(57)【要約】重症肺炎を予防的または治療的に処置するための方法は組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）またはＴＦＰＩアナログをこの症状を患うかまたはそれを発症する危険性のある患者に投与する工程を含む。この方法は、好ましくは有害な副作用を避けるために低用量でのＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの連続的な静脈内注入の使用を含む。本発明の一実施態様において、約２．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度でＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを連続的な静脈内注入により患者へ投与する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
重症肺炎を処置または予防するための方法であって、重症肺炎を有するかまたはそれを有する危険性のある患者にＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを連続的な静脈内注入により約１．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度で投与する工程を含み、該患者はＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与から２４時間以内に抗凝固剤を受容していない、方法。
【請求項２】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が実証可能な感染を有している請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．８０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度で連続的な静脈内注入により投与される請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記投与速度が、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．１０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価であり、ここで前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは少なくとも７２時間投与される請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記投与速度が約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．１０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記投与速度が約０．０２０ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０８ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが少なくとも約９６時間投与される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが連続的な静脈内注入により投与されて約０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２．５ｍｇ／ｋｇの総用量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な総用量を提供する請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが約０．０２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０９ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度で連続的な静脈内注入により投与される請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが連続的な静脈内注入により投与されて約０．０６ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇの一日用量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な一日用量を提供する請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸１９〜８９からなる第１Ｋｕｎｉｔｚドメインを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２Ｋｕｎｉｔｚドメインをさらに含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸１〜１６０を含む請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２Ｋｕｎｉｔｚドメインを含む請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含む凍結乾燥された組成物から調製される請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがアルギニンを含む処方物として投与される請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがクエン酸塩を含む処方物として投与される請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが約３００ｍＭ  塩酸アルギニンおよび約２０ｍＭ  クエン酸ナトリウムを含みｐＨが約５．５である処方物中で約０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度である請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与と同時にまたは２４時間以内に抗生物質、抗体、内毒素アンタゴニスト、抗凝固活性を有する組織因子アナログ、免疫刺激剤、細胞接着遮断剤、ヘパリン、ＢＰＩタンパク質、ＩＬ−１アンタゴニスト、ｐａｆアーゼ（ＰＡＦ酵素阻害剤）、ＴＮＦ阻害剤、ＩＬ−６阻害剤および補体の阻害剤からなる群から選択されるさらなる薬剤を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記さらなる薬剤がＴＮＦ、ＩＬ−６およびＭ−ＣＳＦからなる群から選択される抗原に特異的に結合する抗体である請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
重症肺炎を処置するための方法であって、患者に（ｉ）ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログならびに（ｉｉ）抗生物質、モノクローナル抗体、サイトカイン阻害剤および補体阻害剤からなる群から選択されるさらなる薬剤を投与する工程を含む、方法。
【請求項３６】
前記ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記患者が実証可能な感染を有する請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが約１．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度で連続的な静脈内注入により投与される請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記投与速度が約０．００１ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０９０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記投与速度が約０．００２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記投与速度が約０．００２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記投与速度が約０．００２５ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．０７５ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
重症肺炎を有するかまたはそれを有する危険性のあるヒト患者に過度な出血を誘起しない量のＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与する工程を含む、重症肺炎を処置または予防するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は重症市中肺炎を治療的に処置するための方法に関する。さらに具体的にはそれは重症肺炎に関連する非常に活性化されたまたは増幅された生理学的経路を減弱させるために組織因子経路阻害剤タンパク質を投与することに関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
肺炎は肺胞腔および間質組織を含む肺の一つまたはそれより多い機能的エレメントの急性感染の結果である。米国では毎年約２００万人のヒトが肺炎を進行させ、そしてこれらのヒトのうちの４０，０００から７０，０００人が死亡する。肺炎は死亡原因としての全疾患部類の中で第６番目にランク付けされており、そして最も一般的な致死的な院内発生の感染（院内感染）である。市中肺炎（ＣＡＰ）は米国内の医療費に有意な影響力を有し、毎年直接費用に概算で１４０億ドルおよび賃金損失に９０億ドルが計上されている。（非特許文献１）。発展途上国では典型的には下気道感染が死亡の主要な原因であるか、または感染性下痢に対してのみ次位を占めるかのいずれかである。（非特許文献２）。
【０００３】
「重症肺炎」として公知の症状は米国胸部学会（ＡＴＳ）を含む種々の機関により示されたガイドラインにしたがって特徴付けされる。（非特許文献３）。例えばＡＴＳは重症肺炎の診断のためのその他の基準に加えて、機械的人工換気または敗血症性ショックに関する要件のような少なくとも一つの大基準を必要とする。一般的に重症肺炎は急性肺疾患、肺炎症性疾患または炎症もしくは凝固のような因子による肺機能における任意の攪乱の結果である。重症ＣＡＰの診断は具体的には肺炎のためにＩＣＵに入院している患者に基づく。疫学的にはこの患者集団は全ＩＣＵ入院のおよそ１０％を含む。ＣＡＰで一般病棟に入院している患者で１５％未満であるのに比較して、肺炎を有するＩＣＵの患者は全ＣＡＰ患者（３０％から４０％）のうちで最も高い死亡率を有する。
【０００４】
米国では毎年市中肺炎（ＣＡＰ）がおよそ４００万人の成人で診断されており、６００，０００人ほどが入院を必要としている。非特許文献４。全体ではＣＡＰの発生は年齢と共に増加し、６５歳以上の年齢で最大の有病率が見出される。非特許文献５。その発生は慢性閉塞性肺疾患、ぜんそく、糖尿病、アルコール依存症、免疫抑制、腎不全、慢性肝臓疾患および心臓疾患のような併存症を有する患者においても増加する。非特許文献６；非特許文献７。
【０００５】
米国では肺炎は感染による死亡の主な原因であり、そして全体の死亡の主な原因の第６番目のである。肺炎関連の死亡率は１９７９年から１９９２年で２２％増加し、老齢者（６５歳以上）では１９９２年に全肺炎関連死亡の８９％を占めた。肺炎およびインフルエンザ死亡率−米国、１９７９−１９９４（公開された修正はＭＭＷＲ．４４：７８２（１９９５）で見出される）を参照のこと。ＭＭＷＲ．４４：５３５−５３７（１９９５）。Ｆｉｎｅら（１９９７）は、特定の共存する病気（腫瘍性疾患、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、脳血管疾患、腎臓疾患および肝臓疾患）および特定の身体的試験の知見（精神状態の変化、心拍数の増加、呼吸数の増加、収縮期血圧の低下および異常低温または高温）もまたＣＡＰ関連の死亡率の増加に関連する。加えて、ＣＡＰは米国内の医療費に有意な影響力を有し、直接費用に概算で年あたり１４０億ドルおよび賃金損失に９０億ドルが計上されている。非特許文献８。
【０００６】
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）は哺乳動物血漿中に存在するタンパク質およびセリンプロテアーゼ阻害剤である。非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１。ＴＦＰＩはまた組織因子阻害剤、組織トロンボプラスチン阻害剤、第ＩＩＩ因子阻害剤、外因性経路阻害剤（ＥＰＩ）およびリポタンパク質関連凝固阻害剤（ＬＡＣＩ）としても公知である。「組織因子経路阻害剤」（ＴＦＰＩ）なる名称は１９９１年６月３０日に国際血栓止血学会により承認された。
【０００７】
血液凝固活性化は液体血液の固体ゲルまたは凝血塊への変換である。加えて、凝固プロテアーゼの消費は過度な出血に至る。主要な事象は可溶性フィブリノーゲンの不溶性フィブリン鎖への変換であるが、フィブリンそのものは全血液凝血塊の０．１５％しか形成しない。この変換は複合酵素カスケードの最後の工程である。構成成分（因子）はタンパク質溶解酵素の不活性前駆体であるチモーゲンとして存在し、それは特定の部位でのタンパク質溶解性切断により活性酵素に変換される。一つの因子の少量の活性化は多量の次のもの等の形成を触媒し、極度に急速なフィブリンの形成を招く増幅を招く。
【０００８】
凝固は第ＶＩＩａ因子を内皮の直ぐ下の細胞で発現される組織因子（ＴＦ）に暴露する血管損傷により開始されると考えられている。第ＶＩＩａ−ＴＦ因子複合体は第Ｘ因子を第Ｘａ因子に切断し、そして第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子に切断する。ＴＦＰＩは第ＶＩＩａ因子および第Ｘａ因子の双方に結合する。ＴＦＰＩ、第ＶＩＩａ因子（それが結合したＴＦ因子と共に）および第Ｘａ因子の間で形成された複合体は、持続した止血に必要なさらなる第Ｘａ因子および第ＩＸａ因子の形成を阻止する。非特許文献１２。
【０００９】
直接血流に導入された内毒素を含む細菌生成物による凝固カスケードの活性化は動脈表面での多量のフィブリン沈着ならびにフィブリノーゲン、プロトロンビン、第ＶおよびＶＩＩＩ因子、および血小板の枯渇を招き得る。加えて線維素溶解系が刺激され、フィブリン分解生成物のさらなる形成を招く。
【００１０】
凝固と同時に、細菌生成物（例えば内毒素）により活性化が明らかに開始され、凝血により矛盾する機構、主に線維素溶解系もまた活性化されるようである。活性化された第ＸＩＩＩ因子はプラスミノーゲンプロアクチベーターを、続いてプラスミノーゲンをプラスミンに変換するプラスミノーゲンアクチベーターに変換し、それにより凝血塊溶解を媒介する。したがって血漿線維素溶解系の活性化はまた出血傾向に寄与し得る。
【００１１】
内毒素血症は組織プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤（ＰＡＩ）の循環レベルの増加に関連する。この阻害剤は組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）を急速に不活性化し、それによりその能力を妨げて、プラスミノーゲンのプラスミンへの活性化を介して線維素溶解を促進する。線維素溶解の障害は血管でのフィブリン沈着を引き起こし得て、したがって敗血症ショックに関連するＤＩＣに寄与する。
【００１２】
重症肺炎および関連する凝固障害の防御または処置のための満足される治療介入を同定するために努力を続けている。凝固経路を妨害する薬剤は重症肺炎の治療的または予防的処置として必ずしも有効ではない。例えばヘパリンは一般に抗凝固剤として用いられる。しかしながら、ヘパリンは過度な出血を誘起し得て、そして凝固異常を減弱されるが、延命効果を提供しないことが見出されているので、ヘパリンの使用の管理は困難である。例えば非特許文献１３を参照のこと。主に劇症ＤＩＣが顕著な特徴である髄膜炎菌性内毒素血症では、いくつかの臨床試験によりヘパリン処置による敗血症での死亡率の低下を実証できなかった。例えば非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６を参照のこと。
【００１３】
重症市中肺炎を起こしやすい患者は集中治療室（ＩＣＵ）への入院を必要とする市中肺炎を有するこれらの患者である。市中肺炎を有する患者は臨床的に肺実質の感染を有するとして臨床的に同定され、そして／またはＸ線検査および臨床徴候により確認される。重症肺炎には、典型的には肺炎球菌、レジオネラ、インフルエンザ菌または種々のグラム陰性桿菌を含む十分に定義された病原体を有する重症市中肺炎が含まれる。重症市中肺炎の患者の大部分はＣＡＰ発症の前は地域で生活しており、約２０％だけが病院、介護施設または長期間介護からの転院として入院している。米国で重症ＣＡＰを有する患者は約５０％が男性であり、そして約５０％が女性であるが、老齢である傾向がある。米国で重症ＣＡＰを有する患者の約１７％は５０歳より下であり；約２４％は５０歳と６４歳の間の年齢であり；約２１％は６５歳と７４歳の間の年齢であり、そして約３８％が７５歳よりも上の年齢である。重症ＣＡＰを有するたいていの患者は一つまたはそれより多い有意な共存症を有する。２００３年にＩＣＵ介護を受けた米国のＣＡＰ患者のうちのこれらの患者は典型的には対応する心臓疾患、ＣＯＰＤ／嚢胞性線維症、糖尿病、腎臓疾患、癌、アルコール依存症および／または薬物乱用を有する。
【００１４】
組換えヒトａｌａ−ＴＦＰＩ（ＴＦＰＩアナログ）が敗血症動物モデルで生存率を改善することが示されている。例えば特許文献１を参照のこと。内因性タンパク質としてＴＦＰＩは十分な耐性がある。静脈内注入または皮下注射によるＴＦＰＩ投与により凝血能力が低減されることが示されており、それはプロトロンビン時間（ＰＴ）の増加として明示されている。動物およびヒトの研究では、ＰＴの延長が血漿ＴＦＰＩの増加に直線的に関連した。非特許文献１７。
【００１５】
当分野において、重症肺炎の致死効果を阻止し、そして同時に潜在的な重篤な副作用を最小にする処置研究法に関する必要性が残存している。
【特許文献１】米国特許第６，０６３，７６４号明細書
【非特許文献１】Ｌｙｎｃｈ  Ｊ  Ｐ、Ｍａｒｔｉｎｅｚ  Ｆ  Ｊ．Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．、１９９８年、４：１６２−１７２
【非特許文献２】Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃ．６、Ｃｈ．７３，Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、２０００年
【非特許文献３】Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、２００１年、１６３：１７３０−１７５４
【非特許文献４】Ｆｉｎｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９９７年、３３６：２４３−５０
【非特許文献５】Ｍａｒｓｔｏｎら、Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．、１９９７年、１５７：１７０９−１７１８
【非特許文献６】Ｍａｒｒｉｅ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．、１９９６年、２：１９２−１９７
【非特許文献７】Ｎｉｅｄｅｒｍａｎｎら、Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ．、１９９３年、１４８：１４１８−１４２６
【非特許文献８】ＬｙｎｃｈおよびＭａｒｔｉｎｅｚ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．、１９９８年、４：１６２−１７２
【非特許文献９】Ｔｈｏｍａｓ、Ｂｕｌｌ．Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｈｏｓｐ．、１９４７年、８１：２６
【非特許文献１０】Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１９４７、１４９：１２３
【非特許文献１１】ＢｒｏｚｅおよびＭｉｌｅｔｉｃｈ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８７、８４：１８８６
【非特許文献１２】Ｂｒｏｚｅ，Ｊｒ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．、１９９５年、４６：１０３
【非特許文献１３】Ａｏｋｉら、「Ａ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｄｏｕｂｌｅ−ＢＬＩＮＤ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ  ａｎｄ  Ｕｎｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  Ｈｅｐａｒｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２００２年、７５：５４０−４７
【非特許文献１４】Ｃｏｒｒｉｇａｎら、「Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｎ  Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｄｅｆｅｃｔｓ」Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９７０年、２８３：７７８−７８２
【非特許文献１５】Ｌａｓｃｈら、「Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ（ＤＩＣ）」Ｔｈｒｏｍｂｏｓ．Ｄｉａｔｈｅｓ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．、１９７４年、３３：１０５
【非特許文献１６】Ｓｔｒａｕｂ「Ａ  Ｃａｓｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」Ｔｈｒｏｍｂｏｓ．Ｄｉａｔｈｅｓ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．、１９７４年、３３：１０７
【非特許文献１７】Ａ．Ａ．Ｃｒｅａｓｅｙ、Ｓｅｐｓｉｓ、１９９９年、３：１７３
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
本発明の一つの実施態様は、重症肺炎を有するか、またはそれを進行させる危険性を有する患者にＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与することを含む、重症肺炎を処置または予防するための方法である。いくつかの実施態様では、患者は実証可能な感染を有する。
【００１７】
本発明の別の実施態様は患者にＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログからなる群から選択される薬剤の連続的な静脈内注入を投与することを含む重症肺炎を処置するための方法である。いくつかの実施態様では、患者は実証可能な感染を有する。
【００１８】
本発明の別の実施態様は、重症肺炎を有するか、またはそれを進行させる危険性を有するヒト患者にＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを過度な出血を誘起しない量で投与することを含む重症肺炎を処置または防御するための方法である。
【００１９】
その他の実施態様は、約２．０ｍｇ／ｋｇ／時未満の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度で該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを連続的な静脈内注入により投与する前記の実施態様のいずれかを含む。好ましい実施態様では、該投与速度は約０．０００２５〜約２．０、またはこれに代えて約０．００１〜約１．７５ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である。別の好ましい実施態様では、該投与速度は約０．００５〜約１．５０ｍｇ／ｋｇ／時の参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である。さらに好ましい実施態様では、該投与速度は約０．０１０〜約０．７５ｍｇ／ｋｇ／時の参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である。なおさらに好ましい実施態様では、約０．２ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．８ｍｇ／ｋｇ／時の投与速度での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度で該ＴＦＰＩまたは該ＴＦＰＩアナログを投与する。別の好ましい実施態様では、該投与速度は約０．０２４〜約４．８ｍｇ／ｋｇの総用量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な総用量を提供するために投与される。別の好ましい実施態様では、該投与速度は少なくとも約０．００６ｍｇ／ｋｇおよび約１．２ｍｇ／ｋｇ未満の一日用量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な一日用量を提供するために投与される。
【００２０】
その他の実施態様は、該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが少なくとも７２時間投与される前記の実施態様のいずれかを含む。好ましい実施態様では、該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは少なくとも９６時間投与される。
【００２１】
その他の実施態様は、該ＴＦＰＩアナログが非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩである前記の実施態様のいずれかを含む。
【００２２】
別の実施態様は、該ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸１９〜８９からなる第一Ｋｕｎｉｔｚドメインを含む前記の実施態様のいずれかを含む。好ましい実施態様では、該ＴＦＰＩアナログはさらに配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第二Ｋｕｎｉｔｚドメインを含む。
【００２３】
その他の実施態様は、該ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸１〜１６０を含むか、または該ＴＦＰＩアナログが配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第二Ｋｕｎｉｔｚドメインを含む前記の実施態様のいずれかを含む。
【００２４】
その他の実施態様は、該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含む凍結乾燥組成物から調製される前記の実施態様のいずれかを含む。
【００２５】
その他の実施態様は、該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがアルギニンを含む処方物として投与される前記の実施態様のいずれかを含む。
【００２６】
その他の実施態様は、該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログがクエン酸塩を含む処方物として投与される前記の実施態様のいずれかを含む。
【００２７】
その他の実施態様は、約３００ｍＭ塩酸アルギニンおよび約２０ｍＭクエン酸ナトリウムを含む処方中、該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが約０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度であり、そしてｐＨが約５．５である前記の実施態様のいずれかを含む。
【００２８】
その他の実施態様は、該ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与と同時に、またはその２４時間以内に抗生物質、抗体、内毒素アンタゴニスト、抗凝固活性を有する組織因子アナログ、免疫刺激剤、細胞接着遮断剤、ヘパリン、ＢＰＩタンパク質、ＩＬ−１アンタゴニスト、ｐａｆアーゼ（ｐａｆａｓｅ）（ＰＡＦ酵素阻害剤）、ＴＮＦ阻害剤、ＩＬ−６阻害剤および補体の阻害剤からなる群から選択されるさらなる薬剤を投与する工程をさらに含む前記の実施態様のいずれかを含む。好ましい実施態様では、該さらなる薬剤はＴＮＦ、ＩＬ−６、およびＭ−ＣＳＦからなる群から選択される抗原に特異的に結合する抗体である。
【００２９】
本発明のさらなる実施態様は詳細な説明と組み合わせた以下の参照図面に照らして明白である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
（発明の詳細な説明）
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩのアナログの投与は重症肺炎の予防および処置に有効である。ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩのアナログの連続低用量投与（以下「低用量ＴＦＰＩ投与」）もまた重症肺炎の予防および処置に有効である。ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログ投与、特に低用量投与は急性または慢性炎症、特に重症肺炎を阻止するかまたは減弱させる。低用量ＴＦＰＩ投与を少なくとも３日間続けた場合、重症肺炎から死亡する危険性は低下し、その上副作用からの合併症の率、特に出血障害が最小化され得る。低用量ＴＦＰＩ投与のさらなる利点は、十分な高用量で、ＴＦＰＩの血漿濃度を低下させ得る耐性効果の回避である。耐性効果は約８５０ｎｇ／ｍｌのＴＦＰＩ血漿濃度で最大の半分まで刺激されるが、低用量ＴＦＰＩ投与血漿レベルは一般に５００ｎｇ／ｍｌより低く留まる。一般に低用量ＴＦＰＩ投与をＴＦＰＩまたはＴＦＰＩのアナログ連続的な静脈内注入により実施する。
【００３１】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩ類似態
本明細書で用いる「ＴＦＰＩ」は配列番号１で示す２７６アミノ酸残基配列および分子量約３８，０００ダルトンを有する成熟血清糖タンパク質を意味する。それは組織因子活性、およびしたがって凝固活性化の天然阻害剤である。米国特許第５，１１０，７３０号は組織因子（ＴＦ）が記載されており、そして米国特許第５，１０６，８３３号にはＴＦＰＩが記載されている。ＴＦＰＩ  ｃＤＮＡのクローニングはＷｕｎら、米国特許第４，９６６，８５２号に記載されている。ＴＦＰＩはプロテアーゼ阻害剤であり、そして３個のＫｕｎｉｔｚドメインを有し、そのうちの２個は各々第ＶＩＩおよびＸａ因子と相互作用することが解っている。第３ドメインの機能は未知のままである。ＴＦＰＩはインビボで不活性な第Ｘａ因子：ＴＦＰＩ：第ＶＩＩａ因子：組織因子四元複合体を形成することにより、凝固の開始を制限することで機能すると考えられている。Ｒａｐａｐｏｒｔ、Ｂｌｏｏｄ  ７３：３５９−３６５（１９８９）およびＢｒｏｚｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９：７５３９−７５４６（１９９０）による総説を参照のこと。ＴＦＰＩの多くの構造的特徴を、その他の十分に研究されたプロテアーゼ阻害剤とのそれの相同性から推測することができる。ＴＦＰＩは酵素ではなく、そのためそれは恐らく化学量論的様式で（すなわちＴＦＰＩのＫｕｎｉｔｚドメインの１個が１個のプロテアーゼ分子を阻止する）それのプロテアーゼ標的を阻止する。好ましくは、Ｋｕｎｉｔｚドメイン１および／または２は本発明のＴＦＰＩ分子に存在する。Ｋｕｎｉｔｚドメイン３は未知である。
【００３２】
「ＴＦＰＩアナログ」は、その修飾がＴＦＰＩ生物学的活性を破壊しない限り、一つもしくはそれより多いアミノ酸付加、または置換（一般に性質が保存される）、一つもしくはそれより多いアミノ酸欠失（例えばＴＦＰＩフラグメント）、または一つもしくはそれより多い化学的部分の一つもしくはそれより多いアミノ酸への付加で修飾されたＴＦＰＩの誘導体である。ポリペプチドアナログを作成するための方法は当分野において公知であり、そして以下にさらに記載する。好ましいＴＦＰＩアナログはＮ−Ｌ−アラニル−ＴＦＰＩ（ａｌａ−ＴＦＰＩ）であり、そのアミノ酸配列を配列番号２に示す。ＴＦＰＩアナログは以下で記載するような生物活性アッセイにより決定されるようなある程度のＴＦＰＩの活性を保有する。ＴＦＰＩおよびアナログに関する好ましい生物活性アッセイはプロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイである（以下を参照のこと）。
【００３３】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログはグリコシル化されているか、またはグリコシル化されていないかのいずれかでよい。ＴＦＰＩのアナログは米国特許第５，１０６，８３３号に記載されている。ａｌａ−ＴＦＰＩは国際薬物名「ティファコギン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）」の下でも公知であるＴＦＰＩアナログである。ａｌａ−ＴＦＰＩは成熟全長ヒトＴＦＰＩの全アミノ酸配列にアミノ末端でさらなるアラニン残基を加えたものを含む。大腸菌発現を改善し、そして切断しなければアミノ末端メチオニン残基であるものの切断を行うために、ａｌａ−ＴＦＰＩのアミノ末端アラニン残基をＴＦＰＩ配列に操作した。米国特許第５，２１２，０９１号を参照のこと。
【００３４】
特に好ましいＴＦＰＩアナログには、性質が保存される置換、すなわちその側鎖で関連するアミノ酸のファミリー内で生じるこれらの置換が含まれる。具体的には、アミノ酸を概して四つのファミリーに分ける：（１）酸性−アスパラギン酸およびグルタミン酸；（２）塩基性−リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；ならびに（４）非荷電性極性−グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニンおよびチロシン。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンはしばしば芳香族アミノ酸に分類される。例えばロイシンのイソロイシンまたはバリンとの、アスパラギン酸のグルタミン酸との、トレオニンのセリンとの単独置換、またはあるアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸との類似の保存置換は生物学的活性に大きな影響を有さないであろうということは合理的に予測可能である。例えば目的のポリペプチドは分子の望ましい機能が無傷のままである限り、１、２、３、４、５、６〜５０、１５〜２５、５〜１０または１から７０の任意の整数のような約１−７０までの保存または非保存アミノ酸置換を含み得る。当業者は本明細書で定義するような生物学的活性を保持する合理的な可能性を有して修飾され得る目的の分子の領域を容易に決定することができる。
【００３５】
「相同性」は二つのポリヌクレオチドまたは二つのポリペプチド部分間の類似性パーゼントを意味する。配列が、分子の規定の長さにわたって少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７５％、さらに好ましくは少なくとも約８０％〜８５％、好ましくは少なくとも約９０％、および最も好ましくは少なくとも約９５％〜９８％の配列相同性、または特定の範囲の間で任意の相同パーゼントを呈する場合、二つのポリペプチド配列は互いに「実質的に相同」である。本明細書中で使用される際には「実質的に相同」とはまた特定のポリペプチド配列に完全な同一性を示す配列をも意味する。
【００３６】
一般に「同一性」は二つのポリペプチド配列の各々の正確なアミノ酸対アミノ酸の一致を意味する。配列をアラインし、二つのアラインされた配列間の正確な対合数を計数し、短い配列の長さによって除算し、そしてその結果に１００を乗算することによる、二つの分子間の配列情報の直接比較により同一性パーゼントを決定することができる。
【００３７】
好ましくは天然または非天然発生ＴＦＰＩアナログは配列番号１から誘導されるＴＦＰＩに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％またはそれよりさらに相同であるアミノ酸配列を有する。さらに好ましくは、分子は９８％または９９％相同である。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを用いて、ギャップ開始ペナルティー１２およびギャップ伸長ペナルティー２のアフィンギャップ検索、ならびにＢＬＯＳＵＭマトリックス６２を用いて相同性パーゼントを決定する。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムはＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９（１９８１）で教示されている。
【００３８】
プロトロンビンアッセイによりＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの生物学的活性を決定することができる。適当なプロトロンビンアッセイは米国特許第５，８８８，９６８号およびＷＯ９６／４０７８４に記載されている。簡単には、凝固測定器（例えばＣｏａｇ−Ａ−Ｍａｔｅ  ＭＴＸ  ＩＩ、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ製）を用いてプロトロンビン時間を決定することができる。適当なアッセイバッファーは１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを含有する１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５に調整）である。必要なさらなる試薬は正常ヒト血漿（例えば「Ｖｅｒｉｆｙ  １」、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ製）、トロンボプラスチン試薬（例えば「Ｓｉｍｐｌａｓｔｉｎ  エクセル」、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ製）およびＴＦＰＩ標準溶液（例えばアッセイバッファーｍｌあたり１００％純粋ａｌａ−ＴＦＰＩ（またはその等価物）２０μｇ）である。ＴＦＰＩ標準溶液の連続希釈物（例えば１から５μｇ／ｍｌの範囲の最終濃度まで）の凝固時間を分析することにより標準曲線が得られる。凝血時間を決定するために、試料またはＴＦＰＩ標準を最初にアッセイバッファーに希釈する。次いで正常ヒト血漿を加える。トロンボプラスチン試薬の添加により凝血反応が開始される。次いで装置により凝血時間が記録される。凝血時間の対数対ＴＦＰＩ濃度の対数のプロットから直線的なＴＦＰＩ標準曲線が得られる。標準曲線は、１００％純粋な標準の等価なＴＦＰＩ濃度に一致するために、ＴＦＰＩ標準の純度に基づいて調整される。例えば標準が生化学的に９７％純粋であるａｌａ−ＴＦＰＩの調製物である（すなわちそれはＴＦＰＩの生物学的活性を有さない分子種を３重量％含有する）場合、次いで標準の各希釈物の濃度に０．９７を乗じてＴＦＰＩの実際の濃度を得る。したがって９７％純粋である調製物のｍｌあたりの実際の重量に基づいて１．０μｇ／ｍｌであるＴＦＰＩ標準は１．０×０．９７の濃度、すなわち０．９７μｇ／ｍｌと等価であり、そしてそのように処理される。
【００３９】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの入手
本発明の方法で用いるＴＦＰＩおよびＴＦＰＩのアナログを細胞もしくは組織から単離および精製するか、化学的に合成するか、または原核もしくは真核細胞のいずれかで組換えにより生成することができる。
【００４０】
いくつかの方法によりＴＦＰＩを単離することができる。例えばＴＦＰＩを分泌する細胞には加齢した内皮細胞、ＴＮＦで約３から４日処理した若い内皮細胞、肝細胞および肝細胞腫細胞が含まれる。Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１６７８６−９３（１９９０）、Ｎｏｖｏｔｎｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１８８３２−３７（１９８９）、Ｎｏｖｏｔｎｙら、Ｂｌｏｏｄ  ７８：３９４−４００（１９９１）、Ｗｕｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１６０９６−１０１（１９９０）およびＢｒｏｚｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：１８８６−９０（１９８７）のクロマトグラフ法を含む従来の方法によりＴＦＰＩを精製することができる。ＴＦＰＩは血流に現れ、そして血液から精製され得る（Ｐｅｄｅｒｓｅｎら（１９９０）を参照のこと）。
【００４１】
固相技術を用いる直接ペプチド合成（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４（１９６３）；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９：２０２−２０４（１９９５））によるような、そのアミノ酸配列を合成するための化学的方法を用いてＴＦＰＩまたはＴＦＰＩバリアントを生成することができる。手動技術を用いて、または自動化によりタンパク質合成を実施することができる。例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ  （Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて自動化された合成を達成することができる。場合によっては、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩバリアントのフラグメントを別個に合成し、そして化学的方法を用いて組み合わせて全長分子を生成することができる。
【００４２】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを米国特許第４，９６６，８５２号にて示されるように組換えにより生成することができる。例えば望ましいタンパク質に関するｃＤＮＡを原核細胞または真核細胞において発現させるためにプラスミドに組み込むことができる。米国特許第４，８４７，２０１号は特定のＤＮＡ配列を有する微生物を形質転換し、そしてそれらを発現させるための詳細を提供している。微生物を用いるタンパク質の発現に関する詳細を提供する、当業者に公知の多くのその他の参照文献がある。Ｍａｎｉａｔａｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８２）のようなこれらの多くは米国特許第４，８４７，２０１号に引用されている。
【００４３】
微生物を形質転換し、そしてそれらを用いてＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを発現させるために種々の技術は利用することができる。以下は可能な研究法の単なる実例である。ＴＦＰＩ  ＤＮＡ配列を単離し、そして適切な制御配列に連結させなければならない。ＴＦＰＩ  ＤＮＡ配列は米国特許第４，９６６，８５２号に示されており、そしてそれをＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍのような会社から市販により入手可能であるｐＵＮＣ１３またはｐＢＲ３８２２のようなプラスミドに組み込むことができる。一度ＴＦＰＩ  ＤＮＡをベクターに挿入すると、それを適当な宿主にクローン化することができる。Ｍｕｌｌｉｓに対する米国特許第４，６８３，２０２号およびＭｕｌｌｉｓらに対する米国特許第４，６８３，１９５号に示されるもののような技術によりＤＮＡを増幅することができる。肝細胞腫細胞（例えばＨｅｐＧ２およびＳＫＨｅｐ）のような細胞を誘起してＴＦＰＩ  ｍＲＮＡを作成し、次いでｍＲＮＡを同定および単離し、そしてそれを逆転写してＴＦＰＩに関するｃＤＮＡを入手することによりＴＦＰＩ  ｃＤＮＡを入手することができる。発現ベクターを大腸菌のような宿主に形質転換した後、細菌を発酵させ、そしてタンパク質を発現させることができる。細菌は好ましい原核細胞性微生物であり、そして特に大腸菌が好ましい。本発明にて有用な好ましい微生物はブダペスト条約の条項の下で１９８４年２月１４日にＡＴＣＣに寄託された（受け入れ番号第３９６０７号）大腸菌Ｋ−１２、ＭＭ２９４株である。
【００４４】
もちろん、多細胞生物から誘導された真核細胞性宿主細胞培養物でポリペプチドをコードする遺伝子を発現させることも可能である。例えばＴｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ、ＣｒｕｚおよびＰａｔｔｅｒｓｏｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９７３）を参照のこと。有用な哺乳動物細胞系にはネズミ骨髄腫Ｎ５１、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ、Ｃ１２７、Ｈｅｐ  Ｇ２およびＳＫ  Ｈｅｐが含まれる。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログをバキュロウイルス感染昆虫細胞において発現させることもできる（前記で言及した米国特許第４，８４７，２０１号もまた参照のこと）。Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６５：１６７８６−１６７９３（１９９０）もまた参照のこと。真核細胞のための発現ベクターには通常、例えば一般的に用いられるシミアン・ウイルス４０（ＳＶ４０）由来の初期および後期プロモーター（Ｆｉｅｒｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ２７３：１１３（１９７８））、またはポリオーマ、アデノウイルス２、ウシパピローマウイルスもしくはトリ肉腫ウイルスから誘導されるもののようなその他のウイルス性プロモーター、または免疫グロブリンプロモーターおよび熱ショックプロモーターのような哺乳動物細胞と適合するプロモーターおよび制御配列が含まれる。哺乳動物宿主系形質転換の一般的な態様はＡｘｅｌ、米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。今では「エンハンサー」領域が発現を最適化するのに重要であると考えられている；これらは一般的にはプロモーター領域の上流で見出される配列である。必要な場合、ウイルス供給源から複製起点を得ることができる。しかしながら、染色体への組み込みは真核細胞におけるＤＮＡ複製のための一般的なメカニズムである。植物細胞もまた今では宿主として利用可能であり、そしてノパリンシンターゼプロモーターおよびポリアデニル化シグナル配列（Ｄｅｐｉｃｋｅｒ，Ａ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎ．１：５６１（１９８２））のような植物細胞に適合する制御配列が利用可能である。植物細胞の形質転換のための方法およびベクターはＷＯ８５／０４８９９に開示されている。
【００４５】
哺乳動物細胞において発現されたＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの精製のために用いることができる方法にはヘパリン−セファロースＭｏｎｏＱ、ＭｏｎｏＳおよび逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーの連続適用が含まれる。Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、前掲；Ｎｏｖｏｔｎｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１８８３２−１８８３７（１９８９）；Ｎｏｖｏｔｎｙら、Ｂｌｏｏｄ  ７８：３９４−４００（１９９１）；Ｗｕｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１６０９６−１６１０１（１９９０）；Ｂｒｏｚｅら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８４：１８８６−１８９０（１９８７）；米国特許第５，１０６，８３３号；および米国特許第５，４６６，７８３号を参照のこと。これらの参照文献には哺乳動物で生成されたＴＦＰＩを精製するための種々の方法が記載されている。
【００４６】
マウスＣ１２７細胞（Ｄａｙら、Ｂｌｏｏｄ  ７６：１５３８−４５（１９９０））、ベビーハムスター腎臓細胞（Ｐｅｄｅｒｓｅｎら（１９９０））、チャイニーズハムスター卵巣細胞およびヒトＳＫ肝細胞腫細胞のような哺乳動物細胞宿主を用いて、ＴＦＰＩを組換えグリコシル化タンパク質として発現させることもできる。Ｃ１２７  ＴＦＰＩは動物実験において用いられており、そしてウサギにおける組織因子誘起の血管内凝固の阻止に（Ｄａｙら、前掲）、イヌにおける血栓溶解後の動脈再閉塞の防御に（Ｈａｓｋｅｌら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８４：８２１−８２７（１９９１））、およびヒヒにおける大腸菌敗血症モデルの死亡率の低下に（Ｃｒｅａｓｅｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２８５０（１９９３））有効であることが示されている。大腸菌宿主細胞を用いてａｌａ−ＴＦＰＩを組換え非グリコシル化タンパク質として発現させることができる。大腸菌で生成された組換えタンパク質のインビトロリフォールディングにより高度に活性なａｌａ−ＴＦＰＩを生じる方法が記載されている。例えばＷＯ９６／４０７８４を参照のこと。
【００４７】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを細菌または酵母において生成し、そして続いて精製することもできる。一般に米国特許第５，２１２，０９１号；米国特許第６，０６３，７６４号；および第６，１０３，５００号またはＷＯ９６／４０７８４にて示された手順を用いることができる。ＷＯ９６／４０７８４およびＧｕｓｔａｆｓｏｎら、Ｐｒｏｔ．Ｅｘｐｒｅｓｓ．Ｐｕｒ．５：２３３（１９９４）（これらは出典明示により本明細書の一部とする）にしたがってａｌａ−ＴＦＰＩまたはその他のＴＦＰＩアナログを精製、可溶化およびリフォールディングすることができる。例えばＷＯ９６／４０７８４の実施例９にしたがって調製された場合、成熟し、適切にフォールディングされた、生物学的に活性な、その約１０％から１５％が一つまたはそれより多い酸化されたメチオニン残基を有しているａｌａ−ＴＦＰＩとして、全タンパク質の約８５重量％から９０重量％を含有するａｌａ−ＴＦＰＩの調製物を得ることができる。プロトロンビンアッセイにより決定されるように、これらの酸化された形態は非誘導体化ａｌａ−ＴＦＰＩの生物学的活性と等価である生物学的活性を有し、そして本明細書に開示する本発明において活性であると予測される。残りの材料は二量体化、凝集化およびアセチル化形態を含むａｌａ−ＴＦＰＩの種々の修飾された形態を含む。
【００４８】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは有意数のシステイン残基を有し得て、そして米国特許第４，９２９，７００号に示された手順はＴＦＰＩリフォールディングに適当である。前記で言及したもののような種々のクロマトグラフ法によりバッファー溶液からＴＦＰＩおよびアナログを精製することができる。所望により米国特許第４，９２９，７００号にて示される方法を用いることができる。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを精製して、ヒトに投与するのに適当なある程度の純度および活性レベルに至るために任意の方法を用いることができる。
【００４９】
治療方法および組成物
一般にＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、組織因子発現の上方調節、および故にＴＮＦ、ＩＬ−１またはその他のサイトカインによりもたらされるＴＦ活性により生じるこれらの疾患を処置または防御するのに有用である。ＴＦＰＩ投与および特に低用量ＴＦＰＩ投与は患者においてＩＬ−６のようなサイトカインの濃度を低下させることができる。低用量ＴＦＰＩ投与は一般に重症肺炎のような急性および慢性双方の炎症症状を含む炎症および凝固異常の処置に有用である。
【００５０】
「重症肺炎」は米国胸部学会により示されたガイドラインにしたがって定義される。具体的には重症肺炎は肺炎の診断およびａ）二つの大基準のうちの一つ、ｂ）三つの小基準のうちの二つ、またはｃ）英国胸部学会の四つの基準のうちの二つのいずれかの存在を必要とする（Ｔｈｏｒａｘ  ５６（ｓｕｐｐｌ  ＩＶ）：１−６４（２００１））。大基準は１）機械的人工換気の必要、および２）敗血症ショックまたは＞４時間の昇圧剤の必要である。小基準は１）収縮期血圧９０ｍｍＨｇ以下、２）多葉性肺炎、および３）低酸素血症基準（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）＜２５０である。英国胸部学会の基準は１）呼吸数３０呼吸／分以上、２）拡張期血圧６０ｍｍＨｇ以下、３）血中尿素窒素（ＢＵＮ）＞７．０ｍＭ（＞１９．６ｍｇ／ｄｌ）、および４）錯乱である。当分野において理解されているように、低酸素血症基準（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）は吸気酸素分画に対する動脈酸素分圧を意味し、そしてガス交換の障害のレベルを示す。
【００５１】
好ましくは重症肺炎の患者は当分野において公知の任意の手段により実証可能な感染を有する。これらの方法には、限定するものではないが例えばグラム染色、培養、組織化学的染色、免疫化学的アッセイまたは核酸アッセイによる血液またはその他の正常では無菌の体液もしくは組織の培養物中の病原性生物の検出が含まれる。実証可能な感染を、全身的抗感染治療のための理由を構成する肺炎の診断に一致する胸部Ｘ線、ならびに限定するものではないが呼吸数３０回／分以上、またはＰａＯ２／ＦｉＯ２＜２５０、血圧低下、および体温上昇を含む感染の任意の臨床徴候により明らかにすることもできる。
【００５２】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの処方
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの処方を好ましくは静脈内注入により投与する。本質的には連続的な静脈内注入が好ましい。この投与を達成するための方法は当業者に公知である。中心ラインまたは末梢ラインを介して注入を実施することができる。投与速度の大きな変動は回避すべきであるが、投与されたＴＦＰＩの得られた血漿レベルが本発明の好ましい実施態様による一定の投与速度での持続注入から予測されるものの２０％以内であれば、本発明の投与速度からの短期間の逸脱は許容される。
【００５３】
患者に投与する前にＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログに製剤化剤を添加することができる。液体処方が好ましい。様々な製剤化剤を用いて様々な濃度で、ならびに投与経路、可溶性およびＴＦＰＩタンパク質の安定性に適合する任意の生理学的に適当なｐＨでＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを処方することができる。静脈内注入のための好ましい処方には約０．６ｍｇ／ｍｌまでのａｌａ−ＴＦＰＩ、３００ｍＭまでの塩酸アルギニン、およびｐＨ５．０−６．０のクエン酸ナトリウムバッファーが含まれる。アルギニン、ＮａＣｌ、スクロースおよびマンニトールのような特定の溶質はａｌａ−ＴＦＰＩを可溶化および／または安定化するために供される。ＷＯ９６／４０７８４を参照のこと。静脈内注入のために特に好ましい処方は約０．１５ｍｇ／ｍｌ  ａｌａ−ＴＦＰＩ、３００ｍＭ  塩酸アルギニンおよび２０ｍＭ  クエン酸ナトリウム（ｐＨ５．５）を含有する。１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび２０ｍＭ  リン酸ナトリウムまたは別のバッファー（ｐＨ５．５−７．２）中、場合によっては０．００５（重量／容量）％または０．０１（重量／容量）％ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）を伴って、約０．１５ｍｇ／ｍｌまでの濃度でＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを処方することもできる。その他の処方は１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、８（重量／容量）％スクロース、または４．５（重量／容量）％マンニトールを含有する１０ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）中、約０．５ｍｇ／ｍｌまでのＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログＴＦＰＩを含有する。高塩を用いて数ｍｇ／ｍｌまでさらに高濃度でＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを処方することもできる。例えば一つの処方は５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび２０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）中、約６．７ｍｇ／ｍｌまでのａｌａ−ＴＦＰＩを含有する。加えてＴＦＰＩ処方は好ましくは約１〜約１０ｍＭ  メチオニンの範囲でメチオニンを含有することができる。
【００５４】
ＴＦＰＩ処方の好ましい実施態様は約０．１〜約０．７ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、２００から５００ｍＭ  Ｌ−アルギニン、１から７ｍＭ  メチオニン、５から５０ｍＭ  クエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．０−６．０）である。ＴＦＰＩ処方の好ましい実施態様は約０．１〜約０．５ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、２５０から４００ｍＭ  Ｌ−アルギニン、３から６．５ｍＭ  メチオニン、１５から３０ｍＭ  クエン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．０−６．０）である。ＴＦＰＩ処方の好ましい実施態様では約０．１５ｍｇ／ｍｌ  ａｌａ−ＴＦＰＩ、約３００ｍＭ  塩酸Ｌ−アルギニン、５ｍＭ  メチオニン、２０ｍＭ  クエン酸ナトリウム（ｐＨ５．５）を含有する。ＴＦＰＩ処方の別の好ましい実施態様は約０．４５ｍｇ／ｍｌ  ａｌａ−ＴＦＰＩ、約３００ｍＭ  塩酸Ｌ−アルギニン、５ｍＭ  メチオニン、２０ｍＭ  クエン酸ナトリウム（ｐＨ５．５）を含有する。
【００５５】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログに関する処方のさらなる実例は油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミノ酸、塩、バッファー、アルブミン、界面活性剤または充填剤を含む。好ましくは炭水化物には単、二もしくは多糖類のような糖もしくは糖アルコール、または水溶性グルカンが含まれる。糖類またはグルカンにはフルクトース、デキストロース、ラクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、アルファおよびベータシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンおよびカルボキシメチルセルロース、またはその混合物が含まれる。スクロースが最も好ましい。糖アルコールはＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素として定義され、そしてガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールおよびアラビトールを含む。マンニトールが最も好ましい。前記で言及したこれらの糖または糖アルコールを別個にまたは組み合わせて用いることができる。糖または糖アルコールが水性調製物に溶解する限り、一定の使用量に限定されない。好ましくは糖または糖アルコール濃度は１．０（重量／容量）％と７．０（重量／容量）％の間、さらに好ましくは２．０と６．０（重量／容量）％の間である。
【００５６】
好ましくはアミノ酸にはカルニチン、アルギニンおよびベタインの左旋（Ｌ）体が含まれる；しかしながらその他のアミノ酸を加えてもよい。好ましいポリマーには、平均分子量が２０００と３０００の間であるポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または平均分子量が３０００と５０００の間であるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。凍結乾燥前または再構築後の溶液のｐＨ変化を最小にするために組成物中にバッファーを用いることも好ましい。たいていの任意の生理学的バッファーを用いることができるが、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩およびグルタミン酸塩バッファーまたはその混合物が好ましい。好ましくはバッファーの濃度は０．０１から０．３モル濃度である。処方に添加できる界面活性剤は欧州特許第２７０，７９９号および第２６８，１１０号に示されている。
【００５７】
加えて、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを学的に修飾する、例えばポリマーに共有結合により抱合させてその循環半減期を増すことができる。好ましいポリマーおよびそれらをペプチドに結合させる方法は米国特許第４，７６６，１０６号、第４，１７９，３３７号、第４，４９５，２８５号および第４，６０９，５４６号にて教示されている。好ましいポリマーはポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは室温で水溶性であり、そして一般式：Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ（式中、Ｒは水素か、またはアルキルもしくはアルカノール基のような保護基でよい）を有する。好ましくは、保護基は１個と８個の間の炭素を有し、さらに好ましくは、それはメチルである。ｎなる記号は正の整数であり、好ましくは１と１０００の間、さらに好ましくは２と５００の間である。ＰＥＧは１，０００と４０，０００の間、さらに好ましくは２，０００と２０，０００の間、最も好ましくは３，０００と１２，０００の間の好ましい平均分子量を有する。好ましくは、ＰＥＧは少なくとも１個のヒドロキシ基を有し、さらに好ましくは、それは末端ヒドロキシ基である。阻害剤の遊離アミノ基と反応するために活性化されるのが好ましいのはこのヒドロキシ基である。しかしながら、反応性基の型および量を変えて本発明のＰＥＧ／ＴＦＰＩの共有結合による抱合を達成できることは理解されよう。
【００５８】
水溶性ポリオキシエチル化ポリオールもまた本発明において有用である。それにはポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）等が含まれる。ＰＯＧが好ましい。一つの理由は、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格が例えば動物およびヒトで天然発生の、モノ、ジ、トリグリセリドの骨格と同一であるということである。したがってこの分岐は必ずしも身体における外来薬剤としては見なされないであろう。ＰＯＧはＰＥＧと同一範囲の好ましい分子量を有する。ＰＯＧの構造はＫｎａｕｆら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０（１９８８）にて示され、そしてＰＯＧ−タンパク質包合体に関する議論は米国特許第４，７６６，１０６号にて見出される。
【００５９】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの液体医薬組成物を調製した後、それを凍結乾燥して分解を防御し、そして無菌性を維持することができる。液体組成物を凍結乾燥するための方法は当業者に公知である。使用の直前に組成物を、さらなる成分を含み得る無菌希釈剤（例えばリンゲル液、蒸留水、または無菌生理食塩水）で再構築することができる。再構築時に組成物を連続的な静脈内注入により対象に投与するのが好ましい。
【００６０】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの用量
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを重症肺炎の処置および防御に治療上有効である濃度で投与する。かかる用量はまたその他の急性または慢性炎症、および一般にサイトカインが組織因子発現を上方調節する疾患にも有効である。この目標を達成するために、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを静脈内投与するのが好ましい。この投与を達成するための方法は当業者に公知である。一般に、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを１μｇ／ｋｇと３０ｍｇ／ｋｇの間、さらに好ましくは２０μｇ／ｋｇと２５ｍｇ／ｋｇの間、最も好ましくは１と１５ｍｇ／ｋｇの間の用量で与える。
【００６１】
前記の用量を一般的に少なくとも約１５０時間の期間にわたって、そして好ましくは少なくとも約１００時間の期間にわたって投与する。一つの実施態様では、ＴＦＰＩの投与を約９９〜約９０時間、好ましくは約９７〜約９４時間、そしてさらに好ましくは約９６時間続ける。宿主に１回でまたは分割用量で投与した全一日用量は例えば約２〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重毎日、そして好ましくは約２〜約１５ｍｇ／ｋｇ体重毎日、約４〜約１０ｍｇ／ｋｇの量でよい。投与単位組成物はかかる量またはその約数を含有して、一日用量を成し得る。低一日用量、例えば１μｇ／ｋｇから２ｍｇ／ｋｇが予防的またはその他の目的のために有用であり得る。一回投与形態を生成するための担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は処置される患者および特定の投与様式に依存して異なる。
【００６２】
投与計画は患者の型、年齢、体重、性別、食事および医学的症状を含む種々の因子、症状の重症度、投与の経路、活性、有効性、薬物動態および毒性プロファイルのような薬理学的考慮、薬物分配系を利用するかどうか、ならびに化合物を薬物組み合わせの一部として投与するかどうかにしたがって選択される。したがって実際に用いられる投与計画は非常に広範でよく、そしてしたがって前記で示した好ましい投与計画から逸脱し得る。好ましくはＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの用量は約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時のａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価な投与速度を超えてはならない。
【００６３】
低用量投与
少なくとも約０．０００２５ｍｇ／ｋｇ／時（０．００４１７μｇ／ｋｇ／分）および約２．００ｍｇ／ｋｇ／時（０．８３３μｇ／ｋｇ／分）未満の投与速度のａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度でＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを与える場合、重症肺炎の処置における有効性は保持され、そして出血のような副作用は最小化される。一つの好ましい実施態様では、少なくとも約０．０２ｍｇ／ｋｇ／時〜約１．０ｍｇ／ｋｇ／時の間、さらに好ましくは約０．２４ｍｇ／ｋｇ／時〜約０．８ｍｇ／ｋｇ／時の間の投与速度でａｌａ−ＴＦＰＩを投与する。有効性および安全性の組み合わせを改善するために、好ましくは、投与速度は少なくとも約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時（０．１６７μｇ／ｋｇ／分）および約０．０４５ｍｇ／ｋｇ／時（０．８３３μｇ／ｋｇ／分）未満のａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価であるか、または少なくとも約０．０２０ｍｇ／ｋｇ／時および約０．０４０ｍｇ／ｋｇ／時未満のａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価であり、ならびに最も好ましくは約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時（０．４１７μｇ／ｋｇ／分）のａｌａ−ＴＦＰＩの投与速度と等価である。投与経路は一般に静脈内投与であり、連続的な静脈内注入が好ましい。注入投与を少なくとも約７２、９６、１２０または２４０時間行うことができる。好ましくは、持続注入投与を３から８日間、さらに好ましくは３から６日間、そして最も好ましくは約４日間行う。
【００６４】
投与のための「持続注入による」なる用語は、注入が指示された期間のほとんどで実質的な中断なしにほぼ指示された速度で維持されることを意味する。これに代えて、間欠的な静脈内注入を用いることができる。間欠的注入を用いる場合、次いで持続注入に関して前記した投与速度と等価である時間平均投与速度を用いるべきである。加えて、間欠的注入のプログラムは、持続注入を用いて得られる最大濃度を上回るのが約２０％を超えない最大血清濃度に至るべきである。患者における副作用、特に出血を伴う副作用を回避するために、投与速度を約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時のａｌａ−ＴＦＰＩの連続的な静脈内注入と等価である投与速度未満にすべきである。
【００６５】
投与速度および総用量を含む本明細書に記載した全ての用量は、タンパク質濃度およびプロトロンビンアッセイを用いる生物学的活性の決定における誤差のために、実際には１０％までの変動の可能性がある。したがって本明細書にて記載した用量よりも１０％まで高いかまたは１０％まで低い、任意の実際に投与された用量が記載した用量と等価であると考えられる。この理由のために、全ての用量を具体的な用量の「約」として記載している。例えば「約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時」として記載された用量は０．０２２５から０．０２７５ｍｇ／ｋｇ／時の範囲の任意の実際の用量と等価であると考えられる。
【００６６】
続いて低用量ＴＦＰＩ投与を行う場合、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩのアナログのボーラス注射または簡単には高速注入を本発明の実施において用いることもできる。例えばボーラス注射または高速注入を用いて患者の循環中に投与されたＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの平衡時間を低減させることができる。そうする場合、結果として生じるＴＦＰＩの定常状態の血漿レベルにさらに急速に到達することができ、そしてＴＦＰＩの受容体をより早く飽和させることができる。約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時で２時間のａｌａ−ＴＦＰＩのヒトへの投与はＴＦＰＩ（＋ａｌａ−ＴＦＰＩ）の血漿レベルを約８０ｎｇ／ｍｌ〜約１２５ｎｇ／ｍｌまで増加させる、すなわちおよそ５０％の増加である。注入速度を増すか、またはボーラス注射を用いる場合、同一レベルにより早く到達する。定常状態が得られるまで注入を続ける場合、高速注入は高レベルに至る。敗血症を患う患者における定常状態レベルは、約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与に関しては約３００ｎｇ／ｍｌになることが見出され、そして約０．３３または約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時でのａｌａ−ＴＦＰＩの投与に関しては約少なくとも２μｇ／ｍｌになることが見出された。
【００６７】
１回持続注入で、または分割した注入用量で宿主に投与された全一日用量は例えば少なくとも約０．００６ｍｇ／ｋｇ／日〜約１．２ｍｇ／ｋｇ／日未満のａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価であり、さらに通常的には約０．２４ｍｇ／ｋｇ／日〜約１．２ｍｇ／ｋｇ／日未満のａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価であり、そして好ましくは約０．６ｍｇ／ｋｇ／日のａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価でよい。この範囲内の低量は予防的またはその他の目的のために有用であり得る。この範囲を超える高用量は重症ＣＡＰの処置に有用であり得る。本発明の投与プロトコールを、患者に投与された総用量として表現することもできる。総用量は注入速度および全注入時間の数学的結果である。例えばａｌａ−ＴＦＰＩに関して約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時の好ましい投与速度および９６時間の好ましい注入時間では、総用量はａｌａ−ＴＦＰＩ約２．４ｍｇ／ｋｇ体重である。一つの実施態様では、ａｌａ−ＴＦＰＩに関して約０．２５ｍｇ／ｋｇ／時の好ましい投与速度および９６時間の好ましい注入時間で、総用量はａｌａ−ＴＦＰＩ約２４ｍｇ／ｋｇ体重である。一つの実施態様では、ａｌａ−ＴＦＰＩに関して約０．７５ｍｇ／ｋｇ／時の好ましい投与速度および９６時間の好ましい注入時間で、総用量はａｌａ−ＴＦＰＩ約７２ｍｇ／ｋｇ体重である。別の実施態様では、本発明にしたがって投与されたＴＦＰＩの総用量は少なくとも約０．７５μｇ／ｋｇおよび約４．８ｍｇ／ｋｇ未満のａｌａ−ＴＦＰＩと等価である。好ましくは、総用量は少なくとも約１ｍｇ／ｋｇおよび約４．８ｍｇ／ｋｇ未満のａｌａ−ＴＦＰＩと等価である。さらに好ましくは、総用量は約２．４ｍｇ／ｋｇのａｌａ−ＴＦＰＩと等価である。
【００６８】
投与計画を調整するために用いることができる一つの因子は個々の患者の凝固機能であり、それは典型的にはプロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイまたは国際標準比（ＩＮＲ）を用いて測定される。ＩＮＲは、アッセイが国際参照トロンボプラスチン試薬に対して較正される、ＰＴアッセイの標準化である。例えばＲ．Ｓ．Ｒｉｌｅｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．１４：１０１−１１４（２０００）を参照のこと。健常ヒトボランティアのａｌａ−ＴＦＰＩに対するＩＮＲ応答は、認められた血漿濃度の範囲にわたってほぼ直線的である（図３）。ＩＮＲにおける全体的な変化は血漿ａｌａ−ＴＦＰＩ濃度の１μｇ／ｍｌ上昇あたり１．２単位である。
【００６９】
薬力学モデルにおけるａｌａ−ＴＦＰＩに対するＩＮＲ応答は、対数直線モデルにより最も良好に説明され、そこではＩＮＲの対数がａｌａ−ＴＦＰＩの血漿濃度に直線的に相関した。応答の対数直線特性は、ベースラインでＩＮＲが高い対象は、類似するレベルの循環ａｌａ−ＴＦＰＩを有する、ベースライン値が低い対象よりもさらに大きな抗凝固応答を経験する可能性があることを意味する。
【００７０】
ｍｇ／ｋｇ／時を基盤とする投与速度および全一日用量を含む前記した投与計画は「参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価である」用量として表現される。これは、それらが成熟した、純度１００％（タンパク質基盤で）の適切にフォールディングされた、生物学的に活性な非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩであると定義された「参照ａｌａ−ＴＦＰＩ」の用量に対する正規化により定量的に決定されることを意味している。ａｌａ−ＴＦＰＩはアミノ酸配列が配列番号２で表されるＴＦＰＩのアナログである。成熟した全長ＴＦＰＩおよびそのアナログを含むＴＦＰＩのその他の形態を本発明で用いることもできる。ａｌａ−ＴＦＰＩ以外のＴＦＰＩの形態で、および純度１００％未満であるａｌａ−ＴＦＰＩまたは別のＴＦＰＩアナログの調製物で本発明を実施するための適切な用量範囲を決定するために、参照ａｌａ−ＴＦＰＩに関して本明細書に記載した用量範囲をＴＦＰＩの特定の形態の固有の生物学的活性に基づいて調整することができ、そしてさらに調製物の生化学的純度に基づいて調整することができる。
【００７１】
好ましい実施態様では、患者はＴＦＰＩの最初の投与を受ける１０日間の内に抗凝固剤を投与されていない。好ましい実施態様では、患者はＴＦＰＩの最初の投与を受ける７日間の内に抗凝固剤を投与されていない。好ましくは、患者はＴＦＰＩの最初の投与を受ける２４時間内にある形態のヘパリンを投与されていない。一つの実施態様では、患者はＴＦＰＩの最初の投与を受ける１０時間以内、好ましくは１２時間内に未分画のヘパリンを投与されていない。一つの実施態様では、患者はＴＦＰＩの最初の投与を受ける２０時間以内、好ましくは２４時間以内に低分子量ヘパリンを投与されていない。一つの実施態様では、患者はＴＦＰＩの最初の投与を受ける１０時間以内、好ましくは１２時間以内にドロトレコギンアルファを投与されていない。
【００７２】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの固有の生物学的活性は成熟した、純度１００％の適切にフォールディングされたＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログのプロトロンビン時間により定義されるような具体的な活性を意味する。したがって等価な用量は（参照ａｌａ−ＴＦＰＩ用量）／（（相対的な固有の活性）×（生化学的純度））として計算され、ここで相対的な固有の活性は（アナログの固有の活性）／（参照ａｌａ−ＴＦＰＩの固有の活性）を意味する。例えば特定のＴＦＰＩアナログが参照ａｌａ−ＴＦＰＩの８０％である固有の生物学的活性を有する場合、次いで特定のＴＦＰＩアナログに関する等価な用量は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩに関する用量の値を０．８で除算することにより得られる。さらに患者に投与された処方が例えば生化学的純度が９０％しかない、すなわち１０％のＴＦＰＩの生物学的活性を欠く分子種を含む場合、次いで用量の値を０．９により除算することによりａｌａ−ＴＦＰＩに関する参照用量の値のさらなる補正を実施する。したがって８０％のａｌａ−ＴＦＰＩの固有の活性を有し、そして生化学的純度９０％である仮定のＴＦＰＩアナログが投与された場合、０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時の参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投与速度は０．０３４７ｍｇ／ｋｇ／時（すなわち０．０２５／（０．８×０．９））になる。
【００７３】
固有の活性または生化学的純度のいずれかが解らなくても、相対的生物学的活性を決定することにより等価な用量を決定することもできる。プロトロンビン時間アッセイを用いて特定のＴＦＰＩアナログをＴＦＰＩ生物学的活性標準と比較することにより相対的生物学的活性を決定することができる。例えばＷＯ９６／４０７８４の実施例９の方法にしたがって生成されたａｌａ−ＴＦＰＩは約８５％の生物学的に活性なＴＦＰＩ分子種を含有し、これをＴＦＰＩ生物学的活性標準として使用することができる。ＷＯ９６／４０７８４の実施例９の方法にしたがって生成されたａｌａ−ＴＦＰＩはプロトロンビンアッセイにおいて参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性の約８５％を有する。プロトロンビン時間標準曲線のプロッティングにおいて、凝血時間の対数をＴＦＰＩ濃度の対数に対してプロットする。ＴＦＰＩ生物学的活性標準が参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性の８５％を有する場合、次いでプロッティング前にＴＦＰＩ生物学的活性標準の濃度に０．８５を乗算する場合の参照ａｌａ−ＴＦＰＩに関するものと等価である標準曲線を調製することができ、そうすればプロットした活性が純度１００％の参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性と等価である。特定のＴＦＰＩアナログに関する凝血時間を標準曲線と比較すると、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの等価な濃度を曲線から読み取ることができる。これに代えて、標準曲線の直線部分の傾きが直線回帰分析により得られる場合、次いで傾きを参照ａｌａ−ＴＦＰＩに相対したＴＦＰＩ生物学的活性標準の活性に基づいて補正することができる。したがって特定のＴＦＰＩの相対的生物学的活性はアナログの活性に対する参照ａｌａ−ＴＦＰＩ活性の比率と等価である。例えば特定のアナログが参照ａｌａ−ＴＦＰＩ  １．００μｇと同一のプロトロンビン時間活性を生み出すために１．４３μｇを必要とする場合、次いでアナログの相対的生物学的活性は１．００／１．４３すなわち０．７である。そのアナログに関して、参照ａｌａ−ＴＦＰＩ用量と等価な用量はアナログの相対的生物学的活性により参照ａｌａ−ＴＦＰＩ用量を除算することにより得られる。例えば参照ａｌａ−ＴＦＰＩに関して０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時の用量はアナログの０．０３５７ｍｇ／ｋｇ／時と等価である（すなわち０．０２５／０．７）。
【００７４】
単独で活性な抗凝固医薬製剤としてＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与することができるが、これらの分子を一つまたはそれより多いさらなる治療薬と組み合わせで使用して重症肺炎の処置のための組み合わせ治療を提供することもできる。かかるさらなる治療薬には、例えば抗内毒素、モノクローナル抗体（例えば内毒素結合モノクローナル抗体）および抗ＴＮＦネズミモノクローナル抗体のような抗ＴＮＦ生成物のような抗体が含まれる。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログをインターロイキン−１受容体アンタゴニスト、殺菌性／透過性亢進（ＢＰＩ）タンパク質、免疫刺激剤、ＰＡＦアンタゴニストのような抗炎症活性を有する化合物および細胞接着遮断剤（例えばＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ阻害剤のような抗血小板薬）と組み合わせることもできる。組み合わせとして投与される場合、治療薬を同時または異なる時間に与えられる別個の組成物として処方することができる。好ましくはさらなる治療薬をＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与期間と同時（すなわちＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与期間の間に）または２４時間以内に（すなわちＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与期間の開始前２４時間以内か、または終了後２４時間後）のいずれかに与える。さらなる治療薬をＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログと一緒の単一の組成物として与えることもできる。
【００７５】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを、重症肺炎を処置するのに有効であろうその他の薬剤と組み合わせて与えることもできる。例えば以下のものをＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログと組み合わせて投与することができる：根底にある細菌感染を処置できる抗生物質、細菌細胞壁成分に対して指向するモノクローナル抗体、重症肺炎経路に関与するサイトカインと複合できる受容体、ならびにサイトカインまたは重症肺炎および／もしくはその徴候を減弱させる補体タンパク質を含むその他の活性化もしくは増幅された生理学的経路と相互作用できる一般的な任意の薬剤もしくはタンパク質。
【００７６】
有用な抗生物質にはベータラクタム環（ペニシリン）、グリコシド結合におけるアミノ糖（アミノグリコシド）、大環状ラクトン環（マクロライド）、ナフタセンカルボキサミドの多環式誘導体（テトラサイクリン）、ジクロロ酢酸のニトロベンゼン誘導体、ペプチド（バシトラシン、グラミシジンおよびポリミキシン）、共役二重結合系を有する大環（ポリエン）、スルファニルアミドから誘導されるサルファ剤（スルホンアミド）、５−ニトロ−２−フラニル群（ニトロフラン）、キノロンカルボン酸（ナリジクス酸）およびその他多数の一般的な部類のものが含まれる。その他の抗生物質および前記の具体的な抗生物質のさらなる変種をＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第３版、Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｙｍｅｒ（編）、２巻７８２−１０３６頁（１９７８）および３巻１−７８頁、Ｚｉｎｓｓｅｒ、ＭｉｃｒｏＢｉｏｌｏｇｙ  第１７版、Ｗ．Ｊｏｌｄｉｋら（編）２３５−２７７頁（１９８０）、またはＤｏｒｌａｎｄ‘ｓ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、第２７版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８８）に見出すことができる。
【００７７】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログと組み合わせることができるその他の薬剤にはＥ５５３１（リピッドＡアナログ、Ａｓａｉら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２２：４３２（１９９９）を参照のこと）のような内毒素アンタゴニスト、抗凝固活性を有するＴＦアナログ（例えばＫｅｌｌｅｙら、Ｂｌｏｏｄ  ８９：３２１９（１９９７）およびＬｅｅおよびＫｅｌｌｅｙ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：４１４９（１９９８）を参照のこと）、ＩＬ−６またはＭ−ＣＳＦを指向するこれらのモノクローナル抗体のようなサイトカインを指向するモノクローナル抗体（１９８９年１２月１５日出願の米国特許出願番号第０７／４５１，２１８号を参照のこと）およびＴＮＦを指向するモノクローナル抗体（Ｃｅｒａｍｉら、米国特許第４，６０３，１０６号を参照のこと）、それが生成された細胞からの成熟ＴＮＦプロホルモンを切断するタンパク質阻害剤（１９８９年８月１６日出願の米国特許出願番号第０７／３９５，２５３号を参照のこと）、ＩＬ−１のアンタゴニスト（１９９０年５月１日出願の米国特許出願番号第０７／５１７，２７６号を参照のこと）、インヒビンのようなＩＬ−６サイトカイン発現の阻害剤（米国特許第５，９４２，２２０号を参照のこと）、ならびにＩＬ−１のような種々のサイトカインの受容体基盤の阻害剤が含まれる。ＣＲ１、ＤＡＦおよびＭＣＰのような補体に対する抗体または補体のタンパク質阻害剤を用いることもできる。
【００７８】
全ての特許、特許出願およびこの開示に引用された参考文献はその全てを出典明示により本明細書の一部とする。
【００７９】
本発明をここで特定の有利な実施態様を示す以下の実施例を参考にして説明する。しかしながらこれらの実施態様は説明のためのものであり、そしていかなるようにも本発明を制限することを意図するものではないことに留意すべきである。
【実施例】
【００８０】
（実施例１）
重症肺炎患者のａｌａ−ＴＦＰＩ処置
重症肺炎の患者を評価して比較的相同な群のａｌａ−ＴＦＰＩでの処置の潜在的影響を探索した。発明者が立証した敗血症の一つの起源を肺炎として指定された場合に肺炎患者が同定された。その他の感染部位も存在し得る。化学的続発症から感染を区別するのが困難であるために、誤嚥性肺炎の患者は含めなかった。肺炎を有していると同定された患者を次いで培養陽性（培養またはグラム染色のような感染の任意の証拠）または培養陰性（培養陰性または培養されない）として分類した。３００ｍＭ  Ｌ−アルギニン、２０ｍＭ  クエン酸ナトリウムを含有し、ｐＨ５．５、モル浸透圧濃度５６０＋／−１１０ｍＯｓｍのバッファー中に処方した大腸菌において発現された非グリコシル化ａｌａ−ＴＦＰＩの調製物を用い、０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時の用量で連続的な静脈内注入により患者を処置した。プラセボはａｌａ−ＴＦＰＩ不含の同一バッファーからなり、そして被験薬物と同一の速度で注入された。これらの分析の結果により培養陽性肺炎のこれらの患者のａｌａ−ＴＦＰＩ処置から陽性効果が実証される（表１）。感染起源の証拠のないこれらの患者により陰性効果が実証された。
【００８１】
【表１】
2008536859.tif 000002
高ＩＮＲ培養陰性群の死亡率の増加はヘパリンの投与を加えたまたは加えなかった患者集団で存在したようであるが、肺炎培養陰性の非ヘパリン群の対象の数は比較的少ないことに留意すべきである（表３）。培養陰性／ヘパリンなしのコホートで強い陽性の処置効果が観察された。
【００８２】
【表２】
2008536859.tif 000003
（実施例２）
病気の重症度変数のベースラインの調査
病気の重症度変数のベースラインの数を評価して、観察された結果を説明できる群不均衡があるかどうかを決定した。これらのデータにより、培養状態に関連する結果における差異はベースライン不均衡のためではないことが示される。したがって、結果は感染を有する患者と有さない患者との間の生物学的差異のためのＴＦＰＩ処置の差次的効果を表していると考えられる。重症度の指標（例えばＡＰＡＣＨＥ  ＩＩスコアまたは器官機能障害スコア）がプラセボと等しいか、またはＴＦＰＩ処置肺炎培養陰性群でより低いかのいずれかであったという事実にかかわらず、培養陰性群は全死亡率が最も高いことが実証された（表４）。
【００８３】
【表３】
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ＩＬ−６は敗血症の初期に上昇する炎症性サイトカインであり、炎症応答の強さを反映し、そして結果に関連する。ベースラインでは、ＩＬ−６のレベルは、臨床上肺炎を有するとして同定されたが感染の証拠がない患者においてより低い（表５）。これは肺炎の感染起源が立証された患者対、明らかな感染起源のない患者との間に生物学的差異があることを示唆している。逆説的に言えば、培養陰性ＴＦＰＩ群はＩＬ−６のベースラインレベルは最も低いが、死亡率は最も高い。敗血症集団ではＩＬ−６レベルは経時的に低下する。ＩＬ−６の低下の速度はＴＦＰＩ処置肺炎培養陰性対象では低減される（表５）。これはＴＦＰＩの生物学的効果は感染を有する、および有さないこれらの患者で異なり得ることを示唆している。
【００８４】
【表４】
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（実施例３）
感染の立証の型による重症肺炎患者の分析
前記したように、ａｌａ−ＴＦＰＩ処置からの全ての利益は、感染の確実性が最も高いこれらの患者、すなわち陽性血液培養のものにおいて観察された。感染の立証の型による重症肺炎患者の分析では、ａｌａ−ＴＦＰＩ処置からの利益は陽性血液培養の対象およびその他の証拠を有するものの双方で示された（表６）。菌血症群、すなわち感染の可能性が最も高いまたは感染の起源が最も実証可能な群において影響は最も強かった。
【００８５】
【表５】
2008536859.tif 000006
以前に示したように、感染を立証された患者（血液＋「その他」）はヘパリン不在下のＴＦＰＩ処置から利益を享受した。この結果はほとんど肺炎群から導かれる利益による（表７）。この知見は、内在性抗凝固剤からの利益が重症肺炎感染を有するこれらの患者において最大であることを示していると考えられる。
【００８６】
【表６】
2008536859.tif 000007
さらに不均一性を限定するために、将来性試験（ｆｕｔｕｒｅ  ｔｒｉａｌｓ）を市中肺炎（ＣＡＰ）に焦点を当てることができる。入院中に肺炎を進行させる患者（院内肺炎）は病原生物でコロニー形成される可能性がさらに高く、そして感染性肺炎の診断をさらに困難にするその他の肺障害を有する。加えてＣＡＰの患者は院内肺炎の患者よりもヘパリンに暴露されている可能性が低い。処置前に病院に滞在した長さによりデータを分析した場合、２日より長く入院した患者（院内肺炎）に対して、２日以下の入院の培養陽性患者（市中肺炎）に関して類似の利益が示された。主に院内群において培養陰性患者における陰性効果が認められた（表８）。
【００８７】
【表７】
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（実施例４）
肺胞フィブリン沈着および線維素溶解活性の変化は肺炎および急性肺傷害の特徴である。組織因子はこれの準備における凝固の重要なイニシエーターと考えられており、そして組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）は動物モデルにおいて肺損傷を防御または低減させることが実証されている。
【００８８】
組換え組織因子経路阻害剤（ティファコギン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ））は重症敗血症において調査されており、そして第ＩＩＩ相二重盲検プラセボ対照無作為化試験が完了している（ＴＦＰ００７）。研究は２８日間のあらゆる原因の死亡率の有意な低下を実証するのに失敗した。ｐｏｓｔ−ｈｏｃ分析を実施してＣＡＰによる重症敗血症を進行させている患者がティファコギン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）から利益を享受できるかどうかを評価した。また、ヘパリン相互作用の可能性および微生物学的立証の重要性をも調査した。
【００８９】
材料および方法
ＴＦＰ００７に参加した、重症敗血症の主な原因としてＣＡＰを有する患者（ｐｔｓ）をｐｏｓｔ−ｈｏｃ分析のために管理した。２８日間のあらゆる原因の死亡率および安全性を全ＣＡＰ集団に関して決定した。ＤＶＴ予防のためのヘパリン併用投与の影響および微生物学的立証の重要性をさらに分析した。
【００９０】
結果
ＴＦＰ００７には１９５５の患者が含まれ、その４３５人はＣＡＰを有した（ＴＦＰＩ２１７人、プラセボ２１８人）。ＴＦＰＩおよびプラセボの各々でベースライン特性は２群で類似した（平均年齢６２．３歳対６２歳；平均ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ  ２４．９対２４；平均ＯＤ３対３）（詳記していない）。２８日間のあらゆる原因の死亡率のデータを以下の表９にて提供する。死亡率はプラセボと比較して、とりわけヘパリン併用投与しなかった場合および生物学的立証がある場合にティファコギン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）処置患者で低下する傾向があった。
【００９１】
重篤な出血事象が１２人の処置患者（５．５％）対プラセボの５人の患者（２．２％）において生じた（詳記していない）。最初の２８日間にＣＮＳ出血が６人のティファコギン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）処置患者（２．７％）対プラセボの２人（１％）で観察された（詳記していない）。
【００９２】
【表８】
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結論
このｐｏｓｔ−ｈｏｃ分析から、ティファコギン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）は重症ＣＡＰを有する患者の２８日間のあらゆる原因の死亡率を低下させるようである。立証されたＣＡＰを有する、および／またはヘパリン併用投与を行わない患者ではより大きな利益が得られるようである。安全性プロファイルは許容される。ティファコギン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）の潜在的利益は重症ＣＡＰの患者を含む第ＩＩＩ相臨床試験において現在評価されている。
【００９３】
ＴＦＰ００７に参加した全患者に関する、および種々の亜集団に関する出血および重篤な出血の発生を以下の表９Ａ−９Ｆにて提供する。
【００９４】
【表９−１】
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【００９５】
【表９−２】
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【００９６】
【表１０−１】
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【００９７】
【表１０−２】
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【００９８】
【表１０−３】
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【００９９】
【表１１−１】
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【０１００】
【表１１−２】
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【０１０１】
【表１１−３】
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【０１０２】
【表１１−４】
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【０１０３】
【表１１−５】
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【０１０４】
【表１１−６】
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【０１０５】
【表１１−７】
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【０１０６】
【表１２】
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本発明を具体的な実施態様に関して説明してきた。しかしながら本出願は添付の請求の範囲の精神および範囲から逸脱することなく当業者によりなし得るこれらの変更および置換を対象に含めることを意図する。
【０１０７】
【化１】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年1月29日(2008.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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