(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
その任意の可能な立体異性体を包含する式Ｉ：
【化１】
0005778135.tif 000037
［式中：
Ｒ4は１リン酸、２リン酸もしくは３リン酸エステルであるか；またはＲ4は式
【化２】
0005778135.tif 000038
の基であり；
Ｒ7は、場合によりハロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6アルケニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２個もしくは３個の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか；またはＲ7は、場合によりハロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6アルケニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２個もしくは３個の置換基で置換されていてもよいナフチルであるか；またはＲ7は、場合により１個のＣ1〜Ｃ6アルキルオキシ−カルボニル基でそして場合によりハロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6アルケニル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２個もしくは３個の置換基でさらに置換されていてもよいインドリルであり；
Ｒ8は水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ベンジルもしくはフェニルであり；
Ｒ8'は水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ベンジルもしくはフェニルであるか；または
Ｒ8およびＲ8'はそれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ3〜Ｃ7シクロアルキルを形成し；
Ｒ9はＣ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、フェニル−Ｃ1〜Ｃ6アルキル、もしくはフェニルであり、ここで、フェニルもしくはフェニル−Ｃ1〜Ｃ6アルキルにおけるフェニル部分は、場合によりヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、アミノ、モノ-およびジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノから各々独立して選択される１、２もしくは３個の置換基で置換されていてもよい］
の化合物またはその製薬学的に許容しうる塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ4が式
【化３】
0005778135.tif 000039
の基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ7が、場合によりハロでまたは１もしくは２個のＣ1〜Ｃ6アルキル基で置換されていてもよいフェニルであるか、またはＲ7がナフチルもしくはインドリルである請求項１〜２のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ7が、場合によりハロでまたは２個のＣ1〜Ｃ6アルキル基で置換されていてもよいフェニルであるか、またはＲ7がナフチルである請求項１〜２のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ7がフェニルもしくはナフチルである請求項１〜２のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ8が水素であり、そしてＲ8'が水素もしくはＣ1〜Ｃ6アルキルである請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ8が水素であり、そしてＲ8'がメチルもしくはエチルである請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ9がＣ1〜Ｃ6アルキルもしくはベンジルである請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ9がｎ−ブチルもしくはベンジルである請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
式Ｉの化合物が：
【化４】
0005778135.tif 000040
である請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の式Ｉの化合物の抗ウイルス的に有効な量および製薬学的に許容しうる担体を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項１２】
ＨＣＶ阻害剤としての使用のための請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の阻害剤であるウラシルスピロオキセタンヌクレオシドに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＣＶは、ヘパシウイルス属におけるウイルスのフラビウイルス科に属する一本鎖プラスセンスＲＮＡウイルスである。ＲＮＡポリジーンのＮＳ５Ｂ領域は、ウイルスの複製に必須である、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）をコードする。初期急性感染後に、ＨＣＶは肝細胞において優先的に複製するが直接的に細胞変性性ではないので感染個体の大部分は慢性肝炎を発症する。特に、活発なＴリンパ球応答の欠如および突然変異するウイルスの高い傾向は、高い割合の慢性感染を促進するように思われる。慢性肝炎は、肝硬変、末期肝疾患およびＨＣＣ（肝細胞癌）を引き起こす、肝線維症に進行する可能性があり、それを肝臓移植の主要原因にしている。６つの主要なＨＣＶ遺伝子型および５０より多くの亜型があり、それらは地理的に異なって分布している。ＨＣＶ遺伝子型１型は、欧州におけるそして米国における優勢遺伝子型である。ＨＣＶの広範な遺伝的多様性は重要な診断的および臨床的意味を有し、おそらくワクチン開発の難しさおよび現行治療への反応の欠如を説明する。
【０００３】
ＨＣＶの伝染は、例えば輸血もしくは静脈内薬物使用の後に、汚染された血液もしくは血液製剤との接触を介して起こり得る。血液スクリーニングにおいて使用される診断試験の導入は、輸血後のＨＣＶ発生率の減少傾向をもたらしている。しかしながら、末期肝疾患への緩徐な進行を考えると、既存の感染は数十年にわたって深刻な医学的および経済的負担を与え続ける。
【０００４】
現行のＨＣＶ治療は、リバビリンと組み合わせた（ＰＥＧ化）インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）に基づく。この併用療法は、遺伝子型１型ＨＣＶに感染した患者の４０％より多くそして遺伝子型２および３型に感染したものの約８０％において持続性ウイルス学的著効をもたらす。ＨＣＶ遺伝子型１型への限られた効能に加えて、この併用療法は重大な副作用を有し、そして多数の患者において十分に耐容されない。主要な副作用にはインフルエンザ様症状、血液学的異常および神経精神症状が包含される。従って、より有効な、都合の良い、そしてより耐容性の高い処置の必要性がある。
【０００５】
ＨＩＶ薬での、特にＨＩＶプロテアーゼ阻害剤での経験は、次善の薬物動態および複雑な投与計画が不注意によるコンプライアンス不履行をすぐにもたらすことを教示している。これは結果として、ＨＩＶ処方計画におけるそれぞれの薬剤の２４時間トラフ濃度（最小血漿濃度）が１日の大部分にわたってＩＣ９０もしくはＥＤ９０閾値より低くなることが多いことを意味する。少なくともＩＣ５０、そしてより現実的にはＩＣ９０もしくはＥＤ９０の２４時間トラフレベルは、薬剤エスケープ突然変異体の発生を遅らせるために必須であると考えられる。そのようなトラフレベルを可能にするために必要な薬物動態および薬物代謝を達成することは、薬剤設計に厳しい課題を与える。
【０００６】
ＮＳ５Ｂ  ＲｄＲｐは、一本鎖プラスセンスＨＣＶ  ＲＮＡゲノムの複製に必須である。この酵素は、医薬品化学者の間で高い関心を引いている。ＮＳ５Ｂのヌクレオシドおよび非ヌクレオシド阻害剤の両方とも既知である。ヌクレオシド阻害剤は、鎖停止剤としてもしくは競合的阻害剤として、または両方として働くことができる。活性を有するためには、ヌクレオシド阻害剤は細胞により取り込まれそしてインビボで３リン酸エステルに転化されなければならない。３リン酸エステルへのこの転化は細胞キナーゼにより一般に媒
介され、それは潜在的ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤にさらなる構造的要求を与える。さらにこれは、インサイチューリン酸化の能力を有する細胞に基づくアッセイにＨＣＶ複製の阻害剤としてのヌクレオシドの直接評価を限定する。
【０００７】
ＨＣＶ  ＲｄＲｐの阻害剤としてのヌクレオシドを開発するためにいくつかの試みがなされているが、少数の化合物が臨床開発に入っているものの、登録まで進んでいるものはない。ＨＣＶ標的化ヌクレオシドがこれまで直面している問題の中には、毒性、変異原性、選択性の欠如、低い効能、低い生物学的利用能、次善の投薬計画および高い錠剤負荷を保証すること、ならびに商品原価がある。
【０００８】
副作用、限られた効能、耐性の出現およびコンプライアンス不履行のような現行のＨＣＶ治療の不都合を克服し、ならびに持続性ウイルス学的著効を改善し得るＨＣＶ阻害剤の必要性がある。
【０００９】
本発明は、以下のパラメーター：抗ウイルス効能、耐性発現の好ましいプロフィール、毒性および遺伝毒性の欠如、好ましい薬物動態学および薬力学ならびに製剤および投与の容易さの１つもしくはそれ以上に関して有用な特性を有する一群のＨＣＶ抑制１−（８−ヒドロキシ-７-（ヒドロキシ-メチル）-１，６-ジオキサスピロ［３．４］オクタン-５-イル）ピリミジン-２，４-ジオン誘導体に関する。スピロオキセタンヌクレオシド、特に１−（２-Ｏ，２-Ｃ-エタノ-β-Ｄ-リボフラノシル）チミンおよび１−（２-Ｏ，２-Ｃ-エタノ-β-Ｄ-リボフラノシル）ウラシルは、非特許文献１に記述されている。これらの化合物はＨＩＶに対して試験されたが、活性は見られなかった。
【００１０】
本発明の化合物はまた、他のウイルスに対する、特にＨＩＶに対する活性を欠くということによっても魅力的であり得る。ＨＩＶ感染患者は、ＨＣＶのような共感染を患うことが多い。ＨＩＶもまた抑制するＨＣＶ阻害剤でのそのような患者の処置は、耐性ＨＩＶ株の出現をもたらし得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００３，３５１４-３５２６
【発明の概要】
【００１２】
［発明の記述］
１つの態様において、本発明はその任意の可能な立体異性体を包含する式Ｉ：
【００１３】
【化１】
0005778135.tif 000002
【００１４】
［式中：
Ｒ４は１リン酸、２リン酸もしくは３リン酸エステルであるか；またはＲ４は式
【００１５】
【化２】
0005778135.tif 000003
【００１６】
の基であり；
Ｒ７は、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２個もしくは３個の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか；またはＲ７は、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２個もしくは３個の置換基で置換されていてもよいナフチルであるか；またはＲ７は、場合により１個のＣ１〜Ｃ６アルキルオキシカルボニル基でそして場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２個もしくは３個の置換基でさらに置換されていてもよいインドリルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ベンジルもしくはフェニルであり；
Ｒ８’は水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ベンジルもしくはフェニルであるか；または
Ｒ８およびＲ８’はそれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３〜Ｃ７シクロアルキルを形成し；
Ｒ９はＣ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、フェニルもしくはフェニル−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、フェニルもしくはフェニル−Ｃ１〜Ｃ６アルキルにおけるフェニル部分は、場合によりヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、モノ-およびジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノから各々独立して選択される１、２もしくは３個の置換基で置換されていてもよい］
により表すことができる化合物またはその製薬学的に許容しうる塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１７】
さらなる態様において、本発明は、ＨＣＶを抑制するための、本明細書において特定した通りの式Ｉの化合物の使用に関する。あるいはまた、ＨＣＶを抑制するための；本明細書において特定した通りの式Ｉの化合物の薬剤の製造のための使用が提供される。
【００１８】
基-ＮＨ-Ｃ（Ｒ８）（Ｒ８’）-Ｃ（＝Ｏ）-は、天然および非天然アミノ酸残基を包含するアミノ酸残基を形成することができる。興味深いのは、グリシン（Ｇｌｙ）およびジメチルグリシンン（Ｄｍｇ）である。また興味深いのは、Ｒ８’が水素であるアミノ酸残基である。後者の場合においてＲ８が水素以外である場合、アミノ酸残基はキラル中心を有し、そして不斉炭素原子での立体配置はＬ−アミノ酸のものであることができる。例にはアラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、α-アミノ酪酸（ＡＢＡ、また２-アミノ酪酸もしくはエチルグリシンとも呼ばれる）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）およびフェニルグリシン（Ｐｈｇ）残基、特にＬ−Ａｌａ、Ｌ−Ｖａｌ、Ｌ−Ｉｌｅ、Ｌ−ＡＢＡ、Ｌ−ＰｈｅおよびＬ−Ｐｈｇが包含される。Ｒ８およびＲ８’がそれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３〜Ｃ７シクロアルキルを形成するアミノ酸残基の例は、１，１−シクロプロピルアミノ酸である。同様に、基
【００１９】
【化３】
0005778135.tif 000004
【００２０】
はプロリン残基、好ましくはＬ−プロリン残基を形成する。
【００２１】
式Ｉの化合物の亜群は、Ｒ４が式
【００２２】
【化４】
0005778135.tif 000005
【００２３】
の基である、本明細書において定義した通りの式Ｉもしくは式Ｉの化合物の亜群の化合物である。
【００２４】
式Ｉの化合物の亜群は：
（ａ）Ｒ７が、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２個もしくは３個の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか；またはＲ７が、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルもしくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されていてもよいナフチルであるか；またはＲ７がインドリルである；
（ｂ）Ｒ７が、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１個、２個もしくは３個の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか；またはＲ７がナフチルであるか；またはＲ７がインドリルである；
（ｃ）Ｒ７が、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１個もしくは２個の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか；またはＲ７がナフチルであるか；またはＲ７がインドリルである；
（ｄ）Ｒ７が、場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから各々独立して選択される１個もしくは２個の置換基で置換されていてもよいフェニルであるか；またはＲ７がナフチルである；
（ｅ）Ｒ７が、場合により１もしくは２個のＣ１〜Ｃ６アルキル基で置換されていてもよいフェニルであるか；またはＲ７がナフチルである；
（ｆ）Ｒ７がフェニル、ハロフェニル、ジＣ１〜Ｃ４アルキルフェニルもしくはナフチルである；
（ｇ）Ｒ７がフェニルである；
（ｈ）Ｒ７がナフチルである；
（ｉ）Ｒ７が５−インドリルである
本明細書において定義した通りの式Ｉもしくは式Ｉの化合物の亜群の化合物である。
【００２５】
１つの態様において、Ｒ７は、場合により１個のＣ１〜Ｃ６アルキルオキシ-カルボニル基でその窒素原子でそして場合によりハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよびアミノから各々独立して選択される１、２
個もしくは３個の置換基でさらにその炭素原子で置換されていてもよいインドリルである。
【００２６】
さらなる態様において、式Ｉもしくはその亜群のいずれかの化合物においてインドリルである基Ｒ７は５−インドリルであり、もしくはＮ−Ｃ１〜Ｃ６アルキルオキシ−カルボニルインドリルである基Ｒ７はＮ−ｔ．ブチルオキシカルボニル-５-インドリル、特にＮ−ｔ．ブチルオキシカルボニル-５-インドリルである。インドリル基は、その５位で連結される場合、下記の通り表すことができ：
【００２７】
【化５】
0005778135.tif 000006
【００２８】
、ここで、Ｒ７ａは水素もしくはＣ１〜Ｃ６アルキルオキシ-カルボニルであり、または特にＲ７ａは水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシカルボニルであり、もしくはさらに特にＲ７ａは水素もしくはｔ．ブチルオキシカルボニルである。さらなる態様において、式Ｉもしくはその亜群のいずれかの化合物における基インドリルは５-インドリルである（すなわち、ここで、Ｒ７は水素である）。
【００２９】
式Ｉの化合物の亜群は、
（ａ）Ｒ８がメチルであり、そしてＲ８’がメチルである；または
（ｂ）Ｒ８が水素であり、そしてＲ８’がフェニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルもしくはＣ１〜Ｃ４アルキル、例えばメチル、エチル、イソプロピルもしくはイソブチルである
本明細書において定義した通りの式Ｉもしくは式Ｉの化合物の亜群の化合物である。式Ｉの化合物の亜群は、
【００３０】
【化６】
0005778135.tif 000007
【００３１】
部分がグリシル、ジメチルグリシル、α-アミノブチリル、フェニルグリシン、イソロイシル、アラニル、フェニルアラニルもしくはバリル（それぞれ、Ｇｌｙ、Ｄｍｇ、ＡＢＡ、Ｐｈｇ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、ＰｈｅもしくはＶａｌ；特にＬ−ＡＢＡ、Ｌ−Ｐｈｇ、Ｌ−Ｉｌｅ、Ｌ−Ａｌａ、Ｌ−ＰｈｅもしくはＬ−Ｖａｌ）である、本明細書において定義した通りの式Ｉもしくは式Ｉの化合物の亜群の化合物である。
【００３２】
式Ｉの化合物の亜群は、Ｒ８が水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ベンジルもしくはフェニルであり；そしてＲ８’が水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ベンジルもしくはフェニルである、本明細書において定義した通りの式Ｉのもしくは式Ｉの化合物の亜群の化合物である。
【００３３】
式Ｉの化合物の亜群は、
【００３４】
【化７】
0005778135.tif 000008
【００３５】
部分が構造
【００３６】
【化８】
0005778135.tif 000009
【００３７】
［ここで、Ｒ８は水素であり、そしてＲ８’は水素、フェニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ベンジルであり；または
Ｒ８は水素であり、そしてＲ８’は水素もしくはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ８は水素であり、そしてＲ８’はＣ１〜Ｃ２アルキルであり；
Ｒ８は水素であり、そしてＲ８’はメチルである］
を有する、本明細書において定義した通りの式Ｉもしくは式Ｉの化合物の亜群の化合物である。
【００３８】
１つの態様において、Ｒ８およびＲ８’はそれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３〜Ｃ７シクロアルキルを形成し；または特にＣ３〜Ｃ４シクロアルキルを形成し；または特にシクロプロピルを形成する。
【００３９】
式Ｉの化合物の亜群は、
（ａ）Ｒ９がＣ１〜Ｃ６アルキル、ベンジル、もしくは場合によりヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、モノ-およびジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノから各々独立して選択される１、２もしくは３個の置換基で置換されていてもよいフェニルである；
（ｂ）Ｒ９がＣ１〜Ｃ６アルキルもしくはベンジルである；
（ｃ）Ｒ９がＣ１〜Ｃ６アルキルである；
（ｄ）Ｒ９がＣ１〜Ｃ４アルキルである；
（ｅ）Ｒ９がメチル、エチルもしくはｔ−ブチルである；
（ｆ）Ｒ９がＣ３〜Ｃ７シクロアルキルである
本明細書において定義した通りの式Ｉのもしくは式Ｉの化合物の亜群の化合物である。
【００４０】
興味深いのは、「実施例」の節において記載される化合物１２ａ、１２ｂ、１２ｃ、１２ｄ、１２ｅ、１２ｆ、１２ｇ、１２ｈ、１２ｉ、１２ｊ、１２ｋ、１２ｌ、１２ｍならびにこれらの化合物の製薬学的に許容しうる酸付加塩である。特に興味深いのは、これらの化合物の遊離形態（すなわち、非塩形態）におけるかもしくはその製薬学的に許容しうる酸付加塩としてのいずれかの、化合物１２ａ、１２ｃ、１２ｄおよび１２ｋである。
【００４１】
式Ｉの化合物は、特に炭素原子１’、３’および４’で、いくつかのキラリティー中心を有する。これらの炭素原子での立体化学は固定されるが、これらの化合物はキラル中心の各々で少なくとも７５％、好ましくは少なくとも９０％、例えば９５％もしくは９８％を上回る鏡像異性体純度を示し得る。
【００４２】
【化９】
0005778135.tif 000010
【００４３】
キラリティーはまた、Ｒ４が、Ｒ８保有炭素（ここで、Ｒ８およびＲ８’は異なる）でそしてリン原子でキラリティーを有することができる、
【００４４】
【化１０】
0005778135.tif 000011
【００４５】
である場合のような、置換基においても存在し得る。リン中心は、ＲｐもしくはＳｐ、またはラセミ化合物を包含するそのような立体異性体の混合物として存在することができる。キラルリン中心およびキラル炭素原子に起因するジアステレオ異性体も同様に存在し得る。
【００４６】
さらなる態様において、本発明はＨＣＶ感染の処置もしくは予防（または処置もしくは予防のための薬剤の製造）における使用のための式Ｉの化合物またはその製薬学的に許容しうる塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。本発明に従った処置もしくは予防との関連における代表的なＨＣＶ遺伝子型には、遺伝子型１ｂ（欧州において蔓延している）もしくは１ａ（北アメリカにおいて蔓延している）が包含される。本発明はまたＨＣＶ感染の、特に遺伝子型１ａもしくは１ｂの処置もしくは予防のための方法も提供する。
【００４７】
式Ｉの化合物は、ホスホルアミデート（ｐｈｏｓｐｏｒａｍｉｄａｔｅ）基のリン原子での立体異性を除いて、定義された立体異性体として表される。そのような化合物の絶対立体配置は、例えばＸ線回折もしくはＮＭＲおよび／または既知の立体化学の出発物質からの推測のような当該技術分野で既知の方法を用いて決定することができる。本発明に従った製薬学的組成物は、好ましくは式Ｉの特定の化合物の示される立体異性体の立体異性的に純粋な形態を含んでなる。
【００４８】
本明細書において記載される場合の化合物および中間体の純粋な立体異性体は、該化合物もしくは中間体の同じ基本分子構造の他の鏡像異性体もしくはジアステレオマー形態を実質的に含まない異性体として定義される。特に、「立体異性的に純粋な」という用語は、少なくとも８０％の立体異性体過剰率（すなわち、最低９０％の一方の異性体および最大１０％のもう一方の可能な異性体）〜１００％の立体異性体過剰率（すなわち、１００％の一方の異性体およびもう一方は全くない）を有する化合物もしくは中間体、さらに特に９０％〜１００％の立体異性体過剰率を有する、なおさらに特に９４％〜１００％の立体異性体過剰率を有する、そして最も特に９７％〜１００％のもしくは９８％〜１００％の立体異性体過剰率を有する化合物もしくは中間体に関する。「鏡像異性的に純粋な」および「ジアステレオマー的に純粋な」という用語は同様に、しかしその場合問題になっている混合物のそれぞれ鏡像異性体過剰率およびジアステレオマー過剰率を考慮して理解さ
れるべきである。
【００４９】
本発明の化合物および中間体の純粋な立体異性体は、当該技術分野で既知の方法の適用により得ることができる。例えば、鏡像異性体は、光学活性酸もしくは塩基でのそれらのジアステレオマー塩の選択的結晶化により相互から分離することができる。その例は、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸およびショウノウスルホン酸である。あるいはまた、鏡像異性体は、キラル固定層を用いてクロマトグラフィー技術により分離することができる。該純粋な立体化学的異性体はまた、反応が立体特異的に起こるならば、適切な出発物質の対応する純粋な立体化学的異性体から得ることもできる。好ましくは、特定の立体異性体が所望される場合、該化合物は立体特異的製造方法により合成される。これらの方法は、鏡像異性的に純粋な出発物質を都合よく用いる。
【００５０】
式Ｉの化合物のジアステレオマーラセミ化合物は、常法により別個に得ることができる。都合よく用いることができる適切な物理的分離方法は、例えば、選択的結晶化およびクロマトグラフィー、例えばカラムクロマトグラフィーである。
【００５１】
製薬学的に許容しうる付加塩は、式Ｉの化合物の治療的に有効な無毒の酸および塩基付加塩を含んでなる。興味深いのは、本明細書において特定した式Ｉのもしくは式Ｉの化合物の任意の亜群の化合物の遊離した、すなわち無塩形態である。
【００５２】
製薬学的に許容しうる酸付加塩は、塩基形態をそのような適切な酸で処理することにより都合よく得ることができる。適切な酸は、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば塩酸もしくは臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などのような無機酸；または例えば、酢酸、プロピオン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（すなわち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（すなわち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸（すなわち、ヒドロキシルブタン二酸）、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモン酸などのような有機酸を含んでなる。逆に、該塩形態は、適切な塩基での処理により遊離塩基形態に転化することができる。
【００５３】
酸性プロトンを含有する式Ｉの化合物はまた、適切な有機および無機塩基での処理によりそれらの無毒の金属もしくはアミン付加塩形態に転化することもできる。適切な塩基塩形態は、例えば、アンモニウム塩、アルカリおよびアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩など、有機塩基との塩、例えばベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩、ならびに例えばアルギニン、リシンなどのようなアミノ酸との塩を含んでなる。
【００５４】
「溶媒和物」という用語は、式Ｉの化合物ならびにその塩が形成することのできる任意の製薬学的に許容しうる溶媒和物を含む。そのような溶媒和物は、例えば水和物、アルコラート、例えばエタノラート、プロパノラートなどである。
【００５５】
式Ｉの化合物のあるものはまた、それらの互変異性体において存在することもできる。例えば、アミド（-Ｃ（＝Ｏ）-ＮＨ-）基の互変異性体は、芳香族性を有する環において安定化することができる、イミノアルコール（-Ｃ（ＯＨ）＝Ｎ-）である。ウリジン塩基は、そのような形態の例である。そのような形態は、本明細書に表される構造式において明白に示されないが、本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００５６】
本明細書において用いる場合、基もしくは基の一部としての「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」は、例えばメチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−ブチル、２−メチル-１-プロピル、２−メチル-２-プロピルのような１〜４個の炭素原子を有する飽和
した直鎖状もしくは分枝鎖状炭化水素基を定義する。「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」には、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基および例えば１−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、２−メチル-１-ブチル、２−メチル-１-ペンチル、２−エチル-１-ブチル、３−メチル-２-ペンチルなどのような５もしくは６個の炭素原子を有するその高級同族体が包含される。Ｃ１〜Ｃ６アルキルの中で興味深いのは、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。「Ｃ１〜Ｃ１０アルキル」には、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基および例えばヘプチル、２−ヘプチル、３−ヘプチル、２−メチルヘキシル、オクチル、２−オクチル、３−オクチル、ノニル、２−ノニル、３−ノニル、２−ブチルペンチル、デシル、２−デシルなどのような７、８、９もしくは１０個の炭素原子を有するその高級同族体が包含される。Ｃ１〜Ｃ１０アルキルの中で興味深いのはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｃ１〜Ｃ２アルキルはメチルおよびエチルを定義する。
【００５７】
「Ｃ１〜６アルコキシ」は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルが上記に定義した通りである基−Ｏ-Ｃ１〜Ｃ６アルキルを意味する。Ｃ１〜Ｃ６アルコキシの例は、メトキシ、エトキシ、ｎ-プロポキシもしくはイソプロポキシである。
【００５８】
「Ｃ３〜６シクロアルキル」には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが包含される。興味深いのは、シクロプロピルである。
【００５９】
基もしくは基の一部としての「Ｃ３〜６アルケニル」という用語は、例えば１−プロペニル、２−プロペニル（もしくはアリル）、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−メチル-２-プロペニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、２−メチル-２-ブテニル、２−メチル-２-ペンテニルなどのような、飽和した炭素-炭素結合および少なくとも１個の二重結合を有し、そして３〜６個の炭素原子を有する直鎖状および分枝鎖状炭化水素基を定義する。Ｃ３〜６アルケニルの中で興味深いのは、Ｃ３〜４アルケニルである。Ｃ３〜６アルケニルもしくはＣ３〜４アルケニルの中で興味深いのは、１個の二重結合を有する基である。
【００６０】
「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードの総称である。
【００６１】
１つの態様において、「フェニル-Ｃ１〜６アルキル」という用語はベンジルである。
【００６２】
本明細書において用いる場合、「（＝Ｏ）」もしくは「オキソ」という用語は、炭素原子に結合する場合にカルボニル部分を形成する。原子は、その原子の価数がそのように許容する場合にのみオキソ基で置換され得ることに留意すべきである。
【００６３】
「１リン酸、２リン酸もしくは３リン酸エステル」という用語は、基：
【００６４】
【化１１】
0005778135.tif 000012
【００６５】
をさす。
【００６６】
分子部分上の基の位置が特定されないか（例えばフェニル上の置換基）もしくはフローティング（ｆｌｏａｔｉｎｇ）結合により表される場合、得られる構造が化学的に安定である限り、そのような基はそのような部分の任意の原子上に位置することができる。任意の変記号が分子において１回より多く存在する場合、各定義は独立している。
【００６７】
「式Ｉの化合物」もしくは「本発明の化合物」という用語または同様の用語を本明細書において用いる場合はいつでも、可能な立体化学的異性体を包含する式Ｉの化合物、ならびにそれらの製薬学的に許容しうる塩および溶媒和物が包含されるものとする。
【００６８】
本発明にはまた、自然界において典型的に見られるもの（１つもしくは複数）と異なる同位体で原子の１つもしくはそれ以上が置換される、式Ｉもしくは式Ｉの任意の亜群の同位体標識化合物も包含される。そのような同位体の例には、２Ｈおよび３Ｈのような水素；１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃのような炭素；１３Ｎおよび１５Ｎのような窒素；１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏのような酸素；３１Ｐおよび３２Ｐのようなリン；３５Ｓのような硫黄；１８Ｆのようなフッ素；３６Ｃｌのような塩素；７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒおよび８２Ｂｒのような臭素；ならびに１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉのようなヨウ素の同位体が包含される。本発明の同位体標識化合物は、適切な同位体標識試薬もしくは出発物質を用いることによって本明細書に記載のものと同様の方法により、または当該技術分野で既知の技術により製造することができる。同位体標識化合物に含まれる同位体の選択は、その化合物の特定の用途により決まる。例えば、組織分布アッセイには、３Ｈもしくは１４Ｃのような放射性同位体が取り込まれる。放射性イメージング用途には、１１Ｃ、１８Ｆ、１３Ｎもしくは１５Ｏのような陽電子放出同位体が有用である。重水素の取り込みはより大きい代謝安定性を与えることができ、例えば化合物の増加したインビボ半減期もしくは減少した用量の必要性をもたらす。
【００６９】
合成方法
出発物質１-［（４Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｒ）-８-ヒドロキシ-７-（ヒドロキシメチル）−１，６−ジオキサ-スピロ［３．４］オクタン-５-イル］ピリミジン-２，４（１Ｈ，３Ｈ）-ジオン１０は、下記の通り製造することができる。中間体４はＯｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２００７，９，３００９-３０１２に記載の通り得ることができ、そして臭化アリルマグネシウムと中間体５へと反応させる。後者におけるヒドロキシ基を塩基、例えばトリエチルアミンのようなトリアルキルアミン、もしくはＮ，Ｎ−ジメチルピリジン-４-アミン（ＤＭＡＰ）の存在下で塩化ベンゾイルでベンゾイル化し、中間体６をもたらす。後者の中間体をルイス酸で、特にＳｎＣｌ４で活性化し、そして例えばウラシルをＮ，Ｏ−ビス［トリメチルシリル］アセトアミド（ＢＳＡ）と反応させることにより得られる、シリル化ウラシルと反応させる。この反応により中間体７がもたらされ、ここで、アリル基における二重結合は過ヨウ素酸塩の存在下で四酸化オスミウムでアルデヒドに酸化され、それは次に対応するアルコール８に還元される。塩基、例えばピリジンの存在下での塩化メシルでの後者のメシル化、続いて水素化ナトリウムのような強塩基での処理により、オキセタン形成がもたらされる。例えば水素での貴金属触媒、例えば水酸化パラジウムの存在下での、９におけるベンジル基の除去により中間体１０がもたらされる。後者を塩基、例えばＮ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ）の存在下でホスホルアミドクロリディック（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｏｃｈｌｏｒｉｄｉｃ）酸エステル１１ａもしくは１１ｂと反応させることができる。
【００７０】
【化１２】
0005778135.tif 000013
【００７１】
上記の反応は、下記のスキームにおいて説明される。
【００７２】
【化１３】
0005778135.tif 000014
【００７３】
ホスホルアミドクロリディック酸エステル１１ａもしくは１１ｂは、塩基の存在下でアルコール１ａをＰＯＣｌ３と反応させることにより製造することができ、このようにしてホスホリルジクロリド１ｂが得られ、それをアミノ酸１ｃもしくは１ｄとさらに反応させる。
【００７４】
【化１４】
0005778135.tif 000015
【００７５】
さらなる態様において、本発明は、本明細書において特定した通りの式Ｉの化合物の治療的に有効な量および製薬学的に許容しうる担体を含んでなる製薬学的組成物に関する。該組成物は１％〜５０％もしくは１０％〜４０％の式Ｉの化合物を含有することができ、そして組成物の残りは該担体である。これに関連して治療的に有効な量は、感染患者もしくは感染する危険性がある患者において、ＨＣＶ感染に対して予防的に働くために、ＨＣＶを抑制するために、ＨＣＶ感染を安定させるためにもしくは減らすために十分な量である。なおさらなる態様において、本発明は、本明細書において特定した通りの式Ｉの化合物の治療的に有効な量と製薬学的に許容しうる担体をよく混合することを含んでなる、本明細書において特定した通りの製薬学的組成物を製造する方法に関する。
【００７６】
式Ｉのもしくはその任意の亜群の化合物は、投与目的のために様々な製薬学的形態に調合することができる。適切な組成物として、薬剤を全身的に投与するために通常用いられる全ての組成物を挙げることができる。本発明の製薬学的組成物を製造するために、有効成分として、場合により付加塩形態もしくは金属錯体における、特定の化合物の有効量を製薬学的に許容しうる担体とよく混合して合わせ、この担体は投与に所望される製剤の形態により多種多様な形態をとることができる。これらの製薬学的組成物は、特に経口的、経直腸的、経皮的もしくは非経口注射による投与に適当な単位投与形態物においてが望ましい。例えば、経口投与形態物における組成物を製造することにおいて、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および液剤のような経口用液状製剤の場合には例えば水、グリコール、油、アルコールなどのような通常の製薬学的媒質のいずれかを；または散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には澱粉、糖、カオリン、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などのような固形担体を用いることができる。錠剤およびカプセル剤は、それらの投与の容易さのために、最も都合のよい経口投与単位形態物に相当し、この場合、固形の製薬学的担体が明らかに用いられる。非経口組成物では、例えば、溶解性を促進するために他の成分を含むことができるが、担体は少なくとも大部分において滅菌水を通常は含んでなる。例えば、注入可能な液剤を製造することができ、ここで、担体は食塩水溶液、グルコース溶液もしくは食塩水とグルコース溶液の混合物を含んでなる。注入可能な懸濁剤もまた製造することができ、この場合、適切な液状担体、沈殿防止剤などを用いることができる。また包含されるのは、使用直前に液状製剤に転化することが意図される固形製剤である。経皮投与に適当な組成物において、担体は、場合によりわずかな割合の任意の性質の適当な添加剤と組み合わせて、場合により浸透促進剤および／もしくは適当な湿潤剤を含んでなってもよく、これらの添加剤は皮膚に重大な悪影響をもたらさない。本発明の化合物はまた、任意の当該技術分野で既知の送達系を用いて溶液、懸濁液もしくは乾燥粉末の形態において経口吸入もしくは吹送によって投与することもできる。
【００７７】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために単位投与形態物における上記の製薬学的組成物を調合することは特に好都合である。単位投与形態物は、本明細書において用いる場合、単位投薬量として適当な物理的に別個の単位をさし、各単位は、必要とされる製薬学的担体と会合して所望の治療効果をもたらすように計算された有効成分の所定の量を含有
する。そのような単位投与形態物の例は、錠剤（分割錠もしくはコート錠を包含する）、カプセル剤、丸剤、座薬、散剤パケット、カシェ剤、注入可能な液剤もしくは懸濁剤など、およびその分離した倍量である。
【００７８】
式Ｉの化合物はＨＣＶに対する活性を示し、そしてＨＣＶ感染もしくはＨＣＶと関連する疾患の処置および予防において用いることができる。後者には、肝硬変、末期肝疾患およびＨＣＣを引き起こす進行性肝線維症、炎症および壊死が包含される。本発明の多数の化合物はさらに、ＨＣＶの突然変異株に対して有効であると考えられる。さらに、本発明の化合物の多くは好ましい薬物動態プロフィールを示し、そして許容しうる半減期、ＡＵＣ（曲線下面積）およびピーク値を包含するそして不十分な速やかな発現および組織保持のような好ましくない現象を欠く、生物学的利用能に関して魅力的な特性を有する。
【００７９】
式Ｉの化合物のＨＣＶに対するインビトロ抗ウイルス活性は、Ｋｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７５：４６１４−４６２４（引用することにより本明細書に組み込まれる）により記述されるさらなる改変を有する、Ｌｏｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１１０−１１３に基づく細胞ＨＣＶレプリコン系において試験することができ、それは実施例の節においてさらに例示される。このモデルは、ＨＣＶの完全な感染モデルではないが、現在利用可能な自律的ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の最も強力なそして効率のよいモデルとして広く認められている。ＨＣＶレプリコンモデルにおいて細胞毒性もしくは細胞静止効果を及ぼしそして結果としてＨＣＶ  ＲＮＡもしくは連結されるレポーター酵素濃度の減少を引き起こすものからＨＣＶ機能を特異的に妨げる化合物間を区別することは重要であると認識される。例えばレザズリンのような蛍光性レドックス色素を用いるミトコンドリア酵素の活性に基づく細胞毒性の評価のために該分野においてアッセイは既知である。さらに、細胞カウンタースクリーニングは、ホタルルシフェラーゼのような連結されるレポーター遺伝子活性の非選択的阻害の評価のために存在する。適切な細胞タイプは、その発現が構成的に活性の遺伝子プロモーターに依存するルシフェラーゼレポーター遺伝子での安定なトランスフェクションにより用意することができ、そしてそのような細胞は非選択的阻害剤を除くためにカウンタースクリーニングとして用いることができる。
【００８０】
任意の可能な立体異性体を包含する式Ｉの化合物、その製薬学的に許容しうる付加塩もしくは溶媒和物は、それらの抗ＨＣＶ特性のために、ＨＣＶに感染した温血動物、特にヒトの処置において、そしてＨＣＶ感染の予防において有用である。従って、本発明の化合物は薬剤として、特に抗ＨＣＶもしくはＨＣＶ抑制薬剤として用いることができる。本発明はまた、ＨＣＶ感染の処置もしくは予防のための薬剤の製造における本発明の化合物の使用にも関する。さらなる態様において、本発明は、ＨＣＶに感染したもしくはＨＣＶに感染する危険性がある温血動物、特にヒトを処置する方法に関し、該方法は、本明細書において特定した通りの式Ｉの化合物の抗ＨＣＶ有効量の投与を含んでなる。薬剤としての該使用もしくは処置の方法は、ＨＣＶ感染と関連する症状と闘うために有効な量のＨＣＶ感染患者へのもしくはＨＣＶ感染を受けやすい患者への全身投与を含んでなる。
【００８１】
一般に、抗ウイルス有効毎日量は約１〜約２００ｍｇ／ｋｇ、もしくは約５〜約１７５ｍｇ／ｋｇ、もしくは約１０〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、もしくは約２０〜約１００ｍｇ／ｋｇ、もしくは約５０〜約７５ｍｇ／ｋｇ体重であると考えられる。平均毎日用量は、これらの毎日量に約７０を掛けることにより得ることができる。１日を通して適切な間隔で２、３、４もしくはそれ以上のサブ用量として必要とされる用量を投与することが適切であり得る。該サブ用量は、例えば単位投与形態物当たり約１〜約５０００ｍｇ、もしくは約５０〜約３０００ｍｇ、もしくは約１００〜約１０００ｍｇ、もしくは約２００〜約６００ｍｇ、もしくは約１００〜約４００ｍｇの有効成分を含有する、単位投与形態物として調合することができる。
【００８２】
本明細書において用いる場合、「約」という用語は当業者に既知である意味を有する。ある種の態様において、「約」という用語は省略される可能性があり、そして正確な量が意図される。他の態様において、「約」という用語は、「約」という用語の後の数値が該数値の±１５％の、もしくは±１０％の、もしくは±５％の、もしくは±１％の範囲においてであることを意味する。
【実施例】
【００８３】
以下のスキームは実例となるように意図されるだけであり、そして決して範囲を限定しない。
【００８４】
ＬＣ−ＭＳ分析は、以下の方法のいずれか１つを用いて行った。ＮＭＲデータは、Ｂｒｕｋｅｒ  ４００ＭＨｚ分光計上で記録した。
【００８５】
ＨＰＬＣ条件Ａ
システム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  ２．５μｍ  ４．６ｘ５０ｍｍ；カラム温度：５５℃；流量：２ｍＬ／分
移動相Ａ：Ｈ２Ｏ中１０ｍＭ酢酸アンモニウム＋０．１％ＨＣＯＯＨ
移動相Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
時間        ％Ａ      ％Ｂ
０．００    ８５      １５
３．００    ５        ９５
４．２０    ５        ９５
４．３０    ８５      １５
５．４０    ８５      １５
【００８６】
ＨＰＬＣ条件Ｂ
システム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５
カラム：Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ  ３μ  ４．６ｘ５０ｍｍ；カラム温度：５０℃；流量：２ｍＬ／分
移動相Ａ：Ｈ２Ｏ中１０ｍＭ酢酸アンモニウム／ＣＨ３ＣＮ  １／９
移動相Ｂ：Ｈ２Ｏ中１０ｍＭ酢酸アンモニウム／ＣＨ３ＣＮ  ９／１
時間        ％Ａ      ％Ｂ
０．００    ０        １００
３．００    １００    ０
４．２０    １００    ０
４．３０    ０        １００
５．４０    ０        １００
【実施例１】
【００８７】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）-３-アリル-４-（ベンジルオキシ）-５-（ベンジルオキシメチル）-２-メトキシテトラヒドロフラン-３-オール（５）
【００８８】
【化１５】
0005778135.tif 000016
【００８９】
アルゴン雰囲気下で、-７８℃で乾式テトラヒドロフラン（ＴＨＦ；４００ｍＬ）中の４（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２００７，９，３００９−３０１２における通り得られる）の溶液に、臭化アリルマグネシウム（４００ｍＬ、４００ｍｍｏｌ；ジエチルエーテル中１．０Ｍ）を加えた。反応混合物を-７８℃で４時間攪拌した後に、反応混合物を室温で２時間攪拌させた。反応を飽和水性塩化アンモニウムで注意深くクエンチした。混合物をジクロロメタンで抽出し、そして有機層をブラインで洗浄した。溶媒を除き、そして残留物をヘキサン中１５％〜２０％の酢酸エチルでの勾配溶出によりシリカゲルクロマトグラフィー（６００ｇのシリカ）  で精製して反応生成物５を無色の油（３２．９ｇ、７０％）として生成せしめた。ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．９７分、ｍ／ｚ＝４０２（Ｍ＋ＮＨ４）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．３８−７．２０（ｍ，１０Ｈ），５．８４−５．９７（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ），４．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ），４．５６（ｓ，１Ｈ），４．５３−４．４０（ｍ，３Ｈ），４．０５−４．１１（ｍ，１Ｈ），３．３２−３．５３（ｍ，４Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．３，６．７Ｈｚ），２．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．３，７．６Ｈｚ）．
【実施例２】
【００９０】
安息香酸（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）-３-アリル-４-（ベンジルオキシ）-５-（ベンジルオキシメチル）-２-メトキシテトラヒドロフラン-３-イル（６）
【００９１】
【化１６】
0005778135.tif 000017
【００９２】
室温で乾式ジクロロメタン（５００ｍＬ）中の５（２６．６ｇ、６９．２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ-ジメチルピリジン-４-アミン（ＤＭＡＰ；２．１１３ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１７ｍＬ、１５５７ｍｍｏｌ）および塩化ベンゾイル（１８．０５ｍＬ、１５６ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後に、追加の塩化ベンゾイル（６ｍＬ）およびＤＭＡＰ（２．１ｇ）を加えた。混合物を５日間攪拌した。
【００９３】
次に、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌと攪拌し、そしてジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、そして飽和水性ＮａＨＣＯ３、続いてブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ４での乾燥、濾過および揮発性物質の蒸発後に、残留物をヘプタン〜ヘプタン中１５％の酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィー（４００ｇのシリカ）により精製して反応生成物を油として（化合物５との混合物として）生成せしめた。ＣＨ２Ｃｌ２を溶離剤として混合物を再び精製した（４００ｇのシリカ）。純粋画分を集め、そして中間体６を無色の油（１３．０５ｇ、３９％）として得た。ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：３．４１分、ｍ／ｚ＝４５７（Ｍ-ＯＭｅ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．６８−７．２８（ｍ，１３Ｈ），５．８４−５．７７（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ），４．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ），４．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４０（ｄ，ｌＨ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．２（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），３．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），３．７（ｓ，３Ｈ），３．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８，６．２Ｈｚ），３．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，７．３Ｈｚ），２．４５（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝１５．５，７．３Ｈｚ）．
【実施例３】
【００９４】
１-［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）-３-アリル-４-（ベンジルオキシ）-５-（ベンジルオキシメチル）-３-ヒドロキシテトラヒドロフラン-２-イル］ピリミジン-２，４（１Ｈ，３Ｈ）-ジオン（７）
【００９５】
【化１７】
0005778135.tif 000018
【００９６】
無水アセトニトリル（３００ｍＬ）中の６（１４．０ｇ、２３．１ｍｍｏｌ）およびウラシル（５．９９ｇ、５３．４ｍｍｏｌ）の混合物にビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ；２９．２ｍＬ、１１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間還流させ、そして清澄溶液を室温まで冷却させた。塩化スズ（１１．５５ｍＬ、９９ｍｍｏｌ）を室温で滴下して加え、そして混合物を１時間さらに攪拌した。次に、混合物を１．５時間還流で攪拌し、そして室温まで再び冷却した。酢酸エチル（２５０ｍＬ）、続いて飽和水性ＮａＨＣＯ３（２５０ｍＬ）を加え、そして混合物を１５分間攪拌した。セライトを通した濾過の後に、有機層を分離し、そして飽和水性ＮａＨＣＯ３（２５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出し、そして合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして減圧下で蒸発乾固させた。得られる黄色の油をメタノールに溶解し、そして２５％のナトリウムメタノレート（２５ｍＬ）を加えた。攪拌を一晩続けた。追加の２５％ナトリウムメタノレート（１５ｍＬ）を加え、そして攪拌を一晩続けた。酢酸（３０ｍＬ）を加え、そして溶媒を除いた。残留物をヘプタン／酢酸エチル５０：５０〜１００％酢酸エチルでカラムクロマトグラフィーにより精製した。中間体７（９．３８ｇ、７６％）が無色の油として得られた。ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．４９分、ｍ／ｚ＝４６５（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．３９（１Ｈ，ＮＨ），７．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２２−７．４３（ｍ，１０Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），５．７１−５．８４（ｍ，１Ｈ），５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），５．００−５．１１（ｍ，２Ｈ），４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），４．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），４．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），４．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），４．１１−４．１６（ｍ，１Ｈ），４．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），３．８１−３．８７（ｍ，１Ｈ），３．４５−３．５２（ｍ，１Ｈ），３．１７（ｂｓ，ＯＨ），２．１５−２．３３（ｍ，２Ｈ）．
【実施例４】
【００９７】
１-［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）-４-（ベンジルオキシ）-５-（ベンジルオキシメチル）-３-ヒドロキシ-３-（２-ヒドロキシエチル）テトラヒドロフラン-２-イル］ピリミジン-２，４（１Ｈ，３Ｈ）-ジオン（８）
【００９８】
【化１８】
0005778135.tif 000019
【００９９】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１０ｍＬ）の混合物中の７（７．８ｇ、１６．７９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、過ヨウ素酸ナトリウム（１１．１７ｇ、５２．２ｍｍｏｌ）、続いて四酸化オスミウム（ＶＩＩＩ）（２ｍＬ、ｔｅｒｔ-ブタノール中２．５ｗ／ｖ％、０．１６８ｍｍｏｌ）を加え、そして攪拌を室温で２時間続けた。水（１００ｍＬ）を加え、そして抽出を酢酸エチル（２ｘ５０ｍＬ）で行った。有機層を飽和水性ＮａＨＣＯ３（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層を酢酸エチルで抽出し、そして合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で蒸発乾固させた。得られる油性残留物をＴＨＦ（１００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）の混合物に溶解し、そして水素化ホウ素ナトリウム（１．３６１ｇ、３６．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌し、すぐに水（１００ｍＬ）を加え、そして抽出を酢酸エチル（２ｘ５０ｍＬ）で行った。合わせた有機層を飽和水性ＮａＨＣＯ３で洗浄し、合わせた水層を酢酸エチルで抽出し、そして合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で蒸発乾固させた。得られる油性残留物をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％（ｖ／ｖ）メタノール、次に１０％アイソクラチック）により精製し、反応生成物８を白色のフォーム（ｆｏａｍ）（４．８ｇ、５７％）として生成せしめた。ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．１２分、ｍ／ｚ＝４６９（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ９．８５（１Ｈ，ＮＨ），７．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２２−７．４３（ｍ，１０Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），４．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），４．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），４．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ），４．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ），４．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），４．２（ｓ，１Ｈ），４．１，（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），３．７５−３．７（ｍ，１Ｈ），３．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），３．１７（ｂｓ，ＯＨ），１．８−１．７（ｍ，２Ｈ）．
【実施例５】
【０１００】
１-［（４Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｒ）-８-（ベンジルオキシ）-７-（ベンジルオキシメチル）-１，６-ジオキサスピロ［３．４］オクタン-５-イル］ピリミジン-２，４（１Ｈ，３Ｈ）-ジオン（９）
【０１０１】
【化１９】
0005778135.tif 000020
【０１０２】
乾式ピリジン（１００ｍＬ）中の８（４．３２ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）に塩化メタンス
ルホニル（０．８００ｍＬ、１０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。１時間１５分後に、０．１当量追加の塩化メタンスルホニルを加え、そして混合物を室温で４５分間さらに攪拌した。次に、少量のメタノールを加え、そして混合物を蒸発乾固させた。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、そして飽和ＮａＨＣＯ３（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層を酢酸エチルで抽出した。次に、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして真空中で濃縮した。合わせた残留物を乾式ＴＨＦに溶解し、そして９５％ＮａＨ（９３２ｍｇ、３６．９ｍｍｏｌ）を室温ですぐに加えた。室温で２時間攪拌した後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（３０ｍＬ）の飽和水性溶液上に注ぎ、続いてＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）を加えた。分離した有機層を飽和水性ＮａＨＣＯ３（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、そして合わせた水層をＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして減圧下で蒸発乾固させた。得られる残留物を最初にヘプタンで、次に酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して９（３．２７ｇ、７９％）をフォームとして生成せしめた。ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．３３分、ｍ／ｚ＝４５１（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ２．２０−２．３８（ｍ，１Ｈ）２．３８−２．５２（ｍ，１Ｈ）３．６２−３．７３（ｍ，１Ｈ）３．８９−４．１３（ｍ，３Ｈ）４．３８−４．５６（ｍ，３Ｈ）４．５６−４．６８（ｍ，１Ｈ）４．７０−４．８８（ｍ，２Ｈ）５．２５（ｄ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，１Ｈ）６．２５（ｓ，１Ｈ）７．１８−７．４７（ｍ，１０Ｈ）７．８７（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，１Ｈ）８．９０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【実施例６】
【０１０３】
１-［（４Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｒ）-８-ヒドロキシ-７-（ヒドロキシメチル）-１，６-ジオキサスピロ［３．４］オクタン-５-イル］ピリミジン-２，４（１Ｈ，３Ｈ）-ジオン（１０）
【０１０４】
【化２０】
0005778135.tif 000021
【０１０５】
メタノール（１ｍＬ）およびＰｄ（ＯＨ）２（８ｍｇ）中の９（５０ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）の混合物を室温で水素雰囲気下で攪拌した。４時間後に、追加のＰｄ（ＯＨ）２（３０ｍｇ）およびメタノール（１ｍＬ）を加えた。混合物をＨ２雰囲気下で一晩強く攪拌した。触媒をジカライト上での濾過により除き、そして溶媒を蒸発により除いた。得られる残留物を酢酸エチル中１０％のメタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して中間体１０を白色の粉末（１６．８ｍｇ；５６％）として生成せしめた。ＨＰＬＣ条件Ｂ、Ｒｔ：１．９８分、ｍ／ｚ＝２７１（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δｐｐｍ７．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．１１（ｓ，１Ｈ），５．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），４．４６−４．６１（ｍ，２Ｈ），４．０６−４．１３（ｍ，１Ｈ），３．８７−３．９５（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．７７（ｍ，２Ｈ），２．６２−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．４８−２．５８（ｍ，１Ｈ）．
【実施例７】
【０１０６】
２−（クロロ（フェノキシ）ホスホリルアミノ）-２-メチルプロピオン酸メチル（１１）
【０１０７】
【化２１】
0005778135.tif 000022
【０１０８】
ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）中のフェニルホスホロジクロリデート（１．０ｅｑ．、１３．０ｍｍｏｌ、１．９ｍＬ）およびα-アミノイソ酪酸メチル塩酸塩（１．０ｅｑ．、１３．０ｍｍｏｌ、２．０ｇ）の溶液を-８０℃に冷却した。乾式Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ；２．０ｅｑ．、２６．０ｍｍｏｌ、４．３ｍＬ）を滴下して加えた。２時間後に、反応物を室温まで温め、そして溶媒を減圧下で除いた。乾式ジエチルエーテルを加え、そして沈殿物を濾過して分離し、そしてアルゴン雰囲気下で乾式ジエチルエーテルで２回洗浄した。濾液を蒸発乾固させて１１を生成せしめ、それを-１８℃で乾式テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中０．９０Ｍ溶液として保存した。
【実施例８】
【０１０９】
２−［［［（４Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｒ）-５-（２，４−ジオキソ-３，４-ジヒドロピリミジン-１（２Ｈ）-イル）-８-ヒドロキシ-１，６-ジオキサスピロ［３．４］オクタン-７-イル］メトキシ］（フェノキシ）ホスホリルアミノ］-２-メチルプロパン酸メチル（１２ｅ）
【０１１０】
【化２２】
0005778135.tif 000023
【０１１１】
乾式ＴＨＦ（３ｍＬ）中の１０（１．０ｅｑ．、０．２８ｍｍｏｌ、７５ｍｇ）の溶液に室温で１−メチルイミダゾール（ＮＭＩ；１２．０ｅｑ．、３．３３ｍｍｍｏｌ、０．２７ｍＬ）を加えた。中間体１１（１．４ｅｑ．、０．３９ｍｍｏｌ、０．４３ｍＬ）の溶液を滴下して加え、そして混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を０．５Ｍ  ＨＣｌで３回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％メタノール）により精製して化合物１２ｅ（２４ｍｇ、収率＝１５％、純度＝９５％）をジアステレオマーの混合物として生成せしめた。ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：１．４９分、ｍ／ｚ＝５２６（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３３（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），２．４２−２．４３（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．７０−３．７９（ｍ，１Ｈ），３．８０−３．８８（ｍ，０．４Ｈ），３．８８−３．９６（ｍ，０．６Ｈ），４．０９−４．２０（ｍ，１Ｈ），４．２６−４．４８（
ｍ，３Ｈ），５．５０−５．５６（ｍ，１Ｈ），５．６１−５．６９（ｍ，１Ｈ），５．８８−５．９７（ｍ，１Ｈ），５．９７−６．０４（ｍ，１Ｈ），７．１２−７．２４（ｍ，３Ｈ），７．３１−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．２２Ｈｚ，０．４Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，０．６Ｈ），１１．４９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【実施例９】
【０１１２】
上記に概説するのと同様の方法を用いて、以下の化合物を製造した。各場合において分析はジアステレオマーの混合物に対して行った。
【０１１３】
【化２３】
0005778135.tif 000024
【０１１４】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．００分、ｍ／ｚ＝６０２（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．７１−０．８３（ｍ，３Ｈ），１．４５−１．７３（ｍ，２Ｈ），２．３３−２．４８（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７９−３．９６（ｍ，１Ｈ），４．０４−４．１９（ｍ，１Ｈ），４．２４−４．４７（ｍ，３Ｈ），４．９８−５．１４（ｍ，２Ｈ），５．４７−５．５７（ｍ，１Ｈ），５．５８−５．７３（ｍ，１Ｈ），５．９６−６．０３（ｍ，１Ｈ），５．９６−６．０３（ｍ，１Ｈ），７．０９−７．２２（ｍ，３Ｈ），７．２７−７．３９（ｍ，７Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，０．５Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．２２Ｈｚ，０．５Ｈ），１１．５０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１１５】
【化２４】
0005778135.tif 000025
【０１１６】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：１．９２分、ｍ／ｚ＝５８８（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．１９−１．２９（ｍ，３Ｈ），２．３８−２．４６（ｍ，２Ｈ），３．５３−３．９７（ｍ，３Ｈ），４．０６−４．２０（ｍ，１Ｈ），４．２６−４．４６（ｍ，３Ｈ），５．０５−５．１４（ｍ，２Ｈ），５．４９−５．５９（ｍ，１Ｈ），５．６１−５．７３（ｍ，１Ｈ），５．８８−６．０５（ｍ，１Ｈ），６．０７−６．１８（ｍ，１Ｈ），７．０９−７．２３（ｍ，３Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，７Ｈ），７．４３−７．５１（ｍ，１Ｈ），１１．５１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１１７】
【化２５】
0005778135.tif 000026
【０１１８】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．００分、ｍ／ｚ＝５６８（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．７９−０．９３（ｍ，９Ｈ），１．２０−１．３２（ｍ，３Ｈ），２．３３−２．５０（ｍ，２Ｈ），３．６３−３．７０（ｍ，１Ｈ），３．７１−３．８０（ｍ，２Ｈ），３．８０−３．９３（ｍ，２Ｈ），４．０４−４．２１（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．４６（ｍ，３Ｈ），５．４９−５．５９（ｍ，１Ｈ），５．５８−５．７２（ｍ，１Ｈ），５．９４−６．０３（ｍ，１Ｈ），６．０２−６．１４（ｍ，１Ｈ），７．１１−７．２５（ｍ，３Ｈ），７．３２−７．３９（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．５３（ｍ，１Ｈ），１１．５１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１１９】
【化２６】
0005778135.tif 000027
【０１２０】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：１．８８分、ｍ／ｚ＝５５４（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．７７−０．９３（ｍ，３Ｈ），１．１４−１．２５（ｍ，３Ｈ），１．２４−１．３７（ｍ，２Ｈ），１．４１−１．６２（ｍ，２Ｈ），２．３５−２．４７（ｍ，２Ｈ），３．６３−３．９２（ｍ，３Ｈ），３．９２−４．０６（ｍ，２Ｈ），４．０５−４．２１（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．４６（ｍ，３Ｈ），５．４８−５．５９（ｍ，１Ｈ），５．５９−５．７２（ｍ，１Ｈ），５．８９−６．１５（ｍ，２Ｈ），７．０９−７．２５（ｍ，３Ｈ），７．３１−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．４３−７．５２（ｍ，１Ｈ），１１．５１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【０１２１】
【化２７】
0005778135.tif 000028
【０１２２】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：３．４６分、ｍ／ｚ＝６４４（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．３７−１１．６１（１Ｈ，ｍ）７．４０−７．４６（１Ｈ，ｍ）７．２７−７．３９（５Ｈ，ｍ）７．０９−７．１９（２Ｈ，ｍ）６．８９−６．９６（１Ｈ，ｍ）６．０７−６．２０（１Ｈ，ｍ）５．９８−６．０３（１Ｈ，ｍ）５．５８−５．７２（１Ｈ，ｍ）５．４５−５．５２（１Ｈ，ｍ）５．０２−５．１５（２Ｈ，ｍ）４．２３−４．４５（３Ｈ，ｍ）４．０５−４．１８（１Ｈ，ｍ）３．８２−３．９８（２Ｈ，ｍ）３．６９−３．７８（１Ｈ，ｍ）３．１３−３．２６（１Ｈ，ｍ）２．３７−２．４７（２Ｈ，ｍ）２．１５−２．２３（３Ｈ，ｍ）１．２４−１．３２（３Ｈ，ｍ）１．０６−１．１５（６Ｈ，ｍ）
【０１２３】
【化２８】
0005778135.tif 000029
【０１２４】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．０８および２．２１分（個々のジアステレオマーが見られる）、ｍ／ｚ＝５４０（Ｍ＋Ｈ）＋、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．３９−１１．６０（１Ｈ，ｍ）７．４４−７．５２（１Ｈ，ｍ）７．３１−７．４０（２Ｈ，ｍ）７．１２−７．２４（３Ｈ，ｍ）５．９５−６．０７（２Ｈ，ｍ）５．５９−５．７１（１Ｈ，ｍ）５．５１−５．５８（１Ｈ，ｍ）４．７８−４．９１（１Ｈ，ｍ）４．２６−４．４４（３Ｈ，ｍ）４．０６−４．２０（１Ｈ，ｍ）３．８４−３．９５（１Ｈ，ｍ）３．６８−３．８３（２Ｈ，ｍ）２．３７−２．５８（２Ｈ，ｍ）１．１６−１．２５（３Ｈ，ｍ）１．１１−１．１６（６Ｈ，ｍ）
【０１２５】
【化２９】
0005778135.tif 000030
【０１２６】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：３．０３分、ｍ／ｚ＝６５０（Ｍ＋Ｈ）＋、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．３４−１１．６２（１Ｈ，ｍ）７．０５−７．４６（１６Ｈ，ｍ）６．７１−６．８４（１Ｈ，ｍ）５．９５−６．０３（１Ｈ，ｍ）５．５６−５．７１（１Ｈ，ｍ）５．４６−５．５３（１Ｈ，ｍ）４．９５−５．１６（３Ｈ，ｍ）４．２３−４．４５（３Ｈ，ｍ）４．０５−４．２１（１Ｈ，ｍ）３．７７−３．８８（１Ｈ，ｍ）３．６８−３．７７（１Ｈ，ｍ）２．３５−２．４５（２Ｈ，ｍ）
【０１２７】
【化３０】
0005778135.tif 000031
【０１２８】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．３８および２．４８分（個々のジアステレオマーが見られる）、ｍ／ｚ＝５５４（Ｍ＋Ｈ）＋、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１１．３８−１１．６１（１Ｈ，ｍ）７．４３−７．５３（１Ｈ，ｍ）７．３１−７．４１（２Ｈ，ｍ）７．１１−７．２５（３Ｈ，ｍ）５．９０−６．０６（２Ｈ，ｍ）５．５９−５．７１（１Ｈ，ｍ）５．５０−５．５９（１Ｈ，ｍ）４．７９−４．９３（１Ｈ，ｍ）４．２７−４．４６（３Ｈ，ｍ）４．０３−４．２１（１Ｈ，ｍ）３．８２−３．９５（１Ｈ，ｍ）３．６８−３．８１（１Ｈ，ｍ）３．５２−３．６６（１Ｈ，ｍ）２．３８−２．５１（２Ｈ，ｍ）１．４４−１．７２（２Ｈ，ｍ）１．０９−１．２１（６Ｈ，ｍ）０．７２−０．８９（３Ｈ，ｍ）
【０１２９】
【化３１】
0005778135.tif 000032
【０１３０】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．８４および２．９４分（個々のジアステレオマーが見られる）、ｍ／ｚ＝６２２（Ｍ＋Ｈ）＋、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ１．３８（ｄ，Ｊ＝８．５９Ｈｚ，３Ｈ），２．３８−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．６６−２．８４（ｍ，１Ｈ），３．２５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），３．７８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），３．８１−３．９４（ｍ，１Ｈ），３．９５−４．１５（ｍ，２Ｈ），４．２３−４．４２（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．５８（ｍ，２Ｈ），４．６０−４．７２（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），５．６８（ｄ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，１Ｈ），６．０７（ｓ，０Ｈ），７．０１−７．１９（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．４３（ｍ，７Ｈ），８．７６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【０１３１】
【化３２】
0005778135.tif 000033
【０１３２】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：３．０６分、ｍ／ｚ＝６３８（Ｍ＋Ｈ）＋。１１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ１．２３−１．４１（ｍ，２Ｈ），１．６６（ｂｒ．ｓ．，０Ｈ），１．９３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．３７（ｍ，Ｊ＝１２．５６，１２．５６，８．６３，６．２４Ｈｚ，１Ｈ），２．５４−２．７５（ｍ，１Ｈ），３．４４−３．６７（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝９．２７，１．８５Ｈｚ，１Ｈ），３．８６−４．０３（ｍ，１Ｈ），４．０５−４．１７（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．２８（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．４１（ｍ，１Ｈ），４．４１−４．６６（ｍ，３Ｈ），４．９６−５．１６（ｍ，２Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，０Ｈ），５．４４（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，０Ｈ），６．１１（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．１９Ｈｚ，０Ｈ），７．１８−７．４１（ｍ，６Ｈ），７．４４−７．５７（ｍ，３Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，１Ｈ），７．７８−７．８９（ｍ，１Ｈ），８．０１−８．１８（ｍ，１Ｈ），９．３７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【０１３３】
【化３３】
0005778135.tif 000034
【０１３４】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．４８および２．５９分（個々のジアステレオマーが見られる）、ｍ／ｚ＝５５４（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ０．９２（ｄ，Ｊ＝５．４６Ｈｚ，５Ｈ）１．２８−１．４５（ｍ，２Ｈ）１．４８−２．０２（ｍ，２Ｈ）２．３８−２．５６（ｍ，１Ｈ）２．６４−２．８７（ｍ，１Ｈ）３．６７−４．１７（ｍ，５Ｈ）４．２８−４．５８（ｍ，２Ｈ）４．６６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）５．６０−５．７０（ｍ，１Ｈ）６．１９（ｓ，１Ｈ）７．１０−７．４９（ｍ，６Ｈ）８．５６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【０１３５】
【化３４】
0005778135.tif 000035
【０１３６】
ＨＰＬＣ条件Ａ、Ｒｔ：２．６１分、ｍ／ｚ＝６０８（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ２．４０−２．５６（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．８２（ｍ，１Ｈ），３．２９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），３．７１−３．９７（ｍ，４Ｈ），３．９７−４．１０（ｍ，１Ｈ），４．３２−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．５９（ｍ，２Ｈ），４．６１−４．７０（ｍ，１Ｈ），５．１６（ｓ，２Ｈ），５．６８（ｄ，Ｊ＝７．８０Ｈｚ，１Ｈ），６．１０（ｄ，Ｊ＝６．４４Ｈｚ，１Ｈ），７．１０−７．１９（ｍ，２Ｈ），７．２４−７．３０（ｍ，３Ｈ），７．３０−７．４２（ｍ，５Ｈ），８．８２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【０１３７】
［生物学的実施例］
レプリコンアッセイ
式Ｉの化合物は、細胞アッセイにおいてＨＣＶ−ＲＮＡ複製の阻害における活性について調べた。アッセイは、ＨＣＶレプリコンとしても知られている、ＨＣＶ機能性細胞複製
細胞系を式Ｉの化合物が阻害することを示すために用いた。細胞アッセイは、複数標的スクリーニング戦略における、Ｋｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７５：４６１４−４６２４により記述される改変を有するＬｏｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｖｏｌ．２８５  ｐｐ．１１０−１１３により記述されるような、２シストロン性発現構築物に基づいた。
【０１３８】
本質的に、方法は下記の通りであった。アッセイは、安定にトランスフェクションされた細胞系Ｈｕｈ−７  ｌｕｃ／ｎｅｏ（以下にＨｕｈ−Ｌｕｃと称する）を利用した。この細胞系は、レポーター部分（ＦｆＬ−ルシフェラーゼ）および選択可能なマーカー部分（ｎｅｏＲ、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ）が前に置かれる、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からの内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）から翻訳されるＨＣＶ１ｂ型の野生型ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域を含んでなる２シストロン性発現構築物をコードするＲＮＡを保有する。構築物には、ＨＣＶ遺伝子型１ｂからの５’および３’ＮＴＲ（非翻訳領域）が隣接している。Ｇ４１８（ｎｅｏＲ）の存在下でのレプリコン細胞の継続培養は、ＨＣＶ−ＲＮＡの複製に依存する。とりわけルシフェラーゼをコードする、自律的にそして高レベルに複製する、ＨＣＶ−ＲＮＡを発現する安定にトランスフェクションされたレプリコン細胞を抗ウイルス化合物をスクリーニングするために使用した。
【０１３９】
様々な濃度において加えた試験およびコントロール化合物の存在下でレプリコン細胞を３８４ウェルプレートにおいて平板培養した。３日のインキュベーションの後に、ルシフェラーゼ活性をアッセイすることにより（標準的なルシフェラーゼアッセイ基質および試薬ならびにＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＶｉｅｗＬｕｘＴＭ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレート撮像装置を用いて）ＨＣＶ複製を測定した。コントロール培養物におけるレプリコン細胞は、任意の阻害剤の不在下で高いルシフェラーゼ発現を有する。ルシフェラーゼ活性に対する化合物の阻害活性をＨｕｈ−Ｌｕｃ細胞上でモニターし、各試験化合物について用量反応曲線を可能にした。次にＥＣ５０値を計算し、この値は検出されるルシフェラーゼ活性のレベルを５０％、もしくはさらに特に、遺伝子的に連結されたＨＣＶレプリコンＲＮＡが複製する能力を減少するために必要とされる化合物の量を表す。
【０１４０】
結果
表１は、上記に示した実施例の化合物について得られるレプリコン結果（ＥＣ５０、レプリコン）および細胞毒性結果（ＣＣ５０（μＭ））（Ｈｕｈ−７））を示す。また、ＨＩＶ活性（ＥＣ５０ＨＩＶ（μＭ））およびＨＩＶ細胞系における細胞毒性（ＣＣ５０（μＭ）（ＭＴ−４））も示される。
【０１４１】
【表１】
0005778135.tif 000036