(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽度認知障害（ＭＣＩ）を煩う患者におけるＭＣＩの処置用のジアミノフェノチアジン化合物を含む治療用組成物であって、
該患者が、ＭＭＳＥ  ２５、２６、２７、２８又は２９のミニメンタルステート検査スコアを有し、かつアルツハイマー病と診断されておらず、
該化合物が、
下記式（１）〜（４）：
【化４】
0005725605.tif 000016
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
−Ｆ；−Ｃｌ；−Ｂｒ；−Ｉ；
−ＯＨ；−ＯＲ；
−ＳＨ；−ＳＲ；
−ＮＯ２；
−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ；
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ；−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ；
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＮ１ＲＮ２；
−ＮＨ２；−ＮＨＲ；−ＮＲ２；−ＮＲＮ１ＲＮ２；
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ；−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｈ；−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ；−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ；
−Ｒ
から選択され、
ここで、各Ｒは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択され；
ここで、基−ＮＲＮ１ＲＮ２のそれぞれにおいて、独立に、ＲＮ１とＲＮ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成し；
そしてここで、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択されるか；あるいは、
Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成し；
そしてここで、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択され；
そしてここで、基−ＮＲ７ＮＡＲ７ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＡ及びＲ７ＮＢのそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択されるか；あるいは、
Ｒ７ＮＡとＲ７ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成し、
そしてここで、基＝ＮＲ７ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＣは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択され；
そしてここで、ＲＮ１０は、存在する場合には、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択され；
そしてここで、Ｘ−は、存在する場合には、電気的中性を得るための１つ以上のアニオン性カウンターイオンである]で示される化合物、
ならびにその薬理学的に許容し得る塩、混合塩、水和物及び溶媒和物から選択される、治療用組成物。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれが、独立に：
−Ｈ；
−Ｒ
から選択される、請求項１記載の治療用組成物。
【請求項３】
各Ｒが、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル
から選択される、請求項１または２記載の治療用組成物。
【請求項４】
Ｒ上の置換基が、存在する場合には、独立に：
−Ｆ；−Ｃｌ；−Ｂｒ；−Ｉ；
−ＯＨ；−ＯＲ’；
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ；−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’；
−Ｒ’
から選択される、請求項１〜３のいずれか一項記載の治療用組成物であって、ここで各Ｒ’が、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択される、治療用組成物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれが、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される、請求項１記載の治療用組成物。
【請求項６】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれが、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項１記載の治療用組成物。
【請求項７】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれが、−Ｈである、請求項１記載の治療用組成物。
【請求項８】
基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される、請求項１〜７のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項９】
基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項１〜７のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１０】
基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒから選択される、請求項１〜７のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１１】
基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは独立に：−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項１〜１０のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１２】
基−ＮＲ７ＮＡＲ７ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＡ及びＲ７ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１３】
基−ＮＲ７ＮＡＲ７ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＡとＲ７ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１４】
基＝ＮＲ７ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＣは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１５】
基＝ＮＲ７ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＣは、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１６】
ＲＮ１０が、存在する場合には、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ及び−Ｅｔから選択される、請求項１〜１５のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１７】
ＲＮ１０が、存在する場合には、独立に、−Ｈである、請求項１〜１５のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１８】
Ｘ−が、存在する場合には、電気的中性を得るための１つ以上のアニオン性カウンターイオンであり、場合により、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−から選択される、請求項１〜１７のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項１９】
化合物が、以下の化合物、ならびにその薬学的に許容し得る塩、混合塩、水和物及び溶媒和物から選択される、請求項１記載の治療用組成物。
【表５】
0005725605.tif 000017
0005725605.tif 000018
0005725605.tif 000019
0005725605.tif 000020
【請求項２０】
アセチルコリンの作用を、増強、若しくは模倣するコリン作動性薬剤、又はコリンエステラーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１〜１９のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項２１】
ＭＣＩが健忘症であり、処置が健忘症の症状の寛解による症状軽減のためのものである、請求項１〜２０のいずれか一項記載の治療用組成物。
【請求項２２】
軽度認知障害（ＭＣＩ）を煩う患者であって、ＭＭＳＥ  ２５、２６、２７、２８又は２９のミニメンタルステート検査スコアを有し、かつアルツハイマー病と診断されていない患者におけるＭＣＩの処置用の医薬の製造における請求項１〜１９のいずれか一項に定義した通りのジアミノフェノチアジン化合物の使用。
【請求項２３】
前記処置が、ジアミノフェノチアジン化合物を、アセチルコリンの作用を増強、若しくは模倣するコリン作動性薬剤、又はコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて用いることを含む、請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して軽度認知障害（ＭＣＩ）の処置において使用するための方法及び物質に関する。
【背景技術】
【０００２】
軽度認知障害（ＭＣＩ）は、「認知症を伴わない認知障害」、又はＣＩＮＤと呼ばれる広範な病型の小集団である。
【０００３】
ＣＩＮＤの潜在的原因は数多く、うつ病、アルコール／薬物摂取、精神疾患、せん妄、精神遅滞、血管性要因、パーキンソン病、てんかん、多発性硬化症、社会的要因及び感覚障害が挙げられる。
【０００４】
ＭＣＩ被験体は、認知症になってはいないが、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）のような認知症を発症する危険性がある（Larieu, S. et al. (2002) Incidence and outcome of mild cognitive impairment in a population-based prospective cohort.  Neurology, 59: 1594-1599; Bennett, D.A. et al. (2002) Natural history of mild cognitive impairment in older persons. Neurology, 59: 198-205.  In fact it has been estimated that 10% of those with MCI convert to AD (Bruscoli and Lovestone (2004), Is MCI really just early dementia? A systematic review of conversion studies. Int Psychogeriat. 16:2, 129-140)。
【０００５】
ＭＣＩは、ＦＤＡにより有効な処置対象であると認定されている（FDA (2001)
http://www.fda.gov/ohrms/dockets/ac/01/slides/3724s1_6_grundman/）。
【０００６】
このことは、ＭＣＩに関する多数の臨床試験の出現をもたらした（例えば、Thal et al., (2005), A randomized double-blind study of Rofecoxib in patients with Mild Cognitive Impairment, Neuropsychopharm, 30: 1204-1215）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＭＣＩ又はＭＣＩの症状を軽減するために、ＭＣＩ用の代替の処置モダリティを提供することが、当該技術分野に貢献することは明らかである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らによってここに、ジアミノフェノチアジン（ＤＡＰＴＺ）化合物が、ＡＤ型の任意の基本的な病理学の存在とは独立に、認知障害の症状軽減を提供するために使用できることが、予想外にも見出された。空間的参照記憶の向上が、若年と高齢のマウスを、及びまた正常なマウスとスコポラミン処置されたマウスを比較するモデルにおいて実証された。
【０００９】
これは、現存のＭＣＩ処置に対する代替の処置モダリティを提示するものである。
【００１０】
ジアミノフェノチアジン化合物の以前の用途
ジアミノフェノチアジンは、タウタンパク質の凝集を阻害し、ＰＨＦの構築を乱してＰＨＦコアのタンパク質分解安定性を逆行させることが以前から示されている（WO96/30766, F Hoffman-La Rocheを参照）。そのような化合物については、ＡＤ及びレビー小体病を含む様々な疾患の治療及び予防のための使用が開示されていた。
【００１１】
さらに、ＷＯ０２／０５５７２０(The University Court of the University of Aberdeen)は、ジアミノフェノチアジンの還元形を、様々なタンパク質凝集疾患の処置に特に使用することを述べているが、その開示は主にタウオパチーに関するものである。
【００１２】
上記とは対照的に、本発明は、特にＭＣＩの処置に関する。
【００１３】
いくつかの研究において、薬物（例えばメチルチオニニウム塩化物（ＭＴＣ）、メチレンブルーとしても知られる）が、ミトコンドリア呼吸の増強により媒介可能な記憶に対して効果があることが望ましいことを提唱している（例えば、Callaway et al., 2002; Callaway et al., 2004; Riha et al., 2005）。しかしながら、これらのうちのいずれも、ＭＣＩの対症療法におけるＭＴＣの使用を開示するものはない。
【００１４】
Martinez et al. ("Methylene blue alters retention of inhibitory avoidance responses". Physiol Psychol 1978, 6:387-390)は、ＭＴＣの作用を、一試行の阻害回避ステップスルータスクにおいて調査している。該著者らは、メチレンブルーは、健忘作用（すなわち、健忘症を引き起こす）及び記憶増強効果の両方を有することを、論文の概念的枠組みにおいて結論付けている。該著者らは、異なる用量にて異なる効果が見られ、トレーニング前の高用量においては健忘作用、そしてトレーニング後の低用量においては学習増強効果が見られると主張している。この論文の重要な結論は、ペントースリン酸経路の操作が、記憶保存プロセスの調節に働き得ることである。
【００１５】
Callaway et al. ("Methylene blue restores spatial memory retention impaired by an inhibitor of cytochrome oxidase in rats". Neurosci. Lett. 2002, 332:83-86)は、ミトコンドリア阻害薬（アジ化ナトリウム）により誘発される行動障害を、ＭＢが矯正したことを提唱した。しかしながら、技術開示を客観的に再検討すると、以下が示される：アジ化ナトリウムにより生じた学習欠陥をＭＢが矯正したエビデンスはない；及び、学習に対する作用はないのに記憶に対する選択的作用が存在することを示唆するデータの解釈は、実験計画の欠陥に鑑みて、もっともらしくない。具体的には、その実験計画は、トレーニング段階中の嗅覚的手がかりの検出から実験のプローブ段階中の異なるタスクまでのタスクの変化を管理していなかった。
【００１６】
上記にも関わらず、該著者らは「この研究の結果は、ミトコンドリア機能不全を伴う神経変性障害における記憶保持困難の臨床転帰に、ＭＢが積極的な影響を及ぼす可能性を有することを示唆する」という推論を提起している。しかしながら、データ及び該著者らのいずれも、ミトコンドリア機能不全のない状況下において、ＭＢの使用が向知性薬として作用し得ることを示唆していない。
【００１７】
Gonzalez-Lima F 及び Bruchey AK ("Extinction memory improvement by the metabolic enhancer methylene blue". Learning and Memory, 2004 11(5):633-640)は、消退後のＭＴＣ投与を調査し、ＭＴＣが、失われた条件反応の保持を増強できるかどうかを決定した。該著者らは、以下の推論を導く：「ヒトにおいて消退行動療法と併せておこなうＭＢの投与は、条件性恐怖又は他の外傷性記憶の消退の保持を推進する有用な治療的薬剤となり得る」。すなわち、該著者らはある特定の状況における健忘性作用を達成するための、ＭＴＣに的を絞った使用を主唱しているのである。
【００１８】
Callaway et al. ("Methylene blue improves brain oxidative metabolism and memory retention in rats Pharmacol". Biochem. Behav. 2004, 77:175-181)は、Callaway et al. (2002)と同じ行動パラダイムを用いた。しかしながら、論文の技術的内容を客観的に再検討すると、他の障害を持たない動物においてＭＢが学習を向上させたというエビデンスは明らかにならなかった。学習に対する作用はないのに記憶に対する選択的作用が存在することを示唆するデータの解釈は、実験計画の欠陥に鑑みて、もっともらしくない。具体的には、実験計画は、トレーニング段階中の嗅覚的手がかりの検出から実験のプローブ段階中の異なるタスクまでのタスクの変化を管理していなかった。したがって、ＭＢが他の障害を持たない動物において記憶を向上させたというエビデンスはない。該著者らは、また、１mg/kg用量の単回投与の、１時間又は２時間後ではなく、２４時間後に脳細胞におけるチトクロムオキシダーゼｃ活性が上昇したこと、ならびに、インビトロでチトクロムｃ及び脳細胞の調製に導入されたＭＢが、チトクロムｃの酸化を増大させたということを示した。しかし、実施例３で考察したように、ＭＢの脳レベルは投与後１〜４時間で最大となり、したがって、ＭＢがＭＢの特定のチトクロムオキシダーゼ効果を１時間又は２時間ではなく２４時間後において産生すると議論することは、もっともらしくない。これらの知見より、該著者らは「記憶保持におけるＭＢの作用機序は、チトクロムｃの酸化の促進に関連している可能性がある」という推論を導く。
【００１９】
Riha et al. ("Memory facilitation by methylene blue: Dose-dependent effect on behaviour and brain oxygen consumption". Eur. J. Pharmacol. 2005, 511:151-158)は、１〜４mg/kgのＭＢで処置されたラットは、生理食塩水で処置したラットと歩行運動又は摂食行動において変わりなかったが、４mg/kgの投与は、行動習慣及び対象記憶認知を向上させたことを報告している。しかしながら、技術的開示を客観的に再検討すると、歩行運動に対する非特異的作用とは異なり行動習慣に対する特異的作用が存在するという主張を支持するものではなかった。さらにこの結果は、見慣れた対象の付近における調査の減少によって判断されるように、生理食塩水による処置と比較して、ＭＢが見慣れた対象の検出を促進するということを実証するものではなかった。したがって、他の障害を持たないラットにおいて記憶を円滑化したというエビデンスはない。彼らはまた、低濃度のＭＢは、インビトロ及びインビボ投与の２４時間後において脳の酸素消費量を増加させたが、投与後１時間又は２時間後においてはそのようなことはなかったことを報告している。これより、彼らは「脳の酸素消費量を増加させるメチレンブルーの投与は、記憶保持を円滑にする」と結論づけた。これより、彼らは次の推論を導いた：「我々の知見に基づくと、脳の酸化的代謝が低下しているヒト、例えばアルツハイマー病及び血管性認知症を有する個体における記憶促進剤としても、メチレンブルーが有用である可能性がある」。
【００２０】
Wrubel et al. (2007) ("Methylene blue facilitates the extinction of fear in an animal model of susceptibility of learned helplessness." Neurobiol. Learn. Mem. 2007, 87: 209-217)は、雌先天性無力症ラットにおける条件性恐怖消退に対するメチレンブルーの効果を試験した。該著者らは、消退取得の最中に投与された場合、メチレンブルーは記憶保持の消退を促進しないということを見出した。つまり、ＭＢは消退の習得に対する効果を有さない。それにも関わらず、該著者らは以前の外傷性刺激の忘却をＭＢが促進したと報告している。彼らは、「メチレンブルーは、擬似体験療法の補助として恐怖消退を円滑にし得る」という推論を引き出している。つまり、著者らは、ある特定の状況における健忘性作用を達成するための、ＭＴＣの使用を再び主張しているのである。
【００２１】
Callaway et al. (2002)、Riha et al. (2005)及びCallaway et al. (2004)は、以下の一般的機序を述べるのに際してほぼ同じ様式の言葉を用いている：「記憶を向上するための伝統的な薬理的処置は特異的シナプス伝達物質に照準を合わせる一方、メチレンブルーのような代謝促進剤は、ミトコンドリア酸化的代謝を標的とすることにより、特定の神経伝達系の調整に付随する副作用を産生することなく全体的な脳のエネルギー産生及び記憶保持を向上させ得る」(Callaway et al., 2002)。したがって、彼らがメチレンブルーの使用を示唆する臨床症状は、リー病及びアルツハイマー病としてより具体的に列挙される「ミトコンドリア機能不全に付随する神経変性障害」(Callaway et al., 2002)、又は「アルツハイマー病及び血管性認知症を有する個体など、脳の酸化的代謝が低下しているヒト」(Riha et al., 2005)である。
【００２２】
列挙されたいずれの研究も、ＭＴＣがＭＣＩの処置において症候的に使用できるという推論を引き出すものではなく、またその推論を引き出す根拠を与えるものでもなかった。
【００２３】
しかしながら、以下の実施例において、タウ病状、神経変異性障害、血管性認知症、酸素消費不全の疾患又はミトコンドリア欠損が存在しない別々の認知障害モデル（高齢の野生型マウスを含む）においてジアミノフェノチアジン（例えば、ＭＴＣ）の使用が実証された。このことは、上記の状況における公知の先行技術の効果を考慮すると、全く予測することができない。具体的には、ジアミノフェノチアジン（例えば、ＭＴＣ）は、見込みがないミトコンドリア機能不全、脳の低下した酸化的代謝又は血管機能障害の状況において記憶を向上することが示されている。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明
この予期されない発見は、したがって、（上述のように）新規な処置が著しく必要とされている、ＭＣＩの症状軽減の提供を示唆するものである。
【００２５】
したがって、本発明は様々な態様において以下を提供する：
ｉ）患者におけるＭＣＩの処置のための医薬の調製（又は製造方法）におけるＤＡＰＴＺ化合物の使用。該医薬は、ＤＡＰＴＺ化合物を活性成分として又は活性成分の１種として含むように調製又は製造される。
ｉｉ）有効量のＤＡＰＴＺ化合物を投与することを含む、患者におけるＭＣＩを処置する方法。
ｉｉｉ）有効量のＤＡＰＴＺ化合物を投与することを含む、患者におけるＭＣＩの処置のためにＤＡＰＴＺ化合物を使用するための方法。
【００２６】
以下に好ましいＤＡＰＴＺ化合物をより詳細に述べる。
【００２７】
有効量の投与は、患者に利益、例えば健忘症状の寛解をもたらすものである。
【００２８】
ジアミノフェノチジンは、単独で、又は他の処置と組み合わされて、同時にもしくは連続して投与され得る。
【００２９】
興味深いことに、以下の実施例におけるＭＴＣの作用は、一定期間内での向上に特異的であり、一定期間記憶促進に対しても傾向があったため、ＤＡＰＴＺ化合物による記憶障害の回復は、コリン系に対する作用を介するものではないと考えられている。したがって、処置は非コリン性機序を介して利益を提供するようなものであり得る。同様に、処置は非タウ凝集阻害機序を介して利益を提供するようなものであり得る。興味深いことに、薬剤を個別に投与した場合に、ＭＴＣは、リバスチグミンより良い治療指数を示しただけでなく、リバスチグミン及びＭＴＣの両方を有効量未満の投与で同時投与すると、学習欠損及びスコポラミンに誘発された記憶障害の回復において相乗的に作用した。したがって、ＣｈＥＩ療法と組み合わせる場合、ＭＴＣの効果は増幅されるようであり、これは、この組み合わせ療法が症状の寛解だけでなく神経細胞の代謝にも有益に寄与し得、それにより薬剤の投与をより少なくすることができ、副作用の危険性を最小限にし得るという事実を支持するものである。
【００３０】
ＭＣＩの対症療法のためのＭＴＣのようなＤＡＰＴＺ化合物の、コリン作動性薬剤（例えば、アセチルコリンの作用を増強するか、又は模倣するもの）との組み合わせによる使用は、本発明の一態様である。
【００３１】
したがって、１つの態様において、処置は場合により１種以上の他の薬剤、例えば１種以上のコリンエステラーゼ阻害剤（例えばドネペジル（Aricept（商標）としても知られる）、リバスチグミン（Exelon（商標）としても知られる）、ガランタミン（Reminyl（商標）としても知られる）、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（例えばメマンチン（Ebixa（商標）、Namenda（商標）としても知られる）、ムスカリン受容体アゴニスト、及び／又はβ−アミロイドの生成促進につながるアミロイド前駆体タンパク質プロセッシングの阻害剤との組み合わせであり得る。
【００３２】
ＭＣＩの評価及び診断
ＭＣＩの概念の本質に対する議論が未だに文献でなされているが（Gauthier S. et al., Mild Cognitive Impairment,  Lancet, 2006; 367: 1262-1270;  Petersen RC et al. Neuropathological features of amnestic mild cognitive impairment. Arch Neurol 2006; 63: 665-672を参照）、ＭＣＩは有効な疾患標的であるとＦＤＡにより認識されている。ＭＣＩは、認知症の診断に対する臨床基準を満たさないが、軽度の認知障害を有するものとして定義されている。
【００３３】
ＭＣＩ徴候の代表的な基準は、以下に列挙される特性を含む。
【００３４】
Ａ．患者は、正常でも認知症でもない。
【００３５】
Ｂ．対象認識試験（記憶の二次試験）に関連して、時間経過と共に客観的に測定される低下及び／又は自己及び又は情報提供者による主観的な低下の報告で示される認知の悪化のエビデンスがある。
【００３６】
Ｃ．日常生活の活動は維持され、複雑な道具的機能は損なわれていないか、又は最小限に損なわれている。
【００３７】
（Winblad, B. et al. (2004) Mild cognitive impairment - beyond controversies, towards a concensus: report of the International Working Group on Mild Cognitive Impairment. J. Intern. Med. 256: 240-246も参照のこと。）
【００３８】
上記で用いられる用語「認知症」は、米国精神医学会（American Psychiatric Association）：精神障害の診断と統計の手引き(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders)、第４版、Washington, D.C., 1994 ("DSM-IV")において定義されるように、広義において精神病状を指す。DSM-IVは、「認知症」を、記憶障害を含む複数の認知欠損で特徴付けられるものとして定義し、様々な認知症を、推定される原因にしたがって列挙している。DSM-IVは、そのような認知症及び随伴する精神障害の診断、分類及び処置において一般に受け入れられている基準を規定している。
【００３９】
ＭＣＩは、「健忘症」であり得る。
【００４０】
１つの好ましい定義において、健忘性ＭＣＩを有する個人は、一般的な認知指標については対照患者に対して０．５以内の標準偏差を有し、そしてまた記憶性能については対照患者に対して１．５低い標準偏差を有する。客観的に確認された記憶の低下は、いずれの個人がＭＣＩを有するかを決定する上で有用である。
【００４１】
「ＭＣＩ−非健忘症」又は「ＭＣＩ−他」は、年齢及び教育に関して補正された平均より標準偏差で１．５より大きく下回る認知領域が２つ以上あるものとして定義され得る。
【００４２】
好ましい患者群
当該患者は、通常ＭＣＩと診断される者であるが、ＡＤとは診断されない（つまり、認知症を示さない）者である。患者は、上述のように症状軽減という利益を受ける。
【００４３】
患者は、例えば、４５、５０又は５５歳以上の年齢であり得る。
【００４４】
患者は、（ｉ）ブラークステージ、（ｉｉ）ＭＭＳＥスコアについて以下の基準の１つ又は全てを満たすものであり得る。
【００４５】
（ｉ）ブラークステージ
ブラークステージのスキームにおいては、疾患の進行は７つのステージに分けられる（ブラークステージ０（以降「ＢＳＴ ０」又は「Ｂ ０」と表す）〜ブラークステージ６（「ＢＳＴ ６」又は「Ｂ ６」））。このシステムは、ＡＤにおいて特徴的な神経原線維病理の神経解剖学的進行に基づくものである（Braak and Braak (Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathol (Berl). 1991;82(4):239-59)。
【００４６】
神経原線維の劣化を評価する方法は、ＷＯ０２／０７５３１８に開示されている。
【００４７】
１つの態様において、本発明の方法によって処置することが望ましいＭＣＩ患者群は、ＢＳＴ ３以下、ＢＳＴ ２以下、より好ましくは１以下、より好ましくは０である。好ましい患者群は、臨床的認知症の可能性が比較的低く、そしてＡＤの初期ステージを呈する可能性が比較的低いが、それにも関わらずＭＣＩを煩う者である。
【００４８】
（ｉｉ）ＭＭＳＥスコア
患者は、ある時点における、ＭＣＩの安定的な又は減退しつつある特徴的な認知機能障害（さらなる関連の臨床的特色と共に）を示し得る。
【００４９】
ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）は、簡便かつ迅速な認知機能の類別を管理する方法として提案されている標準化された試験である（Folstein MF, Folstein SE & McHugh PR. ‘Mini-mental state’. A practical method for grading the cognitive state of patients for the clinician. Journal of Psychiatric Research 1975 12 189-198）。ＭＭＳＥは、高齢及び精神病患者における認知症に起因する認知不全の検出において最も広く用いられる認知スクリーニング手段である（Tombaugh TN & McIntyre NJ. The mini-mental state examination: a comprehensive review. Journal of the American Geriatric Society 1992 40 922-935）。ＭＭＳＥは、配向性、記憶、注意力及び言語機能を評価する。
【００５０】
本発明が好ましく用いられ得る患者は、ＭＭＳＥが、２４、２５、２６、２７、２８又は２９以下、より好ましくはＭＭＳＥが２４、２５又は２６以下、最も好ましくはＭＭＳＥが２４又は２５以下の者であり得る。
【００５１】
利益及び処置
患者「を処置する」又は「に利益をもたらす」とは、病状の改善を意味し、例えば寛解、緩解、症状の減少、及び変性又は減退の速度低下のような任意の客観的及び主観的パラメータを含む。
【００５２】
症状の処置又は改善は、客観的又は主観的パラメータに基づくものであってもよく、神経精神的試験及び／又は精神医学的評価の結果、例えば、軽度の記憶喪失又は障害の軽減、及び／又は他の軽度の認知欠損の軽減を示す記憶タスク試験の成績向上を含む。
【００５３】
製品及びキット
別の態様において、本発明はＭＣＩを煩う患者におけるＭＣＩの処置のための薬剤製品であって、該薬剤製品が、ＭＣＩの処置用であることを表示するラベルが貼られているか又はそのラベルを伴う容器を含み、該容器が、それぞれ少なくとも１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤、及び活性成分としての、単離され純粋である、本明細書に記載のものから選択されるＤＡＰＴＺ化合物を含む１以上の投与単位を含有している、薬剤製品である。
【００５４】
本発明はさらに、ＤＡＰＴＺ化合物、ならびに適応症、用量及びＭＣＩの処置のためのＭＴＣ投与スケジュールを教示する取扱い説明書を含む、ヒトにおいてＭＣＩを処置するためのキットを提供する。
【００５５】
ジアミノフェノチアジン（ＤＡＰＴＺ）化合物
本発明は、以下の式の一つを有する特定のジアミノフェノチアジン化合物及びその類似体、ならびにその薬学的に許容しうる塩、水和物及び溶媒和物（以降「ジアミノフェノチアジン」又は「ジアミノフェノチアジン化合物」として総称される）に関する。
【００５６】
【化１】
0005725605.tif 000002
式（１）は、還元型の化合物を表し、他方、式（２）、（３）及び（４）は、それぞれ酸化型の化合物を表す。
【００５７】
一つの実施態様において、化合物は、式（１）で示される化合物、ならびにその薬学的に許容し得る塩、水和物及び溶媒和物から選択される。
【００５８】
一つの実施態様において、化合物は、式（２）又は（３）で示される化合物、ならびにその薬学的に許容し得る塩、水和物及び溶媒和物から選択される。
【００５９】
一つの実施態様において、化合物は、式（４）で示される化合物、ならびにその薬学的に許容し得る塩、水和物及び溶媒和物から選択される。
【００６０】
上記の構造はそれぞれ、数ある等価な共鳴構造の１つに過ぎず、これらは全てその代表的な構造によって包含されるものとする。例えば、構造（４）は、以下に示される数ある等価な共鳴構造の１つに過ぎず、これらは全て構造（４）によって包含されるものとする：
【００６１】
【化２】
0005725605.tif 000003
【００６２】
炭素環原子の置換基
上記の式のそれぞれにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
−Ｆ；−Ｃｌ；−Ｂｒ；−Ｉ；
−ＯＨ；−ＯＲ；
−ＳＨ；−ＳＲ；
−ＮＯ２；
−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ；
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ；−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ；
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＮ１ＲＮ２；
−ＮＨ２；−ＮＨＲ；−ＮＲ２；−ＮＲＮ１ＲＮ２；
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ；−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｈ；−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ；−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ；
−Ｒ
から選択され、
ここで、各Ｒは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択され、
ここで、基−ＮＲＮ１ＲＮ２のそれぞれにおいて、独立に、ＲＮ１とＲＮ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００６３】
ＲＮ１とＲＮ２が、それらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７個の環原子を有する環を形成する、基−ＮＲＮ１ＲＮ２の例には、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、ピロリル、及び置換された形態、例えばＮ−メチルピペラジノのようなＮ−置換体が含まれる。
【００６４】
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
−Ｆ；−Ｃｌ；−Ｂｒ；−Ｉ；
−ＯＨ；−ＯＲ；
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ；−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ；
−Ｒ
から選択される。
【００６５】
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
−Ｒ
から選択される。
【００６６】
一つの実施態様において、各Ｒは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル
から選択される。
【００６７】
一つの実施態様において、各Ｒは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル
から選択される。
【００６８】
一つの実施態様において、各Ｒは、独立に：−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される。
【００６９】
一つの実施態様において、各Ｒは、独立に：−Ｍｅ及び−Ｅｔから選択される。
【００７０】
一つの実施態様において、Ｃ１〜６アルキル基は、Ｃ１〜４アルキル基である。
一つの実施態様において、Ｃ２〜６アルケニル基は、Ｃ２〜４アルケニル基である。
一つの実施態様において、Ｃ３〜６シクロアルキル基は、Ｃ３〜４シクロアルキル基である。
【００７１】
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、イソ−ペンチル、tert−ペンチル、ネオ−ペンチル、ヘキシル、イソ−ヘキシル等が含まれる。
【００７２】
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル基の例には、プロペン−１−イル、プロペン−２−イル、ブテン−１−イル、ブテン−２−イル、ブテン−３−イル等が含まれる。
【００７３】
非置換のＣ３〜６シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロプロピル−メチル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が含まれる。
【００７４】
一つの実施態様において、Ｃ６〜１０カルボアリール基は、Ｃ６カルボアリール基である。
一つの実施態様において、Ｃ５〜１０ヘテロアリール基は、Ｃ５〜６ヘテロアリール基である。
一つの実施態様において、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル基は、Ｃ６カルボアリール−Ｃ１〜２アルキル基である。
【００７５】
非置換のＣ６〜１０カルボアリール基の例には、フェニル、ナフチルが含まれる。
【００７６】
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール基の例には、ピロリル、チエニル、フリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニルが含まれる。
【００７７】
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル基の例には、ベンジル、フェニルエチルが含まれる。
【００７８】
一つの実施態様において、任意の置換基（例えば、脂肪族Ｃ1〜６アルキル、脂肪族Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ６〜１０カルボアリール、Ｃ５〜１０ヘテロアリール、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル上の）は、独立に：
−Ｆ；−Ｃｌ；−Ｂｒ；−Ｉ；
−ＯＨ；−ＯＲ’；
−ＳＨ；−ＳＲ’；
−ＮＯ２；
−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’；
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ；−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’；
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ’；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’２；−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｎ１Ｒ’Ｎ２；
−ＮＨ２；−ＮＨＲ’；−ＮＲ’２；−ＮＲ’Ｎ１Ｒ’Ｎ２；
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ；−Ｎ’ＲＣ（＝Ｏ）Ｈ；−ＮＨＣ（＝Ｏ）’Ｒ；−Ｎ’ＲＣ（＝Ｏ）’Ｒ；
−Ｒ’
から選択され、
ここで、各Ｒ’は、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択され、
ここで、基−ＮＲ’Ｎ１Ｒ’Ｎ２のそれぞれにおいて、独立に、Ｒ’Ｎ１とＲ’Ｎ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００７９】
一つの実施態様において、任意の置換基（例えば、脂肪族Ｃ1〜６アルキル、脂肪族Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ６〜１０カルボアリール、Ｃ５〜１０ヘテロアリール、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル上の）は、独立に：
−Ｆ；−Ｃｌ；−Ｂｒ；−Ｉ；
−ＯＨ；−ＯＲ；
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ；−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’；
−Ｒ’
から選択される。
【００８０】
一つの実施態様において、任意の置換基（例えば、脂肪族Ｃ1〜６アルキル、脂肪族Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ６〜１０カルボアリール、Ｃ５〜１０ヘテロアリール、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル上の）は、上記に定義した通りであり、ただし、各Ｒ’は、独立に
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択される。
【００８１】
一つの実施態様において、任意の置換基（例えば、脂肪族Ｃ1〜６アルキル、脂肪族Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ６〜１０カルボアリール、Ｃ５〜１０ヘテロアリール、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル上の）は、上記に定義した通りであり、ただし、各Ｒ’は、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル
から選択される。
【００８２】
一つの実施態様において、任意の置換基（例えば、脂肪族Ｃ1〜６アルキル、脂肪族Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ６〜１０カルボアリール、Ｃ５〜１０ヘテロアリール、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル上の）は、上記に定義した通りであり、ただし、各Ｒ’は、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル
から選択される。
【００８３】
一つの実施態様において、任意の置換基（例えば、脂肪族Ｃ1〜６アルキル、脂肪族Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ６〜１０カルボアリール、Ｃ５〜１０ヘテロアリール、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル上の）は、上記に定義した通りであり、ただし、各Ｒ’は、独立に：−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される。
【００８４】
一つの実施態様において、任意の置換基（例えば、脂肪族Ｃ1〜６アルキル、脂肪族Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ６〜１０カルボアリール、Ｃ５〜１０ヘテロアリール、Ｃ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル上の）は、上記に定義した通りであり、ただし、各Ｒ’は、独立に：−Ｍｅ及び−Ｅｔから選択される。
【００８５】
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される。
【００８６】
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ及び−Ｅｔから選択される。
【００８７】
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅから選択される。
【００８８】
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のうちの４つ以外は、全て−Ｈである。
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のうちの２つ以外は、全て−Ｈである。
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のうちの１つ以外は、全て−Ｈである。
一つの実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、−Ｈである。
【００８９】
アミノ基
上記の式のそれぞれにおいて、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に、−Ｈ、又は上記でＲについて定義したとおりであるか；あるいはＲ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９０】
例えば、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に、上記でＲについて定義したとおりであるか；あるいはＲ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９１】
例えば、一つの実施態様において、各基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択されるか、あるいは、
Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９２】
例えば、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択されるか、あるいは、
Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９３】
別の例として、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル
から選択されるか、あるいは、
Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９４】
別の例として、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル
から選択されるか、あるいは、
Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９５】
別の例として、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル
非置換のＣ３〜６シクロアルキルから選択されるか、あるいは、
Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９６】
別の例として、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；
から選択されるか、あるいは、
Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【００９７】
別の例として、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される。
【００９８】
別の例として、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡとＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ及び−Ｅｔ（例えば、−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢは、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ２、−ＮＨＥｔ、−ＮＥｔ２又は−ＮＭｅＥｔである）から選択される。
【００９９】
別の例として、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＡ及びＲ３ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅ（例えば、−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢは、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ又は−ＮＭｅ２である）から選択される。
【０１００】
正確な類似性を持って、上記の式のそれぞれにおいて、基−ＮＲ７ＮＡＲ７ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＡ及びＲ７ＮＢのそれぞれは、独立に：−Ｈ又は上記でＲについて定義したとおりであるか；あるいはＲ７ＮＡとＲ７ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【０１０１】
例えば、一つの実施態様において、基−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＡ及びＲ７ＮＢのそれぞれは、独立に、上記でＲについて定義したとおりであるか；あるいはＲ７ＮＡとＲ７ＮＢは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７個の環原子を有する環を形成する。
【０１０２】
一つの実施態様において、−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢ及び−ＮＲ７ＮＡＲ７ＮＢは、もし共に存在する場合には、同一である。
一つの実施態様において、−ＮＲ３ＮＡＲ３ＮＢ及び−ＮＲ７ＮＡＲ７ＮＢは、もし共に存在する場合には、異なっている。
【０１０３】
上記の式のそれぞれにおいて、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に、−Ｈ、又は上記でＲについて定義したとおりである。
【０１０４】
例えば、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に、上記でＲについて定義したとおりである。
【０１０５】
例えば、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択される。
【０１０６】
例えば、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール；置換されたＣ６〜１０カルボアリール；
非置換のＣ５〜１０ヘテロアリール；置換されたＣ５〜１０ヘテロアリール；
非置換のＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル；置換されたＣ６〜１０カルボアリール−Ｃ１〜４アルキル
から選択される。
【０１０７】
別の例として、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル
から選択される。
【０１０８】
別の例として、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；置換された脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；置換された脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル；置換されたＣ３〜６シクロアルキル
から選択される。
【０１０９】
別の例として、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：
−Ｈ；
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル
から選択される。
【０１１０】
別の例として、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：
非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキル；
非置換の脂肪族Ｃ２〜６アルケニル；
非置換のＣ３〜６シクロアルキル
から選択される。
【０１１１】
別の例として、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ及び−ｉＰｒから選択される。
【０１１２】
別の例として、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ及び−Ｅｔ（例えば、＝ＮＲ３ＮＣは、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ又は＝ＮＥｔである）から選択される。
【０１１３】
別の例として、一つの実施態様において、基＝ＮＲ３ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ３ＮＣは、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅ（例えば、＝ＮＲ３ＮＣは、＝ＮＨ又は＝ＮＭｅである）から選択される。
【０１１４】
正確な類似性を持って、上記の式のそれぞれにおいて、基＝ＮＲ７ＮＣのそれぞれにおいて、存在する場合には、Ｒ７ＮＣは、独立に、上記でＲ３ＮＣについて定義したとおりである。
【０１１５】
窒素環原子置換基
さらに、正確な類似性をもって、上記の式のそれぞれにおいて、ＲＮ１０は、存在する場合には、独立に、上記でＲ３ＮＣ（又はＲ７ＮＣ）について定義したとおりである。
【０１１６】
例えば、一つの実施態様において、ＲＮ１０は、存在する場合には、独立に：−Ｈ及び非置換の脂肪族Ｃ１〜６アルキルから選択される。
【０１１７】
例えば、一つの実施態様において、ＲＮ１０は、存在する場合には、独立に：−Ｈ、−Ｍｅ及び−Ｅｔから選択される。
【０１１８】
例えば、一つの実施態様において、ＲＮ１０は、存在する場合には、独立に：−Ｈ及び−Ｍｅから選択される。
【０１１９】
例えば、一つの実施態様において、ＲＮ１０は、存在する場合には、独立に、−Ｈである。
【０１２０】
カウンターイオン
Ｘ−は、存在する場合には、電気的中性を達成するための１つ以上のアニオンカウンターイオンである。
【０１２１】
好適なアニオンカウンターイオンの例は、見出し「塩」のもとで述べられている。
【０１２２】
一つの実施態様において、Ｘ−は、独立に、ハロゲンアニオン（すなわち、ハライド）である。
一つの実施態様において、Ｘ−は、独立に、Ｃｌ−、Ｂｒ−又はＩ−である。
一つの実施態様において、Ｘ−は、独立に、Ｃｌ−である。
一つの実施態様において、Ｘ−は、独立に、ＮＯ３−である。
【０１２３】
組み合わせ
上記の実施態様の有望な組み合わせは全て、本明細書中に各組み合わせが個別かつ明白に記述されているかのように開示されている。
【０１２４】
異性体
特定の化合物は、１つ以上の具体的な幾何学的、光学的、鏡像異性的、ジアステレオ異性的、エピマー的、アトロプ的、立体異性的、互変異性的、立体配座的又はアノマー的形態で存在し得る。その例には、シス及びトランス体；Ｅ及びＺ体；ｃ、ｔ及びｒ体；エンド及びエキソ体；Ｒ、Ｓ及びメソ体；Ｄ及びＬ体；ｄ及びｌ体；（＋）及び（−）体；ケト、エノール及びエノラート体；シン及びアンチ体；シンクリナル及びアンチクリナル体；α及びβ体；アキシャル及びエカトリアル体；ボート、椅子、ねじれ、エンベロープ、半椅子型；ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されず、以降総称して「異性体」（又は「異性型」）と呼ばれる。
【０１２５】
ここで、互変異性型について以下に述べる場合を除いては、特に本明細書で使用される用語「異性体」からは、構造的（又は構成的）異性体（例えば、単に空間における原子の位置ではなく、むしろ、原子間の結合が異なる異性体）が具体的に除かれることに留意すべきである。例えば、メトキシ基の言及は、−ＯＣＨ３は、その構造異性体であるヒドロキシメチル基、−ＣＨ２ＯＨに言及するものであるとは解釈されない。同様に、オルト−クロロフェニルの言及は、その構造異性体であるメタ−クロロフェニルに言及するものであるとは解釈されない。しかしながら、構造の集合の言及は、その集合に該当する構造異性体も含み得る（例えば、Ｃ１〜７アルキルは、ｎ−プロピル及びイソ−プロピルを含み、ブチルは、ｎ−、イソ−及びtert−ブチルを含み、メトキシフェニルは、オルト−、メタ−及びパラ−メトキシフェニルを含む）。
【０１２６】
上記の排除は、互変異性型については関係せず、例えば次の互変異性型の対：ケト／エノール（以下に図解される）、イミン／エナミン、アミド／イミドアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、Ｎ−ニトロソ／ヒドロキシアゾ及びニトロ／アシ−ニトロに見られる、ケト、エノール及びエノラート型などについては関係しない。
【０１２７】
【化３】
0005725605.tif 000004
【０１２８】
用語「異性体」には、１つ以上の同位体置換がされた化合物が具体的に含まれていることに留意すべきである。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）及び３Ｈ（Ｔ）を含む任意の同位体であってもよく；Ｃは、１１Ｃ、１２Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃを含む任意の同位体であってもよく；Ｏは、１６Ｏ及び１８Ｏを含む任意の同位体であってもよい；及び同等のものである。
【０１２９】
他にことわりのない限り、特定の化合物の言及は、そのような異性体の全てを含み、その（完全な又は部分的な）ラセミ混合物及び他の混合物を含む。そのような異性体の製造方法（例えば、不斉合成）及び分離（例えば、分別結晶及びクロマトグラフィーの手法）は、当該技術分野において公知であるか、あるいはここで教示される方法又は公知の方法を、公知のように適合させることにより容易に得ることができる。
【０１３０】
塩
化合物の対応する塩、例えば薬学的に許容し得る塩を製造、精製及び／又は扱うことが便利又は望ましいことがある。薬学的に許容し得る塩の例は、Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19に述べられている。
【０１３１】
例えば、化合物がアニオン性である場合、またはアニオン性であり得る官能基（例えば、−ＣＯＯＨは、−ＣＯＯ−であり得る）を有している場合、塩は、好適なカチオンと形成され得る。好適な無機カチオンには、Ｎａ＋及びＫ＋のようなアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋のようなアルカリ土類カチオン、及びＡｌ３＋のような他のカチオンが含まれるが、これらに限定されない。好適な有機カチオンの例には、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ４＋）及び置換されたアンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例には、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン及びトロメタミンから、ならびにアミノ酸、例えばリジン及びアルギニンから誘導されるものが含まれる。第４級アンモニウムイオンの例は、Ｎ（ＣＨ３）４＋である。
【０１３２】
化合物がカチオン性である場合、又はカチオン性であり得る官能基（例えば、−ＮＨ２は−ＮＨ３＋であり得る）を有している場合、塩は、好適なアニオンと形成され得る。好適な無機アニオンの例には、以下の無機酸：塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸及び亜リン酸から誘導されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３３】
好適な有機アニオンの例には、以下の有機酸：２−アセチルオキシ安息香酸（acetyoxybenzoic）、酢酸、アスコルビン酸、アスパルギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、ケイ皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルケプトン酸（glucheptonic）、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオ酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、粘液酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸及び吉草酸から誘導されるものが含まれるが、これらに限定されない。好適なポリマー有機アニオンの例には、以下のポリマー酸：タンニン酸及びカルボキシメチルセルロースから誘導されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３４】
化合物は、混合塩の形態でも提供され得る（すなわち、塩又は別の塩と組み合わされる化合物）。例えば、メチル−チオニニウム塩化物塩化亜鉛混合塩（ＭＴＺ）は、メチル−チオニニウム塩化物（ＭＴＣ）、塩化物、及び別の塩である、塩化亜鉛の混合塩である。そのような混合塩は、用語「及びその薬学的に許容し得る塩」に包含されることが意図されている。
【０１３５】
他に断りのない限り、特定の化合物の引用は、その塩の形態も含む。
【０１３６】
水和物及び溶媒和物
活性化合物の対応する溶媒和物を製造、精製及び／又は扱うことが便利又は望ましいことがある。本明細書で使用される用語「溶媒和物」は、従来の意味においては溶質（例えば、化合物及び化合物の塩）と、溶媒との錯体を指す。溶媒が水である場合、溶媒和物は好都合には水和物と称され得、例えば一水和物、二水和物、三水和物などである。
【０１３７】
他に断りのない限り、特定の化合物の引用は、その溶媒和物の形態も含む。
【０１３８】
いくつかの好ましい実施例
いくつかの好ましいジアミノフェノチアジンには、以下、ならびにその薬学的に許容し得る塩、水和物及び溶媒和物が含まれる。
【０１３９】
【表１】
0005725605.tif 000005
0005725605.tif 000006
0005725605.tif 000007
0005725605.tif 000008
【０１４０】
一つの実施態様において、ジアミノフェノチアジンは、ＭＴＣ、ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＥＥＴＣ、チオニン及びトロニウム塩化物（トルイジンブルーＯとしても知られる）及び上記の化合物Ｑから選択される。化合物Ｑは、２００６年３月２９日に出願された米国特許仮出願第６０／７８６，６９０号、表題「3,7-Diamino-10H-Phenothiazine Salts and Their Use」（Wischik et al.−ＷＯ２００７／１１０６２７として公開）に基づく同時係属出願に記載されているように製造することができる。
【０１４１】
用量単位、ならびに化合物の配合及び投与
本明細書に記載されている化合物、組成物又は医薬の投与は、好ましくは「治療上有効な量」においてであり、したがって上述のように個人に対して利益を示すのに十分である。
【０１４２】
医薬に関して、実際の投与量、ならびに投与の速度及び経時変化は処置されるＭＣＩの性質及び重篤性に依存する。例えば用量の決定等の処置の指示は、一般の医療従事者及び他の医師の責任の範疇にあり、典型的には処置される障害、患者個人の病状、送達の場所、投与方法及び医療従事者に周知の他の要因を考慮するものである。
【０１４３】
本発明のフェノチアジンの例は、当該技術分野において既知であり、標準的なテキスト（例えばMerck Manual, Houben-Weyl, Beilstein E III/IV 27, 1214 ff, J. Heterocycl. Chem 21, 613 (1984)等）中で引用されている方法によって製造することができる。上記の式で示される化合物、その薬学的に許容し得る塩、又は与えられたアッセイで定義される物性を有することが見出された他の化合物が、毒性に関するさらなる試験の後で医薬として使用されるであろう（例えば医薬製剤の形態で）。
【０１４４】
広範な医学的適応における従前のメチレンブルーの薬学的使用が記載されており、これにはメトヘモグロビン血症の処置及び躁うつ病の予防が含まれ（Naylor (1986) Biol. Psychiatry 21, 915-920）、そしてＣＮＳ浸透とこれに続く全身投与が記載されている（Muller (1992) Acta Anat., 144, 39-44）。アズールＡ及びＢの産生は、メチレンブルーの通常の代謝的分解の産物として起こる（Di Santo and Wagner (1972a) J. Pharm. Sci. 61, 598-602; Di Santo and Wagner (1972b) J. Pharm. Sci. 61 1086-1094）。医薬品の投与は、例えば、経口的（例えば錠剤、コートされた錠剤、ドラジェ、硬及び軟ゼラチンカプセル、液剤、乳剤又は懸濁剤の形態で）、経鼻的に（例えば点鼻薬の形態で）又は直腸的に（例えば坐剤の形態で）など、非経口的に実行できる。しかしながら、投与は非経口的に、例えば筋肉内に又は静脈内に（例えば、注射剤の形態で）実行することもできる。
【０１４５】
組成物は、上述の成分に追加して、薬学的に許容し得る賦形剤、保存剤、可溶化剤、増粘物質、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香味料、浸透圧の変化させるための塩、緩衝剤又はコーティング剤を含んでもよい。そのような材料は、非毒性であって、活性物質の有効性を妨げないものであるべきである。担体又は他の材料の詳細な性質は、投与経路に依存し得る。技法及び手順の例は、"Remington's Pharmaceutical Sciences", 16th edition, Osol, A. (ed.), 1980に見出される。
【０１４６】
組成物が医薬組成物に配合される場合においては、その投与は、経口的に（例えば粉末、錠剤、コートされた錠剤、ドラジェ、硬及び軟ゼラチンカプセル、液剤、乳剤又は懸濁剤の形態で）、経鼻的に（例えば点鼻薬の形態で）又は直腸的に（例えば坐剤の形態で）など、非経口的に実行できる。しかしながら、投与は非経口的に、例えば筋肉内に、静脈内に、皮膚に、皮下に又は腹腔内に（例えば、注射剤の剤形で）に実行することもできる。
【０１４７】
したがって、例えば、医薬組成物が錠剤の形態である場合には、個体担体、例えばゼラチン又は佐剤を含み得る。錠剤、コートされた錠剤、ドラジェ及び硬ゼラチンカプセルの製造において、活性成分及びその薬学的に許容し得る酸付加塩は、薬学的に不活性な、無機及び有機賦形剤と共に加工され得る。例えば、ラクトース、トウモロコシ、デンプン又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等が、そのような錠剤、ドラジェ及び硬ゼラチンカプセル用の賦形剤として使用できる。軟ゼラチンカプセルに好適な賦形剤は、例えば植物油、ワックス、脂肪、半固体及び液体ポリオール等である。組成物が液体の医薬配合物の形態である場合、それは水、石油、動物又は植物油、鉱物油又は合成油のような液体の担体を一般的に含む。生理食塩水、デキストロース又は他のサッカリド溶液、あるいはエチレングリコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールのようなグリコールも含まれ得る。液剤及びシロップの製造用の他の好適な賦形剤は、例えば、水、ポリオール、サッカロース、転化糖、グルコース、トレハロース等である。注射剤に好適な賦形剤は、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油等である。静脈内、皮膚又は皮下注射、あるいは脳へのカテーテル内注入のためには、活性成分は、パイロジェンを含まず、好適なｐＨ、等張性及び安定性を有する、非経口的に許容可能な水溶液の形態である。当該技術分野に関連した当業者は、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性媒体を用いる好適な液剤を調製できるであろう。保存剤、安定剤、緩衝剤及び／又は他の添加剤も、必要に応じて含まれてもよい。
【０１４８】
本明細書の化合物の、リガンドとしての使用は、類似の担体又は組成物を利用し得る。
【０１４９】
したがって、ジアミノフェノチアジン（例えばＭＴＣ）がヒト又は動物の身体の処置又は治療の方法に用いられる本発明の態様において、その方法は、好ましくは有効量のジアミノフェノチアジンを経口的に投与することを伴う。
【０１５０】
好ましくは、医薬は経口投与に適応するようにされており、好ましくは固形製剤である。
【０１５１】
好ましくは、製剤は経口的投与される。好ましくは、１日の総投与量は４００、３００、２００又は１００mg以下である。これは例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、６０、８０、９０、１００、１１０、１２０又は１３０mg t.i.d.（一日三回）の投与単位からなるものであってもよい。
【０１５２】
あるいは、１０、２０、３０、４０、５０、６０、６０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０又は２００mg b.i.d.（一日二回）の投与単位からなるものであってもよい。
【０１５３】
好ましくは、処置は少なくとも２、３又は４週間継続される。
【０１５４】
これらの投与量に関する説明書は、文書の形態で、本発明の薬剤製品の容器上又はその中に含まれ得る。
【０１５５】
投与が静脈内である場合、ジアミノフェノチアジンがＭＴＣではないことが好ましい。
【０１５６】
本明細書中でなされる任意の相互参照の開示は、当業者が本開示を補足するのに必要とされることを考慮して、本発明に具体的に組み込まれる。
【０１５７】
以下、非制限的な図及び実施例を参照し、本発明をさらに記載する。これらの観点から当業者は、本発明の他の実施態様を思いつくであろう。
【０１５８】
本明細書に引用される全ての引例の開示は、当業者が本発明を実施することを考慮して、相互参照により本発明に具体的に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
【図１】空間的参照記憶タスクにおける薬剤の効果。縦軸は、全ての薬剤群に対する１日当たりの経路長（６回の試行の平均値±標準誤差）を表す。
【図２】プールの外面積１０％において費やした時間の割合として表現される、接触走性に対する薬剤の効果；１日の平均値±標準誤差。
【図３】水迷路中での動物の水泳速度に対する薬剤の効果。平均値±標準誤差。
【図４】水迷路タスクの学習段階にある動物の水泳状況の生存プロット。縦軸は、異なる処置群に関する経路長（すなわち、泳いだ距離）に対して、依然として泳ぎ手でいる確率（すなわち、プラットホームを見つけていない）を示す。
【図５】処置後の効果をＣｏｘ比例障害分析により決定されるパラメータを用いて標準化すると、残余分配は、経路長が予測された基礎的指数関数に非常に近いことを示した。
【図６】グラフ中、経路長を表す評価基準が、各処置群について日数に対してプロットされる。全体としての処置の違い（日数に対する平均）が、「平均」という見出しの上に示される。特定の処置群間の違いに対応するｐ値が与えられる。
【図７】逃避潜時を表す評価基準が、各処置群について日数に対してプロットされる。全体としての処置の違い（日数に対する平均）が、「平均」という見出しの上に示される。特定の処置群間の違いに対応するｐ値が与えられる。
【図８】プラットホームを取り除いた後に４分の１領域（target quadrant）で費やした時間の割合。４日目及び５日目は、それぞれ学習段階の完了後１．５時間及び２４時間での能力を表す。処置群間の違いの統計的有意性を示すｐ値及び２５％の可能性レベルが、日ごと及び全日数の両方に関して、日数に対する平均について示される（「平均」）。
【図９】下記に基づく複合的パラメータである、計算された「局所化」：以前のプラットホームの位置への訪問回数；プラットホームの直径の２倍の面積として定義される周辺領域への訪問回数；この周辺領域中にいる時間；及び４分の１領域中にいる時間。４日目は、学習段階の完了後１．５時間での能力を表す。５日目は、学習段階の完了後２４時間での能力を表す。処置群間の違いの統計的有意性を示すｐ値及び２５％の可能性レベルが、日ごと及び全日数の両方に関して、日数に対する平均について示される（「平均」）。
【図１０】プラットホーム領域に到達するのに要する時間及びプラットホームの直径の２倍の面積として定義される領域に到達するのに要する時間に基づく複合的パラメータである、計算された「逃避潜時」。４日目は、学習段階の完了後１．５時間での能力を表す。５日目は、学習段階の完了後２４時間での能力を表す。処置群間の違いの統計的有意性を示すｐ値及び２５％の可能性レベルが、日ごと及び全日数の両方に関して、日数に対する平均について示される（「平均」）。
【図１１】４日目（学習段階の完了後１．５時間）と５日目（学習段階の完了後２４時間）に接触走性ゾーン（プール領域の外側１０％として定義される）で費やした時間の割合。処置群間の違いの統計的有意性を示すｐ値が、日ごと及び全日数の両方に関して、日数に対する平均について示される（「平均」）。接触走性行動が少ない動物ほど不安が少ない。
【図１２】経路長（cm）、逃避潜時（秒）、速さ（cm/s）及び接触走性（ゾーン中で費やした時間の割合）の、齢（月齢）による全体を通した変化。データは、実験の学習段階の４日間について平均化され、プラットホームに到達しないマウスの経路長における天井効果を排除している。標準誤差バーが与えられる。
【図１３】経路長（cm）、逃避潜時（秒）、速さ（cm/s）及び接触走性（ゾーン中で費やした時間の割合）の平均値の、齢（月齢）による１日毎の変化。実験の学習段階の４日間について平均化され、プラットホームに到達しないマウスの経路長における天井効果を排除している。標準誤差バーが与えられる。
【図１４】水迷路タスクの学習段階にある動物の水泳状況の生存プロット。縦軸は、異なる処置群における経路長（すなわち、泳いだ距離）に対して、依然として泳ぎ手でいる確率（すなわち、プラットホームを見つけていない）を示す。
【図１５】Ｃｏｘ比例障害分析により決定されるパラメータを用いて処置後の効果を標準化すると、残余分配は、経路長は予測された基礎的指数関数に非常に近いことを示した。
【図１６】グラフ中、経路長を表す評価基準が、各処置群について齢に対して日ごと及び全日数の平均ごとにプロットされる。特定の処置群間の違いに対応するｐ値が与えられる。
【図１７】グラフ中、逃避潜時を表す評価基準が、各処置群について齢に対して日ごと及び全日数の平均ごとにプロットされる。特定の処置群間の違いに対応するｐ値が与えられる。
【図１８】プラットホームを取り除いた後に４分の１領域で費やした時間の割合。４日目及び５日目は、各齢群（２．５、６及び１３ヶ月）に対して示され、それぞれ学習段階の完了後１．５時間及び２４時間での成果を表す。処置群間の違いの統計的有意性を示すｐ値及び２５％の可能性レベルが示される。
【図１９】異なる齢及び処置群におけるマウスの代表的な水泳経路（Ｔは、４分の１領域を特定する）。
【図２０】下記に基づく複合的パラメータである、計算された「局所化」：以前のプラットホームの位置への訪問回数；プラットホームの直径の２倍の面積として定義される周辺領域への訪問回数；この周辺領域中にいる時間；及び４分の１領域中にいる時間。２つの評価時刻（学習段階の完了後１．５時間及び２４時間）が、各齢群（２．５、６及び１３ヶ月）に関して示される。与えられるｐ値は、日ごとの違いの処置群間の統計的有意性を示す。
【図２１】対照と比較した有効用量より少ない薬剤同時投与。図は、下記評価基準に関して４つの群の比較を示す：経路長（Ａ及びＢ）；経路長の減少（Ｃ）；水泳速度（Ｄ）；接触走性（Ｅ）；及び空間記憶（Ｆ）。
【実施例】
【０１６０】
実施例
実施例１−ＭＴＣ及びスコポラミンの、認知における効果
１）研究の目的及び背景
目的は、ＭＴＣが、ムスカリンアンタゴニストであるスコポラミンの急性注入により誘発される認知欠損を、逆行させることが可能かどうかを調べることである。スコポラミン誘発性記憶障害は、ＭＣＩ又は認知症に見出され得るような健忘症を模倣するのに広く用いられる。
【０１６１】
スコポラミン誘発性記憶障害
中枢ムスカリン受容体の薬理的遮断は、学習及び想起を検証する様々なタスクを行う広範な動物モデルにおいて、短期間の健忘症様の応答を産生する（Flood, T. and A. Cherkin, Scopolamine effects on memory retention on mice: A model of dementia? Behav. Neurol. Biol. 45 (1981), pp. 169-184）。スコポラミンは、タスク訓練の直前に投与された場合において特に効果的である。
【０１６２】
モーリス水迷路
げっ歯類の作業記憶の評価において最も広く実施されるパラダイムの１つが、モリス水迷路空間通行タスクである（Morris, R. Development of a water-maze procedure for studying spatial learning in rat. J. Neurosci. Methods 11 (1984), pp. 47-60）。
【０１６３】
スコポラミンの低用量投与は、タスク能力を効果的に妨げることが示された。スコポラミンの迷路能力に対する効果は、古典的（中枢−作用性の）ムスカリン受容体アゴニスト、特にアセチルコリンエステラーゼの阻害剤の投与により逆行させることができる（Shannon, H.E. and Peters S. C. A comparison of effects of cholinergic and dopaminergic agents on scopolamine-induced hyperactivity in mice. J. Pharmacol. Exp. Ther. 255 (1990), pp. 549-553）。
【０１６４】
２）材料及び方法
試験化合物
生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）、ＭＴＣ（Simpsons, UK）、スコポラミン臭化水素酸塩、Sigmaから購入した非特異的ムスカリンアンタゴニスト、及びポジティブコントロールとして用いられる酒石酸リバスチグミンからなる媒体中に、以下の試験化合物を調製した。
【０１６５】
リバスチグミンは、NovartisよりExelon（登録商標）として販売されているアセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。ドネペジル、ガランタミン及びラバスチグミンは、短期間における有効性が中程度であり、対症的であり、そして患者の小集団においてしか明白でないものの、アルツハイマー病の処置に関して多くの国で承認されている同様の阻害剤である。
【０１６６】
雌、３〜４月齢ＮＭＲＩマウスを、Harlan, UKより入手した。
【０１６７】
マウスを群毎に収容し（ケージ当たり７〜９匹）、明かりを７am〜７pmの間保ち、実験は明期に実施した。マウスは全部で８２匹であり、そのうち１２匹は、水迷路試験中の旋回行動のために研究から除外した。これらは６つの群に分けられ、以下のように薬剤の投与を受けた。
【０１６８】
【表２】
0005725605.tif 000009
【０１６９】
動物は２回の注射を受け、すなわち１回目（生理食塩水又はスコポラミン）を試験の３５分前に、そして２回目（生理食塩水、リバスチグミン、又はＭＴＣの２つの異なる用量のうちの１つ）を１回目の注射の５分後に受け、ＭＴＣが常に試験の３０分前に注射されるようにした。薬剤の注射量は動物の体重３０ｇ当たり０．２mlであり、これらは腹腔内に注射された。用量は、前述の通りであった。
【０１７０】
行動の試験を、モーリス水迷路空間通行タスク（Morris, 1984）を用いて行った。水迷路は、水面下１cmに水浸されたプラットホームが唯一の回避手段となっている、水が満たされたプール（直径１．５ｍ、２０±２℃）からなる。マウスを、４つの基本サイト（南、西、北及び東）から、プールの壁に向けて、ランダムな様式で放し、したがってマウスは、周りの手がかり（distal cue）を用いる空間的マッピングの方法により正確なプラットホームの位置についての空間的知識を獲得しなくてはならなかった。
【０１７１】
各動物に一日当たり６回の試行を行わせ、最長６０秒間泳がせ、プラットホーム上に３０秒間滞在させた。動物が割り当てられた時間（６０秒）中にプラットホームを見つけなかった場合、試験者によってプラットホームまで導かれた。試行間のインターバルは１０〜２０分であった。動物に４日間連続して訓練を受けさせ、訓練後約１．５及び２４時間プローブ試行（プール中にプラットホームがない状況での６０秒間の自由な水泳）を行わせ、短期及び長期の記憶をそれぞれ試験した。動物の行動は、頭上のカメラで記録し、データをＰＣに送信してオンライン保存及び分析（EthoVision basic version 3.0.8. Noldus Information Technology, Netherlands）を行った。ソフトウエアを、以下のように設定した：プール領域、直径１５０cm（２４０ピクセル）；接触走性ゾーン、直径１４１cm（プール領域の外側１０％、２２５ピクセル）；プラットホーム、直径１２cm（１９ピクセル）及びカウンター領域、直径２４cm（３８ピクセル）。
【０１７２】
３）結果
学習段階の結果は、従来のもの及び先端的なものの２つの分析方法で提示される。従来の分析は、行動神経薬理学の分野で一般的に実践されている統計的方法に従い、正規分布の最小二乗直線回帰分析が適切であるという仮定に基づいた分散分析（ＡＮＯＶＡ）を利用するものである。先端的分析は、データに内在する性質に基づいてモデルを作り、そして対応の統計的比較を実施するものである。概して同様な結論に至るが、先端的分析の方法の方が統計的により強固である。
【０１７３】
３．１−学習段階−従来の分析
４日間の訓練にわたる水泳経路長を各群ごとの１日の平均としてプールし、結果を図１に示す。
【０１７４】
スコポラミンと、続けて生理食塩水で処置したマウスは、タスクを学習せず、水泳経路長は４日間かけても減少せず、これにより薬剤で誘発される学習障害が裏付けられ、スコポラミン群に関しては日数による効果（Ｆ（３，３３）＝２．００４；ｐ＝０．１３２５）がなかった。薬剤による処置及び日数をファクターとして用いる２方向ＡＮＯＶＡによる分析は、薬剤に関して（Ｆ（５，１９２）＝９．３０５；ｐ＜０．０００１）の全体的な効果をもたらした。この効果は、主に［生理食塩水＋スコポラミン］群によるものである。なぜならば、分析からこの群を除外すると、全ての群が優れた学習カーブを提示し、強力な日数による効果（Ｆ（３，１５９）＝３６．９７；ｐ＜０．０００１）を示し、薬剤の効果を示さない（Ｆ＜１）ことが裏付けられたためである。これは、ＭＴＣ及びリバスチグミンの両方が、スコポラミンにより誘発される学習欠損を逆行させたことを示す。さらに、Callaway et al. (2004)の知見とは矛盾するが、ＭＴＣ（４mg/kg）は、単独で与えられた場合、すなわち他の障害を持たない動物に与えられた場合、この空間参照記憶パラダイムに対する効果を有さなかった。
【０１７５】
ＭＴＣの投与２つは、両方共、スコポラミンにより誘発される学習欠損を完全に逆行させた（１mg/kg（Ｆ（１，６６）＝１３．６５；ｐ＝０．００１３）；４mg/kg（Ｆ（１，６３）＝２２．１８；ｐ＝０．０００１）［生理食塩水＋スコポラミン］群に対する値）。リバスチグミンもまた、スコポラミンにより誘発される学習欠損を完全に逆行させた（Ｆ（１，６３）＝１７．５５；ｐ＝０．０００４）。
【０１７６】
マウスが壁を好む（接触走性）行動が、図２に描かれている。接触走性は、一般に不安の指標として捉えられ、プールの外側１０％で費やした時間の割合として定義される。通常、訓練の初日においては、動物にタスクの経験がなく、プールの端に沿って逃げようとする自然な傾向を有するため、接触走性が高くなる。
【０１７７】
薬剤処置及び日数を因子とした接触走性データの２方向ＡＮＯＶＡ分析は、薬剤（Ｆ（５，１９２）＝５．９５４；ｐ＝０．０００１）及び日数（Ｆ（３，１９２）＝５１．７０；ｐ＜０．０００１）の主要な効果を明らかにした。［スコポラミン＋生理食塩水］で処置された群は、全ての訓練段階において最も高い接触走性活動を示し、これは、時間とともに減少することはなかった。対照的に、他の全ての群において、接触走性の減少が日数とともに見られた。したがって、ＭＴＣ及びリバスチグミンの両方が、スコポラミンの不安誘発効果を逆行させた。
【０１７８】
マウスの速さを分析すると、薬剤（Ｆ（５，１９２）＝４．４３８；ｐ＝０．００１６）及び日数（Ｆ（３，１９２）＝６．２６１；ｐ＝０．０００４）の効果が見出された（図３）。これは主に、訓練日の最後の２日にかけて速さが減少した［スコポラミン＋リバスチグミン］群によるものである。これは、しかしながら、この空間タスクを学習し、行う能力には影響を及ぼさなかった。全ての他の群が、同様の水泳速度を示した（Ｆ＜１．４）。
【０１７９】
３．２−学習段階−先端的分析
全ての動物及び処置から得た経路長のデータを、水泳距離が生存パラメータの変数であると考えられている生存分析パラダイムを用いて分析した。つまり動物は、プラットホームに到達するまでは泳ぎ手の状態で「生存している」と考えられる。この生存プロットの結果は図４に示されている。見て分かるように、動物が依然として泳ぎ手である可能性は、水泳距離が１５００cmを超えて増加するにつれて約２０％にまで減少する。つまり動物は、泳いだ距離が増大するほどプラットホームを見つける可能性が高くなる。
【０１８０】
処置の効果は、Ｃｏｘ比例障害法を用いて形式的にモデル化することができる。図５に示されるように、ひとたび処置の効果が水泳生存可能性を変化させることにより説明されると、残余分配は基礎的指数関数のそれに非常に近くなる。経路長データの基礎的分配が指数関数的であるという事実は、次のような行動解釈を有する。任意の所与の動物は、プラットホームがどこにあるのかという空間的手がかりを認識するまでは、ランダムに泳ぐようである。ひとたび動物がこの手がかりを認識すると、それはプラットホームへ真っ直ぐに泳ぐ。データを標準化するために必要なＣｏｘ比例障害分析から決定されたパラメータの違いは、いかなる所与のモーメントにおいても動物は水迷路の問題を解決するのに必要な手がかりを認識し得るという可能性に影響を与える種々の処置に関連した違いを反映する。
【０１８１】
データの基礎的指数関数的分配を認識し、経路長の対数変換により統計的分析を行って処置の違いを決定した。これらは、各日及び日数の平均について、処置条件の違いに対応するｐ値と共に図６にプロットされている。見て分かるように、全ての処置が、スコポラミンにより誘発される学習欠損を４日目までに逆行させる効果を有する。特に、リバスチグミン及びＭＴＣは、両方とも欠損を逆行させ、動物の能力レベルを対照と区別できないほどにまで戻した。したがって、ＭＴＣは、スコポラミン学習欠損を逆行させる上で少なくともリバスチグミンと等価である。しかしながら、図６のプロットを見て分かるように、ＭＴＣが生理食塩水で処置されたマウスにおいて学習を向上させたというエビデンスはない。したがって、Callaway et al. (2004)とは矛盾するが、ＭＴＣは、他の障害を持たないマウスにおいては、学習が向上しない。
【０１８２】
図７に示すように、プラットホームを探すための逃避潜時の分析において本質的に同一のパターンが見られる。
【０１８３】
３．３  記憶試験
全体として、４日目（すなわち、１．５時間で試験された記憶）及び５日目（すなわち、２４時間で試験された記憶）のプローブ試験における行動は、以下に記載されるパラメータに関して本質的に同様であった。したがって結論は、個々の日毎の比較が全てのプロットで示されてはいるものの、蓄積された４日目と５日目のデータに基づくものである。
【０１８４】
分析した主要なパラメータは、実験の学習段階においてプラットホームが位置していた４分の１領域中で動物が費やした時間の割合である。図８に分析の結果を示す。統計的分析に用いられたモデルは、線形混合効果モデルであり、処置、日間相互作用及び被検体毎の多様性（すなわち、いくつかのマウスは、処置による群分けによらず、記憶タスクにおいて潜在的に異なった行動をとる可能性がある）を考慮した。スコポラミン処置をしたマウスは、偶然より優れた行動をとることはなかった（すなわち、４分の１領域で費やす時間は２５％より有意な違いがなかった）。リバスチグミン処置は、スコポラミン欠損を逆行させなかった。これとは対照的に、１mg/kg及び４mg/kgの用量のＭＴＣは、スコポラミンにより発生した記憶欠陥を逆行させ、動物の能力レベルを生理食塩水処置した対照と区別できないほどにまで戻した。ＭＴＣ単独では、生理食塩水処置した対照マウスと比較して、記憶に対する識別可能な効果がなかった。
【０１８５】
複合的パラメータである「局在化」を、下記に基づいて計算した：プラットホームが位置する領域への訪問回数；プラットホームの直径の２倍の領域として定義される周辺領域への訪問回数；の周辺領域における時間；及び４分の１領域における時間。これらのパラメータは、プラットホームが学習段階より存在するものとして期待される領域での動物の探索行動の空間的正確性を全てが反映するという点において原則として同様である。図９に結果を示す。１mg/kg及び４mg/kgの用量のＭＴＣは、スコポラミンに対して有意な違いを示した。したがって、ＭＴＣの効果はスコポラミン欠損を逆行させるものである一方で、リバスチグミンは欠損を逆行させることが出来なかった。ＭＴＣ単独では、生理食塩水処置した対照マウスと比較して、空間的正確性に対する識別可能な効果がなかった。
【０１８６】
さらに用いられたパラメータは、「逃避潜時」であった。これは、プラットーホーム領域までの逃避潜時及びプラットホームの直径の２倍の領域として定義される周辺領域への逃避潜時に基づいた、計算による複合的パラメータである。短い逃避潜時は、時間領域における正確性を反映し、そして実験の学習段階より存在するものとして期待される領域に到達するまでに動物が費やす時間を査定する。図１０に結果を示す。日数について平均すると、［スコポラミン＋ＭＴＣ］と、スコポラミン単独もしくは［スコポラミン＋リバスチグミン］のいずれかとの間には、非常に著しい違いがある。生理食塩水処置された動物に比較して、スコポラミンにより産生される欠損は統計的有意性に至らなかったが、ＭＴＣは欠損を有意に改善することができた。リバスチグミンは、全ての欠損に対して効果を有さなかった。ＭＴＣ単独では、生理食塩水処置した対照動物と比較して、時間的正確性に対する識別可能な効果がなかった。
【０１８７】
実験の記憶段階において、接触走性も検討した。接触走性ゾーン（プール領域の外側１０％と定義される）で費やした時間は、不安の評価基準である。図１１から分かるように、生理食塩水処置された対照と比較して、スコポラミンは接触走性を増加させた（ただし、この違いはあまり著しいものではなかった）。しかしながら、「スコポラミン＋ＭＴＣ」およびＭＴＣ単独での処置は、スコポラミン処置された群と比較して接触走性行動を有意に減少させた。リバスチグミンで処置されたマウスは、スコポラミン又は生理食塩水のいずれかにより処置されたものより有意に異なることはなかった。
【０１８８】
４．実施例１からの結論
結果より、学習欠陥は、スコポラミンのコリン作動性阻害剤でマウスを処置することによって産生できるということが裏付けられる。予期したように、神経終末で役立つアセチルコリンを多く生成するアセチルコリンエステラーゼ阻害剤であるリバスチグミンは、スコポラミンにより産生される学習欠損を逆行させることができる。リバスチグミンは、アルツハイマー病及び関連の認知症の処置において使用されるアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に関して広く用いられる薬剤のクラスの１つである。リバスチグミン及び関連の薬剤は、ＭＣＩの対症療法においても使用することができ、この病状においてかなり重要な有益性を産生できる（例えば、Feldman, H.H., Ferris, S., Winblad, B., Sfikas, N., Mancione, L., He, Y., Tekin, S., Burns, A., Cummings, J., del Ser, T., Inzitari, D., Orgogozo, J.-M., Sauer, H., Scheltens, P., Scarpini, E., Herrmann, N., Farlow, M., Potkin, S., Charles, H.C., Fox, N.C. & Lane, R. (2007) Effect of rivastigmine on delay to diagnosis of Alzheimer's disease from mild cognitive impairment: the InDDEx study. Lancet Neurology 6, 501-512; Grundman, M., Petersen, R.C., Ferris, S.H., Thomas, R.G., Aisen, P.S., Bennett, D.A., Foster, N.L., Jack, C.R., Jr, Galasko, D.R., Doody, R., Kaye, J., Sano, M., Mohs, R., Gauthier, S., Kim, H.T., Jin, S., Schultz, A.N., Schafer, K., Mulnard, R., van Dyck, C.H., Mintzer, J., Zamrini, E.Y., Cahn-Weiner, D. & Thal, L.J. (2004)を参照）。軽度認知障害は、臨床試験においてアルツハイマー病及び通常の加齢とは区別することができる。
【０１８９】
リバスチグミンは、学習欠損を逆行させたものの、これは動物の記憶において識別可能な痕跡を何ら残さなかった。これは、様々な範囲のパラメータに着目する実験の記憶段階の分析において見られる。４分の１領域にいる時間である特定のパラメータは、スコポラミン単独又はリバスチグミンによる処置後のいずれにおいても、偶然より予期される２５％と異なるものではなかった。同様の結果が、より広い複合的パラメータであり、プラットホームが予期される領域の探索における動物の行動の空間的正確性を測定する「局在化」を用いた場合においても見られた。リバスチグミンは、スコポラミンにより産生される空間的正確性の損失を逆行させることはなかった。同様に、リバスチグミンは、複合的パラメータ「逃避潜時」により測定されたように、時間的正確性の損失を逆行させることもなかった。しかしながら、接触走性行動により決定されるように、リバスチグミンが、スコポラミン処置されたマウスにおいて何らかの沈静化影響を有し得ることが示唆された。
【０１９０】
リバスチグミンのスコポラミン−誘発学習欠損を逆行させる能力は、コリン作動性活性の増進がタスクの学習段階における注意力の向上をもたらすという、広く支持されている考えに概して一致している。すなわち、スコポラミン障害性マウスの方が、タスクの学習段階において学習の手がかりをよりうまく活用でき、そしてこの向上は日ごとに持続し、それについては、スコポラミンにより破壊されてしまったものが、リバスチグミン処置後に日ごと好転する回復のエビデンスがある。しかしながら、このリバスチグミンの学習に対する効果は、記憶に対する効果として特に試験した場合には、明らかな形跡を残さない。プラットホームの位置に関する記憶のエビデンスは、広範な手段のいずれをもってしても、学習の完了後１．５時間及び２４時間のいずれにおいても検出されなかった。したがって、リバスチグミンは、タスクの習得段階における操作上又はパフォーマンス記憶を向上するものの、短期又は長期記憶のいずれも増強することはない。
【０１９１】
ＭＴＣは、スコポラミン−誘発欠損を逆行させる能力が対照と比べて識別不能であったという点において、実験の学習段階においてパフォーマンスを回復するのと同等の能力を有した。ＭＴＣとリバスチグミンとの間の顕著な違いは、実験の記憶段階においてのみ現れた。ここで、広範なパラメータにおいて記憶回復のエビデンスが見られた。具体的には、１mg/kg又は４mg/kgのいずれかによる処置後の４分の１領域での滞在時間は、偶然のレベル、すなわち２５％より有意に高かった。より広い局在化パラメータは、スコポラミン処置された動物の対照のパフォーマンスレベルまでの回復も示した。同様に、時間的正確性により測定されるパフォーマンスの回復が見られた。最後に、ＭＴＣは、スコポラミンによって産生された接触走性ゾーンから回避する能力の重篤な障害の、完全な逆転を産生した。
【０１９２】
したがって、ＭＴＣは、コリン作動性薬剤であるリバスチグミンと比べて、スコポラミンにより誘発される欠損を逆行させる能力が実質的に優れている。実験の学習段階における操作上のパフォーマンスに関しては概して同様であるものの、リバスチグミンとＭＴＣの質的な違いが、実験の記憶段階において現れる。リバスチグミンが、測定したパラメータのいずれにおいても学習したタスクの記憶回復のエビデンスを産生しなかった一方で、ＭＴＣは、記憶回復のエビデンスを示した。１mg/kg又は４mg/kgでのＭＴＣの投与の間には違いがなかったという点で、ＭＴＣの効果は用量には依存していなかった。実験の学習段階の完了後１．５時間及び２４時間の両方において記憶回復のエビデンスが実証できたことから、時間についても有意な違いはなかった。
【０１９３】
より多い用量のリバスチグミンにおいてさえも（データは示されていない）、スコポラミンの健忘症効果を逆行させることが出来なかったため、得られた結果を考慮して、ＭＴＣがコリン作動性機序を介して作用することは考えにくい。したがって、ＭＴＣは質的に異なる機序を介してスコポラミンの健忘症効果を逆行させる。この機序の特性は、分かっていない。健忘症ＭＣＩに見られる欠損は主に記憶領域にあり、したがってＭＴＣは、ＭＣＩ、特に健忘症型のＭＣＩの対症療法における候補となる。
【０１９４】
リバスチグミンは、すでにＭＣＩの対症療法において使用されている。本明細書における結果に基づくと、リバスチグミンの潜在的利益は、記憶ではなくタスク習得の際の注意力に対する効果に大きく依存し、したがって、タスク習得の最中及び記憶において実証され得る効果を有するＭＴＣのような薬剤が、健忘症ＭＣＩの処置において、リバスチグミン及び他のコリン作動性−増強性薬剤に対して優れた効果を有することが期待される。
【０１９５】
最近の国際的見解の総意は、健忘症及び非健忘症のＭＣＩの２つの型を形成した（Winblad, B., Palmer, K., Kivipelto, M., Jelic, V., Fratiglioni, L., Wahlund, L.O., Nordberg, A., Backman, L., Albert, M., Almkvist, O., Arai, H., Basun, H., Blennow, K., deLeon, M., De Carli, C., Erkinjuntti, T., Giacobini, E., Graff, C., Hardy, J., Jack, C., Jorm, A., Ritchie, K., van Duijn, C., Visser, P. & Petersen, R.C. (2004) Mild cognitive impairment - beyond controversies, towards a consensus: report of the International Working Group on Mild Cognitive Impairment. Journal of Internal Medicine 256, 240-246）。非認知ドメインにおける操作性欠損は、非健忘症型のＭＣＩに特徴的な特性であるため、ＭＴＣは、非健忘症型のＭＣＩの有力な対症療法となることが期待される。具体的には、ＭＴＣは、スコポラミンにより誘発される接触走性（一般には不安症の徴候として捉えられている）に対して強力な効果を発揮する。リバスチグミンは、しかしながら、この作用を有意に発揮しなかった。したがって、ＭＴＣは不安症及びＭＣＩの他の非認知的要素、例えば無感情、引きこもり、信頼及び決断能力の喪失、ならびに一般的な社会的関与に対して有利な効果を有し得る。
【０１９６】
実施例２−若齢及び老齢ＮＭＲＩマウスの水迷路学習におけるＭＴＣの効果
１）研究の目的及び背景
この研究は、３つの異なる月齢、２〜３、６及び１３月齢のＮＭＲＩマウスにおける、空間参照学習及び記憶水迷路タスクにおける認知パフォーマンスに対するＭＴＣの効果を評価するために計画された。
【０１９７】
２）方法
ＭＴＣ（Simpsons, UK.）を水に溶解した。２〜３、６及び１３月齢の雌ＮＭＲＩマウスを、水迷路タスクにおいて異常な水泳行動を示した動物を除いた後に、グループ分けした。ＭＴＣ（１mg/kg）を腹腔内（i.p.）に５mg/kgで与えた。研究の終わりにおける動物の数は、以下の通りであった。
【０１９８】
【表３】
0005725605.tif 000010
【０１９９】
モーリス水迷路空間通行タスク（Morris, 1984）を用いて行動試験を行った［実施例１に記載したように］。マウスは初めに、処置及び参照記憶訓練の前に水迷路に慣らさせた。マウスは、毎日のセッションの１回目の試行３０分前にＭＴＣ又は媒体で処置した。訓練の終わりにプローブ試行を行う、短期及び長期記憶（それぞれ１．５時間及び２４時間）を評価した。
【０２００】
３．  結果
３．１−学習段階−従来の分析
図１２及び１３は、生理食塩水又はＭＴＣ（１mg/kg）で処置した２〜３、６及び１３月齢のマウスに関して、経路長、逃避潜時、速さ及び接触走性を、日数に亘って、及び日数について平均して示している。老齢マウスは、参照記憶水迷路タスクの習得において機能が損なわれていた。対照（生理食塩水処置）マウスのデータのみを、３つの月齢群について検討したところ、１３月齢マウスは、２〜３月齢マウスと比べてタスクにおいて機能が損なわれていた。月齢が高いマウスほど全ての日数に亘ってより長い経路長であった。６月齢マウスの回避経路長は、２〜３又は１３月齢マウスのいずれとも違いがなかった。
【０２０１】
ＭＴＣ処置された１３月齢マウスは、生理食塩水処置された１３月齢マウスより有意に短い経路長を有した。２〜３月齢のＭＴＣ及び生理食塩水処置されたマウスとの間にも、２つのＭＴＣ処置された群との間にも、回避経路長についての有意の違いはなかった。１３月齢の生理食塩水処置された群は、訓練日数に亘って向上（経路長の削減）することができず、他の群は参照記憶水迷路タスクを習得した。１回目の試行で同じ経路長のレベルから始めた全ての群は、違いがなかった。
【０２０２】
水泳速度のパラメータは、２つの月齢群間における運動パフォーマンスを評価すること、及びＭＴＣによる処置がタスクに運動効果をもたらしたか否かを判断することを可能にした。老齢ＮＭＲＩマウスは、常に若年マウスより水泳が遅く、そしてこの特質は、処置に依存するものではなかった。
【０２０３】
１３月齢マウスにおいて、ＭＴＣによる処置は水泳速度を変化させることはなかったが、しかし、２〜３月齢マウスにおいては、ＭＴＣで処置されたマウスは、後の訓練セッションにおいて同月齢の対照より水泳が遅かった。
【０２０４】
全てのマウスにおいて、訓練の初期においては壁を好む行動（接触走性）が明らかであったが、全ての群が一連の訓練セッションに伴って段階的減少を示した。
【０２０５】
学習段階−先端的分析
実施例１のように、年齢に関連した変化を、経路長、逃避潜時、速度及び接触走性のパラメータにより、生理食塩水又は１mg/kgのＭＴＣで処置した動物を比較して調べた。これらを図１２にまとめている。未分析の手段(means)を調べると、加齢に伴う一般的な低下が、４つの全てのパラメータにおいて見られた。ＭＴＣの処置による有益な効果は、１３月齢マウスにおいてのみ見られ、しかもこれは経路長及び逃避潜時についてのみであった。接触走性の場合には、ＭＴＣは２〜３月齢及び６月齢においては悪化を引き起こし、そして１３月齢においては有益性がなかった。
【０２０６】
図１３に、日毎の変化をプロットする。若年マウスは、１日目〜４日目において老齢マウスより向上した。ＭＴＣが老齢マウスにおいて日毎の変化を向上させるということが示唆されているものの、ＭＴＣがなんらかの系統的な影響を学習に与えるかどうかは明らかではない。
【０２０７】
実施例１に見られるように、経路長及び逃避潜時のデータを、生存モデルを用いて分析した。前述のように、生存分析は、経路長に対する「泳ぎ手」の状態で生存する確率を計算する。図１４に経路長データの生存プロットを示す。生理食塩水処置された１３月齢マウスは、１５００cmを泳いだ後においてでさえも、プラットホームを見つける確率は５６％にしか達しなかった。データを正規化して、処置による違いを除去すると、残った分布は指数関数に非常に近かった（図１５を参照）。若年マウスにおいては、低い経路長値において、比較的より高い確率が見られた。これは、次のように解釈できる。老齢マウスは、空間的手がかりを検出するまでランダムに泳ぎ、その後はプラットホームへ真っ直ぐに泳ぐ。若年マウスは、かなり早期に手がかりを認識する傾向があり、そしてしたがって、初期期間において、プラットホームへ真っ直ぐに泳ぐ前のランダムな水泳に費やす時間が少なくなる。
【０２０８】
生存カーブを、Ｃｏｘ比例障害評価を用いてパラメータ化した。これらは、図１６にlog経路長倍数として示される。生理食塩水処置された動物において加齢による強い効果が見られる。若年マウスにおいてはＭＴＣの効果は見られない。１３月齢マウスにおけるＭＴＣの効果は、実質的には全体の経路長を減少させ、老齢マウスのパフォーマンスを６月齢マウスに見られるものパフォーマンスのレベルにまで戻すことである。全体の違いは、統計的有意性に達する（ｐ＝０．０７４）。同様の分析を、逃避潜時データについても行った。逃避潜時に関する結果は、本質的には経路長のものと同一であった（図１７）。図１６及び１７から分かるように、この効果は、１３月齢マウスにおいて４日目に経路長及び逃避潜時の両方に関して統計的有意性に達する（それぞれ０．０５９及び０．０８５のｐ値）。
【０２０９】
３．２  記憶試験
実施例１のように、学習段階の完了後１．５時間（「４日目」）又は学習段階の完了後２４時間（「５日目」）のいずれかに動物を試験した。
【０２１０】
分析した第一のパラメータは、４分の１領域で費やした時間である。これは、４日目及び５日目についてＭＴＣによる処置の有無に関して図１８に示されている。実施例１のように、統計的分析は線形混合効果モデルを用い、処置及び日数の相互関係ならびに対象毎のばらつきを考慮した（すなわち、いくつかのマウスは、潜在的に処置のグループ分けとは関係なく記憶タスクにおいてより優れた機能を示し得る）。
【０２１１】
図１８に見られるように、生理食塩水処置された２〜３月齢及び６月齢のマウスは、１．５時間でプラットホームの位置を思い出すことができた。２４時間時点においては、４分の１領域にいる時間は、偶然のレベル（２５％）より有意に異なるものではなかった。実施例１において２４時間で思い出したエビデンスがあったため、これは、想起出来ないためではなさそうである。むしろこれは、４分の１領域中で１．５時間プラットホームの提示がなかったことに起因する、４分の１領域中での探索行動の消滅を反映し得る。若年動物は、もはやかつての４分の１領域であった所にプラットホームはないということを、より効率的に学習し、そしてそれにしたがって探索戦略を修正し得る。２〜３月齢マウスについては、１．５時間ではＭＴＣの効果はない（すなわち、生理食塩水群と同様、彼らは実際に４分の１領域中で２５％以上の時間を費やす）。６月齢マウスについては、ＭＴＣはこの時点において想起の機能障害を産生するようである。
【０２１２】
生理食塩水処置された１３月齢マウスは、１．５時間及び２４時間の両方において完全な機能不全を示す。ＭＴＣによる処置は、１．５時間において想起を回復させる。この実験からは、ＭＴＣが２４時間において想起を回復させしそこなったのか、又は生理食塩水処置された２〜３月齢及び６月齢マウスと比較して、ＭＴＣが１３月齢マウスにおいてより効率的に消滅を産生したのかを決定することは不可能である。図１９に示される代表的な水泳経路は、ＭＴＣ処置後の１３月齢マウスにおいて水泳経路の方向性が完全に復帰したことを示している。
【０２１３】
図２０に示されるように、局在性分析を行った。実施例１のように、「局在性」は、下記から計算される、探索の空間的正確性を反映する複合的パラメータである：以前のプラットホームの位置への訪問回数；プラットホームの直径の２倍の面積として定義される周辺領域への訪問回数；この周辺領域中にいる時間；及び４分の１領域中にいる時間。図２０から分かるように、１３月齢マウスについては、ＭＴＣにより１．５時間のプローブ時間において局在性が有意に向上した。他に有意な違いはないが、方向性ＭＴＣは６月齢マウスについて１．５時間においての局在性を損なうようである。
【０２１４】
逃避潜時についての同様の分析は、ＭＴＣの著しい効果を明らかにすることはなかった。
【０２１５】
４．実施例２からの結論
本研究は、ＮＭＲＩマウスにおける加齢性の空間学習障害を実証した。これは、経路長及び逃避潜時の両方のデータから実証され得た。水迷路参照記憶タスクにおいては、１３月齢マウスはそのタスクを習得することができなかった。さらに、これらのマウスは４日目の学習の完了後１．５時間においてタスク想起のエビデンスを示さなかった。したがって、１３月齢までに、ＮＭＲＩマウスは有意な認知欠損を示す。加齢に伴う、非認知的パラメータである接触走性の悪化に関するエビデンスも、いくつかある。これは不安の尺度と見なされる。しかしながら、分析において対象間のばらつきが処置の効果を上回ったため、Ｃｏｘ比例障害パラメータ化によりこの一式のデータに適合するモデルを確立することは出来なかった。
【０２１６】
実施例１のデータに見られるように、ＭＴＣは２〜３月齢及び６月齢動物において認知機能向上のエビデンスを示さなかった。特に、経路長又は逃避潜時のＣｏｘ比例障害パラメータ化においては向上がなかった。接触走性データの分析は不確定であった。同様に、ＭＴＣは実験の記憶段階において１．５時間及び２４時間のいずれにおいても向上のエビデンスを産生しなかった。これらの知見は、したがって、ＭＴＣが先在障害の非存在下において記憶機能を向上出来るというCallaway et al. (2004)及びRiha et al. (2005)の主張を確認し得ないという点において実施例１の知見を繰り返すものである。
【０２１７】
実際にＭＴＣは、６月齢動物について、１．５時間において４分の１領域中にいる時間及び局在化により測定される記憶パフォーマンスを損なった。このパターンは、記憶に対してＭＴＣが全く効果を有さなかった２〜３月齢について見られるものと相当異なる。データ中には、ＭＴＣが４日目及び５日目における局在化パラメータにより測定される学習を損なったという示唆もある。したがって、ＭＴＣは、成体マウスにおいて学習及び記憶の両方を損なうことが出来る。
【０２１８】
ＭＴＣの最も特筆すべき効果は、実験の記憶段階においてパフォーマンスの向上を産生することである。これは、特に４分の１領域中にいる時間の分析において見ることができた。１３月齢においては、生理食塩水処置された動物は全く無能であり、学習の完了後わずか１．５時間において試験した場合には４分の１領域の識別能の習得についてのエビデンスを示さなかった。ＭＴＣ処置後、４分の１領域中にいる時間は、２〜３月齢において見られるパフォーマンスと識別できなかった。同じように、複合的パラメータの局在化は、生理食塩水処置された２〜３月齢動物のプローブ試行１．５時間におけるパフォーマンスの回復で見られたように、本質的に完全なパフォーマンスの回復を示した。同様に、習得段階において、ＭＴＣの有益な効果は、１３月齢マウスについては経路長及び逃避潜時のパラメータにおいて４日目に有意性に達した。
【０２１９】
これらの動物において１３月齢で見られた加齢性欠陥は、ヒトにおけるＭＣＩ及び加齢性認知衰退のモデルとして捉えることができる。本モデルにおけるＭＴＣの認知機能を回復させる能力は、ＭＴＣが加齢性認知衰退及びＭＣＩ症候群の処置において治療的に有用であり得ることを示している。
【０２２０】
実施例３：全般的結論
実施例１に示されるように、ＭＴＣは、スコポラミン誘発欠損モデルにおいて実験の学習段階及び記憶段階の両方においてパフォーマンスを回復できる。さらに、ＭＴＣは、スコポラミンによって産生された接触走性ゾーンから回避する能力の重篤な障害の、完全な逆行を産生した。
【０２２１】
実施例２に示されるように、ＭＴＣは、実験の記憶段階においてパフォーマンスの向上を産生することが出来た。これらの動物において１３月齢で見られた加齢性欠損は、ヒトにおけるＭＣＩ及び加齢性認知衰退のモデルとして捉えることができる。
【０２２２】
これらのモデルにおけるＭＴＣの認知機能を回復させる能力は、ＭＴＣが加齢性認知衰退及びＭＣＩ症候群の処置において治療的に有用であり得ることを示している。
【０２２３】
しかしながら、実施例１及び実施例２の両方において、ＭＴＣは非障害性動物の認知機能における向上のエビデンスを示さなかった。
【０２２４】
列挙されている２つの研究（Callaway et al., 2004; Riha et al., 2005）には、他の障害を持たない動物において記憶固定を向上できると主張されている。すなわち、他の障害を持たない動物は、ＭＴＣで処置することによって、通常予期される記憶より良くなると主張されている。
【０２２５】
本知見は、したがって、ＭＴＣが先在障害の非存在下において記憶機能を向上出来るというCallaway et al. (2004)及びRiha et al. (2005)の主張を確認し得ない。すなわち、提唱された用量（つまり、１mg/kg及び４mg/kg）でＭＴＣで繰り返し処置しても、空間的参照記憶の高度に検証された行動パラダイム、すなわちモーリス水迷路において、他の障害を持たない動物に学習及び記憶の増強を産生しなかった。
【０２２６】
さらに、実施例２には、特定の状況においてＭＴＣで繰り返し処置すると、他の障害を持たない動物において学習を損ない得ることが示されている。したがって、ＭＴＣが潜在的及び普遍的な記憶向上性能を有するという理由から、列挙されている研究は、記憶障害の処置の根拠を提供するものであると受け入れることが出来ない。
【０２２７】
これらの先行研究については、さらなる曖昧性がある。例えば、該著者らが、ＭＴＣの効果は具体的に記憶固定に限定されるものであり学習には及ばないと論ずるように、ＭＴＣは学習を増強させるために使用できるというという提案に対して、彼らは示唆することはなくそして実際には具体的に反論している。しかしながら、記載の実験で長期に亘る時間的経過において繰り返し薬剤が投与されていることから、提案されている記憶固定効果は、学習の過程でも起こっているに違いないと期待されている。
【０２２８】
さらに、提案されている記憶効果を産生するのに必要な投与のタイミングに関する矛盾がある。具体的には、ＭＴＣは訓練前に与えた場合には明らかに効果を有さず、訓練後に与えた場合にのみ効果を有した。しかしながら、そのような投与が記憶の増強が必要とされる時以降のみに限定されるのであれば、薬剤がどのようにして記憶障害の処置のための有用性を有し得るのかと整合させるのは難しい。この状況設定は、特定の訓練体制の意味においてのみ、例えば擬似体験療法の補助としての条件性恐怖の消滅においてのみ予想できるものである。列挙された研究により実施可能となる教示からは、ＭＴＣが、投与のタイミングに言及せずに、より一般的に学習及び記憶を増強するのに使用できるということは期待できない。
【０２２９】
したがって、これらの先行の研究は、ＭＴＣ、又は本明細書に開示されている任意のジアミノフェノチアジン化合物が、特定の神経伝達系以外の機序により、具体的にはミトコンドリア代謝の増強を介して学習及び記憶を増強し得る薬剤であるか否かを確実に教示するものではない。これらはさらに、ＭＴＣが、訓練タスクに関して特定の時間に与えられ、そしてある特定の用量で与えられること以外に、より一般的な有用性を有し得るか否かについての教示もしていない。
【０２３０】
これに反して、実施例１には、ＭＴＣがミトコンドリアエネルギー代謝とは関連しないモデルにおける学習及び記憶の欠陥を修正し得ることが示されている。したがって、ＭＴＣの効果がミトコンドリアエネルギー代謝における欠陥の修正になんら関係がないとは受け入れられない。さらに、ＭＴＣの潜在的有用性は、ミトコンドリアエネルギー代謝の存在又は非存在によって制限又は限定されるものではない。むしろ、ＭＴＣは、実証可能な欠陥が、欠陥の原因となっている機序についての任意の推定に関わらず、いかなるようにであっても産生される場合においては、学習及び記憶に対して有益な効果を実証し得る。
【０２３１】
実施例４：ＭＴＣとＣｈＥＩの併用療法
上記のように、ＤＡＰＴＺ化合物を介するＭＣＩの処置は、コリン系への作用を介して作用するものではないと考えられている。
【０２３２】
ＣｈＥＩ治療とともに、ＤＡＰＴＺ化合物の有用性を実証するために、さらなる実験を行った。
【０２３３】
材料及び方法（薬剤、行動療法機器及び試験手順）は、一般に上記の実施例に記載したとおりであった。
【０２３４】
実験計画は、次のとおりであった：
本研究は、８回の追試により行った。これらにおいて、複数処置群が存在し、各群の動物数は少なかった。明確性のために、本発明者らは、分析を３つの部門に分けた。
【０２３５】
実験１では、スコポラミン誘発認知欠損を逆行させるためのリバスチグミンの異なる用量についての効力と用量−応答関係を確定した；
実験２では、ＭＴＣがスコポラミンにより誘発される認知欠損を効果的に逆行させたかどうか、及びその用量を裏付けた；ならびに
実験３では、有効量未満用量のリバスチグミンとＭＴＣの共投与による、スコポラミン効果を逆行させる効果を試験した。
【０２３６】
実験１及び２からのデータは、一部上記の実施例１に記載されているものに基づくが、実験３で使用されるモデルとの比較を容易にするために再度設定し、再分析する。
【０２３７】
動物を、表４−１に要約したように処置群の１つに無作為に割り当てた。対象は、最初の腹腔内注射を試験の３５分前に受け、この注射は生理食塩水又はスコポラミンのいずれかからなり、そして５分後に、続けて２回目及び／又はいくつかの群においては３回目の、媒体、リバスチグミン及び／又はＭＴＣの腹腔内注射を受けた。
【０２３８】
ＭＴＣを、スコポラミンの５分後、そして試験の３０分前に注射した。スコポラミンのタイミング及び用量は、処置逆行前にムスカリン性ＡＣｈ受容体の薬理学的占有を可能とするように、その薬物動態に基づいて選択した。
【０２３９】
スコポラミンは、腹腔内注射後２０〜４０分間のＴｍａｘを有している（Kim et al., 2006; Janas et al., 2005）。本発明者らの研究室での初期実験により、ＭＴＣに関する最大脳中濃度として腹腔内注射後３０〜６０分間と確立された（未発表データ）。ＭＴＣを、コリン作動性崩壊の先在性病状に対する逆行剤として作用させる意図でスコポラミンの後で注射した。薬剤の投与後、行動試験までの間、動物をそのホームケージ中に保管した。
【０２４０】
知覚性副作用はない（Robinson et al., 2004）が、腹腔内注射をした場合には空間的記憶欠損を誘発することが知られている（Steckler and Holsboer, 2001; Noda et al., 1991; Roloff et al., 2007）低用量のスコポラミン（０．５mg/kg）を使用し、そしてリバスチグミンを前述（Bejar et al., 1999）のように０．５mg/kgで与えた。ＭＴＣの活性用量は、文献（Callaway et al., 2004, 上記）及びインビトロにおけるタウ凝集の逆行効率（Wischik et al., 1996）に基づくものである。使用するマウスの数を削減するために、副作用プロファイリングは、最も高く有効でかつ安全な用量のＭＴＣ（４mg/kg）及びリバスチグミン（０．１２５mg/kg）で、生理食塩水処置のマウスについてのみ行った。スコポラミン処置を行わない場合における、０．５及び０．２５mg/kg用量のリバスチグミンによる初期の研究は、マウスにおける重度の副作用（運動協調性の問題、運動失調、短いけいれん症状）のために中断した。
【０２４１】
データ分析は、以下のとおりであった：
学習習得の行動データを、従来の統計（Graph Pad Prism version 4.01）により、処置を被験体間の要因とし、そして日数／試行を被験体内の要因とする、要因反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて分析し、その後、選択された群間での計画的比較を行った。プローブ試行データを、１要因ＡＮＯＶＡにより分析し、そして適切な事後試験（Bonferroniの多重比較試験又はNewman Keuls）を実施して有意な主効果又は相互作用の原因を決定した。両側について分析を行い、帰無仮説が５％の確率水準（ｐ＜０．０５）で認められた。簡潔にするため、文章中には信頼差の条件のみを記述した。
【０２４２】
結果：
実験１：  リバスチグミンは、スコポラミン誘発空間学習欠損を逆行させる
学習習得
リバスチグミンを、０．１〜０．５mg/kgの用量範囲で投与し、スコポラミン誘発認知障害を逆行させる有効性を確立した。さらに、０．１２５mg/kgの用量を生理食塩水の後に投与し、薬剤の副作用プロファイリングを行った。水泳経路長の分析（データ明示せず）により、処置の主効果（Ｆ（６，２０７）＝７．４０８；ｐ＜０．０００１）、１日全体での効果（Ｆ（３，２０７）＝２５．６；ｐ＜０．００１）が明らかになったが、相互作用はなかった（Ｆ＜１）。試行１で達したパフォーマンスについても分析し、薬剤処置の１日全体での効果が見出されたが（ｐ＝０．００６７）、事後分析により処置群のいずれもが対照とは変わらないことが示された。
【０２４３】
このことは、スコポラミン処置により訓練期間に亘って学習が損なわれ、そしてリバスチグミンがこの欠損を逆行させることができるという見解を明確に支持する。個別の群に対するさらなる計画的比較は、この逆行についての用量相関性の所見を支持した。０．５及び０．１２５mg/kg用量のリバスチグミンは、学習欠損を完全に逆行させ（スコポラミンに比較してＦ’ｓ＞２．５；ｐ＜０．０５、生理食塩水との違いなし）、これに対して０．１mg/kgのリバスチグミンは有効ではなかった（スコポラミンとの違いなし、生理食塩水と比べてＦ（３，６３）＝９．６；ｐ＝０．００３）。
【０２４４】
奇妙なことに、経時変化がスコポラミン（Ｆ（３，６０）＝５．２；ｐ＝０．０３５）及び生理食塩水（Ｆ（３，６３）＝４．９；ｐ＝０．０３９）のいずれとも異なったので、０．２５mg/kg群における逆行は部分的でしかなかった。しかしながら、個々のパフォーマンスの厳密な検討により、これはおそらく、学習を全く示さなかった群中の１体の動物に起因するものであろうことが明らかになった。この固体を省くと、このリバスチグミン用量による完全な逆行を裏付けた。
【０２４５】
最後に、リバスチグミン単独では、本タスクにおいて空間学習は変化しなかった。同様の結果が１及び４日目間の全体としての学習において見られた。これは、経路長の全体としての減少として表され、そして、スコポラミン群（ｔ＝１．２）及び０．２５mg/kgリバスチグミン＋スコポラミン群（ｔ＝２．１；ｐ＝０．０７）は別として、全ての群において有意な向上を示した（ｔ値＞２．３；ｐ値＜０．０５）。上記で特定した同じマウスは、後者の群においてもまた、外れ値であった。興味深いことに、０．１mg/kgリバスチグミンで処置された動物は、日毎のパフォーマンス全体については逆行がなかったにも関わらず、実質的に全体としての向上を提示した。これは主に、この群の１日目における学習の出来が悪かったことに起因するものである。水泳速度もまた、薬剤処置の関数として変化させた（Ｆ（６，２０７）＝８．３９５；ｐ＜０．０００１）。対照と比べて、低用量のリバスチグミン（０．１２５mg/kg単独で、又は０．１mg/kgをスコポラミンと併せて）は、対照より有意に異なった（Ｆ値＞７；ｐ値＜０．０２）。水泳速度と比較して、接触走性に対する薬剤処置の主な効果（Ｆ（６，２０７）＝４．０５９；ｐ＝０．００１５）は、主としてスコポラミン単独の群に起因するものであり、この群は対照とは異なった（Ｆ（３，６９）＝９．２；ｐ＝０．００６）。他の全ての群において、壁を好む行動は１日目の高い割合から始まったが、これは次第に減少し、対照と変わらなかった。
【０２４６】
空間記憶
短期記憶を、最後の訓練から１．５時間後に４分の１領域で費やした時間（データ表示せず）として記録した。空間的バイアスを、対照及びスコポラミン＋リバスチグミン０．１２５mg/kg処置マウス（偶然の２５％に対するｐ値＜０．５）について確立し、他の全ての群はこの優先性を示さなかった。対照との比較により、スコポラミン群ならびにスコポラミン＋リバスチグミン０．５mg/kg及び０．２５mg/kg（ｐ値＜０．０５；スチューデントt-検定（Student’s t-test））における記憶欠損が裏付けられた。
【０２４７】
実験２：  ＭＴＣは、スコポラミン誘発認知欠損を、用量相関的に逆行させる
習得学習
実施例１で上述したように、水泳経路長の分析は、薬剤処置の全体としての効果（Ｆ（７，２４０）＝６．５３１；ｐ＜０．０００１）、１日での効果（Ｆ（３，２４０）＝３２；ｐ＜０．０００１）及び相互作用（Ｆ（２１，２４０）＝１．７；ｐ＝０．０３）を明らかにした。試行１を別途分析したが、群間の違いは見出されなかった（データ非表示）。計画的群比較は、対照と比較して、スコポラミン処置されたマウスにおいて学習欠損があることを裏付けた（Ｆ（３，６９）＝２４；ｐ＜０．０００１）。ＭＴＣは、この学習欠損を用量相関的に逆行させた：４及び１mg/kgのＭＴＣは、完全な逆行を達成し（スコポラミン単独群と比べてＦ値＞１３．６；ｐ値＜０．００２、生理食塩水と比べて有意性なし）；０．５mg/kgは、部分的逆行を産生し（スコポラミンと比べてＦ（１，６０）＝４．８；ｐ＝０．０４、生理食塩水と比べてＦ（１，６３）＝４．６；ｐ＝０．０４）；０．２５及び０．１５mg/kgは、スコポラミン欠損を逆行させることが出来なかった（スコポラミンについては有意性なし、生理食塩水と比べてＦ値＞８；ｐ値＜０．０１）。
【０２４８】
ＭＴＣ４mg/kgもまた、生理食塩水と一緒に投与したが、通常の習得学習に影響を与えなかった。数日に亘る水泳経路の減少として計算される全体としての学習が、このデータを裏付けた。
【０２４９】
スコポラミン群及びスコポラミン＋ＭＴＣ ０．１５mg/kg及び０．２５mg/kg群においては、全体としての向上がなかった一方で、全ての他の処置群（スコポラミン及び高用量のＭＴＣ）は信頼性のある学習を示した（全てのｔ値＞２．２；ｐ値＜０．０５）。水泳速度は、群間で変わらなかった（ｐ＞０．０５）。対照的に、接触走性はスコポラミン群において高かったが、用量と無関係に、ＭＴＣ処置によって逆行した。
【０２５０】
全体としての要因分析は、処置の主要な効果（Ｆ（７，２４３）＝３．９；ｐ＝０．００１）、１日での効果（Ｆ（３，２４３）＝６０；ｐ＜０．０００１）及び日数と処置の相互作用（Ｆ（２１，２４３）＝２．０９６；ｐ＝０．００４２）を裏付けた。スコポラミン群だけが生理食塩水群（Ｆ（１，６９）＝９．２；ｐ＝０．００６）と比較して低下したが、全ての他の群はそうではなかった。
【０２５１】
空間記憶
空間短期記憶を、訓練の１．５時間後におけるプローブ試行の手段により評価した。習得学習に関しては、対照及びスコポラミンと組み合わせた２つの高用量ＭＴＣが、記憶形成を後押し、マウスは確かに４分の１領域において偶然より長い時間を費やした（ｔ値＞２．３；ｐ値＜０．０５）。スコポラミン単独及び低用量ＭＴＣは有効ではなかった。
【０２５２】
実験３：  リバスチグミン及びＭＴＣの有効用量未満での共投与
実験１及び２において確立したように、リバスチグミン及びＭＴＣは、スコポラミンにより誘発される認知障害を用量相関的に逆行させた。インビボにおけるＭＴＣの作用機序は、リバスチグミンとは異なるため、本発明者らは両方の化合物の有効量未満の投与は、相加的に、又は相乗的にさえ作用し得、欠損の完全な逆行に至るものと理由付けた。リバスチグミン及びＭＴＣの用量は、それぞれ０．１mg/kg及び０．１５mg/kgであった。
【０２５３】
習得学習
評価基準である経路長の４つの群の比較（図２１Ａ及びＢ）は、全体としての処置の効果（Ｆ（３，１３２）＝１５．５２；ｐ＜０．０００１）、１日目は（Ｆ（３，１３２）＝２２；ｐ＜０．０００１）、そしてこれらの要因の相互作用（Ｆ（９，１３２）＝２．３；ｐ＝０．０２）を明らかにした。
【０２５４】
リバスタグミンとＭＴＣの組み合わせ処置は、スコポラミンにより誘発される空間学習欠損を有意に向上し（処置を要因とした分析においてＦ値＞４、ｐ値＜０．０９）、そして対照では習得が遅いように見受けられたものの、これは確かではなかった（処置を要因とした分析においてＦ値＜４、ｐ値＞０．０５）。同様に、リバスチグミン及び併せて投与されたＭＴＣは、対照を有意に向上することはなく、これは該２つの薬剤の組み合わせは健常な動物を向上させなかったことを示唆するものである。節減（１日目から４日目における経路長の減少、図２１Ｃ）として計算すると、スコポラミン単独群のみが向上しなかった一方で、全ての他の処置は実に空間タスクを学習した（ｔ値＞３．４；ｐ＜０．００５）。水泳速度（図２１）がいかなる薬剤投与にも影響されなかった一方で、組み合わせ治療はスコポラミン依存性の接触走性の増加を完全に逆行させた（図２１Ｅ）（処置を要因とした全体としての分析においてＦ値＞４；ｐ値＜０．００３１、スコポラミン対生理食塩水においてＦ（１，６９）＝９．２；ｐ＝０．００６、全ての他の群は生理食塩水と変わらなかった）。
【０２５５】
空間記憶
リバスチグミン及びＭＴＣは、スコポラミンにより誘発される記憶欠損も逆行させた（スコポラミンと比較してｔ＝２．５；ｐ＝０．０２、生理食塩水に対しては有意性なし）が、組み合わせ投与は、健常な空間記憶そのものを変化させなかった（図２１Ｆ）。スコポラミン処置マウス以外の全ての群は、空間的バイアスを提示し（ｔ値＞２．７；ｐ値＜０．０２）、これは学習欠損の逆行は、短期記憶にも変換されたことを裏付けた。
【０２５６】
実施例４の考察
スコポラミンは、加齢及び認知症に特徴的なムスカリン性減退を模倣するために動物モデルにおいて広く使用されている（Drachman and Leavitt, 1974）。
【０２５７】
上記実施例に記載したように、ＭＴＣは、本発明者らのスコポラミンモデルの認知欠損において、用量依存性の逆行を提供する。有効用量未満のリバスチグミンと併せて有効用量未満で投与された場合においても有効であったので、これは組み合わせ治療において有用であり得ることを示唆するものである。これによりＭＴＣは、向知性薬剤及びＭＣＩの有望な処置用となる。結果の詳細な概略を表４−１に示す。
【０２５８】
ＭＴＣ及びリバスチグミンは、水迷路タスクにおいてスコポラミンにより誘発される認知欠損を特異的に逆行させる
空間作動及び短期記憶は、コリン作動性伝達の封鎖に特に敏感であり（Buxton et al., 1994; Han et al., 2000; Ballard and McAllister, 1999）、情報の一時的な記憶が出来なくなる。これは、本発明者らのタスクにおいて、スコポラミン処置マウスが知覚性フィルタリング及び亢進された不安症に起因する高レベルの接触走性を常に示したという点から容易に自明であった（Smythe et al., 1996）。さらに、プールの端から離れるように泳ぐことは、手続き記憶ならびに、実に、線条体のコリン作動性活性化を必要とする（Blokland, 1998）。これは、スコポラミン処置マウスにおいて損なわれているようであり、そして特に空間的訓練の早期ステージにおいて関連性がある。したがって、リバスチグミン及びＭＴＣの両方が、短期手続き記憶の逆行の初期に作用し、隠れたプラットホームの位置を学習する動物の能力を回復させることを本発明者らは提言する。水泳速度に違いがなかったため、スコポラミンにより誘発される非特異的運動効果は観察されず、そして本発明者らは、低用量のスコポラミンに関する視覚的障害を事前に除いていた（Robinson et al., 2004）。
【０２５９】
低用量でのリバスチグミンは、スコポラミン誘発空間的短期記憶欠損を容易に逆行させた（Bejar et al., 1999;本研究）。この効果は用量依存性であり、空間学習の完全な回復には＞０．１２５mg/kg用量の急性型投与を必要とし、そしてこれはＮＭＲＩマウスにおけるそのような効果を初めて実証するものであり、低濃度においては慢性型の処置が効率的であり得る。本発明者らのデータは、ＣｈＥＩは注意力を増強し（van der Zee and Luiten, 1999;本明細書中の接触走性の低減）、不安症を低減し（Lindner et al., 2006）、そして手続き学習又は認知機能、すなわち短期記憶にいくらか影響するという解釈を提唱するものである。
【０２６０】
本発明者らの以前の研究は、ムスカリン性活性は、これらのパラメータ全てに関して重要であること（von Linstow Roloff et al. 2007）、そして時間をかけた実験計画の変更という手段によって分離可能であることを示唆する。ここで、本発明者らは、薬剤処置の正味の効果にしか興味がなかった。リバスチグミン誘発認知向上が接触走性の低減と同時に起こったということは、手続き学習及び空間認知は強く関連しており（Micheau et al., 2004）、そして実に全てが海馬皮質系中のコリン作動性活動により制御されうることを意味する（Niewiadomska et al., 2008）。
【０２６１】
手続き学習の標準化が認知欠損の逆行に至るのか否か、又はその逆であるのかは、未調査のままである。しかしながら、高用量のＣｈＥＩによるコリン作動系の過刺激が、前臨床モデル及びヒト両方の記憶形成において、有害であることが観察されている（Bejar et al., 1999; Milivojevic et al.,  2001, Beglinger et al., 2004, 2005; Van Dam et al., 2005）ことは、以前の報告に合致しており、これは恐らくＭ２ムスカリン性自己受容体の過剰刺激が原因である（Braida et al., 1996）。これにより、認知症のＣｈＥＩ処置における狭い治療濃度域、及び場合によっては短期持続性の効果が説明される。
【０２６２】
ＭＴＣ
リバスチグミンとは対照的に、ＭＴＣは異なる薬理学的及び精神的プロファイルを提示し、そして、安全であり、そして最大４mg/kgまたはそれ以上（表示せず）の用量においてさえも、観察可能な副作用がないことが判明した。これは、より広い治療濃度域を提供するものであり、そして連続的な投与計画においてより安全であることも判明し得る。学習と記憶形成についての用量−応答関係は、線形的であり、約４mg/kgで飽和した。これは、コリンエステラーゼ阻害（Pfaffendorf et al., 1997）、抗酸化作用、抗タウ凝集、ＮＯＳ阻害及びＣＯＸ活性化（Salaris et al., 1991; Martin et al., 1985; Mayer et al., 1993a, b; Volke et al., 1999; Callaway et al., 2004, supra; Wischik et al., 1996）を含むＭＴＣの異なる物性に由来するものであり得る。あらゆる形態の認知症及び神経変性疾患において、これらのメカニズムは機能しなくなり、したがってＭＴＣは、これらの処置における新規な向知性薬となることが判明し得る。実際に、スコポラミンは、遊離ラジカルの産生（Fan et al., 2005）及び脳の酸化ストレスの増大（El-Sherbiny et al., 2003）を引き起こすことができる。結果として、例えばアクテオシド（Callicarpa dichotoma, Lee et al., 2006からの抽出物）、酸性オリゴ糖糖鎖（Fan et al., 2005）、アスコルビン酸（de Angelis and Furlan, 1995; Parle and Dhingra, 2003）及びオロキシリンＡ（Kim et al., 2007）などのいくつかの抗酸化剤は、スコポラミン誘発認知欠損を逆行させた。
【０２６３】
この実験はしたがって、ＭＴＣは低コリン作動性の被験体における記憶形成も増強させることを示すものである。ＣＯＸ活性は、認知症（Gonzalez-Lima et al., 1997; Kish et al., 1992; Valla et al., 2001）及び海馬中のコリン作動性緊張の減少を伴う海馬采脳弓を切除したラット（Krugel et al., 2001）において低下する。さらに、ＣＯＸはＣｈＥＩ投与後に有意に減少し（Ito et al., 1989）、これはＭＴＣとリバスチグミンの間の薬理学的相違のいくつかを説明している。増強されたＣＯＸ活性の結果は、増強されたグルコース代謝、すなわちＡＴＰ産生である。
【０２６４】
したがってＭＴＣは、グルコースの投与がスコポラミンモデルにおいて認知を増強させることが出来るという知見と一致して、その普遍的な脳グルコースの増強及びＡＴＰ生成に起因し、より広範な向知性薬である可能性がある（Parsons and Gold, 1992; Micheau et al., 1995; Parkes and White, 2000）。
【０２６５】
全体として、ＭＴＣは、一般に処方されているＣｈＥＩとは異なる薬理学的プロファイルと共に存在し、そして神経変性疾患における認知障害の処置のための新規な取り組みを提供し得る。
【０２６６】
ＭＴＣとリバスチグミンの共投与
２種以上の薬剤を有効用量未満で組み合わせることにより、有害な効果をより少なくすると当時に、相加的又は相乗的な治療的成果を導き得る。
【０２６７】
リバスチグミンとＭＴＣの組み合わせにおいて、本発明者らは、各構成成分が自身の効力を超えて最終的な効果に貢献した場合に相乗的な逆を観察した。本発明者らは、スコポラミン誘発欠損の完全な逆を、遅発的に（２日間の訓練後）観察した一方で、両方の薬剤の等用量による付加的効果は部分的逆行（リバスチグミン）に至るのみであったか、又は逆行しなかった（ＭＴＣ）。しかしながら、学習の時間相関的正規化は、リバスチグミン及びＭＴＣを認識的有効用量で個別に投与した場合においても起こり、組み合わせた薬剤の効果の影響ではあり得ない。ここで重要な点は、リバスチグミンとＭＴＣの相乗性は、これらの異なる細胞作用から生ずるものであるかもしれないということである。低用量のリバスチグミンがコリン作動性緊張の正常化に貢献し得る一方で、ＭＴＣは、タスク依存的に活性化される神経に対して栄養とエネルギーをより全体的に提供することができる。そうであれば、より長期の組み合わせ治療において有益な成果を期待することができる。ＭＴＣ共処置は、また、リバスチグミンの治療濃度域を広くしつつ、毒性を低下させ得る。
【０２６８】
【表４】
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【０２６９】
実施例５：認知障害の処置におけるＤＡＰＴＺ化合物の有効性のさらなるエビデンス
前述の実施例は、障害のあるマウスの学習及び記憶に基づくあらゆるモデルにおいて、認知機能を迅速に回復させるＭＴＣの効力に関係していた。これらは、タウ病理、神経変異性障害、血管性認知症、酸素消費障害性の疾患又はミトコンドリア欠損が存在しない老齢野生型マウスを含んでいた。
【０２７０】
これは、ＭＴＣが、認知低下の機序又は正確な診断に関係なく、加齢性の認知低下およびＭＣＩ症候群の処置において治療学的に有用であり得ることを表している。
【０２７１】
この知見は、フェーズ２における、ＭＴＣ単独療法の、２４週間に亘る調査で、用量範囲知見、プラセボ制御した治験の二重盲検により確証されている。本研究は、この治療が、軽度又は中程度のＡＤにおいて認知低下を遅延させたかどうかを決定することを目指したものである（一次成果評価基準としてＡＤＡＳ−ｃｏｇ変化を用いた）。
【０２７２】
しかしながら本研究は、ＦＤＧ−ＰＥＴ（フルオロでオキシグルコースポジトロン放出断層撮影）及び９９ＴｃｍＨＭＰＡＯ−ＳＰＥＣＴ（ヘキサメチル−プロピレン−アミン−オキシム単一光子放出断層撮影）も、二次成果評価基準として実施した。神経機能（及びそれ故に認知パフォーマンス）は血流及びグルコースの利用と密接に結びついていることが知られており、それぞれＳＰＥＣＴ及びＰＥＴにより測定できる。
【０２７３】
これらの画像処理方法は、認知障害の処置で使用するための医薬の有効性の評価に特に有用であることが示されている（２００７年１１月５日に提出された米国仮出願第６０／９９６，１７７号(Wischik)を参照されたい。この内容は参照により明確に本明細書に組み込まれる）。
【０２７４】
重要なことに、本研究は、治療的有効性に対するベースライン分子イメージング診断の影響の分析を可能にするために階層化されている（すなわち、より多くの「アルツハイマー病様」対より多くの血管様の特徴の存在）。本研究において、これらの異なる基本的病理間での処置の効果の違いについてのエビデンスはなかった。むしろＤＡＰＴＺ治療は、Ｂｒａａｋステージ、危険因子及び厳密に定義された診断サブタイプに関わらず、老齢人口における神経原線維変性の遅延又は停止に有用であり得ることが示唆された。
【０２７５】
本研究の結果は、次のように要約される：
ベースライン階層変数及び代替有効性マーカーの両方として、分子脳イメージングが試行に含まれていた。ＳＰＥＣＴコホートには、ベースライン時及び視察４(visit 4）時（１８週）の両方においてＭＴＣによる処置に対する応答としてのイメージを有する１３８の被験体があり、ＰＥＴコホートには、対になるイメージを有する２０の被験体があった。
【０２７６】
診断的に用いた場合、ＳＰＥＣＴ及びＰＥＴの両方において、特徴的な両側頭頭頂欠陥を明らかにした。しかしながら、これらの画像診断の作用の基本的な生理学的機序は異なっている。ＳＰＥＣＴは、静脈内注射後の「初回通過」で得られる脳の血流イメージを報告するものである。ＰＥＴは、注射３時間後の期間におけるグルコースの取り込みに関するイメージを報告するものである。両方とも、神経機能を異なった方式で報告している。ＳＰＥＣＴは、短い時間経過における局所的血流に依存し、したがって、神経の酸素需要は脳の血流と強く結びついているため、神経機能の非直接的な手法を提供する。ＰＥＴは、代謝機能をより直接的に測定するが、長い時間経過におけるグルコースの取り込みを集積する。
【０２７７】
ＳＰＥＣＴの結果
ＳＰＥＣＴデータを分析すると、全ての用量において、ＭＴＣは、未処置ＡＤにおいて６ヶ月の期間に亘って客観的に測定することができる、特徴的に罹患した新皮質領域のかん流の低下を防ぐことが示された。プラセボ及び活性処置された被験体間の違いは、関心領域（「ＲＯＩ」）及び統計的パラメトリックマッピング（「ＳＰＭ」）分析の両方において大きな有意差があった。ベースライン時にＣＤＲ軽症であり、６０mg tid（１日３回）のＭＴＣ処置を受けた被験体において灌流の向上の示唆もあったが、この向上（すなわち、ゼロからのスコアの変化）は統計的差異に達しなかったものの、プラセボに対する違いはほとんどの脳領域において非常に顕著であった。
【０２７８】
ＰＥＴの結果
プラセボ処置された被験体の任意の脳領域において、グルコース取り込みの低下は統計的差異に達しなかった。
【０２７９】
しかしながら、対照的に、ＭＴＣ処置された被験体においては、ベースラインイメージから視察４（visit 4）時（１８週）での２回目のＰＥＴスキャンにかけて、グルコース取り込みが有意に増加した領域があった（頭部全体に亘って多重比較に対して補正されている）。この増加は、左側頭葉内側部（海馬及び内嗅皮質）において見られた。データを再分析し、変化は側頭葉内側部のみにおいて予期されるものと想定すると（すなわち、多数の比較における少ない容積の修正）、ＦＤＧ取り込みの増加はＭＴＬ構造において左右相称に顕著であった。
【０２８０】
考察
そしてＰＥＴデータは、ＭＴＣによる処置が、その最も強力な代謝効果を側頭葉内側部（ＭＴＬ）構造において発揮することを示している。これは、グルコース取り込みの増強によって測定されるように、機能活性における対応の増加を産生するものと期待されている。統計的に有意な効果が、そんなにも少ない症例数において実証できるという事実は、効果の大きさがデータの固有変数に対して大きいことを示唆しており、そして効果が強固であり、そして容易により相次ぐ大きな症例で実証されるという期待に至らせるものである。
【０２８１】
ＳＰＥＣＴスキャン灌流の変化がＭＴＬ構造においても実証できるか否かを決定するためには、さらなる分析が必要である。ＳＰＥＣＴスキャンはより低い分解能を有するが、画像の再構築と登録が行われている平面を変えることによって、対応するＭＴＬ血流変化があるか否かを決定することが可能であり得る。以下においてさらに考察するように、２つのイメージ様式は、異なる機序の分子イメージ作用に依存しているため、同じ結果をもたらさないこともある。
【０２８２】
灰白質の局所的損失（ＭＲＩにより測定される）、灌流の損失（ＳＰＥＣＴにより測定される）及び特定ドメインにおける認知機能の損失の関係は、複雑である。認知の減退と脳血流量の減退との間には強い相関関係があり、これは特に前頭葉にみられ、側頭葉では幾分弱い（Brown et al., 1996）。さらに、疾患の進行に伴い、後方から前側にかけて広がっている灌流欠陥があることが一般的に認識されている。
【０２８３】
しかしながら、伝統的にそれらの脳領域に局在化されている、灌流が減少した領域と、特定の認知機能の損失が見られた領域との間には、単純化された関係はない。さらに、ＭＲＩにより測定される萎縮症の領域と、ＳＰＥＣＴ灌流欠陥との間にも単純化された関係はない。したがって、発症した区域では、脳血流量の減少より容積の減少のほうが一般に多い。そして実際に、ＭＣＩ／中程度ＡＤにおいては、いかなる脳血流量の対応する損失もないまま、容積の減少が（例えば海馬において）起こり得る（Ibanez et al., 1998）。長期的な研究においてMatsuda et al. (2002)は、局所的萎縮症と血流減少区域との間には不一致があることを見出した。提供された解釈は、新皮質において観察された血流の低減は、遠隔（例えば、嗅内における）の病変により部分的に説明されるということ、そして第二に、例えば嗅内皮質のような主要ダメージ領域では、軸索の損失が、残りの神経線維の出芽を誘発し、失われた結合を置き換え、そしてシナプス性活動を保持し、したがって血流を保持することである。
【０２８４】
これらの潜在的複雑性とは関係なく、ＭＴＬ構造が、ＭＴＣ治療に対して代謝的に高応答性であるという本発見は、重要な知見である。
【０２８５】
ＭＴＬ構造内での選択的な代謝増強を実証することができるという本エビデンスは、試行を行って、代替エンドポイントとしてのＰＥＴの使用が主要な役割担うＭＣＩにおける有効性を証明する、可能性を高くするものである。
【０２８６】
Brown DRP, Hunter R, Wyper DJ, Patterson J, Kelly RC, Montaldi D, et al. Longitudinal changes in cognitive function and regional cerebral function in Alzheimer's disease: A SPECT blood flow study. J Psychiatr Res 1996; 30: 109-26.
Matsuda H, Kitayama N, Ohnishi T, Asada T, Nakano S, Sakamoto S, et al. Longitudinal evaluation of both morphologic and functional changes in the same individuals with Alzheimer's disease. J Nuc Med 2002; 43: 304-11.
Ibanez, V., Pietrini, P., Alexander, G.E. et al. (1998) Regional glucose metabolic abnormalities are not the result of atrophy in Alzheimer's disease. Neurology 50, 1585-1593) 
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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