(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
焼酎残渣もろみの濃縮エキスを有効成分として含有する、ＡＧＥ結合または分解剤。
【請求項２】
前記焼酎残渣もろみの濃縮エキスが、該焼酎残渣もろみの濾液の濃縮エキス、および該焼酎残渣もろみの上清の濃縮エキスからなる群から選択される少なくとも１種のエキスである、請求項１に記載のＡＧＥ結合または分解剤。
【請求項３】
前記焼酎残渣もろみの濃縮エキスが、該焼酎残渣もろみの濾液または該焼酎残渣もろみの上清から得られる分子量６０００以下の画分である、請求項２に記載のＡＧＥ結合または分解剤。
【請求項４】
さらに繊維性物質を含有する、請求項１から３のいずれかに記載のＡＧＥ結合または分解剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗糖化剤に関し、より詳細には飲食物または医薬品への使用において、より安全性に優れる抗糖化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
終末糖化産物（Advanced Glycation End-products；ＡＧＥｓ）は、グルコースなどの還元糖のカルボニル基と、タンパク質のアミノ基との非酵素的な反応から始まる一連の反応（メイラード反応）により生じる不可逆的な高分子架橋物質である。これらの反応は、生体内で長期間にわたりゆっくり進行する。例えば、糖尿病の臨床検査項目の１つとして挙げられているヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１ｃ）は、赤血球のタンパク質であるヘモグロビンの糖化物であり、ＡＧＥｓの１種である。
【０００３】
ＡＧＥｓは、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症などの糖尿病による合併症の原因物質である。また、ＡＧＥｓは、血管内皮細胞に存在する特異的な受容体（ＲＡＧＥ）に結合して糖尿病性血管症の発症に関連することも知られている。現在、わが国において、糖尿病の潜在患者数が２２００万人にのぼり、特に中高年の４．５人に１人が糖尿病予備軍であるとの報告を考慮すると、体内のＡＧＥｓを除去することは、今後の糖尿病合併症の発症・進行を予防する上で非常に重要である。さらに、ＡＧＥｓは、アテローム性動脈硬化、アルツハイマー病、慢性関節リウマチなどの種々の衰弱性疾患の発症にも関与している。
【０００４】
ＡＧＥｓは、グルコースだけではなく、グルコースの自動酸化および分解産物などの種々の糖から生成される。このうち、生体内ではその存在比から、グルコース由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−１）が最も多く生成されている。また、グリセルアルデヒド由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−２）は、ＡＧＥレセプター（ＲＡＧＥ）との結合能力が高く、このＲＡＧＥを介して、糖尿病性網膜症もしくは糖尿病性腎症のような糖尿病血管合併症の発症および進展に強く関与していることが知られている（非特許文献１および２）。このように、糖尿病の予防および治療を目的として、ＡＧＥｓ、特に、ＡＧＥ−２はその役割が注目されており、研究が続けられている。
【０００５】
一方で、ＡＧＥｓは、食品中にも存在する。そもそも、ＡＧＥｓは、食品化学の研究において発表された非酵素的糖化反応（メイラード反応）による褐変において注目された物質である。ＡＧＥｓは、煮る・蒸すなどの調理方法ではほとんど生成されず、逆に焼く・炒める・揚げるなどの調理方法では多く生成されることが分かっている。また、ＡＧＥｓは、コーラ、味噌、および醤油のような食材に多く含まれていることも知られている。このように、人間は、生活上、常に多量のＡＧＥｓを食品（特に加工食品）から摂取している。食材としてＡＧＥｓを取り込むことに関してはほとんど害がないと考えられているが、腎臓を悪くしている場合は注意が必要であり、また無害の食品性ＡＧＥｓが体内に吸収された後、有害性のＡＧＥ（例えばＡＧＥ−２）に転換される可能性がある。
【０００６】
このようにＡＧＥｓは生体内でも生成され、また生体外からも摂取される。このため、生体内での過剰なＡＧＥｓの蓄積を抑制するために、種々の薬剤が提案されている。例えば、ＡＧＥ生成抑制剤として、従来からアミノグアニジン、ピリドキサミン誘導体などが知られている。さらに特許文献１には、３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンが開示されている。
【０００７】
確立されたＡＧＥ架橋を破壊する物質も検討されており、例えば、Ｎ−臭化フェナシルチアゾリウム（ＰＴＢ）などが知られている。最近では、１，４−ベンゼン−ｂｉｓ［４−メチレンアミノフェノキシイソ酪酸］などの７種の化合物が報告されている（例えば、特許文献２）。しかし、これらのＡＧＥ分解効果は、必ずしも十分とはいえない。
【０００８】
近年の研究では、ビタミンＢ６が、ＡＧＥ阻害作用を有することが見出され、そのＡＧＥ阻害剤としての利用が期待されている。
【０００９】
ところで、ＡＧＥｓは、加齢と共にその蓄積が認められること、およびＡＧＥｓがコラーゲンとコラーゲンとの間の結合物質として働くことが知られており、これにより、皮膚の老化に関与すると考えられている。アミノグアニジンを投与することにより、加齢に伴う様々な体内組織の老化現象を抑制することができたことが報告され（非特許文献３）、アミノグアニジンは、欧米では、アンチエイジング物質として汎用されている。しかし、アミノグアニジンは、毒性を有することが米国の第III相臨床試験で明らかとなっており、その使用および用量に大きな制限が加えられている。
【００１０】
その他のＡＧＥ形成阻害剤としては、アミノグアニジンの誘導体であるＯＰＢ−９１９５、ＬＲ−９０、ＡＬＴ−９４６、天然化合物及びその類縁体であるチアミン（ビタミンＢ１）、チアミンピロリン酸、ベンフォチアミンなど幾つかの化合物が知られている（非特許文献４〜９）が、いずれも実用化には至っていない。
【００１１】
このような背景から、副作用の問題が少ない天然物由来の糖化阻害剤の開発が期待されている。例えば、生活習慣病の予防食品として有用な抗糖化食品群として、レモン、レモン皮、発酵米ぬか、赤唐辛子、りんご皮、アボガド、発芽玄米、玉ねぎ皮、バナナ皮、クコの実、りんご、黒大豆、キウイ皮、黒米、黒こしょう、シナモン、わかめ、かいわれ、緑茶、白ゴマ、及びピーナッツ皮からなる群から選択される食品からの抽出物の１種又は２種以上を主成分として含有する、アミノリン脂質の糖化抑制物質などが知られている（特許文献３）。
【００１２】
焼酎は、澱粉質原料（穀類、芋類）または糖質原料（黒糖、なつめやし）を発酵させ、次いで蒸留することにより製造される。焼酎の製造過程においては、蒸留後の残渣もろみは、通常、廃棄される。しかし、この焼酎残渣もろみの廃棄については環境上の問題が議論されており、その有効な利用が求められている。焼酎残渣もろみは家畜の飼料としての利用が知られているが、その有用性についてなお研究が続いている（特許文献４および５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００４−３００１５３号公報
【特許文献２】特表２００４−５２９１２６号公報
【特許文献３】特開２００７−２２３９７７号公報
【特許文献４】特開２００２−３７１００３号公報
【特許文献５】特開２００５−２２４２０５号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Yamagishi S.ら, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002年, 290巻, 973-978頁
【非特許文献２】Okamoto T.ら, FASEB J., 2002年, 16巻, 1928-1930頁
【非特許文献３】Li Y.M.ら, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1996年, 93巻, 3902-3907頁
【非特許文献４】Price D.L.ら, J. Biol. Chem., 2001年, 276巻, 48967-48972頁
【非特許文献５】Rahbar S.ら, Mol. Cell. Biol. Res. Commun., 2000年, 3巻, 360-366頁
【非特許文献６】Forbes J.M.ら, Diabetologia., 2001年, 44巻, 108-114頁
【非特許文献７】La Selvaら, Diabetologia, 1996年, 39巻, 1263-1268頁
【非特許文献８】Booth A.A.ら, J. Biol. Chem., 1997年, 2729巻, 5430-5437頁
【非特許文献９】Stracke H.ら, Nat. Med., 2003年, 9巻, 294-299頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、飲食品または医薬品の使用において、より安全性が高い抗糖化剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、焼酎の製造において通常廃棄される焼酎残渣もろみの有用性を見出すことを目的とする。
【００１７】
本発明は、焼酎残渣もろみの濃縮エキスを有効成分として含有する、抗糖化剤を提供する。
【００１８】
１つの実施態様では、上記焼酎残渣もろみの濃縮エキスは、該焼酎残渣もろみの濾液の濃縮エキス、および該焼酎残渣もろみの上清の濃縮エキスからなる群から選択される少なくとも１種のエキスである。
【００１９】
１つの実施態様では、上記焼酎残渣もろみの濃縮エキスは、該焼酎残渣もろみの濾液または該焼酎残渣もろみの上清から得られる分子量６０００以下の画分である。
【００２０】
本発明の抗糖化剤はまた、さらに繊維性物質を含有する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、安全性の高い抗糖化剤ならびにこれを含有する飲食品および医薬品を提供することができる。さらに本発明によれば、終末糖化産物（ＡＧＥｓ）に結合し、ＡＧＥｓの生成を抑制し、ＡＧＥｓを分解しそして細胞への毒性が強いと考えられるグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−２）による細胞アポトーシスを抑制し得る。本発明の抗糖化剤は、例えば、糖尿病合併症（血管症、腎症、網膜症など）、神経障害、アルツハイマー病、動脈硬化症、悪性腫瘍、骨疾患、神経変性疾患、皮膚の老化などの疾患や症状の予防および治療に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】実施例１で得られた麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスの種々の添加濃度におけるグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ分解率を示すグラフである。
【図２】実施例１で得られた焼酎残渣もろみの濃縮エキスの種々の添加濃度における蛍光強度法によるグルコース由来ＡＧＥ分解率を示すグラフである。
【図３】実施例８で得られた焼酎残渣もろみの各種画分の濃縮エキスにおけるグリセルアルデヒド由来ＡＧＥの生成阻害率を示すグラフである。
【図４】実施例９で得られた焼酎残渣もろみの各種分画の濃縮エキスにおけるグルコース由来ＡＧＥの生成阻害率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明における「焼酎残渣もろみ」とは、例えば、澱粉質原料（穀類、芋類など）または糖質原料（黒糖、なつめやしなど）を発酵させ、次いで蒸留してアルコールを除去した後に残存するもろみをいう。
【００２４】
焼酎の製造は、通常、麹菌による澱粉の糖化工程、酵母による糖の発酵工程、およびアルコール蒸留工程を含む。例えば、麦類または米を、常法により処理（水洗、浸漬、水切り、蒸煮、放冷など）し、これに焼酎製造に通常用いられる白麹菌（例えば、Aspergillus Kawachii）の種麹を接種し、製麹適温にて適切な期間の間、製麹する。このようにして得られた麹に、水および通常の焼酎製造に用いられる酵母（例えば、鹿児島酵母または熊本酵母）を添加および混合し、そして常法により糖化発酵させて一次もろみを得る。一次もろみでは、焼酎酵母が増殖される。次に、この一次もろみに、必要に応じて常法により処理（水洗、浸漬、水切り、蒸煮、放冷など）した焼酎主原料および水を添加および混合し、常法により適温で適切な期間の間さらに糖化発酵させて二次もろみを得る。
【００２５】
この焼酎主原料としては、通常用いられる任意の原料が使用でき、大麦、小麦、米、トウモロコシ、蕎麦などの穀類、芋類、黒糖、なつめやしなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、大麦である。上の説明は酵母発酵工程（仕込み）が二段階であるが、仕込みを二段階に必ずしも分ける必要はない。発酵後のもろみを蒸留に供し、アルコールを回収して焼酎とし、一方、アルコール分が除去された残渣もろみが得られる。
【００２６】
上記の焼酎残渣もろみは、そのまま濃縮して、あるいは濾過、遠心分離などによって固液分離され、次いで濾液および／または上清の液部を加熱濃縮、凍結乾燥もしくはスプレードライなどして、濃縮エキスを得ることができる。
【００２７】
さらに、上記濃縮エキスは、シリカゲルカラム、ＯＤＳカラム、イオン交換樹脂、限外濾過膜分子ふるいなどの適当なカラムを用いて、その有効成分を濃縮することもできる。これらのうち、濾液または上清画分が好ましい。さらにこのような画分は、例えば６０００以下、あるいは３０００より多くかつ６０００以下、あるいは３０００以下の分子量を有していることが好ましい。
【００２８】
上記濃縮エキスは、終末糖化産物（ＡＧＥｓ）に対する結合性および終末糖化産物生成阻害活性を有する。「終末糖化産物（ＡＧＥｓ）」とは、グルコースなどの還元糖とタンパク質のアミノ基とが非酵素的に反応し、シッフ塩基、アマドリ転移化合物を経て形成される不可逆的な架橋物質の総称である。ＡＧＥｓは、反応性に富むグリセルアルデヒド、グリコールアルデヒドなどのアルデヒド、およびメチルグリオキサール、グリオキサール、3-デオキシグルコソンのような各種中間代謝産物から、あるいはアマドリ転移化合物の酸化的分解、グルコースの自動酸化、脂質の過酸化などによっても生じ得る。生体内に存在するタンパク質（例えば、赤血球膜蛋白、アルブミン、リポプロテイン、アンチトロンビン、トロンボモジュリンなどの血中血漿タンパク質、コラーゲン、エラスチン、プロテオグリカンなどの細胞外基質構成タンパク質など）、核酸などがＡＧＥ化することにより機能障害が生ずると考えられている。
【００２９】
上記濃縮エキスを経口摂取した場合、生体外由来（例えば、食物性）および生体内のＡＧＥｓを吸着して、腸管からの吸収を阻害し得る。例えば、生体外からの食物性ＡＧＥｓから体内で転換されるグルコース由来終末糖化産物であるＡＧＥ（ＡＧＥ−１）量およびグリセルアルデヒド由来終末糖化産物であるＡＧＥ（ＡＧＥ−２）量を減じ得る。また、生体内におけるＡＧＥｓの生成も抑制し得る。さらに、生体内でＡＧＥ−１およびＡＧＥ−２を分解し得る。
【００３０】
上記濃縮エキスは、毒性の強いＡＧＥ−２による細胞アポトーシス抑制活性も有し得る。
【００３１】
上記濃縮エキスは、経口、経管、経皮、経粘膜投与などによる体内への導入によって、抗糖化剤として、ならびに終末糖化産物が関与する疾患、例えば、糖尿病合併症（血管症、腎症、網膜症など）、神経障害、アルツハイマー病、動脈硬化症、悪性腫瘍、骨疾患、神経変性疾患、皮膚の老化などの疾患や症状の予防および治療に用いられ得る。
【００３２】
上記濃縮エキスは、抗糖化剤として利用できる。「抗糖化剤」とは、終末糖化産物への結合、終末糖化産物生成の阻害、または終末糖化産物の分解などにより体内での終末糖化産物の蓄積を抑制し得、あるいはＡＧＥ−２による細胞アポトーシスのようなＡＧＥ−２による細胞への有害作用を抑制し得る因子であり得る。このような抗糖化剤は、飲食品、医薬品、化粧品、石鹸、皮膚塗布剤、点鼻剤、坐剤などに配合され得る。
【００３３】
上記濃縮エキスを有効成分として含む抗糖化剤は、飲食品および医薬品の素材として用いられ得る。上記濃縮エキスを有効成分として含む抗糖化剤は、飲食品組成物（例えば、経口用サプリメントのような健康食品）および医薬品組成物に含有することができる。これらの飲食品組成物および医薬品組成物は、特に、例えば、糖尿病合併症（血管症、腎症、網膜症など）、神経障害、アルツハイマー病、動脈硬化症、悪性腫瘍、骨疾患、神経変性疾患、皮膚の老化などの疾患や症状の予防または治療のために用いられ得る。
【００３４】
飲食品組成物は、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、マルチトール、ソルビトール、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、アミノ酸類、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料、保存料などをさらに適宜含有し得る。このような飲食品は、用途に応じて、粉末、顆粒、カプセル、錠、シロップ、懸濁液などの形態に成形され得、飴などにも加工され得る。飲食品組成物（例えば、経口用サプリメント）の製造は、当業者が通常用いる方法によって行われ得る。飲食品組成物への抗糖化剤の配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。飲食品組成物は、飲食品組成物全量に対して抗糖化剤を、０．１〜１００質量％、より好ましくは１〜５０質量％（上記濃縮エキス基準）で含有し得る。
【００３５】
抗糖化剤または飲食品組成物は、そのまま摂取することができ、水などの溶媒に溶かすまたは懸濁させるなどしても摂取することができ、食事の前後、または食間に経口摂取することができる。抗糖化剤または飲食品組成物を飲食品に添加して、飲食することもできる。
【００３６】
抗糖化剤または飲食品組成物が添加される飲食品としては、例えば、在宅用糖尿病食、流動食、病者用食品（糖尿病食調製用組み合わせ食品など）、特定保健用食品、ダイエット食品、あるいは炭水化物を主成分とする飲食品が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な食品形態としては、例えば、米飯製品、麦製品、野菜製品、乳飲料、清涼飲料などが挙げられるが、これらに限定されない。抗糖化剤または飲食品組成物の飲食品への添加または加工は、当業者が通常用いる方法によって行われ得、配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。人間以外の動物、例えば家畜またはペット用の飼料への添加も可能である。
【００３７】
医薬品組成物は、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分をさらに適宜含み得る。これらの医薬品組成物は、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液剤などの剤型で経口的あるいは経管的に投与することができる。医薬品組成物の製造は当業者が通常用いる方法によって行われ得、配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。医薬品組成物の投与量は、肥満の程度、患者の体重、投与形態などに応じて適宜選定することができる。医薬品組成物は、医薬品組成物全量に対して抗糖化剤を好ましくは１０〜１００質量％、より好ましくは６０〜１００質量％（上記濃縮エキス基準）で含有し得る。
【００３８】
医薬品組成物は、そのまま投与することができ、水などの溶媒に溶かすまたは懸濁させるなどしても投与することができる。投与は１日に１回または複数回に分けて行われ得る。
【００３９】
本発明の抗糖化剤はまた、上記焼酎残渣もろみの濃縮エキス以外にさらに繊維性物質を含有していてもよい。繊維性物質を含有することにより、さらに終末糖化産物への結合、終末糖化産物生成の阻害、または終末糖化産物の分解などにより体内での終末糖化産物の蓄積を抑制し得、あるいはＡＧＥ−２による細胞アポトーシスのようなＡＧＥ−２による細胞への有害作用を抑制し得る。繊維性物質としては、セルロース、難消化デキストリンおよびこれらの組合わせが挙げられる。本発明の抗糖化剤における上記繊維性物質の含有量は特に限定されない。当業者によって任意の含有量が設定され得る。
【００４０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【００４１】
本実施例では、サツマイモ、大麦、米または蕎麦を原料とする焼酎の残渣もろみの濃縮エキスを、以下のようにして製造した。
【００４２】
（実施例１：麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスの製造）
大麦を精製機で表皮を削り、これに水を加えて蒸煮し、次いで約３５〜４０℃に放冷した。これに種麹菌（Aspergillus Kawachii；株式会社  樋口松之助商店）を混ぜ、５日間おいて麹菌を繁殖させた。次いで、これに水および焼酎酵母を適量加えて混合し、約２５〜３０℃で１０日間かけて発酵させ、もろみを得た。発酵が終了したもろみをポットスチルで蒸留し、もろみ中のアルコールを除去した。このアルコールが除去されたもろみが残渣もろみである。この残渣もろみを室温にて１００００ｇで３０分間遠心分離し、上清を採取した。この上清を限外濾過膜装置（旭化成；ペン型ＵＦ膜）に供し、分子量６０００以下の画分の溶液を採取し、次いで凍結乾燥した。さらに、残留している溶液を分子量５００００以下の画分と分子量が５００００を超える画分とに分離し、それぞれの溶液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を以下の実施例で用いた。
【００４３】
（実施例２：米焼酎残渣もろみの濃縮エキスの製造）
米を精製機で表皮を削り、次いで水を加えて蒸煮した。蒸煮した米を約３５〜４０℃に冷却して種麹菌（Aspergillus Kawachii；株式会社  樋口松之助商店）を混ぜ、５日間おいて麹菌を繁殖させた。次いで、これに水および焼酎酵母を適量加え、約２５〜３０℃で１０日間かけて発酵させ、もろみを得た。引き続いて、上記実施例１と同様にして、残渣もろみを製造し、そして分子量によって分画し、凍結乾燥した。
【００４４】
（実施例３：芋焼酎残渣もろみの濃縮エキスの製造）
サツマイモを、表面を洗浄し、次いで水を加えて蒸煮し、次いで粉砕した。上記実施例２の記載に従って米に種麹菌を植えつけて、製麹した。蒸煮粉砕したサツマイモ、水および焼酎酵母を適量で、製麹した米と混ぜ、約２５〜３０℃で３日間かけて発酵させ、もろみを得た。引き続いて、上記実施例１と同様にして、残渣もろみを製造し、そして分子量によって分画し、凍結乾燥した。
【００４５】
（実施例４：蕎麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスの製造）
蕎麦米を精製機で表皮を削り、次いで水を加えて蒸煮した。蒸煮した蕎麦米を約３５〜４０℃に冷却して種麹菌（Aspergillus Kawachii；株式会社  樋口松之助商店）を混ぜ、５日間おいて麹菌を繁殖させた。製麹した蕎麦に、上記実施例１および２の製麹した麦および米を、米：麦：蕎麦の比が１：１：１．２となるように添加して混ぜ合わせ、さらに水および焼酎酵母適量と混ぜ、約２５〜３０℃で１０日間かけて発酵させ、もろみを得た。引き続いて、上記実施例１と同様にして、残渣もろみを製造し、そして分子量によって分画し、凍結乾燥した。
【００４６】
（実施例５：麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスのＡＧＥ分解作用）
１００μｇ／ｍＬのグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−２）含有溶液に、実施例１の焼酎残渣もろみの濃縮エキスを添加し、３７℃にて５日間インキュベートした。当該含有溶液と同体積の０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を添加したものをコントロールとした。
【００４７】
ＡＧＥ−２は以下のように調製した（以下に示す試薬は全てシグマ社から購入）：
（１）１８０ｍｇのＤＬ−グリセルアルデヒドと３９ｍｇのジエチレントリアミン五酢酸（キレート剤）をそれぞれ秤量し、５０ｍＬのファルコンチューブに移した；
（２）当該ファルコンチューブに０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を２０ｍＬ添加して、ボルテックスミキサーにて溶解した；
（３）当該ファルコンチューブにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を５００ｍｇ添加し、ボルテックスミキサーにて再度溶解した；
（４）溶解後、当該溶液をクリーンベンチ内でポアサイズ０．２２μｍのフィルターを通すことによって無菌溶液とした；
（５）パラフィルムにて５０ｍＬファルコンチューブの蓋を密封し、３７℃で１週間インキュベートした；そして
（６）未反応のＤＬ−グリセルアルデヒドを除くために、ＰＤ−１０カラムにかけて、その結果をＨＰＬＣで確認した
【００４８】
上記インキュベーション後にＡＧＥ−２が分解したか否かを、ＡＧＥ−２の蛍光を最大励起波長（Ｅｘ）３７０ｎｍおよび蛍光波長（Ｅｍ）４５０ｎｍにて測定することによって確認した。
【００４９】
結果は、実施例１の焼酎残渣もろみの濃縮エキスの添加濃度について、コントロールの蛍光強度から各添加濃度の蛍光強度を減算後、コントロールの蛍光強度に対する割合を求めた。この割合をＡＧＥ−２分解率（％）と称した。
【００５０】
結果を図１に示す。図１においては、縦軸にＡＧＥ−２分解率（％）を表し、横軸は実施例１の焼酎残渣もろみの濃縮エキスの添加濃度（ｍｇ／ｍＬ）を表す。
【００５１】
図１に示されるように、実施例１の焼酎残渣もろみの濃縮エキスの添加量に依存して、ＡＧＥ−２分解率の上昇が見られた。焼酎残渣もろみの濃縮エキスを所定期間にわたってＡＧＥ−２とインキュベートすることにより、既に形成されているＡＧＥ−２が分解されることが分かる。
【００５２】
ＡＧＥ−２が５０％分解され得る焼酎残渣もろみの濃縮エキス濃度（ＩＣ５０）は、３．０ｍｇ／ｍＬであった。
【００５３】
（調製例１：グルコース由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−１）の作製）
３６０ｍｇのＤＬ−グルコースと３９ｍｇのジエチレントリアミン五酢酸（キレート剤）とをそれぞれ秤量し、５０ｍＬのファルコンチューブに移した。このファルコンチューブに０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を２０ｍＬ添加して、ボルテックスミキサーにて溶解した。次いで、このファルコンチューブにＨＡＳを５００ｍｇ添加し、ボルテックスミキサーにて再度溶解した。溶解後、得られた溶液をクリーンベンチ内でポアサイズ０．２２μｍのフィルターで濾過して無菌溶液を得た。
【００５４】
得られた無菌溶液を、再度５０ｍＬのファルコンチューブに入れ、パラフィルムにて当該チューブの蓋部を密封し、３７℃で１週間インキュベートした。
【００５５】
インキュベート後、この無菌溶液をＰＤ−１０カラム（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）にかけて、未反応のＤＬ−グルコースを除去した。なお、未反応ＤＬ−グルコースの除去は、ＨＰＬＣにより確認した。
【００５６】
このようにして、グルコース由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−１）を作製した。
【００５７】
（実施例６：麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスのＡＧＥｓ結合活性）
分子間相互作用定量ＱＣＭ装置「ＡＦＦＩＮＩＸ  Ｑ」（型番：ＱＣＭ２０００；株式会社イニシアム製）を用いて、調製例１で得たグルコース由来ＡＧＥおよび実施例５と同様にして調製したグリセルアルデヒド由来ＡＧＥとの相互作用（解離定数）を調べた。具体的な方法は、以下の通りであった：専用センサーチップに、１００μｇ／ｍＬのグルコース由来ＡＧＥあるいはグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ（１μＬ）を滴下し、充分に風乾した後、超純水で当該チップを洗浄した。チップを装置に装着した後、試験容器に、８ｍＬの超純水を入れ、チップを挿入した後、実施例１で得られた麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスの凍結乾燥物を超純水で１ｍｇ／ｍＬとした溶液を８μＬ取り、試験容器に添加した。ＱＣＭ装置のディスプレイ上でチップと麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスとが安定になったことを確認した後、さらに、８μＬを添加した。この操作を２回〜４回繰り返し、グルコース由来ＡＧＥあるいはグリセルアルデヒド由来ＡＧＥと被験物質との相互作用（平衡曲線）を明らかにした。その結果は、当該ＱＣＭ装置に内蔵した専用測定解析ソフトウェアで解析し、解離定数を算出した。
【００５８】
得られた結果を表１に示す。
【００５９】
【表１】
0005804391.tif 000002
【００６０】
表１に示すように、実施例１で得られた麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスは、グルコース由来ＡＧＥおよびグリセルアルデヒド由来ＡＧＥのそれぞれに対して結合活性を有することがわかる。
【００６１】
（実施例７：麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスのグルコース由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−１）分解作用）
調製例１で得られたグルコース由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−１）含有溶液１０ｍｇ／ｍＬに、上記実施例１で得られた焼酎残渣もろみの濃縮エキスを添加し、３７℃にて５日間インキュベーションした。また、当該グルコース由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−１）含有溶液と同体積の０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を添加したものをコントロールとした。
【００６２】
インキュベーション後、このグルコース由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−１）が分解したか否かを、ＡＧＥ−１の蛍光を最大励起波長（Ｅｘ）３７０ｎｍおよび消光波長（Ｅｍ）４５０ｎｍにて測定することによって確認した。さらにコントロールの蛍光強度から各添加濃度の蛍光強度を減算した後、コントロールの蛍光強度に対する割合を求め、ＡＧＥ−１分解率（％）を算出した。
【００６３】
得られた結果を図２に示す。なお、図２において、縦軸はＡＧＥ−１分解率（％）を表し、横軸は焼酎残渣もろみの濃縮エキスの添加濃度（ｍｇ／ｍＬ）を表す。
【００６４】
図２に示すように、実施例１の焼酎残渣もろみの濃縮エキスの添加量に依存して、ＡＧＥ−１分解率の上昇が見られた。焼酎残渣もろみの濃縮エキスを所定期間にわたってＡＧＥ−１とインキュベートすることにより、既に形成されているＡＧＥ−１が分解されることがわかる。
【００６５】
（実施例８：焼酎残渣もろみの濃縮エキスの各種画分のグリセルアルデヒド由来ＡＧＥの生成阻害作用）
実施例１で得られた麦焼酎残渣もろみの濃縮エキスをスピンタイプ限外濾過用具（Ｖｉｖａｓｐｉｎ；ＧＥヘルスケア社製）に供し、分子量３００００を超える画分の溶液を採取しこれを凍結乾燥した（以下「焼酎残渣もろみＭＷ＞３００００」または単に「ＭＷ＞３００００」という）。さらに、濾液から分子量１００００を超える画分の溶液を採取し、凍結乾燥した（以下「焼酎残渣もろみ１００００＜ＭＷ≦３００００」または単に「１００００＜ＭＷ≦３００００」という）。さらに、濾液から分子量６０００を超える画分の溶液を採取し凍結乾燥した（以下「焼酎残渣もろみ６０００＜ＭＷ≦１００００」または単に「６０００＜ＭＷ≦１００００」という）。さらに、濾液から分子量３０００を超える画分の溶液を採取し凍結乾燥した（以下「焼酎残渣もろみ３０００＜ＭＷ≦６０００」または単に「３０００＜ＭＷ≦６０００」という）。さらに、濾液を分子量３０００以下の画分を凍結乾燥した（以下「焼酎残渣もろみＭＷ≦３０００」または単に「ＭＷ≦３０００」という）。
【００６６】
次いで、１８０ｍｇのＤ−（＋）−グリセルアルデヒド（ＳＩＧＭＡ社製）、３９ｍｇのジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）（ＳＩＧＭＡ社製）、５００ｍｇのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）（ＳＩＧＭＡ社製）、１ｍｇ／ｍＬの被験物質（上記で得られたＭＷ＞３００００、１００００＜ＭＷ≦３００００、６０００＜ＭＷ≦１００００、３０００＜ＭＷ≦６０００、またはＭＷ≦３０００でなる焼酎残渣もろみの濃縮エキスの各分子量画分）および２０ｍＬの０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を秤量し、チューブ内で混合した。このチューブに滅菌済みの蓋をし、蓋の周囲をパラフィルムで密封し、さらにアルミ箔でチューブ全体を覆い遮光して、３７℃で１週間インキュベートした。
【００６７】
次いで、これに最終濃度が５０ｍＭとなるよう予めメタノールに溶解し、５Ｍに調整した水素化ホウ素ナトリウムのメタノール溶液を加え、３７℃で４時間インキュベートした。生成したＡＧＥを、グリセルアルデヒド由来ＡＧＥ測定ＥＬＩＳＡキット（株式会社アップウェル製）を用いて測定した。なお、各測定結果について、被験物質を混和させることなく、上記と同様にして測定した結果（コントロールの生成率）を１００％とした場合のグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ生成阻害率の百分率（％）を以下の式：
【００６８】
【数１】
0005804391.tif 000003
【００６９】
より算出した。
【００７０】
得られた結果を図３に示す。
【００７１】
図３に示すように、実施例１で得られた焼酎残渣もろみの濃縮エキスには、グリセルアルデヒド由来ＡＧＥの生成を阻害する効果を有し、特に６０００以下の分子量（例えば、３０００＜ＭＷ≦６０００、またはＭＷ≦３０００でなる焼酎残渣もろみの濃縮エキスの各分子量画分）において、一層優れた生成阻害効果を示していたことがわかる。
【００７２】
（実施例９：焼酎残渣もろみの濃縮エキスの各種画分のグルコース由来ＡＧＥの生成阻害作用）
実施例８におけるグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ生成阻害試験で使用したＤ−（＋）−グリセルアルデヒドの代わりに、３６０ｍｇのＤ−グルコースを用い、かつ検出法をグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ測定ＥＬＩＳＡキットを用いた方法の代わりに、ヒトグルコース由来ＡＧＥポリクローナル抗体（株式会社アップウェル社製）を用いたＥＬＩＳＡ法に変更したこと以外は実施例８と同様にして、グルコース由来ＡＧＥの定量を行った。なお、各測定結果について、被験物質を混和させることなく、上記と同様にして測定した結果（コントロールの生成率）を１００％とした場合のグルコース由来ＡＧＥ生成阻害率の百分率（％）を上記と同様にして算出した。
【００７３】
得られた結果を図４に示す。
【００７４】
図４に示すように、実施例１で得られた焼酎残渣もろみの濃縮エキスには、グルコース由来ＡＧＥの生成を抑制する効果を有し、特に６０００以下の分子量（例えば、３０００＜ＭＷ≦６０００、またはＭＷ≦３０００でなる焼酎残渣もろみの濃縮エキスの各分子量画分）において、一層優れた生成抑制効果を示していたことがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明によれば、終末糖化産物（ＡＧＥｓ）に結合し、ＡＧＥｓの生成を抑制し、ＡＧＥｓを分解しそして細胞への毒性が強いと考えられるグリセルアルデヒド由来ＡＧＥ（ＡＧＥ−２）による細胞アポトーシスを抑制し得る物質が提供される。本発明の焼酎残渣もろみの濃縮エキスまたは該焼酎残渣もろみの濾液もしくは上清の濃縮エキスを有効成分として含む抗糖化剤は、例えば、糖尿病合併症（血管症、腎症、網膜症など）、神経障害、アルツハイマー病、動脈硬化症、悪性腫瘍、骨疾患、神経変性疾患、皮膚の老化などの疾患や症状の予防および治療に用いられ得る。本発明の焼酎残渣もろみの濃縮エキスまたは該焼酎残渣もろみの濾液もしくは上清の濃縮エキスを有効成分として含む抗糖化剤は、食物由来であるので、飲食品、医薬品、化粧品、石鹸、皮膚塗布剤、点鼻剤、坐剤などに安全に配合され得る。さらに、本発明によれば、通常廃棄され得る焼酎残渣もろみを有効に利用することができる。
【図１】
0005804391.tif 000004
【図２】
0005804391.tif 000005
【図３】
0005804391.tif 000006
【図４】
0005804391.tif 000007