(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性Ｃ型肝炎感染症、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、脂肪肝、又は肝性脳症に罹患した対象の処置及び／又は予防で使用するための、初乳由来抗LPS強化免疫グロブリン製剤を含む組成物。
【請求項２】
前記対象が、上昇したレベルのアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）又はアラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記処置及び／又は予防が、対象のAST又はALTのレベルを減少させることを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記初乳がウシ初乳である、請求項１乃至４のいずれか一つに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、病的障害、例えば慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の合併症または障害の進行を治療、遅延または防止するための、抗ＬＰＳ抗体で強化された調製物、例えば、ほ乳類初乳または鳥卵由来のもの、および任意でさらに疾患関連抗原に対する抗体、初乳、乳または乳製品成分／複数可および任意のアジュバントの使用に関する。本発明はさらに、抗ＬＰＳ強化抗体調製物および病的障害に対し特異的な少なくとも１つの抗原を認識する抗体の組み合わせを含む複合組成物ならびに免疫関連障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本出願を通して言及される出版物はすべて参照により全体が本明細書に組み込まれ、本明細書で引用されるすべての参考文献が含まれる。
【０００３】
慢性肝炎は少なくとも６ヶ月続く肝臓の炎症である。慢性肝炎は、急性肝炎よりずっと一般的ではないが、何年も、さらには何十年も持続し得る。ほとんどの人々においては、きわめて軽度であり、著しい肝損傷を引き起こさない。しかしながら、人によっては、継続する炎症が徐々に肝臓を損傷し、ついには肝硬変（肝臓の重傷瘢痕）、肝不全、時として肝癌となる。慢性肝炎は通常、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）および薬物により引き起こされる。
【０００４】
慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染は、宿主が有効な免疫応答を確立できないことにより特徴づけられる。同時に、慢性ＨＣＶ感染は、持続性の異常に高レベルの、免疫活性化を伴う。この活性化は、肝損傷および疾患進行の一因となる。慢性ＨＣＶ感染患者は、非常に様々な臨床経過を有し、肝硬変を発症するものもあれば、肝疾患の進行を示さないものある。
【０００５】
同時エタノール消費を含むいくつかの危険因子は、加速型肝損傷および肝硬変への進行と関連づけられている。慢性ＨＣＶおよびエタノール消費を両方有する患者は、肝疾患の加速された進行を有することが見いだされている。これは、ＬＰＳのレベルの増加と関連づけられている[Bedogni， G. Am. J. Gastroenterol. 103(9): 2248-53
(2008)]。興味深いことに、最近の研究は、ＨＣＶ非構造タンパク質ＮＳ５ＡはＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）４を活性化し、これはまた、ＬＰＳによっても活性化されることを示している。[Machida, K. et al. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 106(5):1548-53 (2009]。
【０００６】
ＬＰＳは肝疾患の進行だけでなく、慢性感染の永続化と関連し得る。自己限定感染患者に比べ、慢性ＨＣＶ患者由来の単球は、ＨＣＶコアタンパク質またはＬＰＳに応答して、著しくより多くのＩＬ−１０およびＴＮＦαを産生する[Martin-Blondel,
G. et al. J. Viral. Hepatitis (March 11,
2009)]。このように、消化管微生物産物のトランスロケーション、免疫活性化および肝疾患の進行は密接に関係するように見えるが、因果関係の証拠は欠如している。さらに、ＬＰＳレベルとウイルス排除の間には関係があるようにみえるが、これは解明する必要がある。このように、これらの関係を明らかにすることを目的とする研究が必要である。微生物トランスロケーションが免疫活性化および肝疾患の進行を推進するなら、微生物トランスロケーションを減少させ、または防止する戦略が免疫活性化、よって慢性ＨＣＶ感染の自然歴に対し著しい影響を有し得る。
【０００７】
突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）は慢性肝疾患、例えば肝硬変、門脈圧亢進症および腹水症の一般的な重症の合併症である。ＳＢＰは３０％までの患者で起こり、２５％までの院内死亡率を伴う。よどんだ免疫除去された腹水中への細菌トランスロケーションは、ＳＢＰの主な発症機序であると考えられる。穿刺術および薬効範囲が広い抗生物質療法が急性感染の有効な治療を構成するが、多くの患者が抗生物質療法に対し益々耐性をもつようになっている病原体によるＳＢＰの再発性エピソードに苦しんでいる[Song,
K.H. et al. BMC Infect Dis. 9(1): 41 (2009)]。慢性抗生物質を使用するＳＢＰ予防のための方法は、議論の余地があり、抗生物質耐性種の出現と関連する[Cohen,
M.J. et al. Cochrane Database Syst Rev. 2: CDO04791 (2009)]。
【０００８】
近年、細菌トランスロケーションと肝硬変の合併症の発生率の間の関連の増加が見いだされている。血清または内毒素血中の細菌産物（リボソーム１６ｓ  ＲＮＡ）のいずれか（ＬＰＳまたはＬＢＰ）のレベルは、静脈瘤出血、肝腎症候群および肝硬変患者において見られる運動過多性循環状態と相関されている[El-Naggar,
M.M. 'et al. J. Med. Microbiol. 57(Pt 12):1533-8 (2008)]。
【０００９】
数十年間、家畜の乳腺を介する免疫源特異抗体の分泌の増加を得るために様々な試みがなされてきた。そのような試みは、乳を介する大量の免疫源特異抗体の産生を目的としている。しかしながら、成熟乳中の抗体レベルは、初乳で達成することができるものに比べ、依然として低いまま（約一桁）である。
【００１０】
初乳（最初の乳としても知られている）は、妊娠後期および生後数日に乳腺から産生される乳の形態である。ヒトでは、高濃度の栄養分および抗体を有するが、量が少ない。初乳は、糖質、タンパク質、無機塩、ビタミンおよび免疫グロブリンが高い。初乳はまた、様々な浮遊細胞、例えば顆粒およびストローマ細胞、好中球、単球／マクロファージおよびリンパ球を含み、ならびに成長因子、ホルモンおよびサイトカインを含む。
【００１１】
白血球もまた、初乳中多数存在し、ウイルスおよび細菌に対する保護を可能にする。初乳白血球は、とりわけ腸の免疫に必須である抗体および免疫グロブリンクラスに関し、新生子ウシの受動免疫を増強する。
【００１２】
初乳で見られる多数の分泌型抗体は新生児の喉、肺、および腸における粘膜の保護を助ける。ウシ初乳（ＢＣ）は３つの主クラスの免疫グロブリン、すなわちＩｇＧ、ＩｇＭおよびＩｇＡを含む。
【００１３】
上記で示した通り、初乳は乳腺の特徴的な生理および機能状態から生じるきわめて独特な産物である。反芻動物では、初乳と成熟乳の間の主要な組成差は、非常に高い量の生理活性成分、例えばラクトフェリンおよび免疫グロブリンであり[Tarbell,
K.V. et al. J. Exp. Med. 199:1467-77 (2004); Bluestone, J.A. and Tang, Q. J.
Autoimmun 24:55-62 (2005); Putnam, A.l. et al J.Autoimmun. 24:55-62 (2005)]、そのうち、ＩｇＧクラスが８０〜９０％を占める。
【００１４】
特異抗原によるウシなどの動物の免疫化により、免疫応答の調節、よって免疫関連障害の治療において使用され得る特異抗体の産生および回収が可能になる。したがって、この方法は、抗原特異抗体および免疫アジュバントを生成するための簡便で安全な手段として機能する。
【００１５】
本発明者らの幾人かによるいくつかの以前の特許および特許出願は、感染症の受動的処置のためのウシ初乳から得られた特定の細菌病原体抗体の使用を記載した。例えば、本発明者らの幾人かによるＷＯ０４／０７８２０９号は、１つ以上の腸内細菌、特定的には、グラム陰性細菌の細胞壁抗原を含むワクチンで宿主動物を免疫化することにより調製された、胃腸障害の治療または予防のための化合物および組成物を記載する。生成された高免疫物質は、経口投与のための錠剤形態である。ＷＯ０３／０９７０９４号は、風媒性病原菌の存在に起因する症状の防止を目的とする鼻腔内投与のための、ほ乳類初乳および初乳抽出物とコンジュゲートされた、抗体（全ＩｇＧ）、またはＦ（ａｂ’）２抗体断片の生成における、高免疫初乳の使用を記載する。
【００１６】
粘膜免疫寛容は、毒性の欠如、投与の容易さ、および抗原特異作用機序のために、自己免疫および炎症疾患の治療のための魅力的なアプローチとされている[Wershil,
B.K. and Furuta, G.T. J. Allergy Clin. Immunol. 121:S380-3; quiz S415 (2008);
Faria, A.M. and Weiner, H.L. Clin. Dev. Immunol. 13:143-57 (2006)]。このように、主な試みは、経口および経鼻投与に好適な安定な初乳由来の生成物を生成するためになされた。例えば、本発明者らの幾人かによるＷＯ９５／０８５６２号は、抗体を豊富に含む初乳から高純度免疫グロブリンを得る方法および活性の実質的な損失なしでこれらの初乳−抗体を錠剤形態に圧縮する可能性を記載する。特異抗体は毒素原性細菌、例えば大腸菌、サルモネラ菌および赤痢菌に対する特異抗原でほ乳類を免疫化することにより得ることができる。本発明者らの幾人かによるＷＯ０６／０５３３８３号は、高免疫初乳、ラクトフェリンまたはラクトフェリシンの生理活性剤組成物に、様々な胃ｐＨ値下での安定性を付与するカルボン酸およびアルカリ化部分を記載する。最後に、本発明者らの幾人かによるＷＯ０３／０８００８２号は、生理活性物質ならびにほ乳類初乳および初乳抽出物の混合物を形成させることを含む、不安定な生理活性物質、好ましくは免疫グロブリンまたはそれらの断片あるいは酵素の胃環境内での生存率を改善する方法を記載する。このコンジュゲーションは抗体または抗体断片を酵素または低ｐＨ条件により引き起こされるタンパク質分解から保護し、胃またはルーメンあるいは他の不適な環境でそれらの機能を保持する。
【００１７】
腸粘膜は身体の最も大きなリンパ器官である。これは、栄養分吸収をしながら消化管内容物に対する物理的および免疫学的障壁を維持するという２つの役割に対処する。絶え間ない抗原刺激に関わらず、通常は炎症が抑制される。以下の２つの重要な概念が、初乳によるウイルス疾患およびその合併症の治療に関連する：粘膜による微生物トランスロケーション、および「経口免疫寛容」と呼ばれる、疾患抗原の経口栄養による増強された免疫調節。
【００１８】
粘膜による微生物トランスロケーションの増加：これは、病因における新しい概念である。ＬＰＳおよび細菌ＤＮＡの存在により定量される、より高い微生物トランスロケーションのレベルは、免疫性疲労および自己免疫損傷の一因となる慢性免疫活性化状態の中心となる。
【００１９】
腸粘膜を介する刺激は免疫寛容誘発免疫応答を引き起こす傾向がある。この特徴を、自己抗原に対する寛容性を誘導するように、よって自己免疫を抑制するように好都合に使用することができ得る。実際、「経口免疫寛容」は、異なる疾患モデルにおいて、経口により摂取させた抗原に対する免疫応答を効果的に減少させることが示されている[Safadi,
R. et al. Am. J. Gastroenterol. 98(11): 2505-15 (2003)]。
【００２０】
ウシ由来の初乳調製物は、毒素による腸管病状を治療する際に使用することができることが以前から、示されている。経口により、腸管毒素原性大腸菌濃縮物に曝露された１０人のボランティアの研究では、対応する大腸菌株でウシを免疫化することにより得られたウシ抗体濃縮物の投与により、生成物を受けた１０人すべての参加者において下痢の発症が防止され；対照的に、対照１０人中９人が下痢を発症した[Tacket,
C.O. et al. N. Engl. J. Med. 318(19): 1240-3 (1988)]。別の研究では、腸管毒素原性大腸菌コロニー形成因子に対する乳由来の抗体の投与により、プラセボが摂取させた１０人中７人の被験者に比べ、１５人中１４人の被件者が下痢から保護された[Freedman,
D.J. et al. J. Infect. Dis. 177(3): 662-7 (1998)]。
【００２１】
同様の病因を有する別の疾患は、偽膜性大腸炎である。ウシをクロストリジウム・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）不活性化毒素および全細胞死滅クロストリジウム・ディフィシルで免疫化することにより得られた免疫乳清タンパク質の効果を評価する研究は、クロストリジウム・ディフィシル疾患の再発を防止することを示した。１６人の患者が、２週間、クロストリジウム・ディフィシル大腸炎の確認されたエピソードに対する標準治療後に、生成物を摂取した。一例を除くすべての例で、クロストリジウム・ディフィシル毒素が便から消失し、３３３日のメジアン追跡期間後、再発はなかった[van
Dissel, J.T. et al. J. Med. Microbiol. 54(2):
197-205 (2005)].
【００２２】
まとめると、これらの観察は、ウシ由来の初乳調製物は、経口により摂取された場合、生物学的に活性な特異抗体濃縮物を腸管腔に送達し、その機序により消化管で様々な型の細菌毒素をブロックすることができ得ることを示唆する。
【００２３】
微生物トランスロケーションは免疫活性化および肝疾患の進行を推進するので、微生物トランスロケーションを減少させ、または防止するための戦略は、免疫活性化、よって慢性ＨＣＶ感染の自然歴に、著しい影響を有し得る。本発明は以下、高レベルの抗体を含む、免疫化ウシ由来のウシ初乳粉末（ＢＰＣ）調製物の、微生物産物、例えばＬＰＳに応答する免疫活性化を減少させることができる免疫調節剤としての使用を明示する。いずれの理論にも縛られないが、本発明者らは、ＢＰＣ抗体の微生物抗原への結合により、それらの血流へのトランスロケーションが防止され、よって、免疫応答が制限され得ると仮定する。免疫系へのこれらの効果により、免疫系が関係する感染症の治療のためにそのような初乳調製物を使用することができる。より具体的には、本発明は慢性肝疾患の治療および寛解における、高濃度の抗ＬＰＳ抗体を含む初乳由来の調製物の使用を提供する。
【００２４】
微生物トランスロケーションはまた、異なる肝臓障害、例えば、ウイルス媒介、薬物媒介、非アルコール性脂肪性肝炎および任意の他の肝障害における肝臓炎症の変化と関連する。微生物トランスロケーションはまた、インスリン抵抗性、２型糖尿病、肥満および体重過多と関連し得る。本発明により示されるように、そのようなトランスロケーションの防止は、本発明の抗ＬＰＳ強化初乳を、任意で制御性Ｔ細胞または任意の他の免疫系成分の制御と共に用い、抗ＬＰＳ強化初乳の、疾患特異抗原を認識する抗体で強化された初乳調製物、例えば、抗インスリン強化初乳との組み合わせを使用して、達成され得る。このように、本発明はさらに、任意の急性または慢性肝疾患、糖尿病およびそれらと関連する任意の合併症、脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、および肥満の治療のための組成物、複合組成物および方法を提供する。
【００２５】
したがって、本発明の目的は組成物での初乳−または鳥卵由来の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の使用および、慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の合併症または障害の進行を治療、遅延、または防止する方法を提供することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、抗ＬＰＳ抗体強化初乳および病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識する抗体の組み合わせを含む複合組成物、ならびに免疫関連障害の治療における、それらの使用を提供することである。
【００２７】
本発明のこれらのおよび他の目的は、説明が進むにつれ、より明らかになるであろう。
【発明の概要】
【００２８】
１つの態様では、本発明は病的障害の治療および／または予防において使用するための抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００２９】
１つの実施形態では、病的障害は急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症である。別の実施形態では、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、出血性静脈瘤、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化からなる群より選択される。別の実施形態では、病的障害は肝損傷である。
【００３０】
別の実施形態では、病的障害は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびこれと関連する任意の障害、感染症、ならびに増殖性疾患からなる群より選択される免疫関連障害である。
【００３１】
また、病的障害は、手術後の続発性腹膜炎および感染、肝性心筋症および低血圧、肝腎症候群、肝細胞癌、アルツハイマー病、任意の型の記憶喪失、任意の型の認知症、注意欠陥障害（ＡＤＨＡ）、任意の型の学習障害、脳へのアルコールまたは薬物の影響、任意の型の免疫媒介疾患、例えば喘息、および腹膜炎からなる群より選択され得る。
【００３２】
別の実施形態では、組成物はさらに、前記病的障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む免疫グロブリン製剤を含む。さらなる免疫グロブリン製剤は、初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００３３】
１つの実施形態では、組成物は制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止または活性化する。
【００３４】
別の実施形態では、組成物は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止し、ここで、前記組成物は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームならびに２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多から選択されるそれらと関連する任意の障害のいずれか１つの治療のためのものである。
【００３５】
別の実施形態では、組成物はメタボリックシンドロームもしくは非アルコール性脂肪性肝炎または両方の治療および／または予防のためのものである。別の実施形態では、組成物は、糖尿病の治療および／または予防、耐糖能障害の治療、例えば耐糖能の減少、血清インスリンレベルの減少、肝臓トリグリセリドレベルの減少、もしくはコレステロールレベルの減少のためのものである。
【００３６】
１つの実施形態では、組成物は、炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対しＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させ、ここで、前記組成物は、感染症、および増殖性疾患の治療のためのものである。
【００３７】
組成物はさらに、治療薬、担体もしくはアジュバントおよび／または非高免疫初乳を含み得る。
【００３８】
組成物は、経口で、エアロゾルとして吸入により、あるいは非経口、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、もしくは直腸投与、またはそれらの任意の組み合わせにより投与するために製剤化され得る。
【００３９】
１つの実施形態では、免疫グロブリン製剤またはそれらに任意の画分は、ＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。
【００４０】
別の実施形態では、組成物は微生物トランスロケーションを阻止する。別の実施形態では組成物は微生物トランスロケーションを阻止し、それにより免疫活性化を調節する。
【００４１】
別の態様では、本発明は対象において免疫寛容を調節するための、または、別の態様では、対象において経口免疫寛容を調節するための、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を増加させる、脾臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導するための、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。
【００４３】
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００４４】
別の態様では、本発明は病的障害の治療および／または予防のための薬剤の製造における、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の使用を提供する。
【００４５】
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００４６】
１つの実施形態では、病的障害は急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症である。
【００４７】
別の実施形態では、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、出血性静脈瘤、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化からなる群より選択される。
【００４８】
別の実施形態では、薬剤は、肝損傷の治療および／または予防のためのものである。
【００４９】
別の実施形態では、病的障害は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、感染症、ならびに増殖性疾患からなる群より選択される免疫関連障害である。また、病的障害は、手術後の続発性腹膜炎および感染、肝性心筋症および低血圧、肝腎症候群、肝細胞癌、アルツハイマー病、任意の型の記憶喪失、任意の型の認知症、注意欠陥障害（ＡＤＨＡ）、任意の型の学習障害、脳へのアルコールまたは薬物の影響、任意の型の免疫媒介疾患、例えば喘息、および腹膜炎からなる群より選択される。
【００５０】
薬剤はさらに、前記病的障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む免疫グロブリン製剤を含み得る。さらなる免疫グロブリン製剤は、初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００５１】
１つの実施形態では、薬剤は制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止または活性化する。
【００５２】
別の実施形態では、薬剤は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止し、ここで、前記組成物は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームならびに２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多から選択されるそれらと関連する任意の障害のいずれか１つの治療のためのものである。
【００５３】
別の実施形態では、薬剤はメタボリックシンドロームもしくは非アルコール性 脂肪性肝炎または両方の治療および／または予防、糖尿病の治療および／または予防、耐糖能障害の治療、例えば耐糖能の減少、血清インスリンレベルの減少、肝臓トリグリセリドレベルの減少、もしくはコレステロールレベルの減少のためのものである。
【００５４】
１つの実施形態では、薬剤は、炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対しＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させ、ここで、前記組成物は、感染症、および増殖性疾患の治療のためのものである。
【００５５】
薬剤はさらに、治療薬、担体もしくはアジュバントおよび／または非高免疫初乳を含み得る。
【００５６】
１つの実施形態では、薬剤は、経口で、エアロゾルとして吸入により、あるいは非経口、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、もしくは直腸投与、またはそれらの任意の組み合わせにより投与するために製剤化される。
【００５７】
別の実施形態では、免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分は、ＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。
【００５８】
別の実施形態では、組成物は粘膜による微生物トランスロケーションを減少させ、または阻止し、それにより免疫活性化を調節する。
【００５９】
別の態様では、本発明は対象において免疫寛容を調節するための薬剤、または、別の実施形態では、対象において経口免疫寛容を調節するための薬剤の製造における、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の使用を提供した。
【００６０】
別の態様では、本発明は、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を増加させる、脾臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、または脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導するための薬剤の製造における、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の使用を提供する。
【００６１】
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００６２】
１つの態様では、本発明は、治療の必要な対象に治療的有効量の、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を含む組成物を投与する工程を含む病的障害を治療および／または予防するための方法を提供する。抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００６３】
１つの実施形態では、病的障害は急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症である。
【００６４】
別の実施形態では、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、出血性静脈瘤、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化からなる群より選択される。
【００６５】
別の実施形態では、病的障害は、肝損傷である。
【００６６】
別の実施形態では、病的障害は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、感染症、ならびに増殖性疾患からなる群より選択される免疫関連障害である。また、病的障害は、手術後の続発性腹膜炎および感染、肝性心筋症および低血圧、肝腎症候群、肝細胞癌、アルツハイマー病、任意の型の記憶喪失、任意の型の認知症、注意欠陥障害（ＡＤＨＡ）、任意の型の学習障害、脳へのアルコールまたは薬物の影響、任意の型の免疫媒介疾患、例えば喘息、および腹膜炎からなる群より選択される。
【００６７】
別の実施形態では、組成物はさらに、前記病的障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む免疫グロブリン製剤を含む。さらなる免疫グロブリン製剤は、初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００６８】
別の実施形態では、組成物は制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止または活性化する。
【００６９】
別の実施形態では、組成物は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止し、ここで、前記組成物は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームならびに２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多から選択されるそれらと関連する任意の障害のいずれか１つの治療のためのものである。
【００７０】
別の実施形態では、病的障害はメタボリックシンドロームもしくは非アルコール性脂肪性肝炎または両方である。
【００７１】
別の実施形態では、病的障害は糖尿病である。別の実施形態では、病的障害は耐糖能障害である。
【００７２】
別の実施形態では、方法は、耐糖能を減少させ、血清インスリンレベルを減少させ、肝臓トリグリセリドレベルを減少させ、またはコレステロールレベルを減少させる。
【００７３】
別の実施形態では、方法は、炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対しＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させ、ここで、前記組成物は、感染症、および増殖性疾患の治療のためのものである。
【００７４】
別の実施形態では、組成物はさらに、非高免疫初乳および／または治療薬、担体もしくはアジュバントを含む。
【００７５】
組成物は、経口で、エアロゾルとして吸入により、あるいは非経口、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、もしくは直腸投与、またはそれらの任意の組み合わせにより投与され得る。
【００７６】
別の実施形態では、免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分は、ＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。
【００７７】
別の実施形態では、方法は粘膜による微生物トランスロケーションを減少させ、または阻止する。別の実施形態では、方法は粘膜による微生物トランスロケーションを減少させ、または阻止し、それにより免疫活性化を調節する。
【００７８】
別の態様では、本発明は治療の必要な対象に、治療的有効量の、ほ乳類抗ＬＰＳ強初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を投与する工程を含む、対象において免疫寛容を調節するための方法を提供する。また、方法は経口免疫寛容を調節するためのものとすることができる。
【００７９】
対象の肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導するための方法は、治療の必要な対象に、治療的有効量の、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を投与する工程を含む。別の実施形態では、方法は、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を減少させる、脾臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、または脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導するためのものとすることができる。
【００８０】
別の態様では、本発明は、病的障害を治療および予防するための組成物を提供する。本発明の組成物は活性成分として、ほ乳類抗リポ多糖（抗ＬＰＳ）強化初乳由来免疫グロブリン製剤および任意で別の初乳、乳または乳製品成分／複数可、および任意のアジュバント／複数可を含む。免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分は、ＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。任意的な実施形態によれば、本発明の組成物はさらに、前記障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を活性化または阻止する初乳由来免疫グロブリン製剤を含み得る。そのような複合組成物は任意でさらに、追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントを含み得る。
【００８１】
このように、１つの特定の実施形態によれば、本発明は活性成分としてほ乳類抗リポ多糖（抗ＬＰＳ）強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。そのような組成物は、特に、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症の治療、防止および予防に適用可能であり、任意で前記組成物はさらに、追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントを含む。
【００８２】
別の任意的な実施形態によれば、本発明は、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を、前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む少なくとも１つの初乳−またはトリ−由来の免疫グロブリン製剤との組み合わせを含む複合組成物を提供する。そのような複合組成物は、任意でさらに追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントを含み得る。これらの複合組成物は自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれと関連する任意の障害、例えば２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多のいずれか１つを治療するために使用され得る。
【００８３】
別の態様では、本発明は、病的障害の治療および予防のための組成物の製造における、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤および任意で、病的障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識する初乳由来免疫グロブリン製剤の使用を提供する。免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分はＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合することに注意すべきである。任意的な実施形態によれば、本発明は、前記障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識する免疫グロブリンを含む少なくとも１つ免疫グロブリン製剤と、さらに組み合わせた、本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の使用を提供する。そのような複合組成物は、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を活性化または阻止する免疫調節組成物として使用され得る。
【００８４】
さらなる態様では、本発明は病的障害の治療および／または予防のための方法を提供する。本発明の方法は、治療の必要な対象に治療的有効量のほ乳類初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤またはこれを含む組成物を投与する工程を含む。免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分はＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合することに注意すべきである。そのような方法は、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症の治療、防止および予防のために使用され得る。任意的な実施形態によれば、本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤はさらに、前記障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識し、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を活性化または阻止する少なくとも１つ免疫グロブリンと組み合わせることができる。この方法は、特定的には免疫関連障害を治療するために適用され得る。本発明の方法により使用される組成物および複合組成物はまた、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれと関連する任意の障害例えば２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多のいずれか１つを治療するために適用され得ることが、特に認識されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は肝臓酵素を減少させる。
値は平均±標準偏差である。ＡＳＴ；アスパラギン酸トランスアミナーゼ、およびＡＬＴ；アラニンアミノトランスフェラーゼ。
【図２】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図３】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、肝臓においてＣＤ２５＋ＣＤ４＋ＬＡＰ−、ＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。値は平均である。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図４】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ８＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図５】経口Ｔ−ＩｇＧ−初乳はＯｂ／Ｏｂマウスにおいて血清インスリンを減少させる。
値は平均±標準偏差である。
【図６】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、Ｏｂ／Ｏｂマウスにおいて耐糖能を減少させる。
【図７】抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は、Ｏｂ／Ｏｂマウスにおいて肝損傷を減少させる。
値は平均±標準偏差である。ＡＳＴ；アスパラギン酸トランスアミナーゼ、およびＡＬＴ；アラニンアミノトランスフェラーゼ。
【図８】抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は、Ｏｂ／Ｏｂマウスにおいて肝臓トリグリセリド（ＴＧｓ）を減少させる。
値は平均±標準偏差である。
【図９】抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図１０】抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
値は平均±標準偏差である。
【図１１】抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図１２】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図１３】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図１４】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、間質血管細胞（前脂肪細胞を含む）において、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図１５】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、間質血管細胞（前脂肪細胞を含む）において、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋リンパ球の発現を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット
【図１６】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＯｂ／Ｏｂマウスにおいて肝臓酵素を減少させる。
値は平均±標準偏差である。ＡＳＴ；アスパラギン酸トランスアミナーゼ、およびＡＬＴ；アラニンアミノトランスフェラーゼ。
【図１７】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、Ｏｂ／Ｏｂマウスにおいて総コレステロールを減少させる。
値は平均±標準偏差である。
【図１８】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＯｂ／Ｏｂマウスにおいて肝臓ＴＧを減少させる。
Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ初乳の経口投与はＯｂ／Ｏｂマウスにおいて肝臓ＴＧを減少される。値は平均±標準偏差である。減少は、Ｄ、Ｅ、Ｆに対して群Ａで有意であった（＊ｐ＜０．０５）。
【図１９】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＯｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させた。
Ａ．１μｇ、１ｍｇ、３ｍｇのＴ−ＩｇＧを、１００μｇＨＩＢＣと共に経口投与すると、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞が減少した。リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ：１μｇおよび１００μｇのＴ−ＩｇＧの経口投与は、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させた。ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図２０】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＯｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−／ＬＡＰ＋細胞を増加させる。
Ａ；リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ；ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図２１】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＣＤ２５＋ＬＡＰ−肝臓リンパ球の変化を誘導する。
Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ−初乳の経口投与は、ＣＤ２５＋ＬＡＰ−肝臓リンパ球の変化を誘導する。ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図２２】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＣＤ２５＋ＬＡＰ＋脾臓リンパ球を減少させる。
Ａ．Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ−初乳経口投与は、ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋脾臓リンパ球を減少させる。リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ：ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図２３】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−脾臓リンパ球を増加させる。
Ａ．１および３ｍｇのＴ−ＩｇＧならびに１００ｍｇのＨＩＢＣ−初乳の経口投与は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−脾臓リンパ球を増加させる。
【図２４】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させる。
Ａ．Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させる。リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。
【図２５】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させる。
Ａ．１００ｍｇのＴ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させる。リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ．１μｇ、１００ｍｇおよび１ｍｇのＴ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させる。ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図２６】経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脂肪細胞においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋を増加させる。
Ａ．Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪細胞においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋を増加させる。リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ：ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【図２７】経口用抗ＬＰＳ濃縮初乳由来免疫グロブリン製剤は、脂肪細胞のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−を増加させる。
Ａ．Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−を増加させる。リンパ球上でのマーカーの平均表面発現。値は平均±標準偏差である。Ｂ：ＦＡＣＳ分析から得られた代表的なドットブロット。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
生産的免疫応答は自然および獲得免疫細胞の両方に影響を有する正および負のシグナルの有効な統合に起因する。正のシグナルが優勢である場合、細胞活性化および炎症促進性応答が起き、病原微生物、ウイルスならびに形質転換された細胞が排除される。そのような生産的な刺激がない場合、細胞活性化はブロックされ、活性抗炎症性応答が起こりえる。この二元系の調節は、サイトカインの作用、下流シグナル制御経路および細胞−細胞接触により起こる。これらのしきい値の動揺は、病原微生物を処理するには不十分であるか、寛容の損失および自己免疫応答の誘導のいずれかとなる異常応答となり得る。本発明は、免疫関連障害の治療のために活性化様式で作用し得る抗リポ多糖（ＬＰＳ）抗体が強化された初乳由来免疫グロブリン製剤の免疫調節効果を示す。
【００８７】
制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、獲得免疫系の重要な免疫調節成分としてますます認識されている。免疫調節異常は、慢性インスリン非感受性に対する誘因として慢性炎症に至らしめる可能性がある。本発明は特定の実施例において、初乳由来抗ＬＰＳ抗体の経口投与は脂肪組織および脂肪組織関連間質血管系においてＴｒｅｇを促進することを示す。これらの変化は、Ｏｂ／Ｏｂマウスモデルにおいてメタボリックシンドロームおよび肝損傷の軽減を伴う。したがって、本発明は、タボリックシンドロームの軽減および治療のための新規治療組成物を提供する。
【００８８】
本発明者らは、経口投与された抗ＬＰＳ抗体が、肝臓、脾臓、脂肪組織およびＳＶ（間質血管細胞）においてＴｒｅｇを促進したことを示している。ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞、ＣＤ４５＋ＬＡＰ＋ＴおよびＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞が肝臓において誘導される。ＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞が脾臓において誘導される。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞が脂肪組織において誘導される。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞が間質血管細胞において誘導され、ＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞が肝臓において、ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞が肝臓において減少される。
【００８９】
脂肪組織の様々な構成物、例えば成熟脂肪細胞および間質血管細胞は別々の機能を有する。それらは、まとめてアディポカインと呼ばれる異なる種類の生理活性分子を発現し、分泌する。アディポカイン分泌パターンの変化は、２型糖尿病に対する主な危険因子である肥満およびインスリン抵抗性を特徴づける。肥満の、および痩せたズッカーラット由来の間質血管細胞では、局所性の遺伝子型差異が存在する[Turkenkopf, I. J. et al. Int. J. Obes. 12:515-24 (1988)]。ＤＮＡマイクロアレイを使用する遺伝子発現プロファイリングは、脂肪組織、脂肪細胞、および間質血管細胞間の違いを示した[Permana (2008) 前記]。本発明はさらに、これらの組織におけるＴｒｅｇの分布はメタボリックシンドロームおよび肝疾患において重要であることを示して、この概念を支持する。
【００９０】
本発明はさらに、抗ＬＰＳ抗体の投与による脂肪組織およびＳＶにおけるＴｒｅｇの促進は、インスリン抵抗性軽減を伴うことを示す。これは、糖負荷試験により証明される。さらに、肝臓酵素の減少により明らかなように、炎症性肝損傷が本発明により軽減される。
【００９１】
上で記載されるように、本発明は抗ＬＰＳ抗体で強化された初乳の経口投与は脂肪組織および脂肪組織関連間質血管系においてＴｒｅｇを促進する手段として機能することができることを示す。
【００９２】
本発明はまた、Ｔｒｅｇの分布に対する効果による初乳由来成分と抗ＬＰＳ抗体との間の相乗作用を提供する。いくつかのタンパク質が生体防御に関与するものとして母乳中で特定されており[Kahn, S. E. et al. Nature 444:840-6 (2006)]、それには自然免疫系の高濃度メディエーターが含まれる[Poggi, M. et al. Diabetologia (2009)]。これらのメディエーターの中には、複数のデフェンシンタンパク質、スフィンゴ脂質、オステオポンチン、エキソソーム、ＴＬＲ、カテリシジン、好酸球由来ニューロトキシン、および高移動度グループボックスタンパク質１、ならびにＬＬ−３７がある[Poggi (2009) 前記; Nagatomo, T. et al. Clin.
Exp. Immunol. 138:47-53 (2004); Admyre, C. et al. J. Immunol. 179:1969-78
(2007); Oppenheim, J. J. and Yang, D. Curr. Opin. Immunol. 17:359-65 (2005)]。これらは、自然および獲得免疫系を活性化することができる。これらのタンパク質のいくつかは、免疫系を起動する際のそれらの役割により「アラーミン」とも呼ばれる[Oppenheim (2005)前記]。アラーミンはＡＰＣに対する走化性および活性化効果の両方を有し、よって、危険シグナルに対する自然およびＡｇ−特異免疫応答を増幅することができる[Yang, D. et al. J.
Immunol. 173:6134-42 (2004); Oppenheim, J. J. et al. Adv. Exp. Med. Biol.
601:185- 94 (2007)]。ＢＣ（ウシ初乳）は高レベルのβ−スフィンゴ糖脂質（ＢＧＳ）を含み[Martin, M.J. et al. Lipids 36:291-8 (2001);
SaIa-Vila, A. et al. Nutrition 21:467-73 (2005); Van, Y.H.
et al. Diabetes 58:146-55 (2009); Nagatomo, T. et al. Clin. Exp. Immunol.
138:47-53 (2004)]、その組成物は消化管−免疫系のＡＰＣまたは他の成分の効果を決定することができる[Novak, J. et al. Int.
Kev. Immunol. 26:49-72 (2007); Nowak, M. and Stein-Streilein, J. Int. Rev.
Immunol. 26:95-119 (2007); Nikoopour, E. and Schwartz, J.A. Inflamm. Allergy
Drug Targets 7:203-10 (2008); Admyre, C. et al. J. Immunol. 179:1969-78 (2007);
Oppenheim, J. J. and Yang, D. Curr. Opin. Immunol. 17:359-65 (2005); Yang, D.
et al. J. Immunol. 173:6134-42 (2004); Oppenheim, J. J. et al. Adv. Exp. Med.
Biol. 601:185-94 (2007)]。これらのメディエーターのいくつかは、粘膜アジュバントとして機能することができ、腸粘膜においてＡＰＣのサブセットとＴｒｅｇの間のクロストークを増強させる[Vignali, D.A. et al. Nat. Rev. Immunol. 8:523-32 (2008); Margalit, M. et al. J.
Pharmacol. Exp. Ther. 319:105-10 (2006); Godfrey, D.I. and Berzins, S.P.
Immunol. 7:505-18 (2007; Margalit, M. and Ilan, Y. 肝臓
Int. 25:501-4 (2005); Novak, J. et al. Int.
Rev. Immunol. 26:49-72 (2007); Nowak, M. and Stein-Streilein, J. Int. Rev.
Immunol. 26:95-119 (2007); Nikoopour, E. and Schwartz, J.A. Inflamm. Allergy
Drug Targets 7:203-10 (2008)]。Ｔｒｅｇ細胞の誘導により、膵臓流入領域リンパ節（ＰＬＮ）において局所免疫調節により媒介される、β細胞抗原への持続性寛容性が得られ得る[Homann, D. et al. J.
Immunol. 163:1833-8 (1999); Homann, D. et al. Immunity 11:463-72 (1999)]。この介入は動物モデルにおいてかなり有望であるが、ヒト試験ではほとんど効力を有さなかった。糖尿病予防試験では、処置された患者の一部のみが、膵島自己抗原による免疫化により有益な効果を示した[Skyler, J.S. et al. Diabetes Care 28:1068-76 (2005)]。１型糖尿病の防止は、患者が前糖尿病性段階中に免疫化された場合にのみ見られ、免疫化は最近発症した糖尿病を復帰させることはできなかった[Larche, M. and Wraith, D. C. Nat. Med. ll:S69-76 (2005)]。したがって、抗原特異介入は、ヒト、とりわけ最近発症した糖尿病における使用を成功させるために追加のアジュバントを必要とする可能性がある[Harlan (2005) 前記]。
【００９３】
本発明者らは免疫系に対する用量依存的効果を示した。
【００９４】
要約すれば、本発明は、抗ＬＰＳ抗体は初乳アジュバントと共に、Ｔｒｅｇ細胞蓄積を促進することができ、よって、炎症反応を軽減し、肝損傷を改善し、メタボリックシンドローム合併症を改善するための手段として機能することを明確に証明する。さらに、本発明によれば、脂肪組織およびＳＶ中の制御性Ｔリンパ球は、メタボリックシンドローム患者において新規治療標的として機能することができる。さらに、初乳中の免疫グロブリンは抗原特異および非特異様式で、傍観者抗原を標的とすることにより、または非関連抗原に対して誘導させることにより、制御性Ｔ細胞または免疫系に関連する任意の他の細胞を促進することができる。
【００９５】
このように、第１の態様では、本発明は、病的障害の治療および／または予防において使用するための抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【００９６】
本明細書では「治療」は、疾患の症状の重篤度、そのような症状が発症する頻度、またはその両方の減少または排除を指す。
【００９７】
本明細書では「予防」は、疾患の症状またはそのような症状が発症する頻度を完全にまたは部分的に防止または阻止することを指す。
【００９８】
１つの態様では、本発明は、病的障害の治療および予防のための組成物を提供する。本発明の組成物は、活性成分としてほ乳類抗リポ多糖（抗ＬＰＳ）強化初乳由来免疫グロブリン製剤、および任意でさらに初乳、乳または乳製品成分／複数可、および任意のアジュバント／複数可を含む。免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分はＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。任意で、本発明の組成物は、抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤と、前記障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識し、よって前記障害に対し特異的に誘導される免疫応答を活性化または阻止する免疫グロブリンを含む少なくとも１つ免疫グロブリン製剤の組み合わせを含み得る。さらに、本発明の抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、任意の他の免疫調節薬、例えば、限定はされないが、他の初乳由来抗体、他の抗原、他のアジュバント、他のサイトカインまたは免疫系の任意の成分を変化させることができる任意の型の分子と組み合わせることができることに注意すべきである。その組み合わせは１つの製品として、または２つ以上の別個の製品として投与することができる。その組み合わせは、一緒にまたは互いに別々に投与することができる。
【００９９】
１つの特定の実施形態によれば、初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＭからなる群より選択される単量体、二量体または多量体免疫グロブリンならびに任意のそれらの断片を含み得る。上記で示した通り、反芻動物では、初乳と成熟乳の間の主要な組成の違いは、ＩｇＧクラスが８０〜９０％を占める、非常に高い初乳免疫グロブリン量である。
【０１００】
このように、特定的な実施形態によれば、本発明の初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は主にＩｇＧ、特定的には、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２を含む。
【０１０１】
本明細書では、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、２つの重鎖および２つの軽鎖から構築される多量体免疫グロブリンである。各複合体は２つの抗原結合部位を有する。これは最も豊富な免疫グロブリンであり、血液および組織液中に大体等しく分布し、ヒトにおける血清免疫グロブリンの７５％を占める。一般に、ＩｇＧサブクラスの数は、異なる種間で広く異なり、ウサギでの１つのサブクラスからウマにおける７つのサブクラスにわたり、そのため、オルソログを見いだすのは困難である。ヒトでは、例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は最も炎症促進性のＩｇＧサブクラスである。しかしながら、マウスでは、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂが最も炎症促進性のＩｇＧ分子であり、多くのインビボモデル系においてマウスＩｇＧ１およびＩｇＧ３よりも大きな活性を示す。
【０１０２】
任意で、または追加的に、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は分泌性抗体、特定的には、ｓＩｇＡを含み得る。
【０１０３】
二量体および多量体ＩｇＡおよびＩｇＭは、多くの外分泌組織により分泌される。ＩｇＡは、初乳、唾液、涙、気管支分泌物、鼻粘膜、前立腺液、膣分泌物、および小腸からの粘膜分泌物中に存在する主な分泌免疫グロブリンである。ＩｇＡ産生量がすべての他の免疫グロブリンの産生量を超えており、身体により毎日産生される主抗体となり、ヒト乳、乳清および初乳において見られる主免疫グロブリンとなっている。ＩｇＭ分泌はＩｇＡほど多くはないが、ＩｇＡ分泌不足を補うために増加し得る。Ｊ鎖を含むＩｇＡが、外分泌細胞の基底膜の真下の固有層に位置するプラズマＢ免疫細胞により産生され、分泌される。ＩｇＡは、２つの重鎖（Ｍｒ５５，０００）および２つの軽鎖（Ｍｒ２３，０００）から構成される典型的な免疫グロブリン４本鎖構造（Ｍｒ１６０，０００）を有する。ヒトでは、ＩｇＡの２つのサブクラスが存在する。それぞれ、１本および２本の重鎖を有するＩｇＡｌおよびＩｇＡ２が存在する。ＩｇＡは単量体、二量体、三量体または多量体として生じ得る。血漿中では、総ＩｇＡの１０％が多量体であり、残りの９０％は単量体である。分泌されるＩｇＡはほとんどの粘膜細胞の側底面内に位置するＭｒ１００，０００ポリ−Ｉｇ受容体に結合する。受容体−ＩｇＡ複合体は次に、ＩｇＡが分泌される頂端膜側に移行される。二量体ＩｇＡのポリ−Ｉｇ受容体への結合は、Ｊ鎖の存在に完全に依存する。単量体ＩｇＡはその受容体に結合しない。
【０１０４】
ｌｇＧおよびＩｇＡの機能差異は、分子が動作する位置に従う。ＩｇＡは主に、組織液が免疫細胞および化学物質を運搬する方法がほとんどない粘膜表面で見いだされる。そのため、ＩｇＡは（しばしば二量体として）、好ましくは病原体の物理的中和のために使用され、他の免疫機能に対しては効果的すぎる可能性がある。ＩｇＧは、白血球、補体系、マクロファージなどの完全な集合が存在する組織液および血液中に存在し、物理的に、病原体を効果的に中和することができ、また、ＩｇＡよりも伝達／提示役割に効果的であり、すなわち、それらは、より良好に貪食細胞（例えば、キラーＴ細胞およびマクロファージ）によるオプソニン作用を誘導し、補体系をより良好に作動させる傾向がある。
【０１０５】
より特定的には、本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は、脱脂乳、全乳、またはそのようなストリームの再構成形態に直接由来する、初乳、初乳血清、過免疫乳または初乳、初乳乳清（チーズまたはカゼインのいずれか）、チーズまたはカゼイン乳清のいずれか１つから得ることができる。
【０１０６】
本発明の組成物内に含まれる抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳の任意の画分とすることができることは認識されるべきである。このように、本明細書で使用される初乳という用語は、初乳の乳、加工初乳、例えば脂肪、細胞残屑、ラクトースおよびカゼインの１つ以上を部分的にまたは完全に除去するように処理された初乳を含む。
【０１０７】
抗ＬＰＳ抗体および任意で、抗原特異抗体を含む初乳、または乳は、好ましくは動物初乳または乳を搾ることにより収集することができ、このように収集されたものは直接使用することができ、あるいは、さらに処理されてもよく、例えば、抗ＬＰＳおよび任意で、抗原特異抗体が精製され得る。（ＬＰＳおよび任意で、抗原特異的）抗体を初乳または乳から（部分）精製するための方法は、当技術分野において存在する。
【０１０８】
任意のアジュバントが本発明の組成物に添加され得ることがさらに認識されるべきである。そのため、適切なアジュバントは任意の抗原、抗体、スフィンゴ糖脂質、タンパク質、サイトカイン、接着分子、および、抗原提示細胞または免疫系に関連する任意の他の細胞の機能を直接または間接的な様式で活性化または変化させることができる成分とすることができる。
【０１０９】
また、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は、アフィニティー精製抗体またはそれらの任意の断片であり得る。「抗体」という用語は、抗原に結合することができる無傷の分子ならびにそれらの断片の両方、例として、例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２を含むことを意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、無傷抗体のＦｃ断片が欠如しており、無傷抗体よりも、循環からより迅速に除去され、より少ない非特異的組織結合を有し得る。無傷抗体分子のために本明細書で開示された方法に従い、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２ならびに本発明において有用な他の抗体断片が免疫調節のために使用され得ることは認識されるであろう。そのような断片は典型的には、酵素、例えばパパイン（Ｆａｂ断片を生成させるため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成させるため）を使用するタンパク質切断により生成される。
【０１１０】
抗体は、この特定の実施例ではある免疫関連障害に特異な抗原または抗原混合物である抗原と特異的に反応することができる場合、ある一定の抗原を「特異的に認識することができる」と言われ、これにより、分子が抗体に結合される。
【０１１１】
「抗原」は抗体により結合され得る分子または分子の一部であり、さらに、動物に、その抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生させるように誘導することができる。抗原は１つ以上のエピトープを含み得る。「エピトープ」という用語は、抗体により結合され得、その抗体により認識されることもできる任意の分子のその部分を示すことを意味する。エピトープまたは「抗原決定基」は通常、分子の化学的に活性な表面基、例えばアミノ酸または糖側鎖から構成され、特異三次元構造特性および特異電荷特性を有する。
【０１１２】
さらに別の実施形態では、本発明の組成物のための活性成分として使用される抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は、ＬＰＳまたはその任意の断片で免疫化されたほ乳類から得ることができる。任意で、ＬＰＳに加えて、ある実施形態による前記ほ乳類はさらに、前記障害に特異的な少なくとも１つ抗原または少なくとも２つの抗原の混合物、ならびに前記疾患と関連する少なくとも２つの異なる抗原に対して誘導される少なくとも２つの異なる抗体の混合物で免疫化することができる。
【０１１３】
１つの実施形態によれば、前記ほ乳類、好ましくはウシまたはトリを免疫化するために使用されるＬＰＳまたは任意の抗原は、前記障害を患う対象から得られる組織培養細胞、プライマリ細胞または組織試料のいずれか一つの単離および精製ペプチド、精製組換えタンパク質、融合タンパク質、細胞可溶化物、膜調製物、核調製物、または細胞質調製物のいずれか一つとして提供され得る。
【０１１４】
別の実施形態によれば、本発明の組成物は、任意でさらに初乳成分／複数可、例えば、アラーミン、デフェンシン、コロストリニン、および任意の他の初乳または乳由来の糖質、糖脂質または、免疫応答の調節をさらに増強または阻止し得る任意の他の分子もしくは成分、またはそれらの任意の調製物、混合物もしくは組み合わせを含み得る。さらに、本発明の組成物は任意の追加のアジュバントを含み得る。そのため、適切なアジュバントは任意の抗原、抗体、スフィンゴ糖脂質、タンパク質、サイトカイン、接着分子、および抗原提示細胞または免疫系に関連する任意の他の細胞の機能を直接または関節様式で活性化または変化させることができる成分とすることができる。
【０１１５】
組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、鳥卵の構成物を含み、ここで、鳥卵はＬＰＳまたはその断片に特異的なＩｇＹを含む。粗卵黄は、抗体源として使用され得る。しかしながら、トリ抗体は通常、使用前に卵黄から精製または濃縮される。鳥卵の構成物は、当業者により理解されるように、必要に応じて濃縮され、または精製され得る。組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、卵黄、または任意のＩｇＹ抗体−を含むその画分を含む。卵黄は典型的には卵白よりもずっと高濃度のＩｇＹを含むので、卵黄が卵白より好ましい。しかしながら、卵白はいくらかの用途に十分な濃度のＩｇＹを含み得る。
【０１１６】
抗体組成物のいくつかの実施形態では、ＩｇＹは鳥卵の構成物から濃縮され、単離され、または精製される。これは、様々な方法により達成することができる。いくつかの実施形態では、抗体は水希釈法により精製され得る。その後、沈殿が、任意の従来の方法、例えば遠心分離により除去され得る。その後、上清は例えば−２０℃で凍結保存することができる。ＩｇＹはその後、硫酸アンモニウムによる沈殿、その後の透析により単離することができる。所望であれば、ＩｇＹ抗体の力価は、イムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡにより決定することができる。水希釈法は、よく知られた文献、例えばAkita and Nakai (1993)（この方法を教示するために参照により組み込まれる）により、より完全に記載される。他の有用な方法は、例えば、米国特許第４，５５０，０１９号、米国特許第４，７４８，０１８号、および米国特許公開第２００４／０１６１４２７号において記載され、これらはそのような教示のために参照により本明細書に組み込まれる。市販のキットが例えばＰｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）から入手可能である。
【０１１７】
抗体組成物のいくつかの実施形態は、実質的に単離される。そのような実施形態では、非抗体卵黄成分のかなりの画分が除去されている。非抗体卵黄成分は、例えば、卵黄の脂質成分、卵黄の糖質成分、卵黄顆粒、卵黄の疎水性成分、卵黄のステロイド成分、および卵黄の非免疫グロブリンタンパク質成分とすることができる。除去される成分の画分は少なくとも５０％である。いくつかの実施形態では、除去される画分は少なくとも６０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９９％、または９９．９％である。より多くの画分が除去されると、より純粋な抗体組成物が生成される利点がある。除去される画分が少ないほど、必要とされる処理が少なくなる利点がある。
【０１１８】
抗体組成物のいくつかの実施形態は実質的に濃縮される。そのような実施形態では、ＩｇＹの濃度は、卵黄よりも組成物中で多くなる。実質的に濃縮され抗体組成物は、卵黄の少なくとも２倍濃縮されたＩｇＹを含む。実質的に濃縮された抗体組成物のいくつかの実施形態は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１００、１０００、または１０，０００倍濃縮される。より濃縮された抗体組成物は、より少ない体積で同じ質量の抗体を提供するという利点を有する。より低く濃縮された抗体組成物は、必要とされる処理が少なくなる利点がある。
【０１１９】
本開示の抗体組成物は、ＩｇＧおよびＩｇＹ以外のアイソタイプすべてをほとんど除去するように処理され得る。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンは多くのドナー由来とすることができる。かなり多数のドナーが使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は１つのドナー由来である。さらなる実施形態では、抗体は１〜１０ドナー由来である。さらなる実施形態では、抗体は１０〜１００ドナー由来である。さらなる実施形態では、抗体は１００〜１０００ドナー由来である。さらに別の実施形態では、抗体は１０００超のドナー由来である。
【０１２０】
抗体組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、インフルエンザに対して前に免疫化された家禽により産み出された卵を得、その卵の卵黄から抗体画分を分離することを含む方法により製造される。組成物のいくつかの実施形態では、家禽は、例えばワクチン接種により、能動免疫される。家禽は好ましくは、飼い慣らされた家禽である。飼い慣らされた家禽は、ニワトリ、アヒル、ハクチョウ、ガチョウ、シチメンチョウ、クジャク、ホロホロチョウ、ダチョウ、ハト、ウズラ、キジ、ハト、または他の飼い慣らされた家禽である。飼い慣らされた家禽は好ましくはニワトリである。飼い慣らされた家禽は、より好ましくは、主に卵または肉生産のために育てられた、飼い慣らされたニワトリである。家禽は任意のインフルエンザ株、任意のサブタイプのインフルエンザ、任意の型のインフルエンザ、またはそれらの組み合わせに対して免疫化され得る。
【０１２１】
卵または肉生産のために育てられ、この目的に従ってワクチン接種されたニワトリ由来の卵の使用は、処理のための原料として、大量に、非常に低い価格で広く市場で入手可能な卵を使用するという大きな利点がある。以前、抗体の産生のために使用される動物はもっぱら、または主にその目的のために育てられ、少数で、非常に高い経費で維持されていた。
【０１２２】
抗体組成物のいくつかの実施形態では、抗体組成物は、雌鳥を抗原で能動免疫し、免疫化期間後に雌鳥から卵を回収し、卵の卵黄から抗体画分を分離することを含む方法により製造される。任意で、雌鳥から卵を収集することは、免疫化期間後連続して実施することができる。鳥の免疫化は当技術分野で知られた任意の手段により実施され得る。例えば、鳥において免疫応答を効果的に誘発することが知られている、またはほ乳類において免疫応答を効果的に誘発することが知られているワクチンが鳥に投与され得る。多くのそのようなインフルエンザワクチンは、市販されており、当業者により過度の実験なしで日常的に開発され得る。さらに、特異標的を用いてＩｇＹを生産させる方法は、当業者に知られている。
【０１２３】
そのような方法は、例えば、米国特許第４，５５０，０１９号、米国特許第４，７４８，０１８号、および米国特許公開第２００４／０１６１４２７号、ならびに米国特許第６，５３７，５００号において見いだすことができ、それらは参照により組み込まれる。
【０１２４】
１つの実施形態では、本発明は、病的障害の治療および／または予防において使用するための抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤およびさらに非高免疫初乳を含む組成物を提供し、ここで、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は鳥卵由来である。
【０１２５】
１つの実施形態では、病的障害は急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症である。別の実施形態では、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、出血性静脈瘤、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化からなる群より選択される。別の実施形態では、病的障害は肝損傷である。
【０１２６】
別の実施形態では、病的障害は自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、感染症、および増殖性疾患からなる群より選択される免疫関連障害である。
【０１２７】
また、病的障害は、手術後の続発性腹膜炎および感染、肝性心筋症および低血圧、肝腎症候群、肝細胞癌、アルツハイマー病、任意の型の記憶喪失、任意の型の認知症、注意欠陥障害（ＡＤＨＡ）、任意の型の学習障害、脳へのアルコールまたは薬物の影響、任意の型の免疫媒介疾患、例えば喘息、および腹膜炎からなる群より選択され得る。
【０１２８】
１つの実施形態では、本発明の免疫調節組成物は、粘膜による微生物トランスロケーションを減少、排除または阻止し、これによって免疫活性化を調節することができる。免疫系の慢性活性化は、進行性ウイルス感染の特徴であり、疾患転帰を予測することに注意すべきである。「粘膜による微生物トランスロケーション」としても知られている過程において、胃腸管由来の可能性のある循環微生物産物は、ウイルス関連全身免疫活性化の主原因であることが以前、示されている。このように、ある実施形態によれば、本発明の組成物は、免疫機能を調節することができ、または、免疫系の変化に関連しない細菌もしくは細菌関連産物の数を減少または変化させることができる。
【０１２９】
１つの実施形態によれば、本発明は活性成分としてほ乳類抗リポ多糖（ＬＰＳ）強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。そのような組成物は、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症の治療、防止および予防のために特に適用することができ、任意で前記組成物は、追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントをさらに含む。
【０１３０】
より特定的には、本発明によれば、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、例えば、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、静脈瘤出血、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化の少なくとも１つとすることができる。
【０１３１】
さらなる実施形態では、本発明の組成物は、病的障害、例えば任意の型のウイルス疾患、例えばＨＣＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ、およびＥＢＶの治療のために使用され得る。
【０１３２】
そのような初乳由来の調製物は、そのため、追加の治療薬として、肝疾患のために使用される任意の薬物と組み合わせることができることに注意すべきである。
【０１３３】
本明細書では「肝硬変」という用語は、肝機能の進行性消失に至る、肝臓組織の線維性瘢痕組織による置換および結節再生により特徴づけられる、様々な慢性肝疾患の最終的な共通の組織学的転帰を示す。肝硬変は通常、ＢおよびＣ型肝炎ウイルス、アルコール依存症および脂肪肝疾患により引き起こされる。
【０１３４】
本明細書では「腹水症」という用語は、最も一般的には肝硬変および重症肝疾患による、腹腔内での病的な液体貯留の状態を説明する。
【０１３５】
そのような初乳由来の調製物は、そのため、任意の免疫調節治療薬／複数可またはそれらの任意の組み合わせもしくは混合物と組み合わせることができ、免疫関連障害、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、感染症、悪性または感染性疾患を治療および／または防止するための複合免疫調節組成物が生成されることに注意すべきである。
【０１３６】
本発明の初乳由来の組成物は、さらに任意の追加のアジュバントを含み得ることに注意すべきである。
【０１３７】
微生物トランスロケーションはまた、多くの肝障害、例えばウイルス−媒介、薬物−媒介、非アルコール性脂肪性肝炎および任意の他の肝障害における肝臓炎症の変化、ならびにインスリン抵抗性、２型糖尿病、肥満および体重過多と関連するので、本発明の組成物による、このトランスロケーションの防止は、これらの障害の治療において適用され得ることに注意すべきである。したがって、本発明はさらに、任意の急性もしくは慢性肝疾患、糖尿病および糖尿病の合併症、脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、および肥満の治療における、疾患と関連する抗原に対し誘導される抗体、例えば、抗インスリン抗体が強化された初乳調製物と組み合わされる本発明の抗ＬＰＳ組成物の使用を提供する。
【０１３８】
別の実施形態では、組成物はさらに、前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む免疫グロブリン製剤 を含む。さらなる免疫グロブリン製剤は、初乳または鳥卵由来とすることができる。
【０１３９】
１つの任意的な実施形態によれば、本発明は抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤と、前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合し、よって免疫制御細胞、特定的には、制御性Ｔ細胞を調節する免疫グロブリンを含む少なくとも１つの初乳由来免疫グロブリン製剤との組み合わせを含む複合組成物を提供する。そのような調節により、例えば、炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節が得られ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答が阻止され得ることに注意すべきである。
【０１４０】
前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合し、これによって免疫制御細胞、特定的には、制御性Ｔ細胞を調節する免疫グロブリンとしては下記が挙げられる：
【０１４１】
インフルエンザの治療および／または予防のための抗インフルエンザ抗体；ＨＣＶ感染に関連する任意の型の肝癌または急性および慢性肝障害の治療および／または予防のための抗体のための抗ＨＣＶ抗体；ＨＢＶ感染に関連する任意の型の肝癌または急性および慢性肝障害の治療および／または予防のための抗ＨＢＶ抗体；ＣＭＶ感染に関連する急性および慢性障害の治療および／または予防のための抗ＣＭＶ抗体；アルツハイマー病、肝性脳症、任意の型の記憶喪失、注意欠陥障害（ＡＤＨＡ）、任意の型の学習障害、脳へのアルコールまたは薬物の影響の治療および／または予防のための抗アミロイド抗体、関連感染に関連する急性および慢性障害の治療および／または予防のための任意のウイルス、細菌、スピロヘータ、プレオン、寄生虫、胞子または真菌抗原に対する抗体；インスリン抵抗性と関連する任意の障害の治療および／または予防のための抗インスリン抗体；標的抗原に関連する、転移性および非転移性、固形および非固形を含む任意の悪性障害の治療および／または予防のための任意の型の癌関連抗原に対する抗体；任意の型の免疫媒介または自己免疫疾患の治療および／または予防のための疾患特異的および疾患関連抗原に対する抗体；ウイルス疾患の治療および／または予防のための抗ＨＳＶ、ＪＣウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルスおよびＲＳＶ抗体；肺炎の治療および／または予防のための抗マイコプラズマ／レジオネラ抗体；分泌腫瘍の治療および／または予防のための抗ＰＴＨｒｐ、アルドステロン、ステロイド、ＧＨおよびプロラクチン抗体；ＩＢＤの治療および／または予防のための抗ＩＬ−１２、ｏｍｐ  Ｃ抗体；巨赤芽球性貧血の治療および／または予防のための抗内因子抗体；ピロリ菌感染の治療および／または予防のための抗ピロリ菌抗体；バーキットリンパ腫の治療および／または予防のための抗ＥＢＶ抗体；ならびに自己免疫性膵炎、慢性肺疾患、例えばＣＦ、喘息など、肝硬変、肝線維症（ＣＣＬ４）、および高カルシウム血症と関連する抗原に特異的な抗体。
【０１４２】
別の代替実施形態によれば、本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤はさらに、治療される障害に対し特異的でない抗原に向けられる免疫グロブリンを含み得る。そのような抗原は免疫応答に対し調節効果を有する任意の標的免疫関連成分とすることができる。それにより、本発明免疫グロブリン製剤によりそのような疾患非特異抗原が認識されると、免疫応答の変化が生じ得る。そのような調節により、例えば、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節が得られ、前記障害に特異的に向けられる免疫応答が阻止される。別の実施形態によれば、本発明の複合組成物は、任意でさらに追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントを含み得る。
【０１４３】
代替として、あるいはさらに、本発明の初乳由来免疫グロブリン製剤の組み合わせならびにそれら由来の免疫調節組成物は、制御性細胞、または抗原提示細胞の特定のサブセットの活性化または促進により、または、任意の型の細胞−細胞接触により、間接的な様式で作用することができる。そのような抗ＬＰＳ強化複合組成物は、免疫系の異なる構成要素に向けられ得る。例えば、特定の制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞もしくは抗原提示細胞、または免疫系への効果と関連する任意の他の細胞の活性化は、サイトカインまたはケモカインの分泌を誘導し、または任意の他の様式で免疫系に影響する。免疫細胞の変化または促進はさらに、任意の型の制御性細胞、好ましくは、制御性Ｔ細胞、例えば、Ｔｈ３細胞、Ｔｒｌ、Ｔ１７細胞または任意の他の型の制御性、エフェクターまたはサプレッサー細胞の誘導を含み得る。Ｔｈ１７細胞は最近特定されたＣＤ４Ｔヘルパー細胞のサブセットであることに注意すべきである。それらは、外部環境と内部環境の間の界面、例えば、皮膚および胃腸管内面で見いだされる。より特定的には、本発明の初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は制御性Ｔ細胞または任意の他の免疫系に関連する細胞を、抗原特異および非特異様式で、傍観者抗原を標的とすることにより、または非関連抗原に向かって誘導されることにより、促進することができることに注意すべきである。
【０１４４】
このように、別の実施形態によれば、本発明は、本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤と、前記障害と関連する少なくとも１つ抗原に対して誘導される免疫グロブリンを含む少なくとも１つの追加の免疫グロブリン製剤の組み合わせ、免疫関連障害を治療するための複合組成物を生成させることを提供する。したがって、そのような組成物は抗原または疾患特異的とすることができ、または、非抗原特異的様式で、例えば免疫傍観者効果で免疫系の特定の細胞または一部を増強するまたは誘導することができる。
【０１４５】
１つの実施形態では、組成物は制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止または活性化する。
【０１４６】
別の実施形態では、組成物は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止し、この場合、前記組成物は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームならびに２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多から選択されるそれらと関連する任意の障害のいずれか１つの治療のためのものである。
【０１４７】
別の実施形態では、組成物はメタボリックシンドロームもしくは非アルコール性脂肪性肝炎または両方の治療および／または予防のためのものである。別の実施形態では、組成物は、糖尿病の治療および／または予防、耐糖能障害の治療、例えば耐糖能の減少、血清インスリンレベルの減少、肝臓トリグリセリドレベルの減少、もしくはコレステロールレベルの減少のためのものである。
【０１４８】
１つの実施形態では、組成物は、炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させ、ここで、前記組成物は、感染症、および増殖性疾患の治療のためのものである。
【０１４９】
組成物はさらに、治療薬、担体もしくはアジュバントおよび／または非高免疫初乳を含み得る。
【０１５０】
本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は能動的または受動的処置のいずれかのために使用され得ることが、さらに認識されるべきである。
【０１５１】
本発明の免疫調節組成物のさらなる実施形態では、前記免疫関連障害は自己免疫疾患、感染症、および増殖性疾患のいずれか１つである。
【０１５２】
本発明の組成物は、急性合併症の治療、またはこれらの合併症の発症もしくは再発の防止に適用することができることに注意すべきである。
【０１５３】
１つの実施形態によれば、本発明の複合組成物は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節をもたらし、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止する。そのような制御は、制御性Ｔ細胞、抗原提示細胞、任意の型のＴ細胞またはＢ細胞、免疫系と直接または関節的に関連する任意の細胞の機能、または任意の型のサイトカインもしくはケモカイン、あるいはアジュバントを含み得る。この特定的な実施形態によれば、そのような組成物は自己免疫疾患の治療に適用され得る。自己免疫障害の例としては、円形脱毛症、ループス、強直性脊椎炎、メニエール病、抗リン脂質抗体症候群、混合性結合組織病、自己免疫アジソン病、多発性硬化症、自己免疫溶血性貧血、重症筋無力症、自己免疫肝炎、尋常性天疱瘡、ベーチェット病、悪性貧血、水疱性類天疱瘡、結節性多発性関節炎、心筋症、多発性軟骨炎、セリアックスプルー−皮膚炎、多腺性症候群、慢性疲労症候群（ＣＦＩＤＳ）、リウマチ性多発筋痛症、慢性炎症性脱髄、多発性筋炎および皮膚筋炎、慢性炎症性多発ニューロパチー、原発性無ガンマグロブリン血症、チャーグ・ストラウス症候群、原発性胆汁性肝硬変、瘢痕性類天疱瘡、乾癬、クレスト症候群、レイノー現象、寒冷凝集素症、ライター症候群、クローン病、リウマチ熱、円板状ループス、関節リウマチ、本態性混合型、クリオグロブリン血症サルコイドーシス、線維筋痛症、強皮症、グレーブス病、シェーグレン症候群、ギラン・バレー、全身硬直症候群、橋本甲状腺炎、高安動脈炎、突発性肺線維症、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、潰瘍性大腸炎、ＩｇＡ腎症、ブドウ膜炎、インスリン依存性糖尿病（１型）、血管炎、扁平苔癬、および白斑が挙げられるが、それらに限定されない。本発明で記載される複合組成物は、細胞、組織または臓器移植、例えば、腎臓、肝臓、および心臓移植と関連する異常な、または望まれない免疫応答と関連する障害、例えば、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療または防止するために、または同種移植片拒絶を防止するために投与することができる。
【０１５４】
さらに別の実施形態では、本発明の複合組成物は、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、例えば、２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多の任意の１つを治療するために使用され得る。
【０１５５】
また、本発明の複合組成物は、炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節をもたらし、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させることができる。そのような制御は、制御性Ｔ細胞、抗原提示細胞、任意の型のＴ細胞またはＢ細胞、免疫系と直接または関節的に関連する任意の細胞の機能、または任意の型のサイトカインもしくはケモカイン、あるいはアジュバントを含み得る。この特定的な実施形態によれば、そのような組成物は、感染症、および増殖性疾患の治療において適用することができる。
【０１５６】
１つの特定の実施形態によれば、悪性増殖性疾患は固形または非固形腫瘍、例えば、癌腫、肉腫、メラノーマ、白血病、ミエローマまたはリンパ腫であり得る。
【０１５７】
別の特定の実施形態によれば、本発明の組成物は、癌腫、例えば肝細胞癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌を防止および／または治療することを対象とする。さらに別の実施形態では、本発明の組成物は白血病、より特定的には、急性もしくは慢性白血病を防止および／または治療するために使用され得る。
【０１５８】
本明細書では、本発明を説明するために、「癌」、「腫瘍」、および「悪性腫瘍」はすべて、組織または臓器の過形成に同等に関連する。組織がリンパまたは免疫系の一部である場合、悪性細胞は、循環細胞の非固形腫瘍を含み得る。他の組織または臓器の悪性腫瘍は、固形腫瘍を生成させ得る。一般に、本発明の方法および組成物は、非固形および固形腫瘍の治療において使用され得る。
【０１５９】
本発明において企図される、悪性腫瘍は、癌腫、メラノーマ、リンパ腫および肉腫からなる群より選択され得る。本発明において有用性が見いだされ得る悪性腫瘍としては、血液悪性腫瘍（白血病、リンパ腫および骨髄増殖性疾患を含む）、低形成性および再生不良性貧血（ウイルス誘導性および特発性の両方）、骨髄異形成症候群、すべての型の腫瘍随伴症候群（免疫媒介および特発性の両方）および固形腫瘍（肺、肝臓、胸部、結腸、前立腺、胃腸管、膵臓およびカポジを含む）が挙げられるが、それらに限定されない。より特定的には、悪性障害は、肝細胞癌、結腸癌、メラノーマ、ミエローマおよび急性もしくは慢性白血病であり得る。
【０１６０】
別の実施形態によれば、本発明の免疫調節組成物は、特定的には感染症、例えば、ウイルス病原体、例えばＨＣＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ、およびＥＢＶにより引き起こされる病状を治療するのに適用され得る。
【０１６１】
１つの特定の実施形態によれば、本発明の複合免疫調節組成物は、Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３抗炎症反応をもたらし得る。より特定的には、そのような抗炎症反応は、炎症促進性サイトカイン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６の量または発現の減少または低減を伴い得る。本発明によるそのような減少または低減は、未処置対照に比べ、約５％〜９９％の低減、特定的には、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の低減とすることができる。さらに別の特定の実施形態では、本発明の組成物は、抗炎症性サイトカイン、例えばＴＧＦ−β、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９およびＩＬ−１３の量または発現を上昇および増加させ得る。より特定的には、抗炎症性サイトカインの増加、誘導または上昇は、未処置対照に比べ、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の増加とすることができる。
【０１６２】
本発明の複合免疫調節組成物の抗炎症性効果は、制御性細胞の特定のサブセット、抗原提示細胞または任意の型の細胞−細胞接触の活性化または促進により、あるいはサイトカインおよび／またはケモカインの直接または間接的活性化により達成され得ることが認識されるべきである。任意の型の制御またはエフェクター細胞、特定的には制御性Ｔ細胞、例えばＴｈ３およびＴｒｌ細胞が関係し得ることにさらに注意すべきである。このように、本発明の初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は、傍観者抗原を標的にすることにより、あるいは、非関連抗原に対して誘導されることにより、抗原特異および非特異様式で制御性Ｔ細胞または免疫系に関係する任意の他の細胞を促進することができる。
【０１６３】
より特定的には、本発明の組成物により活性化または促進される免疫−関連細胞は、ＡＰＣ（例えばＤＣ）、Ｔｒｅｇ細胞または、免疫系と直接または間接的に関連する任意の他の細胞、例えば、限定はされないが、血小板、マクロファージ、任意の型のＢ細胞、Ｔ細胞（ダブルネガティブ細胞を含む）、および任意の型のノンプロフェッショナル抗原提示細胞、脂肪細胞、内皮細胞、臓器、特定的には、治療される免疫関連障害と関係がある臓器の一部である任意の型の細胞、ならびに制御性増強または抑制特性を有する任意の型の細胞とすることができる。より特定的には、本発明の組成物は免疫関連細胞例えば、特異的なＴ制御性細胞、例えば、脂肪細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えばＤＣに対する抗炎症性効果を証明する。そのため、１つの実施形態によれば、本発明の組成物は、肝障害を患う対象においてＴ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞、または制御特性、抑制または誘導のいずれかを有する任意の細胞、脂肪細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）の少なくとも１つを誘導するために使用され得る。
【０１６４】
上記で示した通り、本発明の組成物または任意的な複合組成物は、病的障害、特定的には、肝障害、または免疫関連障害を防止および／または治療することを対象とする。本明細書では、「障害」という用語は、正常機能の異常が存在する状態を示す。「疾患」は、患者またはその人と接触するものに対し不快感、機能不全、または窮迫を引き起こす任意の身体または精神の異常な状態である。時として、この用語は、傷害、能力障害、症候群、症状、異常挙動、ならびに構造および機能の非定型変化を含むように広く使用され、他の状況では、これらは、区別可能なカテゴリとして考えられる。「疾患」、「疾患」、「病状」および「病気」は本明細書では同様に使用されることに注意すべきである。さらに、「免疫関連障害もしくは疾患」または「肝障害」は、正常でない免疫応答と関連する、それにより引き起こされる、それに関係がある任意の障害であり得ることに注意すべきである。そのような障害は通常、妨害された免疫応答と共に起こり得、正常でない免疫応答に影響を有する、またはそれにより影響されると考えられる。
【０１６５】
組成物は、経口で、エアロゾルとして吸入により、または非経口、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、もしくは直腸投与、または任意のそれらの組み合わせにより投与するために製剤化され得る。
【０１６６】
１つの実施形態では、免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分はＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。
【０１６７】
別の実施形態では、組成物は、微生物トランスロケーションを阻止する。別の実施形態では、組成物は微生物トランスロケーションを阻止し、よって免疫活性化を調節する。
【０１６８】
別の態様では、本発明は、対象において免疫寛容を調節するための、または別の態様では、対象において経口免疫寛容を調節するためのほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。
【０１６９】
１つの好ましい実施形態によれば、本発明の組成物のいずれも、経口で、またはエアロゾルとして吸入により、または静脈内、筋内、皮下、腹腔内、非経口、経皮、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、直腸もしくは皮下投与により、あるいは任意のそれらの組み合わせにより、投与され得る。低い胃ｐＨならびに胃および腸管プロテアーゼの存在を考えると、経口で投与される抗体は、胃腸管で分解されると予測される。しかしながら、ウシ初乳ＩｇＧ（ＢＣＩｇ）は、他の免疫グロブリンに比べ、ＧＩ破壊に対し特に抵抗性であると言及されている。ＢＣＩｇの初期の研究は、著しく「異種宿主の腸におけるタンパク質分解消化に対し抵抗性がある」と言及した。ウシＩｇＧ１は他のＩｇよりも、トリプシン、キモトリプシンおよびペプシンによるタンパク質分解に対し幾分抵抗性が高いという証拠も存在する。これらの結果から、経口抗体療法の初期開発の多くが推進された。より特定的には、本発明の組成物は、粘膜投与、例えば、肺、頬側、経鼻、鼻腔内、舌下、直腸、膣内投与およびそれらの任意の組み合わせのために好適であり得る。
【０１７０】
上記で示した通り、経口および経鼻投与が好ましいが、任意の他の投与経路、例えば、静脈内、静脈内、筋内、皮下、腹腔内、非経口、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、直腸もしくは皮下投与、またはそれらの任意の組み合わせが適用可能であることが認識されるべきである。
【０１７１】
さらに、本発明の組成物および複合組成物により使用される抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は、調製物、例えば食品添加物、水溶液、油性調製物、エマルジョン、ジェルなどで調製することができ、これらの調製物は経口、局所、直腸、経鼻、頬側、または膣内投与され得る。調製物は、従来の非毒性の許容される担体を含む投与製剤で投与することができ、１つ以上の許容される添加物、例えば許容される塩、ポリマー、溶媒、緩衝剤、賦形剤、バルク剤、希釈剤、賦形剤、懸濁化剤、滑沢剤、アジュバント、ビヒクル、送達系、乳化剤、崩壊剤、吸収剤、保存剤、界面活性剤、着色剤、香味剤または甘味剤もまた含み得る。本発明の任意的な剤形は、当技術分野で知られている技術を用いて、飲料に組み込むための粉末、丸剤、シロップ、カプセル、錠剤、顆粒、ビーズ、チュアブルトローチまたは食品添加物とすることができる。このように、本発明の免疫調節組成物は、経口粉末、丸剤、カプセル、茶、抽出物、乾燥抽出物、舌下剤、噴霧剤、分散物、溶液、懸濁剤、エマルジョン、泡、シロップ、ローション、軟膏、ジェル、ペースト、皮膚パッチ、注射剤、膣内クリームおよび坐剤からなる群より選択される形態で投与され得る。
【０１７２】
治療製剤は任意の従来の投与製剤で投与され得る。製剤は典型的には、上で規定される少なくとも１つ活性成分を、１つ以上のその許容される担体と共に含む。
【０１７３】
各担体は、他の構成成分と適合可能であり、患者にとって有害でないという意味で、薬学的および生理学的の両方で許容されるべきである。製剤としては、経口、直腸、経鼻、または非経口（例えば皮下、筋内、静脈内および皮内、あるいは吸入による）投与に好適なものが挙げられる。製剤は、都合良く、単位剤形で提供することができ、薬学分野においてよく知られた任意の方法により調製され得る。そのような化合物すべての性質、利用能および供給源、ならびに対象において望ましい効果を生成させるのに必要とされる有効量を含む投与は当技術分野でよく知られており、本明細書でさらに説明する必要はない。
【０１７４】
医薬組成物の調製は当技術分野でよく知られており、多くの論文およびテキストブックで記載されており、例えば、Remington's
Pharmaceutical Sciences, Gennaro A. R. 編, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990、およびとりわけその中の pp. 1521-1712（参照により完全に本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０１７５】
本発明の医薬組成物は、適正な医療行為に従い投与し、服用させることができる。
【０１７６】
本発明の組成物は、遊離形態の活性物質を含むことができ、直接、治療される対象に投与され得る。製剤は典型的には、上記で規定される少なくとも１つ活性成分を、１つ以上の許容されるその担体と共に含む。各担体は、他の構成成分と適合可能であり、患者にとって有害でないという意味で、薬学的および生理学的の両方で許容されるべきである。
【０１７７】
製剤としては、経口、経鼻、または非経口（例えば皮下（ｓ．ｃ．）、筋内（ｉ．ｍ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）および皮内、あるいは肺粘膜への吸入による）投与に好適なものが挙げられる。製剤は、都合良く、単位剤形で提供することができ、薬学分野においてよく知られた任意の方法により調製され得る。そのような化合物すべての性質、利用能および供給源、ならびに対象において望ましい効果を生成させるのに必要とされる有効量を含む投与は当技術分野でよく知られており、本明細書でさらに説明する必要はない。
【０１７８】
本発明の医薬組成物は一般に、緩衝剤、そのオスモル濃度を調節する作用物質、および任意で、１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤および／または当技術分野で知られている添加物を含む。補助的な活性成分もまた、組成物に組み込むことができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール、など）、それらの好適な混合物、おび植物油を含む溶媒または分散媒質とすることができる。特有の流動性は、例として、コーティング、例えばレシチンを使用することにより、分散物の場合要求される粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤の使用により、維持することができる。
【０１７９】
本明細書では、「薬学的に許容される担体」は、任意のおよびすべての溶媒、分散媒質、コーティング、抗菌および抗真菌剤などを含む。医薬活性物質のためのそのような媒質および作用物質の使用は、当技術分野でよく知られている。従来の媒質または作用物質のいずれも活性成分と適合しない場合を除き、治療組成物におけるその使用が企図される。
【０１８０】
経口投与が錠剤またはカプセルの形態である場合、活性薬物成分（抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤または他の免疫グロブリン製剤との組み合わせ）は、非毒性の薬学的に許容される不活性担体、例えばラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、加工糖、加工デンプン、メチルセルロースおよびその誘導体、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール、および他の還元および非還元糖、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ステアリン酸カルシウムなどと組み合わせることができる。液体形態の経口投与のために、活性薬物成分は、非毒性薬学的に許容される不活性担体、例えばエタノール、グリセロール、水などと組み合わせることができる。望まれる、または必要とされる場合、好適な結合剤、滑沢剤、崩壊剤ならびに着色および香味剤もまた、混合物に組み入れることができる。剤形を安定化するために、安定化剤、例えば抗酸化剤、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、クエン酸、メタ重亜硫酸カルシウム、ヒドロキノン、および７−ヒドロキシクマリンもまた添加することができる。他の好適な化合物としては、ゼラチン、甘味剤、天然および合成ゴム、例えばアカシア、トラガカント、またはアルギン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが挙げられる。
【０１８１】
別の態様では、本発明は、病的障害の治療および予防のための免疫調節組成物の製造における、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤および任意で、病的障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識する初乳由来免疫グロブリン製剤の使用を提供する。抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分はＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合することに注意すべきである。任意で、本発明の使用により調製された組成物は、本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤および前記障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識する免疫グロブリンを含む少なくとも１つの免疫グロブリン製剤を含み得る。そのような認識により、制御性Ｔ細胞の変化がもたらされ、結果として、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対するか、あるいは炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節が引き起こされる。これにより、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止または活性化する、複合免疫調節組成物が生成される。
【０１８２】
任意の型の制御またはエフェクター細胞、特定的には制御性Ｔ細胞、例えばＴｈ３およびＴｒｌ［ＴＨ３、Ｔ細胞は粘膜表面で優先的に誘導され、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）−βを分泌する］細胞が関係し得ることに注意すべきである。さらに、本発明の初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は、傍観者抗原を標的にすることにより、あるいは、非関連抗原に対して誘導されることにより、抗原特異および非特異様式で制御性Ｔ細胞または免疫系に関係する任意の他の細胞を促進することができることに注意すべきである。
【０１８３】
１つの実施形態によれば、本発明のために使用される抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＭならびにそれらの任意の断片、混合物または組み合わせからなる群より選択される単量体、二量体または多量体免疫グロブリンを含む。
【０１８４】
さらに別の実施形態では、初乳由来の、乳または乳製品由来の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の本発明による使用は、任意で初乳、乳または乳製品成分／複数可および任意のアジュバント／複数可、好ましくは、アラーミン、デフェンシン、コロストリニンおよびそれらの任意の調製物、混合物または組み合わせをさらに含み得る組成物または複合組成物を製造するためである。本発明の組成物は任意の追加のアジュバントを含み得ることがさらに認識されるべきである。したがって、適切なアジュバントは任意の抗原、抗体、スフィンゴ糖脂質、タンパク質、サイトカイン、接着分子、および抗原提示細胞または免疫系に関連する任意の他の細胞の機能を直接または間接的様式で活性化または変化させることができる成分とすることができる。ある実施形態によれば、本発明はさらに、免疫調節治療薬の免疫調節効果を増強させるための、本発明の複合組成物における初乳または任意の初乳由来調製物の使用を提供することに注意すべきである。
【０１８５】
アラーミンという用語は、感染または組織損傷中に迅速に放出され、宿主防御および組織修復に関与する受容体−発現細胞への効果を起動し、活性化する、一連の構造的に多様な多官能宿主タンパク質を示す。アラーミン機能を有する自然−免疫メディエーターとしては、デフェンシン、好酸球由来ニューロトキシン、カテリシジンおよびＨＭＧＢ１が挙げられる。
【０１８６】
デフェンシンは脊椎動物および無脊椎動物の両方において見られる小さな（１５−２０残基）システインリッチカチオン性タンパク質である。これらは、細菌、真菌およびエンベロープウイルスに対して活性である。これらは６〜８の保存システイン残基を含む１５〜２０のアミノ酸から構成される。免疫系の細胞は、例えば好中球顆粒球およびほとんどすべての上皮細胞において、貪食された細菌を死滅させるのを補助するために、これらのペプチドを含む。ほとんどのデフェンシンは、電気的吸引力により微生物の細胞膜に浸透し、埋め込まれると直ちに、膜内に流出を可能にする細孔を形成することにより機能する。
【０１８７】
本明細書では、「コロストリニン」という用語は、その天然型でほ乳類初乳から得られるポリペプチドを示す。コロストリニンは時として、「コロストリニン（ｃｏｌｏｓｔｒｉｎｉｎｅ）」として知られており、１６，０００〜２６，０００ダルトンの範囲の分子量を有する。コロストリニンは、サブユニッのト二量体または三量体（それぞれが、５，０００〜１０，０００ダルトンの範囲、好ましくは６，０００ダルトンの分子量を有する）を形成することができ、ほとんどプラリン（プロリンの量は任意の他の単一アミノ酸の量よりも大きい）を含む。
【０１８８】
コロストリニンは、サイトカイン、とりわけγインターフェロン（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子ＴＮＦ−α）、インターロイキン（例えばＩＬ−６およびＩＬ−１０）ならびに様々な成長因子の産生を刺激することを特徴とする。
【０１８９】
上で示したように、本発明により使用される抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤およびすべての他の任意的な免疫グロブリン製剤は、ＬＰＳまたはその任意の断片および任意で、さらに、治療される障害に特異的な少なくとも１つ抗原または少なくとも２つの抗原の混合物で免疫化されたほ乳類から得られ得ることに注意すべきである。本発明の手段および方法は、任意の授乳中のほ乳類の初乳、乳または乳製品における高く、長期の抗原特異的抗体産生を得るのに適している。好ましくは、前記動物は家畜である。家畜は、人間により商業ベースで使用される動物であり、乳、肉またはさらには抗体の産生のためのものである。乳の商業規模の生産のためにすでに使用されている家畜は、これらの動物が特別の系であり、およびまたは、乳産生のために最適化されて、飼育され、存在するので、本発明にとって好ましい。好ましくは、前記家畜はウシまたはヤギである。より好ましくは前記家畜はウシである。
【０１９０】
本発明の前記使用の１つの実施形態では、組成物は粘膜による微生物トランスロケーションを減少させ、または阻止する。本発明の前記使用の１つの実施形態では、組成物粘膜による微生物トランスロケーションを減少させ、または阻止し、これによって免疫活性化を調節する。
【０１９１】
１つの実施形態によれば、本発明は、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症の治療、防止および予防のための組成物を製造するための、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の使用に関し、任意で前記組成物はさらに、追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントを含む。
【０１９２】
本発明の使用の１つの実施形態によれば、この特定の組成物は、粘膜による微生物トランスロケーションを減少または阻止し、よって門脈圧亢進症または任意の他の原因によるかに関係なく、細菌または任意の他の感染病原体の急性もしくは慢性肝疾患−関連合併症の病因に対する直接的な影響を変化させる。
【０１９３】
より特定的には、本明細書では、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化の少なくとも１つである。
【０１９４】
これらの合併症は、慢性ＨＣＶ感染、アルコール性肝炎、慢性ＨＢＶ、非アルコール性脂肪性肝炎、薬剤性肝損傷、または急性もしくは慢性肝疾患の任意の他の原因に起因し得ることに注意すべきである。
【０１９５】
任意的な実施形態によれば、本発明は、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の、前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む少なくとも１つの初乳由来免疫グロブリン製剤との組み合わせの使用を提供する。この特定の実施形態によれば、そのような組み合わせの使用は、制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈｌ免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止または活性化する免疫調節組成物を調製するためのものである。任意でそのような複合組成物はさらに、追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントを含む。そのような組成物は、制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止または活性化する。
【０１９６】
さらなる実施形態では、免疫関連障害は自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、感染症、ならびに増殖性疾患のいずれか１つとすることができる。
【０１９７】
本発明の使用の１つの実施形態によれば、本発明の組成物は、急性合併症を治療するために、またはこれらの合併症の発症または再発を防止するために使用され得る。
【０１９８】
別の実施形態によれば、本発明の複合組成物は抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節をもたらし、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を防止する。この特定的な実施形態によれば、そのような組成物は自己免疫疾患の治療において適用され得る。
【０１９９】
また、本発明の複合組成物は炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節をもたらし、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させることができる。この特定的な実施形態によれば、そのような組成物は感染症、および増殖性疾患の治療において適用され得る。
【０２００】
本発明の前記使用のさらに別の実施形態では、本発明の組成物は、経口でまたはエアロゾルとして吸入により、あるいは静脈内、筋内、皮下、腹腔内、非経口、経皮、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、直腸もしくは皮下、またはそれらの任意の組み合わせを介して投与され得る。
【０２０１】
寛容は、自己に対する応答の欠如、または有害な可能性のある免疫応答が防止、抑制され、または有害でないクラスの免疫応答にシフトされるある任意の機序として規定されている。このように、寛容は、その自身の成分に対する免疫系の失認ではなく生産的自己認識に関連する。本発明者らは、自己抗原かどうかに関係なく、疾患関連抗原に曝露されると、免疫系のいくらかの部分が活性化され得、抗原特異的様式で望まれない免疫が抑制されることを証明した。理論に縛られることは望まないが、経口抗原投与は一方では、特定の細胞サブセットを活性化し、特定の細胞を抑制し、望まれない自己免疫を軽減させ、他方では抗ウイルスまたは抗腫瘍関連抗原免疫応答を促進する。免疫系が役割を果たす多くの免疫媒介疾患または障害では、全身免疫系において促進される異なる型のシグナル／細胞間のバランスが、最終的な免疫学的効果を決定する。
【０２０２】
経口免疫寛容は、自然経路を介して身体にアクセスし、その後自己の一部となる外部作用物質を処理するように展開すると考えられる、外因性抗原の存在により駆動される天然の免疫過程である。胃腸管、例えば腸における抗原の経口曝露は活性免疫応答となることを理解すると、抗原特異的療法は、消化管粘膜内に存在する抗原に対する免疫療法のための魅力的なアプローチと考えられ、この場合、それらは非有害な、または非炎症性の免疫環境で処理され得る。したがって、特定の免疫細胞が活性化され得、抗原特異的療法は、慢性肝炎、感染病原体、メタボリックシンドロームおよび本明細書で記載される他の病的障害の免疫療法として機能することができる。
【０２０３】
胃腸恒常性に関与する機序は、異なる型のＴ細胞、例えば制御性Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、と消化管微小環境の間の複雑な相互作用を含む。
【０２０４】
濾胞関連上皮（ＦＡＥ）は抗原取り込みおよびその後の粘膜免疫の誘導において重要な役割を果たす。ＦＡＥ  Ｍ細胞は抗原（Ａｇ）送達を標的にすることにより、全身および粘膜リンパ組織の両方において、Ａｇ特異ＣＤ４＋Ｔ細胞の減少ならびにトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）−βおよびインターロイキン（ＩＬ）−１０−産生ＣＤ２５＋ＣＤ４＋Ｔ−制御性細胞（Ｔｒｅｇ）のレベルの増加を介して経口免疫寛容を促進する。
【０２０５】
腸管ＤＣは、病原性免疫、経口免疫寛容、および腸管炎症の重要な制御因子である。関連するＤＣは、絨毛粘膜のＰＰ、ＭＬＮ、またはＬＰ中に存在し得る。これらの組織はすべて多くの特有のＤＣサブセット、例えば、Ｔｒｅｇの分化を優先的に誘導することができるいくつかを含む。
ＮＫＴ細胞はＮＫ細胞およびメモリーＴ細胞の両方と特性を共有するＴ細胞の独特の系列である。このリンパ球のサブセットは、ＣＤ４＋またはダブルネガティブとすることができ、ＣＤ１ｄ反応性である。これらの細胞は、インバリアントＶα１４−Ｊα１８ＴＣＲ  α−鎖が独特であり、それらのＴ−細胞受容体（ＴＣＲ）β−鎖は、Ｖβ８．２、Ｖβ２、およびＶβ７に偏っている。ＮＫＴ細胞は、それらの糖脂質抗原反応性および優れたサイトカイン産生が独特である。ＮＫＴ細胞がＴｈ１およびＴｈ２応答の両方を生成させることができることは、それらの免疫制御性細胞としての重要性を示す。ＮＫＴリガンドの使用は、これらの細胞の柔軟性を変化させることにより重大な免疫調節効果を誘導する。
【０２０６】
本発明者らは経口免疫寛容誘導におけるＮＫＴ細胞の役割を証明し、最近の証拠は、ＴｒｅｇとＮＫＴ細胞の間のクロストークの証拠を提供した。理論に縛られることを望まないが、ＮＫ細胞は、活性化シグナルに曝露された直後にサイトカインを産生し、Ｔｒｅｇの分化を決定することができると考えられる。
【０２０７】
肝臓は、経口免疫寛容にとって重要であると考えられる。肝臓は、アポトーシスＣＤ８＋Ｔ細胞が抹消免疫応答のクリアランス段階中で蓄積する部位である。正常なマウス肝臓は、通常ではないリンパ球混合物を含み、その中では、ナチュラルキラー（ＮＫ）およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞が豊富であり、アポトーシスＴ細胞もまた存在する。これらの細胞は肝内Ｔ−細胞トラップおよび死滅に関連する。様々な肝細胞型の腸管細菌由来のＬＰＳへの連続曝露は、サイトカイン、抗原提示分子、およびＴ−細胞を不活性化させる同時刺激シグナルの発現を促進すると考えられる。肝臓における免疫寛容誘発環境に対する他の可能な説明はクローン除去、内皮細胞またはクッパー細胞による特異抗原提示、および制御性Ｔ細胞を誘導する能力を含む。
【０２０８】
肝臓微小環境における異なる刺激は、Ｔ−細胞プライミングおよび有効免疫応答の生成と関連し、一方、他のものは寛容をもたらす。樹状細胞による肝臓での抗原提示およびそれらの肝臓への移動は、消化管−肝臓軸における相互作用の一部を表す。肝臓由来ＤＣは、皮膚ＤＣと比べると本質的に免疫寛容誘発性であり、ＩＬ−１０を産生し、低レベルの同時刺激分子を発現する。クッパー細胞および肝細胞によるＩＬ−１０およびＴＧＦ−βの局所分泌は、エフェクター経路ではなく、制御因子の生成の方向にＤＣ機能を偏らせることができる。肝臓類洞内皮細胞（ＬＳＥＣ）は、ＭＨＣクラスＩ上での提示に関係づけられた早期エンドソームコンパートメントへ抗原を輸送することができ、ＣＤ８＋Ｔ細胞へ交差提示できることが説明される。ＬＳＥＣによる抗原提示の結果は、通常寛容であり、ＣＤ８＋Ｔ細胞のアポトーシスならびにＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−４およびＩＬ−１０の分泌を伴う。活性化Ｔ細胞はまた、全身ＣＤ８応答の制御中のアポトーシス経路を制御するための機序としての類洞内の細胞接着分子１（ＩＣＡＭ−１）依存機序によりトラップされる。肝細胞自体は、ＡＰＣとして機能し、未処理Ｔ細胞を活性化することができる。ほとんどの場合、肝細胞による活性化は抗原特異的寛容に至るが、この過程は、Ｔｒｅｇの活性化を含み得る。末梢Ｔｒｅｇは、未成熟ＤＣによる未処理Ｔ細胞の活性化により、またはＩＬ−１０およびＴＧＦ−β（どちらも肝臓環境内に存在する）の存在下で生成される。
【０２０９】
Ｔｒｅｇは消化管−肝臓免疫軸において重要である。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇは、ＬＳＥＣ、クッパー細胞、または肝細胞によるＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を抑制する。この過程は、ＴＬＲ４活性化により克服することができるので、Ｔｒｅｇ、病原体および他の肝細胞の間の相互作用は、肝臓における免疫活性化の結果を決定する。Ｔｒｅｇは、望まれない免疫応答を抑え、ミクロフローラへの応答を制御することができ、多くの消化管の慢性炎症疾患において役割を果たすことができる。Ｔｒｅｇは、消化管下部における共生生物に対する有害な炎症反応を防止することができ、このように、炎症性腸疾患を防いでいる。Ｔリンパの様々なサブセットが、制御機能を示すことが示唆されており、ナチュラルＴｒｅｇ、誘導Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１、およびＴｈ３細胞が挙げられる。これらの細胞は、サイトカインにより活性化することができ、それらの誘導段階は、抗原により駆動され得る。ほとんどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１、Ｔｈ３、およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋）は、樹状細胞と相互作用すると考えられる。Ｔｒｅｇの他のサブセット、例えばＣＤ８＋ＴｒＥ細胞は、腸管上皮細胞により提示される抗原を認識し得る。
【０２１０】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇは、粘膜における免疫応答を制御する際に役に立つと考えられる。ＴＧＦ−βは消化管で産生される最も重要なサイトカインの１つとして出現し、そのＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇとの相互作用は、Ｔ−細胞免疫と寛容の間のバランスを維持する際に重要である。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇでのβ−カテニンの安定形態の発現により、これらの細胞の生存の著しい増強が得られる。炎症性腸疾患に対する保護に必要とされるＴｒｅｇの数は、安定β−カテニン−発現ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇが使用される場合、実質的に減少され得る。ＩＬ−３５は、Ｔｒｅｇ細胞により産生される抑制性サイトカインであり、最大抑制活性のために必要とされる。下記で記載されるように、本発明者らは、本発明による組成物を用いたＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の調節を証明した。
【０２１１】
Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇは、粘膜免疫寛容の確立および維持に重要である。サイトカイン欠乏−誘導アポトーシスは、ＴｒｅｇがエフェクターＴＣＲを阻止する顕著な機序である。したがって、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇは、エフェクターＣＤ４＋Ｔ細胞においてアポトーシスを誘導する。
【０２１２】
Ｔｈ３または他のＴｒｅｇ細胞によるＴＧＦ−β分泌は、経口免疫寛容において重要な因子であると考えられる。ＴＧＦ−β−産生細胞は経口免疫寛容に極めて重要であり、抗原摂食により引き起こされるほとんどの機序の主制御因子となり得る。潜伏関連ペプチド（ＬＡＰ）はＴＧＦ−β前駆体ペプチドのアミノ末端ドメインであり、切断後、ＴＧＦ−βペプチドと非共有結合により結合されたままであり、潜伏複合体を形成する。Ｔｒｅｇの表面上の膜結合ＴＧＦ−βまたはＬＡＰの存在は、ＴＧＦ−βをＴｒｅｇの抑制機能と関連づけた。ＴＧＦ−β分泌Ｔｈ３細胞およびＣＤ８＋制御性細胞は経口免疫寛容と関連しており、ＴＧＦ−βに依存する。下で記載されるように、本発明者らは本発明による組成物を用いたＬＡＰ＋およびＬＡＰ−Ｔｒｅｇ細胞の調節を証明した。
【０２１３】
ＬＡＰを含むＴＧＦ−βの膜結合形態は、記載されている。ＬＡＰ＋ＣＤ４＋細胞は、消化管において、ＴＧＦ−β−依存機序により抑制を媒介する。本発明者らは、表面ＬＡＰを発現するＴＧＦ−β−依存Ｔｒｅｇは抗ＬＰＳ抗体の経口投与により誘導／促進されることを示している。ＴＧＦ−βはＩＬ−１０−産生細胞の分化を誘発することができ、異なるサイトカイン−産生Ｔｒｅｇ間のクロストークが経口免疫寛容誘導において存在し得ることが示され、例えばＣＤ４＋ＣＤ２５−ＬＡＰ＋Ｔｒｅｇが誘導され、これは自己免疫を抑制する。
【０２１４】
ＣＤ８＋リンパ球のサブセットもまた、寛容誘導に関係する。腸管上皮細胞（ＩＥＣ）は、抗原を処理し、Ｔ細胞に提示させるようにＣＤ８＋Ｔｒｅｇを促進することができる。ＩＥＣにより活性化されたＴ細胞は、機能において抑制的であり、一方ＩＥＣはＣＤ８＋末梢Ｔ細胞の一部の増殖を誘導することができる。ＩＥＣ−活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ８＋ＣＤ２８−サブセットは、ＣＤ１０１およびＣＤ１０３を発現し、ｇｐ１８０を介してＩＥＣと相互作用し、制御機能を有する。制御活性を有するＣＤ８＋Ｔ細胞は正常で、健康な個体のＬＰ中には存在するが、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者には存在せず、これらの細胞が粘膜免疫寛容において積極的な役割を果たすことが示される。「抗原交差提示」またはプロフェッショナルＡＰＣにより提示される分子が主要組織適合性抗原クラスＩ（ＭＨＣ−Ｉ）経路に漏れ出し、ＣＤ８＋Ｔ細胞に提示される可能性は、可能な機序である。また、ＣＤ４＋Ｔ−細胞活性化と関連するＡＰＣによるＣＤ８＋の「クロスプライミング」は、抑制に関与する機序であり得る。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＴＧＦ−βの分泌により制御役割を果たす。抗原刺激を受けたＣＤ８＋Ｔ−細胞集団は、ＩＬ−４またはＩＬ−１０を産生し、寛容誘導と関連し得る。
【０２１５】
したがって、別の態様では、本発明は、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を増加させる、脾臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導するための、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を提供する。
【０２１６】
脂肪細胞は、脂肪としてエネルギーを貯蔵することを専門とする、主に脂肪組織を構成する細胞である。２つの型の脂肪組織、すなわち白色脂肪組織（ＷＡＴ）および褐色脂肪組織（ＢＡＴ）が存在し、これらはそれぞれ、白色脂肪および褐色脂肪としても知られており、２つの型の脂肪細胞を成す。白色脂肪細胞または一液胞（monovacuolar）細胞は、細胞質層で囲まれた大きな脂肪滴を含む。核は平らにされ、周辺に位置する。典型的な脂肪細胞は直径０．１ｍｍであり、そのサイズの２倍のものもあり、そのサイズの半分のものもある。貯蔵された脂肪は、半液体状態であり、主にトリグリセリドおよびコレステリルエステルから構成される。白色脂肪細胞はレジスチン、アディポネクチン、およびレプチンを分泌する。褐色脂肪細胞または多液胞（pluri vacuolar）細胞は、多角形形状である。白色脂肪細胞とは異なり、これらの細胞はかなりの細胞質を有し、全体に脂肪滴が分散されている。核は丸く、偏心して位置しているが、細胞周辺にはない。褐色の色は、大量のミトコンドリアに由来する。
【０２１７】
実施例により示されるように、本発明の組成物は、トリグリセリド、ＡＬＴ、ＡＳＴおよびグルコースの血清レベルを著しく減少させた。そのため、１つの実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、肝障害または免疫関連障害、例えば、メタボリックシンドロームを患う対象において、コレステロール、トリグリセリド、ＡＬＴ、ＡＳＴおよびグルコースの血清レベルの減少およびインスリン抵抗性の減少の少なくとも１つをもたらす。減少、低減、阻止と示される場合、本発明の組成物は、免疫関連障害を患う対象において、トリグリセリド、ＡＬＴ、ＡＳＴおよびグルコースのいずれか１つの血清レベルの約５％〜９９％の低減をもたらすことを意味する。より特定的には、そのような低減は、処置前のレベル、または未処置対照のレベルと比べた場合、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％および９９％超の低減であり得る。増加、上昇、増強、誘導と示される場合、本発明の組成物が約５％〜９９％の誘導、または増加をもたらすことを意味する。より特定的には、そのような増加は、処置前のレベル、または未処置対照のレベルと比べた場合、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％および９９％超の増加であり得る。
【０２１８】
１つの特定の実施形態によれば、本発明の組成物は自己免疫疾患、例えば、メタボリックシンドロームまたはこれを含む病状のいずれか、メタボリックシンドロームと関連する、これにより引き起こされる、これに関係するまたはこれに対し影響を有すると考えられる任意の病状、例えば、異常リポ蛋白血症（高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬ−コレステロール）、肥満、ＮＩＤＤＭ（非−インスリン依存性糖尿病）、ＩＧＴ（耐糖能障害）、血液凝固性、血液線維素溶解欠如および高血圧の少なくとも１つを防止および／または治療するために使用され得る。
【０２１９】
メタボリックシンドロームは、下記を含む、一人の人における一群の代謝危険因子により特徴づけられる：
＊腹部肥満（腹部内またはその周囲の過剰脂肪組織）；
＊アテローム生成的脂質異常症（血液脂肪障害−高トリグリセリド、低ＨＤＬコレステロールおよび高ＬＤＬコレステロール−動脈壁においてプラーク蓄積を助長する）；＊血圧上昇；＊インスリン抵抗性または耐糖能障害；＊血栓形成促進性状態（例えば、血液中の高フィブリノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１）；および＊炎症誘発性状態（例えば、血液中の上昇したＣ−反応性タンパク質）。メタボリックシンドロームを有する人々は、冠動脈心疾患および動脈壁中のプラーク蓄積に関連する他の疾患（例えば、脳卒中および末梢血管疾患）および２型糖尿病の危険が増加している。
【０２２０】
より特定的には、本発明の組成物は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症および低ＨＤＬ−コレステロール、肥満、ＮＩＤＤＭ（２型非インスリン依存性糖尿病）、ＩＧＴ（耐糖能障害）、血液凝固性、血液線維素溶解欠如および高血圧を含み得る、異常リポ蛋白血症の治療を対象とする。
【０２２１】
１つの特定の実施形態によれば、本発明の免疫調節組成物は、糖尿病、特に２型糖尿病を治療するために使用され得る。真性糖尿病、しばしば単に糖尿病は、低レベルのインスリンホルモンまたは補うには不十分なレベルのインスリン分泌を伴うインスリンの効果に対する異常な抵抗性のいずれかに起因する障害された代謝および不適切に高い血糖（高血糖）により特徴づけられる症候群である。特徴的な症状は過剰な尿産生（多尿）、過度の口渇および水分摂取量の増加（多渇症）、ならびにかすみ目である。これらの症状は、血糖がわずかに上昇しただけでは生じない可能性がある。
【０２２２】
世界保健機関は、３つの主な型の糖尿病、すなわち１型、２型、および妊娠糖尿病（妊娠中に起こる）を認識し、これらは異なる原因および人口分布を有する。最終的には、すべての型が膵臓のβ細胞が高血糖を防止するのに十分なインスリンを産生することができないことによるが、原因は異なっている。１型糖尿病は通常、膵臓β細胞の自己免疫破壊による。２型糖尿病は、標的組織中のインスリン抵抗性により特徴づけられ、これにより、異常に高い量のインスリンが必要とされ、β細胞がこの要求を満たすことができなくなると糖尿病が発症する。妊娠糖尿病は、インスリン抵抗性が関与するという点で、２型糖尿病に類似し、妊娠中のホルモンは、この病状を発症する遺伝的な傾向がある女性においてインスリン抵抗性を引き起こし得る。
【０２２３】
糖尿病の急性合併症（低血糖、ケトアシドーシスまたは非ケトン性高浸透圧性昏睡）は、疾患が十分に制御されない場合に起こり得る。重篤な長期合併症としては、心血管疾患（倍の危険）、慢性腎不全、網膜障害（失明に至り得る）、神経障害（いくつかの種類）、および微小血管障害（インポテンスおよび治癒不良を引き起こし得る）が挙げられる。特に足の、創傷の治癒不良は壊疽に至る可能があり、切断が必要となる場合がある。
【０２２４】
別の実施形態によれば、本発明の免疫調節組成物は１型糖尿病の治療のために使用され得る。１型糖尿病は、インスリン欠乏に至る、膵臓内のランゲルハンス島のインスリン−産生β細胞の損失により特徴づけられる。このβ細胞損失の主原因は、Ｔ−細胞媒介自己免疫発作である。
【０２２５】
さらに別の実施形態では、本発明の医薬組成物は自己免疫障害の治療のために使用され得る。自己免疫障害の例としては、円形脱毛症、ループス、強直性脊椎炎、メニエール病、抗リン脂質抗体症候群、混合性結合組織病、自己免疫アジソン病、多発性硬化症、自己免疫溶血性貧血、重症筋無力症、自己免疫肝炎、尋常性天疱瘡、ベーチェット病、悪性貧血、水疱性類天疱瘡、結節性多発性関節炎、心筋症、多発性軟骨炎、セリアックスプルー−皮膚炎、多腺性症候群、慢性疲労症候群（ＣＦＩＤＳ）、リウマチ性多発性筋痛症、慢性炎症性脱髄、多発性筋炎および皮膚筋炎、慢性炎症性多発ニューロパチー、原発性無ガンマグロブリン血症、チャーグ・ストラウス症候群、原発性胆汁性肝硬変、瘢痕性類天疱瘡、乾癬、クレスト症候群、レイノー現象、寒冷凝集素症、ライター症候群、クローン病、リウマチ熱、円板状ループス、関節リウマチ、本態性混合型、クリオグロブリン血症サルコイドーシス、線維筋痛症、強皮症、グレーブス病、シェーグレン症候群、ギラン・バレー、全身硬直症候群、橋本甲状腺炎、高安動脈炎、突発性肺線維症、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、潰瘍性大腸炎、ＩｇＡ腎症、ブドウ膜炎、インスリン依存性糖尿病（１型）、血管炎、扁平苔癬、および白斑が挙げられるが、それらに限定されない。本明細書で記載される経口組成物は、細胞、組織または臓器移植、例えば、腎臓、肝臓、および心臓移植に関連する異常なまたは望まれない免疫応答と関連する障害、例えば移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療または防止するために、または同種移植片拒絶を防止するために対象に投与することができる。
【０２２６】
特に好ましい実施形態によれば、本発明の組成物により治療される自己免疫疾患は、関節リウマチ、１型糖尿病、２型糖尿病、アテローム性動脈硬化、喘息、急性および慢性移植片対宿主病、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、ブドウ膜炎、甲状腺炎および免疫媒介肝炎のいずれか１つとすることができる。
【０２２７】
別の実施形態によれば、本発明の組成物は、ＭＳの治療のために使用され得る。多発性硬化症（ＭＳ）は典型的には、ＣＮＳにおける病変により引き起こされる再発性または慢性進行性神経機能障害により臨床的に特徴づけられる。病理学的に、病変は、脳、視神経、および脊髄に影響する複数の脱髄領域を含む。基礎をなす病因は不確かであるが、ＭＳは、少なくとも部分的に自己免疫または免疫媒介疾患であると広く考えられる。
【０２２８】
このように、本発明は経口でまたは粘膜で、本発明の初乳由来免疫グロブリン製剤を投与することにより、ＭＳの発症を治療、遅延または防止する組成物および方法を含む。ＭＳを有するまたはその危険のある対象が、経口で本発明の組成物が投与される方法が含まれる。
【０２２９】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、ＲＡの治療のために使用され得る。関節リウマチ（ＲＡ）は最も一般的な慢性炎症性関節炎であり、成人の約１％が罹患し、男性に比べ女性において２〜３倍高頻度に見られる。ＲＡは、早ければ乳児期に始まる可能性があるが、発症は典型的には、５０代または６０代である。
【０２３０】
診断は、関節リウマチの分類のためのアメリカリウマチ学会判断基準に従い実施され得る。治療的有効量は、下記の１つ以上において改善を引き起こす：炎症関節数、腫脹の程度、および関節可動域。検査室測定（例えば、ＥＳＲおよびヘマトクリット値）および自覚的な特徴の評価（例えば、頭痛および朝のこわばり）もまた実施できる。本発明はまた、対象に治療的有効量の、初乳由来免疫グロブリン製剤を含む本発明の組成物を投与することにより、対象における自己免疫関節炎、例えば、ＲＡを治療する方法を含む。
【０２３１】
本明細書で記載される本発明の組成物はまた、移植レシピエントにおける移植片拒絶を治療または防止するために使用することができる。例えば、組成物は、様々な組織および臓器移植手順において使用することができ、例えば、組成物は、レシピエントにおいて細胞移植片、例えば、幹細胞、例として骨髄の、および／または組織または臓器、例えば膵臓膵島、肝臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、筋肉、神経組織、胃、および腸の中枢性寛容を誘導するために使用することができる。このように、新規方法は、細胞、組織または臓器移植（例えば、高コレステロール血症を治療するための肝臓移植、筋ジストロフィーを治療するための筋細胞の移植、またはハンチントン病もしくはパーキンソン病を治療するための神経組織の移植）を伴う疾患または病状の治療において適用することができる。
【０２３２】
別の実施形態によれば、本発明の組成物は、ＩＢＤを患う対象において抗Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３応答に対してＴｈｌ／Ｔｈ２、Ｔｈ３バランスを調節することができる。そのため、この実施形態によれば、本発明の組成物は、ＩＢＤを治療することを対象とする。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、免疫応答のＴｈｌ−炎症促進性サブタイプとＴｈ２−抗炎症性サブタイプの間のバランス異常の結果であると考えられる、一般に見られる胃腸障害である。
【０２３３】
IＢＤ患者は、結腸細胞の成分およびいくつかの異なる細菌抗原に対する抗体を有する。これらの抗原は、上皮損傷の結果として免疫系に到達する。Ｔ細胞−媒介免疫の異常、例えば同期間のアネルギーおよびＴ細胞刺激への応答性の減少もまた、これらの患者において説明されている。さらに、粘膜細胞媒介免疫の変化、例えば粘膜ＩｇＧ細胞濃度の増加およびＴ細胞サブセットの変化が同定され、抗原刺激が示唆された。
【０２３４】
さらに別の好ましい実施形態では、、本発明の組成物は、アテローム性動脈硬化の治療のために使用され得る。アテローム性動脈硬化は、動脈壁内のコレステロールの蓄積により特徴づけられる遅い進行性疾患である。アテローム性動脈硬化過程は、ＬＤＬ−Ｃが血管壁内に閉じ込められると始まる。ＬＤＬ−Ｃの酸化により、血管壁の内側の内皮細胞へ単球が接着する。これらの単球は活性化され、内皮空間に移動し、そこで、それらはマクロファージに転換され、ＬＤＬ−Ｃのさらなる酸化がもたらされる。酸化ＬＤＬ−Ｃは、マクロファージ上のスカベンジャー受容体を介して取り込まれ、泡沫細胞の形成に至る。線維キャップが、動脈平滑筋細胞の増殖および移動により生成され、よってアテローム性動脈硬化プラークが生成する。アテローム性動脈硬化病変部中の脂質沈着は、主に血漿アポＢを含むリポタンパク質に由来する。これらとしては、カイロミクロン、ＬＤＬ−Ｃ、ＩＤＬ、およびＶＬＤＬが挙げられる。この蓄積は、バルクなプラークを形成し、これは血流を阻止し、最終的に血餅が形成し、動脈を閉塞させ、心発作または脳卒中を引き起こす。
【０２３５】
また、本発明の組成物により使用される免疫グロブリン製剤は、治療される障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合することができ、免疫制御細胞、特定的には、制御性Ｔ細胞を調節することができる。そのような調節により、例えば、炎症促進性ＴｈＩ免疫応答に対するＴｈｌ／Ｔｈ２細胞バランスの調節が得られ、これにより前記障害に特異的に向けられる免疫応答が活性化される。
【０２３６】
本発明の免疫調節組成物の炎症促進性効果は、サイトカイン、および／またはケモカインの直接または間接的な活性化を介する、制御性細胞の特定のサブセット、抗原提示細胞または任意の型の細胞−細胞接触の活性化または促進により達成され得ることが認識されるべきである。
【０２３７】
この特定的な実施形態によれば、炎症促進性Ｔｈ１応答に対するＴｈｌ／Ｔｈ２、Ｔｈ３バランスの調節は、望ましくない不均衡な抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３応答を有する免疫関連障害、例えば、悪性および非悪性増殖性疾患、感染症、遺伝性疾患および神経変性障害において特に適用することができる。
【０２３８】
別の態様では、本発明は、病的障害の治療および／または予防のための薬剤の製造における抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の使用を提供する。抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【０２３９】
１つの実施形態では、病的障害は急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症である。
【０２４０】
別の実施形態では、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、出血性静脈瘤、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化からなる群より選択される。
【０２４１】
別の実施形態では、薬剤は肝損傷の治療および／または予防のためのものである。
【０２４２】
別の実施形態では、病的障害は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、感染症、および増殖性疾患からなる群より選択される免疫関連障害である。また、病的障害は手術後の続発性腹膜炎および感染、肝臓心筋症および低血圧、肝腎症候群、肝細胞癌、アルツハイマー病、任意の型の記憶喪失、任意の型の認知症、注意欠陥障害（ＡＤＨＡ）、任意の型の学習障害、脳へのアルコールまたは薬物の影響、任意の型の免疫媒介疾患、例えば喘息、および腹膜炎からなる群より選択される。
【０２４３】
薬剤は、前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む免疫グロブリン製剤をさらに含み得る。さらなる免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【０２４４】
１つの実施形態では、薬剤は制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応を阻止または活性化する。
【０２４５】
別の実施形態では、薬剤は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止し、ここで、前記組成物は自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームならびに２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多から選択される、それらと関連する任意の障害のいずれか１つの治療のためのものである。
【０２４６】
別の実施形態では、薬剤は、メタボリックシンドロームもしくは非アルコール性脂肪性肝炎または両方の治療および／または予防、糖尿病の治療および／または予防、耐糖能障害の治療、例えば、耐糖能を減少させる、血清インスリンレベルを減少させる、肝臓トリグリセリドレベルを減少させる、またはコレステロールレベルを減少させるのためのものである。
【０２４７】
１つの実施形態では、薬剤は炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させ、ここで、前記組成物は感染症、および増殖性疾患の治療のためのものである。
【０２４８】
薬剤はさらに、治療薬、担体もしくはアジュバントおよび／または非高免疫初乳を含み得る。
【０２４９】
１つの実施形態では、薬剤は、経口で、エアロゾルとして吸入により、または非経口、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、もしくは直腸投与、またはそれらの任意の組み合わせにより投与するために製剤化される。
【０２５０】
別の実施形態では、免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分は、ＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。
【０２５１】
別の実施形態では、組成物は粘膜による微生物トランスロケーションを減少または阻止する。別の実施形態では、組成物は粘膜による微生物トランスロケーションを減少または阻止し、これによって免疫活性化を調節する。
【０２５２】
別の態様では、本発明は、対象において免疫寛容を調節するための薬剤、または別の実施形態では対象において経口免疫寛容を調節するための薬剤の製造におけるほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の使用を提供した。
【０２５３】
別の態様では、本発明は、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を増加させる、脾臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、または脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導するための薬剤の製造におけるほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の使用を提供する。
【０２５４】
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【０２５５】
１つの態様では、本発明は、治療の必要な対象に治療的有効量の、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を含む組成物を投与する工程を含む病的障害の治療および／または予防のための方法を提供する。抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【０２５６】
１つの実施形態では、病的障害は、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変またはそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症である。
【０２５７】
別の実施形態では、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は、肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、出血性静脈瘤、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化からなる群より選択される。
【０２５８】
別の実施形態では、病的障害は肝損傷である。
【０２５９】
別の実施形態では、病的障害は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれと関連する任意の障害、感染症、および増殖性疾患からなる群より選択される、免疫関連障害である。また、病的障害は手術後の続発性腹膜炎および感染、肝臓心筋症および低血圧、肝腎症候群、肝細胞癌、アルツハイマー病、任意の型の記憶喪失、任意の型の認知症、注意欠陥障害（ＡＤＨＡ）、任意の型の学習障害、脳へのアルコールまたは薬物の影響、任意の型の免疫媒介疾患、例えば喘息、および腹膜炎からなる群より選択される。
【０２６０】
別の実施形態では、組成物は、前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む免疫グロブリン製剤をさらに含む。さらなる免疫グロブリン製剤は初乳または鳥卵由来とすることができる。
【０２６１】
別の実施形態では、組成物は制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応を阻止または活性化する。
【０２６２】
別の実施形態では、組成物は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止し、ここで、前記組成物は自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームならびに２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多から選択される、それらと関連する任意の障害のいずれか１つの治療のためのものである。
【０２６３】
別の実施形態では、病的障害は、メタボリックシンドロームもしくは非アルコール性脂肪性肝炎または両方である。
【０２６４】
別の実施形態では、病的障害は糖尿病である。別の実施形態では、病的障害は耐糖能障害である。
【０２６５】
別の実施形態では、方法は耐糖能を減少させ、血清インスリンレベルを減少させ、肝臓トリグリセリドレベルを減少させ、またはコレステロールレベルを減少させる。
【０２６６】
別の実施形態では、方法は炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対してＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスを調節し、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させ、ここで、前記組成物は感染症、および増殖性疾患の治療のためのものである。
【０２６７】
別の実施形態では、組成物はさらに、非高免疫初乳、および／または治療薬、担体もしくはアジュバントを含む。
【０２６８】
組成物は、経口で、エアロゾルとして吸入により、または非経口、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、もしくは直腸投与、またはそれらの任意の組み合わせにより投与され得る。
【０２６９】
別の実施形態では、免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分は、ＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合する。
【０２７０】
別の実施形態では、方法は粘膜による微生物トランスロケーションを減少または阻止する。別の実施形態では、方法は粘膜による微生物トランスロケーションを減少または阻止し、これによって免疫活性化を調節する。
【０２７１】
別の態様では、本発明は、治療の必要な対象に治療的有効量の、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を投与する工程を含む、対象において免疫寛容を調節するための方法を提供する。また、方法は経口免疫寛容を調節するためのものとすることができる。
【０２７２】
対象の肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導するための方法は、治療の必要な対象に有効量の、ほ乳類抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む組成物を投与する工程を含む。別の実施形態では、方法は、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を誘導する、間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を誘導する、肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を減少させる、肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ＋Ｔ細胞を増加させる、脾臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導する、または脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−Ｔ細胞を誘導するためものとすることができる。
【０２７３】
さらなる態様では、本発明は、病的障害の治療および／または予防のための方法を提供する。本発明の方法は、治療の必要な対象に治療的有効量のほ乳類初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤またはそれを含む組成物を投与する工程を含む。免疫グロブリン製剤またはそれらの任意の画分はＬＰＳまたはその任意の断片を認識し、それに結合することに注意すべきである。任意的な実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤と、前記障害に特異的な少なくとも１つ抗原を認識する免疫グロブリンを含む少なくとも１つの免疫グロブリン製剤との複合組成物を投与する工程を含み、これにより、前記障害に特異的に向けられる免疫応答を活性化または阻止する。
【０２７４】
１つの実施形態によれば、本発明の方法により使用される初乳由来の、乳または乳製品／複数可−由来の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤またはそれらの断片または混合物、組み合わせ、または任意の組成物は、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＭからなる群より選択される単量体、二量体および多量体免疫グロブリンならびにそれらの断片、それらの調製物、混合物および組成物を含む。より特定的には、本発明の方法により使用される免疫グロブリン製剤は、特定的にはＩｇＧ、特に、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２およびそれらの任意の断片を含み得る。また、あるいはさらに、本発明の方法により使用される免疫グロブリン製剤は特定的には分泌型二量体ＩｇＡを含む。
【０２７５】
別の実施形態によれば、本発明の方法は初乳由来の抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を含む組成物または複合組成物を使用し得る。そのような組成物は任意でさらに初乳成分／複数可、好ましくは、アラーミン、デフェンシン、コロストリニン、または任意の糖脂質、糖質またはそれらの任意の調製物、混合物および組み合わせ、または任意の他のアジュバント／複数可を含む。本発明はさらに、免疫調節治療薬の免疫調節効果を増強させるために、初乳または任意の初乳由来の調製物の使用を提供することに注意すべきである。１つの特定の実施形態では、本発明の方法により使用される組成物または複合組成物は、任意の追加のアジュバントを含み得る。したがって、適切なアジュバントは任意の抗原、抗体、スフィンゴ糖脂質、タンパク質、サイトカイン、接着分子、および抗原提示細胞または免疫系に関連する任意の他の細胞の機能を直接または間接的様式で活性化または変化させることができる成分とすることができる。
【０２７６】
さらに別の実施形態では、本発明により使用される抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤または任意の他の免疫グロブリン製剤は、ＬＰＳおよび任意で、さらに、治療される障害に特異的な少なくとも１つ抗原または少なくとも２つの抗原の混合物で免疫化されたほ乳類、好ましくはウシから獲得され得る。
【０２７７】
１つの実施形態によれば、本発明の方法は、前記対象に、治療的有効量のほ乳類抗リポ多糖（ＬＰＳ）強化初乳由来免疫グロブリン製剤またはこれを含む任意の組成物を投与する工程を含む。そのような方法は、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびそれらと関連する任意の疾患もしくは合併症の治療、防止および予防に特に適用され得ることに注意すべきである。
【０２７８】
より特定的には、急性もしくは慢性肝疾患、肝硬変およびれらと関連する任意の疾患もしくは合併症は肝性脳症、突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）、腹水症、肝硬変関連収縮過多性循環、肝腎症候群、肝肺症候群、門脈肺高血圧症、静脈瘤出血、副腎不全および意識水準変化の少なくとも１つである。
【０２７９】
これらの合併症は、慢性ＨＣＶ感染、アルコール性肝炎、慢性ＨＢＶ、非アルコール性脂肪性肝炎、薬剤性肝損傷、または急性もしくは慢性肝疾患の任意の他の原因に起因し得ることに注意すべきである。
【０２８０】
１つの任意的な実施形態によれば、本発明は、免疫関連障害を治療するための方法を提供する。この特定的な実施形態によれば、本発明の方法は、前記対象に治療的有効量の、抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤と、前記病的障害に特異的な少なくとも１つの抗原を認識し、それに結合する免疫グロブリンを含む少なくとも１つの初乳由来免疫グロブリン製剤との組み合わせ、あるいはこれらと、および任意で追加の治療薬または任意の担体およびアジュバントを含む複合組成物を投与する工程を含む。
【０２８１】
この実施形態によれば、本発明により使用される組み合わせは、制御性Ｔ細胞を調節し、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答または炎症促進性Ｔｈ１免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節に至らしめ、よって、前記障害に特異的に向けられる免疫応を阻止または活性化する。
【０２８２】
別の実施形態によれば、本発明の方法は、免疫関連障害、例えば、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、メタボリックシンドロームおよびそれと関連する任意の障害、感染症、および増殖性疾患の治療に特に適用され得る。
【０２８３】
別の実施形態では、本発明は耐糖能障害を治療する方法を提供する。
【０２８４】
別の実施形態では、本発明は耐糖能を減少させる方法を提供する。
【０２８５】
別の実施形態では、本発明は血清インスリンレベルを減少させる方法を提供する。
【０２８６】
別の実施形態では、本発明は肝臓トリグリセリドレベルを減少させる方法を提供する。
【０２８７】
別の実施形態では、本発明はコレステロールレベルを減少させる方法を提供する。
【０２８８】
本発明の方法は、急性合併症の治療のため、これらの合併症の発症および／または再発の防止のためのものであることに注意すべきである。
【０２８９】
１つの実施形態によれば、本発明の方法により使用される複合組成物は、抗炎症性Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節をもたらし、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を阻止する。この特定的な実施形態によれば、そのような組成物は、自己免疫疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、アテローム性動脈硬化、メタボリックシンドロームおよびそれらと関連する任意の障害、例えば、２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満および体重過多のいずれか１つの治療に適用され得る。
【０２９０】
また、本発明の方法により使用される複合組成物は、炎症促進性Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫応答に対するＴｈ１／Ｔｈ２、Ｔｒｌ／Ｔｈ３細胞バランスの調節をもたらし、よって前記障害に特異的に向けられる免疫応答を増強させ得る。この特定的な実施形態によれば、そのような組成物は、感染症、および増殖性疾患の治療に適用され得る。
【０２９１】
１つの実施形態によれば、本発明の方法は、ウイルス疾患、例えばＨＣＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ、およびＥＢＶを治療するために特定的に適用され得る。
【０２９２】
前記本発明の方法のさらに別の実施形態では、抗ＬＰＳ−強化免疫グロブリン製剤、またはこれを含む任意の組成物は、経口で、またはエアロゾルとして吸入により、または静脈内、筋内、皮下、腹腔内、非経口、経皮、膣内、鼻腔内、粘膜、舌下、局所、直腸もしくは皮下投与、またはそれらの任意の組み合わせにより投与される。
【０２９３】
特に好ましい実施形態によれば、本発明の方法は、特定的には、ほ乳類対象の治療に好適である。治療のための「ほ乳類」または「ほ乳類の」はほ乳類として分類された任意の動物、例えば、ヒト、研究動物、飼育動物および家畜、ならびに動物園、スポーツ、またはペット動物、例として、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを示す。特定の実施形態では、前記ほ乳類対象はヒト対象である。
【０２９４】
「治療」は、治療的処置を指す。治療の必要なものは、免疫関連疾患を患うほ乳類対象である。「患者」または「治療の必要な対象」は、そのような苦しみを防止、克服または減速させるために、本発明の免疫調節組成物の投与が望ましい任意のほ乳類を意味する。
【０２９５】
「有効量」または「十分量」という用語は、選択された結果を達成するのに必要な量を意味する。「有効治療量」は、防止または治療目的、投与経路、患者の全身状態（年齢、性別、体重および担当医にわかっている他の留意事項）と併せて疾患の重篤度により決定される。
【０２９６】
上で示した通り、一般に、治療効果を達成するのに必要とされる用量は、患者の年齢、体重および性別ならびに投与方法のような因子だけでなく、疾患進行程度および関係する疾患の特定の障害のために使用される特定の誘導体の効力に依存する。
【０２９７】
免疫関連疾患を発症する危険の防止または低減はまた、本発明の範囲内に含まれることが認識されるべきである。そのような方法は、予防的有効量の本発明の組成物またはそのような組成物内に含まれる活性成分の、疾患を発症する危険のある人間への投与を含み得る。
【０２９８】
「予防的有効量」という用語は、研究者、獣医、医師または他の臨床医により組織、系、動物またはヒトにおいて防止されることが求められる生物学的または医学的事象の発生の危険を防止または減少させる医薬複合組成物の量を意味するよう意図される。
【０２９９】
本発明において提供される治療および防止法では、前記治療的有効量または用量は治療される病態の重篤度および反応性に依存し、治療過程は、数日〜数ヶ月続き、または治癒が得られるまで、あるいは病態の減退が達成されるまで続くことに注意すべきである。最適投薬スケジュールは、患者の体内の薬物蓄積の測定から計算することができる。当業者は、容易に最適用量、投与法および繰り返し率を決定することができる。一般に、用量は、体重に従い計算され、毎日、毎週、毎月または毎年、あるいはさらに２〜２０年毎に１回または複数回投与され得る。当業者は、測定された本発明の組成物の体液または組織中での滞留時間および濃度に基づいて投薬のための繰り返し率を推定することができる。治療の成功に続き、病態の再発を防止するために患者に維持療法を受けさせることが望ましい場合があり、ここで、本発明の組成物は、維持量で、１日に１回以上投与される。
【０３００】
開示され、記載されるように、この発明は、本明細書で開示される特定の実施例、方法工程および組成物に限定されないことが理解されるべきである。それは、そのような方法工程および組成物は幾分変動し得るからである。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明するために使用され、制限することを意図していないことも理解されるべきである。それは、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲およびその等価物にのみ制限されるからである。
【０３０１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「１つの（ａ）」、「ａｎ」および「その（ｔｈｅ）」は、その内容が明確に別記しない限り、複数の指示対象を含むことを注意するべきである。
【０３０２】
この明細書および実施例、それに続く特許請求の範囲全体を通して、文脈が別様に要求しない限り、「含む、備える（comprise）」という用語および変形、例えば「含む（comprises）」および「含んでいる」は、１つの提示された完全体もしくは工程または完全体もしくは工程の群を含むが、いかなる他の完全体もしくは工程または完全体もしくは工程の群をも排除しないことを意味することが理解されるであろう。
【０３０３】
下記実施例は、本発明の態様を実施する際に本発明者らに使用される技術を表す。これらの技術は本発明を実施するための好ましい実施形態の例示であるが、当業者であれば、本開示を考慮すると本発明の精神および意図された範囲から逸脱せずに多くの改変が可能であることを認識するであろうことが理解されるべきである。
【０３０４】
実施例
下記実施例は、本発明の態様を実施する際に本発明者らに使用される技術を表す。これらの技術は本発明を実施するための好ましい実施形態の例示でるが、当業者であれば、本開示を考慮すると本発明の精神および意図された範囲から逸脱せずに多くの改変が可能であることを認識するであろうことが理解されるべきである。
【０３０５】
実施例１：初乳由来抗ＬＰＳ強化調製物の調製
製品「ＢｉｏＧＡＲＤ」は、Ａｎａｄｉｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄから供給される専売の初乳調製物である。各Ａｎａｄｉｓ  ＢｉｏＧＡＲＤ錠剤は、無コート１．２ｇ経口錠剤であり、これは６００ｍｇの凍結乾燥されたウシ初乳粉末（ＢＣＰ）を、賦形剤と共に含む。ＢｉｏＧＡＲＤ錠剤中の活性物質は、民間の乳牛飼いにより搾乳された凍結乾燥ウシ初乳粉末である。これらの群れ中のウシは、所定のウシ病原体に対しワクチン接種されると共に、ヒト消化管ミクロフローラ中の主生物である複数の大腸菌の菌株の細胞外壁抗原に対する専売Ａｎａｄｉｓワクチンでワクチン接種される。Ａｎａｄｉｓ  ＢＣＰは、分娩後に集められた民間の乳牛の最初の搾乳由来の、高−タンパク質（＞８０％）、ラクトース−および脂肪低減天然産物である。これは濃縮された凍結乾燥粉末として錠剤化前に提供される。
【０３０６】
Ａｎａｄｉｓ  ＢＣＰは、乾燥粉末中に約４０％の抗体（免疫グロブリン）を含む。ＢｉｏＧＡＲＤのＢＣＰ中の免疫グロブリンは、グラム陰性細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）に対し高い結合活性を有する。ＬＰＳの結合は、Ａｎａｄｉｓにより標準ＥＬＩＳＡおよび免疫ブロット検出システムを用いてアッセイされる。
【０３０７】
３匹の乳牛はＬＰＳ抗原混合物で免疫化される。抗原ワクチンは、妊娠期間の最後の８週の間に投与した。初乳の乳を授乳の最初の２日間中に回収した。乳脂肪を除去し、脱脂乳を５６℃で３０分間低温殺菌し、その後、Hilpert, Human Milk Banking 1984におけるようにレンネット処理することにより凝固させた。カゼインを含む凝乳を除去した後、乳清を遠心分離し、微細沈殿物を廃棄した。等体積の飽和硫酸アンモニウム溶液をＢｒａｎｄｏｎら[Brandon et al.、Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci.
49:613 (1971)]におけるように、上清に連続混合しながら徐々に添加した。遠心分離後、得られた沈殿物を確保し、ラクトースおよび塩を含む上清を廃棄した。
【０３０８】
沈殿物を、０．３２Ｍ  ＮａＣｌ（元の体積の３０％）を含む０．０１Ｍ  ＴＲＩＳ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ８に溶解した。この溶液を、５体積の同じ緩衝液に対し、Ａｍｉｃｏｎスパイラル膜ＳＩＹ３０カートリッジを用いて大規模に透析した。その後、抗体溶液を濃縮し１０％とし、瞬間凍結し、凍結乾燥させた。
【０３０９】
初乳からの抗体断片の生産
抗体断片は、Ｊｏｎｅｓ  Ｒ．Ｇ．Ａ．およびＬａｎｄｏｎ  Ｊ．により記載される方法に基づく改良法に従い調製される[Jones R.G.A. and Landon J. J. Immunol. Methods 263: 57-74
(2002)]。簡単に言うと、等量の０．２Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．０を、上で記載されるように免疫化動物から獲得された初乳プールに添加する。希釈初乳プールのｐＨを、４．６に調節し、３７℃で２時間インキュベートし、カゼインを沈殿させる。その後、初乳を遠心分離し、濾過して（０．４５μｍ）カゼインを除去する。得られた初乳乳清のｐＨをｐＨ４．０に調節し、続いて、ペプシン（１：１５，０００活性を有する酵素溶液）を５．０％ｗ／ｗで添加し、２０時間４５℃でインキュベートする。ペプシン消化を、０．５体積のＩＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８を添加し、反応濃混合物を４℃まで冷却することにより停止させる。反応物のｐＨを７．０に調節し、Ｆ（ａｂ’）２混合物を、３０ｋＤ限外濾過膜および５０体積超の２０ｍＭリン酸ナトリウム／１５０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ６．０緩衝液に対する透析濾過液を用いて濃縮する。その後、小ペプチドを除去し、Ｆ（ａｂ’）２、ペプシンおよび大ペプチドを含む得られた溶液を、ペプシンおよび酸性凝集物に結合するＱセファロースアニオン交換カラムに供した。精製されたＦ（ａｂ’）２を得るために、残りのＦｃおよび未消化ＩｇをＦ（ａｂ’）２（残りの大ペプチドおよび未消化Ｉｇとの混合）から、タンパク質Ｇにより、またはＰｒｏｍｅｔｉｃ  Ｍａｂｓｏｒｂｅｎｔ  ＡｌＰクロマトグラフィーにより除去する。
【０３１０】
２−メルカプトエチルアミン（ＭＥＡ）によるＦａｂ’の調製
Ｆａｂ１を調製するために、新たに調製した５ｍＭ  ＥＤＴＡ−二ナトリウムを含む５０μｌ（１／９体積）の０．１Ｍ２−メルカプトエチルアミン（ＭＥＡ）の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．０を、０．１〜３．０ｍｇのＦ（ａｂ’）２を含む０．４５ｍｌの０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０に添加する。混合物をその後、３７℃で９０分間インキュベートする。その後、反応混合物をＰＤ−１０カラム、または好適なＧ２５カラム上に適用し、過剰なＭＥＡを除去するために、０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．０、５ｍＭ  ＥＤＴＡ−二ナトリウムを有する）をランニング緩衝液として使用する。Ｆａｂ’を含む第１のタンパク質ピークを収集し、本発明書において下で示される対応する異なる適応症を治療するために使用する。
【０３１１】
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を調製するために、初乳を約２００の民間の乳牛飼いから収集した。これらの群れ中のウシは、所定のウシ病原体に対しワクチン接種されていると共に、ヒト消化管ミクロフローラ中の主生物である複数の大腸菌の菌株の細胞外壁抗原に対する専売Ａｎａｄｉｓワクチンでワクチン接種されている。得られた初乳を試験のための個々のバッグ内で凍結させた。処理のために、初乳を解凍し、プールし、脂肪を除去した。各バッチを低温殺菌した。初乳を限外濾過により濃縮し、凍結乾燥前に体積を減少させた。限外濾過工程により最終粉末中のラクトースを７％未満まで（約５０％から）減少させた。
【０３１２】
実施例２：肝炎治療における初乳由来抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の使用
免疫媒介肝炎モデルでは、１１〜１２週齢の雄Ｃ５７／ｂｌマウスに、肝炎を誘発することが知られている、５０ｍＭ  Ｔｒｉｇ  ｐＨ７、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＣａＣｌ２に溶解されたＣｏｎ  Ａ（ＭＰ  Ｂｉｏｒｎｅｄｉｃａｌｓ、ＵＳＡ）の５００μｇｌｉｎｏｕｓｅ（約１５ｍｇ／ｋｇ）の用量を尾静脈注射する。試験されたすべての群の動物は、未処置対照に比べ、異なる濃度の特異抗体調製物または、実験手順で記載されるＢｉｏＧＡＲＤ調製物を用いて経口投与する。試験されたすべての群の動物を、以下のパラメータについて追跡し、対照群と比較する：血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル、肝臓標本の組織学的検査
、ＮＫＴマーカーのための肝内および脾臓内リンパ球のＦＡＣＳ分析、血清サイトカインレベルの測定ならびに転写因子ＳＴＡＴ１、４および６ならびにＮＦκＢの発現に対するウエスタンブロット分析。
【０３１３】
実施例３：抗ＬＰＳ抗体で強化した初乳の経口投与
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤の調製のために、初乳を約２００の民間の乳牛飼いから収集した。これらの群れ中のウシは、所定のウシ病原体に対しワクチン接種されていると共に、ヒト消化管ミクロフローラ中の主生物である複数の大腸菌の菌株の細胞外壁抗原に対する専売Ａｎａｄｉｓワクチンでワクチン接種されている。得られた初乳を試験のための個々のバッグ内で凍結させた。処理のために、初乳を解凍し、プールし、脂肪を除去した。各バッチを低温殺菌した。初乳を限外濾過により濃縮し、凍結乾燥前に体積を減少させた。限外濾過工程により最終粉末中のラクトースが７％未満まで（約５０％から）減少した。
【０３１４】
抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤を含む２つの組成物を、初乳中でＬＰＳに対する高濃縮抗体（ＩｇＧを含む）を生産させるために、妊娠したウシに、多くの大腸菌株から調製された細菌細胞壁抗原（例えばＬＰＳ）をワクチン接種することにより調製した。以下の実施例では、この組成物は「ＨＩＢＣ」と呼ばれる。
【０３１５】
第２の調製をは、初乳中でＬＰＳに対する高濃縮抗体（ＩｇＧを含む）を生産させるために、妊娠したウシに、多くの大腸菌株を含むワクチンを接種することにより調製し、また、ＬＰＳおよび他の表面抗原に対し強化させた。ＩｇＧを、その後、この初乳調製物から精製した。下記実施例では、この組成物は、「Ｔ−ＩｇＧ」と呼ばれる。
【０３１６】
【表１】
0005740390.tif 000002
【０３１７】
実験群
２つの群のマウス（表１１）を研究した。マウス（１群あたり１０匹）に毎日７日間（経口的に）、３０μｌの水（対照、Ａ群）または３０μｌ（約３ｍｇ）の、水に溶解させた抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤（Ｂ群）を与えた。７日後、マウスを屠殺した。屠殺日に、心臓血液を標準技術により収集し、その後、さらなる目的のために血清を獲得した。
【０３１８】
動物
未処置のＣ５７Ｂｌ／６マウス（１１−１２週齢）を使用した。マウスは、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ、Ｉｓｒａｅｌ）から入手し、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈａｄａｓｓａｈ−Ｈｅｂｒｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌで維持した。マウスには、標準の飼料および水を自由に与え、１２時間明／暗サイクルで維持した。動物実験は、Ｈｅｂｒｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ−Ｈａｄａｓｓａｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ（実験動物の世話および使用のための組織委員会）のガイドラインに従い、委員会の承認を得て実施した。
【０３１９】
肝臓
収集した後、肝臓を氷冷ＰＢＳに移し、切り、刻んで、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーを用いて９ｍｌの滅菌冷溶解緩衝液１と共にホモジナイズし、エッペンドルフ管に分割し（各管中１．５ｍｌ）、氷上で３０分間維持し、続いて、超音波処理し（２５秒の５サイクル）、遠心分離する（４℃、１４，０００ＲＰＭで１５分間）。上清を収集して１つの管に入れ、タンパク質定量のためにＢｒａｄｆｏｒｄ技術を用いてサンプリングし、−２０℃で貯蔵する。
【０３２０】
脾臓
切除後、脾臓を細胞解離グリッド（６０メッシュ）上ＲＰＭＩ１６４０媒質中で刻み、遠心分離し（４℃、１４，０００ＲＰＭで１０分間）、上清を廃棄する；赤血球を、１ｍｌの冷ＲＢＣ溶解緩衝液（１５５ｍＭ塩化アンモニウム）を添加することにより溶解させ、続いて３回冷ＰＢＳですすぎ、遠心分離する。
【０３２１】
脾臓の細胞質画分の調製
冷緩衝液１を脾臓細胞のペレットに添加し（６：１の緩衝液対ペレット比）、細胞を２ｍｌのバイアルに分割し、氷上で３０分間維持し、５回超音波処理し（毎回２５秒）、遠心分離する（４℃、１４，０００ＲＰＭで１５分間）；その後、上清をすべてのバイアルから収集し、タンパク質定量のためにサンプリングし、−２０℃で維持する。
【０３２２】
脾臓の膜画分の調製
細胞質分別の上記遠心分離工程から得られる残りのペレットに、１００〜２５０ｍｌの緩衝液２を添加し、３０分間４℃で撹拌し、遠心分離する（４℃、１４，０００ＲＰＭで１５分間）。その後、上清をすべてのバイアルから収集し、タンパク質定量のためにサンプリングし、−２０℃で維持する。
【０３２３】
Ｔ細胞亜集団の決定のための脾臓および肝臓リンパ球の単離
異なる実験モデルのマウスを指示された日に屠殺する。脾臓リンパ球およびＮＫＴ細胞を単離し、赤血球を除去する。肝内リンパ球を以下のように単離する：横隔膜上方の下大静脈を切断した後、肝臓を冷ＰＢＳで、色が薄くなるまでフラッシングし、続いて、結合組織および胆嚢を除去する。肝臓および脾臓を、ＲＰＭＩ−１６４０＋ＦＣＳ中で維持した。その後、脾臓を、７０μｍナイロンセルストレイナー（Ｆａｌｃｏｎ）を通して粉砕し、細胞残屑を除去するために遠心分離した（１２５０ｒｐｍで７分）。赤血球を１ｍｌの冷１５５ｍＭ塩化アンモニウム溶解緩衝液で溶解させ、直ちに遠心分離した（１２５０ｒｐｍで３分）。その後、脾細胞を洗浄し、１ｍｌ  ＲＰＭＩ＋ＦＣＳで再懸濁させた。結合組織の残りを除去した。トリパンブルー染色による生存率は、９０％超であった。肝内リンパ球に対しては、肝臓を最初にステンレスメッシュ（サイズ６０、Ｓｉｇｍａ）を通して粉砕させ、細胞懸濁液を５０ｍｌ管に５分間入れ、細胞残屑を降下させた。１０ｍｌのＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｆｉｃｏｌｌ、Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ  ＰｏＣ  ＡＳ、Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ）を徐々に、５０ｍｌ管内の同じ体積の細胞懸濁液下に入れた。管をその後、１８００ｒｐｍで１８分間遠心分離した。界面中の細胞を収集し、新しい管に取り出し、これを再び１８００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、肝細胞が激減した細胞ペレットを得、２５０μｌの最終体積とした。約１×１０６細胞／マウス肝臓を収集した。細胞生存率はトリパンブルー染色により検出した。
【０３２４】
脂肪細胞の単離
脂肪組織（内臓脂肪体）を刻み、１０ｍＭグルコースおよび２．５％ウシ血清アルブミンを含むＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ重炭酸塩緩衝液（３ｍＬ／ｇ脂肪組織）中でインキュベートし、８４０Ｕ／ｇコラーゲナーゼ１型（Ｓｉｇｍａ、Ｒｅｈｏｖｏｔ、Ｉｓｒａｅｌ）と共に、３７℃で、穏やかに撹拌しながら１時間インキュベートした。その後、２回、シフォンメッシュ（１００μｍ）を通して濾過し、５０×ｇで５分間遠心分離した。その後、浮遊脂肪細胞を間質血管系（ＳＶ）画分のペレットから分離した。下方画分を除去し、２００×ｇで５分間遠心分離し、ＳＶ細胞をペレット化した。その後、細胞数を計数した。
【０３２５】
リンパ球の異なるサブセットを決定するためのフローサイトメトリー分析（ＦＡＣＳ）
血液、脾臓または任意の臓器からリンパ球を単離した後、３組の２〜５×１０５細胞／５００μＬ  ＰＢＳをＦａｌｃｏｎ  ２０５２管に入れ、４ｍＬの１％ＢＳＡと共に１０分間インキュベートし、１４００ｒｐｍで５分間遠心分離する。細胞を１０μＬ  ＦＣＳ中に、下記リンパ球マーカー：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫｌ．１、ＣＤ２５、ＦＯＸｐ３、ＬＡＰ細胞、ＩＬ−１７、アネキシンおよびＴ細胞活性化のための表面マーカーに対し誘導される１：２０標識（ＦＩＴＣ、ＡＰＣまたはＰＥ−標識）１次抗体と共に再懸濁させる。細胞−抗体混合物を、１０分毎に、３０分間混合する。細胞を、それぞれ、抗ＣＤ３および抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、ならびに抗ＮＫｌ．ｌを使用して単離する。細胞を２回１％ＢＳＡ中で洗浄し、４℃で、読み取りまで維持する。対照群では、５μＬの１％ＢＳＡのみを添加する。表面染色は、細胞を、抗体および抗ＣＤ１６／３２（Ｆｃブロック、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と４℃で、ＰＢＳおよび０．５％ＢＳＡを含むＦＡＣＳ緩衝液中、３０分間インキュベートすることにより実施した。細胞をさらに２回ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、フローサイトメトリーにより分析した。分析細胞選別を、各群由来の１×Ｉ０４細胞に対し、蛍光活性化細胞選別機（ＦＡＣＳｔａｒ  Ｐｌｕｓ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて実施する。適切なアイソタイプ対照を、すべての実験で使用した。分析は、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ機器（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を用いて実施した。生細胞のみを計数し、非抗体処理リンパ球からのバックグラウンド蛍光を減算した。ゲートを前方および側方散乱に対し設定し、死細胞および赤血球を排除した。データはＣｏｎｓｏｒｔ３０  ２色輪郭プロット（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｏｘｎａｒｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）またはＣｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔプログラムにより解析した。
【０３２６】
ＮＫＴリンパ球パーセンテージの決定のためのＦＡＣＳ分析
リンパ球単離後直ちに、３組の２〜５×１０５細胞／５００μＬ  ＰＢＳをＦａｌｃｏｎ  ２０５２管に入れ、４ｍＬの１％ＢＳＡと共に１０分間インキュベートし、３５０ｇで５分間遠心分離する。ＮＫＴリンパ球パーセンテージを決定するために、抗ＣＤ３および抗ＤＸ５抗体を使用する（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ＵＳＡ）。分析細胞選別を、各群由来の１×Ｉ０４細胞に対し、蛍光活性化細胞選別機（ＦＡＣＳＴＡＥ  ｐｌｕｓ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて実施する。生細胞のみを計数し、非抗体処理リンパ球からのバックグラウンド蛍光を減算する。ゲートを前方および側方散乱に対し設定し、死細胞および赤血球を排除する。データはＣｏｎｓｏｒｔ３０  ２色輪郭プロット（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｏｘｎａｒｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）またはＣｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔプログラムにより解析する。
【０３２７】
ＮＫＴリンパ球の単離
細胞分離を製造者の指示に従い、磁気細胞選別（ＭＡＣＳ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実施する。抗ＣＤ３および抗ＤＸ５磁気ビーズをＮＫＴリンパ球の分離のために使用する。ビーズを、製造者の指示に従い２つの工程の間で除去する。細胞のＦＡＣＳ分析により、９５％を超える精度が達成される。
【０３２８】
肝細胞障害
肝損傷を、血清アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）活性により評価し、これらは自動分析器を用いて決定された。
【０３２９】
測定
以下のパラメータを測定した：血糖、総コレステロールおよびトリグリセリド。血糖値は、標準グルコメーターを用いて測定した。血漿トリグリセリドおよび総コレステロール値は、臨床化学分析器Ｒｅｆｌｏｖｅｔ  Ｐｌｕｓ機器（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＧｍｂＨ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により測定した。
【０３３０】
耐糖能試験
マウスを第３０日に、一晩の絶食後、耐糖能試験（ＧＴＴ）に供した。グルコースを経口で（１．２５ｇ／ｋｇ）投与した。血清グルコース測定を、尾静脈血液に対して、１５分毎に３時間実施した。グルコースレベルは、標準グルコメーターにより測定した。
【０３３１】
グルコース朝レベル
研究群はまた、安静時（非絶食時）朝グルコースレベルにより評価した。
【０３３２】
サイトカイン決定
血清に対し「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡにより、市販のキット（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を用いて、ＩＦＮ−γおよびＴＧＦ−βレベルを決定した。血清インスリンもまた、製造者の指示に従い、「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡにより、Ｍｅｒｃｏｄｉａ  ＡＢの市販のキット（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて決定した。
【０３３３】
統計
統計的有意性を対応のない両側スチューデントｔ検定により決定し、ｐ＜０．０５の値のみを示す。
【０３３４】
トリグリセリド測定
示される日に、分光光度計（Ｃｏｂａｓ  ＤＰ−２５Ｐ）を用いて血清トリグリセリドレベルを測定する。
【０３３５】
肝臓脂肪性肝炎スコア
各マウス由来の肝臓セグメントを、１０％ホルムアルデヒド中で固定し、組織学的分析のためにパラフィン中に埋め込んだ。５つの切片（５μｍ）をヘマトキシリン／エオシンで染色し、２人の病理学者により盲検方式で検査する。組織学的検査および脂肪性肝炎グレードスコアリング（ＮＡＳＨスコア）を脂肪性肝炎スコアリングシステムを用いて実施する。
【０３３６】
組織学的検査
パラフィンに埋め込まれた肝臓切片のヘマトキシリン／エオシン染色を実施する。切片を実験条件に対しては知らされていない２人の熟練した病理学者（ＶＤ、ＹＳ）により検査する。
【０３３７】
実施例４：抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は肝臓酵素を減少させる
本発明者らは、抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が経口投与された動物の、肝損傷を示す肝臓酵素レベルが治療により改善されるかどうかを評価した。アスパルチルトランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）活性のレベルを、臨床化学分析器、Ｒｅｆｌｏｖｅｔ  Ｐｌｕｓ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＧｍｂＨ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により決定した。図１は、減少がＡＳＴ群Ａ対Ｂ（＊ｐ＜０．００１）に対し有意であったことを示す。これは、対照群に対するＡＬＴおよびＡＳＴ血清レベルの明確で有意な減少により明らかにされるように、肝損傷の寛解を証明する。
【０３３８】
実施例５．経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
肝内リンパ球の単離
マウスを屠殺した後、以下のように、肝内リンパ球を単離した：肝臓を除去した後、媒質（ＲＰＭＩ−１６４０＋ＦＣＳ）中で維持した。その後、肝臓をステンレスメッシュ（サイズ６０、Ｓｉｇｍａ）を通して粉砕し、細胞懸濁液を５０ｍｌ管に５分間入れた。Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（１０ｍｌ、Ｆｉｃｏｌｌ、Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ  ＰｏＣ  ＡＳ、Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ）を、５０ｍｌ管内の同様の体積の細胞懸濁液下に入れた。管を１８００ｒｐｍで１８分間遠心分離した。界面中の細胞を収集し、１８００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、肝細胞が激減した細胞ペレットを得、２５０μｌの最終体積とした。約１×１０６細胞／マウス肝臓を収集し、フローサイトメトリーにより分析した。
【０３３９】
フローサイトメトリー
細胞の２〜３色表面染色を下記表面抗体：抗ＣＤ４−ＦＩＴＣおよび抗ＣＤ２５−ＰＥを用いて実施した。（抗体は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから購入した）。表面染色は、新たに単離した細胞を抗体および抗ＣＤ１６／３２（Ｆｃブロック、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と４℃で、ＰＢＳおよび０．５％ＢＳＡを含むＦＡＣＳ緩衝液中、３０分間インキュベートすることにより実施した。細胞を２回ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、フローサイトメトリーにより分析した。適切なアイソタイプ対照をすべての実験において使用した。分析は、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ機器（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用し、ＦＣＳ  ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｖ．３ソフトウェア（ＤｅＮｏｖｏ  ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ）を用いて実施した。
【０３４０】
統計分析
統計分析を、スチューデントｔ検定を用いて実施した。Ｐ≦０．０５は有意であるとみなした。
【０３４１】
肝臓における制御性Ｔ細胞の増加の特異性を決定するために、肝臓リンパ球上でのマーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）の平均表面発現を、フローサイトメトリーを用いて、第７日に（屠殺日）３．０ｍｇ抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤で処置したすべてのマウスにおいて測定した。図２Ａは、経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が、肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させることを証明する。ゲーティングはＣＤ４上にあり、値は平均±標準偏差である。
【０３４２】
抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤で処置されたマウスの肝臓（群Ｂ）または未処置対照（群Ａ）から単離されたリンパ球上で実施されたＦＡＣＳ由来の代表的なドットブロットを図２Ｂに示し、この図は、経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させることを示す。
【０３４３】
実施例６：経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は、肝臓においてＣＤ２５＋ＣＤ４＋ＬＡＰ−、ＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
肝内リンパ球の単離およびＦＡＣＳ分析を上記のように実施した。
【０３４４】
フローサイトメトリー
ＬＡＰ染色では、以下の抗体を使用した：抗ＣＤ３−Ａｌｅｘａ−ｆｌｕｏｒ４０５、抗ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５および抗ＬＡＰ−ＡＰＣ。アフィニティ精製されたビオチン化ヤギ抗ＬＡＰ特異ポリクローナル抗体をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）から購入し、ストレプトアビジン−ＡＰＣをビオチン化１次抗体（Ｒ＆Ｄ）を検出するための２次試薬として使用した。ＬＡＰ染色では、細胞をＬＡＰ／対照抗体と２０分間プレインキュベートし、ＣＤ３−Ａｌｅｘａ−ｆｌｕｏｒ４０５またはＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５で染色し、続いて、ストレプトアビジン−ＡＰＣ染色を実施した。
【０３４５】
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤がＴｒｅｇを促進するかどうかを決定するために、本発明者らは、組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。図３は、フローサイトメトリーを用いて、第７日に（屠殺日）３．０ｍｇで処置したすべてのマウスにおいて測定した、肝臓リンパ球上でのマーカー（ＣＤ２５＋ＣＤ４＋ＬＡＰ−、ＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ３＋ＬＡＰ＋）の平均表面発現を示す。図３ＡおよびＢは、抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与が、肝臓においてＣＤ２５＋ＣＤ４＋ＬＡＰ−、ＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させたことを証明する。
【０３４６】
実施例７：経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ８＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤がＴｒｅｇを促進するかどうかを決定するために、本発明者らは、脾臓における、組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。図４は、フローサイトメトリーを用いて、第７日に（屠殺日）３．０ｍｇで処置したすべてのマウスにおいて測定した、脾臓リンパ球上でのマーカー（ＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ８＋ＬＡＰ＋）の平均表面発現を示す。図４ＡおよびＢは、抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与が、脾臓においてＣＤ４５＋ＬＡＰ＋およびＣＤ８＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させることを証明する。
【０３４７】
実施例８：抗ＬＰＳ抗体が強化された初乳のＯｂ／Ｏｂマウスへの経口投与
【０３４８】
【表２】
0005740390.tif 000003
実験群
３つの群のマウス（表２）を試験した。Ｏｂ／Ｏｂマウス（４匹／群）に、毎日、２５日間（１週につき５日）、３０μｌのＰＢＳ（対照、群Ａ）または水に溶解した３０μｌ（＝１００μｇ）のＴ−ＩｇＧ初乳（群Ｂ）、または３０μｌ（＝１００ｕｇ）の抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤（群Ｃ）を与えた（ＰＯ）。４週後、マウスを屠殺した。屠殺日に、心臓血液を標準技術により収集し、血清を得た。
【０３４９】
動物
Ｏｂ／Ｏｂモデルでは、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  （ＵＳＡ）から購入した若い（６〜７週齢）雄Ｃ５７ＢＬ／６  Ｏｂ／Ｏｂマウスを使用した。すべてのマウスを、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈａｄａｓｓａｈ−Ｈｅｂｒｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌで維持した。マウスには、標準の飼料および水を自由に与え、１２時間明／暗サイクルで維持した。動物実験は、Ｈｅｂｒｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ−Ｈａｄａｓｓａｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ（実験動物の世話および使用のための組織委員会）のガイドラインに従い、委員会の承認を得て実施した。
【０３５０】
実施例９：経口Ｔ−ＩｇＧはＯｂ／Ｏｂマウスにおいて血清インスリンを減少させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の効果をさらに評価するために、絶食血清インスリンのレベルを、４週のＴ−ＩｇＧまたはＨＩＢＣを経口投与後に、群Ａ〜Ｃのマウスで決定した。血清インスリンを、製造者の指示に従い、「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡにより、Ｍｅｒｃｏｄｉａ  ＡＢの市販のキット（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて決定した。血清を、マウスを３０日に屠殺後Ｏｂ／Ｏｂマウスから収集した。図５は、マウス投与されたＴ−ＩｇＧは、血清インスリンレベルの減少を示し、インスリン抵抗性に対する抗ＬＰＳ抗体の有益な影響が示される。さらに、観察された減少は、代謝的効果における初乳由来のアジュバントの重要な役割を支持するデータを提供する。
【０３５１】
実施例１０：経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤はＯｂ／Ｏｂマウスにおいて耐糖能を減少させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が血清グルコースレベルを減少させることができるかどうかを検査するために、Ｏｂ／Ｏｂマウスは、第３０日に、一晩の絶食後耐糖能試験（ＧＴＴ）を受けた。グルコースを経口で（１．２５ｇ／ｋｇ）投与した。血清グルコース測定を、尾静脈血液に対して、１５分毎に３時間実施した。グルコースレベルは、標準グルコメーターにより測定した。
【０３５２】
図６に示されるように、マウス投与されたＨＩＢＣは耐糖能を改善し、対照群に比べ、耐糖能試験での、曲線下面積の減少を伴う、より低いグルコース値により証明された。統合すると、実施例９および１０で得られたデータは、メタボリックシンドロームの改善における、本発明によるＨＩＢＣの重要性を支持する。
【０３５３】
実施例１１．抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与はＯｂ／Ｏｂマウスにおいて肝損傷を減少させる
抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は様々なメタボリックシンドロームマーカーを改善する、例えば、耐糖能を減少させる、および血清インスリンを減少させることを示してきたので、本発明者らは次に、調製物を与えられた肝臓酵素レベル（肝損傷を示す）もまた、治療により改善されるかどうかを評価した。ＡＳＴおよびＡＬＴ活性のレベルを、臨床化学分析器、Ｒｅｆｌｏｖｅｔ  Ｐｌｕｓ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＧｍｂＨ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により決定した。図７はＴ−ＩｇＧ−初乳処置マウスにおけるＡＳＴおよびＡＬＴレベルの減少を証明する。
【０３５４】
実施例１２．抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与はＯｂ／Ｏｂマウスにおいて肝臓ＴＧを減少させる
抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は様々なメタボリックシンドロームマーカーを改善することを示してきたので、肝臓トリグリセリド蓄積に対する抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤およびＴ−ＩｇＧ初乳の経口投与の効果を、研究の最後に、マウスを屠殺した後決定した。肝臓内での細胞内トリグリセリド（ＴＧ）の蓄積を、Ｆｏｌｃｈ法の改変型を使用して定量した。ＴＧを瞬間凍結肝臓のアリコートから抽出し、その後、ＧＰＯ−Ｔｒｉｎｄｅｒキット（Ｓｉｇｍａ、Ｒｅｈｏｖｏｔ、Ｉｓｒａｅｌ）を用いて分光光度的にアッセイし、ホモジネート中のタンパク質量に正規化させた。肝臓トリグリセリド量を、すべての処置および対照群に対し計算した。
【０３５５】
図８は、経口投与抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が、対照群中のマウスに比べ、肝臓トリグリセリド量を減少させたことを証明する。減少は、対照に比べＨＩＢＣに対し有意であった（＊Ｐ＜０．０４）。
【０３５６】
実施例１３．抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤がＴｒｅｇを促進するかどうかを決定するために、本発明者らは、脾臓において組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。図９は、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脾臓リンパ球上でのマーカー（ＣＤ３＋ＬＡＰ＋）の平均表面発現を示す。値は平均±標準偏差である。図９ＡおよびＢは、Ｔ−ＩｇＧの経口投与が、脾臓においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させることを証明する。
【０３５７】
実施例１４．抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の経口投与は脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤がＴｒｅｇを促進するかどうかを決定するために、本発明者らは、脾臓において組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。脾臓リンパ球の単離、フローサイトメトリー手順および分析ならびに染色抗体は上記で記載したものと同じである。図１０および１１は、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脾臓リンパ球上でのマーカー（ＣＤ８＋ＣＤ２５＋）の平均表面発現を示す。値は平均±標準偏差である。
【０３５８】
図１０および１１は、Ｔ−ＩｇＧの経口投与が、脾臓においてＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させることを証明する。
【０３５９】
実施例１５．経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が脂肪組織においてＴｒｅｇを促進するかどうかを決定するために、本発明者らは、組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。ＦＡＣＳ分析を、脂肪組織から単離したリンパ球に対し実施した。脂肪組織は、屠殺直後に、Ｏｂ／Ｏｂマウスから単離した。組織（内臓脂肪体）を刻んで微細断片とした。刻んだ試料を１０ｍＭグルコースおよび２．５％ウシ血清アルブミンを含むＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ重炭酸塩緩衝液（３ｍＬ／ｇ脂肪組織）に入れ、８４０Ｕ／ｇコラーゲナーゼ１型（Ｓｉｇｍａ、Ｒｅｈｏｖｏｔ、Ｉｓｒａｅｌ）と共に、３７℃で、１時間インキュベートした。細胞を、２回、シフォンメッシュ（１００μｍ）を通して濾過し、５０ｇで５分間遠心分離した。浮遊脂肪細胞をペレット化した脂肪組織関連間質血管（Ｓ／Ｖ）細胞画分から分離した。下澄画分を除去し、２００ｇで５分間遠心分離し、Ｓ／Ｖ細胞をペレット化した。図１２Ａおよび１２Ｂは、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脂肪組織リンパ球上でのマーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）の平均表面発現を示す。
【０３６０】
図１２は、Ｔ−ＩｇＧの経口投与が、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させることを証明する。
【０３６１】
実施例１６．経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が脂肪組織においてＴｒｅｇを促進するかどうかを決定するために、本発明者らは、組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。ＦＡＣＳ分析を、上記の方法に従い、単離した脂肪組織から単離したリンパ球に対し実施した。図１３Ａおよび１３Ｂは、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脂肪組織リンパ球上でのマーカー（ＣＤ３＋ＬＡＰ＋）の平均表面発現を示す。
【０３６２】
図１３は、Ｔ−ＩｇＧの経口投与が、脂肪組織においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させることを証明する。
【０３６３】
実施例１７：経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤は間質血管細胞（前脂肪細胞を含む）においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の発現を増加させる
経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤が脂肪組織においてＴｒｅｇを促進するかどうかを決定するために、本発明者らは、組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。ＦＡＣＳ分析を、上記の方法に従い、単離した前脂肪細胞を含む間質血管細胞から単離したリンパ球に対し実施した。
【０３６４】
図１４Ａおよび１４Ｂは、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脂肪組織リンパ球上でのマーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）の平均表面発現を示す。
【０３６５】
図１４は、Ｔ−ＩｇＧの経口投与が、前脂肪細胞を含む間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させることを証明する。
【０３６６】
さらに、この細胞集団を調べるために、ＦＡＣＳ分析を、間質血管細胞から単離したリンパ球上で実施し、マーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋）の発現を検査した（第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて）。
【０３６７】
図１５Ａおよび１５Ｂは、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脂肪組織リンパ球上でのマーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋）の平均表面発現を示す。
【０３６８】
図１５は、Ｔ−ＩｇＧの経口投与が、前脂肪細胞を含む間質血管細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞のサブセットを増加させることを証明する。
【０３６９】
実施例１８：Ｏｂ／Ｏｂマウスにおける抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の用量研究
【０３７０】
【表３】
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実験群
６つの群のマウス（表３）を試験した。Ｏｂ／Ｏｂマウス（５匹／群）に、毎日、２５日間（１週につき５日）、３０μｌのＰＢＳ（対照、群Ａ）または３０μｌ（＝１μｇ）のＴ−ＩｇＧ初乳（群Ｂ）、または３０μｌ（＝１００μｇ）のＴ−ＩｇＧ初乳（群Ｃ）、または３０μｌ（＝１ｍｇ）のＴ−ＩｇＧ初乳（群Ｄ）、または３０μｌ（＝３ｍｇ）のＴ−ＩｇＧ初乳（群Ｅ）、または３０μｌ（＝１ｍｇ）のＨＩＢＣ初乳（群Ｆ）を与えた（ＰＯ）。初乳調製物はどちらも水に溶解した。
【０３７１】
４週後、マウスを屠殺した。屠殺日に、心臓血液を標準技術により収集し、その後の目的のために血清を得た。
【０３７２】
動物
Ｏｂ／Ｏｂモデルでは、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＵＳＡ）から購入した若い（６〜７週齢）雄Ｃ５７ＢＬ／６  Ｏｂ／Ｏｂマウスを使用した。すべてのマウスを、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈａｄａｓｓａｈ−Ｈｅｂｒｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌで維持した。マウスには、標準の飼料および水を自由に与え、１２時間明／暗サイクルで維持した。動物実験は、Ｈｅｂｒｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ−Ｈａｄａｓｓａｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ（実験動物の世話および使用のための組織委員会）のガイドラインに従い、委員会の承認を得て実施した。
【０３７３】
実施例１９：抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリンの経口投与は、Ｏｂ／Ｏｂマウスにおいて肝臓酵素を減少させる
ＡＳＴおよびＡＬＴ活性のレベルを、上記のように、臨床化学分析器により決定した。図１６は１ｍｇのＴ−ＩｇＧが、肝臓酵素を減少させるのに最も有効な用量であったことを証明する。
【０３７４】
実施例２０：抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリンの経口投与は、Ｏｂ／Ｏｂマウスにおいて総コレステロールを減少させる
血漿トリグリセリドおよび総コレステロールを、上記のように、臨床化学分析器、Ｒｅｆｌｏｖｅｔ  Ｐｌｕｓ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＧｍｂＨ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により決定した。図１７は、１００μｇのＴ−ＩｇＧが、総コレステロールを減少させるのに最も有効な用量であったことを証明する。
【０３７５】
実施例２１：抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリンの経口投与は、Ｏｂ／Ｏｂマウスにおいて肝臓ＴＧを減少させる
肝臓内での細胞内トリグリセリド（ＴＧ）の蓄積を、Ｆｏｌｃｈ法の改変型を使用して定量した。ＴＧを瞬間凍結肝臓のアリコートから抽出し、その後、ＧＰＯ−Ｔｒｉｎｄｅｒキット（Ｓｉｇｍａ、Ｒｅｈｏｖｏｔ、Ｉｓｒａｅｌ）を用いて分光光度的にアッセイし、ホモジネート中のタンパク質量に規準化させた。
【０３７６】
図１８は、１００μｇの１ｍｇ、３ｍｇおよび１００μｇのＴ−ＩｇＧが、肝臓トリグリセリドを減少させるのに最も有効な用量であったことを証明する。減少はＤ、Ｅ、Ｆに対し群Ａで統計学的に有意であった（＊ｐ＜０．０５）。
【０３７７】
実施例２２：１μｇ、１ｍｇ、３ｍｇのＴ−ＩｇＧを１００μｇのＨＩＢＣと共に経口投与すると、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させた
ＦＡＣＳ分析を、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓から単離したリンパ球に対し実施した。肝臓リンパ球上のマーカー（ＣＤ３＋ＮＫ１．１＋）の発現の平均を、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した。フローサイトメトリーでは、下記抗体を使用した：抗ＣＤ３−ＦＩＴＣおよび抗ＮＫ１．１−ＰＥ。表面染色およびＦＡＣＳ分析は、上記のように実施した。
【０３７８】
図１９Ａは、１μｇ、１ｍｇ、３ｍｇのＴ−ＩｇＧを１００μｇのＨＩＢＣと共に経口投与すると、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させたことを証明する。さらに、図１９Ｂは、１μｇおよび１００μｇのＴ−ＩｇＧ経口投与がＯｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ３＋ＮＫ１．１＋細胞を減少させたことを証明する。
【０３７９】
実施例２３：Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ初乳の経口投与はＯｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−／ＬＡＰ＋細胞を増加させる
肝臓においてＴｒｅｇを促進する経口抗ＬＰＳ強化初乳由来免疫グロブリン製剤の用量を決定するために、本発明者らは、組織由来の制御性Ｔ細胞のサブセットに対する経口投与の効果を検査した。ＦＡＣＳ分析を、上記の方法に従い、肝臓から単離したリンパ球に対し実施した。図２０は、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、肝臓リンパ球上でのマーカーの発現の平均を示す。
【０３８０】
図２０Ａは、Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ初乳の経口投与が、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−／ＬＡＰ＋細胞を増加させることを証明する。図２０Ｂは、１００μｇのＨＩＢＣ初乳の経口投与が、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋細胞を増加させることを証明する。
【０３８１】
実施例２４：Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ−初乳の経口投与は、ＣＤ２５＋ＬＡＰ−肝臓リンパ球の変化を誘導する
図２１は、１μｇ、１ｍｇ、３ｍｇのＴ−ＩｇＧを１００μｇのＨＩＢＣと共に経口投与すると、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓においてＣＤ２５＋ＬＡＰ−リンパ球の変化を誘導することを証明する。
【０３８２】
実施例２５：Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ−初乳の経口投与は、ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋脾臓リンパ球の変化を誘導する
図２２Ａは、Ｔ−ＩｇＧおよびＨＩＢＣ−初乳の経口投与が、ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋脾臓リンパ球を減少させることを証明する。図２２Ｂは、Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与が、ＣＤ２５＋ＬＡＰ＋脾臓リンパ球を増加させることを証明する。
【０３８３】
実施例２６：１および３ｍｇのＴ−ＩｇＧならびに１００μｇのＨＩＢＣ−初乳の経口投与はＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−脾臓リンパ球を増加させる
ＦＡＣＳ分析を、Ｏｂ／Ｏｂマウスの肝臓から単離したリンパ球に対し実施した。図２３は、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脾臓リンパ球上でのマーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−）の発現の平均を示す。図２３は、１および３ｍｇのＴ−ＩｇＧならびに１００μｇのＨＩＢＣ−初乳の経口投与が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−脾臓リンパ球を増加させることを証明する。
【０３８４】
実施例２７：Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させる
ＦＡＣＳ分析を、上記のように、Ｏｂ／Ｏｂマウスの脂肪組織から単離したリンパ球に対し実施した。図２４は、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脂肪組織細胞上でのマーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）の発現の平均を示す。図２４は、Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与が、脂肪組織においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋リンパ球を増加させることを証明する。
【０３８５】
実施例２８：１００μｇのＴ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪細胞において、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させる
ＦＡＣＳ分析を、上記のように、Ｏｂ／Ｏｂマウスの脂肪組織から単離した脂肪細胞に対し実施した。図２５Ａは、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脂肪細胞でのマーカー（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）の発現の平均を示す。
【０３８６】
図２５Ａは、１００μｇのＴ−ＩｇＧ−初乳の投与が、脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させることを証明する。図２５Ｂは、１００μｇのＴ−ＩｇＧ−初乳の経口投与が、脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋を増加させることを証明する。
【０３８７】
実施例２９：Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪細胞においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋を増加させる
ＦＡＣＳ分析を、上記のように、Ｏｂ／Ｏｂマウスの脂肪組織から単離した脂肪細胞に対し実施した。図２６は、フローサイトメトリーを用いて、第２５日に（屠殺日）すべてのＯｂ／Ｏｂマウスにおいて測定した、脂肪細胞上でのマーカー（ＣＤ３＋ＬＡＰ＋）の発現の平均を示す。
【０３８８】
図２６Ａは、Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与が、脂肪細胞においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋を増加させることを証明する。図２６Ｂは、Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与が、脂肪細胞においてＣＤ３＋ＬＡＰ＋を増加させることを証明する。
【０３８９】
実施例３０：Ｔ−ＩｇＧ−初乳の経口投与は脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−を増加させる
図２７Ａは、Ｔ−ＩｇＧ−初乳の投与が、脂肪細胞においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＬＡＰ−を増加させることを証明する。
【０３９０】
実施例３１：抗ＬＰＳ強化初乳の経口投与は肝炎モデルにおいて細菌トランスロケーションを減少させる
細菌トランスロケーションおよび肝炎を検査するために、マウス群を下記のように処置した：
群Ａ：ＢＣＰ：抗体を含まない初乳で処理
群Ｂ：抗ＬＰＳ含有初乳
マウスに初乳を４日間与えた後、Ｃｏｎ  Ａ肝炎を誘導した。
【０３９１】
Ｃｏｎ  Ａの投与および血清トランスアミナーゼ活性の測定
Ｃｏｎ  Ａは、ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（Ｏｈｉｏ、ＵＳＡ）から購入した。Ｃｏｎ  Ａ（０．５ｍｇ、２０ｍｇ／ｋｇ）を２００μＬの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＣａＣｌ２に溶解し、マウスに静脈注射した。個々のマウス由来の血清を、Ｃｏｎ  Ａ注射後８または２０時間に得た。アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血清活性を、自動分析器を用いて測定した。
【０３９２】
細菌トランスロケーションを評価するために、リポ多糖（ＬＰＳ）レベルを、リムルスアメボサイトライセート（ＬＡＬ）発色アッセイを用いて測定した；ＬＡＬは、細菌トランスロケーションの程度の測定値である。
【０３９３】
表４は、平均ＬＡＬレベルの減少により示されるように、抗ＬＰＳ初乳の経口投与が細菌トランスロケーションを減少させたことを証明する。
【０３９４】
【表４】
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【０３９５】
重要なことには、減少した細菌トランスロケーションは、表５で示されるように、肝損傷のマーカーである肝臓酵素ＡＬＴの改善を伴った。
【０３９６】
【表５】
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【０３９７】
実施例３２：初乳由来抗ＬＰＳ強化調製物および抗インスリン抗体を含む組成物の調製
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤を調製するために、初乳を約２００の民間の乳牛飼いから収集した。これらの群れ中のウシは、所定のウシ病原体に対しワクチン接種されていると共に、ヒト消化管ミクロフローラ中の主生物である複数の大腸菌の菌株の細胞外壁抗原に対する専売Ａｎａｄｉｓワクチンでワクチン接種されている。抗インスリン強化免疫グロブリン製剤を調製するために、３匹の乳牛を抗原としてＫＬＨにコンジュゲートされたインスリンで免疫化する。抗原ワクチンを妊娠期間の最後の８週の間に投与する。初乳の乳を授乳の最初の２日間中に回収する。得られた初乳を試験のための個々のバッグ内で凍結させた。処理のために、初乳を解凍し、プールし、脂肪を除去した。各バッチを低温殺菌した。初乳を限外濾過により濃縮し、凍結乾燥前に体積を減少させた。限外濾過工程により最終粉末中のラクトースが７％未満まで（約５０％から）減少した。
【０３９８】
抗ＬＰＳ強化免疫グロブリン製剤および抗インスリン強化免疫グロブリン製剤を混合し、下記で示されるように使用するための組成物を形成させる。
【０３９９】
免疫媒介肝炎モデルでは、１１〜１２週齢の雄Ｃ５７／ｂｌマウスに、肝炎を誘発することが知られている、５０ｍＭ  Ｔｒｉｇ  ｐＨ７、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＣａＣｌ２に溶解されたＣｏｎ  Ａ（ＭＰ  Ｂｉｏｒｎｅｄｉｃａｌｓ、ＵＳＡ）の５００μｇｌｉｎｏｕｓｅ（約１５ｍｇ／ｋｇ）の用量を尾静脈注射する。試験されるすべての群の動物に、抗ＬＰＳおよび抗インスリン強化免疫グロブリン製剤を含む異なる濃度の組成物を用いて経口投与し（経管栄養により）、未処置対照と比較する。試験されるすべての群の動物を、以下のパラメータについて追跡し、対照群と比較する：血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル、肝臓標本の組織学的検査、ＮＫＴマーカーのための肝内および脾臓内リンパ球のＦＡＣＳ分析、ＴＧ、総コレステロール、耐糖能、血清インスリン、血清グルコース、サイトカインレベルの測定ならびに転写因子ＳＴＡＴ１、４および６ならびにＮＦκＢの発現に対するウエスタンブロット分析。
【図１】
0005740390.tif 000007
【図２Ａ】
0005740390.tif 000008
【図２Ｂ】
0005740390.tif 000009
【図３Ａ】
0005740390.tif 000010
【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
0005740390.tif 000020
【図１１】
0005740390.tif 000021
【図１２Ａ】
0005740390.tif 000022
【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
0005740390.tif 000030
【図１７】
0005740390.tif 000031
【図１８】
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【図１９Ａ】
0005740390.tif 000033
【図１９Ｂ】
0005740390.tif 000034
【図２０Ａ】
0005740390.tif 000035
【図２０Ｂ】
0005740390.tif 000036
【図２１】
0005740390.tif 000037
【図２２Ａ】
0005740390.tif 000038
【図２２Ｂ】
0005740390.tif 000039
【図２３】
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【図２４】
0005740390.tif 000041
【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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