(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物の断片を乾燥し、粗粉を得る工程；
５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で、アルコールを用いて上記粗粉を抽出し、オレオレジンを得る工程；
（ａ）上記オレオレジンの溶媒を除去し、上記オレオレジン中の溶媒濃度を１０００ｐｐｍ未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１０分以上１５分以下、攪拌して均質化するという工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを室温で、水分含有量が６．０％であるアルコールと共に１０−２０分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、溶媒の下層を排出するという工程を三回または四回行い、濃縮されたオレオレジンを得る工程；
７０℃以上８０℃以下の範囲の温度で、アルコール性アルカリを用いて上記濃縮されたオレオレジンを加水分解し、反応混合物を得る工程；
および、
上記反応混合物に熱水を添加してカロテノイド結晶を沈殿させる工程、を含むことを特徴とする、カロテノイド結晶の分離方法。
【請求項２】
さらに、上記カロテノイド結晶をろ過、洗浄、および乾燥する工程を含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記植物は、天然のマリーゴールド、変異したマリーゴールド、パプリカ、およびクコの実（Lycium barbarum）からなる群より選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記植物の断片は、乾燥させる前に、コントロールされた嫌気性条件下でサイロに貯蔵されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
上記粗粉を抽出するために用いられる上記アルコールが、エタノール、イソプロパノールまたはそれらの混合物であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上記粗粉を抽出する際に用いる上記アルコールがエタノールであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
上記オレオレジンの濃縮工程の（ｂ）において、上記アルコールに対する上記オレオレジンの比（Ｋｇ／Ｌ）が１：０．５から１：４までの範囲であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
上記オレオレジンの濃縮工程の（ｂ）において、上記アルコールに対する上記オレオレジンの比（Ｋｇ／Ｌ）が１：１から１：２までの範囲であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
上記アルコール性アルカリは、エタノール性水酸化ナトリウムかエタノール性水酸化カリウムかであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
熱水に対する反応混合物の比（ｖ／ｖ）が１：１から１：１．５までの範囲であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法であって、
ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
（ａ）上記抽出物の溶媒を除去し、溶媒濃度を１％未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１５分間、均質化し、上記均質化した集団を静置し、分離し、濾過するという工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを、水分含有量が８％であるアルコールと共に周辺温度で１０−１５分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、アルコールの上層を排出するという工程を三回または四回行い、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
（ａ）上記抽出物の溶媒を除去し、溶媒濃度を１％未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１５分間、均質化し、上記均質化した集団を静置し、分離し、濾過するという工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを、水分含有量が８％であるアルコールと共に４５℃で１０−１５分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、アルコールの上層を排出するという工程を三回または四回行い、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンとを、約８０：２０（Ｗ／Ｗ）から９０：１０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを７０℃以上８０℃以下の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加することによってカロテノイド結晶を沈殿させ、沈殿物を生成する工程；および、
ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む方法。
【請求項１２】
ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法であって、
ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
（ａ）上記抽出物の溶媒を除去し、溶媒濃度を１％未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１５分間、均質化し、上記均質化した集団を静置し、分離し、濾過するという工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを、水分含有量が８％であるアルコールと共に周辺温度で１０−１５分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、アルコールの上層を排出するという工程を三回または四回行い、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
（ａ）上記抽出物の溶媒を除去し、溶媒濃度を１％未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１５分間、均質化し、上記均質化した集団を静置し、分離し、濾過するという工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを、水分含有量が８％であるアルコールと共に４５℃で１０−１５分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、アルコールの上層を排出するという工程を三回または四回行い、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンとを、約７０：３０（Ｗ／Ｗ）から３０：７０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを７０℃以上８０℃以下の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加することによってカロテノイド結晶を沈殿させ、沈殿物を生成する工程；および、
ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で含有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む方法。
【請求項１３】
ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法であって、
ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
（ａ）上記抽出物の溶媒を除去し、溶媒濃度を１％未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１５分間、均質化し、上記均質化した集団を静置し、分離し、濾過するという工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを、水分含有量が８％であるアルコールと共に周辺温度で１０−１５分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、アルコールの上層を排出するという工程を三回または四回行い、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
（ａ）上記抽出物の溶媒を除去し、溶媒濃度を１％未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１５分間、均質化し、上記均質化した集団を静置し、分離し、濾過するという工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを、水分含有量が８％であるアルコールと共に４５℃で１０−１５分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、アルコールの上層を排出するという工程を三回または四回行い、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンとを、約１０：９０（Ｗ／Ｗ）から２０：８０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを７０℃以上８０℃以下の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加することによってカロテノイド結晶を沈殿させ、沈殿物を生成する工程；および、
ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む方法。
【請求項１４】
５５℃以上８０℃以下の範囲の温度の熱水を用いて上記カロテノイド結晶を洗浄する工程；および、
上記カロテノイド結晶を乾燥する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
上記オレオレジンの濃縮工程の（ｂ）において、上記アルコールに対する上記オレオレジンの比（Ｋｇ／Ｌ）が、１：０．５から１：４までの範囲であることを特徴とする、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
上記アルコールは、エタノール、イソプロピルアルコールまたはそれらの混合物からなる群より選ばれることを特徴とする、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
上記植物は、天然のマリーゴールド、変異したマリーゴールド、パプリカおよびクコの実（Lycium barbarum）からなる群より選ばれることを特徴とする、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
上記アルコール性アルカリは、エタノール性水酸化ナトリウムおよびエタノール性水酸化カリウムからなる群より選ばれることを特徴とする、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
熱水に対する反応混合物の比（ｖ／ｖ）が１：１から１：１．４までの範囲であることを特徴とする、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
植物の断片を乾燥して粗粉を得る工程；
５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で、アルコールを用いて上記粗粉を抽出し、オレオレジンを得る工程；および、
（ａ）上記オレオレジンの溶媒を除去し、上記オレオレジン中の溶媒濃度を１０００ｐｐｍ未満としたオレオレジンを、プロセス水と共に４５℃で１０分以上１５分以下、攪拌して均質化する工程を二回行い、（ｂ）得られたオレオレジンを室温で、水分含有量が６．０％であるアルコールと共に１０−２０分間、攪拌して均質化し、攪拌停止後に、上記均質化した集団を静置し、溶媒の下層を排出する工程を三回または四回行い、濃縮されたオレオレジンを得る工程、を含むことを特徴とする、濃縮されたオレオレジンの製造方法。
【請求項２１】
上記アルコールが、エタノール、イソプロピルアルコール、またはそれらの混合物からなる群より選ばれることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
上記植物が、天然のマリーゴールド、変異したマリーゴールド、パプリカ、およびクコの実（Lycium barbarum）からなる群より選ばれることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
上記植物の断片は、乾燥させる前に、コントロールされた嫌気性条件下でサイロに貯蔵されることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
上記粗粉を抽出するために用いられる上記アルコールが、エタノール、イソプロパノール、またはそれらの混合物であることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
上記オレオレジンの濃縮工程の（ｂ）において、上記アルコールに対する上記オレオレジンの比（Ｋｇ／Ｌ）が、１：０．５から１：４までの範囲であることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明はカロテノイド結晶を分離する方法に関する。本発明は特に、純粋なカロテノイド結晶を得る方法に関し、得られた上記カロテノイド結晶は、例えばルテイン、ゼアキサンチン、並びに低レベルのβ−カロテンおよびクリプトキサンチンのようなキサントフィルを含む。
【０００２】
本発明はまた、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を種々の植物から分離し、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１、約５：１および約１：１の重量比で得る方法に関する。
【０００３】
〔背景技術〕
カロテノイドは、主に植物、藻類、および光合成細菌中に見られる天然脂溶性色素の一種であり、光合成において重要な役割を果たしている。カロテノイドはまた、いくつかの非光合成細菌、酵母、およびカビにも存在しており、そこでは光および酸素による損傷に対する防御機能を果たしている。動物はカロテノイドを合成することはできないと思われるが、多くの動物は食事からカロテノイドを摂取している。動物において、カロテノイドは明るい色彩を与え、抗酸化剤として機能し、ビタミンＡ活性のソースでありうる（Ong and Tee 1992; Britton et al. 1995）。
【０００４】
カロテノイドはその化学構造によって特定される。主なカロテノイドは、主要な分子であると考えられる炭素数４０のポリエン鎖に由来する。このポリエン鎖は、環状末端基（環）を末端とすることができ、酸素含有官能基と相補的でありうる。炭化水素性カロテノイドはカロテンとして知られ、炭化水素性カロテノイドの酸化誘導体はキサントフィルとして知られている。β−カロテンはニンジンに含まれる主要なカロテノイドであり、よく知られたカロテンである。一方、ルテインはマリーゴールドの花弁の主要な黄色色素であり、一般的なキサントフィルである。
【０００５】
キサントフィルは加齢に伴う斑状変性のリスク低減（Moeller SM,  Jacques PF, Blumberg JB “ The potential role of dietary Xanthophylls in cataract and age related macular degeneration,” Journal of the American College of  Nutrition, 2000 ; 19 : 522S-527S）、ＬＤＬコレステロールの制御（Chopra M., Thurnham DI, “Effect of Lutein on oxidation of low density lipoproteins (LDL) in vitro”, Proceedings of the Nutrition Society, 1994; 53: 1993, # 18A）、冠動脈性心臓病の阻害（Howard AN, Williams NR, Palmer CR,  Cambou JP, Evans AE, Foote JW, et al., “Do hydroxy-carotenoids prevent coronary heart disease”）並びにフリーラジカルの捕捉および免疫増強（Chew BP, Wong MW, Wong TS, “Effects of Lutein from Marigold extract on immunity and growth of mammary tumors in mice,” Anticancer Research, 1996; 16: 3689-3694）に関与することが科学的に証明されている。
【０００６】
ルテイン（β−ε−カロテン−３-３’−ジオール）およびゼアキサンチン（β−β−カロテン−３-３’−ジオール）はカロテノイドファミリー中のキサントフィルグループに属し、高度反応性のヒドロキシル基を備え、ヒトおよび動物は合成することができない。
【０００７】
米国特許第５，３８２，７１４号公報は、遊離のルテインを含む、マリーゴールドのオレオレジンのケン化物から純粋なルテインを分離する方法を開示している。
【０００８】
米国特許第６，２６２，２８４号公報は、ルテインおよびゼアキサンチンを抽出し、ケン化し、分離する方法、および、植物由来の高純度な、いくつかの希少なカロテノイドの混合物を開示している。
【０００９】
米国特許第５，６４８，５６４号公報は、マリーゴールドのオレオレジンを、プロピレングリコールを用いて蒸留した水性アルカリを用いてケン化し、ルテイン結晶を生成する方法を開示している。
【００１０】
米国特許第６，３８０，４４２号公報は、ケン化およびイソプロピルアルコールを用いた加水分解によって、マリーゴールドのオレオレジンからカロテノイドを得る方法を開示している。さらに、上記方法は反応混合物を室温に冷却する工程を含んでいる。
【００１１】
米国特許第６，５０４，０６７号公報は、マリーゴールドのオレオレジンを、炭酸ナトリウムを用いて精製し、次に中和し、精製された上記オレオレジンを水性アルカリを用いてケン化することによってキサントフィル濃縮物を得る方法を開示している。
【００１２】
国際公開ＷＯ２００６／１１４７９４号公報は、マリーゴールドの花弁からルテインを優勢に分離する方法を開示している。
【００１３】
米国特許第５，８７６，７８２号公報は、非遊離型のキサントフィルを、植物の生体物質中に存在するアクリル−キサントフィルのエステル交換反応によって、ｉｎ  ｓｉｔｕで遊離のキサントフィルに変換する方法を開示している。
【００１４】
米国特許第６，７４３，９５３号公報は、溶媒としてヘキサンを用いて、マリーゴールドの乾燥花弁からキサントフィルを抽出する方法を開示している。当該方法は、３時間のケン化工程と、生成物を７０℃で長時間加熱して、ケン化物の集団中で上記生成物を変性した酸化物を得る工程とを含んでいる。
【００１５】
日本国特許第１１３２２２７０８号公報は、ケン化によってマリーゴールドのオレオレジンからルテインを分離する方法を開示している。
【００１６】
米国特許第６，７８４，３５１号公報は、花弁、葉が、非変異マリーゴールドにおける割合と比較して割合が増強されたゼアキサンチン、バイオラキサンチンを加えたネオキサンチン、β−カロテン、α−クリプトキサンチン、フィトエン、またはフィトフルエンのうち一以上を含むマリーゴールドの植物体を開示している。また、上記植物体の調製方法、オレオレジン、および上記割合のカロテノイドを有する可食材料を開示している。
【００１７】
しかしながら、乾燥させた植物の粗粉をアルコールと直接接触させ、そうして得られたカロテノイド結晶が、例えばルテイン、ゼアキサンチン、並びに、低レベルのβ−カロテンおよびクリプトキサンチンのようなキサントフィルを含有する、カロテノイド結晶の分離方法が求められている。
【００１８】
本発明の主題の特徴、側面、および利点は、以下の説明および添付した特許請求の範囲を参照すればより良く理解できるであろう。
【００１９】
〔概要〕
本発明は、植物の断片を乾燥して粗粉を得る工程、および、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で、アルコールを用いて上記粗粉を抽出し、オレオレジンを得る工程を含む、カロテノイド結晶の分離方法を提供する。上記オレオレジンを、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解して、反応混合物を得る。上記カロテノイド結晶は、熱水を添加することによって上記反応混合物から沈殿し、続いてろ過され、洗浄され、乾燥される。
【００２０】
本発明は一側面において、濃縮されたオレオレジンを製造する方法であって、植物の断片を乾燥して粗粉を得る工程；約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて上記粗粉を抽出し、オレオレジンを得る工程；および、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて上記オレオレジンを濃縮し、濃縮されたオレオレジンを得る工程、を含む方法を提供する。
【００２１】
本発明は他の側面において、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶を提供する。当該カロテノイド結晶は、ルテインに富んだ植物の断片をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して抽出物を得る工程、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて上記抽出物を濃縮し、ルテインに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程、を含む方法によって得られる。ゼアキサンチンに富んだ植物は、ゼアキサンチンに富んだ植物の断片をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して他の抽出物を得る工程、および、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で上記抽出物をアルコールを用いて濃縮することによって、ゼアキサンチンに富んだ、濃縮されたオレオレジンを得る工程、によって抽出される。ルテインに富んだオレオレジンを、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンと、約８０：２０（Ｗ／Ｗ）から９０：１０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の重量比で混合する。次に、上記混合されたオレオレジンを、約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る。ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶は、熱水を添加することによって上記反応混合物から沈殿する。上記カロテノイド結晶をろ過し、洗浄し、乾燥する。
【００２２】
他の側面において、本発明は、ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で含有するカロテノイド結晶を提供する。上記カロテノイド結晶は、ルテインに富んだ植物の断片をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出し、抽出物を得る工程、および、さらに、上記抽出物を、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程、を含む方法によって得られる。ゼアキサンチンに富んだ植物は、ゼアキサンチンに富んだ植物の断片をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して他の抽出物を得る工程、および、上記抽出物を、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程、によって抽出される。ルテインに富んだ上記オレオレジンを、約７０：３０（Ｗ／Ｗ）から３０：７０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の重量比で、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンと混合する。次に、混合した上記オレオレジンを、約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度でアルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る。ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で有するカロテノイド結晶は、熱水を添加することによって上記反応混合物から沈殿する。上記カロテノイド結晶を、ろ過し、洗浄し、乾燥する。
【００２３】
他の側面において、本発明は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶を提供する。上記カロテノイド結晶は、ルテインに富んだ植物の断片をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して抽出物を得る工程、および、上記抽出物を、さらに約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程、を含む方法によって得られる。ゼアキサンチンに富んだ植物は、ゼアキサンチンに富んだ植物の断片をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して他の抽出物を得る工程、および、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンをアルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程、によって抽出される。ルテインに富んだ上記オレオレジンを、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンと、約１０：９０（Ｗ／Ｗ）から２０：８０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の重量比で混合する。次に、混合された上記オレオレジンを、約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分し、反応混合物を得る。ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶は、熱水を添加することによって上記反応混合物から沈殿する。上記カロテノイド結晶を、ろ過し、洗浄し、乾燥する。
【００２４】
本発明はまた、ルテインおよびゼアキサンチンを含有し、ルテインのゼアキサンチンに対する重量比が約１０：１、５：１または１：１であるカロテノイド結晶をも提供する。上述の方法によって調製され、これらの重量比を持つカロテノイド結晶もまた、本発明の一部である。ルテインのゼアキサンチンに対するこれらの重量比、特に１０：１、５：１または１：１は、上記カロテノイドをより生理活性があり、より生体利用性が高いものにするために重要である。ルテインおよびゼアキサンチンを含有し、ルテインのゼアキサンチンに対する重量比が約１０：１、５：１または１：１である上記カロテノイド結晶は、抗酸化剤として有用である。これらのカロテノイド結晶は特に、目の保護に有用である。
【００２５】
本発明は、時間と温度との組み合わせ、生体への親和性および安全なクラス３溶媒しか使用しないという点で利点を有する。これらのファクターの全てが、生成物の収量および安定性に寄与し、商業スケールでの生産コストを低減する。この利点はまた、上記生成物を、栄養補助食品、医薬的作用を持つ化粧品、食品またはサプリメントとして用いる際の安全性をも高める。
【００２６】
この概要は、コンセプトの選択を簡略化した形で紹介するためのものである。この概要は、クレームされた主題の鍵となる特徴または必須な特徴を特定することを意図するものではなく、クレームされた主題の範囲を限定するために用いられることを意図するものでもない。
【００２７】
〔詳細な説明〕
本発明は、カロテノイド結晶の分離方法を提供する。上記方法は、植物の断片を乾燥させて粗粉を得る工程；約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で、アルコールを用いて上記粗粉を抽出し、オレオレジンを得る工程；約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で、アルコールを用いて上記オレオレジンを濃縮し、濃縮されたオレオレジンを得る工程；約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度で、アルコール性アルカリを用いて、濃縮された上記オレオレジンを加水分解し、反応混合物を得る工程；上記反応混合物に熱水を添加し、カロテノイド結晶の沈殿を得る工程、を含む。
【００２８】
本発明の他の実施形態において、本発明にかかる方法は、さらに上記カロテノイド結晶をろ過、洗浄、および乾燥する工程を含む。
【００２９】
ルテインに富んだ上記植物源、およびゼアキサンチンに富んだ上記植物源は、マリーゴールドの花（Tagetes erecta）、マリーゴールドの花弁、変異マリーゴールドの花、変異マリーゴールドの花弁、パプリカの果実、およびクコの実（Lycium barbarum）からなる群からそれぞれ独立して選ばれうる。一つの特定の実施形態において、ルテインに富んだ上記植物源は、マリーゴールドの花およびマリーゴールドの花弁からなる群より選ばれ、ゼアキサンチンに富んだ上記植物源は、変異マリーゴールドの花、変異マリーゴールドの花弁、パプリカの果実、およびクコの実からなる群より選ばれる。
【００３０】
好ましい実施形態において、本発明の方法において用いられる上記植物の断片は、乾燥させる前に、コントロールされた嫌気性条件下でサイロに貯蔵される。
【００３１】
本発明の他の実施形態において、上記粗粉の抽出に用いられるアルコールは、エタノール、イソプロパノール、またはそれらの混合物であり、好ましくはエタノールである。
【００３２】
本発明の他の実施形態において、上記オレオレジンを濃縮する際の、上記アルコールに対する上記オレオレジンの比は、約１：０．５から１：４以下（Ｗ／Ｖ）までであり、好ましくは１：１（Ｗ／Ｖ）である。
【００３３】
本発明の他の実施形態において、上記アルコール性アルカリは、エタノール性水酸化ナトリウムかエタノール性水酸化カリウムかである。
【００３４】
他の実施形態において、熱水に対する反応混合物の比は、約１：１以上１：１．５の範囲である。
【００３５】
ルテインとゼアキサンチンとの双方を有する上記カロテノイド結晶を調製する従来法、例えばルテイン結晶とゼアキサンチン結晶とを個別に精製した後に結晶を混合するような方法は、ルテインとゼアキサンチンとの比がばらつくという結果をもたらす。さらに、そのような方法では、得られたゼアキサンチンの精製結晶の回収率は非常に低く、商業的スケールにおいては経済的ではない。それゆえ、異なる植物から、上記オレオレジンを一体化してルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を分離し、約１０：１、約５：１、および約１：１の重量比でルテインおよびゼアキサンチンを含むカロテノイド結晶を得る方法に対するニーズもあるのである。
【００３６】
一実施形態において、本発明は、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法を提供する。上記方法は、ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
上記抽出物を約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
上記抽出物を約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンとを、約８０：２０（Ｗ／Ｗ）から９０：１０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを約７０℃以上８０℃以下の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加することによってカロテノイド結晶を沈殿させ、沈殿物を形成する工程；および、
重量比約１０：１でルテインおよびゼアキサンチンを有するカロテノイド結晶を得る工程、を含んでいる。
【００３７】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法である。上記方法は、ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
上記抽出物を、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
上記抽出物を約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンとを、約７０：３０（Ｗ／Ｗ）から３０：７０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを約７０℃以上８０℃以下の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；  
上記反応混合物に熱水を添加することによってカロテノイド結晶を沈殿させ、沈殿物を形成する工程；および、
重量比約５：１でルテインおよびゼアキサンチンを有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む。
【００３８】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法である。上記方法は、ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
上記抽出物を、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の温度で抽出し、抽出物を得る工程；
上記抽出物を約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンとを、約１０：９０（Ｗ／Ｗ）から２０：８０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを約７０℃以上８０℃以下の温度で、アルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加することによってカロテノイド結晶を沈殿させ、沈殿物を形成する工程；および、
重量比約１：１でルテインおよびゼアキサンチンを有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む。
【００３９】
本発明のさらなる他の実施形態において、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１０：１で含有するカロテノイド結晶の分離方法、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約５：１で含有するカロテノイド結晶の分離方法、および、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１：１で含有するカロテノイド結晶の分離方法は、約５５℃以上８０℃以下の範囲の温度の熱水、好ましくは約７５℃の熱水を用いて上記カロテノイド結晶を洗浄する工程；および、
上記カロテノイド結晶を乾燥する工程をさらに含む。
【００４０】
本発明のさらなる他の実施形態において、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１０：１で含有するカロテノイド結晶の分離方法、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約５：１で含有するカロテノイド結晶の分離方法、および、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１：１で含有するカロテノイド結晶の分離方法は、オレオレジンを濃縮するために用いられるアルコールに対するオレオレジンの比が、約１：０．５から１：４（Ｗ／Ｖ）までの範囲である。
【００４１】
本発明のさらなる他の実施形態において、ルテインおよびゼアキサンチンを有するカロテノイド結晶の分離方法において用いられる上記アルコールは、エタノール、イソプロピルアルコールまたはそれらの混合物からなる群より選ばれる。
【００４２】
特定の一実施形態において、ルテインに富んだ上記植物源、および、ゼアキサンチンに富んだ上記植物源は、それぞれ独立して、マリーゴールドの花（Tagetes erecta）、マリーゴールドの花弁、変異したマリーゴールドの花、変異したマリーゴールドの花弁、パプリカの果実、およびクコの実（Lycium barbarum）からなる群より選ばれうる。
【００４３】
特別な一実施形態では、ルテインに富んだ上記植物源は、マリーゴールドの花およびマリーゴールドの花弁からなる群より選ばれ、ゼアキサンチンに富んだ上記植物源は変異したマリーゴールドの花、変異したマリーゴールドの花弁、パプリカの果実、およびクコの実からなる群より選ばれる。
【００４４】
本発明のさらなる他の実施形態において、カロテノイド結晶の分離方法に用いられる上記アルコール性アルカリは、エタノール性水酸化ナトリウムおよびエタノール性水酸化カリウムからなる群より選ばれる。
【００４５】
本発明のさらなる他の実施形態において、上記反応混合物に熱水を添加することによってカロテノイド結晶を沈殿させ、沈殿物を形成する際の、熱水に対する反応混合物の比は約１：１から１：１．４までの範囲である。
【００４６】
本発明の他の実施形態は、濃縮されたオレオレジンの製造方法を提供する。上記方法は、植物の断片を乾燥して粗粉を得る工程；
約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で、アルコールを用いて上記粗粉を抽出し、オレオレジンを得る工程；および、
約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で約１０分以上２０分以下、アルコールを用いて上記オレオレジンを濃縮し、濃縮されたオレオレジンを得る工程、を含む。
【００４７】
本発明のさらなる他の実施形態において、上記方法において上記乾燥された粗粉を抽出する上記アルコールは、エタノール、イソプロピルアルコール、またはそれらの混合物からなる群より選ばれ、好ましくはエタノールである。
【００４８】
本発明のさらなる他の実施形態において、上記粗粉を得るために乾燥させる上記植物は、天然のマリーゴールド、変異したマリーゴールド、パプリカ、およびクコの実（Lycium barbarum）からなる群より選ばれる。
【００４９】
本発明のさらなる他の実施形態では、上記濃縮されたオレオレジンの製造方法において、上記植物の断片は、乾燥させる前に、コントロールされた嫌気性条件下でサイロに貯蔵される。
【００５０】
本発明のさらなる他の実施形態では、上記濃縮されたオレオレジンの製造方法において、上記オレオレジンは、アルコールに対するオレオレジンの比が、約１：０．５から１：４（Ｗ／Ｖ）まで、好ましくは１：１（Ｗ／Ｖ）から１：２（Ｗ／Ｖ）までの範囲であるアルコールを用いて濃縮される。
【００５１】
本発明の他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶を提供する。
【００５２】
上記カロテノイド結晶は、ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンを、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンを、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだオレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンとを、約８０：２０（Ｗ／Ｗ）から９０：１０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを、約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度でアルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加し、カロテノイド結晶を沈殿させる工程；および、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１０：１で含有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む方法によって得られ、熱水に対する反応混合物の比は１：１から１：１．５までである。
【００５３】
さらに、本発明の他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で有するカロテノイド結晶を提供する。
【００５４】
上記カロテノイド結晶は、ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンを、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンを、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだオレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンとを、約７０：３０（Ｗ／Ｗ）から３０：７０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを、約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度でアルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加し、カロテノイド結晶を沈殿させる工程；および、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約５：１で含有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む方法によって得られ、熱水に対する反応混合物の比は１：１から１：１．５までである。
【００５５】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で有するカロテノイド結晶を提供する。
【００５６】
上記カロテノイド結晶は、ルテインに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して、ルテインに富んだオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだ上記オレオレジンを、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ルテインに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ植物源をアルコールと接触させ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度で抽出して、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンを得る工程；
ゼアキサンチンに富んだ上記オレオレジンを、約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度でアルコールを用いて濃縮し、ゼアキサンチンに富んだ濃縮されたオレオレジンを得る工程；
ルテインに富んだオレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだオレオレジンとを、約１０：９０（Ｗ／Ｗ）から２０：８０（Ｗ／Ｗ）までの範囲の比で混合し、均質化して、混合されたオレオレジンを得る工程；
上記混合されたオレオレジンを、約７０℃以上８０℃以下の範囲の温度でアルコール性アルカリを用いて加水分解し、反応混合物を得る工程；
上記反応混合物に熱水を添加し、カロテノイド結晶を沈殿させる工程；および、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１：１で含有するカロテノイド結晶を得る工程、を含む方法によって得られ、熱水に対する反応混合物の比は１：１から１：１．５までである。
【００５７】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関し、上記沈殿したカロテノイド結晶のろ過はフィルタープレス、遠心分離またはノウチ（neutch）フィルターを用いて行われる。
【００５８】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１、約５：１、または約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関し、上記カロテノイド結晶は流動層乾燥機を用いて乾燥される。
【００５９】
本発明にかかる方法は、コントロールされた嫌気性条件下で植物の断片をサイロに貯蔵し、エポキシドのような変性した酸化物の生成を阻害するとともに、存在するカロテノイドを固定し、濃縮する工程、スクリュープレス、水の排出、および、流動層乾燥などの工程を含む脱水工程を含む。上記流動層乾燥では、乾燥用の熱媒として地球環境に優しい発生炉ガスを用い、有害物質を排出せずに流動層を乾燥する。乾燥させた上記粗粉を、イソプロピルアルコールまたはエタノールを用いて溶媒抽出し、溶媒を可能な限り少ない量まで除去し、大きく分解させることなくオレオレジンを得る。そうして得られた上記オレオレジンは、約４５℃で１０−１５分間、プロセス水で２回洗浄し、室温で１０−１５分間、エタノールで３回洗浄することによって濃縮され、上記最初のオレオレジンよりも少なくとも２倍の濃度のキサントフィルを含有する、濃縮された有機オレオレジンが得られる。上記濃縮されたオレオレジンは均質化される。均質化されたオレオレジンの加水分解は、アルコール性アルカリを用いて行われ、エステルは約７０℃以上８０℃以下の温度で３０分未満の時間ケン化される。加水分解された上記カロテノイドは、例えば、混合物中のアルコールと水との比が１：１から１：３までの範囲に維持されている水を添加することによって沈殿させ、得られた沈殿物は洗浄され、不純物が除去される。洗浄された上記結晶は、フィルタープレスを用いてろ過され、流動層乾燥機によって乾燥され、水分および揮発性有機不純物が除去される。
【００６０】
本発明は、生体への親和性、時間と温度との組み合わせ、および安全なクラス３溶媒しか使用しないという点で利点を有する。これらのファクターの全てが、生成物の収量および安定性に寄与し、商業スケールでの生産コストを低減する。本発明はまた、上記生成物を、栄養補助食品、医薬的作用を持つ化粧品、食品またはサプリメントとして用いる際の安全性をも高める。
【００６１】
本発明は、ルテイン、ゼアキサンチン、またはルテインおよびゼアキサンチンを、種々の組み合わせで豊富に含む植物の断片、特にマリーゴールドの花弁から、カロテノイド結晶を分離し、精製する効果的な方法を提供する。Tagetes erectaの変異体は、専用の有機栽培実践用パッケージの下で栽培され、収穫され、収穫から何時間か以内に脱水される。上記実践用パッケージには、非ＧＭＯ種子の発育および特定の農業気候条件に適合した有機栽培が含まれる。続いて、有機栽培された上記花を洗浄し、閉じられた嫌気的条件下において、生体親和性の抗酸化剤およびサイレージ添加物を適切な濃度でスプレーした後、すぐに摘み取り、サイロに貯蔵する。上記サイロへの貯蔵では、上記サイレージのｐＨおよび温度をモニターし、２週間以上３週間以下の期間に渡って発酵を行い、完全に発酵させた。次に、サイロに貯蔵された上記花を上記サイロから収穫し、一連の工程中の脱水工程に供する。サイロに貯蔵された上記花を、二段階で産業用のスクリュープレスに供し、水を浸出させるために圧搾し、水分量を８８％から７５％まで減少させる。次に、圧搾された上記花は、水分を排出させ、流動層乾燥機中で乾燥する。水分を排出された上記花は、流動層乾燥機中で、発生炉ガス炎を用いて空気を加熱することにより生み出された熱風によって乾燥される。上記発生炉ガス炎は、有害物質を全く排出しない、環境に優しいガス化装置を用いて製造される。トンネルタイプの上記産業用流動層乾燥機（ＦＢＤ）は、異なる温度を有し、最高温度（８５℃以上９０℃以下）である入口から、４５℃以上５０℃以下である出口まで上記トンネルを横切る乾燥チャンバーを備える。
【００６２】
上記ＦＢＤ内部において、入口から出口までの通過時間は最大でわずか３０分であり、上記生成物の水分量は約７５％から約１０％に低下する。この乾燥工程の利点は、上記生成物が長時間高熱にさらされず、熱および空気によって長時間生成されうる、変性しやすい酸化物の生成を最小限にできるということである。乾燥させたマリーゴールドの上記粗粉を、産業用ハンマーミルを用いて粉砕し、粒子のサイズを４００ミクロン未満とした。
【００６３】
そうして得られた上記マリーゴールドの花の粗粉を、溶媒としてイソプロピルアルコールまたはエタノールを用いる溶媒抽出に供する。上記溶媒抽出は、一組の抽出機中で向流抽出により行われ、７５℃を超えない温度で、有効成分すなわちキサントフィルおよびカロテノイドを、他のレジノイドおよび脂質とともに最大限に抽出するために行う。上記希薄な混合物は、次に流下薄膜型エバポレータおよび薄膜エバポレータ中で濃縮され、溶媒の濃度は約９０％以上９５％以下から約５％まで低下する。上記濃縮された混合物は、次に真空蒸留に供され、溶媒の濃度は５％から１％に低下する。有機溶媒を１％含有するこの粗マリーゴールドレオレジンは、窒素および蒸気を流して上記溶媒を除去することによってさらに濃縮され、最終的に得られたマリーゴールドのオレオレジン中の溶媒濃度は１０００ｐｐｍ未満に減少する。こうして得られた上記マリーゴールドのオレオレジンを、プロセス水と共に、４５℃で１０分以上１５分以下、リアクター内で攪拌し、均質化する。上記オレオレジンと上記プロセス水との体積比は１：３から１：５までである。得られた混合物を分離し、次に、分離された層をろ過する。フィルター上のオレオレジンを上記リアクターに戻し、もう一度同様に洗浄する。こうして得られた上記オレオレジンを、均質な混合物を得るために、室温で、水分含有量が約６．０％である体積比１：１のエタノールと共に１０−２０分間、同じリアクター内で攪拌し、均質化する。次に、上記均質化された集団は、攪拌停止後に静置され、分離される。次に、溶媒の下層をリアクターから排出し、洗浄された上記オレオレジンは上記リアクター内に保持される。上記オレオレジンとの体積比が１：１である他のエタノールを、上記リアクター内に保持されたオレオレジンに添加し、上記均質化、静置、分離、および上記溶媒の排出をさらに２回行い、濃縮されたオレオレジンを得る。このようにして得られた、上記濃縮されたマリーゴールドのオレオレジンは、濃縮前の最初のオレオレジンと比較して約２倍量のキサントフィルを含有している。
【００６４】
次に、均質化され、濃縮された上記マリーゴールドのオレオレジンを、上記マリーゴールドのオレオレジンの１．５倍以上２倍以下の体積の２５％のアルコール性水酸化ナトリウムを添加した上記リアクターと同一のリアクター内で、７０℃と８０℃との間の温度で、３０分未満加水分解する。用いたアルコールは水分含有量が６％未満であるエタノールである。ケン化の程度は、薄層クロマトグラフィーか、高速液体クロマトグラフィーかによって保証される。最終的な蒸煮は９９％を超えるケン化の完了後に、上記温度と同じ温度で１０分間行われる。
【００６５】
単独の容器中で調製した６５℃以上７５℃以下の熱水を、上記オレオレジンと熱水との体積比が約１：４となるようにケン化された上記集団へ添加し、１０分間十分に均質化して、カロテノイド結晶の結晶化を助ける。上記反応混合物中にすでに存在している完全アルコールと水との上記比は約１：１から１：３までの範囲に、水に対するエタノールの比は１：２に維持され、カロテノイド結晶のより良好な結晶化を促進するとともに、例えば石鹸、脂質、脂肪およびその他の有機物のような望ましくない不純物を溶解する。
【００６６】
蒸留された上記集団は、次に、窒素か空気かを用いた陽圧を加えたフィルタープレス中に送り込まれ、ろ過される。フィルタープレスのプレート内部に回収された上記集団を、ｐＨが約７．０の中性に低下するまで、６５℃以上７５℃以下の十分量の熱水で洗浄する。
【００６７】
上記フィルタープレスから回収された上記ウェットな集団は、１時間、または生成物の水分レベルが１％未満となり、かつ、有機揮発性不純物がガスクロマトグラフィーで検出限界を下回るまで、５０℃と５５℃との間の温度の流動層乾燥機に収容される。
【００６８】
得られたカロテノイド結晶は、ＵＶ可視分光器を用いて測定すると、少なくとも８０％の総カロテノイドを含有し、９０％超の総カロテノイドを含有するものが最も良く見られる。上記カロテノイド結晶は、すべてトランス型のルテインを４５−８９％（Ｗ／Ｗ）、トランス−ゼアキサンチンを３−４５％（Ｗ/Ｗ）、例えばβ−カロテン、クリプトキサンチン、ヴィオラキサンチン等のようなその他のカロテノイドをそれぞれ１％未満（Ｗ／Ｗ）含有し、シス−ルテインおよびエポキシドは、順相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定したところほとんど含まれていなかった。上記結晶中のワックス含量は、ガスクロマトグラフィーによって測定した結果、約１０％Ｗ／Ｗであり、ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品添加物専門家会議（ＪＥＣＦＡ）によって許容された制限値以内に十分に収まっていた。
【００６９】
最終生成物中の上記有効成分、すなわちカロテノイドおよびキサントフィルの化学的回収率は、最終生成物に要求される純度、および、上述の工程パラメータに基づいて上記方法を若干修正することによって用いられる変動条件によるが、オレオレジンの供給量の６５％Ｗ／Ｗから９５％Ｗ／Ｗの間である。
【００７０】
得られたカロテノイド結晶の最終生成物は、バルク、粉末、ビードレット（beadlets）、顆粒、油中分散物、および水中分散物の形態で処方され、安定化される。上記最終生成物は、栄養補助食品、医薬的作用を持つ化粧品、食品およびサプリメントへの適用に即した末端での用途に応じて医薬品グレードの好適な賦形剤および乳化剤を添加することにより、１％以上４０％以下の範囲の濃度を持つ。
【００７１】
ゼアキサンチンに富んだオレオレジンは、米国特許第６，７８４，３５１号公報に記載の、Ball Horticulture社から入手した種々のマリーゴールドの変異体を溶媒抽出することによって得られる。当該オレオレジンは、ルテインおよびゼアキサンチンの重量比が約１０：１、約５：１、および約１：１の範囲で変化するカロテノイド結晶を得るための２つの異なる植物、すなわちルテインに富んだ一方の植物、およびゼアキサンチンに富んだ他方の植物から、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を分離する方法に用いられる。ゼアキサンチンに富んだオレオレジンの他の供給源は、パプリカおよびクコの実（Lycium barbarum）である。
【００７２】
２種類の異なる植物由来の植物体の断片は、２つの粗粉、すなわちルテインに富んだ粗粉と、ゼアキサンチンに富んだ粗粉とを得るため、別々に乾燥される。上記方法に特に適した植物には、限定されるものではないが、天然のマリーゴールド（Tagetes erecta）、変異マリーゴールド、パプリカおよびクコの実（Lycium barbarum）が含まれる。上記乾燥粗粉は、アルコールを用いて別々に溶媒抽出され、溶媒を可能な限り少ない量まで除去することにより、大きく分解させることなく、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度でルテインに富んだ粗粉からルテインに富んだオレオレジンが得られ、約５０℃以上７５℃以下の範囲の温度でゼアキサンチンに富んだ粗粉からゼアキサンチンに富んだオレオレジンが得られる。
【００７３】
エタノールを用いた上記乾燥粗粉の溶媒抽出は、約７０℃以上７５℃以下の範囲の温度で行われ、イソプロピルアルコールを用いて抽出する場合は、上記温度は約５５℃以上５８℃以下の範囲である。
【００７４】
アルコール抽出によって得られた上記オレオレジンは、水およびエタノールを用いて約２５℃以上５０℃以下の範囲の温度で上記オレオレジンを洗浄することによってさらに濃縮され、濃縮されたオレオレジン、すなわちルテインに富んだ一方のオレオレジンおよびゼアキサンチンに富んだ他方のオレオレジンが別々に得られる。
【００７５】
上記オレオレジン、すなわちルテインに富んだ一方のオレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ他方のオレオレジンとを、（I）８０：２０から９０：１０まで、（ii）７０：３０から３０：７０まで、および（iii）１０：９０から２０：８０までという異なる３つの特異的な重量比で混合する。これらの重量比は、上記オレオレジンのカロテノイド組成に基づいている。上記オレオレジンのカロテノイド含量は、用いた抽出溶媒の種類に依存する；例えば抽出にアルコールを用いた場合は、得られる上記オレオレジンはさらに濃縮され、それゆえに上記カロテノイド含量はさらに増加する。また、上記オレオレジン中の上記カロテノイド含量はまた、上記オレオレジンの粗粉にも依存する。オレオレジンの混合比をこれらの特異的な比にすることによって、ルテインとゼアキサンチンとを重量比（Ｉ）約１０：１、（ｉｉ）約５：１、および（ｉｉｉ）約１：１で有するカロテノイド結晶を容易に得ることができる。ルテインに富んだ一方のオレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ他方のオレオレジンとを重量比（Ｉ）８０：２０から９０：１０までで有する上記オレオレジン混合物は、カロテノイド結晶に、重量比約１０：１のルテインとゼアキサンチンとを提供する。同様に、ルテインに富んだ一方のオレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ他方のオレオレジンとを重量比（ｉｉ）７０：３０から３０：７０までで有する上記オレオレジン混合物は、上記カロテノイド結晶に、重量比約５：１のルテインとゼアキサンチンとを提供する；そして、ルテインに富んだ一方のオレオレジンと、ゼアキサンチンに富んだ他方のオレオレジンとを重量比（ｉｉｉ）１０：９０から２０：８０までで混合した場合、得られたカロテノイド結晶の最終産物におけるルテインとゼアキサンチンとの重量比は約１：１である。ルテインのゼアキサンチンに対するこれらの重量比、特に１０：１、５：１および１：１は、上記ルテインをより生理活性があり、生体に利用されやすいものにするために重要である。
【００７６】
オレオレジンの上記混合物は、湯浴中で４０℃で攪拌し続けることによって均質化される。均質化されたオレオレジンのケン化は約７０℃以上８０℃以下の温度でアルコール性アルカリを用いて３０分未満行う。
【００７７】
ケン化された上記カロテノイドは、熱水で処理され、カロテノイド結晶が得られる。ここで、上記熱水に対する反応混合物の比は約１：１から１：１．５（Ｖ/Ｖ）までの範囲である。当該比は、オレオレジンに対する熱水の比である４：１（Ｖ/Ｗ）に対応する。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、フィルタープレスを用いてろ過され、流動層乾燥機を用いて乾燥され、水分および揮発性有機不純物が除去される。ろ過された上記カロテノイド結晶を、７５℃に維持した熱水で洗浄する。ここで、用いたオレオレジンに対する熱水の比は８：１（Ｖ/Ｗ）である。洗浄された上記カロテノイド結晶は、流動層乾燥機を用いて乾燥される。
【００７８】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、上記カロテノイド結晶は、約７５％以上８５％以下（Ｗ/Ｗ）のトランスルテイン、約６％以上１０％以下（Ｗ/Ｗ）のトランス−ゼアキサンチンおよびそれぞれ５％未満（Ｗ/Ｗ）のその他のカロテノイドを含有する。これらの含有量はＨＰＬＣの測定値である。
【００７９】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、上記カロテノイド結晶は、約７０％以上８０％以下（Ｗ/Ｗ）のトランスルテイン、約１０％以上２０％以下（Ｗ/Ｗ）のトランス−ゼアキサンチン、およびそれぞれ５％未満（Ｗ/Ｗ）のその他のカロテノイドを含有する。これらの含有量はＨＰＬＣの測定値である。
【００８０】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、上記カロテノイド結晶は、約４０％以上５０％以下（Ｗ/Ｗ）のトランスルテイン、約４０％以上５０％以下（Ｗ/Ｗ）のトランス−ゼアキサンチン、およびそれぞれ５％未満（Ｗ/Ｗ）のその他のカロテノイドを含有する。これらの含有量はＨＰＬＣの測定値である。
【００８１】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定した場合、総量約１０％（Ｗ/Ｗ）のワックスを含有する。
【００８２】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定した場合、総量約１０％（Ｗ/Ｗ）のワックスを含有する。
【００８３】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定した場合、総量約１０％（Ｗ/Ｗ）のワックスを含有する。
【００８４】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１０：１で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、粉末、ビードレット（beadlets）、顆粒、油中分散物、または水中分散物の形態で処方される。
【００８５】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、粉末、ビードレット（beadlets）、顆粒、油中分散物、または水中分散物の形態で処方される。
【００８６】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、粉末、ビードレット（beadlets）、顆粒、油中分散物、または水中分散物の形態で処方される。
【００８７】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１、約５：１、または約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、食物、サプリメント、栄養補助食品、または医薬作用を有する化粧品に用いられる。
【００８８】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１０：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、上記オレオレジン中に存在する総カロテノイドの６５％−９５％（Ｗ/Ｗ）を含有する。
【００８９】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、上記オレオレジン中に存在する総カロテノイドの６５％−９５％（Ｗ/Ｗ）を含有する。
【００９０】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の重量比で含有するカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶は、上記オレオレジン中に存在する総カロテノイドの６５％−９５％（Ｗ/Ｗ）を含有する。
【００９１】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１０：１で含有する、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、乾燥後に得られた、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶の水分含量は１％未満であり、残存有機溶媒はほとんど存在しない。
【００９２】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約５：１で含有する、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、乾燥後に得られた、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶の水分含量は１％未満であり、残存有機溶媒はほとんど存在しない。
【００９３】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１：１で含有する、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶の分離方法に関する。ここで、乾燥後に得られた、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ上記カロテノイド結晶の水分含量は１％未満であり、残存有機溶媒はほとんど存在しない。
【００９４】
本発明のさらなる他の実施形態は、ルテインとゼアキサンチンとを重量比約１０：１、約５：１または約１：１で含有するカロテノイド結晶の抗酸化剤としての用途を提供する。
【００９５】
いくつかの好ましい実施形態を参照しながら、上記主題をかなり詳細に開示したが、他の実施形態を取ることも可能である。例えば、添付した特許請求の範囲の精神および範囲は、本願明細書に含まれる好ましい上記実施形態の開示に限定されるべきものではない。
【００９６】
次に、本発明を、実際の実施例を用いて説明する。該実施例は、本発明の作用を説明するためのものであって、本発明の範囲に対し何らかの限定を行うものとして制限的に解釈されることを意図するものではない。
【００９７】
〔実施例１〕
＜溶媒としてイソプロピルアルコールを用いる溶媒抽出＞
８．９９ｇｍ／ｋｇ（０．８９％）のキサントフィル（７４．５８のトランス−ルテイン％、４．２８％のトランス−ゼアキサンチン、および１８．０８％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有する）を含有するマリーゴールドの粗粉（６．０ｋｇ）を、循環設備を有する５０Ｌ容量の抽出機に入れた。水分含有量が１．０％未満であるイソプロピルアルコール（３６Ｌ）を上記抽出機に添加し、循環させた。温度を５５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、上記抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。抽出は、同じ温度および時間の条件下で、同体積のイソプロピルアルコール（３６Ｌ）を用いて２回行った。得られた抽出物を上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。４回目および５回目の抽出は、循環下、５８℃で、それぞれの抽出において３０Ｌのイソプロピルアルコールを用いて行った。５つの上記抽出物から回収した１５２Ｌのミセラ（miscella）を、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、固形分を７０％、溶媒を３０％含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。さらに上記濃縮ミセラ（miscella）を、大気圧下で蒸留ユニットを用いて蒸留し、固形分の濃度を９５％、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に低減した。回収された溶媒の総量は１３６Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％を超え、水分レベルは０．２８％であった。４９．６８ｇ／ｋｇのキサントフィル（４．９７％のキサントフィル）を含有するオレオレジン９６０ｇｍｓが、回収率８８．４２％で得られた。こうして得られた上記オレオレジンは、７０．９８％のトランス−ルテイン、５．３０％のトランス−ゼアキサンチン、および２０．１２％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【００９８】
〔実施例２〕
＜アルコール性アルカリを用いた上記オレオレジンの加水分解＞
４９．６８ｇ／ｋｇのキサントフィル（４．９７％のキサントフィル）を含有し、実施例１で得られた上記マリーゴールドのオレオレジン１００．２６ｇを、湯浴中、４０℃で連続的に攪拌しながら、１０００ｍｌの丸底フラスコ中で１０分間均質化した。エタノール性ＮａＯＨは、純度９５％のＮａＯＨ４９．６０ｇｍｓを２００ｍｌのエタノール中に溶解させることによって調製した。調製した上記エタノール性ＮａＯＨを、上記均質化したマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器中へゆっくりと添加した（上記エタノール性ＮａＯＨと上記オレオレジンの体積比は１：２）。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７０℃に維持した脱ミネラル熱水４００ｍｌをケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンを、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、１６００ｍｌの熱水で洗浄して不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。次に、ウェットな上記結晶を上記フィルターから回収し、真空乾燥機中で、減圧下、約５０℃で３時間乾燥した。
【００９９】
精製されたキサントフィルの結晶（５．８０ｇ）は、粘性のある粉末として得られ、最終生成物の物理的回収率は５．７８％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、５８．５０％のカロテノイドを含有しており（ＵＶ−可視分光器によって測定）、そのうち８４．１０％が全てトランス型のルテイン、３．６０％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．１２％がβ−カロテン、０．３１％がクリプトキサンチン、６．８０％がシス−ルテインおよびエポキシドであった（ＨＰＬＣにより測定）。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、１６．２０％Ｗ／Ｗのワックスを含有していた。最終生成物の化学的回収率は、供給したオレオレジンに対して６８．０７％であった。最終生成物は水分含量が０．９８％であり、ガスクロマトグラフィーによって分析したところ、１４００ｐｐｍのイソプロピルアルコールを含有していた。
【０１００】
〔実施例３〕
＜溶媒としてイソプロピルアルコールを用いたオレオレジンの抽出、およびエタノールを用いた洗浄による上記オレオレジンの濃縮＞
８．９９ｇｍ／ｋｇ（０．８９％）のキサントフィル（７４．５８％のトランス−ルテイン、４．２８％のトランス−ゼアキサンチン、および１８．０８％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有する）を含有するマリーゴールドの粗粉（６．１ｋｇ）を、循環設備を備えた５０Ｌ容量の抽出機に入れた。水分含量１．０％未満のイソプロピルアルコール（３６Ｌ）を上記抽出機に添加し、循環させた。温度は５５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、同じ量のイソプロピルアルコール（３６Ｌ）を用い、同じ温度および時間の条件下で二度繰り返した。得られた抽出物は上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。４回目および５回目の抽出は、循環下、５８℃で、それぞれの抽出において３０Ｌのイソプロピルアルコールを用いて行った。上記５回の抽出により回収したミセラ（miscella）１５０Ｌを、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに供し、固形分を７０％、溶媒を３０％含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。さらに、上記濃縮ミセラ（miscella）を大気圧下で蒸留ユニットを用いて蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量１３５Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であり、水分レベルは３％であった。５０．７２ｇ／ｋｇのキサントフィル（５．０７％のキサントフィル）を含有するオレオレジン９８２ｇｍｓは、回収率９０．８２％で得られた。こうして得られた上記オレオレジンは７０．２２％のトランス−ルテイン、５．４３％のトランス−ゼアキサンチン、および２０．８２％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１０１】
イソプロピルアルコールを用いた抽出によって得られ、５０．７２ｇ／ｋｇのキサントフィルを含有する上記オレオレジン（１６５．６８ｇ）を、コニカルフラスコ中で、水分含有量が６％であるエタノール１６５ｍｌを用いて１０分間、室温で均質化し、均質で一定な混合物を得た。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記溶媒の下層を排出し、得られた上記オレオレジンをコニカルフラスコ中に保持した。エタノール１６５ｍｌを各回ごとに添加することによって上記工程を２回繰り返し、上記オレオレジンを濃縮した。１１９．８６ｇ／ｋｇのキサントフィル（１１．９８％のキサントフィル）を含有する、濃縮されたオレオレジン６４．２５ｇが化学的回収率９１．６４％で得られ、７１．４１％のトランス−ルテイン、４．６２％のトランス−ゼアキサンチン、および２０．１６％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１０２】
〔実施例４〕
＜アルコール性アルカリによる、上記濃縮されたオレオレジンの加水分解＞
実施例３で得られた、１１９．８６ｇ／ｋｇのキサントフィル（１１．９８％のキサントフィル）を含有する、上記濃縮されたマリーゴールドのオレオレジン４４．８２６ｇを、５００ｍｌの丸底フラスコ中に入れ、湯浴中４０℃で連続的に攪拌して１０分間均質化した。エタノール性ＮａＯＨは、純度９５％のＮａＯＨ２２．４０ｇｍｓを９０ｍｌのエタノール中に溶解させることによって調製した。調製した上記エタノール性ＮａＯＨを、上記均質化したマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器中へゆっくりと添加した（上記エタノール性ＮａＯＨと上記オレオレジンとの体積比は１：２）。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７０℃に維持した脱ミネラル熱水１８０ｍｌを、ケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンを、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、７２０ｍｌの熱水で洗浄して不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。次に、ウェットな上記結晶を上記フィルターから回収し、真空乾燥機中で、減圧下、約５０℃で３時間乾燥した。
【０１０３】
精製されたキサントフィルの結晶（４．０ｇ）が得られ、最終生成物の物理的回収率は８．９２％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、９０．７８％のカロテノイドを含有しており（ＵＶ−可視分光器によって測定）、そのうち９３．９９％が全てトランス型のルテイン、４．９０％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．２３％がβ−カロテン、０．５％がクリプトキサンチンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった（ＨＰＬＣにより測定）。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、８．５６％Ｗ／Ｗのワックスを含有していた。最終生成物の化学的回収率は６７．５８％であった。最終生成物は水分含量が０．４７％であり、ガスクロマトグラフィーによって分析したところ、残存溶媒は検出されなかった。
【０１０４】
〔実施例５〕
＜溶媒としてイソプロピルアルコールを用いたオレオレジンの抽出およびエタノール洗浄による上記オレオレジンの濃縮＞
９．４４ｇｍ／ｋｇ（０．９４％）のキサントフィル（７３．９８％のトランス−ルテイン、４．５２％のトランス−ゼアキサンチン、および１８．２８％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有する）を含有するマリーゴールドの粗粉（１００ｋｇ）を、循環設備を備えた１０００Ｌ容量の抽出機に入れた。水分含量０．１％未満のイソプロピルアルコール（６００Ｌ）を上記抽出機に添加し、循環させた。温度は５５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、同じ量のイソプロピルアルコール（６００Ｌ）を用い、同じ温度および時間の条件下で二度繰り返した。得られた抽出物は上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。４回目および５回目の抽出は、循環下、５８℃で、それぞれの抽出において５００Ｌのイソプロピルアルコールを用いて行った。上記５回の抽出により回収したミセラ（miscella）２５００Ｌを、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、７０％の固形分および３０％の溶媒を含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。次に、上記濃縮ミセラ（miscella）を蒸留ユニット中で大気圧下においてさらに蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）でさらに蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量２２７５Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であり、水分レベルは３％であった。
【０１０５】
５２．３２ｇ／ｋｇのキサントフィル（５．２３％のキサントフィル）を含有するオレオレジン（１６．５ｋｇ）が、化学的回収率９１．４４％で得られた。こうして得られた上記オレオレジンは７１．６２％のＴ−ルテイン、５．３９％のＴ−ゼアキサンチン、および１９．５１％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１０６】
イソプロピルアルコールを用いた抽出によって得られ、５２．３２ｇ／ｋｇのキサントフィルを含有する上記オレオレジン（１６．５ｋｇ）を、１００Ｌのリアクター中で、水分含有量が６％であるエタノール１６．５Ｌを用いて１０分間、室温で均質化し、均質で一定な混合物を得た。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記溶媒の下層を排出し、得られた上記オレオレジンを上記リアクター中に保持した。エタノール１６．５Ｌを各回ごとに添加することによって上記工程を２回繰り返し、上記オレオレジンを濃縮した。
【０１０７】
１２０．２２ｇ／ｋｇのキサントフィル（１２．０２％のキサントフィル）を含有する、濃縮されたオレオレジン６．５２ｋｇは化学的回収率９０．８０％で得られ、７１．９８％のトランス−ルテイン、４．３９％のトランス−ゼアキサンチン、および１９．７８％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１０８】
〔実施例６〕
＜アルコール性アルカリによる、上記濃縮されたオレオレジンの加水分解＞
実施例５で得られた、１２０．２２ｇ／ｋｇのキサントフィル（１２．０２％のキサントフィル）を含有する、上記濃縮されたマリーゴールドのオレオレジン６．５２ｋｇを、１００Ｌのリアクターに入れ、上記リアクターのジャケットに熱媒として蒸気か熱水かを入れ、４０℃で連続的に攪拌しながら１０分間均質化した。エタノール性ＮａＯＨは、純度９５％のＮａＯＨ３．２６Ｋｇｓを１３．０Ｌのエタノールに溶解させることによって調製した。調製した上記エタノール性ＮａＯＨを、上記均質化したマリーゴールドのオレオレジンを含有する上記リアクターへゆっくりと添加した（上記エタノール性ＮａＯＨと上記オレオレジンとの体積比は１：２）。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７０℃に維持した脱ミネラル熱水２６Ｌを、ケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンを、フィルタープレスを用いてろ過し、上記結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、１０４Ｌの熱水を上記フィルタープレスに送り込んで不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。次に、ウェットな上記結晶を上記フィルタープレスから回収し、流動層乾燥機中において約５５℃で１時間乾燥した。
【０１０９】
精製されたキサントフィルの結晶（７０６ｇ）が得られ、最終生成物の物理的回収率は１０．８２％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、９１．１２％のカロテノイドを含有しており（ＵＶ−可視分光器によって測定）、そのうち９３．６７％が全てトランス型のルテイン、５．１４％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．２６％がβ−カロテン、０．５２％がクリプトキサンチンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった（ＨＰＬＣにより測定）。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、８．１２％Ｗ／Ｗのワックスを含有していた。最終生成物の化学的回収率は８２．０７％であった。最終生成物は水分含量が０．４２％であり、ガスクロマトグラフィーによって分析したところ、残存溶媒は検出されなかった。
【０１１０】
〔実施例７〕
＜溶媒としてエタノールを用いたオレオレジンの抽出およびエタノール洗浄による上記オレオレジンの濃縮＞
９．４４ｇｍ／ｋｇ（０．９４％）のキサントフィル（７３．９８％のトランス−ルテイン、４．５２％のトランス−ゼアキサンチン、および１８．２８％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有する）を含有するマリーゴールドの粗粉（１００ｋｇ）を、循環設備を備えた１０００Ｌ容量の抽出機に入れた。水分含量３．０％未満のエタノール（６００Ｌ）を上記抽出機に添加し、循環させた。温度は７５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、同じ量のエタノール（６００Ｌ）を用い、同じ温度および時間の条件下で二度繰り返した。得られた抽出物を上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。４回目および５回目の抽出は、循環下、同じ温度で、それぞれの抽出において５００Ｌのエタノールを用いて行った。上記５回の抽出により回収したミセラ（miscella）２５４０Ｌを、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、７０％の固形分および３０％の溶媒を含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。次に、上記濃縮ミセラ（miscella）を蒸留ユニット中で大気圧下においてさらに蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）でさらに蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量２２８６Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であり、水分レベルは４．２％であった。
【０１１１】
４６．１２ｇ／ｋｇのキサントフィル（４．６１％のキサントフィル）を含有するオレオレジン（１８．２０ｋｇ）が、化学的回収率８８．９６％で得られた。こうして得られた上記オレオレジンは７１．０２％のトランス−ルテイン、５．５２％のトランス−ゼアキサンチン、および１９．８１％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１１２】
エタノールを用いた抽出によって得られた、４６．１２ｇ／ｋｇのキサントフィルを含有する上記オレオレジン（１８．２０ｋｇ）を、２００Ｌのリアクター中で、９０Ｌのプロセス水を用いて、４５℃で２０分間均質化した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記分離された混合物を真空下でろ過した。こうしてフィルター上に得られたマリーゴールドのオレオレジンを容器へ移した。全ての水溶性不純物を除去するために、上述のものと同じプロセス水９０Ｌを用いて、この工程を、同じ温度条件下でもう一度繰り返した。得られた上記オレオレジンに、水分含有量が６％であるエタノール１８．０Ｌを添加し、室温で１０分間攪拌して、均質化され一定な混合物を得た。上記混合物を静置し、内容物を分離した。溶媒の下層を排出し、得られた上記オレオレジンを上記リアクター中に保持した。エタノール１８．０Ｌを各回ごとに添加することによって上記工程を２回繰り返し、上記オレオレジンを洗浄した。
【０１１３】
１１８．９９ｇ／ｋｇのキサントフィル（１１．８９％のキサントフィル）を含有する、濃縮されたオレオレジン（６．４４ｋｇ）が、化学的回収率９１．３２％で得られた。こうして得られた濃縮された上記オレオレジンは、７０．９５％のトランス−ルテイン、４．５２％のトランス−ゼアキサンチン、および１９．６６％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１１４】
〔実施例８〕
＜アルコール性アルカリによる、上記濃縮されたオレオレジンの加水分解＞
実施例７で得られた、１１８．９９ｇ／ｋｇのキサントフィル（１１．８９％のキサントフィル）を含有する、上記濃縮されたマリーゴールドのオレオレジン６．４４ｋｇを、１００Ｌのリアクターに入れ、上記リアクターのジャケットに熱媒として蒸気か熱水かを入れ、４０℃で連続的に攪拌しながら１０分間均質化した。エタノール性ＮａＯＨは、純度９５％のＮａＯＨ３．２２Ｋｇを１３．０Ｌのエタノール中に溶解させることによって調製した。調製した上記エタノール性ＮａＯＨを、上記均質化された集団を含有するリアクター内へゆっくりと添加した（上記エタノール性ＮａＯＨと上記オレオレジンとの体積比は１：２）。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７０℃に維持した脱ミネラル熱水２６Ｌを、反応した上記集団に添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンを、フィルタープレスを用いてろ過し、上記結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、１０５Ｌの熱水を上記フィルタープレスに送り込んで洗浄し、不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。次に、ウェットな上記結晶を上記フィルタープレスから回収し、流動層乾燥機中において約５５℃で１時間乾燥した。
【０１１５】
精製されたキサントフィルの結晶（６７７ｇｍｓ）が得られ、最終生成物の物理的回収率は１０．５１％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、９１．２６％のカロテノイドを含有しており（ＵＶ−可視分光器によって測定）、そのうち９３．６２％が全てトランス型のルテイン、５．１１％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．２６％がβ−カロテン、０．５１％がクリプトキサンチンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった（ＨＰＬＣにより測定）。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、８．２９％Ｗ／Ｗのワックスを含有していた。最終生成物の化学的回収率は８０．６２％であった。最終生成物は水分含量が０．４５％であり、ガスクロマトグラフィーによって分析したところ、残存溶媒は検出されなかった。
【０１１６】
〔実施例９〕
＜溶媒としてエタノールを用いたオレオレジンの抽出およびエタノール洗浄による上記オレオレジンの濃縮＞
１２．１２ｇｍ／ｋｇ（１．２１２％）のキサントフィル（７６．２２％のトランス−ルテイン、４．５１％のトランス−ゼアキサンチン、および１７．９２％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有する）を含有するマリーゴールドの粗粉（１００ｋｇ）を、循環設備を備えた１０００Ｌ容量の抽出機に入れた。水分含量３．０％未満のエタノール（６００Ｌ）を上記抽出機に添加し、循環させた。温度は７５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、同じ量のエタノール（６００Ｌ）を用い、同じ温度および時間の条件下でさらに二度繰り返した。得られた抽出物を上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。４回目および５回目の抽出は、循環下、同じ温度で、それぞれの抽出において５００Ｌのエタノールを用いて行った。上記５回の抽出により回収したミセラ（miscella）２５４０Ｌを、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、７０％の固形分および３０％の溶媒を含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。次に、上記濃縮ミセラ（miscella）を蒸留ユニット中で大気圧下においてさらに蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）でさらに蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量２２８０Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であり、水分レベルは３．８％であった。
【０１１７】
５８．３８ｇ／ｋｇのキサントフィル（５．８３８％のキサントフィル）を含有するオレオレジン（１９．２８ｋｇ）が、化学的回収率９２．８７％で得られた。こうして得られた上記オレオレジンは、７４．２２％のトランス−ルテイン、５．５８％のトランス−ゼアキサンチン、および１９．０２％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１１８】
エタノールを用いた抽出によって得られ、５８．３８ｇ／ｋｇのキサントフィルを含有する上記オレオレジン（１９．２８ｋｇ）を、２００Ｌのリアクター中で、９６Ｌのプロセス水を用いて、４５℃で２０分間均質化した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記分離された混合物を真空下でろ過した。こうしてフィルター上に得られたマリーゴールドのオレオレジンを容器へ移した。全ての水溶性不純物を除去するために、上述のものと同じプロセス水９６Ｌを用いて、この工程を、同じ温度条件下でもう一度繰り返した。得られた上記オレオレジンに、水分含有量が６％であるエタノール１９．２５Ｌを添加し、室温で１０分間攪拌して、均質化され一定な混合物を得た。上記混合物を静置し、内容物を分離した。溶媒の下層を排出し、得られた上記オレオレジンを上記リアクター中に保持した。エタノール１９．２５Ｌを各回ごとに添加することによって上記工程を２回繰り返し、上記オレオレジンを洗浄した。
【０１１９】
１３２．２０ｇ／ｋｇのキサントフィル（１３．２２％）を含有する、濃縮されたオレオレジン（７．７６ｋｇ）が、化学的回収率９１．１３％で得られた。こうして得られた濃縮された上記オレオレジンは、７５．２８％のトランス−ルテイン、５．６４％のトランス−ゼアキサンチン、および１７．９６％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１２０】
〔実施例１０〕
＜アルコール性アルカリによる、上記濃縮されたオレオレジンの加水分解＞
実施例９で得られた、１３２．２０ｇ／ｋｇのキサントフィル（１３．２２％のキサントフィル）を含有する、上記濃縮されたマリーゴールドのオレオレジン７．７６ｋｇを、１００Ｌのリアクターに入れ、上記リアクターのジャケットに熱媒として蒸気か熱水かを入れ、４０℃で連続的に攪拌しながら１０分間均質化した。エタノール性ＮａＯＨは、純度９５％のＮａＯＨ３．８８Ｋｇを１５．０Ｌのエタノール中に溶解させることによって調製した。調製した上記エタノール性ＮａＯＨを、上記均質化された集団を含有するリアクター内へゆっくりと添加した（上記エタノール性ＮａＯＨと上記オレオレジンとの体積比は１：２）。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７０℃に維持した脱ミネラル熱水３１Ｌを、反応した上記集団に添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンを、フィルタープレスを用いてろ過し、上記結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、１２０Ｌの熱水を上記フィルタープレスに送り込んで洗浄し、不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。次に、ウェットな上記結晶を上記フィルタープレスから回収し、流動層乾燥機中において約５５℃で１時間乾燥した。
【０１２１】
精製されたキサントフィルの結晶（１０６２ｇｍｓ）が得られ、最終生成物の物理的回収率は１３．６８％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、９１．５８％のカロテノイドを含有しており（ＵＶ−可視分光器によって測定）、そのうち９３．３３％が、全てトランス型のルテイン、５．６２％が、全てトランス型のゼアキサンチン、０．２４％がβ−カロテン、０．４６％がクリプトキサンチンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった（ＨＰＬＣにより測定）。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、８．００％Ｗ／Ｗのワックスを含有していた。最終生成物の化学的回収率は９４．８０％であった。最終生成物は水分含量が０．４２％であり、ガスクロマトグラフィーによって分析したところ、残存溶媒は検出されなかった。
【０１２２】
〔実施例１１〕
＜エタノールを用いたマリーゴールド粗粉の抽出およびエタノール中での濃縮＞
〔Ａ）アルコールとしてエタノールを用いた、ルテインマリーゴールド粗粉の抽出〕
８．９９ｇｍ／ｋｇ（０．８９％）の総カロテノイド（７４．５８％のトランス−ルテイン、４．２８％のトランス−ゼアキサンチン、１．９４％のβ−カロテン、１．０２％のクリプトキサンチン、および１８．０８％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有する。測定値はＨＰＬＣによって測定した。）を含有する、ルテインに富んだマリーゴールド粗粉１２．５ｋｇを、循環設備を備えた２００Ｌ容量の抽出機に入れた。ガスクロマトグラフィーを用いた分析結果で純度９９％超であり、水分含有量が１．０％未満であるエタノール１２５Ｌを上記抽出機に添加し、循環させた。温度は７５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、同じ量のエタノール（１２５Ｌ）を用い、同じ温度および時間の条件下でさらに二度繰り返した。得られた抽出物を上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記３回の抽出により回収したミセラ（miscella）３２５Ｌを、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、７０％の固形分および３０％の溶媒を含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。上記濃縮ミセラ（miscella）を蒸留ユニット中で大気圧下においてさらに蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量２６２Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であり、水分レベルは２％であった。３９．４３ｇ／ｋｇの総カロテノイド（３．９４３％のカロテノイド）を含有する２．５５ｋｇのオレオレジンが、カロテノイドの化学的回収率８９．４７％で得られた。上記ルテインの化学的回収率は９５．１７％であった。こうして得られた、ルテインに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンは、７９．３３％のトランス−ルテイン、４．２４％のトランス−ゼアキサンチン、１５．３３％のシス−アイソマー／エポキシド、０．１８％のβ−カロテン、０．５３％のクリプトキサンチンを含有するカロテノイドのプロファイルを示した。測定値はＨＰＬＣによるものである。
【０１２３】
〔Ｂ）ルテインに富んだマリーゴールドオレオレジンのエタノールによる濃縮〕
工程Ａ）から得られ、３９．４３ｇ／ｋｇの総カロテノイドを含有する、ルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジン２．５５ｋｇを、プロセス水１２．７５Ｌを用いて容器中で１５分間、４５℃で均質化した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記分離された混合物を真空下でろ過した。こうしてフィルター上に得られた上記マリーゴールドのオレオレジンを上記容器へ移した。全ての水溶性不純物を除去するために、上述のものと同じプロセス水１２．７５Ｌを用いて、この工程を、同じ温度条件下でもう一度繰り返した。得られた上記オレオレジンに、水分含有量が約８％であるエタノール５．０Ｌを添加し、１０分以上１５分以下、周辺温度で攪拌した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。エタノールの上層をデカントし、排出した。エタノールを用いた上記洗浄は、５．０Ｌのエタノールを各回ごとに添加することによってさらに３回繰り返し、上記オレオレジンを濃縮した。１２５．０９ｇ／ｋｇの総カロテノイド（１２．５０９％のカロテノイド）を含有する、濃縮されたオレオレジン０．６９５ｋｇが、カロテノイドの化学的回収率８６．４６％で得られた。こうして得られた、ルテインに富んだ上記濃縮されたオレオレジンは、８０．７１％のトランス−ルテイン、３．７９％のトランス−ゼアキサンチン、０．２１％のβ−カロテン、０．６１％のクリプトキサンチン、および１４．６３％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するカロテノイドのプロファイルを示した。測定値はＨＰＬＣによるものである。
【０１２４】
〔実施例１２〕
＜ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドの、エタノール中での抽出および濃縮＞
〔Ａ）エタノールを用いたゼアキサンチンに富んだマリーゴールド粗粉の抽出：〕
３．２９ｇ／ｋｇ（０．３２９％）の総カロテノイドを含有する、ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドの粗粉２０ｋｇ（米国特許第６，７８４，３５１号に記載されているものであり、Ball Horticulture社から入手した）を、循環設備を備えた２００Ｌ容量の抽出機に入れた。上記粗粉は、ＨＰＬＣにより測定したところ、５９．０８％のトランス−ゼアキサンチン、１４．８０％のβ−カロテン、１１．７７％のトランス−ルテイン、２．７６％のα−クリプトキサンチン、２．３３％のβ−クリプトキサンチン、１．９８％のα−カロテン、０．８２％のシス−ルテイン、０．２２％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および６．２４％のその他の未同定カロテノイドというカロテノイドのプロファイルを有していた。ガスクロマトグラフィーを用いた分析結果で純度９９％超であり、水分含有量が５％未満であるエタノール１２０Ｌを上記抽出機に添加し、循環させた。温度は７５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、各回ごとに６０Ｌのエタノールを用いて、同じ温度および時間の条件下でさらに３回繰り返した。得られた抽出物は上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記４回の抽出により回収したミセラ（miscella）２６０．２Ｌは、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、７０％の固形分および３０％の溶媒を含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。上記濃縮ミセラ（miscella）は蒸留ユニット中で大気圧下においてさらに蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量２２４Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であり、水分レベルは５．５％であった。６．７９ｇ／ｋｇの総カロテノイド（０．６７９％のカロテノイド）を含有する９．２６ｋｇのオレオレジンが、回収率９５．５５％で得られた。上記ゼアキサンチンの化学的回収率は８５．４９％であった。こうして得られた、トランス−ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、５２．８６％のトランス−ゼアキサンチン、９．４９％のβ−カロテン、１３．０８％のトランス−ルテイン、７．７５％のα−クリプトキサンチン、３．２８％のβ−クリプトキサンチン、２．８７％のα−カロテン、３．９３％のシス−ルテイン、０．９７％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および５．３９％の他の未同定のカロテノイドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１２５】
〔Ｂ）ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジンの、エタノールを用いた濃縮〕
工程Ａ）で得られ、６．７９ｇ／ｋｇのカロテノイドを含有し、エタノールを用いた抽出によって得られた、上記ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジン７．２５ｋｇを容器に入れ、２２．０Ｌのプロセス水を用いて４５℃で１５分間均質化した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記分離された混合物を真空下でろ過した。こうしてフィルター上に得られた上記マリーゴールドのオレオレジンを上記容器へ移した。全ての水溶性不純物を除去するために、上述のものと同じプロセス水２２．０Ｌを用いて、この工程を、同じ温度条件下でもう一度繰り返した。得られた上記オレオレジンに、水分含有量が約８％であるエタノール７．２５Ｌを添加し、１０分以上１５分以下、４５℃で攪拌した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。エタノールの上層をデカントし、排出した。エタノールを用いた上記洗浄を、７．２５Ｌのエタノールを各回ごとに添加することによってさらに２回繰り返した。４６．９８ｇ／ｋｇの総カロテノイド（４．６９８％のカロテノイド）を含有する、濃縮されたオレオレジン０．９４８ｋｇが、化学的回収率９０．４８％で得られた。上記ゼアキサンチンの化学的回収率は９２．２８％であった。こうして得られた、トランス−ゼアキサンチンに富んだ、濃縮されたマリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、５３．９９％のトランス−ゼアキサンチン、１０．０２％のβ−カロテン、１５．０３％のトランス−ルテイン、８．２５％のα−クリプトキサンチン、２．４２％のβ−クリプトキサンチン、１．９０％のα−カロテン、４．２８％のシス−ルテイン、０．１％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および３．９９％の他の未同定カロテノイドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１２６】
〔実施例１３〕
＜ルテインとゼアキサンチンとの重量比が約１０：１である、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を得るための分離および精製＞
実施例１１で得られた、上記濃縮されたルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジンと、実施例１２で得られた、上記濃縮されたゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジンとを、それぞれ、物理重量比８８：１２で混合する。混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇは、１１４．３２ｇ／ｋｇの総カロテノイド（１１．４３％のカロテノイド）を含有する。上記混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇを５．０Ｌ容量の３つ口丸底フラスコに入れ、湯浴中、４０℃で連続的に攪拌しながら、１０分間均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ１２０ｇ（供給した上記オレオレジンに対して４０％となるように計算されている）を、エタノール０．４５Ｌ（上記オレオレジンとエタノールとの体積比は１：１．５）に溶解させることによって調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化されたマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器内へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水１．２Ｌ（上記オレオレジンと上記脱ミネラル熱水との体積比が１：４となるように計算されている）を、上記ケン化したマリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物を、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、７５℃に維持した熱水２．４Ｌ（上記オレオレジンと上記熱水との体積比が１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去して、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。ウェットな上記結晶（７０．２ｇ）を上記フィルターから回収し、上記容器へ移した。エタノール０．２１Ｌ（上記ウェットな結晶とエタノールとの体積比が１：３）を上記容器に添加し、温度を５０℃に維持して１０分間攪拌した。次に、上記溶液をブフナー漏斗を用いてろ過する。次に、上記ウェットな結晶を上記フィルターから回収し、流動層乾燥機内で、約５５℃で１時間、または水分レベルが０．３％未満およびエタノールレベルが１００ｐｐｍ未満になるまで乾燥した。
【０１２７】
トランス−ルテインおよびトランス−ゼアキサンチンに富んだ精製カロテノイド結晶２６．６２ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は８．６３％であった。得られたカロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、トータル８９．５２重量％のカロテノイドを含有し、そのうち８９．９１％が全てトランス型のルテイン、９．０３％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．３７％がβ−クリプトキサンチン、０．０６％がβ−カロテンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。測定値はＨＰＬＣによるものである。
【０１２８】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、１０．４０％のワックスを含有していた。最終生成物のカロテノイドの化学的回収率は６９．４９％であり、ルテインの化学的回収率は７８．７１％、ゼアキサンチンの化学的回収率は８６．２２％であった。上記最終生成物は５８．８２ｐｐｍのエタノールと共に、０．２２％の水分を含有していた。
【０１２９】
〔実施例１４〕
＜ルテインとゼアキサンチンとを約５：１の比で含有する、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を得るための分離および精製＞
実施例１１で得られた、濃縮され、ルテインに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンと、実施例１２で得られた、濃縮され、ゼアキサンチンに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンとをそれぞれ、物理重量比７０：３０で混合する。混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇは、１０１．８６ｇ／ｋｇの総カロテノイド（１０．１８％のカロテノイド）を含有する。上記混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇを５．０Ｌ容量の３つ口丸底フラスコに入れ、湯浴中、４０℃で連続的に攪拌しながら、１０分間均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ１２０ｇ（オレオレジンの供給量に対して４０％となるように計算されている）を、０．４５Ｌのエタノール（上記オレオレジンとエタノールとの体積比は１：１．５）に溶解させて調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化したマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器中へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水１．２Ｌ（上記オレオレジンと上記脱ミネラル熱水との体積比が１：４となるように計算されている）をケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物を、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶を、７５℃に維持した２．４Ｌの熱水（上記オレオレジンと上記熱水との体積比が１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。上記ウェットな結晶（７８．５ｇ）を上記フィルターから回収し、上記容器へ移した。エタノール０．２３Ｌ（上記ウェットな結晶とエタノールとの体積比が１：３）を上記容器へ添加し、温度を５０℃に保持して１０分間攪拌した。次に、上記溶液をブフナー漏斗を用いてろ過する。次に、上記ウェットな結晶を上記フィルターから回収し約５５℃で１時間、または、水分レベルが０．３％未満に低下し、かつ、エタノールレベルが１００ｐｐｍ未満になるまで流動層乾燥機中で乾燥させた。
【０１３０】
ルテインおよびゼアキサンチンに富んだ精製カロテノイド結晶２１．５９ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は７．１９％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ９１．３９重量％の総カロテノイドを含有しており、ＨＰＬＣにより測定したところ、そのうち８２．６４％が全てトランス型のルテイン、１６．２９％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．７０％がβ−クリプトキサンチン、０．１０％がβ−カロテンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。
【０１３１】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーにて測定したところ、８．４６％のワックスを含有していた。上記最終生成物の、上記カロテノイドの化学的回収率は６４．６１％であり、ルテインの化学的回収率は６９．１２％であり、ゼアキサンチンの化学的回収率は７６．２２％であった。上記最終生成物は、０．２８％の水分および２３．３０ｐｐｍのエタノールを含有していた。
【０１３２】
〔実施例１５〕
＜ルテインおよびゼアキサンチンに富み、ルテインおよびゼアキサンチンを約１：１の比で含有するカロテノイド結晶を得るための分離および精製＞
実施例１１で得られた、濃縮され、ルテインに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンと、実施例１２で得られた、濃縮され、ゼアキサンチンに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンとを、それぞれ重量比１８：８２で混合する。６２．２４／ｋｇの総カロテノイド（６．２２％のカロテノイド）を含有する、混合された上記マリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇを、５．０Ｌ容量の３つ口丸底フラスコに入れ、湯浴中、４０℃で連続的に攪拌して均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ１２０ｇ（オレオレジンの供給量に対して４０％となるように計算されている）を、０．４５Ｌのエタノール（上記オレオレジンとエタノールとの体積比は１：１．５）中で溶解させて調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化したマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器中へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水１．２Ｌ（上記オレオレジンと上記脱ミネラル熱水との体積比が１：４となるように計算されている）をケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物を、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶を、７５℃に維持した２．４Ｌの熱水（上記オレオレジンと上記熱水との体積比が１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。ウェットな上記結晶（６２．２ｇ）を上記フィルターから回収し、上記容器へ移した。エタノール０．１８Ｌ（上記ウェットな結晶とエタノールとの体積比が１：３）を上記容器へ添加し、温度を５０℃に保持して１０分間攪拌した。次に、上記溶液をブフナー漏斗を用いてろ過する。次に、ウェットな上記結晶を上記フィルターから回収し約５５℃で１時間、または、水分レベルが０．３％未満に低下し、かつ、エタノールレベルが１００ｐｐｍ未満になるまで流動層乾燥機中で乾燥させた。
【０１３３】
トランス−ルテインおよびトランス−ゼアキサンチンに富んだ精製カロテノイド結晶１１．２８ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は３．７６％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ９２．３４重量％の総カロテノイドを含有しており、ＨＰＬＣにより測定したところ、そのうち４８．５２％が全てトランス型のルテイン、４６．３８％が全てトランス型のゼアキサンチン、１．２２％がβ−クリプトキサンチン、２．３０％がβ−カロテンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。
【０１３４】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、４４．８０重量％のトランス−ルテイン、および４２．８２重量％のトランス−ゼアキサンチンを含有し、トランス−ゼアキサンチンに対するトランス−ルテインの重量比は約１：１（１．０４）であった。
【０１３５】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーにて測定したところ、７．４２％のワックスを含有していた。上記最終生成物の、上記カロテノイドの化学的回収率は５５．８２％であり、ルテインの化学的回収率は６２．８６％であり、ゼアキサンチンの化学的回収率は６９．３３％であった。上記最終生成物は、０．２７％の水分および３５．５５ｐｐｍのエタノールを含有していた。
【０１３６】
〔実施例１６〕
＜ルテインに富んだマリーゴールドの粗粉のイソプロピルアルコールを用いた抽出およびエタノール中での濃縮＞
〔Ａ）ルテインに富んだマリーゴールドの粗粉のイソプロピルアルコールを用いた抽出〕
８．９９ｇｍ／ｋｇ（０．８９％）の総カロテノイドを含有する、ルテインに富んだマリーゴールドの粗粉１２．５ｋｇ（７４．５８％のトランス−ルテイン、４．２８％のトランス−ゼアキサンチン、１．９４％のβ−カロテン、１．０２％のクリプトキサンチン、並びに１８．０８％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有する。測定値はＨＰＬＣによる。）を、循環設備を備えた１２５Ｌ容量の抽出機に入れた。ガスクロマトグラフィーで測定したところ、純度９９％超であり、水分含有量が１％未満であるイソプロピルアルコール７５Ｌを上記抽出機に添加して循環させた。温度を５５℃に上昇させ、循環下、１時間保持した。１時間後、上記抽出物を排出し、タンクに回収した。上記抽出を、同じ条件の温度および時間の下で、７５Ｌのイソプロピルアルコールを各回ごとに添加することによってさらに２回繰り返した。得られた抽出物をミセラ（miscella）タンクに回収した。４回目および５回目の抽出は、循環させながら、５８℃で、それぞれの抽出において６２．５Ｌのイソプロピルアルコールを用いて行った。５つの上記抽出物から回収した３２５Ｌのミセラ（miscella）を、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、固形分を７０％、溶媒を３０％含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。さらに上記濃縮ミセラ（miscella）を、大気圧下で蒸留ユニットを用いて蒸留し、固形分の濃度を９５％、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に低減した。回収された溶媒の総量は２９５Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％を超えていた。５１．２８ｇ／ｋｇの総カロテノイド（５．１２％のカロテノイド）を含有するオレオレジン２．０ｋｇが、カロテノイドの化学的回収率９１．２６％で得られた。上記ルテインの化学的回収率は８７．２３％であった。ルテインに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、７１．２８％のトランス−ルテイン、５．８３％のトランス−ゼアキサンチン、１．９２％のβ−カロテン、１．５３％のクリプトキサンチン、および１９．３６％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１３７】
〔Ｂ）ルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジンの、エタノールを用いた濃縮〕
工程Ａ）で得られ、５１．２８ｇ／ｋｇの総カロテノイドを含有する、ルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジン２．０ｋｇを、２．０Ｌのエタノールと共に容器に入れ、室温で１０分間均質化して、均質化された一定な混合物を得た。上記混合物を静置し、内容物を分離した。溶媒の下層を排出し、得られたオレオレジンを上記容器内に保持した。各回ごとに２．０Ｌのエタノールを添加することによって上記方法をさらに２回繰り返し、上記オレオレジンを濃縮した。１４２．８ｇ／ｋｇの総カロテノイド（１４．２８％のカロテノイド）を含有する、濃縮されたオレオレジン０．６７２ｋｇが、カロテノイドの化学的回収率９３．５６％で得られた。こうして得られたルテインに富んだ濃縮された上記オレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、７３．２２％のトランス−ルテイン、４．９０％のトランス−ゼアキサンチン、１．６２％のβ−カロテン、０．７９％のクリプトキサンチン、および１９．３８％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１３８】
〔実施例１７〕
＜ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドの粗粉の、イソプロピルアルコールを用いた抽出、およびエタノール中での濃縮＞
〔Ａ）イソプロピルアルコール中でのゼアキサンチンに富んだマリーゴールドの抽出：〕
３．２９ｇ／ｋｇ（０．３２９％）の総カロテノイドを含有する、ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドの粗粉（米国特許第６，７８４，３５１号公報に記載。Ball Horticulture社から入手した）２０ｋｇを、循環設備を備えた２００Ｌ容量の抽出機に入れた。上記粗粉は、ＨＰＬＣによって測定したところ、５９．０８％のトランス−ゼアキサンチン、１４．８０％のβ−カロテン、１１．７７％のトランス−ルテイン、２．７６％のα−クリプトキサンチン、２．３３％のβ−クリプトキサンチン、１．９８％のα−カロテン、０．８２％のシス−ルテイン、０．２２％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および６．２４％の他の未同定カロテノイドというカロテノイドのプロファイルを有する。
【０１３９】
ガスクロマトグラフィーを用いた分析結果で純度９９％超であり、水分含有量が１％未満であるイソプロピルアルコール１２０Ｌを上記抽出機に添加し、循環させた。温度を５５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、６０Ｌのイソプロピルアルコールを用いて、同じ温度および時間の条件下でさらに２回繰り返した。得られた抽出物を上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記３回の抽出により回収したミセラ（miscella）２１７．２Ｌは、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに供し、７０％の固形分および３０％の溶媒を含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。上記濃縮ミセラ（miscella）は蒸留ユニット中で大気圧下においてさらに蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量１８８Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であった。
【０１４０】
２０．０４ｇ／ｋｇの総カロテノイド（２．００４％のカロテノイド）を含有するオレオレジン３．２５２ｋｇを、回収率９９．０４％で得た。上記ゼアキサンチンの化学的回収率は９２．７５％であった。このようにして得られたトランス−ゼアキサンチンに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、５３．７４％のトランス−ゼアキサンチン、１４．５１％のβ−カロテン、１５．１５％のトランス−ルテイン、３．６４％のα−クリプトキサンチン、２．２６％のβ−クリプトキサンチン、３．１１％のα−カロテン、１．６０％のシス−ルテイン、および０．５２％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および５．４７％の他の未同定のカロテノイドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１４１】
〔Ｂ）ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジンの、エタノールを用いた濃縮〕
工程Ａ）で得られ、２０．０４ｇ／ｋｇのカロテノイドを含有する、ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジン２．３１ｋｇを容器に入れ、１０．８Ｌのプロセス水を用いて、４５℃で１５分間均質化した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記分離された混合物を真空下でろ過した。こうしてフィルター上に得られた上記マリーゴールドのオレオレジンを上記容器へ移した。全ての水溶性不純物を除去するために、上述のものと同じプロセス水１０．８Ｌを用いて、この工程を、同じ温度条件下でもう一度繰り返した。得られた上記オレオレジンに、水分含有量が約５％であるエタノール５．４Ｌを添加し、１０分以上１５分以下、４５℃で攪拌した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。エタノールの上層をデカントし、排出した。エタノールを用いた上記洗浄を、４．２Ｌのエタノールを各回ごとに添加することによってさらに２回繰り返した。４０．８３ｇ／ｋｇの総カロテノイド（４．０８３％のカロテノイド）を含有する、濃縮されたオレオレジン０．９６９ｋｇが、化学的回収率８５．４７％で得られた。上記ゼアキサンチンの化学的回収率は８８．８８％であった。こうして得られた、トランス−ゼアキサンチンに富んだ、濃縮されたマリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、５５．８９％のトランス−ゼアキサンチン、１３．６２％のβ−カロテン、１６．６３％のトランス−ルテイン、３．５７％のα−クリプトキサンチン、２．２７％のβ−クリプトキサンチン、３．７２％のα−カロテン、０．７１％のシス−ルテイン、０．２５％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および３．３４％の他の未同定カロテノイドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１４２】
〔実施例１８〕
＜トランス−ルテインとトランス−ゼアキサンチンとの重量比が約１０：１である、トランス−ルテインおよびトランス−ゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を得るための分離および精製＞
実施例１６で得られ、上記濃縮されたルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジンと、実施例１７で得られ、上記濃縮されたゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジンとを、それぞれ、物理重量比８６：１４で混合する。混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇは、１２９．２０ｇ／ｋｇの総カロテノイド（１２．９２％のカロテノイド）を含有する。上記混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇを５．０Ｌ容量の３つ口丸底フラスコに入れ、湯浴中、４０℃で連続的に攪拌しながら、１０分間均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ１２０ｇ（供給した上記オレオレジンに対して４０％となるように計算されている）を、エタノール０．４５Ｌ（上記オレオレジンとエタノールとの体積比は１：１．５）に溶解することによって調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化されたマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器内へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水１．２Ｌ（上記オレオレジンと上記脱ミネラル熱水との体積比が１：４となるように計算されている）を、上記ケン化したマリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物を、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、７５℃に維持した熱水２．４Ｌ（上記オレオレジンと上記熱水との体積比が１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去して、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。次に、ウェットな上記結晶を上記フィルターから回収し、流動層乾燥機内で、約５５℃で１時間、または水分レベルが０．３％未満および上記イソプロピルアルコールおよびエタノールのレベルがそれぞれ１００ｐｐｍ未満になるまで乾燥した。
【０１４３】
トランス−ルテインおよびトランス−ゼアキサンチンに富んだ精製カロテノイド結晶３５．５９ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は１１．８６％であった。得られたカロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、９１．２２重量％の総カロテノイドを含有し、そのうち８９．８４％が全てトランス型のルテイン、９．０４％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．４３％がβ−クリプトキサンチン、０．３７％がβ−カロテンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。測定値はＨＰＬＣによるものである。
【０１４４】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、８２．１０重量％のトランス−ルテイン、８．２６重量％のトランス−ゼアキサンチンを含有し、トランス−ゼアキサンチンに対するトランス−ルテインの重量比は約１０：１（９．９４）であった。
【０１４５】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、８．６２％のワックスを含有していた。上記最終生成物の、上記カロテノイドの化学的回収率は８３．７６％であり、ルテインの化学的回収率は９２．７８％であり、ゼアキサンチンの化学的回収率は９５．２６％であった。上記最終生成物は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、０．５１％の水分、３２．３ｐｐｍのエタノール、２２．５ｐｐｍのイソプロピルアルコールを含有していた。
【０１４６】
〔実施例１９〕
＜ルテインとゼアキサンチンとの重量比が約５：１である、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を得るための分離および精製＞
実施例１６で得られた、上記濃縮されたルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジンと、実施例１７で得られた、上記濃縮されたゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジンとを、それぞれ、物理重量比６０：４０で混合する。混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３０ｋｇは、１０３．５０ｇ／ｋｇの総カロテノイド（１０．３５％のカロテノイド）を含有する。上記混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３ｋｇを５．０Ｌ容量の３つ口丸底フラスコに入れ、湯浴中、４０℃で連続的に攪拌しながら、１０分間均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ１２０ｇ（供給した上記オレオレジンに対して４０％となるように計算されている）を、エタノール０．４５Ｌ（上記オレオレジンとエタノールとの体積比は１：１．５）に溶解することによって調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化されたマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器内へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水１．２Ｌ（上記オレオレジンと上記脱ミネラル熱水との体積比が１：４となるように計算されている）を、上記ケン化したマリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物を、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶は、７５℃に維持した熱水２．４Ｌ（上記オレオレジンと上記熱水との体積比が１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去して、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。上記ウェットな結晶（８３．２ｇ）を上記フィルターから回収し、上記容器へ移した。エタノール０．２５Ｌ（上記ウェットな結晶とエタノールとの体積比が１：３）を上記容器に入れ、温度を５０℃に維持して１０分間攪拌した。次に、上記溶液をブフナー漏斗を用いてろ過する。次に、上記ウェットな結晶を上記フィルターから回収し、流動層乾燥機内で、約５５℃で１時間、または水分レベルが０．３％未満、並びに、イソプロピルアルコールおよびエタノールのレベルがそれぞれ１００ｐｐｍ未満になるまで乾燥した。
【０１４７】
トランス−ルテインおよびトランス−ゼアキサンチンに富んだ精製カロテノイド結晶２２．９５ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は７．６５％であった。得られたカロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、９１．８６重量％の総カロテノイドを含有し、そのうち８２．２３％が全てトランス型のルテイン、１６．７８％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．５７％がβ−クリプトキサンチン、０．４０％がβ−カロテンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。測定値はＨＰＬＣによるものである。
【０１４８】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、７３．５６重量％のトランス−ルテイン、および１５．０１重量％のトランス−ゼアキサンチンを含有し、トランス−ゼアキサンチンに対するトランス−ルテインの重量比は約５：１（４．９）であった。
【０１４９】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、８．０４％のワックスを含有していた。最終生成物のカロテノイドの化学的回収率は６９．４９％であり、ルテインの化学的回収率は８４．６４％、ゼアキサンチンの化学的回収率は８５．４８％であった。上記最終生成物は、ガスクロマトグラフィーで測定したところ、０．２９％の水分、６３．２ｐｐｍのエタノール、および１３．０５ｐｐｍのイソプロピルアルコールを含有していた。
【０１５０】
〔実施例２０〕
＜ルテインとゼアキサンチンとを約１：１の比で含有する、ルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を得るための分離および精製＞
実施例１６で得られた、濃縮され、ルテインに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンと、実施例１７で得られた、濃縮され、ゼアキサンチンに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンとをそれぞれ、物理重量比１４：８６で混合する。混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３０ｋｇは、５６．１３ｇ／ｋｇの総カロテノイド（５．６１３％のカロテノイド）を含有する。上記混合されたマリーゴールドのオレオレジン０．３０ｋｇを５．０Ｌ容量の３つ口丸底フラスコに入れ、湯浴中、４０℃で連続的に攪拌しながら、１０分間均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ１２０ｇ（オレオレジンの供給量に対して４０％となるように計算されている）を、０．４５Ｌのエタノール（上記オレオレジンとエタノールとの体積比は１：１．５）に溶解させて調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化したマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器中へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水１．２Ｌ（上記オレオレジンと上記脱ミネラル熱水との体積比が１：４となるように計算されている）をケン化された上記マリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物を、ブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶を、７５℃に維持した２．４Ｌの熱水（上記オレオレジンと上記熱水との体積比が１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。上記ウェットな結晶（２５．２ｇ）を上記フィルターから回収し、上記容器へ移した。エタノール０．０７５Ｌ（上記ウェットな結晶とエタノールとの体積比が１：３）を上記容器へ添加し、温度を５０℃に保持して１０分間攪拌した。次に、上記溶液をブフナー漏斗を用いてろ過する。次に、上記ウェットな結晶を上記フィルターから回収し約５５℃で１時間、または、水分レベルが０．３％未満に低下し、かつ、イソプロピルアルコールおよびエタノールのレベルがそれぞれ１００ｐｐｍ未満になるまで流動層乾燥機中で乾燥させた。
【０１５１】
トランス−ルテインおよびトランス−ゼアキサンチンに富んだ精製カロテノイド結晶９．６９ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は３．２３％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ９０．９８重量％の総カロテノイドを含有しており、ＨＰＬＣにより測定したところ、そのうち４８．７８％が全てトランス型のルテイン、４９．８７％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．４２％がβ−クリプトキサンチン、０．９３％がβ−カロテンであり、シス−ルテイン、クリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、α−クリプトキサンチン、α−カロテン、およびエポキシドは検出されなかった。
【０１５２】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、４３．７３重量％のトランス−ルテインおよび４４．７０重量％のトランス−ゼアキサンチンを含有し、トランス−ゼアキサンチンに対するトランス−ルテインの重量比は約１：１（０．９７８）である。
【０１５３】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、８．９９％のワックスを含有していた。上記最終生成物の、上記カロテノイドの化学的回収率は５２．３８％であり、ルテインの化学的回収率は６５．５８％であり、ゼアキサンチンの化学的回収率は７６．１９％であった。上記最終生成物は、ガスクロマトグラフィーを用いて測定したところ、０．２８％の水分、１２．０８ｐｐｍのエタノール、および３５．０６ｐｐｍのイソプロピルアルコールを含有していた。
【０１５４】
〔実施例２１〕
＜抽出溶媒としてエタノールを用い、マリーゴールドの粗粉からルテインおよびゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を抽出、分離、および精製し、続いて結晶を混合する＞
〔Ａ）ルテインに富んだマリーゴールドの粗粉のエタノール中での抽出、および、エタノールを用いた、ルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジンの濃縮〕
８．９９ｇｍ／ｋｇ（０．８９％）の総カロテノイドを含有する、ルテインに富んだマリーゴールドの粗粉１００ｋｇを、循環設備を備えた２ＫＬ容量の抽出機に入れた。上記総カロテノイドは、ＨＰＬＣによって測定したところ、７４．５８％のトランス−ルテイン、４．２８％のトランス−ゼアキサンチン、１．９４％のβ−カロテン、１．０２％のクリプトキサンチン、および１８．０８％のシス−アイソマーおよびエポキシドというカロテノイドのプロファイルを有していた。ガスクロマトグラフィーによって測定した純度が９９％超であり、水分含有量が１．０％未満である１０００Ｌのエタノールを上記抽出機に添加し、循環させた。温度を７５℃まで上昇させ、循環下１時間保持した。１時間後、上記抽出物を排出し、タンクに回収した。上記抽出は、同じ条件の温度および時間の下で、それぞれ１０００Ｌのエタノールを用いてさらに２回繰り返した。得られた抽出物をミセラ（miscella）タンクに回収した。３回の抽出によって回収した２６００Ｌのミセラ（miscella）をエバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、固形分を７０％、溶媒を３０％含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。さらに上記濃縮ミセラ（miscella）を、大気圧下で蒸留ユニットを用いて蒸留し、固形分の濃度を９５％、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に低減した。回収された溶媒の総量は２１０４Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％を超え、水分レベルは２％であった。４０．０２ｇ／ｋｇの総カロテノイド（４．０％のカロテノイド）を含有するオレオレジン２０．４ｋｇが得られ、カロテノイドの化学的回収率は９１．７３％であった。上記ルテインの化学的回収率は９７．４３％であった。このようにして得られたルテインに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣを用いて測定したところ、７９．２２％のトランス−ルテイン、４．１８％トランス−ゼアキサンチン、１６．１３％のシス−アイソマー／エポキシド、０．２２％のβ−カロテン、および０．２５％のクリプトキサンチンを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１５５】
工程１（ａ）で得られた、４０．０２ｇ／ｋｇの総カロテノイドを含有する、ルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジン１８．３６ｋｇを容器に入れ、９２Ｌのプロセス水を用いて４５℃で１５分間均質化した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記分離された混合物を真空下でろ過した。こうしてフィルター上に得られた上記マリーゴールドのオレオレジンを上記容器へ移した。全ての水溶性不純物を除去するために、上述のものと同じ９２Ｌのプロセス水を用いて、この工程を、同じ温度条件下でもう一度繰り返した。得られた上記オレオレジンに、水分含有量が約８％であるエタノール３６Ｌを添加し、１０分以上１５分以下、環境気温で攪拌した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。エタノールの上層をデカントして排出した。上記オレオレジンを濃縮するために、エタノールを用いた上記洗浄を、３６Ｌのエタノールを各回ごとに添加することによってさらに３回繰り返す。１２４．３９ｇ／ｋｇの総カロテノイドを（１２．４４％のカロテノイド）を含有する、濃縮されたオレオレジン５．２４ｋｇが、化学的回収率８８．７１％で得られた。こうして得られた、ルテインに富んだ上記濃縮されたオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、７９．８３％のトランス−ルテイン、４．０２％のトランス−ゼアキサンチン、０．２３％のβ−カロテン、０．５６％のクリプトキサンチン、および１５．３６％のシス−アイソマー／エポキシドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１５６】
〔Ｂ）ゼアキサンチンに富んだマリーゴールド粗粉のエタノール中での抽出およびエタノール中での濃縮〕
３．２９ｇ／ｋｇ（０．３２９％）の総カロテノイドを含有する、ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドの粗粉４４ｋｇ（米国特許第６，７８４，３５１号に記載されているものであり、BallHorticulture社から入手した）を、循環設備を備えた５００Ｌ容量の抽出機に入れた。上記粗粉は、ＨＰＬＣにより測定したところ、５９．０８％のトランス−ゼアキサンチン、１４．８０％のβ−カロテン、１１．７７％のトランス−ルテイン、２．７６％のα−クリプトキサンチン、２．３３％のβ−クリプトキサンチン、１．９８％のα−カロテン、０．８２％のシス−ルテイン、０．２２％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および６．２４％のその他の未同定カロテノイドというカロテノイドのプロファイルを有していた。ガスクロマトグラフィーを用いた分析結果で純度９９％超であり、水分含有量が５％未満であるエタノール２６４Ｌを上記抽出機に添加し、循環させた。温度は７５℃まで上昇させ、循環下１時間維持した。１時間後、抽出物を排出し、ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記抽出は、各回ごとに１３２Ｌのエタノールを用いて、同じ温度および時間の条件下でさらに３回繰り返した。得られた抽出物を上記ミセラ（miscella）タンクに回収した。上記４回の抽出により回収したミセラ（miscella）５７８Ｌを、エバポレータ、好ましくは流下膜型エバポレータまたは薄膜エバポレータに入れ、７０％の固形分および３０％の溶媒を含有する濃縮ミセラ（miscella）を得た。上記濃縮ミセラ（miscella）を蒸留ユニット中で大気圧下においてさらに蒸留し、上記濃縮物の固形分濃度を９５％に上昇させ、溶媒レベルを約５％とした。上記溶媒を減圧下（４５０ｍｍＨｇ以上６００ｍｍＨｇ以下）で蒸留し、上記溶媒レベルを１％未満に減少させた。回収された溶媒は、総量４９８Ｌであり、ガスクロマトグラフィーで測定した純度は９９％超であり、水分レベルは５．２％であった。６．６３ｇ／ｋｇの総カロテノイド（０．６６３％のカロテノイド）を含有する２１．１ｋｇのオレオレジンが、回収率９６．６３％で得られた。上記ゼアキサンチンの化学的回収率は８７．０２％であった。こうして得られた、トランス−ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、５３．２０％のトランス−ゼアキサンチン、９．２６％のβ−カロテン、１２．９３％のトランス−ルテイン、６．３８％のα−クリプトキサンチン、２．３８％のβ−クリプトキサンチン、２．６６％のα−カロテン、３．６３％のシス−ルテイン、１．２３％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および８．３３％の他の未同定のカロテノイドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１５７】
６．６３ｇ／ｋｇのカロテノイドを含有し、エタノールを用いた抽出によって得られた、上記ゼアキサンチンに富んだマリーゴールドのオレオレジン１９．５７ｋｇを容器に入れ、６０．０Ｌのプロセス水を用いて４５℃で１５分間均質化した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。上記分離された混合物を真空下でろ過した。こうしてフィルター上に得られた上記マリーゴールドのオレオレジンを上記容器へ移した。全ての水溶性不純物を除去するために、上述のものと同じプロセス水６０．０Ｌを用いて、この工程を、同じ温度条件下でもう一度繰り返した。得られた上記オレオレジンに、水分含有量が約８％であるエタノール２０Ｌを添加し、１０分以上１５分以下、４５℃で攪拌した。上記混合物を静置し、内容物を分離した。エタノールの上層をデカントし、排出した。エタノールを用いた上記洗浄を、２０Ｌのエタノールを各回ごとに添加することによってさらに２回繰り返した。４６．２０ｇ／ｋｇの総カロテノイド（４．６２％のカロテノイド）を含有する、濃縮されたオレオレジン２．５５９ｋｇが、化学的回収率９１．１１％で得られた。上記ゼアキサンチンの化学的回収率は９０．５３％であった。こうして得られた、トランス−ゼアキサンチンに富んだ、濃縮されたマリーゴールドのオレオレジンは、ＨＰＬＣによって測定したところ、５２．８６％のトランス−ゼアキサンチン、１０．３６％のβ−カロテン、１６．２８％のトランス−ルテイン、７．８３％のα−クリプトキサンチン、２．３３％のβ−クリプトキサンチン、２．１０％のα−カロテン、４．３６％のシス−ルテイン、０．０８％のクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、および３．８％の他の未同定カロテノイドを含有するというカロテノイドのプロファイルを示した。
【０１５８】
〔Ｃ）ルテインに富んだカロテノイド結晶を得るための分離および精製〕
上記工程（Ａ）で得られ、１２４．３９ｇ／ｋｇの総カロテノイド（１２．４３％のカロテノイド）を含有し、濃縮され、ルテインに富んだ上記マリーゴールドのオレオレジン４．８ｋｇを１００Ｌ容量の抽出機に入れ、ジャケット内に熱水を循環させることによって温度を４０℃に保持して、連続的に攪拌し、１０分間均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ１．９２ｋｇ（供給した上記オレオレジンに対して４０％となるように計算されている）を、エタノール７．２Ｌ（上記オレオレジンのＷ／ＶとエタノールのＷ／Ｖとの比は１：１．５）に溶解させることによって調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化されたマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器内へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水１９．２Ｌ（上記オレオレジンのＷ／Ｖと、上記脱ミネラル熱水のＷ／Ｖとの比は１：４となるように計算されている）を、上記ケン化したマリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物をノウチ（neutch）フィルターを用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶を、７５℃に維持した３８．４Ｌの熱水（上記オレオレジンのＷ／Ｖと、上記熱水のＷ／Ｖとの比は１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。上記ウェットな結晶（１１６０ｇ）を上記フィルターから回収し、上記容器へ移した。エタノール３．４８Ｌ（上記ウェットな結晶のＷ／ＶとエタノールのＷ／Ｖとの比は１：３である）を上記容器へ添加し、温度を５０℃に保持して１０分間攪拌した。次に、上記溶液をノウチ（neutch）フィルターを用いてろ過する。次に、上記ウェットな結晶を上記ノウチ（neutch）フィルターから回収し、約５５℃で１時間、または、水分レベルが０．３％未満に低下し、かつ、エタノールレベルが１００ｐｐｍ未満になるまで流動層乾燥機中で乾燥させた。
【０１５９】
トランス−ルテインに富んだ精製カロテノイド結晶５０４．６ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は１０．５１％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、カロテノイドをトータル９０．８３％含有しており、ＨＰＬＣにより測定したところ、そのうち９２．３６％が全てトランス型のルテイン、５．７２％が全てトランス型のゼアキサンチン、０．３０％がシス−ルテイン、０．５１％がβ−カロテン、１．１１％がクリプトキサンチンであった。最終生成物の化学的回収率は７６．７６％である。
【０１６０】
〔Ｄ）ゼアキサンチンに富んだカロテノイド結晶を得るための分離および精製〕
上記工程（Ｃ）で得られ、４６．２０ｇ／ｋｇの総カロテノイド（４．６２％のカロテノイド）を含有し、濃縮され、ルテインに富んだマリーゴールドのオレオレジン２．１ｋｇを５０Ｌ容量の抽出機に入れ、ジャケット内に熱水を循環させることによって温度を４０℃に保持して、連続的に攪拌し、１０分間均質化した。アルコール性ＫＯＨは、純度９０％のＫＯＨ８４０ｇ（供給した上記オレオレジンに対して４０％となるように計算されている）を、エタノール３．１５Ｌ（上記オレオレジンのＷ／ＶとエタノールのＷ／Ｖとの比は１：１．５）に溶解させることによって調製した。調製した上記アルコール性ＫＯＨを、上記均質化されたマリーゴールドのオレオレジンを含有する反応容器内へゆっくりと添加した。ケン化反応は７５℃で３０分間行った。ＨＰＬＣによって９９％超のケン化度を確保した後、７５℃に維持した脱ミネラル熱水８．４Ｌ（上記オレオレジンのＷ／Ｖと上記脱ミネラル熱水のＷ／Ｖとの比は１：４となるように計算されている）を、上記ケン化したマリーゴールドのオレオレジンに添加し、１０分間連続的に攪拌した。カロテノイド結晶を含有し、希釈され、ケン化された上記混合物をブフナー漏斗を用いてろ過し、上記カロテノイド結晶を回収した。こうして得られた上記カロテノイド結晶を、７５℃に維持した１６．８Ｌの熱水（上記オレオレジンのＷ／Ｖと、上記熱水のＷ／Ｖとの比は１：８となるように計算されている）を用いて洗浄し、不純物を除去し、排水のｐＨを中性の約７．０に低下させた。上記ウェットな結晶（４７５．３ｇ）を上記フィルターから回収し、上記容器へ移した。エタノール１．４２Ｌ（上記ウェットな結晶のＷ／Ｖと、エタノールのＷ／Ｖとの比は１：３）を上記容器へ添加し、温度を５０℃に保持して１０分間攪拌した。次に、上記溶液をブフナー漏斗を用いてろ過する。次に、上記ウェットな結晶を上記フィルターから回収し、約５５℃で１時間、または、水分レベルが０．３％未満に低下し、かつ、エタノールレベルが１００ｐｐｍ未満になるまで流動層乾燥機中で乾燥させた。
【０１６１】
トランス−ゼアキサンチンに富んだ精製カロテノイド結晶３５．２ｇが得られ、最終生成物の物理的回収率は１．６７％であった。得られた上記カロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、７２．３％の総カロテノイドを含有しており、ＨＰＬＣにより測定したところ、そのうち８８．６０％が全てトランス型のゼアキサンチン、８．２９％が全てトランス型のルテイン、０．２１％がクリサンテマキサンチン（chrysanthemaxantin）、０．５１％がα−カロテン、２．３９％がβ−カロテンであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。
【０１６２】
こうして得られた上記カロテノイド結晶は、トランス−ゼアキサンチンを６４．０５重量％、トランス−ルテインを５．９９重量％含有しており、総カロテノイドの化学的回収率は２６．２３％である。
【０１６３】
〔Ｅ）ルテインに富んだ結晶とゼアキサンチンに富んだ結晶との混合〕
上記工程（Ｃ）で得られた結晶と、上記工程（Ｄ）で得られた結晶とを、実験室のミキサーブレンダー内で特定の比で１０分間、または最終混合物の色が一定になるまで混合する。混合されたサンプルの総カロテノイドおよびＨＰＬＣプロファイルを分析する。トランス−ゼアキサンチンに対するトランス−ルテインの比を１０：１とし、それぞれの混合の際に量を変更することによって、全部で３つの混合物を調製する。トランス−ルテインとトランス−ゼアキサンチンとを１０：１の比で混合した混合物の理論プロファイルは、ＵＶを用いて測定した総カロテノイドが９０．１２％であり、ＨＰＬＣで測定したところ、そのうちトランス−ルテインが８９．１％、トランス−ゼアキサンチンが８．９１％、その他のカロテノイドが１．９７％であった。
【０１６４】
＜混合物１＞
ルテインを２２５ｇ、ゼアキサンチンを９ｇ採取し、上述のように混合する。こうして得られたカロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、９０．０８％の総カロテノイドを含有し、ＨＰＬＣによって測定したところ、そのうち８８．９％が全てトランス型のルテイン、９．７３％が全てトランス型のゼアキサンチン、１．３７％がβ−カロテンおよびその他のカロテノイドであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。上記混合物において得られた上記比は９．１３である。
【０１６５】
＜混合物２＞
ルテインを１５０ｇ、ゼアキサンチンを６ｇ採取し、上述のように混合する。混合物２中に得られたカロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、８８．９６％の総カロテノイドを含有し、ＨＰＬＣによって測定したところ、そのうち８９．４６％が全てトランス型のルテイン、８．５９％が全てトランス型のゼアキサンチン、１．９５％がβ−カロテンおよびその他のカロテノイドであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。上記混合物において得られた上記比は１０．４１である。
【０１６６】
＜混合物３＞
ルテインを１００ｇ、ゼアキサンチンを４ｇ採取し、上述のように混合する。混合物３中に得られたカロテノイド結晶は、ＵＶ−可視分光器によって測定したところ、９０．３８％の総カロテノイドを含有し、ＨＰＬＣによって測定したところ、そのうち９０．６３％が全てトランス型のルテイン、８．１４％が全てトランス型のゼアキサンチン、１．２３％がβ−カロテンおよびその他のカロテノイドであり、シス−ルテインおよびエポキシドは検出されなかった。上記混合物において得られた上記比は１１．１３である。
【０１６７】
上記実験から、別々に精製した後で上記結晶を混合すると、９．１３，１０．４１，１１．１３のようにルテインのゼアキサンチンに対する比が異なるという結果になることが明らかである。上述のようにして得られたゼアキサンチンの精製結晶の回収率は２６．２３％であり、これは商業的スケールでは経済的ではない程度に低い値であることも明らかである。
【０１６８】
〔利点〕
既に開示し説明したように、上記主題とそれに相当するものは、下記の利点を含む多くの利点を有する。
【０１６９】
本発明の利点は、コントロールされた嫌気的条件下でサイロへの貯蔵を行うことにより、カロテノイドを固定および濃縮し、エポキシドのような好ましくない酸化物の生成を阻害することである。本発明の他の利点は、濃縮されたオレオレジン内のカロテノイドエステルの９９％を３０分未満でケン化しうることである。さらに、得られる生成物は長時間熱にさらされないので、変性した酸化生成物の生成を回避することができる。上記ケン化された集団は、大半の不純物を一工程で除去することを補助する熱的条件下で、アルコールと水との混合物の補助によってすぐに沈殿される。結晶化された上記集団をろ過し、熱水で洗浄して不純物を除去する。回収された上記ウェットな結晶を乾燥し、カロテノイド結晶を得る。マリーゴールドの花および／または花弁由来のカロテノイド結晶を得るための全工程は４−５時間以内に完了する。
【０１７０】
本発明はまた、生体への親和性、時間と温度との組み合わせ、および安全なクラス３溶媒しか使用しないという点でも利点を有する。これらのファクターの全てが、生成物の収量および安定性に寄与し、商業スケールでの生産コストを低減する。この利点はまた、上記生成物を、栄養補助食品、医薬的作用を持つ化粧品、食品またはサプリメントとして用いる際の安全性をも高める。
【０１７１】
他の利点として、本発明にかかる方法によって調製された、ルテインとゼアキサンチンとを異なる比で含有するカロテノイド結晶は、より生理活性があり、より生体利用性が高い組成物となるということが挙げられる。
【０１７２】
本発明の他の利点として、商業的に利用できない、非常に低い回収率をもった精製ゼアキサンチン結晶の調製を回避できるということが挙げられる。