(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
スダチの搾汁残渣またはスダチ果皮からのスダチチン及びデメトキシスダチチンを含むスダチポリフェノールの製造方法であって、
食品加工用酵素である、マグナックスＪＷ−２、コクラーゼＳＳ、デナプシン１０Ｐ、グルクＳ、デナチームＡＰ、グルク１００、グルコチーム♯２００００、セルロシンＴ３の中より一つ以上を選択し、
その酵素水溶液の中に、スダチの搾汁残渣またはスダチの果皮を添加して酵素の適温で攪拌し、
更に加熱攪拌を行なった後、
反応液の上清を分離した後、上清の単離精製を行なう
ことを特徴とする、スダチポリフェノールの製造方法。
【請求項２】
上記酵素の適温が３５℃である、請求項１に記載のスダチポリフェノールの製造方法。
【請求項３】
上記加熱攪拌が、５０℃である、請求項１または２に記載のスダチポリフェノールの製造方法。
【請求項４】
上記食品加工用酵素が、マグナックスＪＷ−２を含むものである、請求項１〜３のいずれかに記載のスダチポリフェノールの製造方法。
【請求項５】
上記搾汁残渣または果皮が乾燥粉末状となっている、請求項１〜４のいずれかに記載のスダチポリフェノールの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スダチの搾汁残渣から、メタボリックシンドロームの予防及び／又は治療に有効なスダチポリフェノールを製造する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
柑橘類には、多くのポリフェノール（ポリメトキシフラボノイド）が含まれており、これらのポリフェノールには、糖尿病や高脂血症と言った生活習慣病の予防と改善をもたらす効果があることが知られている（特許文献1と２、非特許文献２）。
また、スダチにはスダチ固有でユニークな構造のスダチポリフェノール（スダチチン、デメトキシスダチチンおよびそれらの配糖体）が多量に含有されている。例えばスダチの乾燥果皮（ここでは、果実の表面を覆う皮をいう。）には、およそ０．１質量％程度のスダチチンが含まれ、これとともに、およそスダチチンの６倍量程度のスダチチン配糖体が含まれている（特許文献３）。
そこで、これまでスダチの乾燥果皮や搾汁残渣から、スダチポリフェノールを単離回収して、有効活用しようという試みが多くなされて来た。例えば、マイクロ波を照射しながら、搾汁残渣からスダチチンの抽出やスダチチン配糖体の塩酸加水分解処理を行うことで、スダチチンを効率的に抽出することが報告されている（特許文献３）。更に、スダチの乾燥果皮から抽出された、スダチチンとスダチチン配糖体の混合物に清酒酵母を加えて反応させると、スダチチン配糖体が加水分解されてスダチチンが生成することも報告されている（非特許文献１）。
【０００３】
しかしながら、上記の方法には、マイクロ波の照射が必要であるため、スケールアップを行なって、工業的なスケールでスダチポリフェノールを単離精製することは特殊な装置も必要とし、コスト的にも大量合成が難しい状況であった。そのため、簡便で安価な大量スケールでの製造方法が求められている状況であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−７７１３９号公報
【特許文献２】ＷＯ２００２／０８７５６７号公報
【特許文献３】特開２００８−２０８０６４号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】農林水産省食品産業グリーンプロジェクト技術実証モデル事業、平成２１年度、事業成果１７課題名「柑橘類果皮由来ポリフェノール分離技術の実証」
【非特許文献２】近畿中国四国農業研究センター研究報告第５号１９〜８４頁２００５年「カンキツ果実の機能性成分の検索とその有効利用に関する研究」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、スダチの搾汁残渣からスダチポリフェノールを効率よく大量に製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、スダチの搾汁残渣からスダチポリフェノールを効率よく大量に製造する方法をこれまで鋭意検討してきたが、スダチの搾汁残渣（乾燥粉末）を用いて市販の食品加工用酵素を作用させることにより、水溶性スダチポリフェノール（配糖体を含む）がより効率的に単離精製できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
本発明の要旨は以下の通りである。
（１）スダチの搾汁残渣またはスダチ果皮からのスダチポリフェノールの製造方法であって、
食品加工用酵素である、マグナックスＪＷ−２、コクラーゼＳＳ、デナプシン１０Ｐ、グルクＳ、デナチームＡＰ、グルク１００、グルコチーム♯２００００、セルロシンＴ３の中より一つ以上を選択し、
その酵素水溶液の中に、スダチの搾汁残渣またはスダチの果皮を添加して酵素の適温で攪拌し、
更に加熱攪拌を行なった後、
反応液の上清を分離した後、上清の単離精製を行なう
ことを特徴とする、スダチポリフェノールの製造方法。
（２）上記酵素の適温が３５℃である、上記（１）に記載のスダチポリフェノールの製造方法。
（３）上記加熱攪拌が、５０℃である、上記（１）または（２）に記載のスダチポリフェノールの製造方法。
（４）上記食品加工用酵素が、マグナックスＪＷ−２を含むものである、上記（１）〜（３）のいずれかに記載のスダチポリフェノールの製造方法。
（５）上記搾汁残渣または果皮が乾燥粉末状となっている、上記（１）〜（４）のいずれかに記載のスダチポリフェノールの製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のスダチポリフェノールの製造方法は、スダチの搾汁残渣またはスダチ果皮に含まれるスダチポリフェノールとその配糖体をより効率的に搾汁残渣等より抽出する方法であって、従来のマイクロ波を照射するような付加的な手段を必要とせず、汎用の食品加工用酵素を添加するだけで、所期の目的を達することが可能となった。このように、本発明の製造方法は操作が簡単であり、水溶性スダチポリフェノールの工業的な大量製造が可能になった。このことにより、水溶性スダチポリフェノールを用いた糖尿病疾患やメタボリック・シンドロームを予防する食品開発あるいは治療応用ができるようになった。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】スダチの搾汁残渣を酵素処理（デナプシン１０Ｐ）して得られた反応液上清中のデメトキシスダチチンとスダチチンの定量を行なったＨＰＬＣ分析チャートの図である。
【図２】上記図１のように酵素処理した反応液上清中の分析チャートではなく、酵素ブランクの上清液のＨＰＬＣ分析チャートの図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の「スダチの搾汁残渣またはスダチ果皮」とは、スダチからスダチ果汁を搾汁する時に副生する残渣であり、また、この残渣を内外果皮分離機（スライサー）で処理することで得られる外果皮のことを言う。なお、この搾汁残渣は乾燥後、粉砕して乾燥粉末のスダチパウダーとして使用することが望ましい。
本発明の「食品加工用酵素」とは、マグナックスＪＷ−２、コクラーゼＳＳ、デナプシン１０Ｐ、グルクＳ、デナチームＡＰ、グルク１００、グルコチーム♯２００００、セルロシンＴ３の中より一つ以上を選択して使用するものである。即ち、マグナックスＪＷ−２とは、洛東化成工業製のグルコアミラーゼである。コクラーゼＳＳは三菱化学フーズ製の蛋白分解酵素剤であり、デナプシン１０Ｐとはナガセケムテックス製の酸性プロテアーゼからなる蛋白分解酵素剤である。グルクＳ、グルク１００は天野製薬製のα−アミラーゼとグルコアミラーゼからなる糖化酵素剤である。デナチームＡＰはナガセケムテックス製の中性プロテアーゼの蛋白分解酵素剤であり、グルコチーム♯２００００はナガセケムテックス製のグルコアミラーゼの糖化酵素剤ある。セルロシンＴ３はエイチビイアイ製のセルラーゼからなる糖化酵素剤である。
【００１２】
本発明の「スダチポリフェノール」とは、スタチに含有されるポリメトキシフラボノイドおよびそれらの配糖体のことを言う。スタチに含有されるポリメトキシフラボノイドとしては、スダチチン、デメトキシスダチチン、ノビレチン、タンゲレチンなどが主なものとして挙げることができる。スダチには、特許文献３に示されるように、スダチチン、デメトキシスダチチンおよびそれらの配糖体が比較的多量に含有されている。
また、水溶性スダチポリフェノールとは、水に溶解しやすいスタチに含有されるポリメトキシフラボノイドおよびそれらの配糖体のことである。
本発明の「酵素の適温」とは、使用する酵素によって適温の範囲は若干異なるが、各酵素の熱安定性を考慮して約３５〜５０℃の範囲が用いられる。例えば、アミラーゼ等の１．1（４）α−グルカンに関する分解酵素は、４０〜５０℃の範囲が用いられる。セルラーゼ等の１．３（４）β−グルカンに関する分解酵素は、３５〜４０℃の範囲が用いられる。プロテアーゼ等の蛋白分解酵素は、３５〜４５℃の範囲が用いられる。より好ましい酵素反応の適温とは、約５５℃前後を挙げることができる。
酵素反応の時間は、酵素反応の進行の程度を見て、適宜調整することができ、特に限定されるものではない。
【００１３】
本発明の「加熱攪拌」とは、酵素分解反応を加速し完結させるために行なわれる昇温と攪拌のことを言う。ここで、昇温とは、反応温度を更に高めることを言い、４０〜５０℃で攪拌することが好ましい。より好ましくは、約５０℃前後の温度を挙げることができる。
過熱攪拌の時間は、搾汁残渣等より遊離してくるスダチポリフェノールの含量をチェックしながら適宜調整することができ、特に限定されるものではない。
本発明の「反応液の上清」とは、反応液を静置若しくは遠心分離を行なうことにより得られる上清のことを言う。上清は、更にメンブランフィルター等で濾過されてもよい。
本発明の「単離精製」とは、実験化学講座等の成書に記載された慣用手段を言う。例えばカラムクロマトグラフィー等の常法による単離精製方法によって単離することができる。
【実施例】
【００１４】
次に実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）スダチ搾汁残渣と各種食品加工用酵素との反応
スダチ搾汁残渣を乾燥後、粉砕してスダチパウダーとした。このパウダーに食品加工用酵素剤を作用させ、機能性成分の可溶化を試みた。即ち、スダチパウダー０．５ｇを１５ｍｌ容遠心管に採り、１０ｍｌの０．５％食品加工用酵素水溶液を添加し３５℃で６時間、続いて５０℃で１５時間反応後、沸騰温浴中で５分間処理した。これらの反応液を遠心分離後、上清をメンブランフィルター（φ０．４５μｍ）でろ過した溶液について酵素処理による可溶化物としてポリフェノール量（配糖体を含む）を試験例１の方法により分析した。
【００１５】
（試験例１）スダチポリフェノールの定量
（１）ポリフェノール測定方法
ポリフェノールの定量はＦｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ法により行った。すなわち１ｍｌの試料溶液と０．５ｍｌの１Ｎフェノール試薬（フォーリン・チオカルト試薬）、５ｍｌの０．４Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３を試験管内で混和後、３０℃で３０分間反応した。反応液を室温に冷却後、６６０ｎｍの吸光度を測定した。定量のための検量線の作成には没食子酸を使用し、試料中のポリフェノール量は没食子酸の相当量で表した。
（２）ポリフェノール量の測定結果
実施例１で得られた各酵素処理溶液中のポリフェノール量を表１に示した。酵素を添加せず（酵素なし）に同じ条件で処理した場合、すなわち水抽出により可溶化したスダチパウダー１ｇ当たりのポリフェノール量は３７．１ｍｇであり、各種の酵素処理によって増加する場合と減少する場合があった。ポリフェノールの回収率の高い順に、その結果を示す。
【００１６】
（３）ポリフェノール中のデメトキシスダチチンとスダチチンの定量
デメトキシスダチチンとスダチチンの定量分析には日立製高速液体クロマトグラフシステムを使用した。分析条件を以下のように設定した。
［カラム］  Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８ＲＳ  （４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍｍ）
［移動相］  Ａ：ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ２．３），  Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
分析開始から４０分かけてＡ（８８％）／Ｂ（１２％）→Ａ（４０％）／Ｂ（６０％）に直線グラジエント、４０分から５０分までＡ（４０％）／Ｂ（６０％）で分析する。
［カラム温度］  ４０℃
［流速］  １．０ｍｌ／ｍｉｎ
［検出］  ３２５ｎｍ
実施例１で得られた各酵素処理溶液中のデメトキシスダチチンとスダチチンの定量を行なった。その結果を併せて表１に示し、スダチポリフェノールの分析例を図１に示した。
【００１７】
【表１】
0005804471.tif 000002
【００１８】
上記表１から、スダチポリフェノールを効率的に回収単離するには、マグナックスＪＷ−２、コクラーゼＳＳ、デナプシン１０Ｐ、グルクＳ、デナチームＡＰ、グルク１００、グルコチーム♯２００００、セルロシンＴ３の酵素でスダチパウダーを反応させることが必要であることが分かった。
また、スダチポリフェノールの中で、スダチチンを効率的に回収するためには、デナプシン１０Ｐが最もよく、酵素なしの場合と比較すると、約２．１倍の回収効率が得られることが示された。また、表１に示されるように、酵素に対する感受性が、デメトキシスダチチンとスダチチンで異なることが分かった。スダチチンの場合にはデナプシン１０Ｐが最も回収効率がよかったが、デメトキシスダチチンの場合にはグルクＳであった。
【産業上の利用可能性】
【００１９】
本発明のスダチポリフェノールの製造方法は、マイクロ波照射装置などを設置する必要がなく、市販の食品加工用酵素を使用して反応させることにより、簡便に、より効率よくスダチポリフェノールが回収単離できる。それ故、堆肥あるいは産業廃棄物として処分されることの多かったスダチの搾汁残渣を有効活用できるようになり、糖尿病や生活習慣病等の疾患の予防や治療に使用される可能性の高い、スダチポリフェノールを大量製造できるようになった。
【図１】
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【図２】
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