(57)【要約】本発明は、ｎ＝３，４；Ｒ＝Ｈ，ＯＨとしたピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン混合物（Ｖ）の合成と、その抗腫瘍剤としての使用に関する。
2008525429.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｖ（ｎ＝３，４；Ｒ＝Ｈ，ＯＨ）で表されるピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン。
【化１】
2008525429.tif 000025
【請求項２】
下記式で表される７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−プロパン−３−カルボキシアミド］−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
【化２】
2008525429.tif 000026
【請求項３】
下記式で表される７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−プロパン−３−カルボキシアミド］−オキシ−（４Ｒ）−ヒドロキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
【化３】
2008525429.tif 000027
【請求項４】
下記式で表される７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−ブタン−４−カルボキシアミド］−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
【化４】
2008525429.tif 000028
【請求項５】
下記式で表される７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−ブタン−４−カルボキシアミド］−オキシ−（４Ｒ）−ヒドロキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
【化５】
2008525429.tif 000029
【請求項６】
（ａ） 無機塩である弱塩基を含んだ非プロトン性の親水性有機溶媒の中で式ＩのＮ−（
９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−１−ブロモアルカンアミドを式ＩＩの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと反応させ、
【化６】
2008525429.tif 000030
【化７】
2008525429.tif 000031
得られた式ＩＩＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−アルカン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離する工程と、
【化８】
2008525429.tif 000032
（ｂ）有機溶媒中で式ＩＩＩのチオアセタールを還元し、それにより得られた式ＩＶの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−アルカン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離する工程と、
【化９】
2008525429.tif 000033
（ｃ）式ＩＶのアミノチオアセタールを脱保護剤と反応させ、式Ｖのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを得る工程とを含む、ｎとＲは上記のままで式Ｖで表されるピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンの製造方法。
【化１０】
2008525429.tif 000034
【請求項７】
式Ｉの化合物を式ＩＩの化合物と還流温度にて４８時間反応させる請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏを使って、有機溶媒を含む状態で還流温度にて式ＩＩＩのチオアセタールを還元させる請求項６に記載の方法。
【請求項９】
工程（ａ）の有機溶媒はアセトンを含む請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ａ）の塩基はＫ２ＣＯ３を含む請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ｂ）は、メタノール溶媒を用いて行われる請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
式Ｖ（ｎ＝３，４、Ｒ＝Ｈ，ＯＨ）で表される、薬学的に有効な量のピロロ［２，１−
ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを対象物に投与する工程を含む対象物における腫瘍の治療方法。
【化１１】
2008525429.tif 000035
【請求項１３】
対象物は哺乳動物である請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
対象物は人間である請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
腫瘍はＨＴ−２９、ＨＣＴ−１５、Ａ−５４９、ＨＯＰ−６２およびＳｉＨＡの群から選ばれた人間の癌細胞系である請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、将来性のある抗腫瘍剤として有用なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンの混合物に関する。本発明は、特に、抗癌剤として有用なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン混合物の合成に関する。新規なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン混合物（Ｖ）の化学式は、ｎ＝３，４；Ｒ＝Ｈ，ＯＨとしたとき、以下の通り表される。
【化１】
2008525429.tif 000003
【０００２】
また、本発明は、このような混合物の製造方法およびその抗腫瘍剤としての使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンは、ストレプトマイセス属から派生したＤＮＡに相互作用する抗腫瘍抗生物質の群に属する。自然のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンには、アントラマイシン、トメイマイシン、シビロマイシンおよびＤＣ−８１が含まれる。これらの化合物は、ｐｕ−Ｇ−ｐｕの配列を選好するＤＮＡ副溝内部に存在するグアニン残留物におけるＣ２−アミンの位置に、Ｎ１０−Ｃ１１イミン／カルビノールアミン部を介して共有結合することにより、その生体機能を発揮する。（Ｋｕｎｉｍｏｔｏ，Ｓ．；Ｍａｓｕｄａ，Ｔ．；Ｋａｎｂａｙａｓｈｉ，Ｎ．；Ｈａｍａｄａ，Ｍ．；Ｎａｇａｎａｗａ，Ｈ．；Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｍ．；Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｕｎｅｚａｗａ，Ｈ．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，１９８０，３３，６６５．；Ｋｏｈｎ，Ｋ．Ｗ．ａｎｄＳｐｅｏｕｓ，Ｃ．Ｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９７０，９１，５５１．；Ｈｕｒｌｅｙ，Ｌ．Ｈ．；Ｇａｉｒｐｌａ，Ｃ．ａｎｄ  Ｚｍｉｊｅｗｓｋｉ，Ｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ．Ａｃｔａ．，１９７７，４７５，５２１．；Ｋａｐｌａｎ，Ｄ．Ｊ．ａｎｄ  Ｈｕｒｌｅｙ，Ｌ．Ｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８１，２０，７５７２．）ＣリングからＡリング方向に向かって見ると、分子は右撚りである。これにより上記ＰＢＤがＢ型ＤＮＡの曲率に倣い、副溝の壁部と床部に対し、等螺旋接触を維持することができるようになる。
【０００４】
ここ数年、新しいピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン混合物の開発に注目が集まっている。多くのＰＢＤ接合体が合成され、その抗癌作用について調査が進められてきた（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．；Ｍｏｒｒｉｓ，Ｓ．Ｊ．；Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｊ．Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９６，５６３．；Ｄａｍａｙａｎｔｈｉ，Ｙ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｐ．；Ｌｏｗｎ，Ｊ．Ｗ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９９，６４，２９０．；Ｋａｍａｌ，Ａ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｎ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｇ．Ｓ．Ｋ．；Ｒａｍｅｓｈ，Ｇ  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１９３３）。最近、Ｃ２／Ｃ２  ｅｘｏ不飽和化を伴いＣ−８結合したＰＢＤ二量体が設計され、合成された（Ｇｒｅｇｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．；Ｈｏｗａｒｄ，Ｐ．Ｗ．；Ｈａｒｔｌｅｙ
，Ｊ．Ａ．：Ｂｒｏｏｋｓ，Ｎ．Ａ．；Ａｄａｍ，Ｌ．Ｊ．；Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｔ．Ｃ．；Ｋｅｌｌａｎｄ，Ｌ．Ｒ．ａｎｄ  Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，７３７）。
【０００５】
最近、非架橋結合した混合イミン−アミドＰＢＤ二量体が合成され、相当なＤＮＡ結合能力と効力の高い抗腫瘍作用を発揮している（Ｋａｍａｌ，Ａ．；Ｒａｍｅｓｈ，Ｇ．；Ｌａｘｍａｎ，Ｎ．；Ｒａｍｕｌｕ，Ｐ．；Ｓｒｉｎｉｖａｓ，Ｏ．；Ｎｅｅｌｉｍａ，Ｋ．；Ｋｏｎｄａｐｉ，Ａ．Ｋ．；Ｓｒｉｎｕ，Ｖ．Ｂ．；Ｎａｇａｒａｊａｒａｍ，Ｈ．Ｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，４５，４６７９）。
【化２】
2008525429.tif 000004
【化３】
2008525429.tif 000005
【化４】
2008525429.tif 000006
【化５】
2008525429.tif 000007
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の主たる目的は、抗腫瘍剤として有用な、新しいピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを提供することにある。
【０００７】
本発明の別の目的は、抗腫瘍剤として有用な、新しいピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンの製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
よって、本発明は、ｎ＝３，４；Ｒ＝Ｈ，ＯＨとしたとき、式Ｖで表される新規なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを提供する。
【化６】
2008525429.tif 000008
【０００９】
本発明の一実施形態によると、式Ｖの化合物は、
（ａ）７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−プロパン−３−カルボキシアミド］−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン；
（ｂ）７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−プロパン−３−カルボキシアミド］−オキシ−（４Ｒ）−ヒドロキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン；
（ｃ）７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−ブタン−４−カルボキシアミド］−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン；
（ｄ）７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−ブタン−４−カルボキシアミド］−オキシ−（４Ｒ）−ヒドロキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オンからなる群から選ばれる。
【００１０】
また、本発明は、ｎを３−４とし、ＲをＨ，ＯＨとしたとき式Ｖで表されるピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンの製造方法を提供する。
【化７】
2008525429.tif 000009
この工程は、
無機塩である弱塩基を含んだ非プロトン性の親水性有機溶媒の中で式ＩのＮ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−１−ブロモ−アルカンアミドを式ＩＩの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと反応させ、
【化８】
2008525429.tif 000010
【化９】
2008525429.tif 000011
得られた式ＩＩＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−アルカン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離する工程と、
【化１０】
2008525429.tif 000012
（ｂ）有機溶媒を含む式ＩＩＩのチオアセタールを還元し、得られた式ＩＶの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−アルカン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離する工程と、
【化１１】
2008525429.tif 000013
（ｃ）ｎとＲを上記の通りとしたとき、式ＩＶのアミノチオアセタールを脱保護剤と反応させて、式Ｖのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを得る工程とを含む。
【００１１】
本発明の一実施形態では、式Ｉの化合物を式ＩＩの化合物と還流温度にて４８時間反応させる。
【００１２】
本発明の別の実施形態では、ＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏを使って、有機溶媒を含む状態で還流温度にて式ＩＩＩのチオアセタールを還元させる。
【００１３】
本発明のさらに別の実施形態では、工程（ａ）の有機溶媒はアセトンを含む。
【００１４】
本発明のさらに別の実施形態では、工程（ａ）の塩基はＫ２ＣＯ３を含む。
【００１５】
本発明の別の実施形態では、工程（ｂ）は、メタノール溶媒を用いて行われる。
【００１６】
また、本発明は、対象物における腫瘍の治療のための方法を提供するものであり、ｎを３−４とし、ＲをＨ，ＯＨとしたとき式Ｖで表される、薬学的に有効な量のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを対象物に投与する。
【化１２】
2008525429.tif 000014
【００１７】
本発明の一実施形態において、対象物は哺乳動物である。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、対象物は人間である。
【００１９】
本発明の別の実施形態において、腫瘍はＨＴ−２９、ＨＣＴ−１５、Ａ−５４９、ＨＯＰ−６２およびＳｉＨＡの群から選ばれた人間の癌細胞系である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明は、ｎを３−４、ＲをＨ，ＯＨとしたとき、式Ｖで表される新規なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを提供する。
【化１３】
2008525429.tif 000015
【００２１】
先駆物質である式ＩのＮ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−１−ブロモ−アルカンアミド（Ｃｏｌｌｉｅｒ，Ｄ．Ａ．；Ｎｅｉｄｌｅ，Ｓ．；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８８，８４７）と、式ＩＩの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．；Ｍｕｒｔｈｙ，Ｖ．Ｓ．；Ｌ
ａｎｇｌｅｙ，Ｄ．Ｒ．；Ｊｏｎｅｓ，Ｇ．；Ｂ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９０，８１)を文献記載の方法で作製した。
【００２２】
本発明の式Ｖの代表的な化合物を下に示す。
１．７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アント
ラセニル）−プロパン−３−カルボキシアミド］−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン
２．７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−プロパン−３−カルボキシアミド］−オキシ−（４Ｒ）−ヒドロキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン
３．７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−ブタン−４−カルボキシアミド］−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン４．７−メトキシ−８−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−ブタン−４−カルボキシアミド］−オキシ−（４Ｒ）−ヒドロキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン
【００２３】
ｎを３−４、ＲをＨ，ＯＨとしたとき、式Ｖで表されるピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンは、
【化１４】
2008525429.tif 000016
無機塩である弱塩基を含んだ非プロトン性の親水性有機溶媒の中で、式ＩのＮ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−１−ブロモ−アルカンアミドを式ＩＩの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと反応させ、
【化１５】
2008525429.tif 000017
【化１６】
2008525429.tif 000018
得られた式ＩＩＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−アルカン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離する。
【化１７】
2008525429.tif 000019
そして、式ＩＩＩのチオアセタールを、有機溶媒を含むＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏで還元し、得られた式ＩＶの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−アルカン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離する。
【化１８】
2008525429.tif 000020
その後、式ＩＶのアミノチオアセタールを従来の方法で周知の脱保護剤と反応させ、ｎとＲは上記のまま式Ｖのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを得る。
【００２４】
上記工程中、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物とを還流温度にて４８時間反応させる。ＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏを使って、有機溶媒を含む状態で還流温度にて式ＩＩＩのチオアセタールを還元する。工程（ａ）の有機溶媒はアセトン及びＫ２ＣＯ３を含む塩基が好ましい。
【００２５】
工程（ｂ）における還元は、メタノール溶媒を用いて行われる。
【００２６】
また、本発明は、対象物における腫瘍の治療のための方法を提供するものであり、ｎを３−４、ＲをＨ，ＯＨとしたとき式Ｖで表される薬学的に有効な量のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを対象物に投与する。
【化１９】
2008525429.tif 000021
【００２７】
対象物は人間のような哺乳動物である。腫瘍は、ＨＴ−２９、ＨＣＴ−１５、Ａ−５４９、ＨＯＰ−６２およびＳｉＨＡの群から選ばれた人間の癌細胞系である。
【００２８】
これらのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン混合物の新たな類似物質が様々な細胞系における抗癌作用を有するものとして有望であることが判明した。合成した分子は、潜在的に選択的ＤＮＡ結合を行うという特性にとって、生物学的に重要な意味を有する。これにより、下記スキームＩに示すように、新たな同種化合物の設計・合成が可能になる。そのスキームＩでは；
エーテル結合はアントラキノン部を有するＤＣ−８１中間体のＣ−８位置で行われる。
反応混合物は、２４から４８時間還流させる。
Ｃ−８結合したＰＢＤ混合物を合成する。
精製は、酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン、およびメタノールなどのような異なる溶媒を使ったカラムクロマトグラフィによって行う。
【化２０】
2008525429.tif 000022
【実施例】
【００２９】
以下に示す例は、単なる説明のためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３０】
（実施例１）
式ＩＩの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（４００ｍｇ、１ｍ．ｍｏｌ）をアセトンに溶解した溶液に、無水Ｋ２ＣＯ３（５３３ｍｇ、４ｍ．ｍｏｌ）と式ＩのＮ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−１−ブロモ
−プロパンアミド（３７２ｍｇ、１ｍ．ｍｇ）を加え、４８時間混合還流させた。反応が完了したら、Ｋ２ＣＯ３をろ過して除去し、減圧下で溶媒を蒸発させ、カラムクロマトグラフィによって精製し、化合物ＩＩＩを得た。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．２１−１．３８（ｍ，６Ｈ）、１．５３−２．４２（ｍ，６Ｈ）、２．６２−２．８１（ｍ，６Ｈ）、３．１０−３．２８（ｍ，２Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）、４．２５（ｍ，２Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、４．８０（ｄ，１Ｈ）、６．７４（ｓ，１Ｈ）、７．６８（ｓ，１Ｈ）、７．７１−７．８５（ｍ，３Ｈ）、８．０（ｄ，１Ｈ）、８．２０−８．３０（ｍ，２Ｈ）、９．１５（ｄ，１Ｈ）、１２．３８（ｂｓ，１Ｈ）．
【００３１】
式ＩＩＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−プロパン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（６９２ｍｇ，１ｍ．ｍｏｌ）をメタノールに溶解した溶液にＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（１１２８ｍｇ，５ｍ．ｍｏｌ）を加え、ＴＬＣが反応の完了を示すまでその混合物を還流させた。メタノールを蒸発させ、１０％ＮａＨＣＯ３溶液を加えた。水層を酢酸エチルとともに抽出し、結合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させてアミノチオアセタール（ＩＶ）を得、次の工程で直接使用した。
【００３２】
ＣＨ２ＣＮ−Ｈ２Ｏ（４：１）に化合物ＩＶ（６６２ｍｇ、１ｍ．ｍｏｌ）、ＨｇＣｌ２（６２４ｍｇ、２．３ｍ．ｍｏｌ）およびＣａＣＯ３（２５０ｍｇ、２．５ｍｇ）を溶かした溶液を、出発物質が完全に消費されたことがＴＬＣにより示されるまで、室温で攪拌した。上記混合液を酢酸エチルで希釈し、セライトろ過を行った。有機層を凝縮し、乾燥し、カラムクロマトグラフィによって精製して化合物Ｖを得た。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）２．０５（ｍ，２Ｈ）、２．２０−２．４０（ｍ，４Ｈ）、２．８１（ｍ，２Ｈ）、３．５０−３．８１（ｍ，３Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）、４．１５−４．２６（ｍ，２Ｈ）、６．７６（ｓ，１Ｈ）、７．４２（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，１Ｈ）、７．８０（ｍ，３Ｈ）、８．０（ｄ，１Ｈ）、８．２−８．３（ｍ，２Ｈ）、９．１５（ｄ，１Ｈ）、１２．３８（ｂｓ，１Ｈ）．
【００３３】
（実施例２）
式ＩＩの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（４００ｍｇ、１ｍ．ｍｏｌ）をアセトンに溶解した溶液に、無水Ｋ２ＣＯ３（５３３ｍｇ、４ｍ．ｍｏｌ）と式ＩのＮ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−１−ブロモ−ブタンアミド（３８６ｍｇ、１ｍ．ｍｇ）を加え、４８時間混合還流させた。Ｋ２ＣＯ３をろ過で除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィで精製して化合物ＩＩＩを得た。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．２１−１．４２（ｍ，６Ｈ）、１．６０−２．４０（ｍ，８Ｈ）、２．６２−２．８５（ｍ，６Ｈ）、３．１５−３．３０（ｍ，２Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）、４．１０−４．２５（ｍ，２Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、４．８４（ｄ，１Ｈ）、６．７８（ｓ，１Ｈ）、７．６８（ｓ，１Ｈ）、７．７５−７．９０（ｍ，３Ｈ）、８．０５（ｄ，１Ｈ）、８．２０−８．３５（ｍ，２Ｈ）、９．１５（ｄ，１Ｈ）、１２．３８（ｂｓ，１Ｈ）．
【００３４】
式ＩＩＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［Ｎ−（９，１０−ジヒドロ−９，１０−ジオキソ−１−アントラセニル）−ブタン−３−カルボキシアミド］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（７０６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解した溶液にＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（１１２８ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣが反応の完了を示すまでその混合物を還流させた。メタ
ノールを蒸発させ、１０％ＮａＨＣＯ３溶液を加えた。水層が酢酸エチルとともに抽出された。結合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で蒸発させてアミノチオアセタール（ＩＶ）を得、次の工程で直接使用した。
【００３５】
ＣＨ２ＣＮ−Ｈ２Ｏ（４：１）に化合物ＩＶ（６７６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ２（６２４ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ３（２５０ｍｇ、２．５ｍｇ）を溶かした溶液を、出発物質が完全に消費されたことがＴＬＣにより示されるまで室温で攪拌した。上記混合液反応を酢酸エチルで希釈し、セライトろ過した。有機層を凝縮し、乾燥させ、カラムクロマトグラフィによって精製して化合物Ｖを得た。
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１．８５−２．４０（ｍ，８Ｈ）、２．６０−２．７８（ｍ，２Ｈ）、３．５１−３．８０（ｍ，３Ｈ）、３．９３（ｓ，３Ｈ）、４．１５−４．２０（ｍ，２Ｈ）、６．７８（ｓ，１Ｈ）、７．４２（ｓ，１Ｈ）、７．６０（ｄ，１Ｈ）、７．６５−７．８３（ｍ，３Ｈ）、８．０（ｄ，１Ｈ）、８．２−８．２５（ｍ，２Ｈ）、９．１５（ｄ，１Ｈ）、１２．３８（ｂｓ，１Ｈ）．
【００３６】
（生物学的作用）
人間の癌細胞系に対する体外での細胞毒性において、米国のフレデリックにある国立癌研究所またはインドのプーンにある細胞科学国立センターから入手した人間の癌細胞系を本研究に使用した。細胞は、組織培養フラスコ内で完全培地（使用前において、２ｍＭのグルタミン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが加えられ、ｐＨを７．４とし、ろ過により殺菌され、１０％のウシ胎児血清および１００単位／ｍｌのペニシリンが加えられているＲＰＭＩ−１６４０培地）に、二酸化炭素培養器内（ＣＯ２５％、相対湿度９０％雰囲気中３７℃）で培養した。細胞毒性の判定のために、サブコンフルエント状態の細胞をトリプシン（０．０２％ＥＤＴＡを含んだＰＢＳ中０．５％）で処理してフラスコから得た。トリパンブルーの除去によって判定し、９８％以上の生存度の細胞を、検査に使用した。細胞毒性の判定のために、必要な細胞密度を有する細胞浮遊液を、ゲンタマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を加えた完全培地において準備した。
【００３７】
試料の培地液（２×１０−２Ｍ）を、ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）を溶媒に用いて準備した。ゲンタマイシンを５０μｇ／ｍｌ含む完全培地で順次希釈し、必要な濃度の試験溶液を得た。
【００３８】
人間の癌細胞系に対する体外での細胞毒性を、９６ウェル組織培養プレートを使って判定した（Ｍｏｎｋｓ，Ａ．，Ｓｃｕｄｉｅｒｏ，Ｄ．，Ｓｋｅｈａｎ，Ｐ．，Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ  Ｒ．，Ｐａｕｌｌ，Ｋ．，Ｖｉｓｔｉｃａ，Ｄ．，Ｈｏｓｅ，Ｃ．，Ｌａｎｇｌｅｙ，ｊ．，Ｃｒｏｎｉｓｅ，Ｐ．，Ｖａｉｇｒｏ−Ｗｏｌｆｆ，Ａ．，Ｇｒａｙ−Ｇｏｏｄｒｉｃｈ，Ｍ．，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｈ，．Ｍａｙｏ，Ｊ  ａｎｄ  Ｂｏｙｄ  ｍ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，１９９１，８３，７５７−７６６）。１００μｌの細胞浮遊液を９６ウェル組織培養プレートの各ウェルに追加した。細胞を２４時間培養した。２４時間培養の後に、完全培地（１００μｌ）内の試料を、細胞浮遊液が加えられたウェルに追加した。試料を追加し、静かにトリクロロ酢酸（ＴＣＡ、５０μｌ、５０％）をすべてのウェルの中の培地上に加えた。細胞の成長が止まった後、プレートをさらに４８時間培養した（二酸化炭素培養器内において５％、相対湿度９０％雰囲気で３７℃）。プレートを４℃で１時間培養し、ウェルの底に付いた細胞を固定した。すべてのウェルの中の液体を静かにピペットで取り、廃棄した。プレートを蒸留水で５回洗浄してＴＣＡ、成長媒体、培地の低分子量代謝産物、血清蛋白等を取り除き、空気乾燥させた。細胞の成長は、スルホローダミンＢ染料で染めることによって測定した（Ｓｋｅｈａｎ他、１９９０）。吸収した染料はトリス緩衝液（１００ｍｌ、０．０１Ｍ、ｐＨ１０．４）に溶解させ、プレートを攪拌機で５分間静かに攪拌した。ＥＬＩＳＡリーダにより、光学濃度は５４０ｎｍで測定された。
【００３９】
細胞の成長は、実験セットの平均ＯＤ値から、それぞれのブランクの平均ＯＤ値を差し引くことによって算出した。試料がある場合の成長率を、試料がない場合の成長率を１００％として計算した。試料がある場合の成長阻害率を計算した。
細胞毒性：一次抗癌作用について、式ＶａおよびＶｃの化合物を評価した。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
【表２】
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【国際調査報告】
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