(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上のスタチンを含む紅麹米からの植物抽出物の調製方法であり、
前記紅麹米から、１つ以上の毒素を除去する工程と、
８〜３６時間、２０〜６０℃の温度で、前記紅麹米を、極性化合物が可溶である水にさらす工程と、
前記水を除去することにより、前記極性化合物を前記紅麹米から除去し、植物抽出物を得る工程と、を含み、
前記植物抽出物は、１つ以上のスタチンを含み、かつ、前記紅麹米中に存在する全極性化合物の３０重量％未満の極性化合物を有し、
前記紅麹米を、前記１つ以上の毒素を溶解するために選択された溶剤にさらす工程によって、前記１つ以上の毒素が前記紅麹米から除去される、調製方法。
【請求項２】
前記溶剤のｐＨは、５〜７未満である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記溶剤は、アルカリ金属の塩を含む請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記塩は、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウムからなる群から選択される請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記溶剤は、さらに、前記１つ以上の毒素を溶解するための有機酸を含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記有機酸は、カルボン酸である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記毒素は、シトリニンを含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記植物抽出物および残った紅麹米を有機溶液にさらし、液体の植物抽出物を得る工程をさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記有機溶液は、アルコール、エーテル、ハロホルム、ケトンおよびアルキレングリコールからなる群から選択される請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記有機溶液は、水と混和性である有機化合物を含む請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記有機溶液は、水溶剤中に少なくとも５０％の有機化合物を含む請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記有機溶液は、水溶剤中に少なくとも７０％の有機化合物を含む請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
残った紅麹米を前記液体の抽出物から分離する工程と、
前記液体の抽出物の溶剤を蒸発させ、乾燥した植物抽出物を形成する工程と、をさらに含む請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記１つ以上のスタチンは、ロバスタチン、シムバスタチン、プラバスタチン、メバスタチンからなる群から選択される自然に存在するスタチンである請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
１つ以上のロバスタチンは、１つ以上のモナコリンから選択される請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記１つ以上のモナコリンは、モナコリンＫ、モナコリンＪ、モナコリンＬおよびモナコリンＭからなる群から選択される請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記モナコリンは、モナコリンＫである請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記モナコリンＫは、前記植物抽出物中に抽出物（ｇ）あたり０．２ｍｇ〜１．０ｍｇの量で存在する請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも８０％の極性化合物を前記紅麹米から除外し、前記植物抽出物を得る請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも９５％の極性化合物を前記紅麹米から除外し、前記植物抽出物を得る請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は全体としてスタチンを含む植物抽出物に関する。本発明はまた、このような抽出物を得る方法およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ハーブサプリメントは周知であり、従来の食事療法および医療を補うために使用されてきた。典型的に、このようなサプリメントは、健康および医療上の利点（例えば、疾病の予防および治療）をもたらすと信じられている抽出物の形態である。
【０００３】
抽出物の製造において使用される多くの植物は、ヒトの健康の維持において有用な化学物質を合成することが知られる。しかし、このような抽出物の使用の増加に関わらず、植物と薬物との相互作用についての理解は、未だ初期段階にある。このような作用についての理解が欠如していると、生命を脅かす、または、最悪の場合には死につながり得る有害反応をもたらす可能性がある。
【０００４】
さらに、このような抽出物の正確な組成は十分に解明されておらず、そのため、多くの植物抽出物は、被験者における薬物動態に有害に影響し得る化合物を含む可能性がある。
【０００５】
例えば、一般的な植物抽出物は紅麹米である。この抽出物は、食品の着色、日本酒中の成分等として多くの用途を有する。近年では、紅麹米抽出物が、脂質およびコレステロールのレベルを低下させるために使用されている。しかし、紅麹米の公知の抽出物は、顕著な量の夾雑物を含む。
【０００６】
従って、これらの夾雑物のうちの１つ以上の除去は、抽出物の正確な量についての消費者からの信頼の増大、および監督機関への抽出物の組成に関する正確なデータの提供の両方において有利である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記の欠点のうち１つ以上を克服または少なくとも改善する、減少した量の夾雑物を有する植物抽出物の提供に対するニーズがある。
【０００８】
被験者における薬物の薬物動態に対する副作用を有する減少した量の夾雑物を含む植物抽出物を提供するニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第１の態様によれば、１つ以上のスタチンを含み、かつ、極性化合物を実質的に含まない植物抽出物が提供される。
【００１０】
第２の態様によれば、１つ以上のスタチンを含み、かつ、被験者における薬物の薬物動態に影響する極性化合物を実質的に含まない植物抽出物が提供される。
【００１１】
第３の態様によれば、極性化合物を植物材料から除去する工程を含み、上記植物材料は、１つ以上のスタチンを含む抽出物の調製方法が提供される。
【００１２】
第４の態様によれば、被験者における薬物の薬物動態に影響する１つ以上の極性化合物を、上記植物抽出物から除去する工程を含む植物抽出物の調製方法が提供される。
【００１３】
有利には、植物抽出物からの１つ以上の極性化合物の除去は、有害な、または不必要な薬物と草本との相互作用を実質的に減少させる。
【００１４】
本発明の方法のさらなる利点は、植物抽出物中の一貫した有効量の１つ以上のスタチンが提供されることである。
【００１５】
第５の態様によれば、第１の態様または第２の態様の植物抽出物を薬理学的に許容できる担体とともに含む組成物が提供される。
【００１６】
第６の態様によれば、第１の態様または第２の態様の植物抽出物を薬理学的に許容できる担体とともに含む投与形態が提供される。
【００１７】
第７の態様によれば、高脂血症の治療または予防のための薬物の製造における、第１の態様または第２の態様の植物抽出物の使用が提供される。
【００１８】
第８の態様によれば、被験者におけるコレステロールの減少のための薬物の製造における、第１の態様または第２の態様の植物抽出物の使用が提供される。
【００１９】
第９の態様によれば、第１の態様または第２の態様の植物抽出物を使用説明書とともに含む包装された投与形態が提供される。
【００２０】
第１０の態様によれば、被験者における３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素の阻害のための薬物の製造における、第１の態様または第２の態様の植物抽出物の使用が提供される。
【００２１】
第１１の態様によれば、
１つ以上の毒素を植物材料から除去する工程と、
１つ以上の極性化合物を植物材料から除去する工程と、
植物材料から抽出物を形成する工程と、を上記の順序で、含む植物抽出物の調製方法が提供される。
【００２２】
添付の図面は、開示された実施形態を示し、開示された実施形態の原理を説明する役割を果たす。しかし、図面は、説明の目的のみで示され、本発明を制限する規定として示されたものではないことが理解されるはずである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１ａは、極性化合物を除去する前の、紅麹米抽出物のＨＰＬＣプロファイルを示す。図１ｂは、本発明の方法に従って得た、極性化合物を除去した後の、乾燥した紅麹米抽出物のＨＰＬＣプロファイルを示す。
【図２】紅麹米抽出物を使用したチトクロムＰ４５０阻害試験の結果を示す。
【図３】陰性対照（ＮａＶＯ４）およびＰ−糖タンパク質に対する極性化合物の活性の結果を示す。
【図４】紅麹米抽出物を使用したＰ−ｇｐ活性アッセイの結果を示す。
【図５】ベラパミルによる、紅麹米抽出物を使用したＣａＣＯ−２吸収試験の結果を示す。
【図６】ベラパミルによる、紅麹米抽出物を使用した動物の吸収試験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
＜定義＞
下記は、本願明細書の理解において有用であり得るいくつかの定義である。これらは、一般的な定義として意図され、本発明の範囲がこれらの用語のみに制限されるべきでは全くないが、下記についてのよりよい理解のために提示される。
【００２５】
別段の記載がない限り、または特にことわりのない限り、本発明の整数、工程、または要素について、単数形で本願明細書に記載される整数、工程または要素は、単数形および複数形の整数、工程または要素を明確に両方含む。
【００２６】
本願明細書全体を通して、別段の記載がない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、記載された工程もしくは要素もしくは整数、または工程もしくは要素もしくは整数の群を含むことを意味するが、他の工程もしくは要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群を除外するものではないことが理解されるだろう。従って、本願明細書における用語「含んでいる」とは、「主に含んでいるが、必ずしも単独で含んでいるわけではない」ことを意味する。
【００２７】
当業者は、本願明細書に記載された本発明が、特に記載されたもの以外の変形および改変を許容することを理解するだろう。本発明は、全てのこのような変形および改変を含むことが理解されるはずである。本発明はまた、個別にまたは包括的に本願明細書において参照され、もしくは記載された工程、特徴、組成物および化合物のうちの全て、上記工程もしくは特徴のいずれかおよび全ての組み合わせ、またはいずれか２つ以上を含む。
【００２８】
用語「薬物動態」は、投与された薬剤のヒトまたは動物の身体内における作用を含むように広く解釈されるものとする。特に、この用語は、薬物の吸収、分布、代謝および排泄；作用の発生；効果の維持；生体内変換；薬物の代謝物の排泄の効果および経路を指す。
【００２９】
本願明細書における用語「極性化合物」およびその文法的変異は、全体としてゼロではない双極子モーメントを有する植物抽出物中の化合物（典型的には有機化合物）を指す。
【００３０】
本願明細書における用語「自然に存在する」は、植物材料中に自然に存在する化合物（スタチン等）を指す。
【００３１】
用語「植物材料」は、植物界、真菌界および藻類の全てのメンバーを含むように広く解釈されるものとする。植物材料は、植物材料の固形の塊または抽出溶液を含んでいてもよい。
【００３２】
本願明細書における用語「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」および当該用語の変化形（「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」および「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」等）は、適切な手段による、本発明の化合物または組成物の、生物もしくは表面への接触、適用、送達または提供を含む。
【００３３】
本願明細書における用語「治療」は、どのような手段であれ、疾病状態もしくは症候を治癒し、疾病の確立を予防し、あるいは、疾病もしくは他の望ましくない症候の進行を予防し、妨げ、遅延させ、または逆転させるいずれかおよび全ての使用を指す。
【００３４】
本願明細書における用語「治療有効量」は、所望の治療効果を与える、本願明細書に記載された化合物または組成物の十分であるが無毒性な量を含む。要求される正確な量は、治療される種、被験者の年齢および全体的な状態、治療される症状の重症度、投与される特定の薬剤、投与方法等の要因に応じて、被験者ごとに異なる。従って、正確な「有効量」を特定することはできない。しかし、所定の場合には、適切な「有効量」は、当業者によって、ルーチンの実験法のみを使用して決定され得る。
【００３５】
本願明細書における用語「被験者」は、社会的、経済的にまたは研究上重要な全ての種のヒトおよび個体を含む（ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ、ネコ、イヌ、霊長類（ヒトおよび非ヒトの霊長類等）、げっ歯類、マウス、ヤギ、ウサギおよびトリのメンバーが挙げられるが、これらに限定されない）。
【００３６】
本願明細書で使用される「投与形態」は、治療される個体のための単位投与量として適した物理的に別々な単位を指す。所定量の植物抽出物を含む各単位は、要求される医薬担体とともに所望の治療効果を生じるように算出される。植物抽出物は、有効量で、許容できる投与単位中で、適した薬理学的に許容できる担体とともに、簡便な、かつ効果的な投与のために製剤化されてもよい。組成物が補助的な有効成分を含む場合、投与量は、上記成分の通常の用量および投与方法を参照することによって決定される。
【００３７】
用語「薬理学的に許容できる担体」としては、溶剤、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤等が含まれるように意図される。薬剤的に活性な物質のためのこのような媒体および剤の使用は、当該技術分野で周知である。いずれかの従来の媒体または薬剤が化合物と不適合である場合を除き、治療組成物中におけるその使用、ならびに治療および予防の方法が考慮される。
【００３８】
用語「実質的に」は、「完全に」を除外するものではなく、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、完全にＹを含まないものであってもよい。あるいは、当該組成物は、１〜１０％のＹを依然として含んでいてもよい。必要に応じ、用語「実質的に」は、本発明の定義から除かれる可能性がある。
【００３９】
本願明細書で使用される用語「約」は、製剤の構成成分の濃度について使用される場合、典型的に、記載された値の±５％、より典型的には記載された値の±４％、より典型的には記載された値の±３％、より典型的には記載された値の±２％、さらにより典型的には記載された値の±１％、さらにより典型的には記載された値の±０．５％を意味する。
【００４０】
本願明細書全体にわたって、特定の実施形態は、範囲形式で開示され得る。範囲形式の記載は、単に便宜および簡潔さのためだけのものであり、開示された範囲についての不動の制限として解釈されてはならないことが理解されるはずである。従って、範囲の記載は、特に開示された全ての可能性のある部分範囲、およびその範囲内の個々の数値を含むように解釈されるものとする。例えば、１〜６等の範囲についての記載は、特に開示された部分範囲（例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６等）、およびその範囲内の個々の数字（例えば、１、２、３、４、５および６）を含むように考慮されるものとする。これは、範囲の広さに関わらず適用される。
【００４１】
特定の実施形態はまた、本願明細書において、広く、かつ総括的に記載され得る。一般的な記載の中に含まれる、より狭い種および下位の分類のそれぞれはまた、本記載の一部を形成する。これは、除かれたものが本願明細書に具体的に記載されているかどうかに関わらず、いずれかの対象物を属から除く、条件または否定的な限定を有する実施形態の一般的な記載を含む。
【００４２】
＜任意の実施形態の開示＞
１つ以上のスタチンを含む植物抽出物の代表的、非限定的な実施形態が以下記載される。
【００４３】
植物抽出物は、被験者における薬物の薬物動態に影響する極性化合物を実質的に含まない。
【００４４】
１つの実施態様では、１つ以上のスタチンは、自然に存在するスタチンであり、ロバスタチン、シムバスタチン、プラバスタチンおよびメバスタチンからなる群から選択されてもよい。
【００４５】
好ましくは、１つ以上のロバスタチンは、１つ以上のモナコリンから選択される。好ましい実施形態では、１つ以上のモナコリンは、モナコリンＫ、モナコリンＪ、モナコリンＬおよびモナコリンＭからなる群から選択される。好ましくは、１つ以上のモナコリンは、モナコリンＫおよびモナコリンＪから選択される。最も好ましい実施形態では、モナコリンは、モナコリンＫである。
【００４６】
別の実施態様では、モナコリンＫは、植物抽出物中に、植物抽出物（ｇ）あたり約０．０１〜５００ｍｇ；約０．１〜４００ｍｇ；約０．２〜３００ｍｇ；約０．２〜２００ｍｇ；約０．２〜１００ｍｇ；約０．２〜５０ｍｇ；約０．２〜２５ｍｇ；約０．２〜１０ｍｇ；約０．２〜５ｍｇおよび約０．２〜２ｍｇからなる群から選択される範囲の量で存在する。好ましくは、モナコリンＫは、植物抽出物中に、抽出物（ｇ）あたり０．２ｍｇ〜ｌｍｇの量で存在する。
【００４７】
別の実施態様では、植物抽出物は微生物発酵の生成物である。好ましくは、微生物発酵において使用される微生物は、Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｐｕｒｐｕｒｅｕｓである。あるいは、微生物発酵において使用される微生物は、Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｒｕｂｅｒおよびＭｏｎａｓｃｕｓ  ｐｉｌｏｓｕｓから選択される。
【００４８】
１つの実施態様では、植物抽出物は、イネ科に属する植物から抽出される。
【００４９】
好ましい実施形態では、植物は、トウモロコシ、コメ、コムギ、オオムギ、ソルガム、アワ、カラスムギ、ライムギ、ライコムギおよびソバからなる群から選択される穀類である。
【００５０】
あるいは、植物は、マメ科から選択される。好ましい実施形態では、植物は、インゲンマメ属から選択されるマメである。好ましくは、マメは、Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｐ．ｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐ．ｃｏｃｃｉｎｅｕｓ、Ｐ．ｌｕｎａｔｕｓ、Ｐ．ｍａｃｕｌａｔｕｓおよびＰ．ａｃｕｔｉｆｏｌｉｕｓからなる群から選択されてもよい。
【００５１】
さらに好ましい実施形態では、穀類はコメである。好ましくは、当該コメは紅麹米である。
【００５２】
別の実施態様では、植物抽出物は、真菌から抽出される。好ましくは、当該真菌はヒラタケ菌である。好ましくは、当該ヒラタケ菌はＰｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓである。
【００５３】
１つの実施態様では、極性化合物のうち少なくとも５０％が上記抽出物から除去される。好ましくは少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％の極性化合物が、上記抽出物から除去される。最も好ましくは、少なくとも９５％の極性化合物は、上記抽出物から除去される。あるいは、植物抽出物は、植物抽出物（ｇ）あたり０．２６ｇもの極性化合物が除去される可能性がある。
【００５４】
１つの実施態様では、植物抽出物は、３０重量％未満の極性化合物、好ましくは２５重量％未満の極性化合物、好ましくは２０重量％未満の極性化合物、好ましくは１５重量％未満の極性化合物、好ましくは１０重量％未満の極性化合物、好ましくは５重量％未満の極性化合物、好ましくは４重量％未満の極性化合物、好ましくは３重量％未満の極性化合物、好ましくは２重量％未満の極性化合物、好ましくは１重量％未満の極性化合物、好ましくは０．５重量％未満の極性化合物を含む。
【００５５】
極性化合物を植物材料から除去する工程を含み、上記植物材料は１つ以上のスタチンを含む、抽出物の調製方法も提供される。
【００５６】
被験者における薬物の薬物動態に影響する１つ以上の極性化合物を、１つ以上のスタチンを含む植物材料から除去する工程を含む抽出物の調製方法も提供される。
【００５７】
１つの実施態様では、植物材料は、固形の植物材料である。
【００５８】
別の実施態様では、植物材料のサイズは、約０．１ｃｍ〜１ｃｍ；約０．２〜０．９ｃｍおよび０．３〜０．９ｃｍからなる範囲から選択される。好ましくは、植物材料のサイズは０．３〜０．９ｃｍである。
【００５９】
１つの実施態様では、植物材料は、抽出物を調製する前に、粉末にしてもよい。
【００６０】
好ましくは、粉末にした植物材料の粒径は、約０．１ｍｍ〜２ｍｍ；約０．２ｍｍ〜１ｍｍ；約０．３ｍｍ〜１ｍｍ；約０．４ｍｍ〜１ｍｍおよび約０．５〜１ｍｍからなる範囲から選択される。好ましくは、粉末にした植物材料の粒径は、０．５〜１ｍｍである。
【００６１】
任意の実施形態では、粉末にした植物材料を、抽出物の調製の前に超音波処理してもよい。
【００６２】
１つの実施態様では、当該方法は、上記１つ以上の極性化合物を除去する工程の前に、１つ以上の毒素（シトリニンおよびタンニン等）を植物材料から除去する工程をさらに含む。
【００６３】
１つの実施態様では、１つ以上の毒素は、上記植物材料を、上記１つ以上の毒素を溶解するために選択された溶剤にさらすことによって除去される。１つの実施態様では、上記１つ以上の毒素を溶解するための溶剤は弱酸性であり、すなわち、上記１つ以上の毒素を溶解するための溶剤のｐＨは、約５〜７未満、より好ましくは約６〜７未満、さらにより好ましくは約６．５〜７未満である。好ましくは、当該溶剤は、塩（アルカリ金属の有機塩等）を含む。代表的な塩は、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウムからなる群から選択されてもよい。さらに、有機酸も、上記１つ以上の毒素を溶解するための溶剤中に存在してもよい。
【００６４】
有機酸は、好ましくはカルボン酸である。最も好ましくは、当該カルボン酸は酢酸である。
【００６５】
塩類溶液の適した濃度は、０．０５Ｍ、０．１Ｍ、０．１５Ｍおよび０．２Ｍからなる群から選択される。好ましくは、塩類溶液は、０．１Ｍ  酢酸ナトリウムを含む。当該酢酸は、好ましくは０．５％の溶液である。
【００６６】
好ましい実施形態では、使用される塩類溶液の量は、植物材料１ｇあたり、０．５ｍｌ／ｇ；１ｍｌ／ｇ；１．５ｍｌ／ｇ；２ｍｌ／ｇ；２．５ｍｌ／ｇ；３ｍｌ／ｇ；３．５ｍｌ／ｇ；４ｍｌ／ｇ；４．５ｍｌ／ｇ；５ｍｌ／ｇ；５．５ｍｌ／ｇ；６ｍｌ／ｇ；６．５ｍｌ／ｇ；７ｍｌ／ｇ；７．５ｍｌ／ｇ；８ｍｌ／ｇ；８．５ｍｌ／ｇ；９ｍｌ／ｇ；９．５ｍｌ／ｇおよび１０ｍｌ／ｇからなる群から選択される範囲である。好ましくは使用される塩類溶液の量は、植物材料１ｇあたり、４ｍｌ／ｇである。
【００６７】
１つの実施態様では、植物材料を、１つ以上の塩および有機酸を含む溶液にさらす工程は、約８〜３６時間、２０〜６０℃の温度で行われる。最も好ましくは、当該植物材料は、約８〜３４時間、約１０〜３２時間、約１２〜３０時間、約１４〜２８時間、約１６〜２６時間、約１８〜２６時間、約２０〜２６時間および約２２〜２６時間からなる群から選択される時間さらされる。最も好ましい実施形態では、当該植物材料は、１つ以上の塩および有機酸を含む溶液に、１２時間さらされる。
【００６８】
別の実施態様では、当該植物材料は、１つ以上の塩および有機酸を含む溶液に２０〜６０℃の温度でさらされる。好ましくは、植物材料は、２１〜５５℃、２２〜５０℃、２３〜４５℃、２４〜４０℃、２５〜３５℃、２５〜３０℃からなる群から選択される温度でさらされる。最も好ましい実施形態では、当該植物材料は、１つ以上の塩および有機酸を含む溶液に、２３℃の温度で、１２時間さらされる。
【００６９】
好ましくは、抽出物は、紅麹米抽出物（ｇ）あたり、５００μｇ未満、より好ましくは４５０μｇ未満、より好ましくは４００μｇ未満、より好ましくは３５０未満、より好ましくは３００μｇ未満、より好ましくは２５０μｇ未満、より好ましくは２００μｇ未満、より好ましくは１５０μｇ未満、より好ましくは１００μｇ未満のシトリニンを含む。最も好ましい実施形態では、抽出物のシトリニンレベルは、紅麹米抽出物のグラムあたり３３２μｇ〜１３３μｇのシトリニンである。
【００７０】
１つの実施態様では、植物材料は、いったん１つ以上の毒素が除去されると、水溶液に約８〜３６時間、２０〜６０℃の温度でさらされ、１つ以上の極性化合物が除去される。最も好ましくは、当該植物材料は、水溶液に、約８〜３４時間、約１０〜３２時間、約１２〜３０時間、約１４〜２８時間、約１６〜２６時間、約１８〜２６時間、約２０〜２６時間および約２２〜２６時間からなる群から選択される時間さらされる。最も好ましい実施形態では、当該植物材料は、水溶液に１２時間さらされる。
【００７１】
別の実施態様では、植物材料は、水溶液に２０〜６０℃の温度でさらされる。好ましくは、植物材料は、水溶液に、２１〜５５℃、２２〜５０℃、２３〜４５℃、２４〜４０℃、２５〜３５℃、２５〜３０℃からなる群から選択される温度でさらされる。最も好ましい実施形態では、植物材料は、水溶液に、２３℃の温度で１２時間さらされる。
【００７２】
好ましい実施形態では、使用される水溶液の量は、植物材料１ｇあたり、０．５ｍｌ／ｇ；１ｍｌ／ｇ；１．５ｍｌ／ｇ；２ｍｌ／ｇ；２．５ｍｌ／ｇ；３ｍｌ／ｇ；３．５ｍｌ／ｇ；４ｍｌ／ｇ；４．５ｍｌ／ｇ；５ｍｌ／ｇ；５．５ｍｌ／ｇ；６ｍｌ／ｇ；６．５ｍｌ／ｇ；７ｍｌ／ｇ；７．５ｍｌ／ｇ；８ｍｌ／ｇ；８．５ｍｌ／ｇ；９ｍｌ／ｇ；９．５ｍｌ／ｇおよび１０ｍｌ／ｇからなる群から選択される範囲である。好ましくは使用される水溶液の量は、植物材料１ｇあたり、４ｍｌ／ｇである。
【００７３】
最も好ましい実施形態では、当該水溶液は水である。
【００７４】
有利には、この工程は、極性化合物を除去するだけではなく、植物材料中に存在する全ての残った塩類溶液も除去する。
【００７５】
いずれかの特定の理論によって拘束されることを望むことなく、植物抽出物中に存在する１つ以上の極性化合物は、被験者における特定の酵素を阻害することによって、投与された薬剤の薬物動態に干渉すると考えられる。これらの酵素としては、チトクロムＰ４５０（サブタイプ１Ａ２、２Ｃ９および３Ａ４等）およびｐ−糖タンパク質が挙げられると考えられるが、これらに限定されない。Ｐ−糖タンパク質は、広い基質特異性を有するＡＴＰ依存性排出ポンプである。Ｐ−糖タンパク質は、細胞膜を通過して、下記のような様々な基質を輸送する；コルヒチン、タクロリムスおよびキニジン等の薬剤；エトポシド、ドキソルビシンおよびビンブラスチン等の化学治療薬；脂質、ステロイド、生体異物、ペプチド、ビリルビン、強心配糖体（ジゴキシン等）、免疫抑制薬、グルココルチコイド（デキサメタゾン等）ならびにＨＩＶ  １型  抗レトロウイルス治療剤（プロテアーゼ阻害剤等）、ならびに非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤。従って、極性化合物の除去は、有害な薬物−ハーブ間の相互作用の発生率を減少させる。
【００７６】
従って、好ましい実施態様では、１つ以上の極性化合物は、チトクロムＰ４５０およびｐ−糖タンパク質と相互作用することによって、投与された薬物の薬物動態に影響する。
【００７７】
いずれかの特定の理論によって拘束されることを望むことなく、極性化合物は、チトクロムＰ４５０および／またはｐ−糖タンパク質に結合することによって、投与された薬物の薬物動態に影響すると考えられる。
【００７８】
別の実施態様では、当該方法は、上記固形の植物材料から液体の抽出物を形成する工程をさらに含む。
【００７９】
好ましくは、植物材料は、いったん１つ以上の極性化合物が除去されると、有機溶液に約８〜３６時間、２０〜５０℃の温度でさらされる。最も好ましくは、植物材料は、有機溶液に、約８〜３４時間、約１０〜３２時間、約１２〜３０時間、約１４〜２８時間、約１６〜２６時間、約１８〜２６時間、約２０〜２６時間および約２２〜２６時間からなる群から選択される時間さらされる。最も好ましい実施形態では、植物材料は、有機溶液に１２時間さらされる。
【００８０】
別の実施態様では、植物材料は、有機溶液に、２０〜５０℃の温度でさらされる。好ましくは、植物材料は、有機溶液に、２１〜５０℃、２２〜４５℃、２３〜４０℃、２４〜３５℃、２５〜３０℃からなる群から選択される温度でさらされる。最も好ましい実施形態では、植物材料は、有機溶液に、２５℃の温度で１２時間さらされる。
【００８１】
好ましい実施形態では、使用される有機溶液の量は、植物材料１ｇあたり、０．５ｍｌ／ｇ；１ｍｌ／ｇ；１．５ｍｌ／ｇ；２ｍｌ／ｇ；２．５ｍｌ／ｇ；３ｍｌ／ｇ；３．５ｍｌ／ｇ；４ｍｌ／ｇ；４．５ｍｌ／ｇ；５ｍｌ／ｇ；５．５ｍｌ／ｇ；６ｍｌ／ｇ；６．５ｍｌ／ｇ；７ｍｌ／ｇ；７．５ｍｌ／ｇ；８ｍｌ／ｇ；８．５ｍｌ／ｇ；９ｍｌ／ｇ；９．５ｍｌ／ｇおよび１０ｍｌ／ｇからなる群から選択される範囲である。好ましくは使用される有機溶液の量は、植物材料１ｇあたり、４ｍｌ／ｇである。
【００８２】
１つの実施態様では、有機溶液は、アルコール、エーテル、ハロホルム、ケトンおよびアルキレングリコールからなる群から選択される。好ましくは、当該有機溶液は、水と混和性である有機化合物を含む。当該有機溶液は、少なくとも水中の５０％有機化合物を含んでいてもよい。好ましくは、当該有機溶液は、少なくとも水中の７０％有機化合物を含む。好ましい実施形態では、当該有機溶液はアルコールである。最も好ましくは、アルコールは７０％エタノールである。
【００８３】
さらに好ましい実施形態では、当該方法は、液体の抽出物から植物材料を分離する工程、および液体の抽出物の溶剤を蒸発させて、乾燥した植物抽出物を形成する工程を含む。
【００８４】
好ましくは、当該抽出液は、ロータリーエバポレーターを使用して蒸発される。
【００８５】
撹拌は、好ましくは、抽出方法の効率を高めるために使用してもよい。撹拌は、抽出方法の工程の１つ以上において行ってもよい。好ましくは、撹拌は、超音波処理によって与えられる。
【００８６】
別の実施態様では、本発明の植物抽出物を、薬理学的に許容できる担体とともに含む組成物が提供される。
【００８７】
さらに別の実施形態では、本発明の植物抽出物を、薬理学的に許容できる担体とともに含む投与形態が提供される。
【００８８】
本発明によれば、植物抽出物は単独で投与してもよい。あるいは、当該抽出物は、少なくとも１つの本発明の植物抽出物を含む医薬品、栄養補助食品、動物用製剤、農業製剤、または産業製剤として投与されてもよい。
【００８９】
植物抽出物は、他の公知の治療薬（例えば、抗真菌薬、抗生物質、化学治療薬等）と組み合わせて使用してもよい。適した薬剤は、例えば、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、Ａｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ（第１２版、１９９６年）に記載されており、これらの全内容は参照により本願明細書に組み入れられる。
【００９０】
活性剤（本発明の植物抽出物等）の組み合わせは、相乗的である可能性がある。
【００９１】
簡便な投与方法としては、経口投与、吸入、経皮投与、局所クリームもしくはゲルもしくは粉末、または直腸投与が挙げられる。好ましくは、当該抽出物は経口投与される。
【００９２】
投与経路に応じて、製剤および／または抽出物は、酵素、酸、および化合物の治療活性を不活性化させる可能性がある他の自然状態の作用から、化合物を守るための物質でコーティングされてもよい。このようなコーティング（例えば、腸溶性のコーティング）は、当業者に周知である。
【００９３】
植物抽出物の懸濁液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物中や、油中で調製してもよい。通常の保存条件および使用の下では、医薬品調製物は、微生物の生育を阻害するための保存剤を含んでいてもよい。
【００９４】
１つの実施態様では、植物抽出物を、例えば、不活性希釈剤または吸収可能な食用の担体とともに経口投与してもよい。植物抽出物および他の成分はまた、ハードシェルまたはソフトシェルのゼラチンカプセル剤中に封入されていてもよく、タブレット中へ圧縮してもよく、または個体の食事中に直接組み入れられてもよい。経口での治療的投与のために、植物抽出物は、賦形剤とともに組み入れられてもよく、摂取可能なタブレット、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、オブラート等の形態で使用されてもよい。適切には、このような組成物および調製物は、少なくとも１重量％の植物抽出物を含んでもよい。あるいは、植物抽出物の組成物および調製物は、もちろん改変してもよく、例えば、便宜には、投与単位の質量あたり約２％〜約９０％、約５％〜約８０％、約１０％〜約７５％、約１５％〜約６５％；約２０％〜約６０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約４５％、または約３５％〜約４５％の範囲でもよい。治療上有用な組成物中の植物抽出物の量は、適した投与量が得られるものである。
【００９５】
補助的な活性化合物もまた、本発明の組成物中へ組み入れられてもよい。
【００９６】
１つの実施態様では、担体は経口投与できる担体であってもよい。
【００９７】
医薬組成物の別の形態は、経口投与に適した、腸溶性となるようにコーティングされた顆粒剤、タブレットまたはカプセル剤として製剤化された投与形態である。
【００９８】
本発明の範囲には徐放製剤も含まれる。
【００９９】
タブレット、トローチ剤、丸剤、カプセル剤等はまた、下記を含んでいてもよい；トラガカントゴム（ｇｕｍ  ｇｒａｇａｃａｎｔｈ）、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチン等の結合剤；リン酸水素カルシウム等の賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；ショ糖、ラクトースもしくはサッカリン等の甘味剤、またはペパーミント、ウィンターグリーン油、もしくはチェリー調味料等の矯味矯臭剤。投与形態がカプセル剤である場合、上記の種類の物質に加えて液体担体を含んでいてもよい。様々な他の物質は、コーティングとして存在していてもよく、あるいは、投与単位の物理的な形態を修飾してもよい。例えば、タブレット、丸剤、またはカプセル剤は、シェラック、糖または両方でコーティングされてもよい。シロップまたはエリキシル剤は、甘味剤として類似物、ショ糖、保存剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素および調味料（チェリーまたはオレンジのフレーバー等）を含んでいてもよい。もちろん、いずれかの投与形態の調製において使用される全ての物質は、薬剤的に純粋、かつ、使用量において実質的に無毒性でなければならない。また、類似物は、徐放調製物および徐放製剤中へ組み入れられてもよい。
【０１００】
好ましくは、医薬組成物は、酸加水分解を最小限にするための適したバッファーをさらに含んでいてもよい。適したバッファー剤は当業者に周知であり、リン酸塩、クエン酸塩、炭酸塩およびその混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０１】
本発明の医薬組成物の単回または複数回の投与を行ってもよい。当業者であれば、ルーチンの実験法によって、植物抽出物および／または組成物の効果的な無毒性の投与量レベルならびに投与方法を決定できるだろう。
【０１０２】
さらに、最適な治療工程（所定の日数にわたる、１日あたりに投与される植物抽出物または組成物の投与回数等）は、従来の治療決定試験の工程を使用して確認できることが当業者に明らかであろう。
【０１０３】
一般的に、２４時間あたりの植物抽出物の効果的な投与量は、体重（ｋｇ）あたり約０．０００１ｍｇ〜約１０００ｍｇ；適切には、体重（ｋｇ）あたり約０．００１ｍｇ〜約７５０ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約０．１ｍｇ〜約２５０ｍｇ；または体重（ｋｇ）あたり約１．０ｍｇ〜約２５０ｍｇの範囲であってもよい。さらに適切には、２４時間あたりの効果的な投与量は、体重（ｋｇ）あたり約１．０ｍｇ〜約２００ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約１．０ｍｇ〜約１００ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約１．０ｍｇ〜約５０ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約１．０ｍｇ〜約２５ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約５．０ｍｇ〜約５０ｍｇ；体重（ｋｇ）あたり約５．０ｍｇ〜約２０ｍｇ；または体重（ｋｇ）あたり約５．０ｍｇ〜約１５ｍｇの範囲であってもよい。
【０１０４】
高脂血症の治療または予防のための薬物の製造における本発明の植物抽出物の使用が提供される。
【０１０５】
被験者におけるコレステロールの減少のための薬物の製造における本発明の植物抽出物の使用が提供される。
【０１０６】
被験者におけるコレステロールの減少のための薬物の製造における本発明の植物抽出物の使用が提供される。
【０１０７】
被験者における３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素の阻害のための薬物の製造における本発明の植物抽出物の使用が提供される。
【０１０８】
本発明の植物抽出物を使用説明書とともに含む包装された投与形態もまた提供される。
【実施例】
【０１０９】
最良の形態等の本発明の非限定的な例および比較例については、本発明の範囲を制限するものとして解釈されてはならない特定の実施例への参照により、より詳細にさらに記載される。
【０１１０】
＜実施例１＞
［紅麹米（ＲＹＲ）の発酵］
調製方法：
１．コメ（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）を、水（４ｍｌ／ｇ）に、１時間、２３℃で浸した。
２．次いで、コメをオーブン中に、１００℃で２時間維持した。
３．次いで、５％（ｗ／ｗ）のＭ．ｐｕｒｐｕｒｅｕｓを加えた。
４．次いで、コメを２４〜３０℃で、７〜１４日間、２日ごとに物理的に撹拌してインキュベーションした。
【０１１１】
＜実施例２＞
抽出方法
１．全紅麹米（ＲＹＲ）を、２３℃で、０．１Ｍ  酢酸ナトリウム（４ｍｌ／１ｇの紅麹米）に、１２時間さらした。この工程は、ＲＹＲからシトリニンおよび他の毒素を除去するために使用した。次いで、塩類溶液を、濾紙またはチーズクロス上の濾過によって除去した。
２．次いで、ＲＹＲ抽出物を、水（４ｍｌ／１ｇの紅麹米）に、２３℃で１２時間さらした。この工程は、上記工程１で得られたＲＹＲ調製物中の極性化合物および全ての残った塩類溶液を除去する。次いで、塩類溶液を濾紙またはチーズクロス上の濾過によって除去した。
３．最後に、最後の抽出工程では、７０％  エタノール（４ｍｌ／１ｇの紅麹米）を、２３℃で１２時間使用し、濃縮されたモナコリンＫ  ＲＹＲ抽出物を作製した。
【０１１２】
最後の抽出についての詳細
シトリニンレベルは、紅麹米抽出物あたり０．３〜０．７μｇ／ｇだった。
当該抽出方法によって除去された極性化合物の割合は約９４．５％である。乾燥した抽出物の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）のクロマトグラフは、図１に示される。ＨＰＬＣの条件は下記の通りである；孔径３μｍのカラム、２つの溶剤（溶剤Ａ  ０．０１％  ギ酸、および溶剤Ｂ  １００％  アセトニトリル）；流量０．７ｍｌ／分；０分での溶剤Ａが９７％、かつ５０分での溶剤Ｂが１００％である勾配流。０分〜１０分の領域内のピークは、乾燥した抽出物中の極性化合物の存在を示す。
【０１１３】
図１ａ中のＨＰＬＣクロマトグラフから理解できる通り、水で処理される前のＲＹＲ物質は、１６５８９６２０１によって表された面積中に示された極性画分を含む。
【０１１４】
図１ｂは、水で処理された後のＲＹＲが、９５３４４６８によって表された面積（図１ｂにおいて赤線で示される）中に示された、実質的に減少した極性画分を有することを示す。この領域におけるピークの不存在は、Ｒ物質からの極性化合物の除去を示す。これは、極性化合物のうち約９５％が、水による処理後にＲＹＲ物質から除去されたことを示す。
【０１１５】
モナコリンＫ（ロバスタチン）レベルは、紅麹米抽出物あたり０．５〜２ｍｇ／ｇだった。
【０１１６】
＜実施例３＞
［ＲＹＲ抽出物についての薬物動態の検証］
［チトクロム（ＣＹＰ）Ｐ−４５０阻害試験］
カブトムシのルシフェリン（ルシフェラーゼ酵素の基質）の誘導体である発光Ｐ４５０プローブ基質を利用した、ＣＹＰ１Ａ２Ａ、ＣＹＰ２Ｃ９およびＣＹＰ３Ａ４の活性アッセイ（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９およびＣＹＰ３Ａ４  Ｐ４５０−Ｇｌｏ（商標）、プロメガ）を使用した。当該誘導体はルシフェラーゼに対応する基質ではないが、ＣＹＰによってルシフェリンに変換され、次いでこれがルシフェラーゼと反応してＰ４５０活性と正比例する測定可能な量の光を生じる。
【０１１７】
ＣＹＰ膜を、２０μｌのルシフェリンを含まない水（未処理の対照）、ナリンゲニン（ＣＹＰ阻害剤、陰性対照）または異なる濃度（１．２５ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌおよび５ｍｇ／ｍｌでの薬物処理）のＲＹＲ水抽出物で、乳白色の９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中で処理した。プレートを３７℃で１０分プレインキュベーションし、次いで、ＮＡＤＰＨ再生溶液を加えることによって反応を開始し、３７℃で２０分インキュベーションした。次いで、反応を停止し、発光の検出を全てのウェルにＡＴＰ検出薬を加えることによって開始し、全ての試料の発光をＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００  プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ）によって測定した。
【０１１８】
ＣＹＰ活性アッセイにおいて認められた発光シグナルは、酵素活性に正比例した。未処理のＣＹＰ反応からの正味のシグナルは、全ＣＹＰ活性を示す。１００μｇ／ｍｌのナリンゲニン（ＣＹＰ阻害剤）を実験の陰性対照として加えた。試験化合物（ＲＹＲ水抽出物）との反応について、未処理のＣＹＰ反応の平均的な正味のシグナルからの変化は、この化合物によるＣＹＰ活性の調節を示す。試験化合物についての発光シグナルは未処理の試料よりも高く、このことはこの化合物がＣＹＰ活性を促進できることを示す。未処理の試料よりも低い発光シグナルは、この化合物がＣＹＰの活性を阻害できることを意味する。結果（図２）は、ＲＹＲ水抽出物がＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９およびＣＹＰ３Ａ４の阻害を引き起こすことを示す。極性化合物の除去後に得られたＲＹＲ抽出物であるＥＹＳ−ＮＹＰ生成物は、ＣＹＰ活性に対する非常に低い阻害を示す。
【０１１９】
＜Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）活性試験＞
酵素キット（Ｐｇｐ−Ｇｌｏ（商標）アッセイシステム（プロメガ、米国））を、Ｐ−ｇｐ活性に対するＲＹＲ水抽出物の影響を分析するために使用した。このアッセイは、細胞膜の画分中の組み換えヒト  Ｐ−ｇｐに対する化合物の効果を検出し、ホタルルシフェラーゼの光生成反応のＡＴＰ依存性に依存する。最初に、ＡＴＰをＰ−ｇｐとともにインキュベーションした。次いで、Ｐ−ｇｐ  ＡＴＰａｓｅ反応を停止し、残りの未代謝のＡＴＰを、ルシフェラーゼによって生成された発光シグナルとして検出する。発光についてのＰ−ｇｐ依存性の減少は、Ｐ−ｇｐによるＡＴＰ消費を示す。従って、シグナルの減少が大きいほど、Ｐ−ｇｐ活性は高い。従って、Ｐ−ｇｐ  ＡＴＰａｓｅを刺激する化合物を含む試料は、未処理の試料と比較して、顕著に低いシグナルを有する。Ｐ−ｇｐの調製、反応混合物およびＡＴＰ検出薬については、製造業者の指示に従った。２０μｌのＲＹＲ水抽出物を、異なる濃度（１．２５、２．５および５ｍｇ／ｍｌ）で調製し、ベラパミル（陽性対照、０．５ｍＭ）およびＮａ３ＶＯ４（Ｐ−ｇｐ阻害剤、０．２５ｍＭ）を、乳白色の９６ウェルプレート（透明な平底を有するもの、Ｃｏｓｔａｒ社（ニューヨーク））へそれぞれ加えた。次いで、Ｐ−ｇｐを、試験化合物を含むウェルに添加し、３７℃で５分間インキュベーションした。反応をＭｇ−ＡＴＰ溶液を添加することによって開始し、９６ウェルプレートを３７℃で４０分間インキュベーションした。次いで、反応を停止し、発光の検出を全てのウェルにＡＴＰ検出薬を加えることによって開始し、得られた発光をＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００  プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ、オーストリア）上で測定した。
【０１２０】
Ｐ−ｇｐ活性アッセイにおいて、Ｐｇｐ  ＡＴＰａｓｅ活性に対するＲＹＲ水抽出物の効果は、未処理の試料（ベース）およびＲＹＲ水抽出物で処理された試料を、Ｎａ３ＶＯ４（オルトバナジン酸ナトリウム）で処理された対照と比較することによって検討した（図３を参照）。Ｎａ３ＶＯ４はＰ−ｇｐの選択的阻害剤であり、Ｎａ３ＶＯ４で処理された試料は、Ｐ−ｇｐ  ＡＴＰａｓｅ活性を有さない。Ｎａ３ＶＯ４の非存在下で、ベースの、および薬剤で刺激されたＰ−ｇｐ  ＡＴＰａｓｅ活性を検出できる。Ｎａ３ＶＯ４の存在下で、ＡＴＰ消費は、膜調製物中に存在するわずかな非Ｐ−ｇｐ  ＡＴＰａｓｅ活性に起因する。Ｎａ３ＶＯ４で処理された試料と未処理の試料との間の発光シグナルの相違は、ベースのＰ−ｇｐ  ＡＴＰａｓｅ活性を示す。一方、Ｎａ３ＶＯ４で処理された試料と試験化合物（ＲＹＲ水抽出物）で処理された試料との間の発光シグナルの相違は、試験化合物の存在下でのＰ−ｇｐ  ＡＴＰａｓｅ活性を示す。
【０１２１】
図４に示される通り、ＲＹＲ水抽出物の添加は、Ｐ−ｇｐ活性を顕著に促進させ、活性化は用量依存性だった。これらの結果は、ＲＹＲ水抽出物がＰ−ｇｐ基質を含んでおり、Ｐ−ｇｐ膜とともにインキュベーションした場合、ＡＴＰはＰ−ｇｐによって消費され、Ｎａ３ＶＯ４で処理された試料と比較して発光の強い変化が認められたことを示した。ＥＹＳ−ＮＹＰ生成物は、Ｐ−ｇｐ活性の相対的に低い活性化を示し、これは、Ｐ−ｇｐ活性に影響し得るＲＹＲ中の化合物が本発明の方法によって効果的に除去されたことを意味する。
【０１２２】
＜ＣａＣｏ−２吸収アッセイ＞
９０〜１００％コンフルエントのフラスコを、トリプシン／ＥＤＴＡで回収し、血清含有培地で中和し、遠心分離した。細胞のペレットをＢａｓａｌ  Ｓｅｅｄｉｎｇ  ｍｅｄｉｕｍ（ＢＤバイオサイエンス）およびＭｉｔｏ＋  Ｓｅｒｕｍ  Ｅｘｔｅｎｄｅｒ（ＢＤバイオサイエンス）からなる無血清培地中に再懸濁し、６ウェルのＣｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｉｎｓｅｒｔｓ（コーニング、ニューヨーク州）上に、６×１０５細胞／ｃｍ２で播種した。このｉｎｓｅｒｔｓは、ポリエステルの０．４μｍ微孔性膜をＩ型コラーゲンとともに含む。播種培地を、分化培地の使用が要求される実験中に、細胞の播種から２４時間後に、Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｍｅｄｉｕｍ（ＢＤバイオサイエンス）で置換した。この培地を、その後４８時間ごとに置換し、細胞を３７℃、９５％の相対湿度、５％  ＣＯ２で維持した。Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｍｅｄｉｕｍ中での３日間のインキュベーション後、ＣａＣｏ−２の単層の準備が透過性試験に対してできた。
【０１２３】
生理学的に、かつ形態学的に十分に生育したＣａＣｏ−２細胞単層であって、経上皮電気抵抗性（ＴＥＥＲ）値が３００Ωｃｍ２超であるものを試験に使用した。
【０１２４】
これらの試験に使用される輸送培地は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを含む改変Ｈａｎ’ｓバッファーであった。頂端および側底の区画のｐＨはともに７．５だった。全ての実験の前に、各単層をバッファーで２度洗浄し、単層の完全性を確認するためにＴＥＥＲを測定した。ベラパミルの頂端から側底（ＡからＢ）への輸送を、試験化合物の不存在下および存在下で測定した。使用されるベラパミルの濃度は１００μＭだった。これはそのＫｍ値（約６０μｍ）よりもずっと低い。試験化合物の濃度は、このアッセイにおいて、１０μｍを選択した。試験は、ジゴキシンを含む適切な量のバッファーを、単層の頂端（ＡからＢへの輸送）または側底（ＢからＡへの輸送）の側のいずれかに加えることによって開始した。頂端および側底の区画の量は、それぞれ１．６および２．８ｍｌであり、試験化合物を（阻害剤として）単層の両側に、１０μＭの濃度で加えた。次いで、単層を３時間、３７℃でインキュベーションした。試料を、側底区画から、０分、１０分、３０分、６０分、９０分、１２０分および１８０分の時点で、頂端区画から０分の時点で、それぞれインキュベーション時間中に回収し、ＨＰＬＣによってベラパミルの濃度を分析した。ベラパミルのＡからＢへの透過係数（Ｐｅｆｆ）を、試験化合物の存在下および不存在下で算出した。
【０１２５】
酵素レベルに対するＲＹＲ水抽出物の効果についての調査（Ｐ−ｇｐおよびＣＹＰアッセイ）の後に、ＣａＣｏ−２吸収アッセイを、細胞レベルでのＲＹＲ水抽出物の効果を分析するために行った。ＣａＣｏ−２細胞単層を使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は、ヒトのｉｎ  ｖｉｖｏでの腸内透過性を予測するための有用なツールである。実験において、５０μｌの１×ＰＢＳ（対照）または様々な濃度（２０ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌでの薬物処理）のＲＹＲ水抽出物を、組織培養用プレートの頂端の区画へ、１００μｇ／ｍｌのベラパミルとともに加えた。側底および頂端の区画から採取した試料の濃度は、ベラパミル標準物質（２５９μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、７．５μｇ／ｍｌおよび３μｇ／ｍｌ）の注入から得られたピーク面積の測定によって作成された較正曲線（データは示していない）から算出した。回帰分析の直線式は、ｙ＝２７０４３ｘ−１１１５３（ｒ２＝０．０９８）だった。ＲＹＲ水抽出物は、ＣａＣｏ−２試験におけるベラパミルの正味の吸収を促進した（２倍）。しかし、ＥＹＳ−ＮＹＰ生成物（本発明の方法に従って作製した）は、対照と似た結果を示す。これは、当該方法が、被験者における薬物の薬物動態に影響する、ＲＹＲ中の極性化合物を効果的に除去できることを示す（図５）。
【０１２６】
＜動物試験＞
オスのスプラーグドーリーラット（体重２００〜２７０ｇ）を、シンガポール国立大学（ＮＵＳ、シンガポール）の動物部門から購入した。ラットの飼育は、機関のガイドラインに従った。動物を、暗／明の制御されたサイクル（１２時間／１２時間）下で、調節された温度（２５℃）で、従来の条件で飼育した。８匹のラットを２群（２×４匹の動物）に割り当て、各群について４回の試行をした。
【０１２７】
ラットは、１ｍｌの１００ｍｇ／ｍｌのＲＹＲ極性抽出物（前処理群）または１ｍｌの生理食塩水（対照群）のいずれかで３０分間、前処理し、次いで、動物に１０ｍｇ／ｋｇのベラパミルを経口投与した。ラットを、ケタミンおよびキシラジン（両方とも１００ｍｇ／ｍｌ）で麻酔した。血液試料を、頸静脈から、薬物投与後０、３０、６０、１２０、２４０、３６０および４８０分間の時点で、１．５ｍｌエッペンドルフチューブ中へ回収し、直後に遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、２分間）にさらした。透明な血漿の層を、未使用のチューブに移し、次いで、等量のアセトニトリルを加え、試料からタンパク質を除去した。ボルテックスで短時間混合した後、試料を１３，０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。上清をＨＰＬＣバイアルへ移し、次いで、ＨＰＬＣによってそのベラパミル量を分析した。未知の試料についてのピーク面積の割合を、薬物を含まない保存されたラット血漿試料で調製したベラパミルの較正曲線を参照することによって、濃度に変換した。
【０１２８】
ＲＹＲ水抽出物の添加は、動物モデルにおけるベラパミルの吸収を顕著に促進した。３０分の時点で、薬物処理された動物におけるベラパミルのレベルは、対照群および極性化合物が除去されたＲＹＲ抽出物（ＥＹＳ−ＮＹＰ試料）よりも約１．６倍高い吸収を示した（図６）。
【０１２９】
＜要約＞
本発明の方法は、被験者における薬物の薬物動態に影響する１つ以上の極性化合物の効果的な除去を示す。上記の例において、１つ以上の極性化合物が、ベラパミルの取り込みを顕著に増加させたことが示された。ベラパミルは、フェニルアルキルアミン類のＬ型カルシウムチャネルの遮断薬である。これは高血圧、狭心症、不整脈の治療に使用される。ベラパミル過量投与による症候としては下記が挙げられる；低い血圧（低血圧症）；遅い心拍数（徐脈）；不規則な心臓のリズム（不整脈）および肺内の液体貯留。
【０１３０】
従って、この予期しない薬物−ハーブ間の相互作用は、脂質およびコレステロールを低下させることによって心血管の健康を改善するためにＲＹＲ抽出物を摂取する対象の生命を潜在的に脅かす。
【０１３１】
＜応用＞
本発明の様々な他の改変および用途は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、上述の記載を読んだ後の当業者には明らかであり、全てのこのような改変および用途は添付の請求項の範囲内であることが意図されることが明白であろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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