(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
視床下部弓状核におけるグルコース抑制性ニューロン（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｎ）のＮＫＡ（Ｎａ+＋Ｋ+−ＡＴＰａｓｅ）活性を抑制するＮＫＡインヒビターを含み、
前記ＮＫＡインヒビターは、前記グルコース抑制性ニューロンの［Ｃａ2+］i濃度を増加させ、
前記ＮＫＡインヒビターは、強心配糖体であり、該強心配糖体は、ウワバイン（ｏｕａｂａｉｎ）又はジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）である
食欲亢進用治療剤。
【請求項２】
前記ＮＫＡインヒビターは、ニューロペプチドＹの発現を惹起する
ことを特徴とする請求項１に記載の食欲亢進用治療剤。
【請求項３】
前記ＮＫＡインヒビターは、ＮＫＡのαサブユニットの活動を調整する
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の食欲亢進用治療剤。
【請求項４】
前記ＮＫＡインヒビターは、前記強心配糖体としての投与の濃度の１／１０以下の量を投与する
ことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の食欲亢進用治療剤。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか１項に記載の食欲亢進用治療剤を用いた
ことを特徴とする食欲不振、抗癌剤の副作用による食欲の低下、加齢、過労、低栄養、神経性食思不振症、うつ病を含む精神疾患、自律神経失調症、拒食症を含む摂食障害のいずれかに対する治療のための治療薬。
【請求項６】
視床下部弓状核におけるグルコース抑制性ニューロン（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｎ）のＮＫＡ（Ｎａ+＋Ｋ+−ＡＴＰａｓｅ）活性を活性化するＮＫＡアクティベータを含み、
前記ＮＫＡアクティベータは、前記グルコース抑制性ニューロンにおける低グルコース誘発［Ｃａ2+］i増加を抑制又は阻止し、
前記ＮＫＡアクティベータは、抗体ＳＳＡ４１２である
ことを特徴とする食欲抑制用治療剤。
【請求項７】
前記ＮＫＡアクティベータは、ニューロペプチドＹの発現を抑制する
ことを特徴とする請求項６に記載の食欲抑制用治療剤。
【請求項８】
前記ＮＫＡアクティベータは、ＮＫＡのαサブユニットに結合する
ことを特徴とする請求項６又は７に記載の食欲抑制用治療剤。
【請求項９】
請求項６乃至８のいずれか１項に記載の食欲抑制用治療剤を用いた
ことを特徴とする、過食、過食による肥満、過食による糖尿病、メタボリックシンドロームのいずれかに対する治療のための治療薬。
【請求項１０】
細胞により生成された抗体ＳＳＡ４１２により、視床下部弓状核のグルコース抑制性ニューロン（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｎ）のＮＫＡ（Ｎａ+＋Ｋ+−ＡＴＰａｓｅ）活性をアクティベートさせ、
前記グルコース抑制性ニューロンの低グルコース誘発［Ｃａ2+］i増加を抑制又は阻止させる食欲抑制用細胞製剤の製造方法であって、
前記細胞に抗体ＳＳＡ４１２の遺伝子を生体外で導入する
ことを特徴とする食欲抑制用細胞製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食欲亢進用治療剤、治療薬、食欲抑制用治療剤、及び食欲抑制用細胞製剤の製造方法に係り、特に視床下部弓状核に作用する食欲亢進用治療剤、治療薬、食欲抑制用治療剤、及び食欲抑制用細胞製剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、摂食とエネルギー代謝の調節メカニズムの研究が国内外で盛んに行われている。これは、世界的な肥満の増加と、肥満が多くの生活習慣病の起点になることが明らかにされたためであった。
図１４を参照して、近年、明らかになっている摂食とエネルギー代謝の調節メカニズムについて説明する。
全身の栄養・代謝状態は、栄養素、ホルモンや自律神経の迷走神経求心路を媒介として脳に伝えられる。
これらの情報は、視床下部を中心とした中枢で情報が統合された後、自律神経遠心路や視床下部下垂体ホルモンを経由して脂肪細胞などの器官にシグナルが送られ、末梢代謝が制御されている。この一連の過程に障害が起こると、代謝恒常性の破綻や肥満をもたらし、ひいてはメタボリック・シンドロームの成因となると考えられる。
【０００３】
従来、高等ほ乳類において、栄養・代謝状態を脳に伝える因子として、グルコース、インスリン、コレシストキニン（ＣＣＫ）等が知られていた。
また、近年、脂肪細胞由来のレブチン、アディポネクチン、また胃由来のグレリンといった新たな摂食代謝調節因子が発見されている。
これらの因子は、栄養・代謝状態の末梢代謝シグナルであり、血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｂａｒｒｉｅｒ、ＢＢＢ）を通過して直接脳に取り込まれるか、又は、迷走神経求心路を経由して脳に情報伝達されることが分かっている。
このような末梢代謝シグナルが脳に入ると、主として視床下部弓状核（Ａｒｃｕａｔｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ、ＡＲＣ）で受容され視床下部のネットワークにおいて統合的に処理される。
具体的には、脳において、まず視床下部弓状核等を中心とした第１次摂食・代謝調節中枢に作用し、次いで視床下部内の神経ネットワークにより統合的に情報処理される。
その情報処理の結果は、自律神経、下垂体ホルモン分泌、高次中枢に出力され、最終的に摂食行動やエネルギー代謝が調節されると考えられている。
このように、高等ほ乳類では、視床下部からの出力が自律神経活動、下垂体ホルモン分泌、高次機能などを調節することにより、摂食と代謝を調節している。
すなわち、血液脳関門を経た入力、視床下部弓状核での情報統合、自律神経を経た出力が特に重要である。
【０００４】
ここで、特許文献１を参照すると、従来の肥満症治療のための薬学的組成物として、食事行動を修正する化合物、そのプロドラッグまたは前記化合物または前記プロドラッグの薬学的に許容可能な塩；および、β−アドレナリン作働剤と前記プロドラッグの薬学的に許容可能な塩を含む薬学的組成物が記載されている（以下、従来技術１とする。）。
特許文献１の薬学的組成物に含まれるβ−アドレナリン作働剤は、アデニル酸サイクラーゼを活性化するため、抗肥満症剤として有用である。また、さらに特許文献１の段落［００１３］［００１５］等を参照すると、食事行動を修正する化合物として、上述のレプチンのような摂食代謝調節因子を食欲抑制剤として用いることが示されている。
すなわち、特許文献１の薬学的組成物は、神経伝達物質とそのシグナル伝達系に働きかけること、及びホルモンやアディポカインを利用して、動物、特にヒトの肥満症を処置するのに有用性を有する薬学的組成物および方法を提供していた。
なお、従来技術１は、食欲抑制剤として、脳内神経伝達物質でもあるセロトニン作働剤やドーパミンアゴニストも用いるように記載していた。これらの脳内神経伝達物質は、向精神薬の標的となっており、脳全体に作用するため、第１次摂食・代謝調節中枢にだけ直接作用するものではなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−２２８４４７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、従来技術１のように、神経伝達物質に働きかけることにより、「脳全体に作用する」ような特異性がない薬学的組成物を用いると、食欲／摂食行動を直接、選択的に変化させることができないため、副作用が大きいという問題があった。
【０００７】
このため、摂食行動に関わる「食欲」そのものを変更するような、視床下部弓状核等を中心とした第１次摂食・代謝調節中枢に直接作用する食欲調整組成物が求められていた。
【０００８】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、上述の課題を解消することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の食欲亢進用治療剤は、視床下部弓状核におけるグルコース抑制性ニューロン（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｎ）のＮＫＡ（Ｎａ+＋Ｋ+−ＡＴＰａｓｅ）活性を抑制するＮＫＡインヒビターを含み、前記ＮＫＡインヒビターは、前記グルコース抑制性ニューロンの［Ｃａ2+］i濃度を増加させ、前記ＮＫＡインヒビターは、強心配糖体であり、該強心配糖体は、ウワバイン（ｏｕａｂａｉｎ）又はジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）であることを特徴とする。
本発明の食欲亢進用治療剤は、前記ＮＫＡインヒビターは、ニューロペプチドＹの発現を惹起することを特徴とする。
本発明の食欲亢進用治療剤は、前記ＮＫＡインヒビターは、ＮＫＡのαサブユニットの活動を調整することを特徴とする。
本発明の食欲亢進用治療剤は、前記ＮＫＡインヒビターは、前記強心配糖体としての投与の濃度の１／１０以下の量を投与することを特徴とする。
本発明の治療薬は、前記食欲亢進用治療剤を用いたことを特徴とする食欲不振、抗癌剤の副作用による食欲の低下、加齢、過労、低栄養、神経性食思不振症、うつ病を含む精神疾患、自律神経失調症、拒食症を含む摂食障害のいずれかに対する治療のための治療薬であることを特徴とする。
本発明の食欲抑制用治療剤は、視床下部弓状核におけるグルコース抑制性ニューロン（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｎ）のＮＫＡ（Ｎａ+＋Ｋ+−ＡＴＰａｓｅ）活性を活性化するＮＫＡアクティベータを含み、前記ＮＫＡアクティベータは、前記グルコース抑制性ニューロンにおける低グルコース誘発［Ｃａ2+］i増加を抑制又は阻止し、前記ＮＫＡアクティベータは、抗体ＳＳＡ４１２であることを特徴とする。
本発明の食欲抑制用治療剤は、前記ＮＫＡアクティベータは、ニューロペプチドＹの発現を抑制することを特徴とする。
本発明の食欲抑制用治療剤は、前記ＮＫＡアクティベータは、ＮＫＡのαサブユニットに結合することを特徴とする。
本発明の治療薬は、前記食欲抑制用治療剤を用いたことを特徴とする、過食、過食による肥満、過食による糖尿病、メタボリックシンドロームのいずれかに対する治療のための治療薬であることを特徴とする。
本発明の食欲抑制用細胞製剤の製造方法は、細胞により生成された抗体ＳＳＡ４１２により、視床下部弓状核のグルコース抑制性ニューロン（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｎ）のＮＫＡ（Ｎａ+＋Ｋ+−ＡＴＰａｓｅ）活性をアクティベートさせ、前記グルコース抑制性ニューロンの低グルコース誘発［Ｃａ2+］i増加を抑制又は阻止させる食欲抑制用細胞製剤の製造方法であって、前記細胞に抗体ＳＳＡ４１２の遺伝子を生体外で導入することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、視床下部弓状核のグルコース抑制性ニューロン（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｎ、ＧＩニューロン）のＮＫＡ（Ｎａ+＋Ｋ+−ＡＴＰａｓｅ）活性を調整するＮＫＡ活動調節剤を用いることで、第１次摂食・代謝調節中枢に直接作用する食欲調整剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の実施の形態に係る視床下部弓状核のＧＩニューロンの食欲調整のモデルを示す概念図である。
【図２】本発明の実施の形態の実施例におけるＧＩニューロンの同定、［Ｎａ+］i又は［Ｃａ2+］i応答測定の概念図である。
【図３Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロンとして定義したニューロンの［Ｃａ2+］i応答のグラフである。
【図３Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロンの８．３ｍＭグルコース（８．３Ｇ）と２．８ｍＭグルコース（２．８Ｇ）における［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図３Ｃ】本発明の実施の形態の実施例において、非ＧＩニューロンとして定義したニューロンの［Ｃａ2+］i応答のグラフである。
【図３Ｄ】本発明の実施の形態の実施例において、非ＧＩニューロンの８．３Ｇと２．８Ｇにおける［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図４Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下とウワバインによるＧＩニューロンの［Ｎａ+］iの応答の変化を示すグラフである。
【図４Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、［Ｎａ+］iとＳＢＦＩ蛍光レシオの関係を表わす較正曲線の図である。
【図４Ｃ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下による［Ｎａ+］iの増加を示し、同じニューロンが［Ｃａ2+］i増加を示すことから、ＧＩニューロンであることを示すグラフである。
【図４Ｄ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下に対して［Ｎａ+］iの変化が見られず、同じニューロンが［Ｃａ2+］iの変化を示さないことから、非ＧＩニューロンであることを示すグラフである。
【図４Ｅ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロン及び非ＧＩニューロンにおけるグルコース濃度低下に誘発された［Ｎａ+］iの変化の平均を示すグラフである。
【図５Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、８．３Ｇでウワバインを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図５Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、ウワバインを投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図５Ｃ】本発明の実施の形態の実施例において、８．３Ｇで、Ｋ+を含まない（Ｋ+−ｆｒｅｅ）溶液を用いた際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図５Ｄ】本発明の実施の形態の実施例において、Ｋ+−ｆｒｅｅ溶液を投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図５Ｅ】本発明の実施の形態の実施例において、ウワバインを投与しない状態で、同一のＧＩニューロンをグルコース濃度低下による反復刺激をした場合の［Ｃａ2+］i応答のグラフである。
【図５Ｆ】本発明の実施の形態の実施例において、８．３Ｇ及び２．８Ｇにおける、グルコース濃度低下１回目刺激（Ａｍｐ１）又はグルコース濃度低下２回目刺激（Ａｍｐ２）における平均［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図５Ｇ】本発明の実施の形態の実施例において、ウワバインが継続的に存在していた場合のグルコース濃度低下反復二回目刺激により誘発された［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図５Ｈ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下１回目刺激（Ａｍｐ１）の後、１００μＭのウワバイン存在下でグルコース濃度低下２回目刺激（Ａｍｐ２）を与えた際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図５Ｉ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロン又は非ＧＩニューロンにおいて、ウワバイン濃度の変化に対して反応した細胞数の割合を示すグラフである。
【図５Ｊ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロン又は非ＧＩニューロンにおいて、ウワバイン濃度の変化に対する［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図５Ｋ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下によるＧＩニューロンの活性化においてウサギＩｇＧを加えたコントロール実験の結果を示すグラフである。
【図５Ｌ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下によるＧＩニューロンの活性化においてＳＳＡ４１２を加えた実験の結果を示すグラフである。
【図５Ｍ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下によるＧＩニューロンの活性化において、ウサギＩｇＧ又はＳＳＡ４１２を加えた際の［Ｃａ2+］i応答の平均示すグラフである。
【図６Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコキナーゼの拮抗阻害剤である１０ｍＭのＭＨを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図６Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、代謝されないグルコース・アナログである１０ｍＭの２ＤＧを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図６Ｃ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロン又は非ＧＩニューロンにおいて、ＭＨに対する［Ｃａ2+］i応答を示した細胞数を示すグラフである。
【図６Ｄ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロン又は非ＧＩニューロンにおいて、２ＤＧに対する［Ｃａ2+］i応答を示した細胞数を示すグラフである。
【図６Ｅ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロン又は非ＧＩニューロンにおいて、ＭＨを投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図６Ｆ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロン又は非ＧＩニューロンにおいて、２ＤＧを投与した際のＧＩ及び非ＧＩニューロンの平均［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図７Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、グルコース濃度低下によるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ自己蛍光低下を示し、同じニューロンが［Ｃａ2+］i増加を示すことから、ＧＩニューロンであることを示すグラフである。
【図７Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、ＧＩニューロンの８．３Ｇ及び２．８ＧにおけるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ自己蛍光の平均を示すグラフである。
【図８Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、１００μＭのＫＣＮを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図８Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、ＫＣＮを投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図８Ｃ】本発明の実施の形態の実施例において、１μＭのＦＣＣＰを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図８Ｄ】本発明の実施の形態の実施例において、ＦＣＣＰを投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。
【図９Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、Ｃａ2+を含まない（Ｃａ2+−ｆｒｅｅ）溶液を投与した［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図９Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、各ＶＤＣＣの非特異性のブロッカーである高濃度Ｎｉ2+（３００μＭ）を投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図９Ｃ】本発明の実施の形態の実施例において、Ｎ型Ｃａ2+チャンネル・ブロッカーであるω−コノトキシンＧＶＩＡ（３００ｎＭ）を投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図９Ｄ】本発明の実施の形態の実施例において、Ｌ形Ｃａ2+チャンネル・ブロッカーであるニフェジピン１０μＭを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
【図９Ｅ】本発明の実施の形態の実施例において、図９Ａ〜Ｄの［Ｃａ2+］i応答の振幅の平均を、コントロール実験と比べて相対的に表現したグラフである。
【図１０】本発明の実施の形態の実施例において、自由摂食下と２４時間絶食下において、視床下部弓状核のＮＫＡ活性の変化を示すグラフである。
【図１１】本発明の実施の形態の実施例において、自由摂食下と２４時間絶食下において、ＧＥニューロンが主要な働きをしている視床下部腹内側部でのＮＫＡ活性の変化を示すグラフである。
【図１２Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、５ｍＭグルコース（５Ｇ）−ＨＫＲＢ溶液、ウワバイン０．５ｎＭ、Ｋ+−ｆｒｅｅ溶液（１０μｌ）を脳室内投与した際の、摂食量の変化の平均を示したグラフである。
【図１２Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、５Ｇ−ＨＫＲＢ溶液、ＭＨ、さらにＭＨとＳＳＡ４１２（ＳＳＡ４１２）、ＭＨとウサギＩｇＧ（Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ）を脳室内投与して、摂食量の変化の平均を示したグラフである。
【図１３Ａ】本発明の実施の形態の実施例において、ウワバインの脳室内投与後の視床下部弓状核のＮＰＹのｍＲＮＡ発現量を示すグラフである。
【図１３Ｂ】本発明の実施の形態の実施例において、ウワバインの脳室内投与後の視床下部弓状核のＰＯＭＣのｍＲＮＡ発現量を示すグラフである。
【図１４】従来の摂食調節メカニズムについての概念図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
＜実施の形態＞
上述したように、副作用の少ない摂食調節用の化合物が必要とされていた。このため、本発明の発明者らは、視床下部弓状核等を中心とした第１次摂食・代謝調節中枢に直接働きかけて、「食欲」そのものを調節するための食欲調節剤を探し求めることを考えた。
この際、本発明の発明者らは、視床下部弓状核（ＡＲＣ）にあるグルコース抑制性（Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ、ＧＩ）の神経細胞（Ｎｅｕｒｏｎ、ニューロン）に着目した。以下、このグルコース抑制製の神経細胞をＧＩニューロンと呼ぶ。
ここで、グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）は、細胞活動に対して不可欠なエネルギー基質であるため、一般的には、グルコース濃度の上昇は細胞活動の上昇をもたらす。
しかしながら、ＧＩニューロンは、このグルコースの働きに対する逆説的な例外である。すなわち、ＧＩニューロンは、外側視床下野の視床下部弓状核で最初に発見され、グルコース濃度の上昇により活動が抑制されるという特徴がある。つまり、ＧＩニューロンの電気的活性及び細胞内Ｃａ活性は、グルコース濃度低下（ＬＧ）に応じて増加する。
また、視床下部弓状核のＧＩニューロンは、強力な食欲促進作用をもつニューロペプチドＹ（Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  Ｙ、ＮＰＹ）を含んでおり、空腹・飢餓による摂食亢進に関連していることが示唆されている。
【００１３】
このＧＩニューロンの制御機構については、従来、不明であった。しかしながら、１９７４年に、Ｏｏｍｕｒａが、細胞膜にある能動輸送系であるナトリウムポンプの抑制が、ＧＩニューロンのグルコース濃度低下による活性化を媒介するという仮説を提唱していた（Ｏｏｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．、１９７４、「Ｇｌｕｃｏｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｌａｔｅｒａｌ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．」、Ｎａｔｕｒｅ、２４７、ｐ．２８４−２８６、参照）。この仮説において、Ｏｏｍｕｒａは、「したがって、グルコースによるこれらのニューロンの抑制は、透過性変化によらないが、それが強心性配糖体あるいは抗代謝物質で有効にブロックされるので、エネルギー依存のナトリウムポンプの活性化による薄膜過分極で引き起こされるように見える。」と述べている。
【００１４】
しかしながら、ＧＩニューロンでは、上述のＯｏｍｕｒａの仮説のように、ナトリウムポンプであるＮａ+／Ｋ+−ＡＴＰアーゼ（ＮＫＡ）の関与、更にｃｌ−チャネルおよびＫ+チャンネルが関与の仮説が提唱されていたものの、直接的な証拠はなかった。つまり、グルコース濃度の低下に誘発されたニューロンの活性化の機構は、実際には殆ど分かっていなかった。
このため、本発明の発明者らは鋭意実験と検討を行い、グルコース濃度低下と連動したＮＫＡ活性の低下が、ＧＩニューロンの活性化と摂食に重大な役割をしていることを見いだした。つまり、ＮＫＡ活動調節剤により、食欲をコントロールすることが可能になる。
【００１５】
ここで、ＮＫＡは、αとβの２種のサブユニットからなる膜貫通タンパク（ＥＣ３．６．３．９）である。
ＮＫＡは、動物細胞において、ＡＴＰ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ＴｒｉＰｈｏｓｐｈａｔｅ）の加水分解により、細胞内からナトリウムイオン（Ｎａ+）を汲み出し、カリウムイオン（Ｋ+）を取り込むのでナトリウム−カリウムポンプとも呼ばれている。
この酵素は、ラットやヒト等のすべての動物細胞でみられる。ＮＫＡは、１つのＡＴＰ分子を加水分解して、細胞から３つのＮａ+を排出し、２つのＫ+を組み入れる能動輸送系である。
細胞は、ＮＫＡによって、細胞内イオン濃度、浸透圧及び含水量を調節している。ＮＫＡによる３Ｎａ+排出、２Ｋ+組み入れの電荷の差し引きにより形成される膜電位（Ｅｍ）は、神経細胞では細胞膜の過分極に関連している。
また、ＮＫＡは、特定の種類の細胞では、グルコースやアミノ酸の能動輸送に必要なＮａ+濃度勾配を形成する役割がある。
細胞は、グルコース代謝で産生した数１０％ものＡＴＰを、ＮＫＡを始めとするイオン能動輸送の過程に用いている。
【００１６】
次に、図１を参照して、本発明の発明者らが明らかにした視床下部弓状核のＧＩニューロンの食欲調整のモデルについて説明する。
上述のように、本発明の発明者らは、グルコース濃度低下によりＮＫＡ活性が抑制されると、これによりＧＩニューロンが活性化され、摂食活動を亢進させることを明らかにした。
すなわち、グルコース濃度が低下すると：
（１）グルコース代謝の低下
（２）細胞内エネルギー産生の低下
（３）ＮＫＡの活性低下による細胞の脱分極
（４）電位依存性Ｃａ2+チャネルの活性化
という一連の流れにより、ＧＩニューロンが活性化され、摂食活動が亢進する。
【００１７】
より詳しく説明すると、グルコース濃度低下は、ＧＩニューロンのグルコース代謝及びＡＴＰを含むエネルギー生産を減少させ、これにより膜電位変化を伴う起電性におけるＮＫＡ活性の低下に結びつく。
このようにＮＫＡ活性が引下すると、細胞膜が脱分極し、電圧依存性Ｃａ2+チャンネル（Ｖｏｌｔａｇｅ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ＶＤＣＣ）を開口する。
すると、細胞内へのＣａ2+流入が誘発され、結果としてＣａ2+に依存したＧＩニューロンの活性化を引き起こすことになる。
ここで、Ｃａ2+に依存したＧＩニューロンの活性化は、ＧＩニューロンがＮＰＹを含有することから、ＮＰＹニューロンの活性化に繋がっている（Ｍｕｒｏｙａ  Ｓ．，  Ｙａｄａ  Ｔ．，  Ｓｈｉｏｄａ  Ｓ．，  Ｔａｋｉｇａｗａ  Ｍ．、１９９９、「Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ａｒｃｕａｔｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ｃｏｎｔａｉｎ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  Ｙ．」、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔ．２６４（１−３）、ｐ．１１３−１１６、及びＫｏｈｎｏ  Ｄ、ｅｔ  ａｌ、２００３、「Ｇ  ｈｒｅｌｉｎ  ｄｉｒｅｃｔｉｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ−Ｙ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ａｒｃｕａｔｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ：Ｃａ２＋  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｖｉａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ａ  ａｎｄ  Ｎ−ｔｙｐｅ  ｃｈａｎｎｅｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ  ｗｉｔｈ  ｌｅｐｔｉｎ  ａｎｄ  ｏｒｅｘｉｎ．」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、５２、ｐ．９４８−９５６、参照）。また、ＮＰＹは、摂食促進、すなわち「食欲」に関わっていることが分かっている。
すなわち、ＮＫＡは、低グルコースによるニューロンの活性化に関与し、ＧＩニューロンの活性化によるＮＰＹ依存性食欲促進に関わっている。
【００１８】
このように、本発明の発明者らは、グルコース濃度低下は細胞内のグルコース代謝及びエネルギー生産を減少させ、これにより、起電性ＮＫＡの活性が低下し、ＧＩニューロンの脱分極及び電圧依存性Ｃａ2+の流入が導かれることを見いだした。
また、本発明の発明者らは、ＮＫＡによるＧＩニューロンの調節が摂食行動に関連づけられるという新規概念を見いだした。つまり、本発明の発明者らの研究は、グルコース／エネルギー代謝の低下を、摂食行動を刺激する視床下部弓状核ＧＩニューロンの興奮に変換するという、ＮＫＡの注目すべき潜在的な役割を明らかにした。さらに、身体中の細胞におけるユビキタスな細胞基本活動維持分子であるＮＫＡが、摂食行動に関連する視床下部弓状核の食欲促進のニューロンを調節する特異的な生理機能を発揮することを見いだした。
このため、この機構を調整することで、摂食行動を調整するための新たな薬剤の開発が可能になる。
つまり、本実施形態においては、ＮＫＡ活動を調整するＮＫＡ活動調節剤として、ＮＫＡアクティベータ／インヒビターを用いることで、肥満及び／又は糖尿病に関連した摂食亢進症を改善する、新規手法を提供する。
【００１９】
よって、視床下部弓状核のＧＩニューロンのＮＫＡを活性化すると、食欲を司るＧＩニューロンの活動を抑制し、「食欲」を抑えることができる。すなわち、第１次摂食・代謝調節中枢による「食欲」を抑制することが可能になる。
このため、本発明の実施の形態に係る食欲調整剤において、ＧＩニューロンのＮＫＡの活性を活性化する各種のＮＫＡアクティベータとなる組成物を用いることができる。このＮＫＡアクティベータを含む食欲調節剤は、食欲抑制剤として用いることができる。
ＮＫＡアクティベータとして用いる組成物としては、例えば、抗体ＳＳＡ４１２（Ｘｕ，  Ｋ．  Ｙ．、２００５、「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  （Ｎａ+＋Ｋ+）−ＡＴＰａｓｅ．」、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、３３８、ｐ．１６６９−１６７７、参照）を用いることができる。視床下部弓状核では、生理的な各種摂食代謝調節因子により食欲を調整する必要があるため、比較的、血液脳関門の物質透過性が高い（リーキー）ため、抗体でも通過できる可能性がある。また、ファージ等を用いた分子量の小さい抗体を作成することで、血液脳関門を通過させることも考えられる。加えて、血液脳関門を通過させるため、この抗体の活性化部位を用いた低分子のペプチドを合成することもできる。
なお、この抗体ＳＳＡ４１２は、上述の文献に記載されているように、心筋細胞においてはＮＫＡを活性化して［Ｃａ2+］iを増加させるという働きがある。ところが、本発明の発明者らが明らかにしたところ、ＧＩニューロンでは、ＳＳＡ４１２は、［Ｃａ2+］iを減少させる、すなわちＣａ2+の細胞内流入を阻害する方向に働くため、上述の文献からは想起できなかった。このため、抗体ＳＳＡ４１２は、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤として自明ではない。
【００２０】
なお、ＮＫＡアクティベータは、任意のものを用いることができる。たとえば、血液脳関門を通過し、ＮＫＡを活性化するペプチドホルモンを用いることができる。また、ＮＫＡを活性化する各種低分子化合物や薬剤を用いることができる。この際に、ＳＳＡ４１２と同様にＮＫＡのαサブユニットに結合してＮＫＡ活性を上げるようにすることができる。ここで、本実施形態のＮＫＡアクティベータは、ＧＩニューロンのＮＫＡに特異的に結合して活性化する薬剤を用いることが特に好適である。例えば、他の細胞のＮＫＡでは影響を及ぼさないように、ドラッグ・デリバリー・システムを用いた各種薬剤を用いることができる。たとえば、リポソームにＮＫＡを活性化する薬剤を封入し、脳特異的に作用するように構成できる。加えて、ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ等も用いることができる。
さらに弓状核ではＮＫＡのαサブユニットのうちα1の発現が他の組織に比べて数倍高いことが報告されている（例えば、Ａｎｔｏｎｅｌｌｉ  ＭＣ  ｅｔ  ａｌ、「Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎａ，  Ｋ−ＡＴＰａｓｅ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔ．」、１９９５、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４１、ｐ．７９−８５を参照。）。このため、ＮＫＡのα１サブユニットのみに対するＮＫＡインヒビター／アクティベータを用いることで、身体の他の部位への副作用が少ない食欲亢進剤／食欲抑制剤を提供することが可能になる。
さらに、ＧＩニューロンの活性を押さえるためには、全身の他のＮＫＡ活性に関連しない程度の低容量の薬剤を用いるだけでも効果的である。このため、ＮＫＡ活性を亢進させる各種の薬剤を、副作用の少ない低容量で用いることが可能となる。
後述する実施例における図５Ｉ、図５Ｊのように、実際に、ラットにおいて、脳室内投与を行った際に、通常実験で用いられる濃度の１／１０程度でもＧＩニューロンの応答を行わせることができる。このため、経口／通常の静脈注射による投与であっても、強心剤として用いられるウワバインやジゴキシンの１／１０の量で、食欲増進の効果があると考えられる。すなわち、ＮＫＡインヒビターは、強心配糖体としての投与の濃度のログオーダーで−１（１／１０）以下の量を投与することが好適である。
このため、通常より低い濃度のウワバインを用いても、食欲を増進させられると考えられる。
【００２１】
以上のように構成することで、以下のような機能を得ることができる。
まず、従来より、中枢セロトニン・ノルアドレナリン・カンナビノイド系に作動する食欲抑制薬が開発され臨床使用されている。
その多くが、肺高血圧症、心弁膜症等などの循環系の障害、うつ病や自殺者の増加を起したために中止されている。
現在日本で唯一臨床使用可能な食欲抑制薬である、ノルアドレナリン系作動薬であるマジンドールは、副作用があり抗肥満効果は限定的であった。
このように、脳の神経伝達に作用する物質は重篤な副作用を伴っており、これは従来技術１の薬学的組成物も同様であった。
よって、別の機序により有効に食欲を制御する肥満症治療薬が待望されている。
【００２２】
これに対して、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤は、神経伝達物質ではなく、グルコース抑制性ニューロンの機能に着目した。すなわち、上述したように、グルコースのシグナル伝達機構の中心として、ＮＫＡの作用に介入して摂食を調節する。
これにより、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤は、従来技術１とは異なり、「食欲促進ニューロン」を直接抑制することができる。さらには、この食欲促進ニューロンは同時に全身エネルギー代謝を調節していることから、視床下部からの出力経路を修飾し、それにより脂肪細胞・肝臓の代謝を調節し、更なる抗肥満作用があることが期待される。同時に、脂肪細胞由来物質の視床下部へのフィードバック入力をも修飾し、統合的な食欲抑制が可能となる。
また、脳内において、ＧＩニューロンは、視床下部弓状核の、第１次摂食・代謝調節中枢をはじめとする数か所にのみ特異的に存在するため、副作用を抑えられる。
このため、ごく少量の薬物を用いて、食欲を根本的に抑制できると考えられ、副作用の少ない食欲抑制や肥満解消を実現させることができる。よって、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤は、効果的な摂食抑制作用が得られ、抗肥満効果が期待でき、メタボリック・シンドロームの解消に資することができる。
これにより、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤は、食物摂取量を制限するために、糖尿病等にも用いることができる。
【００２３】
また、視床下部ＧＩニューロンのＮＫＡを抑制することで、食欲を司るＧＩニューロンの活動を活性化させ、第１次摂食・代謝調節中枢による「食欲」を亢進させることが可能になる。
このため、本発明の実施の形態に係食欲調節剤において、ＧＩニューロンのＮＫＡの活性を抑制する各種のＮＫＡインヒビターとなる組成物を用いることができる。このＮＫＡインヒビターを含む食欲調節剤は、食欲亢進剤として用いることができる。
このＮＫＡインヒビターとしては、例えば、強心配糖体であるウワバイン（ｏｕａｂａｉｎ）、又はジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）を用いることができる。ウワバインは、キョウチクトウ科（Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ）の種子から抽出される強心配糖体の一種であり、ＮＫＡの作用を阻害する。ウワバイン又はジゴキシンは、ＮＫＡの活性を抑制することで、細胞膜の内外にＮａ+、Ｋ+イオンの濃度差を引き起こしやすくし、これにより膜電位が変化する脱分極（ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）による心臓の拍動を助けるため、従来は強心剤として用いられている。
ウワバイン又はジゴキシンは、ＮＫＡを抑制する作用が強いものの、本発明者らの予備的な実験により、心臓等に作用の出ない低容量にてＧＩニューロンの活性化を引き起こすことが分かっている。
これにより、例えば、抗癌剤の副作用による食欲の低下、消化管手術後の食欲低下、加齢による食欲の低下、低栄養、神経性食思不振症、摂食障害を伴う、うつ病等の精神疾患・自律神経失調症等のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｌｉｆｅ）の低下に係る疾病の治療として、食欲を亢進させることができる。
よって、食欲の不振による体力の低下を抑えることができる。
なお、ＮＫＡインヒビターとして、他の強心配糖体、ペプチドホルモン、ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ等を用いることができる。また、ＮＫＡインヒビターも血液脳関門を透過し、視床下部弓状核のＧＩニューロンに特異的に結合するようなものを用いることが望ましい。
また、ヒトに投与する場合、ヒトに用いられる強心配糖体のジゴキシンとこのアナログとして、「ハーフジゴキシンＫＹ」、「ジゴキシンＫＹ」（京都薬品製、トーアイエイヨー、アイテラス）、「ジゴキシン「ＡＦＰ」」（アルフレッサ製）、「ジゴキシン」（中外製薬製）、メチルジゴキシン「ラニラピッド」（中外製薬製）、デスラノシド「ジギラノゲン」（アイロム製）等の製剤を用いることができる。作用機構が同じであるため、本実施の形態におけるジゴキシンとウワバインの効果は、同様となる。
【００２４】
このように、本発明の実施の形態に係る視床下部弓状核のＧＩニューロンのＮＫＡ活性を調整する調整剤を用いることで、ＮＫＡを活性化させて食欲抑制させ、ＮＫＡを抑制させて食欲増進させるという、２つの効果を目的に応じて得ることができる。
これにより、食欲を自在に調整して、適正な体重や体組成等の身体状態を得ることができるようになる。
【００２５】
以上のように、摂食亢進性グルコース抑制性ニューロンを制御する鍵となる分子して、ＮＫＡの修飾により摂食を制御できる。
これにより、ＮＫＡ活性化物質の開発による新規抗肥満薬である治療剤を開発することができる。このプロトタイプとなる物質として、ＳＳＡを用いることができる。
一方、ＮＫＡ抑制物質により、術後・抗がん剤使用・高齢者の食欲低下に伴うＱＯＬ低下の改善の治療剤を開発することもできる。
【００２６】
また、本発明の実施の形態に係る食欲亢進剤と食欲抑制剤とを同一のパッケージに入れて提供することも可能である。これにより、患者の意志で任意の間隔で食欲を調整できる。つまり、食事のタイミングを自在に調節して、各種疾病やダイエット等に適宜用いることができる。このため、血糖値を所定の間隔に保つ必要がある糖尿病患者や、間食が止められない肥満患者等に用いることができる。また、抗癌剤の副作用等により食欲が低下している患者が、病院食を提供する間隔で食欲がでるように調整することができる。
このように本発明の実施の形態に係る食欲亢進剤と食欲抑制剤とは、同一のＮＫＡの活性の抑制／亢進機構により動作するので、それぞれが拮抗すると考えられる。また、同一の機構により食欲亢進／食欲抑制を行うため、薬剤耐性により使用量が増えることが抑えられると考えられる。また、体内の応答を過度に刺激することも少ないと考えら得る。
このため、副作用が少なく、健康食品や動物用飼料としても健康被害がなく用いることが期待できる。
【００２７】
また、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤又は食欲亢進剤は、任意の製剤上許容しうる担体（例えば、生理食塩水、補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等が挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０等を挙げることができるが、それらに限定されない）と共に投与することができる。また、適切な賦形剤等を含んでもよい。
【００２８】
また、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤又は食欲亢進剤は、製剤上許容しうる担体を調製するために、適切な薬学的に許容可能なキャリアを含み得る。
このキャリアとしては、シリコーン、コラーゲン、ゼラチン等の生体親和性材料を含んでもよい。あるいはまた、種々の乳濁液であってもよい。
さらには、例えば、希釈剤、香料、防腐剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、乳化剤、可塑剤などから選択される１または２以上の製剤用添加物を含有させてもよい。
【００２９】
本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤又は食欲亢進剤は、経口投与のための投与に適した投与形態において、当該分野で周知の製剤上許容しうる担体を用いて処方され得る。
本発明の実施の形態に係る医薬組成物の投与経路は、特に限定されないが、非経口的に投与することが好ましい。
非経口投与としては、例えば、静脈内、動脈内、皮下、真皮内、筋肉内または腹腔内の投与が挙げられる。
【００３０】
本発明の実施の形態に係る食欲調整剤は、脊椎動物の脳に存在する視床下部弓状核のグルコース抑制性ニューロンを作用対象としている。
この脊椎動物は特に限定されるものではなく、例えば、ヒト、家畜動物種、野生動物を含む。
このため、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤又は食欲亢進剤は、広く動物の治療、家畜の発育増進等の対象とすることができる。
また、疾病の予防や健康増進のため、健康食品のような食物、動物用の飼料、又は食餌に含ませることもできる。
【００３１】
また、本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤の治療対象としては、メタボリック・シンドロームのような、摂食変調を伴う疾病、糖尿病、高血圧等を含む。また、本発明の実施の形態に係る食欲亢進剤の治療対象としては、摂食障害を含む、痩身による体力低下に関する各種疾病に用いることができる。
【００３２】
また、本発明の実施の形態に係る治療用組成物を上述の治療に用いるために、投与間隔および投与量は、疾患の状況、さらに対象の状態などの種々の条件に応じて適宜選択および変更することが可能である。
【００３３】
本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤又は食欲亢進剤の１回の投与量および投与回数は、投与の目的により、さらに患者の年齢および体重、症状および疾患の重篤度などの種々の条件に応じて適宜選択および変更することが可能である。
投与回数および期間は、１日１回約２〜４週間程度投与して状態をモニターし、その状態により再度あるいは繰り返し投与を行う。
【００３４】
本発明の実施の形態に係る食欲抑制剤又は食欲亢進剤は、他の組成物等と併用することも可能である。また、他の組成物と同時に本発明の組成物を投与してもよく、また間隔を空けて投与してもよいが、その投与順序は特に問わない。
【００３５】
また、本発明の実施の形態において、疾患が改善または軽減される期間は特に限定されないが、一時的な改善または軽減であってもよいし、一定期間の改善または軽減であってもよい。
【実施例】
【００３６】
〔本発明の実施の形態に係る視床下部弓状核のＧＩニューロンのＮＫＡ活性の調整剤の実施例〕
以下で、本発明の実施の形態に係る治療用組成物について、具体的な実験を基にして、実施例としてさらに具体的に説明する。しかしながら、この実施例は一例にすぎず、これに限定されるものではない。
【００３７】
上述の実施の形態で説明したように、本発明の発明者らは、鋭意実験と検討を行い、ＧＩニューロンとＮＫＡの関係について調べた。
まず、図２の実験の概念図を参照して、本実施例における、脳のニューロン同定／機能解析方法について説明する。本実施例では、摂食機能が完成した６週齢ラットの視床下部スライスを作製し、その中から弓状核を切離した。その後、機械的分散及び酵素処理により、ニューロンを単離した。そして、蛍光画像解析装置で、細胞内のＮａ+（［Ｎａ+］i）及びＣａ2+濃度（［Ｃａ2+］i）を測定した。この際、実験に応じて、細胞外液を灌流して測定した。
【００３８】
より具体的には、本発明の発明者らは、視床下部弓状核からＧＩニューロンを単離し、グルコース濃度低下と、ＮＫＡ活性を抑制する薬剤であるＮＫＡインヒビターであるウワバインを用いた実験を行った。この結果、グルコース濃度低下及びＮＫＡ抑制の両方が、視床下部弓状核のＧＩニューロンの［Ｎａ+］i及び［Ｃａ2+］iの増加を引き起こすことを見いだした。
これに対して、ＮＫＡアクティベータとして動作する抗体であるＳＳＡ４１２によって処理をしたところ、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］iの増加は起こらなかった。
また、本発明の発明者らは、ＮＫＡの上流の機構についても調べた。すると、グルコース濃度低下は、ＧＩニューロンのＮＡＤ（Ｐ）Ｈ自己蛍光を減少させた。また、グルコキナーゼインヒビターを用いて処理を行ったところ、グルコース濃度増加により活動しなくなったＧＩニューロンの［Ｃａ2+］iを増加させた。これにより、ＮＫＡがグルコース代謝の経路により制御されていることが示された。
さらに、本発明の発明者らは、ＮＫＡのパスウェイの下流の機構についても調べた。電圧依存性Ｃａ2+チャンネル（ＶＤＣＣ）ブロッカーを用いてＧＩニューロンを処理した。すると、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加が抑制された。これにより、ＧＩニューロンにおけるＮＫＡの下流に、脱分極を介した機構があると推測できた。
この上で、本発明の発明者らは、ＮＫＡによる摂食行動の調節について、すなわちＮＫＡの活性の調節により食欲を変化させられるかについて調べた。具体的には、ラットを絶食状態にして、視床下部弓状核のＮＫＡの活性を調べた。すると、絶食により、視床下部弓状核のＮＫＡの活性が減少した。また、ＮＫＡインヒビターであるウワバインを脳室内に注射したところ、摂食活動が亢進し、ニューロペプチドＹの発現も惹起した。
これに加えて、グルコース代謝を抑制する薬剤であるグルコキナーゼインヒビターをラットの脳室内に注射したところ、摂食活動を喚起したが、ＮＫＡアクティベータであるＳＳＡ４１２を脳室内へ注射したところ、惹起された摂食活動が打ち消された。
このように、本発明の発明者らは、ＮＫＡの抑制がＧＩニューロンのグルコース濃度低下に誘発された活性化を媒介するという仮説の具体的な作用機構を証明した。
よって、本実施例により、エネルギー状態の低下をＧＩニューロンの刺激と摂食行動に結びつける視床下部弓状核のＮＫＡの新規機能を明らかにし、視床下部弓状核のＧＩニューロンのＮＫＡ活性の調整剤を実現した。これにより、従来技術１とは異なり、副作用の少ない食欲抑制剤／食欲亢進剤をそれぞれ同一の作用機構を元に実現できる。
以下で、具体的な各実験と実施の例について、図面とデータを参照して説明する。
【００３９】
（視床下部弓状核からの単一のニューロンの調製）
実験に用いたラットは、オスの成熟ＳＤラットを、１２時間の明／暗サイクル及び従来の食物（ＣＥ−２；  クレア社製、東京、日本）及び水で無制限に飼育した。この研究のための動物プロトコルは、自治医科大学の動物保護委員会で承認された。
視床下部弓状核の単一のニューロンは、５〜７週のラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ｒａｔ、ＳＤラット）から単離された。ラットはウレタン（カルバミン酸エチル；１ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）により麻酔をかけられ、脳を摘出された。そして、両側視床下部弓状核を含んでいる冠状断脳切片が準備された。その後、視床下部弓状核は両側から切離された。切り分けられた組織は、下記の成分からなるＨＥＰＥＳバッファーを用いたクレブス・リンガー重炭酸塩緩衝液（ＨＥＰＥＳ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ  ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ、ＨＫＲＢ）により洗浄した：
ＨＫＲＢの組成（単位、ｍＭ）：  ＮａＣｌ（１２９）、ＮａＨＣＯ３（５．０）、ＫＣｌ（３．７）、ＫＨ２ＰＯ４、１．２、ＣａＣｌ２（１．８）、ＭｇＳＯ４（１．２）、１０ｍＭグルコースを含んでいるＨＥＰＥＳ・ｐＨ７．４（１０）
【００４０】
その後、切除された視床下部弓状核は、５〜１０分間温和な機械的な分散（粉砕）をした後、２０ユニット／ｍｌのパパイン（ｐａｐａｉｎ）（シグマ・ケミカル社製、セントルイス、ミズーリ州、米国）、０．０１５ｍｇ／ｍｌのデオキシリボヌクレアーゼ、０．７５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン、及び１ｍｍｏｌ／Ｌシステインを加えたＨＫＲＢを用いて、３６℃のウォーターバスで１５分振とう培養し、酵素処理を行った。この細胞懸濁液は５分間１００×ｇで遠心分離された。
上澄みの溶液を捨てた細胞の沈殿物はＨＫＲＢで再懸濁され、カバーガラス上に分散して置かれた。細胞は６時間以内、飽和湿度の皿で、室温、遮光にて維持された。その後、単一のニューロンはカバーガラスに配置された。
【００４１】
（単一の視床下部弓状核ニューロンの［Ｃａ2+］i、［Ｎａ+］i及び［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ］iの測定）
［Ｃａ2+］i、［Ｎａ+］i、及び［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ］iは、レシオメトリック・マイクロ蛍光イメージング法にて測定された。
イメージインテンシファイア付電荷結合素子（ＩＣＣＤ）カメラにより検出された。また、レシオ（比率）・イメージは、蛍光画像解析装置であるＡＲＧＵＳ−５０システム又はＡｑｕａｃｏｓｍｏｓシステム（浜松ホトニクス社製、浜松、日本）を用いて取得した。
下記で、各測定のより具体的な方法を説明する。
【００４２】
［Ｃａ2+］iの測定は、単一ニューロンの調製後、２〜６時間静置し、レシオメトリックｆｕｒａ−２イメージングを用いて行った。この際、２μＭのＣａ2+感受性色素ｆｕｒａ−２／アセトキシメチル・エステル（ＡＭ）（株式会社ケミカル同仁製、熊本、日本）を負荷して、室温で１時間培養された。その後、細胞は倒立顕微鏡のステージ上の保温装置付チェンバーに取り付けられ、３２℃で１ｍｌ／分でＨＫＲＢにより灌流された。
細胞は、３４０及び３８０ｎｍで交互に１２．０秒ごとに励起された、
５１０ｎｍ（それぞれＦ３４０及びＦ３８０）の発光信号はＩＣＣＤカメラにより検出された。
また、レシオ・イメージ（Ｆ３４０／Ｆ３８０）はＡＲＧＵＳ−５０あるいはＡｑｕａｃｏｓｍｏｓシステムで取得した。
データは従来に報告された手順により、形態学的及び生理学的なニューロン判定基準を満たす細胞から得られた。
薬剤に応じた［Ｃａ2+］i増加のピーク振幅が、自発的な変動の１３０％以上だった場合、それらは［Ｃａ2+］i応答であるとした。
薬剤に応じた［Ｃａ2+］i増加の振幅は、ピーク［Ｃａ2+］iレシオから刺激前の基準となる［Ｃａ2+］iレシオを引くことにより計算された。
阻害剤の影響を調査する実験では、刺激性の薬剤に誘発された［Ｃａ2+］i増加の振幅が３０％以上阻害剤で抑えられた場合、抑制と判定した。
【００４３】
［Ｎａ+］iの測定は、単一ニューロンの調製後２時間静置し、３２℃で１．５〜２．０時間、Ｎａ+感受性色素であるナトリウム結合イソフタル酸ベンゾフラン（ＳＢＦＩ）（５μＭ）／ＡＭ（１μＭ）（モレキュラー・プローブズ社製、ユージーン、オレゴン、アメリカ）及び非イオンの分散剤であるプクロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１２７（０．０１２５％）（モレキュラー・プローブズ社）を負荷して培養された。
その後、細胞は倒立顕微鏡のステージ上の保温装置付チェンバーに取り付けられ、３２℃で１ｍｌ／分でＨＫＲＢにより灌流された。
ＳＢＦＩ蛍光測定法のための手順は、ｆｕｒａ−２のための標準的な手順に従った。
ＨＥＰＥＳバッファーを用いたＮａ+を含まない（Ｎａ+−ｆｒｅｅ）溶液は、ＮａＣｌの代わりにＮ−メチルＤグルカミン塩化物（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃａｍｉｎｅ）を用いることにより準備された。
単離細胞の［Ｎａ+］i値は較正曲線に従って計算された。
当該構成曲線は、膜内外のＮａ+およびＫ+濃度を平衡化するイオン透過担体グラミシジンＤ（ＭＰバイオメディカルズ社製、アーヴィン、ＣＡ、アメリカ）１０μｇ／ｍｌを含んだ各種のＮａ+（５、１０、１５、３０、６０、１００  ｍＭ）及びＫ+濃度（Ｎａ+＋Ｋ+＝１３５、グルコン酸塩１０５、ＣａＣｌ２  ２．５、ＭｇＣｌ２  １．２、ＨＥＰＥＳ  １０、及びグルコース８．３（単位、ｍＭ））を含む溶液に段階的に灌流することで、観察されたレシオを設定した。
【００４４】
（同一ニューロンの［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ］iおよび［Ｃａ2+］iの測定）
以前に報告された同様の方法により、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの自己蛍光が最初に測定された。
細胞は３６０ｎｍで励起された。また、４７０ｎｍの蛍光発光が検出された。各時点における蛍光強度Ｆ３６０は、測定開始時の蛍光強度Ｆ３６０（０）に対する割合（Ｆ３６０／Ｆ３６０（０））により計算された。
［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ］iを測定した後に、同一ニューロンにおいて［Ｃａ2+］i測定のために、細胞に室温で１時間、２μＭ  ｆｕｒａ−２を負荷した。また、上述した手順で［Ｃａ2+］iが測定された。
【００４５】
（同一ニューロンの［Ｎａ+］iおよび［Ｃａ2+］iの測定）
上に述べられるような［Ｎａ+］iの測定の後に、同一ニューロンにおいて、［Ｃａ2+］iの測定を行った。Ｃａ2+およびＮａ+測定のための２つの励起波長を分離するために、Ｃａ2+感受性色素として、ｆｌｕｏ−４／ＡＭ（モレキュラー・プローブズ社製）を使用して測定された。
［Ｎａ+］iを測定した後に、同一ニューロンにおいて［Ｃａ2+］i測定のために、細胞に室温で１時間間２μＭ  ｆｌｕｏ−４が負荷された。
細胞は、４９０ｎｍで１２秒ごとに励起された。また、５２０ｎｍの蛍光発光が検出された。
各時点における蛍光強度Ｆ４９０は、測定開始時の蛍光強度Ｆ４９０（０）に対する割合（Ｆ４９０／Ｆ４９０（０））により計算された。
【００４６】
（ＳＳＡ４１２と［Ｃａ2+］iの測定）
最初に、［Ｃａ2+］i測定は、灌流を行わない状態で、８．３ｍＭグルコースを含んだ、３０μｌの小滴を用いて１０分間、行なわれた。
第１の測定の後、２０μｌ小滴が静かに除去された。また、グルコースのないＳＳＡ４１２又はコントロールのウサギＩｇＧを含んでいる２０μｌのＨＫＲＢが加えられた。これにより、２．８のｍＭグルコースを含んでいる３０μｌのＨＫＲＢとなった。
この３０μｌのＨＫＲＢを使用して、灌流を行わない状態で、次の１０分において、第２の［Ｃａ2+］i測定が行なわれた。
最後に、ＧＩニューロンを明確に識別するために、同一ニューロンの［Ｃａ2+］iが上述した灌流条件下で測定された。
【００４７】
（ＮＫＡ活性の決定）
８週間の年齢の自由に食物を与えられた（ｎ＝７）又は２４時間の絶食条件下の（ｎ＝７）ラットから、左右の視床下部弓状核およびＶＭＨを取得し、直ちに液体窒素中で凍結した。
ウワバイン−センシティブＡＴＰアーゼアッセイの手順は、従来のＫｙｔｅの方法（Ｋｙｔｅ、１９７２、「Ｊ．  Ｔｈｅ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｒｄｉａｃ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  （Ｎａ＋  ＋  Ｋ＋）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ．」、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２４７、ｐ．７６３４−７６４１）を修正して用いた。
【００４８】
組織試料はそれぞれ、ティッシュティアラー（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｅａｒｏｒ、ドレメル社製、ラシーン、ウィスコンシン州、アメリカ）を使用して、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ  ７．４の０．５ｍｌでホモジナイズされた。その上で、ガラス繊維布ホモジナイザーで均質化された。
ホモジェネートのタンパク濃度は、ＢＣＡプロテインアッセイ（ピアス社製、ロックフォード、イリノイ州、アメリカ）で決定された。
ホモジェネートされたサンプルは、分析のための、ウワバインを入れた／ウワバインを入れない２つのグループに分割された。
【００４９】
酵素活性は、Ｎａ+およびＫ+がある状態で、ウワバインを入れた／ウワバインを入れないグループについて、ＭｇＡＴＰのウワバイン感受性の加水分解として定義した。
タンパク質、ＭｇＡＴＰ、Ｎａ+、Ｋ+、及びウワバインの最終的な濃度は、それぞれ２０μｇ／ｍｌ、３ｍＭ、１２０ｍＭ、２０ｍＭ、及び２ｍＭだった。
その反応は、３７℃で３０分の培養の後、ＭｇＡＴＰを加えることにより始められ、０．７５ｍｌの反応停止溶液と混合することにより停止された。
発色剤（０．０２ｍｌ）が加えられ、３０分間室温で現像させた。
その後、遊離したリン酸塩の濃度が、分光測光器で７００ｎｍの波長の測定により決定された。
【００５０】
（脳室内投与および食餌実験）
９〜１０週のＳＤラットにおいて、ガイド・カニューレを脳の第三脳室に挿入した。この箇所は、正中線上でブレグマの尾側の０．７ｍｍ、及び頭蓋骨表面からの７．０ｍｍ下に位置している。
手術の後、ラットを７日間回復させ、非特異性のストレス応答を最小限にするために、毎日５分間のハンドリングを行った。
脳室内投与は、午前中（１０：００−１２：００）に開始し、食物摂取させた２時間後の摂取量を測定した。
【００５１】
（ＮＰＹ及びＰＯＭＣのｍＲＮＡ量の測定）
１０週の年齢のＳＤラットの脳室内に、５ｍＭグルコースと一緒にウワバイン又はＨＫＲＢが投与された。視床下部弓状核は、投与の３時間後に摘出された。
ｍＲＮＡは以前に報告されたのと同様な方法によりリアルタイムＰＣＲで測定された。
トータルＲＮＡは、Ｔｒｉｚｏｌ（インヴィトロゲン社、ゲーサーズバーグ、メリーランンド州、アメリカ）及びＲＮＡｓｅフリーのＤＮＡｓｅ（プロメガ社、マディソン、ウィスコンシン州、アメリカ）により単離された。
その後、トータルＲＮＡをＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ（登録商標）（東洋紡績株式会社製、大阪、日本）による相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）へ転換した後、ＳＹＢＲ  ｐｒｅｍｉｘ  Ｅｘ  ｔａｑ  ＩＩポリメラーゼ（タカラバイオ社製、大津、日本）が用いられ、リアルタイムＰＣＲにより測定された。
蓄積した生成物は実時間（リアルタイム）で測定された。
また、最初に生成物を検出することができる平均のサイクルしきい値は、同じプレート上で実行されたプライマー・ペアおよびｃＤＮＡサンプル当たり５つの独立した反応の反復試験試料に対して決定された。
ＮＰＹ又はＰＯＭＣ（Ｐｒｏ−ｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ）の各ｃＤＮＡサンプルは、ハウスキーピング遺伝子であるグリセリンアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）の生成物のプライマー・セットを使用して標準化された。
各ｃＤＮＡに対応するプライマーは以下の通りだった：
ＧＡＰＤＨ  −  フォーワードプライマー（配列番号１）、リバースプライマー（配列番号２）
ＮＰＹ  −  フォーワードプライマー（配列番号３）、リバースプライマー（配列番号４）；
ＰＯＭＣ  −  フォーワードプライマー（配列番号５）、リバースプライマー（配列番号６）
【００５２】
（統計）
データはすべて平均±ｓ．ｅ．ｍ（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｅｒｒｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｅａｎ、ＳＥＭ）として示される。
ペア又はペアでないスチューデントｔ検定は、２つのグループの実験で使用された。
次に、Ｂｏｎｆｆｅｒｏｎｉのポスト・ホック・テストの後、４つのグループの実験において、階乗分散分析が使用された。
Ｐ＜０．０５の場合、統計的に有意であると考慮した。
【００５３】
（ＧＩニューロンの定義）
次に図３Ａ〜図３Ｄを参照して、ＧＩニューロンの定義について検討した際の実験結果について説明する。
グルコース濃度低下は、視床下部弓状核から単離された３６２のニューロンのうち１３７ニューロン（３７．８％）の［Ｃａ2+］iを増加させた。
図３Ａは、本実施例において、ＧＩニューロンとして定義したニューロンの［Ｃａ2+］i応答の具体例を示している。本実施例では、単離された視床下部弓状核のニューロンにおいて、グルコース濃度低下とグルタミン酸ナトリウム（ｇｌｕｔａｍａｔｅ、１００μＭ）とに応答して［Ｃａ2+］iを増加させたニューロンを、ＧＩニューロンと定義した。
図３Ｂは、ＧＩニューロン（ｎ＝１３７）において、８．３Ｇ及び２．８Ｇでの［Ｃａ2+］i応答の平均を示している。「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。
この実験により、８．３Ｇから２．８Ｇまでグルコース濃度を低下させた際に［Ｃａ2+］i増加応答したニューロンについて、ＧＩニューロンとして定義した。これらのニューロンは、ＧＩニューロンとして所定の応答基準を満たしている。
【００５４】
これに対して、図３Ｃは、非ＧＩニューロンとして定義されたニューロンの［Ｃａ2+］i応答の具体例を示している。視床下部弓状核から取得したニューロンにおいて、グルコース濃度低下により、［Ｃａ2+］iの増加を示さなかったニューロンを非ＧＩニューロンと定義した。非ＧＩニューロンでは、グルコース濃度低下において［Ｃａ2+］iは変化がないものの、通常の興奮物質であるグルタミン酸ナトリウムには応答する。
図３Ｄは、非ＧＩニューロン（ｎ＝１２３）において、８．３Ｇ及び２．８Ｇでの［Ｃａ2+］i応答の平均を示している。このように、８．３Ｇと２．８Ｇでは有意差がなかった。
【００５５】
また、以下の実験において、グルコース濃度低下に応答して［Ｃａ2+］iを減少させるグルコース興奮性（ＧＥ）ニューロンは、分析から除外された。
【００５６】
（ＧＩニューロンにおけるグルコース濃度低下による［Ｎａ+］i増加応答）
ここで、本発明の発明者らは、ＮＫＡ活性の指標である［Ｎａ+］iの反応を、ＳＢＦＩを使用してマイクロ蛍光分析測定を行い、ＮＫＡ活性を評価した。図４Ａ〜Ｅを参照して、このＮＫＡ活性の実験結果について説明する。
図４Ａは、グルコース濃度低下とウワバインによるＧＩニューロンの［Ｎａ+］i応答を示すグラフである。グルコース濃度低下およびウワバインは、視床下部弓状核から単離されたニューロンの［Ｎａ+］iを増加させた。このニューロンとしては、上述のように、摂食機能がほぼ成熟する５〜７週のラットの視床下部弓状核からニューロンを単離した。結果は、７つのニューロン（ｎ＝７）のうち代表的な反応について示した。
図４Ｂは、ＳＢＦＩ蛍光レシオに［Ｎａ+］iを関連づける較正曲線を示している。この構成曲線は、１μｇ／ｍｌグラミシジンＤ及びＮａ+濃度を段階的に変化させることで作成した。
グルコース濃度低下は、［Ｎａ+］iの増加を誘発した。また、ＮＫＡの特異的インヒビターのウワバインは、同じニューロンの［Ｎａ+］i増加を誘発した。
また、グルコース濃度低下に誘発された［Ｎａ+］i増加は、７．５±１．１ｍＭ（ｎ＝７）であった。
【００５７】
図４Ｃは、もう一つの一連の実験である、ＧＩニューロンにおけるグルコース濃度低下による［Ｎａ+］iの変化と、同一ニューロンでの［Ｃａ2+］iの変化を示すグラフである。グルコース濃度低下は、［Ｎａ+］i増加を誘発し、同じニューロンで［Ｃａ2+］i増加を引き起こした。すなわち、グルコース濃度低下により、ＧＩニューロンにおいて［Ｎａ+］iが増加した（ｎ＝１３）。
【００５８】
図４Ｄは、非ＧＩニューロンにおけるグルコース濃度低下による［Ｎａ+］iの変化と、同一ニューロンでの［Ｃａ2+］iの変化を示すグラフである。
グルコース濃度低下は、２．８Ｇに対する［Ｃａ2+］i応答の欠如を示した非ＧＩニューロンにおいては、［Ｎａ+］iを顕著に変化させなかった（ｎ＝８）。
【００５９】
図４Ｅは、ＧＩニューロン又は非ＧＩニューロンにおけるグルコース濃度低下に誘発された［Ｎａ+］iの変化の平均を示すグラフである。「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。
すなわち、ＧＩニューロンにおけるグルコース濃度低下に誘発された［Ｎａ+］i増加の変化量は、非ＧＩニューロンにおける変化量に対して、有意に大きかった。
【００６０】
これらのデータにより、ＧＩニューロンにおいて、グルコース濃度低下が、ＮＫＡ活性を選択的に低減するという概念が立証された。
【００６１】
（ＧＩニューロンにおけるＮＫＡ活性低下によるＧＩニューロンの活性化）
次に、本発明の発明者らは、ＮＫＡ活性の低下が、実際にＧＩニューロンの活性化に関連しているかどうかを調べた。図５Ａ〜Ｍを参照して、ＮＫＡインヒビターであるウワバインと、ＮＫＡを働かせなくするためにＫ+を含まない溶液を投与した実験結果について説明する。
図５Ａは、２．８Ｇで反応したＧＩニューロンにおいて、８．３Ｇでウワバイン（１００μＭ）を投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである（ｎ＝１５）。このようにウワバインの投与により、ＧＩニューロンの［Ｃａ2+］i増加を誘発することができた。
図５Ｂは、ウワバインを投与しない群と投与した群における、８．３Ｇでの［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。
図５Ｃは、８．３Ｇで、Ｋ+を含まない（Ｋ+−ｆｒｅｅ）溶液を投入した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである（ｎ＝１２）。このように、Ｋ+−ｆｒｅｅ溶液にした場合には、細胞膜内外の電位差を変化させられないため、ウワバインと同様にＮＫＡが機能しなくなる。この場合でも、ＧＩニューロンの［Ｃａ2+］i増加を誘発した。
図５Ｄは、Ｋ+−ｆｒｅｅ溶液を投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。
このように、ＧＩニューロンにおいて、［Ｃａ2+］i反応を安定化させる８．３Ｇグルコース濃度において、ＮＫＡをブロックする条件となる１００μＭウワバインの投与および外部Ｋ+の除去を行うことで、［Ｃａ2+］i増加を誘発した。すなわち、ＮＫＡ活性を低下させることで、ＧＩニューロンの［Ｃａ2+］i増加を誘発し、ＧＩニューロンを活性化することができる。
【００６２】
次に、本発明の発明者らは、ウワバインの継続的な投与にてＮＫＡが既にブロックされていた場合、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加応答を防ぐことができるかどうか調べた。
図５Ｅは、まずはウワバインを投与しない状態で、ＧＩニューロンに対してグルコース濃度低下による反復刺激をした場合の［Ｃａ2+］i応答を観測したグラフである。２．８Ｇによるグルコース濃度低下１回目刺激（Ａｍｐ１）、及びグルコース濃度低下２回目刺激（Ａｍｐ２）において、それぞれグルコース濃度低下による反復刺激は［Ｃａ2+］i増加を反復して誘発することが分かる。
図５Ｆは、８．３Ｇと、２．８Ｇのグルコース濃度低下１回目刺激（Ａｍｐ１）又はグルコース濃度低下２回目刺激（Ａｍｐ２）における［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである。Ａｍｐ２に対する［Ｃａ2+］i応答の振幅は、Ａｍｐ１と同様であった（ｎ＝９）。すなわち、Ａｍｐ１、Ａｍｐ２とも、それぞれ８．３Ｇに対してＰ＜０．０１（＊＊）であった。
これに対して、ウワバイン非投与下におけるコントロール実験においては、グルコース濃度低下２回目刺激（Ａｍｐ２）で誘発された［Ｃａ2+］iの増加は、グルコース濃度低下１回目刺激（Ａｍｐ１）で誘発された［Ｃａ2+］iの増加と有意差が認められなかった。
【００６３】
図５Ｇは、ウワバインが継続的に存在していた場合のグルコース濃度低下の反復刺激により誘発された［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。このように、グルコース濃度低下１回目刺激（Ａｍｐ１）で誘発された［Ｃａ2+］i増加の後、１００μＭのウワバインが継続的に存在している状態でグルコース濃度低下２回目刺激（Ａｍｐ２）を行った場合、［Ｃａ2+］iの増加応答は抑えられた。
図５Ｈは、８．３Ｇと、２．８Ｇのグルコース濃度低下１回目刺激（Ａｍｐ１）及び１００μＭのウワバインが継続的に存在している状態でグルコース濃度低下２回目刺激（Ａｍｐ２）を与えた際の、［Ｃａ2+］i応答の平均を示すグラフである（ｎ＝１０）。１００μＭウワバインが継続的にある状態でのＡｍｐ２は、同じ実験のＡｍｐ１と比較して、有意に小さかった（＊、Ｐ＜０．０５）。また、図５Ｈと図５Ｆとを比較すると、コントロール実験（図５ＦのＡｍｐ２）と比べても、図５ＨのＡｍｐ２は有意に小さかった（＃、Ｐ＜０．０５）。
これらの結果により、ＧＩニューロンにおいてＮＫＡ活性を抑制させることによって、グルコース濃度低下に誘発された場合と同様の［Ｃａ2+］i増加が誘発されることが分かる。
すなわち、ＧＩニューロンにおいて、低グルコース刺激による［Ｃａ2+］i増加はＮＫＡの活性に依存していることが示された。
【００６４】
（ウワバインの濃度と、ＧＩニューロンの活性化の関係）
次に、図５Ｉ〜Ｊを参照して、２．８Ｇで反応したＧＩニューロンと、反応しなかった非ＧＩニューロンにおいて、８．３Ｇで、濃度を変えてウワバインを投与した際の［Ｃａ2+］i応答について説明する。この応答の実験は、ウワバインの濃度の他は、図５Ａ、Ｂの実験と同様に行った。
図５Ｉは、ウワバイン濃度に対して反応した細胞数の割合を示すグラフである。横軸は、ウワバインの濃度（μ  ｍｏｌ／Ｌ、μＭ）を示し、縦軸はウワバインにより応答が増加したニューロンの割合（％）を示す。黒丸は、ＧＩニューロンを示す。また、白丸は、非ＧＩニューロンを示す。
図５Ｊは、［Ｃａ2+］i増加応答の平均を示すグラフである。横軸は、ウワバインの濃度（μ  ｍｏｌ／Ｌ、μＭ）を示し、縦軸は［Ｃａ2+］i増加応答の平均を示す。黒丸はＧＩニューロン、白丸は非ＧＩニューロンを示す。「＃」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。
このように、ウワバインの濃度が１００μＭの１／１０００の０．１μＭであっても、顕著に応答を増加させることが分かる。また、１００μＭの１／１００の１μＭにて［Ｃａ2+］i増加応答が最大化する。さらに、１００μＭの１／１０の１０μＭにて、ＧＩニューロンと非ＧＩニューロンとの差がなくなることが分かる。ここで、１００μＭのウワバインを脳室内投与すると、通常の強心剤として用いられる投与量と同等であると考えられる。すなわち、通常の投与量の１／１０で、グルコース濃度低下によるＧＩニューロンの活性化を抑えることが可能である。
【００６５】
（ＮＫＡの活性化による、ＧＩニューロンの不活性化）
上述の結果により、ＮＫＡを活性化させる操作は、グルコース濃度低下に対する［Ｃａ2+］i増加応答を減ずる可能性がある。
そこで、本発明の発明者らは、ＮＡＫのαサブユニットと特異的に作用し、ＮＫＡを活性化させるＮＫＡアクティベータとなるＳＳＡ４１２抗体を用いて、ＮＫＡ活性増加とＧＩニューロンの不活性化について検討した。
この実験では、灌流を行わない状態で８．３Ｇから２．８Ｇにグルコース濃度を低下させ、ＳＳＡ４１２を２μＭ又はコントロールのウサギＩｇＧを２μＭ投入し、単離されたニューロンの［Ｃａ2+］iを測定した。
【００６６】
図５Ｋは、ウサギＩｇＧを加えたコントロール実験の結果である。
まずは、８．３Ｇの［Ｃａ2+］i応答を測定した（図５Ｋ左欄）。
その後、コントロールとなる２μＭのウサギＩｇＧを加えて、２．８Ｇの［Ｃａ2+］i応答を測定した（図５Ｋ中央欄）。２．８Ｇにおいて、［Ｃａ2+］iの増加応答を示したニューロンが存在した。
さらにウサギＩｇＧを洗浄し、溶液を灌流させた状態で［Ｃａ2+］i応答を測定した（図５Ｋ右欄、ｎ＝１２）。２．８Ｇで［Ｃａ2+］iは増加し、これらがＧＩニューロンにおける反応であったことが確認できた。
【００６７】
図５Ｌは、ＮＫＡアクティベータであるＳＳＡ４１２を加えた実験の結果である。
コントロール実験と同様に、まずは８．３Ｇの［Ｃａ2+］i応答を測定した（図５Ｌ左欄）。
その後、２μＭのＳＳＡ４１２を加えて、２．８Ｇの［Ｃａ2+］i応答を測定した（図５Ｌ中央欄）。２．８Ｇにおいて、［Ｃａ2+］iは増加応答を示さなかった。
その後、ＳＳＡ４１２を洗浄し、溶液を灌流させた状態で［Ｃａ2+］i応答を測定した（図５Ｌ右欄、ｎ＝８）。２．８Ｇで、［Ｃａ2+］iは増加し、これらがＧＩニューロンにおける変化であったことが確認できた。
すなわち、ＧＩニューロンにおいて、ＳＳＡ４１２存在下では［Ｃａ2+］i増加が誘発されず、ＧＩニューロンが活性化しないことが示された。
【００６８】
図５Ｍは、コントロールのウサギＩｇＧ、又はＮＫＡアクティベータであるＳＳＡ４１２を加えた際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示す。「＊」は、Ｐ＜０．０５であることを示す。また「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。
この結果を参照すると、２．８ＧにおけるＳＳＡ４１２存在下での［Ｃａ2+］iは、８．３Ｇの［Ｃａ2+］iとの有意差を認められなかった。さらに、コントロールであるＩｇＧ存在下での［Ｃａ2+］iに対して、ＳＳＡ４１２存在下での［Ｃａ2+］iは有意に低かった（Ｐ＜０．０５）。
すなわち、ＧＩニューロンにおけるグルコース濃度低下に対する［Ｃａ2+］i反応は、ＳＳＡ４１２の存在によって抑制された。
【００６９】
これらの結果は、ＳＳＡ４１２によるＮＫＡの活性化により、グルコース濃度低下がＧＩニューロンの［Ｃａ2+］i増加を誘発するのを抑制することを示している。
ＮＫＡ活性に対するインヒビターとアクティベータとで操作した上述のデータは、視床下部弓状核ＧＩニューロンが、ＮＫＡにより、グルコース感知によるニューロン活性化と結びつけられていることを強く示唆する。
【００７０】
（ＧＩニューロン活性化の上流でのグルコースによるシグナル伝達機構）
次に、本発明の発明者らは、ＧＩニューロン活性化の上流でのグルコースによるシグナル伝達機構を検討した。
膵臓形態のグルコキナーゼは、グルコースをリン酸化する際の律速酵素であり、ランゲルハンス島β細胞のグルコース反応及び視床下部のＧＥニューロンの応答に重要な役割を果たしている。また、ＧＩニューロンにも密接に関連している可能性が推測される。
以下で図６Ａ〜図８Ｄを参照して、このグルコースによるシグナル伝達機構に関する実験の結果について説明する。
【００７１】
図６Ａは、ＧＩニューロンにおいて、灌流液内のグルコース濃度を８．３Ｇで維持させた状態で、グルコキナーゼの拮抗阻害剤である１０ｍＭマンノヘプツロース（Ｍａｎｎｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ、ＭＨ）を投与した実験例を示すグラフである（ｎ＝１４）。この結果として、８．３Ｇにおいて、１０ｍＭのＭＨを投与すると［Ｃａ2+］iを増加させた。すなわち、グルコース濃度低下と同様の効果が得られた。
図６Ｂは、ＧＩニューロンにおいて灌流液内のグルコース濃度を８．３Ｇで維持させた状態で、代謝されないグルコース・アナログである２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）を投与した実験例を示すグラフである（ｎ＝１３）。１０ｍＭの２ＤＧを投与した結果、ＭＨと類似した結果が得られた。すなわち、８．３Ｇで、１０ｍＭの２ＤＧは、［Ｃａ2+］i増加を誘発し、グルコース濃度低下と同様の効果が得られた。
【００７２】
図６Ｃは、ＭＨに対する［Ｃａ2+］i増加応答の発生率を示しており、ＧＩニューロン（黒塗りのバー）で７７．８％（１４／１８）、非ＧＩニューロン（オープンバー）では２６．７％（４／１５）であった。
図６Ｄは、２ＤＧに対する［Ｃａ2+］i応答の割合を示しており、ＧＩニューロン（黒塗りのバー）で７６．９％（１０／１３）、非ＧＩニューロン（オープンバー）では１６．７％（１／６）であった。
図６Ｅは、ＭＨを投与した際のＧＩ及び非ＧＩニューロンの［Ｃａ2+］i応答の平均を示している。「＊＊」はＰ＜０．０１であることを示す。
図６Ｆは、２ＤＧを投与した際のＧＩ及び非ＧＩニューロンの［Ｃａ2+］i応答の平均を示している。「＊＊」はＰ＜０．０１であることを示す。
このように、ＭＨ及び２ＤＧに対する［Ｃａ2+］i応答の割合と振幅は、非ＧＩニューロンよりもＧＩニューロンにおいて有意に大きかった。
これらのデータにより、グルコキナーゼを媒介としたグルコース代謝が、ＧＩニューロンを調節することが明確となった。
【００７３】
次に、本発明の発明者らは、ＧＩニューロンにおいて、グルコース低下による反応が細胞内のエネルギー生産に関連しているかについて調べた。図７を参照して、この実験について説明する。
図７Ａにおいて、左図は、視床下部弓状核から単離したニューロンにおいて、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ自己蛍光を測定した実験例である（ｎ＝６）。これらのニューロンのＮＡＤ（Ｐ）Ｈ自己蛍光は、２．８Ｇでは減少し、８．３Ｇで増加した。右図は、この同一ニューロンにおける２．８Ｇに対する［Ｃａ2+］i増加応答を示しており、ＧＩニューロンであることを確認した。
図７Ｂは、ＧＩニューロンにおける８．３Ｇ及び２．８ＧにおけるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ自己蛍光（の平均）を示している。「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。平均のＮＡＤ（Ｐ）Ｈ自己蛍光レベルは、グルコース濃度が８．３Ｇの場合より、２．８Ｇの場合において有意に低かった。
これらのデータは、グルコース濃度低下がＧＩニューロンにおいてＮＡＤ（Ｐ）Ｈを減少させることを示している。
【００７４】
更に、本発明の発明者らは、ＧＩニューロンにおいてエネルギー生産を引き下げる条件により、ＧＩニューロンが活性化するか否かを検証するための実験を行った。具体的には、ＧＩニューロンに対して、８．３Ｇのグルコースにより［Ｃａ2+］iを安定化した後、電子伝達系の阻害剤である１００μＭのシアン化カリウム（ＫＣＮ）、又は酸化的リン酸化の脱共役剤である１μＭのカルボニルシアニドｐ−トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）の投与をした。
図８Ａは、８．３Ｇにおいて、１００μＭのＫＣＮを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
図８Ｂは、ＫＣＮを投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示す（ｎ＝８）。「＊＊」はＰ＜０．０１であることを示す。
図８Ｃは、８．３Ｇにおいてで、１μＭのＦＣＣＰを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである。
図８Ｄは、ＦＣＣＰを投与した際の［Ｃａ2+］i応答の平均を示す（ｎ＝１０）。「＊＊」はＰ＜０．０１であることを示す。
このように、ＫＣＮとＦＣＣＰは、両方とも［Ｃａ2+］iを増加させた。これは、グルコース濃度低下時の反応と同様の反応である。
これらの結果により、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加は、細胞内エネルギー産生率の低下と、これにより必然的に起こるＮＫＡの抑制にて媒介されると考えられる。
【００７５】
（ＧＩニューロン活動性の下流のＶＤＣＣによるシグナル伝達機構）
次に、本発明者らは、ＮＫＡの抑制とＧＩニューロンの活性化をどのように結びつけて考えることができるかについて考察した。
具体的なＮＫＡの抑制とＧＩニューロンの活性化における作用機構としては、［Ｎａ+］i増加に関連したＮＫＡの電気的な活性の抑制により細胞膜が脱分極され、これにより、電位依存Ｃａ2+チャンネルを介してＣａ2+流入を刺激する、と推測される。
このため、本発明者らは、Ｌ形及びＮ型のＶＤＣＣとＧＩニューロン活性について実験により確かめた。Ｌ形及びＮ型のＶＤＣＣは、グルコース感知ニューロン、ＮＰＹニューロン、及び低血糖下でグルカゴンを分泌する膵臓のα−細胞の調節に密接に関連している。以下で図９Ａ〜図９Ｅを参照して、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加に対して、各ＶＤＣＣに関連する試薬を投与した実験を示している。
図９Ａは、Ｃａ2+を取り除いた（Ｃａ2+−ｆｒｅｅ）溶液にした際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである（ｎ＝８）。［Ｃａ2+］i増加は、Ｃａ2+−ｆｒｅｅ溶液では抑制されている。
図９Ｂは、各ＶＤＣＣの非特異性のブロッカーである高濃度Ｎｉ2+（３００μＭ）を投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである（ｎ＝１３）。Ｎｉ2+投与によっても、［Ｃａ2+］i増加は抑制されている。
図９Ｃは、Ｎ型Ｃａ2+チャンネル・ブロッカーであるω−コノトキシンＧＶＩＡ（ω−ｃｏｎｏｔｏｘｉｎ）５００ｎＭを投与した際の［Ｃａ2+］iを応答示すグラフである（ｎ＝７）。グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加は、ω−コノトキシンＧＶＩＡによっても、抑制されている。
図９Ｄは、Ｌ形Ｃａ2+チャンネル・ブロッカーであるニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）１０μＭを投与した際の［Ｃａ2+］i応答を示すグラフである（ｎ＝９）。グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加は、ニフェジピンによっても抑制されている。
図９Ｅは、図９Ａ〜Ｄの試験条件下のグルコース濃度低下に対する［Ｃａ2+］i応答の振幅の平均を、コントロール実験と比べて相対的に表現したものである。「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。すなわち、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加は、Ｃａ2+−ｆｒｅｅ溶液、Ｎｉ2+（３００μＭ）投与、ω−コノトキシンＧＶＩＡ（５００ｎＭ）投与、及びニフェジピン（１０μＭ）投与により有意に減少した。
これらのデータは、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加は、主としてＮ型及びＬ形ＶＤＣＣによるＣａ2+流入を介して行われることを示している。
そして、グルコース濃度低下に誘発されたＮＫＡの抑制が、細胞膜を脱分極化してＶＤＣＣを開くことを示唆している。
【００７６】
なお、グルコース濃度低下に誘発された［Ｃａ2+］i増加において、ＶＤＣＣをブロックした後に残った反応の一部は、グルコース濃度低下に誘発された［Ｎａ+］i増加が引き金となって起きる、形質膜Ｎａ+／Ｃａ2+エクスチェンジャー（ＮＣＸ）の逆モードで引き起こされることも、可能性としては考えられる。
しかしながら、本発明の発明者らは、ＶＤＣＣを抑制した条件下でも［Ｎａ+］i増加を観察した。このため、上述の可能性はないと考えられる。
【００７７】
（ＮＫＡ活性による摂食行動の生理学的調節）
本発明の発明者らは、更に、ＧＩニューロンの活性化を調節するＮＫＡの重大な役割を明らかにする生体外のデータに基づき、ＮＫＡ活性が摂食行動の生理学的調節に関係するか否かについて、調査した。
以下、図１０、図１１を参照して、実際にラット個体を用いて、ＮＫＡ活性の低下が絶食又はグルコース濃度低下の感知と摂食との刺激に関連しているかについて調べた実験について説明する。
図１０は、視床下部弓状核のＮＫＡ活性を計測した結果を示す（ｎ＝７）。自由に食物が与えられたラット（Ｃｏｎｔｒｏｌ）をオープンバーで示し、断食させたラット（Ｆａｓｔｅｄ）を塗りつぶしたバーで示す。「＊＊」はＰ＜０．０１であることを示す。この実験結果においては、任意に食物が与えられたラットと比較して、２４時間絶食させたラットにおいて視床下部弓状核のＮＫＡ活性は４８．３％と著しく減少した。
図１１は、ＧＥニューロンが主要な働きをしている視床下部腹内側部（ｖｅｎｔｒｏｍｅｄｉａｌ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ、ＶＭＨ）でのＮＫＡ活性を計測した結果を示す（ｎ＝７）。視床下部弓状核とは異なり、ＶＭＨにおいては、コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）及び絶食下（Ｆａｓｔｅｄ）においてもＮＫＡ特性は不変だった。
したがって、絶食により、視床下部弓状核のＮＫＡ活性は選択的に著しく低減されるため、ＮＫＡ活性を低下させることで摂食を促進することが可能であると示唆される。
【００７８】
次に、ラットにＮＫＡインヒビターのウワバイン（０．５ｎｍｏｌ／５μｌ）とＫ+−ｆｒｅｅ溶液（１０μｌ）とを脳室内投与して、摂食量を比較した。
図１２Ａは、この摂食量の比較を示すグラフである。ウワバイン（０．５のｎｍｏｌ／５μｌ）（ｎ＝８）及び１０μｌのＫ+−ｆｒｅｅ溶液（ｎ＝５）の脳室内投与により、コントロールＨＫＲＢ（ｎ＝５）と比較して、脳室内投与の２時間後に、摂食量を著しく増加させた。ＨＫＲＢは、ＧＩニューロンを興奮させないために５ｍＭグルコース（５Ｇ）を含んでいる。「＊」は、Ｐ＜０．０５であることを示す。
【００７９】
次に、グルコキナーゼ阻害剤であるＭＨ、ＮＫＡアクティベータであるＳＳＡ４１２、コントロールのウサギＩｇＧを脳室内投与して、摂食量を比較した。
図１２Ｂは、この摂食量の比較を示すグラフである。「＊」は、Ｐ＜０．０５、「＊＊」はＰ＜０．０１であることを示す。
まず、脳室内にＭＨを投与せず、ＳＳＡ４１２（ｎ＝７）又はウサギＩｇＧ（ｎ＝６）のみを注射した場合、摂食量は変化なかった。
ここで、脳室内にＭＨを投与すると、ニューロンのグルコース利用が低減され、従ってグルコース濃度低下および飢餓／絶食の条件を反映する状況に置かれるため、摂食量が有意に増加した。
これに対して、ＭＨに誘発された摂食行動は、１０μｇ／５μｌのＳＳＡ４１２の脳室内前投与により打ち消された（ｎ＝８）。
しかしながら、コントロールの１０μｇ／５μｌのウサギＩｇＧの脳室内前投与では打ち消されなかった（ｎ＝６）。
このように、ＮＫＡアクティベータであるＳＳＡ４１２により、実際に摂食量を変化させ、食欲を減らすことができる可能性がある。
【００８０】
さらに、本発明の発明者らは、視床下部弓状核のＮＰＹ又はＰＯＭＣのｍＲＮＡ発現量についての測定を行った。
図１３Ａは、ウワバインの脳室内投与後３時間における、視床下部弓状核のＮＰＹのｍＲＮＡ発現量を示すグラフである（ｎ＝６）。ウワバインの脳室内投与の後、コントロール（Ｖｅｈｉｃｌｅ）と比較して、視床下部弓状核のＮＰＹのｍＲＮＡ発現量は有意に増加した。「＊＊」は、Ｐ＜０．０１であることを示す。
図１３Ｂは、ウワバインの脳室内投与後３時間における、視床下部弓状核のＰＯＭＣ（Ｐｒｏ−ｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ）のｍＲＮＡ発現量を示すグラフである（ｎ＝６）。ＰＯＭＣは、脳下垂体前葉に含まれ、ＡＣＴＨ（Ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ  ｈｏｒｍｏｎｅ）やＭＳＨ（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ）等に分解されるペプチドホルモン前駆体であり、摂食抑制として機能する。ウワバインの脳室内投与を行っても、ＰＯＭＣのｍＲＮＡ発現量は変わらなかった。
【００８１】
これらの結果は、飢餓／絶食条件下でグルコース濃度低下に誘発された視床下部弓状核のＮＫＡ活性の低下が、ＮＰＹを含むＧＩニューロンを活性化し、これにより摂食行動を刺激することを示している。
【００８２】
この摂食行動の病態生理学の意味として、ＧＩニューロンを含む視床下部弓状核ＮＰＹニューロンが、過食・内臓肥満症の２型糖尿病Ｇｏｔｏ−Ｋａｋｉｚａｋｉ（ＧＫ）ラットでアップレギュレートされることが考えられる。
このモデルでは、グルコース利用の低下は、グルコース濃度上昇に誘発されるインスリン分泌促進の障害及びグルコース濃度上昇に誘発されるＧＩニューロン、すなわちＮＰＹニューロンの活動抑制の障害と共通の原因でありえる。グルコース利用が低下していても、ＮＫＡ活性化剤によりＧＩニューロンを活性化すれば、過食を是正し、その結果、内臓肥満と糖尿病を改善する効果が期待できる。
摂食行動異常をもつ肥満と糖尿病は、ＧＫラットとヒト患者で共通の機序により生じると推測できるため、ＳＳＡ４１２を含むＮＫＡ活性化物質を本実施例の食欲抑制剤として用いることにより、肥満及び２型糖尿病の治療にも用いることが考えられる。
【００８３】
以上のように、本実施例において、本発明の発明者らは、以前からの推測はあるものの証明されていない仮説である、ＮＫＡ活性の低下がグルコース低下によるＧＩニューロンの活性化に関連していることを証明した。
【００８４】
なお、上記実施の形態の構成及び動作は例であって、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で適宜変更して実行することができることは言うまでもない。
【産業上の利用可能性】
【００８５】
本発明によれば、視床下部弓状核ＧＩニューロンのＮＫＡの作用を調整することで、第１次摂食・代謝調節中枢に直接働きかけて、「食欲」そのものを調節することができる。よって、従来とは作用機構の違う食欲促進剤、食欲抑制剤の提供が可能となる。このため、産業条利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図５Ｊ】
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【図５Ｋ】
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【図５Ｌ】
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【図５Ｍ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【配列表】
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