(57)【要約】  ヒトを含む感受性のある温血動物における、膣機能障害、より詳細には、膣乾燥および性交疼痛症を有し、性機能障害ならびに低い性的欲求および性的能力の原因となる可能性を処置または低減する、性ステロイド前駆体の投与を含む新規方法。さらに、エストロゲンまたは選択的エストロゲン受容体モジュレータの投与、特に、ラロキシフェン、アルゾキシフェン、タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、イドキシフェン（ｌｏｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＧＷ５６３８、ＴＳＥ−４２４、ＥＲＡ−９２３およびラソフォキシフェンからなる群から選択され、より詳細には、一般構造：式（Ｉ）を有する化合物が、医療処置および／またはいくつかのこれらの上述した疾患の発症の阻害のために、具体的に開示される。本発明に有用な、活性成分の送達のための医薬組成物およびキットもまた開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
閉経後の女性において膣の固有層および／または筋層に影響を及ぼす問題となる可能性を処置または低減する方法であって、前記処置を必要とする患者にデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体を投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
併用療法の一部として、治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを前記患者に投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
併用療法の一部として、治療的有効量のエストロゲンを前記患者に投与する工程をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
閉経後の女性において膣の炎症となる可能性を処置または低減する方法であって、治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを前記患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項５】
閉経後の女性において膣上皮の粘液細胞の数および大きさを増加させる方法であって、前記方法は、治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを前記患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項６】
前記膣疾患が、膣乾燥、性交疼痛症および性機能障害からなる疾患の群から選択される、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項７】
閉経後の女性において膣壁の固有層のコラーゲン線維の密集度を増加させる方法であって、前記方法は、前記処置を必要とする患者にデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体を投与する工程を含む、方法。
【請求項８】
閉経後の女性において膣壁の筋層（ｍｕｓｃａｒａｌｉｓ）の厚さを増大させる方法であって、前記処置を必要とする患者にデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体を投与する工程を含む、方法。
【請求項９】
閉経後の女性において性機能障害となる可能性を処置または低減する方法であって、前記処置を必要とする前記患者に治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを投与する工程、および併用療法の一部として前記患者に治療有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンを投与する工程をさらに含む、方法。
【請求項１０】
デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される治療有効量の性ステロイド前駆体を前記患者に投与する工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項１、２、３、７および８のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記性ステロイド前駆体が硫酸デヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項１、２、３、７および８のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記性ステロイド前駆体がアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールである、前述の請求項１、２、３、７および８のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤が、シルデナフィル（ｌ−［［３−（４，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジン）、タダラフィル（６Ｒ，１２ａＲ）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチルピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン、ＤＡ−８１５９、ＥＭＲ−６２２０３、ＴＡ−１７９０、ＵＫ−３７１８００およびＳＣＨ−４４６１３２からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
前記プロスタグランジンが、プロスタグランジンＥ１（アルプロスタジル；（ｌｌα，１３Ｅ，１５Ｓ）−ｌｌ，１５−ジヒドロキシ−９−オキソプロスタ−１３−エン−１−酸））である、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
を含む、膣適用のための医薬組成物。
【請求項１７】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータおよび
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤
を含む、医薬組成物。
【請求項１８】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータ；
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤および
ｄ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
プロスタグランジンＥ１、シルデナフィルおよびタダラフィルからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を含む第１の容器を備え、そして少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを含む第２の容器をさらに備える、キット。
【請求項２０】
デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体を含む第１の容器を備え、そして少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを含む第２の容器をさらに備え、そして少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンＥ１を含む第３の容器をさらに備える、キット。
【請求項２１】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、前述の請求項２から５、９、１７から２０、４２および４３に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２２】
前記側鎖が
【化１】
2008516995.tif 000034
からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２３】
前記２つの芳香環の両方がフェニルであり、前記側鎖がメチン、メチレン、−ＣＯ、−Ｏ−および−Ｓ−、芳香環ならびに第三級アミン官能基またはそれらの塩からなる群から選択される部分を有する、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２４】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータがベンゾチオフェン誘導体、トリフェニルエチレン誘導体、インドール誘導体、ベンゾピラン誘導体、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレンおよびセントクロマン誘導体からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化２】
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（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらに結合する窒素は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリ
ノからなる群から選択される任意の構造であり；
Ａは、−ＣＯ−、−ＣＨＯＨおよび−ＣＨ２−からなる群から選択され；
Ｂは、フェニレン、ピリジリデンおよび−シクロＣ４Ｈ２Ｎ２−からなる群から選択される）
のベンゾチオフェン誘導体化合物である、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、ラロキシフェン、アルゾキシフェン（ＬＹ３５３３８１）およびＬＹ３３５５６３からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２７】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化３】
2008516995.tif 000036
（式中、Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ３）Ｒ４または−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＯＨであり（Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらが結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリノからなる群から選択される環状構造である）；
ＥおよびＫは、独立して水素またはヒドロキシルであり；
Ｊは、水素またはハロゲンである）
のトリフェニルエチレン誘導体化合物である、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２８】
選択的エストロゲン受容体モジュレータが、タモキシフェン、ＯＨ−タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、イドキシフェンおよびＧＷ５６３８である、請求項２７に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項２９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化４】
2008516995.tif 000037
（式中、Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ７）Ｒ８、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮ（Ｒ７）Ｒ８、−ＣＣ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ７）Ｒ８からなる群から選択され（Ｒ７およびＲ８は、独立してＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ７、Ｒ８およびこれらが結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ、環からなる群から選択される環状構造である）；
Ｘは、水素およびＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択される）
のインドール誘導体化合物である、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３０】
選択的エストロゲン受容体モジュレータが、ＴＳＥ−４２４およびＥＲＡ−９２３である、請求項２９に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３１】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化５】
2008516995.tif 000038
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択され；
Ｒ５およびＲ６は、独立して水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ３）Ｒ４であり（Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらの結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノからなる群から選択される環状構造である）
Ｘは、−Ｏ−および−ＣＨ２−からなる群から選択される）
の化合物である、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３２】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）−酒石酸塩（ラソフォキシフェン）および（３，４−トランス−２，２−ジメチル−３−フェニル−４−［４−（２−（２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ）フェニル］−７−メトキシクロマン）からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３３】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化６】
2008516995.tif 000039
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項２１に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３４】
Ｚが−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−および−ＣＨ２−からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３５】
前記化合物が、以下の一般構造：
【化７】
2008516995.tif 000040
（式中、Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ３）Ｒ４であり（Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらに結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ、環からなる群から選択される環状構造である）
Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択される）
のベンゾピラン誘導体である、請求項３３に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３６】
前記ベンゾピラン誘導体が、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物または医薬的に許容可能なそれらの塩であり、前記化合物は、分子構造：
【化８】
2008516995.tif 000041
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項３５に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３７】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項３６に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３８】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項３５に記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項３９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、アコルビフェン
【化９】
2008516995.tif 000042
である、前述の請求項２から５、９、１７から２０、４２および４３のいずれかに記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項４０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、ラロキシフェン、アルゾキシフェン（Ａｒｚｏｘｉｆｅｎｅ）、タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、イドキシフェン、ＧＷ５６３８、ＴＳＥ−４２４、ＥＲＡ−９２３およびラソフォキシフェンからなる群から選択される、前述の請求項２から５、９、１７から２０、４２および４３のいずれかに記載の方法、医薬組成物またはキット。
【請求項４１】
前記性ステロイド前駆体が膣内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
少なくとも１つの治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項４２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ヒトを含む感受性のある温血動物において、性ステロイド前駆体を単独でまたは新規な併用療法において使用して、膣の固有層または筋層に影響を及ぼす問題を得る可能性を処置または低減する方法に関する。特に、この併用療法は、選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）を投与する工程および患者の性ステロイドの前駆体レベルを上昇させる工程を含む。この前駆体は、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ−Ｓ）およびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール（５−ジオール）からなる群から選択される。エストロゲンはまた、のぼせおよび他の閉経期の症状に対するいくつかのＳＥＲＭの潜在的な効果を妨げる（ｃｏｎｔｅｒａｃｔ）ために投与され得る。５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤もまた、性行為を改善するために投与され得る。本発明はまた、前述の併用療法を実施するためのキットおよび医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
米国特許第５，８４３，９３２号では、卵巣切除したラットの背側の皮膚の２ｃｍ２の範囲に５０％エタノール−５０％プロピレングリコール溶液中のＤＨＥＡを１日に２回、３０ｍｇの用量で投与する１、３または６ヶ月の処置の膣萎縮に対する効果が報告された。病理組織学的実験により、ＤＨＥＡで処置したラットにおける膣上皮の増殖および粘液分泌（ｍｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）ならびに膣粘膜萎縮の回復が示された。
【０００３】
１、３および６ヶ月間、背側の皮膚にＤＨＥＡを適用したときのラットを用いて実施された研究では、膣上皮への効果のみが実験され（Ｓｏｕｒｌａら、１９９８、Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．、６６（３）：１３７−１４９）、他の２つの層、すなわち固有層および筋層への効果は実験されなかった。そして、ＤＨＥＡは、膣から遠位の部位の皮膚に投与するときよりも局所的に適用するときのほうが膣上皮に対して約１０倍効果的だったことにより、その作用を発揮するためには全身吸収を必要とすることを述べている。
【０００４】
１２ヶ月間、閉経後の女性の皮膚に投与した１０％ＤＨＥＡクリーム中のＤＨＥＡの効果についての以前の研究では、ＤＨＥＡのエストロゲン活性のみが評価された（Ｌａｂｒｉｅら，１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８２：３４９８−３５０５）。（３５００ページ）「膣の細胞学をＤＨＥＡのエストロゲン作用の特異的パラメータとして調べた」ことが示唆された。これは、評価方法、すなわち、上皮の表在性細胞および容易に除去される細胞に限定される膣塗抹による。
【０００５】
本発明は、膣の３つの層、すなわち筋層、固有層および上皮に対する、３つのレベルで新規な利点を有するＤＨＥＡおよび他の成分の効果を説明する。固有層および筋層に対するＤＨＥＡの有益な効果は、５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼの阻害剤（例えば、バイアグラおよび他の化合物またはプロスタグランジンＥ１）の正の作用に非常に重要であると考えられている。
【０００６】
関連分野の背景
膣乾燥は、５０から６０歳の閉経後の女性の約５０％および７０歳以上の７２％に影響を及ぼす（Ｒｏｓｓｉｎ−Ａｍａｒ，２０００，Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｆｅｒ
ｔｉｌ，２８（３）：２４５−２４９）。これらの女性のうち約８０％は、泌尿生殖器障害、特に膣炎および性交疼痛症を経験している（Ｐａｎｄｉｔ  ａｎｄ  Ｏｕｓｌａｎｄｅｒ，１９９７，Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ，３１４（４）：２２８−３１）。これらの問題は、性ステロイドの欠乏に少なくとも部分的に関連していると考えられているので、適切な局所的なホルモン補充療法が閉経期に考慮されるべきである。閉経後の女性は、すべての卵巣のエストロゲンを欠乏しているだけでなく、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）の、アンドロゲンおよびエストロゲン両方への末梢のイントラクライン変換由来のアンドロゲンを進行的に欠乏していることが最近認識された（Ｌａｂｒｉｅら，１９９１，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，７８：Ｃ１１３−Ｃ１１８；Ｌａｂｒｉｅら，１９９５，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，７７４：１６−２８；Ｌａｂｒｉｅら，２００３，Ｅｎｄ  Ｒｅｖ，２４（２）：１５２−１８２）。実際には、血清ＤＨＥＡおよびＤＨＥＡ−Ｓは、３０から４０歳の年齢から徐々に減少する（Ｌａｂｒｉｅら，２００３，Ｅｎｄ  Ｒｅｖ，２４（２）：１５２−１８２；Ｏｒｅｎｔｒｅｉｃｈら，１９８４，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ，５９：５５１−５５５；Ｌａｂｒｉｅら，１９９７，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ，８２：２３９６−２４０２）。一連の研究により、低レベルのＤＨＥＡおよびＤＨＥＡ−Ｓが一連の年齢関連性の病的状態および疾患に関連することが示唆された（Ｌａｂｒｉｅら，１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８２：３４９８−３５０５；Ｈｅｌｚｌｓｏｕｅｒら，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５２（１）：１−４；Ｓｚａｔｈｍａｒｉら，１９９４，Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ  Ｉｎｔ，４（２）：８４−８８；Ｔｈｏｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｅｉｇｌｅ，１９８９，Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｕｎｏｌ，４６：２２１−２６１；Ｂａｒｒｅｔｔ−Ｃｏｎｎｏｒら，１９９９，Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｍｅｄ，４４（１２）：１０１２−１０２０；Ｂａｒｒｅｔｔ−Ｃｏｎｎｏｒら，１９９９，Ｊ  Ａｍ  Ｇｅｒｉａｔｒ  Ｓｏｃ，４７（６）：６８５−６９１）。
【０００７】
膣乾燥および他の閉経期の症状を緩和するための効果的なアプローチは、ホルモン補充療法（ＨＲＴ）の使用である（Ｇｒｅｅｎｄａｌｅ  ａｎｄ  Ｊｕｄｄ，１９９３，Ｊ  Ａｍ  Ｇｅｒｉａｔｒ  Ｓｏｃ，４１（４）：４２６−４３６；Ｓｔｕｄｄら，１９８０，Ｐａｓｅｔｔｏ，Ｐａｌｅｏｔｔｉ  ａｎｄ  Ａｍｂｒｕｓ  Ｅｄｓ，ＭＴ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ｐ：１２７−１３９）。しかしながら、最近の臨床研究では、エストロゲンおよびプロゲスチンの併用は、心臓血管の事象に負の影響を及ぼす可能性のある、乳癌の発生率を増加させることが示唆された（Ｃｏｌｄｉｔｚら，１９９５，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３３２：１５８９−１５９３；Ｒｏｓｓら，２０００，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，９２（４）：３２８−３３２；Ｒｏｓｓｏｕｗら，２００２，ＪＡＭＡ，２８８（３）：３２１−３３３）。その一方で、上述した潜在的合併症によってエストロゲン成分の使用が限定されているが、エストロゲン−アンドロゲン併用の補充療法の可能性への関心が高まっている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，１９９７，Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｍｅｄ，４２（７）：３９４−４０４；Ｂｕｒｄら，２００１，Ｃｕｒｒ  Ｗｏｍｅｎ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｒｅｐ，１（３）：２０２−２０５）。特に、閉経後の女性におけるヒト性ステロイド生理機能の本発明者らの理解における最近の進歩に基づいて（Ｌａｂｒｉｅら，１９９１，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，７８：Ｃ１１３−Ｃ１１８；Ｌａｂｒｉｅら，２００３，Ｅｎｄ  Ｒｅｖ，２４（２）：１５２−１８２）、ＤＨＥＡの使用により、全身性の効果を有さないイントラクライン機構によって特異的な組織で合成した適切なレベルのアンドロゲンおよびエストロゲンを閉経後の女性に提供することが可能になる（Ｌａｂｒｉｅら，１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８２：３４９８−３５０５：１６−２８；Ｌａｂｒｉｅら，２００３，Ｅｎｄ  Ｒｅｖ，２４（２）：１５２−１８２；Ｌａｂｒｉｅ，２００１，Ｒｅｆ  Ｇｙｎ  Ｏｂｓｔｅｔ，８：３１７−３２２；Ｌａｓｃｏら，２００２，１４５：４５７−４６１）。膣機能のアンドロゲン感受性要素の回復はまた、５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼの阻害剤またはプロスタグランジンＥ１の作用を助けるはずである。
【０００８】
選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）であるアコルビフェン（ＥＭ−６５２）は、当初は乳癌の予防および処置のために開発されたベンゾピラン誘導体である（Ｇａｕｔｈｉｅｒら，１９９７，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，４０：２１１７−２１２２）。アコルビフェンは、ＥＲに対するすべての公知の化合物の中で最も親和性が高い化合物であり（Ｇａｕｔｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ，１９９７，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，４０：２１１７−２１２２；Ｌａｂｒｉｅら，１９９９，Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，６９（１−６）：５１−８４；Ｔｒｅｍｂｌａｙら，１９９７，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１１：３５３−３６５）、ＥＲαおよびＥＲβの両方に対して活性を発揮する（Ｔｒｅｍｂｌａｙら，１９９８，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１３９：１１１−１１８）。少なくともラットにおいて、この化合物は、血清コレステロールおよびトリグリセリドを減少させ、骨量減少を予防しながら、乳腺および子宮内膜において純然かつ非常に強力な抗エストロゲン活性を示す（Ｌａｂｒｉｅら，１９９９，Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，６９（１−６）：５１−８４）。さらに、ＤＨＥＡの投与により、ヌードマウスにおけるヒト乳腺腫瘍増殖に対する純粋な抗エストロゲンアコルビフェンを妨げないだけでなく、付加的な阻害効果を発揮することが証明された（Ｄａｕｖｏｉｓら，１９９１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５１：３１３１−３１３５；Ｌｕｏら，１９９７，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１３８：４４３５−４４４４）。ＤＨＥＡおよびアコルビフェンの併用処置は、乳癌における有益な化学予防的かつ治療的アプローチとして提案された（Ｌａｂｒｉｅ，２００１，Ｒｅｆ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｂｓｔｅｔ，８：３１７−３２２）。実際には、ヌードマウスにおけるヒト乳癌異種移植片の増殖に対するＤＨＥＡの阻害効果は、ホルモン補充療法としてのその使用を支持する（Ｄａｕｖｏｉｓら，１９９１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５１：３１３１−３１３５；Ｃｏｕｉｌｌａｒｄら，１９９８，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ，９０：７７２−７７８）。
【０００９】
ＷＯ９９／６３９７４は、性ステロイド前駆体と選択的エストロゲン受容体モジュレータ併用の医学的使用を開示した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
発明の概要
従って、本発明の目的は、望ましくない副作用を最小限にしながら、性的欲求および性行為を減少させ得る膣の問題、より詳細には膣乾燥、性交疼痛症および性機能障害の処置の効果的な方法を提供することである。
【００１１】
上記の問題を得る危険性を低減する方法を提供することが別の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
１つの実施形態において、本発明は、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ−Ｓ）およびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール（５−ジオール）からなる群から選択される性ステロイド前駆体のレベルを、前記処置または前記ステロイド前駆体を必要とする被験体または患者において、上昇させる工程を含み、併用療法の一部として前記患者に治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）を投与する工程をさらに含む、膣乾燥になる危険性を処置または低減する方法に関する。
【００１３】
別の実施形態において、本発明は、のぼせおよび他の閉経期の症状に対するＳＥＲＭの効果を妨げる（ｃｏｎｔｅｒａｃｔ）エストロゲンの付加的投与を含む。
【００１４】
別の実施形態において、本発明は、性行為を改善するため、５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンＥ１の付加的投与を含む。
【００１５】
本明細書中で使用されるとき、選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）は、直接か、またはその活性な代謝産物を介してかのいずれかで、乳房組織におけるエストロゲン受容体アンタゴニスト（「抗エストロゲン」）として機能する化合物であるが、骨組織および血清コレステロールレベル（すなわち、血清コレステロールを低下することによって）に対してエストロゲン効果またはエストロゲン様効果を提供する。インビトロまたはヒトもしくはラットの乳房組織においてエストロゲン受容体アンタゴニストとして機能する非ステロイド性化合物は（特にその化合物がヒト乳癌細胞で抗エストロゲンとして作用する場合）、ＳＥＲＭとして機能する可能性がある。反対に、ステロイド性抗エストロゲンは、血清コレステロールへのいかなる有益な効果も示さない傾向があるので、ＳＥＲＭとして機能しない傾向がある。本発明者らが試験し、ＳＥＲＭとして機能することが見出された非ステロイド性抗エストロゲンとしては、ＥＭ−８００、ＥＭ−０１５３８、ラロキシフェン、タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＥＲＡ−９２３、ラソキシフェン（ＣＰ３３６１５６）、アルゾキシフェン（ＬＹ３５３３８１）およびＧＷ−５６３８が挙げられる。本発明者らは、ステロイド性抗エストロゲンＩＣ１１８２，７８０を試験し、ＳＥＲＭとして機能しないことを見出した。本発明によれば、ＳＥＲＭは、これら化合物が抗エストロゲンとして使用されるとき、当該分野で公知の用量と同じ用量で投与され得る。
【００１６】
理論によって結合されることを意図することなしに、ＳＥＲＭ（それらの多くが、好ましくは１から２個の炭素原子によって連結される２つの芳香環を有する）は、エストロゲン受容体によって最もよく認識される分子の前述の部分に基づいて、エストロゲン受容体と相互作用すると予想されると考えられている。好ましいＳＥＲＭは、他の組織において顕著な拮抗特性を有さずに乳房組織において拮抗特性を選択的に引き起こし得る側鎖を有する。従って、ＳＥＲＭは、驚いたことに、そして望ましいことに、骨および（脂質および／またはコレステロールの濃度が都合よく影響される）血液成分においてエストロゲンとして機能（またはエストロゲン様活性を提供）しながら、望ましいことに乳房において抗エストロゲンとして機能し得る。コレステロールおよび／または脂質への好ましい効果は、不適切なレベルのコレステロールおよび脂質によって有害な影響をうけることが知られているアテローム性動脈硬化症に対する好ましい効果に転換する可能性がある。
【００１７】
別の実施形態において、本発明は、選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、方法、医薬組成物およびキットを含む。
側鎖は、
【００１８】
【化１】
2008516995.tif 000003
【００１９】
からなる群から選択されることが好ましい。
２つの芳香環は、ともにフェニルであり、そして側鎖は、メチン、メチレン、−ＣＯ、−Ｏ−および−Ｓ−、芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩からなる群から選択される部分を有することもまた好ましい。
【００２０】
別の実施形態において、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、ベンゾチオフェン誘導体、トリフェニルエチレン誘導体、インドール誘導体、ベンゾピラン誘導体、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレンおよびセントクロマン誘導体からなる群から選択される。
【００２１】
１つの実施形態において、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、以下の式：
【００２２】
【化２】
2008516995.tif 000004
【００２３】
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらに結合する窒素は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリノからなる群から選択される任意の構造であり；
Ａは、−ＣＯ−、−ＣＨＯＨおよび−ＣＨ２−からなる群から選択され；
Ｂは、フェニレン、ピリジリデンおよび−シクロＣ４Ｈ２Ｎ２−からなる群から選択される）
のベンゾチオフェン誘導体化合物であることが好ましい。
【００２４】
特に、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、ラロキシフェン、アルゾキシフェン（ＬＹ３５３３８１）およびＬＹ３３５５６３からなる群から選択される。
【００２５】
別の実施形態において、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、以下の式：
【００２６】
【化３】
2008516995.tif 000005
【００２７】
（式中、Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ３）Ｒ４または−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＯＨであり（Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらに結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノおよびモルホリノからなる群から選択される環状構造である）；
ＥおよびＫは、独立して水素またはヒドロキシルであり；
Ｊは、水素またはハロゲンである）
のトリフェニルエチレン誘導体化合物であることが好ましい。
【００２８】
特に、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、タモキシフェン，ＯＨ−タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、イドキシフェンおよびＧＷ５６３８である。
【００２９】
別の実施形態において、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、以下の式：
【００３０】
【化４】
2008516995.tif 000006
【００３１】
（式中、Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ７）Ｒ８、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＮ（Ｒ７）Ｒ８、−ＣＣ−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ７）Ｒ８からなる群から選択され（Ｒ７およびＲ８は、独立してＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ７、Ｒ８およびこれらが結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ、環からなる群から選択される環状構造である）；
Ｘは、水素およびＣ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立して水素、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択される）
のインドール誘導体化合物であることが好ましい。
【００３２】
特に、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、ＴＳＥ−４２４およびＥＲＡ−９２３である。
【００３３】
別の実施形態において、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、以下の式：
【００３４】
【化５】
2008516995.tif 000007
【００３５】
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択され；
Ｒ５およびＲ６は、独立して水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ３）Ｒ４であり（Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらに結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノからなる群から選択される環状構造である）
Ｘは、−Ｏ−および−ＣＨ２−からなる群から選択される）
の化合物であることが好ましい。
【００３６】
特に、この化合物は、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）−酒石酸塩（ラソフォキシフェン）および（３，４−トランス−２，２−ジメチル−３−フェニル−４−［４−（２−（２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ）フェニル］−７−メトキシクロマン）からなる群から選択される。
【００３７】
別の実施形態において、選択的エストロゲン受容体モジュレータは、以下の式：
【００３８】
【化６】
2008516995.tif 000008
【００３９】
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり、特にＺは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−および−ＣＨ２−からなる群から選択され；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１−Ｃ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され；
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１−Ｃ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され；
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有することが好ましい。
【００４０】
より詳細には、以下の一般構造：
【００４１】
【化７】
2008516995.tif 000009
【００４２】
（式中、Ｄは、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒ３）Ｒ４であり（Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択されるか、またはＲ３、Ｒ４およびこれらに結合する窒素原子は一緒になって、ピロリジノ、ジメチル−１−ピロリジノ、メチル−１−ピロリジニル、ピペリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノ、環からなる群から選択される環状構造である）、
Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換される部分からなる群から選択される）
のベンゾピラン誘導体が好ましい。
【００４３】
ベンゾピラン誘導体は、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物または医薬的に許容可能なそれらの塩であり、この化合物は、分子構造：
【００４４】
【化８】
2008516995.tif 000010
【００４５】
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有することもまた好ましい。
【００４６】
１つの実施形態において、ベンゾピラン誘導体は、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸，乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である。
【００４７】
好ましい選択的エストロゲン受容体モジュレータは、アコルビフェン、
【００４８】
【化９】
2008516995.tif 000011
【００４９】
ラロキシフェン、アルゾキシフェン、タモキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、イドキシフェン、ＧＷ５６３８、ＴＳＥ−４２４、ＥＲＡ−９２３およびラソフォキシフェンである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
発明の詳細な説明
閉経期の卵巣によるエストロゲン分泌の停止後、実際にはすべてのアンドロゲンおよびエストロゲンは、副腎起源のデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）からイントラクライン機構によって末梢の標的組織において合成される。実際に、卵巣のエストロゲンが存在しないとき、血清ＤＨＥＡの漸進的な減少は、閉経期に頻繁に関連する、膣乾燥、炎症、性交疼痛症および性機能障害に重要な役割を果たす可能性がある。他の有益な効果のうち、膣乾燥を緩和し得る可能性がある新規ホルモン補充療法の特異的なエストロゲンおよび／またはアンドロゲンの効果を評価するために、本発明者らは、卵巣切除（ＯＶＸ）およびＤＨＥＡ、抱合エストロゲン（プレマリン）および選択的エストロゲン受容体モジュレータであるアコルビフェンを単独または併用して投与する処置の８ヶ月後のＯＶＸ動物のラット膣の形態を調べた。発情期の無処置動物およびプレマリンで処置したＯＶＸラットにおいて、典型的な膣のエストロゲンのパターンは、角質化し、重層化した扁平上皮である。ＯＶＸによって、炎症変化に関連する一般の萎縮が生じたが、アコルビフェンは、炎症の発生を減少させ、膣上皮の粘液細胞の数および大きさを増加させた。使用した用量において、プレマリンは、ＯＶＸ誘導の上皮の萎縮を完全に回復させ、ＤＨＥＡは、萎縮を部分的に回復させた。実際に、ＤＨＥＡで処置したＯＶＸ動物の膣上皮は、アンドロゲン効果に典型的な３から５層の円柱状の粘液細胞および杯状細胞を伴う過形成になった。ＤＨＥＡへのプレマリンの追加は、無処置動物よりも上皮を厚くした。さらに、固有層におけるコラーゲン線維の密集度は、ＤＨＥＡによって増加した。他方では、アコルビフェン単独での処置は、固有層の厚さを増加させる傾向を示し、ＤＨＥＡと併用したとき、無処置の値に達した。
【００５１】
ＯＶＸ後、膣の筋層は、４６％に減少し、ＤＨＥＡおよびプレマリンによって回復し、その効果はそれぞれ４１％および１００％であった。他方では、ＯＶＸ後の膣壁全体の厚さにおける５０％減少がＤＨＥＡおよびプレマリンによってそれぞれ４２％および９３％に回復し、ＤＨＥＡとアコルビフェンとの併用により、膣壁全体の厚さは、無処置のコントロール動物と有意な差がない値にまで回復した。
【００５２】
免疫組織化学は、すべてのＤＨＥＡ処置群において強力なアンドロゲン受容体（ＡＲ）標識を表した。他方では、エストロゲン受容体α（ＥＲα）標識およびプロゲステロン受容体（ＰＲ）標識は、いずれのアコルビフェン処置群においても検出されなかった。
【００５３】
結論として、ＤＨＥＡまたはＤＨＥＡとアコルビフェンとの併用よる処置は、上皮の粘液分泌およびＡＲのアップレギュレーションによって明らかにされたように、優勢なアンドロゲン効果を介して膣壁の種々の層において観察されたＯＶＸ誘導の萎縮性変化を部分的または完全に防ぐ。本データはまた、膣壁の３つの層に対するＤＨＥＡの特に興味深い効果、すなわち高度に粘液分泌された上皮、固有層における増加したコラーゲン線維の密集度ならびに筋層の厚さの増加を示す。従って、ＤＨＥＡは、膣の粘膜において、アンドロゲンおよびエストロゲン両方の効果を発揮し、より生理学的な補充療法を提供する。調べた化合物の各々は、膣の機能に対して有望で有益な効果を有し、ＤＨＥＡ単独または併用によって、効果的に、最適に膣乾燥を緩和し、そして全体的な膣の生理機能を回復し、そして閉経期に関連する性機能障害の正常化を助ける。ＤＨＥＡおよび他の成分を、局所的または全身的に投与することができた。
【００５４】
本発明の選択的エストロゲン受容体モジュレータは、以下の特徴：ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間され２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていない、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている芳香環；およびｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖を備えた分子式を有する。
【００５５】
本発明の１つの好ましいＳＥＲＭは、ＰＣＴ／ＣＡ９６／０００９７（ＷＯ９６／２６
２０１）において報告されたＥＭ−８００である。ＥＭ−８００の分子構造は：
【００５６】
【化１０】
2008516995.tif 000012
【００５７】
である。
本発明の別の好ましいＳＥＲＭは、米国特許第６，７１０，０５９Ｂ１号において報告されたアコルビフェン（ＥＭ−１５３８、ＥＭ−６５２．ＨＣ１とも呼ばれる）である。
【００５８】
【化１１】
2008516995.tif 000013
【００５９】
は、強力な抗エストロゲンＥＭ−６５２の塩酸塩である。ＥＭ−８００と比較すると、ＥＭ−１５３８は、より柔らかく、より単純、そしてより合成しやすい塩である。ＥＭ−８００またはＥＭ−１５３８のいずれかを投与するとき、インビボにおいて、同一の活性な化合物が生じると考えられている。
【００６０】
別の好ましいＳＥＲＭは、ラソキシフェン（Ｌａｓｏｘｉｆｅｎｅ）（ＣＰ−３３６，１５６；（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）−酒石酸塩）（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．，米国より入手可能）である。
【００６１】
本発明の他の好ましいＳＥＲＭとしては、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニル−１−ブテニル）］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン）（Ｚｅｎｅｃａ，イギリスより入手可能）、トレミフェン（Ｏｒｉｏｎ−Ｆａｒｍｏｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ，フィンランドまたはＳｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈより入手可能）、ドロロキシフェンおよびラロキシフェン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．，米国）、アルゾキシフェン（ＬＹ３３５５６３）およびＬＹ３５３３８１（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．，米国）、オスペミフェン（ＦＣ１２７１）（Ｏｒｉｏｎ−Ｆａｒｍｏｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ，，フィンランドより入手可能）、イドキシフェン（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ，米国）、レボルメロキシフェン（ＳｈａｌｍｉらＷＯ９７／２５０３４、ＷＯ９７／２５０３５、ＷＯ９７／２５０３７、ＷＯ９７／２５０３８；およびＫｏｒｓｇａａｒｄらＷＯ９７／２５０３６に開示されている、３，４−トランス−２，２−ジメチル−３−フェニル−４−［４−（２−（２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ）フェニル］−７−メトキシクロマン）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ａ／Ｓ，デンマーク））、ＧＷ−５６３８（Ｗｉｌｌｓｏｎら，１９９７，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１３８（９）：３９０１−３９１１によって記載されている）、Ａｖｅｎｔｉｓ（
フランス）によって開発中のＳＥＲＭ３３３９およびインドール誘導体（ＭｉｌｌｅｒらＥＰ０８０２１８３Ａ１によって開示されている）およびＷｙｅｔｈ  Ａｙｅｒｓ（米国）によって開発され、ＪＰ１００３６３４７に開示されているＴＳＥ−４２４およびＥＲＡ−９２３（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｈｏｍｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびＷＯ９７／３２８３７に記載されている非ステロイド性エストロゲン誘導体が挙げられる。
【００６２】
製造業者により推奨される効力の要求に応じて使用される任意のＳＥＲＭを使用することができる。適切な用量は、当該分野で公知である。市販の他の任意の非ステロイド性抗エストロゲンは、本発明に従って使用され得る。ＳＥＲＭと同様の活性を有する任意の化合物（例：ラロキシフェンが使用され得る）。
【００６３】
本発明に従って投与されるＳＥＲＭは、好ましくは、１日あたり０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、０．０５から１．０ｍｇ／ｋｇ）の用量範囲で投与されるか（経口投与の場合、１日あたり１０ｍｇ（特に、１日あたり２０ｍｇ）を２等分した用量で投与することが平均体重の人に対しては好ましい）、または１日あたり０．００３から３．０ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは、０．０１５から０．３ｍｇ／ｍｌ）の用量範囲で投与される（非経口投与（すなわち、筋肉内、皮下または経皮投与）の場合、１日あたり１．５ｍｇ（特に、１日あたり３．０ｍｇ）を２等分した用量で投与することが平均体重の人に対しては好ましい）。好ましくは、ＳＥＲＭは、以下に記載の医薬的に許容可能な希釈剤または担体と共に投与される。
【００６４】
好ましい５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、Ｐｆｉｚｅｒ  ＵＳＡによって商品名「バイアグラ」として販売されているシルデナフィル、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ＵＳＡによって商品名「シアリス」として販売されているタダラフィル、Ｂａｙｅｒ（ドイツ）によって商品名「レビトラ」として販売されているバルデナフィルである。現在、開発中である５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤：Ｄｏｎｇ−Ａ  Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ（韓国）によるＤＡ−８１５９、Ｍｅｒｃｋ（ドイツ）によるＥＭＲ−６２２０３、田辺製薬株式会社（日本）によるＴＡ−１７９０、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ（米国）によるＳＣＨ−４４６１３２およびＰｆｉｚｅｒ（米国）によるＵＫ−３７１８００もまた好ましい。
【００６５】
１つの好ましいプロスタグランジンは、ＮｅｘＭｅｄ（米国）により商品名「Ａｌｐｒｏｘ−ＴＤ」として販売されているアルプロスタジルである。
【００６６】
本明細書中で推奨されたすべての用量に関して、参加する臨床医は、個別の患者の応答を監視すべきであり、それに応じて用量を調節するべきである。
【００６７】
本発明の効果の実施例
実施例１
材料および方法
動物および処置
実験の開始時に約２２０から２７０ｇの体重であった、１０から１２週齢の雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ）Ｂｒ  ＶＡＦ／Ｐｌｕｓ（商標））（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｔ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ、カナダ）を使用した。この動物を、実験を開始する少なくとも１週間前に環境条件（温度：２２±３℃；湿度：５０±２０％；１２時間明期、１２時間暗期サイクル、０７：１５ｈに点灯）に順応させた。動物を個別に収容し、水およびげっ歯類用の食物（Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ  ５００２、Ｒａｌｓｔｏｎ  Ｐｕｒｉｎａ、ミズーリ州セントルイス）に自由に近づけるようにした。実験は、カナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ）および実験動物
管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）によって承認されている、動物施設における実験動物の管理および使用に関するＣＣＡＣ指針に従って行った。
【００６８】
合計１２６匹の雌ラットを以下のとおり、無作為に各１４匹の動物の９群に分けた：１）無処置のコントロール；２）卵巣切除した（ＯＶＸ）コントロール；３）ＯＶＸ＋アコルビフェン（２．５ｍｇ／ｋｇ）；４）ＯＶＸ＋プレマリン（０．５ｍｇ／ｋｇ）；５）ＯＶＸ＋プレマリン＋アコルビフェン；６）ＯＶＸ＋ＤＨＥＡ（８０ｍｇ／ｋｇ）；７）ＯＶＸ＋ＤＨＥＡ＋アコルビフェン；８）ＯＶＸ＋ＤＨＥＡ＋プレマリン；９）ＯＶＸ＋ＤＨＥＡ＋アコルビフェン＋プレマリン。研究の第１日目に、すべての群（群１以外）の動物を、イソフルラン誘導の麻酔下で左右相称に卵巣切除（ＯＶＸ）した。プレマリンおよびアコルビフェンを０．４％メチルセルロース中の懸濁液として経口経管栄養により投与した（０．５ｍｌ／ラット）。一方、５０％エタノール−５０％プロピレングリコール中のＤＨＥＡ（０．５ｍｌ／ラット）を、背側の皮膚の２×２ｃｍの剪毛した範囲に局所的に適用した。プレマリンについての用量選択は、ＯＶＸ誘導の子宮萎縮を回復させるのに有効な最少用量に一致させ、アコルビフェンは、プレマリン処置したＯＶＸ動物への投与後にＯＶＸと同様の子宮萎縮を引き起こすのに充分な用量で投与した。使用したＤＨＥＡの用量によってＤＨＥＡの血中レベルが７０から１００ｎｍｏｌ／Ｌになった。処置を研究の第２日目に開始し、化合物を３６週間に亘って１日に１回投与した。無処置およびＯＶＸコントロール群の動物には、賦形剤のみを与えた。
【００６９】
最後の投与の２４時間後に、一晩絶食させた動物をイソフルラン麻酔下で腹部大動脈における瀉血によって（１群あたり９匹の動物）かまたは１０％中性緩衝ホルマリンを用いた心臓内灌流によって（１群あたり５匹の動物）屠殺した。灌流されていない動物由来の膣を回収し、重量を計測し、灌流された動物から回収した膣の腹側に黒色インクで印をつけ、以下に記載するように切断した。
【００７０】
組織学的手順
各動物の灌流された膣全体を１０％中性緩衝ホルマリン中で後固定した。各膣を、図１に示すように７つの均等な断面切片に分割し、ルーチン的に処理し、一斉に同じパラフィンブロック内に包埋した。パラフィンブロック内の７つの膣の円柱状の切片を元の解剖学的位置に対応した配列に配置し、ブロックの表面に対して垂直の向きに置いた。このようにして、切片を断面切片に切断することが可能になった。各動物について、４μｍの厚さのパラフィン切片に切断し、形態学的実験のためにヘマトキシリン−エオシンで染色した。
【００７１】
組織形態計測
異なる膣の層の計測を、中間部と子宮膣部（切片７）との間のほぼ中間点である第５切片において実施した（図ｌ）。この第５切片は、典型的な上皮の表面および十分な厚さの平滑筋を示すことが分かった。画像は、ＤＣ−３３０  ３ＣＣＤカラーカメラ（Ｄａｇｅ−ＭＴＩ、インディアナ州ミシガン市、米国）を用いて記録され、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ３．０ソフトウェア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、メリーランド州シルバースプリング、米国）を使用して定量化された。このようにして、×５対物レンズ（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｌｌｏｗｄａｌｅ、オンタリオ州、カナダ）を使用して、１層あたり３から４個の厚さの計測を、上皮および筋層の典型的な範囲において行い、同時に３つの膣の層についても行った。このようにして膣の厚さ、上皮の厚さおよび筋層の厚さのすべてを計測した。固有層の厚さは、膣の厚さ全体から上皮および筋層の厚さを引くことによって得た。
【００７２】
免疫組織化学
免疫染色を、Ｚｙｍｅｄ  ＳＰキット（カリフォルニア州サンフランシスコ）を使用し
て実施した。パラフィン切片（４μｍ）を、トルエン中で脱パラフィンし、エタノールに通して再水和した。内在性ペルオキシダーゼ活性を、３０分間、３％Ｈ２Ｏ２を含むメタノールを用いたプレインキュベーションにより排除した。クエン酸緩衝液を使用したマイクロ波修復技術（Ｔａｃｈａ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，１９９４）を適用した。スライドを冷却した後、１０％ヤギ血清を使用して２０分間、非特異的な結合を遮蔽した。そして、切片を、それぞれ１：２００、１：２５０および１：２５０で、ＥＲα（ＡＢ−１，Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア）、ＡＲ（Ｎ−２０，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カリフォルニア）またはＰＲ（Ａｂ−４，ＮｅｏＭａｒｋｅｒｓ、カリフォルニア）抗体とともに室温で１．５時間、インキュベートした。ＰＢＳ緩衝液中で洗浄後、切片をビオチン化した抗ウサギ二次抗体とともに１０分間インキュベートし、その後ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼとともにさらに１０分間インキュベートした。ジアミノベンジジンを、色素原として使用し、顕微鏡監視下でビオチン／ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ複合体を可視化した。対比染色を、３０秒間、＃２Ｇｉｌｌ’ｓヘマトキシリンを使用して実施した。コントロールについては、抗体を惹起させるために使用される過剰量のペプチドを用いた免疫吸着または非免疫ウサギＩｇＧによる置換を実施した。表２に示されるように、免疫染色された核の数および強度の半定量的評価を実施した。
【００７３】
【表１】
2008516995.tif 000014
【００７４】
【表２】
2008516995.tif 000015
【００７５】
統計解析
データは、膣の重さについては１群あたり８から９匹の動物または膣の層の厚さの測定については１群あたり５匹の動物の平均±ＳＥＭとして表される。統計的有意性は、Ｄｕｎｃａｎ−Ｋｒａｍｅｒの多重範囲検定（Ｋｒａｍｅｒ，１９５６，Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ，１２：３０７−３１０）に従って決定された。
【００７６】
結果
ラット膣の様々な層の形態および厚さ
ラット膣壁の３つの層、すなわち上皮、固有層および筋層を正確かつ詳細に調べるために、長手方向の軸に沿って得られた７つの切片（図１）を初めに調べた。重要な形態学的差異が、群の間に概して観察されたが、その差異は、同じ群のすべての動物において一様であり、切片２、３、４、５、６および７は、同様の上皮の形態を示した。観察された数少ない例外は、後で言及される。従って、切片５が、膣上皮の種々の処置の効果を説明するために使用された。
【００７７】
ＯＶＸ群において、卵巣刺激がないことにより、いくつかの小型の粘液細胞の範囲の存在とともにすべての切片を特徴付ける膣上皮の萎縮が生じた（表１および図２Ｃ）。最も重要なことには、上皮内の微小膿瘍（ｍｉｃｒｏａｂｃｅｓｓ）（上皮内の小さい範囲の凝集した白血球）の多くの病巣に中程度から重度の炎症が頻繁に見られた。これらの変化は、病巣の侵食（上皮の層が部分的に消失している区域）および潰瘍化（上皮の層の完全な消失）を伴うことが多かった（図３）。
【００７８】
切片１が発情期の動物において見られた１０から１５個の層と比較して、９から１１個の細胞層を含むことを除いて、またはＯＶＸ動物がプレマリンを投与されたときアコルビフェンで処置したＯＶＸ動物において、切片１は、無処置群と同様に角質化し、重層化した扁平上皮を示した（図４）。従って、切片１におけるアコルビフェン処置動物の上皮の厚さは、４から６個の細胞層だけを含むＯＶＸラットの厚さよりも厚かった。他の切片において（表１）、基底層は、ＯＶＸ動物より発達していた薄い円柱状粘液細胞の層によって覆われていた（図２Ｄ）。ＯＶＸ＋アコルビフェン群において、５匹の動物のうち３匹だけが最小の炎症の徴候を示したが、中程度から重度の炎症変化がすべてのＯＶＸ動物においておおむね見られた。
【００７９】
すべての群において、萎縮が優勢な特徴であったＯＶＸ群の動物を除いて、切片１は、同程度の重層化した扁平上皮を示した（図４）。さらに、ＯＶＸ＋ＤＨＥＡおよびＯＶＸ＋ＤＨＥＡ＋アコルビフェン群において、粘液細胞は、切片１の優勢な重層化した扁平上皮を伴うことが多かった（図示せず）。
【００８０】
ＤＨＥＡを投与したＯＶＸ動物の膣上皮の７つの切片は、典型的なアンドロゲン効果の特徴である、膨張した細胞質空胞を有する大型の多層円柱状粘液細胞から構成されていた（表１、図２Ｇ）。いくつかの大きな陥入は、ＤＨＥＡ処置後の上皮を特徴付けた。粘液細胞の大きさおよびそれらの層の数が減少したことを除いては、同様の上皮の形態がＯＶＸ＋ＤＨＥＡ＋アコルビフェン群のすべての切片において見られた（表１、図２Ｈ）。ＤＨＥＡ＋プレマリン処置した動物において、様々な比の、粘液細胞の層によって覆われた扁平上皮から構成される「混合」型の厚い重層化した上皮（表１、図２Ｉ）が、第２切片から第５切片までで観察され、このことから、併用されたエストロゲンおよびアンドロゲンの効果が明らかになった。この群において、３匹の動物が上述した切片において粘液分泌を示した。他の２匹の動物において、重層化した扁平上皮がすべての切片において観察された（表１）。プレマリンをＤＨＥＡおよびアコルビフェンと併用したとき、上皮は、ＤＨＥＡ＋アコルビフェン群の上皮と同様であった。このことから、アコルビフェンによるエストロゲン誘導の扁平上皮細胞増殖の遮断が示唆される（表１および図２Ｊ）。
【００８１】
ＯＶＸ動物へのＤＨＥＡの投与により、膣上皮の厚さが３８±４μｍに増大し、一方、ＤＨＥＡへのアコルビフェンの追加は、上皮の厚さを変化させず、３７±５μｍのままであった。プレマリンおよびＤＨＥＡをＯＶＸ動物に同時投与したとき、８４±６μｍの厚い厚さが観察され、プレマリン単独を投与された動物の群の厚さとは著しく異なる値であった。最終的には、プレマリン、ＤＨＥＡおよびアコルビフェンの併用により、３２±３
μｍの厚さの上皮が生じ、ＤＨＥＡ単独またはアコルビフェンと併用したＤＨＥＡを投与された群の厚さと同様の値であった。
【００８２】
固有層
膣におけるコラーゲン線維の密集の程度は、上皮に近位の範囲において観察するとき、低い、中程度および高いとして分類された（図６）。「低い」および「中程度の密集度」は、それぞれゆるくか、またはさほどゆるくなくともに凝集した粗いコラーゲン線維の存在に関連し、「高い密集度」は、なめらかできめのある外観を示す、固く詰められた微細なコラーゲン線維を説明するために使用される用語であった。すべての動物において、コラーゲンの量に比例して相対的に少ししか線維細胞は存在しなかった。それらは、大部分は平板化かつ萎縮して見られた。
【００８３】
各動物の注意深い実験により（表１）、切片２および３における密集度が切片７まで一般に一定のままであるプラトーに達するまで増加する間、概して、切片１におけるコラーゲン線維の密集度が（発情期のラットおよびプレマリン処置したＯＶＸ動物において低かったものまたはＯＶＸラットおよびＤＨＥＡ処置したＯＶＸラットにおいて高かったものを除いて）中程度であることが明らかになる。従って、発情期の無処置ラットにおける膣の長手方向の軸に沿って、コラーゲン線維の密集度は切片１から３においては低く、切片４から７においては中程度であった。萎縮は、ＯＶＸ群およびＯＶＸ＋アコルビフェン群におけるコラーゲン線維の増加した密集度に関連することが多かった（表１）。プレマリン処置したＯＶＸ動物において、切片１における密集度は低く、切片２および３においては中程度であり、他の切片において、コラーゲン線維の密集度は、切片６および７において高くなるように徐々に増加した。
【００８４】
膣に沿った固有層の厚さの視覚的な光学顕微鏡実験により、その厚さは、切片１において中程度に厚く、切片２から４においてより薄かったことがおおむね明らかになった。切片５から７において、厚さは、切片１と同様のレベルに段階的に増加した。切片５において計測された固有層の厚さの対応する平均値（図５Ｂ）は、ＯＶＸによって、固有層の厚さを有意に減少させ（無処置群の１３５±２８μｍに対して７６±２μｍ）、アコルビフェン（６０±８μｍ）によっては有意ではない減少が誘導されることが示唆される。ＯＶＸ動物におけるプレマリンまたはプレマリン＋アコルビフェン投与後に観察された増加は、無処置群より低いままであった（１３５±２８μｍに対して、それぞれ１００±９μｍおよび９０＋３μｍ）。ＤＨＥＡの投与により、固有層の厚さにおいて統計的に有意でない増加も生じ（９６±２０μｍ）、アコルビフェンの追加によりさらに、無処置動物の厚さに達する厚さの増加が生じた（１３６±１７μｍ）。プレマリン＋ＤＨＥＡでのＯＶＸ動物の処置は、ＤＨＥＡ単独と比較したとき、厚さを有意に増加させた（１４４±１４μｍ）。最終的に、プレマリン＋ＤＨＥＡ＋アコルビフェンで処置された動物は、その差は統計的に有意ではなかったが、ＤＨＥＡ単独で処置した群と同様の厚さおよびプレマリン＋ＤＨＥＡ群より低い厚さを示した（９９±９μｍ）。
【００８５】
ＤＨＥＡは、筋層の厚さにおいて中程度の増加を誘導し（５０±２μｍ）、その厚さは、アコルビフェンの追加によってわずかに減少した（４１±３μｍ）。最終的に、プレマリンおよびＤＨＥＡを併用した処置により、ＤＨＥＡ単独で処置した動物と比較したとき、著明な厚さの増加を生じた（６２±３μｍ）。アコルビフェンをプレマリンおよびＤＨＥＡに追加したとき、筋層の厚さは、ＤＨＥＡおよびアコルビフェンと同程度の値に減少した（４６±５μｇ）。
【００８６】
膣壁の厚さ全体を計測したとき（図５Ｄ）、外膜を構成する、結合組織の外側の薄い層を、含まなかった。ＯＶＸにより、顕著な（５１％）膣壁の萎縮が生じた（無処置の２６２±３９μｍに対して１２８±３μｍ）およびＯＶＸへのアコルビフェンの追加は、効果
がなかった（１０８±８μｍ）（図７Ａ，ＢおよびＣ）。プレマリン処置は、無処置動物の厚さと同様の値（２５３±１０μｍ）に厚さ全体を維持し、一方、プレマリンへのアコルビフェンの追加は、プレマリンの効果を回復した（１５０±４μｍ）（それぞれ図７ＤおよびＥ）。ＤＨＥＡ処置によって達成された膣の厚さ全体は（１８４±２１μｍ）、プレマリン単独処置群の厚さよりも約２５％低かった（図７Ｆ）。他方では、ＤＨＥＡへのアコルビフェンの追加により、有意でない厚さの増加が生じ（２１３±２０μｍ）、それは、無処置群とは有意でなく異なっていた（図７Ｇ）。最終的には、ＯＶＸ動物へのプレマリンおよびＤＨＥＡの同時投与により、無処置動物の厚さと同様の値まで顕著に増加した（２９０±１３μｍ）（図７Ｈ）。ＤＨＥＡおよびプレマリンへのアコルビフェンの追加は、ＤＨＥＡ単独とは有意ではなく異なる値まで効果が回復した（１７６±１１μｍ）（図７Ｉ）。
【００８７】
膣重量
処置の８ヶ月後に、様々な群間の膣重量において観察された変化（図８）は、上記した形態学的観察に概して従う。実際は、ＯＶＸ後の膣重量は、無処置群（２０５±１１ｍｇ）と比較して約５０％減少し（１０１±５ｍｇ）、一方、アコルビフェン単独でのＯＶＸ動物の処置は、膣重量に対して効果がなかった。他方では、プレマリンの投与により、無処置動物の値（１７０±９ｍｇ）には達しない膣重量の増加が生じ、プレマリンへのアコルビフェンの追加により、ＯＶＸ動物の重量と同様の値（９６±４ｍｇ）までエストロゲン誘導の重量増加が回復した。反対に、ＤＨＥＡをＯＶＸ動物に与えたとき、膣重量は、プレマリン処置群の重量と同様の値まで増加し（１７１±１２ｍｇ）、アコルビフェンとＤＨＥＡとの併用により、重量の減少が生じ（１３５±９ｍｇ）、ＯＶＸ群の重量のより少ないままであった。最終的に、ＯＶＸ動物におけるプレマリンおよびＤＨＥＡの同時投与により、ＯＶＸ＋ＤＨＥＡ群およびＯＶＸ＋プレマリン群の重量と同様の値に達する膣重量の増加が生じた（１７９±１０ｍｇ）。この併用へのアコルビフェンの追加は、有意な効果がなかった（１９４±１２ｍｇ）。
【００８８】
ＯＶＸ動物のＤＨＥＡ処置により、３つの膣の層において多くの核の強力な標識またはＡＲが生じ、ＤＨＥＡ＋アコルビフェンおよびＤＨＥＡ＋プレマリンの併用を使用したときに、後者の群における上皮の表面の層における標識された核の数がより少なかったという例外を有する、同じパターンが見られた。ＤＨＥＡ、プレマリンおよびアコルビフェンの併用により、３つの膣壁の層における大部分の核の強力な染色も生じた。
【００８９】
考察
性機能障害を伴う膣乾燥または萎縮性膣炎（尿生殖器の萎縮ともいわれる）は、閉経後の女性における共通の問題である（Ｎｏｔｅｌｏｖｉｔｚ，２０００，Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ，７（３）：１４０−１４２）。最もよくある症状は、乾き、灼熱感、かゆみ、刺激および性交疼痛症であり、従って、性欲および生活の質の低下を引き起こす（Ｂｅｒｍａｎら，１９９９，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｕｒｏｌ，９（６）：５６３−５６８）。エストロゲン喪失が関連することが知られているので、エストロゲン補充療法（ＥＲＴ）およびＨＲＴが処置の選択肢である。しかしながら、女性における性ステロイドの生理機能についての新規な情報は、アンドロゲンの重要な役割を強く示唆しているので（Ｌａｂｒｉｅら，２００３，Ｅｎｄ  Ｒｅｖ，２４（２）：１５２−１８２）、本研究では、ラットの膣の形態および性ステロイド受容体発現に対する、ＨＲＴまたはＥＲＴに対する代替物、すなわちＤＨＥＡ単独か、または純粋な抗エストロゲンであるアコルビフェンおよびプレマリンと関連してすべてのホルモンの効果を比較する。ＤＨＥＡは、肝臓を通る初回通過を避けるために経皮的に投与された（Ｌａｂｒｉｅら，１９９６，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１５０：Ｓ１０７−Ｓ１１８）。
【００９０】
最終的に、本発明者らの結果は、ＯＶＸ動物と比較したとき、プレマリン処置による膣
重量の有意な増加を示し、その値はＤＨＥＡ処置群において観察された重量と同様であった。げっ歯類における膣および子宮の重量の増加が、エストロゲン原性の計測として通常使用されるが、これらの器官はまた、他の化合物のうちプロゲステロンおよびテストステロンに応答し得ることを想起することが適切である（Ｅｍｍｅｎｓ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，１９６４，Ｄｏｒｆｍａｎ  Ｅｄ，Ｅｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ＮＹ：１）。
【００９１】
可能性のある３種類の併用において、ウマのエストロゲンであるプレマリンは、血管運動性の症状を軽減するために脳において作用することを目的としている。実際に、所望しない末梢のエストロゲンの効果を中和させるために、エストロゲンと純粋な選択的抗エストロゲンであるアコルビフェンとの同時投与の利点は、Ｌａｂｒｉｅらによってよく説明されている（Ｌａｂｒｉｅら，２００３，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１４４（１１）：４７００−４７０６）。本研究において、アコルビフェンをＯＶＸ動物に投与したとき、ＳＥＲＭによって誘導される最も典型的な形態学的特徴は、ＳＥＲＭをＤＨＥＡに追加したときを含む、プレマリン＋アコルビフェン群においてわずかに顕著であり、アコルビフェンで処置したすべての群において優勢なままであったパターン、基底細胞層を覆うきちんと整列した小さい粘液細胞の表面の層の発生であった。抗エストロゲンでの処置下における膣上皮の粘液分泌は、未成熟ラット（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋａｎｇ，１９７５，Ａｍ  Ｊ  ａｎａｔ，１４４（２）：１９７−２０７）および成体ラット（Ｙｏｓｈｉｄａら，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ，１３４（１）：４３−５１）において報告されている。この形態学的パターンが、プロゲステロン誘導の粘液分泌と比較されたが（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋａｎｇ，１９７５，Ａｍ  Ｊ  ａｎａｔ，１４４（２）：１９７−２０７）、抗エストロゲンが上皮の粘液分泌を誘導する分子機構は、未知なままである。
【００９２】
ＤＨＥＡの多くの有益な効果が、閉経後の女性において報告されている（Ｌａｂｒｉｅら，１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８２：３４９８−３５０５；Ｌａｂｒｉｅら，１９９１，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，７８：Ｃ１１３−Ｃ１１８）。ＤＨＥＡについての特異的な受容体が特徴付けられていないので、ＤＨＥＡ処置後のラット膣において観察された形態学的変化は、イントラクライン機構を介したアンドロゲンおよび／またはエストロゲンの作用を有する活性な性ステロイドへのイントラクライン変換を反映する（Ｌａｂｒｉｅら，１９９１，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，７８：Ｃ１１３−Ｃ１１８）。それらの変化は、著しい上皮の粘液分泌、きめの細かい、微細に編みこまれた固有層のコラーゲン線維の高い密集度およびＯＶＸ動物と比較したときの中程度の筋層の厚さの増加を含む。２つの第１の形態学的変化は、アンドロゲン効果の典型であり、第３の形態学的変化は、筋層におけるプロゲステロン受容体発現の付随する増加によってさらに支持されるエストロゲン様活性を示す。
【００９３】
ＤＨＥＡは、末梢組織においてアンドロゲンおよびエストロゲンのいずれかまたは両方に変換されるので、ＤＨＥＡでのＯＶＸ動物の処置後に本研究において観察された厚い粘液分泌された多層性の上皮は、ラット膣における粘液分泌の優勢なアンドロゲン効果を示唆し、この効果は、上皮のレベルで軽微なエストロゲン効果を共存する可能性を隠し得る。以前の研究では、ラット膣において同じ粘液分泌効果が示された（Ｓｏｕｒｌａら，１９９８，Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，６６（３）：１３７−１４９）；この以前の研究において、ＤＨＥＡの膣内適用は、ＤＨＥＡの背側の皮膚への適用後に活性であることが見出された効果よりも１０倍低い用量で顕著な効果を達成した。
【００９４】
本データは、ラット膣において共存するＤＨＥＡの主なアンドロゲン作用および軽微なエストロゲン作用を示唆する。さらに、本結果は、抗アンドロゲンであるフルタミド（Ｆ
ＬＵ）の皮下用量を加えて、本発明者らの研究において使用されたＤＨＥＡと同じ局所適用を受けたＯＶＸ動物の膣上皮の観察により、十分に支持される（非公開の結果）。実際は、ＤＨＥＡのアンドロゲン成分によって産生される粘液分泌のアンドロゲン効果は、ＦＬＵによって完全に回復され、エストロゲン効果の典型である重層化した扁平上皮を生じた（データは示さず）。ＤＨＥＡがラット膣において独占的なアンドロゲン効果（粘液分泌）を有し得る場合、この効果は、ＦＬＵによって回復し得、ＯＶＸ動物と同様の萎縮性上皮が観察されるはずである。性腺摘出された雄および雌ラットにおける以前の研究によって、ＤＨＥＡを用いた処置が、研究中の標的組織に依存して前立腺、精嚢および子宮に対するアンドロゲンおよび／またはエストロゲンの刺激効果をもたらすことが明確に確証された（Ｌａｂｒｉｅら，１９８８，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１２３：１４１２−１４１７）。
【００９５】
他方では、ＤＨＥＡ＋アコルビフェンの併用は、上皮の粘液分泌の程度の減少を示し、従って、交互のきちんと整列した粘液細胞層（アコルビフェン効果）および多層性の肥大化した粘液細胞の陥入を示した。これは、ＤＨＥＡのアンドロゲン効果に一致する。従って、アコルビフェンは、ＤＨＥＡのエストロゲンの部分的な効果を阻害し、ＤＨＥＡの主なアンドロゲンの対応物が維持され、アコルビフェンの軽微なエストロゲン様効果が追加された。後者は、小孔レベルで最もよく見られる。ＤＨＥＡへのアコルビフェンの追加後に観察された膣重量の減少は、プレマリンへのアコルビフェンの追加後に得られたものよりも小さい。従って、抗エストロゲンによって回復されるＤＨＥＡのより小さいエストロゲン成分を説明するが、主なアンドロゲン成分は影響されない。さらに、ＤＨＥＡ＋アコルビフェン群における固有層の厚さおよびコラーゲン線維の密集度の増加は、それぞれＯＶＸ動物および無処置動物と比較したとき、ＤＨＥＡのエストロゲン成分がアコルビフェンによって遮断されるので、コラーゲン密集度および厚さを増加させるときアンドロゲン類の潜在的な役割を再度示唆する。
【００９６】
他の研究は、ラット乳腺（Ｓｏｕｒｌａら，１９９８，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１３９：７５３−７６４）、皮膚の皮脂腺（Ｓｏｕｒｌａら，２０００，Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１６６（２）：４５５−４６２）および骨ミネラル密度（Ｍａｒｔｅｌら，１９９８，Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１５７：４３３−４４２）におけるＤＨＥＡの作用が、ほぼ独占的にアンドロゲン性であることを実証した。それにもかかわらず、ラット膣におけるＤＨＥＡのエストロゲン作用の存在は、この化合物で処置した未成熟のラットにおける膣の開口および早発性の排卵の誘導を通して以前に実証されていたが、エストロゲンに芳香化できないアンドロゲンであるＤＨＴは、このような効果を発揮しなかった（Ｋｎｕｄｓｅｎ  ａｎｄ  Ｍａｈｅｓｈ，１９７５，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，９７（２）：４５８−４６８）。ラット膣の組織のアンドロゲン（特にＴｅｓｔｏ）を芳香化する能力は、この器官におけるＤＨＥＡのエストロゲン効果の大部分を説明する可能性がある（Ｌｅｐｈａｒｔら，１９８９，Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐｒｏｄ，４０（２）：２５９−２６７）。エストロゲン受容体に結合することが知られているＤＨＥＡ代謝産物であるアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオール（５−ジオール）（Ｓｈａｏら，１９５０，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２５０：３０９５−３１００；Ｐｏｏｒｔｍａｎら，１９７５，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ，４０（３）：３７３−３７９；Ｖａｎ  Ｄｏｏｒｎら，１９８１，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１０８：１５８７−１５９４；Ａｄａｍｓら，１９８１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，４１：４７２０−４７２６）はまた、エストロゲン効果に寄与し得る（Ｐｏｕｌｉｎ  ａｎｄ  Ｌａｂｒｉｅ，１９８６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，４６：４９３３−４９３７）。従って、抗エストロゲンであるアコルビフェンとＤＨＥＡとの提案された併用は、５−ジオールの所望されていない任意の刺激効果を防ぎ得る。他方では、アコルビフェンは、骨量減少を防ぐことによってさらなる利点を示し得る（Ｍａｒｔｅｌら，２０００，Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，７４（１−２）：４５−５６）。
【００９７】
本発明者らの最大の知見として、以前の研究では、固有層およびそれほどではないにせよ筋層のコラーゲン線維の密集度および形態に対するＤＨＥＡの刺激効果は示されなかった。ＤＨＥＡ由来のアンドロゲンおよびエストロゲンのこのような作用は、閉経後の女性の膣機能に対して有益な効果を有し得、おそらくアンドロゲンまたはエストロゲン誘導の内皮の一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）に媒介される膣の平滑筋弛緩の促進を介して、５型ホスホジエステラーゼの阻害剤（例えば、シルデナフィルまたはタダラフィル）の作用に必要とされる基質を提供し得る（Ｍｕｎａｒｒｉｚら，２００３，Ｊ  Ｕｒｏｌ，１７０（２Ｐｔ２）：Ｓ４０−Ｓ４４，Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  Ｓ４４−Ｓ４５において概説されている）。実際に、アコルビフェンは、ヒトおよびラット内皮細胞におけるｅＮＯＳを誘導することが見出されている（Ｓｉｍｏｎｃｉｎｉら，２００２，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１４３（６）：２０５２−２０６１）。
【００９８】
ＤＨＥＡ処置を含むすべての群において得られた結果は、ＡＲ発現が、３つの組織の区画において同様の様式でラット膣におけるＤＨＥＡのイントラクライン変換由来のアンドロゲンによってアップレギュレートされることを明らかにする。
【００９９】
アンドロゲンによるラット膣のＡＲの強力な調節に付随して観察される有益な形態学的変化は、閉経後の女性における減少した血清レベルのＤＨＥＡ由来のアンドロゲンが、低下した膣の健康状態および究極的にはこの年齢群において観察される性欲および性的享楽の喪失に寄与し得る。血清中の総Ｔｅｓｔｏ、遊離ＴｅｓｔｏおよびＤＨＥＡ−Ｓの減少が、性的欲求の減少について受診した女性において実際に見られた（Ｇｕａｙ  ａｎｄ  Ｊａｃｏｂｓｏｎ，２００２，Ｊ  Ｓｅｘ  Ｍａｒｉｔａｌ  Ｔｈｅｒ，２８  Ｓｕｐｐｌ  １：１２９−１４２）。
【０１００】
本研究において、本発明者らは、ＤＨＥＡまたはＤＨＥＡとアコルビフェンとの併用およびＤＨＥＡとアコルビフェンおよびプレマリンとの併用を用いたＯＶＸ雌ラットの処置は、優勢なアンドロゲン効果を通して、ＡＲを介して、膣において見出されたＯＶＸ誘導の萎縮性変化を回復させた。このことは、強力な上皮の粘液分泌および固有層における増加したコラーゲン線維の密集度によって示された。ＤＨＥＡ単独による処置はまた、筋層の厚さを中程度に増加させた。このようなデータは、末梢の標的組織においてＤＨＥＡおよびＤＨＥＡ−Ｓから局所的に合成された性ステロイドの重要性を強調する。これらの有益な効果に加えて、アコルビフェンは、おそらく、小孔レベルでの保護的な角質化した扁平上皮のエストロゲン様の誘導および体内レベルでの粘液分泌の抗エストロゲン効果を介して炎症発生率を減少させた。
【０１０１】
性交疼痛症および性的享楽の喪失に関連することが多い膣乾燥の問題を解決するために種々の試みがなされた。一例としては、局所的な膣のエストロゲン調製物が、緩和を提供するために処方されることが多いが、子宮内膜は、対立しないエストロゲンによって刺激され得る（Ｍａｔｔｓｏｎら，１９８９，Ｍａｔｕｒｉｔａｓ，１１：２１７−２２２）。子宮摘出された閉経後の女性において、ＥＲＴは、いまだ使用されているが、乳癌を発症する危険性が高いことが周知である。さらに、ＥＲＴは、グロブリンを結合する性ホルモンを増加させることによって血清アンドロゲンレベルを低下させる。このことは、相対的な卵巣および副腎のアンドロゲン欠乏を誘導し得、従って、同時に起こる生理学的アンドロゲン置換についてのさらなる理論的根拠を与える（Ｃａｓｓｏｎら，１９９７，Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ，９０（６）：９９５−９９８）。
【０１０２】
実施例２
方法
動物および処置
卵巣摘出時に２１５から２６５ｇの体重であった、１０から１２週齢の雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）Ｂｒ）（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｔ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ、カナダ）を使用した。この動物を、環境的に制御された部屋（温度：２２±３℃；湿度：５０±２０％；１２時間明期、１２時間暗期サイクル，０７：１５ｈに点灯）に個別に収容した。動物を、水道水および認可されたげっ歯類用の飼料（Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ  ５００２（固形飼料），Ｒａｌｓｔｏｎ  Ｐｕｒｉｎａ，ミズーリ州セントルイス）に自由に近づけるようにした。実験は、カナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ）および実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）によって承認されている、動物施設における実験動物の管理および使用に関するＣＣＡＣ指針に従って行った。
【０１０３】
様々な実験：２つの２０日間の研究および２つの８ヶ月の研究が実施された。２つの第１実験の各々において、動物を無作為に以下のとおり１３または１４匹の動物の３群に分けた：１）無処置のコントロール；２）卵巣切除した（ＯＶＸ）コントロール；３）ＯＶＸ＋ラロキシフェン（０．５ｍｇ／ｋｇ）または３）ＯＶＸ＋ＬＹ３６３３８１（０．５ｍｇ／ｋｇ）。１つの８ヶ月の研究において、動物を無作為に以下のとおり７から８匹の動物の５群に分けた：１）無処置のコントロール；２）卵巣切除した（ＯＶＸ）コントロール；３）ＯＶＸ＋アコルビフェン（０．５ｍｇ／ｋｇ）；４）ＯＶＸ＋ＥＲＡ−９２３（０．５ｍｇ／ｋｇ）；５）ＯＶＸ＋ＴＳＥ−４２４（０．５ｍｇ／ｋｇ）。他の８ヶ月の研究において、動物を無作為に以下のとおり１０から１１匹の動物の３群に分けた：１）無処置のコントロール；２）卵巣切除した（ＯＶＸ）コントロール；３）ＯＶＸ＋ラソフォキシフェン（０．５ｍｇ／ｋｇ）。研究の第１日目に、適切な群の動物を、イソフルラン麻酔下で左右相称に卵巣切除（ＯＶＸ）した。次に試験される化合物を、研究の第１日目から第２０日目までか、または研究の第１日目から第３２週目まで０．４％メチルセルロースの懸濁液として（０．５ｍｌ／ラット）１日に１回、経口経管栄養によって与えた。
【０１０４】
最後の投与の２４時間後に、動物をイソフルラン麻酔下、瀉血によって屠殺した。膣を回収し、切除後すぐに１０％中性緩衝ホルマリン中に浸漬した。次に膣を、７つの断面切片に切断するか（アコルビフェン、ＥＲＡ−９２３およびＴＳＥ−４２４について）または中間の断面切片のみをサンプリングするために切断した（ラロキシフェン、ラソフォキシフェンまたはＬＹ３６３３８１）。次に切片をルーチン的に処理し、パラフィンブロック内に包埋した。適切なすべての切片をパラフィンブロック内で元の解剖学的位置に対応した配列に配置し、ブロックの表面に対して垂直の向きに置いた。このようにして、切片を断面に切断することが可能になった。各動物について、４μｍの厚さのパラフィン切片に切断し、形態学的実験のためにヘマトキシリン−エオシンで染色した。
【０１０５】
図１０および１１に様々なＳＥＲＭ間の比較が示される：倍率２００×でのＯＶＸラットにおける膣上皮の形態。写真ＡからＤは、膣（小孔）の第１切片の上皮の形態を示す。ＡにおいてＯＶＸ動物の上皮は薄く（４から６個の細胞層）、萎縮性であり、眼に見える顆粒層を示さず、一方、同じ上皮は、３つのＳＥＲＭにおいてより厚く（８から１１個の細胞層）、Ｂ、ＣおよびＤにおいて多層性の顆粒性区画を示す。ＥからＫにおいては、膣の中間に位置している切片を図示する。ＯＶＸ動物において、Ｅにおいて膣上皮は、薄くかつ萎縮性であり（２から３個の細胞層）、厚さは、基底細胞層を覆う１つ（アコルビフェン、ＥＲＡ−９２３およびＴＳＥ−４２４）または多くの（ラロキシフェン、ラソフォキシフェンまたはＬＹ３６３３８１）粘液細胞層の存在が原因で、すべての処置群において増加する（ＦからＫ）。
【０１０６】
実施例３
材料および方法
実験の開始時に約２５０から２７５ｇの体重であった、１０から１２週齢の雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ）Ｂｒ  ＶＡＦ／Ｐｌｕｓ（商標））（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｔ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ、カナダ）を使用した。この動物を、実験を開始する少なくとも１週間前に環境条件（温度：２２±３℃；湿度：５０±２０％；１２時間明期、１２時間暗期サイクル，０７：１５ｈに点灯）に順応させた。動物を個別に収容し、水およびげっ歯類用の食物（Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ  ５００２，Ｒａｌｓｔｏｎ  Ｐｕｒｉｎａ，ミズーリ州セントルイス）に自由に近づけるようにした。実験は、カナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ）および実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）によって承認されている、動物施設における実験動物の管理および使用に関するＣＣＡＣ指針に従って行った。
【０１０７】
合計２５匹の雌ラットを無作為に以下のとおり５群に分けた：１）３匹の卵巣切除した無傷のコントロール（ＯＶＸ）；２）４匹のＯＶＸ＋プラセボ坐剤；３）６匹のＯＶＸ＋０．３３ｍｇ  ＤＨＥＡ坐剤；４）６匹のＯＶＸ＋０．６６ｍｇ  ＤＨＥＡ坐剤；５）６匹のＯＶＸ＋１．００ｍｇ  ＤＨＥＡ坐剤。研究の第１日目に、すべての群の動物を、イソフルラン誘導の麻酔下で左右相称性に卵巣切除した（ＯＶＸ）。１つの坐剤の膣への挿入を研究の第５日目に開始し、研究の第１８日目まで１日に１回継続した（合計１４日間の処置）。坐剤を、膣の開口部に静かに配置し、次に７０％アルコール中で消毒し、各動物間で乾燥させた小型のなめらかなガラス棒の補助を伴って膣の内側約２−３ｍｍにそっと押し込んだ。
【０１０８】
最後の投与の２４時間後に、動物をイソフルラン麻酔下、瀉血によって屠殺した。尿道を含む膣および子宮を回収し、以下に記載するように切断した。さらなる解析のために、２片の鼡径部の乳腺ならびに剪毛した背側の皮膚の約２×２ｃｍの正方形の片をサンプリングし、後者は、１枚のボール紙の上に置き、静かに平板化する。
【０１０９】
坐剤の調製
ＤＨＥＡ坐剤をＷｈｉｔｅｐｓｏｌ  Ｈ−１５基剤（Ｍｅｄｉｓｃａ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ、カナダ）を使用して調製した。他の任意の脂肪親和性の基剤（例えば、Ｆａｔｔｉｂａｓｅ、Ｗｅｃｏｂｅｅ、ココアバター、カカオ脂）またはＷｈｉｔｅｐｓｏｌ基剤の他の併用もまた、使用され得る。ＤＨＥＡの適切な量を、最終容積が５０μｌ±３μｌの坐剤１つあたり０．３３ｍｇまたは０．６６ｍｇまたは１．００ｍｇの最終濃度を与えるために計量した。必要とされる最終容積を得るために、適切な量の坐剤の基剤の小丸剤の重さは、以前に計測された坐剤の基剤の濃度に基づいて算出し、それは、５０μｌあたり４７．５ｍｇであった。坐剤の基剤を小型のビーカーに入れ、電子レンジにて５０％の力で約３分３０秒間融解し、次いで５０±３℃の温度で坐剤の基剤を維持するために最低の力に調節された加温板上に移動させた。次いで微粉にしたＤＨＥＡ（１００％の純度でＳｃｈｅｗｅｉｚｅｒｈａｌｌ  Ｉｎｃ．から入手）を基剤に一度に添加し、塊り全部を沈んだままにし、３分間湿らせ、その後、端がなめらかで丸いガラス棒を用いて慎重かつゆっくり粉砕し、溶解した。最終的に、溶解されたＤＨＥＡを含む基剤（プラセボは、ＤＨＥＡなしの基剤であった）を予め温められたピペットチップを備えた１０００μｌ−Ｇｉｌｓｏｎピペットを使用してチューブラックに備えた一連の５０μｌ型に注ぐ。これらの型は、微量遠心分離チューブから作製され、その各々は、事前に５０μｌの水で目盛りを定められ、水の表面に引かれた線のレベルで切断された。室温における３０分の冷却の後、坐剤をさらに３０分間、４℃に置く。最終的に、基剤の過剰分を剃刀で切り取り、坐剤をその型から取り出し、閉鎖系のガラスビン内で４℃にて使用するまで保管する。それらは、動物に適用される前に室温に達されることが可能であった。
【０１１０】
組織学的手順
器官を、切除後すぐに１０％中性緩衝ホルマリン中に浸漬した。各膣および子宮を、そ
れぞれ子宮頚部からの２つおよび各々の２つの近位および遠位の角からの２つを含む、８つの等しい断面切片および４つの断面切片に分割した。次いで切片をルーチン的に処理し、一斉に同じパラフィンブロック内に包埋した。パラフィンブロック内のすべての切片を元の解剖学的位置に対応した配列に配置し、ブロックの表面に対して垂直の向きに置いた。このようにして、切片を断面に切断することが可能になった。各動物について、４μｍの厚さのパラフィン切片に切断し、形態学的実験のためにヘマトキシリン−エオシンで染色した。
【０１１１】
結果
上皮の形態
すべての膣の切片の実験後、切片４および６が処置間の比較について典型であることが分かった。切片４は、外部の皮膚の特徴を示さない小孔に最も近位であり、コントロール動物における膣の粘膜の外側の範囲において通常見られる軽度から中程度の炎症変化によって影響されないかまたはそれほど影響されなかった。切片６は、より深い膣の粘膜を示し、子宮頚部からたった１切片によって隔てられている。概して、膣の腹側は、背側と比較されるとき、より厚く、かつより粘液分泌された上皮を示す。
【０１１２】
無処置
図１３に示されるように、主なエストロゲンの影響下にある発情期において、膣上皮は、厚く、かつ角質化している。それは、切片４では１２から１８個の細胞層および切片６では１２から１５個の層から示される。小孔において見られる厚く重層化した扁平上皮とは反対に、顆粒層は、内部の膣上皮では明らかではなかった。ホルモンの影響下が最小の発情後期において、膣上皮は、より薄い。それは、切片４では６から１０個の細胞層および切片６では５から７個の層から示される。
【０１１３】
卵巣切除した無傷
図１４に示されるように、切片４において、膣は、２から６個の細胞層の重層化した扁平上皮によって裏打ちされる。この切片の厚さは、動物間でかなり変化している。切片６において、扁平な細胞の２から３個の細胞層を伴う完全な萎縮が観察される。小型の円柱状の粘液細胞のいくつかの珍しい病巣が、これらの動物の膣全体にわたって見られ得る。この群の３匹の動物のうち２匹が、外側の３つの切片において経度の炎症変化を示した。
【０１１４】
プラセボ
図１５に示されるように、ＯＶＸ無傷群と比較して、プラセボ群の膣の重層化した扁平上皮は、わずかに厚く、切片４で４から８個の細胞層を示した。しかしながら、切片６においては、２から３個の上皮の細胞層を有する、ＯＶＸ無傷群において見られたのと同じ形態が観察された。ＯＶＸ無傷動物において見られたように、小型の円柱状の粘液細胞の病巣は、ＯＶＸ無傷動物と比較されるとき、膣にわたってわずかに多く見られ得る。この群の４匹の動物のうち３匹は、外側の３つの切片において経度の炎症変化を示した。
ＤＨＥＡ  ０．３３ｍｇ／坐剤
図１６において示されるように、概して、低用量でのＤＨＥＡの形態学的効果は、きちんと整列した円柱状の粘液細胞によって特徴付けられ、一方、高用量では、粘液細胞は、大型化（肥大）し、空胞化し、重層化する。本群において、ＤＨＥＡの効果は、切片２においてわずかに識別可能であり、きちんと整列し、かつ肥大化した粘液細胞が交互になっている切片３から４において徐々に増大する。ほぼきちんと整列した粘液細胞のみが観察され得る切片５および６において、ＤＨＥＡ効果は、ゆっくり減少する。効果は、切片７においては非常に小さく（子宮頚部の最初の部分を含む）切片８の外側の膣のひだは消失する。したがって、切片４において、膣上皮は、３から７個の細胞層を有する重層化した扁平上皮である。膣の裏打ちの約２０から６０％は、１つ以上の重層化した扁平上皮層を覆う、１５から５０％の肥大化した粘液細胞と粘液分泌されていない範囲とが交互になっ
ている、きちんと整列した粘液細胞からなる。切片６において、上皮の厚さは、ＯＶＸ無傷動物において見られる厚さまでほとんど減少する。それは、きちんと整列した粘液細胞の層によって覆われる２から５個の細胞層の重層化した扁平上皮からなる。粘液細胞の発生における大きな変化が観察され、これらの細胞は、粘液分泌されていない範囲と交互になって膣の表面の５から７５％にまで及ぶ。６匹の処置動物のうち４匹が、膣全体にわたって不均等に分布した軽度の炎症を示した。
【０１１５】
ＤＨＥＡ  ０．６６ｍｇ／坐剤
図１７において示されるように、この群において、ＤＨＥＡの効果は、切片２において識別可能であり、そして肥大化した粘液細胞の大部分が観察される切片３から４および５において有意に増加する。肥大化した粘液細胞の数は、細胞の大部分がきちんと整列した粘液細胞である切片６および７において減少する。従って、切片４において、重層化した扁平上皮は、３から６個の細胞層の厚さである。膣の裏打ちの約５から２０％は、１つ以上の重層化した扁平上皮層を覆う肥大化した粘液細胞の１０から７５％と交互になっているきちんと整列した粘液細胞からなる。粘液分泌されていない範囲もまた存在する。切片６において、上皮の厚さは減少し、２から４個の細胞層の重層化した扁平上皮からなり、きちんと整列した粘液細胞の層を載せている。粘液分泌された範囲の量は、粘液分泌されていない範囲と交互になって２０から８０％の膣の表面に変化した。６匹の処置動物のうち、２匹が３つの外部の切片において軽度の炎症を示した。
ＤＨＥＡ  １．００ｍｇ／坐剤
図１８において示されるように、この群において、ＤＨＥＡの効果はまた、切片２において識別可能であるが、肥大化した粘液細胞の広大な大部分が観察される切片３から４および５において有意に増加し、きちんと整列した粘液細胞の大部分が観察される切片６から７および８において非常にゆっくり減少する。従って、切片４において、重層化した扁平上皮は、３から９個の細胞層を表す。３から４個の扁平上皮細胞層を覆う肥大化した粘液細胞は、膣の表面の５０から７０％に及び、きちんと整列した粘液細胞は、膣の表面の５から３０％に及ぶ。粘液分泌されていない範囲は、粘液分泌された細胞の間に散在している。切片６において、上皮の厚さはまた減少し、２から４個の細胞層からなる。１から３個の扁平上皮細胞層を覆う肥大化した粘液細胞は、膣の表面の約３０から１００％に及び、きちんと整列した粘液細胞は、０から７０％に及ぶ。散在する粘液分泌されていない範囲はまた、ほとんど観察されない。６匹の処置動物のうち、４匹が４つの外部の切片において軽度の炎症を示した。
【０１１６】
結論
１．ラットの膣内の処置に使用される賦形剤は、所望の特徴を有する：
ａ．較正された型内で容易に調製される；
ｂ．微粉化したＤＨＥＡを完全に溶解することにより、標準化された用量を保証する優れた機能；
ｃ．膣の粘膜の重大な組織応答および形態学的変化がない：最初の３から４切片においてわずかな上皮の厚さの増大が観察されただけであり、これはおそらく、坐剤の挿入に伴う操作によるものである。
【０１１７】
２．ＤＨＥＡは、試験された最低の用量（０．３３ｍｇ／坐剤）で膣の上皮の形態に効果を発揮した。効果は、第３から第５切片において最大であり、徐々に減少し、第７切片のレベルで消失する。
【０１１８】
３．０．６６ｍｇ／坐剤のＤＨＥＡ用量で、第３切片において効果があり、第６切片においてかなり強力なままである。
【０１１９】
４．１．００ｍｇ／坐剤のＤＨＥＡ用量で、切片２から３から、子宮頚部に隣接する深
い膣のひだまで効果は強力である。
【０１２０】
医薬組成物の実施例
好ましい活性なＳＥＲＭであるアコルビフェン、好ましい活性な性ステロイド前駆体であるＤＨＥＡ、好ましいエストロゲンである１７β−エストラジオールまたはプレマリン、好ましい５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤であるシルデナフィルまたはタダラフィルを利用するいくつかの医薬組成物を下記に説明するが、これは、例示の目的であり、限定するものではない。活性成分の濃度は、本明細書中で議論されるような広範な範囲にわたって変化され得る。含まれ得る他の成分の量および型は、当該分野において周知である。
【０１２１】
実施例Ａ
【０１２２】
【表３】
2008516995.tif 000016
【０１２３】
実施例Ｂ
【０１２４】
【表４】
2008516995.tif 000017
【０１２５】
実施例Ｃ
【０１２６】
【表５】
2008516995.tif 000018
【０１２７】
実施例Ｄ
【０１２８】
【表６】
2008516995.tif 000019
【０１２９】
実施例Ｅ
【０１３０】
【表７】
2008516995.tif 000020
【０１３１】
実施例Ｆ
【０１３２】
【表８】
2008516995.tif 000021
【０１３３】
実施例Ｇ
【０１３４】
【表９】
2008516995.tif 000022
【０１３５】
実施例Ｈ
【０１３６】
【表１０】
2008516995.tif 000023
【０１３７】
実施例Ｉ
【０１３８】
【表１１】
2008516995.tif 000024
【０１３９】
実施例Ｊ
【０１４０】
【表１２】
2008516995.tif 000025
【０１４１】
実施例Ｋ
【０１４２】
【表１３】
2008516995.tif 000026
【０１４３】
実施例Ｌ
【０１４４】
【表１４】
2008516995.tif 000027
【０１４５】
ＤＨＥＡ坐剤は、Ｗｈｉｔｅｐｓｏｌ  Ｈ−１５基剤（Ｍｅｄｉｓｃａ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ、カナダ）を使用して調製される。他の任意の脂肪親和性の基剤（例えば、Ｆａｔｔｉｂａｓｅ、Ｗｅｃｏｂｅｅ、ココアバター、カカオ脂または他のＷｈｉｔｅｐｓｏｌ基剤の併用）が使用され得る。
【０１４６】
キットの実施例
好ましい活性なＳＲＥＭであるアコルビフェン、好ましい活性な性ステロイド前駆体であるＤＨＥＡ、好ましいエストロゲンである１７β−エストラジオールまたは抱合エストロゲン類、好ましい５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤であるシルデナフィルまたはタダラフィルを利用するいくつかのキットを下記に説明するが、これは、例示の目的であり、限定するものではない。活性成分の濃度は、本明細書中で議論されるような広範な範囲にわたって変化され得る。含まれ得る他の構成要素の量および型は、当該分野において周知である。
【０１４７】
実施例Ａ
ＳＥＲＭ、エストロゲン類および５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、経口的に投与され、性ステロイド前駆体は、局所的または経皮的に投与される。
【０１４８】
【表１５】
2008516995.tif 000028
【０１４９】
【表１６】
2008516995.tif 000029
【０１５０】
【表１７】
2008516995.tif 000030
【０１５１】
【表１８】
2008516995.tif 000031
【０１５２】
実施例Ｂ
ＳＥＲＭおよび性ステロイド前駆体は、経口投与される。
【０１５３】
【表１９】
2008516995.tif 000032
【０１５４】
【表２０】
2008516995.tif 000033
【０１５５】
他の性ステロイド阻害剤がＤＨＥＡに置換され得、他のエストロゲン類がプレマリンに置換され得、他の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤がシルデナフィルもしくはタダラフィルに、またはプロスタグランジンＥ１によって置換され得るのと同様に、他のＳＥＲＭ（トレミフェン、オスペミフェン、ラロキシフェン、アルゾキシフェン、ラソフォキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＥＲＡ−９２３、ＥＭ−８００、ＳＥＲＭ３３３９、ＧＷ−５６３８）は、上記の処方物において、アコルビフェンに置換され得る。１個より多いＳＥＲＭまたは１個より多い前駆体もしくはエストロゲン類もしくは５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、組み合わせた重量パーセントが、好ましくは上記の実施例において与えられた単一の前駆体または単一のＳＥＲＭについての重量パーセントである場合に含まれ得る。
【０１５６】
本発明は、好ましい実施形態および実施例に関して説明するが、これによって限定されない。当業者は、より広範な適用性および特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を容易に認識し得る。
【図面の簡単な説明】
【０１５７】
【図１】図１は、ラット膣の長手方向の軸に沿って、外部の口（小孔）（切片１）から子宮頚部レベル（切片７）（子宮膣部）までの７つの断面切片への分割を示す。
【図２】図２は、ラットの９群の切片５の膣上皮の組織形態を示す。（Ｊ）における棒線は、４０μｍである。図２Ａは、エストロゲン効果の典型として、発情周期に入っているラットの発情期における重層化した扁平上皮は、４つの主な層からなる：１つの細胞層の基底層（ｂ）、６から７個細胞層の有棘層（ｓ）および固く詰められた、平板化し、角化した細胞によって作られる角質層（ｃ）によって覆われる５から６層の顆粒層（ｇ）。図２Ｂは、エストロゲン−プロゲステロンの影響下である発情周期に入っている発情前期のラットが、粘液分泌を説明するために使用される。切片２から７のほとんどにおいて、１つの基底細胞層（ｂ）が、５から６個の細胞層の有棘層（ｓ）および３から４層の粘液細胞からなる粘液層（ｍ）によって覆われていた。図２Ｃは、ＯＶＸコントロールにおいて、基底細胞層（ｂ）は、萎縮性の立方状の細胞の層（ａ）によって覆われていた。図２Ｄは、アコルビフェンの１日あたりの経口用量（２．５ｍｇ／ｋｇ）で処置されたＯＶＸラットの膣上皮は、基底細胞層（ｂ）を覆う薄い円柱状の粘液細胞の外側の層（ｍ）を伴うが、萎縮を示す。図２Ｅは、プレマリンの１日あたりの経口用量（０．５ｍｇ／ｋｇ）で処置されたＯＶＸラットの膣上皮。ＯＶＸ誘導の萎縮は、発情期において見られたパターンと同程度のエストロゲンのパターンで置換されていた。図２Ｆは、プレマリン＋アコルビフェンを投与されたＯＶＸ動物において、より大きな粘液細胞が見られたが、萎縮はアコルビフェン処置動物の形態と同様の形態が優勢であった。図２Ｇは、１日に１回、背側の皮膚２×２ｃｍの範囲へのＤＨＥＡの皮膚適用（８０ｍｇ／ｋｇ）によるＯＶＸ動物の処置後、３から５層の粘液細胞（ｍ）から作られる肥厚性上皮が、基底層（ｂ）を覆っているのが見られた。いくつかの陥入は、この上皮を特徴付けた（矢印）。図２Ｈは、ＤＨＥＡ＋アコルビフェン処置動物の膣上皮のほとんどの範囲において、粘液細胞の層（ｍ）は、基底細胞層（ｂ）上にあり、いくつかの範囲において、粘液細胞の多くの層は、基底細胞層を覆っていた。いくつかの陥入は、この上皮を特徴付けた（矢印）。図２Ｉは、３匹の動物において、ＤＨＥＡ＋プレマリンを用いた処置により、３から５層の粘液細胞（ｍ）によって覆われる３から７個の細胞層の厚さの重層化した扁平上皮（ｓ）から構成される混合上皮が生じた。２匹の動物において、重層化した扁平上皮の範囲は、優勢であった（挿入）。書き込まれた棒線は、３０μｍである。図２Ｊは、ＤＨＥＡ、プレマリンおよびアコルビフェンが併用されたとき、上皮は、ＤＨＥＡ＋アコルビフェン群の上皮と同様であった。
【図３】図３は、ＯＶＸ動物の膣の粘膜を示す。（Ａ）においては、上皮内の微小膿瘍（Ｍ）を伴う病巣の白血球浸潤によって特徴付けられる重度の炎症変化を示し、（Ｂ）においては、上皮の完全な消失（ｄｉｓｅａｐｐｅａｒａｎｃｅ）として可視化される減少した上皮の厚さおよび潰瘍化（Ｕ）によって特徴付けられる病巣の侵食（Ｅ）を示す。
【図４】膣上皮が裏打ちされた切片１（外部開口部）におけるアコルビフェンのエストロゲン様効果を図解するために、関連する群との比較を行う。発情期の無処置ラット（Ａ）およびプレマリン処置（Ｄ）動物において、上皮は、１０から１５層の厚さであり、角質化されていた。ＯＶＸコントロール（Ｂ）において、上皮の厚さは、４から６層に減少し、おおむね角質化していなかった（顆粒層は存在しないことを参照のこと）。一方、アコルビフェン処置動物（Ｃ）において、厚さは、９から１１層に回復していて、角質化していた。
【図５Ａ】図５Ａは、ラット膣の第５切片のレベルで３つの異なる膣の区画の厚さ（μｍ）：ＤＨＥＡ、プレマリンおよびアコルビフェンを単独または併用した処置の３６週間後のＯＶＸ動物の上皮を示す。発情期および発情前期の無処置動物を、基準のコントロールとして加えられる。同じ文字を共有する群は、ｐ＜０．０５で統計的に差がない。
【図５Ｂ】図５Ｂは、ラット膣の第５切片のレベルで３つの異なる膣の区画の厚さ（μｍ）：ＤＨＥＡ、プレマリンおよびアコルビフェンを単独または併用した処置の３６週間後のＯＶＸ動物の固有層を示す。発情期および発情前期の無処置動物を、基準のコントロールとして加えられる。同じ文字を共有する群は、ｐ＜０．０５で統計的に差がない。
【図５Ｃ】図５Ｃは、ラット膣の第５切片のレベルで３つの異なる膣の区画の厚さ（μｍ）：ＤＨＥＡ、プレマリンおよびアコルビフェンを単独または併用した処置の３６週間後のＯＶＸ動物の筋層を示す。発情期および発情前期の無処置動物を、基準のコントロールとして加えられる。同じ文字を共有する群は、ｐ＜０．０５で統計的に差がない。
【図５Ｄ】図５Ｄは、ラット膣の第５切片のレベルで３つの異なる膣の区画の厚さ（μｍ）：ＤＨＥＡ、プレマリンおよびアコルビフェンを単独または併用した処置の３６週間後のＯＶＸ動物の全体の厚さを示す。発情期および発情前期の無処置動物を、基準のコントロールとして加えられる。同じ文字を共有する群は、ｐ＜０．０５で統計的に差がない。
【図６】図６は、固有層のコラーゲン線維の密集度を示し、切片５において低い（Ａ）、中程度（Ｂ）または高い（Ｃ）として図解される。
【図７】図７は、様々な群における相対的な筋層の厚さを強調して、ラット膣の第５切片のレベルにおける３つの膣の区画：（Ｅ）上皮、（Ｌ）固有層および（Ｍ）筋層のマイクロ写真を示す。棒線による３つの膣壁の層の分離は、様々な群の間の厚さの分布を最良に推定するために示される。Ａ）無処置、Ｂ）ＯＶＸおよびＣ）アコルビフェンで処置したＯＶＸ、Ｄ）プレマリンで処置したＯＶＸ、Ｅ）プレマリン＋アコルビフェンで処置したＯＶＸ、Ｆ）ＤＨＥＡで処置したＯＶＸ、Ｇ）ＤＨＥＡ＋アコルビフェンで処置したＯＶＸ、Ｈ）ＤＨＥＡ＋プレマリンで処置したＯＶＸ、Ｉ）ＤＨＥＡ＋プレマリン＋アコルビフェンで処置したＯＶＸ。
【図８】図８は、ＯＶＸならびにアコルビフェン、プレマリンおよびＤＨＥＡを単独または併用した処置の３６週間後に計測したＯＶＸ動物の膣重量を示す。無処置動物は、コントロールとして加えられた。
【図９Ａ】図９Ａは、様々な群の第５の膣の切片のレベルにおける、（Ｅ）上皮、（Ｌ）固有層および（Ｍ）筋層におけるＡＲの免疫組織化学的局在を示す。棒線は、３つの膣の区画の間の分離を示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、様々な群の第５の膣の切片のレベルにおける、（Ｅ）上皮、（Ｌ）固有層および（Ｍ）筋層におけるＥＲαの免疫組織化学的局在を示す。棒線は、３つの膣の区画の間の分離を示す。
【図９Ｃ】図９Ｃは、様々な群の第５の膣の切片のレベルにおける、（Ｅ）上皮、（Ｌ）固有層および（Ｍ）筋層におけるＰＲの免疫組織化学的局在を示す。棒線は、３つの膣の区画の間の分離を示す。
【図１０】図１０は、様々なＳＥＲＭの間の比較を示す：ラットにおける膣の上皮の形態。
【図１１】図１１は、様々なＳＥＲＭの間の比較を示す：ラットにおける膣の上皮の形態。
【図１２】図１２は、８つの膣の切片（上の列全ておよび右下角の切片）の位置決めを表す顕微鏡スライドの写真を示し、続いて元の解剖学的位置に対応する配列で、４つの子宮切片（子宮頚部の１つの切片および２つの子宮角の３つの切片（１つの子宮角あたり２つの切片））を示す。切片８は、子宮頚部の先頭部分に隣接する外側の膣のひだを含む。
【図１３】図１３は、無処置ラットの効果を示す。発情期（左欄）では、膣上皮は、切片４において１２から１８層の厚さであり、切片６においては１２から１５層の厚さである。発情後期（右欄）では、膣上皮は、切片４において６から１０個の細胞層を示し、切片６においては５から７層を表す。
【図１４】図１４は、卵巣切除した無傷ラットの効果を示す。切片４において、膣は、２から６個の細胞層の重層化した扁平上皮によって裏打ちされている。切片６において、完全な萎縮が平らな２から３個の細胞層とともに観察される。小型の円柱状の粘液細胞いくつかの珍しい病巣は、膣全体にわたって見られた。
【図１５】図１５は、プラセボ／坐剤の効果を示す。ＯＶＸ無傷群と比較して、プラセボ群の膣の重層化した扁平上皮は、わずかに厚く、切片４では４から８個の細胞層を表した。切片６において、ＯＶＸ無傷群と同じ形態が、２から３個の上皮の細胞層とともに観察された。小型の円柱状の粘液細胞の病巣は、ＯＶＸ無傷動物と比較されるとき、膣のいたるところでわずかに多く見られた。
【図１６】図１６は、ＤＨＥＡ  ０．３３ｍｇ／坐剤の効果を示す。切片４において、膣上皮は、３から７個の細胞層を有する重層化した扁平上皮である。膣の裏打ちの約２０から６０％は、１つ以上の重層化した扁平上皮層を覆う１５から５０％の肥大化した粘液細胞と粘液分泌されていない範囲とが交互になった、きちんと整列した粘液細胞からなる。切片６において、上皮の厚さは、ＯＶＸ無傷動物において見られた厚さ：円柱状の粘液細胞によって覆われた２から５個の細胞層までほぼ減少した。粘液細胞の発生における大きな変化が観察された。これらの細胞は、粘液分泌されていない範囲と交互に膣の表面の５から７５％にまで及ぶ。
【図１７】図１７は、ＤＨＥＡ  ０．６６ｍｇ／坐剤の効果を示す。切片４において、重層化した扁平上皮は、３から６個の細胞層の厚さである。膣の裏打ちの約５から２０％は、１つ以上の重層化した扁平上皮層を覆う１０から７５％の肥大化した粘液細胞と交互になったきちんと整列した粘液細胞からなる。粘液分泌されていない上皮の範囲もまた、存在する。切片６において、上皮の厚さは減少し、２から４個の細胞層の重層化した扁平上皮からなり、きちんと整列した粘液細胞の層を載せている。粘液分泌された範囲は、粘液分泌されていない範囲と交互に膣の表面の２０から８０％に変化した。
【図１８】図１８は、ＤＨＥＡ  １ｍｇ／坐剤の効果を示す。切片４において、重層化した扁平上皮は、３から９個の細胞層を表す。３から４個の扁平上皮細胞層を覆う肥大化した粘液細胞は、膣の表面の５０から７０％に及び、きちんと整列した粘液細胞は、膣の表面の５から３０％を裏打ちする。粘液分泌されていない範囲は、粘液分泌された細胞の間に散在する。切片６において、上皮の厚さはまた、減少し、２から４個の細胞層からなる。１から３個の扁平上皮細胞層を覆う肥大化した粘液細胞は、膣の表面の約３０から１００％に及び、きちんと整列した粘液細胞は、０から７０％に及ぶ。散在した粘液分泌されていない範囲はまた、少ししか観察されない。
【図１９】図１９は、ＯＶＸラットにおいて膣内に適用されたＤＨＥＡ（坐剤）での処置１４日目の体重に対する効果のグラフである。プラセボ群と比較して、０．３３ｍｇおよび０．６６ｍｇの用量でＤＨＥＡを与えた群の体重は、わずかに減少し、その減少は、１ｍｇ群においてより顕著であった。
【図２０】図２０は、ＯＶＸラットへ０．３３ｍｇ、０．６６ｍｇまたは１ｍｇの膣内適用後のＤＨＥＡの血清濃度のグラフである。ＤＨＥＡをそれぞれ０．３３ｍｇ、０．６６ｍｇまたは１ｍｇの用量で与えたとき、ＤＨＥＡ処置の７時間後の曲線値より下の範囲（ＡＵＣ）は、３２±４ｎｇ・ｈ／ｍｌ、５０±７ｎｇ・ｈ／ｍｌおよび１３１±２３ｎｇ・ｈ／ｍｌであった。
【図１】
2008516995.tif 000043
【図２】
2008516995.tif 000044
【図３】
2008516995.tif 000045
【図４】
2008516995.tif 000046
【図５Ａ】
2008516995.tif 000047
【図５Ｂ】
2008516995.tif 000048
【図５Ｃ】
2008516995.tif 000049
【図５Ｄ】
2008516995.tif 000050
【図６】
2008516995.tif 000051
【図７】
2008516995.tif 000052
【図８】
2008516995.tif 000053
【図９Ａ】
2008516995.tif 000054
【図９Ｂ】
2008516995.tif 000055
【図９Ｃ】
2008516995.tif 000056
【図１０−１】
2008516995.tif 000057
【図１０−２】
2008516995.tif 000058
【図１１】
2008516995.tif 000059
【図１２】
2008516995.tif 000060
【図１３】
2008516995.tif 000061
【図１４】
2008516995.tif 000062
【図１５】
2008516995.tif 000063
【図１６】
2008516995.tif 000064
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年8月18日(2006.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
閉経後の女性において膣の固有層および／または筋層に影響を及ぼす問題を得る可能性を処置または低減する方法であって、前記処置を必要とする患者にデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体を投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを、癌に対する子宮および乳腺の保護のために投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータがアコルビフェンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
併用療法の一部として、治療的有効量のエストロゲンを前記患者に投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量のエストロゲンおよび治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを、癌に対する子宮および乳腺の保護のために投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータがアコルビフェンである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
膣の疾患または問題が、膣乾燥、萎縮性膣炎、膣のかゆみ、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、膣の萎縮、萎縮性膣炎、性交疼痛症
および性機能障害からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、膣の萎縮、萎縮性膣炎、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、萎縮性膣炎、膣の萎縮、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
閉経後の女性において膣壁の固有層のコラーゲン線維の密集度を増加させる方法であって、前記処置を必要とする患者にデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体を投与する工程を含む、方法。
【請求項１２】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを、癌に対する子宮および乳腺の保護のために投与する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量のエストロゲンを投与する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量のエストロゲンおよび治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを投与する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
閉経後の女性において膣壁の筋層（ｍｕｓｃａｒａｌｉｓ）の厚さを増大させる方法であって、前記処置を必要とする患者にデヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体を投与する工程を含む、方法。
【請求項１６】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを、癌に対する子宮および乳腺の保護のために投与する工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量のエストロゲンを投与する工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量のエストロゲンおよび治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを投与する工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
閉経後の女性において性機能障害を得る可能性を処置または低減する方法であって、前記処置を必要とする前記患者に治療有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを投与する工程、および併用療法の一部として前記患者に治療有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンを投与する工程をさらに含む、方法。
【請求項２０】
閉経後の女性において性機能障害を得る可能性を処置または低減する方法であって、前記処置を必要とする前記患者に、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロス
テン−３，１７−ジオンからなる群から選択される治療的有効量の性ステロイド前駆体を投与する工程、および併用療法の一部として前記患者に治療有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンを投与する工程をさらに含む、方法。
【請求項２１】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを投与する工程をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量のエストロゲンを投与する工程をさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記性ステロイド前駆体が硫酸デヒドロエピアンドロステロンである、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記性ステロイド前駆体がアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールである、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤が、シルデナフィル（ｌ−［［３−（４，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジン）、タダラフィル（６Ｒ，１２ａＲ）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチルピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン、ＤＡ−８１５９、ＥＭＲ−６２２０３、ＴＡ−１７９０、ＵＫ−３７１８００およびＳＣＨ−４４６１３２からなる群から選択される、請求項１９から２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記プロスタグランジンが、プロスタグランジンＥ１（アルプロスタジル；（ｌｌα，１３Ｅ，１５Ｓ）−ｌｌ，１５−ジヒドロキシ−９−オキソプロスタ−１３−エン−１−酸））である、請求項１９から２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記性ステロイド前駆体が膣内に投与される、請求項１、２から６、１１から１８および２０から２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記性ステロイド前駆体が、経口的または経皮的に投与される、請求項１から６、１１から１８および２０から２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、経口的、経皮的または膣内に投与される、請求項２、３、５、６、１２、１４、１６、１８、１９、２１および２２に記載の方法。
【請求項３１】
閉経後の女性における萎縮性膣炎または膣萎縮を処置する方法であって、このような処置を必要とする患者に選択的エストロゲン受容体モジュレータと関連して、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよびアンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体を投与する工程を含む、方法。
【請求項３２】
併用療法の一部として、前記患者に治療的有効量のエストロゲンを投与する工程をさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ステロイド前駆体および前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、膣内、経口的または経皮的に投与される、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、
前述の請求項２、３、５、１２、１４、１６、１８、１９、２１、２２または３０から３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが以下の式：
【化１】
2008516995.tif 000069
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物または医薬的に許容可能なそれらの塩であり、前記化合物は、分子構造：
【化２】
2008516995.tif 000070
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが：
【化３】
2008516995.tif 000071
である、前述の請求項１２、１４、１６、１８、１９、２１、２２または３０から３３のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）酒石酸塩（ラソフォキシフェン）からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項２から
６、１１から１８、２０から２２、２８、２９または３１から３３のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β、１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
を含む、膣適用のための医薬組成物。
【請求項４３】
少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
少なくとも１つの治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン；およびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体および
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤
を含む、医薬組成物。
【請求項４６】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤および
ｄ）治療的有効量の１つの選択的エストロゲン受容体モジュレータ
を含む、医薬組成物。
【請求項４７】
前記賦形剤、希釈剤または担体がゲルである、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
この医薬組成物が、坐剤または卵である、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、
前述の請求項４３または４４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化４】
2008516995.tif 000072
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項４３または４４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物または医薬的に許容可能なそれらの塩であり、前記化合物は、分子構造：
【化５】
2008516995.tif 000073
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項４３または４４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項５１に記
載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、
【化６】
2008516995.tif 000074
である、前述の請求項４３または４４に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）酒石酸塩（ラソフォキシフェン）である、請求項４３または４６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項４２から５５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５７】
プロスタグランジンＥ１，シルデナフィルおよびタダラフィルまたは同様の活性を有する化合物からなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を含む第１の容器を備え、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体を含む第２の容器をさらに備える、キット。
【請求項５８】
デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体を含む第１の容器を備え、少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを含む第２の容器および少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンＥ１を含む第３の容器をさらに備える、キット。
【請求項５９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備える分子式を有する、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化７】
2008516995.tif 000075
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物または医薬的に許容可能なそれらの塩であり、該化合物は、分子構造：
【化８】
2008516995.tif 000076
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項５９に記載のキット。
【請求項６２】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項６１に記載のキット。
【請求項６４】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが：
【化９】
2008516995.tif 000077
である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６５】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−（４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）−酒石酸塩（ラソフォキシフェン）からなる群から選択される、請求項５８に記載のキット。
【請求項６６】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項５７から６５のいずれかに記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５６
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正書】
【提出日】平成19年1月2日(2007.1.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４２】
ａ）膣の粘膜への適用に適当な医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β、１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
を含む、膣適用のための医薬組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成19年12月18日(2007.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
閉経後の女性において膣の固有層および／または筋層に影響を及ぼす問題を得る可能性を処置または低減するために用いられるキットの製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用。
【請求項２】
前記キットが、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータがアコルビフェンである、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲン、ならびに、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータがアコルビフェンである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
膣の疾患または問題が、膣乾燥、萎縮性膣炎、膣のかゆみ、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、膣の萎縮、萎縮性膣炎、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項２に記載の使用。
【請求項９】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、膣の萎縮、萎縮性膣炎、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項１０】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、萎縮性膣炎、膣の萎縮、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項５に記載の使用。
【請求項１１】
閉経後の女性において膣壁の固有層のコラーゲン線維の密集度を増加させるために用いられるキットの製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用。
【請求項１２】
前記キットが、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲン、ならびに、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１５】
経後の女性において膣壁の筋層（ｍｕｓｃａｒａｌｉｓ）の厚さを増大させるために用いられるキットの製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用。
【請求項１６】
前記キットが、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲン、ならびに、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
閉経後の女性において性機能障害を得る可能性を処置または低減するために用いられるキットの製造における、選択的エストロゲン受容体モジュレータ、ならびに、５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンの使用。
【請求項２０】
閉経後の女性において性機能障害を得る可能性を処置または低減するために用いられるキットの製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体、ならびに、５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンの使用。
【請求項２１】
前記キットが、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項１に記載の使用。
【請求項２４】
前記性ステロイド前駆体が硫酸デヒドロエピアンドロステロンである、請求項１に記載の使用。
【請求項２５】
前記性ステロイド前駆体がアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールである、請求項１に記載の使用。
【請求項２６】
前記５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤が、シルデナフィル（ｌ−［［３−（４，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジン）、タダラフィル（６Ｒ，１２ａＲ）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチルピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン、ＤＡ−８１５９、ＥＭＲ−６２２０３、ＴＡ−１７９０、ＵＫ−３７１８００およびＳＣＨ−４４６１３２からなる群から選択される、請求項１９から２２に記載の使用。
【請求項２７】
前記プロスタグランジンが、プロスタグランジンＥ１（アルプロスタジル；（ｌｌα，１３Ｅ，１５Ｓ）−ｌｌ，１５−ジヒドロキシ−９−オキソプロスタ−１３−エン−１−酸））である、請求項１９から２２に記載の使用。
【請求項２８】
前記性ステロイド前駆体が膣内に投与される、請求項１から６、１１から１８および２０から２２に記載の使用。
【請求項２９】
前記性ステロイド前駆体が、経口的または経皮的に投与される、請求項１から６、１１から１８および２０から２２に記載の使用。
【請求項３０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、経口的、経皮的または膣内に投与される、請求項２、３、５、６、１２、１４、１６、１８、１９、２１および２２に記載の使用。
【請求項３１】
閉経後の女性における萎縮性膣炎または膣萎縮を処置するために用いられるキットの製造における、選択的エストロゲン受容体モジュレータ、ならびに、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよびアンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用。
【請求項３２】
前記キットが、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記ステロイド前駆体および前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、膣内、経口的または経皮的に投与される、請求項３１または３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、
前述の請求項２、３、５、１２、１４、１６、１８、１９、２１、２２または３０から３３のいずれかに記載の使用。
【請求項３５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが以下の式：
【化１】
2008516995.tif 000078
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物またはキット的に許容可能なそれらの塩であり、前記化合物は、分子構造：
【化２】
2008516995.tif 000079
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項３４に記載の使用。
【請求項３７】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項３６に記
載の使用。
【請求項３８】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項３６に記載の使用。
【請求項３９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが：
【化３】
2008516995.tif 000080
である、前述の請求項１２、１４、１６、１８、１９、２１、２２または３０から３３のいずれかに記載の使用。
【請求項４０】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）酒石酸塩（ラソフォキシフェン）からなる群から選択される、請求項３４に記載の使用。
【請求項４１】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項２から６、１１から１８、２０から２２、２８、２９または３１から３３のいずれかに記載の使用。
【請求項４２】
ａ）膣の粘膜への適用に適当な医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β、１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
を含む、膣適用のための医薬組成物。
【請求項４３】
少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
少なくとも１つの治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン；およびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体および
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤
を含む、医薬組成物。
【請求項４６】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤および
ｄ）治療的有効量の１つの選択的エストロゲン受容体モジュレータ
を含む、医薬組成物。
【請求項４７】
前記賦形剤、希釈剤または担体がゲルである、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
この医薬組成物が、坐剤または卵である、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、
前述の請求項４３または４４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化４】
2008516995.tif 000081
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項４３または４４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物または医薬的に許容可能なそれらの塩であり、前記化合物は、分子構造：
【化５】
2008516995.tif 000082
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項４３または４４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、
【化６】
2008516995.tif 000083
である、前述の請求項４３または４４に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）酒石酸塩（ラソフォキシフェン）である、請求項４３または４６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項４２から５５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５７】
プロスタグランジンＥ１，シルデナフィルおよびタダラフィルまたは同様の活性を有する化合物からなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を含む第１の容器を備え、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体を含む第２の容器をさらに備える、キット。
【請求項５８】
デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体を含む第１の容器を備え、少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを含む第２の容器および少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンＥ１を含む第３の容器をさらに備える、キット。
【請求項５９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備える分子式を有する、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化７】
2008516995.tif 000084
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ１００は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物またはキット的に許容可能なそれらの塩であり、該化合物は、分子構造：
【化８】
2008516995.tif 000085
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項５９に記載のキット。
【請求項６２】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項６１に記載のキット。
【請求項６４】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが：
【化９】
2008516995.tif 000086
である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６５】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−（４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）−酒石酸塩（ラソフォキシフェン）からなる群から選択される、請求項５８に記載のキット。
【請求項６６】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、前述の請求項５７から６５のいずれかに記載のキット。
【手続補正書】
【提出日】平成20年3月25日(2008.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
閉経後の女性において膣の固有層および／または筋層に影響を及ぼす問題を得る可能性を処置または低減するために用いられる薬剤の製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用であって、当該処置が、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、性ステロイド前駆体の使用。
【請求項２】
閉経後の女性において膣の固有層および／または筋層に影響を及ぼす問題を得る可能性を処置または低減するために用いられる薬剤の製造における、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータの使用であって、当該処置が、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体をさらに含む、選択的エストロゲン受容体モジュレータの使用。
【請求項３】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータがアコルビフェンである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記薬剤が、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項１または２に記載の使用。
【請求項５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータがアコルビフェンである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項６】
膣の疾患または問題が、膣乾燥、萎縮性膣炎、膣のかゆみ、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、膣の萎縮、萎縮性膣炎、性交疼痛症
および性機能障害からなる群から選択される、請求項２に記載の使用。
【請求項８】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、膣の萎縮、萎縮性膣炎、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項９】
前記膣の疾患または問題が、膣乾燥、膣のかゆみ、萎縮性膣炎、膣の萎縮、性交疼痛症および性機能障害からなる群から選択される、請求項５に記載の使用。
【請求項１０】
閉経後の女性において膣壁の固有層のコラーゲン線維の密集度を増加させるために用いられる薬剤の製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用であって、当該処置が、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、性ステロイド前駆体の使用。
【請求項１１】
閉経後の女性において膣壁の固有層のコラーゲン線維の密集度を増加させるために用いられる薬剤の製造における、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータの使用であって、当該処置が、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体をさらに含む、選択的エストロゲン受容体モジュレータの使用。
【請求項１２】
前記薬剤が、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項１０または１１に記載の使用。
【請求項１３】
閉経後の女性において膣壁の筋層（ｍｕｓｃａｒａｌｉｓ）の厚さを増大させるために用いられる薬剤の製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用であって、当該処置が、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、性ステロイド前駆体の使用。
【請求項１４】
閉経後の女性において膣壁の筋層（ｍｕｓｃａｒａｌｉｓ）の厚さを増大させるために用いられる薬剤の製造における、癌に対する子宮および乳腺の保護のための治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータの使用であって、当該処置が、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体をさらに含む、選択的エストロゲン受容体モジュレータの使用。
【請求項１５】
前記薬剤が、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項１３または１４に記載の使用。
【請求項１６】
閉経後の女性において性機能障害を得る可能性を処置または低減するために用いられる薬剤の製造における、選択的エストロゲン受容体モジュレータ、ならびに、５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンの使用であって、当該処置が、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体をさらに含む、選択的エストロゲン受容体モジュレータの使用。
【請求項１７】
閉経後の女性において性機能障害を得る可能性を処置または低減するために用いられる薬剤の製造における、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび４−アンドロステン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用であって、当該処置が、選択的エストロゲン受容体モジュレータ、ならびに、５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンをさらに含む、性ステロイド前駆体の使用。
【請求項１８】
前記薬剤が、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項１６または１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２０】
前記性ステロイド前駆体が硫酸デヒドロエピアンドロステロンである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２１】
前記性ステロイド前駆体がアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２２】
前記５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤が、シルデナフィル（ｌ−［［３−（４，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジン）、タダラフィル（６Ｒ，１２ａＲ）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチルピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン、ＤＡ−８１５９、ＥＭＲ−６２２０３、ＴＡ−１７９０、ＵＫ−３７１８００およびＳＣＨ−４４６１３２からなる群から選択される、請求項１６〜２２のいずれかに記載の使用。
【請求項２３】
前記プロスタグランジンが、プロスタグランジンＥ１（アルプロスタジル；（ｌｌα，１３Ｅ，１５Ｓ）−ｌｌ，１５−ジヒドロキシ−９−オキソプロスタ−１３−エン−１−酸））である、請求項１６〜２２のいずれかに記載の使用。
【請求項２４】
前記性ステロイド前駆体が膣内に投与される、請求項１〜５、１０〜１５、１７、１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２５】
前記性ステロイド前駆体が、経口的または経皮的に投与される、請求項１〜５、１０〜１５、１７、１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、経口的、経皮的または膣内に投与される、請求項２、３、５、１１、１４、１６および１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２７】
閉経後の女性における萎縮性膣炎または膣萎縮を処置するために用いられる薬剤の製造における、選択的エストロゲン受容体モジュレータ、ならびに、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールおよびアンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンからなる群から選択される性ステロイド前駆体の使用
【請求項２８】
前記薬剤が、治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記ステロイド前駆体および前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、膣内、経
口的または経皮的に投与される、請求項２７または２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、
請求項２、３、１１、１４、１６、１８、２６−２９のいずれかに記載の使用。
【請求項３１】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが以下の式：
【化１】
2008516995.tif 000087
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ100は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物またはキット的に許容可能なそれらの塩であり、前記化合物は、分子構造：
【化２】
2008516995.tif 000088
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状
部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項３０に記載の使用。
【請求項３３】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが：
【化３】
2008516995.tif 000089
である、請求項１１、１４、１６、１８、２６〜２９のいずれか記載の使用。
【請求項３６】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）酒石酸塩（ラソフォキシフェン）からなる群から選択される、請求項３０に記載の使用。
【請求項３７】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項２〜５、１０〜１５、１７、１８、２４、２５、２７〜２９のいずれかに記載の使用。
【請求項３８】
ａ）膣の粘膜への適用に適当な医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト−５−エン−３β、１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
を含む、膣適用のための医薬組成物。
【請求項３９】
少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータをさらに含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
少なくとも１つの治療的有効量のエストロゲンをさらに含む、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン；およびアンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体および
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤
を含む、医薬組成物。
【請求項４２】
ａ）医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体；
ｂ）デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体
ｃ）少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤および
ｄ）治療的有効量の１つの選択的エストロゲン受容体モジュレータ
を含む、医薬組成物。
【請求項４３】
前記賦形剤、希釈剤または担体がゲルである、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
この医薬組成物が、坐剤または卵である、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備えた分子式を有する、
請求項３９または４０に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化４】
2008516995.tif 000090
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ100は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項３９または４０に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物または医薬的に許容可能なそれらの塩であり、前記化合物は、分子構造：
【化５】
2008516995.tif 000091
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ2−Ｃ6アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項３９または４０に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、
【化６】
2008516995.tif 000092
である、請求項３９または４０に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）酒石酸塩（ラソフォキシフェン）である、請求項３９または４２に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項３８〜５１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５３】
プロスタグランジンＥ１，シルデナフィルおよびタダラフィルまたは同様の活性を有する化合物からなる群から選択される少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホ
ジエステラーゼ阻害剤を含む第１の容器を備え、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体を含む第２の容器をさらに備える、キット。
【請求項５４】
デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロスト−５−エン−３β，１７β−ジオールからなる群から選択される、少なくとも１つの治療的有効量の性ステロイド前駆体を含む第１の容器を備え、少なくとも１つの治療的有効量の選択的エストロゲン受容体モジュレータを含む第２の容器および少なくとも１つの治療的有効量の５型ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤またはプロスタグランジンＥ１を含む第３の容器をさらに備える、キット。
【請求項５５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の特徴：
ａ）１から２個の介在炭素原子によって離間される２つの芳香環であって、両方の芳香環が置換されていないか、またはヒドロキシル基もしくはインビボでヒドロキシルに変換される基によって置換されている；
ｂ）芳香環および第三級アミン官能基またはそれらの塩を有する側鎖
を備える分子式を有する、請求項５４に記載のキット。
【請求項５６】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、以下の式：
【化７】
2008516995.tif 000093
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して水素、ヒドロキシルまたはインビボでヒドロキシルに変換される部分であり；
Ｚは、２価の閉環部分であり；
Ｒ100は、４から１０個の介在原子によってＢ環からＬを離す２価の部分であり；
Ｌは、−ＳＯ−、−ＣＯＮ−、−Ｎ＜および−ＳＯＮ＜の群から選択される２価または３価の極性部分であり；
Ｇ１は、水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ２およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ２は、存在しないか、あるいは水素、Ｃ１からＣ５炭化水素、または５から７員の複素環および前述のハロもしくは不飽和誘導体を形成するためにＧ１およびＬを結合する２価の部分からなる群から選択され、
Ｇ３は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される）
を有する、請求項５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが、２位の炭素に絶対配置Ｓを有する光学活性化合物またはキット的に許容可能なそれらの塩であり、該化合物は、分子構造：
【化８】
2008516995.tif 000094
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立してヒドロキシルおよびインビボでヒドロキシルに変換可能な部分からなる群から選択され；
Ｒ３は、飽和、不飽和または置換ピロリジニル、飽和、不飽和または置換ピペリジノ、飽和、不飽和または置換ピペリジニル、飽和、不飽和または置換モルホリノ、窒素含有環状部分、窒素含有多環状部分およびＮＲａＲｂからなる群から選択される化学種である（ＲａおよびＲｂは、独立して水素、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ2−Ｃ6アルケニルおよび直鎖または分岐鎖のＣ２−Ｃ６アルキニルである）
を有する、請求項５５に記載のキット。
【請求項５８】
前記化合物または塩が、実質的に（２Ｒ）−鏡像異性体を欠いている、請求項５７に記載のキット。
【請求項５９】
前記ベンゾピラン誘導体が、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、フマル酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、ヒドロクロロチアジド酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、メチル硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、パルミチン酸、ピバル酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、テレフタル酸、ｐ−トルエンスルホン酸および吉草酸からなる群から選択される酸の塩である、請求項５７に記載のキット。
【請求項６０】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレータが：
【化９】
2008516995.tif 000095
である、請求項５４に記載のキット。
【請求項６１】
前記化合物が、（−）−シス−（５Ｒ，６Ｓ）−６−フェニル−５−（４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール、Ｄ−（−）−酒石酸塩（ラソフォキシフェン）からなる群から選択される、請求項５４に記載のキット。
【請求項６２】
前記性ステロイド前駆体がデヒドロエピアンドロステロンである、請求項５３〜６１のいずれかに記載のキット。
【国際調査報告】
2008516995.tif 000096
2008516995.tif 000097
2008516995.tif 000098
2008516995.tif 000099
2008516995.tif 000100