(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤を含む癌性または前癌性疾患若しくは状態の治療における癌化学療法剤または放射線により病変細胞を殺す有効性を増大するための医薬組成物であって、当該治療が、
（ａ）治療学的に有効な量の、Ｇ１／Ｓ細胞周期チェックポイントを通過する細胞周期の進行を阻害することにより病変細胞の増殖を阻害し、Ｇ１期にある増殖型細胞の割合を増大するＴ型カルシウムチャネル阻害剤を、そのような治療を必要とする哺乳類に投与すること、および
（ｂ）続いて、ある期間の後に病変細胞を殺すために当該哺乳類に対して、少なくとも１つの癌化学療法剤の適用、放射線の適用、または少なくとも１つの癌化学療法剤および放射線の適用のその組み合わせを、実施し、ここでＴ型カルシウムチャネル阻害剤の投与によりＧ１／Ｓ細胞周期チェックポイントに蓄積した細胞がＧ１期を過ぎて進行していること
を含む医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物であって、当該癌性または前癌性疾患若しくは状態が、癌である医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の医薬組成物であって、当該癌性または前癌性疾患若しくは状態が腫瘍である医薬組成物。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬組成物であって、前記治療が更に、工程（ａ）および（ｂ）を更なる１以上の回数で繰り返すことを含む医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該癌性または前癌性疾患若しくは状態が、グリア芽細胞腫、黒色腫、膵臓癌、乳癌および結腸癌からなる群より選択される医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤が、ミベフラジル、エフォニジピン、エトスクシミド、スニチニブ、ＴＴＬ−１１７７またはニッケルを含む医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜６の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤がミベフラジルを含む医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜７の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該治療が、少なくとも１つの癌化学療法剤の適用を実施することを更に含む医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜８の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該治療が、放射線の適用を実施することを含む医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が細胞毒素である医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の医薬組成物であって、当該細胞毒素がアルキル化剤を含む医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１０に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が代謝拮抗物質および抗有糸分裂薬からなる群より選択される医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜９の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が、テモゾロミド、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イホスファミド、イリノテカン、トポテカン、メルファラン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンデシン、マイトマイシンCおよびその組み合わせからなる群より選択される医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が、テモゾロミドである医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が、カルボプラチンである医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が、ゲンシタビンである医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が、メルファランである医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が、イリノテカンである医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が、５−フルオロウラシルである医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載の医薬組成物であって、当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤が、ミベフラジルである医薬組成物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の医薬組成物であって、当該癌性または前癌性疾患若しくは状態が癌である医薬組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の医薬組成物であって、当該癌性または前癌性疾患若しくは状態が、グリア芽細胞腫、黒色腫、膵臓癌、乳癌および結腸癌からなる群より選択される医薬組成物。
【請求項２３】
請求項２０〜２２の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該治療が、少なくとも１つの癌化学療法剤の適用の実施を含む医薬組成物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤がテモゾロミドである医薬組成物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の医薬組成物であって、当該癌がグリア芽細胞種である医薬組成物。
【請求項２６】
請求項２４に記載の医薬組成物であって、当該癌が黒色腫である医薬組成物。
【請求項２７】
請求項２３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤がカルボプラチンである医薬組成物。
【請求項２８】
請求項２３に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤がゲンシタビンである医薬組成物。
【請求項２９】
請求項２８に記載の医薬組成物であって、当該癌が膵臓癌である医薬組成物。
【請求項３０】
請求項２８に記載の医薬組成物であって、当該癌が乳癌である医薬組成物。
【請求項３１】
請求項２７に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤がメルファランである医薬組成物。
【請求項３２】
請求項３１に記載の医薬組成物であって、当該癌が黒色腫である医薬組成物。
【請求項３３】
請求項２４に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤がイリノテカンである医薬組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の医薬組成物であって、当該癌が結腸癌である医薬組成物。
【請求項３５】
請求項２４に記載の医薬組成物であって、当該少なくとも１つの癌化学療法剤が５−フルオロウラシルである医薬組成物。
【請求項３６】
請求項３５に記載の医薬組成物であって、当該癌が結腸癌である医薬組成物。
【請求項３７】
請求項２０〜３６の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該治療が、放射線の適用との組み合わせにおけるミベフラジルの適用を含む医薬組成物。
【請求項３８】
請求項１〜３７の何れか１項に記載の医薬組成物であって、当該哺乳類がヒトである医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
従来の癌治療は、およそ病気に効くものではなく、深刻な有害な副作用を有する可能性がある。一つには、これは、殆どの化学療法剤の作用の細胞周期に特異的な機序に由来するものであり、それは細胞周期のあらゆる期を示す細胞の部分に対する効果を弱くする。
【０００２】
細胞周期は、分裂および複製を引き起こす細胞において生じる一連の事象である。真核細胞では、その周期は、２つの期、即ち、中間期と有糸分裂とに分けられる。細胞周期のこれらの２つの期を経る移行は、進行または増殖として知られる。中間期の間に、細胞は成長し、有糸分裂のために必要な栄養物を蓄積し、且つそのＤＮＡを複製する。有糸分裂の間に、細胞は、それ自身を２つの異なる娘細胞に分裂する。中間期は、３つの異なる期、即ち、Ｇａｐ１（Ｇ１）期、Ｓ期およびＧａｐ２（Ｇ２）期を含み、一方で有糸分裂は、２つの過程を含む。Ｇ１期は、細胞のサイズの増大、細胞の生合成活性の増大および後続工程におけるＤＮＡ複製のために必要な酵素の合成を含む。Ｓ期は、ＤＮＡ合成の開始と全染色体の複製とを含む。Ｇ２期は、細胞が有糸分裂に入るまで続き、有糸分裂のための微小管の生成を含むタンパク質合成を含む。有糸分裂は、細胞の染色体が２つの娘細胞の間で分配される過程と、起源細胞の細胞質が分配されて２つの異なる娘細胞を形成する細胞質分裂の過程とを含む。細胞周期はまた、一般的にＧ０と称される休止期を含む。種々の期の間の境界、例えば、Ｇ１期とＳ期との間の境界は、細胞周期チェックポイントと称される。
【０００３】
細胞周期の進行は、特定の細胞が、次の期に進行する前に、ある点、細胞チェックポインドで停止できるように阻害され得る。細胞周期チェックポイントは、細胞周期の異なる期の間に位置し、２つのチェックポイントがＧ１期とＳ期の間の境界面（Ｇ１／Ｓ）とＧ２期およびＭ期の間の境界面にある。細胞周期阻害剤は、細胞の進行が次の期に通過するのを止めることができ、例えば、細胞がＧ１／Ｓ細胞周期チェックポイントで阻害されると、その阻害剤が排除されるまで、細胞はＧ１期に留まることを強いられる。
【０００４】
個体における何れの特定の癌細胞個体群または腫瘍においても、細胞周期の長さは変化する。この可変性は、Ｇ０から起算したＧ１において費やす期間が異なるためであり、その一方で、Ｓ期の始まりから、Ｍ期の終わりまでの時間の長さは比較的に一定である。
【０００５】
従来の化学療法は、細胞周期のＳ期またはＭ期における事象を中断するのみであり、細胞周期の他の期にある細胞は、比較的に無傷のままにされる。例えば、アルキル化剤は、Ｓ期において作用し、一方で、微小管を安定化するおよび崩壊する作用物はＭ期において作用する。残念なことに、特定の細胞が特定の時期に細胞周期のＳ期またはＭ期にあるものではない。これを補うために、化学療法剤は、細胞周期の特定の期にある細胞に到達する機会を増やすために、長い期間に亘って繰り返し投与される必要がある。この繰り返し投与は、有害な作用物のより多くの投与量と対象における毒性の増大に繋がる。
【０００６】
化学療法薬の有効性を改善できるように、臨床的に関連する細胞の画分について、Ｇ１／Ｓ細胞周期チェックポイントで細胞周期を拘束するための治療法が望まれている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、哺乳動物の疾患または状態を治療するための方法であって、治療学的に有効な量のＴ型カルシウムチャネル阻害剤を投与し、細胞周期のＳ期、Ｇ２期およびＭ期を経る真核細胞の進行を効果的に遅くまたは停止し、Ｇ１期にある真核細胞の部分の割合を増大する工程と、ある期間に亘り当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤の投与を停止する工程と、および少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用およびその組み合わせからなる群より選択される適用を実施し、当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤の投与の停止の後に、細胞周期のＧ期を過ぎて進行する真核細胞の部分を殺す工程と、を含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、細胞周期を示す略図である。外側の輪は、中間期（Ｉ）および有糸分裂期（M）を含み、他の期との関連で有糸分裂の期間が誇張されている。内側の輪は、Ｇａｐ１期（Ｇ１）、Ｇａｐ２期（Ｇ２）および合成期を含む。Ｇａｐ０（Ｇ０）または休止期は示していない。
【図２】図２は、カルシウム流入を阻害する幾つかの化学物質の能力を、同じ化学物質の細胞増殖を阻害する能力と比較して示すグラスである。
【図３】図３は、細胞周期と細胞周期の工程において幾つかのカルシウムチャネル遮断剤が有する影響を示す略図である。
【図４】図４は、組み合わせ療法の間に測定されたデータを示すグラフである。
【図５】図５は、組み合わせ療法の間に測定されたデータを示すグラフである。
【定義】
【０００９】
本発明の説明および特許請求の範囲において、次の用語は以下に説明される定義に従って使用されるであろう。
【００１０】
ここにおいて使用されるとき、用語「治療」は、特定の疾病、疾患、障害または状態に関連する症状を予防、治癒、改善、軽減、抑制または軽減緩和／軽減予防するために治療を施すこと、および／または症状を予防または排除することを含む。例えば、癌の治療は、腫瘍の抑制または完全な成長の排除、腫瘍細胞の数の減少、腫瘍サイズの縮小、末梢器官／組織への腫瘍細胞浸潤の抑制、転移の抑制、並びに疾病に関連する１または１以上の症状のある程度の緩和を含む。癌の治療はまた、腫瘍細胞の病変を直接に減少する治療作用物の投与、または他の治療作用物、例えば、放射線および／または化学療法による治療に対する腫瘍細胞の感受性を高める治療作用物の投与を含む。ここにおいて使用されるとき、用語「治療」は、特定の疾病若しくは状態の予防、または特定の疾病若しくは状態に関連する症状の緩和、および／または症状の抑制若しくは排除を含む。
【００１１】
ここにおいて使用されるとき、用語「薬学的に許容さえる担体、媒体または希釈剤」は、何れかの標準的な薬学的担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、水、乳剤、例えば、水中油水乳剤若しくは油中水乳剤、および各種の湿潤剤を含む。当該用語はまた、米国連邦政府監督官庁により認可された何れかの医薬品またはヒトを含む動物において使用するための米国薬局方に記載された何れかの医薬品を含む。
【００１２】
用語「治療学的に有効な量」は、本発明の化合物が特定の疾患または状態を改善、弱力化、軽減または排除する量、または特定の疾患または状態の発現を予防または遅延する量を意味する。
【００１３】
「哺乳動物」により、全ての哺乳動物を指すことを意味し、例えば、ヒトおよびサルなどの霊長類などを含む。ここに含まれるその他の哺乳動物の例は、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、マウス、ラットおよびウマである。好ましくは、哺乳動物は、女性または男性のヒトである。
【００１４】
語句「前癌状態（pre-cancerous condition）」は、仮に治療されなければ、悪性になりそうであるが、悪性ではない成長をいう。「前癌状態」はまた、「前悪性状態」としても当業者に知られている。
【００１５】
「Ｔ型カルシウムチャネル遮断薬」が「Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤」としても知られることは当業者に理解されている。
【００１６】
ここで使用されるとき、用語「細胞周期阻害剤」は、細胞周期の１つの段階にある単数の細胞または複数の細胞が、進行によって細胞周期の次の段階に進行することを遅くまたは停止する能力のある化合物をいう。
【００１７】
ここにおいて使用されるとき、用語「細胞毒素」は、その化合物の影響を受ける細胞に対してネクローシスまたはアポトーシスを引き起こすことができる化合物をいう。
【発明の詳細な説明】
【００１８】
細胞周期の長さの変動は、主にＧ１期に留まる時間により決定される。このため、個体群中の何れの特定の細胞も、細胞が細胞周期のＳ期に入る前には、ある期間に亘りＧ１に属するものである。細胞周期チェックポイントを越えて連続する細胞周期を停止するためには、Ｔ型カルシウムチャネル阻害を含む細胞周期阻害剤が投与されてもよい。
【００１９】
先ず、細胞周期阻害剤が哺乳動物に対して細胞周期のＳ期、Ｇ２期およびＭ期を経る真核細胞の進行を効果的に遅くまたは停止するために治療学的に有効な量で投与されると、それにより、Ｇ１期とＳ期との間の細胞周期チェックポイント（Ｇ１／Ｓ）での真核細胞の部分の割合が増加する。哺乳動物はヒトであってもよい。この方法は、哺乳動物における癌および前癌状態、並びに癌性および前癌性の腫瘍を治療するために使用されてよい。
【００２０】
細胞周期阻害剤によって、個体群における非同期的に進行型または増殖型の癌細胞がＳ期に進行するための能力が停止されるために、細胞周期阻害の投与は、それらが細胞周期の中を進行したときに、それらをＧ１／Ｓに蓄積させる。細胞が細胞周期チェックポイントを通過してＧ期からＳ期に移行するためには、進行に必要な生化学的なカスケードを誘引するために、細胞は細胞内カルシウムの流入を必要とする。細胞外の培地からのカルシウムの除去は、各細胞の細胞周期移行を阻害する。この阻害は、Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤の投与を介して達成できる。適切なＴ型カルシウムチャネル阻害剤は、とりわけ、ミベフラジル（mibefradil）、エフォニジピン（efonidipine）、エトスクサミド（ethosuxamide）、スチニブ（sutinib）、TTL-1177（商標化合物、以下の参考文献に記載される；Gray, L.S., Perez-Reyes, E., Gomora, J.C., Haverstick, D.M., Shattock, M., McLatchie, L., Harper, J., Brooks, G., Heady, T., and MacDonald, T.L. (2004) Cell Calcium 36, 489-497）およびニッケルを含む。従って、各細胞は、それが細胞外カルシウムの存在中にある限りＧ１期を持続するが、カルシウムなしでＧ１／Ｓが達成されるときに、特定の場所に固定されるようになり、それによりＧ１／Ｓで細胞は同期化される。細胞へのカルシウム流入は、細胞周期を経る進行および移行のためには必須である。このことは更に以下の例１において記載される。
【００２１】
細胞周期阻害剤の投与は、Ｇ１／Ｓでの細胞の割合を増大する。この投与の後で、少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用またはその両方の適用が実施され、これらの適用は、細胞周期のＳ期にある細胞を殺すことを目的としている。化学療法剤は、癌化学療法薬、細胞毒素またはその組み合わせであってよい。細胞毒素はアルキル化剤であってよい。癌化学療法薬は、代謝拮抗物質または抗有糸分裂薬であってよく、および以下の例から選択されてもよい；テモゾラミド（temozolamide）(Temo)、５−フルオロウラシル、６−メカプトプリン（6-mecaptopurine）、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、ヒドロキシウレア、イホスファミド、イリノテカン、トポテカン、メトトレキサート（metotrexate）、ミトキサントロン、オキサリプラチン（oxaliplatin）、パクリタキセル、ドオセタキソール（doocetaxol）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン（vinorelbine）、ビンデシン、マイトマイシンＣおよびその組み合わせ。少なくとも１つの化学療法剤の適用は、放射線の適用前、適用後または適用中に投与されてもよい。放射線の適用は、少なくとも１つの化学療法剤の適用前、適用後または適用中に実施されてもよい。細胞周期阻害剤の最初の投与と細胞毒素との間の期間が、細胞周期のＧ１／Ｓでの細胞の蓄積を可能にする。この方法は、Ｓ期またはＭ期にある細胞の割合を増大し、それにより少なくとも１の化学療法剤の適用、放射線の適用またはその両方の適用の有効性を増大し、続いて、所定量の真核細胞を殺すために必要とされる毒素負荷を低減する。
【００２２】
細胞周期阻害剤は、標的細胞または腫瘍の再成長に対して、少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用またはその両方の適用の後に、二度、投与されてもよく、それにより必要に応じた適用の更なる適用が提供される。この細胞周期阻害剤の第２の投与が、Ｇ１／Ｓでの細胞の個体群の部分を再同期化するであろう。
【００２３】
細胞周期阻害剤は、非経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、坐薬、経皮的、局所または経口を含む幾つかの経路を介して投与できる。細胞周期阻害剤の経口投与が最も好ましい。経口投与は、投与量単位、典型的には、薬学的に許容される担体と共に錠剤またはカプセルとして投与されてよい。
【００２４】
Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤は、多くの生命維持に必要な細胞のプロセスにとって重要な細胞への細胞外カルシウムの流入を制限する。これらのプロセスに必要なカルシウムは、カルシウムチャネルを経る流入を介して細胞外環境に由来する。カルシウムチャネルは、配列解析、生物物理学的特徴および薬理学的感受性に基づいて幾つかのファミリーに分けられる。これらのカルシウムチャネルは、血圧、心調律および細胞増殖の調節に関わっている。また、研究により、Ｔ型カルシウムチャネルが加齢性黄斑変性症において重要な役割を果たす可能性が示唆されている。少なくとも１つの薬理作用のある物質、ミベフラジルは、Ｔチャネル機能の阻害のために、臨床的に有効であることが証明されている。カルシウム流入の阻害は、高血圧、心不整脈および臨床的に有害な細胞増殖の治療のために有用である。
【００２５】
Ｔ型カルシウムチャネルは、細胞、細胞株および特に癌細胞株において存在する。特に、Ｔ型カルシウムチャネルのＣａｖ３．２アイソフォームは、以下の先行文献で論じられているように、日本人女性において、隣接する正常な乳房組織に比較し、乳癌組織において異常に発現されていることが示されている（Asaga, S., Ueda, M., Jinno, H., Kikuchi, K., Itano, O., Ikeda, T., and Kitajima, M. (2006) Anticancer Res 26, 35-42）。
【００２６】
細胞周期阻害剤は、Ｇ１／Ｓを含む細胞周期チェックポイントで真核細胞の進行を効果的に遅くまたは停止するものであり、これは更に以下の例２において説明される通りである。更に、細胞周期阻害剤の投与は、以下の例３において説明される通り、疾患または状態の成長または増殖を効果的に遅くする。
【００２７】
細胞周期阻害剤の投与の後に、細胞周期阻害剤を加えない期間がある。この期間は、約０時間から約３３６時間に及んでよい。この期間は、Ｇ１／Ｓに蓄積された細胞が細胞周期のＳ期に入ることを可能にする。細胞周期阻害剤の投与のために、細胞の約５％から約２５％がＧ１／Ｓに蓄積されるであろう。多くの割合の細胞が各適用により影響を受けることから、Ｓ期における細胞の数の増加は、少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用またはその両方の適用をより効果的にする。「影響を受ける」は、殺されることまたは取り除かれることを意味する。
【００２８】
細胞周期阻害剤が添加されない期間の後に、少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用またはその両方の適用が実施されて、Ｓにおける細胞の部分が殺される。「殺される」は、細胞がアポトーシスまたはネクローシスになることを意味する。特定の少なくとも１の化学療法剤、放射線の適用またはその両方の適用は、当業者の臨床経験により決定され、異なる疾患は異なる適用および異なる作用物により治療される。例えば典型的には、以下の疾患の治療のために以下の化学療法剤の適用が使用されてよい。グリア芽細胞種の治療において、細胞毒素テモゾラミドが使用されてよい。黒色腫の治療において、細胞簿毒素メルファランまたはテモゾラミドが使用されてよい。膵臓癌の治療において、細胞毒素ゲムシタビン（gemcitabine）が使用されてよい。乳癌の治療において、細胞毒素ゲムシタビンが使用されてよい。結腸癌の治療において、細胞毒素イリノテカンまたは５−フルオロウラシルが使用されてよい。
【００２９】
この組み合わせ療法、即ち、細胞周期阻害剤の投与とそれに続く少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用またはその両方の適用は、疾患または状態の進行、増殖または成長を緩和するために使用でき、これは以下の例４および５においてより十分に説明される通りである。この組み合わせ療法の使用において、単独で使用された場合の同じ化学療法剤または放射線適用と比較して、少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用またはその両方の適用がより効果的である。
【００３０】
例１
カルシウム流入阻害と進行または増殖との間の対応を測定するために、以下の図２に示されるように、カルシウム流入を阻害するための幾つかの化学物質の能力を、増殖を阻害する同じ物質の能力に対してプロットした。これらの作用物は、バージニア大学で合成された商標を有する化学物質であった。０．９８の傾きで０．９２のＲ２値を有する最小二乗相関線が得られた。慣習的に、相関は因果関係を推測するためには使用できないが、この場合においては、カルシウム流入の遮断が対応するように増殖を阻害するように、増殖に先駆けてカルシウム流入が必要であるために、ベイズ的アプローチが正当化される。極めて１に近い傾きを有する回帰線は、変数において基本的に全ての変動が、その他における変動により計算されることを意味し、これは、これらの作用物の増殖における作用は、カルシウム流入の阻害以外にはないことを意味する。
【００３１】
例２
細胞周期の分析が、フローサイトメトリーおよびＢＵｄＲ染色を使用して行われた。図３において、「Ｃｏｎ」は未処理のコントロール細胞を示す。全ての他の細胞培養物を、微小管重合を阻害し、Ｍ期の間に細胞周期を阻害するノコダゾール（nocodazole）で処理した。フローサイトメトリーにより測定されたように、Ａ１０細胞のノコダゾール単独での処理は、Ｍ期を経る細胞周期の移行を阻害した。Ａ１０細胞が、主としてＧ０とＧ１との間の細胞周期チェックポイントに属することから（図３の「Ｃｏｎ」を参照されたい）、薬理作用のある物質がその期から外への移行を阻害する可能性の評価は、他の細胞周期チェックポイントでの障害を測定すること程には直接的ではない。そのために、ニコダゾールを添加する前に、細胞培養物を２４時間に亘り、Ｔ型カルシウムチャネル遮断薬ミベフラジル（ｍｉｂ）、ニッケル（Ｎｉ）またはＴＴＬ−１１７７(譲受人Tau Therapeuticsにより所有される商標化合物）で処理した。Ｔ型チャネル遮断剤による影響がないときには、細胞は、それ単独で処理された細胞で生じたように、ニコダゾールによって、細胞はＧ２とＭの間の細胞周期チェックポイントで固定される。代わりにＴ型カルシウムチャネル遮断剤での処理は、Ｇ０とＧ１の間の細胞周期チェックポイントで細胞を停止し、Ｇ２とＭとの間の細胞周期チェックポイントでの蓄積を妨げたが、それは別の方法ではニコダゾールに由来しているだろう。これは、Ｔ型カルシウムチャネル遮断薬がＧ１／Ｓで細胞の周期を拘束することを示す。
【００３２】
例３
患者から切除された膵臓癌をヌードマウスの脇腹に直ちに移植し、連続するインビボ継代により維持した。移植された腫瘍は、約１００ｍｍ３の体積で移植し、処理の開始前に２００から３００ｍｍ３に成長させた。ＰＡＮＣ２１９を有するマウスを未処理で維持するか、または６５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｂ．ｉ．ｄ．（各郡ｎ＝１０）のミベフラジルで処理した。腫瘍成長は、処理の開始時に測定されたサイズに対して正規化した。これらの結果を図４に示す。図４において矢印により表示した通り、処理群のマウス１例が９日目（Ｄ９）で死亡した。慣習的な化学療法剤とは異なり、Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤での処理は腫瘍退行を引き起こさなかった。その代り、処理は、Ｇ１／Ｓで腫瘍細胞を拘束することにより腫瘍の成長を制御した。
【００３３】
例４
Ｄ５４細胞株を用いるマウス異種移植片モデルにおけるヒトグリア芽細胞種に対する組み合わせ療法の試験を行った。約１００ｍｍ３の体積を定着されたＤ５４腫瘍の皮下移植片を有するマウスが、７日間に亘る４０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑ．ｉ．ｄ．でのミベフラジルで処理されるか、または未処理のままで維持された。７日目において、全ての動物に対して、５日間を通してＬＤ１０の２５％の用量でＳ期細胞毒素テモゾラミドを与えた。処理のない２日間に続き、本来ミベフラジルで処理されたマウス群において、３５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑ．ｉ．ｄ．の用量でのミベフラジル処理を再開始した。テモゾラミドとミベフラジル併用群のマウスでは、平均腫瘍体積は１０２ｍｍ３であったのに対して、２０日目において、テモゾラミド単独群のマウスの平均腫瘍体積は１７３mm３であった（ｐ＝０．０４８５；ｎ＝１０／群； スチューデント・プール・両側ｔ検定）。前７例の腫瘍体積計測結果間のプール・両側スチューデントｔ検定からｐ＝０．０３２９が得られた。どちらの群においても腫瘍サイズにより安楽死させられた動物はなかった。未処理のコントロール群における平均体積は、１２１４ｍｍ３であり、３例の動物が腫瘍サイズのために安楽死させられた。
【００３４】
例５
Ｄ５４株を用いたマウス異種移植片モデルにおけるヒトグリア芽細胞種に対する組み合わせ療法の更なる試験を行った。定着されたＤ５４腫瘍の皮下移植片を有するマウスが、７日間に亘る４０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑ．ｉ．ｄ．でのミベフラジルにより処理されるか、または未処理のまま維持された。７日目において、すべての動物が、５日間を通してＬＤ１０の２５％の用量でＳ期細胞毒素テモゾラミドを投与された。処理のない２日間に続き、本来ミベフラジルで処理されたマウス群において、３５ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑ．ｉ．ｄ．の用量でのミベフラジルの処理を再開始した。ミベフラジル処理の５日間に続いて、テモゾラミドをＬＤ１０の１０％の用量で５日間に亘り再度投与したが、この用量は細胞毒素が、最初の期間の細胞毒素処理の後で２０例のマウスのうちの６例において腫瘍サイズを測定するには小さ過ぎるものにしたためである。結果を以下の図５に示す。テモゾラミド単独で処理されたマウスは、平均体積が１５６±６５ｍｍ３の腫瘍を有したが、それに対してミベフラジルとテモゾラミドの併用で処理された動物については体積が７０±１９ｍｍ３であった。体積の差は、組み合わせ療法で処理されたマウスが、３０日間を超えて細胞毒素単独で処理されたマウスに比べて約５５％小さい腫瘍を有することを示す。３５日目に関して、組み合わせ療法群における全マウスが触診できない癌を有していた。３０日目と３５日目での両側ｔ検定についてｐ＜０．０００１。ノンパラメトリックのウィルコクソン符号付き順位検定は、３５日目で０．０００１０の同じｐ値を与えた。一部においては、これは組み合わせ群における腫瘍の全ては、受け入れ難いサイズに退行する事実を反映する。
以下、実施形態の例を記載する。
［１］  哺乳動物における疾患または状態を治療するための方法であって、
（ａ）治療学的に有効な量のＴ型カルシウムチャネル阻害剤を投与し、細胞周期のＳ期、Ｇ２期およびＭ期を経る真核細胞の進行を効果的に遅くまたは停止し、Ｇ１期にある真核細胞の部分を増大する工程と；
（ｂ）ある期間に亘り当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤の投与を停止する工程と；および
（ｃ）少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用およびその組み合わせからなる群より選択される適用を実施し、当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤の投与を停止した後で細胞周期のＧ１期を通過して進行した真核細胞の部分を殺す工程と
を含む方法。
［２］  前記［１］に記載の方法であって、更に（ｄ）治療学的に有効な量のＴ型カルシウムチャネル阻害剤を投与し、少なくとも１つの化学療法剤の適用、放射線の適用およびその組み合わせからなる群より選択される適用を行った後に、Ｇ１期およびＳ期の間のチェックポイントを通過した真核細胞の進行を効果的に遅くまたは停止する工程を更に含む、方法。
［３］  前記［１］に記載の方法であって、当該疾患または状態が、癌および前癌状態からなる群より選択される方法。
［４］  前記［３］に記載の方法であって、当該疾患または状態が腫瘍である方法。
［５］  前記［４］に記載の方法であって、当該腫瘍が癌性腫瘍または前癌状態の腫瘍である方法。
［６］  前記［１］に記載の方法であって、当該哺乳動物がヒトである方法。
［７］  前記［１］に記載の方法であって、当該Ｔ型カルシウムチャネル阻害剤がミベフラジル、エフォニジピン、エトスクサミド、スチニブ、ＴＴＬ−１１７７およびニッケルを含む方法。
［８］  前記［１］に記載の方法であって、当該真核細胞の約５％〜約２５％が、Ｇ１期とＳ期の間の細胞周期チェックポイントで進行が停止している方法。
［９］  前記［１］に記載の方法であって、更に、工程（ａ）〜（ｃ）を１または１以上の回数で繰り返すことにより長期処理のための方法を含む方法。
［１０］  前記［９］に記載の方法であって、当該疾患または状態が腫瘍である方法。
［１１］  前記［１０］に記載の方法であって、当該腫瘍が癌性腫瘍または前癌状態の腫瘍である方法。
［１２］  前記［１１］に記載の方法であって、細胞毒素単独で処理された腫瘍と比較して、３０日間を通して、当該癌性腫瘍のサイズが約５５％分縮小される方法。
［１３］  前記［１］に記載の方法であって、当該ある期間が約０時間〜約３３６時間である方法。
［１４］  前記［９］に記載の方法であって、当該ある期間が約０時間〜約３３６時間である方法。
［１５］  前記［１］に記載の方法であって、当該疾患または状態が、グリア芽細胞腫、黒色腫、膵臓癌、乳癌および結腸癌からなる群より選択される方法。
［１６］  前記［１５］に記載の方法であって、当該疾患または状態が腫瘍である方法。
［１７］  前記［１６］に記載の方法であって、当該腫瘍が癌性腫瘍または前癌状態の腫瘍である方法。
［１８］  前記［１］に記載の方法であって、当該治療学的な適用が癌化学療法剤である方法。
［１９］  前記［１８］に記載の方法であって、当該癌化学療法剤が細胞毒素である方法。
［２０］  前記［１９］に記載の方法であって、当該細胞毒素がアルキル化剤を含む方法。
［２１］  前記［１９］に記載の方法であって、当該癌化学療法剤が代謝拮抗物質および抗有糸分裂薬からなる群より選択される方法。
［２２］  前記［１９］に記載の方法であって、癌化学療法剤が、テモゾラミド、５−フルオロウラシル、６−メカプトプリン、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、ヒドロキシウレア、イホスファミド、イリノテカン、トポテカン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドオセタキソール、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンデシン、マイトマイシンCおよびその組み合わせからなる群より選択される方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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