(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロ波化学処理に基づく高等植物及び真菌の多糖類抽出方法であって、次の各工程：
１）粉砕した高等植物及び真菌を有機溶媒で処理し、その脂溶性成分を除去して高等植物及び真菌の残渣を得る工程と、
２）工程１）で得られた残渣又は粉砕した高等植物及び真菌をマイクロ波反応チャンバに投入し、質量濃度が５％〜９９％の酸溶液を添加し、１ｋＷ／ｋｇ物質〜１０ｋＷ／ｋｇ物質の質量出力密度のマイクロ波電力で２０ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの作業圧力下、５〜１２０分混合物の反応を行い、濃縮した後、有機溶媒で洗浄して残留酸を除去する工程であって、酸溶液は、有機酸、又は有機酸と無機酸との混合物である工程と、
３）工程２）で得られた生成物に５〜１５倍の水溶液を添加し水抽出を行い、濃縮後の濾液をアルコール沈殿に付し、沈殿物、即ち、多糖類生成物を分離する工程とを含む、方法。
【請求項２】
工程２）におけるマイクロ波電力の印加方法は、連続マイクロ波モード又は連続マイクロ波モードとパルスマイクロ波モードの組み合わせであり、連続マイクロ波とパルスマイクロ波の組み合わせを用いる場合、先ず、酸溶液が還流するまでは連続マイクロ波照射を用い、その後パルスマイクロ波に変えて５分〜１２０分行う、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程２）で用いる酸溶液中の有機酸が不揮発性酸の場合、マイクロ波反応後に濃縮によって酸を除去せず、用いる有機酸が揮発性酸の場合、先ず濃縮を行って酸を除去する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
工程２）で用いる酸溶液中の有機酸が不揮発性酸の場合、マイクロ波加熱と共に減圧蒸留を行って酸を除去する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
工程２）においては、連続マイクロ波を用いる場合、質量出力密度は１ｋＷ／ｋｇ物質〜５ｋＷ／ｋｇ物質であり、パルスマイクロ波を用いる場合、質量出力密度は２ｋＷ／ｋｇ物質〜１０ｋＷ／ｋｇ物質であり、デューティ比Ａ／Ｂは、Ａは１秒〜１００秒であり、Ｂは１秒〜１００秒である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
工程２）の有機酸溶液は、シュウ酸、ギ酸、酢酸又はプロピオン酸から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
工程２）シュウ酸の重量パーセント濃度は５％〜５０％であり、ギ酸の重量パーセント濃度は１０％〜９９％であり、酢酸の重量パーセント濃度は１０％〜９９％であり、プロピオン酸の重量パーセント濃度は１０％〜９９％である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
工程２）シュウ酸の重量パーセント濃度は１０％〜３５％であり、ギ酸の重量パーセント濃度は３０〜８５％であり、酢酸の重量パーセント濃度は６０〜９５％であり、プロピオン酸の重量パーセント濃度は７０〜９５％である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
工程２）で用いる有機酸と無機酸の混合溶液における無機酸の質量パーセント濃度は０．１％〜１５％である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
工程２）で用いる無機酸は、塩酸、硫酸、硝酸又はリン酸から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
工程２）において、酸溶液の量に対する工程１）で得られた残渣又は粉砕した高等植物及び真菌の比は５／１〜１／５である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
工程２）において用いる有機溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール又はアセトンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
工程１）において用いる有機溶媒は、石油エーテル、メタノール、エタノール、プロパノール又は酢酸エチルである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
工程１）において用いる脂溶性物質は、揮発性油、フラボノイド、トリテルペノイド又はサポニンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
工程３）において用いるアルコールはエタノールである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記高等植物は、オウギ、クコ、イチョウ葉、パパイヤ、ハニーサックル、中国アンゼリカ、橙皮、シナマオウ、カラセンキュウ、セキショウ、ニンニク、シャープリーフガランガル果実、アンゼリカ、中国ヨモギ葉、アサルム、シスタンシェ、ヤナギバグミ、ユーカリ葉、コルダータ、トウネズミモチ、キョウカツ、チョウセンニンジン、サンシチニンジン、センリョウ、オオバコ、オオケタデ果実、フジモドキ、ベルガモット、トウグワ根−樹皮、ヤドリギ、コガネバナ、エピメディウム、茶葉、ロディオラ、アロエ、オートムギ、コンニャク、ヤムイモ、オニノヤガラ、サイコ又はアカントパナックスの花、葉、種子、樹皮、果実、根又は塊茎の原材料から選択され、前記真菌は、レイシ、キクラゲ、マッシュルーム、ポリポラス、トレメラ、マイタケ、ブクリョウ、クロクモタケ、ヤマブシタケ、冬虫夏草の真菌子実体や菌糸体から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記高等植物は、オウギ、クコ、ヤムイモ、イチョウ葉、サンシチニンジン、オオバコ、オニノヤガラ、トチュウ、タンジン又はクズであり、前記真菌は、レイシ、ブクリョウ、キクラゲ又はマッシュルームである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
オウギ多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のオウギをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の１０％〜３５％シュウ酸を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、シュウ酸溶液の還流状態を１５〜３０分維持した後、減圧下でマイクロ波抽出チャンバ内の液体を蒸発乾固する工程；オウギの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてオウギ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
オウギ多糖類の分子量分布は３０００〜４００００である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
クコ多糖類を調製する方法であって、該方法は、石油エーテル又はエタノールで脱脂した後のクコをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固する工程；クコの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてクコ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
クコ多糖類の分子量分布は３０００〜２００００である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ヤムイモ多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕した後のヤムイモをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の７０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固する工程；ヤムイモの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてヤムイモ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
ヤムイモ多糖類の分子量分布は３０００〜２００００である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
イチョウ多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のイチョウをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固する工程；イチョウの重量の４〜６倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてイチョウ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
イチョウ多糖類の分子量分布は５０００〜１２０００である請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
サンシチニンジン多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のサンシチニンジンをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の６０％〜９５％酢酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酢酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酢酸を蒸発乾固する工程；サンシチニンジンの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてサンシチニンジン多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
サンシチニンジン多糖類の分子量分布は４０００〜２００００である請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
オオバコ多糖類を調製する方法であって、該方法は、石油エーテル及びエタノールで脱脂した後のオオバコをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の８０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固する工程；オオバコの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてオオバコ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
オオバコ多糖類の分子量分布は４０００〜３００００である請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
オニノヤガラ多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のオニノヤガラをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍のギ酸−塩酸混合溶液であって、０．３％〜０．６％塩酸及び３０％〜８５％ギ酸である溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酸混合溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酸混合溶液を蒸発乾固する工程；オニノヤガラの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてオニノヤガラ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
オニノヤガラ多糖類の分子量分布は３０００〜２００００である請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
トチュウ多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のトチュウをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固する工程；トチュウの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてトチュウ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
トチュウ多糖類の分子量分布は３０００〜２００００である請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
タンジン多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のタンジンをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の６０％〜９５％酢酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酢酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酢酸を蒸発乾固する工程；タンジンの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてタンジン多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
タンジン多糖類の分子量分布は５０００〜２５０００である請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
クズ多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のクズをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の７０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固する工程；クズの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてクズ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
クズ多糖類の分子量分布は３０００〜２５０００である請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
レイシ多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のレイシ子実体をマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の１０％〜３５％シュウ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、シュウ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で該液体を蒸発乾固する工程；レイシ子実体の重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてレイシ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
レイシ多糖類の分子量分布は３０００〜１２０００である請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ブクリョウ多糖類を調製する方法であって、粉砕してエタノールで脱脂した後のブクリョウをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固する工程；ブクリョウの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてブクリョウ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
ブクリョウ多糖類の分子量分布は２０００〜８０００である請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
キクラゲ多糖類を調製する方法であって、粉砕した後のキクラゲをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の６０％〜９５％酢酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酢酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酢酸を蒸発乾固する工程；キクラゲの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてキクラゲ多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
キクラゲ多糖類の分子量分布は５０００〜４００００である請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
マッシュルーム多糖類を調製する方法であって、該方法は、粉砕した後のマッシュルーム子実体をマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の７０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固する工程；マッシュルームの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加し、４０〜６０分洗浄し、濾過する工程；乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出する工程において、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする工程；濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮する工程；続いてエタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてマッシュルーム多糖類を得る工程を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
マッシュルーム多糖類の分子量分布は３０００〜１５０００である請求項４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬化学の分野に関し、高等植物や真菌を原料として用いる水溶性多糖類の調製方法に関する。詳細には、マイクロ波化学法に基づく高等植物及び真菌の多糖類抽出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多糖類は、グリコシド結合によって結合した複数の単糖分子から成る天然高分子化合物であり、生命の基本物質の１種である。最近２０年で、分子生物学及び細胞生物学の発展に伴い、多糖類が様々な生物学的機能を有し、多糖類やその複合物が細胞の生命活動（例えば、細胞特異的認識や、細胞表面の様々な抗原や薬物受容体の成分、免疫細胞の活性化）に関与することが分かってきた。このように、多糖類は大いに研究的興味を惹起している。
【０００３】
高等植物や真菌の多糖類は、中国では長年に亘って用いられており、その資源も非常に豊富である。このような多糖類は注目を浴びており、研究のホットスポットとなっている。現代の薬理学的研究によって、これら２種の多糖類が非常に重要で特別な生理活性を有し、免疫や抗菌、抗ウイルス、抗寄生虫、抗腫瘍、抗放射線、抗血栓、抗凝固、抗老化、抗炎症を促進し、血中脂質を低下させ、動物の繁殖性や他の側面を改善する上で明確な役割を果たすことが分かっている。更に、多糖類の多くは直接的な細胞毒性を有さず、長期間使用することができる。高等植物や真菌の多糖類は現在、最も有望な医療資源の１種である。
【０００４】
多糖類の生物活性は、その利用価値を大きく決める。多糖類の構成成分や、組成及び空間配置、分子量及び分子量分布、水溶性は、多糖類の生物活性に影響を及ぼす主な因子である。多くの研究によって、活性多糖類の分子量が生物活性を有するのに必要な一条件であることが分かっている。多糖類の分子量が高いことやその分子の見掛け体積が大きいことは、多糖類が複数の膜障壁を超えてインビボ生物活性を担う上での利点にはならない。水溶性多糖類はその分子量と密接な関係があるが、分子量はその生物活性を担う上で他の重要な条件である。
【０００５】
多糖類の構造は非常に複雑であるため、その合成は極めて困難である。現在、活性多糖類は全て天然産物から抽出している。高等植物多糖類や真菌多糖類は、様々な植物や同一植物の様々な部分、真菌子実体や菌糸体、菌糸体発酵ブロスから抽出、単離する。
【０００６】
多糖類の抽出に関しては、一般に認められ、効果的で統一された分離方法はない。既存の方法は通常、水抽出、酸抽出、アルカリ抽出、塩抽出及び酵素補助抽出に要約することができる。これらの方法は、多糖抽出効率や製造方法の清浄度、エネルギー及び材料の消費、多糖構造の改変等の面で大きな問題を有する。得られる多糖製品の技術的価値はそれほど高くなく（特に、多糖純度が低い、水溶性が低い、分子量分布が広い等）、多糖類の高付加価値の用途は制限される。具体的には、既存の多糖抽出法は次の問題を有する。
【０００７】
水抽出は通常、時間が掛かり、エネルギーを大量に消費し、大量の抽出溶媒を用い、多糖抽出率が低い。
【０００８】
酸アルカリ抽出においては無機強酸や強塩基の量、反応時間を制御するのが困難であるため、多糖分子の活性が容易に失われたり、多糖類から低分子量の色素分子が生じることもあり、その後の漂白作業に負担が掛かる。更に、反応終了後、酸やアルカリ溶液に対する中和や透析を迅速に行う必要があり、そうしないと製品が汚染され、食品や医療製品の不安定さが増す。また、非分解性の無機酸や塩基を用いると、大規模な工業生産において深刻な環境汚染を引き起こし易い。
【０００９】
酵素補助抽出に用いる酵素は一般に高価であり、容易に不活化することも多く、短寿命や低純度等の他の問題点も有する。酵素加水分解方法においては、最適温度領域が非常に狭いことが多く、僅かな反応条件の変動によって酵素活性が大幅に低下する場合がある。従って、酵素抽出の場合、実験条件への要求が比較的高く、抽出原料に対して非常に複雑な前処理が必要なこともある。酵素抽出技術では、多糖類の工業的抽出を行うには依然として更なる研究が必要である。
【００１０】
このような困難さには多くの理由が存在する。一般に、高等植物や真菌の活性多糖類は分子量が高く、水溶性が低い。このような多糖類は、植物材料での含有量が低く、分布状況や分布状態が複雑である。即ち、一部は遊離状態であり、一部はタンパク質やヘミセルロース等の高分子と結合して複合物を形成しており、一部は細胞質に存在し、一部は細胞壁に存在する。植物細胞壁の主成分はセルロースであり、他の物質としては、ヘミセルロースやペクチン、リグニン等が挙げられる。セルロースは、高度な結晶領域から成る超分子安定構造を有しており、加水分解するのが困難である。通常の抽出法では、多数の溶媒を用いて長時間浸漬させ、植物細胞壁を十分に膨張させてコンパクト構造が緩くなるようにし、細胞から溶媒へ拡散する有効成分の物質移動抵抗を低下させるのみである。従って、従来法では、エネルギーや材料を大量に消費し、植物内で遊離状態の多糖類を用いるが、細胞壁に包まれていたり、他の高分子とある種の結合をしている多糖に対しては、抽出効果が低い。
【００１１】
特許文献１では、レイシ胞子の有効成分を十分に遊離させる方法が開示されている。この方法では、レイシ胞子をマイクロ波反応チャンバに投入し、有機酸溶液を添加し、混合後にマイクロ波処理を行った後、真空蒸留によって有機酸を除去し、最後に、従来の水抽出やアルコール沈殿法を用いて、マイクロ波処理したレイシ胞子から粗レイシ胞子多糖類を抽出する。従来の抽出法と比較して、この方法では多糖類の収率が大幅に上昇する（３倍超）が、主に以下の問題を有する。第一には、マイクロ波処理後に残留酸を除去するのに有機溶媒で更に洗浄するのではなく、真空蒸留を用いるのみであるため、得られる生成物の残留酸含量が高い。また、シュウ酸の除去にカルシウム沈殿法を用いており、先ず、水と共に溶解した多糖を用いて胞子からシュウ酸を洗い落とすが、カルシウムイオンを添加してシュウ酸カルシウム沈殿物を形成すると、少量の多糖類が包み込まれたり、失われたりすることがある。第二には、このメカニズムは、レイシ胞子の細胞壁内のグリアやキチンと有機酸との間のマイクロ波増強反応に基づき、これらの物質の多糖遊離に対する制限を抑制することであるが、多糖類とタンパク質、セルロース、ヘミセルロース及びキチンとの間の化学結合を切断することや、多糖類の収率や水溶性を向上させる上での多糖類の分解の重要性を認識していない。
【００１２】
特許文献２では、アルテミシア・ソンガリカ・シュレンク（artemisia songarica schrenk）からの活性多糖類のマイクロ波抽出法が開示されている。しかし、この方法には技術的な問題点があり、例えば、大量の抽出溶媒を用いること（３０〜５０倍の水を必要とする）や、多糖類を得た後に酵素分解を必要とし、酵素分解では多くの制約が生じること（例えば、長い反応時間（該特許では１０〜１２時間）や反応後の酵素の除去（該特許ではｎ−ブタノール及びクロロホルム抽出））が挙げられる。
【００１３】
特許文献３では、オウギ多糖類のマイクロ波抽出法が開示されている。この方法では、無機強酸（塩酸又は硫酸）や無機強塩基（水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、アンモニア）を用いるが、無機強酸や無機強塩基は深刻な装置腐食の原因となり、再利用するのが困難であり、容易に環境汚染を引き起こし、無機酸の量は依然として比較的多い。無機酸又は塩基による多糖類の加水分解は主に酸濃度を調整して行うが、多糖類に対する酸、アルカリ分解及び結合切断作用を有するのみであり、無機強酸及び強塩基条件下での多糖類の加水分解は制御が困難であり、多糖分子に対する保護効果を得ることができない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】中国特許出願第０３１３３７７８．３号
【特許文献２】米国特許第８１１０６７７号
【特許文献３】中国特許出願第２００５１００２６８８９．１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従って、高等植物や真菌から活性多糖類を抽出する新しい方法を更に開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上述の技術的な問題点を克服するため、本発明は、マイクロ波化学処理によって高等植物及び真菌の多糖類を抽出する新規な方法を提供する。本発明の方法においては、少量の酸を用い、原料を均一に加熱し、多糖類の抽出率は高く、多糖類は高い水溶性と良好な活性を有する。
【００１７】
本発明のマイクロ波化学に基づく高等植物及び真菌の多糖類抽出方法は、次の各工程：
１）粉砕した高等植物及び真菌を有機溶媒で処理し、その脂溶性成分を除去して高等植物及び真菌の残渣を得るか、又は粉砕した高等植物及び真菌を直接用いる工程と、
２）工程１）で得られた残渣又は粉砕した高等植物及び真菌をマイクロ波反応チャンバに投入し、質量濃度が５％〜９９％の酸溶液を添加し、１ｋＷ／ｋｇ物質〜１０ｋＷ／ｋｇ物質の質量出力密度のマイクロ波電力で２０ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの作業圧力下、５〜１２０分混合物の反応を行い、必要に応じて混合物を濃縮して有機酸を除去した後、有機溶媒で洗浄して更に残留酸を除去する工程と、
３）工程２）で得られた生成物に５〜１５倍の水溶液を添加し、水抽出及び濾過を行い、濃縮後の濾液をアルコール沈殿に付し、好ましくは溶液にアルコールを添加してエタノール含量を７０％〜８５％にして沈殿物、即ち、多糖類生成物を分離する工程とを含む。
【００１８】
本発明の方法においては、その一実施形態として、工程２）で用いる酸溶液中の有機酸が不揮発性酸の場合、マイクロ波反応後に濃縮によって酸を除去する必要はないが、用いる有機酸が揮発性酸の場合、マイクロ波反応が終了した後、濃縮を行って酸を除去し、その後、有機溶媒で洗浄して少量の残留酸を除去する。
【００１９】
この場合、工程２）における濃縮は、当該技術分野で一般的な方法によって（好ましくは減圧下でのマイクロ波加熱によって）行うことができ、その後、有機溶媒による洗浄を行って残留酸を除去する。
【００２０】
本発明の方法においては、その一実施形態として、前記工程２）におけるマイクロ波電力の印加方法は、連続マイクロ波モード又は連続マイクロ波モードとパルスマイクロ波モードの組み合わせであり、酸溶液が還流するまで、還流開始後マイクロ波を５分〜１２０分維持するが、連続マイクロ波とパルスマイクロ波の組み合わせを用いる場合、先ず、酸溶液が還流するまでは連続マイクロ波照射を用い、その後パルスマイクロ波に変えて５分〜１２０分行う。
【００２１】
好ましい一実施形態として、前記工程２）においては、連続マイクロ波を用いる場合、質量出力密度は１ｋＷ／ｋｇ物質〜５ｋＷ／ｋｇ物質であり、パルスマイクロ波を用いる場合、質量出力密度は２ｋＷ／ｋｇ物質〜１０ｋＷ／ｋｇ物質であり、デューティ比はＡ／Ｂ（Ａ＝１秒〜１００秒、Ｂ＝１秒〜１００秒）である。
【００２２】
本発明の方法においては、当該技術分野で一般的なマイクロ波反応チャンバをマイクロ波反応に用いることができるが、該反応チャンバは、進行波マイクロ波反応チャンバ又は共鳴マイクロ波反応チャンバのいずれか一方である。
【００２３】
本発明の方法においては、その一実施形態として、前記工程２）の酸溶液は、有機酸又は有機酸と無機酸の混合溶液であり、有機酸溶液は、シュウ酸、ギ酸、酢酸又はプロピオン酸から選択され、更に好ましくは、シュウ酸の重量パーセント濃度は５％〜５０％（好ましくは１０％〜３５％）であり、ギ酸の重量パーセント濃度は１０％〜９９％（好ましくは３０〜８５％）であり、酢酸の重量パーセント濃度は１０％〜９９％（好ましくは６０〜９５％）であり、プロピオン酸の重量パーセント濃度は１０％〜９９％（好ましくは７０〜９５％）である。
【００２４】
本発明の方法においては、その一実施形態として、前記工程２）で用いる有機酸と無機酸の混合溶液における有機酸濃度は、上述の有機酸濃度であり、無機酸の質量パーセント濃度は０．１％〜１５％であるが、更に好ましくは、無機酸は、塩酸、硫酸、硝酸又はリン酸から選択される。
【００２５】
上述の無機酸溶液は市販品を購入することができ、その後、当該技術分野の従来法を用いて対応する濃度の有機−無機混合酸溶液を調製するのに用いる。例えば、有機酸に濃度３６％の塩酸を添加して対応する濃度とする。
【００２６】
本発明の方法においては、その一実施形態として、工程２）では、酸溶液の量に対する工程１）で得られた残渣又は粉砕した高等植物及び真菌の比は５／１〜１／５であるが、当業者であれば、上述の範囲内で増減させて調整し、確実に材料を十分に湿潤させることができ、過剰の酸溶液を用いて後処理を困難にしたり、大量にエネルギーを消費することはない。
【００２７】
本発明の方法においては、その一実施形態として、前記工程２）で用いる有機溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール又はアセトンから選択される。
【００２８】
本発明の方法においては、前記工程２）は原料のマイクロ波化学処理であり、マイクロ波化学処理の機能は主に、多糖類と有機高分子（例えば、高等植物や真菌の細胞壁のタンパク質やセルロース、ヘミセルロース、リグニン、キチン等）との間の様々な結合を切断し、結合多糖類を遊離多糖類に転化して後の方法での抽出率を向上させることであり、第二には、高分子多糖類のグリコシド結合を適度に切断して、それを一部分解してその水溶性を向上させることである。また、有機酸を用いて、Ｈ＋イオンの多糖類への分解作用に加え、有機酸ラジカルイオンが多糖類の水酸基と共に水素結合を形成して多糖分子を保護することができる。
【００２９】
本発明の方法においては、前記工程１）での高等植物や真菌原料の前処理方法としては、次の二方法が挙げられるが、これらに限定されない。１）前記高等植物の花、葉、種子、樹皮、果実、根又は塊茎、又は真菌原料の菌糸体又は子実体を乾燥させ、除染し、機械的に粉砕して次の工程で原料として用いる。或いは、２）前記高等植物の花、葉、種子、樹皮、果実、根又は塊茎、又は真菌原料の菌糸体又は子実体を乾燥させ、除染し、機械的に粉砕し、有機溶媒で抽出してその脂溶性活性物質（例えば、揮発性油やフラボノイド、トリテルペノイド、サポニン等）を除去し、乾燥後の抽出残渣を次の工程で原料として用いる。
【００３０】
本発明の方法においては、その一実施形態として、前記工程１）で粉砕した高等植物や真菌の処理に用いる有機溶媒は、石油エーテル、メタノール、エタノール、プロパノール又は酢酸エチルである。当業者であれば、本発明と当該技術分野の一般知識に従って、材料を浸漬可能にする有機溶媒の量を決めることができるが、通常は材料の体積の６〜８倍とし、その脂溶性活性物質（例えば、揮発性油やフラボノイド、トリテルペノイド、サポニンが挙げられるが、これらに限定されない）を除去する。
【００３１】
本発明の方法においては、その一実施形態として、前記工程３）で用いるアルコールはエタノールである。
【００３２】
本発明の方法においては、本発明の方法によって得られる活性多糖類を、当該技術分野における従来の精製法を用いて更に精製することができる。精製法としては次の方法が挙げられるが、これに限定されない。即ち、得られた粗多糖類生成物をその重量の１０〜２０倍の蒸留水に添加し、十分に撹拌して溶解し、４０００〜８０００ＲＰＭで１０〜３０分遠心分離し、沈殿物を廃棄し、上清を蒸留水で２４時間透析し、透析液を直接凍結乾燥させて高純度の多糖類を得るか、又は、透析液をその元の体積の１／５まで濃縮した後、溶液中に沈殿物がなくなるまでエタノールを添加し、遠心分離を行い、沈殿物を乾燥させて精製多糖類を得る。
【００３３】
本発明の方法においては、本発明の方法で活性多糖類の抽出に用いる原料の高等植物としては、オウギやクコ、イチョウ葉、パパイヤ、ハニーサックル、中国アンゼリカ、橙皮、シナマオウ、カラセンキュウ、セキショウ、ニンニク、シャープリーフガランガル果実、アンゼリカ、中国ヨモギ葉、アサルム、シスタンシェ、ヤナギバグミ、ユーカリ葉、コルダータ、トウネズミモチ、キョウカツ、チョウセンニンジン、サンシチニンジン、センリョウ、オオバコ、オオケタデ果実、フジモドキ、ベルガモット、トウグワ根−樹皮、ヤドリギ、コガネバナ、エピメディウム、茶葉、ロディオラ、アロエ、オートムギ、コンニャク、ヤムイモ、オニノヤガラ、サイコ、アカントパナックスの花、葉、種子、樹皮、果実、根又は塊茎が挙げられるが、これらに限定されない。また、真菌としては、レイシ、キクラゲ、マッシュルーム、ポリポラス、トレメラ、マイタケ、ブクリョウ、クロクモタケ、ヤマブシタケ、冬虫夏草の真菌子実体や菌糸体が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい一実施形態として、高等植物は、オウギ、クコ、ヤムイモ、イチョウ葉、サンシチニンジン、オオバコ、オニノヤガラ、トチュウ、タンジン又はクズであり、真菌は、レイシ、ブクリョウ、キクラゲ又はマッシュルームである。
【００３４】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はオウギ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のオウギをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の１０％〜３５％シュウ酸を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、シュウ酸溶液の還流状態を１５〜３０分維持した後、減圧下でマイクロ波抽出チャンバ内の液体を蒸発乾固することを含む。オウギの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてオウギ多糖類を得る。
【００３５】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたオウギ多糖類であって、分子量分布が３０００〜４００００であるオウギ多糖類も提供する。
【００３６】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はクコ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、石油エーテル又はエタノールで脱脂した後のクコをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固することを含む。クコの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてクコ多糖類を得る。
【００３７】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたクコ多糖類であって、分子量分布が３０００〜２００００であるクコ多糖類も提供する。
【００３８】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はヤムイモ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕した後のヤムイモをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の７０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固することを含む。ヤムイモの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてヤムイモ多糖類を得る。
【００３９】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたヤムイモ多糖類であって、分子量分布が３０００〜２００００であるヤムイモ多糖類も提供する。
【００４０】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はイチョウ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のイチョウをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固することを含む。イチョウの重量の４〜６倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてイチョウ多糖類を得る。
【００４１】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたイチョウ多糖類であって、分子量分布が５０００〜１２０００であるイチョウ多糖類も提供する。
【００４２】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はサンシチニンジン多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のサンシチニンジンをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の６０％〜９５％酢酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酢酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酢酸を蒸発乾固することを含む。サンシチニンジンの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてサンシチニンジン多糖類を得る。
【００４３】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたサンシチニンジン多糖類であって、分子量分布が４０００〜２００００であるサンシチニンジン多糖類も提供する。
【００４４】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はオオバコ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、石油エーテル及びエタノールで脱脂した後のオオバコをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の８０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固することを含む。オオバコの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてオオバコ多糖類を得る。
【００４５】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたオオバコ多糖類であって、分子量分布が４０００〜３００００であるオオバコ多糖類も提供する。
【００４６】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はオニノヤガラ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のオニノヤガラをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍のギ酸−塩酸混合溶液（０．３％〜０．６％塩酸及び３０％〜８５％ギ酸）を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酸混合溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酸混合溶液を蒸発乾固することを含む。オニノヤガラの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてオニノヤガラ多糖類を得る。
【００４７】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたオニノヤガラ多糖類であって、分子量分布が３０００〜２００００であるオニノヤガラ多糖類も提供する。
【００４８】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はトチュウ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のトチュウをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固することを含む。トチュウの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてトチュウ多糖類を得る。
【００４９】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたトチュウ多糖類であって、分子量分布が３０００〜２００００であるトチュウ多糖類も提供する。
【００５０】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はタンジン多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のタンジンをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の６０％〜９５％酢酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酢酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酢酸を蒸発乾固することを含む。タンジンの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてタンジン多糖類を得る。
【００５１】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたタンジン多糖類であって、分子量分布が５０００〜２５０００であるタンジン多糖類も提供する。
【００５２】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はクズ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のクズをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の７０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固することを含む。クズの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてクズ多糖類を得る。
【００５３】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたクズ多糖類であって、分子量分布が３０００〜２５０００であるクズ多糖類も提供する。
【００５４】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はレイシ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のレイシ子実体をマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の１０％〜３５％シュウ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、シュウ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で該液体を蒸発乾固することを含む。レイシ子実体の重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてレイシ多糖類を得る。
【００５５】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたレイシ多糖類であって、分子量分布が３０００〜１２０００であるレイシ多糖類も提供する。
【００５６】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はブクリョウ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕してエタノールで脱脂した後のブクリョウをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の３０％〜８５％ギ酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、ギ酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でギ酸を蒸発乾固することを含む。ブクリョウの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてブクリョウ多糖類を得る。
【００５７】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたブクリョウ多糖類であって、分子量分布が２０００〜８０００であるブクリョウ多糖類も提供する。
【００５８】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はキクラゲ多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕した後のキクラゲをマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の６０％〜９５％酢酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、酢酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下で酢酸を蒸発乾固することを含む。キクラゲの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてキクラゲ多糖類を得る。
【００５９】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたキクラゲ多糖類であって、分子量分布が５０００〜４００００であるキクラゲ多糖類も提供する。
【００６０】
本発明の方法においては、その一実施形態として、本発明はマッシュルーム多糖類を調製する方法を更に提供するが、該方法は、粉砕した後のマッシュルーム子実体をマイクロ波抽出チャンバに投入し、その重量の１．５〜２．５倍の７０％〜９５％プロピオン酸溶液を添加し、１〜２ＫＷ／Ｋｇのマイクロ波出力密度で５００ｍｍＨｇ〜７６０ｍｍＨｇの圧力下、プロピオン酸溶液の還流状態を１５〜２５分維持した後、減圧下でプロピオン酸を蒸発乾固することを含む。マッシュルームの重量の３〜５倍のエタノール溶液を反応チャンバに添加する。混合物を撹拌し、４０〜６０分洗浄し、濾過する。乾燥後の濾過残渣を水で２回抽出するが、１回の抽出に用いる水の量は残渣の重量の６〜８倍とし、抽出温度は７０℃、抽出時間は約４０分とする。濾過を行い、２種の濾液を混合し、体積が元の抽出溶液の１／５になるまで濃縮した後、エタノールを添加して沈殿を行い、沈殿物を乾燥させてマッシュルーム多糖類を得る。
【００６１】
また、本発明は、上述の方法によって調製されたマッシュルーム多糖類であって、分子量分布が３０００〜１５０００であるマッシュルーム多糖類も提供する。
【発明の効果】
【００６２】
本発明は次の特徴を有する。
第一には、有機酸又は有機酸含有の混合酸と共にマイクロ波を医薬原料に直接作用させ、有機酸を利用して植物や真菌の細胞壁の高分子（キチンやセルロース、タンパク質を含む）と多糖類との間の結合を切断して前記医薬材料からの多糖類の遊離を促進すると共に、多糖類の抽出率を向上させた上、有機酸に関しては、Ｈ＋イオンの多糖類への分解作用に加え、有機酸ラジカルイオンが多糖類の水酸基と共に水素結合を形成して多糖分子を保護することができる。
【００６３】
第二には、マイクロ波によって増強された有機酸又は有機酸含有の混合酸が遊離多糖類を更に適度に分解して、多糖類の水溶性を大幅に高めることができる。分子量分布が比較的集中し水溶性が良好な多糖類が得られ、方法全体によって、高等植物や真菌の多糖類を効率良く抽出し、再構築することができる。
【００６４】
第三には、マイクロ波加熱によって材料の内側と外側の同時加熱を確実に行うことができ、従来の加熱法における一連の克服できない問題（材料の不均一な加熱やエネルギーの大量消費等）を十分に克服することができる。
【００６５】
先行技術と比較して、本発明は更に次の利点を有する。
１．本発明によって、時間が節約され、有機酸又は有機酸含有の混合酸の使用量が低減し、再利用が容易且つ効率的になり、節水及び省エネルギー効果が顕著になる。マイクロ波加熱技術を用いることによって、従来の加熱法では回避することが困難な伝熱問題が効果的に克服され、有機酸の使用量や加工時間（特に、酸を除去する蒸留方法の時間）が大幅に低減し、従来の加熱法では克服できない不均一加熱の問題を克服することができる。大規模生産におけるこのような特徴は特に顕著である。
【００６６】
２．マイクロ波によって増強された有機酸又は有機酸含有の混合酸によって、遊離した高等植物や真菌の多糖類の分子構造を更に適度に調整し、多糖類の水溶性を大幅に向上させることができる一方、有機酸に関しては、Ｈ＋イオンの多糖類への分解作用に加え、有機酸ラジカルイオンが多糖類の水酸基と共に水素結合を形成して多糖分子を保護することができる。
【００６７】
本発明の方法では、有機酸又は有機酸含有の混合酸を用いて医薬原料に直接作用させ、先行技術の多糖類抽出に関する多くの問題を克服する。本発明の方法によって得られる活性多糖類は、より良好な生物活性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】本発明の方法におけるフロー図である。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
以下、実施例及び実験例により本発明を更に説明する。
【００７０】
本発明の方法を次に示す。
１）予備処理した高等植物原料又は真菌原料をマイクロ波反応チャンバに投入し、有機酸又は有機酸／無機酸混合溶液を加えて、粉末が十分な湿潤状態となるよう十分に撹拌し；
２）マイクロ波電力を印加するマイクロ波処理を行い、マイクロ波と、有機酸分子と、高等植物の細胞壁又は真菌の細胞壁の有機高分子との間の共同作用を利用して、前記高等植物の花、葉、果実若しくは根茎又は真菌の菌糸若しくは子実体から多糖を分離すると共に、高分子多糖を適度に分解するように、高分子多糖のグリコシド結合を選択的に切断し；
３）マイクロ波加熱によって減圧蒸留を行うことにより、有機酸又は有機酸／無機酸混合溶液の大部分を除去し、得られた物質を有機溶媒で十分に洗浄することにより少量の残留する酸を除去して、前記高等植物原料又は前記真菌原料のマイクロ波予備処理を完了し；
４）マイクロ波で予備処理された高等植物又は真菌に約５〜１５倍の水を加えることによって抽出を行い、抽出液を濃縮した後、アルコール沈殿を行うことによって、非常に高い水溶性を有する粗生成物を得る。
【００７１】
図１に本方法の全体を示す。
【００７２】
本実施例においては、抽出率、多糖含有量、多糖の分子量分布、有機酸の量、反応時間及び他のデータを表１に示す。ここに記載する多糖の抽出率とは、高等植物原料に対する生成物の重量百分率であり、多糖含有量は、農業技術雑誌（Shiling Sun著、Method for Determination of polysaccharide content of yam、「Agriculture and Technology」、２０１０年、第２０巻第３号、ｐｐ．３５−３９）に報告されているフェノール硫酸法により測定したものであり、多糖の分子量分布は、ゲルクロマトグラフィーにより測定したものである（composition analysis of astragalus polysaccharide、Yaping Cai、Rui Zhao、Dan Zhu著、「China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae」、２０１１年、第１７巻第１号、ｐｐ．８１−８３）。
【実施例】
【００７３】
実施例１
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥オウギ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加え、この混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、２回分の濾液を混合して減圧蒸留することによりエタノールを回収し、フラボノイド、サポニン、クマリン等の脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）シュウ酸（３００ｇ）を水に加えて１０％シュウ酸溶液を調製する。
５）工程４）のシュウ酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（５ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を１０ＫＷとする。１５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）においてマイクロ波で処理されたオウギに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過して濾液を蒸留することによりエタノール及びシュウ酸を回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたオウギを得る。
８）工程７）でマイクロ波処理されたオウギ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（５００ｍＬ）を加え、この混合物を７０℃の湯浴に４０分浸して抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００７４】
実施例２
１）乾燥クコ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、石油エーテル（１０Ｌ）を加え、この混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行った後、濾過する。濾過残渣にエタノール（１０Ｌ）を加えて、１時間加熱還流させることにより抽出を行う。
２）これを濾過した後、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、クコ色素（wolfberry color）を含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）高純度ギ酸（２．４Ｌ）を水に加えて７０％ギ酸溶液を調製する。
５）工程４）のギ酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（６ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を８ＫＷとする。２５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）においてマイクロ波で処理されたクコに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過して濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたクコを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたクコ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（５００ｍＬ）を加え、この混合物を７０℃の湯浴に４０分浸して抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００７５】
実施例３
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥ヤムイモ（１．５ｋｇ）を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
２）高純度のプロピオン酸（２．８Ｌ）を水に加えて９０％プロピオン酸溶液を調製する。
３）工程２）のプロピオン酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加え、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
４）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（５ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒とし、ピーク電力を８ＫＷとする。２０分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
５）工程４）でマイクロ波処理されたヤムイモに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過して濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによってマイクロ波処理されたヤムイモを得る。
６）工程７）でマイクロ波処理されたヤムイモ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（８００ｍＬ）を加え、この混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
７）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
８）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００７６】
実施例４
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥イチョウ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することによりフラボン及びラクトンを含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）高純度のギ酸（２．８Ｌ）を水に加えて３０％ギ酸溶液を調製する。
５）工程４）のギ酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加え、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（４ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を６ＫＷとする。１５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたイチョウに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過して濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたイチョウを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたイチョウ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（６００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００７７】
実施例５
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥サンシチニンジン（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、トリテルペノイドサポニンを含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）高純度の酢酸（２．８Ｌ）を水に加えて８５％酢酸溶液を調製する。
５）工程４）の酢酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加え、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（６ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を８ＫＷとする。１５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたサンシチニンジンに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過して濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたサンシチニンジンを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたサンシチニンジン（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（５００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００７８】
実施例６
１）乾燥オオバコ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、石油エーテル（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行った後、濾過する。濾過残渣をエタノール（１０Ｌ）に加えて、１時間加熱還流させることにより抽出を行う。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、脂肪酸を含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）高純度のプロピオン酸（３Ｌ）を水に加えることにより９０％プロピオン酸溶液を調製する。
５）工程４）のプロピオン酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加え、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（５ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を１０ＫＷとする。２０分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたオオバコ属植物に無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過して濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたオオバコ属植物を得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたオオバコ属植物（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（５００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００７９】
実施例７
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥オニノヤガラ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、フェノール系の酸を含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）高純度のギ酸（２．８Ｌ）を３６％濃塩酸（１００ｍＬ）及び水に加えてギ酸−塩酸混合溶液（塩酸０．５％及びギ酸７５％）を調製する。
５）工程４）のギ酸−塩酸混合溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態になるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（６ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を８ＫＷとする。１５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたオニノヤガラに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによってマイクロ波処理されたオニノヤガラを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたオニノヤガラ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（８００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８０】
実施例８
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥トチュウ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、リグナンを含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）高純度のギ酸（２．８Ｌ）を水に加えて８０％ギ酸溶液を調製する。
５）工程４）のギ酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（６ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を８ＫＷとする。１５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたトチュウに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたトチュウを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたトチュウ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（８００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８１】
実施例９
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥タンジン（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、タンジンノリン酸を含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）純粋な酢酸（２．８Ｌ）を水に加えて８５％酢酸溶液を調製する。
５）工程４）の酢酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加え、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（５ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を１０ＫＷとする。２０分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたタンジンに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたタンジンを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたタンジン（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（６００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８２】
実施例１０
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥クズ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、フラボノイド及びサポニンを含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）高純度のプロピオン酸（３．０Ｌ）を水に加えて９０％プロピオン酸溶液を調製する。
５）工程４）のプロピオン酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物を、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（５ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を８ＫＷとする。２５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたクズに無水エタノール（５Ｌ）を加え、十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたクズを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたクズ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（８００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮してアルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８３】
実施例１１
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥レイシ子実体（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加え、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、トリテルペンを含むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）シュウ酸（３００ｇ）を水に加えることにより１０％シュウ酸溶液を調製する。
５）工程４）のシュウ酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（６ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を８ＫＷとする。１５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理されたレイシ子実体に無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることにより、マイクロ波処理されたレイシ子実体を得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたレイシ子実体（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（８００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮した後、アルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖の粗生成物を得る。
１０）工程９）で得られた有効成分である多糖の粗生成物（５ｇ）を１００ｍＬのビーカーに投入する。
１１）蒸留水（５０ｍＬ）を工程１０）のビーカーに加えて３０分撹拌する。
１２）工程１１）で得られた溶液を、回転数を５０００回転／分として遠心分離に付し、沈殿を廃棄して上清を残す。
１３）工程１２）で得られた上清を透析バッグ（分画分子量３０００）に投入し、蒸留水中で２４時間透析を行う。
１４）工程１３）の透析バッグ内の溶液を取り出し、凍結乾燥器で凍結乾燥させることにより多糖の精製物を得る。
１５）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８４】
実施例１２
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥ブクリョウ（１．５ｋｇ）を抽出容器に投入し、エタノール（１０Ｌ）を加えて、混合物を１時間加熱還流させることにより抽出を行う。この手順を再度繰り返す。
２）これを濾過し、濾液を減圧蒸留してエタノールを回収することにより、トリテルペンを含む脂溶性有効成分に富むアルコール抽出液を得る。濾過残渣は更なる方法に用いるために６０〜８０℃で乾燥させる。
３）工程２）で乾燥させた濾過残渣を入射波式マイクロ波反応チャンバに投入する。
４）ギ酸（２．８Ｌ）を水に加えて８０％ギ酸溶液を調製する。
５）工程４）のギ酸溶液（３Ｌ）を上述したマイクロ波反応チャンバに加えて、均一な湿潤状態となるまで材料を十分に撹拌する。
６）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（６ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を１０ＫＷとする。２０分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
７）工程６）でマイクロ波処理したブクリョウに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたブクリョウを得る。
８）工程７）のマイクロ波処理されたブクリョウ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（８００ｍＬ）を加え、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
９）濾液を濃縮してアルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
１０）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８５】
実施例１３
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥キクラゲを抽出容器に投入する。
２）酢酸（２．８Ｌ）を水に加えて８５％酢酸溶液を調製する。
３）工程２）の酢酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
４）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（４ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を６ＫＷとする。１５分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
５）工程４）でマイクロ波処理したキクラゲに無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによってマイクロ波処理されたキクラゲを得る。
６）工程５）のマイクロ波処理されたキクラゲ（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（５００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
７）濾液を濃縮してアルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
８）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８６】
実施例１４
１）夾雑物を除いて機械的に粉砕した乾燥マッシュルーム子実体を抽出容器に投入する。
２）プロピオン酸（３Ｌ）を水に加えて９０％プロピオン酸溶液を調製する。
３）工程２）のプロピオン酸溶液（３Ｌ）を上述のマイクロ波反応チャンバに加えて、材料が均一な湿潤状態となるまで混合物を十分に撹拌する。
４）上述の混合物に、液体が還流するまで、即ち有機酸溶液が気化するまでマイクロ波電力（６ＫＷ）を連続照射し、次いでパルス波動作モードに切り替え、デューティ比（即ち、オン時間及びオフ時間の比）を５秒／５秒、ピーク電力を８ＫＷとする。２０分後、マイクロ波反応チャンバに液体が存在しなくなるまで減圧を行う（反応チャンバの作動圧力を２０ｍｍＨｇとする）。
５）工程４）でマイクロ波処理したマッシュルーム子実体に無水エタノール（５Ｌ）を加えて十分に撹拌した後、濾過する。濾液を蒸留することによりエタノールを回収し、濾過残渣を乾燥させることによりマイクロ波処理されたマッシュルーム子実体を得る。
６）工程５）のマイクロ波処理されたマッシュルーム子実体（１００ｇ）を１Ｌのビーカーに投入し、蒸留水（６００ｍＬ）を加えて、混合物を７０℃の湯浴に４０分浸すことにより抽出を行った後、濾過する。この手順を再度繰り返す。２回分の濾液を混合する。
７）濾液を濃縮してアルコール沈殿に付し、沈殿を乾燥させることにより有効成分である多糖を得る。
８）多糖の抽出率、多糖の含有量、多糖の分子量分布及び抽出に使用した水の量を含むデータを表１に列挙する。
【００８７】
表１に実施例１〜１４における多糖生成物の抽出率、多糖含有量及び多糖抽出に使用した水の量を示す。
【００８８】
【表１】
0005795444.tif 000002
【００８９】
実験１  レイシ多糖由来有効成分の抗腫瘍薬としての薬効
実験材料：実施例１１で調製したレイシ多糖（粗生成多糖（純度７８％）及び精製多糖（純度９４％））
実験動物：昆明マウス、雄、体重（２２±２）ｇ、エクスペリメンタル・アニマル・センター・オブ・ミリタリー・メディカル・サイエンシーズ（Experimental Animal Center of Military Medical Sciences）（北京）より入手
腫瘍株：ルイス（Lewis）肺癌細胞株及びＳ１８０肉腫株、Shanghai Institutes for Biological Sciencesより購入
主要機器：ＤＳＸ−２８０Ａオートクレーブ（Shanghai Shen An Med Instrument製）；ＬＤ５−２Ａ低速遠心分離機（Beijing Medical Centrifuge Company製）；１４ＺＱ−Ｆ１６０恒温振盪機（Harbin Donglian Electronic Technology Development Co., Ltd製）
実験方法：ルイス肺癌細胞及びＳ１８０腫瘍細胞を移植後７日目に、腫瘍が十分に増大した担癌マウスを屠殺する。十分に増大した腫瘍組織を選択して細胞懸濁液を調製する。これを試験マウスの腋窩部に移植量を０．２ｍＬ／匹として移植することにより標的の固形腫瘍モデルを作出する。移植後のマウスを、対照群、陽性対照群、多糖投与群に無作為に割り付ける（１０匹／群）。マウスに腫瘍細胞を移植して２４時間後から薬剤を腹腔内に９日間連日投与し、最終投与から２４時間後にマウスの体重を測定した後、頸椎脱臼により屠殺し、腫瘍を摘出して重量を測定する。
腫瘍増殖抑制率を次のように求める：
腫瘍増殖抑制率（％）＝（モデル群の平均腫瘍重量−薬剤投与群の平均腫瘍重量）／モデル群の平均腫瘍重量×１００
【００９０】
結果を次の表に示す。
【００９１】
【表２】
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【００９２】
レイシ多糖が腫瘍増殖抑制に有効であることが判明した。
この実験結果は、一般的な高等植物の花、葉、果実、種子、樹皮、根又は塊茎及び一般的な真菌の菌糸体又は子実体の処理にマイクロ波化学的方法を用いた後、水抽出法及びアルコール沈殿法を用いることによって水溶性の多糖を得る本発明により、多量の水消費、多量のエネルギー消費、生成物の低い収率等の先行技術の欠点が解消されることを示している。高等植物及び真菌は、有効成分である多糖のみならず、トリテルペン、フラボノイド、サポニン等の他の多くの有効成分を含んでおり、これらは多糖との溶解性の差に応じて、マイクロ波処理を行う前又は後にそれぞれアルコールで抽出するか又は水で抽出することができる。このように、高等植物の有効成分及び真菌の有効成分を包括的に利用することが可能になる。
【図１】
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