(57)【要約】  ３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドのブロッキング作用を示し，ガンマ−アミノ酪酸（Ａ）レセプター（ＧＡＢＡ−Ａ）に対する拮抗作用がないかまたはわずかしかない化合物，および前記レセプターに対する部分的拮抗作用を示す化合物が開示される。種々のＣＮＳ疾患を予防，治療および／または緩和する方法，ならびにそのような用途のための医薬組成物が示唆される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガンマ−アミノ酪酸（Ａ）レセプター（ＧＡＢＡ−Ａ）が関与するＣＮＳ疾患を治療および／または緩和する方法であって，レセプターに及ぼすＧＡＢＡ作用に対する拮抗効果を実質的に有さずに３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイド作用を阻害する第１の物質，またはレセプターに及ぼすＧＡＢＡ作用と拮抗する第２の物質のいずれかを使用することにより，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす影響を調節することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記第１の物質が，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される，請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記第１の物質が，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオールおよび５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される，請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記第２の物質が，５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される，請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記第２の物質が，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オンおよび５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オンから選択される，請求項４記載の方法。
【請求項６】
５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される物質の医薬品としての使用。
【請求項７】
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの作用により引き起こされるＣＮＳ疾患の予防，治療および／または緩和用の医薬品として用いるための，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される物質であって，前記治療は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに対する拮抗効果を実質的に有しないことを特徴とする物質。
【請求項８】
５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される，医薬品として使用するための物質。
【請求項９】
ＧＡＢＡ−Ａレセプターの過剰刺激により引き起こされるＣＮＳ疾患の予防，治療および／または緩和用の医薬品として用いるための，５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される物質の使用。
【請求項１０】
５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される物質の，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドがＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす作用により引き起こされるＣＮＳ疾患を予防，治療および／または緩和するための医薬品の製造における使用であって，前記治療は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに対する拮抗効果を実質的に有しないことを特徴とする使用。
【請求項１１】
前記物質が５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオールである，請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
前記物質が５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールである，請求項１０記載の使用。
【請求項１３】
５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される物質の，ＧＡＢＡ−Ａレセプターの過剰刺激により引き起こされるＣＮＳ疾患を予防，治療および／または緩和するための医薬品の製造における使用。
【請求項１４】
物質が，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；および５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オンである，請求項１３記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，中枢神経系（ＣＮＳ）のＧＡＢＡ−ステロイド関連および／または誘導性疾患の治療，緩和または予防に関し，特に，この目的のための特定のステロイド化合物，前記治療用の医薬品の製造のためのこれらの使用，ならびにこれらの使用を伴う治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
性およびストレスホルモンであるプレグネノロン，プロゲステロン，デスオキシコルチコステロン，コルチゾンおよびコルチゾル（プレグナノロンとしても知られる）の代謝産物；ならびにテストステロン，アントロステンジオンおよびデヒドロエピアンドロステロンの代謝産物はすべて種々の研究の対象であり，哺乳動物の神経学的シグナル系におけるこれらの役割が少なくとも部分的に解明されてきた。
【０００３】
本発明において興味の対象であるＣＮＳ症状および疾患を誘導するステロイドはすべて，３アルファ−ヒドロキシ基，５アルファまたは５ベータプレグナンステロイド体，および，１７，２０または２１位にケトンまたはヒドロキシ基を含む点において，構造的類似性を有する。
【０００４】
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オン／オールまたは３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−アンドロスタン−１７−オン／オールを含むステロイドは，ガンマ−アミノ酪酸（Ａ）レセプター（ＧＡＢＡ−Ａ）の重要な特異的増強剤であることが示されている。これらは，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに結合し，ＧＡＢＡ−Ａレセプターの開放頻度および開放時間に関して，ＧＡＢＡの効果を増強することにより作用する。この効果は，ベンゾジアゼピンおよびバルビチュレートの両方の効果と類似する。しかし，前記ステロイド化合物は，これらの両方の化合物とは別の結合部位を有する。そのようなＧＡＢＡ増強性ステロイドの例およびｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ／Ｃｈｉｃａｇｏ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＣＡＳ）にしたがうその番号を表１に示す。
【０００５】
ステロイドの命名法は，完全には一致しておらず，したがって，本明細書の全体をとおしてｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｒｅａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＵＰＡＣ）により開発された命名法を使用する。
【０００６】
【表１】
2008525317.tif 000002
【０００７】
これらのステロイドのいくつかは，高い薬理学的用量で感覚脱失を誘導する能力を有することが示されている。これらはまた，抗てんかん薬として，または催眠剤としても用いることができる。これらの化合物のいくつかはまた，動物実験において抗不安効果を有することが示されている。しかし，これらの効果を得るためには，高濃度または高用量が必要である。さらに，これらは急性の効果として現れる。
【０００８】
上述したように，これらの直接ＣＮＳ効果に関しては，これらの化合物はベンゾジアゼピンおよびバルビチュレートに類似する。しかし，これらはまた，ベンゾジアゼピンおよびバルビチュレートに通常付随する効果と類似する有害な効果も有する。内因性３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−２０−オン−ステロイドまたは３アルファ−ヒドロキシ−アンドロスタン−ステロイドの有害な効果が，これらのステロイドにより誘導される負のＣＮＳ効果の基礎である。３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドおよび３アルファ−ヒドロキシ−アンドロスタン−ステロイドは内因的に産生され，ステロイドホルモンの代謝産物であって，これらのいくつかは生命に必須であるため，これらの産生は容易に遮断することはできない。これらのステロイドは，月経周期の黄体期の間，すなわち，成熟した卵胞から卵子が放出された後，妊娠の間，およびストレスの間の数日間から数週間のうちに大量に産生される。これらは脳内でも産生される。
【０００９】
３アルファ−ヒドロキシ−ステロイドにより引き起こされる疾病
内因的に産生される３アルファ−ヒドロキシ−５アルファステロイドまたは３アルファ−ヒドロキシ−５ベータステロイドがＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす作用により引き起こされる疾患は，よく特徴決定され理解されている。また，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドが，曝露後にそれ自身および別の類似の物質に対する耐性を誘導しうること，および３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの離脱に際して禁断症状が起こることもよく知られている。まとめると，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドが上述の３つの可能なメカニズム，すなわち，ａ）直接作用，ｂ）耐性誘導，およびｃ）脱離症状を介してＣＮＳ疾患を引き起こすことは一般に知られている。これらのメカニズムを以下に詳細に説明する。
【００１０】
ａ）直接作用
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドがＣＮＳ機能の阻害を直接引き起こしうることは確立されている。３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの直接作用により引き起こされる症状の例としては，鎮静，疲労感，記憶障害，学習障害，運動機能の障害，粗相，食欲増進および大食症，緊張などの負の気分，月経前不快疾患における主要な症状である被刺激性および抑うつ，月経前症候群および小発作てんかんの悪化が挙げられる。この直接作用の例はまた，以下のように分けることができる：鎮静および麻酔効果；運動機能の障害；認識機能，記憶および学習に及ぼす効果；小発作てんかんの悪化；月経前症状；気分変化；実験動物における不安の誘発；過食症および食欲増進；大食症など。
【００１１】
ｂ）耐性
連続的かつ長期の３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドへの曝露は，ＧＡＢＡ−Ａレセプター系の機能不全を引き起こす。耐性が発現し，この耐性は最終的に，ストレス過敏症，集中困難症，および衝動調節の喪失および抑うつにつながるプロセスの初期段階である。また，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの作用は，薬剤依存性を高める因子であることが見いだされている。これは，多くの研究の焦点であった。これまで，以下のテーマが研究の主な主題であった：大量の３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータステロイドの長期分泌後のＧＡＢＡ機能のダウンレギュレーションおよび低下；ＰＭＳにおけるベンゾジアゼピンおよび３アルファ−ヒドロキシ−５ベータステロイド感受性の低下；および依存性誘発。
【００１２】
ｃ）禁断症状
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドへの連続的であるがより短い曝露は，曝露が終了したときに脱離症状をもたらす。この現象は，例えば，自然には，月経の間に卵巣の黄体による３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの産生が中断したときに生ずる。この離脱現象はまた，出産後（分娩後）に胎盤による３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの産生が中断したときにも生ずる。同じ現象はまた，ストレスが終止した間，例えば，週末に業務上のストレスが中断したときにも認められる。ストレスに対する応答として，副腎が３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドを産生していたのである。この産生が中断すると，禁断症状が起こりうる。
【００１３】
この離脱現象により影響される状態の例は，患者が大脳皮質中にてんかん性病巣を有するてんかんであり，この場合には，月経の間の離脱期間に悪化する。この現象は"月経てんかん"と称されている。他の例は，月経関連片頭痛，ストレス関連片頭痛，および分娩後気分変化である。同様の症状および状態は，例えば，経口避妊薬，閉経後ホルモン補充療法，炎症性疾患のステロイド治療において用いられるようなステロイドホルモンによる治療の間，およびアナボリック／アンドロゲン性ステロイドの摂取の間に誘発される。メカニズムは，直接的効果，耐性発現および離脱の誘導におけるものと類似している。
【００１４】
ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）過剰刺激により引き起こされる疾患
ＧＡＢＡそれ自体による高刺激は，ある状況下では学習および記憶機能を阻害することが知られている。ＧＡＢＡの過剰産生は，短期学習および記憶機能を低下させる。これは，特に老齢者においては臨床的に重要である。そのような状況下においては，ＧＡＢＡの効果の拮抗作用は有益でありえ，記憶障害の治療に有用である可能性がある。しかし，ＧＡＢＡ拮抗作用が強すぎると，例えば，けいれんを引き起こし，これは患者にとって危険でありうる。したがって，ＧＡＢＡ−ステロイド誘導性状態を選択的にブロックする特異的拮抗剤，およびＧＡＢＡ−ＡレセプターにおけるＧＡＢＡにより活性化されるクロライド流出にも影響を与えるが本質的にＧＡＢＡ−Ａレセプターを完全にブロックすることができない拮抗剤を見いだすことに興味がもたれる。
【００１５】
本発明者らは，驚くべきことに，主としてＧＡＢＡそれ自体の効果に対して拮抗作用を有する物質および主としてＧＡＢＡがＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼすステロイド作用に影響を与える物質を見いだした。これらの効果の間を区別することが重要である。これは，ＧＡＢＡ−ステロイド作用の拮抗作用は，ＧＡＢＡそれ自体の効果の直接的な部分拮抗作用以外の状況で示されるためである。
【００１６】
現在，アルツハイマー病（ＡＤ）および軽度認識障害（ＭＣＩ）の治療はほとんど実現されておらず，予防的または治癒的な治療法は存在しない。ＧＡＢＡ−ステロイド，ベンゾジアゼピンおよびアルコール等のＧＡＢＡ−Ａレセプター作動剤が記憶喪失作用を有すること，および脳領域のＧＡＢＡ−Ａレセプターが最もＡＤにより影響されるという事実から，ＧＡＢＡ−ＡレセプターはＡＤおよびＭＣＩにおける可能性のある治療標的として注目されてきた。記憶喪失性のＧＡＢＡ−Ａレセプター作動剤とは対照的に，逆作動剤ないし拮抗剤は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターの機能を低下させるであろう。ＧＡＢＡ−ステロイド拮抗剤およびＧＡＢＡ拮抗剤は，動物モデルにおいて学習および記憶の能力を改善することが示されている。残念ながら，非選択的であり全体をブロッキングするリガンドもまた，けいれんを誘発する。すなわち，部分的かつ選択的ブロッカーが求められている（Ｍａｕｂａｃｈ，Ｋ．，ＧＡＢＡ−Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｔｙｐｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒｓ，Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ＣＮＳ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｄｉｓｏｒｄ．，２００３（２）２３３−２３９）。現在市販されている認識強化剤は，効果が低く顕著な副作用を有しており，新規物質が求められている。これが本発明の主題である。
【００１７】
従来技術
本発明者らの知る限りでは，ＧＡＢＡ−ステロイド作用を選択的に阻害するか，またはＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼすＧＡＢＡ作用を主として阻害するステロイド物質はこれまでに開示されていない。従来技術は，すべてのＧＡＢＡ−ステロイド効果に及ぼす一般的作用を述べているのみである。
【００１８】
ＰｒｉｎｃｅおよびＳｉｍｍｏｎｓ（Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３２，ｎｏ．１，ｐｐ．５９−６３，１９９３）は，雄ラットの全脳の膜画分を用いるモデルを使用している。全脳ホモジネートのこの画分において，著者らはステロイド効果およびＧＡＢＡ−Ａレセプターのコンフォメーションの変化のモデルとして，ベンゾジアゼピン，３Ｈ−フルニトラゼパムの結合を用いた。この実験は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターのアロステリック調節を示すものであると示唆されている。しかし，ＧＡＢＡ刺激の際のフルニトラゼパム（ＦＮＺ）結合の変化とクロライド流の変化との間の相関は不明確であり，結合の変化はＧＡＢＡレセプターを通るクロライド流の変化の証拠とすることはできず，ＧＡＢＡ−Ａレセプター機能の変化の証拠ともすることができない。クロライド流の変化は重要な効果である。
【００１９】
中心となる疑問，すなわち，ＦＮＺ結合の変化と神経興奮性との間に相関が存在するかという疑問は，さらに不明確であり，ＦＮＺ−結合の結果のみからではそのような結論を導くことができない。ＦＮＺ結合特性の変化または結合特性のそのような変化がないことは，神経活性またはＧＡＢＡ−Ａ媒介性クロライド流の変化または変化がないことを示唆していない。
【００２０】
ＧＡＢＡ−Ａレセプターがいくつかのサブユニットを含に，これらを多様に組み合わせることができることもよく知られている。興味深いことに，ある種の組み合わせはステロイド認識部位を欠失している。また，けいれん誘発物質であるＴＢＰＳ（ｔ−ブチルビシクロ−ホスホロチオネート）の結合に及ぼすステロイドの影響は，異なる脳領域では異なっていることも知られている。さらに，雌ラットにおいてＴＢＰＳの結合は発情周期によって異なることも知られており，このことは，効果が卵巣ホルモン産生に関連して変化することを示す。発情周期に関連するこれらの変化は，もちろん，ＰｒｉｎｃｅおよびＳｉｍｍｏｎｓ（上掲）の実験で用いられたような雄ラットでは知られていない。
【００２１】
米国特許５，２３２，９１７（Ｂｏｌｇｅｒら）および米国特許５，９３９，５４５（Ｕｐａｓａｎｉら）は，多数の３アルファ−ヒドロキシステロイドを開示する。これらの特許は両方ともＧＡＢＡ−Ａレセプターの作動性調節に関する。すなわち，これらの特許は両方とも，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドのベンゾジアゼピン様効果に焦点をあてている。ＧＡＢＡ−Ａレセプターの調節剤であるすべてのステロイドは，１つの３アルファ−ヒドロキシ構造という共通の特徴を有する。これらの文献において言及されている３ベータ−ヒドロキシステロイドは，単に，３アルファ−ヒドロキシ−ステロイドが特異的であることを示すために対照として用いられているにすぎない。３ベータ−ヒドロキシ構造のみを有するステロイドがＧＡＢＡ−Ａレセプター調節効果を有していると示されたことはこれまでにない。有効なＧＡＢＡ−Ａレセプター調節効果が認められたすべての場合において，ステロイドは３アルファ−ヒドロキシ基を有するものである。
【００２２】
ＷＯ９９／４５９３１（Ｂａｃｋｓｔｒｏｍ＆Ｗａｎｇ）は，１つの特定のステロイド，すなわち，３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンの拮抗効果を開示するが，他の３ベータ−ヒドロキシ−ステロイドについては何も述べていない。
【００２３】
３ベータ−ＯＨ−５アルファ−プレグナン−２０−オンの３アルファ−ＯＨ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オンに対する拮抗効果は，最初にＷａｎｇらにより開示された（Ｗａｎｇ  Ｍ．Ｄ．，Ｂａｃｋｓｔｒｏｍ  Ｔ．ａｎｄ  Ｌａｎｄｇｒｅｎ  Ｓ．（２０００）Ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｌｌｏｐｒｅｇｎａｎｏｌｏｎｅ  ａｎｄ  ｐｒｅｇｎａｎｏｌｏｎｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｓｐｉｋｅ，ｅｖｏｋｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ＣＡ１  ｓｔｒａｔｕｍ  ｐｙｒａｍｉｄａｌｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，ｃａｎ  ｂｅ  ｂｌｏｃｋｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｂｙ  ｅｐｉａｌｌｏｐｒｅｇｎａｎｏｌｏｎｅ．Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｓｃａｎｄ  １６９，３３３−３４１）。この論文においては，３ベータ−ＯＨ−５アルファ−プレグナン−２０−オンが２つの３アルファ−ＯＨ−５アルファ／ベータ−ステロイドに及ぼす用量依存的な拮抗効果が示されている。
【００２４】
ＷＯ０３／０５９３５７（Ｂａｃｋｓｔｒｏｍら）は，ＣＮＳ疾患の治療におけるプレグナンステロイドの使用を開示する。この特許は，ＧＡＢＡ−ステロイド効果またはＧＡＢＡそれ自体に対する作用を選択的に阻害する可能性については言及していない。
【００２５】
３ベータ  ステロイドがＧＡＢＡそれ自身の効果に対する影響も有しうることは，Ｗａｎｇらに開示されている（Ｍｉｎｇｄｅ  Ｗａｎｇ，Ｙｅｊｕｎ  Ｈｅ，Ｌａｗｒｅｎｃｅ  Ｎ．Ｅｉｓｅｎｍａｎ，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｆｉｅｌｄｓ，Ｃｈｕｎ−Ｍｉｎ  Ｚｅｎｇ，Ｊｏｓｅ  Ｍａｔｈｅｗｓ，Ａｎｎ  Ｂｅｎｚ，Ｔａｏ  Ｆｕ，Ｅｒｉｋ  Ｚｏｒｕｍｓｋｉ，Ｊｏｅ  Ｈｅｎｒｙ  Ｓｔｅｉｎｂａｃｈ，Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｆ．Ｃｏｖｅｙ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｆ．Ｚｏｒｕｍｓｋｉ，ａｎｄ  Ｓｔｅｖｅｎ  Ｍｅｎｎｅｒｉｃｋ．３ｂｅｔａ−Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｅｇｎａｎｅ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ａｒｅ  Ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ−ｌｉｋｅ  ＧＡＢＡＡ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍａｙ  １，２００２，２２（９）：３３６６−３３７５）。この文献においては，著者らは，ＧＡＢＡによりＧＡＢＡ−Ａレセプターの最大刺激が与えられると，ある種の３ベータ−ヒドロキシプレグナンステロイドがＧＡＢＡそれ自身の効果を阻害しうることを示す。しかし，ある種の３ベータ−ヒドロキシステロイドが主としてＧＡＢＡにより開閉されるクロライド流出に及ぼすＧＡＢＡ−ステロイドの効果を阻害すること，および他のステロイドもまたＧＡＢＡそれ自体の効果を阻害することは発見していない。
【００２６】
ＧＡＢＡ阻害効果の低い３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイド作用の特異的拮抗剤を見いだすこと，および，その化合物が生理学的に安全であり，医薬としての使用に適しており，さらに生理学的に許容しうる投与量で適用しうる，ＧＡＢＡ作用の部分的拮抗剤を見いだすことが，課題として残っている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２７】
したがって，本発明の１つの目的は，ＧＡＢＡ−ステロイド拮抗作用およびＧＡＢＡそれ自体に対する部分的拮抗作用の特異的ブロッカーを同定し，ステロイド関連および／またはステロイド誘導性ＣＮＳ疾患の治療，緩和または予防のための新規医薬品および方法を利用可能とすることである。
【００２８】
さらなる目的，これに関連した解決法およびその利点は，説明，実施例および特許請求の範囲を熟知することにより，当業者には明らかとなるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
発明の概要
本発明者らは，驚くべきことに，３ベータ位にヒドロキシ基の形で水素ドナーを有し，さらに２０位にヒドロキシ基を有するステロイド化合物が，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイド作用の有効なブロッカーとして機能するが，ＧＡＢＡそれ自体に対しては最少の活性しか有しないことを見いだした。したがって，これらは，ステロイド関連またはステロイド誘導性ＣＮＳ疾患を予防および／または治療するための治療用物質として有用である。
【００３０】
さらに，本発明者らは，驚くべきことに，３位に，または３，２０および２１位にアセテート基を有するプレグナンステロイドが，ＧＡＢＡ媒介性クロライド流出に及ぼすＧＡＢＡそれ自体の効果を部分的に阻害しうることを見いだした。したがって，これらは，例えば，アルツハイマー病の場合におけるようにＧＡＢＡの機能それ自体が過剰刺激されている疾患を予防および／または治療するための治療用物質として有用である。
【００３１】
本発明者らは，ステロイド関連またはステロイド誘導性ＣＮＳ疾患の予防および／または治療において使用するための，およびこの目的のために医薬品を製造するための，ＧＡＢＡ作用に対して低い拮抗作用を示すが３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイド（ＧＡＢＡ−ステロイド）作用に対して有意な効果を有する４種類の化合物を提供する。これらの化合物は，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール（表２を参照）である。
【００３２】
【表２】
2008525317.tif 000003
【００３３】
さらに，本発明者らは，ＧＡＢＡによる過剰刺激により引き起こされる疾患およびこのことにより誘導されるＣＮＳ疾患の予防および／または治療に用いるための，およびこの目的のための医薬品の製造に用いるための，ＧＡＢＡ作用に対して部分的拮抗作用を有する１０種類の化合物を提供する。これらの化合物は，５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートである（表３を参照）。
【００３４】
本発明の１つの観点は，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイド作用およびＧＡＢＡ−作用に対するブロッキング物質としての上述の化合物の治療用途である。さらに，これらの物質は，添付の特許請求の範囲に記載されるように，多くの特定のステロイド関連またはステロイド誘導性ＣＮＳ疾患の治療用の医薬品の製造の用途，および治療方法の用途が示唆される。
【００３５】
【表３】
2008525317.tif 000004
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
図面の簡単な説明
表および図面を参照して，以下の説明および実施例において，本発明をさらに詳細に説明する。
【００３７】
図１は，Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｖｉｅｓ卵母細胞で発現させた組換えＧＡＢＡ−Ａレセプター（アルファ１，ベータ２，ガンマ２Ｌ）における，最大ＧＡＢＡ媒介性クロライド流出（３０μＭＧＡＢＡ）の阻害と，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出との相関を示す。データ点のラベルは製品番号で示されており，この番号に対応する正式名称は表２および３に示される。黒×３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オン（３μＭ）により亢進されたＧＡＢＡ（３μＭ）応答を阻害するステロイド拮抗剤を強調する。黒丸は，直接ＧＡＢＡ応答（３０μＭ）と３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ応答との両方を阻害するステロイド拮抗剤を強調する。
【００３８】
図２は，Ｘｅｎｏｐｕｒｓ  ｌａｖｉｅｓ卵母細胞で発現させた組換えＧＡＢＡ−Ａレセプター（アルファ１，ベータ２，ガンマ２Ｌ）における，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の阻害と，雄ラット大脳皮質からの皮質ミクロ嚢包（ｍｉｃｒｏｓ  ｓａｃｓ）における，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド取り込みの阻害との間の相関を示す。データ点は製品名で示され，正式名称は表２および３に示される。
【００３９】
発明の説明
本発明を説明する前に，本発明は添付の特許請求の範囲およびその均等物によってのみ限定されるため，本明細書において使用される用語は特定の態様を記述する目的でのみ用いられ，限定を意図するものではないことが理解される。
【００４０】
特に，本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる場合，単数形"ａ"，"ａｎ"，および"ｔｈｅ"は，文脈が明らかにそうではないことを示していない限り，複数の指示対象も含むことに注意しなければならない。
【００４１】
以下の説明においては，"ステロイド関連疾患"などにおける，"ステロイド関連"および"ステロイドにより誘導される"との用語は，ステロイドが中枢神経系に対して作用する次の３つの可能なメカニズムを包含することを意味する：ａ）直接作用，ｂ）耐性誘導（tolerance induction），およびｃ）離脱症状（withdrawal effect）。そのような疾患の例は上に記載されているが，これらはそれぞれのメカニズムを説明することを意味しており，本発明を限定するものと解釈すべきではない。
【００４２】
"ブロッキング"との用語は，この場合には３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドがＧＡＢＡ−Ａレセプターに作用することが妨げられるという効果を定義することを意味する。"ブロッキング"とは，作用がなお生じているがより低い程度でまたはより遅い速度で称することを示唆する"調節"または"抑制"または同様の用語が意味する効果とは全く異なる効果であることが理解される。
【００４３】
"拮抗剤"との用語は，別の物質（作動剤）がその効果を誘発することを妨害する物質を意味する。本明細書において，拮抗剤およびブロッカーとの用語は同様に用いられる。
【００４４】
"医薬組成物"との用語は，その最も広い意味で用いられ，少なくとも１つの活性な物質，および任意に担体，アジュバント，構成要素等を含む，すべての薬学的に適用しうる組成物を包含する。"医薬組成物"との用語はまた，誘導体またはプロドラッグ，例えば，薬学的に許容しうる塩，サルフェートおよびエステルの形の活性物質を含む組成物を包含する。種々の投与経路用の医薬組成物の製造は，製剤化学の技術者の能力の範囲内である。
【００４５】
"投与"および"投与のモード"，ならびに"投与の経路"との用語もまたその最も広い意味で用いられる。本発明の医薬組成物は，多くの方法により投与することができ，これは治療すべき状態には局部，局所または全身投与モードのいずれが最も適しているかによって決まる。これらの種々の投与モードには，例えば，局所（例えば皮膚上），局部（例えば目に，および種々の粘膜（例えば膣および直腸デリバリー）），経口または非経口および肺（例えば上気道および下気道）が含まれる。
【００４６】
そのような組成物および処方剤の製造は，一般に製薬および処方剤の技術分野の当業者に知られており，本発明の組成物の処方に適用することができる。
【００４７】
本発明者らは，驚くべきことに，薬学的に適切でありかつ実用的に適用可能な投与量の，３ベータ位に水素ドナーを，２０位にヒドロキシ基を有するステロイドが，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの作用をインビトロで阻害することができるが，ＧＡＢＡそれ自身による効果に対して非常に低い拮抗効果を有することを示した。すなわち，これらは３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの負の効果の発現をブロックするが，ＧＡＢＡそれ自身の作用にはほとんど影響を有しない。本発明では，ＣＮＳ疾患の発症における３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの作用のメカニズムと，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドとの相互作用における，３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナンまたは３ベータ−サルフェート−５アルファ／デルタ５−プレグナン／プレグネンステロイドの作用のメカニズムとの両方の問題を扱う。これらの化合物の例は表２に示される。
【００４８】
さらに，本発明者らは，驚くべきことに，薬学的に適切でありかつ実用的に適用可能な投与量の，３位に，および／または３，２０および２１位にアセテート基を有するステロイドが，ＧＡＢＡ媒介性クロライド流出に及ぼすＧＡＢＡそれ自身の効果を部分的に阻害しうることを示した。したがって，これらのステロイドは，アルツハイマー病におけるようにＧＡＢＡ機能それ自体が過剰刺激されている疾患を予防および／または治療するための治療物質として有用である。そのような化合物の例は表３に示される。
【００４９】
本発明は，３ベータ位に水素ドナーを，特にヒドロキシ基またはサルフェート基を有し，さらに２０位にヒドロキシ基を有するすべてのステロイドに関する。本明細書においては，その例は表２に記載される３ベータ−ヒドロキシ−プレグナン−２０−オールのステロイドである。本発明者らは，これらのステロイドは拮抗剤であり，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドの効果に拮抗することができるが，中枢神経系（ＣＮＳ）におけるＧＡＢＡそれ自身の効果に対してはほとんど影響しないことを見いだした。驚くべきことに，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドと表２に記載される３ベータ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドで同時に処理すると，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドにより誘導される，Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｖｉｅｓ卵母細胞で組換え的に発現させたＧＡＢＡ−Ａレセプターを通るクロライド流出が阻害されるが，ＧＡＢＡ単独により誘導されるクロライド流出にはほとんど影響がない。
【００５０】
本発明の１つの利点は，３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン２０−オール−ステロイド，特に，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールが，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドのＧＡＢＡ−Ａレセプター調節効果と有効に拮抗するが，ＧＡＢＡ−ＡレセプターのＧＡＢＡ活性化には低い程度の影響しか与えないことである。特に有利な点は，このブロッキングが薬学的にかつ生理学的に適切な濃度で達成されるという点である。
【００５１】
すなわち，本発明の背後にある新たなかつ驚くべき知見は，薬学的および生理学的に許容しうる量の３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイドを投与することにより，ＧＡＢＡ効果に対してほとんどまたは全く影響を及ぼさずに，ＧＡＢＡにより活性化される，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドによる電流の上昇を選択的にブロックすることが可能であるということである。
【００５２】
本発明における別の新たなかつ驚くべき知見は，３，２０および２１位にアセテート基を有する３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド，特に，５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテート；およびある種の３ベータ−５ベータ−ステロイド，特に，５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン，および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オンが，ＧＡＢＡ−Ａレセプターにおける直接的ＧＡＢＡ応答を部分的に阻害しうるということである。特に有利な点は，このブロッキングは薬学的にかつ生理学的に適切な濃度で達成されることである。
【００５３】
ＧＡＢＡ−Ａレセプターはクロライドチャネルであり，ＧＡＢＡ−Ａレセプターはチャネルを通るクロライドの流入を変化させることによりその作用を発揮する。ＧＡＢＡ−Ａレセプターが開き大量のクロライドが細胞内に流入すると，脳における神経活性が低下することは当該技術分野においてよく知られている。流入するクロライドの量とＧＡＢＡ−Ａレセプター活性薬剤の臨床的効果との間には相関があることもよく知られている。
【００５４】
ベンゾジアゼピン，バルビチュレート，およびアルコール（ある程度）は，このメカニズムによりその作用を発揮する。しかし，これはまた，これらの薬剤の有害な効果の原因でもある。ＧＡＢＡ−Ａレセプターに伴う問題点は，これが脳のほとんどの部位でその作用を有することである。したがって，ＧＡＢＡ作用の完全なブロッカーは危険であり，精神異常の症状およびけいれんを引き起こしうる。３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド作用と拮抗すべき場合には，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド効果と特異的に拮抗し，ＧＡＢＡそれ自体の効果には拮抗しない物質を使用することが望まれるであろう。しかし，疾患の原因がＧＡＢＡそれ自体の作用によるＧＡＢＡ系の一般的過剰活性化である状況では，ＧＡＢＡ自体の効果に対して作用するより一般的な拮抗剤が好ましい。しかしながら，これらの一般的拮抗剤がＧＡＢＡ−Ａレセプターを完全にブロックすると，これらは危険である。したがって，本発明により記載されるような部分的拮抗剤が好ましい。
【００５５】
上で説明したように，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドに関連する多くの症状および状態が存在しており，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド効果をブロッキングすることは，これらの状態の治療となりうる。本発明者らは，本発明によりそのようなブロッキングのための物質および方法を利用可能とするものである。
【００５６】
さらに，ＧＡＢＡ−Ａ系の一般的過剰刺激に関連する状態が存在しており，ＧＡＢＡ効果の部分的ブロッカーはそのような状態の治療となりうる。本発明者らは，本発明により，ＧＡＢＡ効果のそのような部分的ブロッキングのための物質および方法を利用可能とするものである。
【００５７】
ＰｒｉｎｃｅおよびＳｉｍｍｏｎｓ（上掲）により報告された実験においては，間接的リガンド結合アッセイが用いられた。しかし，ＦＮＺ結合を単独で研究することによっては，インビボでの神経活性において同じ効果が見られると推測することはできない。また，ＰｒｉｎｃｅおよびＳｉｍｍｏｎｓは，論文ではこのことを主張していない。彼らは，ステロイドの結合部位への影響およびこれらの部位が同じであるか否かについて議論しているのみである。これは新たな議論ではなく，ステロイド結合部位がいくつかある可能性はそれ以前の刊行物において示されている。彼らが引き出した唯一の結論および，彼らの実験設計およびモデルを用いて引き出すことが可能な結論は，ステロイドはＦＮＺの結合を異なるように変化させ，ＦＮＺ結合に対してある種の相互作用を有するということである。ＰｒｉｎｃｅおよびＳｉｍｍｏｎｓの結果からは，神経活性または臨床的な意味に及ぼす影響についての結論を引き出すことはできない。
【００５８】
本発明者らは，驚くべきことに，薬学的に適切かつ使用可能な用量の３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイド，特に５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；および，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールは，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの作用の選択的ブロッカーであり，したがって，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの負の効果の発症をブロックするが，ＧＡＢＡ阻害に対しては極めて小さい影響しか有しないことを見いだした。本発明者らはまた，驚くべきことに，薬学的に適切かつ実用的に使用可能な用量の，３，２０または２１位にアセテート基を有する３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド，特に５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテート，およびいくつかの３ベータ−５ベータ−ステロイド，特に５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン，および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オンはＧＡＢＡ効果の部分的ブロッカーであることを見いだした。
【００５９】
本発明者らは，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドおよびＧＡＢＡそれ自体に起因する疾患の背後にある作用の両方のメカニズムを決定した。当該技術分野においては，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドが，３つの可能なメカニズム，すなわち，ａ）直接作用，ｂ）耐性誘導，およびｃ）離脱症状によりＣＮＳ疾患を引き起こすことはよく確立されている。さらに，ＧＡＢＡによる広範囲の過剰刺激が，最終的にはＧＡＢＡ−Ａ系の機能を破壊すること，および低下する機能には，アルツハイマー病において生ずることが知られているような，記憶および学習能力が含まれることもよく確立されている。
【００６０】
先に開示されている発明と比較すると，例えば，Ｂｏｌｇｅｒらの米国特許５，２３２，９１７およびＵｐａｓａｎｉらの米国特許５，９３９，５４５は，特許においてもその対応する科学文献（Ｌａｎ  Ｎ．Ｃ，Ｇｅｅ  Ｋ．Ｗ．，Ｂｏｌｇｅｒ  Ｍ．Ｂ．＆Ｃｈｅｎ  Ｊ．Ｓ．（１９９１），Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｇａｍｍａ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ  Ａｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｔｏ ｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｓ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．５７（５）：１８１８−１８２１）においても，３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドがＧＡＢＡ−Ａレセプターの調節剤であるとは開示していない。
【００６１】
したがって，本発明の一般的観点として，本発明者らは，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドがＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす作用をブロッキングしうるが，ＧＡＢＡの効果をブロッキングしない化学化合物，ならびにＧＡＢＡ作用の部分的拮抗剤を利用可能とするものである。
【００６２】
本発明の別の観点は，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドがヒトＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす作用をブロッキングしうる化合物，またはＧＡＢＡ効果の部分的ブロッカーを含む医薬組成物である。好ましくは前記化合物（表２，３）は，適切でありかつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で存在する。
【００６３】
本発明の別の観点は，ヒト患者においてステロイド関連ＣＮＳ疾患を治療および／または予防するための一般的方法であり，この方法では，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドがヒトＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす作用をブロッキングしうる少なくとも１つの化合物を前記患者に投与する。好ましくは，前記化合物は，３ベータ位にヒドロキシ基および硫酸基から選択される基の形で水素ドナーを有し，２０位にヒドロキシ基を有する。最も好ましくは，前記化合物は表２に記載される物質から選択される。さらに，ヒト患者においてＧＡＢＡ−Ａレセプターの一般的過剰刺激に関連するＣＮＳ疾患を治療および／または予防する一般的方法が開示される。この方法では，ＧＡＢＡのヒトＧＡＢＡ−Ａレセプターに対する作用を部分的にブロッキングしうる少なくとも１つの化合物を前記患者に投与する。最も好ましい化合物は，表３に挙げられる化合物中に見いだされる。好ましくは前記化合物は，適切かつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で用いられる。
【００６４】
本発明にしたがえば，前記少なくとも１つの化合物は，以下の投与経路の１つにより投与される：静脈内，経鼻，経直腸，経膣，経皮および経口。１つの好ましい態様にしたがえば，前記少なくとも１つのステロイドは静脈内投与される。別の好ましい態様にしたがえば，前記少なくとも１つのステロイドは経鼻投与される。
【００６５】
特に，経鼻投与は，患者による自己投与が容易であり可能であるという利点をもつため，有望な代替法である。自己投与は，患者が自身の状態の主観的な評価にしたがうか，または治療している医師により処方されるスケジュールにしたがって，投与量または投薬頻度を調節することができるという利点を有する。"治療している医師により処方されるスケジュール"との用語は，患者が独力でまたは質問票または範囲または目盛りの助けを借りて，または適切な次回の投与量を示すアルゴリズムまたはコンピュータプログラムを用いて，自身の状態の主観的評価を行うという選択肢も含む。
【００６６】
クリーム，ゲル，および軟膏として処方された物質，または徐放接着薬剤パッチの形の物質を用いる経皮投与は，投与の別の可能な形であり，同様に自己治療に適している。上述した自己投与の利点は，経皮投与にもあてはまり，さらなる利点として，所望または必要な場合に，容易に，例えば薬剤パッチを除去することにより，投与を中断することができる点がある。
【００６７】
これらのまたは他の投与経路のいずれにおいても，組成物の処方物は，選択された経路に適切な化学形の有効な薬物を慣用的に用いられ当業者によく知られる適切なアジュバントおよびベヒクルと一緒に含むよう，通常の薬理学的方法にしたがって，適合させるか調節することができる。
【００６８】
経口投与用に慣用的に用いられているアジュバントおよびベヒクルは，例えば，賦形剤または懸濁剤，例えば，二酸化チタン，無水ラクトース，シリカ，コロイド状シリカ，メチルセルロール，ステアリン酸マグネシウム，微晶質セルロース等である。
【００６９】
静脈内投与用に慣用的に用いられているアジュバントおよびベヒクルは，例えば，注射用滅菌水（ＷＦＩ），滅菌バッファ（例えば，溶液をｐＨ７．４に緩衝化する），アルブミン溶液，脂質溶液等である。
【００７０】
経皮投与用に慣用的に用いられているアジュバントおよびベヒクルは，例えば，ワセリン，液体パラフィン，グリセロール，水等である。
【００７１】
投与量は，当然ながら，投与モード，治療すべき特定の状態，または望まれる効果，患者の性別，年齢，体重および健康状態，ならびに治療する医師により評価される他の因子により様々である。本発明にしたがえば，前記少なくとも１つのステロイドを静脈内に投与する場合，適切な範囲は，約０．２−２００ｍｇ／ｋｇ体重，好ましくは０．２−２；２−１０，１０−２０；２０−４０；４０−８０；８０−１２０；１２０−１６０；および１６０−２００ｍｇ／ｋｇ体重である。動物における予備的研究は，静脈内投与の好ましい範囲は約２０−１００ｍｇ／ｋｇ体重であることを示す。
【００７２】
他の投与モードについての対応する投与範囲は，当業者が容易に計算することができ,必要であれば日常的な動物実験または前臨床もしくは臨床試験により確認することができる。
【００７３】
本発明の１つの態様は，ステロイド関連またはステロイド誘導性ＣＮＳ疾患，特に月経前症候群を治療するための方法であり，この方法では，本発明にしたがう少なくとも１つの物質を投与することにより，耐性発現を予防し，ＧＡＢＡ−Ａレセプターのダウンレギュレーションを予防する。この治療は，ＧＡＢＡ−Ａ系の感受性を保存し，黄体期の間により感受性の低い状態が発現することを阻害する。ラットにおいて，慢性プロゲステロン治療の間にＧＡＢＡ−Ａレセプターが変化することが示されている。本発明にしたがう，３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドまたは３ベータ−サルフェート−５アルファ／デルタ５−プレグナン／プレグネン−ステロイドを用いる治療は，耐性の発現を防ぐように，したがって，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの投与を中止したときの脱離症状を妨害するように設計される。
【００７４】
耐性の発現は，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンまたはベンゾジアゼピン等の，ＧＡＢＡ−Ａにより亢進される，内因的に産生される物質に対する感受性を低下させるであろう。月経周期の黄体期の終期におけるように薬剤が急速に除去されると，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−ステロイドの離脱後にリバウンド効果が生ずる。そのような状況は，ヒトにおいて，月経の間のステロイドの産生の終了および離脱の直後の片頭痛およびてんかん性発作の増加に見いだされる。
【００７５】
したがって，本発明の別の態様は，本発明にしたがう少なくとも１つの物質を投与することにより，耐性の発達および／または禁断症状を治療または予防する方法である。
【００７６】
本発明はさらに，上述したように，ヒト患者においてステロイド関連またはステロイド誘導性気分障害を治療および／または予防する方法に関する。この方法にしたがえば，少なくとも１つの３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイドを前記患者に投与する。好ましくは，前記ステロイド化合物は，表２に記載されるステロイドから選択される。最も好ましくは，前記化合物は，適切かつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で用いられる。
【００７７】
投与の適当な経路としては，例えば以下のものが挙げられる：静脈内，経鼻，経直腸，膣内，経皮および経口。
【００７８】
しかし，多くのＣＮＳ疾患の治療のため，および抗感覚脱失薬（ａｎｔｉ−ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ）として用いるためには，有効化合物を静脈内に投与することが好ましい。
【００７９】
静脈内投与において，本発明にしたがう適当な投与量は，約０．２−約２００ｍｇ／ｋｇ体重，好ましくは０．２−２；２−１０，１０−２０；２０−４０；４０−８０；８０−１２０；１２０−１６０；および１６０−２００ｍｇ／ｋｇ体重，および最も好ましくは約２０−約１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【００８０】
上述したように，組成物の処方物は，通常の薬理学的方法にしたがって適合させ調節することができる。さらに，投与量は本来，投与のモード，治療すべき特定の状態または望まれる効果，患者の性別，年齢，体重および健康状態により様々であり，治療する医師により評価される他の因子によっても異なる。
【００８１】
さらに，本発明は，ヒト患者において，ステロイド関連性またはステロイド誘導性ＣＮＳ疾患を治療および／または予防する方法を包含する。本発明の方法にしたがえば，１またはそれ以上の３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイド（表２を参照）を薬学的にかつ生理学的に許容しうる投与量で前記患者に投与する。好ましくは前記ステロイド化合物は，表２のステロイドから選択される。最も好ましくは，前記化合物は，適切かつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で用いられる。
【００８２】
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの直接作用により引き起こされる症状および状態の例は，鎮静，疲労感，記憶障害，学習障害，運動機能の障害，不器用（ｃｌｕｍｓｉｎｅｓｓ），食欲増進および嗜好の変化，緊張などの陰性気分，および月経前症候群および小発作てんかんの悪化の主要な症状である過敏および抑うつである。
【００８３】
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドへの長期（長期間）の曝露後の耐性の発達により引き起こされる状態および症状は，例えば，ストレス過敏症，集中困難症，ストレスまたは月経周期連鎖集中困難症，睡眠疾患，疲労感，衝動調節の喪失および抑うつである。３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドはまた薬剤依存性を強化する。本発明にしたがえば，少なくとも１つの３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイドを患者に投与することにより，これらの状態または症状を予防，軽減または治療することができる。好ましくは前記ステロイド化合物は表２に記載されるステロイドから選択される。最も好ましくは前記化合物は，適切かつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で用いられる。
【００８４】
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドへの連続的ではあるがより短い曝露は，曝露が終了したときに脱離症状を与える。この現象は月経の間に，卵巣の黄体による３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの産生が中断されるときに生ずる。この離脱現象はまた出産後（分娩後）に，胎盤による３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイド産生が中断されるときにも生ずる。同じ現象は，ストレスの期間が終了し，ストレスの間に副腎により産生された３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドが中断されたときにも認められる。この離脱／禁断現象により影響される状態の例は，患者が大脳皮質にてんかん性病巣を有し，月経中の離脱時期に悪化する部分てんかんである。この現象は"月経てんかん"と称される。別の例は月経関連片頭痛およびストレス関連片頭痛および分娩後の気分変化である。禁断症状は先に発達した耐性の徴候である。
【００８５】
ステロイド関連性であるかまたはステロイド誘導性であると考えられる疾患の例としては，てんかん，月経周期依存性てんかん，抑うつ，ストレス関連抑うつ，片頭痛，疲労感，特にストレス関連疲労感，月経前症候群，月経前不快疾患，月経周期連鎖気分変化，月経周期連鎖記憶変化，ストレス関連記憶変化，月経周期連鎖集中困難症，月経周期連鎖睡眠疾患および疲労感などが挙げられる。肥満症および食欲増進，ならびにある形態の平衡感覚障害，アルコールおよび物質乱用もまた，ステロイド関連性またはステロイド誘導性であることが強く示唆されている。したがって，本発明は，これらの状態を治療，緩和または予防するための物質および方法を提供する。
【００８６】
多数の女性を悩ます問題に向けた本発明の１つの好ましい態様は，ヒト患者における閉経後療法の副作用を治療および／または予防する方法である。この方法にしたがえば，少なくとも１つの３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイドを前記患者に投与する。好ましくは，前記ステロイド化合物は，表２に記載されるステロイドから選択される。最も好ましくは，前記化合物は，適切かつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で使用する。
【００８７】
本発明の別の好ましい態様は，ヒト患者における経口避妊薬の副作用の治療および／または予防であり，この治療では，少なくとも１つの３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイドを前記患者に投与する。好ましくは，前記ステロイド化合物は，表２に記載されるステロイドから選択される。最も好ましくは，前記化合物は，適切かつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で使用する。
【００８８】
本発明においては，上で例示した３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドまたは３ベータ−サルフェート−５アルファ／デルタ５−プレグナン／プレグネン−ステロイドの少なくとも１つの有効な組成物は，患者が服用する経口避妊薬とともに投与することが好ましい。経鼻および経皮投与もまた適切な投与経路である。
【００８９】
したがって，本発明の１つの特定の態様は，経口避妊薬および治療上適当な用量のヒトＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドの作用をブロックしうる少なくとも１つの化学化合物を含む医薬組成物であり，ここで，前記化合物は，３ベータ位にヒドロキシおよびサルフェート基から選択される基の形で水素ドナーを有し，２０位にヒドロキシ基を有する。好ましくは，前記化合物は，表２のステロイドから選択される。最も好ましくは前記化合物は，適切かつ薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で使用する。
【００９０】
さらに，上述の態様の範囲内で，３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドがヒトＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす作用をブロックしうる化学化合物の投与量は，好ましくはストレスまたは月経周期の間の内因性ステロイドのレベルに適応させる。本発明にしたがえば，ヒトＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす３アルファ−ヒドロキシ−プレグナン−ステロイドの作用をブロックしうる化学化合物は，経口避妊薬の副作用を軽減させるかまたは除くために，または内因性ステロイドの周期的変化の望ましくない影響を軽減させるかまたは除くために，経口避妊薬中に含ませることができる。
【００９１】
一般に，本発明は，本明細書に記載される３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド−関連または−誘導性疾患の任意の１つ，特に以下の疾患：てんかん，月経周期依存性てんかん，抑うつ，ストレス関連抑うつ，片頭痛，疲労感，特にストレス関連疲労感，月経前症候群，月経前不快疾患，月経周期連鎖気分変化，月経周期連鎖記憶変化，ストレス関連記憶変化，月経周期連鎖集中困難症，月経周期連鎖睡眠疾患および疲労感の１つまたはいくつかを治療または予防するための医薬品の製造において，３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−オール−ステロイド，特に表２に記載されるステロイドを，単独でまたは組み合わせて使用することを包含する。好ましくは，前記化合物は，適当な薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で使用する。
【００９２】
本発明の別の好ましい態様は，３，２０および２１位にアセテート基（単数または複数）を有する３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド，およびある種の３ベータ−ヒドロキシ−５ベータ−プレグナン−ステロイドを使用することにより，ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）過剰刺激により引き起こされる疾患を治療および／または予防する方法である。
【００９３】
ＧＡＢＡそれ自体によるＧＡＢＡ−Ａレセプターの高い刺激は，ある状況では，学習および記憶機能を阻害することが知られている。ＧＡＢＡ−Ａレセプター系の過剰刺激は，短期学習および記憶機能を悪化させるであろう。これは，特に老齢者では臨床的に重要である。そのような状況では，ＧＡＢＡの効果の拮抗作用は有益であり，記憶障害の治療として用いることができる。しかし，ＧＡＢＡ拮抗作用が強すぎれば，危険であり，けいれんを引き起こすであろう。したがって，ＧＡＢＡ−ＡレセプターのＧＡＢＡ誘導性変化と部分的に拮抗するが，ＧＡＢＡ−Ａレセプターを完全にはブロックしない拮抗剤が好ましい。さらに，本発明は，ヒト患者において，ＧＡＢＡ−Ａレセプター系の一般的過剰刺激により誘導されるＣＮＳ疾患を治療および／または予防する方法を包含する。この方法にしたがえば，３，２０および２１位にアセテート基（単数または複数）を有する１またはそれ以上の３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド，およびある種の３ベータ−ヒドロキシ−５ベータ−プレグナン−ステロイド（表３を参照）を薬学的におよび生理学的に許容しうる用量で前記患者に投与する。好ましくは前記ステロイド化合物は，表３に挙げられるステロイド：５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテート，５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン，および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オンから選択される。最も好ましくは，前記化合物は，適当な薬学的に許容しうる塩，最も好ましくはナトリウム塩の形で使用する。特に有利な点は，このブロッキングが薬学的および生理学的に適当な濃度で達成されることである。
【００９４】
ＧＡＢＡ−Ａ系の過剰刺激に関連するかまたはこれにより誘導されると考えられる疾患の例としては，アルツハイマー病（ＡＤ）および軽度認識障害（ＭＣＩ），特に老齢者の疾患が挙げられる。したがって，本発明は，これらの状態を治療，緩和または予防するための物質および方法を提供する。
【実施例】
【００９５】
本発明は，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出のブロッキングに対する効果と，ＧＡＢＡそれ自身の効果の応答に対するブロッキング効果との別々の効果における特異性を確認するために行われたインビトロ実験に基づく。Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ卵母細胞の表面で発現させた組換えＧＡＢＡ−Ａレセプターにおけるインビトロ試験からの結果を，本発明者らにより行われた，雄ラットからの皮質組織を用いる試験で確認した。
【００９６】
電圧固定法を用いた，Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ卵母細胞で発現させた組換えＧＡＢＡ−Ａレセプター（アルファ１，ベータ２，ガンマ２Ｌ）におけるクロライド流出の実験
本発明においてステロイドを試験するために用いたＧＡＢＡ−Ａレセプターは，Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓの卵母細胞で組換え的に発現させた。卵母細胞は，卵母細胞中に注入されたｍＲＮＡから蛋白質を表面膜に発現させる大きな能力を有する。レセプターは３つの異なるタイプの５つの蛋白質を含み，今回の実験条件ではレセプターサブタイプであるアルファ１，ベータ２，ガンマ２ＬのｍＲＮＡを発現させた。ＧＡＢＡ−Ａレセプターのこれらのサブタイプは中枢神経系で最も一般的なものである。これらのＧＡＢＡ−Ａレセプターは２つのアルファ１蛋白質，２つのベータ２および１つのガンマ蛋白質を含む。４８時間インキュベートした後，ＧＡＢＡ−Ａレセプターは膜中にマウントされ，インビトロでインサイチューにおけるレセプターと同様に振る舞う。したがって，当業者には，このモデル系は，ＧＡＢＡ−Ａレセプター活性薬剤の優れたインビトロの試験系であると考えられている。クロライドチャネルを通るクロライドの流出は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼすＧＡＢＡ活性の結果であり，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド等のＧＡＢＡ−Ａレセプター調節剤は，ＧＡＢＡの有効性を増強することができる。レセプターを通るクロライドの流出は，電圧固定法を用いて，流出により誘導される電流として測定される。作動剤および拮抗剤の用量応答曲線を作成することができ，電流は，種々の投与量の作動剤と拮抗剤との間の相互作用の後に得られるＧＡＢＡ−Ａレセプター活性化に依存する。データを正確な電流（この実験では２μＡ）に対して正規化することにより，異なる卵母細胞からの結果を比較することができ，電流の変化を特定の投与量（この実験では１０μＭ）に対して正規化することにより，異なる試験物質を比較することができる。３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより誘導されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の亢進を１に設定する。これはＧＡＢＡ−Ａレセプターを発現する卵母細胞をインビトロの浴中で３μＭＧＡＢＡ＋３μＭ３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンで表面潅流（ｓｕｐｅｒｆｕｓｉｎｇ）することにより得られる。クロライド流出は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターを通るクロライドの流出により誘導される電流として測定した。ＧＡＢＡ誘導性クロライド流出を１に設定し，これはＧＡＢＡ−Ａレセプターを発現する卵母細胞をインビトロで３０μＭＧＡＢＡで表面潅流することにより得た。試験したＵＣ−ステロイドが３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オン誘導性のＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の亢進に及ぼす阻害効果を，同じＵＣ−ステロイドがＧＡＢＡによるＧＡＢＡ−Ａレセプターの活性化に及ぼす阻害効果と比較した。結果を図１および表４に示す。図１では，低いＧＡＢＡ拮抗作用を有するＵＣ−ステロイドはＸで強調表示されており，部分的ＧＡＢＡ拮抗作用を有するＵＣ−ステロイドは黒丸（・）で強調表示されている。
【００９７】
図１は，Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ卵母細胞において発現させた組換えＧＡＢＡ−Ａレセプター（アルファ１，ベータ２，ガンマ２Ｌ）における，最大ＧＡＢＡ媒介性クロライド流出（３０μＭＧＡＢＡ）の阻害（Ｘ軸）と，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の阻害（Ｙ軸）との間の関係を示す。図において，結果は３０ＭＧＡＢＡまたは３μＭＧＡＢＡ＋３μＭ３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより活性化された対照電流に対して正規化されている。ステロイド拮抗剤の非存在下における対照電流を０とした。各ステロイド拮抗剤は１０μＭで試験した。黒×印（Ｘ）は低いＧＡＢＡ阻害を示すが３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性応答を有意に阻害するステロイドを強調表示している。黒丸（・）は，直接ＧＡＢＡ応答（３０μＭ）および３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ応答の両方を阻害するステロイド拮抗剤を強調表示している。データ点のラベルは製品番号により示されており，種々の物質の正式名称の番号は表２および表３に示される。
【００９８】
表４は，試験したＵＣ−ステロイドが，３μＭのＧＡＢＡ＋３μＭの３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより刺激されたクロライド流出，ならびに３０μＭのＧＡＢＡにより刺激されたクロライド流出に及ぼす拮抗効果をまとめたものである。拮抗作用について試験した物質は，３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−２０−ヒドロキシ−ステロイドおよび３，２０および２１位にアセテート基を有する３ベータ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド，および表２および３に示されるいくつかの３ベータ−ヒドロキシ−５ベータ−プレグナン−ステロイドである。ステロイドのうちのいくつか（５アルファアルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン，ＵＣ１０１０；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール，ＵＣ１０１１；５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート，ＵＣ１０１２；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，ＵＣ１０１３；５ベータ−プレグナン−３ベータ−ＯＬ−２０−オン，ＵＣ１０１４；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン，ＵＣ１０１５）は，先にＷＯ９９／４５９３１およびＷＯ０３／０５９３５７に開示されており，ここでは完全の目的のために含めた。ＷＯ０３／０５９３５７に開示されるステロイドのいくつかは，追加の効果を有することが発見された。すなわち，いくつか（５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール，ＵＣ１０１１；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール，ＵＣ１０１３）はＧＡＢＡそれ自体に対してより低い拮抗作用を有し，一方，別のいくつか（５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート，ＵＣ１０１２；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン，ＵＣ１０１４；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン，ＵＣ１０１５）はＧＡＢＡ効果に対して部分的な拮抗作用を有することが発見された。
【００９９】
【表４】
2008525317.tif 000005
【０１００】
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オン阻害についての実験は，３μＭＧＡＢＡ＋３μＭ３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンの存在下で行った。ＧＡＢＡ拮抗作用についての実験は，１００μＭＧＡＢＡの投与量で行った。記録された電流を２μアンペアの刺激に対して正規化し，表に示される平均の効果は，それぞれ３μＭ３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンおよび１００μＭＧＡＢＡに対する正規化−１である。記録された細胞の数：ｎ＝３−１０
【０１０１】
皮質組織ホモジネート実験
アフリカツメガエル卵母細胞モデルにおいて調べたステロイドのいくつかを（図２を参照），クロライド取り込みのＧＡＢＡ−Ａレセプターモデルにおいて３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドの効果を阻害する能力について試験した。クロライド取り込み実験で用いたＧＡＢＡ−Ａレセプターはラット皮質組織から回収した。これは，ＧＡＢＡ−Ａレセプター効果を測定するための脳の代表的な部分である。２つの手法の結果が非常に類似しているため，このモデルにおいて得られた結果が高等哺乳動物およびヒト患者において確認しうることを，高い信頼性をもって推定することができる。
【０１０２】
これらの実験では，成熟雄ラットからの皮質組織をバッファ中でホモジナイズした。この方法の結果，小さいベシクルの懸濁液が形成され，前記ベシクルはＧＡＢＡ−Ａレセプターをその表面に有する。放射活性クロライドをこの懸濁液に加えると，ある量がベシクル中に入る。この量は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターがどの程度開いているかに関連する。レセプターを開く薬剤は，薬剤の投与量と相関してベヒクル中のクロライドの量を増加させる。同様に，ＧＡＢＡ−Ａレセプターを閉じる薬剤は，ベヒクル中に移動するクロライドの量を減少させる。ベヒクルの外側にある標識クロライドを洗い流し，内部のクロライドと分離した。その後，ベヒクル内の放射性標識したクロライドの量を液体シンチレータで測定し，曲線を求めた。各実験において，増加する用量のＧＡＢＡの対照を用いて組織サンプルが正しく作動していることを確認した。第２の対照を用いて，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナノ−２０−オン＋１０μＭのＧＡＢＡによる完全用量応答曲線を作成した。
【０１０３】
図２は，Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ卵母細胞で発現させた組換えＧＡＢＡ−Ａレセプター（アルファ１，ベータ２，ガンマ２Ｌ）における，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の阻害と，雄ラット大脳皮質からの皮質微小嚢における，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド取り込みの阻害との間の相関を示す。Ｘ軸およびＹ軸のデータは，別々の物質による阻害効果を示すため，正規化した値−１として示される。卵母細胞のデータについては，３μＭＧＡＢＡ＋３μＭ３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンを０と設定した。各ステロイドは１０μＭで試験した。クロライド取り込みアッセイにおけるデータは，１０μＭＧＡＢＡ＋１μＭ３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンの効果を０と設定し，この値に対して正規化した。各ステロイドは３０μＭで試験した。各点のラベルは製品番号であり，種々の物質の完全な名称は表２および３に示される。相関の回帰線から，卵母細胞における正規化−１の３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オン阻害＝−０．０４＋０．９６＊が得られた。
皮質微小嚢におけるクロライド取り込みの正規化−１
ピアソンの相関係数ｒ＝０．９０；ｐ＜０．００２
ＵＣ−ステロイドの阻害特性を示す２つの異なる方法は，非常によく相関した結果を与えた。この結果は，実際にステロイド効果の相違が存在することを示す。
【０１０４】
本発明においてステロイドを試験するために用いたＧＡＢＡ−Ａレセプターは，Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｅｓの卵母細胞で組換え的に発現させた。卵母細胞は，卵母細胞中に注入されたｍＲＮＡから膜に蛋白質を発現させる高い能力を有する。レセプターは３つの異なる蛋白質を含み，今回はレセプターサブタイプアルファ１，ベータ２，ガンマ２ＬのｍＲＮＡを発現させた。ＧＡＢＡ−Ａレセプターのこれらのサブタイプは中枢神経系において最も一般的なものである。これらのＧＡＢＡ−Ａレセプターは，インビトロでインシトゥーにおけるレセプターと同様に振る舞い，したがって，当業者にはＧＡＢＡ−Ａレセプター活性薬剤についての優れたインビトロ試験系であると考えられている。クロライドチャネルを通るクロライドの流出は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに対するＧＡＢＡ活性の結果であり，ＧＡＢＡの有効性は，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイド等のＧＡＢＡ−Ａレセプター調節剤により増強することができる。レセプターを介したクロライドの流出により生じた電流を電圧固定法で測定する。用量応答曲線を作成し，データを正確な電流（今回の実験では２μＡ）に対して正規化することにより，種々の卵母細胞からの結果を比較することができ，特定の投与量（今回の場合は１０μＭ）に対して正規化することにより，種々の試験物質を比較することができる。試験したＵＣ−ステロイドによる，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより誘導されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の亢進に及ぼす阻害効果を，同じＵＣ−ステロイドがＧＡＢＡ−ＡレセプターのＧＡＢＡ活性化に及ぼす阻害効果と比較する。結果は，図１において別のラベルで示される。アフリカツメガエル卵母細胞モデルにおいて調べたステロイドのいくつか（図２を参照）は，クロライド取り込みのＧＡＢＡ−Ａレセプターモデルにおいて３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−プレグナン−ステロイドの効果を阻害することも示された。クロライド取り込み実験に用いたＧＡＢＡ−Ａレセプターは，ラットのＧＡＢＡ−Ａレセプターの効果の測定に関して脳の代表的な部分である皮質組織から取得した。このモデルで得られる結果を高等哺乳動物およびヒト患者において確認しうることを，高い信頼性をもって推測することができる。
【０１０５】
本発明者らが現在知る最良のモードを構成する好ましい態様に関して本発明を説明してきたが，特許請求の範囲に記載される本発明の範囲から逸脱することなく，当業者に明らかな種々の変更および改変をなしうることが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１】図１は，組換えＧＡＢＡ−Ａレセプターにおける，最大ＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の阻害と，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出との相関を示す。
【図２】図２は，組換えＧＡＢＡ−Ａレセプターにおける，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド流出の阻害と，雄ラット大脳皮質からの皮質ミクロ嚢包における，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ−プレグナン−２０−オンにより亢進されるＧＡＢＡ媒介性クロライド取り込みの阻害との間の相関を示す。
【図１】
2008525317.tif 000006
【図２】
2008525317.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成20年3月3日(2008.3.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガンマ−アミノ酪酸（Ａ）レセプター（ＧＡＢＡ−Ａ）が関与するＣＮＳ疾患を治療および／または緩和する方法であって，レセプターに及ぼすＧＡＢＡ作用に対する拮抗効果を実質的に有さずに３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイド作用を阻害する第１の物質，またはレセプターに及ぼすＧＡＢＡ作用と拮抗する第２の物質のいずれかを使用することにより，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす影響を調節することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記第１の物質が，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される，請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記第１の物質が，５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオールおよび５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される，請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記第２の物質が，５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール
３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される，請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記第２の物質が，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オンおよび５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オンから選択される，請求項４記載の方法。
【請求項６】
５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールの医薬品としての使用。
【請求項７】
３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドの作用により引き起こされるＣＮＳ疾患の予防，治療および／または緩和用の医薬品として用いるための，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールであって，前記治療は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに対する拮抗効果を実質的に有しないことを特徴とする物質。
【請求項８】
５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される，医薬品として使用するための物質。
【請求項９】
ＧＡＢＡ−Ａレセプターの過剰刺激により引き起こされるＣＮＳ疾患の予防，治療および／または緩和用の医薬品として用いるための，５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される物質の使用。
【請求項１０】
５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールから選択される物質の，３アルファ−ヒドロキシ−５アルファ／ベータ−ステロイドがＧＡＢＡ−Ａレセプターに及ぼす作用により引き起こされるＣＮＳ疾患を予防，治療および／または緩和するための医薬品の製造における使用であって，前記治療は，ＧＡＢＡ−Ａレセプターに対する拮抗効果を実質的に有しないことを特徴とする使用。
【請求項１１】
前記物質が５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオールである，請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
前記物質が５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオールである，請求項１０記載の使用。
【請求項１３】
５アルファ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン  アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オン；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ３−アセテート；
５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ３−アセテート；５アルファ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０アルファ−ジオール  ジアセテート；５ベータ−プレグナン−３ベータ，２０ベータ−ジオール  ジアセテート；および５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン  ２１−アセテートから選択される物質の，ＧＡＢＡ−Ａレセプターの過剰刺激により引き起こされるＣＮＳ疾患を予防，治療および／または緩和するための医薬品の製造における使用。
【請求項１４】
物質が，５ベータ−プレグナン−３ベータ，２１−ジオール−２０−オン；および５ベータ−プレグナン−３ベータ−オール−２０−オンである，請求項１３記載の使用。
【国際調査報告】
2008525317.tif 000008
2008525317.tif 000009
2008525317.tif 000010
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