(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
特発性血小板減少性紫斑病を治療する目的で使用される組成物であって、当該組成物がキバナオウギ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ）の根の精製された抽出物を含み、その抽出物が、
４：１から５：１の範囲のアラビノース：ガラクトース比；
５％から１０％のラムノース；
１５％から２０％のガラクトース；
１０％から２０％のガラクツロン酸；
２重量％以下のタンパク質；
１０％から約１５％のグルコース；を含み、
かつ、その高収率抽出物が、キバナオウギから粗抽出物を単離することと、粗抽出物を酸で穏やかに処理することとを含む第１のプロセスを用いて調製され、その穏やかに処理することが、０．０５Ｍから０．５Ｍの濃度で、１５℃から２５℃の温度で、１時間から２４時間の間、酸を粗抽出物に適用することを含み、酸を適用する温度及び時間が、前記のアラビノース：ガラクトース比、ガラクトース含有量、グルコース含有量、及び高収率を得るように選択され、かつ、
高収率が、３．５：１未満のアラビノース：ガラクトース比、２０％から３５％のガラクトース、及び１０％未満のグルコースを得るように選択される温度及び時間で、酸を粗抽出物に適用することを含む第２のプロセスを用いて生成されるキバナオウギの抽出物の収率よりも実質的に高い
ことを特徴とする組成物。
【請求項２】
キバナオウギが、マメ科ナイモウオウギ（Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｇｅ．ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ（Ｂｇｅ．）Ｈｓｉａｏ）またはマメ科キバナオウギ（Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｂｇｅ）である
請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
キバナオウギが、中華人民共和国の内モンゴル自治区または山西省で生育したものである
請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
根が、２年もののキバナオウギ植物に由来するものである
請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
アラビノース、ガラクトース、ラムノース、ガラクトース、ガラクツロン酸からなる群の重量平均分子量が、少なくとも１００キロダルトンである、
請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
少なくとも８０重量％の炭水化物を有する
請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
酸が、トリクロロ酢酸または塩酸である
請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
水溶液中、４．５から６．５のｐＨを有する
請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
造血を刺激する薬剤を含む
請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、及びそれらの誘導体からなる群から選択される薬剤を含む
請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
治療的有効量の請求項１に記載の組成物と水性注射用賦形剤とを含む
ことを特徴とする水性注射用製剤。
【請求項１２】
特発性血小板減少性紫斑病を治療する目的で使用される組成物であって、当該組成物がキバナオウギの根の精製された抽出物を含み、その抽出物が、
３．５：１を超えるアラビノース：ガラクトース比；
５％から１０％のラムノース；
１５％から２０％のガラクトース；
１０％から２０％のガラクツロン酸；
１０％から１５％のグルコース；を含む
ことを特徴とする組成物。
【請求項１３】
キバナオウギの高分子量抽出物を含む組成物であって、その抽出物が、
２．０：１から４：１の範囲のアラビノース：ガラクトース比；
５％から１５％のアラビノース；
２％から４％のラムノース；
８％から２５％のガラクトース；
５％から２５％のグルコース；を含み、
組成物が、治療的有効量で前記医薬品を投与することにより、哺乳動物における特発性血小板減少性紫斑病を治療するための医薬品の製造に用いられる
ことを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００８年１２月１５日に出願された特許文献１の関連出願を主張するものであり、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、キバナオウギ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ  ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ）の抽出物を含む組成物の調製及び使用に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
血小板または巨核球の数の減少は、血小板減少として知られる状態であり、これは、いくつかの疾患、ならびに骨髄機能を抑制するか、造血を抑制するか、または血小板数もしくは巨核球の低下を引き起こす治療において経験される状態である。例えば、癌患者は、化学療法または放射線療法による治療を受けて、血小板減少を経験することが多く、患者の出血のリスクが増加し、場合によっては化学療法剤の投与を制限する。
血小板減少を引き起こすメカニズムは少なくとも２つあり、これらは、（１）巨核球または血小板の産生を低下させるメカニズムと、（２）血小板を破壊するかまたは血小板を血液循環から取り除くように働くメカニズムである。
【０００４】
第２のメカニズムが用いられる疾患の一例は、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）である。ＩＴＰは、血液中の血小板を破壊して血小板数を異常に少なくする、免疫系からの攻撃を特徴とする自己免疫血液病である。血小板の破壊は、患者自身の血小板に対する抗体である抗血小板自己抗体の存在が原因である。この血小板数の少なさのせいで、あざができやすくなり、歯茎からの出血が起こり、また、頻度は少ないが、重度の内出血が生じることがある。鼻、歯茎、消化管または尿路からの出血も起こる場合があり、脳内出血は稀ではあるが、恐れられている合併症である。
【０００５】
現在、米国では約２００，０００人がＩＴＰに罹患しており、知られている治療法がない。全症例の約半数は、原因が不明であることを意味する「特発性」として分類される。「血小板減少」という用語は、血小板の減少を指し、「紫斑」という用語は、血小板の減少が原因で出血が起こっている皮膚や粘膜（例えば、口腔粘膜）の紫色がかった部分を指す。「免疫性血小板減少性紫斑病」という用語は、この疾患の免疫に関わる性質を明確に規定しているという理由で、この状態を説明するのによく用いられ、この用語には、原因が分かっている症例だけでなく、原因不明の症例も含まれる。
【０００６】
ＩＴＰは、薬物により誘発されるか、または感染症、妊娠、もしくは免疫障害（例えば、全身性エリテマトーデス）と関連することがある。急性ＩＴＰは、幼児に起こることが最も多い。男女の差なく病気にかかり、ウイルス感染の後に症状が出ることが多い。約８５％の子供は１年以内に回復し、この問題は再発しない。６カ月よりも長く続く場合、ＩＴＰは慢性とみなされ、慢性ＩＴＰの発症はどの年代でも起こり得る。ＩＴＰは成人期でピークに達し、女性は男性よりも２〜３倍病気にかかりやすい。残念なことに、けがによる出血を防ぐために、ライフスタイルの変更が求められることが多い。
【０００７】
いくつかの実施形態では、標準的なＩＴＰ治療には、高用量のコルチコステロイドが用いられる。患者は高用量のコルチコステロイドに応答するが、この応答は長続きせず、治療は耐容性が低く、重大な副作用を伴う。また、脾臓は血小板破壊の主要部位であり、この血小板破壊は当然さらなる合併症を引き起こすので、コルチコステロイドの失敗またはコルチコステロイドへの不耐容は、脾臓摘出を選択させることになる可能性がある。いくつかの実施形態では、治療は、プレドニゾン及び／またはＩＶ免疫グロブリンの投与を含むことができる。ビンクリスチン、アザチオプリン（イムラン）、ダナゾール、シクロホスファミド、及びシクロスポリンなどの他の薬物を用いることもできる。
【０００８】
当業者であれば、異常に少ない血小板数が、化学療法薬による治療または放射線治療によって生じることが知られていることを理解する。これらの治療は、骨髄機能を抑制し、巨核球の産生を低下させ、ひいては血小板数を低下させるという点で、上記の第１のメカニズムを提供する。対照的に、ＩＴＰの異常に少ない血小板数は、血小板に結合する抗体の生成を通じて血小板を血液循環から取り除く第２のメカニズムによって生じる。したがって、当業者であれば、血液循環中で巨核球もしくは血小板を生成する生物学的プロセスの損傷によるか、または抗体を介するＩＴＰのメカニズムによるかにかかわらず、血小板減少を治療することができる組成物を理解する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国仮特許出願６１／１２２，５８６
【特許文献２】米国特許６，９９１，８１７
【特許文献３】ＷＯ２００１００６８２号
【特許文献４】米国特許６，９９１，８１７
【００１０】
【非特許文献１】Ｍａｒｔｉｎ，Ｅ．Ｗ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
【非特許文献２】Ａｌｆｏｎｓｏ  ＡＲ：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．，１９８５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、一般に、キバナオウギの抽出物を含む組成物の調製及び使用に関するものである。
いくつかの実施形態では、キバナオウギの高収率抽出物を含む組成物、ここで、この抽出物は、約３．５：１を超えるアラビノース：ガラクトース比；約５％から約１０％のラムノース；約１５％から約２０％のガラクトース；約１０％から約２０％のガラクツロン酸；及び約１０％から約１５％のグルコースを含む。これらの実施形態では、高収率抽出物は、粗抽出物をキバナオウギから単離することと、粗抽出物を酸で穏やかに処理することとを含む第１のプロセスを用いて調製され、穏やかに処理することは、約０．０５Ｍから約０．５Ｍの濃度で、約１５℃から２５℃の温度で、約１時間から約２４時間の間、酸を粗抽出物に適用することを含む。酸を適用する温度及び時間は、このアラビノース：ガラクトース比、このガラクトース含有量、このグルコース含有量、及び高収率を得るように選択される。高収率は、３．５：１未満のアラビノース：ガラクトース比、２０％から３５％のガラクトース、及び約１０％未満のグルコースを得るように選択される温度及び時間で、酸を粗抽出物に適用することを含む第２のプロセスを用いて生成されるキバナオウギの抽出物の収率よりも実質的に高い。いくつかの実施形態では、酸処理で用いられる酸は、トリクロロ酢酸または塩酸である。
【００１２】
いくつかの実施形態では、抽出物はキバナオウギの根から単離される。これらの実施形態では、キバナオウギは、マメ科ナイモウオウギ（Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ  Ｂｇｅ．ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ（Ｂｇｅ．）Ｈｓｉａｏ）またはマメ科キバナオウギ（Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｂｇｅ）であることができる。いくつかの実施形態では、キバナオウギは、中華人民共和国の内モンゴル自治区または山西省で生育したものである。さらに、いくつかの実施形態では、根は、約２年もののキバナオウギ植物に由来するものであることができる。
【００１３】
抽出物の組成物は様々であることができ、いくつかの実施形態では、抽出物は、少なくとも１００キロダルトンの重量平均分子量を有するか、少なくとも８０重量％の炭水化物と２重量％以下のタンパク質を有するか、約４．０：１から約４．５：１のアラビノース：ガラクトース比を有するか、水溶液中、約４．５から約６．５のｐＨを有するか、または任意のその組合せである。
【００１４】
抽出物を含む組成物はさらに、造血を刺激する薬剤を含むことができるかまたは造血を刺激する薬剤と組み合わせて投与されることができる。いくつかの実施形態では、薬剤は、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、及びそれらの誘導体からなる群から選択されることができる。いくつかの実施形態では、組成物は、治療的有効量の組成物と水性注射用賦形剤とを含む水性注射用製剤中にあることができる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、抽出物は、約１．５：１から約３：１のアラビノース：ガラクトース比；約５％から約１５％のアラビノース；約１．５％未満のラムノース；約３％から約７％のガラクトース；約４％未満のガラクツロン酸；及び約７０％から約９０％のグルコースを含む。これらの実施形態では、抽出物は、約２０キロダルトンから約６０キロダルトンの重量平均分子量、水溶液中、約４．５から約６．５のｐＨ、またはそれらの組合せを有することができる。
【００１６】
本発明は、哺乳動物の造血系を刺激する方法も含む。本方法は、本明細書に示された抽出物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む。いくつかの実施形態では、刺激することは、血小板数を増加させること、白血球数を増加させること、リンパ球数を増加させること、またはそれらの組合せを含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本方法は、第２の活性剤の共投与をさらに含む。これらの実施形態では、第２の活性剤は造血剤であることができる。第２の活性剤は、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、及びそれらの誘導体からなる群から選択され得る。
【００１８】
哺乳動物は、実験目的のためであれ、治療目的のためであれ、組成物が投与される任意の哺乳動物であることができる。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトであり、いくつかの実施形態では、ヒトは骨髄抑制に苦しんでいる。骨髄抑制は化学療法または放射線療法の結果であることがある。
【００１９】
本発明はまた、抽出物を調製する方法を提供する。本方法は、粗抽出物をキバナオウギから単離することと、粗抽出物を酸で穏やかに処理することとを含む。穏やかに処理することは、約０．０５Ｍから約０．５Ｍの濃度で、約１５℃から２５℃の温度で、約１時間から約２４時間の間、酸を粗抽出物に適用することを含む。酸を適用する温度及び時間は、約３．５：１を超えるアラビノース：ガラクトース比；約５％から約１０％のラムノース；約１５％から約２０％のガラクトース；約１０％から約２０％のガラクツロン酸；約１０％から約１５％のグルコース；及び高収率を得るように選択される。高収率は、３．５：１未満のアラビノース：ガラクトース比、２０％から３５％のガラクトース、及び約１０％未満のグルコースを得るように選択される温度及び時間で、酸を粗抽出物に適用することを含む第２のプロセスを用いて生成されるキバナオウギの抽出物の収率よりも実質的に高い。いくつかの実施形態では、アラビノース：ガラクトース比を、約４．０：１から約４．５：１、約３．７５：１から約４．５：１、約３．８：１から約４．２５：１、またはその中の任意の範囲内にまで低下させることができる。
【００２０】
本発明はまた、特発性血小板減少性紫斑病を治療する方法であって、有効量の本明細書に示された抽出物を、特発性血小板減少性紫斑病を有する対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、酸修飾されたアラビノガラクタンタンパク質組成物は第２の活性剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、第２の活性剤は、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、及びそれらの誘導体からなる群から選択されることができる。また、いくつかの実施形態では、組成物を、治療的有効量で医薬品を投与することにより哺乳動物における特発性血小板減少性紫斑病を治療するための医薬品の製造に用いることができる。
【００２１】
以下の教示を読んだ当業者であれば、これらの概念が、特許請求の範囲の文字通りの解釈、特許請求の範囲に記載された発明、及び特許請求の範囲に記載された用語を超えたさらなる実施形態にまで及ぶことができることを理解する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】いくつかの実施形態に従って致死線量に近い放射線を投与した後の高収率抽出物に対する、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける血小板レベルの応答を示すグラフ
【図２】いくつかの実施形態に従ってＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した７日後のマイトマイシン誘導性の血小板減少を示すグラフ
【図３】いくつかの実施形態に従って高収率抽出物を投与した後の放射線照射ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける白血球の回復を示すグラフ
【図４】いくつかの実施形態に従って高収率抽出物とＧ−ＣＳＦを共注射したときの放射線照射ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける血小板数の回復速度を示すグラフ
【図５】いくつかの実施形態に従って高収率抽出物とＧ−ＣＳＦを共注射したときの放射線照射ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける白血球数の回復速度を示すグラフ
【図６】台湾での臨床試験のフローチャート。なお、この臨床試験では、米国血液学会（ＡＳＨ）のガイドラインに従って、患者が慢性特発性血小板減少症を有すると診断された。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明は、一般に、キバナオウギの抽出物を含む組成物の調製及び使用に関するものである。
いくつかの実施形態では、本抽出物は、骨髄抑制において造血を刺激し、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、またはＧ−ＣＳＦの産生を刺激し、白血球の産生または作用を刺激し、好中球減少症、白血球減少症、単球減少症、貧血、または血小板減少症を有する哺乳動物の免疫系及び／または造血系を刺激するために用いることができる。本抽出物は、例えば、偶発的なものであれ、治療プログラムの一部としてであれ、細胞毒性薬または放射線への曝露によって引き起こされる状態を治療するのに用いることができ、この状態としては、骨髄抑制または免疫応答の結果としての、造血細胞の損傷、抑制、または除去が挙げられるが、これらに限定されない。症状は、本明細書に提供される治療を用いて改善させることができ、この症状としては、例えば、悪液質、嘔吐、及び薬物離脱症状を挙げることができる。このような抽出物の例は、例えば、特許文献２〜３に見出すことができ、その各々は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００２４】
本抽出物は造血活性を刺激し、ひいては血球産生を増加させる。本抽出物は、例えば、血小板数を増加させることができ、癌治療を受けている患者に見られることが最も多い状態である血小板減少を治療するのに有効である。しかしながら、免疫障害やウイルス性障害などの、血小板減少の他の原因も数多く存在する。免疫障害の一例は、ＩＴＰであり、ウイルス性障害の一例は、ＨＩＶまたは慢性肝炎である。薬物の投与も血小板減少を引き起こすことがあり、その場合、血小板数低下は、薬物に対する有害反応、または骨髄機能を抑制する薬物の結果と理解することができる。抗炎症薬、心臓の薬、抗生物質は、血小板減少の原因として特定されている。肥大した脾臓などの身体状態が血小板減少を引き起こすことがあるが、それは、肥大した脾臓が血小板を捕捉して破壊することが理由である。ループスやリウマチ様疾患などの、免疫系の病気も血小板減少を引き起こすことがある。
【００２５】
したがって、本抽出物を、例えば、免疫障害が原因であるか、骨髄抑制が原因であるかを問わず、血小板減少を治療するのに用いることができる。本抽出物を用いて、白血球の産生を刺激することもできる。本明細書に記載の組成物及び方法は、造血を刺激し、巨核球、及び他の白血球の増殖または成熟を誘導する。本明細書に記載の組成物及び方法は、血小板、巨核球、及び他の白血球の産生、増殖、及び成熟を刺激するだけでなく、それらの産生が抑制されるか、またはそれらが疾患もしくは他の治療により破壊されて、血液循環から取り除かれた後に、それらの回復を加速させる。当業者であれば、提供された教示を概観した後に、特許請求の範囲をより良く理解する。
【００２６】
本明細書に提供される抽出物は、感染に対するまたは免疫抑制状態における免疫応答を回復させ、Ｂ型肝炎において肝細胞を保護するのに役立つことができる。また、本抽出物は、より成熟した造血細胞の始原造血前駆体の増殖や活性を刺激することが当然予想される。さらに、本抽出物は、患者における造血を刺激し、治療の投与を遅らせるか、または治療の強度を低下させることになる感染を阻止することによって、感染に対する患者の抵抗性を強化することにより、実行中の治療プログラム（例えば、化学療法）の効力を改善するのに役立つことができる。
【００２７】
約１．５：１から約３：１のＡｒａ：Ｇａｌ及び約２０Ｋダルトンから約６０Ｋダルトンの平均分子量を有するキバナオウギの抽出物（「精製抽出物」）の調製：
【００２８】
本発明では、抽出物をキバナオウギから単離精製する方法が記載されている。いくつかの実施形態では、２年もののキバナオウギ植物の根は、組成物の良好な供給源を提供する。多くの実施形態では、根は、例えば、マメ科ナイモウオウギ；マメ科キバナオウギ；または中華人民共和国の内モンゴル自治区もしくは山西省で生育したキバナオウギに由来するものであることができる。
【００２９】
キバナオウギ由来の抽出物は、通常、加工してチップまたは切片にした滅菌乾燥根から得られる。調製は、乾燥根をトリミングすることと、それを限外濾過（ＵＦ）水でこすり洗いすることと、それを７０％エタノールなどの消毒溶液で浄化することとを含む。根を薄切りにし、滅菌条件で乾燥させて、本明細書では「クリーンチップ」とも呼ばれる、「飲用チップ」を産生する。この抽出物は、アラビノガラクタンタンパク質と、少なくとも８０〜１００℃の温度を有する水性抽出溶媒を適用することを含むプロセスを用いて飲用チップから単離される関連多糖類とから構成される。
【００３０】
抽出溶媒は水であることができ、任意でアルカリ金属塩などの共抽出剤を含むことができる。アルカリ金属塩としては、例えば、リン酸二水素カリウムまたはリン酸二水素ナトリウムを挙げることができる。共抽出剤は、例えば、濃度０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ約４．５）であることができる。
【００３１】
根から抽出物を単離するのに必要な時間、温度で、及び根から抽出物を単離するのに必要な抽出サイクルと同じだけ、抽出溶媒を飲用チップに適用する。典型的なプロセスは、３回の抽出サイクルを含み、各サイクルは約３時間持続し、約１００℃の温度を有する抽出溶媒を適用する。いくつかの実施形態では、飲用チップを、最初の熱い水性塩洗浄液を用いて（例えば、ｐＨ４．５、温度約１００℃で０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４中で）約３０分間、抽出する。いくつかの実施形態では、飲用チップの調製後の全工程を、滅菌器具と滅菌試薬の使用を含む無菌条件下で行なう。
【００３２】
その後、抽出溶媒を濃縮し、これを、真空下、約６０〜７０℃の温度で行なって、飲用チップ１ｋｇ当たり約１Ｌの濃度を達成することができる。この濃度は、限外濾過、例えば、１００キロダルトンの分子量カットオフのフィルターを用いる限外濾過を用いて達成することもできる。
【００３３】
その後、抽出物を、低級アルカノールを用いて濃縮抽出溶媒から沈殿させる。低級アルカノールは、例えば、エタノールであることができる。いくつかの実施形態では、エタノールを、約室温で約７０％エタノールの濃度になるまで溶媒に添加して、沈殿物を生成させることができる。いくつかの実施形態では、まず、第１の沈殿工程で、より低い濃度の約３５％エタノールを用いて、その後、第２の沈殿工程で、より高い濃度の約７０％エタノールを用いて、沈殿を行なう。沈殿に用いられる低級アルカノールの濃度は、例えば、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜９０％、またはその中の任意の濃度であることができる。
【００３４】
さらなる精製のためにアルカノール洗浄を繰り返すことができる。例えば、沈殿物をもっと多くの低級アルカノールで洗浄することができ、その場合、典型的な洗浄としては、例えば、９５％エタノールによる３回の洗浄を挙げることができる。その後、沈殿物を、さらなる処理に好適な濃度、例えば、約１８〜２０％重量／容量で水に懸濁する。この水に低級アルカノールを再添加することによる再沈殿を用いて、水に溶けないさらなる物質を除去することができる。上清をより高い濃度の低級アルカノールで沈殿させることができる。より高い濃度の低級アルカノールは、アラビノガラクタンタンパク質と関連多糖類とを含有する粗抽出物沈殿物を生成させるために、例えば、４０〜８０％エタノール、及びいくつかの実施形態では、６０〜７０％エタノールであることができる。
【００３５】
粗抽出物を水に再溶解させ、乾燥させる。好適な乾燥プロセスとしては、過度の加熱を避ける、当業者に公知の任意のプロセスを挙げることができ、例えば、噴霧乾燥、真空乾燥、フリーズドライ、臨界点乾燥、溶媒交換などを挙げることができる。粗抽出物を、水または水溶液に再溶解させることもでき、その場合、粗抽出物を限外濾過に好適な濃度にする。いくつかの実施形態では、限外濾過に好適な濃度は約２％である。その後、粗抽出物を限外濾過して、低分子量物質をさらに除去し、溶液の容量を減らすことができ、その場合、限外濾過系は、例えば、５キロダルトンの分子量カットオフを有することができる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、粗抽出物は、白色からオフホワイト色の粉末、または淡黄色の粉末として現われることがあり、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬまで水に溶ける。いくつかの実施形態では、粉末は、少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬまで水に溶ける。粉末は、乾燥させると、約１５％未満の重量損失を示し、約０．５ＥＵ／ｍｇ未満の内毒素含有量を有し、いくつかの実施形態では、約０．３ＥＵ／ｍｇ未満の内毒素含有量を有する。
【００３７】
粗抽出物をイオン交換クロマトグラフィーでさらに精製することができる。組成物を水溶液に再溶解させ、限外濾過に好適な濃度、通常、約２％の濃度にする。その後、再溶解した組成物を限外濾過して、低分子量物質をさらに除去し、溶液の容量を減らすことができる。上記５キロダルトンの分子量カットオフの限外濾過系を用いることができる。限外濾過の保持液を、２０ｍＭのＮａＯＡｃ緩衝液（ｐＨ５．２０）で平衡化したＳＰセファロース陽イオン交換カラムなどの陽イオン交換カラムに通して溶出させる。陽イオン交換カラムからの溶出液を、同じＮａＯＡｃ緩衝液で平衡化したＱセファロース陰イオン交換カラムなどの陰イオン交換カラムに通して溶出させる。
【００３８】
陰イオン交換カラムからの溶出液を、（１）本明細書に示されている他の形態の抽出物の調製に直接用いるか、（２）濃縮し、乾燥させて、精製抽出物の調製に好適な中間体として保持することができる粗抽出物を形成させるか、または（３）精製抽出物の調製に直接用いることができる。
【００３９】
精製抽出物の調製では、粗抽出物を０．１μｍフィルターなどの好適な静菌フィルターに通して精密濾過し、限外濾過して、溶液を脱塩し、再度その容量を減らしてもよい。いくつかの実施形態では、８キロダルトンの分子量カットオフの限外濾過を用いてもよい。限外濾過からの保持液を濃縮し、屈折計を用いて濃度パーセントを決定することができる。いくつかの実施形態では、保持液を５０〜６０℃で約２０〜２６％の濃度まで濃縮する。その後、濃縮した保持液を低級アルカノールで沈殿させる。いくつかの実施形態では、低級アルカノールは、約８０〜９０％の濃度まで添加されるエタノールであることができる。沈殿物をさらに洗浄してもよく、その場合、典型的な洗浄としては、無水エタノールによる３回の洗浄を挙げることができる。その後、沈殿物を乾燥させて精製抽出物を得る。いくつかの実施形態では、沈殿物の乾燥を、例えば、６０〜７０℃の温度の真空オーブンを用いて行なうことができる。
【００４０】
このプロセスから得られる抽出物がバッチ毎に変動するのを減らすために、抽出プロセスの１つまたは複数の段階で材料を混ぜ合わせることができる。いくつかの実施形態では、このプロセスには、プロセスにおける原材料の混合、「飲用チップ」の混合、他の中間体の混合、またはそれらの組合せが含まれる。
【００４１】
精製抽出物の組成を、当業者に公知の標準的な分析技術を用いて、メタノール化した組成物抽出物のトリメチルシリル誘導体のガス液体クロマトグラフィーによって決定することができる。いくつかの実施形態では、精製抽出物は、約５〜１５％、約５〜１２％、約５〜１０％、約１０〜１５％、またはその中の任意の範囲の量のＡｒａ；約１〜１．５％未満の量のＲｈａ；約４％未満の量のＧａｌＡ；約３〜７％、約３〜５％、約４〜６％、またはその中の任意の範囲の量のＧａｌ；約７０〜９０％、約７０〜８５％、約７５〜８０％、約８５〜９０％、またはその中の任意の範囲の量のＧｌｃを含有する。パーセントは全てｍｏｌ％として表す。
【００４２】
精製抽出物中のＡｒａ：Ｇａｌ比は、約１．５：１から約３：１である。いくつかの実施形態では、Ａｒａ：Ｇａｌ比は、約１．５：１から約１．７５：１、約１．７５：１から約３：１、またはその中の任意の範囲である。
【００４３】
精製抽出物は、約２０〜６０キロダルトンの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、分子量は、約２５〜４０キロダルトン、約２７〜３５キロダルトン、またはその中の任意の範囲である。
【００４４】
さらに、精製抽出物は、約２重量％未満の灰含有量、約１０重量ｐｐｍ未満の重金属含有量、及び約０．１％未満のヒドロキシプロリン含有量を有する。いくつかの実施形態では、ヒドロキシプロリン含有量は、約０．０５％未満、約０．０３％未満、またはその中の任意の範囲である。
【００４５】
精製抽出物は内毒素を実質的に含まず、Ｅｎｄｏｓｐｅｃｙ（生化学工業株式会社、東京、日本）で決定した場合、内毒素含有量は、１．０ＥＵ／ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、内毒素含有量は、０．５ＥＵ／ｍｇ未満、０．３ＥＵ／ｍｇ未満、またはその中の任意の範囲である。また、精製抽出物は、少なくとも２０ｍｇ／ｍｌまで水に溶け、水溶液中、約４．５〜６．５のｐＨを有する。
【００４６】
いくつかの実施形態では、抽出物は、約１．５：１から約３：１のアラビノース：ガラクトース比；約５〜１５％のアラビノース；約１．５％未満のラムノース；約３〜７％のガラクトース；約４％未満のガラクツロン酸；及び約７０〜９０％のグルコースを含む。これらの実施形態では、抽出物は、約２０〜６０キロダルトンの重量平均分子量、水溶液中、約４．５〜６．５のｐＨ、またはそれらの組合せを有することができる。
【００４７】
約２：１から約４：１のＡｒａ：Ｇａｌ及び約１００Ｋダルトンを超える平均分子量を有するキバナオウギの抽出物（「高ＭＷ抽出物」）の調製：
【００４８】
一般的に言って、本実施例の抽出物は、より高分子量の形態の精製抽出物であり、抽出物は少なくとも１００キロダルトンの重量平均分子量を有する。他の利点として、これらの抽出物は容量がより小さい。これらのより高分子量の抽出物は、通常、精製抽出物を調製するための方法を用いて調製され、その場合、陰イオン交換カラムからの溶出液、粗抽出物、または精製抽出物が直接用いられてもよい（「精製抽出物またはその中間体」）。
【００４９】
１００Ｋの分子量カットオフの限外濾過系を用いて、精製抽出物またはその中間体から高ＭＷ抽出物を調製する。例えば、陰イオン交換カラムからの溶出液を１００Ｋの分子量カットオフの限外濾過系に直接適用することができ、保持液を濃縮し、沈殿させ、任意でさらに洗浄し、乾燥させ、各工程を、精製抽出物の調製において上で記載した方法を用いて遂行することができる。
【００５０】
いくつかの実施形態では、高ＭＷ抽出物は、約４５〜７５％、約５０〜７５％、約５０〜６５％、約５５〜６０％、またはその中の任意の範囲の量のＡｒａ；約２〜４％、約２〜３％、またはその中の任意の範囲の量のＲｈａ；約４〜６％、約４〜５％、またはその中の任意の範囲の量のＧａｌＡ；約８〜２５％、約１０〜２０％、約１２〜１８％、またはその中の任意の範囲の量のＧａｌ；約５〜２５％、約７〜２０％、約１０〜１５％、またはその中の任意の範囲の量のＧｌｃを含有する。パーセントは全てｍｏｌ％として表す。
【００５１】
高ＭＷ抽出物中のＡｒａ：Ｇａｌ比は約２：１から約４：１である。いくつかの実施形態では、Ａｒａ：Ｇａｌ比は、約２：１から約３．７５：１、約２．５：１から約３．５：１、約２．５：１から約３：１、約３：１から約４：１、またはその中の任意の範囲である。
【００５２】
高ＭＷ抽出物は、１００キロダルトンを超える重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、高ＭＷ抽出物は、約１００〜３５０キロダルトンの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、分子量は、約１００〜３００キロダルトン、約１２５〜２７５キロダルトン、約１５０〜２５０キロダルトン、約２００〜２７５キロダルトン、またはその中の任意の範囲である。
【００５３】
さらに、高ＭＷ抽出物は、約２重量％未満の灰含有量、約２０重量ｐｐｍ未満未満の重金属含有量、及び約０．２％を上回り、いくつかの実施形態では、約０．２〜０．３％であるヒドロキシプロリン含有量を有する。
【００５４】
高ＭＷ抽出物は内毒素を実質的に含まず、Ｅｎｄｏｓｐｅｃｙ（生化学工業株式会社、東京、日本）で決定した場合、内毒素含有量は、１．０ＥＵ／ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、内毒素含有量は、０．５ＥＵ／ｍｇ未満、０．３ＥＵ／ｍｇ未満、またはその中の任意の範囲である。また、精製抽出物は、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌまで水に溶け、水溶液中、約４．５〜６．５のｐＨを有する。
【００５５】
高ＭＷ抽出物は、約９５％の炭水化物（アラビノガラクタンタンパク質のタンパク質コアをグリコシル化する炭水化物を含む）と約５％のタンパク質とを含有し、その場合、ヒドロキシプロリンは、全アミノ酸含有量の約２０％を占める。
【００５６】
高収率、約３．５：１から約５．０：１のＡｒａ：Ｇａｌ、及び約１００Ｋダルトンを超える平均分子量を有するキバナオウギの抽出物（「高収率抽出物」）の調製：
【００５７】
酸修飾された抽出物は、特許文献４に示されている。一般的に言って、本実施例の抽出物は、少なくとも、実質的により高収率の形態の活性抽出物を提供するという理由でより優れたものである。いくつかの実施形態では、本実施例に記載される穏やかな酸処理を含む、高ＭＷ抽出物を調製する方法を用いて、高収率抽出物を調製することができる。
【００５８】
このプロセスは、粗抽出物を単離することと、粗抽出物を酸で穏やかに処理することとを含み、穏やかに処理することは、酸を粗抽出物に約０．０５〜０．５Ｍ、約０．０１〜１．０Ｍ、約０．０５〜０．１Ｍ、またはその中の任意の範囲の濃度で適用することを含む。このプロセスでは、約１５〜２５℃の処理温度及び約１〜２４時間の処理時間が用いられる。処理を、２４時間を超えて、いくつかの実施形態では、好ましい加水分解技術の実行に必要とされる時間まで増加させることができる。酸を適用する温度及び時間は、３．５：１を超えるアラビノース：ガラクトース比、ならびに約１５〜２０％のガラクトース含有量、約１０〜１５％のグルコース含有量、及び高収率などの他の組成特性を得るように選択される。
【００５９】
収率は、３．５：１未満のアラビノース：ガラクトース比、２０〜３５％のガラクトース、及び約１０％未満のグルコースを得るように選択される温度及び時間で、酸を粗抽出物に適用することを含む異なるプロセスを用いて生成されるキバナオウギの抽出物の収率よりも実質的に高い。高収率抽出物の収率は、３〜３０％超、５〜２５％超、１０〜２０％超、１０〜１５％超、１５〜２０％超、２０〜３０％超、またはその中の任意の範囲であることができる。高収率抽出プロセスによって、約３．５：１から約５．０：１のアラビノース：ガラクトース比が得られ、３．５：１以下のアラビノース：ガラクトース比を有する抽出物を生じる本明細書に示される他の抽出物調製プロセスを用いて得られる収率よりも高い収率が得られる。
【００６０】
穏やかな酸処理は、例えば、十分な加水分解を確保して、所望の精製及び高収率を達成すると同時に、多糖鎖を保持するように選択される。いくつかの実施形態では、酸は、鉱酸、有機酸、またはそれらの組合せを含むことができる。いくつかの実施形態では、有機酸は、弱い有機酸である。いくつかの実施形態では、酸は、トリクロロ酢酸、塩酸、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、酸は、ギ酸、酢酸、クエン酸、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、酸は、ホウ酸、リン酸、フッ化水素酸、またはそれらの組合せを含む。
【００６１】
いくつかの実施形態では、穏やかな酸処理は、約０．０１〜０．５Ｍの範囲の塩酸を含むことができる。いくつかの実施形態では、塩酸を、過塩素酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、もしくはその組合せと置き換えるか、またはこれらの酸と組み合わせて用いることができる。いくつかの実施形態では、酸は、ジクロロ酢酸、マレイン酸、シュウ酸、サリチル酸、トリクロロ酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ベンゼンスルホン酸、またはそれらの組合せからなる群から選択される有機酸を含むことができる。当業者は、適切な濃度及び条件を容易に選択することができる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、酸濃度は、約１．０Ｍ以下、約０．５Ｍ以下、約０．３Ｍ以下、約０．２Ｍ以下、約０．１Ｍ以下、約０．０５Ｍ以下、約０．０１Ｍ以下、またはその中の任意の範囲であることができる。いくつかの実施形態では、酸濃度は、約０．１〜０．５Ｍ、約０．２〜０．４Ｍ、約０．２〜０．３Ｍ、またはその中の任意の範囲であることができる。いくつかの実施形態では、保持時間は、約０．５〜１０時間、約１〜８時間、約２〜７時間、約２〜５時間、約２〜３時間、またはその中の任意の範囲であることができる。
【００６３】
次に、高収率抽出物を、上記の限外濾過とイオン交換の方法を用いてさらに精製することができる。さらなる精製は、もっと多くの塩及び低分子量物質を除去すること、ならびに溶液の容量を減らすことを含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、高収率抽出物は、約３５〜６５％、約５０〜６５％、約５０〜６０％、約４０〜６０％、またはその中の任意の範囲の量のＡｒａ；約５〜１０％、約５〜８％、約６〜９％、またはその中の任意の範囲の量のＲｈａ；約１０〜２０％、約１０〜１８％、約１２〜１６％、またはその中の任意の範囲の量のＧａｌＡ；約１５〜２５％、約１５〜２０％、約１８〜２１％、またはその中の任意の範囲の量のＧａｌ；約１０％未満、約１〜８％、約２〜６％、またはその中の任意の範囲の量のＧｌｃを含有する。パーセントは全てｍｏｌ％として表す。
【００６５】
高収率抽出物中のＡｒａ：Ｇａｌ比は約３．５：１を超える。いくつかの実施形態では、Ａｒａ：Ｇａｌ比は、約３．５：１から約４．５：１、約４．０：１から約４．５：１、約３．５：１から約４：１、約３．７５：１から約４．５：１、またはその中の任意の範囲である。
【００６６】
高収率抽出物は、１００キロダルトンを超える重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、分子量は、約１００〜３５０キロダルトンの範囲であり、いくつかの実施形態では、分子量は、約１００〜３００キロダルトン、約１２５〜２７５キロダルトン、約１５０〜２５０キロダルトン、約２００〜２７５キロダルトン、またはその中の任意の範囲である。
【００６７】
さらに、高収率抽出物は、約２重量％未満の灰含有量、約２０重量ｐｐｍ未満の重金属含有量、及び約１．０％未満のヒドロキシプロリン含有量を有する。
【００６８】
高収率抽出物は内毒素を実質的に含まず、Ｅｎｄｏｓｐｅｃｙ（生化学工業株式会社、東京、日本）で決定した場合、内毒素含有量は、１．０ＥＵ／ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、内毒素含有量は、０．５ＥＵ／ｍｇ未満、０．３ＥＵ／ｍｇ未満、またはその中の任意の範囲である。また、精製抽出物は、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌまで水に溶け、水溶液中、約４．５〜６．５のｐＨを有する。
【００６９】
グリカンは抽出物の約８０％を構成することができ、タンパク質、及び場合によって、微量の脂質がその残りに含まれる。いくつかの実施形態では、プルランサイジングと比較して、約３５０キロダルトンのピーク分子量を有する抽出物の部分がより大きい分子量に相当し、一方、約７５キロダルトンのピーク分子量を有する抽出物の部分がより小さい分子量に相当する。より大きい分子量を有する部分の重量平均分子量は約２６０キロダルトンであることができ、より小さい分子量を有する部分は約１２０キロダルトンであることができる。多分散度は、例えば、約１〜５、約１．５〜３．５、またはその中の任意の範囲であることができる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、抽出物は、約３．５：１を超えるアラビノース：ガラクトース比；約５〜１０％のラムノース；約１５〜２０％のガラクトース；約１０〜２０％のガラクツロン酸；及び約１０〜１５％のグルコースを含む。
【００７１】
当業者であれば、同じまたは同様の結果が得られるように抽出物の調製において上で示された工程の順序を変更し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、連続的なイオン交換クロマトグラフィー工程を用いることができる。いくつかの実施形態では、イオン交換クロマトグラフィーを、同じまたは同様のイオン交換樹脂を用いるバッチ法で行なうことができる。別々の陰イオン樹脂と陽イオン樹脂の使用を、陰イオン交換と陽イオン交換の両方の機能を有する混合床樹脂の使用に置き換えることができる。いくつかの実施形態では、イオン交換精製を、穏やかな酸処理の前後を含む、このプロセスの様々な時点で行なうことができ、限外濾過膜の分子量カットオフサイズの選択は、様々に異なることができる。
【００７２】
本明細書に示される抽出物のいずれかを含む組成物はさらに、造血を刺激する薬剤を含むことができるかまたは造血を刺激する薬剤と組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、薬剤は、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、及びそれらの誘導体からなる群から選択されることができる。いくつかの実施形態では、組成物は、治療的有効量の組成物と水性注射用賦形剤とを含む水性注射用製剤中にあることができる。
【００７３】
使用及び投与方法：
【００７４】
組成物は、対象における疾患の治療、または疾患の１以上の症状の改善において治療的及び／または予防的効果を提供することができる。「対象」及び「患者」という用語は互換的に用いられ、動物、例えば、限定するものではないが、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット及びマウス）と霊長類（例えば、サルまたはヒト）とを含む、哺乳動物を指す。
【００７５】
本明細書に提供される組成物を、例えば、造血の刺激；巨核球の増殖または成熟の誘導；ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、またはＧ−ＣＳＦの産生の刺激；白血球、好中球の産生または作用の刺激、好中球減少症、白血球減少症、単球減少症、貧血、または血小板減少症の治療を含む、本明細書に記載の種々の治療のために投与することができる。本組成物は、偶発性または非治療的曝露、及び治療的曝露を含む、細胞毒性薬または放射線への曝露からの回復を加速させるのにも役立ち得る。
【００７６】
本発明は、哺乳動物の造血系を刺激する方法も含む。本方法は、哺乳動物に本明細書に示された抽出物を含む有効量の組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、刺激することは、血小板数を増加させること、白血球数を増加させること、リンパ球数を増加させること、またはそれらの組合せを含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本方法は、第２の活性剤の共投与をさらに含む。これらの実施形態では、第２の活性剤は造血剤であることができる。第２の活性剤は、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、及びそれらの誘導体からなる群から選択され得る。
【００７８】
多くの実施形態では、哺乳動物は、実験目的のためであれ、治療目的のためであれ、組成物が投与される任意の哺乳動物であることができる。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトであり、いくつかの実施形態では、ヒトは骨髄抑制に苦しんでいる。骨髄抑制は化学療法または放射線療法の結果であることがある。
【００７９】
本発明はまた、特発性血小板減少性紫斑病を治療する方法であって、有効量の本明細書に示された抽出物を、特発性血小板減少性紫斑病を有する対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、酸修飾されたアラビノガラクタンタンパク質組成物は第２の活性剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、第２の活性剤は、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、及びそれらの誘導体からなる群から選択されることができる。
【００８０】
本発明は、疾患の予防、治療、及び／または疾患の症状の改善において治療的及び／または予防的な量の抽出物を含む薬学的組成物も含む。
【００８１】
組成物中で用いられる抽出物の量は、疾患の種類、対象の年齢、性別、及び体重などの因子によって様々であることができる。投薬レジメンを、治療応答を最適化するように調整してもよい。いくつかの実施形態では、当業者に公知の治療的状況及び要因の要件が示すように、単回ボーラスが投与されてもよいし、複数回分割用量が時間をかけて投与されてもよいし、用量を比例的に減少させても増加させてもよいし、または任意のその組合せであってもよい。投薬量の値は、緩和される状態の重症度によって変わり得ることに留意すべきである。個別の必要性や組成物の投与を施すかまたは監督する人の専門的判断によって、投薬レジメンを経時的に調整してもよく、また、本明細書に示される投薬量の範囲は単に例示的なものであって、医師が選択し得る投薬量の範囲を制限するものではない。
【００８２】
「投与」または「投与すること」という用語は、疾患を診断するか、予防するか、治療するか、または疾患の症状を改善するために、インビボまたはエクスビボのいずれかで、対象の細胞または組織に組成物を取り込ませる方法を指す。一例では、化合物をインビボで非経口的に対象に投与することができる。別の例では、限定するものではないが、組成物の有用性及び効力を決定するためのアッセイを含む目的のために、化合物と対象由来の細胞または組織とをエクスビボで組み合わせることにより、化合物を対象に投与することができる。化合物を１以上の活性剤と組み合わせて対象に取り込ませる場合、「投与」または「投与すること」という用語は、例えば、上記の任意の薬剤などの他の薬剤とともに化合物を連続的にまたは同時に取り込ませることを含むことができる。本発明の薬学的組成物を、その意図される投与経路と適合するように製剤化する。投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内、皮内、筋肉内、及び皮下）注射；経口；吸入；鼻腔内；経皮；経粘膜；ならびに直腸投与が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
本発明の化合物の「有効量」は、治療的有効量または予防的有効量を説明するために用いられることができる。有効量は、疾患の症状を改善する量であることもできる。「治療的有効量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な投薬量及び期間で有効な量を指し、また、研究者、獣医、医師、または他の臨床医により求められる、組織、システム、または対象における何らかの生物学的または医学的応答を誘発する活性化合物、プロドラッグまたは薬学的薬剤の量を指す場合もあり、これらの活性化合物、プロドラッグまたは薬学的薬剤は、所望の効果をもたらす治療計画の一部でもあり得る。いくつかの実施形態では、治療的有効量は、障害の１以上の症状の改善、障害の進行の予防、または障害の退行をもたらすのに十分な量で投与される必要があり得る。炎症性障害または炎症を特徴とする自己免疫障害の治療の一例では、治療的有効量は、好ましくは、組成物の所望の作用の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％の測定可能な応答を提供する治療剤の量を指す。「治療すること」という用語は、本明細書に示される１以上の治療的または予防的薬剤を指す。
【００８４】
「予防的有効量」は、血小板または白血球数の降下の重症度を予防もしく阻止すること、または降下の最下点を軽減することなどの、所望の予防結果を達成するのに必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。通常、予防的用量は、疾患または疾患の症状の発症を予防または阻止するために、疾患の発症前に、または疾患の発症の早い段階で対象に用いられる。予防的有効量は、治療的有効量より少なくても、治療的有効量より多くても、または治療的有効量と同じであってもよい。
【００８５】
いくつかの実施形態では、投与は経口的なものであることができる。他の実施形態では、投与は、皮下注射であることができる。他の実施形態では、投与は、滅菌等張水性緩衝液を用いた静脈内注射であることができる。別の実施形態では、投与は、注射部位での不快感を和らげるために可溶化剤及び局所麻酔薬（例えば、リグノカイン）を含むことができる。他の実施形態では、投与は、例えば、投与のしやすさ及び均一性を得るために、非経口的なものであってもよい。
【００８６】
化合物を投薬単位で投与することができる。「投薬単位」という用語は、単一の投薬として対象に投与することができる化合物の個別的な所定量を指す。活性化合物の所定量を、所望の治療効果をもたらすように選択することができ、薬学的に許容される担体とともに投与することができる。各々の単位投薬における所定量は、限定するものではないが、（ａ）活性化合物の特有の特徴及び達成されるべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）そのような投薬単位を作製及び投与する技術分野に固有の限界を含む要因によって決まることがある。
【００８７】
「薬学的に許容される担体」は、それと一緒に組成物を投与する希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルである。担体は、対象における使用について、州もしくは連邦政府の監督官庁による承認、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた情報源における記載に準拠して、薬学的に許容されているものである。
【００８８】
薬学的担体には、任意の及び全ての生理的に適合する溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。薬学的担体の例としては、水、油及び脂質（例えば、リン脂質や糖脂質）などの滅菌液が挙げられるが、これらに限定されない。これらの滅菌液としては、ペトロリアム、動物、植物または合成起源から得られるもの（例えば、ピーナツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油など）が挙げられるが、これらに限定されない。水は、静脈内投与のための好ましい担体であることができる。生理食塩水溶液、水性デキストロース及びグリセロール溶液も、特に注射溶液用の液体担体であることができる。
【００８９】
好適な薬学的賦形剤としては、デンプン、糖類、不活性ポリマー、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、微量の湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、またはそれらの組合せを含有することもできる。組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、持続放出製剤などの形態をとることができる。経口製剤は、例えば、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含むことができる。非特許文献１を参照されたい。補助的な活性化合物を組成物に組み入れることもできる。
【００９０】
いくつかの実施形態では、担体は、非経口投与に好適である。他の実施形態では、担体は、静脈内、腹腔内、筋肉内、舌下または経口投与に好適であることができる。他の実施形態では、薬学的に許容される担体は、薬学的に許容される塩を含み得る。
【００９１】
非経口投与のための薬学的製剤としてはリポソームを挙げることができる。リポソーム及びエマルジョンは、疎水性の薬物に特に有用な送達ビヒクルまたは担体である。治療試薬の生物学的安定性に応じて、タンパク質安定化のためのさらなる戦略を利用し得る。さらに、例えば、標的特異的抗体でコーティングしたリポソームなどの、標的薬物送達系に入れて薬物を投与し得る。リポソームは、標的タンパク質に結合し、標的タンパク質を発現する細胞によって選択的に取り込まれる。
【００９２】
治療的組成物は、通常、製造及び保存の条件下で滅菌及び安定でなければならない。組成物を溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の秩序ある構造として製剤化することができる。いくつかの実施形態では、担体は、限定するものではないが、水；エタノール；ポリオール、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングルコールなど；及びそれらの組合せを含む、溶媒または分散媒体であることができる。例えば、レシチンなどのコーティングを用いること、分散液中で所要の粒径を維持すること、及び界面活性剤を用いることなどの、種々の方法で適切な流動性を維持することができる。
【００９３】
いくつかの実施形態では、例えば、糖類；限定するものではないが、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、及びそれらの組合せを含むポリアルコール類；ならびに塩化ナトリウムなどの、等張剤を用いることができる。例えば、モノステアリン酸塩、ゼラチン、及び徐放性ポリマーなどの、吸収を遅延させる薬剤を含めることによって、持続吸収特性を組成物に導入することができる。活性化合物が速やかに放出されるのに防ぐために担体を用いることができ、そのような担体としては、インプラント及びマイクロカプセル化送達系中の制御放出製剤が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧ）などの、生体分解性かつ生体適合性のポリマーを用いることができる。このような製剤は、通常、当業者に公知の方法を用いることにより調製することができる。
【００９４】
化合物を、例えば、注射用油懸濁液などの懸濁液として投与し得る。親油性溶媒またはビヒクルとしては、例えば、ゴマ油などの脂肪油；オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル；及びリポソームが挙げられるが、これらに限定されない。注射に用いることができる懸濁液は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの、懸濁液の粘稠度を増加させる物質も含有し得る。場合により、懸濁液は、安定剤または化合物の溶解度を増加させて高濃縮溶液の調製を可能にする薬剤を含み得る。
【００９５】
一実施形態では、有効量の活性化合物を、上記の所望の追加成分のいずれか１つまたはいずれかの組合せとともに溶媒中に組み入れ、濾過した後に、溶液を安定化することによって、滅菌注射溶液を調製することができる。別の実施形態では、活性化合物を、分散媒体と上記の所望の追加成分のいずれか１つまたはいずれかの組合せとを含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって、分散液を調製することができる。真空乾燥、フリーズドライ、またはそれらの組合せにより、活性成分及び任意の所望の追加成分から構成されることができる粉末を生じさせることによって、滅菌注射溶液で用いるための滅菌粉末を調製することができる。さらに、追加成分は、別々に調製された滅菌濾過溶液に由来するものであることができる。別の実施形態では、抽出物の溶解度を高める１以上の追加の化合物と組み合わせて抽出物を調製し得る。
【００９６】
いくつかの実施形態では、化合物を、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、またはそれらの組合せなどの、好適な高圧ガスを含み得るエアロゾルスプレーまたはネブライザーからの吸入により投与することができる。一例では、加圧エアロゾル用の投薬単位を定量バルブから送達し得る。別の実施形態では、ゼラチンのカプセル及びカートリッジを、例えば、吸入器中で用い得るし、また、化合物と例えば、デンプンまたはラクトースなどの好適な粉末基剤との粉末化混合物を含有するように製剤化することができる。
【００９７】
いくつかの実施形態では、組成物の治療的または予防的有効量は、濃度が約０．００１ｎＭ〜０．１０Ｍ；約０．００１ｎＭ〜０．５Ｍ；約０．０１ｎＭ〜１５０μＭ；約０．０１ｎＭ〜５００μＭ；約０．０１ｎＭ〜１０００μＭ、またはその中の任意の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、組成物を、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ；約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇ；約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ；約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２５０ｍｇ／ｋｇ；約０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ；約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１５０ｍｇ／ｋｇ；約０．４ｍｇ／ｋｇ〜１２０ｍｇ／ｋｇ；約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、またはその中の任意の範囲の量で投与し得るが、その場合、ヒト対象は平均約７０ｋｇと仮定されている。
【００９８】
本発明は、１以上の薬剤を投与するための持続放出製剤を包含する。いくつかの実施形態では、持続放出製剤は、そのような薬剤を対象に投与する投薬量及び／または頻度を減らすことができる。
【００９９】
いくつかの実施形態では、本発明の抽出物の有効量は、平均体重のヒトの場合、例えば、約１０〜１０００ｍｇ／日、約５０〜５００ｍｇ／日、約１００〜２５０ｍｇ／日、またはその中の任意の範囲であることができる。悪液質、嘔吐、もしくは薬物離脱症状を治療するために、または生物学的応答を修飾するかもしくはＢ型肝炎において肝細胞を保護するために、同様の量が治療的に有効となるであろう。当業者であれば、過度の実験をすることなく、その技能と本開示とを考慮して、所与の疾患についての本発明の組成物の治療的有効量を決定することができるであろう。
【０１００】
組成物を注射により薬学的製剤として投与することができる。いくつかの実施形態では、製剤は、水性注射用賦形剤と組み合わせた抽出物を含むことができる。好適な水性注射用賦形剤の例は当業者に周知であり、これらの例、及び製剤を製剤化する方法を、非特許文献２のような標準的な参考文献に見出し得る。好適な水性注射用賦形剤としては、酸修飾されたアラビノガラクタンタンパク質組成物のための溶解促進剤、例えば、３〜１０％のマンニトールまたは他の糖類、３〜１０％のグリシンまたは他のアミノ酸を任意で含有する、水、水性生理食塩水溶液、水性デキストロース溶液などが挙げられる。
【０１０１】
通常、造血剤として投与するとき、皮下、筋肉内、腹腔内、または静脈内に注射することによって抽出物を投与することができる。いくつかの実施形態では、静脈内投与を用い、これは、約１５分などの、数分から１時間またはそれより長い間の連続的な静脈内注入であることができる。投与される量は、製剤の種類、単位投薬量のサイズ、賦形剤の種類、及び当業者に周知の他の因子によって様々に異なり得る。製剤は、例えば、約０．００１〜１０％（ｗ／ｗ）、約０．０１〜１％、約０．１〜０．８％、またはその中の任意の範囲を構成し、残りが賦形剤（単数または複数）を構成し得る。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、治療される疾患状態のための少なくとも１つの他の治療剤、特に、例えば、エリスロポエチン、トロンボポエチン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＬ−３などの、造血を刺激することができる別の薬剤とともに、抽出物を投与することができる。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量の抽出物を、約０．００１ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇ；約０．００５〜４００ｍｇ／ｋｇ；約０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇ；約０．０１〜２５０ｍｇ／ｋｇ；約０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ；約０．２〜１５０ｍｇ／ｋｇ；約０．４〜１２０ｍｇ／ｋｇ；約０．１５〜１００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５〜７５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、またはその中の任意の範囲の量で投与し得るが、その場合、ヒト対象は平均約７０ｋｇと仮定されている。
【０１０３】
抽出物を互いにまたは他の薬剤と組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、薬剤を約１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、１８時間、２４時間、４８時間または１週間だけ時間が異なる時点で投与することができる。いくつかの実施形態では、薬剤のうちの少なくとも１つは、造血系を刺激する薬剤である。他の実施形態では、薬剤としては、抗増殖剤、抗新生物剤、抗有糸分裂剤、抗炎症剤、抗血小板剤、抗凝固剤、抗フィブリン剤、抗トロンビン剤、抗生物質、抗アレルギー剤、抗酸化剤、及び任意のプロドラッグ、コドラッグ、代謝体、類似体、相同体、同族体、誘導体、塩、ならびにそれらの組合せを挙げることができる。
【０１０４】
本明細書に示された抽出物を、例えば、治療的有効量で投与される造血剤と組み合わせて投与することができる。造血剤は造血を刺激する分子である。造血剤の例としては、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、エリスロポエチン及び赤血球生成促進因子、トロンボポエチン、インターロイキン−３、ならびにそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。Ｇ−ＣＳＦの例としては、フィルグラスチム（ニューポジェン）、及びその誘導体（例えば、ペグフィルグラスチム）が挙げられるが、これらに限定されない。ＧＭ−ＣＳＦの例としては、サルグラモスチム（リューカイン）が挙げられる。エリスロポエチンの一例は、エポエチンα（エプレックス）である。赤血球生成促進因子の一例は、ダルベポエチンα（ネスプ、アラネスプ）である。
【０１０５】
造血剤を本明細書に示された抽出物と組み合わせて投与することができ、また、例えば、３０分間、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、１８時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、２週間、３週間、４週間、６週間、３カ月間、６カ月間、１年間、任意のその組合せ、または当業者が必要と考える任意の量の時間、投与することができる。薬剤を、同時に、連続的に、または周期的に対象に投与することができる。サイクリング療法は、第１の薬剤を所定の時間投与し、第２の薬剤を第２の所定の時間投与し、このサイクリングを、例えば、治療効力の増強などの、任意の所望の目的のために繰り返すことを含む。薬剤を同時的に投与することもできる。「同時的に」という用語は、ちょうど同じ時に薬剤を投与することに限定されるものではなく、むしろ、薬剤が一緒に作用して付加的な利益を生じることができるような順序や時間間隔で薬剤を投与することができることを意味する。各々の薬剤を、薬剤（１つまたは複数）を投与する任意の適当な手段を用いて別々にまたは任意の適当な形態で一緒に投与することができる。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、当業者が有効であると知っている任意の量、時間、及び投与方法を用いて、本明細書に示される抽出物と組み合わせてＧ−ＣＳＦを投与する。Ｇ−ＣＳＦは、例えば、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜５００μｇ／ｋｇ、約１〜２５０μｇ／ｋｇ、約１〜１００μｇ／ｋｇ、約１〜５０μｇ／ｋｇ、またはその中の任意の範囲の量で投与されるニューポジェンであることができる。
【０１０７】
製造品：
【０１０８】
本発明は、完成し、包装され、ラベルが付された薬学的製品を包含する製造品を提供する。製造品は、例えば、密封されたガラスバイアルまたは他の容器などの、適当な入れ物または容器中に適当な単位投薬形態を含む。非経口投与に好適な投薬形態の場合、活性成分、例えば、本明細書に示される抽出物を含む１以上の薬剤は滅菌されており、微粒子を含まない溶液としての投与に好適である。言い換えれば、本発明は、各々滅菌された非経口溶液と凍結乾燥粉末の両方を包含し、後者は、注射前の再構成に好適である。あるいは、単位投薬形態は、経口、経皮、局所または粘膜送達に好適な固体であってもよい。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、単位投薬形態は、静脈内、筋肉内、局所または皮下送達に好適である。したがって、本発明は、好ましくは滅菌され、各々の送達経路に好適な溶液を包含する。送達される薬剤の濃度及び量は本明細書に記載の通りに含まれる。
【０１１０】
全ての薬学的製品について、包装材料及び容器は、保存及び輸送時の製品の安定性を保護するように設計される。さらに、製造品は、例えば、医師、技術者または患者などの利用者に、懸念される疾患の予防的、治療的、または改善的治療として組成物を適切に投与する方法について助言することができる使用説明書または他の情報的資料を含むことができる。いくつかの実施形態では、説明書は、限定するものではないが、実際の用量及びモニタリング方法を含む、投与レジメンを指示するかまたは提案することができる。
【０１１１】
他の実施形態では、説明書は、組成物の投与が、限定するものではないが、例えば、アナフィラキシーなどのアレルギー反応を含む有害反応を引き起こすことがあることを表示する情報的資料を含むことができる。情報的資料は、アレルギー反応が単に軽度の掻痒性皮疹として示される可能性があるかまたはアレルギー反応が重症であって、紅皮症、血管炎、アナフィラキシー、スティーブン・ジョンソン症候群などを含む可能性があることを表示することができる。情報的資料は、アナフィラキシーが致命的であることがあり、何であれ異種タンパク質が体内に導入されたときに生じる可能性があることを表示すべきである。情報的資料は、これらのアレルギー反応が、それ自体はじんましんまたは皮疹として現われて、致死的な全身反応へと発展し、曝露した後すぐに、例えば、１０分以内に生じることがあることを表示すべきである。情報的資料は、アレルギー反応が、錯感覚、低血圧、喉頭水腫、精神状態の変化、顔面または咽頭の血管性浮腫、気道閉塞、気管支痙攣、じんましん及び掻痒、血清病、関節炎、アレルギー性腎炎、糸球体腎炎、側頭部関節炎、好酸球増加、またはそれらの組合せを対象に経験させる可能性があることをさらに表示することができる。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、製造品は、例えば、箱、瓶、チューブ、バイアル、容器、噴霧器、吸入器、静脈内（Ｉ．Ｖ．）バッグ、薬包紙などの１以上の包装材料と、この包装材料中に本明細書に示される抽出物を含む少なくとも１つの単位投薬形態の薬剤とを含むことができる。他の実施形態では、製造品は、懸念される疾患の予防的、治療的、または改善的治療として組成物を用いるための説明書も含み得る。
【０１１３】
他の実施形態では、製造品は、例えば、箱、瓶、チューブ、バイアル、容器、噴霧器、吸入器、静脈内（Ｉ．Ｖ．）バッグ、薬包紙などの１以上の包装材料と、この包装材料中に本明細書に示される抽出物を含む少なくとも１つの単位投薬形態の薬剤を含む第１の組成物とを、例えば、グリコサミノグリカン、リン脂質、ポリ（アルキレングリコール）、本明細書に示される任意の他の生体活性剤、または任意のプロドラッグ、コドラッグ、代謝体、類似体、相同体、同族体、誘導体、塩、及びそれらの組合せなどの、第２の薬剤を含む第２の組成物とともに含むことができる。他の実施形態では、製造品は、懸念される疾患の診断的、予防的、治療的、または改善的治療として組成物を用いるための説明書も含み得る。
【０１１４】
任意の理論または作用機序に限定することを意図するものではないが、本明細書に示された教示をさらに説明するために以下の実施例を提供する。当業者に企図されるいくつかのバリエーションがあること、及び本実施例が、特許請求の範囲を限定するものとみなされることを意図するものではないことが理解されるべきである。
【実施例】
【０１１５】
実施例１．約１．５：１から約３：１のＡｒａ：Ｇａｌ及び約２０Ｋダルトンから約６０Ｋダルトンの平均分子量を有するキバナオウギの抽出物（「精製抽出物」またはＥＰ０１１）の調製：
【０１１６】
精製抽出物は、２０〜６０キロダルトンのＭＷ及び７０〜９０％のグルコース組成物を有する。
【０１１７】
精製抽出物を、内モンゴル自治区から入手したキバナオウギの根のチップから調製した。乾燥根（３００ｋｇ）を、脱イオン水、次に限外濾過水で浄化して、チップへと加工した。汚染した表面の部分を取り除き、根を切って厚さ２〜５ｍｍのチップにした。その後、このチップを滅菌して、乾燥させた。
【０１１８】
チップ（２００ｋｇ）を、３トンの水性抽出器中、１００℃で３時間、３回抽出した。得られた水性抽出物を合わせ、その後、減圧下６０〜７０℃で３０〜４０倍に濃縮した。得られた水抽出物を、７０％エタノールで２回、３５％エタノールで１回沈殿させた。エタノール沈殿物を水に溶解させ、噴霧乾燥させて、多糖中間体を生成させた。
【０１１９】
多糖中間体（３．０ｋｇ）を水に溶解させ、精密濾過し、限外濾過し、その後、まず陽イオン交換カラムで、次に陰イオン交換カラムで連続的に精製した。最終的な濃縮の前に、所望の溶出液を精密濾過し、限外濾過した。最後に、濃縮液をバルクで凍結乾燥させて、混合した後に精製抽出物を得た。
【０１２０】
精製抽出物は、グルカン、ラムノガラクツロナン（ＲＧ）、アラビノガラクタン（ＡＧ）の多糖類と、重量平均分子量が２０，０００〜６０，０００ダルトンのアラビノガラクタンタンパク質（ＡＧＰ）の糖タンパク質とからなる。原薬は、無臭で、白色に近い非晶質粉末である。これは、ｐＨ４．５〜６．５の水や生理食塩水によく溶け、低濃度のエタノールにわずかに溶け、アセトンのような有機溶媒には溶けない。
【０１２１】
精製抽出物中に存在する多糖類及び糖タンパク質の構造を特徴解析し、ＴＭＳ−ＧＬＣによるグリコシル残基組成と、ＧＬＣ−ＭＳのメチル化によるグリコシル結合組成と、１Ｈ−ＮＭＲスペクトロスコピーと、ＡＡ分析装置によるアミノ酸組成と、サイズ排除ＨＰＬＣによるＭＷ分布の組合せにより解明した。糖組成分析によって決定された主要なグリコシル残基は、グルコシル（６０〜８５モル％）、アラビノシル（５〜２０モル％）、及びガラクトシル（５〜１５モル％）残基である。少量（２〜５モル％）のガラクツロン酸及びラムノースもこの生成物中に存在する。グリコシル結合分析は、グルコシル残基の主なグリコシル結合が、末端、４−、６−、及び４，６−結合であり、アラビノシル残基の主なグリコシル結合が、末端、５−、３−、及び３，５−結合であり、ガラクトシル残基の主なグリコシル結合が、末端、３−、６−、及び３，６−結合であり、ガラクツロン酸の主なグリコシル結合が４−結合であり、ラムノシル残基の主なグリコシル結合が２−結合であることを示している。アミノ酸組成分析は、この生成物中に存在する糖タンパク質が、Ｈｙｐ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、及びＬｙｓ残基に富むことを示した。
【０１２２】
精製抽出物の分析：
【０１２３】
グリコシル残基組成分析を表１に示す。精製抽出物中の多糖類は主に、グルコシル、アラビノシル、及びガラクトシル残基を含有する。ラムノース及びガラクツロン酸は、精製抽出物中にわずかな量しか存在しない。ＧＬＣによるｐｅｒ−Ｏ−トリメチルシリル化メチルグリコシドの分析により、精製抽出物のグリコシル残基組成を決定した。ＨＰ−５８９０ガスクロマトグラフを用いて、Ｊ＆ＷサイエンティフィックＤＢ−１カラム（０．２５ｍｍ×３０ｍ）中で誘導体を分離した。
【０１２４】
【表１】
0005732604.tif 000002
【０１２５】
表２に示すグリコシル結合組成、及び１Ｈ−ｎｍｒスペクトロメトリー分析に基づくと、この生成物中の主要な多糖は、骨格残基の６位に、ある程度の分岐を有する１，４−結合グルカンである。精製抽出物中に存在する他の多糖類は、互いに架橋しているアラビノガラクタン及びラムノガラクツロナンである。グリコシル結合をメチル化分析により決定した。Ｍｅ２ＳＯ中の試料をブチルリチウム及びヨードメタンでメチル化した。メチル化した試料をＳｅｐＰａｋ  Ｃ１８カートリッジを用いて精製し、ウロノシル残基のカルボキシメチル基を重水素化トリエチルホウ素リチウムで還元した。次に、部分メチル化アルドトールを調製し、ＨＰ  ５９７１  ＭＳＤ−５８９０  ＧＬＣ（複合ＧＬＣ−ＭＳ）で分析した。
【０１２６】
【表２】
0005732604.tif 000003
【０１２７】
下記の表３に示すアミノ酸組成分析は、Ｈｙｐ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＬｙｓが、精製抽出物中のタンパク質の主なアミノ酸残基であることを示している。精製抽出物のアミノ酸組成を、コラーゲン加水分解物分析法を用いて、ベックマン６３００アミノ酸分析装置で分析した。試料を、１１０℃で２４時間、６Ｎ  ＨＣＬにより加水分解し、希釈した後、ＨＰＬＣシステムに注入した。
【０１２８】
【表３】
0005732604.tif 000004
【０１２９】
生成物の投与経路は注射によるものであるので、内毒素の除去は精製抽出物の生成に極めて重要である。この生成物の多糖類のいくつかは、内毒素ＬＰＳと構造が似ている。したがって、内毒素を製造期間中に取り除くよりもむしろ、最初からこのプロセスに入り込ませないことが重要である。
【０１３０】
実施例２．高収率、約３．５：１から約５．０：１のＡｒａ：Ｇａｌ、及び約１００Ｋダルトンを超える平均分子量を有するキバナオウギの抽出物（「高収率抽出物」またはＥＰ０１１ＡＭ）の調製：
【０１３１】
より穏やかな酸条件を用いると、３．５を超えるＡｒａ：Ｇａｌ比及び本明細書に示された精製抽出物または高分子量抽出物よりもはるかに多い収率の抽出物が得られる。いくつかの実施形態では、Ａｒａ：Ｇａｌ比は、高収率の５．０未満に維持される。
【０１３２】
高収率抽出物を内モンゴル自治区から入手したキバナオウギの根のチップから調製した。根を、脱イオン水、次に限外濾過水で浄化して、チップへと加工した。汚染した表面の部分を取り除き、根を切って厚さ２〜５ｍｍのチップにした。その後、このチップを滅菌して、乾燥させた。
【０１３３】
チップをまず、１００℃、３時間の０．５Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４抽出で抽出し、次に、１００℃の水で３時間抽出し、これを繰り返した。プールした抽出物を遠心分離し、限外濾過した。得られた溶液を濃縮し、まず３５％エタノールで、次に８０％エタノールで沈殿させた。この８０％エタノール沈殿物を水に溶解させ、噴霧乾燥させて、粗抽出物を得た。
【０１３４】
粗抽出物をまずＳＰ陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに、次にＱ陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに通した。溶出液を限外濾過した。
【０１３５】
濃縮後、得られた溶出液を塩酸（濃度０．３Ｍ）を用いて２２℃で、３時間加水分解した。中和、限外濾過及び凍結乾燥の後に、高収率抽出物が、粗抽出物ベースにして収率３．３％で得られる。
【０１３６】
高収率抽出物の分析：
【０１３７】
グリコシル残基組成をＴＭＳ−メチルグリコシド誘導体のＧＬＣで決定した。Ａｒａ、Ｇａｌ、ＧａｌＡ、及びＧｌｃは原薬中の主な糖残基である。グリコシル残基組成の結果を下記の表４に示す。
【０１３８】
【表４】
0005732604.tif 000005
【０１３９】
Ａｒａ：Ｇａｌ比が４．３５であることに留意されたい。タンパク質含有量をＢＣＡタンパク質マイクロアッセイを用いて決定した。高収率抽出物のタンパク質含有量を下記の表５に示す。
【０１４０】
【表５】
0005732604.tif 000006
【０１４１】
高収率抽出物のヒドロキシプロリン含有量を比色定量アッセイで決定した。これを下記の表６に示す。
【０１４２】
【表６】
0005732604.tif 000007
【０１４３】
実施例３．より穏やかな酸条件で抽出することにより収率を増加させる：
【０１４４】
本実施例は、より穏やかな酸条件を用いて、有用な抽出物の収率を増加させることができることを示す。第１の抽出物を、０．５ＭのＨＣｌ、６時間の加水分解時間、２２℃という条件を用いて生成させ、第１の抽出物の収率を、０．３ＭのＨＣｌ、３時間の加水分解時間、２２℃というより穏やかな酸条件を用いて生成された第２の抽出物及び第３の抽出物の収率と比較する。表７は、より穏やかな条件を用いた場合の収率の実質的な増加を示す。
【０１４５】
【表７】
0005732604.tif 000008
【０１４６】
実施例４．致死量に近い放射線照射を受けた哺乳動物に精製抽出物を投与することにより血小板レベルを増加させる：
【０１４７】
本実施例は、精製抽出物が致死線量に近いＸ線を受けた哺乳動物において血小板レベルを刺激することを示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスを本実験で用い、マウスの一部に致死線量に近い５００ｃＧｙのＸ線を０日目に受けさせて、血小板レベルの減少及び血小板減少を引き起こした。血小板レベルを、（ａ）放射線照射または精製抽出物の投与のどちらも受けていない、正常マウス；（ｂ）Ｘ線を受けると同時に、生理食塩水のみを腹腔内投与された対照マウス；（ｃ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から実験の１４日目まで続けて、週５回の注射の割合で生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの精製抽出物の注射を１０回受けた実験マウス；及び（ｄ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から実験の２５日目まで毎日続けて、１００ｍｇ／ｋｇ／日の精製抽出物を投与された実験マウスで測定した。
【０１４８】
放射線照射の０日目から実験の１４日目まで続けて、週５回の注射の割合で生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの精製抽出物の皮下注射を１０回受けたマウスでは、致死線量に近いＸ線によって、血小板レベルの減少（これは１０日目に最初に測定された）が引き起こされた。対照群と放射線照射の０日目から実験の２５日目まで続けて、１００ｍｇ／ｋｇ／日の精製抽出物を投与された実験マウスとを比較した場合、精製抽出物は、１４日目の血液中の血小板レベルの増加を示し、対照群と比べてＥＰ０１１処理マウスの血液中に見られる低レベルの血小板の差は、１４日目以降に増加し、２５日目まで明白であり続けた。したがって、精製抽出物は、致死量に近い放射線照射を受けたマウスの血液中の血小板レベルを増加させ、放射線処理からの血小板レベルの回復を高めた。
【０１４９】
実施例５．致死量に近い放射線照射を受けた哺乳動物に、高収率抽出物を、単独で及び造血剤単独と比較して、投与することにより血小板レベルを増加させる：
【０１５０】
本実施例は、高収率抽出物が、致死線量に近い５００ｃＧｙのＸ線を受けた哺乳動物において血小板レベルを刺激することを示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスを本実験で用い、マウスの一部に致死線量に近い５００ｃＧｙのＸ線を０日目に受けさせた。血小板レベルを、（ａ）放射線照射または高収率抽出物の投与のどちらも受けていない、正常マウス；（ｂ）Ｘ線を受けると同時に、生理食塩水のみを腹腔内投与された対照マウス；（ｃ）Ｘ線を受けると同時に、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの高収率抽出物を投与された実験マウス；（ｄ）Ｘ線を受けると同時に、１００ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物を投与された実験マウス；（ｅ）Ｘ線を受けると同時に、５０ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物を投与された実験マウス；及び（ｆ）Ｘ線を受けると同時に、Ｇ−ＣＳＦ処理された実験マウスで測定した。高収率抽出物を、０日目から４日目までは毎日皮下投与し、その後、次の３週間は３回／週で、高収率抽出物を７日目から９日目と、１４日目から１６日目と、２１日目から２３日目に投与した。
【０１５１】
図１は、いくつかの実施形態に従って致死線量に近い放射線を投与した後の高収率抽出物に対するＢＡＬＢ／ｃマウスにおける血小板レベルの応答を示す。図１から分かるように、Ｘ線は、血小板レベルの減少を引き起こし、放射線照射した約１０日後に血小板レベルの減少及び血小板減少を引き起こした。高収率抽出物による処理を、０日目から週５回の注射で、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの１０回の注射として施した。高収率抽出物は、生理食塩水対照群よりも約３〜５日早く正常血小板数の５０％を回復させるのに有効であり、したがって、この処理は、致死量に近い放射線照射を受けたマウスの血液中の血小板量を増加させ、放射線照射処理後の血小板回復を高めた。比較目的で、Ｇ−ＣＳＦ（ニューポジェン）の効果を図１に示した。
【０１５２】
実施例６．化学療法を受けた哺乳動物に、高収率抽出物を、単独で及び造血剤と組み合わせて、投与することにより血小板レベルを増加させる：
【０１５３】
本実施例は、高収率抽出物の投与が血小板レベルの刺激によって化学療法からの回復を加速させ、したがって、化学療法によって引き起こされる血小板減少症を治療することを示す。
【０１５４】
血小板レベルを、（ａ）化学療法または高収率抽出物の投与のどちらも受けていない、正常マウス；（ｂ）静注による化学療法を受けると同時に、生理食塩水のみの腹腔内投与を受けた対照マウス；（ｃ）化学療法を受けると同時に、生理食塩水中２００ｍｇ／ｋｇの高収率抽出物を皮下投与された実験マウス；（ｄ）化学療法を受けると同時に、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物を皮下投与された実験マウス；（ｅ）化学療法を受けると同時に、生理食塩水中４００ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物を皮下投与された実験マウス；（ｆ）化学療法を受けると同時に、生理食塩水中２００μｇのＧ−ＣＳＦを投与された実験マウス；及び（ｇ）化学療法を受けると同時に、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物の皮下投与と、生理食塩水中２００μｇのＧ−ＣＳＦの投与を受けた実験マウスで測定した。
【０１５５】
使用したマウスはＢＡＬＢ／ｃマウスであり、これに４ｍｇ／ｋｇのマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）を２回（「−１」日目に１回と０日目に１回）静脈内注射した。マウスは、０日目から６日目まで７日間、２５０ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物の皮下注射を毎日受けた。
【０１５６】
図２は、いくつかの実施形態に従ってＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した７日後のマイトマイシン誘導性の血小板減少を示す。生理食塩水のみで処理した対照マウスは、２６日目の実験の最後までに、正常血小板数の６０％、すなわち、約３００×１０３／μＬにまで回復したのに対し、高収率抽出物で処理した実験マウスは、約１０日目までに正常血小板数の６０％、及び約１９日目までに正常血小板数の１００％に達した（これらの場合、正常血小板数は約５００×１０３／μＬであった）。したがって、高収率抽出物は、化学療法誘導性の血小板減少において血小板回復を誘導した。
【０１５７】
高収率抽出物は、化学療法に曝露した後の血小板または巨核球の回復を加速させる。図２は、上記の化学療法及び抽出物量を用いた同様の結果を強調するものであるが、図示されていないデータにより、ＭＭＣ処理が通常３日目に血小板数を減少させ、約１０日目までに基礎血小板数レベルの２５％という最下点に達することが示された。生理食塩水のみで処理した対照マウスは、２４日目までに基礎血小板数レベルの約５０％にまで回復したのに対し、２００〜４００ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物で処理した実験マウスは、１０日目までに基礎血小板数レベルの約４０〜５０％にまで増加回復し、それ以後、血小板数を回復し続けた。４００ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物で処理したマウスでは、血小板数は、２１日目までに基礎血小板数レベルの１００％に達したのに対し、生理食塩水のみを投与された対照マウスは、基礎血小板数レベルの約５０％にとどまっていた。高収率抽出物によって、血小板減少の持続時間が、生理食塩水のみを投与された対照マウスでの６日から、高収率抽出物を投与された実験マウスでの０日に減った。
【０１５８】
図２では、Ｇ−ＣＳＦ（ニューポジェン）を投与されたマウスは、生理食塩水中２００μｇのニューポジェンを０日目から７回注射されたか、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの高収率抽出物と２００μｇのニューポジェンを０日目から７回皮下注射されたかのいずれかである。結果は、高収率抽出物とニューポジェンとの組合せが、どちらかの単独処理を受けたマウスと比較した場合、血小板の回復を加速させ、この併用療法によって、１０日目までに、正常な対照血小板レベルが速やかに得られたことを示す。特に興味深い発見は、高収率抽出物と併用療法が両方とも、Ｇ−ＣＳＦ単独投与よりも優れていたことであり、このＧ−ＣＳＦ単独投与では、２６日目以降、実験の最後までに、正常な血小板レベルに達することができなかった。しかしながら、Ｇ−ＣＳＦと高収率抽出物との組合せでは、高収率抽出物の単独投与によるものよりも約９日早く正常な血小板数が得られた。
【０１５９】
したがって、化学療法誘導性の血小板減少を有する哺乳動物への高収率抽出物の投与は、少なくとも（１）２００×１０−９／Ｌ未満の血小板数として定義される、重度の血小板減少を消失させ、（２）血小板減少状態の血小板最下点の重症度を軽減し、（３）血小板減少状態の持続期間を短縮し、（４）血小板回復を用量依存的に加速させ、（５）Ｇ−ＣＳＦの共投与により血小板回復を顕著に高める。
【０１６０】
実施例７．致死量に近い放射線照射を受けた哺乳動物に高収率抽出物を投与することにより、白血球の産生を刺激する：
【０１６１】
本実施例は、高収率抽出物を用いて、骨髄機能または造血を抑制する放射線に曝露された哺乳動物において白血球の回復を刺激することができることを示す。したがって、この抽出物は、別の形で白血球レベルが低下して、哺乳動物が感染症に罹りやすくなることがある場合に役立つ可能性がある。
【０１６２】
本実施例は、高収率抽出物が致死線量に近いＸ線を受けた哺乳動物において白血球の回復を刺激することを示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスを本実験で用い、マウスの一部に致死線量に近い５００ｃＧｙのＸ線を０日目に受けさせた。細胞数を、（ａ）放射線照射または高収率抽出物の投与のどちらも受けていない、正常マウス；（ｂ）Ｘ線を受けると同時に、生理食塩水のみを腹腔内投与された対照マウス；（ｃ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から実験の１４日目まで続けて、週５回の注射の割合で生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの精製抽出物の注射を１０回受けた実験マウス；及び（ｄ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から実験２６日目まで続けて、生理食塩水中２００μｇのＧ−ＣＳＦを投与された実験マウスで測定した。
【０１６３】
図３は、いくつかの実施形態に従って高収率抽出物を投与した後の放射線照射ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける白血球の回復を示す。重度の白血球減少は放射線照射後７〜１０日で見られ、その場合、マウスは約６００〜１０００／μｌの白血球数を示した。高収率抽出物は、約２１〜２５日で白血球の回復を誘導し、生理食塩水のみで処理した対照マウスの白血球数は、実験の最後まで回復しなかった。白血球数の差は、高収率抽出物がリンパ球の回復も誘導することを示した。
【０１６４】
したがって、図３を図２と比較すると、高収率抽出物が、致死線量に近いＸ線を受けたＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、血小板数を増加させるだけでなく、白血球の回復を加速させ、白血球減少の持続期間を短縮することも分かる。
【０１６５】
実施例８．高収率抽出物と造血を刺激する薬剤とを共投与することにより、放射線誘導性の血小板減少に苦しんでいる哺乳動物における血小板回復を高める：
【０１６６】
本実施例は、高収率抽出物とＧ−ＣＳＦとの共投与が、致死量に近い放射線照射を受けたＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて血小板産生を刺激することができることを示す。
【０１６７】
ＢＡＬＢ／ｃマウスを本実験で用いた。マウスの一部に致死線量に近い５００ｃＧｙのＸ線を０日目に受けさせた。血小板レベルを、（ａ）放射線照射または高収率抽出物の投与のどちらも受けていない、正常マウス；（ｂ）Ｘ線を受けると同時に、生理食塩水のみを腹腔内投与された対照マウス；（ｃ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から７日間、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物の皮下注射を毎日受けた実験マウス；（ｄ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から７日間、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物と１μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを毎日皮下に共注射された実験マウス；（ｆ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から７日間、生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇ／日の高収率抽出物と１００μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを毎日皮下に共注射された実験マウスで測定した。
【０１６８】
図４は、いくつかの実施形態に従って高収率抽出物とＧ−ＣＳＦを共注射したときの放射線照射ＢＡＬＢ／ｃマウスの血小板数の回復速度を示す。回復速度は、マウスに高収率抽出物と１μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを共注射した場合と、高収率抽出物と１００μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを共注射した場合とで、ほぼ同じであった。両方の群において、マウスは、１５日目までに正常血小板数の約５０％にまで回復し、一方、高収率抽出物のみを投与されたマウスは、１８日目までに正常血小板数の約５０％にまで回復した。対照的に、対照マウスでは、正常血小板数の約５０％に達するのに約２２日目までかかった。
【０１６９】
実施例９．高収率抽出物と造血を刺激する薬剤とを共投与することにより、致死線量に近いＸ線による放射線照射を受けた哺乳動物における白血球回復を高める：
【０１７０】
本実施例は、高収率抽出物とＧ−ＣＳＦとの共投与が、致死量に近い放射線照射を受けたＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて白血球産生を刺激することができることを示す。
【０１７１】
ＢＡＬＢ／ｃマウスを本実験で用いた。マウスの一部に致死線量に近い５００ｃＧｙのＸ線を０日目に受けさせた。血小板レベルを、（ａ）放射線照射または高収率抽出物の投与のどちらも受けていない、正常マウス；（ｂ）Ｘ線を受けると同時に、生理食塩水のみを腹腔内投与された対照マウス；（ｃ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から実験の１４日目まで続けて、週５回の注射の割合で生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの高収率抽出物の注射を１０回受けた実験マウス；（ｄ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から実験の１４日目まで続けて、週５回の注射の割合で生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの高収率抽出物と１００μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦの皮下への共注射を１０回受けた実験マウス；及び（ｅ）Ｘ線を受けると同時に、放射線照射の０日目から実験の１４日目まで続けて、週５回の注射の割合で生理食塩水中２５０ｍｇ／ｋｇの高収率抽出物と１μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦの皮下への共注射を１０回受けた実験マウスで測定した。
【０１７２】
図５は、いくつかの実施形態に従って高収率抽出物とＧ−ＣＳＦを共注射したときの放射線照射ＢＡＬＢ／ｃマウスの白血球数の回復速度を示す。放射線は、白血球の著しい低下を引き起こした。高収率抽出物を単独で注射すると、ゆっくりとした速度の白血球回復が誘導された。また、図５には示していないが、回復速度は、マウスに高収率抽出物と１００μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを共注射した場合と、高収率抽出物と１μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦを共注射した場合とで、やはりほぼ同じであった。この共注射によって、１５日目に正常白血球数の一時的な急増がもたらされたのに対し、高収率抽出物単独では、正常数の５０％への回復が誘導された。１８日目から実験の最後まで、共注射と高収率抽出物単独投与の間にほとんど差はなかった。両処理とも正常数の６０％を示し、２９日目までに正常数を完全に回復した。生理食塩水のみを投与された対照マウスは、２９日目に正常白血球数の４０％を示した。
【０１７３】
実施例１０．台湾でのＩＴＰ患者の治療：
【０１７４】
２つの並行研究群を用いた現在進行中の非盲検多施設用量設定試験でヒトを治療するために、本明細書に示される精製抽出物を用いた。この抽出物を用いた治療の安全性と有効性を、慢性特発性血小板減少症を有する対象で評価した。本試験は、台湾有数の２つの医療施設で行なわれた。
【０１７５】
図６は、台湾での臨床試験のフローチャートを示す。この臨床試験では、米国血液学会（ＡＳＨ）のガイドラインに従って、患者が慢性特発性血小板減少症を有すると診断された。図６に示すように、ＡＳＨガイドラインは、選択／除外基準を用いた少なくとも６カ月間のスクリーニング６０５を含む。また、６週間の研究期間中、全ての患者に、本研究の前に設定されていたコルチコステロイドまたは他の治療薬を服用させた。本研究はさらに、４つの研究群のうちの１つへの患者の無作為割当て６１０を含んだ。
【０１７６】
本研究はさらに、最初の２週間の、２つのレジメンのうちの１つによる精製抽出物の投与６１５を含んだ。（レジメン１）週に連続５日、約３時間（２．５〜３．５時間）、抽出物５００ｍｇをＩＶ注入；または（レジメン２）週に３日、約３時間（２．５〜３．５時間）、抽出物５００ｍｇをＩＶ注入。次の工程は、応答の評価６２０を含んだ。（１）患者の血小板数が、１５日目までに７５×１０９／Ｌ以上に改善するが、４５０×１０９／Ｌ未満である場合、治療は、次の２週間の抽出物の投与中止６２０を含み、（２）患者の血小板数が、１５日目までに７５×１０９／Ｌ以上に改善しないが、４５０×１０９／Ｌ未満である場合、治療は、さらに２週間続けられる抽出物の投与の継続を含んだ。
【０１７７】
研究の第５週目と第６週目に、抽出物の不投与６２５のまま、患者を経過観察した。研究期間中のどの時点であっても、血小板数が４５０×１０９／Ｌ以上に上昇した場合は、患者にそれ以上抽出物を投与することを止め、患者を研究の終了６３０までモニタリングした。重度の出血の場合、ＩＶＩＧ、ステロイドまたは血小板輸血を含むように救援治療が設計され、使用され、記録された。非ＩＴＰ関連の医学的状態に必要と思われる他の治療が認められた。
【０１７８】
本研究結果に基づくと、抽出物は、ＩＴＰ患者で血小板数を増加させるのに安全でかつ有効であるように思われる。
【０１７９】
実施例１１．中国でのＩＴＰ患者の治療：
【０１８０】
精製抽出物を、中国での慢性難治性ＩＴＰ症例の研究に用いた。患者は、数年来ＩＴＰと診断されており、脾臓摘出を含めて有効な治療がなかった。患者は、数年間、血小板数を維持するためにプレドニゾロンまたはトリアムシノロンによる治療を受け、数回の出血事象が記録された。治療期間の最後に、患者は、２週間毎日、抽出物（２５０ｍｇ／日）と組み合わせたトリアムシノロンによる治療を受けた。表８に示すように、２週間の治療の後、患者の血小板数は、４４×１０９／Ｌから１１０×１０９／Ｌにまで回復した。
【０１８１】
【表８】
0005732604.tif 000009
【０１８２】
この結果は、従来のステロイド療法の使用をはるかに上回る回復を示し、抽出物の投与後３カ月を超えた持続的な効果も示した。血小板数が正常に近づいた場合に、さらに２週間、抽出物の追加投与を施した。次の３カ月間は、この抽出物が、血小板数の増えすぎに対する制御として自己フィードバック機構を働かせるように思われるので、血小板数が増えすぎることはなかった。これは重要なことである。
【０１８３】
実施例１１．ＩＴＰ患者の治療−個別研究：
【０１８４】
本研究の目的は、慢性特発性血小板減少症（ＩＴＰ）を有する個々の患者における精製抽出物の有効性と安全性を評価することにあり、患者には、維持ＩＴＰ治療を受けて６カ月以上この状態を有する患者が含まれた。本研究は、２つの研究コホートを用いた、非盲検無作為化研究であった。主要評価項目は血小板数応答であった。
【０１８５】
ある女性患者（Ｒ０１００１）は、１０年余り前からＩＴＰであると診断され、プレドニゾロン（１０ｍｇ  ＱＤ）を用いて治療されていた。この患者に精製抽出物を５日／週で４週間投与した。結果を表９に示す。
【０１８６】
【表９】
0005732604.tif 000010
【０１８７】
精製抽出物による治療後、治療に対する応答を示すものとして、血小板数がベースラインの２倍になり、２３，０００にまで回復したことが評価されるべきである。有害事象は発生しなかった。
【０１８８】
４６歳のある女性患者（Ｒ０２００１）は、５年余り前からＩＴＰであると診断され、プレドニゾロン（２０ｍｇ  ＱＤ）を用いて治療されていた。この患者に精製抽出物を５日／週で３週間投与した。結果を表１０に示す。
【０１８９】
【表１０】
0005732604.tif 000011
【０１９０】
精製抽出物による治療後、血小板数が１１，０００にまで回復したことが評価されるべきである。有害事象は発生しなかった。
【０１９１】
６１歳のある男性患者（Ｒ０１００２）は、１０年余り前からＩＴＰであると診断され、プレドニゾロン（１０ｍｇ  ＱＤ）を用いて治療されていた。この患者に精製抽出物を３日／週で２週間投与した。結果を表１１に示す。
【０１９２】
【表１１】
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【０１９３】
精製抽出物による治療後、治療に対する応答を示すものとして、血小板数が３７，０００から８４，０００にまで回復したことが評価されるべきである。有害事象は発生しなかった。
【０１９４】
最後に、６０歳のある女性患者（Ｒ０２００２）は、約４年前にＩＴＰであると診断され、プレドニゾロン（１５ｍｇ  ＱＤ）を用いて治療されていた。この患者に精製抽出物を３日／週で３週間投与した（治療は現在進行中である）。結果を表１１に示す。
【０１９５】
【表１２】
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【０１９６】
精製抽出物による治療後、治療に対する応答を示すものとして、血小板数が８，０００から５４，０００にまで回復したことが評価される。
【図１】
0005732604.tif 000014
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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