(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのアロエベラ由来リポ多糖、少なくとも１つのアロエベラ由来多糖、および少なくとも１つのアロエベラ由来リポタンパク質の混合物を含む免疫賦活用組成物であって、前記混合物は、１０μｇ／ｍＬの濃度の大腸菌リポ多糖ＥＬＰＳによって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも５０％の免疫賦活活性を示し、この免疫賦活活性は、２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定される組成物。
【請求項２】
前記アロエベラ由来多糖が、２５モル％〜７０モル％のグルコース、０．５モル％〜３５モル％のラムノース、５モル％〜３０モル％のガラクトース、３モル％〜２５モル％のマンノースおよび０モル％〜１５モル％のアラビノースを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記混合物が、０．０１重量％〜５０重量％のアロエベラ由来多糖と、合計で０．０００１重量％〜１０重量％のアロエベラ由来リポタンパク質およびアロエベラ由来リポ多糖とを含む請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記混合物が、１％〜２０％のアロエベラ由来多糖を含む請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記混合物が、１重量％〜１５重量％のアロエベラ由来多糖を含む請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記混合物が、１０重量％〜１５重量％のアロエベラ由来多糖を含む請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
前記アロエベラ由来リポタンパク質および／またはアロエベラ由来リポ多糖は、アロエベラと関連する微生物に由来する請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記アロエベラ由来リポタンパク質、アロエベラ由来リポ多糖および／またはアロエベラ由来多糖は、アロエベラから単離されるまたは合成によって製造される請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記アロエベラ由来リポタンパク質、アロエベラ由来リポ多糖および／またはアロエベラ由来多糖は、アロエベラ皮、アロエベラ粘液、アロエベラゲル、全葉アロエベラおよび／またはそれらの組合せから単離される請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記混合物とブレンドされた医薬担体または賦形剤をさらに含む請求項１〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
均質なディスパージョン、溶液、サスペンション、またはエマルションを製造するのに十分な量の材料をさらに含む請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記材料は、前記材料および前記混合物の合計量に対して少なくとも１０重量％〜９０重量％の量で前記組成物中に存在する請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記材料は、アロエベラ由来材料である請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記アロエベラ由来材料は、免疫賦活性アロエベラ由来組成物および非免疫賦活性アロエベラ由来組成物からなる群から選択される請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記アロエベラ由来材料は多糖からなり、少なくとも５０％の前記多糖は１，５００，０００ダルトン以下の分子量を有する請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記材料は、アロエベラゲル１Ｘ（天然の粉砕フィレ、微粒子フィレまたは脱色）、アロエベラゲル１０Ｘ（天然または脱色）、アロエベラゲル２００ｘ（脱水粉末または噴霧乾燥粉末）、アロエベラ全葉噴霧乾燥粉末１００Ｘ、アロエベラ全葉脱色液、エースマンナン、およびアロエベラ粘質多糖から成る群より選択されるアロエベラ由来材料である請求項１３〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
請求項１３〜１６のいずれかで定義される前記アロエベラ由来材料の量は、請求項１〜９で定義される少なくとも１つのアロエベラ由来リポ多糖、少なくとも１つのアロエベラ由来多糖、および少なくとも１つのアロエベラ由来リポタンパク質の混合物の量以上であり、前記組成物は実質的に均質な溶液、サスペンション、ディスパーションまたはエマルションである請求項１３〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記アロエベラ由来材料はアロエベラゲル２００ｘであり、前記アロエベラゲル２００ｘは前記材料および前記混合物の合計量に対して８０重量％の量が前記組成物中に存在する請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
筋肉痛または関節痛、免疫不全症、癌、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染および創傷から成る群より選択される疾患または状態の治療に使用するための請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
前記疾患または状態は、筋肉痛または間接痛である請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物の治療用量は、１日当たり０．２ｍｇ〜１ｇである請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
治療が必要な被験者の皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／または弾力性の改善、および／または新しい皮膚細胞の促進的成長を与えるために使用するための請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物の治療用量は、１日当たり０．０００５ｍｇ〜１ｇである請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
痛みを治療するため、または、皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／もしくは弾力性を強化するための請求項１９〜２３のいずれかに記載の組成物を製造する方法であって、
ａ）請求項１〜１０のいずれかで定義される第１のアロエベラ由来組成物を請求項１３〜１６のいずれかで定義される第２のアロエベラ由来材料と合わせるステップ、
ｂ）前記第１のアロエベラ由来組成物と、前記第２のアロエベラ由来材料と、溶媒とで混合物を形成するステップ、および
ｃ）前記混合物を均質化するステップ
を含み、
前記第２のアロエベラ由来材料の量が前記第１のアロエベラ由来組成物の量以上であり、かつ前記組成物が実質的に均質な溶液、サスペンション、ディスパーション、またはエマルションである方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、その開示内容を参照によって本明細書に組み込まれる２００７年５月１１日出願の米国仮特許出願第６０／９２８，９２４号の出願日の利益を主張する。
【０００２】
一態様では、本発明は、皮膚の強化および痛みの軽減のための、アロエベラ植物もしくはその一部から製造、単離、もしくは抽出され、またはそれらに基づくかもしくは由来する生理活性組成物の使用に関する。本発明は、免疫賦活性組成物、安定化免疫賦活性組成物、ならびに該組成物の製造および使用方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
アロエ属（ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ））は低木の熱帯／亜熱帯植物であり、多肉多汁の細長い葉を有する。３６０を超える既知のアロエ種のうち、Ａｌｏｅ  ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓ  Ｍｉｌｌｅｒ（Ａｌｏｅ  ｖｅｒａ  Ｌｉｎｎｅ）は、商業的にもその治療特性のためにも最も広く利用されている。アロエベラ植物は２つの主要な汁材（ｊｕｉｃｅ  ｍａｔｅｒｉａｌ）を含み、第１の汁材は、数世紀にわたって下剤としておよび薬物の下剤のために使用されている高濃度のアントラキノン化合物を含有する黄色浸出液であり、第２の汁材は、古代以来、やけどおよび他の創傷を治療するために使用されている清澄な粘液質ゲルであり、治癒の速度を増し、感染のリスクを低減すると考えられる。Ｇｒｉｎｄｌａｙ，Ｄ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，Ｔ．，Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍｃｏｌ．１９８６，１６（２〜３），１１７〜１５１；およびＪｏｓｈｉ，Ｓ．Ｐ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ａｒｏｍａｔ．Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉ．１９９８，２０（３），７６８〜７７３を参照されたい。
【０００４】
数世紀の間、アロエ植物は、その薬用特性および治療特性を有するとみなされ、このような特性の基礎についていかなる明白な理解または科学的分析もなく、該特性のために使用されてきた。アリストテレスは、アロエの治癒特性が戦闘で負傷した兵士に非常に有益であることに気づき、彼の生徒アレキサンダー三世（「大王」）に、アロエを栽培しているすべての領土、特に東アフリカの海岸沖のソコトラ島を征服するように助言した。ローマ軍の医師であるペダニウス・ディオスコリデス（Ｐｅｄａｎｉｕｓ  Ｄｉｏｓｃｏｒｉｄｅｓ）は、彼の百科事典ギリシア薬草薬物誌（Ｇｒｅｅｋ  ｈｅｒｂａｌ  Ｄｅ  Ｍａｔｅｒｉａ  Ｍｅｄｉｃａ）（紀元前約７５年）で薬物アロエに言及した。さらに、新鮮なアロエ植物の生物学的活性は非常に速く衰退することが知られている。
【０００５】
過去数十年にわたって、免疫機能強化に関するその有益な効果の原因であるアロエの活性成分の理解を発展させることに高いレベルの関心があった。この分野の調査は主に多糖および他の炭水化物含有物質、例えば糖タンパク質に集中していた。
【０００６】
米国特許第７，１９６，０７２号（「’０７２特許」、第５，９０２，７９６号、第４，７３５，９３５号、第４，８５１，２２４号、第４，９１７，８９０号、第４，９５７，９０７号、第４，９５９，２１４号、および第４，９６６，８９２号に記載されているように、例えば、アロエ葉の多糖または他の炭水化物含有物質を含めた活性化学物質および混合物が同定、単離および安定化されている。
【０００７】
ある活性化学物質群はアロエベラ粘液質多糖と呼ばれており、多糖の混合物で構成されている。用語「多糖」は、炭水化物または単糖のオリゴマーおよびポリマーの両方を含めて大雑把に使用されており、本明細書でも同様に使用する。このような多糖の１群はエースマンナン（ａｃｅｍａｎｎａｎ）と命名されている。
【０００８】
文献によれば、エースマンナンは、Ｃａｒｒｉｎｇｔｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｉｒｖｉｎｇ，Ｔｅｘ．）から入手可能な実質的にアセチル化されたマンノースモノマーの規則性直鎖ポリマーであり、実験室研究において、組織培養で線維芽細胞の複製を４８時間で３００％まで増やすことが示されており、線維芽細胞は皮膚および胃腸内面のやけど、潰瘍ならびに他の創傷を治癒させる役を担っていることが分かっている。
【０００９】
３年間にわたり、その胃がヒトの胃と同様に反応する実験室ラットを試験した。エースマンナンは、胃潰瘍の治療に使われている当時最新の薬物と等価またはそれより優れていることが分かった。大部分のそのような製品は胃内の塩酸を抑制するように作用した。エースマンナンは異なる原理に基づいて働き、一見したところ消化酸の自然の流れを変えなかった。米国特許第５，９０２，７９６号、２欄、２０〜２５行を参照されたい。
【００１０】
エースマンナンは、培養内におけるヒト末梢血接着細胞によるＩＬ−ＩおよびプロスタグランジンＥ２（ＰＥＧ２）の産生の誘導物質であることが分かっている。ＩＬ−Ｉは、リンパ球、線維芽細胞、Ｂリンパ球および内皮細胞の活性および産生に影響を及ぼすと文献で報告された重要なマクロファージ産物である。かつてのＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ，２５８（５）：５９〜６０，６９〜７５（１９８８）を参照されたい。
【００１１】
ＩＬ−１は、創傷治癒にとって基本的である線維芽細胞の増殖を誘発する。またＩＬ−１は、（１）骨髄活性を強化し（それは骨髄が低下している個体にとって治療的であり得る）、（２）一般的に免疫系を強化する。
【００１２】
文献によれば、混合リンパ球培養（ＭＬＣ）を用いた一連の実験は、エースマンナンが用量関連様式でこれらのリンパ球の同種抗原反応を増強することを示した。エースマンナンと単球をインキュベーションすると、単球駆動型シグナルがレクチン（ｌｅｅｔｉｎ）に対するＴリンパ球の反応を強化することができた。エースマンナンがＭＬＣに及ぼす効果についての関連研究は、ナチュラルキラー細胞の食作用と活性の増加を示した。これらのインビトロ試験システムでは、エースマンナンは無毒であり、免疫エンハンサーであると言われていた。
【００１３】
エースマンナンがリンパ球を刺激してリンホカインを分泌し、かつグルコシダーゼＩインヒビターの機構と同様の機構でＨＩＶ感染リンパ球に変性糖タンパク質（ＧＰ−１２０）を生じさせるとも言われている。Ｇｒｕｔｅｒｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３０：７４〜７７（１９８７）およびＰａｌら、Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌ．３０：２７〜３５（１９８９）を参照されたい。エースマンナンは貪食され、外見上ポンプ式に単球のゴルジ／糖タンパク質器官に動かされて、そこでエースマンナンは糖タンパク質合成を直接妨害する。
【００１４】
アロエ産物の他の用途は、例えば、米国特許第５，１０６，６１６号、第５，１１８，６７３号、第５，３０８，８３８号、第５，４４１，９４３号、および第５，４４３，８３０号に記載されている。これらの記載されている研究は、主に抗ウイルス薬、抗腫瘍薬、免疫賦活薬、免疫調節薬、ワクチンアジュバント、日和見感染を減少させる手段、炎症を制御する手段、免疫系および創傷治癒プロセスを刺激する手段としてのアロエベラの生理活性化学物質の活性に集中していた。
【００１５】
アロエベラから単離された多糖含有画分に基づく他のいくつかの産物が特許文献などで公開されている。例えば、分子量が２７５，０００〜３７４，０００ダルトンのポリウロニドが表面創傷の治療で有用であると報告されている。（Ｆａｒｋａｓ，Ａ．、米国特許第３，１０３，４６６号（１９６３）参照）。
【００１６】
７０ｋＤの多糖、アロエフェロン（Ａｌｏｅｆｅｒｏｎ）も治療薬の可能性があると報告されている。（Ｍａｄｉｓ，Ｖ．Ｈ．、Ｏｍａｒ，Ｍ．Ｍ．、Ｍａｄｉｓ，Ｖ．、米国特許第４，８６１，７６１号（１９８９）参照）。
【００１７】
アロエから単離された他の活性成分として、等量のグルコースとマンノースを含む４２０，０００〜５２０，０００ダルトンの多糖が挙げられる。（Ｆａｒｋａｓ，Ａ．、米国特許第３，３６２，９５１号（１９６８）参照）。
【００１８】
さらに、アロエ中に天然に存在する炭水化物から数群の変性多糖組成物が酵素的に調製されている（Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄ，Ｆ．Ｍ．、Ｐｅｌｌｅｙ，Ｒ．Ｐ．、Ｋｒｉｐｋｅ，Ｍ．Ｌ．、米国特許第５，８２４，６５９号（１９９８）参照）。
【００１９】
アロエベラ多糖は、対照試験で動物の治癒速度を高めることも示されている。アロエベラ多糖は、動物試験で胃潰瘍にとっても有効な治療薬であることも示されている。
【００２０】
アロエベラゲルの抗炎症活性は、口頭証言および評価の高い科学雑誌の両方で報告されている。Ｒｕｂｅｌ［Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ，９８：１０９〜１１４（１９８３）］は、アロエゲルの抗炎症作用の考えられる機構について論じた。Ｕｋａｉら［Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎａｍｉｃｓ、６（１２）：９８３〜９９０（１９８３）］は、数種の真菌の子実体から抽出された多糖の抗炎症活性に注目した。多糖は、カラギーナン誘発水腫に対して有意な阻害作用を示したと言われている。該ポリマーの１つであるＯ−アセチル化−Ｄ−マンナン（Ｔ−２−ＨＮ）はさらに、熱傷痛覚過敏に対してフェニルブタゾンより顕著な阻害作用を示した（Ｕｋａｉら、上記）。この多糖がタンパク質と脂質を含まないとされているこの論文の主張は、抗炎症作用がアセチル化マンナンのみに起因することを示唆している。
【００２１】
他の研究者らも、複合多糖［Ｓａｅｋｉら、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２４（１）：１０９〜１１８（１９７４）］、糖タンパク質［Ａｒｉｔａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７６（４）：８６１〜８６９（１９７４）］および硫酸化多糖［Ｒｏｃｈａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１８：１２８５〜１２９５（１９６９）］の抗炎症作用について報告している。
【００２２】
したがって、本質的に多糖である、アロエベラ植物の成分である粘液質ゲル、およびその中の成分は、アロエベラの薬用特性に一部関与している可能性がある。この多糖がグルコマンナン、マンナン、ペクチン、または何らかの他の組成のものであるかどうかについての議論は、一連の化学的精製ステップによって解決されると言われている。Ｙａｇｉらは［Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ、３１（１）：１７〜２０（１９７７）］、わずかに改変した抽出方法を用いて、キダチアロエ（Ａｌｏｅ  ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｍｉｌｌｅｒ  ｖａｒ．  ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）由来のアセチル化マンナン（アロエマンナン）を単離した。しかし、Ｏｖｏｄｏｖａ［Ｋｈｉｍ、Ｐｒｉｏｒ、Ｓｏｅｄｉｎ、１１（１）：３２５〜３３１（１９７５）］はさらに早く、同一アロエ種の主成分としてペクチンを単離した。
【００２３】
最近、アロエベラゲルについていくつかの他の薬理学研究が行われた。結果は、放射線によるやけどのより迅速な治癒［Ｒｏｗｅ、Ｊ．Ａｍ．Ｒｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃ．、２９：３４８〜３５０（１９４０）］および創傷の短時間治癒［Ｌｕｓｈｂａｕｇｈら、Ｃａｎｃｅｒ、６：６９０〜６９８（１９５３）］を含んでいた。アロエベラゲルで治療した熱傷は、未治療熱傷よりずっと速く治癒する［Ａｓｈｌｅｙら、Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ．、２０：３８３〜３９６（１９５７）、Ｒｏｖａｔｔｏ、上記、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｂｉｇａｓら、Ｊ．Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ．、８１：３８６〜３８９（１９８８）］。ゲルは、下腿潰瘍の治療［Ｅｌ  Ｚａｗａｈｒｙら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１２：６８〜７３（１９７３）］および術後治癒の促進（Ｐａｙｎｅ、Ｔｈｅｓｉｓ  ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ  ｔｏ  Ｆａｃｕｌｔｙ  ｏｆ  Ｂａｙｌｏｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｗａｃｏ、Ｔｅｘ．、ＭＳ  Ｄｅｇｒｅｅ）に有用である。実験の証拠は、アロエベラの抽出物は抗感染特性を有すること［Ｓｏｌａｒ、Ａｒｃｈ．Ｉｎｓｔ．Ｐａｓｔｅｕｒ  Ｍａｄａｇａｓｃａｒ、４７：９〜３９（１９７９）］および食作用を強化すること［Ｓｔｅｐａｎｏｖａ、Ｆｉｚｉｏｌ．Ａｋｔ．Ｖｅｓｈｃｈｅｓｔｖａ、９：９４〜９７（１９７７）］を示唆している。
【００２４】
アロエ製品の商業的加工および品質管理中には、微生物学的分析が重要問題として認識されている（Ｗａｌｌｅｒ  ＴＡら、Ｉｎ  Ａｌｏｅｓ：Ｔｈｅ  ｇｅｎｕｓ  Ａｌｏｅ；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔ編；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：ＮＹ、２００４；第８章、１３９〜２０５ページ）。微生物学的生物は、環境などの外因性源とアロエ植物自体内の両方に由来し得る。内因性細菌叢は、アロエ内に天然に存在する微生物であり、当該ユニークな環境でよく成長するように進化している。内因性細菌への主な関心は、収穫後の不適当な加工法（例えばパスツール殺菌法の欠如または不正確）によって起こる可能性のある細菌の異常増殖を制御することについてだった。さらに、アロエ製品の高い細菌負荷は生理活性の損失をもたらす可能性があることが強調されていた。このことは、高い細菌含量（＞１００，０００の生物／１グラムのゲル）は、皮膚免疫系をＵＶＢ誘導抑制から保護するアロエの能力の損失と関係があるという観察によって報告されている（Ｗａｌｌｅｒ  ＴＡら、Ｉｎ  Ａｌｏｅｓ：Ｔｈｅ  ｇｅｎｕｓ  Ａｌｏｅ；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔ編；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：ＮＹ、２００４；第８章、１３９〜２０５ページ）。
【００２５】
当技術分野の参考文献は、活性物質とされている該エースマンナン多糖の生理活性を評価する際の交絡因子として内毒素（リポ多糖とも称する）汚染に関連してアロエ中の細菌成分について記載している。例えば、この点をＴｉｚａｒｄは強調した（Ｔｉｚａｒｄ  ＩＲおよびＲａｍａｍｏｏｒｔｈｙ  Ｌ．Ｉｎ  Ａｌｏｅｓ：Ｔｈｅ  ｇｅｎｕｓ  Ａｌｏｅ；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔ編；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：ＮＹ、２００４；第１３章、３１１〜３３２ページ）：「内毒素汚染のないアロエ炭水化物溶液を製造することは困難である。この材料に関する初期の研究は、少量だが有意な量の細菌内毒素を含んでいたので、エースマンナンの結果とみなされていた生理活性の一部が内毒素の作用だった可能性がある」。このように、アロエ製剤中の細菌産物は汚染物質とみなされている。
【００２６】
米国特許第５，９０２，７９６号は、アロエベラから異なる因子を得るための種々の方法および分離プロセスについて記載している。記載されている１つの因子は、「微粒子因子」と呼ばれ、アロエ溶液の低速遠心分離（１８０ｇ）から得られた上清の２０，０００ｇでの遠心分離によってペレットとして得られる。ろ過を利用してこの因子を得る方法も記載されている。この微粒子因子はマクロファージの活性化因子である。この微粒子因子の大きさは約１μｍと推定される。
【００２７】
微粒子の特徴づけは、後の論文に記載された（Ｎｉ  Ｙら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００４、４：１７４５〜１７５５）。微粒子は、以下の組成のガラクトースに富む多糖を含むと報告された：４０．２％のガラクトース、３２．２％のマンノース、２０．６％のグルコースおよび他の少量の糖。この論文は、「均質化によるパルプの崩壊後、連続遠心分離によって３成分が単離された。それらは、形態学および化学分析に基づいて葉肉細胞の細胞壁、退化細胞小器官および液体量に相当する、薄いクリアシート、微粒子および粘性液体ゲルだった」と要約しているように、微粒子を葉肉細胞の退化細胞小器官と同定している。明らかにこれらの微粒子は細菌ではなく、むしろ明確な炭水化物組成を有すると考えられ、植物の構造成分（すなわち葉肉細胞の退化細胞小器官）である。
【００２８】
グラム陽性ミクロコッカス細菌種は最も広く用いられているアロエ関連生物である。これらの細菌はアロエ植物内でよく成長するように進化しており、他の環境内ではあまりよく成長しない（Ｗａｌｌｅｒ  ＴＡら、Ｉｎ  Ａｌｏｅｓ：Ｔｈｅ  ｇｅｎｕｓ  Ａｌｏｅ；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔ編；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：ＮＹ、２００４；第８章、１３９〜２０５ページ）。
【００２９】
最近の研究は、一定のグラム陽性細菌を含有する食品の消費が免疫系に有益な作用を及ぼし得ることを指摘する。このことは、ヨーグルトおよび同様の食品で見られるプロバイオティック乳酸菌ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）およびビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）株の消化に関して最も広範に研究されている（Ｎｕｔｒ  Ｒｅｖ．、２００６、６４：１〜１４参照）。これらの免疫強化作用の多くは、加熱死生物の消費によって模倣され得るので、生細菌細胞を必要としない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３０】
老化に伴うことが多い問題として、皮膚の弾力性の損失および筋肉痛または関節痛が挙げられる。これらの症状は関連していていることもいないこともあり、かなりのステップが老化プロセスの理解内で起こっているが、まだあまり分かっていない。皮膚の弾力性の治療は、事実上、化粧品によってのみであることが多い。皮膚を化粧品でカバーすることによって、より若い外観を得られる場合もある。一部の製品は、実際に、たるんだ皮膚を糊付けして、よりピンと張ったように見せる。一般的に「フェイスリフト」と呼ばれる手順で過剰の皮膚を除去し、および／または皮膚を引き締めることを含み得る外科的方法もある。しかし、摂取するかまたは局所適用し、実際に皮膚の弾力性に直接作用する製剤を用いて皮膚の弾力性を改善できたら、外科術を延期または完全に回避することができ、化粧品が少なくてすむであろう。
【００３１】
同様に、関節炎などの関節痛には多くの原因が考えられ、それを治療するための多くの戦略がある。これらの戦略には、局所製品、医薬製剤および関節置換術さえ含まれる。関節痛、または皮膚の弾力性に関しては、まだ治療方法の改善が必要である。活性成分がすべて天然の製品を用いて一次解放をもたらすことができるか、または他の戦略と併用できれば、その結果は非常に望ましいだろう。
【課題を解決するための手段】
【００３２】
本発明は、一態様では、少なくとも一定量の免疫賦活活性を示すアロエベラ由来材料に関する（「ＩＡｖＤ」）。約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定した場合にＩＡｖＤとみなすのに必要な免疫賦活活性の度合は、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％である。この測定の標準物質は粗製細菌リポ多糖「ＥＬＰＳ」（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．から得た大腸菌血清型０２６：Ｂ６）である。
【００３３】
本発明の別の態様は、リポタンパク質と、リポ多糖と、必要に応じて少なくとも１種の多糖との混合物を含む組成物である。これらをすべてアロエベラから単離することができるが、混合物を合成によって製造することもできる。本明細書では、この混合物を「ＰＬＬ」と称する。ＩＡｖＤおよびＰＬＬ混合物は、２種以上の材料をいずれの組合せによって含んでもよい。これらの混合物を医薬担体または賦形剤とブレンドしてよい。
【００３４】
好ましい実施形態では、免疫賦活性組成物は、（１）アロエ由来多糖、（２）アロエ由来リポタンパク質、および（３）アロエ由来リポ多糖の少なくともいずれか２種の混合物を含み、この混合物は、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％の免疫賦活活性を示し、この免疫賦活活性は、約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定される。
【００３５】
混合物は、アロエ由来多糖、アロエ由来リポタンパク質、およびアロエ由来リポ多糖を含んでよい。
【００３６】
好ましい実施形態では、ＰＬＬが、１）その開示内容を参照によって本明細書に引用したものとする’０７２特許で開示されたアロエベラ由来多糖、２）アロエ由来リポタンパク質「ＡＬＰ」、および３）アロエ由来リポ多糖「ＡＬＰＳ」を含む、本明細書で「ＡｌｏｅＥｘ」と称する特定混合物である。好ましくは、この混合物は、本明細書で述べるようにＩＡｖＤとみなすのに十分な免疫賦活活性を含む。
【００３７】
好ましくは、ＰＬＬは、約０．０１重量％〜約５０重量％のＡｌｏｅｒｉｄｅ多糖と、約０．０００１重量％〜約１０重量％のＡＬＰおよびＡＬＰＳ（ＡＬＰとＡＬＰＳの合計量）を含む。他の実施形態では、Ａｌｏｅｒｉｄｅ多糖が約１重量％〜約１５重量％を構成し、約０．０００１重量％〜約１０重量％のＡＬＰおよびＡＬＰＳを含む。別の実施形態では、Ａｌｏｅｒｉｄｅ多糖がＩＡｖＤの約１０〜１５重量％であり、ＡＬＰおよびＡＬＰＳが約０．０００１重量％〜約１０重量％である。
【００３８】
これらのＡＬＰおよびＡＬＰＳは、実際にはアロエベラと関連する微生物由来であると考えられる。ＡＬＰおよびＡＬＰＳは、独立の免疫賦活特性を有するとも考えられる。これらを、例えば、’０７２特許の免疫賦活性アロエ由来多糖などの免疫賦活性アロエ由来多糖に加えて、またはその代わりに使用して、とりわけ、先行するアロエ誘導体と関連する技術分野で以前に記載されているいずれかの状態の治療または予防、例えばやけどおよび創傷の治療、皮膚および胃腸管の潰瘍の治療、骨髄が低下している個体の骨髄活性の強化、一般的な免疫系の強化において、抗ウイルス薬、抗腫瘍薬、免疫賦活薬、免疫調節薬、ワクチンアジュバント、感染を低減させるための手段、炎症を制御する手段、創傷治癒プロセスを刺激する手段、治癒速度を高めるための手段、熱傷痛覚過敏の抑制、放射線によるやけどおよび熱傷の迅速な治癒、下腿潰瘍の治療、術後治癒の促進、抗感染適用、食作用の強化、免疫不全障害、癌、感染性疾患または他の疾患および状態の治療、症状の緩和、筋肉痛および関節痛の軽減、代謝プロセスの改善、皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／または弾力性の改善において、ならびに栄養補助食品または栄養助剤として種々の利益をもたらし得る。
【００３９】
本発明の別の態様では、免疫賦活性組成物はアロエ由来リポタンパク質を含む。このアロエ由来リポタンパク質は、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％の免疫賦活活性を示し、この免疫賦活活性は、約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定される。
【００４０】
本発明の別の態様では、本組成物は１種以上のＩＡｖＤを含む医薬組成物である。一実施形態では、本組成物は、１種以上のＰＬＬを医薬担体または賦形剤と共に含む医薬組成物である。好ましい実施形態では、ＰＬＬがＡｌｏｅＥｘである。これらの医薬組成物は、ＰＬＬに関連して直前で述べたいずれの目的のためにも使用し得る。
【００４１】
本発明で有用な一定のＩＡｖＤは、細工および調製するのが困難なことがある。特定のＩＡｖＤを分散または溶解させ、その均質混合物を製造するという問題があり得る。このことは、剤形を調製するときに特に問題となり得る。不均質な混合物は、剤形ごとに、ひいては用量ごとに許容できないレベルで用量が変化するリスクがある。したがって、ＩＡｖＤと適合し、かつＩＡｖＤの免疫賦活特性または安定性に負の効果を及ぼさず、なおさらに好ましくは不必要にその活性を希釈せず、ひいてはより高価な材料を大量に必要としない適切な加工助剤、溶媒または賦形剤を見出すことが非常に望ましいだろう。
【００４２】
本発明の別の態様により、種々の「第２の」材料をＰＬＬまたはＩＡｖＤと関連して使用することができる。「第２の」材料と併用すると、ＰＬＬまたはＩＡｖＤの均質なディスパーション、エマルション、サスペンションまたは溶液などを製造することができることが発見されている。これらの「第２の」材料はアロエ由来材料であってもなくてもよく、実際にはＩＡｖＤであってもなくてもよい（例えば、それらは本明細書で定義されるようにＩＡｖＤとみなすのに十分な免疫賦活性でなくてよい）。
【００４３】
しかし、１つの好ましい実施形態では、これらの第２の材料がアロエベラ由来である。特に、一定の非常に活性な第１のＩＡｖＤを第２のアロエ由来材料を用いて分散、懸濁、乳化および／または可溶化できることが分かった。一部の好ましい実施形態では、この第２のアロエ由来材料が第２のＩＡｖＤ、例えば、本明細書でＩＡｖＤについて述べた活性要件を満たすアロエ由来材料である。
【００４４】
他の好ましい実施形態では、第２の材料は、それらが少しでも免疫賦活活性を有する場合、ＩＡｖＤの活性未満のレベルの活性を示すアロエ由来材料である。これらの第２の非ＩＡｖＤアロエ由来材料は一般的に有意な多糖含量を有し、多糖の約５０％以上が約１，５００，０００ダルトン以下の分子量のものである。例えば、２５０μｇ／ｍｌのＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧは２５％未満の活性化を示す。
【００４５】
さらに、これらの第２の材料は、第１のＩＡｖＤの加工性を改善または強化をもすべきである。使用するこの第２のアロエ由来材料（第２のＩＡｖＤであれ第２の非ＩＡｖＤであれ）の量は、要望通りに、第１のＩＡｖＤの均質なディスパーション、溶液、サスペンション、またはエマルションを製造するのに十分な量であるべきである。一般的にこの第２のアロエ由来材料は、第１のＩＡｖＤと第２のアロエ由来材料の重量％に対して、少なくとも約１０重量％必要である。
【００４６】
本発明の好ましい実施形態では、第１の材料がＰＬＬであり、第２の材料が、ＩＡｖＤでなく、上述した多糖含量を有し（一般的に少なくとも５０％が１，５００，０００ダルトン未満）、かつ安定した均質のディスパーション、溶液、サスペンション、またはエマルションの形成を可能にするアロエ由来材料である。特に好ましい実施形態では、ＰＬＬがＡｌｏｅＥｘであり、第２の材料がＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧである。これらの配合物を製造する方法をも考慮する。
【００４７】
本発明のさらに別の態様では、筋肉痛または関節痛を治療する方法、皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／もしくは弾力性を改善するための方法、および／または新しい皮膚細胞の促進的成長を与えるための方法であって、該方法が必要な個体に、治療用量のＩＡｖＤまたはＰＬＬ組成物を投与するステップを含む方法を提供する。１日に１回または数回、本組成物を経口、局所または経皮投与してよく、また本組成物を単独で、医薬的に許容し得る担体もしくは賦形剤と共に、および／または他の活性もしくは不活性成分と共に投与してよい。
【００４８】
この態様の一実施形態では、ＩＡｖＤがＰＬＬである。
【００４９】
特定の実施形態では、ＰＬＬがＡｌｏｅＥｘである。
【００５０】
別の実施形態では、ＩＡｖＤ組成物がアロエ由来多糖または多糖の混合物、例えば、限定ではなく、’０７２特許に記載されているものなどのアロエ由来多糖を含む。
【００５１】
本発明の別の態様は、アロエベラ源材料を準備するステップと、このアロエベラ源材料から液状アロエ溶液を抽出するステップと、この液状アロエ溶液をろ過するステップと、凝集剤を添加することによって、微生物または微生物成分／フラグメントを含有する凝集体を作製するステップと、この凝集体を収集するステップとを含む、ＩＡｖＤの調製方法である。
【００５２】
別の実施形態では、アントラキノンが存在する場合、収集した凝集体を加工してアントラキノンを除去することができる。
【００５３】
一実施形態では、アロエベラ源材料が、アロエベラゲル、全葉アロエベラ、アロエベラ皮、アロエベラ粘液およびアロエベラ新芽（ｐｕｐ）から成る群より選択される。アロエベラパップは、通常、廃棄物とみなされる小さいアロエベラ植物である。
【００５４】
好ましい実施形態では、アロエベラ源材料は、アロエベラ皮およびアロエベラ粘液を含む。典型的に他のプロセスからの廃棄材料とみなされる使用済みアロエ材料などの他のアロエベース材料を使用してよい。
【００５５】
本発明の別の態様では、化学的に標準化されたアロエベラ由来材料の調製方法は、アロエベラ由来材料を準備するステップと、このアロエベラ由来材料中の２，３−ジヒドロキシプロピルシステインの含量を決定するステップと、このアロエベラ由来材料中の２，３−ジヒドロキシプロピルシステインの量を標準製剤中の２，３−ジヒドロキシプロピルシステインの量と比較することによって、該アロエベラ由来材料の標準化値を決定するステップとを含む。
【００５６】
一実施形態では、本方法は、アロエベラ由来材料中の２，３−ジヒドロキシプロピルシステインの含量を決定する前に、アロエベラ由来材料を精製するステップをさらに含む。
【００５７】
本発明のさらに別の態様では、生物学的に標準化されたアロエベラ由来材料の調製方法は、アロエベラ由来材料を準備するステップと、このアロエベラ由来材料の免疫細胞の活性化レベルを決定するステップと、このアロエベラ由来材料の活性レベルを標準免疫賦活性値と比較することによって、該アロエベラ由来材料の標準化活性値を決定するステップとを含む。
【００５８】
一実施形態では、本方法は、アロエベラ由来材料の免疫細胞の活性化レベルを決定する前に、アロエベラ由来材料を精製するステップをさらに含む。
【００５９】
本発明の別の態様では、免疫機能を強化する方法は、該方法が必要な個体に、治療用量の少なくとも１種のＩＡｖＤを投与するステップを含む。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】全炭水化物のモル％によるＡｌｏｅＥｘバッチ５６（ＡＬＯＥ０５６）のグルコシル残基の組成を示す図である。
【図２】平均皮膚反発時間の統計的に有意な減少（皮膚の弾力性または堅さの増加の指標）を秒で示す図である。
【図３】性別および年齢別の皮膚の弾力性試験の人口統計学的データを同定する図である。
【図４】試験パネリストの人口統計学的データを示す図である。
【図５】測定のランダム化パラメーターを同定する図である。
【図６】治療／群ランダム化を同定する図である。
【図７Ａ】被験物質群のキュートメーター（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）測定値の統計解析を示す図である。
【図７Ｂ】プラセボ群のキュートメーター測定値の統計解析を示す図である。
【図７Ｃ】被験物質群およびプラセボ群の両者のキュートメーター測定値の統計解析を示す図である。
【図７Ｄ】被験物質群のキュートメーター測定値の統計解析を示す図である。
【図８Ａ】活性治療に割り当てられた被験者のアンケート結果を示す図である。
【図８Ｂ】活性治療に割り当てられた被験者のアンケート結果を示す図である。
【図９Ａ】プラセボ治療に割り当てられた被験者のアンケート結果を示す図である。
【図９Ｂ】プラセボ治療に割り当てられた被験者のアンケート結果を示す図である。
【図１０Ａ】ＴＬＲ２がＡｌｏｅＥｘによるＮＦ−κＢの活性化に関与することを示す図である。
【図１０Ｂ】ＴＬＲ２がＡｌｏｅＥｘによるＮＦ−κＢの活性化に関与することを示す図である。
【図１１】ＡｌｏｅＥｘ（バッチ０５６）およびＡｌｏｅＥｘ粗製画分に対するＴＨＰ−１細胞の反応を示す図である。
【図１２】ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分の４％ＳＤＳ抽出液のプロテイナーゼＫ消化およびＳＤＳポリアクリルアミドゲル分析を示す図である。
【図１３】ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分の４％ＳＤＳ抽出液のリポタンパク質リパーゼ消化を示す図である。
【図１４】異なるアロエベラ葉部に対するＴＨＰ−１細胞の反応を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
本明細書は、本発明を詳細に示し、かつ明瞭に主張する特許請求の範囲で締めくくるが、本発明は、以下の説明からさらによく理解されるものと考えられる。
【００６２】
本明細書で使用するすべての百分率および比は、特に断らない限り、組成物全体の重量についてであり、すべての測定は２５℃および常圧で行われる。
【００６３】
すべての温度は、特に断らない限り、摂氏温度である。
【００６４】
本発明は、本発明の成分および本明細書で述べる他の成分もしくは要素を含み得る（オープンエンド）、または本質的に本発明の成分および本明細書で述べる他の成分もしくは要素から成り得る。本明細書で使用する場合、「含む」とは、列挙した要素、またはそれらの構造もしくは機能等価物、および列挙していないいずれの他の要素（複数可）をも意味する。用語「有する」および「包含する」も、その文脈が他の意味を示唆しない限り、オープンエンドと解釈するものとする。本明細書で使用する場合、「本質的に〜から成る」という表現は、本発明は請求項で列挙した当該成分に加えて成分を包含し得るが、主張した発明の基本的および新規な特徴をその追加成分が実質的に変えない場合にのみ包含し得ることを意味する。好ましくは、このような添加物が全く存在しないかまたは痕跡量のみ存在する。しかし、本組成物の有用性を維持する限り（有用性の度合に対抗するように）、本発明の基本的および新規な特徴を実質的に変え得る物質を約１０重量％まで包含することができる。
【００６５】
本明細書で列挙するすべての範囲は、２つの値「の間」の範囲を示す当該値を含めて両端を包含する。「約」、「一般的に」、「実質的に」などの用語は、ある用語または値が絶対でないが、先行技術で読めないように用語または値を加減するものと解釈する。このような用語はその状況によって定義され、当業者には状況が当該用語として加減する用語が分かる。これには、最低限でも、値を測定するために使用する所定の技術について予測される実験的エラー、技術的エラーおよび設備上のエラーの度合が含まれる。
【００６６】
本明細書および特許請求の範囲は、本発明の錠剤または他の剤形が、例えば、一定の粒径もしくは粒度分布を有する粒子、または一定タイプの、例えば、充填剤を含有すると言及することがあるが、この記述を満足していることを最終剤形から判別することが困難な場合があることに留意されたい。しかし、このような記述は、例えば、最後の調合および配合の前に使用する材料が当該記述を満たす場合に満足され得る。
【００６７】
別の例では、完成剤形中に実際にコーティングが存在するときに該コーティングがコーティング粒子またはその粒度分布に寄与する重量増加を知ることは困難であり得るが、例えば、錠剤の場合、剤形を作るために使用するコーティング粒子が、最後の調合および圧縮ステップ前に、所望のコーティングレベルおよび／または粒径を示したことが決定されれば十分である。
【００６８】
ここで実際には、特定配合物中の特定成分の含量または最終配合物中の特定成分の活性を確立することは困難であり得る。これを出発材料または中間材料に基づいて確立できれば、十分である。実際には、完成製品から直接確認し得ないいずれの特性についても、最終生産直前に該配合物中に当該特性が存在すれば十分である。当然のことながら、配合前後のいずれの時に、本明細書で述べるＩＡｖＤを定義するのに十分な免疫賦活活性を確立してもよいことが認識されよう。
【００６９】
本明細書で使用する場合、治療および／または改善という表現は、関節痛もしくは皮膚の弾力性または実際には本明細書で述べる他の状態に関連して使用する場合、永久的であれ一時的であれ、持続的であれ過渡的であれ、ＰＬＬおよび／またはＩＡｖＤ組成物の投与に帰するかまたは該投与と関連し得る、関節痛もしくは筋肉痛のいかなる低減または皮膚の弾力性のいかなる増加をも意味する。治療および改善は、ある状態またはその再発を予防するために本明細書で述べる製品を使用することをも包含する。本文または文脈がそうでないと指示しない限り、改善および治療は相互交換可能に使用されることにも留意されたい。
【００７０】
特に、本明細書でＩＡｖＤとみなすためには、材料は本組成物の免疫賦活特性に実質的に寄与しなければならない。本明細書で使用する場合、本組成物の免疫賦活特性に「実質的に寄与する」という表現は、本明細書で述べる免疫賦活作用を意味する。
【００７１】
本明細書で使用する場合、用語「免疫賦活性」、「免疫賦活作用」または「免疫賦活特性」および／または「活性」は、本発明のＩＡｖＤの、マクロファージ活性化を引き起こす能力、特に、前述したようにＴＨＰ−１単球内のＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の増加によって表される免疫賦活活性に関する（２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度での１０μｇ／ｍＬのＥＬＰＳの当該発現の約５０％に等しい）。いずれの個々のアロエ由来成分またはその集合物もしくは混合物に基づいてこれを測定してもよい。したがって、活性は、例えば、アロエ由来多糖またはそのＡＬＰおよび／もしくはＡＬＰＳとの組合せの活性を反映することができる。このタイプのマクロファージの活性化を測定するための方法は、その内容を参照によって本明細書に引用したものとする’０７２特許、５欄の１２行目〜６欄の２２行目に開示されている。
【００７２】
一般的に、ＴＨＰ−１ヒト単球細胞内のルシフェラーゼ受容体遺伝子アッセイを利用してマクロファージの活性化を測定することができる。このアッセイは、ＮＦ−κβ駆動型ルシフェラーゼ受容体の発現の増加によって表される免疫賦活活性を測定する。ウシ胎児血清（１０％ｖ／ｖ）およびアミカシン（６０ｍｇ／Ｌ）で補充したＲＰＭＩ１６４０培地内で５％ＣＯ２および９５％空気下、３７℃でＴＨＰ−１細胞を培養する。活発に成長する細胞を、ＤＥＡＥ−デキストラン（１０μｇ／１×１０６細胞）と、ＮＦ−κβ用の２つの結合部位を含むｐＢＩＩＸＬＵＣ受容体プラスミド（１μｇ／１×１０６細胞）とを用いて一時的にトランスフェクトする。ＴＨＰ−１細胞を含むトランスフェクション溶液を３７℃の水浴内で７分間インキュベートする。次に、トランスフェクトされた細胞を１０％ＦＢＳ、ＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁させ、９６ウェルプレート内に１ウェル当たり２×１０５個の細胞の細胞密度でプレートアウトする。２４時間後、トランスフェクトされた細胞に試験サンプルを添加する。サンプルの添加４時間後、細胞を収集し、ルシフェラーゼ活性を測定する。Ｐａｃｋａｒｄろ過プレートを用いて細胞を収集し、３０μＬのルシフェラーゼミックス（１：１、ＬｕｃＬｉｔｅ（商標）ルシフェラーゼ：１×ＰＢＳ、１ｍＭのＣａおよびＭｇ）を用いて溶解させる。Ｐａｃｋａｒｄマイクロプレートシンチレーションカウンターを用いて単一光子モードでルシフェラーゼの発光を測定する。正対照として使用する１０μｇ／ｍＬのＥＬＰＳによるＮＦ−κβの最大活性化に対する百分率として活性化を報告する。他のアッセイ法も考えられる。
【００７３】
本明細書で使用する場合、非免疫賦活性アロエベラ由来材料という用語およびこの概念を暗示する他の語は、本明細書で定義するＩＡｖＤの免疫賦活性要件を満たさないアロエベラ由来材料と定義される。
【００７４】
用語アロエ由来リポタンパク質または「ＡＬＰ」は、アロエベラ内在性細菌由来の細菌リポタンパク質を表す。細菌を別々に培養または栽培してもよいので、この用語は、細菌がアロエベラ由来でなければならないことを意味しない。グラム陽性ミクロコッカス細菌種は最も広く用いられているアロエ関連生物である。これらの細菌はアロエ植物内でよく成長するように進化しており、他の環境内ではあまりよく成長しない（Ｗａｌｌｅｒ  ＴＡら、Ｉｎ  Ａｌｏｅｓ：Ｔｈｅ  ｇｅｎｕｓ  Ａｌｏｅ；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔ編；ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：ＮＹ、２００４；第８章、１３９〜２０５ページ）。グラム陽性細菌はリポタンパク質を含有するが、リポ多糖を含まない。本明細書で開示するように、リポタンパク質は、グラム陽性細菌由来の、インビトロマクロファージ活性化に対する有意な寄与物質であると考えられる。グラム陽性細菌はアロエ中で最も多く見られるタイプの細菌なので、リポタンパク質はアロエに由来する重要な活性を代表している。
【００７５】
最近の研究は、一定のグラム陽性細菌を含有する食品の消費が免疫系に有益な作用を及ぼし得ることを指摘する。これは、ヨーグルトおよび同様の食品で見られるプロバイオティック乳酸菌ラクトバシラスおよびビフィドバクテリウム株の消化に関して最も広範に研究されている（Ｅｚｅｎｄａｍおよびｖａｎ  Ｌｏｖｅｒｅｎ、Ｎｕｔｒ．Ｒｅｖ．、２００６、６４：１〜１４で精査されている）。これらの免疫強化作用の多くは、加熱死生物の消費によって模倣され得るので、生細菌細胞を必要としない。
【００７６】
本明細書で使用する場合、用語アロエベラ由来リポ多糖およびＡＬＰＳは、共有結合によって連結された脂質と多糖（炭水化物）とを含む大型分子を表す。ＡＬＰＳは、アロエベラ中で見られるかまたはアロエベラと関連するグラム陰性細菌の外膜の主成分であり、細菌の構造的完全性に大いに寄与し、かつ一定種類の化学的攻撃から膜を保護する。ＡＬＰＳは内毒素であり、正常な動物の免疫系から強い反応を誘発する。
【００７７】
ＬＰＳは、多くの細胞型内、特にマクロファージ内で炎症誘発性サイトカインの分泌を促進するＣＤ１４／ＴＬＲ４／ＭＤ２受容体複合体に結合するので、一般的に原型内毒素として作用する。免疫学における「ＬＰＳ誘発」とは、毒素として作用し得るＬＰＳに対象をさらすことである。ＬＰＳは、細胞膜の負電荷をも増やし、膜構造全体の安定化を助ける。ＬＰＳはさらに外因性ピロゲン（外部熱誘導組成物）である。ＡＬＰの免疫賦活作用はトール様受容体２によって媒介されると考えられるが、ＡＬＰＳはトール様受容体４によって媒介されると考えられる点で、ＡＬＰは、やはり本発明のＰＬＬの望ましい成分であるＡＬＰＳとは異なる。
【００７８】
一部のＩＡｖＤ組成物には、該組成物の免疫賦活特性に実質的に寄与するＡＬＰまたはＡＬＰＳが存在しない。しかし、他のＩＡｖＤ組成物は、該組成物の免疫賦活特性に実質的に寄与するＡＬＰＳ以外の多糖を包含しない。さらに他のＩＡｖＤ組成物は、該組成物の免疫賦活特性に実質的に寄与するＡＬＰのみを有する。
【００７９】
好ましくは、２種以上の多糖、ＡＬＰおよび／またはＡＬＰＳがあり、そのいずれかまたはすべてが個々にまたは相乗的にＩＡｖＤ組成物の免疫賦活活性に実質的に寄与する。
【００８０】
一部のＩＡｖＤ組成物は、アロエベラ中で見られるか、そうでなくてもアロエベラと関連する一定の細菌、酵母菌、真菌、カビなどの微生物に由来する免疫賦活活性を有するＡＬＰおよび／またはＡＬＰＳを包含する。これらのＡＬＰおよびＡＬＰＳは、当該属および種がアロエベラ上で見られるかまたはアロエベラと関連する限り、培養された微生物から回収されてもよい。アロエベラ植物上またはアロエベラ植物内で見られ、濃縮または合成されてもよいこれらのＡＬＰおよびＡＬＰＳを多糖に加えて、または多糖の代わりに使用して、とりわけ、関節痛および筋肉痛の治療、ならびに皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／または弾力性の強化において種々の利益をもたらし得る。’０７２特許に記載されているもののような、アロエ由来多糖を含有するＰＬＬ、およびＡＬＰとＡＰＬＳの両者が、これらの用途のために考えられる。
【００８１】
本明細書で使用する場合、用語アロエ由来材料は、アロエベラ中に含まれるかまたはアロエベラ上に存在するいずれの材料をも表し、限定するものではないが、アロエ由来多糖、リポタンパク質およびリポ多糖が挙げられる。該材料は、アロエ植物から単離され、および／または合成され得る。
【００８２】
本明細書で使用する場合、合成または合成されたという用語は、人工および／または製造された材料、かつ本来見られる当該材料と組成が同一または類似している材料を指す。ＡＬＰおよびＡＬＰＳの場合、それは別々に培養された材料をも指す。
【００８３】
本明細書で使用する場合、用語「ＡｌｏｅＥｘ」は、’０７２特許の多糖ならびにＡＬＰおよびＡＬＰＳを含む、アロエベラから抽出されたかまたは合成によって製造された免疫賦活性ＰＬＬ混合物を表す。ＡｌｏｅＥｘのようなＰＬＬは、アロエベラ葉の皮および／または粘液（すなわち内部ゲルと外皮の間の部分）から単離され、またアロエ廃棄材料（すなわち他のプロセスで使用され、現在の産業基準によって廃棄物とみなされる使用済みの皮）から得られる。
【００８４】
ＡｌｏｅＥｘは、本明細書で述べる技術で測定した場合、５μｇ／ｍＬの免疫賦活活性を有することが多い。このことは、約５μｇ／ｍＬの濃度のＡｌｏｅＥｘは、ＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κＢ誘導ルシフェラーゼ発現を１０μｇ／ｍＬの濃度のＥＬＰＳを用いて実現される当該レベルの５０％以上に匹敵するレベルに高めることを意味する。当然に、このレベルの活性内でバッチごとの変化が生じ得る。
【００８５】
本明細書で使用する場合、用語Ａｌｏｅｒｉｄｅ（後述する商標名ＡＬＯＥＲＩＤＥ（登録商標）とは区別されるように）は、アロエベラから単離されたかまたは合成によって製造された免疫賦活性多糖組成物を表す。ここで、この多糖は、’０７２特許で報告されたように、約２００万ダルトンを超える見掛け分子量を有し、かつグルコース、ガラクトース、マンノースおよびアラビノースを含む。特に、Ａｌｏｅｒｉｄｅ多糖組成物は、約２５％〜約７０％のグルコース、約０．５％〜３５％のラムノース、約５％〜約３０％のガラクトース、約３％〜約２５％のマンノースおよび約０％〜約１５％のアラビノースを含み得る（モル％で）。’０７２特許では、Ａｌｏｅｒｉｄｅ多糖はＮＰ１８２９８とも呼ばれる。本発明の目的では、ＡｌｏｅｒｉｄｅとＮＰ１８２９８は同一組成物を表す。
【００８６】
本明細書で使用する場合、用語ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｉｒｓｔＡｌｏｅｖｅｒａ．ｃｏｍ／ｍａｇｎＡｌｏｅ＿ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．ｈｔｍに示される分子量分布を有するアロエ由来多糖の粉末混合物を表す。本明細書で述べるＩＡｖＤまたは非ＩＡｖＤの目的では、高分子量のアロエ由来多糖材料を含むいずれの混合物をも考慮する。
【００８７】
’０７２特許につながる予備所見は、粗製アロエ汁およびゲル中で検出可能なレベルの免疫賦活は、既知のアロエ成分によっては説明できないことを示唆した。市販のアロエ製剤（２００μｇ／ｍＬ）は、マクロファージアッセイにおいて無視できるほどのＮＦ−κβ活性化をもたらすだけだった。この活性の原因となるＡｌｏｅｒｉｄｅ「ＮＰ１８２９８」は多糖含有画分を含み、この画分に存在する多糖の見掛け分子量は２００万ダルトンを超えることが分かった。’０７２特許で報告されたその主要グリコシル成分はグルコース、ガラクトース、マンノースおよびアラビノースを包含した。’０７２特許で使用かつ報告された精製の度合および方法に基づき、Ａｌｏｅｒｉｄｅが実質的レベルのＡＬＰおよび／またはＡＬＰＳを包含したとは考えられない。
【００８８】
Ａｌｏｅｒｉｄｅ含有材料の代替源およびスケールアップ生産方法を調査する際に、他の画分、’０７２特許に記載の画分を包含し得る画分が、ＡＬＰおよびＡＬＰＳなどの他の材料と共に、望ましい免疫賦活活性を所有することを引き続き発見した。
【００８９】
記載された出発材料を使用する’０７２特許に記載の方法は、有意のさらなる免疫賦活活性をもたらすのに十分なＡＬＰおよびＡＬＰＳを欠いている、相対的に純粋な多糖含有画分を与えた。
【００９０】
作用のいかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、ＡＬＰおよびＡＬＰＳは別々の免疫賦活特性を所有し、多糖に加えて、または多糖の代わりにＡＬＰおよびＡＬＰＳを使用して、とりわけ、関節痛および筋肉痛の治療、ならびに皮膚の弾力性の強化において種々の利益をもたらし得ると考えられる。
【００９１】
試験の結果は、Ａｌｏｅｒｉｄｅ多糖、ＡＬＰおよびＡＬＰＳを含むＡｌｏｅＥｘは、Ａｌｏｅｒｉｄｅ多糖、ＡＬＰおよびＡＬＰＳが集合的にＡｌｏｅＥｘのマクロファージ活性化特性（免疫賦活特性）の原因であることを示唆している。
【００９２】
ＩＡｖＤとしては、ＰＬＬ、ＡｌｏｅＥｘ、ＡＬＰとＡＬＰＳの混合物、多糖およびＡｌｏｅｒｉｄｅ多糖（実質的にＡＬＰおよびＡＬＰＳがない）が挙げられる。ＩＡｖＤには他の材料も含まれ、免疫賦活性誘導組成物を有し、かつＴＨＰ−１細胞内でＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現を、本明細書で述べるＩＡｖＤの基準を満たす程度に活性化させることが分かっている市販の多糖製剤が挙げられる。
【００９３】
ＩＡｖＤの安定化配合物および組成物が望ましい場合、該配合物は、ＩＡｖＤ材料と共に第２のアロエ由来非ＩＡｖＤ材料を含んでよい。第２のアロエ由来非ＩＡｖＤ材料は、免疫賦活活性がより低い材料および分子量が一般的に１，５００，０００ダルトン以下の多糖を少なくとも５０％含む。
【００９４】
ＩＡｖＤを第２のアロエ由来材料と混合する場合、第２のアロエ由来材料が第２のＩＡｖＤであっても非ＩＡｖＤであっても、当然、個々の炭水化物の割合、および実際には総分子量が変化し得る。さらに、混合物の全活性が変化してよい。例えば、ＡｌｏｅＥｘとＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの２０％：８０％混合物は、一般的に多糖ではより低い総分子量を有し、ＡｌｏｅＥｘより低い全活性を有し、かつ最も多く見られる炭水化物としてマンノースを有するだろう。
【００９５】
これらの第２の非ＩＡｖＤアロエ由来材料の非限定例として、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧ、アロエベラゲル１Ｘ（天然の粉砕フィレ、微粒子フィレまたは脱色）、アロエベラゲル１０Ｘ（天然または脱色）、アロエベラゲル２００ｘ（脱水粉末または噴霧乾燥粉末）、アロエベラ全葉噴霧乾燥粉末１００Ｘ、アロエベラ全葉脱色液（１Ｘ、２Ｘ、４Ｘ、または１０Ｘ）、エースマンナン、アロエベラ粘質多糖（ＡＶＭＰ）およびＭａｎａｐｏｌから成る群より選択される当該材料が挙げられる。
【００９６】
配合物中に存在する第２のアロエ由来材料の量は、一般的に第２のアロエ由来材料と第１のＩＡｖＤの総量に対して少なくとも約１０重量％〜約９０重量％である。第２のアロエ由来材料の、第１のＩＡｖＤを可溶化、懸濁、乳化および／または分散させる能力が大きいほど、また第２のアロエ由来材料の活性が大きいほど、第２のアロエ由来材料の量は少なくてよい。１つの好ましい実施形態では、第２のアロエ由来材料がＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧであり、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの量がＡｌｏｅＥｘの量より多く、特に好ましい実施形態では、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧ対ＡｌｏｅＥｘの重量比が４：１で供給される。この２つの材料によって結果として形成された均質混合物中、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧがその約８０％を形成するだろう。本明細書で記載および定義するように、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧは、本明細書で定義するＩＡｖＤとみなすものとは考えられない。
【００９７】
他のＩＡｖＤおよび非ＩＡｖＤとして、免疫賦活誘導組成物を有し、かつ２００μｇ／ｍＬのＴＨＰ−１細胞内でＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現を活性化させることが分かっている市販の多糖製剤、例えばＣａｒｒｉｎｇｔｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｉｒｖｉｎｇ、ＴＸ）から入手可能なアロエベラ粘質多糖（ＡＶＭＰ）およびＭａｎａｐｏｌが挙げられる。特に、ＡＶＭＰおよびＭａｎａｐｏｌは、１０μｇ／ｍＬのＥＬＰＳによるＮＦ−κβの最大活性化に対して２〜４％の範囲の活性化が報告されている非ＩＡｖＤであると考えられる。
【００９８】
本発明では、上記いずれの組成物をも単独で、または組み合わせて利用してよい。
【００９９】
皮膚の治療
本発明の一態様は、皮膚の改善または治療が必要な対象の皮膚の外観、テクスチャー、堅さ、および／もしくは弾力性を改善する方法または低下した皮膚の弾力性を治療する方法である。皮膚の改善または治療が必要な対象はいずれの哺乳動物でもあり、特に、皮膚の弾力性の強化または改善が必要なヒトである。これは、皮膚の弾力性の強化または改善が必要な対象に、この対象の皮膚の弾力性の改善を果たすのに十分な時間、有効量のＩＡｖＤ組成物を投与することによって達成される。皮膚の弾力性の文脈における本発明の改善も治療も、主観的な基礎について何らかの認識できる測定可能以上の改善は必要ない。特に断らない限り、これは、いずれの対象にとっても、例えば、視覚および触覚観察に基づく主観的な基礎に関する改善であってよい。
【０１００】
しかし、多くの場合、統計的に有意な改善に基づいて改善を測定する。ＡＮＯＶＡで判断する場合、臨床試験の規定群の被験者で本方法を利用するとき、本明細書で述べるいずれか１つの試験で測定するように試験する。例えば、皮膚の弾力性は伸縮に関係するので、キュートメーターパラメーターＵｒ／Ｕｅは皮膚の弾力性を表す。群１の被験者の７０パーセントがキュートメーターパラメーターＵｒ／Ｕｅの改善を示した。ベースラインに対して、パラメーターＵｒ／Ｕｅのこの有意な増加は、本発明の栄養補助食品を摂取した被験者の第１２週における２９％の改善に相当する。
【０１０１】
統計的有意性を達成するのに必要な改善の量は、いくつかの因子によって決定される。該因子としては、限定ではなく、対象の数、試験の長さ、弾力性の改善を測定するために使用する技術、対象の状態、剤形のタイプ、使用する１日の用量などが挙げられる。さらに、統計的有意性が少なくとも１つの弾力性試験で得られる限り、ありとあらゆる試験方法論を用いて統計的有意性が達成されることは本発明の要件でない。
【０１０２】
いずれの通常の経路を介しても本発明のＩＡｖＤ組成物を投与することができる。しかし、経口および経皮経路を含めた局所経路が好ましい。当然に、投与経路は、投与を達成するために使用する剤形の設計の多くを決定し得る。
【０１０３】
単一用量に含まれるＩＡｖＤ組成物の量は、局所適用するかまたは摂取するか否かによって、また何の目的で使用するかによって影響を受ける。しかし、一般的に、選択した剤形に関係なく、皮膚の弾力性を治療するために本発明に従って使用するＩＡｖＤ組成物の量は、１日当たり約０．００２５ｍｇ〜約１ｇの範囲である。これは、アロエ由来材料の総量ではなく、ＩＡｖＤの量を意味する。ＩＡｖＤ配合物の個々の成分を区別できないことがある。これらの目的のためには、他の材料と混合する前にＩＡｖＤがこれらの特性を所有すれば十分である。
【０１０４】
例えば、ＩＡｖＤとアロエ由来非ＩＡｖＤが存在してもよく、またはＩＡｖＤが存在してよい。
【０１０５】
皮膚の弾力性を改善するためのＩＡｖＤ配合物を単一用量としてまたは１日全体で分割した用量として与えてよく、一般的に投与する用量の数は、１日１〜約６、さらに好ましくは１日１〜４、最も好ましくは１日１〜２の範囲である。これは、本明細書で述べるように、約５μｇ／ｍＬの濃度で試験した場合に約１０μｇ／ｍＬの濃度を有するＥＬＰＳで達成される（一般的にＡｌｏｅＥｘ中で見られる）当該発現レベルの約５０％のレベルにＴＨＰ−１細胞内のＮＦ−κＢ誘導ルシフェラーゼ発現を増加させることで特徴づけられるＩＡｖＤが示す活性に基づく。この単球／マクロファージ活性化のレベルは、バッチごとに変化するので、同等レベルの活性をもたらすために、より多いかまたはより少ないＰＬＬが必要なことがあることに留意されたい。さらに、他のＩＡｖＤは、ＰＬＬと比較した場合、より多いかまたはより少ない免疫賦活性であってよい。ＰＬＬに匹敵する活性を与えるであろう量のこれらの各ＩＡｖＤが必要なこともある。
【０１０６】
したがって、本発明の各剤形に含まれるＩＡｖＤ組成物の量は、約０．０００５ｍｇ〜約１ｇの範囲であってよく、１日の用量、用量の数および投与経路によって決まる。
【０１０７】
最も好ましくは、経口投与による皮膚の弾力性改善および／または皮膚細胞の再生促進の観点では、ＩＡｖＤ組成物の量は、１日当たり約０．２ｍｇ〜約５ｇ、さらに好ましくは約５ｍｇ〜約１ｇ、最も好ましくは約１０ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲である。また、局所投与する場合、この量は約０．０００５ｍｇ〜約２．５ｍｇ、さらに好ましくは約０．００２５ｍｇ〜約０．２５ｍｇ、なおさらに好ましくは約０．００２５ｍｇ〜約０．０２５ｍｇの範囲である。これらの量は、約５μｇ／ｍＬの活性のＡｌｏｅＥｘの使用に基づく。同様の結果をもたらす他のＩＡｖＤの量が考えられる。
【０１０８】
本発明の好ましい実施形態では、ＩＡｖＤ組成物の毎日の投与を少なくとも７日間、さらに好ましくは少なくとも２週間、さらに好ましくは少なくとも２ヶ月間続ける。最も好ましくは、本発明の材料を対象の生涯を通じて継続的に投与して、皮膚の弾力性を改善かつ維持する。しかし、治療のために投与する量を最終的に減らして、一定の所望レベルの皮膚の弾力性の維持または促進的皮膚細胞再生を達成し得る。したがって、ある治療期間後に一旦皮膚の弾力性が改善されたら、その維持のためにより少ない用量の投与でよい。
【０１０９】
局所適用の場合、患部の上に直接薬用量を広げてよい。場合によっては、皮膚にこすりつけてよい。他の場合には、薬用量を操作せずに、適用したまま適用域上で吸収させるかまたはそこに残す。ＩＡｖＤを密封包帯またはＩＡｖＤの上に置く何らかの他のタイプの覆いの上にＩＡｖＤを適用してもよい。
【０１１０】
これとは別に、ＩＡｖＤをパッチ中に配合してよい。ＩＡｖＤを皮膚の表面または皮膚自体の一部の層もしくは複数の層に送達するように、これらの局所適用を設計することができる。あるいは、より深い局所的または全身的分布のためＩＡｖＤを経皮送達するようにＩＡｖＤを配合することができる。経口および局所剤形を調製するために使用できる材料のタイプについてはさらに本明細書で論じる。
【０１１１】
経口投与する場合、錠剤、カプセル剤、散剤、サシェ剤、ロゼンジ剤、ガムキャンディーまたはいずれの他の摂取形態でＩＡｖＤ組成物を与えてもよい。液体としてまたは摂取前にまず液体に溶かすかまたは液体と混合する固体としてＩＡｖＤを提供してもよい。飲み込める剤形であってもよく、または摂取前に口内で固体であり、口内で崩壊してもよい。ＩＡｖＤを食品上に振り掛けて、食品と一緒に摂取してさえもよい。
【０１１２】
「促進的細胞再生」はそれ自体で終点であり、促進的細胞再生を強化する方法およびＩＡｖＤ組成物を用いてこれを達成する製品も企図していることに留意されたい。促進的細胞再生は、望ましくは剥脱している、皮膚の死んだ層下の皮膚細胞の再生である。これは、皮膚の弾力性に関連して述べたのと同じ技術および製品を利用して達成される。
【０１１３】
関節／筋肉痛
本発明の別の態様は、本発明のＩＡｖＤ組成物を用いた、改善または治療が必要な被験者の関節痛および／もしくは筋肉痛の改善または治療である。一般的に、皮膚の弾力性に合わせて前述した投与経路および剤形はこれらの方法に同様によく当てはまる。局所適用は、特定の筋肉もしくは筋肉群および／または特定の関節に作用し得る。全身投与（経口または経皮）は、当該同位置の痛みを減らし、かつ／または多くの筋肉群および／もしくは関節にわたるより広範な痛みの軽減をもたらし得る。
【０１１４】
皮膚の弾力性との関連でも前述したように、本発明のこの態様の治療は、対象ごとの基礎について主観的に測定できる関節痛および／または筋肉痛の減少を意味する。しかし、さらに好ましくは、本発明の成功製品は、長期間にわたって対象群に投与すると、統計的に有意な仕方で十分な治療をもたらすだろう。望ましくは、少なくとも７５％の対象が、１２週間の治療後に筋肉痛および／または関節痛の頻度の減少、痛み強度の低下または痛みの持続時間の減少を証明するであろう。これは全身または特有の筋肉もしくは関節の痛みであってよい。
【０１１５】
関節痛および／もしくは筋肉痛の文脈における対象の状態の改善は、治療前、治療中および／または治療後に、それぞれ個々に特定部位でのまたは全身での自分の痛みを評定することによってスコア化する主観的評定システムで決定されることが多い。
【０１１６】
以前にも注意したように、本発明のこの態様に従って投与するＩＡｖＤ組成物の量は、投与経路、治療すべき領域、痛みの度合およびタイプなどによって変化するだろう。しかし、この量は、一般的に皮膚の弾力性を改善する方法に関連して前述したのと同じ範囲内であろう。この方法および皮膚の弾力性の改善方法の両方法では、同時または同日内にＩＡｖＤ組成物を経口と局所の両方で、あるいは何らかの代替または補足計画に基づいて投与することによって、全身およびより特異的に目標とした軽減または改善をもたらすこともできる。
【０１１７】
本発明によれば、いずれのＩＡｖＤ組成物を使用してもよい。例えば、本明細書で述べる免疫賦活特性を示すいずれのＰＬＬ、いずれのＡｌｏｅＥｘまたはいずれのＡｌｏｅｒｉｄｅ多糖配合物をも使用し得る。本発明は、必要に応じて許容し得る医薬担体または賦形剤と共にＩＡｖＤを使用する医薬組成物および方法を包含する。
【０１１８】
組成物
本発明で使うのに適した医薬組成物は、その意図した目的を果たすために有効な量で活性成分を含有する組成物を包含する。さらに詳細には、治療的に有効な量は、治療する対象の症状の発生を予防するかまたは現存症状を軽減するために有効な量を意味する。この有効な量の決定は、特に本明細書で提供する詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力範囲内である。
【０１１９】
投与する組成物の量は、治療する状態、治療する対象、対象の体重、苦痛の重症度、投与様式および個々の医師または個人の判断によって決まるだろう。
【０１２０】
上述したように、適切な投与経路として、例えば、経口、経粘膜、局所または経皮が挙げられる。
【０１２１】
それ自体既知の方法、例えば、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、粉末化、ゲル化、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスを用いて、本発明の医薬組成物を製造することができる。
【０１２２】
したがって、組成物および化合物を医薬的に使用可能な製剤に加工するのを容易にする賦形剤および補助剤を含む１または複数の生理学的に許容し得る担体を用いて、通常の様式で、本発明で使う医薬組成物を調製することができる。適切な処方は、選択した投与経路によって決まる。
【０１２３】
経口投与のため、組成物を単独で投与することができ、または活性組成物を技術上周知の医薬的に許容し得る担体と組み合わせて容易に調製することができる。該担体により、治療すべき患者による経口摂取のため、本発明の組成物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、サスペンションなどとして調製することができる。
【０１２４】
固体賦形剤を用いて、必要に応じて製剤および／または結果混合物の個々の成分を粉砕または製粉し、所望により、例えば、クリーム、ローション、セラム、散剤、発泡配合物、錠剤または糖衣錠コアを得るため、適切な補助剤を添加した後、成分および／または顆粒混合物を加工することによって、経口および／または局所使用のための医薬製剤を得ることができる。しかし、顆粒化は、使用し得る多くの既知技術の１つにすぎない。
【０１２５】
適切な賦形剤は、特に、充填剤、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールなどの糖；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのセルロース製剤である。
【０１２６】
所望により、ＰＶＰ、ナトリウムデンプングリコラート、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を添加してよい。
【０１２７】
糖衣錠コアは適切なコーティングを備える。この目的のため、濃縮糖溶液を使用することができ、必要に応じてアラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）ゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでよい。識別のためまたは活性組成物用量の異なる組合せを特徴づけるため、染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに添加してよい。
【０１２８】
経口使用できる医薬製剤として、ゼラチン製の押し込み型カプセル剤、およびゼラチンと、グリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤とで作られた軟らかい密封カプセル剤が挙げられる。押し込み型カプセル剤は、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤沢剤、および必要に応じて安定剤との混合物に活性成分を含有し得る。軟カプセル剤では、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に活性組成物を溶解または懸濁させてよい。さらに、安定剤を添加してよい。経口投与用のすべての配合物は、該投与に適した薬用量を成しているべきである。
【０１２９】
頬側投与のため、組成物は通常の様式で調製した錠剤またはロゼンジ剤の形態を取ってよい。
【０１３０】
局所投与のため、エマルション、マイクロエマルション、または他の局所クリーム、ローション、ミルク、洗浄液、軟膏、セラムまたはゲルを調製してもよい。ＡｌｏｅＥｘの直接乳化、例えば、ＡｌｏｅＥｘ水中油エマルションの製剤が可能であり、この疎水性コアまたは油相は大部分がＡｌｏｅＥｘで構成される。他の界面活性剤または処方賦形剤を添加してエマルションを物理的に安定化することができる。
【０１３１】
局所投与に適した医薬製剤は、約０．０５〜約５重量％のＩＡｖＤ組成物を含有する特にクリーム、軟膏およびゲル、またペースト、フォーム、チンキ剤および溶液である。好ましくは製剤は約０．５重量％のＩＡｖＤ組成物である。これらの組成物は、必要に応じて、少なくとも１種のＩＡｖＤおよびいずれの他のアロエベース材料をも含め、合計量のアロエ由来材料を包含する。臨床試験で論じられた処方では、例えば、０．５％のＩＡｖＤ組成物はＡｌｏｅＥｘとＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの１：４混合物で構成された。
【０１３２】
クリームまたはローションは、典型的に水を５０％より多く含有する水中油エマルションであってよい。油性基剤として、特に脂肪アルコール、特に１２〜１８個の炭素原子を含有する脂肪アルコール、例えばラウリル、セチルもしくはステアリルアルコール、脂肪酸、特に１０〜１８個の炭素原子を含有する脂肪酸、例えばパルミチン酸もしくはステアリン酸、液状乃至固形ワックス、例えばミリスチン酸イソプロピル、羊毛脂または蜜蝋、および／または炭化水素、特に液状、半固形もしくは固形物質またはその混合物、例えば石油ゼリー（ワセリン）もしくはパラフィン油が使用される。好適な乳化剤は、主に親水特性を有する表面活性物質、例えば対応する非イオン性乳化剤、例えばポリアルコールの脂肪酸エステルまたはそのエチレンオキシド付加物、特に（ポリ）エチレングリコール、（ポリ）プロピレングリコールもしくはソルビトールとの対応する脂肪酸エステル（該脂肪酸部分は特に１０〜１８個の炭素原子を含有する）、特にポリヒドロキシエチレンソルビタンの部分グリセリル脂肪酸エステルもしくは部分脂肪酸エステル、例えばポリグリセロール脂肪酸エステルもしくはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ）、またポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテルまたは脂肪酸エステル（該脂肪アルコール部分は特に１２〜１８個の炭素原子を含有し、かつ該脂肪酸部分は特に１０〜１８個の炭素原子を含有する）、特に約２〜２３個のエチレングリコールもしくはエチレンオキシド単位を有するもの、例えばポリヒドロキシエチレンセチルステアリルエーテル（例えばＣｅｔｏｍａｃｒｏｇｏｌ）、ポリヒドロキシエチレン−（４）−ラウリルエーテルおよびポリヒドロキシエチレングリセロール脂肪酸エステル（例えばＴａｇａｔ  Ｓ）、または対応するイオン性乳化剤、例えば脂肪アルコールスルファートのアルカリ金属塩（特に該脂肪アルコール部分中に１２〜１８個の炭素原子を有する）、例えばラウリル硫酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウムもしくはステアリル硫酸ナトリウム（通常、脂肪アルコール、例えばセチルアルコールまたはステアリルアルコールの存在下で使用する）である。
【０１３３】
水相への添加剤は、クリームが乾燥してしまうのを防止する薬剤、例えば湿潤剤、例えばポリアルコール、例えばグリセロール、ソルビトール、プロピレングリコールおよび／またはポリエチレングリコール、ならびに保存剤、香料などである。
【０１３４】
軟膏またはローションは、典型的に７０％まで、好ましくは約２０％〜約５０％の水または水相を含有する油中水エマルションであってよい。脂肪相としては、特に、水結合能を改善するため、好ましくは適切なヒドロキシ化合物、例えば脂肪アルコールまたはそのエステル（例えばセチルアルコールもしくは羊毛脂アルコール）、または羊毛脂を含有する炭化水素、例えば石油ゼリー、パラフィン油および／または硬質パラフィンが好適である。
【０１３５】
乳化剤は、対応する親脂性物質、例えばソルビタン脂肪酸エステル（Ｓｐａｎｓ）、例えばオレイン酸ソルビタンおよび／またはイソステアリン酸ソルビタンである。水相への添加剤は、とりわけ、湿潤剤、例えばポリアルコール、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールおよび／またはポリエチレングリコール、ならびに保存剤、香料などである。
【０１３６】
マイクロエマルションは、下記４成分を基礎とする等方系である：水、乳化剤（例えば上述したタイプの乳化剤、例えば界面活性剤、例えばエマルギン（ｅｍｕｌｇｉｎ））、脂質（例えば無極性油、例えばパラフィン油）、および親油性基を含有するアルコール、例えば２−オクチルドデカノール。所望により、他の添加剤をマイクロエマルションに添加してよい。
【０１３７】
脂肪性軟膏は水を含まず、基材として特に炭化水素、例えばパラフィン、石油ゼリーおよび／または液体パラフィンを含み、また天然もしくは部分合成脂肪、例えばグリセロールの脂肪酸エステル、例えばココナツ脂肪酸トリグリセリド、または好ましくは硬化油、例えば水素化落花生油もしくはひまし油、またグリセロールの脂肪酸部分エステル、例えばモノおよびジステアリン酸グリセロール、ならびに例えば、水吸収能を高める脂肪アルコール、乳化剤および／または軟膏に関連して言及した添加剤をも含有する。
【０１３８】
ゲルについては、水性ゲル、無水ゲルおよび少量の水を含むゲルの間で区別され、ゲルは膨潤性のゲル形成材料から成る。特に、無機または有機巨大分子を基礎とする透明のヒドロゲルを使用する。ゲル形成特性を有する高分子量の無機成分は、主に含水ケイ酸塩、例えばケイ酸アルミニウム、例えばベントナイト、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、例えばＶｅｅｇｕｍ、またはコロイドケイ酸、例えばＡｅｒｏｓｉｌである。高分子量の有機物質としては、例えば、天然、半合成または合成巨大分子を使用する。天然および半合成ポリマーは、例えば、多種の炭水化物成分、例えばセルロース、デンプン、トラガカント、アラビアガムおよび寒天、ならびにゼラチン、アルギン酸およびその塩、例えばアルギン酸ナトリウム、ならびにそれらの誘導体、例えば低級アルキルセルロース、例えばメチルもしくはエチルセルロース、カルボキシもしくはヒドロキシ低級アルキルセルロース、例えばカルボキシメチルもしくはヒドロキシエチルセルロースを含有する多糖から誘導される。合成ゲル形成巨大分子の成分は、例えば、適宜置換されている不飽和脂肪族化合物、例えばビニルアルコール、ビニルピロリジン、アクリル酸またはメタクリル酸である。該ポリマーの例は、ポリビニルアルコール誘導体、例えばポリビオール、ポリビニルピロリジン、例えばコリドン、ポリアクリラートおよびポリメタクリラート（特に約８０，０００〜約１，０００，０００の分子量を有する）、またはその塩、例えばＲｏｈａｇｉｔ  Ｓ、ＥｕｄｉｓｐｅｒｔもしくはＣａｒｂｏｐｏｌである。慣例の添加剤、例えば保存剤、安定剤、または香料をゲルに添加してよい。
【０１３９】
フォームは、例えば、加圧容器から投与され、エアロゾル形態の液状水中油エマルションであり；噴霧剤として無置換基またはハロゲン化炭化水素、例えばアルカン、例えばプロパンもしくはブタン、またはクロロフルオロ低級アルカン、例えばジクロロジフルオロメタンおよびジクロロテトラフルオロエタンが用いられる。油相としては、とりわけ、炭化水素、例えばパラフィン油、脂肪アルコール、例えばセチルアルコール、脂肪酸エステル、例えばミリスチン酸イソプロピル、および／または他のワックスが用いられる。乳化剤としては、とりわけ、主に親水特性を有する乳化剤、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、および主に親脂特性を有する乳化剤、例えばソルビタン脂肪酸エステルの混合物が用いられる。慣例の添加剤、例えば保存剤なども添加される。
【０１４０】
チンキ剤および液剤は、一般的にエタノール性基剤を有し、この基剤に水を加えてよく、これにとりわけ、蒸発を減少させるための湿潤剤としてポリアルコール、例えばグリセロール、グリコールおよび／またはポリエチレングリコール、ならびに脂肪復元物質（例えば低分子量のポリエチレングリコールとの脂肪酸エステル）、すなわちエタノールによって皮膚から除去された脂肪物質の置換として、水性混合物に溶ける親脂性物質、ならびに、必要な場合、他の補助物質および添加剤を加える。適切なチンキ剤または液剤を適切な装置を用いて噴霧形態で適用してもよい。
【０１４１】
局所投与できる医薬製剤の製造は、それ自体既知の方法、例えば、基剤に、または必要な場合は基剤の一部に活性成分を溶解または懸濁させることによって行われる。活性成分を液剤の形態で投与する場合、一般的に、乳化前の二相の一方に活性成分を溶かし；活性成分をサスペンションの形態で投与する場合、乳化後の基剤の一部と活性成分を混合してから残りの配合物に加える。
【０１４２】
皮膚の弾力性の向上および／または皮膚細胞の成長もしくは再生の促進などの局所作用のための局所薬物として、ＩＡｖＤ組成物またはＩＡｖＤ組成物の組合せを適用し得る。これは、皮膚に適用し、その適用部位で直接作用する治療薬である。病原の部位に治療薬を置かなければならず、皮膚を通して直接吸収され、その効果を発揮する。効果を生じさせるために全身吸収は必要ないと考えられる。
【０１４３】
全身作用のための局所薬物として、ＩＡｖＤ組成物またはＩＡｖＤ組成物の組合せを適用し得る。これは、皮膚に適用し、その適用部位から離れた部位で作用して筋肉痛または関節痛を軽減し、皮膚の弾力性を高め、または両方を行う治療薬である。この薬物は体のどこに適用しても、その効果をもたらし得る。配合物は皮膚を通して吸収され、血流に入り、血中で有効レベルに達してからその作用部位に移動して、その効果を発揮しなければならない。
【０１４４】
当業者には、皮膚浸透向上剤を用いてＩＡｖＤ組成物（複数可）の全身送達またはより深い筋肉もしくは関節への浸透さえも容易にできることが分かるだろう。この点に関して、浸透向上剤を用いて薬物への皮膚表面の浸透性を高めており、浸透向上剤は、多くの場合ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびジメチルアセトアミドなどのプロトン受容溶媒である。研究され、有効であると報告されている他の浸透向上剤として、２−ピロリジン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド（Ｄｅｅｔ）、１−ドデカル−アザシクロヘプタン−２−オンおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリジン、チオグリコール酸カルシウム、ヘキサノール、脂肪酸およびエステル、ピロリドン誘導体、１，３−ジオキサンおよび１，３−ジオキソランの誘導体、１−Ｎ−ドデシル−２−ピロリドン−５−カルボン酸、２−ペンチル−２−オキソ−ピロリジン酢酸、２−ドデシル−２−オキソ−１−ピロリジン酢酸、１−アザシクロヘプタン−２−オン−２−ドデシル酢酸、およびアミノアルコール誘導体、例えば１，３−ジオキサンの誘導体、その他多数が挙げられる。
【０１４５】
ＩＡｖＤ組成物またはＩＡｖＤ組成物の組合せを、使用する剤形に含めて、関節痛、筋肉痛、皮膚の弾力性の損失または皮膚のしわなどのいずれの反応性状態をも治療することができる。
【０１４６】
医薬組成物は、適切な固相もしくはゲル相担体または賦形剤を含んでもよい。このような担体または賦形剤の例として、限定するものではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー、例えばポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１４７】
状態、疾患、苦痛、創傷などのいずれか、限定するものではないが、関節痛または筋肉痛の１つまたは複数の症状の治療、予防、または改善するための、および皮膚の弾力性を向上させるための安定組成物を提供する。本明細書で提供する組成物は、長期貯蔵中に安定な薬理学的に適切な流体中の、免疫賦活性アロエベラ抽出物またはその誘導体の安定配合物である。本組成物は、投与が必要な対象に直接投与するのに適していてよく、または濃縮形態でもよい。薬理学的に適切な流体としては、限定するものではないが、プロトン性流体を含めた極性流体が挙げられる。本明細書の特定の実施形態では、組成物が水溶液である。他の実施形態では、組成物は非水性またはエマルションである。
【０１４８】
ＩＡｖＤ組成物を薬理学的に適切な流体または溶媒と配合することができる。薬理学的に適切な流体として、限定するものではないが、極性溶媒が挙げられ、例えば、ヒドロキシル基または他の極性基を含有する化合物が挙げられるが、これに限定されない。該溶媒として、限定するものではないが、水またはアルコール、例えばエタノール、イソプロパノール、およびグリコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリコールエーテル、グリセロールおよびポリオキシエチレンアルコールが挙げられる。
【０１４９】
極性溶媒には、プロトン性溶媒も含まれ、限定するものではないが、水、食塩水（１種または複数の医薬的に許容し得る塩と共に）、アルコール、グリコールまたはそれらの混合物が挙げられる。溶媒としてかまたは溶媒の成分としての食塩水のためには、特に適切な塩は、投与後に薬理活性を示さないかまたは無視できる薬理活性しか示さない当該塩である。
【０１５０】
本明細書で提供する組成物は賦形剤および添加剤をも包含し得る。本明細書で提供する長期貯蔵用組成物で使う特定の賦形剤または添加剤は、当業者に周知の方法を利用して経験的に決定され得る。賦形剤および添加剤は、活性物質でないいずれかの薬理学的に適切かつ治療的に有用な物質である。賦形剤および添加剤には一般的に薬理活性がないか、または少なくとも望ましくない薬理活性がない。賦形剤および添加剤としては、限定するものではないが、界面活性剤、安定剤、錯化剤、抗酸化剤、または完成医薬配合物の使用期間を延長する保存剤、香味料、ビタミン、または当技術分野で既知の他の添加剤が挙げられる。
【０１５１】
錯化剤としては、限定するものではないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはその塩、例えば二ナトリウム塩、クエン酸、ニトリロ三酢酸およびそれらの塩が挙げられる。一実施形態では、錯化剤がＥＤＴＡである。保存剤としては、限定するものではないが、病原粒子による汚染から溶液を保護するもの、例えば塩化ベンザルコニウムまたは安息香酸、または安息香酸塩、例えば安息香酸ナトリウムが挙げられる。抗酸化剤としては、限定するものではないが、ビタミン、プロビタミン、アスコルビン酸、ビタミンＥまたはそれらの塩もしくはエステルが挙げられる。
【０１５２】
本明細書で提供する組成物は、添加剤または活性成分の溶解度を高める共溶媒を含んでもよい。本明細書で提供する長期貯蔵用組成物で使う特定の共溶媒は、当業者に周知の方法を利用して経験的に決定され得る。本明細書で使う共溶媒として、限定するものではないが、ヒドロキシル化溶媒または他の極性溶媒、例えばアルコール、例えばイソプロピルアルコール、グリコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリコールエーテル、グリセロール、およびポリオキシエチレンアルコールが挙げられる。
【０１５３】
他の実施形態では、本組成物はさらにバッファーを含む。バッファーとしては、限定するものではないが、クエン酸／ホスファート、アセタート、バルビタール、ボラート、Ｂｒｉｔｔｏｎ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、カコジラート、シトラート、コリジン、ホルマート、マレアート、ＭｃＩｌｖａｉｎｅ、ｐｈＦｏｓｐｈａｔｅ、Ｐｒｉｄｅａｕｘ−Ｗａｒｄ、スクシナート、シトラート−ホスファート−ボラート（Ｔｅｏｒｅｌｌ−Ｓｔａｎｈａｇｅｎ）、酢酸ベロナール、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸）、ＢＩＳ−ＴＲＩＳ（ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノ−トリス−（ヒドロキシメチル）メタン）、ＡＤＡ（Ｎ−（２−アセトアミド）−２−イミノ二酢酸）、ＡＣＥＳ（Ｎ−（カルバモイルメチル）−２−アミノエタンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸））、ＭＯＰＳＯ（３−（Ｎ−モルフォリノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＢＩＳＴＲＩＳ  ＰＲＯＰＡＮＥ（１，３−ビス（トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ）プロパン）、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）、ＤＩＰＳＯ（３−（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＭＯＢＳ（４−（Ｎ−モルフォリノ）−ブタンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（３−（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＴＲＩＺＭＡ．ＲＴＭ．（トリス（ヒドロキシメチルアミノメタン）、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＴＥＡ（トリエタノールアミン）、ＥＰＰＳ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（３−プロパンスルホン酸）、ＴＲＩＣＩＮＥ（Ｎ−トリス（ヒドロキシ−メチル）メチルグリシン）、ＧＬＹ−ＧＬＹ（グリシルグリシン）、ＢＩＣＩＮＥ（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、ＨＥＰＢＳ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（４−ブタンスルホン酸））、ＴＡＰＳ（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＡＭＰＤ（２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール）、および／または当業者に既知のいずれの他のバッファーをも挙げられる。
【０１５４】
本明細書で提供する所定組成物の特定のバッファーおよびバッファー濃度は、当業者に周知の標準的安定性アッセイを利用して経験的に決定され得る。
【０１５５】
本組成物は、所望により、活性成分を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有し得るパックまたは調剤装置で提供されることもある。パックは、例えばブリスターパックのような金属またはプラスチック箔を含んでよい。パックまたは調剤装置は、投与の説明書を付随してよい。適合性医薬担体中で配合された本発明の組成物を含む組成物を調製し、適切な容器内に入れ、指示状態の治療についてラベルを付けてもよい。ラベル上に指示される適切な状態が、ある状態の治療を包含し得る。
【０１５６】
配合物は、任意成分、例えば、ハーブ、ビタミン、ミネラル、エンハンサー、着色剤、甘味料、香味料、不活性成分などを含んでもよい。このような任意成分は天然に存在する形態でも濃縮形態でもよい。これらの成分の１種または数種の選択は、処方、設計、消費者の好みおよび最終使用者の問題である。
【０１５７】
本発明の別の態様により、種々の材料を用いて、ＩＡｖＤの均質なディスパーション、エマルション、サスペンション、溶液などを製造できることが分かった。特に、第２のアロエ由来材料を使用することによって、一定の高活性であるが、一般的に不溶性のＩＡｖＤを分散、懸濁、乳化および／または可溶化できることが分かった。当該第２のアロエ由来材料は、第２のＩＡｖＤであってよく、またはＩＡｖＤとみなすには不十分な活性の材料であってもよい。第２のアロエ由来材料の量は、要望通りに、第１のＩＡｖＤの均質ディスパーション、溶液、均質サスペンション、または均質エマルションの製造を可能にするのに十分な量であるべきである。一般的に、第１のＩＡｖＤと第２のアロエ由来材料との総量の重量％に対して、少なくとも約１０重量％の第２のアロエ由来材料が必要である。
【０１５８】
本発明の特に好ましい実施形態では、第１のＩＡｖＤがＡｌｏｅＥｘである。第１のＩＡｖＤの加工性を改善できるいずれのアロエ由来材料を使用してもよい。第２のアロエ由来材料は一般的に多糖で構成され、該多糖の少なくとも５０％が１，５００，０００ダルトン以下の分子量を有する。この第２のアロエ由来材料として、限定するものではないが、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧ、アロエベラゲル１Ｘ（天然の粉砕フィレ、微粒子フィレまたは脱色）、アロエベラゲル１０Ｘ（天然または脱色）、アロエベラゲル２００ｘ（脱水粉末または噴霧乾燥粉末）、アロエベラ全葉噴霧乾燥粉末１００Ｘ、アロエベラ全葉脱色液（１Ｘ、２Ｘ、４Ｘ、または１０Ｘ）、エースマンナン、アロエベラ粘質多糖（ＡＶＭＰ）およびＭａｎａｐｏｌから成る群より選択されるアロエベース材料が挙げられる。ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧは、Ｃｏｓｔａ  Ｒｉｃａ、Ｓ．Ａ．のＦｉｒｓｔ  Ａｌｏｅから入手可能な粉末である。ｗｗｗ．ｆｉｒｓｔＡｌｏｅｖｅｒａ．ｃｏｍ／ｍａｇｎＡｌｏｅ＿ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．ｈｔｍで情報を得ることができる。ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの多糖レベルは、以下に示すように８００キロダルトン（ＫＤａ）を超える。これは、市販されている噴霧乾燥２００−１アロエベラ粉末より平均４０％高い。ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧは全部で６８３．１ｍｇ／ｇの多糖を含み、そのうち４２．６５ｍｇ／ｇの多糖の分子量（ＭＷ）が５０〜２００ＫＤａであり、１１８．５ｍｇ／ｇの多糖のＭＷが２００〜８００ＫＤａであり、３６６．２ｍｇ／ｇの多糖のＭＷが８００〜１４００ＫＤａであり、１５５．８ｍｇ／ｇの多糖のＭＷが１４００〜２０００ＫＤａであると報告されている。ＭａｇｎＡｌｏｅの水に対する溶解度は、一般的に約１５％である。
【０１５９】
アロエベラゲル１Ｘ（天然の粉砕フィレ、微粒子フィレまたは脱色）、アロエベラゲル１０Ｘ（天然または脱色）、アロエベラゲル２００ｘ（脱水粉末または噴霧乾燥粉末）、アロエベラ全葉噴霧乾燥粉末１００Ｘ、アロエベラ全葉脱色液（１Ｘ、２Ｘ、４Ｘ、または１０Ｘ）は、Ｉｍｐｒｏｖｅ  ＵＳＡ、Ｉｎｃ．、２１５  Ｄａｌｔｏｎ  Ｄｒｉｖｅ、Ｓｕｉｔｅ  Ｄ、ＤｅＳｏｔｏ、ＴＸ  ７５１１５から入手可能である。アロエベラゲル２００ｘの水に対する溶解度は、一般的に約９０〜１００％である。
【０１６０】
エースマンナン、アロエベラ粘質多糖（ＡＶＭＰ）およびＭａｎａｐｏｌは、Ｃａｒｒｉｎｇｔｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｒｖｉｎｇ、ＴＸから入手可能である。１つの特に好ましい実施形態では、ＩＡｖＤ中の単一の最も優勢な炭水化物がグルコースであり、第２のアロエ由来材料中の単一の最も優勢な炭水化物がマンノースである。
【０１６１】
一実施形態では、第１のＩＡｖＤと第２のアロエ由来材料との総量に基づいて第１のＩＡｖＤの量が約１０重量％〜約９０重量％の範囲であり、第１のＩＡｖＤと第２のアロエ由来材料との量に基づいて第２の材料の量が約９０％〜約１０％の範囲である。１つの好ましい実施形態では、第２の材料の量が第１のＩＡｖＤの量より多く、特に好ましい実施形態では、第２の材料対第１のＩＡｖＤの重量比が４：１で第１のＩＡｖＤと第２の材料を供給する。この両者によって結果として形成される均質混合物中、第２の材料は該混合物の約８０％を形成するであろう。さらに別の好ましい態様では、第１のＩＡｖＤがＡｌｏｅＥｘであり、第２の材料が多糖を含むアロエ由来材料（該多糖の少なくとも５０％が約１，５００，０００ダルトン以下の分子量を有する）、例えばＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧであり、ＡｌｏｅＥｘの量が、ＡｌｏｅＥｘとＭａｇｎＡｌｏｅの量に基づいて約１０重量％〜約９０重量％の範囲であり、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの量が、ＡｌｏｅＥｘとＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの量に基づいて約９０％〜約１０％の範囲である。１つの好ましい実施形態では、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの量がＡｌｏｅＥｘの量より多く、特に好ましい実施形態では、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧ対ＡｌｏｅＥｘの重量比が４：１でＡｌｏｅＥｘとＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧを供給する。この両者によって結果として形成される均質混合物中、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧは該混合物の約８０％を形成するであろう。
【０１６２】
一実施形態では、原料ＡｌｏｅＥｘを約８０℃に加熱した水と混合することによって、ＡｌｏｅＥｘおよび第２の材料、好ましくは第２のアロエ由来材料を配合することができる。混合物を少なくとも１０分間撹拌して材料を均質にする。次いで、好ましくは孔径が１５μｍ以下のフィルターを用いて混合物をろ過する。結果として生じたろ液を本明細書で述べる種々のＩＡｖＤ組成物を調製する際に利用することができる。
【０１６３】
ＡｌｏｅＥｘの均質化は、利用する装置によって、熱が必要な場合もあるし、必要でない場合もある。例えばプロセスの一部としてホモジナイザーを用いて均一な粒子サスペンションとすることができる。周知の「カラー」ホモジナイザーを用いて、ＡｌｏｅＥｘ粒径を小さくして、水性のＡｌｏｅＥｘサスペンションおよび／またはエマルションを調製することができる。
【０１６４】
ＡｌｏｅＥｘの特徴づけを図１に示す。この材料は褐色から緑色のフレーク状散剤を形成する。
【０１６５】
図１を参照すると、チャートは、１ロットのＡｌｏｅＥｘ材料（バッチ５６）を炭水化物全体のモル％に基づいて関連糖含量と共に示している。
【０１６６】
図１は、酸メタノリシスによってサンプルから生成した単糖メチルグリコシドのペル−Ｏ−トリメチルシリル（ＴＭＳ）誘導体の混合ガスクロマトグラフィー／質量分析（ＧＣ／ＭＳ）によって、ジョージア大学、複合炭水化物研究センター（Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）が行ったグリコシル組成物分析の結果を示す。
【０１６７】
まず、発明者らが提供した乾燥サンプルから、メタノール中１ＭのＨＣｌ中８０℃（１８〜２２時間）でのメタノリシスによってメチルグリコシドを調製し、次にメタノール中のピリジンおよび無水酢酸で再びＮ−アセチル化した（アミノ糖の検出のため）。そしてサンプルをＴｒｉ−Ｓｉｌ（Ｐｉｅｒｃｅ）で８０℃にて処理して（０．５時間）ペル−Ｏ−トリメチルシリル化した。［これらの手順は、以前にＭｅｒｋｌｅおよびＰｏｐｐｅ（１９９４）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２３０：１〜１５；Ｙｏｒｋら（１９８５）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１１８：３〜４０に記載されている通りに行った。］Ｔｒｉ−Ｓｉｌを添加すると即座に有意レベルの沈殿物に気づいた。５９７０ＭＳＤに連結したＨＰ５８９０ＧＣで、Ａｌｌ  Ｔｅｃｈ  ＥＣ−１溶融シリカキャピラリーカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ  ＩＤ）を用いてＴＭＳメチルグリコシドのＧＣ／ＭＳ分析を行った。
【０１６８】
単糖を標準物質と比較したその保持時間によって同定し、これらの炭水化物特性をその質量スペクトルによって確証した。質量スペクトルデータを解釈するため、フラグメントイオン７３はすべてのＴＭＳメチルグリコシドの特徴的基本フラグメントであり、２０４および２１７は中性糖の特徴的フラグメントであり、１７３はアミノ糖の特徴的フラグメントである。フラグメント２１７はウロン酸の特徴的フラグメントでもあり、フラグメントイオン２９８はシアル酸の特徴的フラグメントである。
【０１６９】
図１は、モル％でグリコシル残基組成を同定する。値は炭水化物全体のモルパーセントとして表されている。炭水化物全体のパーセントを計算すると８．６％だった。測定した構成成分の値は、グルコース６１．１％、アラビノース９．５％、ガラクトース９．２％、ガラクツロン酸７．９％、マンノース６．６％、キシロース１．６％、リボース１．５％、ラムノース１．４％およびフコース１．１％だった。
【０１７０】
臨床試験−皮膚の弾力性−局所配合物
以下に概要を述べる１つの臨床試験は、商標名ＡＬＯＥＲＩＤＥ（登録商標）のもとで販売されている１つのＩＡｖＤ組成物の効果を実証する。ＡＬＯＥＲＩＤＥ（登録商標）を局所投与して皮膚の弾力性を改善することができ、かつ栄養補助食品の成分として使用することもできる。
【０１７１】
ＡＬＯＥＲＩＤＥ（登録商標）ゲル０．５％製品＃１０８４９ＬＬ、ロット＃１１９３９の皮膚の弾力性または堅さに及ぼす効果をＦａｉｒｆｉｅｌｄ、ＮＪのＣｏｎｓｕｍｅｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｔｅｓｔｉｎｇ、Ｉｎｃ．による臨床試験で判断した。試験配合物（ＡＬＯＥＲＩＤＥ（登録商標）ゲル０．５％）はＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧとＡｌｏｅＥｘの重量で４：１の混合物を含み、これを水、アルコール（１０％）および少量のカルボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）（０．５％）と混合してからホモジナイザーを用いて分散させた。ＡｌｏｅＥｘ、水、アルコールおよび少量のカルボポールのディスパーションを用いて、試験ゲルサスペンションを調合した。
【０１７２】
被験品を規定顔面域に適用する場合に８週間保つのに十分な小型容器に供給した（アルコールは保存剤として働く）。
【０１７３】
臨床試験はＡｌｏｅＥｘ機能の二重試験（ｄｏｕｂｌｅ  ｔｅｓｔ）だった：カルボポールは乾燥しやすく、負の試験性能因子（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｔｅｓｔ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｆａｃｔｏｒ）を（−）１５％で推定した。臨床試験はＡｌｏｅＥｘ／ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧの、１）４週間および８週間で被験者の統計的多数で細線およびしわを減少させる能力、２）カルボポールに関連するいずれのマイナスの乾燥（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｄｒｙｎｅｓｓ）をも克服するＡｌｏｅＥｘの能力を証明した。
【０１７４】
この臨床試験で用いたＡｌｏｅＥｘは非分散性／不溶性であり、均質化し難かった。しかし、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧと１：４で混合すると、均質なゲル／エマルションが実現した。
【０１７５】
４０〜６５歳の範囲の３１人の有資格の男性および女性被験者を試験のために選択した。被験物質は４週間および８週間の評価間隔の両方で皮膚の反発時間の有意な減少を示した。試験参加者には、試験終了時に皮膚の弾力性または堅さの７２％までの改善が認められ（図２）、試験参加者の１００％に皮膚の弾力性の全般的改善が認められた。年齢と性別に基づいた試験人口統計学的データを図３に示す。
【０１７６】
被験者は、基礎測定のために試験の初日の洗顔をして検査室に出頭した。いずれの測定（ｒｅａｄｉｎｇ）またはスコアリングを行う前にも、周囲条件（２１℃±２℃の温度、４０％±２％の相対湿度）で環境制御した室内で１５分間被験者を平衡させた（ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｅｄ）。
【０１７７】
Ｓｈａｎａｈａｎ．Ｒ．Ｗ．ら、Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｓｋｉｎ  Ｃａｒｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｄｒｕｇ＆Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、１４０、第１号、４２〜４８、１９８７で開示されているつまみ試験を使用して皮膚の弾力性（堅さ）を測定した。熟練試験者が目の側面、眼窩下域の皮膚を親指と人差し指でつまむことによって、皮膚の弾力性または堅さのスコアを得た。結果として生じた折り目を解放し、解放したときからさらに動かなくなるまで、皮膚の目に見えるすべての動きのタイミングを観察し、１秒の１００分の１まで測定した。スコアを測定値の統計解析用データ記録用紙に記録した。
【０１７８】
ベースライン測定と、それに続く治療後４週間および８週間のスコアリング間隔との間の平均スコアの統計的に有意な（対応のあるｔ検定を用いてＰが０．０５以下）減少がある場合に、皮膚の弾力性の改善の存在が立証されたとみなす。
【０１７９】
図２は、皮膚の平均反発時間（秒）の統計的に有意な減少（皮膚の弾力性または堅さの増加の指標）を示す。すべてのベースライン測定値の平均は、左右の測定でそれぞれ２．０９秒および１．９６秒だった。４週間の試験間隔で有意な減少が観察され、それぞれ１．６０および１．５３秒をもたらした。８週間の試験間隔では、皮膚の平均反発時間のさらなる減少が測定され、左右について１．１９および１．１８秒だった。以前に論じたように、すべての測定間隔についてｐを計算するとゼロ以下だったので、結果は統計的に有意だった（図２）。
【０１８０】
以下に概要を述べる別の臨床試験は、筋肉痛および／または関節痛ならびに皮膚の弾力性を改善するために経口投与した別のＩＡｖＤ組成物の効果を実証する。
【０１８１】
臨床試験−皮膚の弾力性−関節／筋肉痛−経口配合物
１２週間で皮膚の堅さおよび弾力性を改善し、かつ筋肉痛および関節痛を軽減するように設計された本発明の経口栄養補助食品の有効性を評価するため、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．で試験を行った。（その内容全体を参照によって本明細書に組み込むものとする、加齢を軽減するようにデザインされた経口栄養補助食品の安全性と有効性を評価するための二重盲検プラセボ対照パイロット試験（Ａ  Ｄｏｕｂｌｅ−Ｂｌｉｎｄ  Ｐｌａｃｅｂｏ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｐｉｌｏｔ  Ｓｔｕｄｙ  ｔｏ  Ａｓｓｅｓｓ  ｔｈｅ  Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｔｏ  Ｄｉｍｉｎｉｓｈ  Ａｇｉｎｇ）、試験番号ＣＲＬ３４７０６）。この臨床試験で用いたプラセボ錠剤は、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ステアリン酸、二酸化ケイ素、およびステアリン酸マグネシウムを含有した。実錠剤は、プラセボ錠剤と同じ不活性成分と、ＭａｇｎＡｌｏｅ  ＡＧとＡｌｏｅＥｘの４：１混合物５０ｍｇとを含有した。これらの錠剤を１日２回、起床時および就寝時に経口投与した。
【０１８２】
本試験は２００６年８月３０日に開始し、２００６年１２月１５日に終了した。最初に、各被験者について以下のように安全性スクリーニングを行った。
【０１８３】
安全性評価血液分析
指定された試験来院時に各被験者から採血し、以下の血液試験を行った。
【０１８４】
白血球分画および血小板数を含む全血球数（ＣＢＣ）。
【０１８５】
化学パネル＋ＨＤＬ  ＡＳＴ（ＧＯＴ）、ＡＬＴ（ＧＰＴ）、γＧｔ、ＬＤＨ（ＬＤ）、全タンパク質（ＴＰ）、尿酸、（ＵＡ）、全ビリルビン、尿素窒素（ＵＮ）、全コレステロール（ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＴＧ）、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｃｌ
【０１８６】
尿分析
指定された試験来院時に各被験者から尿試料を得、以下の尿試験を行った。
グルコース、タンパク質、ウロビリノーゲン、血液、ｐＨ
【０１８７】
座位バイタルサイン
スクリーニング来院時に座位バイタルサイン（すなわち、脈拍、血圧および呼吸数）の評価を記録した。
【０１８８】
妊娠試験
スクリーニング来院時にすべてのパネリスト（閉経後の女性を除く）について尿妊娠試験を行った。
【０１８９】
皮膚の評価
治療が皮膚に及ぼす効果を判断するため、各被験者の顔面についてＣＲＬ技師が皮膚の評価を行って紅斑、水腫および乾燥の有無を調べた。以下のスコアリングスケールを用いて皮膚刺激の証拠の程度および／または重症度を記録した。
【０１９０】
紅斑、水腫および乾燥のスコアリングスケール
０＝なし、１＝軽度、２＝中等度、３＝重度
【０１９１】
有効性の評価
キュートメーター
可変真空ポンプで吸引力を生じさせ、プローブ中への皮膚の浸透の深さを０．０１ｍｍの正確度で光学的に測定する。真空適用を制御し、皮膚の変形を時間の関数としてプロットするコンピュータにプローブを取り付ける。結果として生じた曲線から、即時、遅延および最終伸張（ｄｉｓｔｅｎｔｉｏｎ）ならびに即時収縮（ｒｅｔｒａｃｔｉｏｎ）などのいくつかの変数を推定することができる（Ｅｌｓｎｅｒ  １９９０）。
【０１９２】
これらの可変値は、皮膚の弾力性、粘弾性および純粋な粘性挙動を予測する（Ｂａｒｅｌら  １９９５）。
【０１９３】
以下のパラメーターを測定した。
１０秒で測定した最終膨張、Ｕｆ。０．１秒で測定した即時膨張、Ｕｅ。遅延膨張、Ｕｖ。即時収縮、Ｕｒ。
【０１９４】
変形パラメーターは、皮膚厚に依存性の外因性パラメーターである。
【０１９５】
皮膚厚の測定を迂回するため、以下の比を用いて皮膚の弾力的性質を評価した（Ｅｌｓｎｅｒ  １９９０、Ｃｕａら  １９９０、ＫｒｕｓｈｅおよびＷｏｎｅｔ  １９９５ならびにＤｏｂｒｅｖ  １９９５）。
【０１９６】
Ｕｒ／Ｕｅは皮膚の生物学的弾力性である。Ｕｒ／Ｕｅは、変形後にその最初の形状を回復する皮膚の能力を測定する。値１が１００％の弾力性を示す。
【０１９７】
Ｕｖ／Ｕｅは遅延変形と即時変形の比であり、すなわち、Ｕｖ／Ｕｅは粘弾性対弾性の比である。この比の値の増加は、変形の粘弾性部分の増加および／または弾性部分の相対的減少があったことを示す。
【０１９８】
Ｕｒ／Ｕｆは皮膚の正味の弾性力の尺度である。
【０１９９】
本試験は予備スクリーニング来院を含み、この間に臨床試験技師（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｉｃｉａｎ）が被験者を検査して適格性を判断した。適格な被験者は、顔の目尻に軽度から中等度の細線およびしわを示し、慢性の筋肉痛および／または関節痛があった。この時、血液および尿の分析に備えて、予定されたスクリーニング来院前夜の午後９：００以降は何も飲食しないように被験者に通知した。
【０２００】
試験開始前、被験者は予定されたスクリーニング来院のためＣＲＬ検査室に到着した。各見込み被験者から採血し、採血に用いた前腕を症例報告書に記録した。尿分析のため各パネリストから尿試料を得、座位バイタルサイン（すなわち、脈拍、血圧および呼吸数）の評価を行って記録し、すべてのパネリスト（閉経前の被験者を除く）について尿妊娠試験を行った。被験者は、コンディショニング期間の残りの期間および試験期間には、試験中に各被験者に与えられる経口栄養補助食品を除き、すべての経口栄養補助食品の使用を中断した。
【０２０１】
ベースライン時で試験対象集団の皮膚状態を標準化し、異なるスキンケアレジメンの使用に起因するばらつきを最小限にするため、１週間のコンディショニング期間で試験を始めた。被験者は１週間のコンディショニング期間を経る必要があり、この期間、試験開始前のすべての洗顔のためグリセリン石鹸を使用した。スクリーニング来院時、各被験者に詳細な試験の説明書、すべての洗顔に使うための１個のグリセリン石鹸、１日１回使うためのＣｅｔａｐｈｉｌ（登録商標）デイリーフェイシャルモイスチャライザー（Ｄａｉｌｙ  Ｆａｃｉａｌ  Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｅｒ）  ＳＰＦ１５、および石鹸の使用を記録し、コンプライアンスを立証するための日誌（Ｄａｉｌｙ  Ｄｉａｒｙ）を与えた。被験者は、ベースライン来院前７日に開始して、この石鹸で１日２回（朝と夜）洗顔し始めた。このスクリーニング来院時に、すべての被験者はスクリーニングアンケートに回答した。
【０２０２】
有資格被験者は、先に言及したスクリーニング来院の安全性評価の結果として、血液および尿試験の結果が正常であり、各パネリストのバイタルサインは正常範囲内であった。さらに、フォローアップ来院および試験要件に同意し、すべての組み入れ／除外基準を満たす適格被験者を試験用の名簿に載せた。
【０２０３】
ベースライン来院のためＣＲＬ試験施設に戻ったら、評価前の３０分間周囲の検査室条件に被験者を馴化させた。馴化時間後、紅斑、水腫および乾燥の有無について、熟練ＣＲＬ専門技術者が各被験者の顔の皮膚の評価を行った。各被験者について、コンピュータ生成ランダム化コードによる決定通りに、測定のため顔の右または左側を選択した（図４）。測定の選定は試験を通して一貫したままだった。顔の同側の眼下の頬骨部分からキュートメーターの示度を得た。すべての測定を適切に記録した。各被験者は、筋肉痛および関節痛のタイプと頻度を評価するため、ベースライン消費者知覚アンケートに回答した。
【０２０４】
特定の被験物質を各被験者にランダムに割り当てて、群１のパネリストは実錠剤を受け、群２のパネリストはプラセボ錠剤を受けた。被験者群への指定はコンピュータ生成ランダム化コードに従って決定された。治療の指定／群の割当ては、試験を通して一貫したままだった（図５〜６）。
【０２０５】
各被験者に指定被験物質と、詳細な試験説明書と、栄養補助食品の毎日の使用回数、Ｃｅｔａｐｈｉｌ（登録商標）デイリーフェイシャルモイスチャライザーＳＰＦ１５の毎日の適用、および栄養補助食品の使用に関連するいずれの示唆コメントをも記録するための新しい日誌とを与えた。
【０２０６】
印刷された試験説明書には各来院の試験手順およびＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．への再来院の予約日時が詳述された。被験者は、支給されたグリセリン石鹸の１日２回の使用、およびＣｅｔａｐｈｉｌ（登録商標）デイリーフェイシャルモイスチャライザーＳＰＦ１５の１日１回の使用を続けるように指導された。
【０２０７】
各被験者は、電話経由で、ＣＲＬ技師によって第４週コンプライアンスチェックを受けた。指定経口栄養補助食品を８週間摂取後に、被験者はＣＲＬ試験施設に報告し、各パネリストを３０分間周囲の温度と湿度に馴化させた。馴化後、熟練ＣＲＬ技師がすべての被験者の顔の皮膚の評価を行った。キュートメーターで測定した。ベースライン試験間隔について先に説明したように、これらの手順および評価を行って記録した。
【０２０８】
栄養補助食品を１２週間使用後に、被験者はＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．に出頭し、各被験者を３０分間周囲の温度と湿度に馴化させた。各被験者から採血し、採血のために用いた前腕を症例報告書に記録した。最後の尿試料を各パネリストから得た。熟練ＣＲＬ技師が、紅斑、水腫および乾燥の有無について顔の皮膚の評価を行った。顔の同一側の眼下の頬骨部分からキュートメーターの測定値を得た。すべての測定値を適切に記録した。
【０２０９】
第１２週時、すべての被験者は最終アンケートに回答し、被験物質および日誌の未使用分を返却した。
【０２１０】
統計的方法
本試験の有意な結果をもたらす主要な有効性パラメーターは、キュートメーター測定値および消費者知覚アンケートである。
【０２１１】
一元配置ＡＮＯＶＡ検定（反復測定）を各群に適用して、すべてのパラメーターについてベースラインと第８週の間およびベースラインと第１２週の間に差があるかを判断した。全体的なＦ検定が有意な場合、チューキー（Ｔｕｋｅｙ）の多重比較検定をさらに適用してどこに有意差が存在するかを判断した。ＡＮＯＶＡ検定は、Ｆ検定を利用して治療の手段または時間間隔の間に有意差が存在するかを判断する。Ｆ検定が帰無仮説を棄却する場合、通常、因子水準効果の性質の徹底解析を行う必要がある。チューキー検定は多重比較手順である。これは、同時に１対より多くの手段または割合を調査または比較するが、全体の有意水準が単一対の比較の場合に指定されるものと同じになるように全体の有意水準を制御する方法である。
【０２１２】
群１（本発明の被験物質栄養補助食品に割り当てられた被験者）と群２（プラセボ被験物質栄養補助食品に割り当てられた被験者）との間の比較は、各時間間隔（第８週および第１２週）におけるベースラインからのパーセント変化率に基づいた。２サンプルｔ検定を適用して、群１と群２の間に有意差が存在するかを判断した（図８Ａ〜８Ｄ）。
【０２１３】
０．０５以下の両側ｐ値は、信頼水準９５％に相当する有意性の基準だった。すべての統計的コンピュータ処理はマイクロソフトのＥｘｃｅｌまたはＳＡＳ（登録商標）統計解析ソフトウェアを用いて行った。
【０２１４】
結果
２０名の被験者が試験を完了した。１名の被験者（＃７）は、被験物質と無関係の理由で試験参加を途中で中止した。
【０２１５】
有害事象
２００６年１１月２０日、被験者＃６（プラセボ製品に割り当てられた）は、プラセボ錠剤を摂取してから約９週間後の２００６年１１月１７日に、彼女の顔の両側の頬域内および上胸部上に赤い発疹および蕁麻疹様の隆起に気づいたことを報告した。この被験者は、これらの領域にかゆみがあったことも報告した。２００６年１１月２０日に、ＣＲＬ認定皮膚科医による検査時に、この被験者はツタうるしかぶれと診断された。被験者＃６は試験参加を継続した。治験責任医師は、この中等度の重症度の有害事象は被験物質の使用とは全く関係ないと判断した。ＣＲＬ技師がフォローアップの電話をかけ、各会話からの情報を以下のように記録した：２００６年１１月２２日、被験者は蕁麻疹が消失し、顔面発赤が縮小しつつあると報告した。
【０２１６】
２００６年１１月２７日に、被験者＃６は、蕁麻疹が乾燥しつつあり、ほぼすべての発赤がなくなったことを示した。２００６年１２月８日に、この被験者は、毒素がなくなり、有害な顔面皮膚状態が完全に解消されたと報告した。
【０２１７】
機器測定、皮膚評価およびアンケートへの回答
両被験者群について、図７Ａ〜Ｄは、各指定試験間隔での各パネリストのキュートメーター測定を要約する。表ＶＩは、ベースラインに対する第８週と第１２週の測定間の差を比較するために決定した統計的変数を列挙する。各被験者について、表ＶＩＩは、紅斑、水腫および乾燥の存在についてベースライン、第８週および第１２週の皮膚の評価スコアを列挙する。表ＶＩＩＩは、スクリーニングアンケート［両被験者群を合わせて］に対する百分率に基づいたアンケートデータを列挙する。表ＩＸおよびＸは、群１（実錠剤に割り当てられた被験者）および群２（プラセボ錠剤に割り当てられた被験者）のベースラインおよび第１２週（最終）の消費者知覚アンケートに対する百分率に基づいたアンケートデータを列挙する。これらのアンケート表には、オープンエンドの質問も含まれる。
【０２１８】
結論
各被験者について、試験手順は、血液および尿の分析、座位バイタルサイン、妊娠試験（閉経前のパネリストを除く）、キュートメーター測定および消費者知覚アンケートを包含した。
【０２１９】
血液分析
各被験者について、上述したように、ベースラインおよび第１２週の試験間隔で血液分析を行った。ベースラインで認められた所見については第１２週では臨床的に有意な所見は認められなかった。
【０２２０】
尿分析
上述したように、ベースラインおよび第１２週の試験間隔で各被験者から尿試料を得た。ベースラインで認められた所見については第１２週では臨床的に有意な所見は認められなかった。
【０２２１】
有効性の評価
キュートメーターパラメーターＵｒ／Ｕｅによって評価した場合、群１の被験者（原成分被験物質栄養補助食品１０８５３ＬＬＡに割り当てられた）ではベースラインと第１２週との間に統計的有意差が存在した。キュートメーターパラメーターＵｒ／Ｕｅは伸張および収縮に関連するので、皮膚の弾力性を表す。群１の被験者の７０％がキュートメーターパラメーターＵｒ／Ｕｅの改善を示した。ベースラインに対して、パラメーターＵｒ／Ｕｅのこの有意な増加は、第１２週で２９％の改善に相当し、本発明の栄養補助食品である１０８５３ＬＬＡを摂取した群１の被験者では皮膚の弾力性および伸展性が改善したことを示唆している。図７Ａ〜８Ｄは、試験結果の統計解析を要約する。図７Ｄは、ベースライン乃至第１２週のＵｒ／Ｕｅの統計的に有意な改善を示す（ｐ＝０．０１０９）。
【０２２２】
Ｚスコア解析によって解析したアンケートへの回答は、第１２週（最終）アンケートでの質問番号１０〜１５から成っていた。後述するように、Ｚスコア解析に適用できる、第１２週（最終来院）における試験対象集団の消費者知覚アンケートへの好ましい回答を分析すると、各被験者が回答したアンケートに統計的有意性（絶対値１．９６以上のＺスコア）があった。
【０２２３】
実錠剤である１０８５３ＬＬＡに割り当てられた群Ｉ試験対象集団の有意な割合が栄養補助食品を１２週間使用した後に改善を認め、被験者は以下の治療効果に関して好ましい回答をした。
【０２２４】
約８５％の被験者が、本品を１２週間使用した後、筋肉痛および／または関節痛の頻度が減ったことを認めた。
【０２２５】
約８５％の被験者が、本品を１２週間使用した後、全体的な痛みの強度が低減していることを認めた。
【０２２６】
約９０％の被験者が、本品を１２週間使用した後、痛みがそれほど長くは続かなかったことを認めた。
【０２２７】
約８５％の被験者が、自分の関節痛および／または筋肉痛に本品がプラスの効果があることを認めた。詳細な統計結果を図８Ａ〜Ｂに示す。
【０２２８】
プラセボ錠剤である１０８５３ＬＬＢに割り当てられた群２試験対象集団では、栄養補助食品を１２週間使用した後に好ましくない回答が報告された。結果を図９Ａ〜Ｂに示す。
【０２２９】
試験参考文献
Ｂａｓｅｌ、ＣｏｕｒａｇｅおよびＣｌａｒｙｓ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｎｏｎ−Ｉｎｖａｓｉｖｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ、ＳｅｒｕｐおよびＪｅｍｅｃ編、１９９５。
ＢｌｉｃｈｍａｎおよびＳｅｒｕｐ、Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ、１９８８。
Ｃｕａ、ＭａｉｂａｃｈおよびＷｉｌｈｅｌｍ、Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９０。
Ｄｏｂｒｅｖ、Ｓｉｘｔｈ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｅｎｅｒｏｌｏｇｙ、Ｐｌｅｖｅ、Ｂｕｌｇａｒｉａ、Ｍａｙ  １１〜１３、１９９５。
Ｅｌｓｎｅｒ、Ｅｉｇｈｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  “Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｋｉｎ”、Ｓｔｒｅｓａ／ｌｔａｌｉａ、Ｊｕｎｅ  １９９０。
Ｆｒａｎｋｏｗｓｋｉ、ＣｈｅｎおよびＨｕｔｈ、Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ  Ｗｅｓｔ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ、Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２０００、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、Ｊａｎｕａｒｙ  ２３〜２８、２０００。
Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｉ、Ｂｅｃｈｅｒｏｎｉ、Ｉｏｒｉｏ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｓｃｉ．２６〜２９、１９８８。
Ｆｒｉｅｄｍａｎ、Ｓｋｏｖｅｒ、ＰａｙｏｎｋおよびＧｅｒｏｎｅｍｕｓ、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｓｕｒｇｅｒ、２００、２１（４）：２６６〜２７３。
ＫｒｕｓｈｅおよびＷｏｒｒｅ、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２８７〜２９３、１９９５。
Ｍｏｒｇａｎｔｉ、ＲａｎｄａｚｚｏおよびＣａｒｄｉｌｌｏ、Ａｐｐｌ．Ｃｏｓｍｅｔ、１０〜１２、１９８６。
Ｒａｎｄｅａｕ、Ｋｕｒｄｉａｎ、Ｓｉｒｖｅｎｔ、ＣｌｏｓｓおよびＧｉｒａｒｄ、Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  ２００２。
Ｓｉｍｏｎ、Ａｒｚｌｉｃｈｅ  Ｋｏｓｍｅｔｏｌｏｇｉｅ、２５６〜２５９、１９８４。
【０２３０】
上述したすべての参考文献は、その内容を参照によって本出願に明白に組み込むものとする。
【０２３１】
単球活性化アッセイの方法
単球活性化アッセイを用いて免疫賦活活性を評価した。ＴＨＰ−１ヒト単球細胞系を、前述したように、ＨＩＶ／ＩｇＫのためのＮＦ−κＢモチーフの２つのコピーを含有するルシフェラーゼレポーター遺伝子構築物でトランスフェクトした。この単球活性化アッセイは、アロエベラ抽出物および製品材料の生物活性に基づいた標準化のために使用できるインビトロ試験システムの例である。
【０２３２】
トール様受容体２（ＴＬＲ２）発現ベクター実験の方法
ウシ胎児血清（１０％）および１％ペニシリン−ストレプトマイシンで補充したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地内で５％ＣＯ２下、３７℃にてＨＥＫ２９３細胞を培養した。活発に成長する細胞をエレクトロポレーションを利用して適切なプラスミドで一時的にトランスフェクトした（１５０Ｖおよび１回の７０ｍｓパルスで）。エレクトロポレーション後、細胞を２００μｌ／ウェルの培養培地内で５×１０４個の細胞密度にてプレートした。４８時間後、トランスフェクトされた細胞に被験薬剤を添加した。サンプルの添加６時間後に細胞を収集してルシフェラーゼ活性を測定した。ＮＦ−κＢプラスミド構築物（ｐＢＩＩＸＬＵＣ）は、ＨＩＶ／ＩｇＫ由来のＮＦ−κＢモチーフの２つのコピーを含有した。ヒトＣＤ１４とヒトＴＬＲ２を同時発現しているプラスミド（ｐＤＵＯ−ｈＣＤ１４／ＴＬＲ２）はＩｎｖｉｖｏＧｅｎから購入した。ザイモサン（Ｚｙｍｏｓａｎ）はＳｉｇｍａから購入し、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ペプチドグリカンはＦｌｕｋａから購入し、超純粋なサルモネラ・ミネソタ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）ＬＰＳはＬｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．から購入した。
【０２３３】
ＡｌｏｅＥｘはＴＬＲ２依存性プロセスを介してＮＦ−κＢをインビトロで活性化する。
図１０Ａ〜１０Ｂは、ＡｌｏｅＥｘ（バッチ２−５−０５）がＴＬＲ２を介して作用することを示す。ＮＦ−κＢのための２つの結合部位を含有するルシフェラーゼレポーター遺伝子構築物のみで（図１０Ａ）、またはｐＤＵＯ−ｈＣＤ１４／ＴＬＲ２発現プラスミドと併用して（図１０Ｂ）、ＨＥＫ２９３細胞（ＴＬＲ発現が最小限の細胞系）を一時的にトランスフェクトした。ｐＤＵＯ−ｈＣＤ１４／ＴＬＲ２発現プラスミドはＴＬＲ２−（ＣＤ１４およびＴＬＲ２）依存性ＮＦ−κＢ活性化を支持するタンパク質を発現する。トランスフェクション４８時間後に細胞をＡｌｏｅＥｘ  ＴＬＲ２アゴニストペプチドグリカン（ＰＧ）もしくはザイモサン（Ｚ）、またはＴＬＲ４アゴニスト超純粋Ｓ．ミネソタリポ多糖（ＬＰＳ）で指示濃度（μｇ／ｍｌ）にて処理した。薬剤の添加６時間後にルシフェラーゼ活性を決定した。
【０２３４】
ＴＬＲ２特異性（ペプチドグリカンもしくはザイモサン）またはＴＬＲ４特異性（超純粋ＬＰＳ）リガンドもＡｌｏｅＥｘも、レポータープラスミドのみでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞内のＮＦ−κＢ依存性ルシフェラーゼ発現を活性化しなかった（図１０Ａ）。ＡｌｏｅＥｘは、ＴＬＲ２依存性（ＣＤ１２およびＴＬＲ２を発現する）活性化を支持する細胞内のＮＦ−κＢを活性化した（図１０Ｂ）。ペプチドグリカンおよびザイモサンも、ＴＬＲ２およびＣＤ１４を発現している細胞内のＮＦ−κＢを活性化した。それに比べて超純粋ＬＰＳは活性化しなかった。
【０２３５】
ＡｌｏｅＥｘ中のＡＬＰＳおよびＡＬＰの存在
発明者らは、ＡｌｏｅＥｘがアロエベラと関連する微生物に由来する可能性が最も高い細菌ＬＰＳおよび細菌リポタンパク質を含有することを実証した。ＡｌｏｅＥｘ中のこれらの細菌成分の存在は、ＡｌｏｅＥｘ由来の製品の治療特性に寄与すると考えられる。
【０２３６】
ＡｌｏｅＥｘを９０％の水性フェノール：水（１：１）で７０℃にて抽出した。抽出物を冷却し、引き続き遠心分離すると、２層（水とフェノール）および不溶性材料のペレットが形成された。水層はＡＬＰＳを含む。リポタンパク質上の非極性脂質部分のため、フェノール層はＡＬＰを含む。この手順を利用して、ＡｌｏｅＥｘ（バッチ０５６）を水層画分、フェノール層画分および不溶性材料中に分けた。水層画分を凍結乾燥させた（収率８．９％）。２体積のエーテル：アセトン（１：５）と４体積の酢酸エチルを添加して、フェノール層中の材料を沈殿させた。フェノール層沈殿物を酢酸エチルおよびイソプロパノールで広範囲に洗浄してから６０℃で乾燥させた（収率４５％）。元のＡｌｏｅＥｘ材料、水層画分、フェノール層画分および不溶性材料をすべて単球アッセイで試験した（図１１）。ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポータープラスミドによるトランスフェクション２４時間後に細胞を指示サンプル（μｇ／ｍｌの濃度）で４時間処理した。ルシフェラーゼ活性を決定し、ＬＰＳ処理細胞からの最大光出力のパーセントとして記録する。水層とフェノール層は両方ともそれぞれ細菌ＡＬＰＳおよびＡＬＰに起因すると考えられる実質的な単球の活性化を示した。不溶性材料も、５μｇ／ｍｌで試験した場合に３５％だけＮＦ−κＢ活性化を促進するその能力によって示されるように活性だった。
【０２３７】
ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分中のＡＬＰの特徴づけ
フェノール層画分材料を３回４％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（２６ｍｇ／ｍｌ）で１００℃にて３０分間抽出した。ＳＤＳに溶けない材料を遠心分離で除去して単球アッセイで試験すると、元のフェノール層画分中に存在する全活性の約１〜２％だけ含有した。
【０２３８】
フェノール層画分のＳＤＳ抽出物を、５０ｍＭのＴＲＩＳ（ｐＨ７．５）中のＴｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ  ａｌｂｕｍ（Ｓｉｇｍａ）由来プロテイナーゼＫ０．１ｍｇ／ｍｌ（３．９単位／ｍｌ）、５ｍＭのβ−メルカプトエタノール、および５ｍＭのＣａＣｌ２と２時間５０℃でインキュベートした。次にその消化物を９８℃で１０分間加熱した。プロテイナーゼＫのない対照サンプルを同一条件下で試験した。ＳＤＳポリアクリルアミドゲル分析のため、抽出物（プロテイナーゼＫ処理および未処理）を１体積のトリス−トリシン（Ｔｒｉｓ−Ｔｒｉｃｉｎｅ）サンプルバッファー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）と混合し、１６．５％トリス−トリシンプレキャストゲル（Ｒｅａｄｙ  Ｇｅｌ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ）の非隣接レーン内に装填した。装填されたサンプルの量は、１３０μｇのＡｌｏｅＥｘフェノール層画分中に存在するＳＤＳ抽出可能材料に相当した。広い分子量範囲のタンパク質マーカー（Ｓｉｇｍａ）をゲルに流した。個々のゲルレーンを１２等区分に切断し（０．５ｃｍ／区分）、１５０μｌの１．５％オクチルグルコシド、２．５ｍＭのＴＲＩＳ（ｐＨ７．５）、５ｍＭのＣａＣｌ２で９５℃にて５分間抽出した。サンプルの上清を収集し、単球活性化アッセイで活性について評価した。
【０２３９】
図１２は、タンパク質がＡｌｏｅＥｘフェノール層画分による単球の活性化の直接の原因であるとは思われないが、むしろタンパク質はこの活性の原因である分子の一部であることを示す。このことは、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上の分別法によって決定されるように、プロテイナーゼＫ処理後の活性化合物の見掛けの大きさの減少によって示される。プロテイナーゼＫ処理後に６６〜６．５ｋＤａの領域では活性の実質的な減少があり、６．５ｋＤａ〜ゲル前部の領域では活性の増加があった。この結果は、プロテイナーゼＫの消化はリポタンパク質の活性を低減しない（すなわちリポタンパク質のタンパク質成分は単球活性化に必要ない）が、プロテイナーゼＫ処理は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で分別するとき、リポタンパク質の大きさを減少させるという点で、細菌リポタンパク質によって得られた結果に類似している。図１２中、「Ｃ」および「ＰＫ」と標識した黒棒は、ゲル上での分別前の、それぞれ未処理およびプロテイナーゼＫ処理ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分の活性を表す。
【０２４０】
ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分の４％ＳＤＳ抽出物のリポタンパク質リパーゼに対する感度を決定するため、０．８８％オクチルグルコシドの存在下でＳＤＳ排出試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてＳＤＳを除去した。このサンプルを次に１０μＭのＡＥＢＳＦプロテアーゼインヒビターカクテル溶液（Ｓｉｇｍａ）および０．２％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、番号Ａ−９４１８）の最終濃度に調整した。このサンプルをシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種（Ｓｉｇｍａ、番号Ｌ９６５６）由来のリポタンパク質リパーゼ３９，６００単位／ｍｌ（１ｍｇ／ｍｌ）と３７℃で１６時間インキュベートした。対照サンプル（リポタンパク質リパーゼなし）を同一条件下で処理した。リポタンパク質リパーゼ処理サンプルおよび未処理サンプルの活性を単球活性化アッセイを利用して評価した。
【０２４１】
図１３に示す結果は、ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分の４％ＳＤＳ抽出物中に存在する活性がリポタンパク質リパーゼによる処理で完全に阻害されることを示す。図１２で示した結果と共にこの結果は、ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分中の活性がＡＬＰに起因することを確証する。この手順は、ＡｌｏｅＥｘがアロエベラと関連する微生物由来であると考えられるＡＬＰを含有することを実証した。ＡｌｏｅＥｘ中の他成分と併せたこの細菌成分の存在がこの製品の治療特性に有意に寄与すると考えられる。
【０２４２】
ＡｌｏｅＥｘ中のＡＬＰＳの特徴づけ
以下にＡｌｏｅＥｘ（バッチ０５６）中に存在するＡＬＰＳの量およびこの材料由来の２つの画分（水層画分およびフェノール層画分）の量を要約する。
ＡｌｏｅＥｘ（バッチ０５６）            ６２５〜６２５０ＥＵ／ｍｇ
ＡｌｏｅＥｘ水層画分            ６２，５００〜６２５，０００ＥＵ／ｍｇ
ＡｌｏｅＥｘフェノール層画分    ＜４．８ＥＵ／ｍｇ
【０２４３】
Ｐｙｒｏｓａｔｅ  ＬＡＬアッセイキット（Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｏｆ  Ｃａｐｅ  Ｃｏｄ  Ｉｎｃ）を用いて製造業者の使用説明書に従ってＡＬＰＳの量を見積もった。予想通りに、水層画分は、フェノール層画分に比し、ＡｌｏｅＥｘ中に存在するＡＬＰＳの本質的にすべてを含有した。このデータは、ＡｌｏｅＥｘがアロエベラと関連する微生物由来であると考えられるＡＬＰＳを含有することを実証した。ＡｌｏｅＥｘ中の他成分と併せたこの細菌成分の存在がこの製品の治療特性に寄与すると考えられる。
【０２４４】
皮および粘液がアロエベラ中の単球活性成分の大部分を含有する
アロエベラ葉を３つの基本構造部分、すなわちゲル、外皮および粘液（ゲルと外皮の間の層）に分割することができる。アロエ葉のどの部分が最高レベルの単球活性化成分を含有するかを決定するため実験を行った。１枚のアロエベラ葉から、内皮表面に平行にナイフを通すことによって、慎重にゲルを切り抜いた。ゲルの除去後、バイアルの縁上に葉をこすりつけて粘液部分を収集し、それを外皮から分けた。３成分すべておよび全葉アロエの切片を凍結乾燥させ、粉砕して微粉末にした。次に各サンプルを広範囲にメタノールで抽出して、アントラキノンなどの単球活性化アッセイで阻害作用を及ぼす無極性物質を除去した。無極性物質を除去したサンプルを水中の微細サスペンションとして調製した。ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポータープラスミドによるトランスフェクションの２４時間後に、ＴＨＰ−１細胞を調製サンプルで４時間処理した。ルシフェラーゼ活性を決定し、ＥＬＰＳ処理細胞からの最大光出力のパーセントとして記録する。図１４は、異なるアロエベラ葉部分の反応および全葉材料の反応を示す。このデータは、粘液層と外皮がアロエ葉中の単球活性化成分の大部分を含有することを示唆している。この実験では、各葉部分がアロエ葉の総乾燥重量に占めるパーセントは、ゲル（８．７％）、粘液層（６．２％）および皮（８５．１％）だった。
【０２４５】
外皮と粘液層が単球活性化成分の大部分を含有し、かつこれらの部分がアロエ葉中の乾燥固体の大部分をも含むので、発明者らは、外皮と粘液層が商業的利益を持つと結論を下す。典型的に、外皮は、ゲルを除去した後かまたは全アロエ葉を加工してアロエジュースを作製した後に廃棄物として捨てられる。別の廃棄物はアロエパップ（より大きい植物から生じる小さいアロエ植物）である。アロエパップは大部分はゲルがほとんどない皮を含むので、商業的価値は少ないとみなされている。皮およびアロエパップ廃棄物を加工して、例えば、免疫機能を高める栄養補助食品を製造できる。乾燥した皮を粉砕して粉末にして加工してアントラキノンを除去できた。この材料をさらに抽出によって加工して粗製抽出物および精製画分を製造できた。粗製抽出物および精製画分の目的は、ＡｌｏｅＥｘおよび／またはアロエベラと関連する微生物および微生物フラグメント／成分の量を濃縮することであろう。
【０２４６】
ＡｌｏｅＥｘ中の単球活性化成分は洗浄剤で抽出可能かつ溶ける
種々の製品（例えば化粧品用）の開発のため、ＡｌｏｅＥｘ材料中の免疫強化成分を可溶化することが望ましいだろう。免疫強化成分は、アロエベラと関連する微生物由来のＡｌｏｅｒｉｄｅ多糖、ＡＬＰおよびＡＬＰＳを包含するだろう。既に述べたように、ＡｌｏｅＥｘ材料の免疫強化成分の有意部分を水層画分とフェノール層画分に分別することができる。フェノール層画分中に存在する免疫強化活性（ＡＬＰ）を４％ＳＤＳで１００℃にて完全に抽出／可溶化することができる。水層中に存在する免疫強化活性（ＡＬＰＳおよびＡｌｏｅｒｉｄｅ多糖）は水に溶け、ＳＤＳにも溶ける。
【０２４７】
ＡｌｏｅＥｘのＳＤＳによる抽出は、この材料中に存在する免疫強化成分の有意部分を可溶化する、可能性のある方法であることを意味する。このデータは、他の既知洗浄剤（製品配合物とさらに適合性のものを含めて）もＡｌｏｅＥｘ材料中の免疫強化成分の抽出／可溶化に役立つ可能性があることを示唆している。この洗浄剤抽出方法を用いて、全葉、皮、アロエパップなどの原材料由来の単球活性化成分（すなわちＡｌｏｅｒｉｄｅ多糖およびアロエベラと関連する微生物成分）を可溶化することもできた。
【０２４８】
アロエベラと関連する微生物および微生物成分／フラグメントの単離による抽出物の製造方法
実証したように、アロエベラと関連する微生物由来の細菌産物はＡｌｏｅＥｘの免疫強化特性のかなりの部分の原因である。ＡｌｏｅＥｘがアロエベラのインビトロ単球／マクロファージ活性化の可能性の大部分を占めることが分かる。したがって、微生物由来の細菌産物はアロエベラの免疫強化特性のかなりの部分の原因であると考えられる。
【０２４９】
廃棄物材料（例えば残り物の皮、アロエパップなど）を含めた粗製アロエ材料および／またはアロエベラ原材料から、アロエベラと関連する微生物および／または微生物成分／フラグメントの量を濃縮する抽出物を調製することができる。溶媒を用いて細菌リポタンパク質および／または他の細菌成分を抽出することによって、粗製抽出物を加工して精製画分を作製することができる。これらの画分に含まれるアロエベラと関連する細菌成分レベルは向上しているだろう。精製画分を調製するために使用し得る溶媒として、洗浄剤、例えばＳＤＳ、水、水混和性溶媒、例えばアルコール、およびこれら溶媒の組合せまたは当技術分野で周知の他の溶媒が挙げられる。
【０２５０】
以下の手順を用いて、アロエベラと関連する微生物および／または微生物成分／フラグメントの量を濃縮する抽出物を調製することができた。当技術分野で既知の方法を用いてアロエベラ原材料（ゲル、全葉、皮、パップなど）を液化することができる。この液体を粗ろ過に供して繊維材料を除去することができる。食品グレードの凝集剤（清澄剤または同様の物質）を液化アロエに添加して粒子（細菌、他の微生物、微生物フラグメント／成分）の凝集体を作製することができる。次にこれらの凝集粒子を当技術分野で既知の方法を用いて残存液体から分離することができた。該方法として、遠心分離、ろ過、沈降法後のデカンテーション、ネットを用いて液体から凝集体をろ過する方法などが挙げられる。存在する場合、アントラキノンを除去するため、アルコールによる洗浄／抽出などの技術を利用して最終収集材料を加工することもできる。所望により、結果として生じた材料を乾燥させることができる。
【０２５１】
標準化アロエベラ製品の製造方法
生物学的および化学的標準化は、本発明で述べる免疫強化薬剤を含有するアロエベラ製品を標準化するために使用できる２つの方法に相当する。両方法を抽出材料または原材料のどちらかを標準化するために使用することができる。標準化の目的は、各バッチの製品材料が確実に同レベルの活性成分を含有するようにすることである。
【０２５２】
一方法では、有効量の免疫賦活活性を含有する生理活性標準化アロエベラ製品を調製する。この方法では、免疫細胞の活性化についてアロエベラ製品材料をインビトロで試験してから生理活性を標準製剤の免疫賦活値と比較して該製品の標準化活性値を決定する。インビトロ試験システムの例は、前述した単球活性化アッセイである。製品材料の生理活性に基づいた標準化は、活性成分の化学的含量が未知の構造−活性関係および／または複数の活性間の複雑な相互作用による生理活性と関係がない場合に重要である。このような状況下では、活性物質の量は製品材料の効能を反映するには十分でなく、生物学的アッセイを利用した標準化が望ましい。インスリンおよびサイトカインなどの生物学的薬剤の製薬業界では生理活性標準化を使用している。
【０２５３】
別の方法では、アロエベラと関連する微生物に由来する有効量の免疫賦活性リポタンパク質を含有する、化学的に標準化したアロエベラ製品を調製する。標準化のために使用し得る化学マーカーは２，３−ジヒドロキシプロピルシステインである。この修飾されたシステインアミノ酸は、原核生物由来の免疫賦活性であるリポタンパク質に独特であると考えられる。この方法では、２，３−ジヒドロキシプロピルシステインの量についてアロエベラ製品材料を試験してから標準製剤中の２，３−ジヒドロキシプロピルシステインの量と比較して、該製品の標準化値を決定する。
【０２５４】
ある実施形態では、食品グレードの凝集剤、清澄剤または凝固剤を用いて微生物凝集体を形成してよい。例としては、限定するものではないが、例えば、明礬、水和塩化アルミニウム、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、塩化鉄（ＩＩＩ）、硫酸鉄（ＩＩ）、ポリアクリルアミド、アルミン酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウムおよびそれらの組合せが挙げられる。凝集剤としても使用できる天然製品としては、キトサン、ワサビノキ（Ｍｏｒｉｎｇａ  ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子、パパイン、マチン属（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ）の種（種子）、アイシングラス（Ｉｓｉｎｇｌａｓｓ）およびそれらの組合せが挙げられる。他のこのような材料は当業者に周知である。
【０２５５】
本明細書では、特定の実施形態を参照して本発明について述べたが、これらの実施形態は本発明の原理および適用の単なる例示であるものと解釈すべきである。したがって、添付の特許請求の範囲で定義する本発明の精神および範囲から逸脱することなく、これらの例示実施形態に多くの修正を加えることができ、かつ他のアレンジメントを案出できるものと解釈すべきである。
なお、出願当初の特許請求の範囲は以下の通りである。
請求項１：
（１）アロエ由来多糖、（２）アロエ由来リポタンパク質、および、（３）アロエ由来リポ多糖のうちの少なくともいずれか２種の混合物を含む免疫賦活性組成物であって、前記混合物は、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％の免疫賦活活性を示し、この免疫賦活活性は、約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定される組成物。
請求項２：
前記混合物が、アロエ由来多糖、アロエ由来リポタンパク質およびアロエ由来リポ多糖を含む請求項１に記載の組成物。
請求項３：
前記混合物が、約０．０１％〜約５０％のアロエ由来多糖と、合計で約０．０００１％〜約１０％のアロエ由来リポタンパク質およびアロエ由来リポ多糖とを含む請求項１に記載の組成物。
請求項４：
前記混合物が、約１％〜約２０％のアロエ由来多糖を含む請求項３に記載の組成物。
請求項５：
前記アロエ由来多糖が、約２００万ダルトンを超える見掛け分子量を有し、かつグルコース、ガラクトース、マンノースおよびアラビノースを含む請求項１に記載の組成物。
請求項６：
前記混合物が、アロエ皮、アロエ粘液、アロエゲル、全葉アロエおよびそれらの組合せから成る群より得られる請求項１に記載の組成物。
請求項７：
前記混合物とブレンドされた医薬担体または賦形剤をさらに含む請求項１に記載の組成物。
請求項８：
前記混合物が約０．０１％〜約５０％のアロエ由来多糖と、合計で約０．０００１％〜約１０％のアロエ由来リポタンパク質およびアロエ由来リポ多糖とを含む請求項７に記載の組成物。
請求項９：
アロエ由来リポタンパク質を含む免疫賦活性組成物であって、前記アロエ由来リポタンパク質は、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％の免疫賦活活性を示し、この免疫賦活活性は、約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定される組成物。
請求項１０：
関節痛および／または筋肉痛を治療する方法であって、治療が必要な被験者に、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％の免疫賦活活性を示す、有効量のアロエベラ由来材料を投与するステップを含み、前記免疫賦活活性は、約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定される方法。
請求項１１：
前記対象が、ヒトである請求項１０に記載の方法。
請求項１２：
前記対象が、動物である請求項１０に記載の方法。
請求項１３：
関節痛および／または筋肉痛を治療する方法であって、治療が必要な対象に、１日当たり約０．２ｍｇ〜約１ｇの治療用量の少なくとも１種の免疫賦活性アロエベラ由来組成物を投与するステップを含む方法。
請求項１４：
皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／または弾力性を強化する方法であって、強化が必要な対象に、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％の免疫賦活活性を示す、有効量のアロエベラ由来材料を投与するステップを含み、前記免疫賦活活性は、約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定される方法。
請求項１５：
前記対象がヒトである請求項１４に記載の方法。
請求項１６：
前記対象が動物である請求項１４に記載の方法。
請求項１７：
皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／または弾力性を強化する方法であって、強化が必要な個体に、１日当たり約０．０００５ｍｇ〜約１ｇの治療用量の少なくとも１種の免疫賦活性アロエベラ由来組成物を投与するステップを含む方法。
請求項１８：
疾患または状態を治療する方法であって、治療が必要な対象に、約１０μｇ／ｍＬの濃度の細菌リポ多糖によって達成される最大ＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現の少なくとも約５０％の免疫賦活活性を示す、有効量のアロエベラ由来材料を投与するステップを含み、前記免疫賦活活性は、約２５０μｇ／ｍＬ以下の濃度のＴＨＰ−１単球におけるＮＦ−κβ誘導ルシフェラーゼ発現によって測定され、かつ前記疾患または状態が、免疫不全症、癌、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染および創傷から成る群より選択される方法。
請求項１９：
前記対象がヒトである請求項１８に記載の方法。
請求項２０：
第１の免疫賦活性アロエベラ由来組成物と、第２の免疫賦活性アロエベラ由来組成物および非免疫賦活性アロエベラ由来材料から成る群より選択される第２のアロエベラ由来材料とを含むアロエベラ由来組成物であって、
前記第２のアロエベラ由来材料の量が、前記第１の免疫賦活性アロエベラ由来組成物の量以上であり、かつ
前記組成物が実質的に均質な溶液、サスペンション、ディスパーションまたはエマルションである組成物。
請求項２１：
前記第２のアロエベラ由来材料が、Ｍａｇｎａｌｏｅ ＡＧ、アロエベラゲル１Ｘ、アロエベラゲル１０Ｘ、アロエベラゲル２００ｘ、アロエベラ全葉噴霧乾燥粉末１００Ｘ、アロエベラ全葉脱色液、エースマンナン、アロエベラ粘質多糖およびＭａｎａｐｏｌから成る群より選択される請求項２０に記載の組成物。
請求項２２：
痛みを治療するため、または、皮膚の外観、テクスチャー、堅さおよび／もしくは弾力性を強化するためのアロエベラ由来組成物を製造する方法であって、
ａ）第１の免疫賦活性アロエベラ由来組成物を第２のアロエベラ由来材料と合わせるステップ、
ｂ）前記第１の免疫賦活性アロエベラ由来組成物と、前記第２のアロエベラ由来材料と、溶媒とで混合物を形成するステップ、および
ｃ）前記混合物を均質化するステップ
を含み、
前記第２のアロエベラ由来材料の量が前記第１の免疫賦活性アロエベラ由来組成物の量以上であり、かつ前記組成物が実質的に均質な溶液、サスペンション、ディスパーション、またはエマルションである方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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