(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
イヌ疾患に関してイヌを治療する方法であって、前記イヌに治療有効量のワクチンを投与することを含み、ここで、前記ワクチンは、ウイルス抗原、バクテリンまたはこれら両方を含み、前記ワクチンを、第１回用量では皮下または経口投与で、第２回用量では経口で、場合による第３回用量では経口で、１回または複数回の年１回用量では経口で投与し、前記ウイルス抗原は、１）イヌジステンパー（ＣＤ）ウイルス、２）イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）、３）イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウイルス、４）イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、５）およびイヌコロナウイルス（ＣＣＶ）のうちの１種または複数を含み、また前記イヌジステンパー（ＣＤ）ウイルス、イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）、イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウイルス、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）が修飾された生ウイルスワクチンであり、そのうちの1種または複数を必ず含み、前記バクテリンは、レプトスピラ・カニコーラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、Ｌ．グリッポティフォーザ（Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、Ｌ．イクテロヘモラジア（Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ）、Ｌ．ポモナ（Ｌ．ｐｏｍｏｎａ）、Ｌ．ブラティスラバ（Ｌ．ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）およびボルデテラ・ブロンキセプティカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）から選択される１種または複数の細菌およびウイルス抗原とこれらの細菌との任意の組合せを含む方法。
【請求項２】
イヌ疾患に関してイヌを治療する方法であって、前記イヌに治療有効量のワクチンを投与することを含み、ここで、前記ワクチンは、ウイルス抗原、バクテリンまたはこれら両方を含み、前記ワクチンを、第１回および第２回用量では皮下で、第３回用量では経口で、１回または複数回の年１回投与では経口で投与し、前記ウイルス抗原は、１）ＣＤウイルス、２）ＣＡＶ−２、３）ＣＰＩウイルス、４）ＣＰＶ、５）およびＣＣＶのうちの１種または複数を含み、また前記ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルス、ＣＰＶが修飾された生ウイルスワクチンであり、そのうちの1種または複数を必ず含み、前記バクテリンは、レプトスピラ・カニコーラ、Ｌ．グリッポティフォーザ、Ｌ．イクテロヘモラジア、Ｌ．ポモナ、Ｌ．ブラティスラバ（およびボルデテラ・ブロンキセプティカから選択される１種または複数の細菌およびウイルス抗原とこれらの細菌との任意の組合せを含む方法。
【請求項３】
前記ウイルス抗原が、ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルスおよびＣＰＶである請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ウイルス抗原が、ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルスおよびＣＰＶであり、前記バクテリン中の細菌が、レプトスピラ・カニコーラ、Ｌ．グリッポティフォーザ、Ｌ．イクテロヘモラジア、およびＬ．ポモナである請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記ウイルス抗原が、ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルス、ＣＰＶおよびＣＣＶであり、前記バクテリン中の細菌が、レプトスピラ・カニコーラ、Ｌ．グリッポティフォーザ、Ｌ．イクテロヘモラジア、およびＬ．ポモナである請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記ウイルス抗原が、ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルスおよびＣＰＶであり、前記バクテリン中の細菌が、ボルデテラ・ブロンキセプティカである請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
前記イヌ疾患が、１）ＣＤウイルスが原因のＣＤ；２）ＣＡＶ−１が原因の感染性イヌ肝炎；３）ＣＡＶ−２または呼吸器ＣＣＶが原因の呼吸器疾患；４）ＣＰＩウイルスが原因のＣＰＩ；５）ＣＣＶまたはＣＰＶが原因の腸炎；６）レプトスピラ・カニコーラ、Ｌ．グリッポティフォーザ、Ｌ．イクテロヘモラジア、Ｌ．ポモナまたはＬ．ブラティスラバが原因のレプトスピラ症；および７）ボルデテラ・ブロンキセプティカが原因の感染性気管気管支炎（「ケンネルコフ」）のうちの１種または複数を含む請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】
前記疾患が、１）ＣＤウイルスが原因のＣＤ；２）ＣＡＶ−１が原因の感染性イヌ肝炎；３）ＣＡＶ−２が原因の呼吸器疾患；４）ＣＰＩウイルスが原因のＣＰＩ；５）およびＣＰＶが原因のイヌパルボウイルス腸炎を含む請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ウイルス抗原が、ＣＤウイルスでは１０２ＴＣＩＤ５０以上から１０８ＴＣＩＤ５０以下；ＣＡＶ−２では１０２ＴＣＩＤ５０以上から１０８ＴＣＩＤ５０以下；ＣＰＶでは１０３ＴＣＩＤ５０以上から１０１０ＴＣＩＤ５０以下；ＣＰＩウイルスでは１０３ＴＣＩＤ５０以上から１０１０ＴＣＩＤ５０以下；およびＣＣＶでは１用量当たり少なくとも１００相対単位（ＲＵ）の範囲の量で存在する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１０】
前記ウイルス抗原が、ＣＤウイルスでは１０３ＴＣＩＤ５０以上から１０６ＴＣＩＤ５０以下；ＣＡＶ−２では１０３ＴＣＩＤ５０以上から１０６ＴＣＩＤ５０以下；ＣＰＶでは１０６ＴＣＩＤ５０以上から１０９ＴＣＩＤ５０以下；ＣＰＩウイルスでは１０５ＴＣＩＤ５０以上から１０９ＴＣＩＤ５０以下；およびＣＣＶでは１用量当たり１０００ＲＵから４５００ＲＵの範囲の量で存在する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
前記ウイルス抗原が、ＣＤウイルスでは１０４ＴＣＩＤ５０以上から１０５ＴＣＩＤ５０以下；ＣＡＶ−２では１０４ＴＣＩＤ５０以上から１０５ＴＣＩＤ５０以下；ＣＰＶでは１０７ＴＣＩＤ５０以上から１０８ＴＣＩＤ５０以下；ＣＰＩウイルスでは１０６ＴＣＩＤ５０以上から１０８ＴＣＩＤ５０以下の範囲の量で存在する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
各Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａが、ワクチン１用量当たり１００比濁単位（ＮＵ）から３５００ＮＵの範囲の量で存在し、前記ボルデテラ・ブロンキセプティカが細胞３×１０６個以上から３×１０１１個以下の範囲で存在する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１３】
各Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａが、１用量当たり２００ＮＵから２０００ＮＵの範囲の量で存在し、前記ボルデテラ・ブロンキセプティカが細胞３×１０７個以上から３×１０１０個以下の範囲で存在する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ボルデテラ・ブロンキセプティカが細胞３×１０８個以上から３×１０９個以下の範囲で存在する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１５】
前記第２回用量を、前記第１回用量の７日以上から３５日以下の後に投与する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２回用量を、前記第１回用量の３週間後に投与する請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記第３回用量を、前記第２回用量の７日以上から３５日以下の後に投与する請求項１または２に記載の方法。
【請求項１８】
前記第３回用量を、前記第２回用量の３週間後に投与する請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記年１回用量を、前記第１回用量の１年後に投与する請求項１または２に記載の方法。
【請求項２０】
前記年１回用量の後に投与される年１回用量を、直前の年１回用量の１年後に繰り返し投与する請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
イヌ疾患に関してイヌを治療する方法であって、前記イヌに治療有効量のワクチンを投与することを含み、ここで、前記ワクチンは、経口で投与され、投与２１日以内に、ワクチンがＣＡＶ−１では１：１６以上の抗体力価をイヌに生じさせ、また前記ワクチンがイヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）および１）イヌジステンパー（ＣＤ）ウイルス、２）イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウイルス、３）イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、および４）イヌコロナウイルス（ＣＣＶ）からなる群から選ばれる１以上の追加のウイルス抗原を含んでよく、また前記イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）が修飾された生ウイルスワクチンである、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イヌ疾患に関してイヌを治療する方法に関し、これは、前記イヌに治療有効量のワクチンを投与することを含み、ここで、前記ワクチンは、ウイルス抗原、バクテリンまたはこれら両方を含み、前記ワクチンを、本明細書に示されているスケジュールに従い皮下または経口投与する。
【背景技術】
【０００２】
主なイヌ感染症に対するワクチンは、３０年から４０年間利用されていて、イヌにおけるこれらの感染症の発生率を著しく低下させている（Ａｐｐｅｌ，ＭＪ．１９９９．Ａｄｖ  Ｖｅｔ  Ｍｅｄ．４１：３０９〜３２４）。Ｐｆｉｚｅｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈは、イヌにおける様々なウイルス性および細菌性疾患に伴う疾患を予防するための数種のワクチンを販売している。イヌのコアワクチンを含むワクチンのＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）ラインは、イヌジステンパー（ＣＤ）ウイルスが原因のイヌジステンパー（ＣＤ）、イヌアデノウイルス１型（ＣＡＶ−１）が原因の感染性イヌ肝炎（ＩＣＨ）、イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）が原因の呼吸器疾患、イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウイルスが原因のイヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）およびイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）が原因のイヌパルボウイルス腸炎を予防する際の補助として、６週齢以上の健康なイヌにワクチン接種するために使用されている（Ｍｏｕｚｉｎ  ＤＥら、２００４、ＪＡＶＭＡ、２２４：５５〜６０）。
【０００３】
ＣＤは、世界中のワクチン接種されていないイヌ集団で生じる高い罹患率、高い死亡率のウイルス性疾患である。ワクチン接種されてなく、免疫のないイヌがＣＤＶに感染すると、その約５０％が臨床症状を示し、それらのイヌの約９０％が死亡する（Ｓｗａｎｇｏ  ＬＪ．１９８３．Ｎｏｒｄｅｎ  Ｎｅｗｓ  ５８：４〜１０）。ＣＡＶ−１が原因のＩＣＨは、肝臓および全身内皮病変により特徴づけられるイヌの汎発性で、時に致死性のウイルス疾患である。ＣＡＶ−２が原因の呼吸器疾患は、重度の場合には、肺炎および気管支肺炎を含むことがある。ＣＡＶ−２ワクチンは、ＣＡＶ−１が原因のＩＣＨに対して干渉効果を示すことが判明している（Ｂａｓｓ  ＥＰら、１９８０、ＪＡＶＭＡ、１７７：２３４〜２４２）。ＣＰＩウイルスが原因の上気道疾患は、軽度か、無症状のこともあるが、他の呼吸性病原との同時感染が存在する場合には、徴候はより重度になる。ＣＰＶが原因の腸疾患は、往々にして出血性の嘔吐および下痢の突然の発症により特徴づけられ、白血球減少症を伴うこともある（Ａｐｐｅｌ  ＭＪら、１９７９、ＶｅｔＲｅｃ、１０５：１５６〜１５９）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
主な動物健康関連会社は、イヌのコアワクチンを、そのコンパニオン動物ワクチンフランチャイズで販売している。しかしながら、これらのワクチンは全て、非経口経路、特に皮下注射により送達されている。容易に送達することができるイヌワクチンは、ペット、獣医師およびペットの飼い主にワクチン送達の高い利便性をもたらし、非経口投与技術に未習熟のヒトが動物にイヌのコアワクチンを送達することを可能にするであろう。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
イヌ疾患に関してイヌを治療する方法を本明細書では提供し、これは、前記イヌに治療有効量のワクチンを投与することを含み、ここで、前記ワクチンは、ウイルス抗原、バクテリンまたはこれら両方を含み、前記ワクチンを、第１回用量では皮下または経口用量で、第２回用量では経口で、場合による第３回用量では経口で、１回または複数回の年１回投与では経口で投与する。ウイルス抗原は、１）イヌジステンパー（ＣＤ）ウイルス、２）イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）、３）イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウイルス、４）イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、５）およびイヌコロナウイルス（ＣＣＶ）のうちの１種または複数を含み、前記バクテリンは、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ、Ｌ．Ｐｏｍｏｎａ、Ｌ．ｂｒａｔｉｓｌａｖａおよびＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａのうちの１種または複数ならびにこれらのウイルス抗原およびバクテリンの任意の組合せを含む。
【０００６】
さらに、イヌ疾患に関してイヌを治療する方法を本明細書では提供し、これは、前記イヌに治療有効量のワクチンを投与することを含み、ここで、前記ワクチンは、ウイルス抗原、バクテリンまたはこれら両方を含み、前記ワクチンを、第１回および第２回用量では皮下で、第３回用量では経口で、１回または複数回の年１回用量では経口で投与する。前記ウイルス抗原は、１）ＣＤウイルス、２）ＣＡＶ−２、３）ＣＰＩウイルス、４）ＣＰＶ、５）およびＣＣＶのうちの１種または複数を含み、前記バクテリンは、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ、Ｌ．Ｐｏｍｏｎａ、Ｌ．ｂｒａｔｉｓｌａｖａおよびＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａのうちの１種または複数ならびにこれらのウイルス抗原およびバクテリンの任意の組合せを含む。
【０００７】
一実施形態では、ワクチンは、１種もしくは複数の生ウイルス、１種もしくは複数の修飾されている生ウイルス、１種もしくは複数の不活化ウイルスまたはこれらの組合せを含む。
【０００８】
一実施形態では、ウイルス抗原は、ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルスおよびＣＰＶである。他の実施形態では、これら４種のウイルス抗原を、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅおよびＬ．ｐｏｍｏｎａからなるバクテリンと組み合わせる。さらに他の実施形態では、これら４種のウイルス抗原を、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａからなるバクテリンと組み合わせる。さらに他の実施形態では、これら４種のウイルス抗原を、ＣＣＶ抗原ならびにＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅおよびＬ．ｐｏｍｏｎａからなるバクテリンと組み合わせる。
【０００９】
治療されるイヌ疾患は、１）ＣＤウイルスが原因のＣＤ；２）ＣＡＶ−１が原因の感染性イヌ肝炎；３）ＣＡＶ−２または呼吸器ＣＣＶが原因の呼吸器疾患；４）ＣＰＩウイルスが原因のＣＰＩ；５）ＣＣＶまたはＣＰＶが原因の腸炎；６）Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ、Ｌ．ｐｏｍｏｎａまたはＬ．Ｂｒａｔｉｓｌａｖａが原因のレプトスピラ症；および７）Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａが原因の感染性気管気管支炎（「ケンネルコフ」）のうちの１種または複数を含む。
【００１０】
一実施形態では、治療される疾患は、１）ＣＤウイルスが原因のＣＤ；２）ＣＡＶ−１が原因の感染性イヌ肝炎；３）ＣＡＶ−２が原因の呼吸器疾患；４）ＣＰＩウイルスが原因のＣＰＩ；５）およびＣＰＶが原因のイヌパルボウイルス腸炎を含む。
【００１１】
一実施形態では、第２回用量を、前記第１回用量の約７日以上から約３５日以下の後に投与する。さらに具体的な実施形態では、第２回用量を、前記第１回用量の約３週間後に投与する。他の実施形態では、第３回用量を、前記第２回用量の約７日以上から約３５日以下の後に投与する。さらに具体的な実施形態では、第３回用量を、前記第２回用量の約３週間後に投与する。さらに他の実施形態では、年１回用量を、前記第１回用量の約１年後に投与する。さらに他の実施形態では、前記年１回用量の後に投与される年１回用量を、直前の年１回用量の約１年後に繰り返し投与する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
定義および略語
測定可能な数値変数に関連して使用される場合、「約」または「ほぼ」は、示されている変数の値および示されている値の実験誤差の範囲内（例えば平均値に関して９５％の信頼区間内）または示されている値の１０％の範囲内で、いずれにしろより高い変数の値全てを指しているが、ただし、週での時間隔に関して約が使用される場合を除き、この場合には、「約３週間」は１７から２５日であり、約２から約４週間は１０から４０日である。
【００１３】
「アジュバント」は、抗原に対する免疫応答を高める薬学的に許容できる物質または組成物を意味している。
【００１４】
「抗体」は、抗原に対する免疫応答の結果として特異性抗原に結合しうる免疫グロブリン分子を指している。免疫グロブリンは、「定常」領域および「可変」領域を有する「軽」および「重」ポリペプチド鎖からなる血清タンパク質であり、定常領域の組成に基づき、群（例えばＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ）に分類されている。
【００１５】
「抗原」および「免疫原」は、対象に曝露すると、抗原に特異的な免疫応答を誘発する１種または複数のエピトープ（リニア、コンフォーメーショナルまたはそれら両方）を含む分子を指している。エピトープは、Ｔ細胞受容体または特異性抗体に結合する抗原の特異的な部位であり、通常は、約３個のアミノ酸残基から約２０個のアミノ酸残基を含む。抗原との用語は、死滅、弱毒化または不活化細菌またはウイルスを指している。抗原との用語はさらに、抗イディオタイプ抗体またはその断片などの抗体を指しており、さらに抗原または抗原決定基（エピトープ）を模倣しうる合成ペプチドミモトープを指している。
【００１６】
「賦形剤」は、抗原ではないワクチンの任意の成分を指している。
【００１７】
「用量」は、対象に与えられるワクチンまたは免疫原性組成物を指している。「第１回用量」または「初回ワクチン」は、０日目に与えられた組成物などの用量を指している。「第２回用量」または「第３回用量」または「年１回用量」は、第１回用量と同じワクチンまたは免疫原性組成物であってもなくてもよい、第１回用量の後に与えられた組成物の量を指している。
【００１８】
対象における「免疫応答」は、抗原に対する体液性免疫応答、細胞性免疫応答または体液性および細胞性免疫応答の展開を指している。「体液性免疫応答」は、抗体により仲介されるものを指している。「細胞性免疫応答」は、Ｔリンパ球または他の白血球またはそれら両方により仲介されるものであり、サイトカイン、ケモカインならびに活性化Ｔ細胞、白血球またはそれら両方により産生される同様の分子の産生を含む。免疫応答は、当分野で知られている標準的な免疫アッセイおよび中和アッセイを使用して決定することができる。
【００１９】
抗原の「免疫学的保護量」または「免疫応答を生じさせるために有効な量」は、受容体において免疫原性応答を誘発するために有効な量である。免疫原性応答は、診断目的または他の試験に関して十分であればよいか、疾患因子への感染が原因の有害な健康作用またはその合併症を含む疾患の徴候または症状を予防するために適していればよい。体液性免疫もしくは細胞仲介免疫またはそれら両方を誘発すればよい。免疫原性組成物に対する動物の免疫原性応答は例えば、抗体力価の測定、リンパ球増殖アッセイを介して間接的に、または野生型株での攻撃の後の徴候および症状の監視を介して直接的に評価することができる一方で、ワクチンがもたらした保護的免疫は、例えば対象の死亡、罹患、温度値、全身状態ならびに健康状態および動作全体などの臨床徴候の減少を測定することにより評価することができる。免疫応答は、限定ではないが、細胞性および／または体液性免疫の誘発を含んでよい。
【００２０】
「免疫原性」は、免疫応答の誘発または抗原性を意味している。したがって、免疫原性組成物は、免疫応答を誘発する任意の組成物である。
【００２１】
「鼻腔内」は、鼻の内部を意味している。したがって鼻腔内投与は、可能な場合には例えば１滴または複数滴を鼻に入れることにより、鼻で、または鼻経由で対象の体内にワクチンなどの物質を導入することを指している。これは、主に鼻および鼻咽頭粘膜での物質の送達を含む。
【００２２】
イベントの後の「Ｎ日」、時間の「Ｎ」間隔もしくは期間または「Ｍ日」はそれぞれ、イベントの後のＮ日目またはＭ日目の任意の時間を指している。例えば、第１回ワクチンの投与の後２１日目での対象への第２回ワクチンのワクチン接種は、第２回ワクチンを、第１回ワクチンの後２１日目の任意の時間に投与することを意味している。この記載は往々にして、第１回および第２回ワクチン接種の間隔または第２回および第３回ワクチン接種の間隔にも当てはまる。
【００２３】
「口」または「経口」投与は、口で、または口を介して対象の体内にワクチンなどの物質を導入することを指しており、嚥下もしくは口腔粘膜（例えば舌下または頬吸収）での送達またはそれら両方を含む。
【００２４】
「口鼻」投与は、行う場合には、例えば鼻に１滴または複数滴を入れることにより、鼻および口で、または鼻および口を介して対象の体内にワクチンなどの物質を導入することを指している。口鼻投与は、経口および鼻腔内投与に関連する送達方法を含む。
【００２５】
「非経口投与」は、消化管を含まない経路で、またはその経路を介して対象の体内にワクチンなどの物質を導入することを指している。非経口投与には、皮下投与、筋肉内投与、経皮投与、皮内投与、腹腔内投与、眼内投与および静脈内投与が含まれる。この開示の目的では、非経口投与は、口、鼻、気管および肺の粘膜組織での物質の送達を主に含む投与経路を除外する。
【００２６】
「薬学的に許容できる」とは、正常な医学的判断の範囲内であり、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などを伴わずに対象の組織と接触させて使用するために適しており、合理的な便益−リスク比に相応し、その意図した使用に有効である物質を指している。
【００２７】
「対象」は、イヌを指している。
【００２８】
「ＴＣＩＤ５０」は、「組織培養感染用量」を指しており、接種細胞培養の所与のバッチの５０％を感染させるために必要なウイルスの希釈と定義される。当業者に知られている様々な方法を、ＴＣＩＤ５０を算出するために使用することができ、この明細書を通して利用されるＳｐｅａｒｍａｎ−Ｋａｒｂｅｒ法が含まれる。Ｓｐｅａｒｍａｎ−Ｋａｒｂｅｒ法の記載に関しては、Ｂ．Ｗ．Ｍａｈｙ  ＆  Ｈ．Ｏ．Ｋａｎｇｒｏ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ  ２５〜４６（１９９６）参照。
【００２９】
本開示の内容における「治療有効量」は、抗原またはワクチンを投与された対象において、ウイルスまたは細菌などの病原体への感染が原因の有害な健康作用またはその合併症を含む疾患の徴候または症状を防ぐために十分な免疫応答を誘発するだろう抗原またはワクチンの量を指している。体液性免疫もしくは細胞仲介免疫または体液性免疫および細胞仲介免疫の両方を誘発すればよい。ワクチンに対する動物の免疫原性応答は例えば、抗体力価の測定、リンパ球増殖アッセイを介して間接的に、または野生型株での攻撃の後の徴候および症状の監視を介して直接的に評価することができる。ワクチンがもたらした保護的免疫は、例えば対象の死亡、罹患、温度値、全身状態ならびに健康状態および動作全体などの臨床徴候の減少を測定することにより評価することができる。治療に有効なワクチンの量は、使用される特定のウイルスまたは対象の状態に応じて変動し、獣医師であれば決定することができる。
【００３０】
「治療する」は、このような用語が適用される障害、状態または疾患を予防すること；またはこのような障害、状態または疾患の１種または複数の症状を予防すること；またはこのような障害、状態または疾患の進行を逆転、緩和または阻害することを指している。
【００３１】
「治療」は、前記で定義された「治療する」の行為を指している。
【００３２】
「ワクチン」は、本明細書に定義されている抗原を含む組成物を指している。対象へのワクチンの投与は、通常は１種または複数の特定の疾患に対する免疫応答をもたらす。治療に有効なワクチンの量は、使用される特定のウイルスまたはイヌの状態に応じて変動し、獣医師であれば決定することができる。ワクチンは、投与の皮下、経口、口鼻または鼻腔内経路によって対象に直接導入することができる。
【００３３】
「ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５」は、イヌジステンパー（ＣＤ）ウイルス、イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）、イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウイルスおよびイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）を含む市販のワクチンである。「ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４」は、ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルス、ＣＰＶおよびＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅおよびＬ．ｐｏｍｏｎａを含む市販のワクチンである。「ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４ＣＶ」は、ＣＤウイルス、ＣＡＶ−２、ＣＰＩウイルス、ＣＰＶ、イヌコロナウイルス（ＣＣＶ）ならびにＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅおよびＬ．ｐｏｍｏｎａを含む市販のワクチンである。ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）の名称は、登録されており、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃにより所有されている。
【００３４】
本発明の説明
本明細書には、動物の罹患率および死亡率を低減し、ペット、獣医師および動物所有者にワクチン投与の高い容易性をもたらすワクチン接種計画が提供されている。動物が高齢である場合、注射を必要としない方法を使用して、ワクチンを投与することが極めて望ましい。さらに、経口ワクチンは、非経口ワクチン接種の後に見られることのある望ましくない副作用をおそらく誘発しにくい。経口ワクチンは、物質を非経口投与（即ち針およびシリンジを介して）することに未習熟の個人が投与することもできるので、ワクチン接種の考えられる回数および疾患からの保護を高める。
【００３５】
本発明は、これらに限られないが１）イヌジステンパー（ＣＤ）ウイルスが原因のイヌジステンパー（ＣＤ）；２）イヌアデノウイルス１型（ＣＡＶ−１）が原因の感染性イヌ肝炎（ＩＣＨ）；３）イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ−２）が原因の呼吸器疾患；４）イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウイルスが原因のイヌパラインフルエンザおよび５）イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）が原因のイヌパルボウイルス腸炎を含む毒性ウイルスまたは細菌株が原因の疾患を予防または治療する際の補助としてのワクチンまたは免疫原性組成物をイヌにワクチン接種する方法を提供する。下記に記載の他のイヌ疾患も、本発明により治療することができる。
【００３６】
方法は、治療有効量で、対象において免疫応答を誘発しうる組成物の第１回用量、第２回用量および場合によって第３回用量をイヌに投与することを含む。さらに、年１回の追加免疫として第１回用量の約１年後に、投与する。第１回用量は、皮下または経口投与することができる。第２回用量は、第１回ワクチンの投与の約Ｎ日後に経口投与する。ここで、Ｎは、約７以上から約３５以下の整数であるが、通常は、約１４以上から約２８以下の整数である。第１回および第２回用量の間の間隔はさらに、約２から約４週間であってもよく、好ましい間隔は、約３週間である。
【００３７】
方法はさらに、第２回用量の投与のＭ日後に経口投与される、場合による第３回用量を含む。ここで、Ｍは、約７以上から約３５以下の整数であるが、通常は、約１４以上から約２８以下の整数である。第２回および第３回用量の間の間隔はさらに、約２から約４週間であってもよく、好ましい間隔は、約３週間である。したがって、０日目（第１回用量の投与日）からだと、Ｍは、約２８以上から約５６以下までの整数であるが、通常は、約３５以上から約４９以下までの整数である。第１および第３回用量の間の間隔は、約５から約７週間までであってよく、好ましい間隔は約６週間である。
【００３８】
さらに方法は、第１回ワクチンの投与の約１年後に与えられるワクチンの年１回経口投与を含む。通常、この用量は、第１回ワクチンの１周年の約４週間前から約４週間後までに与える。担当の獣医師が、動物の生活様式および曝露の危険性を元に、任意の後続の追加免疫ワクチンの必要性および頻度を決定するはずである。
【００３９】
方法は、イヌにおいて免疫応答を誘発しうる任意のワクチンを使用することができる。ワクチンのための投与経路には、皮下、経口、口鼻および鼻腔内が含まれる。第１回ワクチンは、経口または皮下投与されるために適している。第２回、第３回および年１回の用量は、経口投与されるために適している。任意の適切なデバイスを使用して、ワクチンを投与することができるが、これには、シリンジ、ドロッパー、無針注射デバイスなどが含まれる。経口投与では、カニューレを備えたシリンジを使用して、ワクチンの用量をイヌの口内に入れることができる。
【００４０】
前記投与スケジュールに加えて、方法はさらに、第１回用量を皮下投与する投与スケジュールを含む。第２回用量は、第１回ワクチンの投与の約Ｎ日後に皮下投与する。ここで、Ｎは、約７以上から約３５以下の整数であるが、通常は、約１４以上から約２８以下の整数である。第１回および第２回用量の間の間隔はさらに、約２から約４週間であってもよく、好ましい間隔は、約３週間である。第３回用量は、第２回用量の投与のＭ日後に経口投与する。ここで、Ｍは、約７以上から約３５以下の整数であるが、通常は、約１４以上から約２８以下の整数である。第２回および第３回用量の間の間隔はさらに、約２から約４週間であってもよく、好ましい間隔は、約３週間である。ワクチンの年１回経口投与は、第１回ワクチンの投与の約１年後に与える。通常、この用量は、第１回ワクチンの１周年の約４週間前から約４週間後までに与えられる。担当の獣医師が、動物の生活様式および曝露の危険性を元に、任意の後続の追加免疫ワクチンの必要性および頻度を決定するはずである。この投与スケジュールでは、第１回および第２回用量は、皮下投与に適している。第３回および年１回投与は、経口投与に適している。
【００４１】
第１回、第２回、第３回および年１回用量は、同じか、異なるワクチンまたは免疫原性組成物であってよく、それぞれ独立に、１種または複数の抗原を含む。ワクチンは、生または死滅ウイルスおよび死滅細菌株を元にしている。したがって有用なワクチンは、生ウイルスワクチン、修飾された生ウイルスワクチンおよび不活化ウイルスワクチンを単独で、またはそれらの組合せで含む。生および修飾された生ワクチンは、イヌにおいて疾患をもたらさず、非毒性形態で単離されているか、適切な細胞系での連続継代または紫外線もしくは化学的突然変異原への曝露を含む当分野でよく知られている方法を使用して弱毒化されている株を含む。不活化または死滅ワクチンは、ホルマリン、ベータプロプリオラクトン（ｂｅｔａｐｒｏｐｒｉｏｌａｃｔｏｎｅ）（ＢＰＬ）、二成分エチレンイミン（ＢＥＩ）での処理または当業者に知られている他の方法を含む、知られている方法により不活化されている株を含む。
【００４２】
ワクチンは、これらに限られないが１）イヌジステンパーウイルスが原因のイヌジステンパー；２）イヌアデノウイルス１型が原因の感染性イヌ肝炎；３）イヌアデノウイルス２型またはイヌ呼吸器コロナウイルスが原因の呼吸器疾患；４）イヌパラインフルエンザウイルスが原因のイヌパラインフルエンザ；５）イヌコロナウイルスまたはイヌパルボウイルスが原因の腸炎；６）ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ、Ｌ．ｐｏｍｏｎａまたはＬ．Ｂｒａｔｉｓｌａｖａが原因のレプトスピラ症；および７）Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａが原因の感染性気管気管支炎（「ケンネルコフ」）を含む疾患に対して保護するか、これらの疾患を治療するためにイヌを免疫化する抗原を含むことができる。適切なワクチンの例には、ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）製品ラインのものが含まれ、これらに限られないがＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５、ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４およびＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４ＣＶが含まれる。あるワクチンを、他のワクチンと組み合わせて、他の病原体が原因の幅広い様々な疾患に対してイヌを保護することができる多価ワクチン製品を製造することもできる。現在では、イヌワクチンの商業生産、さらに最終使用者も、多価ワクチン製品を好む。
【００４３】
修飾された生ウイルスまたは弱毒化ウイルスを含むワクチンでは、治療有効用量は通常、約１０２ＴＣＩＤ５０以上から約１０１０ＴＣＩＤ５０以下の範囲である。特定のウイルスでは、治療有効用量は通常、次の範囲である：ＣＤウイルスでは、約１０２ＴＣＩＤ５０以上から約１０８ＴＣＩＤ５０以下；または約１０３ＴＣＩＤ５０以上から約１０６ＴＣＩＤ５０以下；または約１０４ＴＣＩＤ５０以上から約１０５ＴＣＩＤ５０以下；ＣＡＶ−２では約１０２ＴＣＩＤ５０以上から約１０８ＴＣＩＤ５０以下；または約１０３ＴＣＩＤ５０以上から約１０６ＴＣＩＤ５０以下；または約１０４ＴＣＩＤ５０以上から約１０５ＴＣＩＤ５０以下；ＣＰＶでは約１０３ＴＣＩＤ５０以上から約１０１０ＴＣＩＤ５０以下；または約１０６ＴＣＩＤ５０以上から約１０９ＴＣＩＤ５０以下；または約１０７ＴＣＩＤ５０以上から約１０８ＴＣＩＤ５０以下；およびＣＰＩウイルスでは約１０３ＴＣＩＤ５０以上から約１０１０ＴＣＩＤ５０以下；または約１０５ＴＣＩＤ５０以上から約１０９ＴＣＩＤ５０以下；または約１０６ＴＣＩＤ５０以上から約１０８ＴＣＩＤ５０以下である。不活化ウイルス製剤中のＣＣＶの量は、１用量当たり少なくとも約１００相対単位、好ましくは１用量当たり約１０００から約４５００相対単位の範囲であるべきである。
【００４４】
バクテリンを含有するワクチンでは、ワクチン中の各Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａｌ種での治療有効用量は通常、ワクチン１用量当たり約１００比濁単位（ＮＵ）から約３５００ＮＵの範囲、好ましくは１用量当たり約２００ＮＵから約２０００ＮＵの範囲である。ワクチン中のＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａでの治療有効用量は、通常細胞約３×１０６個以上から約３×１０１１個以下の範囲；または細胞約３×１０７個以上から約３×１０１０個以下の範囲；または細胞約３×１０８個以上から約３×１０９個以下の範囲内である。
【００４５】
ワクチンの他の成分は、担体、溶媒および希釈剤を含む薬学的に許容できる賦形剤、等張剤、緩衝剤、安定剤、防腐剤、免疫調節剤（例えばインターロイキン、インターフェロンおよび他のサイトカイン）、血管収縮剤、抗菌剤、抗カビ剤などを含むことができる。通常の担体、溶媒および希釈剤には、水、生理食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロールなどが含まれる。代表的な等張剤には、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトースなどが含まれる。有用な安定剤には、ゼラチン、アルブミンなどが含まれる。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体」には、任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、アジュバント、安定剤、希釈剤、防腐剤、抗菌剤および抗カビ剤、等張剤、吸着遅延剤などが含まれる。本発明の成分と相容性であり、免疫化される対象に対して有害でないという意味において、担体は「許容でき」なければならない。通常、担体は、無菌および発熱物質不含であり、使用される投与方法を元に選択される。ワクチンを含有する薬学的に許容できる担体のための好ましい製剤は、米国（ＵＳ）農務省または米国以外の国における相当する政府機関により公布された適切な規制で承認された薬学的担体であることは、当業者にはよく知られている。したがって、ワクチンを商業生産するための薬学的に許容される担体は、ＵＳまたは外国の適切な政府機関により既に承認されているか、承認されるだろう担体である。
【００４７】
ワクチン組成物は、薬学的媒体、賦形剤または媒質として役立つワクチン相容性の薬学的に許容できる（即ち無菌および非毒性）液体、半固体または固体希釈剤を場合により含むこともできる。希釈剤には、水、生理食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロールなどが含まれうる。等張剤には、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトールおよびラクトースなどが含まれうる。安定剤には、アルブミンなどが含まれる。
【００４８】
ワクチンをさらに、薬学的に許容できる１種または複数のアジュバントと混合することができる。当分野では、多くのこのようなアジュバントが知られている。代表的なアジュバントには、フロイント完全アジュバントおよびフロイント不完全アジュバントなどのオイルベースのアジュバント、ミコール酸エステルベースのアジュバント（例えば二ミコール酸トレハロース）、細菌性リポ多糖類、ペプチドグリカン（即ちムレイン、ムコペプチドまたはＮ−Ｏｐａｃａ、ムラミールジペプチドもしくはその類似体などの糖タンパク質）、プロテオグリカン（例えばＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅから抽出）、連鎖球菌製剤（例えばＯＫ４３２）、ＢＩＯＳＴＩＭ（登録商標）（例えば０１Ｋ２）、Ｉｓｃｏｍｓ（例えば欧州特許出願ＥＰ第１０９９４２号明細書、ＥＰ第１８０５６４号明細書およびＥＰ第２３１０３９号明細書）、水酸化アルミニウム、サポニン、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−デキストラン、中性油（例えばミグリオール）、植物油（例えば落花生油）、リポソーム、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオールが含まれる。他のアジュバントには、ＲＩＢＩアジュバント系、ミョウバン、水酸化アルミニウムゲル、コレステロール、水中油型エマルション、油中水型エマルション、ブロックコポリマー（ＣｙｔＲｘ、Ａｔｌａｎｔａ  ＧＡ）、ＳＡＦ−Ｍ（Ｃｈｉｒｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ  ＣＡ）、油中レシチン（例えばＡＭＰＨＩＧＥＮ（登録商標）アジュバント）、サポニン、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＳ−２１（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＭＡ）、ＧＰＩ−０１００（Ｇａｌｅｎｉｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）または他のサポニンフラクション、モノホスホリル脂質Ａ、Ａｖｒｉｄｉｎｅ脂質アミンアジュバント、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉからの非耐熱性エンテロトキシン（組換え型またはその他）、コレラ毒素またはムラミールジペプチドなどが含まれる。
【００４９】
免疫原性組成物はさらに、例えばインターロイキン、インターフェロンまたは他のサイトカインなどの１種または複数の他の免疫調節剤を含むことができる。免疫原性組成物はさらに、ゲンタマイシンおよびマーシオレートを含む抗生物質を含むことができる。
【００５０】
ワクチンの用量規模は通常、約１／１０ｍＬ以上から約５ｍＬ以下の範囲である。通常、約１ｍＬの用量を、経口ワクチンでは使用する。各用量は、１種または複数の抗原の治療有効量を含み、これは、イヌの年齢および全身状態、投与経路、抗原の性質ならびに他のファクターに応じて変動しうる。ワクチンの他の成分の量および濃度を調節して、ワクチンの物理的および化学的特性を変えることができ、これは、熟練した専門家であれば容易に決定することができる。例えば、アジュバントは通常、１ｍＬ用量のうち、約２５μｇ以上から約１０００μｇ以下を占める。同様に、抗生物質は通常、１ｍＬ用量のうち、約１μｇ以上から約６０μｇ以下を占める。
【００５１】
当業者であれば、ワクチンを容易に製剤することができる。ワクチンは、無菌および発熱物質不含で提供される。免疫原性組成物は、投与経路、貯蔵の必要性などに応じて、様々な形態で製造することができる。例えば、免疫原性組成物を、注射可能な使用に適した無菌水溶液または分散液の形態で製造することもできるし、凍結乾燥技術を使用して凍結乾燥形態で製造することもできる。凍結乾燥された免疫原性組成物は使用前に、アジュバントを伴うか伴わない安定化溶液、例えば生理食塩水および／またはＨＥＰＥＳ中で再構成することができる。
【００５２】
ワクチン接種に適している対象には、約４週間齢以上のイヌが含まれる。したがって、第１回用量を、約４週間齢目にイヌに与え、本明細書に記載の予定表に従い後続の用量を続ける。一定の商業的に調製されたワクチンは、移行抗体干渉の潜在性を元に、投与のタイミングおよび用量数に関する指示を提供している。例えば、ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ）のための製品ラベルは、９週齢未満で第１回ワクチンを受けたイヌは、第２回用量の後、約３週間目に第３回経口投与１ｍｌ用量を投与されるべきであることを記載している。
【００５３】
次の実施例は、詳述を意図しており、非限定的であり、本発明のいくつかの具体的な実施例を示している。
【実施例１】
【００５４】
この試験は、ワクチンを第１回用量では皮下で、次いで第２回および第３回用量では経口で投与した場合に、セロコンバージョン（例えば抗体を有さない状態から、特異性抗原に対して比較的高い濃度の抗体を有する状態へ）をもたらす修飾された生ワクチンの能力を評価した。
【００５５】
該当する抗原は、イヌアデノウイルス１型（ＣＡＶ−１）、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）およびイヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ）である。ＣＡＶ−１、ＣＰＶまたはＣＤＶに対する抗体を有さなかった試験開始時に６週から９週齢の３３匹の子イヌを、それぞれ１１匹のイヌからなる３つの治療群に無作為に分けた。治療群Ｔ０１のイヌには偽薬ワクチンを３回、３週間ごとに与えた。この治療群は、実験的ワクチン接種を介して以外、何ら該当するウイルスに動物が曝露されていないことを保証するために含めた。治療群Ｔ０２およびＴ０３の動物には、実験ワクチンを第１回は皮下で（０日目）、次いで同じワクチンを経口で３週間後（２１日目）および６週間後（４２日目）に与えた。Ｔ０２とＴ０３との唯一の違いは、投与されるワクチン中のウイルスの量であり、Ｔ０２は、比較的低い用量を受け、Ｔ０３は、比較的高い用量を受けた。血液試料を毎週採取して、特異性抗体の濃度（例えば力価）を測定した。血清試料を、標準的な手順に従いＣＤＶ、ＣＰＶおよびＣＡＶ１に対する血清抗体に関して分析した。実験計画および研究用動物用製品（ＩＶＰ）の詳細を表１および２に示した。
【００５６】
【表１】
0005762664.tif 000002
【００５７】
【表２】
0005762664.tif 000003
【００５８】
Ｔ０１の動物は全て、該当する抗原に対する抗体を実質的に含まないままであり、このことは、これらのウイルスに対する環境曝露がなかったことを示していた。Ｔ０２およびＴ０３の動物は、ワクチンに対して同様に応答し、このことは、用量が応答パターンに著しい影響を及ぼさないことを示していた。抗原に関わらず、実験ワクチンを与えられた動物（Ｔ０２群およびＴ０３群）は、第１回（皮下投与された）ワクチン用量に対してしっかりと応答した。比較および展望のために、動物がＣＡＶ−１では１：１６以上、ＣＤＶでは１：３２以上、ＣＰＶでは１：８０以上の抗体力価を有する場合には、動物が疾患から保護されていると考える。
【００５９】
Ｔ０２およびＴ０３でそれぞれ１：３４９９および１：３６６８の平均力価で、ＣＤＶ特異性抗体は、第１回ワクチン接種の後２８日目にピークになった（図１参照）。皮下ワクチン接種の後のＣＤＶ特異性力価の場合には、抗体のこの濃度は、経口投与されたワクチンに対して後で反応する動物の能力を妨害するために十分に高かったかもしれない。ＣＰＶに対する特異性抗体は、同様のパターンに従ったが、ピーク抗体力価は、Ｔ０２のイヌでは、第１回経口ワクチン接種の２週間後に（３６日目で１：５７０２の平均力価）、Ｔ０３のイヌでは第１回経口ワクチン接種の１週間後に（２８日目に１：５６１３の平均力価）生じた（図２参照）。
【００６０】
ＣＤＶおよびＣＰＶピーク抗体濃度のタイミングの差により、このパターンは、経口ワクチン接種に対する免疫応答と解釈することができるが、当初の高い抗体力価が再び、解釈を難しくしている。しかしながら、ＣＡＶ−１に対する特異性抗体は明らかに、この抗原の経口投与に対するしっかりとした免疫応答が存在することを示している（図３参照）。第１回経口ワクチン接種の日である２１日目に、Ｔ０２の動物は、１：５のＣＡＶ−１特異性抗体の平均力価を有し、Ｔ０３の動物は、１：１６の平均力価を有した。２週間後に、イヌは、Ｔ０２およびＴ０３群でそれぞれ１：２５および１：１１８の平均抗体力価を有した。さらにいっそう顕著なことに、第２回経口投与ワクチンの２週間後、５６日目に、動物は、Ｔ０２およびＴ０３でそれぞれ１：８３および１：１５０の平均力価を有した。慣例的に、ＣＡＶ−１抗体力価は、皮下ワクチン接種が原因の妨害の可能性を低下させたかもしれない他の２種の抗原よりも低い。
【００６１】
皮下ワクチン接種の後のＣＤＶおよびＣＰＶに対して特異的な抗体の高い力価が、ＣＤＶおよびＣＰＶの経口投与の有効性の明確な解釈を困難にしているが、この試験による結論は、イヌは皮下ワクチン接種、続く経口ワクチン接種に応答してセロコンバージョンしうるということである。二次的な結論は、経口ワクチン接種は、イヌへのワクチン投与の実際的かつ有効でありうる経路であるということである。
【実施例２】
【００６２】
この試験は、ワクチンを第１回用量では皮下または経口投与し、次いで第２回および第３回用量では経口投与した場合、セロコンバージョン（例えば抗体を有さない状態から、特異性抗原に対して比較的高い濃度の抗体を有する状態へ）をもたらす修飾された生ワクチンの能力を評価した。
【００６３】
イヌアデノウイルス１型（ＣＡＶ−１）、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、イヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ）またはイヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）に対する抗体を有さなかった試験開始時に６週齢から１０週齢の３９匹の子イヌを、それぞれ１３匹のイヌからなる３つの治療群に無作為に分けた。治療群Ｔ０１のイヌには偽薬ワクチンを３回、３週間ごとに経口投与した。この治療群は、実験的ワクチン接種を介して以外、何ら該当するウイルスに動物が曝露されていないことを保証するために含めた。治療群Ｔ０２の動物には、同じ実験ワクチンを０、２１および４２日目に経口投与した。治療群Ｔ０３の動物には、実験ワクチンを０日目に皮下で、次いで同じワクチンを３週間後（２１日目）および６週間後（４２日目）に経口で投与した。Ｔ０２とＴ０３との唯一の違いは、Ｔ０２は第１回用量を経口で受け、Ｔ０３は第１回用量を皮下で受けたことである。血液試料を毎週採取して、特異性抗体の濃度（例えば力価）を測定した。血清試料を、標準的な手順に従いＣＤＶ、ＣＰＶおよびＣＡＶ−１に対する血清抗体に関して分析した。（ＣＡＶ−２をワクチン接種された動物はＣＡＶ−１と交差反応する抗体を生じた）。ＣＡＶ−１では１：１６以上、ＣＤＶでは１：３２以上およびＣＰＶでは１：１６以上の抗体力価を有する場合に、動物を陽性応答体（即ち疾患から保護されている）とみなした。実験計画および研究用動物用製品（ＩＶＰ）の詳細を表３および４に示した。
【００６４】
【表３】
0005762664.tif 000004
【００６５】
【表４】
0005762664.tif 000005
【００６６】
表５に示されているように、Ｔ０３群（ＳＱ、経口、経口）の動物は全て、６３日目までに３種の測定ウイルスに対してセロコンバージョンした。Ｔ０２群（経口、経口、経口）の動物は全て、６３日目までにＣＰＶおよびＣＡＶ−１に対してセロコンバージョンした。Ｔ０２群の動物の約半数が、６３日目までにＣＤＶに対してセロコンバージョンしたが、このことは、本製剤への変更が可能であることを示唆している。したがって、これらの結果は、経口投与がワクチン接種のための有効な手法であることを証明している。
【００６７】
【表５】
0005762664.tif 000006
【実施例３】
【００６８】
この概念的実験では、イヌジステンパーアデノウイルス２型−パラインフルエンザ−パルボウイルス修飾された生ウイルスワクチンのイヌへの投与を記載している。ラベルの指示に従って、ワクチンの凍結乾燥製剤を、無菌希釈剤で無菌的に再水和させ、十分に振盪する。このようなワクチンの例は、ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ）である。このワクチンは、樹立イヌ細胞系で増殖させたＣＤウイルス（約１０５ＴＣＩＤ５０）、ＣＡＶ−２（約１０４ＴＣＩＤ５０）、ＣＰＩウイルス（約１０８ＴＣＩＤ５０）およびＣＰＶ（約１０８ＴＣＩＤ５０）の弱毒化株を含む。
【００６９】
４週間齢以上の健康なイヌに、再構成されたワクチン１ｍｌの第１回用量を経口または皮下で投与する。イヌに、第１回ワクチンの約３週間後に１ｍｌの第２回用量を経口で、続いて第２回用量の約３週間後に第３回経口投与１ｍｌ用量を与える。イヌに、第１回ワクチンの約１年後に年１回経口投与１ｍｌの追加免疫ワクチンを与えた。担当の獣医師が、動物のライフスタイルおよび曝露の危険性に基づき、任意の後続の追加免疫ワクチンの必要性および頻度を決定する。
【実施例４】
【００７０】
この概念的実施例は、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  Ｃａｎｉｃｏｌａ−Ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ−Ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ−Ｐｏｍｏｎａバクテリンを含むイヌジステンパーアデノウイルス２型−パラインフルエンザ−パルボウイルス修飾された生ウイルスワクチンのイヌへの投与を記載している。ラベルの指示に従って、ワクチンの凍結乾燥製剤を、無菌希釈剤で無菌的に再水和させ、十分に振盪する。このようなワクチンの例は、ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ）である。このワクチンは、凍結乾燥ＣＤウイルス（約１０５ＴＣＩＤ５０）、ＣＡＶ−２（約１０４ＴＣＩＤ５０）、ＣＰＩウイルス（約１０８ＴＣＩＤ５０）、ＣＰＶ（約１０８ＴＣＩＤ５０）製剤の弱毒化株およびＬ．ｃａｎｉｃｏｌａ、Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ、Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅおよびＬ．ｐｏｍｏｎａの不活化全培養を含む。アジュバント付与された無菌ゲルを使用して、凍結乾燥された成分を再水和し、これを、真空の代わりに不活性ガスを使用してパッケージングした。
【００７１】
４週間齢以上の健康なイヌに、再構成されたワクチン１ｍｌの第１回用量を経口または皮下で投与する。イヌに、第１回の約３週間後に１ｍｌの第２回用量を経口投与する。９週齢未満の第１回ワクチンを受けたイヌに、第２回用量の約３週間後に第３回経口投与１ｍｌ用量を投与する。イヌに、第１回ワクチンの約１年後に年１回経口投与１ｍｌの追加免疫ワクチンを与えた。担当の獣医師が、動物のライフスタイルおよび曝露の危険性に基づき、任意の後続の追加免疫ワクチンの必要性および頻度を決定する。
【実施例５】
【００７２】
この概念的実施例は、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  Ｃａｎｉｃｏｌａ−Ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ−Ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ−Ｐｏｍｏｎａバクテリンを含むイヌジステンパーアデノウイルス２型−コロナウイルス−パラインフルエンザ−パルボウイルスワクチンのイヌへの投与を記載している。
【００７３】
ラベルの指示に従って、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  Ｃａｎｉｃｏｌａ−Ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ−Ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ−Ｐｏｍｏｎａバクテリンを含む凍結乾燥されたイヌジステンパーアデノウイルス２型−パラインフルエンザ−パルボウイルス修飾された生ウイルスワクチン（例えばＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４、実施例４参照）を、液体コロナウイルスワクチンで無菌的に再水和させ、十分に振盪する。このようなコロナウイルスワクチンの例は、アジュバントを伴う不活化イヌコロナウイルス（ＣＣＶ）の液体製剤である。ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４とＣＣＶワクチンとの組合せは、ＰｆｉｚｅｒからＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５Ｌ４ＣＶとして販売されている。
【００７４】
４週間齢以上の健康なイヌに、再構成されたワクチンの１ｍｌの第１回ワクチンを経口または皮下で投与する。イヌに、第１回ワクチンの約３週間後に組合せワクチンの１ｍｌの第２回用量を経口投与する。イヌに、第２回用量の約３週間後にコロナウイルスワクチンのみ１ｍｌ用量を経口投与する。９週齢未満の第１回ワクチンを受けたイヌに、第２回ワクチンの約３週間後に組合せワクチン（コロナウイルスワクチンの代わりに）の第２回経口投与１ｍｌ用量を与える。イヌに、初回ワクチンの約１年後に組合せワクチンの年１回経口投与１ｍｌの追加免疫を与える。担当の獣医師が、動物のライフスタイルおよび曝露の危険性に基づき、任意の後続の追加免疫ワクチンの必要性および頻度を決定する。
【実施例６】
【００７５】
この概念的実施例は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａバクテリンを含むイヌジステンパーアデノウイルス２型−パラインフルエンザ−パルボウイルス修飾された生ウイルスワクチンのイヌへの投与を記載している。ラベルの指示に従って、ワクチンの凍結乾燥製剤を、Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの不活化全培養を含む液体希釈剤で無菌的に再水和させ、十分に振盪する。このようなワクチンの例は、ＶＡＮＧＵＡＲＤ（登録商標）Ｐｌｕｓ５（実施例４参照）である。このような希釈剤の例は、Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの不活化培養の液体製剤である。
【００７６】
４週間齢以上の健康なイヌに、再構成されたワクチンの１ｍｌの第１回ワクチンを経口または皮下で投与する。イヌに、第１回ワクチンの約２から約４週間後にワクチンの１ｍｌの第２回用量を経口投与する。４ヶ月齢未満で第１回ワクチンを受けたイヌに、約４ヶ月齢目にワクチンの第３回経口投与１ｍｌ用量を与える。イヌに、初回ワクチンの約１年後にワクチンの年１回経口投与１ｍｌの追加免疫を与える。続く経口１ｍｌの追加免疫ワクチンを年１回投与する。ブリーディング、ボーディングおよびショーイング環境などのＢ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａおよびイヌウイルス曝露がありうる場合には、付加的な追加免疫が指示されることがあるか、年１回再ワクチン接種がこれらのイベントの２から４週間前に設定されるべきである。
【００７７】
本明細書および添付の請求項において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの単数冠詞は、文脈で他に明確に記載されていない限り、１個の対象または複数の対象を指しうることを特記する。したがって例えば、「（ａ）化合物」を含む組成物に関する言及は、単一化合物または２種以上の化合物を含みうる。
【００７８】
前記の実施例および説明は、詳述を意図しており、制限的ではないことを理解されたい。前記の説明を読めば、当業者には、多くの実施形態が明らかであろう。したがって本発明の範囲は、添付の請求項と共に、このような請求項が権利を有する同等の全範囲により決定されるべきである。
【００７９】
本明細書に開示および請求されている方法は全て、本開示を考慮すれば、過度の実験を伴わずに実行することができる。本発明の方法を様々な実施形態で記載したが、本発明の概念、意図および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の方法およびステップまたはステップの順番に変更を加えることができることは、当業者には明らかであろう。さらに、本明細書に記載の薬剤を、化学的および生理学的に関連する一定の薬剤に代えても、同じか類似の結果を達成することができるであろうことは、明らかであろう。当業者には明らかなこのような類似の置換および変更全てを、添付の請求項により定義されている本発明の意図、範囲および概念の範囲内であると考える。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】ＣＤＶに対する血清応答（ＳＮ）（平均力価）を示すグラフ。治療群Ｔ０２およびＴ０３の動物に、実験ワクチンを第１回目には皮下で（０日目）、次いで同じワクチンを３週間後（２１日目）および６週間後（４２日目）に経口で投与した。Ｔ０２群の動物は、比較的低い用量を受け、Ｔ０３群の動物は比較的高い用量を受けた。血液試料を毎週採取して、ＣＤＶの濃度（例えば力価）を測定した。
【図２】ＣＰＶに対する血清応答（ＳＮ）（平均力価）を示すグラフ。動物を図１での記載と同様に処置した。血液試料を毎週採取して、ＣＰＶの濃度（例えば力価）を測定した。
【図３】ＣＡＶ−１に対する血清応答（平均力価）を示すグラフ。動物を図１での記載と同様に処置した。血液試料を毎週採取して、ＣＡＶ−１の濃度（例えば力価）を測定した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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