(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0005674211.tif 000049
（Ｉ）
［式中、
Ｒ１は水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであるか、または
Ｒ１は式−ＯＲ７で示される基であり、ここで
Ｒ７は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
Ｒ２は水素またはフルオロであり、
Ｒ３は水素またはメチルであり、
Ｒ４は３個までのフルオロ原子で置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
Ｒ５は水素である］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩、水和物および／または溶媒和物。
【請求項２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩、水和物および／または溶媒和物の製造法であって、まず、式（ＩＩ）：
【化２】
0005674211.tif 000050
（ＩＩ）
［式中、Ｒ１およびＲ２は請求項１の記載と同意義である］
で示されるアルデヒドを、式（ＩＩＩ）：
【化３】
0005674211.tif 000051
（ＩＩＩ）
［式中、Ｒ４は請求項１の記載と同意義である］
で示されるシアノケトンまたはそのナトリウムエノラートと、酸、酸／塩基の組み合わせ、および／または脱水剤の存在下で反応させ、式（ＩＶ）：
【化４】
0005674211.tif 000052
（ＩＶ）
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物を得、ついで該化合物を式（Ｖ）：
【化５】
0005674211.tif 000053
（Ｖ）
［式中、Ｒ３は請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物と、要すれば酸触媒の下で、縮合させ、式（Ｉ−Ａ）：
【化６】
0005674211.tif 000054
（Ｉ−Ａ）
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は請求項１の記載と同意義である］
で示される化合物を得、
必要とあれば、つづいて（ｉ）化合物（Ｉ−Ａ）をその個々のエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離し、および／または（ｉｉ）化合物（Ｉ−Ａ）を溶媒および／または酸または塩基で処置することにより、その個々の対応する水和物、溶媒和物、塩および／またはその塩の水和物または溶媒和物に変換することを特徴とする、方法。
【請求項３】
疾患の治療または予防のための請求項１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩、水和物および／または溶媒和物。
【請求項４】
細胞増殖性障害の治療または予防用の医薬組成物を製造するための請求項１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩、水和物および／または溶媒和物の使用。
【請求項５】
細胞増殖性障害が癌である、請求項４記載の使用。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物、あるいはその医薬上許容される塩、水和物および／または溶媒和物、および医薬上許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項７】
１種または複数の付加的な治療薬をさらに含む、請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
付加的な治療薬が抗腫瘍薬である、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
細胞増殖性障害を治療または予防するための請求項６〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
細胞増殖性障害が癌である、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
癌が乳房、気道、脳、生殖器、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺もしくは副甲状腺の癌、または充実性腫瘍の遠隔転移である、請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】
外科手術または放射線療法と併用して投与するための、請求項６〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明は、蛋白チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規な４−（インダゾール−５−イル）−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン誘導体、その製造方法およびｃ−Ｍｅｔ介在疾患またはｃ−Ｍｅｔ介在症状、特に癌および他の増殖性障害を治療するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は最も一般的な広域に及ぶ疾患の一つである。２００２年には、世界中で４４０万以上の人が、乳癌、大腸癌、卵巣癌、肺癌または前立腺癌であると診断され、２５０万以上の人がこれら重篤な病気が原因でなくなった（Globocan 2002 Report、http：／／www−dep.iarc.fr／globocan／downloads.htm）。米国だけで、２００５年には１２５万人以上の人が新たに癌と診断され、５０万人以上の人が死亡すると予測された。これら新しい診断患者の大部分は大腸癌（約１０万人）、肺癌（約１７万人）、乳癌（約２１万人）および前立腺癌（約２３万人）であると考えられた。平均増加率が１．４％であると想定して、癌の発生率と有病率は共に次の１０年間で約１５％増加すると予測される（American Cancer Ｓociety、Cancer Facts and Figures 2005; http：／／www.cancer.org／docroot／ＳTT／content／ＳTT_1 x_Cancer_Facts_Figures_2007.asp）。
【０００３】
癌がどのように発症しうるかについては多くの経路があり、それが癌の治療を困難とする理由の一つである。一の経路が、遺伝的変異によって正常な細胞蛋白から派生する癌蛋白による細胞の形質転換であり、これがこれら蛋白の非生理的活性化をもたらす。多くの癌蛋白が由来する一のファミリーの蛋白がチロシンキナーゼ（例えば、ｓｒｃキナーゼ）であり、特に受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。過去２０年間、幾多の研究は、哺乳動物の細胞増殖の制御における、受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）介在のシグナル伝達の重要性を明らかにしてきた。最近になって、チロシンキナーゼの選択的小型分子阻害剤を抗腫瘍剤として用いる臨床試験での結果が得られた。
【０００４】
ｃ−Ｍｅｔ受容体もまた受容体型チロシンキナーゼである。１９８０年代の初めに、Ｎ−末端の二量化ドメインに融合したＭｅｔ遺伝子のキナーゼドメインを有する、化学的に誘導されたヒト骨肉腫細胞株より変異Ｍｅｔを単離した際にその発癌能が同定された［C.S. Cooperら、Nature 311：29-33（1984）］。
【０００５】
細胞性Ｍｅｔ蛋白は単鎖の１９０ｋｄの先駆体として合成された異種二量体の膜貫通型蛋白である［G.A. Rodriguesら、Mol. Cell Biol. 11：2962-70（1991）］。該先駆体はアミノ酸残基３０７の後で細胞内で切断され、５０ｋｄのα鎖と１４５ｋｄのβ鎖を形成し、それらがジスルフィド結合により連結される。α鎖は完全に細胞外にあるのに対して、β鎖は細胞膜にまで及ぶ。β鎖はＮ−末端側のセマドメインからなり、α鎖と一緒になってリガンド結合を媒介する。β鎖の細胞外ドメインの残りはシステインに富むドメインおよび４つの免疫グロブリンのドメインからなり、その後に膜貫通領域および細胞内ドメインが続く。細胞内ドメインは膜近傍ドメイン、キナーゼドメインおよびＣ−末端ドメインを含有し、それが下流へのシグナル伝達を媒介する。リガンドが結合すると、受容体の二量化が誘発され、膜近傍領域（Ｙ１００３）、キナーゼの活性化ループ（Ｙ１２３４およびＹ１２３５）およびカルボキシ末端ドメイン（Ｙ１３４９およびＹ１３５６）における一連のチロシン自己リン酸化工程により、キナーゼドメインが活性化される。リン酸化されたＹ１３４９およびＹ１３５６は、下流にあるｃ−Ｍｅｔのシグナル伝達に必要なアダプター蛋白を結合するための複数の基質のドッキング部位を含む［C. Ponzettoら、Cell 77：261-71（1994）］。ｃ−Ｍｅｔのシグナル伝達に最も重要な基質の一つがスカフォードアダプター蛋白Ｇａｂ１であり、一般的でないホスホ−チロシン結合部位（ｍｂｓ：met binding siteと称される）を介してＹ１３４９またはＹ１３５６のいずれかに結合し、独特な長期にわたる細胞内シグナルを惹起する。もう一つ別の重要な基質がアダプター蛋白Ｃｒｂ２である。細胞状況に応じて、これらのアダプターは、ＥＲＫ／ＭＡＰＫ、Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ、ＪＮＫ、ＳＴＡＴ、ＮＦκＢおよびβ−カテニンを介するシグナル伝達経路のような種々の細胞内シグナル経路の活性化を媒介する。
【０００６】
ｃ−Ｍｅｔは、独自に、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）（分散因子としても知られている）およびその唯一知られている生物学的に活性なリガンドである、そのスプライス変異体により活性化される［L. Naldiniら、Oncogene 6：501-4（1991）］。ＨＧＦはプラスミノゲンファミリーのプロテイナーゼとの類似性を示す、独特な構造を有する。それはアミノ末端ドメインと、それに続く４つのクリングルドメインおよびセリンプロテアーゼ相同性ドメインとからなり、該セリンプロテアーゼ相同性ドメインは酵素学的に活性ではない。ｃ−Ｍｅｔと同様に、ＨＧＦは不活性な単鎖先駆体（プロＨＧＦ）として合成され、セリンプロテアーゼ（例えば、プラスミノゲンアクチベータおよび凝固因子）により細胞外にて切断され、ジスルフィド結合した活性α−およびβ−鎖の異種二量体に変換される。ＨＧＦはヘパラン硫酸プロテオグリカンと高親和力で結合し、主に細胞外マトリックスとの結合を維持し、その拡散を制限する。結晶構造分析は、ｃ−Ｍｅｔと結合すると、ＨＧＦが受容体の二量化を誘発する二量体を形成することを示す。
【０００７】
ＨＧＦは間葉細胞で発現し、特に上皮細胞にて広範囲にわたって発現するｃ−Ｍｅｔと結合することで、上皮、内皮、神経および造血細胞を含む種々の組織にて多面発現効果が得られる。該効果は、一般に、一またはすべての以下の現象：ｉ）有糸分裂誘発の刺激；ＨＧＦは肝細胞でのその細胞分裂活性により同定された；ｉｉ）浸潤および移動の刺激；独立した実験にて、ＨＧＦはその細胞運動性の誘発（「分散」）に基づいて分散因子として同定された；およびｉｉｉ）形態形成（管形成）の刺激、を包含する。ＨＧＦはコラーゲンマトリックスでのイヌ腎細胞から分岐した細管の形成を誘発する。さらには、遺伝的に修飾されたマウスから由来の、および細胞培養実験から由来の証拠は、ｃ−Ｍｅｔが生存受容体として作用し、細胞をアポトーシスから保護することを示す［N. Tomitaら、Circulation 107：1411-1417（2003）；S. Dingら、Blood 101：4816-4822（2003）；Q. Zeng ら、J. Biol. Chem. 277：25203-25208（2002）；N. Horiguchiら、Oncogene 21：1791-1799（2002）；A. Bardelliら、Embo J. 15：6205-6212（1996）；P. Longatiら、Cell Death Differ. 3：23-28（１996）；E.M. Rosen、Symp. Soc. Exp. Biol. 47：227-234（1993）］。ＨＧＦによるこれら生物学的方法の協調的遂行は、「浸潤性増殖」とも称される、特定の遺伝的プログラムをもたらす。
【０００８】
正常な条件下、ｃ−ＭｅｔおよびＨＧＦは、マウスの胚の発育に、特に胎盤および肝臓の発育に、筋芽細胞の脚の体節からの一定方向への遊走に不可欠である。ｃ−ＭｅｔまたはＨＧＦ遺伝子の遺伝的崩壊は、その独特な相互作用を示す、同じ表現型をもたらす。成体におけるｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦの生理学的役割はそれほど理解されていないが、実験結果はそれらが損傷治癒、組織再生、造血および組織恒常性に関与していることを示唆する。
【０００９】
癌蛋白ＴＰＲ−ＭＥＴの同定は、ｃ−Ｍｅｔが腫瘍形成にて一の役割を果たしている可能性のあることの最初のヒントであった。付加的な実質的証拠が多くの異なる実験的方法から誘導される。ｃ−ＭｅｔまたはＨＧＦのヒトおよびマウス細胞系での過剰発現は腫瘍形成を、およびヌードマウスで発現される場合は、転移表現型を誘発する。ｃ−ＭｅｔまたはＨＧＦのトランスジェニック過剰発現はマウスにて腫瘍形成を誘発する。
【００１０】
最も興味深いことに、ｃ−Ｍｅｔのミスセンス変異または受容体を活性化する変異が、散発性および遺伝性乳頭状腎細胞癌（ＨＰＲＣ）にて、ならびに肺癌、胃癌、肝臓癌、頭頸部癌、卵巣癌および脳癌のような他の癌型にて同定された。ＨＰＲＣファミリーにおける特異的なｃ−Ｍｅｔ変異により、ｃ−Ｍｅｔの活性化とヒト癌との間で因果関係を形成する、疾患が顕著に区別される［L. Schmidtら、Nat. Genet. 16：68-73（1997）；B. Zbarら、Adv. Cancer Res. 75：163-201（1998）］。最も強い形質転換活性を有する活性化変異が活性化ループ（D1228N／HおよびY1280H／D／C）および隣接するＰ＋１ループ（M1250T）に存する。付加的なより弱い変異が触媒ループの近くで、キナーゼドメインのＡローブにて見出された。さらには、ｃ−Ｍｅｔの膜近傍ドメインでの変異であって、キナーゼを直接活性化するのではなく、むしろ該キナーゼをユビキチン化およびその後の分解に対して耐性とすることで該蛋白を安定化する変異が、肺腫瘍において観察された［M. Kong-Beltranら、Cancer Res. 66：283-9（2006）；T.E. Taherら、J. Immunol. 169：3793-800（2002）；P. Peschard ら、Mol. Cell 8：995-1004（2001）］。興味深いことに、ｃ−Ｍｅｔの体細胞変異が種々の癌での悪性強度の増加および広範囲に及ぶ転移と関連付けられる。生殖細胞および体細胞の変異の頻度は低くても（５％未満）、パラクリンまたはオートクリン機構により、変異なく、ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達の調節解除に至る、別の主たる機構が観察された。パラクリンの活性化が、生理学的にＨＧＦを産生する、骨肉腫または横紋筋肉腫のような間葉細胞由来の腫瘍にて、および外胚葉を起源とするグリア芽腫および乳癌にて、観察された。
【００１１】
しかしながら、最も頻繁に起こるケースが、大腸、膵臓、胃、乳房、前立腺、卵巣および肝臓の癌腫にて観察されるような、ｃ−Ｍｅｔが過剰発現されている癌腫である。例えば胃および肺癌細胞系にて観察されるように、遺伝子増幅により、過剰発現が生じるかもしれない。つい最近になって、ｃ−Ｍｅｔの過剰発現が、ＥＧＦ受容体阻害に対する耐性を獲得した肺腫瘍細胞系にて検出された［J.A. Engelmannら、Science 316：1039-1043（2007）］。ｃ−Ｍｅｔを過剰発現するある種の上皮細胞腫瘍はまたＨＧＦを一緒に発現し、オートクリンｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦ刺激ループをもたらし、それにより体細胞由来のＨＧＦの必要性を回避する。
【００１２】
一般に、ヒト癌におけるｃ−Ｍｅｔの活性化の異常は、典型的には、特異的な機構とは関係なく、予後不良と関連付けられる［J.G. Christensenら、Cancer Lett. 225：1-26（2005）］。
【００１３】
要するに、ｃ−Ｍｅｔを重要な癌標的として認証する多くのインビトロおよびインビボ実験がなされており、http：／／www.vai.org／met［C. Birchmeierら、Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 4：915-25（2003）］においてその総覧を見ることができる。ヒト腫瘍における異常なＭｅｔシグナル伝達を弱めるのに、ＨＰＦアンタゴニストおよび小型分子阻害剤等を含む、いくつかの方策が追随された。ARQ-197（Arqule）、XL-880（Exelixis）およびPH-2341066（Pfizer）などの小型分子阻害剤の多くは、現在、臨床開発段階にあり；最近になって、概説されている［J.J. Cui、Expert Opin. Ther. Patents 17：1035-45（2007）］。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、本願発明の解決すべき技術的課題は、ｃ−Ｍｅｔキナーゼに対する阻害活性を有する別の化合物を提供し、かくしてｃ−Ｍｅｔ介在疾患、特に癌および他の増殖性障害を治療するための、新たな治療選択肢を提示することにある。
【００１５】
降圧活性を有するカルシウムアンタゴニストとしての４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジンが特開平０２−０４０３８５［CAS Document-No. 113：40675］に開示されている。ＷＯ  ０１／６６５４４−Ａ２において、三環式３−オキソ−１,３,４,７−テトラヒドロイソオキサゾロ［３,４−ｂ］ピリジン誘導体が泌尿生殖器疾患および他の疾患の治療に有用であるカリウムチャネルオープナーとして記載されている。最近では、ＷＯ  ２００９／００６５８０−Ａ１に、後期ナトリウムチャネル遮断薬として作用するヘテロアリール縮合のジヒドロピリジン、およびその心血管障害を治療するための使用がクレームされている。ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害活性を有する特定の１,４−ジヒドロピリジン誘導体がＷＯ２００８／０７１４５１−Ａ１に開示されている。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
一の態様において、本願発明は、一般式（Ｉ）：
【化１】
0005674211.tif 000002
（Ｉ）
［式中
Ｒ１は、水素、クロロ、ブロモ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、ここで
（ｉ）該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよびフェニルは、フルオロ、クロロ、ブロモ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルおよび４〜６員のヘテロシクロアルキルからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく(ここで、該（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ置換基のアルキル基は、ヒドロキシまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシで所望により置換されていてもよい）、
（ｉｉ）該（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリールからなる群より独立して選択される１、２または３個の置換基で所望により置換されていてもよいか（ここで、該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリール置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよい）または
Ｒ１は式−ＮＲ６ＡＲ６Ｂまたは−ＯＲ７で示される基であり、ここで
Ｒ６ＡおよびＲ６Ｂは、水素、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよび４〜７員のヘテロシクロアルキルからなる群より独立して選択され、ここで
（ｉ）該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよび４〜７員のヘテロシクロアルキルは、フルオロ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
（ｉｉ）該（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリールからなる群より独立して選択される１、２または３個の置換基で所望により置換されていてもよいか（ここで、該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリール置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよい）、または
Ｒ６ＡおよびＲ６Ｂは、その結合する窒素原子と一緒に結合して、４〜７員のヘテロシクロアルキル環を形成し、その環はＮ、ＯおよびＳから選択される別の環ヘテロ原子を含有してもよく、フルオロ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよび（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
Ｒ７は（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよび４〜７員のヘテロシクロアルキルからなる群より選択され、ここで
（ｉ）該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよび４〜７員のヘテロシクロアルキルは、フルオロ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
（ｉｉ）該（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリールからなる群より独立して選択される１、２または３個の置換基で所望により置換されていてもよく（ここで、該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリール置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよい）、
Ｒ２は水素、フルオロ、クロロまたはメチルであり、
Ｒ３は水素、メチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルまたはエチルであり、
Ｒ４は（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニルおよび５または６員のヘテロアリールからなる群より選択され、ここで
（ｉ）該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニルおよび５または６員のヘテロアリールは、フルオロ、クロロ、シアノ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
（ｉｉ）該（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、３個までのフルオロ原子で、またはトリフルオロメチル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリールからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく（ここで、該（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ置換基の該アルキル基は、３個までのフルオロ原子で、またはトリフルオロメチル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよび４〜７員のヘテロシクロアルキルから独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよく、該（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキル、フェニル、４〜７員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリール基は、フルオロ、クロロ、シアノ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよい）、
Ｒ５は水素、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたはシクロプロピルである］
で示される、４−（インダゾール−５−イル）−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン誘導体に関する。
【００１７】
本願発明の化合物はまた、その塩、水和物および／または溶媒和物の形態にて存在し得る。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本願発明の目的とする塩は、好ましくは、本願発明の化合物の医薬上許容される塩である（例えば、S. M. Bergeら、"Pharmaceutical Salts"、J. Pharm. Sci. 1977、66、1-19を参照のこと）。
【００１９】
医薬上許容される塩は、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩を包含する。
【００２０】
医薬上許容される塩はまた、例えば、好ましくはアルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは有機アミン、例示的に、好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、ジヒドロアビエチルアミン、アルギニン、リジンおよびエチレンジアミンより誘導されるアンモニウム塩などの通常の塩基の塩を包含する。
【００２１】
本願発明の化合物の水和物またはその塩は、化合物と水の、例えばヘミ−、モノ−またはジ−水和物などの化学量論的組成物である。
【００２２】
本願発明の化合物の溶媒和物またはその塩は、化合物と溶媒の化学量論的組成物である。
【００２３】
本願発明の化合物は、不斉中心の特性によって、または回転が制限されることで、異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）の形態にて存在してもよい。いずれの異性体も不斉中心が（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ,Ｓ）−配置にて存在してもよい。
【００２４】
２つまたはそれ以上の不斉中心が本願発明の化合物中に存在する場合、例示される構造の数種のジアステレオマーおよびエナンチオマーが可能であることが多く、純粋なジアステレオマーおよび純粋なエナンチオマーが好ましい例を表すことも理解されよう。純粋な立体異性体、純粋なジアステレオマー、純粋なエナンチオマーおよびその混合物は本願発明の範囲内にあることを意図とする。
【００２５】
二重結合または環についての置換基の特性による幾何異性体はシス（＝Ｚ−）またはトランス（＝Ｅ−）形態で存在してもよく、両方の形態の異性体が本願発明の範囲内に含まれる。
【００２６】
本願発明の化合物の、分離されているか、純粋か、部分的に純粋か、またはラセミ混合物のいずれかである、すべての異性体は、本願発明の範囲内に含まれる。該異性体の精製および該異性体混合物の分離は当該分野にて公知の標準的方法によりなされうる。例えば、ジアステレオマー混合物はクロマトグラフィー方法または結晶化により個々の異性体に分離され得、ラセミ体はキラル相でのクロマトグラフィー操作または分割のいずれかにより個々のエナンチオマーに分離され得る。
【００２７】
加えて、上記した化合物の可能性のあるすべての互変異性体の形態も本願発明に包含される。
【００２８】
特記しない限り、以下の定義は当該明細書および特許請求の範囲を通して用いられる置換基および残基に適用される：
【００２９】
アルキルは、一般に、炭素数１〜６の、好ましくは１〜４の、より好ましくは１〜３の直鎖または分岐飽和炭化水素基を示す。限定しない例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシルが挙げられる。同じことが、アルコキシ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ等などの基に適用される。
【００３０】
アルコキシは、例示的に、好ましくは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシを表す。
【００３１】
モノアルキルアミノは、一般に、一のアルキル残基が窒素原子に結合しているアミノ基を表す。限定しない例として、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノが挙げられる。
【００３２】
ジアルキルアミノは、一般に、２つの独立して選択されるアルキル残基が窒素原子に結合しているアミノ基を表す。限定しない例として、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノが挙げられる。
【００３３】
シクロアルキルは、一般に、３〜７個の、好ましくは３〜６個の環炭素原子を有する単または二環式飽和炭化水素基を表す。単環式シクロアルキル基が好ましい。限定しない例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ビシクロ［２.２.１］ヘプチルを表す。
【００３４】
ヘテロシクロアルキルは、一般に、３〜６個の、好ましくは３〜５個の炭素原子、およびＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯおよびＳＯ２からなる群より独立して選択される２個までのヘテロ原子および／またはヘテロ基を含む、合計４〜７個の、好ましくは４〜６個の環原子を有する、単または二環式飽和ヘテロ環式基を表し、その環系は環炭素原子を介して、あるいは可能であるならば、環窒素原子を介して結合され得る。限定しない例として、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、テトラヒドロフラニル、チオラニル、スルホラニル、１,３−ジオキソラニル、１,３−オキサゾリジニル、１,３−チアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１,３−ジオキサニル、１,４−ジオキサニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１,１−ジオキシドチオモルホリニル、ペルヒドロアゼピニル、ペルヒドロ−１,４−ジアゼピニル、ペルヒドロ−１,４−オキサゼピニル、７−アザビシクロ［２.２.１］ヘプチル、３−アザビシクロ［３.２.０］ヘプチル、７−アザビシクロ［４.１.０］ヘプチル、２,５−ジアザビシクロ［２.２.１］ヘプチル、２−オキサ−５−アザビシクロ［２.２.１］ヘプチルが挙げられる。ＮおよびＯからなる群より選択される２個までのヘテロ原子を有する、例示的に、好ましくは、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、１,３−ジオキソラニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、１,４−ジオキサニル、ピペリジニル、ピペラジニル、およびモルホリニルなどの、４〜６員の単環式ヘテロシクロアルキル基が特に好ましい。
【００３５】
アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノおよびモルホリノは、具体的には、環窒素原子を介して分子の残基に結合した、個々のヘテロシクロアルキル基をいう。
【００３６】
ヘテロアリールは、一般に、２〜５個の炭素原子、およびＮ、ＯおよびＳからなる群より独立して選択される３個までのヘテロ原子を含む、合計５または６個の環原子を有する、単環式芳香族ヘテロ環式基を表し、その環系は環炭素原子を介して、あるいは可能であるならば、環窒素原子を介して結合され得る。限定しない例として、フリル、ピロリル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニルおよびトリアジニルが挙げられる。ピリジル、ピリミジル、ピリダジニルおよびピラジニルなどの、２個までの窒素原子を有する６員のヘテロアリール基、およびチエニル、フリル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリルおよびイソキサゾリルなどの、Ｎ、ＯおよびＳからなる群より選択される２個までのヘテロ原子を有する５員のヘテロアリール基が好ましい。
【００３７】
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の基を表す。フッ素および塩素の基が好ましい。
【００３８】
オキソは二重結合した酸素原子を表す。
【００３９】
本願明細書を通して、簡単にするためには、単数形の使用が、複数形よりも好ましいが、一般に、特記しない限り、複数形を含むことを意図とする。例えば、「有効量の式（Ｉ）の化合物を患者に投与することを含む、患者における疾患を治療する方法」なる語は、複数の疾患の同時治療、ならびに式（Ｉ）の複数の化合物の投与を含む意図である。
【００４０】
好ましい実施態様において、本願発明は、一般式（Ｉ）の化合物であって、
Ｒ１が水素、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルからなる群より選択され、ここで
（ｉ）該（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルは、フルオロ、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよび４〜６員のヘテロシクロアルキルからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
（ｉｉ）該（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキル、４〜６員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリールからなる群より独立して選択される１、２または３個の置換基で所望により置換されていてもよいか（ここで、該（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキル、４〜６員のヘテロシクロアルキルおよび５または６員のヘテロアリール置換基は、フルオロ、クロロ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよい）、あるいは
Ｒ１が式−ＯＲ７の基であり、ここで
Ｒ７は（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルからなる群より選択され、ここで
（ｉ）該（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルは、フルオロ、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
（ｉｉ）該（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルおよび４〜６員のヘテロシクロアルキルからなる群より独立して選択される１、２または３個の置換基で所望により置換されていてもよく（ここで、該（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルおよび４〜６員のヘテロシクロアルキル置換基は、フルオロ、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよい）、
Ｒ２が水素またはフルオロであり、
Ｒ３が水素、メチル、ジフルオロメチルまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ４が（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、シクロプロピル、フェニルおよびピリジルからなる群より選択され、ここで
（ｉ）該シクロプロピルは、フルオロ、トリフルオロメチルおよびメチルからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
（ｉｉ）該フェニルおよびピリジルは、フルオロ、クロロ、シアノ、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
（ｉｉｉ）該（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、３個までのフルオロ原子で、または（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよび４〜６員のヘテロシクロアルキルからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく（ここで、
該（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ置換基のアルキル基は、３個までのフルオロ原子で、または（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよび４〜６員のヘテロシクロアルキルからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよく、
該４〜６員のヘテロシクロアルキル基は、フルオロ、トリフルオロメチル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、オキソ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよい）、
Ｒ５が水素またはメチルである、化合物に関する。
【００４１】
別の実施態様において、本願発明は、Ｒ２が水素またはフルオロである、一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００４２】
さらに別の実施態様において、本願発明は、Ｒ３が水素またはメチルである、一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００４３】
もう一つ別の実施態様において、本願発明は、Ｒ５が水素である、一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００４４】
さらに好ましい実施態様において、本願発明は、一般式（Ｉ）の化合物であって、
Ｒ１が水素または所望により（Ｃ１−Ｃ３）−アルコキシで、または３個までのフルオロ原子で置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであるか、または
Ｒ１が式−ＯＲ７の基であり、ここで
Ｒ７は所望により３個までのフルオロ原子で、またはヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ３）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルアミノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノおよびモルホリノからなる群より選択される置換基で置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、ここで、該アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノおよびモルホリノ基は、フルオロ、メチル、オキソ、メトキシおよびエトキシからなる群より独立して選択される１または２個の残基で所望により置換されていてもよく、
Ｒ２が水素またはフルオロであり、
Ｒ３が水素またはメチルであり、
Ｒ４が（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、フェニルおよびピリジルからなる群より選択され、ここで、
（ｉ）該（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、所望により、３個までのフルオロ原子で、または（Ｃ１−Ｃ３）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルアミノからなる群より選択される１個の置換基で置換されていてもよく、
（ｉｉ）該フェニルおよびピリジルは、フルオロ、クロロ、シアノ、メチルおよびトリフルオロメチルからなる群より独立して選択される１または２個の置換基で所望により置換されていてもよく、
Ｒ５が水素である、化合物に関する。
【００４５】
特に好ましい実施態様において、本願発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物であって、
Ｒ１が水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであるか、または
Ｒ１が式−ＯＲ７で示される基であり、ここで
Ｒ７は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
Ｒ２が水素またはフルオロであり、
Ｒ３が水素またはメチルであり、
Ｒ４が３個までのフルオロ原子で所望により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
Ｒ５が水素である、化合物に関する。
【００４６】
残基の個々の組み合わせまたは好ましい組み合わせにおいて具体的に示される残基の定義はまた、その残基について示される特定の組み合わせに関わりなく、所望により、他の組み合わせの残基の定義と置き換えられてもよい。２またはそれ以上の上記した好ましい範囲の組み合わせが特に好ましい。
【００４７】
もう一つ別の実施態様において、本願発明は、Ｒ５が水素である、一般式（Ｉ）の化合物の製造法であって、まず、式（ＩＩ）：
【化２】
0005674211.tif 000003
（ＩＩ）
［式中、Ｒ１およびＲ２は上記と同意義である］
で示されるアルデヒドを、式（ＩＩＩ）：
【化３】
0005674211.tif 000004
（ＩＩＩ）
［式中、Ｒ４は上記と同意義である］
で示されるシアノケトンまたはそのナトリウムエノラートと、酸、酸／塩基の組み合わせ、および／または脱水剤の存在下で反応させ、式（ＩＶ）：
【化４】
0005674211.tif 000005
（ＩＶ）
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は上記と同意義である］
で示される化合物を得、ついで該化合物を式（Ｖ）：
【化５】
0005674211.tif 000006
（Ｖ）
［式中、Ｒ３は上記と同意義である］
で示される化合物と、所望により酸触媒の助けを借りて、縮合させ、式（Ｉ−Ａ）：
【化６】
0005674211.tif 000007
（Ｉ−Ａ）
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記と同意義である］
で示される化合物を得、
所望により、必要とあれば、つづいて（ｉ）化合物（Ｉ−Ａ）をその対応する個々のエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに好ましくはクロマトグラフィー法を用いて分離し、および／または（ｉｉ）化合物（Ｉ−Ａ）を、溶媒および／または酸または塩基で処置することにより、その対応する個々の水和物、溶媒和物、塩および／またはその塩の水和物または溶媒和物に変換する、方法に関する。
【００４８】
工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）および（ＩＶ）＋（Ｖ）→（Ｉ−Ａ）は、一般に、＋２０℃から溶媒の沸点までの温度範囲で、大気圧の下、不活性溶媒中で実施される。
【００４９】
この目的に適する溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコール、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエンまたはキシレンなどの炭化水素、ジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、トリクロロエタン、１,２−ジクロロエタン、クロロベンゼンまたはクロロトルエンなどのハロ炭化水素、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサンまたは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル、またはアセトニトリル、ピリジンまたは酢酸などの他の溶媒である。
【００５０】
これら溶媒の混合物を用いることも同様に可能である。（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）の反応は、ジクロロメタン、トルエン、エタノールまたはイソプロパノール中、個々の還流温度で、大気圧の下でなされるのが好ましく、（ＩＶ）＋（Ｖ）→（Ｉ−Ａ）の反応は、また、エタノールまたはイソプロパノール中、還流温度で、大気圧の下で実施されるのが好ましい。
【００５１】
（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）の反応は、有利には、酸、酸／塩基の組み合わせ、および／または、例えば、モレキュラーシーブなどの脱水剤の存在下で行われうる。適当な酸の例が酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸である；適当な塩基は、特にピペリジンまたはピリジンである。成分の反応性に応じて、（ＩＶ）＋（Ｖ）→（Ｉ−Ａ）の変換は、さらに補助剤を用いることなく、実施可能であるし、また酸触媒、好ましくは酢酸を用いて促進され得る。
【００５２】
（ＩＩ）→（ＩＶ）→（Ｉ−Ａ）の反応経路は、上記した２つの別々な工程にて、あるいはワン・ポット操作を用いることで、すなわち、化合物（ＩＶ）の中間体の単離を行うことなく、実施され得る［１,４−ジヒドロピリジンの合成は、一般に、例えば、D.M. Stout、A.I. Meyers、Chem. Rev. 1982、82、223-243；H. Meierら、Liebigs Ann. Chem. 1977、1888；H. Meierら、前掲、1977、1895；H. Meierら、前掲、1976、1762；F. Bossertら、Angew. Chem. 1981、93、755を参照のこと］。
【００５３】
Ｒ５が（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたはシクロプロピルである式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−Ａ）の化合物をまず標準的方法で、式（ＶＩ）：
【化７】
0005674211.tif 000008
（ＶＩ）
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記と同意義であり、ＰＧはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルまたはｐ−メトキシベンジルなどの適当なインダゾール保護基を表す］
で示されるインダゾールＮ１−保護誘導体に変換し、
つづいて、ジヒドロピリジンを、塩基の存在下で、式（ＶＩＩ）：
【化８】
0005674211.tif 000009
［式中、
Ｒ５Ａは（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたはシクロプロピルであり、
Ｚはハロゲン、メシラート、トリフラートまたはトシラートなどの脱離基である］
で示される化合物を用いてＮ−アルキル化に付して式（ＶＩＩＩ）：
【化９】
0005674211.tif 000010
（ＶＩＩＩ）
［式中、ＰＧ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５Ａは上記と同意義である］
で示される化合物を得、その後で保護基ＰＧを標準的操作を用いて除去し、式（Ｉ−Ｂ）：
【化１０】
0005674211.tif 000011
（Ｉ−Ｂ）
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５Ａは上記と同意義である］
で示される化合物を得ることで調製され得る。
【００５４】
工程（Ｉ−Ａ）→（ＶＩ）および（ＶＩＩＩ）→（Ｉ−Ｂ）におけるインダゾール保護基ＰＧの導入および除去は、各々、当該分野にて周知の標準的方法により実施されるのが一般的である［例えば、T.W. GreeneおよびP.G.M. Wuts、Protective Groups in Organic Synthesis、Wiley、New York、1999；M. BodanszkyおよびA. Bodanszky、The Practice of Peptide Synthesis、Springer-Verlag、Berlin、1984を参照のこと］。上記した工程にて保護基として、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭ）またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）が用いられるのに好ましい。これらの基の除去は、水、ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸などの不活性溶媒中、塩化水素、臭化水素またはトリフルオロ酢酸などの強酸と反応させることで実施されるのが一般的である；必要に応じて、除去は付加的な不活性溶媒を用いることなく実施されることも可能である。インダゾールの保護にＳＥＭ基を用いると、切断は別にまた、テトラヒドロフランなどの不活性溶媒中、フッ化カリウムまたはフッ化テトラブチルアンモニウムなどのフッ化物源で処理することにより達成される。
【００５５】
しかしながら、場合によっては、事前のインダゾールＮ１−窒素の遮断をすることなく、ジヒドロピリジンＮ−アルキル化工程を行い、好ましくはクロマトグラフィー操作を用いて結果的に生じる、生成混合物を分離することがより都合がよい。
【００５６】
アルキル化反応（ＶＩ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩＩＩ）のための不活性溶媒は、例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサンまたは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサンまたはシクロヘキサンなどの炭化水素、ジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、１,２−ジクロロエタン、トリクロロエタン、テトラクロロエタン、クロロベンゼンまたはクロロトルエンなどのハロ炭化水素、あるいはアセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ,Ｎ'−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）またはピリジンなどの他の溶媒である。これら溶媒の混合物を用いることも可能である。ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドまたはその混合物を用いるのも好ましい。
【００５７】
工程（ＶＩ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩＩＩ）に適する塩基は、特に、炭酸リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウムまたはセシウムなどのアルカリ金属またはアルカリ土類金属炭酸塩、水素化ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ金属水素化物、ナトリウムまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの立体的に遮蔽されたアルカリアルコキシド、リチウム、ナトリウムまたはカリウムビス（トリメチルシリル）アミドまたはリチウムジイソプロピルアミドなどの立体的に遮蔽されたアルカリアミドあるいはトリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはピリジンなどの有機アミンである。炭酸カリウム、炭酸セシウム、水素化ナトリウムまたはトリエチルアミンが好ましくは使用される。
【００５８】
反応（ＶＩ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩＩＩ）は、一般に、−２０℃〜＋１２０℃の、好ましくは０℃〜＋８０℃の温度範囲で大気圧の下で実施される。
【００５９】
適切ならば、上記した方法によって得られた本願発明の式（Ｉ）の他の化合物を用いて出発し、個々の置換基、特にＲ１およびＲ４で列挙された置換基の官能基を変形することで、さらなる式（Ｉ）の化合物も調製され得る。これらの変形は当業者に知られた慣用的方法、例えば、求核または求電子置換反応、遷移金属介在カップリング反応（例えば、スズキまたはヘック反応）、酸化、還元、水素化、ハロゲン化、アルキル化、アミノ化、ヒドロキシル化およびエーテル化などの反応、ならびに一時的な保護基の導入および除去も包含する。
【００６０】
式（ＩＩ）の化合物は文献に記載されているか、または文献に記載の標準的方法を適用することで容易に入手可能な出発物質より調製され得る［例えば、G. Luoら、J. Org. Chem. 71、5392（2006）、およびＷＯ  ２００７／１２４２８８−Ａ１、ＷＯ  ２００５／０５６５５０−Ａ２、ＵＳ  ２００５／０２２７９６８−Ａ１およびＥＰ  １５１０５１６−Ａ１に記載の操作］。
【００６１】
一の合成経路において、式（ＩＩ−Ａ）：
【化１１】
0005674211.tif 000012
（ＩＩ−Ａ）
［式中、Ｒ２は上記と同意義である］
で示される親のインダゾリルアルデヒドを、第一に、標準的操作を用いて、３位でハロゲン化し、式（ＩＸ）：
【化１２】
0005674211.tif 000013
（ＩＸ）
［式中、
ＰＧおよびＲ２は上記と同意義であり、
Ｘはクロロ、ブロモまたはヨードであり、
Ｒ８は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを表すか、または両方のＲ８残基が一緒になって−（ＣＨ２）２−または−（ＣＨ２）３−架橋を形成する］
で示されるジ保護誘導体に変形し、第二に、式（ＩＸ）の化合物を、適当な遷移金属触媒、好ましくは銅またはパラジウム触媒を用いて、
［Ａ］式（Ｘ）：
【化１３】
0005674211.tif 000014
［式中、
Ｒ１Ａは、上記した式−ＮＲ６ＡＲ６Ｂまたは−ＯＲ７の各々のＮ−またはＯ−連結Ｒ１残基を表す］
で示される化合物とカップリングさせて、式（ＸＩ−Ａ）
【化１４】
0005674211.tif 000015
（ＸＩ−Ａ）
［式中、ＰＧ、Ｒ１Ａ、Ｒ２およびＲ８は上記と同意義である］
で示される化合物を得るか、または
［Ｂ］式（ＸＩＩ）：
【化１５】
0005674211.tif 000016
［式中、
Ｒ１Ｂは、上記したように、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択される所望により置換されていてもよいＣ−連結Ｒ１残基を表し、および
Ｑは−Ｂ（ＯＲ９）２、−ＭｇＨａｌ、−ＺｎＨａｌまたは−Ｓｎ（Ｒ１０）３基を表し、ここで、
Ｈａｌはハロゲン、特にクロロ、ブロモまたはヨードであり、
Ｒ９は水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであるか、または両方のＲ９残基が一緒になって−（ＣＨ２）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ（ＣＨ３）２−、−（ＣＨ２）３−または−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−架橋であり、
Ｒ１０は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルである］
で示される化合物とカップリングさせて、式（ＸＩ−Ｂ）：
【化１６】
0005674211.tif 000017
（ＸＩ−Ｂ）
［式中、ＰＧ、Ｒ１Ｂ、Ｒ２およびＲ８は上記と同意義である］
で示される化合物を得、
最終的に、標準的方法を用いて保護基をその後でまたは同時に除去し、各々、式（ＩＩ−Ｂ）および（ＩＩ−Ｃ）：
【化１７】
0005674211.tif 000018
［式中、Ｒ１Ａ、Ｒ１ＢおよびＲ２は上記と同意義である］
で示される３−置換インダゾリルアルデヒドを得る。
【００６２】
工程（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ−Ａ）および（ＩＸ）＋（ＸＩＩ）→（ＸＩ−Ｂ）に適する不活性溶媒は、例えば、ベンゼン、トルエンおよびキシレンなどの芳香族炭化水素、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、１,２−ジメトキシエタンおよびビス−（２−メトキシエチル）−エーテルなどのエーテル、またはアセトニトリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、Ｎ,Ｎ'−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）およびピリジンなどの二極性非プロトン性溶媒を包含する。カップリング試薬（Ｘ）として脂肪族アルコール［Ｒ１ＡはＯＲ７であり、Ｒ７はアルキルである］を用いる場合、その過剰分はまた溶媒として供されてもよい。これら溶媒の混合物の使用も実現可能である。好ましい溶媒はトルエン、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびその混合物である。
【００６３】
カップリング反応（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ−Ａ）および（ＩＸ）＋（ＸＩＩ）→（ＸＩ−Ｂ）は遷移金属触媒の助けを借りて実施される。この目的には、特に、ヨウ化銅（Ｉ）などの銅触媒、活性炭上パラジウム、パラジウム（ＩＩ）アセタート、ビス（ジベンジリデンアセトン）−パラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）−ジパラジウム（０）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（０）、ビス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（ＩＩ）クロリド、ビス（アセトニトリル）−パラジウム（ＩＩ）クロリドまたは［１,１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−パラジウム（ＩＩ）クロリドなどのパラジウム触媒、所望により、例えば、ジシクロヘキシル［２',４',６'−トリス（１−メチルエチル）ビフェニル−２−イル］ホスファン（ＸＰＨＯＳ）または４,５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９,９−ジメチルキサンテン（Xantphos）などの付加的なホスファンリガンドと組み合わせたものが適している［例えば、J. Hassanら、Chem. Rev. 102、1359-1469（2002）；V. Farina、V. KrishnamurthyおよびW.J. Scott：The Stille Reaction、Wiley、New York、1998を参照のこと］。
【００６４】
工程（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ−Ａ）および（ＩＸ）＋（ＸＩＩ）→（ＸＩ−Ｂ）は、通常、＋２０℃〜＋２００℃、好ましくは＋８０℃〜＋１８０℃の温度範囲で、大気圧にて行われる。しかしながら、これら反応を高圧で、または低圧で（例えば、０．５〜５バールの範囲で）行うことも可能である。さらには、該変形は、有利には、マイクロ波を同時に照射することでなされうる。
【００６５】
別法として、かかるインダゾールカップリング反応は、例えば、Ｒ１がクロロまたはブロモである、前駆体としての式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を用いて、調製工程における後半で実施されてもよい。溶媒および触媒などの変換（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ−Ａ）および（ＩＸ）＋（ＸＩＩ）→（ＸＩ−Ｂ）について上記された反応パラメータは同様に適用される。ある場合には、特定の反応条件および試薬に応じて、これらのカップリング反応は直接的に、すなわち、従前にインダゾールＮ１−窒素を保護することなく、実施され得る。
【００６６】
式（ＩＩ−Ａ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩＩ）、（Ｘ）および（ＸＩＩ）の化合物は市販されているか、文献に記載されているか、または文献に記載の標準的方法を適用することで利用可能な出発物質より製造され得る。
【００６７】
本願発明の化合物の調製は、以下の合成経路により説明され得る。より詳細な操作が、以下の実施例を記載する実験セクションにて記載される。
【００６８】
【化１８】
0005674211.tif 000019
【００６９】
【化１９】
0005674211.tif 000020
［ａ）：ＮＣＳ（Ｘ＝Ｃｌ）またはＮＢＳ（Ｘ＝Ｂｒ）またはＩ２／水性ＮａＯＨ（Ｘ＝Ｉ）；ｂ）：Ｍｅ３ＳｉＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２Ｃｌ、Ｃｓ２ＣＯ３；ｃ）：ＨＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、触媒ｐ−ＴｓＯＨ；ｄ）：Ｒ７−ＯＨ、Ｃｓ２ＣＯ３、触媒ＣｕＩ；ｅ）：１.ＴＢＡＦ、２.水性ＨＣｌ］
【００７０】
使用方法
本願発明の化合物は、受容体型チロシンキナーゼ、特にｃ−Ｍｅｔ受容体型チロシンキナーゼの活性または発現を阻害ずるのに用いられてもよい。したがって、式（Ｉ）の化合物は治療薬として価値があると考えられる。かくして、もう一つ別の実施態様において、本願発明は、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性に関する、または該活性により媒介される障害の治療法であって、かかる治療を必要とする患者において、該患者に有効量の上記した式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性に関する障害は、細胞増殖性障害、特に癌である。
【００７１】
当該明細書を通して用いられる「治療する」または「治療」なる語は、慣用的には、例えば、癌などの疾患または障害の状態を根絶、緩解、軽減、緩和、改善する目的で対象を管理またはケアするのに用いられる。
【００７２】
「対象」または「患者」なる語は、ヒトおよびヒト以外の動物などの、細胞増殖性障害を患う可能性のある生物、そうでなければ本願発明の化合物を投与することで利益を受けうる生物を包含する。好ましいヒトは、本願明細書に記載される、細胞増殖性障害またはそれに付随する病態を患っているヒト患者または該障害等に罹患する傾向にあるヒト患者を包含する。「ヒト以外の動物」なる語は、脊椎動物、例えばヒト以外の霊長類、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコおよび噛歯動物、例えばマウスなどの哺乳動物、および鳥類、両生類、は虫類などの哺乳動物以外の脊椎動物を包含する。
【００７３】
「ｃ−Ｍｅｔに関連する、またはｃ−Ｍｅｔにより媒介される障害」なる語は、ｃ−Ｍｅｔ活性、例えばｃ−Ｍｅｔの過剰活性に付随するまたは関連する疾患、およびこれらの疾患に付随する病態を包含する。「ｃ−Ｍｅｔに関連する、またはｃ−Ｍｅｔにより媒介される障害」の例として、異常に多量のｃ−Ｍｅｔによるｃ−Ｍｅｔの過剰刺激またはｃ−Ｍｅｔにおける変異よりもたらされる障害、または異常に多量のｃ−Ｍｅｔによる異常に多量のｃ−Ｍｅｔ活性またはｃ−Ｍｅｔの変異よりもたらされる障害が挙げられる。
【００７４】
「ｃ−Ｍｅｔの過剰活性」なる語は、通常ではｃ−Ｍｅｔを発現しない細胞でのｃ−Ｍｅｔ発現あるいは活性なｃ−Ｍｅｔを通常では有しない細胞によるｃ−Ｍｅｔ活性、または望ましくない細胞増殖に至る増加したｃ−Ｍｅｔ発現あるいはｃ−Ｍｅｔの構成的活性化に至る変異のいずれかをいう。
【００７５】
「細胞増殖性障害」なる語は、望ましくないまたは制御されない細胞の増殖に関与する障害を包含する。本願発明の化合物は、細胞増殖および／または細胞分裂を防止、阻害、遮断、減少、低下、制御等するか、および／またはアポトーシスを惹起するのに利用することができる。この方法は、ヒトを含む哺乳動物を含め、その必要とする対象に、上記した障害を治療または予防するのに効果的である一定量の本願発明の化合物またはその医薬上許容される塩、異性体、多形体、代謝産物、水和物または溶媒和物を投与することを含む。
【００７６】
本願発明との関連で、細胞増殖性または過剰増殖性障害は、限定されるものではないが、例えば、乾癬、皮膚に影響を及ぼすケロイド等の過形成、子宮内膜症、骨障害、血管形成または血管増殖性障害、肺高血圧、線維障害、メサンギウム細胞増殖性障害、大腸ポリープ、多嚢胞性腎疾患、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、および乳房、気道、脳、生殖器、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺の癌などの充実性腫瘍、およびその充実性腫瘍の遠隔転移を包含する。該障害はまた、リンパ腫、肉腫および白血病を包含する。
【００７７】
乳癌の例は、限定されるものではないが、浸潤性腺管癌、浸潤性小葉癌、非浸潤性乳管癌および上皮内小葉癌を包含する。
【００７８】
気道の癌の例として、限定されるものではないが、小細胞および非小細胞肺癌、ならびに気管支腺腫および胸膜肺芽腫が挙げられる。
【００７９】
脳癌の例は、限定されるものではないが、脳幹および視床下部グリオーマ、小脳および大脳星細胞腫、グリア芽腫、髄芽種、上衣種ならびに神経外肺葉性腫瘍および松果体腫瘍を包含する。
【００８０】
男性生殖器の腫瘍は、限定されるものではないが、前立腺および精巣癌を包含する。女性生殖器の腫瘍は、限定されるものではないが、子宮内膜癌、子宮頸癌、卵巣癌、膣および外陰癌、ならびに子宮肉腫を包含する。
【００８１】
消化管の腫瘍は、限定されるものではないが、肛門癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、膵臓癌、直腸癌、小腸癌、および唾液腺癌を包含する。
【００８２】
尿路の腫瘍は、限定されるものではないが、膀胱癌、陰茎癌、腎臓癌、腎盂癌、尿管癌、尿道癌、ならびに遺伝性および散発性乳頭状腎癌を包含する。
眼の癌は、限定されるものではないが、眼内黒色腫および網膜芽種を包含する。
【００８３】
肝臓癌の例として、限定されるものではないが、肝細胞癌（フィブロラメラ変種（fibrolamellar variant）を伴う、または伴わない肝細胞癌）、胆管癌（肝臓内胆管癌）および混合型肝細胞性胆管癌が挙げられる。
【００８４】
皮膚癌は、限定されるものではないが、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚癌、および非黒色腫皮膚癌を包含する。
【００８５】
頭頚部癌は、限定されるものではないが、咽頭、下咽頭、鼻咽頭または口腔咽頭癌、口唇および口腔癌、および扁平上皮癌を包含する。
【００８６】
リンパ腫は、限定されるものではないが、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ホジキン病および中枢神経系のリンパ腫を包含する。
【００８７】
肉腫は、限定されるものではないが、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫を包含する。
【００８８】
白血病は、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病およびヘアリー細胞白血病を包含する。
【００８９】
本願発明の化合物および方法で治療することができる、線維性増殖性障害、すなわち、細胞外マトリックスの異常形成として、肺線維症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、肝硬変、および糸球体腎炎、糖尿病性腎症、悪性腎硬化症、血栓性微小血管症候群、移植片拒絶反応および糸球体症を含む腎疾患を包含するメサンギウム細胞増殖性障害が挙げられる。
【００９０】
本願発明の化合物を投与することで治療することのできるヒトまたは他の哺乳動物における他の病態は、腫瘍の成長、糖尿病性網膜症を含む網膜症、虚血性網膜静脈閉塞、未熟児網膜症および加齢性黄斑変性症、関節リウマチ、乾癬、ならびに、水疱性類天疱瘡、多形性紅斑および疱疹状皮膚炎を含む、表皮下水疱形成に伴う水疱性障害を包含する。
【００９１】
本願発明の化合物はまた、気道および肺の疾患、胃腸管の疾患、ならびに膀胱および胆管の疾患を予防および治療するのにも用いられてもよい。
【００９２】
上記した障害はヒトで十分に特徴付けられているが、哺乳動物を含む他の動物においても同様の病因で存在し、本願発明の医薬組成物を投与することで治療され得る。
【００９３】
式（Ｉ）の化合物は、単独の治療薬として、またはその組合せが許容できない副作用を惹起しない１または複数の付加的な治療薬と組み合わせて投与されてもよい。この併用療法は、式（Ｉ）の化合物と、１または複数の付加的な治療薬とを含有する単一の治療投与製剤として投与すること、ならびに式（Ｉ）の化合物と、付加的な各々の治療薬をそれ自体別々の治療投与製剤にて投与することを包含する。例えば、式（Ｉ）の化合物および治療薬は、錠剤またはカプセルとして単一の経口投与組成物にて一緒に患者に投与されてもよく、あるいは各薬剤が別々の投与製剤にて投与されてもよい。
【００９４】
分離した投与製剤が用いられる場合、式（Ｉ）の化合物と１または複数の付加的な治療薬は、本質的に、同時に（例えば、一斉に）、または時間をずらして別々に（例えば、連続的に）投与されてもよい。
【００９５】
特に、本願発明の化合物は、他の抗腫瘍剤、例えば、アルキル化剤、抗代謝剤、植物由来の抗腫瘍剤、ホルモン治療剤、トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン誘導体、キナーゼ阻害剤、標的薬物、抗体、インターフェロンおよび／または生物学的応答修飾剤、抗血管形成化合物、および他の抗腫瘍薬物と、固定して、または独立して組み合わせて使用されてもよい。この点で、以下の記載は、本願発明の化合物と組み合わせて使用されてもよい第二の薬剤の一覧であって、それは限定されるものではなく、例示である：
【００９６】
・アルキル化剤は、限定されるものではないが、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、シクロホスファミド、イホスファミド、チオテパ、ラニムスチン、ニムスチン、テモゾロマイド、アルトレタミン、アパジクオン、ブロスタリシン、ベンダムスチン、カルムスチン、エストラムスチン、ホテムスチン、グルホスファミド、マホスファミド、ベンダムスチン、およびミトラクトールを包含し；プラチナ配位のアルキル化化合物は、限定されるものではないが、シスプラチン、カルボプラチン、エプタプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチンおよびサトラプラチンを包含する；
【００９７】
・抗体謝剤は、限定されるものではないが、メトトレキサート、６−メルカプトプリンリボシド、メルカプトプリン、５−フルオロウラシル単独またはロイコボリンとの組み合わせ、テガフール、ドキシフルリジン、カルモフール、シタラビン、シタラビンオクホスフェート、エノシタビン、ゲムシタビン、フルダラビン、５−アザシチジン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、デシタビン、エフロルニチン、エチニルシチジン、シトシンアラビノシド、ヒドロキシウレア、メルファラン、ネララビン、ノラトレキシド、オクホスフィト、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ペリトレキソール、ラルチトレキセド、トリアピン、トリメトレキセート、ビダラビン、ビンクリスチン、およびビノレルビンを包含する；
【００９８】
ホルモン治療剤は、限定されるものではないが、エキセメスタン、ルプロン、アナストロゾール、ドキセルカルシフェロール、ファドロゾール、ホルメスタン、１１−ベータヒドロキシステロイド脱水素酵素１阻害剤、１７−アルファ水酸化酵素／１７,２０ リアーゼ阻害剤、例えば酢酸アビラテロン、５−アルファ還元酵素阻害剤、例えばフィナステリドおよびエプリステリド、抗エストロゲン、例えばクエン酸タモキシフェンおよびフルベストラント、トレルスター、トレミフェン、ラロキシフェン、ラソホキシフェン、レトロゾール、抗−アンドロゲン、例えばビカルタミド、フルタミド、ミフェプリストン、ニルタミド、カソデックスおよび抗−プロゲステロン、ならびにそれらの組み合わせを包含する；
【００９９】
植物由来抗腫瘍剤は、例えば、有糸分裂阻害剤、例えばサゴピロン、イキサベピロンおよびエポチロンＢなどのエポチロン、ビンブラスチン、ビンフルニン、ドセタキセルおよびパクリタキセルより選択される物質を包含する；
【０１００】
・細胞傷害性トポイソメラーゼ阻害剤は、限定されるものではないが、アクラルビシン、ドキソルビシン、アモナファイド、ベロテカン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ジフロモテカン、イリノテカン、トポテカン、エドテカリン、エピムビシン、エトポシド、エキサテカン、ジマテカン、ラルトテカン、ミトキサントロン、ピラムビシン、ピキサントロン、ルビテカン、ソブゾキサン、タフルポシドおよびそれらの組み合わせを包含する；
【０１０１】
免疫学的物質は、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ−１ａ、およびインターフェロンガンマ−ｎ１などのインターフェロン、および他の免疫亢進剤、例えばＬ１９−ＩＬ２および他のＩＬ２誘導体、フィルグラスチム、レンチナン、シゾフィラン、テラシス（TheraCys）、ウベニメックス、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＢＡＭ−００２、ダカルバジン、ダクリズマブ、デニロイキン、ゲムツズマブ、オゾガミシン、イブリツモマブ、イミクイモド、レノグラスチム、レンチナン、メラノーマワクチン（Corixa）、モルグラモスチム、サルグラモスチム、タソネルミン、テセロイキン(tecleukin)、チマラシン、トシツモマブ、ビムリジン、エプラツズマブ、ミツモマブ、オレゴボマブ、ペムツモマブ、およびプロベンゲを包含する；
【０１０２】
生物学的応答修飾剤は、生物の防御機構または組織細胞の生存、増殖または分化などの生物学的応答を修飾し、抗腫瘍活性を有するように方向付ける、薬剤である；かかる薬剤は、例えば、クレスチン、レンチナン、シゾフィラン、ピシバニル、プロムンおよびウベニメックスを包含する；
【０１０３】
抗血管形成化合物は、限定されるものではないが、アシトレチン、アフリベルセプト、アンジオスタチン、アプリジン、アセンタール、アキシチニブ、レセンチン、ベバシズマブ、アラニン酸ブリバニブ、シレングチド、コンブレタスタチン、ＤＡＳＴ、エンドスタチン、フェンレチニド、ハロフギノン、パゾパニブ、ラニビズマブ、レビマスタット、レモバブ、レブリミド、ソラフェニブ、バタラニブ、スクアラミン、スニチニブ、テラチニブ、サリドマイド、ウクライン、およびビタキシンを包含する；
【０１０４】
抗体は、限定されるものではないが、トラスツズマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、イピリムマブ、ルミリキシマブ、カツマキソマブ、アタチセプト、オレゴボマブおよびアレムツズマブを包含する。
例えば、ソラフェニブ、ＤＡＳＴ、ベバシズマブ、スニチニブ、レセンチン、アキシチニブ、アフリベルセプト、テラチニブ、アラニン酸ブリバニブ、バタラニブ、パゾパニブ、およびラニビズマブなどのＶＥＧＦ阻害剤；
【０１０５】
例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、ベクチビックス、ゲフィチニブ、エルロチニブ、およびザクチマなどのＨＧＦＲ（ＨＥＲ１）阻害剤；
例えば、ラパチニブ、トラツズマブ、およびペルツズマブなどのＨＥＲ２阻害剤；
例えば、テムシロリムス、シロリムス／ラパマイシン、およびエベロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤；
ｃ−Ｍｅｔ阻害剤；
ＰＩ３ＫおよびＡＫＴ阻害剤；
ロスコビチンおよびフラボピリドールなどのＣＤＫ阻害剤；
【０１０６】
ＰＬＫ阻害剤、オーロラ阻害剤（例えば、ヘスペラジン）、チェックポイントキナーゼ阻害剤、およびＫＳＰ阻害剤などの紡錘体集合チェックポイント阻害剤および標的化有糸分裂阻害剤
例えば、パノビノスタット、ボリノスタット、ＭＳ２７５、ベリノスタット、およびＬＢＨ５８９などのＨＤＡＣ阻害剤；
ＨＳＰ９０およびＨＳＰ７０阻害剤；
ボルテゾミブおよびカルフィルゾミブなどのプロテアソーム阻害剤；
ソラフェニブなどのＭＥＫ阻害剤およびＲａｆ阻害剤を含むセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤；
例えば、チピファルニブなどのフェルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；
【０１０７】
例えば、ダサチニブ、ニロチビブ、ＤＡＳＴ、ボスチニブ、ソラフェニブ、ベバシズマブ、スニチニブ、ＡＺＤ２１７１、アキシチニブ、アフリベルセプト、テラチニブ、メシル酸イマチニブ、アラニン酸ブリバニブ、パゾパニブ、ラニビズマブ、バタラニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ベクチビックス、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、トラツズマブ、ペルツズマブ、およびｃ−キット阻害剤を含む、チロシンキナーゼ阻害剤；
【０１０８】
ビタミンＤ受容体アゴニスト；
オバトクラックス、オブリメルセンナトリウム、およびゴシポールなどのＢｃｌ−２蛋白阻害剤；
例えば、リツキシマブなどのCD (cluster of differentiation) ２０の受容体アンタゴニスト；
例えば、ゲムシタビンなどのリボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤；
例えば、マパツムマブなどの、腫瘍壊死アポトーシス誘導リガンド受容体１アゴニスト；
【０１０９】
例えば、ｒＥＶ５９８、キサリプロド、塩酸パロノセトロン、グラニセトロン、ジンドール、およびＡＢ−１００１などの５−ヒドロキシトリプタミン受容体アンタゴニスト；
例えば、Ｅ７８２０、ＪＳＭ６４２５、ボロシキシマブおよびエンドスタチンなどのアルファ５−ベータ１インテグリン阻害剤を含む、インテグリン阻害剤；
【０１１０】
例えば、デカン酸ナンドロロン、フルオキシメステロン、アンドロイド、プロスタイド、アンドロムスチン、ビカルタミド、フルタミド、アポシプロテロン、アポフルタミド、酢酸クロルマジノン、アンドロクル、タビ、酢酸シプロテロン、およびニルタミドを含む、アンドロゲン受容体アンタゴニスト；
例えば、アナストロゾール、レトロゾール、テストラクトン、エクセメスタン、アミノグルテチミド、およびホルメスタンなどのアロマターゼ阻害剤；
マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；
【０１１１】
例えば、アリトレチノイン、アムプリゲン、アトラセンタンベキサロテン、ボルテゾミブ、ボセンタン、カルシトリオール、エキスリンド、ホテムスチン、イバンドロン酸、ミルテホシン、ミトキサントロン、Ｉ−アスパラギナーゼ、プロカルバジン、デカルバジン、ヒドロキシカルバミド、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、タザロテン、ベルケード、硝酸ガリウム、カンホスファミド、ダリナパルシン、およびトレチノインを含む、他の抗癌剤。
【０１１２】
好ましい実施態様において、本願発明の化合物は化学療法剤（すなわち、細胞傷害性剤）、抗ホルモン剤および／または他のキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤）、ｍＴＯＲ阻害剤および血管形成阻害剤などの標的療法剤と組み合わせて用いられてもよい。
【０１１３】
本願発明の化合物はまた、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて癌治療に用いられてもよい。
【０１１４】
さらには、式（Ｉ）の化合物はその物で、または組成物にて、当該分野にて周知である、研究または診断において、あるいは分析用標体等として利用されてもよい。
【０１１５】
医薬組成物および治療方法
もう一つ別の態様において、本願発明は、上記した式（Ｉ）の化合物を、医薬上許容される担体と一緒に含む、医薬組成物を提供する。
【０１１６】
さらにもう一つ別の態様において、本願発明は医薬組成物の製法を提供する。該方法は、上記の少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物を、少なくとも一つの医薬上許容される担体と合わせ、その得られた組み合わせを適当な投与形態とする工程を包含する。
【０１１７】
式（Ｉ）の活性成分は、全身および／または局所的に作用しうる。この目的のために、該成分は、適当な方式にて、例えば、経口的、非経口的、経肺的、経鼻的、舌下的、舌側的、頬側的、経直腸的、経皮的、結膜的、経眼的に、あるいはインプラントまたはステントとして、適用され得る。
【０１１８】
これらの適用経路では、式（Ｉ）の活性成分は適当な適用形態にて投与され得る。
有用な経口適用形態は、活性成分を即時に、および／または修飾形態にて放出する、例えば、錠剤（非被覆錠および、例えば腸溶性コーティング剤での被覆錠）、カプセル、糖衣錠、顆粒、ペレット、散剤、エマルジョン、懸濁液、液剤およびエアロゾルなどの、適用形態を包含する。
【０１１９】
非経口的適用は、吸収工程（静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰髄内に）を回避して、または吸収工程（筋肉内、皮下、皮内、経皮的または腹腔内）を含めて実施され得る。有用な非経口適用形態は、液剤、懸濁液、エマルジョン、凍結乾燥製剤および滅菌散剤の形態の注射および注入用製剤を包含する。
【０１２０】
他の適用経路に適する形態は、例えば、吸入用剤形（粉末吸入器、噴霧器を含む）、点鼻剤、液剤またはスプレー、舌側に、舌下にまたは頬側に投与されるべき錠剤またはカプセル、坐剤、耳および眼用製剤、膣用カプセル、水性懸濁液（ローション、振盪混合液）、親油性懸濁液、軟膏、クリーム、乳液、ペースト、散布粉末、インプラントまたはステントを包含する。
【０１２１】
好ましい実施態様において、上記の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は経口投与に適する形態にて提供される。もう一つ別の好ましい実施態様において、上記の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は静脈内投与に適する形態にて提供される。
【０１２２】
式（Ｉ）の活性成分は、自体公知の方法にて列挙されている適用形態に変換され得る。このことは不活性な非毒性の医薬的に適する賦形剤を用いて行われる。これは、とりわけ、担体（例えば、微結晶セルロース）、溶媒（例えば、液体ポリエチレングリコール）、乳化剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム）、分散剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成および天然の生体ポリマー（例えば、アルブミン）、安定化剤（例えば、アスコルビン酸などの酸化防止剤）、着色剤（例えば、酸化鉄などの無機色素）または矯味および／または矯臭剤を包含する。
【０１２３】
もう一つ別の実施態様において、本願発明は、細胞増殖性障害の治療法であって、かかる治療を必要とする患者に有効量の上記した式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、細胞増殖性障害は癌である。
【０１２４】
さらにもう一つ別の態様において、本願発明は細胞増殖性障害の治療または予防用の医薬組成物を製造するための上記した式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。ある実施態様において、細胞増殖性障害は癌である。
【０１２５】
本願発明の化合物が医薬としてヒトおよび動物に投与される場合、該化合物はそれだけで、または例えば、０.１〜９９.５％（より好ましくは、０.５〜９０％）の活性成分を医薬上許容される担体と組み合わせて含有する医薬組成物として投与され得る。
【０１２６】
選択した投与経路とは関係なく、適当な水和形態にて用いてもよい本願発明の化合物、および／または本願発明の医薬組成物は、当業者に公知の慣用的手段により医薬上許容される剤形に処方される。
【０１２７】
本願発明の医薬組成物における活性成分の実際の用量レベルおよび投与期間は、個々の患者、組成物および投与経路について所望の治療応答を達成するのに効果的な量の活性成分が得られ、患者にとって毒性でないように変化させてもよい。一例としての用量範囲が０.０１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日または０.１〜１５０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１２８】
特定の実施態様において、本願発明の化合物は慣用的な癌化学治療薬との併用療法にて用いられ得る。白血病および他の腫瘍の慣用的な治療方法は、放射線照射、薬物またはその組み合わせを包含する。
【０１２９】
本願発明の化合物の治療的に効果的な抗増殖量または予防的に効果的な抗増殖量の決定は、既知の方法を用い、同様の環境下で得られる結果を観察することで、当業者としての医者または獣医（顧問医）により容易になされうる。用量は、顧問医の判断；治療される症状の重篤度および使用される特定の化合物にて、患者の要求に応じて変化してもよい。治療的に効果的な抗増殖量または用量、および予防的に効果的な抗増殖量または用量を決定するにおいて、限定されるものではないが、関連する特定の細胞増殖性障害；特定の薬剤の薬力学的特性ならびにその投与方法および経路；所望の治療期間；哺乳動物の種類；その大きさ、年齢および全体的な健康；関与する特定の疾患；疾患の程度、または疾患の関与または重篤度；個々の患者の応答；投与される個々の化合物；投与方法；投与される製剤の生物学的利用特性；選択される投与計画；併用療法の種類（すなわち、本願発明の化合物の他の併用治療剤との相互作用）；および他の関連する環境を含む、多くの要因が顧問医により考慮される。
【０１３０】
治療は最適用量よりも少ない用量の化合物で開始され得る。その後、その環境下で最適な効果が達成されるまで、用量を少しずつ増加させてもよい。便宜上、日用量の全量は分割され、所望により一日の間に少しずつ投与されてもよい。本願発明の化合物の治療的に効果的な抗増殖量および予防的に効果的な抗増殖量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日（一日当たりの体重１ｋｇに対するミリグラム数）〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日で変化すると考えられる。
【０１３１】
本願発明にとってその化合物の好ましい用量は、患者が耐えることができ、重度の副作用を惹起しない、最大用量である。例示的に、本願発明の化合物は約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。上記した値の中間にある範囲も本願発明の一部を形成することを意図とする。
【０１３２】
特記しない限り、以下の試験および実施例における％は重量％であり；部は重量部である。溶媒割合、希釈割合および液体／液体溶液にて報告される濃度は、各々、容量に基づくものである。
【０１３３】
Ａ．実施例
略語および頭字語：
Ａｃ              アセチル
ａｑ．            水性（溶液）
ｂｒ．ｓ          ブロードなシングレット（ＮＭＲ）
ｃａｔ．          触媒的
ｃｏｎｃ．        濃縮した
ｄ                ダブレット（ＮＭＲ）
ＤＣＩ            直接化学イオン化（ＭＳ）
ｄｄ              ダブレットのダブレット（ＮＭＲ）
ＤＭＦ            Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ          ジメチルスルホキシド
ＤＭＳＯ−ｄ６    ジメチルスルホキシド−ｄ６
ＥＩ              電子衝撃イオン化（ＭＳ）
ｅｑｕｉｖ．      当量（複数も可）
ＥＳＩ            電子噴射イオン化（ＭＳ）
Ｅｔ              エチル
ＧＣ−ＭＳ        ガスクロマトグラフィーを連結した質量分析
ｈ                時間（複数も可）
１Ｈ-ＮＭＲ        プロトン核磁気共鳴分析
ＨＯＡｃ          酢酸
ＨＰＬＣ          高性能／高圧液体クロマトグラフィー
ＬＣ−ＭＳ        液体クロマトグラフィーを連結した質量分析
ｍ                マルチプレット（ＮＭＲ）
Ｍｅ              メチル
ｍｉｎ            分（複数も可）
ＭＳ              質量分析
ｍ／ｚ            質量／電荷の割合
ＮＢＳ            Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＣＳ            Ｎ−クロロスクシンイミド
ＮＭＰ            Ｎ−メチルピロリジン−２−オン
ｏｆ  ｔｈ．      理論値の値（化学収量）
ｐ−ＴｓＯＨ      パラトルエンスルホン酸
ｑ                カルテット（ＮＭＲ）
Ｒｆ              ＴＬＣ保持因子
ＲＰ              逆相（ＨＰＬＣ）
ｒｔ              室温
Ｒｔ              保持時間（ＨＰＬＣ）
ｓ                シングレット（ＮＭＲ）
ＳＥＭ            ２−（トリメチルシリル）エトキシメチル
ｓｅｐｔ          セプテット（ＮＭＲ）
ＴＢＡＦ          テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド
ｔＢｕ            ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ            トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ            テトラヒドロフラン
ＴＬＣ            薄層クロマトグラフィー
ｔ                トリプレット（ＮＭＲ）
ｖ／ｖ            容量／容量の割合
ｗ／ｖ            重量／容量の割合
ｗ／ｗ            重量／重量の割合
【０１３４】
ＬＣ−ＭＳおよびＧＣ−ＭＳ法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Waters Alliance 2795を備えたMicromass ZQ；カラム：Phenomenex Synergi 2.5u MAX-RP 100A Mercury、２０ｍｍｘ４ｍｍ；溶出液Ａ：１リットルの水＋０.５ｍＬの５０％ギ酸、溶出液Ｂ：１リットルのアセトニトリル＋０.５ｍＬの５０％ギ酸；勾配：０.０分の９０％Ａ→０.１分の９０％Ａ→３.０分の５％Ａ→４.０分の５％Ａ→４.０１分の９０％Ａ；流速：２ｍＬ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【０１３５】
方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Waters UPLC Acquity を備えたMicromass Quattro Premier；カラム：Thermo Hypersil GOLD 1.9u、５０ｍｍｘ１ｍｍ；溶出液Ａ：１Ｌの水＋０.５ｍＬの５０％ギ酸、溶出液Ｂ：１Ｌのアセトニトリル＋０.５ｍＬの５０％ギ酸；勾配：０.０分の９０％Ａ→０.１分の９０％Ａ→１.５分の１０％Ａ→２.２分の１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.３３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【０１３６】
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Agilent 1100 Seriesを備えたMicromass Quattro Micro；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3u、２０ｍｍｘ４ｍｍ；溶出液Ａ：１Ｌの水＋０.５ｍＬの５０％ギ酸、溶出液Ｂ：１Ｌのアセトニトリル＋０.５ｍＬの５０％ギ酸；勾配：０.０分の１００％Ａ→３.０分の１０％Ａ→４.０分の１０％Ａ→４.０１分の１００％Ａ（流速 ２.５ｍＬ／分）→５.００分の１００％Ａ；オーブン：５０℃；流速：２ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【０１３７】
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Waters Acquity SQD UPLC System；カラム：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8u、５０ｍｍｘ１ｍｍ；溶出液Ａ：１Ｌの水＋０.２５ｍＬの９９％ギ酸、溶出液Ｂ：１Ｌのアセトニトリル＋０.２５ｍＬの９９％ギ酸；勾配：０.０分の９０％Ａ→１.２分の５％Ａ→２.０分の５％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ
【０１３８】
方法５（ＧＣ−ＭＳ）：
装置：Micromass GCT、GC 6890；カラム：Restek RTX-35、１５ｍｘ２００μｍｘ０.３３μｍ；ヘリウムの定常流：０.８８ｍＬ／分；オーブン：７０℃；入口：２５０℃；勾配：７０℃、３０℃／分→３１０℃（３分間保持）
【０１３９】
出発物質および中間体：
実施例１Ａ
３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド
【化２０】
0005674211.tif 000021
【０１４０】
テトラヒドロフラン（６００ｍｌ）をアルゴン雰囲気下で−７８℃に冷却した。この温度で、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムのｎ−ペンタン（２００ｍｌ）中１．７Ｍ溶液を滴下した。−７８℃で１５分経過した後、２２.４ｇ（１０６.１ミリモル）の５−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−インダゾールのＴＨＦ（３００ｍｌ）中溶液を、溶液の温度が−７０℃を越えない速度で滴下した。該混合物を３０分間攪拌し、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２４.５ｍｌ）を滴下した。２０分後、冷却浴を取り外し、攪拌を１時間続け、水（２５０ｍｌ）を注意して添加した。該混合物を酢酸エチル（５００ｍｌ）で数回抽出した。合わせた有機層を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して１８.５ｇの粗３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒドを得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３.１３（ｂｒｓ，１Ｈ）、１０.０１（ｓ，１Ｈ）、８.４０（ｓ，１Ｈ）、７.８１（ｄ，１Ｈ）、７.５８（ｄ，１Ｈ）、２.５６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１４１】
実施例２Ａ
（２Ｅ）−２−［（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化２１】
0005674211.tif 000022
【０１４２】
３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例１Ａ、５.０ｇ、３１.２ミリモル）、ナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロパ−１−エン−２−オレート（３.６１ｇ、３４.３ミリモル）、酢酸（２.２３ｍｌ、３９ミリモル）およびピペリジン（０.３１ｍｌ、３.１２ミリモル）の、４Åモレキュラーシーブを含有する乾燥ジクロロメタン（２５０ｍｌ）中混合物を１２時間還流下で攪拌した。冷却後、沈殿物が形成し、それを濾過により集め、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液および水で洗浄した。固体をエタノールに溶かし、モレキュラーシーブを濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルおよび炭酸ナトリウム飽和水溶液で処理した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮して表記化合物（３.５ｇ、理論値の５０％）を淡黄色固体として得、それを次の工程にてさらに精製することなく用いた。ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３.１８（ｂｒｓ，１Ｈ）、８.５２（ｓ，１Ｈ）、８.４９（ｓ，１Ｈ）、８.１９（ｄ，１Ｈ）、７.６９（ｄ，１Ｈ）、２.５５（ｂｒｍ，６Ｈ）ｐｐｍ
【０１４３】
実施例３Ａ
３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド
【化２２】
0005674211.tif 000023
【０１４４】
１,４−ジオキサン（６４０ｍｌ）に溶かした、１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド［ＵＳ  ２００５／０２２７９６８−Ａ１（中間体１）に記載の調製物］（２０ｇ、１３７ミリモル）を水酸化ナトリウム（８２ｇ、２０５３ミリモル）の水（６４０ｍｌ）中溶液で処理した。ついで、ヨウ素（４３.２ｇ、１７０ミリモル）を加え、該混合物を室温で１時間攪拌した。その後で、別のバッチのヨウ素（４３.２ｇ、１７０ミリモル）を加え、該混合物を再び室温で１時間攪拌した。混合物を減圧下で濃縮して沈殿固体を得た。濾過して、該沈殿物を水で洗浄し、デシケータ中、酸化リン上、高真空下で１２時間乾燥させ、表記化合物（２６.６ｇ、理論値の７２％）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝９.８１（ｓ，１Ｈ）、７.７４（ｄ，１Ｈ）、７.４０（ｄ，１Ｈ）、７.３２（ｄｄ，１Ｈ）ｐｐｍ
【０１４５】
実施例４Ａ
３−ヨード−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド
【化２３】
0005674211.tif 000024
【０１４６】
ＤＭＦ（１００ｍｌ）に溶かした、３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例３Ａ、２１.６ｇ、７９.５ミリモル）、および炭酸セシウム（３１.１ｇ、９５.４ミリモル）を、０℃で、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド（１５.９ｇ、９５.４ミリモル）でゆっくりと処理した。該混合物を室温に加温し、攪拌を１２時間続けた。ついで、固体を濾過し、濾液を蒸発乾固させ、表記化合物（２６.４ｇ、理論値の８２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１０.２２（ｓ，１Ｈ）、８.２６（ｄ，１Ｈ）、８.０９（ｄｄ，１Ｈ）、８.０５（ｄ，１Ｈ）、５.９２（ｓ，２Ｈ）、３.６５（ｔ，２Ｈ）、０.９１（ｔ，２Ｈ）、０.００（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ
【０１４７】
実施例５Ａ
５−（１,３−ジオキソラン−２−イル）−３−ヨード−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−インダゾール
【化２４】
0005674211.tif 000025
【０１４８】
トルエン（１００ｍｌ）中の３−ヨード−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例４Ａ、６.１１ｇ，１５.２ミリモル）、エチレングリコール（２.８２ｇ，４５.６ミリモル）およびｐ−トルエンスルホン酸（微量）をディーン−スターク（Dean-Stark）トラップを用いて一夜加熱還流した。冷却後、該混合物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で２回抽出し、ブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。残りの物質を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水の勾配）に付して精製し、３.９４ｇ（理論値の５８％）の純粋な表記化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７.９０（ｄ，１Ｈ）、７.６９（ｄｄ，１Ｈ）、７.６３（ｓ，２Ｈ）、５.８７（ｓ，２Ｈ）、４.２３（ｍ，２Ｈ）、４.０９（ｍ，２Ｈ）、３.６２（ｔ，２Ｈ）、０.８９（ｔ，２Ｈ）、０.００（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ
【０１４９】
実施例６Ａ
５−（１,３−ジオキソラン−２−イル）−３−メトキシ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−インダゾール
【化２５】
0005674211.tif 000026
【０１５０】
５−（１,３−ジオキソラン−２−イル）−３−ヨード−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−インダゾール（実施例５Ａ、３００ｍｇ、０.６７２ミリモル）、炭酸セシウム（４３８ｍｇ、１.３４４ミリモル）および３,４,７,８−テトラメチル−１,１０−フェナントロリン（３２ｍｇ、０.１３４ミリモル）をメタノール（４ｍｌ）中に含有するマイクロ波フラスコに、ヨウ化銅（Ｉ）（１３ｍｇ、０.０６７ミリモル）を添加した。該フラスコを超音波浴に入れ、アルゴンを５分間にわたって通気した。ついで、該フラスコを密封し、マイクロ波を照射装置を用いて１４０℃に２時間加熱した。該反応混合物をセライトを通して濾過し、それをアセトニトリルで洗浄した。このスケールでの７回の反応の濾液を全て集め、分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水の勾配）に付して精製し、９４０ｍｇ（理論値の５７％）の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２.５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７.７７（ｂｒｓ，１Ｈ）、７.７３（ｄ，１Ｈ）、７.５９（ｄｄ，１Ｈ）、５.９１（ｓ，１Ｈ）、５.６７（ｓ，２Ｈ）、４.２０−４.１７（ｍ，２Ｈ）、４.１１（ｓ，３Ｈ）、４.０７−４.０４（ｍ，２Ｈ）、３.６１（ｔ，２Ｈ）、０.８９（ｔ，２Ｈ）、０.０１（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ
【０１５１】
実施例７Ａ
３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド
【化２６】
0005674211.tif 000027
【０１５２】
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の５−（１,３−ジオキソラン−２−イル）−３−メトキシ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−インダゾール（実施例６Ａ、９４０ｍｇ、２.６８２ミリモル）およびエタン−１,２−ジアミン（８０５ｍｇ、１３.４１ミリモル）に、フッ化テトラブチルアンモニウム溶液（１２.９８ｍｌ、１２.９８ミリモル、ＴＨＦ中１.０Ｍ）を加えた。該反応混合物を５０℃で３時間加熱した。この時間の経過後、フッ化テトラブチルアンモニウム溶液（１２.９８ｍｌ、１２.９８ミリモル、ＴＨＦ中１.０Ｍ）を再び加え、変換が完了するまで、加熱をさらに１２時間続けた。該混合物を酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム飽和水溶液の間で分配した。層を分離し、水層を酢酸エチルで２回洗浄した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過した後、溶媒を蒸発させ、残りの固体をシリカゲル上のクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチルの勾配）に付して精製し、５５６ｍｇ（理論値の９４％）の中間化合物、５−（１,３−ジオキソラン−２−イル）−３−メトキシ−１Ｈ−インダゾールを得た［ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１１（Ｍ＋Ｈ）＋］。この物質をエタノール（３７ｍｌ）に溶かし、１Ｎ塩酸（９.４ｍｌ）で処理し、９０℃に３０分間加熱した。この期間の経過後、該混合物を蒸発乾固させ、こうして得られた粗アルデヒドをさらに精製することなく次の工程に用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１７７（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１５３】
実施例８Ａ
（２Ｅ）−２−［（３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化２７】
0005674211.tif 000028
【０１５４】
３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例７Ａ、３００ｍｇ、１.７０４ミリモル）、ナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロパ−１−エン−２−オレート（１５１ｍｇ、１.４４２ミリモル）、酢酸（９３μｌ、１.６３９ミリモル）およびピペリジン（１１ｍｇ、０.１３１ミリモル）の乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）中混合物を水分離装置を用いて一夜還流した。冷却後に、沈殿物が形成され、それを濾過により除去した。こうして得られた濾液を濃縮し、残渣を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水の勾配）に付して精製し、４３ｍｇ（理論値の１０％）の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１５５】
実施例９Ａ
６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド
【化２８】
0005674211.tif 000029
【０１５６】
５−ブロモ−６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール［ＷＯ  ２００５／０８５２２７−Ａ１、実施例１０４ｃに記載されている調製物；また、ＣＡＳ登録番号［８６４７７３−６６−０］としても入手可能；３０ｇ、１３１ミリモル］のＴＨＦ（５２５ｍｌ）中溶液を−４５℃に冷却した。塩化メチルマグネシウムのＴＨＦ中溶液（３Ｍ；５０.２ｍｌ、１５１ミリモル）を−４５℃で滴下し、得られた溶液をこの温度で４０分間攪拌した。注入ポンプを用い、温度が−４０℃を越えないように、２−ブチルリチウム溶液（２５３ｍｌ、３５４ミリモル、シクロヘキサン中１.４Ｍ）を添加した。得られた混合物を−４０℃で３０分間攪拌し、ついでＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０.２ｍｌ、３９３ミリモル）を、温度を−４０℃に維持しながら、滴下した。得られた混合物を−４０℃で３０分間攪拌し、ついで室温にまで加温させ、２.８Ｌの容量の５℃に冷却した（氷水浴）２Ｎ塩酸にゆっくりと注いだ。該混合物を酢酸エチルで数回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶かし、シリカゲル上のクロマトグラフィー（溶出液：ペンタン／酢酸エチル  ６：４  ｖ／ｖ）に付して精製し、１９.６ｇ（理論値の７８％）の表記化合物を淡黄色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１７９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３.１４（ｓ，１Ｈ）、１０.１７（ｓ，１Ｈ）、８.３３（ｄ，１Ｈ）、７.３７（ｄ，１Ｈ）、２.５４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１５７】
実施例１０Ａ
（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化２９】
0005674211.tif 000030
【０１５８】
実施例２Ａに記載の操作に従って、６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例９Ａ、２.７４ｇ、１５.５ミリモル）およびナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロパ−１−エン−２−オレート（２.６ｇ（２４.８ミリモル）を用いて表記化合物を調製し、１.６ｇ（理論値の４２％）の粗生成物を得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４４（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１５９】
実施例１１Ａ
４,４−ジフルオロ−３−オキソブタンニトリル
【化３０】
0005674211.tif 000031
【０１６０】
火炎乾燥させたフラスコに、不活性気体雰囲気下にて、乾燥ＴＨＦ（１９ｍｌ）中のｎ−ブチルリチウム溶液（３.８ｍｌ、６.１ミリモル、ヘキサン中１.６Ｍ）を充填し、−７８℃に冷却した。次に、アセトニトリル（０.２８ｍｌ、５.３ミリモル）をゆっくりと加え、得られた混合物を−７０℃で１時間攪拌した。ついで、ジフルオロ酢酸エチル（０.４ｍｌ、３.８ミリモル）を、温度を−６９℃未満に維持しながら、５分間にわたってゆっくりと添加した。反応混合物を−４５℃で２時間攪拌し、ついで温度を−２０℃未満に維持しながら塩酸（２Ｍ、４.８ｍｌ）を添加することでクエンチさせた。得られた透明溶液を室温にまで加温させ、ついで減圧下で濃縮した。こうして得られた粗生成物（１.０ｇ、４６％純度、理論値の９９％）を−２１℃で貯蔵し、次の工程にさらに精製することなく用いた。
ＧＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.４９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１９（Ｍ）＋
【０１６１】
実施例１２Ａ
６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド
【化３１】
0005674211.tif 000032
【０１６２】
６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニトリル［商業的に入手可能；ＥＰ  １５１０５１６−Ａ１（製造例８２）に記載されている調製物；４.８ｇ、３０ミリモル）］の無水トルエン（１５０ｍｌ）中スラリーを−４０℃に冷却した。不活性気体の雰囲気下で、水素化ジイソブチルアルミニウム溶液（４８ｍｌ、７２ミリモル、トルエン中１.５Ｍ）を３０分間にわたって添加し、得られた混合物を−４０℃で３時間攪拌した。ついで、酢酸エチル（３０ｍｌ）を加え、該混合物を−４０℃でさらに２０分間攪拌し、つづいて水性酒石酸（１Ｍ、３０ｍｌ）を滴下した。該混合物を０℃に加温させ、この温度で濾過した。濾液を酢酸エチルで数回抽出し、合した有機相をその後で炭酸水素ナトリウム飽和水溶液およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。こうして得られた粗生成物（２.６０ｇ、理論値の５３％）をさらに精製することなく次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１６５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１６３】
実施例１３Ａ
（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化３２】
0005674211.tif 000033
【０１６４】
表記化合物を６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例１２Ａ、３.７ｇ、８０％純度、１８.０ミリモル）およびナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロパ−１−エン−２−オレート（２.０８ｇ、１９.８４ミリモル）より、実施例２Ａに記載の操作と同様にして調製し、２.５ｇ（理論値の６１％）の生成物を得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝０.７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３.９０（ｓ，１Ｈ）、８.５９（ｓ，１Ｈ）、８.４６（ｓ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，１Ｈ）、２.５（ｂｒｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１６５】
実施例１４Ａ
１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノール
【化３３】
0005674211.tif 000034
【０１６６】
５−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド（１５ｇ、７３.９ミリモル）のジエチルエーテル（１００ｍｌ）中溶液に、０℃にて、臭化エチルマグネシウム溶液（２７.１ｍｌ、８１.３ミリモル、ジエチルエーテル中３Ｍ）をゆっくりと添加した。０℃で３時間攪拌した後、水（２０ｍｌ）を注意して添加すると、白色沈殿物が形成された。該固体を濾過し、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで洗浄した。合わせた濾液をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。こうして得られた粗表記化合物（１６.１ｇ、理論値の９３％）をさらに精製することなく次の工程に使用した。
ＧＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４.５４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３２（Ｍ）＋
【０１６７】
実施例１５Ａ
１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノン
【化３４】
0005674211.tif 000035
【０１６８】
１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノール（実施例１４Ａ、１０ｇ、４２.９ミリモル）、中性アルミナ（８.７５ｇ、８５.８ミリモル）およびクロロクロム酸ピリジニウム（１８.５ｇ、８５.８ミリモル）のジクロロメタン（１００ｍｌ）中混合物を室温で４時間攪拌した。ついで、該混合物をシリカゲル（０.０６−０.２ｍｍ、２００ｇ）を介して濾過し、それをジクロロメタン（１０００ｍｌ）で十分に洗浄した。合わせた濾液をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。こうして得られた粗表記化合物（８.６ｇ、理論値の８７％）をさらに精製することなく次の工程に使用した。
ＧＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４.３０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３０（Ｍ）＋
【０１６９】
実施例１６Ａ
５−ブロモ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール
【化３５】
0005674211.tif 000036
【０１７０】
１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−プロパノン（実施例１５Ａ、７.５０ｇ、３２.５ミリモル）の１−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ；１００ｍｌ）中溶液をヒドラジン水和物（３.２５ｇ、３.１６ｍｌ、６４.９ミリモル）で処理し、還流温度で１６時間攪拌した。冷却した後、該混合物を氷と水の混合物中に注いだ。沈殿物を濾過で集め、水で十分に洗浄し、４.５６ｇ（理論値の６２％）の表記化合物を灰白色固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１７１】
実施例１７Ａ
３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド
【化３６】
0005674211.tif 000037
【０１７２】
５−ブロモ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール（実施例１６Ａ、６.９０ｇ、３０.７ミリモル）のＴＨＦ（３００ｍｌ）中溶液を−７８℃に冷却した。この温度で、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム溶液（６３.１ｍｌ、１０７ミリモル、ｎ−ペンタン中１.７Ｍ）をゆっくりと添加した。該混合物を−７８℃で３０分間攪拌し、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（８０.０ｍｌ）をゆっくりと加えた。冷却浴を取り外し、室温に達するまで攪拌を続けた。ついで、水（２５０ｍｌ）を注意して加えた。該混合物を酢酸エチル（５００ｍｌ）で数回抽出した。合わせた有機層を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、４.５ｇ（理論値の８４％）の粗表記化合物を得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１７５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１７３】
実施例１８Ａ
（２Ｅ）−２−［（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル
【化３７】
0005674211.tif 000038
【０１７４】
３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例１７Ａ、０.５０ｇ、２.８７ミリモル）、ナトリウム（１Ｚ）−１−シアノプロパ−１−エン−２−オレート（０.３３ｇ、３.１６ミリモル）、酢酸（０.２１ｍｌ、３.６ミリモル）およびピペリジン（０.０２８ｍｌ、０.２９ミリモル）の、４Åモレキュラーシーブ含有の乾燥ジクロロメタン（２５ｍｌ）中混合物を１６時間還流下で攪拌した。冷却すると、沈殿物が形成され、それを濾過で集め、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液および水で洗浄した。固体をエタノールに溶かし、モレキュラーシーブを濾去した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルおよび炭酸ナトリウム飽和水溶液で処理した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮して、表記化合物（０.６０ｇ、理論値の８８％）を淡黄色固体として得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３.１７（ｂｒｓ，１Ｈ）、８.５９（ｓ，１Ｈ）、８.５１（ｓ，１Ｈ）、８.１７（ｄ，１Ｈ）、７.６７（ｄ，１Ｈ）、２.９７（ｑ，２Ｈ）、２.５５（ｂｒｍ，３Ｈ）、１.３６（ｔ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１７５】
調製例：
実施例１
３,６−ジメチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化３８】
0005674211.tif 000039
【０１７６】
（２Ｅ）−２−［（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例２Ａ、１８０ｍｇ、０.８０ミリモル）および３−メチル−１,２−イソオキサゾール−５−アミン（７８ｍｇ、０.８０ミリモル）のプロパン−２−オール（３.６ｍｌ）中混合物を還流温度で一夜攪拌した。ついで、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡの勾配）に付して精製し、１５３ｍｇ（理論値の６３％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝０.９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３０６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１２.６４（ｂｒｓ，１Ｈ）、１０.７９（ｓ，１Ｈ）、７.５６（ｓ，１Ｈ）、７.４３（ｄ，１Ｈ）、７.１９（ｄ，１Ｈ）、４.９８（ｓ，１Ｈ）、２.４８（ｓ，３Ｈ）、２.１３（ｓ，３Ｈ）、１.６９（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１７７】
実施例２
６−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化３９】
0005674211.tif 000040
【０１７８】
（２Ｅ）−２−［（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例２Ａ、５０ｍｇ、０.２２ミリモル）および１,２−オキサゾール−５−アミン（１９ｍｇ、０.２２ミリモル）のプロパン−２−オール（１.０ｍｌ）中混合物を還流温度で一夜攪拌した。ついで、該反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡの勾配）に付して精製し、４５ｍｇ（理論値の６９％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝０.８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１２.６３（ｂｒｓ，１Ｈ）、１０.９１（ｓ，１Ｈ）、８.１４（ｓ，１Ｈ）、７.５５（ｓ，１Ｈ）、７.４３（ｄ，１Ｈ）、７.１９（ｄ，１Ｈ）、５.０２（ｓ，１Ｈ）、２.４８（ｓ，３Ｈ）、２.１６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１７９】
実施例３
４−（３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−６−メチル−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化４０】
0005674211.tif 000041
【０１８０】
（２Ｅ）−２−［（３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例８Ａ、４３ｍｇ、０.１７８ミリモル）を１,２−オキサゾール−５−アミンで実施例２に記載の操作に従って処理した。粗生成物を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水の勾配）に付して精製し、３ｍｇ（理論値の５％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.６２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３０８（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１１.９１（ｂｒｓ，１Ｈ）、１０.９１（ｂｒｓ，１Ｈ）、８.１５（ｓ，１Ｈ）、７.４０（ｂｒｓ，１Ｈ）、７.３４（ｄ，１Ｈ）、７.２３（ｄｄ，１Ｈ）、４.９９（ｓ，１Ｈ）、３.９９（ｓ，３Ｈ）、２.４８（ｓ，３Ｈ）、２.１６（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１８１】
実施例４
４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３,６−ジメチル−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化４１】
0005674211.tif 000042
【０１８２】
（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例１０Ａ、１００ｍｇ、０.４１１ミリモル）および３−メチル−１,２−イソオキサゾール−５−アミン（４０.３ｍｇ、０.４１１ミリモル）のプロパン−２−オール（２.０ｍｌ）中混合物を還流温度で一夜攪拌した。酢酸（０.２ｍｌ）を加え、該混合物をさらに１時間還流温度で攪拌した。ついで、該反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（メタノール／水＋０.１％ＴＦＡの勾配）に付して精製し、１９.８ｍｇ（理論値の１５％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１２.７１（ｂｒｓ，１Ｈ）、１０.８２（ｓ，１Ｈ）、７.６０（ｄ，１Ｈ）、７.２３（ｄ，１Ｈ）、５.１８（ｓ，１Ｈ）、２.４６（ｓ，３Ｈ）、２.１４（ｓ，３Ｈ）、１.７２（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１８３】
実施例５
６−（ジフルオロメチル）−４−（６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−メチル−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化４２】
0005674211.tif 000043
【０１８４】
６−フルオロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例９Ａ、２００ｍｇ、１.１２２ミリモル）、４,４−ジフルオロ−３−オキソブタンニトリル（実施例１１Ａ、１４７ｍｇ、１.２３４ミリモル）、酢酸（０.０８ｍｌ、０.７０ミリモル）およびピペリジン（１２μｌ、０.０５６ミリモル）の、４Åモレキュラーシーブ含有の乾燥ジクロロメタン（４ｍｌ）中混合物を還流下で１２時間攪拌した。ついで、該混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をアルゴン下で２−プロパノール（２ｍｌ）および酢酸（１ｍｌ）に溶かした。３−メチル−１,２−イソオキサゾール−５−アミン（１１０ｍｇ、１.１２２ミリモル）を加え、該溶液を還流下で１２時間攪拌した。冷却して、該混合物を蒸発乾固させ、該残渣を４Åモレキュラーシーブ含有のＴＨＦ（４ｍｌ）に溶かした。フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム溶液（ＴＢＡＦ、ＴＨＦ中１Ｎ、４.５ｍｌ）を添加し、該混合物を５５℃で１２時間攪拌した。再び、ＴＢＡＦ溶液（ＴＨＦ中１Ｎ、４.５ｍｌ）を加え、該混合物を５５℃でさらに１２時間攪拌した。冷却して、該混合物を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶かした。有機層をブラインで、ついで水で数回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（メタノール／水＋０.１％ＴＦＡの勾配）に付して精製し、２９ｍｇ（理論値の７％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１２.７７（ｂｒｓ，１Ｈ）、１１.５８（ｓ，１Ｈ）、７.６９（ｄ，１Ｈ）、７.２８（ｄ，１Ｈ）、６.９３（ｔ，１Ｈ，２ＪＨ，Ｆ＝５２Ｈｚ）、５.３８（ｓ，１Ｈ）、２.４７（ｓ，３Ｈ）、１.７４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１８５】
実施例６
４−（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３,６−ジメチル−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化４３】
0005674211.tif 000044
【０１８６】
（２Ｅ）−２−［（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例１８Ａ，１００ｍｇ，０.４２ミリモル）を実施例２に記載の操作に従って３−メチル−１,２−オキサゾール−５−アミンで処理した。粗生成物を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（メタノール／水＋０.１％ＴＦＡの勾配）に付して精製し、５１ｍｇ（理論値の３８％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１２.６３（ｂｒｓ，１Ｈ）、１０.７９（ｂｒｓ，１Ｈ）、７.５９（ｓ，１Ｈ）、７.４４（ｄ，１Ｈ）、７.１７（ｄｄ，１Ｈ）、４.９８（ｓ，１Ｈ）、２.９２（ｑ，２Ｈ）、２.１４（ｓ，３Ｈ）、１.７０（ｓ，３Ｈ）、１.３１（ｔ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１８７】
実施例７
４−（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３,６−ジメチル−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化４４】
0005674211.tif 000045
【０１８８】
（２Ｅ）−２−［（６−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−５−イル）メチリデン］−３−オキソブタンニトリル（実施例１３Ａ，１００ｍｇ，０.４４ミリモル）を実施例２に記載の操作に従って３−メチル−１,２−オキサゾール−５−アミンで処理した。粗生成物を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（メタノール／水＋０.１％ＴＦＡの勾配）に付して精製し、５５ｍｇ（理論値の４１％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３.１５（ｂｒｓ，１Ｈ）、１０.８７（ｂｒｓ，１Ｈ）、８.０９（ｓ，１Ｈ）、７.６８（ｄ，１Ｈ）、７.３５（ｄｄ，１Ｈ）、５.１９（ｓ，１Ｈ）、２.１４（ｓ，３Ｈ）、１.７３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１８９】
実施例８
６−（ジフルオロメチル）−３−メチル−４−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−４,７−ジヒドロイソオキサゾロ［５,４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル
【化４５】
0005674211.tif 000046
【０１９０】
３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルバルデヒド（実施例１Ａ、１５０ｍｇ、０.９３６ミリモル）、４,４−ジフルオロ−３−オキソブタンニトリル（実施例１１Ａ、１１１ｍｇ、０.９３６ミリモル）、酢酸（０.０６７ｍｌ、１.１７ミリモル）およびピペリジン（９.３μｌ、０.０９４ミリモル）の、４Åモレキュラーシーブ含有の乾燥ジクロロメタン（４ｍｌ）中混合物を還流下で１２時間攪拌した。ついで、該混合物を濾過し、該濾液を減圧下で濃縮した。残渣を２−プロパノール（２ｍｌ）および酢酸（１ｍｌ）にアルゴン下で溶かした。３−メチル−１,２−イソオキサゾール−５−アミン（９５ｍｇ、０.９３６ミリモル）を加え、該溶液を還流下で３０分間攪拌した。冷却して、該混合物を蒸発乾固させ、残渣を酢酸エチルに溶かした。有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液および水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を分取性ＲＰ−ＨＰＬＣ（メタノール／水＋０.１％ＴＦＡの勾配）に付して精製し、１６ｍｇ（理論値の５％）のラセミ体の表記化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝０.８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１２.７０（ｓ，１Ｈ）、１１.５５（ｓ，１Ｈ）、７.６０（ｓ，１Ｈ）、７.４８（ｄ，１Ｈ）、７.２１（ｄ，１Ｈ）、６.９３（ｔ，１Ｈ、２ＪＨ,Ｆ＝５２Ｈｚ）、５.１９（ｓ，１Ｈ）、２.５０（ｓ，３Ｈ）、１.７１（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ
【０１９１】
Ｂ．生物学的活性の評価
本願発明の化合物の活性の証明は、当該分野にて周知である、インビトロ、エクスビボおよびインビボアッセイを介して達成され得る。例えば、本願発明の化合物の活性を証明するのに、以下のアッセイが用いられてもよい。
【０１９２】
ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ活性アッセイ（ＮＡＤＨの読み取り）：
組換えヒトｃ−Ｍｅｔ蛋白（Invitrogen、Carlsbad、California、USA）を用いる。該キナーゼ反応についての基質として、ペプチド  KKKSPGEYVNIEFG（JPT、Germany）を用いる。アッセイについては、試験化合物のＤＭＳＯ中で５１倍に濃縮した溶液（１μＬ）をピペットで３８４ウェルの白色マイクロタイタープレート（Greiner Bio-One、Frickenhausen、Germany）に取る。２５μＬのｃ−Ｍｅｔ（最終濃度：３０ｎＭ）およびピルビン酸キナーゼ／乳酸デヒドロゲナーゼ（Roche Diagnostics、Mannheim、Germany；最終濃度：８ｍｇ／Ｌ）のアッセイ緩衝液［３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、５０ｍＭ、ｐＨ７；ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ；ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０.０１％；トリトンＸ１００、０.０１％；ＤＴＴ、２ｍＭ］中溶液を添加し、該混合物を室温で５分間インキュベートする。ついで、２５μＬのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、最終濃度：３０μＭ）、基質（最終濃度：１００μＭ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ、最終濃度：５０μＭ）およびジチオトレイトール（ＤＴＴ、最終濃度：２ｍＭ）のアッセイ緩衝液中溶液を添加することでキナーゼ反応を開始させ、その得られた混合物を３２℃で１００分間の反応時間でインキュベートさせる。
【０１９３】
その後で、ＮＡＤＨ蛍光の減少を測定することでリン酸化基質の量を評価する。したがって、３４０ｎｍで励起した後の４６５ｎｍでの蛍光発光を蛍光リーダー、例えばTecan Ultra（Tecan、Mannedorf、Switzerland）にて測定する。データを正規化する（阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害；酵素はないが他のすべてのアッセイ成分を含む場合＝１００％阻害）。通常は、試験化合物を同じマイクロタイタープレート上で１０μＭ〜１ｎＭの範囲内で９種の異なる濃度（１０μＭ、３.１μＭ、１.０μＭ、０.３μＭ、０.１μＭ、０.０３μＭ、０.０１μＭ、０.００３μＭ、０.００１μＭ；５１倍に濃縮したストック溶液のレベルでアッセイする前に１：３の連続希釈により調製される一連の希釈体）で、各濃度で２回ずつ試験し、社内のソフトウェアを用いてＩＣ５０値を計算する。
【０１９４】
このアッセイで試験した場合の、本願発明の化合物は、１０μＭ未満の、好ましくは１μＭ未満のＩＣ５０値で、ｃ−Ｍｅｔチロシンキナーゼ活性を阻害する能力を示した。
【０１９５】
代表的なＩＣ５０値のいくつかを以下の表に列挙する：
【表１】
0005674211.tif 000047
【０１９６】
ｃ−Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼの均一な時間分解蛍光アッセイ（別のフォーマット）
昆虫細胞（ＳＦ２１）にて発現され、Ｎｉ−ＮＴＡアフィニティクロマトグラフィーおよび連続的サイズ排除クロマトグラフィー（Superdex 200）で精製されたヒトｃ−ＭｅｔのＮ−末端Ｈｉｓ６−タグ化組換えキナーゼドメイン（アミノ酸９６０−１３９０）を用いる。あるいはまた、市販のｃ−Ｍｅｔ（Millipore）を用いることもできる。キナーゼ反応の基質として、ビオチニル化したポリ−Ｇｌｕ、Ｔｙｒ（４：１）コポリマー（番号61GT0BLC、Cis Biointernational、Marcoule、France）を用いる。
【０１９７】
アッセイについては、試験化合物のＤＭＳＯ中で１００倍に濃縮した溶液（５０ｎＬ）をピペットで黒色低容量の３８４−ウェルのマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One、Frickenhausen、Germany）に取る。２μＬのｃ−Ｍｅｔのアッセイ緩衝液［２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／ＮａＯＨ、ｐＨ７.５；５ｍＭ  ＭｇＣｌ２；５ｍＭ  ＭｎＣｌ２；２ｍＭ  ジチオスレイトール；０.１％（ｖ／ｖ）ツィーン２０（Sigma）；０.１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン］中溶液を添加し、該混合物を２２℃で１５分間インキュベートし、試験化合物を酵素に予め結合させ、キナーゼ反応を開始する。ついで、アッセイ緩衝液にて、３μＬのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ、１６．７μＭ；５μＬのアッセイ容量における最終濃度は１０μＭ）および基質（２．２７μｇ／ｍＬ、５μＬのアッセイ容量における最終濃度は１．３６μｇ／ｍＬ〜３０ｎＭである）を添加することでキナーゼ反応を開始させ、その得られた混合物を２２℃で３０分間の反応時間でインキュベートさせる。ｃ−Ｍｅｔの該アッセイにおける濃度は、ロットによる酵素の活性に応じて調節され、適切には、アッセイを直線状の範囲にあるように：典型的には酵素濃度が約０．０３ｎＭ（５μＬのアッセイ容量における最終濃度）の範囲にあるように選択される。水性ＥＤＴＡ溶液［５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ、ｐＨ７．５中の１００ｍＭ  ＥＤＴＡ、０.２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン］中のＨＴＲＦ検出試薬［４０ｎＭ  ストレプトアビジンＸＬｅｎｔおよび２.４ｎＭ  ＰＴ６６−Ｅｕ−キレート、ユーロピウム−キレート標識化抗−ホスホチロシン抗体（Perkin-Elmer）］溶液（５μＬ）を添加することで反応を停止させる。
【０１９８】
得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートし、ビオチニル化されたリン酸化ペプチドをストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔおよびＰＴ６６−Ｅｕ−キレートに結合させる。その後で、ＰＴ６６−Ｅｕ−キレートからストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔへの共鳴エネルギー移動を測定することにより、リン酸化基質の量を評価する。従って、３５０ｎｍで励起した後の６２０ｎｍおよび６６５ｎｍでの蛍光発光をＨＴＲＦリーダー、例えばRubystar（BMG Labtechnologies、Offenburg、Germany）またはViewlux（Perkin-Elmer）にて測定する。６６５ｎｍと６２０ｎｍでの発光の割合をリン酸化基質の量の尺度として捕らえる。データを正規化する（阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害；酵素はないが他のすべてのアッセイ成分を含む場合＝１００％阻害）。通常は、試験化合物を同じマイクロタイタープレート上で２０μＭ〜１ｎＭの範囲内で１０種の異なる濃度（２０μＭ、６．７μＭ、２．２μＭ、０.７４μＭ、０.２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９．２ｎＭ、３．１ｎＭおよび１ｎＭ；１００倍に濃縮したストック溶液のレベルでアッセイする前に１：３の連続希釈により調製される一連の希釈体）で、各濃度で２回ずつ試験し、社内のソフトウェアを用いる４−パラメータ−適合によりＩＣ５０値を計算する。
【０１９９】
このアッセイで試験した場合の、本願発明の化合物は、１０μＭ未満の、好ましくは１μＭ未満のＩＣ５０値で、ｃ−Ｍｅｔチロシンキナーゼ活性を阻害する能力を示した。
【０２００】
代表的なＩＣ５０値のいくつかを以下の表に列挙する：
【表２】
0005674211.tif 000048
【０２０１】
ホスホ−ｃ−Ｍｅｔアッセイ：
この操作は、成長因子を刺激することなく、ＭＫＮ−４５腫瘍細胞（胃癌細胞、ＡＴＣＣより入手）を用いる、細胞に基づいたＥＬＩＳＡ様アッセイ［Meso Scale Discovery（ＭＳＤ）、Gaithersburg、MD、USA］である。１日目に、９６−ウェルのプレートに、フルな成長培地中に該細胞をプレートする（１００００細胞／ウェル）。２日目、血清不含培地にて２時間薬物処置した後に、細胞を洗浄し、ついで溶解させ（６０μｌ／ウェル、ＭＳＤ推奨の溶解緩衝液を用いる）、−８０℃で凍結させる。２日目にはまた、ＭＳＤブロッキングソルーションＡで、ＭＳＤホスホ−Ｍｅｔプレート上の非特異的抗体結合部位を４℃にて一夜遮断する。３日目に、凍結させたライゼートを氷上で解凍させ、トリス緩衝セイライン＋０．０５％ツィーン２０（ＴＢＳＴ）で１回洗浄した後で、２５μｌのライゼートをＭＳＤホスホ−Ｍｅｔプレートに移して１時間振盪させる。結合していない蛋白を除去した後、ＭＳＤからのSulfa-ＴＡＧ抗−Ｍｅｔ抗体を、抗体希釈緩衝液（ＭＳＤのプロトコルに従う）中５ｎＭの最終濃度にて、プレートに加え、１時間振盪させる。ついで、該プレートをＴＢＳＴ緩衝液で３回洗浄し、１ｘＭＳＤリードバッファーを添加する。ついで、該プレートをＭＳＤディスカバリー・ワークステーション装置で読み取る。１０μＭの対照化合物のウェル（最小シグナル）、および薬物処置を行っていないＤＭＳＯウェル（最大シグナル）を含む、生データをアナライズ５プログラムに入力し、ＩＣ５０値を決定する。
【０２０２】
細胞性ホスホ−ｃ−Ｍｅｔアッセイ：
３８４−ウェルのマイクロタイタープレートに播種したヒト胃腺癌細胞（ＭＫＮ４５、ＡＴＣＣより入手）を、２５μｌのフルな成長培地にて、３７℃で２４時間、５％ＣＯ２下でインキュベートする。２日目、０．１％ＦＣＳ含有の血清減少培地にて２時間薬物処置した後、細胞を洗浄かつ溶解させる。ライゼートをトリス緩衝セイライン＋０．０５％ツィーン２０（ＴＢＳＴ）で１回洗浄した後で、それをｃ−Ｍｅｔ捕獲抗体［Mesoscale Discovery（ＭＳＤ）、Gaithersburg、MD、USAより入手］を予め結合させたＢＳＡ遮断のプレートに移し、１時間振盪させる。ＭＳＤのプロトコルに従って、Sulfa-ＴＡＧ抗−ホスホ−ｃ−Ｍｅｔ検出抗体を、抗体希釈緩衝液中５ｎＭの最終濃度にて、プレートに加え、室温で１時間振盪させる。該ウェルをトリス緩衝液で洗浄した後、１ｘリーディング緩衝液を添加し、プレートをSector Imager 6000（Mesoscaleより入手）で測定する。ＩＣ５０値をMarquardt-Levenberg-Fitを用いる用量応答曲線より算定する。
【０２０３】
インビトロ腫瘍細胞増殖アッセイ：
本願発明の化合物を試験するのに用いられる接着腫瘍細胞増殖アッセイは、Promega［B.A. Cunningham、"A Growing Issue：Cell Proliferation Assays. Modern kits ease quantification of cell growth"、The Scientist 2001、15（13）、26；S.P. Crouchら、"The use of ATP bioluminescence as a measure of cell proliferation and cytotoxicity"、Journal of Immunological Methods 1993、160、81-88］により開発されたCell Titre-Gloと称される装置での読み取りを含む。発生した発光シグナルはＡＴＰの存在量に相当し、それは代謝活性な（増殖性）細胞の数に正比例する。
【０２０４】
Ｈ４６０細胞（肺癌、ＡＴＣＣより入手）を、１０％ウシ胎仔血清を含む完全培地にて３０００細胞／ウェルで９６−ウェルプレートにプレートし、３７℃で２４時間インキュベートする。プレートして２４時間後に、０．２％の最終濃度のＤＭＳＯで連続希釈して試験化合物を１０ｎＭ〜２０μＭの最終濃度範囲にわたって加える。試験化合物を添加した後、完全成長培地にて細胞を３７℃で７２時間インキュベートする。４日目に、Promega Cell Titre-Glo Luminescent（登録商標）アッセイキットを用い、細胞を溶解させ、１００μｌの基質／緩衝液の混合物を各ウェルに加え、混合し、室温で８分間インキュベートする。試料を照度計で読み取り、各ウェルからの細胞ライゼートにあるＡＴＰの存在量を測定し、それはそのウェルにある生存細胞の数に相当する。２４時間のインキュベーションで読み取られた値を０日目として減算する。ＩＣ５０値を測定するのに、線形回帰分析を用い、このアッセイフォーマットを用いて細胞増殖を５０％阻害する薬物の濃度を決定することができる。このプロトコルは、限定されるものではないが、ＣＡＫＩ−１、ＭＮＫ−４５、ＧＴＬ−１６、ＨＣＣ２９９８、Ｋ５６２、Ｈ４４１、Ｋ８１２、ＭＥＧ０１、ＳＵＰ１５およびＨＣＴ１１６を含む、目的とする種々の細胞系に適用され得る。
【０２０５】
本願発明は特定の実施態様に関連して開示されているが、本願発明の他の実施態様および変形が、当業者によって、本願発明の精神と範囲を逸脱することなく、考案され得ることは明らかである。特許請求の範囲はかかる実施態様および均等な変形の全てを含むように解釈されると考える。
【０２０６】
Ｃ．医薬組成物に関連する例
本願発明の医薬組成物は以下のように説明され得る：
滅菌性静脈内溶液：
本願発明の所望の化合物の５ｍｇ／ｍｌ溶液は、滅菌した注射用水を用い、必要ならばそのｐＨを調節することで製造され得る。該溶液を投与するのに滅菌５％デキストロースで１〜２ｍｇ／ｍｌに希釈し、約６０分間にわたって静脈内点滴液として投与する。
【０２０７】
静脈内投与用の凍結乾燥散剤：
（ｉ）凍結乾燥散剤としての１００〜１０００ｍｇの本願発明の所望の化合物、（ｉｉ）３２〜３２７ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム、および（ｉｉｉ）３００〜３０００ｍｇのデキストラン４０で、滅菌調製物が調製され得る。滅菌注射用セイラインまたは５％デキストロースを用いて１０〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度に製剤を復元し、それをさらにセイラインまたは５％デキストロースで０.２〜０.４ｍｇ／ｍｌに希釈し、１５〜６０分間にわたって静脈内ボーラスまたは静脈内注入のいずれかとして投与する。
【０２０８】
筋肉内用懸濁液：
以下の溶液または懸濁液は筋肉内注射用に調製され得る：
５０ｍｇ／ｍｌの本願発明の所望の水不溶性化合物；５ｍｇ／ｍｌのカルボキシメチルセルロースナトリウム；４ｍｇ／ｍｌのTWEEN 80；９ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウム；９ｍｇ／ｍｌのベンジルアルコール。
【０２０９】
ハード殻カプセル：
通常のツーピースハードゼラチンカプセルの各々を１００ｍｇの粉末化活性成分、１５０ｍｇのラクトース、５０ｍｇのセルロースおよび６ｍｇのステアリン酸マグネシウムで充填することで多数の単位カプセルが調製される。
【０２１０】
ソフトゼラチンカプセル：
活性成分の大豆油、綿実油またはオリーブ油などの可消化油中混合物を調製し、該混合物を容積移送式ポンプの手段により融解されたゼラチンに射出し、１００ｍｇの活性成分を含有するソフトゼラチンカプセルを形成する。該カプセルを洗浄し、乾燥させる。活性成分をポリエチレングリコール、グリセリンおよびソルビトールの混合物に溶かし、水混和性の薬混合物を調製しうる。
【０２１１】
錠剤：
投与単位が１００ｍｇの活性成分、０.２ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素、５ｍｇのステアリン酸マグネシウム、２７５ｍｇの微結晶セルロース、１１ｍｇの澱粉、および９８.８ｍｇのラクトースを含むように、慣用的操作により多数の錠剤を調製する。適当な水性および非水性コーティング剤を塗布して、好性を高め、外観および安定性を改善し、または吸収を遅らせてもよい。