(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリヌクレオチドと会合したブロック共重合体を含んでなる組成物であって、前記ブロック共重合体は組成的に異なる第一、第二および第三のブロックを含み、
前記第一のブロックは次式Ｉａ−１の親水性ポリマーブロックであり、
【化１】
0005766611.tif 000061
ここで、
Ａ６、Ａ７、およびＡ８の各々は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−、および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から独立に選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、およびアリールからなる群から独立に選択され、これらは何れも任意に置換され；
Ｒ６ａ、Ｒ７、Ｒ８で完全には置換されないＡ６〜Ａ８の四価炭素原子およびＹ６〜Ｙ８は、適切な数の水素原子で完成されており；
各Ｒ６ａ、Ｒ７、およびＲ８は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それらは何れも１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ６は、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール
、ポリプロピレングリコール、およびチオールからなる群から選択される残基であり；
Ｑ７は、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、ピリジル、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、およびホスフェートからなる群から選択される残基であり；
Ｑ８は、アジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、p-ニトロフェニルエステル、ピリジルジスルフィド、アルデヒド、ケトン、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フォレート、およびＲＧＤペプチドからなる群から選択される；
ｇは、０〜１であり；
ｈは、０〜１未満であり；
ｋは、０〜１であり；ここで、ｇ＋ｈ＋ｋ＝１であり；および
ｙは、１〜１００ｋＤａであり；
前記第二のブロックは次式Ｉｂからなり、前記第一および第三のブロックの間に位置し且つポリヌクレオチドと結合しており、
【化２】
0005766611.tif 000062
ここで、
Ａ０およびＡ１は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−０（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｙ０およびＹ１は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−からなる群から独立に選択され；
Ｒ１〜Ｒ２およびＹ０〜Ｙ１で完全に置換されないＡ０〜Ａ１の四価炭素原子は、適切な数の水素原子で完成され；
各Ｒ１、Ｒ２、およびＲ６は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それらは何れも１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ０は、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、ピリジル、アジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、ピリジルジスルフィド、および水素からなる群から選択される残基であり；
Ｑ１は、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、ピリジル、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、ホスフェート、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびチオールからなる群から選択される残基であり；
ｍは、０〜１．０未満であり；
ｎは、０超〜１．０であり；ここでｍ＋ｎ＝１であり；および
ｖは、１〜２５ｋＤａであり；
前記第三のブロックは次式Ｉｃの疎水性ポリマーブロックであり、
【化３】
0005766611.tif 000063
ここで、
Ａ２、Ａ３およびＡ４は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から独立に選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｙ４は、水素、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（１Ｃ−１０Ｃ）およびアリールからなる群から選択され、それらは何れも１以上のフッ素基で任意に置換され；
Ｙ２は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−からなる群から選択され；
Ｙ３は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキルおよび（６Ｃ−１０Ｃ）アリールからなる群から選択され；
Ｒ３〜Ｒ５およびＹ２〜Ｙ４で完全に置換されていないＡ２〜Ａ４は、適切な数の水素原子で完成され；
各Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それらは何れも１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ２は、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、およびピリジルからなる群から選択され;
Ｑ３は、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、およびホスフェートからなる群から選択され;
ｐは、０．１〜０．９であり；
ｑは、０．１〜０．９であり；
ｒは、０〜０．８であり；ここでｐ＋ｑ＋ｒ＝１であり；および
ｗは、１〜５０ｋＤａである。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記疎水性の第一のブロックは次式Ｉａ−２に対応する構造を有する組成物：
【化４】
0005766611.tif 000064
ここで、
Ａ６は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−、および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｙ６は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、およびアリールからなる群から選択され、これらの何れもが任意に置換され；
完全にはＲ６ａで置換されないＡ６の四価炭素原子およびＹ６は、適切な数の水素原子で完成され；
各Ｒ６ａは、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それらの何れもが１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ６は、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびチオールからなる群から選択される残基であり；および
ｙは、１〜３０ｋＤａである。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、前記第一または第二のブロックは、次式IIIのモノマーの重合または共重合に由来する反復単位を含む組成物；
【化５】
0005766611.tif 000065
ここで、
Ｘは、（ＣＲ１Ｒ２）ｍであり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換され、
Ｙは、Ｏ、ＮＲ４、またはＣＲ１Ｒ２であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フォレート、およびＲＧＤペプチドからなる群から独立に選択され；
Ｒ４は、水素および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｒ８は、（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換される。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、前記第一ブロックは、メタクリル酸ポリエチレングリコールのモノマー残基（ＰＥＧＭＡ）の重合または共重合に由来する反復単位を含む組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の組成物であって、前記第一のブロックは組成的に異なる２以上の反復単位を含んでなるランダム共重合体である組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物であって、前記第二のブロックは次式１に対応する反復単位を含んでなる組成物；
【化６】
0005766611.tif 000066
ここで、
各Ｘ１およびＸ２は、水素であり、Ｘ３は、水素またはアルキルであり、Ｘ４は、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５であり、且つＸ４５はジスルフィド置換アルキル部分である。
【請求項７】
請求項６に記載の組成物であって、Ｘ４５はピリジルジスルフィド置換エチルである組成物。
【請求項８】
請求項６に記載の組成物であって、Ｘ４５はポリヌクレオチドを含んでなり、該ポリヌクレオチドはＸ４５を介して前記組成物に共有結合されている組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物であって、前記第二のブロックは組成的に異なる２以上の反復単位を含む組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ａに対応する反復単位を含んでなる組成物；
【化７】
0005766611.tif 000067
ここで、
＊は、式１Ａの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、Ｘ３はアルキルである。
【請求項１１】
請求項１または１０に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ｅに対応する反復単位を含んでなる組成物；
【化８】
0005766611.tif 000068
ここで、
＊は、式１Ｅの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、各Ｘ３およびＸ４７は独立にアルキルである。
【請求項１２】
請求項１、１０または１１に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ｃに対応する反復単位を含んでなる組成物；
【化９】
0005766611.tif 000069
ここで、
＊は、式１Ｃの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、Ｘ３はアルキルであり、またＸ４８はアミノ置換アルキルである。
【請求項１３】
請求項１に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、（Ｃ２−Ｃ８）アルキルアクリル酸の重合に由来するアニオン性反復単位を含んでなる組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物であって、前記アニオン性反復単位はプロピルアクリル酸の重合に由来する組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ａｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡである組成物。
【請求項１７】
ポリヌクレオチドの細胞内送達のための医薬の製造における請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１８】
ポリヌクレオチドの細胞内送達のための方法であって、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物を、第一のｐＨにおいて媒質中で細胞表面と接触させることと；該組成物をエンドサイトーシスを介して前記細胞におけるエンドソーム膜の中に導入することと；該エンドソーム膜を不安定化し、それにより前記組成物または前記ポリヌクレオチドを前記細胞の細胞質へ送達することを含んでなる方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の組成物であって、前記ブロック共重合体が、以下のものである組成物：
［Ｇａｌ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ−ＭＡＡ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ−ＭＡＡ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ−Ｄ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ−Ｄ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ−ＭＡＡ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ−Ｄ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［Ｇａｌ−Ｄ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ−ＭＡＡ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ−Ｄ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＮＡｃＧａｌ−Ｄ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
フォレート−［ＰＥＧ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｄ−Ｂ−Ｐ］；または
フォレート−［ＰＥＧ］−［ＨＰＭＡ−ＭＡＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｄ−Ｂ−Ｐ］
（ここで、Ｂはメタクリル酸ブチルのモノマー残基であり、Ｐはアクリル酸プロピルのモノマー残基であり、Ｄはメタクリル酸ジメチルアミノエチルのモノマー残基であり、ＰＥＧＭＡはメタクリル酸ポリエチレングリコールのモノマー残基であり、ＨＰＭＡはＮ−（２−プロピル）メタクリルアミドまたはＮ−メタクリル酸プロピルのモノマー残基であり、ＰＡは一級アミノ基含有モノマー残基であり、ＮＡｃＧａｌはＮ−アセチルガラクトース−ＰＥＧ−ビニルモノマー由来のモノマー残基であり、Ｇａｌはガラクトース−ＰＥＧ−ビニルモノマー由来のモノマー残基であり、ＰＤＳＭＡはメタクリル酸２−（２−ピリジニルジスルファニル）エチルまたは２−（２−ピリジニルジスルファニル）エチルメタクリルアミド由来のモノマー残基であり、ＭＡＡはメチルアクリル酸由来のモノマー残基であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールであり、また、フォレートは葉酸残基である。）。  
【請求項２０】
請求項１に記載の組成物であって、前記ブロック共重合体が、以下のものである組成物：
フォレート−［ＰＥＧ］２Ｋ−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］１２．０Ｋ−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］３０Ｋ；
フォレート−［ＰＥＧ］２Ｋ−［ＨＰＭＡ９０−ＭＡＡ１０−ＰＤＳＭＡ１０］１２．０Ｋ−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］３０Ｋ；
［ＰＥＧＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＤＭＡＥＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］；
［ＧＡＬ］−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］；または
［ＧＡＬ９０−ＭＡＡ１０］−［ＨＰＭＡ８０−ＰＤＳＭＡ１０−ＭＡＡ１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］
（ここで、Ｂはメタクリル酸ブチルのモノマー残基であり、Ｐはアクリル酸プロピルのモノマー残基であり、Ｄはメタクリル酸ジメチルアミノエチルのモノマー残基であり、ＰＥＧＭＡはメタクリル酸ポリエチレングリコールのモノマー残基であり、ＨＰＭＡはＮ−（２−プロピル）メタクリルアミドまたはＮ−メタクリル酸プロピルのモノマー残基であり、Ｇａｌはガラクトース−ＰＥＧ−ビニルモノマー由来のモノマー残基であり、ＰＤＳＭＡはメタクリル酸２−（２−ピリジニルジスルファニル）エチルまたは２−（２−ピリジニルジスルファニル）エチルメタクリルアミド由来のモノマー残基であり、ＭＡＡはメチルアクリル酸由来のモノマー残基であり、ＭＡＡ（ＮＨＳ）はメチルアクリル酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル由来のモノマー残基であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールであり、また、フォレートは葉酸残基である。）。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
この出願は、２００８年１１月６日に出願された米国特許出願第６１／１１２，０４８号；２００８年１１月６日に出願された米国特許出願第６１／１１２，０５４号；２００８年１２月２４日に出願された米国特許出願第６１／１４０，７７４号；２００８年１２月２４日に出願された米国特許出願第６１／１４０，７７９号；２００９年４月２１日に出願された米国特許出願第６１／１７１，３５８号；２００９年４月２１日に出願された米国特許出願第６１／１７１，３６９号；２００９年５月１３日に出願された米国特許出願第６１／１７７，９２１号；２００９年９月１８日に出願された米国特許出願第６１／２４３，８９８号；の優先権を主張するものであり、各出願の全体の内容を本明細書の一部として援用する。
【発明の背景】
【０００２】
ある場合には、ポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）のような治療剤を生体細胞に与えるのが有益である。幾つかの場合、このようなポリヌクレオチドの送達は治療的利益を与える。
【発明の概要】
【０００３】
本発明の種々の側面のうちの一つは、（ポリヌクレオチドのような）治療剤と結合されたブロック共重合体を含んでなる組成物である。該ブロック共重合体は、組成的に異なる少なくとも三つのブロックを含んでいる。三つのブロックのうちの第一は、親水性のポリマーブロックである。三つのブロックのうちの第二は、第一および第三のブロックの間に位置するポリマーブロックであり、（ｉ）前記治療剤と結合するか、または（ｉｉｉ）前記治療剤にを結び付けるための官能基を有する。第三のブロックは、アニオン性反復単位を含んでなる疎水性ポリマーブロックである；該アニオン性反復単位は、その置換基として、ｐＨに依存して数が変化するアニオン集団を有し、該集団はｐＨ５のときよりもｐＨ７．４のときの方が大きい。
【０００４】
本発明の種々の側面のうちの一つは、ポリヌクレオチドと結合されたブロック共重合体を含んでなる組成物であり、該ブロック共重合体は第一のブロックと、第一のブロックおよび第三のブロックの間の第二のブロックと、第三のブロックを含み、前記第一のブロックは前記ポリヌクレオチドをターゲッティングまたは立体的に遮蔽するのに適した親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは前記ポリヌクレオチドに結合し、また前記第三のブロックは疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックである。
【０００５】
本開示のもう一つの側面は、ポリヌクレオチドに結合したブロック共重合体を含んでなる組成物であって、前記ブロック共重合体は第一のブロックと、第一のブロックおよび第三のブロックの間の第二のブロックと、第三のブロックを含み、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックはオリゴヌクレオチドに結合しており、前記第三のブロックは複数の疎水性モノマー残基および複数のアニオン性モノマー残基を含んでなるポリマーブロックを含んでなる組成物に向けられている。
【０００６】
本開示のもう一つの側面は、ポリヌクレオチドに結合したブロック共重合体を含んでなる組成物であって、前記ブロック共重合体は第一のブロックと、第一のブロックおよび第三のブロックの間の第二のブロックと、第三のブロックを含み、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは親水性で且つポリヌクレオチドとイオン結合した複数のカチオン性モノマー残基を含んでなり、前記第三のブロックは疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックを含んでなる組成物に向けられている。
【０００７】
本開示のもう一つの側面は、ポリヌクレオチドに結合したブロック共重合体を含んでなる組成物であって、前記ブロック共重合体は第一のブロックと、第一のブロックおよび第三のブロックの間の第二のブロックと、第三のブロックを含み、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは該第二のブロックに共有結合したポリヌクレオチドを含んでなるポリマーバイオ接合体であり、前記第三のブロックは、疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックであるか、またはこれを含んでなる組成物に向けられている。
【０００８】
本開示のもう一つの側面は、ポリヌクレオチドに結合したブロック共重合体を含んでなる組成物であって、前記ブロック共重合体は第一のブロックと、第一のブロックおよび第三のブロックの間の第二のブロックと、第三のブロックを含み、前記第一のブロックは前記ポリヌクレオチドをターゲッティングまたは立体的に遮蔽するのに適した親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは該第二のブロックに共有結合したポリヌクレオチドを含んでなるポリマーバイオ接合体であり、前記第三のブロックは、複数の親水性モノマー残基および複数のアニオン性モノマー残基を含んでなるポリマーブロックであるか、またはこれを含んでなる組成物に向けられている。
【０００９】
本開示の更にもう一つの側面は、ここに記載の組成物を含んでなるポリマーミセルに向けられている。
【００１０】
ここでのある実施形態において与えられるのは、ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは下記を含む複数のブロック共重合体を含んでなり、また前記複数のブロック共重合体は前記ミセルがｐＨ７．４の水性媒質中で安定であるように前記ミセルの中に結合される組成物である：
ａ．親水性の遮蔽ブロックである第一のブロック；
ｂ．前記第一のブロックと第三のブロックの間にある第二のブロックであって、ポリヌクレオチドキャリアブロックである第二のブロック；および
ｃ．疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ブロックである第三のブロック。
【００１１】
ここでのある実施形態において与えられるのは、ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは下記を含む複数のブロック共重合体を含んでなり、また前記複数のブロック共重合体は前記ミセルの中において結合され、前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物である：
ａ．ポリヌクレオチドをターゲッティングまたは立体的に遮蔽するのに適した親水性の遮蔽ブロックである第一のブロック；
ｂ．前記第一とブロックの第三のブロックの間にある第二のブロックであって、ポリヌクレオチドに結合する第二のブロック；および
ｃ．疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ブロックである第三のブロック。
【００１２】
ここでの幾つかの実施形態において与えられるのは、ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは下記を含む複数のブロック共重合体を含んでなり、また前記複数のブロック共重合体は前記ミセルの中において結合され、前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物である：
ａ．親水性ポリマーブロックである第一のブロック；
ｂ．前記第一のブロックと第三のブロックの間にある第二のブロックであって、ポリヌクレオチドに結合する第二のブロック；
ｃ．複数の疎水性モノマー残基および複数のアニオン性モノマー残基を含んでなるポリマーブロックであるか、またはこれを含んでなる第三のブロック。
【００１３】
ここでのある実施形態において与えられるのは、ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは下記を含む複数のブロック共重合体を含んでなり、また前記複数のブロック共重合体は前記ミセルの中において結合され、前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物である：
ａ．親水性ポリマーブロックである第一のブロック；
ｂ．前記第一のブロックと第三のブロックの間にある第二のブロックであって、親水性であり、且つ前記ポリヌクレオチドとイオン結合している複数のカチオン性モノマー残基を含んでなる第二のブロック；
ｃ．疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックである第三のブロック。
【００１４】
ここでの幾つかの実施形態において与えられるのは、ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは下記を含む複数のブロック共重合体を含んでなり、また前記複数のブロック共重合体は前記ミセルの中において結合され、前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物である：
ａ．親水性ポリマーブロックである第一のブロック；
ｂ．前記第一のブロックと第三のブロックの間にある第二のブロックであって、該第二ブロックに共有結合されたポリヌクレオチドを含んでなるポリマーバイオ接合体である第二のブロック；および
ｃ．疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックであるか、またはこれを含んでなる第三のブロック。
【００１５】
本開示のもう一つの側面は、ポリマーミセルおよび該ミセルに結合されたポリヌクレオチドを含んでなる組成物を調製する方法に向けられており、該方法は、ブロック共重合体を第一の変性媒質と混合することであって、該ブロック共重合体は第一、第二および第三のブロックを備え、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは前記第一および第三のブロックの間に位置するポリヌクレオチドと結合するための能力をもった部分を含んでなる親水性ポリマーブロックであり、前記第三のブロックは疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックであることと、前記ブロック共重合体を第二の水性媒質に露出させることと、前記ブロック共重合体を前記水性媒質中で結合させてミセルを形成することと、ポリヌクレオチドを前記ブロック共重合体の第二のブロックに結合させることを含んでなる方法に向けられている。
【００１６】
本発明のもう一つの側面は、本発明のブロック共重合体またはミセルの何れかを含んでなる医薬組成物である。
【００１７】
本発明の更なる側面は、本発明のブロック共重合体またはミセルの医薬の製造における使用である。
【００１８】
本発明の更なる側面は、ポリヌクレオチドの細胞間送達方法であり、該方法は、本発明のブロック共重合体またはミセルを第一のｐＨの媒質中で細胞表面に接触させることと；エンドサイトーシスを介して前記組成物を細胞内のエンドソーム膜の中に導入することと；エンドソーム膜を不安定化させることを含んでなり、それによって前記組成物またはポリヌクレオチドは前記細胞の細胞質へと送達される。
【００１９】
本発明の更なる側面は、細胞における細胞内標的の活性を調節する方法であり、該方法は、本発明のブロック共重合体またはミセルを含んでなる組成物を使用して、細胞の細胞質へポリヌクレオチドを送達することと、該ポリヌクレオチドを前記細胞内標的と相互作用させることを含んでなり、それによって前記細胞内標的の活性が調節される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理を利用した例示的実施形態を記載する以下の詳細な説明および添付の図面を参照することによって得られ、該図面は次の通りである：
【図１】図１は、ポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］の合成を示している。
【図２】図２は、ＮＭＲによるポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］の特性決定を示している。
【図３】図３は、ＧＰＣによるポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］の特性決定を示している。
【図４】図４は、ポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ−ＢＭＡ−ＰＡＡ］の合成を示している。
【図５】図５は、ＮＭＲによるポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ−ＢＭＡ−ＰＡＡ］の特性決定を示している。
【図６】図６は、ＧＰＣによるポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ−ＢＭＡ−ＰＡＡ］の特性決定を示している。
【図７】図７は、ＰＢＳ−ｄ中でのＮＭＲによるポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ−ＢＭＡ−ＰＡＡ］の特性決定を示している。
【図８】図８は、ＤＬＳによるポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ］−ｂ−［ＤＭＡＥＭＡ−ＢＭＡ−ＰＡＡ］の特性決定を示している。
【略語および定義】
【００２１】
本発明またはその好ましい実施形態の要素を紹介するときに、冠詞である「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」および「前記の（ｓａｉｄ）」は、１以上の要素が存在することを意味するように意図されている。「含んでなる」、「含む」および「有する」の語句は、包括的で、列記した要素以外の追加の要素が存在し得ることを意味するように意図されている。
【００２２】
脂肪族：別途指示しない限り、「脂肪族」または「脂肪族基」は、任意に置換された非芳香族炭化水素部分を意味する。該部分は、例えば直鎖状、分岐鎖状もしくは環状（例えば単環、または縮合多環、架橋多環もしくはスピロ縮合多環のような多環）、またはそれらの組合せであってよい。別途特定しない限り、脂肪族基は１〜２０の炭素原子を含む。
【００２３】
アルキル：別途指示しない限り、ここに記載するアルキル基は、好ましくは、主鎖に１〜８の炭素原子を含み、且つ２０以下の炭素原子を含む低級アルキルである。それらは直鎖状、分岐鎖状または環状であり、メチル、エチル、プロピル、ブチル、およびヘキシル等を含む。
【００２４】
アミノ：別途指示しない限り、単独でまたはもう一つの基の一部としてここで使用する「アミノ」は、−ＮＲ１Ｒ２部分を意味し、ここでのＲ１およびＲ２は水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビルまたはヘテロ環である。
【００２５】
アミド（ａｍｉｄｅ）またはアミド（ａｍｉｄｏ）：別途指示しない限り、「アミド（ａｍｉｄｅ）」または「アミド（ａｍｉｄｏ）」の部分は式−ＣＯＮＲ１Ｒ２の基を表し、ここでのＲ１およびＲ２は用語「アミノ」に関連して定義した通りである。「置換アミド」は、例えば、式−ＣＯＮＲ１Ｒ２の基を意味し、ここでのＲ１およびＲ２は両者とも水素である。
【００２６】
アニオン性モノマー、アニオン性モノマー単位、またはアニオン性反復単位：別途指示しない限り、「アニオン性モノマー」、「アニオン性モノマー単位」または「アニオン性反復単位」は、アニオン帯電状態で存在するが、非帯電状態では、例えば親電子基（例えばプロトン（Ｈ＋）、例えばｐＨに依存して）が除去されたときにアニオンに帯電するに至ることができる基を備えたモノマーまたはモノマー単位である。ある場合に、この基は概ね生理学的ｐＨにおいて実質的に負に帯電されるが、弱酸性のｐＨではプロトン負荷を受けて実質的に中性になる。このような基の非限定的な例には、カルボキシ基、バルビツール酸およびその誘導体、キサンチンおよびその誘導体、ホウ酸、ホスフィン酸、ホスホン酸、スルフィン酸、ホスフェートおよびスルホアミドが含まれる。
【００２７】
アニオン種：別途指示しない限り、「アニオン種」は、アニオン的に帯電した状態または非帯電状態で存在するが、非帯電状態は、例えば親電子基（例えばプロトン（Ｈ＋）、例えばｐＨに依存して）を除去したときにアニオンに帯電される基、残基または分子である。ある場合、この基、残基または分子はほぼ生理学的ｐＨにおいて実質的に負に帯電しているが、弱酸性ｐＨではプロトン付加を受けて実質的に中性になる。
【００２８】
アリール：別途指示しない限り、用語「アリール」または「アリール基」は、合計で５〜１５の環員数を有する任意に置換された単環、二環、および三環系であって、該環系における少なくとも一つの環が芳香族であり、また各々の環が３〜７の環員を含んでいる環系を意味する。単独またはもう一つの基の一部としてここで使用される「アリール」または「ａｒ」の用語は、ホモ環式芳香族基、好ましくは環部分に６〜１２の炭素を含む単環基または二環基、例えばフェニル、ビフェニル、ナフチル、置換フェニル、置換ビフェニルまたは置換ナフチルを意味する。フェニルおよび置換フェニルが、より好ましいアリールである。
【００２９】
結び付けられた：別途指示しない限り、二つの部分または化合物は、それらが例えば１以上の共有結合、１以上の非共有結合（例えばイオン結合、静電力、ワンデルワールス相互作用、それらの組合せ等）、またはそれらの組合を含む何れかの相互作用によって一緒に保持されるときに、「結び付けられる」という。
【００３０】
ブロック共重合体：別途指示しない限り、「ブロック共重合体」は、共有結合により連結された２以上のホモポリマーサブ単位またはコポリマーサブ単位を含んでいる。二つまたは三つの異なるブロックを備えたブロック共重合体は、それぞれジブロック共重合体およびトリブロック共重合体と称される。ジブロック共重合体の概略的な一般化は、式［ＡａＢｂＣｃ．．．］ｍ−［ＸｘＹｙＺｚ．．．］ｎによって表され、ここでの各文字は構成単位もしくはモノマー単位であり、構成単位の各下付き添え字は特定のブロックにおける当該単位のモル分率を表し、三つの点は各ブロック中に更に多くの（より少ない）構成単位が存在し得ることを示し、またジブロック共重合体における各ブロックの分子量を示している。この概略表現により示唆されるように、幾つかの場合、各構成単位の数および性質は各ブロックについて別々に制御される。この概略表現は、該ブロックの各々における構成単位の数、または異なる種類の構成単位の数の間に何らかの関係があることを暗示することを一切意味せず、またはそのように解釈されるべきではない。また、この概略的表現は、特定のブロック内における構成単位の何らかの特定の数または配列を記載することを意味するものでもない。別途明示的に述べない限り、各ブロックにおいて、構成単位は純粋にランダムな構成、交互ランダムな構成、規則的に交互の構成、規則的ブロック構成、またはランダムブロック構成で配置されてよい。純粋にランダムな構成とは、例えば、ｘ−ｘ−ｙ−ｚ−ｘ−ｙ−ｙ−ｚ−ｙ−ｚ−ｚ−ｚ．．の非限定的形態を有していてよい。非限定的で例示的な交互ランダム構成はｘ−ｙ−ｘ−ｚ−ｙ−ｘ−ｙ−ｚ−ｙ−ｘ−ｚ．．の形態を有していてよく、また例示的な規則的交互構成はｘ−ｙ−ｚ−ｘ−ｙ−ｚ−ｘ−ｙ−ｚ．．の非限定的形態を有していてよい。例示的な規則的ブロック構成は、次の非限定的構成．．．ｘ−ｘ−ｘ−ｙ−ｙ−ｙ−ｚ−ｚ−ｚ−ｘ−ｘ−ｘ．．．を有してよいのに対して、例示的なランダムブロック構成は、非限定的構成．．．ｘ−ｘ−ｘ−ｚ−ｚ−ｘ−ｘ−ｙ−ｙ−ｙ−ｙ−ｚ−ｚ−ｚ−ｘ−ｘ−ｚ−ｚ−ｚ−．．．を有してよい。勾配ポリマーでは、１以上のモノマー単位の含量が、該ポリマーのα端からω端へと傾斜的に増大または減少する。以前の一般的な例においては、ブロックにおける個々の構成単位もしくはブロックの特定の近接配置、またはブロックにおける構成単位の数もしくはブロックの数は示されておらず、更に、如何なる意味でも、ここに記載したミセルを形成するブロック共重合体の実際の構造ブロックにおける構成単位の数もしくはブロックの数に影響し、またはこれを限定するように解釈されるべきではない。ここで使用するとき、構成単位を囲むブラケットは、該構成単位自身がブロックを形成することを意味せず、またそのように解釈されるべきではない。即ち、スクエアブラケット内の構成単位は、当該ブロック内の他の構成単位と如何様にでも、即ち、純粋にランダムな構成、交互ランダムな構成、規則的に交互の構成、規則的ブロック構成、またはランダムブロック構成で組み合わされてもよい。ここに記載のブロック共重合体は任意に、交互、勾配もしくはランダムのブロック��重合体である。いつかの実施形態において、該ブロック共重合体はデンドリマー、星型共重合体、またはグラフト共重合体である。
【００３１】
カチオン性モノマー、カチオン性モノマー単位、またはカチオン性反復単位：別途指示しない限り、「カチオン性モノマー」、「カチオン性モノマー単位」または「カチオン性反復単位」は、カチオン、または親電子基（例えばプロトン（Ｈ＋））の付加したときにカチオン電荷を有することができる部分を持ったモノマー、モノマー単位または反復単位（「モノマー単位」および「反復単位」は互換的に用いられる）である。
【００３２】
帯電可能な種、帯電可能な基、または帯電可能なモノマー単位：別途指示しない限り、「帯電可能な種」、「帯電可能な基」、または「帯電可能なモノマー単位」は、帯電状態または非帯電状態にある種、基、またはモノマー単位である。ある場合に、「帯電可能なモノマー単位」は、親電子基（例えばプロトン（Ｈ＋）、例えばｐＨに依存して）の付加または除去によって、帯電状態（アニオンまたはカチオンに帯電した状態）に変換可能なものである。「帯電可能な種」、「帯電可能な基」、または「帯電可能なモノマー単位」の用語の何れかの使用は、他に断らない限り、何れか他の「帯電可能な種」、「帯電可能な基」、または「帯電可能なモノマー単位」の開示を包含するものである。「アニオンに帯電した、または帯電可能」もしくは「アニオン種に帯電した、または帯電可能」である「帯電可能な種」は、アニオン帯電状態または非帯電状態にあるが、非帯電状態では、例えばプロトン（Ｈ＋）のような親電子基の除去によってアニオン帯電状態に変換され得る種または基である。「カチオンに帯電した、または帯電可能」もしくは「カチオン種に帯電した、または帯電可能」である「帯電可能な種」は、カチオン帯電状態または非帯電状態にあるが、非帯電状態では、例えばプロトン（Ｈ＋）のような親電子基の付加によってカチオン帯電状態に変換され得る種または基である。ここに記載する「帯電可能なモノマー単位」は、「帯電可能なモノマー残基」と互換的に使用される。
【００３３】
共重合体：別途指示しない限り、「共重合体」の用語は、当該ポリマーが２以上の異なるモノマーの重合の所産であることを規定する。
【００３４】
臨界ミセル濃度およびＣＭＣ：別途指示しない限り、「臨界ミセル濃度」または「ＣＭＣ」は、ミセルが自己集合される濃度である。
【００３５】
ダイサー基質：別途指示しない限り、「ダイサー基質」は、細胞中においてＲＮａｓｅＩＩＩ科のメンバーであるダイサーのための基質であり、該基質は少なくとも約２５塩基対の二本鎖ＲＮＡを有している。ダイサー基質は開裂されて約２１塩基対で二本鎖の小さい干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を産生し、該干渉ＲＮＡは、ｍＲＮＡノックダウンにより遺伝子サイレンシングをもたらすＲＮＡ干渉効果を誘発する。
【００３６】
崩壊される：別途指示しない限り、ミセルはそれが安定なミセルと同一の、実質的に類似の、または類似の仕方で機能せず、および／または同一の、実質的に類似の、または類似の物理的および／または化学的特徴を持たなければ「崩壊」する。ミセルの「崩壊」は何れか適切な方法で決定することができる。一例において、ミセルは、それが同じブロック共重合体を含んでなり、且つ７．４のｐＨの水溶液中で形成またはヒト血清中で形成されたミセルの流体力学的粒子サイズの５倍、４倍、３倍、２倍、１．８倍、１．６倍、１．５倍、１．４倍、１．３倍、１．２倍、または１．１倍未満である流体力学的粒子サイズをもたないときに「崩壊」される。一例において、ミセルは、それが同じブロック共重合体を含んでなり、且つ７．４のｐＨの水溶液中で形成またはヒト血清中で形成されたミセルの集合濃度の５倍、４倍、３倍、２倍、１．８倍、１．６倍、１．５倍、１．４倍、１．３倍、１．２倍、または１．１倍未満である集合濃度をもたないときに「崩壊」される。
【００３７】
エンドソーム崩壊的およびエンドソーム溶解的：別途指示しない限り、エンドソームに対する組成物の影響がエンドソーム膜の透過性を増大させることであるならば、当該組成物は「エンドソーム崩壊的」である。
【００３８】
ヘテロアルキル：別途指示しない限り、「ヘテロアルキル」の用語は、少なくとも一つの骨格炭素原子がヘテロ原子で置換されているアルキル基を意味する。
【００３９】
ヘテロアリール：別途指示しない限り、「ヘテロアリール」の用語は、少なくとも一つの環員がヘテロ原子であり、好ましくは各環に５または６個の原子があるアリール基を意味する。このヘテロ芳香族基は、好ましくは１または２の酸素原子、１または２の硫黄原子、および／または１〜４の窒素原子を環の中に有しており、且つ炭素またはヘテロ原子を介して当該分子の残りの部分に結合されてよい。例示的へテロ芳香族には以下の基の１以上が含まれる：フリル、チエニル、ピリジル、オキサゾリル、ピロリル、インドリル、キノリニル、またはイソキノリニル等が含まれる。例示的置換基には、１以上の次の基が含まれる：即ち、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ケト（即ち、＝０）、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、アシル、アシロキシ、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アリーロキシ、ハロゲン、アミド、アミノ、ニトロ、シアノ、チオール、ケタール、アセタール、エステルおよびエーテルである。
【００４０】
ヘテロ原子：別途指示しない限り、「ヘテロ原子」の用語は、水素または炭素以外の原子、例えば酸素、硫黄、窒素、リン、ホウ素、砒素、セレンまたはケイ素の原子を意味する。
【００４１】
ヘテロ環：別途指示しない限り、ここに単独でまたは他の基の一部として用いる「ヘテロ環」および「ヘテロ環状」の用語は、少なくとも一つの環に少なくとも一つのヘテロ原子を有し、好ましくは各環に５もしくは６個の原子を有する、任意に置換された完全な飽和もしくは不飽和の、単環式もしくは二環式、芳香族もしくは非芳香族の基を意味する。このヘテロ環基は、環の中に、好ましくは１もしくは２個の酸素原子、１もしくは２個の硫黄原子、および／または１〜４個の窒素原子を有しており、炭素もしくはヘテロ原子を介して当該分子の残りの部分に結合されてよい。例示的ヘテロ環にはヘテロ芳香族、例えばフリル、チエニル、ピリジル、オキサゾリル、ピロリル、インドリル、キノリニル、またはイソキノリニル等が含まれる。例示的置換基には、１以上の次の基が含まれる：即ち、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ケト、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、アシル、アシロキシ、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アリーロキシ、ハロゲン、アミド、アミノ、ニトロ、シアノ、チオール、ケタール、アセタール、エステルおよびエーテルである。
【００４２】
ヘテロヒドロカルビル：別途指示しない限り、「ヘテロヒドロカルビル」の用語は、連鎖状炭素原子の少なくとも一つがヘテロ原子で置換されたヒドロカルビル基を意味する。
【００４３】
炭化水素またはヒドロカルビル：別途指示しない限り、ここで使用する「炭化水素」および「ヒドロカルビル」の用語は、専ら炭素および水素の元素のみからなる有機化合物もしくはラジカルを記載するものである。これらの部分には、アルカリール、アルケナリールおよびアルキナリールのような他の脂肪族または環式炭化水素基で置換されたアルキル部分、アルケニル部分、アルキニル部分、およびアリール部分が含まれる。別途指示しない限り、これらの部分は好ましくは１〜２０の炭素原子を含むものである。
【００４４】
疎水性：別途指示しない限り、「疎水性の」および「疎水性」の用語は、非極性溶媒と水の間での組成物の移動自由エネルギーによって測定される、組成物の物理的性質を記載する技術の用語である（Hydrophobicity regained. Karplus P. A.、Protein ScL、1997、6: 1302-1307）。組成物の疎水性はそのｌｏｇＰ値、即ち分配計数（Ｐ）の対数によって測定することができ、この値は二つの非混和性溶媒、例えばオクタノールおよび水の混合物の二つの相における化合物の濃度の比として定義される。疎水性を決定する実験的方法、並びにｌｏｇＰ値のコンピュータ援用計算の方法は当業者に知られている。本発明の疎水性種には、脂肪族基、ヘテロ脂肪族基、アリール基およびヘテロアリール基が含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
疎水性コア：別途指示しない限り、「疎水性コア」の用語は、疎水性部分を含んでなるものである。ある場合に、「疎水性コア」は実質的に帯電されていない（例えば、電荷は実質的に正味の中性である）。
【００４６】
疎水性反復単位：別途指示しない限り、「疎水性反復単位」または「疎水性モノマー単位」は、疎水性置換基を有するポリマーの反復単位またはモノマー単位である。
【００４７】
疎水性種：別途指示しない限り、「疎水性種」および「疎水性向上部分」は、モノマーまたはポリマーのような分子に共有結合で結び付けられたときに、該分子の疎水性を増大させる置換基、残基または基である。
【００４８】
阻害、サイレンシング、減衰またはノックダウン：別途指示しない限り、ここで使用する「阻害」、「サイレンシング」、「減衰」または「ノックダウン」の用語は、ノックダウン剤の不存在下でのｍＲＮＡまたは対応するタンパク質の発現と比較したときの、標的ｍＲＮＡまたは対応するタンパク質の発現における測定可能な低下を意味する。標的ｍＲＮＡもしくは対応するタンパク質の「ノックダウン」または発現における低下は、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）増幅、ＲＮＡ溶液ハイブリダイゼーション、ヌクレアーゼ保護、ノーザンブロッティングおよびハイブリダイゼーション、マイクロアレイを用いた遺伝子発現モニタリングのような当該技術で周知の技術を使用してｍＲＮＡレベルを測定することによって；またタンパク質の場合には、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体結合、ウエスタンブロット分析、免疫沈降、放射免疫アッセイまたは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化細胞分析および免疫細胞化学によって評価することができる。
【００４９】
遺伝子発現を阻害する：別途指示しない限り、「遺伝子発現を阻害する」との語句は、遺伝子の発現産物の量において、何らかの測定可能な低下を生じさせることを意味する。この発現産物は、遺伝子から転写されたＲＮＡ（例えばｉｍＲＮＡ）および／または遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチドであることができる。発現のレベルは、ｍＲＮＡまたはタンパク質を測定するための標準技術を使用して決定されてよい。
【００５０】
膜不安定化ポリマーまたは膜不安定化ブロック：別途指示しない限り、「膜不安定化ポリマー」または「膜不安定化ブロック」は、細胞膜構造体（例えばエンドソーム膜）において直接または間接に電荷（例えば透過性電荷）を誘起し、薬剤（例えばポリヌクレオチド）をミセル（またはその構成ポリマー）と共に、またはこれとは独立に斯かる膜構造体を通過させて、例えば細胞に侵入させ、または細胞ベシクル（例えばエンドソーム）から出すことができる。膜不安定化ポリマーは、（必ずではないが）膜崩壊性ポリマーであることができる。膜崩壊性ポリマーは、直接または間接に、細胞ベシクルの溶解を誘起し、或いは細胞膜を崩壊させる（例えば細胞膜の集団の実質的な断片について観察されるように）ことができる。一般に、ポリマーまたはミセルの膜不安定化特性または膜崩壊特性は、種々の手段によって評価することができる。一つの非限定的アプローチにおいて、細胞膜構造体における変化は、細胞膜（例えばエンドソーム膜）からの薬剤（例えばポリヌクレオチド）の放出を（直接または間接に）測定するアッセイにおいて、例えば斯かる膜の外部環境における斯かる薬剤の存在または不存在、または斯かる薬剤の活性を決定することにより評価することによって観察することができる。もう一つの非限定的アプローチは、例えば興味ある細胞膜のための代理アッセイとして、赤血球溶解（溶血）を測定することを含んでいる。これらのアッセイは、単一のｐＨ値で、または、あるｐＨ値を超えてなされ得る。
【００５１】
ミセル：別途指示しない限り、「ミセル」はコアおよび親水性シェルを含んでなる粒子であり、ここでのコアは少なくとも部分的に、主に、または実質的に、疎水性相互作用を介して一緒に保持される。該ミセルは、例えば少なくとも二つのドメイン、即ち、内部ドメインまたはコア、および外部ドメインまたはシェルを含んでなる多成分のナノ粒子であってよい。ここに記載するミセル粒子は、例えば１０００ナノメータ（ｎｍ）の、何れかの適切なまたは望ましい直径を有してよい。一般に、該ミセルは真核細胞によるそれらの取込みを可能にするのに十分に小さい寸法を有するべきである。典型的には、該ミセルは２００ｎｍ以下の、直径としても知られる最長横寸法を有している。幾つかの実施形態において、該ミセルは１００ｎｍ以下の直径を有している。幾つかの実施形態では、例えば約１０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１００ｎｍ、または５０ｎｍ以下、例えば５ｎｍ〜３０ｎｍの直径を有するより小さいミセルが使用される。ミセル粒子サイズは何れかの方法で決定することができ、それにはゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、動的光散乱（ＤＬＳ）、電子顕微鏡技術（例えばＴＥＭ）および他の方法によるものが含まれるが、これらに限定されない。
【００５２】
非帯電性反復単位：別途指示しない限り、「非帯電反復単位」は、アニオン性反復単位またはカチオン性反復単位の何れでもない反復単位である。
【００５３】
ヌクレオシド：別途指示しない限り、「ヌクレオシド」の用語は、単糖および塩基を含んでなる組成物を記述するために使用される。単糖には、ペントースおよびヘキソース単糖類が含まれるが、これらに限定されない。該単糖にはまた、単糖擬似物や、ヒドロキシ基をハロゲン、メトキシ、水素またはアミノ基で置換することにより、または追加のヒドロキシル基のエステル化により修飾された単糖類も含まれる。
【００５４】
ヌクレオチド：別途指示しない限り、「ヌクレオチド」の用語は、その最も広義の意味において、ポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）鎖の中に組み込まれ、または組込まれることができる何れかの化合物および／または物質を意味する。幾つかの実施形態において、ヌクレオチドはリン酸ジエステル結合を介してポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）の中に組み込まれ、または組込まれることができる化合物および／または物質である。幾つかの実施形態において、「ヌクレオチド」は、個々の核酸残基（例えばヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）を意味する。ある実施形態において、「少なくとも一つのヌクレオチド」は、存在する１以上のヌクレオチドを意味する；種々の実施形態において、１以上のヌクレオチドは異なるヌクレオチドであり、非共有結合で相互に結び付けられており、または相互に共有結合で結び付けられている。こうして、ある場合、「少なくとも一つのヌクレオチド」は、１以上のポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）を言う。こうして、ある場合、「少なくとも一つのヌクレオチド」は、１以上のヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）を意味する。幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは２以上のヌクレオチドモノマー単位を含んでなるポリマーである。
【００５５】
オリゴヌクレオチド：別途指示しない限り、「オリゴヌクレオチド」の用語は、７から２００のヌクレオチドモノマー単位を含んでなるポリマーを意味する。幾つかの実施形態において、「オリゴヌクレオチド」は、一本鎖および／または二本鎖のＲＮＡ、並びに一本鎖および／または二本鎖のＤＮＡを包含する。更に、「ヌクレオチド」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」および／または同様の用語は、核酸類似体、即ち、修飾された骨格を有する類似体を包含するものであり、これにはペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ホスホノＰＮＡ、モルホリノ核酸、または修飾されたリン酸基（例えばホスホロチオエート、ホスホネート、５’−Ｎ−ホスホルアミダイト結合）を備えた核酸が含まれるがこれらに限定されない。ヌクレオチドは天然原料から精製することができ、組換え発現系を使用して製造して任意に精製することができ、化学的に合成すること等ができる。幾つかの実施形態において、ヌクレオチドは天然のリン酸ヌクレオシド（例えばアデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジンのリン酸エステル）であるか、またはこれらを含んでなるものである。幾つかの実施形態において、塩基には、種々の核酸において天然に存在する何れかの塩基、並びに斯かる天然に存在する塩基を模倣または類似した他の修飾体が含まれる。修飾または誘導された塩基の非限定的な例には、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキュェオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキュェオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸、ワイブトキソシン、シュードウラシル、キュェオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、２−アミノアデニン、ピロロピリミジン、および２，６−ジアミノプリンが含まれる。また、ヌクレオシド塩基には、ジフルオロトリル、ニトロインドリル、ニトロピロリル、またはニトロイミダゾリルのような普遍的ヌクレオ塩基（universal nucleobases）が含まれる。ヌクレオチドにはまた、ラベルを収容したモノマーまたは脱塩基の、即ち、塩基を含まないモノマーを含むヌクレオチドが含まれる。核酸配列は、別��指示しない限り５’から３’への方向で提示される。ヌクレオチドは、ワトソンクリック塩基対を介した水素結合により、配列特異的な仕方で、もう一つのヌクレオチドに結合することができる。このような塩基対は、相互に相補的であると言われる。オリゴヌクレオチドは、一本鎖、二本鎖または三本鎖であることができる。
【００５６】
オリゴヌクレオチド遺伝子発現モジュレータ：ここで使用するとき、「オリゴヌクレオチド遺伝子モジュレータ」は、アンチセンス機構（これに限定されない）を含む機構によって、またはＲＮＡ干渉によって、生きた細胞内での遺伝子発現の選択的モジュレーションを誘導できるオリゴヌクレオチド遺伝子である。ＲＮＡ干渉は（ＲＮＡｉ）に媒介された経路であり、（ｉ）転写不活性化、（ｉｉ）ｍＲＮＡ分解もしくは隔離、（ｉｉｉ）転写の阻害もしくは減衰、または（ｉｖ）翻訳の阻害もしくは減衰を含んでよい。
【００５７】
オリゴヌクレオチド遺伝子発現モジュレータは、調節ＲＮＡ（事実上全ての調節ＲＮＡを含む）を包含し、これにはアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡ、アプタマー、およびこれらの何れかの類似体または前駆体が含まれるが、これらに限定されない。
【００５８】
オリゴヌクレオチドノックダウン剤：別途指示しない限り、「オリゴヌクレオチドノックダウン剤」とは、配列特異的な仕方で細胞内核酸をターゲッティングして該核酸に結合することにより、遺伝子発現を阻害するオリゴヌクレオチド種である。オリゴヌクレオチドノックダウン剤の非限定的な例には、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、おとりＤＮＡもしくはおとりＲＮＡ、アンチ遺伝子オリゴヌクレオチド、およびそれらの何れかの類似体および前駆体が含まれる。
【００５９】
ｐＨ依存性の膜不安定化：別途指示しない限り、「ｐＨ依存性の膜不安定化」基またはブロックは、少なくとも部分的に、主に、または実質的に疎水性であり、且つｐＨ依存的に膜を不安定化する基またはブロックである。ある場合、ｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックは、ブロック共重合体の疎水性のポリマー切片である、および／または複数の疎水性種を含み；また複数の帯電可能な種を含む。幾つかの実施形態において、帯電可能な種はアニオン性である。幾つかの実施形態において、該アニオン性の帯電可能な種は、約中性のｐＨにおいてアニオンである。更なる実施形態または別の実施形態において、アニオン性の帯電可能な種は、より低いｐＨ、例えばエンドソームのｐＨでは帯電しない。幾つかの実施形態において、膜を不安定化する帯電可能な疎水性物質は複数のカチオン種を含んでいる。ｐＨ依存性で膜を不安定化する帯電可能な疎水性物質は、非ペプチド性で且つ非脂質性のポリマー骨格を含む。例えば、ｐＨ依存性の膜不安定化ブロックはイオン性反復単位を有してよく、その置換基は或るｐＨ、例えばｐＨ７．４では主にイオン化され（アニオン）、またより低いｐＨ、例えばｐＨ５．０では主に中性であり、それにより該ｐＨ依存性の膜不安定化基またはブロックは７．４から５．０へのｐＨ低下の関数として徐々に疎水性が増大するに至る。
【００６０】
ＲＮＡｉ剤：別途指示しない限り、「ＲＮＡｉ剤」とは、ＲＮＡｉ機構を介して遺伝子発現の阻害を媒介できるオリゴヌクレオチドを意味し、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、ダイサー基質およびこれらの前駆体が含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）：別途指示しない限り、「ＲＮＡ干渉」または「ＲＮＡｉ」の用語は、遺伝子発現の配列特異的阻害および／または少なくとも部分的に二本鎖で且つ標的ＲＮＡに対して実質的に相補的なＲＮＡにより媒介された、標的ｍＲＮＡおよびタンパク質のレベル低下を意味する。
【００６２】
短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）：別途指示しない限り、「短ヘアピンＲＮＡ」または「ｓｈＲＮＡ」は、二本鎖（二重）構造を形成するために相互にハイブリダイズしまたはハイブリダイズできる少なくとも二つの相補的部分、および少なくとも一つの一本鎖部分を有するオリゴヌクレオチドを意味する。
【００６３】
短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）：別途指示しない限り、「短干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」は、長さが約１５〜５０塩基対であり、任意に更に０〜２つの一本鎖オーバーハングを含んだＲＮＡｉ剤を意味する。ｓｉＲＮＡの一方の鎖は、標的ＲＮＡと相補的にハイブリダイズする部分を含んでいる。幾つかの実施形態において、ｓｉＲＮＡと標的ＲＮＡの標的部分の間には１以上の不適合が存在し得る。幾つかの実施形態において、ｓｉＲＮＡは標的転写物の分解を生じさせることにより遺伝子発現の阻害を媒介する。
【００６４】
安定な：別途指示しない限り、ここに記載するミセルは、その結合が解離せず、または不安定化されるに至らないときには「安定」である。ある場合、安定なミセル結合体は、ｐＨ７．４の水溶液（例えばリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）中で最初に形成された同じブロック共重合体を含んでなるミセル結合体の流体力学的粒子サイズの約６０％、５０％、４０％、３０％、２０％または１０％以内である流体力学的粒子サイズを有するものである。幾つかの場合に、安定なミセル結合体は、ｐＨ７．４の水溶液（例えばリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）中で最初に形成された同じブロック共重合体を含んでなる形成体／結合体の濃度の約６０％、５０％、４０％、３０％、２０％または１０％以内である形成体／結合体の濃度を有するものである。
【００６５】
実質的に非帯電のブロック：別途指示しない限り、「実質的に非帯電性のブロック」の用語は、中性電荷または約中性電荷を有するポリマーブロックを意味する。例えば、実質的に非帯電性のブロックでは約１０モル％未満の反復単位がアニオン性、カチオン性、または双性イオン性の反復単位であろう。更なる例として、実質帯電のブロックにおいては、ブロックの約５モル％未満の反復単位がアニオン性、カチオン性または双性イオン性であろう。
【００６６】
置換された、または任意に置換された：別途指示しない限り、「置換された」および「任意に置換された」の用語は、言及された基が、アセタール、アシル、アシロキシ、アルケノキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アルキノキシ、アミド、アミノ、アリール、アリーロキシ、アリールチオ、カルボニル、カルボキシアミド、カルボキシル、シアノ、エステル、エーテル、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロアルキル、シクロアルキル、ハロゲン、ヘテロ脂環基、ヘテロアリール、ヒドロキシ、イソシアナト、イソチオシアナト、ケタール、ケト、メルカプト、ニトロ、ペルハロアルキル、シリル、スルホンアミド、スルホニル、チオカルボニル、チオシアナト、チオール、および／またはその保護された誘導体から個別に且つ独立に選択されてよい１以上の追加の適切な基で置換され、または置換されてよいことを意味する。
【００６７】
治療剤：別途指示しない限り、「治療剤」の語句は、患者、臓器、組織または細胞に投与されたときに治療的効果を有し、および／または望ましい生物学的および／または薬理学的効果を誘発する何れかの薬剤を意味する。
【００６８】
治療的有効量：別途指示しない限り、治療剤の「治療的有効量」の用語は、疾患、障害、および／または病状に罹患し、または罹り易い患者に投与したときに、該疾患、障害および／または病状を治療、診断、予防し、および／またはそれらの症状の発生を遅延させるのに十分な量を意味する。
【００６９】
双性イオン性モノマー、双性イオン性モノマー単位、または双性イオン性反復単位：別途指示しない限り、「双性イオン性モノマー」、「双性イオン性モノマー単位」、または「双性イオン性反復単位」は、（ｉ）カチオン、または親電子体（例えばプロトン（Ｈ＋））が付加した時にカチオン電荷を有することができる部分、および（ｉｉ）アニオン、または親電子体（例えばプロトン（Ｈ＋））を除去した時にアニオン電荷を有することができる部分をもったモノマー、またはモノマー単位もしくは反復単位である（「モノマー単位」および「反復単位」は互換的に使用される）。
【好ましい実施形態の詳細な説明】
【００７０】
本発明の一つの側面は、各々が幾らか異なる特性を有し、または幾らか異なる機能を与える三つの異なったポリマーブロックを含んでなる共重合体である。これらブロックのうちの一つは親水性ポリマーブロックであり、ここでは時々、「第一のブロック」、「遮蔽ブロック」、「親水性遮蔽ブロック」または単純に「親水性ブロック」と呼ばれる。ここでは別途どこかで更に詳細に説明するように、第一のブロックはミセル形成を補助するため、該共重合体を細胞もしくは他の生物学的標的をターゲッティングするため、該共重合体と結合する治療剤を遮蔽するため、またはそれらの２以上の組合せを達成するために、水溶性に寄与するように使用されてよい。これらブロックの第二（ここでは時々、「第二のブロック」または「キャリアブロック」と称する）は、治療剤に結び付けられた、または少なくとも治療剤を該共重合体に結び付けるための官能基を有する。これらブロックの第三は、疎水性ポリマーブックであり、ここでは時々、第三のブロックまたは単に「疎水性ブロック」と称する。ここでは別途どこかで更に詳細に説明するように、該第三のブロックは、ミセル形成を補助するため、細胞膜もしくは他の生物学的標的を不安定化するため、またはそれらの２以上の組合せのために、当該共重合体の水溶性を減少させるように使用されてよい。当該共重合体は、任意に、本発明の共重合体の第一、第二および第三ブロックの機能を増幅し、または該共重合体に他の機能性または性質を導入する追加のポリマーブロックを有してよい。ブロックの数には関係なく、一般に、キャリアブロックは第一ブロック（親水性）および第三ブロック（疎水性）の間に位置するのが好ましい。更に、第一ブロック、第二ブロックおよび第三ブロックの数平均分子量は、合わせて約５，０００〜約１００，０００ダルトンである。加えて、一実施形態において、本発明のブロック共重合体を含有するポリマー溶液のゼータ電位（ポリヌクレオチドのような集合された治療剤なし）は、±６ｍＶ（ミリボルト）の間である。一つの好ましい実施形態において、ポリマー溶液（ポリヌクレオチドのような集合された治療剤なし）は、±２ｍＶ（ミリボルト）の間である。
【００７１】
一般に、第一、第二および第三のブロックの該ポテンシャルは、三つのブロックの各々を構成するモノマー残基または相対的モル分率の選択によって調整されてよい。例えば、第一のブロックは親水性で、第三のブロックは疎水性であり、親水性における差は、第一のブロックおよび第三のブロックについての異なる一組のモノマーの重合によって達成されてよい；或いは二つのブロックについて同じ組のモノマーを使用してよいが、第一のブロックは、該全体的な親水性の特徴を備えた第一のブロックを与えるために相対的により大きいパーセンテージの親水性モノマー残基を含む一方、第三のブロックは、全体的に疎水性の特徴を備えた疎水性ブロックを与えるために相対的により大きなパーセンテージの疎水性モノマー残基を含むであろう。同様に、第二のブロックは治療剤に結び付けられ、または少なくとも治療剤を結び付けるための官能基を有している。従って、第一および第三のブロックに比較して、このキャリアブロックは、第一および第三のブロックとは異なる組のモノマー残基を含むか、または少なくとも異なるパーセンテージで、治療剤を該キャリアブロックに結び付けるために用いられるモノマー残基を含むであろう。こうして、第一、第二および第三のブロックは、それぞれのブロックの間の組成的な差の結果として、相互に幾らか異なる性質または機能を有している。
【００７２】
キャリアブロックは親水性ブロックと疎水性ブロックの間に位置するが、必ずしも各々に直ぐ隣接してはいない。別の言い方をすれば、キャリアブロックは、ポリマーもしくは非ポリマーの連結部分を介して親水性ブロックに共有結合されてよい。或いは、またはこれに加えて、キャリアブロックはポリマーもしくは非ポリマーの連結部分を介して疎水性ブロックに共有結合されてよい。例えば、キャリアブロックは、それぞれのブロックの間に開裂点または他の官能性を導入するために、一連のアミノ酸残基、糖残基、核酸残基等によって親水性ブロックおよび／または疎水性ブロックに結合されてよい。更なる例として、キャリアブロックはジスルフィド結合、ヒドラジド結合、エステル結合、アセタール結合、またはリン酸二エステル結合部分のような開裂可能な部分によって、親水性ブロックおよび／または疎水性ブロックに共有結合されてよい。一般に、現在のところ、キャリアブロックは親水性ブロックに直ぐ隣接しているのが好ましい。また、現在のところ、キャリアブロックは疎水性ブロックにも直ぐ隣接するのが好ましい。
【００７３】
ここでのある実施形態では、ここに記載のブロック共重合体または複数の斯かるブロック共重合体を含んでなるミセルは、親水性の遮蔽ブロック、キャリアブロックおよび疎水性ブロックを含んでおり、キャリアブロックは親水性の遮蔽ブロックと疎水性ブロックの間にある。
【００７４】
ある実施形態では、少なくとも三つのブロックを含んでなるブロック共重合体およびそのミセルが提供される。更に特殊な実施形態においては、ブロック共重合体は少なくとも三つのブロックを含んでいる。幾つかの実施形態において、ここに記載するポリマーは少なくとも一つの疎水性ブロックおよび少なくとも二つの親水性ブロックを含んでいる。ある実施形態において、ここに記載するポリマーは少なくとも一つの疎水性ブロック、少なくとも一つの親水性ブロック、および治療剤（例えばポリヌクレオチドまたはペプチド）と集合した少なくとも一つのブロックを含み、該治療剤と集合したブロックは前記親水性ブロックと疎水性ブロックの間にある。
【００７５】
幾つかの実施形態において少なくとも一つの親水性ブロックは複数の帯電種（即ち、多価カチオン、多価アニオン、または両方）を含んでなり、および／または複数の帯電種（例えばポリヌクレオチドまたはポリペプチド）を含んでなる分子と集合している。特定の実施形態において、少なくとも一つの親水性ブロックは、約中性ｐＨにおいて帯電する複数の種（約中性ｐＨにおいて多価カチオン、多価アニオン、または両方）を含んでいる。ある実施形態において、少なくとも一つの親水性ブロックは遮蔽ブロックである。特定の実施形態において、該遮蔽ブロックは、例えば約中性ｐＨにおいて非帯電性である。
【００７６】
一般には、一以上のポリマーブロックは共重合体ブロックであるのが好ましく、該共重合体ブロックはランダム共重合体ブロックであるのが好ましい。従って、例えば、第一、第二または第三のブロックの少なくとも一つは、一般に、２以上の組成的に異なるモノマー残基を含んでなるランダム共重合体であるのが好ましい。このような一つの例において、第一のブロック（即ち親水性ブロック）は、２以上の組成的に異なるモノマー残基を含んでなるランダム共重合体ブロックである。これに加えて、またはその代わりに、第二のブロック（即ちキャリアブロック）は、２以上の組成的に異なるモノマー残基を含んでなるランダム共重合体であってよい。これに加えて、またはその代わりに、第三のブロック（即ち疎水性ブロック）は、２以上の組成的に異なるモノマー残基を含んでなるランダム共重合体であってよい。幾つかの実施形態において、ここに記載するポリマーの第一または第二のブロックはホモ重合体ブロックである。例えば、一つの実施形態において、第一のブロックはホモ重合体であり、第二および第三のブロックはランダム共重合体である。更なる例として、一つの実施形態では、第一および第二のブロックは組成的に異なるホモ重合体であり、第三のブロックはランダム重合体である。更なる例として、一つの実施形態では、三つのブロックが組成的に異なるホモ重合体である。また更なる例として、一つの実施形態では、三つのブロックが組成的に異なるランダム共重合体である。
【００７７】
第一、第二および第三のブロックは、鎖原子および該鎖原子に共有結合したペンダント基を含んでいる。好ましくは、鎖原子は炭素であるか、または（ｉ）炭素原子および（ｉｉ）硫黄および／または酸素原子の組合せである。従って、例えば、第一、第二および第三のブロックの反復単位は、置換アルキレン反復単位、置換アルキレングリコール反復単位、置換アルキレンチオグリコール反復単位、およびこれらの組合せからなる群から独立に選択される。一つの好ましい実施形態において、第一、第二および第三のブロックの鎖原子は炭素である。もう一つの実施形態において、第一および第二のブロックの鎖原子は独立に炭素原子、または炭素、酸素および硫黄原子の組合せであり、また第三のブロックの鎖原子は炭素である。もう一つの実施形態において、第一および第二のブロックの鎖原子は独立に炭素原子、または炭素および酸素原子の組合せであり、また第三のブロックの鎖原子は炭素である。もう一つの実施形態において、第一および第二のブロックの鎖原子は独立に炭素原子、または炭素および硫黄原子の組合せであり、また第三のブロックの鎖原子は炭素である。もう一つの実施形態において、第一のブロックの鎖原子は炭素原子および酸素原子の組合せであり、また第二および第三のブロックの鎖原子は炭素である。鎖原子の選択とは独立に、ペンダント基は好ましくは水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、置換カルボニルおよびヘテロ環からなる群から選択される。
【００７８】
好ましい実施形態において、本発明のブロック共重合体は、一連の複数の個別反応（例えば、ペプチド合成またはオリゴヌクレオチド合成のための当該技術で知られたもの）を含む段階的カップリングアプローチによる方法以外の方法によって調製される。例えば、一つの実施形態では、第一、第二および第三のブロックのうちの少なくとも一つは、ときには付加重合とも呼ばれる鎖成長重合によって形成される。更なる例として、一つの実施形態では、第一、第二および第三のブロックのうちの少なくとも二つが鎖成長重合によって形成される。更なる例として、一つの実施形態では、第一、第二および第三のブロックの各々が鎖成長重合によって形成される。こうして、第一、第二および第三のブロックは非脂質である。
【００７９】
各々のブロックは、例えばアミノ酸の縮合反応によって、またはアミノ酸以外の種（例えばジアミンおよびジカルボン酸）の縮合反応によって形成された、アミド結合で連結されたある反復単位を含んでよいが、一般には、第一、第二および第三のブロックを構成する実質的に大部分の残基がペプチドではないのが好ましい。異なった言い方をすれば、一般に、第一、第二および第三のブロックの実質的に大部分の残基が、ペプチド結合により連結されたアミノ酸残基以外であるのが好ましい。例えば、一つの実施形態において、第一のブロックを構成する残基の少なくとも９０％が、べプチド結合で連結されたアミノ酸残基以外である。更なる例として、一つの実施形態において、第二のブロックを構成する残基の少なくとも９０％が、べプチド結合で連結されたアミノ酸残基以外である。更なる例として、一つの実施形態において、第三のブロックを構成する残基の少なくとも９０％が、べプチド結合で連結されたアミノ酸残基以外である。更なる例として、一つの実施形態では、全体として考慮したとき、第一、第二および第三のブロックを構成する残基の少なくとも９０％が、ペプチド結合により連結されたアミノ酸残基以外である。更なる例として、一つの実施形態では、第一、第二、および第三のブロックのおのおのを構成する残基の少なくとも９０％が、ペプチド結合により連結されたアミノ酸残基以外である。好ましくは、各ブロックが、実質的に非ペプチドポリマー（アミノ酸ポリマー以外のポリマーからなる）である。
【００８０】
対照的に、明確化のために言えば、既述したことにもかかわらず、また既述の事項にとらわれることなく、本発明のターゲッティング部分および／または他の生物分子剤は、アミノ酸ポリマー（例えばペプチド）または核酸ポリマー（例えばオリゴヌクレオチド）または多糖であることができる。一つの好ましい実施形態では、水溶性を増大し、遮蔽、ターゲッティングを与えるためのペンダント基として、または治療剤として、ペプチド、糖、または核酸残基が反復単位に結び付けられ、或いは、他の親水性基またはターゲッティング基が、ペンダント基として反復単位に結び付けられる。しかし、ペンダント基として結び付けられるとき、該ペプチド、糖、および核酸は、それらが反復単位として取り込まれたときに形成するようなポリマーブロックの骨格に沿ったペプチド結合、グリコシド結合または燐酸二エステル結合を与えない。
【００８１】
好都合なことに、第一、第二および第三のブロックは、容易に重合可能なモノマーから調製されてよい。一つの実施形態において、反復単位はエチレン系不飽和モノマーの残基である。もう一つの実施形態において、第一、第二および第三のブロックは、任意に置換されたアクリル酸モノマー、任意に置換されたビニルアリールモノマー、任意に置換されたアクリルアミドモノマー、任意に置換されたアクリレートモノマーおよびそれらの組合せから独立に誘導された反復単位を含んでいる。
【００８２】
一つの好ましい実施形態において、第一、第二または第三のブロックは、式１の反復単位を含んでなるものである：
【化１】
0005766611.tif 000002
【００８３】
ここで、*は、式１の反復単位の他の反復単位への結び付き点を意味し；各Ｘ１およびＸ２は、水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロ環、および置換カルボニルからなる群から独立に選択されるが、但し、同じ反復単位においては、Ｘ１およびＸ２はアリール、ヘテロアリール、ヘテロ置換カルボニル、およびそれらの組合せからなる群から選択されず；各Ｘ３は、独立に、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；各Ｘ４は、独立に、ヘテロ置換カルボニル、アリール、またはヘテロアリールである。例えば、一つの斯かる実施形態において、前記第一、第二または第三のブロックは、Ｘ４がアリールまたはヘテロアリールである式１に対応した反復単位を含んでなるものである。もう一つの斯かる実施形態において、前記第一、第二または第三のブロックは式１に対応した反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、またＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。もう一つの斯かる実施形態では、前記第一、第二または第三のブロックのうちの二つが式１に対応した反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、且つＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換へテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。もう一つの斯かる実施形態では、前記第一、第二または第三のブロックが式１に対応した反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、且つＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換へテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。もう一つの斯かる実施形態では、前記第一、第二または第三のブロックは式１に対応した反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、且つＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換へテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。
【００８４】
＜親水性ブロック＞
本発明の共重合体の第一のブロックは、当該共重合体の広範な性質または機能に寄与するように使用されてよい。例えば、第一のブロックの構成単位の数および組成は、望ましい程度の水溶性／分散性を当該共重合体に付与するように選択されてよい。或いは、またはこれに加えて、本発明のポリマーがミセルに組込まれる実施形態において、第一のブロックの構成単位の数および組成は、望ましいサイズ、臨界ミセル濃度または他の性質を有するミセルを与えるように選択されてよい。ミセル形成とは独立に、第一のブロックの構成単位の数および組成は、該ポリマーを、細胞標的または他の生物学的標的にターゲッティングするように選択されてよい。或いは、またはこれに加えて、第一のブロックの構成単位の数および組成は、当該共重合体に集合される治療剤を遮蔽するように選択されてよい。
【００８５】
望ましい性質および機能に応じて、第一のブロックはホモ重合体ブロックまたは共重合体ブロックであってよい。それが共重合体ブロックである実施形態において、それは好ましくはランダム共重合体ブロックである。例えば、第一のブロックは、２以上の組成的に異なるモノマー残基を含んでなる共重合体ブロックであってよい。更なる例として、第一のブロックは、帯電した反復単位（即ち、カチオン性反復単位、アニオン性反復単位、双性イオン性反復単位またはそれらの組合せ）を含んでなる共重合体ブロックであってよい。一つの特定の実施形態において、第一のブロックは帯電した反復単位を含んでいる。もう一つの特定の実施形態において、第一のブロックはカチオン性反復単位を含んでいる。更にもう一つの実施形態において、第一のブロックはカチオン性反復単位および非帯電性反復単位を含んでいる。更にもう一つの実施形態において、第一のブロックは双性イオン性反復単位および非帯電性反復単位を含んでいる。更にもう一つの実施形態において、第一のブロックはもっぱら非帯電性反復単位のみを含んでおり、該ブロックは中性ｐＨにおいて非帯電性である。更に、第一のブロックがカチオン性反復単位を含んでなる実施形態では、第一のブロックは２以上の組成的に異なるカチオン性反復単位の組合せを含んでよく；第一のブロックがアニオン性反復単位を含んでなる実施形態では、該第一のブロックは２以上の組成的に異なるアニオン性反復単位の組合せを含んでよく；第一のブロックが双性イオン性反復単位を含んでなる実施形態では、第一のブロックは２以上の組成的に異なる双性イオン性反復単位の組合せを含んでよく；また第一のブロックが非帯電性反復単位を含んでなる実施形態では、第一の実施形態は２以上の組成的に異なる非帯電性反復単位の組合せを含んでよい。
【００８６】
一般に、親水性の第一のブロックは、その全体の特徴が親水性であることを条件として、アニオン性反復単位、カチオン性反復単位、双性イオン性反復単位、２以上の帯電性反復単位の組合せ（例えば、アニオン性反復単位およびカチオン性反復単位、アニオン性反復単位および双性イオン性反復単位、カチオン性反復単位および双性イオン性反復単位、またはアニオン性反復単位、カチオン性反復単位および双性イオン性反復単位）、実質的に非帯電性の反復単位、またはそれらの組合せを含んでよい。別の言い方をすれば、親水性の第一のブロックは、第一のブロックを構成する反復単位の寄与の合計が全体的な親水性の特徴を有するブロックを与えるならば、親水性または例え疎水性であっても、広範な反復単位の何れを含んでいてもよい。反復単位がイオン化可能な基を含んでいるとき、ブロックを構成する成分である個々の反復単位の当該ブロック全体の親水性に対する寄与は、それが存在する環境のｐＨに対するそのｐＫａの関数として変化してよい。例えば、アクリル酸プロピル反復単位−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−は、ｐＨ７において大半がイオン化されるので、ブロックに対するアクリル酸プロピルの疎水性寄与は、ｐＨ７でよりもｐＨ５において有意に大きい。従って、一般に、第一のブロックがイオン化可能なカチオン性反復単位またはイオン化可能なアニオン性反復単位を含むときは、第一ブロックを構成する反復単位の寄与の合計が、該ブロックの全体の特徴が生理学的ｐＨにおいて親水性であるようなものであるのが好ましい。例えば、一つの実施形態において、第一のブロックはｐＨ５．０〜ｐＨ７．５の全ｐＨ範囲に亘って親水性であるのが好ましい。
【００８７】
幾つかの実施形態において、親水性の第一のブロックは実質的に非帯電性ブロックである。特定の実施形態において、親水性の第一のブロックは、実質的に非帯電性であり、帯電した第二のブロックおよび／または第二のブロックに集合された帯電した治療剤を遮蔽する。例えば、第一のブロックは多糖ブロックであってよい。幾つかの他の実施形態において、親水性の第一のブロックはポリ双性イオン性（即ち、約中性ｐＨにおいて両イオン種およびアニオン種の両方、またはモノマー残基の複数を含む）またはポリアニオン性ブロック（即ち、約中性ｐＨにおいて、複数のアニオン性モノマー残基を含む）である。これら実施形態の何れにおいても、親水性ブロックは少なくとも一つの接合可能または官能化可能なモノマー残基を含んでよく、これは重合の後に、例えばターゲッティング基、水溶性化基、または他の官能基を該ポリマーブロックに連結するために使用されてよい。
【００８８】
一つの好ましい実施形態において、親水性の第一のブロックは、ポリヌクレオチドの立体的遮蔽に適した（ができる／に有効な）親水性ポリマーブロックである。この実施形態において、親水性の第一のブロックは、遮蔽種を有する複数のモノマー残基を含んでおり、該遮蔽種はポリマーまたは該ポリマーを含むミセルと集合したポリヌクレオチドを立体的に遮蔽するのに効果的である。例えば、該遮蔽種は、血漿中での酵素的消化に対するポリヌクレオチドの安定性を高めるために効果的である可能性がある。加えて、またはその代わりに、該遮蔽種は、記載したポリマーまたはミセルの毒性を低減するために効果的である可能性がある（例えば帯電した第二の親水性ブロックを遮蔽して、ポリマーもしくはミセルの有効表面電荷を低減することにより）。加えて、またはその代わりに、該遮蔽種は、該ポリマーを含んでなるミセルの望ましい表面特性を維持するために有効である。加えて、またはその代わりに、該遮蔽種は、腎臓における循環時間を増大させ、またはその腎臓によるクリアランスを減少させるために有効であるかもしれない。
【００８９】
望ましい性質に応じて、ポリマーまたはミセルの遮蔽種は、或る範囲の成分から選択されてよい。例えば、遮蔽種はアルコール、フェノール、チオール、ポリオキシル化アルキル（例えば、ポリエチレングリコール、またはポリプロピレングリコール等）、エーテル、またはチオエーテル等であってよい。幾つかの実施形態において、親水性の第一のブロックは、遮蔽オリゴマー（例えば、ポリエチレングリコール、またはポリプロピレングリコール等）を含んだペンダント基を有する複数のモノマー残基を含んでいる。特定の実施形態では、ここに記載したポリマーまたはミセルの遮蔽種は、式ＩＩの構造を備えたポリオキシアルキルである。
【化２】
0005766611.tif 000003
【００９０】
ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から選択され、またｎは整数である。好ましい実施形態において、反復単位の数ｎは、約４０〜約２０００ダルトンの分子量を有する遮蔽種を与えるであろう。特定の実施形態において、ｎは約２〜２０であろう；例えば、ｎは約３〜１０であり、ポリマーに応じて約４〜５、約８〜９等であってよい。幾つかの実施形態において、遮蔽種は式ＩＩに対応し、約４０〜約２０００ダルトン、または約１００〜約２０００ダルトン、または約１００〜約２０００ダルトンの分子量を有する。
【００９１】
幾つかの実施形態において、親水性の第一のブロックは式Ｉａ−１に対応する：
【化３】
0005766611.tif 000004
【００９２】
ここで、
Ａ６、Ａ７、およびＡ８の各々は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−０（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）−、および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から独立に選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｙ６、Ｙ７、およびＹ８は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、およびアリールからなる群から独立に選択され、これらは何れも任意に置換され；
Ｒ６ａ、Ｒ７、Ｒ８で完全には置換されないＡ６〜Ａ８の四価炭素原子およびＹ６〜Ｙ８は、適切な数の水素原子で完成されており；
各Ｒ６ａ、Ｒ７、およびＲ８は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリーおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それらは何れも１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ６は、生理学的ｐＨにおいて親水性であり、且つ約中性ｐＨにおいて実質的に非帯電性である残基（例えば、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはチオール等）からなる群から選択される残基であり；
Ｑ７は、生理学的ｐＨにおいて親水性であり、且つ約中性ｐＨにおいて少なくとも部分的に正に帯電する残基（例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、またはピリジル等）；中性ｐＨで少なくとも部分的に負に帯電するが、より低いｐＨではプロトン付加を受ける残基（例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、またはホスフェート等）；生理学的ｐＨでは少なくとも部分的に両イオン性である残基（例えば、ホスフェート基およびアンモニウム基を含むモノマー残基）、または水素からなる群から選択される残基であり；
Ｑ８は、接合可能もしくは官能化可能な残基（例えば反応性基、例えばアジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、p-ニトロフェニルエステル、ピリジル ジスルフィド、アルデヒド、ケトン、またはアミン等）またはターゲッティング剤（例えば糖残基、フォレート、またはペプチド等）からなる群から選択される。
【００９３】
ｇは、０〜１であり；
ｈは、０〜１未満であり；
ｋは、０〜１であり；
ここで、ｇ＋ｈ＋ｋ＝１であり；
ｙは、約１〜約１００ｋＤａ、または約１〜約３０ｋＤａである。
【００９４】
幾つかの実施形態において、親水性の第一のブロックは式Ｉａ−２に対応した構造を有する：
【化４】
0005766611.tif 000005
【００９５】
ここで、
Ａ６は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−０（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）−、および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｒ４は、水素、および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
Ｙ６は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、およびアリールからなる群から選択され、これらの何れもが任意に置換され；
完全にはＲ６ａで置換されないＡ６の四価炭素原子およびＹ６は、適切な数の水素原子で完成され；
各Ｒ６ａは、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それらの何れもが１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ６は、生理学的ｐＨにおいて親水性であり、且つ生理学的ｐＨにおいて実質的に非帯電性である残基（例えば、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはチオール等）からなる群から選択される残基であり；
ｙは、約１〜約３０ｋＤａである。
【００９６】
幾つかの実施形態において、親水性の第一のブロックは、式Ｉａに対応するモノマー残基および他のモノマー残基を含んでなる共重合体である。好ましい実施形態において、他のモノマー残基は非帯電性である。幾つかの実施形態において、この他のモノマー残基は非帯電性である。ある実施形態において、この他のモノマー残基は親水性の第一のブロックの全体の親水性に有意に影響しない。
【００９７】
一つの好ましい実施形態において、親水性ブロックは、式１に対応する反復単位を含んでいる：
【化５】
0005766611.tif 000006
【００９８】
ここで、
*は、式１の反復単位の他の反復単位への結び付き点を意味し；各Ｘ１およびＸ２は、水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロ環、および置換カルボニルからなる群から独立に選択されるが、但し、同じ反復単位においては、Ｘ１およびＸ２はアリール、ヘテロアリール、ヘテロ置換カルボニル、およびそれらの組合せからなる群から選択されず；各Ｘ３は、独立に、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；各Ｘ４は、独立に、ヘテロ置換カルボニル、アリール、またはヘテロアリールである。例えば、一つの斯かる実施形態において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、またＸ１およびＸ２は水素である。もう一つの斯かる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素であり、またＸ３は水素またはアルキルである。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、またＸ４は独立にヘテロ置換カルボニルである。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、また各Ｘ４は独立にヘテロ置換カルボニルである。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、またＸ４０およびＸ４１は独立に、水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、またＸ４０およびＸ４１は独立に、水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０であり、またＸ４０は水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０であり、Ｘ４０は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔＸ４００であり、ｔは正の整数であり、またＸ４００はアルキル、置換アルキル、またはヘテロ環である。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０であり、Ｘ４０は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔＸ４００であり、ｔは正の整数であり、またＸ４００はターゲッティング部分を含んでいる。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、また式１に対応する反復単位は、当該親水性ブロックにおける反復単位の合計数の大部分を構成する。更なる例において、親��性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、また式１に対応する反復単位は、当該親水性ブロックにおける反復単位の合計数の少なくとも７５％を構成する。更なる例において、親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、また式１に対応する反復単位は、当該親水性ブロックにおける反復単位の合計数の少なくとも９０％を構成する。
【００９９】
一つの代替実施形態において、親水性ブロックは、少なくとも二つの組成的に異なる反復単位を含んでなり、その少なくとも一方が式１に対応しているランダム共重合体である。もう一つの代替実施形態において、親水性ブロックは、少なくとも二つの組成的に異なる反復単位を含んでなり、その各々が式１に対応しているランダム共重合体である。例えば、該親水性ブロックは、（ｉ）Ｘ４が−Ｃ（Ｏ）ＯＨである式１に対応した反復単位、および（ｉｉ）組成的に異なる式１に対応した第二の反復単位を含んでなるランダム共重合体であってよい。更なる例において、親水性ブロックは、少なくとも二つの組成的に異なる反復単位を含んでなり、その各々が式１に対応し、該式１に対応する反復単位は当該親水性ブロックにおける反復単位の合計数の大部分を構成するランダム共重合体である。更なる例において、親水性ブロックは、少なくとも二つの組成的に異なる反復単位を含んでなり、その各々が式１に対応し、該式１に対応する反復単位は当該親水性ブロックにおける反復単位の合計数の少なくとも９０％を構成するランダム共重合体である。
【０１００】
もう一つの好ましい実施形態において、親水性ブロックは、式１ＥＴＳに対応する反復単位を含んでなるものである：
【化６】
0005766611.tif 000007
【０１０１】
ここで、
*は、式１ＥＴＳの反復単位の他の反復単位への結び付き点を意味し；Ｘ３はアルキルであり、またＸ４４はターゲッティング部分または遮蔽部分である。例えば、Ｘ４４はポリオール、ビタミン、ペプチド、または細胞もしくは生物学的標的に対する結合親和性を持った他の部分であってよい。例えば、一つの斯かる実施形態において、親和性ブロックは、式１ＥＴＳに対応し、且つＸ４４がポリオールである反復単位を含んでいる。更なる例において、親水性ブロックは式１ＥＴＳに対応する反復単位を含んでなり、且つ式１ＥＴＳに対応する反復単位は当該親水性ブロックにおける反復単位の合計数の少なくとも２％を構成してよい。更なる例において、親水性ブロックは式１ＥＴＳに対応する反復単位を含んでなり、且つ式１ＥＴＳに対応する反復単位は当該親水性ブロックにおける反復単位の合計数の少なくとも５％を構成してよい。更なる例において、親水性ブロックは、少なくとも二つの反復単位を含んでなり、その一方は式１ＥＴＳに対応し、また他方は組成的に異なる式１に対応した反復単位である。更なる例において、親水性ブロックは、少なくとも二つの反復単位を含んでなり、その一方は式１ＥＴＳに対応し、もう一方はＸ４が−ＣＯＯＨである式１に対応している。
【０１０２】
ある実施形態において、親水性ブロックは、式ＩＩＩｂのモノマーの重合または共重合によって得られる複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化７】
0005766611.tif 000008
【０１０３】
ここで、
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｘは、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｙは、−Ｏ−、−ＮＲ４−または−（ＣＲ１Ｒ２）−であり；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｚ１およびＺ２は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
Ｒ４は、水素および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ８は、水素または（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１  Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｒ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、ポリオール、ビタミン、ペプチド、２００〜１２００ダルトンの分子量を有する小分子、または接合可能な基である。
【０１０４】
ある実施形態において、親水性ブロックは、式ＩＩＩｃのモノマー重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化８】
0005766611.tif 000009
【０１０５】
ここで、
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｘは、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｙは、−Ｏ−、−ＮＲ４−または−（ＣＲ１Ｒ２）−であり；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｚ１およびＺ２は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
各Ｒ４は、水素、および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から独立に選択され；
Ｒ８は、水素または（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｒ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、ポリオール、ビタミン、ペプチド、２００〜１２００ダルトンの分子量を有する小分子、または接合可能な基である。
【０１０６】
例えば、一つの実施形態において、親水性の第一のブロックは式ＩＩＩｃに対応する複数のモノマー残基を含んでなり、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ１およびＺ２は水素であり、Ｒ３は水素またはＣ１−Ｃ３アルキルであり、ｎは２〜２０であり、Ｒ９はポリオール、ビタミン、ペプチド、または２００〜１２００ダルトンの分子量を有する小分子である。
【０１０７】
ある実施形態において、親水性の第一のブロックまたは遮蔽性の親水性ブロックは、式ＩＩＩのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化９】
0005766611.tif 000010
【０１０８】
ここで、
Ｘは、（ＣＲ１Ｒ２）ｍであり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ、ＮＲ４、またはＣＲ１Ｒ２であり；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、または限定するものではないが、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フォレート、ＲＧＤペプチドのようなターゲッティング基からなる群から独立に選択され；
Ｒ４は、水素および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｒ８は、（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換される。
【０１０９】
特定の実施形態において、親水性の第一のブロックまたは遮蔽性の親水性ブロックは、式ＩＩＩａのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化１０】
0005766611.tif 000011
【０１１０】
ここで、
Ｘは、（ＣＲ１Ｒ２）ｍであり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換され；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ９は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｒ８は、（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換される。
【０１１１】
一つの実施形態において、親水性の第一のブロックは、式ＩＩＩａに対応する複数のモノマー残基を含んでなり、またＲ３はメチルである（即ち、式ＩＩＩのモノマーはＰＥＧＭＡである）。
【０１１２】
ある実施形態において、親水性の第一のブロックまたは遮蔽性の親水性ブロックは、式ＩＶのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化１１】
0005766611.tif 000012
【０１１３】
ここで、
各Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｒ８は、（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換される。
【０１１４】
一つの実施形態において、親水性の第一のブロックは式ＩＶに対応する複数のモノマー残基を含んでなり、Ｒ３はメチルであり、ｎは２〜２０である。
【０１１５】
一般に、親水性の第一のブロックは複数、即ち、少なくとも二つの反復単位を含んでなるものである。幾つかの実施形態において、ここに記載したポリマーの親水性の第一のブロックは、約１，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトン、約２，０００ダルトン〜約３０，０００ダルトン、約５，０００ダルトン〜約２０，０００ダルトン、または約７，０００ダルトン〜約１５，０００ダルトンの数平均分子量を有する。特定の実施形態では、該親水性ブロックは、約７，０００ダルトン、８，０００ダルトン、９，０００ダルトン、１０，０００ダルトン、１１，０００ダルトン、１２，０００ダルトン、１３，０００ダルトン、１４，０００ダルトン、または１５，０００ダルトンのものである。
【０１１６】
＜キャリアブロック＞
ここに記載のブロック共重合体は、第二のブロック（即ち、中間体ブロック、または親水性の第一のブロックと疎水性ブロックの間のブロック）を含んでなり、これは（ｉ）治療剤（例えばポリヌクレオチドまたはペプチド）と集合しているか、または（ｉｉ）治療剤と結合するための官能基を有している。例えば、キャリアブロックは、ポリヌクレオチドのような治療剤とイオン的に結合するための多価カチオンを有していてよい。その代わりに、またはそれに加えて、該キャリアブロックは、治療剤をブロック共重合体に２価的に結合させるためのジスルフィド結合または他の部分を含んでよい。一つの実施形態において、該キャリア（第二の）ブロックは親水性である。もう一つの実施形態において、該キャリア（第二の）ブロックは疎水性である。一つの実施形態において、第二のブロックは多価カチオン性である。幾つかの実施形態において、第二のブロックは親水性であり、複数のカチオン性モノマー残基（例えば約中性ｐＨにおいて）を含んでいる。もう一つの実施形態において、キャリア（第二の）ブロックは疎水性であり、複数のカチオン性モノマー残基（例えば約中性ｐＨにおいて）を含んでいる。特定の実施形態において、第二のブロックはポリヌクレオチドとイオン的に結合する。ある実施形態において、第二のブロックは非帯電性であるか、または少なくとも実質的に非帯電性であり、且つポリヌクレオチドに結び付けられる。幾つかの実施形態において、第二のブロックは親水性、多価カチオン性であり、且つ共有結合およびイオン的相互作用の両者を介してポリヌクレオチドに結び付けられる。
【０１１７】
一般に、キャリアブロックは、アニオン性反復単位、カチオン性反復単位、双性イオン性反復単位、２以上の帯電性反復単位の組合せ（例えば、アニオン性反復単位およびカチオン性反復単位、アニオン性反復単位および双性イオン性反復単位、カチオン性反復単位および双性イオン性反復単位、またはアニオン性反復単位、カチオン性反復単位および双性イオン性反復単位）、実質的に非帯電性反復単位、またはそれらの組合せを含んでよい。別の言い方をすれば、該キャリアブロックは、親水性または疎水性であっても、広範な反復単位の何れを含んでもよい。一つの実施形態において、キャリアブロックに含まれる反復単位の寄与の合計は、全体的に親水性の特徴を有するブロックを与える。別の実施形態では、キャリアブロックに含まれる反復単位の寄与の合計は、全体的に疎水性の特徴を有するブロックを与える。反復単位がイオン化可能な基を含むとき、個々の反復単位の、それらを構成成分とするブロックの全体の親水性に対する寄与は、それが存在する環境のｐＨに対するそのｐＫａの関数として変化する可能性がある。例えば、アクリル酸プロピル反復単位−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−は、ｐＨ７では主にイオン化しているが、ｐＨ５ではイオン化しておらず、従ってブロックに対するアクリル酸プロピル反復単位の疎水性寄与は、ｐＨ７におけるよりもｐＨ５での方が有意に大きい。従って、一般に、キャリアブロックがイオン化可能なカチオン性反復単位またはイオン化可能なアニオン性反復単位を含み、且つ該キャリアブロックが親水性であるのが望ましいときは、該キャリアブロックを構成する反復単位の寄与の合計は、該ブロックの全体的な特徴が生理的ｐＨにおいて親水性であるようなものであるのが好ましい。例えば、一つの実施形態では、該キャリアブロックはｐＨ５．０〜ｐＨ７．５の範囲に亘って親水性であるのが好ましい。或いは、該キャリアブロックがイオン化可能なカチオン性反復単位またはイオン化可能なアニオン性反復単位を含み、且つ該キャリアブロックが疎水性であるのが望ましいときは、該キャリアブロックを構成する反復単位の寄与の合計は、該ブロックの全体的な特徴が生理的ｐＨにおいて疎水性であるようなものであるのが好ましい。例えば、一つの実施形態において、該キャリアブロックはｐＨ５．０〜ｐＨ７．５の範囲に亘って疎水性であってよい。
【０１１８】
幾つかの実施形態において、キャリアブロックは、約６．０〜約１０．０、典型的には約６．２〜約９．５、幾つかの実施形態では約６．５〜約８．５の範囲の何処かに分布するｐＫａをもったカチオン性モノマーから誘導された反復単位を含んでいる。該モノマーをポリマーブロックの中に取り込むと、該残基のｐＫａは、未重合モノマーに比較して低下する傾向にある；従って、一般に、組込まれた反復単位のｐＫａは約６．０〜１０．０、典型的には約６．２〜９．０、幾つかの実施形態では約６．５〜８．０であろう。
【０１１９】
ある実施形態において、第二のブロックは親水性であり、且つ非環式アミン（例えばアミン、アルキルアミン、またはジアルキルアミン等）、非環式イミン（例えばイミン、またはアルキルイミン等）、環式アミン（例えばピペリジン）、窒素含有へテロ環（例えばピリジンまたはキノリン）等を含んでなるモノマー種を含んでいる。特定の実施形態において、個々で利用されるようイオン種には、プロトン付加された非環式アミン（例えばアミン、アルキルアミン、またはジアルキルアミン等）、非環式イミン（例えばイミン、またはアルキルイミン等）、環式アミン（例えばピペリジン）、または窒素含有へテロ環（例えばピリジン、またはキヌクリジン）等が含まれる。
【０１２０】
非環式アミンの非限定的な例には、メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ｎ−ブチルアミン、ｓｅｃ−ブチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ペンチルアミン、ネオペンチルアミン、イソペンチルアミン、またはヘキサンアミン等が含まれる。非環状イミンの非限定的な例には、メチルイミン、エチルイミン、プロピルイミン、イソプロピルイミン、ｎ−ブチルイミン、ｓｅｃ−ブチルイミン、ペンチルイミン、ネオペンチルイミン、イソペンチルイミン、またはヘキシルイミン等が含まれる。環式アミンの非限定的な例には、シクロプロピルアミン、シクロブチルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、シクロヘプチルアミン、ピペリジン、ピラジン、ピロリジン、ホモピペリジン、アザビシクロヘプタン、またはジアザビシクロウンデカン等が含まれる。環式イミンの非限定的な例には、シクロプロピルイミン、シクロブチルイミン、シクロペンチルイミン、シクロヘキシルイミン、またはシクロヘプチルイミン等が含まれる。窒素を含むヘテロアリールの非限定的な例には、イミダゾリル、ピロリル、ピリジル、またはインドリル等が含まれる。
【０１２１】
幾つかの実施形態においては、ここに記載のポリマーの第二のブロックは親水性であり、且つ任意に置換された、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレート、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレート、（Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレート、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレート、（Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレート、またはそれらの組合せの複数のモノマー残基を含んでいる。特定の実施形態において、斯かるモノマー残基が、ここに記載した中性ｐＨでカチオン性のモノマー残基を構成する。
【０１２２】
一つの実施形態において、当該キャリアブロックは、複数のアニオン性モノマー残基を含んでなるものである。このアニオン性モノマー残基は、アニオンに帯電した種、またはプロトン付加可能なアニオン種を含む帯電可能な種を有することができる。帯電可能な種は、好ましくは、血清の生理学的ｐＨにおいてアニオンであることができ、また膜が不安定化または破壊されるｐＨ、例えば、好ましくはエンドソームのｐＨにおいては実質的に中性または非帯電であることができる。幾つかの実施形態において、キャリアブロックは複数のアニオン性の疎水性モノマー残基を含んでおり、該モノマー残基は、疎水性の種（例えばＣ２−Ｃ８アルキル置換基）およびアニオンに帯電した、または帯電可能な種の両方を含んでいる。
【０１２３】
幾つかの実施形態において、第二のブロックは、前記第二のブロックに共有結合したポリヌクレオチドを含んでなるポリマーバイオ接合体である。幾つかの実施形態において、共有結合による接合体は、治療剤（例えばポリヌクレオチドまたはペプチド）とポリマーにおけるモノマーのペンダント側鎖との間で形成される。幾つかの実施形態において、第二のブロックは、連結部分を介して該第二のブロックに共有結合されたポリヌクレオチドを含んでいる。ある実施形態において、第二のブロックはポリヌクレオチドの３’末端に共有結合される。幾つかの実施形態では、第二のブロックはポリヌクレオチドの５’末端に共有結合される。ある実施形態において、前記連結部分は共有結合である。幾つかの実施形態において、前記連結部分は２以上の反応性官能基を含んでなる多価官能部分から誘導される。ある実施形態では、前記連結部分はｐＨ感受性の不安定部分である。幾つかの実施形態において、前記連結部分は血清ｐＨでは安定であり、エンドソームｐＨでは不安定である。幾つかの実施形態において、前記連結部分はｐＨ７．４では安定であり、ｐＨ６．０では酸不安定である。ある実施形態において、前記連結部分はジスルフィドである。
【０１２４】
ある実施形態において、第二のブロックは、接合可能な、または接合した側鎖（例えばモノマー残基のペンダント基）を含む１以上のモノマー残基を含んでなるものである。ここで使用する接合された側鎖は、最初に重合されたときには接合可能な側鎖を保有し、それが後に、例えばポリヌクレオチドに接合されたモノマー残基を含むことを意味する。幾つかの場合に、接合可能な側鎖とは、当該技術で知られた化学、例えば「クリック」化学（「クリック」反応の例については、Wu, P.; Fokin, V. V. Catalytic Azide-Alkyne Cycloaddition: Reactivity and Applications. Aldrichim. Acta, 2007, 40, 7-17参照）により、重合後に追加の官能基を導入するために使用できる１以上の反応性基を有する基である。ある実施形態において、ここに与えられる接合可能または官能化可能な側鎖は、１以上の何れか適切な親電子的または求核的な官能基、例えば、限定されるものではないがＮ−ヒドロスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）エステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ピリジルジスルフィド基、マレイミド、アルデヒド、ケトン、酸無水物、チオール、アミン、ヒドロキシル、ハロゲン化アルキル等を含んでいる。より具体的な実施形態において、第二のブロックは、生体分子、例えばポリヌクレオチドまたはペプチドとバイオ接合される１以上の官能化可能な側鎖を含んでいる。
【０１２５】
ある実施形態において、第二のブロックは、式ＶＩＩＩを有する接合可能なモノマーの重合から誘導されたモノマー残基を含んでなるものである：
【化１２】
0005766611.tif 000013
【０１２６】
ここで、
Ｘは、共有結合、Ｃ（Ｏ）、二価のＣ５−Ｃ１０アリール、および二価のＣ２−Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｙは、共有結合、または任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０アルキル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０ヘテロアルキル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０アルケニル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０アルキニル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０シクロアルキル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０シクロヘテロアルキル、任意に置換された二価のＣ５−Ｃ１０アリール、もしくは任意に置換された二価のＣ３−Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される連結基であり；
Ｒ３は、水素および任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択され；
Ｑは、限定されるものではないが、Ｎ−ヒドロスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）エステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ピリジルジスルフィド基、マレイミド、アルデヒド、ケトン、酸無水物、チオール、アミン、ヒドロキシル、ハロゲン化アルキル等のような接合可能な基である。
【０１２７】
ある実施形態において、第二の親水性ブロックは更に、式Ｉａの親水性ブロックにおいて記載した複数のモノマー残基を含んでなるものである。特定の実施形態において、第二の親水性ブロックは、遮蔽性オリゴマー（例えばポリエチレングリコール）を含んでなるペンダント基を有する少なくとも約５重量％、少なくとも約１０重量％、少なくとも約２０重量％、少なくとも約３０重量％、または少なくとも約４０重量％のモノマー残基（例えばＰＥＧＭＡ）を含んでなるランダム共重合体である。
【０１２８】
治療剤（例えばポリヌクレオチドまたはペプチド）が「第二の親水性ブロック」に接合される別の実施形態において、該第二のブロックは、治療剤に接合される非親水性ブロック（例えば疎水性ブロック）で任意に置き換えられてよい。
【０１２９】
ある実施形態において、中間ブロックは次式を有する：
【化１３】
0005766611.tif 000014
【０１３０】
ここで、Ａ０およびＡ１は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−０（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｙ０およびＹ１は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−からなる群から独立に選択され；
Ｒ１−Ｒ２およびＹ０−Ｙ１で完全に置換されないＡ０およびＡ１の四価炭素原子は、適切な数の水素原子で完成され；
各１、Ｒ２、およびＲ６は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それは何れも１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ０は、生理学的ｐＨにおいて親水性であり、且つ生理学的ｐＨにおいて少なくとも部分的に正に帯電する残基（例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、またはピリジル等）；接合可能または官能化可能な残基（例えば、反応性基を含んでなる残基、例えばアジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、またはピリジルジスルフィド等）；または水素からなる群から選択される残基であり；
Ｑ１は、生理学的ｐＨにおいて親水性であり、且つ生理学的ｐＨにおいて少なくとも部分的に正に帯電する残基（例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、またはピリジル等）；生理学的ｐＨにおいて少なくとも部分的に負に帯電するが、より低いｐＨではプロトン付加を受ける残基（例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、またはホスフェート等）；生理学的ｐＨにおいて実質的に中性である残基（例えば、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはチオール等）；または生理学的ｐＨにおいて少なくとも部分的に双性イオン性である残基（例えば、生理学的ｐＨにおいてホスフェート基およびアンモニウム基を含んでなるモノマー残基）であり；
ｍは、０〜１．０未満（例えば、０〜約０．４９）であり；
ｎは、０超〜１．０（例えば約０．５〜約１．０）であり；
ｍ＋ｎ＝１であり；
ｖは、約１〜約２５ｋＤａである。
【０１３１】
ある実施形態において、Ｑ０の前記接合可能または官能化可能な残基は、少なくとも一つのアミノ酸または少なくとも一つの核酸に接合される。
【０１３２】
一つの好ましい実施形態において、キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなるものである：
【化１４】
0005766611.tif 000015
【０１３３】
ここで、
*は、式１の反復単位の他の反復単位への結び付き点を意味し；
各Ｘ１およびＸ２は、水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロ環、および置換カルボニルからなる群から独立に選択されるが、但し、同じ反復単位においては、Ｘ１およびＸ２はアリール、ヘテロアリール、ヘテロ置換カルボニル、およびそれらの組合せからなる群から選択されず；
各Ｘ３は、独立に、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
各Ｘ４は、独立に、ヘテロ置換カルボニル、アリール、またはヘテロアリールである。例えば、一つの斯かる実施形態において、当該キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、またＸ１およびＸ２は各々水素である。もう一つの斯かる例において、キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２は各々水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルである。更なる例において、キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２は各々水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、各Ｘ４は独立にヘテロ置換カルボニルである。更なる例において、該親水性ブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、またＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。更なる例において、該キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４５、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４１Ｘ４５であり、またＸ４１およびＸ４５は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。更なる例において、該キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４１Ｘ４５であり、またＸ４１およびＸ４５は独立にヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。更なる例において、該キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２は各々水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５であり、またＸ４５は水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロ環である。更なる例において、該キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２は各々水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５であり、Ｘ４５はジスルフィド置換アルキル部分（例えば、ピリジルジスルフィド置換エチル）である。更なる例において、該キャリアブロックは式１に対応する反復単位を含んでなり、Ｘ１およびＸ２は各々水素であり、Ｘ３は水素またはアルキルであり、Ｘ４は−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４１Ｘ４５であり、Ｘ４１は水素であり、またＸ４５はアルキルまたは置換アルキルである。
【０１３４】
一つの別の実施形態において、該キャリアブロックは、その各々が式１に対応している少なくとも二つの組成的に異なる反復単位を含んでなるランダム共重合体である。例えば、該キャリアブロックは、（ｉ）Ｘ４が−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５である式１に対応した第一の反復単位、および（ｉｉ）Ｘ４が−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４１Ｘ４５である式１に対応した第二の反復単位を含んでなるランダム共重合体であってよい。有利なことに、キャリアブロックが少なくとも二つの組成的に異なる反復単位を含んでなるランダム共重合体であるときは、これら反復単位の一つが、核酸のような治療剤を結び付けるための官能基を提供してよい。従って、例えば該キャリアブロックは、（ｉ）Ｘ４が−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４５、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４１Ｘ４５である式１に対応した第一の反復単位であって、核酸のような治療剤がＸ４５を介して該キャリアブロックに結び付けられ、またはＸ４５が治療剤を結び付けるための官能基を含む第一の反復単位と、（ｉｉ）式１に対応する組成的に異なる反復単位を含んでよい。
【０１３５】
ある実施形態において、該キャリアブロックは、式ＩＩＩｂのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化１５】
0005766611.tif 000016
【０１３６】
ここで、
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｘは、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１−Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｙは、−Ｏ−、−ＮＲ４−または−（ＣＲ１Ｒ２）−であり；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｚ１およびＺ２は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
Ｒ４は、水素、および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ８は、水素または（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｒ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、ポリオール、ビタミン、ペプチド、２００〜１２００ダルトンの分子量を有する小分子、または接合可能な基である。
【０１３７】
ある実施形態において、当該キャリアブロックは、式ＩＩＩｃのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化１６】
0005766611.tif 000017
【０１３８】
ここで、
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｘは、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｙは、−Ｏ−、−ＮＲ４−または−（ＣＲ１Ｒ２）−であり；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｚ１およびＺ２は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
各Ｒ４は、水素、および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から独立に選択され；
Ｒ８は、水素または（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され；
Ｒ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、ポリオール、ビタミン、ペプチド、２００〜１２００ダルトンの分子量を有する小分子、または接合可能な基である。
【０１３９】
ある実施形態において、当該キャリアブロックは式ＩＩＩのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化１７】
0005766611.tif 000018
【０１４０】
ここで、
Ｘは、（ＣＲ１Ｒ２）ｍであり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換され；
Ｙは、Ｏ、ＮＲ４、またはＣＲ１Ｒ２であり；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、または限定するものではないが、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フォレート、ＲＧＤペプチドのようなターゲッティング基からなる群から独立に選択され；
Ｒ４は、水素および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｒ８は、（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換される。
【０１４１】
特定の実施形態において、親水性の第一のブロックまたは遮蔽性の親水性ブロックは、式ＩＩＩａのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化１８】
0005766611.tif 000019
【０１４２】
ここで、
Ｘは、（ＣＲ１Ｒ２）ｍであり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換され；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ９は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｒ８は、（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換される。
【０１４３】
特定の実施形態において、Ｒ３はメチルである（即ち、式ＩＩＩａのモノマーはＰＥＧＭＡである）。
【０１４４】
ある実施形態において、親水性の第一のブロックまたは遮蔽性の親水性ブロックは、式ＩＶのモノマーの重合または共重合により得られた複数のモノマー残基を含んでなるものである：
【化１９】
0005766611.tif 000020
【０１４５】
ここで、
各Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素、ハロゲン、および任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され；
ｎは、２〜２０の整数であり；
Ｒ８は、（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位はＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１またはＳＲ１で任意に置換される。
【０１４６】
一般に、キャリアブロックは複数、即ち、少なくとも二つのの反復単位を含んでなるものである。幾つかの実施形態において、ここに記載したポリマーのキャリマまたは第二のブロックは、約１，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトン、約２，０００ダルトン〜約３０，０００ダルトン、約５，０００ダルトン〜約２０，０００ダルトン、または約７，０００ダルトン〜約１５，０００ダルトンの数平均分子量を有する。特定の実施形態では、該親水性ブロックは、約７，０００ダルトン、８，０００ダルトン、９，０００ダルトン、１０，０００ダルトン、１１，０００ダルトン、１２，０００ダルトン、１３，０００ダルトン、１４，０００ダルトン、または１５，０００ダルトンのものである。
【０１４７】
＜疎水性ブロック＞
ある実施形態において、ここに記載するポリマーの疎水性ブロックは、疎水性でｐＨ依存性の膜を不安定化させるブロックである。幾つかの実施形態において、ここに記載するポリマーの疎水性ブロックは、複数の疎水性モノマー残基および複数のアニオン性モノマー残基を含んでなるポリマーブロックであるか、該ポリマーブロックを含んでいる。特定の実施形態において、複数のアニオン性モノマー残基は、約中性ｐＨにおいてアニオン性である。更に特定の実施形態においては、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の複数のアニオン性モノマー残基は、約ｐＨ５において、約ｐＨ５．５において、約ｐＨ５．７において、約ｐＨ６．０において、約ｐＨ６．２において、約ｐＨ６．５において、または約エンドソームのｐＨにおいて非帯電性である（例えば、与えられたモノマー残基のｐＫａ値から計算したとき）。
【０１４８】
ある実施形態において、疎水性種または疎水性モノマー単位は、約１〜約２０の疎水性ブロックのπ値を有する。化合物のπ値は、その相対的な親水性−親油性値の尺度であり（例えば、Cates、L.A.、"Calculation of Drug Solubilities by Pharmacy Students" Am. J. Pharm. Educ. 45:11 -13 (1981)参照）、化合物の疎水性または親水性を記載するために使用される。
【０１４９】
ある実施形態において、ここに記載する疎水性ブロックは、複数の疎水性種（ここでは「疎水性エンハンサ」と互換的に使用される）を含んでいる。疎水性種は、非限定的な例として、アルキル（ここで使用するときは、飽和および不飽和のアルキル基を含む）、アリール−アルキル、アルキル−アリール、アルキル−アリール−アルキル、ヘテロアルキル、アリール、またはヘテロアリールを含んでよく、その各々は任意に置換される。特定の実施形態において、この疎水性種は、アルキル、アリール−アルキル、アルキル−アリール、アルキル−アリール−アルキル、またはアリールである。
【０１５０】
幾つかの実施形態において、ここに記載の疎水性ブロックは、複数の非帯電性（即ち、実質的に全電荷をもたず、または完全に全電荷をもたない）の疎水性モノマー残基を含んでいる。特定の実施形態において、疎水性モノマー残基は、少なくとも一つの疎水性種を含んでいる。疎水性種には、非限定的な例として、アルキル（ここで使用するときは飽和および不飽和のアルキル基を含む）、アリール−アルキル、アルキル−アリール、アルキル−アリール−アルキル、ヘテロアルキル、アリール、またはヘテロアリール等が含まれてよく、その各々は任意に置換される。特定の実施形態において、該疎水性種はアルキル、アリール−アルキル、アルキル−アリール、アルキル−アリール−アルキル、またはアリールである。幾つかの実施形態において、ポリマー鎖は独立に、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル、（Ｃ２−Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ８）アルキニル、アリール、およびヘテロアリール（その各々は任意に置換されてよい）から選択された疎水性種を有する複数のモノマー残基を含むことができる。ある実施形態において、複数のモノマー残基は、（Ｃ２−Ｃ８）アルキルエタクリレート、（Ｃ２−Ｃ８）アルキルメタクリレート、または（Ｃ２−Ｃ８）アルキルアクリレート（その各々は任意に置換されてよい）の重合から誘導されることができる。
【０１５１】
一つの実施形態において、疎水性ブロックは、複数のアニオン性モノマー残基を含んでなるものである。一般に、該疎水性ブロックは数十または数百のアニオン性モノマー残基を含んでなるのが好ましい。例えば、一つの実施形態において、疎水性ブロックは少なくとも１０の斯かる残基を含んでいる。もう一つの実施形態において、それは少なくとも２０の斯かる残基を含んでいる。もう一つの実施形態では、それは少なくとも５０の斯かる残基を含んでいる。もう一つの実施形態では、それは少なくとも１００の斯かる残基を含んでいる。このような実施形態において、疎水性ブロックは典型的には約１０〜約５００のアニオン性残基を含むであろう。アニオン性モノマー残基は、プロトン付加可能なアニオン種を含む、アニオンに帯電した、または帯電可能な種を有することができる。帯電可能な種は、好ましくは血清の生理学的ｐＨにおいてアニオン性であることができ、また膜が不安定化または崩壊されるｐＨ、好ましくはエンドソームｐＨにおいて実質的により少なく帯電されることができる。幾つかの好ましい実施形態において、疎水性ブロックは複数のアニオン性の疎水性モノマー残基を含み、該モノマー残基は疎水性種（例えばＣ２−Ｃ８アルキル置換基）およびアニオンに帯電した、または帯電可能な種の両者を含む。このような上記実施形態の各々において、疎水性ブロックは全体として疎水性であるとみなすことができる。
【０１５２】
従って一般に、疎水性ブロックは、その全体の特徴が疎水性であれば、アニオン性反復単位、カチオン性反復単位、双性イオン性反復単位、２以上の帯電性反復単位の組合せ（例えば、アニオン性反復単位およびカチオン性反復単位、アニオン性反復単位および双性イオン性反復単位、カチオン性反復単位および双性イオン性反復単位、またはアニオン性反復単位、カチオン性反復単位および双性イオン性反復単位）、実質的に非帯電性の反復単位、またはそれらの組合せを含んでよい。別の言い方をすれば、疎水性ブロックは、該疎水性ブロックに含まれる反復単位の寄与の合計が全体的な疎水性の特徴を有するブロックを与えるとすれば、疎水性でも、または例え親水性であっても、広範な反復単位の何れを含んでもよい。反復単位がイオン化可能な基を含むときは、それらを構成成分とするブロックの全体の親水性に対する個々の反復単位の寄与は、それが存在する環境のｐＨに対するそのｐＫａの関数として変化してよい。例えば、アクリル酸プロピル反復単位の−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−は、ｐｈ７では主にイオン化しているが、ｐＨ５ではイオン化しておらず、従って、ブロックに対するアクリル酸プロピル反復単位の寄与はｐＨ７でよりもｐＨ５での方が有意に大きい。従って、一般に、該疎水性ブロックを構成する反復単位の寄与の合計は、該ブロックの全体の特徴が、生理学的ｐＨよりも低いｐＨにおいて疎水性であるようなものが好ましい。例えば、一つの実施形態において、寄与の合計は、該ブロックの全体の特徴が約５のｐＨにおいて疎水性であるようなものである。更なる例として、一つの実施形態においては、寄与の合計は、該ブロックの全体の特徴が約５．５のｐＨにおいて疎水性であるようなものである。更なる例として、一つの実施形態では、寄与の合計は、該ブロックの全体の特徴が約６．０のｐＨにおいて疎水性であるようなものである。更なる例として、一つの実施形態では、寄与の合計は、該ブロックの全体の特徴が約６．８のｐＨで疎水性であるようなものである。更なる例として、一つの実施形態において、寄与の合計は、該ブロックの全体の特徴が約６．２〜６．８の範囲内のｐＨにおいて疎水性であるようなものである。
【０１５３】
ある実施形態において、ここに記載の疎水性ブロックは、疎水性種を含んだモノマーの重合または共重合から生じるモノマー残基を含んでなるものである。疎水性種を含んだモノマーには、非限定的例として、任意に置換された、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−エタクリレート、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−メタクリレート、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−アクリレート、スチレン、または（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−ビニル等が含まれる。ある実施形態において、疎水性種を含んでなるモノマーには、非限定的な例として、式ＶＩのモノマーが含まれる：
【化２０】
0005766611.tif 000021
【０１５４】
ここで、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｒ３は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５であり；
Ｒ４は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５は、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、−ＳＲ６、−ＯＲ６、または−ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ６は、水素、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立に、水素、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたヘテロアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリールであるか；またはＲ７およびＲ８は、それらが結び付けられている窒素と一緒になって、任意に置換されたヘテロ環を形成する。
【０１５５】
ある実施形態においては、疎水性種に加えて、ここに記載する疎水性ブロックは更に、アニオン種を含んでいる。特定の実施形態において、該アニオン種は約中性ｐＨにおいてアニオンである。特定の実施形態において、疎水性ブロックは疎水性種を含んだ第一のモノマー残基、およびアニオン種を含んだ第二のモノマー残基を含んでいる。
【０１５６】
ある実施形態において、ここに記載した疎水性ブロックは、複数の疎水性モノマー残基および複数のアニオン性モノマー残基を含んだポリマーブロックを含んでいる。幾つかの実施形態において、ここに記載の疎水性ブロックは、複数の帯電可能な残基を含んだポリマーブロックを含んでいる。幾つかの実施形態において、このアニオン性モノマー残基は、（１）約中性ｐＨ、約７．２よりも大きなｐＨ、または約７．４よりも大きな何れかのｐＨにおいてアニオン性であり、また（２）約６未満、約５．８未満、約５．７未満、約５．６未満、約５．５未満、約５．４未満、約５．２未満、約５．０未満、または約４．５未満のｐＨにおいて非帯電性である。幾つかの実施形態において、該モノマー残基は約４．５〜約８．０の何処か、約５．５〜約７．５の何処か、または約６．０〜約７．０の何処かのｐＫａを有する。ある実施形態において、重合されるときにアニオン性モノマー残基を与えるモノマーは、約４．５〜約８．０の何処か、約５．５〜約７．５の何処か、または約６．０〜約７．０の何処かのｐＫａを有する。
【０１５７】
特定の実施形態において、ここに記載するアニオン性モノマー残基に存在し得るアニオン種には、非限定的な例として、カルボン酸基、スルホンアミド基、ホウ酸基、スルホン酸基、スルフィン酸基、硫酸基、リン酸基、ホスフィン酸基、および亜リン酸基、またはそれらの共役塩基または共役酸が含まれる。幾つかの実施形態において、アニオン性モノマー残基は、Ｃ１−Ｃ６アルキルアクリル酸またはアクリル酸の残基である。ある実施形態において、マレイン酸無水物等のモノマー（Scott M. Henry、Mohamed E. H. El-Sayed、Christopher M. Pirie、Allan S. Hoffman、and Patrick S. Stayton、pH-Responsive Poly(styrene-alt-無水マレイン酸) alkylamide Copolymers for Intracellular Drug Delivery. Biomacromolecules 2006、7、2407-2414）が、無水マレイン酸モノマー単位の重合後加水分解によるアニオン種の導入のために使用される。
【０１５８】
ある実施形態においては、疎水性種に加えて、ここに記載の疎水性ブロックは更にカチオン種を含んでいる。幾つかの実施形態では、疎水性種およびアニオン種に加えて、ここに記載の疎水性ブロックは更にカチオン種を含んでいる。ある実施形態においては、疎水性モノマー残基に加えて、ここに記載の疎水性ブロックは更にカチオン性モノマー残基を含んでいる。幾つかの実施形態では、疎水性モノマー残基およびアニオン性モノマー残基に加えて、ここに記載の疎水性ブロックは更にカチオン性モノマー残基を含んでいる。幾つかの実施形態では、カチオン性である種および／またはモノマー残基は、約中性ｐＨにおいてカチオン性である。
【０１５９】
幾つかの実施形態において、ここに記載のカチオン性モノマー残基は、約６．０〜約１０．０、典型的には約６．２〜約９．５、および幾つかの実施形態では約６．５〜約８．５の何れかのｐＫａを有している。モノマーをポリマーブロックの中に組み込むと、残渣のｐＫａは未重合のモノマーに比較して減少する傾向がある；従って、一般に、組込まれた反復単位のｐＫａは約６．０〜１０．０、典型的には約６．２〜９．０、幾つかの実施形態では約６．５〜８．０になるであろう。
【０１６０】
ある実施形態において、疎水性ブロックは、非環式アミン（例えばアミン、アルキルアミン、もしくはジアルキルアミン等）、非環式イミン（例えばイミン、もしくはアルキルイミン等）、環式アミン（例えばピペリジン)、または窒素含有ヘテロ環（例えばピリジンもしくはキノリン）等を含んだモノマー種を含んでいる。特定の実施形態において、ここで利用されるカチオン種には、プロトン付加された非環式アミン（例えばアミン、アルキルアミン、またはジアルキルアミン等）、非環式イミン（例えばイミン、またはアルキルイミン等）、環式アミン（例えばピペリジン）、窒素含有ヘテロ環（例えばピリジンまたはキノリン）が含まれる。
【０１６１】
非環式アミンの非限定的な例には、メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ｎ−ブチルアミン、ｓｅｃ−ブチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ペンチルアミン、ネオペンチルアミン、イソペンチルアミン、またはヘキサンアミン等が含まれる。非環式 イミンの非限定的な例には、メチルイミン、エチルイミン、プロピルイミン、イソプロピルイミン、ｎ−ブチルイミン、ｓｅｃ−ブチルイミン、ペンチルイミン、ネオペンチルイミン、イソペンチルイミン、またはヘキシルイミン等が含まれる。環式アミンの非限定的な例には、シクロプロピルアミン、シクロブチルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、シクロヘプチルアミン、ピペリジン、ピラジン、ピロリジン、ホモピペリジン、アザビシクロヘプタン、またはジアザビシクロウンデカン等が含まれる。環式イミンの非限定的な例には、シクロプロピルイミン、シクロブチルイミン、シクロペンチルイミン、シクロヘキシルイミン、またはシクロヘプチルイミン等が含まれる。窒素含有ヘテロアリールの非限定的な例には、イミダゾリル、ピロリル、ピリジル、またはインドリル等が含まれる。
【０１６２】
幾つかの実施形態において、ここに記載するポリマーの疎水性ブロックは、任意に置換されたアミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレート、アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレート、（Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレート、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレート、（Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレート、またはそれらの組合せの複数のモノマー残基を含んでいる。特定の実施形態において、斯かるモノマー残基は、ここに記載した中性ｐＨでカチオン性のモノマー残基を構成する。
【０１６３】
ある実施形態において、ここに記載した疎水性ブロックは、複数のアニオン性モノマー残基、複数のカチオン性モノマー残基および複数の疎水性モノマー残基を含んでいる。
【０１６４】
ある特別な実施形態では、約中性のｐＨ（例えば約ｐＨ７．４）において、疎水性ブロックは実質的に中性の全体の電荷を有する。更に特定の実施形態において、疎水性ブロックの実質的に中性の全体の電荷とは、カチオン性モノマー残基またはアニオン性モノマー残基の何れかの電荷の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％が、他のカチオン性モノマー残基またはアニオン性モノマー残基の電荷によって中和されることを意味する。換言すれば、種々の実施形態において、約中性のｐＨにおいてカチオン性の疎水性ブロック中のモノマー単位の数の、約中性のｐＨにおいてアニオン性である疎水性ブロック中のモノマー単位の数に対する比は、約３：５〜約５：３、約７：１０〜約１０：７、約４：５〜約５：４、約９：１０〜約１０：９、約９５：１００〜約１００：９５、または約９８：１００〜約１００：９８である。電荷比率の決定は、何れかの適切な方法で、例えばそのｐＫａおよび／またはｐＫｂ値を使用して帯電種の量を計算することによって達成することができる。
【０１６５】
幾つかの実施形態において、約中性ｐＨにおいて（例えば約ｐＨ７．４で）、疎水性ブロックはアニオン種およびカチオン種を、約１０：１〜約１：１０、約５：１〜約１：５、約４：１〜約１：４、約１：０〜約１：４（アニオン種：カチオン種）で含んでいる。好ましい実施形態において、約中性ｐＨ（例えば約ｐＨ７．４）では、疎水性ブロックはアニオン種およびカチオン種を約１：１の比率（アニオン種：カチオン種）の比率で含んでいる。幾つかの実施形態では、約中性ｐＨにおいて（例えば約ｐＨ７．４）、疎水性ブロックはアニオン性モノマー残基およびカチオン性モノマー残基を、約１：０〜約１：４（アニオン性モノマー残基：カチオン性モノマー残基）の比率で含んでいる。好ましい実施形態において、約中性ｐＨにおいて（例えば約ｐＨ７．４）、疎水性ブロックはアニオン性モノマー残基およびカチオン性モノマー残基を、約１：１（アニオン性モノマー残基：カチオン性モノマー残基）の比率で含んでいる。
【０１６６】
ある実施形態では、約中性ｐＨ（例えば約ｐＨ７．４）において、疎水性ブロックは疎水性モノマー残基、カチオン性モノマー残基、およびアニオン性モノマー残基を含んでいる。特定の実施形態において、帯電したモノマー残基（カチオン性モノマー残基＋アニオン性モノマー残基）に対する疎水性モノマー残基の比率は、約１：５〜約５：１、または約１：３〜約３：１、または約１：２〜約３：１、または約１：１、または約１：２、または約２：１である。
【０１６７】
ある実施形態において、ここに記載の疎水性ブロックは、プロトン付加可能なアニオン種および疎水性種を有する第一の重合可能なモノマーから誘導された複数の第一のモノマー残基、および任意に、脱プロトン可能なカチオン種を有する第二の重合可能なモノマーから誘導された複数の第二のモノマー残基を含んでいる。
【０１６８】
幾つかの実施形態において、ここに記載する疎水性ブロックは式Ｉｃの構造を含んでなるものである：
【化２１】
0005766611.tif 000022
【０１６９】
ここで、
Ａ２、Ａ３およびＡ４は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−０（Ｃ）３Ｃ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−からなる群から独立に選択され；
ａは、１〜４であり；
ｂは、２〜４であり；
Ｙ４は、水素、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（１Ｃ−１０Ｃ）およびアリールからなる群から選択され、それらは何れも１以上のフッ素基で任意に置換され；
Ｙ２は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−および−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−からなる群から選択され；
Ｙ３は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキルおよび（６Ｃ−１０Ｃ）アリールからなる群から選択され；
Ｒ３〜Ｒ５およびＹ２〜Ｙ４で完全に置換されていないＡ２〜Ａ４は、適切な数の水素原子で完成され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環アルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立に選択され、それらは何れも１以上のフッ素原子で任意に置換されてよく；
Ｑ２は、生理学的ｐＨにおいて正に帯電される残基であり、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、およびピリジルが含まれるが、これらに限定されず;
Ｑ３は、生理学的ｐＨにおいて負に帯電されるが、より低いｐＨではプロトン付加を受ける残基であり、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、およびホスフェートが含まれるが、これらに限定されず；
ｐは、約０．１〜約０．９（例えば、約０．２〜約０．５）であり；
ｑは、約０．１〜約０．９（例えば、約０．２〜約０．５）であり；
ｒは、０〜約０．８（例えば、０〜約０．６）であり；
ｐ＋ｑ＋ｒ＝１であり；
ｗは、約１〜約５０ｋＤａである。
【０１７０】
好ましい実施形態において、疎水性ブロックは式１Ａの反復単位を含んでなるものである：
【化２２】
0005766611.tif 000023
【０１７１】
ここで、
＊は、式１Ａの反復単位の他の反復単位への結び付き点を意味し、Ｘ３はアルキルである。例示的アルキルには、メチル、エチル、プロピルおよびブチルが含まれる。典型的には、Ｘ３はエチルまたはプロピルである。好ましい実施形態において、Ｘ３はプロピルである。
【０１７２】
一つの好ましい実施形態において、疎水性ブロックは式１Ｅに対応した反復単位を含んでなるものである：
【化２３】
0005766611.tif 000024
【０１７３】
ここで、
＊は、式１Ａおよび式１Ｅの反復単位の他の反復単位への結び付き点を意味し、各Ｘ３およびＸ４７は独立にアルキルである。例示的アルキルには、メチル、エチル、プロピルおよびブチルが含まれる。典型的には、Ｘ３はメチル、エチルまたはプロピルであり、Ｘ４７は独立にメチル、エチル、プロピルまたはブチルである。一つの好ましい実施形態において、Ｘ３はメチルであり、Ｘ４７はブチルである。
【０１７４】
一つの好ましい実施形態において、疎水性ブロックは、式１Ｃに対応した反復単位を含んでなるものである。
【化２４】
0005766611.tif 000025
【０１７５】
ここで、
＊は、式１Ｃの反復単位の他の反復単位への結び付き点を意味し、Ｘ３はアルキルであり、またＸ４８はアミノ置換アルキルである。例示的アルキルには、メチル、エチル、プロピルおよびブチルが含まれる。典型的には、Ｘ３はエチルまたはプロピルであり、またＸ４８はＮ、Ｎ−ジアルキルアミノアルキル、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミノエチルである。
【０１７６】
一つの好ましい実施形態において、疎水性ブロックは、（ｉ）式１Ａおよび式１Ｅに対応した反復単位、（ｉｉ）式１Ａおよび式１Ｃに対応した反復単位、または（ｉｉｉ）式１Ａ、式１Ｃおよび式１Ｅに対応した反復単位を含んでなるランダム共重合体である。一般に、疎水性ブロックが式１Ａおよび式１Ｅに対応した反復単位を含んでなる（式１Ｃに対応する反復単位を伴って、または伴わずに）ランダム共重合体であるとき、第三のブロックにおいて、式１Ａに対応する反復単位の数の式１Ｅに対応する反復単位の数に対する比率は、それぞれ約２０：１〜１：４である。例えば、一般に第三のブロックにおいて、式１Ａに対応する反復単位の数の式１Ｅに対応する反復単位の数の比率は、それぞれ約３：１〜１：３であるのが好ましい。加えて、一般に、式１Ａに対応する反復単位の数は、式１Ｃに対応する反復単位の数を超えるのが好ましい。
【０１７７】
一般に、疎水性ブロックは複数の反復単位、即ち、少なくとも二つの反復単位を含んでいる。ある実施形態において、ここに記載するポリマーの疎水性ブロックは、約１，０００ダルトン〜約２００，０００ダルトン、約１，０００ダルトン〜約１００，０００ダルトン、約１，０００ダルトン〜約１００，０００ダルトン、約５，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン〜約３５，０００ダルトン、または約２０，０００ダルトン〜約３０，０００ダルトンの数平均分子量を有している。
【０１７８】
＜ブロック比率＞
ある実施形態において、当該ブロック共重合体は、数平均分子量の比（Ｍｎ１ｓｔで表される第一のブロック、即ち親水性ブロックの数平均分子量、Ｍｎ２ｎｄで表される第二のまたは中間のまたは治療剤キャリアブロック、およびＭｎ３ｒｄで表される第三のブロックの数平均分子量）として、約２：１〜約１：９の（Ｍｎ１ｓｔ＋Ｍｎ２ｎｄ）：（Ｍｎ３ｒｄ）を有している。幾つかの実施形態において、（Ｍｎ１ｓｔ＋Ｍｎ２ｎｄ）：（Ｍｎ３ｒｄ）は約１：１〜約１：３である。
【０１７９】
＜重合可能なモノマー＞
ある実施形態において、当該ブロック共重合体の第一、第二および第三のブロックは、重合可能なモノマー由来のモノマー残基を含んでいる。先に述べたように、ブロック共重合体はまた、第一、第二および第三のブロックに加えて１以上の他のブロックを含んでよく、その場合、該少なくとも一つの追加のブロックもまた、重合可能なモノマー由来のモノマー残基を含んでよい。特定の実施形態においては、重合または共重合して親水性ブロック、中間ブロックまたは疎水性ブロックを与える何れかのモノマーには、エチレン系不飽和モノマーが含まれる。更に特定の実施形態において、エチレン系不飽和モノマーには、非限定的な例として、アクリルモノマー、およびビニルモノマー等が含まれる。幾つかの実施形態において、エチレン系不飽和モノマーは、非限定的な例として、任意に置換されたアクリル酸、任意に置換されたアクリルアミド、および任意に置換されたアクリレートから選択されるアクリルモノマーである。ある実施形態において、該エチレン系不飽和モノマーは、非限定的例として、任意にＣ１−Ｃ８アルキル置換されたアクリル酸、任意にＣ１−Ｃ８アルキル置換されたアクリルアミド、および任意にＣ１−Ｃ８アルキル置換されたアクリレートである。
【０１８０】
ある実施形態において、ここに与えられるミセルのブロック共重合体（例えば、膜不安定化ブロック共重合体）は、エチレン系不飽和モノマーを含んでいる。「エチレン系不飽和モノマー」の用語は、ここでは少なくとも一つの二重結合または三重結合を有する化合物として定義される。エチレン系不飽和モノマーの非限定的な例は、アルキル（アルキル）アクリレート、メタクリレート、アクリレート、アルキルアクリルアミド、メタクリルアミド、アクリルアミド、スチレン、アリルアミン、アリルアンモニウム、ジアリルアミン、ジアリルアンモニウム、Ｎ−ビニルホルムアミド、ビニルエーテル、ビニルスルホネート、アクリル酸、スルホベタイン、カルボキシベタイン、ホスホベタイン、または無水マレイン酸である。
【０１８１】
種々の実施形態において、ここに記載したミセルのポリマー（例えば、膜不安定化ブロック共重合体を含む）を与えるのに適した何れかのモノマーが使用される。幾つかの実施形態において、ここに与えられるミセルのポリマー（例えば、膜不安定化ブロック共重合体を含む）の調製に使用するのに適したモノマーには、非限定的な例として、以下のモノマーの１以上が含まれる：メタクリル酸メチル、アクリル酸エチル、メタクリル酸プロピル（全ての異性体）、メタクリル酸ブチル（全ての異性体）、メタクリル酸２−エチルヘキシル、イソメタクリル酸ブチル、メタクリル酸、メタクリル酸ベンジル、メタクリル酸フェニル、メタクリロニトリル、α−メチルスチレン、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸プロピル（全ての異性体）、アクリル酸ブチル（全ての異性体）、アクリル酸２−エチルヘキシル、アクリル酸イソボルニル、アクリル酸、アクリル酸ベンジル、アクリル酸フェニル、アクリロニトリル、スチレン、以下から選ばれるアクリレート類およびスチレン類；メタクリル酸グリシジル、メタクリル酸２−ヒドロキシエチル、メタクリル酸ヒドロキシプロピル（全ての異性体）、メタクリル酸ヒドロキシブチル（全ての異性体）、メタクリル酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル、メタクリル酸Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル、メタクリル酸トリエチルエチレングリコール、無水イタコン酸、イタコン酸、アクリル酸グリシジル、アクリル酸２−ヒドロキシエチル、アクリル酸ヒドロキシプロピル（全ての異性体）、アクリル酸ヒドロキシブチル（全ての異性体）、アクリル酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル、アクリル酸Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル、アクリル酸トリエチルエチレングリコール、メタクリルアミド、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルメタクリルアミド、Ｎ−ｎ−ブチルメタクリルアミド、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−エチロールアクリルアミド、安息香酸ビニル（全ての異性体）、ジエチルアミノスチレン（全ての異性体）、安息香酸α−メチルビニル（全ての異性体）、ジエチルアミノ  α−メチルスチレン（全ての異性体）、ｐ−ビニルベンゼンスルホン酸、ｐ−ビニルベンゼンスルホン酸ナトリウム塩、メタクリル酸トリメトキシシリルプロピル、メタクリル酸トリエトキシシリルプロピル、メタクリル酸トリブトキシシリルプロピル、メタクリル酸ジメトキシメチルシリルプロピル、メタクリル酸ジエトキシメチルシリルプロピル、メタクリル酸ジブトキシメチルシリルプロピル、メタクリル酸ジイソプロポキシメチルシリルプロピル、メタクリル酸ジメトキシシリルプロピル、メタクリル酸ジエトキシシリルプロピル、メタクリル酸ジブトキシシリルプロピル、メタクリル酸ジイソプロポキシシリルプロピル、アクリル酸トリメトキシシシリルプロピル、アクリル酸トリエトキシシリルプロピル、アクリル酸トリブトキシシリルプロピル、アクリル酸ジメトキシメチルシリルプロピル、アクリル酸ジエトキシメチルシリルプロピル、アクリル酸ジブトキシメチルシリルプロピル、アクリル酸ジイソプロポキシメチルシリルプロピル、アクリル酸ジメトキシシリルプロピル、アクリル酸ジエトキシシリルプロピル、���クリル酸ジブトキシシリルプロピル、アクリル酸ジイソプロポキシシリルプロピル、酢酸ビニル、酪酸ビニル、安息香酸ビニル、塩化ビニル、フッ化ビニル、臭化ビニル、無水マレイン酸、Ｎ−アリールマレイミド、Ｎ−フェニルマレイミド、Ｎ−アルキルマレイミド、Ｎ−ブチルマレイミド、Ｎ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルカルバゾール、ブタジエン、イソプレン、クロロプレン、エチレン、プロピレン、１，５−ヘキサジエン、１，４−エキサジエン、１，３−ブタジエン、１，４−ペンタジエン、ビニルアルコール、ビニルアミン、Ｎ−アルキルビニルアミン、アリルアミン、Ｎ−アルキルアリルアミン、ジアリルアミン、Ｎ−アルキルジアリルアミン、アルキレンイミン、アクリル酸類、アルキルアクリレート類、アクリルアミド類、メタクリル酸類、アルキルメタクリレート類、メタクリルアミド類、Ｎ−アルキルアクリルアミド類、Ｎ−アルキルメタクリルアミド類、スチレン、ビニルナフタレン、ビニルピリジン、エチルビニルベンゼン、アミノスチレン、ビニルピリジン、ビニルイミダゾール、ビニルビフェニル、ビニルアニソール、ビニルイミダゾリル、ビニルピリジニル、ビニルポリエチレングリコール、ジメチルアミノメチルスチレン、トリメチルアンモニウムエチルメタクリレート、トリメチルアンモニウムエチルアクリレート、ジメチルアミノプロピルアクリルアミド、トリメチルアンモニウムエチルメタクリレート、トリメチルアンモニウムエチルアクリレート、トリメチルアンモニウムプロピルアクリルアミド、アクリル酸ドデシル、アクリル酸オクタデシルもしくはメタクリル酸オクタデシル・モノマー類、またはそれらの組合せ。
【０１８２】
幾つかの実施形態では、これらモノマー類の官能化されたバージョンが任意に使用される。ここで使用される官能化されたモノマーは、マスクされた、またはマスクされない官能基、例えば、重合の後に他の部分を結び付けることができる基を含むモノマーである。斯かる基の非限定的な例は、一級アミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、およびシアノ基である。幾つかの適切なマスキング基が利用可能である（例えば、T.W. Greene & P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis (2nd edition) J. Wiley & Sons, 1991 . P. J. Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag, 1994参照）。
【０１８３】
ここに記載するポリマーは、何れか適切な方法で調製される。ここで提供されるポリマーを製造するために用いられる適切な合成方法には、非限定的な例として、カチオン重合、アニオン重合、遊離ラジカル重合が含まれる。幾つかの例において、カチオンプロセスが使用されるときは、モノマーは重合を開始するために触媒で処理される。必要に応じ、共重合体を形成するために１以上のモノマーが使用される。幾つかの実施形態において、斯かる触媒は、例えばプロトン酸（ブロンステッド酸）またはルイス酸を含む開始剤であり、ルイス酸を使用する場合には、水またはアルコールのような幾つかのプロモータもまた任意に使用される。幾つかの実施形態においては、非限定的な例として、該触媒はヨウ化水素、過塩素酸、硫酸、リン酸、フッ化水素、塩化スルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、三塩化アルミニウム、塩化アルキルアンモニウム、三フッ化ホウ素複合体、四塩化錫、五塩化アンチモン、塩化亜鉛、四塩化チタン、五塩化リン、オキシ塩化リン、またはオキシ塩化クロムである。ある実施形態において、ポリマー合成はニートで、または何れかの適切な溶媒中で行われる。適切な溶媒には、ペンタン、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）が含まれる。ある実施形態において、ポリマー合成は、例えば約−５０℃〜約１００℃、または約０℃〜約７０℃を含む適切な反応温度で行われる。
【０１８４】
ある実施形態において、ポリマー合成は遊離ラジカルにより調製される。遊離ラジカル重合プロセスが用いられるときは、遊離ラジカル重合プロセスをトリガーするために、（ｉ）モノマー、（ｉｉ）任意にコモノマー、（ｉｉｉ）遊離ラジカルの任意の供給源が与えられる。幾つかの実施形態において、幾つかのモノマーは高温で加熱したときに自己開始できるので、遊離ラジカルの供給源は任意である。ある場合、重合混合物を形成した後に、該混合物を重合状態に置く。重合条件とは、少なくとも一つのモノマーに、ここで述べた少なくとも一つのポリマーを形成させるための条件である。斯かる条件は、何れかの適切なレベルに任意に変化され、非限定的な例としては、温度、圧力、雰囲気、重合混合物中に使用される出発成分の比、および反応時間が含まれる。重合は、例えば溶液重合、分散重合、懸濁重合、エマルジョン重合またはバルク重合を含む何れか適切な方法で行われる。
【０１８５】
幾つかの実施形態において、反応混合物中には開始剤が存在する。ここに記載する重合プロセスにおいて有用であれば、何れかの適切な開始剤が任意に利用される。このような開始剤には、非限定的な例として、アルキルペルオキシド、置換アルキルペルオキシド、アリールペルオキシド、置換アリールペルオキシド、アシルペルオキシド、アルキルヒドロペルオキシド、置換アルキルヒドロペルオキシド、アリールヒドロペルオキシド、置換アリールヒドロペルオキシド、ヘテロアルキルペルオキシド、置換ヘテロアルキルペルオキシド、ヘテロアルキルヒドロペルオキシド、置換ヘテロアルキルヒドロペルオキシド、ヘテロアリールペルオキシド、置換ヘテロアリールペルオキシド、ヘテロアリールヒドロペルオキシド、置換ヘテロアリールヒドロペルオキシド、アルキルパーエステル、置換アルキルパーエステル、アリールパーエステル、置換アリールパーエステル、またはアゾ化合物の１以上が含まれる。特定の実施形態では、ベンゾイルペルオキシド（ＢＰＯ）および／またはＡＩＢＮが開始剤として使用される。
【０１８６】
幾つかの実施形態において、重合プロセスは、限定されるものではないが、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）、ニトロオキシドを介したリビング遊離ラジカル重合（ＮＭＰ）、開環重合（ＲＯＰ）、縮退移動（ＤＴ）、または可逆的付加開裂連鎖移動（ＲＡＦＴ）のような何れか適切な方法において、リビングモードで行われる。従来のおよび／またはリビング／制御された重合方法を使用することにより、限定するものではないが、ブロック共重合体、グラフト共重合体、星状共重合体、およびグラジエント共重合体のような種々のポリマー構造を製造することができ、それによってモノマー単位は統計的に、または鎖に沿って傾斜的に分布し、或いはブロックシーケンスまたはペンダントグラフト中でホモ重合される。他の実施形態において、ポリマーは、キサントゲン酸塩の可逆的付加−開裂連鎖移動（ＭＡＤＩＸ）（“Direct Synthesis of Double Hydrophilic Statistical Di- and Triblock Copolymers Comprised of Acrylamide and Acrylic Acid Units via the MADIX Process"、Daniel Taton、et al.、Macromolecular Rapid Communications、22、No. 18、1497-1503 (2001)）を介した、マクロ分子設計によって合成される。
【０１８７】
ある実施形態においては、可逆的付加−開裂連鎖移動またはＲＡＦＴが、本発明のエチレン骨格のポリマー合成において使用される。ＲＡＦＴはリビング重合プロセスである。ＲＡＦＴは、遊離ラジカル縮退鎖移動プロセスである。幾つかの実施形態において、ここに記載のポリマーを調製するためのＲＡＦＴ法は、限定するものではないが、可逆的鎖移動機構により重合を媒介するために、ジチオエステル、ジチオカルバメート、トリチオカルボネートおよびキサンテートのようなチオカルボニルチオ化合物を用いる。ある場合、ポリマーラジカルと以前の化合物の何れかのＣ＝Ｓ基との反応は、安定化されたラジカル中間体の形成を導く。典型的には、これら安定化されたラジカル中間体は、標準的なラジカル重合に典型的な停止反応を受けずに、むしろ、モノマーと共に再開始もしくは伝播をすることができるラジカルを再導入し、Ｃ＝Ｓ結合を再形成する。殆どの場合、このＣ＝Ｓ結合への付加および得られたラジカルのその後の分裂のサイクルは、全てのモノマーが消費されてしまうまで、または反応がクエンチされるまで継続される。一般に、低濃度の活性ラジカルは、如何なる特定のときにも正常な停止反応を制限する。
【０１８８】
幾つかの実施形態において、ここに与えられるミセルにおいて利用されるポリマー（例えば、膜不安定化ブロック共重合体）は、低い多分散指数（ＰＤＩ）または鎖長差を有している。多分散指数（ＰＤＩ）は、何れか適切な方法で、例えばポリマー鎖の重量平均分子量をそれらの数平均分子量で除算することにより決定することができる。数平均分子量は、鎖の数で除算された個々の鎖分子量の合計である。重量平均分子量は、その分子量の分子の数で除算した該分子量の二乗に比例する。重量平均分子量は常に数平均分子量よりも大きいから、多分散性は常に１以上である。これらの数が接近して同一に近くなるとき、即ち、多分散性が１の値に近づくときに、該ポリマーは、全ての鎖が正確に同じ数の構成単位を有している単分散に近くなる。１に近づく多分散値は、ラジカルリビング重合を使用して達成可能である。限定するものではないが、サイズ排除クロマトグラフィー、動的光散乱、マトリックス支援レーザ脱離／イオン化クロマトグラフィー、および電子スプレー質量クロマトグラフィーのような、多分散性を決定する方法が、当該技術において周知である。幾つかの実施形態において、ここに与えられるミセルのブロック共重合体（例えば、膜不安定化ブロック共重合体）は、２．０未満、または１．８未満、または１．６未満、または１．５未満、または１．４未満、または１．３未満、または１．２未満の多分散指数（ＰＤＩ）を有している。
【０１８９】
ここに記載する重合プロセスは、任意に、何れか適切な溶媒またはそれらの混合物中で生じる。適切な溶媒には、水、アルコール（例えばメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ブタノール）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトン、アセトニトリル、ヘキサメチルホスホラミド、酢酸、蟻酸、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、ジオキサン、塩化メチレン、エーテル（例えば、ジエチルエーテル）、クロロホルム、および酢酸エチルが含まれる。一つの側面において、該溶媒には、水、および水とＤＭＦのような水混和性有機溶媒との混合物が含まれる。
【０１９０】
ある実施形態において、ここで使用されるポリ（ＤＭＡＥＭＡ）および他のポリマー（例えば、ＢＭＡ、ＤＭＡＥＭＡおよびＰＡＡの共重合体または共重合体ブロック）は、何れかの適切な方法で調製される。一つの実施形態において、ポリ（ＤＭＡＥＭＡ／ＰＥＧＭＡ）は、ＲＡＦＴ・ＣＴＡ、ＥＣＴ、およびラジカル開始剤の存在下に、ＤＭＡＥＭＡおよびＰＥＧＭＡを共重合させることによって調製される。幾つかの実施形態において、ブロックポリ（ＤＭＡＥＭＡ／ＰＥＧＭＡ）マクロＣＴＡが使用されて、疎水性ブロックがＢＭＡ、ＤＭＡＥＭＡおよびＰＡＡを含む、一連のトリブロックまたは他のマルチブロック共重合体が調製される。他の特定の実施形態において、トリブロックまたは他のマルチブロックポリマー上でのブロックの向きは、自己集合の際にポリマーのω末端が当該ミセルの親水性切片上で露出するように、反転される。種々の実施形態において、これは、多くの方法を含む何れか適切な方法で合成的に達成される。例えば、幾つかの実施形態において、ここに記載のブロック共重合体の合成は、ＰＡＡ／ＢＭＡ／ＤＭＡＥＭＡコアを形成する疎水性ブロックの調製で始まり、得られたシェルを形成する親水性の帯電ブロックは、ＰＡＡ／ＢＭＡ／ＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡに第二のＲＡＦＴ重合工程を受けさせることにより、第二の合成ステップに加えられる。別のアプローチは、ＰＡＡ／ＢＭＡ／ＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡを還元してチオール末端を形成し、次いで、予め形成された親水性の帯電ポリマーを該形成されたチオールに共有結合で結び付けることを含んでいる。この合成的アプローチは、ミセルの表面に露出されたポリマー鎖のω末端上に反応基を導入するための方法を提供し、従って、ミセルに対する化学的接合のための別のアプローチを提供する。
【０１９１】
幾つかの実施形態において、ブロック共重合体は、別の重合プロセスにより調製される幾つかのポリマーブロックの化学的接合によって合成される。
【０１９２】
ある実施形態において、エチレン系不飽和モノマーは、非限定的例として下記から選択される：
【化２５】
0005766611.tif 000026
【０１９３】
ここで、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、または任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ４は、−ＳＲ５、−ＯＲ５、−ＮＲ６Ｒ７であるか、または
Ｒ４は、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、シリルアルキル、シリルアリール、−ＮＲ９Ｒ１０、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ９、−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ９、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ９、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ９Ｒ１０、開裂可能な基または官能化可能な基で任意に置換された、Ｃ１−Ｃ４０アルキルまたはＣ１−Ｃ４０ポリオキシ化アルキルであり；
Ｒ５は、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、シリルアルキル、シリルアリール、−ＮＲ９Ｒ１０、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ９、−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ９、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ９、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ９Ｒ１０、開裂可能な基または官能化可能な基で任意に置換された、Ｃ１−Ｃ４０アルキル、Ｃ１−Ｃ４０ポリオキシ化アルキル、Ｃ１−Ｃ４０アルケニル、Ｃ１−Ｃ４０アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ６およびＲ７は、各々独立に、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、シリルアルキル、シリルアリール、−ＮＲ９Ｒ１０、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ９、−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ９、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ９、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ９Ｒ１０、開裂可能な基または官能化可能な基で任意に置換された、水素、Ｃ１−Ｃ４０アルキル、Ｃ１−Ｃ４０ポリオキシ化アルキル、Ｃ１−Ｃ４０アルケニル、Ｃ１−Ｃ４０アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであるか；または
Ｒ６およびＲ７は、それらが結び付けられている窒素と一緒になって任意に置換されたヘテロ環を形成し；
Ｒ９およびＲ１０は、各々独立に、水素、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリールであるか；または
Ｒ９およびＲ１０は、それらが結び付けられている窒素と一緒になってヘテロ環を形成する。
【０１９４】
＜トリブロック共重合体＞
ある実施形態において、ここに提供されるのは式Ｉにより表されるトリブロック共重合体である：
［Ａ１ｘ−Ａ２ｙ］Ｍｎ−［Ａ’１ｘ−Ａ’２ｙ］Ｍｎ−［Ｂ１ｘ−Ｂ２ｙ−Ｂ３ｚ］Ｍｎ    （Ｉ）
ある実施形態において、［Ａ１−Ａ２］は、モノマー残基Ａ１およびＡ２で構成される第一のブロック共重合体であり、ここでのＡ１は親水性モノマー残基であり、［Ａ１−Ａ２］は全体的に親水性である。幾つかの実施形態において、［Ａ’１−Ａ’２］は、モノマー残基Ａ’１およびＡ’２で構成される第二のブロック共重合体である。ある実施形態において、［Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３］は、モノマーＢ１、Ｂ２、Ｂ３で構成される第三のブロック共重合体である。ｘ、ｙ、ｚは、個々のモノマーのモル％でポリマー組成を定義している。Ｍｎは、各々のポリマーブロックの分子量である。
【０１９５】
他の実施形態において、このトリブロック共重合体は以下のトリブロックから選択される：
［ＰＥＧＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  （１−１）
［ＤＭＡＥＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  （１−２）
［ＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−３）
［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  （１−４）
［ＮＡｃＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−５）
［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  （１−６）
［ＧａＩ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−７）
［ＮＡｃＧａＩ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−８）
［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−９）
［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１０）
［ＧａＩ−Ｄ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１１）
［ＮＡｃＧａＩ−Ｄ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１２）
［ＧａＩ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１３）
［ＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１４）
［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１５）
［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１６）
［ＧａＩ−Ｄ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１７）
［ＧａＩ−Ｄ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１８）
［ＮＡｃＧａＩ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−１９）
［ＮＡｃＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（Ｉ−２０）
［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（１−２１  ）
［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（Ｉ−２２）
［ＮＡｃＧａＩ−Ｄ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（Ｉ−２３）
［ＮＡｃＧａＩ−Ｄ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（Ｉ−２４）
［ＰＡＡ−ＢＡ］−  ［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［フォレート］  
（Ｉ−２５）
［ＰＡＡ−ＢＡ］−  ［ＨＰＭＡ−ＭＡＡ−ＰＤＳＭＡ］−［フォレート］  （１−２６）
フォレート［ＰＥＧ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｄ−Ｂ−Ｐ］  
（１−２７）
フォレート［ＰＥＧ］−［ＨＰＭＡ−ＭＡＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｄ−Ｂ−Ｐ］  （１−２８）
ここで、
Ｂは、メタクリル酸ブチルのモノマー残基であり；Ｐはアクリル酸プロピルのモノマー残基であり；ＤはＤＭＡＥＭＡ（メタクリル酸ジメチルアミノエチル）のモノマー残基であり；ＰＥＧＭＡはメタクリル酸ポリエチレングリコールのモノマー残基であり、ここで、例えばｗ＝４〜５または７〜８のエチレンオキシド単位であり、ＨＰＭＡはＮ−（２−プロピル）メタクリルアミドまたはＮ−メタクリル酸プロピル（全異性体を含む）のモノマー残基であり、ＰＡは一級アミノ基含有モノマー残基であり、ＮＡｃＧａＩはＮ−アセチルガラクトースＰＥＧ−ビニルモノマー由来のモノマー残基であり、ＧａＩはガラクトースＰＥＧ−ビニルモノマー由来のモノマー残基であり、ＰＤＳＭＡはメタクリル酸２−（２−ピリジニルジスルファニル）エチルまたは２−（２−ピリジニルジスルファニル）エチルメタクリルアミド由来のモノマー残基であり、またＭＡＡ（ＮＨＳ）はメチルアクリル酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル由来のモノマー残基である。フォレートは、ＣＴＡの中に組込まれたモノマー残基のペンダント基に接合されることができ、またはポリマーのω末端基の還元に由来するチオールに接合されることができる葉酸残基である。
加えて、ＨＰＭＡ−Ｅ（２−ヒドロキシメタクリル酸プロピルまたはそれに由来するモノマー残基）は、ＨＰＭＡが出現する先の例の各々、即ち、Ｉ−３〜Ｉ−５、Ｉ−１４、Ｉ−１６、Ｉ−１８、Ｉ−２０、Ｉ−２２、およびＩ−２４〜Ｉ−２８において、ＨＰＭＡを置き換えてよいことが理解されるべきである；簡潔化するために、このような追加の構造は、繰り返すことはしないが、この開示の一部と看做されるべきである。
【０１９６】
ある実施形態において、ミセルは、本明細書の何処かで記載した親水性ブロック、キャリアブロック、および疎水性ブロックを含む複数のポリマーで形成される。ある実施形態において、ここに記載したミセルは複数のブロック共重合体を含んでなり、該ミセルはコアおよびシェルを含んでいる。特定の実施形態において、ミセルのコアは複数のブロック共重合体の疎水性ブロックを含んでなり、またシェルは該ブロック共重合体の親水性ブロックを含んでなる。更に、特定の実施形態において、シェルは内側層および外側層（相互に対して；更なる層もまた可能である）を含んでおり、親水性の第一のブロックがミセルシェルの外側層を形成し、また第二の親水性ブロックがミセルシェルの内側層を形成する。
【０１９７】
ある実施形態において、親水性の第一のブロックは、表面（または少なくとも、親水性もしくは治療剤が結合した第二のブロックに対してミセルの表面のより近傍）にある。ある実施形態において、親水性の第一のブロックは、ミセルの内側部分（例えば、親水性および／または治療剤が結合した第二のブロック、または第二のブロックと結合したポリヌクレオチドのような治療剤により形成されるミセルの層）を遮蔽する（例えば立体的および／または静的な相互作用を介して）。
【０１９８】
特定の実施形態においては、ここに記載した何れか１以上の複数のポリマーが結合してミセルを構築する。特定の実施形態において、斯かるミセルは約中性のｐＨにおいて安定である（例えば、約ｐＨ７．４の水性媒質中で安定である）。
【０１９９】
幾つかの実施形態において、ここに記載したミセルは、何れかの数のここに記載のポリマー、例えば、ミセル当たり約１０〜約１００個のここに記載の共重合体、またはミセル当たり約２０〜約６０個のここに記載の共重合体を含んでいる。
【０２００】
一つの実施形態において、ここに記載のミセル（ポリヌクレオチドのような結合した治療剤を伴わない）は、±６ｍＶ（ミリボルト）のゼータ電位を有している。一つの好ましい実施形態では、ここに記載のミセル（ポリヌクレオチドのような結合した治療剤を伴わない）は、±５ｍＶのゼータ電位を有している。一つの好ましい実施形態では、ここに記載のミセル（ポリヌクレオチドのような結合した治療剤を伴わない）は、±２ｍＶのゼータ電位を有している。
【０２０１】
ある実施形態において、ここに記載のミセルは約０．２μｇ／ｍＬ〜約２０μｇ／ｍＬに亘る臨界ミセル濃度ＣＭＣを有している。特定の実施形態において、該ミセルは約０．５μｇ／ｍＬ〜約１０μｇ／ｍＬに亘る臨界ミセル濃度ＣＭＣを有している。ある実施形態において、ここに記載のミセルは、ここに記載の複数のブロック共重合体を含んでおり、該ここに記載の複数のブロック共重合体は約１．０〜約１．７、または約１．０〜約１．４の多分散指数（ＰＤＩ）を有している。幾つかの実施形態において、ミセルはここに記載の複数の共重合体を含んでなり、ここで該ブロック共重合体の第一のブロック、第二のブロックおよび第三のブロックは１．５以下の多分散指数を有する。
【０２０２】
ある実施形態において、ここに記載のミセルは、ここに記載したように複数の共重合体を含んでおり、ここでは複数の共重合体の少なくとも１以上が第二のポリマーに共有結合で架橋され、それによってポリマーミセルはポリマーミセルに架橋される。特定の実施形態では、第二のポリマーもまた、ここに記載の共重合体である。幾つかの実施形態において、該ブロック共重合体は、第二のポリマーの疎水性ブロックに共有結合で架橋される。特定の実施形態において、ここに記載の二つの共重合体の疎水性ブロックは相互に架橋される。ある実施形態において、ブロック共重合体は、エチレン性モノマーの制御されたラジカル重合に由来する複数のモノマー残基を含んでおり、斯かるモノマーの少なくとも一つは二官能の架橋性モノマーである。
【０２０３】
幾つかの実施形態において、ここに与えられるミセルは次の１以上によって特徴付けられる：（１）該ミセルはブロック共重合体の自発的な自己結合によって形成されて、水混和性溶媒（限定されるものではないが、例えばエタノール）から水性溶媒（例えばリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）へと希釈したときに、組織された結合体（例えばミセル）を形成する；（２）該ミセルは希釈に対して安定である（例えば、臨界安定濃度または臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を構成する１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、または１μｇ／ｍＬのポリマー濃度まで）；（３）該ミセルは周囲媒質の高いイオン強度に対して安定である；および／または（４）該ミセルは有機溶媒の濃度が増大すると共に増大する不安定性を有しており、斯かる有機溶媒にはメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびジオキサンが含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセルは、少なくとも二つの上記性質を有することを特徴とする。幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセルは、少なくとも三つの上記性質を有することを特徴とする。幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセルは、全ての上記性質を有することを特徴とする。
【０２０４】
幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセルは、何れか適切な濃度において自己集合する。ある実施形態において、ここに提供されるミセルは自己集合する（例えば、約２μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ、約８μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約２０μｇ／ｍＬ、約２５μｇ／ｍＬ、約３０μｇ／ｍＬ、約４０μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ、約６０μｇ／ｍＬ、約７０μｇ／ｍＬ、約８０μｇ／ｍＬ、約９０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ、またはそれ以上の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）、またはミセルが形成される最小濃度を有する）。ある実施形態において、ここに提供されるミセルは、約１μｇ／ｍＬ〜約１００μｇ／ｍＬの間の少なくとも一つの濃度において自己集合する。
【０２０５】
幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセルは、ここに記載したポリマーの自発的な自己集合により調製される。ある実施形態において、ここに記載したポリマーは、水混和性有機溶媒中のポリマーの溶液を水性媒質中に希釈したときに結合し、ここに提供されるミセルを形成する。幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセルは、ポリマーを水性媒質中に直接溶解させたときに自発的に形成される。幾つかの実施形態において、該ミセルは、ミセル形成のためにはポリヌクレオチドの存在を必要としない。
【０２０６】
幾つかの実施形態において、ミセルは水性溶液中での希釈に対して安定である。特定の実施形態において、該ミセルは生理学的ｐＨ（ヒトでの循環する血液のｐＨを含む）における臨界安定濃度（例えば、約５０〜約１００μｇ／ｍＬ、または約１０〜約５０μｇ／ｍＬ、または１０μｇ／ｍＬ未満の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ））での希釈に対して安定である。ここで使用するとき、「ミセルの不安定化」とは、ミセルを形成するポリマー鎖が少なくとも部分的に脱凝集し、構造的に変化し（例えばサイズが拡大および／または形状が変化する）、および／またはアモルファスの超分子構造（例えば非ミセルの超分子構造）を形成し得ることを意味する。
【０２０７】
幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセルは水性媒質中で安定である。ある実施形態において、ここに提供されるミセルは選択されたｐＨ、例えば概ね生理学的ｐＨ（例えば、循環するヒト血漿のｐＨ）の水性媒質中において安定である。特定の実施形態において、ここに提供されるミセルは、水性媒質中において、概ね中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）で安定である。特定の実施形態において、該水性媒質は、動物（例えばヒト）の血清または動物（例えばヒト）の血漿である。ある実施形態において、ここに提供されるミセルは、ヒト血清および／またはヒト血漿中において安定である。特定の実施形態において、該ミセルは循環するヒト血漿中において安定である。該ミセルの安定性は、指定されたｐＨに限定されず、それは最低でも指定されたｐＨを含むｐＨ値において安定であると理解される。特定の実施形態において、ここに記載されるミセルは、約中性のｐＨでよりも、酸性のｐＨにおいて実質的に安定性が低い。更に特定の実施形態において、ここに記載のミセルは、約７．４のｐＨでよりも、約５．８のｐＨにおいて実質的に安定性が低い。
【０２０８】
特定の実施形態において、該ミセルは、約１０μｇ／ｍＬまたはそれ以上の濃度において安定である（例えば約中性のｐＨで）。幾つかの実施形態において、該ミセルは、約１００μｇ／ｍＬまたはそれ以上の濃度において安定である（例えば約中性のｐＨで）。
【０２０９】
一つの実施形態において、該ミセルは、本発明のブロック共重合体および少なくとも一つの組成的に異なる追加のポリマーを含んでなる不均一なポリマーミセルである。他の組成的に異なるポリマーには、例えば、親水性ブロックおよび疎水性ブロックを含んでなる他のブロック共重合体が含まれる。有利には、他のブロック共重合体の疎水性ブロックは、本発明の共重合体の疎水性ブロックと疎水性相互作用により結合して、疎水性コアを形成することができる。好ましくは、該不均一なミセルは、生理学的に関連するｐＨ（例えばｐＨ７．４）において水性媒質中で安定である。幾つかの実施形態において、該不均一なポリマーミセルは、１以上の組成的に異なる追加のポリマー、例えば、第一のポリマーおよび第二のポリマーの各々とは組成的に異なる第三のポリマーを含んでいる。一般に、ブロック共重合体（例えば、第一のポリマーおよび／または第二のポリマー）の各ブロックは、ホモポリマーまたはランダム共重合体であることができ、その各々の場合に線型または非線型（例えば分岐した）であり、また各々の場合に架橋型または非架橋型であり、また一般に、重合可能なモノマーの重合（例えば、制御されたリビングラジカル重合のアプローチを用いる）に由来する１以上のモノマー残基を含んでいる。
【０２１０】
＜ターゲッティング＞
ある実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセルは、少なくとも一つのターゲッティング部分（例えば、特定の細胞または細胞型を標的にする部分）を含んでいる。特定の場合に、ここに提供されるポリマーおよびミセルは、固体の特異的な標的細胞に治療剤を送達するために有用である。ある場合に、ポリマーまたはミセルの細胞摂取効率は、ターゲッティング部分をポリマーまたはミセルに、またはミセルの表面に組込むことによって向上する。「ターゲッティング部分」（「ターゲッティング剤」と互換的に使用される）は、細胞の表面（例えば選択された細胞）を認識する。幾つかの実施形態において、ターゲッティング部分は細胞表面抗原を認識し、または標的細胞の表面にある受容体に結合する。ある他の実施形態において、ここに記載するポリマーまたはミセルは、複数のターゲッティング部分を持ったモノマー単位に加えて、複数の第二のモノマー単位を含んでおり、ここでの第二のモノマー単位は、多価受容体または標的への結合を最大化するように空間的に配置された一群のターゲッティング部分を与えるためのスペーサ単位として働く。適切なターゲッティング部分には、非限定的な例として、抗体、抗体様分子、またはペプチド、例えばＲＧＤ含有ペプチドのようなインテグリン結合ペプチド、または小分子、例えば葉酸のようなビタミン、ラクトース、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミンのような糖、または他の小分子が含まれる。細胞表面抗原には、タンパク質、糖、脂質または細胞表面上の他の抗原のような、細胞表面分子が含まれる。特定の実施形態において、細胞表面抗原は内部移行を受ける。該ミセルのターゲッティング部分による標的とされる細胞表面抗原の例は、限定されるものではないが、トランスフェリン受容体１型および２型、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、インテグリン、ＮＧＦ、ＣＤ２，ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４３、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ６９、およびアシアロ糖タンパク質受容体が含まれる。
【０２１１】
ターゲッティング部分（スペーサ単位を伴い、または伴わない）は、種々の実施形態において、ミセルのポリマー（例えばブロック共重合体）の何れかの末端に、もしくはモノマー単位の側鎖に結び付けられ、またはポリマーブロックの中に組込まれる。ポリマーへのターゲッティング部分の結び付きは何れかの適切な方法で、例えば、限定されるものではないがアミン−カルボキシルリンカー、アミン−スルフヒドリルリンカー、アミン−炭水化物リンカー、アミン−ヒドロキシルリンカー、アミン−アミンリンカー、カルボキシル−スルフヒドリルリンカー、カルボキシル−炭水化物リンカー、カルボキシル−ヒドロキシルリンカー、カルボキシル−カルボキシルリンカー、スルフヒドリル−炭水化物リンカー、スルフヒドリル−ヒドロキシルリンカー、スルフヒドリル−スルフヒドリルリンカー、炭水化物−ヒドロキシルリンカー、炭水化物−炭水化物リンカー、およびヒドロキシル−ヒドロキシルリンカーを含む多くの接合化学アプローチの何れか一つによって達成される。特定の実施形態においては、ここに提供されるミセルを形成するブロック共重合体にターゲッティングリガンドを結び付けるために、「クリック」化学が使用される（「クリック」反応の例については、Wu, P.; Fokin, V. V. Catalytic Azide-Alkyne cycloaddition: Reactivity and Applications. Aldrichim. Acta 2007, 40, 7-17参照）。極めて多様な接合化学が任意に利用される（例えば、Bioconjugation, Aslam and Dent, Eds, Macmillan, 1998 and chapters therein, and Hermanson, GT. (2008). Bioconjugate Techniques: 2nd Edition. New York: Academic Press,参照）。幾つかの実施形態では、該リンカーは生理学的に不安定であるか、または生理学的に不安定な結合を含んでいる。
【０２１２】
幾つかの実施形態においては、ターゲッティングリガンドがモノマーに結び付けられ、得られた化合物は、次いで、ここに記載のミセル中で利用されるここに記載のポリマー（例えばブロック共重合体）の重合合成に使用される。ある実施形態において、斯かるターゲッティングリガンドを持ったモノマーはビニルモノマーである。幾つかの例において、斯かるターゲッティングリガンドを持ったモノマーは、以下の式ＶＩＩを有する：
【化２６】
0005766611.tif 000027
【０２１３】
ある実施形態において：
Ｘは、共有結合、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、二価のＣ５−Ｃ１０アリール、および二価のＣ２−Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合であるか、または任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０アルキル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０ヘテロアルキル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０アルケニル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０アルキニル、任意に置換された二価のＣ３−Ｃ２０シクロアルキル、任意に置換された二価のＣ１−Ｃ２０シクロヘテロアルキル、任意に置換された二価のＣ５−Ｃ１０アリール、または任意に置換された二価のＣ３−Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択される連結基であり、
Ｒ３は、水素および任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択され、
Ｑは、糖残基、ペプチド、ビタミン、または細胞表面受容体もしくは抗原に対する親和性を有する小分子（１．５ｋＤａ未満のＭＷ）からなる群から選択される。
【０２１４】
幾つかの実施形態において、ターゲッティング部分は、混合されたミセル中における第一のブロック共重合体のブロックまたは第二のブロック共重合体のブロックに結び付けられる。幾つかの実施形態において、ターゲッティングリガンドは、ポリマーまたはミセルのポリマーに結合されたｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖に結び付けられる。ある実施形態において、ターゲッティング剤は、センス鎖またはアンチセンス鎖の５’末端または３’末端に結び付けられる。
【０２１５】
ある実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセルは、該ポリマーのα末端に少なくとも一つのターゲッティング部分を含んでいる。ある実施形態において、ターゲッティング基は、ターゲッティング基を組み込むＣＴＡ（連鎖移動剤）の構築によって、ポリマーのα末端に含めることができる。ある他の実施形態において、組込まれたターゲッティング基は、リンカー基、例えばポリエチレングリコールを介して、ＣＴＡの反応中心から離間して連結される。ある他の実施形態において、葉酸基を含んでなるＣＴＡが、ここに記載のポリマーを調製するためにＲＡＦＴ・ＣＴＡとして使用される。或いは、ターゲッティング基は、ターゲッティング基を保持する部分を備えたマクロＣＴＡ上の化学基の修飾によって、例えば、限定するものではないが、マクロＣＴＡ上のカルボン酸とターゲッティング基を保持するアルコールとの反応によって、ポリマーのα末端に含めることができる。
【０２１６】
ある実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセルは、当該ポリマーのω末端に、少なくとも一つのターゲッティング部分を含んでいる。ある実施形態において、ターゲッティング基は、追加のポリマーブロックの合成により、ポリマーのω末端に含めることができ、該追加のブロックは、ターゲッティング基を保持するビニルモノマーを用いて重合される。ある他の実施形態において、ターゲッティング基は追加のポリマーブロックの合成によってポリマーのω末端に含めることができ、該追加のブロックはターゲッティング基を結び付けるためのビニルモノマーと共に重合される。ある他の実施形態においては、ターゲッティング基は、追加のポリマーブロックの合成によって当該ポリマーのω末端に含めることができ、該追加のブロックはターゲッティング基を保持するビニルモノマーと共に重合される。ある他の実施形態において、重合はマレイミドモノマーの添加によって停止され、ここでのマレイミドモノマーはターゲッティング基を組込んでいる。ある他の実施形態において、重合はマレイミドモノマーの添加によって停止され、ここでのマレイミドモノマーは、例えばヘンリー等（End-Functionalized Polymers and Junction-Functionalized Diblock Copolymers Via RAFT Chain Extension with Maleimido Monomers. Scott M. Henry, Anthony J, Convertine, Danielle S. W. Benoit. Allan S. Hoffman and Patrick S. Stayton. Bioconjugate Chem., 2009, 20 (6), pp 1 122-1 128）によって記載されたような、ターゲッティング基を結び付けるための官能基を組込んでいる。更に他の実施形態において、ターゲッティング基は、マクロＣＴＡ上のＺ基の合成的修飾、例えば、トリチオカルボニル基のチオール基への還元と、それに続くポリマー上のチオールに対するターゲッティング基の接合により、当該ポリマーのω末端に含めることができる。
【０２１７】
ある実施形態において、ここに記載のミセルまたはポリマーは、選択された細胞のために当該ポリマー、ミセルまたは治療剤をターゲッティングするための機構を含んでいる。幾つかの実施形態において、ポリマー、ミセル、または治療剤のターゲッティングは、ターゲッティング部分を含んでなるここに記載の共重合体、または斯かる共重合体を含んでなるミセルを提供することによって達成される。幾つかの実施形態にいて、該ターゲッティング部分は、エンドサイトーシスを媒介するために効果的な１以上の受容体についての親和性を有するリガンドである。特定の実施形態において、ターゲッティング部分は前記第一のブロックに共有結合される。
【０２１８】
＜膜不安定化＞
幾つかの実施形態において、ここに記載するポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）は、約６．５以下のｐＨにおいて、好ましくは約５．０〜約６．５のｐＨにおいて、または約６．２以下のｐＨにおいて、好ましくは約５．０〜約６．２のｐＨにおいて、または約６．０以下のｐＨにおいて、好ましくは約５．０〜約６．０のｐＨにおいて、膜不安定化性である。例えば、一つの実施形態において、該ポリマーまたはミセルは約６．２以下、または約６．５以下、または約６．８以下、または約７．０以下のｐＨにおいて、膜不安定化性である。ある実施形態において、膜不安定化は、例えば細胞外膜、細胞内膜、小胞、オルガネラ、エンドソーム、リポソーム、または赤血球のような、何れかの細胞膜についてのものである。幾つかの実施形態において、ここに提供される膜不安定化ポリマー（例えば共重合体）または膜不安定化ブロック共重合体は、エンドソームｐＨにおいて膜不安定化性である（例えば水性媒質中において）。
【０２１９】
幾つかの実施形態において、ここに記載するポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）は、約６．２以下、約６．５以下、約６．８以下、または約７．０以下のｐＨにおいて溶血性である。更なる実施形態または別の実施形態において、該ポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）は、約７．０を超えるｐＨにおいて実質的に非溶血性である。特定の実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）は、所定の濃度および約６．２のｐＨにおいて溶血性であり、また同じ濃度および約７．０を超えるｐＨにおいて実質的に非溶解性である。更に特定の実施形態において、この濃度は２〜１８μｇ／ｍＬであり、その場合に、ｐＨ５．８では５０〜１００％の溶血が存在し、またｐＨ７．４では溶血は少ししか存在せず、または有意な溶解は存在しない。ある実施形態において、ここに記載するポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）の溶血性は、何れかの適切な方法で、例えばインビトロ溶血試験のような何れかの標準溶血試験を使用することによって決定される。
【０２２０】
ある実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）は、エンドソーム崩壊的である。幾つかの実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）は、約６．２以下、約６．５以下、約６．８以下、約７．０以下のｐＨにおいてエンドソーム崩壊的である。ある実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）のエンドソーム崩壊的性質は、何れか適切な方法で、例えば、インビトロエンドソーム溶解試験またはインビボ非ヒト哺乳動物エンドソーム溶解試験を使用することにより決定される。
【０２２１】
＜治療剤＞
ある実施形態では、ここに記載のポリマーまたはミセル（ポリマーサブユニットのようなその部分を含む）が治療剤と組合されて提供される。特定の実施形態において、治療剤はポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）またはペプチドである。治療剤は、ワクチンとして予防的に、または医学的状態を治療するために使用されてよい。幾つかの実施形態において、治療剤はここに記載した共重合体の中間体または第二のブロックとイオン的に結合し、および／またはバイオ接合する。
【０２２２】
種々の実施形態において、研究試薬、診断試薬、および／または治療剤は、何れか適切な方法で、ブロック共重合体または該ブロック共重合体を含有するミセルに結び付けられる。特定の実施形態において、結び付きは、共有結合、非共有結合的相互作用、静電的相互作用、疎水性相互作用、その他の類似法、またはそれらの組合せによって達成される。幾つかの実施形態において、研究試薬、診断試薬、および／または治療剤は、ブロック共重合体の中間もしくは第二のブロック、またはそのミセルに結び付けられる。ある実施形態において、研究試薬、診断試薬または治療剤はブロック共重合体の中間ブロックもしくは第二のブロック、またはそのミセルを形成する。幾つかの実施形態において、研究試薬、診断試薬もしくは治療剤は、ミセルのシェルの中にある。
【０２２３】
幾つかの実施形態において、ここでは、ミセルのシェル中の第一の治療剤およびミセルのコア中の第二の治療剤を含んでなるミセルが提供される。特定の実施形態において、第一の治療剤はポリヌクレオチドである。また、第二の治療剤は疎水性薬物である。ある実施形態において、ここに提供されるのは、ミセルのコアの中に疎水性薬物（例えば、小分子疎水性薬物）を含んでなるミセルである。
【０２２４】
ある実施形態において、ここに提供されるのは、治療剤が結び付けられた少なくとも１〜５、５〜２５０、５〜１０００、２５０〜１０００、少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、または少なくとも５０のポリマーを含んでなるミセルである。幾つかの実施形態において、ここに提供されるのは、ここに記載した複数のミセルを含んでなる組成物であり、ここでのミセルは、平均で少なくとも１〜５、５〜２５０、５〜１０００、２５０〜１０００、少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、または少なくとも５０の、治療剤が結び付けられたポリマーを含んでいる。
【０２２５】
幾つかの実施形態において、治療剤、診断試薬等は、非限定的な例として、少なくとも一つのヌクレオチド（例えばポリヌクレオチド）、少なくとも一つの炭水化物、または少なくとも一つのアミノ酸（例えばペプチド）から選択される。特定の実施形態において、治療剤はポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、遺伝子発現モジュレータ、ノックダウン剤、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤、ダイサー基質、ｉｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはアプタマーである。他の特定の実施形態において、治療剤はａｉＲＮＡ（Asymmetric RNA duplexes mediate RNA interference in mammalian cells. Xiangao Sun、Harry A Rogoff 、Chiang J Li Nature Biotechnology 26、1379 - 1382 (2008)）である。ある実施形態において、治療剤はタンパク質、ペプチド、酵素、抗体、または抗体断片である。幾つかの実施形態において、治療剤は炭水化物、または約５００ダルトンよりも大きい分子量を持った小分子である。
【０２２６】
幾つかの実施形態において、ここに記載のポリマーまたはミセルと結合したポリヌクレオチドは、オリゴヌクレオチド遺伝子発現モジュレータである。ある実施形態において、前記ポリヌクレオチドはオリゴヌクレオチドアプタマーである。幾つかの実施形態において、前記ポリヌクレオチドはオリゴヌクレオチドノックダウン剤である。幾つかの実施形態において、前記ポリヌクレオチドはｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ａｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択されるオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、前記ポリヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。
【０２２７】
幾つかの実施形態において、治療剤（例えばオリゴヌクレオチド）は、少なくとも一つの負の電荷を含んでおり（例えば負に帯電した骨格を含んでいる）、またポリマーの中間物もしくは第二のブロックと結合している（例えば、ミセル中において）。特定の実施形態において、中間物もしくは第二のブロックは、ポリマーまたは該ポリマーを含むミセルに結び付けられ、またはその中に存在する１以上の治療剤（例えばオリゴヌクレオチド）の中に存在する負電荷を少なくとも部分的に中和する。ある実施形態において、１以上の治療剤（例えば１以上のオリゴヌクレオチド、１以上のｓｉＲＮＡ、またはそれらの組合せ）は、ミセルの多価カチオン性の中間物もしくは第二のブロックと結合体（例えば複合体）を形成する。幾つかの実施形態において、ポリマーもしくはミセルと治療剤（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）との間の結合体（例えば複合体）は、ブロック共重合体の治療剤（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）に対する何れか望ましい電荷比率、例えば１：１〜１６：１で形成される。特定の実施形態において、ミセルとｓｉＲＮＡの間の複合体は、２：１、４：１または８：１の電荷比率で形成される。換言すれば、幾つかの実施形態において、ここに記載の中間ブロックにより形成されるミセルの中間層に存在するカチオン電荷の数の、治療剤に存在するアニオン電荷の数に対する比率は、何れかの望ましい値、例えば、約１：１〜約１６：１、約２：１〜約８：１、約４：１〜約１２：１、約２：１、約４：１、または約８：１である。幾つかの実施形態において、ｓｉＲＮＡは、ミセルを形成するブロック共重合体の多価カチオン性中間ブロックによって電荷を中和される。例えば、幾つかの特定の実施形態において、生理学的ｐＨにおいて４０の負電荷を含んでいる２０塩基対のポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）は、ｐＫａが約７．４のポリＤＭＡＥＭＡ中間物もしくは第二のブロック（長さが８０モノマー単位、ＭＷ＝１１，６８０）と結合（例えば複合体形成）される。このｐＨにおいて、ポリＤＭＡＥＭＡは４０の負電荷を含んでおり、それによって、電荷が実質的に正味で中性のポリヌクレオチド−中間体ブロック結合体（例えば複合体）を形成する。ある場合に、極めて多数の過剰な正電荷を回避することは、インビトロおよびインビボでの毒性の低減を補助する。幾つかの実施形態において、治療剤（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）は、ここに提供されるミセルの正に帯電したシェルと自発的に結合する。
【０２２８】
幾つかの実施形態においては、治療剤（例えばオリゴヌクレオチド）は、何れかの適切な化学的接合技術によって、ポリマーまたはミセルに、および／またはミセルの１以上のポリマーに化学的に接合される。幾つかの実施形態において、ＲＮＡｉ剤を含有するミセルは、複数のポリマーを含んでなる既に形成されたミセルとのＲＮＡｉ剤の接合により形成される。他の実施形態において、ＲＮＡｉ剤を含有するミセルは、ポリマー（例えば膜不安定化ブロック共重合体）とのＲＮＡｉ剤の接合と、それに続いて、何れか適切な方法、例えば得られた接合体のＲＮＡｉ剤を含んでなるミセルへの自己集合でミセルを形成することによって形成される。種々の実施形態において、斯かるミセルは任意に、ＲＮＡｉ剤に接合されたものと類似、同一、または異なる未接合のポリマー（例えばブロック共重合体）を更に含んでいる。ここに記載したミセルのポリマーと治療剤の間の共有結合は、任意に、非開裂性または開裂性である。ある実施形態において、１以上のＲＮＡｉ剤（例えばダイサー基質）の前駆体が、非開裂性（開裂可能でない）の結合によって、ミセルまたは該ミセルのポリマー単位に結び付けられる。幾つかの実施形態では、１以上のＲＮＡｉ剤が、開裂性（開裂可能な）結合を介して結び付けられる。ある実施形態において、ここに記載のミセルに利用される開裂可能な結合は、非限定的な例として、ジスルフィド結合（例えば原形質の還元性環境において解離するジスルフィド結合）が含まれる。幾つかの実施形態において、ミセル（その成分を含む）および治療剤（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）の間の共有結合による結合は適切な化学的接合法を介して達成され、該説合法にはアミン−カルボキシルリンカー、アミン−スルフヒドリルリンカー、アミン−炭水化物リンカー、アミン−ヒドロキシルリンカー、アミン−アミンリンカー、カルボキシル−スルフヒドリルリンカー、カルボキシル−炭水化物リンカー、カルボキシル−ヒドロキシルリンカー、カルボキシル−カルボキシルリンカー、スルフヒドリル−炭水化物リンカー、スルフヒドリル−ヒドロキシルリンカー、スルフヒドリル−スルフヒドリルリンカー、炭水化物−ヒドロキシルリンカー、炭水化物−炭水化物リンカー、およびヒドロキシル−ヒドロキシルリンカーが含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、この接合はまた、ｐＨ感受性の結合およびリンカーを用いて行われ、これにはヒドラゾンおよびアセタール結合が含まれるが、これらに限定されない。同様に、何れか他の適切な接合方法が任意に利用され、例えば、極めて多様な接合化学が利用可能である（例えば、Bioconjugation, Aslam and Dent, Eds, Macmillan, 1998 and chapters therein参照）。
【０２２９】
特定の実施形態において、ここに提供されるポリマーまたはミセルにより送達される薬剤は、診断剤である。幾つかの実施形態において、該診断剤は診断的撮像剤、例えば、哺乳類血管系を撮像するために有用な薬剤であり、それにはポジトロン放出トモグラフィー（ＰＥＴ）剤、コンピュータトモグラフィー（ＣＴ）剤、磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）剤、核磁気撮像（ＮＭＩ）、蛍光透視剤、および超音波造影剤が含まれるが、これらに限定されない。斯かる診断剤には、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ等を含むヨウ素（Ｉ）、バリウム（Ｂａ）、ガドリニウム(Ｇｄ）、９９Ｔｃを含むテクネチウム（Ｔｃ）、３１Ｐを含むリン（Ｐ）、鉄（Ｆｅ）、マンガン（Ｍｎ）、タリウム（Ｔｌ）、５１Ｃｒを含むクロム（Ｃｒ）、１４Ｃを含む炭素（Ｃ）等のような元素の放射性同位体、蛍光標識された化合物、それらの複合体、キレート、付加物、接合体が含まれる。他の実施形態において、該診断剤は、細胞内で発現されたときに容易に検出可能なタンパク質（β−ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質、およびルシフェラーゼ等を含むが、これらに限定されない）をコードするマーカー遺伝子、および標識された核酸プローブ（例えば放射能標識され、または蛍光標識されたプローブ）である。幾つかの実施形態において、ここに提供されるポリマーまたはミセルに対する診断剤の共有結合による接合は、種々の接合プロセスに従って達成される。他の実施形態において、診断剤は、ブロック共重合体の中に組込まれたキレート化残基（例えばカルボン酸残基）との複合体形成によって、ここに提供されるポリマーまたはミセルと非共有結合的に結合される。幾つかの実施形態では、放射能標識されたモノマー（例えば１４Ｃ標識されたモノマー）が、ミセルのポリマー骨格中（例えば中間体ブロックまたは第二のブロック）に組込まれる。幾つかの実施形態において、診断剤と結合されたポリマーまたはミセルはターゲッティング部分を含んでいる。
【０２３０】
＜ミセル組成物を調製するための方法＞
ここでのある実施形態では、不均一なポリマーミセルおよび該ミセルと結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物を調製する方法が提供され、該方法は、
ａ．第一の変性媒質中のブロック共重合体を準備し、該ブロック共重合体は親水性ブロックおよび疎水性ブロックを含んでなることと、
ｂ．前記ブロック共重合体を第二の水性媒質に露出させることと、
ｃ．前記ブロック共重合体の親水性ブロックを前記水性媒質中で結合させて、前記ブロック共重合体を含んでなるミセルを形成することと、
ｄ．ポリヌクレオチドを前記ブロック共重合体の第二のブロックと結合させること
を含んでなるものである。
【０２３１】
幾つかの実施形態において、該方法は更に、前記ポリヌクレオチドに、前記第一のポリマーの親水性ブロックとのイオン複合体を形成させることを含んでいる。ある実施形態において、該方法は更に、連結部分を介して、前記ポリヌクレオチドを前記第二のブロックへ、前記第二のブロックと前記第一のブロックまたは第三のブロックの間の接合部分へ共有結合させることを含んでいる。また、ここでは斯かる方法に従って調製される組成物が提供される。
【０２３２】
ここでは本発明の好ましい実施形態を示し且つ説明してきたが、斯かる実施形態は例としてのみ提供されることが当業者には明らかであろう。今や当業者は、本発明を逸脱することなく、多くの変形例、変更および置換を想起するであろう。本発明の実施においては、ここに記載した発明の実施形態に対する種々の代替例を用い得ることが理解されるべきである。以下の請求項は本発明の範囲を定義すること、またこれら請求項の範囲内の方法および構造、並びにそれらの均等物は、それら請求項によってカバーされることが意図されている。
【０２３３】
＜医薬組成物＞
ポリマーもしくはポリマーミセル、および生体分子薬物（例えばポリヌクレオチド）のような薬物を含んでなる組成物は、医薬組成物であることができる。斯かる医薬組成物は、例えば、ポリマーまたはポリマーミセル、ポリヌクレオチドのような生体分子薬物、および医薬的に許容可能な賦形剤を含有することができる。
【０２３４】
ここに提供されるポリマーおよびミセル組成物（例えば、１以上のＲＮＡｉ剤治療剤、例えば１以上のオリゴヌクレオチドに結び付けられたもの）が、任意に組成物（例えば医薬的に許容可能な組成物）中に提供される。幾つかの実施形態において、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物は、何れかの適切な方法で、例えば、医薬組成物を形成するための安定剤、および緩衝剤等を伴って、または伴わずに、患者に投与される。幾つかの実施形態において、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物は、経口投与のための錠剤、カプセル、またはエリキシール、直腸投与のための座薬、注射投与のための滅菌溶液、懸濁液または溶液、および何れか他の適切な組成物として処方される。
【０２３５】
少なくとも一つのここに記載したＲＮＡｉ治療剤を含んでなるポリマーまたはミセル組成物の、医薬的に許容可能な製剤が提供される。これらの製剤は、上記化合物の塩、例えば酸付加塩、例えば、塩酸、臭素酸、酢酸およびベンゼンスルホン酸の塩を含んでいる。薬理学的組成物または製剤は、細胞または例えばヒトを含む患者への投与、例えば全身投与に適した形態の組成物または製剤を意味する。適切な形態は、部分的には、使用または導入の経路、例えば経口、経皮、または注射による経路に依存する。こうして、ポリマーまたはミセル組成物がポリヌクレオチドを含み且つこれを送達する特定の実施形態において、該製剤は、ポリマーまたはミセル組成物、より詳細にはポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）が、無傷および／または機能性の状態で標的細胞に到達するのを妨げない形態である。例えば、ある実施形態において、血流の中に注射される薬理学的組成物は、可溶性および／または分散性である。更に、ここに記載する医薬組成物は、好ましくは非毒性である。ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物が治療的利益のために投与される幾つかの実施形態において、治療剤（例えばｓｉＲＮＡのようなポリヌクレオチド）を含む治療的有効量の組成物が投与される。例示的な実施形態において、治療的有効量は、個体１ｋｇ当たり約１０ｍｇ以下のｓｉＲＮＡを与えるために十分な量の、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物を含んでいる。
【０２３６】
幾つかの実施形態において、ＲＮＡｉ治療剤（例えばｓｉＲＮＡのようなポリヌクレオチド）を含んだ、ポリマーまたはミセル組成物を含んでなる医薬組成物は、全身的に投与される。ここで使用するとき、「全身的投与」とは、インビボにおける全身的な吸収または血流における薬剤の蓄積と、それに続いて全身に亘り分布することを意味する。全身的吸収に導く投与経路には、静脈内、皮下、腹腔内、吸入、経口、肺内および筋肉内が含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、該組成物は局所的に投与される。
【０２３７】
幾つかの実施形態において、該組成物は保存または投与のために調製され、また、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物を含んでなる医薬的有効量の治療剤を、医薬的に許容可能なキャリアまたは希釈剤中に含有している。何れかの許容可能なキャリアまたは希釈剤が、ここで任意に利用される。特定のキャリアおよび希釈剤は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., A.R. Gennaro Ed., 1985に記載されている。例えば、保存剤、安定化剤、色素およびフレーバー剤が任意に添加される。これらには、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。加えて、抗酸化剤および懸濁剤が任意に使用される。ここで使用するとき、「医薬的に許容可能なキャリア」の用語は、非毒性で不活性な固体、半固体または液体の、充填剤、希釈剤、封入材料または何れかのタイプの製剤化補助剤を意味する。医薬的に許容可能なキャリアとして任意に使用される材料の幾つかの例は、ラクトース、グルコースおよび蔗糖のような糖；コーンスターチおよびポテトスターチのようなデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースのようなセルロースおよびその誘導体；粉末トラガカントゴム；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤ワックスのような賦形剤；ピーナッツ油、綿実油のような油；ベニバナ油；ごま油；オリーブ油；コーン油および大豆油；プロピレングリコールのようなグリコール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのようなエステル；寒天；Ｔｗｅｅｎ８０のような界面活性剤；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；およびリン酸緩衝溶液であり、同様に、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムのような他の無毒の適合性滑沢剤、並びに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、フレーバー剤および芳香剤、保存剤および抗酸化剤もまた、調剤者の判断により組成物中に存在させてよい。幾つかの実施形態において、ここで提供される医薬組成物は、ヒトおよび／または動物に対して、経口的に、直腸に、非経口的に、槽内に、膣内に、鼻腔
内に、腹腔内に、局所的に（粉末、クリーム、軟膏または液滴により）、皮下に、頬に、または経口もしくは経鼻のスプレーとして投与される。
【０２３８】
種々の実施形態において、経口投与のための液体剤形には、医薬的に許容可能なエマルジョン、ミクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルが含まれる。活性成分（例えば、ここに提供されるミセル−オリゴヌクレオチド複合体）に加えて、液体剤形は、任意に、不活性な希釈剤もしくは賦形剤を更に含み、その非限定的な例は、水もしくは他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびごま油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、プロピレングリコールおよびソルビタン脂肪酸エステルのような乳化剤および可溶化剤、ならびにこれらの混合物である。不活性な希釈剤に加えて、経口組成物はまた、任意に、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、フレーバー剤、および芳香剤のような製剤化補助剤も含まれる。
【０２３９】
幾つかの実施形態において、注射可能な製剤（例えば、無菌の注射用水または油性懸濁液）は、例えば、分散剤、湿潤剤および／または懸濁剤を用いて、何れかの適切な方法に従って製剤化される。無菌の注射製剤は、任意に、無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒（例えば、１，３−ブタンジオール）中の無菌の注射可能な溶液、懸濁液、またはエマルジョンである。任意に使用される許容可能な賦形剤および溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張の塩化ナトリウム溶液がある。更に、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒質として慣用的に使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む何れかの無刺激の不揮発性油が任意に使用される。更なる実施形態において、オレイン酸のような脂肪酸が、注射可能な製剤中に使用される。特定の実施形態において、ポリマーまたはミセル組成物は、１％（ｗ／ｖ）カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ８０を含むキャリア液中で可溶化される。
【０２４０】
幾つかの実施形態において、注射可能な製剤は、例えば細菌保持フィルターを通してろ過することにより、または、任意に使用に先立って滅菌水またはその他の無菌注射用溶媒に溶解または分散させる無菌固体組成物の形態の殺菌剤を組込むことによって殺菌される。
【０２４１】
ある実施形態において、直腸または膣への投与のための組成物は坐剤である。坐剤は、任意に、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物を含む治療剤と、ココアバター、ポリエチレングリコール、または坐剤ワックスのような適切な無刺激の賦形剤またはキャリアとを混合することにより調製され、これら賦形剤またはキャリアは外界温度では固体であるが体温では液体であるため、直腸または膣腔で溶解し、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物を放出する。
【０２４２】
経口投与のための適切な固体剤形には、限定するものではないが、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形において、ＡＮＡｉ治療剤（例えばオリゴヌクレオチド）を含むポリマーまたはミセル組成物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムのような少なくとも一つの不活性で且つ医薬的に許容可能な賦形剤もしくはキャリア、および／またはａ）デンプン、ラクトース、蔗糖、グルコース、マンニトール、およびケイ酸のような充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、蔗糖、およびアラビアゴムのような結合剤、ｃ）グリセロールのような湿潤剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ポテトデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムのような崩壊剤、ｅ）パラフィンのような溶液遅延剤、ｆ）４級アンモニウム化合物のような吸収促進剤、ｇ）例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートのような湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土のような吸収剤、およびｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムのような滑沢剤、およびこれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、製剤は、緩衝剤を含んでもよい。
【０２４３】
同様のタイプの固体組成物はまた、任意に、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコール等のような賦形剤を使用する軟質ゼラチンカプセルおよび硬質ゼラチンカプセルにおける充填剤として使用されてもよい。
【０２４４】
幾つかの実施形態において、錠剤、ドラジェ、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤の固体製剤は、腸溶コーティングおよび他の適切なコーティングのようなコーティングおよび外殻を用いて調製される。ある実施形態において、それらは、好ましくは腸管のある部分において、任意に遅延性の態様で、活性成分のみを放出する組成物である。適切な包埋組成物の非限定的な例には、高分子物質およびワックスが含まれる。
【０２４５】
同様のタイプの固体組成物は、任意に、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコール等のような賦形剤を使用する軟質ゼラチンカプセルおよび硬質ゼラチンカプセルにおける充填剤として使用されてもよい。
【０２４６】
本発明の医薬組成物の局所投与または経皮投与のための剤形の非限定的な例には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入薬、またはパッチが含まれる。幾つかの実施形態において、ここに提供されるミセル結合体を含む治療剤は、無菌条件下で、医薬的に許容可能なキャリアおよび任意に、１以上の保存剤、１以上のバッファー、またはこれらの組み合わせ（例えば、必要な場合）と混合される。眼用製剤、点耳薬、および点眼薬も、本発明の範囲内であると考えられる。
【０２４７】
ここで提供される軟膏、ペースト、クリーム、およびゲルは、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物に加えて、動物性脂肪および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカントゴム、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、および酸化亜鉛、またはこれらの混合物のような賦形剤を任意に含む。
【０２４８】
粉末およびスプレーは、ここに提供されるポリマーまたはミセル組成物を含む治療剤に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を任意に含む。幾つかの実施形態において、スプレーは、任意に、クロロフルオロ炭化水素のような慣習的な噴霧剤を含む。
【０２４９】
経皮パッチは、化合物の体への制御された送達を提供する付加的な利点を有する。そのような製剤は、何れかの適切な方法、例えば適切な媒質中にミクロ粒子またはナノ粒子を溶解または分散することにより作られる。吸収増強剤は、任意に、皮膚中への化合物の流入を増大させるために使用される。その速度は、速度制御膜を使用するか、またはポリマーマトリックスまたはゲル中にここに提供されるミセル結合体を含む治療剤を分散させることにより制御され得る。
【０２５０】
本発明の幾つかの側面において、ポリマーまたはミセル組成物は、通常賦形剤により達成される幾つかの特性（例えば、機械的、熱的等）を提供するため、製剤中に必要とされるそのような賦形剤の量を減らすことができる。
【０２５１】
＜治療的用途＞
ポリマーまたはポリマーミセルおよびポリヌクレオチド等の薬剤を含む組成物は、種々の方法で使用することができる。
【０２５２】
一般に、かかる組成物は、例えば、ポリヌクレオチドなどの薬剤の細胞内デリバリーのための方法で使用することができる。ポリマーまたはポリマーミセルおよびそれと結合した薬剤（例えばポリヌクレオチド）を含む組成物は、第１のｐＨの媒質において、（例えば、方向性ターゲティングを介して）細胞表面に露出させ、細胞表面と接触させることができる。該組成物は、例えばエンドサイトーシスにより、幾つかの態様では受容体媒介性エンドサイトーシスにより、細胞内でエンドソーム膜に取り込まれる。エンドソーム膜は、（例えば、膜不安定化ポリマーである構成ポリマーまたはそのブロックにより）不安定化され、これにより、組成物または薬剤（例えばポリヌクレオチド）を細胞の細胞質ゾルに送達する。媒質は、インビトロ媒質とすることができる。媒質は、生理学的媒質などのインビトロ媒質とすることができる。
【０２５３】
一般に、例えば、かかる組成物は、細胞において細胞内ターゲットの活性を調節するために使用することができる。ポリヌクレオチドなどの薬剤は、直前の段落に記載した方法に従って、細胞の細胞質ゾルに送達することができる。薬剤（例えばポリヌクレオチド）を、細胞内ターゲットと相互作用させ、これにより細胞内ターゲットの活性を調節する。
【０２５４】
より詳細には、例えば、幾つかの態様では、ここに提供されるポリマーまたはポリマーミセル（例えばミセル）を含む組成物は、高血漿レベルのコレステロール、アポリポ蛋白質ｂ、および／またはＬＤＬコレステロールに関連した、および／またはこれにより引き起こされる障害、例えば高コレステロール血症の危険があるか、またはこれに罹患している患者を治療する際に有用である。幾つかの態様において、治療は、ポリマーミセルおよびそれと結合した治療用薬剤（例えばオリゴヌクレオチド薬剤）を提供することを含み、ここで治療用薬剤は、かかる症状を促進する遺伝子または遺伝子産物を（例えば切断により）サイレンシングさせる（ｓｉｌｅｎｃｅ）。幾つかの態様において、治療用薬剤（例えばオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡｉ薬剤）は、低比重リポタンパク質（ＬＤＬＲ）レベルおよび機能の調節を担うプロタンパク質コンバターゼサブチリシン／ケキシン９（ＰＣＳＫ９）遺伝子をサイレンシングさせ、このため、かかる治療用薬剤を含むポリマーまたはポリマーミセルは、望ましくないＰＣＳＫ９発現により特徴付けられる障害、例えば、高血漿レベルのコレステロール、アポリポ蛋白質ｂ、および／またはＬＤＬコレステロールに関連した、および／またはこれにより引き起こされる障害、例えば高コレステロール血症を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用される。幾つかの態様において、ポリマーまたはポリマーミセルは、ＰＣＳＫ９を発現する細胞に、ＰＣＳＫ９−サイレンシングポリヌクレオチド薬剤（例えばｓｉＲＮＡ）を送達する。幾つかの態様において、細胞は肝細胞である。
【０２５５】
幾つかの態様において、本明細書で提供されるポリマーまたはポリマーミセル（例えばミセル）は、望ましくない細胞増殖（例えば悪性または非悪性の細胞増殖）に対する危険があるか、またはそれに罹患している患者を治療する際に有用である。治療は、ポリマーまたはポリマーミセルおよび治療用薬剤（例えばオリゴヌクレオチド薬剤）を含む組成物であって、治療用薬剤が、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子または遺伝子産物を（例えば切断により）サイレンシングさせることができる組成物を提供すること；および治療的に有効な量のポリマーまたはポリマーミセルを患者（例えばヒト患者）に投与することを含む。幾つかの態様において、治療用薬剤は、遺伝子に対して相同性があり、遺伝子を（例えば切断により）サイレンシングさせることができるポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）である。
【０２５６】
ある態様において、遺伝子は、増殖因子または増殖因子受容体遺伝子、ホスファターゼ、キナーゼ、例えば蛋白質チロシン、セリンまたはトレオニンキナーゼ遺伝子、アダプター蛋白質遺伝子、Ｇ蛋白質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、または転写因子をコードする遺伝子であるが、これらに限定されない。幾つかの例において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、および肺、膵臓、肝臓、腎臓、卵巣、筋肉、皮膚、乳房、結腸、胃などを含むがこれらに限定されない特定の組織または器官で発現される遺伝子をサイレンシングさせるポリヌクレオチドを含む。
【０２５７】
幾つかの態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、以下の遺伝子の一または複数をサイレンシングさせる：ＰＤＧＦベータ遺伝子、これにより、望ましくないＰＤＧＦベータ発現により特徴付けられる障害、例えば精巣および肺の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子（例えばＥｒｂ−Ｂ−２またはＥｒｂ−Ｂ−３）、これにより、望ましくないＥｒｂ−Ｂ発現により特徴付けられる障害、例えば乳房または肺の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；Ｓｒｃ遺伝子、これにより、望ましくないＳｒｃ発現により特徴付けられる障害、例えば結腸の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＣＲＫ遺伝子、これにより、望ましくないＣＲＫ発現により特徴付けられる障害、例えば結腸および肺の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる：ＧＲＢ２遺伝子、これにより、望ましくないＧＲＢ２発現により特徴付けられる障害、例えば扁平上皮癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＲＡＳ遺伝子、これにより、望ましくないＲＡＳ発現により特徴付けられる障害、例えば膵臓、結腸および肺の癌、および慢性白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＭＥＫＫ遺伝子、これにより、望ましくないＭＥＫＫ発現により特徴付けられる障害、例えば扁平上皮癌、黒色腫または白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＪＮＫ遺伝子、これにより、望ましくないＪＮＫ発現により特徴付けられる障害、例えば膵臓または乳房の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＲＡＦ遺伝子、これにより、望ましくないＲＡＦ発現により特徴付けられる障害、例えば肺癌または白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；Ｅｒｋ１／２遺伝子、これにより、望ましくないＥｒｋ１／２発現により特徴付けられる障害、例えば肺癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、これにより、望ましくないＰＣＮＡ発現により特徴付けられる障害、例えば肺癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＭＹＢ遺伝子、これにより、望ましくないＭＹＢ発現により特徴付けられる障害、例えば結腸癌または慢性骨髄性白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ｃ−ＭＹＣ遺伝子、これにより、望ましくないｃ−ＭＹＣ発現により特徴付けられる障害、例えばバーキットリンパ腫または神経芽細胞腫を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＪＵＮ遺伝子、これにより、望ましくないＪＵＮ発現により特徴付けられる障害、例えば卵巣、前立腺または乳房の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＦＯＳ遺伝子、これにより、望ましくないＦＯＳ発現により特徴付けられる障害、例えば皮膚または前立腺の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＢＣＬ−２遺伝子、これにより、望ましくないＢＣＬ−２発現により特徴付けられる障害、例えば肺もしくは前立腺の癌または非ホジキンリンパ腫を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＣｙｃｌｉｎＤ遺伝子、これにより、望ましくないＣｙｃｌｉｎＤ発現により特徴付けられる障害、例えば食道および結腸の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＶＥＧＦ遺伝子、これにより、望ましくないＶＥＧＦ発現により特徴付けられる障害、例えば食道および結腸の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＥＧＦＲ遺伝子、これにより、望ましくないＥＧＦＲ発現により特徴付けられる障害、例えば乳癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＣｙｃｌｉｎＡ遺伝子、これにより、望ましくないＣｙｃｌｉｎＡ発現により特徴付けられる障害、例えば肺および子宮頸部の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＣｙｃｌｉｎＥ遺伝子、これにより、望ましくないＣｙｃｌｉｎＥ発現により特徴付けられる障害、例えば肺および乳房の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＷＮＴ−１遺伝子、これにより、望ましくないＷＮＴ−１発現により特徴付けられる障害、例えば基底細胞癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ベータ−カテニン（ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ）遺伝子、これにより、望ましくないベータ−カテニン発現により特徴付けられる障害、例えば腺癌または肝細胞癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ｃ−ＭＥＴ遺伝子、これにより、望ましくないｃ−ＭＥＴ発現により特徴付けられる障害、例えば肝細胞癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＰＫＣ遺伝子、これにより、望ましくないＰＫＣ発現により特徴付けられる障害、例えば乳癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＮＦＫＢ遺伝子、これにより、望ましくないＮＦＫＢ発現により特徴付けられる障害、例えば乳癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＳＴＡＴ３遺伝子、これにより、望ましくないＳＴＡＴ３発現により特徴付けられる障害、例えば前立腺癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；サーバイビン（ｓｕｒｖｉｖｉｎ）遺伝子、これにより、望ましくないサーバイビン発現により特徴付けられる障害、例えば子宮頸部または膵臓の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、これにより、望ましくないＨｅｒ２／Ｎｅｕ発現により特徴付けられる障害、例えば乳癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；トポイソメラーゼＩ遺伝子、これにより、望ましくないトポイソメラーゼＩ発現により特徴付けられる障害、例えば卵巣および結腸の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；トポイソメラーゼＩＩアルファ遺伝子、これにより、望ましくないトポイソメラーゼＩＩ発現により特徴付けられる障害、例えば乳房および結腸の癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる。
【０２５８】
他の態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、以下の遺伝子の一つにおける変異をサイレンシングさせる：ｐ７３遺伝子、これにより、望ましくないｐ７３発現により特徴付けられる障害、例えば結腸直腸の腺癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子、これにより、望ましくないｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）発現により特徴付けられる障害、例えば肝臓癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子、これにより、望ましくないｐ２７（ＫＩＰ１）発現により特徴付けられる障害、例えば肝臓癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＰＰＭ１Ｄ遺伝子、これにより、望ましくないＰＰＭ１Ｄ発現により特徴付けられる障害、例えば乳癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＲＡＳ遺伝子、これにより、望ましくないＲＡＳ発現により特徴付けられる障害、例えば乳癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；カベオリン（ｃａｖｅｏｌｉｎ）Ｉ遺伝子、これにより、望ましくないカベオリンＩ発現により特徴付けられる障害、例えば食道扁平上皮癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＭＩＢ・Ｉ遺伝子、これにより、望ましくないＭＩＢ・Ｉ発現により特徴付けられる障害、例えば男性乳癌（ＭＢＣ）を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＭＴＡＩ遺伝子、これにより、望ましくないＭＴＡＩ発現により特徴付けられる障害、例えば卵巣癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；Ｍ６８遺伝子、これにより、望ましくないＭ６８発現により特徴付けられる障害、例えば食道、胃、結腸、および直腸のヒト腺癌を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる。
【０２５９】
幾つかの態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、癌抑制遺伝子における変異をサイレンシングさせ、これにより、化学療法と組合せてアポトーシス活性を促進する方法として使用することができる。幾つかの態様において、癌抑制遺伝子は、以下の癌抑制遺伝子の一または複数から選択される：ｐ５３癌抑制遺伝子、ｐ５３ファミリーのメンバーＤＮ−ｐ６３、ｐＲｂ癌抑制遺伝子、ＡＰＣ１癌抑制遺伝子、ＢＲＣＡ１癌抑制遺伝子、ＰＴＥＮ癌抑制遺伝子。
【０２６０】
幾つかの態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、以下の融合遺伝子の一つをサイレンシングさせる：ｍＬＬ融合遺伝子、例えばｍＬＬ−ＡＦ９、これにより、望ましくないｍＬＬ融合遺伝子発現により特徴付けられる障害、例えば急性白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、これにより、望ましくないＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子発現により特徴付けられる障害、例えば急性および慢性白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、これにより、望ましくないＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子発現により特徴付けられる障害、例えば小児急性白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、これにより、望ましくないＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子発現により特徴付けられる障害、例えばユーイング肉腫を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、これにより、望ましくないＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子発現により特徴付けられる障害、例えば粘液性脂肪肉腫を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、これにより、望ましくないＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子発現により特徴付けられる障害、例えば粘液性脂肪肉腫を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、これにより、望ましくないＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子発現により特徴付けられる障害、例えば急性白血病を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる。
【０２６１】
ここで幾つかの側面において、ポリマーまたはポリマーミセルおよび薬剤、例えばポリヌクレオチドを含む組成物は、脈管形成阻害により利益を得ることができる疾患または障害、例えば癌または網膜変性に対する危険があるか、またはそれに罹患している患者、例えばヒトを治療するための治療用薬剤を提供する。治療は、オリゴヌクレオチド薬剤を含むポリマーまたはポリマーミセルであって、前記オリゴヌクレオチド薬剤が、脈管形成を媒介する遺伝子（例えば、ＶＥＧＦ−Ｒ１、ＶＥＧＦ−Ｒ２またはこれら受容体経路のシグナリング蛋白質をコードする遺伝子）に対して相同性があり、および／またはそれを例えば切断によりサイレンシングさせることができるポリマーまたはポリマーミセルを提供すること；および治療的に有効な投薬量の、オリゴヌクレオチド薬剤を含む前記ポリマーまたはポリマーミセルを患者（例えばヒト患者）に投与することを含む。
【０２６２】
幾つかの態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、以下の遺伝子の一つをサイレンシングさせる：アルファｖインテグリン遺伝子、これにより、望ましくないアルファＶインテグリンにより特徴付けられる障害、例えば脳腫瘍または上皮由来の腫瘍を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；Ｆｌｔ−１受容体遺伝子、これにより、望ましくないＦｌｔ−１受容体により特徴付けられる障害、例えば癌および慢性関節リウマチを有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる；チューブリン遺伝子、これにより、望ましくないチューブリンにより特徴付けられる障害、例えば癌および網膜新生血管を有するか、またはそれに対する危険がある患者を治療するために使用することができる。
【０２６３】
幾つかの側面において、ポリマーまたはポリマーミセルおよびオリゴヌクレオチド薬剤を含む組成物は、ウイルスに感染しているか、あるいはウイルス感染に関連した障害または疾患に対する危険があるか、またはそれに罹患している患者を治療する方法に関連がある。当該方法は、オリゴヌクレオチド薬剤を含むポリマーまたはポリマーミセルであって、前記オリゴヌクレオチド薬剤が、ウイルス遺伝子またはウイルスの機能を媒介する細胞遺伝子に対して相同性があり、および/またはそれを例えば切断によりサイレンシングすることができるポリマーまたはポリマーミセルを提供すること；および治療的に有効な用量の前記オリゴヌクレオチド薬剤を患者、例えばヒト患者に投与することを含む。
【０２６４】
幾つかの態様において、ポリマーまたはポリマーミセルおよびオリゴヌクレオチド薬剤を含む組成物は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に感染しているか、あるいはＨＰＶにより媒介される障害、例えば子宮頸癌に対するリスクがあるか、またはそれに罹患している患者を治療する際に有用である。
【０２６５】
幾つかの態様において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、およびＨＰＶ遺伝子の発現をサイレンシングして低下させるオリゴヌクレオチド薬剤を含む。幾つかの態様において、ＨＰＶ遺伝子は、Ｅ２、Ｅ６、またはＥ７の群から選択される。
【０２６６】
別の態様において、ＨＰＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２６７】
幾つかの態様において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染しているか、あるいはＨＩＶにより媒介される障害、例えば後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に対するリスクがあるか、またはそれに罹患している患者を治療する際に有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。幾つかの態様において、ＨＩＶ遺伝子の発現を低下させる。他の態様において、ＨＩＶ遺伝子は、ＣＣＲ５、Ｇａｇ、またはＲｅｖである。幾つかの態様において、ＨＩＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。幾つかの態様において、遺伝子はＣＤ４またはＴｓｇ１０１である。
【０２６８】
幾つかの態様において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、およびＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染しているか、あるいはＨＢＶにより媒介される障害、例えば肝硬変症および肝細胞癌に対するリスクがあるか、またはそれに罹患している患者を治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。一つの態様において、ＨＢＶ遺伝子の発現を低下させる。他の態様において、標的とされるＨＢＶ遺伝子は、ＨＢＶコアタンパク質のテール領域、前クレギアス（ｐｒｅ−ｃｒｅｇｉｏｕｓ；ｐｒｅ−ｃ）領域、またはクレギアス（ｃｒｅｇｉｏｕｓ；ｃ）領域の群の一つをコードする。他の態様において、標的とされるＨＢＶ−ＲＮＡ配列は、ポリ（Ａ）テールから構成される。幾つかの態様において、ＨＢＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２６９】
幾つかの態様において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、および以下のウイルスから選択されるウイルスに感染しているか、あるいはそれにより媒介される障害に対するリスクがあるか、またはそれに罹患している患者を治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む：Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）；Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）；Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、またはＨ型肝炎を含む肝炎ウイルス株の群の何れか；呼吸器系合胞体ウイルス（ＲＳＶ）；ヘルペスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；ヘルペスエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）；カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）；ＪＣウイルス（ＪＣＶ）；ミクソウイルス（例えば、インフルエンザを引き起こすウイルス）、ライノウイルス（例えば、感冒を引き起こすウイルス）、またはコロナウイルス（例えば、感冒を引き起こすウイルス）；セントルイス脳炎フラビウイルス；ダニ媒介脳炎フラビウイルス；マリーバレー脳炎フラビウイルス；デング熱フラビウイルス；シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）；脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）；麻疹ウイルス（ＭＶ）；水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）；アデノウイルス（例えば、気道感染症を引き起こすウイルス）；ポリオウイルス；またはポックスウイルス（痘瘡を引き起こすポックスウイルス）。幾つかの態様において、これらウイルスの複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２７０】
幾つかの態様において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に感染しているか、あるいはＨＳＶにより媒介される障害、例えば主に免疫障害を持つ患者における、例えば陰部ヘルペスおよび単純ヘルペス、並びに致命的または視力障害の疾患に対するリスクがあるか、またはそれに罹患している患者を治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。幾つかの態様において、ＨＳＶ遺伝子の発現を低下させる。他の態様において、標的とされるＨＳＶ遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼまたはヘリカーゼ−プライマーゼをコードする。幾つかの態様において、ＨＳＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２７１】
幾つかの態様において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、および西ナイルウイルスに感染しているか、あるいは西ナイルウイルスにより媒介される障害に対するリスクがあるか、またはそれに罹患している患者を治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。幾つかの態様において、西ナイルウイルス遺伝子の発現を低下させる。他の好ましい態様において、西ナイルウイルス遺伝子は、Ｅ、ＮＳ３、またはＮＳ５を含む群から選択される。幾つかの態様において、西ナイルウイルスの複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２７２】
幾つかの態様において、ポリマーまたはポリマーミセルは、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）に感染している患者、あるいはこのウイルスに関連した疾患または障害、例えば白血病またはミエロパシーを治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。幾つかの態様において、ＨＴＬＶ遺伝子の発現を低下させる。幾つかの態様において、ＨＴＬＶ１遺伝子は、Ｔａｘ転写アクチベーターである。幾つかの態様において、ＨＴＬＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２７３】
幾つかの側面において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、および病原体、例えば細菌、アメーバ、寄生生物、または真菌の病原体に感染した患者を治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。治療方法は、オリゴヌクレオチド薬剤を含むポリマーまたはポリマーミセルであって、前記オリゴヌクレオチドが、病原体の遺伝子または病原体の増殖に関与する遺伝子に対して相同性があり、それを例えば切断によりサイレンシングさせることができるポリマーまたはポリマーミセルを提供すること；および治療的に有効な用量の前記オリゴヌクレオチド薬剤を患者、例えばヒト患者に投与することを含む。ターゲット遺伝子は、病原体の増殖、細胞壁の合成、蛋白質の合成、転写、エネルギー代謝、例えばクレブス回路、または毒素の産生に関与する遺伝子から選択することができる。
【０２７４】
このため、幾つかの態様において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、およびマラリアを引き起こすマラリア原虫に感染した患者を治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。幾つかの態様において、マラリア原虫遺伝子の発現を低下させる。他の態様において、遺伝子は、先端膜抗原１（ａｐｉｃａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｔｉｇｅｎ・１；ＡＭＡ１）である。幾つかの態様において、マラリア原虫の複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２７５】
幾つかの態様において、ポリマーまたはポリマーミセルは、マイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ・ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム・ツベルクロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ・ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・リプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ・ｌｅｐｒａｅ）、ストレプトコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ・ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ・ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ・ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ・ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ・ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に感染した患者、あるいはこれら病原体の何れかと関連した疾患または障害を治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。幾つかの態様において、細菌遺伝子および／またはこれら細菌の複製に必要なヒト遺伝子の発現を低下させる。
【０２７６】
幾つかの態様において、ポリマーまたはポリマーミセルおよびここで提供される薬剤を含む組成物により治療される疾患は、全身性であってもよいし、特定の組織、例えば肺、皮膚、肝臓、乳房、腎臓、膵臓、ＣＮＳなどに存在してもよい。ある側面において、オリゴヌクレオチドは、代謝疾患または障害、例えば糖尿病、肥満症などを媒介するか、またはそれに関与する遺伝子をサイレンシングさせる。ある態様において、オリゴヌクレオチドは、肺の疾患または障害、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、または肺癌を媒介するか、またはそれに関与する遺伝子をサイレンシングさせる。本明細書で幾つかの側面において、ポリマーまたはポリマーミセルは、望ましくない免疫応答、例えば炎症性疾患もしくは障害、または自己免疫疾患もしくは障害により特徴付けられる疾患または障害に対する危険があるか、またはそれに罹患している患者、例えばヒトを治療する方法に有用な、および／または当該方法に関連したオリゴヌクレオチド薬剤を含む。当該方法は、オリゴヌクレオチド薬剤を含むポリマーまたはポリマーミセルであって、前記オリゴヌクレオチド薬剤が、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子に対して相同性があり、および／またはそれを例えば切断によりサイレンシングさせることができるポリマーまたはポリマーミセルを提供すること；および前記オリゴヌクレオチド薬剤を患者、例えばヒト患者に投与することを含む。幾つかの態様において、疾患または障害は、虚血または再灌流傷害、例えば、急性心筋梗塞、不安定狭心症、心肺バイパス、外科的介入、例えば血管形成術、例えば経皮経管冠状動脈形成術、移植された器官または組織に対する応答、例えば移植された心臓または脈管の組織；または血栓崩壊と関連した虚血または再灌流傷害である。他の態様において、疾患または障害は、再狭窄、例えば、外科的介入、例えば血管形成術、例えば経皮経管冠状動脈形成術と関連した再狭窄である。他の態様において、疾患または障害は、炎症性腸疾患、例えばクローン病または潰瘍性大腸炎である。幾つかの態様において、疾患または障害は、感染または傷害と関連した炎症である。他の態様において、疾患または障害は、喘息、アレルギー、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、例えばＩＩ型糖尿病、関節炎、例えばリウマチ様または乾癬性の関節炎である。ある態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、インテグリンまたはそのコリガンド（ｃｏ−ｌｉｇａｎｄ）、例えばＶＬＡ４、ＶＣＡＭ、ＩＣＡＭをサイレンシングさせる。他の態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、セレクチンまたはそのコリガンド、例えばＰ−セレクチン、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ）、Ｉ−セレクチン、Ｐ−セレクチン糖蛋白質−１（ＰＳＧＬ−１）をサイレンシングさせる。ある態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、補体系の構成成分、例えばＣ３、Ｃ５、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、Ｃ３コンバターゼ、およびＣ５コンバターゼをサイレンシングさせる。幾つかの態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、ケモカインまたはその受容体、例えばＴＮＦＩ、ＴＮＦＪ、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１Ｊ、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦＲＩ、ＴＮＦＲＩＩ、ＩｇＥ、ＳＣＹＡ１１、およびＣＣＲ３をサイレンシングさせる。他の態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、ＧＣＳＦ、Ｇｒｏ１、Ｇｒｏ２、Ｇｒｏ３、ＰＦ４、ＭＩＧ、前血小板塩基性タンパク質（Ｐｒｏ−Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ；ＰＢＰ）、ＭＩＰ−１Ｉ、ＭＩＰ−１Ｊ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＣＭＢＫＲ１、ＣＭＢＫＲ２、ＣＭＢＫＲ３、ＣＭＢＫＲ５、ＡＩＦ−１、またはＩ−３０９をサイレンシングさせる。
【０２７７】
幾つかの側面において、組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、および神経疾患もしくは障害に対する危険があるか、またはそれに罹患している患者、例えばヒトを治療するために有用なオリゴヌクレオチド薬剤を含む。方法は、オリゴヌクレオチド薬剤を含むポリマーまたはポリマーミセルであって、前記オリゴヌクレオチドが、神経疾患もしくは障害を媒介する遺伝子に対して相同性があり、および／またはそれを例えば切断によりサイレンシングさせることができるポリマーまたはポリマーミセルを提供すること；および治療的に有効な用量の前記オリゴヌクレオチド薬剤を患者、例えばヒトに投与することを含む。幾つかの態様において、疾患または障害は、アルツハイマー病またはパーキンソン病である。ある態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、アミロイドファミリー遺伝子、例えばＡＰＰ；プレセニリン（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ）遺伝子、例えばＰＳＥＮ１およびＰＳＥＮ２、またはＩ−シヌクレイン（ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ）をサイレンシングさせる。他の態様において、疾患または障害は、神経変性トリヌクレオチドリピート病、例えばハンチントン病、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ｄｅｎｔａｔｏｒｕｂｒａｌ  ｐａｌｌｉｄｏｌｕｙｓｉａｎ  ａｔｒｏｐｈｙ）または脊髄小脳失調症、例えばＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３（マチャド−ジョセフ病）、ＳＣＡ７またはＳＣＡ８である。幾つかの態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、ＨＤ、ＤＲＰＬＡ、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ１、ＣＡＣＮＬ１Ａ４、ＳＣＡ７、またはＳＣＡ８をサイレンシングさせる。
【０２７８】
ある側面において、当該組成物は、ポリマーまたはポリマーミセル、および２以上の遺伝子を切断またはサイレンシングすることができるオリゴヌクレオチド薬剤を含む。これらの態様において、オリゴヌクレオチド薬剤は、２以上の遺伝子に見出される配列、例えばこれら遺伝子の間で保存された配列に対して十分なホモロジーを有するように選択される。このため、幾つかの態様において、かかる配列をターゲットとするオリゴヌクレオチド薬剤は、遺伝子の全コレクションを効果的にサイレンシングする。
【０２７９】
以下の実施例は、本発明の種々の例示的態様、並びに合成方法および種々の生物学的および他の活性パラメータを提供する。しかし、これらの実施例は、本発明の実施形態の幾つかのみに関する詳細を提供するものであり、限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０２８０】
本発明の記述の全体を通して、モノマーまたは斯かるモノマーの重合に由来するモノマー残基を記載するために、種々の既知の頭字語および略語が使用される。別途注記しない限り、限定することなく：「ＢＭＡ」（または対応する短縮表記としての文字「Ｂ」）は、メタクリル酸ブチルまたはそれに由来するモノマー残基を表し；「ＤＭＡＥＭＡ」（または対応する短縮表記としての文字「Ｄ」）は、メタクリル酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルまたはそれに由来するモノマー残基を表し；「Ｇａｌ」は、ガラクトース（任意にヒドロキシル保護部分（たとえばアセチル）を含む）またはそれに由来するｐｅｇ化した誘導体を指し；「Ｎａｇ」は、任意にヒドロキシル保護部分（例えばアセチル）を含むＮ−アセチルガラクトサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン残基、またはそれらのｐｅｇ化された誘導体を意味し；「ＨＰＭＡ」は、２−ヒドロキシプロピルメタクリルアミドまたはそれから誘導されたモノマー残基を表し；「ＨＰＭＡ−Ｅ」は、２−ヒドロキシメタクリル酸プロピルまたはそれから誘導されたモノマー残基を表し；「ＭＡＡ」は、メチルアクリル酸またはそれに由来するモノマー残基を表し；「ＭＡＡ（ＮＨＳ）」は、メタクリル酸のＮ−ヒドロキシル−スクシンイミドエステルまたはそれに由来するモノマー残基を表し；「ＰＡＡ」（または対応する短縮表記としての文字「Ｐ」）は、２−プロピルアクリル酸またはそれに由来するモノマー残基を表し、「ＰＥＧＭＡ」は、ｐｅｇ化したメタクリルモノマー、ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）７−ＳＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）ＣＨ２、またはこれに由来するモノマー残基を指す。各々の場合において、何れかのかかる記号表示は、モノマー（全ての塩またはそのイオン化類似体を含む）、または該モノマーの重合に由来するモノマー残基（全ての塩またはそのイオン化類似体を含む）を示し、示された特定の形態は、文脈により当業者に明らかである。
【０２８１】
＜トリブロックポリマーの調製および特性決定＞
ある実施形態では、式Ｉにより表されるトリブロック共重合体がここに提供される。
【０２８２】
［Ａ１ｘ−Ａ２ｙ］Ｍｎ−［Ａ’１ｘ−Ａ’２ｙ］Ｍｎ−［Ｂ１ｘ−Ｂ２ｙ−Ｂ３ｚ］Ｍｎ  （Ｐｌ）
ある実施形態において、［Ａ１−Ａ２］はモノマー残基Ａ１およびＡ２で構成される第一のブロック共重合体であり、ここでＡ１は親水性モノマー残基であり、ｘは＞０であり、［Ａ１−Ａ２］は全体的に親水性である。幾つかの実施形態において、［Ａ’１−Ａ’２］は第二のブロック共重合体であり、モノマー残基Ａ’１およびＡ’２で構成される。ある実施形態において、［Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３］は第三のブロック共重合体であり、モノマーＢ１、Ｂ２、Ｂ３で構成される。ｘ、ｙ、ｚは、該ポリマーの組成を、個々のモノマーのモル％で定義している。Ｍｎは、各ポリマーブロックの分子量である。
【０２８３】
特定の実施形態において、トリブロック共重合体は下記を含んでいる：
［ＰＥＧＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（ＰＩ−１）
［ＤＭＡＥＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
（ＰＩ−２）
トリブロック共重合体は、独特の構造的および機能的特徴を与える。幾つかの例において、第一の二つのブロックは、典型的には主に親水性のモノマーで構成される。ＰＥＧＭＡを含む第一のブロックは、例えばＤＭＡＥＭＡで構成されるカチオン性の第二のホモポリマーブロックの立体的遮蔽として作用する（例えば、毒性を低減するため）。第一のブロックはまた、細胞型特異的ターゲッティングにおいて機能するリガンドの接合のために使用されるアミン反応性エステルモノマー、例えばＭＡＡ（ＮＨＳ）を含んでいてよい。ＤＭＡＥＭＡを含む第二のカチオン性ブロックは、核酸薬物結合ドメインとして機能する。同時に、第一および第二の親水性ブロックは、それぞれ親水性シェルの外部ドメインおよび内部ドメインを構成する。第三のブロックは、一緒になって主に疎水性のコアを形成する疎水性モノマーおよびイオン化可能なモノマーの両方を含んでおり、これは細胞内エンドソーム核酸薬物放出において機能する。実施例に示すように、親水性シェル（内部ドメインおよび外部ドメインを備える）および疎水性コアからなるトリブロック共重合体は、ミセルの性質を有する粒子を形成する。
【０２８４】
実施例１：  第一のブロック［Ａ１−Ａ２］ポリマーマクロ−ＣＴＡの調製：［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ−ＮＨＳ］−ＣＴＡ
第一のブロック共重合体のＲＡＦＴ重合は、典型的には、窒素雰囲気下において６８℃のＤＭＦ中で、連鎖移動剤（ＣＴＡ）として４−シアノ−４−（エチルスルファニルチオカルボニル）スルファニルペンタン酸（ＥＣＴ）を使用し、またラジカル開始剤としてアザビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（和光ケミカルズ社）を使用して１〜４時間行われた。ＣＴＡの初期モノマーに対する比（［ＣＴＡ］０／［Ｍ］０）は、５０％変換における理論的Ｍｎが望ましい分子量（ｇ／ｍｏｌ）であるようなものであった。第一のブロックにおけるＰＥＧＭＡおよびＭＡＡ（ＮＨＳ）またはＰＥＧＭＡおよびＤＭＡＥＭＡの比は、ここのモノマーの異なる供給比、例えば７０：３０を用いることによって変化した。［ＣＴＡ］０／［Ｍ］０は１００：１であった。開始剤に対する初期ＣＴＡの比（［ＣＴＡ］Ｏ／［Ｉ］Ｏ）は１０〜１であった。得られたジブロック共重合体マクロ−ＣＴＡは、アセトンからヘキサン／エーテル＝７５／２５中への４回の沈殿形成と、真空中で終夜の乾燥によって単離された。Ｍｎ＝１１，７００ｋＤａ；  ＰＤＩ＝１．４８であった。
【０２８５】
実施例２：  第二のブロック［Ａ’１］ポリマーＤＭＡＥＭＡ−マクロＣＴＡの調製
ＲＡＦＴ重合および第二のブロックホモポリマーＤＭＡＥＭＡマクロ−ＣＴＡの単離を、第一のブロック共重合体をマクロ−ＣＴＡとして使用して、実施例１に記載したようにして行った。Ｍｎ＝２０．５ｋＤａ、ＰＤＩ＝１．２であった。図１は、［ＰＥＧＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］の合成についての反応スキームを要約している。ＣＤＣｌ３の中でのＮＭＲ分光法を使用してポリマー構造を確認し、第二のブロックの組成を計算した（図２）。Ｖｉｓｃｏｔｅｋ・ＧＰＣｍａｘ・ＶＥ２００１および屈折計ＶＥ３５８０（Ｖｉｓｃｏｔｅｋ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）を使用して、ＤＭＦ中のポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−マクロ−ＣＴＡおよびジブロック共重合体サンプルの両方の分子量および多分散（ＰＤＩ、Ｍｗ／Ｍｎ）を決定するために、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）を使用した。１．０重量％のＬｉＢｒを含有するＨＰＬＣ等級のＤＭＦを、移動相として使用した。図３Ａ、３Ｂおよび３Ｃは、それぞれ光散乱（ＬＡＩＳ）、屈折率（ＲＩ）、およびＵＶ吸収をモニタリングする溶出プロファイルを示している。
【０２８６】
実施例３：  ポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［ＤＭＡＥＭＡ］−ジブロックマクロＣＴＡからの、ＤＭＡＥＭＡ、ＰＡＡ、およびＢＭＡの第三のブロック共重合体（Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３）の調製
望ましい化学量論的量のＢＭＡ、ＰＡＡ、およびＤＭＡＥＭＡ（例えば５０：２５：２５）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中に溶解されたポリ［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［ＤＭＡＥＭＡ］−ジブロック（溶媒に対して２５重量％のモノマーおよびマクロＣＴＡ）に加えた。全ての重合について、［Ｍ］０／［ＣＴＡ］０および［ＣＴＡ］０／［Ｉ］０は、それぞれ２５０：１および１０：１であった。ＡＩＢＮの添加に続いて、該溶液を窒素で３０分間パージし、６８℃で６〜１２時間反応させた（図４）。得られたトリブロック共重合体を、アセトンからヘキサン／エーテル（７５／２５）中への４回の沈殿形成により単離し、真空中で終夜乾燥させた。ＣＤＣｌ３中でのＮＭＲ分光法を使用して、ポリマー構造を確認し、第二のブロックの組成を計算した（図５）。Ｖｉｓｃｏｔｅｋ・ＧＰＣｍａｘ・ＶＥ２００１および屈折計ＶＥ３５８０（Ｖｉｓｃｏｔｅｋ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）を使用して、ＤＭＦ中のマクロＣＴＡおよびトリブロック共重合体サンプルの分子量および多分散（ＰＤＩ、Ｍｗ／Ｍｎ）を決定するために、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）を使用した。１．０重量％のＬｉＢｒを含有するＨＰＬＣ等級のＤＭＦを移動相として使用した。図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃ当該トリブロックの特性決定を要約しており、それぞれ光散乱、屈折率（ＲＩ）、およびＵＶ吸収をモニタリングする溶出プロファイルを示している。Ｍｎ＝５２．５Ｋｄａ、ＰＤＩ＝１．４９。
【０２８７】
実施例４：  トリブロック共重合体［ＰＥＧＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ５０−Ｐ２５−Ｄ２６］のＮＭＲ分光法（図７）
この実施例は、ＮＭＲ分光法を使用して、トリブロックポリマーが水溶液中でミセル様構造を形成することの証拠を提供する。
【０２８８】
２５℃の重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）および重水（Ｄ２Ｏ）中において、Ｂｒｕｋｅｒ・ＡＶ３０１上で１Ｈ・ＮＭＲスペクトルを記録した。重水素ロック（ＣＤＣｌ３、Ｄ２Ｏ）を使用して、テトラメチルシラン（ＣＤＣｌ３について）および３−（トリメチルシリル）プロピオン−２，２，３，３−ｄ４酸ナトリウム塩（Ｄ２Ｏについて）からの化学シフトをｐｐｍで決定した。ポリマー濃度は６ｍｇ／ｍＬであった。
【０２８９】
一例としてトリブロックポリマーを使用して合成したポリマーの水性緩衝液中のＮＭＲは、本発明のトリブロックポリマーが水溶液中でミセルを形成することの証拠を提供した。ミセルの形成は、遮蔽された粘性の内部コアの形成を生じ、これはコアセグメントを形成するプロトンの移動を制限して、溶液とコアのプロトンの間の重水素交換を妨げる。これは対応するプロトンの１Ｈ・ＮＭＲ信号の有意性の抑制または消失によって反映される。我々は、溶液ＮＭＲ分光法のこの固有の性質を使用して、ミセルのコアの疎水性ブロックが効果的に遮蔽されることを示した。水性媒質中でミセルが形成されれば、疎水性共重合体ブロックのプロトンによる信号の消失が起きるはずである。
【０２９０】
図７は、Ｄ２Ｏ（水性溶媒）中でのトリブロックポリマーの１Ｈ・ＮＭＲ実験を示している。室温でのＣＤＣｌ３中におけるポリマーの１Ｈ・ＮＭＲ（示していない）は、全てのポリマープロトンに帰すべき信号を示した。このことは、該ポリマー鎖がＣＤＣｌ３中で分散したままであり、それらの移動が維持されるので、それらのプロトンが溶媒と交換できるであろうことを示している。これにより、有機溶媒中ではコアが遮蔽された安定なミセルは形成されないことが示された。図７は、Ｄ２Ｏ中でのトリブロックポリマーの１Ｈ・ＮＭＲスペクトルを示している。疎水性ブロック（ＢＭＡ、ＰＡＡ、ＤＭＡＥＭＡ）のプロトンを表す信号は、スペクトルから消失した。これは、水溶液中のトリブロックポリマーから、コアが遮蔽された安定なミセルが形成されたことを示している。更に、同じスペクトルにおいて、信号ＤＭＡＥＭＡの二つのメチル基のプロトンの共鳴に帰される信号（２．２８ｐｐｍ）が有意な抑制を受け、シェルの第二のブロックポリＤＭＡＥＭＡのみ、即ち、ＤＭＡＥＭＡの主に帯電基ならびにＰＥＧＭＡを構成する全てのプロトンが水に露出されたことを示唆した。総合すると、１Ｈ・ＮＭＲ実験の結果は、該トリブロックポリマーが秩序だったコア−シェル構造を備えたミセルを形成し、ここでは第一のブロックおよび第二のブロックが水和した外部シェルを形成し、該シェルが疎水性単位（ＢＭＡ）および逆電荷の静電的安定化単位（ＰＡＡ、ＤＭＡＥＭＡ）で構成されるコアを取り囲むことを示している。
【０２９１】
実施例５：  トリブロックポリマー［ＰＥＧＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３０］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ５０−Ｐ２５−Ｄ２５］の粒子のダイナミック光散乱（ＤＬＳ）測定（図８）
以下の例は、トリブロックポリマーが、サイズ５４ｎｍの均一な粒子を形成することを示している。
【０２９２】
トリブロックポリマーの粒子サイズは、マルベルン・ゼータサイザー・ナノＺＳ（Malvern Zetasizer Nano ZS）を使用して、ダイナミック光散乱によって測定した。図８Ａおよび図８Ｂは、それぞれ強度および容積による粒子サイズ分布を示している。ポリマーは、リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４（ＰＢＳ）中において、１ｍｇ／ｍＬで測定された。ポリマーは、ＰＤＩが０．１３０の概ね均一な分布を持った粒子サイズを示した。
【０２９３】
実施例６：  トリブロックポリマーの合成：［ＧＡＬ］−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］および［ＧＡＬ９０−ＭＡＡ１０］−［ＨＰＭＡ８０−ＰＤＳＭＡ１０−ＭＡＡ１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］
合成された構造は、式（ＰＩＩ）および式（ＰＩＩ.１）によって表される：
［ＧａＩ］４Ｋ−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］１２．０Ｋ−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２Ｓ］３０Ｋ
（ＰＩＩ）
【化２７】
0005766611.tif 000028
【０２９４】
実施例６．１：ＰＥＧ２ビニルモノマーの合成
合成は、スキーム１に要約したようにして、文献（Tew et al.;Polymer、2008、49、1761 -1769）に記載された方法を修飾して行った。
【化２８】
0005766611.tif 000029
【０２９５】
丸底フラスコに、ジエチレングリコール（１２０ｍｍｏｌ）を加え、続いて無水ＣＨ２Ｃｌ２（３３０ｍＬ）およびトリエチルアミン（１２０ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、アルゴンガス流の下に、０℃で５分間撹拌した。２５ｍＬの添加漏斗に、無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）および塩化メタクリロイル（９．３ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この塩化メタクリロイル溶液を、冷却した反応溶液中に３０分に亘って滴下により添加した。添加が完了した後に、この均一な混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで、３０分に亘って室温にまで加温した。次いで、該溶液を室温で終夜撹拌した。反応の進行を、ＳｉＯ２を固定相に用い、ＥｔＯＡｃおよびヘキサン（４：６ｖ／ｖ）を移動相に用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により追跡した（望ましい生成物のＲｆ＝０．２）。ＴＬＣプレートを、ホスホモリブジン酸で現像し、またはＵＶで可視化した。
【０２９６】
終夜の反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（１×１００ｍＬ）で洗浄し、次いでＨ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄した。その有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。
【０２９７】
次に、粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）の中に溶解し、ＥｔＯＡｃおよびヘキサンを４：６ｖ／ｖで用いた定組成溶離で、ＳｉＯ２カラムクロマトグラフィーを使用して精製した。ＵＶ現像を備えたＴＬＣを使用して、画分を分析した。望ましい生成物を含有する画分を合体させ、溶媒を蒸発させて、４．４５ｇの生成物を得た（２７％）。１Ｈ・ＮＭＲにより、正しい構造が立証された。
【０２９８】
例６．２：ガラクトースＯＡＣ−ＰＥＧ２ビニルモノマーの合成
合成は、スキーム２に要約したようにして、文献（Ambrosi et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 2002, 45-52）に記載の方法に変更を加えて行った。
【０２９９】
丸底フラスコに、３Åの分子篩（４．６ｇ、１５０℃で終夜活性化したもの）を加え、続いてＰＥＧ２ビニルモノマー（例６．１に記載のようにして調製した）（３．８３ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）および無水ＣＨ２Ｃｌ２（９０ｍＬ）を加えた。この混合物を４０℃で１５分間撹拌した。次いで、この反応混合物に臭化２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−ａ−Ｄ−ガラクトピラノシル（３．００ｇ、７．３３ｍｍｏｌ）を加え、続いてトリフルオロメタンスルホン酸銀（２．２７ｇ、８．８３ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を４０℃（±５℃）でアルゴン流の下に４時間撹拌した。反応の温度は、ドライアイスおよびアセトンの混合物を使用して手動で−４０℃（±５℃）に維持された。
【化２９】
0005766611.tif 000030
【０３００】
−４０℃で４時間の撹拌の後、反応混合物を室温にまで加温し、重力フィルターにより濾過し、次いで母液を蒸発させ、褐色油状物として粗生成物を得た。次いで、この褐色油状物を無水ピリジン（５０ｍＬ、６１８ｍｍｏｌ）中に溶解し、無水酢酸（１０ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物をアルゴン雰囲気下に室温で１．０時間撹拌して、未反応のアルコールをキャップした。
【０３０１】
次いで、ロータリーエバポレータを使用して該反応混合物を蒸発させ、褐色液体を得た。この濃縮された混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）中に溶解し、開放フラスコ中において室温で飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７５ｍＬ）と共に激しく撹拌し、何らかの残存するＡｃ２Ｏをクエンチした。溶液の閉鎖フラスコ中への移動は、全てのＡｃ２Ｏが反応し、最早ガスが発生しなくなった後に行われた（Ａｃ２Ｏをクエンチするために、＞１５分の反応時間が必要とされた）。全てのＡｃ２Ｏがクエンチされた後、該溶液は５００ｍＬの分離漏斗に移され、有機層が分離された。水層をＣＨ２Ｃｌ２（１×１００ｍＬ）で抽出し、全ての有機層を合体させた。次いで、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１×２０ｍＬ）で洗浄し、分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレータを使用して蒸発させて、粗生成物を得た。精製を試みる前の３０分以下の間、オイル真空ポンプを使用して、極低圧での蒸発により残留ピリジンを除去した。次いで、粗生成物を８０℃で終夜保存した。
【０３０２】
次いで、粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に溶解し、ＥｔＯＡｃおよびヘキサンを４：６ｖ／ｖで用いた定組成溶離で、ＳｉＯ２カラムクロマトグラフィーを使用して精製した。ＵＶ現像を備えたＴＬＣを使用して、画分を分析した。望ましい画分を合体させ、溶媒を蒸発させて、１．６ｇの生成物を得た（４３％）。１Ｈ・ＮＭＲにより、正しい構造が立証された。
【０３０３】
実施例６．３：  ポリマーゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）分析のための標準条件
全てのＧＰＣ分析は、ＵＶ／Ｖｉｓ、ＲＩ、粘度計、および光散乱検出器（ＲＡＬＳをおよびＬＡＬＳ）を備えたＶｉｓｃｏｔｅｃｋ・ＧＰＣ・ｍａｘ上で行われた。サンプル（１００μＬ、０．１〜０．３％ポリマー）を、直列の二つのＰｏｌａｒＧｅｌ−Ｍカラム（３００×７．５ｍｍ、ポリマーラボラトリーズ社）上において、ＤＭＦ／１％ＬｉＢｒ溶離液、６０℃、０．７５ｍＬ／ｍｉｎの流量で流した。このＧＰＣカラムは、ＰＭＭＡイージーバイアル標準（ポリマーラボラトリーズ社）で標準化された。
【０３０４】
実施例６．４：  ガラクトース−ＯＡｃ−ＰＥＧ２ビニルモノマーの重合
合成は、スキーム３に概説したように、次の通りに行った：実施例６．２で得たビニルガラクトースモノマー（１．５ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）、ＥＣＴ（１９．６ｇ、０．０７４４ｍｍｏｌ）、ＡＩＢＮ（０．３１ｍｇ、０．００１８６ｍｍｏｌ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ４０：１）およびＤＭＦ（０．９９ｍＬ）を、窒素下において、密封されたバイアル中に導入した。モノマー濃度は、ガラクトースモノマーの容積を算入せずに３Ｍであった。得られた溶液を、該混合物の中に３０分間窒素をバブリングすることにより脱ガスした。得られた溶液を加熱ブロックの中に置いた（温度計：６７〜６８℃；ディスプレー：７０〜７１；撹拌速度３５０ｒｐｍ）。５時間後、バイアルを氷上に置き、混合物を空気に露出させることにより反応を停止させた。２ｋＤａの膜を用い、メタノールに対して２時間透析することにより、得られたポリマーを精製した。還元雰囲気においてメタノールを除去し、ポリマーを少なくとも６時間真空下で乾燥した。
【化３０】
0005766611.tif 000031
【０３０５】
ポリマーの特性決定はＧＰＣ分析により行った。構造および組成は、１Ｈ・ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）により確認した。Ｍｎ＝５．８ｋＤａ、ＰＤＩ＝１．１４、ｄｎ／ｄｃ＝０．０７５。
【０３０６】
実施例６．５：  ポリジブロックポリマーであるポリ［ＧＡＬ（ＯＡＣ）ＰＥＧ２］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］（式ＩＶおよびＩＶ．１）の、ポリ［ＧＡＬ（ＯＡＣ）ＰＥＧ２］からの合成
ポリ［Ｇａｌ（ＯＡｃ）ＰＥＧ２］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］  （ＰＩＩＩ）
【化３１】
0005766611.tif 000032
【０３０７】
０．０４３４ｍｍｏｌのポリ［ＧＡＬ（ＯＡｃ）ＰＥＧ２］−マクロＣＴＡに、ＨＰＭＡ（０．８６０ｇ、５．９９６ｍｍｏｌ）およびＰＤＳＭＡ（０．１３３２ｇ、０．５２１６ｍｍｏｌ）、（１：１５０のＣＴＡ：モノマー）、ＡＩＢＮ（０．７１ｍｇ、０．００４３４ｍｍｏｌ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ＝１０：１）を加え、またＤＭＦ（２．６２ｍＬ）を窒素下に密封バイアルの中に導入した。モノマー濃度は約２．５Ｍであった。得られた溶液を、該混合物の中に窒素を３０分間バブリングすることによって脱ガスした。得られた溶液を熱ブロック上に４．５時間置いた（温度計：６８℃；ディスプレー：７０〜７１；撹拌速度３００ｒｐｍ）。４．５時間後、バイアルを氷上に置き、混合物を空気に露出させることにより反応を停止させた。メタノールに対して２４時間透析することにより、得られたポリマーを精製し、次いで少なくとも６時間真空下で乾燥した。ポリマー構造は１Ｈ・ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）および分析的ＧＰＣにより確認し、ポリマー分子量および多分散度を決定した：Ｍｎ＝１７．９ｄＤａ、ＰＤＩ＝１．２６。
【０３０８】
実施例６．６：  ジブロックポリマーであるポリ［ＧＡＬ（ＯＡＣ）ＰＥＧ２］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］（ＰＩＶ）からの、トリブロックポリマーであるＰＯＬＹ［ＧＡＬ（ＯＡＣ）ＰＥＧ２］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［ＤＭＡＥＭＡ−ＢＭＡ−ＰＡＡ］の合成
【化３２】
0005766611.tif 000033
【０３０９】
ＢＭＡ（０．８８ｇ、６．１６ｍｍｏｌ）、ＰＡＡ（０．３５１ｇ、３．０７５ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＥＭＡ（０．４８４ｇ、３．０７５ｍｍｏｌ）、工程６．５からのマクロＣＴＡ（０．５０７３ｇ、０．０２８４ｍｍｏｌ；１：４３４ＣＴＡ：モノマー）、ＡＩＢＮ（０．００２８４ｍｍｏｌ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ＝１０：１）およびＤＭＦ（２．２２ｍｌ）を、窒素下で密封バイアルの中に導入した。モノマー濃度は３Ｍであった。次いで、該混合物中に３０分間窒素をバブリングすることにより、得られた溶液を脱ガスした。この得られた溶液を、熱ブロックの中に１１時間置いた（温度計：６７〜６８℃；ディスプレー：７０〜７１；撹拌速度３５０ｒｐｍ、５０％の変換）。１１時間後、バイアルを氷上に置き、溶液を空気に露出させることにより反応を停止させた。得られたポリマーを、アセトン／ＤＭＦ＝１：１からヘキサン／エーテル＝７５／２５へと沈殿させることにより（３回）精製した。得られたポリマーを真空下で少なくとも８時間乾燥させ、１Ｈ・ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）により分析して正しい構造を確認し、また分析的ＧＰＣによりポリマー分子量および多分散を決定した。Ｍｎ＝４７ｋＤａ、ＰＤＩ＝１．７．
実施例６．７：  実施例６．６からポリマーを形成するためのトリブロックポリマーの脱保護
反応条件は、スキーム４に要約する通り、文献（J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 2002, 45-52）に記載の方法を変更したものである。
【化３３】
0005766611.tif 000034
【０３１０】
５０ｍＬの丸底フラスコに、実施例６．６からのポリマー（６８０ｍｇ、４３３４μｍｏｌのポリマー、１７３μｍｏｌのガラクトース、８７μｍｏｌのピリジルジスルフィド）を加え、続いて無水メタノール（３．０ｍＬ）、無水クロロホルム（１．５ｍＬ）、およびナトリウムメトキシド（７４．８ｍｇ、７４．８ｍｇ、１３８６μｍｏｌ、ガラクトースに対して８当量）を加えた。得られた混合物をアルゴン雰囲気下において室温で１．０時間撹拌した。次いで、氷酢酸（３９．７μＬ、６９３μｍｏｌ、ガラクトースに対して４当量）を反応に加え、続いて２，２’−ジピリジルジスルフィド（４９．５ｍｇ、２２５．２μｍｏｌ、ピリジルジスルフィドに対して２当量）を加えた。この混合物を室温で１．０時間、アルゴンガス流の下で撹拌した。
【０３１１】
２，２’−ジピリジルジスルフィドで１．０時間キャッピングした後、この反応をＭｅＯＨ（４ｍＬ）で希釈し、フィルターにより濾過した。この濾過した反応混合物を、２００分子量カットオフの透析膜（Spectrum Labs、Spectra/Por Dialysis Membrane MWCO: 2000）に移し、ＭｅＯＨ（２×５０ＯｍＬ）に対して２４時間透析した。透析が完了した後、ポリマーを丸底フラスコに移し、ロータリーエバポレータを使用して溶媒を蒸発させた。得られたポリマーを、ＣＤ３ＯＤおよびＤＭＦ−ｄ７を使用した１Ｈ・ＮＭＲにより分析して、正しい構造を確認した。ポリマーの溶液（４０ｍＭ）のゼータ電位を、５％グルコース、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．７）中で測定し、５．３１ｍＶと決定された（幅＝５．２５ｍＶ、４６．４ｋｃｐｓ、Ｍｏｂ：０．４２μｍｃｍ／Ｖｓ、Ｃｏｎｄ：０．１５ｍＳ／ｃｍ）。
【０３１２】
ポリマー上のピリジルジスルフィド官能基はＮＭＲ分光法で検出するのが困難なため、この官能基はＵＶ／ＶＩＳを使用して定量した（図２６）。この最終的なポリマー（１００ｍｇ）をＥｔＯＨ（１．０ｍＬ）中に溶解して、濃度１００ｍｇ／ｍＬのポリマー溶液を得た。該ポリマー溶液のアリコート（１０μＬ、１．０ｍｇ、６．６μｍｏｌ）を、Ｈ２Ｏ（８０μＬ）で希釈する前に、１．０Ｍのジチオトレイトール（１０μＬ、１０．０μｍｏｌ、ＤＴＴ）で１０分間処理し、０．０６６Ｍの還元されたポリマー溶液を得た。ピリジルジスルフィドの予想された取込みはポリマー上で２％なので、ポリマーが上記のようにＤＴＴで処理された後、脱離基のピリジン−２−チオンの濃度は１．３３ｍＭと予想されるであろう（即ち、０．０６６×０．０２＝０．００１３３Ｍ）。ピリジン−２−チオンの３４３ｎｍにおけるモル吸光度は、ε＝８．０８×１０３Ｍ−１ｃｍ−１であり（Hermanson, G. T. Bioconjugate Techniques, 1996, 1 st ed. Academic Press, an imprint of Elsevier, page 66）、また使用したＮａｎｏＤｒｏｐ分光計の経路長は０．１ｃｍであるから、上記で述べた還元されたポリマー溶液の予想吸光度は、Ａ＝１．０７５である。還元されたポリマー溶液のＵＶ／Ｖｉｓによる分析の後、実験的に決定された吸光度は、３４３ｎｍにおいてＡ＝０．４３８であった。これは、全ピリジルジスルフィド取込みの１％の実際の濃度での、ポリマー中のピリジルジスルフィド官能基の存在を証明した（理論的に計算された値は２％であった）。
【０３１３】
透析後、該ポリマーを無水ＥｔＯＨ中に１００ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、次いでＳｉＲＮＡとの接合反応に直接使用した。
【０３１４】
実施例７：  トリブロックポリマーへのＳｉＲＮＡの接合
［Ｇａｌ］４Ｋ−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］１２．０Ｋ−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］３０Ｋ
（ＰＶ）
【化３４】
0005766611.tif 000035
【０３１５】
実施例７．１：  ＧＡＰＤＨに対する活性化ＲＮＡ二本鎖の調製
チオール化されたｓｉＲＮＡの調製は次の通りであった。１５ｍＬのファルコン管に、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（１．０ｍｇ、３．５μｍｏｌ、ＴＣＥＰ）を加え、続いてＮａＨＣＯ３（１．２ｍｇ、１４．０μｍｏｌ）、Ｈ２Ｏ（５００μＬ）およびＧＡＰＤＨ−ＳＳＣ６ＯＨ二本鎖（５．０ｍｇ、０．３７μｍｏｌ、Ａｇｉｌｅｎｔテクノロジーズ社）を加えた。この混合物を室温で放置した。３０分後、５．０ＭのＮａＣｌ（２０．０μＬ）を加え、続いて冷（−２０℃）１００％ＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）を加えた。該混合物を８０℃の冷蔵庫の中に３０分間置いて、ＲＮＡ沈殿を達成した。次いで、このファルコン管を遠心分離してＲＮＡをペレット化した。母液を除去し、冷（＋４℃）７０％ＥｔＯＨ（１×１．０ｍＬ）を使用して、残留するＲＮＡペレットを磨砕した。残りのＲＮＡペレットを等張グルコース（５．０ｍＬ、５．０５重量％のグルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）に溶解して、ＲＮＡ濃度が０．７μｇ／μＬ（ＵＶ分析による）のＲＮＡ水溶液を得た。
【０３１６】
同様の方法により、以下の活性化されたＲＮＡ二本鎖（ＡｐｏＢに対する）をも調製した。
【０３１７】
実施例７．２：  トリブロックポリマー（式ＰＩＩ）およびジブロックポリマー（ガラクトースターゲッティングブロックを伴わない式ＩＩ）への活性なＲＮＡ二本鎖の接合
製剤１．  ポリマー（式ＰＩＩ）（５００ｍｇ）を１００％ＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）の中に溶解して、１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を有する溶液を得た。該ポリマー溶液のアリコート（３４．６９μＬ、２２．９μｍｏｌ）を、１５ｍＬのファルコン管の中に移した。このポリマー／ＥｔＯＨ溶液に、還元されたＧＡＰＤＨ・ＲＮＡ等張グルコース溶液（３００μＬ、３００μｇ・ＲＮＡ、０．０２２μｍｏｌ・ＲＮＡ、上記で述べた溶液標本）のアリコートを一度に添加した。この反応混合物を混合し、室温で放置した。反応の進行を、ゲル電気泳動（以下で述べる）によってモニターした。終夜（約１８時間)反応させた後、溶液を等張グルコース（２６６５．３μＬ、５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で希釈し、インビボ試験のために準備できている合計３．０ｍＬの製剤を得た。これは、製剤中において０．１ｍｇ／ｍＬの所期のｓｉＲＮＡ濃度、および１．１６ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を与えた。
【０３１８】
製剤２．  ポリマー（製剤ＰＩＩ）（５００ｍｇ）を１００％ＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）の中に溶解して、１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を有する溶液を得た。該ポリマー溶液のアリコート（１５１．３μＬ、９９．９μｍｏｌ）を、１５ｍＬのファルコン管の中に移した。このポリマー／ＥｔＯＨ溶液に、還元されたＧＡＰＤＨ・ＲＮＡ等張グルコース溶液のアリコート（３００μＬ、０．０２２μｍｏｌのＲＮＡ、上記で述べた溶液標本）を一度に添加した。この反応混合物を混合し、室温で放置した。反応の進行は、ゲル電気泳動（以下で述べる）によってモニターした。終夜（約１８時間）反応させた後、溶液を等張グルコース（２５４８．７μＬ、５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で希釈し、インビボ試験のために準備できている合計３．０ｍＬの製剤を得た。これは、製剤中において０．１ｍｇ／ｍＬの所期のｓｉＲＮＡ濃度、および５．０４ｍｇ／ｍＬの所期のポリマー濃度を与えた。該接合体のゼータ電位を測定し（５％グルコース、１０ｍＭＨｅｐｅｓ／ｐＨ７．４中の４０ｍＭ（ポリマーに基づく））、１．２．ｍＶ（幅＝５．７１ｍＶ、１００．６ｋｃｐｓ、Ｍｏｂ・０．０９μｍｃｍ／Ｖｓ、Ｃｏｎｄ・０．１５ｍＳ／ｃｍ）と決定された。
【化３５】
0005766611.tif 000036
【０３１９】
製剤３．  前記ポリマー（式ＰＩＩ）（５００ｍｇ）を１００％ＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）の中に溶解して、１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を有する溶液を得た。該ポリマー溶液のアリコート（６９．５４μＬ、４５．９μｍｏｌ）を、１５ｍＬのファルコン管の中に移した。このポリマー／ＥｔＯＨ溶液に、還元されたＧＡＰＤＨ・ＲＮＡ等張グルコース溶液のアリコート（６００μＬ、６００μｇのＲＮＡ、０．４４μｍｏｌ・ＲＮＡ、上記で述べた溶液標本）を一度に添加した。この反応混合物を混合し、室温で放置した。反応の進行は、ゲル電気泳動（以下で述べる）によってモニターした。終夜（約１８時間）反応させた後、溶液を等張グルコース（２３３０．５μＬ、５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で希釈し、インビボ試験のために準備できている合計３．０ｍＬの製剤を得た。これは、製剤中において０．２ｍｇ／ｍＬの所期のｓｉＲＮＡ濃度、および２．３２ｍｇ／ｍＬの所期のポリマー濃度を与えた。
【０３２０】
製剤４．  前記ポリマー（式ＰＩＩ）（５００ｍｇ）を１００％ＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）の中に溶解して、１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を有する溶液を得た。該ポリマー溶液のアリコート（２９５．６μＬ、１９５．１μｍｏｌ）を、１５ｍＬのファルコン管の中に移した。このポリマー／ＥｔＯＨ溶液に、還元されたＧＡＰＤＨ・ＲＮＡ等張グルコース溶液のアリコート（６００μＬ、６００μｇのＲＮＡ、０．４４μｍｏｌ・ＲＮＡ、上記で述べた溶液標本）を一度に添加した。この反応混合物を混合し、室温で放置した。反応の進行は、ゲル電気泳動（以下で述べる）によってモニターした。終夜（約１８時間）反応させた後、溶液を等張グルコース（２１０４．４μＬ、５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で希釈し、インビボ試験のために準備できている合計３．０ｍＬの製剤を得た。これは、製剤中において０．２ｍｇ／ｍＬの所期のｓｉＲＮＡ濃度、および９．８５ｍｇ／ｍＬの所期のポリマー濃度を与えた。
【０３２１】
製剤５．  前記ポリマー（ガラクトースブロックを伴わない式ＰＩＩ）（２００ｍｇ）を１００％ＥｔＯＨ（２．０ｍＬ）の中に溶解して、１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を有する溶液を得た。該ポリマー溶液のアリコート（１２６．５μＬ、８８．１５μｍｏｌ）を、１５ｍＬのファルコン管の中に移した。このポリマー／ＥｔＯＨ溶液に、還元されたＧＡＰＤＨ・ＲＮＡ等張グルコース溶液のアリコート（３００μＬ、０．２２μｍｏｌ・ＲＮＡ、上記で述べた溶液標本）を一度に添加した。この反応混合物を振盪し、室温で放置した。反応の進行は、ゲル電気泳動（以下で述べる）によってモニターした。終夜（約１８時間）反応させた後、溶液を等張グルコース（２５７３．５μＬ、５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で希釈し、インビボ試験のために準備できている合計３．０ｍＬの製剤を得た。
【０３２２】
製剤６．  ポリマー（ガラクトースブロックを含まない式ＰＩＩ）（２００ｍｇ）を、１００％ＥｔＯＨ（２．０ｍＬ）の中に溶解して、１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を有する溶液を得た。該ポリマー溶液のアリコート（５９．７８μＬ、４７．７μｍｏｌ）を、１５ｍＬのファルコン管の中に移した。このポリマー／ＥｔＯＨ溶液に、還元されたＧＡＰＤＨ・ＲＮＡ等張グルコース溶液のアリコート（６００μＬ、０．４４μｍｏｌ・ＲＮＡ、上記で述べた溶液標本）を一度に添加した。この反応混合物を振盪し、遠心分離し、室温で放置した。反応の進行は、ゲル電気泳動（以下で述べる）によってモニターした。室温で終夜（約１８時間）反応させた後、溶液を等張グルコース（２３４０．２μＬ、５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で希釈し、インビボ試験のために準備できている合計３．０ｍＬの製剤を得た。
【０３２３】
同様の方法により、トリブロックポリマー（式ＰＩＩ）およびジブロックポリマー（ガラクトースブロックを伴わない式ＰＩＩ）に接合した活性化されたＲＮＡ二本鎖（ＡｐｏＢ）を用いて、以下の製剤を調製した。ポリマーを、１００ｍｇ／ｍＬでＥｔＯＨ中に採取した。活性化されたＲＮＡ二本鎖を等張グルコース中に溶解し、ＲＮＡ濃度が１．０μｇ／μＬ（ＵＶ分析による）のＲＮＡ水溶液を得た。１６時間後、この混合物に追加の等張グルコース（５．０ｍＬ、５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）を加えて、最終容積を３．０ｍＬにした。
【表１】
0005766611.tif 000037
【０３２４】
実施例７．３：  ゲル電気泳動分析
接合反応を、ゲル電気泳動（２０％ポリアクリルアミド、インビトロゲン社からの１×ＴＢＥゲル、２０Ｖで約１時間のための１×ＴＢＥ緩衝液、２．５μＬｎｏＳＹＢＲ金を用いて５０ｍＬの１×ＴＢＥ中で１５分間染色した）により分析した。上記で調製したインビボサンプルの３．０ｍＬのアリコートを抜き取り、希釈系列を調製した。例えば、サンプル（４．０μＬ）を青色素負荷緩衝液（６．０μＬ）で希釈して、最終ＲＮＡ濃度が０．０４μｇ／μＬのサンプルを得た。次いで、４μＬのこの希釈サンプルをゲルに適用した。同様に、サンプル（４．０μＬ）をＤＴＴ（１．０μＬ、１．０Ｍ溶液）で１０分間処理し、その後、２．５％ＳＤＳ（２．０μＬ）およびローディング緩衝液（３．０μＬ）で更に希釈して、０．０４μｇ／μＬの最終ＲＮＡ濃度をもったサンプルを得た。次いで、４μＬのこの還元された溶液もまた、分析のためにゲルに適用した。
【０３２５】
実施例８．１：  一般的トランスフェクション方法およびノックダウン活性の決定
細胞は、別途注記しない限り、ＡＴＣＣ（バージニア州マナッサス）から購入し、分譲業者の説明書に従って培養した。細胞を、１０，０００細胞／ウエルの密度で９６ウエルプレートに播種し、１０％ＦＢＳ（１００μＬ）を含むＭＥＭ培地中で終夜付着させた。トランスフェクションサンプルを、ＩＴＧ（５．０５重量％グルコース、１０ｍＭ・ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）またはＰＢＳを用いて２５μＬの最終容積まで希釈し、細胞に加えた(１２５μＬの最終容積)。２４時間後に、ｓｉＲＮＡに媒介されたＧＡＰＤＨまたはＡｐｏＢ・ｍＲＮＡ還元が評価された。培地を除去し、細胞をＰＢＳで濯いだ。細胞培養ウエルからの直接の二段階ＲＴ−ＰＣＲを、Ｆａｓｔ・ＳＹＢＲ・Ｇｒｅｅｎ・Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−Ｃｔ・Ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ社）を使用して行った。ＳＹＢＲグリーンＰＣＲ；ＧＡＰＤＨおよびＲＰＬ１３Ａ内部正規化遺伝子のためのプライマーを使用して、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓリアルタイムＰＣＲシステムを用い、リアルタイムＰＣＲを行った。反応（合計２０μＬ）は、１０μＬの２Ｘ・Ｆａｓｔ・ＳＹＢＲグリーンＰＣＲ・Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ、１μＬのプライマー、および９μＬのヌクレアーゼを含まない水中の１：４希釈されたｃＤＮＡからなっていた。以下のＰＣＲパラメータが利用された：９５℃で２０秒、続いて９５℃で３秒および６０℃で３０秒の４０サイクル。閾値サイクル（ＣＴ）分析を使用してＧＡＰＤＨを定量し、ＲＰＬ１３Ａに対して、且つ未処理細胞の発現に対して相対的に正規化された。ＡｐｏＢノックダウンのために、細胞を先に記載したようにして処理した。
【０３２６】
実施例８．２：  マウスへの尾静脈注射によるＩＶ送達に続いて、トリブロックポリマー（式ＰＩＩ）に接合されたｓｉＲＮＡを用いた、生細胞におけるインビボ生体分布およびｍＲＮＡノックダウン
実施例８．３：  一般的方法
７〜９週齢の雌Ｂａｌｂ／Ｃマウス（チャールズリバーラボラトリーズ社）に、０．０１ｍＬ／ｇ、グループ当たりｎ＝５の容積で、尾静脈を介してｓｉＲＮＡポリマー製剤を投与した。ＡｐｏＢおよびＧＡＰＤＨのためのｓｉＲＮＡ配列は、下記の示す通りであった。
【０３２７】
ＲＮＡ配列：
【表２】
0005766611.tif 000038
【０３２８】
ｍ＝２’−Ｏ−メチル修飾の、ｒ＝リボヌクレオチド、ｄ＝デオキシヌクレオチド
投与後１８〜４８時間で動物を屠殺した。血液化学分析についての血清単離のための心臓穿刺を介して、血液を採取した。肝臓組織を単離し（左葉の下２／３）、ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ社）中に配置し、組織振盪を改善するために小片に切断した。ＭｉｃｒｏＡｒｒａｙｓ全ＲＮＡ単離キット（Ａｍｂｉｏｎ社）のためのＭａｇＭＡｘ−９６を使用して、ＲＮＡを単離した。高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Ａｐｐｌｉｅｄ・Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を使用して、ＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。ＳＹＢＲ・ＧｒｅｅｎリアルタイムＰＣＲを行って、ｓｉＲＮＡ標的遺伝子ＡｐｏＢおよびＧＡＰＤＨ、並びに正規化遺伝子Ｃａｌｎｅｘｉｎ１およびＨｐｒｔｉのｍＲＮＡレベルを調べた（プライマー配列を下記に示す）。
【表３】
0005766611.tif 000039
【０３２９】
ステップワンソフトウエア２．１版（Ａｐｐｌｉｅｄ・Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を使用して、標的遺伝子を両方の正規化遺伝子に対して正規化した。各緩衝液対照サンプルからのｃＤＮＡアリコートをプールし、各試験サンプルに対して比較するために使用した。加えて、各緩衝液対照サンプルはプールされた緩衝液サンプルと比較された。投与後４８時間で採取された血液サンプルについての血液化学分析を、フェニックスセントラルラボラトリーズ（Phoenix Central Laboratory ；Everett, A）において行った。
【０３３０】
ハイブリダイゼーション試験によりｓｉＲＮＡを検出するための生体分布／ＰＫ研究のために、以下の実験を行った。７〜９週齢のＢａｌｂ／Ｃマウスに対して、尾静脈を介して、ＧＡＰＤＨもしくはＡｐｏＢのｓｉＲＮＡ−ポリマー製剤を投与した。投与後１時間に動物を屠殺した。心臓穿刺を介して血液を採取し、室温で凝血させ、遠心分離して血清を採取し、次いで後での分析のために、氷上または−２０℃で保存した。血液に加えて、分析のために肝臓、脾臓、腎臓、および肺の組織を採取した。〜５０ｍｇ片の組織を秤量し、〜１ｍＬの組織ホモジナイズ緩衝液（３Ｍのイソチオシアン酸グアニジニウム／１０ｍＭのＥＤＴＡ／０．１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５、０．５ＭのＮａＣＩ）を含んだホモジナイズ管の中に置いて、５０ｍｇ／ｍＬの最終組織濃度にした。ＦａｓｔＰｒｅｐ２４ホモジナイザーを使用して、組織を各々２０秒間で３回（各実行サイクル間で３分の休止）ホモジナイズした。サンプルを５分間氷上に置き、続いて１２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。組織ホモジネートのアリコートを９６ウエルのプレートに写し、後での使用のために、氷上またはー２０℃で保存した。血液および組織サンプルにおけるｓｉＲＮＡレベルを測定するために、ストレプトアビジンで被覆された９６ウエルのプレートを捕獲オリゴ、即ち、ｓｉＲＮＡアンチセンス鎖の９ヌクレオチドに対して相補的なビオチン化オリゴと共にインキュベートした。この捕獲オリゴを、２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣＩ、ｐＨ７．５中で２５０ｎＭにまで希釈し、１００μＬ／ウエルを各プレートに添加し、プレート震盪機上において室温で３０分間インキュベートさせた。０．２９３ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬ（３００ｎｇ／ｍＬから始まる１１の２倍希釈系列）のｓｉＲＮＡ標準曲線、並びに血清および組織サンプルの希釈を、希釈緩衝液（１Ｍイソチオシアン酸グアニジニウム／１０ｍＭのＥＤＴＡ／０．１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５、０．５ＭのＮａＣＩ）中において調製した。これらのサンプルを９０℃に１０分間加熱した。一方、捕獲プローブで被覆されたプレートを、洗浄用緩衝液（１ＭのＮａＣｌ、０．１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ９．０、２ｍＭのＭｇＣｌ２、１％のツウィーン２０）で２回洗浄した。アンチセンス鎖の残り１１ヌクレオチドに対して相補的な、希釈緩衝液中で０．１μＭに希釈された５０μＬ／ウエルのフルオレセイン標識したレポータオリゴを、プレートに加えた。非常に迅速に作業することにより、９０℃のインキュベーションから、５０μＬ／ウエルのｓｉＲＮＡ標準および希釈組織サンプルを、フルオレセイン標識したオリゴを含むプレートに２回添加した。サンプルを、室温で５分間インキュベートした。プレートの内容物を廃棄し、プレートを洗浄用緩衝液で５回洗浄した。ＰＢＳ中で１５ｍＵ／ｍＬに希釈された１００μＬ／ウエルの、ＨＲＰ標識された抗フルオレセインＦａｂ（ロッシュ社）を加えた。プレートを室温で１時間、プレート震盪機上でインキュベートし、次いで洗浄用緩衝液で５回洗浄した。１００μＬ／ウエルのＴＭＢ基質を添加し、暗所で１０分間インキュベートした。１００μＬ／ウエルの停止溶液（１Ｍリン酸）を加える。プレートを４５０ｎｍＯ．Ｄ.で読取った。読出し値をｓｉＲＮＡのｎｇ／ｍｇ組織としてプロットし、ここにおいて組織中のｓｉＲＮＡ濃度は、標準曲線からｓｉＲＮＡのｎｇとして決定した。次いで、これらの値を、出発溶液からの５０ｍｇ／ｍＬ組織濃度で除算した。
【０３３１】
実施例８．４：  トリブロックポリマー（式ＰＩＩ)に接合されたｓｉＲＮＡの複合体のマウスへの尾静脈送達後の、生体分布研究およびＧＡＰＤＨ／ＡＰＯＢノックダウン
先に記載したように、尾静脈注射によって複合体をマウスに送達した。
【表４】
0005766611.tif 000040
【０３３２】
生体分布研究は、先に記載したようにして実施した。ノックダウン試験は先に記載したようにして実施した。
【０３３３】
実施例８．５：  トリブロックポリマーに接合されたｓｉＲＮＡ複合体のマウスへの尾静脈送達後の、ＧＡＰＤＨ／ＡＰＯＢノックダウン
トリブロックポリマーに接合されたｓｉＲＮＡを、先に記載したようにして（実施例７．２）調製した。得られたｓｉＲＮＡトリブロックポリマー接合体は、列挙した研究プロトコールの下で先に記載したように、尾静脈注射によってマウスに送達された。投与後２４〜４８時間において、動物を屠殺し、実施例８．３において先に詳述したようにして、ｍＲＮＡレベルを決定した。
【表５】
0005766611.tif 000041
【０３３４】
これらのトリブロックポリマー−ｓｉＲＮＡ接合体インビボノックダウン活性研究からの結果は、以下の表中に見られる。
【表６−１】
0005766611.tif 000042
【表６−２】
0005766611.tif 000043
【０３３５】
特記事項：
ａ：投与前７日間４℃で保存された製剤。ｂ：Ｃ５７ブラックマウスへの注射
実施例９：  トリブロックポリマー［ＰＥＧＭＡｘ−ＢＰＡｍＹ］−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］、およびフォレートターゲッティングリガンドおよびｓｉＲＮＡとの重合後接合
特定の細胞表面受容体をターゲッティングする小分子リガンド（例えばフォレート）をトリブロックポリマーの中に組込むための方法を記載する。第一の共重合体ブロックは、反応性アミン（ＢＰＡｍと称するそのＢｏｃ保護された形態で重合される）および任意に第二の親水性モノマー（例えばＰＥＧＭＡまたはＨＰＭＡ）を含んでいる。ポリマー合成に続いて、Ｂｏｃ保護基が除去されて、活性化された小分子ターゲッティング剤と反応して安定な接合体を形成できるアミンを生じる。ポリマー中のＢＰＡｍ（Ｙ）のモル％および第二の親水性モノマー（Ｘ）のモル％、並びにブロックサイズ（Ｍｎ１）は、ターゲッティング分子の最も効果的な結合価を達成して、ターゲッティング効率を最適化するために変化させることができる。合成される構造は、式ＶＩＩおよび式ＶＩＩ．１によって表される。
【０３３６】
［ＰＥＧＭＡＸ−ＢＰＡｍＹ］Ｍｎ１−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］Ｍｎ２
−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］Ｍｎ３      （ＰＶＩ）
【化３６】
0005766611.tif 000044
【０３３７】
実施例９．１：ＢＯＣ保護されたアミンビニルモノマーの合成
【化３７】
0005766611.tif 000045
【０３３８】
この合成はスキーム６に表されている。１００ｍＬの水および１ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液の混合物中のアミン（０．５１ｇ、１００ｍｍｏｌ）の溶液に対して、２００ｍＬのＴＨＦ中のＢｏｃ酸無水物（２２．９４ｇ、１０５ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を室温で終夜撹拌させる。該混合物に、１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液および４００ｍＬのＥｔＯＡｃを加える。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、蒸発させる。残渣を真空下で乾燥して、粗生成物を透明な油状物として得る。この化合物は、精製を伴うことなく次の工程で使用される。
【０３３９】
工程１からの粗生成物（１９．８０ｇ、９６．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１６．１ｍＬ、１１５ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１８０ｍＬ）中に溶解し、該溶液を０℃にまで冷却し、塩化メタクリロイル（１１．２ｍＬ、１１５ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下において、０℃でシリンジを介して徐々に加える。この反応混合物を室温にまで徐々に加温し、室温で終夜撹拌する。次いで、反応を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍＬ）およびジクロロメタン（１５０ｍＬ）で希釈する。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、真空下で蒸発させる。その生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（エーテル／ヘキサン：１／１）により精製する。生成物を含有する画分をプールし、蒸発させる（Ｒｆ＝０．３５）。１Ｈ・ＮＭＲおよびＴＬＣは、少量の不純物（約２〜３％）を示すかもしれない。化合物をシリカゲル上で精製する（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／３）。生成物を含有する画分を蒸発させた後に、透明な無色油状物が得られる。この生成物は、緊密にキャップされたフラスコの中に、−２０℃において空気下に保存される。その構造は、１Ｈ・ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）によって確認される。
【０３４０】
実施例９．２：［ＰＥＧＭＡＸ−ＢＰＡＭＹ］−ＣＴＡの合成
トリブロックポリマーの第一のブロックを合成し、実施例１に記載したようにして精製した。ＰＥＧＭＡおよびＢＰＡｍのためのビニルモノマーの供給比は、望ましい組成をほぼ反映するように選択した。例えば、５０：５０または８０：２０の供給比は、同様の分子反応性をもったモノマーについて、それぞれ約５０％ＰＥＧＭＡおよび５０％ＢＰＡｍ、または８０％ＰＥＧＭＡおよび２０％ＢＰＡｍの相対的モル％を与えてよい。望ましいモル組成の精密な調節は、実験的に決定される。第一のブロックの分子量は、ターゲッティングリガンドの望ましい結合価に依存して約５〜１５ｋＤａに調節することができ、実験的に決定される。構造は１Ｈ・ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）によって確認される。
【０３４１】
実施例９．２：  ［ＰＥＧＭＡＸ−ＢＰＡｍＹ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−ＣＴＡの合成
実施例９．１に記載したように合成した［ＰＥＧＭＡｘ−ＢＰＡｍＹ］−ＣＴＡを含めて、実施例６．５に記載したようにしてトリブロックの第二のブロックを合成し、特性決定した。典型的には、モル組成は９０％ＨＰＭＡおよび１０％ＰＤＳＭＡであり、重合反応におけるビニルモノマーの供給比を調節することによって製造される。第二のブロックの分子量は、典型的には５〜５０ｋＤａである。構造は１Ｈ・ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）によって確認される。
【０３４２】
実施例９．３：  θＦ［ＰＥＧＭＡＸ−ＢＰＡＭＹ］−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］の合成
実施例９．２に記載したようにして合成した、マクロ−ＣＴＡとしての重合反応における［ＰＥＧＭＡｘ−ＢＰＡｍＹ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−ＣＴＡを含めて、実施例６．６に記載したようにしてトリブロックポリマーの第三のブロックを合成した。典型的には、モル組成は２５％ＤＭＡＥＭＡ、５０％ＢＭＡおよび２５％ＰＡＡであり、重合反応におけるビニルモノマーの供給比を調節することによって製造される。第三のブロックの分子量は、典型的には２０〜４０ｋＤａである。構造は１Ｈ・ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）によって確認される。
【０３４３】
実施例９．４：  トリブロックポリマーのＢＯＣ基の脱保護
トリブロックポリマーのターゲッティングブロックを活性化されたターゲッティングリガンドと反応させる前に、ＢＯＣ保護基を除去して、反応性の一級アミンを生じさせる。（実施例６．６に記載のような）透析工程および蒸発の後に、Ｎ２下に無溶媒のＴＦＡを加え、脱プロトン反応を室温で２時間行い、続いてエーテル沈殿を行う。構造は１Ｈ・ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）によって確認される。
【０３４４】
実施例９．５：  ［ＰＥＧＭＡｘ−ＭＡ（フォレート）Ｙ］−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳＭＡ１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］を製造するための、トリブロックポリマーの第一のブロックへのフォレートターゲッティングリガンドの接合
フォレートを、カルボジイミド法を使用することによって、そのγカルボン酸を介してスペーサ単位Ｈ２ＮＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＢＯＣに結合させる。葉酸を、ジメチルスルホキシド中に溶解する。得られた溶液を、１〜４倍モル過剰のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）および５モル当量のＮ−ヒドロキシスクシンイミドに加え、該反応を、Ｎ２下に室温で１６時間撹拌する。活性化されたフォレート−ＮＨＳ化合物を、ジエチルエーテルを用いた沈殿により単離し、続いてジエチルエーテルおよびアセトンで洗浄する。単離された化合物を真空下で乾燥し、構造を１Ｈ・ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）により確認する。γ−カルボキシレート活性化のα−カルボキシレート活性化に対するレベルは、約３：１である。
【０３４５】
ジメチルスルホキシド中の活性化されたフォレート−ＮＨＳ化合物に、１〜２倍モル過剰のＨ２ＮＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＢＯＣを、１等量のトリエチルアミンと共に加える。この反応を、Ｎ２下に室温で１６時間撹拌する。Ｂｏｃ−アミン修飾されたフォレートを、ジエチルエーテルを用いた沈殿により単離し、続いてジエチルエーテルで洗浄する。この単離された化合物を真空下で乾燥し、構造を１Ｈ・ＮＭＲにより確認する。
【０３４６】
葉酸誘導体をポリマーと反応させる前に、実施例９．４に記載したように、Ｂｏｃ保護基を除去して、葉酸誘導体上に反応性の一級アミンを生じさせる。このアミン修飾されたフォレートを、ジエチルエーテルを用いた沈殿により単離し、続いてジエチルエーテルで洗浄する。この単離された化合物を真空下で乾燥し、構造を１Ｈ・ＮＭＲにより確認する。
【０３４７】
１０倍モル過剰のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を、ジメチルスルホキシド中の上記アミン修飾されたフォレートに添加し、該反応を室温で１６時間撹拌する。得られたフォレート由来のイミダゾール尿素を、ジエチエーテルを用いた沈殿により単離し、続いてジエチルエーテルで洗浄して未反応のＣＤＩおよびイミダゾールを除去する。次いで、５倍モル過剰のイミダゾール尿素を、ジメチルスルホキシド中の脱保護されたポリマー（セクション９．４）と混合する。室温で１６時間の後、水に対する透析（２０００ＭＷＣＯ透析膜）に続く凍結乾燥により生成物を単離する。トリブロックポリマーを含むフォレートの構造が、１Ｈ・ＮＭＲにより確認される。
【０３４８】
実施例９．６：  ［ＰＥＧＭＡＸ−ＭＡ（フォレート）Y］−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳ（ｓｉＲＮＡ）１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］を製造するための、トリブロックポリマーの第二のブロックへのｓｉＲＮＡの接合
［ＰＥＧＭＡＸ−ＭＡ（フォレート）Ｙ］−［ＨＰＭＡ９０−ＰＤＳ（ｓｉＲＮＡ）１０］−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］      （ＰＶＩＩ）
【化３８】
0005766611.tif 000046
【０３４９】
標的とされるトリブロックポリマーの構築における最終段階は、ｓｉＲＮＡをトリブロックポリマーの第二のブロックに接合して、式ＰＶＩＩおよびＰＶＩＩ．１により表される最終ポリマー構造を製造することを含んでいる。この接合反応は、実施例７に記載したようにして行われる。最初に、チオール化（活性化）されたｓｉＲＮＡが調製され（実施例７．１）、次いで、これはトリブロックポリマーの第二のブロック（実施例７．２）におけるＰＤＳ基と反応されて、ポリマー−ｓｉＲＮＡ接合体を形成する。
【０３５０】
フォレート受容体をターゲッティングする第一のブロック、および接合されたｓｉＲＮＡを含んだ第二のブロックを含有する最終のトリブロックポリマーを、実施例８に記載したようにして、生物学的活性（即ち、遺伝子特異的ノックダウン活性）について分析する。二つの異なる細胞株を使用することができ、一つは特異的フォレート受容体を発現するものであり、他方はフォレート受容体を発現しない対照細胞である。フォレート受容体を介した細胞型特異的ターゲッティングおよびノックダウンを証明するために使用できる複数の細胞株が記載されている（例えば、e.g., Low PS, Kularatne SA. folate-targeted therapeutic and imaging agents for cancer. Curr Opin Chem Biol. 2009 Jun; 13(3):256-62.）。
【０３５１】
実施例１０：  親水性ブロックにＭＡＡ単位を含んでなるトリブロックポリマー
別法として、トリブロックポリマーは、式（ＰＶＩＩＩ）および式（ＰＩＸ）によって表されるポリマーブロック１および２へのメタクリル酸（ＭＡＡ）の付加によって合成された。酸性残基の付加は、当該ポリマーの親水性／可溶性を増大させた。
【０３５２】
実施例１０．１：  ポリマーＰＶＩＩＩの合成
【化３９】
0005766611.tif 000047
【０３５３】
工程１．  マクロＣＴＡ［Ｎａｇ−Ｐ３８０％−ｃｏ−ＭＡＡ２０％］
Ｏ−アセチル保護されたＮ−アセチルガラクトサミンモノマーのＮａｇ−Ｐ３−ＭＡ（１．５ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）、ＭＡＡ（０．０５９ｇ、０．６８５ｍｍｏｌ）、ＥＣＴ（２２．５ｍｇ、０．０８５６ｍｍｏｌ、１：４０ ＣＴＡ：モノマー類）、ＡＩＢＮ（０．３５１ｍｇ、０．００２１４ｍｍｏｌ、ＥＣＴ：ＡＩＢＮ＝４０：１）およびＤＭＦ（１．６４ｍＬ）を、窒素下に密封バイアル中に導入した。モノマー濃度は、〜２．１Ｍであった。次いで、該混合物中に窒素を３０分間バブリングすることにより、この混合物を脱ガスした。それらをヒータブロックに置いた（温度計：６８℃；ディスプレー；７０〜７１；撹拌速度３００ｒｐｍ）。この反応を９時間５分放置した。該バイアルを氷の中に置き、また混合物を空気に露出させることによって、反応を停止させた。メタノールに対して３６時間透析することによって、ポリマーの精製を行った。その後、溶媒を除去した。得られたポリマーを、真空下で少なくとも６時間乾燥させた。得られたマクロＣＴＡの構造および組成は、１Ｈ・ＮＭＲにより確認した。該生成物の分子量（１２．７ｋＤａ）およびその多分散（１．１）は、ＧＰＣ分析により決定した。
【０３５４】
工程２：  マクロＣＴＡ［Ｎａｇ−Ｐ３８Ｏ％−ＭＡＡ２０％］−ｂ−［ＨＰＭＡ８２−ＰＤＳＭＡ８−ＭＡＡ］の調製
ＨＰＭＡ（０．５５６ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）、ＰＤＳＭＡ（０．０９７ｇ、０．３７９ｍｍｏｌ）、［Ｎａｇ−Ｐ３８０−ＭＡＡ２０］マクロＣＴＡ（０．３０ｇ、０．０３１５ｍｍｏｌ；１：１５０ ＣＴＡ：モノマー類）、ＡＩＢＮ（０．５２ｍｇ、０．００３１６ｍｍｏｌ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ １０：１）およびＤＭＦ（１．５２ｍｌ）を、窒素下で密封バイアルの中に導入した。モノマー濃度は、〜３．０Ｍであった。次いで、該混合物中に窒素を３０分間バブリングすることにより、この混合物を脱ガスした。それらをヒータブロックに置いた（温度計：６８℃；ディスプレー；７０〜７１；撹拌速度３００ｒｐｍ）。この反応を５時間進行させ、次いで、該バイアルを氷の中に置き、また混合物を空気に露出させることによって反応を停止させた。メタノールに対して３６時間透析することによって、ポリマーの精製を行った。溶媒を除去し、得られたポリマーを真空下で少なくとも６時間乾燥させた。ＮＭＲスペクトルは、生成物の高い純度を示した。未反応のモノマーに対応するビニル基は観察されなかった。生成物のＧＰＣ分析は、正しい分子量（トリプレット検出により１９ｋＤａ、ＵＢ吸収によるリビング末端の９３％）および良好な多分散（１．１）を与えた。
【０３５５】
工程３．  保護された［Ｎａｇ−Ｐ３−ＭＡＡ］−ｂ−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−ｂ−［ＢＭＡ−ＰＡＡ−ＤＭＡＥＭＡ］の調製
ＢＭＡ（０．７７６ｇ、５．４５８ｍｍｏｌ）、ＰＡＡ（０．３１２ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＥＭＡ（０．４２９ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）、ＭａｃｒｏＣＴＡ（０．８８１ｇ、０．０２７５７ｍｍｏｌ；１：３９６ ＣＴＡ：モノマー類）、ＡＩＢＮ（０．４５２ｍｇ、０．００２７５７ｍｍｏｌ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ １０：１）およびＤＭＦ（１．９８６ｍＬ）を、窒素下で密封バイアルの中に導入した。モノマー濃度は３Ｍであった。次いで、この混合物中に窒素を３０分間バブリングすることにより該混合物を脱ガスし、それらをヒータブロックに置いた（温度計：６７〜６８℃；ディスプレー；７０〜７１；撹拌速度３５０ｒｐｍ）。この反応を１１時間進行させた（５０から６０％の変換を想定）。該バイアルを氷の中に置き、また混合物を空気に露出させることによって反応を停止させた。アセトン／ＤＭＦ＝１：１からヘキサン／エーテル＝７５／２５への沈殿（３回）によって、ポリマーの精製を行った。得られたポリマーを真空下で少なくとも８時間乾燥させた。ＮＭＲスペクトルは、生成物の高い純度を示した。ＧＰＣ分析によって、生成物の分子量（４３．２ｋＤ）およびその多分散（１．９）が決定された。
【０３５６】
工程４：  Ｎ−アセチルガラクトサミンポリマー［Ｎａｇ−Ｐ３−ＭＡＡ］−ｂ−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−ｂ−［ＢＭＡ−ＰＡＡ−ＤＭＡＥＭＡ］の脱保護
２０ｍＬの反応ガラスバイアルに、工程３で調製されたポリマー（ＣＤ−０２−２２）（０．７ｍｇ、４２２５μｍｏｌポリマー）を加え、続いて無水メタノール（３．０ｍＬ）、無水クロロホルム（１．５ｍＬ）およびナトリウムメトキシド（９０ｍｇ、１６５０μｍｏｌ、Ｎａｇに対して６当量）を加えた。この混合物を、Ｎ２雰囲気下で１．０時間１５分撹拌した。次いで氷酢酸（５４０μＬ、６９５μｍｏｌ、ポリマーのＮ−アセチルガラクトサアミンに対して３当量）を反応混合物に加えて、続いて２，２’−ジピリジルジスルフィド（１５ｍｇ、６８μｍｏｌ、ピリジルジスルフィドに対して１当量）を加えた。この混合物を、Ｎ２ガス流の下にＲＴで１．０時間撹拌した。  ２，２’−ジピリジルジスルフィドで７５分間キャッピングした後、反応混合物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）で希釈し、単純な重力フィルターにより濾過した。この濾過された溶液を、２０００ｇ／ｍｏｌ・ＭＷＣＯを備えた透析膜に移し、ＭｅＯＨ（４×１Ｌ）に対して１８時間に亘り透析し、続いてミリＱ水（５×４Ｌ）に対して２０時間に亘り透析し、続いて凍結乾燥した。ＣＤ３ＯＤ中でＮＭＲ分析を行って、ポリマー構造を確認した。
【０３５７】
ポリマー上のジピリジルジスルフィド官能基はＮＭＲ分光法により検出するのが困難なので、該官能基はＵＶ／Ｖｉｓ吸収を使用して定量した。脱保護されたポリマー（１３．４ｍｇ）をＥｔＯＨ（２６８ｍＬ）中に溶解して、５０ｍｇ／ｍＬの濃度のポリマー溶液を得た。このポリマー溶液のアリコート（２０μＬ、１．０ｍｇ、６．３５μｍｏｌ）を、１．０Ｍジチオトレイトールの水溶液（１０μＬ、１０．０μｍｏｌ、ＤＴＴ）で１０分間処理し、続いてＨ２Ｏ（７０μＬ）で希釈して、０．０６３５Ｍ（６．３５μｍｏｌ／１００ｕＬ＝０．０６３５ｍｏｌ／Ｌ）の還元されたポリマー溶液を得た。ピリジルジスルフィドの予想された取り込みは、ポリマー中において１．９％なので、上記のようにポリマーをＤＴＴで処理した後には、脱離基であるピリジン−２−チオンの濃度は１．２１ｍＭ（即ち、０．０６３５×０．０１９＝０．００１２１Ｍ）であると予想されるであろう。３４３ｎｍでのピリジン−２−チオンのモル吸光度は、ε＝８．０８×１０３Ｍ−１ｃｍ−１であり（Hermanson, G. T. Bioconjugate Techniques, 1996, 1st ed. Academic Press, an imprint of Elsevier, page 66 which is incorporated herein by reference）、また使用したＮａｎｏＤｒｏｐ分光系の経路長は０．１ｃｍであるので、上記の還元されたポリマー溶液の予想吸光度はＡ＝０．９８（即ち、Ａ＝８．０８×１０３Ｍ−１ｃｍ−１×０．１ｃｍ×０．００１５３Ｍ）である。ＵＶ／Ｖｉｓによる還元されたポリマー溶液の分析の後、実験的に決定された吸光度は、３４３ｎｍにおいてＡ＝０．４８である。これは、理論的に計算された２．４％に比較して、ポリマー中の０．９３％の全ピリジルジスルフィド組み込みの実際の濃度（［０．４８／０．９８］×１．９）での、ポリマー中のピリジルジスルフィド官能基の存在を示している。
【０３５８】
実施例１０．２：  ポリマーＰＩＸの合成
【化４０】
0005766611.tif 000048
【０３５９】
工程１．ポリ（Ｎａｇ−Ｐ３）の合成
トリエチレングリコールリンカー（Ｎａｇ−Ｐ３−ＭＡ）を備えたＯ−アセチル保護されたＮ−アセチルガラクトサミンモノマー（１．０ｇ、１．８３ｍｍｏｌ）、ＥＣＴ（２４．１ｍｇ、０．０９１３ｍｍｏｌ）、およびＡＩＢＮ（０．３７５ｍｇ、０．００２２８ｍｍｏｌｅｓ；ＥＣＴ：ＡＩＢＮ ４０：１）およびＤＭＦ（１．６ｇ）を、窒素下で密封バイアルの中に導入した。この混合物中に窒素を３０分間バブリングすることにより該混合物を脱ガスし、それらをヒータブロックの中に置いた（温度計：６７〜６８℃；ディスプレー；７０〜７１；撹拌速度３５０ｒｐｍ）。この反応を９時間５分進行させ、該バイアルを氷の中に置き、また混合物を空気に露出させることによって反応を停止させた。最終ポリマーの精製は、メタノールに対して２日間透析することによって行った。ＮＭＲスペクトルにはビニル基は観察されず、また該スペクトルは望ましい構造を確認した。ＧＰＣ分析により測定したとき、ｄｎ／ｄｃ＝０．０５９２３４；Ｍｎ＝１１．８ｋＤａ（〜２１単位）；ＰＤＩ＝１．２であった。
【０３６０】
工程２．  標的とされた構造、ポリ（Ｎａｇ−Ｐ３）１１．８ｋＤａ−ｂ−（ＨＰＭＡ−Ｅ−ＰＤＳＭＡ）５ｋＤａ］のポリマーの合成
ＨＰＭＡ−Ｅ（０．６９ｇ、４．７９ｍｍｏｌ）、ＰＤＳＭＡ（０．１１ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、工程からのマクロＣＴＡ（０．４１ｇ、０．０３４７ｍｍｏｌ；１：１５０ ＣＴＡ：モノマー）、ＡＩＢＮ（０．５７ｍｇ、０．００３４７ｍｍｏｌ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ  １０：１）およびＤＭＦ（１．６ｇ）を、窒素下で密封バイアルの中に導入した。モノマー濃度は、〜３Ｍであった。次いで、該混合物の中に窒素を３０分間バブリングすることによりこれを脱ガスし、次いで熱ブロックの中に浸漬した（温度計：６８℃；ディスプレー；７０〜７１；撹拌速度３００ｒｐｍ）。この反応を３時間進行させ、次いで該バイアルを氷の中に置き、また混合物を空気に露出させることによって反応を停止させた。ポリマーの精製は、メタノールに対して２４時間透析することにより行った。溶媒を蒸発し、得られたポリマーを真空下で少なくとも６時間乾燥させた。ＮＭＲスペクトルは、生成物の高い純度およびＰＤＳＭＡの存在を示した。未反応のモノマーに起因するビニル基の化学シフトは観察されなかった。ＧＰＣ分析は、得られたポリマーの１６８００の分子量および１．１の多分散を与えた。
【０３６１】
工程３．  Ｎａｇ−保護されたポリマー［Ｎａｇ−Ｐ３］１１．８ｋＤａ−ｂ−［ＨＰＭＡ−Ｅ−９２−ＰＤＳＭＡ８］５ｋＤａ−ｂ−［ＢＭＡ５０−ＰＡＡ４０−ＤＭＡＥＭＡ１０］３０ｋＤａの合成
ＢＭＡ（０．５９６ｇ、４．１９４ｍｍｏｌ）、ＰＡＡ（０．３８３ｇ、３．３５５ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＥＭＡ（０．１３２ｇ、０．８３９ｍｍｏｌ）、マクロＣＴＡ（０．３００ｇ、０．０１８５２ｍｍｏｌ；１：４５３  ＣＴＡ：モノマー）、ＡＩＢＮ（０．３０４ｍｇ、０．００１８５２ｍｍｏｌ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ  １０：１）およびＤＭＦ（１．５０６７ｇ）を、窒素下で密封バイアルの中に導入した。モノマー濃度は、〜３Ｍであった。この混合物は、該混合物の中に窒素を３０分間バブリングすることにより脱ガスし、次いで熱ブロックの中に置いた（温度計：６７〜６８℃；ディスプレー；７０〜７１；撹拌速度３５０ｒｐｍ）。この反応を２１時間進行させた（５０〜６０％の変換を想定）。該バイアルを氷の中に置き、また混合物を空気に露出させることによって反応を停止させた。アセトン／ＤＭＦ＝１：１からヘキサン／エーテル＝７５／２５へと沈殿させることにより（３回）精製した。得られたポリマーを真空下で少なくとも８時間乾燥させた。ＮＭＲスペクトルは、生成物の高い純度およびＰＤＳＭＡの存在を示し、未反応のモノマーの不純物に起因するビニル基の存在は示さなかった。生成物のＧＰＣ分析は、ｄｎ／ｄｃ＝０．０５８１７３；Ｍｎ＝４１．９ｋＤａ；ＰＤＩ＝１．３０を与えた。
【０３６２】
工程４．  脱保護
２０ｍＬの反応ガラスバイアルに、工程３からのポリマー（４４０ｍｇ、２５７５μｍｏｌポリマー）を加え、続いて無水メタノール（２．０ｍＬ）、無水クロロホルム（１ｍＬ）、およびナトリウムメトキシド(７２ｍｇ、１３２９μｍｏｌ、ポリマーのＮａｇ含量に対して６当量)を加えた。この混合物をＮ２の雰囲気下にＲＴで１．０時間撹拌し、次いで、２，２’−ジピリジルジスルフィド（３４ｍｇ、１５４．５μｍｏｌ、ピリジルジスルフィドに対して５当量）を反応に加えた。この混合物をＲＴで３０分撹拌した。
【０３６３】
２，２’−ジピリジルジスルフィドで３０分間キャッピングした後、該反応混合物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）で希釈した。この濾過した溶液を、２０００ｇ／ｍｏｌＭＷＣＯを備えた透析膜に移し、ＭｅＯＨ（４×１Ｌ）に対して１８時間透析し、ミリＱ水（３×４Ｌ）に対して２０時間に亘り透析し、続いて凍結乾燥した。ＣＤ３ＯＤを使用してＮＭＲ分析を行い、ＰＤＳＭＡ信号の存在が示された。ポリマー上のジピリジルジスルフィド官能基はＵＶ／Ｖｉｓ吸収を使用して定量した。最終ポリマー（６．２ｍｇ）をＥｔＯＨ（２４８μＬ）中に溶解して、２５ｍｇ／ｍＬの濃度のポリマー溶液を得た。このポリマー溶液のアリコート（２０μＬ、０．５ｍｇ、３．１２５μｍｏｌ）を、１．０Ｍジチオトレイトールの水溶液（１０μＬ、１０．０μｍｏｌ、ＤＴＴ）で１０分間処理し、続いてＨ２Ｏ（７０μＬ）で希釈して、０．０３１２５Ｍ（３．１２５μｍｏｌ／１００ｕＬ＝０．０３１２５ｍｏｌ／Ｌ）の還元されたポリマー溶液を得た。ピリジルジスルフィドの予想された取り込みは、ポリマー上では１．２％なので、上記のようにポリマーをＤＴＴで処理した後には、脱離基であるピリジン−２−チオンの濃度は０．３７５ｍＭ（即ち、０．０３１２５×０．０１２＝０．０００３７５Ｍ）であると予想されるであろう。３４３ｎｍでのピリジン−２−チオンのモル吸光度は、ε＝８．０８×１０３Ｍ−１ｃｍ−１であり（Hermanson, G. T. Bioconjugate Techniques, 1996, 1st ed. Academic Press, an imprint of Elsevier, page 66）、また使用したＮａｎｏＤｒｏｐ分光系の経路長は０．１ｃｍであるので、上記の還元されたポリマー溶液の予想吸光度はＡ＝０．３０３（即ち、Ａ＝８．０８×１０３Ｍ−１ｃｍ−１×０．１ｃｍ×０．０００３７５Ｍ）である。ＵＶ／Ｖｉｓ吸収による還元されたポリマー溶液の分析の後、実験的に決定された吸光度は、３４３ｎｍにおいてＡ＝０．３４５である。これは、理論的に計算された１．２％の代りに、ポリマー中の１．３％の全ピリジルジスルフィド組み込みの実際の濃度（［０．３４５／０．３０９３］×１．２）での、ポリマー中のピリジルジスルフィド官能基の存在を示している。
【０３６４】
実施例１１：  別のトリブロック構造
上記で述べた方法を使用して、以下の追加のトリブロックポリマーを調製することができる。加えて、ＨＰＭＡ−Ｅ（２−ヒドロキシメタクリル酸プロピルまたはこれに由来するモノマー残基）は、ＨＰＭＡが出現する以下のトリブロックポリマーの各々において、ＨＰＭＡのために置換されてよい；簡略化のためのみを目的として斯かる追加の構造は反復されないが、本開示の一部と看做されるべきである：
・［ＰＡＡ９ｏ−ＢＡｉｏ］ｉ８Ｋ−［ＨＰＭＡ９ｏ−ＰＤＳＭＡ１０］５Ｋ−［フォレート］
・［ＰＡＡ９ｏ−ＢＡ１ｏ］１８Ｋ−［ＨＰＭＡ８ｏ−ＭＡＡ１ｏ−ＰＤＳＭＡ１ｏ］５Ｋ−［フォレート］
・フォレート−［ＰＥＧ］２κ−［ＨＰＭＡ９ｏ−ＰＤＳＭＡ１０］ｉ２  ＯＫ−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］ＳＯＫ
・ＦｏＩａＩｅ−［ＰＥＧ］２Ｋ−［ＨＰＭＡ９Ｏ−ＭＡＡ１Ｏ−ＰＤＳＭＡ１０］Ｉ２  ＯＫ−［Ｄ２５−Ｂ５０−Ｐ２５］ＳＯＫ
・［ＰＥＧＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３Ｏ］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＤＭＡＥＭＡ７０−ＭＡＡ（ＮＨＳ）３Ｏ］−［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］  
・［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ−ＭＡＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ−Ｄ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ−Ｄ］−［Ｄ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ−Ｄ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＧａＩ−Ｄ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ−ＭＡＡ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ−Ｄ］−［ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＮＡｃＧａＩ−Ｄ］−［ＨＰＭＡ−ＰＡ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］
・［ＰＡＡ−ＢＡ］−  ［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［フォレート］
・［ＰＡＡ−ＢＡ］−  ［ＨＰＭＡ−ＭＡＡ−ＰＤＳＭＡ］−［フォレート］
・フォレート−［ＰＥＧ］−［ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｄ−Ｂ−Ｐ］
・フォレート−［ＰＥＧ］−［ＨＰＭＡ−ＭＡＡ−ＰＤＳＭＡ］−［Ｄ−Ｂ−Ｐ］  
以下に、本願出願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  ポリヌクレオチドと会合したブロック共重合体を含んでなる組成物であって、前記ブロック共重合体は組成的に異なる第一、第二および第三のブロックを含み、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは前記第一および第三のブロックの間に位置し且つポリヌクレオチドと結合したポリマーブロックであり、前記第三のブロックはアニオン性反復単位を含んでなる疎水性ポリマーブロックであり、該アニオン性反復単位は、その置換基として、ｐＨに依存して数が変化するアニオン集団を有し、該集団はｐＨ５のときよりもｐＨ７．４のときの方が大きく、ここで前記第一、第二および第三のブロックの反復単位の少なくとも９０％はペプチド結合により連結されたアミノ酸の残基ではない組成物。
［２］  ［１］に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックの数平均分子量は、合わせて約５，０００〜約１００，０００ダルトンである組成物。
［３］  ［１］または［２］に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、アニオン性反復単位およびイオン化不能な疎水性反復単位を含んでなるランダム共重合体である組成物。
［４］  ［１］または［２］に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックは反復単位を含んでなり、該反復単位は鎖原子および該鎖原子に共有結合されたペンダント基を有し、前記鎖原子は炭素原子であるか、または炭素原子と硫黄原子もしくは酸素原子の組合せである組成物。
［５］  ［１］または［２］に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックは反復単位を含んでなり、該反復単位は鎖原子および該鎖原子に共有結合されたペンダント基を有し、前記鎖原子は炭素原子であるか、または炭素原子と酸素原子の組合せである組成物。
［６］  ［１］〜［５］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ペンダント基が水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、置換カルボニルまたはヘテロシクロからなる群から選択される組成物。
［７］  ［１］〜［６］の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックの反復単位が、置換アルキレン反復単位、置換アルキレングリコール反復単位、置換アルキレンチオグリコール反復単位およびそれらの組合せからなる群から独立に選択される組成物。
［８］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックは、各々がエチレン系不飽和モノマーの残基である反復単位から実質的になる組成物。
［９］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記ブロック共重合体の第一、第二および第三のブロックは、任意に置換されたアクリル酸モノマー、任意に置換されたビニルアリールモノマー、任意に置換されたアクリルアミドモノマー、任意に置換されたアクリレートモノマーおよびそれらの組合せに由来する反復単位から実質的になる組成物。
［１０］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックは非ペプチドである組成物。
［１１］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックは非脂質である組成物。
［１２］  ［１］に記載の組成物であって、前記第一、第二および第三のブロックは次式１の反復単位を含んでなる組成物：
【化Ａ】
0005766611.tif 000049
ここで、
*は、式１の反復単位の他の反復単位への結合点を意味し；
各Ｘ１およびＸ２は、水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロシクロ、および置換カルボニルからなる群から独立に選択されるが、但し、同じ反復単位においては、Ｘ１およびＸ２はアリール、ヘテロアリール、ヘテロ置換カルボニル、およびそれらの組合せからなる群から選択されず；
各Ｘ３は、独立に、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
各Ｘ４は、独立に、ヘテロ置換カルボニル、アリール、またはヘテロアリールである。
［１３］  ［１２］に記載の組成物であって、前記第一、第二または第三のブロックは、Ｘ４がアリールまたはヘテロアリールである式１の反復単位を含んでなる組成物。
［１４］  ［１２］または［１３］に記載の組成物であって、前記第一、第二または第三のブロックが式１の反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、またＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロシクロである組成物。
［１５］  ［１２］または［１３］に記載の組成物であって、前記第一、第二または第三のブロックのうちの二つが式１の反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、且つＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換へテロヒドロカルビル、またはヘテロシクロである組成物。
［１６］  ［１２］または［１３］に記載の組成物であって、前記第一、第二または第三のブロックの各々が式１の反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、−Ｃ（Ｏ）ＳＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、且つＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換へテロヒドロカルビル、またはヘテロシクロである組成物。
［１７］  ［１２］または［１３］に記載の組成物であって、前記第一、第二または第三のブロックは反復単位を含んでなり、ここでのＸ４は−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４０、または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４０Ｘ４１であり、且つＸ４０およびＸ４１は独立に水素、ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、置換へテロヒドロカルビル、またはヘテロシクロである組成物。
［１８］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一または第二のブロックは次式を有する重合可能なモノマーに由来する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｂ】
0005766611.tif 000050
ここで、
ｎは、２〜２０の整数であり、
Ｘは、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は任意に−ＮＲ１−Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で置換され、
Ｙは、−Ｏ−、−ＮＲ４−または−（ＣＲ１Ｒ２）−であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｚ１およびＺ２は、水素、ハロゲンおよび任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ４は、水素、および任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ８は、水素または（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され、
Ｒ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、ポリオール、ビタミン、または２００〜１２００ダルトンの分子量を有するペプチドもしくは小分子、または接合可能な基である。
［１９］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一、第二または第三のブロックは次式を有する重合可能なモノマーに由来する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｃ】
0005766611.tif 000051
ここで、
ｎは、２〜２０の整数であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｚ１およびＺ２は、水素、ハロゲンおよび任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ８は、水素または（ＣＲ１Ｒ２）ｍＲ９であり、ここでのｍは０〜１０であり、また１以上の（ＣＲ１Ｒ２）単位は−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ１または−ＳＲ１で任意に置換され、
Ｒ９は、水素、ハロゲン、任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル、ポリオール、ビタミン、または２００〜１２００ダルトンの分子量を有するペプチドもしくは小分子、または接合可能な基である。
［２０］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一のブロックは重合可能なモノマーの制御されたラジカル重合に由来するモノマー残基を含んでなる組成物。
［２１］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一のブロックは組成的に異なる２以上の反復単位を含んでなるランダム共重合体である組成物。
［２２］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一のブロックはエチレン系不飽和モノマーの残基である反復単位を含んでなる組成物。
［２３］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第一のブロックは次式１ＥＴＳに対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｄ】
0005766611.tif 000052
ここで、
*は、式１ＥＴＳの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し；Ｘ３はアルキルであり、またＸ４４はターゲッティング部分または遮蔽部分である。
［２４］  ［２１］に記載の組成物であって、前記Ｘ４４はポリオール、ビタミン、または２００〜１２００ダルトンの分子量を有するペプチドもしくは小分子である組成物。
［２５］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第二のブロックは親水性ポリマーブロックである組成物。
［２６］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第二のブロックは組成的に異なる２以上の反復単位を含んでなるランダム共重合体である組成物。
［２７］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第二のブロックはエチレン系不飽和モノマーの残基である反復単位を含んでなる組成物。
［２８］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第二のブロックは重合可能なモノマーの制御されたラジカル重合に由来の残基である反復単位を含んでなる組成物。
［２９］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第二のブロックは次式１に対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｅ】
0005766611.tif 000053
ここで、
Ｘ４は、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４５または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４５Ｘ４１であり、Ｘ４５は置換ヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロシクロであり、且つＸ４５はジスルフィド部分を含んでなる組成物。
［３０］  ［２９］に記載の組成物であって、Ｘ４５は置換ヒドロカルビルであり、且つＸ４５はジスルフィド部分を含んでなる組成物。
［３１］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第二のブロックは次式１に対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｆ】
0005766611.tif 000054
ここで、
Ｘ４は、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４６または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４６Ｘ４１であり、Ｘ４６は置換ヒドロカルビル、置換ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロシクロであり、且つＸ４６はポリヌクレオチドを含んでなり、該ポリヌクレオチドはＸ４６を介して前記組成物に共有結合されている組成物。
［３０］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第二のブロックは次式１に対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｇ】
0005766611.tif 000055
ここで、
Ｘ４は、−Ｃ（Ｏ）ＯＸ４６または−Ｃ（Ｏ）ＮＸ４６Ｘ４１であり、Ｘ４６は置換ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、またはヘテロシクロであり、Ｘ４６はポリヌクレオチドを含んでなり、該ポリヌクレオチドはＸ４６を介して前記組成物に非共有結合で結合されている組成物。
［３２］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは組成的に異なる２以上の反復単位を含んでなるランダム共重合体である組成物。
［３３］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックはエチレン系不飽和モノマーの残基である反復単位を含んでなる組成物。
［３５］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは重合可能なモノマーの制御されたランダム重合に由来する反復単位を含んでなる組成物。
［３６］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーであり、該膜不安定化ポリマーは約６．２以下のｐＨにおいてエンドソーム破壊的である組成物。
［３７］  ［３６］に記載の組成物であって、前記膜不安定化ポリマーは、７．０よりも大きいｐＨでは実質的に非エンドソーム破壊的である組成物。
［３８］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ａに対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｈ】
0005766611.tif 000056
ここで、
＊は、式１Ａの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、Ｘ３はアルキルである。
［３９］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ｅに対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｉ】
0005766611.tif 000057
ここで、
＊は、式１Ｅの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、Ｘ３およびＸ４７は独立にアルキルである。
［４０］  ［１］〜［３５］の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ａおよび式１Ｅに対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｊ】
0005766611.tif 000058
ここで、
＊は、式１Ａおよび式１Ｅの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、各Ｘ３およびＸ４７は独立にアルキルであり、また前記第三のブロックにおいて、式１Ａに対応する反復単位の数の式１Ｅに対応する反復単位の数に対する比は、それぞれ約２０：１〜１：４である。
［４１］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ｃに対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｋ】
0005766611.tif 000059
ここで、
＊は、式１Ｃの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、Ｘ３はアルキルであり、またＸ４８はアミノ置換アルキルである。
［４２］  ［１］〜［４０］の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは次式１Ａおよび式１Ｃに対応する反復単位を含んでなる組成物：
【化Ｌ】
0005766611.tif 000060
ここで、
＊は、式１Ａおよび式１Ｃの反復単位の他の反復単位への結合点を意味し、各Ｘ３は独立にアルキルであり、Ｘ４８はアミノ置換アルキルであり、また前記第三のブロックでの式１Ａに対応する反復単位の数は、前記第三のブロックでの式１Ｃに対応する反復単位の数に少なくとも等しい。
［４３］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックにおけるアニオン性反復単位は、７．０を超えるｐＨでは主にアニオン性であり、また６．０未満のｐＨでは主に非帯電性である組成物。
［４４］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、４．５〜７．０の範囲のｐＫａを有する重合可能なモノマーに由来するアニオン性反復単位を含んでなる組成物。
［４５］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、カルボン酸基、スルホンアミド基、ホウ酸基、スルホン酸基、スルフィン酸基、硫酸基、燐酸基、ホスフィン酸基、亜燐酸基、およびそれらの組合せから選択されるプロトン付加可能なアニオン種を有するアニオン性反復単位を含んでなる組成物。
［４６］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、（Ｃ２−Ｃ８）アルキルアクリル酸の重合に由来するアニオン性反復単位を含んでなる組成物。
［４７］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは更に、６．０〜１０．０の範囲のｐＫａを有する重合可能なモノマー由来の複数のカチオン性反復単位を含んでなる組成物。
［４８］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、ｐＨに依存して数が変化するアニオン集団をその置換基として有する少なくとも１０個のアニオン性反復単位を含んでなる組成物。
［４９］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、ｐＨに依存して数が変化するアニオンの集団をその置換基として有する少なくとも２０個のアニオン性反復単位を含んでなる組成物。
［５０］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記第三のブロックは、ｐＨに依存して数が変化するアニオンの集団をその置換基として有する数十個のアニオン性反復単位を含んでなる組成物。
［５１］  ［４８］〜［５０］の何れか1項に記載の組成物であって、前記アニオン性反復単位は、（Ｃ２−Ｃ８）アルキルアクリル酸の重合に由来する組成物。
［５２］  ［４８］〜［５０］の何れか1項に記載の組成物であって、前記アニオン性反復単位はプロピルアクリル酸の重合に由来する組成物。
［５３］  ［４８］〜［５２］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ブロック共重合体の第一のブロック、第二のブロックおよび第三のブロックの各々は、約１．７以下の多分散指数を有する組成物。
［５４］  ［５３］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ブロック共重合体の第一のブロック、第二のブロックおよび第三のブロックの各々は、約１．０〜約１．４の多分散指数を有する組成物。
［５５］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記ブロック共重合体は、（Ｍｎ１ｓｔ＋Ｍｎ２ｎｄ）：（Ｍｎ３ｒｄ）で定義される、第一のブロック（Ｍｎ１ｓｔ）、第二のブロック（Ｍｎ２ｎｄ）および第三のブロック（Ｍｎ３ｒｄ）の約２：１〜約１：９に亘る数平均分子量Ｍｎの比を有する組成物。
［５６］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記ブロック共重合体は、（Ｍｎ１ｓｔ＋Ｍｎ２ｎｄ）：（Ｍｎ３ｒｄ）で定義される、第一のブロック（Ｍｎ１ｓｔ）、第二のブロック（Ｍｎ２ｎｄ）および第三のブロック（Ｍｎ３ｒｄ）の約１：１〜約１：３に亘る数平均分子量Ｍｎの比を有する組成物。
［５７］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドである組成物。
［５８］  ［１］〜［５６］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ａｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである組成物。
［５９］  先行する全ての項の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡである組成物。
［６０］  ポリマーミセルを含んでなる組成物であって、前記ミセルはブロック共重合体および該ブロック共重合体に結合したポリヌクレオチドを含有し、前記ブロック共重合体は組成的に異なる第一、第二および第三のブロックを含み、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは前記第一および第三のブロックの間に位置し且つポリヌクレオチドと結合したポリマーブロックであり、前記第三のブロックはアニオン性反復単位を含んでなる疎水性ポリマーブロックであり、該アニオン性反復単位は、その置換基として、ｐＨに依存して数が変化するアニオン集団を有し、該集団はｐＨ５のときよりもｐＨ７．４のときの方が大きく、ここで前記第一、第二および第三のブロックの反復単位の少なくとも９０％はペプチド結合により連結されたアミノ酸の残基ではない組成物。
［６１］  ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは（ｉ）第一のブロックであって、前記ポリヌクレオチドのターゲッティングまたは立体的遮蔽に適した親水性ポリマーブロック、（ｉｉ）第二のブロックであって、前記第一のブロックと第三のブロックの間に位置し且つポリヌクレオチドと結合したブロック、および（ｉｉｉ）第三のブロックであって、疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックを含んでなる第三のブロックを包含する複数のブロック共重合体を含んでなり、該複数のブロック共重合体は前記ミセル中において会合され、且つ前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物。
［６２］  ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは（ｉ）第一のブロックである親水性ポリマーブロック、（ｉｉ）第二のブロックであって、前記第一のブロックと第三のブロックの間に位置し且つポリヌクレオチドと結合したブロック、および（ｉｉｉ）第三のブロックであって、疎水性で複数のモノマー残基および複数のアニオン性モノマー残基を含んでなるポリマーブロックであるか、またはこれを含んでなる第三のブロックを包含する複数のブロック共重合体を含んでなり、該複数のブロック共重合体は前記ミセル中において会合され、且つ前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物。
［６３］  ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは（ｉ）第一のブロックである親水性ポリマーブロック、（ｉｉ）第二のブロックであって、前記第一のブロックと第三のブロックの間に位置し、親水性であり且つ前記ポリヌクレオチドとイオン会合した複数のカチオン性モノマー残基を含んでなるブロック、および（ｉｉｉ）第三のブロックであって、疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックを含んでなる第三のブロックを包含する複数のブロック共重合体を含んでなり、該複数のブロック共重合体は前記ミセル中において会合され、且つ前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物。
［６４］  ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは（ｉ）第一のブロックである親水性ポリマーブロック、（ｉｉ）第二のブロックであって、前記第一のブロックと第三のブロックの間に位置し、該第二のブロックに共有結合したポリヌクレオチドを含んでなるポリマーバイオコンジュゲートであるブロック、および（ｉｉｉ）第三のブロックであって、疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックを含んでなる第三のブロックを包含する複数のブロック共重合体を含んでなり、該複数のブロック共重合体は前記ミセル中において会合され、且つ前記ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物。
［６５］  ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物であって、前記ミセルは第一、第二および第三のブロックを有するブロック共重合体を含んでなり、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは前記第一および第三のブロックの間に位置し且つポリヌクレオチドと結合した親水性ポリマーブロックであり、前記第三のブロックは疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックであり、ここで（ｉ）前記第一のブロックは前記ポリヌクレオチドのターゲッティングおよび／または立体的遮蔽に適しており、（ｉｉ）前記第二のブロックは前記ポリヌクレオチドとイオン会合したカチオン性反復単位を含んでなり、または（ｉｉｉ）前記ポリヌクレオチドは前記第二のブロックに共有結合されている組成物。
［６６］  ［６０］〜［６５］の何れか1項に記載の組成物であって、該組成物は［１］〜［５９］の何れか１項に記載の組成物を含んでなる組成物。
［６７］  ［６０］〜［６５］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドである組成物。
［６８］  ［６０］〜［６５］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ａｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである組成物。
［６９］  ［６０］〜［６５］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡである組成物。
［７０］  ［６０］〜［６５］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリマーミセルは、ミセル当たり約１０〜約１００鎖の凝集数により特徴付けられる組成物。
［７１］  ［６０］〜［６９］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリマーミセルは、ミセル当たり約６０鎖以下の凝集数により特徴付けられる組成物。
［７２］  ［６０］〜［６９］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリマーミセルは約０．２μｇ／ｍＬ〜約５０μｇ／ｍＬの限界ミセル濃度ＣＭＣにより特徴付けられる組成物。
［７３］  ［６０］〜［６９］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリマーミセルは約０．５μｇ／ｍＬ〜約１０μｇ／ｍＬの限界ミセル濃度ＣＭＣにより特徴付けられる組成物。
［７４］  ［６０］〜［７３］の何れか1項に記載の組成物であって、前記ポリマーミセルは組成的に異なる少なくとも二つのブロック共重合体を含有し、該ミセルはｐＨ７．４の水性媒質中で安定である組成物。
［７５］  ポリマーミセルおよび該ミセルに結合したポリヌクレオチドを含んでなる組成物を調製する方法であって、
ブロック共重合体を第一の変性媒質と混合し、該ブロック共重合体は第一、第二および第三のブロックを含み、前記第一のブロックは親水性ポリマーブロックであり、前記第二のブロックは前記第一および第三のブロックの間に位置し、且つポリヌクレオチドと結合する能力を有する部分を含んでなる親水性ポリマーブロックであり、前記第三のブロックは疎水性でｐＨ依存性の膜不安定化ポリマーブロックであることと、
前記ブロック共重合体を第二の水性媒質に露出させることと、
前記ブロック共重合体を前記水性媒質中で会合させてミセルを形成することと、
ポリヌクレオチドを前記ブロック共重合体の第二のブロックと会合させること
を含んでなる方法。
［７６］  ［７５］に記載の方法であって、前記第二のブロックは複数のカチオン性モノマー残基を含んでなり、当該方法は更に、前記ポリヌクレオチドが前記第一のポリマーの第二のブロックとのイオン性複合体を形成することを可能にすることを含んでなる方法。
［７７］  ［７５］に記載の方法であって、更に、前記ポリヌクレオチドを、連結部分を介して、前記第二のブロックに、または前記第二のブロックと前記第一のブロックもしくは前記第三のブロックとの間の接合部分に共有結合させることを含んでなる方法。
［７８］  ［１］〜［７４］の何れか１項に記載の組成物および医薬的に許容可能な賦形剤を含んでなる医薬組成物。
［７９］  医薬の製造における［１］〜［７４］の何れか１項に記載の組成物の使用。
［８０］  ポリヌクレオチドの細胞間送達のための方法であって、［１］〜［７４］、［７８］及び［７９］の何れか１項に記載の組成物を、第一のｐＨにおいて媒質中で細胞と接触させることと；エンドサイトーシスを介して前記組成物を前記細胞におけるエンドソーム膜の中に導入することと；前記エンドソーム膜を不安定化し、それにより前記組成物またはポリヌクレオチドを前記細胞の細胞質へ送達することを含んでなる方法。
［８１］  細胞における細胞内標的の活性を調節するための方法であって、［８０］の方法に従ってポリヌクレオチドを細胞の細胞質へと送達することと、前記ポリヌクレオチドが前記細胞内標的と相互作用することを可能にし、それにより前記細胞内標的の活性を調節することを含んでなる方法。
［８２］  ［６０］〜［７７］の何れか１項に記載の組成物であって、前記ミセルが±５ｍＶの間にあるゼータ電位を有する組成物。
［８３］  ［６０］〜［７７］の何れか１項に記載の組成物であって、前記ミセルが±２ｍＶの間にあるゼータ電位を有する組成物。
【図１】
0005766611.tif 000070
【図２】
0005766611.tif 000071
【図３】
0005766611.tif 000072
【図４】
0005766611.tif 000073
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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