(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）式（Ａ）の化合物１と：
【化１】
0005683462.tif 000007
（ｂ）ベバシズマブとの組み合わせを含む腫瘍治療用組成物であって、組み合わせの活性成分が、いずれの場合も遊離の形態またはこれらの医薬的に許容される塩もしくはいずれかの水和物の形態にて存在する組成物。
【請求項２】
同時、別々または連続的使用のために組み合わせた調製物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と混合された請求項１に記載の組成物を含む腫瘍治療用医薬組成物。
【請求項４】
増殖性障害を処置するまたはこの進行を遅延させるための薬剤の調製のための、請求項１または２に記載の組成物の使用。
【請求項５】
治療が必要なヒトを含む哺乳類におけるベバシズマブを用いた抗悪性腫瘍治療によって生じる副作用を低下させるための薬剤の調製のための、請求項１または２に記載の組成物の使用。
【請求項６】
好適な容器の手段において、（ａ）請求項１に記載の式（Ａ）の化合物１と、（ｂ）ベバシズマブとの組み合わせを含む腫瘍治療用組成物を含有する商業用のパッケージであって、活性成分が、いずれの場合も遊離の形態またはこれらの医薬的に許容される塩もしくはいずれかの水和物の形態にて存在し、同時、別々または連続的なこれらの使用に関する説明書も伴う、パッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に癌の処置分野に関し、より詳細にはオーロラキナーゼ阻害剤と、相乗的な抗増殖作用を有する、成長因子を阻害する抗体および／またはプロテアソーム阻害剤および／またはキナーゼ阻害剤とを含む抗腫瘍組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼ（ＰＫ）の機能障害は多数の疾患の特徴である。ヒト癌に関与するオンコジーンおよびプロトオンコジーンの多くはＰＫをコードする。ＰＫの高い活性は多くの非悪性疾患、例えば良性前立腺肥大、家族性腺腫症、ポリープ症、神経線維腫症、乾せん、アテローム性動脈硬化症を伴う血管平滑筋細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎ならびに術後狭窄および再狭窄にも関与している。
【０００３】
ＰＫは炎症状態およびウイルスや寄生生物の増殖にも関与している。ＰＫは神経変性障害の病原性および発生において重要な役割も果たし得る。
【０００４】
ＰＫの機能障害または非調節の一般的参考のために、例えばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，３，４５９−４６５を参照されたい。
【０００５】
癌細胞の成長に関与するとして当分野において公知の幾つかのプロテインキナーゼの中には、オーロラキナーゼ、特にオーロラ−２がある。
【０００６】
オーロラ−２は多数の各種腫瘍タイプにおいて過剰発現していることが分かっている。この遺伝子座は、乳癌［Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９９，５９（９），２０４１−４］および結腸癌を含めた多くの癌においてしばしば増幅される染色体領域である２０ｑ１３に位置している。
【０００７】
２０ｑ１３増幅はリンパ節転移陰性乳癌の患者における悪い予後と相関しており、高いオーロラ−２発現は膀胱癌患者における悪い予後および短い生存時間を示している［Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，２００２，９４（１７）：１３２０−９］。癌における異常な中心体機能におけるオーロラ−２の役割の一般的参考のために、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００３，２：５８９−５９５も参照されたい。
【０００８】
当分野においてプロテインキナーゼ阻害剤として、幾つかの複素環式化合物が知られている。これらのうち、３−カルボキシアミド−ピラゾールおよび３−ウレイド−ピラゾールおよびこれらの誘導体が、国際特許出願ＷＯ０１／１２１８９、ＷＯ１２１８８、ＷＯ０２／４８１１４およびＷＯ０２／７０５１５においてプロテインキナーゼ阻害剤として開示されている。
【０００９】
ピラゾール部分を含み、キナーゼ阻害活性を有する縮合二環式化合物も、ＷＯ００／６９８４６、ＷＯ０２／１２２４２、ＷＯ０３／０２８７２０およびＷＯ０３／９７６１０に開示されている。
【００１０】
特定のテトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール誘導体は、オーロラキナーゼの強力なＡＴＰ競合性阻害剤であることが明らかにされている（Ｆａｎｃｅｌｌｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００５，ｖｏｌ．４８，ｎｏ．８，ｐ．３０８０−３０８４、ＰＣＴ／ＷＯ２００５００５４２７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第０１／１２１８９号
【特許文献２】国際公開第１２１８８号
【特許文献３】国際公開第０２／４８１１４号
【特許文献４】国際公開第０２／７０５１５号
【特許文献５】国際公開第００／６９８４６号
【特許文献６】国際公開第０２／１２２４２号
【特許文献７】国際公開第０３／０２８７２０号
【特許文献８】国際公開第０３／９７６１０号
【特許文献９】国際公開第２００５００５４２７号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，３，４５９−４６５
【非特許文献２】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９９，５９（９），２０４１−４
【非特許文献３】Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，２００２，９４（１７）：１３２０−９
【非特許文献４】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００３，２：５８９−５９５
【非特許文献５】Ｆａｎｃｅｌｌｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００５，ｖｏｌ．４８，ｎｏ．８，ｐ．３０８０−３０８４
【発明の概要】
【００１３】
驚くべきことに、テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール誘導体の抗悪性腫瘍作用、即ち特に増殖性疾患の進行遅延もしくは処置、特に抗悪性腫瘍剤として知られる他の化学療法に抵抗性の腫瘍の処置は、特定の抗悪性腫瘍剤と組み合わせて投与される場合に大きく向上することを見出した。特に、こうした組み合わせの抗悪性腫瘍作用は、いずれかのタイプの組み合わせパートナー単独で達成することができる作用よりも大きい、即ち組み合わせパートナーのうちただ１つを用いた単独療法の作用よりも大きい。
【００１４】
故に、本発明は、増殖性障害、特に癌の処置に特に適した、テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール誘導体と公知の医薬剤との新規な組み合わせを提供する。より詳細には、本発明の組み合わせは、抗腫瘍剤としての治療に非常に有用であり、毒性および副作用の両方の観点から、市販されている抗腫瘍薬に関連する欠点がない。
【００１５】
本発明は、（ａ）式（Ａ）の化合物１と：
【００１６】
【化１】
0005683462.tif 000002
（ｂ）成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体、プロテアソーム阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグ、およびキナーゼ阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグから成る群から選択される１つ以上の抗悪性腫瘍剤とを含む治療用組み合わせを提供し、これらの活性成分は、いずれの場合も遊離の形態またはこれらの医薬的に許容される塩もしくはいずれかの水和物の形態にて存在する。
【００１７】
本発明はまた、上述の組み合わせの同時、別々または連続的使用のための組み合わせた調製物を提供する。
【００１８】
本発明はまた、医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とさらに混合される上述の組み合わせを含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、増殖性障害を処置する方法を提供し、この方法は、こうした処置または遅延が必要な患者に、上述の組み合わせを治療的に有効な量で投与することによる。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、第１の実施形態において、（ａ）式（Ａ）の化合物１と：
【００２１】
【化２】
0005683462.tif 000003
（ｂ）成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体、プロテアソーム阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグ、およびキナーゼ阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグから成る群から選択される１つ以上の抗悪性腫瘍剤とを含む治療用組み合わせを提供し、これらの活性成分は、いずれの場合も遊離の形態またはこれらの医薬的に許容される塩もしくはいずれかの水和物の形態にて存在する。
【００２２】
別の実施形態において、本発明に従う組み合わせは、同時、別々または連続的使用のための組み合わせた本発明に従う調製物である。
【００２３】
さらなる実施形態は、増殖性障害を処置するまたは進行を遅延させる方法における本発明に従う組み合わせに関し、この方法は、処置または遅延を必要とする患者に、治療用組み合わせを同時、連続的または別々に投与することを含む。
【００２４】
なおさらなる実施形態において、本発明は、医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と混合された本発明による組み合わせを含む医薬組成物を提供する。
【００２５】
なおさらなる実施形態は、増殖性障害の処置のための薬剤の調製における上記で定義された式（Ａ）の化合物１の使用に関し、前記処置は、これを必要とする患者への、上記で定義された式（Ａ）の化合物１と、成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体、プロテアソーム阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグ、およびキナーゼ阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグから成る群から選択される１つ以上の抗悪性腫瘍剤との同時、連続または別々の投与を含む。
【００２６】
式（Ａ）の化合物１は、化学名Ｎ−｛５−［（２Ｒ）−２−メトキシ−２−フェニルエタノイル］−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−３−イル｝−４−（４−メチルピペラジン−ｌ−イル）ベンズアミドを有する。これは、ＷＯ２００５／００５４２７（本明細書に参考として組み込まれる。）に記載されるように調製でき、プロテインキナーゼ阻害活性が賦与され、故に抗腫瘍剤として治療に有用である。
【００２７】
式（Ａ）の化合物の医薬的に許容される塩には、無機または有機酸、例えば、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、メシル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、イセチオン酸およびサリチル酸などとの酸付加塩が含まれる。
【００２８】
本発明の好ましい実施形態によれば、成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体は、ベバシズマブ（血管内皮成長因子に対する抗体）、セツキシマブ、パニツムマブ、マツズマブ、ニモツズマブ（上皮成長因子受容体に対する抗体）、トラスツマブおよびペルツズマブ（ＥｒｂＢ２に対する抗体）から成る群から選択される。
【００２９】
本発明のより好ましい実施形態によれば、成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体はベバシズマブである。ベバシズマブはＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）として販売されている。
【００３０】
プロテアソーム阻害剤は、プロテアソームの作用をブロックする薬物、タンパク質を分解する細胞複合体である。本発明の好ましい実施形態によれば、プロテアソーム阻害剤は、好ましくはボルテゾミブである。ボルデゾミブは、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからＶｅｌｃａｄｅ（登録商標）として販売されており、ヒトで試験された最初の治療用プロテアソーム阻害剤であった。これは、反復多発性骨髄腫およびマントル細胞リンパ腫の処置のために米国で承認されている。
【００３１】
本発明の好ましい実施形態によれば、キナーゼ阻害剤はフラボピリドールまたはダサチニブである。
【００３２】
本発明において、組み合わせの活性成分のそれぞれは、相乗的な抗悪性腫瘍作用を生じるのに有効な量で提供される。
【００３３】
本発明はまた、抗悪性腫瘍治療が必要なヒトを含む哺乳類における抗悪性腫瘍剤を用いた抗悪性腫瘍治療によって生じる副作用を低下させるための方法を提供し、この方法は、相乗的な抗悪性腫瘍作用を生じるのに有効な量で、上記で定義された式（Ａ）の化合物と、成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体、プロテアソーム阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグ、およびキナーゼ阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグから成る群から選択される１つ以上の抗悪性腫瘍剤とを含む組み合わせた調製物を、前記哺乳類に投与することを含む。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「相乗的な抗悪性腫瘍作用」という用語は、ヒトを含む哺乳類に、上記で定義される式（Ａ）の化合物１と、成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体、プロテアソーム阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグ、およびキナーゼ阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグから成る群から選択される１つ以上の抗悪性腫瘍剤との組み合わせの有効量を投与することによる、腫瘍の成長阻害、好ましくは腫瘍の完全な退縮を意味する。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「組み合わせた調製物」という用語は、特に上記で定義された組み合わせ成分（ａ）および（ｂ）を独立に投与でき、または組み合わせ成分（ａ）および（ｂ）の区別された量を有する様々な一定の組み合わせの使用によって、即ち同時または異なる時点で投与できることを意味する「キット・オブ・パーツ」を規定する。次いでキット・オブ・パーツの要素は、例えば同時に投与されることができ、または経時的にずらすことができ、即ちキット・オブ・パーツのいずれかの要素に関して異なる時点で、等しいまたは異なる時間間隔で投与できる。最も好ましくは、時間間隔は、パーツの組み合わせた使用において処置される疾患に対する作用が組み合わせ成分（ａ）および（ｂ）のいずれか１つだけの使用によって得られる作用よりも大きくなるように選択される。組み合わせた調製物において、投与されるべき組み合わせ成分（ａ）と組み合わせ成分（ｂ）との総量比は、例えば処置されるべき患者の分集団の必要性または特定の疾患、患者の年齢、性別、体重などによって異なり得る個々の患者の必要性に対処するために、変更され得る。好ましくは、少なくとも１つの有益な作用、例えば組み合わせの成分（ａ）および（ｂ）の作用の相互向上性、特に相乗作用、例えば添加作用を上回るもの、追加の有利な作用、副作用の低減、毒性の低減、または組み合わせ成分（ａ）および（ｂ）のうち１つまたは両方の非有効投与量での組み合わせた治療作用、および非常に好ましくは組み合わせ成分（ａ）および（ｂ）の強い相乗作用がある。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「投与される」または「投与する」という用語は、非経口および／または経口投与を意味する。「非経口」とは、静脈内、皮下、および筋肉内投与を意味する。
【００３７】
主題発明の方法において、式（Ａ）の化合物１の投与に関して、一般に使用される治療の過程は、２１日間の連続した日数までの間では体表面積の１００ｍｇ／ｍ２／日〜１５００ｍｇ／ｍ２／日の範囲である。より好ましくは使用される治療過程は、２１日間の連続した日数の間では体表面積の約１５０ｍｇ／ｍ２／日〜約３５０ｍｇ／ｍ２／日である。
【００３８】
特に好ましいレジメンにおいて、式（Ａ）の化合物は、３週間のサイクルの１日目および８日目において３時間の点滴に関しては体表面積の１９０または２５０ｍｇ／ｍ２／日の用量にて投与される。他の可能な治療スケジュールは、例えば２００８年５月８日に公開されたＷＯ２００８／０５２９３１（本明細書に参考として組み込まれる。）に開示されている。
【００３９】
式（Ａ）の化合物１は、種々の剤形、例えば錠剤、カプセル、糖衣錠またはフィルムコーティング錠、液剤または懸濁液剤の形態において経口にて；坐剤の形態において直腸にて；非経口的に、例えば筋肉内にてまたは静脈内および／またはくも膜下腔内および／または脊髄内注射または点滴を通して投与できる。
【００４０】
主題の発明の方法において、プロテアソーム阻害剤、好ましくはボルテゾミブ投与に関して一般に使用される治療過程は、３週毎に約５０ｍｇ／ｍ２〜１００ｍｇ／ｍ２、または毎週３０ｍｇ／ｍ２である。
【００４１】
成長因子を阻害する抗体、好ましくはベバシズマブの投与に関して、一般に使用される治療過程は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。より好ましくは使用される治療の過程は、３週間サイクルの１日目において１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇである。
【００４２】
キナーゼ阻害剤、好ましくはフラボピリドールの投与に関して、一般に使用される治療過程は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。より好ましくは使用される治療過程は、１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇである。
【００４３】
本発明の抗悪性腫瘍治療は、特に、癌腫、例えば膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌（小細胞肺癌を含む。）、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌および皮膚癌（扁平上皮癌を含む。）；リンパ系の造血性腫瘍、例えば白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫およびバーキット・リンパ腫；骨髄系の造血性腫瘍、例えば急性および慢性骨髄性白血病、骨髄形成異常症候群および前骨髄球性白血病；多発性骨髄腫；間葉起源の腫瘍、例えば線維肉腫および横紋筋肉腫；中枢および末梢神経系の腫瘍、例えば星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫；他の腫瘍、例えばメラノーマ、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫、甲状腺濾胞状癌およびカポジ肉腫が含まれるが、これらに限定されない癌のあらゆる形態を処置するために好適である。
【００４４】
上記で述べたように、本発明の組み合わせの作用は、対応する毒性の増大なしに顕著に増大する。換言すれば、本発明の組み合わせた治療は、本発明の組み合わせ成分（ａ）および／または成分（ｂ）の抗腫瘍作用を向上させ、それによって腫瘍に関して最も有効で、毒性の少ない処置となる。
【００４５】
本発明に従う医薬組成物は、抗癌治療に有用である。
【００４６】
本発明はさらに、好適な容器の手段において、（ａ）上記で定義された式（Ａ）の化合物と、（ｂ）成長因子または成長因子の受容体を阻害する抗体、プロテアソーム阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグ、およびキナーゼ阻害剤またはこれらの誘導体もしくはプロドラッグから成る群から選択される１つ以上の抗悪性腫瘍剤とを含む商業用のパッケージを提供し、活性成分は、いずれの場合も遊離の形態またはこれらの医薬的に許容される塩もしくはいずれかの水和物の形態にて存在し、同時、別々または連続的なこれらの使用に関する説明書も伴う。
【００４７】
本発明に従うパッケージにおいて、成分（ａ）および（ｂ）のそれぞれは、単一容器手段内にまたは別個の容器手段内に存在する。
【００４８】
本発明の別の実施形態は、上述のような医薬組成物または製品を含む商業用のパッケージである。
【００４９】
細胞有糸分裂および増殖の調節におけるオーロラ・キナーゼ・プロテインの重要な役割のために、本発明の組み合わせはまた、種々の細胞増殖性障害、例えば良性前立腺肥大、家族性腺腫症、ポリープ症、神経線維腫症、乾せん、アテローム性動脈硬化症を伴う血管平滑筋細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎ならびに術後狭窄および再狭窄の処置においても有用である。
【００５０】
本発明の組み合わせは、アポトーシスのモジュレータとして、癌、ウイルス感染症の処置、ＨＩＶ感染者におけるＡＩＤＳ進行の予防、自己免疫疾患および神経変性障害の予防に有用でもあり得る。本発明の組み合わせの活性は、例えば本発明を例示することを目的とするが、限定するものではないインビトロおよびインビボ試験にて次のように示される。
【実施例１】
【００５１】
インビトロ細胞毒性活性試験のための材料および方法
指数関数的に成長したヒト結腸癌（ＨＣＴ−１１６）株化細胞を播種し、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中にて３７℃で温置した。薬物を実験培地に添加し、暗所中、３７℃にて７２時間温置した。上記で定義された式（Ａ）の化合物１および抗悪性腫瘍剤のスカラー用量を、播種の２４時間後に媒質に添加した。連続的投与スケジュールを試験した（他の試薬の２４時間後に化合物１を投与する。）。薬物溶液は、使用直前に調製した。処置の終わりに、読み取り機としてＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いる細胞内のアデノシン三リン酸のモニタリングシステム（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ−Ｐｒｏｍｅｇａ）によって細胞増殖を決定した。阻害活性を、Ａｓｓａｙ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＭＤＬ）プログラムを用いて、処置されたデータとコントロールデータとを比較して評価した。細胞成長の５０％を阻害する用量を、Ｓ字補間曲線を用いて計算した。組み合わせ指数（Ｃ．Ｉ．）は、相互に非排他的な薬物に関するＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの式（Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ  １９８４；２２：２７−５５）に基づく複数の薬剤作用分析に関するコンピュータプログラムを用いて計算したが、ここでＣ．Ｉ．＜１は、追加作用よりも大きいことを示す（Ｃ．Ｉ．＞３は強力な拮抗作用を示し；１．３＜Ｃ．Ｉ．＜３は拮抗作用；０．８＜Ｃ．Ｉ．＜１．３は加算性；０．３＜Ｃ．Ｉ．＜０．８は相乗作用；Ｃ．Ｉ．＜０．３は強い相乗性）。
【実施例２】
【００５２】
フラボピリドールを用いる組み合わせのインビトロ細胞毒性活性
表１に示される結果は、ヒト結腸癌ＨＣＴ−１１６株化細胞において、フラボピリドールと組み合わせた化合物１の投与が相乗的な抗腫瘍作用をもたらしたことを示している。
【００５３】
【表１】
0005683462.tif 000004
【実施例３】
【００５４】
モノクローナル抗体ベバシズマブとの組み合わせのインビボ抗腫瘍効能
Ｈａｒｌａｎ（イタリア）からのＢａｌｂ，Ｎｕ／Ｎｕオスマウスを、紙フィルターカバー、餌、滅菌された床および酸性化水を備えたケージ中に維持した。２．５×１０６ＤＵ１４５前立腺癌細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ製）を、胸腺欠損マウスに皮下注射した。この腫瘍モデルは、ベバシズマブがインビボモデルの血管新生および成長を阻害することが以前に示されている（参考として：Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ３６：１−１０，１９９８を参照のこと）ため、選択された。処置は、腫瘍の重量平均がすべての群で０．１５ｇであり、腫瘍が触知可能となった時である腫瘍細胞の注射から９日後に開始した。ベバシズマブは、処置の直前に調製する一方で、化合物１は、化合物の公知の安定性に基づいて毎日調製した。
【００５５】
化合物１は、９日目から１７日目までの９日間１日２回（ＢＩＤ）１５ｍｇ／ｋｇの用量にて、１０ｍｌ／ｋｇの体積で腹腔内経路によって投与した。ベバシズマブは、腫瘍細胞注射の日から９、１３、１７日目に２０ｍｇ／ｋｇの用量にて１０ｍｌ／ｋｇ体積で腹腔内投与した。組み合わせた場合、化合物１は９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８および１９日目に投与し、ベバシズマブは、化合物１の投与直後の９、１３および１７日目に投与した。腫瘍成長および体重を３日毎に測定した。腫瘍成長をノギスによって評価した。２つの直径を記録し、腫瘍重量を次の式に従って計算した：長さ（ｍｍ）×幅２／２。抗腫瘍処置の作用は、腫瘍の指数関数的な成長の発生における遅延として評価した（参考としてＡｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ７：４３７−６０，１９９６を参照のこと）。この遅延（Ｔ−Ｃ曲線）は、処置群（Ｔ）および対照群（Ｃ）の腫瘍の所定のサイズ（１ｇ）に到達するのに必要な時間（日単位）の差として規定した。毒性は、体重減少の基準にて評価した。結果を以下の表２に報告する。ベバシズマブと組み合わせた化合物１は明らかな追加／相乗作用を生じた：化合物１をベバシズマブと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃは、単一の処置によって得られたＴ−Ｃの単純な添加によって予測されるべきものより優れていた。いずれの処置群でも毒性は観察されなかった。
【００５６】
【表２】
0005683462.tif 000005
【実施例４】
【００５７】
ボルテゾミブとの組み合わせのインビボ抗腫瘍効能
Ｈａｒｌａｎ（イタリア）からのＳＣＩＤオスマウスを、紙フィルターカバー、餌、滅菌された床および酸性化水を備えたケージ中に維持した。５×１０６ＨＬ−６０ヒト急性骨髄性白血病細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ製）を、ＳＣＩＤマウスにて皮下注射した。この腫瘍モデルは、化合物１がインビボモデルの成長を阻害することが以前に示されているため、さらに血液系腫瘍の代表例としてこのモデルが使用されていることに基づいて選択した。
【００５８】
処置は、腫瘍が触知可能となった時である腫瘍細胞の注射から１２日後に開始した。ボルテゾミブは、処置の直前に調製し、化合物１は、化合物の公知の安定性に基づいて毎日調製した。
【００５９】
化合物１は、１２日間（１２日目から２３日目まで）１日２回（ＢＩＤ）１５ｍｇ／ｋｇの用量にて、１０ｍｌ／ｋｇの体積で腹腔内経路によって投与した。ボルテゾミブは、細胞注射の日から１２、１６、２０および２４日目にて０．５ｍｇ／ｋｇの用量にて、および細胞注射の日から１２、１６、２０および２４日目にて１ｍｇ／ｋｇの用量にて、１０ｍｌ／ｋｇ体積で静脈内経路により投与した。組み合わせた場合、化合物１は１３、１４、１５、１７、１８、１９、２１、２２、２３，２５、２６および２７日目にてボルテゾミブの処置の間の間隔で投与した。腫瘍成長および体重を３日毎に測定した。腫瘍成長をノギスによって評価した。２つの直径を記録し、腫瘍重量を次の式に従って計算した：長さ（ｍｍ）×幅２／２。抗腫瘍処置の作用は、腫瘍の指数関数的な成長の発生における遅延として評価した（参考としてＡｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ７：４３７−６０、１９９６を参照のこと）。この遅延（Ｔ−Ｃ曲線）は、処置群（Ｔ）および対照群（Ｃ）の腫瘍の所定のサイズ（１ｇ）に到達するのに必要な時間（日単位）の差として規定した。毒性は、体重減少の基準にて評価した。結果を以下の表３に報告する。ボルテゾミブ０．５ｍｇ／ｋｇと組み合わせた化合物１は明らかな追加／相乗作用を生じた：化合物１をボルテゾミブ０．５ｍｇ／ｋｇと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃは、単一の処置によって得られたＴ−Ｃの単純な添加によって予測されるべきものより優れていた。処置群において毒性は観察されなかった。ボルテゾミブ１ｍｇ／ｋｇと組み合わせた化合物１は強力な相乗作用を生じた：化合物１をボルテゾミブ１ｍｇ／ｋｇと組み合わせた場合に観察されるＴ−Ｃ（３５．７）は、単一の処置によって得られたＴ−Ｃの単純な添加によって予測されるものより優れていた（１７．３）。処置群で幾つかの毒性サインが観察された。
【００６０】
【表３】
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