(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類のテロメラーゼからの４つのペプチド：
（ｉ）１つのＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチド、及び
（ｉｉ）３つのＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチド
を含む腎癌又は前立腺癌を治療するための組成物であって、前記組成物は１つ以上のアジュバントと組み合わせて用いられることを特徴とし；ここで、
（ａ）該ＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチドが、ＩＬＡＫＦ  ＬＨＷＬ（配列番号１）であり、
（ｂ）該３つのＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチドが、各々ＲＰＧＬＬ  ＧＡＳＶＬ  ＧＬＤＤＩ（配列番号２）、ＬＴＤＬＱ  ＰＹＭＲＱ  ＦＶＡＨＬ（配列番号３）及びＥＡＲＰＡ  ＬＬＴＳＲＬ  ＲＦＩＰＫ（配列番号４）であり、
（ｃ）前記ペプチドが唯一の有効成分であり、
（ｄ）該１つ以上のアジュバントがイミキモドである、組成物。
【請求項２】
該１つ以上のアジュバントが、ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ−５１をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
哺乳類のテロメラーゼがヒトのテロメラーゼである、請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
各ペプチドが１００〜１０００μｇの量で存在する請求項１から３までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
各ペプチドが２００〜８００μｇの量で存在する請求項４記載の組成物。
【請求項６】
各ペプチドが４００〜６００μｇの量で存在する請求項５記載の組成物。
【請求項７】
医薬における使用のための請求項１から６までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項８】
該医薬がヒト医薬である請求項７記載の使用のための組成物。
【請求項９】
腎癌又は前立腺癌のためのワクチンとしての使用のための請求項１から６までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項１０】
腎癌が進行した腎癌である請求項９記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
ＨＬＡ適合したヒト患者への投与のために適切である請求項７から１０までのいずれか１項記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
該ＨＬＡ適合したヒト患者が、ＨＬＡ−Ａ２アレルについて試験して陽性であった患者である請求項１１記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
皮内注射による投与のために適切である請求項７から１２までのいずれか１項記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の詳細な説明
本発明は、全ての癌患者の治療のための、特に腎癌又は前立腺癌を有する患者の治療のためのテロメラーゼ由来のペプチドの使用に関する。
【０００２】
腎臓細胞癌腫（ＲＣＣ）は成人における腫瘍の３％を示し、かつその罹患率は一年に１．５〜５．９％の速度で増加する。この疾病のための死亡率はこの罹患率の増加に比例して増大する。約２５〜３０％の患者は、進行した、転移性疾病を診断の際に有し、そして、診断時に転移の臨床上の証拠を有しない幾人かの患者は既に播種性のミクロ転移を有する。これは実際の療法上のアプローチの乏しい効能及び低い生存率の原因である（診断から５年後に０〜１３％の転移性患者が生存する）。
【０００３】
前立腺癌は主要な医学的問題である。ヨーロッパでは毎年２６０万人の新しい症例が存在する。これは男性における腫瘍症例の１１％を構成し、かつ、ヨーロッパにおける癌による死の９％の原因である。さらに、男性集団におけるその罹患率は肺癌の２倍である：前立腺癌は高められた死亡率でもって男性における新しい異常増殖症例の３０％を構成する。
【０００４】
診断時に４５％の患者が既に、療法上のアプローチの種類とは無関係に、５年で生存率＜５０％との進行した疾病を有する。
【０００５】
テロメラーゼは、染色体のテロメア領域の合成のために必要とされる真核細胞の逆転写酵素である。テロメラーゼは胚細胞に存在するが、成人の体細胞には、胚芽細胞及び活動的に増殖する細胞により構成されるわずかな例外を除き、存在しない。しかしながら、これら細胞におけるテロメラーゼ発現の速度は余りに低く、このためテロメラーゼはテロメラーゼ特異的細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）により認識されることができない。テロメラーゼは細胞不死化のために本質的である：これは、なぜ約９０％の腫瘍が（組織学的種類とは無関係に）テロメラーゼを発現するのかを説明することになる。この理由のために今、テロメラーゼは可能性のある「普遍的な」腫瘍抗原であると考えられている。この観点は更に、ヒトのテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）の触媒性サブユニット由来のペプチドの特異的な認識を介して癌細胞を殺すことができる細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）が、健康な被験体及び癌患者の両者の末梢血液中で同定されたという知見により裏付けられている。特に、約９０％の癌患者がテロメラーゼ特異的ＣＴＬを有する。
【０００６】
これを基礎として、単一テロメラーゼペプチド又は２のテロメラーゼペプチドの組み合わせを用いて癌患者の免疫化の安全性及び免疫学的効果を分析するための臨床試験が実施されている（又は進行中である）。これら試験は、テロメラーゼ免疫化が安全な手段であることを実証している。特に、造血幹細胞に対する毒性は検出されていない（Vonderheide RH, et al. Vaccination of cancer patients against telomerase induces functional antitumor CD8+ T lymphocytes. Clin Cancer Res 2004;10:828-839. Danet-Desnoyers GH, et al. Telomerase vaccination has no detectable effect on SCID-repopulating and colony-forming activities in the bone marrow of cancer patients. Exp Hematol 2005;33: 1275-1280. Brunsvig PF, et al. Telomerase peptide vaccination: a phase I/I I study in patients with non-small cell lung cancer. Cancer Immunol Immunother. 2006;55:1553-1564）。更なるテロメラーゼ特異的免疫応答が幾人かの癌患者において誘発された。しかしながら、様々な実験的アプローチが適用されたにもかかわらず、部分的又は完全な臨床的応答は処置患者の少数だけで得られている。
【０００７】
本発明者らは今や、免疫原性ペプチド及び有効なアジュバントの正確な選択が、有効なテロメラーゼペプチドを基礎とする免疫療法プロトコルの開発のために必須であることを見出した。本発明によれば、複数のテロメラーゼ由来ペプチドを含有する組成物を、抗原提示細胞による提示のために投与する。この組成物は、ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチドの両者を含有する。ＨＬＡクラスＩ又はＩＩ分子により拘束され、それ故、それぞれＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔリンパ球により認識されるテロメラーゼエピトープの有用性は極めて大きな重要性を有し、というのも、完全に生理学的な免疫応答を模倣する可能性のある能動免疫のプロトコルを設計する機会を提供するからである。事実、腫瘍特異的ＣＴＬだけでなく腫瘍特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化により特徴付けられる免疫応答が、有効な抗腫瘍作用を達成するのに本質的であることが実証されている。これは、ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ＣＴＬ媒介免疫応答また同様に直接的な抗腫瘍死滅の、誘導、調節及び維持のプロセスを担うという事実によるものである。ＨＬＡクラスＩＩ分子により拘束されるテロメラーゼ由来エピトープの分子的特徴は、その乱雑性にあり、すなわち、様々なＨＬＡクラスＩＩアレルにより結合かつ提示されるその能力にある。これは免疫療法的プロトコルを設計するのには大きな利点であり、というのも、これにより、単一ペプチドエピトープが、様々なＨＬＡハプロタイプを有する個体を免疫化するために有効に使用されてよいことが可能となるからである。このため、多数の患者が、適した組み合わせのテロメラーゼ由来ペプチドを用いた免疫化に対して応答性である可能性がある。
【０００８】
第１の観点において、本発明は、
（ｉ）少なくとも１つのＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチド、及び
（ｉｉ）少なくとも２つのＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチド
を含有する、哺乳類のテロメラーゼ、特にヒトのテロメラーゼからの少なくとも３つのペプチドの組成物に関する。
【０００９】
本発明のペプチド組成物は、少なくとも３つのペプチド、例えば３、４、５又はそれより多いペプチドを含有する。有利には、この組成物は４つのペプチドを含有する。より有利には、この組成物は１つのＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチド及び少なくとも２つ、特に少なくとも３つのＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチドを含有する。このＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチドは有利にはＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドである。このＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチドは有利にはＨＬＡ−ＤＲ１、−ＤＲ４、−ＤＲ７、−ＤＲ１５、−ＤＰ４及び−ＤＱ４拘束性ペプチドである。ＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチドは有利には約７〜約１１アミノ酸、例えば約９アミノ酸の長さを、ＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチドは有利には約１２〜約１８アミノ酸、例えば約１５アミノ酸の長さを有する。
【００１０】
有利にはこの組成物のペプチドは単一容器中に存在する。この組成物中の各ペプチド量は通常は、１００〜１０００μｇ、有利には２００〜８００μｇ、より有利には４００〜６００μｇである。最も有利には各ペプチドはおおよそ同じ量で、例えば約５００μｇの量で存在する。
【００１１】
このＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチド（ｉ）は有利には、ヒトのテロメラーゼのアミノ酸５４０〜５４８に相当するアミノ酸配列ＩＬＡＫＦ  ＬＨＷＬ（配列番号１）を含有する。しかしながら、ＨＬＡクラスＩアレルの任意の遺伝子産物に結合することができ、かつ、ペプチド特異的ＣＴＬｓの活性化を誘発することができる任意のテロメラーゼ由来ペプチドが、本発明において含まれる特異的な使用に適していると考慮されるべきである。ＨＬＡクラスＩＩ拘束性ペプチド（ｉ）は有利には、ヒトテロメラーゼのアミノ酸６７２〜６８６に相当するアミノ酸配列ＲＰＧＬＬ  ＧＡＳＶＬ  ＧＬＤＤＩ（配列番号２）、ヒトテロメラーゼのアミノ酸７６６〜７８０に相当するＬＴＤＬＱ  ＰＹＭＲＱ  ＦＶＡＨＬ（配列番号３）、及び、ヒトのテロメラーゼのアミノ酸６１１〜６２６に相当するＥＡＲＰＡ  ＬＬＴＳＲＬ  ＲＦＩＰＫ（配列番号４）を含むペプチドから選択されている。しかしながら、任意のＨＬＡクラスＩＩアレルの任意の遺伝子産物に結合することができ、かつ、ペプチド特異的ＣＤ４＋Ｔリンパ球の活性化を誘発することができる任意のテロメラーゼ由来ペプチドが、本発明において含まれる特異的な使用に適していると考慮されるべきである。
【００１２】
このペプチドは既知の方法により、例えば固相合成技術により合成されてよい。所望の場合には、ペプチドはＮ−及び／又はＣ−末端改変、例えばアシル化又はアミド化を含んでよい。
【００１３】
本発明の有利な一実施態様において、このペプチド組成物はアジュバント、特にｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲｓ）と相互作用し、かつ、炎症誘発性支持を提供することができるアジュバントと組み合わせて投与される。本発明の特に有利な一実施態様において、アジュバントはイミキモド、イミダゾキノリン誘導体であってヒト樹状細胞上のＴＬＲ７及び８に結合し、これら細胞の成熟を、ＨＬＡ及び共刺激性分子の発現の増加により、ケモカインレセプター、例えばＣＣＲ７の発現の増加及び／又はＴｈ１サイトカイン、例えばＩＦＮγ、ＩＮ１２又はＴＦＮαの分泌の誘発により、抗原提示にむかって誘発するものである。更なる有利なアジュバントは、ＴＬＲｓ、例えばＣｐＧ−含有オリゴヌクレオチドに結合及び／又はこれを活性化する剤である。さらに、注射部位で投与されるペプチドのクリアランスを減少させ、かつアジュバント活性を発揮させることができる化合物、例えばモンタニドＩＳＡ−５１の付加的な使用も本発明の一部である。
【００１４】
本発明の組成物は、医薬、特にヒト医薬における、とりわけ癌のためのワクチンとしての使用のために適している。この組成物は、テロメラーゼ陽性である全ての癌に対するワクチン化のために有用である。有利な例は腎癌、例えば腎臓細胞癌腫、前立腺癌、例えば前立腺の腺癌であり、しかし肺、胸部、卵巣の癌及びリンパ腫でもある。癌は任意のステージに、例えば初期ステージに又は進行したステージに、例えば少なくともステージＩＶにあってよい。
【００１５】
有利な一実施態様において、組成物はＨＬＡ適合ヒト患者、すなわち、ペプチド（ｉ）及び／又は（ｉｉ）のＴリンパ球に対する提示を拘束するＨＬＡクラスＩ又はＩＩアレルに相当するＨＬＡアレルに対して陽性であるヒト患者への投与のために使用される。特に有利なのは、配列番号１を含有する好ましいＨＬＡクラスＩ拘束性ペプチド（ｉ）に相当するＨＬＡ−Ａ２アレルについて試験して陽性であった患者への投与である。
【００１６】
本発明の組成物は、任意の適した経路により、例えば注射により、特に皮内注射により投与される。免疫応答を促進するために、この組成物は通常はアジュバント、例えばイミキモドと一緒に投与される。
【００１７】
更に、この組成物を、複数の引き続く投与、例えば５回以上の引き続く投与を含むプロトコルにより投与することが有利である。特に有利な一実施態様において、この組成物は
−第１週：２〜４回の投与、有利には約４８時間の間隔での３回の投与、
−第２〜４週：１週間に１〜２回、有利には１週間に１回の投与、
−第５〜７週、１回の投与、有利には第６週に１回の投与、
−第９〜１２週から第１２週：１回の投与、有利には第１０週に１回の投与
を含むプロトコルによる投与のためである。
【００１８】
各投与前及び後に、アジュバント、例えばイミキモドを有利にはこの投与部位に、例えば少なくとも３０秒間にわたり塗り広げ、その作用を開始させる。
【００１９】
この投与された用量は有利には各ペプチドをおおよそ同じ量で、例えば約５００μｇ含有する。
【００２０】
さらに、本発明は、以下の実施例により更に詳細に説明される。
【００２１】
実施例
ＩＶステージの腎臓又は前立腺癌を有する患者の治療のための第Ｉ／ＩＩ相臨床試験
１．  前立腺癌を罹患する患者のための選択基準
−前立腺の腺癌の組織学的診断
−４週間の治療後のプログレッションとして定義されるホルモン療法に対する抵抗性
−疾病のＩＶステージ
−最後の月にＰＳＡ＞１０マイクロｇ／ｍｌ増加
−次のように定義される許容可能な肝機能：全ビリルビン＜ＵＮＬ（「正常上限値」）、ＡＳＴ及びＡＬＴ＜２．５×ＵＮＬ、アルカリホスファターゼ＜５×ＵＮＬ
−次のとおり定義される許容可能な腎機能：血清クレアチニン＜１．５×ＵＮＬ
−次のとおり定義される許容可能な造血機能：ヘモグロビン＞７ｇ／ｌ、白血球＞３×１０9／ｌ、血小板＞１００×１０9／ｌ
−ＨＬＡ−Ａ２アレルについて陽性（positivity）
−ＥＣＯＧパフォーマンスステータス＜３
−余命＞３ヶ月
−研究開始３０日前からの共存する免疫抑制療法又は化学療法なし
−共存する自己免疫疾患なし
−患者はプロトコル要求を厳守できなくてはならない
−患者は書面のインフォームドコンセントを提供しなくてはならない
−年齢＞１８歳。
【００２２】
２．  腎癌を罹患する患者のための選択基準
−腎細胞癌腫の組織学的診断
−罹患してない腎臓の正常な腎機能
−次のように定義される許容可能な肝機能：全ビリルビン＜ＵＮＬ（「正常上限値」）、ＡＳＴ及びＡＬＴ＜２．５×ＵＮＬ、アルカリホスファターゼ＜５×
−次のとおり定義される許容可能な造血機能：ヘモグロビン＞７ｇ／ｌ、白血球＞３×１０9／ｌ、血小板＞１００×１０9／ｌ
−ＨＬＡ−Ａ２アレルについて陽性
−ＥＣＯＧパフォーマンスステータス＜３
−余命＞３ヶ月
−男性患者
−女性患者は妊娠しておらず、母乳栄養中でなく、有効な避妊療法下
−研究開始３０日前からの共存する免疫抑制療法又は化学療法なし
−共存する自己免疫疾患なし
−患者はプロトコル要求を厳守できなくてはならない
−患者は書面のインフォームドコンセントを提供しなくてはならない
−年齢＞１８歳。
【００２３】
３．  治療プロトコル
３．１  テロメラーゼ由来ペプチド
以下の免疫原性の、テロメラーゼ由来ペプチドをこの研究において使用した：
ｈＴＥＲＴ５４０−５４８（配列：ＩＬＡＫＦＬＨＷＬ（配列番号１）：拘束：ＨＬＡ−Ａ２）；
ｈＴＥＲＴ６７２−６８６（配列：ＲＰＧＬＬＧＡＳＶＬＧＬＤＤ（配列番号２）：拘束：ＨＬＡ−ＤＲ１、ＤＲ７、ＤＲ１５）；
ｈＴＥＲＴ７６６−７８０（配列：ＬＴＤＬＱＰＹＭＲＱＦＶＡＨＬ（配列番号３）：拘束：ＨＬＡ−ＤＲ４、ＤＲ７、ＤＲ１５）；
ｈＴＥＲＴ６１１−６２６（配列：ＥＡＲＰＡＬＬＴＳＲＬＲＦＩＰＫ（配列番号４）：拘束：ＨＬＡ−ＤＰ４、ＤＱ４）。
【００２４】
３．２  群組成
２群の患者を構成し、疾病の各組織学的種類につき１である。一群につき１０人の患者が登録。
【００２５】
３．３  治療
上述のテロメラーゼ由来ペプチドの皮内注射を介した能動的免疫療法により患者を治療する。４つの異なるペプチドのプールを、各注射でもって投与する（注射につき各ペプチド５００μｇ）。合計の注射した体積は０．４ｍｌである。
【００２６】
治療スケジュールは以下のとおりである：
第１週：３回の皮内注射、４８時間の間隔で；
第２〜４週：毎週１回の注射；
第６週：１回の注射；
第１０週：１回の注射。
【００２７】
注射前及び後にイミキモド（市販名：Ａｌｄａｒａ）を注射部位で３０秒間塗り広げ、吸収させる。
【配列表】
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