(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤエヤマノイバラの抽出物を含有することを特徴とし、抽出する溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
ヤエヤマノイバラの抽出物を含有することを特徴とし、抽出する溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とするコラゲナーゼ活性阻害剤。
【請求項３】
ヤエヤマノイバラの抽出物を含有することを特徴とし、抽出する溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とするメラニン生成抑制剤。
【請求項４】
ヤエヤマノイバラの抽出物を含有することを特徴とし、抽出する溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とする細胞増殖促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性酸素消去、コラゲナーゼ活性阻害、メラニン生成抑制及び細胞増殖促進作用に優れた新規な外用剤又は内用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内には活性酸素消去酵素が存在しており、その能力を超える活性酸素が発生しないかぎり活性酸素の傷害から皮膚細胞を防衛している。ところが、皮膚細胞内の活性酸素消去酵素の活性は加齢とともに低下することが知られており、活性酸素による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。また、皮膚以外の臓器においても、その活性酸素消去能を越える活性酸素に曝されたとき、機能低下が起こり老化してゆくと考えられる。そこで、活性酸素による傷害からの防御を目的として活性酸素消去剤や抗酸化剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質などの活性酸素消去剤や抗酸化剤を配合した食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等が開発されている（特許文献１，２参照）。
【０００３】
【特許文献１】特開平９−１１８６３０号公報
【特許文献２】特開平９−２０８４８４号公報
【０００４】
紫外線によってコラゲナーゼ等のマトリックスメタロプロテアーゼが活性化され、真皮中のコラーゲンを減少させることによりシワやタルミを促進することが報告されている。一方、口腔領域では歯周病の発症や進行にポルフィロモナス・ジンジバリスが関わっており、それが産生するコラゲナーゼによって歯周組織が破壊されることが知られている。このため、コラゲナーゼの活性を阻害することにより、皮膚の老化改善や歯周病の予防、治療が可能であると考えられる。コラゲナーゼの阻害活性を有する素材として、例えば、カカオ豆皮であるカカオハスク抽出物（特許文献３参照）、バラ科オニイチゴ抽出物（特許文献４参照）、ラクトフェリン（特許文献５参照）などが提案されている。皮膚老化や口腔衛生にますます関心が高まっている状況下で、副作用がなく、安全性が高い、コラゲナーゼ活性阻害作用の優れた素材を見出すことが求められている。
【０００５】
【特許文献３】特開平３−４４３３１号公報
【特許文献４】特開２００３−１３７８０１号公報
【特許文献５】特開平５−１８６３６８号公報
【０００６】
一般に、シミ、ソバカス、日焼け等に見られる皮膚の色素沈着は、ホルモンの異常や紫外線の刺激により、皮膚内に存在するメラニン色素生成細胞がメラニン色素を過剰に生成し、これが皮膚内に沈着することが原因と考えられている。このような色素沈着を防ぐ方法の一つに、メラニンの過剰な生成を抑制する方法が知られている。従来、色素沈着の治療には、内用や外用などにおいて、アスコルビン酸（ビタミンＣ）等が用いられてきた。
【０００７】
加齢とともに表皮細胞の増殖・分裂能は低下し、表皮層自体は薄くなる（非特許文献１参照）。生体因子であるＥｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ（ＥＧＦ／上皮細胞成長因子）や女性ホルモン（エストロゲン）は皮膚の表皮細胞増殖に働きかけるが、加齢と共にその分泌は低下する。このような加齢による表皮細胞代謝機能の低下は、皮膚のターンオーバー速度を遅らせ、肌荒れや皮膚の老化の原因となる。また、角層表面から剥がれ落ちる角層細胞が滞留することで、表皮内メラニンの排泄がスムーズに行われなくなり、色素沈着や肌のくすみの原因となる。さらに表皮の創傷治癒が遅くなることなども知られている。これらの現象の進行を防止あるいは改善するために、表皮細胞の増殖を促進させる成分の探索や、多くの皮膚外用剤の提案がなされてきた。
【０００８】
【非特許文献１】Ｖａｒａｎｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ，１９９８，３，５７６０
【０００９】
しかしながら、これらの活性酸素消去効果、コラゲナーゼ活性阻害効果、メラニン生成抑制効果及び細胞増殖促進効果を有する植物由来の天然原料として、本発明に用いたヤエヤマノイバラは検討されていなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
安全で安定性に優れ、活性酸素消去作用、コラゲナーゼ活性阻害作用、メラニン生成抑制作用及び細胞増殖促進作用に優れた素材が望まれているが、未だ十分満足し得るものが提供されていないのが現状である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
このような事情により、本発明者らは鋭意検討した結果、ヤエヤマノイバラの抽出物が優れた活性酸素消去作用、コラゲナーゼ活性阻害作用、メラニン生成抑制作用及び細胞増殖促進作用を持ち、安定性においても優れていることを見出した。さらに、その抽出物を含有する外用剤又は内用剤が、安全で安定であり、活性酸素消去作用、コラゲナーゼ活性阻害作用、メラニン生成抑制作用及び細胞増殖促進作用に優れており、多機能性美容・健康用素材と成り得ることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明に用いるヤエヤマノイバラの抽出物とは、バラ科バラ属ヤエヤマノイバラ（学名：Ｒｏｓａ  ｂｒａｃｔｅａｔａ  ｗｅｎｄｌ）（別名：カカヤンバラ）の花、茎、葉、枝、枝葉、根、種子等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。
【００１３】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００１４】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１５】
本発明の外用剤又は内用剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分を配合することもできる。
【００１６】
本発明の剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、錠菓、飲料等が挙げられる。
【００１７】
本発明に用いる上記抽出物の配合量は、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１〜１０重量％がより好ましい。さらに、０．０１〜５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。一方、内用の場合、投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人１人当たりの１日の量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ〜０．５ｇがより好ましい。さらに、２０ｍｇ〜０．２ｇが最も好ましい。
【００１８】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。
【実施例１】
【００１９】
製造例１  ヤエヤマノイバラの熱水抽出物
ヤエヤマノイバラの全草の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してヤエヤマノイバラの熱水抽出物を３．０ｇ得た。
【００２０】
製造例２  ヤエヤマノイバラの５０％エタノール抽出物
ヤエヤマノイバラの全草の乾燥物１００ｇに５０％エタノール水溶液１Ｌを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ヤエヤマノイバラの５０％エタノール抽出物を４．０ｇ得た。
【００２１】
製造例３  ヤエヤマノイバラのエタノール抽出物
ヤエヤマノイバラの葉の乾燥物１００ｇにエタノール１Ｌを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ヤエヤマノイバラのエタノール抽出物を４．５ｇ得た。
【００２２】
製造例４  ヤエヤマノイバラの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
ヤエヤマノイバラの地上部の乾燥物２０ｇに５０％１，３−ブチレングリコール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、ヤエヤマノイバラの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物を３７０ｇ得た。
【実施例２】
【００２３】
処方例１  化粧水
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの熱水抽出物（製造例１）                      １．０
２．１，３−ブチレングリコール                                    ８．０
３．グリセリン                                                    ２．０
４．キサンタンガム                                                ０．０２
５．クエン酸                                                      ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．１
７．エタノール                                                    ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２４】
比較例１  従来の化粧水
処方例１において、ヤエヤマノイバラの熱水抽出物を精製水に置き換えたものを従来の化粧水とした。
【００２５】
処方例２  クリーム
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの５０％エタノール抽出物（製造例２）          ０．５
２．スクワラン                                                    ５．５
３．オリーブ油                                                    ３．０
４．ステアリン酸                                                  ２．０
５．ミツロウ                                                      ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                  ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ベヘニルアルコール                                            １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．５
１０．香料                                                          ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．０５
１３．１，３−ブチレングリコール                                    ８．５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２６】
処方例３  乳液
処方                                                            配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの熱水抽出物（製造例１）                    ０．０１
２．スクワラン                                                  ５．０
３．オリーブ油                                                  ５．０
４．ホホバ油                                                    ５．０
５．セタノール                                                  １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                  ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）            ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）  ２．０
９．香料                                                        ０．１
１０．プロピレングリコール                                        １．０
１１．グリセリン                                                  ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２７】
処方例４  ゲル剤
処方                                                            配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラのエタノール抽出物（製造例３）              １．０
２．エタノール                                                  ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）              ０．１
５．香料                                                        適量
６．１，３−ブチレングリコール                                  ５．０
７．グリセリン                                                  ５．０
８．キサンタンガム                                              ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                    ０．２
１０．水酸化カリウム                                              ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００２８】
処方例５  パック
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの熱水抽出物（製造例１）                    １．０
２．ヤエヤマノイバラの
５０％１，３−ブチレングリコール抽出物（製造例４）          ５．０
３．ポリビニルアルコール                                      １２．０
４．エタノール                                                  ５．０
５．１，３−ブチレングリコール                                  ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）              ０．５
８．クエン酸                                                    ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                          ０．３
１０．香料                                                        適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００２９】
処方例６  ファンデーション
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの５０％エタノール抽出物（製造例２）          １．０
２．ステアリン酸                                                  ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
５．セタノール                                                    １．０
６．液状ラノリン                                                  ２．０
７．流動パラフィン                                                ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                                      ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．１
１０．ベントナイト                                                  ０．５
１１．プロピレングリコール                                          ４．０
１２．トリエタノールアミン                                          １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１４．二酸化チタン                                                  ８．０
１５．タルク                                                        ４．０
１６．ベンガラ                                                      １．０
１７．黄酸化鉄                                                      ２．０
１８．香料                                                          適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３０】
処方例７  浴用剤
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの熱水抽出物（製造例１）                      １．０
２．炭酸水素ナトリウム                                          ５０．０
３．黄色２０２号（１）                                            適量
４．香料                                                          適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３１】
処方例８  軟膏
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの熱水抽出物（製造例１）                      １．０
２．ヤエヤマノイバラの
５０％１，３−ブチレングリコール抽出物（製造例４）            ５．０
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン                                  １０．０
５．流動パラフィン                                                ５．０
６．セタノール                                                    ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
８．プロピレングリコール                                        １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３２】
処方例９  散剤１
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの熱水抽出物（製造例１）                      １．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ３９．０
３．微結晶セルロース                                            ６０．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、散剤とする。
【００３３】
処方例１０  散剤２
処方例９において、ヤエヤマノイバラの熱水抽出物をエタノール抽出物（製造例３）に置き換えたものを散剤２とした。
【００３４】
処方例１１  錠剤
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラのエタノール抽出物（製造例３）                ５．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ２５．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム                        ２０．０
４．微結晶セルロース                                            ４０．０
５．ポリビニルピロリドン                                          ７．０
６．タルク                                                        ３．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成型する。成型した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【００３５】
処方例１２  錠菓
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラのエタノール抽出物（製造例３）                ２．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ４９．８
３．エリスリトール                                              ４０．０
４．クエン酸                                                      ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                                          ３．０
６．香料                                                          ０．１
７．精製水                                                        ０．１
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成型する。成型した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００３６】
処方例１２  飲料
処方                                                              配合量（部）
１．ヤエヤマノイバラの熱水抽出物（製造例１）                      ０．０５
２．ステビア                                                      ０．０５
３．リンゴ酸                                                      ５．０
４．香料                                                          ０．１
５．精製水                                                      ９４．８
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１、４及び５を加えて混合する。
【００３７】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【実施例３】
【００３８】
実験例１  活性酸素消去作用
フリーラジカル捕捉除去作用の評価を行った。陽性対照としてはアスコルビン酸を用いた。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルであるα，α−ジフェニル−β−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨとする）を用い、試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカルの量を波長５１７ｎｍの吸光度の減少量から測定した。
【００３９】
フリーラジカル捕捉除去作用の測定方法
各試料を、最終濃度０．０１ｍｇ／ｍＬ（アスコルビン酸は０．０１ｍｇ／ｍＬ）となるように加えた０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）２ｍＬに無水エタノール２ｍＬ及び０．５ｍＭ  ＤＰＰＨ無水エタノール溶液１ｍＬを加えて反応液とした。また、油溶性の試料の場合は無水エタノール２ｍＬに試料を加えて反応液とした。その後、３７℃で３０分間反応させ、水を対照として波長５１７ｎｍの吸光度（Ａ）を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を用いて吸光度（Ｂ）を測定した。フリーラジカル捕捉除去率は、以下に示す式より算出した。
フリーラジカル捕捉除去率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００
【００４０】
これらの試験結果を表１に示した。本発明のヤエヤマノイバラの熱水及び５０％エタノール抽出物は、安定で優れたフリーラジカル捕捉除去作用を有していることが認められた。また、その他の抽出物についても効果が認められた。なお、アスコルビン酸は、１００℃、１時間の熱処理で失活するが、本発明のヤエヤマノイバラの抽出物は、活性に変化はなかった。
0005690149.tif 000002
【００４１】
実験例２  コラゲナーゼ活性阻害試験
試料液５０μＬ（最終濃度が１ｍｇ／ｍＬ）に酵素液として５０Ｕ／ｍＬのコラゲナーゼ  Ｔｙｐｅ  ＩＶ（シグマ製）水溶液を５０μＬ加えた。基質溶液として０．３９ｍｇ／ｍＬのＰｚ−ペプタイド（Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ、シグマ製）を含む２０ｍＭ塩化カルシウム入りトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）を４００μＬ加えて混合し、３７℃、３０分反応させた後、２５ｍＭクエン酸０．５ｍＬを加えて反応を停止させた。酢酸エチル２．５ｍＬを加え、酢酸エチル層について３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、各試料の阻害作用は、次の式から求められる阻害率で算出した。なお、対照には試料の代わりに精製水を用い、ブランクとしてコラゲナーゼの代わりに２０ｍＭ塩化カルシウム入りトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）を用いた。
阻害率（％）＝〔１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）〕×１００
Ａ：対照の３２０ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．３２０）
Ｂ：対照ブランクのＯ．Ｄ．３２０
Ｃ：試料のＯ．Ｄ．３２０
Ｄ：試料ブランクのＯ．Ｄ．３２０
【００４２】
これらの実験結果を表２に示した。その結果、本発明のヤエヤマノイバラの熱水及び５０％エタノール抽出物は優れたコラゲナーゼ活性阻害作用を示した。また、その他の抽出物についても効果が認められた。
0005690149.tif 000003
【００４３】
実験例３  Ｂ１６マウスメラノーマを用いたメラニン生成抑制試験
対数増殖期にあるＢ１６マウスメラノーマをφ６０ｍｍｄｉｓｈに３×１０４個の細胞を播種し、各試料（最終濃度１μｇ／ｍＬ）を含むＥａｇｌｅｓ’ＭＥＭ（１０％牛胎児血清含有）培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件下にて培養した。培養５日後に細胞をｄｉｓｈから剥離し、細胞を超音波破砕した後、４ＮＮａＯＨを加え６０℃で２時間の処理を行い、分光光度計でＯ．Ｄ．４７５ｎｍを測定した。尚、超音波処理後の細胞破砕液をＬｏｗｒｙの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５−２７５，１９５１）でタンパク定量し、タンパク量当りのメラニン量を比較することによって、メラニン生成抑制効果の指標とした。
【００４４】
これらの試験結果を表３に示した。本発明のヤエヤマノイバラの熱水抽出物は、優れたメラニン生成抑制作用を有していることが認められた。また、その他の抽出物についても効果が認められた。
0005690149.tif 000004
【００４５】
実験例４  細胞増殖促進試験
ＨａＣａＴ細胞を０．１％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり５，０００個播種し、各試料（最終濃度０．０１μｇ／ｍＬ）を添加した後、３７℃、５％ＣＯ２条件下にて３日間培養した。細胞数の測定は、ＭＴＴ法により行った。すなわち、培養終了後、培養液を除き、５００μｇ／ｍＬの濃度にて、ＭＴＴを溶解させたＤＭＥＭに培地を入れ替え、２時間培養した後、１５０μＬのＤＭＥＭに細胞を溶解させ、マイクロプレートリーダーをもちいて５９０及び６５０ｎｍにおける吸光度を測定した。細胞数は、５９０ｎｍの吸光度値から、６５０ｎｍの吸光度値を引いた値にて算出し、試料を添加しない細胞群（未添加細胞群）を１００％とした換算値として示した。
【００４６】
これらの実験結果を表４に示した。その結果、本発明のヤエヤマノイバラの熱水及び５０％エタノール抽出物は、優れた細胞増殖促進作用を示した。また、その他の抽出物についても効果が認められた。
0005690149.tif 000005
【００４７】
実験例５  使用試験１
処方例１の化粧水及び比較例１の従来の化粧水を用いて、シミ、ソバカスに悩む女性１０人（２３〜５０才）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、シミ、ソバカスの改善効果をアンケートにより判定した。
【００４８】
その結果、本発明の抽出物を含有する皮膚外用剤は、優れたシミ、ソバカスの改善作用を示した。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
以上のことから、本発明のヤエヤマノイバラの抽出物は、優れた活性酸素消去作用、コラゲナーゼ活性阻害作用、メラニン生成抑制作用及び細胞増殖促進作用を有し、安定性にも優れていた。よって、本発明のヤエヤマノイバラの抽出物は、皮膚の老化や美白といった美容分野だけでなく、老化による機能低下の抑制、歯周病の予防、治療や創傷治癒などといった医療分野にも利用ででき、食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等への応用が期待される。