(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
発酵ギンネムの抽出物を含有することを特徴とする皮膚線維芽細胞増殖促進剤。
【請求項２】
発酵ギンネムの抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ−１産生促進剤。
【請求項３】
発酵ギンネムの抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ活性阻害剤。
【請求項４】
発酵ギンネムの抽出物を含有することを特徴とするＭＭＰ−１活性阻害剤。
【請求項５】
発酵ギンネムの抽出物を含有することを特徴とするエストロゲン様作用剤。
【請求項６】
発酵ギンネムの抽出物を含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項７】
発酵ギンネムの抽出物を含有することを特徴とするＵＶ−Ｂダメージからの回復作用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物発酵抽出物を含有する抗老化剤、並びに、前記抗老化剤を利用した皮膚外用剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、コラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
【０００３】
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
コラーゲンの中でもＩ型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。
また、エラスターゼは皮膚の真皮に存在するエラスチンの加水分解酵素であるが、エラスターゼは、紫外線暴露や老化により過剰発現することがあり、エラスターゼによりエラスチンが変性・破壊されると、皮膚の弾力性が低下すると考えられている。
【０００４】
また、近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群が挙げられる。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３）、（２）ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９）、（３）ストロメライシン群（ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０）、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献１参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
【０００５】
また、加齢に伴う皮膚老化の一因として、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することがある。エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっており、その分泌不足は種々の内科的疾患を招く他、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等の好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。
【０００６】
また、角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から形成される。セラミドを主成分とする細胞間脂質は、ラメラ構造を形成することにより、角層バリア機能を担っている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、以下「ＣＥ」と略す。）という疎水的で強靭な細胞膜様構造物に覆われている。ＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリン、ロリクリンなど複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼ−１により架橋され、不溶化して形成され、このＣＥが皮膚のバリア機能に密接に関与している。さらに、その一部にはセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角層バリア機能及び皮膚の水分保持機能の基礎が形成される。
【０００７】
しかしながら、加齢、乾燥、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）などの影響によりターンオーバー速度に異常が生じると、ラメラ構造の乱れやＣＥが不完全な状態で形成された、いわゆる不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角層の水分保持機能及びバリア機能は低下する。このことが肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状につながると考えられる。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の患者では、バリア機能が低下した皮疹部で未熟なＣＥが高頻度に観察され、ＣＥが正しく形成されることが皮膚のバリア機能に非常に重要であると考えられている（非特許文献１参照）。
【０００８】
このようなことから、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用等の各作用を有する抗老化剤は、皮膚の弾力性低下、荒れ、シワ等の皮膚の老化症状を、効果的に予防乃至改善することができると考えられる。
【０００９】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚外用剤及び飲食品に広く使用可能な抗老化剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【００１０】
【特許文献１】特開２０００−３４４６７２号公報
【非特許文献１】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １２：５９１−６０１（２００３）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた抗老化作用（皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用等）を有し、かつ、安全性の高い抗老化剤、並びに、前記抗老化剤を利用した皮膚外用剤及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、ヨモギ、バガス、グアバ、ニガナ、ギンネム、ウコン、及び月桃の各植物をそれぞれ発酵させて得られる各植物発酵物を、更に抽出することにより得られる各植物発酵抽出物が、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかに基づく、優れた抗老化作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  発酵ヨモギの抽出物、発酵バガスの抽出物、発酵グアバの抽出物、発酵ニガナの抽出物、発酵ギンネムの抽出物、発酵ウコンの抽出物、及び発酵月桃の抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜２＞  皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗老化剤である。
＜３＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗老化剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤である。
＜４＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗老化剤を含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗老化作用（皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用等）を有し、かつ、安全性の高い抗老化剤、並びに、前記抗老化剤を利用した皮膚外用剤及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（抗老化剤）
本発明の抗老化剤は、発酵ヨモギの抽出物、発酵バガスの抽出物、発酵グアバの抽出物、発酵ニガナの抽出物、発酵ギンネムの抽出物、発酵ウコンの抽出物、及び発酵月桃の抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記発酵ヨモギの抽出物、発酵バガスの抽出物、発酵グアバの抽出物、発酵ニガナの抽出物、発酵ギンネムの抽出物、発酵ウコンの抽出物、及び発酵月桃の抽出物とはそれぞれ、ヨモギ、バガス、グアバ、ニガナ、ギンネム、ウコン、及び月桃の各植物をそれぞれ発酵させて得られる発酵物（本明細書中において、「植物発酵物」と称することがある）を、更に抽出することにより得られる抽出物（本明細書中において、「植物発酵抽出物」と称することがある）をいう。
【００１６】
前記抗老化剤は、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかに基づく抗老化作用を有するものである。
前記発酵ヨモギの抽出物、発酵バガスの抽出物、発酵グアバの抽出物、発酵ニガナの抽出物、発酵ギンネムの抽出物、発酵ウコンの抽出物、及び発酵月桃の抽出物における、抗老化作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物発酵抽出物がこのような優れた作用を有し、抗老化剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００１７】
前記ヨモギは、キク科の植物であり、学名はＡｒｔｅｍｉｓｉａ ｐｒｉｎｃｅｐｓである。前記ヨモギは、多年草であり、日本全国に広く分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
発酵原料として使用する前記ヨモギの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉、茎が好ましい。
前記バガス（ｂａｇａｓｓｅ）とは、サトウキビ（学名：Ｓａｃｃｈａｒｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ）から砂糖を製造する過程で発生するサトウキビの圧搾かすである。そのため、前記バガスは、サトウキビから砂糖を製造する際の廃棄物として、容易に入手可能である。
発酵原料として使用する前記バガスとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、生バガス、乾燥バガスなどが挙げられ、これらの中でも、乾燥バガスが好ましい。
前記グアバは、フトモモ科の植物であり、学名はＰｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ  Ｌｉｎｎである。前記グアバは、常緑樹であり、東南アジア、中国南部、ハワイなどの熱帯、亜熱帯地域に広く分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
発酵原料として使用する前記グアバの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記ニガナは、キク科の植物であり、学名はＣｒｅｐｉｄｉａｓｔｒｕｍ ｌａｎｃｅｏｌａｔｕｍ  Ｎａｋａｉである。前記ニガナは、多年草であり、沖縄など、日本の山地や野原に広く植生・分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
発酵原料として使用する前記ニガナの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記ギンネムは、マメ科の植物であり、学名はＬｅｕｃａｅｎａ ｌｅｕｃｏｃｅｐｈａｌａである、前記ギンネムは、多年性植物であり、熱帯、亜熱帯地方に広く分布しており、また、日本では沖縄地方でも栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。
発酵原料として使用する前記ギンネムの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉、茎が好ましい。
前記ウコンは、ショウガ科の植物であり、学名はＣｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ  Ｌ．である。前記ウコンは、多年草であり、インド、東南アジア、中国南部などの熱帯地方や、日本では沖縄地方でも栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。
発酵原料として使用する前記ウコンの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根茎が好ましい。
前記月桃は、ショウガ科の植物であり、学名はＡｌｐｉｎｉａ ｓｐｅｃｉｏｓａ  Ｋ．Ｓｃｈｕｍである。前記月桃は、多年草であり、九州南部から中国南部〜熱帯アジアに広く分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
発酵原料として使用する前記月桃の部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
【００１８】
前記各植物は、各植物発酵物を得るための発酵原料として使用される。前記各植物を、任意の方法で発酵させることにより、各植物発酵物を得ることができる。前記各植物の発酵方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、特開２００４−２６７１００号公報（ヨモギ）、特許第４０３１６３７号公報（ヨモギ、グアバ、月桃）、特許第４０６７８０５号（バガス）、特開２００６−３４７９８５号公報（ニガナ）、特許第２５９６４７２号公報（ギンネム）、特許第２９４９４１１号（ウコン）、特開２００４−３４５９８６号公報（ウコン）、特開２００７−９９６２５号公報（月桃）に記載の方法などを、好適に採用することができる。具体的には、例えば、前記各植物を、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、乳酸菌、酵母、枯草菌などの微生物による発酵処理に供することにより、前記各植物発酵物を得ることができる。
【００１９】
前記のようにして得られた各植物発酵物は、各植物発酵抽出物を得るための抽出原料として使用される。前記各植物発酵物は、例えば、乾燥した後、溶媒抽出に供することができる。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、前記各植物発酵物は、滅菌処理を施してから、抽出原料として使用してもよい。前記滅菌処理は、例えば、加熱等の公知の方法により行うことができる。なお、前記各植物発酵物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから、抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記各植物発酵物の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００２０】
前記各植物発酵抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用して、前記植物発酵物に抽出処理を施すことにより、容易に得ることができる。また、前記各植物発酵抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記各植物発酵抽出物には、前記各植物発酵物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２１】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記各植物発酵物に含まれる抗老化作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００２２】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
なお、発酵月桃を抽出原料とする場合、これらの溶媒の中でも、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用等を高めることができる点で、低級アルコールを、水１０質量部に対して５〜２０質量部混合した混合溶媒を使用することが好ましい。
【００２４】
抽出原料である前記各植物発酵物から、抗老化作用を有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜９５℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗老化剤の有効成分として用いることができる。
【００２５】
抽出により得られる前記各植物発酵物の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記各植物発酵物の抽出液は、そのままでも抗老化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記各植物発酵物は特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記各植物発酵物の抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２６】
以上のようにして得られる前記各植物発酵物の抽出物（植物発酵抽出物）は、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の抗老化剤の有効成分として好適に利用可能なものである。なお、前記植物発酵抽出物は、前記した各作用に基づき、皮膚線維芽細胞増殖促進剤、トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤、エラスターゼ活性阻害剤、ＭＭＰ−１活性阻害剤、エストロゲン様作用剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、表皮角化細胞増殖促進剤、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用剤としても、それぞれ好適に利用可能である。
前記抗老化剤中の前記各植物発酵抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記抗老化剤は、前記各植物発酵抽出物そのものであってもよい。
また、前記抗老化剤中、前記各植物発酵抽出物は、いずれか１種のみが含まれていてもよいし、２種以上が含まれていてもよい。前記抗老化剤中に２種以上の植物発酵抽出物が含まれる場合の、各々の含有量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２７】
また、前記抗老化剤中に含まれ得る、前記各植物発酵抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記各植物発酵抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記抗老化剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記抗老化剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００２８】
本発明の抗老化剤は、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかに基づく、優れた抗老化作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚外用剤、本発明の飲食品などへの利用に好適である。
【００２９】
（皮膚外用剤）
本発明の皮膚外用剤は、前記した本発明の抗老化剤を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記皮膚外用剤とは、皮膚に適用される各種の薬剤を意味し、その区分としては特に制限されるものではなく、例えば、皮膚化粧料、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものである。
前記皮膚外用剤は、前記各植物発酵抽出物を、その活性を妨げないように任意の皮膚外用剤に配合したものであってもよいし、前記各植物発酵抽出物を主成分とした皮膚外用剤であってもよい。また、前記皮膚外用剤は、前記各植物発酵抽出物そのものであってもよい。
【００３０】
前記皮膚外用剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、美容液、ローション、パック、ファンデーション、リップクリーム、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディシャンプーなどが挙げられる。
【００３１】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、皮膚外用剤を製造するにあたって通常用いられる成分、例えば、収斂剤、殺菌、抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、抗老化剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。
【００３２】
前記皮膚外用剤中の、前記抗老化剤の含有量としては、特に制限はなく、皮膚外用剤の種類などに応じて適宜選択することができるが、例えば、前記各植物発酵抽出物の量として、０．０００１〜１０質量％が好ましく、０．００１〜５質量％がより好ましい。
【００３３】
（飲食品）
本発明の飲食品は、前記した本発明の抗老化剤を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記飲食品は、前記各植物発酵抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、前記各植物発酵抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記飲食品は、前記各植物発酵抽出物そのものであってもよい。
【００３４】
前記飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００３５】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００３６】
前記飲食品中の、前記抗老化剤の含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分である前記各植物発酵抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、前記各植物発酵抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分である前記各植物発酵抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００３７】
（効果）
本発明の抗老化剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品は、日常的に使用することが可能であり、有効成分である前記各植物発酵抽出物の働きによって、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかに基づく抗老化作用を、極めて効果的に発揮させることができるものである。そのため、本発明の抗老化剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品によれば、皮膚の弾力性低下、荒れ、シワ等の皮膚の老化症状の予防・改善を、効果的に行えるようになることが期待される。
【００３８】
なお、本発明の抗老化剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明の抗老化剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品は、天然由来の各植物発酵抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００３９】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００４０】
（製造例１）
−各植物発酵物の水抽出物の製造−
抽出原料となる植物発酵物として、発酵ヨモギ、発酵バガス、発酵グアバ、発酵ニガナ、発酵ギンネム、発酵ウコン、及び発酵月桃（いずれも株式会社琉球バイオリソース開発製）をそれぞれ使用した。前記各植物発酵物１００ｇを、水１０００ｍｌに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、９０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、粉末状の抽出物を得た。得られた抽出物（植物発酵抽出物）の収率を表１に示す。
【００４１】
（製造例２）
−各植物発酵物の５０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料となる植物発酵物として、発酵ヨモギ、発酵バガス、発酵グアバ、発酵ニガナ、発酵ギンネム、発酵ウコン、及び発酵月桃（いずれも株式会社琉球バイオリソース開発製）をそれぞれ使用した。前記各植物発酵物１００ｇを、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）１０００ｍｌに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、９０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、粉末状の抽出物を得た。得られた抽出物（植物発酵抽出物）の収率を表１に示す。
【００４２】
（製造例３）
−各植物発酵物の８０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料となる植物発酵物として、発酵ヨモギ、発酵バガス、発酵グアバ、発酵ニガナ、発酵ギンネム、発酵ウコン、及び発酵月桃（いずれも株式会社琉球バイオリソース開発製）をそれぞれ使用した。前記各植物発酵物１００ｇを、８０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：４）１０００ｍｌに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、９０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、粉末状の抽出物を得た。得られた抽出物（植物発酵抽出物）の収率を表１に示す。
【００４３】
【表１】
0005822423.tif 000002
【００４４】
（実施例１：皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
【００４５】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、３日間培養した。皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、各ｗｅｌｌから１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに２０μＬずつ添加した。４．５時間培養した後に、１０％ＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌ  塩酸溶液を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加し、一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
皮膚線維芽細胞増殖促進作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表２〜７に示す。
皮膚線維芽細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）×１００
Ｓｔ：被験試料を添加した細胞での吸光度
Ｓｂ：被験試料を添加した空試験の吸光度
Ｃｔ：被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｃｂ：被験試料を添加しない空試験の吸光度
【００４６】
【表２】
0005822423.tif 000003
【００４７】
【表３】
0005822423.tif 000004
【００４８】
【表４】
0005822423.tif 000005
【００４９】
【表５】
0005822423.tif 000006
【００５０】
【表６】
0005822423.tif 000007
【００５１】
【表７】
0005822423.tif 000008
【００５２】
（実施例２：トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりトランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。
【００５３】
ヒト正常新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）をヒト正常新生児表皮角化細胞用培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、２日間培養した。培養終了後、ＫＧＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量をモノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。
トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表８〜１２に示す。
トランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料無添加時（コントロール）の波長４０５ｎｍにおける吸光度
【００５４】
【表８】
0005822423.tif 000009
【００５５】
【表９】
0005822423.tif 000010
【００５６】
【表１０】
0005822423.tif 000011
【００５７】
【表１１】
0005822423.tif 000012
【００５８】
【表１２】
0005822423.tif 000013
【００５９】
（実施例３：エラスターゼ活性阻害作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりエラスターゼ活性阻害作用を試験した。
【００６０】
９６ｗｅｌｌプレートにて、０．２ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した被験試料５０μＬ及び２０μｇ／ｍＬ  エラスターゼ・タイプIII溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬ  Ｎ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥ  １００μＬを添加して、２５℃にて１５分反応させた。反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
エラスターゼ活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表１３〜１４に示す。
エラスターゼ活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
Ａ：被験試料無添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料無添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
【００６１】
【表１３】
0005822423.tif 000014
【００６２】
【表１４】
0005822423.tif 000015
【００６３】
（実施例４：ＭＭＰ−１活性阻害作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＭＭＰ−１活性阻害作用を試験した。
【００６４】
試験方法としては、Ｗｕｎｓｃｈ  ａｎｄ  Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変した方法を使用した。即ち、蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬ  塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した被験試料５０μＬ、ＭＭＰ−１（ＣＯＬＬＡＧＥＮＡＳＥ  Ｔｙｐｅ  ＩＶ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（Ｓｉｇｍａ社））溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ  Ｆｅｉｎｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ  ＡＧ社））溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌ  クエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
ＭＭＰ−１活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表１５〜１９に示す。
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
Ａ：被験試料無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加、酵素無添加での３２０ｎｍにおける吸光度
【００６５】
【表１５】
0005822423.tif 000016
【００６６】
【表１６】
0005822423.tif 000017
【００６７】
【表１７】
0005822423.tif 000018
【００６８】
【表１８】
0005822423.tif 000019
【００６９】
【表１９】
0005822423.tif 000020
【００７０】
（実施例５：エストロゲン様作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりエストロゲン様作用を試験した。
【００７１】
ヒト乳癌由来細胞（ＭＣＦ−７）を１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌ  ピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を活性炭処理した１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌ  ピルビン酸ナトリウムを含有するフェノールレッド不含ＭＥＭ（Ｔ−ＭＥＭ）を用いて３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり４５０μＬずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。６時間後（０日目）にＴ−ＭＥＭで終濃度の１０倍に調製した被験試料を各ｗｅｌｌに５０μＬ添加し培養を続けた。３日目に培地を抜き、Ｔ−ＭＥＭで終濃度に調製した被験試料を各ｗｅｌｌに０．５ｍＬ添加し、さらに培養を続けた。エストロゲン様作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、１％ＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭに終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、１×１０−９Ｍエストラジオールを使用した。
エストロゲン様作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表２０〜２４に示す。
エストロゲン様作用率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料添加時の吸光度
Ｂ：被験試料無添加時の吸光度
【００７２】
【表２０】
0005822423.tif 000021
【００７３】
【表２１】
0005822423.tif 000022
【００７４】
【表２２】
0005822423.tif 000023
【００７５】
【表２３】
0005822423.tif 000024
【００７６】
【表２４】
0005822423.tif 000025
【００７７】
（実施例６：Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００７８】
ヒト正常線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に上記培地で希釈した後、９６ｗｅｌｌマイクロプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．２５％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１５０μＬ添加し、３日間培養した。培養後、各ｗｅｌｌの培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
Ｉ型コラーゲン産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表２５〜２９に示す。
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料添加時のＩ型コラーゲン量
Ｂ：被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量
【００７９】
【表２５】
0005822423.tif 000026
【００８０】
【表２６】
0005822423.tif 000027
【００８１】
【表２７】
0005822423.tif 000028
【００８２】
【表２８】
0005822423.tif 000029
【００８３】
【表２９】
0005822423.tif 000030
【００８４】
（実施例７：表皮角化細胞増殖促進作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
【００８５】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（発酵ニガナ、発酵ウコンの場合）又は２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ（発酵月桃の場合）の濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、３日間培養した。表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。
表皮角化細胞増殖促進作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表３０〜３２に示す。
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝Ｓｔ／Ｃｔ×１００
Ｓｔ：被験試料を添加した細胞での吸光度
Ｃｔ：被験試料を添加しない細胞での吸光度
【００８６】
【表３０】
0005822423.tif 000031
【００８７】
【表３１】
0005822423.tif 000032
【００８８】
【表３２】
0005822423.tif 000033
【００８９】
（実施例８：ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用試験）
前記各植物発酵抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＵＶ−Ｂダメージからの回復作用を試験した。
【００９０】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をα−ＭＥＭを用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり２００μＬずつ播種した。２４時間培養後、培地を１００μＬのＰＢＳ（−）へ交換し、１．０Ｊ／ｃｍ２のＵＶ−Ｂを照射した。照射後、直ちに、ＰＢＳ（−）を抜き、１０％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭに溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに４００μＬ添加し、２４時間培養した。紫外線ＵＶ−Ｂダメージからの回復効果は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様に細胞播種した後、ＵＶ−Ｂを照射しない細胞、及び細胞播種後ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
ＵＶ−Ｂダメージ回復作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表３３〜３４に示す。
ＵＶ−Ｂダメージ回復率（％）＝｛（Ｎｔ−Ｃ）−（Ｎｔ−Ｓａ）｝／（Ｎｔ−Ｃ）×１００
Ｎｔ：ＵＶ−Ｂを照射しない細胞での吸光度
Ｃ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｓａ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加した細胞での吸光度
【００９１】
【表３３】
0005822423.tif 000034
【００９２】
【表３４】
0005822423.tif 000035
【００９３】
実施例１〜８の結果から、発酵ヨモギの抽出物、発酵バガスの抽出物、発酵グアバの抽出物、発酵ニガナの抽出物、発酵ギンネムの抽出物、発酵ウコンの抽出物、及び発酵月桃の抽出物は、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、及びＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の少なくともいずれかを有することが確認され、これらのことから、発酵ヨモギの抽出物、発酵バガスの抽出物、発酵グアバの抽出物、発酵ニガナの抽出物、発酵ギンネムの抽出物、発酵ウコンの抽出物、及び発酵月桃の抽出物が、抗老化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００９４】
（配合例１）
−乳液−
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
・発酵ヨモギの５０質量％エタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カツミレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
【００９５】
（配合例２）
−化粧水−
下記組成に従い、化粧水を常法により製造した。
・発酵バガスの５０質量％エタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００９６】
（配合例３）
−クリーム−
下記組成に従い、クリームを常法により製造した。
・発酵グアバの５０質量％エタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００９７】
（配合例４）
−パック−
下記組成に従い、パックを常法により製造した。
・発酵ニガナの５０質量％エタノール抽出物・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【００９８】
（配合例５）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・発酵ギンネムの５０質量％エタノール抽出物・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【００９９】
（配合例６）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・発酵月桃の５０質量％エタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【０１００】
本発明の抗老化剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品は、優れた抗老化作用を有するので、例えば、皮膚の弾力性低下、荒れ、シワ等の皮膚の老化症状の予防・改善を目的とした皮膚外用剤や飲食品に、好適に利用可能である。