(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
0005766884.tif 000014
で表される化合物であって、
Ｒ１は、ポリエチレングリコール又はポリグリセロールたる溶解性官能基Ｒ２であり、
Ｘの各々は、ＯＰＯ３２−、ＯＰＳＯ２２−、又はＯＳＯ３−から個別に選択され、
Ｚは、１−３個の炭素原子及びヘテロ原子を含むアルキル鎖、又は、１−３個の炭素原子を含むアルキル鎖である
ことを特徴とする化合物。
【請求項２】
前記Ｘ及び前記Ｒ１が定義された一般式（２）
【化３】
0005766884.tif 000015
で表されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｘ及び前記Ｒ１が定義された一般式（３）
【化４】
0005766884.tif 000016
で表されることを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
５−７員環を含み、少なくとも４つの環員は、前記Ｘの各々が個別に定義された式ＣＨ‐Ｘで表されるとともに、１つの環員は、ＣＨ又はＮたるＹと前記Ｒ１とが定義された式Ｙ‐Ｒ１で表されることを特徴とする請求項１−３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｘの各々が個別に定義され、ＹがＣＨ又はＮであると定義され、前記Ｒ１が定義された一般式（４）、（５）、又は（６）
【化５】
0005766884.tif 000017
で表されることを特徴とする請求項１−４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
ミオ‐イノシトール‐ペンタキスホスフェート‐２‐ＰＥＧ（４００）（７）で表されることを特徴とする化合物。
【請求項７】
Ｘの全部がＯＰＯ３２−でなく且つＸの全部がＯＳＯ３−ではないという条件で、Ｘの各々が個別にＯＰＯ３２−、ＯＰＳＯ２２−、又はＯＳＯ３−から選択される一般式（１５）
【化６】
0005766884.tif 000018
で表されることを特徴とする化合物。
【請求項８】
一般式（１５ａ）又は（１５ｂ）
【化７】
0005766884.tif 000019
で表されることを特徴とする請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
式（１６ａ）又は（１６ｂ）
【化８】
0005766884.tif 000020
で表され
ａ）Ｘ２はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６は各々が個別にＯＰＯ３２−、ＯＰＳＯ２２−、もしくはＯＳＯ３−から選択される、
ｂ）Ｘ１、Ｘ３、及びＸ５はＯＰＯ３２−であり、Ｘ２、Ｘ４、及びＸ６はＯＳＯ３−である、
ｃ）Ｘ１、Ｘ３、及びＸ５はＯＳＯ３−であり、Ｘ２、Ｘ４、及びＸ６はＯＰＯ３２−である、
ｄ）Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３はＯＰＯ３２−である、
ｅ）Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＰＯ３２−であり、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３はＯＳＯ３−である、
ｆ）Ｘ２及びＸ５はＯＰＯ３２−であり、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ６はＯＳＯ３−である、
ｇ）Ｘ２及びＸ５はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ６はＯＰＯ３２−である、
ｈ）Ｘ２及びＸ３はＯＰＯ３２−であり、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＳＯ３−である、又は
ｉ）Ｘ２及びＸ３はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＰＯ３２−である
ことを特徴とする請求項７又は８に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１−９のいずれか一項に記載の化合物を含むことを特徴とする、Ｃ．ディフィシル感染症の予防又は治療用薬剤。
【請求項１１】
さらに抗生物質を含むことを特徴とする請求項１０に記載の薬剤。
【請求項１２】
前記抗生物質はメトロニダゾール、バンコマイシン、又はフィダキソマイシンであることを特徴とする請求項１１に記載の薬剤。
【請求項１３】
錠剤、カプセル、液剤、粉末、又はシロップ剤としての請求項１０−１２のいずれか一項に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
説明
本発明は、クロストリジウム・ディフィシル毒素の腸溶性活性化物質、特に六員環ポリオールのポリ‐リン酸誘導体、ポリ硫酸誘導体、又はポリリン酸／硫酸混合誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロストリジウム・ディフィシルは、ヒト患者において重度の下痢を引き起こすグラム陽性菌の種である。細菌は劣化した細菌叢を有する患者の大腸にのみコロニーを形成することができるため、Ｃ．ディフィシル感染症（ＣＤＩ）は、一般には抗生物質治療を受けている患者に影響を与える。Ｃ．ディフィシルの抗生物質耐性株の出現は、北米及び欧州において最近発生しており、新たな、より毒性のある株の蔓延によってますます深刻な罹患率及び死亡率をもたらしている。
【０００３】
Ｃ．ディフィシルは、ヒト成人人口の２．５％に無症候性にコロニーを形成する。この細菌は一般的な殺菌方法によって無力化することが困難である胞子を形成する。その結果、Ｃ．ディフィシル感染症は、病院での長期滞在においてよく見られる結果である。米国において、この病原体は病院関連性下痢症の主要な原因であると考えられている。
【０００４】
選択された現在の治療は、メトロニダゾール、又はこれが失敗した場合にはバンコマイシンの経口投与である。ＣＤＩの臨床症状は、細菌自体の存在によってよりも、大腸内でＣ．ディフィシルによって分泌される２つの毒性タンパク質によって引き起こされているので、近年これらの毒素を標的にして努力がなされてきたが（例えば、高分子結合剤を使用）、これまでのところ臨床試験において成功していない。
【０００５】
Ｃ．ディフィシルエンテロトキシン（毒素Ａ、ＴｃｄＡ）及び細胞毒（毒素Ｂ、ＴｃｄＢ）は、疾患の症状の主な原因物質である（毒素生物学の再調査のために、Ｖｏｔｈ  ａｎｄ  Ｂａｌｌａｒｄ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００５，１８，２４７‐２６３を参照のこと）。簡潔には、両方の毒素は、毒素の細胞への付着を仲介する第１ドメイン；サイトゾルへの移行を促進する第２ドメイン；自己タンパク質分解により有毒なドメインの切断を引き起こす第３ドメイン；そして最後に、影響を受ける細胞内において毒素の生理学的影響をもたらす有毒なドメイン又はその「弾頭」、の４つのドメインから構成されている。
【０００６】
Ｒｅｉｎｅｋｅら（Ｎａｔｕｒｅ  ２００７，４４６，４１５）は、細胞サイトゾル内でのＴｃｄＡ／ＴｃｄＢ自動処理の天然トリガーとしてのミオ‐イノシトールヘキサキスホスフェート（ＩＰ６）を同定した。Ｅｇｅｒｅｒら（ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．２０１０，６，ｅ１０００９４２）及びＳｈｅｎら（Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１１，１８，３６４）は、毒素の媒介による病原性に対する治療的介入の手段として、ＩＰ６誘発性の自動処理メカニズムを標的とすることを提案した。
【０００７】
Ｋｒｅｉｍｅｙｅｒらは、ＣＤＩに介入するためにＩＰ６を薬学的に使用することを提案した（Ｎａｕｎｙｎ‐Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ  Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１１，３８３，２５３）。しかしながら、大腸内での高いカルシウム濃度の存在は、ＩＰ６を沈殿させ、かつそれが活性になることを妨げるため、この手法は実現可能ではない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｖｏｔｈ  ａｎｄ  Ｂａｌｌａｒｄ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００５，１８，２４７‐２６３
【非特許文献２】Ｒｅｉｎｅｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２００７，４４６，４１５
【非特許文献３】Ｅｇｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．２０１０，６，ｅ１０００９４２
【非特許文献４】Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１１，１８，３６４
【非特許文献５】Ｎａｕｎｙｎ‐Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ  Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１１，３８３，２５３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、本発明の目的は、ＣＤＩに悩む患者のために改善された治療の選択肢を提供することである。この目的は、独立請求項の主題によって達成される。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
定義
本発明との関係において、アルキル又はアルキル基という用語は、直鎖、分岐鎖、環状、又は直鎖若しくは分岐鎖の側鎖を有する環状であり得る飽和炭化水素部分を意味する。アルキルという用語は、プロペニルなどの部分的に不飽和な炭化水素を含む。例としては、メチル、エチル、ｎ‐ブチル又はイソブチル、ｎ‐ヘキシル又はシクロヘキシルがある。アルキルという用語は、ヘテロ原子によって連結又は架橋されたアルキル基にまで及んでもよい。本発明との関係において、ヘテロ原子は、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）及び酸素（Ｏ）である。
【００１１】
本発明との関係において、Ｃ１‐Ｃ３アルキルは、１，２、又は３個の炭素原子を有する飽和した直鎖又は分岐鎖の炭化水素を意味し、１つの炭素‐炭素結合は不飽和であってもよく、１つのＣＨ２部分は酸素と交換されてもよい（エーテル架橋）。Ｃ１‐Ｃ３アルキルについての非限定的な例には、メチル、エチル、プロピル、プロプ‐２‐エニル、及びプロプ‐２‐イニルがある。
【００１２】
本発明との関係において、Ｃ１‐Ｃ５アルキルは、１，２、３、４、又は５個の炭素原子を有する飽和した直鎖又は分岐鎖の炭化水素を意味し、１つ又は２つの炭素‐炭素結合は不飽和であってもよく、１つのＣＨ２部分は酸素と交換されてもよい（エーテル架橋）。
Ｃ１‐Ｃ５アルキルについての非限定的な例には、上記のＣ１‐Ｃ３アルキルに対して与えられた例、さらにｎ‐ブチル、２−メチルプロピル、ｔｅｒｔ‐ブチル、３−メチルブタ‐２‐エニル、２‐メチルブタ‐３‐エニル、３‐メチルブタ‐３‐エニル、ｎ‐ペンチル、２‐メチルブチル、３‐メチルブチル、１，１‐ジメチルプロピル、１，２‐ジメチルプロピル、１，２‐ジメチルプロピル、ブタ‐３‐エニル、ブタ‐３‐イニル、及びペント‐４‐イニルがある。
【００１３】
本発明との関係において、Ｃ３‐Ｃ１０アルキルは、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の炭素原子を有する飽和した直鎖又は分岐鎖の炭化水素を意味し、１、２、又は３つの炭素‐炭素結合は不飽和であってもよく、１つのＣＨ２部分は酸素と交換されてもよい（エーテル架橋）。
【００１４】
本発明との関係において、単糖は、３、４、５、６、又は７個の炭素原子を含む糖を意味する。例としては、グリセルアルデヒド（Ｃ３）、エリトロース若しくはトレオース（Ｃ４）、アラビノース、リボース、若しくはキシロース（Ｃ５）、グルコース、マンノース、ガラクトース、若しくはフルクトース（Ｃ６）、又はセドヘプツロース（Ｃ７）がある。Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、及びＣ７の単糖の糖アルコール及びアミノ糖は、本明細書で使用される定義に従って単糖の群に含まれる。
【００１５】
オリゴ糖は、上記の定義に従い、２−１０個の同一又は異なる単糖から成る分子である。多糖は１０個超の単糖を含む。
【００１６】
特定群の単量体の重合体はホモ重合体である（多数の同一単量体で構成されている）。特定の選択された単量体の共重合体は、少なくとも２群の単量体によって構成されるヘテロ重合体である。
【００１７】
本発明は、大腸内腔において毒素の切断を誘発することで、弾頭がその目的地に到達する前にそれを切り離してそれを無害にするための、経口療法として提供されるＩＰ６の小分子類似体の新規設計に基づいている。ＩＰ６自体は大腸内腔に見られる高いカルシウム濃度では可溶性でないのでこの目的のために使用することができないため、本発明では改善された溶解性を有するＩＰ６の新規類似体を提供する。
【００１８】
本発明の第１の態様によれば、一般式（１）によって特徴付けられる医薬化合物が提供される。
【００１９】
【化１】
0005766884.tif 000002
【００２０】
式中、Ｒ１は以下を含む群より選択される溶解性官能基Ｒ２であるか、又はそれを含む。
【００２１】
‐ポリエチレングリコール；
‐単糖、オリゴ糖、又は多糖、
‐ポリグリセロール、例えば式（（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＨ‐ＣＨ２Ｏ）ｎ‐）で表されるポリグリセロールであり、Ｒ３は水素、メチル、又はエチルであり、ｎは３−２００の値を有し、又は分岐若しくは超分岐ポリグリセロール、例えばそれは式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＲ５‐ＣＨ２‐０）ｎ‐）によって表すことができ、Ｒ５は水素又はグリセロール鎖であり、Ｒ３は水素、メチル、又はエチルである；
‐ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、ビニルアルコール（ＶＡ）、ビニルピロリドン（ＶＰ）、Ｎ‐イソプロピルアクリルアミド（ＮＩＰＡＭ）、及び／又はＰＥＧメタクリレート（ＰＥＧＭＡ）のいずれかの複数の単量体を含む重合体又は共重合体であり、
【００２２】
【化２】
0005766884.tif 000003
【００２３】
ｎ及びｍは独立して３−２００の値を有する；
‐スチレン・無水マレイン酸共重合体；
‐独立してアミン‐、ヒドロキシ‐、チオール‐、カルボン酸、カルボン酸アミド、スルホン酸、又はスルホンアミドの官能基を含む群から選択される少なくとも３つの置換官能基を含むＣ３‐Ｃ１０アルキル。
【００２４】
各Ｘは独立してＯＰＯ３２−、ＯＰＳＯ２２−、又はＯＳＯ３ーから選択される。
【００２５】
Ｚは１−３個の炭素原子及び／又はヘテロ原子を含むアルキル鎖であり、必要に応じてＸ基を含み、Ｘは上記で定義した意味を有する。
【００２６】
アミン官能基は、ＮＲ’Ｒ’’官能基であり、Ｒ’及びＲ’’は独立して水素及びＣ１‐Ｃ５アルキルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ’及びＲ’’は、水素及びＣ１‐Ｃ３アルキルから選択される。ヒドロキシ官能基はＯＨである。チオール官能基はＳＨである。カルボン酸官能基はＣＯＯＨ又はそのアニオン、ＣＯＯーである。カルボン酸アミドは、ＣＯＮＲ’Ｒ’’であり、Ｒ’及びＲ’’は独立して上記で示される意味を有する。スルホン酸はＳＯ３Ｈである。スルホン酸アミドはＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’であり、Ｒ’及びＲ’’は独立して上記で示される意味を有する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、前記ポリエチレングリコールは、式（Ｒ３‐（Ｏ‐ＣＨ２‐ＣＨ２）ｎ‐）で表され、Ｒ３は水素、メチル、又はエチルであり、ｎは３−２００の値を有する。いくつかの実施形態では、ｎは３−２０の値を有する。いくつかの実施形態では、ｎは１０−３０の値を有する。いくつかの実施形態では、ｎは９−４５の値を有する。いくつかの実施形態では、前記ポリエチレングリコールは分岐ポリエチレングリコールである。
【００２８】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、エーテル、チオエーテル、カルボン酸エステル、アミン、カルボン酸アミド、尿素、スルホンアミド、ホスホルアミド、リン酸エステル、ホスホロチオエート、アルキル、トリアゾール、若しくはカルバメートの官能基、又は前述の基のいずれかの組み合わせを含み、これらはＲ２を分子に連結させる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｒ２を分子に連結させる、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨＸ、ＣＨＸ‐ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨＸ、ＣＨＸ‐ＣＨＸ、ＣＨ２‐Ｏ、又はＣＨＸ‐Ｏ基である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、式（１）は、五員、六員、又は七員のアルキル環を表し、Ｒ１は環を形成している炭素原子の１つに共有結合している。
【００３１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は環を形成しているＣＨ基に結合している。他の実施形態によれば、Ｒ１は環を形成しているＣＸ基に結合している（つまり、環炭素はＣＸＲ１で表すことができ、Ｘ及びＲ１は上記で示される意味を有する）。
【００３２】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、独立してアミン‐、ヒドロキシ‐、チオール‐、カルボン酸、カルボン酸アミド、スルホン酸、又はスルホンアミドの官能基を含む群から選択される、３、４、５、６、７、又は８個の置換機能基を含む、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、又はＣ８のアルキル基である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＨ‐ＣＨ２Ｏ）ｎ‐）で表されるポリグリセロールであり、Ｒ３は、水素、メチル、又はエチルであり、ｎは３−２００の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは３−２０の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは１０−３０の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは９−４５の値を有する。
【００３４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＲ５‐ＣＨ２‐Ｏ）ｎ‐）で表される分岐ポリグリセロールであり、Ｒ５は水素、又は式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＨ‐ＣＨ２‐Ｏ）ｎ‐）で表される直鎖のグリセロール鎖であり、Ｒ３は水素、メチル、又はエチルである。
【００３５】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＲ５‐ＣＨ２‐Ｏ）ｎ‐）で表される超分岐ポリグリセロールであり、Ｒ５は水素、又は式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＲ６‐ＣＨ２‐Ｏ）ｎ‐）で表されるグリセロール鎖であり、Ｒ６は水素、又は式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＲ７‐ＣＨ２‐Ｏ）ｎ‐）で表されるグリセロール鎖であり、Ｒ７は水素、又は式（Ｒ３‐Ｏ‐（ＣＨ２‐ＣＨＯＨ‐ＣＨ２‐Ｏ）ｎ‐）で表される直鎖のグリセロール鎖であり、Ｒ３は、水素、メチル、又はエチルである。
【００３６】
超分岐グリセロール及びその合成方法は、Ｏｕｄｓｈｏｒｎら、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（２００６），２７，５４７１‐５４７９；Ｗｉｌｍｓら、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（２０１０）４３，１２９‐４１、及びこれらの中で引用されている参考文献に記載されている。
【００３７】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、ビニルアルコール（ＶＡ）、ビニルピロリドン（ＶＰ）、Ｎ‐イソプロピルアクリルアミド（ＮＩＰＡＭ）、及び／又はＰＥＧメタクリレート（ＰＥＧＭＡ）のいずれかの複数の単量体を含む重合体又は共重合体である。
【００３８】
【化３】
0005766884.tif 000004
【００３９】
ｎは３−２００の値を有し、ｍは３−２００の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは３−２０の値を有し、ｍは３−２００の値を有する。
これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは１０−３０の値を有し、ｍは３−２００の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは２０−５０の値を有し、ｍは３−２００の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは３−２００の値を有し、ｍは３−２０の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは３−２００の値を有し、ｍは１０−３０の値を有する。これらの実施形態のいくつかの代替形態では、ｎは３−２００の値を有し、ｍは２０−５０の値を有する。
【００４０】
溶解性官能基が直接化合物に結合されている実施形態では、Ｒ１はＲ２に等しい（Ｒ１はＲ２である）。
【００４１】
いくつかの実施形態では、Ｚは、ＣＨ２、ＣＨＸ、ＣＨＲ１、ＣＸＲ１、ＣＨ２‐ＣＨ２、ＣＨ２‐ＣＨＸ、ＣＨＸ‐ＣＨＸ、ＣＨＲ１‐ＣＨＸ、ＣＸＲ１‐ＣＨＸ、ＣＨＲ１‐ＣＨ２、ＣＸＲ１‐ＣＨ２、ＣＨＲ１‐ＣＨＯＨ、ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２、ＣＨ２‐Ｏ‐ＣＨ２、ＣＨＯＨ‐ＣＨ２‐ＣＨ２、ＣＨＯＨ‐ＣＨＯＨ‐ＣＨＲ１、ＣＨＯＨ‐ＣＨＲ１‐ＣＨＯＨ、ＣＨＸ‐ＣＨ２‐ＣＨ２、ＣＨ２‐ＣＨＸ‐ＣＨ２、ＣＨＸ‐ＣＨＸ‐ＣＨ２、ＣＨＸ‐ＣＨ２‐ＣＨＸ、又はＣＨＸ‐ＣＨＲ１‐ＣＨＸである。
【００４２】
溶解性官能基は、１０ｍｍｏｌ／ｌのＣａ２＋の存在下で、水溶液中での分子の溶解性を提供する。本発明の分子は、１ｍｍｏｌ／ｌよりも高いカルシウム濃度において、ＩＰ６よりも高い溶解性を有する。好ましい実施形態によれば、本発明の分子の溶解度は１０μｍｏｌ／ｌ超である。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明による医薬化合物は一般式（２）によって特徴付けられる。
【００４４】
【化４】
0005766884.tif 000005
【００４５】
式中、Ｘ及びＲ１は上記に概説した意味を有する。
【００４６】
いくつかの実施形態において、化合物は一般式（３）によって特徴付けられ、式中、Ｘ及びＲ１は上記に概説した意味を有する。
【００４７】
【化５】
0005766884.tif 000006
【００４８】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は５−７員環を含み、少なくとも４つの環員は式ＣＨ‐Ｘによって表すことができ、１つの環員は式Ｙ‐Ｒ１によって表すことができ、ＹはＣＨ又はＮであり、Ｒ１及び各Ｘは、独立して上記に定義した意味を有する。いくつかの実施形態では、１つの環員のみが式Ｙ‐Ｒ１によって表すことができる。
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は５員環状構造を有しており、環のうちの４員は式ＣＨ‐Ｘで表され、１員は式Ｙ‐Ｒ１で表され、Ｘ、Ｙ、及びＲ１は上述した通りである。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は６員環状構造を有しており、環のうちの５員は式ＣＨ‐Ｘで表され、１員は式Ｙ‐Ｒ１で表され、Ｘ、Ｙ、及びＲ１は上述した通りである。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は７員環状構造を有しており、環のうちの６員は式ＣＨ‐Ｘで表され、１員は式Ｙ‐Ｒ１で表され、Ｘ、Ｙ、及びＲ１は上述した通りである。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は式（４）によって表される。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は式（５）又は式（６）によって表される。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本発明によるこのような環状分子は、以下の一般式によって表すことができる。
【００５１】
【化６】
0005766884.tif 000007
【００５２】
式中、各Ｘ（独立して）、Ｙ、及びＲ１は上記で定義した意味を有する。
【００５３】
一実施形態では、（６）はポリ（エチレングリコール）ＰＥＧ４００を溶解性官能基として含み、Ｒ１はＣＨ３（ＯＣＨ２‐ＣＨ２）９‐Ｏ‐である。
【００５４】
【化７】
0005766884.tif 000008
【００５５】
ミオ‐イノシトール‐ペンタキスホスフェート‐２‐ＰＥＧ（４００）（７）は、ミオ‐イノシトール‐ヘキサキスホスフェートのＰＥＧ４００類似体である。（７）はカルシウムの存在下でＴｃｄＢ  ＣＰＤを切断するための改善された能力を有することが証明されている。
【００５６】
他の実施形態は、（７）のＰＥＧ２０００類似体、すなわち約４５個のエチレングリコール単量体を有するＰＥＧに関する。
【００５７】
他の実施形態は、式（８）で表されるようなシロ‐イノシトールヘキサキスホスフェートの類似体に関する。
【００５８】
【化８】
0005766884.tif 000009
【００５９】
式中、Ｒ１は、上記で概説したものと同様の意味を有する。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は式（８）で表すことができ、Ｒ１はポリ（エチレングリコール）部分である。
【００６０】
非限定的な例として本明細書に示される溶解性官能基であるポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖は、大腸内腔においてその中に存在するカルシウムの濃度で本発明の化合物を溶解させるために分子に結合される。
【００６１】
本発明の第２の態様によれば、イノシトールヘキサキススルフェート（イノシトールヘキサスルフェート；ＩＳ６）がＣＤＩの治療又は予防のために提供される。特に好ましい実施形態は、ミオ‐イノシトールヘキサキススルフェート（１１）又はシロ‐イノシトールヘキサキススルフェート（１２）である。
【００６２】
【化９】
0005766884.tif 000010
【００６３】
構造及び電荷密度においてはＩＰ６と同等であるが、本発明では驚くべきことに、カルシウムの存在下で、ＩＳ６はＩＰ６よりもはるかに活性があることを示す（図４を参照のこと）。
【００６４】
イノシトールヘキサキススルフェートは市販されている（ＣＡＳ番号２８４３４‐２５‐５；とりわけ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、米国、カリフォルニア州、サンタクルーズ）。
【００６５】
本発明の第３の態様によれば、一般式（１５）によって特徴付けられる医薬化合物が提供される。
【００６６】
【化１０】
0005766884.tif 000011
【００６７】
式中、各Ｘは、全てのＸがＯＰＯ３２−でなく、かつ全てのＸがＯＳＯ３−ではないという条件で、独立してＯＰＯ３２−、ＯＰＳＯ２２−、又はＯＳＯ３−から選択される。
【００６８】
本発明の第４の態様によれば、前の段落で式（１５）によって特徴付けられる化合物は、薬剤としての使用のために、特にクロストリジウム・ディフィシルによる感染の予防又は治療に使用するために提供される。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本発明のこの第３の態様による化合物は、一般式（１５ａ）又は（１５ｂ）によって特徴付けられ、式中、Ｘは上記で概説した意味を有する。
【００７０】
【化１１】
0005766884.tif 000012
【００７１】
いくつかの実施形態では、本発明のこの第３の態様による化合物は、一般式（１６ａ）又は（１６ｂ）によって特徴付けられる。
【００７２】
【化１２】
0005766884.tif 000013
【００７３】
式（１６ａ）又は（１６ｂ）中、
ａ）Ｘ２はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６は独立してＯＰＯ３２−、ＯＰＳＯ２２−、もしくはＯＳＯ３−から選択される、
ｂ）Ｘ１、Ｘ３、及びＸ５はＯＰＯ３２−であり、Ｘ２、Ｘ４、及びＸ６はＯＳＯ３−（化合物１６ａ‐ｂ又は１６ｂ‐ｂ）である、
ｃ）Ｘ１、Ｘ３、及びＸ５はＯＳＯ３−であり、Ｘ２、Ｘ４、及びＸ６はＯＰＯ３２−（化合物１６ａ‐ｃ又は１６ｂ‐ｃ）である、
ｄ）Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３はＯＰＯ３２−（化合物１６ａ‐ｄ又は１６ｂ‐ｄ）である、
ｅ）Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＰＯ３２−であり、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３はＯＳＯ３−（化合物１６ａ‐ｅ又は１６ｂ‐ｅ）である、
ｆ）Ｘ２及びＸ５はＯＰＯ３２−であり、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ６はＯＳＯ３−（化合物１６ａ‐ｆ又は１６ｂ‐ｆ）である、
ｇ）Ｘ２及びＸ５はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ６はＯＰＯ３２−（化合物１６ａ‐ｇ又は１６ｂ‐ｇ）である、
ｈ）Ｘ２及びＸ３はＯＰＯ３２−であり、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＳＯ３−（化合物１６ａ‐ｈ又は１６ｂ‐ｈ）である、又は
ｉ）Ｘ２及びＸ３はＯＳＯ３−であり、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６はＯＰＯ３２−（化合物１６ａ‐ｉ又は１６ｂ‐ｉ）である。
【００７４】
上記で定義した化合物は、標準的な方法に従って合成することができる。化合物１６ａ‐ｂの合成は本発明の実施例において記載する。
【００７５】
本発明の他の態様によれば、本発明の上記態様のいずれかによる化合物は、最も広い所定の定義において、又はいずれかの実施形態で特定されるように、薬剤としての使用のために提供される。
【００７６】
本発明のさらに他の態様によれば、本発明の上記態様のいずれかによる化合物は、最も広い所定の定義において、又はいずれかの実施形態で特定されるように、Ｃ．ディフィシル感染症の治療又は予防において使用するために提供される。
【００７７】
本発明による化合物は、すでにＣＤＩと診断された患者に、又はＣＤＩを患っている疑いのある患者に与えることができる。あるいは、化合物は、病院環境において抗生物質治療中の患者など、感染症にかかる危険性のある患者のための予防薬として使用することができる。
本発明による化合物は、合成が簡単であり、胃腸管内での分解に抵抗性があり、かつ血流に吸収されにくいため、潜在的な副作用を回避することができる。本発明による化合物は、活性であるために哺乳類又は細菌の膜を貫通する必要はなく、このため本発明による化合物は生体内でより効果的となる。さらに、本発明による化合物は細菌に対して選択圧を及ぼす可能性が低いため、耐性に関連する問題を回避する。
【００７８】
本発明のさらに他の態様によれば、本発明の上記態様のいずれかによる化合物を含む、Ｃ．ディフィシル感染症を予防又は治療する方法に使用するための医薬組成物が提供される。
【００７９】
好ましい医薬組成物は、約１％−約９５％の活性成分、好ましくは約２０％−約９０％の活性成分を含む。
【００８０】
本発明の上記態様による医薬組成物は単独で、又は１つ以上の他の治療薬と組み合わせて投与することができる。併用療法は、本発明の化合物と１つ以上の他の抗生物質との固定された組み合わせの形態をとることができる。投与は交互に行ってもよく、あるいは薬物は互いに独立して与えられるか、又は固定された組み合わせとして与えられてもよい。
【００８１】
好ましい実施形態によれば、医薬組成物は、本発明の上記態様のいずれかによる本発明の化合物、さらにメトロニダゾール、バンコマイシン、及び／又はフィダキソマイシンを含む。
【００８２】
本発明のさらに他の態様によれば、剤形は本発明の上記態様のいずれかによる化合物を含んで提供される。経口製剤、特に錠剤、シロップ剤、液剤、カプセル、又は粉末が好ましい。
【００８３】
好ましい実施形態によれば、このような剤形はさらに、抗生活性化合物、例えば（非限定的な例として）、メトロニダゾール、バンコマイシン、又はフィダキソマイシンを含む。
【００８４】
本発明のさらに他の態様によれば、治療計画は、本発明による化合物の投与を含むＣＤＩの予防及び治療のために提供される。投与は本明細書に記載の手段のいずれかによって達成され得る。
【００８５】
また、本発明の範囲内には、本発明による化合物をそれを必要とする対象に投与することを含む、ＣＤＩを予防又は治療する方法がある。
【００８６】
同様に、本発明による化合物は、ＣＤＩの予防及び治療のための薬剤を製造するために提供される。本発明による薬剤は、当該技術分野において周知の方法、特に、従来の混合、コーティング、造粒、溶解、又は凍結乾燥によって製造される。
【００８７】
例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｘなどの単一の特徴についての代替手段が「実施形態」として本明細書において説明されている場合はいつでも、このような代替手段は、分子自体が提供される、又は本明細書における方法又は医療適用に使用するために提供される分子全体の別個の実施形態を形成するために、自由に組み合わせることが可能であることを理解すべきである。従って、Ｒ１についての代替実施形態のいずれかは、Ｚの代替実施形態のいずれかと、又は本明細書に記載の式で提供される環構造のいずれかと組み合わせることができる。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】インビトロにおける活性化物質の化合物（白色の丸）又はＩＰ６の存在下でのＴｃｄＢシステインプロテアーゼドメイン切断の濃度依存性（１Ａ）、及び１０ｍＭのＣａ２＋での対応する速度論（１Ｂ）を示す図である。
【図２】活性化物質の化合物（７）（白色の丸）、そのＰＥＧ２０００類似体（白色の三角）、及びそのメチル類似体（黒色の四角）の存在下での、ＴｃｄＢシステインプロテアーゼドメイン切断の濃度依存性を示す図である。
【図３】化合物７の合成を示す図である。
【図４】活性化物質の化合物（１１）に対する１０ｍＭのＣａ２＋の存在下でのＴｃｄＢシステインプロテアーゼドメイン切断の濃度依存性を示している。活性化物質のデータを白色の丸で示し、ＩＰ６コントロールを黒色の四角で示す図である。
【図５】化合物（１６ａ‐ｂ）の合成を示す図である。
【図６】活性化物質の化合物（１６ａ‐ｂ）に対する１０ｍＭのＣａ２＋の存在下でのＴｃｄＢシステインプロテアーゼドメイン切断の濃度依存性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００８９】
＜実施例＞
１．化合物（７）の合成
合成は図３に示す順序に従った。
【００９０】
化合物Ｂ：水素化ナトリウム（４．３ｍｍｏｌ、１０３．７ｍｇ）／ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１０ｍＬ）の懸濁液に、化合物Ａ［Ｍａｒｔｉｎ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９４，５９，４８０５］（２．１６ｍｍｏｌ、１３６３ｍｇ）／ＤＭＦ（１０ｍＬ）の溶液を滴下しながら添加した。
添加が完了したら、混合物を室温で３０分間撹拌し、続いてＭｅＯ‐ＰＥＧ‐ＯＴｓ（ＯＴｓはトルエンスルホナート）（３．２ｍｍｏｌ、１．６４ｇ／１０ｍＬ  ＤＭＦ）を添加した。反応物を一晩撹拌させた後、水（５ｍＬ）で急冷した。混合物をジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチル：ヘキサンが２０：８０；３０：７０；４０：６０；６０：４０；８０：２０；１００：０である６つの割合の１００ｍＬを用いて、シリカゲルでクロマトグラフィー精製した。
クロマトグラフィーにより、平均して９ＰＥＧ単位を有する化合物Ｂを含む、異なるＰＥＧサイズの生成物の分画をもたらした。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ７．２９‐７．１３（ｍ，２５Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），４．７９（ｓ，２Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ），４．５９（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９７‐３．８８（ｍ，５Ｈ），３．６４‐３．４２（ｍ，３１Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２９‐３．２５（ｍ，５Ｈ）。
【００９１】
化合物Ｃ：化合物Ｂを、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、４ｍＬ）、メタノール（７ｍＬ）、及び水（３ｍＬ）の混合物に溶解し、続いて炭素上のパラジウム（１０％超）を添加した。混合物を水素雰囲気下に置き、室温で一晩撹拌した。
その後、反応混合物を窒素でパージし、濾過して溶媒を蒸発させた。粗混合物を逆相カートリッジ（Ｓｅｐ‐Ｐａｋ、Ｗａｔｅｒｓ社、１ｇ、Ｃ１８、カタログ番号ＷＡＴ  ０３６９０５）を用いて１０ｍＬの水で溶出することにより精製した。全ての画分（１．５ｍｌ）を凍結乾燥し、１Ｈ  ＮＭＲ分析により分析した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ  ３．９６‐３．９４（ｍ，２Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７８‐３．６９（ｍ，２８Ｈ），３．６９‐３．６０（ｍ，５Ｈ），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，２．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ），３．２５（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）。
【００９２】
化合物Ｄ：化合物Ｃ（０．２ｍｍｏｌ、１１９ｍｇ）をテトラゾール（３．６３０ｍｍｏｌ、８．１ｍＬ、０．４５Ｍ／ＣＨ３ＣＮ）及びＤＣＭ（１０ｍＬ）に懸濁させ、その後Ｎ，Ｎ‐ジエチル‐１，５‐ジヒドロ‐２，４，３‐ベンゾジオキサホスフェピン‐３‐アミン（１．８ｍｍｏｌ、４３４ｍｇ）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。その後、混合物を−１０℃に冷却し、メタ‐クロロ過安息香酸（ｍＣＰＢＡ、Ｎａ２ＳＯ４で予め乾燥、４．８ｍｍｏｌ、１１８９ｍｇ）／ＤＣＭ（２ｍＬ）の溶液を添加した。混合物をさらに１０分間−１０℃で撹拌させ、その後それを室温にして１時間撹拌した。混合物を希亜硫酸ナトリウムで洗浄し、ＤＣＭで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して濃縮した。残留物を、１−５％のメタノール／ＤＣＭの勾配によりシリカゲルでクロマトグラフィー精製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ７．４１‐７．２７（ｍ，１８Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝６．９，１．７Ｈｚ，２Ｈ），５．５９‐５．５１（ｍ，６Ｈ），５．４４（ｔ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，２Ｈ），５．３７‐５．２９（ｍ，６Ｈ），５．２５‐４．９５（ｍ，１０Ｈ），４．７４（ｄｄｄ，Ｊ＝９．９，７．６，２．１Ｈｚ，２Ｈ），４．６１（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．６８‐３．５０（ｍ，２２Ｈ），３．４８（ｄｄ，Ｊ＝６．１，４．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４０‐３．３４（ｍ，７Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １３５．７８，１３５．７２，１３５．４，１３５．１４，１３４．９９，１２９．３８，１２９．２７，１２９．２６，１２９．２２，１２９．１４，１２９．１１，１２８．９６，１２８．９５，７７．６，７６．０５，７６．０１，７３．８，７１．９，７０．６７，７０．６０，７０．５７，７０．５４，７０．５３，７０．４９，７０．３８，７０．３４，７０．２９，６９．４６，６９．３９，６９．３３，６９．２４，６９．１６，６９．０１，６８．９５，５９．０。
【００９３】
化合物（７）：化合物ＤをＴＨＦ（１ｍＬ）、メタノール（１．５ｍＬ）、及び水（２ｍＬ）の混合物に溶解させ、続いて炭素上のパラジウム（１０％超）を添加した。混合物を水素雰囲気下に置いて室温で一晩撹拌した。その後、混合物を窒素でパージし、濾過して濃縮した。化合物を希ＮａＯＨ（１７０μｌ、０．１Ｍ）の添加によりｐＨ７とした。残留物をセファデックスカラム（ＰＤ‐１０，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社，Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ‐２５  Ｍ，カタログ番号１７‐０８５１‐０１）を用いて１０ｍｌの水で溶出することにより精製した。
全ての画分（１．５ｍＬ）を凍結乾燥し、１Ｈ  ＮＭＲ分析により分析した。生成物を含む画分を、さらに逆相カートリッジ（Ｓｅｐ‐Ｐａｋ、Ｗａｔｅｒｓ社、１ｇ、Ｃ１８、カタログ番号ＷＡＴ  ０３６９０５）を用いて１０ｍＬの水で溶出することにより精製した。全ての画分（１．５ｍｌ）を凍結乾燥し、１Ｈ  ＮＭＲ分析により分析した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ  ４．４４（ｑ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｓ，１Ｈ），４．１６‐４．１０（ｍ，３Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ），３．８３‐３．６３（ｍ，２６Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ  １．５，１．２，０．８。
【００９４】
２．１０ｍＭのＣａ２＋の存在下でのＥＣ５０の決定
試験される化合物を、１０ｍＭのＣａ２＋の存在下で、ＳＥＱ  ＩＤ  １のＣ．ディフィシル毒素Ｂの組換えＨｉｓ標識システインプロテアーゼドメイン／トリス（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。切断されたタンパク質断片をＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分離し、クマシー染色によって可視化した。切断の程度は、ＩｍａｇｅＪソフトウェアパッケージを使用してタンパク質のバンド強度から定量した。シグナルは、陽性及び陰性のコントロールの切断に対して標準化した。
【００９５】
ＩＰ６及び化合物（７）に対するこのアッセイの結果を図１Ａに示す。結果は、５０％の毒素断片の切断は、ＩＰ６及び（７）において同様の濃度で達成されることを実証している。ＩＰ６の活性は１００μＭでほぼ完全に消失する一方で、（７）は残存活性を保持している。（７）のＰＥＧ鎖は、恐らくより広い範囲の溶解性を有する分子を与える。
【００９６】
３．切断速度の比較
試験される化合物を、１０ｍＭのＣａ２＋の存在下で、（上記に示されるものと同じ配列の）Ｃ．ディフィシル毒素ＢのＨｉｓ標識システインプロテアーゼドメイン／トリス（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）に添加し、３７℃で２４時間インキュベートして、一定分量を一定の間隔で取り出した。切断されたタンパク質断片を、上記に示したように分離し、可視化して分析した。ＩＰ６及び化合物（７）に対するこのアッセイの結果を図１Ｂに示す。結果は、４間後の切断の程度は（７）においてＩＰ６よりも５倍高いことを実証している。
【００９７】
４．化合物（１６ａ‐ｂ）の合成
化合物Ｆ：窒素雰囲気下の２，４，６‐トリ‐Ｏ‐（４−メトキシベンジル）‐ミオ‐イノシトール（Ｅ）［Ｄ．Ｌａｍｐｅ，Ｃ．Ｌｉｕ，Ｂ．Ｖ．Ｌ．Ｐｏｔｔｅｒ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４，３７，９０７］（０．５４１ｇ、１ｍｍｏｌ、１当量）／乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ、０．０５ｍ）の溶液を、テトラゾール／アセトニトリル０．４５ｍ（２０．０ｍｌ、９．０ｍｍｏｌ、９当量）及びＯ‐キシリレン‐Ｎ，Ｎ−ジエチルホスホラミダイト（６ｍｍｏｌ、１．４４ｇ、６当量）で処理した。反応混合物を２日間室温で撹拌した。
Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させたｍＣＰＢＡ（１２ｍｍｏｌ、２．０７ｇ、１２当量）の溶液を−１０℃で添加し、反応混合物をさらに４５分間室温で撹拌した。その後、混合物をＥｔＯＡｃ中で希釈し、水性ＮａＨＣＯ３の飽和溶液及び食塩水で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して真空中で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、勾配０％−４％、３回）での精製により、２，４，６‐トリ‐Ｏ‐（４‐メトキシベンジル）‐１，３，５‐トリ‐Ｏ‐（ｏ‐キシレンホスホ）ミオ‐イノシトール（Ｆ）を白色固体として得た（９８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．２８‐７．３６（１２Ｈ，ｍ），７．１９‐７．２２（２Ｈ，ｍ），７．１２‐７．１７（４Ｈ，ｍ），６．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５Ｈｚ），６．７１（４Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １３．６Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １３．６Ｈｚ），５．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １３．７Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １３．７Ｈｚ），４．９１‐５．０８（８Ｈ，ｍ），４．８３‐４．８９（４Ｈ，ｍ），４．６９‐４．６１（３Ｈ，ｍ），４．５７（１Ｈ，ｑ，Ｊ  ９．２Ｈｚ），４．３８（２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ  ２．４，８．１，９．５Ｈｚ），４．１０（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ９．５Ｈｚ），３．７８（３Ｈ，ｓ），３．７２（６Ｈ，ｓ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）１５９．３，１５９．１，１３５．４，１３５．３，１３５．２，１３０．８，１３０．３，１２９．７，１２９．６，１２９．２，１２９．１３，１２９．１２，１２９．０，１２８．９，１２８．６，１１３．７４，１１３．５７，８０．６（ｄ，ＪＣＰ  ６．０Ｈｚ），７８．１（ｄｄ，ＪＣＰ  ６．９，３．２Ｈｚ）７７．６，７７．１（ｍ），７６．０，７４．９，６８．８，６８．７０，６８．６８，６８．６２，６８．３４，６８．２８，５５．４，５５．３；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６０ＭＨｚ，１Ｈ‐デカップル，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）１．１０，‐１．３２。
【００９８】
化合物Ｇ：化合物Ｆ（９７ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を１ｍＬのジクロロメタンに溶解した。５：１に混合した６ｍＬのトリフルオロ酢酸‐水を添加した。２５分間撹拌し、その後１０ｍＬのトルエンで希釈して真空下で濃縮した。得られた残留物をヘキサン及びジクロロメタンを用いてすり潰し、その後、高真空下で乾燥させた。６８ｍｇの粗化合物Ｇを得て、それを次の工程で直接使用した。
【００９９】
化合物Ｈ：化合物Ｇ（３９ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＤＭＦに溶解し、ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ（１９５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を５０℃で一晩撹拌し、ロータリーエバポレータで濃縮した。残留物を６ｍＬの水に溶解し、濾過して３つのＶａｃ  ６ｃｃ  １ｇ  ｔＣ１８  Ｓｅｐ‐Ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社）にロードした。カラムを０‐４０％の勾配のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏで溶出した。３２ｇのＨを得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＭｅＯＤ）：δ  ７．４５‐７．４０（ｍ，４Ｈ），７．３９‐７．３３（ｍ，４Ｈ），７．２８‐７．２４（ｍ，２Ｈ），７．２１‐７．１９（ｍ，２Ｈ），５．６９‐５．６０（ｍ，４Ｈ），５．４７（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，１０．４Ｈｚ，２Ｈ），５．４１（ｔ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，２Ｈ），５．４０‐５．３５（ｍ，２Ｈ），５．２０‐５．１６（ｍ，１Ｈ），５．１１‐４．９７（ｍ，５Ｈ），４．９０‐４．８１（ｍ，２Ｈ），３．２４（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１７Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２５Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ；ＭｅＯＤ／ＣＤＣｌ３）：δ  １３１．６，１３１．２，１２５．２６，１２５．２１，１２５．０９，１２４．９３，１２４．８７，１２４．７８，７０．２５，７０．２２，７０．１９，６９．９５，６９．９０，６５．１８，６５．１１，６５．０７，６５．００，６４．８５，６４．７８，４２．４，４．２；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ；ＭｅＯＤ／ＣＤＣｌ３）：δ‐７．８，‐８．９。
【０１００】
化合物ＰＳＰＳＰＳ（（１６ａ）ｂ）：化合物Ｈ（３２ｍｇ）を３ｍＬのＨ２Ｏに溶解した。小さじ１杯の活性炭上のＰｄ（１０％）を添加し、混合物をＨ２雰囲気下に置き、４時間撹拌した。その後、混合物をＮ２でパージして、少量のＮＨ４ＯＨを添加した。混合物をセライトを通して濾過し、ロータリーエバポレータで蒸発させた。残留物を１ｍＬの水に溶解し、Ｖａｃ  ６ｃｃ  １ｇ  ｔＣ１８  Ｓｅｐ‐Ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社）にロードし、水で溶出した。溶出画分を凍結乾燥し、１Ｈ  ＮＭＲにより分析した。１６ｍｇのＰＳＰＳＰＳ・２Ｅｔ３ＮＨ＋・ｘＮＨ４＋を得た。
１Ｈ‐ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ  ４．９３‐４．７８（ｍ，３Ｈ），４．５５‐４．３９（ｍ，３Ｈ），３．１３（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１４Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２１Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ  ‐０．３，‐０．７。
【０１０１】
化合物ＰＳＰＳＰＳ（１６ａ‐ｂ）によって誘発される切断は、実施例２に記載するようにカルシウムの存在下で測定し、その結果を図６に示す。この誘導体によって誘発される切断は２０μＭの濃度で５０％であり、これはＩＰ６（６０１μＭ）よりも効率的である。この結果は、いくつかの硫酸基の存在はカルシウムの存在下で化合物の活性を増強することを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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