(57)【要約】  一定の式Ｉで示され、その式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸが明細書中に記載される意味を有する化合物は、Ｅｇ５阻害活性、抗増殖活性及び／又はアポトーシス誘導活性を有する新規の有効な化合物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2008509971.tif 000017
［式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
Ｒ１１２は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ又は完全にもしくは大部分がフッ素で置換されたＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｒ３は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である］で示される化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩。
【請求項２】
式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ4−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキルであり、
Ｒ１１２は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、請求項１記載の化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩。
【請求項３】
式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
Ｒ１１２は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ又は完全にもしくは大部分がフッ素で置換されたＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｒ３は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルである、請求項１記載の化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩。
【請求項４】
式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
Ｒ１１２は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ又は完全にもしくは大部分がフッ素で置換されたＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｒ３は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素である、請求項１記載の化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩。
【請求項５】
式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、メチル、エチル又はシクロプロピルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、
Ｒ４は、メチルである、請求項１記載の化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩。
【請求項６】
式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、メチル、エチル又はシクロプロピルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、
Ｒ４は、水素である、請求項１記載の化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩。
【請求項７】
請求項１から６までのいずれか１項記載の化合物であって、３ａ位及び１０位に関して式Ｉ*
【化２】
2008509971.tif 000018
に示される立体配置を有する化合物及びそれらの塩。
【請求項８】
請求項７に示される式Ｉ*で示され、その式中、
Ｒ１は、メチル、エチル又はＲ１１によって置換されたエチルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、メチルであり、
Ｒ１１２は、メチルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、モルホリニルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、請求項１記載の化合物並びにこれらの化合物の塩。
【請求項９】
請求項７に示される式Ｉ*で示され、その式中、
Ｒ１は、メチル又はＲ１１によって置換されたエチルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、メチルであり、
Ｒ１１２は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨであり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、メチルである、請求項１記載の化合物及びこれらの化合物の塩。
【請求項１０】
請求項７に示される式Ｉ*で示され、その式中、
Ｒ１は、メチル又はＲ１１によって置換されたエチルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、メチルであり、
Ｒ１１２は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、請求項１記載の化合物及びこれらの化合物の塩。
【請求項１１】
請求項７で示される式Ｉ*で示され、その式中、
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨであり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、メチルである、請求項１記載の化合物並びにこれらの化合物の塩。
【請求項１２】
請求項７で示される式Ｉ*で示され、その式中、
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、請求項１記載の化合物並びにこれらの化合物の塩。
【請求項１３】
請求項７に示される式Ｉ*で示され、その式中、Ｒ２及びＲ３は、両者とも水素であり、かつＲ１、Ｒ４及びＸは、以下の表：
【表１】
2008509971.tif 000019
中に示される１．１〜１．６の意味のいずれか１つを有する、請求項１記載の化合物並びにこれらの化合物の塩。
【請求項１４】
疾病の治療で使用するための請求項１記載の式Ｉの化合物。
【請求項１５】
請求項１記載の１種以上の式Ｉの化合物と一緒に慣用の医薬品賦形剤及び／又はビヒクルを含有する医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１記載の式Ｉの化合物を、良性新形成及び／又は悪性新形成、例えば癌の治療用の医薬組成物の製造において用いる使用。
【請求項１７】
哺乳動物における、細胞性（過剰）増殖性疾患及び／又はアポトーシスの誘導に反応を示す疾患、例えば良性新形成又は悪性新形成、例えば癌を治療、予防、改善又は阻害するための方法において、請求項１に記載の式Ｉの化合物１種以上の製剤学的に有効かつ治療学的に効果的かつ許容される量を、それを必要とする前記の哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１８】
哺乳動物における、Ｅｇ５キネシン活性に関連する疾病及び／又は疾患、例えば良性新形成又は悪性新形成、例えば癌を治療、予防、改善又は阻害するための方法において、請求項１に記載の式Ｉの化合物１種以上の製剤学的に有効かつ治療学的に効果的かつ許容される量を、それを必要とする前記の哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１９】
Ｅｇ５キネシン活性を調整するための方法において、製剤学的に有効かつ治療学的に効果的かつ認容される量の請求項１記載の式Ｉの化合物１種以上を、前記の調整を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項２０】
請求項１から１３までのいずれか１項記載の少なくとも１種の化合物である第一の有効成分と、化学療法抗癌剤及び標的特異的抗癌剤からなる群から選択される少なくとも１種の抗癌剤である第二の有効成分とを有する組合せ物であって、療法、例えば良性新形成又は悪性新形成の療法、例えば癌の療法において、別々に、連続的に、同時に又は時間的にずらして使用するための組合せ物。
【請求項２１】
請求項２０記載の組合せ物であって、前記の化学療法抗癌剤が、（ｉ）アルキル化剤／カルバミル化剤；（ｉｉ）白金誘導体；（ｉｉｉ）有糸分裂インヒビター／チューブリンインヒビター；（ｉｖ）トポイソメラーゼインヒビター；（ｖ）ピリミジンアンタゴニスト；（ｖｉ）プリンアンタゴニスト及び（ｖｉｉ）葉酸アンタゴニストから選択される組合せ物。
【請求項２２】
請求項２０又は２１記載の組合せ物であって、前記の標的特異的抗癌剤が、（ｉ）キナーゼインヒビター；（ｉｉ）プロテアソームインヒビター；（ｉｉｉ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター；（ｉｖ）ヒートショックタンパク質９０インヒビター；（ｖ）血管標的剤（ＶＡＴ）及び抗脈管形成剤；（ｖｉ）モノクローナル抗体並びに突然変異体及びモノクローナル抗体と抗体フラグメントのコンジュゲート；（ｖｉｉ）オリゴヌクレオチド系治療薬；（ｖｉｉｉ）Ｔｏｌｌ様レセプター／ＴＬＲ９アゴニスト；（ｉｘ）プロテアーゼインヒビター；（ｘ）ホルモン療法剤；ブレオマイシン；レチノイド；ＤＮＡメチルトランスフェラーゼインヒビター；アラノシン；サイトカイン；インターフェロン；ＴＲＡＩＬ；ＤＲ４／５アゴニスト抗体；ＦａｓＬ及びＴＮＦ−Ｒアゴニストから選択される組合せ物。
【請求項２３】
請求項１６、１７、１８及び２０のいずれか１項記載の使用、方法又は組合せ物であって、前記の癌が、胸部、膀胱、骨、脳、中枢神経系及び末梢神経系、結腸、内分泌腺、食道、子宮内膜、生殖細胞、頭部及び頚部、腎臓、肝臓、肺、喉頭及び下咽頭の癌、中皮腫、肉腫、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、腎臓、小腸、軟部組織、精巣、胃、皮膚、尿管、膣及び肛門の癌；遺伝性癌、網膜芽腫及びウィルムス腫瘍；白血病、リンパ腫、非ホジキン病、慢性及び急性の骨髄性白血病、急性のリンパ芽球性白血病、ホジキン病、多発性骨髄腫及びＴ細胞リンパ腫；骨髄異形成症候群、形質細胞新生物、経産婦腫瘍性症状、未知の原発部位の癌並びにＡＩＤＳ関連悪性疾患からなる群から選択される、使用、方法又は組合せ物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物の製造のための医薬品工業で使用できる、インドロピリジン、ベンゾフラノピリジン及びベンゾチエノピリジンの新規のクラスに関する。
【０００２】
背景技術
Ｈｏｔｈａ他著の文献Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．２００３，１１５，２４８１−２４８４において、インドロピリジン化合物ＨＲ２２Ｃ１６は、Ｅｇ５を標的とすることによる細胞分裂のインヒビターとして記載されている。
【０００３】
ＥＰ３５７１２２号は、とりわけ細胞分裂抑制化合物として、インドロピリジン、ベンゾフラノピリジン及びベンゾチエノピリジンの誘導体を含んでいる。
【０００４】
国際出願ＷＯ９６３２００３号及びＷＯ０２２８８６５号では、インドロピリジン誘導体は、ＰＤＥ阻害活性に関して記載されている。
【０００５】
国際出願ＷＯ２００４／００４６５２号では、とりわけトランス−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２−メチル−３ａ，４，９，１０−テトラヒドロ−２，９，１０ａ−トリアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオンは、キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）との結晶化された複合体で記載されている。
【０００６】
米国出願ＵＳ２００５／０００４１５６号では、インドロピリジン誘導体、特にモナストロリン（ｍｏｎａｓｔｒｏｌｉｎｅ）誘導体が、Ｅｇ５インヒビターとして記載されている。
【０００７】
発明の開示
ここで、以下に非常に詳細に記載される新規のインドロピリジン、ベンゾフラノピリジン及びベンゾチエノピリジンの誘導体が、先行技術の化合物とは予想しない構造的特徴の点で異なり、かつ意想外かつ特に有利な特性を有することが判明した。このように、例えば本発明による化合物は、Ｅｇ５キネシンのインヒビターとして作用しうる。より詳細には、予想外にも、これらの誘導体が、細胞（過剰）増殖の強力かつ非常に効果的なインヒビター及び／又は癌細胞におけるアポトーシスの細胞周期特異的なインデューサーであることが判明した。従って、予期せぬことに、これらの化合物は、アポトーシス、特に癌におけるアポトーシスの誘導に反応を示す過剰増殖性疾病及び／又は疾患を治療するのに有用となりうる。細胞周期特異的な作用様式を有することによって、これらの誘導体は、ＤＮＡ複製のような基本的な細胞プロセスを標的とするか又はＤＮＡのような基本的な細胞分子と干渉する標準的な化学療法薬と比較してより高い治療指数を有することが望ましい。
【０００８】
こうして例えば、本発明による化合物は、標的癌療法において有用であることが期待される。
【０００９】
従って、本発明は、第一の態様（態様Ａ）においては、式Ｉ
【化１】
2008509971.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
Ｒ１１２は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ又は完全にもしくは大部分がフッ素で置換されたＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｒ３は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である］で示される化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩に関する。
【００１０】
更に、本発明は、態様ａの一実施態様である第二の態様（態様Ｂ）においては、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
Ｒ１１２は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ又は完全にもしくは大部分がフッ素で置換されたＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｒ３は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルである、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩に関する。
【００１１】
更に、本発明は、態様ａの一実施態様である第三の態様（態様Ｃ）においては、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
Ｒ１１２は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルコキシ、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ又は完全にもしくは大部分がフッ素で置換されたＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｒ３は、水素又はＣ1〜Ｃ4−アルコキシであり、
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素である、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩に関する。
【００１２】
Ｃ1〜Ｃ4−アルキルは、直鎖状又は分枝鎖状の１〜４個の炭素原子を有するアルキル基である。例は、ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、プロピル基、イソプロピル基、特にエチル基及びメチル基である。
【００１３】
Ｃ2〜Ｃ7−アルキルは、直鎖状又は分枝鎖状の２〜７個の炭素原子を有するアルキル基である。例は、ヘプチル基、イソヘプチル（５−メチルヘキシル）基、ヘキシル基、イソヘキシル（４−メチルペンチル）基、ネオヘキシル（３，３−ジメチルブチル）基、ペンチル基、イソペンチル（３−メチルブチル）基、ネオペンチル（２，２−ジメチルプロピル）基、ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、プロピル基、イソプロピル基及びエチル基である。
【００１４】
Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチルを表し、そのうちシクロプロピル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが特に挙げられるべきである。
【００１５】
Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルは、前記のＣ3〜Ｃ7−シクロアルキル基の１つによって置換されている前記のＣ1〜Ｃ4−アルキル基の１つを表す。挙げられる例は、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキルメチル基、特にシクロプロピルメチル基及びシクロペンチルメチル基及びシクロヘキシルエチル基である。
【００１６】
本発明の意味上の範囲内ではハロゲンは、ヨウ素又は、特に臭素、塩素又はフッ素である。
【００１７】
Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシは、酸素原子の他に直鎖状又は分枝鎖状の１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を有する基を表す。挙げられる例は、ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ及び、有利にはエトキシ基及びメトキシ基である。
【００１８】
Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシは、酸素原子の他に、２〜４個の炭素原子を有する直鎖状又は分枝鎖状のアルキル基を有する基を表す。挙げられる例は、ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、有利にはエトキシ基である。
【００１９】
Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシは、前記のＣ1〜Ｃ4−アルコキシ基の１つによって置換されている前記のＣ2〜Ｃ4−アルコキシ基の１つを表す。挙げられる例は、２−メトキシエトキシ基、２−エトキシエトキシ基及び２−イソプロポキシエトキシ基である。
【００２０】
ヒドロキシ−Ｃ2〜Ｃ4−アルコキシは、ヒドロキシル基により置換されている前記のＣ2〜Ｃ4−アルコキシ基の１つを表す。挙げられる例は、２−ヒドロキシエトキシ基及び３−ヒドロキシプロポキシ基である。
【００２１】
Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルコキシは、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ又はシクロヘプチルオキシを表し、そのうちシクロプロピルオキシ、シクロペンチルオキシ及びシクロヘキシルオキシが特に挙げられるべきである。
【００２２】
Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシは、前記のＣ3〜Ｃ7−シクロアルキル基の１つによって置換されている前記のＣ1〜Ｃ4−アルコキシ基の１つを表す。挙げられる例は、Ｃ3〜Ｃ7−シクロアルキルメトキシ基、例えばシクロプロピルメトキシ、シクロブチルメトキシ、シクロペンチルメトキシ、シクロヘキシルメトキシ又はシクロヘプチルメトキシであり、そのうちシクロプロピルメトキシ又はシクロペンチルメトキシが特に挙げられる。
【００２３】
完全にもしくは大部分がフッ素で置換されたＣ1〜Ｃ4−アルコキシは、例えば２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロポキシ基、ペルフルオロエトキシ基、１，２，２−トロフルオロエトキシ基、特に１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ基、２，２，２−トリフルオロエトキシ基、トリフルオロメトキシ基及びジフルオロメトキシ基であり、そのうちジフルオロメトキシ基が好ましい。この関連での"大部分が"とは、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ基中の水素原子の半分より多くがフッ素原子により置換されていることを意味する。
【００２４】
本発明による式Ｉの化合物についての適当な塩（置換基に依存して）は全ての酸付加塩又は塩基との全ての塩である。薬学で慣用に使用される薬理学的に認容性の無機及び有機の酸及び塩基のそれが特に挙げられる。これらの好適なものは、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、酢酸、クエン酸、Ｄ−グルコン酸、安息香酸、２−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、酪酸、スルホサリチル酸、マレイン酸、ラウリン酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、シュウ酸、酒石酸、エンボン酸、ステアリン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸又は３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸のような酸との、一方では、水不溶性の酸付加塩、特に水溶性の酸付加塩であり、その際、前記の酸は塩調製において（一塩基酸又は多塩基酸のどちらが考慮されるかに依存して、そしてどの塩が望ましいかに依存して）等モル量比又はそれとは異なる比で使用される。
【００２５】
他方で、置換によっては塩基との塩も適当である。塩基との塩の例としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、マグネシウム、チタン、アンモニウム、メグルミン又はグアニジニウムの塩であり、その際、この場合にも塩基は塩調製において等モル量比又はそれとは異なる比で使用される。
【００２６】
本発明による式Ｉの化合物の工業的規模での製造の間に、例えばプロセス生成物として得ることができる薬理学的に非認容性の塩は当業者に公知の方法によって薬理学的に認容性の塩に変換される。
【００２７】
専門知識によれば、本発明による式Ｉの化合物並びにそれらの塩は、例えば結晶形で単離された場合に、種々の量の溶剤を含有してよい。従って本発明の範囲内では、本発明による式Ｉの化合物の全ての溶媒和物及び、特に全ての水和物、及びまた本発明による式Ｉの化合物の塩の全ての溶媒和物及び、特に全ての水和物が包含される。
【００２８】
式Ｉの化合物の置換基Ｒ２及びＲ３は、フェニル環が骨格に結合される結合位置に対してオルト位、メタ位又はパラ位で結合されてよく、その際、メタ位又はパラ位での結合が好ましい。
【００２９】
式Ｉの化合物は３ａ位及び１０位にキラル中心を有するキラル化合物である。
【００３０】
【化２】
2008509971.tif 000003
【００３１】
本発明は、全ての考えられる立体異性体、例えばジアステレオマー及びエナンチオマーを、実質的に純粋形で並びに任意の混合比で、例えばラセミ体を包含している。
【００３２】
それにより、式Ｉで示される化合物であって、３ａ位及び１０位に対して、式Ｉ*に示されるのと同じ立体配置を有する化合物が好ましい。
【００３３】
【化３】
2008509971.tif 000004
【００３４】
例えば、式Ｉ*の化合物中で、Ｒ４がメチル又は水素の意味を有するのであれば、その立体配置は、カーン・インゴールド・プレログ則に従って、３ａ位でＳであり、かつ１０位でＲである。
【００３５】
更に、式Ｉで示され、３ａ位及び１０位に関して、式Ｉ**：
【化４】
2008509971.tif 000005
に示されるのと同じ立体配置を有する化合物も挙げるに値する。
【００３６】
例えば、式Ｉ**の化合物中で、Ｒ４がメチル又は水素の意味を有するのであれば、その立体配置は、カーン・インゴールド・プレログ則に従って、３ａ位でＲであり、かつ１０位でＲである。
【００３７】
更に、また挙げられるべき式Ｉの化合物は、３ａ位及び１０位に関して、式Ｉ***又は式Ｉ****：
【化５】
2008509971.tif 000006
に示されるのと同じ立体配置を有する化合物である。
【００３８】
例えば、式Ｉ***の化合物中で、Ｒ４がメチル又は水素の意味を有するのであれば、その立体配置は、カーン・インゴールド・プレログ則に従って、３ａ位でＲであり、かつ１０位でＳである。
【００３９】
例えば、式Ｉ****の化合物中で、Ｒ４がメチル又は水素の意味を有するのであれば、その立体配置は、カーン・インゴールド・プレログ則に従って、３ａ位でＳであり、かつ１０位でＳである。
【００４０】
一般に、本発明のエナンチオマー的に純粋な化合物は、当該技術分野で知られる方法に従って、例えば不斉合成を介して、例えば好適なジアステレオ異性化合物の製造と分離とによって；キラル分離カラム上でのクロマトグラフィー分離によって；ラセミ化合物と光学活性の酸又は塩基との塩の形成と、それに引き続く塩の分割及び該塩からの所望の化合物の遊離によって；キラル補助試薬を用いた誘導体化と、それに引き続くジアステレオマー分離及びキラル補助基の除去によって；又は好適な溶剤からの（分別）結晶化によって製造することができる。有利には、エナンチオマー的に純粋な化合物は、公知のエナンチオマー的に純粋な出発化合物から出発して、公知法（例えばクロマトグラフィー分離又は結晶化）によって分離できるジアステレオマー中間体の合成を介して得ることができる。
【００４１】
本発明の文脈では、過剰増殖及び類似の用語は、異常型／調節不全型の細胞増殖、つまり癌のような疾病の顕著な特徴を説明するために使用される。この過剰増殖は、各々の細胞における単細胞性又は多細胞性の／分子性の変化によってもたらされ、かつ生物全体に関しては、良性又は悪性の性質であってよい。細胞増殖の阻害及び類似の用語は、化合物の能力であってその化合物と接触した細胞の増殖を、その化合物と接触していない細胞と比較して遅延及び／又は死滅させる能力を示すために使用される。この細胞増殖の最も好ましい阻害は１００％であり、これはつまり全ての細胞の増殖が停止し、かつ／又は細胞がプログラムされた細胞死を受けることを意味する。幾つかの有利な実施態様では、接触される細胞は、新生細胞である。新生細胞は、異常型の細胞増殖を伴う細胞として定義される。良性の新形成は、細胞の増殖であって、それが進行性で転移性の腫瘍をインビボで形成できないこととして説明される。それに対して、悪性の新形成は、細胞が種々異なる細胞性及び生化学的な異常性を有し、例えば腫瘍転移を形成しうることとして説明される。悪性の新生細胞の後天的な機能的な異常性（"癌の顕著な特徴"としても定義される）は、複製能力（"過剰増殖"）、増殖シグナル、抗増殖シグナルに対する感受性における自足、アポトーシスからの回避、持続的な血管形成及び組織侵襲及び転移である。
【００４２】
アポトーシスの誘導及び類似の用語は、接触した細胞においてプログラムされた細胞死が引き起こされる化合物を特定するのに使用される。アポトーシスは、接触した細胞内での複雑な生化学的事象、例えばシステイン特異的プロテイナーゼ（"カスパーゼ"）の活性化及びクロマチンの断片化によって定義される。該化合物と接触した細胞におけるアポトーシスの誘導は、必ずしも細胞増殖の阻害と結びつかない。有利には、細胞増殖の阻害及び／又はアポトーシスの誘導は、異常型の細胞増殖（過剰増殖）を伴う細胞に特異的である。このように、異常型の細胞増殖を伴う細胞と比較すると、正常な増殖細胞又は停止細胞は、化合物の増殖阻害活性又はアポトーシス誘導活性に対して感受性が低いか又は更には非感受性である。最後に、細胞毒性及び類似の用語は、種々の機構、例えば細胞周期に依存して又は細胞周期に依存せずに、アポトーシス／プログラムされた細胞死の誘導によって細胞を死滅させる化合物を同定するために、より一般的な範囲で使用される。
【００４３】
細胞周期特異的及び類似の用語は、細胞周期の特定の段階を能動的に通過する連続的に増殖する細胞においてのみアポトーシスを誘導するが、停止した非分裂細胞には誘導しない化合物を同定するために使用される。連続的に増殖する細胞は、癌のような疾病に典型的であり、かつ全ての細胞分裂周期の段階、つまりＧ（"間期"）１、Ｓ（"ＤＮＡ合成"）、Ｇ２及びＭ（"有糸分裂"）にある細胞によって特徴付けられる。
【００４４】
より挙げるに値する本発明の態様Ａによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ4−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキルであり、
Ｒ１１２は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル又はピロリジニルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００４５】
特に挙げるに値する本発明の態様Ａによる化合物は、式Ｉで示され、以下に示される式Ｉ*からなり、その式中、
Ｒ１は、メチル、エチル又はＲ１１によって置換されたエチルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、メチルであり、
Ｒ１１２は、メチルであるか、又は
Ｒ１１１及びＲ１１２は、一緒になって、これらが結合される窒素原子を含んで、環Ｈｅｔを形成し、その際、
Ｈｅｔは、モルホリニルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、化合物並びにこれらの化合物の塩である。
【００４６】
一実施態様においては、殊に挙げるに値する本発明の態様Ａによる化合物は、式Ｉで示され、以下に示される式Ｉ*からなり、その式中、
Ｒ１は、メチル又はＲ１１によって置換されたエチルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、メチルであり、
Ｒ１１２は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨであり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、メチルである、化合物及びこれらの化合物の塩である。
【００４７】
もう一つの実施態様においては、殊に挙げるに値する本発明の態様Ａによる化合物は、式Ｉで示され、以下に示される式Ｉ*からなり、その式中、
Ｒ１は、メチル又はＲ１１によって置換されたエチルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、メチルであり、
Ｒ１１２は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、化合物及びこれらの化合物の塩である。
【００４８】
一実施態様においては、強調されるべき本発明の態様Ａによる化合物は、式Ｉで示され、以下に示される式Ｉ*からなり、その式中、
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨであり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、メチルであるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、メチルである、化合物及びこれらの化合物の塩である。
【００４９】
もう一つの実施態様においては、強調されるべき本発明の態様Ａによる化合物は、式Ｉで示され、以下に示される式Ｉ*からなり、その式中、
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、かつ
Ｒ４は、水素であるか、もしくは
Ｘは、酸素であり、かつ
Ｒ４は、水素である、化合物及びこれらの化合物の塩である。
【００５０】
より挙げるに値する本発明の態様Ｂによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ5−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ5−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素であり、
Ｒ１１２は、水素であり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、
Ｒ４は、メチルである、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００５１】
特に挙げるに値する本発明の態様Ｂによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル又は２−アミノ−エチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、
Ｒ４は、メチルである、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００５２】
殊に挙げるに値する本発明の態様Ｂによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、メチル、エチル又はシクロプロピルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、
Ｒ４は、メチルである、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００５３】
強調されるべき本発明の態様Ｂによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、ＮＨ、酸素又は硫黄であり、
Ｒ４は、メチルである、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００５４】
より挙げるに値する本発明の態様Ｃによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ3〜Ｃ5−シクロアルキル、Ｃ3〜Ｃ5−シクロアルキル−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル又は、Ｒ１１によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルであり、その際、
Ｒ１１は、−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２であり、その際、
Ｒ１１１は、水素であり、
Ｒ１１２は、水素であり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、
Ｒ４は、水素である、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００５５】
特に挙げるに値する本発明の態様Ｃによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、Ｃ1〜Ｃ2−アルキル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル又は２−アミノ−エチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、
Ｒ４は、水素である、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００５６】
殊に挙げるに値する本発明の態様Ｃによる化合物は、式Ｉで示され、その式中、
Ｒ１は、メチル、エチル又はシクロプロピルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素であり、
Ｘは、硫黄であり、
Ｒ４は、水素である、化合物並びにそれらの塩、立体異性体及びこれらの化合物の立体異性体の塩である。
【００５７】
本発明による化合物において特に関心が持たれるのは、本発明の範囲内で、以下の実施態様の１つ又は可能であれば、それより多くにより包含される式Ｉの化合物である：
本発明による式Ｉの化合物の特定の一実施態様（実施態様１）は、式Ｉで示され、その式中、Ｒ１がメチルである化合物を指す。
【００５８】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様２）は、式Ｉで示され、その式中、Ｒ２が水素である化合物を指す。
【００５９】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様３）は、式Ｉで示され、その式中、Ｒ３が水素である化合物を指す。
【００６０】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様４）は、式Ｉで示され、その式中、Ｒ２及びＲ３が両者とも水素である化合物を指す。
【００６１】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様５）は、前記の式Ｉ*からの化合物を指す。
【００６２】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様６）は、式Ｉで示され、その式中、Ｒ４がメチルである化合物を指す。
【００６３】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様７）は、式Ｉで示され、その式中、ＸがＮＨであり、かつＲ４がメチルである化合物を指す。
【００６４】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様８）は、式Ｉで示され、その式中、Ｘが酸素であり、かつＲ４がメチルである化合物を指す。
【００６５】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様９）は、式Ｉで示され、その式中、Ｘが硫黄であり、かつＲ４がメチルである化合物を指す。
【００６６】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様１０）は、式Ｉで示され、その式中、Ｒ４が水素である化合物を指す。
【００６７】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様１１）は、式Ｉで示され、その式中、Ｘが硫黄であり、かつＲ４が水素である化合物を指す。
【００６８】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様１２）は、式Ｉで示され、その式中、Ｘが酸素であり、かつＲ４が水素である化合物を指す。
【００６９】
本発明による式Ｉの化合物の特定のもう一つの実施態様（実施態様１３）は、式Ｉで示され、その式中、Ｒ１が２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−エチルである化合物を指す。
【００７０】
本発明による式Ｉの化合物の特に特定の一実施態様（実施態様１４）は、式Ｉ*で示され、その式中、ＸがＮＨであり、Ｒ１が２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−エチルであり、かつＲ４がメチルである化合物を指す。
【００７１】
本発明による式Ｉの化合物の特に特定のもう一つの実施態様（実施態様１５）は、式Ｉ*で示され、その式中、Ｘが硫黄であり、Ｒ１が２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−エチルであり、かつＲ４がメチルである化合物を指す。
【００７２】
本発明による式Ｉの化合物の特に特定のもう一つの実施態様（実施態様１６）は、式Ｉ*で示され、その式中、Ｘが硫黄であり、Ｒ１が２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−エチルであり、かつＲ４が水素である化合物を指す。
【００７３】
本発明による式Ｉの化合物の更に特に特定の一実施態様（実施態様１３）は、式Ｉ*で示され、その式中、ＸがＮＨであり、Ｒ１がメチルであり、かつＲ４がメチルである化合物を指す。
【００７４】
本発明による式Ｉの化合物の更に特に特定の一実施態様（実施態様１４）は、式Ｉ*で示され、その式中、Ｘが硫黄であり、Ｒ１がメチルであり、かつＲ４がメチルである化合物を指す。
【００７５】
本発明による式Ｉの化合物の更に特に特定の一実施態様（実施態様１５）は、式Ｉ*で示され、その式中、Ｘが硫黄であり、Ｒ１がメチルであり、かつＲ４が水素である化合物を指す。
【００７６】
本発明による化合物の例としては、式Ｉ*で示され、その式中、Ｒ２及びＲ３が両者とも水素である以下の化合物は、以下の第１表におけるＲ１、Ｒ４及びＸについての置換基の意味によって挙げることができる。
【００７７】
第１表
【表１】
2008509971.tif 000007
【００７８】
本発明による化合物は、例えば以下のようにして、かつ以下に特記される反応工程に従って、又は特に以下の実施例に例として記載されるようにして、又はそれと同様にもしくは類似に当業者に公知の製造手法又は合成ストラテジーに従って製造することができる。
【００７９】
以下の反応式１に概説される合成経路に示されるように、式ＩＶで示され、その式中、Ｘ及びＲ４が前記の意味を有する化合物を、式ＩＩＩで示され、その式中、Ｒ２及びＲ３が前記の意味を有するベンズアルデヒドとのＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応において縮合環化させて、式ＩＩａ及び／又は式ＩＩｂで示される相応の化合物が主に混合物として得られる。前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応は、当業者に公知のようにして、又は以下の実施例に記載されるようにして、有利には、触媒又は促進剤として適した酸（例えばトリフルオロ酢酸）の存在下で、好適な溶剤、例えばトルエン中で高められた温度で実施することができる。
【００８０】
式ＩＶで示され、その式中、Ｘ及びＲ４が前記の意味を有する化合物は、公知であるか、又は公知の様式で、例えば公知であるか又は公知のようにして得られる式Ｖの相応の化合物のエステル化によって得ることができる。こうして、例えば２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチル−プロピオン酸メチルエステルは、産業上入手可能である。更に、（Ｒ）−２−アミノ−３−（ベンゾチオフェン−３−イル）−プロピオン酸メチルエステルは、Ｄ−チオトリプトファンからエステル化反応によって得られる。前記のエステル化反応は、当業者に自体慣用のようにして、例えば好適な相応の活性化された形の酸、例えば相応の酸塩化物（塩化チオニル又はその同等物を用いて得ることができる）を介して、それを相応のアルコール、有利にはメタノールと反応させて実施することができる。Ｄ−チオトリプトファンは、公知であるか、又は公知のようにして得ることができる。
【００８１】
更に、式ＩＶ又は式Ｖで示され、その式中、Ｒ４がＣ1〜Ｃ4−アルキル、特にメチルである化合物は、不斉合成によって得ることができる。このように、例えば式ＩＶ又は式Ｖで示され、その式中、Ｒ４がＣ1〜Ｃ4−アルキル、特にメチルであるエナンチオマー的に純粋な化合物は、式ＩＶ又は式Ｖでそれぞれ示され、それらの式中、Ｒ４が水素である相応の化合物から、当該技術分野で知られる立体選択的なアルキル化反応によって得ることができる、例えば（Ｓ）−α−メチルトリプトファンは、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５．６０，５７１９−５７２０に記載されるようにしてＬ−トリプトファンから得ることができる。
【００８２】
式ＩＩＩの化合物は公知であるか、又は公知のようにして得ることができる。
【００８３】
反応式１：
【化６】
2008509971.tif 000008
【００８４】
式ＩＶの化合物は、前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応において、ラセミ体又はエナンチオマー的に純粋な化合物として使用することができる。それに応じて、得られる混合物は、式ＩＩａ及び式ＩＩｂの化合物を、ジアステレオマーとして又はジアステレオマー的ラセミ体として含有しうる。前記の混合物は、場合により当業者に自体慣用のようにして分離することができる、例えば式ＩＩａ及び式ＩＩｂのジアステレオマー化合物は、カラムクロマトグラフィーによって分離することができる。適宜、前記混合物を、後続工程において、更なるそれらのジアステレオ異性体の分離なくして使用することもできる。次いで、ジアステレオマーの分離を、以下の工程の１つに引き続き実施することができる。
【００８５】
式ＩＶで示され、その式中、Ｒ４がＣ1〜Ｃ4−アルキル、特にメチルである化合物を前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応においてラセミ混合物として使用する場合に、式ＩＩａ′及び式ＩＩｂ′で示され、それぞれの式中、Ｒ４  Ｒ４がＣ1〜Ｃ4−アルキル、特にメチルであるエナンチオマー化合物を有するラセミ体が、前記の反応から、優勢に又は過剰に得ることができる。
【００８６】
【化７】
2008509971.tif 000009
【００８７】
式ＩＶで示され、その式中、Ｒ４がＣ1〜Ｃ4−アルキル、特にメチルである化合物の好適な純粋なエナンチオマーから出発して、式ＩＩａ′又は式ＩＩｂ′（式ＩＶの出発化合物の立体配置に応じて）のいずれかで示される相応の化合物が優勢に得ることができる。従って、例えば（Ｓ）−α−メチルトリプトファンメチルエステル［すなわち（Ｓ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル］を前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応において使用する場合に、式ＩＩａ′で示され、その式中、ＸがＮＨであり、かつＲ４がメチルである相応の化合物が優勢に得られる。
【００８８】
式ＩＶで示され、その式中、Ｒ４が水素である化合物を前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応においてラセミ混合物として使用する場合に、式ＩＩａ′′及び式ＩＩｂ′′で示され、それぞれの式中、Ｒ４が水素であるエナンチオマー化合物を有するラセミ体が、前記の反応から、優勢に又は過剰に得ることができる。
【００８９】
【化８】
2008509971.tif 000010
【００９０】
式ＩＶで示され、その式中、Ｒ４が水素である化合物の好適な純粋なエナンチオマーから出発して、式ＩＩａ′′又は式ＩＩｂ′′（式ＩＶの出発化合物の立体配置に応じて）のいずれかで示される相応の化合物が優勢に得ることができる。従って、例えば（Ｒ）−２−アミノ−３−（ベンゾチオフェン−３−イル）−プロピオン酸メチルエステルを前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応において使用する場合に、式ＩＩａ′′で示され、その式中、ＸがＳであり、かつＲ４が水素である相応の化合物が優勢に得られる。
【００９１】
式ＩＩａ′又は式ＩＩｂ′で示され、それぞれの式中、Ｒ４がＣ1〜Ｃ4−アルキル、特にメチルである化合物を、エナンチオマー的に純粋な形で又はラセミ混合物もしくは前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応において同時生成する相応のジアステレオマーを有するラセミ混合物として、式Ｒ１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏのイソシアネート又は相応の活性化されたカルバミン酸エステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド活性化ウレタン、例えばＨ3Ｃ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ［式中、Ｒは１Ｎ−スクシンイミジルである］と、反応式２に示されるヒダントイン合成において反応させて、式Ｉ*（式ＩＩａ′の化合物由来）又はＩ***（式ＩＩｂ′の化合物由来）で示され、それぞれの式中、Ｒ４がＣ1〜Ｃ4−アルキル、特にメチルである相応の所望のヒダントインを得ることができる。前記のヒダントイン合成は、当該技術分野で知られるようにして、又は以下の実施例に記載されるようにして、例えばマイクロ波の存在下で実施することができる。式Ｉ*及び式Ｉ***の化合物がラセミ混合物として得られる場合に、エナンチオマー的に純粋な化合物は、当該技術分野で知られる分離技術、例えば前記の技術又は以下の実施例に明記される技術によって達成することができる。
【００９２】
式Ｒ１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで示され、その式中、Ｒ１が前記の意味を有するイソシアネートは、公知であるか又は公知法に従って得ることができる。このように例えば、式Ｒ１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで示され、その式中、Ｒ１が−Ｎ（Ｒ１１１）Ｒ１１２により置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルである化合物は、式Ｒ１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで示され、その式中、Ｒ１が好適な離脱基、例えば臭素によって置換されたＣ2〜Ｃ7−アルキルである化合物から、式ＨＮ（Ｒ１１１）Ｒ１１２の相応のアミンによる求核置換反応によって、当業者に自体慣用のようにして又は以下の実施例に例として記載されるのと同様にして得ることができる。
【００９３】
反応式２：
【化９】
2008509971.tif 000011
【００９４】
式ＩＩａ′′又は式ＩＩｂ′′で示され、それぞれの式中、Ｒ４が水素である化合物を、エナンチオマー的に純粋な形で又はラセミ混合物もしくは前記のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応において同時生成する相応のジアステレオマーを有するラセミ混合物として、式Ｒ１−Ｎ＝Ｃ＝Ｏのイソシアネート又は相応の活性化されたカルバミン酸エステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド活性化ウレタン、例えばＨ3Ｃ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ［式中、Ｒは１Ｎ−スクシンイミジルである］と、反応式３に示されるヒダントイン合成において反応させて、式Ｉ**（式ＩＩａ′′の化合物由来）又はＩ****（式ＩＩｂ′′の化合物由来）で示され、それぞれの式中、Ｒ４が水素である相応の所望のヒダントインを得ることができる。前記のヒダントイン合成は、当該技術分野で知られるようにして、又は以下の実施例に記載されるようにして、例えばマイクロ波の存在下で実施することができる。
【００９５】
反応式３：
【化１０】
2008509971.tif 000012
【００９６】
場合により、式Ｉで示され、その式中、Ｒ４が水素である化合物のキラル炭素原子３ａの立体配置は、好適な塩基、例えば炭酸カリウムを用いて、好適な溶剤、例えばアセトニトリル中で脱プロトン化／再プロトン化を介してエピマー化することができる。このように例えば、反応式４に示されるように、式Ｉ**で示され、その式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が前記の意味を有し、かつＲ４が水素である化合物を変換して、式Ｉ*の相応の化合物とすることができる。
【００９７】
反応式４：
【化１１】
2008509971.tif 000013
【００９８】
同様に、使用される反応条件に応じて、カルボニル基に隣接したＣＨ原子の立体配置の少なくとも部分的なエピマー化は、前記のヒダントイン合成において実施することができる。
【００９９】
式Ｉ*及び式Ｉ***の化合物がラセミ混合物として得られる場合に、相応のエナンチオマー的に純粋な化合物は、当該技術分野で知られる分離技術、例えば前記の技術によって達成することができる。
【０１００】
場合により式Ｉの化合物をその塩に変換できるか、又は場合により式Ｉの化合物の塩を遊離の化合物に変換することができる。
【０１０１】
更に当業者には、多数の反応中心が出発化合物又は中間体化合物に存在する場合には、１つ以上の反応中心を反応が所望の反応中心だけで行われるように保護基で封鎖する必要があることもあることは知られている。多数の証明された保護基の使用のための詳細な記載は、例えば"Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ"、Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｗｕｔｓ著（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ & Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９９，３ｒｄ Ｅｄ）又は"Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ（Ｔｈｉｅｍｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｅｒｉｅｓ Ｎ Ｇｒｏｕｐ）"、Ｐ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ著（Ｔｈｉｅｍｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，２０００）で述べられている。
【０１０２】
本発明による物質は、自体公知の方法で、例えば減圧下で溶剤を留去し、そして得られた残留物を適当な溶剤から再結晶させるか、又は慣用の精製法の１つ、例えば適当な担体材料上でのカラムクロマトグラフィーを実施することによって単離及び精製される。
【０１０３】
塩は、遊離の化合物を所望の酸又は塩基を含有する適当な溶剤（例えばケトン、例えばアセトン、メチルエチルケトン又はメチルイソブチルケトン、エーテル、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン又はジオキサン、塩素化炭化水素、塩化メチレン又はクロロホルム又は低分子量の脂肪族アルコール、例えばエタノール又はイソプロパノール）中に、又は所望の酸又は塩基がその後に添加される溶剤中に溶解させることによって得られる。塩は、付加塩のための非溶剤を用いる濾過、再沈殿、沈殿又は溶剤の蒸発によって得られる。得られた塩を、遊離の化合物に変換してよく、該化合物はまたアルカリ性化又は酸性化によって塩に変換してもよい。前記のように、薬理学的に非認容性の塩を薬理学的に認容性の塩に変換できる。
【０１０４】
適宜、本発明に挙げられる転化は、当業者に自体公知の方法と類似して又は同様にして実施することができる。
【０１０５】
当業者はその知識に基づいて、本発明の明細書中に示され記載されたこれらの合成経路に基づいて、本発明による化合物に関して他の可能な合成経路をどのように見いだすかを知っている。全てのこれらの他の可能な合成経路もまた本発明を構成する部分である。
【０１０６】
本発明を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの記載される特性又は実施態様のみに制限されるものではない。当業者に明らかなように、記載される本発明に対する改変、類推、変更、誘導、対応及び適合はこの分野で知られる知識及び／又は、特に本発明の開示（例えば明示、暗示又は本来の開示）に基づき、付随する特許請求の範囲によって定義される本発明の主旨及び範囲から逸脱することなくなされてよい。
【０１０７】
以下の実施例は本発明を更に説明するものであり、それを制限するものではない。同様に製造方法が明記されていない本発明による他の化合物は、同様に又は類似にして又は当業者に公知の方法で慣用の処理技術を用いて製造できる。
【０１０８】
以下の実施例で最終化合物として挙げられる本発明による式Ｉの任意の全ての化合物及び、特に式Ｉ*を有するそれらのエナンチオマー並びにこれらの化合物の塩及びエナンチオマーは、本発明の有利な対象である。
【０１０９】
実施例において、ｍ．ｐ．は、融点を表し、ｈは、時間を表し、ｍｉｎは、分を表し、ｃｏｎｃ．は、濃縮を表し、ｃａｌｃ．は、計算値を表し、ｆｎｄ．は実測値を表し、Ｍは、質量分析法における分子イオンを表し、かつ他の略語は、当業者に自体慣用の意味を有する。
【０１１０】
立体化学における通常の実施に従って、ＲＳ及びＳＲという記号はラセミ体の指定された各キラル中心の特定の立体配置を示すために使用される。より詳細には、例えば表現"（３ａＳＲ，１０ＲＳ）"は立体配置（３ａＳ，１０Ｒ）を有する一方のエナンチオマーと立体配置（３ａＲ，１０Ｓ）を有する他方のエナンチオマーとを有するラセミ体を表す。
【０１１１】
実施例
最終化合物
１．  （±）−（３ａＳＲ，１０ＲＳ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２，３ａ−ジメチル−３ａ，４，９，１０−テトラヒドロ−２，９，１０ａ−トリアザ−シクロペンチル［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
２５０ｍｇ（７４０マイクロモル）（１ＲＳ，３ＳＲ）−１−（３−ヒドロキシ−フェニル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチルエステル（化合物Ａ１）を４ｍｌのアセトニトリル及び１ｍｌの水中に入れた懸濁液に、５１１ｍｇ（３ミリモル）のＮ−スクシンイミジル−Ｎ−メチルカルバメートを添加する。該混合物を、マイクロ波反応器を用いて１５０℃に５分間加熱した。溶剤を減圧下で除去する。残留物を、酢酸エチル中に溶解させ、そして有機層を水で洗浄する。該溶液を、硫酸マグネシウムを用いて乾燥させ、そして溶剤を減圧下で除去する。カラムクロマトグラフィー（トルエン、酢酸エチル  ４：１）後に、６８ｍｇ（２５％）の表題化合物が、白色の固体として得られる（融点：２９９〜３０５℃；ｍ／ｚ（ＭＨ+）＝３６２．２）。
【０１１２】
２．  （３ａＳ，１０Ｒ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２，３ａ−ジメチル−３ａ，４，９，１０−テトラヒドロ−２，９，１０ａ−トリアザ−シクロペンチル［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
相応のラセミ体（実施例１）から出発して、表題化合物並びに（３ａＲ，１０Ｓ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２，３ａ−ジメチル−３ａ，４，９，１０−テトラヒドロ−２，９，１０ａ−トリアザ−シクロペンチル［ｂ］フルオレン−１，３−ジオンを以下の条件を用いたクロマトグラフィー分離によって得ることができる：
カラム：２５０×２０ｍｍのＣｈｉｒａｌｐａｋ ＯＤ−Ｉ ２０μｍ；移動相：８０／２０  ＣＯ２／ＭｅＯＨ（試料は５０／５０のＤＭＳＯ／ＭｅＯＨ中）；流速：６０ｍｌ／分；検出：ＵＶ２９５ｎｍ；温度：２５℃；出口圧：１５０バール。これらの条件を用いて、表題化合物は、第二に溶出する化合物として得られる。
【０１１３】
３．  （３ａＳ，１０Ｒ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２−メチル−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
以下に記載されるようにして得ることができる粗製の（３ａＲ，１０Ｒ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２−メチル−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０−ジアザ−シクロ−ペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン（化合物Ａ３）を、１０ｍｌのアセトニトリル中に溶解させる。８１５ｍｇ（５．９０ミリモル）の炭酸カリウムを添加し、そして該懸濁液を、還流にまで２時間加熱する。溶剤を減圧下で除去する。水と酢酸エチルとを添加し、そして水層を酢酸エチルで洗浄する。合した有機相を、ブラインで洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させる。溶剤を減圧下で除去する。残留物にジイソプロピルエーテルを添加した後に、４８ｍｇ（２２％）の表題化合物を、白色の結晶として得ることができる（融点２１３．３℃〜２１６．４℃、ｍ／ｚ（ＭＨ+）＝３６５．１）。
【０１１４】
４．  （３ａＳ，１０Ｒ）−２−ブチル−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０ａ−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
表題化合物は、実施例３の達成に記載されるのと同様にして、Ｎ−スクシンイミジル−Ｎ−メチルカルバメートの代わりにイソシアネートを用いて製造する。
【０１１５】
Ｃ２３  Ｈ２２  Ｎ２  Ｏ３  Ｓ（計算値：４０６．５１）
実測値：ｍ／ｚ（ＭＨ+）＝３６２．２
５．  （３ａＳＲ，１０ＲＳ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２，３ａ−ジメチル−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０ａ−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
表題化合物は、実施例１の達成に記載されるのと同様にして、出発材料として化合物Ａ５を用いて製造される。
【０１１６】
Ｃ２１  Ｈ１８  Ｎ２  Ｏ３  Ｓ（計算値：３７８．４５）
実測値：ｍ／ｚ（ＭＨ+）＝３７９．０
６．  （３ａＳ，１０Ｒ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２，３ａ−ジメチル−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０ａ−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
相応のラセミ体（実施例５）から出発して、表題化合物は、クロマトグラフィー分離によって得ることができる。
【０１１７】
７．  （３ａＳＲ，１０ＲＳ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−３ａ−メチル−３ａ，４，９，１０−テトラヒドロ−２，９，１０ａ−トリアザ−シクロペンチル［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
表題化合物は、実施例１に記載されるのと同様の手順を用いるが、出発材料として化合物Ａ６を選択して製造することができる。
【０１１８】
８．  （３ａＳ，１０Ｒ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−３ａ−メチル−３ａ，４，９，１０−テトラヒドロ−２，９，１０ａ−トリアザ−シクロペンチル［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
相応のラセミ体（実施例７）から出発して、表題化合物は、クロマトグラフィー分離によって得ることができる。
【０１１９】
９．  （３ａＳ，１０Ｒ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
表題化合物は、実施例３の達成に記載されるのと同様の手順を用いるが、出発材料として化合物Ａ６を選択して製造することができる。
【０１２０】
１０．  （３ａＳＲ，１０ＲＳ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−３ａ−メチル−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０ａ−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
表題化合物は、実施例５の達成に記載されるのと同様の手順を用いるが、出発材料として化合物Ａ６を選択して製造することができる。
【０１２１】
１１．  （３ａＳ，１０Ｒ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−３ａ−メチル−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０ａ−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
相応のラセミ体（実施例１０）から出発して、表題化合物は、クロマトグラフィー分離によって得ることができる。
【０１２２】
出発化合物
Ａ１．  （±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−１−（３−ヒドロキシ−フェニル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチルエステル
１．００ｇ（４．３０ミリモル）の市販の２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−メチル−プロピオン酸メチルエステルを、６００ｍｇ（４．７３ミリモル）の３−ヒドロキシ−ベンズアルデヒドと、トリフルオロ酢酸の存在下で、Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応に従って反応させる。得られたジアステレオマーの混合物を、カラムクロマトグラフィー（トルエン、酢酸エチル  ４：１）によって分離する。１．１７ｇ（６８％）の表題化合物と３２０ｍｇ（１４％）の（１ＳＲ，３ＳＲ）−１−（３−ヒドロキシ−フェニル）−３−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−β−カルボリン−３−カルボン酸メチルエステル（化合物Ａ２）が、白色の固体として得られる。
【０１２３】
化合物Ａ１：融点：２２７．５℃；ｍ／ｚ  （ＭＨ+）：３３７．０
化合物Ａ２：融点：２２１．５℃；ｍ／ｚ  （ＭＨ+）：３３６．９
Ａ３．  （３ａＲ，１０Ｒ）−１０−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２−メチル−４，１０−ジヒドロ−３ａＨ−９−チア−２，１０−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−１，３−ジオン
４０５ｍｇ（２．３５ミリモル）のＮ−スクシンイミジル−Ｎ−メチルカルバメートを、２００ｍｇ（５９０マイクロモル）の（１Ｒ，３Ｒ）−１−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボン酸メチルエステル（化合物Ａ４）を４ｍｌのアセトン中に溶かした溶液に添加する。該混合物を、マイクロ波反応器を用いて１５０℃に５分間加熱した。溶剤を減圧下で除去する。得られた粗生成物を出発材料として用いて、化合物３を得ることができる。
【０１２４】
Ａ４．  （１Ｒ，３Ｒ）−１−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボン酸メチルエステル
１．４５ｇ（１１．９ミリモル）の３−ヒドロキシベンズアルデヒド及び４．２ｍｌ（５４．６ミリモル）のトリフルオロ酢酸を、２．０４ｇ（８．７ミリモル）の２−アミノ−３−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−プロピオン酸メチルエステル（化合物Ｂ１）を２０ｍｌのトルエン中に溶かした溶液に添加する。該溶液を、４０℃で一晩撹拌する。該混合物を、炭酸水素ナトリウムの飽和溶液で洗浄する。水層を、酢酸エチルで洗浄し、そして合した有機層を、５Ｍの塩酸で洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させる。３．６１ｇの褐色の油状物が、粗生成物として得られる。表題化合物を、副生成物と得られたジアステレオマーとからカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、トルエン／酢酸エチル  ９：１）によって分離する。９６０ｍｇ（３２％）が、白色の固体として得られる（融点２８２．９℃〜２８５．３℃、ｍ／ｚ（ＭＨ+）＝３８１．１）。
【０１２５】
Ａ５．  （±）−トランス−１−（３−ヒドロキシフェニル）−５−メチル−５−メトキシカルボニル−１，２，３，４−テトラヒドロベンゾ［４，５］チエノ［２，３］ピリジン
１．１９ｇの化合物Ｂ２をトルエン中に溶かした溶液に、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．８０ｇ）及びトリフルオロ酢酸（２．３０ｍＬ）を添加し、そして該混合物を４０℃で撹拌する。２日後に、該混合物を水性ＮａＨＣＯ3でアルカリ性にし、そして酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出する。合した有機層を水で洗浄し、乾燥させて、濃縮させる。残留物のカラムクロマトグラフィー（トルエン−アセトン、９：１）によって、２種のジアステレオマーが得られ、そのうち表題化合物は、より早く移行するものである（融点２１４〜２１５℃（酢酸エチル−石油エーテルから））。
【０１２６】
Ａ６．  （２−イソシアナト−エチル）−ジメチル−アミン
２．５０ｇの２−ブロモエチルイソシアネートを、２０ｍｌのジクロロメタン中に溶解させる。弱めのジメチルアミン流を、該溶液中に３時間通気させる。
【０１２７】
溶剤を減圧下で除去する。１．９ｇの表題化合物が無色の油状物として得られ、それは更なる精製をせずに使用できる（ｍ／ｚ（Ｍ+）＝１１４．１。
【０１２８】
Ｂ１．  ２−アミノ−３−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−プロピオン酸メチルエステル
５．００ｇ（２２．６ミリモル）のＨ−β−（３−ベンゾチエニル）−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨを７０ｍｌのメタノール中に入れた懸濁液を、０℃に冷却する。８．３ｍｌ（１１３ミリモル）の塩化チエニルを、滴加する（温度は、添加の間に１０℃まで上がる）。その溶液を０℃で１時間撹拌し、そして室温で一晩撹拌する。溶剤を減圧下で除去して、残留物を、炭酸水素ナトリウムの飽和溶液で洗浄する。その水層を、酢酸エチルで抽出する。合した有機層を、ブラインで洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させる。溶剤を減圧下で除去する。５．３７ｇ（量）の表題化合物が、淡黄色の油状物として得られる（ｍ／ｚ  （ＭＨ+）＝２３６．０）。
【０１２９】
Ｂ２．  （±）−メチル ２−アミノ−３−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル−２−メチル−プロピオネート
カリウム ｔ−ブトキシド（４．８２ｇ）を無水テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中に溶かして−３０℃に冷却された溶液に、６．８５ｇの（±）−２−（ベンジリデン−アミノ）−プロピオン酸メチルエステル（化合物Ｃ２）をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中に溶かした溶液を滴加する（化合物Ｃ２は、Ｊ．Ｗ．Ｔｉｌｌｅｙ，Ｐ．Ｌｅｖｉｔａｎ，Ｒ．Ｗ．Ｋｉｅｒｓｔｅａｄ，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．，１６，３３３（１９７９）及びＰ．Ｂｅｙ．Ｊ．−Ｐ．Ｖｅｖｅｒｔ，Ｖ．Ｖａｎ Ｄｏｒｓｓｅｌａｅｒ，Ｍ．Ｋｏｌｂ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４４，２７３２（１９７９）に記載されるようにして製造される）。該化合物を−３０℃で３０分間撹拌し、次いで７．８５ｇの化合物Ｃ１をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中に溶かした溶液を添加し、そして該混合物を同じ温度で撹拌する。ＴＬＣ（トルエン−アセトン、９５：５）により出発化合物の消失が示されたら（約６時間）、該混合物をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄し、乾燥させ、そして溶剤を蒸発させる。残留物をジクロロメタン（３０ｍＬ）中に溶解させ、氷浴中で冷却し、そしてＨＣｌのエーテル性溶液を添加して、ｐＨ約１とする。該混合物を１時間撹拌し、そして溶剤を減圧下で除去する。残留物をメタノール中に取り、そしてＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ ４００［ＯＨ］型樹脂でアルカリ性にする。樹脂を濾別し、メタノールで洗浄し、そして濾液を濃縮する。残留物のカラムクロマトグラフィー（トルエン−アセトン、４：１）によって、表題化合物（４．２８ｇ、４８％）がシロップ状物として得られ、それは放置することで結晶化する。融点４４〜４５℃（酢酸エチル−石油エーテルから）。
【０１３０】
Ｃ１．  ３−クロロメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン
表題化合物を、Ｓ．Ａｖａｋｉａｎ，Ｊ．Ｍｏｓｓ ａｎｄ Ｇ．Ｊ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７０，３０７５（１９４８）及びＦ．Ｆ．Ｂｌｉｃｋｅ．Ｄ．Ｇ．Ｓｈｅｅｔｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７０，３７６８（１９４８）に従って製造する。迅速な塩化水素ガスを、ベンゾチオフェン（４０．２６ｇ）、３６％水性ホルムアルデヒド（８０ｍＬ）及び濃塩酸（２０ｍＬ）の激しく撹拌され氷浴中で冷却された混合物に通気する。２０分後に、該混合物を氷水で希釈し、そしてジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出する。合した有機相を、水性ＮａＨＣＯ3で洗浄し、乾燥させ、そして溶剤を蒸発させる。残留物の真空蒸留により、表題化合物（２８．９ｇ、５２％）が、１２８〜１３２℃（７．１ミリバール）の沸点の主留分として得られ、それは放置することで結晶化する。
【０１３１】
産業上利用性
本発明による化合物は、産業上利用を可能にする有用な薬理学的特性を有する。こうして例えば、本発明による化合物は、有糸分裂キネシンＥｇ５のインヒビターとして作用でき、そしてこれらの化合物は、前記キネシンの阻害に反応を示す疾病、例えば以下の疾病の治療において産業上利用可能であると想定される。また例えば、本発明による化合物は、細胞周期依存性の抗増殖活性及び／又はアポトーシス誘導活性を示すことができる。
【０１３２】
有糸分裂キネシンＥｇ５は、双極性有糸分裂紡錘体の集合と機能のために必須の酵素である。Ｅｇ５は、有糸分裂の全ての期間にわたり必須の役割を担う。有糸分裂を摂動する薬剤は、多くの癌の治療において臨床的に有効であると判明している。新規の癌療法の発見のためのターゲットとして活用できる必須の紡錘体タンパク質が数多く様々であるにも拘わらず、臨床的に今日使用される全ての紡錘体を対象とする治療剤は、１つだけのタンパク質、つまりチューブリンに作用する。驚くべきことに、キネシンＥｇ５の発現は、増殖しているヒトの組織中に最も豊富であるが、一方で、殆どの有糸分裂後細胞、例えばヒトの中枢神経系ニューロンには存在せず、それは細胞増殖におけるＥｇ５についての主だった又はほぼ限定された役割に一致している。微小管の動的不安定性を妨げる薬剤に対して、Ｅｇ５キネシンインヒビターは、微小管を基礎とする細胞プロセス、例えば神経小胞輸送といった増殖には無関係の細胞プロセスを妨害しないと想定される。有糸分裂の間に、Ｅｇ５は、微小管を双極性構造に編成し、有糸分裂紡錘体を形成するのにほとんど関与している。Ｅｇ５機能の実験的な摂動により、有糸分裂紡錘体の特徴的な形成異常又は機能不全が引き起こされ、それはしばしば細胞周期停止及び細胞死をもたらす。
【０１３３】
本発明による化合物は、有糸分裂紡錘体形成の調整に使用することができるので、有糸分裂における細胞分裂停止の延長を引き起こし、それに引き続きしばしばアポトーシスが起こる。ここでの"調整"とは、紡錘体形成の増加と減少を含む、有糸分裂紡錘体形成の改変を意味する。ここでの"有糸分裂紡錘体形成"とは、微小管が有糸分裂キネシンによって編成されて双極性構造となることを意味する。ここでの"有糸分裂紡錘体の機能不全"とは、有糸分裂停止及び単極紡錘体形成を意味する。"有糸分裂紡錘体の形成異常"は、有糸分裂紡錘体極の分離を含むか、又はその他に有糸分裂紡錘体の形態学的摂動の惹起を含む。
【０１３４】
更に、これらの化合物は、良性又は悪性の新形成の治療において有用でありうる。"新形成"は、異常細胞増殖及び／又は異常細胞生存及び／又は分化の妨害を示す細胞によって定義される。"良性の新形成"は、細胞の増殖であって、それが進行性で転移性の腫瘍をインビボで形成できないこととして説明される。反対に、"悪性の新形成"は、多細胞性かつ生化学的な異常性を有する細胞が、全身性疾病をもたらしうる、例えば離れた器官に腫瘍転移をもたらすこととして説明される。
【０１３５】
種々の疾病は、際限ない複製能力及び異常な細胞増殖（"過剰増殖"）並びにアポトーシスからの回避によって引き起こされる。これらの疾病は、前立腺（"ＢＰＨ"）又は結腸上皮の発育不全のような良性の発育不全を含む。最も重要には、これらの疾病は、通常は癌として説明され、かつ別の器官又は組織に最終的に転移する腫瘍細胞によって特徴付けられる悪性新形成を含む。悪性の新形成は充実性及び血液学的腫瘍を含む。充実性腫瘍は、胸部、膀胱、骨、脳、中枢神経系及び末梢神経系、結腸、内分泌腺（例えば甲状腺及び副腎皮質）、食道、子宮内膜、生殖細胞、頭部及び頚部、腎臓、肝臓、肺、喉頭及び下咽頭の腫瘍、中皮腫、肉腫、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、腎臓、小腸、軟部組織、精巣、胃、皮膚、尿管、膣及び肛門の腫瘍によって例示される。悪性新形成は、網膜芽腫及びウィルムス腫瘍によって例示される遺伝性癌を含む。更に、悪性新形成は、前記の器官における一次腫瘍と別の器官における相応の二次腫瘍（"腫瘍転移"）を含む。血液学的腫瘍は、白血病及びリンパ腫の進行性形及び無痛性形、すなわち非ホジキン病、慢性及び急性の骨髄性白血病（ＣＭＬ／ＡＭＬ）、急性のリンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ホジキン病、多発性骨髄腫及びＴ細胞リンパ腫によって例示される。また骨髄異形成症候群、形質細胞新形成、経産婦腫瘍性症状、未知の原発部位の癌並びにＡＩＤＳ関連悪性疾患が含まれる。
【０１３６】
癌疾患並びに悪性新形成は、離れた器官に転移を形成することを必ずしも必要としないことに留意すべきである。一定の腫瘍は、その一次器官にそれらの攻撃的な増殖特性を通じて破壊的な作用を発揮する。これらは、組織及び器官の構造の破壊をもたらし、最終的に器官に割り当てられた機能の不全を引き起こすことがある。
【０１３７】
本発明による化合物は、前記の良性及び悪性の挙動の疾病の治療、予防又は軽減のために産業上利用可能である。
【０１３８】
腫瘍細胞増殖は、通常の細胞挙動と器官機能をもたらすことがある。例えば新生血管の形成は血管新生として記載される過程であり、これは腫瘍又は腫瘍転移によって誘発される。本発明による化合物は、良性の細胞増殖又は腫瘍細胞増殖によって引き起こされる病態生理学的な関連過程、例えば制限されないが、血管内皮細胞の非生理学的増殖による血管新生の治療のために産業上利用可能である。
【０１３９】
標準的な癌療法の屡々起こる不具合について、薬剤耐性が特に重要である。この薬剤耐性は、種々の細胞性及び分子性の機構、例えば薬剤流出ポンプの過剰発現又は細胞標的タンパク質内の突然変異によって引き起こされる。本発明による化合物の産業上利用可能性は、患者の第一選択薬試験に制限されるものではない。規定の癌化学療法剤又は標的特異的抗癌剤（第二選択薬試験又は第三選択薬試験）に対する耐性を有する患者は、本発明による化合物での治療のために改めることができる。
【０１４０】
本願に挙げられる特性、機能及び有用性の関連において、本発明による化合物は、それらと関連する有用かつ所望の効果、例えば低い毒性、優れた一般的な生物学的利用能（例えば良好な腸内吸収）、優れた治療ウィンドウ、重篤な副作用の不在及び／又はそれらの治療的かつ製剤的な適性に関連する更なる有用な効果の点で卓越していることが見込まれる。
【０１４１】
それらの細胞性抗増殖特性のため、本発明による化合物は、細胞周期及び細胞増殖に関連する疾病、例えば前記の癌以外に、例えば線維増殖性及び分化的疾患、乾癬、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、過形成、再狭窄、心臓肥大、（自己）免疫性疾患、真菌疾患、骨疾患又は急性もしくは慢性の炎症の治療のためにも産業上利用可能である。
【０１４２】
更に本発明は、アポトーシスの誘発に反応を示す（過剰）増殖性疾病及び／又は疾患に罹患するヒトを含む哺乳動物を治療するための方法において、それを必要とする前記哺乳動物に薬理学的に有効かつ治療学的に有効かつ認容性の量の本発明による化合物１種以上を投与することを含む方法を含む。
【０１４３】
更に本発明は、良性又は悪性の腫瘍疾患、例えば癌の治療においてアポトーシス及び／又は異常型の細胞増殖を調節するのに有用な方法において、かかる治療を必要とする被験体に、本発明による化合物の１種以上の薬理学的に有効かつ治療学的に有効かつ許容できる量を投与することを含む方法を含む。
【０１４４】
更に本発明は、細胞におけるＥｇ５活性の阻害方法において、薬理学的に有効でかつ治療学的に効果的かつ認容される量の本発明による化合物１種以上を、かかる阻害を必要とする患者に投与することを含む方法を含んでいる。
【０１４５】
本発明は更に、有糸分裂紡錘体を調整する方法、すなわち有糸分裂紡錘体形成を改変する方法、例えば紡錘体形成を減少させる方法又は有糸分裂紡錘体極の形成異常を引き起こす紡錘体極分離を増大もしくは減少させる方法において、薬理学的に有効でかつ治療学的に効果的かつ認容される量の本発明による化合物１種以上を、かかる調整が必要な患者に投与することを含む方法を含んでいる。
【０１４６】
更に本発明は、細胞における有糸分裂の阻害方法において、薬理学的に有効でかつ治療学的に効果的かつ認容される量の本発明による化合物１種以上を、かかる阻害を必要とする患者に投与することを含む方法を含んでいる。
【０１４７】
更に本発明は、前記の病気の治療、予防、阻害及び／又は改善のために使用される医薬品組成物の製造のための、本発明による化合物の使用に関する。
【０１４８】
更に本発明は、良性又は悪性挙動の過剰増殖性疾病及び／又は哺乳動物におけるアポトーシスの誘発に反応を示す疾患、例えば癌の治療、予防又は改善において使用できる医薬品組成物の製造のための、本発明による化合物の使用に関する。
【０１４９】
更に本発明は、異常な細胞増殖の停止及び／又はアポトーシスの誘発に反応を示す疾患の治療、予防又は改善に使用できる医薬品組成物の製造のための、本発明による化合物の使用に関する。
【０１５０】
更に本発明は、１種以上の本発明による化合物と製剤学的に認容性の担体又は希釈剤を含有する医薬品組成物に関する。
【０１５１】
更に本発明は、１種以上の本発明による化合物と製剤学的に認容性の担体又は希釈剤を組み合わせることでなる医薬組成物に関する。
【０１５２】
更に本発明は、１種以上の本発明による化合物並びに製剤学的に認容性の助剤、賦形剤又はビヒクルを含有する、例えば良性又は悪性の新形成、例えば癌の治療、予防又は改善において使用するための組合せ物に関する。
【０１５３】
更に本発明は、例えば過剰増殖性疾病、例えば癌及び／又はアポトーシスの誘発に反応を示す疾患の治療、予防又は改善のための、本発明による化合物１種以上の治療学的に有効かつ認容性の量を必須とし、それと一緒に通常の製剤学的に認容性のビヒクル、希釈剤及び／又は賦形剤からなる組成物に関する。
【０１５４】
更に本発明は、良性又は悪性の挙動の過剰増殖性疾患及び／又はアポトーシスの誘導に反応を示す疾患、例えば前記の疾患、特に癌の治療、予防又は改善における使用のための、本発明による化合物に関する。
【０１５５】
更に本発明は、抗増殖活性及び／又はアポトーシス誘発活性を有する本発明による化合物に関する。
【０１５６】
更に本発明は、Ｅｇ５阻害特性を有する本発明による化合物に関する。
【０１５７】
更に本発明は、Ｅｇ５阻害特性を有する本発明による医薬組成物に関する。
【０１５８】
更に本発明は、前記の病気の治療又は予防のための医薬製品の製造における、１種以上の本発明による化合物を単独の有効成分として含有し、かつ製剤学的に認容性の担体又は希釈剤を含有する医薬品組成物の使用に関する。
【０１５９】
本発明による医薬組成物は、自体公知かつ当業者によく知られた方法によって製造できる。医薬品組成物としては、本発明による化合物（＝有効化合物）はそれ自体で、又は有利には適当な医薬品助剤及び／又は賦形剤と組み合わせて、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、カプレット剤、坐剤、パッチ剤（例えばＴＴＳ）、乳剤、懸濁剤、ゲル剤又は液剤の形で使用され、その際、有効化合物の含有率は有利には０．１〜９５％であり、かつ助剤及び／又は賦形剤の適当な選択によって、有効化合物に厳密に適合された、及び／又は作用の所望の開始に厳密に適合された医薬品投与形（例えば遅延放出形又は腸溶形）を達成できる。
【０１６０】
当業者はその専門知識により所望の医薬品製剤に適した助剤、ビヒクル、賦形剤、希釈剤、担体又はアジュバントに精通している。溶剤、ゲル形成剤、軟膏基材及び他の有効化合物の他に、賦形剤、例えば酸化防止剤、分散剤、乳化剤、保存剤、溶解剤、着色剤、錯化剤又は侵透促進剤を使用してよい。
【０１６１】
治療されるべき又は予防されるべき特定の疾病によっては、その疾病を治療又は予防するのに通常投与される付加的な治療的活性剤を場合により同時投与してよい。本願で使用される場合に、特定の疾病を治療又は予防するのに通常投与される付加的な治療的活性剤は、治療される疾病に好適であるとして知られている。
【０１６２】
例えば、本発明による化合物を、前記の疾病の治療に使用される１種以上の標準的な療法剤と組み合わせてもよい。特定の一実施態様においては、本発明による化合物を、１種以上の当該技術分野で公知の抗癌剤、例えば以下に記載される１種以上の化学療法薬及び／又は標的特異的な抗癌剤と組み合わせることができる。
【０１６３】
組み合わせ療法でしばしば使用される公知の化学療法抗癌剤の例は、これらに制限されないが、（ｉ）アルキル化剤／カルバミル化剤、例えばシクロホスファミド（エンドキサン（登録商標））、イフォスファミド（ホロキサン（登録商標））、チオテパ（チオテパレダーレ（登録商標））、メルファラン（アルケラン（登録商標））又はクロロエチルニトロソウレア（ＢＣＮＵ）；（ｉｉ）白金誘導体、例えばシスプラチン（プラチネックス（登録商標）ＢＭＳ）、オキサリプラチン又はカルボプラチン（カルボプラット（登録商標）ＢＭＳ）；（ｉｉｉ）有糸分裂インヒビター／チューブリンインヒビター、例えばビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンフルニン）、タキサン類、例えばタキソール（パクリタキセル（登録商標））、タキソテレ（ドセタキセル（登録商標））及び類似体並びにその新規の製剤及びコンジュゲート、エポチロン、例えばエポチロンＢ（パツピロン（登録商標）、アザエポチロン（イクサベピロン（登録商標））又はＺＫ−ＥＰＯ、全合成エポチロンＢ類似体；（ｉｖ）トポイソメラーゼインヒビター、例えばアントラサイクリン類、例えばドキソルビシン（アドリブラスチン（登録商標））、エピポドフィロトキシン類（例えばエトポシド、例えばエトポフォス（登録商標）及びカンプトテシン類似体、例えばテポテカン（ハイカムチン（登録商標））；（ｖ）ピリミジンアンタゴニスト、例えば５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（キセロダ（登録商標））、アラビノシルシトシン／シタラビン（アレキサン（登録商標））又はゲムシタビン（ゲムザール（登録商標））；（ｖｉ）プリンアンタゴニスト、例えば６−メルカプトプリン（プリネトール（登録商標））、６−チオグアニン又はフルダラビン（フルダラ（登録商標））及び最後に（ｖｉｉ）葉酸アンタゴニスト、例えばメトトレキセート（ファルミトレキセート（登録商標））及びペメトレキセド（アリムタ（登録商標））を含む。
【０１６４】
実験的及び標準的癌療法で使用される標的特異的抗癌剤クラスの例は、これらに制限されないが、（ｉ）キナーゼインヒビター、例えばグリベック（イマチニブ（登録商標））、ＺＤ−１８３９／イレッサ（ゲフィチニブ（登録商標））、ＢＡＹ４３−９００６（ソラフェニブ（登録商標））、ＳＵ１１２４８（ステント（登録商標））又はＯＳＩ−７７４／タルセバ（エルロチニブ（登録商標））；（ｉｉ）プロテアソームインヒビター、例えばＰＳ−３４１（ベルカデ（登録商標））；（ｉｉｉ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター、例えばＳＡＨＡ、ＰＸＤ１０１、ＭＳ２７５、ＭＧＣＤ０１０３、ＣＩ−９９４、デプシペプチド／ＦＫ２２８、ＮＶＰ−ＬＢＨ５８９、ＬＡＱ−８２４、バルプロン酸（ＶＰＡ）及び酪酸塩；（ｉｖ）ヒートショックタンパク質９０インヒビター、例えば１７−アリルアミノゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ）；（ｖ）血管標的剤（ＶＡＴ）、例えばコンブレタスタチンＡ４リン酸又はＡＶＥ８０６２／ＡＣ７７００及び抗脈管形成剤、例えばＶＥＧＦ抗体アバスチン（ベバシズマブ（登録商標））又はＫＤＲチロシンキナーゼインヒビターＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（バタラニブ（登録商標））；（ｖｉ）モノクローナル抗体、例えばヘルセプチン（トラスツズマブ（登録商標））、マブテラ／リツキサン（リツキシマブ（登録商標））又はＣ２２５／エルビタックス（セツキシマブ（登録商標））又はアバシン（前記参照）並びに突然変異体及びモノクローナル抗体と抗体フラグメントのコンジュゲート；（ｖｉｉ）オリゴヌクレオチド系治療薬、例えばＧ−３１３９／ゲナセンス（オブリメルセン（登録商標））；（ｖｉｉｉ）Ｔｏｌｌ様レセプター／ＴＬＲ９アゴニスト、例えばプロムン（登録商標）；（ｉｘ）プロテアーゼインヒビター（ｘ）ホルモン療法剤、例えば抗エストロゲン類（例えばタモキシフェン）、抗アンドロゲン類（例えばフルタミド又はカソデックス）、ＬＨＲＨ類似体（例えばロイプロリド、ゴセレリン又はトリプトレリン）及びアロマターゼインヒビターを含む。
【０１６５】
組合せ療法のために使用できる他の公知の標的特異的な抗癌剤は、ブレオマイシン、レチノイド類、例えばオールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼインヒビター、例えば２−デオキシシチジン誘導体デシタビン（ドカゲン（登録商標））、アラノシン、サイトカイン、例えばインターロイキン−２又はインターフェロン、例えばインターフェロンα２又はインターフェロン−γ、ＴＲＡＩＬ、ＤＲ４／５アゴニスト抗体、ＦａｓＬアゴニスト及びＴＮＦ−Ｒアゴニストを含む。
【０１６６】
本発明による組合せ療法で有用といえる抗癌剤の例としては、これらに制限されないが、以下の薬剤
５ＦＵ、アクチノマイシンＤ、アバレリックス、アブシキシマブ、アクラルビシン、アダパレン、アレムツズマブ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミプリローズ、アムルビシン、アナステロゾール、アンシタビン、アルテミシニン、アザチオプリン、バシリキシマブ、ベンダムスチン、ベキサール、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブロクスリジン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルボクオン、カルムスチン、セトロレリックス、クロラムブシル、クロロメチン、シスプラチン、クラドリビン、クロミフェン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダクリズマブ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デスロレリン、デキシラゾキサン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、ドロスタノロン、エデルフォシン、エフロルニチン、エミテフール、エピルビシン、エピチオスタノール、エプタプラチン、エルビツックス、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、ファドロゾール、フィナステリド、フロクスリジン、フルシトシン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォルメスタン、フォスカルネット、フォスフェストロール、フォテムスチン、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、グリベック、ゴセレリン、グスペリムス、ヘルセプチン、イダルビシン、イドクスリジン、イフォスファミド、イマチニブ、イムプロスルファン、インフリキシマブ、イリノテカン、ランレオチド、レトロゾール、ロイプロレリン、ロバプラチン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキセート、メツレデパ、ミボプラチン、ミフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトマイシン、ミトキサントロン、ミゾリビン、モテキサフィン、ナルトグラスチム、ネバズマブ、ネダプラチン、ニルタミド、ニムスチン、オクトレオチド、オルメロキシフェン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パリビズマブ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペンテトレオチド、ペントスタチン、ペルフォスファミド、ピポスルファン、ピラルビシン、プリカマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン、プロパゲルマニウム、塩化プロスピジウム、ラルチトレキセド、ラニムスチン、ランピルナーゼ、ラスブリカーゼ、ラゾキサン、リツキシマブ、リファンピシン、リトロスルファン、ロムルチド、ルボキシスタウリン、サルグラモスチム、サトラプラチン、シロリムス、ソブゾキサン、スピロムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、タソネルミン、テガフール、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオテパ、チマルファシン、チアミプリン、トポテカン、トレミフェン、トラスツズマブ、トレオスルファン、トリアジクオン、トリメトレキセート、トリプトレリン、トロフォスファミド、ウレデパ、バルルビシン、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボロゾール及びゼバリンが挙げられる。
【０１６７】
当業者は、その専門知識に基づいて、同時投与される付加的な治療剤の全日用量及び投与形を認識している。前記の全日用量は広い範囲で変更できる。
【０１６８】
本発明の実施において、本発明による化合物は、組合せ療法において、別々に、連続的に、同時に又は時間的にずらして（例えば組合せ単位投与形として、別々の単位投与形として、隣接した不連続な単位投与形として、固定組合せ物又は非固定組合せ物として、小分けキットとして又は混合物として）、１種以上の標準的な療法剤、特に当該技術分野で知られる抗癌剤、例えば前記の抗癌剤（例えば化学療法薬及び／又は標的特異的な抗癌剤）と一緒に投与してよい。
【０１６９】
この文脈で、更に、本発明は、本発明による化合物少なくとも１種である第一の有効成分と、当該技術分野で公知の少なくとも１種の抗癌剤、例えば本願で前記の抗癌剤１種以上である第二の有効成分とを含有し、療法において、例えば本願で述べた疾病の療法において、別々に、連続的に、同時に又は時間的にずらして使用するための組合せ物に関する。
【０１７０】
本発明による用語"組合せ物"は、固定組合せ物、非固定組合せ物又は小分けキットとして存在してよい。
【０１７１】
"固定組合せ物"は、前記の第一の有効成分と第二の有効成分とが１つの単位用量で又は単一物で一緒に存在する組合せ物として定義される。"固定組合せ物"の一例は、前記の第一の有効成分と前記の第二の有効成分とが、例えば一製剤中に同時の投与のために混合物で存在する医薬組成物である。"固定組合せ物"のもう一つの例は、前記の第一の有効成分と前記の第二の有効成分とが、混合されることなく１つの単位で存在する医薬品組合せ物である。
【０１７２】
"小分けキット"は、前記の第一の有効成分と前記の第二の有効成分とが１単位より多くで存在する組合せ物として定義される。"小分けキット"の一例は、前記の第一の有効成分と前記の第二の有効成分とが別々に存在する組合せ物である。小分けキットの成分は、別々に、連続的に、同時に又は時間的にずらして投与してよい。
【０１７３】
更に本発明は、少なくとも１種の本発明による化合物である第一の有効成分と、少なくとも１種の当該技術分野で公知の抗癌剤、例えば前記の抗癌剤の１種以上である第二の有効成分、及び場合により製剤学的に認容性の担体又は希釈剤を含有する、療法において別々に、連続的に、同時に又は時間的にずらして使用するための医薬品組成物に関する。
【０１７４】
更に、本発明は、ａ）本発明による少なくとも１種の化合物と製剤学的に認容性の担体又は希釈剤との配合物及びｂ）少なくとも１種の当該技術分野で知られる抗癌剤、例えば前記の１種以上の抗癌剤と製剤学的に認容性の担体又は希釈剤との配合物を含有する組合せ製品に関する。
【０１７５】
更に本発明は、本発明による化合物である第一の有効成分と製剤学的に認容性の担体又は希釈剤の調剤；当該技術分野で知られる抗癌剤、例えば前記の抗癌剤の１つある第二の有効成分と製剤学的に認容性の担体又は希釈剤の調剤を含有する、療法において同時に、連続的に、別々に又は時間的にずらして使用するための小分けキットに関する。場合により、前記キットは、療法において、例えば過剰増殖性疾病及び／又はアポトーシスの誘発に反応を示す疾患、例えば癌を治療するのに使用するための説明書を含む。
【０１７６】
更に本発明は、本発明による少なくとも１種の化合物と少なくとも１種の当該技術分野で知られる抗癌剤とを含有する、同時に、連続的に又は別々に投与するための組合せ調剤に関する。
【０１７７】
この関連で、本発明は更に、抗増殖特性及び／又はアポトーシス誘導特性を有する本発明による組合せ物、組成物、製剤、調剤又はキットに関する。
【０１７８】
またこの関連で、本発明は更に、Ｅｇ５阻害活性を有する本発明による組合せ物、組成物、製剤、調剤又はキットに関する。
【０１７９】
加えて更に、本発明は、患者において、（過剰）増殖性疾病及び／又はアポトーシスの誘発に反応を示す疾患を治療する方法において、それを必要とする患者に、本願に記載される組合せ物、組成物、製剤、調剤又はキットを投与することを含む方法に関する。
【０１８０】
加えて更に、本発明は、患者において、過剰増殖性疾病及び／又はアポトーシスの誘発に反応を示す疾患を治療する方法において、組合せ療法において、別々に、同時に、連続的に又は時間的にずらして、本発明による化合物及び製剤学的に認容性の担体又は希釈剤を含有する製剤学的に有効かつ治療学的に有効かつ認容性の量の医薬組成物及び製剤学的に有効かつ治療学的に有効かつ認容性の量の１種以上の当該技術分野で知られる抗癌剤、例えば前記の抗癌剤の１種以上をそれを必要とする患者に投与することを含む方法に関する。
【０１８１】
更に加えて、本発明は、患者において、アポトーシスの誘導に反応を示す過剰増殖性の疾病及び／又は疾患、例えば良性又は悪性の新形成、特に本願に挙げられる癌のいずれかを治療、予防又は改善するための方法において、本発明による組合せ物を投与することを含む方法に関する。
【０１８２】
加えて更に、本発明は、過剰増殖疾病、例えば癌及び／又はアポトーシスの誘発に反応を示す疾患、特に前記の疾病を治療、予防又は改善するための医薬製品、例えば市販パッケージ又は医薬品の製造における、組成物、組合せ物、製剤、調剤又はキットの使用に関する。
【０１８３】
更に本発明は、本発明による１種以上の化合物を、１種以上の抗癌剤、例えば１種以上の、化学療法剤及び標的特異的抗癌剤から、例えば本願に挙げられる剤から選択される抗癌剤と組み合わせて使用するための、癌の治療のための、特に前記の癌疾病の１つの治療のための医薬品の製造のために用いる使用に関する。
【０１８４】
更に本発明は、１種以上の本発明による化合物を含有し、それと一緒に、１種以上の化学療法剤及び／又は標的特異的抗癌剤、例えば前記の任意のものと同時に、連続的に又は別々に使用するための説明書を含有する市販パッケージに関する。
【０１８５】
更に本発明は、唯一の有効成分としての１種以上の本発明による化合物を必須とし、それと一緒に、１種以上の化学療法剤及び／又は標的特異的抗癌剤、例えば前記の任意のものと同時に、連続的に又は別々に使用するための説明書を含有する市販パッケージに関する。
【０１８６】
更に本発明は、１種以上の化学療法剤及び／又は標的特異的抗癌剤、例えば前記の任意のものを含有し、それと一緒に、１種以上の本発明による化合物と同時に、連続的に又は別々に使用するための説明書を含有する市販パッケージに関する。
【０１８７】
本発明による組合せ療法の文脈で挙げられた組成物、組合せ物、調剤、製剤、キット又はパッケージは、また本発明による化合物１種以上及び／又は当業者に公知の挙げられる抗癌剤１種以上も含む。
【０１８８】
本発明による組合せ物又は小分けキットの第一の有効成分と第二の有効成分は、組合せ療法において、同時に、連続的に、別々に又は時間的にずらして使用するために後に一緒にされる別々の製剤（すなわち互いに独立している）として提供することができ、又は組合せ療法において、同時に、連続的に、別々に又は時間的にずらして使用するための組合せパッケージの別々のコンポーネントとして一緒に包装され一緒に存在することができる。
【０１８９】
本発明による組合せ物又は小分けキットの第一の有効成分と第二の有効成分の医薬製剤の型は同様であってよい、すなわち両方の成分は、別々の錠剤又はカプセル剤で製剤されているか、又は前記の医薬製剤の型は異なってよい、すなわち異なる投与形に適合せることができる、例えば一方の有効成分を錠剤又はカプセル剤として製剤し、もう一方を、例えば静脈内投与用に製剤する。
【０１９０】
本発明による組合せ物、組成物又はキットの第一の有効成分と第二の有効成分の量は、一緒になって、（過剰）増殖性疾患及び／又はアポトーシスの誘導に反応を示す疾患、例えば良性もしくは悪性の新形成、特に本願で挙げられた癌疾病の１つの治療、予防又は改善のために治療学的に有効な量を含む。
【０１９１】
更に、本発明による化合物は癌の術前又は術後の治療に使用することができる。
【０１９２】
更に加えて、本発明による化合物は放射線療法と組み合わせて使用することができる。
【０１９３】
本発明による組合せ物は、本発明による化合物と他の有効な抗癌剤との両者を固定組合せで含有する組成物（固定単位投与形）又は２種以上の有効成分を不連続な別々の投与形として含有する医薬品パッケージ（非固定組合せ物）を指すことができる。２種以上の有効成分を含有する医薬品パックの場合に、有効成分は、有利にはコンプライアンスの改善に適したブリスターカード中に入れられる。
【０１９４】
各ブリスターカードは、有利には一日の治療に摂取されるべき医薬品を含有する。それらの薬品が一日の異なる時点で摂取される場合には、これらの薬剤は、一日のなかでそれらが摂取される時間の種々の範囲に応じてブリスターカードの種々の区画に割り付けてよい。一日の特定の時点で一緒に摂取されるべき医薬品のためのブリスター空隙は一日の時間のそれぞれの範囲で調節される。一日の種々の時間は、もちろんまた明瞭に見えるようにブリスターに付けられる。またもちろん、例えば医薬品を摂取すべき期間を指示する、例えばそれらの時間を述べることも可能である。
【０１９５】
一日の区画は、ブリスターカードの１本の線に相当することがあり、そしてその際、一日の時間はこの列の時間的順序で確認される。
【０１９６】
一日の特定の時間で一緒に摂取せねばならない医薬品は、有利には距離を離さず、それらが容易にブリスターから押し出せ、そしてブリスターからその投与形を取り出すのを忘れないという趣旨で、ブリスターカードに適切な時間で一緒に配置される。
【０１９７】
本発明による医薬組成物又は組合せ物の投与は、この分野で利用できる一般的に許容される任意の様式で実施できる。好適な投与様式の実例は、例えば静脈内、経口、経鼻、非経口、局所、経皮及び直腸内の送達である。経口及び静脈内の送達が好ましい。
【０１９８】
皮膚病の治療のためには、本発明による化合物を、特に局所適用のために適当な医薬組成物の形で適用できる。該医薬組成物の製造のために、本発明による化合物（＝有効化合物）を有利には適当な製薬学的賦形剤と混合し、更に加工して適当な医薬品製剤を得る。適当な医薬品製剤は、例えば粉剤、乳剤、懸濁剤、スプレー剤、オイル剤、軟膏剤、脂肪軟膏剤、クリーム剤、ペースト剤、ゲル剤又は液剤である。
【０１９９】
本発明による医薬品組成物は自体公知の方法によって製造できる。有効化合物の投与は、Ｅｇ５インヒビター、細胞増殖のインヒビター又はアポトーシス誘発物質について慣用のオーダーで行われる。従って皮膚病の治療のための局所適用形（例えば軟膏）は有効化合物を、例えば０．１〜９９％の濃度で含有する。全身療法の場合の慣用の用量は、経口で０．０３〜３０ｍｇ／ｋｇ／日であり、静脈内で０．０３〜３０ｍｇ／ｋｇ／時間である。もう一つの実施態様においては、全身療法の場合の用量は、経口で０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ／日であり、静脈内で０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ／時間である。
【０２００】
生物学的調査
Ｅｇ５キネシンモータードメイン（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ社、カタログ番号ＥＧ０１）のＡＴＰアーゼ活性を用いて、調整剤の効果をモニタリングすることができる。試験化合物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の１０ｍＭ溶液として溶解させる。試験化合物の好適なＤＭＳＯ希釈物１μｌを、９６ウェル平底プレートの各ウェルに添加する。各化合物希釈物を二重反復試験として試験する。試薬を添加し、標準アッセイの最終反応物は、１５ｍＭのＰｉｐｅｓ（ｐＨ６．８）、５．０ｍＭのＭｇＣｌ2、０．５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、０．０２５％のＴｗｅｅｎ２０、２ｍＭのグルタチオン、５μＭのパクリタキセル、２００ｎＭの事前形成された微小管（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ社、カタログ番号ＭＴ００１）、３００μＭのＡＴＰ及びＥｇ５タンパク質（５０ｎｇ）が１００μｌの反応容量中に含んでいる。対照群は、ＡＴＰと１％ＤＭＳＯとを含むバッファーのウェルを含む。反応をＡＴＰの添加により開始させ、室温で３０分間インキュベートし、そして２０μｌの反応容量を取り除き、そこに８０μｌの１Ｍ過塩素酸を添加することにより反応を停止させ、引き続き８０μｌのマラカイトグリーン試薬を添加する。マラカイトグリーン試薬は、４．２ｇのモリブデン酸アンモニウムを１００ｍｌの４ＮのＨＣｌ中に溶かした溶液と、０．１３５ｇのマラカイトグリーンを３００ｍｌのＨ2Ｏ中に溶かした溶液とを混合することによって製造する。その反応物を、更に２０分間インキュベートし、次いで６１５ｎｍで読み取る。Ｅｇ５阻害についての化合物の相応のＩＣ50値を、濃度−効果曲線から決定する。
【０２０１】
前記のアッセイで測定された代表的なＩＣ50値［−ｌｏｇ ＩＣ50（モル／ｌ）として測定される］は、以下の表Ａとなり、そこでは化合物の番号は実施例の番号に相当する。
【０２０２】
表Ａ
Ｅｇ５活性の阻害
【表２】
2008509971.tif 000014
【０２０３】
本願に記載の化合物の抗増殖活性／細胞毒性活性は、ＲＫＯ型ヒト結腸腺癌のサブクローン（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９，２４２３−２４２９；２０００）において、Ａｌａｍａｒ社製のＢｌｕｅ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイ（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２６７，５４２１−５４２６，２０００に記載される）を用いて試験できる。化合物を、ＤＭＳＯ中に１０ｍＭの溶液として溶解させ、引き続き片対数段階で希釈する。ＤＭＳＯ希釈物を更に１：１００で、１０％の仔ウシ血清を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に希釈して、試験における最終濃度の２倍だけの最終濃度にする。ＲＫＯサブクローンを、９６ウェル平底プレート中に、１ウェルあたり４０００細胞の密度で、ウェルあたり５０μｌの容量で播種した。播種２４時間後に、ＤＭＥＭ培地中の化合物希釈物それぞれ５０μｌを９６ウェルプレートの各ウェルに添加する。各化合物希釈物を四重反復試験として試験する。未処理の対照細胞を含有するウェルを１％のＤＭＳＯを含有する５０μｌのＤＭＥＭ培地で満たす。次いでこれらの細胞を物質と一緒に３７℃で７２時間、５％の二酸化炭素を含有する湿潤雰囲気中でインキュベートする。細胞の生存度を測定するために、１０μｌのアラマーブルー（バイオソース社）を添加し、そして５４４ｎｍの吸光及び５９０ｎｍの発光で蛍光を測定する。細胞生存度の計算のために、未処理の細胞からの蛍光値を１００％の生存度に設定し、未処理の細胞の蛍光率を未処理の細胞の値について設定する。生存度は％値として表現する。高増殖活性／細胞毒性についての化合物の相応のＩＣ50値を濃度−効果曲線から決定する。
【０２０４】
細胞周期に特異的な作用様式を測定するために、ＲＫＯ型の結腸腺癌細胞のサブクローン（Ｓｃｈｍｉｄｔ他によってＯｎｃｏｇｅｎｅ １９，２４２３−２４２９；２０００に記載されるＲＫＯｐ２７又はＲＫＯｐ２１）を、９６ウェル平底プレート中に、１ウェルあたり１６０００細胞の密度で、ウェルあたり５０μｌの容量で、１０μＭのポナステロンＡを含有する１０％ＰＣＳを有するＤＭＥＭ成長培地中で播種する。播種２４時間後に、ＤＭＥＭ培地中の化合物希釈物それぞれ５０μｌを９６ウェルプレートの各ウェルに添加する。各化合物希釈物を四重反復試験として試験する。未処理の対照細胞を含有するウェルを１％のＤＭＳＯを含有する５０μｌのＤＭＥＭ培地で満たす。次いでこれらの細胞を物質と一緒に３７℃で７２時間、５％の二酸化炭素を含有する湿潤雰囲気中でインキュベートする。細胞の生存度を測定するために、１０μｌのアラマーブルー（バイオソース社）を添加し、そして５４４ｎｍの吸光及び５９０ｎｍの発光で蛍光を測定する。細胞生存度の計算のために、未処理の細胞からの蛍光値を１００％の生存度に設定し、未処理の細胞の蛍光率を未処理の細胞の値について設定する。生存度は％値として表現する。インデューサーのポナステロンＡの不在下で発育した増殖細胞の生存度と、ポナステロンＡによって誘導された異所性ｐ２７Ｋｉｐ１の発現によって停止した細胞の生存度とを比較する。
【０２０５】
前記のアッセイで測定された抗増殖性／細胞毒性についての代表的なＩＣ50値［−ｌｏｇ ＩＣ50（モル／ｌ）として測定される］は、以下の表Ｂとなり、そこでは化合物の番号は実施例の番号に相当する。
【０２０６】
表Ｂ
高増殖活性／細胞毒性
【表３】
2008509971.tif 000015
【０２０７】
アポトーシスの誘発は、細胞死検出ＥＬＩＳＡ（ロシュ・バイオケミカルズ社、マンハイム、ドイツ）を用いて測定できる。ＰＫＯｐ２７型の結腸癌細胞を、９６ウェル平底プレート中に、１ウェルあたり１００００個の細胞の密度で、１ウェルあたり５０μｌのＲＰＭＩ培地（１０％仔ウシ血清を含有する）の容量で播種する。播種２４時間後に、ＲＰＭＩ培地中の化合物希釈物それぞれ５０μｌを９６ウェルプレートの各ウェルに添加する。各化合物の希釈物は少なくとも三重反復試験で試験する。未処理の対照細胞を含有するウェルを１％のＲＰＭＩを含有する５０μｌのＤＭＥＭ培地で満たす。次いでこれらの細胞を物質と一緒に３７℃で２４時間、５％の二酸化炭素を含有する湿潤雰囲気中でインキュベートする。アポトーシスの誘発についてのポジティブコントロールとして、細胞を５０μＭのシスプラチン（Ｇｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｋｉｒｃｈｚａｒｔｅｎ，ドイツ）で処理する。次いで培地を除去し、細胞を２００μｌの溶解バッファー中で溶解させる。製造元によって記載されるように遠心分離した後に、１０μｌの細胞溶解物をプロトコールに記載されるように処理する。アポトーシスの程度は以下のように計算する：
５０μＭのシスプラチンで処理された細胞からの溶解物で得られた４０５ｎｍでの吸光度を１００ｃｐｕ（シスプラチン単位）として設定し、一方で４０５ｎｍでの吸光度０．０を０．０ｃｐｕとして設定した。アポトーシスの程度は、５０μＭのシスプラチンで処理された細胞から得られた溶解物で達成された１００ｃｐｕの値に対するｃｐｕとして表現される。アポトーシス誘導活性についての化合物の相応のＥＣ50値を、濃度−効果曲線から決定する。
【０２０８】
前記のアッセイで測定されたアポトーシス誘導についての代表的な値［−ｌｏｇ ＥＣ50（モル／ｌ）として測定される］は、以下の表Ｃとなり、そこでは化合物の番号は実施例の番号に相当する。
【０２０９】
表Ｃ
アポトーシス誘導
【表４】
2008509971.tif 000016
【０２１０】
Ｅｇ５機能の実験的摂動により、有糸分裂紡錘体の特徴的な形成異常が惹起され、これは共焦点レーザ走査型顕微鏡によって測定できる。ＮＣＩ−Ｈ４６０型の非小細胞肺癌細胞を、ガラス製カバーガラス（Ｎｕｎｃ（商標）Ｌａｂ−Ｔｅｋ（商標）型のチャンバースライド（Ｃｈａｍｂｅｒ Ｓｌｉｄｅ））状で、１０％仔ウシ血清を含有するＤＭＥＭ１８００μｌ中で一晩増殖させる。試験化合物を、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ溶液として溶解させる。試験化合物の好適なＤＭＳＯ希釈物を、更に１：１０で、１０％の仔ウシ血清を含有するＤＭＥＭ中に希釈して、試験における最終濃度の１０倍だけの最終濃度にする。播種２４時間後に、ＤＭＥＭ培地中の化合物希釈物２００μｌを、カバーガラスの各ウェルに添加する。対照群として、１０％のＤＭＳＯを含有するＤＭＥＭ２００μｌを添加する。試験化合物と一緒にインキュベートした２４時間後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、そしてＨ2Ｏ中の３．７％ホルムアルデヒドで３７℃で２０分間固定する。引き続き、細胞をＰＢＳで洗浄し、１．４７１ｍＭのＫＨ2ＰＯ4、８．５０４ｍＭのＮａ2ＨＰＯ4、１３７ｍＭのＮａＣｌ、１．３２５ｍＭのＣａＣｌ2、２．６８５ｍＭのＫＣｌ、０．５４２ｍＭのＭｇＣｌ2を含有するバッファー（ｐＨ７．２）中の０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００と一緒に室温で１５分間インキュベートする。非特異的結合の飽和のために、細胞を、ＰＢＳ中の２％ＢＳＡ／１０％ＦＣＳ（＝ブロッキングバッファー）中で室温で３０分間インキュベートし、その後に抗α−チューブリンモノクローナル抗体（シグマ社、＃Ｔ５１６８；１：１０００）と一緒にインキュベートし、引き続きＣｙ３−結合ウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社；１：１０００）と一緒にインキュベートする。全ての抗体のインキュベーションは、ブロッキングバッファー中で３７℃で１時間実施し、そして細胞を、異なるインキュベーションの間にＰＢＳ中で３回洗浄する。ＤＮＡを、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（０．１μｇ／ｍｌ）で対比染色する。スライドガラスを、Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、バーリンゲーム、ＣＡ）中に装着させ、そしてライカ社製ＴＣＳ ＳＰ２型の共焦点レーザ走査型顕微鏡を用いて好適なフィルタ（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ社、ドイツ・ベンスハイム在）を取り付けて測定する。代表として、本発明において実施例１及び実施例３として番号付けした化合物を、前記のアッセイ（各１μＭの適用）で試験し、そして凝集した有糸分裂染色体のロゼットが放射状の微小管アレイに結合して有糸分裂で停止した細胞の多大な富化が生ずることが判明した。
【国際調査報告】
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