(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学構造式：
【化１】
0005829866.tif 000003
から選択されるクロメポリフェノールを含有するクロメ由来のフロロタンニン類を有効成分とすることを特徴とする紫外線照射障害保護剤。
【請求項２】
クロメ由来のフロロタンニン類が、クロメのエタノール水溶液抽出物である請求項１に記載の紫外線照射障害保護剤。
【請求項３】
皮膚を紫外線照射傷害から保護する機能を有する請求項１または２に記載の紫外線照射障害保護剤。
【請求項４】
皮膚が皮膚繊維芽細胞である請求項３に記載の紫外線照射障害保護剤。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載の紫外線照射障害保護剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項６】
請求項１から４のいずれかに記載の紫外線照射障害保護剤を含有することを特徴とする化粧料。
【請求項７】
上記化粧料が、日焼け止め材料である請求項６に記載の化粧料。
【請求項８】
クロメをエタノール濃度４０〜８０（v／v）％の水溶液で抽出することを特徴とする請求項１または２に記載の紫外線照射障害保護剤を製造する方法。
【請求項９】
さらに溶離液としてエタノール水溶液を用いてカラム分画する、請求項８に記載の紫外線照射障害保護剤を製造する方法。
【請求項１０】
溶離液としてのエタノール水溶液が、エタノール濃度２０〜６０（v／v）％の水溶液である請求項９に記載の紫外線照射障害保護剤を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロメ由来のフロロタンニン類を有効成分とする紫外線照射障害保護剤およびその製造方法に関するものであり、例えば、日光の照射による日焼けを防止し皮膚の損傷を低減する保護剤、その製造方法、海藻類から抽出された天然成分を含有する化粧品、医薬品、医薬部外品、食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、海藻類からの抽出物には生理活性があり様々な医療用、食品用の有用成分としての用途が提案されてきた。例えば、血管新生をより効果的に抑制し得るとともに、生体に対する安全性が向上した血管新生抑制剤として、褐藻類こんぶ目こんぶ科のマコンブ（Laminaria japonica）、アラメ（Eisenia bicyclis）、サガラメ（Eisenia arborea）、ツルアラメ（Ecklonia stolonifera）、クロメ（Ecklonia kurome）、カジメ（Ecklonia cava）、褐藻類こんぶ目ちがいそ科のワカメ（Undaria pinnatifida）、アオワカメ（Undaria peterseniana）、ヒロメ（Undaria undarioides）、アイヌワカメ（Alaria praelonga）、およびチガイソ（Alaria crassifolia）；褐藻類ひばまた目ほんだわら科のホンダワラ（Sargassum fulvellum）、ヒジキ（Hizikia fusiformis）、およびアカモク（Sargassum horneri）；褐藻類ながまつも目もずく科のモズク（Nemacystus decipiens）、褐藻類ながまつも目ながまつも科のオキナワモズク（Cladosiphon okamuranus）；紅藻類スギノリ目すぎのり科に属する海藻；からなる群より選択される少なくとも１種の海藻由来の抽出物を有効成分として含有する血管新生製剤（特許文献1）が提案され、また、アルドース還元酵素阻害剤（特許文献２）や、ＡＧＥ生成阻害剤（特許文献３）などが提案されている。
【０００３】
こうした海藻類由来の生理活性物質の一つとして、フロロタンニン類が注目されてきている。例えば、安全性が高く食品や化粧品に適用しやすいβ−グルクロニダーゼ阻害剤を、褐藻類こんぶ目こんぶ科のクロメ(Ecklonia kurome) およびカジメ(Ecklonia cava)からなる海藻に由来する抽出物を有効成分とするもの（特許文献４）、脂質代謝の改善に有効な脂質代謝改善物質として、海藻、特にクロメ由来のフロロタンニンを摂取することにより優れた脂質代謝改善効果を奏し、飲食料品や医薬品の有効成分として使用することにより、脂質代謝異常に由来する疾患の予防・治療への応用が可能とするもの（特許文献５）、肝炎治療剤または肝炎予防剤として、フロロタンニンを含有するもの（特許文献６）、フロロタンニン類を主成分とする抗菌剤であって、フロログルシノール（phloroglucinol）、エコール（eckol）、フロロフコフロエコールＡ（phlorofucofuroeckol A）、ダイエコール（dieckol）、８,８'−バイエコール（bieckol）から選択される１つまたは２つ以上の組み合わせである抗菌剤（特許文献７）などが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２２０３３号公報
【特許文献２】特開２００８−２１４２４５号公報
【特許文献３】特開２００８−２１４２４６号公報
【特許文献４】特開２０１０−１８９４３９号公報
【特許文献５】特開２００６−３２８０１０号公報
【特許文献６】特開２０１０−３０９１７号公報
【特許文献７】特開２００３−２７７２０３号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】J.Dermatol.Sci.,55,161-169(2009)
【非特許文献２】J.Korean Med.Sci.,25,930-937(2010)
【非特許文献３】Biol.Pharm.Bull.,28(7),1244-1248(2005)
【非特許文献４】Biol.Phram.Bull.,31(2),284-289(2008)
【非特許文献５】Exp.Mol.Med.,35(4),263-268(2003)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
紫外線照射保護作用を有する化合物は従来数多く知られ日焼け止め剤などとして使用されてはいるが、本発明は、天然由来の紫外線照射障害保護作用を有する物質を新たに見出したものであり、クロメ由来のフロロタンニン類を有効成分とする紫外線照射障害保護剤を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は以下の（１）ないし（６）の紫外線照射障害保護剤を要旨とする。 
（１）下記化学構造式：
【化１】
0005829866.tif 000002
から選択されるクロメポリフェノールを含有するクロメ由来のフロロタンニン類を有効成分とすることを特徴とする紫外線照射障害保護剤。
（２）クロメ由来のフロロタンニン類が、クロメのエタノール水溶液抽出物である上記（１）に記載の紫外線照射障害保護剤。
（３）皮膚を紫外線照射傷害から保護する機能を有する上記（１）または（２）に記載の紫外線照射障害保護剤。
（４）皮膚が皮膚繊維芽細胞である上記（３）に記載の紫外線照射障害保護剤。
【０００８】
また、本発明は以下の（５）の皮膚外用剤、（６）および（７）の化粧料、および（８）ないし（１０）の紫外線照射障害保護剤を製造する方法を要旨とする。
（５）上記（１）から（４）のいずれかに記載の紫外線照射障害保護剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
（６）上記（１）から（４）のいずれかに記載の紫外線照射障害保護剤を含有することを特徴とする化粧料。
（７）上記化粧料が、日焼け止め材料である上記（６）に記載の化粧料。
（８）クロメをエタノール濃度４０〜８０（v／v）％の水溶液で抽出することを特徴とする上記（１）または（２）に記載の紫外線照射障害保護剤を製造する方法。
（９）さらに溶離液としてエタノール水溶液を用いてカラム分画する、上記（８）に記載の紫外線照射障害保護剤を製造する方法。
（１０）溶離液としてのエタノール水溶液が、エタノール濃度２０〜６０（v／v）％の水溶液である上記（９）に記載の紫外線照射障害保護剤を製造する方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のクロメ由来のフロロタンニン類を含有する紫外線照射障害保護剤は、紫外線照射障害保護剤として市販の保護剤よりも優れた効果を発揮するものであり、例えば、皮膚に適用することにより紫外線による皮膚や皮膚繊維芽細胞の損傷を保護することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１−１】クロメ由来の各フロロタンニン類の構造式を示す。
【図１−２】クロメ由来の各フロロタンニン類の構造式を示す。
【図１−３】クロメ由来の各フロロタンニン類の構造式を示す。
【図２】クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで１〜２４時間抽出して得た抽出物の乾燥重量を示す。
【図３】クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで１〜２４時間抽出して得た抽出物の総ポリフェノール量を示す。
【図４】クロメを抽出したＥｔＯＨ濃度と抽出物の乾燥重量の関係を示す。
【図５】クロメを抽出したＥｔＯＨ濃度と抽出物の総ポリフェノール量の関係を示す。
【図６】クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで抽出した抽出物をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムで分画した際の溶離エタノール濃度と各画分の溶離物の乾燥重量の関係を示す。
【図７】クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで抽出した抽出物をダイヤイオン（登録商標） ＨＰ２０カラムで分画した際の溶離エタノール濃度と各画分の総ポリフェノール量の関係を示す。
【図８】クロメ分画物のＵＶＡ照射障害に対する防御効果を、ヘアレスマウスの皮膚厚変化による動物試験データで示す。
【図９】クロメ分画物のＵＶＢ照射障害に対する防御効果を、ヘアレスマウスの皮膚厚変化による動物試験データで示す。
【図１０】クロメ分画物のＵＶＢ照射障害に対する防御効果を、ヘアレスマウスの皮膚の色調変化による動物試験データで示す。
【図１１】クロメ分画物の濃度によるＵＶＢ照射障害に対する防御効果を、ヘアレスマウスの皮膚厚による動物試験データで示す。
【図１２】クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで抽出した抽出物をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムで分画した各画分のＵＶＢ照射障害に対する防御効果を、ヘアレスマウスの皮膚厚による動物試験データで示す。
【図１３】クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで抽出した抽出物をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムで分画した各画分のＵＶＢ照射障害保護効果をヒト皮膚繊維芽細胞での試験データで示す。
【図１４】クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで抽出した抽出物をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムで分画した４０（v／v）％ＥｔＯＨで溶出画分から各種カラムで分離精製したフロロタンニン類各化合物のＵＶＢ照射障害保護効果をヒト皮膚繊維芽細胞での試験データで示す。
【図１５】クロメ分画物のＵＶＢ照射障害に対する防御効果を、長期塗布したヘアレスマウスの皮膚厚変化による動物試験データで示す。
【図１６】クロメ分画物のＵＶＢ照射障害に対する防御効果を、長期塗布したヘアレスマウスの皮膚水分量変化による動物試験データで示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、クロメ由来の抽出物であるフロロタンニン類を有効成分とする紫外線照射障害保護剤に関するものであり、例えば、紫外線による皮膚の傷害や皮膚繊維芽細胞の障害から保護する効果を有するものである。また、本発明の保護剤は、皮膚外用剤としてヒト皮膚の繊維芽細胞の増殖を促進するのに有効であり、創傷治癒剤、化粧品、浴用剤、繊維芽細胞用培地、食品などの構成原料として用いることができる。
【００１２】
［紫外線］
太陽から照射される紫外線は、人間の健康や環境への影響と観点から、ＵＶＡ、ＵＶＢ、ＵＶＣと分類されているが、ＵＶＣは大気により吸収されて地上には到達しないので、健康上の理由からは主としてＵＶＡおよびＵＶＢからの保護が重要である。
これらの紫外線について説明する。
ＵＶＡは、地表に到達する紫外線のー種であり、波長３２０〜４００nmの紫外線を言う。この紫外線は、肌の奥深く真皮まで届き、肌の弾力の低下やしわ、たるみなど皮膚の老化を促進する。また、強い日ざしを浴びた直後に肌が黒くなり、３０分から数時間で消える反応（即時黒化）はＵＶＡが関係している。これは，皮膚の表皮にある淡色のメラニン色素が濃色のメラニン色素に変化して黒くなる現象である。
ＵＶＢは、地表に到達する紫外線の一種であり、波長２９０〜３２０nmの紫外線を言う。大部分が表皮で吸収され，短時間で皮膚に炎症（赤み，腫れ，皮膚癌など）を起こさせる作用がある。炎症が治まると数日して皮膚のメラニン色素が増加して黒く変化する（遅延黒化）。黒くなった表皮は，約1ケ月で新陳代謝によってはがれて元の肌色に戻るが、繰返しＵＶＢを浴びることによりしわやしみなどの皮膚老化を促進する。また，皮膚癌を誘発することもある。
【００１３】
［クロメ］
クロメは、こんぶ目こんぶ科かじめ属の褐藻の一種であり、潮下帯付近の岩に付着して生育する海藻である。藻体の大きさは普通４０〜５０ｃｍ、時には１ｍ以上にもなり冬場の藻体は食用になる。その形態は、同属のカジメに似ているが、葉状の部分にしわが生じること、全体的に小型であることなどから区別できる。またアラメとは異なり、茎部が二分岐しない。日本近海では本州太平洋岸の中南部から九州にかけて、および瀬戸内海、日本海に分布する。大形で多年生。芽生えはじめの個体は短い茎に単葉である。
【００１４】
[フロロタンニン類]
海藻に含有されるフロロタンニン類としては、図１に示す、Ｎｏ．７＝エコール（eckol）、Ｎｏ．３＝ダイエコール（dieckol）、Ｎｏ．２＝８，８’−バイエコール（bieckol）、Ｎｏ．１５＝６，８’−バイエコール（bieckol）、Ｎｏ．６＝２−フロロエコール（phloroeckol）、Ｎｏ．５＝フロロフコフロエコールＡ（phlorofucofuroeckol-A）、Ｎｏ．４＝ダイオキシノデヒドロエコール（dioxinodehydroeckol）が知られている。フロロタンニン類の総量は、「フロログルシノール（phloroglucinol）を標準品としたフォーリンチオカルト法（Folin-Ciocalteu法）」（測定波長は７２０ｎｍ）により測定されるポリフェノール総量で示す。
【００１５】
[クロメからフロロタンニン類の抽出]
クロメからフロロタンニン類を抽出する方法を以下に説明する。
本発明では、人体への影響、食品、医薬品などへの使用を考慮してクロメからフロロタンニン類を抽出するには食品工業で利用されている溶剤であるエタノール水溶液を使用した。抽出試験には、水、エタノール、およびエタノール濃度２０〜８０（v／v）％の水溶液を使用し、原料のクロメと混合後撹拌することにより抽出を促進させた。撹拌時間と総ポリフェノールの抽出量については図３にみられるごとく、撹拌が長時間であるほど抽出量は増加し、２４時間後は全量が抽出されると考えられる。抽出用の溶媒のエタノール濃度については、エタノール濃度が４０（v／v）％以上でポリフェノールが抽出され、特に好ましくは、エタノール濃度４０〜８０（v／v）％の範囲であり、さらに好ましくはエタノール濃度５０〜７０（v／v）％の範囲を挙げることができる。
【００１６】
以後の抽出条件としては主に「７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出」によったが、これは７０（v／v）％濃度ＥｔＯＨの極性がフロロタンニン類の抽出に適した極性であること、高いＥｔＯＨ濃度により気温が高い時の微生物汚染の危険性を回避できること、抽出後、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着剤〔例えば三菱化学（株）製ダイヤイオン(登録商標) ＨＰ２０〕あるいはスチレン系合成吸着剤〔例えばダウ・ケミカル（株）製アンバーライトＸＡＤ(登録商標)２やアンバーライトＸＡＤ(登録商標)４〕を含むカラムで分画する前処理の濃縮がし易いことによる。抽出におけるクロメと抽出溶媒との比率は、撹拌機、容器の容量などの抽出条件に応じて変えることができるが、１：１０の比率によった。抽出温度は高いほど抽出率は向上するが目的物以外の物質が抽出され、抽出液の粘性の増加などを生じることがあるため室温（水温２０〜２５℃）での抽出が好ましい。
以下の説明において、「エタノール」を「ＥｔＯＨ」と略記し、「エタノール＊＊（v／v）％の水溶液」を「＊＊（v／v）％ＥｔＯＨ」と略記することがある。
【００１７】
[カラム分画]
上記の抽出方法によりクロメからのエタノール７０（v／v）％、および５０（v／v）％による抽出物をダイヤイオン（登録商標）ＨＰ２０〔三菱化学（株）製]を充填したカラムで分画した。溶離液として、水、２０〜８０（v／v）％のエタノール濃度の水溶液、および１００（v／v）％エタノールを使用したところ、総ポリフェノール量は水から６０（v／v）％エタノール濃度の分画で多量に溶離された。各濃度で溶出した液をＮＭＲにより分析したところ、各分画の含有組成は次のようになり、フロロタンニン類は２０〜６０（v／v）％のエタノールの分画に溶離することが判明した。
各画分の溶出物を次に記載する。
「水溶出」画分：無機塩を除き、ほぼ多糖類である。
「２０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  フロロタンニン類が出始める。不飽和脂肪酸の混入が多少認められる。
「４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  フロロタンニン類の排出の主流画分。多少の不飽和脂肪酸の混入が認められる。
「６０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  不飽和脂肪酸が主となるが、残余のフロロタンニン類が出切る。フロロタンニン類としての絶対量は「２０（v／v）％ＥｔＯＨ」画分と「４０（v／v）％ＥｔＯＨ」画分を合わせた量の５〜１０％程度と推定される。
「８０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  ほぼ不飽和脂肪酸のみで、フロロタンニン類は認められない。
「１００（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  ほぼ不飽和脂肪酸のみで、フロロタンニン類は認められない。
【００１８】
また、これまでの試験の結果，以下の事項についても明らかとなった。
（１）フォーリンチオカルト法（Folin-Ciocalteu法）で検出されるが、ＮＭＲでフロロタンニン類のピークが認められない画分は、フロロタンニン類とは異なる還元物質が含まれていることが推定される。
（２）「７０（v／v）％ＥｔＯＨ」を抽出の基本としているが、抽出ＥｔＯＨの濃度を比較したところでは「５０〜７０（v／v）％ＥｔＯＨ」がポリフェノール（フロロタンニン類）の抽出に適していることが判明した。
（３）「７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物のカラムでの分画」の結果、目的のフロロタンニン類は「２０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」〜「６０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」に高率に溶出されることが判明した。
（４）「５０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物のダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラム分画」の結果、目的のフロロタンニン類は「２０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」〜「６０（v／v）％
ＥｔＯＨ溶出画分」に高率に溶出されることが判明した。
【００１９】
[クロメ分画物のＵＶＡ又はＵＶＢ照射障害に対する保護効果（動物実験）]
本発明のクロメ分画物のＵＶＡ照射障害に対する保護効果を実証するために、ヘアレスマウスの皮膚に分画物をＵＶＡの増感剤である8-メトキシソラーレンとともに塗布してＵＶＡを照射した。その後の障害の程度を、皮膚厚及び色調により判断したところ、皮膚厚の変化はコントロール（エタノール水溶液）と比較して大きく減少するとともに、ポジティブコントロール（市販の日焼け止め剤）と同等の効果が認められた。また、照射７２時間後の色調の変化は、本発明のクロメ分画物は、コントロール群よりも変化量が少なく優れた効果を示した。光源をＵＶＢとし、クロメ分画物の濃度を変えて同様の動物実験をしたところ、濃度１％〜０．２５％の範囲で皮膚肥厚抑制効果が認められた。
２０〜６０（v／v）％エタノール水溶液で溶離したクロメポリフェノール（フロロタンニン類）を含有する画分にはＵＶＢによる皮膚肥厚の抑制作用が認められ、本発明のクロメ画分は、ＵＶＡおよびＵＶＢの照射障害に対する保護効果を示した。
【００２０】
[ＵＶＢ照射によるヒト皮膚繊維芽細胞ＴＩＧ−１１４の障害に対するクロメ抽出物の効果」
クロメＨＰ２０カラム分画物のＵＶＢ防御効果を検討した。ヒト皮膚繊維芽細胞ＴＩＧ
−１１４にＵＶＢを照射し、培養した後の細胞数を計測して防御効果を判定した結果、２０〜６０（v／v）％ＥｔＯＨにより溶離した画分にはＵＶＢ照射によるヒト皮膚繊維芽細胞障害抑制効果が認められた。上記動物実験および細胞実験の結果より、クロメなどの海藻類から抽出したフロロタンニン類が、皮膚外用剤として、ヒト皮膚の繊維芽細胞の増殖を促進するのに有効であり、創傷治癒剤、化粧品、浴用剤、繊維芽細胞用培地、食品などの構成原料として用いることができる有用な物質であることが判明した。
次に、本発明について具体例を挙げて説明するが、本発明が以下の実施例に限定されるものではない。  
【実施例１】
【００２１】
［フロロタンニン類含有抽出物の製造条件および評価方法］
以下の実施例におけるクロメからフロロタンニン類の抽出装置および評価方法の概要を示す。
１．抽出用装置
使用ビーカー：３Ｌ（直径１３０ｍｍ）
使用器材：スリーワンモーター  BLh300P（新東科学）を用いて撹拌羽根（φ１００ｍｍ，６枚羽根雪結晶型）で撹拌。
原料クロメ：熊本県天草漁業協同組合五和支所鬼池地区で養殖しているクロメ２０１０年収穫品（水分含量＝９．９％、固形分＝９０．１％、ポリフェノール含量（対固形分）＝３．４１％）
原料状態＝粗粉砕品（ガーデンシュレッダーで破砕した状態）
抽出後の濾過条件＝水流式の吸引濾過、１５０ｍｍφのＮｏ２の濾紙使用
（１）抽出溶媒＝ＥｔＯＨ濃度０〜１００％水溶液
（２）クロメ:溶媒の比率＝１：１０
（３）抽出条件＝7日間静置抽出または１〜２４時間撹拌
（４）抽出温度＝２０℃
【００２２】
２．評価方法
（１）抽出効率は「乾燥重量」により判断した。
（２）ポリフェノール含量は、「フロログルシノールを標準品としたフォーリンチオカルト法」を用い、７２０ｎｍの測定波長により求めた。
（３）組成の確認は、次の方法でＮＭＲ解析によった。
１）ＥｔＯＨ抽出物を乾燥後、エタノール−水混合液にて溶解。
２）ロータリーエバボレーターで溶媒留去後、真空にて一晩乾燥。
３）重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）に溶解する。
４）ブルカーバイオスピン（株）製核磁気共鳴装置BrukerAVANCEＩＩＩ500（１Ｈ共鳴周波数＝５００ＭＨｚ）により測定した。
５）各抽出物のＮＭＲチャートについて、次の２つの範囲の積分強度（面積強度）比により組成を確認した。大量に含まれる「多糖類のＣＨシグナル」を「１００．０」とした。この値は、直接化合物（群）間のモル比や重量比を示すものではないが相対的な量比の目安となる。
ａ）δ３．６〜４．０ｐｐｍ  多糖類のシグナル
ｂ）δ５．８〜６．９ｐｐｍ  フロロタンニン類の芳香族Ｈのシグナル
【実施例２】
【００２３】
［カラムによる分離条件の検討］
クロメのエタノール抽出液を濃縮しスチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着剤の一例である三菱化学（株）製ダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０を充填したカラムに吸着させた後エタノールで分画する条件の概要を示す。
１．抽出液の乾燥重量の測定法；
抽出液の一部（１００ｍｌ）をサンプリングし、その抽出液をロータリーエバボレーターで溶媒留去後、真空ポンプで２４時間以上乾燥させて秤量して乾燥重量を求めた。
２．ダイヤイオン(登録商標) ＨＰ２０カラムによる分画；
（１）クロメからのエタノール抽出液を、ダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０を充填したカラムで分画した。５０または７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出液をロータリーエバボレーターで濃縮し、その濃縮液をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０樹脂で分画するにあたりφ３８ｍｍ×６００ｍｍサイズのカラム（樹脂長は１１０ｍｍ）を使用した。
（２）乾燥重量は，分画液をロータリーエバボレーターで溶媒留去後、真空ポンプで２４時間以上乾燥させて秤量した結果から求めた。
（３）分画には０〜１００（v／v）％エタノール水溶液を使用した。
【実施例３】
【００２４】
［抽出時間］
本実施例では最適抽出時間を検討した。
試料はクロメ２００ｇ（固形分：１８０．２ｇ）をクロメ：７０（v／v）％ＥｔＯＨの比率＝１：１０で所定時間撹拌した後の抽出物の乾燥濃度、および抽出物に含まれる総ポリフェノール量を測定した。同時に７日間静置抽出試験を行った。乾燥重量については図２に、総ポリフェノール量については図３に試験結果を示す。
その結果、原料のクロメのポリフェノール含量（対固形分３．４１％）と比べると、「７日間静置条件」と「２４時間撹拌条件」でほぼ全量のポリフェノールが抽出されたものと推定される。各抽出物にポリフェノールが含まれていることはＮＭＲで確認できた。撹拌抽出条件としては「少なくとも１時間以上，望ましくは３時間以上」の抽出時間が必要であることが判明した。
【実施例４】
【００２５】
［抽出ＥｔＯＨの濃度］
本実施例では、抽出に最適なＥｔＯＨ濃度を検討した。試料はクロメ２００ｇ（固形分＝１８０．２ｇ）を、クロメ：ＥｔＯＨ溶液の比率＝１：１０で所定時間撹拌した後の抽出物の乾燥濃度、および抽出物に含まれる総ポリフェノール量を測定した。「０（v／v）％ ＥｔＯＨ」、「３０（v／v）％ＥｔＯＨ」の抽出では、抽出液の粘性が高いため、濾紙による濾過ができなかったが、他の手段による濾過は可能であると判断される。乾燥重量については図４に、総ポリフェノール量については図５に試験結果を示す。図４，５から明らかなように「７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出」よりも「５０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出」の方がポリフェノールを多く抽出できた。
【実施例５】
【００２６】
［ダイヤイオン（登録商標） ＨＰ２０カラムによる吸着画分］
サンプル「クロメからの７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出液」〔クロメ２１６．７ｇ相当（固形分＝１９５．２ｇ）]をロータリーエバポレータで濃縮し、この濃縮液をダイヤイオン(登録商標) ＨＰ２０カラムに吸着させ、０〜１００（v／v）％のＥｔＯＨ水溶液で分画した。各分画の乾燥重量を図６に示す。各分画中の総ポリフェノール量を測定し図７に示す。「水溶出画分」はポリフェノールの含有比率は低いが乾燥重量が多い（配分が多い）ためポリフェノールの総量は多くなっている。
「８０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」と「１００（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」ではフォーリンチオカルト法で少量ポリフェノールが検出されているが、ＮＭＲチャート上でフロロタンニン類の芳香族Ｈのシグナルが認められないことから，別の還元物質が含まれていると推定される。フォーリンチオカルト法で検出されるポリフェノール総量は
「２．１５％」であり，原料クロメのポリフェノール含量（対固形分３．４１％）に比べると約６３％の回収率である。
また、条件検討を行なった「６ｈｒ撹拌抽出」条件での「回収率＝２．９％」と比べると約７４％の回収率である。フロロタンニン類が含まれていると推定される「２０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」、「４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」、「６０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」のポリフェノール含量を合計すると，「２８７１．５ｍｇ」で対「原料固形分」比率は「１．４７％」となる。原料クロメのポリフェノール含量（対固形分３．４１％）に比べると約４３％の回収率となる。また、条件検討を行なった「６ｈｒ撹拌抽出」条件での「回収率＝２．９％」と比べると約５１％の回収率である。
【実施例６】
【００２７】
［ダイヤイオン（登録商標） ＨＰ２０カラムにより分画した生成物の組成］
クロメを７０（v／v）％ＥｔＯＨで抽出した抽出物を分画した各分画物（実施例５）の組成をＮＭＲチャートの次のピークで比較、検討した。
（１）δ３．６〜４．０ｐｐｍ：多糖類のＣＨシグナル
（２）δ５．３〜５．５ｐｐｍ：不飽和脂肪酸のオレフィンＨのシグナル
（３）δ５．８〜６．９ｐｐｍ：フロロタンニン類の芳香族Ｈのシグナル
各画分のＮＭＲチャートの解析結果は次の通りである。
「水溶出」画分：  無機塩を除き、ほぼ多糖類である。
「２０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  フロロタンニン類が出始める。不飽和脂肪酸の混入が多少認められる。
「４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  フロロタンニン類の排出の主流画分。多少の不飽和脂肪酸の混入が認められる。
「６０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  不飽和脂肪酸が主となるが、残余のフロロタンニン類が出切る。フロロタンニン類としての絶対量は「２０（v／v）％ＥｔＯＨ」画分と「４０（v／v）％ＥｔＯＨ」画分を合わせた量の５〜１０％程度と推定される。
「８０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  ほぼ不飽和脂肪酸のみで、フロロタンニン類は認められない。
「１００（v／v）％ＥｔＯＨ溶出」画分：  ほぼ不飽和脂肪酸のみで、フロロタンニン類は認められない。
【実施例７】
【００２８】
実施例５、６と同様の試験を５０（v／v）％ＥｔＯＨ 抽出物のダイヤイオン（登録商標）ＨＰ２０カラム分画物について行ったが、実施例６と同様の結果が得られた。
【実施例８】
【００２９】
［クロメ分画物のＵＶＡ照射障害に対する保護効果の動物試験概要］
本実施例では、クロメ７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物をダイヤイオン（登録商標）ＨＰ２０カラムにて分画した４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物について、ＵＶＡ照射短期モデルでＵＶＡ照射障害保護効果を確認するための試験条件の概要を示した（参考文献：非特許文献１，２）。
１．試薬・検体
（１）クロメ抽出物：  乾燥クロメ３０ｋｇから７０（v／v）％ＥｔＯＨ １２０Lで7日間静置抽出した抽出物。
（２）クロメ分画物：  クロメ抽出物をダイヤイオン（登録商標）ＨＰ２０カラムに吸着させた後、「４０（v／v）％ＥｔＯＨ」で溶出させた分画物。
（３）ソラーレン溶液：８−メトキシソラーレン〔８−ＭＯＰＳ：東京化成工業（株）製]を0.1%でEtOHに溶解。ＵＶＡによる障害を増幅する増感剤として用いる。
（４）コントロール溶液：  ６０（v／v）％ＥｔＯＨ。
（５）ＫＰ４０ 溶液：  ４０（v／v）％ＥｔＯＨ 溶出分画物を２．５％になるように６０（v／v）％ＥｔＯＨに溶解する。
（６）サンスクリーン剤：  市販日焼け止め（ＳＰＦ ２５、ＰＡ++）。皮膚に当たる紫外線をブロックする効果がある。ポジティブコントロールとして使用。
（７）ＵＶＡ：  三共電機 GL-20BLB×５本を平行に並べて照射。
２．試験群
（１）コントロール群：  コントロール溶液を使用。
（２）ポジティブコントロール 群：  サンスクリーン剤を使用。
（３）ＫＰ-４０ 群：  ＫＰ-４０溶液を使用。
【００３０】
３．試験方法   
（１）ヘアレスマウスを１８頭用意する。
（２）すべてのマウスに耳パンチでラベルし、背部皮膚厚をマイクロメーターで測定する。
（３）皮膚厚の平均が均等になるように３群に分ける（コントロール群, ポジティブコントロール群, ＫＰ−４０群）
（４）マウスの背中をセロテープ（登録商標）で５回ゆっくりストリッピングする。 
（５）マウスの背部に0.1%8-MOP/EtOHを50microL滴下し、ドライヤーで乾燥させる。
（６）（４）-（５）を２度繰り返す。
（７）３０分後コントロール群マウス背部にハトメ（15mm径）と朱肉で印をし、印内に６０（v／v）％ＥｔＯＨを２５microL滴下して広げ、ドライヤーで乾かす。
（８）ポジティブコントロール群マウスも同様にハトメで印をつけ、中に市販日焼け止めを塗る（ミクロスパーテル1杯目安）。
（９）ＫＰ−４０群マウスにもハトメで印をし、印内にKP40を２５microL滴下して拡げ、ドライヤーで乾かす。 
（１０）マウス尾部をガムテープでケージに固定し、さらに後肢を含む臀部と前肢を含む後頭部をビニールテープで固定する。プラスチックケージに４頭×３列＝１２頭並べる。
（１１）ＵＶＡを２時間照射する。
（１２）紫外線照射直後、および２０時間後に背部の印内の皮膚厚をマイクロメーターで測定する。
（１３）（４）−（１０）を再度行い、今度は４時間照射する。
（１４）紫外線照射直後、および２０時間後に背部の印内の皮膚厚をマイクロメーターで測定する。
【００３１】
４．試験結果 
ＫＰ−４０によるＵＶＡ照射障害に対する保護効果の動物試験の結果を図８に示す。
コントロール群はＵＶＡ照射により皮膚厚が増加し、ＵＶＡ照射による皮膚障害を示した。ポジティブコントロール群は皮膚厚のＵＶＡによる肥厚を抑えることが判明した。ＫＰ−４０群はポジティブコントロール群よりもさらに強くＵＶＡによる皮膚の肥厚を抑制することが判明した。４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物はＮＭＲ分析によりポリフェノールが主成分であることから、ＵＶＡ照射障害保護効果はクロメポリフェノール（フロロタンニン類）によるものと推察される。
【実施例９】
【００３２】
［クロメ分画物のＵＶＢ照射障害に対する保護効果の動物試験概要］ 
本実施例では、クロメ７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物をダイヤイオン（登録商標）ＨＰ２０カラムにて分画した、４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物について、ＵＶＢ照射短期モデルでＵＶＢ照射障害防護効果を確認するための試験条件の概要を示した（参考文献：非特許文献１，２）。
１．試薬・検体
（１）クロメ抽出物：  乾燥クロメ３０ｋｇから７０（v／v）％ＥｔＯＨ １２０Lで7日間静置抽出した抽出物。
（２）クロメ分画物：  クロメ抽出物をダイヤイオン（登録商標） ＨＰ２０カラムに吸着させた後、「４０（v／v）％  ＥｔＯＨ」で溶出させた分画物。
（３）親水軟膏：  局方親水軟膏「ホエイ」（ニプロファーマ製）  
（４）コントロール軟膏：  水を４倍量の親水軟膏に加えて、乳鉢でよく撹拌した。
（５）ＫＰ−４０ 軟膏：  ４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出分画物を１０％になるように６０（v／v）％ＥｔＯＨに溶解し、４倍量の親水軟膏に加えて，乳鉢でよく撹拌した（最終濃度＝２％ ＫＰ−４０）。  
（６）サンスクリーン剤：  市販日焼け止め（ＳＰＦ ２５、ＰＡ++）。皮膚に当たる紫外線をブロックする効果がある。ポジティブコントロールとして使用。
（７）ＵＶＢ：  三共電機 GL-20SE×４本を，SCHOTT WG２９５相当のガラスフィルターで低波長成分をカットしたものを照射。
２．試験群   
（１）コントロール群：  コントロール軟膏を使用。  
（２）ポジティブコントロール群：  サンスクリーン剤を使用。  
（３）ＫＰ-４０ 群：  ＫＰ-４０ 軟膏を使用。
【００３３】
３．試験方法
（１）へアレスマウスＨＯＳ：  ＨＲ−１（メス）（８週令）を１８頭用意する。
（２）背部皮膚の色調を分光測色計（コニカミノルタ CR-400 ）で測定し、ａ*値（赤色度）が均一になるように３群（１群６頭）に分ける。
（３）各群背部にそれぞれ コントロール軟膏、サンスクリーン剤、ＫＰ−４０ 軟膏を約１０ｍｇ／ｃｍ２ 塗布する。
（４）ＵＶＢを２００ｍＪ／ｃｍ２照射する。
（５）照射直後に再度 各群の軟膏を塗布する。
（６）照射４８時間後，７２時間後にマイクロメーターで皮膚厚を計り，浮腫の指標とする。
（７） 照射７２時間後に分光測色計で背部皮膚３ヶ所の色調を測定し，ａ*値を算出する。
【００３４】
４．試験結果 
ＫＰ−４０によるＵＶＢ照射障害に対する保護効果の動物試験の結果を図９および図
１０に示す。コントロール群はＵＶＢ照射により皮膚厚が増加し、同時に赤みを増し、
ＵＶＢ照射による皮膚障害を示した。ポジティブコントロール群は皮膚厚、色調のいずれもＵＶＢによる障害を抑えることが判明した。ＫＰ−４０軟膏の２．０％濃度群ではポジティブコントロール群と同等の障害抑制効果が認められた。
さらにＫＰ−４０軟膏の有効成分濃度を、１．０％、０．２５％、０．１％、
０．０２５％、０．０１％と変化させてＵＶＢ照射による２４〜７２時間後の皮膚肥厚を測定したところ、皮膚厚は全郡ともに照射４８時間後に最大値を示した。４８時間後の皮膚厚を比較すると、図１１に示す如く、「ＫＰ−４０」の「１％群」と「０．２５％群」に皮膚肥厚抑制作用が認められた。
また、通常、ＵＶ照射障害保護効果の判断に使用される４８時間後の皮膚肥厚を対比すると、「２０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」、「４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」、「６０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出画分」軟膏群は、「ＵＶ（＋）コントロール」群に比べて有意に皮膚厚の上昇（浮腫）を抑制していることが認められた（図１２）。これらの画分はポリフェノールの含有が認められているところから、ＵＶＢ照射障害保護効果はクロメポリフェノール（フロロタンニン類）によるものと推察される。
【実施例１０】
【００３５】
［ＵＶＢ照射によるヒト皮膚繊維芽細胞ＴＩＧ−１１４の障害に対するクロメＨＰ−２０分画物の効果］
クロメ７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物をＨＰ−２０カラムにて分画した各分画物についてヒト繊維芽細胞ＴＩＧ−１１４のＵＶＢ照射による障害に対する保護効果を検討した（参考文献：非特許文献３〜５）。
１．試薬・検体
（１）クロメ抽出物：  乾燥クロメ３０ｋｇから７０（v／v）％ＥｔＯＨで６時間撹拌抽出した抽出物
（２）クロメ分画物：  クロメ抽出物からＨＰ−２０カラムに吸着させた後、「水」、「２０（v／v）％ＥｔＯＨ」、「４０％（v／v）ＥｔＯＨ」、「６０（v／v）％ＥｔＯＨ」、「８０（v／v）％ＥｔＯＨ」、「１００（v／v）％ＥｔＯＨ」で溶出させた分画物。
（３）ヒト繊維芽細胞ＴＩＧ−１１４：  ヒューマンサイエンス研究資源バンクから入手（ＪＣＲＢ０５３４）し、１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地で培養。
（４）ＵＶＢ：  三共電機GL−１５SE ×3本を平行に並べて照射。
２．試験群
（１）コントロール群：  クロメ抽出物も分画物も含まないＰＢＳ培地に混合。
（２）クロメ分画物群：  「水」、「２０（v／v）％ＥｔＯＨ」、「４０（v／v）％ＥｔＯＨ」、「６０（v／v）％ＥｔＯＨ」分画物は「２００μｇ／ｍｌ、４００μｇ／ｍｌ」の濃度で含むＰＢＳ培地に混合。「８０％ＥｔＯＨ」、「１００（v／v）％ＥｔＯＨ」分画物は「１００μｇ／ｍｌ、２００μｇ／ｍｌ」の濃度で含むＰＢＳ培地に混合。
【００３６】
３．試験方法
（１）細胞濃度を１×１０５Cells/ｍｌに調節する。
（２）９６ウエルマイクロブレートに１００μｌ／ｗｅｌｌ（１０，０００ｃｅｌｌｓ／
ｗｅｌｌ）まく。
（３）３７℃で２４時間培養する。（１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地）
（４）培地を各試験群の検体を含むＰＢＳ（−）培地１００μｌに交換し，ＵＶＢを
４００ｍＪ／ｃｍ２照射する。
（５）７２時間後に１０％のCell Counting Kit-8（和光純薬(株)製）を加えて３７度、５％ＣＯ２インキュベーターで１．５時間インキュべ−卜し、４５０ｎｍの吸光度を測定する事により繊維芽細胞の数を測定する。
【００３７】
４．結果
７２時間培養後の細胞数を「∪ＶＢ（−）時の細胞数」に対する割合（ＵＶＢ（＋）／ＵＶＢ（−））で表示し図１３に結果を示す。
クロメのＨＰ−２０分画物のうち、「２０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物」、「４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物」、「６０％（v／v）ＥｔＯＨ溶出物の低濃度群」には「∪ＶＢ照射によるヒト皮膚繊維芽細胞の障害に対する保護作用」が認められた。これらの画分はポリフェノール含量が高い画分であり、また動物試験の結果とも共通する結果が得られた。
クロメのダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０分画物のうち，「水溶出物」、「８０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物」、「１００（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物」には、「ＵＶＢ照射によるヒト皮膚繊維芽細胞の障害に対する保護作用」は認められなかった。「６０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物」、「８０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物」、「１００（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物」では濃度が高くなると細胞数が減る傾向が認められる。これらの画分には脂肪酸が含まれているので，脂肪酸による細胞障害が発生している可能性がある。
【実施例１１】
【００３８】
［ダイヤイオン（登録商標） ＨＰ２０カラムにより分画して得た４０（v／v）％ＥｔＯＨ分画物に含まれる化合物単体］
クロメ７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物をダイヤイオン（登録商標）ＨＰ２０カラムにて分画して得た４０（v／v）％ＥｔＯＨ分画物から次の工程で１９種類の既知及び新規化合物単体を得た。
【００３９】
４０（v／v）％ＥｔＯＨ分画物（６３．４ｇ）についてセファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（ＧＥヘルスケア・ジャパン（株）製，Φ５×２２ｃｍ）を４回に分けて行なった。メタノール，メタノール／イソプロパノール５／１液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)９画分、(2)８画分、(3)８画分、(4)９画分を得た。NMRが類似した(1)第4画分、(2)第4画分、(3)第6画分、(4)第5画分をひとまとめにし（５．９６ｇ）、さらにコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（ナカライテクス（株）製，Φ５×１５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１５／８５液５００ｍＬ、2／8液４００ｍＬ、3／7液４００ｍＬ、4／6液４００ｍＬ、5／5液４００ｍＬ、メタノール４００ｍＬにより分離して9画分を得た。得られた第1画分（１８７．６ｍｇ）を再びコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ２×１５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が1／9液６０ｍＬ、15／85液１０ｍＬ、3／7液１０ｍＬ、4／6液３０ｍＬ、メタノール５０ｍＬにより分離して6画分を得た。
得られた第2画分（２３．８ｍｇ）について、ユニソンＵＫ−Ｃ１８カラム（インタクト（株）製、１０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル８５／１５液を用い、流速２ｍＬ／分で行い、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「８，８’−バイエコール−７−サルフェート（8,8'-bieckol-7-sulfate），溶出時間１２．８分」（図１−１のＮｏ．１）を１０．３ｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C36H21O21SNa （高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：844.59  （ESI-MS法により測定した（M-H）−=821.0296）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.95（s、1H）、6.20（s、1H）、6.17（s、1H）、6.14（s、1H）、5.98（d、J＝1.84Hz、2H）、5.97（d、J＝1.84Hz、2H）、5.95（t、J＝1.84Hz、1H）、5.95（t、J＝1.84Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：160.3、160.3、158.7（2C）、158.7（2C）、151.3、147.2、146.0、145.7、144.3、144.0、141.8、141.7、141.4、141.0、137.1、136.9、126.6、124.0、123.3、123.1、122.5、122.5、109.9、105.3、99.4、98.5、98.1、96.3、96.3、94.9、93.9（2C）、93.9（2C）
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４０】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／１液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。NMRが類似した(1)第3画分、(2)第5画分、(3)第5画分、(4)第4画分をひとまとめにし（２．１５ｇ）、さらにコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ４×１５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行った。メタノール／水が２／８液２００ｍＬ、２５／７５液２００ｍＬ、３／７液２００ｍＬ、4／6液２００ｍＬ、5／5液２００ｍＬ、6／4液２００ｍＬ、7／3液２００ｍＬ、メタノール２００ｍＬにより分離して１３画分を得た。得られた第2画分（１２６．６ｍｇ）を再びコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ１．５×１１．５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１５／８５液３０ｍＬ、２／８液３０ｍＬ、３／７液３０ｍＬ、メタノール３０ｍＬにより分離して8画分を得た。
得られた第7画分（４８．８ｍｇ）について、ユニソンＵＫ−フェニルカラム（１０×２５０ｍｍ）カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（８／２）液を用い、流速２ｍＬ／分で行い、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「８，８’−バイエコール（8,8'-bieckol），溶出時間２８．８分）」（図１−１のＮｏ．２）を３３．５ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C36H22O18（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：742.55（ESI-MS法により測定した（M-H）−=741.0722）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.19（s、2H）、6.14（s、2H）、5.98（d、J＝1.88Hz、4H）、5.96（t、J＝1.88Hz、2H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：160.4（2C）、158.8（4C）、151.8（2C）、145.9（2C）、144.6（2C）、141.9（2C）、141.3（2C）、137.3（2C）、123.4（2C）、123.1（2C）、122.5（2C）、104.4（2C）、98.2（2C）、96.3（2C）、94.0（4C）、93.9（2C）
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４１】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）カラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第3溶出分画分（３ｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１２ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液２５０ｍＬ、2／8液７００ｍＬ、3／7液７００ｍＬ、4／6液３００ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、5画分を得た。メタノール分画（４６８ｍｇ）に「ダイエコール（dieckol）」（図１−１のＮｏ．３）を得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C36H22O18（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：742.55（ESI−MS法により測定した（M＋Na）＋＝765.0704）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.21（s、1H）、6.19（s、1H）、6.15（s、2H）、6.12（d、J＝2.9 Hz、1H）、6.11（d、J＝2.9 Hz、1H）、6.04（d、J＝2.7 Hz、1H）、6.01（d、J＝2.7 Hz、1H）、5.98（s、3H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125 MHz（溶媒DMSO-d6））：
（ppm）：160.3、158.8（2C）、155.9、154.2、153.0、151.1（2C）、146.1、146.0、145.9、145.9、142.6、142.4、141.9、141.8、137.2、137.0、124.2、124.0、123.2、123.1、122.6、122.3、122.2、98.5、98.3、98.2、98.0、96.2、94.5（2C）、93.8、93.6（2C）、93.5
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性
【００４２】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）を行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第1溶出分画分（１０ｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１３ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液６５０ｍＬ、2／8液６００ｍＬ、3／7液６００ｍＬ、4／6液６００ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、5画分を得た。得られた第4溶出分画分（１０２ｍｇ）を更にユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２５０×２０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてアセトニトリル／水＝１５／８５液を用い流速１０．０ｍＬ／分で行い溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。精製操作を1回行い、「ジオキシノデヒドロエコール（dioxinodehydroeckol），溶出時間３２．８分）」（図１−１のＮｏ．４）を３６．８ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C18H10O9（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：370.27（ESI−MS法により測定した（M＋Na）＋＝393.0229）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.19（s、1H）、6.06（d、J＝2.8 Hz、1H）、6.05（d、J＝2.8 Hz、1H）、6.03（d、J＝2.8 Hz、1H）、6.00（d、J＝2.8 Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100 MHz（溶媒DMSO-d6））：
（ppm）：153.3、153.0、146.1、145.9、142.1、141.7、140.1、137.2、131.6、125.9、122.7、122.5、122.3、98.9、98.8、97.6、93.9、93.9 
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４３】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）を行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第3溶出分画分（３ｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１２ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液２５０ｍＬ、2／8液７００ｍＬ、3／7液７００ｍＬ、4／6液３００ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、5画分を得た。得られた第4溶出分画分（８２８ｍｇ）を更にコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３ｃｍ×１３ｃｍ）によるODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液１８０ｍＬ、2／8液１８０ｍＬ、3／7液４２０ｍＬ、4／6液１５０ｍＬ、５／５液１５０ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、6画分を得た。得られた第3溶出画分（８０ｍｇ）をユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２５０×２０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてアセトニトリル／水＝２５／７５液を用い流速１０．０ｍＬ／分で行い溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。精製操作を１回行ない、「フロロフコフロエコール−Ａ（phlorofucofuroeckol−A），溶出時間５８．４分」（図１−１のＮｏ．５）を７．９ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C30H18O14（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：602.46（ESI−MS法により測定した（M−H）−＝601.0615）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.68（s、1H）、6.45（s、1H）、6.31（s、1H）、6.01（d、J＝2.2 Hz、2H）、5.99（t、J＝2.2 Hz、1H）、5.97（t、J＝2.2 Hz、1H）、5.93（d、J＝2.2 Hz、2H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125 MHz（溶媒DMSO-d6））：
（ppm）：160.3、160.1、159.1（2C）、158.9（2C）、150.9、150.5、149.6、147.0、146.6、144.8、142.1、136.9、134.1、126.5、122.7、122.6、120.2、103.5、103.3、99.2、98.4、96.6、96.5、94.9、93.8（2C）、93.6（2C） 
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４４】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）を行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第1溶出分画分（１０ｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１３ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液６５０ｍＬ、2／8液６００ｍＬ、3／7液６００ｍＬ、4／6液６００ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、5画分を得た。得られた第1溶出分画分（２．９ｇ）を更にコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ４ｃｍ×１２ｃｍ）によるODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。水６００ｍＬ、メタノール／水が1／9液３５０ｍＬ、2／8液３５０ｍＬ、3／7液３００ｍＬ、5／5液３００ｍＬ、メタノール３００ｍＬにより分離して、6画分を得た。得られた第2溶出分画分（５６５ｍｇ）を更にコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３ｃｍ×１３ｃｍ）によるODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。水３００ｍＬ、メタノール／水が５／９５液９０ｍＬ、1／9液９０ｍＬ、１５／８５液９０ｍＬ、2／8液６０ｍＬ、3／7液９０ｍＬ、３５／６５液９０ｍＬ、4／6液９０ｍＬ、2／8液６０ｍＬにより分離して、9画分を得た。得られた第2溶出画分（１２２ｍｇ）をユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２５０×２０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてアセトニトリル／水＝１５／８５液を用い流速９．０ｍＬ／分で行い溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。精製操作を1回行い、「２−フロロエコール（2−phloroeckol），溶出時間４１．６分」（図１−１のＮｏ．６）を３７．２ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C24H16O12（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：496.38（ESI−MS法により測定した（M＋Na）＋＝519.0374）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.12（d、J＝2.2 Hz、2H）、6.02（t、d＝2.2 Hz、1H）、6.01（d、J＝2.5 Hz、1H）、6.00（d、J＝2.5 Hz、2H）、5.95（s、2H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100 MHz（溶媒DMSO-d6））：
（ppm）：160.4、158.6（2C）、154.7、153.0、151.0（2C）、147.6、146.0、142.0、141.5、137.3、124.9、122.9、122.7、121.8、98.7、96.4、96.2、94.9（2C）、94.2（2C）、93.9
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４５】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）を行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第1溶出分画分（１０ｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１３ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液６５０ｍＬ、2／8液６００ｍＬ、3／7液６００ｍＬ、4／6液６００ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、5画分を得た。得られた第1溶出分画分（２．９ｇ）を更にコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ４ｃｍ×１２ｃｍ）によるODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。水６００ｍＬ、メタノール／水が1／9液３５０ｍＬ、2／8液３５０ｍＬ、3／7液３００ｍＬ、5／5液３００ｍＬ、メタノール３００ｍＬにより分離して、6画分を得た。得られた第2溶出分画分（５６５ｍｇ）を更にコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３ｃｍ×１３ｃｍ）によるODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。水３００ｍＬ、メタノール／水が５／９５液９０ｍＬ、1／9液９０ｍＬ、１５／８５液９０ｍＬ、2／8液６０ｍＬ、3／7液９０ｍＬ、３５／６５液９０ｍＬ、4／6液９０ｍＬ、2／8液６０ｍＬにより分離して、9画分を得た。得られた第2溶出画分（１２２ｍｇ）をユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２５０×２０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてアセトニトリル／水＝１５／８５液を用い流速９．０ｍＬ／分で行い溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。精製操作を1回行い、「エコール（eckol），溶出時間３６．０分」（図１−１のＮｏ．７）を１８．０ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C18H12O9（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：372.28（ESI−MS法により測定した（M−H）−＝371.0410）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.20（s、1H）、6.01（s、2H）、6.00（s、3H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125 MHz（溶媒DMSO-d6））：
（ppm）：160.5、158.9（2C）、153.1、146.2、146.1、142.7、142.0、137.3、123.3、122.8、122.4、98.6、98.3、96.4、94.0、93.9（2C）
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４６】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。4回目の第2画分（３．９７ｇ）をコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１１ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１／９液４００ｍL、２／８液３００ｍL、３／７液３００ｍL、４／６液３００ｍL、５／５液２４０ｍL、メタノール３００ｍLにより分離して１２画分を得た。
得られた第2画分（１０５．８ｍｇ）について、ユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（８８／１２）液を用い、流速１０ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「フコジフロレトールG（fucodiphlorethol G），溶出時間１５．６分」（図１−１のＮｏ．８）を３．９ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C24H18O12（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：498.39（ESI-MS法により測定した（M-H）−=497.0726）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6,16（d、J＝2.32Hz、1H）、6.10（s、2H）、6.06（d、J＝2.32Hz、1H）、6.05（d、J＝2.76Hz、1H）、5.95（s、2H）、5.73（d、J＝2.76Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：157.8、157.7、157.2、157.1（2C）、156.5、154.6、154.5、153.0、151.1（2C）、150.3、123.3、121.9、101.6、101.0、96.8、95.7、94.7（2C）、94.7（2C）、93.3、92.3
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４７】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）を行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第３溶出分画分（３ｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１２ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液２５０ｍＬ、2／8液７００ｍＬ、3／7液７００ｍＬ、4／6液３００ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、5画分を得た。得られた第４溶出分画分（８２８ｍｇ）を更にコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３ｃｍ×１３ｃｍ）によるODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が1／9液１８０ｍＬ、2／8液１８０ｍＬ、3／7液４２０ｍＬ、４／６液１５０ｍＬ，5／5液１５０ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、6画分を得た。得られた第３溶出分画分（８０ｍｇ）をユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２５０×２０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてアセトニトリル／水＝２５／７５液を用い流速１０．０ｍＬ／分で行い溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。精製操作を1回行い、「フロロフコフロエコール−B（phlorofucofuroeckol−B），溶出時間５２．０分」（図１−２のＮｏ．９）を７．９ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C30H18O14（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：602.46（ESI−MS法により測定した（M−H）−＝601.0618）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.71（s、1H）、6.42（s、1H）、6.21（s、1H）、6.02（d、J＝2.2 Hz、2H）、5.99（t、J＝2.2 Hz、1H）、5.97（t、J＝2.2 Hz、1H）、5.92（d、J＝2.2 Hz、2H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：162.0、161.8、160.2（2C）、160.1（2C）、152.6、151.5、150.9、147.6、147.6、143.4、143.2、138.7、138.3、127.8、125.5、124.6、122.5、109.8、106.9、99.7、99.3、97.7、97.6、95.5（2C）、95.3（2C）、92.6 
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４８】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）を行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第６溶出分画分（７２５ｍｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３ｃｍ×１２ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が2／8液３００ｍＬ、3／7液６００ｍＬ、５／５液３６０ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、４画分を得た。得られた第３溶出分画分（９６ｍｇ）をユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２５０×２０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてアセトニトリル／水＝２５／７５液を用い流速１０．０ｍＬ／分で行ない溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。精製操作を1回行い、「Ｎｏ．１０（化合物名未確定の新規化合物），溶出時間６９．６分」（図１−２のＮｏ．１０）を１８．８ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C48H30O23（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：974.74（ESI−MS法により測定した（M＋Na）＋＝997.1077）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.68（s、1H）、6.45（s、1H）、6.30（s、1H）、6.25（d、J＝2.3 Hz、1H）、6.23（d、J＝2.2 Hz、1H）、6.17（d、J＝2.2 Hz、1H）、6.09（d、J＝2.8 Hz、1H）、5.98（s、2H）、5.96（t、J＝2.0 Hz、1H）、5.95（d、J＝2.3 Hz、1H）、5.93（d、J＝2.0 Hz、2H）5.79（d、J＝2.8 Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：161.7、160.3（2C）、159.5、159.5、159.0、159.0、157.5、156.9、156.4、156.4、153.7、153.3、152.1（2C）、151.8、151.6、151.1、148.1、147.6、145.7、144.2、138.0、135.1、127.6、125.0、124.9、124.3、124.2、122.3、105.2、105.2、102.6、102.4、99.9、99.3、98.7、98.4、97.7、97.6、96.4（2C）、96.0、95.3（2C）、95.2、94.4、94.2
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００４９】
４０％エタノール抽出物（１５ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２１ｃｍ）を行なった。メタノール７００ｍＬ、以降メタノール／2−プロパノールが5／1液５６０ｍＬ、4／1液５６０ｍＬ、2／1液５６０ｍＬ、2−プロパノール５６０ｍＬ、酢酸エチル５００ｍＬ、ジメチルスルホキシド４００ｍＬで順次溶出分離し、7画分を得た。この操作をあと5回繰り返した。
第６溶出分画分（７２５ｍｇ）について、コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３ｃｍ×１２ｃｍ）を用いたODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が2／8液３００ｍＬ、3／7液６００ｍＬ、５／５液３６０ｍＬ、メタノール５００ｍＬにより分離して、４画分を得た。得られた第３溶出分画分（９６ｍｇ）をユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２５０×２０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてアセトニトリル／水＝２５／７５液を用い流速１０．０ｍＬ／分で行い溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。精製操作を1回行い、「Ｎｏ．１１（化合物名未確定の新規化合物），溶出時間５６．０分」（図１−２のＮｏ．１１）を４７．３ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C48H30O23（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：974.74（ESI−MS法により測定した（M＋Na）＋＝997.1077）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：6.73（s、1H）、6.43（s、1H）、6.27（d、J＝2.5 Hz、1H）、6.25（d、J＝2.2 Hz、1H）、6.22（s、1H）、6.20（d、J＝2.2 Hz、1H）、6.11（d、J＝2.7 Hz、1H）、6.05（s、2H）、5.96（t、J＝2.0 Hz、1H）、5.95（d、J＝2.5 Hz、1H）、5.93（d、J＝2.0 Hz、2H）5.81（d、J＝2.7 Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125 MHz（溶媒CD3OD））：
（ppm）：161.8、160.0（2C）、159.6、159.5、159.1、158.9、157.4、156.8、156.5、156.3、153.7、152.6、152.1（2C）、151.9、151.5、150.8、148.2、146.9、143.7、142.8、138.0、137.9、127.3、125.3、124.7、124.0（2C）、122.2、109.8、106.3、102.6、102.5、99.6、99.5、98.6、98.4、97.7、97.6、96.5（2C）、95.3（2C）、95.1、94.3（2C）、92.8
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５０】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。１回目の第2画分（５．７４ｇ）をコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１０ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１／９液３００ｍL、２／８液２００ｍL、３／７液４００ｍL、５／５液４００ｍL、メタノール４００ｍLにより分離して７画分を得た。得られた第１画分
（９３２．８ｍｇ）をコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３．５×１１ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１／９液３００ｍL、１３／８７液２００ｍL、３／７液１００ｍL、４／６液１００ｍL、メタノール１００ｍLにより分離して７画分を得た。
得られた第2画分（６３．４ｍｇ）について、ユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（９／１）液を用い、流速１０ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「トリフロレトールA（Triphlorethol A），溶出時間２０．４分」（図１−２のＮｏ．１２）を３．８ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C18H14O9（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：374.30（ESI-MS法により測定した（M-H）−=373.0573）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.10（d、J＝2.76Hz、1H）、6.05（d、J＝2.13Hz、2H）、5.98（t、J＝2.13Hz、1H）、5.94（s、2H）、5.80（d、J＝2.76Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：160.7、158.6（2C）、154.5、154.2、153.0、151.1、151.1（2C）、123.2、122.2、96.1、95.7、94.7（2C）、94.0（2C）、92.7
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５１】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。３回目の第2画分（７７９．２ｍｇ）をコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ２．５ｃｍ×１２ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１／９液２００ｍL、２／８液１００ｍL、３／７液１００ｍL、４／６液１００ｍL、メタノール１００ｍLにより分離して１１画分を得た。
得られた第９画分（９３．６ｍｇ）について、ユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（１０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（８５／１５）液を用い、流速２ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「ジオキシノデヒドロエコール−１１−サルフェート（dioxinodehydroeckol-11-sulfate）、溶出時間４８．０分」（図１−２のＮｏ．１３）を１４．０ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C18H9O12SNa-（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：472.31（ESI-MS法により測定した（M-H）−=448.9801）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.57（d、J＝2.68Hz、1H）、6.52（d、J＝2.68Hz、1H）、6.21（s、1H）、6.05（d、J＝2.74Hz、1H）、6.03（d、J＝2.74Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：153.0、149.0、145.9、145.4、141.6、141.3、140.1、137.2、131.3、125.9、125.2、122.6、122.4、104.1、99.2、98.8、97.9、93.9
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５２】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。NMRが類似した(1)第３画分、(2)第５画分、(3)第５画分、(4)第４画分をひとまとめにし（２．１５ｇ）、さらにコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ４ｃｍ×１５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が２／８液２００ｍL、２．５／７．５液２００ｍL、３／７液２００ｍL、４／６液２００ｍL、５／５液２００ｍL、６／４液２００ｍL、７／３液２００ｍL、メタノール２００ｍLにより分離して１３画分を得た。
得られた第９画分（１２．１ｍｇ）について、ユニソンＵＫ−フェニルカラム（１０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（７／３）液を用い、流速２ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「Ｎｏ．１４（化合物名未確定の新規化合物）、溶出時間３０．４分」（図１−２のＮｏ．１４）を１．６ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C24H14O11（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：478.36（ESI-MS法により測定した（M-H）−=477.0445）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.68（s、1H）、6.49（d、J＝1.88Hz、1H）、6.31（d、overlapped、1H）、6.30（s、1H）、6.01（d、J＝2.07Hz、2H）、5.99（t、J＝2.07Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：160.2、158.8（2C）、158.2、157.7、150.4、150.2、146.9、144.3、141.9、136.9、133.5、126.1、122.6、122.4、103.1、102.3、98.2、98.0、96.3、94.6、93.7（2C）、90.5
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５３】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。NMRが類似した(1)第３画分、(2)第５画分、(3)第５画分、(4)第４画分をひとまとめにし（２．１５ｇ）、さらにコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ４ｃｍ×１５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が２／８液２００ｍL、２．５／７．５液２００ｍL、３／７液２００ｍL、４／６液
２００ｍL、５／５液２００ｍL、６／４液２００ｍL、７／３液２００ｍL、メタノール２００ｍLにより分離して１３画分を得た。
得られた第１画分（２１．３ｍｇ）について、ユニソンＵＫ−Ｃ１８カラム（１０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（８５／１５  ０．１％トリフルオロ酢酸含有）液を用い、流速２ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「６，８’−バイエコール（６,8'-bieckol），溶出時間８６．４分」（図１−２のＮｏ．１５）を４．９ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C36H22O18（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：742.55（ESI-MS法により測定した（M-H）−=741.0737）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.21（s、1H）、6.19（s、1H）、6.12（s、2H）、5.98（d、overlapped、2H）、5.98（d、overlapped、2H）、5.97（t、overlapped、1H ）、5.97（t、overlapped、1H ）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：160.4、160.4、158.7（2C）、158.7（2C）、151.5、151.5、145.8、145.4、144.8、144.3、141.9、141.8、141.6、140.9、137.3、137.2、123.6、123.4、123.0、122.9、122.4、122.0、104.5、99.5、98.2、97.9、97.9、96.3、96.2、93.9（2C）、93.7（2C）、93.6
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５４】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。NMRが類似した(1)第４画分、(2)第４画分、(3)第６画分、(4)第５画分をひとまとめにし（５．９６ｇ）、さらにコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１５／８５液５００ｍL、２／８液４００ｍL、３／７液４００ｍL、４／６液４００ｍL、５／５液４００ｍL、メタノール４００ｍLにより分離して９画分を得た。得られた第１画分（１８７．６ｍｇ）を再びコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ２ｃｍ×１５ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１／９液６０ｍL、１５／８５液１０ｍL、３／７液１０ｍL、４／６液３０ｍL、メタノール５０ｍLにより分離して６画分を得た。
得られた第３画分（３４．３ｍｇ）について、ユニソンＵＫ−Ｃ１８カラム（１０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（９／１）液を用い、流速２ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「６，８’−バイエコール−７’−サルフェート（6,8'-bieckol-7’-sulfate），溶出時間２４．８分」（図１−２のＮｏ．１６）を１６．２ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C36H21O21SNa-（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：844.59（ESI-MS法により測定した（M-H）−=821.0296）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：7.00（s、1H）、6.21（s、1H）、6.10（s、1H）、6.08（s、1H）、6.00（d、J＝2.07Hz、2H）、6.00（d、J＝2.07Hz、2H）、5.96（t、J＝2.07Hz、1H）、5.96（t、J＝2.07Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125MHz、溶媒 DMSO-d6）
（ppm）：160.3、160.3、158.8（2C）、158.7（2C）、151.1、147.5、145.9、145.5、145.0、143.6、141.9、141.4、140.9、140.6、137.0、136.7、125.9、123.9、123.4、122.8、122.4、122.3、108.4、99.3、98.8、98.5、98.4、98.0、96.2、96.1、93.8（2C）、93.6（2C）
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５５】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。４回目の第2画分（３．９７ｇ）をコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ５ｃｍ×１１ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１／９液４００ｍL、２／８液３００ｍL、３／７液３００ｍL、４／６液３００ｍL、５／５液２４０ｍL、メタノール３００ｍLにより分離して１２画分を得た。得られた第８画分（４５３．２ｍｇ）を再びコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ３．５ｃｍ×１３ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１５／８５液２００ｍL、２／８液２００ｍL、２５／７５液４００ｍＬ、３／７液２００ｍL、４／６液２００ｍL、メタノール２００ｍLにより分離して７画分を得た。
得られた第５画分（６０．０ｍｇ）について、ユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒として水／アセトニトリル（７５／２５）液を用い、流速１０ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「Ｎｏ．１７（化合物名未確定の新規化合物），溶出時間１８．０分」（図１−３のＮｏ．１７）を２０．１ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C36H24O18（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：744.56（ESI-MS法により測定した（M+Na）＋=767.0836）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（400MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.24（d、J＝2.26Hz、1H）、6.22（d、J＝2.26Hz、1H）、6.17（s、1H）、6.16（d、J＝2.26Hz、1H）、6.09（d、J＝2.76Hz、1H）、5.99（d、J＝2.76Hz、1H）、5.98（s、2H）、5.97（d、J＝2.76Hz、1H）、5.92（d、J＝2.26Hz、1H）、5.79（d、J＝2.76Hz、1H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（125MHz、溶媒CD3OD）
（ppm）：159.6、159.5、159.2、159.1、157.5、156.9、156.6、156.5、154.7、153.9、152.3（2C）、151.9、147.0、146.7、144.2、143.8、138.4、125.5、124.8、124.4、124.1、124.0、102.6、102.5、99.6、99.2、98.6、
98.4、97.6、96.4（2C）、95.7、95.3、94.4、94.3
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５６】
４０％エタノール抽出物（６３．４ｇ）について、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Φ５ｃｍ×２２ｃｍ）を4回に分けて行った。メタノール、メタノール／イソプロパノール５／1液、４／１液、２／１液、イソプロパノール、酢酸エチル、ジメチルスルホキシドで順次溶出分離し、それぞれ(1)9画分、(2)8画分、(3)8画分、(4)9画分を得た。３回目の第2画分（７７９．２ｍｇ）をコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム（Φ２．５ｃｍ×１２ｃｍ）を用いて、ODSシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行なった。メタノール／水が１／９液２００ｍL、２／８液１００ｍL、３／７液１００ｍL、４／６液１００ｍL、メタノール１００ｍLにより分離して１１画分を得た。
得られた第６画分（８３．９ｍｇ）について、ユニソンＵＳ−Ｃ１８カラム（２０×２５０ｍｍ）を用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒としてＡ：水／アセトニトリル（９５／５）液、Ｂ：水／アセトニトリル（５／５）液、を用い、０−４５ｍｉｎ；１５−６０％Ｂにてグラジエント溶出を行なった。流速５ｍL／分で行ない、溶出物をＵＶ２７０ｎｍの吸収で検出した。1回の精製により、「６，６’−バイエコール（6,6'-bieckol）溶出時間４４．０分」（図１−３のＮｏ．１８）を１０．５ｍｇ得た。
以下に理化学的性質を示す。
1）分子式：C36H22O18（高分解能質量スペクトル（HRMS）法により測定）
2）分子量：742.55（ESI-MS法により測定した（M-H）−=741.0717）
3）水素核磁気共鳴スペクトル（500MHz、溶媒CD3OD）：
（ppm）：6.18（s、2H）、6.12（s、2H）、6.02（d、J＝2.05Hz、4H）、5.99（t、J＝2.05Hz、2H）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（100MHz、溶媒 DMSO-d6）：
（ppm）：160.4（2C）、158.8（4C）、151.3（2C）、145.4（2C）、144.5（2C）、141.9（2C）、141.4（2C）、137.2（2C）、123.6（2C）、122.7（2C）、122.0（2C）、99.7（2C）、97.9（2C）、97.8（2C）、96.2（2C）、93.7（4C）
5）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００５７】
セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー［ＧＥヘルスケア・ジャパン（株）製］における分画物から「フロログルシノール（Phloroglucinol）」（図１−３のＮｏ．１９）を得た。
以下に市販試薬の理化学的性質を示す。
試薬名：phloroglucinol, dehydrate
製造元：東京化成工業株式会社
製品番号：P1376
1）分子式：C6H6O3
2）分子量：162.14
3）水素核磁気共鳴スペクトル（300MHz、溶媒CDCl3+ DMSO-d6）：
（ppm）：5.92（s）
4）炭素核磁気共鳴スペクトル（60MHz、溶媒CDCl3+ DMSO-d6）：
（ppm）：158.8、94.2
【実施例１２】
【００５８】
［ＵＶＢ照射によるヒト皮膚繊維芽細胞ＴＩＧ−１１４の障害に対するクロメＨＰ−２０分画物中の各化合物の効果］
クロメ７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムにて分画して得た４０（v／v）％ＥｔＯＨ分画物に含まれる１９種類の既知及び新規化合物単体についてヒト繊維芽細胞ＴＩＧ−１１４のＵＶＢ照射による障害に対する保護効果を検討した（参考文献：非特許文献３〜５）。
１．試薬・検体
（１）クロメ抽出物：  乾燥クロメ３０ｋｇから７０（v／v）％ＥｔＯＨで６時間撹拌抽出した抽出物
（２）クロメ分画物：  クロメ抽出物からダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムに吸着させた後、「水」、「２０（v／v）％ＥｔＯＨ」に続けて「４０％（v／v）ＥｔＯＨ」で溶出させた分画物。
（３）ヒト繊維芽細胞ＴＩＧ−１１４：  ヒューマンサイエンス研究資源バンクから入手（ＪＣＲＢ０５３４）し、１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地で培養。
（４）ＵＶＢ：  三共電機GL−１５SE ×3本を平行に並べて照射。
２．試験群
（１）コントロール群：  クロメ抽出物も分画物も含まないＰＢＳ培地に混合。
（２）ポジティブコントロール群：  ビタミンＣを５０μＭの濃度で含むＰＢＳ培地に混合。
（３）クロメ各化合物群：  実施例１１で得た１９種類の各化合物を５０μｇ／ｍｌの濃度で含むＰＢＳ培地に混合。
（４）ＫＰ−４０分画物群：比較の為に「４０％（v／v）ＥｔＯＨ」分画物を５０μｇ／ｍｌの濃度で含むＰＢＳ培地に混合。
【００５９】
３．試験方法
（１）細胞濃度を１×１０５Cells/ｍｌに調節する。
（２）９６ウエルマイクロブレートに５０μｌ／ｗｅｌｌ（５，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）まく。
（３）３７℃で２４時間培養する。（１０％牛胎児血清添加ＤＭＥＭ培地）
（４）培地を各試験群の検体を含むＰＢＳ（−）培地１００μｌに交換し，ＵＶＢを４００ｍＪ／ｃｍ２照射する。
（５）４８時間後に１０％のCell Counting Kit-8（和光純薬(株)製）を加えて３７度、５％ＣＯ２インキュベーターで１．５ｈｒインキュべ−卜し、４５０ｎｍの吸光度を測定する事により繊維芽細胞の数を測定する。
【００６０】
４．結果
４８時間培養後のサンプル群の細胞の生存率（％）を次の式で求めて図１４に結果を示す。
細胞生存率（％）＝（サンプル群の細胞数−コントロール群の細胞数）／
（UV未照射の細胞数−コントロール群の細胞数）×１００
分画物であるＫＰ−４０群はポジティブコントロール群であるビタミンＣ群と同程度の生存率を示した。
各化合物のうち，新規化合物であるＮｏ．１０と，既知物質であるがクロメでの含有が
公知となっていないＮｏ．８のフコジフロレトールG（fucodiphlorethol G），Ｎｏ．９のフロロフコフロエコールＢ（phlorofucofuroeckol−B），及びクロメでの含有が公知であるＮｏ．４のジオキシノデヒドロエコール（dioxinodehydroeckol）の４種の化合物にポジティブコントロール群であるビタミンＣ群よりも細胞生存率が高い傾向が認められた。これらの化合物にはＵＶＢ照射障害から細胞を守る効果があると推定される。
【実施例１３】
【００６１】
[クロメ分画物のＵＶＢ照射障害に対する保護効果の長期塗布動物試験概要］
本実施例では、クロメ７０（v／v）％ＥｔＯＨ抽出物をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムにて分画した４０（v／v）％ＥｔＯＨ溶出物について、ＵＶＢ照射長期モデルでＵＶＢ照射障害防護効果を確認するための試験条件の概要を示した（参考文献：非特許文献１，２）。
１．試薬・検体
（１）クロメ抽出物：  乾燥クロメ３０ｋｇから７０（v／v）％ＥｔＯＨ １２０Lで7日間静置抽出した抽出物。
（２）クロメ分画物：  クロメ抽出物をダイヤイオン(登録商標)ＨＰ２０カラムに吸着させた後、「４０（v／v）％ＥｔＯＨ」で溶出させた分画物。
（３）親水軟膏：  局方親水軟膏「ホエイ」（ニプロファーマ製）  
（４）コントロール軟膏：  ６０％（v／v）ＥｔＯＨを４倍量の親水軟膏に加えて、乳鉢でよく撹拌した。
（５）０．０２５％ 軟膏：  ４０（v／v）％ＥｔＯＨ 溶出分画物を０．１２５％になるように６０（v／v）％ＥｔＯＨに溶解し、４倍量の親水軟膏に加えて，乳鉢でよく撹拌した（最終濃度＝０．０２５％ ＫＰ−４０）。  
（６）０．２５％ 軟膏：  ４０（v／v）％ＥｔＯＨ 溶出分画物を１．２５％になるように６０（v／v）％ＥｔＯＨに溶解し、４倍量の親水軟膏に加えて，乳鉢でよく撹拌した（最終濃度＝０．２５％ ＫＰ−４０）。  
（７）ＵＶＢ：  三共電機 GL-20SE×５本を，SCHOTT WG２９５相当のガラスフィルターで低波長成分をカットしたものを照射。
２．試験群   
（１）ＵＶ（−）コントロール群：コントロール軟膏を使用。ＵＶＢの照射は無し。
（２）ＵＶ（＋）コントロール群：コントロール軟膏を使用。ＵＶＢの照射を行なう。
（３）０．０２５％ＫＰ-４０ 群：  ０．０２５％ＫＰ-４０軟膏を使用。ＵＶＢ照射を行なう。
（４）０．２５％ＫＰ-４０ 群：  ０．２５％ＫＰ-４０軟膏を使用。ＵＶＢ照射を行なう。
【００６２】
３．試験方法
（１）へアレスマウスＨＯＳ：  ＨＲ−１（メス）（７週令）を２４頭用意する。
（２）３日間の予備飼育後，各群の体重平均が等しくなるように４群に分ける。
（３）各群背部にそれぞれコントロール軟膏、０．０２５％ＫＰ−４０ 軟膏，０．２５％ＫＰ−４０ 軟膏を約１０ｍｇ／ｃｍ２塗布する。
（４）ＵＶ（−）コントロール群以外の群について,週３回ＵＶＢを背部に照射する。照射線量は週ごとに54，108，162，216，216，216 ｍJ／ｃｍ２ と増加させる。
（５）照射直後に再度 各群の軟膏を塗布する。
（６）７週間の照射・塗布試験後に，各測定を行なう。マイクロメーターで皮膚厚を計り，浮腫の指標とする。分光測定計で背部皮膚３ヶ所の色調を測定し，Ｌ＊値，ａ＊値，ｂ＊値を算出する。皮膚水分量を測定する。経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を測定する。
【００６３】
４．試験結果
ＫＰ−４０によるＵＶＢ照射障害に対する保護効果の長期塗布動物試験の結果を図１５
および図１６に示す。７週間の照射・塗布試験後には、ＵＶ（＋）コントロール群は
ＵＶＢ照射により皮膚厚が増加し、同時に皮膚水分量が減少してＵＶＢ照射による皮膚障害を示した。
０．０２５％ＫＰ−４０軟膏を塗布した群では、７週間のＵＶＢ照射による皮膚水分量
の減少を有意に抑制した。
また、０．２５％ＫＰ−４０軟膏を塗布した群では、７週間のＵＶＢ照射による皮膚厚
の上昇（浮腫）を有意に抑制していることが認められた。
これらの結果から、この軟膏の継続塗布により，日常の紫外線による障害から皮膚を保護する効果が期待される。また、この画分にはポリフェノールの含有が認められているところから、ＵＶＢ照射障害保護効果はクロメポリフェノール（フロロタンニン類）によるものと推察される。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明は、クロメから抽出されたフロロタンニン類を有効成分とする紫外線照射障害保護剤に関するものであり、従来の日焼け防止剤と同等以上の効果を有する物質を自然界に産するクロメ海藻から抽出して優れた紫外線照射障害保護剤を提供するものである。本発明のフロロタンニン類は天然物を原料とすることから人体にも害を与える心配が少ない紫外線照射障害保護剤を提供することができ、また例えば、皮膚外用剤として、ヒト皮膚の繊維芽細胞の増殖を促進するのに有効であり、創傷治癒剤、化粧品、食品、浴用剤、繊維芽細胞用培地などの構成原料として用いることができる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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