１１】確認されたＭＫ−０６４６感受性化ヒットを示す図である。ある用量設定の薬剤（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ）への暴露に続く、コロニーアウトグロースアッセイ（＞２倍）又は７２時間のアラマー（Ａｌａｍａｒ）アッセイ（ｐ＜０．０５）のいずれかにおいて、ＭＫ−０６４６に対する腫瘍細胞の感受性を増大させたスクリーニングヒットを下に示す。あるベクターは、薬剤の不在下での毒性のため、いずれのアッセイでも検査不能であったことに注目されたい。色分けは、図１０に定義した通りである。
【図１２】リダフォロリムス−ダロツズマブ併用に応答している患者のＣＴ画像を示す図である。画像は、肝臓（図に示した通り）及び他の部位に転移した、エストロゲン受容体陽性乳癌をもつ５６歳の女性からである。患者は、多数回の事前の化学療法及びホルモン療法の後に進行した。上部パネルは、肝臓の左葉中の大きい腫瘍を示しており、下部パネルは、ダロツズマブと併用したリダフォロリムスの第Ｉ相臨床試験による２サイクルの処置後の、著しくサイズの縮小した同腫瘍を示す。患者は部分寛解を達成しており、これは８ヵ月を超える実験的治療後に継続していた。
【０００７】
発明の詳細な記載
絶え間ない研究の結果、本発明者らは、ｍＴＯＲ阻害剤又はその薬学的に許容される塩を抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体と組合せて使用することにより、相乗的に優れた抗癌活性を達成し得ることを見出しており、ここで、ｍＴＯＲ阻害剤は、リダフォロリムス、エベロリムス、テムシロリムス、ラパマイシン類似体、又はそれらの組合せであり、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ダロツズマブ、フィギツムマブ、シクスツムマブ、ＳＨＣ７１７４５４、ロシュＲ１５０７、ＥＭ１６４、又はアムジェンＡＭＧ４７９である。本発明は特に、非小細胞肺癌、乳癌、結腸直腸癌、軟部組織又は骨肉腫、及び子宮内膜癌からなる群より選択される癌の治療に有用である。しかしながら、本発明は、様々な他の癌、例えば脳腫瘍、頚大脳癌（ｃｅｒｖｉｃｏｃｅｒｅｂｒａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、食道癌、甲状腺癌、小細胞肺癌、肺癌、胃癌、胆嚢／胆管癌、肝臓癌、膵臓癌、卵巣癌、絨毛上皮癌、子宮体癌、子宮頚癌、腎盂／尿管癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣癌、胎児性癌、ウィルムス癌、皮膚癌、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング腫瘍、軟部肉腫、急性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、及びホジキンリンパ腫の治療に有用であることも立証し得た。
【０００８】
したがって、本発明は、ｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を用いて、非小細胞肺癌、乳癌、結腸直腸癌、軟部組織又は骨肉腫、及び子宮内膜癌からなる群より選択される癌を治療する方法であって、ここで、ｍＴＯＲ阻害剤が、リダフォロリムス、エベロリムス、テムシロリムス、ラパマイシン類似体、又はそれらの組合せであり、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体が、ダロツズマブ、フィギツムマブ、シクスツムマブ、ＳＨＣ７１７４５４、ロシュＲ１５０７、ＥＭ１６４、又はアムジェンＡＭＧ４７９である、該方法に関する。
【０００９】
本発明の１つの実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、リダフォロリムスである。
【００１０】
本発明の別の実施態様においては、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、少なくとも１つの非ヒト由来の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、少なくとも１つの非ヒト由来の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含んでなり、ここで、ＩＧＦ−１Ｒに結合する前記抗体は、以下：（ａ）ＩＧＦ−１Ｒには結合するが、ＩＲには結合しない；（ｂ）インスリン受容体とインスリン成長因子受容体とを含んでなるハイブリッド受容体（ＩＲ／ＩＧＦ−１Ｒハイブリッド−Ｒ）には結合するが、単独のＩＲには結合しない；（ｃ）ヒトＩＧＦ−１Ｒと、ＩＧＦ−１及び／又はＩＧＦ−２との間の結合を阻害する；（ｄ）前記ハイブリッド−Ｒ及びその天然のリガンド（好ましくは本明細書ではＩＧＦ１及び／又はＩＧＦ２及び／又はインスリンとして示されている）と、１００ｎＭ未満の阻害定数及び／又はＩＣ５０で結合する；（ｅ）前記ＩＧＦ−１Ｒのチロシンキナーゼ活性を特異的に阻害する；（ｆ）前記ハイブリッド−Ｒのチロシンキナーゼ活性を特異的に阻害する；（ｇ）前記ハイブリッド−Ｒについて、１０ｎＭ以下の結合親和性を有する；（ｈ）ＩＧＦ−１Ｒ発現をダウンレギュレートする；（ｉ）ハイブリッド−Ｒ発現をダウンレギュレートする；（ｊ）インビボの腫瘍増殖を阻害する、からなる群より選択される特性の少なくとも１つを有する。
【００１１】
本発明の１つのクラスにおいては、重鎖ＣＤＲは、配列番号４、５、又は６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなり、かつ軽鎖ＣＤＲは、配列番号１、２、又は３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる。
【００１２】
本発明の別のクラスにおいては、ヒト化抗体、又はその機能性フラグメントの１つは、配列番号７又は８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる軽鎖か、或いは配列番号９、１０、又は１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含んでなる。
【００１３】
本発明の別のクラスにおいては、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ダロツズマブである。
【００１４】
本発明の別の実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、リダフォロリムスであり、かつ抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ダロツズマブである。
【００１５】
本発明の別の実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、１０ｍｇないし４０ｍｇの用量で投与される。本発明の１つのクラスにおいては、リダフォロリムスは、１週間に５回投与される。
【００１６】
本発明の別の実施態様においては、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。本発明の１つのクラスにおいては、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、週１回投与される。本発明の別のクラスにおいては、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、２週間に１回投与される。
【００１７】
ｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、同時に、別々に、又は逐次に投与するために調製し得る。
【００１８】
上記に示した好ましい実施態様についての記載は、別に指定されない限り、特定の及び好ましい群の全ての組合せを含むものとする。本明細書において使用される用語の意味は、以下に記載されており、本発明は以下にさらに詳細に記載される。
【００１９】
用語「同時」は、本明細書で言及する場合、本発明の医薬品が、時間的に同時に投与されることを意味する。
【００２０】
用語「別々」は、本明細書で言及する場合、本発明の医薬品が、共通の治療スケジュールの過程の間の別々の時間に投与されることを意味する。
【００２１】
用語「逐次」は、本明細書で言及する場合、１つの医薬品の投与に続いて、別の医薬品の投与がなされることを意味し；第２の医薬品は、１つの医薬品の投与後に、第１の医薬品の実質的に直後に投与してもよく、又は第２の医薬品を、第１の医薬品の有効期間の後に投与してもよく；また有効期間は、第１の医薬品の投与からの最大利益の実現のために与えられる時間の量である。
【００２２】
用語「癌」は、本明細書で言及する場合、種々の肉腫及び癌腫を包含し、かつ固形癌及び造血器癌を包含する。固形癌は、本明細書で言及する場合、例えば、脳腫瘍、頚大脳癌、食道癌、甲状腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、子宮内膜癌、肺癌、胃癌、胆嚢／胆管癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸癌、直腸癌、卵巣癌、絨毛上皮癌、子宮体癌、子宮頚癌、腎盂／尿管癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣癌、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、皮膚癌、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング腫瘍、軟部肉腫を包含する。一方、造血器癌は、例えば、急性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、赤血球増加症、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、及びホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫を包含する。
【００２３】
用語「癌の治療」は、本明細書で言及する場合、癌の症例に抗癌剤を投与して、その症例の癌細胞の増殖を阻害するようにすることを意味する。好ましくは、治療の結果として、癌増殖の退縮を生じるか、又はすなわち、それにより検出可能な癌のサイズが縮小される。さらに好ましくは、治療は癌の完全な消失をもたらす。
【００２４】
ｍＴＯＲ阻害剤
現在臨床開発中のｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシンの構造類似体である。本発明のｍＴＯＲ阻害剤は、リダフォロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、ラパマイシン類似体、及びそれらの組合せを包含する。
【００２５】
リダフォロリムスは、ＡＰ  ２３５７３、ＭＫ−８６６９、及びデフォロリムスとしても知られ、インビトロの広範囲のヒト腫瘍細胞系において、またヒト腫瘍細胞系を利用したマウス腫瘍異種移植片モデルにおいて抗増殖活性をもつ、ラパマイシンの独特の非プロドラッグ類似体である。リダフォロリムスは、進行癌患者に投与されてきており、現在、進行した軟部組織又は骨肉腫の患者における研究を含め、様々な進行性悪性腫瘍について臨床開発中である。今までのところ、これらの試験は、リダフォロリムスが、予測可能かつ管理可能な有害事象プロフィールをもち、全般的に充分に許容されること、及び広範囲の癌において抗腫瘍活性をもつことを証明してきた。リダフォロリムスの記載及び調製法は、アリアド・ジーン・セラピューティクス・インク（Ａｒｉａｄ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）に対する米国特許第７，０９１，２１３号に記載されており、これは、その記載全体が本明細書に援用される。
【００２６】
テムシロリムスは、トリセル（Ｔｏｒｉｓｅｌ）（登録商標）としても知られ、現在、腎細胞癌の治療用に市販されている。テムシロリムスの記載及び調製法は、アメリカン・ホーム・プロダクツ・コーポレーション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に対する米国特許第５，３６２，７１８号に記載されており、これは、その記載全体が本明細書援用される。
【００２７】
エベロリムスは、サーティカン（Ｃｅｒｔｉｃａｎ）（登録商標）又はＲＡＤ００１としても知られ、ノバルティス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）から市販されており、ラパマイシン（シロリムス）と比較して、有機溶媒中でより優れた安定性及び増強された溶解性を有するとともに、副作用が少なくより好ましい薬物動態を有する。エベロリムスは、免疫抑制レジメンの効力を高めるため、シクロスポリンのマイクロエマルジョン製剤（ネオラール（Ｎｅｏｒａｌ）（登録商標）、ノバルティス）と併用されてきた。
【００２８】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤はまた、種々の結晶、アモルファス物質、薬学的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物として存在してもよい。さらに、本発明のｍＴＯＲ阻害剤は、プロドラッグとして提供してもよい。一般に、かかるプロドラッグは、本発明のｍＴＯＲ阻害剤の機能性の誘導体であり、これは、生体によって必要とされる化合物へ容易に変換し得る。したがって、本発明の種々の癌の治療法においては、用語「投与」は、特定の化合物の投与のみならず、患者への投与後に生体内で特定の化合物に変換し得る化合物の投与も包含する。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び製造のための通常の方法は、例えば、バンガード（Ｈ．Ｂｕｍｄｇａａｒｄ）編、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（プロドラッグの設計）」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年、に記載されており、これは、本明細書において参照され、かつその記載全体が本明細書の一部として本明細書に含まれる。化合物の代謝産物は、該化合物を生物学的環境内に置くことにより産生される活性化合物を包含してもよく、これらは本発明の化合物の範囲内にある。
【００２９】
抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体
本発明の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、単離された抗体か、又はその機能性のフラグメントであり、ここで、前記抗体又はその前記フラグメントは、ヒトインスリン様増殖因子Ｉ受容体に特異的に結合可能であり、かつ必要であれば、好ましくはさらに、リガンドであるＩＧＦ１及び／又はＩＧＦ２が、ＩＧＦ−１Ｒへ結合するのを阻害することができ、及び／又は少なくとも１つのリガンドが、前記ＩＧＦ−１Ｒ受容体へ結合するのに付随するシグナリングカスケードを特異的に阻害し得る。本発明のＩＧＦ−１Ｒ抗体は、特異的にＩＧＦ−１Ｒに結合し得る、モノクローナル及び／又はポリクローナル抗体を包含する。本発明の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ダロツズマブ、フィギツムマブ、シクスツムマブ、ＳＨＣ７１７４５４、ロシュＲ１５０７、ＥＭ１６４、及びアムジェンＡＭＧ４７９を包含する。
【００３０】
ダロツズマブは、配列番号１、２、又は３のアミノ酸配列のＣＤＲから選択される少なくとも１つの相補性決定領域ＣＤＲか、又はその配列が、最適アラインメントの後に、配列番号１、２、又は３の配列と、少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％、及び９８％の同一性をもつ少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、軽鎖を含んでなること、或いは、配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列のＣＤＲから選択される少なくとも１つのＣＤＲか、又はその配列が、最適アラインメントの後に、配列番号４、５、及び６の配列と、少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％、及び９８％の同一性をもつ少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、重鎖を含んでなること、により特徴づけられる。前記抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体を製造及び使用する方法は、米国特許第７，２１４，４４４号に記載されており、その記載全体が本明細書に援用される。
【００３１】
本明細書においては、用語「結合すること（ｔｏ  ｂｉｎｄ）」及び「結合すること（ｔｏ  ａｔｔａｃｈ）」は、同じ意味をもち、互に交換可能である。
【００３２】
本明細書においては、抗体化合物又はその配列に結合した、用語であるポリペプチド、ポリペプチド配列、ペプチド、及びタンパク質は、互に交換可能である。
【００３３】
本発明は、天然型の抗体には関係しないこと、すなわち、それらは、その天然の環境中にあるのはなく、天然の供給源から精製により単離又は入手し得たものであるか、或いは遺伝的組み換えによるか、又は化学合成によって得られたものであること、及びしたがって、これより先に記載される、非天然のアミノ酸を含有し得ることが理解されるべきである。
【００３４】
ＣＤＲ領域又はＣＤＲにより、カバット（Ｋａｂａｔ）らにより定義された、免疫グロブリンの重及び軽鎖の超可変領域を示すことが意図されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ（免疫学的に興味深いタンパク質の配列）、第５版」、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ、１９９１年及びその後の版）。３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲが存在する。用語ＣＤＲ又は複数のＣＤＲ（ＣＤＲｓ）は、本明細書では、抗体の抗原若しくはそれを認識するエピトープへの、親和性による結合に役割を果たしているアミノ酸残基の大半を含有するこれらの領域の、場合により、１つ若しくはいくつか、又はさらに全てを示すために使用する。
【００３５】
本発明の意味においては、２つの核酸又はアミノ酸配列の間の「同一性のパーセント」により、最良のアラインメント（最適アラインメント）後に得られた、比較されるべき２つの配列間のヌクレオチド又は同一のアミノ酸残基のパーセントを示すことが意図され、このパーセントは、純粋に統計的であり、２つの配列の間の差異は、ランダムに、かつその全長にわたり分布している。２つの核酸又はアミノ酸配列間の比較は、慣例的に、それらを最適な方法で整列させた後、これらの配列を比較することにより実施され、前記比較は、セグメントごとに、又は「比較ウィンドウ」ごとに行ない得る。比較のための配列の最適アラインメントは、手作業によるものに加えて、スミス（Ｓｍｉｔｈ）及びウォーターマン（Ｗａｔｅｒｍａｎ）の局所ホモロジーアルゴリズム［「Ａｄ．Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．」、１９８１年、第２巻、ｐ．４８２］によるか、ネドルマン（Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ）及びヴンシュ（Ｗｕｎｓｃｈ）の局所ホモロジーアルゴリズム［「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、１９７０年、第４８巻、ｐ．４４３］によるか、ピアソン（Ｐｅａｒｓｏｎ）及びリプマン（Ｌｉｐｍａｎ）の同様の検索法［「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、１９８８年、第８５巻、ｐ．２４４４］によるか、又はこれらのアルゴリズムを用いたコンピューターソフトウェア（ウィスコンシン・ジェネティクス・ソフトウェア・パッケージ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ）、ジェネティクス・コンピュータ・グループ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ）、５７５サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ又はＢＬＡＳＴＮ若しくはＢＬＡＳＴＰ比較ソフトウェア）により実行し得る。
【００３６】
２つの核酸又はアミノ酸配列の間の同一性のパーセントは、最適な方法で整列されたこれら２つの配列を比較することにより決定し、これにおいて、比較されるべき核酸又はアミノ酸配列は、これら２つの配列間の最適アラインメント用の参照配列に比較して、付加又は欠失を含んでいてもよい。同一性のパーセントは、その位置について核酸又はアミノ酸残基が２つの配列間で同一である、同一位置の数を測定すること、同一位置数を比較ウィンドウ内の全位置数で割ること、及び得られた結果を１００倍して、これら２つの配列間の同一性のパーセントを得ることにより計算する。
【００３７】
例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｂｌ２．ｈｔｍｌのサイトにおいて利用可能なＢＬＡＳＴプログラム、「ＢＬＡＳＴ２ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」（タツソヴァ（Ｔａｔｕｓｏｖａ）ら、「Ｂｌａｓｔ  ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ−ａ  ｎｅｗ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ（Ｂｌａｓｔ２配列−タンパク質及びヌクレオチド配列比較のための新規なツール）」ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．第１７４巻、ｐ．２４７−２５０）を使用可能であり、用いたパラメータは、デフォルトによって与えられたものであり（特に、パラメータである、「オープンギャップペナルティ」：５、及び「伸長ギャップペナルティ」：２について、選択されたマトリックスは、例えば、プログラムによって推奨されたマトリックス「ＢＬＯＳＵＭ  ６２」である）、比較されるべき２つの配列間の同一性のパーセントは、このプログラムにより直接計算される。
【００３８】
参照アミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％、及び９８％の同一性をもつアミノ酸配列により、参照配列に比較して、ある修飾、特に、少なくとも１つのアミノ酸の欠失、付加、若しくは置換、トランケーション（先端の切断）、又は伸長を有するものが好ましい。１つ以上の連続又は不連続のアミノ酸の置換の場合、置換は、好ましくは、置換されたアミノ酸が「同等（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）」のアミノ酸に置き換えられる。「同等のアミノ酸（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ）」という表現は、本明細書では、基本構造をもつアミノ酸の１つによって置換され得るが、しかしながら、対応する抗体の生物活性を本質的に修飾することはない、任意のアミノ酸を示すことを意図しており、例えば、後に特に実施例において定義されるものなどである。
【００３９】
これらの同等のアミノ酸は、それらが置換するアミノ酸との、その構造上の相同性か、又は実行可能な種々の抗体間の生物活性の比較試験の結果のいずれかに依存して決定し得る。
【００４０】
単なる例としては、対応する修飾された抗体の生物活性の大きな修飾をもたらすことなく実行し得る置換の可能性が挙げられる。それ故、ロイシンをバリン又はイソロイシンで、アスパラギン酸をグルタミン酸で、グルタミンをアスパラギンで、アルギニンをリジンで、などの置換が可能であり、逆の置換が、同じ条件下で必然的に予想される。
【００４１】
本発明の抗体は、好ましくは、特異的なモノクローナル抗体であり、特に、マウス、キメラ、又はヒト化起源のものであり、これらは当業者に周知の標準的な方法により取得し得る。
【００４２】
一般に、モノクローナル抗体又はその機能性フラグメント、特にマウス起源のものの調製には、特に、マニュアル「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（抗体）」（ハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）及びレーン（Ｌａｎｅ）著、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（抗体：実験室マニュアル）」、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ＮＹ、１９８８年、ｐ．７２６）に記載されている技術、又はコーラー（Ｋｏｈｌｅｒ）及びミルスタイン（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）（Ｎａｔｕｒｅ、１９７５年、第２５６巻、ｐ．４９５−４９７）により記載されたハイブリドーマからの調製技術を参照し得る。
【００４３】
本発明のモノクローナル抗体は、例えば、ＩＧＦ−１Ｒ受容体か又は本発明の前記モノクローナル抗体によって特異的に認識されるエピトープを含有するそのフラグメントの１つに対し免疫化された、動物細胞から得られる。前記ＩＧＦ−１Ｒ受容体、又はその前記フラグメントの１つは、通常の実施の方法に従い、ＩＧＦ−１Ｒ受容体をコードするｃＤＮＡ配列中に含まれる核酸配列から出発する遺伝的組換えによるか、又はＩＧＦ−１Ｒ受容体のペプチド配列中に含まれるアミノ酸配列から出発するペプチド合成により、特別に合成し得る。
【００４４】
本発明のモノクローナル抗体は、例えば、ＩＧＦ−１Ｒ受容体か又は本発明の前記モノクローナル抗体によって特異的に認識されるエピトープを含有するそのフラグメントの１つがその上に予め固定されている、アフィニティカラム上で精製し得る。さらに具体的には、前記モノクローナル抗体は、プロテインＡ及び／又はＧ上でのクロマトグラフィー後に、残留するタンパク質不純物、並びにＤＮＡ及びＬＰＳを除去する目的で、イオン交換クロマトグラフィーを続けるか、又は続けずに精製してもよく、これに、二量体又は他の多量体の存在による潜在的な凝集体を除去する目的で、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）ゲル上での排除クロマトグラフィーを続けるか、又は続けなくてもよい。なおさらに好ましい方法では、これらの技術の全てを同時に、又は逐次に使用し得る。
【００４５】
キメラ又はヒト化された抗体は、同様に本発明の抗体に包含される。
【００４６】
キメラ抗体により、所与の種の抗体に由来する天然の可変（軽鎖及び重鎖）領域を、前記所与の種に対して異種の抗体の軽鎖及び重鎖定常領域と組合せて含有する抗体を示すことが意図されている。
【００４７】
本発明の抗体又はそのキメラ型のフラグメントは、遺伝的組換えの技術を用いることにより調製し得る。例えば、キメラ抗体は、プロモータと、本発明の非ヒトの、特にマウスのモノクローナル抗体の可変領域をコードする配列と、及びヒト抗体の定常領域をコードする配列とを含有する、組換えＤＮＡをクローニングすることにより産生し得る。かかる組換え遺伝子によりコードされた本発明のキメラ抗体は、例えば、マウス−ヒトキメラであり、この抗体の特異性は、マウスＤＮＡ由来の可変領域により決定され、そのアイソタイプは、ヒトＤＮＡ由来の定常領域によって決定される。キメラ抗体の調製法については、例えば、ヴァーホイエン（Ｖｅｒｈｏｅｙｎ）らの文献（「ＢｉｏＥｓｓａｙｓ」、１９８８年、第８巻、ｐ．７４）を参照し得る。
【００４８】
ヒト化抗体により、非ヒト起源の抗体に由来するＣＤＲ領域を含有する抗体を示すことが意図され、抗体分子の他の部分は、一つの（又は数個の）ヒトの抗体に由来する。さらに、骨格のセグメント（ＦＲと称する）のいくつかの残基を、結合の親和性を保持する目的で、修飾してもよい（ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら著、「Ｎａｔｕｒｅ」、１９８６年、第３２１巻、ｐ．５２２−５２５；ヴァーホイエン（Ｖｅｒｈｏｅｙｎ）ら著、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、１９８８年、第２３９巻、ｐ．１５３４−１５３６；リーチマン（Ｒｉｅｃｈｍａｎ）ら著、「Ｎａｔｕｒｅ」、１９８８年、第３３２巻、ｐ．３２３−３２７）。
【００４９】
本発明のヒト化抗体又はそのフラグメントは、当業者に周知の技術により調製し得る（例えば、シンガー（Ｓｉｎｇｅｒ）ら著、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．」、１９９２年、第１５０巻、ｐ．２８４４−２８５７；マウンテン（Ｍｏｕｎｔａｉｎ）ら著、「Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｅｎｇ．Ｒｅｖ．」、１９９２年、第１０巻、ｐ．１−１４２；又はベビントン（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ）ら著、「Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、１９９２年、第１０巻、ｐ．１６９−１７５、などの文献に記載されたもの）。本発明のかかるヒト化抗体は、好ましくは、インビトロの診断法、又はインビボの予防的及び／又は治療的処置における使用が好ましい。
【００５０】
本発明の抗体の機能性フラグメントにより、特に抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（ｓｃは単鎖）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント、又はダイアボディ、或いは、例えば、ポリ（エチレン）グリコール（「ＰＥＧ化」）（Ｆｖ−ＰＥＧ、ｓｃＦｖ−ＰＥＧ、Ｆａｂ−ＰＥＧ、Ｆ（ａｂ’）２−ＰＥＧ、又はＦａｂ’−ＰＥＧと呼ばれるフラグメント）（「ＰＥＧ」はポリ（エチレン）グリコール）などのポリ（アルキレン）グリコールの付加による化学修飾によるか、又はリポソーム内への取込みによって、半減期が増大しているであろう、任意のフラグメントであって、前記フラグメントは、本発明の配列番号１、２、３、４、５、又は６の特徴的なＣＤＲの少なくとも１つを有し、かつ特に、抗体ＩＧＦ−１Ｒ受容体を認識及び結合し、必要であればＩＧＦ−１Ｒ受容体の活性を阻害する能力など、それが由来する抗体のたとえ部分的な活性であっても、一般的な方法で及ぼすことができる前記フラグメント、を示すものとする。
【００５１】
好ましくは、前記機能性フラグメントは、それらが由来する抗体の重又は軽可変鎖の、部分的な配列からなるか、又は含んでなり、前記部分的な配列は、ＩＧＦ−１Ｒ受容体について、それが由来する抗体と同様の結合特異性及び、十分な親和性（好ましくは、それが由来する抗体の親和性の少なくとも１／１００、さらに好ましい態様では、少なくとも１／１０に等しい充分な親和性）を保持するのに充分である。
【００５２】
かかる機能性フラグメントは、それが由来する抗体の配列の、最低５個のアミノ酸、好ましくは１０、１５、２５、５０、及び１００個の連続したアミノ酸を含有することができる。
【００５３】
好ましくは、これらの機能性フラグメントは、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ−Ｆｃ型、又はダイアボディのフラグメントであり、これらは一般に、それらが由来する抗体と同じ結合特性を有する。本発明によれば、本発明の抗体フラグメントは、例えば、ペプシン又はパパインなどの酵素による消化等の方法により、及び／又は化学的還元によるジスルフィド結合の切断により、上記記載の抗体などから出発して取得し得る。別の方法では、本発明に含まれる抗体フラグメントは、同様に当業者に周知の遺伝的組換え技術により、又はさもなければ、例えば、アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）社等により供給されるものなどの自動ペプチド合成装置によるペプチド合成によって取得し得る。
【００５４】
さらに好ましい態様においては、本発明は、本発明の抗体、又はその機能性フラグメント、特に、遺伝的組換えにより、又は化学合成により取得された、キメラ又はヒト化抗体を含んでなる。
【００５５】
好ましい実施態様においては、本発明の主題は、配列番号６の少なくとも１つのＣＤＲ、又は配列番号６の配列との最適アラインメント後に少なくとも８０％の同一性を有する配列を含んでなることを特徴とする、本発明の抗体又はその機能性フラグメントの１つである。
【００５６】
６つの短いＣＤＲ配列の中で、重鎖の３番目のＣＤＲ（ＣＤＲＨ３）は、サイズの変異性が大きい（高い多様性は、本質的に、それを生じるもとである遺伝子の配列のメカニズムに起因する）。これは、２アミノ酸程の短さであってもよいが、既知の最長のサイズは２６である。機能上は、ＣＤＲＨ３は、一部は、抗体の特異性の決定に役割を果たしている（セガル（Ｓｅｇａｌ）ら著、「ＰＮＡＳ」、１９７４年、第７１巻、ｐ．４２９８−４３０２；アミット（Ａｍｉｔ）ら著、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、１９８６年、第２３３巻、ｐ．７４７−７５３；チョシア（Ｃｈｏｔｈｉａ）ら著、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、１９８７年、第１９６巻、ｐ．９０１−９１７；チョシア（Ｃｈｏｔｈｉａ）ら著、「Ｎａｔｕｒｅ」、１９８９年、第３４２巻、ｐ．８７７−８８３；ケイトン（Ｃａｔｏｎ）ら著、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１９９０年、第１４４巻、ｐ．１９６５−１９６８；シャロン（Ｓｈａｒｏｎ）ら著、「ＰＮＡＳ」、１９９０年、第８７巻、ｐ．４８１４−４８１７；シャロン（Ｓｈａｒｏｎ）ら著、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１９９０年、第１４４巻、ｐ．４８６３−４８６９；カバット（Ｋａｂａｔ）ら著、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１９９１年、第１４７巻、ｐ．１７０９−１７１９）。
【００５７】
ＣＤＲのアミノ酸のうちのわずかなパーセントのものだけが、抗体の結合部位の構造に寄与することが知られているが、これらの残基は、非常に特異的な三次元的立体配座において維持されているはずである。
【００５８】
さらに好ましい態様においては、本発明は、３つのＣＤＲ又は配列番号４、５、及び６の配列の３つのＣＤＲの、少なくとも２つか、或いは３つのＣＤＲ又は配列番号４、５、及び６の配列との最適アラインメント後に各々少なくとも８０％の同一性を有する配列の３つのＣＤＲの、少なくとも２つを含んでなる、重鎖を含んでなることを特徴とする、本発明の抗体又はその機能性フラグメントの１つに関する。
【００５９】
同様の好ましい実施態様においては、本発明の主題は、配列番号１、２、又は３の配列のＣＤＲから選択される少なくとも１つのＣＤＲ、又は、その配列が、配列番号１、２、又は３の配列との最適アラインメント後に少なくとも８０％の同一性を有するＣＤＲを含んでなる、軽鎖を含んでなることを特徴とする、本発明の抗体又はその機能性フラグメントの１つである。
【００６０】
さらに好ましい実施態様においては、本発明の主題は、３つのＣＤＲ又は配列番号１、２、及び３の配列の３つのＣＤＲの、少なくとも２つか、或いは３つのＣＤＲ又は配列番号１、２、及び３の配列との最適アラインメント後に各々少なくとも８０％の同一性を有する配列の３つのＣＤＲの、少なくとも２つを含んでなる、軽鎖を含んでなることを特徴とする、本発明の抗体又はその機能性フラグメントである。
【００６１】
さらに好ましい態様においては、本発明の抗体又はその機能性フラグメントの１つは、それが、配列番号４、５、及び６の配列の３つのＣＤＲ、又は配列番号４、５、及び６の配列との最適アラインメント後に各々少なくとも８０％の同一性を有する配列の３つのＣＤＲを含んでなる、重鎖を含んでなること、及びさらに、配列番号１、２、及び３の配列の３つのＣＤＲ、又は配列番号１、２、及び３の配列との最適アラインメント後に各々少なくとも８０％の同一性を有する配列の３つのＣＤＲを含んでなる、軽鎖を含んでなることを特徴とする。
【００６２】
別の態様によれば、本発明の主題は、ヒトインスリン受容体ＩＲに結合しないか、又は有意な態様では結合しないことを特徴とする、本発明の抗体又はその機能性フラグメントの１つである。
【００６３】
好ましい態様においては、本発明の前記機能性フラグメントは、フラグメントであるＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、又はダイアボディ、或いは、化学修飾、特にＰＥＧ化によるか、又はリポソーム内への取込みによって半減期が増大しているであろう、任意のフラグメントから選択される。
【００６４】
別の態様によれば、本発明は、本発明のモノクローナル抗体を分泌することが可能なマウスハイブリドーマ、特に、２００１年９月１９日に、Ｃｅｎｔｒｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅ（ＣＮＣＭ、国立微生物培養センター）（パスツール研究所、パリ、フランス）に、番号Ｉ−２７１７で寄託されたマウス由来のハイブリドーマに関する。
【００６５】
抗体が、２００１年９月１９日に、ＣＮＣＭに、番号Ｉ−２７１７で寄託されたハイブリドーマにより分泌されることを特徴とする、本明細書で７Ｃ１０と称されるモノクローナル抗体、又はその機能性フラグメントの１つは、もちろん本発明の一部である。
【００６６】
「ダロツズマブ」、「ｈ７Ｃ１０」、「ＭＫ−０６４６」、又は「Ｆ５００３５」は、ＩＧＦ−１Ｒに結合すること、並びにＩＲ／ＩＧＦ−１ハイブリッド受容体に結合することを特徴とするヒト化抗体を記載するべく区別なく使用される。かかる抗体は、例えば、米国特許出願第１０／７３５，９１６号（ＵＳ２００５００８４９０６）（これは、ＰＣＴ／ＦＲ０３／００１７８及び／又はＵＳ２００５０２４９７３０の一部継続出願である）において記載された抗体を包含してもよく、ここで前記のものは、ヒト化抗体又はそのフラグメントであり、かつ軽鎖及び／又は重鎖を含んでなり、これにおいて前記軽鎖及び／又は重鎖の骨格セグメントＦＲ１ないしＦＲ４は、それぞれヒト抗体の軽鎖及び／又は重鎖の骨格セグメントＦＲ１ないしＦＲ４に由来する。ヒト化抗体は、非ヒト由来であり、かつ配列番号１、２、又は３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つ以上の相補性決定領域を含んでなる、少なくとも１つの軽鎖と、配列番号４、５、又は６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つ以上の相補性決定領域を含んでなる、少なくとも１つの重鎖とを含んでなってもよい。軽鎖は、配列番号７又は８のうちの１つに示した１つ以上のアミノ酸配列か、又は配列番号７又は８との最適アラインメントの後に少なくとも８０％の同一性を有する配列を含んでなってもよい。同様に、重鎖は、配列番号９、１０、又は１１のうちの１つに示した１つ以上のアミノ酸配列か、又は配列番号９、１０、又は１１との最適アラインメントの後に少なくとも８０％の同一性を有する配列を含んでなってもよい。
【００６７】
特定の実施態様においては、本発明は、本発明のマウス抗体又はその機能性フラグメントの１つに関し、前記抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、又は配列番号１２の配列との最適アラインメントの後に少なくとも８０％の同一性を有する配列を含んでなる配列の軽鎖を含んでなること、及び／又は、配列番号１３のアミノ酸配列、又は配列番号１３の配列との最適アラインメントの後に少なくとも８０％の同一性を有する配列を含んでなる配列の重鎖を含んでなることを特徴とする。
【００６８】
フィギツムマブは、ＣＰ７５１，８７１としても知られ、ファイザー（Ｐｆｉｚｅｒ）による研究下にある完全ヒト抗体である。フィギツムマブの記載及び調製法は、アブジェニックス・インク（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ）及びファイザー・インク（Ｐｈｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）に対する米国特許第７，０３７，４９８号に記載されており、これはその記載全体が本明細書に援用される。
【００６９】
シクスツムマブは、ＩＭＣ  Ａ−１２としても知られ、イムクローン（ＩｍＣｌｏｎｅ）による研究下にある完全ヒト抗体である。シクスツムマブの記載及び調製法は、米国特許公報第ＵＳ２００８／００２５９９０号に記載されており、これはその記載全体が本明細書に援用される。
【００７０】
ＳＨＣ７１７４５４は、ＣＰ  ７５１，８７１としても知られ、シェーリング・プラウ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）（現在はメルク・アンド・カンパニー・インク（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．））による研究下にある完全ヒト抗体である。ＳＨＣ７１７４５４の記載及び調製は、シェーリング・コーポレーションに対する米国特許第７，２１７，７９６号に記載されており、これはその記載全体が本明細書に援用される。
【００７１】
ロシュＲ１５０７は、ホフマン−ラロシュ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）による研究下にある。ロシュＲ１５０７の記載及び調製は、ホフマン−ラロシュに対する米国特許第７，３７８，５０３号に記載されており、これはその記載全体が本明細書に援用される。
【００７２】
ＥＭ１６４は、イムノジェン（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ）による研究下にある。ＥＭ１６４の記載及び調製は、イムノジェン・インクに対する国際特許公開  ＷＯ０３／１０６６２１に記載されており、これはその記載全体が本明細書に援用される。
【００７３】
アムジェンＡＭＧ４７９は、アムジェン・インクによる研究下にある。アムジェンＡＭＧ４７９の記載及び調製は、アムジェン・インク対する国際特許公開  ＷＯ０６／０６９２０２に記載されており、これはその記載全体が本明細書に援用される。
【００７４】
同様の特定の態様によれば、本発明は、本発明のキメラ抗体又はその機能性フラグメントの１つに関係し、前記抗体はさらに、マウスに対して異種の、特にヒトの抗体に由来する軽鎖及び重鎖定常領域含んでなること、及び好ましい態様においては、ヒト抗体に由来する軽鎖及び重鎖定常領域は、各々カッパ及びガンマ−１、ガンマ−２、又はガンマ−４領域であることを特徴とする。
【００７５】
同様の特定の態様によれば、本発明は、本発明のヒト化抗体又はその機能性フラグメントの１つに関し、前記抗体は、軽鎖及び／又は重鎖を含んでなり、これにおいて前記軽鎖及び／又は重鎖の骨格セグメントＦＲ１ないしＦＲ４（以下の実施例１２及び１３、表５及び６において定義された通り）は、それぞれヒト抗体の軽鎖及び／又は重鎖の骨格セグメントＦＲ１ないしＦＲ４に由来することを特徴とする。
【００７６】
好ましくは、本発明のヒト化抗体又はその機能性フラグメントの１つは、前記ヒト化抗体が、配列番号８のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖を含んでなること、及び配列番号１０又は１１の、好ましくは配列番号１１のアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含んでなることを特徴とする。
【００７７】
本発明において区別なく使用される用語である、核酸、核又は核酸配列、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド配列、ヌクレオチド配列により、ヌクレオチドの厳密な結合を示すことが意図されており、これらは修飾されているか又は未修飾であり、フラグメント又は定義されるべき核酸の領域を与え、非天然のヌクレオチドを含有するか又は含有せず、また二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡにも、前記ＤＮＡの転写産物と同様に対応し得るものである。
【００７８】
また本明細書では、本発明が、その天然の染色体環境、すなわち、天然の状態にあるヌクレオチド配列には関与しないことも理解されるべきである。本発明は、単離及び／又は精製された配列に関するものであり、すなわち、それらは、直接又は間接的に、例えばコピーにより選択されたものであって、その環境は、少なくとも部分的に修飾されたものである。それ故それは、同様に、本明細書では、例えば、宿主細胞による遺伝的組換えによって得られるか、又は化学合成によって得られる、単離した核酸を示すことが意図されている。
【００７９】
好ましい配列との最適アラインメントの後に、少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％、及び９８％の同一性を有する核酸配列により、該核酸配列が、参照核酸配列と比較して、ある種の修飾、特に、欠失、トランケーション、伸長、キメラ融合、及び／又は置換、とりわけ点置換などを有する核酸配列を示すことが意図されている。好ましくは、本発明は、その配列が参照配列と同じアミノ酸配列をコードしている配列に関与しており、このことは、遺伝コードの縮重か、又は、好ましくは、特に以下に定義される高ストリンジェント条件下で、参照配列と特異的にハイブリダイズし得る相補的配列につながる。
【００８０】
高ストリンジェント条件下のハイブリダイゼーションは、温度条件及びイオン強度条件が、それらが相補的なＤＮＡの２つのフラグメント間のハイブリダイゼーションを維持させるように選択されることを意味する。単なる例証として、上記記載のポリヌクレオチドフラグメントを定義することを目的とする高ストリンジェントなハイブリダイゼーション工程の条件は、好ましくは以下の通りである。
【００８１】
ＤＮＡ−ＤＮＡ、又はＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーションは、２工程で行なわれる：（１）５ｘＳＳＣ（１ｘＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ＋０．０１５Ｍ  クエン酸ナトリウム溶液に相当）、５０％  ホルムアミド、７％  ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１０ｘ  デンハート（ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ）、５％  硫酸デキストラン、及び１％  サケ精子ＤＮＡを含有するリン酸バッファ（２０ｍＭ、ｐＨ７．５）中で、４２℃で３時間のプレハイブリダイゼーション；（２）プローブのサイズに依存した温度（すなわち、プローブサイズ＞１００ヌクレオチドに対し、４２℃）において、２０時間の実際のハイブリダイゼーションの後に、２ｘＳＳＣ＋２％  ＳＤＳ中での、２０℃で２０分間の２回の洗浄、０．１ｘＳＳＣ＋０．１％  ＳＤＳ中での、２０℃で２０分間の１回の洗浄。最後の洗浄は、プローブサイズ＞１００ヌクレオチドに対し、０．１ｘＳＳＣ＋０．１％  ＳＤＳ中で、６０℃で３０分間行なった。上記記載のストリンジェンシーの高いハイブリダイゼーション条件は、ある規定されたサイズのポリヌクレオチドについては、当業者により、サンブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）らの教示（「Ｍｏｌｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（分子クローニング：実験室マニュアル）」、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、１９８９年）に従って、より大きい又はより小さいサイズのオリゴヌクレオチドに適用し得る。
【００８２】
投薬及び投与経路
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体については、様々な製剤形態を選択でき、その例は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒又は液体などの経口製剤、溶液又は懸濁液などの無菌の液体製剤、坐剤、軟膏などを包含する。ｍＴＯＲ阻害剤は、薬学的に許容される塩として利用し得る。本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に調製される。
【００８３】
用語「薬学的に許容される塩」は、本明細書で言及される場合、通常の薬学的に許容される塩を意味する。例えば、化合物がヒドロキシル基か、又はカルボキシル基及びテトラゾリル基などの酸性基をもつ場合、ヒドロキシル基又は酸性基において塩基付加塩を形成してもよく；或いは化合物がアミノ基又は塩基性の複素環基をもつ場合には、アミノ基又は塩基性複素環基において酸付加塩を形成してもよい。
【００８４】
塩基付加塩は、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；及び有機アミン塩、例えばトリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、プロカイン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩を包含する。
【００８５】
酸付加塩は、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩などの無機酸塩；マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、トリフルオロ酢酸塩などの有機酸塩；及びメタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩などのスルホン酸塩を包含する。
【００８６】
用語「薬学的に許容される担体又は希釈剤」は、賦形剤［例えば、脂肪、蜜蝋、半固体及び液体ポリオール、天然又は硬化油など］；水（例えば、蒸留水、特に注射用蒸留水など）、生理食塩水、アルコール（例えば、エタノール）、グリセロール、ポリオール、グルコース水溶液、マンニトール、植物油など）；添加剤［例えば、増量剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、安定化剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味剤、着色剤、調味剤又は芳香剤、濃縮剤、希釈剤、緩衝剤、溶媒又は可溶化剤、貯蔵効果を達成するための化学物質、浸透圧を調整するための塩、コーティング剤、又は酸化防止剤］などを指す。
【００８７】
固形製剤は、錠剤、カプセル、顆粒、及び粉末の形態で、何ら添加剤を用いずに、又は適当な担体（添加剤）を用いて調製し得る。かかる担体（添加剤）の例には、ラクトース又はグルコースなどの糖類；トウモロコシ、コムギ、又はコメのデンプン；ステアリン酸などの脂肪酸；メタケイ酸アルミン酸マグネシウム又は無水リン酸カルシウムなどの無機塩；ポリビニルピロリドン又はポリアルキレングリコールなどの合成ポリマー；ステアリルアルコール、ベンジルアルコールなどのアルコール；メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、又はヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの合成セルロース誘導体；及び他の通常使用される添加剤、例えばゼラチン、タルク、植物油、及びアラビアゴムが挙げられてよい。
【００８８】
錠剤、カプセル、顆粒、及び粉末などのこれらの固形製剤は、各製剤の全重量に基づき、一般に、例えば、０．１ないし１００重量％、及び好ましくは、５ないし９８重量％の、ｍＴＯＲ阻害剤を含有してもよい。
【００８９】
液体製剤は、懸濁液、シロップ、注射液、及び点滴剤（静脈内輸液）の形態で、水、アルコール、又は植物由来の油、例えば大豆油、ラッカセイ油、及びゴマ油などの、液体製剤において通常用いられる適当な添加剤を使用して製造される。
【００９０】
特に、製剤が、筋肉内注射、静脈内注射、又は皮下注射の形態で、非経口的に投与される場合、適当な溶媒又は希釈剤は、注射用の蒸留水、塩酸リドカインの水溶液（筋肉内注射用）、生理食塩水、グルコース水溶液、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、静脈内注射用の液体（例えば、クエン酸、又はクエン酸ナトリウムなどの水溶液）、又は電解質溶液（静脈内点滴輸液及び静脈内注射用）、又はそれらの混合溶液に例示される。
【００９１】
かかる注射剤は、予め溶解された溶液の形態か、或いは、使用時に溶解される、粉末自体、又は適当な担体（添加剤）と混合された粉末の形態でよい。注射液は、各製剤の全重量に基づき、例えば、０．１ないし１０重量％の活性成分を含有してもよい。
【００９２】
経口投与用の懸濁液又はシロップなどの液体製剤は、各製剤の全重量に基づき、例えば、０．１ないし１０重量％の活性成分を含有してもよい。
【００９３】
本発明の各製剤は、当業者により、通常の方法又は一般的な技術によって調製し得る。例えば、調製は、製剤が経口用製剤である場合には、例えば、適切な量の本発明の化合物を、適切な量のラクトースと混合すること、この混合物を経口投与に適した硬ゼラチンカプセル内に充填することによって実施し得る。一方、本発明の化合物を含有する製剤が注射剤の場合には、適切な量の本発明の化合物を、適切な量の０．９％生理食塩水と混合すること、及びこの混合物を注射用のバイアル内に充填することにより実施し得る。
【００９４】
本発明の成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）は、ヒトを含む哺乳類へ、単独で、又は薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤と組合せて、医薬組成物の状態で、標準的な薬学のプラクティスに従って投与してもよい。かかる成分は、経口的に、又は静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸内、及び局所の投与経路を含め、非経口的に投与し得る。
【００９５】
適切な投薬量は、医師にとり既知であり、当然のことながら、特定の疾病状態、投与される組成物の比活性、及び治療を受ける個々の患者に依存するであろう。ある場合には、所望の治療量を達成するため、反復した投与を提供すること、すなわち特定のモニター又は計測された用量の個々の投与を反復することが必要であってもよく、この場合、個々の投与は所望の１日用量又は効果が達成されるまで反復される。適切な投薬量についてのさらなる情報は、以下に提供される。
【００９６】
用語「投与」及びその変形（例えば、化合物を「投与すること」）は、本発明の成分に関して、かかる成分又は該成分のプロドラッグを、治療を要する動物の系内に導入することを意味する。本発明の成分又はそのプロドラッグが、１つ以上の他の活性薬剤（例えば、ｍＴＯＲ阻害剤）と組合せて与えられる場合、「投与」及びその変形は、各々、かかる成分又はそのプロドラッグと他の薬剤との、同時の、及び逐次の導入を包含するものと理解される。
【００９７】
本明細書で用いる場合、用語「組成物」は、指定された量の指定された成分を含んでなる生成物、並びに指定された量の指定された成分の組合せから、直接又は間接的にもたらされる任意の生成物を包含することが意図されている。
【００９８】
用語「治療有効量」は、本明細書で用いるとき、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床家によって求められている、組織、系、動物、又はヒトにおける生物学的又は医学的応答を示す活性化合物又は医薬の量を意味する。
【００９９】
ｍＴＯＲ阻害剤の適切な量が、癌の治療を受けている患者に投与される。１つの実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、１日当たり約１０ｍｇないし４０ｍｇの用量で投与される。本発明の１つの実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、１日当たり１０ｍｇの用量で投与される。本発明の別の実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、１日当たり２０ｍｇの用量で投与される。本発明の別の実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、１日当たり３０ｍｇの用量で投与される。本発明の別の実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、１日当たり４０ｍｇの用量で投与される。
【０１００】
本発明の１つの実施態様においては、ｍＴＯＲ阻害剤は、１週間当たり５回投与される。例えば、リダフォロリムスは、１日目に開始され、指定された用量レベルで連続して５日間継続され、これにリダフォロリムスの処置のない２日間が続けられる。リダフォロリムスは次に、この毎週５回のスケジュールで継続される。
【０１０１】
本発明の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体とｍＴＯＲ阻害剤とを含んでなる併用療法は、ボーラスとしての静脈内投与、又は一定期間の連続した輸液によるか、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、髄腔内、経口、局所、又は吸入経路によるなどの既知の方法に従って、ヒト患者に投与される。抗体の静脈内又は皮下投与が好ましい。３つの異なる送達アプローチが、本発明の抗体の送達に有用であることが期待される。通常の静脈内送達は、おそらく大多数の腫瘍のための標準的な送達技術であろう。しかしながら、卵巣、胆管、他の管系などの腫瘍に代表される腹腔内のものなどのいくつかの腫瘍に関しては、腫瘍において高線量の抗体を得るために、また抗体クリアランスを最少化するために、腹腔内投与が好適であることを示すことがある。同様に、ある固体腫瘍は血管系を有しており、これは局所灌流に適する。局所灌流により、腫瘍部位において高線量の抗体を得ることができ、また短時間の抗体クリアランスを最小にすることができる。
【０１０２】
任意のタンパク質又は抗体の輸液をベースとする治療と同様に、安全性の懸念は主として（ｉ）サイトカイン放出症候群、すなわち、低血圧、発熱、震え、悪寒、（ｉｉ）物質に対する免疫応答の発生（すなわち、患者による治療抗体に対するヒト抗体の発生、又はＨＡＨＡ若しくはＨＡＣＡ応答）、及び（ｉｉｉ）ＥＧＦ受容体を発現する正常細胞、例えば、ＥＧＦＲ及び／又はＩＧＦ−１Ｒを発現する肝細胞に対する毒性、に関連する。標準的試験及び追跡調査を利用して、これらの安全性懸念の各々がモニターされる。特に、肝機能は、もしあれば肝臓に対する損傷を評価する目的で、臨床試験の間頻繁にモニターされる。
【０１０３】
疾患の予防又は治療用には、抗体の適切な用量は、上記に定義した通りの、治療されるべき疾患のタイプ、疾患の重症度及び経過、抗体が予防又は治療目的で投与されるのかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体に対する応答、及び主治医の自由裁量に依存するであろう。抗体は、一度に、又は一連の治療にわたり、適宜患者に投与される。併用療法レジメンでは、本発明の組成物は、治療上の有効量又は相乗的な量で投与される。本明細書で用いるとき、治療有効量は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体及びｍＴＯＲ阻害剤の同時投与、又は本発明の組成物の投与が、標的とする疾患又は症状の低減又は阻害をもたらす量である。治療上の相乗的な量は、特定の疾患に伴う症状又は症候群を、相乗的に又は有意に、緩和又は除去するのに必要な、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体及びｍＴＯＲ阻害剤の量である。
【０１０４】
広い実施態様においては、本発明の治療は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体とｍＴＯＲ阻害剤との
併用投与を包含する。併用投与は、別々の製剤又は単一の医薬製剤を用いた同時投与、及びいずれかの順序での逐次的な投与を包含し、これにおいて、その間に双方の（又は全ての）活性薬剤が同時にその生物活性を及ぼす期間があることが好ましい。かかる化学療法剤のための製剤及び投薬スケジュールは、製造業者の指示に従って、又は熟練の開業医により経験的に決定された通りに使用してもよい。化学療法のための製剤及び投薬スケジュールはまた、ペリー（Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ）編、「Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（化学療法）、Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｅｄ」、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍｄ．、１９９２年に記載されている。ｍＴＯＲ阻害剤は、抗体の投与に先行するか、又は後続して投与してもよく、或いはそれらを同時に投与してもよい。本発明の治療的併用での臨床的投薬は、副作用の程度によって制限されることが見込まれる。
【０１０５】
例えば、１つ以上の別々の投与によるものであろうと、連続した輸液によるものであろうと、疾患のタイプ及び重症度に依存して、約１μｇ／ｋｇないし５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１−２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者への投与の最初の候補投薬量である。典型的な一日用量は、上記の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲内である。数日間以上にわたる反復投与では、症状に依存して、疾患症状に所望の抑制が生じるまで継続される。しかしながら、他の用量用法を使用してもよい。
【０１０６】
１つの態様においては、本発明の抗体は、約５ｍｇ／ｋｇないし約１５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で、毎週投与されるか、又は２週間ないし３週間ごとに投与してもよい。ある態様においては、化学療法レジメンは、従来の高用量の間欠的投与を包含する。別の態様においては、化学療法剤は、計画的中断なしに、より少量で頻繁な投薬を用いて投与される（「メトロノミック・ケモセラピー」）。本発明の療法の進行は、通常の技術及びアッセイによりによりモニターし得る。
【０１０７】
１つの実施態様においては、投薬順序は、ｍＴＯＲ阻害剤をＩＧＦ−１Ｒ抗体と同時に投与することを含んでなる−例えば、リダフォロリムスは毎日投与され、一方ＩＧＦ−１Ｒ抗体（ダロツズマブ）は毎週投与される。特に、ダロツズマブは１０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週静脈内投与され、一方リダフォロリムスは毎日１０ｍｇのスケジュールで投与される。
【０１０８】
別の実施態様においては、投薬順序は、ｍＴＯＲ阻害剤をＩＧＦ−１Ｒ抗体と同時に投与することを含んでなる−例えば、リダフォロリムスは毎日投与され、一方ＩＧＦ−１Ｒ抗体（ダロツズマブ）は毎週投与される。特に、ダロツズマブは１０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週静脈内投与され、一方リダフォロリムスは毎日２０ｍｇのスケジュールで投与される。
【０１０９】
１つの実施態様においては、投薬順序は、ｍＴＯＲ阻害剤をＩＧＦ−１Ｒ抗体と同時に投与することを含んでなる−例えば、リダフォロリムスは毎日投与され、一方ＩＧＦ−１Ｒ抗体（ダロツズマブ）は毎週投与される。特に、ダロツズマブは１０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週静脈内投与され、一方リダフォロリムスは毎日３０ｍｇのスケジュールで投与される。
【０１１０】
１つの実施態様においては、投薬順序は、ｍＴＯＲ阻害剤をＩＧＦ−１Ｒ抗体と同時に投与することを含んでなる−例えば、リダフォロリムスは毎日投与され、一方ＩＧＦ−１Ｒ抗体（ダロツズマブ）は毎週投与される。特に、ダロツズマブは１０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週静脈内投与され、一方リダフォロリムスは毎日４０ｍｇのスケジュールで投与される。
【０１１１】
ＩＧＦ−１Ｒ抗体に関する別の投薬レジメンは、以下の通りである：（ａ）１５ｍｇ／ｋｇ（ｌｏａｄｉｎｇ）を、続いて毎週７．５ｍｇ／ｋｇを投入する；（ｂ）一週間当たり７．５ｍｇ／ｋｇ；（ｃ）一週間当たり１０．０ｍｇ／ｋｇ；（ｄ）隔週ごとに７．５ｍｇ／ｋｇ；（ｅ）隔週ごとに１０．０ｍｇ／ｋｇ；（ｆ）隔週ごとに２０．０ｍｇ／ｋｇ；（ｇ）３週間ごとに３０．０ｍｇ／ｋｇ。
【０１１２】
併用のためのサンプル投薬レジメンは、以下の通りである：
【０１１３】
【化１−１】
0005719347.tif 000002
【０１１４】
【化１−２】
0005719347.tif 000003
【０１１５】
効能追加
非小細胞肺癌、乳癌、結腸直腸癌、軟部組織又は骨肉腫、及び子宮内膜癌の治療に加えて、ｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の併用はまた、以下の癌の治療にも有用であってよい：心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、及び奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫様過誤腫、中皮腫；胃腸：食道（扁平上皮細胞癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（腺管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）、結腸、結腸直腸、直腸；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱及び尿道（扁平上皮細胞癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（精上皮腫、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛上皮腫、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽細胞腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄種、悪性巨細胞腫軟骨腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨症）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫及び、巨細胞腫；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、上衣細胞腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形性神経膠芽腫、乏突起神経膠腫、神経鞘種、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科系：子宮（子宮内膜癌）、子宮頚（子宮頚癌、前腫瘍性子宮頚部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、分類不能癌腫］、顆粒膜卵胞膜細胞腫、セルトリ−ライディッヒ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰（扁平上皮細胞癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌腫）；血液系：血液（骨髄性白血病［急性及び慢性］、急性リンパ芽球生白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、脊髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、カポジ肉腫、色素性異形成毋斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維種；及び副腎：神経芽細胞腫を包含する。したがって、本明細書に提供された、用語「癌性細胞」は、上記に定義された症状の任意の１つに苦しめられた細胞を包含する。
【０１１６】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の併用はまた、以下の疾患症状の治療においても有用であってよい：ケロイド及び乾癬。
【０１１７】
本発明の範囲内にさらに包含されるのは、血管新生が関与する疾患を治療又は予防する方法であり、これは、かかる治療を必要とする哺乳類に対し、治療有効量の本発明の組合せを投与することを含んでなる。眼の血管新生疾患は、結果として生じる組織損傷の大部分を眼の血管の異常な浸潤に帰し得る症状の一例である（２０００年６月２日公開のＷＯ  ００／３０６５１を参照）。望ましくない浸潤は、虚血性網膜症、例えば、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、網膜静脈閉塞その他から結果として生じるものにより、又は、神経変性疾患、例えば、加齢関連黄班変性症において観察される脈絡膜血管新生により誘発され得る。本発明化合物の投与による血管増殖の阻害は、それ故、血管の浸潤を防止し、かつ、血管新生が関与する疾患、例えば、網膜血管新生、糖尿病性網膜症、加齢関連黄班変性症などのような眼疾患を予防又は治療するであろう。
【０１１８】
本発明の範囲内にさらに包含されるのは、限定されないが：眼疾患（例えば、網膜血管新生、糖尿病性網膜症、及び加齢関連黄班変性症）、アテローム性動脈硬化症、関節炎、乾癬、肥満、及びアルツハイマー病を含む、血管新生が関与する非悪性疾患（ドレッジ（Ｄｒｅｄｇｅ）ら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００２年、第２巻、第８号、ｐ．９５３−９６６）を、治療又は予防する方法である。別の実施態様においては、血管新生が関与する疾患を治療又は予防する方法は、眼疾患（例えば、網膜血管新生、糖尿病性網膜症、及び加齢関連黄班変性症）、アテローム性動脈硬化症、関節炎、及び乾癬を包含する。
【０１１９】
本発明の範囲内にさらに包含されるのは、再狭窄、炎症、自己免疫疾患、及びアレルギー／喘息といった、過増殖性疾患を治療する方法である。
【０１２０】
本発明の範囲内にさらに包含されるのは、ステントを被覆するための本発明の組合せの使用であり、かつそれ故に、再狭窄の治療及び／又は予防用の被覆ステント（ＷＯ  ０３／０３２８０９）に対する本化合物の使用である。
【０１２１】
本発明の範囲内にさらに包含されるのは、変形性関節症の治療及び／又は予防（ＷＯ  ０３／０３５０４８）のための本発明の組合せの使用である。
【０１２２】
本発明の範囲内にさらに包含されるのは、低インスリン症を治療する方法である。
【０１２３】
本発明を例示するものは、非小細胞肺癌、乳癌、結腸直腸癌、軟部組織又は骨肉腫、及び子宮内膜癌の治療及び／又は予防用医薬の調製における、上記記載のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の併用使用である。
【０１２４】
追加の抗癌剤
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の併用はまた、さらなる治療剤、化学療法剤、及び抗癌剤との併用においても有用である。本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の併用を、治療剤、化学療法剤、及び抗癌剤とさらに併用することは、本発明の範囲内である。かかる薬剤の例は、デヴィータ（Ｖ．Ｔ．Ｄｅｖｉｔａ）及びヘルマン（Ｓ．Ｈｅｌｌｍａｎ）（共編）“Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）（癌の原理及び腫瘍学のプラクティス）”、第６版、２００１年２月１５日、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、において見出すことができる。当業者は、薬物及び関係する癌の、特定の性質に基づき、どの薬剤の組合せが有用であるかを識別することができるであろう。かかるさらなる抗癌剤は、限定されないが以下を包含する：エストロゲンレセプターモジュレータ、アンドロゲンレセプターモジュレータ、レチノイドレセプターモジュレータ、細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤及び他の血管新生インヒビター、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、細胞増殖及び生存シグナリングの阻害剤、ビスホスホネート、アロマターゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ治療、γ−セクレターゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を妨害する薬剤、及び細胞周期チェックポイントを妨害する薬剤。本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の併用は、放射線療法と同時投与された場合、特に有用でありえる。
【０１２５】
「エストロゲンレセプターモジュレータ」は、メカニズムにかかわらず、エストロゲンの受容体への結合を妨害又は阻害する化合物を指す。エストロゲンレセプターモジュレータの例は、限定されないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、ヨードキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノアート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾン、及びＳＨ６４６を包含する。
【０１２６】
「アンドロゲンレセプターモジュレータ」は、メカニズムにかかわらず、アンドロゲンの受容体への結合を妨害又は阻害する化合物を指す。アンドロゲンレセプターモジュレータの例は、フィナステリド及び他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、及びアビラテロンアセタートを包含する。
【０１２７】
「レチノイドレセプターモジュレータ」は、メカニズムにかかわらず、受容体へのレチノイドの結合を妨害又は阻害する化合物を指す。かかるレチノイドレセプターモジュレータの例は、ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチンアミド、及びＮ−４−カルボキシフェニルレチンアミドを包含する。
【０１２８】
「細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤」は、主として細胞の機能化を直接妨害するか又は細胞有糸分裂を阻害又は妨害することにより、細胞死を引き起こすか又は細胞増殖を阻害する化合物を指し、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素活性化化合物、微小管阻害剤／微小管安定化剤、有糸分裂キネシンの阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、有糸分裂の進行に関与するキナーゼの阻害剤、成長因子及びサイトカインシグナル伝達経路に関与するキナーゼの阻害剤、代謝拮抗物質、生物応答調節剤；ホルモン／抗ホルモン治療剤、造血成長因子、モノクローナル抗体標的化治療剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤、及びオーロラキナーゼ阻害剤を包含する。
【０１２９】
細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤の例は、制限なされることなく、セルテネフ、カケクチン、イフォスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモダルシトール、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキザリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、インプロスルファントシラート、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、シス−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド、ＧＰＸ１００、（トランス、トランス、トランス）−ビス−ミュー−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュー−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニル（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌ）スペルミン、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、及び４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（ＷＯ００／５００３２参照）、Ｒａｆキナーゼ阻害剤（例えば、Ｂａｙ４３−９００６）、及びさらなるｍＴＯＲ阻害剤を包含する。
【０１３０】
低酸素活性化化合物の１つの例は、チラパザミンである。
【０１３１】
プロテオソーム阻害剤の例は、限定されないが、ラクタシスチン及びＭＬＮ−３４１（ベルケード（Ｖｅｌｃａｄｅ））を包含する。
【０１３２】
微小管阻害剤／微小管安定化剤の例は、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール、リゾキシン、ドラスタチン、ミボブリンイセチオナート、アウリスタチン、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、エポチロン（例えば米国特許第６，２８４，７８１及び６，２８８，２３７号参照）、及び、ＢＭＳ１８８７９７を包含する。１つの実施態様においては、エポチロンは微小管阻害剤／微小管安定化剤に包含されない。
【０１３３】
トポイソメラーゼラーゼ阻害剤のいくつかの例は、トポテカン、ハイカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−シャールトルーシン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、エトポシドホスファート、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシ−エトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクライン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソキノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、及び、ジメスナである。
【０１３４】
有糸分裂キネシン、及び特にヒト有糸分裂キネシンＫＳＰの阻害剤の例は、国際公開ＷＯ  ０３／０３９４６０、ＷＯ  ０３／０５００６４、ＷＯ  ０３／０５０１２２、ＷＯ  ０３／０４９５２７、ＷＯ０３／０４９６７９、ＷＯ  ０３／０４９６７８、ＷＯ  ０４／０３９７７４、ＷＯ  ０３／０７９９７３、ＷＯ  ０３／０９９２１１、ＷＯ  ０３／０１５８５５、ＷＯ  ０３／１０６４１７、ＷＯ  ０４／０３７１７１、ＷＯ  ０４／０５８１４８、ＷＯ  ０４／０５８７００、ＷＯ  ０４／１２６６９９、ＷＯ０５／０１８６３８、ＷＯ０５／０１９２０６、ＷＯ０５／０１９２０５、ＷＯ０５／０１８５４７、ＷＯ０５／０１７１９０、ＵＳ２００５／０１７６７７６に記載されている。１つの実施態様においては、有糸分裂キネシンの阻害剤は、限定されないが、ＫＳＰの阻害剤、ＭＫＬＰ１の阻害剤、ＣＥＮＰ−Ｅの阻害剤、ＭＣＡＫの阻害剤、及びＲａｂ６−ＫＩＦＬの阻害剤を包含する。
【０１３５】
「ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤」の例は、限定されないが、ＳＡＨＡ、ＴＳＡ、オキサムフラチン、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８、及びスクリプタイドを包含する。他のヒストン脱アセチル化酵素阻害剤に関するさらなる参考文献は、以下の文書に見出されてよい；ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ）ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２００３年、第４６巻、第２４号、ｐ．５０９７−５１１６。
【０１３６】
「有糸分裂の進行に関与するキナーゼの阻害剤」は、限定されないが、オーロラキナーゼの阻害剤、ポロ様キナーゼの阻害剤（ＰＬＫ；特にＰＬＫ−１の阻害剤）、ｂｕｂ−１の阻害剤、及びｂｕｂ−Ｒ１の阻害剤を包含する。「オーロラキナーゼ阻害剤」の一例は、ＶＸ−６８０である。
【０１３７】
「抗増殖剤」は、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、及びＩＮＸ３００１；及び、代謝拮抗物質、例えばエノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキセート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクフォスファート、フォステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジンン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクチナサイジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソール、デキシラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、３−アミノピリジン−２−カルボキシアルデヒドチオセミカルバゾン、及びトラツズマブを包含する。
【０１３８】
モノクローナル抗体標的化治療剤の例は、癌細胞特異又は標的細胞特異モノクローナル抗体へ結合した、細胞傷害剤又は放射性同位元素を有する治療剤を包含する。例は、ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）を包含する。
【０１３９】
「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼの阻害剤を指す。使用してもよいＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の例は、限定されないが、ロバスタチン（メバコール（ＭＥＶＡＣＯＲ）（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８、４，２９４，９２６、及び４，３１９，０３９号参照）、シンバスタチン（ゾコール（ＺＯＣＯＲ）（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４、４，８２０，８５０、及び４，９１６，２３９号参照）、プラバスタチン（プラバコール（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ）（登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７、４，５３７，８５９、４，４１０，６２９、５，０３０，４４７、及び５，１８０，５８９号参照）、フルバスタチン（レスコール（ＬＥＳＣＯＬ）（登録商標）；米国特許第５，３５４，７７２、４，９１１，１６５、４，９２９，４３７、５，１８９，１６４、５，１１８，８５３、５，２９０，９４６、及び５，３５６，８９６号参照）、アトルバスタチン（リピトール（ＬＩＰＩＴＯＲ）（登録商標）；米国特許第５，２７３，９９５、４，６８１，８９３、５，４８９，６９１、及び５，３４２，９５２号参照）、及びセリバスタチン（リバスタチン及びバイコール（ＢＡＹＣＨＯＬ）（登録商標）としても知られる；米国特許第５，１７７，０８０号参照）を包含する。これらの、及び、本方法において使用してもよい追加のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の構造式は、ヤルパーニ（Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ）、“Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ（コレステロール低下薬）”，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，１９９６年２月５日、ｐ．８５−８９の第８７頁、及び、米国特許第４，７８２，０８４及び４，８８５，３１４号に記載されている。本明細書で使用される場合、用語、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、全ての薬学的に許容されるラクトン及びオープン酸型（すなわち、ラクトン環が開裂されて遊離酸を形成する場合）、並びに、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を有する化合物の塩及びエステル型であって、それ故、かかる塩、エステル、オープン酸、及びラクトン型の使用は、本発明の範囲内に包含される。
【０１４０】
「プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤」は、プレニルタンパク質トランスフェラーゼ酵素の任意の１つ又は任意の組合せを阻害する化合物を指し、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＦＰＴアーゼ）、ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴアーゼ−Ｉ）、及び、ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴアーゼ−ＩＩ、またＲａｂ  ＧＧＰＴアーゼとも呼ばれる）を包含する。
【０１４１】
プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の例は、以下の出版物及び特許に見出すことができる：ＷＯ  ９６／３０３４３、ＷＯ  ９７／１８８１３、ＷＯ  ９７／２１７０１、ＷＯ  ９７／２３４７８、ＷＯ  ９７／３８６６５、ＷＯ  ９８／２８９８０、ＷＯ  ９８／２９１１９、ＷＯ９５／３２９８７、米国特許第５，４２０，２４５号、米国特許第５，５２３，４３０号、米国特許第５，５３２，３５９号、米国特許第５，５１０，５１０号、米国特許第５，５８９，４８５号、米国特許第５，６０２，０９８号、欧州特許公開０  ６１８  ２２１、欧州特許公開０  ６７５  １１２、欧州特許公開０  ６０４  １８１、欧州特許公開第０  ６９６  ５９３、ＷＯ  ９４／１９３５７、ＷＯ  ９５／０８５４２、ＷＯ  ９５／１１９１７、ＷＯ  ９５／１２６１２、ＷＯ  ９５／１２５７２、ＷＯ  ９５／１０５１４、米国特許第５，６６１，１５２号、ＷＯ  ９５／１０５１５、ＷＯ  ９５／１０５１６、ＷＯ  ９５／２４６１２、ＷＯ  ９５／３４５３５、ＷＯ  ９５／２５０８６、ＷＯ  ９６／０５５２９、ＷＯ  ９６／０６１３８、ＷＯ  ９６／０６１９３、ＷＯ  ９６／１６４４３、ＷＯ  ９６／２１７０１、ＷＯ  ９６／２１４５６、ＷＯ  ９６／２２２７８、ＷＯ  ９６／２４６１１、ＷＯ  ９６／２４６１２、ＷＯ  ９６／０５１６８、ＷＯ  ９６／０５１６９、ＷＯ  ９６／００７３６、米国特許第５，５７１，７９２号、ＷＯ  ９６／１７８６１、ＷＯ  ９６／３３１５９、ＷＯ  ９６／３４８５０、ＷＯ  ９６／３４８５１、ＷＯ  ９６／３００１７、ＷＯ  ９６／３００１８、ＷＯ  ９６／３０３６２、ＷＯ  ９６／３０３６３、ＷＯ  ９６／３１１１１、ＷＯ  ９６／３１４７７、ＷＯ  ９６／３１４７８、ＷＯ  ９６／３１５０１、ＷＯ  ９７／００２５２、ＷＯ  ９７／０３０４７、ＷＯ  ９７／０３０５０、ＷＯ  ９７／０４７８５、ＷＯ  ９７／０２９２０、ＷＯ  ９７／１７０７０、ＷＯ  ９７／２３４７８、ＷＯ  ９７／２６２４６、ＷＯ  ９７／３００５３、ＷＯ  ９７／４４３５０、ＷＯ  ９８／０２４３６、及び米国特許第５，５３２，３５９号。血管新生に対するプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の役割の１つの例については、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、１９９９年、第３５巻、第９号、ｐ．１３９４−１４０１参照。
【０１４２】
「血管新生インヒビター」は、メカニズムにかかわらず、新たな血管の形成を阻害する化合物を指す。血管新生インヒビターの例は、限定されないが、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）及びＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）の阻害剤、上皮由来、線維芽細胞由来、又は血小板由来の成長因子の阻害剤、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害剤、インテグリンブロッカー、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、ペントサン多硫酸塩、アスピリン及びイブプロフェンのような非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）並びにセレコキシブ及びロフェコキシブのような選択的シクロオキシ−ゲナーゼ−２阻害剤を含む、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（ＰＮＡＳ、１９９２年、第８９巻、ｐ．７３８４；ＪＮＣＩ、１９８２年、第６９巻、ｐ．４７５；Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．１９９０年、第１０８巻、ｐ．５７３；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ．１９９４年、第２３８巻、ｐ．６８；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９５年、第３７２巻、ｐ．８３；Ｃｌｉｎ．Ｏｒｔｈｏｐ．１９９５年、第３１３巻、ｐ．７６；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９９６年、第１６巻、ｐ．１０７；Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７年、第７５巻、ｐ．１０５；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９７年、第５７巻、ｐ．１６２５；Ｃｅｌｌ、１９９８年、第９３巻、ｐ．７０５；Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１９９８年、第２巻、ｐ．７１５；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９年、第２７４巻、ｐ．９１１６、ステロイド系抗炎症剤（例えばコルチコステロイド、ミネラルコルチコイド、デキサメタゾン、プレドニソン、プレドニソロン、メチルプレド、ベタメタゾン）、カルボキサミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ−４、スクアラミン、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール、サリドマイド、アンギオスタチン、トロポニン−１、アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト（例えば、フェルナンデス（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ）ら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１９８５年、第１０５巻、ｐ．１４１−１４５を参照）、及びＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１９９９年１０月、第１７巻、ｐ．９６３−９６８；キム（Ｋｉｍ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９３年、第３６２巻、ｐ．８４１−８４４；ＷＯ  ００／４４７７７；及び、ＷＯ  ００／６１１８６参照）を包含する。
【０１４３】
血管新生を調節又は阻害し、かつ本発明化合物と組合せて使用されてもよい他の治療薬は、凝固及び線溶系を調節又は阻害する薬剤を包含する（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．２０００年、第３８巻、ｐ．６７９−６９２の総説を参照）。凝固及び線溶経路を調節又は阻害する、かかる薬剤の例は、限定されないが、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．１９９８年、第８０巻、ｐ．１０−２３を参照）、低分子量ヘパリン、及びカルボキシペプチダーゼＵ阻害剤（活性型のトロンビン活性化線溶抑制因子［ＴＡＦＩａ］の阻害剤としても公知）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．２００１年、第１０１巻、ｐ．３２９−３５４参照）を包含する。ＴＡＦＩａ阻害剤は、米国特許出願番号６０／３１０，９２７（２００１年８月８日出願）及び６０／３４９，９２５号（２００２年１月１８日出願）に記載されている。
【０１４４】
「細胞周期チェックポイントを妨害する薬剤」は、細胞周期チェックポイントシグナルを伝達するプロテインキナーゼを阻害し、それにより癌細胞をＤＮＡ損傷剤に対し感受性化する化合物を指す。かかる薬剤は、ＡＴＲ、ＡＴＭ、ＣＨＫ１１及びＣＨＫ１２キナーゼの阻害剤、及び、ｃｄｋ及びｃｄｃキナーゼ阻害剤を包含し、かつ特に、７−ヒドロキシスタウロスポリン、フラボピリドール、ＣＹＣ２０２（サイクラセル（Ｃｙｃｌａｃｅｌ））、及びＢＭＳ−３８７０３２に例示される。
【０１４５】
「受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を妨害する薬剤」は、ＲＴＫを、及びそれ故に、発癌及び腫瘍進行に関与するメカニズムを阻害する化合物を指す。かかる薬剤は、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３、及びｃ−Ｍｅｔの阻害剤を包含する。さらなる薬剤は、ブーム・ジェンセン（Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ）及びハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）、Ｎａｔｕｒｅ、２００１年、第４１１巻、ｐ．３５５−３６５により記述された、ＲＴＫの阻害剤を包含する。
【０１４６】
「細胞増殖及び生存シグナリング経路の阻害剤」は、細胞表面受容体の下流のシグナル伝達カスケードを阻害する化合物を指す。かかる薬剤は、セリン／スレオニンキナーゼ（限定されないが、Ａｋｔの阻害剤、例えばＷＯ  ０２／０８３０６４、ＷＯ  ０２／０８３１３９、ＷＯ  ０２／０８３１４０、ＵＳ２００４−０１１６４３２、ＷＯ  ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ  ０３／０８６４０４、ＷＯ  ０３／０８６２７９、ＷＯ  ０３／０８６３９４、ＷＯ  ０３／０８４４７３、ＷＯ  ０３／０８６４０３、ＷＯ  ２００４／０４１１６２、ＷＯ  ２００４／０９６１３１、ＷＯ  ２００４／０９６１２９、ＷＯ  ２００４／０９６１３５、ＷＯ  ２００４／０９６１３０、ＷＯ  ２００５／１００３５６、ＷＯ  ２００５／１００３４４、ＵＳ２００５／０２９９４１、ＵＳ２００５／４４２９４、ＵＳ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９に開示されたものを包含する）、Ｒａｆキナーゼの阻害剤（例えばＢＡＹ−４３−９００６）、ＭＥＫの阻害剤（例えば、ＣＩ−１０４０及びＰＤ−０９８０５９）、ｍＴＯＲの阻害剤（例えばワイス（Ｗｙｅｔｈ）ＣＣＩ−７７９）、及びＰＩ３Ｋの阻害剤（例えば、ＬＹ２９４００２）を包含する。
【０１４７】
上記記載のように、ＮＳＡＩＤとの併用は、強力なＣＯＸ−２阻害剤であるＮＳＡＩＤの使用に向けたものである。本明細書では、ＮＳＡＩＤは、細胞又はミクロソームアッセイにより測定されるとき、ＣＯＸ−２の阻害について１μＭ以下のＩＣ５０をもつ場合に効力がある。
【０１４８】
本発明はまた、選択的なＣＯＸ−２阻害剤である、ＮＳＡＩＤとの併用も包含する。本明細書では、選択的ＣＯＸ−２阻害剤であるＮＳＡＩＤは、細胞又はミクロソームアッセイにより評価される、ＣＯＸ−１のＩＣ５０に対するＣＯＸ−２のＩＣ５０の比率によって測定されるとき、少なくとも１００倍の、ＣＯＸ−１に対するＣＯＸ−２阻害特異性を有するものとして定義される。かかる化合物は、限定されないが、米国特許５，４７４，９９５、米国特許５，８６１，４１９、米国特許６，００１，８４３、米国特許６，０２０，３４３、米国特許５，４０９，９４４、米国特許５，４３６，２６５、米国特許５，５３６，７５２、米国特許５，５５０，１４２、米国特許５，６０４，２６０、米国特許５，６９８，５８４、米国特許５，７１０，１４０、ＷＯ  ９４／１５９３２、米国特許５，３４４，９９１、米国特許５，１３４，１４２、米国特許５，３８０，７３８、米国特許５，３９３，７９０、米国特許５，４６６，８２３、米国特許５，６３３，２７２、及び米国特許５，９３２，５９８に開示されているものを包含し、これらは全て参考として本明細書に含まれる。
【０１４９】
本治療法において特に有用であるＣＯＸ−２の阻害剤は、３−フェニル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノン；及び５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−メチル−５−ピリジニル）ピリジン；又はその薬学的に許容される塩である。
【０１５０】
ＣＯＸ−２の特異的阻害剤として記載されてきており、かつそれ故、本発明において有用である化合物は、限定されないが以下を包含する：パレコキシブ、ベクストラ（ＢＥＸＴＲＡ（登録商標））、セレブレックス（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））、又はその薬学的に許容される塩。
【０１５１】
血管新生インヒビターの他の例は、限定されないが、エンドスタチン、ウクライン、ランピルナーゼ、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクト−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、アセチルジナナリン（ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｎａｌｉｎｅ）、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン、コンブレタスタチン、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノペンタオースホスファート、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホナート）、及び、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）を包含する。
【０１５２】
前記に使用したように、「インテグリンブロッカー」は、生理的リガンドの、αｖβ３インテグリンへの結合を選択的に拮抗するか、阻害するか、又は反対に作用する化合物、生理的リガンドの、αｖβ５インテグリンへの結合を選択的に拮抗するか、阻害するか、又は反対に作用する化合物、生理的リガンドの、αｖβ３インテグリン及びαｖβ５インテグリン双方への結合を拮抗するか、阻害するか、又は反対に作用する化合物、及び、毛細血管内皮細胞上に発現された特定のインテグリンの活性を拮抗するか、阻害するか、又は反対に作用する化合物を指す。該用語はまた、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１、及びα６β４インテグリンのアンタゴニストも指す。該用語はまた、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、β５α１、α６β１、及びα６β４インテグリンの任意の組合せのアンタゴニストも指す。
【０１５３】
チロシンキナーゼ阻害剤のいくつかの具体的な例は、Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチリデニル］インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン、ＳＴＩ５７１、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホナート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミン、及びＥＭＤ１２１９７４を包含する。
【０１５４】
抗癌化合物以外の化合物との併用もまた、本方法に包含される。例えば、本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の併用と、ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニスト及びＰＰＡＲ−δ（すなわち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとの組合せは、いくつかの悪性疾患の治療において有用である。ＰＰＡＲ−γ及びＰＰＡＲ−δは、核のペルオキシソーム増殖剤活性化受容体γ及びδである。ＰＰＡＲ−γの、内皮細胞上での発現及び、血管新生におけるその関与は、文献に報告されてきた（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８年、第３１巻、ｐ．９０９−９１３；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９年、第２７４巻、ｐ．９１１６−９１２１；Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０００年、第４１巻、ｐ．２３０９−２３１７参照）。より最近では、ＰＰＡＲ−γアゴニストが、インビトロでＶＥＧＦに対する血管新生応答を阻害することが示された；トログリタゾン及びマレイン酸ロシグリタゾンの双方は、マウスにおいて、網膜の血管新生の発生を阻害する（Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｍｏｌ．２００１年、第１１９巻、ｐ．７０９−７１７）。ＰＰＡＲ−γアゴニスト及びＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例は、限定されないが、チアゾリジンジオン（例えばＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン、ロシグリタゾン、及びピオグリタゾン）、フェノフィブラート、ゲンフィブロジル、クロフィブラート、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンゾイソオキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸（ＵＳＳＮ  ０９／７８２，８５６に開示）、及び２（Ｒ）−７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−２−カルボン酸（ＵＳＳＮ  ６０／２３５，７０８及び６０／２４４，６９７に開示）を包含する。
【０１５５】
本発明の別の実施態様は、本開示化合物の、癌の治療のための遺伝子療法と組合せた使用である。癌を治療するための遺伝学的戦略の概要に関しては、ホール（Ｈａｌｌ）ら、（Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ，Ｇｅｎｅｔ．１９９７年、第６１巻、ｐ．７８５−７８９）、及びクーフェ（Ｋｕｆｅ）ら（「Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（癌医療）」、第５版、ＢＣ  Ｄｅｃｋｅｒ、ハミルトン、２０００年、ｐ．８７６−８８９）を参照のこと。遺伝子療法を用いて、任意の腫瘍抑制遺伝子を送達することができる。かかる遺伝子の例は、限定されないが、組換えウイルス媒介性の遺伝子導入により送達可能であるｐ５３（例えば、米国特許第６，０６９，１３４号参照）、ｕＰＡ／ｕＰＡＲアンタゴニスト（「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｕＰＡ／ｕＰＡＲ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ（ｕＰＡ／ｕＰＡＲアンタゴニストのアデノウイルス媒介送達は、血管新生依存性の腫瘍増殖及び播種をマウスにおいて抑制する）」、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９８年８月、第５巻、第８号、ｐ．１１０５−１３）、及びインターフェロンガンマ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００年、第１６４巻、ｐ．２１７−２２２）を包含する。
【０１５６】
本発明化合物はまた、生来多剤耐性（ＭＤＲ）、特に、高レベルのトランスポータ−タンパク質の発現に関与しているＭＤＲの阻害剤と併用して投与されてもよい。かかるＭＤＲ阻害剤は、ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）の阻害剤、例えばＬＹ３３５９７９、ＸＲ９５７６、ＯＣ１４４−０９３、Ｒ１０１９２２、ＶＸ８５３、及びＰＳＣ８３３（バルスポダール）を包含する。
【０１５７】
本発明化合物は、本発明化合物の、単独の又は放射線療法との使用の結果として生じるかもしれない急性、遅発性、遅延相、及び予測性嘔吐を含めた、悪心又は嘔吐を治療するべく、抗嘔吐薬と一緒に用いてもよい。嘔吐の予防又は治療のためには、本発明化合物は、他の抗嘔吐薬、特にニューロキニン−１受容体アンタゴニスト；５ＨＴ３受容体アンタゴニスト、例えばオンダンセトロン、グラニセトロン、トロピセトロン、及びザチセトロン；ＧＡＢＡＢ受容体アゴニスト、例えばバクロフェン；コルチコステロイド、例えばデカドロン（デキサメタゾン）、ケナログ（Ｋｅｎａｌｏｇ）、アリストコート（Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ）、ナサライド（Ｎａｓａｌｉｄｅ）、プレフェリド（Ｐｒｅｆｅｒｉｄ）、ベネコルテン（Ｂｅｎｅｃｏｒｔｅｎ）、又は他の、米国特許第２，７８９，１１８、２，９９０，４０１、３，０４８，５８１、３，１２６，３７５、３，９２９，７６８、３，９９６，３５９、３，９２８，３２６、及び３，７４９，７１２号に開示されたもの；抗ドーパミン作動薬、例えばフェノチアジン類（例えばプロクロペラジン、フルフェナジン、チオリダジン、及びメソリダジン）、メトクロプラマイド、又はドロナビノールと一緒に使用してもよい。別の実施態様においては、ニューロキニン−１受容体アンタゴニスト、５ＨＴ３受容体アンタゴニスト、及びコルチコステロイドから選ばれる抗嘔吐薬との併用療法が、本化合物の投与の結果として生じるかもしれない嘔吐の治療又は予防用に開示されている。
【０１５８】
本発明化合物との併用において役立つニューロキニン−１受容体アンタゴニストは、例えば、米国特許第５，１６２，３３９、５，２３２，９２９、５，２４２，９３０、５，３７３，００３、５，３８７，５９５、５，４５９，２７０、５，４９４，９２６、５，４９６，８３３、５，６３７，６９９、５，７１９，１４７号；欧州特許公開番号ＥＰ  ０  ３６０  ３９０、０  ３９４  ９８９、０  ４２８  ４３４、０  ４２９  ３６６、０  ４３０  ７７１、０  ４３６  ３３４、０  ４４３  １３２、０  ４８２  ５３９、０  ４９８  ０６９、０  ４９９  ３１３、０  ５１２  ９０１、０  ５１２  ９０２、０  ５１４  ２７３、０  ５１４  ２７４、０  ５１４  ２７５、０  ５１４  ２７６、０  ５１５  ６８１、０  ５１７  ５８９、０  ５２０  ５５５、０  ５２２  ８０８、０  ５２８  ４９５、０  ５３２  ４５６、０  ５３３  ２８０、０  ５３６  ８１７、０  ５４５  ４７８、０  ５５８  １５６、０  ５７７  ３９４、０  ５８５  ９１３、０  ５９０  １５２、０  ５９９  ５３８、０  ６１０  ７９３、０  ６３４  ４０２、０  ６８６  ６２９、０  ６９３  ４８９、０  ６９４  ５３５、０  ６９９  ６５５、０  ６９９  ６７４、０  ７０７  ００６、０  ７０８  １０１、０  ７０９  ３７５、０  ７０９  ３７６、０  ７１４  ８９１、０  ７２３  ９５９、０  ７３３  ６３２、及び０  ７７６  ８９３；ＰＣＴ国際特許公開番号ＷＯ  ９０／０５５２５、９０／０５７２９、９１／０９８４４、９１／１８８９９、９２／０１６８８、９２／０６０７９、９２／１２１５１、９２／１５５８５、９２／１７４４９、９２／２０６６１、９２／２０６７６、９２／２１６７７、９２／２２５６９、９３／００３３０、９３／００３３１、９３／０１１５９、９３／０１１６５、９３／０１１６９、９３／０１１７０、９３／０６０９９、９３／０９１１６、９３／１００７３、９３／１４０８４、９３／１４１１３、９３／１８０２３、９３／１９０６４、９３／２１１５５、９３／２１１８１、９３／２３３８０、９３／２４４６５、９４／００４４０、９４／０１４０２、９４／０２４６１、９４／０２５９５、９４／０３４２９、９４／０３４４５、９４／０４４９４、９４／０４４９６、９４／０５６２５、９４／０７８４３、９４／０８９９７、９４／１０１６５、９４／１０１６７、９４／１０１６８、９４／１０１７０、９４／１１３６８、９４／１３６３９、９４／１３６６３、９４／１４７６７、９４／１５９０３、９４／１９３２０、９４／１９３２３、９４／２０５００、９４／２６７３５、９４／２６７４０、９４／２９３０９、９５／０２５９５、９５／０４０４０、９５／０４０４２、９５／０６６４５、９５／０７８８６、９５／０７９０８、９５／０８５４９、９５／１１８８０、９５／１４０１７、９５／１５３１１、９５／１６６７９、９５／１７３８２、９５／１８１２４、９５／１８１２９、９５／１９３４４、９５／２０５７５、９５／２１８１９、９５／２２５２５、９５／２３７９８、９５／２６３３８、９５／２８４１８、９５／３０６７４、９５／３０６８７、９５／３３７４４、９６／０５１８１、９６／０５１９３、９６／０５２０３、９６／０６０９４、９６／０７６４９、９６／１０��６２、９６／１６９３９、９６／１８６４３、９６／２０１９７、９６／２１６６１、９６／２９３０４、９６／２９３１７、９６／２９３２６、９６／２９３２８、９６／３１２１４、９６／３２３８５、９６／３７４８９、９７／０１５５３、９７／０１５５４、９７／０３０６６、９７／０８１４４、９７／１４６７１、９７／１７３６２、９７／１８２０６、９７／１９０８４、９７／１９９４２、及び９７／２１７０２；及び英国特許公開番号２  ２６６  ５２９、２  ２６８  ９３１、２  ２６９  １７０、２  ２６９  ５９０、２  ２７１  ７７４、２  ２９２  １４４、２  ２９３  １６８、２  ２９３  １６９、及び２  ３０２  ６８９において充分に記載されている。かかる化合物の調製は、上述の特許及び刊行物において充分に記載されており、それらは参考として本明細書に含まれている。
【０１５９】
１つの実施態様においては、本発明化合物との併用使用のためのニューロキニン−１受容体アンタゴニストは：２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）エトキシ）−３−（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−４−（３−（５−オキソ−１Ｈ，４Ｈ−１，２，４−トリアゾロ）メチル）モルホリン、又は、その薬学的に許容される塩から選ばれ、それは、米国特許第５，７１９，１４７号に記載されている。
【０１６０】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、貧血症の治療において有用な薬剤とともに投与してもよい。かかる貧血症治療薬は、例えば、持続性の赤血球形成受容体活性化剤（例えばエポエチン・アルファ）である。
【０１６１】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、好中球減少症の治療において有用な薬剤とともに投与されてよい。かかる好中球減少症治療薬は、例えば、ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）のような、好中球の産生及び機能を調節する造血成長因子である。Ｇ−ＣＳＦの例は、フィルグラスチムを包含する。
【０１６２】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、免疫強化剤、例えば、レバミソール、イソプリノシン、及びザダキシン（Ｚａｄａｘｉｎ）とともに投与してもよい。
【０１６３】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、ビスホスホネート（ビスホスホナート、ジホスホナート、ビスホスホン酸、及びジホスホン酸を包含するべく理解される）と併用して、骨癌を含む癌の治療又は予防に有用であってよい。ビホスホネートの例は、限定されないが：エチドロネート（ダイドロネル（Ｄｉｄｒｏｎｅｌ））、パミドロネート（アレディア（Ａｒｅｄｉａ））、アレンドロネート（フォサマックス（Ｆｏｓａｍａｘ））、リセドロネート（アクトネル（Ａｃｔｏｎｅｌ））、ゾレドロネート（ゾメタ（Ｚｏｍｅｔａ））、イバンドロネート（ボニバ（Ｂｏｎｉｖａ））、インカドロネート又はシマドロネート、クロドロネート、ＥＢ−１０５３、ミノドロネート、ネリドロネート、ピリドロネート（ｐｉｒｉｄｒｏｎａｔｅ）、及びチルドロネートを包含し、任意の及び全ての、薬学的に許容される塩、誘導体、水和物、及びそれらの混合物を包含する。
【０１６４】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、アロマターゼ阻害剤と組合せて、乳癌の治療又は予防に有用でありえる。アロマターゼ阻害剤の例は、限定されないが、アナストロゾール、レトロゾール、及びエキセメスタンを包含する。
【０１６５】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、ｓｉＲＮＡ治療薬との併用において、癌の治療又は予防に有用でありえる。
【０１６６】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、γ−セクレターゼ阻害剤及び／又はＮＯＴＣＨシグナリング阻害剤と併用して投与してもよい。かかる阻害剤は、ＷＯ  ０１／９００８４、ＷＯ  ０２／３０９１２、ＷＯ  ０１／７０６７７、ＷＯ  ０３／０１３５０６、ＷＯ  ０２／３６５５５、ＷＯ  ０３／０９３２５２、ＷＯ  ０３／０９３２６４、ＷＯ  ０３／０９３２５１、ＷＯ  ０３／０９３２５３、ＷＯ  ２００４／０３９８００、ＷＯ  ２００４／０３９３７０、ＷＯ  ２００５／０３０７３１、ＷＯ  ２００５／０１４５５３、ＵＳＳＮ  １０／９５７，２５１、ＷＯ  ２００４／０８９９１１、ＷＯ  ０２／０８１４３５、ＷＯ  ０２／０８１４３３、ＷＯ  ０３／０１８５４３、ＷＯ  ２００４／０３１１３７、ＷＯ  ２００４／０３１１３９、ＷＯ  ２００４／０３１１３８、ＷＯ  ２００４／１０１５３８、ＷＯ  ２００４／１０１５３９、及びＷＯ  ０２／４７６７１（ＬＹ−４５０１３９を含む）。
【０１６７】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、Ａｋｔの阻害剤との併用において、癌の治療又は予防に有用でありえる。かかる阻害剤は、限定されないが、以下の出版物に記載された化合物を包含する：ＷＯ  ０２／０８３０６４、ＷＯ  ０２／０８３１３９、ＷＯ  ０２／０８３１４０、ＵＳ２００４−０１１６４３２、ＷＯ  ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ  ０３／０８６４０４、ＷＯ  ０３／０８６２７９、ＷＯ  ０３／０８６３９４、ＷＯ  ０３／０８４４７３、ＷＯ  ０３／０８６４０３、ＷＯ  ２００４／０４１１６２、ＷＯ  ２００４／０９６１３１、ＷＯ  ２００４／０９６１２９、ＷＯ  ２００４／０９６１３５、ＷＯ  ２００４／０９６１３０、ＷＯ  ２００５／１００３５６、ＷＯ  ２００５／１００３４４、ＵＳ２００５／０２９９４１、ＵＳ２００５／４４２９４、ＵＳ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９。
【０１６８】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、ＰＡＲＰ阻害剤との併用において、癌の治療又は予防に有用でありえる。
【０１６９】
放射線療法自体は、癌治療の分野では通常の方法を意味する。放射線療法には、Ｘ線、γ線、中性子線、電子線、陽子線などの種々の放射線；及び放射線源を使用し得る。最も一般的な放射線療法においては、外部放射線、γ線による照射にリニア加速器が使用される。
【０１７０】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体の組合せはまた、以下の治療薬との併用において、癌の治療に有用でありえる：アバレリックス（プレナキシス・デポ（Ｐｌｅｎａｘｉｓ  ｄｅｐｏｔ）（登録商標））；アルデスロイキン（プロカイン（Ｐｒｏｋｉｎｅ）（登録商標））；アルデスロイキン（プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標））；アレムツズマブ（キャンパス（Ｃａｍｐａｔｈ）（登録商標））；アリトレチノイン（パンレチン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ）（登録商標））；アロプリノール（ザイロプリム（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ）（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサレン（Ｈｅｘａｌｅｎ）（登録商標））；アミフォスチン（エチヨル（Ｅｔｈｙｏｌ）（登録商標））；アナストロゾール（アリミデックス（Ａｒｉｍｉｄｅｘ）（登録商標））；三酸化ヒ素（トリセノックス（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ）（登録商標））；アスパラギナーゼ（エルスパル（Ｅｌｓｐａｒ）（登録商標））；アザシチジン（ビダザ（Ｖｉｄａｚａ）（登録商標））；ベバシズマブ（アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）（登録商標））；ベキサロテン・カプセル（タルグレチン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ）（登録商標））；ベキサロテン・ゲル（タルグレチン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ）（登録商標））；ブレオマイシン（ブレノキサン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ）（登録商標））；ボルテゾミブ（ベルケード（Ｖｅｌｃａｄｅ）（登録商標））；ブスルファン・静脈内（ブスルフェックス（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ）（登録商標））；ブスルファン・経口（マイレラン（Ｍｙｌｅｒａｎ）（登録商標））；カルステロン（メトサーブ（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ）（登録商標））；カペシタビン（ゼローダ（Ｘｅｌｏｄａ）（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ）（登録商標））；カルムスチン（ＢＣＮＵ（登録商標）、ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（グリアデル（Ｇｌｉａｄｅｌ）（登録商標））；インプラント型ポリフェプロサン２０カルムスチン（グリアデル・ウエファー（Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ）（登録商標））；セレコキシブ（セレブレックス（（Ｃｅｌｅｂｅｘ）（登録商標））；セツキシマブ（アービタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）（登録商標））；クロランブシル（ロイケラン（Ｌｅｕｋｅｒａｎ）（登録商標））；シスプラチン（プラチノール（Ｐｌａｔｉｎｏｌ）（登録商標））；クラドリビン（ロイスタチン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ）（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（クロラール（Ｃｌｏｌａｒ）（登録商標））；シクロホスファミド（サイトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）（登録商標）、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（登録商標））；シクロホスファミド（サイトキサン注射薬（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（登録商標））；シクロホスファミド（サイトキサン・錠剤（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｔａｂｌｅｔ）（登録商標））；シタラビン（サイトサール−Ｕ（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ）（登録商標））；リポソーム化シタラビン（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））；デカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ（コスメゲン（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ）（登録商標））；ダルベポエチン・アルファ（アラネスプ（Ａｒ���ｎｅｓｐ）（登録商標））；リポソーム化ダウノルビシン（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（ダウノルビシン（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（セルビジン（Ｃｅｒｂｉｄｉｎｅ）（登録商標））；デニロイキン・ｄｉｆｔｉｔｏｘ（オンタック（Ｏｎｔａｋ）（登録商標））；デクスラゾキサン（ザインカード（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）（登録商標））；ドセタキセル（タキソテール（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシンＰＦＳ（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ）（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）（登録商標）、ルベックス（Ｒｕｂｅｘ）（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシンＰＦＳ注射薬（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（登録商標））；リポソーム化ドキソルビシン（ドキシル（Ｄｏｘｉｌ）（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（ドロモスタノロン（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（マステロン注射薬（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（登録商標））；エリオットのＢ溶液（エリオットのＢ溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（登録商標））；エピルビシン（エレンス（Ｅｌｌｅｎｃｅ）（登録商標））；エポエチン・アルファ（エポジェン（ｅｐｏｇｅｎ）（登録商標））；エルロチニブ（タルセバ（Ｔａｒｃｅｖａ）（登録商標））；エストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））；エトポシドリン酸塩（エトポフォス（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ）（登録商標））；エトポシド、ＶＰ−１６（ベペシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ）（登録商標））；エキセメスタン（アロマシン（Ａｒｏｍａｓｉｎ）（登録商標））；フィルグラスチム（ノイポゲン（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）（登録商標））；フロクスウリジン（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラビン（フルダラ（Ｆｌｕｄａｒａ）（登録商標））；フルオロウラシル、５−ＦＵ（アドルシル（Ａｄｒｕｃｉｌ）（登録商標））；フルベストラント（ファスロデックス（Ｆａｓｌｏｄｅｘ）（登録商標））；ゲフィチニブ（イレッサ（Ｉｒｅｓｓａ）（登録商標））；ゲムシタビン（ゲムザール（Ｇｅｍｚａｒ）（登録商標））；ゲムツズマブ・オゾガマイシン（マイロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）（登録商標））；ゴセレリン酢酸塩（ゾラデックス・インプラント（Ｚｏｌａｄｅｘ  Ｉｍｐｌａｎｔ）（登録商標））；ゴセレリン酢酸塩（ゾラデックス（Ｚｏｌａｄｅｘ）（登録商標））；ヒストレリン酢酸塩（ヒストレリン・インプラント（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ  ｉｍｐｌａｎｔ）（登録商標））；ヒドロキシウレア（ハイドレア（Ｈｙｄｒｅａ）（登録商標））；イブリツモマブ・チウキセタン（ゼヴァリン（Ｚｅｖａｌｉｎ）（登録商標））；イダルビシン（イダマイシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ）（登録商標））；イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））；イマチニブメシル酸塩（グリベック（Ｇｌｅｅｖｅｃ）（登録商標））；インターフェロンアルファ２ａ（ロフェロンＡ（Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ａ）（登録商標））；インターフェロンアルファ−２ｂ（イントロンＡ���Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ）（登録商標））；イリノテカン（カンプトサール（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）（登録商標））；レナリドマイド（レブリミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）（登録商標））；レトロゾール（フェマーラ（Ｆｅｍａｒａ）（登録商標））；ロイコボリン（ウェルコボリン（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ）（登録商標）、ロイコボリン（Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）（登録商標））；酢酸ロイプロリド（エリガード（Ｅｌｉｇａｒｄ）（登録商標））；レバミソール（エルガミゾール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）（登録商標））；ロムスチン、ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ（登録商標））；メクロレタミン・ナイトロジェンマスタード（マスタルゲン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）（登録商標））；酢酸メゲストロール（メゲース（Ｍｅｇａｃｅ）（登録商標））；メルファラン、Ｌ−ＰＡＭ（アルケラン（Ａｌｋｅｒａｎ）（登録商標））；メルカプトプリン、６−ＭＰ（プリネトール（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ）（登録商標））；メスナ（メスネックス（Ｍｅｓｎｅｘ）（登録商標））；メスナ（メスネックス錠（Ｍｅｓｎｅｘ  ｔａｂｓ）（登録商標））；メトトレキサート（メトトレキセート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）（登録商標））；メトキサレン（ウヴァデクス（Ｕｖａｄｅｘ）（登録商標））；マイトマイシンＣ（ミュータマイシン（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ）（登録商標））；ミトタン（リソドレン（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ）（登録商標））；ミトキサントロン（ノバントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）（登録商標））；フェンプロピオン酸ナンドロロン（デュラボリン−５０（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ−５０）（登録商標））；ネララビン（アラノン（Ａｒｒａｎｏｎ）（登録商標））；ノフェツモマブ（ヴァールマ（Ｖｅｒｌｕｍａ）（登録商標））；オプレルベキン（ニューメガ（Ｎｅｕｍｅｇａ）（登録商標））；オキサリプラチン（エロキサチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）（登録商標））；パクリタキセル（パクセン（Ｐａｘｅｎｅ）（登録商標））；パクリタキセル（タキソール（Ｔａｘｏｌ）（登録商標））；パクリタキセル・タンパク質結合粒子（アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）（登録商標））；パリフェルミン（ケピバンス（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ）（登録商標））；パミドロネート（アレディア（Ａｒｅｄｉａ）（登録商標））；ペグアデマーゼ（アダジェン（Ａｄａｇｅｎ）（ウシ・ペグアデマーゼ（Ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ  Ｂｏｖｉｎｅ））（登録商標））；ペグアスパラガーゼ（オンキャスパー（Ｏｎｃａｓｐａｒ）（登録商標））；ペグフィルグラスチム（ニューラスタ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）（登録商標））；ペメトレキセド２ナトリウム（アリムタ（Ａｌｉｍｔａ）（登録商標））；ペントスタチン（ナイペント（Ｎｉｐｅｎｔ）（登録商標））；ピポブロマン（バーサイト（Ｖｅｒｃｙｔｅ）（登録商標））；プリカマイシン、ミトラマイシン（ミトラシン（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ）（登録商標））；ポルフィマー・ナトリウム（フォトフリン（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ）（登録商標））；プロカルバジン（マツラン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（登録商標））；キナクリン（アタブリン（Ａｔａｂｒｉｎｅ）（登録商標））；ラスブリカーゼ（エリテック（Ｅｌｉｔｅｋ）（登録商標））；リツキシマブ（リツキサン（Ｒｉｔｕｘ���ｎ）（登録商標））；サルグラモスチン（リューカイン（Ｌｅｕｋｉｎｅ）（登録商標））；サルグラモスチン（プロカイン（Ｐｒｏｋｉｎｅ）（登録商標））；ソラフェニブ（ネクサバール（Ｎｅｘａｖａｒ）（登録商標））；ストレプトゾシン（ザノサール（Ｚａｎｏｓａｒ）（登録商標））；スニチニブ・マレイン酸塩（スーテント（Ｓｕｔｅｎｔ）（登録商標））；タルク（スクレロゾール（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ）（登録商標））；タモキシフェン（ノルバデックス（Ｎｏｌｖａｄｅｘ）（登録商標））；テモゾロミド（テモダール（Ｔｅｍｏｄａｒ）（登録商標））；テニポシド、ＶＭ−２６（ヴァモン（Ｖｕｍｏｎ）（登録商標））；テストラクトン（テスラク（Ｔｅｓｌａｃ）（登録商標））；チオグアニン、６−ＴＧ（チオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）（登録商標））；チオテパ（チオプレックス（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）（登録商標））；トポテカン（ハイカムチン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）（登録商標））；トレミフェン（フェアストン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）（登録商標））；トシツモマブ（ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）（登録商標））；トシツモマブ／Ｉ−１３１  トシツモマブ（ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）（登録商標））；トラツズマブ（ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（登録商標））；トレチノイン、ＡＴＲＡ（ベサノイド（Ｖｅｓａｎｏｉｄ）（登録商標））；ウラシル・マスタード（ウラシル・マスタード・カプセル（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｃａｐｓｕｌｅｓ）（登録商標））；バルルビシン（バルスター（Ｖａｌｓｔａｒ）（登録商標））；ビンブラスチン（ベルバン（Ｖｅｌｂａｎ）（登録商標））；ビンクリスチン（オンコビン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）（登録商標））；ビノレルビン（ナベルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）（登録商標））；及びゾレドロネート（ゾメタ（Ｚｏｍｅｔａ）（登録商標））。
【０１７１】
全ての特許、刊行物、及び確認された係属中の特許は、参考として本明細書に含まれる。
【０１７２】
本明細書において使用された略号は、以下の表に示した意味を有する。以下の表に記載されていない略号は、別に特に述べない限り、一般に使用される意味を有する。
【０１７３】
【化２】
0005719347.tif 000004
【０１７４】
本発明のｍＴＯＲ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体は、適当な材料を使用して、以下の一般的なスキームに従って調製してよく、かつその後の具体的な実施例によってさらに例示される。しかしながら、実施例に例示された具体的な抗癌剤が、本発明とみなされる唯一のジーナス（Ｇｅｎｕｓ）を形成するものと解釈されるべきではない。それ故、以下の例示的な実施例は、リストされた抗癌剤によって、又は例示を目的として使用された特定の物質によって、限定されるものではない。当業者は、これらの化合物を調整するため、以下の調製法の条件及びプロセスについて既知の変形を用いてもよいことを容易に理解するであろう。別に記載のない限り、すべての温度は摂氏である。
【０１７５】
合成法
【０１７６】
【化３】
0005719347.tif 000005
【０１７７】
本発明は、ここに、以下の非限定的例において例示され、ここで、別段の指定のない限り：
１．全ての最終生成物は、ＮＭＲ、ＬＣＭＳにより分析した。
２．中間体は、ＮＭＲ及び／又はＴＬＣ及び／又はＬＣＭＳにより分析した。
３．ほとんどの化合物は、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー、逆相ＨＰＬＣ、再結晶化、及び／又はスウィッシュ（溶媒中に懸濁した後、固体を濾過する）により精製した。
４．反応の経過は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）及び／又はＬＣＭＳにより追跡し、また反応時間は例示のみのために示されている。
【０１７８】
実施例１
ジメチル−ホスフィン酸Ｃ−４３ラパマイシンエステル
【０１７９】
【化４】
0005719347.tif 000006
【０１８０】
ジクロロメタン  １．８ｍＬ中のラパマイシン（０．１ｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）の冷却された（０℃）溶液に、２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルピリジン  ０．１６８ｇ（０．８２ｍｍｏｌ）を、Ｎ２流下で添加し、直後にジクロロメタン  ０．２ｍＬ中のジメチルホスフィン酸クロリド（０．０６２ｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。わずかに黄色の反応溶液を、０℃で、Ｎ２雰囲気下で３．５時間攪拌した（反応はＴＬＣによりモニターした）。冷却した（０℃）反応溶液を、ＥｔＯＡｃ  約２０ｍＬで希釈し、次にＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）を含有する分液漏斗に移した。水層を除去し、有機層を氷冷した１Ｎ  塩酸（１ｘ１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１ｘ１００ｍＬ）、及び食塩水（１ｘ１００ｍＬ）で順次洗浄し、次にＭｇＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１：１０：３：３  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出）により精製して、白色固体  ０．０９２ｇを得た：
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ４．１８（ｍ，１Ｈ）、４．１０（ｍ，１Ｈ）、３．０５（ｍ，１Ｈ）、１．５１（ｍ，６Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５３．６；１０１３ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１８１】
実施例２
ジメチルホスフィン酸Ｃ−４３ラパマイシンエステル、別の合成法
ラパマイシン及びジクロロメタンを、窒素でパージした反応フラスコに装入する。攪拌した溶液を、約０℃に冷却する（−５±５℃の外部温度を反応の間中、維持する）。次に、ジクロロメタン中のクロロジメチルホスフィン酸クロリド（２．０モル当量）の溶液を、約８−１３分間にわたり添加する。この直後に、ジクロロメタン中の３，５−ルチジン（２．２モル当量）の溶液を、約１５−２０分間にわたり添加する。双方の添加の間中、反応は０℃未満にとどまる。冷却した反応溶液を１時間攪拌し、次に、まだ冷たいうちに、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及びメチル−ｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、酢酸エチル、又はジエチルエーテルを含有する抽出器に移す。製造過程のサンプルは、３０及び６０分の時点で取出す。サンプルは、反応ワークアップに記載したものと同様の方法で調製する。反応の進行は、ＴＬＣ（１：１０：３：３  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）及び逆相ＨＰＬＣ分析によりモニターする。単離した有機層を、氷冷した１Ｎ  塩酸、飽和ＮａＨＣＯ３（２ｘ）、飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。濾過及び溶媒除去し、残渣をアセトンで溶媒交換し、続いて真空中で濃縮して粗生成物を得て、これを順相及び逆相ＨＰＬＣにより、純度について分析してもよい。
【０１８２】
実施例３
マウスモノクローナル抗体（ＭＡＢ）の生成及び選択
ＩＧＦ−１Ｒに対し特異的に向けられ、かつＩＲは認識しない、ＭＡｂの生成を目的として、６工程のスクリーニングを含んでなるプロトコールについて考察した。
【０１８３】
それは以下のものから構成される：
−ハイブリドーマを生成する目的で、マウスを組換えＩＧＦ−１Ｒで免疫化すること、
−培養上清を、免疫化に寄与した組換えタンパク質について、ＥＬＩＳＡによりスクリーニングすること、
−陽性のハイブリドーマの全ての上清を、ＭＣＦ−７腫瘍細胞の表面上で過剰発現している天然の受容体について、ＥＬＩＳＡにより試験すること、
−ハイブリドーマ陽性の上清を、ＩＧＦ−１Ｒ又はＩＲを各々発現するバキュロウイルスで感染された昆虫細胞上での、ＩＧＦ−１Ｒ及びＩＲの特異的認識の観点から、２つの最初のスクリーニングで評価すること、
−この工程で選択された抗体が、ＭＣＦ−７細胞の誘導されたＩＧＦ１増殖を、インビトロで阻害し得ることを検証すること、
−腫瘍ＭＣＦ−７の増殖に対するインパクトという観点から保持された候補の、インビボの活性をヌードマウスにおいて確認すること。
【０１８４】
これらの個別の工程及び得られた結果の全てを、以下の実施例１において簡単に記載する。
【０１８５】
免疫化の工程では、マウスに８μｇの組換えＩＧＦ−１Ｒを、皮下経路により２回注射した。雌ラットの細胞が、マウス骨髄腫Ｓｐ２ＯＡｇ１４の細胞と融合する３日前に、３μｇの組換え受容体の静脈内注射により、マウスを刺激した。融合の１４日後、ハイブリドーマ上清を、組換えＩＧＦ−１Ｒによって感作したプレート上で、ＥＬＩＳＡによってスクリーンした。その上清が陽性であると判明したハイブリドーマを保持し、増殖させた後、ＦＡＣＳｃａｎで試験して、産生した抗体が同様に天然のＩＧＦ−１Ｒを認識し得ることを確認した。これを行なうため、ＩＧＦ−１Ｒを過剰発現するエストロゲン依存性の乳房腫瘍由来のＭＣＦ−７細胞を、ＥＬＩＳＡで選択されたハイブリドーマにより産生し各培養上清とともにインキュベートした。細胞表面上の天然／ＭＡｂ受容体複合体は、蛍光色素へ結合した二次抗種抗体（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｎｔｉ−ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）によって示された。図３Ａないし３Ｃは、ハイブリドーマ７Ｃ１０の上清で得られたヒストグラムタイプ（図３Ｃ）を、細胞標識単独＋二次抗体（図３Ａ）、又はコントロールアイソタイプを利用した標識（図３Ｂ）と比較して示す。
【０１８６】
選択のこの工程において、ＭＡｂを分泌すると同時に組換え受容体及び天然受容体を認識するハイブリドーマのみを選択し、クローニングした。これらのハイブリドーマによって分泌されるＭＡｂを産生し、次に精製した後、２つの受容体を同時に認識するハイブリドーマを除去する目的で、ＩＧＦ−１Ｒ又はＩＲを発現するＳｆ９昆虫細胞上で、上記記載の方法に従ってＦＡＣＳｃａｎで試験した。図４Ａは、未感染細胞＋二次抗体（１）、αＩＲ３で標識された未感染細胞＋二次抗体（２）、及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体で標識された未感染細胞＋二次抗体（３）にそれぞれ対応するヒストグラム１、２、３の全回収率を示す。この最初の結果は、これらの未感染昆虫細胞の表面上には、検出可能なＩＧＦ−１Ｒ及びＩＲが存在しないことを充分に示している。図４Ｂは、ＩＧＦ−１Ｒを発現するバキュロウイルスに感染された細胞の標識を示す。この２番目の図では、陽性コントロールとして用いたαＩＲ３が、予想通り充分に細胞を標識するが（ピーク２）、一方、抗ＩＲ（ピーク３）は、単一細胞のピークに重なっている。最後に、図４Ｃでは、抗ＩＲが、予想通り充分にＩＲを発現するＳｆ９細胞を標識するが（ピーク３）、予想外なことに、文献ではＩＧＦ−１Ｒに特異的であると記載されているαＩＲ３が、ＩＲを認識するように見られる（ピーク２）ことが示されている。
【０１８７】
この３番目のスクリーニング系で得られた結果は、表１に要約されており、ＩＧＦ−１Ｒを認識しかつＩＲを認識しないという基準を満たすＭＡｂ：７Ｃ１０の生成を示している。Ｍａｂ  ７Ｃ１０のアイソタイピングにより、それがＩｇＧ１を含むことが示されている。
【０１８８】
【表１】
0005719347.tif 000007
【０１８９】
ＭＡｂの選択用に提供された最後の２つのスクリーニングは、後者が、細胞系ＭＣＦ−７においてＩＧＦ−Ｉによって誘導される細胞増殖を、インビボ及びインビトロにおいて大いに阻害し得ることを証明するものであった。
【０１９０】
インビトロの選択では、ＭＣＦ−７細胞を接種し、ウシ胎児血清を除去し、次に漸増濃度のＩＧＦ−Ｉ（１ないし５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、最終濃度１０μｇ／ｍｌまで添加された、試験されるべき７Ｃ１０抗体の存在下又は非存在下でインキュベートした。この実験では、市販のαＩＲ３  ＭＡｂを陽性コントロールとし、７Ｇ３  ＭＡｂ（７Ｃ１０と同時に単離され、天然の受容体を弱く認識する（ＦＡＣＳによるＭＦＩは、ＭＡｂ  ７Ｃ１０の２００に比較して５０））を、コントロールアイソタイプとして添加した。細胞増殖は、細胞によるトリチウムチミジンの取込みをβカウンターで追跡することにより推定する。結果は、増殖指数として表わす。図５に提示したデータは、ＩＧＦ１がＭＣＦ−７細胞の増殖を用量依存的に刺激し得ることを示している。陽性コントロールとして使用したＭＡｂ  αＩＲ３は、ＩＧＦ−Ｉによって誘導されるＭＣＦ−７細胞の増殖を完全に阻害する。同様に、ＭＡｂ  ７Ｃ１０は、ＩＧＦ−Ｉによって誘導されたＭＣＦ−７細胞の増殖を有意に阻害する。最後に、アイソタイプコントロールとして用いたＭＡｂ  ７Ｇ３は、予想通りに、ＭＣＦ−７細胞のインビトロの腫瘍細胞増殖に影響なしにうまくいく。
【０１９１】
インビボの選択は、確立された腫瘍モデルにおいて実施した。これを行なうため、ヌードマウスは、マウスモデルにおいて腫瘍を得るために不可欠な徐放性エストロゲンの皮下移植を受けた。エストロゲンの移植の２４時間後、５．１０６のＭＣＦ−７細胞を、マウスの右側腹部の皮下に移植する。この細胞移植の５日後には、腫瘍は測定可能であり、６匹のマウスからなるバッチがランダムに形成される。マウスの処置は、週当たり２回、５ないし６週間にわたり、２５０μｇ／１回用量／マウスの用量で実施する。コントロール群では、マウスを、マウスコントロールアイソタイプと同様に処理する。図６Ａに提示した結果は、抗体７Ｃ１０により誘導される、非常に有意な腫瘍増殖阻害を示している。通常はＩＧＦ１の受容体のドメインの参照として用いられ、エストロゲン依存性の腫瘍の増殖に対し何らインビボで活性をもたないことが知られる、αＩＲ３について得られるデータを参照した場合、この活性は特に予想外である（図６Ｂ参照）。同様に、マウスＭＡｂ  １Ｈ７由来の組換え抗体ｓｃＦｖ−Ｆｃで得られた結果に比較して（図６Ｃ参照）、ＭＡｂ  ７Ｃ１０は、ＭＣＦ−７細胞の増殖のインビボでの阻害においてはるかに効力がある。
【０１９２】
実施例４
ヒト肺癌細胞系におけるＭＫ−０６４６及びリダフォロリムスの効果
要約：併用が提案された根拠は、ＭＫ−０６４６及びリダフォロリムスの各々が、組合された場合に、ＰＩ３キナーゼシグナリング経路を介して発癌シグナリングを阻害することにより作用すること、及び２つが組合された状態では、いずれかの薬剤が単独で作用するよりも有効な経路の阻害をもたらすことを示唆する観察に基づいている。また、カオ（Ｃａｏ）ら著、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、２００８年も参照。
【０１９３】
手短に言えば、ＭＫ−０６４６（これは、ＩＧＦ１Ｒを標的とするモノクローナル抗体である）、及び、リダフォロリムス（これは、ｍＴＯＲ阻害剤であり、またラパマイシン類似体である）は、各々、肺癌の治療用に現在開発中である。ラパマイシン類似体による治療は、ＡＫＴのリン酸化により測定される、ＡＫＴシグナリングのアップレギュレーションをもたらす。リダフォロリムスによるｍＴＯＲの阻害は、腫瘍増殖停止を誘導し得るが、ＩＲＳ−１により媒介されるネガティブフィードバックループを無効にし、結果としてＡＫＴを活性化し、このことがその抗腫瘍活性の低減に関連づけられてきた。ＡＫＴの、このフィードバック活性化は、ＩＧＦ１Ｒシグナリング経路によって媒介される。最近の臨床研究は、このフィードバックメカニズムによるＡＫＴの活性化が、ラパマイシンを処置された患者におけるより短い進行期間（ｓｈｏｒｔｅｒ  ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）に関連づけ得ることを示唆している（クラフェシー（Ｃｌｏｕｇｈｅｓｙ）ら著、「ＰＬｏＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、２００８年）。さらに、ｍＴＯＲは、ＭＫ−０６４６の効力の重要なエンハンサーであると考えられ、したがって、リダフォロリムスをＭＫ−０６４６と併用することでＡＫＴのこのフィードバック活性化を阻止することが、ＰＩ３Ｋ経路の阻害、並びにＭＫ０６４６の抗腫瘍活性を増強するために有益り得る。併用が提案された根拠は、一部は、上記の観察に基づいている。この可能性を研究するため、本発明者らは、提案された組合せを、一群の肺癌細胞系において検査した。本明細書において以下に詳述されるのは、ＭＫ−０６４６とリダフォロリムスとを含んでなる併用治療がＰＩ３Ｋ経路の阻害及び細胞増殖を有意に増強するという仮説を支持するものである。同様に、提案された組合せは、エルロチニブ抵抗性、ＫＲＡＳ突然変異肺癌異種移植モデルにおいて、抗腫瘍活性の増強を実証した。
【０１９４】
（Ａ）ＭＫ−０６４６＋リダフォロリムス併用は、ＰＩ３Ｋ経路標的化を増強する：
方法：すべてのＮＳＣＬＣ細胞系は、ＡＴＣＣから入手し、１０％  ウシ胎児血清（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））と共に、ＲＰＭＩ  １６４０中に維持した。ウエスタンブロット分析では、細胞からの全タンパク質溶解物を、６ウエルプレート中で培養し、リダフォロリムス（１０ｎＭ）若しくはＭＫ−０６４６（１０ｎｇ／ｍｌ）のいずれかで、又は組合せて４時間処置し、ＳＤＳゲルローディング色素（インビトロジェン）中に採取した。サンプルは、指示された全抗体又はホスホ特異抗体で、次に二次抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ＣＳＴ）でウエスタンブロットし、次にスーパーシグナル（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ）化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ）とインキュベートした。次いでブロットを、コダック  バイオマックス  ライト  フィルム（Ｋｏｄａｋ  Ｂｉｏｍａｘ  Ｌｉｇｈｔ  Ｆｉｌｍ）に暴露させた。ＥＲＫ、ｐ−ＥＲＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）、ＡＫＴ及びｐ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）、ＩＧＦ１Ｒ  Ｓ６Ｋ＆Ｐ−Ｓ６Ｋ（Ｔ３８９）、ＩＲＳ１＆Ｐ−ＩＲＳ１（Ｓ３０２）、及びアクチンに対する抗体は、ＣＳＴから入手した．細胞周期分析は、Ｈ２１２２細胞にて、指示された化合物（上記参照）による２４時間処理の後に実施した。百万個の細胞を、透過性化し、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で、製造業者による記載の通り染色した（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＃５５０８２５）。ＰＩは、ＤＮＡ及びＲＮＡの双方に結合するため、後者をリボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼＡ）による消化により除去した。フローサイトメトリーにより測定されるＤＮＡ含有量は、細胞周期について有用な情報を示し得る。細胞周期のＧ２及びＭ期にある細胞は、Ｇ０及びＧ１期にあるものの２倍のＤＮＡ含有量をもつ。Ｓ期にある細胞は、これらの両極端の間にあるＤＮＡ含有量をもつ。ＰＩは、フローサイトメーターを使用し、５６２−５８８ｎｍバンドパスフィルタを用いて、橙色の範囲内で検出される。
【０１９５】
分析：リダフォロリムスとＭＫ−０６４６との併用は、ヒト肺癌細胞系で評価されてきた。双方の化合物は、ＰＩ３キナーゼシグナリング経路を介して発癌シグナリングを阻害することにより作用する。本明細書で実施された研究は、２つの薬剤がいずれかの薬剤単独よりもさらに有効な経路阻害をもたらすという他の報告を確認した。ｍＴＯＲ（ＴＯＲＣ１複合体）の阻害が、二次的効果をもたらし、この結果、活性のあるリン酸化型のＡＫＴが生じ、これにより腫瘍細胞の生存が促進されることが先に報告されている。重要なことには、ＭＫ−０６４６によるＩＧＦ１Ｒの阻害は、この効果を阻止する上で有効である。図１は、フィードバックループ現象を例示しており、２つの薬剤の併用が、この効果を打ち消し、発癌性ＰＩ３Ｋ経路の標的化を改善することを示している。ｍＴＯＲ阻害剤は、Ｓ６キナーゼの、及びしたがってタンパク質翻訳の有効な阻害剤である。しかしながら、Ｓ６キナーゼ阻害はまた、ＩＧＦ１Ｒシグナリングを抑制するＳ６キナーゼ（Ｓ６Ｋ）により媒介されるネガティブフィードバックの廃止につながる。このフィードバックループを阻止することの効果は、ＩＧＦ１Ｒシグナリングが高められることであり、活性のあるリン酸化型のＡＫＴ（ＡＫＴ−Ｐ）のレベルの上昇につながり、これにより腫瘍生存が駆動される。リダフォロリムスに類似しているラパログ（ｒａｐａｌｏｇｕｅ）ＲＡＤ００１による患者の治療は、結果としてＡＫＴ−Ｐの上昇をもたらす（オーライリー（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ，Ｋ．Ｅ．）ら著、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、２００６年、図１Ｂ）。ある研究者らは、このことが、ある状況において単一の薬剤として使用した場合の化合物の有効性を限定し得ることを示唆してきた（クラフェシー（Ｃｌｏｕｇｈｅｓｙ）ら著、「ＰＬｏＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、２００８年）。この効果がＩＧＦ１Ｒ活性に依存すると考えられることから、本発明者らは、ｍＴＯＲを、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤であるＭＫ−０６４６と組合せて使用することを提案した。今日までのところ、収集されたデータは先の知見と一致する。データは、非小細胞肺癌細胞系Ｈ２１２２を、リダフォロリムスとＭＫ−０６４６との組合せと共に同時治療することが、シグナリングの阻止において、いずれかの薬剤単独よりもさらに有効であり（図１Ｃ、右）、Ｓ６Ｋのリン酸化（リダフォロリムスによる）及びＡＫＴリン酸化（ＭＫ−０６４６による）の双方を妨げることを示唆している。併用はまた、細胞周期阻害及びこれらの腫瘍細胞のインビトロの生存の阻害においても、単一の薬剤よりもさらに有効である。併用によるＨ２１２２腫瘍細胞系の治療は、活発に分裂している細胞のパーセントの低減、及び死んだか又は死にかけている細胞の増加をもたらした（図１Ｄ）。
【０１９６】
（Ｂ）リダフォロリムス＋ＭＫ−０６４６併用は、インビトロの効力を増大する。
ＭＫ−０６４６若しくはリダフォロリムス又は組合せの効力を評価するため、本発明者らは、軟寒天アッセイを用いて、一群中の肺腫瘍細胞系において、これらの阻害剤の存在下でアンカレッジ（ａｎｃｈｏｒａｇｅ）非依存性増殖を評価した。コロニー形成アッセイは、補充ＩＧＦの不在下で実施した。ＭＫ−０６４６若しくはリダフォロリムス又は組合せの効果は、９つの細胞系（５つの突然変異−ＫＲＡＳ；４つのｗｔ−ＫＲＡＳ）で評価した。ＭＫ−０６４６単一薬剤の感受性は、１つのＫＲＡＳ突然変異細胞系（Ｈ２３）及び３つのＫＲＡＳ野生型細胞系において観察された（図２）。ＩＧＦ１Ｒの発現が低いＨ１７０３は、ＭＫ−０６４６には抵抗性であった。高レベルのＩＧＦ−１Ｒをもつ２つのＫＲＡＳ突然変異細胞系（Ａ５４９＆Ｈ２１２２）では、単一薬剤の活性は限られたものにすぎなかったのに対し、併用は有意な増殖阻害を示した。一群中のほぼ全体の細胞系が、併用の利点を示した。ＫＲＡＳ状態と、併用に対する応答との有意な相互関係は何ら観察されなかった。
【０１９７】
方法：軟寒天アッセイは、９６ウエルガラス底プレート（ＭａｔｒｉＣａｌ）において行なった。細胞は、１４％ＦＢＳ及び０．３％（ｗ／ｖ）シープラーク（ＳｅａＰｌａｑｕｅ）アガロース（Ｌｏｎｚａ  Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｉｎｃ）を補充したＲＭＰＩ１６４０  １００μＬ中で、各ウエル当たり３，０００−９，０００細胞の濃度で、０．８％アガロースを補充した同じ培地からなるボトムレイヤーの上に播種した。化合物は、アガロースを固化させた後に、補充した培地１００μｌ中で添加した。細胞は、７−１４日間インキュベートした後、ラバセル（ＬａｖａＣｅｌｌ）（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ）で一晩染色した。コロニーは、Ｉｓｏｃｙｔｅ（登録商標）レーザースキャニングサイトメータを用いて定量化した。ＭＫ−０６４６の、単独又は標準的な治療薬剤と組合せての、アンカレッジ非依存性増殖阻害能を、軟寒天コロニー形成アッセイにおいて評価した。ＲＴＫ状態は、全タンパク質溶解物中で、Ｐ−ＲＴＫアレイ（Ｒ＆Ｄ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、製造業者による記載の通り評価した。ＫＲＡＳにおける活性化突然変異は、公開された癌ゲノムデータベース（Ｓａｎｇｅｒ）から同定した。
【０１９８】
（Ｃ）Ａ５４９肺異種移植モデルの組合せにおける、ＭＫ−０６４６及びリダフォロリムスの併用の利点。
リダフォロリムス及びＭＫ−０６４６の組合せを、Ａ５４９突然変異−ＫＲＡＳ異種移植モデル（Ａ５４９  ｍｕｔａｎｔ−ＫＲＡＳ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌ）において評価した。ＭＫ−０６４６が、０．２又は２ｍｐｋのいずれかで、リダフォロリムス（０．１ｍｐｋ）と組合せて投薬された場合、有意な抗腫瘍活性を示した。もっとも、ＭＫ−０６４６を２０ｍｐｋで、リダフォロリムス（０．１ｍｐｋ）と組合せて投薬すると、いずれかの薬剤単独に対し、統計的な有意性をもって腫瘍退縮を示した（図３）。同様の結果は、腫瘍重量を群間で比較した場合に観察された。ＭＫ−０６４６（２０ｍｐｋ）をリダフォロリムス（０．１ｍｐｋ）と組合せて投薬されたマウスでの腫瘍重量には、いずれかの薬剤単独に対し、統計的に有意な減少があった（図３）。これらのデータを合わせれば、リダフォロリムスと組合された低い用量のＭＫ−０６４６は腫瘍静止状態を誘導するのに対し、リダフォロリムスと組合された高用量のＭＫ−０６４６（２０ｍｐｋ）は、腫瘍退縮を引き起こし得ることの、強力なインビボの証拠を提供する。また、腫瘍重量の有意な減少も、この組合せにおいて観察された（図４）。このモデルにおけるエルロチニブによる処置は、結果として何ら容易に評価し得る腫瘍増殖抑制を生じなかった（図５）。このモデルでのエルロチニブによる効力の欠如は、ＫＲＡＳにおける活性化突然変異がこのモデルに存在するとすれば、驚くべきことではない。結果として、データは、エルロチニブ耐性のＮＳＣＬＣモデルにおける、ＭＫ−０６４６＆リダフォロリムス併用の利益を証明している。
【０１９９】
方法：２．５ｘ１０６のＡ５４９ヒトＮＳＣＬＣ細胞を、４−６週齢の無胸腺Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎｌｎｕマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右側腹部の皮下に注射した。腫瘍が約３００ｍｍ３のサイズ（長さ＊幅＊幅＊０．５）に達した時、マウスを処置群に無作為化した。マウス（ｎ＝８／群）に、ビヒクルを週１回３週間にわたり（ｑｗｋｘ３）（２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５％  ＰＳ８０  ｐＨ＝６）、又は０．２若しくは２若しくは２０ｍｐｋのＭＫ−０６４６を腹腔内に、ｑｗｋｘ３で、或いはリダフォロリムス（０．１ｍｇ／ｋｇ）を、又はＭＫ−０６４６と組合せて、３週間にわたり投薬した。動物を秤量し、腫瘍体積を、実験の間週２回、及び終了時に、キャリバーで測定した。腫瘍重量は、終了時に測定した。２１日目、動物をＣＯ２窒息により犠牲にした。マウスは、最後の投薬の２４時間後に犠牲にした。犠牲にする時点で、組織サンプルを収集し、加工した。
【０２００】
処理の終了時の相対腫瘍体積を、以下の表に表わす。負の値は、腫瘍の退縮を表わす。単一薬剤に比較して、有意な腫瘍増殖阻害が、全てのＭＫ−０６４６＆リダフォロリムスの併用群において観察された。
【０２０１】
【表２】
0005719347.tif 000008
【０２０２】
実施例５
ＭＫ−０６４６エンハンサースクリーン
要約：多くの一連の証拠が、ＩＧＦ１Ｒシグナリングの過剰活性化が、腫瘍進行と関連することを示唆している。ＩＧＦ１Ｒ及びそのリガンドＩＧＦ１の双方は、しばしば、ヒト癌において過剰発現されており、不良な予後に関係づけられている（ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）及びイー（Ｙｅｅ）、２００５年）。さらに、ＩＧＦ１又はＩＧＦ１Ｒのいずれかの強制された過剰発現は、動物組織において、自然発生腫瘍の形成をもたらす（ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら、２００６年）。対照的に、ＩＧＦ１Ｒノックアウトマウスから単離された線維芽細胞腫が、発癌遺伝子の過剰発現による形質転換に抵抗性であることから、低減したＩＧＦ１Ｒ機能は、腫瘍発生を防止し得る（セル（Ｓｅｌｌ）ら、１９９４年）。
【０２０３】
ＩＧＦ−１Ｒ特異的抗体（ＭＫ−０６４６）を用いて、併用療法プロトコールにおいての有効性を増強し得るかどうかを確認するため、レンチウイルス媒介ＲＮＡｉスクリーンを使用した。スクリーンの結果、３７の標的が同定され、そのサイレンシングは、ＭＫ−０６４６に対する腫瘍細胞の感受性を有意に増強した。これらのエンハンサーの中には、ＰＩ３キナーゼシグナリングカスケードの４つの別個のポジティブレギュレータ（ＰＩ３ＫＣＡ、ＰＤＰＫ１、ＡＫＴ２、及びＦＲＡＰ１／ｍＴＯＲ）を標的とするｓｈＲＮＡがあった。対照的に、その経路のネガティブレギュレータであるＰＴＥＮを標的とするｓｈＲＮＡは、ＭＫ−０６４６に対する抵抗性を示した。これらのデータを合わせれば、ＰＴＥＮについてネガティブな腫瘍は、ＭＫ−０６４６に対し抵抗性を示し得る。さらに、データは、ｍＴＯＲｉ又はＡＫＴｉ又はＰＩ３ＫｉなどのＰＩ３Ｋ経路を標的とする阻害剤を、ＭＫ−０６４６と組み合せることが、ＭＫ−０６４６応答を実際に強化し得ることを示唆する仮説を支持している。
【０２０４】
結果：本発明者らは、レンチウイルス媒介ＲＮＡｉスクリーニングを適用して、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）ｍａｂ、特にＭＫ−０６４６に対する腫瘍細胞感受性のキナーゼレギュレータを同定した。この目的に向けて、４８０の別個のヒトキナーゼを標的とする１４３９のレンチウイルスｓｈＲＮＡベクターをスクリーンして、ＭＫ−０６４６の抗腫瘍細胞活性の強力なエンハンサーを同定した。
【０２０５】
種々の濃度のＭＫ−０６４６（２００μｇ／ｍＬないし３００ｎｇ／ｍＬ）を用いた９つの別個のスクリーンを、ＭＫ−０６４６及びキナーゼ標的レンチウイルスｓｈＲＮＡベクターを用いて実施した。スクリーンから、ＭＫ−０６４６エンハンサーの上位３％を代表する３７のコンセンサスヒットのリストが同定された。図１０参照。これらのヒットのうち顕著なものは、２つの別個のベクター、ＰＤＰＫ１，ＡＫＴ２、及びＦＲＡＰ１／ｍＴＯＲによる、標準ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路−ＰＩＫ３ＣＡの多数のメンバーを標的とするｓｈＲＮＡベクターであった。スクリーンからの２つの別々のコンセンサスヒット（ＣＣＲＫ及びＮＥＫ８）は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路のレギュレータとして、既にｓｉＲＮＡスクリーンにおいて同定されていた（ブレイス（Ｂｒａｃｅ）ら、２００６年参照）。またＭＫ−０６４６エンハンサーのリストの中で注目すべきであるのは、Ｒａｓシグナリングカスケードの２つのメンバーを標的とするｓｈＲＮＡであった（２つの別個のベクターによるＢ−Ｒａｆ及び２つの別個のベクターによるＭＡＰ２Ｋ１）。全てにおいて、上位３７のｓｈＲＮＡヒットのうちの１１は、ＩＧＦ１Ｒ活性化に続いて活性化されるものと仮定された、２つの確立されたシグナリングカスケードのメンバーであるキナーゼを標的とする。図６参照。
【０２０６】
ＨＴ２９結腸癌細胞によるコロニー形成に基づく、独立した増殖アッセイを実施して、上記で言及されたスクリーニングヒットを確認した。
【０２０７】
方法／分析−図６：新鮮なベクターによる感染に続き、細胞を５用量力価のＭＫ−０６４６に暴露し、次に９日間にわたりコロニー形成させた。３７のｓｈＲＮＡヒットの各々について、ＭＫ−０６４６に対する感受性の増強能を、空のベクターコントロール、並びにｓｈＲＮＡキナーゼベクターセットから無作為に選択された３つの「非ヒット」（”ｎｏｎ−ｈｉｔ”）ｓｈＲＮＡベクターと比較した。さらに、ＰＩ３Ｋ経路の多くのポジティブエフェクターがヒットとしてスコアされたことから、脂質ホスファターゼＰＴＥＮ（ＰＩ３Ｋシグナリングの主要なネガティブレギュレータ）を効率的にサイレンスさせる別のベクターもまた試験した。ＰＴＥＮは、確立した腫瘍サプレッサーであり、ＰＩ３Ｋ活性の生成物を脱リン酸化することによって作用し、それ故下流キナーゼの活性化を妨げる。ベクターなし（ＭＫ−０６４６単独）及び処置なし（ウイルスなし及び薬剤なし）のコントロールもまた実施した。
【０２０８】
方法：４８０の個別の遺伝子、主としてキナーゼ、を標的とするレンチウイルスは、１４３９のレンチウイルスｓｈＲＮＡベクター（Ｋａｌｙｐｓｉｓ  ｌｉｂｒａｒｙ，ＧＮＦ）を、２９３Ｔ細胞において、インビトロジェン・レンチウイルスパッケージングシステム（Ｖｉｒａｐｏｗｅｒ  ｐａｃｋａｇｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ，Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ）により推奨されるパッケージングベクターと同時トランスフェクトすることにより、パッケージし生成した。ＨＴ−２９細胞（ｎ＝５００）を、３８４ウエルプレートにて、１０％  ＦＢＳ（ＤＭＥＭ中）の存在下で培養した。翌日、細胞をパッケージされたウイルス１０ｕＬで感染させた。３日目、培地を除去し、細胞を１日回復させた。４日目、細胞をＭＫ−０６４６（２００μｇ／ｍＬないし３００ｎｇ／ｍＬ）で処置した。８日目、細胞増殖の量を、既に記載された通りにアラマーブルーで染色することにより評価した（クリングホッファー（Ｋｌｉｎｇｈｏｆｆｅｒ）ら、「Ａｓｓａｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ」、２００８年）。
【０２０９】
方法−図７：ＨＴ２９細胞は、１５００細胞／ウエルで、６ウエルプレートに播種し、ウイルスに１６時間暴露した。ウイルスを除去し、薬剤を含有しないか又はＭＫ−０６４６の希釈物（０．０５、０．１、０．５、１、又は１０ｕｇ／ｍｌ）を含有する新鮮な培地で置き換えた。ＭＫ−０６４６は、アッセイの過程にわたり３日ごとに交換した。プレートは、薬剤添加の９日後にクリスタル紫で染色した。コロニー数及び面積は、ＡｌｐｈａＩｍａｇｅｒを用いたイメージングにより計算した。
【０２１０】
無作為に選ばれた３つのｓｈＲＮＡベクターの、空のベクター及びベクターなしのコントロールとの比較は、腫瘍細胞のＭＫ−０６４６に対する感受性に何ら差異を示さなかった。対照的に、このアッセイにおいて評価し得た２０スクリーニングのうち１１は、腫瘍細胞増殖のＭＫ−０６４６阻害に２倍以上の増強を生じる結果となった。図７参照。
【０２１１】
定量的リアルタイムＰＣＲ分析は、これらのベクターの１０／１１が、その標的を＞５０％、また７／１１が＞７０％サイレンスさせたことを示し、観察された増強が意図されたサイレンシングによるものであったことを示唆している−図１０。同様に、このアッセイの使用により、３７のｓｈＲＮＡヒットのうち１７が、薬剤の不在下で細胞毒性を生じる結果となり、ＭＫ−０６４６感受性化の評価が妨げられた。これらの毒性ｓｈＲＮＡは、細胞が感染に続き、１０用量力価のＭＫ−０６４６に暴露されたことを除いて、プライマリースクリーンに類似の短時間（７２時間）のアラマーブルーアッセイを用いて分析した。このアッセイの結果として、さらなる８つのｓｈＲＮＡが同定され、ＭＫ−０６４６に対する腫瘍細胞感受性の有意な（ｐ＜０．０５）増強を実証した。図１１参照。
【０２１２】
図７及び１０を参照すれば、ＩＧＦ媒介性の腫瘍増殖におけるＰＩ３Ｋ経路シグナリングの主要な役割と一致して、コロニーアッセイによる上位３つのＭＫ−０６４６エンハンサーは、ＰＩ３Ｋ、ＦＲＡＰ１／ｍＴＯＲ、及びＮＥＫ８を標的とするベクターであった（これら３つのベクターは、それぞれ８６％、８０％、及び７０％の標的サイレンシングをもたらした）。
【０２１３】
さらに、７２時間のアラマーブルーアッセイによる最強のエンハンサーは、推定上のＰＩ３Ｋ経路レギュレータＣＣＲＫを標的とするベクターであった（６４％の標的サイレンシング：示さず）。反対に、ＰＴＥＮを標的とするベクターに暴露された細胞は、ＭＫ−０６４６の抗増殖効果に対し抵抗性であり、処置されなかった細胞と同様の増殖を示した（図６）。Ｒａｓ経路のメンバーを標的とするベクター、ＭＡＰ２Ｋ１及びＢ−ｒａｆ（それぞれ９７％及び７５％のサイレンシング）もまた確認された。図１０参照。ＰＩ３Ｋ及びＲＡＳシグナリングカスケードのメンバーの間に広範囲のクロスレギュレーションが存在するとすれば、ＭＡＰ２Ｋ１及びＢ−ｒａｆ  ｓｈＲＮＡの感受性効果は、一部は、ＰＩ３Ｋシグナリングのクエンチングによることが仮定される。
【０２１４】
今日までのところ、同じ遺伝子を標的とする２つのｓｈＲＮＡが、プライマリースクリーンで増強を証明する場合（ＰＩＫ３ＣＡ、Ｂ−ｒａｆ、ＭＡＰ２Ｋ１、ＢＵＢ１、及びＣＳＮＫ１Ａ１）、２つのｓｈＲＮＡの一方は確認されるのに対し、他方は薬剤の不在下で実証された毒性をもつように見える。第２のｓｈＲＮＡの確認には、より短いアッセイフォーマットが必要であってよい。
【０２１５】
ＰＴＥＮの結果をさらに支持するため、アッセイを、ＰＴＥＮ  ｓｈＲＮＡの安定なインテグレーションを内部にもつ細胞上で実施した。これらを、ベクターコントロール、又はＣＳＫ及びＭＡＰ４Ｋ５を標的とするｓｈＲＮＡ、を安定に発現する細胞に対し比較することを開始した。ＣＳＫ及びＭＡＰ４Ｋ５を標的とするベクターは、プライマリースクリーンからのコンセンサスヒットであったが、ＭＡＰ４Ｋ５のみをコロニーアッセイで確認した。新鮮なウイルスの適用の結果と同様に、ＰＴＥＮ  ｓｈＲＮＡを発現する細胞系は、コロニーアッセイによってＭＫ−０６４６抵抗性を示したのに対し、ＣＳＫ  ｓｈＲＮＡを発現する系は、ベクターコントロールと同様に応答し、ＭＡＰ４Ｋ５  ｓｈＲＮＡを発現する細胞は、薬剤に対し感受性化された。図８参照。
【０２１６】
方法−図８：ＰＴＥＮ、ＣＳＫ、及びＭＡＰ４Ｋ５を標的とする安定なインテグレーションｓｈＲＮＡを内部にもつＨＴ２９細胞を、１５００細胞／ウエルで、６ウエルプレートに播種した。翌日、何ら薬剤を含有しないか、又は０．０１、０．１、１、１０、又は１００ｕｇ／ｍｌのＭＫ−０６４６を含有する新鮮な培地を、細胞に与えた。ＭＫ−０６４６は、アッセイの過程にわたり３日ごとに交換した。プレートは、薬剤添加の９日後にクリスタル紫で染色した。コロニー増殖は、上記記載の通り定量化した。ＭＫ−０６４６に対する応答は、上記で分析された各レンチウイルスベクターへの急性暴露に続いて観察されたものと同様であった。
【０２１７】
データ及び付随する観察から、ＰＴＥＮに機能喪失型突然変異のある腫瘍をもつ患者は、ＭＫ−０６４６による処置に対し不十分に応答し得ることが示唆される。かかる突然変異は癌において一般的であることから、本発明者らは、ＰＩ３Ｋを阻害することによりＭＫ−０６４６抵抗性細胞が薬剤に対し再感受性化され得るかどうか判定することを試みて、追加のアッセイを実施した。
【０２１８】
方法−図９：ベクターコントロールの安定な発現があるか（赤色の線）（ＭＫ−０６４６に感受性）、又はＰＴＥＮ  ｓｈＲＮＡの安定な発現がある（青色の線）（ＭＫ−０６４６に抵抗性）、ＨＴ２９細胞を、ＰＩ３Ｋ、ＰＤＰＫ１、又はＭＥＬＫを標的とするｓｈＲＮＡベクターで感染させた。（Ａ）図６に示した本発明者らのアッセイと同様に、ＰＩ３Ｋ又はＭＥＬＫを標的とするｓｈＲＮＡによる、ベクターコントロールＨＴ２９細胞の感染は、結果としてＭＫ−０６４６に対し、各々強い及び中程度の感受性化を生じるが、一方ＰＤＰＫｌを標的とするｓｈＲＮＡは何ら効果をもたない。（Ｂ）ＭＥＬＫ又はＰＤＰＫ１による安定なＰＴＥＮ、ｓｈＲＮＡ  ＨＴ２９細胞の感染は、ＰＴＥＮ欠失により引き起こされるＭＫ−０６４６抵抗性の逆転には、何ら影響をもたない。対照的に、ＰＩ３Ｋ  ｓｈＲＮＡベクターによる感染は、この抵抗性を完全に逆転させる。
【０２１９】
分析：本発明者らの先の結果に一致して、ＰＴＥＮ  ｓｈＲＮＡを発現する細胞は、ベクターコントロールを発現する細胞に比較して、ＭＫ−０６４６に抵抗性であった。図９Ａを参照すれば、本発明者らの先の実験と一致して、ＰＤＰＫ１ではないがＰＩ３Ｋ又はＭＥＬＫのいずれかを標的とするベクターによるコントロール細胞の感染は、細胞をＭＫ−０６４６に対し感受性化した。ＰＴＥＮ欠失細胞では、ＭＥＬＫ  ｓｈＲＮＡによる感染は、これらの細胞がＭＫ−０６４６抵抗性のままであるため、何ら強い影響はなかった。ＰＩ３Ｋを標的とするｓｈＲＮＡによる感染は、しかしながら、ＭＫ−０６４６の効果に対し、ＰＴＥＮ  ｓｈＲＮＡ系を再感受性化し得た−図９Ｂ。したがって、ＰＩ３Ｋを介したシグナリングが、ＩＧＦ１Ｒ媒介性の腫瘍細胞増殖にとり律速となるように考えられる。この観察は、過剰活性ＰＩ３Ｋシグナリングをもつ患者は、抗ＩＧＦ−１Ｒ薬剤による単一療法に対し不応答性でありえる、ｍＴＯＲなどのＰＩ３Ｋ経路のメンバーの阻害剤による併用療法は、実際に有効であり得ることを示唆している。
【０２２０】
本発明の多数の実施態様を記載してきたが、基本的な例は、本発明によって包含される別の実施態様を提供するべく、変更されてもよい。それ故、本発明の範囲は、単なる例として記述された具体的な実施態様よりもむしろ、添付の特許請求の範囲によって提起されるべきであることが理解されるべきである。
【図１−Ａ】
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【図１−Ｂ】
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【図１−Ｃ】
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【図１−Ｄ】
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【図２−Ａ】
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【図２−Ｂ】
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【図３−Ａ】
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【図３−Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−Ａ】
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【図７−Ｂ】
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【図８】
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【図９−Ａ】
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【図９−Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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