(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）のみを含有することを特徴とする人工授精用培地。
【請求項２】
ホルモノネチン（Formononetin）のみを含有することを特徴とする人工授精用培地。
【請求項３】
甘草から酢酸エチルでイソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）又はホルモノネチン（Formononetin）を抽出した抽出液を含有することを特徴とする人工授精用培地。
【請求項４】
請求項１〜請求項３のいずれかに記載の人工授精用培地を用いて家畜や希少動物の卵子と精子とを授精させることを特徴とする人工授精方法。
【請求項５】
請求項１〜請求項３のいずれかに記載の人工授精用培地を用いて家畜や希少動物の精子を培養し、培養した精子を人工授精用培地とともに家畜や希少動物の卵子を培養した人工授精用培地に添加して家畜や希少動物の精子と卵子とを授精させることを特徴とする人工授精方法。
【請求項６】
精子と卵子とが授精する培地に添加して妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤であって、  イソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）を含有することを特徴とする妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤。
【請求項７】
精子と卵子とが授精する培地に添加して妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤であって、  ホルモノネチン（Formononetin）を含有することを特徴とする妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤。
【請求項８】
精子と卵子とが授精する培地に添加して妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤であって、  甘草から酢酸エチルでイソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）又はホルモノネチン（Formononetin）を抽出した抽出液を含有することを特徴とする妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人工授精用培地及び同人工授精用培地を用いた人工授精方法並びに妊娠促進剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来より、優良な家畜の安定的な生産や希少動物の保護や不妊治療などのために、動物の雄から採取した精子と雌から採取した卵子とを人工的に授精させる人工授精が行われている。
【０００３】
この人工授精において、精子や卵子や授精卵は、人工授精用培地を用いて培養されている（たとえば、特許文献１、非特許文献１参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１１−３４６５９６号公報
【非特許文献１】Toru Takeo,et al,BIOLOGY OF REPRODUCTION 78,546-551(2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来より、人工授精においては、貴重な精子や卵子を用いて人工的に授精させることから、その授精率を向上させて効率良く人工授精を行えるようにすることが望まれている（非特許文献１参照。）。
【０００６】
そこで、本発明者らは、既存の人工授精用培地を用いた人工授精において、授精率を向上させる培養条件を鋭意研究したところ、甘草エキス水溶液を人工授精用培地として用いることで授精率を向上できることがわかった。そして、更なる研究を行った結果、甘草エキス水溶液に含有される物質のうちで特に授精率の向上に寄与する物質を突き止め、本発明を成すに至った。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
請求項１に係る本発明は、イソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）のみを含有することを特徴とする人工授精用培地を提供するものである。
【０００８】
また、請求項２に係る本発明は、ホルモノネチン（Formononetin）のみを含有することを特徴とする人工授精用培地を提供するものである。
【０００９】
また、請求項３に係る本発明は、甘草から酢酸エチルでイソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）又はホルモノネチン（Formononetin）を抽出した抽出液を含有することを特徴とする人工授精用培地を提供するものである。
【００１０】
また、請求項４に係る本発明は、請求項１〜請求項３のいずれかに記載の人工授精用培地を用いて家畜や希少動物の卵子と精子とを授精させることを特徴とする人工授精方法を提供するものである。
【００１１】
また、請求項５に係る本発明は、請求項１〜請求項３のいずれかに記載の人工授精用培地を用いて家畜や希少動物の精子を培養し、培養した精子を人工授精用培地とともに家畜や希少動物の卵子を培養した人工授精用培地に添加して家畜や希少動物の精子と卵子とを授精させることを特徴とする人工授精方法を提供するものである。
【００１２】
また、請求項６に係る本発明は、精子と卵子とが授精する培地に添加して妊娠の確立を向上させるための妊娠促進剤であって、イソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）を含有することを特徴とする妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤を提供するものである。
【００１３】
また、請求項７に係る本発明は、精子と卵子とが授精する培地に添加して妊娠の確立を向上させるための妊娠促進剤であって、ホルモノネチン（Formononetin）を含有することを特徴とする妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤を提供するものである。
【００１４】
また、請求項８に係る本発明は、精子と卵子とが授精する培地に添加して妊娠の確立を向上させるための妊娠促進剤であって、甘草から酢酸エチルでイソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）又はホルモノネチン（Formononetin）を抽出した抽出液を含有することを特徴とする妊娠の確率を向上させるための妊娠促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明では、人工授精等における授精率を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】検体と授精率との関係（表１）を示すグラフ。
【図２】検体と授精率との関係（表２）を示すグラフ。
【図３】検体と授精率との関係（表４）を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下に、本発明に係る人工授精用培地及び同人工授精用培地を用いた人工授精方法並びに妊娠促進剤について説明する。
【００１８】
本発明では、公知の人工授精方法と同様に、動物から採取した精子と卵子とをそれぞれ人工授精用培地で培養した後に、同一の人工授精用培地で精子と卵子とを培養して、精子と卵子とを授精させるものである。
【００１９】
本発明では、人工授精において、使用する人工授精用培地に最も特徴を有している。
【００２０】
本発明者らは、既に、人工授精用培地に甘草エキス水溶液を含有させることで、授精率を向上させることに成功している。
【００２１】
その試験結果を表１及び図１に示す。これは、甘草エキス水溶液を含有する人工授精用培地でマウスの精子を培養した後に、培養した精子を甘草エキス水溶液（人工授精用培地）とともにマウスの卵子を培養した人工授精用培地に添加して精子と卵子とを授精させた場合の試験結果である。なお、甘草エキス水溶液を含有する人工授精用培地は、甘草の根から抽出した粉末状の甘草エキスを水に溶かして甘草エキス水溶液を生成し、その甘草エキス水溶液を既存（公知）の人工授精用培地に添加した。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
この試験では、比較のために、甘草エキス水溶液を添加していない人工授精用培地と甘草エキス水溶液を添加した人工授精用培地とを用いて同一のマウス（検体ａ〜検体ｅ）から採取した精子と卵子とを人工的に授精させて行った。
【００２４】
その結果、検体ａでは、甘草エキス水溶液を添加していない人工授精用培地を用いた場合には、授精率が0.0%であったのに対して、甘草エキス水溶液を添加した人工授精用培地を用いた場合には、授精率が15.6%に向上した。同様に、検体ｂでは、8.0%から31.3%に、検体ｃでは、43.5%から84.0%に、検体ｄでは、18.5%から38.1%に、検体ｅでは、4.2%から47.1%に向上した。
【００２５】
このように、甘草エキス水溶液を含有する人工授精用培地を用いた場合には、いずれの検体でも授精率が著しく増加することがわかった。なお、甘草エキス水溶液を含有する人工授精用培地を用いて精子及び卵子又は卵子のみを培養しても同様に授精率を向上させることができる。
【００２６】
本発明者らは、甘草エキス水溶液に含有される成分の中から授精率の向上に寄与する有効成分を特定するため、更なる試験を行った。
【００２７】
まず、甘草エキス水溶液をブタノールとエチルアセテートとでそれぞれ抽出した抽出液を生成し、その抽出液を添加した人工授精用培地を用い、上記と同様に、同一のマウス（検体１〜検体６）から採取した精子と卵子とを人工的に授精させた。なお、甘草エキス水溶液をブタノールで抽出した抽出液は、甘草の薬効成分として広く知られたグリチルリチン（Glycyrrhizin）を主に含んでいる。甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液は、リクイリチゲニン（Liquiritingenin）やイソリクイリチゲニン（Isoliquiritingenin）やホルモノネチン（Formononetin）などを含んでいる。
【００２８】
その試験結果を表２及び図２に示す。
【表２】
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検体１では、甘草エキス水溶液を添加していない人工授精用培地（基準培地）を用いた場合には、授精率が22%であったのに対して、甘草エキス水溶液をブタノールで抽出した抽出液を添加した人工授精用培地（ブタノール抽出液含有培地）を用いた場合には、授精率が33%に向上し、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液を添加した人工授精用培地（エチルアセテート抽出液含有培地）を用いた場合には、授精率が92％にも向上した。同様に、検体２では、基準培地で授精率が０％であったのに対して、ブタノール抽出液含有培地で31％、エチルアセテート抽出液含有培地で100％となり、検体３では、基準培地で授精率が０％であったのに対して、ブタノール抽出液含有培地で46％、エチルアセテート抽出液含有培地で62％となり、検体４では、基準培地で授精率が4％であったのに対して、ブタノール抽出液含有培地で10％、エチルアセテート抽出液含有培地で18％となり、検体５では、基準培地で授精率が1％であったのに対して、ブタノール抽出液含有培地で0％、エチルアセテート抽出液含有培地で12％となり、検体６では、基準培地で授精率が25％であったのに対して、ブタノール抽出液含有培地で18％、エチルアセテート抽出液含有培地で44％となった。
【００２９】
このことから、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液を人工授精用培地に添加することで、甘草エキス水溶液を添加していない人工授精用培地を用いた場合よりも顕著に授精率が向上することがわかった。なお、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液を含有する人工授精用培地を用いて精子及び卵子又は卵子のみを培養しても同様に授精率を向上させることができる。
【００３０】
さらに、授精率を向上させる物質を特定するために、エチルアセテートで抽出した抽出液に含まれる主な成分（表３に示す４種類の成分）をそれぞれ添加した人工授精用培地を用い、上記と同様に、同一のマウス（検体Ａ〜検体Ｅ）から採取した精子と卵子とを人工的に授精させた。
【００３１】
【表３】
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【００３２】
その試験結果を表４及び図３に示す。
【００３３】
【表４】
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【００３４】
検体Ａでは、甘草エキス水溶液を添加していない人工授精用培地（基準培地）を用いた場合には、授精率が4%であったのに対して、培地１を用いた場合には、授精率が2％に低減し、培地２を用いた場合には、授精率が51％に向上し、培地３を用いた場合には、授精率が3％に低減し、培地４を用いた場合には、授精率が22％に向上した。同様に、検体Ｂでは、基準培地で授精率が8％であったのに対して、培地１で7％、培地２で70％、培地３で12％、培地４で63％となり、検体Ｃでは、基準培地で授精率が10％であったのに対して、培地１で0％、培地２で20％、培地３で4％、培地４で15％となり、検体Ｄでは、基準培地で授精率が22％であったのに対して、培地１で20％、培地２で35％、培地３で6％、培地４で45％となり、検体Ｅでは、基準培地で授精率が24％であったのに対して、培地１で26％、培地２で74％、培地３で27％、培地４で90％となった。
【００３５】
このことから、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液のうちで、イソリクイリチゲニンを添加した人工授精用培地（培地２）やホルモノネチンを添加した人工授精用培地（培地４）を用いた場合には、甘草エキス水溶液を添加していない人工授精用培地を用いた場合よりも顕著に授精率が向上することがわかった。なお、イソリクイリチゲニンを添加した人工授精用培地やホルモノネチンを添加した人工授精用培地を用いて精子及び卵子又は卵子のみを培養しても同様に授精率を向上させることができる。
【００３６】
以上に説明したように、人工授精において、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液、特に、イソリクイリチゲニンやホルモノネチンを人工授精用培地に含有させることで、授精率を向上させることができる。
【００３７】
そのため、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液やイソリクイリチゲニンやホルモノネチンを含有する人工授精用培地を用いて動物から採取した貴重な精子と卵子とを人工的に授精させることで、優良な家畜の安定的な生産や希少動物の保護や不妊治療などを行うことができる。
【００３８】
なお、本発明では、人工授精において、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液やイソリクイリチゲニンやホルモノネチンを含有する人工授精用培地を用いて、精子のみ、卵子のみ、精子及び卵子のいずれかを培養すればよく、精子のみを培養する場合に卵子を公知の人工授精用培地で培養し、卵子のみを培養する場合に精子を公知の人工授精用培地で培養してもよく、精子及び卵子を公知の人工授精用培地で培養した後に本発明に係る人工授精用培地で精子と卵子とを培養してもよい。
【００３９】
また、本発明に係るイソリクイリチゲニンやホルモノネチンは、甘草の地下茎や地上茎から抽出したものを用いてもよく、他の生物から抽出したものでもよく、化学合成により生成したものでもよい。
【００４０】
さらに、甘草エキス水溶液をエチルアセテートで抽出した抽出液やイソリクイリチゲニンやホルモノネチンは、イソリクイリチゲニンやホルモノネチンの化学構造から体外受精における人工授精用培地に添加して使用する場合に限られず、動物の体内での授精の効率を上げて妊娠の確率を向上させることを目的として座薬や経口薬などの妊娠促進剤として使用することもできる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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