(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の構造を有する化合物
【化８】
0005659010.tif 000028
［式中、Ａ＋が、モノ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）の共役酸からなる群より選択され、
Ｘ及びＹは共にハロゲンであり、該化合物は結晶性であり、該化合物の融点が１０３〜１０６℃である］。
【請求項２】
Ａ＋がＴｒｉｓの共役酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ及びＹが共にＣｌである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記
【化８−２】
0005659010.tif 000029
と前記Ａ＋が、２：１〜１：２の比で存在する、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
前記
【化８−３】
0005659010.tif 000030
と前記Ａ＋が、１：１の比で存在する、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
融点が１０５〜１０６℃である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
単一の多形結晶を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
水の存在下で少なくとも１日間室温で安定である、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物を生理食塩水溶液に溶解させるステップを含む、医薬組成物を調製するための方法
であって、
（ａ）該溶液が、少なくとも１２０分間室温で安定である、
（ｂ）該化合物の溶解度が、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬである、そして／あるいは、
（ｃ）該医薬組成物が、経口、局所、経皮又は非経口投与用として製剤される、
方法。
【請求項１０】
前記医薬組成物が、非経口又は経口投与用として製剤される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
過剰増殖性障害を治療するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項１２】
前記過剰増殖性障害が、急性白血病、慢性白血病、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、骨髄異形成症候群、有毛状細胞性白血病、異形成脊髄、肉腫と癌腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性疾患、膵臓癌、乳腺癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆道癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、睾丸腫瘍、膀胱癌及びＣＮＳ腫瘍から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
抗ＣＰＡ症状を治療するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項１４】
式（Ｉ）
【化８Ａ】
0005659010.tif 000031
［式中、該Ａ＋がトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）の共役酸であり、Ｘ及びＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］
の構造を有する、ＩＰＭ又はその類似体を含む凍結乾燥体。
【請求項１５】
医薬として許容される希釈剤又は賦形剤と、請求項１に記載の化合物とを含む、経口投与に適合した医薬組成物。
【請求項１６】
室温で少なくとも１か月間安定である、請求項１４に記載の凍結乾燥体。
【請求項１７】
化学療法剤の効果を改良するための、請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、該組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１８】
前記化学療法剤が微小管結合剤、又はＤＮＡ及び／もしくはＲＮＡ転写阻害剤である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記化学療法剤がドセタキセル又はドキソルビシンである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、該組成物は化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項２１】
前記化学療法剤が、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレータもしくは架橋剤、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ及び／もしくはＲＮＡ転写阻害剤、抗生物質、酵素、酵素阻害剤、遺伝子調整剤、ならびに／又は血管形成阻害剤から選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記化学療法剤が、酵素阻害剤、又はＤＮＡインターカレータもしくは架橋剤である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記化学療法剤が、エトポシド、又はカルボプラチンである、請求項２２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２００７年４月６日に出願された米国仮特許出願第６０／９２２，１４８号、２００７年５月２日に出願された同第６０／９２７，３６３号、２００７年６月１５日に出願された同第６０／９３４，９１４号および２００７年１０月３０日に出願された同第６１／００１，２３７号の利益を主張し、これらの出願は、その全体を本明細書中で参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
第一次世界大戦でマスタードガスによって殺された兵士を解剖することによって、サルファマスタードが速やかに分割する細胞に対する不均化効果を有することが分かり、サルファマスタード化合物が抗腫瘍効果を有する場合がありそうであることが示唆された。実際、早期の研究者達は、サルファマスタードを腫瘍内に直接注射することによって癌を治療しようと試みた。この研究は、サルファマスタード化合物の極めて強い毒性によって制約を受け、メクロレタミンなどの窒素マスタード類似体が毒性の低い方の代替品として調査された。
【０００３】
【化１】
0005659010.tif 000002
メクロレタミン類似体の大部分には選択性がないので、新生腫瘍細胞中に存在する高濃度のホスホルアミダーゼによって活性化することができる、ホスホルアミド化合物などのプロドラッグが調査されてきた。２つのホスホルアミドアルキル化剤、シクロホスファミド（ＣＰＡ）およびその異性体化合物であるイホスファミド（Ｉｆｏｓ）が、特に有効であることが証明された。
【０００４】
【化２】
0005659010.tif 000003
図１を参照すると、イソホスホルアミドマスタード（ＩＰＭ）は、ＣＰＡおよびＩｆｏｓの共通の代謝産物である。ＩＰＭは、ＣＰＡおよびＩｆｏｓによって示される抗腫瘍活性の原因の少なくとも一部であると考えられている。部分的にはＩＰＭが不安定であるために、抗癌剤としてこの化合物を直接使用する努力は成功していない。ＩＰＭが合成され、その化合物の予備的な生物学的評価が実施されているが、残念なことに、ＩＰＭが非常に不安定であるために、単離し、ヒトの治療に使用することができない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
式（Ｉ）の結晶性化合物を本明細書で開示する
【０００６】
【化３】
0005659010.tif 000004
［式中、Ａ＋は脂肪族アンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
【０００７】
ある実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物と、医薬として許容される希釈剤または担体とを含む医薬組成物に関する。このような化合物および組成物を調製する方法も記載されている。
【０００８】
本明細書では、凍結乾燥体、およびイソホスホルアミドマスタード（ＩＰＭ）および／またはＩＰＭ類似体と、１つまたは複数の塩基の等価体と、賦形剤とを含む凍結乾燥体を生成させるための方法も開示されている。ある実施形態では、その方法は、ＩＰＭまたはその類似体の結晶性塩およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）などの脂肪族アミン、あるいはＩＰＭまたはその類似体と１つまたは複数の脂肪族アミンの混合物（好ましくは、ＩＰＭまたはその類似体と１つまたは複数のアミンの比が約１：１）を水と接触させ、生成混合物を凍結乾燥するステップを含む。ある実施形態では、その混合物および生成凍結乾燥体は、マンニトール、無水ラクトース、スクロース、Ｄ（＋）−トレハロース、デキストラン４０またはポビドン（ＰＶＰ  Ｋ２４）、好ましくはマンニトールなどの賦形剤を含む。
【０００９】
このような製剤は、マンニトール、無水ラクトース、スクロース、Ｄ（＋）−トレハロース、デキストラン４０またはポビドン（ＰＶＰ  Ｋ２４）、好ましくはマンニトールなどの賦形剤と次式の化合物とを好ましくは含む凍結乾燥体を含む
【００１０】
【化４】
0005659010.tif 000005
［式中、Ａ＋は、塩基性アミノ酸、複素環式アミン、置換および非置換ピリジン、グアニジンおよびアミジンを含めての、脂肪族アミンおよび芳香族アミンのプロトン化（共役酸）形または第四級形から選択されるアンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
【００１１】
医薬として許容される希釈剤または賦形剤と、本明細書で開示された化合物とを含む、経口投与に適合した医薬組成物も本明細書で開示されている。
【００１２】
ある実施形態では、本発明は、例えば、本明細書で議論された化合物または製剤を用いて、過剰増殖性障害を治療するための方法に関する。このようなある実施形態では、本発明は、急性白血病（急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、および骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血球性白血病などの）、慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病および慢性リンパ球性白血病などの）、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（緩慢形および重症形）、多発性骨髄腫、ワルデンストレームグロブリン血症、Ｈ鎖病、骨髄異形成症候群、有毛状細胞性白血病および異形成脊髄を含めての白血病から選択される過剰増殖性障害の治療に関する。
【００１３】
開示の化合物および組成物を使用して治療できる症状の追加の例として、限定されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、シクロホスファミド耐性肉腫およびその他の肉腫を含めての肉腫と癌腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性疾患、膵臓癌、乳腺癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆道癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、睾丸腫瘍、膀胱癌ならびにＣＮＳ腫瘍（神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、クラニオファリオジマ（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、メナンジオマ（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽腫）が挙げられる。
例えば、本発明は、以下を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）の構造を有し、ＩＰＭまたはその類似体を含む結晶性化合物
【化８】
0005659010.tif 000006
［式中、Ａ＋はヒドロキシル化脂肪族アミンであり、
ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
（項目２）
Ａ＋が、モノ−、ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）から選択される、項目１に記載の結晶性化合物。
（項目３）
アンモニウム種がＴｒｉｓの共役酸である、項目２に記載の結晶性化合物。
（項目４）
ＸおよびＹが、それぞれ独立に、ハロゲンである、項目１から３のいずれか一項に記載の結晶性化合物。
（項目５）
ＸおよびＹが同じである、項目４に記載の結晶性化合物。
（項目６）
ＸおよびＹが共にＣｌである、項目５に記載の結晶性化合物。
（項目７）
前記ＩＰＭまたはその類似体と前記アンモニウム種が、２：１〜１：２の比で存在する、項目１から６のいずれか一項に記載の結晶性化合物。
（項目８）
前記ＩＰＭまたはその類似体と前記アンモニウム種が、１：１の比で存在する、項目７に記載の結晶性化合物。
（項目９）
融点が、約１０３〜約１０６℃である、項目８に記載の結晶性化合物。
（項目１０）
融点が、１０５〜１０６℃である、項目９に記載の結晶性化合物。
（項目１１）
単一の多形結晶を含む、項目１から１０のいずれか一項に記載の結晶性化合物。
（項目１２）
水の存在下で少なくとも１日室温で安定である、項目１から１１のいずれか一項に記載の結晶性化合物。
（項目１３）
水の存在下で少なくとも３日室温で安定である、項目１２に記載の結晶性化合物。
（項目１４）
水の存在下で少なくとも６日室温で安定である、項目１３に記載の結晶性化合物。
（項目１５）
項目１から１４のいずれか一項に記載の結晶性化合物を生理食塩水に溶解させるステップを含む、医薬組成物を調製するための方法。
（項目１６）
溶液が、少なくとも約１２０分間室温で安定である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記結晶性化合物の溶解度が、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬである、項目１７に記載の方法。
（項目１８）
前記医薬組成物が、経口、局所、経皮または非経口投与に適合するように製剤される、項目１４から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記医薬組成物が、非経口投与用として製剤される、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
項目１に記載の結晶性化合物を投与するステップを含む、過剰増殖性障害を治療するための方法。
（項目２１）
過剰増殖性障害が、急性白血病、慢性白血病、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、骨髄異形成症候群、有毛状細胞性白血病、異形成脊髄、肉腫と癌腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性疾患、膵臓癌、乳腺癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆道癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、睾丸腫瘍、膀胱癌およびＣＮＳ腫瘍から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
過剰増殖性障害を治療するための医薬を製造するための、項目１に記載の化合物の使用。
（項目２３）
前記過剰増殖性障害が、急性白血病、慢性白血病、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、骨髄異形成症候群、有毛状細胞性白血病、異形成脊髄、肉腫と癌腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性疾患、膵臓癌、乳腺癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆道癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、睾丸腫瘍、膀胱癌およびＣＮＳ腫瘍から選択される、項目２０に記載の使用。
（項目２４）
抗ＣＰＡ症状を治療するための医薬を製造するための、項目１に記載の化合物の使用。
（項目２５）
式（Ｉ）の構造を有し、ＩＰＭまたはその類似体を含む凍結乾燥体
【化９】
0005659010.tif 000007
［式中、Ａ＋はヒドロキシル化脂肪族アンモニウム対イオンであり、
ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
（項目２６）
Ａ＋が、モノ−、ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）から選択されるプロトン化アミ
ンを表す、項目２５に記載の凍結乾燥体。
（項目２７）
前記アンモニウム対イオンがＴｒｉｓの共役酸である、項目２６に記載の凍結乾燥体。
（項目２８）
ＸおよびＹが、それぞれ独立に、ハロゲンである、項目２５に記載の凍結乾燥体。
（項目２９）
ＸおよびＹが同じである、項目２８に記載の凍結乾燥体。
（項目３０）
ＸおよびＹが共にＣｌである、項目２９に記載の凍結乾燥体。
（項目３１）
マンニトールをさらに含む、項目２５に記載の凍結乾燥体。
（項目３２）
次式の化合物を含み、生理食塩水中で再構成すると、少なくとも約３０分間室温で＞９０％の効力を維持する凍結乾燥体
【化１０】
0005659010.tif 000008
［式中、Ａ＋は、塩基性アミノ酸、複素環式アミン、置換および非置換ピリジン、グアニジンおよびアミジンを含めての、脂肪族アミンおよび芳香族アミンのプロトン化（共役酸）形または第四級形から選択されるアンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
（項目３３）
生理食塩水中で再構成すると、少なくとも約１６０分間室温で＞９０％の効力を維持する、項目３２に記載の凍結乾燥体。
（項目３４）
賦形剤をさらに含む、項目３２に記載の凍結乾燥体。
（項目３５）
前記賦形剤がマンニトールである、項目３４に記載の凍結乾燥体。
（項目３６）
医薬として許容される希釈剤または賦形剤と、次式の化合物とを含む、経口投与に適合した医薬組成物
【化１１】
0005659010.tif 000009
［式中、Ａ＋は、塩基性アミノ酸、複素環式アミン、置換および非置換ピリジン、グアニジンおよびアミジンを含めての、脂肪族アミンおよび芳香族アミンのプロトン化（共役酸）形または第四級形から選択されるアンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
（項目３７）
少なくとも１カ月間室温で安定である、ＩＰＭまたはその類似体を含む凍結乾燥体。
（項目３８）
少なくとも２カ月間室温で安定である、項目３７に記載の凍結乾燥体。
（項目３９）
前記ＩＰＭまたはその類似体が、式（Ｉ）の構造を有する、項目３７に記載の凍結乾燥体
【化１２】
0005659010.tif 000010
［式中、Ａ＋はヒドロキシル化脂肪族アンモニウム対イオンであり、
ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
（項目４０）
Ａ＋が、モノ−、ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）から選択されるプロトン化アミンを表す、項目３９に記載の凍結乾燥体。
（項目４１）
前記アンモニウム対イオンがＴｒｉｓの共役酸である、項目４０に記載の凍結乾燥体。
（項目４２）
ＸおよびＹが、それぞれ独立に、ハロゲンである、項目３９に記載の凍結乾燥体。
（項目４３）
ＸおよびＹが同じである、項目４２に記載の凍結乾燥体。
（項目４４）
ＸおよびＹが共にＣｌである、項目４３に記載の凍結乾燥体。
（項目４５）
マンニトールをさらに含む、項目３９に記載の凍結乾燥体。
（項目４６）
前記ＩＰＭまたはその類似体の純度が、蒸発光散乱検出法を使用してＨＰＬＣによって室温で１カ月後に測定した場合、初期純度の少なくとも９７％である、項目３９に記載の凍結乾燥体。
（項目４７）
前記医薬組成物が、経口投与に適合するように製剤された、項目１８に記載の方法。
（項目４８）
化学療法剤を項目１に記載の化合物と組み合わせて投与するステップを含む、前記化学療法剤の効果を改良する方法。
（項目４９）
前記化学療法剤が微小管結合剤である、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記化学療法剤がドセタキセルである、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記化学療法剤がＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写阻害剤である、項目４８に記載の方法。
（項目５２）
前記化学療法剤がドキソルビシンである、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
化学療法剤と一緒に投与するための医薬の製造における、項目１に記載の化合物の使用。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】アクロレインおよびイソホスホルアミドマスタードの生成を含むイホスファミドの代謝を例示する図である。
【図２】ＩＰＭ・トリスのＸ線粉末回析を示す図である。
【図３】ＩＰＭ・トリスの示差走査熱分析（ＤＳＣ）を示す図である。
【図４】ＩＰＭ・トリスの熱重量分析（ＴＧＡ）を示す図である。
【図５】結晶性ＩＰＭ・トリスの走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）像を示す図である。
【図６】ヒトＭＸ−１乳癌異種移植片におけるＩＰＭ・（ＬＹＳ）２とＩＰＭ・トリスの比較を示す図である。
【図７】ヒトＭＸ−１乳癌異種移植片における、ＩＰＭ・トリスのＩＰ投与と経口投与の抗腫瘍活性の比較を示す図である。
【図８−１】（図８Ａ）様々な濃度のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いて治療したときの、ＲＤおよびＲＨ３０横紋筋肉腫細胞の生存度を示す図である。（図８Ｂ）様々な濃度のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いて治療したときの、ＳＫＥＳ１およびＳＫＰＮＤＷユーイング肉腫細胞の生存度を示す図である。
【図８−２】（図８Ｃ）様々な濃度のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いて治療したときの、ＯＳ２３０、ＯＳ２２９、ＯＳ２２２、およびＳａＯＳ骨肉腫細胞の生存度を示す図である。（図８Ｄ）様々な濃度のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いて治療したときの、ＳＹＯ１およびＨＳＳＹＩＩ滑膜肉腫細胞の生存度を示す図である。
【図９】（図９Ａ）様々な濃度のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を１日１回または１日３回用いて治療したときの、ＲＨ３０横紋筋肉腫細胞の生存度を示す図である。（図９Ｂ）様々な濃度のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を１日１回または１日３回用いて治療したときの、ＯＳ２２９骨肉腫細胞の生存度を示す図である。
【図１０】３種の投与計画（対照、１７５ｍｇ／ｋｇ毎日×１、または１００ｍｇ／ｋｇ毎日×３）のそれぞれ毎の、ＣＢ１７雌性スキッド＊／＊マウスに移植したシクロホスファミド耐性ＯＳ３１骨肉腫細胞株における最大耐用量（ＭＴＤ）での投与により、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２が、腫瘍増殖の有意な遅延につながることを示す図である。
【図１１】（図１１Ａ）対照と比較して、治療がシクロホスファミドの投与を含み、ＣＢ１７雌性スキッド＊／＊マウスに移植したＯＳ３１骨肉腫細胞におけるシクロホスファミド耐性を相対腫瘍体積の観点から示す図である。（図１１Ｂ）対照と比較して、治療がＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の投与を含み、ＣＢ１７雌性スキッド＊／＊マウスに移植したＯＳ３３骨肉腫細胞におけるシクロホスファミド耐性を相対腫瘍体積の観点から示す図である。
【図１２】ＣＢ１７雌性スキッド＊／＊マウス（対照と比較して１００ｍｇ／ｋｇ毎日×３）に移植したシクロホスファミド耐性ＯＳ３１骨肉腫細胞の治療におけるＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の活性を相対腫瘍体積の観点から示す図である。
【図１３】ｑ１ｄ×５の用量の生理食塩水を用いたＩＰ治療および経口治療に対する、ＳＣ  ＭＸ−１乳房腫瘍の反応を示す図である。
【図１４】ｑ１ｄ×５の用量のＩＰＭ・トリス、ＩＰＭおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いたＩＰ治療に対する、ＳＣ  ＭＸ−１乳房腫瘍の反応を示す図である。
【図１５】ｑ１ｄ×５の用量のＩＰＭ・トリス、ＩＰＭおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いた経口治療に対する、ＳＣ  ＭＸ−１乳房腫瘍の反応を示す図である。
【図１６】ｑ１ｄ×５の用量の生理食塩水を用いたＩＰ治療および経口治療に対する、ＳＣ  ＭＸ−１乳房腫瘍の反応を示す図である。
【図１７】ｑ１ｄ×５の用量のＩＰＭ・トリス、ＩＰＭおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いたＩＰ治療に対する、ＳＣ  ＭＸ−１乳房腫瘍の反応を示す図である。
【図１８】ｑ１ｄ×５の用量のＩＰＭ・トリス、ＩＰＭおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いた経口治療に対する、ＳＣ  ＭＸ−１乳房腫瘍の反応を示す図である。
【図１９】１２ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・トリスＱ１Ｄ×５および８ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンＱ４Ｄ×３の用量で、ＩＰＭ・トリスをドキソルビシンと併用して用いた治療の、ＭＸ−１乳癌腫瘍に対する作用を示す図である。
【図２０】１２ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・トリスＱ１Ｄ×５および８ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンＱ４Ｄ×３の用量での、ＩＰＭ・トリスとドキソルビシンの併用の、生存率に対する作用を示す図である。
【図２１】２４ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・トリスＱ１Ｄ×５および８ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンＱ４Ｄ×３で、ＩＰＭ・トリスをドキソルビシンと併用して用いた治療の、ＭＸ−１乳癌腫瘍に対する作用を示す図である。
【図２２】２４ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・トリスＱ１Ｄ×５および８ｍｇ／ｋｇドキソルビシンＱ４Ｄ×３での、ＩＰＭ・トリスとドキソルビシンの併用の、生存率に対する作用を示す図である。
【図２３】５４ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・トリスＱ１Ｄ×５および８ｍｇ／ｋｇドキソルビシンＱ４Ｄ×３で、ＩＰＭ・トリスをドキソルビシンと併用して用いた治療の、ＭＸ−１乳癌腫瘍に対する作用を示す図である。
【図２４】５４ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・トリスＱ１Ｄ×５および８ｍｇ／ｋｇドキソルビシンＱ４Ｄ×３での、ＩＰＭ・トリスとドキソルビシンの併用の、生存率に対する作用を示す図である。
【図２５】ＩＰＭ・トリス／ドキソルビシン併用療法の毒性を示す図である。
【図２６】５４ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・トリスＱ１Ｄ×５ＩＰおよび１０ｍｇ／ｋｇドセタキセルＱ４Ｄ×３で、ＩＰＭ・トリスをドセタキセルと併用して用いた治療の、ＭＸ−１乳癌腫瘍に対する作用を示す図である。
【図２７】３６ｍｇ／ｋｇＩＰの用量または８１ｍｇ／ｋｇＰＯの用量で投与した、ＩＰＭ・トリスを用いた治療の、ＭＸ−１乳癌腫瘍に対する作用を示す図である。
【図２８】３６ｍｇ／ｋｇＩＰの用量または８１ｍｇ／ｋｇＰＯの用量で投与した、ＩＰＭ・トリスの、生存率に対する作用を示す図である。
【図２９】経口投与およびＩＶ投与したＩＰＭ・トリスの、雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける薬物動態を示す図である。
【図３０】ＰＯ投与またはＩＶ投与したＩＰＭ・トリスの用量増加に伴うＡＵＣを示す図である。
【図３１】ＰＯ投与またはＩＶ投与したＩＰＭ・トリスの用量増加に伴うＣｍａｘを示す図である。
【図３２】２５℃でのｐＨ７．０緩衝液におけるＩＰＭの溶液安定性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（発明の詳細な説明）
１．ＩＰＭ塩およびそれらの類似体
本明細書で開示された組成物は、結晶性ＩＰＭまたはそれらの類似体を含む。ある実施形態では、開示された塩は、１つまたは複数のカチオンを含む。ある実施形態では、カチオンは、アミン塩基の共役酸であっても、第四級アンモニウムカチオンであってもよい。
【００１６】
ある実施形態では、開示された結晶性化合物は、ＩＰＭまたはその類似体の塩を含む。このような化合物は、式（Ｉ）の結晶性化合物を含む
【００１７】
【化５】
0005659010.tif 000011
［式中、Ａ＋は、ヒドロキシル化脂肪族アミンのプロトン化（共役酸）形または第四級形から選択されるアンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。ある実施形態では、ＸおよびＹは、それぞれ独立に、ハロゲンである。好ましくは、ＸおよびＹは、同じである。ある実施形態では、ＸおよびＹは、共にＣｌである。
【００１８】
アミン塩基の適切な共役酸の特定の例として、限定されないが、モノ、ビスまたはトリス（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）の共役酸が挙げられる。このようなある実施形態では、Ａ＋は、Ｔｒｉｓの共役酸である。
【００１９】
ある実施形態では、本発明は、ＩＰＭまたはその類似体の結晶性塩を含み、ＩＰＭまたはその類似体と対イオン、好ましくは、Ｔｒｉｓとが２：１〜１：２の比、好ましくは、１：１の比で存在する化合物に関する。ある実施形態では、結晶性組成物は、２つ、３つ、４つまたは５つさえもの多形結晶など、１つを超える多形結晶を含む。このようなある代替の実施形態では、結晶性組成物は、単一の多形結晶を含む。ある実施形態では、このような塩は、遊離酸としてのＩＰＭおよびＩＰＭ類似体よりも安定である。
【００２０】
このようなある実施形態では、化合物は、ＩＰＭとＴｒｉｓの比が１：１である結晶塩である。このようなある実施形態では、結晶固体の融点は、約１００と約１１０℃の間、約１０２〜約１０８℃、約１０３〜約１０６℃、または、１０５〜約１０６℃である。
【００２１】
ある実施形態では、化合物、例えば、ＩＰＭとＴｒｉｓの比が１：１である結晶性塩は、純度が少なくとも約８０％、純度が少なくとも約８５％、純度が少なくとも９０％、純度が少なくとも９５％、純度が少なくとも９７％、純度が少なくとも９８％、または純度が少なくとも９９％もある。ある実施形態では、いかなる単一不純物も１重量％を越えない。ある実施形態では、純度は、組成物のその他の成分の全てを基準として測定されるが、他の実施形態では（例えば、化合物が医薬組成物または凍結乾燥体混合物の一部である場合）、純度は、化合物の分解生成物（例えば、化合物の亜リン酸含有分解生成物）または化合物製造時の副生物（例えば、化合物の亜リン酸含有分解生成物）を基準にして測定され、それによって、組成物に意図的に添加された他の成分を除外する。
【００２２】
ある実施形態では、化合物は、ＩＰＭ塩またはそれらの類似体であり、塩は、同じ条件下で水の存在下でのＩＰＭ（即ち、遊離酸として）の半減期よりも長い、室温で（例えば、約２３℃）水の存在下での半減期を有する。ある実施形態では、ＩＰＭ塩は、水の存在下でのＩＰＭそれ自体の半減期の２倍以上、より好ましくは、５倍以上の水の存在下での半減期を有する。
【００２３】
ある実施形態では、化合物は、ＩＰＭ塩またはそれらの類似体であり、塩は、水の存在下室温で少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、または１週間も安定である。
【００２４】
本明細書では、「安定な」という用語は、一定期間後（例えば、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、１年など）のＩＰＭ塩またはその類似体の純度が、最初の純度の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％もあり、この純度は、例えば、蒸発光散乱検出法（ＥＬＳＤ）を使用したＨＰＬＣによって測定できることを意味する。このような検定は、例えば、水中に０．００５Ｍヘプタフルオロ酪酸および０．１％トリフルオロ酢酸を含む移動層を用いるＣ１８カラムおよび定組成系を使用して実施することができる。
【００２５】
ある実施形態では、本発明は、次式の化合物を含む凍結乾燥体に関する
【００２６】
【化６】
0005659010.tif 000012
［式中、Ａ＋は、塩基性アミノ酸、複素環式アミン、置換および非置換ピリジン、グアニジンおよびアミジンを含めての、脂肪族アミンおよび芳香族アミンのプロトン化（共役酸）形または第四級形から選択されるアンモニウム種を表し、ＸおよびＹは、それぞれ独立に、脱離基を表す］。
【００２７】
本発明の化合物において使用するための適切なアミン塩基（およびそれらの対応するアンモニウムイオン）の特定の例として、限定されないが、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロノナン、ジアザビシクロウンデセン、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、モノ、ビスまたはトリス（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンが挙げられる。
【００２８】
ある実施形態では、本発明は、次式の化合物を含む凍結乾燥体に関する。
【００２９】
【化７】
0005659010.tif 000013
式を参照すれば、Ｂは、それぞれのｎに対して独立に選択された塩基性分子であってよい。式の一実施形態では、Ｂは、塩基性アミノ酸、非環式脂肪族アミン、ジおよびトリアルキルアミン、複素環式脂肪族アミン、芳香族アミン、置換および非置換ピリジン、環式および非環式グアニジン、および環式および非環式アミジンから選択することができる。通常、ｎは、式が異なる塩基性分子を含み得るように１〜約３である。続けて式を参照すれば、ＸおよびＹは、脱離基である。当業者には、例示のイソホスホルアミドマスタード構造が、酸性プロトンを含み、そのために、生理学的なｐＨでおよびＢなどの塩基の存在下でその共役塩基として主として存在することが理解されよう。同様に、塩基性基であるＢは、生理学的なｐＨでおよびイソホスホルアミドマスタードおよびイソホスホルアミドマスタード類似体の存在下でその共役酸として主として存在する。開示された化合物の例示的な実施形態を表１に示す。
【００３０】
【表１−１】
0005659010.tif 000014
ＩＩ．組成物および方法
ある実施形態では、本発明は、ＩＰＭ塩またはその類似体と医薬用希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物に関する。このようなある実施形態では、医薬組成物は、溶液、好ましくは、ＩＰＭまたはＩＰＭ類似体を含む生理食塩水による溶液である。このようなある実施形態では、溶液中のＩＰＭ塩またはＩＰＭ類似体塩の濃度は、約３ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬまたはさらにより大きい。このような生理食塩水による溶液は、例えば、室温で撹拌しながら、例えば、本明細書で開示された、式（Ｉ）の結晶性化合物、またはＩＰＭもしくはＩＰＭ類似体の凍結乾燥体を生理食塩水中に溶解させることによって調製することができる。このようなある実施形態では、生理食塩水は、塩化ナトリウム濃度が約０．５％、０．９％、２．５％、２．７％、３．０％、４．０％または５．０％になるように調製される。
【００３１】
ある実施形態では、水溶液は、本明細書で開示された、式（Ｉ）の結晶性化合物、またはＩＰＭもしくはＩＰＭ類似体の凍結乾燥体から調製することができる。このような水溶液（例えば、水溶液または等張生理食塩水による溶液）は、室温で少なくとも約６０分間、８０分間、１００分間、１２０分間、１４０分間、または約１６０分間も安定である。
【００３２】
ある実施形態では、ＩＰＭとＴｒｉｓの塩などの式（Ｉ）の結晶性化合物は、水中の溶解度が、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、または８０ｍｇ／ｍＬでさえある。ある実施形態では、ＩＰＭとＴｒｉｓの塩などの式（Ｉ）の結晶性化合物は、水中の溶解度が、少なくとも約少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２００ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約１４００ｍｇ／ｍＬでさえある。ある実施形態では、結晶性化合物の水溶液のｐＨは、約５．０と８．５の間、好ましくは約５．０と約７．０の間など約４．５と約１０の間である。ある実施形態では、このような溶液のｐＨは、約５．０である。
【００３３】
ある実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の結晶性化合物と、生理食塩水とを含むキットに関する。
【００３４】
本明細書で開示の凍結乾燥体は、１つまたは複数の塩基等価体とともに製剤されたＩＰＭおよびＩＰＭ類似体を含む。ＩＰＭおよびその類似体は、酸に対して不安定であり、酸性であるので、本発明で開示された凍結乾燥体は、より大きい安定性およびその他の利点を提供する。合成、安定性および生物利用性の点で開示の製剤の利点は、本開示を考察すれば当業者には明らかであろう。１つまたは複数の塩基等価体とともに製剤されたＩＰＭおよびＩＰＭ類似体の追加の利点として、水または体液への溶解度の増加を挙げることができる。
【００３５】
ある実施形態では、開示された凍結乾燥体は、１つまたは複数のカチオンを含むイソホスホルアミドマスタードもしくはイソホスホルアミドマスタード類似体の塩である。ある実施形態では、カチオンは、アミン塩基の共役酸であっても、第四級アンモニウムカチオンであってもよい。イソホスホルアミドマスタードおよびその類似体に対する適切な対イオンとして、塩基性アミノ酸、脂肪族アミン、複素環式アミン、芳香族アミン、ピリジン、グアニジンおよびアミジンを含めての塩基の共役酸が挙げられる（文脈が、遊離アミンを意図することを明確に示していない限り、本明細書では、アミンを指す用語はそれらの共役酸を含むと理解されたい）。脂肪族アミンのうち、非環式脂肪族アミン、ならびに環式および非環式ジおよびトリアルキルアミンは、開示の化合物において使用するのに特に適している。加えて、第四級アンモニウム対イオンは、使用できる適切な対イオンの例である。ある実施形態では、このような凍結乾燥体は、賦形剤をさらに含むことができる。適切な賦形剤として、限定されないが、マンニトール、無水ラクトース、スクロース、Ｄ（＋）−トレハロース、デキストラン４０およびポビドン（ＰＶＰ  Ｋ２４）が挙げられる。
【００３６】
ある実施形態では、本明細書で開示の凍結乾燥体などの化合物および組成物は、室温で、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも６カ月も安定である。ある実施形態では、塩は、より低い温度（例えば、０℃、２℃、４℃、６℃など）で少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、または少なくとも６カ月も安定である。このようなある実施形態では、凍結乾燥体などの化合物および組成物は、より低い温度（例えば、約０℃と約２０℃の間、約０℃と約１０℃の間、約２℃と約８℃の間）で少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも４カ月、または少なくとも６カ月も安定である。ある実施形態では、凍結乾燥体は、ＩＰＭ塩またはその類似体を含む。ある実施形態では、凍結乾燥体は、ＩＰＭ・ＴｒｉｓまたはＩＰＭ（ＬＹＳ）２、好ましくは、ＩＰＭ・Ｔｒｉｓを含み、特に好ましい実施形態では、このような組成物は、マンニトールなどの増量剤をさらに含む。
【００３７】
さらなる実施形態では、上記の塩は、第２のアミンまたはアンモニウム基を含むことができる。一実施形態では、本明細書で開示の凍結乾燥体は、イソホスホルアミドマスタードまたはイソホスホルアミドマスタード類似体のそれぞれの当量に対して１を超える当量のアミンを含む。このような実施形態は、アミンとイソホスホルアミドマスタードまたはイソホスホルアミドマスタード類似体の非整数比を有する実施形態を含む。ある実施形態では、凍結乾燥体は、アミンとイソホスホルアミドマスタードまたはイソホスホルアミドマスタード類似体の比が、２：１または３：１である。ワーキング実施形態では、イソホスホルアミドマスタード当量当たり２当量のアミン塩基を含む塩が生成された。ある実施形態では、イソホスホルアミドマスタードおよびイソホスホルアミドマスタード類似体の塩を形成するのに使用されたアミン塩基は１を超えるアミノ基を含み、このような塩基は、「多塩基性」と呼ぶことができる。より具体的には、使用できる多塩基性塩基のある例は、２つのアミノ基を有し、このような化合物は、「二塩基性」と呼ぶことができる。例えば、１つの適切な二塩基性分子は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンであり、これは２つの塩基性アミノ基を含む。本明細書で開示の凍結乾燥体のある実施形態は、イソホスホルアミドマスタードまたはイソホスホルアミドマスタード類似体と、一当量の二塩基性アミンとを含む。
【００３８】
本明細書で開示のあるイソホスホルアミドマスタードおよびイソホスホルアミドマスタード類似体の凍結乾燥体は、２つの脱離基を含む。理論から制約されることなしに、２つの脱離基は、核酸およびタンパク質などの生体分子求核体によってｉｎ  ｖｉｖｏで置換され、それによって生体分子を架橋すると考えられている。「脱離基」という用語は、求核体によって置換され得る基を指す。本発明で開示の化合物を参照すれば、脱離基は、置換してアジリジニウム中間体を形成することができ、あるいは核酸求核体などの生体分子求核体によって直接置換されて、例えば、７−アルキル化グアニジニウム種を形成することができる基を指す。適切な脱離基の例として、ハロゲンおよびスルホネート（−ＳＯ２Ｒ）が挙げられる。開示のイソホスホルアミド類似体の塩の一実施形態では、その化合物は、２つの異なる型の脱離基、例えば、ハロゲンとスルホネート、または臭化物および塩化物などの２つの異なるハロゲンを含む、「混合」脱離基化合物である。Ｓｔｒｕｃｋへの米国特許第６１９７７６０は、このような混合脱離基化合物を作製する方法を教示する。
【００３９】
ある実施形態では、開示の塩の凍結乾燥体によって、イソホスホルアミドマスタードそれ自体の凍結乾燥調製物に比較してもどした場合の安定性が改良される。このようなある実施形態では、生理食塩水（好ましくは、塩化ナトリウム５％）中でもどされた、例えばマンニトールなどの増量剤を任意選択で含むＩＰＭまたはその類似体とＴｒｉｓからなど、ＩＰＭまたはその類似体の開示の塩と賦形剤とから調製された凍結乾燥体は、＞９０％の効力を少なくとも約３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、１４０分間、または約１６０分間も保持する。
【００４０】
このようなある実施形態では、ＩＰＭ・Ｔｒｉｓ、またはＩＰＭ・ＴｒｉｓなどのＩＰＭもしくはその類似体の塩と任意選択の賦形剤例えばマンニトールなどの増量剤とから調製された凍結乾燥体などのＩＰＭもしくはその類似体の塩を生理食塩水に溶解させると、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の純度が少なくとも約３０分間、６０分間、９０分間、３時間、または４．５時間も室温で保持される。ある実施形態では、このようなもどされた溶液は、もどされたＩＰＭ・（ＬＹＳ）２溶液より同一の条件下で安定性が長い。このようなある実施形態では、もどされたＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、ＩＰＭもしくはその類似体の塩よりも少なくとも１．２５倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、または少なくとも３〜４倍早く分解する。
【００４１】
凍結乾燥体が、ＩＰＭもしくはその類似体の塩と賦形剤とを含む、例えば、ＩＰＭもしくはその類似体とＴｒｉｓとマンニトールとを含むある実施形態では、その混合物は、水への溶解度が少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、または８０ｍｇ／ｍＬである。
【００４２】
ある実施形態では、ＩＰＭまたはその類似体の開示の塩の凍結乾燥体は、イソホスホルアミドマスタードそれ自体、即ち遊離酸としての凍結乾燥調製物より安定性が大きい。好ましいこのようなある実施形態では、開示の塩の凍結乾燥体は、イソホスホルアミドマスタードそれ自体の凍結乾燥調製物より貯蔵寿命が長く、好ましくは、少なくとも２倍、より好ましくは、少なくとも５倍長い。ある実施形態では、凍結乾燥体は、溶解前において結晶性であってもなくてもよいＩＰＭのＴｒｉｓ塩から形成される。
【００４３】
上記したように、ある実施形態では、このような凍結乾燥体は、賦形剤、例えば、増量剤、好ましくはマンニトールをさらに含む。ある実施形態では、凍結乾燥体は、マンニトール、無水ラクトース、スクロース、Ｄ（＋）−トレハロース、デキストラン４０またはポビドン（ＰＶＰ  Ｋ２４）から選択される増量剤、好ましくはマンニトールを含む。ある実施形態では、このような増量剤の添加によって増量剤を含まない凍結乾燥体製剤に比較して凍結乾燥体の安定性を改良することができる。このようなある実施形態では、このような凍結乾燥体は、約−７０℃、約−２０℃、または５℃で、例えば１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、９カ月、１年、または２年以上も安定である。
【００４４】
凍結乾燥体がマンニトールなどの増量剤を含むこのようなある実施形態では、凍結乾燥体は、約１％〜約１０％、または約１％〜約５％（ｗ／ｖ）の増量剤、例えばマンニトールを含む。凍結乾燥をする前、または再構成する際に、このような組成物は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのＩＰＭ、および／または約０．５〜約１．５Ｍの濃度で、好ましくはＩＰＭに対してほぼ等モル量でＴｒｉｓなどのアミンを含むことができる。ある実施形態では、凍結乾燥する前に溶液を調製する場合、別々の成分としてＩＰＭとＴｒｉｓなどのアミンとを添加する代わりに、本明細書で開示のように結晶性ＩＰＭ・Ｔｒｉｓ塩の形で一緒に添加される。
【００４５】
ある実施形態では、本発明は、本明細書で開示の凍結乾燥体と生理食塩水とを含むキットに関する。
【００４６】
本明細書で開示の化合物は、経口で、局所的に、経皮で、非経口で、吸入またはスプレーを介して投与することができ、従来の非毒性で医薬として許容される、担体、アジュバントおよびビヒクルを含む単位用量製剤で投与することができる。
【００４７】
ある実施形態では、注射を介して開示のＩＰＭ塩またはそれらの類似体を非経口投与することが好ましい。ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはそれらの類似体を経口投与することが好ましい。ある実施形態では、経口（ＰＯ）投与されたＩＰＭ塩またはそれらの類似体は、静脈（ＩＶ）投与の際に観察されるのと類似の薬物動態（ＰＫ）パラメーターを示す。当業者の理解するように、作用剤は、特定の疾患、患者の症状、化合物の毒性およびその他の因子に応じて単一投与または長期的に提供することができる。
【００４８】
投与される１つまたは複数の化合物の治療有効量は、所望の効果および上記の因子に応じて変動する場合がある。
【００４９】
患者に投与するための医薬組成物は、好みの分子に加えて、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、防腐剤、界面活性剤などを含むことができる。医薬組成物はまた、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔薬などの１つまたは複数の追加の有効成分も含むことができる。医薬製剤は、担体などの追加の成分を含むことができる。こうした製剤に有用な医薬として許容される担体は、従来のものである。E.W.Martin著の「Remington's Pharmaceutical Sciences」、Mack PublishingCo.、Easton、PA、第２１版（２００６年）には、本明細書で開示の化合物を医薬として送達するのに適した組成物および製剤が記載されている。
【００５０】
一般には、担体の性質は、用いられる特定の投与形態によって決まることになる。例えば、非経口製剤は、通常、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、グリセリンなど、医薬としておよび生理学的に許容される流体を含む注射可能な流体をビヒクルとして含む。固体組成物（例えば、粉末、ピル、錠剤またはカプセル形態）では、従来の非毒性固体担体は、例えば、医薬級の、マンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムを含むことができる。生物学的に中性な担体に加えて、投与される医薬組成物は、湿潤または乳化剤、防腐剤、およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートなどの非毒性補助物質を微量含むことができる。
【００５１】
ある実施形態では、開示の化合物は、ピル、錠剤またはカプセルなどの経口用量形態として製剤される。ある実施形態では、経口用量形態はカプセルである。
【００５２】
ある実施形態では、このような経口用量形態は、賦形剤、流動促進剤、希釈剤、潤滑剤、および／または崩壊剤を少なくとも１つ含む。このようなある実施形態では、適切な賦形剤、流動促進剤、希釈剤、潤滑剤、および／または崩壊剤として、限定されないが、タルク、フュームド二酸化ケイ素、デンプン、ケイ酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラクトース、微晶質セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デキストロース、グルコース、スクロース、デンプン、デンプン誘導体、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマール酸ナトリウム、ポリエチレングリコール４０００、ポリエチレングリコール６０００、安息香酸ナトリウム、軽質鉱油、水素化植物油、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、不溶性イオン交換樹脂、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロースナトリウム）ガム（例えば、寒天、グアー、キサンタン）、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、およびクロスポビドンが挙げられる。
【００５３】
このようなある実施形態では、経口用量形態は、本明細書で開示の化合物と、少なくとも１つの賦形剤、流動促進剤、希釈剤、潤滑剤、および／または崩壊剤；好ましくは、吸湿性の有効剤を含む製剤に対して適切である、少なくとも１つの賦形剤、流動促進剤、希釈剤、潤滑剤、および／または崩壊剤とを含む。このようなある実施形態では、経口用量形態は、微晶質セルロース、ラクトース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、二塩基性リン酸カルシウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびマンニトールから選択される少なくとも１つの賦形剤、流動促進剤、希釈剤、潤滑剤、および／または崩壊剤を含む。
【００５４】
ある実施形態では、開示の化合物は、ヒトの患者へ投与するために製剤される。本実施形態の一態様では、医薬組成物は、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬなどの約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬのＩＰＭ塩またはその類似体の化合物を含む。
【００５５】
一態様では、医薬組成物のある実施形態は、製剤されて単位用量形態になる。例えば、このような単位用量形態は、約５ｍｇ〜約２００ｍｇ、または２００ｍｇ〜約１５００ｍｇなど、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、または１００ｍｇ〜約１５００ｍｇのＩＰＭ塩またはその類似体を用量単位当たり含むことができる。ある実施形態では、用量単位は、約１５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４５ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、または約７７ｍｇもの開示のＩＰＭ塩またはその類似体を含むことができる。
【００５６】
一部の実施形態では、本発明の化合物が、例えば、DepoFoam（SkyePharma、Inc、SanDiego、CA）などの多少胞性リポソームを含む、注入されるおよび／または植え込まれる薬物デポーを介して送達されることが特に企図される（例えば、Chamberlainら、Arch．Neuro．１９９３年、５０巻、２６１〜２６４頁；KatriらJ．Pharm．Sci．１９９８年、８７巻、１３４１〜１３４６頁；YeらJ．ControlRelease ２０００年、６４巻、１５５〜１６６頁；およびHowell，Cancer J．２００１年、７巻、２１９〜２２７頁を参照されたい）。
【００５７】
１つまたは複数の開示の化合物および組成物を患者に投与することによって異常なもしくは病的な過剰増殖活性または新生組織形成によって特徴づけられる症状を治療するための方法が、本明細書で開示されている。
【００５８】
開示された方法に従って治療できる症状として、癌およびその他の新生組織形成状態など、異常な細胞成長および／または分化を特徴とする状態が挙げられる。開示の化合物および組成物を使用して治療できる過剰増殖性障害の典型的な例を以下に列挙する。
【００５９】
本明細書で開示の化合物および組成物を使用して治療できる血液学的腫瘍の例として、急性白血病（急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、および骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血球性白血病などの）、慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病および慢性リンパ球性白血病などの）、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（緩慢形および重症形）、多発性骨髄腫、ワルデンストレームグロブリン血症、Ｈ鎖病、骨髄異形成症候群、有毛状細胞性白血病および異形成脊髄を含めての白血病が挙げられる。
【００６０】
開示の化合物および組成物を使用して治療できる症状の追加の例として、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、シクロホスファミド耐性肉腫およびその他の肉腫を含めての肉腫と癌腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性疾患、膵臓癌、乳腺癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆道癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、睾丸腫瘍、膀胱癌ならびにＣＮＳ腫瘍（神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、クラニオファルオジマ（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、メナンジオマ（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽腫などの）が挙げられる。
【００６１】
ある実施形態では、本明細書で開示の化合物は、抗ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓ性の腫瘍の成長に対してＣＰＡまたはＩｆｏｓ単独より優れている。したがって、本明細書で開示の方法の一態様には、抗ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓ性の新生腫瘍症状を有する患者を本明細書で開示のＩＰＭ塩またはその類似体を用いて治療するステップが含まれる。
【００６２】
一部の実施形態では、本明細書で開示の化合物では、ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓに比較して毒性が減少する。例えば、ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓを多量に投与すると、クロロアセトアルデヒドおよびアクロレインなどのある代謝産物が存在するために、腎臓、膀胱および／または中枢神経系に対する毒性が増加する恐れがある。一部の実施形態では、本発明の化合物によって、効力を保持しつつ、これらやその他の有毒代謝産物の産生が低減または防止される。したがって、本発明の化合物は、ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓの代謝産物に関係している場合がある、腎臓、膀胱および／または中枢神経系の正常な細胞の死など、有害な副作用を低減しつつ、治療処置を提供することができる。したがって、本発明の化合物は、ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓの代替物として有用である。
【００６３】
例えば、本発明の化合物は患者に血液細胞および骨髄移植を提供するのに有用である。ＣＰＡおよびＩｆｏｓは、血液細胞および骨髄移植において使用される場合が多く、本発明の化合物は、例えば、本発明の化合物における毒性プロフィルの低減および／または効力の増加のために、有利な代替物になる。さらには、ＣＰＡおよびＩｆｏｓが不適切である場合、例えば、ＣＰＡおよびＩｆｏｓを多量に投与すると、毒性が過度になることが分かっている場合、本発明の化合物は、血液細胞および骨髄移植において用いることもできる。本発明の化合物は、移植する前に、数分間、数時間、数日間、数週間または数カ月間、特に移植する前に、数日間または数週間投与することができる。さらには、本発明の化合物は、血液細胞または骨髄移植の準備において、単一回の、複数回のおよび／または反復した用量形態でおよび／または他の作用剤と一緒に投与することができる。
【００６４】
ある実施形態では、本発明の化合物は、血液細胞または骨髄移植に対する調整投与計画において、例えば、ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓの代替物として有用である。さらには、本発明の化合物は、ＣＰＡおよびＩｆｏｓと一緒に使用される場合が多いメスナおよび／または静脈水和などの保護手段を使用することなく投与することができる。
【００６５】
別の実施形態では、本発明の化合物は、ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓと組み合わせて、例えば、患者に血液細胞または骨髄移植を提供する際に、および血液細胞および骨髄移植に対する調整投与計画において使用することができる。ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓと組み合わせて１つまたは複数の本発明の化合物を含む組成物は、ＣＰＡおよび／またはＩｆｏｓ単独より優れた毒性の低減および／または効力の増加など追加の利益を提供する。
【００６６】
本方法のある実施形態では、患者は、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の開示のＩＰＭ塩またはその類似体を投与される。例えば、約１〜約７．５ｍｇ／ｋｇ／日など約０．５ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日の開示の化合物を患者に投与することができる。
【００６７】
ある実施形態では、ＩＰＭ、類似体またはその塩は、約１．０ｇ超、約１．５ｇ超、約２．０ｇ超、約２．５ｇ超の用量（例えば、日用量）で患者に投与される。ある実施形態では、ＩＰＭは、例えば、最高約２．０ｇ、２．５ｇまたは３．０ｇのＩＰＭ・Ｔｒｉｓである。
【００６８】
ある実施形態では、ＩＰＭまたはその類似体は、ＩＰＭまたはその類似体（即ち、塩のＩＰＭアニオンのみを考慮し、対イオンまたは組成物のその他の成分の重量を除外して）の用量（例えば、日用量）が、約０．４ｇ超、約０．６ｇ超、約０．８ｇ超、または約１．０ｇ超になるように塩として患者に投与される。ある実施形態では、ＩＰＭは、約０．４ｇ超、約０．６ｇ超、約０．８ｇ超、または約１．０ｇ超、例えば、最高約２．０ｇ、２．５ｇまたは３．０ｇの用量で本明細書で開示の組成物において投与される。
【００６９】
ある実施形態では、一治療単位のＩＰＭ塩またはその類似体は、約０．８ｇ超、約１．０ｇ超、約１．５ｇ超、または約２．０ｇ超であるＩＰＭまたはその類似体の全量（即ち、塩のＩＰＭアニオンのみを考慮し、対イオンまたは組成物のその他の成分の重量を除外して）を含むことができる。
【００７０】
ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体の用量は、１週間に１回、１週間に３回、１週間に５回、１日に１回、１日に２回、好ましくは１日に１回投与することができる。このようなある実施形態では、一治療単位のＩＰＭ塩またはその類似体を投与することができ、一治療単位は、２回以上の連続投与である。ある実施形態では、一単位の治療は、２、３、４または５日間、好ましくは３日間、１日１回、ＩＰＭ塩またはその類似体の用量を投与するステップを含むことができる。このような投与は、連続した日であっても、連続しない日であってもよい。
【００７１】
ある実施形態では、単一用量（例えば、１日の用量）は、１を超える用量形態を含むことができ、例えば、単一用量は、２つ以上のカプセル、錠剤またはピルを含むことができる。ある実施形態では、複数の用量形態を含む１日の用量は、一度に全部を投与してもよく、あるいはその用量形態のサブセットを丸１日を一定間隔で投与してもよい。
【００７２】
本方法の別の実施形態では、患者は、約１〜約７００ｍｇ／ｍ２、約５〜約１０００ｍｇ／ｍ２、約５〜約７００ｍｇ／ｍ２、約５〜約５００ｍｇ／ｍ２、約６００〜約１２００ｍｇ／ｍ２、約１００〜約１５００ｍｇ／ｍ２、約３０〜約６００ｍｇ／ｍ２、約１０〜約６００ｍｇ／ｍ２、または約１０〜約１００ｍｇ／ｍ２などの約１〜約１５００ｍｇ／ｍ２の本明細書で開示のＩＰＭ塩またはその類似体の用量（例えば、日用量）を投与される。例えば、約１０ｍｇ／ｍ２、約１２、または１４ｍｇ／ｍ２。
【００７３】
本明細書で開示の高過剰増殖性障害を治療するための方法のある実施形態では、開示の化合物は、日用量の複数のスケジュールで患者に投与される。このような実施形態では、化合物は、少なくとも２日で、および５日もの異なる日で投与される。日用量の複数のスケジュールの一態様では、化合物は、２〜５連続日などの連続日で患者に投与される。あるいは、化合物は、１日おきなどの非連続日で患者に投与される。
【００７４】
本方法のある実施形態では、１つまたは複数の追加の治療剤が、本発明で開示の化合物および組成物に加えて患者に投与される。例えば、使用できる追加の治療剤として、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレータまたは架橋剤、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写阻害剤、抗生物質、酵素、酵素阻害剤、遺伝子調整剤、および／または血管形成阻害剤が挙げられる。
【００７５】
微小管結合剤は、チューブリンと相互作用することによって微小管の形成を安定化させまたは不安定化させて、それによって細胞分割を阻害する作用剤を指す。ＩＰＭ、類似体、またはその塩と一緒に使用できる微小管結合剤の例として、限定されないが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン（ナベルビン）、エポチロネス、コルヒチン、ドラスタチン１５、ノコダゾール、ポドフィロトキシンおよびリゾキシンが挙げられる。このような化合物の類似体および誘導体も使用することができ、それらは、当業者に公知であろう。例えば、本発明の化合物に組み込むための適切なエポチロンおよびエポチロン誘導体は、参照により本明細書に組み込まれている国際公開ＷＯ２００４／０１８４７８に記載されている。パクリタキセルおよびドセタキセルなどのタキソイドは、現在、本発明で開示の化合物において治療剤として特に有用であると考えられている。パクリタキセルの類似体を含めて追加の有用なタキソイドの例は、Holtonの米国特許第６６１０８６０号、Gurramらの同第５５３００２０号、およびWittmanらの同第５９１２２６４号に教示され、それぞれが、その全体の参照により本明細書に組み込まれている。
【００７６】
限定されないが、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ならびにそれらの誘導体および類似体を含めての適切なＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写調整剤も、本発明で開示の化合物と組み合わせての使用に適切である。
【００７７】
開示の化合物に組み込むことができるＤＮＡインターカレータおよび架橋剤として、限定されないが、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ブレオマイシン、クロランブシル、シクロホスファミド、ならびにそれらの誘導体および類似体が挙げられる。
【００７８】
治療剤として使用するのに適切なＤＮＡ合成阻害剤として、限定されないが、メトトレキセート、５−フルオロ−５’−デオキシウリジン、５−フルオロウラシルおよびそれらの類似体が挙げられる。
【００７９】
本発明で開示の化合物と組み合わせて使用するための適切な酵素阻害剤の例として、限定されないが、カンプトテシン、エトポシド、ホルメスタン、トリコスタチンならびにそれらの誘導体および類似体が挙げられる。
【００８０】
遺伝子調整に影響を与える本発明で開示の化合物とともに使用するための適切な治療剤として、限定されないが、ラロキシフェン、５−アザシチジン、５−アザ−２’−デオキシシチジン、タモキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、ミフェプリストンならびにそれらの誘導体および類似体など、１つまたは複数の遺伝子の発現を増加させる、または減少させる作用剤が挙げられる。
【００８１】
血管形成阻害剤は当技術分野で公知であり、適切な血管形成阻害剤の例として、限定されないが、アンギオスタチンＫ１−３、スタウロスポリン、ゲニステイン、フマギリン、メドロキシプロゲステロン、スラミン、インターフェロン−α、メタロプロテナーゼ阻害剤、プラテレット因子４、ソマトスタチン、トロモボスポンジン、エンドスタチン、サリドマイドならびにそれらの誘導体および類似体が挙げられる。
【００８２】
１つまたは複数の上記の分類に入っても、入らなくてもよいその他の治療剤、特に抗腫瘍剤も本発明で開示の化合物と組み合わせて投与するのに適切である。このような作用剤の例として、アドリアマイシン、アピゲニン、ラパマイシン、ゼブラリン、シメチジンならびにそれらの誘導体および類似体が挙げられる。
【００８３】
ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、ドキソルビシンなどのＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写調整剤と組み合わせて投与される。代替のある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、ドセタキセルまたはパクリタキセルなどの微小管結合剤と組み合わせて投与される。
【００８４】
ある実施形態では、本明細書で開示の組合せは、本質的に相乗的である場合があり、これは、ＩＰＭ塩またはその類似体とその他の治療剤（複数可）との組合せの治療効果が、２つ以上の作用剤を同じ量で別々に投与した場合の個別の効果の和より大きいことを意味する。
【００８５】
このようなある実施形態では、このような相乗効果によってＩＰＭ塩またはその類似体を治療用量以下で投与することが可能になる。このようなある実施形態では、治療用量以下で投与することによって、ＩＰＭ塩またはその類似体のより多い用量に伴う副作用を低減または防止することができる、例えば、本発明の方法は、従来の抗癌剤がより少ない用量でより大きい効果を出すことを可能にすることによって既存の組合せ療法より有利である場合がある。
【００８６】
ある実施形態では、追加の作用剤の効果は、ＩＰＭ塩またはその類似体と組み合わせて投与した場合に改良される。このようなある実施形態では、追加の作用剤は、限定されないが、微小管結合剤、ＤＮＡインターカレータまたは架橋剤、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写阻害剤、抗生物質、酵素、酵素阻害剤、遺伝子調整剤、および／または血管形成阻害剤を含めての化学療法剤である。このようなある実施形態では、ドセタキセルまたはパクリタキセルなどの微小管結合剤の効果は、ＩＰＭ塩またはその類似体と組み合わせて投与した場合に改良される。このようなある代替の実施形態では、ドキソルビシンなどのＤＮＡおよび／またはＲＮＡ転写阻害剤の効果は、ＩＰＭ塩またはその類似体と組み合わせて投与した場合に改良される。ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、ＩＰＭ・Ｔｒｉｓである。
【００８７】
本明細書では、「治療用量以下」という用語には、腫瘍体積を安定化または低減できるが、その用量では有効な治療と見なされないと思われる用量、または単独ではいかなる治療効果ももたらさない用量が含まれる。
【００８８】
ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約４００ｍｇ、または約１７５ｍｇ〜約３００ｍｇの用量で投与される。ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約２８５ｍｇ、約２９０、または約３００ｍｇの用量で投与される。このようなある実施形態では、このような用量で投与されるＩＰＭ塩またはその類似体は、経口で投与される。
【００８９】
ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、ドキソルビシンと組み合わせて、約１００ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１１０ｍｇ〜約１８０ｍｇ、または約１１５ｍｇ〜約１５０ｍｇの用量で投与される。このようなある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、ドキソルビシンと組み合わせて、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８５ｍｇ、または約２００ｍｇの用量で投与される。
【００９０】
ある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、ドセタキセルと組み合わせて、約５０ｍｇ〜約２００ｇ、約７５ｍｇ〜約１９５ｍｇ、または約８０ｍｇ〜約１９０ｍｇの用量で投与される。このようなある実施形態では、ＩＰＭ塩またはその類似体は、ドセタキセルと組み合わせて、約５０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、または約２００ｍｇの用量で投与される。
【００９１】
ＩＩＩ．定義
用語および実施例の以下の説明は、本発明の化合物、組成物および方法をよりよく説明するため、および本開示の実施において当業者をガイドするために提供される。本開示で使用される専門用語は特定の実施形態および実施例を説明するためのみのもであり、限定するものではないことも理解されたい。
【００９２】
範囲は、本明細書で、１つの特定の「およそ」の値から、別の特定の「およそ」の値までとして表現される。このような１つの範囲が表現された場合、別の実施形態は、１つの特定の値から、他の特定の値までを含む。同様に、値が、先行詞「約」を使用して概略値として表現された場合、特定の値は別の実施形態を形成することを理解されたい。それぞれの範囲の終点は、もう一方の終点との関係において重要でもあり、もう一方の終点とは独立に重要でもあることをさらに理解されたい。
【００９３】
「非環式脂肪族アミン」という用語は、少なくとも１つの脂肪族基が非環式である上記のような脂肪族アミンを指す。
【００９４】
本明細書では、「脂肪族アミン」は、Ｒ１〜３の少なくとも１つが脂肪族基である式ＮＲ１Ｒ２Ｒ３の化合物を指す。
【００９５】
「血管形成阻害剤」という用語は、限定されないが、ペプチド、タンパク質、酵素、ポリサッカライド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、組換えベクター、および血管成長を阻害する働きをする小分子などの生体分子を含めての分子を意味するために本明細書で使用される。血管形成は、糖尿病性網膜症、慢性炎症疾患、関節リウマチ、皮膚炎、乾癬、胃潰瘍、およびヒト固体腫瘍の大部分の型などの障害に関与する病理プロセスなどのある病理プロセスに関係があるとされている。
【００９６】
「複素環式アミン」という用語は、Ｒ１〜３の少なくとも１つが複素環式基であり、あるいはＲ１、Ｒ２および／またはＲ３が共通の窒素原子と一緒に環を形成する式ＮＲ１Ｒ２Ｒ３の化合物を指す。
【００９７】
「脱離基」という用語は、求核体によって置換され得る基を指す。本発明で開示の化合物を参照すれば、脱離基は、置換されてアジリジニウム中間体を形成することができる、あるいは核酸求核体などの生体分子求核体によって直接に置換されて、例えば、７−アルキル化グアニジニウム種を形成することができる基を指す。適切な脱離基の例として、ハロゲンおよびスルホネート（−ＳＯ２Ｒ）が挙げられる。開示のイソホスホルアミド類似体塩のある実施形態では、化合物は、２つの異なる型の脱離基、例えば、ハロゲンとスルホネート、ブロミドとクロリドなどの２つの異なるハロゲンを含む「混合」脱離基化合物である。Struckの米国特許第６１９７７６０号は、このような混合脱離基化合物を作製するための方法を教示する。
【００９８】
「新生腫瘍形成」は、異常で制御されていない細胞成長を指す。新生腫瘍形成は、過剰増殖障害の一例である。新生腫瘍形成の産生物は、新生生物（腫瘍）であり、これは、過剰な細胞分割に由来する組織の異常な成長である。転移しない腫瘍は、「良性」と呼ばれる。周囲の組織を侵食する、および／または転移できる腫瘍は、「悪性」と呼ばれる。
【００９９】
「任意選択の」または「任意選択で」とは、続いて記載された事象または状況が起る必要がなくてもよく、その記載には事象または状況が起る場合と起らない場合が含まれることを意味する。
【０１００】
本明細書では、安定なという用語は、化合物が、少なくとも５日間、または指定の期間、５％超は分解しない、好ましくは、２％または１％以下しか分解しないことを意味する。このような分解は、１Ｈ  ＮＭＲ、ＨＰＬＣまたは他の適切な手段によって監視することができる。
【０１０１】
本明細書では、および当技術分野ではよく理解されているように、「治療」は、臨床結果を含めての有利なまたは所望の結果を得るための手法である。有利なまたは所望の臨床結果として、限定されないが、検出されてもされなくても、１つまたは複数の兆候または症状の緩和または改良、疾患状況の軽減、疾患の安定化（即ち、悪化していない）状態、疾患の広がりの防止、疾患の進行の遅延または遅くすること、疾患状態の改良または緩和、および寛解（部分的でも全体的でも）を挙げることができる。「治療」とは、治療を受けない場合の予想生存期間に比較して延長された生存期間を意味する場合もある。
【実施例】
【０１０２】
ＩＶ.実施例
以下の非限定的実施例により前述の開示をさらに説明する。
【０１０３】
（実施例１）
反応器にトリス（１０３．３ｍｇ）およびＭｅＣＮ（３ｍＬ）を投入し、引き続きＩＰＭ（２００．５ｍｇ）をＭｅＣＮ（３ｍＬ）に添加した。その反応混合物を終夜撹拌した。次いで、固形物を濾過により回収し、ＭｅＣＮを用いてケーキを洗浄した。ケーキを真空下で恒量まで乾燥させて、最終製品（２９６ｍｇ）を得た。結晶化度を確認するために、最終製品をＸ線粉末回析に付した（図２）。結晶化度は、１０５．７７で鋭いピークが現れたＤＳＣによって、さらに裏付けられた（図３）。さらに、ＩＰＭ・トリス塩は、ＴＧＡにより、約１２５℃で０．７６９２％の重量減少を示した（図４）。最後に、ＳＥＭは、ＩＰＭ・トリスが、板状の結晶形状を有することを示した。
【０１０４】
結晶性ＩＰＭ・トリスの安定性を１ＨＮＭＲにより観察し、室温で最大６日間安定なままであることを見出した。結晶構造の安定性をＤＳＣにより観察し、ＤＳＣは、室温での１０日の間に、ＩＰＭ・トリス結晶が吸水しなかった、またはその構造が変化しなかったことを示した。
【０１０５】
（実施例２）
反応器にトリス（８．５６３ｇ）およびＤＭＦ（４０ｍＬ）を投入し、加熱して透明な溶液を形成した。該溶液を室温まで冷却した後、ＩＰＭを添加した。混合物を撹拌して透明な溶液を形成した。次いで、アセトニトリル（４０ｍＬ）および少量の種結晶を該溶液に添加し、引き続き、ＭＴＢＥ（２４０ｍＬ）を緩徐に添加してスラリーを得た。スラリーをさらに１時間撹拌し、その間に、濾過により沈殿物を回収し、ＭＴＢＥ（８０ｍＬ）を用いて濾過ケーキを洗浄した。濾過ケーキを真空下で、室温で恒量まで乾燥させて、最終製品（２３．２ｇ）を得た。
【０１０６】
（実施例３）
ｉｎ  ｖｉｖｏ継代のＭＸ−１ヒト乳房腫瘍の３０〜４０ｍｇの切片をｎｕ／ｎｕマウスの乳房脂肪パッドに皮下移植し、治療の開始前に重量を７５〜２００ｍｇに到達させた。治療は、腫瘍移植後の１０日目に開始し、１日１回、５日間、腹腔内投与した。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２（４３％ＩＰＭおよび５７％Ｌｙｓ）およびＩＰＭ・トリスは、用量をＩＰＭに正規化したとき、ＭＸ−１腫瘍に対して類似の活性を示した（図６参照）。
【０１０７】
（実施例４）
ｉｎ  ｖｉｖｏ継代のＭＸ−１ヒト乳房腫瘍の３０〜４０ｍｇの切片をｎｕ／ｎｕマウスの乳房脂肪パッドへｓｃ移植し、治療の開始前に重量を７５〜２００ｍｇに到達させた。治療は、腫瘍移植後の１０日目に開始し、１日に１回、５日間、腹腔内投与または経口投与した。実施例１に記載したように調製し得るＩＰＭ・トリスは、経口投与または全身投与したとき、各投与について最大耐用量で、ＭＸ−１腫瘍に対して等しく活性であった（図７参照）。
【０１０８】
（実施例５）
細胞増殖アッセイ
増殖阻害作用は、微小培養テトラゾリウム法により求めた。簡潔に言うと、１００μＬの培地中で細胞５００個／ウェルの濃度で、９６ウェル平底マイクロタイタープレートに細胞を播種した。終夜インキュベートした後、規定最終濃度および２００μＬ／ウェルの最終体積を実現するために、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を含有する１００μＬの培地を添加した。データ点は、平均生存度およびエラーバーを表す（３回実施した各実験の標準偏差）。３−［４，５−ジメチルチアゾン−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）のホルマジン（ｆｏｒｍａｚｉｎｅ）へのミトコンドリア変換により、１２０時間で、治療および未治療の細胞の相対代謝活性を測定した。薬物療法の完了時に、各ウェルに２５０μｇのＭＴＴを添加し、３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした。ホルマジン結晶をＤＭＳＯ中、およびＶＥＲＳＡｍａｘ分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）で測定した５９５ｎｍの光学濃度で溶解した。生存度は、治療した試料の５９５ｎｍでの吸収度を対照試料の５７０ｎｍでの吸収率で除度したものとして定義した。ＩＣ５０は、治療した細胞の生存度が、対照の生存度の５０％である濃度（治療／対照＝０．５）として定義した。
【０１０９】
異種移植マウスモデル
ＣＢ１７雌性スキッド＊／＊マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）に、腫瘍皮下側腹部腫瘍を移植した。ＯＳ３１腫瘍株は、Ｓｔ．Ｊｕｄｅｓ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｈｏｓｐｉｔａｌで樹立され、前述した（２０）。ＯＳ１腫瘍を用いた移植のために、４％のイソフルランを用いて、マウスに麻酔をかけた。マウスの側腹部で小切開をした後、腫瘍の４ｍｍ×４ｍｍの切片を皮下移植した。
【０１１０】
ＣＢ１７雌性スキッド＊／＊マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）をＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いて、１日目に開始して２１日毎に２サイクル、１または３日間、毎日、尾静脈注射を介して治療した。５匹の非担腫瘍マウスを各治療群に割り当てた。７５ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日、１５０ｍｇ／ｋｇ／日、または２００ｍｇ／ｋｇ／日のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いて、マウスを治療した。毒性事象は、無作為化または死亡時における、動物の重量の２０％以上の重量減少として定義した。ＭＴＤは、毒性が発生しなかった最も高い用量として定義した。
【０１１１】
腫瘍の直径が約０．２０〜０．７ｃｍであるとき、担腫瘍マウスを１つの治療群と１つの対照群の、５〜８匹のマウスの群に無作為に分けた。治療マウスに、９０ｍｇ／ｋｇ／日の用量のタシドチン（ｔａｓｉｄｏｔｉｎ）を腹腔内注射薬として、１日目と２１日目に開始して５日間毎日投与する。球形腫瘍であると仮定して、体積を式：ｍｍ３＝＊／６（Ｄ）ｄ２（式中、Ｄは最大直径であり、ｄは、Ｄに垂直の直径である）により求めた。任意の所与の時点における腫瘍体積を出発腫瘍体積で除算した相対腫瘍体積（ＲＴＶ）として、体積を表現する。治療マウスおよび対照マウスのＲＴＶを最低週１回測定した。
【０１１２】
マウスにおける腫瘍反応の評価および統計的考察
進行性疾患は、Ｈｏｕｇｈｔｏｎらによって以前に定義された基準を使用して、研究期間全体の間の、最初の腫瘍体積からの５０％未満の退縮（ＲＴＶ＞０．５）、および研究期間の最後における２５％を超える腫瘍体積の増加（ＲＴＶ＞１．２５）として定義する。研究期間全体を通して最初の腫瘍体積の５０％を上回らない安定疾患の腫瘍退縮（ＲＴＶ＞０．５）、および研究期間の最後における２５％未満の腫瘍体積の増加（ＲＴＶ＜１．２５）。部分寛解は、腫瘍体積の５０％を超える退縮であるが、０．１０ｃｍ３を超える測定可能な腫瘍体積を有する（ＲＴＶ＜０．５）ものとして定義する。治療期間（６週間）の間の任意の時点での、測定可能な腫瘍体積の減少（＜０．１０ｃｍ３）を完全寛解（ＣＲ）と定義した。持続的ＣＲは、治療開始後の任意の時点での、測定可能な腫瘍体積の減量（＜０．１０ｃｍ３）であり、６週間の研究期間の間の再増殖を伴わないものとして定義した。９週目の前または腫瘍が初期体積の４倍に到達する前に死亡したマウスは除外した。
【０１１３】
統計的分析は、無事象生存率（ＥＦＳ）に基づいていた。事象は、４×の相対腫瘍体積（即ち、出発腫瘍寸法の４倍）、または死亡として定義する。ＥＦＳは、研究の開始から事象までの時間として定義する。６週目、研究期間の最後までに事象に到達しない腫瘍に関しては、その場合、ＥＦＳ時間を除外した。治療群と対照群の間の無事象生存率分布を比較するために、正確なログランク検定を使用した。さらに、Ｗｉｌｃｏｘｉａｎ−Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を使用して、対照マウスと治療マウスの２２日目のＲＴＶを比較した。このことが、１サイクルのタシドチン後と、未治療マウスの事象時またはその付近での腫瘍体積の比較を可能にする。
【０１１４】
生物学的データ
使用した腫瘍細胞株としては、ＲＤおよびＲＨ３０横紋筋肉腫株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）、Ｓａｏｓ−２骨肉腫株、ＳＫＰＮＤＷおよびＳＫＥＳ１ユーイング肉腫株、ならびにＨＳＳＹＩＩおよびＳＹＯＩ滑膜肉腫株が挙げられる。各細胞は、１０％のウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、０．５％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、および１％のグルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）で補足した、ＭＥＭ（Ｓａｏｓ−２、ＳＹＯ−１、ＨＳＳＹ−ＩＩ）、ＤＭＥ（ＳＫ−ＰＮ−ＤＷ、ＲＤ）、またはＲＰＭＩ（ＲＨ３０）の培地中の、３７℃、５％のＣＯ２の単層中で増殖した。その結果を以下に示す（図８および９）。
【０１１５】
【数１】
0005659010.tif 000015
シクロホスファミド（ＣＰＡ）およびイホスファミド（ＩＦＯＳ）に対する耐性は、癌治療において克服しなければならない主要な障害である。ＣＰＡ耐性ヒト肉腫細胞の異種移植片を有するマウスは、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いて治療したとき、肉腫増殖が５倍を超えて減少し、ＣＰＡ療法は効果がなかった（図１０〜１２）。
【０１１６】
ヒト臨床試験
安全性および用量反応の第Ｉ相試験は、４週間（１サイクル）毎に毎日３日連続で投与するＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を利用した。その結果は、肉腫（ＩＦＯＳ療法に失敗した少なくとも１人を含む２／１１の被検者）および中皮腫（長期安定疾患を有する１人の被検者）における臨床活性の証拠を示した。この計画でのＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の最大耐用量（ＭＴＤ）は、４００ｍｇ／ｍ２／ｄであった。骨髄毒性はほとんどなく、出血性膀胱炎（膀胱毒性）またはＣＮＳ毒性はなかった。用量制限毒性は、電解質不均衡によって特徴づけられた。このＭＴＤは、２５ｇ／ｍ２を超えるＩＦＯＳ用量に匹敵し、この用量は、ヒト肉腫細胞株の５０％を死滅させる用量より２５倍高い血清レベルを実現する。
【０１１７】
（実施例６）
材料および方法
動物のケア：５〜６週齢の雄性ＣＤ２Ｆ１マウスをＦｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）から購入した。
【０１１８】
腫瘍モデル：２３ゲージの針を使用して、マウスに、Ｐ３８８マウス白血病の１００万個の細胞をｉｐ移植した。Ｐ３８８腫瘍株をｉｎ  ｖｉｖｏで継代維持した。腫瘍移植した日を０日目と呼び、腫瘍移植後の１日目に治療を開始した。十分な数のマウスに移植し、その結果、可能な限り狭い範囲の体重の動物を試験用に選択した。
【０１１９】
製剤：予め秤量した１００ｍｇのバイアルで供給したＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を治療初日（１日目）に、７０ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水中に処方した。次いで、この溶液の一部を４６．６５、２３．３５、１４、９．３５、４．６５、および２．８ｍｇ／ｍＬの、より低い投薬濃度まで希釈した。治療の後日、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を１４ｍｇ／μＬで処方し、次いで、その溶液の一部をより低い投薬濃度まで希釈した。全ての注射薬を正確な体重に基づいて投与し、注射容量は０．２ｍＬ／体重１０ｇである。
【０１２０】
薬物療法：該研究は、治療初日に、１群当たり８匹のマウスの８つの治療群および１０匹のマウスを有する２つの溶媒投与対照群、計８４匹のマウスからなる。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を１日目（ｑ１ｄ×１）に、ｐｏ投与する１４００、９３３、および４６７ｍｇ／ｋｇの投与量、およびｉｐ投与する２８０ｍｇ／ｋｇの投与量で、単回注射として投与した。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を毎日１回、５日連続で（ｑ１ｄ×５）、ｐｏ投与する２８０、１８７、および９３ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量、およびｉｐ投与する５６ｍｇ／ｋｇ／投与の投与量でも投与した。１つ目の対照群は、１日目に単回投与としてｐｏ投与する生理食塩水を用いて治療した。２つ目の対照群は、ｑ１ｄ×５治療計画でｐｏ投与する生理食塩水を用いて治療した。
【０１２１】
研究期間：該研究は、腫瘍移植の６１日後に終了した。瀕死状態になった動物は、研究終了前に全て安楽死させた。
【０１２２】
評価したパラメーター：非特異的死亡数、死亡日数中央値、および死亡日数中央値に基づいて百分率（％ＩＬＳ）で表現される生存期間の増加；生存期間中央値および生存期間中央値に基づいて算出した％ＩＬＳ。
【０１２３】
統計的分析：各群の間の生存データを統計的に比較するために、個々の動物の生存期間を生命表分析（階層的Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定とその後のＭａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌログランク検定）でエンドポイントとして使用した。生命表分析は、エンドポイントに到達しなかった各動物をそれらを除外することにより使用して、各群の間の生存データの比較を可能にする。
【０１２４】
結果
両方の溶媒投与対照群の死亡日数中央値は、１１．０日であり、１０日目と１４日目の間に死亡が発生した。全ての動物に、腹水が存在していた。
【０１２５】
１日目に投与する単回治療としてｐｏ投与するＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、１４００および９３３ｍｇ／ｋｇの投与量で、マウスにとって有毒であった。１４００ｍｇ／ｋｇの投与量を用いた治療を受けた群では、１匹の動物が死亡し、瀕死が原因で４匹の動物を５日目に安楽死させ、２匹の動物を６日目に安楽死させ、最後の動物は１０日目に死亡した。９３３ｍｇ／ｋｇの投与量を用いた治療を受けた群では、瀕死が原因で６匹の動物を５日目に安楽死させ、その群の残りの２匹は、９日目に死亡した。剖検は、これらの２つの治療群において腫瘍の存在を示さなかった。１４００および９３３ｍｇ／ｋｇの投与量でＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を投与した群では、各動物の死亡または安楽死の前に、それぞれ、２４％および２２％の顕著な重量減少が観察された。単回ｐｏ治療として４６７ｍｇ／ｋｇの投与量で投与したＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の耐容性がより高かったが、瀕死が原因で２匹の動物を８日目に安楽死させた。この群の平均体重における最大の減少は、８％であった。その群の残りの６匹の動物は、１１日目と１５日目の間に死亡し、剖検時に、腹水が存在していると判定した。この治療群に関するＩＬＳは、その算出が死亡日数中央値と生存期間中央値のいずれに基づいていても、９％であった。この群に関する生存データと、溶媒投与対照群（群１、治療ｑ１ｄ×１）の生存データの統計的比較は、差が有意ではないことを示した。
【０１２６】
単回注射として２８０ｍｇ／ｋｇの投与量でｉｐ投与したＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、死亡がなく、平均体重の減少が最小（４％、１ｇ）であり、耐容性を示した。この群の死亡日数中央値は、３４．５日であり、２１４％のＩＬＳであった。生存期間中央値は、３８．０日であり、２４５％のＩＬＳであった。さらに、２匹の動物が、６１日目の研究終了まで生存した。剖検は、腫瘍の存在を示さなかった。この治療群と溶媒投与対照群（群１、治療ｑ１ｄ×１）に関する生存データの統計的分析は、その差が有意であることを示した。
【０１２７】
ｑ１ｄ×５治療計画で２８０、１８７、および９３ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｐｏ投与したＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、治療関連の死亡なしで耐容性を示した。２８０ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を投与した群で、平均体重の最小の減少（４％、１ｇ）が観察された。より低い２つの投与群では、体重減少は観察されなかった。死亡日数中央値および生存期間中央値は、２８０、１８７、および９３ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関して、それぞれ、１７．０、１７．０、および１５．０日であり、５５％、５５％、および３６％のＩＬＳ値であった。これら３つの各群に関する生存データと、溶媒投与対照群（群６、治療ｑ１ｄ×５）に関する生存データとの統計的比較は、各群に関する生存期間の増加が、統計的に有意であることを示した。
【０１２８】
ｑ１ｄ×５注射計画で５６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｉｐ投与したＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、Ｐ３８８／０白血病に対して相当に効果的であり、死亡日数中央値は２８．５日であった。最初の死亡は、２４日目、最後の死亡は、３３日目に発生し、その群の８匹の動物のうちの４匹は、６１日目の研究終了時まで生存した。死亡日数中央値に基づいて算出したＩＬＳ値は、１５９％であった。この治療群の生存期間中央値は、＞４７．０日であり、算出したＩＬＳ値は３２７％であった。この治療レジメンは、治療関連の死亡なし、および平均体重の減少４％（１ｇ）で、十分に耐容性を示した。この群に関する生存データと、溶媒投与対照群（群６、治療ｑ１ｄ×５）の生存データと比較したとき、その差が有意であることを見出した。
【０１２９】
【数２】
0005659010.tif 000016
結論
ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、１４００および９３３ｍｇ／ｋｇの投与量で単回治療としてｐｏ投与すると、マウスにとって有毒であった。ｐｏ投与した４６７ｍｇ／ｋｇの投与量を用いた単回治療は、耐容性を示したが、統計的に有意ではない、生存期間の最小限の増加しか誘発しなかった。２８０ｍｇ／ｋｇの投与量で単回ｉｐ注射したＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、相当に効果的であり、２匹の６１日生存マウスおよび生存期間の有意な増加をもたらした。
【０１３０】
ｑ１ｄ×５治療計画で２８０、１８７、および９３の投与量でｐｏ投与したＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、より高い投与量を用いた単回治療より、はるかに耐容性を示し、Ｐ３８８／０白血病に対してより効果的であった。３種全ての投与量をｑ１ｄ×５でｐｏ投与した治療は、生存期間の統計的に有意な増加をもたらした。ｑ１ｄ×５治療計画で５６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｉｐ投与したとき、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、生存期間の有意な増加を誘発し、その群の８匹の動物のうち４匹が、６１日の研究終了まで生存した。
【０１３１】
（実施例７）
材料および方法
動物のケア：５週齢の雌性胸腺欠損ＮＣｒ−ｎｕ／ｎｕマウスをＴａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）から購入した。
【０１３２】
腫瘍モデル：ｉｎ  ｖｉｖｏで継代維持したＭＸ−１ヒト乳房腫瘍の３０〜４０ｍｇの切片を１２ゲージ外套針を使用してマウスの乳房脂肪パッドへｓｃ移植し、増殖させた。腫瘍移植した日を０日目と呼んだ。治療の開始前に、腫瘍を１３８〜２４５ｍｇの重量（１３８〜２４５ｍｍ３の寸法）に到達させた。十分な数のマウスに移植し、その結果、治療開始日（腫瘍移植後の１０日目）に、可能な限り狭い範囲の重量の腫瘍を試験用に選択した。適切な寸法範囲の腫瘍を有する、選択した動物を治療初日の平均腫瘍重量が可能な限り互いに近接する（１７２〜１９７ｍｇ）ように、様々な治療群に割り当てた。
【０１３３】
製剤：実施例１に記載したように調製し得るＩＰＭ・トリス（２０５ｍｇのＩＰＭ／バイアル）、およびＩＰＭの両方を治療初日（１０日目）に、６．０ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水中に処方し、次いで、生理食塩水を用いて、４．０５、１．８、および１．２ｍｇ／ｍＬの、より低い投薬濃度まで希釈した。治療の後日、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２（１００ｍｇＩＰＭ−リジン／バイアル）を治療初日に、１４ｍｇ／ｍＬの濃度で、生理食塩水中に処方し、次いで、生理食塩水を用いて、９．３５、４．２および２．８ｍｇ／ｍＬのより低い投薬濃度まで希釈した。次いで、各濃度の薬剤を連日投与のために分け、凍結し、−２０℃で保存し、連日投与のために解凍した。全ての注射薬を正確な体重に基づいて投与し、注射容量は０．２ｍＬ／体重１０ｇである。
【０１３４】
薬物療法：該実験は、治療初日に、１群当たり８匹のマウスの１２の治療群およびそれぞれが１０匹のマウスを有する２つの溶媒投与対照群、計１１６匹のマウスからなる。全ての薬剤（および溶媒）を毎日１回、５日連続で（ｑ１ｄ×５）投与した。ＩＰＭ・トリスおよびＩＰＭの両方を３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｉｐ投与し、１２０および８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｐｏ投与した。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、８４および５６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｉｐ投与し、２８０および１８７ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｐｏ投与した。対照群は、溶媒（生理食塩水）を用いて、ｉｐまたはｐｏで治療した。
【０１３５】
腫瘍測定および体重：ｓｃ腫瘍を測定し、各動物を治療初日に開始して週２回秤量した。腫瘍体積は、キャリパー（ｃａｌｉｐｅｒ）測定（ｍｍ）により、楕円球形に関する式
Ｌ×Ｗ２／２＝ｍｍ３
（式中、ＬおよびＷは、各測定で収集した、より大きい、およびより小さい垂線の寸法を指す）を使用して求めた。この式は、単位密度（１ｍｍ３＝１ｍｇ）を仮定しながら、腫瘍重量を算出するためにも使用する。
【０１３６】
研究期間：該研究は、腫瘍移植の５０日後に終了した。瀕死状態になった全ての動物、またはその腫瘍が潰瘍化もしくは４０００ｍｇに到達したものは、研究終了の前に安楽死させた。
【０１３７】
評価したパラメーター：非特異的死亡数、部分的および完全な腫瘍退縮の数、腫瘍のない生存マウスの数、ならびに個々の動物の、２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間を求めた。治療群（Ｔ）および対照群（Ｃ）における、２回の腫瘍体積倍加までの時間の中央値を中央値腫瘍の増殖における遅延全体（Ｔ−Ｃ）の算出に使用した。
【０１３８】
統計的分析：各群の間の増殖データを統計的に比較するために、個々の動物の、２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間をＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定／Ｍａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ順位和検定または生命表分析でエンドポイントとして使用した。生命表分析（階層的Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定と、その後のＭａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌログランク検定）は、その腫瘍が評価点に到達しなかった動物をそれらを除外することによって使用して、各群の間の増殖データの比較を可能にする。
【０１３９】
結果
両方の溶媒投与対照群の腫瘍は、１０匹全てのマウスで十分に増殖した。中央値腫瘍は、ｉｐ投与群およびｐｏ投与群に関して、それぞれ、７．４および７．２日で２回の腫瘍体積倍加を達成した。これら２つの群に関しては、研究の間に平均体重の減少はなかった。
【０１４０】
３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・トリスの腹腔内投与は、それぞれ、１０．２および７．７日の腫瘍増殖の遅延（Ｔ−Ｃ）を誘発した。高い方の投与量では、１匹の腫瘍のない生存マウスがいた。３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関して、両方の投与量が耐容性を示し、それぞれ、平均体重の最大減少が１０％（２ｇ）および０％であった。３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭの腹腔内投与は、それぞれ、５．２および２．６日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関して、両方の投与量が耐容であり、それぞれ、平均体重の最大減少が０％および５％（１ｇ）であった。ＩＰＭに関して、２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間は、統計的に、ＩＰＭ・トリスの相当する投与量に関する該時間未満であった（３６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．０００；２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．０２１）。３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量のＩＰＭ投与量に相当する、８４および５６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の腹腔内投与は、それぞれ、２４．３および９．０日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の高い方の投与量は、有毒であり、２匹のマウスが２０日目に死亡し、瀕死または体重の過度の減少が原因で、２匹を安楽死させた。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の低い方の投与量は、耐容性を示し、平均体重の最大減少は１５％（３ｇ）であった。耐容ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２投与量は、２４ｍｇ／ｋｇ／用量の相当する投与量でのＩＰＭ・トリスの活性に匹敵する活性（ｐ＝０．７６６）を示し、２４ｍｇ／ｋｇ／用量の相当する投与量でのＩＰＭ・トリスの活性より優れた活性（ｐ＝０．００４７）を示した。
【０１４１】
１２０および８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・トリスの経口投与は、それぞれ、８．７および９．０日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。ＩＰＭ・トリスの高い方の投与量では、平均体重の１５％（３ｇ）の最大減少を誘発し、１４ｇ未満の体重が原因で、１匹のマウスを安楽死させた。低い方の投与量は、耐容性を示し、平均体重の最大減少が１０％（２ｇ）であった。１２０および８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ経口投与は、それぞれ、４．６および４．０日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。両方の投与量が耐容性を示し、平均体重の最大減少が５％（１ｇ）であった。２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間と、ＩＰＭ・トリスの相当する投与量に関する該時間の間には、統計的な差はなかった（１２０ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．１１７４；８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．１１５２）。１２０および８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量のＩＰＭ投与量に相当する、２８０および１８７ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の経口投与は、それぞれ、５．０および３．５日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。両方の投与量が耐容性を示し、平均体重の最大減少が５％（１ｇ）および０％であった。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の高い方の投与量は、１２０ｍｇ／ｋｇ／用量の相当する投与量でのＩＰＭ・トリスおよびＩＰＭの両方の活性に匹敵する活性を示した（それぞれ、ｐ＝０．１０００およびｐ＝０．９１４３）。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の低い方の投与量は、８１ｍｇ／ｋｇ／用量の相当する投与量でのＩＰＭ・トリスの活性より劣った活性（ｐ＝０．０２９０）を示し、８１ｍｇ／ｋｇ／用量の相当する投与量でのＩＰＭの活性に匹敵する活性（ｐ＝０．３０７３）を示した。
【０１４２】
【数３】
0005659010.tif 000017
ＭＸ−１ヒト乳房腫瘍異種移植片の、（１）溶媒−ｉｐおよびｐｏ、（２）ｉｐ  ＩＰＭ・トリス、ＩＰＭ、およびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２、ならびに（３）ｐｏ  ＩＰＭ・トリス、ＩＰＭ、およびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いた治療に対する反応をそれぞれ、図１３、１４、および１５に示す。
【０１４３】
結論
等価ＩＰＭ投与量のｉｐ投与に関しては、ＩＰＭ・トリスの抗腫瘍活性が、ＩＰＭ（両方の投与量）の腫瘍活性より優れており、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２（両方の投与量）の腫瘍活性に匹敵していた。等価ＩＰＭ投与量のｐｏ投与に関しては、ＩＰＭ・トリスの抗腫瘍活性が、ＩＰＭ（両方の投与量）の腫瘍活性に匹敵しており、高い方の投与量でＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の腫瘍活性に匹敵しており、低い方の投与量でＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の腫瘍活性より優れていた。
【０１４４】
（実施例８）
材料および方法
動物のケア：５週齢の雌性胸腺欠損ＮＣｒ−ｎｕ／ｎｕマウスをＨａｒｌａｎ（Ｐｒａｔｔｖｉｌｌｅ、ＡＬ）から購入した。
【０１４５】
腫瘍モデル：１２ゲージ外套針を使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏで継代維持したＭＸ−１ヒト乳房腫瘍の３０〜４０ｍｇの切片をマウスの乳房脂肪パッドへｓｃ移植し、増殖させた。腫瘍移植した日を０日目と呼んだ。治療の開始前に、腫瘍を１１３〜２４５ｍｇの重量（１１３〜２４５ｍｍ３の寸法）に到達させた。十分な数のマウスに移植し、その結果、治療開始日（腫瘍移植後の６日目）に、可能な限り狭い範囲の重量の腫瘍を試験用に選択した。適切な寸法範囲の腫瘍を有する、選択した動物を治療初日の平均腫瘍重量が可能な限り互いに近接する（１４４〜１６２ｍｇ）ように、様々な治療群に割り当てた。
【０１４６】
製剤：実施例１に記載したように調製し得るＩＰＭ・トリス（２０５ｍｇのＩＰＭ／バイアル、Ｃａｒｄｉｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ）を各治療日に、１３．５ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水中に処方し、次いで、生理食塩水を用いて、９．６、４．０５、２．７、１．８、および１．２ｍｇ／ｍＬの、より低い投薬濃度まで希釈した。ＩＰＭ（Ｅａｇｌｅ−Ｐｉｃｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅ）を各治療日に、６．０ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水中に処方し、次いで、生理食塩水を用いて、４．０５、１．８、および１．２ｍｇ／ｍＬの、より低い投薬濃度まで希釈した。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２（１００ｍｇのＩＰＭ−リジン／バイアル、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｏｗａ）を各治療日に、１４ｍｇ／ｍＬの濃度で、生理食塩水中に処方し、次いで、生理食塩水を用いて、９．３５、４．２および２．８ｍｇ／ｍＬのより低い投薬濃度まで希釈した。全ての投与液を処方後に氷上に保持し、３０分以内に投与した。全ての注射液を正確な体重に基づいて投与し、注射容量は０．２ｍＬ／体重１０ｇである。
【０１４７】
薬物療法：該実験は、治療初日に、１群当たり８匹のマウスの１６の治療群およびそれぞれが１０匹のマウスを有する２つの溶媒投与対照群、計１４８匹のマウスからなる。全ての薬剤（および溶媒）を毎日１回、５日連続で（ｑ１ｄ×５）投与した。ＩＰＭ・トリスを８１、５４、３６、および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｉｐ投与し、２７０、１８０、１２０および８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｐｏ投与した。ＩＰＭは、３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｉｐ投与し、１２０および８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｐｏ投与した。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２は、８４および５６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｉｐ投与し、２８０および１８７ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でｐｏ投与した。対照群は、溶媒（生理食塩水）を用いて、ｉｐ（１番の群）またはｐｏ（１０番の群）で治療した。
【０１４８】
腫瘍測定および体重：ｓｃ腫瘍を測定し、各動物を治療初日に開始して週２回秤量した。腫瘍体積は、キャリパー測定（ｍｍ）により、楕円球形に関する式
Ｌ×Ｗ２／２＝ｍｍ３
（式中、ＬおよびＷは、各測定で収集した、より大きい、およびより小さい垂線の寸法を指す）を使用して求めた。この式は、単位密度（１ｍｍ３＝１ｍｇ）を仮定しながら、腫瘍重量を算出するためにも使用した。
【０１４９】
研究期間：該研究は、腫瘍移植の５２日後に終了した。瀕死状態になった全ての動物、またはその腫瘍が潰瘍化し４０００ｍｇに到達したものは、研究終了の前に安楽死させた。
【０１５０】
評価したパラメーター：非特異的死亡数、部分的および完全な腫瘍退縮の数、腫瘍のない生存マウスの数、ならびに個々の動物の、２回の腫瘍体積の倍加までの時間を求めた。治療群（Ｔ）および対照群（Ｃ）における、２回の腫瘍体積倍加までの時間の中央値を中央値腫瘍の増殖における遅延全体（Ｔ−Ｃ）の算出に使用した。
【０１５１】
統計的分析：各群の間の増殖データを統計的に比較するために、個々の動物の、２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間をＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定／Ｍａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ順位和検定でエンドポイントとして使用した。
【０１５２】
結果
両方の溶媒投与対照群の腫瘍は、１０匹全てのマウスで十分に増殖した。中央値腫瘍は、ｉｐ投与群およびｐｏ投与群に関して、それぞれ、９．２および８．９日に２回の腫瘍体積倍加を達成した。これら２つの群に関しては、研究の間に平均体重の減少はなかった。
【０１５３】
８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・トリスの腹腔内投与は、マウスにとって有毒であり、３匹の死亡、ならびに瀕死および平均体重の２０％（４．５ｇ）の最大減少が原因の、１匹の動物の安楽死を誘発した。５４、３６、および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の低い方の投与量は、耐容性を示し、平均体重の最大減少が、それぞれ、５％（１．２ｇ）、６％（１．３ｇ）、および１％（０．２ｇ）であった。５４、３５、および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量は、それぞれ、４．４、３．３、および０．９日の腫瘍増殖の遅延（Ｔ−Ｃ）を誘発した。３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭの腹腔内投与は、それぞれ、１．１、および０．３日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。両方の投与量が耐容性を示し、３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関して、平均体重の最大減少が、それぞれ、８％（１．８ｇ）および２％（０．４ｇ）であった。ＩＰＭに関して、２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間は、統計的に、ＩＰＭ・トリスの最も高い耐容投与量の該時間未満であったが、ＩＰＭ・トリスの相当する投与量と統計的に同じであった（５４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．０１４８；３６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．１８７９）。３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量のＩＰＭ投与量に相当する、８４および５６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の腹腔内投与は、それぞれ、０．５および０．３日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。両方の投与量が耐容性を示し、３６および２４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関して、平均体重の最大減少が、それぞれ１％（０．３ｇ）および０％であった。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２に関して、２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間は、統計的に、ＩＰＭ・トリスの最も高い耐容投与量の該時間未満であったが、ＩＰＭ・トリスの相当する投与量と統計的に同じであった（５４ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．０１０４；３６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．１５７８）。
【０１５４】
２７０、１８０、および１２０ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・トリスの経口投与は、マウスにとって有毒であり、それぞれ、瀕死が原因の８匹の死亡／安楽死、７匹の死亡、および３匹の死亡を誘発した。１８０および１２０ｍｇ／ｋｇ／用量は、それぞれ、平均体重の２３％（５．３ｇ）および２０％（４．７ｇ）の最大減少を誘発した。８１ｍｇ／ｋｇ／用量の最も低い投与量は、耐容性を示し、平均体重の最大減少が１０％（２．２ｇ）であった。８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量は、２．６日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。１２０ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭの経口投与は、マウスにとって有毒であり、２匹の死亡、および平均体重の１８％（３．８ｇ）の最大減少を誘発した。８１ｍｇ／ｋｇ／用量の低い方の投与量は、耐容性を示し、平均体重の最大減少が９％（２ｇ）であり、２．３日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。２回の腫瘍体積倍加を達成するまでの時間と、ＩＰＭ・トリスの相当する投与量に関する該時間との間には、統計的な差はなかった（８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量に関してｐ＝０．２９３２）。１２０および８１ｍｇ／ｋｇ／用量のＩＰＭ投与量に相当する、２８０および１８７ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量でのＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の経口投与は、それぞれ、３．９および４．７日の腫瘍増殖の遅延を誘発した。両方の投与量が耐容性を示し、平均体重の最大減少が１４％（３ｇ）および７％（１．６ｇ）であった。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の低い方の投与量は、８１ｍｇ／ｋｇ／用量の相当する投与量でのＩＰＭ・トリスの活性と類似の活性を示した（ｐ＝０．８７８５）。
【０１５５】
【数４】
0005659010.tif 000018
ＭＸ−１ヒト乳房腫瘍異種移植片の、（１）溶媒−ｉｐおよびｐｏ、（２）ｉｐ  ＩＰＭ・トリス、ＩＰＭ、およびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２、ならびに（３）ｐｏ  ＩＰＭ・トリス、ＩＰＭ、およびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２を用いた治療に対する反応をそれぞれ、図１６、１７、および１８に示す。
【０１５６】
結論
等価ＩＰＭ投与量のｉｐ投与に関しては、ＩＰＭ・トリスの抗腫瘍活性が、ＩＰＭおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の両方（高い方の投与量）の腫瘍活性に匹敵していた。低い方の投与量は、この研究では、ＭＸ−１腫瘍に対して不活性であった。ＩＰＭ・トリスの最も高い耐容投与量は、ＩＰＭまたはＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の最も高い試験投与量より優れていた。等価ＩＰＭ投与量のｐｏ投与に関しては、ＩＰＭ・トリスの抗腫瘍活性が、ＩＰＭおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の両方の低い方の投与量での腫瘍活性に匹敵していた。１２０ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量は、ＩＰＭ・トリスおよびＩＰＭの両方に関して、マウスに有毒であった。
【０１５７】
先のＭＸ−１研究（実施例７）では、等価ＩＰＭ投与量のｉｐ投与に関しては、ＩＰＭ・トリスの抗腫瘍活性が、ＩＰＭ（両方の投与量）の抗腫瘍活性より優れており、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２（両方の投与量）の抗腫瘍活性に匹敵していた。等価ＩＰＭ投与量のｐｏ投与に関しては、ＩＰＭ・トリスの抗腫瘍活性が、ＩＰＭ（両方の投与量）の抗腫瘍活性に匹敵しており、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の高い方の投与量での抗腫瘍活性に匹敵し、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の低い方の投与量での抗腫瘍活性より優れていた。
【０１５８】
２つの研究を比較すると、ｉｐ投与したときの３種の薬剤の活性が、この研究では低かった（例えば、３６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量のＩＰＭ・トリスに関して―１０．２日ｖｓ．３．３日のＴ−Ｃ値；３６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量のＩＰＭに関して―５／２日ｖｓ．１．１日のＴ−Ｃ値；および５６ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２に関して―９．０日ｖｓ．０．３日のＴ−Ｃ値）。ｐｏ投与したときのＩＰＭ・トリスの活性も、この研究では低かった（ＩＰＭおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２に関しても類似の値）（例えば、８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量のＩＰＭ・トリスに関して―９．０日ｖｓ．２．６日のＴ−Ｃ値；８１ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量のＩＰＭに関して―４．０日ｖｓ．２．３日のＴ−Ｃ値；および２８０ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２に関して―５．０日ｖｓ．３．９日のＴ−Ｃ値）。そのような生命システムに伴う研究毎の変化だとしても、活性の減少の理由（複数可）は明らかではない。該研究の腫瘍成分に関しては、各溶媒投与対照腫瘍が、２つの研究において類似の速度で増殖した。治療初日の平均腫瘍重量は、この実施例（１４４〜１６２ｍｇの範囲）より実施例７（１７２〜１９７ｍｇの範囲）で僅かに大きかったが、この小さな差は、抗腫瘍活性に対して顕著な効果を有さないであろう。
【０１５９】
（実施例９）
材料および方法
８匹のマウスの３つの群を実施例１に記載したように調製し得るＩＰＭ・トリスを用いて治療し、８匹のマウスの３つの群をドキソルビシンを用いて治療し、１０匹のマウスの１つ群を溶媒を用いて治療し、８匹のマウスの１８の群をＩＰＭ・トリス／ドキソルビシンの併用を用いて治療した。ＭＸ−１腫瘍切片（３０〜４０ｍｇ、ｉｎ  ｖｉｖｏ継代から）を雌性胸腺欠損ヌードマウスの乳房脂肪パッドに皮下移植した。ＩＰＭ・トリス（またはその溶媒）を３種の投与量（１２、２４、および５４ｍｇ／ｋｇ／用量）で、毎日１回、５日連続で（Ｑ１ｄ×５）腹腔内投与し、ＩＰＭ・トリス処方は、２５８．９ｍｇのＩＰＭ（ＭＷ２２１．０２）、１４１．９ｍｇのトリス塩基（ＭＷ１２１．１４、モル比ＩＰＭ：トリス塩基１：１）、および３％のマンニトールを含んでいた。ドキソルビシン（またはその溶媒）を８ｍｇ／ｋｇ／用量で４日毎に１回、計３回分の注射薬として（Ｑ４ｄ×３）腹腔内投与した）。投与液は、治療日に調製し、ＩＰＭ・トリス投与液は、調製すると氷上に保持した。
【０１６０】
腫瘍が約１７５ｍｇの寸法（１００〜２５０ｍｇの範囲）になったとき、治療を開始した。各腫瘍をキャリパーにより２次元で測定し、単位密度（１ｍｍ３＝１ｍｇ）を仮定しながら、長軸楕円体に関する式（ａ×ｂ２／２）（式中、ａは長い方の寸法、ｂは小さい方の寸法）を使用して、腫瘍体積へ変換した。腫瘍測定値を週２回記録し、抗腫瘍活性を溶媒投与対照群と比較した治療群の腫瘍増殖の遅延、部分的および完全な退縮、ならびに腫瘍のない生存マウスにより評価した。８ｍｇ／ｋｇ／日のドキソルビシンと併用して５４ｍｇ／ｋｇ／日でＩＰＭ・トリスを投与すると、併用群の２匹の動物が、毒性が原因で早期に死亡したということに留意されたい。結果を図１９〜２５に示す。
【０１６１】
ＩＰＭ・トリスとドキソルビシンの併用は、顕著な腫瘍活性をもたらし、該併用による腫瘍増殖抑制が、単一薬剤投与と共に観察されたものを上回り、該併用は、単一薬剤投与と比較して、生存率を有意に増加させた。実際、該併用の作用は、ＩＰＭ・トリス単独の投与量が、溶媒投与対照動物と比較して、僅かしか、または全く改善をもたらさないほど低い場合でさえ、相乗効果、即ち、同様の用量で個別に投与した薬剤と比較して、相加効果を超える効果を示す。治療の間に併用群の動物重量が減少した（２２日目の投薬終了時に平均動物重量が２０％減少した）が、投薬が終了すると、すぐに回復し（３８日目に完全な回復が観察された）、毒性が可逆的であることを示唆している。このデータは、ＩＰＭ・トリスとドキソルビシンを用いた併用療法が、これに限定はしないが、乳癌、卵巣癌、および肉腫を含めた、単一の薬剤としての、または併用による、ドキソルビシンまたはＩＰＭ・トリスに反応する全ての癌の治療に、有用であり得ることを示唆する。
【０１６２】
（実施例１０）
ｉｎ  ｖｉｖｏ継代のＭＸ−１ヒト乳房腫瘍の切片（それぞれ３０〜４０ｍｇ）をヌードマウスの乳房脂肪パッドに皮下移植し、治療の開始前に７５〜１９８ｍｇの重量に到達させた。実施例１に記載したように調製し得るＩＰＭ・トリス（５４ｍｇ／ｋｇ）、およびドセタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）をそれぞれ、腫瘍移植の１０日後に開始してＱ１Ｄ×５ＩＰおよびＱ６Ｄ×３ＩＶで投与した。２種の薬剤の併用は、図２６に示すように、単一薬剤として投与したいずれかの薬剤と比較して、増加した抗腫瘍効果を実証した。
【０１６３】
（実施例１１）
ｉｎ  ｖｉｖｏ継代のＭＸ−１ヒト乳房腫瘍の切片（それぞれ３０〜４０ｍｇ）をヌードマウスの乳房脂肪パッドに皮下移植し、治療の開始前に７５〜１９８ｍｇの重量に到達させた。ＩＰ投与した、実施例１に記載したように調製し得るＩＰＭ・トリス（３６ｍｇ／ｋｇ）が、図２７に示すように、ＰＯ投与したＩＰＭ・トリス（８１ｍｇ／ｋｇ）とおおよそ同程度まで、腫瘍増殖を抑制することを見出した。さらに、ＩＰＭ・トリスの経口投与または全身投与は、ＭＸ−１異種移植片保有マウスにおける生存率の同様の増加をもたらした。図２８に示すように、ＩＰ群の平均生存日数は３９日、ＰＯ群の平均生存日数は３７．５日であり、溶媒対照群の平均生存日数は３０日であった。これらのＰＯ用量およびＩＰ用量の等価な腫瘍活性は、経口投与および全身投与したＩＰＭ・トリスのＰＫから予期した範囲内である。
【０１６４】
（実施例１２）
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、実施例１に記載したように調製し得るＩＰＭ・トリスを経管栄養（ＰＯ）またはボーラスＩＶ注射を介して、毎日１回投与した。ＩＰＭ・トリスを２０、３０、または４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、ＰＫ評価用の血液試料を投与の前に、ならびに投与の０．５、１、２、４、６、８、１２、および２４時間後に、眼窩後洞から得た。１群当たり３匹の動物を各時点で試料として採取した。投与前、０．５、１、２、および４時間のＰＫ結果を図２９に示し、Ｔｍａｘが約０．５時間であると分かる。終端の推定値ｔ１／２は、０．２５〜０．６４時間の範囲であった。各用量に関して、ＡＵＣ値を経口投与したＩＰＭ・トリスの絶対的なバイオアベイラビリティーを推定するために、比（ＰＯ投与後ＡＵＣ）／（ＩＶ投与後ＡＵＣ）として使用した。各用量に関するＡＵＣ値を図３０に示し、各投与量に関するＣｍａｘ値は、図３１に示す。ＡＵＣ値およびＣｍａｘ値の両方は、ＰＯ投与またはＩＶ投与したＩＰＭ・トリスの用量の増加と共に、直線的に増加した。
【０１６５】
ＩＰＭ・トリスの２０、３０、および４０ｍｇ／ｋｇＰＯ用量のバイオアベイラビリティーは、それぞれ、４８％、６５％、および７３％であった。全体の平均バイオアベイラビリティーは、雌で６２％であった。同様のＰＫがラットで観察されたが、雄の平均バイオアベイラビリティーは、４１％であると推定した。
【０１６６】
（実施例１３）
ＩＰＭ・トリス／マンニトールおよびＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の溶液安定性
ＩＰＭ・トリス処方の再構成安定性を注射用の５％塩化ナトリウム溶液中で評価した。ＩＰＭの濃度が、＞９０％の効力を最大で２．０時間維持することを見出した。
【０１６７】
ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２処方を注射用の０．９％塩化ナトリウム溶液中で評価した。ＩＰＭの濃度が、＞９０％の効力を最大で１．０時間維持することを見出した。
【０１６８】
ＩＰＭ・トリス／マンニトールの溶液安定性
表１は、注射用の５％塩化ナトリウム溶液２５ｍＬの存在下での、ＩＰＭ・トリス／マンニトールに関する再構成安定性データを提示する。〜１時間、１．５時間、２．５時間、３．５時間、４．０時間、および５．０時間の標的時間で、一定分量を採取した。各試料をＩＰＭ効力に関して分析した。
【０１６９】
【表１−２】
0005659010.tif 000019
ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の溶液安定性
表２は、注射用の０．９％塩化ナトリウム溶液２５ｍＬの存在下での、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２に関する再構成安定性データを提示する。〜１時間、２時間、２．５時間、３．５時間、４．０時間、および５．０時間の標的時間で、一定分量を採取した。各試料をＩＰＭ・（ＬＹＳ）２効力に関して分析した。
【０１７０】
【表２】
0005659010.tif 000020
結論
ＩＰＭ／トロメタミン／マンニトール処方は、溶液の５％塩化ナトリウムに付したとき、９０％効力を２．０時間維持する。ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２処方は、０．９％塩化ナトリウムの存在下で、９０％効力を１．０時間維持する。２種の処方の間の再構成安定性（＞９０％効力）の差は、１．０時間、２倍である。安定時間の増加は、薬品の調製および投与の間、臨床医を補助し得る。
【０１７１】
（実施例１４）
ＩＰＭの溶液安定性
ＩＰＭ処方の再構成安定性を以下の表３および図３２で示すように、約２５℃のｐＨ７緩衝液中で３．５時間にわたって評価した。
【０１７２】
【表３】
0005659010.tif 000021
ＩＰＭ・トリス／マンニトールの溶液安定性
表４は、注射用の５％塩化ナトリウム溶液２５ｍＬの存在下での、ＩＰＭ・トリス／マンニトールの再構成安定性データを提示する。１．５、３．０、および４．５時間の標的時間で、一定分量を採取した。
【０１７３】
【表４】
0005659010.tif 000022
ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の溶液安定性
表５は、注射用の０．９％塩化ナトリウム溶液２５ｍＬの存在下での、ＩＰＭ・（ＬＹＳ）２の再構成安定性データを提示する。１．５、３．０、および４．５時間の標的時間で、一定分量を採取した。
【０１７４】
【表５】
0005659010.tif 000023
（実施例１５）
固体のＩＰＭ・トリスの安定性
【０１７５】
【数５】
0005659010.tif 000024
固体のＩＰＭ・トリス／マンニトール凍結乾燥体の安定性
【０１７６】
【数６】
0005659010.tif 000025
固体のＩＰＭ・（ＬＹＳ）２凍結乾燥体の安定性
【０１７７】
【数７】
0005659010.tif 000026
（実施例１６）
【０１７８】
【数８】
0005659010.tif 000027
均等物
当業者は、日常的実験法のみを使用して、本明細書で記載した化合物の多数の均等物およびその使用方法を認識するか、または確認できよう。そのような均等物は、本発明の範囲内であると見なされ、以下の特許請求の範囲により包含される。
【０１７９】
上に引用した全ての参考文献および刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
0005659010.tif 000032
【図２】
0005659010.tif 000033
【図３】
0005659010.tif 000034
【図４】
0005659010.tif 000035
【図５】
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【図６】
0005659010.tif 000037
【図７】
0005659010.tif 000038
【図８−１】
0005659010.tif 000039
【図８−２】
0005659010.tif 000040
【図９】
0005659010.tif 000041
【図１０】
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【図１１】
0005659010.tif 000043
【図１２】
0005659010.tif 000044
【図１３】
0005659010.tif 000045
【図１４】
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【図１５】
0005659010.tif 000047
【図１６】
0005659010.tif 000048
【図１７】
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【図１８】
0005659010.tif 000050
【図１９】
0005659010.tif 000051
【図２０】
0005659010.tif 000052
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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