(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子の集合から遺伝子データを罹病した類と正常な類に分類するために一群の候補遺伝子を選択するためのコンピュータで実施される方法であって、
一群の遺伝子データを受信するステップと、
前記一群の遺伝子データを、クラスタ化アルゴリズムの使用により同様のプロファイルを持つ一群のクラスタに配列するステップと、
前記一群のクラスタを遺伝アルゴリズムに入力して、前記一群のクラスタから一群の候補遺伝子を選択するステップとを有し、
一群の個体が前記遺伝アルゴリズムに入力され、各個体は数のアレイとしてあらわされ、その各インデックスが前記遺伝子データからの対応する遺伝子をあらわし、各インデックスにおける値が前記対応する遺伝子が属するクラスタをあらわし、
次の世代のための個体がルーレット盤選択ルーチンに基づいて選択され、該ルーレット盤が各個体の相対的適応度から構築され、
前記一群の候補遺伝子が、最高の適応度を持つ個体として選択され、
前記クラスタ化アルゴリズムが距離尺度として相互依存冗長尺度を使用し、二つの遺伝子間の前記相互依存冗長尺度がエントロピ尺度によって正規化される相互情報に基づき、
前記遺伝アルゴリズムの各進化において、最高の多重相互依存冗長性を持つ各クラスタの遺伝子である、各クラスタのモードを先ず決定し、前記遺伝子の多重相互依存冗長性は同一のクラスタに属する全ての他の遺伝子との自身の相互依存冗長尺度の和に基づき、他の遺伝子を前記クラスタのモードと最高の相互依存冗長性を持つ各クラスタに割り当てることにより、前記遺伝子がクラスタに再割り当てされ、
前記個体の適応度が前記クラスタの多重相互依存冗長性に基づいて決定される、
方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記一群の遺伝子データは疾病状態及び非疾病状態に関連する部分集合を有し、前記一群の遺伝子データは前記疾病状態部分集合及び前記非疾病状態部分集合において類似する遺伝子を除去するために前処理されている方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記個体の遺伝子が、前記最高の多重相互依存冗長性に従って更にランク付けされる方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記遺伝子データはマイクロアレイデータ、ＤＮＡ型アレイ、差異的ＤＮＡメチル化アレイ、クロマチン免疫沈降オン・チップ（ＣｈＩＰ）又はメチル化及び遺伝子番号変化から取得される方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記候補遺伝子はガン疾病に対するバイオマーカであり、該バイオマーカが、TGIF1、X90840、IGFBP4、HMHA1、CUL5、QSCN6(QSOX1)、COPS5、UBE4A、LOC440345、CCL4及びACAT1から、又はこれらバイオマーカの何れかの組み合わせから選択される方法。
【請求項６】
コンピュータ上で使用された場合に、システムに請求項１に記載の方法を実行させるコンピュータプログラム。
【請求項７】
遺伝子の集合から遺伝子データを罹病した類と正常な類に分類するために一群の候補遺伝子を選択するシステムであって、
一群の遺伝子データを受信し、
前記一群の遺伝子データを、クラスタ化アルゴリズムの使用により同様のプロファイルを持つ一群のクラスタにクラスタ化し、
前記一群のクラスタを遺伝アルゴリズムにより進化させて、前記一群のクラスタから一群の候補遺伝子を選択する、
計算ユニットを有し、
一群の個体が前記遺伝アルゴリズムに入力され、各個体は数のアレイとしてあらわされ、その各インデックスが前記遺伝子データからの対応する遺伝子をあらわし、各インデックスにおける値が前記対応する遺伝子が属するクラスタをあらわし、
次の世代のための個体がルーレット盤選択ルーチンに基づいて選択され、該ルーレット盤が各個体の相対的適応度から構築され、
前記一群の候補遺伝子が、最高の適応度を持つ個体として選択され、
前記クラスタ化アルゴリズムが距離尺度として相互依存冗長尺度を使用し、二つの遺伝子間の前記相互依存冗長尺度がエントロピ尺度によって正規化される相互情報に基づき、
前記遺伝アルゴリズムの各進化において、最高の多重相互依存冗長性を持つ各クラスタの遺伝子である、各クラスタのモードを先ず決定し、前記遺伝子の多重相互依存冗長性は同一のクラスタに属する全ての他の遺伝子との自身の相互依存冗長尺度の和に基づき、他の遺伝子を前記クラスタのモードと最高の相互依存冗長性を持つ各クラスタに割り当てることにより、前記遺伝子がクラスタに再割り当てされ、
前記個体の適応度が前記クラスタの多重相互依存冗長性に基づいて決定される、
システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遺伝子の集合からの一群の候補遺伝子の選択に係り、特には、クラスタ化及び進化計算の使用による候補遺伝子の選択に関する。
【背景技術】
【０００２】
マイクロアレイ遺伝子発現データからのクラスタ化及び遺伝子選択は、罹病状態につながる特定の生物学的状況において重要な役割を果たす遺伝子を識別する助けとなるので、とてつもない重要性を有している。
【０００３】
マイクロアレイ・サンプリングにおいては、ＲＮＡサンプルは、アレイ上の既知のｃＤＮＡ／オリゴ・プローブとハイブリッド化される。通常、スポットされるマイクロアレイ又はオリゴヌクレオチド・マイクロアレイが使用され、ユーザは、固有の実験的用件に従ってスポットされるべきプローブを選択することができる。オリゴヌクレオチド・マイクロアレイにおいては、既知のｍＲＮＡの配列の部分と合致する短いＤＮＡオリゴヌクレオチドがアレイ上にスポットされる。これらは、遺伝子発現の絶対値の推定を与える。
【０００４】
マイクロアレイ遺伝子発現データに対して作用するクラスタ化アルゴリズムは、或る特定の条件下では、共制御遺伝子（co-regulated genes）及び共発現遺伝子（co-expressed genes）を識別する助けとなる。これにより、試験サンプルを罹病類及び正常類に分類することが可能な遺伝子を識別する助けとする。Ｋ平均法アルゴリズム、自己組織化マップ（ＳＯＭ）アルゴリズム、階層クラスタ・アルゴリズム、バイクラスタ（bi-cluster）・アルゴリズム等を含む多数のクラスタ化アルゴリズムが開発されている。クラスタ化アルゴリズムは、遺伝子をクラスタ化するために遺伝子発現値の差を使用する。該差は距離尺度で表され、従来は、２つの遺伝子の間の類似性を計算するためにユークリッド距離及びピアソン相関係数が使用されている。しかしながら、これらのタイプの距離尺度は、プロファイル形状の類似性、異常値（outliers）に対する感度に関して幾らかの限界を有し、その上、クラスタの数が最初に指定されねばならない。
【０００５】
これらの限界のうちの少なくとも幾つかは、IEEE/ACM Transactions on Computational Biology and Bioinformatics 2(2), p.83-101 (2005)にAu他により公開された属性クラスタ化アルゴリズム（ＡＣＡ）と呼ばれる方法により満足される。該ＡＣＡは、Ｋ平均法アルゴリズムの概念を本質的に使用している。しかしながら、使用されている距離尺度は、遺伝子間の相互依存性を考慮に入れた情報理論的速度、所謂、相互依存性冗長尺度である。
【０００６】
生物情報科学で使用される他のタイプのアルゴリズムは、最適化問題に対する真の又は大凡の解を見つけるために使用される検索技術である、遺伝アルゴリズム（ＧＡ）である。遺伝アルゴリズムは、ランダムに発生された個体（即ち、可能性のある解）の個体群から開始し、より良い解を見つけるために後続の世代に進む。各世代において、当該個体群内の各々の個体は、新たな個体を形成するために修正される。該アルゴリズムは、最大数の世代の後に又は或る世代が所与の適応度基準を満たした場合に終了する反復アルゴリズムである。
【０００７】
所与の生物学的条件に対する分類器として使用することができるような、候補遺伝子を識別する助けとなる多数の方法が見つかっているが、現状技術においては、遺伝子データに基づいて生物学的条件を理解する複雑さを更に洞察するための他の解決策に対する必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、遺伝子データに基づいた被験体の分類のために、遺伝子の集合から候補遺伝子を識別する方法及びシステムに関するものである。特に、本発明の目的は、既知の解決策に対する代替的又は改善された解決策を提供することである。この目的のために、遺伝子データを罹病した又は正常な類に分類するために候補遺伝子を識別するための既知の解決策を凌駕する解決策を提供することを、本発明の１つの目的と見ることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第１態様によれば、遺伝子の集合（pool）から一群の候補遺伝子を選択する方法であって、
−  一群の遺伝子データを入力するステップと、
−  上記一群の遺伝子データを、クラスタ化アルゴリズムの使用により、同様のプロファイルを持つ一群のクラスタに配列するステップと、
−  前記一群のクラスタを遺伝アルゴリズムに入力して、該一群のクラスタから一群の候補遺伝子を選択するステップと、
を方法が提供される。
【００１０】
該方法は、クラスタ化計算による選択と進化計算による選択との間のハイブリッドに関するものである。このハイブリッドは、進化クラスタ化アルゴリズム（ＥＣＡ）とも称される。これにより、クラスタ化方法及び進化的方法の強さを組み合わせて、医療診断のための殆どの情報を含むのに適うような候補遺伝子の検索を促進し、これにより、特定の条件下で共制御（co-regulated）遺伝子及び共発現（co-expressed）遺伝子を見つける検索を改善する効果的な方法が提供される。これにより、試験サンプルを罹病した及び正常な類に分類するために使用することが可能な代替的及び改善されたアルゴリズムが提供される。
【００１１】
実施例において、上記クラスタ化アルゴリズムは距離尺度（distance measure）として相互依存冗長尺度を使用する。この距離尺度は、クラスタ内の遺伝子のバイアスされた初期分布から生じる制限に関する問題等の、例えばユークリッド／ピアソン的距離尺度のような伝統的な距離尺度の制限及び問題の幾つかを満足させることが分かった。
【００１２】
実施例において、一群の個体が遺伝アルゴリズムに入力され、その場合において、各個体は一群の個体遺伝子を有し、該一群の個体遺伝子は、遺伝子データからの対応する遺伝子をインデックスに割り当てると共に、各インデックスにおける値を当該遺伝子が割り当てられたクラスタに割り当てることにより発生される。このように、個体遺伝子は遺伝アルゴリズムの伝統的遺伝子の拡張である。何故なら、クラスタの層が遺伝子に追加されているからである。
【００１３】
実施例において、最高の多重相互依存冗長度の概念が、クラスタの再割り当て、適応度、突然変異及び候補選択の評価のために使用される。遺伝アルゴリズムの種々の要素を最高の多重相互依存冗長度の概念に基づかせることは非常に強力な概念であることが分かった。
【００１４】
本発明の第２態様によれば、コンピュータ上で使用された場合、システムに本発明の第１態様の方法を実行させるコンピュータプログラム製品が提供される。
【００１５】
本発明の第３態様によれば、遺伝子の集合から一群の候補遺伝子を選択するシステムであって、
−  一群の遺伝子データを入力し、
−  前記一群の遺伝子データをクラスタ化アルゴリズムの使用により同様のプロファイルを持つ一群のクラスタにクラスタ化し、
−  前記一群のクラスタを遺伝アルゴリズムにより進化させて、該一群のクラスタから一群の候補遺伝子を選択する、
ように構成された計算ユニットを有するシステムが提供される。
【００１６】
概して、本発明の種々の態様は、本発明の範囲内で可能な如何なる方法によっても組み合わせ及び結合することができる。本発明の上記及び他の態様、フィーチャ及び／又は利点は後述する実施例から明らかとなり斯かる実施例を参照して解説されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、進化クラスタ化アルゴリズム（ＥＣＡ）の全体のフローチャートを示す。
【図２】図２は、突然変異処理のフローチャートを概略示す。
【図３】図３は、次の世代のための個体を選択するために使用されるルーレット盤の一実施例を概略図示する。
【図４】図４のＡ〜Ｃは複数のサンプルに関する遺伝子発現値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の実施例を、図面を参照して例示としてのみ説明する。
【００１９】
以下においては、オリゴヌクレオチド・マイクロアレイ・データから得られる遺伝子発現に関連して実施例を説明する。しかしながら、本説明を如何なるタイプの実験から得られる遺伝子発現に一般化することも、当業者の能力の範囲内である。実施例において、当該遺伝子データは、ＤＮＡ型アレイ、差異的ＤＮＡメチル化アレイ、クロマチン免疫沈降オン・チップ（ＣｈＩＰ）又はメチル化及び遺伝子番号変化等のマイクロアレイデータ一般から得ることができる。
【００２０】
最初に本発明を図１〜３に関連して全体的レベルで説明し、２番目に本発明が遺伝子データに適用された実施例が提示される。
【００２１】
マイクロアレイにおける遺伝子発現値は、典型的には、連続的であり、情報尺度を計算するためには適切な区間に離散化される必要がある。通常、データは測定誤差又は値の不正確な入力によるノイズを含んでいる。ノイズは、離散化結果において多数の区間を生成し得る。より多くの区間は、情報の一層大きな損失につながるので、データの離散化においては斯かる問題を考慮に入れる必要がある。
【００２２】
一実施例においては、連続的データを離散化するために、最適クラス依存離散化（ＯＣＤＤ）アルゴリズムが使用される。というのは、該アルゴリズムは略全体的な最適な解を与えるからである。ＯＣＤＤアルゴリズムは、Wong他による"A global optimal algorithm for class dependent discretization of continuous data, Intelligent Data Analysis 8(2), p 151 - 170, 2004"に公開されている。ＯＣＤＤは、クラスと遺伝子発現データとの間の相互依存性を考慮に入れ、情報損失を最少化する。クラスは、各サンプルが属するカテゴリ（種類）と定義される。この前後関係においては、２つのクラス、即ち正常及び罹病が存在する。実データを扱いながら問題を回避するために、当該データの平滑化及び例えばカイ二乗検定等の統計的検定が実行される。平滑化は、離散化を実行する前にノイズを除去するために実施され、カイ二乗検定は区間の数を低減するために実施される。上記平滑化、カイ二乗検定及び使用されるパラメータは、本質的に、前記ＯＣＤＤアルゴリズムに記載されるものと同様である。
【００２３】
図１は、本発明の一実施例の全体的フローチャートを示す。本発明の実施例の全体的アルゴリズムは、進化クラスタ化アルゴリズム（ＥＣＡ）と称される。ＥＣＡにおいては、一群の遺伝子データ１０が、更なる処理のために入力される。
【００２４】
前処理ステップとして、疾病類及び非疾病又は正常類に対して類似している遺伝子発現データは、遺伝子発現の数を低減するために削除される。
【００２５】
ステップ１：第１世代が取得される。
【００２６】
第１世代は、前記一群の遺伝子発現データを、クラスタ化アルゴリズムの使用により同様の発現プロファイルを持つ一群のクラスタに配列することにより取得される。
【００２７】
一実施例において、上記クラスタ化アルゴリズムは、距離尺度（distance measure）として相互依存冗長尺度を使用する。好適なクラスタ・アルゴリズムの一例として、Ａｕ他により"Attribute Clustering for Grouping, Selection and Classification of Gene Expression Data", IEEE/ACM Transactions on Computational and Bioinformatics 2(2): p 83 - 101, 2005に公開された相互情報によるクラスタ化モデル（ＣＭＩ）が使用される。階層、収縮重心等の他のアルゴリズムも使用することができる。
【００２８】
使用されている遺伝距離尺度は、相互依存冗長尺度と称される情報理論的尺度である。この尺度は、遺伝子間の相互依存性を考慮に入れる。ｎ個の属性を有する、２つの遺伝子ｘ及びｙの間の相互依存冗長尺度は、
【数１】
0005674679.tif 000002
により与えられ、ここで、Ｍ(x: y)は相互情報であり、Ｅ(x: y)は結合エントロピであり、ｇはｘの区間の数であり、ｈはｙの区間の数であり、νｋはｘのｋ番目の区間であり、νｌはｙのｌ番目の区間であり、Ｐ(νｋ∧νｌ)は区間νｋ及びνｌで遺伝子値が生じる確率であり、Ｐ(νｋ)は区間νｋ内で値が生じる確率であり、Ｐ(νｌ)は区間νｌ内で値が生じる確率である。
【００２９】
相互情報は、例えばｘ及びｙ等の２つの遺伝子の相互依存性に関する知識を提供するが、該相互情報の値は、可能性のある遺伝子発現値の数と共に増加する。したがって、遺伝子間の正しい距離尺度を見つけるためには、相互情報は上記エントロピ尺度により正規化される。この正規化された情報尺度は、相互依存冗長（ＩＲ(x: y)）尺度と呼ばれる。該尺度は上記式に示したように計算される。該尺度は、２つの遺伝子の間の依存性からの逸脱の程度を反映する。
【００３０】
前記ＣＭＩから、第１群のクラスタが取得され、これらクラスタは候補遺伝子を選択するための遺伝計算に伝達される。
【００３１】
先に進む前に、２つの追加の概念が定義される。第１に、所謂、多重相互依存冗長度（ＭＩＲ）が定義される。遺伝子(x)のＭＩＲは、同一のクラスタに属する全ての他の遺伝子に対する自身のＩＲ尺度の和として定義される：
【数２】
0005674679.tif 000003
ここで、ｙはｘと同一のクラスタ内の遺伝子を表す。
【００３２】
第２に、クラスタのモード（Ｍ）が、最高のＭＩＲを持つクラスタ内の遺伝子として定義される。
【００３３】
前記一群のクラスタは、該一群のクラスタから一群の候補遺伝子を見つけるために、遺伝アルゴリズム１１に入力される。
【００３４】
一実施例において、前記クラスタに基づいて一群の個体が生成され、上記遺伝アルゴリズムに入力されるのは、これら個体である。各個体は数のアレイとして表され、該アレイの各インデックスは前記遺伝子発現データからの対応する遺伝子を表す。各インデックスにおける値は、これが属するクラスタを表す。
【００３５】
一群の固有の遺伝子は、第１世代においては、ランダムに選択され、各クラスタに対するモードとして割り当てられる。固有の遺伝子の数は、クラスタの数と等しくなるように設定される。この場合、残りの遺伝子は、クラスタに対して、各クラスタの対応するモードに対する最高のＩＲ尺度に基づいて割り当てられる。当該個体群における他の個体も、同様の方法で生成される。個体における遺伝子の全数は、一定であり、如何なる他の個体とも同じ値を有する。このようにして、クラスタ内に異なるタイプの遺伝子分布を持つ多様な群の個体が発生される。個体群のサイズは、個体群のサイズの影響についでの研究に基づいて、３００となるように最適化される。
【００３６】
ステップ２：適応度及びモードの計算
【００３７】
第２のステップ２、即ち第１の反復又は進化においては、クラスタのモード及び適応度が各個体に対して計算される。最高の適合値を持つ個体は、当該個体群における最も適合する個体である。個体の適応度は、全数のクラスタの多重相互依存尺度の和である。該適応度は：
【数３】
0005674679.tif 000004
と定義され、ここで、Ｆは個体の適応度であり、ｉはクラスタ番号を示し、Ｒｉはクラスタｉのモードの多重相互依存冗長尺度である。
【００３８】
ステップ３：クラスタの割り当て
【００３９】
クラスタの割り当ては、クラスタ割当オペレータの使用に基づくものである。該クラスタ割当においては、各クラスタのモード（Ｍ）が識別される。他の遺伝子は、クラスタモードに対して一層高いＩＲ、即ちＩＲ（ｘ：Ｍｋ）（ここで、Ｍｋはｋ番目のクラスタのモードである）を持つ各クラスタに割り当てられる。
【００４０】
ステップ４：確率的突然変異オペレータ
【００４１】
突然変異率は、ユーザにより定義される入力である。より良好に適合する個体の損失を回避すると共に当該遺伝アルゴリズムの効率を高めるために、当該個体群の最良の５％が保持される。個体の残りの９５％は、突然変異のために確率的に選択される。突然変異のための個体を選択するために、ランダム数が発生される。該ランダム数が突然変異率より小さい場合、全個体群から或る個体が突然変異のために選択される。該選択された個体に関し、少なくとも５つの遺伝子を持つクラスタにおいて、同じ個体の他のクラスタへ献ずるために最小のＭＩＲ尺度を持つ遺伝子が選択される。クラスタのモードに対する当該遺伝子のＩＲの値の相対分布が、ルーレット盤（roulette wheel）を構築するために使用される。この遺伝子が移転されるクラスタが、ルーレット盤による選択を用いて確率的に選択される。クラスタの新しいモード及び個体の適応度が計算される。全てのクラスタが突然変異を受けたら、突然変異された個体が形成される。かくして、新しい個体群は、該個体群の最良の５％、突然変異された個体及び突然変異されない個体からなる。突然変異されない個体は、当該個体群における一層低い適合値を持つソートされた個体群から取り出される。これは、個体群の最良の５％の選択によるバイアスを取り除き、早計な収束を回避し、多様性をもたらし、より悪い個体が進化するのを可能にするために実施された。突然変異率の影響を分析した後（データは示されない）、確率的突然変異率は０.１となるように最適化された。
【００４２】
突然変異の処理が、図２のフローチャートに概略示されている。当該個体群は、第１ステップ２０として、Ｍ大であると設定される。突然変異率は例えば０.１であると設定され（２１）、突然変異されるべき個体はＭ'として見つけられる。最小のＭＩＲを持つ遺伝子が、突然変異された個体の各クラスタ内で見つけられる（２２）。これらの遺伝子は、ルーレット盤方法の使用により他のクラスタに確率的に移転される（２３）。最後に、次の世代のための新しい個体２４は、上記の突然変異されない個体及び突然変異された個体である。
【００４３】
ステップ５：選択
【００４４】
次の世代のための全個体を選択するために、ルーレット盤選択方法が使用される。該方法は、遺伝アルゴリズムにおいて使用される良く知られた選択方法である。ルーレット盤は、各個体の相対的適応度（個々の適応度と全適応度との比）から構築される。ルーレット盤は、該ルーレット盤上で各個体により占有される面積が該個体の相対的適応度に比例するような円グラフ（パイチャート）の形で表される。相対的適応度の和（Ｓ）が計算される。０とＳとの区間内のランダム数が発生される。個体群が走査され、対応する相対的適応度の値が総和される。該和が上記の発生されたランダム数より大きい場合、対応する個体が選択される。より良好な適合値を持つ個体は当該円グラフにおいて一層大きな面積を占めるので、該個体を選択する確率も一層高くなる。
【００４５】
上記選択処理が、３つの個体で例示された図３のチャートに概略示されている。最も適合する個体３０には当該ルーレット盤において最大の占有率が付与され、最も弱い個体３２には当該選択において最小の占有率が付与される。残りの個体３１は、これらの個体の相対的適応度に比例する占有率となる。選択点３４が、突然変異のための個体を見つけるために設定される。
【００４６】
ステップ６：個体の適応度を評価する
【００４７】
１０個の連続する世代に対する平均適応度の変化が評価される。該平均適応度の変化が２％未満なら、当該アルゴリズムは終了される（７）。そうでない場合、新しい世代が生成される（８）。一例として、ｎ番目の世代においては、（ｎ−ｉ）番目の世代の平均適応度と（ｎ−１０）番目の世代の平均適応度との間の百分率差が計算される（ここで、ｉは０から９まで変化する）。これらの１０個の差の全てが２％未満なら、当該プログラムの実行は終了され、それ以外の場合は、次の世代に進む。
【００４８】
７：候補遺伝子
【００４９】
最高の適応度を持つ個体が選択され、この個体の遺伝子が候補遺伝子となる。
【実施例１】
【００５０】
２ＧＢのＲＡＭを備える３ＧＨｚのデュアルコア・インテル・ジーオン・プロセッサ上で試験が実施された。全体のワークは、ジャバ・バージョン1.6.0で実施化された。該ワークは、３つの区分、即ち離散化、冗長度の計算及びＥＣＡに分割された。７１２９の遺伝子及び３０のサンプルの群に対する離散化のために掛かる時間は、０.６４６９分であり、生成される区間の合計数は５５３３７である。同一のデータ群（データセット）に対して、冗長度の計算は１３６３.３９９７分掛かり、ＥＣＡの１つのシミュレーションは４８.６１５３分掛かる。平衡発生（equilibrium generation）は１２と１４との間の範囲である。同一のデータ群に対して、ＣＭＩの１つのシミュレーションは０.７０６８分掛かり、収束のためには２ないし４の反復を要する。そして、１００００反復に対するｋ平均法の１つのシミュレーションは７０.５６分掛かる。より大きな数の反復に対しては、ｋ平均法は２回以上の解の反復を示したが、これは、該解が統計的に最適な解でありそうなことを意味する。
【００５１】
合成データ：
【００５２】
クラスタ化データに対する当該アルゴリズムの効率を解析するために、最初に２つの異なる合成データに対する研究が行われた。各データ群は、２００のサンプル及び２０の遺伝子を含むものである。発現値は、当該ドメインが２つの区間に分割されるように０.０から１.０まで変化する。これら２つの区間は、［０.０，０.５］及び［０.５，１.０］である。第１のデータ群は、以下に定義されるように２つのクラスタ及び３つのクラスからなる。遺伝子の値の範囲Ｇ１及びＧ２が、他の遺伝子の値を定義するために使用される。Ｇ１は、Ｇ３ないしＧ６がＧ１と同一の範囲内であり、Ｇ７ないしＧ１１が反対の範囲内となるように遺伝子Ｇ３ないしＧ１１の値を定義する。同様にして、Ｇ２はＧ１２ないしＧ２０の値を定義する。Ｇ１２ないしＧ１５の値はＧ２と同一の範囲内であり、Ｇ１６ないしＧ２０のものは反対の範囲内となる。Ｇ１及びＧ２が０.０から０.５までの範囲であるサンプルは、クラスのラベル１が割り当てられる。クラスのラベル２は、Ｇ１及びＧ２が０.５から１.０までの範囲であるサンプルに割り当てられ、当該サンプルの残りにはクラス・ラベル３が割り当てられる。第２のデータ群は４つのクラスタ及び５つのクラスからなり、発現値は０から１０まで変化する。該第２データ群を発生するように構成された方法は、第１データ群に関して説明した方法と同様のものである。当該合成データ群を離散化するために、等幅離散化が用いられる。これら両データ群に関して、全てのシミュレーションに対しＥＣＡはクラスタ内の遺伝子分布を正しく識別することが分かる。しかしながら、ＣＭＩは平均で６５％の遺伝子を正しくグループ化することができる（示されていない）。
【００５３】
実データ：
【００５４】
ＥＣＡの性能が３つの遺伝子発現データ群、即ち、
−  Tsutusmi, S.他により(2002) Global gene expression analysis of gastric cancer by oligonucleotide microarrays. Cancer res 1; 62(1): 233 - 40に公開された胃ガンデータ群；
−  Alon, U.他により(1999) Broad Patterns of Gene Expression Revealed by Clustering Analysis of Tumor and Normal Colon Tissues Probed by Oligonucleotide Arrays, Proc. Nat'l Academy of Science of the United States of America 96(12): 6745 - 6750に公開された結腸ガンデータ群；及び
−  MacDonald, T.J.他により(2001) Expression Profiling of Medulloblastoma: PDGFRA and the RAS/MAPK pathway as therapeutic targets for metastatic disease. Nat Genet. Oct; 29(2): 143 - 52に公開された脳腫瘍［髄芽腫転移］データ群、
に対して評価される。
【００５５】
全データ群の説明が表１に示される。
【表１】
0005674679.tif 000005
【００５６】
各データ群に対して、ＣＭＩの５０のシミュレーションが実行される。これらのシミュレーションの各々に対して、クラスタの数は２から２０まで変化する。最高の個体適応度を示すクラスタが、当該シミュレーションに対する、当該データ群における最適なクラスタとなる。最小の値が選択される。何故なら、クラスタの数は、データを分散させるので大きくすべきではないからである。５０のシミュレーションにおける最適クラスタ数の最小値が、当該データ群に対する最適クラスタ数として使用される。全てのアルゴリズムに関して、全シミュレーションに対し最小のクラスタ数が使用される。
【００５７】
ＥＣＡが、ｋ平均法及びＣＭＩと比較される。比較の目的で、当該アルゴリズムの各々に対する１０のシミュレーションが考察される。各シミュレーションに対して、一群のクラスタが取得される。分類研究のために、各クラスタから候補遺伝子と呼ばれる遺伝子の部分集合が選択される。これらの候補遺伝子は、最上位の遺伝子からなる。ＥＣＡ及びＣＭＩの場合、最上位遺伝子は、クラスタにおいて最高の多重冗長尺度を持つ遺伝子と定義される。ｋ平均法の場合、これらは、当該クラスタの平均から最小のユークリッド距離を持つ遺伝子である。分類精度計算のために、リーブ・ワン・アウト交差検定（ＬＯＯＣＶ）が使用される。ＬＯＯＣＶの場合、１つのサンプルが試験群として選択され、残りのサンプルは訓練群として選択される。該処理は、全てのサンプルを通して繰り返される。分類精度は、罹病した又は正常の何れかとして正しく予測された試験サンプルのパーセンテージとして計算される。より高い分類精度の値は、殆どの診断情報を含むような重要な遺伝子を選択する場合の当該アルゴリズムの一層良好な効率を表す。
【００５８】
［実施例Ａ］胃ガンデータ群（GDS1210）の研究
【００５９】
最上位遺伝子の平均分類精度が、当該アルゴリズムの各々に関して計算される。表２は胃ガンデータ群の一例を示す（他のデータは示されていない）。ＣＭＩ及びｋ平均法に対するＥＣＡの分類精度の百分率差が計算される。これは、他のアルゴリズムに対するＥＣＡの改善度を表している。
【表２】
0005674679.tif 000006
【００６０】
胃ガンデータ群の最上位胃に関するＣＭＩ及びｋ平均法に対するＥＣＡの改善度が、表３に示されている。これら研究は、ＥＣＡがＣＭＩ及びｋ平均法より優れていることを示している。
【表３】
0005674679.tif 000007
【００６１】
クラスタ内の遺伝子分布に関する初期条件の異なる群に対応して、複数のシミュレーションが考察される。胃ガンデータ群に対するアルゴリズムの総括的分析は、試験サンプルの一層高い分類精度をもたらすような最上位遺伝子を含むシミュレーションの数は、ＣＭＩ及びｋ平均法よりもＥＣＡにおいて一層多いことを示している。このことは、ＥＣＡにおいては、他のものよりも正しい候補遺伝子を見つける一層高い確率が存在することを証明している。ＥＣＡ、ＣＭＩ及びｋ平均法の１０個のシミュレーションに関する分類精度の個々の性能が、表４に示されている。該表は、対応する分類精度を示す、異なる数の最上位遺伝子に対するシミュレーションの数を示している。
【表４】
0005674679.tif 000008
【００６２】
分類遺伝子の分析
【００６３】
更に、遺伝子部分集合に対してC4.5により構築された決定木（デシジョンツリー）を研究すると、９６.６７％の分類精度を示すケースは、TGIF1又は、幾つかのケースでは、D26129の何れかである１つのみの遺伝子を使用することが分かる。文献の調査は、TGIF1は重要な役割を果たし、TGIF1の一層低い発現はリンパ節の転移と重大に相関関係があり、ＭＭＰ９及びＶＥＧＦタンパク質のダウン・レギュレーションを介して胃ガンの侵入及び転移を示し得ることを示している。D26129も、胃ガンの進行に関連する重要な遺伝子である。ＣＭＩ及びｋ平均法による上述した２つの分類遺伝子のランク付けに関する簡単な研究が実施される。上記２つの遺伝子TGIF1及びD26129は、ｋ平均法によっては非常に低くランク付けされ、ＣＭＩによっても比較的低くランク付けされる。表５において、各アルゴリズムの名前の下の数は、３つの異なるシミュレーションに関する各クラスタ（角括弧内に示される）内の対応する遺伝子の位置を示す。ＥＣＡの10個の全てのシミュレーションは、最上位の３つの遺伝子に対して９６.６７％の分類精度を示した。遺伝子TGIF1及びD26129の何れも９６.６７％の精度値しか達成することができないので、これら遺伝子の何れも最上位の３つの遺伝子のうちにランク付けされねばならない。したがって、ＥＣＡは、特定の疾病に関する重要な診断的情報を含む遺伝子を取り出す場合に効果的であると結論することができる。
【表５】
0005674679.tif 000009
【００６４】
上述した全てのシミュレーションにわたり分類精度の閾レベルを超えて見つけられる共通の遺伝子に基づいて３つのアルゴリズムの比較研究が実施された。表６に示されるような、最上位の、即ち上位１、２及び３の遺伝子の群が、各シミュレーションから選択される。これらの全てのシミュレーションにおいて繰り返し生じる遺伝子は、共通遺伝子と呼ばれる。
【表６】
0005674679.tif 000010
【００６５】
最上位の６つにランク付けされる遺伝子に対してＥＣＡを用いて得られる最上位の共通遺伝子のリストが、表７ａに示される。表７ｂは、C4.5決定木により実施される分類処理において重要であると見いだされる遺伝子、即ち上記決定木を構築する際にノードとして使用される遺伝子を含む。
【表７ａ】
0005674679.tif 000011
【表７ｂ】
0005674679.tif 000012
【００６６】
代表的遺伝子に基づくアルゴリズムの比較
【００６７】
共発現又は共制御された一群の遺伝子の発現レベルの集合的傾向は、コヒーレンスの度合いにより示される。遺伝子の間の類似性は遺伝的距離のみを考慮に入れる一方、相互依存性は遺伝子の間の負及び正の相関関係並びに遺伝的距離を考慮する。一対の遺伝子に対しては、コヒーレンスの度合いは、類似性又は正／負の相関関係の点で測定することができる。コヒーレンスのパターンを研究するために、３つの代表的遺伝子が最上位の５つの遺伝子から選択され、これらのパターンが各アルゴリズムに関して異なるクラスタにわたって調査される。ＥＣＡ及びＣＭＩの場合、異なるクラスタ内の最も重要な遺伝子が、それらの多重相互依存性尺度の大きさに基づいて選択される。ｋ平均法の場合、クラスタの平均から一層短い距離を示す遺伝子が選択される。ＥＣＡ、ＣＭＩ及びｋ平均法のアルゴリズムに対する、これら遺伝子のコヒーレンスのパターンが、ランダムに選択された単一のシミュレーションに関して、図４Ａ〜４Ｃに各々示されている。該図は、水平軸に沿ってプロットされた複数のサンプルに対して、垂直軸に沿って遺伝子の発現値を示す。
【００６８】
図４Ａは、胃ガンデータ群に関するＥＣＡアルゴリズムの場合の単一シミュレーションの、クラスタ１に関する３つの代表的遺伝子の発現パターンのノーマル線図を示す。図４Ｂは、胃ガンデータ群に関するＣＭＩアルゴリズムの場合の単一シミュレーションの、クラスタ２に関する３つの代表的遺伝子の発現パターンのノーマル線図を示す。図４Ｃは、胃ガンデータ群に関するｋ平均法アルゴリズムの場合の単一シミュレーションの、クラスタ３に関する３つの代表的遺伝子の発現パターンのノーマル線図を示す。
【００６９】
ＥＣＡにおいては、HMHA1及びTGIF1遺伝子は、これらの間の大きな遺伝的距離により類似してはいないが、全体の発現プロファイル形状において負の相関関係を示すから、相互依存的である。HMHA1及びC21orf33遺伝子は、発現プロファイルが類似しており、当該プロファイルの幾つかの領域において負の相関関係を示す。TGIF1及びC21orf33遺伝子は、発現プロファイル形状にわたって正及び負の相関関係の領域を示している。ＣＭＩも、HMHA1及びCUL5遺伝子により示されるように大きな倍率により遺伝子は類似していないが、相互依存性を示す。HMHA1及びCOPS5遺伝子は類似しており、当該プロファイルにわたり負的に及び正的に相関された領域を示す。しかしながら、ｋ平均法アルゴリズムは、類似性の点でのみコヒーレンスを示すが、全ての遺伝子に対して倍率又は相互依存性は考慮していない。
【００７０】
このように、ユークリッド距離は遺伝子をクラスタ化するために類似性のみを考慮に入れるが、相互依存冗長尺度は遺伝子を類似性及び相互依存性の両方を用いてクラスタ化することができると結論することができる。また、ＥＣＡは、プロファイル形状にまたがる小さな領域とは反して、全体の発現プロファイル形状において相関性を示す遺伝子をグループ化することができることが分かる。また、ＥＣＡは、ＣＭＩと比較して、より大きな倍率を考慮に入れる。これらの結果から、ＥＣＡはＣＭＩと較べて、遺伝子をクラスタ化する場合に一層コヒーレントであると結論することができる。このことは、ＥＣＡ及びＣＭＩはクラスタ化のために同じ距離尺度、即ち相互依存冗長尺度を使用するが、ＥＣＡは遺伝子をクラスタ化するために、ＣＭＩと比較して相互依存尺度を一層良好に使用することを示す。
【００７１】
クラスタにおける遺伝子分布の検討
【００７２】
ＥＣＡにより形成されるクラスタは、大凡同数の遺伝子からなる（データは示されない）。このように、異なるクラスタの遺伝子は、大凡、均一に分布される。上位にランクされる、したがって選択される遺伝子は、重要な且つ洞察に満ちた情報を提供する。これは、これら上位にランクする遺伝子が使用される場合、試験サンプルを分類する際の高い精度レベルにより明らかである。このように、ＥＣＡにより得られるクラスタの構成は、上位の遺伝子を選択するのに一層信頼のあるものである。しかしながら、ｋ平均法アルゴリズムは、最も偏った分布を生成する（データは示されない）。ｋ平均法アルゴリズムにおける遺伝子分布は、殆どのケースにおいて高度に偏ったものである。ｋ平均法アルゴリズムと比較して、ＣＭＩは、より良好な性能、即ち多くのケースにおいて均一な分布を示す（データは示されない）。しかしながら、ＥＣＡと比較すると劣ったものである。
【００７３】
ＥＣＡ、ＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムの各々に関するランダムに選択された単一のシミュレーションは、異なるクラスタにおける遺伝子分布の下記のような傾向を示す。一例として、ＥＣＡは７１２９の遺伝子を１９１１、１７８６、１６２８及び１８０４のような４つの異なるクラスタに分割したが、ＣＭＩは同じ数の遺伝子を２２８０、２７５２、１７６７及び３３１の遺伝子にクラスタ化した。ｋ平均法アルゴリズムにおける偏った分布の一例は、４５８、２５、６５４５及び１０１の遺伝子のようなものである。遺伝子分布も、ＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムよりも一層良好なＥＣＡの性能を示している。
【００７４】
［実施例Ｂ］結腸ガンデータ群についての簡単な検討
【００７５】
比較の目的で、前記アルゴリズムの各々に関して、前記10個のシミュレーションの全てに対して試験サンプルの平均分類精度が計算される。表８はクラスタ当たりの上位５つの遺伝子に関する結腸ガンデータ群の一事例を示す（他のデータは示されていない）。
【表８】
0005674679.tif 000013
【００７６】
分類精度の点でのＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムに対するＥＣＡの改善を検討するために、分類精度のパーセンテージ差が計算される。当該結腸ガンデータ群の場合のクラスタ当たりの幾つかの上位ランク遺伝子に関するＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムに対するＥＣＡの改善度が、表９に示されている。該比較研究は、ＥＣＡがＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムを凌駕することを示している。
【００７７】
この結腸ガンデータ群は、Ａｕ他（２００５）により子細に研究されている。ここでは、発明者の狙いは、上位にランクする遺伝子により予測される試験サンプルの分類精度の分析に限定される。従って、発明者は、異なるクラスタにおける遺伝子分布及び代表的遺伝子の分析を意図的に省略した。
【表９】
0005674679.tif 000014
【００７８】
［実施例Ｃ］脳腫瘍（髄芽腫転移）データ群（GDS232）に関する簡単な検討
【００７９】
前記アルゴリズムの各々に対して、前記10個の全シミュレーションに関する平均分類精度が計算される。表１０は、クラスタ当たり上位の１つの遺伝子に関する髄芽腫転移データ群の一事例を示す。この場合においても、試験サンプルの分類精度のパーセンテージ差の点で、他の２つのアルゴリズムに対するＥＣＡの一層良好な性能を見いだしている。当該検討は、ＥＣＡの性能はＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムを凌駕することを示している。
【表１０】
0005674679.tif 000015
【００８０】
胃ガンデータ群に関対してクラスタ当たり数個の上位ランク遺伝子により予測される分類精度の点でのＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムに対するＥＣＡのパーセンテージの改善が、表１１に示されている。
【表１１】
0005674679.tif 000016
【００８１】
脳腫瘍データ群に対する上述した３つのアルゴリズムの包括的分析は、より高い分類精度を生じるような上位ランク遺伝子を含むシミュレーションの数がＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムにおけるよりもＥＣＡにおいて一層多いことを示している。このことは、ＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムのものよりも、ＥＣＡにおいて正しい候補遺伝子を見つける一層高い確率が存在することを証明している（データは示されない）。ここでは、ＣＭＩ及びｋ平均法アルゴリズムに対する本アルゴリズムの優れた性能のみを証明することに焦点を合わせた。ＥＣＡは、概して、小さな群の選択された遺伝子による試験サンプルの分類精度の点で他の２つのアルゴリズムを凌駕していることが分かる。胃ガン、結腸ガン及び脳腫瘍データ群に対して、分類精度は、ＥＣＡにより選択された上位ランク遺伝子に関し分類精度が計算される。上位ランク遺伝子のみが使用される場合、特定の分類精度は、全データ群が分類精度を見つけるために使用される場合よりも高い。一例として、胃ガンデータ群の場合、全データ分が考慮に入れられた場合、分類精度は９３.３３％となる。しかしながら、重要な分類遺伝子（TGIF1／D26129）の何れか１つのみが使用される場合、分類精度は９６.６７％となる。このことは、ＥＣＡは、次いで機能及び診断特性に関して調査され得るような分類遺伝子を適切且つ効果的に選択することができることを示している。
【００８２】
ＥＣＡの本方式は、３階級のマイクロアレイ遺伝子発現データの分析に拡張することができる。例えば、ガン・マイクロアレイ・データは正常な、緩やかに進展した、及び完全に罹病した組織のサンプルを有し得る。この目的のために、前記離散化アルゴリズムは変更される。この離散化処理、特に当該データの平滑化は、マシン学習アルゴリズムを一層効果的にさせるために更に改善することができる。原理的に、ＥＣＡを一層効果的にさせるために、他の可能な突然変異オペレータを調査することができる。
【００８３】
本発明は、ハードウェア、ソフトウェア、ファームウエア又はこれらの何れかの組み合わせを含む如何なる好適な形態でも実施化することができる。本発明又は本発明の幾つかのフィーチャは、１以上のデータプロセッサ及び／又はデジタル信号プロセッサ上で動作するコンピュータソフトウェアとして実施化することができる。本発明の実施例の構成要素及び部品は、物理的に、機能的に及び論理的に如何なる好適な態様でも実施化することができる。確かなことに、当該機能は、単一ユニット内で、複数のユニット内で又は他の機能ユニットの一部として実施化することができる。そのようであるので、本発明は、単一のユニット内で実施化することができるか、又は異なるユニット及びプロセッサの間で物理的に及び機能的に分散させることができる。
【００８４】
以上、本発明を特定の実施例に関連して説明したが、これは、ここに説明した特定の形態に限定されることを意図するものではない。むしろ、本発明の範囲は、添付請求項によってのみ限定されるものである。なお、請求項において、"有する"なる用語は他の構成要素又はステップの存在を排除するものではない。更に、個々のフィーチャは異なる請求項に含まれるかもしれないが、これらは有利に組み合わせることができ、異なる請求項に含まれることは、これらフィーチャの組み合わせが可能ではない及び／又は有利でないということを意味するものではない。更に、単数形は複数形を排除するものではない。従って、単数形、"第１の"、"第２の"等の参照は、複数を排除するものではない。更に、請求項における符号は、範囲を限定するものと見なしてはならない。
【図１】
0005674679.tif 000017
【図２】
0005674679.tif 000018
【図３】
0005674679.tif 000019
【図４Ａ】
0005674679.tif 000020
【図４Ｂ】
0005674679.tif 000021
【図４Ｃ】
0005674679.tif 000022