(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２０〜７０ｍｇ／ｍｌのヒト乳タンパク質成分と、
３５〜８５ｍｇ／ｍｌのヒト乳脂肪成分と、
７０〜１１５ｍｇ／ｍｌのヒト乳炭水化物成分と
を含むヒト乳強化剤組成物であって、ヒトＩｇＡを含むヒト乳強化剤組成物。
【請求項２】
５０ｍｇ／ｍｌのヒト乳タンパク質成分と、
７５ｍｇ／ｍｌのヒト乳脂肪成分と、
１０５ｍｇ／ｍｌのヒト乳炭水化物成分と
を含む、請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項３】
３１ｍｇ／ｍｌのヒト乳タンパク質成分と、
４４ｍｇ／ｍｌのヒト乳脂肪成分と、
７９ｍｇ／ｍｌのヒト乳炭水化物成分と
を含む、請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項４】
ビタミンＡ、ビタミンＣ、カルシウム、鉄、リン、マグネシウム、塩素、亜鉛、銅、マンガン、ナトリウム、カリウム、リゾチーム、ラクトフェリン、ビタミンＢ６、およびこれらの任意の組合せからなる群より選択される成分をさらに含む、請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項５】
前記ヒトＩｇＡが、分泌型ＩｇＡを含む、請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項６】
前記ＩｇＡが、１００〜６００ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項７】
前記ＩｇＡが、２３０ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項８】
前記リゾチームが、２２，０００ＩＵ／ｍｌである、請求項４に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項９】
前記ラクトフェリンが、０．３３ｍｇ／ｍｌである、請求項４に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物、および前記ヒト乳強化剤組成物を生ヒト乳と混合して混合配合物を得るための計量ボトルを含み、前記混合配合物は前記ヒト乳強化剤組成物を含まない生乳よりも４ｃａｌ／オンス多く含む、キット。
【請求項１１】
生ヒト乳の栄養含有量を測定することと、
請求項１に記載のヒト乳強化剤組成物を生乳に添加して生乳の栄養価を４カロリー／オンス増加させること
とを含む、栄養乳組成物を得る方法。
【請求項１２】
少なくとも２．１ｇ／ｄＬのヒト乳タンパク質、およびヒト乳脂肪を含む、ドナーの自己生乳および同種異系乳組成物を含むヒト乳強化剤組成物。
【請求項１３】
前記ヒト乳タンパク質が、凍結乾燥されていないヒト乳タンパク質である、請求項１２に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項１４】
２．１ｇ／ｄＬ（２１ｍｇ／ｍｌ）〜３．７５ｇ／ｄＬ（３７．５ｍｇ／ｍｌ）のヒト乳タンパク質を含む、請求項１２に記載のヒト乳強化剤組成物。
【請求項１５】
２．１％〜３．７５％のヒト乳タンパク質を含む、請求項１２に記載のヒト乳強化剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、それらの開示を参照により本明細書に組み入れる２００６年８月３０日出願の米国特許仮出願第６０／８４１３７１号、および２００６年１１月２９日出願の米国特許仮出願第６０／８６７７４８号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、実質的な量の有益な生物学的因子が保持され、かつ、バイオバーデン（bioburden）が低減された全乳の殺菌方法に関する。本開示は、本開示の方法によって得られる乳製品をも含む。
【背景技術】
【０００３】
ヒト乳は、早産児、重病および他の免疫が低下した新生児および子供の重要な治療剤である。しかし、これらの重病患者にとって、加工されたヒトドナー乳は、特にヒト乳サンプルの約４％に見出される遍在する食品毒素セレウス菌（B．cereus）からのリスク測度を有する。セレウス菌は、標準的な低温殺菌によっては殺すことができない胞子を形成するというその能力ゆえに最も厄介である。他の懸念される細菌には、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridiumu perfringens）、クリプトスポリジウム・パーバム（Cryptosporidium parvum）、シクロスポラ・カイエタネンシス（Cyclospora cayetanensis）、大腸菌（Escherichia coli）、リステリア・モノシトゲネス（Listeria monocytogenes ）、サルモネラ菌（Salmonella）、およびスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）が含まれる。
【０００４】
さらに事態を複雑にするのは、一部のドナーはいくつかの（セレウス菌および他の病原菌を含まない）「清浄な」ロットを提供し、次いでロットが汚染されることである。認定されたドナーの乳がプールされる際に、セレウス菌などの病原菌に感染した乳は他の清浄なロットを汚染することになり、プール全体の破滅に至る。これらの細菌のコロニー形成単位の数に対する制限があり、それらの限度に達することは稀だが、それらの限度を超過している任意のプールは廃棄され、加工に使用することはできない。プールする前に生乳を試験することは役に立つが、ある種の製品を効率よく作るために行われるタンパク質の濃縮は、これらの病原菌を含む乳中のすべてのものを濃縮する。他の病原菌は低温殺菌で除去することができるが、セレウス病原菌は低温殺菌では除去できず、したがって、プールされた製品は、低温殺菌および充填する前にセレウス菌を含まないことを確証されることが不可欠である。さらに、製品の品質および安全性を最適化するためには、低温殺菌前に実質的に病原菌を含まない生乳のプールを提供することが望ましい。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、全乳を約１００〜４００ミクロンのフィルターを通して濾過することと、全乳を約５８〜６５℃で約２０〜４０分間熱処理することと、全乳をスキム部分および脂肪部分に分離することと、スキム部分を１つ以上のスキムフィルターを通して濾過し、透過液部分およびタンパク質に富むスキム部分（すなわち、残留部分（retentate））を得ることと、脂肪部分を約９０〜１２０℃の温度に脂肪部分のバイオバーデンを低減させるのに十分な約１時間加熱することと、処理された脂肪部分の分画をタンパク質に富むスキム部分と混合してヒト乳組成物を得ることとを含む、ヒト乳組成物を得る方法を提供する。一態様においては、全乳はプールされたヒト乳を含む。別の態様において、本方法はさらに、全乳サンプルを濾過の前にＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）またはこれらのあらゆる組合せの存在について試験することを含む。さらなる一態様においては、約２００ミクロンのフィルタースクリーンを通して全乳の濾過が実施される。全乳の熱処理は、約６３℃で約３０分間実施することができる。別の態様では、分離後のスキム部分は約０．６９％の脂肪、約１．０７％のタンパク質、および約７．１４％のラクトースを含み、かつ分離後の脂肪部分は約４６％の脂肪、約２％のタンパク質、および約１０％のラクトースを含む。一部の態様においては、脂肪部分はさらに処理されて追加のスキムを得て、この追加のスキムはスキム部分と一緒にプールされる。本方法は、スキム部分の濾過の前にスキム部分をクリーム部分を用いて調節して、スキム部分のタンパク質含有量の約５５％〜約６５％のスキム部分中の脂肪濃度を得ることをさらに含むことができる。別の態様においては、タンパク質に富むスキム部分は、約８％のタンパク質を含む。本方法は、１つ以上のスキムフィルターを透過液を用いて洗浄してタンパク質洗浄液を得て、このタンパク質洗浄液をタンパク質に富むスキム部分に添加することをさらに含むことができる。全乳はヒト乳であることができる。本方法は、本方法から得られる乳製品を低温殺菌することをさらに含むことができる。
【０００６】
本開示は、本開示の方法から得られるヒト乳組成物も提供する。一態様においては、ヒト乳組成物は、約２０〜７０ｍｇ／ｍｌのタンパク質成分、３５〜８５ｍｇ／ｍｌの脂肪成分、約７０〜１１５ｍｇ／ｍｌの炭水化物成分を含み、かつ組成物は任意選択でヒトＩｇＡ（免疫グロブリンＡ）を含む。
【０００７】
本開示は、ドナーの自己生乳および同種異系乳組成物を含むヒト乳組成物を提供し、そのヒト乳組成物は少なくとも約２．１ｇ／ｄＬのヒト乳タンパク質を含む。一態様において、ヒト乳タンパク質は、凍結乾燥されたタンパク質サンプル由来ではない（すなわち、ヒトタンパク質は凍結乾燥されていないヒトタンパク質である）。別の態様においては、本組成物は約２．１ｇ／ｄＬ〜約４．０ｄＬのヒト乳タンパク質を含む。一態様においては、最終混合されたヒト乳組成物は、約２．２〜約４％のヒトタンパク質を含む。
【０００８】
本開示は、本開示のヒト乳組成物およびヒト乳組成物を生ヒト乳と混合して混合された配合物を得るための計量ボトル（graduated bottle）を提供し、その混合配合物は本開示のヒト乳組成物が入っていない生乳よりも約４ｃａｌ／オンス多くを含む。
【０００９】
本開示はさらに、生ヒト乳の栄養含有量を測定することと、本開示のヒト乳組成物を生乳に添加して生乳の栄養価を約４カロリー／オンス増大させることとを含む、栄養乳組成物を得る方法を提供する。
【００１０】
本開示は、本開示のヒト乳組成物を生ヒト乳に添加することおよび混合ヒト乳を未熟乳児に投与することを含む、早産乳児に対して補助栄養分を提供する方法を提供する。
【００１１】
本開示の１つ以上の実施形態の詳細を添付の図面および以下の説明において示す。他の特徴、目的、および利点は記載および図面から、また特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本開示の方法を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する単数形「ａ」「ａｎｄ」および「ｔｈｅ」は、文脈が別に指示しない限り複数の言及を含む。したがって、例えば「１つのサンプル」への言及はこのようなサンプルの複数を含み、「そのタンパク質」への言及は当業者に知られている１つ以上のタンパク質への言及を含む、などである。
【００１４】
別途に定義されない限り、本明細書で使用するすべての技術的および科学的用語は、本開示が属する技術分野の当業者に普通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または等価な方法および材料を本開示の方法および組成物の実施において使用することができるが、本明細書には例示となる方法、装置および材料が記載されている。
【００１５】
上記および本文を通じて論じた刊行物は、単に本出願の出願日付に先行する開示に対して提供されている。本明細書に記載されるものを、本発明者らがそのような開示に先行するものとすることが先行開示のためにできない、との承認をするものと解釈するべきではない。
【００１６】
ヒト乳は、その栄養的な組成および免疫学的な利点のために、長らく早産乳児および満期出産乳児のための理想的な食物として認められてきた。ヒト乳は、このような栄養的および免疫学的利点の最も望ましい供給源である。しかし、ドナー乳の栄養上の価値は変化し、かつドナー乳の細菌、ウイルスおよび他の汚染についての懸念がある。乳児、特に未熟乳児のためには、理想的な栄養的状況は生みの母の乳を含む。あるいは、またはさらに、母親は搾乳器を用いて乳を搾り出し、かつそれを後の使用のために貯蔵することがある。母乳での授乳についての禁忌は少ないが、一部の禁忌には、ガラクトース血症を有する乳児、および母親が活動性結核を有する、ＨＴＬＶ（ヒトＴ細胞白血病ウイルス）ＩまたはＩＩ陽性である、放射性同位元素、代謝拮抗剤、もしくは化学療法剤を投与されている、または薬物乱用の対象者である場合が含まれる。ＨＩＶ感染に関しては、状況はより複雑であり、リスクと利益のバランスは専門的に評価されなければならない。
【００１７】
文献で十分に立証されている母乳での授乳の肯定的な効果にもかかわらず、米国における現在の病院内開始率は６４パーセントにすぎず、産後６ヶ月での継続率は約２９パーセントである。母乳授乳に対する代替法は、ヒトドナー乳、ヒト乳に対する補助食としての調乳（formula）、および調乳単独の使用である。搾られた乳の強化は、多くの極めて低い出生体重児に対して必要とされる。
【００１８】
Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  Ｐｏｌｉｃｙ  Ｓｔａｔｅｍｅｎｔは、バンク保存のヒト乳が、乳児の母親が自身の乳を与えることができないかまたは嫌がる（例えば社会的理由で）該乳児のための好適な代替食であり得ることを示唆している。１９８５年に設立されたＨｕｍａｎ  Ｍｉｌｋ  Ｂａｎｋｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ（ＨＭＢＡＮＡ）は、ドナーヒト乳バンクの設立および運営のための全国的な指針を発行した。これらの指針は、ヒト血液バンクにおける供給を守るために使用されているものと類似である。
【００１９】
早産乳児は、通常、これらの乳児のために特定の設計がなされた市販の乳児用調乳または自身の母親の乳を与えられる。これらの乳児の栄養の必要条件についてはまだ研究が途上にある。しかし、多くの研究では、非栄養補助早産乳児用乳およびバンク保存満期産児用乳によってはこれらの乳児の必要性を満たすためには不適切な量のいくつかの栄養分しか提供されないことの証拠資料が提供されてきた（Davies、D.P.、「早産乳児の初期成長のための搾乳された母乳の妥当性（Adequacy of expressed breast milk for early growth of preterm infants）」、ARCHIVES OF DISEASE IN CHILDHOOD、５２巻、２９６〜３０１頁、１９９７年）。推定されている低出生体重乳児のエネルギー要求量は、約１２０Ｃａｌ／ｋｇ／日であり、正確なエネルギー必要量は、活動、基礎エネルギー消費量、栄養分吸収の効率、病気および組織合成のためにエネルギーを利用する能力における相違のために変化する。エネルギー摂取量の約５０％は基礎代謝の必要性、活動および体温の維持のために消費される。約１２．５％は新しい組織を合成するために使用され、２５％は貯蔵される。残る１２．５％は排泄される。早産ヒト乳は、しばしば特定の栄養面で不足している。例えば、早産ヒト乳はしばしばカルシウム、リンおよびタンパク質が不足している。したがって、早産乳児に早産ヒト乳を与える場合は、早産乳児の栄養必要性をよりよく満たすためにヒト乳を強化することが推奨されてきた。
【００２０】
Ｓｉｍｉｌａｃ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｃａｒｅ（登録商標）およびＥｎｆａｍｉｌ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  Ｍｉｌｋ  Ｆｏｒｔｉｆｉｅｒは、市販されている乳強化剤である。これらの強化剤は、それらの形態、成分源およびエネルギー、ならびに栄養組成において異なる。さらに、これらの製品は本来人工である。新生児集中治療室（ＮＩＣＵ）においては、液体および粉末の両方のヒト乳強化剤に対する必要性がある。理想的には、最良の強化剤はヒト由来のものである。現在は、入手可能なヒト由来の乳強化剤はない。
【００２１】
女性の乳腺からの流体の分泌物は多くの成分を含み、本明細書において以後簡潔に乳と呼ぶ。搾られた乳は通常無菌ではなく、たとえ無菌の条件下で得たとしても細菌を含有している。しかし、乳は環境（空気、搾乳器具、手もしくは他の非無菌の物体、乳タンクまたは容器との接触）からの微生物によって極めて迅速に汚染され、セレウス菌などの特定の病原菌は低温殺菌された乳中でさえ迅速に増殖する。
【００２２】
炭水化物、タンパク質、脂肪、ミネラルおよびビタミンから成る組成ゆえに、乳は事実上すべての微生物にとって理想的な培地であり、乳は短時間内に腐敗する。乳を冷蔵することは細菌の増殖をわずかに遅らせ、その品質保持を数日間延長する。
【００２３】
乳を酸っぱくする乳酸菌などの細菌に加えて、ヒトの病原菌は特に大きな問題を構成する。これらは、特に無低温殺菌乳中に存在し得るサルモネラ菌、カンピロバクター菌、リステリア菌およびブドウ球菌、または耐熱性胞子ゆえに６２〜７４℃での低温殺菌を生き延びることができるクロストリジウム属または桿菌類の様々な病原菌株を含む。
【００２４】
通常乳はＵＨＴ処理と呼ばれるもの、すなわち、１２０℃〜１４５℃で数秒間の熱処理によって殺菌される。「煮沸された味」に加え、極度の加熱は、タンパク質の熱変性などにより、生物学的活性の喪失をもたらす。このようなタンパク質は、例えばイムノグロブリンおよび他の免疫刺激物質、同様に他の重要なタンパク質、例えばラクトフェリン、ラクトペルオキシダーゼ、成長因子などを含む乳に存在する免疫学的に活性な価値のある成分を含む。例えば、生物学的に活性なコロストラルミルク（colostral milk）は、とりわけ胃腸障害のために有用であることが示されてきた。
【００２５】
さらに、熱活性化によって細菌から毒素が放出され得る。例えば、グラム陰性細菌内毒素は低温殺菌によっては破壊されない。ＵＨＴ殺菌では、グラム陰性細菌を殺すことにより内毒素が６〜７だけ増え得る（Motter、J.、Neth. Milk Dairy Journal、４１巻、１３７〜１４５頁、１９８７年）。
【００２６】
現在の全乳を処理する方法は、生物学的に有益な活性タンパク質および他の分子の低減をもたらす。例えば、凍結乾燥、高熱処理などは、例えば、分解および変性によって生物学的に活性なタンパク質、脂質、その他の作用物質を低減させる。加えて、低温殺菌において低減した加熱が使用される場合、その結果は、バイオバーデンが増加し、したがって消費者のリスクが増加した乳製品を提供する。現在使用されているある種の濾過工程は、タンパク質含有量を低減させ、かつラクトースおよび塩をろ別するために使用される。
【００２７】
本開示は、成長を助けるために追加の栄養分を必要とする未熟乳児のためのヒト乳強化剤を提供する。本開示は、本開示の方法によって得られるヒト乳由来の強化剤を含む。一部の態様においては、ヒト乳強化剤／ヒト乳由来の補助製品をヒト乳に添加することができ、それによってタンパク質、脂肪、ビタミンおよびミネラルのレベルを補充する。本開示はさらに、成長のために追加の栄養分を必要とする未熟乳児に補助栄養価を提供するための方法を提供する。
【００２８】
「未熟」、「早産」および「低出生体重（ＬＢＷ）」乳児という用語は、互換的に使用され、妊娠期間３７週間未満で生まれたおよび／または出生体重２５００ｇ未満の乳児のことを言うものである。未熟乳児の必要性は特に緊急である。極めて低い出生体重（＜１５００ｇ）の乳児については、１歳以前の死亡率は２５％である。低出生体重（＜２５００ｇ）の乳児については、１年間の死亡率は２パーセントであり、やはり正常出生体重（＞２５００ｇ）の乳児についての０．２５％という数字よりもかなり高い。
【００２９】
特に懸念されるのは新生児における病因不明の重篤な胃腸疾患、壊死性腸炎（ＮＥＣ）である。ＮＥＣは、腸の部分の粘膜のまたは経粘膜的壊死によって特徴づけられる。予定日より前に生まれる、極めて小さな、病気の乳児が最もＮＥＣになりやすい。高リスク群未熟乳児の生存率が向上した一部理由ために、ＮＥＣの発症は増加しつつある。
【００３０】
一態様において、本開示は、ドナーまたはドナーの群からのヒト乳を得る方法および加工する方法を提供する。本開示の方法は、強化された調製物中の栄養価を維持しつつバイオバーデンを低減させる方法を含む。一般に、本方法は、好適なドナーを確認し認定する方法を含む。ドナーは、通常、かかりつけの医師によってドナーとして推奨される。理由は他にもあるがとりわけ、このことはドナーが慢性的に病気ではないこと保障するのに役に立つ。乳の収集および配給を認定しモニターする方法およびシステムは、米国特許出願第１１／５２６１２７号に記載されている（この特許出願を参照により本明細書に組み入れる）。
【００３１】
インタビューによるスクリーニング方法および生物学的サンプル処理を行う。生物学的サンプルは、ウイルス（例えばＨＩＶ  １および２、ＨＴＬＶ  ＩおよびＩＩ、ＨＢＶ、およびＨＣＶ）および梅毒、ならびに他の病原菌（例えばセレウス菌）についてスクリーニングし、試験が陽性の献乳は廃棄される。
【００３２】
スクリーニングで陽性と判明したサンプルはいずれも、そのサンプルの処理を停止し、当該ドナーからの以後の献乳を停止する。さらに取った別の手段は、ドナーサンプルまたは乳のプールを薬物の乱用について試験することを含む。
【００３３】
ドナーは定期的に再認定されてもよい。例えば、ドナーは、４ヶ月毎に当初の認定において使用されたものと同じ手順によってスクリーニングを受けることを求められてもよい。再認定されないまたは認定されないドナーは、適切に再認定されるときまで保留される。一部の事例では、ドナーは、再認定スクリーニングの結果によって正当化される場合、永久に保留される。後者の状況の場合は、そのドナーによって提供されたすべての残っている乳は、在庫から取り除かれ完全に破壊される。
【００３４】
認定されたドナーは指定された施設（例えば、乳バンクの事務所）で献乳するかまたは通常家庭で搾乳する。一態様においては、認定されたドナーは、乳バンクによってまたは乳加工業者から直接に（乳バンクと加工業者は同じまたは異なる事業体であり得る）支給品を提供され家庭に持ち帰る。支給品は、通常、容器上のコンピューターで読み取り可能なコード（例えば、バーコードラベル）を含み、さらに搾乳器を含み得る。次いでドナーは家庭で乳を絞り、好ましくは−２０℃の温度で、冷凍する。一態様では、最後にドナー乳センターを訪れた１０〜１４日後に血液試験の結果が満足なものであるという条件でドナーの乳は受け入れられ、このような結果を満足するなら、ドナーは乳をセンターに届けるかまたは家庭から収集してもらうという予約をする。乳および容器はそれらの状態を調べ、バーコードをデータベースと照合する。満足なものであれば、そのユニットをドナー乳センターまたは加工センターの冷凍庫（−２０℃）に、以後の試験および加工ができるときまで入れておく。
【００３５】
別の態様においては、乳は家庭でドナーによって搾乳され、乳貯蔵施設では集められない場合、本開示の方法は、乳が本当に登録されているドナーからのものであることを保障する指標のためにそれぞれのドナーの乳のサンプリングをすることを含む。このような対象確認技法は当業において知られている（例えば、参照により本明細書に組み入れる国際特許出願整理番号第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／３６８２７号を参照されたい）。乳は貯蔵して（例えば−２０℃で）試験結果を受け取るまで隔離しておけばよい。上記の方法を通じて、どの不適合乳も廃棄される。献血センターの場合と同様に、ドナーについてのすべての機密情報は、血液試験データを含めて、厳重に管理される。
【００３６】
集められ、承認された（例えば、リスク要因試験に合格した）乳は、無菌濾過および／または低温殺菌（またはバイオバーデンを低減させる他の方法）のどちらかあるいは組合せによって処理される。一態様においては、乳は大きなミクロンのフィルターまたはスクリーン（例えば、約１００〜４００ミクロン、通常は約２００ミクロン）を通して濾過により処理される。濾過された全乳を分離の準備において熱処理（１００；図１参照）する。全乳を約６３℃（例えば、約５０〜８０℃）で約３０分間（例えば、約２０〜６０分間）加熱する。一態様では、本方法は、濾過前に、全乳温度を７０℃超で許容される時間の間、高くする（ＨＴＳＴ）。例えば、特定の製造ロットのために指定された乳容器の内容物を６５℃で解凍し、断熱されたプロセスタンク中にプールする。タンクは連続温度監視装置および循環エチレングリコール冷却剤を収容しているジャケットを組み入れている。グリコールをプール工程のために２〜８℃に冷却し、重要なタンパク質成分を損なう可能性のあるボルテックスを発生させたり乳を泡立たせたりすることなくタンクミキサーを撹拌する。プールした乳のサンプルをバイオバーデンについて分析することができる。
【００３７】
さらに別の態様においては、プロセスタンク内の全乳配合物をプラチナ硬化シラスティック管を介して高温・短時間（ＨＴＳＴ）低温殺菌器に接続する。低温殺菌後、乳を第２のプロセスタンク中に集めて冷却する。他の低温殺菌方法を使用することができ（例えば、バット（vat）低温殺菌）、このような技法は当業において知られている。例えば、バット低温殺菌では、タンク内の乳を最低で６２．５℃に加熱し、その温度に約３０分間保つ。乳の上の空気は乳温度の５℃上まで蒸気加熱する。別の態様においては、ＨＴＳＴおよびバット低温殺菌の両方を実施する。
【００３８】
さらに別の態様においては（図１に図示する通り）、ヒト全乳１００は、本明細書で記載する通りに加熱される１１０。加熱された全乳は、次いでスキムとクリーム（すなわち、脂肪）に分離される１２０。乳は、遠心分離などの従来の方法によってスキムミルクに脱脂される。一態様においては、脂肪とスキムの分離は二価イオン（例えば、カルシウムなど）の除去を含まない。一態様においては、プールした乳は、遠心分離機中にポンプ輸送されて脂肪が乳の残部から分離され、スキムミルクは第２のプロセスタンク中に移されて、そこで任意選択による濾過工程まで２〜８℃に維持する。遠心分離後、クリームは小さなステンレス鋼容器中へ流れる。一態様においては、次いでクリーを低温殺菌した後、カロリー、タンパク質および脂肪の含有量の定量化する。別の態様においては、分離が完了した後、クリームの容積、タンパク質および脂肪の含有量を決定し、クリームの一部はスキムミルクに戻して加えられて、濾過を助けるためまたは作られる特定の製品のためのカロリー、タンパク質および脂肪の含有量を達成する。低温殺菌および／または濾過の前または後において、乳にミネラルを添加することができる。
【００３９】
スキムタンパク質１３０は、濾過されて１４０残留物１５０（例えば、タンパク質富化スキム部分）中の生物学的因子の濃度が増加される。次いで富化されたスキムのカロリー含有量が決定され、必要な場合には前に得られたクリーム１７０の添加によって調節される１６０。一態様においては、第１通過の濾過から得られた透過液１８０を収集し、再濾過して１９０、第１の濾過１４０の間に透過液へ通過し得る追加の生物学的因子を含む第２の残留物２００を得る。この第２の残留物２００は、第１の残留物１５０に添加して生物学的因子の濃度（例えば、タンパク質濃度）を増加させることができる。第１分離１２０からのクリーム１７０をさらに処理し２２０、追加のスキム２３０を得ることができる。例えば、クリーム１７０をさらに分離して２２０、バター２４０およびスキム２３０を得ることができる。追加のスキム２３０は、スキムタンパク質１３０に添加することができる。
【００４０】
「全乳」は、脂肪を除去されていない乳を意味する。「スキム」または「スキムミルク」は、脂肪含有量の全部または一部を除いた全乳を意味する。したがって、「スキムミルク」は、実質的に全部には満たない脂肪含有量の除去がなされた「低脂肪乳」などの変形形態を含むことはよく理解されるであろう。「クリーム」または「脂肪部分」によっては、スキムミルクから分離された全乳の部分が意味されている。通常、クリームは、長鎖、中鎖および短鎖脂肪酸を、同一の調製物から得られたスキムミルクの濃度よりも高い濃度で含む。
【００４１】
一実施形態によれば、スキムミルクを濾過するために使用される限外濾過膜は、４０ｋＤａを超える分子量を有する任意の物質の通過を防ぐサイズである。このような排除される物質は、限定されないが、乳タンパク質および乳脂肪を含む。あるいは、１〜４０ｋＤａおよびこの範囲内のいずれかの範囲を超える分子量を有する任意の物質の透過を防ぐ限外濾過膜を使用することもできる。通常は、０．４５μｍ以下を含む（例えば、０．２μｍ）フィルターを使用することができる。通常は、０．２μｍのフィルターが使用される。一部の実施形態では、段階的濾過を使用することができる（例えば、０．４５μｍでの第１の濾過、０．３μｍでの第２の濾過、０．２μｍでの第３の濾過、またはこれらの任意の組合せ）。脂肪のスキムからの分離により、濾過が容易となる。殺菌は、適切なデプスフィルターまたは膜フィルターを用いて、濾過または接線濾過などの知られている方法によって実施することができる。
【００４２】
以下の乳タンパク質は、限外濾過膜によって補捉することができる（分子量を括弧内に記す）：ラクトアルブミン（約１４ｋＤａ）、カゼイン（約２３ｋＤａ）、ラクトグロブリン（約３７ｋＤａ）、アルブミン（約６５ｋＤａ）、およびイムノグロブリン（＞１００ｋＤａ）。
【００４３】
３．５ｋＤａ以下の遮断分子量を有する限外濾過膜が、例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．およびＤｏｗ  Ｄｅｎｋａｒｋ、Ｎａｓｋｏｖ、Ｄｅｎｍａｒｋからそれぞれ入手可能である。セラミック材料で作られた限外濾過膜も使用することができる。セラミックフィルターは、合成フィルターより優れた利点を有する。セラミックフィルターは生蒸気で殺菌することができる。
【００４４】
濾過を促進するため、通常、限外濾過膜に圧力勾配が与えられる。通常、圧力勾配は、膜を通過する所望の濾過フラックスを維持するために調節される。一態様においては、濾過の開始前に、限外濾過膜を少量の乳でプライミングし、透過液を廃棄する。この様式でのフィルターのプライミングは、濾過効率のために有利であると考えられている。
【００４５】
低温殺菌後、乳製品は無菌的に処理される。約２〜８℃に冷却後、低温殺菌された乳は、栄養含有量、タンパク質含有量、特定の因子について試験され、所望のレベルに調節される。一態様においては、富化されたスキム／残留物は、栄養含有量、タンパク質含有量、特定の因子について測定され、例えば低温殺菌されたクリームを戻し加えて所望のカロリー含有量を得ることによって所望のレベルに調節される。製品は、シリンジまたはボトル中に分配するために、プロセスタンクから充填装置にポンプで送られる。最終製品は、パーケージおよび配給の前にウイルスおよび細菌汚染について試験される。
【００４６】
本開示の方法および組成物は、バイオバーデンを低減させつつ重要なタンパク質およびビタミンの望ましい活性を維持する。乳の最終製品への加工の様々な工程において様々な生物がその存在について試験される。汚染を判定するための確認試験において使用される生物としては、細菌：大腸菌（E. coli）、黄色ブドウ球菌（S. aureus）、およびストレプトコッカス・アガラクチエ（S. agalactiae）、およびウイルス：ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、ウシウイルス性下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）および仮性狂犬病ウイルス（ＰＳＲ）が挙げられ、この後者はＣＭＶのマーカーとして使用される。ＨＩＶおよびＨＡＶは、ヒト乳の可能性ある汚染物質であることが知られており、したがって、関連ウイルスとして選択した。Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）もヒト乳の可能性ある汚染物質であることが知られている。本開示の方法を用いて、次のものが得られた：
【００４７】
【表１】
0005770690.tif 000002
【００４８】
ウイルスの対数（log）減少値は、本開示の方法によって達成され得る最大の減少を表すものではない。特に興味深いのは、乳業界で伝統的に使用されている低温殺菌条件（６２．５±１．０℃、１５分間）に影響されない、小さく、非脂質で包まれた、強靭なウイルスであるＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）の殺滅である。さらに、黄色ブドウ球菌は熱処理に対してかなり耐性であるが、この生物は本開示の方法で約１５の対数減少を示した。
【００４９】
本開示は、強化剤組成物（fortifier composition)も提供する。強化剤は、本明細書に記載されている収集および濾過および／または低温殺菌の方法を実施することによって得られる。本開示の強化剤は、重要な乳タンパク質および生物学的因子を含む。
【００５０】
ヒト乳は、約１００，０００の異なる生物学的因子−タンパク質、脂質、炭水化物、ビタミン、および微量ミネラル−を含む。重要な成分は、モノマーの免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）および二量体の分泌型ＩｇＡ（ｓ［ＩｇＡ］２）、リゾチーム、およびラクトフェリンを含む。したがって、低温殺菌方法は、乳製品の安全性を確実にしつつ、理想的には熱不安定性を有する可能性のあるこれらの必須の成分を適切な量保たなければならない。
【００５１】
免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）および分泌型ＩｇＡ（ｓ［ＩｇＡ２］）は、ＥＬＩＳＡサンドイッチ法を用いて乳サンプル中で定量化された。Ｐｒｏｌａｃｔａ  ＨＴＳＴ法を用いた低温殺菌後、未処理のヒト乳サンプルの対応する値と比較して、平均で、ＩｇＡ濃度は約２７％（例えば、約７％〜約４７％に）低下し、分泌型ＩｇＡレベルは１７％（例えば、約７％〜約２７％）低下した。
【００５２】
リゾチーム活性は、ミクロコッカス・デイクチカス懸濁液を基質として用いてマイクロタイターアッセイによって決定した。低温殺菌後のヒト乳中のリゾチーム活性は約２２，０００ＩＵ／ｍＬであり、生ヒト乳中の当初の活性（３９，０００ＩＵ／ｍＬ）の５７％（例えば、約４７％〜約６７％以上）であった。
【００５３】
ラクトフェリンの濃度は、ＥＬＩＳＡ技法によって決定した。本開示の方法を用いた低温殺菌後のヒト乳のラクトフェリン含有量は、０．０３３ｇ／１００ｍＬであり、生ヒト乳中の当初の濃度（０．２４ｇ／１００ｍＬ）の約１４％（例えば、約４〜２４％）であった。
【００５４】
ビタミンの分析を有効性が実証されたＨＰＬＣ手順によって実施した。ビタミンＡ、ビタミンＣ，およびα−、γ−、およびδ−トコフェロールのレベルは、低温殺菌後も不変のままであった。ヒト乳のビタミンＢ６含有量は、約７．８μｇ／１００ｍＬまでわずかに減少し、当初の濃度８．８μｇ／１００ｍＬの約８９％であった。これらの結果は表２に示す。
【００５５】
【表２】
0005770690.tif 000003
【００５６】
本開示の乳組成物および強化剤のタンパク質成分により、タンパク質源が提供される。タンパク質は、成長、酵素およびホルモンの合成、ならびに皮膚からおよび尿や糞便中に失われるタンパク質の補充に必要とされる。これらの代謝過程が、給食におけるタンパク質の総量および特定のアミノ酸の相対的な量の両方に対する必要性を決定する。乳児の給食におけるタンパク質の量および種類の妥当性は、成長、窒素の吸収および保持、血漿アミノ酸、ある種の血液分析物質および代謝応答を測定することによって決定される。本開示の特有の利点は、組成物中のヒトＩｇＡタンパク質、リゾチーム、およびラクトフェリンの存在である。
【００５７】
必要ではないが、本開示のヒト乳組成物は、非天然に存在するかまたは異種／異質の成分で改変または補充することができることは認識されるであろう。例えば、タンパク質含有量は、ヒトの消費に好適である窒素源を用いて調節または改変することができる。そのようなタンパク質は、当業者にはよく知られており、このような組成物を調製する際には簡単に選択することができる。添加することができる好適なタンパク質成分の例は、カゼイン、乳清、コンデンススキムミルク、無脂肪乳、大豆、豆、米、コーン、加水分解されたタンパク質、遊離アミノ酸、タンパク質を含むコロイド状懸濁物中にカルシウムを含有するタンパク質源およびこれらの混合物を含む。
【００５８】
本開示の乳組成物の他の成分は、脂肪源を含む。脂肪は一般に、その高カロリー密度だけではなく溶液中での低浸透圧活性という理由でも、低出生体重乳児（ＬＢＷ）のためのエネルギー源である。ここでも、必ずしも必要ではないが、本開示の乳組成物は、脂肪成分で補充することができる。このような異種／異質の脂肪成分は、高オレインのベニバナ油、大豆油、分画されたココナツ油（中鎖トリグリセリド、ＭＣＴ油）、高オレインひまわり油、コーン油、キャノーラ油、ココナツ、パームおよびパーム核油、魚油、綿実油ならびにドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびアラキドン酸などの特定の脂肪酸を含む。
【００５９】
ドコサヘキサエン酸は、オメガ３脂肪酸である。ＤＨＡは、ヒト乳中に最も豊富にある炭素２０個のオメガ３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）である。しかし、ヒト乳のＤＨＡ含有量は、母親の食事に大きく依存して変化する。母親がＤＨＡの多い魚を頻繁に食べると、その乳はより高いＤＨＡレベルを含有し、魚の摂取がより少ない母親は、より低いＤＨＡレベルを乳中に有することになる。したがって、早産乳児が十分な量のＤＨＡを摂ることを確実にするには、ヒト乳にはＤＨＡの補充を必要とするであろう。ＤＨＡの補充は、通常、アラキドン酸の補充を伴う。Ｋｙｌｅらの米国特許第５４９２９３８号は、ＤＨＡを渦鞭毛藻から得る方法ならびにその薬剤組成物および補助食品中での使用を記載している。
【００６０】
炭水化物は、本開示の組成物の別の成分である。炭水化物は、成長を助け、かつ、栄養不良が急速に進む乳児となる組織異化のリスクを低減させる簡単に利用可能なエネルギー源を提供する。ヒト乳および最も標準的な乳に基づく乳児用調乳においては、重要な炭水化物はラクトースである。低出生体重（ＬＢＷ）乳児は、胎児の腸におけるラクターゼ活性は妊娠期間の後期（３６〜４０週）までは完全には発達していないので、ラクトースを十分に消化することができないことがある。他方、スクラーゼ活性は、妊娠３２週までに最大であり、コーンシロップ固形分（グルコースポリマー）を消化するグルコアミラーゼ活性は、第三期中にラクターゼ活性の２倍の早さで増加する。本開示のヒト乳組成物は炭水化物で補充することができる。ヒト乳組成物を補充するために使用することができる炭水化物の例は、これらだけには限定されないが、加水分解されたコーンスターチ、マルトデキストリン、グルコースポリマー、スクロース、コーンシロップ、コーンシロップ固形分、米シロップ、グルコース、フルクトース、ラクトース、高フルクトースコーンシロップおよびフルクトオリゴサッカリド（ＦＯＳ）などの消化しにくいオリゴサッカリドを含む。
【００６１】
ビタミンおよびミネラルは、乳児の適切な栄養摂取および発育に重要である。未熟乳児またはＬＢＷ乳児は、成長のためおよび酸−塩基バランスのためにナトリウム、カリウムおよび塩素などのミネラルを必要とする。これらの電解質の十分な摂取は、尿中および糞便中ならびに皮膚からの損失の補充のためにも必要である。カルシウム、リンおよびマグネシウムは適切な骨の石灰化のために必要である。骨が成長するためには、これらのミネラルの適切な量が給食中に存在しなければならない。
【００６２】
微量ミネラルは、細胞分裂、免疫機能および成長に関連している。したがって、乳児の成長および発達のためには十分な量の微量ミネラルの供給が必要である。重要な微量ミネラルは、銅、マグネシウムおよび鉄（これはヘモグロビン、ミオグロビン、および鉄含有酵素の合成のために重要である）を含む。亜鉛は、成長のために、多数の酵素の活性のために、またＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質の合成のために必要である。銅は、いくつかの重要な酵素の活性のために必要である。マンガンは、骨および軟骨の発育のために必要であり、また多糖類および糖タンパク質の合成において重要である。したがって、本開示のヒト乳および強化剤組成物は、ビタミンおよびミネラルで補充されることができる。
【００６３】
ビタミンＡは、成長、細胞分化、視覚および免疫システムのために必須の脂溶性ビタミンである。ビタミンＤは、カルシウムおよびより低い程度でリンの吸収のために、また骨の発育のために重要である。ビタミンＥ（トコフェロール）は、細胞中の多価不飽和脂肪酸の過酸化を防ぎ、したがって組織の損傷を防ぐ。葉酸は、アミノ酸およびヌクレオチドの代謝において重要である。血清葉酸塩濃度は、葉酸摂取が低いＬＢＷ乳児では２週齢以後正常未満に低下することが示されてきた。加えて、いくつかのＢ群ビタミンは、早産乳中には低い濃度で存在する。
【００６４】
上記の通り、ヒト乳のビタミンおよびミネラル濃度の変動性および早産乳児の必要性の増加により、発育中の乳児が適切な量のビタミンおよびミネラルを摂取することを保証するための最小限の強化が求められる。本開示のヒト乳組成物および強化剤における補助ビタミンおよびミネラルの例は、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビオチン、葉酸、パントテン酸、ナイアシン、ｍ−イノシトール、カルシウム、リン、マグネシウム、亜鉛、マンガン、銅、ナトリウム、カリウム、塩素、鉄、およびセレンを含む。さらなる栄養分クロム、モリブデン、ヨウ素、タウリン、カルニチンおよびコリンも補充を必要とすることがある。
【００６５】
６７Ｋｃａｌ／ｄＬ（１オンス当たり２０カロリー）の全乳製品、８０Ｋｃａｌ／ｄＬ（１オンス当たり２４カロリー）の全乳製品、およびヒト乳強化剤を含む組成物が提供される。該乳強化剤組成物は、約２０〜７０ｍｇ／ｍｌのタンパク質、約３５〜８５ｍｇ／ｍｌの脂肪、約７０〜１１５ｍｇ／ｍｌの炭水化物を含み、かつヒトＩｇＡを含有する。様々なカロリーの組成物を本開示の方法を用いて得ることができる。例となる組成物は、２４カロリーの乳組成物および強化剤乳組成物である。
【００６６】
２４カロリー全乳組成物は、以下の成分を含む：ヒト乳、グリセロリン酸カルシウム、クエン酸カリウム、グルコン酸カルシウム、炭酸カルシウム、リン酸マグネシウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、および硫酸マンガン。２４カロリー組成物は、摂取単位（unit serving）（１０ｍｌ）当たりに以下の特徴を有する（値は近似値であり、当業界において認識される通り、試験の方法、使用機器などによって変動することに留意されたい）：
カロリー          ８．５
脂肪合計          ０．４４ｇ
ナトリウム        ２．３ｍｇ
カリウム          ６．３ｍｇ
合計  炭水化物    ０．７９ｇ
糖類        ０．６４ｇ
タンパク質        ０．３１ｇ
ビタミンＡ        ２１．１ＩＵ
ビタミンＣ        ＜０．１０ｍｇ
カルシウム        ８．０ｍｇ
鉄                １３．３μｇ
リン              ３．８ｍｇ
マグネシウム      ０．７４ｍｇ
塩素              ５．０ｍｇ
亜鉛              ０．１２μｇ
銅                １７．３μｇ
マンガン          ＜６．２μｇ
オスモル濃度    −３２２ｍＯｓｍ／Ｋｇ  Ｈ２Ｏ
【００６７】
本強化剤組成物は、以下の成分を含む：ヒト乳、炭酸カルシウム、リン酸カリウム、リン酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、リン酸マグネシウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸マンガン。本強化組成物は、摂取単位（２ｍｌ）当たりに以下の特徴を有する（値は近似値であり、当業において認識される通り、試験の方法、使用機器などによって変動することに留意されたい）：
カロリー          ２．７
脂肪合計          ０．１５ｇ
ナトリウム        １．２ｍｇ
カリウム          ２．３ｍｇ
合計  炭水化物    ０．２１ｇ
糖類        ０．１５ｇ
タンパク質        ０．１０ｇ
ビタミンＡ        ５．５ＩＵ
ビタミンＣ        ＜０．０２ｍｇ
カルシウム        ８．９ｍｇ
鉄                ０．０１ｍｇ
リン              ３．６ｍｇ
マグネシウム      ０．３８ｍｇ
塩素              ０．４ｍｇ
亜鉛              ０．０５ｍｇ
銅                ２．７μｇ
マンガン          ＜１．３μｇ
オスモル濃度    −３４３ｍＯｓｍ／Ｋｇ  Ｈ２Ｏ（生乳との混合時）
【００６８】
本開示のヒト乳組成物および強化剤のオスモル濃度（osmolality）は、組成物の吸着、吸収および消化にとって重要である。不適切なオスモル濃度は、乳児の腹部膨張および嘔吐をもたらすことがある。本開示のヒト乳組成物および（生乳と混合された）強化剤のオスモル濃度は、通常、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ  Ｈ２Ｏ未満である。通常は、オスモル濃度は約３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ水〜約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ水である。本開示の組成物が炭水化物または脂肪成分で補充される場合、組成物のオスモル濃度を調節しなければならない。例えば、成分（例えば、炭水化物または脂肪）の種類は、強化ヒト乳のオスモル濃度に影響する。炭水化物は、加水分解されているほど浸透圧活性が高い。加えて、部分的に加水分解された炭水化物源は、ヒト乳と再構成された場合にはヒト乳アミラーゼによるさらなる加水分解によって、オスモル濃度を増加させることがある。当業者は、再構成された強化剤／ヒト乳組成物の所望のオスモル濃度をもたらす炭水化物または炭水化物の組合せを直ちに選択することができる。
【００６９】
本強化剤は通常、ヒト乳と混合されて４ｃａｌ／オンスを加える。通常、これは生乳：強化剤の８０：２０混合物（例えば、生乳８ｍｌおよび強化剤２ｍｌ）であり、以下の表では「Ｐｌｕｓ  ４」と表示されている。他の典型的な混合物は、７０：３０（「Ｐｌｕｓ  ６」）、６０：４０（「Ｐｌｕｓ  ８」）および５０：５０（「Ｐｌｕｓ  １０」）を含むが、生乳量と強化剤との任意かつすべての相対的な比率または量が本発明により企図されている。表３は、本開示のヒト乳組成物と組み合わせた生ヒト乳の混合物の例を提示している。表４は、生ヒト乳および本開示の乳組成物の混合物についての例示としてのカロリー計算を示している。
【００７０】
【表３】
0005770690.tif 000004
【００７１】
【表４】
0005770690.tif 000005
【００７２】
強化剤は典型的には、１０ｍｌシリンジまたは２０ｍｌボトル中に入れられる。ボトルは、シリンジと共に含まれ得る。シリンジキット（例えば、シリンジおよびボトル）または２０ｍｌボトルのどちらの場合も、ボトルは適切な希釈の助けとするために計量目印を含むことができる。例えば、生母乳を生乳の栄養価を決定するために試験することができる。通常の生乳は平均で１．１％のタンパク質、４．２％の脂肪、７．０％のラクトース（１つの糖）を含み、１００グラム当たりに７２ｋｃａｌのエネルギーを供給する。生母乳は、栄養価につき試験することができ、次いで生母乳に４カロリー／オンスを加えるために本開示の強化剤組成物を用いて調節することができる。
【００７３】
「単位投与（unit dose）」は、乳児用の乳の調製において使用されるある量の強化剤を含有する強化剤の個々のパッケージのことを言う。未熟乳児のために調製される強化されたヒト乳の量は、通常、１日当たり２５ｍｌ〜１５０ｍｌの範囲である。したがって、単一の単位投与は、８〜４０ｍｌの生乳調製物を強化するための適切量の強化剤である。より大きい容積に対してはさらなる単位投与量を加えることができる。したがって、単位投与は、生乳８ｍｌ当たりに２ｍｌの強化剤または生乳４０ｍｌ当たりに１０ｍｌの強化剤である。一態様においては、単位投与は、１０ｍｌのシリンジを含み、複数の乳調製物を調製するのに十分な２ｍｌの計量目印を含んでいてもよい。
【００７４】
通常は、調製されるヒト乳の量は、乳児に２４時間の栄養供給を提供するために必要な乳の量に基づいている。例えば、１５００ｇの乳児には、１日当たりに１５０ｍｌの乳を与える。凍結乳が使用される場合は、凍結された乳を完全に解凍されるまで温水浴中に入れておく。強化剤における混合においては、特別な注意を払う。哺乳容器の側面への乳脂肪の付着を増大し、かつ脂肪（エネルギー）の著しい損失をもたらし得る乳脂肪球の破壊を避けるためには穏やかな混合が必要である。規定量の強化された乳をシリンジに取り入れ、識別ラベルを貼る。乳の調製が完了したら、看護スタッフが取りやすいように、ラベルを貼ってある分取された哺乳食を育児室に届けて冷凍庫に入れる。通常、凍結された強化乳は、哺乳の前に温める。例えば強化乳を約３５〜４５℃の範囲内に設定された実験用乾熱インキュベーター中で１５分間温める。これにより、強化乳の温度が室温になる。強化乳は、食塊（bolus）での供給として、あるいは連続的な供給のためにシリンジ注入ポンプを通して、乳児に投与することができる。シリンジ注入ポンプを使用する場合は、シリンジの先端を直立させて脂肪の連続的な注入を可能にし、シリンジを直接哺乳管に取り付けて脂肪および免疫上の成分が付着する可能性のある表面積を少なくする。
【００７５】
本開示は、異種ではないヒト乳および強化剤組成物を提供し、免疫発達および乳児成長を促進させることが実証されているヒトタンパク質を提供する。さらに、本開示のヒト乳および強化剤組成物は、ヒト乳のエネルギー、タンパク質、カルシウム、リン、ナトリウムおよび他の微量栄養分の供給源としてのヒト乳の変動性に対処する一方で、良好な寛容性を示し、ヒト乳の健康上の有益性を最大化する。
【００７６】
通常、大容量のパーケージ材料よりも個々の単位投与サイズのパーケージが使用される。１日の哺乳の過程にわたって未熟乳児に投与される乳が小容量であるため、小容量の強化されたヒト乳が調製される。繰り返し開けられ、分取され、かつ貯蔵された大容量の容器の無菌性は、病院の環境においては常に懸念される事項である。個々の単位投与は、少量の強化剤のヒト乳への添加を、残りの強化剤の汚染の恐れなく、可能にする。
【００７７】
多くの種類の容器が簡単に入手可能であり、かつ当業者に知られている。本開示の方法および組成物において有用な種類の容器の例は、ボトル、シリンジおよび缶を含む（例えば、金属、ガラスまたはプラスチック）。
【００７８】
上記で述べた通り、本開示は、本開示の強化剤をヒト乳に添加して生ヒト乳を所望の栄養含有量に調節し、かつ、強化されたヒト乳を未熟乳児に投与することによる、早産乳児に栄養を提供する方法にも関する。本開示はさらに、強化されたヒト乳を未熟乳児に投与することによって未熟乳児の成長を促進する方法を提供する。
【００７９】
ヒトまたはウシから得た乳は、本開示の方法を用いて加工することができる。一態様においては、乳は初乳を含む。通常、初乳は適宜、無菌水中で希釈する（例えば水で１：１に）。
【００８０】
本開示の方法によって得られた乳は、実質的に生乳と同一であるが、低減された量のバイオバーデンを含むかまたはセレウス菌などの病原菌は含まない。得られる無菌乳製品は、生物活性を含む（例えば、タンパク質および抗体組成物を含む）が生乳に見出される細菌、真菌、胞子は含まない。
【００８１】
得られるスキムミルク部分は、細菌、真菌および胞子を含まない。濾過されたスキムは、次いで脂肪部分と別々にまたは濾過後に再度合わせて貯蔵される。スキムが別に貯蔵される場合は、後でそれを消費前に脂肪部分と再度合わせることができる。あるいは、スキム部分を消費することができる。スキムおよび／または再度合わせた乳は、好ましくは室温未満で、より好ましくは４℃で、長期間貯蔵することができる。
【００８２】
以下の実施例はさらに例示することを意図されているが、本開示を限定することは意図されていない。
【実施例】
【００８３】
加工はクラス１００，０００のクリーンルーム内で行い、充填はクラス１０，０００のクリーンルーム内で行う。ドナー乳をプールし、リスク因子の決定（例えば、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶの汚染および感染についてＰＣＲを行う）のためにサンプルを採る。ドナー乳を２００ミクロンのスクリーンに通して濾過し、塊および大粒子状物質を除去する。
【００８４】
濾過された全乳を、次いで６３℃で３０分間熱処理するかまたは７３℃で１６秒間処理する（例えば、ＨＴＳＴ）。この熱処理は、バイオバーデンを低減させると同時に乳を分離のために準備する。濾過および加熱された乳をスキムと脂肪（クリーム）に分離する。分離後のスキムおよびクリームの分析は、（ａ）スキム−脂肪約０．６９％、タンパク質約１．０７％、ラクトース約７．１４％；（ｂ）クリーム−脂肪約４６％、タンパク質約２％、ラクトース約１０％を含む。
【００８５】
クリームの約５０％を取り出してもう一度分離器を通す。この工程はより多くのスキムミルクを生じ、それがタンパク質の収量を増大させる。分離器のスキムではない側から出てくる生成物はバターであり、これを保持して他の工程のために使用することができる。
【００８６】
クリームまたは脂肪部分をスキムに添加してより良好な限外濾過のためにスキムの含有量を調節する。例えば、スキム中の脂肪は、タンパク質含有量の約５５％〜約６５％であることが必要である。限外濾過工程の１つの目的は、過剰の水を除去し、タンパク質を濃縮することである。限外濾過において使用するフィルターは約４０ｋＤａの遮断分子量を有する。水は透過液と呼ばれる。限外濾過後に集められたスキムを分析すると、タンパク質が約８％である。濾過または後洗浄は、限外濾過中にフィルターに捕捉されたすべてのタンパク質を回収するために、透過液を用いて実施することができる。後洗浄液を濃縮されたスキムミルクに添加して、約７．２％のタンパク質含有量を得る。
【００８７】
後洗浄液を添加した後、クリームを濃縮スキムミルクに添加し、カロリーを正しい目標値まで上げる。この時点で、製品は、脂肪約９．２％、タンパク質約６．３％、およびラクトース約１０．５％を有する。最終バルク物のサンプルをミネラル分析に送る。これはバルク物中のミネラルを測定するためである。最終バルク物を−２０℃以下で凍結させる。実験室からミネラルの結果が戻ってきたら、最終バルク物を解凍する。添加される任意の追加ミネラルは、該ミネラルが在る場合には、この最終バルク物の出発ミネラル含有量に基づき計算する。最終目標は以下の通りである：（ａ）低カロリー含有量バルク製品（例えば、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋４、Ｐｌｕｓ  ４としても知られている、またはＰｒｏｌａｃｔ（商標）＋６、Ｐｌｕｓ  ６としても知られている）については、カルシウム＝４７１．６ｍｇ／ｄＬ、リン＝２２５．２ｍｇ／ｄＬ、ナトリウム＝７５ｍｇ／ｄＬ、カリウム＝２０８．１ｍｇ／ｄＬ、マグネシウム＝２４．４ｍｇ／ｄＬ、塩素＝６９．１ｍｇ／ｄＬ、亜鉛＝３．１ｍｇ／ｄＬ、銅＝０．１ｍｇ／ｄＬ、およびマンガン＝９．２ｍｇ／ｄＬ；（ｂ）Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋８、Ｐｌｕｓ  ８としても知られている、およびＰｒｏｌａｃｔ（商標）＋１０、Ｐｌｕｓ  １０としても知られている、については、カルシウム＝２３５．８ｍｇ／ｄＬ、リン＝１１２．６ｍｇ／ｄＬ、ナトリウム＝３７．５ｍｇ／ｄＬ、カリウム＝１０４ｍｇ／ｄＬ、マグネシウム＝１２．２ｍｇ／ｄＬ、塩素＝３４．６ｍｇ／ｄＬ、亜鉛＝１．６ｍｇ／ｄＬ、銅＝０．０５ｍｇ／ｄＬ、およびマンガン＝４．６ｍｇ／ｄＬ。最終バルク物を５０℃に加熱し、ミネラルを最終バルク物に混合する。
【００８８】
ミネラルが混合された後で、製品をタンク中で低温殺菌する。タンクはジャケット付きであり、タンクの加熱には熱グリコールを使用し（製品温度は約６７℃であり、製品上の空気の温度は約７０℃である）、製品は３０分間低温殺菌する。ジャケット付きタンク中で冷グリコールを用いて製品温度を約５℃まで下げる。次いで製品を必要に応じて充填可能な容器中へ分取する。例えば、充填サイズは、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋４  １０ｍＬ、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋４  ２０ｍＬ、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋６  １５ｍＬ、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋６  ３０ｍＬ、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋８  ２０ｍＬ、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋８  ４０ｍＬ、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋１０  ２５ｍＬ、Ｐｒｏｌａｃｔ（商標）＋１０  ５０ｍＬを含む。充填を行ったら、栄養価およびバイオバーデンの試験のためにボトルをランダムに取ることができる。次の病原体を以下につき試験することができる；総好気性菌計数（Aerobic Count)−＜１０コロニー形成単位／ｍＬ；セレウス菌−１コロニー形成単位／ｍＬ；病原性大腸菌−１コロニー形成単位／ｍＬ、大腸菌類−１コロニー形成単位／ｍＬ；シュードモナス菌−１コロニー形成単位／ｍＬ；サルモネラ菌−１コロニー形成単位／ｍＬ；ブドウ球菌−１コロニー形成単位／ｍＬ；酵母菌−１コロニー形成単位／ｍＬ；カビ−１コロニー形成単位／ｍＬ。上記の本方法によって生成される製品は、以下の内容物を含むことができる：（ａ）Ｐｒｏｌａｃｔ  ＋４およびＰｒｏｌａｃｔ  ＋６では、（ｉ）全カロリーは、約１．３５Ｃａｌ／ｍＬ〜約１．５５Ｃａｌ／ｍＬである、（ｉｉ）タンパク質は、約５．５ｇ／ｄＬ〜約６．５ｇ／ｄＬであり、（ｉｉｉ）脂肪は、約８．５ｇ／ｄＬ〜約９．５ｇ／ｄＬであり、（ｉｖ）カルシウムは、約４１７．６ｍｇ／ｄＬであり、（ｖ）塩素は、約６９．１ｍｇ／ｄＬであり、（ｖｉ）銅は、約０．１ｍｇ／ｄＬであり、（ｖｉｉ）マグネシウムは、約２４．４ｍｇ／ｄＬであり、（ｖｉｉ）マンガンは、約９．２マイクログラム／ｄＬであり、（ｉｘ）リンは、約２２５．２ｍｇ／ｄＬであり、（ｘ）カリウムは、約２０８．１ｍｇ／ｄＬであり、（ｘｉ）ナトリウムは、約７５ｍｇ／ｄＬであり、および（ｘｉｉ）亜鉛は、約３．１ｍｇ／ｄＬである。（ｂ）Ｐｒｏｌａｃｔ  ＋８およびＰｒｏｌａｃｔ  ＋１０では、（ｉ）全カロリーは約１．３５Ｃａｌ／ｍＬ〜約１．５５Ｃａｌ／ｍＬであり、（ｉｉ）タンパク質は、約５．５ｇ／ｄＬ〜約６．５ｇ／ｄＬであり、（ｉｉｉ）脂肪は、約８．５ｇ／ｄＬ〜約９．５ｇ／ｄＬであり、（ｉｖ）カルシウムは、約２０８．８ｍｇ／ｄＬであり、（ｖ）塩素は、約３４．６ｍｇ／ｄＬであり、（ｖｉ）銅は、約０．０５ｍｇ／ｄＬであり、（ｖｉｉ）マグネシウムは、約１２．２ｍｇ／ｄＬであり、（ｖｉｉｉ）マンガンは、約４．６マイクログラム／ｄＬであり、（ｉｘ）リンは、約１１２．６ｍｇ／ｄＬであり、（ｘ）カリウムは、約１０４．１ｍｇ／ｄＬであり、（ｘｉ）ナトリウムは、約３７．５ｍｇ／ｄＬであり、および（ｘｉｉ）亜鉛は、約１．６ｍｇ／ｄＬである。
【００８９】
本開示の実施形態は、言うまでもなく、本明細書で記載したもの以外の方法で本開示の趣旨および範囲を逸脱することなく行うことができる。したがって、本実施形態はあらゆる点で例示的なものであって限定的なものではなく、かつあらゆる変更形態および等価な形態も本開示の記載の範囲内に入ると考えられる。
【図１】
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