(57)【要約】本発明は人類と関連したＰｏｒｃｕｐｉｎｅ（ＰＰＮ）／ＭＧ６１の水準に対して、進行した比較性検査及び応用、Ｐｏｒｃｕｐｉｎｅ（ＰＰＮ）／ＭＧ６１蛋白質は膜結合でできたＯ−酸基前の酵素の家族構成員の一員であり、それは果蝿過激遺伝子Ｐｏｒｃｕｐｉｎｅ（Ｐｏｒｃ）の人類同源のものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
人類のＰＰＮ／ＭＧ６１の表現と酵素水準を測定するのに使われる一種の方法で、この方法には下記のような何種類が含まれる：
（ａ）一種の人類ＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物と人類細胞が接触して生成された多複合物である化合物ＰＰＮ／ＭＧ６１；
及び（ｂ）この複合物の存在に対する検査を通じて、この細胞が表現するＰＰＮ／ＭＧ６１の水準に対して測定を進行し；
そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物はＰＰＮ／ＭＧ６１を結合した  小分子化合物、ただ特異性抗体あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１を結合したｓｃＦｖ及び核酸ゾンデ（独，ｓｏｎｄｅ）で抜いたものである核酸ゾンデには反互化合物、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡが含まれて、このようなゾンデは必ずＰＰＮ／ＭＧ６１ｍＲＮＡと／あるいはｃＤＮＡと交雑しなければならないが、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１のアミノ酸はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１、あるいは任意のＳｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：１と少なくとも８０パーセント同一性を持っている序列あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１活性を持っている序列である。
【請求項２】
人類のＰＰＮ／ＭＧ６１の活性と表現を測定するのに使われる一種の方法で、この方法には下記のような何種類が含まれる：
（ａ）一種のＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物と第１種細胞を接触するようにすることで、第１種化合物ＰＰＮ／ＭＧ６１である多複合物を生成して、この細胞は基礎水準でＰＰＮ／ＭＧ６１を表現する。
（ｂ）一種のＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物と第２種細胞を接触するようにすることで、第２種化合物ＰＰＮ／ＭＧ６１である多複合物を生成して、この細胞は過渡拡増の水準でＰＰＮ／ＭＧ６１を表現する。
（ｃ）第１種と第２種の多複合体の存在に対する検査を通じて、第１種と第２種細胞が表現するＰＰＮ／ＭＧ６１水準に対して測定を進行する。
（ｄ）第１種と第２種細胞が表現するＰＰＮ／ＭＧ６１水準の差に対する測定を通じて、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物はＰＰＮ／ＭＧ６１を結合した小分子化合物、ただし 特異性抗体あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１を結合したｓｃＦｖ及び核酸ゾンデ（独，ｓｏｎｄｅ）で抜いたものである核酸ゾンデにはバンウィグァハブムル，ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡが含まれて、このようなゾンデは必ずＰＰＮ／ＭＧ６１ｍＲＮＡと／あるいはｃＤＮＡと交雑しなければならないのに、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１のアミノ酸はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１、あるいは任意のＳｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：１と少なくとも８０パーセント同一性を持っている序列あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１活性を持っている序列である。
【請求項３】
組織に対して進行する一種の体内性状の方法には、下記のような何種類が含まれる：
（ａ）一種のＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物で人類に給薬を進行して、その中この化合物には一種の測定できる表記物が含まれていて、またその中でこの化合物は一種の人類細胞と結合を進行して、この細胞は過度拡増の水準でＰＰＮ／ＭＧ６１を表現する。
及び（ｂ）人類組織中のこのような細胞の位置に対して測定を進行して、この測定はＫＡ測定表記物議性状を通して進行になって、その中のＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物はＰＰＮ／ＭＧ６１を結合した小分子化合物、ただ特異性抗体あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１を結合したｓｃＦｖ及び核酸ゾンデ（独，ｓｏｎｄｅ）で選んだものである核酸ゾンデには反互化合物、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡが含まれて、このようなゾンデは必ずＰＰＮ／ＭＧ６１ｍＲＮＡと／あるいはｃＤＮＡと交雑するべきだが、その中のＰＰＮ／ＭＧ６１のアミノ酸序列はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１、または任意のＳｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：１と 少なくとも８０パーセント同一性を持っている序列あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１活性を持っている序列である。
【請求項４】
抑制ＰＰＮ／ＭＧ６１の医療有効化合物に対して選別する一種の方法であり、この方法には下記のような何種類が含まれる：
（ａ）一種のＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物と第１種細胞を接触して第１種化合物ＰＰＮ／ＭＧ６１である多複合物を生成して、この細胞は過度拡増の水準でＰＰＮ／ＭＧ６１を表現する。
（ｂ）一種のＰＰＮ／ＭＧ６１の潜在した抑制剤と第２種細胞を接触して第２種化合物ＰＰＮ／ＭＧ６１である全ての複合物を生成して、この細胞は過度拡増の水中でＰＰＮ／ＭＧ６１を表現する。
（ｃ）第１種と第２種全ての複合体の存在に対する検査を通して、第１種と第２種多複合体のＰＰＮ／ＭＧ６１水準に対して測定を進行する。
（ｄ）第１種と第２種細胞が表現するＰＰＮ／ＭＧ６１水準の差に対する測定を進行することで、潜在した抑制化合物がＰＰＮ／ＭＧ６１に対する表現と／または活性の抑制を測定するのにその中ＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物はＰＰＮ／ＭＧ６１を結合した小分子化合物、ただ特異性抗体またはＰＰＮ／ＭＧ６１を結合したｓｃＦｖ及び核酸ゾンデ（独，ｓｏｎｄｅ）から選んだものである。
核酸ゾンデには反互化合物、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡが含まれ、このようなゾンデは必ずＰＰＮ／ＭＧ６１ｍＲＮＡと／またはｃＤＮＡと交雑しなければならないが、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１のアミノ酸はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１、または任意のＳｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：１と少なくとも８０パーセント同一性を持っている序列またはＰＰＮ／ＭＧ６１活性を持っている序列である。
【請求項５】
権利要求１−４任意の項の方法。
その中細胞は：腎上線細胞、脳細胞、乳腺細胞、結腸細胞、上皮細胞、内皮細胞、心臓細胞、兔疫細胞、腎臓細胞、肝細胞、肺細胞、卵巣細胞、膵膓細胞、前立腺細胞、皮膚細胞、脾臓細胞、胃細胞、睾丸細胞、甲状腺細胞、子宮細胞、脈管細胞などで選定したのである。
【請求項６】
権利要求５の方法。
その中上皮細胞は：内皮細胞、非コロイド神経細胞、 結腸細胞、乳腺細胞、腎臓の近小管細胞、前立腺の平滑筋細胞、子宮の平滑筋細胞及び睾丸の平滑筋細胞などで選定したものである。
【請求項７】
権利要求５の方法。
その中兔疫細胞は多形核白細胞、単核細胞、 巨咬細胞、上皮形細胞、巨大細胞、小神経コロイド細胞、肝巨咬細胞で選定したものである。
【請求項８】
権利要求２の方法。
その中過渡拡増の水準でＰＰＮ／ＭＧ６１の人類細胞は癌細胞または腫瘍未環境の中に処した細胞であること表現する。
【請求項９】
権利要求８の方法。
その中癌細胞は： 肺癌、 乳腺癌、直腸結腸癌、腫瘍癌、胃癌、神経コロイド腫瘍、肝細胞腫瘍、平滑肌肉瘤、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮癌、痰頸癌、膣道睾丸癌、脳腫瘍、子宮頸部癌、食道癌、リンパ腫瘍、悪性色素腫瘍、間皮腫瘍、骨髓腫瘍、卵巣癌、膵膓癌、前立腺癌、甲状腺癌、腎細胞癌、眼癌、横紋筋腫瘍、肉癌未分化腫瘍及び白血病などで選定したものである。
【請求項１０】
権利要求８の方法。
その中腫瘍未環境の中に処した細胞はコロイド繊維源細胞、コロイド蛋白細胞と性根纎維細胞の中で選定したのである。
【請求項１１】
ＰＰＮ／ＭＧ６１抑制剤化合物はＰＰＮ／ＭＧ６１が開導した癌を治療する薬品を製造する用途で使われ、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１抑制剤化合物は小分子、抗体、ｓｃＦｖ、反互化合物、小干抗ＲＮＡ、小発カロリーＲＮＡなどで選定したものである。
【請求項１２】
権利要求１１の用途、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１抑制剤の化合物は一種のＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物である。
【請求項１３】
権利要求１２の用途、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物は一種の小分子、または単熱Ｆｖ部分である。 
【請求項１４】
１４．権利要求１２の用途、そのうちＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物はただし特異性抗体で選定したことで、この抗体は情況に根拠して一種の細胞独性薬物として表記して、このＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物は変らず一種の核酸ゾンデで選定したこものであり、この核酸ゾンデは情況に根拠してＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと雑交する。
【請求項１５】
権利要求１１の用途、その中薬物と第２種医療薬物の組み合わせまたは化学治療組合せに対して説明した。
【請求項１６】
権利要求１５の用途、その中第２種医療薬物は一種の化学治療薬物である。
【請求項１７】
一種の薬物調合物の中にはＰＰＮ／ＭＧ６１を抑制する化合物と薬物賦形剤が含まれている。
【請求項１８】
一種の薬物化合物の中にはＰＰＮ／ＭＧ６１タンパク質と薬物賦形剤が含まれている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は人類細胞の中でＰＰＮ／ＭＧ６１の表現と活性水準を測定するにおける一種の方法、酵素の活性を抑制することを通じて癌を治療する方法及びこのような方法に対する応用などを提供した。具体的に言えば、本発明は一種の正常細胞と癌細胞の中でＰＰＮ／ＭＧ６１の表現と活性水準に対する比較測定を進行するのに使われる方法、酵素の活性を抑制して癌を治療する方法及びこのような方法に対する応用などを提供した。
【背景技術】
【０００２】
Ｗｎｔ（ｗｉｎｇｌｅｓｓ  ａｎｄ  ｉｎｔ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ）は半胱気酸（アミノ酸の一種）を含んだ分泌糖タンパク質家族で、この家族はすでに多種脊椎動物と無脊椎動物の中で鑑定されたように細胞運命の確定及び発育と暗証中の多段階細胞に対して重要な作用をしていることを証明した。
これらは細胞表面の特異のＦｒｉｚｚｌｅｄ（Ｆｚ）（数体家族）と結合して、信号通路を活性化することで反応を加えた。
例えば、遺伝子コピー（Ｃａｄｉｇａｎ  ＫＭとＮｕｓｓｅ  Ｒ，１９９７；  Ｐｏｌａｋｉｓ  Ｐ，２０００）に作用するＷｎｔ家族の特徴中の一つはこのタンパク質分子の補修位置点が２３または２４個の半胱気酸残基に存在するのである。
仮想に根拠すればこのような半胱気酸残基が硫黄結合をパスする時Ｗｎｔタンパク質の折れ現象が現われるにあって重要な役目をするであろう。
【０００３】
加工処理された多くの種類のＷｎｔ培養細胞を使って、Ｗｎｔタンパク質の加工と分泌に対する研究（Ｓｍｏｌｉｃｈ  ＢＤ，ｅｔ  ａｌ，１９９３；  Ｂｕｒｒｕｓ  ＬＷとＭｃＭａｈｏｎ  ＡＰ，１９９５）を進行した。
多数細胞の類型中Ｗｎｔ的に加工效率が最も低いが、ハ等しい一種のＨＳ７０タンパク質−ＢｉＰ−と結合してＥＲ中（Ｋｉｔａｊｅｗｓｋｉ  Ｊ，ｅｔａｌ，１９９２）中に残っている。
果蝿結合ためし剤を通じて、Ｗｇ（果蝿同源物）信号伝導する遺伝子に対して選別し、一種の新しい遺伝子に対しても検証し、その産物はＷｇの加工と分泌（Ｍｕｌｌｅｒ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ，１９９９）に必須である。
【０００４】
このような結果はＷｎｔ加工と分泌は複雑であり、多くの種の特異性遺伝子がこの事件に参与されたこことを提示した。
果蝿体制極性遺伝子中のひとつのｐｏｒｃｕｐｉｎｅ（ｐｏｒｃ）は一種の多跨膜ＥＲタンパク質をコーディングし、このタンパク質はＷｇが胚中の正常分布に必須であるＰｏｒｃ突然体の胚中、Ｗｇは合成細胞内に隔離され周辺細胞の中には分布されなかった。Ｗｇ信号組み立ては多細胞生物の体内で相当保守的で、ｐｏｒｃ類似物もその他と同一に存在する。
【０００５】
線虫類ｐｏｒｃ類似物であるｍｏｍ−１は、Ｍｏｍ−２細胞を生成するにおいて必須だが、これはｐｏｒｃはＷｇ合成細胞の中に必須だからである（Ｔｈｏｒｐｅ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ，１９９７）。脊椎動物(鼠とひき蛙)のｐｏｒｃ類似物はすでに培養した細胞の中でＷｇ及び鼠Ｗｎｔタンパク質のＮ−当期化（Ｔａｎａｋａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ，２０００）を修飾することができることが証明された。
果蝿遺伝子ｐｏｒｃｕｐｉｎｅ（ｐｏｒｃ）の人類類似物も近年クローンされた（Ｃａｒｉｃａｓｏｌｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ，２０００）。
【０００６】
人類ｐｏｒｃｕｐｉｎｅ遺伝子（ＰＰＮ／ＭＧ６１）は１５個内の胞子にかかわっており、Ｘｐ１１．２３の遺伝子調書列中おおよそ１２ｋｂに相当する。
鼠とひき蛙類似物が似ているのでＰＰＮ／ＭＧ６１は組職特異性方式に表現される。またＴ−細胞因子回答レポーターの分析（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｆａｃｔｏｒ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ａｓｓａｙ）の中で人類ＰＰＮ／ＭＧ６１は人類Ｗｎｔ７Ａが表達構建体の活性に対しても影響を与えることが分かる。
このような結果はｐｏｒｃ遺伝子家族が進化上保守的なＥＲ膜タンパク質に対してコーディングし、このタンパク質がＷｎｔ家族の加工に参与したことを充分に証明した。
【０００７】
Ｐｏｒｃとその他の膜結合されたアシルキ転換酵素の超家族の間のアミノ酸の保守性に根拠して、ｐｏｒｃはＷｎｔのアシルキ転換酵素として機能を発揮（Ｈｏｆｍａｎｎ  Ｋ，２０００）した可能性がある。
ＰｏｒｃはＷｎｔタンパク質に対してアシルキ化を進行し、またＥＲ膜上に固定させこれらのコピーを刺激させた後 Ｎ−当期化させて、この過程で分泌は必須であるＰｏｒｃが欠乏した状況で、Ｗｎｔタンパク質は合成細胞の中で分泌するのではなく、このためＷｎｔ信号電動は周辺細胞の中で活性化されない。
すべての生（物）化学検証を経た膜結合されたアシルキ転換酵素の超家族構成員はすべてコーディングされた酵素類で、このような酵素は有機酸を膜包囲目的にした水酸基単位で転移させて、典型的な情況で有機酸は脂肪酸を言う。
【０００８】
このような例題の中には：ＡＣＡＴ（コレステロールアシルキ転換酵素：脂肪酸をコレステロールで転換させる。）、Ａｒｅ１／２（脂肪酸を酵母ステロール上に転移させる。）、ＤＧＡＴ（トアシルギグルリセリンＯ−アシルキ転換酵素；脂肪酸をトアシルギグルリセリン上に転移させる。）、パラフィン合成酵素（脂肪酸をチャンリョンアルコール上に転移させる。）、ＤｌｔＢ（  壁酸質中でアルラニンを浸透させる。）及びＡｌｇＩ（アルギン酸塩Ｏ−アシルキ化）（Ｈｏｆｍａｎｎ  Ｋ，２０００）などが含まれる。
【０００９】
このタンパク質家族の推測に根拠した酵素作用は末っ子と膜附近極性残基の保守性の支持を受けなければならない。
最も著しいことは一つの長疏水区域内のヒスタディンは変わらないし、これは可能に一つの活性位置残基である。この超家族のその他の構成員はただ遺伝子上で検証された。
【００１０】
このような構成員には果蝿遺伝子ｐｏｒｃｕｐｉｎｅ及び線虫類似かむｍｏｍ−１が含まれる。
ＰｏｒｃｕｐｉｎｅはＷｉｎｇｌｅｓｓ信号電動に対して重要で、これはＷｉｎｇｌｅｓｓ加工及び分泌（Ｋａｄｏｗａｋｉ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ，１９９６）に影響を与える。Ｍｏｍ−１は胚内層分化の突然体に対して進行した遺伝子選別の中とｍｏｍ−２（一種のｗｉｎｇｌｅｓｓ類似物）とｍｏｍ−５（一種のｆｒｉｚｚｌｅｄ類似物）と共に検証された（Ｔｈｏｒｐｅ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ，１９９７）。
Ｐｏｒｃｕｐｉｎｅ型タンパク質はＷｉｎｇｌｅｓｓ信号伝導での一つの公証はもう確認されたところがある。
【００１１】
動員性に根拠してこれは一種のアシルキ転換酵素の作用方式で見る時、概して信頼を得たのある。しかし、この基礎の物質の性質はまだ研究解決しなければならない問題である。
【００１２】
このような観察結果とはアシルキ化とＷｎｔ信号伝達の間にだけ存在する関係ではない。
Ｗｎｔ抑制剤であるＤｉｃｋｋｏｐｆ（ＤＫＫ）家族の構成員と保持酵素と留官されることを見いだせる（Ａｒａｖｉｎｄ  Ｌと  ＫｏｏｎｉｎＥＶ，１９９８）。
そのためＤｉｃｋｋｏｐｆ（ＤＫＫ）タンパク質に開導した脱アシルキ化が可能にＰｏｒｃｕｐｉｎｅ（Ｐｏｒｃ；  ＰＰＮ／ＭＧ６１）が開導したアシルキ化に対して拮抗作用があることを暗示した。
Ｗｎｔ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ  ＦＺ経路は一部重要な調節遺伝子と連関されるのでこのような遺伝子は動員発癌症（Ｐｒｉｍａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ）と係わる多態性現象を超過した。
【００１３】
信号伝導期間胞質ベータ−連輪蛋白質（ｃａｔｅｎｉｎ）は蓄積を進行して転移して細胞核に入って行くようにし、またその他コピー遺伝子と複合物を生成することを通じて遺伝子の表現を増強させた。
Ｗｎｔ信号が欠乏した状況で、遊離的な胞質ベータ−連輪蛋白質は一種の複合体に併入れされて、この複合体はＡｘｉｎ、結直腸腺腫性息肉（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｉ，ＡＰＣ）遺伝子産物及び糖源合成酵激酵（ＧＳＫ）−３ベータに造成された。
ＧＳＫ−３ベータを通じて進行したＡｘｉｎ、ＡＰｃとベータ−連輪蛋白質の連結燐酸化はベータ−連輪蛋白質を経路に設定及び蛋白質媒体を通じて分解を進行した。
Ｗｎｔ／ベータ−連輪蛋白質の信号伝導は多種細胞の中で細胞の存在を促進させることはすでに認証された。
Ｗｎｔ信号経路は等しい腫瘍の発育と／または発展と係わることも既に認証された。
【００１４】
Ｗｎｔ信号通路の異常活性化と多種人類癌症も関連がある。
例えば、遺伝子ＡＰＣ突変は散発したまたは遺伝的な直腸結腸腫瘍の中での発生はすべて一種の発端事件である。
ＡＰＣ突変体と腫瘍の発生に関連があることはこの異常タンパク質がＷｎｔ信号伝導造成部分だからである。このタンパク質産物はいくつかの孔陵構造範囲を含んでいるし、このような構造範囲はベータ−連輪蛋白質と分解位置点に作用を発揮する。
ベータ−連輪蛋白質のアミノ気基末端片段的な突然変異は一般的に燐酸化に依頼された分解に参与し、これによりベータ−連輪蛋白質を安定させた。
安定化された胞質連輪蛋白質が蓄積される時、このタンパク質は細胞核に入って行って Ｔｃｆ／Ｌｅｆ高速連動族（ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ）コピー遺伝子とともに作用して、このようなコピー遺伝子の調節例を挙げれば、ｃ−Ｍｙｃがこのような癌遺伝子の表現である証拠は進一歩でＷｎｔタンパク質の多くの癌症の中で表現と異常活性化に対しても提示した。
しかし、Ｗｎｔ信号伝導通路は癌症の発生過程での具体的な役目に対しては上記不透明である。
【００１５】
本発明の方法は、果蝿Ｐｏｒｃｕｐｉｎｅ遺伝子の人類類似物であるＰＰＮ／ＭＧ６１は多くの種類の人類癌症細胞系中、豊かに表現されることを証明するが、このような癌症には肺癌、乳腺癌、直腸結腸癌、間皮腫瘍、痰頸癌（ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｃａｎｃｅｒ）及び悪性黒色腫瘍が含まれる。
これと対応して培養した正常細胞の中ではＰＰＮ／ＭＧ６１の表現が観察されなかった。
本発明は進一歩ＰＰＮが初期肺癌と間皮腫瘍サンプルの中で過量に表現されたことが明らかになったが、対応した正常組職サンプル（同一患者で採取）中では明らかにならなかった。
以外で、多くの種類の癌症患者から採取した血清の中でＰＰＮ／ＭＧ６１の表現に対して測定することができた。
このような癌には肺癌と甲状腺癌などが含まれるが、正常な血清の中では測定されなかった。
【００１６】
本発明の方法はまた人類ＰＰＮ／ＭＧ６１の表現が癌細胞存在において必須なことも表明した。
Ｋｎｏｃｋｉｎｇ−ｄｏｗｎ  ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／または抑制ＰＰＮ／ＭＧ６１タンパク質のアシルキ転換酵素の活性は多種癌中で細胞の死亡を誘導した。
特に肺癌と間皮腫瘍である。
このような数値はＰＰＮ／ＭＧ６１を通じて進行したＷｎｔ信号伝導分子の脂肪修飾はこの経路が腫瘍の発生過程での作用に対して非常に重要さを提示したし、またＰＰＮ／ＭＧ６１が一種の治療效果を考えさせる医療目的の可能性があることを提示した。そのためＰＰＮ／ＭＧ６１の表現に対する測定及びＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性の抑制が人類癌症分子診断、初期測定と治療において広範な可能性があることを示している。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
発明概要
本発明は人類細胞、組職、血清と唾液を含んだ体液の中でＰＰＮ／ＭＧ６１の表現と／または酵素活性及び抑制アシルキ転換酵素の活性を通じて、過表現を抑制するＰＰＮ／ＭＧ６１の癌細胞成長の診断方法を提供した。
第１実施方案の中で本発明は一種のＰＰＮ／ＭＧ６１遺伝子コピー（例えばｍＲＮＡ）の測定に対する方法を提供し、この方法は繰り返しＰＣＲ−（ＲＴ−ＰＣＲ）の使用を通じて進行するとかまたは基盤拡増（例えばＰＣＲ）の使用を通じて直接的にＤＮＡコピー数値を測定する方法で実施された。
【００１８】
第２実施方案の中で本発明は一種のＰＰＮ／ＭＧ６１タンパク質数量の測定に使われるまたは、このようなタンパク質細胞数量に対する測定表現の方法を提供し、この方法は任意の一種の広範囲で認証された免疫結合の分析を使って進行しなければならないし、このような分析には等しいＰＰＮ／ＭＧ６１と結合された単特異性抗体使って進行したＥＬＩＳＡ（酵素免疫吸附分析に対する分析）が含まれる。
ＰＰＮ／ＭＧ６１の翻訳タンパク質水準は本領域の技術人員たちがよく分かっている任意の手段を使うことを通じて測定を進行することができる。
このような手段には分析性生（水）化学方法例えば電泳、毛細管電泳、高性能液晶色譜（ＨＰＬＣ）、葉層層析（ＴＬＣ）、超拡散（ｈｙｐｅｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）色譜などが含まれる。
また分離したタンパク質は標準方法に根拠して序列測定を進行することで多胎性（Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）を検証することもできる。
【００１９】
第３実施方案中、本発明は一種のＰＰＮ／ＭＧ６１の酵素（Ｏ−アシルキ転換酵素）活性に使われる測量と／または定量を進行する方法を提供し、この方法は底物転換の使用を通じて進行した。
第１課第２細胞のＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準と／または酵素活性の差はあらゆる癌症に対する検査または診断、あらゆる暗証の転移可能性に対する診断、あらゆる癌症に対する予後と発展に対するモニタリングまたは母種癌症に対する治療效果に対するモニタリングなどに使われた。
このような癌症には： 肺癌、乳腺癌、直腸結腸癌、類腫瘍（ｃａｒｃｉｎｏｉｄ）、胃癌、神経コロイド腫瘍、肝細胞腫瘍、平滑肌腫瘍、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮癌、痰頸癌、尿道睾丸癌、脳腫瘍、子宮頸部癌、食道癌、淋巴腫瘍、悪性黒素腫瘍、間皮癌、骨髓腫瘍、卵巣癌、膵膓癌、前立腺癌、甲状腺癌、腎細胞癌、眼癌、横紋肌肉瘤、肉腫、未分化腫瘍及び白血病などが含まれ、これは全部ではない。
【００２０】
第４実施方案の中で、本発明は一種の本発明で提示したＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準と／または酵素活性の試剤するに対する方法を提供し、この試剤はあらゆる癌症に対する検査または診断、あらゆる癌症の転移可能性に対する試剤、あらゆる癌症の予後と発展に対するモニタリングまたはあらゆる癌症に対する治療效果に対するモニタリングなどに使われた。
これ以外の実施方案の中で、本発明は体外と体内で使われるある種の組職に対する性状の方法を提供した。
以外の実施方案の中で、本発明は一種の方法と／または発明が提示した試剤することを提供し、この方法と／または試剤は抑制ＰＰＮ／ＭＧ６１に対する医療に效力的な化合物の選別に使われた。本発明でＰＰＮ／ＭＧ６１を含んだ特異性化合物には：ある種のＰＰＮ／ＭＧ６１と結合、低物を模倣して酵素活性を抑制する小分子化合物、ある種のＰＰＮ／ＭＧ６１タンパク質と結合した単特異性抗体、またはＰＰＮ／ＭＧ６１のｍＲＮＡ／ｃＤＮＡと雑交を進行した核酸ゾンデ／引物などが含まれるが、これが全部ではない。
【００２１】
本発明の一つの進一歩の実施方案には一種の需要に対して治療を進行した受試者のＰＰＮ／ＭＧ６１が開導した癌症に対して治療を進行する方法が含まれ、この方法には治療の有效量のＰＰＮ／ＭＧ６１抑制剤の化合物の薬学製剤としてこの受試者に給薬を進行するのが含まれ、その中このＰＰＮ／ＭＧ６１抑制剤の化合物は状況に根拠して細胞独性を持っている。
優先的に選別されたＰＰＮ／ＭＧ６１抑制私の化合物にはＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物が含まれるがこれは全部ではない。
本発明のこのような方面で一つのまず選別された実施方案の中には、この薬学製剤は一種の気嚢導管（ｂａｌｌｏｏｎ  ｃａｔｈｅｔｅｒ）、またはｓｔｅｎｔの中にはいっており、時間依頼性方式で放出を進行していた。
この実施方案は進一歩で単独で癌症患者に上で言及した薬学製剤を試用、または２種治療薬物（例えば化学治療薬物）と／または放射線治療に共にに試用される二つが含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
定義
他の一種のポーリヌクレオシドあるいは多胎は特定百分率である「序列相同性」の一種のポーリヌクレオシドあるいは多胎を持っている。
言い換えれば配列比較を進行するにおいて、二つの種類の序列に対して比較の時の等しいアルカリキあるいはアミノ酸の百分率に対して比較を進行する。序列の相等性は二つの浮動した方式で測定を進行することができる。
序列の同一性を測定するために、一部方法と計算器機プログラムを利用して、序列配列に対する比較を進行し、このような方法とプログラムにはＢＬＡＳＴが含まれて、がある。
【００２３】
他の一種の配列比較計算法はＦＡＳＴＡで、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．，ＵＳＡ，ａ  ｗｈｏｌｌｙ  ｏｗｎｅｄ  ｓｕｂｓｉｄｉａｒｙ  ｏｆ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．の遺伝学計算基調（ＧＣＧ）で捜すことができる。
配列比較に使われるその他方法はＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２６６：Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  （１９９６），ｅｄ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ａ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ Ｈａｒｃｏｕｒｔ  Ｂｒａｃｅ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ．中で説明された。
【００２４】
序列の中で空席を許容した配列比較プログラムは特に人々の興味を催した。
Ｓｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎの局部同源性計算法（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２：４８２−４８９（１９８１）を使うにおいて、序列の同上性ＢｅｓｔＦｉｔ測定プログラムは特におもしろい。空席は罰点が賦課されるのに（ｇａｐ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）一般的に１から５間であり、２から４の場合もあるので、いくつかの実施方案の中では３で規定した。
Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎは一種の序列配列の中で空席を許容する計算法であるＭｅｔｈ．Ｍｌｏ．Ｂｉｌｏ．７０：１７３−１８７（１９９７）。
【００２５】
この以外にも、ＮｅｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈ配列比較方法を使うＧＡＰプログラムは序列の配列比較（参照，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０））を進行するにも使われる。
空位延長罰点（ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ）は一般的に０．０１から０．２０間であり、さまざまな状況では０．１０である。
このプログラムの結成係数は比較を待つ入力序列を通じて測定を進行する。
優先的な情況下で、この序列の同一性の使用プログラムは決めた結成係数で測定を進行する。
このプログラムはＧｅｎｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）ｐａｃｋａｇｅ，ｆｒｏｍ  Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．，ＵＳＡで捜すことができる。
【００２６】
この配列比較区域の長さの百分比は最強配列株の個体序列の残期数に対する計算を通じて計算される。
この数値で目標あるいはｑｕｅｒｙの序列の残期数を差し引いた値段が百分比である序列白粉同一性は目標とｑｕｅｒｙのポーリヌクレオシド序列間の符合残期数を通じて計算を進行して、最強配列区域中の総符合数で目標あるいはｑｕｅｒｙ序列の残期数を差し引いて計算する。  
「ＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物」と言うのは、例えば、合成あるいは天然的なアーミー老産多胎、タンパク質、小合成遺棄分子あるいはデオキシリボ核酸あるいはリボ核酸序列、このような化合物とＰＰＮ／ＭＧ６１が結合した親和性はその他タンパク質と核酸の２０倍あるいは以上である。
例えば、抗ＰＰＮ／ＭＧ６１タンパク質あるいはその胎段落のすべてクローンあるいはただクローン（典型的なあるいはバクテリオファージ展示が含まれる）抗体、あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１  Ｍｒｎａと雑交した核酸ゾンデなどがあるのに、これは全部ではない。
優先的な、ＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物は：ＰＰＮ／ＭＧ６１（Ｓｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：１，あるいは任意のＳｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：１と少なくとも８０パーセント以上同一性の序列あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１活性の序列）を結合した小分子化合物、ただ特異性抗体あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１を結合したｓｃＦｖ及び核酸ゾンデで選定したことであり、この核酸ゾンデには反意化合物、ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡなどが含まれているし、このようなゾンデとＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／あるいはｃＤＮＡ（Ｓｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：２，あるいは任意のＳｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：２と少なくとも８０パーセント等しい序列）と雑交する。
【００２７】
特別に優先的な、小分子は腕ミット酸共塩あるいはブロムファパルミト酸塩あるいはその他の腕ミット酸塩が誘導体である。ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／あるいはＣｄｎａと結合した核酸序列の長さは６ｂｐあるいは６ｂｐ以上であり、優先的に６から１３８６ｂｐ、もっと優先的に６から５０ｂｐ、もっと優先的に６から２０ｂｐ、もっと優先的に６から１５ｂｐ、特別に優先的に６から１０ｂｐである優先的に、ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／あるいはｃＤＮＡを結合した核酸序列とＰＰＮ／ＭＧ６１遺伝子（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、あるいは彼の補助序列、少なくとも８０パーセント、優先的に書いても９０パーセント、もっと優先的に９５パーセント、最優先的に１００パーセントが序列の動員性。
あるいは、ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／あるいはｃＤＮＡを結合した核酸序列とＰＰＮ／ＭＧ６１遺伝子（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の補助序列中のモダン序列に少なくとも８０パーセント、優先的に書いても９０パーセント、もっと優先的に９５パーセント、最優先的に１００パーセントの序列相同性。
【００２８】
本発明の中で、以外の説明がない限り「ＰＰＮ／ＭＧ６１」はＰＰＮ／ＭＧ６１タンパク質あるいは多胎、イタリック体「ＰＰＮ／ＭＧ６１」は符号化（コーディング）ＰＰＮ／ＭＧ６１タンパク質の遺伝子を言う。
本文で使った「医療有効量」は薬物組合物あるいはその中の化合物は一種の抑制ＰＰＮ／ＭＧ６１活性の量を言う。この薬物組合物は一般的に約０．００１から１００ｍｇ／ｋｇの毎剤単位（例えば、薬片、カプセル、粉末、注射剤、薬匙量等々）である。
一つの実施方案の中で、この薬物調合物は約０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ化合物の毎剤量単位を持っているし、優先的な情況下で約０．０５から２０ｍｇ／ｋｇを含んでいる。
この薬物調合物の医療有効量を測定するのに使う方法は見た領域の中ではもう分かっている。
例えば、この薬物組合物で人類に進行した給薬の有効量は動物研究の結果の中で数学計算を進行することができる。
【００２９】
まず一歩、本発明の化合物は鼻腔内形式方法で給薬を進行することができるし、この級の薬は適当な鼻腔内運搬体の局部応用を通じて、あるいはトゥピの腺を通じてトゥピ肌ブパスを使って進行することができるし、このトゥピ肌ファースは見た領域の技術人員たちが掌握している。
トゥピ配送系統の方式で給額をするためにはこの第量給薬は連続的に、第量方案（ｄｏｓａｇｅ  ｒｅｇｉｍｅｎ）を通じる間接進行ではならない。
【００３０】
また本の発明は最初で証拠を提供して、人類ＰＰＮ／ＭＧ６１の課税表県は本文の中で交差的に使う述語「個体」、「実験者」、「宿主（ｈｏｓｔ）」と「患者」は哺乳動物、例えば鼠、猿、人類、猫、犬、言葉、牛、哺乳類家畜、哺乳類競技動物で哺乳類愛玩動物が含まれるのに、これは全部ではない。
発明に対する詳細な説明  本発明は最初で証拠を提供して、実技転換酵素にとって作用を発揮するようにした人類 ＰＰＮ／ＭＧ６１は特定の組職病患状態で上り調節（ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ）になった 。
特に、ＰＰＮ／ＭＧ６１は色々種類の人類暗証の中で豊かに表現されたし、肺癌、乳腺癌、直腸結腸癌、間皮瘤、頭癌と悪性黒素瘤を含む。これと反対に、培養した正常細胞中ではＰＰＮ／ＭＧ６１の表現に対して観察することができなかった。
【００３１】
また本発明は最初で証拠を提供して、人類ＰＰＮ／ＭＧ６１の過表現は癌細胞の生存に必須したことを証明した。
高低ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ及び／あるいは抑制ＰＰＮ／ＭＧ６１の実技転換酵素の活性は多くの種類の癌症の中で細胞の死亡を誘導したし、特に肺癌の中である。
そうするので、ある種の細胞の中でＰＰＮ／ＭＧ６１の存在に対する測定及び定量あるいは体内でＰＰＮ／ＭＧ６１の存在に対する測定に一種の方法を提供したし、この方法は疾病の状態に対して診断あるいは検側を進行するのに使われたし、このような疾病には癌症と腫瘍転移が含まれながらもこれは全部ではない。
【００３２】
これにして、ＰＰＮ／ＭＧ６１の上り調節あるいは上り調節の科表現に対して抑制を進行する一種の方法を提供したし、この方法はある種の疾病状態に対する治療、特にＰＰＮ／ＭＧ６１の表現に開度した癌症に使われた。
本発明で連関された人類細胞は：身の上では細胞、脳細胞、乳腺細胞、結腸細胞、上皮細胞、内皮細胞、心臓細胞、兔疫細胞、腎臓細胞、肝細胞、肺細胞、卵巣細胞、膵膓細胞、前立腺細胞、肌細胞、脾臓細胞、胃細胞、睾丸細胞、甲状腺細胞、子宮細胞と脈管細胞で選定になったし、上皮細胞は：内皮細胞、非コロイド神経細胞、結腸細胞、乳腺細胞、腎臓のおよそ所管（Ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｔｕｂｕｌｅｓ）細胞、前立腺が平滑筋細胞、子宮の平滑筋細胞及び睾丸が平滑筋細胞で選定されたし、兔疫細胞は多型核百細胞、単核細胞、かけて細胞、 上皮様細胞（ｅｐｉｔｈｅｌｏｉｄ  ｃｅｌｌｓ）、巨大細胞、小神経コロイド細胞、肝の細胞（Ｋｕｐｆｆｅｒ  ｃｅｌｌ）と肺胞の細胞で選定されたのである。
【００３３】
本発明はただ一歩、一部調合物を提供した、このような組合物には薬物組合者が含まれて、この薬物組合物には本発明の多胎、ポーリヌクレオシド、抗体、重組載体及び宿主細胞等が含まれる。
このような組合物にはある種の緩衝液が含まれることができるのに、この緩衝液は多胎、ポーリヌクレオシド、抗体、重組載体及び宿主細胞が必要な応用に根拠して選択を進行して、またその他の目的応用にもふさわしい物質も含むことができる。本の領域の技術人員は易しく目的応用にふさわしい適当な緩衝液を選択することができる、その中の多くの種類はもう見た領域で分かっているのであるどんな情況下で、この組合物には一種の薬物剤を含んでいるし、本の領域の中ではすでに分かっているので具体的に討論する必要がない。
【００３４】
本発明は一部ＰＰＮ／ＭＧ６１に珍しい抗体を提供した。
適当な抗体はある種の宿主動物に対して免疫を進行して得ることができるし、この免疫は目的タンパク質を含んだ全部のあるいは一部分の胎を使って進行する。
適当な宿主動物には小さな鼠、大きい鼠、綿羊、山羊、ハムスター、兎など等が含まれる。
このタンパク質免疫院のレワンは小さな鼠、人類、兎、猿等々になることができる。この宿主動物は一般的に免疫院が浮動した水や鐘であり、例えば、人類タンパク質を使って小さな鼠に対して免疫を進行する、等々。
【００３５】
この免疫院には完成されたタンパク質あるいは端くれ及び誘導体が含まれる。
優先的な免疫院には目的タンパク質の全部あるいは一部が含まれて、その中でこのような残期は天然目的蛋白中に存在する翻訳後の修飾を含んでいるのに例えれば、当期化である細胞外構造地域を含んだ免疫院は見た領域が示すさまざまな方法を通じて生産を進行して例えれば伝統的な重曹方法を使って進行したクローン遺伝子の表現であり、腫瘍細胞培養物の上聴の中で分離する等々である。
【００３６】
多クローン抗体の進行を製造準備するために、第１補助は目的タンパク質を使って宿主動物に対して免疫化を進行して、その中でこの目的タンパク質は優先的な情況下で基本上清浄であり、約１パーセント以下の雑質を含んでいる。
この免疫院には完全な目的タンパク質、その端くれまたは誘導体が含まれる。
この宿主動物の免疫反応を提供するために、この目的タンパク質は坐剤と組合せを進行することができるし、その中ふさわしい坐剤には：明汎、ポツィ糖、乳酸塩、ダポルリウムイオン、油と授乳額が含まれる。
例えば、 ボックシ坐剤、ボックシ完全坐剤などであるこの目的タンパク質は合成された運搬体タンパク質あるいは合成された抗原と双で連結を進行する。
【００３７】
さまざまな宿主に対して免疫化を進行してすべてクローン抗体を生産する。
このような宿主には：兎、ギニアピーク、例えば小さな鼠、大きい鼠などこのようなげっ歯類、綿羊、塩素等々である一般的にこの目的タンパク質はこの宿主に対して肌内給薬を進行して、１次初期調剤量後１次あるいはすべて次的な超過補強調剤量を続いてこの補強調剤量は一般的に二度にする。
免疫化された後この宿主体内で血液を収集して、血清と血細胞を分離する。生成された抗血清の中にはＩｇが存在してまず一歩級分分離を進行してこの分離はすでに知っている方法を使って進行する。
【００３８】
例えばＥＬＩＳＡ、アムモニュムヨック、ＤＥＡＥ階分析等々である。
単クローン抗体は伝統的な方法を通じて進行する。
一般的な情況下で、免疫化された宿主動物の脾臓とリンパ腺は血細胞を提供する根源であるこの血細胞は骨髓腫瘍細胞との融合を進行することを通じて永生化されたし、交雑腫瘍細胞も生成した。
標準的な方法を使って個体からの交雑腫瘍の培養物上聴に対して選別を進行して必要な特異性を含んだ抗体細胞の生成を検証するのである。
【００３９】
抗人類タンパク質単クローンでは抗体に使われる適当な動物には：小さな鼠、大きい鼠、ハムスター、ギニアピーク、兎など等が含まれる。
この抗体は交雑腫瘍細胞の上聴あるいは復讐の中で清浄化を進行して、この清浄化過程は伝統的な方法に進行される。
例えば、不可用媒体を結合したタンパク質を使って親和層分析を進行して、タンパク質Ａ寒天糖、タンパク質Ｇ寒天糖等々を使って親和層分析を進行する。
【００４０】
抗体は単列形式で 非正常なすべての合成体の構造を生成する。
端麗を抗体の設計はＪｏｓｔ  ｅｔ  ｓｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂ．Ｃ．２６９：２６２６７−７３とその他文献を参照にする。
この中リョルの可変区とひきつけ可変区のＤＮＡ序列のコーディングは一つの間隔区（ｓｐａｃｅｒ）で繋がれて、この間隔区は少なくとも４個の中小性アミノ酸残期にコーディングされているし、このようなアミノ酸には減アミノ酸と／あるいはサアミノ酸が含まれている。
こんな融合を通じてコーディングになったタンパク質は原抗体特異性と親和性の孔陵性可変区の組み立てを維持することを承諾する。
【００４１】
体内での応用を進行するために、特に人類に対する注射に使うためには、この抗体の抗原性を低下させなければならない。
ある種の数体がこの棒肺薬剤の免疫反応に対応するようになればこの治療の有效期間を著しく低下させる。
抗体に対して進行する人類化の方法はもう見た領域の中で分かっているところである人員化抗体は転移遺伝子人類免疫区タンパク質航程区遺伝子を持っている動物の産物（例えば、アメリカ特許出願したＷＯ９０／１００７７とＷＯ９０／０４０３６）である。
あるいは、この目的抗体は重組ＤＮＡ方法を通じて加工処理を進行してＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、鈎錬構造地域と／あるいはフレーム構造地域にとって対応した人類序列を使って交換を進行する。（参照，ＷＯ９２／０２１９０）。
【００４２】
Ｉｇ  ｃＤＮＡは雑合免疫球団白質遺伝子構造に対する応用はもう見た領域の中で分かっている（Ｌｉｕ  ｅｒ  ａｌ．（１９８７）Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８４：３４３９と（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１）。
交雑腫瘍あるいはその他抗体を生成する細胞の中で分離したｍＲＮＡもこれはｃＤＮＡ生成に使われた。目的ｃＤＮＡは特異性引導物（アメリカ特許４，６８３，１９５ａｎｄ４，６８３，２０２）を使って合成酵素軟式反応を通じて拡増を進行する。
あるいは一つの文庫を生成してそれに対して選別を進行することで目的序列を分離する。
この抗体可変区のＤＮＡ序列をコーディングした後、人類航程区序列と融合を進行する。
この人類航程区遺伝子の序列はＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎ．Ｉ．Ｈ．Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２を参照にする。
【００４３】
人類Ｃ区域遺伝子はもう分かっているクローンの中で易しく求めることができる。
等しい類型の選択に対して必ず必要なヒョウングギェ孔陵の地図に根拠して進行しなければならない。
例えば補助体結合あるいは数体で依頼した細胞毒作用中の活性である優先的な同種型は ＩｇＧＩ、ＩｇＧ３とＩｇＧ４である人類ひきつけ航程区、ｋあるいｒが皆使われることができる。
次の伝統的な方法を通じてこの雑合人源化抗体に対する表現を進行する。
【００４４】
他の一つの実施方案中、この抗体は皆人類抗体であるかも知れない。
例えば人類抗体と等しい浮動した種類の人類抗体（ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）に応用することができる。
浮動した種類（異種）の人類抗体と言うのは人類抗体と等しい抗体を言ってすなわち、彼らは完全に人類抗体であり、浮動した点は彼らが非人類宿主を使って生成された点であり、このような宿主は遺伝子公正の処理を経って人類抗体に表現された。
例えばＷＯ９８／１５０４３３；ＷＯ９８／２４８９３とＷＯ９９／５３０４９、このような文献はここで参照できる。
【００４５】
Ｆｖ，Ｆ（ａｂ’）とＦａｂこのような抗体段落は完全タンパク質に対する切断で製造用意したのである例えば、タンパク質酵素あるいは化学切断を利用するのである。
あるいは一種の極力節約（切断）の遺伝子を設計しなければならない。
例えば、Ｆ（ａｂ’）端くれが一部分の雑合遺伝子のコーディングにはＨ演義ＣＨ１構造地域と蝶番区ＤＮＡ序列が含まれて、一つの翻訳中止コドンで、切断分子を生成する。
【００４６】
ＨとＬリョンのＪ区域の共有序列は科ヌクレオシドの設計に使われて、引導物としてこのＪ区域中に制限性位置店を取り入れて、次のＶ旧段落と人類Ｃで段落の連結に使われるようにする。
Ｃ区域のｃＤＮＡは頂点突然変異誘導を通じて修飾を進行して、一つの制限性位置点を人類序列の動員位置に位するようにする。
表現運搬体にはプラスミド、繰り返し兵毒、ＹＡＣ，ＥＢＶ誘導の付加体（ｅｐｉｓｏｍｅｓ）等々が含まれる。
便利な運搬体コーディング機能性の完全人類ＣＨあるいはＣＬ免疫球団白質序列、適当な制限性位置点を携帯してどんなＶＨあるいはＶＬ序列にとって便利に参入と表現をするようにする。
【００４７】
このような運搬体の中で全段は一般的に浸入されたＪ口伝団球体位置点と人類Ｃ焼き物前の全段数体位置店の間で発生されて、この全段も人類ＣＨ外現自重の全段区域の中で進行されるのであるダポルリ腺減産化とコピー中止はコーディング区域ハハ類の天然染色体位置点に存在する。
生成された雑合抗体にはどんな強  動子も添加することができるし、反転がＬＴＲを含む。例えば、ＳＶ−４０初期機動者、 ロシホック病毒ＬＲＴ、モラックニシズィ百血病毒ＬＴＲ：天然Ｉｇ機動者等々である。
【００４８】
本発明の多胎と核酸調合物はさまざまな浮動した用途で使うことができる。
目的応用には：研究、診断と治療薬物の選別／発見／製造準備応用及び医療調合物などが含まれる。
目的応用には以外にも：ＰＰＮ／ＭＧ６１動員物の検証、新しい機動資源本の根源で使用、調節因子のピョダル検証、合成酵素軟式反応（ＰＣＲ）でこのような交雑応用中ゾンデと引導物で使用、生物物種の中でピョダル模式の検証、ＰＰＮ／ＭＧ６１孔陵に使われる細胞あるいは動物模型の製造準備、ＰＰＮ／ＭＧ６１機能の体外模型の製造準備なども含まれる。
さまざまな方法を通じて同源物を検証やりこなすことができる。
提供されたｃＤＮＡの段落は目的有機体から来たＣｄｎａ文庫の交雑ゾンデに対するオーダーメードに使われることができる。
【００４９】
この引導水は一つの段落あるいは一つあるいはいろいろな小簡病引導物である序列の上司性を持っている核酸はゾオム性の条件で条件の下で例えば５０度及び６＊ＳＳＣ（０．９Ｍヨックワナトリュム／０．０９Ｍレモサンナトリュム）中での交雑、５５度及び１＊ＳＳＣ（０．１５ｍＭ塩化ナトリウム／０．０１５Ｍレモサンナトリュム）の中で結合を保存して検側になる。
序列の同上性はオムが性の条件下で、例えば、５０度あるいはもっと高い温度で及び０．０１＊ＳＳＣ（１５ｍＭ塩化ナトリウム／１．５ｍＭレモサンナトリュム）の中で交雑して測定される。
提供した核酸序列である例えば：ｓｅｑ  ＩＤ  Ｎｏ：  ２と基本上等しい核酸を保有した及びこの遺伝子の遺伝変化板本・版本と基本上等しい核酸と提供した序列はオムがの交雑条件の下で結合される。
【００５０】
５’側生（ｆｌａｎｋｉｎｇ）区域の序列は増強子結合位置点を含んだ機動自負品に使われて、この部品は遺伝子の組職の中での表現に発育の調節を提供した。
この組職の特異性表の方は表現模式の測定及び模擬天然表現模式の  動子を提供するのに使う。
この  動子区域の中で天然で存在する多型胎性は表現中の天然変化を測定するのに使われて、特に等しい疾病(特に癌症)と係わる表現変化である。
あるいは、突然変異をこの機動者区域を引入して実験定義（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙｄｅｆｉｎｄｅ）系統の中で変化された表現の作用を測定する。
コピー因子の結合に参加した特定ＤＮＡ祈願に対する検証に使われる方法は見た領域の中ではすでに分かっているし例えば、もうすでに分かっている結合基元序列想像性、引き延ばし（ｇｅｌ  ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ）研究などである。
【００５１】
調節序列は表現のコピーと翻訳調節の順式作用序列に使われて、特に浮動した組職と発育の浮動した階段で進行した検証であり、また調節と開度表現の順式作用序列と作用序列の検証に使われる。
このようなコピーと翻訳調節区域は調節可能に一種の遺伝子に繋がれて、野生型あるいは目的タンパク質の培養細胞、配組職、胎組織あるいは性体組職中の表現を促進して、遺伝子治療に使われる。
小ＤＮＡ段落はＰＣＲ引導物、交雑選別ゾンデ等々に使われる。比較的大きいＤＮＡ段落、すなわち１００ｎｔより大きい段落は多胎のコーディング生産に使われることができる。
【００５２】
ＰＣＲのようなこのような拡増反応に対してつがいの引導物を使わなければならない。
優先的な情況下で選択した引導物は一種で少なくとも５０ｎｔの拡増産物を対応生産して、優先的な情況下で少なくとも約１００−３００ｎｔである引導物序列に使われる選択の計算法は一般的に分かっているし、商品化されたソフトウェアの中で得ることができる。
拡増引導物はＤＮＡの補助連と交雑を進行してまた上向き引導も進行する。
ＤＮＡは生物物種の中で遺伝子表現の検証に使われる。
細胞に対して特定ヌクレオシド序列の存在を進行する。例えば、遺伝子組ＤＮＡあるいはＲＮＡの存在に対して進行した検証方法は文献の中でもう比較的良好に確立された。
【００５３】
総体的に言えば、細胞のサンプルの中でＤＮＡあるいはｍＲＮＡを分離させるのであるＲＴ−ＰＣＲを通じてＭｒｎａに対して拡増を進行して、繰り返し死酵素を使って一つの補助ＤＮＡリョンを生成した後ＤＮＡ序列特異の引導物を使って合成酵素軟式反応を通じて拡増を進行する。
あるいは、ウングギョ電気永同を通じてこのｍＲＮＡ序列を分離させて、彼を一つの適当な支持物で転移させる。
例えば、窒酸纎維素、ナイロン等であり、次にこのＤＮＡ段落を使ってゾンデとして検証を進行する。
その他の方法を使うこともでき、例えば科ヌクレオシドの連結分析、円位交雑及びチンリョルした固体チップ上のＤＮＡゾンデに対して進行した交雑等々である同序列で進行した交雑がｍＲＮＡの測定はサンプル中の遺伝子表現を提示した。
【００５４】
本発明の遺伝子序列には、側生機動者区域とコーディング区域が含まれて、さまざまな本領域で分かっている方法を通じて突然変異を進行して、機動者の強度、タンパク質序列などの中で目的変化を起こす。
このような突然変異を持っているＤＮＡ序列あるいはタンパク質産物は一般的に基本上本文で提供した序列と類似のすなわちそれぞれ少なくとも一つニュークレオティドあるいはアミノ酸上でばかり変化がなければならないし、可能にも少なくとも二つで１０個を超過しないニュークレオティドあるいはアミノ山酸上で変化がなければならない。
この序列変化は交換、結実あるいは彼らの組合せであるかも知れない。このような結実は進一歩比較的大きい変化を含んで、例えば、某区域の結実あるいは外現者であるその他の目的修飾には表上表記が含まれて、例えばＦＬＡＧ系統、ＨＡ等々を通じて進行した表上表記であるアセポの正位の研究に対して緑蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を含んだ融合タンパク質を使うことができる。  
本発明の核酸は転移遺伝子を生成するの人類動物あるいは細胞係の中で生成された位置の特異性遺伝子修飾に使われる。
そうするので、一部実施方案の中で本発明は一種の非人類の転移遺伝子動物を提供したし、この動物は一種の核酸を含んだ分子にこの動物の転移遺伝子に整合口して、この核酸分子は一種のＰＰＮ／ＭＧ６１序列を含んで、この序列の一種の機動者と街調節的に繋がれてコーディングＰＰＮ／ＭＧ６１の核酸分子が細胞あるいは動物の中で表現するようにする。
このような転移遺伝子動物は動員重合を通じて生きて、その中内院遺伝子坐には変化が発生する。あるいは一種の核酸分子を無作為にこの遺伝子組に整合進入して整合の運搬体：プラスミド、繰り返し死病毒とその他動物の病独、ＹＡＣ等などを安定させるのに使われる。
【００５５】
修飾された細胞あるいは動物は遺伝子の機能と調節の研究に使われる。
例えば、宿主の天然遺伝子の中で生きた一連の小規模結実と／あるいは入れ替えに浮動した外現者が暗証発生、信号伝導の中での作用を測定する。
興味を催すことはこのような遺伝子が暗証の転移遺伝子動物模型の応用の具けんに使われて、その中このタンパク質は特異性が低下あるいは不足を表現する。
具体的な目的具けん体には半意具けん体、小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ダンバルカＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）が含まれて、このＲＮＡはＰＰＮ／ＭＧ６１の表現、顕性と隠性変異の表現及び遺伝子の過表現を中断させる。
【００５６】
某序列を引入する時には、引入された序列は宿主動物の天然遺伝子序列の全部あるいは一部であることもできて、あるいは宿主動物に対して言えば外苑序列の全部あるいは一部であるかも知れない。
Ｌａｃ  Ｚようにこのような仮検査表記はこの遺伝子組に引入することができるし、その表現された上向き調節は表現上で易しく検側になる変化をもたらす。
また一部細胞あるいは組職の中で遺伝子を表現することができるし、例えば、ＰＰＮ／ＭＧ６１遺伝子あるいはその変体、表という水準は上で言及した細胞あるいは組職の中での正常な情況下で存在しないし、あるいは発育の異常時間以内で表現される。
【００５７】
一部宿主細胞(転移遺伝子を含んだ動物中の宿主細胞)でも生きていて、このような細胞には一種の二元核酸分子が含有されているし、この分子は一種の多胎をコーディングしたし、この多胎は内源ＰＰＮ／ＭＧ６１起動者を調節あるいはコピー調節区域の機能を持っている。
同源組合せに使われるＤＮＡでけん体には人類遺伝子の少なくとも一部分あるいは宿主動物の天然遺伝子の少なくとも一部分含まなければならない。
その中この遺伝子は必要な遺伝子修飾を行われているし、また目的遺伝子の同源区域も含んでいる。
任意整合を進行するのに使われるＤＮＡ具けん体には犬も重合の同源区域を含む必要がない。便宜をはかるために、養成と音声選択に引入になった表記を含む。同源重合を通じて使われる目的遺伝子修飾を含んだ方法は見た領域の中ですでに分かっている。
【００５８】
胚性干細胞（ＥＳ）に対して、ＥＳ細胞系を利用あるいは宿主中から新鮮な胚細胞を得て宿主の例題には小さな鼠、大きい鼠、ギニアピークなどがある。
このような細胞は適当な纎維原細胞飼養（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ−ｆｅｅｄｅｒ） 階上で生長を進行するとかあるいは存在白細胞抑制である人（ＬＩＦ）の情況下で成長する。
ＥＳあるいは胚細胞がもう転化時には転移遺伝子動物の発生に利用される。
転移された後にはこのような細胞は適当な培養基の遠慮層上に敷いておくのにこの具けん体を含んだ細胞は善策培養基を使うことを通じて測定を進行する。
クローンにとって十分な時間で育つようにすることで、このような細胞を検出して、この具けん体の同源重合あるいは整合の発生可否に対して分析する。
【００５９】
養成クローンは直ちに、配調節と配布注射に利用される。
配布は４から６株大きさの排卵過渡の暗体を得る。トリプシンでＥＳ縦を処理して、修飾された細胞をこの配布のベナングガンに注射入れ込む。注射した後にはこの配布を仮母体の各個に子宮閣で返す。
次にこの仮母体にとって安全出産するようにしてこのように産まれた後代に対してこの具けん体の選別を進行する。
不同表現型の配布と遺伝修飾した細胞を提供することを通じて、易しく後代の雑合を測定することができる。
【００６０】
この雑合動物に対して修飾遺伝子を狙った選別を進行して、この修飾を行われている数体に対して交配を進行して後代を生かす。
もしこの遺伝変化が発育の某位置で死んだ場合、組織あるいは器官を得て等しい種類の振込みあるいは同類の係の植物体あるいは移植体にしてあるいはその体外培養物を得ることができる。
この転移遺伝子動物は任意の人類の包囲動物であり、例えば実験室動物、家で遠慮された動物等々であるこの転移遺伝子動物は機能性研究、薬物選別等々に使われて例えばある種のＰＰＮ／ＭＧ６１活性に作用する候補薬物の效果に対して測定を進行する。
【００６１】
本発明はまた一種の疾病状態を診断する方法を提供したし、特に暗証を診断する方法であるこの方法は目標生物サンプルの中で観察されたＰＰＮ／ＭＧ６１水準と／あるいは活性及び／あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１多ニュークルレオティドの水準に基礎して進行した。
本文で使われたサンプルには生物液体が含まれて例えば血液、脳骨髓液、涙、唾液、淋巴液、滲出液、乳線管洗液ｋ（ｂｒｅｓｔ  ｄｕｃｔａｌ  ｌａｖａｇｅ  ｆｌｕｉｄ）、精液等などが含まれて、細胞；器官あるいは組織培養物が発生した液体；腫瘍活組織検査サンプル、糞便サンプル及び生理組織の中で抽出した液体であるサンプルの外にこのような液体の誘導体と成分も含まれる。
【００６２】
固体組職において細胞に対して分解を進行するとかあるいは組職切片に対して分析を進行する。
入れ替えされた情況下でこのような細胞の分解分解物を製造準備することができる。本発明の測定方法は定性あるいは定量で進行することができる。
だから本文で使われた述語「検測」、「測定」等々が示すことは定性と定量の測定であり、「測量」も含まれる。
本発明の測定方法には生物サンプルに使われるＰＰＮ／ＭＧ６１多タイを測定する方法、生物の中でＰＰＮ／ＭＧ６１  Ｍｒｎａを測定する方法及び生物サンプルの中でＰＰＮ／ＭＧ６１の酵素活性を測定する方法などがある。
【００６３】
一部実施方案の中で、検測方法は生物サンプル（例えば：血液、血清）中癌細胞に対して検測を進行する方法を提供した。
実施例題中の描写に根拠して、人類ＰＰＮ／ＭＧ６１水準が癌測定の中で決まった向上があったし、例えば肺癌、有線癌、直腸結腸癌と間血腫瘍中であるこれにして正常（癌ではない）組織と比べてコーディングＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準の昇華を測定したし、測定された生物サンプルの中には癌組職が存在した。
このような検測方法は時差し引きの一部分で提供された。
【００６４】
これによって本発明はまず一歩生物サンプルの中に使われてＰＰＮ／ＭＧ６１多胎あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１ヌクレオシドの存在と水準が試剤することを提供した。
このような時差し引きのプログラム方法を使って、臨床実験室、実験性実験室、医学従事人員と個人から実施した。
本発明はＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の試剤することを測定するのに使われて、この試剤するには可特異性に結合されたＰＰＮ／ＭＧ６１の一つの部分（ｍｏｉｅｔｙ）、ＰＰＮ／ＭＧ６１特異性化合物あるいは抗体を含むが、これは全部ではない。本発明はＰＰＮ／ＭＧ ６１ダポルリニュークルレオティドの試剤する：特異性でＰＰＮ／ＭＧ６１ダポルリニュークルレオティドと交雑した一つの部分で測定するのに使う。
【００６５】
一部実施方案の中で本発明はＰＰＮ／ＭＧ６１のニュークルレオティドの試剤することを測定するのに使われる。
例えばコーディングＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの試剤箱には一番の核酸が含まれて、彼は「正」と「反」引導水として機能を発揮して、このような引導物は特異成績にコーディングＰＰＮ／ＭＧ６１  Ｃｄｎａがコピーに対して拡増を進行する。
こういう「正」と「反」引導物は一番として、分離した核酸分子によって提供されて、長さが１０から２００個のヌクレオシドであり、この引導物双の中の第１核酸分子には少なくとも１０個の連続されたヌクレオシドの序列があり、この序列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：０２中の一段落の核酸序列のような１００パーセントのヌクレオシドと同一性を持っているし、この引導物双の中の第２核酸分子には一つあるいは少なくとも１０個の連続的なヌクレオシドの序列が内包になっている。
【００６６】
この序列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：０２中の一段落の核酸序列の反向補助序列のような１００パーセントのヌクレオシドと同一性を持っているし、その中の核酸分子の序列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：０２中の一段落の核酸序列の反向補助序列のような１００パーセントのヌクレオシドと同一性を持っているし、その中核酸分子の序列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：０２の中で第１核酸分子の核酸序列の３’に位している。
この引導物核酸分子は任意の分かっている方法を使って製造準備を進行することができる。
例えば自動合成等々であるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，４，５，６，７，８，９，１０，１１と１２は「正」と「反」引導物の一部例題である。
【００６７】
本発明は一種の試剤箱を提供したし、この試剤箱は上で言及した一双の核酸が含まれている。
このような核酸は適当な保存媒体の中に存在して例えば緩衝溶液である典型的な情況のもとでは適当な容器中に保存する。
この試剤するには核酸番が含まれて、まず一歩で一種の緩衝液、 合成酵素リョン式反応 （ＰＣＲ）に使われる試剤（例えば脱酸ツリーヌクレオシドｄＡＴＰ，ｄＴＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ）、熱安定したＤＮＡ合成酵素、繰り返し死酵素、ＰＣＲに相応しい緩衝液、Ｍｇ２＋イオンを含んだ溶液及びその他領域の技術人員たちがよく分かっているＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲあるいは実施ＲＴ−ＰＣＲの成分）が含まれている。
【００６８】
この試剤するには進一歩にこの試剤の使用指導が含まれて、この指導はさまざまな形式で提供されるのに、例えば印刷材料あるいは光版上等々である。
この試剤することは進一歩生物サンプル（例えば血液、血清サンプル、ファルゾジック、切片サンプル等々）の中で抽出したＤＮＡに必須した試剤及びｍＲＮＡを発生するＣｄｎａコピーの試剤も含まれる。
下問に根拠してもっと詳細に描写されたし、この試剤することは診断応用に使われる。
分離した核酸分子は拡増反応例えば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲあるいは実施ＲＴ−ＰＣＲ）の中で引導物として使われる。
【００６９】
一部実施方案の中で第１と／あるいは第２核酸分子には一種の仮測定表記物が含有されている。
適当な表記物では蛍光染料が含まれて例えば二流試案産形光素（ＦＩＴＣ）、ラダンミョン、ｄｅｋｅｓａｓｉ紅、早紅タンパク質、 別組のタンパク質、６−水酸気形光素（６−ＦＡＭ）、２’、７’−  二甲酸素気−４’、５’−二塩化−６−水酸気形光素（ＪＯＥ）、６−水酸気−ラダンミョン（ＲＯＸ）、６−水酸気−２’、４、４’、５、７、７’−六塩化水酸気形光素（ＨＥＸ）、５−ヒドロキ実技形光素（５−ＦＡＭ）あるいはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ‘，−四甲気−６−ヒドロキ実技ラダンミョン（ＴＡＭＲＡ）、また放射性活性表記物も含まれて、例えば３２  Ｐ，３５Ｓ，３Ｈ等々であるこの表記物は一種の双晶系統（ｔｗｏ  ｓｔａｇｅ  ｓｙｓｔｅｍ）で、その中にこのＤＮＡ拡増は生物所、反抗院等によって繋がれたし、一種のその親和性を持っている結合複式分子であり、例えば親和所、特異性抗体等などでその中にこの結合複式分子は一種のが可検測表記物と繋がれた。
【００７０】
この表記物は引導物の一つあるいは二つと皆繋がれることができる。
あるいは拡増の中で使われたヌクレオシド合併水（ｐｏｏｌ）で表記することで、この表記を拡増産物に引入できる。試剤することは情況に根拠して付け加えた成分を提供して、このような成分はもう申し立てた方法に使われて、緩衝液、現色剤、表記物、反応表なら、検測手段、参照サンプル、標準物、指導説明及び解釈情報などの含まれるのにこれは全部ではない。
試剤することがＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の測定に提供される時、この試剤することは一種のあるいは色々種の特異されたこのＰＰＮ／ＭＧ６１を含む。
【００７１】
一部実施方案の中で特異されたこのＰＰＮ／ＭＧ６１抗体は仮測定の表記を受ける。
その他の実施方案の中で特になったこのＰＰＮ／ＭＧ６１の抗体は表記を受けるのではなくて、第２終値測定表記の抗体を提供したし、この抗体は特異されたこのＰＰＮ／ＭＧ６１抗体（「第１」抗体）と結合する。
試剤することは進一歩で封閉試剤、緩衝液及び現色に使われる試剤と／あるいは測定に使われる仮測定表記物の試剤が含まれる。
この試剤するには進一歩で使用資も、参照及び解釈情報が含まれる。
【００７２】
試剤することがＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性の検測に使われる時、この試剤するには一種の底物が含まれて、この底物はＰＰＮ／ＭＧ６１作用を受ける時一種の仮測定の産物を提供する。
この試剤には進一歩でが測種表記物現色と測定に必要な試剤が含まれる。
この試剤するには進一歩で使用視も、参照及び解釈性情補が含まれる。
本発明は進一歩で生物サンプルの中で測定したＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の存在と／あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の水準を測定する方法を提供した。
【００７３】
この方法は一種のＰＰＮ／ＭＧ６１特異性抗体を使う。この方法には一般的に：ａ）このサンプルと特異されたＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の抗体の接触を進行する。及びｂ）この抗体とサンプル分子の間の結合を測定する。
適当な参照と備えを進行する時、ＰＰＮ／ＭＧ６１特異性抗体の特異性結合の検測はこのサンプルの中で存在するＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の跡である適当な参照には：すでに分かっているＰＰＮ／ＭＧ６１を含まない多胎のサンプル；及び一種の非特異されたＰＰＮ／ＭＧ６１の抗体と接触したサンプル、例えば同抗特異性抗体（ａｎｔｉ−ｉｄｉｏｔｙｐｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）と接触したサンプルである多くの検測特異性抗体抗原作用に使われた方法は見た領域の中ですでに分かっているし、この方法で使われることができる。
【００７４】
この方法には標準免疫組織化学方法、免疫沈澱、酵素法免疫分析及び放射性免疫等の含まれるのにこれは全部ではない。
一般的な正黄化でこのＰＰＮ／ＭＧ６１特異性抗体は直接的あるいは間接的に仮測定表記を進行する。
直接表記には放射性同位素；仮測定産物の酵素（例えば、蛍光素酵素、ベータ−反落他児の剤等々）；蛍光打ち上げ金属、例えば１５２Ｅｕあるいは連携のその他金属、このような金属はＥＤＴＡのような金属五合期団を通じて抗体に繋がれて；化学発光化合物、例えば発光アンモニア、ｉｓｏｌｕｍｉｎｏｌ、ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ塩など；生物発光化合物、例えば蛍光素、緑蛍光タンパク質等々が含まれる。
【００７５】
この抗体はある種の不用支持物に連結できて、例えばポリスチレン平盤あるいは美句である間接表記には特異されたＰＰＮ／ＭＧ６１特異性抗体の二項が含まれて、その中にこの二項は上文で言及した表記に根拠して進行して；及び特異性結合分子台の構成員、例えば生物所−親和所等々であるこの生物学サンプルは一種の具体支持水あるいはただ体上の固形物と接触を進行して、例えば窒酸纎維素、このような支持水あるいは運搬体は細胞、細胞ただあるいは可溶タンパク質を固定化させることができる。
【００７６】
この支持水は次に使われる適当な緩衝液に対して洗浄を進行して、その次ＰＰＮ／ＭＧ６１特異性抗体と接触を進行して、この抗体は仮測定表記を経過する。
測定方法は見た領域ですでに分かっているし、可測定表記が発射する信号に相応しい選択を進行しなければならない。
一般的に適当な参照と適当な標準と備えを進行して測定を完成する。
本発明は進一歩で一部方法を提供したし、このような方法は生物サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性の存在と／あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性の水準の測量にふさわしくなければならない。
【００７７】
このような方法には次のような何種類が連関される。
ａ）このサンプルを等しい種有の低物と接触させて、この低物はＰＰＮ／ＭＧ６１作用を受ける時可測定の産物を生み出す；ｂ）この酵素反応の産物を測定する。どんな児実技化化合物は皆見た分析の応用に適用されて、児実技化化合物はＰＰＮ／ＭＧ６１の実技の前が酵素活性を通じて児実技分解を進行した情況下で、吸収も、蛍光及びその他測定に相応しい測定の物理性質変化をもたらす。
本発明は進一歩一部方法を提供したし、このような方法は生物サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの存在を測定するのに使われた。
【００７８】
このような方法は例えばＰＰＮ／ＭＧ６１遺伝子表現に影響させるある種の化合物に対して直接的にあるいは間接的に推測を進行するのに使われる。このような方法には一般的に：ａ）交雑を許容した条件の下でこのサンプルと本発明のＰＰＮ／ＭＧ６１ダポルリニュークルレオティドの接触を進行する；ｂ）可能に存在する交雑に対して測定を進行する。
適当な参照と備えを進行する情況下で雑交に対する測定はＰＰＮ／ＭＧ６１ダポルリニュークルレオティド存在の表示跡である適当な参照には例えば、すでに分かっているＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡを含まないサンプル及びＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと「同意」の表記ダポルリニュークルレオティドが含まれる。
【００７９】
交雑を承諾した条件は見た領域ですでに分かっているし、また上文でも詳細に描いた．．表記したＰＰＮ／ＭＧ６１ダポルリニュークルレオティドを使うにおいて任意ですでに分かっている方法を通じて測定を完成する。
このような方法には円位交雑、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、実施ＲＴ−ＰＣＲと「Ｎｒｔｈｅｒｎ」あるいはＲＮＡ自国、あるいはこのような方法の組合せが含まれながらこれは全部ではない。
このようなダポルリニュークルレオティドに使われる多種表記物と表記方法は見た領域ですでに分かっているし、本発明の分析方法に使われる。
特異性交雑は適当な参照との備えを通じて測定を進行する。
一部実施方案の中で、こんな方法は生物サンプルで連関されたある種のｍＲＮＡの一つのｃＤＮＡコピーを発生して、また一双の分離した核酸を使って拡増反応（例えば．ＰＣＲ）中の丁香と反響引導物としてこのｃＤＮＡに対して拡増を進行する。
【００８０】
この核酸双の中の各個核酸分子は長さが１０から２００ヌクレオシドの間であり、この引導物双の中の第１核酸分子は一つで少なくとも１０個の連続ヌクレオシドの序列を含んでいるし、この序列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：０２中の一段落の核酸序列と１００％のヌクレオシドの同上性を持ってなければならないし、この引導物双の中の第２核酸分子は一つで少なくとも１０個の連続ヌクレオシドの序列を含んでいるし、この序列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：０２中の一段落の核酸序列の反響補助序列と１００パーセントのヌクレオシド同上性を持ってなければならないし、その中にこの第２核酸分子の序列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：０２中の第１核酸分子の核酸序列の３’に位する。
この引導物核酸分子は任意の分かっている方法を使って製造準備することができるし例えば、自動合成等々であるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ３，４，５，６，７，８，９，１０，１１と１２は「丁香」と「反響」引導物の一部例題である。 
ＰＣＲ拡増の方法を使って単一細胞中のＤＮＡを進行することができるし、少なくとも約１０５個細胞を使うにおいて比較的便利である合成酵素軟式反応の使用に対する描写はＳａｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：４８７を参照して、ただ前方法の総合敍述はＳａｎｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９，ＰＰ．１４．２−１４．３３で参照にする。
この拡増反応の中では一種の可測定表記水を含む。
適当な表記物には蛍光染料が含まれて、例えば二流試案酸蛍光素（ＦＩＴＣ）、ラダンミョン、ｄｅｋｅｓａｓｉ蛋白、早紅蛋白、別組な蛋白、６−水酸気蛍光素（６−ＦＡＭ）、２’、７’−二甲酸素気−４’、４’−二塩化−６−水酸気蛍光素（ＪＯＥ）、５−水酸気蛍光（５−ＦＡＭ）あるいはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四甲気−６−水酸気ラダンミョン （ＴＡＭＲＡ）、また放射活性表記物も含まれているし、例えば３２Ｐ，３５Ｓ，３Ｈ等々であるこの表記物は一種の双晶系統（ｔｗｏ  ｓｔａｇｅｓｙｓｔｅｍ）で、その中にこの拡増ＤＮＡは生物所に繋がれるなど、彼らは一種のその親和性結合複式分子を持っているし、例えば親和所、特異性抗体など等であるその中にこの結合複式分子は同一種の仮測定表記物と連結する。
【００８１】
この表記物は引導物中の一つあるいは養子と皆連結することができる。
あるいは拡増の中で使われたヌクレオシドを合併物によって表記して、この表記物を拡増産物で引入させる。
さまざまな方法は特定された組職の中である種の遺伝子あるいはタンパク質の表現水準を測定するのに使われる。
さまざまな方法を通じて、診断を進行して患者のサンプルの中で正常あるいは変なＰＰＮ／ＭＧ６１の存在可否あるいは量の変化を測定する。
例えば、測定は細胞あるいは組織切片に染め付けを進行する伝統的な方法を利用及び根拠で実施することができる。
この細胞サンプル中に目的蛋白を添加して、十分な時間を保温して表上に対する結合を許容して、この時間は一般的に約１０分であるこの抗体は放射性同位所、酵素、蛍光制、化学発物あるいはその他直接的に測定した表記を使うことができる。
【００８２】
あるいは第２抗体あるいは試剤を使ってこの信号を拡増する。
このような試剤は見た領域の中でもうすべて分かっている。
例えば、第１抗体は生物牛と右リョンを進行して、ドングラルグンと陽化物酵素右リョンの親和所を加入して第２試剤にする。
あるいは第２抗体は一種の蛍光化合物と右リョンして、例えば蛍光所、ラダンミョン、ｄｅｋｅｓａｓｉ紅燈等である最終の測定は一種の科陽化物酵素の存在の下に色変化になる低物を使う。
このような方法には分散細胞の有識細胞の、燎微鏡、放射現零、きらっと係数等々が含まれる。
入れ替えされた情況下でＰＰＮ／ＭＧ６１遺伝子の表現に着眼しなければならない。
【００８３】
生物化学研究を進行してコーディング区域あるいは調節区域の序列多胎性が疾病と同一女と係わることを測定する。
疾病と係わるすべて形態性にはタンパク質活性に影響を与えるには遺伝子結実あるいは切断、表現水準を改変させる突然変異等々が含まれる。
遺伝子の表現水準に影響を与えるには機動者序列あるいは増強者序列の変化は見た領域中ですでに分かっているさまざまな方法と正常の同位遺伝子の表現水準を通じて比較を進行する。
機動者あるいは増強者強度を測定する方法には表現された天然タンパク質に対する定量、さまざまな調節部品を報告遺伝子の運搬体に滲入などがあり、この補遺伝子ではクルロルマイセティンアセトの前が酵素、蛍光所酵素、ベータ−反落他児制等々があり、この遺伝子は便利な定量を提供する；等々。
【００８４】
特異性序列に使うにおいて、例えば疾病と係わる多胎性に対して核酸分析を進行する方法はとても多い。
大量のＤＮＡを得ることができる情況で、遺伝子組ＤＮＡを直接使う。
あるいは、この目的区域クローンを適当な運搬体に入れて分析の量に充分に使われるまで伸ばす。
この遺伝子を表現する細胞はｍＲＮＡの根源で使われて、このｍＲＮＡは直接分析あるいは繰り返し視を進行してｃＤＮＡで作りながらこれは分析に使われる。
この核酸は伝統的な方法を通じて、例えばＰＣＲ、拡増を進行して分析に充分に量を提供する。
合成酵素軟式反応の使用描写はＳａｉｋｉ，ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：４８７を参照して、方法に対する総合敍述はＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９，ＰＰ．１４．２−１４．３３を参照する。
【００８５】
あるいは本の領域の中ですでに分かっているさまざまな方法は科ニュークルレオティドを利用した連結ですべての形態性の方法を測定する。
例えばＲｉｌｅｙ  ｅｒ  ａｌ．（１９９０），Ｇｅｎｅｔ．５８：  １２３９−１２４６であるこの拡増反応の中から一種の仮測定表記物を含むことができる。
適当な表記物には蛍光染料が含まれて、例えば二流時掻酸蛍光素（ＦＩＴＣ）、ラダンミョン、ｄｅｋｅｓａｓｉ紅、早紅蛋白、 別組の蛋白、６−水酸気蛍光素（６−ＦＡＭ）、２’、７’−二甲酸素気−４’、５’−二塩化−６−水酸気蛍光素（ＪＯＥ）、６−水酸気−ラダンミョン（ＲＯＸ）、６−水酸気−２’、４、４’、５、７、７’−六塩化水酸気蛍光素（ＨＥＸ）、５−水酸気蛍光素（５−ＦＡＭ）あるいはＮ，Ｎ，Ｎ‘，Ｎ’−四甲気−６−水酸気ラダンミョン（ＴＡＭＲＡ）、放射活性表記物も含まれる。
【００８６】
例えば３２Ｐ，３５Ｓ，３Ｈ等々であるこの表記物は一種の双晶系統（ｔｗｏ  ｓｔａｇｅｓｙｓｔｅｍ）で、その中のこの拡張ＤＮＡは生物所などに繋がれて、一種のその親和性結合複式分子を持っているし、例えば、親和素、特異性抗体等々、その中にこの結合複式分子は一種の仮測定表記水と繋がれる。
この表記物は引導物中の一つあるいは両方と皆繋がれる。
あるいは、確定中使われたヌクレオシド合併物で表記して、拡増産物に引入する。核酸分子、例えば拡張あるいはクローンを経った段落は見た領域でもうさまざまな方法で分析を進行した。
核酸は双脱酸あるいはその他方法で測定を進行して、アルカリ気序列と野生型序列を比較分析する。
Ｓｏｕｔｈｅｒｎを通じる跡、点跡など方法と変化序列の交雑も存在の測定に利用することができる。
【００８７】
参照組及びさまざまな変化序列と固定化された支持物の科ニュークルレオティドゾンデジンリョルの交雑模式は変化序列の存在を測定する手段で使われる。
ダンリョル構想多胎性（ＳＳＣＰ）分析、 変性制度ウングギョ電気永同（ＤＧＧＥ）及びウングギョ気質中の二元双リョン分析は電気永同転移率でＤＮＡ序列変化がもたらした構想変化の測定に使われる。
あるいはすべて形態性の生きている時あるいは某制限性ネゾル酵素の識別位置点を破壊した情況で、このネゾル酵素を使ってこのサンプルを消化してまたこの産物大きさに対して分給を進行して、この部分の消化可否を測定する。
分給はウングギョあるいは毛細管電気流しを通じて進行して特にアクリンサ酸アミンあるいは寒天湯ウングギョである  この遺伝子中突然変異の選別はこのタンパク質の孔陵性あるいは抗原性特徴に根拠して進行する。
【００８８】
タンパク質切断分析はこのタンパク質の生物活性に影響与える結実に測定に使われる。
選別の中でさまざまな設計を利用してタンパク質のすべて形態性の免疫分析に使われる。
さまざまな浮動した遺伝子突然変異である種の特定された疾病表現型をもたらした情況下で、孔陵性タンパク質分析はもう有效な選別工具に証明された。
このコーディングタンパク質の活性は野生型タンパク質との比較を通じて測定される。
本発明の表現水準を狙った診断方法は典型的な情況下で目的サンプルの核酸豊度と真実値の比較に連関されて、これとして任意の相手変化に対して測定する。
その中にこの変化は定量と／あるいは定性によって測定されて、直ちにこの変化とある種の以上表現模式の存在可否と係わる。本の領域の技術人員はもうさまざまなサンプルの中で核酸風度の浮動した方法に対して測定したし、その中面白い特定方法にはＰｉｅｔｕ  ｅｒ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．（Ｊｕｎｅ  １９９６）６：４９２−５０３；Ｚｈａｏ  ｅｒ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ（メック．２４，１９９５）１５６：２０７−２１３；Ｓｏａｒｅｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９９７）８：５４２−５４６；Ｒａｖａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９９４）３２：１２５−１２７；及びＣｈａｌｉｆｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｆｅｂ．１，１９９４）２１６：  ２９９−３０４で描写された方法である。
【００８９】
本発明は調節ＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性の薬物に対する検証の選別を進行するのに使われる方法を提供したし、細胞の中での調節ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎水準の薬物に対して検証する選別を進行するのに使われる方法も提供した。
及び細胞の中での調節ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準の薬物に対して検証選別を進行するのに使われる方法、調節ＰＰＮ／ＭＧ６１のチン核細胞の中での放出された薬物に対して検証の選別を進行するのに使われる方法なども含まれる。
一部実施方案の中でこの分析は無細胞分析であるその他の実施方案の中でこの分析は細胞の分析に基礎したのである。
本文で使った述語「調節」には「向上」と「低下」が含まれる。
【００９０】
一部実施方案の中で、注目を引くことは抑制ＰＰＮ／ＭＧ６１活性の薬物、及び／あるいは細胞の中でＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の水準を低下させる薬物と／あるいは細胞の中でＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの水準を低下させる薬物及び／あるいはＰＰＮ／ＭＧ６１がジンヘックセポの中から放出されることを低下させる薬物であるこのような薬物は癌を治療する候補薬物として関心を受けている。
その他の実施方案の中で注目を引くことはＰＰＮ／ＭＧ６１活性を向上する薬物であり、このような薬物はある種の均衡を失う症状を治療するのに使われて、このような均衡の失うことは血管発生を向上することを通じて治療を進行する。
例えば局所ギョルヒョル症状である。
述語「候補薬物」、「薬物」、「物質」と「化合物」は本門でお互いに使われる。
【００９１】
候補薬物にはさまざまな化学類型が含まれるのに、典型的な情況下で合成、飯ごう性あるいは天然的に存在する遺棄あるいは武器分子である候補薬物は遺棄所化合物であり、その分子量は５０以上で約２５００ドルトンよりは低い。
候補薬物には一部機能性基団が含有されていて、この基団はタンパク質と構造作用を進行するのに必要であり、特に水酸基であり、また少なくとも一種のアーミー怒気、カルボニルギ、水酸基あるいは水酸基気団も含みながら少なくとも二つこのような機能性化学基団を含む。
この候補薬物には炭環あるいはザブファングゾと／あるいは芳香族あるいは多芳香族族構造が含まれてこのような構造は一種のあるいは色々種の上で言及した機能性基団の代替を受ける。
【００９２】
候補薬物も同じく生物分子の中で捜すことができるし、このような分子には泰、党、脂肪酸、ステロール、プリン、ピリミディン、このような分子の誘導体、構造類似物あるいは彼らの組合せ等が含まれる。
候補薬物のさまざまな根源の中で得たことでこのような根源には合成あるいは天然化合物の倉庫（ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）が含まれて、例えば、さまざまな手段は大量の有機化合物と生物分子の無作為合成あるいは丁香合成に利用されて、これは無作為したグァニュークルレオティドと過怠の表現も含む。
あるいは、得ることができることあるいは易しく細菌、濃い菌、植物と動物抽出物をサンセングする形式で存在する天然化合物の倉庫である以外にも天然あるいは合成でサンセングドエン倉庫と化合物は伝統的な化学、物理と生物化学方法で便利に修飾を進行して、組合せ倉庫のサンセングに利用される。
【００９３】
もう分かっている薬学試剤は直接あるいは任意の化学修飾に使われて、例えばアシルキ化、アルキルグループ化、地方化、産児民画等々があり構造類似物をサンセングする。
選別分析は一種の結合分析である情況で、一種のあるいはさまざまなこういう分子は一種の表記物で繋がれて、その中にこの表記物は直接あるいは間接的に一種の仮測定信号を提供する。
さまざまな表記物には放射性同位元素、蛍光制、化学発狂物、酵素、特異性結合分子、料粒、例えば自性料粒、等々が含まれる。
特異性化合物には分子双、例えば生物所とリョンチン化素、デーゴシンと項グデーゴシン等々が含まれる。
特異性結合構成員に対して補助性の構成員は正常な情況下ですでに分かっているプログラムに根拠して測定した分子に対して表記を進行する。
この選別分析中にはさまざまなその他試剤も含まれる。
【００９４】
このような試剤に含まれた例では炎、中性タンパク質（例えば白檀白質）．，クレンザー等々であり、このような試剤は補助タンパク質−タンパク質の最適結合と／あるいは非特異性の低下あるいは背景の相互作用に使われる。
一部分析效率を向上させる試剤を使って例えばタンパク質酵素抑制剤、核酸酵素抑制剤、項微生物薬物等々であるこのような成分の混合物は任意の必要結合を生かす序列で添加することができる。保温は任意の適当な温度下で進行されて、典型的な情況下で４度から４０度間である保温は最適活性を狙って選択を進行して、また寓話を通じて速かに苦痛量選別を補助することができる。
典型的な情況下で０．１から１時間なら満たす。
本発明は一部方法を提供して本発明のＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の酵素活性を調節する薬物に対して検証を進行した。
この述語「調節」には血測定ＰＰＮ／ＭＧ６１活性と測定した参照と比べると相対的に向上あるいは低下が含まれる。
【００９５】
上文で提示した方法には一般的にａ）測定する薬物をＰＰＮ／ＭＧ６１を含んだ多胎のサンプルとの接触を進行する。
及びｂ）この物質が存在する情況下でＰＰＮ／ＭＧ６１のアシル気前二酵素活性に対して分析を進行する。
適当な参照されたＰＰＮ／ＭＧ６１活性（例えば測定受ける物質が不足な情況下でＰＰＮ／ＭＧ６１を含んだ多胎のサンプル）と比べるとＰＰＮ／ＭＧ６１活性の低下するこの物質の調節ＰＰＮ／ＭＧ６１の酵素活性を表示する。
本文で使った「調節ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎のアシル気前二酵素活性の薬物」に対する描写は任意の分子であり、例えば合成あるいは天然の遺棄あるいは無機化合物、タンパク質あるいは薬物、こんな分子は本文では調節ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎を変化させるアシル気前二酵素活性を持っている能力に対して説明した。
一般的な情況下でさまざまな分析混合物は浮動した薬物濃度化で平行作用を進行して浮動した濃度の浮動した反応を得ることができる。
【００９６】
典型的な情況下で一種の濃度は音声参照で、すなわち営農もあるいは測定水準より低い濃度である。
アシル気転換酵素活性を通じてアシル気に対する分解作用下で、吸収も、蛍光あるいはその他測定に有利な物理性性質の任意のアシル気化化合物は皆見た分析の応用に相応しい。
特定された実施方案の中で、一種の３５Ｓ表記物を含んだ物質を使っている。
３５Ｓ放出は任意のふさわしい分析を使って測量を進行して例えばきらっと係数等々である。
その他の実施方案中、この物質は一種のアシル基化部分を含有しており、いったんアシル基がアシル基転移酵素の作用を通して放出され、可測定信号を提供する。
アシル基移転酵素の活性は蛍光についての測定を通して検測を進める。
この分析は高通量形式（ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｇｏｒｍａｔ）に特別に適応している。
適当な参照組と比較してみると調節ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎を調節するアシル基転移酵素活性の薬物は活性を少なくとも１０パーセント程度上昇または低下させ、少なくとも１５パーセント、少なくとも２０パーセント、少なくとも２５パーセントであり、優先的な状況下で少なくとも５０パーセント、さらに優先的な状況下では少なくとも１００パーセントまたは二倍、さらに優先的な状況下では少なくとも約５倍、それ以上優先的な状況下では少なくとも約１０倍またはそれ以上である。
【００９７】
理想程度においてＰＰＮ／ＭＧ６１多胎を上昇または低下させるアシル基転移酵素活性の薬物は選択を経て、研究をさらに一歩すすめるために用いられ、細胞の可用性（ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）、細胞毒作用、生物相容性などに対して推定を進めることができる。
ある実施方案では、ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎を低下させるアシル基転移酵素活性の薬物は特に注目を浴びている。
医療効果を生み出す状況下でアシル基転移酵素活性の最大抑制に対して一般的に必要なことではなく、また、さらに言うと理想的でもない。
ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎を低下させるアシル基転移酵素活性の薬物は腫瘍細胞が刺激するＷｎｔ信号伝導と／または血管発生を低下させるのに使用し、これによって癌の治療に使用される。
ある実施方案では、ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎を上昇させるアシル基転移酵素活性の薬物は特に注目を浴びている。
ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎を上昇させるアシル基転移酵素活性の薬物は血管発生の上昇に使用され、これによって局部欠血症状を治療するのに使用される。
【００９８】
細胞に基礎をおいた方法は調節ＰＰＮ／ＭＧ６１  Ｍｒｎａ水準と／またはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎水準の薬物について測定を進める方法および調節ＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞中から放出する薬物について測定を進める方法をふくむ。
候補薬物に対してできるだけ分析中に使用した細胞が生産した任意の細胞毒作用に対して分析を進行し、この分析はすでにわかっている分析を使用して進行する。
たとえば台分藍染色排除、ＭＴＴ（３−（４，５−イメチルキディアゾル−２−基）−２，５−イペニルギ−２Ｈ−ソサオンブロームなどである。
分析中使用した細胞は一般的に哺乳細胞であり、このような細胞には人類細胞が含まれるのだが、これはすべてではない。
このような細胞は原細胞培養物また永生化細胞系である。
【００９９】
さまざまな細胞の分析に既存の分析は調節ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準の薬物に対する検証および調節ＰＰＮ／ＭＧ６１を真核細胞中に放出する薬物に対する検証に使用される。
このような方法の使用は、たとえばコーディングＰＰＮ／ＭＧ６１のＣＤＮＡを含む構建体転化哺乳細胞としてこのｃＤＮＡを過表現する。
またはおおくの状況下で、一種のＰＰＮ／ＭＧ６１起動子を含有した構建体を使用し、この起動子と同一種類の報告遺伝子を連結させる。
ゆえに、本発明は一種の検証薬物に使用され、特に生物活性薬物を検証する方法を提供する。
また、この薬物は細胞中にＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準を調節し、この方法には測定を待っている候補薬物と一種の細胞と結合を進める方法を含む。
そしてこの細胞には一種のコーディングＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の核酸を含有している。
さらにすでに言及した薬物に対する測定はＰＰＮ／ＭＧ６１について表現した効果である。
ＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準の「調節」には次のようなものがいくつか含まれる。
【０１００】
被測定薬物が結合した参照組と比べ、ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの上昇または低下と／またはこのＰＰＮ／ＭＧ６１ダニュークルレオティドがコーディングしたＰＰＮ／ＭＧ６１多胎水準の上昇または低下である。
未添加薬物の参照と比較するとこの細胞と大気測定の候補薬物を接触させた後、ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／またはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎水準(すなわち含量)上に約１．２５倍程度上昇または低下させ、一般的に少なくとも１．５倍、一般的に少なくとも２倍、一般的に少なくとも５倍、一般的に少なくとも約１０倍またはそれ以上この薬物がＰＰＮ／ＭＧ６１表現を調節した指示意向である。
測定されたＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／またはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎は内源ＰＰＮ／ＭＧ６１ダニュークルレオティドにコーディングまたは重組載体を含有するこの細胞に引きいれられたＰＰＮ／ＭＧ６１ダニュークルレオティドコーディングすなわちこのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／またはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎は内源ＰＰＮ／ＭＧ６１ダニュークルレオティドにコーディングする。
【０１０１】
たとえばひとつの重組載体は分離したＰＰＮ／ＭＧ６１複写調節序列を含有することができ、たとえば起動子序列、この序列と一種の報告遺伝子（たとえばベータ−パンラクターゼ、ＣＡＴ蛍光酵素またはその他かんたんに表現分析を進行する遺伝子）と可調節的に連結される。
このような実施方案に細胞中にＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準を調節する薬物に対して検証を進行する方法には次のようないくつかが含まれる。
待機測定中の候補薬物と一種の細胞を結合し、この細胞には一種の核酸を含有していてこの核酸には一種のＰＰＮ／ＭＧ６１複写調節部品を含有しており、この部品は報告遺伝子と可調節的に結合する。
および、言及した薬物がこの報告遺伝子の表現の効果を測定する。
【０１０２】
重組載体には一種の分離したＰＰＮ／ＭＧ６１複写調節序列を含有しており、たとえば起動子序列、この序列とコーディングＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の序列は可調節的に連結し、またはこの複写調節序列は酵母のＰＰＮ／ＭＧ６１融合たんぱく質のコーディング序列と可調節的を連結し、この融合たんぱく質にはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎がふくまれ、このＰＰＮ／ＭＧ６１多胎は測定を補助することができる多胎と融合をすすめる。
このような実施方案中にこの方法には次のようないくつかがふくまれる。
待機測定中の候補薬物は一種の細胞と結合し、この細胞は一種の核酸を含有しており、この核酸には一種のＰＰＮ／ＭＧ６１多胎コーディング序列と可調節的に連結する。
および言及した薬物がＰＰＮ／ＭＧ６１表現の効果に対して測定する。
この測定はこの細胞が生産したＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ，ＰＰＮ／ＭＧ６１多胎またはＰＰＮ／ＭＧ６１融合多胎の量を通して進行する。
【０１０３】
細胞に基礎をおいた分析には次のような手続きがふくまれる。
この細胞と待機測定中の薬物を接触させ、測定サンプルを形成、および適当な時間経過後この薬物がＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準の効果を推定する。
参照サンプルには同一の細胞を含有しているが、候補薬物は添加しない。
この測定サンプルと参照サンプル中にＰＰＮ／ＭＧ６１の表現水準を測定する。
この測定サンプルと参照サンプルのＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準のあいだに比較を進める。
たとえばＰＰＮ／ＭＧ６１表現を生み出す構建体を哺乳細胞系に転化するとき、上に言及したＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの水準に根拠をおいて検査と測量を進める。
この薬物と細胞が接触するのだが使用される適当な時間は経験に根拠をおいて測定を進める。
【０１０４】
一般的にこの薬物を十分にこの細胞に侵入させるまたはこの薬物がＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡと／または多胎水準に対して測定することができる効果をもつことができる時間である。
一般的にいって、適当な時間は１０分と２４時間のあいだであり、典型的な状況では約１８時間である。
【０１０５】
ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準を測量する方法は本領域ですでにわかっており、そのなかでさまざまな方法は上で描写されており、このような方法中の任意の一種はすべて本発明の方法で細胞中でのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準を調節する薬物に対して検証を進行するのに使用し、進めたＰＣＲ，実施ＲＴ−ＰＣＲおよびさまざまな交雑分析が含まれ、これは全部ではない。
類似のＰＰＮ／ＭＧ６１多胎水準は任意の表中方法を使用し、測定を進める。
そのなかで、さまざまな方法に対して上で言及した。この方法にはＥＬＩＳＡのような免疫分析、たとえば一種の可測定表記をへた特異なＰＰＮ／ＭＧ６１多胎の抗体を使用して進行したＥＬＩＳＡ、これはすべてではない。
選別分析にはさまざまなその他の試剤も含まれる。ふくまれた試剤は塩、白蛋白のような中性たんぱく質、クレンザーなどである。
【０１０６】
このような試剤は最適なたんぱく質−たんぱく質結合の補助と／または非特異性または背景の相互適用に使用される。
この分析の効率を提供することができる試剤を使用することができ、たとえばたんぱく質酵素抑制剤、核酸抑制剤、抗微生物薬物などである。このような選別方法は本領域ですでにわかるさまざまな多様な方式を通して設計を進行し、そのなかでさまざまな分析配置と方案を使用することができる。
たとえばこのような組分中のひとつは某種の固体支持物と結合し、またはほかの組分はこの支持物と結合した組分と接触を進める。
この方法は上の組分は基本上同時にまたは不同の時間に結合を進める。
保温は任意の適当な温度下で進行し、典型的な状況下で４から４０度の間である。
保温に必要な時間は最適活性によって選択を進め優化へて迅速な高通量選別を進めることができる。
【０１０７】
典型的な状況下で０．１から１時間は十分である。
このような接触と保温手続き後、本方法は一般的な状況下でさらにひとつの洗浄手続きで測定時、発生することができる背景信号の表記を除去する。
たとえば放射状または蛍光表記の非特異性結合の組分、これは全部ではない。
状況に根拠をおいて進める選択手続きは次にはすなわち結合複合物の存在を建築する。
上で言及した方法を通して、さまざまな不同な候補薬物に対して選別を進める。候補薬物にはさまざまな化学類型が含まれ、典型的な条件下で合性、反合成または天然的に存在する有機または無機分子である。
候補薬物は有機消化合物であり、分子量は５０以上で、２５００トルレンよりは少ない。
候補薬物には一部功能性基団が含有され、このような基団はたんぱく質と構造作用を進行するのに必須であり、特に鍵でありまたは少なくとも一種のアミノ基、炭基、水酸基または俊基基団もふくまれ、少なくとも二種類このような功能性化学基団を含有している。
【０１０８】
この候補薬物には炭環または雑環構造と／または芳香族または多芳香族構造を含有し、このような構造中で一種類またはさまざまな上で言及した功能性基団のおおむねを受ける。
候補薬物も同様に生物分子中で求めることができ、このような分子には胎、糖、脂肪酸、コレステロール、プリン、ピリミドン、このような分子の誘導体、構造類似物またはその総合が含まれる。
候補薬物はさまざまな来源があるが、このような来源には合成または天然化合物の庫が含まれる。
たとえば、さまざまな手段は大量の有機化合物と生物分子の無作為合成または典型合成に利用され、これは無作為化カニュクルレオチドと過胎の表現が含まれる。
または得ることができるまたは簡単に生じ、細菌、真菌、植物と動物抽出物の形式で存在する天然化合物の庫が含まれることが含まれる。
このほかに天然または合成され生じた庫と化合物は伝統的な化学、物理と生物化学方法を通して便利に修飾を進行し、または組合庫の生産に使用される。
すでにわかっている薬学剤は直接または無作為の化学修飾に使用され、たとえばアシル基化、メタン基化、エステル化などであり、これによって構造類似物が生じる。
【０１０９】
調節ＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞中に放出された薬物に対して検証を進めるのに使用される方法には、一般的に正常的に生じたＰＰＮ／ＭＧ６１の細胞と測定薬物を接触させ、またはＰＰＮ／ＭＧ６１放出の影響に対して測定を進めるなどがふくまれる。
ＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞中に放出した「調節」にはこの大気測定物が不足する参照組と対比するとＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞中での放出を上昇または低下させる。
未添加薬物の参照と比較すると、この細胞と待機測定の抗余白物を接触させたのち、ＰＰＮ／ＭＧ６１ｍＲＮＡと／またはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎水準（すなわち含量）上に約１．２５倍程度上昇または低下させ、一般的に少なくとも１．５倍、一般的に少なくとも２倍、一般的に少なくとも５倍、一般的に少なくとも約１０倍または以上この薬物がＰＰＮ／ＭＧ６１表現を調節した指示意向である。
【０１１０】
細胞に基礎をおく分析には一般的に次のような手続きが含まれる。
この細胞と待機測定中である薬物を接触し生産された測定サンプルと適当な時間経過後この薬物がＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞中で放出した効果に対して推定する。
参図サンプルは同一の細胞を含んでいるが、候補薬物は参加していない。
測定サンプルと参照サンプル中でＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞で放出を測定する。
この測定サンプルと参照サンプル中でＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞中の放出の間に比較を進行する。
伝統的な方法を使用し、ＰＰＮ／ＭＧ６１の活性を測定することができ、これによりＰＰＮ／ＭＧ６１が真核細胞中の放出に対して測定される。
たとえば生産されたＰＰＮ／ＭＧ６１の表現構建体を哺乳細胞系に転化するのに使用されるとき、上で描写した真核細胞中に放出されるＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性に根拠をおき、検査と測量を進行する。
【０１１１】
この薬物を細胞で接触するのに使用される適当な時間は経験に根拠をおき、測定を進行し、一般的にこの薬物で十分にこの細胞に進入し、（必要ならば）、または細胞とその他の作用（たとえば細胞表面成分と）を進行し、またはこの薬物でＰＰＮ／ＭＧ６１放出に対して測定することができる効果の時間をもつようにする。
一般的に適当な時間は１０分から２４時間の間であり、さらに典型的な状況で約１−８時間である。
本発明はさらに本発明の選別分析を使用し、検証した薬物、およびこのような薬物を含む化合物を提供し、このような総合物には薬物化合物がふくまれ、このような化合物はすでにわかっている試剤と方法を使用し、配制を進めることができる。
本領域ではさまざまな薬物賦形剤に対してすでにわかっているので本分でさらに討論する必要がない。
薬物賦形剤はさまざまな出版物中で十分に描写されており、このような出版物にはたとえば、Ａ．  Ｇｅｎｎａｒｏ  （２０００）  “Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｉａｍｓ，  ＆  Ｗｉｋｉｎｓ； Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  （１９９９） Ｈ．Ｃ．  Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  （２０００）  Ａ．Ｈ．  Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．， ３ｒｄ  ｅｄ，．  Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃ．
このような薬物賦形剤、たとえば佐剤、載体剤、または希釈剤は、かんたんに購入することができる。
さらに薬物物質、たとえばＰＨ調節剤と緩衝剤、浸透液調節剤、安定剤、潤湿剤などであり、やはり簡単に購入することができる。
本発明の核酸化合物と多胎化合物は宿主体内のＰＰＮ／ＭＧ６１活性を高める必要がある状況下で薬物に特にこの多胎の活性を高めまたは特定の解剖位置にＰＰＮ／ＭＧ６１活性を提供するのに使用される。
一部実施方案中にＰＰＮ／ＭＧ６１は一種の薬物化合物中に提供され、この薬物化合物は一種の薬物賦形剤をもっている。
このような遺伝子、基因段またはコーディングされたたんぱく質またはたんぱく質段はＰＰＮ／ＭＧ６１と関連した均衡を失うことを治療するのに使用される。
表現団体が細胞にこの遺伝子を引き入れるのに使用されることもできる。
【０１１２】
このような載体は一般的にこの起動子序列付近の便利をもっている制限性位置点に核酸序列の挿入を提供する。
複写することは調整を通して一種の複写起源区域、この目的遺伝子またはその段、および複写中止区域をふくんでいる。
複写することをさまざまな載体に引き入れることができ、たとえばプラスミド、反複写病毒たとえば慢病毒、腺病毒など。
そのなかでこの載体はこのような細胞中で瞬間にまたは安定的に維持され、一般的に少なくとも一日維持され、さらに、一般的な状況下で少なくとも約数日数週維持される。
【０１１３】
遺伝子またはたんぱく質はさまざまな道のりをへて組織または宿主細胞に引き入れられ、このような道のりには病毒感染、微注射または  泡融合などがふくまれる。
噴射（ｊｅｔ）注射は筋肉間給薬に利用され、描写はＦｕｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２），  Ａｎａｌ  Ｂｉｌｃｈｅｍ  ２０５：  ３６５−３６８を参照する。
このＤＮＡは金微粒に包囲されており、しかも顆粒によって装置を砲撃する（Ｐａｒｔｉｃｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ  ｄｅｖｉｃｅ）または「基因銃」を通して皮内運送を進行し描写は文献（例Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２），Ｎａｔｕｒｅ  ３５６：  １５２−１５４）参照し、その中このような 金微粒はＤＮＡによって包囲されておりのちに皮膚細胞に進入することを砲撃される。
【０１１４】
このほかの実施方案中でこの活性薬物は宿主内で目的遺伝子の表現に対して調節コーディングし、一般的な状況下でそれに対して削弱または下向調節を進行する。たとえば反義分子、小干乱ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短発カーＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は細胞中でこの遺伝子の表現に対して下向調節を進行する。
この反義試剤は反義カニュクルレオチード（ＯＮＤ）であり、一部は天然核酸からきたもので化学修飾の合成のＯＮＤをもっているが、またはこのようなＲＮＡ形式の反義分子の核酸構建体をもっている。
このＯＮＤ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ序列はこの目的遺伝子のｍＲＮＡまたはｃＤＮＡと相互補助し、この目的遺伝子の産物表現を抑制する。
ＯＤＮ，ｓｉＲＮＡ，ｓｈＲＮＡ分子中のひとつまたは化合を利用して急速に進行し、そのなかで一種類化合にはさまざまな不同な序列を含むことができる。
【０１１５】
反義序列、ｓｉＲＮＡとｓｈＲＮＡ分子は適当な載体中の目的遺伝子序列の全部または部分を通して表現を進行し、生産し、そのなかでこの複写開始の典型はひとつの反義鍵のＲＮＡ分子で生産される。
または反義、ｓｉＲＮＡとｓｈＲＮＡ分子は合成されたものである。
反義カニュクレオチード、ｓｉＲＮＡとｓｈＲＮＡ分子は本領域で示した方法を通して合成を進行する。
優先的なニュクレオチードは天然燐酸二酸構造および化学修飾からくるものである。
こうしてこのようなニュクレトチードの細胞内安定性と結合親和性を高めた。
本領域中ではすでにさまざまなこのような改変骨格、糖または雑環アルカリ基が化学性の修飾に対して描写を進めた。
骨格化学性状での有用変化ではリュデインサンエステル、比較（ｎｏｎ−ｖｒｉｄｇｉｎｇ）酸素が原因で代替される二リュデインサンエステル、アインサンアミド、アルキルギインサントリエステルおよびｂｏｒａｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｓがある。
【０１１６】
非手性燐酸誘導体には３’−Ｏ’−５’−Ｓ−リュデインサンエステル、３’−Ｓ−５’−Ｏ−リュデインサンエステル、３’−ＣＨ２−５’−Ｏ−燐酸塩および３’−ＮＨ−５’−Ｏ−アインサンアミドなどがふくまれる。
胎核酸は胎の連結で全体核糖インサンイエステル骨格を代替した。
糖修飾は安定性と親和性を増加させるのに使用される。脱サンリボスのベータ−類頭物（ａｎｏｍｅｒ）を使用し、そのなかでアルカリ基の天然アルファ類頭物に対して反転を進行する。
このリボースは２’−ＯＨを使用し、変化をへて２’−Ｏ−メチル基または２’−Ｏ−燐丙基糖を生産し、この糖は低下した抗性を提供し、親和性には損傷を与えない。雑環アルカリ基の修飾は必ず適当なアルカリ基複式を維持しなければならない。
一部使用可能な交換には脱酸ニュピリミディンで脱酸胸ソンピリミディンを代替し、５−メチル基−２’−脱酸ポピリミディンと５−ブロム−２’−脱酸ポミリミディンに脱酸ポピリミディンに交代する。
５−スプロピレン２’−ノグルコシドと５−ソプロピレン−２’−ノグルコシドと５−ソプロピレン−２’−脱酸ポニュクルシリンはそれぞれ脱酸胸ソンピリミディンと脱酸ポピリミディンに交代するとき親和性と生物活性を上昇することはすでに証明されている。
【０１１７】
本発明はさまざまな治療方法を提供した。
一部実施方案中でたんぱく質の酵素活性を調節する方法を提供し、その方法にはそれに対する調節と抑制が含まれていた。
本方法はさまざまな不同な疾病に対する治療中で用途を探し、このような病気には癌、炎症が含まれる。
Ｗｎｔ信号伝導とまたは血管発生を高めることを通して不均衡に影響を与える。
たとえば局部欠血性失調、および血栓症などであり、これは全部ではない。宿主または患者は任意の哺乳類物からきたものであり、たとえば霊長類、特に人類である。
実験性探索に使用される動物模型は注目をよんでおり、このような模型は人類疾病治療の模型を提供した。
【０１１８】
本文で使用した術語「薬物」がさすものは酵素学活性をもっているＰＰＮ／ＭＧ６１の水準の調節する物質である。
一部実施方案中で薬物は本発明の選別分析を通して検定された薬物である。
「調節は酵素学性質をもっている本ＰＰＮ／ＭＧ６１の水準」にはＰＰＮ／ＭＧ６１の酵素活性を上昇または低下させる。
酵素学活性をもっているＰＰＮ／ＭＧ６１たんぱく質の水準を高めまたは低下させる。
およびコーディングが酵素学活性をもっているＰＰＮ／ＭＧ６１たんぱく質のｍＲＮＡ水準の上昇または低下などを含む。
一部実施方案中、薬物はＰＰＮ／ＭＧ６１としてそのなかでＰＰＮ／ＭＧ６１自体は個体に対して給薬を進行されるのに使用される。
一部実施方案中薬物は特異なＰＰＮ／ＭＧ６１の抗体である。
【０１１９】
ＰＰＮ／ＭＧ６１活性の低下と／またはＰＰＮ／ＭＧ６１多胎またはｍＲＮＡ水準の低下を通して影響を与える疾病には腫瘍中のＷｎｔ信号伝導と／または血管発生の促進と関連した症状またはそれによって招来される症状が含まれる。
ゆえに、本方案はＷｎｔ信号伝導と／または血管発生を低下させ、誘導した腫瘍に使用する。一部実施方案中で一部方法を提供し、癌治療に使用された。
このような実施方案中の一部方案中で腫瘍発生を低下させる方法を提供した。
その他の実施方案中で分化がECM中の放出を低下させる方法を提供した。
腫瘍生長を低下させる方法およびＰＰＮ／ＭＧ６１活性を低下させる方法には一般的に、某種の酵素活性ＰＰＮ／ＭＧ６１の水準を低下させる薬物を個体に対して薬物を進行する。
適当な参照と比較すると、有効量の薬物は酵素活性ＰＰＮ／ＭＧ６１の水準を少なくとも約１０パーセント、少なくとも約２０パーセント、少なくとも約３０パーセント、少なくとも約４０パーセント、少なくとも約５０パーセントまたはそれ以上を低下させた。
【０１２０】
因子がＥＣＭ中の放出を制限させる方法を提供し、このような因子の例としては生長因子と分化因子がある。
このような方法には一般的に某種の酵素活性ＰＰＮ／ＭＧ６１の水準を低下させる薬物として個体に対して給薬を進行し、そのなかで酵素活性ＰＰＮ／ＭＧ６１水準の低下は因子が腫瘍付近または周辺のＰＰＮ／ＭＧ６１中の放出を低下させた。
分化と生長因子にはＷｎｔ、繊維原細胞生長因子（ＦＧＦ）、肝素結合の類EGF生長因子、肝細胞成長因子、Ｗｎｔ家族の分泌糖たんぱく質の成員、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血小板誘導の生長因子（ＰＤＧＦ）、転化生長因子（ＴＧＦ）たとえばＴＧＦ−ベータ, 骨格形態発生たんぱく質、ＧＭ−ＣＳＦおよび肝細胞生長因子などがふくまれているすべてではない。
【０１２１】
本発明の方法を使用して治療を進めることができる腫瘍には悪性腫瘍、たとえば非小細胞肺がん、結腸癌、前立腺がん、乳腺癌、悪性黒色小腫瘍、導管腫瘍、子宮内膜腫瘍、胃がん、脾臓がん、間皮腫瘍、口腔粘膜発育異常（ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｏｒａｌｍｕｃｏｓａ）、侵入性口腔がんｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｃａｒｃｉｍｏｍａなどがふくまれる。
また、神経悪性増長、たとえば神経細胞腫瘍、成交質細胞腫瘍、星細胞腫瘍、神経交質腫瘍など、慢性リンパ性白血病、悪性皮膚Ｔ細胞（ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ）、蕈祥  菌病、非ＭＦ皮膚Ｔ細胞リンパ腫瘍、リンパ腫瘍瘍丘疹病、Ｔ細胞富集皮膚リンパ増生（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｉｃｈ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、大疱性遺伝疱疹、盛状紅斑狼瘡、扁平苔癬などがふくまれる。
本領域ですでにわかっている任意の手段は腫瘍細胞の成長の抑制または低下に対して推定を進行し、このような方法には腫瘍体的な測定、腫瘍の増殖いかんに対する測定、たとえば３Ｈ−参入分析、および／または腫瘍細胞に対して計数を進行するのにこれは全部ではない。
【０１２２】
一部実施方案中で本発明はがんを低下させる方法を提供し、この方法には酵素活性ＰＰＮ／ＭＧ６１の水準を高める方法が含まれた。
一部実施方案中でこの方法にはＰＰＮ／ＭＧ６１で個体に薬物を進行した。
その他の実施方案中でこの方法は薬物で（たとえば上で言及した選別方法を総じて検証した薬物）で個体に給薬を進行し、そのなかで言及した薬物は個体中でＰＰＮ／ＭＧ６１の水準を上昇させる薬物である。
医療有効量の薬物の量は十分に相当比例の配基中でアシル基部分を除去することができ、これによってがんを防止または改善するものである。
これから本文は癌の上下文で使用される「治療」がさすことはがんのまたはがんと関連した症状の防止と改善をいう。
【０１２３】
薬物に使用されるＰＰＮ／ＭＧ６１または薬物の量を測定するためには必ず完全にすべてのアシル基基団を除去しようとは考えてはならないという点を注意しなければならない。
正常の治療を進行するために傷の発生した部分、肝炎、または疾病形態の区域の組織中で必ず少なくとも一部分白血細胞または嗜中性細胞を添付しなければならない。
給薬に使用されるＰＰＮ／ＭＧ６１または薬物の量は患者の特定需要に根拠をおいて調節を進め、同時にさまざまな要素も考慮しなければならない。
たとえば治療をのぞむ疾病類型である。
このようなＰＰＮ／ＭＧ６１と／または薬物はさまざまな疾病の治療に使用されたとえば風習性関節炎、喘息、成人呼吸困難総合症、有類型腫瘍病、過敏性肺炎、多発性硬化、同種異体移植物排類およびリンパ腫瘍が皮膚位置への分布などである。
【０１２４】
本発明の化合物は任意の状態を治療するのに使用され、そのなかでこの免疫系統が転換され身体を対抗することによって白細胞が組織中で積累する程度を招来し、これによって組織損傷、浮腫、炎症と／または病痛を誘発した。
たとえば大量の白血細胞は迅速に患病区域の間接に浸入しまたは周辺細胞を振興するとき風湿性関節炎の炎症を発生した。一部実施方案中でこの発明は血管発生の増強に使用される方法を提供した。
このような方法には一般的に一種の有効量のＰＰＮ／ＭＧ６１で失っている症状の哺乳動物に対して給薬を進行するのに関連し、この症状は血管発生を増強させることをとおして治療を進行する。
多くの実施方案中でＰＰＮ／ＭＧ６１は某解剖位置に対して局部給薬を進行した。
【０１２５】
本発明の方法に根拠をおいて進めたｃｌｆｙｒｋ影響は症状と疾病の例としては血管閉塞と関連した任意の症状が含まれており、たとえば動脈、静脈または毛細系統の閉塞である。
このような症状の具体的な例には冠状動脈閉塞疾病、結動脈閉塞疾病、動脈閉塞疾病、末梢動脈閉塞疾病、動脈硬化症、ｍｙｏｎｔｉｍａｌ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ（たとえば血管手術または気嚢血管整形術または ｖａｘｃｕｌａｒ  ｓｔｅｎｔｉｎｇ）、閉塞性血栓性管炎、成血栓失調、脈管炎などが含まれるのだがこれは全部ではない。
本発明の方法を使用して予防することができる症状と疾病にはさまざまな局部失血症のうちの（たとえば、心筋失血、四肢失血、中風と関連した失血）任意の一種が含まれ、心臓病発作（心筋失血）またはその他の血流減少と関連した血管壊死、中風、四肢壊死、または消失などもふくまれこれは全部ではない。
【０１２６】
これから、本発明は失血症状を治療する方法を提供した。
有効量のＰＰＮ／ＭＧ６１で進行した給薬は血管発生を促進し、その結果は失血組織に対する血液供給の増加である。
適当な参照と比較すると、ＰＰＮ／ＭＧ６１で吸薬を進めた後失血組織に対する血液供給（血流）が増加は少なくとも約１０パーセント、少なくとも約２０パーセント、少なくとも約３０パーセント、少なくとも約５０パーセント、少なくとも約７５パーセント、少なくとも約１００パーセントまたはそれ以上である。
本領域ですでにわかっている任意の方法を通して、局部失血組織に対する血液供給の増加いかんについて測定して、このような方法には温度記録（ｔｈｅｒｍｎｏｇｒａｐｈｙ）、紅外記録、透皮ＰＯ２、透皮ＰＣＯ２、レーザーｄｕｏｐｕｌｅ、ｄｕｏｐｕｌｅ波形、距肱指数（ａｎｋｌｅ  ｂｒａｃｈｉａｌ  ｉｎｄｅｘ）、脈拍体積記録（ｐｕｌｓｅ  ｖｏｌｕｍｅ  ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ）、指圧（ｔｏｅ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）、双波形（ｄｕｐｌｅｘｗａｖｅｆｏｒｍ）、磁共振成像影、同位素衝失（ｉｓｏｔｏｐｅ  ｗａｓｈｏｕｔ）およびＮＡＤ／ＮＡＤＨ蛍光分光密度などが含まれており、これがすべてではない。このような方法は本領域中ですでにわかっており、いくつかの出版物でもすでに描写された。 
血管発生が増加のいかんを本領域中の任意のわかっている方法を使用して測定を進めてこの方法には：新生血管を浸以松弛の植物内への生成を刺激し、血管が角膜または前眼室内の生長を刺激し、内皮細胞の増殖、転移または体外管の形成を刺激し、および鶏絨幕尿嚢幕分析、ハムスター頬嚢分析、ポリビニールアルコール錦板分析（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｓｐｏｎｇｅ  ｄｉｓｋ  ａｓｓａｙ）などが含まれる。
このような分析は本領域中ですでに広範囲にわかっているさまざまな種類の出版物で描写されている。
このような出版物の例をあげるとＡｕｅｒｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）Ｐｈａｒｍａｃ  Ｔｈｅｒ  ５１：  １−１１），で、ここに参考に応用された。上で言及したように、一種の有効量の活性薬物（たとえば小分子、抗ＰＰＮ／ＭＧ６１抗体またはＰＰＮ／ＭＧ６１）は宿主に対してこの薬物を進行し、そのなかで「有効量」がさすことは十分に必要な結果を生産する量をいう。
【０１２７】
一部実施方案中で必要な結果は少なくともＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性と参照と比較した低下である。
その他の実施方案中でこの必要な結果はＰＰＮ／ＭＧ６１酵素活性と参照と比較した増加（個体中、または個体の局部解剖位置）である。
典型的な状況で、本発明の化合物は必ず活性分子が１パーセントから約９５パーセント以下を含まねばならず、優先的な状況では約１０パーセントから約５０パーセントの間である。
一般的な状況下で自動に対しては必ず１００ｍｇから約５００ｍｇのあいだで給薬を進行させなければならない、成人は約５００ｍｇから約５ｇの間で給薬を進行する。
給薬は一般的な状況下で注射を通して進行し、一般的に注射を通して局部区域に対して給薬を進行する。
給薬の頻率は必ず患者反応に基礎をおいて決定を考慮しなければならない。
その他有効量は本領域中の普通技術人員が生産した剤量反応曲線で簡単に測定することができる。
【０１２８】
ＰＰＮ／ＭＧ６１の量を測定するために、本領域の技術人員は簡単に得られる有管除去給定量ＰＰＮ／ＭＧ６１に必要な酵素量の情報、たとえば給定された酵素がもっている活性はひとつ単位で酵素で生理ＰＨ下で底物から１ｍｍｏｌ／分のＳＯ４の除去を進行し、治療目的として７０ｋｇの人類へは１から１０単位で静脈内給薬を進行する。
酵素活性ＰＰＮ／ＭＧ６１水準を除去するのだが必要な薬物は量は対外実験を通して計算を進行する。
たとえば高アシル基基団が給定量の底物中の除去に必要な薬物量を除去することを通して計算を進行し、待機治療区域中のこの底物（または体内対応物）の量を推定することを通して給薬に作用する薬物の量を測定する。
この薬物量は使用される特定薬物によって変化がある。本発明の方法中で活性薬物は任意の便利な手段を利用し、給薬を進行しこの手段は必要なＰＰＮ／ＭＧ６１活性抑制を招来することができなければならない。
【０１２９】
これからこの薬物は治療性給薬に使用されるさまざまな配制、引入されることができる。
さらに特定の状況下で本発明の薬物は適当な薬物用載体または希釈剤を通して化合を進行し薬物化合物に配入することができ、また固体、半固体、液体または気体形式の制剤、たとえば薬片、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座薬、注射剤、吸入剤または気体交質（ジェル）などである。
同様に、このような薬物の使用はさまざまな方式で完成された場合、口腔、直腸、非腸胃道、皮下、透皮、ｉｎｔｒａｃｈｅａｌなど給薬が含まれる。
薬学薬剤の形式下で、この薬物は薬物用塩の形式で給薬を進行し、またはそれらは単独作用またはその他の薬学活性化合物と適当な関連作用または化合作用を進行する。以下の方法と賦形剤は例にすぎず絶対的なものではない。
【０１３０】
口腔製剤に対してこの薬物は単独作用または適当な添加剤と化合作用しこれによって薬片、粉末、顆粒、カプセルを生産したとえば伝統的な添加剤と加工した乳糖、甘露糖、とうもろこしでんぷん、またはさつまいもでんぷん、粘合剤と結合した結晶繊維素、繊維素衍生物、アラビア松脂とうもろこしでんぷんまたはジェル、崩解剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ）と結合したとうもろこしでんぷん、さつまいもでんぷんまたは水酸メチル基繊維ナトリウム、潤滑剤と結合した滑石または硬脂酸マグネシウム、必要な希釈剤、緩衝剤、潤滑剤、防腐剤と調味剤と結合することができる。
適当な賦形剤載体はたとえば水、塩、ブドウ糖、グリセリン、エチルアルコールなど、およびその加工物である。もし必要ならばこの載体は最小量の補助物質を含有しなければならない。
たとえば潤湿剤またはＰＨ緩衝剤である。このような薬剤形式の物質を製造する実際の方法は本領域の技術人員が知っており、簡単に見ることができる。
たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，  １７ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，  １９８５である。給薬に使用される化合物または製剤は任意の状況下で一定の量の充分に待機治療対象の体内で得ることができる必要な塩酸塩／セレン塩および／またはＰＰＮ／ＭＧ６１を含有しなければならない。
【０１３１】
溶解を通して浮遊または乳化された含水溶剤または非水溶剤でこの薬物は注射に使用される製剤として製造することができ非水溶製剤の例としては植物性油、またはその他類似の油、合成された脂肪酸グリセリンエステル、トリプロピルアルコールまたは高級脂肪酸エステル。
もし需要されれば伝統的な添加剤も含有することができ、たとえば増溶剤、等浸薬物、浮遊薬物、乳化剤、安定剤または防腐剤である。
この薬物は基溶膠製剤に使用され、吸入を通して給薬を進行する。
本発明の化合物は加圧を加えることができる促進剤に配入することができ、たとえばイプルソイ塩化メタン、プロパン、窒素などである。
さらに、この薬物はさまざまな基質との混合を進行するものを通して座薬として製造され、たとえば乳化基質または水溶基質混合である。本発明の化合物は座薬を通して直腸給薬を進行する。
この座薬にふくまれることができる載体にはココア油、タンラプ、トゥエチルアルコールが含まれこのような座薬は体温下で溶解し室温では固体形態である。
【０１３２】
口腔はたは直腸給薬に使用される単位剤量形式提供される。
たとえばシロップ、エリクサーおよび浮遊物であり、そのなかで体量単位ごとにたとえば茶さじ量ごと、湯さじ量ごと、欠片ごと、栓ごとであり、予定量の調合物を含有し、この調合物は一種のまたはさまざまの抑制剤を含有した。
類似の注射または静脈内給薬に使用される単位剤量は調合物中で抑制剤を含有し、この調合物は無菌水溶液、生理塩水、またはほかの一種の薬物載剤である。
本文で使用した術語「単位剤量形式」がさすものは実際中連結されない単位であり、単位は人類または動物対象の一つ単位の剤量に適合する単位ごとには予定量の本発明の化合物を含有しており、この量は計算を通して水溶に充分な効果を生み出し、この化合物は薬物希釈財、載体または負載物と連合する。
本発明に使用される新しい単位製剤形式の企画は使用される特定化合物および必要なだけの効果および各化合物が宿主体内に関連した薬効学によって決定される。
【０１３３】
薬物賦形剤たとえば座薬、載体または希釈剤はすでにわかっている。
さらに薬学で受け付けることができる補助性物質たとえばＰＨ調節剤と緩衝剤、浸透圧調節剤、安定剤、潤滑剤などに対してもすでに充分にわかっている。
薬物が一種の多胎、タポリニュークレオチドそれらの類似物または模型物（ｍｉｍｅｔｉｃ）である場合、たとえば反義序列、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ調合物の状況下でこの薬物は任意の道筋をへて組織または宿主細胞に浸入しこのような道筋には病毒感染、微注射または嚢泡融合が包括される。
噴射注射は筋肉間給薬に使用され、描写は、Ｆｕｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２），Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２０５：３６５−３６８を参照する。
このＤＮＡは金微粒につもっており、顆粒衝撃設備または「気因銃」を通して皮下に運送される。
描写は文献（たとえば：Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２），Ｎａｔｕｒｅ  ３５６：１５２−１５４）を参照とし、そのなかでこのような金微粒はＤＮＡによってうずもれ皮膚細胞に砲撃浸入された。
【０１３４】
技術人員は剤量水準を具体的な化合物、症状の重さ程度および被実験者が副作用に対する敏感度などによって変化されることを認定しなければならない。
給定化合物に対して選択した剤量は簡単に本領域中の技術人員がさまざまな手段を通して測定することができる。
治療がさすものはこの対象を困惑させる病状と関連した症状が少なくとも緩和がなければならず、その中の緩和は広範囲な意味で同一の待機治療の病状と関連した某ケースをいう。
たとえば症状程度の緩和、病状の例としては炎症または関連した病痛がある。
治療にはまたはこの病状または少なくとも関連した症状が緩制抑制たとえば防止と発生、または完全停止、たとえば中止であり、これによって宿主がさらにこのような病状を病まず少なくともこの病状の特定症状を病んではならない。
さまざまな宿主は本発明に根拠をおいて治療を進行することができる。
【０１３５】
一般的な状況下でこのような宿主は「哺乳動物」または「哺乳類」であり、そのなかでこのような術語は広範囲な意味でこのような哺乳類に属する有機物に対して描写し、このような有機物には食肉目（たとえば犬と猫）、げっ歯類（たとえば小さなねずみ、ギニアピーク、大きなねずみ）、および霊長動物（たとえば人類、オラウータン、猿）である。
多くの実施方案中で宿主は大部分が人類である。
上の文の描写に根拠をおいて、本発明のＰＰＮ／ＭＧ６１と薬物自体に使用され、おたがいに同じように使用することができ、または薬物賦形剤材料と連合使用することができる。
単位剤量活性をもっている試剤箱を提供し、一般的に口服または注射薬剤である。
このような試剤箱中で単位剤量の含有する容器を除いたほかには説明書がなければならず、この説明書はこの薬物が治療目的病状のなかでの応用と付加特長に対して描写されなければならない。
優先的な化合物と単位剤量は本文の上の文に説明した。
【０１３６】
有利な状況で本発明のＰＰＮ／ＭＧ６１と薬物は少なくとも一種のその他の非白金と含白金の抗腫瘍薬物とともに悪性症状を病んでいる対象に対して給薬を進行するのに使用された。
たとえば一種の抗ＰＰＮ／ＭＧ６１の化合物は剤量方案（ｄｏｓｉｎｇｒｅｇｉｍｅｎ）中で一種の細胞毒性化合物たとえばＤＮＡアルコール気化薬物、または一種の抗血管発生薬物または抗腫瘍薬物（化合物またはタンクルロン抗体）とともに給薬を進行するのに本発明はこれが全部ではない。
優先的な腫瘍薬物はｃｈａｄｒｉｂｉｎｅ（２−塩素−２’−脱酸−β−Ｄ−ソンクルコシジン）、ベンゼン落酸窒素（（４−［双（２−塩化エチル基）アミノ基］ベンゼン落酸）、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（５−３’３−メチル基−１−ｔｒｉａｚｅｎｏ）−４−メチルアミド）、含白金抗腫瘍薬物および非白金抗腫瘍薬物で選定されたものである。
白金を含有しない抗腫瘍薬物には環燐酸アミン、ビュルソニョピリミジン、ピャロビシン、アンモニアメチルディエロン、チャンチュンシンハン、アマイシン、パクレマイシンとキグウルチャガムなどがふくまれこれは全部ではない。
各種腫瘍薬物は医療有効領内で給薬し、この量は本領域ですでにわかっており、使用された薬物、悪性症状類型およびその他症状によって変化がなければならない。
【実施例】
【０１３７】
以下の実施例題は本領域の普通技術人員にどのように実施するのかを提供と本発明の完全提示と描写に使用され、このような例題は本発明者が認定した発明範囲に対して進めた制限ではなく、また下の問いの実験は実施した全部の実験ではない実施することができる実験である。
実施例１：人類正常と癌細胞系中のＰＰＮ／ＭＧ６１の表現
私たちは半定量ＲＴ−ＰＣＲを使用しＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡがさまざまな人類がん細胞中での表現および正常人類原細胞中での表現に対して研究した。
（図１）私たちが測定した人類がん細胞系には非小細胞肺がん（ＮＡＣＬＣ）（Ａ５４９，Ｈ４６０，Ｈ８３８，Ｈ１７０３），乳腺がん（ＭＣＦ−７，ＢＴ４７４，ＨｕＬ１００），悪性多間皮腫瘍細胞系（Ｈ５１３，Ｈ２０５２，Ｈ２９０，ＭＳ−１，Ｈ２８），結腸がん細胞系（ＳＷ４８０），頭頚癌細胞系（Ｕ８７），子宮頚部がん（Ｈｅｌａ），瘤細胞系（Ｍｅｓ−ＳＡ，Ｓａｏｓ−２，Ａ２０４）がふくまれる。
私たちが測定した正常人類原細胞としては小気管上皮細胞（ＳＡＥＣ），気管支上皮細胞（ＮＨＢＥ），および正常の間皮細胞（ＬＰ−９）などである。
各個の細胞できた類型の総ＲＮＡを製造準備して同量の総ＲＮＡをそれぞれＲＴ−ＰＣＲ分析に使用した。
【０１３８】
それぞれサンプル中で一種の持ち家（ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ）遺伝子ＧＡＰＤＨに対して拡増を進行し内参加と可量で対照した。
すべて３種類の正常人類細胞培養物中ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの表現を見ることができなかった。
（図１）これと比較して、私たちは測定したすべての人類がん細胞中ですべて高水準のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの表現を考察することができた。
（図１）このような結果はＰＰＮ／ＭＧ６１がさまざまなまたはすべての人類癌細胞系中で高度に表現されたが正常人類細胞中では貫徹しなかったことを提示した。
【０１３９】
実施例２：ＰＰＮ／ＭＧ６１が人類正常細胞と癌組織サンプル中での表現
私たちは半定量のＲＴ−ＰＣＲを使用し原非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）組織サンプルとそれが同一の患者体内で対応した正常肺サンプル中でＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの表現に対して測定した。
（図２）腫瘍に対する治療性初歩切除の患者の新鮮な肺がん組織と周辺の正常肺組織は手術時収集されたものであり、即時液体窒素内に冷凍させたものである。
このような組織サンプルは液体窒素冷凍容器中で保存され−１７０度まで冷凍した後使用した。
次にこのような新鮮に除去した肺がんと同一の患者自体に対応する正常肺組織中から総ＲＮＡを製造準備して同量の総ＲＮＡをそれぞれＲＴ−ＰＣＲ分析に使用する。
私たちが測定した２４個の対応した人類非がんとがん化肺組織サンプル中、私たちは対応した正常肺組織サンプルと比較してほとんどすべて（２３個）肺がん組織サンプル（９５．８パーセント）からＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡが過表現された。（図２）
【０１４０】
実施例３：原人類間皮腫瘍組織サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準に対するＲＴ−ＰＣＲ分析
私たちは半定量ＲＴ−ＰＣＲを使用して原間皮腫瘍組織と正常複合（ｐｌｕｒａｌ）組織サンプル中にでＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの表現に対して測定した。
腫瘍治療性初歩切除を受けた患者の新鮮な間皮腫瘍組織と周辺の正常複合組織を手術時収集し、即時液体窒素で冷凍させた。
このような組織サンプルは液体窒素で−１７０度まで保存して使用した。
次にこの患者の新鮮に除去された間皮腫瘍と正常組織中で総ＲＮＡを製造準備し同量の総ＲＮＡをそれぞれＲＴ−ＰＣＲ分析に使用する。
私たちが測定したすべてのがん化間皮主要の組織サンプル中で、私たちは６４．７パーセント（１７中の１１個）の間皮腫瘍組織サンプルからＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡが過表現されたことを発見した。
（図３）すべての正常組織中ではＰＰＮ／ＭＧ６１の表現を貫徹できなかった。
【０１４１】
実施例４：正常人類血清とがん患者からの血清サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１表現水準のＲＴ−ＰＣＲ分析
次に私たちはがん患者の結成サンプル中からＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの頻度過表現の測定いかんに対して測定した。
血清サンプルは標準プログラムに根拠をおいてさまざまながん患者中から収集を進め、ＮＳＣＬＣ、間皮腫瘍、結腸癌、悪性黒色小腫瘍、腎臓癌、食道がん、甲状腺がん、悪性毒腫瘍と卵巣がんがふくまれる。
次は血清収集の３時間内にこのような血清サンプルからの血清の３２個のサンプル中から私たちは９３．８パーセント（３２個中の３０個）のサンプル中からＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡが過表現されたことを発見した。
参照組中から総ＲＮＡ８個の不同な正常人の血清中から製造されたものである。
第２実験中にわたしたちはＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの過表現のいかんについて測定し、ＲＴ−ＰＣＲを使用してがん患者の結成サンプル中から総ＲＮＡに対する分離作業がなく直接的に測定した。（図５）
【０１４２】
この実験中にすべて血清サンプルは収集した後さらに処理過程をへず直接的にＲＴ−ＰＣＲ反応（毎２５マイクロＩ反応系統中１マイクロＩ血清）に添加した。
この実験は血清収集後３時間内に進行した。３６個の循環した後私たちは１６個のがん患者の結成サンプル中の１０個（６２．５パーセント）からＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの過表現を測定した。
これと反対に同一の実験条件かで全部で４個の正常血清サンプル中ではＰＰＮ／ＭＧ６１の表現を発見できなかった。
（図５）第３実験中、私たちはＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの過表現がＲＴ−ＰＣＲを使用することを通してがん患者の熱処理された血清サンプル中から総ＲＮＡ分離なく直接的に測定されたのかどうかについて測定した。
(図６)この実験から血清収集後すべての血清サンプルは７５度から１０分間加熱しこのＲＴ−ＰＣＲ反応（毎２５マイクロＩ反応系統中１ミューｉ熱処理された血清）に添加した。
【０１４３】
この実験は同様に血清収集後３時間内に進行した。
３６個循環した後に私たちは２２個のがん患者の結成サンプルの１２個（５４．５パーセント）のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの過表現を発見することができた。
これと反対に同一の実験条件かで全部の４個の正常血清サンプルからはＰＰＮ／ＭＧ６１の表現を発見することはできなかった。
まとめると、不同の方法を使用することを通して私たちはがん患者から収集した血清サンプルから直接の比較的高い比率（５５パーセント超過）のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡの過表現を測定することができた。
しかし同一の条件下で私たちは不同の非癌人から収集したすべての正常細胞血清サンプルからはＰＰＮ／ＭＧ６１の表現を発見できなかった。 
実施例５：ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡが非小細胞肺がん（ＮＡＣＬＣ）細胞から細胞の死亡を誘導し、Ｗｎｔ／ベータ−連関たんぱく質の信号伝導を遮断した。
【０１４４】
さらにＰＰＮ／ＭＧ６１が人類ＮＳＣＬＣ発展期間中での役割について理解するために私たちはＰＰＮ／ＭＧ６１がＮＳＣＬＣ細胞生存と増殖に必要かどうか測定した。
この実験はＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ）を通して進行したＰＰＮ／ＭＧ６１表現の考証によって完成する。
小干擾ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は設計を通してＱｉａｇｅｎ，  Ｉｎｃから合成される。
次にＥｌｂａｓｈｉｒなど人（２００１）が描写した方案どおりＲＮＡｉを進めた。
ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ  ４−６日の処理を進めて私たちが測定する表現ＰＰＮ／ＭＧ６１のＮＳＣＬＣ細胞系から顕著な細胞死亡を誘導した（図７Ａと８Ａ，Ｐ＜０．００１）。
しかし参照ｓｉＲＮＡ処理をへた後私たちは顕著な効果を見ることはできなかった。
わたしたちはさらに細胞の死傷はとても大きな程度からこのような細胞系から誘導した細胞死亡によるものであることを発見することができた。
１００ｎＭのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡは顕著な細胞死亡を誘導し、非沈黙ｓｉＲＮＡ参照は細胞の死亡（１００ｎＭ）（Ｐ＜０．０１）（図７Ｂ，８Ｂ，９Ｂ）を誘導できなかった。
私たちはＲＴ−ＰＣＲ分析を通してＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後（１００ｎＭ，７２時間）ＰＰＮ／ＭＧ６１表現の沈黙 （図７Ｃ，８Ｃ，９Ｃ）を証明した。
非沈黙性ｓｉＲＮＡは参照（１００ｎＭ，７２時間）で使用した。
この細胞の死亡効果がＷｎｔ信号伝導の抑制と関連のいかんを測定するために私たちはＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理（図７Ｃ，８Ｃ，９Ｃ）を経た後、胞質ベータ−連関たんぱく質と生存たんぱく質（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）の表現水準が下向調節された。ベータ−肌動たんぱく質はすべて実験から加量で参照された。
【０１４５】
実施例６：ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡが間皮腫瘍細胞から誘導し、またＷｎｔ／．  ベータ−連関たんぱく質の信号伝導を遮断した。 
さらにＰＰＮ／ＭＧ６１が人類間皮腫瘍発展時間中の作用について理解するために私たちはＰＰＮ／ＭＧ６１が間皮腫瘍細胞の生存と増殖に必要いかんについて測定した。
この実験はＲＮＡｉを使用することを通して進めたＰＰＮ／ＭＧ６１表現の考証によって完成された。
使用されたｓｉＲＮＡは上での描写と同一である。次にＥｌｂａｓｈｉｒなど人（２００１）が描写した方案どおりにＲＮＡｉを進めた。
ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡで４−６日の処理を進めて私たちが測定する表現ＰＰＮ／ＭＧ６１の間皮腫瘍細胞から細胞死亡を誘導した。
【０１４６】
（図１０）１００ｎＭのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡは顕著な細胞死亡を誘導し、非沈黙ｓｉＲＮＡ参照は細胞の死亡（１００ｎＭ）（Ｐ＜０．０１）（１０Ａ）を誘導できなかった。
私たちはＲＴ−ＰＣＲ分析を通してＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後（１００ｎＭ，７２時間）ＰＰＮ／ＭＧ６１表現の沈黙（図１０Ｂ）を証明した。非沈黙性ｓｉＲＮＡは参照（１００ｎＭ，７２時間）で使用された。
この細胞の死亡効果がＷｎｔ信号伝導の抑制と関連のいかんを測定するためにわたしたちはＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理（図１０Ｂ）を経た後胞質ベータ−連関たんぱく質と生存たんぱく質（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）の表現水準が下向調節された。ベータ−起動たんぱく質はすべて実験から加量に参照された。
実施例７：ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡが乳腺がん細胞から細胞死亡を誘導しまたはＷｎｔ／．ベータ−連関たんぱく質の信号伝導を遮断した。
【０１４７】
さらにＰＰＮ／ＭＧ６１が人類乳腺癌発展時間中の適用にたいして理解するために、わたしたちはＰＰＮ／ＭＧ６１が乳腺がん細胞の生存と増殖に必要なのかどうかを測定した。
この実験はＲＮＡｉを使用することを通して進めたＰＰＮ／ＭＧ６１表現の考証によって完成された。
使用したｓｉＲＮＡは上の文での描写と同一である。つぎにＥｌｂａｓｈｉｒなど人（２００１）が描写した方案のとおりにＲＮＡｉを進めた。
ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡに４−６日の処理を進めて私たちが測定する表現ＰＰＮ／ＭＧ６１の乳腺がん細胞中から細胞死亡を誘導した。
（図１１）１００ｎＭのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡは顕著な細胞死亡を誘導し、非沈黙ｓｉＲＮＡ参照は細胞の死亡（１００ｎＭ）（Ｐ＜０．０１）（図１１Ａ）を誘導できなかった。
わたしたちはＲＴ−ＰＣＲ分析を通してＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後（１００ｎＭ，７２時間）ＰＰＮ／ＭＧ６１表現の沈黙（図１１Ｂ）を証明した。
非沈黙性ｓｉＲＮＡは参照（１００ｎＭ，７２時間）に使用された。
この細胞の死亡効果がＷｎｔ信号伝導の抑制と関連があるのかどうかを測定するために私たちはＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理（図１１Ｂ）を経た後、胞質ベータ−連関たんぱく質と生存たんぱく質（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）の表現水準が下向調節された。 ベータ−起動たんぱく質はすべて実験中から加量に参照された。
【０１４８】
実施例８：陰性対照：ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡがＰＰＮ／ＭＧ６１表現が欠乏した正常細胞から細胞の死亡を誘導できず、またＷｎｔ／．ベータ−連関たんぱく質の信号伝導を遮断した。
【０１４９】
ＰＰＮ／ＭＧ６1表現を貫徹できず正常細胞からＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡの効果を測定し、私たちはＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡを転移染色し二種類の不同なＰＰＮ／ＭＧ６１表現が欠乏した正常細胞培養物に添加した。
（図１２）１００ｎＭのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡに４−６日の処理した後非沈黙性ｓｉＲＮＡ（１００ｎＭ）参照との比較で私たちは顕著な細胞死亡の誘導を発見できなかった。
（図１２Ａ）。このような正常な組織から半定量ＲＴ−ＰＣＲを使用し、ｓｉＲＮＡ処理される前までと後にＰＰＮ／ＭＧ６１の表現を測定できなかった。
（１００ｎＭ，７２時間）（図１２Ｂ）非沈黙性ｓｉＲＮＡは参照（１００ｎＭ，７２時間）で使用された。
同様に胞質ベータ−連関たんぱく質と生存たんぱく質の表現水準はＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後には変化がなく、私たちはＷｎｔ信号伝導も抑制しないことを発見した。 
（図１２Ｂ）同様にベータ−起動たんぱく質はすべての実験で加量に対照された。
【０１５０】
私たちの結果はＰＰＮ／ＭＧ６１の抑制は表現ＰＰＮ／ＭＧ６１のがん細胞から特異にまたは選択的に細胞死亡を誘導することを提示したが、表現しないＰＰＮ／ＭＧ６１の正常細胞にもこのようなことではない。
このような結果はさらにＰＰＮ／ＭＧ６１の功能とがん細胞生存のあいだに強烈な関係があることを提示した。 
実施例９：膜結合Ｏ−アシル基転移酵素家族の保守区域の多配列比較
単に選択されたたんぱく質（図１３）に対してのみ提示した。
物種と酵素の名称は：ＡＴ，擬南芥；ＢＳ，枯草芽胞杆菌；ＣＥ，線虫；ＤＭ，果蝿ＨＳ，人類；ＳＩ，Ｓｉｍｍｉｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ＴＰ，梅毒らせん体；ＡＣＡＴ，コレステロールアシル基転移酵素；ＤＧＡＴ，二アシル基グリセリン ０−アシル基転移酵素；ＷａｘＳｙｎ，蝋合成酵素である。５０パーセントを超過する序列からの変化残基と保守残基はそれぞれ黒色と灰色背景を表現し、高度に保守された激性残基は有色背景で表現された。
排列比較の左側の数値は序列の位置を表現し、上部の黒線は長蔬水区域を表現した。
【０１５１】
Ｐ４７：序列表；北京雅康博生物化学有限会社；ＰＰＮ／ＭＧ６１の表現を測定する方法とその応用；人類ＰＰＮ／ＭＧ６１の胎序列 
Ｐ４８： 人類; 引物対
Ｐ４９： 人類; 引物対 
Ｐ５０： 人類; 引物対 
Ｐ５１： 標的序列
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
添付図面に対する説明
【図１】ＰＰＮ／ＭＧ６１が人類の正常と癌細胞係中の表現。多種癌細胞係の中でのＰＰＮ／ＭＧ６１が表現したＰＴ−ＰＣＲ分析、使った細胞系には悚素細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（Ａ５４９，Ｈ４６０，Ｈ８３８，Ｈ１７０３）、乳線癌細胞系（ＭＣＦ−７，ＢＴ４７４と ＨｕＬ１００）、悪性多間皮腫瘍細胞系（Ｈ５１３，Ｈ２０５２，Ｈ２９０，ＭＳ−１，Ｈ２８）、結腸癌細胞系（ＳＷ４８０）、小頚癌細胞系（Ｕ８７）、Ｈｅｌａ細胞係、肉腫瘍細胞系（Ｍｅｓ−ＳＡ）及び正常細胞（小気管上皮細胞）（ＳＡＥＣ）、支気管上皮細胞（ＮＨＢＥ）などが含まれる。各細胞類型のすべてＲＮＡを製造準備した。
【図２】ＰＰＮ／ＭＧ６１が人類の正常と癌細胞組職サンプルの中での表現。初期非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）組職サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準に対するＲＴ−ＰＣＲ分析。すべてＲＮＡは新鮮に切り取りされた肺癌と等しい患者の体内の同源符号した正常な肺組織中で栽培される。
【図３】初期人類間皮腫瘍組職サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１の表現水準とＲＴ−ＰＣＲ分析。すべてＲＮＡは新鮮に切り取りされた癌症患者の中で栽培される。
【図４】正常人類の血清と癌症患者からの血清サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準のＲＴ−ＰＣＲ分析、この癌症にはＮＳＣＬＣ、間皮腫瘍、結腸癌、悪性色素腫瘍、腎臓癌、食道癌、甲状腺癌、肉腫、卵巣癌などが含まれる。すべてＲＮＡは血清サンプルの中で栽培されてまたこの反応に使われる。
【図５】正常人類の血清と癌証患者からの血清サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準のＲＴ−ＰＣＲ分析。血清サンプルは未処理状態に直接この反応に使われる。
【図６】正常人類の血清と癌証患者からの血清サンプル中のＰＰＮ／ＭＧ６１  ｍＲＮＡ水準のＲＴ−ＰＣＲ分析。血清サンプルはこの反応に使われる前に熱処理されなければならない。
【図７】標的はＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡを向けてＮＳＣＬＣ細胞係のＨ４６０の中で細胞の死亡を誘導する。Ａ）このＨ４６０細胞は１００ｎＭのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理された後（6日後）０．５％のゲンティアンバイオレットの使用を通じて染色を進行する。Ｂ）ＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡが誘導する細胞死亡に対して進行した雲り式細胞の分析（膜聯蛋白Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩ染色）。左から右の手順で、Ｈ４６０癌細胞はそれぞれ１００ｎＭの非沈黙（ｎｏｎ−ｓｉｅｎｃｉｎｇ）参照ｓｉＲＮＡとＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡの処理を受ける。Ｃ）ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後Ｈ４６０細胞の中でのＲＴ−ＰＣＲとＷｅｓｔｅｒｎ分析。非沈黙ｓｉＲＮＡは参照で使われる。ベータ−皮動蛋白は加祥量の対照に使われる。
【図８】標的はＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡを向けてＮＳＣＬＣ細胞係のＨ１７０３の中で細胞の死亡を誘導して、Ｗｎｔ／ベータ−連環蛋白質信号の前途を遮断する。Ａ）Ｈ１７０３細胞は１００ｎＭのＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理された後（４日後）０．５パーセントのゲンティアンバイオレットの使用を通じて染色を進行する。Ｂ）ＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡが誘導する細胞死亡に対して進行した雲り式細胞の分析（膜聯蛋白Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩ染色）。左から右の手順で、Ｈ１７０３癌細胞はそれぞれ１００ｎＭの非沈黙（ｎｏｎ−ｓｉｅｎｃｉｎｇ）参照ｓｉＲＮＡとＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡの処理を受ける。Ｃ）ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後Ｈ１７０３細胞中でのＲＴ−ＰＣＲとＷｅｓｔｅｒｎ分析。非沈黙ｓｉＲＮＡは参照で使われる。ベータ−皮動蛋白は加祥量の対照に使われる。
【図９】標的はＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡを向けてＮＳＣＬＣ細胞係のＡ５４９の中で細胞の死亡を誘導して、Ｗｎｔ／ベータ−連環蛋白質信号の前途を遮断する。Ａ）ＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡが誘導する細胞死亡に対して進行した雲り式細胞の分析（膜聯蛋白Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩ染色）。左から右の手順で、Ｈ４６０癌細胞はそれぞれ１００ｎＭの非沈黙（ｎｏｎ−ｓｉｅｎｃｉｎｇ）参照ｓｉＲＮＡとＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡの処理を受ける。Ｃ）ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後Ａ５４９細胞中でのＲＴ−ＰＣＲとＷｅｓｔｅｒｎ分析。非沈黙ｓｉＲＮＡは参照で使われる。
【図１０】標的はＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡを向けて間皮腫瘍細胞係Ｈ２０５２の中で細胞死亡を誘導して、Ｗｎｔ／ベータ−連環蛋白質信号の前途を遮断する。Ａ）ＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡが誘導する細胞死亡に対して進行した雲り式細胞の分析（膜聯蛋白Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩ染色）。左から右の手順で、Ｈ２０５２癌細胞は１００ｎＭの非沈黙（ｎｏｎ−ｓｉｅｎｃｉｎｇ）参照ｓｉＲＮＡとＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡの処理を受ける。Ｂ）ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後Ｈ２０５２細胞の中でのＲＴ−ＰＣＲとＷｅｓｔｅｒｎ分析。非沈黙ｓｉＲＮＡは参照で使われる。ベータ−皮動蛋白は加祥量の対照に使われる。
【図１１】標的はＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡを向けて間皮腫瘍細胞系ＭＣＦ−７の中で細胞死亡を誘導して、Ｗｎｔ／ベータ−連環蛋白質信号の前途を遮断する。Ａ）ＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡが誘導する細胞死亡に対して進行した雲り式細胞の分析（膜聯蛋白Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩ染色）。左から右の手順で、ＭＣＦ−７癌細胞は１００ｎＭの非沈黙（ｎｏｎ−ｓｉｅｎｃｉｎｇ）参照ｓｉＲＮＡとＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡの処理を受ける。Ｂ）ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後ＭＣＦ−７細胞中でのＲＴ−ＰＣＲとＷｅｓｔｅｒｎ分析。非沈黙ｓｉＲＮＡは参照で使われる。ベータ−皮動蛋白は加祥量の対照に使われる。
【図１２】陰性参照実験：標的はＰＰＮ／ＭＧ６１のｓｉＲＮＡを向けてＰＰＮ／ＭＧ６１表現が欠乏した正常細胞培養物ＳＡＥＣとＮＨＢＥで細胞死亡を誘導しなくて、Ｗｎｔ／ベータ−連環蛋白質信号の前途を遮断する。Ａ）雲り式細胞の分析（膜聯蛋白Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩ染色）。左から右の手順で、ＳＡＥＣ（上部）とＮＨＢＥ（下部）はそれぞれ１００ｎＭの非沈黙（ｎｏｎ−ｓｉｅｎｃｉｎｇ）参照ｓｉＲＮＡとＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡの処理を受ける。Ｂ）ＰＰＮ／ＭＧ６１  ｓｉＲＮＡ処理後正常細胞（ＳＡＥＣとＮＨＢＥ）中でのＲＴ−ＰＣＲとＷｅｓｔｅｒｎ分析。非沈黙ｓｉＲＮＡは参照で使われる。ベータ−皮動蛋白は加祥量の対照に使われる。
【図１３】膜結合のＯ−アシルキ転換酵素家族中の一つの保護区域の多配列に対する比較。表示されたことは選択されたタンパク質。
【符号の説明】
【０１５３】
物膜と酵素の名称の簡写
ＡＴ、似南芥
ＢＳ、枯草芽胞杆菌
ＣＥ、糸虫
ＤＭ、果蝿
ＨＳ、人類
ＭＭ、小鼠
ＰＡ、緑膿杆菌
ＳＡ、金黄色葡萄球菌
ＳＣ、酒酒酵母
ＳＩ、Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ＴＰ、梅毒螺旋体
ＡＣＡＴ、肝固アルコールアシルキ転移酵素
ＤＧＡＴ、二酸基甘油Ｏ−アシルキ転移酵素
ＷａｘＳｙｎ、蝋合成酵素
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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