【事件の表示】
　特許第３０２６００５号「腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地であるラムノ―スマッコンキ―（ＲＭＡＣ）培地及びセフィキシム・亜テルル酸カリウム加ラムノ―スマッコンキ―（ＣＴ―ＲＭＡＣ）培地の開発」の請求項１に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３０２６００５号の請求項１に係る特許を維持する。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本件特許第３０２６００５号に係る発明についての出願は、平成１１年１月２６日に特願平１１−１６８１４号として出願され、平成１２年１月２８日にその特許の設定登録がなされ、その後、栄研化学株式会社より特許異議申立がなされ、取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１３年２月１９日に訂正請求がなされたものである。
　
II．訂正請求
１．訂正の内容
(1)特許請求の範囲の請求項１に係る記載を、
「大腸菌を検出するための基礎培地に、培地１０００ｍｌあたり、糖成分としてラムノースが、０．１ｇ〜５０ｇ、亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量で添加され、かつ、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬を含有してなることを特徴とする腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地。」と訂正する。
(2)特許請求の範囲の請求項２〜８を削除する。
(3)明細書段落【0009】を、
「【課題を解決するための手段】
　ここで、上述した課題を解決するため、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地は、大腸菌を検出するために基礎培地に、培地１０００ｍｌあたり、糖成分としてラムノースが、０．１ｇ〜５０ｇ、亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０mgの量で添加され、かつ、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬とを含有してなることを特徴としている。」と訂正する。
(4)明細書段落【0011】〜【0012】を削除する。
(5)明細書段落【0021】、【0024】、【0045】、【0051】及び【0053】の「Ｏ２６」を「腸管出血性大腸菌Ｏ２６」と訂正する。
２．訂正の目的の適否、新規事項の有無及び拡張・変更の存否
　上記訂正事項(1)は、「糖成分としてラムノースを添加したことを特徴とする」を「培地１０００ｍｌあたり、糖成分としてラムノースが、０．１ｇ〜５０ｇ、亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量で添加され、かつ、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬を含有してなることを特徴とする」という事項を直列的に付加するものであるから特許請求の範囲の減縮に該当し、訂正事項(2)は、請求項２〜８を削除するものであるから特許請求の範囲の減縮に該当し、訂正事項(3)〜(5)は、訂正事項(1)に伴う訂正である。
　そして、上記いずれの訂正も新規事項に該当せず、また、実質上特許請求の範囲を拡張し、または変更するものではない。
　
３．むすび
　以上のとおりであるから、本件訂正請求は、特許法１２０条の４,２項、及び同条３項で準用する１２６条２項および３項の規定に適合するので、請求のとおり当該訂正を認める。
　
III．特許異議申立
　特許異議申立人は、甲第１号証を提出し、訂正前の本件請求項１に係る発明は、甲第１号証に記載された発明であるから、特許法２９条１項３号に該当し特許を受けることができない、と主張している。
　よって検討するに、甲第１号証（「感染症学雑誌 第７２巻 臨時増刊号」（平成１０年３月２０日発行））には、「ヒト由来腸管出血性大腸菌の生化学的性状及び血清型Ｏ２６の分離培地について」との表題で、「ＥＨＥＣについて、亜テルル酸カリウムに対する抵抗性試験とソルビット・マッコンキー培地のソルビットの代わりにラムノースを添加した培地（R-MAC）及びR-MAC培地にセフィキシムと亜テルル酸カリウムを添加した培地（CT-RMAC）及びＤＨＬ培地における発育状況について検討した。」（１３９頁左欄２１〜２６行）、「２，Ｏ２６はR-MAC培地及びCT-RMAC培地で白色集落として発育し、他の大腸菌と容易に区別され、発育集落数もＤＨＬ培地と変わらなかった。」（同下から５〜３行）が記載されている。
　しかるに、訂正後の請求項１に係る発明（以下、「本件発明１」という。）は、「大腸菌を検出するための基礎培地に、培地１０００ｍｌあたり、糖成分としてラムノースが、０．１ｇ〜５０ｇ、亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量で添加され、かつ、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬を含有してなることを特徴とする腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地。」であるところ、甲第１号証には、本件発明１に係る成分、すなわち、ラムノース、亜テルル酸カリウム、及びセフィキシムについての記載はあるが、これらの成分をどれくらい培地に添加するのか具体的数値については全く開示されていない。
　そして、ラムノースが、０．１ｇ〜５０ｇ、亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、セフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇという数値が、本件出願時において自明であると認めるに足る証拠もないので、結局、本件発明１は、甲第１号証に記載された発明であるとはいえない。
　したがって、本件発明１は、甲第１号証に記載された発明であるという特許異議申立人の主張は採用できない。
３．まとめ
　以上のとおりであるから、特許異議申立の理由及び証拠によっては、本件発明１についての特許を取り消すことはできない。
　また他に本件発明１についての特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１３年６月１日（２００１．６．１）
【訂正の要旨】
（訂正の要旨）
（１）特許請求の範囲の請求項１に係る記載を、特許請求の範囲の減縮を目的として「大腸菌を検出するための基礎培地に、培地１０００ｍｌあたり、糖成分としてラムノースが、０．１ｇ〜５０ｇ、亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量で添加され、かつ、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬を含有してなることを特徴とする腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地。」と訂正する。
（２）特許請求の範囲の請求項２〜８を特許請求の範囲の減縮を目的として削除する。
　明りょうでない記載の釈明を目的として、（３）乃至（５）のように訂正する。
（３）明細書段落【０００９】を、
「【課題を解決するための手段】
　ここで、上述した課題を解決するため、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地は、大腸菌を検出するために基礎培地に、培地１０００ｍｌあたり、糖成分としてラムノースが、０．１ｇ〜５０ｇ、亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量で添加され、かつ、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬とを含有してなることを特徴としている。」と訂正する。
（４）明細書段落【００１１】〜【００１２】を削除する。
（５）明細書段落【００２１】、【００２４】、【００４５】、【００５１】及び【００５３】の「０２６」を「腸管出血性大腸菌Ｏ２６」と訂正する。
（５４）【発明の名称】
腸管出血性大腸菌Ｏ２６選択分離培地
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】大腸菌を検出するための基礎培地に、
培地１０００ｍｌあたり、
が、０．１〜５０ｇ、
亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、
腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量で添加され、
　
かつ大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬を含有してなる
　【請求項２】上記基礎培地が、胆汁酸塩を用いた腸内細菌分離培地であることを特徴とする
請求項１に
　【請求項３】腸内細菌から腸管出血性大腸菌Ｏ２６を識別する方法において、
請求項１〜２のいずれかに
　【請求項４】腸内細菌から腸管出血性大腸菌Ｏ２６を単離・同定する方法において、
請求頂１〜２のいずれかに
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　【発明の属する技術分野】
　本発明は、試料を培養して腸管出血性大腸菌Ｏ２６を選択分離するための腸管出血性大腸菌の選択分離培地に関する。また本発明は、上記培地を用いて腸管出血性大腸菌Ｏ２６を他の腸内細菌から単離するための単離方法、および識別するための識別方法に関する。
　【０００２】
　【従来の技術】
　近年、腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）による食中毒が、世界各国から報告されている。我が国おいても、１９８４年に最初の報告があり、１９９６年７月の大阪府堺市における腸管出血性大腸菌の一種Ｏ１５７による集団食中毒事例以降、大きな社会問題となってきており、その原因究明と予防対策の確立が急務となっている。
　【０００３】
　ここで、Ｏ１５７については、Ｏ１５７がソルビトールに対して遅分解性を有することが知られており、これを指標としたＯ１５７の選択分離培地が開発されている。したがって、これを使用して試料を培養することで、Ｏ１５７の検出を精度よく行うことが可能になり、迅速で確度の高い感染性下痢症の検査法の確立に成功している。
　【０００４】
　【発明が解決しようとする課題】
　ところで、１９９６年以降、Ｏ１５７以外の腸管出血性大腸菌であるＯ２６やＯ１１１による感染性下痢症の事例が増加している。特に、Ｏ２６は現在のところ腸管出血性大腸菌としてはＯ１５７に次ぐ頻度で、その原因菌として検出されている。
　【０００５】
　また、Ｏ１５７以外の腸管出血性大腸菌については適当な選択分離培地が未開発であるため、Ｏ１５７以外の腸管出血性大腸菌を検出するためには、一般的な病原性大腸菌（腸管出血性大腸菌も含む）の検出用選択分離培地である、ＤＨＬ（Ｄｅｓｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ　Ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｓｕｌｆｉｄｅ　Ｌａｃｔｏｓｅ）培地を用いて、細菌を増殖させなければならなかった。
　【０００６】
　しかしながら、このＤＨＬ培地を用いると、人を含む動物の生体内および自然界に存在する病原性大腸菌およびその他多くの非病原性大腸菌のいずれもが、培地中のラクトースを分解して赤色を示す集落を形成して発育する。このため、Ｏ２６を検出するためには全ての大腸菌を釣菌（菌を培地より取り出すこと）して、その全てについて生化学的性状と血清学的検査を行う必要があった。このような検出方法は、非能率であるために、多大な時間と労力とを必要としていた。
　【０００７】
　そこで、本発明は、上述した実状に鑑みてなされたものであり、試料を培養することによって腸管出血性大腸菌Ｏ２６のみを選択分離することができる選択分離培地を提供することを目的としている。
　【０００８】
　また、本発明は、上記培地を使用して腸管出血性大腸菌Ｏ２６を単離する方法、ならびにこの腸管出血性大腸菌Ｏ２６を識別する方法をも提供することを目的としている。
　【０００９】
　【課題を解決するための手段】
　ここで、上述した課題を解決するため、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地は、大腸菌を検出するための基礎培地に、
培地１０００ｍｌあたり、
が、０．１ｇ〜５．０ｇ、
亜テルル酸塩として亜テルル酸カリウムが、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、
腸内細菌叢の発育を阻止する抗生物質としてセフィキシムが、０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量で添加され、
　
かつ、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈する指示薬を含有してなることを特徴としている
　【００１０】
　上記基礎培地が、胆汁酸塩を用いた腸内細菌分離培地に加えられることが好ましい。
　【００１１】
　また、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の単離方法は、上記のいずれかの選択分離培地を用いて試料を培養する工程を少なくとも含むことを特徴としている。
　【００１２】
　また、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の識別方法は、上記のいずれかの選択分離培地を用いて試料を培養する工程を少なくとも含むことを特徴としている。
　【００１３】
　【発明の実施の形態】
　以下、本発明を具体的に説明する。
　【００１４】
　本発明者らは、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７、Ｏ２６（以下、単にそれぞれ「Ｏ１５７」、「Ｏ２６」とよぶこともある）など多くの大腸菌の生化学的性状を検討した結果、Ｏ２６は他の大腸菌と異なり、糖であるラムノース（６−デオキシマンノース）を分解できないこと、およびＯ１５７と同様に亜テルル酸カリウムに耐性であることを発見した。
　【００１５】
　ここで得た知見から、大腸菌を検出するための基礎培地、例えば腸内細菌分離培地として広く知られている胆汁酸塩を用いた培地、例えばマッコンキー（ＭａｃＣｏｎｋｅｙ）らにより開発された培地（ＭＡＣ培地）の糖成分であるラクトースをラムノースに置き換えることで、Ｏ２６の検出が可能になることを見いだして本発明の完成に至った。
　【００１６】
　本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地は、大腸菌を検出するための基礎培地に糖成分としてラムノースを添加して得られるものである。
　【００１７】
　ここで、基礎培地としては、胆汁酸塩を用いた腸内細菌分離培地であるマッコンキー培地が挙げられる。表１に代表的なマッコンキー培地の組成例および本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地（ラムノースＭＡＣ培地：ＲＭＡＣ培地）の組成例を示す。
　【００１８】
　【表１】
　【００１９】
　表１に示したようなＲＭＡＣ培地において、
腸管出血性大腸菌
　【００２０】
　すなわち、大腸菌などの腸内細菌が培地内で発育し、糖成分を分解すると酸が生ずる。この酸が、培地に指示薬として添加されているニュートラルレッドの黄褐色を紅色に変色させると同時に、胆汁酸塩から不溶性の胆汁酸を析出させる。この胆汁酸は、本来ニュートラルレッド、メチレンブルーなどの色素と強く結合する性状を有するため、析出された胆汁酸は、紅変したニュートラルレッドと結合する結果、その集落は鮮明なレンガ紅色を呈する。よって、赤色集落が形成される。
　【００２１】
　一方、糖成分を分解しない大腸菌は培地内での発育過程で酸を発生させないため、ニュートラルレッドは紅変しない。このため、上述のように赤色集落が形成されない。
　【００２２】
　本発明においては、
腸管出血性大腸菌
　【００２３】
　表１で示したような成分で構成される培地において、ラムノース含量は、蒸留水１０００ｍｌに対して０．１ｇ〜５０ｇ、好ましくは５ｇ〜１５ｇ、特に好ましくは８ｇ〜１２ｇの量で用いられる。
　【００２４】
　ラムノースをあまり多量用いると、浸透圧が変化し、細胞発育を阻害することがあり、少量では細菌が示すラムノース分解の性状が見難くなる。
　【００２５】
　また、胆汁酸塩としては例えばタウロコール酸ナトリウムが用いられ、主としてグラム陽性菌の発育を阻止するために用いられている。
　【００２６】
　胆汁酸塩は、グラム陽性菌の発育を阻止するとともに、大腸菌には何ら影響を及ぼさない量である必要があり、例えば本発明者等が用いたＢａｃｔｏ　Ｂｉｌｅ　ｓａｌｔｓ　Ｎｏ．３（ｄｉｆｃｏ社）では蒸留水１０００ｍｌにつき、０．１ｇ〜１５ｇ、好ましくは０．５ｇ〜５ｇ、特に好ましくは１．０　ｇ〜２．０ｇの量で用いられる。
　【００２７】
　また、クリスタルバイオレッドはグラム陽性菌の発育を阻止し、かつ胆汁酸塩と相互作用する。
　【００２８】
　なお、本発明の選択分離培地として上記表１に示したような組成のもの（ＲＭＡＣ培地）を例に挙げて説明したが、これに限定されないことは言うまでもない。また、指示薬としてニュートラルレッドを用いた例を挙げているが、これに限定されることはなく、大腸菌の発育過程で培地中の糖成分が分解されて生じる酸と反応して特定の色を呈するとともに、この反応物が胆汁酸とさらに反応して所定の色を呈するものであれば、どんな指示薬を用いてもよい。
　【００２９】
　本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地は、さらに主としてグラム陰性菌の発育を阻止する亜テルル酸塩を含有することが好ましい。亜テルル酸塩としては、亜テルル酸カリウム、亜テルル酸ナトリウムなどが挙げられ、特に亜テルル酸カリウムが好ましい。
　【００３０】
　亜テルル酸カリウムは、蒸留水１０００ｍｌに対して、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜７ｍｇ、特に好ましくは１．５ｍｇ〜５．０ｍｇの量で添加される。
　【００３１】
　ここで、亜テルル酸塩は、主としてグラム陰性菌の発育を抑制する薬剤であるが、腸管出血性大腸菌は一般に、この亜テルル酸塩に対して耐性を示すのに対して、その他のほとんどの腸内細菌は感受性を示し、その発育が阻害される。
　【００３２】
　したがって、ＲＭＡＣ培地に亜テルル酸塩を添加した培地を用いることで、腸管出血性大腸菌以外の腸内細菌の発育が阻害される。さらに、この培地ではＯ２６以外の腸管出血性大腸菌は赤色集落を形成して発育し、Ｏ２６は白色集落を形成して発育する。
　【００３３】
　このようにして、亜テルル酸塩を含む培地を用いると、腸管出血性大腸菌Ｏ２６にその他多くの腸内細菌が混在する試料であっても、単に試料を培養させることで腸管出血性大腸菌が選択的に培養され、特にＯ２６のみが白色集落を形成して培養される。
　【００３４】
　また、亜テルル酸塩を添加したこの培地を用いる場合、腸内細菌叢の一部を構成するプロテウスの発育を阻止する抗生物質も一緒に添加するのが好ましい。この抗生物質としては、セフィキシム、セフロキシム、セファレキシンなどが挙げられ、特にセフィキシムが好ましい。
　【００３５】
　セフィキシムは、蒸留水１０００ｍｌに対して通常０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇ、好ましくは０．０１ｍｇ〜０．２ｍｇ、特に好ましくは０．０１ｍｇ〜０．０８ｍｇの量で用いられる。
　【００３６】
　また、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の識別方法は、上記の選択分離培地を用いて試料を培養する工程を少なくとも含む方法である。
　【００３７】
　上述のように、本発明の選択分離培地であって、亜テルル酸塩を添加しない培地を用いる場合には、グラム陰性菌を含め多くの腸内細菌が赤色集落を形成して発育するのに対し、Ｏ２６は白色集落を形成して発育する。これに対し、亜テルル酸塩を添加した培地を用いる場合には、この薬剤に耐性を示す腸管出血性大腸菌のみが発育し、またＯ２６以外の腸管出血性大腸菌は赤色集落を形成するのに対して、Ｏ２６は白色集落を形成することから、Ｏ２６を識別することができる。
　【００３８】
　また、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の単離・同定方法は、上記の選択分離培地を用いて試料を培養する工程を少なくとも含む方法である。
　【００３９】
　上述のように、本発明のいずれの選択分離培地を用いても、試料をそのまま培養して白色集落形成の有無を目視にて識別した後、この集落を単離し、得られた菌体がＯ２６によるものであるか否かを生化学的性状および血清学的性状を調べることで確認できる。この生化学的性状とは、大腸菌である性状と、腸管出血性大腸菌に特徴的なベロ毒素産生の有無のことであり、血清学的性状とは菌体抗原（Ｏ２６）の検出である。
　【００４０】
　以上のように、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の選択分離培地は、大腸菌を検出するための基礎培地の糖成分としてラムノースを添加したものであるため、ラムノースを分解する一般の腸内細菌は赤色集落を形成して発育するのに対して、ラムノースを分解しない腸管出血性大腸菌Ｏ２６は白色集落を形成して発育する。したがって、この培地を用いて試料を培養することで、Ｏ２６を選択分離することが可能となる。
　【００４１】
　また、ＲＭＡＣ培地に亜テルル酸塩を添加することで、腸管出血性大腸菌以外の腸内細菌の発育が阻害される。また、Ｏ２６以外の腸管出血性大腸菌は赤色集落を形成して発育し、Ｏ２６は白色集落を形成して発育する。したがって、この選択分離培地を用いて単に試料中の細菌を培養させることで、非常に雑多な腸内細菌が多く混在する試料であっても、腸管出血性大腸菌が選択的に培養され、特にＯ２６のみが白色集落を形成して発育する。
　【００４２】
　また、本発明に係る腸管出血性大腸菌Ｏ２６の識別方法および単離・同定方法によれば、上記選択分離培地を用いて単に試料からの培養を実施して、白色集落を形成するか否かを目視にて確認するだけで、腸管出血性大腸菌Ｏ２６の識別、単離・同定が容易にできる。
　【００４３】
　したがって、試料中の
腸管出血性大腸菌
　【００４４】
　【発明の効果】
　本発明により、試料からの細菌培養において、腸管出血性大腸菌Ｏ２６を選択的に分離するための選択分離培地を提供することができる。
　【００４５】
　また、上記選択分離培地を用いることで、容易に腸管出血性大腸菌Ｏ２６の単離を行うことができる。また、Ｏ２６の有無の識別を、多大な労力、時間を費やすことなく、迅速に、容易に、かつ確実に行うことができる。
　【００４６】
　【実施例】
　以下、実施例に基づいて、本発明の好ましい態様をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　【００４７】
　【実施例１〜１２】
　選択分離培地としては、下記の表２に示した組成のものを用いた。
　【００４８】
　【表２】
　【００４９】
　
腸管出血性大腸菌
　【００５０】
　【比較例１〜４】
　実施例１〜１２と全く同じ条件で、Ｏ２６の代わりに４株のＯ１５７を用いてそれぞれ培養を行った。培養後における培地上の集落数および集落の色を表３に示す。
　【００５１】
　【比較例５】
　実施例１〜１２と全く同じ条件で、
腸管出血性大腸菌
　【００５２】
　【表３】
　【００５３】
　【実施例１３〜２４】
　実施例１〜１２で用いた同一のＯ２６の菌株を用い、下記表４に示した組成の選択分離培地を用いた以外は、実施例１〜１２と同様の条件下で、それぞれ培養を行った。培養後における培地上の集落数および集落の色を表５に示す。
　【００５４】
　【表４】
　【００５５】
　【比較例６〜９】
　比較例１〜４で用いた同一の株を用い、上記表４に示す組成の培地を用いた以外は、比較例１〜４と同様の条件で培養を行った。培養後における培地上の集落数および集落の色を表５に示す。
　【００５６】
　【比較例１０】
　比較例５で用いた同一の株を用い、上記表４に示す組成の培地を用いた以外は、比較例５と同様の条件で培養を行った。培養後における培地上の集落数および集落の色を表５に示す。
　【００５７】
　【表５】