(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする上皮性ナトリウムチャネル阻害剤。
【化１】
0005674984.tif 000007
（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）
【請求項２】
下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする塩味抑制剤。
【化２】
0005674984.tif 000008
（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）
【請求項３】
請求項１記載の上皮性ナトリウムチャネル阻害剤又は請求項２記載の塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に対して使用する、塩味抑制方法。
【請求項４】
塩味物質含有組成物がミネラル由来の金属イオン及び／若しくは塩化物イオン、又は当該金属イオンと塩化物イオンからなる金属塩化物を含有する組成物である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
ミネラルがナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びリンから選ばれる一種以上の金属である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
組成物が食品又は口腔用組成物である、請求項３〜５のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上皮性ナトリウムチャネル（以下「ＥＮａＣ」とも称する）を阻害し、塩味抑制効果等を有する上皮性ナトリウムチャネル阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
食塩は、広く自然界の食材の多くに含有されており、通常の生活では不足する心配は殆どない。ただし、スポーツ等により大量の汗をかいたり、嘔吐や下痢をしている場合、熱中症の場合等には、多くのナトリウムが喪失され、血中ナトリウム量が減少する。したがって、ナトリウムを始めとするミネラルを適切に補給することが必要となる。例えば、熱中症予防のためには、こまめに水分を摂取すること、及び適切な塩分を摂取することが、厚生労働省より指導されている。
【０００３】
しかしながら、ミネラル成分を飲食品に配合した場合、その濃度が高くなると塩味が強くなり、嗜好性が下がると云う問題がある。そこで、斯かる塩味を抑制する手段が求められ、例えば、イヌリン（特許文献１）や、Ｄ−プシコース（特許文献２）等の糖類を添加して、塩味をマスキングする方法等が知られている。
【０００４】
斯かる塩味の口腔内受容の一つとして、近年、アミロライドによってその活性が抑制される電位非依存性のナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）が見出されている。アミロライドは、舌前方の塩味を抑制するが、舌後方の塩味は抑制せず、口腔内全体の感覚として約半分程度の塩味を抑えるだけであることが知られている（非特許文献１）。このことから、塩味の口腔内受容には、ＥＮａＣの他にアミロライド非感受性の塩味受容体も存在すると考えられ、当該受容体として苦味及び酸味受容体の関与が示唆されている。具体的には、１００ｍＭ以下の低濃度の塩味にはＥＮａＣが、高濃度の塩味には苦味や酸味の受容体が関与していると考えられている（非特許文献２）。したがって、低濃度の塩味の抑制には、ＥＮａＣを阻害することが有効であると考えられる。
【０００５】
また、ＥＮａＣは、味蕾の他に、ヒトの多くの上皮組織（腎臓、膀胱、肺、気道、唾液腺、汗腺など）に発現し、ナトリウムイオンの流入経路となっている（非特許文献３）。例えば、腎臓においては、腎皮質集合管においてナトリウムを再吸収することにより体内ナトリウム量を緻密に制御することが知られており、体液量、血漿浸透圧、血圧等の調節に非常に重要な役割を有している。更にＥＮａＣの過剰発現や機能亢進は、高血圧症や腎機能悪化を始め、嚢胞性線維症、肺水腫、潰瘍性大腸炎、下痢等の疾患と関連があるとされ、ＥＮａＣ阻害剤は斯かる疾患の予防・改善に有用であることが報告されている（非特許文献３参照）。
【０００６】
一方、アルケニル硫酸エステルは、シス／トランス−３−デセニルサルフェートが緑藻の形態変化誘導を齎すカイロモン様物質として（非特許文献４、非特許文献５）、トランス−３−デセニルサルフェートが抗菌活性を有すること（非特許文献６）等が報告されている。
しかしながら、ＥＮａＣ阻害作用或いは塩味抑制作用を有するアルケニル硫酸エステルはこれまでに全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００７−２０９２６８号公報
【特許文献２】特許第５３１４２０７号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ninomiya, Y. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America, 1998, 95, 5347-5350.
【非特許文献２】Oka, Y.; et al. Nature, 494, 472-475 (2013)
【非特許文献３】Bhalla, V.; et al. Journal of American Society of Nephrology. 2008, 19, 1845-1854.
【非特許文献４】Yasumoto, K.; et al. Chemical ＆ Pharmceutical Bulltein, 2008, 56(1), 133-136.
【非特許文献５】Yasumoto, K.; et al. Tetrahedron Letters, 2005, 46, 4765-4767.
【非特許文献６】La, M-P.; et al. CHEMISTRY ＆ BIODIVERSITY, 2012, 9, 1166-1171
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ＥＮａＣ阻害作用を有し、塩味の低減等に有効なＥＮａＣ阻害剤及び塩味抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、オクテニル硫酸エステル又はその塩にＥＮａＣ阻害作用及び塩味抑制作用があり、ＥＮａＣ阻害剤及び塩味抑制剤として使用できることを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の１）〜３）に係るものである。
１）下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする上皮性ナトリウムチャネル阻害剤。
２）下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする塩味抑制剤。
３）上記２）の塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に対して使用する、塩味抑制方法。
【００１２】
【化１】
0005674984.tif 000002
【００１３】
（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）
【発明の効果】
【００１４】
本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤は、塩化ナトリウム等の塩味物質を含有する口腔用組成物や、食品等に対して使用することにより、安全性を害することなく、当該塩味を低減できる。その結果、当該口腔用組成物の使用感を向上させる、食品の味を向上させる等、それらの製品価値を高めることができる。
また、本発明のＥＮａＣ阻害剤は、ＥＮａＣの過剰発現（機能亢進型変異）に起因して発症する疾患、例えば、高血圧症、嚢胞性線維症、肺水腫、潰瘍性大腸炎、下痢等の予防又は改善のために使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ＥＮａＣ阻害効果を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の一般式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル（オクテニル硫酸エステル（１）と称する）は、下記式で示される、トランス−３−オクテニルサルフェート（１ａ）と、シス−３−オクテニルサルフェート（１ｂ）であるが、ＥＮａＣ阻害作用及び塩味抑制の点からトランス体が好ましい。
【００１７】
【化２】
0005674984.tif 000003
【００１８】
本発明のオクテニル硫酸エステル（１）の好適な塩は、製薬学的に許容される塩であって、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩等）等の金属塩、アンモニウム塩、又はトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、キノリン、ピペリジン、イミダゾール、ピコリン、ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジエチルアミン、シクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等の含窒素有機塩基、リジン、アルギニン、オルニチンなどの塩基性アミノ酸との塩を挙げることができる。このうち、アルカリ金属塩が好ましく、ナトリウム塩、カリウム塩がより好ましい。
【００１９】
また、本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、未溶媒和型のみならず、水和物又は溶媒和物としても存在することができる。従って、本発明においては、その全ての結晶型及び水和若しくは溶媒和物を含むものである。
【００２０】
本発明のオクテニル硫酸エステル（１）は、例えば、トランス−３−オクテン−１−オール（２）又はシス−３−オクテン−１−オール（３）を、有機溶媒中、硫酸化試薬と反応させて硫酸エステル化することにより製造することができる。
【００２１】
【化３】
0005674984.tif 000004
【００２２】
ここで用いられる硫酸化試薬としては、アルコール類を硫酸エステル化できるものであれば特に限定さないが、例えば三酸化硫黄ピリジン錯体、三酸化硫黄トリメチルアミン錯体、三酸化硫黄トリエチルアミン錯体、三酸化硫黄ジメチルホルムアミド錯体、硫酸−ジシクロヘキシルカルボジイミド、クロロ硫酸、濃硫酸、スルファミン酸等が挙げられ、このうち三酸化硫黄ピリジン錯体が好ましい。
反応溶媒としては、上記エステル化反応を妨害するものでない限り限定されないが、好適な溶媒として、例えば、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、エーテル、四塩化炭素等が挙げられる。
反応温度は、室温からその溶媒の沸点付近で行うことが可能であるが、好ましくは−２０〜２００℃、より好ましくは０〜１００℃である。また、反応時間は、０．１〜４８時間、好ましくは１〜１２時間である。
【００２３】
原料として用いる、トランス−３−オクテン−１−オール（２）は、例えば、１−ヘプテンとパラホルムアルデヒドを、ジメチルアルミニウムクロライド等の有機アルミニウム化合物の存在下で反応させることにより得ることができる（Snider, B.B; et al. Journal of American Chemical Society, 1982, 104, 555-563.参照）。
また、シス−３−オクテン−１−オール（３）は、一般に入手できるが、例えば、３−オクチン−１−オールを、リンドラー触媒を用いた接触水素化反応させることで、得ることができる。（Mayer, S.F.; et al. European Journal of Organic Chemistry, 2001, 4537-4542.参照）
【００２４】
本発明のオクテニル硫酸エステル（１）の塩は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等の塩基性化合物、アンモニア、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、キノリン、ピペリジン、イミダゾール、ピコリン、ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジエチルアミン、シクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等の含窒素有機塩基、リジン、アルギニン、オルニチンなどの塩基性アミノ酸との存在下、オクテニル硫酸エステル（１）を室温又は適宜加熱することにより得ることができる。また、オクテニル硫酸エステル（１）を、塩基性の陰イオン交換樹脂に吸着させ、上記塩基性化合物を含む溶離液で溶出させることでも得ることができる。
【００２５】
上記反応により得られる本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩の単離及び／又は精製は、例えば濾過、洗浄、乾燥、再結晶、各種クロマトグラフィー等により、行うことができる。
【００２６】
本発明のオクテニル硫酸エステル（１）は、後記実施例に示すように、ＥＮａＣからの細胞内へのナトリウムイオンの流入を阻害し、また、塩化ナトリウムによる塩味を効果的に抑制する。
したがって、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、ＥＮａＣ阻害剤、塩味抑制剤となり得、また、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を製造するために使用することができる。
【００２７】
本発明において、「ＥＮａＣ阻害」とは、上皮性ナトリウムチャネルからの細胞内へのナトリウムイオンの流入を阻害することを意味する。尚、ＥＮａＣ阻害活性は、適当な細胞系アッセイにおいて、ＥＮａＣに対する阻害効果を測定することによって試験することができる。例えば、ＥＮａＣを内生的に発現するか、または過剰発現するように設計された、単一細胞またはコンフルエント上皮を使用し、電気生理学的技術を使用して、チャンネル機能を評価することができる（The journal of biological chemistry, 284(2):pages 792-798 (2009)）。
【００２８】
ＥＮａＣは、味蕾に発現し、アミロライド感受性の塩味受容体として機能する。また、ＥＮａＣは、腎臓、膀胱、肺、気道、唾液腺、汗腺等多くのヒト上皮組織にも発現し（前記非特許文献３）、体液量、血漿浸透圧、血圧等の調節を担っており、ＥＮａＣの過剰発現（機能亢進型変異）は、高血圧症や嚢胞性線維症、肺水腫、潰瘍性大腸炎、下痢等の疾患を引き起こすことが知られている（前記非特許文献３）。
したがって、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩は、上記疾患の予防又は改善を目的とし、ＥＮａＣを阻害するために使用できる。ここで、「使用」は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。また、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００２９】
すなわち、本発明のＥＮａＣ阻害剤を含む組成物は、ＥＮａＣ阻害、或いは上述した各疾患に対する予防又は改善効果を奏する医薬品、医薬部外品又は食品となり、ＥＮａＣ阻害剤は、医薬品、医薬部外品若しくは食品へ配合するための素材又は製剤として有用である。尚、当該食品には、ＥＮａＣ阻害や上記疾患の症状改善を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品、サプリメントが包含される。
医薬品、医薬部外品、食品の製剤形態は特に限定されず、夫々許容される担体とオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を適宜組み合わせて調製することができる。
【００３０】
また、本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を用いた塩味の抑制は、塩味物質（塩味原因物質）を含有する組成物に対してこれらを使用することにより、当該塩味を抑制することができる。
ここで、「塩味の抑制」には、塩味を低減すること、及び塩味を阻害することが含まれる。
塩味物質含有組成物としては、例えば口腔用組成物、食品等が挙げられる。塩味物質としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リン等のミネラル由来の金属イオン、塩化物イオン、及び当該金属イオンと塩化物イオンからなる金属塩化物の一種又は二種以上が挙げられる。代表的には塩化ナトリウム、塩化カリウムが挙げられる。
【００３１】
本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を塩味抑制のために使用する場合の使用態様は、当該ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を、塩味物質含有組成物に配合すること、塩味物質含有組成物と併用すること等が主として挙げられる。
塩味物質含有組成物との併用には、例えば、当該ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤の水溶液を調製し、これを予め口腔に含み、その後に塩味物質含有組成物を経口摂取等する方法、又は当該ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤の水溶液と塩味物質含有組成物を同時に経口摂取等する方法が挙げられる。
【００３２】
本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤は、上記オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩のみを含むものでものよく、例えば、水、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、防腐剤、保存料、酸化防止剤のごとき医薬品類や食品に通常用いられる原料及び／又は素材の１又は複数を配合するものでもよい。また、その形態は、任意であり、溶液状、懸濁状、シロップ状、粉末状、顆粒状、粒子状等の何れもでもよく、所望の形状に成形することができる。
【００３３】
上記塩味物質含有組成物（例えば、口腔用組成物、食品等）の形態は、水溶液、懸濁物、乳化物等の液状又はペースト状、あるいは粉末状、顆粒状、粒子状等の固形物のいずれでもよい。食品は、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、スポーツドリンク、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の一般飲食品や栄養食品、機能性食品等の何れの種類でもよい。口腔用組成物としては、例えば、歯磨剤、洗口液、歯肉マッサージクリーム等が挙げられる。好適な塩味物質含有組成物としては、塩味物質を含有する各種固形食品、飲料、歯磨剤、洗口液等が挙げられる。
【００３４】
本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤の斯かる組成物への適用に際しては、組成物の形態が、水溶液、懸濁物、乳化物等の液状又はペースト状の場合には、本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を添加し、充分に攪拌、分散する方法を適用することができる。また、組成物の形態が、粉末等の固形物の場合には、本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を単に添加、混合する方法を適用することができる。
【００３５】
本発明のＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を、塩味物質含有組成物に対して使用する場合、ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤は、塩味物質１質量部に対して、本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を、０．００１質量部以上、好ましくは０．０１質量部以上で、９０質量部以下、好ましくは１０質量部以下で用いるのが好ましい。また、０．００１〜９０質量部、好ましくは０．０１〜１０質量部用いるのがより好ましい。
【００３６】
本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を含有する医薬品、医薬部外品又は食品における、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩の含有量は、特に限定されないが、製剤全質量の０．１質量％以上、好ましくは１質量％以上、更に好ましくは１０質量％以上であり、そして９９質量％以下、好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは５０質量％以下である。また０．１〜９９質量％、好ましくは１〜９０質量％、更に好ましくは１０質量％〜５０質量％が挙げられる。
【００３７】
本発明のオクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を医薬品或いはサプリメントに配合して使用する場合の投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩として、通常０．１ｍｇ以上、好ましくは１ｍｇ以上、更に好ましくは５ｍｇ以上であり、そして１０ｇ以下、好ましくは１ｇ以下、更に好ましくは５００ｍｇ以下である。また、０．１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは１ｍｇ〜１ｇ、更に好ましくは５〜５００ｍｇが挙げられる。
【００３８】
上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数ヶ月間継続して投与することが好ましい。また、投与又は摂取対象としては、それを必要としている若しくは希望しているヒト、例えば高血圧症や腎機能障害等のＥＮａＣの過剰発現に起因する疾患の予防又は改善を必要とする若しくは希望するヒトが挙げられる。
【００３９】
上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする上皮性ナトリウムチャネル阻害剤。
＜２＞下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩を有効成分とする塩味抑制剤。
＜３＞上皮性ナトリウムチャネル阻害剤を製造するための、下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
＜４＞塩味抑制剤を製造するための、下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩の使用。
＜５＞上皮性ナトリウムチャネル阻害に使用するための下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩。
＜６＞塩味抑制に使用するための下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩。
＜７＞下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する上皮性ナトリウムチャネル阻害方法。
＜８＞＜１＞のＥＮａＣ阻害剤又は＜２＞の塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に対して使用する、塩味抑制方法。
＜９＞ＥＮａＣ阻害剤又は塩味抑制剤を塩味物質含有組成物に配合して使用する、＜８＞の方法
＜１０＞塩味物質含有組成物がミネラル由来の金属イオン及び／若しくは塩化物イオン、又は当該金属イオンと塩化物イオンからなる金属塩化物を含有する組成物である、＜８＞又は＜９＞の方法。
＜１１＞ミネラルがナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びリンから選ばれる一種以上の金属である、＜１０＞の方法。
＜１２＞組成物が食品又は口腔用組成物である、＜８＞〜＜１１＞のいずれかの方法。
＜１３＞塩味物質１質量部に対して、オクテニル硫酸エステル（１）又はその塩を、０．００１質量部以上、好ましくは０．０１質量部以上で、９０質量部以下、好ましくは１０質量部以下で用いるか、或いは０．００１〜９０質量部、好ましくは０．０１〜１０質量部用いる、＜８＞〜＜１２＞のいずれかの方法。
【００４０】
【化４】
0005674984.tif 000005
【００４１】
（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）
【実施例】
【００４２】
製造例１  トランス−３−オクテニルサルフェートの合成
１−ヘプテン(１９６ｍｇ、２ｍｍｏｌ)に塩化メチレン（６ｍＬ）とパラホルムアルデヒド（６０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた後、０℃に冷却し、１．０８Ｍのジメチルアルミニウムクロライド−ヘキサン溶液（２．７７ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を滴下し、室温に昇温後一晩撹拌した。続いて、飽和リン酸二水素ナトリウム水溶液（２ｍＬ）と１Ｍ塩酸水溶液（３ｍＬ）加えた後、エーテル（１０ｍＬ）で抽出を３回繰り返し行い、得られたエーテル層を芒硝乾燥後、減圧濃縮し、トランス−３−オクテン−１−オール（１９０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を得た。続いて、得られたトランス−３−オクテン−１−オール（１９０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）と三酸化硫黄ピリジン（４２１ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を加えて一晩撹拌した。続いて、１ＭのＮａＯＨ水溶液を加えて、反応系内を塩基性にしたのち、乾燥窒素を吹き付けテトラヒドロフランを除去した。残渣をＯＤＳ（コスモシール  １４０Ｃ１８  ＯＰＮ、１０ｇ、ナカライテスク社製）に通導後、水で洗浄し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出させ、得られた溶出液を減圧下濃縮乾固することで、トランス−３−オクテニルサルフェート（１１５ｍｇ）を得た。
【００４３】
性状：  白色粉末, 融点１５９℃（分解）;
1Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−８），１．２９−１．３８（４Ｈ，ｍ，Ｈ−６，７），２．０１（２Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝６．８，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ−５），２．３５（２Ｈ，ｄｔｄ，Ｊ＝６．８，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ−２），３．９７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１），５．４４（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１５．３，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ−３），５．５５（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１５．３，６．８，１．２Ｈｚ，Ｈ−４）
【００４４】
13Ｃ  ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ１４．２８（Ｃ−８），２３．２３（Ｃ−７），３２．７８（Ｃ−６），３０．４０（Ｃ−５），３３．７２（Ｃ−２），６８．８９（Ｃ−８），１２６．６２（Ｃ−３），１３４．２２（Ｃ−４）
【００４５】
製造例２  シス−３−オクテニルサルフェートの合成
【００４６】
シス−３−オクテン−１−オール（東京化成工業社製、２５６ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）と三酸化硫黄ピリジン（６００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えて一晩撹拌した。続いて、１ＭのＮａＯＨ水溶液を加えて、反応系内を塩基性にしたのち、乾燥窒素を吹き付けテトラヒドロフランを除去した。残渣をＯＤＳ（コスモシール  １４０Ｃ１８  ＯＰＮ、１０ｇ、ナカライテスク社製）に通導後、水で洗浄し、２０％アセトニトリル水溶液で溶出させ、得られた溶出液を減圧下濃縮乾固することで、シス−３−オクテニルサルフェート（８１ｍｇ）を得た。
【００４７】
性状：白色粉末, 融点１８５℃（分解）;
1Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−８），１．３３−１．３７（４Ｈ，ｍ，Ｈ−６，７），２．０８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５），２．４２（２Ｈ，ｔｄｄｄ，Ｊ＝７．２，７．２，１．０，１．０Ｈｚ，Ｈ−２），３．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−１），５．４０（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１０．７，７．２，１．２Ｈｚ，Ｈ−３），５．４９（１Ｈ，ｄｔｔ，Ｊ＝１０．７，７．７，１．０Ｈｚ，Ｈ−４）
【００４８】
13Ｃ  ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ１４．３３（Ｃ−８），２３．２５（Ｃ−７），２７．９９（Ｃ−６），２８．５５（Ｃ−５），３２．９８（Ｃ−２），６８．５７（Ｃ−８），１２５．６９（Ｃ−３），１３３．４６（Ｃ−４）
【００４９】
試験例１  オクテニル硫酸エステルのＥＮａＣ阻害活性
The journal of biological chemistry, 284(2):pages 792-798 (2009)に記載の方法に準じ、アフリカツメガエル卵母細胞に発現させたＥＮａＣの阻害活性を測定した。具体的には以下の手順に従い、ＥＮａＣ複合体を発現させた卵母細胞に製造例１で製造されたトランス−３−オクテニルサルフェートを添加し、ＥＮａＣの活性を電気生理学的に解析した。
まず、ヒトＥＮａＣα、β、γそれぞれをコードするＤＮＡ配列は、同遺伝子がクローニングされたプラスミドベクター（クロンテック社製）を鋳型としてＰＣＲを行うことで得た。得られたＰＣＲ増幅断片を転写用ベクターｐＳＰ６４（プロメガ社製）に組み込み、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣα、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣβ、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣγそれぞれを作製した。
ｐＳＰ６４／ＥＮａＣα、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣγをＥｃｏＲＩで、ｐＳＰ６４／ＥＮａＣβをＰｖｕＩＩで、それぞれ消化することで、プラスミドＤＮＡを直鎖化した。これら直鎖化ＤＮＡに対してＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼ（タカラ社製）を使用することで、ＥＮａＣα、ＥＮａＣβ、ＥＮａＣγそれぞれを発現させるｐｏｌｙＡ配列が付加したｃＲＮＡを合成した。合成したｃＲＮＡにフェノール・クロロホルム処理を行い、得られた上清を回収し、さらにイソプロピルアルコールを混和して遠心分離することによりｃＲＮＡを沈殿させた。沈殿させたｃＲＮＡを７５％エタノールで洗浄した後に、蒸留水に１ｍｇ／ｍＬの濃度になるように溶解させた。
得られたＥＮａＣα、ＥＮａＣβ、ＥＮａＣγそれぞれをコードするｃＲＮＡ水溶液を等量混和し、一つのアフリカツメガエル卵母細胞につき５０ｎｇずつ注入した。具体的には、マニピュレーター（ＮＡＲＩＳＨＩＧＥ社製）を用いてガラスキャピラリーにｃＲＮＡ水溶液を充填し、一つの卵母細胞につき５０ｎＬずつ注入した。その後、２−３日間をかけてＥＮａＣ α、β、γ、複合体を卵母細胞膜に発現させた。
二本の微小ガラス電極を卵母細胞に刺入し、膜電位を−６０ｍＶに固定する。このとき、恒常的に活性状態にあるＥＮａＣ複合体によって誘起されるＮａ＋イオンの流入を、電流量の変化に置き換えて測定した。すなわち、１１５ｍＭ  ＮａＣｌ溶液（１１５ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＫＣｌ、１．８ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）中にあり、卵母細胞が内向きの電流を引き起こしている状況下で、同溶液に溶解させたトランス−３−オクテニルサルフェートを投与した。
【００５０】
その結果、図１に示すとおり、トランス−３−オクテニルサルフェートは３−３０ｍＭの範囲で濃度依存的にＥＮａＣ発現卵母細胞の内向き電流を抑制した。この効果は、既存のＥＮａＣ阻害剤アミロライドと同様のものであった。また、このトランス−３−オクテニルサルフェートの効果は、ＥＮａＣを発現させない卵母細胞では認められなかったことから、ＥＮａＣに対するものであることが確かめられた。
【００５１】
試験例２
被験者７名に塩味標準溶液として０．６ｗ／ｖの食塩水を呈示し、５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、感じた塩味強度（０〜１０）を中央値の５とした。
次に、食塩水溶液（０．６，１．０ｗ／ｖ％）をそれぞれ５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、感じた強度を、感じない場合は０、非常に強く感じる場合を１０とし、１から１０の範囲で回答してもらった。続いて、５ｍＭのトランス−３−オクテニルサルフェートを含む食塩水溶液（０．６，１．０ｗ／ｖ％）を調製し、試験者に呈示した。それぞれ５秒ほど口に含んだ後、吐き出し、感じた強度を０から１０の値で回答してもらった。その結果を表１に示す。
【００５２】
【表１】
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【００５３】
表１より、本発明のオクテニル硫酸エステルには塩味抑制作用があることが確認された。
【要約】
【課題】本発明は、ＥＮａＣ阻害作用を有し、塩味の低減等に有効なＥＮａＣ阻害剤及び塩味抑制剤の提供。
【解決手段】下記式（１）で表されるオクテニル硫酸エステル又はその塩（式中、波線はシス又はトランス配置のいずれかを示す）を有効成分とする上皮性ナトリウムチャネル阻害剤、塩味抑制剤。
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【選択図】なし【図１】
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