(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式２の構造を有することを特徴とする、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
0005781224.tif 000016
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、１である）。
【請求項２】
前記ペプチド誘導体が、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−ヒスチジン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−ヒスチジン−リシンであることを特徴とする、請求項１に記載のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩（前記において、「−」は、アミド結合を示す）。
【請求項３】
下記の化学式３の構造を有することを特徴とする、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩：
【化２】
0005781224.tif 000017
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、１である）。
【請求項４】
前記ペプチド誘導体が、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−ヒスチジン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−ヒスチジン−リシンであることを特徴とする、請求項３に記載のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩（前記において、「−」は、アミド結合を示す）。
【請求項５】
下記の化学式４の構造を有することを特徴とする、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩：
【化３】
0005781224.tif 000018
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、１である）。
【請求項６】
前記ペプチド誘導体が、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−ヒスチジン−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−ヒスチジン−リシンであることを特徴とする、請求項５に記載のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩（前記において、「−」は、アミド結合を示す）。
【請求項７】
下記の化学式５の構造を有することを特徴とする、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩：
【化４】
0005781224.tif 000019
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、１である）。
【請求項８】
前記ペプチド誘導体が、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−ヒスチジン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−ヒスチジン−リシンであることを特徴とする、請求項７に記載のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩（前記において、「−」は、アミド結合を示し、「（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン」は、リシンのＮ−末端と側鎖にそれぞれＮ−アルキル化されたリシンがアミド結合をなしているものを示し、「（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン」は、オルニチンのＮ−末端と側鎖にそれぞれＮ−アルキル化されたオルニチンがアミド結合をなしているものを示す）。
【請求項９】
請求項１ないし８のいずれか１項に記載のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩からなる群より選択された１種以上を含むことを特徴とする、保湿用化粧料組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、皮膚、頭皮または毛髪に適用されるものであることを特徴とする、請求項９に記載の保湿用化粧料組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、皮膚老化防止、シワ改善、または肌荒れ改善のためのものであることを特徴とする、請求項９に記載の保湿用化粧料組成物。
【請求項１２】
請求項１ないし８のいずれか１項に記載のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩からなる群より選択された１種以上を含むことを特徴とする、皮膚乾燥症の予防または治療用薬学組成物。
【請求項１３】
前記皮膚乾燥症が、肌荒れ、紅班、かゆみ症、乾癬またはアトピーであることを特徴とする、請求項１２に記載の薬学組成物。
【請求項１４】
下記の化学式１の構造を有することを特徴とする、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩：
【化５】
0005781224.tif 000020
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は、それぞれ同一または異なり、−Ｈ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、または下記の構造式を有するＷ基であり、
【化６】
0005781224.tif 000021
（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ同一または異なり、−Ｈまたは−ＣＨ２ＣＯＯＨであり）、
Ｚ１およびＺ２は、Ｚ１がＯであり、Ｚ２がＨであるか、またはＺ１がアスパラギン酸またはヒスチジンの側鎖（Ｒ）を有する−ＮＨＣＨＲＣ（＝Ｏ）ＯＨであり、Ｚ２がグルタミン酸またはアルギニンの側鎖（Ｒ’）を有する−ＮＨＣＨＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり、Ｚ１とＺ２はＺ１のカルボキシル基を通じて互いにアミド結合された形態であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
前記ペプチド誘導体は、下記表に記載された化合物１〜２４番からなる群より選択されたいずれか一つである］。
【表１】
0005781224.tif 000022
0005781224.tif 000023
【請求項１５】
ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の保湿用化粧料組成物。
【請求項１６】
ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の皮膚乾燥症の予防または治療用薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、保湿能に優れたペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩およびその保湿用途に関するものである。より具体的には、本発明は、新規ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩、これらの製造方法、これを有効成分として含有する保湿用化粧料組成物および皮膚乾燥症の予防および治療用薬学組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
医学的な観点からみて、皮膚は、人体の最外郭で保護膜としての機能を果たし、水と電解質などの生体成分の損失を防止すると同時に、外部の有害物質の生体内流入を遮断する重要な機能を果たしている。特に、角質層は、皮膚の最外郭層を形成し、乾燥した外部環境から皮膚内部の水分の損失を防止する重要な役割を果たしており、それと同時に、自らも適当な水分を保有することで柔軟性または弾力性を保つ。
【０００３】
正常な皮膚の角質層には、通常１０％以上の水分が含有され、弾力性と柔軟性を有するようになる。水の含有程度は、皮膚の部位ごとにみると、深い真皮から表面の表皮にいくほど減少する。角質層は、約１５％の水、７０％の蛋白質、および１５％の脂質から構成されているのに対し、真皮層、特に角質形成細胞の場合、７０％の水、１５％の蛋白質、および５％の脂質から構成されている。角質細胞が表面に近づくほど、水分含有量は次第に減少して、結局、５〜１０％にとどまる。いくら良い皮膚といっても、最外郭の皮膚は２０％以上の水が含有されていない。通常、しっとりとした皮膚とされる皮膚の角質層の水分量は１５％前後である。
【０００４】
しかし、老化、ホルモン分泌の変化、風、気温および日光などのような外部環境、洗顔およびひげそりなどのような物理的因子などの様々な要因によって皮膚の水分の均衡を失ってしまい、角質層の水分含有量が１０％以下の乾性皮膚になりやすい。これによって、皮膚の弾力性および柔軟性が失われ、窮極的に皮膚の保護機能が無くなって、肌割れ、紅班、かゆみ症などが誘発され、より深刻になると、乾癬、アトピーなどの皮膚疾患が発生する。
【０００５】
このような問題点を解決するためには、原因となる要因を解決することが最も理想的な方法であるが、その原因が多様で、不可抗力的な原因が大多数であるため、次善策が講じられている。その方法は、皮膚水分量の減少を防止するために、皮膚細胞自体の水分の蒸発を防止して保護する方法と、皮膚に人為的な保湿膜を形成させることで外部環境からの刺激を最少化する方法があり得る。なかでも、人為的な保湿膜を形成させる方法が最も簡単であり、このために、多様な種類の皮膚保湿剤および保湿化粧品が開発されている。
【０００６】
しかし、従来使用している保湿剤および保湿化粧品原料としての皮膚親和型材料は、様々な問題点を有している。例えば、保湿剤成分中に最も多く使用されているグリセリンやソルビトールのような水溶性多価アルコール類は、優れた保湿力を示すものの、べたつきがひどくて不快感を誘発し、物理的な影響により簡単に皮膚表面から分離されて長時間の効果は期待しにくい。また、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールのような原料は、多量、繰り返し使用時、紅班などのような皮膚副作用を誘発したりする。これとともに、天然保湿因子（ｎａｔｕｒａｌ  ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ：ＮＭＦ）である乳酸ナトリウム（Ｎａ−ｌａｃｔａｔｅ）、ピロリドンカルボン酸ナトリウム（ＰＣＡ−Ｎａ）、尿素（Ｕｒｅａ）などは、電解性が強くて化粧品や保湿剤製品などの乳化安定性を阻害する問題点があり、その効果にも限界がある。
【０００７】
最近は、このような化学製剤でない、生物由来あるいは生物学的製剤を活用して、皮膚に保湿膜を形成しようとする努力が多くなっている。そのうち、天然物抽出物、各種蛋白質およびその分解産物を保湿成分として活用するための努力が多く、実際にこのような成分が含有されている製品が開発され、販売が行われている。そのうち、蛋白質分解産物の場合、コラーゲン分解産物、エラスチン分解産物、シルク分解産物などが主に使用されているが、これらの場合、一貫した保湿能力を示すことができないだけでなく、その効果もわずかしかないため、高濃度で含有していてはじめて保湿能力を示す傾向がある。
【０００８】
特に、シルクは、フィブロイン（ｆｉｂｒｏｉｎ）とセリシン（ｓｅｒｉｃｉｎ）とから構成されている蛋白質系繊維で、以前には服地に主に使用されたが、最近は、研究によって、シルク蛋白質およびその分解産物であるペプチドとそのアミノ酸が血中コレステロール濃度の低下、二日酔いの解消および痴呆予防効果があることが明らかになっており、これによって、健康機能性食品および化粧料として大きく脚光を浴びている。また、シルク由来の蛋白質およびその分解産物であるシルクペプチドが保湿効果を保有していることと、これを化粧料として使用できることが、様々な特許および論文に開示されている。
【０００９】
具体的には、大韓民国特許登録第１０−０４２８４３１号は、シルク蛋白質の蛋白質分解酵素による分解産物（低分子シルク蛋白質）の使用について開示しており、大韓民国特許登録第１０−０６５２１２２号は、セリシンの加水分解産物の使用について開示しており、大韓民国特許出願第１０−２００３−００５３８７３号および大韓民国特許出願第１０−２００３−００１８０８６号は、セリシン蛋白質の使用について開示しており、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、２００５、４：２５０−２５７では、セリシン蛋白質の保湿剤としての使用可能性について言及している。しかし、前記文献は、その大部分がシルク蛋白質中のセリシンおよびその分解産物について言及しているだけであり、その結果も、短時間に限定されている保湿効果についてのものが大部分であるため、実際に消費者が使用する時に十分な保湿効果を得ることが困難であった。
【００１０】
また、大韓民国特許登録第１０−０８４７２９９号は、シルク蛋白質分解産物、特に、フィブロイン蛋白質の分解産物中において保湿効果の全くない分画による妨害作用を除去させることによって、保湿効果を増大させた特定のシルクペプチド分画の使用について開示している。しかし、分解産物を得る過程によって最終産物の収得量および保湿能が異なるなどの問題が発生し、化粧料剤形への適用時、保湿維持時間が８時間以上を超えない問題があり、性能の改善が要求される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】大韓民国特許登録第１０−０４２８４３１号
【特許文献２】大韓民国特許登録第１０−０６５２１２２号
【特許文献３】大韓民国特許出願第１０−２００３−００５３８７３号
【特許文献４】大韓民国特許出願第１０−２００３−００１８０８６号
【特許文献５】大韓民国特許登録第１０−０８４７２９９号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、２００５、４：２５０−２５７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
そこで、本発明者らは、上記の問題点を解決し、保湿能が持続かつ優れた保湿剤を開発するために努力した結果、シルク蛋白質分解産物中、フィブロイン蛋白質の分解産物の分画から保湿効果に優れた官能基だけを含む新概念のペプチド誘導体を合成し、これらペプチド誘導体の優れた保湿効果を究明することによって、本発明を完成するに至った。
【００１４】
本発明の一つの目的は、保湿能に優れた新規ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩を提供することである。
【００１５】
本発明のもう一つの目的は、前記ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩の製造方法を提供することである。
【００１６】
本発明のもう一つの目的は、前記ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩を含む保湿用化粧料組成物を提供することである。
【００１７】
本発明のもう一つの目的は、前記ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩を含む皮膚乾燥症の予防または治療用薬学組成物を提供することである。
【００１８】
本発明のもう一つの目的は、前記ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩を個体に投与する段階を含む皮膚保湿方法に関するものである。
【００１９】
本発明のもう一つの目的は、前記ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩を個体に投与する段階を含む皮膚乾燥症の治療方法に関するものである。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の保湿能に優れたペプチド誘導体は、人体への適用時、皮膚刺激などの副作用がなく皮膚に最適な保湿状態を維持させることによって、乾燥による皮膚のトラブルから皮膚状態の改善および悪化抑制の効果を期待することができる物質であり、外用医薬品、化粧品の製造などの産業分野において非常に有用な物質である。
【００２１】
また、本発明にかかる保湿能に優れたペプチド誘導体が含まれている保湿用組成物の場合、皮膚水分保有能力の改善に優れた効果を発揮し、作業時および皮膚適用時の応用性および塗布性も良い。このような保湿能に優れたペプチド誘導体が含まれている皮膚保湿用組成物は、皮膚副作用およびべたつきがなく、皮膚表面に長時間保湿膜を形成して、優れかつ持続的な保湿効果、肌荒れ改善および皮膚老化防止などの機能を発揮することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明にかかるペプチド誘導体の水分保有能の測定結果を示すものである。
【図２】本発明にかかるペプチド誘導体の保湿能力の測定結果を示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
上記の目的を達成するための一態様として、本発明は、保湿能に優れた新規ペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩に関するものである。
【００２４】
具体的には、本発明は、下記の化学式１の構造を有するペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩に関するものである:
【化１】
0005781224.tif 000002
【００２５】
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は、それぞれ同一または異なり、−Ｈ、−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）ＯＨ、または下記の構造式を有するＷ基であり、
【化２】
0005781224.tif 000003
【００２６】
（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ同一または異なり、−Ｈまたは−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）ＯＨであり）
Ｚ１およびＺ２は、Ｚ１がＯであり、Ｚ２がＨであるか、またはＺ１がアミノ酸残基の側鎖（Ｒ）を有する−ＮＨＣＨＲＣ（＝Ｏ）ＯＨであり、Ｚ２がアミノ酸残基の側鎖（Ｒ’）を有する−ＮＨＣＨＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり、Ｚ１とＺ２が互いにアミド結合された形態であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、２〜５の整数である］。
【００２７】
好ましい態様として、本発明は、下記の化学式２の構造を有するペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩に関するものである:
【化３】
0005781224.tif 000004
【００２８】
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、２〜５の整数である）。
【００２９】
より好ましくは、前記化学式２のペプチド誘導体は、Ｎ−アルキル化されたリシンまたはＮ−アルキル化されたオルニチンにアスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジンまたはリシンがアミド結合をしているトリペプチドであることが好ましく、このようなアミノ酸の組み合わせの例として、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−ヒスチジン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−ヒスチジン−リシンである、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩が好ましい。前記において、「−」は、アミド結合を示す。
【００３０】
もう一つの好ましい態様として、本発明は、下記の化学式３の構造を有するペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩に関するものである:
【化４】
0005781224.tif 000005
【００３１】
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、２〜５の整数である）。
【００３２】
より好ましくは、前記化学式３のペプチド誘導体は、Ｎ−アルキル化されたリシンまたはＮ−アルキル化されたオルニチンがそれぞれまたは同時にジペプチドをなしており、これにアスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジンまたはリシンがアミド結合をしているテトラペプチドであることが好ましく、このようなアミノ酸の組み合わせの例として、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−ヒスチジン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−ヒスチジン−リシンである、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩が好ましい。前記において、「−」は、アミド結合を示す。
【００３３】
もう一つの好ましい態様として、本発明は、下記の化学式４の構造を有するペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩に関するものである:
【化５】
0005781224.tif 000006
【００３４】
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、２〜５の整数である）。
【００３５】
より好ましくは、前記化学式４のペプチド誘導体は、Ｎ−アルキル化されたリシンまたはＮ−アルキル化されたオルニチンの側鎖にＮ−アルキル化されたリシンまたはＮ−アルキル化されたオルニチンがそれぞれまたは同時にジペプチドをなしており、これにアスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジンまたはリシンがアミド結合をしているテトラペプチドであることが好ましく、このようなアミノ酸の組み合わせの例として、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アスパラギン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−グルタミン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−アルギニン−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたリシン）−（Ｎ−アルキル化されたリシン）−ヒスチジン−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−グルタミン酸、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アスパラギン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−アルギニン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−グルタミン酸−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−ヒスチジン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−アルギニン−リシン、（側鎖とアミド結合されたＮ−アルキル化されたオルニチン）−（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）−ヒスチジン−リシンである、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩であるペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩が好ましい。前記において、「−」は、アミド結合を示す。
【００３６】
もう一つの好ましい態様として、本発明は、下記の化学式５の構造を有するペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩に関するものである:
【化６】
0005781224.tif 000007
【００３７】
（式中、ＲおよびＲ’は、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群より選択される、同一または異なるアミノ酸の側鎖であり、
ｎは、３〜７の整数であり、および
ｍは、２〜５の整数である）。
【００３８】
より好ましくは、前記化学式５のペプチド誘導体は、リシンまたはオルニチンのＮ−末端と側鎖にＮ−アルキル化されたリシンまたはＮ−アルキル化されたオルニチンが同時にアミド結合をなしており、これにアスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジンまたはリシンがアミド結合をしているペンタペプチドであることが好ましく、このようなアミノ酸の組み合わせの例として、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン−ヒスチジン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−グルタミン酸、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アスパラギン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−グルタミン酸−アルギニン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−グルタミン酸−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−グルタミン酸−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アルギニン−ヒスチジン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−アルギニン−リシン、（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン−ヒスチジン−リシンである、ペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩であるペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩が好ましい。
【００３９】
前記において、「−」は、アミド結合を示す。また、「（Ｎ−アルキル化されたリシン）２−リシン」は、リシンのＮ−末端と側鎖にそれぞれＮ−アルキル化されたリシンがアミド結合をなしているものを示し、「（Ｎ−アルキル化されたオルニチン）２−オルニチン」は、オルニチンのＮ−末端と側鎖にそれぞれＮ−アルキル化されたオルニチンがアミド結合をなしているものを示す。
【００４０】
本発明者らは、本発明のペプチド誘導体を開発するために、親水性残基および水分を維持させる能力がある物質の構造を綿密に観察した。その結果、大部分の保湿能力に優れることが知られた物質であるアミノ酸、ピロリドンカルボン酸、アミノヘキサン酸などに共通に存在する反応性残基としてカルボキシル基を導出することができた。また、シルクペプチド分解産物中、保湿能力に優れた分画物の組成を分析した結果、ジあるいはトリペプチドにカルボキシル基が含まれている分解産物が大部分であることを確認することができた。そこで、本研究者らは、ジあるいはトリペプチドを基本としてカルボキシル基が満たされた状態のペプチド誘導体として保湿能力を極大化させた原料物質である、化学式１ないし化学式５のペプチド誘導体を開発することができた。
【００４１】
また、本発明は、化学式１ないし化学式５のペプチド誘導体の薬学的に許容可能な塩を含む。
【００４２】
本願において、用語「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容される無機酸、有機酸、または塩基から誘導された塩を含む。好適な酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられる。好適な塩基から誘導された塩は、ナトリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、およびアンモニウムなどを含むことができる。
【００４３】
もう一つの態様として、本発明は、前記新規ペプチド誘導体を合成する方法に関するものである。
【００４４】
本発明のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩は、当業界で知られた技術を用いて製造することができる。代表的な合成の方法を図式でまとめると、下記の反応式１ないし反応式４の通りであるが、本発明がこのような例に制限されるわけではなく、当業界で知られた技術の範囲内で当業者が適切に変形して使用することができる。
【化７】
0005781224.tif 000008
0005781224.tif 000009
【００４５】
本発明の具体的な実施例では、一般的な固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によるＦｍｏｃ−化学合成方法と溶液化学合成方法を利用して、保湿能のあるペプチド誘導体を合成した。
【００４６】
固相ペプチド合成方法は、１）レジンに保護化されたアミノ酸をローディングする段階；２）アミノ酸の保護基を除去する段階；３）アミノ酸のカップリング反応を誘導する段階；４）反応の有無を確認する段階（例えば、カイザー（Ｋａｉｓｅｒ）テスト）；５）レジンおよび保護基を除去する段階；および６）ペプチドを固形化する段階の計６つの段階によって合成を行い、最終的に、溶液上においてＮ−アルキル化反応で化合物を合成した。
【００４７】
以下、前記合成方法を段階別により詳細に説明する。
【００４８】
第１段階は、レジンにアミノ酸をローディングする段階である。前記レジンとしてヒドロキシルレジンであるＷａｎｇ（ＨＭＰ；４−ヒドロキシメチルフェノキシ）などを使用することができ、適切な溶媒を添加してレジンを膨潤（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）させる。前記溶媒として、例えば、ＭＣ（塩化メチレン）を使用することができるが、これに制限されるわけではない。次に、減圧下で前記溶媒を除去し、適切な溶媒に溶かした保護化されたアミノ酸と、ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）およびＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）の混合溶液を容器に添加して反応させる。前記溶媒としては、例えば、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）を使用することができ、アミノ酸の保護基としてＦｍｏｃ（9-フルオレニルメトキシカルボニル）を使用することができるが、これに制限されるわけではない。
【００４９】
第２段階は、アミノ酸の保護基を除去する段階である。アミノ酸保護基の除去は、当業界で一般に知られた方法によって行うことができ、本発明の具体的な実施例では、レジンにローディングしたアミノ酸溶液を減圧下で除去して洗浄した後、ピペリジンで希釈されたＤＭＦ溶液で反応して保護基を除去した。
【００５０】
第３段階は、アミノ酸のカップリング反応を誘導する段階である。アミノ酸のカップリング反応は、当業界で一般に知られた方法、例えば、ＨＯＢｔ−ＤＣＣ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール-ジシクロヘキシルカロジイミド）方法、またはＨＯＢｔ−ＤＩＣ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール-ジイソプロピルカルボジイミド）方法などによって行うことができる（Ｗａｎｇ  Ｃ．Ｃｈａｎ，Ｐｅｒｔｅｒ  Ｄ．ｗｈｉｔｅ、「Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成」、Ｏｘｆｏｒｄ）。この他にも、カップリング試薬であるＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、ベンゾ−トリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、ベンゾ−トリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、［Ｏ−（７−アザベンゾトリ−アゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロ−ホスフェート］（ＨＡＴＵ）、ｌＨ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、ｌＨ−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）などを用いて合成を進行させることができ、カップリング試薬によってトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）などのような有機塩基を添加して反応を進行させることができるが、これに制限されるわけではない。
【００５１】
第４段階は、反応の有無を確認する段階である。例えば、本発明の具体的な実施例では、アミノ酸のカップリング反応を確認するために、カイザーテスト（Ｋａｉｓｅｒ  ｔｅｓｔ；Ｅ．Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９７０）３４，５９５）を利用した。カイザーテストは、ニンヒドリンを用いて１次アミンの官能基の存在の有無を色変化の差から確認する定性的な確認方法である。具体的には、アミノ酸のカップリング反応後、洗浄した少量のレジンにカイザーテスト溶液を２−３滴添加した後、一定時間の間レジンの色変化を観察して、レジンの色変化がない場合、カップリング反応が進行したと見なして次の反応を進行させ、レジンの色が青色を呈すると、未反応の部分が残っていると見なしてアミノ酸のカップリング反応を再び進行させることができる。
【００５２】
第５段階は、レジンおよび保護基を除去する段階である。前記第３ないし第５段階を繰り返すことで合成されたペプチドをレジンから除去し、アミノ酸の側鎖保護基を脱保護化させる段階である。レジンおよびアミノ酸保護基の除去は、当業界で一般に知られた方法によって行うことができ、本発明の具体的な実施例では、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＴＩＳ（トリイソプロピルシラン）、チオアニソール（チオアニソール）、Ｈ２Ｏ、ＥＤＴ（エタンジチオール）から構成された切断カクテル溶液（ｃｌｅａｖａｇｅ  ｃｏｃｋｔａｉｌ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を添加してペプチド溶液を得た。前記溶液の構成は、当業者が実験条件に従って適切に変形して使用することができる。
【００５３】
第６段階は、ペプチドを固形化する段階である。例えば、ジエチルエーテル溶媒を過剰添加して沈殿した固形物を生成させることができるが、これに制限されるわけではない。
【００５４】
前記段階を経てペプチドを合成すると、ペプチドのＮ−アルキル化反応を行って所望のアミノ基にアルキル基を導入することができる。本発明では、ペプチドのアミノ基位に−（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）ＯＨをアルキル化することが好ましいため、アルキル化剤として前記アルキル基を提供可能なブロモ酢酸などを使用することができるが、これに制限されるわけではない。
【００５５】
本発明にかかるペプチド誘導体およびその薬学的に許容される塩は、皮膚副作用およびべたつきがなく、皮膚表面に長時間保湿膜を形成することで優れた保湿効果を発揮する。具体的には、本発明の具体的な実施例において、本発明にかかるペプチド誘導体は、対照群のバッファー溶液の条件に比べて２０−３０％程度向上した水分保有能力を示し（図１）、本発明にかかるペプチド誘導体が含まれている剤形の場合、無添加群の剤形に比べて、８時間経過した後統計的に有意な水準の高い皮膚電気伝導度を示し、皮膚への塗布から１２時間後も優れた皮膚水分含有量の増加効果を示した（図２）。
【００５６】
したがって、もう一つの態様として、本発明は、本発明のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩からなる群より選択された１種以上を含む保湿用組成物に関するものである。本発明のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する保湿用組成物は、用途および所望の効果によって、化粧料組成物および薬学的組成物をすべて含む概念である。
【００５７】
好ましい態様として、本発明は、本発明のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩からなる群より選択された１種以上を含む保湿用化粧料組成物に関するものである。
【００５８】
保湿用化粧料組成物として使用する場合、前記組成物を皮膚、頭皮または毛髪に適用可能であり、皮膚老化防止、シワ改善、および肌荒れ改善のために使用することができる。
【００５９】
もう一つの好ましい態様として、本発明は、本発明のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩からなる群より選択された１種以上を個体に投与する段階を含む皮膚保湿方法に関するものである。
【００６０】
もう一つの好ましい態様として、本発明は、本発明のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩からなる群より選択された１種以上を含む皮膚乾燥症の予防または治療用薬学組成物に関するものである。
【００６１】
薬学的組成物として使用する場合、肌割れ、紅班、かゆみ症、乾癬またはアトピーのような皮膚乾燥症を予防または治療するのに使用することができる。
【００６２】
もう一つの好ましい態様として、本発明は、本発明のペプチド誘導体またはその薬学的に許容可能な塩からなる群より選択された１種以上を個体に投与する段階を含む皮膚乾燥症の治療方法に関するものである。
【００６３】
本発明の保湿用組成物に含まれるペプチド誘導体は、皮膚または体内に吸収されなくても、少なくとも皮膚表面に保湿膜を形成すれば効果を発揮できるものであるため、その分子量の範囲には制限がなく、通常、重量平均分子量１００〜１０，０００、好ましくは１００〜２，０００の範囲のものを使用することができる。
【００６４】
本発明の保湿用組成物に含まれている、保湿能に優れたペプチド誘導体の含有量は、組成物の用途、適用形態、使用目的および所望の効果によって適切に調節可能であり、含有量対比の効果を考慮して、例えば、全体組成物の重量に対して０．０００１〜９９重量％、好ましくは０．００１〜５０重量％、より好ましくは０．０１〜１０重量％、最も好ましくは０．０１〜１重量％であるのが良い。前記有効含有量の組成物内の含有量が前記範囲未満の場合には実質的な保湿効果が得られず、前記範囲以上であれば、本原料の高保湿能によって剤形の安定性を低下させることがあり、また、含有量対比の得られる効果がわずかしかなくて経済的でないため、前記範囲であるのが良い。
【００６５】
本発明の保湿用組成物は、投与経路によって、経口、経皮、皮下、または静脈投与が可能であり、好ましくは経口または経皮、より好ましくは経皮投与可能な組成物であり得る。
【００６６】
前記化粧料組成物は、皮膚、頭皮または毛髪に経皮的に適用され、基礎化粧品、メークアップ化粧品、ボディー製品、ひげそり用製品、毛髪製品などのすべての化粧品製品の製造に使用可能な組成物を意味するもので、硬膏剤、スプレー剤、懸濁液、乳液、クリーム、ジェル、フォームなどの形態に製剤化されたものであり得るが、その形態に特別な制限がない。
【００６７】
また、前記薬学組成物は、保湿作用によって皮膚および／または毛髪乾燥症によって誘発される疾病の予防および／または治療効能を発揮するもので、主に経口的または経皮的に使用され、硬膏剤、スプレー剤、懸濁液、乳液、クリーム、ジェルなどの形態に製剤化されたものであり得るが、その形態に特別な制限がない。前記乾燥症によって誘発される疾病には、肌割れ、紅班、かゆみ症、乾癬、アトピーなどがある。したがって、本発明の薬学的組成物は、肌割れ、紅班、かゆみ症、乾癬およびアトピーなどからなる群より選択された１種以上の乾燥症によって誘発される疾病の予防および／または治療用組成物であり得る。
【００６８】
本発明にかかる保湿力に優れた化粧料組成物および薬学組成物は、その優れた保湿力によって皮膚老化防止、シワ改善および肌荒れ改善などの効果も共に示すことができて、優れた皮膚状態の改善および皮膚状態の悪化抑制効果を有する。
【００６９】
前記本発明の化粧料組成物および薬学組成物は、前記有効成分のほか、通常の製品化または製剤化に使用可能なすべての種類の成分、例えば、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤、保湿剤、増粘剤、賦形剤、希釈剤、無機塩類および合成高分子物質などを追加的に含むことができ、その種類および含有量は最終産物の用途および使用目的によって適切に調節することができる。
【００７０】
また、本発明の組成物は、適用される形態に通常含まれる溶媒を含むものであり得、例えば、エタノール、グリセリン、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，２，４−ブタントリオール、ソルビトールエステル、１，２，６−ヘキサントリオール、ベンジルアルコール、イソプロパノール、ブタンジオール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジメチルイソソルビド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、プロピレンカーボネート、グリセレス−２６、メチルグルセス−２０、イソセチルミリステート、イソセチルオクタノエート、オクチルドデシルミリステート、オクチルドデカノール、イソステアリルイソステアレート、セチルオクタノエートおよびネオペンチルグリコールジカプレートなどの中から選択された１種以上を含むことができる。このような溶媒を用いて本発明の組成物を製造する場合、化合物の種類によって、または溶媒の混合比によって溶媒に対する化合物の溶解度が少しずつ異なるが、本発明の属する技術分野における当業者であれば、製品の特性によって溶媒の種類および使用量を適切に選択して適用することができる。
【００７１】
また、本発明の組成物は、経皮投与時の経皮透過を強化するための多様な物質を含むことができる。例えば、ラウロカプラム誘導体およびオレイン酸、モノオレート誘導体のエステル誘導体、アダパレン、トリチノイン、レチンアルデヒド、タザロテン、サリチル酸、アゼライン酸、グリコール酸、エトキシジグリコール、ツイン８０、レシチンオルガノゲルなどを含むことができる。また、本発明の組成物は、付加的な機能を付与するために、本発明の保湿効果を付与する組成物の効果を阻害しない範囲内で共界面活性剤、界面活性剤、ふけ防止剤、角質軟化剤、血行促進剤、細胞活性剤、清凉剤、保湿剤、抗酸化剤、ｐＨ調節剤、精製水などの補助成分を添加することができ、適用される形態によって適切な香料、色素、防腐剤、賦形剤などの添加剤を含有することができる。
【実施例】
【００７２】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明する。ただし、下記の実施例は本発明を例示するものであり、本発明が下記の実施例によって限定されるのではない。
【００７３】
実施例１．ペプチド誘導体の製造
本発明では、一般的なペプチド合成方法としてＦｍｏｃ（9-フルオレニルメトキシカルボニル）をＮα−アミノ酸の保護基として使用する固相法とＮ−アルキル化反応過程により計２４個の化合物を得、その具体的な実施例は、次の通りである。
【００７４】
まず、ヒドロキシルレジンであるＷａｎｇ（ＨＭＰ；4-ヒドロキシメチルフェノキシ）レジン（１．１ｍｍｏｌ／ｇ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の１ｍｍｏｌに対する量を測量して反応容器に入れた後、ＭＣ３０ｍｌを添加して、１０分間レジンを膨潤（ｓｗｅｌｌｉｎｇ）させた。減圧下で溶媒を除去し、ＤＭＦ溶媒に溶かしたＦｍｏｃ−リシンまたはＦｍｏｃ−オルニチン（４当量）、ＤＩＣ（２当量；ジイソプロピルカルボジイミド）＆ＤＭＡＰ（０．１当量；４−ジメチルアミノピリジン）の混合溶液を容器に添加して、４時間反応させた。次に、Ｗａｎｇレジンにローディングしたアミノ酸溶液を減圧下で除去し、レジンをＤＭＦとＭＣでそれぞれ３０ｍｌ×５回洗浄した。Ｆｍｏｃ−アミノ酸がローディングされたレジンを２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンで希釈されたＤＭＦ溶液で１０分間反応して脱保護させた後、ＤＭＦとＭＣでそれぞれ３０ｍｌ×５回洗浄した。次に、Ｆｍｏｃ保護基が除去されたレジンに、ＤＭＦ溶媒に溶かしたＦｍｏｃ−アミノ酸（４当量）、ＤＩＣ（４当量；ジイソプロピルカルボジイミド）、ＨＯＢｔ（４当量；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）カップリング溶液を添加し、４時間室温で反応させてアミノ酸のカップリング反応を誘導した。アミノ酸のカップリング反応後、洗浄した少量のレジンにカイザーテスト溶液Ａ、Ｂ、Ｃ［試薬Ａ：エタノール（１００ｍｌ）内のニンヒドリン５ｇ）、試薬Ｂ：エタノール（２０ｍｌ）内のフェノール（８０ｇ）、試薬Ｃ：ピリジン（９８ｍｌ）内の０．１Ｍ  ＫＣＮ（２ｍｌ）］を２−３滴添加した後、１００℃を維持しながら１０分間レジンの色変化を観察した。レジンの色変化がない場合、カップリング反応が進行したと見なして次の反応を進行させ、レジンの色が青色を呈すると、未反応の部分が残っていると見なしてアミノ酸のカップリング反応を再び進行させた。
【００７５】
このような過程で合成されたペプチドをレジンから除去し、アミノ酸の側鎖保護基を脱保護化させるために、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＴＩＳ（トリイソプロピルシラン）、チオアニソール、Ｈ２Ｏ、ＥＤＴ（エタンジチオール）から構成された混合物を９０：２．５：２．５：２．５：２．５の割合で添加して沈殿した固形物を生成させ、こうして得られた沈殿物を遠心分離させ、濾液のＴＦＡ、ＴＩＳ、チオアニソール、Ｈ２Ｏ、ＥＤＴなどを除去し、３回以上繰り返すことで固形化されたペプチドを得た。
【００７６】
次に、固形化段階により得られたペプチド１ｍｍｏｌを水に溶かした後、１Ｎ  ＮａＯＨ（４当量）溶液を徐々に添加した。混合物を１０分間室温で撹拌した後、０℃に冷却させた後、ブロモ酢酸（〜８当量）を徐々に添加した。冷却状態で１０分間撹拌した後に、氷浴を除去し、室温で１２時間反応させた。反応後、６０℃の温度で４時間さらに撹拌した後に反応を終わらせ、ＥＡを添加して、水層を３−４回洗浄した後、逆相クロマトグラフィーによりＮ−アルキル化されたペプチドを得た。
【００７７】
ペプチドＩＩ−１、ＩＩ−２、ＩＩ−３、ＩＩ−４、ＩＩ−９、ＩＩ−１０、ＩＩ−１１、ＩＩ−１２の場合、具体的な合成方法は、下記の反応式２の通りである。
【化８】
0005781224.tif 000010
【００７８】
ペプチドＩＩ−５、ＩＩ−６、ＩＩ−１３、ＩＩ−１４の場合、具体的な合成方法は、下記の反応式３の通りである。
【化９】
0005781224.tif 000011
【００７９】
ペプチドＩＩ−７、ＩＩ−８、ＩＩ−１５、ＩＩ−１６の場合、具体的な合成方法は、下記の反応式４の通りである。
【化１０】
0005781224.tif 000012
【００８０】
前記過程で得られたペプチドの具体的な精製条件および分子量は、次の通りである。
【００８１】
実施例１−１．ペプチドＩ−１の製造
Ｒｔ＝１１．２５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７９
（以下で使用する単位％は、特別な言及がない限り、％（ｖ／ｖ）を示す）
実施例１−２．ペプチドＩ−２の製造
Ｒｔ＝１０．６５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９５
実施例１−３．ペプチドＩ−３の製造
Ｒｔ＝１０．５７分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９５
実施例１−４．ペプチドＩ−４の製造
Ｒｔ＝１０．３８分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８２５
実施例１−５．ペプチドＩ−５の製造
Ｒｔ＝１２．８７分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝５０７
実施例１−６．ペプチドＩ−６の製造
Ｒｔ＝１１．２５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝６２３
実施例１−７．ペプチドＩ−７の製造
Ｒｔ＝１０．７５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝６２３
実施例１−８．ペプチドＩ−８の製造
Ｒｔ＝１０．５８分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８６７
実施例１−９．ペプチドＩＩ−１の製造
Ｒｔ＝１５．２５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２３
実施例１−１０．ペプチドＩＩ−２の製造
Ｒｔ＝１４．８７分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝７７２
実施例１−１１．ペプチドＩＩ−３の製造
Ｒｔ＝１４．７５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８３９
実施例１−１２．ペプチドＩＩ−４の製造
Ｒｔ＝１５．４５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８８８
実施例１−１３．ペプチドＩＩ−５の製造
Ｒｔ＝１５．６４分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８３９
実施例１−１４．ペプチドＩＩ−６の製造
Ｒｔ＝１４．６５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８８８
実施例１−１５．ペプチドＩＩ−７の製造
実施例１５）ペプチドＩＩ−７：Ｒｔ＝１６．２９分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０７０
実施例１−１６．ペプチドＩＩ−８の製造
Ｒｔ＝１６．３５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１１９
実施例１−１７．ペプチドＩＩ−９の製造
Ｒｔ＝１５．２５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝７５１
実施例１−１８．ペプチドＩＩ−１０の製造
Ｒｔ＝１４．５５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８０１
実施例１−１９．ペプチドＩＩ−１１の製造
Ｒｔ＝１５．５５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８６７
実施例１−２０．ペプチドＩＩ−１２の製造
Ｒｔ＝１４．７５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝９１６
実施例１−２１．ペプチドＩＩ−１３の製造
Ｒｔ＝１４．３９分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝８６７
実施例１−２２． ペプチドＩＩ−１４の製造
Ｒｔ＝１４．３１分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝９１６
実施例１−２３．ペプチドＩＩ−１５の製造
Ｒｔ＝１６．１８分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１１２
実施例１−２４．ペプチドＩＩ−１６の製造
Ｒｔ＝１６．７５分（０．０１％ＴＦＡを含有する５％〜１００％のアセトニトリル／水から３０分にわたって多様な濃度勾配）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１６１。
【００８２】
下記の表１は、合成したペプチド全体のリストを示したものであり、ａｓｐはアスパラギン酸、ｇｌｕはグルタミン酸、ｈｉｓはヒスチジン、およびａｒｇはアルギニンを示す。表１のペプチド誘導体は、いずれも下記の化学式１のペプチドを基本構造とする。
【表１】
0005781224.tif 000013
0005781224.tif 000014
【００８３】
実施例２：ペプチド誘導体の水分保有能力の測定
提示された合成方法によって合成したペプチド誘導体Ｉ−５、Ｉ−６、Ｉ−７およびＩ−８を１％（ｗ／ｖ）となるように、グリセリン５％溶液に溶かして得られた溶液１ｍｌずつを化粧綿を濡らし、２４℃、４５〜５０％ＲＨ（相対湿度）下で適当な時間間隔で重量の変化を測定した。
【００８４】
前記で得られた結果を、表２および図１に示した。
【表２】
0005781224.tif 000015
【００８５】
前記表２および下記図１から分かるように、ペプチド誘導体Ｉ−５、Ｉ−６、Ｉ−７およびＩ−８を含んでいる溶液の場合、バッファー（５％グリセリン溶液）に比べて顕著な水分保有能力を示しており、特にＩ−６およびＩ−７誘導体を含む剤形の場合、２０〜３０％程度の向上した水分保有能力を示している。このような結果によって、多量のカルボキシル基を含有できるように製造されたペプチド誘導体の高い水分保有能力を確認することができた。
【００８６】
実施例３：ペプチド誘導体の保湿能力の測定
ペプチド誘導体Ｉ−５、Ｉ−６、Ｉ−７およびＩ−８の含有に応じた化粧品の保湿効果を比較するために、いくつかの組み合わせでもってヒトの皮膚における保湿能力を測定した。
【００８７】
つまり、ゼニコス（株）で製造したアトペプクリーム（シクロメチコン、ベタイン、ヒアルロン酸ナトリウム、グリセリン、ネオペンチルグリコールジカプレート、スクアラン、プロピレングリコール、セテアリルアルコール、ソルビタンステアレート、ＰＥＧ−４０ステアレート、ビーズワックス、ステアリン酸、ラノリンワックス、グリセリンステアレート、ＰＥＧ−１００ステアレート、ジメチコン、トコフェリルアセテート、アルブチン、オウレン（Ｃｏｐｔｉｓ  Ｊａｐｏｎｉｃａ）根抽出物、ヤマグワ（ｏｒｕｓ  Ｂｏｍｂｙｃｉｓ）根抽出物、アロエベラ葉汁、カルボマー、キサンタンガム、メチルパラベン、フラグランス、プロピルパラベン、トリエタノールアミン、ＥＤＴＡ２ナトリウム、イミダゾリジニルウレア含有剤形）にそれぞれ４種類のペプチド誘導体を０．５％（ｗ／ｖ）となるように均一に混合したクリーム剤形に製作し、ペプチド誘導体が含まれていない剤形を比較剤形として用意した後、各組成物を被試験者の腕の下膊内側に一定量（０．０３ｇ／１６ｍ２）を塗布した後よく擦ってから、塗布前、塗布４時間後、塗布８時間後、塗布１２時間後に、Ｃｏｕｒａｇｅ＆Ｋｈａｚａｋａ  Ｇｅｒｍａｎｙ社のＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５を用いて皮膚電気伝導度を測定し、皮膚の水分含有量を測定した。
【００８８】
塗布当時、保湿能に優れたペプチド誘導体を含む４つの剤形がいずれも塗布性やべたつきなどにおいて差がなかったし、塗布後に、紅班、かゆみなどのような皮膚異常現象が現れなかった。
【００８９】
また、図２から分かるように、保湿能に優れたペプチド誘導体が含まれている剤形の場合、無添加群（ｂｌａｎｋ  ｃｒｅａｍ）の剤形に比べて、８時間経過した後統計的に有意な水準の高い皮膚電気伝導度を示し、皮膚への塗布から１２時間後も優れた皮膚水分含有量の増加効果を示した。
【図１】
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【図２】
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