【事件の表示】
　特許第２８１８８９８号「活性に鋭敏な人のプロテインから成る装薬を作用物質として備えている双室注射器」の請求項１ないし４に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第２８１８８９８号の請求項１ないし４に係る特許を維持する。
【理　由】
（１）手続の経緯
　本件特許第２８１８８９８号に係る出願は、１９８９年３月１日（パリ条約による優先権主張、１９８８年３月１日、ドイツ国）を国際出願日とする出願であって、平成１０年８月２８日に設定登録がされた後、平成１０年１０月３０日に特許掲載公報が発行され、平成１１年４月２６日に特許異議申立人・ファーマシア　アンド　アップジョン　アクチボラーグより特許異議申立がなされ、平成１２年１月２８日付けで全請求項に係る特許について取消理由が通知され、それに対して平成１２年８月１５日付けでに訂正請求がされたものである。
　
（２）訂正の適否についての判断
イ、訂正の要旨
　本件特許に係る訂正請求は、願書に添付した明細書（以下、「特許明細書」という。）の請求項１について、特許請求の範囲の減縮及び明瞭でない記載の釈明を目的として、以下のとおり訂正しようとするものである。
『１．注射針と反対側の第１室内に発熱物質を含有しない無菌の溶剤を有し、注射針に面している第２室中にウロキナーゼ、プローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、第VIII因子、第IX因子又は、アンチトロンビンIIIで構成されている装薬を治療上効きめのある一回の投与に必要とされる量としてウロキナーゼ、プローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼの場合には少なくとも２百万国際単位、第VIII因子、第IX因子の場合には少なくとも１０００国際単位、またアンチトロンビンIIIの場合には少なくとも５００国際単位を有しかつ、各装薬の溶液を第２室で凍結乾燥させた状態で各装薬を第２室に保有していることを特徴とする双室注射器。』
を
『１．注射針と反対側の第１室内に発熱物質を含有しない無菌の溶剤を有し、注射針に面している第２室中にウロキナーゼ、プローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、第VIII因子、第IX因子又は、アンチトロンビンIIIで構成されている装薬を治療上効きめのある一回の投与に必要とされる
量を有し、
前記第２室の容積の多くとも５８％の体積の溶液中に含まれる濃縮度を達成するまで、弱い酸性の特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液に対する弱い塩基性の特にｐＨ７．３ないし７．５の溶液からの透析と、弱い酸性、特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液によるクロマトグラフィーの溶離の透析及び／又はクロマトグラフィー分析がＰＥＧ予備精製つき、又は該予備精製なしに、行われることにより得られた
第２室の容積の多くとも５８％まで第２室に装填して
と訂正。
　
ロ、訂正の目的の適否及び拡張・変更の存否
　上記訂正は、請求項１において、特許請求の範囲の減縮を目的として、
ａ）「・・・少なくとも５００国際単位を有しかつ、」を、「・・・少なくとも５００国際単位が
前記第２室の容積の多くとも５８％の体積の溶液中に含まれる濃縮度を達成するまで、弱い酸性の特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液に対する弱い塩基性の特にｐＨ７．３ないし７．５の溶液からの透析と、弱い酸性、特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液によるクロマトグラフィーの溶離の透析及び／又はクロマトグラフィー分析がＰＥＧ予備精製つき、又は該予備精製なしに、行われることにより得られた
ｂ）「
第２室の容積の多くとも５８％まで第２室に装填して
ｃ）さらに上記ａ，ｂに係る訂正に伴い構文を整えるために、「量として」とあるのを「量を有し、」と訂正するものである。
　
　そして、上記ａ）に係る記載は特許明細書の請求項３及び４に記載されていた事項であるから、このａ）に係る訂正は特許明細書に記載されていた事項の範囲内のものであって特許請求の範囲の減縮を目的とするものであり、プロテインを所望の高い濃度で投与することができるという技術的課題に変更が生じるものではないから実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもない。
　また、上記ｂ）に係る記載は特許明細書の請求項２に記載されていた事項であるから、このｂ）に係る訂正は特許明細書に記載されていた事項の範囲内のものであって特許請求の範囲の減縮を目的とするものであり、プロテインを所望の高い濃度で投与することができるという技術的課題に変更が生じるものではないから実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもない。
　さらに、上記ｃ）に係る訂正はａ，ｂに係る訂正により必要となった構文の修正であるから明瞭でない記載の釈明に相当する。
　したがって、これらの訂正は、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであって、特許明細書に記載した事項の範囲内の訂正であり、実質上特許請求の範囲を拡張又は変更するものではない。
　
ハ、独立特許要件の判断
１）訂正発明
　訂正後の請求項１に係る発明（以下、「訂正発明１」という。）は、上記２，イの訂正の要旨の訂正後の請求項１として記載したとおりのものである。
　
２）甲各号証記載の発明
　これに対して、本件に係る出願の出願日前に頒布された刊行物である特許異議申立人・ファーマシア　アンド　アップジョン　アクチボラーグが提示した甲第１〜５号証には、次の事項が記載されている。
ｉ）甲第１号証（製薬産業、第４６巻、第３号、１９８４年発行、第３１７頁〜第３１８頁／当審取消理由の刊行物１）；
「第１に、溶解された作用物質が±０．１％の精度で前充填注射器の前室に投与される。続いて凍結乾燥が標準装置において行われる。凍結乾燥の終了後、前充填注射器の前室は凍結乾燥機中で密封される。前充填注射器はその後凍結乾燥機から取り出される。その後で、溶液を備えた第２室が充填されかつ閉止される。」旨の記載。
ii）甲第２号証（欧州特許出願公開第２１１５９２号／当審取消理由の刊行物２）；
「薬剤投与単位を調整するためのキットは無菌多重室容器、例えば双室容器から構成することができ、双室容器において、一室は凍結乾燥されたｔＰＡを含有し、そして第２室は再調整用溶液を含有し、２つの室は破壊可能な障壁により分離され、各室の内容物は障壁を破壊することにより無菌的に混合させることができる。」旨の記載。
iii）甲第３号証（国際出願公開ＷＯ８４／０３６２８号／当審取消理由の刊行物３）；
「高い溶解度を有した第VIII因子を少量の２〜５ｍｌの注射製剤として、１０００単位を注射投与することができるようにする。」旨の記載。
iv）甲第４号証（英国特許出願公開第２０６４５４５号／当審取消理由の刊行物４）；
「ヒト起源のアンチトロンピンIIIの水溶液を凍結乾燥させることにより粉末のアンチトロンピン製剤を製造する」旨の記載。
v)甲第５号証（製薬産業、第４６巻、第１０号、１９８４年発行、第１０４５頁〜第１０４９頁／当審取消理由の刊行物５）
「プラズマ誘導体で構成されている装薬の溶液を双室注射器の注射針に面している３ｍｌの容積の第２室に０．１〜１ｍｌまで装填し、次いでこの溶液をその場所で凍結乾燥する双室注射器の製造方法。」に関する記載。
　
３）対比・判断
　そこで、訂正発明１と特許異議申立人が提示した甲第１〜５号証に記載された発明を対比してみると、甲第１〜５号証にはそれらの記載事項を総合してみると、
「注射針と反対側の第１室内に発熱物質を含有しない無菌の溶剤を有し、注射針に面している第２室中にｔＰＡ、第VIII因子、又は、アンチトロンビンIIIで構成されている装薬を治療上効きめのある一回の投与に必要とされる量としてｔＰＡの場合には少なくとも２百万国際単位、第VIII因子の場合には少なくとも１０００国際単位、またアンチトロンビンIIIの場合には少なくとも５００国際単位を有しかつ、各装薬の溶液を第２室で凍結乾燥させた状態で各装薬を第２室に保有している双室注射器。」
については記載があるものの、訂正発明１の構成要件である、「
第２室の容積の多くとも５８％の体積の溶液中に含まれる濃縮度を達成するまで、弱い酸性の特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液に対する弱い塩基性の特にｐＨ７．３ないし７．５の溶液からの透析と、弱い酸性、特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液によるクロマトグラフィーの溶離の透析及び／又はクロマトグラフィー分析がＰＥＧ予備精製つき、又は該予備精製なしに、行われることにより得られた
第２室の容積の多くとも５８％まで第２室に装填
　そして、訂正発明１は、この点を有することにより、治療上効き目のある一回の投与に必要とされる作用物質の量を、凍結乾燥の再に飛び散ったり壁にはいまつわることなく、また掻き集める必要もなく、凍結乾燥をしたままの状態で第２室に保有することができるという作用効果を奏しうるものである。
　これに対して、特許異議申立人は、
「この種のプロテインの溶離及び精製方法において、一定の濃縮度を達成するまで何度も透析及び／又はクロマトグラフィー分析をＰＥＧ予備精製つき又は該予備精製なしに行うこと」
は周知の技術手段であると主張し、さらに、
「この種のプロテインの溶離及び精製方法において、弱い酸性の緩衝液に対する弱い塩基性の溶液からの透析と、弱い酸性の緩衝液によるクロマトグラフィーの溶離とを行うこと」
は周知の技術手段であると主張している。
　しかし、この二つの技術手段が周知のものである点については何ら証拠が示されておらず、何を以て周知といい得るのか不明であって上記主張を理由あるものとすることはできない。
　また、「第２室の容積の多くとも５８％の体積の溶液中に含まれる濃縮度を達成するまで」濃縮する点、及び、「装薬の溶液を第２室の容積の多くとも５８％まで第２室に装填」する点については、甲第１〜５号証の何れにも記載も示唆もない。
　したがって、訂正発明１は、上記甲第１〜５号証に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとは認めることができない。
　　
ニ、訂正の適否についてのむすび
　以上のとおりであるから、本件に係る訂正は、特許法第１２０条の４第２項及び同条第３項で準用する平成６年改正前の特許法第１２６条第２，３項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
　
（３）特許異議申立についての判断
イ、申立の理由の概要
　特許異議申立人・ファーマシア　アンド　アップジョン　アクチボラーグは甲第１〜５号証を提示して本件の請求項１〜４に係る発明は、甲第１〜５号証記載の発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから請求項１〜４に係る特許は取り消されるべき旨主張している。
　
ロ、異議申立についての判断
　しかしながら、請求項１に係る発明は、上記（２）に記載したとおりの理由で訂正が認められるものであって、その訂正が認められた訂正発明１は上記（２）ハで検討したように、特許異議申立人が提示した甲第１〜５号証記載の発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとは認められない。
　また、本件の請求項２〜４に係る発明は、製造方法であって双室注射器ではなく発明のカテゴリーが相違するが、各請求項とも請求項１を実質的に引用しており訂正発明１に係る双室注射器を製造する方法に係る発明である。
　そして、訂正発明１が甲第１〜５号証記載の発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとは認められないものであるから、訂正発明１の製造方法に係る請求項２〜４に係る発明もまた甲第１〜５号証記載の発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものとは認められない。
　さらに、他に請求項１〜４に係る特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１２年９月２７日（２０００．９．２７）
【訂正の要旨】
　特許請求の範囲の欄の請求項１について、特許請求の範囲の減縮及び明瞭でない記載の釈明を目的として、以下のとおり訂正する。
『１．注射針と反対側の第１室内に発熱物質を含有しない無菌の溶剤を有し、注射針に面している第２室中にウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子又は、アンチトロンビンＩＩＩで構成されている装薬を治療上効きめのある一回の投与に必要とされる量としてウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼの場合には少なくとも２百万国際単位、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子の場合には少なくとも１０００国際単位、またアンチトロンビンＩＩＩの場合には少なくとも５００国際単位を有しかつ、各装薬の溶液を第２室で凍結乾燥させた状態で各装薬を第２室に保有していることを特徴とする双室注射器。』
を
『１．注射針と反対側の第１室内に発熱物質を含有しない無菌の溶剤を有し、注射針に面している第２室中にウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子又は、アンチトロンビンＩＨで構成されている装薬を治療上効きめのある一回の投与に必要とされる
量を有し、
前記第２室の容積の多くとも５８％の体積の溶液中に含まれる濃縮度を達成するまで、弱い酸性の特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液に対する弱い塩基性の特にｐＨ７．３ないし７．５の溶液からの透析と、弱い酸性、特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液によるクロマトグラフィーの溶離の透析及び／又はクロマトグラフィー分析がＰＥＧ予備精製つき、又は該予備精製なしに、行われることにより得られた
第２室の容積の多くとも５８％まで第２室に装填して
と訂正する。
（５４）【発明の名称】
活性に鋭敏な人のプロテインから成る装薬を作用物質として備えている双室注射器
（５７）【特許請求の範囲】
　１．注射針と反対側の第１室内に発熱物質を含有しない無菌の溶剤を有し、注射針に面している第２室中にウロキナーゼ、プローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子又は、アンチトロンビンＩＩＩで構成されている装薬を治療上効きめのある一回の投与に必要とされる量を有し、ウロキナーゼ、プローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼの場合には少なくとも２百万国際単位、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子の場合には少なくとも１０００国際単位、またアンチトロンビンＩＩＩの場合には少なくとも５００国際単位
が前記第２室の容積の多くとも５８％の体積の溶液中に含まれる濃縮度を達成するまで、弱い酸性の特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液に対する弱い塩基性の特にｐＨ７．３ないし７．５の溶液からの透析と、弱い酸性、特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液によるクロマトグラフィーの溶離の透析及び／又はクロマトグラフィー分析がＰＥＧ予備精製つき、又は該予備精製なしに、行われることにより得られた
第２室の容積の多くとも５８％まで第２室に装値して
　２．特許請求の範囲第１項の双室注射器を製造する方法において、ウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子又は、アンチトロンビンＩＩＩで構成されている装薬の溶液を双室注射器の注射針に面している第２室中へ多くともその容積の５８％まで装填し、前記の装填された量の溶液にはウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼの場合には少なくとも２百万国際単位、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子の場合には少なくとも１０００国際単位、またアンチトロンビンＩＩＩの場合には少なくとも５００国際単位の装薬が含まれており、次いでこの溶液をその場所で凍結乾燥することにより特徴づけられる前記双室注射器を製造する方法。
　３．特許請求の範囲第２項の製造方法において、双室注射器の注射針に面している第２室中に装填される、ウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子又は、アンチトロンビンＩＩＩで構成されている装薬の溶液が、前記第２室の容積の多くとも５８％の体積の溶液中にウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ｔＰＡ、ストレプトキナーゼの場合には少なくとも２百万国際単位、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子の場合には少なくとも１０００国際単位、またアンチトロンビンＩＩＩの場合には少なくとも５００国際単位の装薬が含まれる濃縮度を達成するまで、何度も透析及び／又はクロマトグラフィー分析がＰＥＧ予備精製つき、又は該予備精製なしに、行われることにより得られることを特徴とする製造方法。
　４．弱い酸性の特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液に対する弱い塩基性の特にｐＨ７．３ないし７．５の溶液からの透析と、弱い酸性、特にｐＨ６．６ないし７．０の緩衝液によるクロマトグラフィーの溶離とが行われることを特徴とする特許請求の範囲第３項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
　双室注射器が使われるようになってからかなり長い時間がたっており、そこにおいて一つの室内には発熱物質のない溶剤が、又、注射針に面した第２室には、注射器自身内で凍結乾燥された装薬が入っており、この装薬は注射の際、発熱物質を含んでいない水で溶かされて注入される。
　活性に鋭敏な人の血漿−プロテインに基づく作用物質が多数揃っている。これらの作用物質は相当高い濃度では、例えば５，６時間というまともな期間にわたり溶液として維持不可能とされる。と言うのは、高い濃度において作用物質は生物学的活性を失うか、又は分解させられるか、一部沈殿するからである。これはとりわけ第ＶＩＩＩ因子について言える。この種の調剤は目下相当低い濃度でしか使用できない。注射器用として携帯に便利なサイズのアンプル中の濃度は低すぎ治療上十分な効きめのある注射溶液量としては不足する。このためこれらは点滴（注入）溶液として使われる。これらの溶液は必然的に特別希釈されているので、点滴すなわち作用物質の供給は特別時間をかけて続けられる。しかしたいていの場合、できるだけ迅速な効果を達成するため、作用物質をスピーディーに供給する方が望ましい。この種の作用物質の濃度が適当に高められている場合ですら、点滴に必要とされる時間は、物質の分解又は低下を阻止するには余りにも長過ぎることがしばしばある。
　双室注射器内で直接凍結乾燥させるために使われる従来入手可能とされる溶液の濃度は、一回の凍結乾燥により十分な量の物質をその室中で得るには低すぎた。
　しかし室の中で何回もの装填と凍結乾燥を繰り返すことは、より濃縮された溶液を使う場合と同じ理由から不可能である。なぜならば、この種の人のプロテインが、活性に鋭敏であるので、新たに室に装填するときプロテインに傷がつくかもしれないからである。
　本発明では、注射器の室へ一回装填してすぐに凍結乾燥する際に時間に関する安定性と濃度に関し作用物質を損うことなしに注射室へ移すことのできるこの種のプロテインのかなり高い溶液濃度を達成することに成功したので、その結果、製造した注射器をかなり長期間保存しておくことが出来、又、注射の直前に、プロテインは注射器の別の室の発熱物質を含まない溶剤により溶かされ、すぐに注射されることになる。従って実際に使われる前の、溶けている時間は、せいぜい数分に過ぎない。
　本発明では、この方法により、活性に鋭敏な人のプロテインを所望の高い濃度に、しかも短時間のうちに投与することができる。
　この種の調剤としては、特にウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ＴＰＡ、ストレプトキナーゼ、第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子並びにアンチトロンビンＩＩＩが挙げられる。
　従って、凍結乾燥する溶液（つまり作用物質）を入れる室のための６ｍｌまでと溶剤のための４．５ｍｌまでのこの種の注射器のふつうの室の寸法の場合、３ないし３．５ｃｍ３の血漿濃縮液を充填することにより、少なくとも約２〜３百万単位のウロキナーゼ、ブローウロキナーゼ、ＴＰＡ、ストレプトキナーゼ、少なくとも約１０００単位の第ＶＩＩＩ因子或いは第ＩＸ因子並びに、少なくとも約５００〜１０００単位のアンチトロンビンＩＩＩを、一回の凍結乾燥により注射器の作用物質用の室中に収容することができる。
　６ｍｌの容積を持つ室の場合、せいぜい３〜３．５ｃｍ３（５０〜５８％）の凍結乾燥され得る溶液を、装填することができる。なぜならば、凍結乾燥の際、溶液が飛び散って壁に高くはいまつわるからである。これは、治療に必要な量を注射用の室の中にしまっておくため、かなり強く濃縮された溶液を装薬として利用することの重要性を強調している。
　次に、この種の注射器について一層詳細に説明することにする。
　公知の双室注射器は、カニューレと隣り合っている前室或いは第２室中に凍結乾燥される作用物質を入れている。この室の細くなった部分の左側には取外し式の密閉キャップがかぶさっており、ここにカニューレがセットされる。二つの室の間には小さな孔つきのプレートが置かれ、これは孔及び、注射器の壁の反りのためにつくられた隆起を通り抜けてピストンを溶剤用の室の中に押込む際、そこに含有されている溶剤を前方の室中へ押し込む働きをし、そこで、短時間振ると凍結乾燥された作用物質が溶ける。引き続いてすぐに注射器の中身を投与することができるようになる。
　注射溶液を勝手に多量注射することはできず、静脈注射の場合ですら一度に注射される量は多過ぎてはならないので、室の容量が６ｍ１をオーバーすることはほとんどあり得ない。このため、このサイズ以下の室の中にできるだけ多くの作用物質を一回の凍結乾燥により、つまり一度に入れることが大切である。
　注射器には、それ自体公知の方法により、装填される。つまり、無菌を条件として、装填されるべき活性に敏感な人のプロテインの溶液を、予め企図されている量だけ装填される。これを受けて注射器は、その次のステーションへ運ばれ、そこで凍結乾燥させられる。次に、凍結乾燥された内容物の入っている注射器はその次のステーションへ運ばれると、発熱物質を含んでいない溶剤が第２室中へ入れられ、これに続いて無菌条件の下で最終的に一体化及び包装が行われる。なお注射器のサイズとピストンの挿入と、注射器の密閉キャップのふつうの栓の形とは異なる形を考慮に入れると、既製品の注射器の装填用としてふつうに使われている自動装置をわずかに改造したものを使わなくてはならない。
　この種の注射器は、例えば、医師が実践において使用したり、又、臨床部門で使われる場合だけではなく、特に救急医学とか、患者が家で自ら治療するために使うのにも適している。
　活性に鋭敏な人のプロテインの溶液の濃度を高める処理方法については、若干例に基づいて表示されることになる。若干例から判る通り、従来可能とされていたものに比べるとはるかに高い濃度の溶液を入手できることになった。その結果一回だけの注射器への装填、例えば６ｍｌの内容量の注射器の室には、凍結乾燥の時に飛び散ったり、壁にはいまつわることのないように、せいぜい３．５ｍｌが一回装填されそして一回だけの凍結乾燥で、有効な治療に必要な量のプロテインが用意されることになる。
　下記実施例は本発明を説明するものである。
実施例　１
　ウロキナーゼの濃縮溶液の製造
　約１５００１の尿を用いて出発して、ベントナイト−活性化剤−錯体が多数、例えば約５０、のバッチにつくられ、これから、公知の方法により粗製のウロキナーゼが再び分離される。これを材料にしてリン酸カルシウム−ウロキナーゼ−錯体が多数のバッチに形成され、再びこれを材料として、５〜１０ｌの量の中に含有された、５０００００ないし、６０００００国際単位（Ｉ．Ｕ．）／ｍｌを有する濃縮ウロキナーゼが二つのバッチに分離される。
　詳しい作業方法は下記の通りである：
　棚酸を用いて濃縮された尿はベントナイトと混合され、ベントナイト−活性化剤−錯体は注射に適切な水で洗われ、１２０ｋｇの硫酸アンモニウムと、バルク重合体の形の非イオンノゲンエーテルグリコール（これは市販名プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）として入手可能である）の６．２ｋｇとに３１０ｌになるまで水を加えた溶液で、溶離される。次にこの溶離物は、約１６５ｋｇの硫酸アンモニウムを用いて塩析される。得られた粗製の大量のウロキナーゼは、注射に好適な水４３０ｌ中の０．９ｋｇのエタクリジニウムラクタート溶液で溶離され、そして、溶離物は、水が１８０ｌになるまで加えられ、１１ｋｇのリン酸ナトリウム×１２Ｈ２Ｏと、６．４ｋｇの塩化カルシウム×２Ｈ２Ｏから得られたリン酸カルシウムーゲルに吸収される。カルシウム−ウロキナーゼ−錯体は約１２．５ｋｇリン酸二水素ナトリウム×２Ｈ２Ｏに３−Ｎの苛性ソーダ溶液が２２０ｌまで加えられた溶液により溶離され、続いて溶離物はＣＭ−セルロース或いはＣＭ−セファデックスを用いて精製される。こうして得られたＣＭ−セルロース−ウロキナーゼ−錯体は５０ｋｇのリン酸二水素ナトリウム×２Ｈ２Ｏに３−Ｎの苛性ソーダ溶液が１６５ｌまで加えられた溶液により溶離され、溶離物はリン酸で酸性化され、６０℃で約１０時間低温殺菌が行われてから、０．１Ｍリン酸塩緩衝溶液に対して透析され、次いで濾過される。引き続き透析物は、精製された濃縮ウロキナーゼに関する標準的な方法でテストされる。ウロキナーゼ濃度は、普通７００００〜１６００００Ｉ．Ｕ．／ｍｌであり、リン酸塩濃度は透析用の０．１Ｍのリン酸塩緩衝液の場合と同じである。場合によってこのウロキナーゼ溶液は、ｐＨ７．１のアルブミン−リン酸塩−緩衝溶液の好適量を透析物に加えて所望の濃度になるまで希釈される、この場合ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ／Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏの比が１３／６０（重量）である。
　続いて、所望の濃度の溶液が注射器の中へ充填され、その中で凍結乾燥される。
　下記のイオン交換器と薄膜フィルターが、製造中に利用される。
　イオン交換器として、１．１４ｍＥｑ／ｇ乾燥重量のイオン交換容量を有するカルボキシメチルセルロースと、４．５＋／−０．５ｍＥｑ／ｇ乾燥重量のイオン交換容量を有するＣＭ−セファデックスＣ−２５型が用いられ、
　薄膜フィルターとしては、一方では孔のサイズが０．２μｍ、そして他方では０．８μｍのポリアミドフィルターが用いられる。
実施例　２
　アンチトロンビンＩＩＩの濃縮溶液の製造
　血漿および血、特に、コーン血漿分割−ＶＩ−１−ぺーストからのアンチトロンビンの分離は、ポリエチレングリコール分別法、ヘパリン−セファローゼ４Ｂ上のアフィニティクロマトグラフィー、および６０℃で１０時間の熱処理による浄化法により公知の方法で実施される。これを行うとき、ＮａＣｌの濃度の増大する緩衝液による勾配溶離を行うことは必須ではなく、洗浄と溶離のため溶媒濃度を常に一定に保つこと、即ちカラムを洗うためのｐＨ７．３の０．４ＭのＮａＣｌ、０．０２Ｍのイミダゾール溶液と、溶離のための、ｐＨ６．５の２ＭのＮａＣｌ、０．０２Ｍのイミダゾール溶液を保つことが必須である。入手したアンチトロンビンＩＩＩの溶液は、中空の繊維を通して濃縮され、クエン酸ナトリウムと混合され、撹拌され、６０℃で１０時間低温殺菌される。次にその塩は中空の繊維での透析により除去される〔透析用の溶剤：Ｎａ３Ｃ６Ｈ５Ｏ７・２Ｈ２Ｏ（約６ｇ）、約５ｇのＮａＣｌとｐＨを７．５に調整するための１ＮのＨＣｌ又は、１ＮのＮａＯＨ、注射に適する水が１０００ｍｌまで加えられる〕。次に下記の工程は腐敗性の条件（非滅菌性の条件）の下に実施される：即ち、
　透析物中の滴定濃度を調整した後、続いてＤ−マニトーゼ（Ｍａｎｎｉｔｏｓｅ）（２０ｇ／ｌ）がその中に溶かされ、ｐＨ値が１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨを用いて７．５に調整され、続いて孔のサイズが０．４５ミクロンの薄膜フィルターを通って濾過され、溶液は、続いて凍結乾燥のため、注射器の室の中へ充填される。この溶液の活性は３００〜３５０Ｉ．Ｕ．／ｍｌに相当する。
実施例　３
　人の抗血友病性因子（ＡＨＦ又は第ＶＩＩＩ因子）の濃縮溶液の製造
　ＡＨＦはプールされた人の血漿を材料にしてポリエチレングリコール法に従って製造される。凍結した血漿を温度条件を調節して溶解し、遠心分離により寒冷沈降物が回収され、ヘパリン化蒸留水（１ｍｌ当り８０ヘパリン単位）の中に再懸濁され、この溶液のｐＨ値は希釈されたＨＣｌを用いて７．０に調整され、次に２８℃でゆっくりと混合しながら再懸濁させられる。ヘパリン化水の容量は、約３１／ｋｇ寒冷沈降物である。
　続いてポリエチレングリコールが、ＡＨＦ溶液に３％の最終濃度で添加され２５℃において十分混ぜ合わせられる。ＡＨＦ溶液のｐＨは、ここでは希釈された酢酸を用いて６．３に調整される。この懸濁液は、２５℃で、少なくとも約１５分間引き続き混ぜられる。続いて遠心分離機にかけられる。
　遠心分離後の上澄み液は、全ての固体粒子を除去するために濾過される。続いてリン酸トリ−ｎ−ブチルと、ポリゾルバート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔ）８０が前記の濾過ＡＨＦ溶液へ、最終濃度が０．３０％のＴＮＢＰ（容積／重量）及び１％のポリゾルバート（重量／重量）になるまで添加される。このｐＨは、希釈された酢酸で６．３に調整され、その混合物は２７℃で一晩中放置される。続いて更にＰＥＧが１２％の最終濃度になるまで添加される。この懸濁液は、しばらくの間２５℃において、上と同様に混ぜ合わせられ、形成されたＡＨＦ沈殿物は遠心分離機にかけられて回収される。
　ＰＥＧを沈殿させたＡＨＦは、０．２３Ｍのクエン酸塩と１３Ｕ／ｌのヘパリンを含有する１．６Ｍのグリシン溶液中で５℃で再懸濁されている。グリシン溶液の容積は、沈殿させたＡＨＦの１ｋｇ当り２０ｌである。この懸濁液が均質に混合させられたとき、遠心分離によってＡＨＦ沈殿物が回収される。
　グリシンを沈殿させたＡＨＦは、再びクエン酸塩とヘパリンを含有するグリシン溶液の中で５℃で、再び懸濁させられる。このグリシン溶液の容積は、沈殿させたＡＨＦの１ｋｇ当り２０１である。均質になるまでこの懸濁液をまぜてから、ＡＨＦ沈殿物は再び遠心分離機にかけて回収される。
　この沈殿物は、０．４ＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．３〜７．５）（８１／ｋｇ）で再び懸濁され、洗浄用緩衝液（０．０２Ｍのクェン酸ナトリム＋０．０５Ｍの塩化ナトリウム、ｐＨ６．６〜７．０）に対して透析される。
　これは、所望の濃度が達成されるまで、数回繰り返される。
　別法として、この沈殿物はグリシン−クエン酸ナトリウム溶液中で２０℃で、溶解させられる。その際、ｐＨは希釈されたＮａＯＨ又はＨＣ１を用いて７．３に調整される。グリシン−クエン酸ナトリウム溶液の容積は、グリシンを沈殿させたＡＨＦの１ｋｇ当り２０ｌである。続いてこの溶液は、バクテリアを引きとめる予め消毒済みの薄膜フィルターを通されて無菌になされ、無菌条件下に注射器の中へ充填されてから凍結乾燥される。その濃度は約３００〜３５０Ｉ．Ｕ．／ｍｌである。
実施例　４
　第ＩＸ因子の製造
　ふつうの方法で入手された第ＩＸ因子錯体−粉末（プロトロンビン錯体）は、蒸留水の中で１．２％のプロテイン濃度として溶解される。次に希釈緩衝液（０．０２Ｍのクエン酸ナトリウム＋０．２５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．３；４．０ｌ／ｌ）と混ぜ合わせ、この溶液に、１ｌについて１Ｍの塩化バリウム溶液０．１６ｌが加えられ、第ＩＸ因子プロテインを沈殿させる。沈殿したプロテインは濾過又は遠心分離され、続いて１ｋｇ当り８１で０．４ＭのＥＤＴＡ溶液中に溶解され、洗浄緩衝液（０．０２Ｍのクエン酸ナトリウム＋０．０５ＭのＮａＣｌ）によって透析濾過される。このように濾過された第ＩＸ因子は、所望の濃度が達成されるまで、何度も、硫酸デキストランＳｉＯ２樹脂を含有するクロマトグラフィカラムに通され溶離され乱カラム中の樹脂の量は、処理された出発材料１００ｇ当り約２．５ｌである。
　樹脂に吸着された第ＩＸ因子はカラム内で１０倍又はこれ以上の容積の洗浄用緩衝液で洗われ、これら緩衝液は捨てられる。精製された第ＩＸ因子は０．０２Ｍのクエン酸ナトリウム及び０．５Ｍの塩化ナトリウムからなりｐＨ６．６から７の溶離用の緩衝液の量を徐々に増大させることによって線形の塩勾配で樹脂から溶離される。勾配の最後には、カラムはさらに追加の溶離用緩衝液を用いて溶離される。第ＩＸ因子の溶離物は、プールされ、濾過され、又、場合によっては、透析濾過された後、ｐＨ７に調整され、これが、注射器中へ充填され、凍結乾燥される。溶液の濃度は平均すると、約３００〜３５０Ｉ．Ｕ．／ｍｌに相当する。