(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリケーション後期生成産物（ＡＧＥ)を有効成分として含有するペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化剤であって、前記グリケーション後期生成産物（ＡＧＥ)が血清アルブミングリケーション後期生成産物（ＡＧＥ−ＳＡ)及び／又は味噌の有機溶媒抽出物であり、前記ＰＰＡＲ活性剤がＰＰＡＲαのリガンドとして作用しＰＰＡＲαを活性化させることを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体α（ＰＰＡＲα）活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリケーション後期生成産物（ＡＧＥ：Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔ)を有効成分として含有してなる、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ：ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の活性化剤、ならびにそれを用いた医薬、サプリメント、機能性食品および食品添加物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は糖尿病、高血圧、高脂血症など多くの生活習慣病の発症基盤と言われ、社会問題化している。
【０００３】
生体内の糖・脂質代謝は、低分子化合物をリガンドとして活性化される核内受容体という転写因子群により直接、間接に制御されている。肥満に伴い生体内の糖・脂質代謝異常が引き起こされることから、生体内における核内受容体の活性調節が、肥満および生活習慣病の改善に重要であることが明らかになりつつある（非特許文献１）。
【０００４】
糖尿病の発症に関わるインスリン抵抗性の研究において、核内受容体であるＰＰＡＲを活性化すると、インスリン抵抗性の改善に効果があることが分かっている。
【０００５】
ＰＰＡＲは、インスリン抵抗性の改善に大きく関わっており、加えて、高インスリン血症、２型糖尿病、その他、肥満、高血圧、高脂血症および動脈硬化の改善にも関わっていると言われている。このような観点から、ＰＰＡＲを活性化する物質、例えば、フィブラート系化合物、チアゾリジン誘導体、脂肪酸、ロイコトリエンＢ４、インドメタシン、イブプロフェン、フェノプロフェン、１５−ｄｅｏｘｙ−Δ−１２，１４−ＰＧＪ２のような合成物質系のＰＰＡＲ活性化剤は、治療薬として使用されている。
【０００６】
しかしながら、合成物質系のＰＰＡＲ活性化剤は、長期摂取による副作用の問題がある。これに対して天然成分由来のＰＰＡＲ活性化剤として、油脂の一種であるモノアシルグリセロール、お茶などに含まれるカテキン類、柑橘類に含まれるポリフェノールなどの天然物質が、ＰＰＡＲ活性化剤として報告されている（例えば、特許文献１参照）。しかしながら、天然成分由来のものはＰＰＡＲ活性化剤の含有量が少ないことから製造コストが高くなることが課題であった。
【０００７】
一方、食品中には加工工程の加熱処理により、ＡＧＥという褐色物質が生成されていることが知られている。ＡＧＥは、生体内において老化、糖尿病合併症、動脈硬化症に関与し、これらの疾患の発症・進展において増悪因子として作用していると考えられている。しかし、古来より食品として用いられている味噌には、ＡＧＥが生成していることが知られており、最近の研究で味噌に多く含まれるＡＧＥは、抗酸化作用、うまみの増強効果がある等のメリットがあることが示されているが、ＰＰＡＲ活性化作用についてはこれまでに報告されていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開番号  ＷＯ２００５／１１２９０４号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】肥満と脂肪エネルギー代謝  メタボリックシンドロームへの戦略  健常社
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、このような事情に鑑みなされたものであって安全、安価で且つ、活性の強いＰＰＡＲ活性化剤の提供をその目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前記課題を解決するために、本発明者は、食品の加工工程で加熱処理することにより生成するＡＧＥに着目した。
【００１２】
その結果、ＡＧＥに上記活性があることをはじめて見出し、本発明の完成に至ったものである。
すなわち本発明は、ＡＧＥを有効成分としてなることを特徴とするＰＰＡＲ活性化剤であって、次のような態様が例示される。
【００１３】
（１）  グリケーション後期生成産物（ＡＧＥ)を有効成分として含有してなることを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化剤。
【００１４】
（２）  グリケーション後期生成産物（ＡＧＥ)を有効成分が血清アルブミングリケーション後期生成産物（ＡＧＥ−ＳＡ)及び／又は味噌の有機溶媒抽出物であることを特徴とする前記（１）記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化剤。
【００１５】
（３）  前記（１）又は（２）に記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化剤を含有する、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化および肥満のいずれか1以上の疾病の予防、改善又は治療のための医薬。
【００１６】
（４）  前記（１）又は（２）に記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化剤を含有する、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化および肥満のいずれか1以上の疾病の予防、改善又は治療のためのサプリメント。
【００１７】
（５）  前記（１）又は（２）に記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化剤を含有する、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化および肥満のいずれか1以上の疾病の予防、改善又は治療のための機能性食品。
【００１８】
（６）  前記（１）又は（２）に記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化剤を含有する、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化および肥満のいずれか1以上の疾病の予防、改善又は治療のための食品添加剤。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、医薬、サプリメント、機能性食品及び食品添加物を添加した食品としてＡＧＥを摂取することにより、ＰＰＡＲ活性化作用が高まり、肝臓のβ酸化関連酵素の遺伝子発現が促進され、脂質代謝が促進される結果、肥満を予防、治療及び改善でき、さらに肥満状態に誘導される糖尿病、高血圧、高脂血症などの生活習慣症を予防し、予防、改善及び治療しうる組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、本発明の一実施例において、ＡＧＥ−ＳＡ及び味噌抽出物のＰＰＡＲαリガンド活性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＡＧＥを有効成分として含んでいることを特徴としている。
【００２２】
本発明で使用するＡＧＥとして、より簡便に得られるものは、食品を加熱処理するものがある。その場合、加熱処理した食品を極性溶媒で抽出して得られる抽出物を用いれば、ＡＧＥの含有率が高くなり、より有効なＰＰＡＲ活性化剤とすることができる。
ここでいう抽出物とは、加熱処理した食品を極性溶媒で抽出して得られる抽出液、その希釈液、濃縮液、エキス、これを乾燥して得られる乾燥物、及び分離精製された化合物を意味する。
【００２３】
その他の具体例としては、血清アルブミン（ＳＡ）とグルコースを加熱処理して得られたＡＧＥ−ＳＡが好ましいものである。
【００２４】
血清アルブミンは（ＳＡ）は、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、ヤギなど動物由来のＳＡを用いることができる。
【００２５】
血清アルブミン（ＳＡ）とグルコースとによる加熱処理による、グリケーション後期生成産物（ＡＧＥ)の生成は、通常の方法で生成することができるが、その例を示すとＳＡ  ０．１〜２０ｍｇ／ｍｌ、をバッファー（例えば、食塩、リン酸カリウム溶液）中で０．０１〜１Ｍのグルコースと共に６０〜１２０℃、２０分〜１時間加熱処理すればよい。
【００２６】
さらに好ましいＡＧＥの他の具体例には、ＡＧＥを多く含んでいる味噌がある。
【００２７】
味噌については、極性溶媒による抽出を行い、抽出物を得るのがより好ましい。ここでいう抽出物とは、味噌を極性溶媒で抽出して得られる抽出液、その希釈液、濃縮液、エキス、これを乾燥して得られる乾燥物、及び分離精製された化合物を意味する。
【００２８】
また、ここで極性溶媒とは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール等のアルコール類、１，４−ジオキサン等のエーテル類、アセトン等のケトン類、アセトニトリル等のニトリル類が挙げられ、この中でも特に、ＰＰＡＲ活性化剤を用いた医薬、サプリメント、機能性食品及び食品添加物とする場合に精製工程が省略又は簡略化することができるエタノールが好ましい。
【００２９】
エタノール以外の極性溶媒によって抽出を行った場合は、精製工程を経て極性溶媒を除去することにより医薬、サプリメント、機能性食品及び食品添加物とすることができる。極性溶媒の除去は、通常一般に用いられる公知の方法により除去することができる。
【００３０】
例を示せば、一般的には、ロータリーエバポレーター等を用いて減圧蒸留により除去することができるが、より完全に極性溶媒を除去するためには、減圧蒸留後、再度抽出物にエタノールを添加し、再蒸留を数回繰り返せば良い。
【００３１】
また、ＡＧＥを糖分子内のジオールと特異的に結合するボロン酸カラムクロマトグラフィーを用いて吸着、非還元糖であるソルビトールなどを用いて脱着し分離精製することにより、前記極性溶媒を除去することも出来る。
【００３２】
本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化および肥満の疾病の予防、改善又は治療のために医薬、サプリメント、機能性食品及び食品添加物に用いることができる。
【００３３】
本発明に係る医薬、サプリメント、機能性食品及び食品添加物組成物の形態は特に制限されず、例えば医薬として使用する場合は、経口投与剤、非経口投与剤（例えば、乳剤や注射剤等の静脈注射剤その他）として投与することができる。
【００３４】
本発明の医薬において、投与経路としては、特に制限されず、例えば経口投与および非経口投与があげられる。具体的な経口投与剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、細粒剤（散剤を含む）、スティック状剤、カプセル及び液剤（シロップ剤を含む）等があげられる。また、非経口投与剤としては、例えば乳剤、注射剤などの静脈注射剤等があげられる。
本発明の医薬は、各剤形に適した添加剤や基材等を適宜使用し、日本薬局方等に記載された通常の方法に従い製造できる。
【００３５】
本発明のサプリメントの形態は、特に制限されず、例えば、錠剤、顆粒剤、細粒剤（散剤を含む）、カプセル及び液剤（シロップ剤を含む）等があげられる。
【００３６】
本発明の機能性食品の形態は、特に制限されず、例えば、菓子類、加工食品、機能性飲料等があげられる。
【００３７】
本発明の食品添加剤の形態は、特に制限されないが、例えば、液状、ペースト状、粉末状、フレーク状、及び顆粒状等があげられる。また、本発明の食品添加剤は、飲料を含む。
【実施例】
【００３８】
以下に、実施例等を挙げて本発明を更に詳細に述べるが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。
【００３９】
（実施例１）  ＡＧＥ化ウシ血清アルブミン（ＡＧＥ−ＢＳＡ）の調製
ウシ血清アルブミン２０ｍｇ／ｍｌにグルコースを９０ｇ/ｍｌ添加し、１２１℃、２０分間、加熱処理を実施した。加熱処理後、遠心分離（１０，０００×ｇ、４℃、１５分間）することによって上清を回収し、得られた上清をＡＧＥ−ＢＳＡとした。
【００４０】
（実施例２）  味噌有機溶媒抽出液の調製
味噌１０ｇが入った１００ｍｌビーカーに１００ｍｌのエタノールを加え、攪拌子を用いて室温、１時間攪拌した。攪拌後、遠心分離（１０，０００×ｇ、４℃、１５分間）することによって上清を回収し、得られた上清をロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、乾固物に１ｍｌのエタノールを加えて味噌抽出物を得た。
【００４１】
（実施例３）  本実施例は、ＡＧＥ−ＢＳＡ及び味噌抽出物によるＰＰＡＲαの活性化を確認した例である。
【００４２】
ＣＶ−１細胞（雄性アフリカミドリザル腎臓由来の培養細胞）を、９６穴培養プレートに１０＾４個／ｗｅｌｌとなるように細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。培地には、１０％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）、１０ｍｇ／ｍｌペニシリン・ストレプトマイシン溶液を含むＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ：ナカライテスク社）を用いた。つぎに、リポフェクトアミンシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて、ｐＭ−ｈＰＰＡＲαとｐ４×ＵＡＳｇ−ｔｋｌｕｃとを、培養したＣＶ−１細胞にトランスフェクションした。なお、前記ｐＭ−ｈＰＰＡＲαは、ＧＡＬ４結合ドメインである１〜１４７残基とヒトＰＰＡＲαリガンド結合ドメインである２０４〜５０５残基とを含む融合タンパク質を発現するためのベクターであり、前記ｐ４×ＵＡＳｇ−ｔｋ−ｌｕｃは、ルシフェラーゼ遺伝子上流に、４コピーのＧＡＬ４結合ドメインのための上流活性化配列（ＵＡＳ）とチミジンキナーゼ遺伝子プロモータとを含むレポーター・プラスミドである。前記トランスフェクションを行った細胞を約２４時間培養し、ついで、前記細胞の培地を、ＡＧＥ−ＢＳＡ及び味噌抽出物を含む培地に変え、さらに２４時間培養した。培養後、前記細胞を溶解し、デュアル・ルシフェラーゼレポータージーンアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いて、ルシフェラーゼ活性を測定した。コントロールのルシフェラーゼ活性を１００％とした場合のＡＧＥ−ＢＳＡ、味噌抽出物添加区のルシフェラーゼの相対活性値をＰＰＡＲαリガンド活性とした。
【００４３】
図１から分かるように、ＡＧＥ−ＢＳＡ、味噌抽出物によって、ＰＰＡＲαリガンド活性が向上した。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
以上のように、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、ＰＰＡＲ活性を有し、安価に製造することが可能である。したがって、本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、例えば、インスリン抵抗性、高インスリン血症、２型糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化および肥満などの疾病の予防若しくは改善のための医薬、サプリメント、機能性食品および食品添加物として使用できる。
【図１】
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