(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病を有するヒト対象におけるアルツハイマー病の処置における使用のための、バクロフェンまたはテルビナフィン、またはその塩もしくは徐放性処方物を含む医薬。
【請求項２】
バクロフェンまたはテルビナフィンとの併用の、別々のまたは逐次的な投与のための、レフルノミド、スルフィソキサゾール、テルビナフィン、バクロフェン、クロピドグレル、フェノルドパム、メパクリンおよびフェンホルミン、またはその塩もしくは徐放性処方物の群より選択される少なくとも１つの化合物をさらに含む、請求項１記載の医薬。
【請求項３】
医薬が以下の薬物の組み合わせの少なくとも１つを含み、組み合わせの各々の中の薬物が併用の、別々のまたは逐次的な投与のためのものである、請求項２記載の医薬：
−  バクロフェンおよびスルフィソキサゾール、
−  バクロフェンおよびレフルノミド、
−  テルビナフィンおよびスルフィソキサゾール、
−  テルビナフィンおよびレフルノミド、
−  テルビナフィンおよびフェノルドパム、
−  テルビナフィンおよびメパクリン、
−  テルビナフィンおよびフェンホルミン、
−  テルビナフィンおよびクロピドグレル、
−  バクロフェンおよびフェンホルミン、または
−  バクロフェンおよびクロピドグレル。
【請求項４】
該ヒト対象におけるアルツハイマー病の進行の遅延における使用のための、請求項１〜３のいずれか1項記載の医薬。
【請求項５】
薬学的に許容され得る担体または賦形剤を含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の医薬。
【請求項６】
医薬が対象に反復して投与される、請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）および関連障害の処置のための組成物および方法に関する。
【０００２】
ＡＤは、皮質連合野の関与に起因し得る失語症（会話および会話の理解の機能障害が存在する言語障害）、統合運動障害（運動または感覚機能障害の非存在下で特定の目的のある動作および身振りを協調および実施することの能力障害）および失認（物体、人物、音、形状、または臭いを認識する能力）と一緒の記憶欠損によって特徴付けられる原型皮質認知症である。痙性対麻痺（下肢を冒す脱力）のような特殊な症候も関与し得る（１〜４）。
【０００３】
アルツハイマー病の発生率は年齢とともに劇的に増加する。ＡＤは、現在、認知症の最も一般的な原因である。それは、ゆっくりと進行し、そして末期患者をベッドに結びつけ、失調させ、そして療護に依存したたままにする認知機能の包括的な減退によって臨床的に特徴付けられる。死亡は、平均で、診断の９年後に起こる（５）。
【０００４】
ＡＤの発生率は年齢とともに劇的に増加する。国際連合人口予測は、８０歳より高齢の人々の数は２０５０年までに３億７千万に近づくと見積もっている。現在、８５歳より高齢の人々の５０％がＡＤに苦しんでいると見積もられている。それゆえ、世界中で１億人より多くの人々が５０年のうちに認知症に罹患する。不断の介護および他の奉仕を必要とする多数の人々が医学的、金銭的および人的資源に厳しい影響を及ぼす（６）。
【０００５】
記憶障害は、疾患の初期の特徴であり、そしてそれにはエピソード記憶（毎日の出来事のための記憶）が関与する。意味記憶（言語的および視覚的意味のための記憶）は、より後期に疾患に関与する。対照的に、作業記憶（情報を一時的に貯蔵および操作するために使用される構造およびプロセスが関与する短期記憶）および手続記憶（技術および手順の長期記憶である無意識記憶）は後期まで保存される。疾患が進行するにつれて、言語機能障害、視覚的知覚および空間欠損、失認および失行のさらなる特徴が出現する。
【０００６】
アルツハイマー病の古典的臨床像は、症例の約８０％における同定を可能にするために十分に特徴的である（７）。それにもかかわらず、臨床的不均一性が起こり、そしてこれは臨床管理のために重要であるだけでなく、機能的に異なる形態のための特定の薬物適用処置のさらなる意味を提供する（８）。
【０００７】
ＡＤの病理学的特徴は、βアミロイド（Ａβ）を含むアミロイド斑、タウを含む神経原線維変化（ＮＦＴ）ならびにニューロンおよびシナプスの機能障害および損失を含む（９〜１１）。この１０年間の間に、ＡＤの原因についての２つの主要な仮説が提唱されている：神経変性プロセスがアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の異常なプロセシングによって誘発される一連の事象であると述べる「アミロイドカスケード仮説」（１２）、および細胞骨格の変化が誘発事象であると提唱する「ニューロン細胞骨格変性仮説」（１３）。ＡＤの進行を説明する最も広く受け入れられている理論はアミロイドカスケード仮説に留まっており（１４〜１６）、そしてＡＤ研究者は主に、Ａβタンパク質に関連する毒性の基礎をなす機構の決定に集中している。反対に、タウタンパク質は、根本的および実用的の両方の懸念の故に、アミロイドよりもずっと少ない注目を製薬業界から受けている。さらに、シナプス密度の変化は、他の２つよりも認知機能障害に最も良好に相関する病理学的病変である。研究により、アミロイド病理が、コリン作動性終末が最も脆弱に見え、グルタミン酸作動性終末および最後にＧＡＢＡ作動性終末が続く、神経伝達物質特異的様式で進行するようであることが明らかになった（１１）。
【０００８】
発明の概要
本発明の目的は、ＡＤおよび関連障害を処置するための新たな治療アプローチを提供することである。
【０００９】
本発明者らは、ＡＤの起源に関与する分子経路を同定し、そしてＡＤおよび関連障害を寛解させるための新たな処置の開発のための、特に、新規の分子または他の適応症において以前に使用されている既存の分子を使用する併用療法の開発のための新規の標的を提供する。より特定すると、本発明者らは、単独でまたは組み合わせで、そのような経路に有効に影響を及ぼし、そしてＡＤおよび関連障害の処置のための新たなそして有効な治療を表すいくつかの薬物を同定した。
【００１０】
それゆえ、本発明は、ＡＤおよび関連障害を処置するための新規の組成物および方法を提供する。
【００１１】
より特定すると、本発明は、それを必要とする対象においてアルツハイマー病または関連障害を処置するために適切な組成物に関し、ここで組成物は血管新生を増加させる薬物を含む。
【００１２】
本発明のさらなる目的は、それを必要とする対象においてアルツハイマー病または関連障害を処置するために適切な組成物に関し、ここで組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な投与のための、少なくとも２つの、血管新生を増加させる薬物の組み合わせを含む。
【００１３】
より好ましくは、血管新生を増加させる薬物（単数または複数）は、ＡＢＣＡ１、ＡＣＡＴ、ＡＣＣ２、ＡＤＡＭＴＳ１２、ＡＤＣＹ２、ＡＤＩＰＯＱ、ＡＤＩＰＯＲ１、ＡＤＩＰＯＲ２、ＡＤＲＢ２、ＡＧＰＡＴ５、ＡＩＰ４、ＡＫＡＰ２、ＡＫＲ１Ｃ２、ＡＭＰＫ、ＡＮＧ２、ＡＮＫ１、ＡＮＸＡ１、ＡＰＯＡ１、ＡＲＨＧＡＰ１７、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＵＨ、ＡＵＴＯＴＡＸＩＮ、ＢＡＩ３、ＢＣＡＲ１、ＢＩＮ１、ＢＭＰ３Ａ、ＣＡ１０、ＣＡＭＫ１Ｄ、ＣＡＭＫＫ２、ＣＤ３６、ＣＤ４４、ＣＤＣ４２、ＣＤＨ１３、ＣＨＡＴ、ＣＮＴＦＲ、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＰＴ、ＣＳＨ１、ＣＴＮＮ、ＣＵＢＮ、ＣＹＰ７Ｂ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＧＫＢ、ＤＧＫＨ、ＤＧＫＺ、ＤＨＣＲ７、ＤＨＦＲ、ＤＲＤ２、ＤＲＤ５、ＥＤＧ１、ＥＤＧ２、ＥＤＧ３、ＥＤＧ４、ＥＤＧ５、ＥＤＧ６、ＥＤＧ７、ＥＤＧ８、ＥＤＮＲＡ、ＥＨＨＡＤＨ、ＥＮＰＰ６、ＥＲＢＢ４、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＥＳＲＲＧ、ＥＴＦＡ、Ｆ２、ＦＤＰＳ、ＦＧＦ２、ＦＬＮＡ、ＦＬＴ４、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＯ３Ａ、ＦＴＯ、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＴＡ３、ＧＨ１、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＲＫ２、ＧＲＫ５、ＧＲＭ５、ＨＡＰＬＮ１、ＨＡＳ１、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＨＣＲＴＲ２、ＨＩＦ１Ａ、ＨＳＤ１１Ｂ１、ＨＹＡＬ１、ＨＹＡＬ２、ＨＹＡＬ３、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ８、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＢ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ１、ＬＤＬＲ、ＬＥＰＲ、ＬＥＰＴＩＮ、ＬＩＦＲ、ＬＩＰＬ２、ＬＫＢ１、ＬＲＰ、ＬＴＢＰ２、ＭＡＴ２Ｂ、ＭＥ１、ＭＥＧＡＬＩＮ、ＭＥＲＬＩＮ、ＭＥＴ、ＭＧＳＴ２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＴＯＲ、ＭＴＲ、ＮＣＫ２、ＮＥＤＤ９、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢＩＢ、ＮＯＳ２Ａ、ＮＯＳ３、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲＧ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＯＰＲＳ１、ＯＳＢＰＬ１０、ＯＳＢＰＬ３、ＯＳＴＥＯＰＯＮＴＩＮ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１２、ＰＡＩ１、ＰＡＩ２、ＰＡＫ１、ＰＡＫ６、ＰＡＬＬＤ、ＰＡＰ１、ＰＡＲ１、ＰＡＸＩＬＬＩＮ、ＰＣ、ＰＣＴＰ、ＰＤＥ１１Ａ、ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ｄ、ＰＤＥ５、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＩ３Ｋ、ＰＩＴＰＮＣ１、ＰＫＡ、ＰＫＣＤ、ＰＬＡ１Ａ、ＰＬＡ２、ＰＬＡＴ、ＰＬＡＵ、ＰＬＣＢ１、ＰＬＤ１、ＰＬＤ２、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣ２、ＰＰＡＲＡ、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＡＲＧＣ１Ｂ、ＰＲＫＧ１、ＰＲＬ、ＰＴＧＳ２、ＰＴＮ、ＰＴＰＮ１１、ＰＹＫ２、ＲＡＣ１、ＲＡＳ、ＲＨＥＢ、ＲＨＯＡ、ＲＯＣＫ１、ＲＯＣＫ２、ＲＰＳ６ＫＡ１、ＲＰＳ６ＫＢ２、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＨＩＰ１、ＳＧＰＰ２、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＢＳ２、ＳＰＬＡ２、ＳＰＯＣＫ１、ＳＲＤ５Ａ１、ＳＲＥＢＦ１、ＳＲＥＢＦ２、ＳＴＡＴ３、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＥＭ２、ＴＨＲＢ、ＴＩＡＭ１、ＴＩＭＰ２、ＴＬＬ２、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＴＳＰＯ、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ１、およびＹＥＳ１から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質に結合するかまたはその活性を調節する。
【００１４】
そのような薬物の特定のそして好ましい例としては、限定するものではないが、アカンプロセート、アルブテロール、アレンドロネート、アンブリセンタン、アミノカプロン酸、アルガトロバン、バクロフェン、バルサラジド、ベカプレルミン、カベルゴリン、シロスタゾール、クロピドグレル、デシルジン、ジヒドロエルゴタミン、エプレレノン、フェノルドパム、フルドロコルチゾン、フルニトラゼパム、ゲムフィブロジル、ヘスペレチン、イマチニブ、ケトチフェン、レフルノミド、Ｌ−ヒスチジン、リオチロニン、マリマスタット、メロキシカム、メパクリン、メタゾラミド、メチマゾール、ミルリノン、モンテルカスト、ネチルマイシン、ニトログリセリン、ニトロプルシド、ペガプタニブ、ペンタゾシン、フェンホルミン、フェニル酪酸ナトリウム、ピリメタミン、スルフィソキサゾール、スニチニブ、タダラフィル、テマゼパム、テルビナフィン、チエチルペラジン、チロフィバン、トピラメート、トポテカン、ビダラビンおよびワルファリン、またはその組み合わせから選択される化合物が挙げられる。
【００１５】
特定の実施態様において、本発明の組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な使用のための、少なくとも１つの、シナプス機能を調節する薬物をさらに含む。
【００１６】
あるいは、またはさらに、本発明の組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な使用のための、少なくとも１つの、細胞ストレス応答を調節する薬物をさらに含んでもよい。
【００１７】
本発明の組成物は、典型的には、薬学的に許容され得る担体または賦形剤をさらに含む。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、アルツハイマー病または関連障害を処置するための薬物の製造方法であって、血管新生に対する活性について候補薬物を試験し、そして血管新生を増加させる候補薬物を選択する工程を含む、方法にある。
【００１９】
本発明はまた、アルツハイマー病または関連障害を処置するための組成物の製造方法であって、それを必要とする対象への同時の、別々のまたは逐次的な投与のための、血管新生を増加させる薬物およびシナプス機能または細胞ストレス応答を調節する薬物の組み合わせを調製すること、および薬物の組み合わせを処方することを含む、方法に関する。
【００２０】
本発明はさらに、アルツハイマー病または関連障害の処置方法であって、血管新生を増加させる薬物または薬物の組み合わせを、それを必要とする対象に同時に、別々にまたは逐次的に投与することを含む、方法に関する。
【００２１】
本発明はさらに、アルツハイマー病または関連障害の処置方法であって、血管新生を増加させる薬物およびシナプス機能を調節する薬物および／または細胞ストレス応答を調節する薬物を、それを必要とする対象に同時に、別々にまたは逐次的に投与することを含む、方法に関する。
【００２２】
本発明はさらに、アルツハイマー病または関連障害を処置するための医薬の製造のための、血管新生を増加させる薬物の使用に関する。
【００２３】
本発明はさらに、アルツハイマー病または関連障害を処置するための医薬の製造のための、少なくとも２つの、血管新生を増加させる薬物の組み合わせの使用に関し、ここで少なくとも２つの薬物は一緒に、別々にまたは逐次的に投与される。
【００２４】
本願において考察するように、上記の治療および併用療法は、ヒト対象においてＡＤを処置するための新規のそして有効なアプローチを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ラット内皮大脳細胞からのＬＤＨ遊離に対するβアミロイドペプチド毒性に対する選択した薬物の保護効果。◇：ｐ＜０．０５：ビヒクルとは有意に異なる。＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．０００１；＊＊＊＊：ｐ＜０．００００１：Ａβ２５−３５とは有意に異なる。両側スチューデントｔ検定。Ａβ２５−３５  ３０μＭは、中程度のしかし有意な中毒を生じる（図１−Ａ〜Ｄ、赤色）。この中毒は、レフルノミド（図１Ａ）、テルビナフィン（図１Ｂ）、スルフィソキサゾール（図１Ｃ）またはバクロフェン（−）（図１Ｄ）によって有意に防止される。さらに、レフルノミドおよびテルビナフィンは、アミロイドの有害な効果を防止するだけでなく、培養培地における自発的細胞死を減少させもする。
【００２６】
発明の詳細な説明
本発明は、ＡＤまたは関連障害を処置するための新たな治療アプローチを提供する。本発明は、そのような疾患の有効な矯正を可能にし、そして患者の処置のために使用され得る薬物または薬物の組み合わせの新規の使用を開示する。
【００２７】
用語「ＡＤ関連障害」は、アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤ型老年認知症（ＳＤＡＴ）、パーキンソン病、レビー小体型認知症（Lewis body dementia）、血管性認知症、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、加齢性記憶障害（ＡＡＭＩ）および加齢に関連する問題、脳炎後パーキンソニズム、ＡＬＳおよびダウン症候群を指す。
【００２８】
本明細書において使用する障害の「処置」は、障害によって誘発される症候の治療、防止、予防、遅延または低下を含む。処置なる用語は、特に、疾患の進行および関連する症候の制御を含む。
【００２９】
血管新生に言及する場合の用語「増加」は、対象における既存のレベルに比較しての血管新生の任意の増加を含む。そのような寛解は、回復（すなわち、正常レベルへの）、または、患者の状態を改善するためになお十分であるより低い増加を含み得る。そのような増加を、実験の節において記載するような、公知の生物学的試験を使用して評価または検証することができる。
【００３０】
また、本発明の関連内での特定の化合物の指摘は、具体的に指名された分子だけでなく、その任意の薬学的に許容され得る塩、水和物、エステル、エーテル、異性体、ラセミ体、複合物、またはプロドラッグも含むことが意味される。
【００３１】
用語「組み合わせ」は、少なくとも２つ以上の薬物が対象に共投与されて、生物学的効果を引き起こす処置を指す。本発明による併用療法において、少なくとも２つの薬物を、一緒にまたは別々に、同時にまたは逐次的に投与してもよい。また、少なくとも２つの薬物を、異なる経路およびプロトコルを通して投与してもよい。その結果、それらは一緒に処方されてもよいが、組み合わせの薬物は別々に処方されてもよい。
【００３２】
上記で考察するように、本発明は、血管新生を増加させる薬物または薬物の組み合わせを使用する、それを必要とする対象におけるアルツハイマー病または関連障害を処置するための組成物および方法に関する。
【００３３】
アルツハイマー病の様々な局面ならびに細胞シグナル伝達および機能的経路に存在する関連を描写する、細胞生物学研究、発現プロファイリング実験および遺伝子関連研究の結果をカバーする実験データの包括的統合により、本発明者らは、血管新生が、ＡＤを有する対象において変化した重要な機構を表すこと明らかにした。機能的ネットワーク中に位置し、そしてアルツハイマー病に関係付けられる遺伝子を以下の基準によって選択した：
（１）  −  アルツハイマー病の家族性症例を原因として担う遺伝子との直接的相互作用（ＡＰＰ、ＡｐｏＥ、プレセニリン、タウタンパク質）、
（２）  −  基準（１）によって選択される遺伝子の機能的パートナー；
（３）  −  基準（２）によって選択される遺伝子の最も近い機能的パートナー。
【００３４】
このプロセスを通して、本発明者らは、血管新生を担うネットワークがアルツハイマー病において冒されている主要な機能的ネットワークであることを確立することができた。
【００３５】
血管新生は、組織ホメオスタシスの保証ならびに低酸素または創傷治癒のような環境的および生理的チャレンジに対する適応応答における根本的な役割を果たしている；その機能障害は、心血管合併症から腫瘍の成長および転移に及ぶ多数のそして不均一な病理の病因に寄与する。
【００３６】
アルツハイマー病は、側副血管病理が付随する神経変性状態として古典的に考えられているが、本発明者らの分析は、血管調節解除の病原性の影響の再評価を可能にし、そしてこの疾患の病因学において、重要なそしておそらく原因となる役割を血管新生経路に起因させる。本発明者らは、血管新生を調節している遺伝子がアルツハイマー病に関係付けられるシグナル伝達ネットワークにおいて非常に富化されることを見出した。この結論は、アルツハイマー病の防止および治癒のための深い重大さを有し、そしてこの複雑な神経変性障害の組み合わせ治療のための新たなガイドラインを提供する。本発明者らはまた、このネットワークが、血管新生の調節に密接に関与する血管新生因子のファミリーおよび２つの経路（ＡＭＰＫ経路およびＬＰＡ代謝経路）からのタンパク質のファミリーに形式上細分され得ることを見出した。
【００３７】
アミロイドＡβタンパク質は、ニューロンの生物学に強く影響を及ぼすだけでなく、強い抗血管新生活性も有する（１７）。アルツハイマー病の家族性症例に原因として関連する別の遺伝子であるプレセニリンは、膜内タンパク質分解の調節により、その機能的基質であるＶＥＧＦＲ１、ＥｒｂＢ４、ノッチ、ＤＣＣ、ＣＤ４４、エフリン受容体およびカドヘリンによって媒介されるいくつかの独立したシグナル伝達経路を通して血管新生を調節することができる（１８〜２０）。
【００３８】
ＣＤ４４遺伝子は、その分解産物が血管新生を促進するヒアルロン酸（ＨＡ）の受容体をコードする（２１）。この受容体は、形成中のまたは新たに形成された血管の内皮の組織化および／または安定化に関係付けられた（２２）。それはまた、新たな血管の形成が付随する細胞外マトリックスダイナミクスに関係付けられるオステオポンチン、コラーゲン、およびマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）のようなタンパク質に結合しそしてその活性を調節することができる（２３）。
【００３９】
本発明者らのデータマイニングによって同定された他の膜受容体としては、ＩＬ２０Ｒα、ＬＥＰＴＲ、ＮＲＰ１およびＮＲＰ２、ならびにエンドセリンＥＤＮＲＡ受容体が挙げられる。ＩＬ２０Ｒα遺伝子は、血管形成に関与する多面性サイトカインであるＩＬ２０の受容体をコードする（２４）。内分泌ホルモンおよびＬＥＰＴＲのリガンドであるレプチンは、２つの最も強力なそして偏在性に発現される血管新生因子である線維芽細胞増殖因子ＦＧＦ−２および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）と相乗的に血管新生を刺激する。同様に、それは血管透過性の増加に関与する（２５）。ＮＲＰ１およびＮＲＰ２は、発生血管新生を保証する、ＶＥＧＦＲ−２シグナル伝達活性化を調節する膜貫通共受容体である（２６）。
【００４０】
最後に、本発明者らはまた、細胞外マトリックスの組織化およびリモデリング（ＴＨＢＳ２、ＬＡＭＡ１、ＣＯＬ４Ａ２、ＡＤＡＭＴＳ１２およびＡＤＡＭ１０）、またはプロラクチン、成長ホルモン、および胎盤性ラクトゲンのような周知の血管新生モジュレーターの機能的プロセシング（ＴＬＬ２）に関与する一群の遺伝子を選択した（２７）。
【００４１】
ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）ファミリーは、ＡＭＰ：ＡＴＰ比の細胞内センサーとして認識されており、そして、グルコースまたは脂肪酸代謝のような代謝プロセスを調節することによってエネルギーホメオスタシスの維持における主要な役割を果たしている。このファミリーのセリン／スレオニンキナーゼは、ＡＴＰ産生を阻害するかまたはＡＴＰ消費を刺激する代謝ストレスによって活性化される（２８）。
【００４２】
細胞エネルギーバランスの制御におけるその十分に確立された役割に加えて、ＡＭＰＫシグナル伝達はまた、低酸素の条件下での内皮細胞の移動および分化のために必要とされる血管新生のレギュレーターである（２９）。このキナーゼは、ＶＥＧＦ（３０）、アディポネクチン（３１）、ＩＧＦ−１および、おそらく、ＰＰＡＲγ受容体の血管新生促進効果を担う下流エフェクターの１つである。ＡＭＰＫは、アルツハイマー病のインビボモデルである二重トランスジェニックＡＰＰ／ＰＳ２マウスにおいて異常に活性化されることが見出されている（３２）。
【００４３】
本発明者らは、アルツハイマー病に関連し、そしてＡＭＰ活性化キナーゼの上流モジュレーターおよび下流エフェクターの両方を表すいくつかの遺伝子を同定した。ＡＭＰＫタンパク質の上流モジュレーターの中で、レプチンおよびＣＮＴＦ受容体、アディポネクチンＡｃｒｐ３０の推定の共受容体であるＣＤＨ１３（３３）、およびトロンビンシグナル伝達経路、ならびに、ＬＫＢ１キナーゼと一緒に、ＡＭＰＫ活性の主な直接的モジュレーターとして認識されているＣＡＭＫＫ２βキナーゼに言及し得る（２８）。
【００４４】
ＡＭＰＫの下流エフェクターに関して、脂肪酸およびコレステロール代謝に関与する遺伝子は特定の関心を表す。特に、ＡＭＰＫシグナル伝達の十分に確立された標的であるＡＣＣ２遺伝子は、アセチルＣｏＡのマロニルＣｏＡへのＡＴＰ依存性カルボキシル化を触媒し、従って脂肪酸合成における律速段階を制御するアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）をコードする。活性化されたＡＭＰＫは、ＡＣＣ２タンパク質をリン酸化し、その酵素活性を減少させ、それゆえ、脂肪酸酸化を増強する。脂肪酸代謝に関与するいくつかの他の、主にミトコンドリアの、遺伝子、例えば、ＥＦＴＡ、ＡＵＨ、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＰＣ、ＭＥ１およびＥＨＨＡＤＨも、アルツハイマー病の関連で細胞エネルギーバランスのＡＭＰＫ媒介制御に関与し得る。それらの中で、ＰＣ遺伝子は、ピルビン酸カルボキシラーゼをコードし、そして糖新生、脂肪生成および神経伝達物質であるグルタミン酸の合成のような複数の代謝経路に関与する。ＰＣ活性における機能障害が脳機能不全に関連し得ることが示されている（３４〜３５）。興味深いことに、ＧＡＢＡ（Ｂ）受容体も、ＡＭＰ活性化キナーゼのための機能的標的として同定された。最近の研究により、ＡＭＰＫ活性化が、ＧＡＢＡ（Ｂ）受容体のリン酸化を介して、神経保護的であり得（３６）、従って、ＧＡＢＡ作動性終末を標的化するアミロイド病理の進行に関与し得ることが実証された（１１）。
【００４５】
さらに、ＡＭＰＫシグナル伝達経路は、コレステロール代謝に影響を及ぼすことによってアルツハイマー病関連病変の発展を改変し得る。ＡＭＰＫは、ＳＲＥＢＰ転写因子の活性を低下させることによってコレステロール代謝に影響を及ぼし得る（３７）。ＳＲＥＢＰタンパク質は、細胞内コレステロールレベルの主なセンサーおよびレギュレーターであり；コレステロールレベルが低下するとタンパク質分解切断によって活性化され、ＳＲＥＢＰは、コレステロール生合成に関与する酵素をコードする遺伝子のプロモーター領域中の特異的ステロール調節エレメント（ＳＲＥ）に結合し、そしてその転写を増強する。
【００４６】
コレステロールは、神経保護ステロイドの生合成のための前駆体として作用するだけでなく、膜流動性の重要なレギュレーターとしても認識されており、そして脂質ラフトのダイナミクスにおける中心的な役割を果たしており、膜ソーティング、輸送およびシグナル伝達に関与する種々の分子のために構築基板を濃縮する。ファルネシルＰＰおよびゲラニルゲラニルＰＰシンターゼによって生成されるコレステロール生合成における中間産物は、血管新生および軸索成長の主要なレギュレーターであるＲｈｏＡおよびＲａｃを含む低分子ＧＴＰａｓｅの活性の調節における中心的な役割を果たしている。
【００４７】
コレステロールの代謝および輸送に関係付けられるいくつかの他の遺伝子も、アルツハイマー病の発達に影響を及ぼし得る。ＤＨＣＲ７、ＳＲＤ５Ａ１およびＣＹＰ７Ｂ１タンパク質は、アルツハイマー病に関連する有毒な発作に対してニューロン細胞を保護し得るステロイドの産生に関与する（３８）。ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターファミリーのメンバーをコードするＡＢＣＡ１遺伝子も、それがアルツハイマー病の発達のための主な素因危険因子であるＡｐｏＥリポタンパク質の分泌を制御するので、特定の関心を表す（３９）。
【００４８】
ホスファチジン酸（ＰＡ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、およびスフィンゴシン１−リン酸（Ｓ１Ｐ）は、強力なシグナル伝達特性を有する天然のリン脂質である。特に、これらのリン脂質増殖因子は、内皮細胞の血管新生能に対する多岐にわたる効果を示し、そして、相補的な組み合わせの様式で、新血管新生を有効に誘導し得る。Ｓ１Ｐは、内皮細胞の走化性移動の促進に主に関与し、ＬＰＡは、血管新生の後期における内皮単層バリアー機能の安定化により多く関係付けられる（４０）。
【００４９】
ＬＰＡは、ＲｈｏＡ  ＧＴＰａｓｅの活性を調節することによってか、またはいくつかの血管新生因子（ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦＢおよびＩＬ−８）の発現を増強することによってかのいずれかで血管新生に影響を及ぼす（４１〜４５）。血管新生へのその密接な関与のほかに、ＬＰＡはまた、神経突起成長円錐崩壊を誘発し、そして発生の間に初期有糸分裂後ニューロンの移動に影響を及ぼす、細胞外脂質シグナル伝達として認識されている（４６）。
【００５０】
ＬＰＡは、分泌されたリゾホスホリパーゼＤ（オートタキシン）によって合成され得、そして特異的Ｇタンパク質共役型ＥＤＧ２、ＥＤＧ４およびＥＤＧ７受容体を介して作用し、細胞の増殖、生存および運動に影響を及ぼす（４７）。おそらく、細胞の形態および運動を制御するＬＰＡの能力は、Ｇ１２／１３タンパク質を通したＲｈｏＡ−ＲＯＣＫシグナル伝達モジュールの活性化によって媒介されている（４８）。
【００５１】
いくつかの実験データは、アルツハイマー病の病因におけるＬＰＡ媒介シグナル伝達のための重要な役割を示す。オートタキシン発現がアルツハイマー型認知症患者の前頭皮質において増強され（４９）、そして分化したヒト神経芽細胞腫細胞におけるタウタンパク質のアルツハイマー病様リン酸化パターンの増加が、インビトロでＬＰＡによって誘導される神経突起退縮に付随することが実証されている（５０）。さらに、ＡＰＰまたはプレセニリンタンパク質での遺伝子操作は、トランスジェニックマウスの脳におけるオートタキシン酵素の発現に影響を及ぼす（５１〜５２）。
【００５２】
本発明者らのデータマイニングアプローチを使用して、本発明者らは、ＬＰＡ代謝に関与するかまたはＬＰＡシグナル伝達によって調節され、そしてアルツハイマー病の進行に潜在的に関連付けられる多数の遺伝子を同定した（ＭＴＲ、ＭＡＴ２Ｂ、ＣＵＢＮ、ＡＴＰ１０Ａ、ＴＨＥＭ２、ＰＩＴＰＮＣ１、ＥＮＰＰＧ、ＳＧＰＰ２、ＡＧＰＡＴ、ＤＧＫＨ、ＤＧＫＢ、ＭＧＳＴ２、ＰＬＤ２、およびＤＲＤ２）。それらの中で、ＣＵＢＮ遺伝子は内因子ビタミンＢ１２の受容体をコードし、葉酸およびコバラミン（ビタミンＢ９およびＢ１２）生物学的利用能の欠損は以前にアルツハイマー病の病因に関連付けられた（５３）。
【００５３】
本発明において、本発明者らは、アルツハイマー病および他の神経変性障害において変化した血管新生を増加させるために使用することができる新規の組成物を提唱する。
【００５４】
特定の実施態様において、本発明によるＡＤを処置する組成物および方法は、上記で列挙するような１つの遺伝子またはタンパク質とのその相互作用またはその調節を通して血管新生を増加させる薬物を使用する。
【００５５】
より具体的には、本発明の組成物は、ＡＢＣＡ１、ＡＣＡＴ、ＡＣＣ２、ＡＤＡＭＴＳ１２、ＡＤＣＹ２、ＡＤＩＰＯＱ、ＡＤＩＰＯＲ１、ＡＤＩＰＯＲ２、ＡＤＲＢ２、ＡＧＰＡＴ５、ＡＩＰ４、ＡＫＡＰ２、ＡＫＲ１Ｃ２、ＡＭＰＫ、ＡＮＧ２、ＡＮＫ１、ＡＮＸＡ１、ＡＰＯＡ１、ＡＲＨＧＡＰ１７、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＵＨ、ＡＵＴＯＴＡＸＩＮ、ＢＡＩ３、ＢＣＡＲ１、ＢＩＮ１、ＢＭＰ３Ａ、ＣＡ１０、ＣＡＭＫ１Ｄ、ＣＡＭＫＫ２、ＣＤ３６、ＣＤ４４、ＣＤＣ４２、ＣＤＨ１３、ＣＨＡＴ、ＣＮＴＦＲ、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＰＴ、ＣＳＨ１、ＣＴＮＮ、ＣＵＢＮ、ＣＹＰ７Ｂ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＧＫＢ、ＤＧＫＨ、ＤＧＫＺ、ＤＨＣＲ７、ＤＨＦＲ、ＤＲＤ２、ＤＲＤ５、ＥＤＧ１、ＥＤＧ２、ＥＤＧ３、ＥＤＧ４、ＥＤＧ５、ＥＤＧ６、ＥＤＧ７、ＥＤＧ８、ＥＤＮＲＡ、ＥＨＨＡＤＨ、ＥＮＰＰ６、ＥＲＢＢ４、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＥＳＲＲＧ、ＥＴＦＡ、Ｆ２、ＦＤＰＳ、ＦＧＦ２、ＦＬＮＡ、ＦＬＴ４、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＯ３Ａ、ＦＴＯ、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＴＡ３、ＧＨ１、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＲＫ２、ＧＲＫ５、ＧＲＭ５、ＨＡＰＬＮ１、ＨＡＳ１、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＨＣＲＴＲ２、ＨＩＦ１Ａ、ＨＳＤ１１Ｂ１、ＨＹＡＬ１、ＨＹＡＬ２、ＨＹＡＬ３、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ８、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＢ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ１、ＬＤＬＲ、ＬＥＰＲ、ＬＥＰＴＩＮ、ＬＩＦＲ、ＬＩＰＬ２、ＬＫＢ１、ＬＲＰ、ＬＴＢＰ２、ＭＡＴ２Ｂ、ＭＥ１、ＭＥＧＡＬＩＮ、ＭＥＲＬＩＮ、ＭＥＴ、ＭＧＳＴ２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＴＯＲ、ＭＴＲ、ＮＣＫ２、ＮＥＤＤ９、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢＩＢ、ＮＯＳ２Ａ、ＮＯＳ３、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲＧ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＯＰＲＳ１、ＯＳＢＰＬ１０、ＯＳＢＰＬ３、ＯＳＴＥＯＰＯＮＴＩＮ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１２、ＰＡＩ１、ＰＡＩ２、ＰＡＫ１、ＰＡＫ６、ＰＡＬＬＤ、ＰＡＰ１、ＰＡＲ１、ＰＡＸＩＬＬＩＮ、ＰＣ、ＰＣＴＰ、ＰＤＥ１１Ａ、ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ｄ、ＰＤＥ５、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＩ３Ｋ、ＰＩＴＰＮＣ１、ＰＫＡ、ＰＫＣＤ、ＰＬＡ１Ａ、ＰＬＡ２、ＰＬＡＴ、ＰＬＡＵ、ＰＬＣＢ１、ＰＬＤ１、ＰＬＤ２、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣ２、ＰＰＡＲＡ、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＡＲＧＣ１Ｂ、ＰＲＫＧ１、ＰＲＬ、ＰＴＧＳ２、ＰＴＮ、ＰＴＰＮ１１、ＰＹＫ２、ＲＡＣ１、ＲＡＳ、ＲＨＥＢ、ＲＨＯＡ、ＲＯＣＫ１、ＲＯＣＫ２、ＲＰＳ６ＫＡ１、ＲＰＳ６ＫＢ２、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＨＩＰ１、ＳＧＰＰ２、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＢＳ２、ＳＰＬＡ２、ＳＰＯＣＫ１、ＳＲＤ５Ａ１、ＳＲＥＢＦ１、ＳＲＥＢＦ２、ＳＴＡＴ３、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＥＭ２、ＴＨＲＢ、ＴＩＡＭ１、ＴＩＭＰ２、ＴＬＬ２、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＴＳＰＯ、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ１、およびＹＥＳ１から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質への結合またはその活性の調節を通して血管新生を増加させる薬物（単数または複数）を含む。
【００５６】
上記に列挙する遺伝子およびタンパク質の全ての配列は、遺伝子ライブラリーから入手可能であり、そして当技術分野において公知の技術によって単離され得る。さらに、これらの遺伝子およびタンパク質の活性を、実験の節において考察するような当技術分野において自体公知の技術によって評価することができる。
【００５７】
本発明はさらに、これらの標的遺伝子およびタンパク質を調節するために使用することができる薬物を記載する。本発明は、単独で、しかし好ましくは組合せで、上記の経路を調節し、そして前記疾患を処置するために使用され得る特定の薬物の同定および活性を開示する。特に、本発明者らは、文献中に既に存在するが、ヒト対象における異なる疾患を処置するために使用されている低分子を同定した。
【００５８】
この点で、最も好ましい実施態様において、本発明の組成物は、少なくともＡＣＡＴのインヒビター（好ましくは、ヘスペレチン）、ＡＤＣＹ２のモジュレーター（好ましくは、ビダラビン）、ＡＭＰＫのモジュレーター（好ましくはフェンホルミンおよびビダラビンから選択される）、ＡＵＴＯＴＡＸＩＮのモジュレーター（好ましくは、Ｌ−ヒスチジン）、ＣＡ１０のインヒビター（好ましくは、メタゾラミド）、ＣＹＳＬＴＲ１およびＣＹＳＬＴＲ２のアンタゴニスト（好ましくは、モンテルカスト）、ＤＨＦＲのインヒビター（好ましくは、ピリメタミン）、ＤＲＤ２のモジュレーター（好ましくはジヒドロエルゴタミンおよびカベルゴリンから選択される）、ドーパミン受容体ＤＲＤ５のアゴニスト（好ましくは、フェノルドパム）、ＥＤＮＲＡのアンタゴニスト（好ましくは、スルフィソキサゾール）、Ｆ２のモジュレーター（好ましくは、ワルファリン）、ＦＤＰＳのインヒビター（好ましくは、アレンドロネート）、ＧＡＢＢＲ２のモジュレーター（好ましくはバクロフェンおよびアカンプロセートから選択される）、ＨＡＳ１−３ヒアルロナンシンターゼのモジュレーター（好ましくは、レフルノミド）、ＨＩＦ１Ａのモジュレーター（好ましくはトポテカンおよびメロキシカムから選択される）、ＭＧＳＴ２のモジュレーター（好ましくは、バルサラジド）、ＭＭＰ２およびＭＭＰ９のモジュレーター（好ましくは、マリマスタット）、ＮＯＳ２Ａのモジュレーター（好ましくはゲムフィブロジル、アルブテロールおよびチエチルペラジンから選択される）、ＮＯＳ３のモジュレーター（好ましくは、ケトチフェン）、ＮＲ１Ｉ２のアゴニスト（好ましくは、トピラメート）、ＮＲ３Ｃ２のモジュレーター（好ましくはエプレレノンおよびフルドロコルチゾンから選択される）、ＯＰＲＳ１のアゴニスト（好ましくは、ペンタゾシン）、Ｐ２ＲＹ１およびＰ２ＲＹ１２のモジュレーター（好ましくはクロピドグレルおよびチロフィバンから選択される）、トロンビン受容体ＰＡＲ１のインヒビター（好ましくは、アルガトロバン）、ＰＤＥ１１Ａのインヒビター（好ましくは、タダラフィル）、ＰＤＥ３Ａのインヒビター（好ましくは、シロスタゾール）、ＰＤＥ４Ｄのインヒビター（好ましくは、ミルリノン）、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢのモジュレーター（好ましくはベカプレルミンおよびイマチニブから選択される）、ホスホリパーゼＰＬＡ１ＡおよびＰＬＡ２のインヒビター（好ましくはネチルマイシンおよびメパクリンから選択される）、ＰＬＡＴのモジュレーター（好ましくは、フェニルブチレート）、ＰＬＤ２のモジュレーター（好ましくはアンブリセンタンおよびフェノルドパムから選択される）、ＰＬＧのモジュレーター（好ましくは、アミノカプロン酸）、ＰＰＡＲＡのアゴニスト（好ましくは、ゲムフィブロジル）、ＰＰＡＲＧのアゴニスト（好ましくは、フェニル酪酸ナトリウム）、ＰＲＫＧ１のアクチベーター（好ましくはニトロプルシド、ニトログリセリン、タダラフィルおよびシロスタゾールから選択される）、ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくはアレンドロネートおよびテルビナフィンから選択される）、ＴＨＲＢのモジュレーター（好ましくはリオチロニンおよびメチマゾールから選択される）、トロンビンのインヒビター（好ましくは、デシルジン）、ＴＳＰＯのモジュレーター（好ましくはフルニトラゼパムおよびテマゼパムから選択される）、および／またはＶＥＧＦＲ１のアンタゴニスト（好ましくはスニチニブおよびペガプタニブから選択される）を含む。
【００５９】
上記で考察するように、本発明は、特に、ＡＤおよび関連障害の機構に取り組むための併用療法をデザインすることを提唱する。この点で、最も好ましい標的および薬物の組み合わせの例を以下に開示する。
【００６０】
より好ましくは、本発明の組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な投与のための、以下の薬物の組み合わせの少なくとも１つを含む：
−  ＧＡＢＢＲ２受容体のモジュレーター（好ましくは、バクロフェン）およびＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、テルビナフィン）、
−  ＧＡＢＢＲ２受容体のモジュレーター（好ましくは、バクロフェン）およびＥＤＮＲＡエンドセリン受容体のアンタゴニスト（好ましくは、スルフィソキサゾール）、
−  ＧＡＢＢＲ２受容体のモジュレーター（好ましくは、バクロフェン）およびＨＡＳ１−３ヒアルロナンシンターゼのモジュレーター（好ましくは、レフルノミド）、
−  ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、テルビナフィン）およびＥＤＮＲＡエンドセリン受容体のアンタゴニスト（好ましくは、スルフィソキサゾール）、
−  ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、テルビナフィン）およびＨＡＳ１−３ヒアルロナンシンターゼのモジュレーター（好ましくは、レフルノミド）、
−  ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、テルビナフィン）およびドーパミン受容体ＤＲＤ５のアゴニスト（好ましくは、フェノルドパム）、
−  ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、テルビナフィン）およびホスホリパーゼＰＬＡ１ＡおよびＰＬＡ２のインヒビター（好ましくは、メパクリン）、
−  ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、テルビナフィン）およびＡＭＰＫのモジュレーター（好ましくは、フェンホルミン）、
−  ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、テルビナフィン）およびプリン作動性受容体Ｐ２ＲＹ１およびＰ２ＲＹ１２のモジュレーター（好ましくは、クロピドグレル）、
−  ＧＡＢＢＲ２受容体のモジュレーター（好ましくは、バクロフェン）およびＡＭＰＫのモジュレーター（好ましくは、フェンホルミン）、
−  ＧＡＢＢＲ２受容体のモジュレーター（好ましくは、バクロフェン）およびプリン作動性受容体Ｐ２ＲＹ１およびＰ２ＲＹ１２のモジュレーター（好ましくは、クロピドグレル）、
−  ＥＤＮＲＡエンドセリン受容体のアンタゴニスト（好ましくは、スルフィソキサゾール）およびＡＭＰＫのモジュレーター（好ましくは、フェンホルミン）、
−  ＨＡＳ１−３ヒアルロナンシンターゼのモジュレーター（好ましくは、レフルノミド）およびドーパミン受容体ＤＲＤ５のアゴニスト（好ましくは、フェノルドパム）、または
−  ＨＡＳ１−３ヒアルロナンシンターゼのモジュレーター（好ましくは、レフルノミド）およびホスホリパーゼＰＬＡ１ＡおよびＰＬＡ２のインヒビター（好ましくは、メパクリン）。
【００６１】
本発明の組成物の最も好ましい例は、アカンプロセート、アルブテロール、アレンドロネート、アンブリセンタン、アミノカプロン酸、アルガトロバン、バクロフェン、バルサラジド、ベカプレルミン、カベルゴリン、シロスタゾール、クロピドグレル、デシルジン、ジヒドロエルゴタミン、エプレレノン、フェノルドパム、フルドロコルチゾン、フルニトラゼパム、ゲムフィブロジル、ヘスペレチン、イマチニブ、ケトチフェン、レフルノミド、Ｌ−ヒスチジン、リオチロニン、マリマスタット、メロキシカム、メパクリン、メタゾラミド、メチマゾール、ミルリノン、モンテルカスト、ネチルマイシン、ニトログリセリン、ニトロプルシド、ペガプタニブ、ペンタゾシン、フェンホルミン、フェニル酪酸ナトリウム、ピリメタミン、スルフィソキサゾール、スニチニブ、タダラフィル、テマゼパム、テルビナフィン、チエチルペラジン、チロフィバン、トピラメート、トポテカン、ビダラビンおよびワルファリン、またはその組み合わせから選択される化合物を含む。
【００６２】
別の好ましい実施態様において、本発明による組成物は、同時の、別々のまたは逐次的な投与のための、レフルノミド、スルフィソキサゾール、テルビナフィン、バクロフェン、クロピドグレル、フェノルドパム、メパクリンおよびフェンホルミン、またはその塩もしくはプロドラッグもしくは誘導体もしくは徐放性処方物からなる群より選択される少なくとも１つの化合物を含む。
【００６３】
別の好ましい実施態様において、本発明による組成物は、同時の、別々のまたは逐次的な投与のための、レフルノミド、スルフィソキサゾール、テルビナフィン、バクロフェン、クロピドグレル、フェノルドパム、メパクリンおよびフェンホルミン、またはその塩もしくはプロドラッグもしくは誘導体もしくは徐放性処方物からなる群より選択される少なくとも２つの化合物の組み合わせを含む。
【００６４】
別の実施態様において、本発明の組成物は、レフルノミド、スルフィソキサゾール、テルビナフィン、バクロフェン、クロピドグレル、フェノルドパム、メパクリンおよびフェンホルミン、またはその塩もしくはプロドラッグもしくは誘導体もしくは徐放性処方物からなる群より選択される少なくとも２つの化合物の組み合わせを含み、ここで、組成物は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および多発性硬化症（ＭＳ）からなる群より選択される神経変性障害において変化した血管新生を増加させる。
【００６５】
別の好ましい実施態様において、本発明の組成物は、アルツハイマー病（ＡＤ）を処置するための、レフルノミド、スルフィソキサゾール、テルビナフィン、バクロフェン、クロピドグレル、フェノルドパム、メパクリンおよびフェンホルミン、またはその塩もしくはプロドラッグもしくは誘導体もしくは徐放性処方物からなる群より選択される少なくとも２つの化合物の組み合わせを含む。
【００６６】
好ましくは、それを必要とする対象におけるアルツハイマー病または関連障害を処置する組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な投与のための、以下の薬物の組み合わせの少なくとも１つを含む：
−  バクロフェンおよびテルビナフィン、
−  バクロフェンおよびスルフィソキサゾール、
−  バクロフェンおよびレフルノミド、
−  テルビナフィンおよびスルフィソキサゾール、
−  テルビナフィンおよびレフルノミド、
−  テルビナフィンおよびフェノルドパム、
−  テルビナフィンおよびメパクリン、
−  テルビナフィンおよびフェンホルミン、
−  テルビナフィンおよびクロピドグレル、
−  バクロフェンおよびフェンホルミン、
−  バクロフェンおよびクロピドグレル、
−  スルフィソキサゾールおよびフェンホルミン、
−  レフルノミドおよびフェノルドパム、または
−  レフルノミドおよびメパクリン。
【００６７】
最も好ましい実施態様において、本発明の組成物は、同時の、別々のまたは逐次的な投与のための、レフルノミド、テルビナフィン、スルフィソキサゾールおよびバクロフェン、またはその塩もしくはプロドラッグもしくは誘導体もしくは徐放性処方物から選択される少なくとも２つの化合物の組み合わせを含む。
【００６８】
別の好ましい実施態様において、本発明による組成物は、アルツハイマー病または関連障害を処置するための、レフルノミド、テルビナフィン、スルフィソキサゾールおよびバクロフェン、またはその塩もしくはプロドラッグもしくは誘導体もしくは徐放性処方物から選択される１つ以上の化合物を含む。
【００６９】
別の実施態様において、本発明の組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な使用のための、少なくとも１つの、血管新生を増加させる薬物をさらに含む。
【００７０】
好ましくは、血管新生を増加させるさらなる薬物は、ＡＣＡＴのインヒビター（好ましくは、ヘスペレチン）、ＡＤＣＹ２のモジュレーター（好ましくは、ビダラビン）、ＡＭＰＫのモジュレーター（好ましくは、ビダラビン）、ＡＵＴＯＴＡＸＩＮのモジュレーター（好ましくは、Ｌ−ヒスチジン）、ＣＡ１０のインヒビター（好ましくは、メタゾラミド）、ＣＹＳＬＴＲ１およびＣＹＳＬＴＲ２のアンタゴニスト（好ましくは、モンテルカスト）、ＤＨＦＲのインヒビター（好ましくは、ピリメタミン）、ＤＲＤ２のモジュレーター（好ましくはジヒドロエルゴタミンおよびカベルゴリンから選択される）、Ｆ２のモジュレーター（好ましくは、ワルファリン）、ＦＤＰＳのインヒビター（好ましくは、アレンドロネート）、ＧＡＢＢＲ２のモジュレーター（好ましくは、アカンプロセート）、ＨＩＦ１Ａのモジュレーター（好ましくはトポテカンおよびメロキシカムから選択される）、ＭＧＳＴ２のモジュレーター（好ましくは、バルサラジド）、ＭＭＰ２およびＭＭＰ９のモジュレーター（好ましくは、マリマスタット）、ＮＯＳ２Ａのモジュレーター（好ましくはゲムフィブロジル、アルブテロールおよびチエチルペラジンから選択される）、ＮＯＳ３のモジュレーター（好ましくは、ケトチフェン）、ＮＲ１Ｉ２のアゴニスト（好ましくは、トピラメート）、ＮＲ３Ｃ２のモジュレーター（好ましくはエプレレノンおよびフルドロコルチゾンから選択される）、ＯＰＲＳ１のアゴニスト（好ましくは、ペンタゾシン）、Ｐ２ＲＹ１およびＰ２ＲＹ１２のモジュレーター（好ましくは、チロフィバン）、トロンビン受容体ＰＡＲ１のインヒビター（好ましくは、アルガトロバン）、ＰＤＥ１１Ａのインヒビター（好ましくは、タダラフィル）、ＰＤＥ３Ａのインヒビター（好ましくは、シロスタゾール）、ＰＤＥ４Ｄのインヒビター（好ましくは、ミルリノン）、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢのモジュレーター（好ましくはベカプレルミンおよびイマチニブから選択される）、ＰＬＡ１ＡおよびＰＬＡ２のインヒビター（好ましくは、ネチルマイシン）、ＰＬＡＴのモジュレーター（好ましくは、フェニル酪酸ナトリウム）、ＰＬＤ２のモジュレーター（好ましくは、アンブリセンタン）、ＰＬＧのモジュレーター（好ましくは、アミノカプロン酸）、ＰＰＡＲＡのアゴニスト（好ましくは、ゲムフィブロジル）、ＰＰＡＲＧのアゴニスト（好ましくは、フェニルブチレート）、ＰＲＫＧ１のアクチベーター（好ましくはニトロプルシド、ニトログリセリン、タダラフィルおよびシロスタゾールから選択される）、ＲＨＯＡのモジュレーター（好ましくは、アレンドロネート）、ＴＨＲＢのモジュレーター（好ましくはリオチロニンおよびメチマゾールから選択される）、トロンビンのインヒビター（好ましくは、デシルジン）、ＴＳＰＯのモジュレーター（好ましくはフルニトラゼパムおよびテマゼパムから選択される）、および／またはＶＥＧＦＲ１のアンタゴニスト（好ましくはスニチニブおよびペガプタニブから選択される）から選択される。
【００７１】
他の実施態様において、血管新生を増加させるさらなる薬物は、ＡＢＣＡ１、ＡＣＡＴ、ＡＣＣ２、ＡＤＡＭＴＳ１２、ＡＤＣＹ２、ＡＤＩＰＯＱ、ＡＤＩＰＯＲ１、ＡＤＩＰＯＲ２、ＡＤＲＢ２、ＡＧＰＡＴ５、ＡＩＰ４、ＡＫＡＰ２、ＡＫＲ１Ｃ２、ＡＭＰＫ、ＡＮＧ２、ＡＮＫ１、ＡＮＸＡ１、ＡＰＯＡ１、ＡＲＨＧＡＰ１７、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＵＨ、ＡＵＴＯＴＡＸＩＮ、ＢＡＩ３、ＢＣＡＲ１、ＢＩＮ１、ＢＭＰ３Ａ、ＣＡ１０、ＣＡＭＫ１Ｄ、ＣＡＭＫＫ２、ＣＤ３６、ＣＤ４４、ＣＤＣ４２、ＣＤＨ１３、ＣＨＡＴ、ＣＮＴＦＲ、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＰＴ、ＣＳＨ１、ＣＴＮＮ、ＣＵＢＮ、ＣＹＰ７Ｂ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＧＫＢ、ＤＧＫＨ、ＤＧＫＺ、ＤＨＣＲ７、ＤＨＦＲ、ＤＲＤ２、ＤＲＤ５、ＥＤＧ１、ＥＤＧ２、ＥＤＧ３、ＥＤＧ４、ＥＤＧ５、ＥＤＧ６、ＥＤＧ７、ＥＤＧ８、ＥＤＮＲＡ、ＥＨＨＡＤＨ、ＥＮＰＰ６、ＥＲＢＢ４、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＥＳＲＲＧ、ＥＴＦＡ、Ｆ２、ＦＤＰＳ、ＦＧＦ２、ＦＬＮＡ、ＦＬＴ４、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＯ３Ａ、ＦＴＯ、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＴＡ３、ＧＨ１、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＲＫ２、ＧＲＫ５、ＧＲＭ５、ＨＡＰＬＮ１、ＨＡＳ１、ＨＡＳ２、ＨＡＳ３、ＨＣＲＴＲ２、ＨＩＦ１Ａ、ＨＳＤ１１Ｂ１、ＨＹＡＬ１、ＨＹＡＬ２、ＨＹＡＬ３、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ８、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＢ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ１、ＬＤＬＲ、ＬＥＰＲ、ＬＥＰＴＩＮ、ＬＩＦＲ、ＬＩＰＬ２、ＬＫＢ１、ＬＲＰ、ＬＴＢＰ２、ＭＡＴ２Ｂ、ＭＥ１、ＭＥＧＡＬＩＮ、ＭＥＲＬＩＮ、ＭＥＴ、ＭＧＳＴ２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＴＯＲ、ＭＴＲ、ＮＣＫ２、ＮＥＤＤ９、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢＩＢ、ＮＯＳ２Ａ、ＮＯＳ３、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲＧ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＯＰＲＳ１、ＯＳＢＰＬ１０、ＯＳＢＰＬ３、ＯＳＴＥＯＰＯＮＴＩＮ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１２、ＰＡＩ１、ＰＡＩ２、ＰＡＫ１、ＰＡＫ６、ＰＡＬＬＤ、ＰＡＰ１、ＰＡＲ１、ＰＡＸＩＬＬＩＮ、ＰＣ、ＰＣＴＰ、ＰＤＥ１１Ａ、ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ｄ、ＰＤＥ５、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＩ３Ｋ、ＰＩＴＰＮＣ１、ＰＫＡ、ＰＫＣＤ、ＰＬＡ１Ａ、ＰＬＡ２、ＰＬＡＴ、ＰＬＡＵ、ＰＬＣＢ１、ＰＬＤ１、ＰＬＤ２、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣ２、ＰＰＡＲＡ、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＡＲＧＣ１Ｂ、ＰＲＫＧ１、ＰＲＬ、ＰＴＧＳ２、ＰＴＮ、ＰＴＰＮ１１、ＰＹＫ２、ＲＡＣ１、ＲＡＳ、ＲＨＥＢ、ＲＨＯＡ、ＲＯＣＫ１、ＲＯＣＫ２、ＲＰＳ６ＫＡ１、ＲＰＳ６ＫＢ２、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＨＩＰ１、ＳＧＰＰ２、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＲＢＳ２、ＳＰＬＡ２、ＳＰＯＣＫ１、ＳＲＤ５Ａ１、ＳＲＥＢＦ１、ＳＲＥＢＦ２、ＳＴＡＴ３、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＥＭ２、ＴＨＲＢ、ＴＩＡＭ１、ＴＩＭＰ２、ＴＬＬ２、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＴＳＰＯ、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ１、およびＹＥＳ１から選択される遺伝子によってコードされるタンパク質に結合するかまたはその活性を調節する薬物（単数または複数）から選択される。
【００７２】
本発明者らは、上記の薬物および薬物の組み合わせが有効な矯正を導く改善されそして相乗的な生物学的効果またはＡＤおよび関連障害に導く機能的調節不全の正常化を提供することを確立した。
【００７３】
上記の指名した化合物を以下の表１に、そのＣＡＳ番号と一緒に列挙する。上記で考察したように、本発明が上記の化合物ならびにその任意の薬学的に許容され得る塩、水和物、エステル、エーテル、異性体、ラセミ体、複合物、またはプロドラッグの使用を包含することを理解すべきである。プロドラッグは、処置の薬物動態パラメーターに対するより良好な制御を与えるように（例えば、薬物を適切な担体に結合することによって）調製され得る。
【００７４】
【表１】
0005721230.tif 000002
0005721230.tif 000003
【００７５】
薬学的に許容され得る塩の例としては、薬学的に許容され得る酸付加塩、薬学的に許容され得る塩基付加塩、薬学的に許容され得る金属塩、アンモニウムおよびアルキル化アンモニウム塩が挙げられる。酸付加塩としては、無機酸および有機酸の塩が挙げられる。適切な無機酸の代表的な例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸などが挙げられる。適切な有機酸の代表的な例としては、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ケイ皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモ酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ＥＤＴＡ、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩、ホウ酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、グリセロリン酸塩、ケトグルタル酸塩などが挙げられる。薬学的に許容され得る無機または有機酸付加塩のさらなる例は、例えば、J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2（本明細書に参照により組み入れる）に列挙されている。金属塩の例としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム塩などが挙げられる。アンモニウムおよびアルキル化アンモニウム塩の例としては、アンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、エチルアンモニウム、ヒドロキシエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、ブチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基の例としては、リジン、アルギニン、グアニジン、ジエタノールアミン、コリンなどが挙げられる。
【００７６】
本発明による治療を、単独で、または薬物の組み合わせとして、そして／または、同じ経路を標的化するかまたは異なる作用様式を有する、任意の他の治療と共同で行ってもよい。それは、家、医師のオフィス、クリニック、病院の外来、または病院で、医師が治療の効果を綿密に観察でき、そして必要とされる任意の調整を行えるように、提供され得る。
【００７７】
特定の実施態様において、本発明の組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な使用のための、少なくとも１つの、シナプス機能を調節する、好ましくはシナプス機能を寛解させる薬物をさらに含む。より好ましくは、少なくとも１つの、シナプス機能を調節する薬物は、アルフェンタニル、アミロライド、アムロジピン、アズトレオナム、ブクリジン、ブメタニド、ブプレノルフィン、リドカイン、クロルゾキサゾン、シナカルセト、ダサチニブ、ジフィリン、エレトリプタン、エルゴタミン、ホスフェニトイン、フェノバルビタール、プレガバリン、プロピルチオウラシル、チアガビン、トリアムテレン、ビガバトリンおよびゾニサミドから選択される（以下の表２参照）。
【００７８】
【表２】
0005721230.tif 000004
【００７９】
あるいは、または先行する実施態様に加えて、本発明の組成物は、併用の、別々のまたは逐次的な使用のための、少なくとも１つの、細胞ストレス応答を調節する、好ましくは細胞ストレス応答を阻害する薬物をさらに含んでもよい。最も好ましい細胞ストレス応答を調節する薬物は、アラビトール、マンニトール、メタラミノール、オメプラゾール、プリロカイン、ラパマイシン、リファブチン、チオグアニン、トレハロースおよびビダラビンから選択される（以下の表３参照）。
【００８０】
【表３】
0005721230.tif 000005
【００８１】
特定の実施態様において、本発明は、同時の、別々のまたは逐次的な投与のための、血管新生を増加させる薬物、シナプス機能を寛解させる薬物、および細胞ストレス応答を阻害する薬物を含む組成物に関する。
【００８２】
本発明の組成物は、典型的には、１つまたはいくつかの薬学的に許容され得る担体または賦形剤を含む。治療の持続期間は、処置される疾患のステージ、使用される組み合わせ、患者の年齢および状態、ならびに患者が処置にどのように応答するかに依存する。
【００８３】
組み合わせの各成分の投与量、頻度および投与様式を独立して制御することができる。例えば、１つの薬物を経口投与し、第２の薬物を筋肉内投与してもよい。患者の身体が任意の不測の副作用から回復する機会を有するように、併用療法を、休息期間を含む断続（on-and-off）サイクルで与えてもよい。１つの投与が全ての薬物を送達するように、薬物を一緒に処方してもよい。
【００８４】
組み合わせの各々の薬物の投与は、他の成分と組み合わせて、ＡＤに関係付けられる経路の機能を矯正できる薬物の濃度を生じる任意の適切な手段により得る。
【００８５】
組み合わせの活性成分を純粋な化学薬品として投与することは可能であるが、それらを医薬組成物（この関連で医薬処方物ともいう）として提供することが好ましい。可能な組成物としては、経口、直腸、局所（経皮、頬側および舌下を含む）、または非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与に適切なものが挙げられる。
【００８６】
より一般的には、これらの医薬処方物は、単一の包装、通常ブリスター包装中に別個の処置期間の間の使用のための計量された単位用量の投与のための数投薬単位（number dosing unit）または他の手段を含む「患者パック（patient pack）」中で患者に処方される。患者パックは、伝統的な処方を上回る利点を有する。ここで、薬剤師は医薬の患者の供給を原体供給から分け、その中で、患者は常に患者パック中に含まれる包装挿入物（伝統的な処方においては通常紛失される）を利用できる。包装挿入物を含めることは、医師の指示についての患者のコンプライアンスを改善することが示されている。従って、本発明はさらに、処方物に適切な包装材料と組み合わせた、本明細書において上記したような医薬組成物を含む。そのような患者パックにおいて、併用処置のための処方物の意図される使用を、処置のために最も適切な処方物の使用を助ける説明書、設備、規定、適用および／または他の手段によって推量することができる。そのような基準は、患者パックを、本発明の組み合わせでの処置のための使用に特に適切にしそしてそれに適合させる。
【００８７】
薬物は、任意の適切な量で任意の適切な担体物質中で含まれ得、そして組成物の全重量の１〜９９重量％の量で存在し得る。組成物は、経口、非経口（例えば、静脈内、筋肉内）、直腸、皮膚、鼻、膣、吸入、皮膚（パッチ）、または眼投与経路に適切な投与形態で提供され得る。従って、組成物は、例えば、錠剤、カプセル、丸剤、散剤、顆粒剤、懸濁液、乳濁液、溶液、ゲル（ヒドロゲルを含む）、ペースト、軟膏、クリーム、プラスター、水薬、浸透圧送達デバイス、坐薬、浣腸、注射剤、インプラント、スプレー、またはエアロゾルの形態であり得る。
【００８８】
医薬組成物は、従来の医薬習慣に従って処方され得る（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000およびEncyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York参照）。
【００８９】
本発明による医薬組成物は、投与に際して実質的に即時に、または投与後の任意の所定の時点もしくは期間に、活性薬物を放出するように処方され得る。
【００９０】
放出制御処方物としては、（ｉ）延長された期間にわたって身体内で実質的に一定の薬物濃度を生じる処方物；（ｉｉ）所定の時間経過後に、延長された期間にわたって身体内で実質的に一定の薬物濃度を生じる処方物；（ｉｉｉ）活性薬物物質の血漿レベルの変動に関連する所望されない副作用の同時の最小化をともなって、身体における相対的に一定の有効な薬物レベルを維持することによって所定期間、薬物作用を持続させる処方物；（ｉｖ）例えば疾患組織または器官の近くまたはその中への放出制御組成物の空間的配置によって、薬物作用を局在化させる処方物；および（ｖ）特定の標的細胞型に薬物を送達するために担体または化学誘導体を使用することによって薬物作用を標的化する処方物が挙げられる。
【００９１】
放出制御処方物の形態の薬物の投与は、薬物（単独または組み合わせのいずれか）が、（ｉ）狭い治療指数（すなわち、有害な副作用または有毒な反応を導く血漿濃度と、治療効果を導く血漿濃度との間の差が小さい；一般に、治療指数（ＴＩ）は半有効量（ＥＤ５０）に対する半致死量（ＬＤ５０）の比として定義される）；（ｉｉ）胃腸管における狭い吸収ウインドウ（absorption window）；または（ｉｉｉ）治療レベルで血漿レベルを持続させるために１日の間の頻繁な投薬が必要とされるような非常に短い生物学的半減期を有する場合、特に好ましい。
【００９２】
問題の薬物の代謝の速度に放出の速度がまさる放出制御を得るために、いくつかのストラテジーの任意のものを実行することができる。放出制御を、例えば、種々の型の放出制御組成物およびコーティングを含む種々の処方パラメーターおよび成分の適切な選択によって得てもよい。従って、薬物は、投与に際して、制御された様式で薬物を放出する医薬組成物（単または多単位錠剤またはカプセル組成物、油溶液、懸濁液、乳濁液、マイクロカプセル、マイクロスフェア、ナノ粒子、パッチ、およびリポソーム）に、適切な賦形剤を用いて処方される。
【００９３】
経口使用のための固体投与形態
経口使用のための処方物としては、非毒性の薬学的に許容され得る賦形剤との混合物中に活性成分を含む錠剤が挙げられる。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤または充填剤（例えば、スクロース、微結晶セルロース、デンプン（バレイショデンプンを含む）、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム）；造粒および崩壊剤（例えば、セルロース誘導体（微結晶セルロースを含む）、デンプン（バレイショデンプンを含む）、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、またはアルギン酸）；結合剤（例えば、アカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、アルファ化デンプン、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはポリエチレングリコール）；ならびに潤滑剤、滑剤（glidant）、および抗接着剤（例えば、ステアリン酸、シリカ、またはタルク）であり得る。他の薬学的に許容され得る賦形剤は、着色料、香料、可塑化剤、湿潤剤、緩衝剤などであり得る。
【００９４】
錠剤は無コーティングであってもよく、またはそれは、場合により、胃腸管における崩壊および吸収を遅延させ、それにより長期間にわたる持続性の作用を提供するように、公知の技術によってコーティングされてもよい。コーティングを、所定のパターンで活性薬物物質を放出するように適合させてもよく（例えば、放出制御処方物を達成するために）またはそれを、胃の通過後まで活性薬物物質を放出しないように適合させてもよい（腸溶コーティング）。コーティングは、糖衣、フィルムコーティング（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルソース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリレートコポリマー、ポリエチレングリコール、および／またはポリビニルピロリドンに基づく）、または腸溶コーティング（例えば、メタクリル酸コポリマー、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ポリビニルアセテートフタレート、シェラック、および／またはエチルセルロースに基づく）であってもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはグリセリルジステアレートのような時間遅延材料を用いてもよい。
【００９５】
固体錠剤組成物としては、所望されない化学的変化（例えば、活性薬物物質の放出前の化学的分解）から組成物を保護するように適合させられたコーティングが挙げられ得る。コーティングは、Encyclopedia of Pharmaceutical Technologyに記載されるのと同様に固体投与形態上に適用され得る。
【００９６】
いくつかの薬物を、錠剤中で一緒に混合してもよく、または分割してもよい。例えば、第２の薬物の実質的部分が第１の薬物の放出前に放出されるように、第１の薬物は錠剤の内側に含まれ、そして第２の薬物は外側である。
【００９７】
経口使用のための処方物を、咀嚼錠として、または活性成分が不活性固体希釈剤（例えば、バレイショデンプン、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合されている硬ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水または油媒質（例えば、流動パラフィン、またはオリーブ油）と混合されている軟ゼラチンカプセルとして提供してもよい。散剤および顆粒剤を、従来の方法で錠剤およびカプセルについて上記した成分を使用して調製してもよい。
【００９８】
経口使用のための放出制御組成物を、例えば、活性薬物物質の溶解および／または拡散を制御することによって活性薬物を放出するように構築してもよい。
【００９９】
溶解または拡散放出制御を、薬物の錠剤、カプセル、ペレット、もしくは顆粒剤処方物の適切なコーティングによって、または適切なマトリックス中に薬物を組み込むことによって達成することができる。放出制御コーティングは、上記のコーティング物質、および／または、例えば、シェラック、ミツロウ、グリコワックス、ヒマロウ、カルナウバロウ、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリン、グリセリルジステアレート、パルミトステアリン酸グリセロール、エチルセルロース、アクリル樹脂、ｄｌ−ポリ乳酸、セルロースアセテートブチレート、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、２−ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートヒドロゲル、１，３ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート、および／またはポリエチレングリコールの１つ以上を含んでもよい。放出制御マトリックス処方物において、マトリックス材料は、例えば、水和メチルセルロース、カルナウバロウおよびステアリルアルコール、カルボポール９３４、シリコーン、三ステアリン酸グリセリン、メチルアクリレート−メチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、および／またはハロゲン化フルオロカーボンを含んでもよい。
【０１００】
本発明の組み合わせの薬物の１つ以上を含む放出制御組成物は、浮揚性の錠剤またはカプセル（すなわち、経口投与に際して、特定の期間、胃内容物の上部に浮かぶ錠剤またはカプセル）の形態であってもよい。薬物の浮揚性錠剤処方物を、薬物の、賦形剤および２０〜７５％ｗ／ｗの親水コロイド、例えば、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースとの混合物を造粒することによって調製することができる。次いで、得られた顆粒を錠剤に圧縮することができる。胃液と接触して、錠剤は実質的に水不透過性のゲルバリアをその表面の周囲に形成する。このゲルバリアは、１未満の密度の維持に関与し、それにより錠剤が胃液中に浮揚したままになることを可能にする。
【０１０１】
経口投与のための液剤
水の添加による水性懸濁液の調製に適切な粉末、分散粉末、または顆粒は、経口投与のための好都合な投与形態である。懸濁液としての処方物は、活性成分を、分散または湿潤剤、懸濁剤、および１つ以上の保存料との混合物中で提供する。適切な懸濁剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウムなどである。
【０１０２】
非経口組成物
医薬組成物を、注射、注入または埋め込みによって（静脈内、筋肉内、皮下など）、従来の非毒性の薬学的に許容され得る担体および佐剤を含む投与形態、処方物中で、または適切な送達デバイスもしくはインプラントを介して非経口で投与してもよい。そのような組成物の処方および調製は医薬処方物の当業者に周知である。
【０１０３】
非経口使用のための組成物を、単位投与形態で（例えば、単一用量アンプル中で）、またはいくつかの用量を含みそして適切な保存料を添加してもよいバイアル中で提供してもよい（下記参照）。組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、注入デバイス、もしくは埋め込みのための送達デバイスの形態であってもよく、またはそれは、使用前に水または別の適切なビヒクルで再構成されるべき乾燥粉末として提供されてもよい。活性薬物のほかに、組成物は適切な非経口的に許容され得る担体および／または賦形剤を含んでもよい。活性薬物を、放出制御のために、マイクロスフェア、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどに組み入れてもよい。組成物は、懸濁剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、および／または分散剤を含んでもよい。
【０１０４】
本発明による医薬組成物は、無菌注射のために適切な形態であってもよい。そのような組成物を調製するために、適切な活性薬物は、非経口的に許容され得る液体ビヒクル中に溶解または懸濁される。用いられ得る許容され得るビヒクルおよび溶媒の中には、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウムまたは適切な緩衝剤の添加によって適切なｐＨに調整された水、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。水性処方物は、１つ以上の保存料（例えば、メチル、エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸）を含んでもよい。薬物の１つが乏しくまたはわずかにのみ水中に可溶性である場合、溶解増強剤または可溶化剤を添加することができるか、または溶媒に１０〜６０％ｗ／ｗのプロピレングリコールなどを含めてもよい。
【０１０５】
放出制御非経口組成物は、水性懸濁液、マイクロスフェア、マイクロカプセル、磁性マイクロスフェア、油溶液、油懸濁液、または乳濁液の形態であってもよい。あるいは、活性薬物を、生体適合性担体、リポソーム、ナノ粒子、インプラント、または注入デバイス中に組み入れてもよい。マイクロスフェアおよび／またはマイクロカプセルの調製における使用のための材料は、例えば、生分解性／生物腐食性ポリマー、例えば、ポリガラクチン、ポリ（イソブチルシアノアクリレート）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−Ｌ−グルタミン）である。放出制御非経口処方物を処方する場合に使用し得る生体適合性担体は、炭水化物（例えば、デキストラン）、タンパク質（例えば、アルブミン）、リポタンパク質、または抗体である。インプラントにおける使用のための材料は、非生分解性（例えば、ポリジメチルシロキサン）または生分解性（例えば、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（グリコール酸）もしくはポリ（オルトエステル））であることができる。
【０１０６】
直腸組成物
直腸適用について、組成物に適切な投与形態としては、坐薬（乳濁液または懸濁液型）、および直腸ゼラチンカプセル（溶液または懸濁液）が挙げられる。典型的な坐薬処方物において、活性薬物は、適切な薬学的に許容され得る坐薬基材、例えばカカオバター、エステル型脂肪酸、グリセリン化ゼラチン、および種々の水溶性または分散性基材、例えば、ポリエチレングリコールと組み合わされる。種々の添加物、増強剤または界面活性剤を組み込んでもよい。
【０１０７】
経皮および局所組成物
医薬組成物を、マイクロスフェアおよびリポソームを含む、従来の非毒性の薬学的に許容され得る担体および賦形剤を含む投与形態または処方物中で経皮吸収のために皮膚上に局所的に投与してもよい。処方物としては、クリーム、軟膏、ローション、リニメント、ゲル、ヒドロゲル、溶液、懸濁液、スティック、スプレー、ペースト、プラスター、および他の種類の経皮薬物送達システムが挙げられる。薬学的に許容され得る担体または賦形剤は、乳化剤、抗酸化剤、緩衝剤、保存料、湿潤剤、浸透増強剤、キレート剤、ゲル形成剤、軟膏基材、香料、および皮膚保護剤を含んでもよい。
【０１０８】
乳化剤は天然ガム（例えば、アカシアガムまたはトラガカントガム）であってもよい
保存料、湿潤剤、浸透増強剤は、パラベン、例えば、メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸、および塩化ベンザルコニウム、グリセリン、プロピレングリコール、尿素などであってもよい。
【０１０９】
皮膚上の局所投与について上記した医薬組成物を、処置しようとする身体の部分上へのまたはその近くの局所投与に関連して使用してもよい。組成物を、直接適用のために、または、ドレッシングあるいはプラスター、パッド、スポンジ、ストリップ、または他の形態の適切な可動性材料のような特殊な薬物送達デバイスによる適用のために適合させてもよい。
【０１１０】
投与量および処置の持続期間
組み合わせの薬物が同時に（同じかまたは異なるかのいずれかの医薬処方物中で）または逐次的に投与され得ることが理解される。逐次的な投与が存在する場合、第２の（または、追加の）活性成分の投与の遅延は、活性成分の組み合わせの有効な効果の利益が失われるようにすべきでない。本説明に従う組み合わせのための最小の要件は、組み合わせが、活性成分の組み合わせの有効な効果の利益を有して併用のために意図されるべきであるということである。意図される組み合わせの使用を、本発明による組み合わせの使用を助ける設備、規定、適用および／または他の手段によって推量することができる。
【０１１１】
本発明の活性薬物を分割用量で（例えば、１日に２回または３回）投与してもよいが、組み合わせ中の各薬物の単一１日用量が好ましく、単一の医薬組成物中の全ての薬物の単一１日用量（単位投与形態）が最も好ましい。
【０１１２】
用語「単位投与形態」は、各々の単位が、必要とされる医薬担体と共同で所望の治療効果を生じるように算出された所定量の活性材料（単数または複数）を含む、ヒト対象のための単位投薬として適切な物理的に分離した単位（例えば、カプセル、錠剤、またはロードしたシリンジシリンダー）を指す。
【０１１３】
投与は、１日に１回〜数回、数日間〜数年間であることができ、そして患者の生涯にわたりさえし得る。慢性のまたは少なくとも定期的に反復される長期投与の必要が大部分の症例において示される。
【０１１４】
さらに、特定の患者についての薬理ゲノミクス（治療の薬物動態、薬力学または効力プロファイルに対する遺伝子型の効果）情報が、使用される投与量に影響を及ぼし得る。
【０１１５】
より高い投与量が必要とされ得る特に損なわれているＡＤ疾患症例に応答する場合以外、組み合わせ中の各薬物の好ましい投与量は通常、長期維持処置のために通常処方されるかまたは大きな第３相臨床試験において安全であると判明した用量を上回らない範囲内にある。
【０１１６】
最も好ましい投与量は、長期維持処置のために通常処方されるものの１％〜１０％の量に対応する。
【０１１７】
例えば、本発明の特に好ましい併用療法のための可能な投与量は以下のとおりであり得る：
−  エプレレノン、経口、約０．２５〜５ｍｇ、１日当たり１回または２回、およびマリマスタット、経口、１日当たり約０．１〜１ｍｇ、
−  ゲムフィブロジル、経口、約１２〜１２０ｍｇ、朝食および夕食の３０分前に２分割用量で投与、およびマリマスタット、経口、１日当たり約０．１〜１ｍｇ、
−  マリマスタット、経口、１日当たり約０．１〜１ｍｇ、およびテルビナフィン、経口、約２．５〜２５ｍｇ、１日１回または２回、
−  トポテカン、経口、１日当たり約０．０２５〜０．２５ｍｇ、およびメタゾラミド、経口、約１〜１０ｍｇ、１日２〜３回、
−  エプレレノン、経口、約０．２５〜５ｍｇ、１日当たり１回または２回、およびタダラフィル、経口、１日当たり約０．０５〜０．５ｍｇ、
−  エプレレノン、経口、約０．２５〜５ｍｇ、１日当たり１回または２回、およびシロスタゾール、経口、１日当たり約１〜１０ｍｇ、
−  スニチニブ、経口、１日当たり約０．５〜５ｍｇ、およびテルビナフィン、経口、約２．５〜２５ｍｇ、１日１回または２回、
−  フェンホルミン、経口、１日当たり約０．５〜５ｍｇ、およびバクロフェン、経口、１日当たり約０．４〜８ｍｇ、２または３分割用量で投与、
−  フェンホルミン、経口、１日当たり約０．５〜５ｍｇ、およびテルビナフィン、経口、約２．５〜２５ｍｇ、１日１回または２回、
−  タダラフィル、経口、１日当たり約０．０５〜０．５ｍｇ、およびアレンドロネート、経口、約０．７〜７ｍｇ、１週１回、または０．７〜７ｍｇ、１日１回、
−  シロスタゾール、経口、１日当たり約１〜１０ｍｇ、およびアレンドロネート、経口、約０．７〜７ｍｇ、１週１回、または０．７〜７ｍｇ、１日１回、
−  メパクリン、経口、１日当たり約３〜３０ｍｇ、およびテルビナフィン、経口、約２．５〜２５ｍｇ、１日１回または２回、
−  メパクリン、経口、１日当たり約３〜３０ｍｇ、およびバルサラジド、経口、約７〜７５ｍｇ、１日３回投与、
−  テルビナフィン、経口、約２．５〜２５ｍｇ、１日１回または２回、およびイマチニブ、経口、１日当たり約４〜６０ｍｇ。
【０１１８】
実際に投与される薬物の量が、処置しようとする状態（単数または複数）、投与しようとする正確な組成物、個々の患者の年齢、体重、および応答、患者の症候の重症度、および選択された投与経路を含む関連事情の見地から、医師よって決定されることが理解される。それゆえ、上記の投与量範囲は、本明細書における教示のための一般的な案内および支持を提供することが意図され、本発明の範囲を限定することは意図されない。
【０１１９】
以下の実施例は、例証の目的のために与えられ、そして限定としては与えられない。
【０１２０】
実施例
インビトロアッセイを使用する薬物検証
インビトロアッセイは、ＡＤに関係付けられる経路に作用する薬物およびその組み合わせの改良のための強力なツールである。本発明の薬物およびその組み合わせを、本発明において同定されたＡＤネットワークに従って適合させた特異的インビトロアッセイに対する作用によって最適化する。その後、これらの分子またはその組み合わせを、ＡＤのインビボモデルにおいて試験し得る。
【０１２１】
これらのインビトロ試験は、Ａβタンパク質の毒性効果に曝露された内皮細胞に対する薬物の保護潜在力の研究で開始する。関係付けられる経路における薬物を個々に試験し、続いてその組み合わせの作用のアッセイを行い得る。その後の段階で、個々の経路における標的に対して作用する最も効率的な組み合わせを、組み合わせそして細胞ストレス、軸索成長および血管毒性についてのアッセイにおいて再度試験する。
【０１２２】
細胞培養
ラット内皮大脳細胞の初代培養物（Vect-Horus SAS, Marseille）を、継代０で培養する。コンフルエンスで、内皮細胞をトリプシンＥＤＴＡ（Pan Biotech Ref: P10-023100）を用いて解離させる。細胞を９６ウェルプレート（ウェルは１．５ｍｇ／ｍｌのタイプＩラットコラーゲン３０μｌでコーティングされている、Vect-Horus SAS, Marseille）中２５０００細胞／ウェルの密度で播種し、そして１％の微小血管成長補充物（MVGS, S-005-25, Invitrogen）を補充したＭＣＢＤ１３１培地（M-131-500, Invitrogen）中で培養する。細胞を３７℃で湿潤空気（９５％）／ＣＯ２（５％）雰囲気中で培養する。培地の半分を１日おきに新鮮な培地に交換する。
【０１２３】
４日後、ＤＭＳＯ  ０．１％または水に溶解した、様々な濃度の薬物を細胞培養培地に加える。２％のウシ胎児血清（ＦＢＳ  ； Invitrogen ref: 16000-036）、１％のＬ−グルタミン（Pan Biotech ref: P04-80100）、１％のペニシリン−ストレプトマイシン（ＰＳ；Pan Biotech ref: P06-07100）、０．１ｍｇ／ｍｌのヘパリン（Sigma）、１０ｎｇ／ｍｌの上皮増殖因子（ＥＧＦ、Invitrogen）および１０ｎｇ／ｍｌの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ、PHG0146, Invitrogen）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Pan Biotech Ref: P04-03600）を含む培養培地中で１時間のプレインキュベーションを行う。
【０１２４】
次いで、同じ培養培地中、薬物と一緒の３０μＭのβアミロイド（２５−３５；Sigma）を用いて細胞を中毒させる。次いで、細胞を３日間中毒させる。
【０１２５】
乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性アッセイ
各々の培養物について、中毒の３日後に、上清を収集し、そしてCytotoxicity Detection Kit（LDH, Roche Applied Sciences）を用いて分析する。細胞死の定量のためのこの比色アッセイは、上清中へ損傷細胞の細胞質ゾルから遊離された乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性の測定に基づく。光学密度（ＤＯ）を、マルチスキャン装置（Thermo, Ref Ascent）による４９２ｎｍ波長における分光光度計によって評価する。
【０１２６】
結果
図１に示す結果は、２つの独立した培養物（条件当たり６つのウェル）から抽出されている。全ての値を平均±ｓ．ｅ．ｍ．で表す。両側スチューデントｔ検定分析が生データに対して行われている。結果を、コントロール（ビヒクル）と比較した、細胞生存率の百分率で表す。
【０１２７】
薬物を、３日間続くＡβ２５−３５  ３０μＭ中毒の１時間前にラット初代大脳内皮細胞とともにインキュベートする。
【０１２８】
このインキュベーションの３日後に、細胞死のレベルを反映する、培養培地におけるＬＤＨ遊離を定量する。本発明者らは、４つの薬物が、このＡβ２５−３５中毒に対する保護効果を明らかに発揮することを観察した（図１）。
【０１２９】
インビボ試験
インビトロ試験において活性な化合物およびその組み合わせを、アルツハイマー病のインビボモデルにおいて試験した。アルツハイマー病関連変異ヒトアミロイドβタンパク質前駆体（ＡＰＰ）トランスジーンの過剰発現は、多数の研究においてＡＤ疾患モデルとして作用するトランスジェニックマウスの脳におけるＡβの沈着を促進する最も信頼できる手段であった。加齢とともに、これらの変異ＡＰＰマウスは強いアミロイド病理および他のＡＤ様特徴（減少したシナプス密度、反応性グリオーシス、およびいくらかの認知障害を含む）を発達させる。多くの変異ＡＰＰマウスモデルは、明白なニューロン損失および神経原線維変化（ＮＦＴ）病理の証拠をほとんど示さない。このＢＲＩ−Ａβ４２トランスジーンについてヘミ接合型のマウスは、正常な寿命を有して生存可能でありそして繁殖性である。トランスジェニックＢＲＩ−Ａβ４２  ｍＲＮＡは、マウスプリオンタンパク質プロモーターに特徴的なパターンで発現される；最高のトランスジーン発現レベルは小脳顆粒細胞および海馬、続いて皮質、脳橋、視床、および中脳において検出される。トランスジェニック融合タンパク質において、Ａβ１−４２はフューリン様切断部位でＢＲＩタンパク質のＣ末端に融合されており、その結果、切断によって管腔または細胞外空間中への効率的なＡβ１−４２分泌が生じる。それゆえ、これらのマウスはＡβ１−４２アイソフォームを特異的に発現する。ヘミ接合型ＢＲＩ−Ａβ４２マウスは、加齢とともに界面活性剤不溶性アミロイドβを蓄積し、そして３月齢ほどの早期に小脳においてコア斑（cored plaque）を発達させる。前脳病理の発達が後に起こり、１２月齢まで海馬および嗅内／梨状葉皮質中に細胞外Ａβ斑は一貫して存在しない。アミロイドβ沈着（コア斑）は、３ヶ月ほどの早期にトランスジェニックマウスの小脳の分子層において観察され得、そして加齢とともにより明白になる；ところどころの細胞外斑が６月齢で嗅内／梨状葉皮質および海馬において見られるが、＞１２月齢まで一貫して見出されない。最高齢のマウスは、小脳、皮質、海馬、および嗅球におけるコアおよび拡散斑を有して広範な病理を示す。細胞外アミロイド斑は、放射型原線維を有して密なアミロイドコアを示す；多くの異栄養性神経突起の束がこれらの斑の末梢において観察される。反応性グリオーシスが斑に付随する。
【０１３０】
薬物処置
トランスジェニックＴｇ（Ｐｒｎｐ−ＩＴＭ２Ｂ／ＡＰＰ６９５＊４２）Ａ１２Ｅ  ｍｃマウス（５７）をJackson Laboratoryから得た（http://jaxmice.jax.org/strain/007002.html）。最高のＡβ４２血漿レベルを有するマウス樹立系統ＢＲＩ−Ａβ４２Ａ（１２ｅ）を混合Ｂ６Ｃ３バックグラウンド上で維持した。成体雄性トランスジェニックマウスは食物および水への自由な接近を有する。承認されたInstitutional Animal Care and Use Committeeプロトコルに従って、マウスを秤量し、そしてコントロール溶液（プラセボ）または様々な用量で調製したＰＸＴ薬物のいずれかを１０〜２０週間連続して１日に１回ｉ．ｐ．注射するかまたは強制摂取した。
【０１３１】
生存分析
Kaplan-Meier方法を使用して生存率を分析した。Holm-Sidak方法（post hoc）を全ての多重対比較検定のために使用した。外来性の死亡を検閲する。いずれもの、バックグラウンド系統の差異からの潜在的に混乱させる効果を制限するために、全ての比較を同腹仔間で行った。
【０１３２】
行動試験
行動試験を数人の著者らによって公開された方法に従ってデザインしそして実施した（５８〜６１）。
【０１３３】
モーリス水迷路（ＭＷＭ）における空間学習および記憶
この実験を、白色プラスチックで作製され、そして乳白色の水を満たした直径９０ｃｍの円形プール中で行う。透明プラスチックで作製された直径８ｃｍの避難プラットフォームを水面下０．５ｃｍに水没させた。Ａ４サイズの文字で印刷し、そして４つの周囲の壁（プールからの距離は５０〜７０ｃｍであった）に配置した様々な幾何学形態によって視覚的目印を提供する。各々のマウスに４日間１日に４回の試行を与えた（試行の間５〜７分間隔、合計１６回の試行）。各々の試行を４つの異なる開始点の１つから行った。マウスの移動をVideotrack Software（View Point）を使用してモニターする。避難プラットフォームを位置付けるためにかかった時間（避難潜伏期；６０秒まで）を決定した。プラットフォームを位置付けた後、マウスをその上に１５秒間座らせた。６０秒以内にプラットフォームを見出せなかったマウスを、それに導き、そしてその上に１５秒間留めた。６０秒の潜伏期をそのような出来事について記録に入れる。１日目の１回目の試行以外、１日当たりの４回の試行の全てを統計分析のために平均した。９日目（最後の訓練の５日後）に、マウスを、プラットフォームを取り外しそしてマウスにそれを探索させる６０秒間探索試行に供した。各動物が各四分円において費やした時間を記録した（四分円探索時間）。雄性マウスのいくつかの群を３、７、１０、および１２月で使用した。
【０１３４】
いくつかの少しのマウスは試験を強く妨害するすくみ行動（例えば、水中で動かないで横たわり、そして泳ぎを拒む）を示し、これらの動物をデータ分析から除外した。
【０１３５】
全ての行動試験を静かな減光環境下で行う。
【０１３６】
放射状水迷路における作業記憶試験
この認識に基づく作業記憶の高感度の測定を、６つの放射状に分布した水泳アームを作製するようにアルミニウムインサートを装着した直径１００ｃｍの水を満たしたプール（モーリス水迷路およびプラットフォーム認識課題のためにも使用）からなる器具の助けで得た。試験は、連続した９〜１２日間、１日のセッション当たり５回の１分間試行からなる。各セッションの開始時に、透明な水没させたプラットフォームを６つの水泳アームの１つの末端に配置する（ランダムに選択、毎日変更）。最初の４回の獲得試行の各々について、動物を非プラットフォーム含有アームの１つに配置し（ランダム化した順序）、そしてプラットフォームを探索させる。６０秒間試行の間、動物が別の非プラットフォーム含有アームに入る毎に、静かにそれをその出発位置に戻し、そしてエラーを記録する。第４の試行の後、動物を３０分間休ませ、続いて最後の非プラットフォーム含有水泳アームにおいて始める第５の（保持）試行を行う。エラー（正しくないアームの選択）の数および避難潜伏期（プラットフォームに到達する時間、最大６０秒）を各試行について記録する。
【０１３７】
円形プラットフォーム試験における空間参照学習および記憶
この認識に基づく課題試験を、外周の周りに等距離間隔で配置した１６個の「避難」孔を有する直径６９ｃｍの円形プラットフォームからなる器具の助けで行う。避難所は孔の１つの下に取り付けられており、そしてその上に種々の視覚的合図が配置されている黒色のカーテンがプラットフォームを取り囲んでいる。動物を単一の５分間試行の開始時にプラットフォームの中央に配置し、そして嫌悪刺激（明光、ファンの風）を与える。エラー（非避難孔中へ頭を突くこと）の総数および避難潜伏期（避難孔に到達する時間）を記録する。
【０１３８】
プラットフォーム認識試験における認識能力
この認識に基づく探索課題は、物体同定および認識能力を評価する。標的物体は、直径１００ｃｍの円形プール中の水表面の０．８ｃｍ上に配置されている１０ｃｍ×４０ｃｍ黒色の旗を装着した直径９ｃｍの円形プラットフォームからなる。試験は、連続した４日間の各々の日当たり４回の６０秒間試行からなる。各々の日に、標的物体を各試行についてプールの異なる四分円中に配置し、そして動物を４回全ての試行についてプールの外周に沿った同じ位置で放す。全潜伏期（最大６０秒）を各試行について記録する。
【０１３９】
改変Irwin検査
Irwinから改変した包括的スクリーニングを、マウスのいずれかがその遺伝子型に関連する生理的な、行動の、または感覚運動の機能障害を示したかどうかを決定するために使用する。運動習熟、協調、および筋力を調査するために、マウスを２つの高さ３０ｃｍの柱の間に張ったワイヤー上に配置し、そしてワイヤー上でバランスを取るその能力を評価する。さらに、少なくとも５秒間４つ全部の足でワイヤーを掴みそしてそれにぶら下がり、そしてワイヤー上に登って戻るその能力を決定する。
【０１４０】
血管アミロイド沈着の定量
脳アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）の定量のために、頭頂葉皮質または小脳皮質軟膜を通した３０μｍ間隔の５μｍパラフィン包埋切片を、一晩４℃でビオチン化Ａｂ９抗体（抗Ａβ１−１６、１：５００）を用いて免疫染色する（各齢群における遺伝子型当たりｎ＝５〜７匹のマウス、マウス当たりｎ＝６切片）。陽性に染色された血管を、改変Vonsattelスコアリングシステムを使用して視覚的に評価する（６２）。ＣＡＡ重症度スコアを、ＣＡＡ血管数にＣＡＡ重症度グレードを掛けることによって算出する。
【０１４１】
組織学：免疫組織化学および免疫蛍光
３〜１２月のＴｇおよびＷＴマウスを麻酔し、そして０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）中の０．９％ＮａＣｌおよび４％パラホルムアルデヒドまたは０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の１０％ホルマリンおよび４％パラホルムアルデヒドで順次経心的に灌流する。脳および脊髄を取り出し、そして４％パラホルムアルデヒド中で貯蔵する。いくつかの試料をパラフィン中に包埋し、そしてスライディングミクロトーム上で１０μｍの厚さで切断する。凍結切片（１４μｍ）をクリオスタット上で切断し、そしてクロムミョウバンコーティングしたスライド上にマウントする。内在性ペルオキシダーゼを、切片を０．３％Ｈ２Ｏ２を含むメタノールで３０分間処理することによってクエンチする。切片を１０％ウマ血清中でブロックする。一次抗体を使用し、そして一晩４℃で１％ウマ血清の存在下でインキュベートする。全ての二次ビオチン化またはフルオレセイン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、およびＡＭＣＡ結合抗体、蛍光色素、ＡＢＣキット、およびペルオキシダーゼ活性用の色素原としての３，３’−ジアミノベンジジンは、Vector Laboratoriesからである。二次抗体とのインキュベーションを室温で１時間保持する。全ての洗浄工程（３〜１０分）および抗体希釈をリン酸緩衝食塩水（０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＰＢＳ、ｐＨ７．４）またはＴｒｉｓ緩衝食塩水（０．０１ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ、０．１５ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）を使用して行う。ＡＢＣ複合体とのインキュベーションおよび３，３’−ジアミノベンジジンを用いる検出を、製造業者のマニュアルに従って行う。ヘマトキシリン対比染色を標準的手順に従って行う。遺伝子型、齢および性別当たり最小３匹のマウスを各々の決定のために使用する（６３）。
【０１４２】
インビボデータの統計分析
全ての実験からの結果をSTATISTICA 8.0（Statsoft）を用いて分析する。
【０１４３】
ＣＡＡ重症度を、post hoc Holm-Sidak多重比較検定または両側スチューデントｔ検定とともにＡＮＯＶＡを使用することによって分析する。データのセットがパラメトリックな検定仮定を満たさない場合は、Kruskal-Wallis検定およびそれに続くpost hoc Dunn多重比較またはMann-Whitney順位和検定のいずれかを行う。全ての比較を同腹仔間で行う。
【０１４４】
コントロール（０ｍｇ／ｋｇ）試料を除外して薬物応答モデリングを行う。ＥＤ５０は、実験における最大薬物誘導応答の５０％を誘導するために必要とされる用量（ｍｇ／ｋｇ）に対応する。それをＥＤ５０の対数についてHill式モデルを使用して算出する。
【０１４５】
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【図１】
0005721230.tif 000006