(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ
【化１】
0005648044.tif 000024
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、式Ｒ９−（ＣＨＲ８）ｐ−（ＣＲ６Ｒ７）ｍ−（ＣＲ４Ｒ５）ｎ−の基であり；
式中
Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、独立してＨ、水酸基、またはカルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ５、Ｒ７、およびＲ９は、独立してＨまたは非存在であり；
ｍ、ｎ、およびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ≧４である；
Ｒ３は、ＮＨ２またはＮＨＲ１０である；
式中、Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリールおよびＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択される；
ただし、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、同時にすべてがＨではない］を有する化合物、その鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項２】
ｎ＝２、ｍ＝１、およびｐ≧１である、請求項１に記載の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項３】
Ｒ６が、ＯＨ、またはカルボニルを意味する＝Ｏである、請求項１または２に記載の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項４】
ｎ＝１およびＲ４が、ＯＨ、またはカルボニルを意味する＝Ｏである、請求項１に記載の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項５】
４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール、（Ｓ）−４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール、１−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール、４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−２−オン、４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール、（Ｒ）−４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール、および１−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−１−オンから成る群に含まれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項に記載の少なくとも一つの化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩を活性成分として、医薬的に許容される少なくとも一つのビヒクルおよび／または賦形剤とともに混合物中に含む、医薬組成物。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか一項に記載の少なくとも一つの化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩を、医薬的に許容される少なくとも一つのビヒクルおよび／または賦形剤とともに混合することを含む、請求項６に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項８】
Ａ２Ａ受容体活性の調節が患者の健康の改善となる病的状態を治療するための医薬であって、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩を含む医薬。
【請求項９】
前記病的状態が、運動障害である、請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
前記運動障害が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、ウィルソン病、またはハレルフォルデン・スパッツ病である、請求項９に記載の医薬。
【請求項１１】
前記病的状態が、神経変性プロセスに任意に関連する脳虚血である、請求項８に記載の医薬。
【請求項１２】
Ｌ−ＤＯＰＡと併用するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩を含む医薬。
【請求項１３】
パーキンソン病の治療においてＬ−ＤＯＰＡと併用するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそのラセミ体、またはその医薬的に許容され得る塩を含む医薬。
【請求項１４】
請求項１に記載の式Ｉ
【化２】
0005648044.tif 000025
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、式 Ｒ９−（ＣＨＲ８）ｐ−（ＣＲ６Ｒ７）ｍ−（ＣＲ４Ｒ５）ｎ−の基であり；
Ｒ４およびＲ５は、Ｈであり；
Ｒ６およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨまたはカルボニルを意味する＝Ｏであり；Ｒ６およびＲ８の少なくとも１つは、カルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ７およびＲ９は、いずれの発生においても、独立してＨであるか、または前記Ｒ６基または前記Ｒ８基と結合する関連炭素原子がカルボニル結合に関与する場合には非存在であり；
ｍおよびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｎは、１または２であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ≧４である；
Ｒ３は、ＮＨ２またはＮＨＲ１０である；
式中、Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリールおよびＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択される］
の化合物を合成するための方法であって、
式ＩＩ
【化３】
0005648044.tif 000026
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ１１は、Ｎ（Ｒ１３）２であり；
Ｒ１３は、ベンジル、ｐ−（ＭｅＯ）−ベンジル、ｐ−（Ｃｌ）−ベンジル、またはｐ−（Ｂｒ）−ベンジルであり；
Ｒ１２は、Ｃｌである］の化合物と、
化学式ＩＶ
【化４】
0005648044.tif 000027
［式中、
Ｘは、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、いずれの発生においても、独立して両方がＨであるか、またはそれらが結合する炭素原子とともに、２以上のメチル基によって任意に置換される１，３−ジオキサン基を形成し、少なくとも１つの発生は、２以上のメチル基によって任意に置換された１，３−ジオキサン基であり；
ｑは、０と３の間に含まれる整数であり；
ｒおよびｓは、独立して１と３の間に含まれる整数であり；
ｑ＋ｒ＋ｓ≧４である］の化合物を、
０℃から室温の温度範囲で、非プロトン性溶媒中のＦｅ（ａｃａｃ）３存在下で、反応させるステップを含む、方法。
【請求項１５】
前記非プロトン性溶媒がＴＨＦまたはＮＭＰである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１４に記載の式ＩＩの化合物と、式ＩＸ
【化５】
0005648044.tif 000028
［式中、
Ｒ１４およびＲ１５は、いずれの発生においても、独立してＨまたはＯＨであり；
ｖは、≧２である］の化合物との反応を、
極性溶媒中、ヘルマン触媒およびナトリウムアセタートの存在下で行う、請求項１に記載の化合物の合成方法。
【請求項１７】
前記極性溶媒がＮＭＰである、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のトリアゾリルプリン誘導体、それらの製造方法、およびアデノシンＡ２Ａ受容体の阻害によって患者の健康状態が改善される神経障害の治療のためのそれらを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アデノシンＡ２は内在性モジュレーターであり、他の効果の中で、このモジュレーターは中枢神経系の一般的な鬱病、血管拡張、および血小板凝集阻害の仲介をする。
【０００３】
アデノシン受容体は、プリン受容体（ｐｕｒｉｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）として知られるプリン・ヌクレオチド受容体およびプリン・ヌクレオシド受容体の群のサブクラス（Ｐ１）を意味する。現在まで、アデノシン受容体の４つのサブタイプが知られている（すなわち、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ（高アフィニティーと低アフィニティー）、およびＡ３受容体）。すべてのアデノシン受容体は、Ｇタンパク質と共役している；Ａ１およびＡ３のサブタイプは阻害性Ｇタンパク質と関連しており、Ａ２ＡおよびＡ２Ｂのサブタイプは刺激性Ｇタンパク質と関連している。Ａ１受容体およびＡ３受容体の活性化は、アデニル酸シクラーゼおよびホスホリパーゼＣの阻害を引き起こし、そして神経伝達を阻害する。Ａ１受容体は、脳内で適度に発現されるＡ３受容体と比較して、脳の特に海馬、視床、小脳、および皮質において顕著に発現される。Ａ２Ａ受容体およびＡ２Ｂ受容体の活性化は、アデニル酸シクラーゼおよびホスホリパーゼＣの活性化を引き起こし、そして神経伝達への刺激となる。Ａ２Ａ受容体は、ドーパミンＤ２受容体とともに、脳の特に線条体、嗅結節、および側坐核において共発現され、また神経変性病変に関係している。
【０００４】
Ａ２ａ受容体は、中枢神経系（線条体、側坐核、および嗅結節）において高密度に分布し、そこで心的状態と運動活動の制御において重要な機能を果たす（Ｐｏｕｌｓｅｎ，Ｓ．Ａ．ら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６，６１９；Ｏｎｇｉｎｉ，Ｅ．ら，ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１９９６，１７，３６４）。パーキンソン病は、ドーパミン置換戦略によって３０年以上にわたり治療されてきた（Ｃｏｔｚｉａｓ，Ｇ．Ｃ．ら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，１９６９，２８０，３３７）。しかし、ドーパミン置換剤の長期にわたる使用は重度の機能障害を引き起こす副作用に関連しているので、最も顕著なのは運動障害（Ｃｈａｓｅ  Ｔ．Ｎ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９９８，５０，Ｓ１７-Ｓ２５）であり、単独療法としての非ドーパミン治療は、そのような疾患を治療する有望な戦略と判断された（Ｂｒｏｔｃｈｉｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，１９９７，１０，３４０）。さらに、いくつかの科学的なエビデンスも、線条体淡蒼球系経路ニューロンにおけるアデノシンＡ２ａ受容体の合成の増加が、パーキンソン病での長期にわたるレボドパ療法の後に生じる運動障害の発症と関連していることを示唆する（Ｃａｌｏｎ，Ｆ．ら，Ｂｒａｉｎ，２００４，１２７，１０７５；Ｘｉａｏ，Ｄ．ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００６，２６，５２，１３５４８）。Ｌ−ＤＯＰＡの低用量と関連して、Ａ２Ａアンタゴニストは、異常な運動性副作用の増悪を伴わないＬ−ＤＯＰＡの総量によって生じるものと類似した抗パーキンソン病活性を示した（Ｔｒｏｎｃｉ  Ｅ．ら，Ｅｕｒ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００７，５６６，９４；Ｊｅｎｎｅｒ  Ｐ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，２００５，１４，６，７２９）。
【０００５】
アデノシンは、例えばてんかん、脳の虚血性プレコンディショニング、睡眠、および脳内の免疫反応といった数多くの他の病変に関連するとされてきた（Ｂｒｕｎｄｅｇｅ，Ｊ．Ｍ．ら，Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａ．，１９９７，３９，３５３）。
【０００６】
抗糖尿病化合物としての式Ａのイミダゾピリミジン誘導体は、米国再発行特許第  ＲＥ３９１１２号（Ｅｉｓａｉ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）で開示されている。
式Ａ
【化１】
0005648044.tif 000002
である。
【０００７】
後者の化合物の９４％（２３７個の例証化合物の内２２３個）は、Ｒ３基としてフルオロ含有フェニル部分、および／またはＲ１基内に第三級アルコールを示し、このことは、それらの部分は、活性を化合物に与えるために重要な特徴を構成することを示唆した。
【０００８】
本出願人によって提出された特許（欧州特許第１４１２３５４号）は、抗精神病特性を有するトリアゾリル−イミダゾピリジン（ｔｒｉａｚｏｌｖｌ−ｉｍｉｄａｚｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）誘導体およびトリアゾリルプリン誘導体を開示している。しかし、本発明の化合物のいずれもが、開示も示唆もされていなかった。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は式Ｉの新規の化合物、またはその水和物、またはその溶媒和物を提供し、アデノシンＡ２ａ阻害特性を有するそのような化合物を含む組成物を提供する：
【化２】
0005648044.tif 000003
［式中、
Ｒ１＝は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、式
【化３】
0005648044.tif 000004
の群であり；
Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨ、水酸基、またはカルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ５、Ｒ７、およびＲ９は、いずれの発生においても、独立してＨまたは非存在であり；
ｍ、ｎ、およびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４であり；
Ｒ３は、ＮＨ２、ＮＨＲ１０であり；
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシアルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アミノ基は１または２のＣ１−Ｃ３アルキル基で任意に置換され、前記アルキル基は直鎖状または分枝状である；Ｃ６−Ｃ１４アリールまたはＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和のアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルで一または二置換されるアミノからなる群から選択される同一であるか異なる１以上の置換基により任意に置換される］
それらの光学的に活性な形態、例えば鏡像異性体、ジアステレオマーおよびそのラセミ体、ならびにそれらの医薬的に許容され得る塩である；
ただし、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、同時にすべてがＨではない。
【発明の効果】
【００１０】
我々は、本発明によって製造された誘導体（Ｉ）が、Ａ２Ａ受容体活性の調節が患者の健康の増進となる病態、疾患、および病的状態の治療に有用な薬剤であることを見いだした。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】マウスでのハロペリドールによって誘発されたカタレプシーに拮抗することにおけるＳＴ３９３２の有効性を示す図である。
【図２】６−ＯＨＤＡ破壊ラットの反対側回転の回数の増加におけるＳＴ４２０６の有効性を示す図である。
【図３】６−ＯＨＤＡ破壊ラットの反対側回転の回数の増加におけるＳＴ３８２９の有効性を示す図である。
【図４】６−ＯＨＤＡ破壊ラットの反対側回転の回数の増加におけるＳＴ３９３２の有効性を示す図である。
【図５】６−ＯＨＤＡ破壊ラットの反対側回転の回数の増加におけるＳＴ４２０６の有効性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の実施形態は、薬剤としての使用のための、式Ｉの化合物の実施形態である。
【００１３】
他の実施形態では、前記薬剤は、大脳基底核における機能的な変化に由来する運動障害により影響を受ける対象者を治療するために使用される。
【００１４】
さらに他の実施形態では、前記運動障害は、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、およびウィルソン病を含む病気に関連するものから成る。
【００１５】
他の実施形態では、式Ｉの化合物は、脳虚血の治療のためのおよび／または神経変性プロセスに関する治療のための薬剤の製造にも有用である。
【００１６】
「アルキル」という用語は、１から６の炭素原子を有する直鎖状または分枝状のアルキル基を言う。好ましいアルキル基は、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｎｅｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシルなどの群により例示される。
【００１７】
「アルケニル」という用語は、好ましくは２から１２の炭素原子を有するか、または好ましくは「低級」アルケニル基とも呼ばれる２から６の炭素原子を有する直鎖状または分枝状のアルケニル基を意味し、そしてアルケニル基は、少なくとも１箇所または２箇所にアルケニル不飽和を有する。好ましいアルケニル基は、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、プロペニル（アリル、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）などを含む。アルケニルという用語は、「シス」および「トランス」幾何学的配置を有するまたは代わりに「Ｚ」および「Ｅ」を有する基を含む。
【００１８】
「シクロアルキル」という用語は、３から１０の炭素原子を有する飽和または部分的に不飽和の（すなわち、芳香族ではない）炭素環式基を意味し、該炭素環式基は単環または縮合環を有する。Ｃ３−Ｃ１０のシクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルニル、アダマンチルなどが含まれる。
【００１９】
「ヘテロシクロアルキル」という用語は、窒素原子、酸素原子、または硫黄原子からなる群から選択される一またはそれ以上のヘテロ原子を含む飽和または部分的に不飽和の（すなわち、芳香族ではない）５員環、６員環、または７員環を意味し、そしてその環は、低級アルキル、低級アルケニル、またはアリールで置換され得る。好ましいヘテロシクロアルキルは、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ケトピペラジン、２，５−ジケトピペラジン、１−メチルピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラン、ジヒドロピロール、イミダゾリジン、ジヒドロピラゾール、ピラゾリジンなどを含む。
【００２０】
「アリール」という用語は、張り出した形で結合し得るか、または縮合し得る単環（例えば、フェニル）または縮合環を有する６から１４の炭素原子を有する芳香族炭素環式基を意味する。好ましいアリールは、フェニルを含む。
【００２１】
「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−Ｒ基を意味し、そこでＲは、「Ｃ１−Ｃ６アルキル」、「Ｃ２−Ｃ６アルケニル」、「Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル」、および「ヘテロシクロアルキル」を含む。
【００２２】
「アルコキシアルキル」という用語は、上記で定義されるようなアルコキシ置換基を有する上記で定義されるようなアルキル基を意味し、２−エトキシエチル、メトキシメチルなどを含む。
【００２３】
「アミノ」という用語は、−ＮＲＲ’基を意味し、そこでＲおよびＲ’は、独立したＨ、「アルキル」、「アルケニル」、「シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」であり、そこでＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子とともに、上記で定義されるような３員から８員のヘテロシクロアルキル環を任意に形成する。「アミノアルキル」または「アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル」という用語は、上記で定義されるようなアルキル基を意味し、上記で定義されるようなアミノ置換基を有する。
【００２４】
「医薬的に許容され得る塩または複合体」は、式（Ｉ）の化合物の下記で特定する塩または複合体を意味し、その塩または複合体は、好ましい生物活性を保持する。そのような塩の例は、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）とともに形成される酸添加塩や、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、メタンスルホン酸、およびポリガラクツロ酸といった有機酸とともに形成される塩を含むが、これらに限定されない。塩がモノ酸（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、またはアセテート）である場合、水素はジ酸（例えば硫酸水素塩またはコハク酸塩）を形成し、または二水素はトリ酸（例えばリン酸二水素塩またはクエン酸塩）を形成し、少なくとも一つのモル当量と通常は酸のモル過剰が使用される。しかし、硫酸塩、ヘミコハク酸塩、リン酸水素塩、またはリン酸塩といった塩が好まれる場合、適切で正確な酸の化学当量が通常、使用される。
【００２５】
「医薬的に活性な誘導体」は、患者への投与において、本明細書で開示する活性を直接的または間接的に提供し得るあらゆる化合物を意味する。
【００２６】
式Ｉの化合物は、単独で、または例えばＬ−ＤＯＰＡといったさらなる医薬品と併用して使用され得る。
【００２７】
本発明の化合物は、以下の一般的な方法および手順を使用して、容易に入手され得る出発物質から調製され得る。一般的または好ましい実験条件（すなわち、反応温度、時間、試薬のモル、溶媒、その他）が与えられるが、特に明記しない限り他の実験条件も使用され得ると認識されるだろう。最適反応条件は、使用する特定の反応物または溶媒によって変化し得るが、そのような条件は、ルーチンの最適化手順によって当業者により決定され得る。
【００２８】
医薬品として使用される場合、本発明の化合物は、医薬組成物の形で一般的に投与される。したがって、化学式（Ｉ）の化合物および医薬的に許容され得るキャリヤを含む医薬組成物は、したがって、希釈剤または賦形剤もまた本発明の範囲内である。そのような組成物は、製薬技術でよく知られている方法で調製され得る、そして少なくとも一つの活性化合物を含む。当業者は、医薬組成物を形成するのに適したそのようなキャリヤ化合物、希釈剤化合物、または賦形剤化合物のすべての種類を認識している。
【００２９】
本発明の化合物は、従来通り使用されるアジュバント、キャリヤ、希釈剤、または賦形剤とともに、医薬組成物およびその単位用量の形に入れられ得る、そしてそのような形は、経口投与のための全ての、例えばタブレットまたは充填カプセルといった固体として、あるいは例えば溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシル剤、またはそれらを充填したカプセルといった液体として、または非経口（皮下投与を含む）のための無菌の注射剤の形にて使用され得る。そのような医薬組成物およびその単位剤形は、従来の割合で成分を含み、さらなる活性化合物または有効成分を含むまたは含まず、そしてそのような単位剤形は、使用目的の１日の用量範囲に相応した、有効成分のあらゆる適切な有効量を含み得る。
【００３０】
通常、本発明の化合物は、「医薬的な有効量」で投与される。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、薬の組合せ、年齢、体重、各患者の反応、患者の症状の重症度などを含む関連状況を考慮して、通常医師によって決定されるであろう。通常、有効量は０．０１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、そして好ましくは０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇである。組成物は、単独で患者に投与され得る、あるいは他の化学物質、薬剤、またはホルモンと併用して投与され得る。あらゆる化合物では、治療的な有効量は、細胞培養アッセイにおいて、あるいは通常、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、またはブタの動物モデルにおいて、最初に推定され得る。
【００３１】
動物モデルは、適切な濃度範囲と投与経路を決定するためにも使用され得る。次に、そのような情報は、ヒトにおける有用な用量および投与経路を決定するのに使用され得る。ヒト相当用量（ＨＥＤ）を計算する際に、ＦＤＡから入手可能なＧｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｒｅｖｉｅｗｅｒｓ（工業とレビュアーのためのガイダンス）文書でＦＤＡによって提供される換算表を使用することが推奨される。本発明の医薬組成物は、経口、直腸、舌下、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内、および外科手術後の病変組織の局所を含む様々な経路によって投与され得る。
【００３２】
化合物送達の使用経路に従い、化合物は、非経口用組成物、局所用組成物、または経口用組成物として好適に形成される。経口投与のための組成物は、バルク液体溶液、バルク液体懸濁液、またはバルク粉末の形をとり得る。しかし、より一般には、組成物は、正確な投薬を容易にするために単位剤形として存在する。「単位剤形」という用語は、被験者や他の哺乳類のために単位用量として適した物理的に個別の単位を意味し、各単位は、適当な医薬賦形剤に関連して、好ましい治療効果を生じさせるために計算されたあらかじめ定量された活性成分量を含む。一般的な単位剤形は、液体組成物では詰め替えの測定済みのアンプルまたは注射器、あるいは固体組成物の場合では錠剤、タブレット、カプセルなどを含む。そのような組成物では、本発明の化合物は、通常、マイナー成分（約０．１から約５０重量％、または好ましくは約１から約４０重量％）であり、残りは様々なビヒクルまたはキャリヤ、および好ましい投薬形を形成するのを支援する加工助剤である。
【００３３】
投薬治療は、単回投与計画または複数回投与計画であり得る。経口投与に適した液状形は、バッファー機能を有する適切な水性または非水性のビヒクル、懸濁化剤、分配剤（dispensing agents）、着色剤、香味料などを含み得る。
【００３４】
固体形は、例えば、あらゆる以下の成分、または類似した性質の化合物を含み得る：例えば微結晶セルロース、アカシア、トラガカントゴム、ゼラチン、またはポリビニルピロリドンといった結合剤；例えば澱粉またはラクトースといった賦形剤、例えばアルギン酸、プリモゲル（ｐｒｉｍｏｇｅｌ）ジャガイモ澱粉、またはトウモロコシ澱粉といった崩壊剤；例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、またはシリカといった潤滑剤；例えばコロイド状二酸化ケイ素といった滑剤；例えば蔗糖またはサッカリンといった甘味料；あるいは、例えばペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香味料といった香味剤。タブレットは、医薬品業務の当業者によく知られている方法に従ってコーティングされ得る。
【００３５】
非経口組成物は、通常、注射可能な無菌食塩水、またはリン酸緩衝生理食塩水、または当技術分野に知られている他の注射可能なキャリヤに基づく。上記で述べたように、そのような組成物中の式Ｉの化合物は、通常、約０．０５から約１０重量％の範囲内であることが多いマイナー成分であり、その残りは注射可能なキャリヤなどである。
【００３６】
また、本発明の化合物は、徐放の形で、または徐放性の薬物送達システムから、投与され得る。代表的な徐放材料についての説明は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに組み込まれた材料においても見つけられ得る。
【００３７】
経口投与組成物または非経口投与組成物に関する上記の成分は、単に代表的なものにすぎない。さらなる材料とともに加工技術などは、「Ｐａｒｔ  ５  ｏｆ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ」に述べられており、それを参照として本明細書に組み込む。
【００３８】
本発明のさらなる実施形態は、一またはそれ以上の式（Ｉ）の化合物を、適した賦形剤、安定剤、および／または医薬的に許容され得る希釈剤と混合することを特徴とする医薬組成物の製造方法についてである。
【００３９】
上記で開示したように、本発明の化合物は、それらのＡ２ａ調節特性のため、Ａ２ａ調節が患者の健康を改善する疾患の治療のための薬剤として有用である。特に、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、ウィルソン病、精神障害、ハレルフォルデン・スパッツ病、進行性淡蒼球変性症、および糖尿病を患っている患者を治療できる。
【００４０】
本発明の目的は、先に述べたように、賦形剤および／または医薬的に許容され得る希釈剤と組合せた、式Ｉの化合物を含む医薬組成物についてである。
【００４１】
本発明のさらなる実施形態は、上記で定義したような式Ｉの化合物の製造方法である。本発明の化合物は、従来の合成方法によって製造され得る、そして以下に説明する。
【００４２】
方法Ａ
化学式（Ｉ）
[式中；
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、式
【化４】
0005648044.tif 000005
の基であり；式中、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、およびＲ９は、Ｈであり；
Ｒ６およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨまたは水酸基であり、それらの少なくとも１つは水酸基であり；
ｍおよびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｎは、１または２であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４である；
Ｒ３は、ＮＨ２、ＮＨＲ１０である；式中、
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシアルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アミノ基は１または２のＣ１−Ｃ３アルキル基で任意に置換され、前記アルキル基は直鎖状または分枝状である；Ｃ６−Ｃ１４アリールまたはＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和のアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルで一または二置換されるアミノからなる群から選択される、同一であるか異なる１以上の置換基により任意に置換されている］
の化合物は、
温度範囲０℃から室温で、例えばＴＨＦまたはＮＭＰといった非プロトン性溶媒中にＦｅ（ａｃａｃ）３存在において、
式ＩＩ
【化５】
0005648044.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ１１は、Ｎ（Ｒ１３）２であり；
Ｒ１３は、ベンジル、ｐ−（ＭｅＯ）−ベンジル、ｐ−（Ｃｌ）−ベンジル、またはｐ−（Ｂｒ）−ベンジルであり；
Ｒ１２は、Ｃｌである］の化合物と、
化学式ＩＩＩ
【化６】
0005648044.tif 000007
［式中、
Ｘは、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、およびＲ９は、Ｈであり；
Ｒ６ａとＲ８ａは、いずれの発生においても、独立してＯＨまたはＨであり、それらの少なくとも１つはＯＨであり；
ｍおよびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｎは、１または２であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４である］の化合物との反応を含む方法により合成され得る。
【００４３】
方法Ｂ
化学式Ｉ
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、式
【化７】
0005648044.tif 000008
の基であり；式中、
Ｒ４およびＲ５は、Ｈであり；
Ｒ６およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨまたはカルボニルを意味する＝Ｏであり；Ｒ６およびＲ８の少なくとも１つは、カルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ７およびＲ９は、いずれの発生においても、独立してＨであるか、または前記Ｒ６基または前記Ｒ８基と結合する関連炭素原子がカルボニル結合に関与する場合には非存在であり；
ｍおよびｐは、独立して０と２に含まれる整数であり；
ｎは、１または２であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４である；
Ｒ３は、ＮＨ２、ＮＨＲ１０である；式中、
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシアルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アミノ基は１または２のＣ１−Ｃ３アルキル基で任意に置換され、前記アルキル基は直鎖状または分枝状である；Ｃ６−Ｃ１４アリールまたはＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和のアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルで一または二置換されるアミノから構成される群から選択される、同一であるか異なる１以上の置換基により任意に置換されている］の化合物は、
温度範囲０℃から室温で、例えばＴＨＦまたはＮＭＰといった非プロトン性溶媒中にＦｅ（ａｃａｃ）３存在下において、
上記で定義したように、式ＩＩの化合物と、
化学式ＩＶ
【化８】
0005648044.tif 000009
［式中
Ｘは、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、いずれの発生においても、独立して両方がＨであるか、あるいはそれらが結合する炭素原子とともにまとまる場合、２以上のメチル基によって任意に置換された１，３−ジオキサン基を形成し、少なくとも１の発生は、２以上のメチル基によって置換された１，３−ジオキサン基であり；
ｑは、０と３の間に含まれる整数であり；
ｒおよびｓは、独立して１と３の間に含まれる整数であり；そして
ｑ＋ｒ＋ｓ＞４である］
の化合物との反応を含む方法により合成され得る。
【００４４】
方法Ｃ
式Ｉ
［式中
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、式
【化９】
0005648044.tif 000010
の基であり；式中
Ｒ４は、ヒドロキシル基、またはカルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ５は、Ｈであるか、またはＲ４がカルボニルを意味する＝Ｏである場合には非存在であり；
Ｒ６およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨ、ヒドロキシル基、またはカルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ７およびＲ９は、いずれの発生においても、独立してＨであるか、または前記Ｒ６基および前記Ｒ８基と結合する関連炭素原子がカルボニル結合に関与する場合には非存在であり；
ｎは、１であり；
ｍおよびｐは、１と２の間で含まれる独立した整数であり、そしてｍ＋ｐ＞３である；
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシアルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、そこで該アミノ基は１または２のＣ１−Ｃ３アルキル基で任意に置換され、前記アルキル基は直鎖状または分枝状である；Ｃ６−Ｃ１４アリールまたはＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、そのアリール基は１以上の置換基により任意に置換され、その置換基は同一であるか異なる、その置換基はハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和のアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルで一または二置換されるアミノからなる群から選択される］の化合物は、
以下の工程を含む方法により合成され得る：
温度範囲−７８℃から室温で、例えばＴＨＦといった非プロトン性溶媒中における、
ａ）式Ｖ
【化１０】
0005648044.tif 000011
［式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルである］
の化合物と、ｉ−ＰｒＭｇＣｌとの反応；
ｂ）式ＶＩの化合物のｉｎ  ｓｉｔｕ添加
【化１１】
0005648044.tif 000012
式中、
Ｒ６ｄおよびＲ７ｄは、いずれの発生においても、独立してＨまたはＯＨであり、それらの少なくとも１つはＨであり；あるいは、
Ｒ６ｄおよびＲ７ｄは、それらが結合する炭素原子とともにまとまる場合、２以上のメチル基によって任意に置換される１，３−ジオキサン基を形成し；
Ｒ８ｄは、Ｈまたはヒドロキシル基であり；
ｓおよびｔは、１と２の間に含まれる独立した整数であり、そしてｓ＋ｔ＞３である］。
【００４５】
方法Ｄ
式（Ｉ）
［式中、
Ｒ１＝は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、
式
【化１２】
0005648044.tif 000013
（式中、
Ｒ４およびＲ５は、Ｈであり；
Ｒ６およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨ、ヒドロキシル基、またはカルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ７およびＲ９は、いずれの発生においても、独立してＨである、または前記Ｒ６基および前記Ｒ８基と結合する関連炭素原子がカルボニル結合に関与する場合には非存在であり； 
ｍおよびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｎ＝２であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４である）の基である；
Ｒ３はＮＨ２、ＮＨＲ１０であり；式中、
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシアルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アミノ基は１または２のＣ１−Ｃ３アルキル基で任意に置換され、前記アルキル基は直鎖状または分枝状であり；Ｃ６−Ｃ１４アリールまたはＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和のアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルで一または二置換されるアミノからなる群から選択される、同一であるか異なる１以上の置換基により任意に置換される］の化合物は、温度範囲０℃から室温で、例えばジオキサンといった極性溶媒中でビス−トリフェニルホスフィン・パラジウム・ジクロリド、ＣｕＩ、および任意に例えばトリエチルアミンといった第三アミンの存在下における、
式ＶＩＩ
【化１３】
0005648044.tif 000014
［式中、
Ｒ１＝は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルである］の化合物と、
式ＶＩＩＩ
【化１４】
0005648044.tif 000015
［式中、Ｒ６は、いずれの発生においても、独立してＨまたはＯＨであり、
ｕは、２または２よりも大きい整数である］の化合物との反応を含む方法により合成され得る。
【００４６】
方法Ｅ
化学式（Ｉ）
［式中、
Ｒ１＝は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、
式
【化１５】
0005648044.tif 000016
（式中、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨ、ヒドロキシル基、またはカルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ５、Ｒ７、およびＲ９は、いずれの発生においても、独立してＨであるか、あるいは前記Ｒ４基、前記Ｒ６基、および前記Ｒ８基と結合する関連炭素原子がカルボニル結合に関与する場合には非存在であり；
ｍ、ｎ、およびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｎ＝は、２であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４である）の基であり；
Ｒ３はＮＨ２、ＮＨＲ１０である；
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシアルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アミノ基は１または２のＣ１−Ｃ３アルキル基で任意に置換され、前記アルキル基は直鎖状または分枝状である；Ｃ６−Ｃ１４アリールまたはＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和のアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルで一または二置換されるアミノからなる群から選択される、同一であるか異なる１以上の置換基により任意に置換される］の化合物は、例えばＮＭＰといった極性溶媒中にヘルマン触媒（Ｈｅｒｍａｎｎ’ｓ  ｃａｔａｌｙｓｔ）およびナトリウムアセタートの存在下において、
上記で述べたように式ＩＩの化合物と、
化学式ＩＸ
【化１６】
0005648044.tif 000017
［式中、
Ｒ１４は、各発生において、独立してＨまたはＯＨであり；
Ｒ１５は、ＨまたはＯＨであり；
ｖ＞２である］の化合物との反応を含む方法により合成され得る。
【００４７】
方法Ｆ
式（Ｉ）
［式中、
Ｒ１＝は、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルであり；
Ｒ２は、式
【化１７】
0005648044.tif 000018
（式中、Ｒ４およびＲ５は、Ｈであり；
Ｒ６およびＲ８は、いずれの発生においても、独立してＨ、ヒドロキシル基、またはカルボニルを意味する＝Ｏであり；
Ｒ７およびＲ９は、いずれの発生においても、独立してＨまたは非存在であり； 
ｍおよびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｎ＞１であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４である）の基であり；
Ｒ３はＮＨ２、ＮＨＲ１０である；式中、
Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシアルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アミノ基は１または２のＣ１−Ｃ３アルキル基で任意に置換され、前記アルキル基は直鎖状または分枝状であり；Ｃ６−Ｃ１４アリールまたはＣ６−Ｃ１４アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ここで前記アリール基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状の飽和または不飽和のアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６の直鎖状または分枝状のアルキルで一または二置換されるアミノからなる群から選択される、同一であるか異なる１以上の置換基により任意に置換されている］の化合物は、
例えばＴＨＦといった極性溶媒中において
上記で述べたように式ＶＩＩの化合物と、化学式Ｘ
【化１８】
0005648044.tif 000019
［式中、
Ｒ４およびＲ５は、Ｈであり；
Ｒ６ｄおよびＲ７ｄは、いずれの発生においても、独立してＨまたはＯＨであり、それらの少なくとも１はＨであり；あるいは、
Ｒ６ｄおよびＲ７ｄは、それらが結合する炭素原子とともにまとまる場合、２以上のメチル基によって任意に置換される１，３−ジオキサン基を形成し；
Ｒ８は、いずれの発生においても、独立してＨまたはヒドロキシル基であり；
Ｒ９は、Ｈであり；
ｍおよびｐは、独立して０と２の間に含まれる整数であり；
ｎ＞１であり；
ｍ＋ｎ＋ｐ＞４である］の化合物との反応を含む方法により合成されうる。
【００４８】
すべての前記変換においては、有機化学で述べられ、そして当業者によく知られているよく確立された手順（例えば以下を参照：Ｇｒｅｅｎｅ  Ｔ．Ｗ．ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（有機合成における保護基），Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，３ｒｄ  Ｅｄ．，  １９９９）に従って、あらゆる阻害的な反応基は保護され得る、そして脱保護される。
【００４９】
実施例
略語：
ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル
ａｔｍ：気圧
ｂｓ：ブロード・シングレット
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ変法イーグル培地
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＦＢＳ：ウシ胎仔血清
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭｇＣｌ２：二塩化マグネシウム
ＭＳ：質量スペクトル
Ｎａ２ＳＯ４：硫酸ナトリウム
ＮＥｔ３：トリエチルアミン
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリジノン
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＰＣＣ：ピリジニウムクロロクロマート
ＲＰＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィー
Ｒｔ：保持時間
ＲＴ：室温
ＴｆＯＨ：トリフルオロメタンスルホン酸
概論：１Ｈスペクトルは、記述の通りにＣＤＣｌ３溶液中またはＤＭＳＯ−ｄ６溶液中で、Ｂｒｕｋｅｒ製機器で２００ＭＨｚで記録された。化学シフト値はｐｐｍで表し、結合定数はＨｚで表す。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ  ２３０〜４００ｍｅｓｈ）を使用して行った。
【００５０】
キラルクロマトグラフィーは、Ｖｉｓ−ＵＶ  ＳＰＤ  １０Ａ  Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ｄｅｔｅｃｔｏｒとＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｃ−Ｒ６Ａ  ｃｈｒｏｍａｔｏｐａｋ  ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒに接続した、ＨＰＬＣ  Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−１０ＡＳ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈを使用して行った。固定相は、直径０．４６ｃｍで長さ２５ｃｍのＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ｃｏｌｕｍｎ、Ｄａｉｃｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｃｈｉｒａｌ  Ｆｒａｎｃｅ）［アミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）でコーティングされた５ｍｍのシリカゲル］から成った。移動相は、ｎ−ヘキサン／２−プロパノール：９／１で構成され、流速は１ｍｌ／分に等しく、λ２８９ｎｍであった。
【００５１】
実施例１
４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（ＳＴ４０２３）
工程Ａ：４−（６−クロロ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−１−オール
ＮＥｔ３（４．９ｍｌ、３４．５ｍｍｏｌ）と３−ブチン−１−オール（１．１ｍｌ、２５．６３ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（９３ｍｌ）中に６−クロロ−２−ヨード−９−メチル−９Ｈ−プリン（６．８ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４５４ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、およびビス−トリフェニルホスフィン・パラジウム・ジクロリド（８１１ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を含む溶液に添加した。反応混合物を、ＲＴで１時間にわたり撹拌した。溶媒を、減圧下で除去した。水（５０ｍｌ）を、得られた暗色の残留物に添加した。水相を、ＤＣＭ（３Ｘ１００ｍｌ）で抽出した。複合有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９４／６）により精製して、灰色の沈殿物を得た。
収率７７％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．６７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．８２Ｈｚ）、３．６８（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．８２Ｈｚ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、５．０１（ｂｓ、１Ｈ）、８．６８（ｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２３．３３、３０．６３、５９．６２、８０．５５、８８．１１、１３０．４２、１４４．７３、１４８．８６、１４９．２８、１５２．７９
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２３７〜２３９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５２】
工程Ｂ：４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−１−オール
ジオキサン（４ｍｌ）中の４−（６−クロロ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−１−オール（６５０ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、３０重量％のアンモニア水溶液（８ｍｌ）を添加した。反応混合物を、７０℃のオートクレーブ内にて一晩にわたり撹拌した。溶液を、アンモニアを除去するために、５０℃で大気圧下で濃縮した。反応混合物を、２時間ＲＴに維持し、そして白色の沈殿物を得た。その固体を、真空下でろ過し、乾燥させた。
収率７８％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．５２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．８２Ｈｚ）、３．５８（ｄｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．８２Ｈｚ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、３．６８（ｓ、３Ｈ）、４．９０（ｔ、１Ｈ、Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、７．２５（ｂｓ、２Ｈ）、８．０９（ｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２３．２４、２９．８４、５９．９５、８２．２３、８３．４６、１１８．５１、１４２．５８、１４６．０１、１５０．３８、１５６．０５
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２１８（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５３】
工程Ｃ：４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール
エタノール（３０ｍｌ）中の４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−１−オール（１．５ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）の溶液に、黒鉛上１０％のパラジウム（１．３５ｇ、重量の２０％）を添加した。混合物を、４気圧の水素下で５０℃のオートクレーブ内にて１６時間にわたり撹拌した。触媒を、セライトの小さなパッドを通してろ過し、そして得られた溶液を、減圧下に濃縮し、さらなる精製なしに以下の反応に使用される残留物を得た。
収率７０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．４９（ｍ、２Ｈ）、１．７０（ｍ、２Ｈ）、２．５５（ｔ、２Ｈ）、３．３９（ｍ、２Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、４．３４（ｂｓ、１Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７，９７（ｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２５．５４、２９．６８、３２．８５、３９．０４、６１．０９、１１７．３９、１４１．３３、１５１．０４、１５６．０５、１６４．９３
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２２２．０（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５４】
工程Ｄ：４−（６−アミノ−８−ブロモ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール
−１４℃で、臭素（０．４ｍｌ、６．８ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（５ｍｌ）とアセテート・バッファーｐＨ４（２．５ｍｌ）（１００ｍｌの水に、４ｇのナトリウムアセテートを溶かし、氷酢酸でｐＨ４に調整して得られる）の混合物に溶解した４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（２５０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）に、滴下状に添加した。反応物を、この温度で１０分間にわたり撹拌し、次にＲＴで１５分間にわたり撹拌した。過剰な臭素を、メタ重亜硫酸ナトリウムで除去し、そして反応物を、Ｎａ２ＣＯ３飽和溶液を添加することによりｐＨ８にした。水相を、ＤＣＭ（６Ｘ１０）で抽出した。有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、さらなる精製なしで以下の反応に使用される残留物が得られた。
【００５５】
工程Ｅ：  ４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（ＳＴ４０２３）
無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中に４−（６−アミノ−８−ブロモ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（１．４ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（５．９ｇ、１８．２４ｍｍｏｌ）を添加して、次に、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．２ｇ、１．０ｍｌ、１７．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、９０℃で一晩にわたり撹拌した。溶媒を、減圧下で濃縮し、得られた残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９３／７）により精製した。
収率３０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．４６（ｍ、２Ｈ）、１．７３（ｍ、２Ｈ）、２．６７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、３．３８（ｍ、２Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）、４．３８（ｂｓ、１Ｈ）、７．３８（ｓ、２Ｈ）、８，３１（ｓ、２Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２５．４３、３０．６５、３２．８０、３９．１５、６１．０４、１１４．９２、１３８．０６、１４１．４２、１５１．１４、１５６．１７、１６６．１７
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２８９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５６】
実施例２
４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール（ＳＴ３９３２）
工程Ａ：４−（６−クロロ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−２−オール
ジオキサン（９３ｍｌ）中に６−クロロ−２−ヨード−９−メチル−９Ｈ−プリン（６．８ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４５４ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、およびビス−トリフェニルホスフィン・パラジウム・ジクロリド（８１１ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を含む溶液に、トリエチルアミン（４．９ｍｌ、３４．５ｍｍｏｌ）と３−ブチン−２−オール（１．１ｍｌ、２５．６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、ＲＴで１時間にわたり撹拌した。揮発成分を、減圧下で除去した。水（５０ｍｌ）を、得られた暗色の残留物に添加した。水相を、ＤＣＭ（３Ｘ１００ｍｌ）で抽出した。複合有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。複合有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９４／６）により精製した。
収率７７％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．６２（ｄ、３Ｈ、Ｊ＝６．６７Ｈｚ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、４．８１（ｑ、１Ｈ、Ｊ＝６．６４）、８．１７（ｂｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：２３．５２、２９．７２、５７．３１、８１．４１、８９．９４、１３０．５９、１４４．７５、１４８．２０、１４９．２１、１５２．６５。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２３７−２３９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５７】
工程Ｂ：４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−２−オール
ジオキサン（３０ｍｌ）中に４−（６−クロロ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−２−オール（４．８ｇ、２０．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、３０重量％のアンモニア水溶液（６０ｍｌ）を添加した。反応混合物を、７０℃のオートクレーブ内にて一晩にわたり撹拌した。溶液を、５０℃で大気圧下で濃縮して、次に減圧下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９７／３）により精製した。
収率７８％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．４２（ｄ、３Ｈ、Ｊ＝６．６７Ｈｚ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）、４．６１（ｑ、１Ｈ）、５．７１（ｂｓ、１Ｈ）、７．４２（ｂｓ、２Ｈ）、８．１７（ｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２４．７５、２９．８９、５６．８３、８３．１４、８７．６３、１３０．０１、１４２．７４、１４５．６５、１５０．２８、１５６．０７
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２１８（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５８】
工程Ｃ：４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール
エタノール（３０ｍｌ）とともに４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）３−ブチン−２−オール（１．５ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）をオートクレーブ内に置き、黒鉛上１０％のパラジウム（０．３５０  ｇ、重量の２０％）を添加した。混合物を、５０℃で４気圧の水素下で一晩にわたり撹拌した。触媒を、セライトを通してろ過して除去し、そして得られた溶液を、減圧下で濃縮し、さらなる精製なしで使用される残留物を得た。
収率７０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１．２１（ｄ、３Ｈ、Ｊ＝６．３２  Ｈｚ）、１．９（ｍ、２Ｈ）、２．８５（ｍ、２Ｈ）、３．３５（ｂｓ、２Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８９（ｍ、１Ｈ）、８．００（ｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：２２．０１、２８．７２、３４．９７、３７．７２、６６．８９、１１６．５９、１４１．５４、１５０．３７、１５５．５６、１６５．４２
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２２２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００５９】
工程Ｄ：４−（６−アミノ−８−ブロモ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール
−１４℃で、臭素（２．１ｍｌ、４１ｍｍｏｌ）は、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ（２０ｍｌ、１／１）とアセテート・バッファーｐＨ＝４（１０ｍｌ）の混合物中に４−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール（８００ｍｇ、３．６０ｍｍｏｌ）の水溶液に、滴下状に添加した。後者のバッファーを、１００ｍｌの水に、４ｇのナトリウムアセテートを溶かし、氷酢酸を添加することによりｐＨ４に調整して得た。反応物を、この温度で１０分間にわたり撹拌し、次にＲＴで１５分間にわたり撹拌した。過剰な臭素を、メタ重亜硫酸ナトリウムで除去し、そして反応物を、Ｎａ２ＣＯ３飽和溶液を添加することによりｐＨ８とした。有機相を、減圧下で濃縮し、そして得られたろ過済みの固体を、いかなるさらなる精製をぜずに使用した。
収率７６％。
【００６０】
工程Ｅ：  ４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール（ＳＴ３９３２）
無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中に４−（６−アミノ−８−ブロモ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール（１．４ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣｓＣＯ３（５．９ｇ、１８．２４ｍｍｏｌ）と１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．２ｇ、１．０ｍｌ、１８．２４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、９０℃で一晩にわたり撹拌した。溶媒を、減圧下で濃縮し、得られた残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９３／７）により精製した。
収率２７％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．０９（ｄ、３Ｈ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、１．７８（ｍ、２Ｈ）、２．７２（ｍ、２Ｈ）、３．６６（ｍ、１Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）、４．４５（ｂｓ、１Ｈ）、７．３２（ｂｓ、２Ｈ）、８．２９（ｓ、２Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２４．０、３０．６、３５．９、３８．５、６６．２、１１４．９、１３８．０、１４１．４、１５１．２、１５６．２、１６６．４
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：２８９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６１】
実施例３
（Ｓ）−４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール（ＳＴ５７４８）
この化合物は、実施例２で述べた手順に従って調製され、工程１では、（Ｓ）−（−）−３−ブチン−２−オールを使用し、そのラセミ体は使用しなかった。工程Ｅでは、粗反応混合物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５／５）により精製した。
ＨＰＬＣ：ｒｔ：２９ｍｎ
【００６２】
実施例４
（Ｒ）−４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−２−オール（ＳＴ５７４９）
この化合物は、実施例２で述べた手順に従って調製され、工程１では、（Ｒ）−（−）−３−ブチン−２−オールを使用し、そのラセミ体は使用しなかった。工程Ｅでは、粗反応混合物を、最初にフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５／５）により精製した。
ＨＰＬＣ：ｒｔ：２６ｍｎ
【００６３】
実施例５
１−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（ＳＴ３８２９）
工程Ａ：１−（６−クロロ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール
窒素雰囲気下で−７８℃において、無水ＴＨＦ（４８ｍｌ）中に６−クロロ−２−ヨード−９−メチル−９Ｈ−プリン（３．７ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、イソプロピルマグネシウムクロリド（８ｍｌ、１５．１２ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後に、ブチルアルデヒド（１．７ｍｌ、１６．３８ｍｍｏｌ）を、−７８℃において、滴下状に添加した。反応混合物を、−７８℃で８時間にわたり撹拌し、次に一晩にわたりＲＴに昇温させた。反応を、ＮＨ４Ｃｌ飽和溶液で停止した。水相を、ＤＣＭで抽出した（３回）。有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（濃度勾配ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９８／２からＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９６／４）により精製した。
収率５９％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：０．９６（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．３４）、１．４５（ｍ、２Ｈ）、１．８６（ｍ、２Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、４．８３（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝６．５）、８．４７（ｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１２．８５、１８．４１、２９．２２、３８．９０、７３．８０、１２９．１３、１４７．４６、１４９．６、１５２．５３、１６６．２７。
ＭＳ（ＥＳＩ＋）：２４１〜２４３（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６４】
工程Ｂ：１−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール
ジオキサン（１０ｍｌ）中に１−（６−クロロ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（１．８ｇ、７．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、３０重量％のアンモニア水溶液（２０ｍｌ）を添加した。反応混合物を、７０℃のオートクレーブ内にて一晩にわたり撹拌した。溶液を、５０℃で大気圧下で濃縮して、次に減圧下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５／５）により精製した。
収率８０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：０．９３（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．０６）、１．４０（ｍ、２Ｈ）、１．７８（ｍ、２Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）、４．４８（ｍ、１Ｈ）、４．８４（ｄ、１Ｈ）、７．３１（ｓ、２Ｈ）、８．１２（ｓ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：  １４．９５、１９．３７、３０．２９、３９．９９、７３．８６、１１８．３５、１４２．３３、１５１．１８、１５６．５２、１６６．４３。
ＭＳ（ＥＳＩ＋）：２２２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６５】
工程Ｃ：１−（６−アミノ−８−ブロモ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール
−１４℃で、臭素（３．６ｍｌ、７０．４ｍｍｏｌ）は、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ（２０ｍｌ、１／１）、ＴＨＦ（２０ｍｌ）、およびアセテート・バッファーｐＨ４（２０ｍｌ）（１００ｍｌの水に、４ｇのナトリウムアセテートを溶かし、氷酢酸でｐＨ  ４に調整して得られる）の混合物中に１−（６−アミノ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（１７００ｍｇ、７．６９ｍｍｏｌ）が溶解したものに、滴下状に添加した。反応物を、この温度で１５分間にわたり撹拌し、次に、ＲＴで１０分間にわたり撹拌した。過剰な臭素を、メタ重亜硫酸ナトリウムで除去し、そして反応物を、Ｎａ２ＣＯ３飽和溶液を添加することによりｐＨ８とした。有機相を、減圧下で濃縮し、そして得られたろ過済みの固体を、さらなる精製なしで以下の反応に使用した。
収率８２％。
【００６６】
工程Ｄ：１−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（ＳＴ３８２９）
無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中に１−（６−アミノ−８−ブロモ−９−メチル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（１．４ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣｓＣＯ３（５．９ｇ、１８．２４ｍｍｏｌ）を添加し、次に１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（１．２ｇ、１．０ｍｌ、１８．２４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、９０℃で一晩にわたり撹拌した。溶媒を、減圧下で濃縮し、得られた残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９３／７）により精製した。
収率３０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：０．９２（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．１８）、１．４０（ｑ、２Ｈ、Ｊ  ＝  ８．２）、１．７５（ｍ、２Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、４．５０（ｍ、１Ｈ）、４．８８（ｄ、１Ｈ）、７．５８（ｂｓ、１Ｈ）、８．３７（ｓ、２Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１４．９４、１９．３７、３１．３４、３９．８８、７４．０６、１１５．９０、１３８．６３、１４２．２７、１５１．４２、１５６．６４、１６７．７２。
ＭＳ（ＥＳＩ＋）：２８９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６７】
実施例６
１−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−１−オン（ＳＴ４２０８）
ＲＴで、ＭｎＯ２（４３９ｍｇ、５．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４ｍｌ）中に１−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）ブタン−１−オール（５１ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。生じた不均一な溶液は、一晩にわたり撹拌した。セライト・パッドでろ過した後、溶媒を、減圧の下で除去し、そして目的の生成物を白色の粉として得られた。
収率４０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．４（ｓ、２Ｈ）、７．７（ｂｓ、２Ｈ）、３．９（ｓ、３Ｈ）、３．１４（ｔ、２Ｈ）、１．６６（ｍ、２Ｈ）、０．９５（ｔ、３Ｈ）
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７．１（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６８】
実施例７
４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−２−オン  ＳＴ４２０６
０℃で、モレキュラーシーブ４Å（１００ｍｇ）とＰＣＣ（５９ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）は、ＤＣＭ（１．２ｍｌ）中に４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−２−オール（２５ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を、ＲＴで１時間にわたり撹拌し、次に、０℃でＥｔ２Ｏで希釈し、そして３０分間にわたり撹拌した。生じた懸濁液を、セライト・パッドでろ過した。ろ過水を、真空下で濃縮し、そして残留物を、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭからＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５／５）により精製して、白色の粉を得た。
収率３７％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）δ：８．１（ｓ、２Ｈ）、５．９（ｂｓ、２Ｈ）、３．８（ｓ、３Ｈ）、３．０７（ｔ、２Ｈ）、２．９（ｔ、２Ｈ）、２．２（ｓ、３Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７．１（Ｍ＋Ｈ）＋
【００６９】
代わりとしては、４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−２−オンを、上記で述べたようにおよび下記で述べるように、方法Ｂに関する方法により得られる最終的な中間体から製造できる。
【００７０】
調製１
４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−２−オン（ＳＴ４２０６）
工程Ａ：ジベンジル−｛９−メチル−２−［２−（２，５，５−トリメチル−［１，３］ジオキサン−２−イル）−エチル］−９Ｈ−プリン−６−イル｝−アミン
ｉ）  不活性雰囲気（Ａｒ）中で、１，２−ジブロモエタン（７７０μｌ、８．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（７５ｍｌ）中にＭｇ（３．１ｇ、１２７．５ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。次に、ＴＨＦ（７５ｍｌ）中に２−（２−ブロモエチル）−２，５，５−トリメチル−１，３−ジオキサン（８．０ｍｌ、４２．５ｍｍｏｌ）と１，２−ジブロモエタン（３．０８ｍｌ、３６ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、そして発熱反応が終了した後、生じた反応混合物を、５０℃で１時間にわたり加熱した。
ｉｉ）  Ｆｅ（ａｃａｃ）３（３１５ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１１５ｍｌ）とＮＭＰ（２８．５ｍｌ）中にジベンジル−（２−クロロ−９−メチル−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン（３．２４ｇ、８．９ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、そして生じた反応混合物を、ＲＴで３０分間にわたり撹拌した。工程Ａ（ｉ）から得られた、調製したばかりの試薬１４０ｍｌを、反応混合物に添加し、そして１時間にわたり撹拌した。溶媒を、減圧下で除去し、そして粗反応混合物を、水中へ注ぎ、ＡｃＯＥｔにより抽出した。複合有機相を、塩水で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。減圧下で溶媒を除去した後、目的の付加物を、褐色の油として量的に得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８５（ｓ、３Ｈ）、１．００（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｓ、３Ｈ）、１．８９〜２．００（ｍ、２Ｈ）、２．８５〜２．９１（ｍ、２Ｈ）、３．４７〜３．６１（ｍ、４Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、４．９１（ｂｒｓ、２Ｈ）、５．４０（ｂｒｓ、２Ｈ）、７．２〜７．４（ｍ、１０Ｈ）、７．６６（ｓ、１Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８６（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７１】
工程Ｂ：ジベンジル−｛８−ブロモ−９−メチル−２−［２−（２，５，５−トリメチル−［１，３］ジオキサン−２−イル）−エチル］−９Ｈ−プリン−６−イル｝−アミン
０℃で、臭素（０．８９ｍｌ、１７．５ｍｍｏｌ）を、２０ｍｌのＭｅＯＨ／ＴＨＦ（１／１）混合物とアセテート・バッファーｐＨ＝４（１０ｍｌ）中にジベンジル−｛９−メチル−２−［２−（２，５，５−トリメチル−［１，３］ジオキサン−２−イル）−エチル］−９Ｈ−プリン−６−イル｝−アミン（１．７ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）の水溶液に、滴下状に添加した。後者のバッファーは、１００ｍｌの水に、４ｇのナトリウムアセテートを溶かし、氷酢酸を添加することによりｐＨ４に調整して得た。反応物を、ＲＴで２時間にわたり撹拌した。過剰な臭素は、メタ重亜硫酸ナトリウムで除去し、そして反応物を、Ｎａ２ＣＯ３飽和溶液を添加することによりｐＨ８とした。有機溶媒を、減圧下で濃縮し、そして得られたろ過済みの固体を、いかなるさらなる精製なしで以下の工程に使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８５（ｓ、３Ｈ）、１．００（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｓ、３Ｈ）、１．８９〜２．００（ｍ、２Ｈ）、２．８２〜２．８９（ｍ、２Ｈ）、３．４７〜３．６１（ｍ、４Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）、４．９１（ｂｓ、２Ｈ）、５．４０（ｂｓ、２Ｈ）、７．２０〜７．４０（ｍ、１０Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６４−５６６（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７２】
工程Ｃ：ジベンジル−｛９−メチル−８−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−２−［２−（２，５，５−トリメチル−［１，３］ジオキサン−２−イル）−エチル］−９Ｈ−プリン−６−イル｝−アミン
無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中にジベンジル−｛８−ブロモ−９−メチル−２−［２−（２，５，５−トリメチル−［１，３］ジオキサン−２−イル）−エチル］−９Ｈ−プリン−６−イル｝−アミン（１．９ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．７２ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を添加し、次に１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（３６２ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、１００℃で一晩にわたり撹拌した。溶媒を、減圧下で濃縮し、得られた残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：  ９３／７）により精製した。
収率３０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８５（ｓ、３Ｈ）、１．００（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｓ、３Ｈ）、１．８９〜２．００（ｍ、２Ｈ）、２．７９〜２．８３（ｍ、２Ｈ）、３．４７〜３．６１（ｍ、４Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）、４．９１（ｂｒｓ、２Ｈ）、５．４０（ｂｓ、２Ｈ）、７．２〜７．４（ｍ、１０Ｈ）、８．００（ｓ、２Ｈ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ：５５３（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７３】
工程Ｄ：  ４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−２−オン（ＳＴ４２０６）
工程Ｃから得られた中間体を、標準的なＴｆＯＨ条件を使用して脱保護し、このことによりシリカゲルクロマトグラフィーの後に目的の付加物を量的に得ることができた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）δ：８．１０（ｓ、２Ｈ）、５．９０（ｂｓ、２Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、３．０７（ｔ、２Ｈ）、２．９０（ｔ、２Ｈ）、２．２０（ｓ、３Ｈ）。
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８７（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７４】
代わりとしては、４−（６−アミノ−９−メチル−８［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル）−ブタン−２−オンを、上記で述べたようにおよび下記で述べるように、方法Ｅに関する方法により得られる最終的な中間体から製造できる。
【００７５】
調製２
ヘルマン触媒（８ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、０．０８ｅｑ）、Ｂｕ４ＮＢｒ（８ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、０．２５ｅｑ）、ＮａＯＡｃ（９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）、および３−ブテン−２−オール（１３μｌ、０．１５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を、ＮＭＰ（１ｍｌ）中に（２−クロロ−９−メチル−８−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−６−イル）−ビス−（４−メトキシ−ベンジル）−アミン（４９ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。生じた反応混合物を、１００℃で１６時間にわたり加熱し、そしてさらなるヘルマン触媒、Ｂｕ４ＮＢｒおよびＮａＯＡｃは同一の割合で、さらなる３ｅｑの３−ブテン−２−オールとともに添加した。ＲＴまで冷却する前に、１４０℃で２２時間にわたり撹拌を続けた。生じた粗懸濁液を、ＡｃＯＥｔで希釈して、そして固体を濾去した。有機相を、Ｈ２Ｏで洗浄して、次にＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。真空下で溶媒を除去し、分取薄層クロマトグラフィーによる精製により、目的の４−｛６−［ビス−（４−メトキシ−ベンジル）−アミノ］−９−メチル−８−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−９Ｈ−プリン−２−イル｝−ブタン−２−オンの白色固体を得ることができた。
収率４２％。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：２．１２（ｓ、３Ｈ）、２．９４（ｔ、２Ｈ）、３．１６（ｔ、２Ｈ）、３．７８（ｓ、６Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）、４．８５（ｂｓ、２Ｈ）、５．３９（ｂｓ、２Ｈ）、６．８２（ｄ、４Ｈ）、７．１８（ｄ、４Ｈ）、７．９４（ｓ、２Ｈ）。
【００７６】
生物学
本発明の化合物は、Ａ２ａ受容体を阻害するその能力に関して、競合結合アッセイにおいて検証された。
【００７７】
実施例８
Ａ２ａ受容体阻害
方法
ＨＥＫ２９３細胞培養と膜調製
安定してヒト・アデノシンＡ２ａ受容体遺伝子を発現するＨＥＫ２９３細胞（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ボストン、マサチューセッツ州、ＵＳＡ、ｃａｔ．  ＲＢＨＡ２ＡＣ）を、ファルコン・フラスコ内でＤＭＥＭ（Ｃａｍｂｒｅｘ、ベルビエ、ベルギー）中において、１０％ＦＢＳ（Ｃａｍｂｒｅｘ）、１ｍｍｏｌ／ｌのピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州、ＵＳＡ）、０．４ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加し、３７℃で５％ＣＯ２雰囲気で培養した。放射性リガンド結合実験に関して、細胞を、８０％コンフルーエンスで、２ｍｍｏｌ／ｌのＥＤＴＡを含む５ｍｍｏｌ／ｌのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ｐＨ  ７．４内に採取して、数を計測し、ＰＢＳ（Ｃａｍｂｒｅｘ）で洗浄して、５０ｍｍｏｌ／ｌのＴｒｉｓ-ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍｍｏｌ／ｌ、ＭｇＣｌ２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む培養用バッファーＡ中に再懸濁し、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ  Ｔ２５を使用してホモジナイズした。その膜を、遠心分離にかけて、再度ホモジナイズし、最終的なペレットを、使用するまで−８０℃で保存した。競合結合アッセイの前に、ペレットを、好ましいタンパク質濃度でバッファーＡ中に再懸濁し、そして膜懸濁液を、内在性アデノシンを除去するために、３７℃で３０分間にわたり、２Ｕ／ｍｌのアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）とともに培養した。
【００７８】
タンパク質濃度と競合結合アッセイ
膜懸濁液のタンパク質濃度は、標準としてウシ・アルブミンを用いるＢｒａｄｆｏｒｄ法（Ｐｉｅｒｃｅ、ロックフォード、イリノイ州、ＵＳＡ）を使用して定量された。競合結合実験は、９６ウェル・フィルター・プレート（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ  ｓｙｓｔｅｍ、ｃａｔ．  ＭＡＦＢＮ０Ｂ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビルリカ、マサチューセッツ州、ＵＳＡ）において、様々な濃度（範囲は１０−５から１０−１１  ｍｏｌ／ｌ）の検証化合物および参照化合物の存在下で、単一濃度のＡ２ａアンタゴニスト［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５（Ｂｉｏｔｒｅｎｄ、ケルン、ドイツ）（２ｎｍｏｌ／ｌ）とともに、膜（サンプル中５〜１０μｇのタンパク質）を培養することにより行い、培養は４℃で１時間にわたり、好適なバッファー（５０ｍｍｏｌ／ｌのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４、１０ｍｍｏｌ／ｌのＭｇＣｌ２）で２００μｌ／ウェルの全量であった。非特異的な結合は、１０μｍｏｌ／ｌのタグ無し（ｃｏｌｄ）ＺＭ２４１３８５（Ｔｏｃｒｉｓ、エリスヴィル、ミズーリ州、ＵＳＡ）の存在下で定量された。培養終了後、結合放射性リガンドと遊離放射性リガンドを、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅろ過装置（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎＨＴＳ  ｖａｃｕｕｍ  ｍａｎｉｆｏｌｄ）を使用して、９６ウェル・フィルター・プレートをろ過して分離した。次に、フィルター・プレートを、氷冷のバッファー（５０ｍｍｏｌ／ｌのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４）で数回洗浄し、そしてフィルターに結合している放射線を、３０μｌ／ウェルのＯｐｔｉＰｈａｓｅ  ＳｕｐｅｒＭｉｘ  ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）添加後にＭｉｃｒｏＢｅｔａ  ｃｏｕｎｔｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して測定した。４つの実験は、ＪＡＮＵＳR  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）により、三連で行った。
【００７９】
データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭ市販ソフトを使用して非線形回帰分析法により分析され、ＩＣ５０として表され、これは、［３Ｈ］ＺＭ２４１３８５結合の５０％を阻害する化合物の濃度と定義された。阻害結合定数（Ｋｉ）値は、Ｃｈｅｎｇ  ａｎｄ  Ｐｒｕｓｏｆｆの式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｃ］／Ｋｄ）に従いＩＣ５０値から計算され、そこで［Ｃ］は、放射性リガンド濃度であり、Ｋｄは、その解離定数である。
【００８０】
結果
すべての検証化合物は、Ａ２Ａ受容体結合アッセイにおいて高い活性があることを証明した（表１）。
【表１】
0005648044.tif 000020
【００８１】
実施例９
Ａ１受容体の阻害
方法
競合結合実験を、９６ウェル・フィルター・プレート（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ  ｓｙｓｔｅｍ、ｃａｔ  ＃  ＭＡＦＢＮ０Ｂ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビルリカ、マサチューセッツ州、ＵＳＡ）において、様々な濃度（範囲は１０−５から１０−１０  Ｍ）のタグ無しのＤＰＣＰＸ、ＳＴ４２０６、およびＳＴ４２０８の存在下で、単一濃度の［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ（１．７  ｎｍｏｌ／ｌ）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）とともに、ヒト・アデノシンＡ１受容体（ｃａｔ．ＥＳ−０１０−Ｍ４００ＵＡ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ボストン、マサチューセッツ州、ＵＳＡ）を安定して導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞からの膜を培養することにより行い、培養は２５℃で６０分間にわたり、２５ｍｍｏｌ／ｌのＨｅｐｅｓ、５ｍｍｏｌ／ｌのＭｇＣｌ２、１ｍｍｏｌ／ｌのＣａＣｌ２、１００ｍｍｏｌ／ｌのＮａＣｌ、ｐＨ７．４（すべてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）により２００μｌ／ウェルの全量であった。非特異的な結合を、２５０μｍｏｌ／ｌのタグ無しＤＰＣＰＸ（８−シクロペンチル−１，３−ジプロピルキサンチン、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の存在下で定量した。培養終了後、結合放射性リガンドと遊離放射性リガンドは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅろ過装置（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎＨＴＳ  ｖａｃｕｕｍ  ｍａｎｉｆｏｌｄ）を使用して、９６ウェル・フィルター・プレートをろ過することにより分離した。フィルター・プレートを、氷冷のバッファー（５０ｍｍｏｌ／ｌのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４）で数回洗浄し、そしてフィルターに結合している放射線を、３０μｌ／ウェルのＯｐｔｉＰｈａｓｅ  ＳｕｐｅｒＭｉｘ  ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）添加後にＭｉｃｒｏＢｅｔａ  ｃｏｕｎｔｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して測定した。
【００８２】
データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭ市販ソフトを使用して非線形回帰分析法により分析した。データを、対照値の半分の最大阻害を生じさせる検証化合物濃度（ＩＣ５０）として表す。阻害結合定数（Ｋｉ）値は、Ｃｈｅｎｇ  ａｎｄ  Ｐｒｕｓｏｆｆの式Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｃ］／Ｋｄ）に従い、ＩＣ５０値から計算される、ここで［Ｃ］は、放射性リガンド濃度であり、Ｋｄは、その解離定数である。
【００８３】
結果
検証化合物は、表２で報告するＫｉ値で、Ａ１アデノシン受容体と結合した。
【表２】
0005648044.tif 000021
【００８４】
ｃＡＭＰ阻害
本発明の化合物を、Ａ２Ａアゴニスト５’−Ｎ−エチルカルボキサミドアデノシン（ＮＥＣＡ）によって誘発されるｃＡＭＰ蓄積を阻害するその能力を評価するために検証した。
【００８５】
方法
ｃＡＭＰの定量を、メーカーの使用説明書に従い、酵素免疫測定装置（ｃａｔ．  ＲＰＮ２２５５、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行った。安定してヒト・アデノシンＡ２ａ受容体遺伝子を発現するＨＥＫ２９３細胞（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ボストン、マサチューセッツ州、ＵＳＡ、ｃａｔ．  ＲＢＨＡ２ＡＣ）を、ファルコン・フラスコ内でＤＭＥＭ（Ｃａｍｂｒｅｘ、ベルビエ、ベルギー）中において、１０％ＦＢＳ（Ｃａｍｂｒｅｘ）、１ｍｍｏｌ／ｌのピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州、ＵＳＡ）、および０．４ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で培養した。細胞を、検証化合物へ曝露する４８時間前に、１０３細胞／ウェルの濃度で、９６ウェル・プレートに固定した。化合物により細胞を刺激する前に、細胞を、０．５ｍｍｏｌ／ｌのホスホジエステラーゼ阻害剤Ｒｏ  ２０−１７２４（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）と２Ｕ／ｍｌのアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）により、３７℃で１０分間にわたり処理した。次に、その溶媒を、スカラー（ｓｃａｌａｒ）濃度（１０−１０〜１０−４  ｍｏｌ／ｌ）の検証化合物を含む３７℃の新しい溶媒と交換し、そして１０分後に、１００ｎｍｏｌ／ｌのＮＥＣＡを添加した。２０分後に、ｃＡＭＰを抽出して、定量した。
【００８６】
データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭ市販ソフトを使用して非線形回帰分析法により分析した。対照値の半分の最大阻害を生じさせる検証化合物濃度（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトにより計算されるＩＣ５０）を報告する（４つの独立した実験の平均値±ＳＥＭ）。
【００８７】
結果
すべての化合物は、アゴニストによって誘発されたｃＡＭＰ蓄積を阻害することに有効であり（表３）、予想通りＡ２ａ受容体アンタゴニストとしての挙動を示した。
【表３】
0005648044.tif 000022
【００８８】
実施例１１
本発明の化合物の選択性プロフィールを評価するために、本化合物の内３つ（ＳＴ３８２９、ＳＴ３９３２、およびＳＴ４０２３）を、５１個の異なる受容体のやり取りへのアフィニティーに関して特徴づけを行った。５１個のアッセイの大部分は、以下のタイプのヒトの組み換え型受容体であった：非ペプチド受容体ファミリーに属するアデノシン、アドレナリン、カンナビノイド、ドーパミン、ＧＡＢＡ、ヒスタミン、メラトニン、ムスカリン、プロスタノイド、およびセロトニンの受容体；ペプチド受容体ファミリーに属するアンギオテンシンＩＩ、ブラジキニン（ｂｒａｄｙｃｈｉｎｉｎ）、ケモカイン、コレシストキニン（ｃｈｏｌｅｃｉｓｔｏｋｉｎｉｎ）、エンドセリン、ガラニン、メラノコルチン（ｍｅｌａｃｏｒｔｉｎ）、ニューロキニン、ニューロペプチドＹ、ニューロテンシン、オピオイドとオピオイド様、ソマトスタチン、血管作動性腸ペプチド、およびバソプレシンの受容体；  イオンチャンネル・ファミリーに属するＣａ２＋チャンネル、Ｋ＋チャネル、およびＮａ＋チャネル、ならびにアミン輸送体受容体ファミリーに属するドーパミン、ノルエピネフリン、およびセロトニン。これらの３つの化合物を、１０μＭ濃度で検証した。興味深いことに、それらのどれもが、上記で述べた受容体のいずれに対しても、いかなる実質的なアフィニティーを示さなかった。
【００８９】
実施例１２
ハロペリドール誘発性カタレプシーのマウス・モデル
ＳＴ３８２９、ＳＴ３９３２、およびＳＴ４０２３を、マウスにおいてハロペリドールによって誘発されたカタレプシーに拮抗するその能力を評価するために検証した。
【００９０】
方法
ハロペリドール（２ｍｇ／ｋｇ）を、ＳＴ３９３２またはＳＴ４２０６の経口投与の２．５時間前に、ＣＤ１マウスに腹腔内投与した。後者は、１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。
【００９１】
次に、各ＣＤ１マウスを、４．５ｃｍの高さのワイヤー上に、その前足を静かに置いた。カタレプシーは、動物が少なくとも１つの前足を降ろすのに要する時間（秒で表される）として測定され、６０秒を終点とし、終点後には、マウスをワイヤーから静かに外した。次に、カタレプシーを、７時間にわたり６０分毎に記録した。
【００９２】
データ評価
すべてのデータを、個体値と平均値の両方として表し、秒でのカタレプシー時間の平均値プラスあるいはマイナス標準誤差（平均値±ＳＥＭ）で表した。統計解析は、ｓｉｇｍａ  ｓｔａｔプログラムを使用して行われた。７時間にわたるＡＵＣを計算した後、一元配置分散分析を使用し、次に、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を使用した。ベース時間は、統計学的に考慮されなかった、その理由としては、この時点は、カタレプシーがすべての動物においてうまく誘発されたことを確認することのみに使用されたためである。
【００９３】
結果
ＳＴ３９３２とＳＴ４２０６の両者は、ハロペリドールによって誘発されたカタレプシーに、用量依存的に有意に拮抗した（図１および図２）。
【００９４】
実施例１３
Ｌ−ＤＯＰＡ抗パーキンソン病活性の増強
抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ）麻酔下のラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）は、Ｋｏｐｆ定位固定装置に置かれた。６−ＯＨＤＡを、ステンレス製カニューレによって、Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｏアトラスに従って座標Ａ＝−２．２、Ｌ＝＋１．５、およびＶ＝−７．８で、左の内側前脳束に注射した。偽投与（ｓｈａｍ）ラットを含むすべてのラットは、ノルアドレナリン作用性ニューロンの損傷を防止するために、麻酔の１０分前に、デシプラミン（１０ｍｇ／ｋｇ）を投与された。
【００９５】
６−ＯＨＤＡ注射の２週間後に、すべての動物を、３０ｍｇ／ｋｇのベンセラジドの腹腔内投与とその３０分後に行った５０ｍｇ／ｋｇのＬ−ＤＯＰＡの腹腔内投与への反応における反対側回転能力について試験した。３時間の試験時間内に少なくとも２００の反対側回転を示さなかったラットを、研究から除外した。この試験の１週間後に、選ばれた動物は、３つの研究に供されるためにランダム化を受けた。各研究は、動物８匹の７群を含んだ。
【００９６】
検証化合物（ＳＴ３８２９、ＳＴ３９３２、およびＳＴ４２０６）を、３つの異なる剤形（すなわち、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇ）を得るために、滅菌水中に１０％の蔗糖および０．３％のＴｗｅｅｎ  ８０を含む溶液に溶解した。
【表４】
0005648044.tif 000023
【００９７】
群５、群６、および群７では、ベンセラジドは最初に投与され、次に、２５分後に検証化合物が投与され、最後に、５分後にＬ−ＤＯＰＡが投与された。
【００９８】
結果
パーキンソン病の６−ＯＨＤＡラット・モデルにおいて、アデノシンＡ２ａ受容体アンタゴニストは、Ｌ−ＤＯＰＡによって誘発された回転挙動を増加させ、抗パーキンソン病効果を示した。本研究において、Ｌ−ＤＯＰＡの閾値容量とともにラットに投与されたＳＴ３９３２およびＳＴ４２０６は、Ｌ−ＤＯＰＡによって誘発された反対側回転挙動を増加させ、顕著な抗パーキンソン病活性を示した。
【図１】
0005648044.tif 000029
【図２】
0005648044.tif 000030
【図３】
0005648044.tif 000031
【図４】
0005648044.tif 000032
【図５】
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