(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベンゾフェナントリジンアルカロイドの塩を含み、該ベンゾフェナントリジンアルカロイドが、サンギナリン、チェレリスリンおよびケリドニンから選択され、該塩が、ルテイック酸塩、ヒアルロン酸塩およびホスファチジン酸塩から選択される、腫瘍治療用組成物。
【請求項２】
前記アルカロイドがサンギナリンである、請求項１に記載の腫瘍治療用組成物。
【請求項３】
前記塩がルテイック酸塩またはホスファチジン酸塩である、請求項１に記載の腫瘍治療用組成物。
【請求項４】
前記ベンゾフェナントリジンアルカロイドの塩がサンギナリンルテイック酸塩である、請求項３に記載の腫瘍治療用組成物。
【請求項５】
前記ベンゾフェナントリジンアルカロイドの塩がサンギナリンホスファチジン酸塩である、請求項３に記載の腫瘍治療用組成物。
【請求項６】
前記ベンゾフェナントリジンアルカロイドの塩が、前記ベンゾフェナントリジンアルカロイドとアルブミンとの複合体からなるナノ粒子の形態で存在する、請求項１に記載の腫瘍治療用組成物。
【請求項７】
前記腫瘍が多剤耐性腫瘍幹細胞の過剰増殖に由来する腫瘍である、請求項１に記載の腫瘍治療用組成物。
【請求項８】
前記腫瘍が、中咽頭、頭部および頸部または子宮頸部の腫瘍あるいは黒色腫である、請求項１に記載の腫瘍治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍治療用薬剤の調製のための、ベンゾフェナントリジンアルカロイドおよびそれらの塩の使用に関する。
【０００２】
本発明はさらに、前記アルカロイドの新規な塩およびそれらを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
最新技術
腫瘍学の第１の目的は、それが重篤な副作用を伴う場合でも、なんとしても腫瘍を完全に根絶することである；腫瘍治療の指針として、「ｐｒｉｍｕｍ  ｎｏｎ  ｎｏｃｅｒｅ」（「何よりもまず害を成すなかれ」）というモットーは使用されず、「ｐｒｉｍｕｍ  ｓｕｃｃｅｒｅｒｅ」（「何よりもまず救済を急務とする」）に置き換えることが好ましい。
【０００４】
腫瘍治療は、根治手術、光線力学的治療を含めた標的化放射線治療、高用量の化学療法薬、放射線治療ならびにサイトカイン（ＩＬ２）およびモノクロナール抗体を用いた治療を通常含む。利用可能な治療の数は多く、絶え間なく増えているにもかかわらず、治癒に関する成功率は、特に化学療法の場合は薬剤耐性の発症のため、いまだ満足のいくものではない。
【０００５】
固形腫瘍において、化学療法は腫瘍量を迅速に減少させるが完全ではなく；少数の特に耐性のある細胞が、腫瘍を活性に維持でき、その後発達し、多くの場合致命的な結果となる。これらの細胞は、近年は腫瘍幹細胞として分類され、これらは強い増殖力および適応能力を保有する。前記細胞は、腫瘍量のおよそ５％を構成し、現在使用されている公知の化学療法薬すべてに耐性である。腫瘍幹細胞の存在は、初めは骨髄性白血病において確立され（Ｂｏｎｎｅｔ Ｄ、Ｄｉｃｋ ＪＥ. Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３、７３０−７３７(１９９７)）、その後、乳癌および脳腫瘍において実証された（Ａｌ−Ｈａｊｊ Ｍら、Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ、ＵＳＡ、１００.３９８３−３９８８、２００３、Ｓｉｎｇ ＳＫら、４３２、３９６−４０１、Ｎａｔｕｒｅ ２００４）。
【０００６】
より最近では、幹細胞は、黒色腫、結腸腫瘍および肺のミクロトームから単離されている（Ｒｉｃｃｉ−Ｖｉｔａｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ ４４５、１１１−１１５（２００７）;Ｆａｎｇ Ｄ.、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ.、６５、９３２８−９３３７ ２００５、Ｅｒａｍｏ、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、先行オンライン公開２００７年１１月３０日、Ｄｏｉ: １０．１０３８／ｓｊ.ｃｄｄ.４４０２２８３）。
【０００７】
上述のように、これらの細胞は標準的な治療では制御されず、腫瘍が再生する。このため、おそらくアポトーシス過程を誘導することにより、腫瘍幹細胞を阻害できる化合物の開発の明らかな必要性がある。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
発明の説明
現在、ベンゾフェナントリジンアルカロイド、特にサンギナリン（ｓａｎｇｕｉｎａｒｉｎｅ）、チェレリスリン（ｃｈｅｌｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）、ケリドニン（ｃｈｅｌｉｄｏｎｉｎｅ）およびそれらのルテイック酸（ｌｕｔｅｉｃ  ａｃｉｄ）、ホスファチジン酸またはヒアルロン酸との塩が、多剤耐性腫瘍幹細胞に対する増殖抑制効果を有することが見出されている。
【０００９】
具体的には、ルテイック酸との塩は、強力な癌細胞に対する細胞毒性作用ならびに同等に強力な抗血管形成作用、抗炎症作用および鎮痛作用を上記分子に与える。
【００１０】
第１の態様において、したがって、本発明は、腫瘍治療用薬剤の調製のための、ベンゾフェナントリジンアルカロイドまたはそれらの塩の使用に関する。
【００１１】
第２の態様において、本発明は、ベンゾフェナントリジンアルカロイドとホスファチジン酸またはヒアルロン酸との新規な塩を提供する。前記塩は、標的化局所投与または全身投与に特に有用である。
【００１２】
さらなる態様において、本発明は、ベンゾフェナントリジンまたはイソキノリンアルカロイドとヒトアルブミンとのナノ粒子形態の複合体、および静脈内投与または経口投与できる、前記複合体を含有する懸濁液を提供する。このナノ粒子は腫瘍に選択的に到達し、その場において、それらは細胞毒性作用および抗血管形成腫瘍量減少作用を発揮する。この製剤は、固形腫瘍および白血病のより一般的な形態の治療に特に有用である。
【００１３】
ホスファチジン酸は脂肪酸残基を含有し、これらの脂肪酸は同じでも異なっていてもよく、１２から２２個の炭素原子を含む飽和または不飽和の直鎖であってよい。
【００１４】
経口および局所の生物学的利用能が大幅に増加する、ジパルミトイルホスファチジン酸およびジステアロイルホスファチジン酸が好ましい。
【００１５】
サンギナリンとホスファチジン酸との塩は特に好ましい。
【００１６】
本発明に従った塩は、マイクロモル以下の濃度において腫瘍幹細胞のアポトーシスを誘導できる。
【００１７】
サンギナリンとルテイック酸との塩は、２００ｎｇ／ｍｌの濃度において、黒色腫および結腸幹細胞に対する強力な阻害活性がｉｎ  ｖｉｔｒｏで立証した。他の腫瘍学的幹細胞に対するその挙動は、同一であった。このため、これらのアルカロイドは、新世代の抗腫瘍薬と考えることができ、これらはヒトの腫瘍を効率的に治療できる。結腸、肝臓、膵臓および子宮頸部の腫瘍に関して最も適切な形態は、適切なビヒクル中に分散されたルテイック酸との塩であり、一方、黒色腫などの皮膚腫瘍の治療に関しては、ホスファチジン酸との塩が、腫瘍により侵された領域に局所的に直接、有利に投与できる。
【００１８】
アルブミンとの複合体は、中毒量よりかなり少ない用量で、非常に長期にわたった局所領域的な注射による投与に適しており；正常細胞と比較した腫瘍幹細胞に対する選択性および強力な抗血管形成効果が、腫瘍量の迅速な減少および最終的な根絶をひき起こす。
【００１９】
経口投与および局所投与に最も適した製品は、サンギナリンとルテイック酸との塩である。前記塩は、中咽頭、頭部および頸部の腫瘍、黒色腫ならびに子宮頸部の腫瘍の治療において、非塩化アルカロイドより強い程度で特に有効であり、腫瘍に関与する任意のウィルスとも相互作用することを立証した。
【００２０】
細胞のアルカロイド取り込みを増加させ、腫瘍の根絶を可能にするヒアルロン酸との塩も有利である。
【００２１】
この製剤は、適切な賦形剤と一緒に、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ.、Ｎ.Ｙ.、ＵＳＡに記載のものなど、周知の方法により調製されるだろう。
【実施例】
【００２２】
下記の例は、本発明を詳細に例示する。
【００２３】
例１  ルテイック酸サンギナリン塩の調製
３．６８ｇの塩化サンギナリンを、１００ｍｌのエタノールに溶解し、撹拌しながら３．６ｇのカリウムルテアート（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｌｕｔｅａｔｅ）を加え、混合物を３時間反応させる。形成された塩化カリウムをろ別し、溶液を少量に濃縮する。５．６ｇの塩を得る。
【００２４】
例２  １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）サンギナリン塩の調製
３．７ｇの塩化サンギナリンを５０ｍｌのメタノールに溶解する；この溶液を撹拌しながら７．５ｇの１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩を加え、混合物を撹拌しながら２時間放置する。得られた溶液を等量の塩化メチレンで希釈し、混合物を撹拌しながら０．５時間放置する。沈殿した塩化ナトリウムをろ別し、ろ液を真空下、３５℃以下の温度下で、乾燥するまで濃縮した。７０℃の融点を有する１０ｇの赤みがかった固体を得る。
【００２５】
例３  アルブミンとサンギナリンとのナノ粒子の調製
１ｇのサンギナリンを、１５ｍｌのジオキサンに室温で溶解し、３００ｍｌの生理食塩水中の５ｇのヒトアルブミン溶液に加える。混合物を撹拌しながら、無菌環境において４時間放置する。得られた混濁溶液を、超音波に１分間供する。懸濁液の外観および色が変化する。溶液を賦形剤を加えずに凍結乾燥する。
【００２６】
例４
例３の手順に従って、サンギナリン溶液を調製し、この過程の完了後、１０ｍｇのサンギナリンを含有するであろう容器において、溶質を無菌条件下で凍結乾燥する。
【００２７】
この凍結乾燥品を中咽頭腫瘍の局所領域的治療に使用する。
【００２８】
例５  頭部および頸部腫瘍の治療用の１グラム咀嚼錠
サンギナリンルテアート（Ｓａｎｇｕｉｎａｒｉｎｅ  ｌｕｔｅａｔｅ）    １０．００ｍｇ
大豆レシチン                    ３０．００ｍｇ
無水クエン酸                    １０．００ｍｇ
ラクトース                      ２４０．００ｍｇ
マンニトール                    ５５０．００ｍｇ
メチルセルロース                ４０．００ｍｇ
ステアリン酸パルミトイル        ５０．００ｍｇ
ベリー香料                      ４０．００ｍｇ
グリチルリチン酸アンモニウム    ０．５ｍｇ
タルク                          １０．００ｍｇ。
【００２９】
例６  子宮頸部腫瘍治療用軟ゼラチンカプセル
サンギナリンルテアート          １０．００ｍｇ
大豆レシチン                    ５０．００ｍｇ
蜜蝋                            ５０．００ｍｇ
グリチルリチン酸アンモニウム    １０．００ｍｇ
植物油                          ８００．００ｍｇまで適量。
【００３０】
例７  子宮頸部腫瘍治療用軟ゼラチンカプセル
サンギナリンルテアート          １０．００ｍｇ
大豆レシチン                    ５０．００ｍｇ
蜜蝋                            ５０．００ｍｇ
スクシニルグリチルリチシン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ  ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔａｔｅ）    １０．００ｍｇ
植物油                          ８００．００ｍｇまで適量。
【００３１】
例８  黒色腫の局所治療用のホスファチジン酸サンギナリン塩の油中水乳剤
ジパルミトイルホスファチジン酸サンギナリン塩      ０．４０ｇ
プロピレングリコール                              １０．００ｇ
ミリスチン酸イソプロピル                          ５．００ｇ
セチルアルコール                                  ５．００ｇ
ポリソルベート８０                                ３．００ｇ
カルボマー                                        ０．４０ｇ
パラヒドロキシ安息香酸メチル                      ０．１０ｇ
パラヒドロキシ安息香酸プロピル                    ０．０５ｇ
精製水                                            １００ｇまで適量。