(57)【要約】  式(I) [式中、R2は、場合により置換されたC5-20アリール基であり；R6およびR9は独立して、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、ニトロ、Me3Snおよびハロから選択され；ここで、RおよびR’は独立して、場合により置換されたC1-12アルキル、C3-20ヘテロシクリルおよびC5-20アリール基から選択され；R7は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR’、ニトロ、Me3Snおよびハロから選択され；R”はC3-12アルキレン基であって、その鎖中に1個以上のヘテロ原子および／または芳香環を含んでもよく；Xは、O、S、またはNHから選択され；zは、2または3であり；Mは、製薬上許容される1価のカチオンであり；R2’、R6’、R7’、R9’、X’およびM’は、それぞれR2、R6、R7、R9、XおよびMと同じ群から選択され、またはMおよびM’は一緒になって製薬上許容される2価のカチオンを表してもよい]の化合物、またはその溶媒和物。
2008536905.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I:
【化１】
2008536905.tif 000072
[式中、
R2は、場合により置換されたC5-20アリール基であり；
R6およびR9は独立して、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、ニトロ、Me3Snおよびハロから選択され；
ここで、RおよびR’は独立して、場合により置換されたC1-12アルキル、C3-20ヘテロシクリルおよびC5-20アリール基から選択され；
R7は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR’、ニトロ、Me3Snおよびハロから選択され；
R”はC3-12アルキレン基であって、その鎖中に1個以上のヘテロ原子および／または芳香環を含んでもよく；
Xは、O、S、またはNHから選択され；
zは、2または3であり；
Mは、製薬上許容される1価のカチオンであり；
R2’、R6’、R7’、R9’、X’およびM’は、それぞれR2、R6、R7、R9、XおよびMと同じ群から選択され、またはMおよびM’は一緒になって製薬上許容される2価のカチオンを表してもよい]
の化合物、またはその溶媒和物。
【請求項２】
XがOである、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
R”が直鎖飽和C3-12アルキレン基を表す、請求項1または請求項2のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項４】
R9がHである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項５】
R6がHである、請求項1〜4のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項６】
R7がH、OHおよびORから選択され、ここで、Rが場合により置換されたC1-7アルキル、C3-10ヘテロシクリルおよびC5-10アリール基から選択される、請求項1〜5のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項７】
R7がOMeまたはOCH2Phである、請求項6に記載の化合物。
【請求項８】
R2が場合により置換されたC5-7アリール基である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項９】
R2が場合により置換されたフェニル基である、請求項8に記載の化合物。
【請求項１０】
両方のPBDモノマーが同一に置換されている、請求項1〜9のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１１】
MおよびM’が製薬上許容される1価のカチオンである、請求項1〜10のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１２】
MおよびM’がNa+である、請求項11に記載の化合物。
【請求項１３】
zが3である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１４】
治療の方法に使用するための、請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物および医薬品賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１６】
増殖性疾患の治療のための医薬品の製造における、請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
増殖性疾患の治療に使用するための、請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、特にC2アリール置換を有するピロロベンゾジアゼピン二量体に関する。
【背景技術】
【０００２】
いくつかのピロロベンゾジアゼピン(PBD)はDNAの特定の配列を認識して結合する能力を有する。好ましい配列はPuGPuである。最初のPBD抗腫瘍抗生物質である、アントラマイシン(anthramycin)は1965年に発見された(Leimgruberら、J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruberら、J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965))。それ以来、多くの天然のPBDが報告され、種々の類似物を合成するための10種以上の合成系路が開発された(Thurstonら、Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994))。ファミリーのメンバーには、アベイマイシン(abbeymycin)(Hochlowskiら、J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987))、チカマイシン(chicamycin)(Konishiら、J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984))、DC-81 (日本国特許第58-180 487号；Thurstonら、Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Boseら、Tetrahedron, 48, 751-758 (1992))、マゼトラマイシン(mazethramycin)(Kuminotoら、J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980))、ネオスラマイシン(neothramycin)AおよびB  (Takeuchiら、J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976))、ポロスラマイシン(porothramycin)(Tsunakawaら、J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988))、プロトラカルシン(prothracarcin)(Shimizuら、J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); LangleyおよびThurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987))、シバノマイシン(sibanomicin)(DC-102)(Haraら、J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itohら、J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988))、シビロマイシン(sibiromycin)(Leberら、J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988))およびトママイシン(tomamycin)(Arimaら、J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972))が含まれる。PBDは、一般構造：
【化１】
2008536905.tif 000003
【０００３】
を有する。
【０００４】
それらは、芳香族A環およびピロロC環の両方において、置換基の数、タイプおよび位置が異なり、また、C環の飽和度が異なる。B環において、DNAのアルキル化に関与する求電子中心であるN10-C11位に、イミン(N=C)、カルビノールアミン(NH-CH(OH))、またはカルビノールアミンメチルエーテル(NH-CH(OMe))のいずれかが存在する。公知の天然産物はすべてキラルC11a位が(S)配置であり、それにより、C環からA環の方向を見た場合に右回りのねじれを与える。このため、それらはB型DNAのマイナーグルーブと同じらせん構造を取るのに適切な三次元形状を有し、それにより、結合部位にぴったりと適合する(Kohn, 「抗生物質III」(Antibiotics III), Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); HurleyおよびNeedham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986))。それらは、そのマイナーグルーブ中に付加物を形成する能力により、DNAプロセシングに介入することが可能であり、そのため抗腫瘍薬として使用される。
【０００５】
本発明者らは、先にWO 2004/043963において、C2位にアリール基を有する細胞毒性化合物、たとえば、
【化２】
2008536905.tif 000004
【０００６】
を開示した。
【０００７】
また、本発明者らは、先に同時係属PCT出願、PCT/GB2005/000768 (WO 2005/085251として公開)において、
【化３】
2008536905.tif 000005
【０００８】
などの、C2アリール置換基を有する二量体PBD化合物を開示した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者らは、ZC-207などの化合物の溶解度の問題に直面していたが、それはこれらの化合物の異なる形を使用することにより解決した。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、式I:
【化４】
2008536905.tif 000006
【００１１】
[式中、
R2は、場合により置換されたC5-20アリール基であり；
R6およびR9は独立して、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、ニトロ、Me3Snおよびハロから選択され；
ここで、RおよびR’は独立して、場合により置換されたC1-12アルキル、C3-20ヘテロシクリルおよびC5-20アリール基から選択され；
R7は、H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR’、ニトロ、Me3Snおよびハロから選択され；
R”はC3-12アルキレン基であって、その鎖中に1個以上のヘテロ原子、たとえば、O、S、NH、および／または芳香環、たとえばベンゼンまたはピリジンを含んでもよく；
Xは、O、S、またはNHから選択され；
zは、2または3であり；
Mは、製薬上許容される1価のカチオンであり；
R2’、R6’、R7’、R9’、X’およびM’は、それぞれR2、R6、R7、R9、XおよびMと同じ群から選択され、またはMおよびM’は一緒になって製薬上許容される2価のカチオンを表してもよい]
の化合物、またはその溶媒和物を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
イミン結合を有するピロロベンゾジアゼピンは水中でジカルビノールアミン型に変換することが知られており、単離されたピロロベンゾジアゼピンはしばしばイミン、モノカルビノールアミンおよびジカルビノールアミン型の混合物として存在する。さらに、化合物がこれらの3つの形の混合物を有する固体として単離された場合、それらの間のバランスは時間と共に変化する。これは化合物の投与に問題となるわけではないが、一定量の粉末中の活性物質の量を正確に評価することが困難になる可能性がある。本発明の化合物は、活性を維持しながら、少なくともある程度はこの問題を克服し、そのため、医薬品の製剤に適している。
【００１３】
二量体ピロロベンゾジアゼピンは、マイナーグルーブにおいてDNAに架橋する能力を有し、そのため細胞毒性がより強いという点で、単量体ピロロベンゾジアゼピンよりも有利である。
【００１４】
本発明の別の態様は、治療の方法（特に、増殖性疾患の治療）に使用する化合物、前記化合物を含む医薬組成物、および増殖性疾患の治療のための医薬品の製造におけるそれらの使用に関する。
【００１５】
定義
置換基
本明細書において使用する「場合により置換された」という用語は、無置換であっても置換されていてもよい親基を意味する。
【００１６】
他に特定されない限り、本明細書において使用する「置換された」という用語は、1個以上の置換基を有する親基を意味する。本明細書において、「置換基」という用語は通常使用される意味で使用され、親基に共有結合により結合する、または適切な場合には縮合する化学部分を指す。非常にさまざまな置換基が公知であり、それらの形成および種々の親基への導入の方法もまた公知である。
【００１７】
下に置換基の例をより詳細に記載する。
【００１８】
C1-12アルキル：本明細書において使用する「C1-12アルキル」という用語は、1〜12個の炭素原子を有し、脂肪族または脂環式であってよく、飽和または不飽和（たとえば、部分的不飽和、完全な不飽和）であってよい炭化水素化合物の炭素原子から1個の水素原子を除去することにより得られる1価の基を意味する。したがって、「アルキル」という用語は、下で論じるアルケニル、アルキニル、シクロアルキル等のサブクラスを含む。
【００１９】
飽和アルキル基の例には、メチル(C1)、エチル(C2)、プロピル(C3)、ブチル(C4)、ペンチル(C5)、ヘキシル(C6)およびヘプチル(C7)が含まれるが、これらに限定されない。
【００２０】
飽和直鎖アルキル基の例には、メチル(C1)、エチル(C2)、n-プロピル(C3)、n-ブチル(C4)、n-ペンチル（アミル）(C5)、n-ヘキシル(C6)およびn-ヘプチル(C7)が含まれるが、これらに限定されない。
【００２１】
飽和分枝鎖アルキル基の例には、イソプロピル(C3)、イソブチル(C4)、sec-ブチル(C4)、tert-ブチル(C4)、イソペンチル(C5)、およびネオペンチル(C5)が含まれる。
【００２２】
C2-12アルケニル：本明細書において使用する「C2-12アルケニル」という用語は、1個以上の炭素-炭素二重結合を有するアルキル基を意味する。
【００２３】
不飽和アルケニル基の例には、エテニル（ビニル、-CH=CH2）、1-プロペニル（-CH=CH-CH3）、2-プロペニル（アリル、-CH-CH=CH2）、イソプロペニル（1-メチルビニル、-C(CH3)=CH2）、ブテニル(C4)、ペンテニル(C5)、およびヘキセニル(C6)が含まれるが、これらに限定されない。
【００２４】
C2-12アルキニル：本明細書において使用する「C2-12アルキニル」という用語は、1個以上の炭素-炭素三重結合を有するアルキル基を意味する。
【００２５】
不飽和アルキニル基の例には、エチニル（-C≡CH）および2-プロピニル（プロパルギル、-CH2-C≡CH）が含まれるが、これらに限定されない。
【００２６】
C3-12シクロアルキル：本明細書において使用する「C3-12シクロアルキル」という用語は、シクリル基でもあるアルキル基、すなわち、環状炭化水素（炭素環式）化合物の脂環式環原子から1個の水素原子を除去することにより得られる、3〜7個の環原子を含む3〜7個の炭素原子を有する1価の基を意味する。
【００２７】
シクロアルキル基の例には下記の化合物から誘導されるものが含まれるが、それらに限定されない。
【００２８】
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン(C3)、シクロブタン(C4)、シクロペンタン(C5)、シクロヘキサン(C6)、シクロヘプタン(C7)、メチルシクロプロパン(C4)、ジメチルシクロプロパン(C5)、メチルシクロブタン(C5)、ジメチルシクロブタン(C6)、メチルシクロペンタン(C6)、ジメチルシクロペンタン(C7)およびメチルシクロヘキサン(C7)；
不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン(C3)、シクロブテン(C4)、シクロペンテン(C5)、シクロヘキセン(C6)、メチルシクロプロペン(C4)、ジメチルシクロプロペン(C5)、メチルシクロブテン(C5)、ジメチルシクロブテン(C6)、メチルシクロペンテン(C6)、ジメチルシクロペンテン(C7)およびメチルシクロヘキセン(C7)；および
飽和多環式炭化水素化合物：
ノルカラン(C7)、ノルピナン(C7)、ノルボルナン(C7)。
【００２９】
C3-20ヘテロシクリル：本明細書において使用する「C3-20ヘテロシクリル」という用語は、複素環化合物の環原子から1個の水素原子を除去することにより得られる、3〜20個の環原子を有し、そのうちの1〜10個は環ヘテロ原子である1価の基を意味する。好ましくは、それぞれの環は3〜7個の環原子を有し、そのうち1〜4個が環ヘテロ原子である。
【００３０】
この文脈において、接頭辞（たとえば、C3-20、C3-7、C5-6等）は、炭素原子であるかヘテロ原子であるかにかかわらず、環原子の数、または環原子の数の範囲を意味する。たとえば、本明細書において使用する「C5-6ヘテロシクリル」という用語は5または6個の環原子を有するヘテロシクリル基を意味する。
【００３１】
単環式ヘテロシクリル基の例には下記の化合物から誘導されるものが含まれるが、それらに限定されない。  
N1: アジリジン(C3)、アゼチジン(C4)、ピロリジン（テトラヒドロピロール）(C5)、ピロリン（たとえば、3-ピロリン、2,5-ジヒドロピロール）(C5)、2H-ピロールまたは3H-ピロール（イソピロール、イソアゾール）(C5)、ピペリジン(C6)、ジヒドロピリジン(C6)、テトラヒドロピリジン(C6)、アゼピン(C7)；
O1: オキシラン(C3)、オキセタン(C4)、オキソラン（テトラヒドロフラン）(C5)、オキソール（ジヒドロフラン）(C5)、オキサン（テトラヒドロピラン）(C6)、ジヒドロピラン(C6)、ピラン(C6)、オキセピン(C7)；
S1: チイラン(C3)、チエタン(C4)、チオラン（テトラヒドロチオフェン）(C5)、チアン（テトラヒドロチオピラン）(C6)、チエパン(C7)；
O2: ジオキソラン(C5)、ジオキサン(C6)、およびジオキセパン(C7)；
O3: トリオキサン(C6)；
N2: イミダゾリジン(C5)、ピラゾリジン（ジアゾリジン）(C5)、イミダゾリン(C5)、ピラゾリン（ジヒドロピラゾール）(C5)、ピペラジン(C6)；
N1O1: テトラヒドロオキサゾール(C5)、ジヒドロオキサゾール(C5)、テトラヒドロイソキサゾール(C5)、ジヒドロイソキサゾール(C5)、モルホリン(C6)、テトラヒドロオキサジン(C6)、ジヒドロオキサジン(C6)、オキサジン(C6)；
N1S1: チアゾリン(C5)、チアゾリジン(C5)、チオモルホリン(C6)；
N2O1: オキサジアジン(C6)；
O1S1: オキサチオール(C6)およびオキサチアン（チオキサン）(C6)；および
N1O1S1: オキサチアジン(C6)。
【００３２】
置換単環式ヘテロシクリル基の例には、環状の形態のサッカリド、たとえば、アラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノース、およびキシロフラノースなどのフラノース(C5)、およびアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、グロピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース、およびタロピラノースなどのピラノース(C6)から誘導されるものが含まれる。
【００３３】
C5-20アリール：本明細書において使用する「C5-20アリール」という用語は、芳香族化合物の芳香環原子から1個の水素原子を除去して得られる、3〜20個の環原子を有する1価の基を意味する。好ましくは、それぞれの環は5〜7個の環原子を有する。
【００３４】
この文脈において、接頭辞（たとえば、C3-20、C3-7、C5-6等）は、炭素原子であるかヘテロ原子であるかにかかわらず、環原子の数、または環原子の数の範囲を意味する。たとえば、本明細書において使用する「C5-6アリール」という用語は5または6個の環原子を有するアリール基を意味する。
【００３５】
環原子は、「カルボアリール基」における場合のように、すべて炭素原子であってよい。カルボアリール基の例には、ベンゼン（すなわち、フェニル）(C6)、ナフタレン(C10)、アズレン(C10)、アントラセン(C14)、フェナントレン(C14)、ナフタセン(C18)、およびピレン(C16)から誘導されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【００３６】
少なくとも1個の環が芳香環である縮合環を含むアリール基の例には、インダン（たとえば、2,3-ジヒドロ-1H-インデン）(C9)、インデン(C9)、イソインデン(C9)、テトラリン（1,2,3,4-テトラヒドロナフタレン）(C10)、アセナフテン(C12)、フルオレン(C13)、フェナレン(C13)、アセフェナントレン(C15)、およびアセアントレン(C16)から誘導される基が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
あるいは、環原子は、「ヘテロアリール基」における場合のように、1個以上のヘテロ原子を含んでもよい。単環式ヘテロアリール基の例には、下記の化合物から誘導されるものが含まれるが、それらに限定されない。  
N1: ピロール（アゾール）(C5)、ピリジン（アジン）(C6)；
O1: フラン（オキソール）(C5)；
S1: チオフェン（チオール）(C5)、；
N1O1: オキサゾール(C5)、イソキサゾール(C5)、イソキサジン(C6)；
N2O1: オキサジアゾール（フラザン）(C5)；
N3O1: オキサトリアゾール(C5)；
N1S1: チアゾール(C5)、イソチアゾール(C5)；
N2: イミダゾール（1,3-ジアゾール）(C5)、ピラゾール（1,2-ジアゾール）(C5)、ピリダジン（1,2-ジアジン）(C6)、ピリミジン（1,3-ジアジン）(C6)（たとえば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（1,4-ジアジン）(C6)；
N3: トリアゾール(C5)、トリアジン(C6)；および
N4: テトラゾール(C5)。
【００３８】
縮合環を含むヘテロアリールの例には、下記のものが含まれるが、それらに限定されない。  
ベンゾフラン(O1)、イソベンゾフラン(O1)、インドール(N1)、イソインドール(N1)、インドリジン(N1)、インドリン(N1)、イソインドリン(N1)、プリン(N4)（たとえば、アデニン、グアニン）、ベンズイミダゾール(N2)、インダゾール(N2)、ベンズオキサゾール(N1O1)、ベンズイソキサゾール(N1O1)、ベンゾジオキソール(O2)、ベンゾフラザン(N2O1)、ベンゾトリアゾール(N3)、ベンゾチオフラン(S1)、ベンゾチアゾール(N1S1)、ベンゾチアジアゾール(N2S)から誘導されるC9（2個の縮合環を有する）；
クロメン(O1)、イソクロメン(O1)、クロマン(O1)、イソクロマン(O1)、ベンゾジオキサン(O2)、キノリン(N1)、イソキノリン(N1)、キノリジン(N1)、ベンズオキサジン(N1O1)、ベンゾジアジン(N2)、ピリドピリジン(N2)、キノキサリン(N2)、キナゾリン(N2)、シンノリン(N2)、フタラジン(N2)、ナフチリジン(N2)、プテリジン(N4) から誘導されるC10（2個の縮合環を有する）；
ベンゾジアゼピン(N2)から誘導されるC11（2個の縮合環を有する）；
カルバゾール(N1)、ジベンゾフラン(O1)、ジベンゾチオフェン(S1)、カルボリン(N2)、ペリミジン(N2)、ピリドインドール(N2) から誘導されるC13（3個の縮合環を有する）；および
アクリジン(N1)、キサンテン(O1)、チオキサンテン(S1)、オキサントレン(O2)、フェノキサチイン(O1S1)、フェナジン(N2)、フェノキサジン(N1O1)、フェノチアジン(N1S1)、チアントレン(S2)、フェナントリジン(N1)、フェナントロリン(N2)、フェナジン(N2) から誘導されるC14（3個の縮合環を有する）。
【００３９】
上記の基は、単独であっても、他の置換基の一部である場合でも、場合によりそれ自体が、それら自体および下に挙げる別の置換基から選択される1個以上の基により置換されていてもよい。
【００４０】
ハロ：-F、-Cl、-Br、および-I。  
ヒドロキシ：-OH。  
エーテル：-OR、ここで、Rはエーテル置換基、たとえば、C1-7アルキル基（C1-7アルコキシ基とも呼ぶ、下記）、C3-20ヘテロシクリル基（C3-20ヘテロシクリルオキシ基とも呼ぶ）、またはC5-20アリール基（C5-20アリールオキシ基とも呼ぶ）であり、好ましくはC1-7アルキル基である。
【００４１】
アルコキシ：-OR、ここで、Rはアルキル基、たとえば、C1-7アルキル基である。C1-7アルコキシ基の例には、-OMe（メトキシ）、-OEt（エトキシ）、-O(nPr)（n-プロポキシ）、-O(iPr)（イソプロポキシ）、-O(nBu)（n-ブトキシ）、-O(sBu)（sec-ブトキシ）、-O(iBu)（イソブトキシ）、およびO(tBu)（tert-ブトキシ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４２】
アセタール：-CH(OR1)(OR2)、ここで、R1およびR2は独立してアセタール置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基であり、または、「環状」アセタール基の場合には、R1およびR2はそれらが結合する2個の酸素原子およびそれらが結合する炭素原子と一緒になって4〜8個の環原子を有する複素環を形成する。アセタール基の例には、-CH(OMe)2、-CH(OEt)2、および-CH(OMe)(OEt)が含まれるが、これらに限定されない。
【００４３】
ヘミアセタール：-CH(OH)(OR1)、ここで、R1はヘミアセタール置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。ヘミアセタール基の例には、-CH(OH)(OMe)および-CH(OH)(OEt)が含まれるが、これらに限定されない。
【００４４】
ケタール：-CR(OR1)(OR2)、ここで、R1およびR2はアセタールについて定義した通りであり、Rは水素以外のケタール置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。ケタール基の例には、-C(Me)(OMe)2、-C(Me)(OEt)2、-C(Me)(OMe)(OEt)、-C(Et)(OMe)2、-C(Et)(OEt)2、および-C(Et)(OMe)(OEt)が含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
ヘミケタール：-CR(OH)(OR1)、ここで、R1はヘミアセタールについて定義した通りであり、Rは水素以外のヘミケタール置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。ヘミアセタール基の例には、-C(Me)(OH)(OMe)、-C(Et)(OH)(OMe)、-C(Me)(OH)(OEt)、および-C(Et)(OH)(OEt)が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
オキソ（ケト、-オン）：=O。  
チオン（チオケトン）：=S。  
イミノ（イミン）：=NR、ここで、Rはイミノ置換基、たとえば、水素、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくは水素またはC1-7アルキル基である。エステル基の例には、=NH、=NMe、=NEt、および=NPhが含まれるが、これらに限定されない。  
ホルミル（カルバルデヒド、カルボキシアルデヒド）：-C(=O)H。
【００４７】
アシル（ケト）：-C(=O)R、ここで、Rはアシル置換基、たとえば、C1-7アルキル基（C1-7アルキルアシルまたはC1-7アルカノイルとも呼ぶ）、C3-20ヘテロシクリル基（C3-20ヘテロシクリルアシルとも呼ぶ）、またはC5-20アリール基（C5-20アリールアシルとも呼ぶ）であり、好ましくはC1-7アルキル基である。アシル基の例には、-C(=O)CH3（アセチル）、-C(=O)CH2CH3（プロピオニル）、-C(=O)C(CH3)3（t-ブチリル）および-C(=O)Ph（ベンゾイル、フェノン）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４８】
カルボキシ（カルボン酸）：-C(=O)OH。  
チオカルボキシ（チオカルボン酸）：-C(=S)SH。  
チオロカルボキシ（チオロカルボン酸）：-C(=O)SH。  
チオノカルボキシ（チオノカルボン酸）：-C(=S)OH。  
イミド酸：-C(=NH)OH。  
ヒドロキサム酸：-C(=NOH)OH。
【００４９】
エステル（カルボキシレート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：-C(=O)OR、ここで、Rはエステル置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。エステル基の例には、-C(=O)OCH3、-C(=O)OCH2CH3、-C(=O)OC(CH3)3、および-C(=O)OPhが含まれるが、これらに限定されない。
【００５０】
アシルオキシ（逆エステル）：-OC(=O)R、ここで、Rはアシルオキシ置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。アシルオキシ基の例には、-OC(=O)CH3（アセトキシ）、-OC(=O)CH2CH3、-OC(=O)C(CH3)3、-OC(=O)Ph、および-OC(=O)CH2Phが含まれるが、これらに限定されない。
【００５１】
オキシカルボニルオキシ：-OC(=O)OR、ここで、Rはエステル置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。エステル基の例には、-OC(=O)OCH3、-OC(=O)OCH2CH3、-OC(=O)OC(CH3)3、および-OC(=O)OPhが含まれるが、これらに限定されない。
【００５２】
アミノ：-NR1R2、ここで、R1およびR2は独立してアミノ置換基、たとえば、水素、C1-7アルキル基（C1-7アルキルアミノまたはジ-C1-7アルキルアミノとも呼ぶ）、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはHまたはC1-7アルキル基であり、または「環状」アミノ基の場合には、R1およびR2はそれらが結合する窒素原子と一緒になって4〜8個の環原子を有する複素環を形成する。アミノ基は、第一級(-NH2)、第二級(-NHR1)、または第三級(-NHR1R2)であってよく、また、カチオン型において、第四級(-+NR1R2R3)であってよい。アミノ基の例には、-NH2、-NHCH3、-NHC(CH3)2、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、および-NHPhが含まれるが、これらに限定されない。環状アミノ基の例には、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、およびチオモルホリノが含まれるが、これらに限定されない。
【００５３】
アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキシアミド）：-C(=O)NR1R2、ここで、R1およびR2は独立して、アミノ基について定義した通りのアミノ置換基である。アミド基の例には、-C(=O)NH2、-C(=O)NHCH3、-C(=O)N(CH3)2、-C(=O)NHCH2CH3、および-C(=O)N(CH2CH3)2、ならびに、たとえば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル、およびピペラジノカルボニルの場合のような、R1およびR2がそれらが結合する窒素原子と一緒になって複素環構造を形成するアミド基が含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
チオアミド（チオカルバミル）：-C(=S)NR1R2、ここで、R1およびR2は独立して、アミノ基について定義した通りのアミノ置換基である。アミド基の例には、-C(=S)NH2、-C(=S)NHCH3、-C(=S)N(CH3)2、および-C(=S)NHCH2CH3が含まれるが、これらに限定されない。
【００５５】
アシルアミド（アシルアミノ）：-NR1C(=O)R2、ここで、R1はアミド置換基、たとえば、水素、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくは水素またはC1-7アルキル基であり、R2はアシル置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくは水素またはC1-7アルキル基である。アシルアミド基の例には、-NHC(=O)CH3、-NHC(=O)CH2CH3、および-NHC(=O)Phが含まれるが、これらに限定されない。R1およびR2は一緒になって、たとえばスクシンイミジル、マレイミジル、およびフタルイミジルの場合のような環構造を形成してもよい。
【化５】
2008536905.tif 000007
【００５６】
アミノカルボニルオキシ：-OC(=O)NR1R2、ここで、R1およびR2は独立して、アミノ基について定義した通りのアミノ置換基である。アミノカルボニルオキシ基の例には、-OC(=O)NH2、-OC(=O)NHMe、-OC(=O)NMe2、および-OC(=O)NEt2が含まれるが、これらに限定されない。
【００５７】
ウレイド：-N(R1)CONR2R3、ここで、R2およびR3は独立して、アミノ基について定義した通りのアミノ置換基であり、R1はウレイド置換基、たとえば、水素、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくは水素またはC1-7アルキル基である。ウレイド基の例には、-NHCONH2、-NHCONHMe、-NHCONHEt、-NHCONMe2、-NHCONEt2、-NMeCONH2、-NMeCONHMe、-NMeCONHEt、-NMeCONMe2、および-NMeCONEt2が含まれるが、これらに限定されない。
【００５８】
グアニジノ：-NH-C(=NH)NH2。  
テトラゾリル：4個の窒素原子および1個の炭素原子を有する5員芳香環、
【化６】
2008536905.tif 000008
【００５９】
イミノ：=NR、ここで、Rはイミノ置換基、たとえば、水素、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはHまたはC1-7アルキル基である。イミノ基の例には、=NH、=NMe、および=NEtが含まれるが、これらに限定されない。
【００６０】
アミジン（アミジノ）：-C(=NR)NR2、ここで、Rはアミジン置換基、たとえば、水素、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはHまたはC1-7アルキル基である。アミジン基の例には、-C(=NH)NH2、-C(=NH)NMe2、および-C(=NMe)NMe2が含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
ニトロ：-NO2。  
ニトロソ：-NO。  
アジド：-N3。  
シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：-CN。  
イソシアノ：-NC。  
シアナート：-OCN。  
イソシアナート：-NCO。  
チオシアノ（チオシアナート）：-SCN。  
イソチオシアノ（イソチオシアナート）：-NCS。  
スルフヒドリル（チオール、メルカプト）：-SH。
【００６２】
チオエーテル（スルフィド）：-SR、ここで、Rはチオエーテル置換基、たとえば、C1-7アルキル基（C1-7アルキルチオ基とも呼ぶ）、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。C1-7アルキルチオ基の例には、-SCH3および-SCH2CH3が含まれるが、これらに限定されない。
【００６３】
ジスルフィド：-SS-R、ここで、Rはジスルフィド置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基（本明細書において、C1-7アルキルジスルフィドとも呼ぶ）である。C1-7アルキルジスルフィド基の例には、-SSCH3および-SSCH2CH3が含まれるが、これらに限定されない。
【００６４】
スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：-S(=O)R、ここで、Rはスルフィン置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルフィン基の例には、-S(=O)CH3および-S(=O)CH2CH3が含まれるが、これらに限定されない。
【００６５】
スルホン（スルホニル）：-S(=O)2R、ここで、Rはスルホン置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基であり、たとえば、フッ素化または過フッ素化C1-7アルキル基を含む。スルホン基の例には、-S(=O)2CH3（メンタンスルホニル、メシル）、-S(=O)2CF3（トリフリル）、-S(=O)2CH2CH3（エシル）、-S(=O)2C4F9（ノナフリル）、-S(=O)2CH2CF3（トレシル）、-S(=O)2CH2CH2NH2（タウリル）、-S(=O)2Ph（フェニルスルホニル、ベシル）、4-メチルフェニルスルホニル（トシル）、4-クロロフェニルスルホニル（クロシル）、4-ブロモフェニルスルホニル（ブロシル）、4-ニトロフェニル（ノシル）、2-ナフタレンスルホネート（ナプシル）、および5-ジメチルアミノナフタレン-1-イルスルホネート（ダンシル）が含まれるが、これらに限定されない。
【００６６】
スルフィン酸（スルフィノ）：-S(=O)OH、-SO2H。  
スルホン酸（スルホ）：-S(=O)2OH、-SO3H。  
スルフィネート（スルフィン酸エステル）：-S(=O)OR、ここで、Rはスルフィネート置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルフィネート基の例には、-S(=O)OCH3（メトキシスルフィニル；メチルスルフィネート）および-S(=O)OCH2CH3（エトキシスルフィニル；エチルスルフィネート）が含まれるが、これらに限定されない。
【００６７】
スルホネート（スルホン酸エステル）：-S(=O)2OR、ここで、Rはスルホネート置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルホネート基の例には、-S(=O)2OCH3（メトキシスルホニル；メチルスルホネート）および-S(=O)2OCH2CH3（エトキシスルホニル；エチルスルホネート）が含まれるが、これらに限定されない。
【００６８】
スルフィニルオキシ：-OS(=O)R、ここで、Rはスルフィニルオキシ置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルフィニルオキシ基の例には、-OS(=O)CH3および-OS(=O)CH2CH3が含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
スルホニルオキシ：-OS(=O)2R、ここで、Rはスルホニルオキシ置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルホニルオキシ基の例には、-OS(=O)2CH3（メシレート）および-OS(=O)2CH2CH3（エシレート）が含まれるが、これらに限定されない。
【００７０】
スルフェート：-OS(=O)2OR、ここで、Rはスルフェート置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルフェート基の例には、-OS(=O)2OCH3および-SO(=O)2OCH2CH3が含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
スルファミル（スルファモイル；スルフィン酸アミド；スルフィンアミド）：-S(=O)NR1R2、ここで、R1およびR2は独立して、アミノ基について定義した通りのアミノ置換基である。スルファミル基の例には、-S(=O)NH2、-S(=O)NH(CH3)、-S(=O)N(CH3)2、-S(=O)NH(CH2CH3)、-S(=O)N(CH2CH3)2、および-S(=O)NHPhが含まれるが、これらに限定されない。
【００７２】
スルホンアミド（スルフィナモイル；スルホン酸アミド；スルホンアミド）：-S(=O)2NR1R2、ここで、R1およびR2は独立して、アミノ基について定義した通りのアミノ置換基である。スルホンアミド基の例には、-S(=O)2NH2、-S(=O)2NH(CH3)、-S(=O)2N(CH3)2、-S(=O)2NH(CH2CH3)、-S(=O)2N(CH2CH3)2、および-S(=O)2NHPhが含まれるが、これらに限定されない。
【００７３】
スルファミノ：-NR1S(=O)2OH、ここで、R1はアミノ基について定義した通りのアミノ置換基である。スルファミノ基の例には、-NHS(=O)2OHおよび-N(CH3)S(=O)2OHが含まれるが、これらに限定されない。
【００７４】
スルホンアミノ：-NR1S(=O)2R、ここで、R1はアミノ基について定義した通りのアミノ置換基であり、Rはスルホンアミノ置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルホンアミノ基の例には、-NHS(=O)2CH3および-N(CH3)S(=O)2C6H5が含まれるが、これらに限定されない。
【００７５】
スルフィンアミノ：-NR1S(=O)R、ここで、R1はアミノ基について定義した通りのアミノ置換基であり、Rはスルフィンアミノ置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基である。スルフィンアミノ基の例には、-NHS(=O)CH3および-N(CH3)S(=O)C6H5が含まれるが、これらに限定されない。
【００７６】
ホスフィノ（ホスフィン）：-PR2、ここで、Rはホスフィノ置換基、たとえば、H、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはH、C1-7アルキル基、またはC5-20アリール基である。ホスフィノ基の例には、-PH2、-P(CH3)2、-P(CH2CH3)2、-P(t-Bu)2、および-P(Ph)2が含まれるが、これらに限定されない。
【００７７】
ホスホ：-P(=O)2。  
ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：-P(=O)R2、ここで、Rはホスフィニル置換基、たとえば、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはC1-7アルキル基またはC5-20アリール基である。ホスフィニル基の例には、-P(=O)(CH3)2、-P(=O)(CH2CH3)2、-P(=O)(t-Bu)2、および-P(=O)(Ph)2が含まれるが、これらに限定されない。
【００７８】
ホスホン酸（ホスホノ）：-P(=O)(OH)2。  
ホスホネート（ホスホノエステル）：-P(=O)(OR)2、ここで、Rはホスホネート置換基、たとえば、H、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはH、C1-7アルキル基、またはC5-20アリール基である。ホスホネート基の例には、-P(=O)(OCH3)2、-P(=O)(OCH2CH3)2、P(=O)(O-t-Bu)2、および-P(=O)(OPh)2が含まれるが、これらに限定されない。
【００７９】
リン酸（ホスホノオキシ）：-OP(=O)(OH)2。  
ホスフェート（ホスホノオキシエステル）：-OP(=O)(OR)2、ここで、Rはホスフェート置換基、たとえば、H、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはH、C1-7アルキル基またはC5-20アリール基である。ホスフェート基の例には、-OP(=O)(OCH3)2、-OP(=O)(OCH2CH3)2、-OP(=O)(O-t-Bu)2、および-OP(=O)(OPh)2が含まれるが、これらに限定されない。
【００８０】
亜リン酸：-OP(OH)2。  
ホスファイト：-OP(OR)2、ここで、Rはホスファイト置換基、たとえば、H、C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはH、C1-7アルキル基、またはC5-20アリール基である。ホスファイト基の例には、-OP(OCH3)2、-OP(OCH2CH3)2、-OP(O-t-Bu)2、および-OP(OPh)2が含まれるが、これらに限定されない。
【００８１】
ホスホルアミダイト：-OP(OR1)-NR22、ここで、R1およびR2はホスホルアミダイト置換基、たとえば、H、（場合により置換された）C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはH、C1-7アルキル基、またはC5-20アリール基である。ホスホルアミダイト基の例には、-OP(OCH2CH3)-N(CH3)2、-OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2、および-OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2が含まれるが、これらに限定されない。
【００８２】
ホスホルアミデート：-OP(=O)(OR1)-NR22、ここで、R1およびR2はホスホルアミデート置換基、たとえば、H、（場合により置換された）C1-7アルキル基、C3-20ヘテロシクリル基、またはC5-20アリール基であり、好ましくはH、C1-7アルキル基、またはC5-20アリール基である。ホスホルアミデート基の例には、-OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2、-OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2、および-OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2が含まれるが、これらに限定されない。
【００８３】
ビスオキシアルキレン：-O-(CH2)n-O-、ここで、n=1〜3であり、これは隣接する原子に結合する。ビスオキシアルキレン基の例には、-O-CH2-O-が含まれるが、これらに限定されない。
【００８４】
アルキレン
C3-12アルキレン：本明細書において使用する「C3-12アルキレン」という用語は、3〜12個の炭素原子を有し（他に特定されない限り）、脂肪族または脂環式であってよく、飽和、部分的不飽和、または完全に不飽和であってよい炭化水素化合物の、どちらも同じ炭素原子から、または2個の異なる炭素原子のそれぞれから、2個の水素原子を除去することにより得られる二座の基を意味する。したがって、「アルキレン」という用語は、下で論じるアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン等のサブクラスを含む。
【００８５】
直鎖飽和C3-12アルキレン基の例には、-(CH2)n-（ここで、nは3〜12の整数である）、たとえば、-CH2CH2CH2-（プロピレン）、-CH2CH2CH2CH2-（ブチレン）、-CH2CH2CH2CH2CH2-（ペンチレン）および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-（へプチレン）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８６】
分枝鎖飽和C3-12アルキレン基の例には、-CH(CH3)CH2-、-CH(CH3)CH2CH2-、-CH(CH3)CH2CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2CH2-、-CH(CH2CH3)-、-CH(CH2CH3)CH2-、および-CH2CH(CH2CH3)CH2-が含まれるが、これらに限定されない。
【００８７】
直鎖部分的不飽和C3-12アルキレン基（C3-12アルケニレンおよびアルキニレン基）の例には、-CH=CH-CH2-、-CH2-CH=CH2-、-CH=CH-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-CH2-CH2-、-CH=CH-CH=CH-、-CH=CH-CH=CH-CH2-、-CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-CH=CH-、-CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-、および-CH2-C≡C-CH2-が含まれるが、これらに限定されない。
【００８８】
分枝鎖部分的不飽和C3-12アルキレン基（C3-12アルケニレンおよびアルキニレン基）の例には、-C(CH3)=CH-、-C(CH3)=CH-CH2-、-CH=CH-CH(CH3)-、および-C≡C-CH(CH3)-が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
脂環式飽和C3-12アルキレン基（C3-12シクロアルキレン）の例には、シクロペンチレン（たとえば、シクロペンタ-1,3-イレン）およびシクロヘキシレン（たとえば、シクロヘキサ-1,4-イレン）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９０】
脂環式部分的不飽和C3-12アルキレン基（C3-12シクロアルキレン）の例には、シクロペンテニレン（たとえば、4-シクロペンテン-1,3-イレン）、シクロヘキセニレン（たとえば、2-シクロヘキセン-1,4-イレン；3-シクロヘキセン-1,2-イレン；2,5-シクロヘキサジエン-1,4-イレン）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９１】
製薬上許容されるカチオン
製薬上許容される1価および2価のカチオンの例は、Bergeら、J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)に論じられており、この文献を参照により本明細書に組み入れる。
【００９２】
製薬上許容されるカチオンは無機または有機である。
【００９３】
製薬上許容される1価の無機カチオンの例には、Na+およびK+などのアルカリ金属イオンが含まれるが、これらに限定されない。製薬上許容される2価の無機カチオンの例には、Ca2+およびMg2+などのアルカリ土類金属カチオンが含まれるが、これらに限定されない。製薬上許容される有機カチオンの例には、アンモニウムイオン（すなわち、NH4+）および置換アンモニウムイオン（たとえば、NH3R+、NH2R2+、NHR3+、NR4+）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミン、ならびにリシンおよびアルギニンなどのアミノ酸から誘導されるものである。一般的な第四アンモニウムイオンはN(CH3)4+である。
【００９４】
増殖性疾患
当業者は、候補の化合物がある特定の細胞型の増殖性の状態を治療するかどうかを容易に決定することができる。たとえば、特定の化合物により提供される活性を評価するために便利に使用することができるアッセイが下記の実施例に記載されている。
【００９５】
「増殖性疾患」という用語は、in vitroまたはin vivoにおける、新生物または過形成成長などの望まれない過剰なまたは異常な細胞の、望まれないまたは制御されない細胞増殖を意味する。
【００９６】
増殖性の状態の例には、新生物および腫瘍（たとえば、組織球腫、神経膠腫、星状細胞種、骨腫）、癌（たとえば、肺癌、小細胞肺癌、消化管癌、腸癌、大腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、黒色腫）、白血病、乾癬、骨疾患、繊維増殖性疾患（たとえば、結合組織の）、およびアテローム性動脈硬化を含むがこれらに限定されない、良性、前癌状態、および悪性の細胞増殖が含まれるが、これらに限定されない。
【００９７】
肺、消化管（たとえば、腸、大腸を含む）、乳（乳房）、卵巣、前立腺、肝臓（肝）、腎臓（腎）、膀胱、膵臓、脳、および皮膚を含むがこれらに限定されないすべての型の細胞を治療することができる。
【００９８】
治療の方法
上記のように、本発明は式Iの化合物の治療の方法への使用を提供する。また、本発明は、治療を必要とする被験体に治療上有効な量の式Iの化合物を、好ましくは医薬組成物の形で投与することを含む治療の方法をも提供する。「治療上有効な量」という用語は、患者に利益を与えるのに十分な量である。前記の利益は少なくとも1つの症状の少なくとも緩和である。投与される実際の量、および投与の速度および時間過程は治療されるものの性質および重篤度に依存する。治療の処方、たとえば投与量の決定は医師の責任の範囲である。
【００９９】
化合物は、治療される状態に応じて、単独で投与してもよいし、他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続して投与してもよい。治療および療法の例には、化学療法（たとえば薬物を含む活性物質の投与）；手術；および放射線療法が含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
本発明の、および本発明に従って使用するための医薬組成物は、活性成分、すなわち式Iの化合物に加えて、製薬上許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤または他の当業者に公知の物質を含むことができる。前記の物質は無毒でなければならず、また活性成分の効果を妨害してはならない。担体および他の物質の正確な性質は投与経路に依存する。投与経路は、経口、またはたとえば皮膚、皮下、もしくは静脈内注射であってよい。
【０１０１】
経口投与のための医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末または液体の形であってよい。錠剤は固体の担体または補助剤を含んでもよい。液体の医薬組成物は一般的に、水、石油、動物もしくは植物油、鉱油または合成油などの液体の担体を含む。生理食塩水、デキストロースもしくは他のサッカリド溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールなどのグリコールを含んでもよい。カプセルは、ゼラチンなどの固体の担体を含んでもよい。
【０１０２】
静脈内、皮膚または皮下注射、または苦痛の部位への注射のために、活性成分を、発熱物質を含まず、好適なpH、等張性および安定性を有する非経口投与に許容される水溶液の形にする。当業者は、たとえば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、乳酸リンゲル液などの等張媒体を用いて好適な溶液を調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤および／または他の添加物を含んでもよい。
【０１０３】
他の可能な形
他に特定されない限り、上記にはこれらの置換基の公知のイオン、塩、溶媒和物、および保護された形が含まれる。たとえば、カルボン酸(-COOH)という記載には、アニオン（カルボキシレート）型(-COO-)、その塩または溶媒和物、ならびに通常使用される保護された形も含まれる。同様に、アミノ基という記載には、プロトン化された形(-N+HR1R2)、アミノ基の塩または溶媒和物、たとえば、塩酸塩、ならびに通常使用されるアミノ基の保護された形が含まれる。同様に、ヒドロキシル基という記載には、アニオン型(-O-)、その塩または溶媒和物、ならびに通常使用される保護された形も含まれる。
【０１０４】
特に、基(-SOzM)の記載には、アニオン型(-SOz-)、またはその溶媒和物、ならびに通常使用される保護された形も含まれる。
【０１０５】
異性体および溶媒和物
ある種の化合物は、cisおよびtrans型；EおよびZ型；c、t、およびr型；endoおよびexo型；R、S、およびmeso型；DおよびL型；dおよびl型；(+)および(-)型；ケト、エノール、およびエノレート型；synおよびanti型；シンクリナルおよびアンチクリナル型；αおよびβ型；アキシアルおよびエクアトリアル型；舟、いす、ねじれ、封筒および半いす形；およびそれらの組合せを含むがこれらに限定されない1種以上の特定の幾何異性体、光学異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、エピマー、アトロプ異性体、立体異性体、互変異性体、配座異性体、またはアノマー異性体として存在し得る。以後これらを集合的に「異性体」（または「異性体形」）と呼ぶ。
【０１０６】
ある実施形態において、本発明の化合物は、C11位において次の立体化学：
【化７】
2008536905.tif 000009
【０１０７】
を有する。
【０１０８】
下で互変異性体について論じるものを除いて、本明細書において使用する「異性体」という用語からは構造（または構成）異性体（すなわち、単に空間における原子の位置によるのではなく、原子間の結合が異なる異性体）が特に除外されていることに留意されたい。たとえば、メトキシ基、-OCH3という記載は、その構造異性体であるヒドロキシメチル基、-CH2OHを指すものとは解釈されない。同様に、オルトクロロフェニルという記載は、その構造異性体であるメタクロロフェニルを指すものとは解釈されない。しかしながら、構造のクラスを記載する場合はそのクラスの範囲に含まれる構造異性体を含み得る（たとえば、C1-7アルキルはn-プロピルおよびイソプロピルを含み；ブチルはn-、イソ、sec-およびtert-ブチルを含み；メトキシフェニルはオルト、メタ、およびパラメトキシフェニルを含む）。
【０１０９】
上記の除外は互変異性体、たとえば、ケト、エノール、およびエノレート型には当てはまらない。互変異性体には、たとえば、次の互変対：ケト／エノール（下に示す）、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、N-ニトロソ／ヒドロキシアゾ、およびニトロ／アシニトロが含まれる。
【化８】
2008536905.tif 000010
【０１１０】
「異性体」という用語には、1種以上の同位体置換を有する化合物が特に含まれることに留意されたい。たとえば、Hは、1H、2H (D)、および3H (T)を含むいかなる同位体型であってもよく；Cは、12C、13C、および14Cを含むいかなる同位体型であってもよく；Oは、16Oおよび18Oを含むいかなる同位体型であってもよい等である。
【０１１１】
他に特定されない限り、特定の化合物の記載は、その（完全なまたは部分的）ラセミ混合物および他の混合物を含むすべての前記の異性体を含む。前記の異性体の調製（たとえば不斉合成）および分離（たとえば分別結晶およびクロマトグラフィー手段）の方法は、当業者に公知であるか、本明細書に記載の方法または公知の方法を、公知の方式により改変することにより容易に得られる。
【０１１２】
活性化合物の対応する溶媒和物を調製、精製、および／または処理することが便利であるまたは望ましい場合がある。本明細書において使用する「溶媒和物」という用語は、通常使用される意味で、溶質（たとえば、活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒の複合体を指す。溶媒が水である場合には、溶媒和物は便利に水和物、たとえば、一水和物、二水和物、三水和物等と呼ばれる。
【０１１３】
一般的合成経路
PBD化合物の合成については、WO 00/12508に広く論じられており、その論述を参照により本明細書に組み入れる。
【０１１４】
前記の特許出願において論じられているように、好ましいPBD合成経路のキーステップは、11位になるアルデヒド（またはそれと同等の官能基）の生成、およびそこへの前-N10-窒素による攻撃を含む、B環を形成する環化反応である。
【化９】
2008536905.tif 000011
【０１１５】
[式中、置換基は上で定義した通りであり、R8は他方のPBD部分への結合(-X-R”-X-)を表し、R10は窒素保護基であり、R12はR2またはその前駆基である]
「保護されたアルデヒド」-CPQはアセタールまたはチオアセタールであってよく、その場合には環化反応は脱保護を含む。あるいは、それはアルコール-CHOHであってもよく、その場合には反応は、たとえばTPAP、TEMPOまたはDMSO(Swern酸化)による酸化を含む。
【０１１６】
保護されたアルデヒド化合物は、対応する2,4-置換ピロリジンを2-ニトロ安息香酸と縮合させることにより製造することができる。
【化１０】
2008536905.tif 000012
【０１１７】
次に、ニトロ基を-NH2に還元し、好適な試薬、たとえばクロロホルメートとの反応により保護して、式IVの化合物中に除去可能な窒素保護基を与える。
【０１１８】
酸化的環化法を含む方法をスキーム1に示す（別のタイプの環化反応は後にスキーム2を参照して説明する）。
【化１１】
2008536905.tif 000013
【０１１９】
アルコール(B)（ここで、前-N10-窒素は通常カルバメートとして保護されている）を、A4ふるい上で過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム(TPAP)/N-メチルモルホリンN-オキシド(NMO)に曝すと、自発的なB環の閉環を伴う酸化が起こり、目的の生成物IVが得られる。TPAP/NMO酸化法は少量の反応に特に便利であることが見出されている。一方、DMSOを用いる酸化法、特にSwern酸化はより大量の反応（たとえば、＞1 g）において優れていることがわかった。特に好ましい酸化剤は、(ジアセトキシヨード)ベンゼン(1.1当量)およびTEMPO (0.1当量)をCH2Cl2に溶解したものである。
【０１２０】
環化されていないアルコール(B)は、好ましくはクロロホルメートまたは酸塩化物である式Dの窒素保護試薬を、通常、溶液中で、通常、ピリジンなどの塩基（好ましくは2当量）の存在下、穏やかな温度（たとえば、0℃）で、アミノアルコールCの溶液と反応させることにより調製することができる。これらの条件下では通常O-アシル化はほとんどまたは全く観察されない。
【０１２１】
基本となるアミノアルコールCは対応するニトロ化合物Eを、分子の他の部分が反応せずに保存される方法を選んで還元することにより調製することができる。一般的に、Eを好適な溶媒中、たとえば還流したメタノール中で塩化スズ(II)により処理すると、スズ塩を除去した後に、所望の生成物が高収率で得られる。
【０１２２】
Eをヒドラジン／ラネーニッケルに曝すことにより、スズ塩の生成を回避し、Cの収率を向上させることができるが、この方法は可能なCおよびA環の置換基の範囲との相性が悪い。たとえば、C環に不飽和結合が存在すると（環自体またはR2もしくはR3中のいずれでも）、この技術は適さない。別の好適な還元手段は触媒としてパラジウム炭素を用いる接触水素化である。
【０１２３】
式Eのニトロ化合物は、適切な塩化o-ニトロベンゾイルを、たとえばK2CO3の存在下、-25℃、N2雰囲気下で式Fの化合物にカップリングさせることにより調製することができる。式Fの化合物は、たとえばL-trans-ヒドロキシプロリンから誘導されたケトンのオレフィン化により容易に調製することができる。ケトン中間体はエノールトリフレートに変換することにより、パラジウム媒介カップリング反応に使用することもできる。
【０１２４】
塩化o-ニトロベンゾイルは式Gのo-ニトロ安息香酸（またはアルキルエステルを加水分解した後）から合成される。式Gのo-ニトロ安息香酸はバニリン酸（またはアルキルエステル）誘導体Hから調製される。これらの多くは市販されており、いくつかはAlthuis, T.H.およびHess, H.J., J. Medicinal Chem., 20(1), 146-266 (1977)に開示されている。
【０１２５】
別の環化（スキーム2）
【化１２】
2008536905.tif 000014
【０１２６】
スキーム1において、最終段階またはその前の段階は酸化的環化であった。チオアセタールカップリングを使用する別法をスキーム2に示す。水銀媒介の脱保護により環化が起こり、保護されたPBD化合物IVが得られる。
【０１２７】
チオアセタール化合物はスキーム2に示す通りに調製することができる。チオアセタール保護されたC環（文献の方法：Langley, D.R.およびThurston, D.E., J. Organic Chemistry, 52, 91-97 (1987)により調製する）を、文献の方法を用いてo-ニトロ安息香酸（またはアルキルエステルを加水分解した後）(G)とカップリングさせる。得られたニトロ化合物は、チオアセタール基のために水素化によっては還元することができないので、塩化スズ(II)法を用いてアミンを得る。次に、これを、たとえば2,2,2-トリクロロエチルクロロホルメートなどのクロロホルメートまたは酸塩化物との反応によりN-保護する。
【０１２８】
酸性条件の使用を含む他の方法による脱保護を用いるこのタイプの経路における別法として、アセタールを有するC環を使用することができる。
【０１２９】
二量体の合成（スキーム3）
【化１３】
2008536905.tif 000015
【０１３０】
本発明におけるPBD二量体は、保護されたPBDモノマーの合成のために開発された戦略を用いて合成することができる。スキーム3に示された合成経路は、二量体の結合が式-O-(CH2)n-O-で表される化合物の場合を示しており、これは他の二量体結合に容易に変更することができる。二量体形成の段階は、通常ビス(ニトロ酸) G’を形成するように実施する。次に、この化合物を上記のスキーム1またはスキーム2における化合物Gとして処理する。
【０１３１】
ビス(ニトロ酸) G’は、ビス(カルボン酸)をニトロ化することにより（たとえば70%硝酸を用いて）得ることができる。ビス(カルボン酸)は、2当量の対応する安息香酸を塩基性条件下で適切なジヨードアルカンを用いてアルキル化することにより合成することができる。多くの安息香酸が市販されており、他のものは従来の方法により合成することができる。あるいは対応する安息香酸エステルを、適切なアルカンジオールを用いて光延エーテル化により結合した後、ニトロ化し、次いで加水分解することもできる（図示しない）。
【０１３２】
ビス(ニトロ酸)の別の合成法は、たとえば過マンガン酸カリウムによるビス(ニトロアルデヒド)の酸化を含む。ビス(ニトロアルデヒド)は、ビス(アルデヒド)を、たとえば70% HNO3により直接ニトロ化することにより得ることができる。ビス(アルデヒド)は、2当量のベンズアルデヒドを適切なアルカンジオールを用いて光延エーテル化することにより得ることができる。
【０１３３】
PBDの別の合成経路
N10を保護されたPBDを合成するための別法はWO 2005/023814（これを本明細書に組み入れる）に開示されており、そこにはイソシアネート中間物質を使用することが記載されている。
【０１３４】
C2アリール置換基の導入：C2への脱離基の導入
【化１４】
2008536905.tif 000016
【０１３５】
適切な物質から出発して式IVの化合物中にC2アリール置換基を導入することができ、その場合には、N10を脱保護して目的の化合物を生成する（下記参照）。あるいは、R12が保護されたヒドロキシ基である場合には下記の方法を使用することができる。環化によりB環を形成した後、好ましくはC11-アルコールIVを従来の方法により再度保護してIIIbを得る。たとえば、R11がTBSである場合には、保護はIVをTBSOTfおよび2,6-ルチジンと反応させることによりおこなう。次いで、IIIbからのC2保護基の開裂によりC2アルコールを得る。たとえば、C2保護基(R14)がアシルである場合、この脱保護はK2CO3の水溶液を加えることにより実施できる。
【０１３６】
このC11位における再保護およびC2アルコールの脱保護により、次の反応がC2アルコール位に選択的に起こり、C11位は影響を受けずに保存される。次に、C2アルコールを酸化してケトンIIIbを得る。好ましくは、この酸化はSwern条件下でおこなうと収率が良い。けれども、TPAPまたはDess Martin試薬を用いる他の酸化法によっても良い収率でケトンが得られる。
【０１３７】
式IIの化合物におけるR”12は、-OSO2CH3、-OSO2(CnF2n+1)（ここで、n=0、1または4である）、または-OSO2-RSであってよく、その場合にはIIIbからの変換は適切な酸無水物で処理することにより達成し得る。たとえば、R”12がトリフレートである場合、ピリジンの存在下、DCM中で無水トリフルオロメタンスルホン酸と反応させる。
【０１３８】
式IIの化合物におけるR”12は、-Iまたは-Brであってもよく、その場合にはIIIbからの変換はヒドラジンおよびそれぞれヨウ素または臭素との反応により達成し得る。
【０１３９】
式IIの化合物におけるR”12は、-Clであってもよく、その場合にはIIIbからの変換はオキシ塩化リン（たとえば、POCl3）との反応により達成し得る。
【０１４０】
C2アリール置換基の導入：脱離基の置換
【化１５】
2008536905.tif 000017
【０１４１】
この式IIの化合物にさまざまな条件下で反応をおこなって、C2位に結合するペンダント基を有するPBD前駆分子Icを得ることができる。
【０１４２】
特に、鈴木、Stille、およびHeckカップリングなどのパラジウム触媒カップリングの使用が好ましい。パラジウム触媒は好適な触媒、たとえば、Pd(PPh3)4、Pd(OCOCH3)2、PdCl2、Pd(dba)3であってよい。カップリングする化合物は、任意の好適な反応物、たとえば、Heckカップリングにはsp2Hを有するアルケン；Stilleカップリングには有機スタンナン；および鈴木カップリングには有機ホウ素誘導体とすることができる。
【０１４３】
本発明の好ましい態様において、カップリングはマイクロ波照射下でおこなう。典型的には、Pd(PPh3)4などのパラジウム触媒を、後処理を促進し、触媒の再利用を促すために、固体、たとえばポリスチレン上に担持させる。トリフレートが完全に消費された後に、PS-DEAMを用いて、未反応のボロン酸を除去し、同時に相分離カートリッジを用いてカップリング生成物を単離することができる。前記の方法により、2種以上（10、20または30種まで）の化合物を同時に平行合成することが可能になる。
【０１４４】
式Icの化合物におけるイミン結合を標準的な方法により脱保護して、保護されていない化合物Ib（使用する溶媒に依存して、そのカルビノールアミンまたはカルビノールアミンエーテルの形で存在し得る）を得ることができる。たとえば、R10がAllocである場合、パラジウムを用いて脱保護をおこなってN10保護基を除去した後、水を脱離する。R10がTrocである場合、Cd/Pdカップルを用いて脱保護をおこなって式Ibの化合物を得る。
【０１４５】
WO 2004/043963およびWO 2005/085251の合成の考察および実施例をも参照する。これらの特許を参照により本明細書に組み入れる。
【０１４６】
硫黄含有型への変換
式Ibの化合物の本発明の化合物への変換は、適切な亜硫酸水素塩またはスルフィン酸塩を加えることにより実施することができ、次に適切な精製をおこなう。別の方法は、GB 2 053 894に記載されており、これを参照により本明細書に組み入れる。
【０１４７】
別の好ましい置換基
XはOであることが好ましい。  
R”は直鎖飽和C3-12アルキレン基を表すことが好ましく、より好ましくは、3、5、7、8、9、10、11または12個の炭素原子を有するアルキレン基を表す。これらの中で、C3およびC5直鎖飽和アルキレン基が好ましい。  
R9は好ましくはHである。  
R6は好ましくはH、OH、OR、SH、NH2、ニトロおよびハロから選択され、より好ましくは、Hまたはハロであり、最も好ましくはHである。
【０１４８】
R7は好ましくはH、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、およびハロから選択され、より好ましくはH、OHおよびORから独立して選択され、ここで、Rは好ましくは場合により置換されたC1-7アルキル、C3-10ヘテロシクリルおよびC5-10アリール基から選択される。特に好ましい7位の置換基はOMeおよびOCH2Phである。
【０１４９】
R2は好ましくは場合により置換されたC5-7アリール基であり、最も好ましくは場合により置換されたフェニル基である。
【０１５０】
ある実施形態において、R2はC9-12アリール基、たとえば、ナフチ-1-イルまたはナフチ-2-イルである。C9-12アリール基の別の例には、キノリニル、たとえば、キノリン-2-イル、キノリン-3-イルおよびキノリン-6-イルが含まれる。
【０１５１】
別の実施形態において、R2はC5-7ヘテロアリール基、たとえば、フラニル、チオフェニルおよびピリジルである。これらの中で、チオフェニル、たとえば、チオフェン-2-イルおよびチオフェン-3-イルが好ましい。
【０１５２】
C5-20アリール基はいかなる置換基を有してもよい。それは好ましくは1〜3個の置換基を有し、1および2個がより好ましく、一置換された基が最も好ましい。
【０１５３】
好ましいC5-20アリール置換基、特にフェニルの置換基には、ハロ（たとえば、F、Cl、Br）；C1-7アルコキシ（たとえば、メトキシ、エトキシ）；C1-7アルキル（たとえば、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、t-ブチル）；ビスオキシアルキレン（たとえば、ビスオキシメチレン、-O-CH2-O-）が含まれる。
【０１５４】
特に好ましい置換C5-20アリール基には、4-メチルフェニル、4-メトキシフェニル、3-メトキシフェニル、4-フルオロフェニル、3,4-ビスオキシメチレンフェニル、4-トリフルオロメチルフェニル、4-メチルチオフェニル、4-シアノフェニル、および4-フェノキシフェニルが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５５】
特に好ましい無置換C5-20アリール基には、チオフェン-2-イル、ナフチ-2-イル、キノリン-3-イルおよびキノリン-6-イルが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５６】
Rが場合により置換されたC1-12アルキルである場合、それは場合により置換されたC1-7アルキルであることが好ましい。
【０１５７】
両方のPBDモノマーが同一に置換されていることが好ましい。
【０１５８】
MおよびM’が1価の製薬上許容されるカチオンであることが好ましく、より好ましくはNa+である。
【０１５９】
Zは好ましくは3である。
【０１６０】
好ましい化合物には、下記のものが含まれる。
【化１６】
2008536905.tif 000018
【０１６１】
2008536905.tif 000019
【０１６２】
2008536905.tif 000020
【０１６３】
より好ましい化合物には下記のものが含まれる。
【化１７】
2008536905.tif 000021
【０１６４】
最も好ましい化合物は
【化１８】
2008536905.tif 000022
【０１６５】
である。
【０１６６】
上記の好ましい化合物はC5アルキレン連結鎖を有してもよい。
【実施例１】
【０１６７】
(a) (2S,4R)-N-(ベンジルオキシカルボニル)-2-t-ブチルジメチルシリルオキシメチル-4-ヒドロキシピロリジン(1)
【化１９】
2008536905.tif 000023
【０１６８】
化合物1を、trans-4-ヒドロキシ-L-プロリンから出発して、当業者に公知の4段階の方法により高収率で生成する(S.J. Gregsonら、J. Med. Chem., 2004, 1161-1174)。
【０１６９】
(b) (2S,4R)-N-(ベンジルオキシカルボニル-2-t-ブチルジメチルシリルオキシメチル-4-オキシアセチルピロリジン(2)
【化２０】
2008536905.tif 000024
【０１７０】
ピリジン(18.3 g、18.7 mL、232 mmol、1.1当量)、無水酢酸(23.6 g、21.8 mL、232 mmol、1.1当量)およびDMAP (5.14 g、42.1 mmol、0.2当量)を、撹拌した1 (76.9 g、211 mmol)の無水THF (1 L)溶液に加えた。反応混合物を16時間攪拌した後、TLC (95:5 v/v CHCl3/MeOH)により出発物質が完全に消費されたことが示された。過剰な溶媒をロータリーエバポレーターにより除去し、残渣をEtOAc (1 L)に溶解し、1N HCl (2 x 1 L)、H2O (1 L)および食塩水(1 L)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて、酢酸エステル2を無色のオイル(80.7 g、94%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)（回転異性体）δ7.36-7.12 (m, 5H), 5.30-5.10 (m, 3H), 4.09-3.97 (m, 2H), 3.74-3.55 (m, 3H), 2.36-2.29 (m, 1H), 2.11-2.06 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 0.87 (s, 6H), 0.86 (s, 3H), 0.03および0.00 (s x 2, 6H); MS (ES), m/z（相対強度）430 ([M + Na]+., 95), 408 ([M + H]+., 100)。
【０１７１】
(c) (2S,4R)-2-t-ブチルジメチルシリルオキシメチル-4-オキシアセチルピロリジン(3)
【化２１】
2008536905.tif 000025
【０１７２】
シリルエーテル2 (1.95 g、4.80 mmol)および10% Pd/C (0.17 g)の無水エタノール(10 mL) 中のスラリーに、45 Psiで16時間、Parr水素化をおこなった後、TLC (95:5 v/v CHCl3/MeOH)により出発物質が完全に消費されたことが示された。反応混合物をセライトにより濾過してPd/Cを除き、フィルターパッドをエタノールにより繰り返し洗浄した。過剰な溶媒をロータリーエバポレーターにより減圧除去して、アミン3を淡橙色の蝋状のオイル(1.28 g, 98%)として得た。IR (CHCl3) 3315, 2930, 2858, 1739, 1652, 1472, 1435, 1375, 1251, 1088, 838, 779, 667 cm-1。
【０１７３】
(d) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-(5-メトキシ-2-ニトロ-1,4-フェニレン)カルボニル]]ビス[2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシメチル)-4-オキシアセチルピロリジン] (5)
【化２２】
2008536905.tif 000026
【０１７４】
触媒量のDMF (2滴)を、撹拌したニトロ酸4 (8.12 g、17.4 mmol)1および塩化オキサリル(3.80 mL、5.52 g、43.5 mmol、2.5当量)の無水THF (250 mL)溶液に加えた。最初の沈殿は次第に溶解し、反応混合物を室温で16時間攪拌した。得られた酸塩化物溶液を、0℃（氷／アセトン）、窒素雰囲気下で撹拌したアミン3 (11.9 g、43.5 mmol、2.5当量)、TEA (9.71 mL、7.05 g、69.7 mmol、4.0当量)およびH2O (2.26 mL)のTHF (100 mL)中の混合物に滴下した。反応混合物を室温に温め、さらに2.5時間攪拌した。過剰なTHFをロータリーエバポレーターにより除去して、得られた残渣をH2O (400 mL)およびEtOAc (400 mL)により分配した。層を分離し、水層をEtOAc (3 x 200 mL)により抽出した。有機相を合わせて、飽和NH4Cl (200 mL)、飽和NaHCO3 (200 mL)および食塩水(200 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を暗色のオイルとして得た。フラッシュクロマトグラフィー(99.7:0.3 v/v CHCl3/MeOH)により精製して、純粋なアミド5を淡黄色のガラス状物質(13.3 g、78%)として単離した。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.60 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 5.06 (br s, 2H), 4.44 (br s, 2H), 4.25-4.20 (m, 4H), 4.10-4.08 (m, 2H), 3.80 (s, 6H), 3.64-3.62 (m, 2H), 3.36-3.32 (m, 2H), 3.11-3.08 (m, 2H), 2.36-2.26 (m, 4H), 2.13-2.08 (m, 2H), 1.92 (s, 6H), 0.80 (s, 18H), 0.00 (s x 2, 12H); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ171.0, 166.3, 154.5, 148.2, 137.4, 128.0, 127.2, 109.2, 108.5, 72.9, 65.6, 62.6, 57.4, 56.5, 54.8, 33.0, 28.6, 25.8, 21.0, 18.1; MS (ES), m/z (相対強度) 1000 ([M + Na]+., 39), 978 ([M + H]+., 63), 977 (M+., 100), 812 (13)。
【０１７５】
(e) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-(5-メトキシ-2-アミノ-1,4-フェニレン)カルボニル]]ビス[2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシメチル)-4-オキシアセチルピロリジン] (6)
【化２３】
2008536905.tif 000027
【０１７６】
亜ジチオン酸ナトリウム(16.59 g、95.27 mmol、5当量)を、撹拌したアミド5 (18.6 g、19.1 mmol)のH2O (200 mL)およびTHF (400 mL)中の溶液に加えた。反応混合物を36時間攪拌した後、過剰のTHFをロータリーエバポレーターにより除去し、得られた残渣をEtOAc (3 x 250 mL)により抽出した。有機層を合わせて、H2O (300 mL)および食塩水(300 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで純粋なEtOAcまでの勾配)により精製して、生成物6を黄色の泡状物質(9.53 g、55%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) (回転異性体)δ6.70および6.67 (s x 2, 2H), 6.25および6.23 (s x 2, 2H), 5.20 (br s, 2H), 4.49 (br s, 4H), 4.16-4.05 (m, 6H), 3.70 (s, 6H), 3.68-3.57 (m, 4H), 2.36-2.27 (m, 4H), 2.12-2.04 (m, 2H), 1.96 (s, 6H), 0.85 (s, 18H), 0.01および0.00 (s x 2, 12H); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ170.6, 170.0, 141.1, 116.3, 113.1, 102.3, 102.1, 102.0, 66.2, 65.3, 65.2, 57.0, 28.9, 18.2; MS (ES), m/z (相対強度) 946 (M+. + 29, 43), 933 ([M + 16]+., 61), 932 ([M + 15]+., 100), 918 ([M + H]+., 72)。
【０１７７】
(f) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-[5-メトキシ-1,4-フェニレン-2-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニルアミノ)]カルボニル]]ビス[2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシメチル)-4-オキシアセチルピロリジン] (7)
【化２４】
2008536905.tif 000028
【０１７８】
2,2,2-トリクロロエチルクロロホルメート(3.58 mL、5.50 g、26.0 mmol、2.2当量)の無水DCM (60 mL)溶液を、-10℃（液体窒素／エタンジオール）で、無水ピリジン(3.82 mL、3.80 g、47.2 mmol、4.0当量)およびビスアニリン6 (10.8 g、11.8 mmol)の無水DCM (150 mL)溶液に滴下した。室温で16時間置いた後、反応混合物を飽和NH4Cl (2 x 150 mL)、飽和CuSO4 (150 mL)、H2O (150 mL)および食塩水(150 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を除去して黄色の粘性のオイルを得た。これをフラッシュクロマトグラフィー(70:30 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、生成物7を白色のガラス状物質(13.8 g、92%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ9.42 (br s, 1H), 7.83 (s, 2H), 6.76および6.74 (s x 2, 2H), 5.21 (br s, 2H), 4.79および4.73 (d x 2, 4H, J = 12.0 Hz), 4.56 (br s, 2H), 4.26-4.23 (m, 4H), 4.09-4.04 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.72-3.68 (m, 2H), 3.60 (br s, 4H), 2.40-2.32 (m, 4H), 2.23-2.08 (m, 2H), 1.95 (s, 6H), 0.85 (s, 18H), 0.01および0.00 (s x 2, 12H); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ170.4, 169.2, 151.9, 151.5, 150.8, 143.4, 132.6, 114.4, 111.7, 95.3, 74.4, 65.5, 65.4, 57.3, 56.4, 32.5, 28.8, 25.8, 21.1, 18.1, 14.9; MS (ES), m/z (相対強度) 1306 ([M + 38]+., 92), 1304 ([M + 36]+., 100), 1282 ([M + 14]+., 97), 1280 ([M + 12]+., 55)。
【０１７９】
(g) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-[5-メトキシ-1,4-フェニレン-2-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニルアミノ)]カルボニル]]ビス(2-ヒドロキシメチル-4-オキシアセチルピロリジン) (8)  
【化２５】
2008536905.tif 000029
【０１８０】
氷酢酸(310 mL)およびH2O (100 mL)の混合物を、7 (13.8 g、10.9 mmol)のTHF (250 mL)溶液に加えて、室温で16時間攪拌した。反応混合物をDCM (750 mL)により希釈し、飽和NaHCO3 (5 L)により中和した。水層をDCM (3 x 500 mL)により抽出して、有機層を合わせて、食塩水(1 L)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。TLC (60:40 v/v ヘキサン/EtOAc)により出発物質の完全な消失が確認された。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.7:0.3 v/v CHCl3/MeOH、次いで96:4 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、生成物8を白色のガラス状物質(11.6 g、> 100%)として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ8.92 (br s, 2H), 7.55 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.18 (br s, 2H), 4.78 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.72 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.50 (br s, 2H), 4.22-4.19 (m, 4H), 4.00 (br s, 2H), 3.78 (s, 6H), 3.76-3.52 (m, 6H), ), 2.32-2.30 (m, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H), 2.09-2.04 (m, 2H) 1.94 (s, 6H); 13C NMR (125.8 MHz, CDCl3)δ170.4, 152.2, 149.8, 145.0, 111.3, 106.5, 95.6, 74.4, 72.5, 65.4, 64.1, 58.7, 56.5, 56.3, 33.6, 29.l, 21.1。
【０１８１】
(h) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS,2R)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-ヒドロキシ-7-メトキシ-2-オキシアセチル-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (9)
【化２６】
2008536905.tif 000030
【０１８２】
TEMPO (0.69 g、4.42 mmol、0.4当量)およびBAIB (15.7 g、48.7 mmol、4.4当量)を、撹拌したジオール8 (11.5 g、11.1 mmol)のDCM (150 mL)溶液に加えた。反応混合物を2時間攪拌し、DCM (400 mL)により希釈し、飽和NaHSO3 (500 mL)、飽和NaHCO3 (500 mL)および食塩水(200 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH、次いで99.7:0.3 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、生成物9を淡黄色のガラス状物質(4.43 g、39%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.28 (s, 2H, H6), 6.84 (s, 2H, H9), 5.68 (d, 2H, J = 9.1 Hz, H11), 5.37-5.35 (m, 2H, H2), 5.18 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.32-4.21 (m, 6H, OCH2CH2CH2O, Troc CH2), 4.03 (dd, 2H, J = 13.2, 2.6 Hz, H3), 3.92 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.39-3.69 (m, 4H, H3およびH11a), 2.39-2.35 (m, 6H, OCH2CH2CH2OおよびH1), 2.03 (s, 6H, CH3CO2 x 2); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ170.4 (CH3CO2), 167.4 (Cquat), 154.3 (Cquat), 150.5 (Cquat), 149.1 (Cquat), 127.4 (Cquat), 124.9 (Cquat), 114.1 (C9), 110.9 (C6), 95.0 (Troc CCl3), 87.5 (C11), 75.0 (Troc CH2), 71.4 (C2), 65.5 (OCH2CH2CH2O), 58.4 (C11a), 56.1 (OCH3), 51.1 (C3), 35.8 (C1), 29.1 (OCH2CH2CH2O), 21.0 (CH3CO2 ); MS (ES), m/z (相対強度) 1058 ([M + Na]+., 100)。  
(i) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS,2R)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-オキシアセチル-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (10)
【化２７】
2008536905.tif 000031
【０１８３】
TBSOTf (2.70 mL、3.10 g、11.7 mmol、3.0当量)を、撹拌したビスアルコール9 (4.05 g、3.91 mmol)および2,6-ルチジン(1.82 mL、1.68 g、15.6 mmol、4.0当量)のDCM (50 mL)溶液に加えた。反応混合物を2.5時間攪拌し、DCM (150 mL)により希釈し、飽和CuSO4 (2 x 100 mL)、飽和NaHCO3 (100 mL)および食塩水(200 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH)により精製して、生成物10を白色のガラス状物質(5.05 g、>100%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.05 (s, 2H, H6), 6.52 (s, 2H, H9), 5.53 (d, 2H, J = 9.0 Hz, H11), 5.14 (br s, 2H, H2), 4.99 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.06-3.87 (m, 8H, OCH2CH2CH2O, Troc CH2およびH11a), 3.71 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.48-3.43 (m, 4H, H3), 2.21-2.11 (m, 4H, OCH2CH2CH2OおよびH1), 2.03-1.96 (m, 2H, H1), 1.81 (s, 6H, CH3CO2 x 2), 0.63 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.00 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ170.3 (CH3CO2), 167.9 (Cquat), 153.6 (Cquat), 150.4 (Cquat), 149.2 (Cquat), 127.9 (Cquat), 125.5 (Cquat), 113.9 (C9), 110.7 (C6), 95.2 (Troc CCl3), 88.2 (C11), 74.7 (Troc CH2), 71.7 (C2), 65.0 (OCH2CH2CH2O), 60.5 (C11a), 56.1 (OCH3), 51.2 (C3), 36.2 (C1), 28.8 (OCH2CH2CH2O), 25.6 (TBS CH3), 21.0 (CH3CO2 ), 17.8 (TBS Cquat), 14.2および14.1 (TBS CH3); MS (ES), m/z (相対強度) 1285 ([M + 21]+., 100), 1265 ([M + H]+., 75)。
【０１８４】
(j) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS,2R)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-ヒドロキシ-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (11)  
【化２８】
2008536905.tif 000032
【０１８５】
K2CO3 (93 mg、0.67 mmol、5.0当量)のH2O (2 mL)溶液を、撹拌した酢酸エステル10 (170 mg、0.13 mmol)のMeOH (3 mL)溶液に滴下した。最初の無色の溶液は、最終的に黄色に変化し、白色の沈殿の形成が観察された。反応混合物を16時間攪拌した後、TLC (95:5 v/v CHCl3/MeOH)により出発物質が完全に消費されたことが示された。過剰な溶媒をロータリーエバポレーターにより除去し、混合物を1N HClにより注意深く中和してpH 7とした。得られた混合物をEtOAc (3 x 25 mL)により抽出し、有機層を合わせて食塩水(40 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を除去して、生成物11を白色のガラス状物質(151 mg、95%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ6.94 (s, 2H, H6), 6.52 (s, 2H, H9), 5.53 (d, 2H, J = 9.0 Hz, H11), 5.00 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.36-4.35 (m, 2H, H2), 4.06-3.82 (m, 8H, OCH2CH2CH2O, Troc CH2およびH3), 3.61 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.54-3.48 (m, 2H, H11a), 3.39-3.34 (m, 2H, H3), 2.96および2.95 (br s x 2, 2H, OH x 2), 2.21-2.20 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 2.19-2.08 (m, 2H, H1), 1.90-1.74 (m, 2H, H1), 0.64 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.00 (s, 12H, TBS CH3 x 4); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ168.5 (Cquat), 153.6 (Cquat), 150.3 (Cquat), 149.1 (Cquat), 127.9 (Cquat), 125.4 (Cquat), 113.9 (C9), 110.7 (C6), 95.2 (Troc CCl3), 88.3 (C11), 74.7 (Troc CH2), 69.4 (C2), 65.0 (OCH2CH2CH2O), 60.9 (C11a), 55.9 (OCH3), 54.1 (C3), 38.8 (C1), 28.9 (OCH2CH2CH2O), 25.6 (TBS CH3), 17.8 (TBS Cquat); MS (ES), m/z (相対強度) 1196 ([M + 16]+., 100), 1181 ([M + H]+., 82)。
【０１８６】
(k) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-オキソ-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (12)  
【化２９】
2008536905.tif 000033
【０１８７】
無水DMSO (0.82 mL、0.90 g、11.5 mmol、6.0当量)の無水DCM (20 mL)溶液を、窒素雰囲気下、-60℃（液体N2/CHCl3）で撹拌した塩化オキサリル(2 M DCM溶液を2.88 mL、5.76 mmol、3.0当量)に滴下した。-55℃で1.5時間攪拌した後、反応混合物に基質11 (2.26 g、1.92 mmol)の無水DCM (30 mL)溶液を滴下し、次いでこれを-45℃でさらに2時間撹拌した。TEA (10.8 mL、7.82 g、71.7 mmol、4.2当量)の無水DCM (90 mL)溶液を混合物に滴下し、さらに30分間撹拌した。反応混合物を0℃に温め、冷1 N HCl (2 x 50 mL)、H2O (50 mL)および食塩水(50 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を減圧蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(70:30 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで40:60 v/v ヘキサン/EtOAcまでの勾配)により精製して、カルビノールアミン12を白色のガラス状物質(1.62 g、72%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.02 (s, 2H, H6), 6.54 (s, 2H, H9), 5.59 (d, 2H, J = 9.2 Hz, H11), 4.98 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.09-3.86 (m, 8H, OCH2CH2CH2O, Troc CH2およびH3), 3.75-3.66 (m, 10H, OCH3 x 2, H11a,およびH3), 2.72 (dd, 2H, J = 10.2, 19.6 Hz, H1), 2.82 (dd, 2H, J = 2.6, 19.6 Hz, H1), 2.22-2.19 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.63 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.00 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ207.7 (C2), 168.0 (Cquat), 153.7 (Cquat), 150.7 (Cquat), 149.4 (Cquat), 127.8 (Cquat), 124.6 (Cquat), 114.0 (C9), 110.6 (C6), 95.1 (Troc CCl3), 87.4 (C11), 74.8 (Troc CH2), 65.0 (OCH2CH2CH2O), 58.9 (C11a), 56.1 (OCH3), 53.0 (C3), 40.3 (C1), 28.8 (OCH2CH2CH2O), 25.6 (TBS CH3), 17.8 (TBS Cquat); MS (ES), m/z (相対強度) 1224 ([M + 48]+., 100), 1210 ([M + 34]+., 60), 1199 ([M + Na]+., 35), 1192 ([M + 16]+., 40), 1176 (M+., 18)。
【０１８８】
(l) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-[[(トリフルオロメチル)スルホニル]オキシ]-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (13)  
【化３０】
2008536905.tif 000034
【０１８９】
開けたばかりのアンプルから取り出した無水トリフルオロメタンスルホン酸無水物(3.09 mL、5.19 g、18.4 mmol、22当量)を、室温、窒素雰囲気下で激しく撹拌したケトン12 (0.98 g、0.84 mmol)および無水ピリジン(1.49 mL、1.46 g、18.4 mmol、22当量)の無水DCM (50 mL)溶液に素早く一度に加えた。最初にできた沈殿は次第に溶解し、溶液は最終的に暗赤色になった。反応混合物を4.5時間攪拌した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。混合物を冷飽和NaHCO3 (60 mL)中に注ぎ、DCM (3 x 80 mL)により抽出した。有機層を合わせて、飽和CuSO4 (2 x 125 mL)および食塩水(125 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、トリフレート13を淡黄色のガラス状物質(0.74 mg、61%)として得た。[α]25D = +46.0 o(c = 0.33, CHCl3); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.23 (s, 2H, H6), 7.19 (s, 2H, H3), 6.77 (s, 2H, H9), 5.94 (d, 2H, J = 8.9 Hz, H11), 5.23 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.31-4.28 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 4.18 (d, 2H, J = 12.2 Hz, Troc CH2), 4.15-4.13 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 3.95-3.91 (m, 8H, OCH3 x 2, H11a), 3.35 (dd, 2H, J = 11.0, 16.6 Hz, H1), 2.84 (d, 2H, J = 16.6 Hz, H1), 2.46-2.44 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.89 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.29および0.26 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ164.9 (Cquat), 153.6 (Cquat), 151.0 (Cquat), 149.5 (Cquat), 136.0 (Cquat), 127.7 (Cquat), 123.9 (Cquat), 121.0 (C3), 114.0 (C9), 110.9 (C6), 95.1 (Troc CCl3), 86.3 (C11), 74.8 (Troc CH2), 65.0 (OCH2CH2CH2O), 60.6 (C11a), 56.2 (OCH3), 34.4 (C1), 28.8 (OCH2CH2CH2O), 25.6 (TBS CH3), 17.8 (TBS Cquat); IR (CHCl3) 3020, 2957, 2860, 1725, 1674, 1651, 1604, 1516, 1466, 1454, 1431, 1409, 1329, 1312, 1274, 1216, 1138, 1113, 1083, 1042, 1006, 900, 840, 757, 668, 646, 610 cm-1; MS (ES), m/z (相対強度) 1461 ([M + 21]+., 100), 1440 (M+., 55)。
【０１９０】
(m) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(p-メトキシベンゼン)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (14)  
【化３１】
2008536905.tif 000035
【０１９１】
TEA (0.20 mL、148 mg、1.46 mmol、6.0当量)のH2O (1.5 mL)およびEtOH (10 mL)中の溶液を、室温で、トリフレート13 (350 mg、0.24 mmol)のトルエン(10 mL)溶液に加えた。この混合物に、4-メトキシベンゼンボロン酸(96 mg、0.63 mmol、2.6当量)およびPd(PPh3)4 (11 mg、9 μmol、0.04当量)を加えた。反応混合物を15分間撹拌し、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰の溶媒を除去し、残渣をEtOAc (25 mL)に溶解し、H2O (15 mL)および食塩水(15 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで50:50 v/v ヘキサン/EtOAcまでの勾配) により精製して、14を黄色のガラス状物質(286 mg、87%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.38 (s, 2H, H3), 7.32-7.28 (m, 6H, H6およびH13), 6.92 (d, 4H, J = 8.7 Hz, H14), 6.81 (s, 2H, H9), 5.93 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H11), 5.24 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.34-4.29 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 4.20-4.11 (m, 4H, Troc CH2およびOCH2CH2CH2O), 4.00-3.96 (m, 8H, H11aおよびOCH3 x 2), 3.84 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.36 (dd, 2H, J = 10.8, 16.6 Hz, H1), 2.85 (d, 2H, J = 16.5 Hz, H1), 2.48-2.45 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.93 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.30および0.27 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4); 13C NMR (100.6 MHz, CDCl3)δ162.5 (Cquat), 161.3 (Cquat), 159.2 (Cquat), 151.1 (Cquat), 148.1 (Cquat), 140.3 (Cquat), 126.2 (C13), 126.0 (Cquat), 123.2 (Cquat), 121.9 (C3), 119.3 (Cquat), 114.3 (C6), 111.9 (C14), 111.2 (C9), 95.2 (Troc CCl3), 87.3 (C11), 74.8 (Troc CH2), 65.0 (OCH2CH2CH2O), 61.5 (C11a), 56.1および55.3 (OCH3), 35.3 (C1), 28.8 (OCH2CH2CH2O), 25.7 (TBS CH3), 17.9 (TBS Cquat); MS (ES), m/z (相対強度) 1357 (M+., 63), 1114 (48), 955 (59), 919 (78)。
【０１９２】
(n) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(p-メトキシベンゼン)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (ZC-207)  
【化３２】
2008536905.tif 000036
【０１９３】
10% Cd/Pdカップル(461 mg、3.73 mmol、20当量)を、急速に撹拌した14 (253 mg、0.19 mmol)、THF (5 mL)および1 N NH4OAc (5 mL)の混合物に加えた。反応混合物を1.5時間攪拌した後、TLCにより出発物質が完全に消費されたことが示された。固体を濾過し、H2OおよびDCMにより洗浄した。水層をDCM (3 x 30 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、食塩水(50 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH、次いで95:5 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、ZC-207を黄色のガラス状物質(132 mg、96%)として得た。[α]20 D = +880.0 o (c = 0.22, CHCl3); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.79 (d, 2H, J = 3.9 Hz, H11), 7.44 (s, 2H, H6), 7.30 (s, 2H, H3), 7.24 (d, 4H, J = 8.7 Hz, H13), 6.81 (d, 4H, J = 8.7 Hz, H14), 6.79 (s, 2H, H9), 4.30-4.18 (m, 6H, OCH2CH2CH2OおよびH11a), 3.86 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.74 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.48 (dd, 2H, J = 11.8, 16.2 Hz, H1), 2.85 (d, 2H, J = 16.2 Hz, H1), 2.38-2.32 (m, 2H, OCH2CH2CH2O); 13C NMR (62.9 MHz, CDCl3)δ162.5 (C11), 161.3(Cquat), 159.2 (Cquat), 151.1 (Cquat), 148.1 (Cquat), 140.3 (Cquat), 126.2 (C13), 126.0 (Cquat), 123.2 (Cquat), 121.9 (C3), 114.3 (C14), 111.9 (C9), 111.2 (C6), 65.4 (OCH2CH2CH2O), 56.2および55.3 (OCH3), 53.8 (C11a), 35.6 (C1), 28.9 (OCH2CH2CH2O); MS (ES), m/z (相対強度) 741 (M+., 43), 660 (71)。
【０１９４】
(o) 1,1’-[[(プロパン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(4-メトキシフェニル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (ZC-423)
【化３３】
2008536905.tif 000037
【０１９５】
亜硫酸水素ナトリウム(6.74 mg、65 μmol)の水(1.5 mL)溶液を、撹拌したZC-207 (24.01 mg、32 μmol)のジクロロメタン(1.5 mL)溶液に加えた。反応混合物を2時間激しく撹拌した後、有機層と水層を分離した。水層のTLC 分析（溶離液-EtOAc）により、ZC-207が存在せず、ベースライン上に強いUV吸収を有する物質が存在することが示された。水層を凍結乾燥して亜硫酸水素塩付加物ZC-423を白色の固体(17 mg、55%)として得た。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO)δ7.42 (s, 2H, H-3), 7.38 (d, 4H, J = 8.72 Hz, 2’-H), 7.05 (s, 2H, H-6), 6.92 (d, 4H, J = 8.92 Hz, 3’-H), 6.52 (s, 2H, H-9), 5.27 (s, 2H, NH), 4.35-4.25 (m, 2H, H11a), 4.15-4.05 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.95 (d, 2H, J = 10.4 Hz, H11), 3.77 (s, 6H, OMe), 3.72 (s, 6H, OMe), 3.55-3.45 (m, 2H, H1), 3.30-3.15 (m, 2H, H1), 2.25-2.15 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。
【実施例２】
【０１９６】
(a) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(ナフタレン-2-イル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (17)  
【化３４】
2008536905.tif 000038
【０１９７】
TEA (0.15 mL、1.05 mmol、6.0当量)のH2O (1 mL)およびEtOH (10 mL)中の溶液を、室温で、13 (251 mg、0.17 mmol)のトルエン(6 mL)溶液に加えた。この混合物に、2-ナフタレンボロン酸(77.9 mg、0.45 mmol、2.6当量)およびPd(PPh3)4 (8.0 mg、7 μmol、0.04当量)を加えた。反応混合物をマイクロ波照射により100℃に20分間加熱した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰の溶媒を除去して、残渣をEtOAc (20 mL)に溶解し、H2O (15 mL)および食塩水(15 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで50:50 v/v ヘキサン/EtOAcまでの勾配)により精製して、17を黄色のガラス状物質(191 mg、81%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.32-7.29 (m, 6H, Harom ), 7.61-7.58 (m, 6H, Harom), 7.52-7.42 (m, 4H, H3およびHarom), 7.30 (s, 2H, H6), 6.81 (s, 2H, H9), 5.98 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H11), 5.24 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.35-4.30 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 4.20-4.13 (m, 4H, Troc CH2およびOCH2CH2CH2O), 4.08-4.00 (m, 2H, H11a), 3.97 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.50 (dd, 2H, J = 10.8, 16.6 Hz, H1), 2.98 (d, 2H, J = 16.5 Hz, H1), 2.50-2.48 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.94 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.30および0.28 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4)。  
(b) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(ナフタレン-2-イル)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (18)
【化３５】
2008536905.tif 000039
【０１９８】
10% Cd/Pbカップル(455 mg、3.71 mmol、26当量)を、急速に撹拌した17 (190 mg、0.14 mmol)、THF (3.2 mL)および1 N NH4OAc (3.2 mL)の混合物に加えた。反応混合物を6.5時間攪拌した後、TLCにより出発物質の不完全な消費および副産物の生成が示された。固体を濾過してH2OおよびMeOHにより洗浄した。過剰な溶媒を除去して、残渣をH2O (25 mL)およびDCM (25 mL)により希釈した。水層をDCM (3 x 25 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、食塩水(50 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99:1 v/v CHCl3/MeOH、次いで98:2 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、18を黄色のガラス状物質(38 mg、36%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.85 (d, 2H, J = 3.9 Hz, H11), 7.77-7.65 (m, 6H, Harom ), 7.59-7.50 (m, 6H, H3およびHarom), 7.47 (s, 2H, H6), 7.44-7.33 (m, 4H, Harom), 6.82 (s, 2H, H9), 4.42-4.32 (m, 2H, H11a), 4.31-4.14 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.89 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.69-3.56 (m, 2H, H1), 3.50-3.37 (m, 2H, H1), 2.45-2.29 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。  
(c) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(ナフタレン-2-イル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (19)
【化３６】
2008536905.tif 000040
【０１９９】
亜硫酸水素ナトリウム(6.67 mg、0.064 mmol、2.0当量)のH2O (1.5 mL)溶液を、化合物18 (25 mg、0.032 mmol)の無水DCM (1.5 mL)溶液に加えた。反応混合物を5時間攪拌した。反応混合物をDCM (5 mL)およびH2O (5 mL)により希釈した。水層を分離して（分液ロートを振らずに）、凍結乾燥器により乾燥して、19を軽量の白色の固体(7 mg、22 %)として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO)δ7.78-7.72 (m, 8H, Harom), 7.68 (s, 2H, H3), 7.59-7.27 (m, 6H, Harom), 6.92 (s, 2H, H6), 6.41 (s, 2H, H9), 5.21 (d, 2H, J = 5.2 Hz, NH), 4.38-4.31 (m, 2H, H11a), 4.12-3.96 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.87 (d, 2H, J = 10.4 Hz, H11), 3.70 (s, 3H, OCH3), 3.61 (s, 3H, OCH3), 3.40-3.12 (m, 4H, H1), 2.28-2.22 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。  
【実施例３】
【０２００】
(a) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(チオフェン-2-イル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (20)
【化３７】
2008536905.tif 000041
【０２０１】
TEA (0.11 mL、0.82 mmol、6.0当量)のH2O (0.8 mL)およびEtOH (5 mL)中の溶液を、13 (197 mg、0.14 mmol)のトルエン(5 mL)溶液に加えた。この混合物に、チオフェン-2-ボロン酸(45.5 mg、0.36 mmol、2.6当量)およびPd(PPh3)4 (6.3 mg、5 μmol、0.04当量)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰な溶媒を除去して、残渣をEtOAc (20 mL)に溶解し、H2O (15 mL)および食塩水(15 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、20を黄色のガラス状物質(168 mg、94%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.32 (s, 2H, H3), 7.26 (s, 2H, H6), 7.24-7.19 (m, 2H, Harom), 7.04-6.79 (m, 2H, Harom), 6.94-6.88 (m, 2H, Harom), 6.78 (s, 2H, H9), 5.92 (d, 2H, J = 8.9 Hz, H11), 5.24 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.36-4.25 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 4.19-4.08 (m, 4H, Troc CH2およびOCH2CH2CH2O), 4.02-3.87 (m, 8H, H11aおよびOCH3 x 2), 3.37 (dd, 2H, J = 10.8, 16.6 Hz, H1), 2.85 (d, 2H, J = 16.5 Hz, H1), 2.52-2.37 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.91 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.28および0.25 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4)。  
(b) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(チオフェン-2-イル)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (21)  
【化３８】
2008536905.tif 000042
【０２０２】
10% Cd/Pbカップル(288 mg、2.35 mmol、20当量)を、急速に撹拌した20 (154 mg、0.12 mmol)、THF (3 mL)および1 N NH4OAc (3 mL)の混合物に加えた。反応混合物を3時間攪拌した後、TLCにより出発物質が完全に消費されたことが示された。固体を濾過して、H2OおよびDCMにより洗浄した。水層をDCM (3 x 15 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、食塩水(40 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99:1 v/v CHCl3/MeOH、次いで98:2 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、21を黄色のガラス状物質(59 mg、72%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.90 (d, 2H, J = 4.0 Hz, H11), 7.51 (s, 2H, H6), 7.36 (s, 2H, H3), 7.22 (d, 2H, J = 5.2 Hz, Harom ), 7.02 (dd, 2H, J = 3.6, 5.0 Hz, Harom), 6.98 (d, 2H, J = 3.4 Hz, Harom), 6.88 (s, 2H, H9), 4.43-4.23 (m, 6H, H11aおよびOCH2CH2CH2O), 3.94 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.59 (ddd, 2H, J = 2.0, 11.5, 16.0 Hz, H1), 2.85 (ddd, 2H, J = 1.5, 5.2, 16.0 Hz, H1), 2.49-2.40 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。
【０２０３】
(c) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(チオフェン-2-イル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (22)  
【化３９】
2008536905.tif 000043
【０２０４】
亜硫酸水素ナトリウム(16.5 mg、0.159 mmol、2.0当量)のH2O (3.5 mL)溶液を、化合物21 (55.0 mg、0.079 mmol)のDCM (3.5 mL)溶液に加えた。反応混合物を4時間攪拌した。TLC (EtOAc)により、出発物質が完全に消費されたことおよびベースライン上に生成物のスポットが存在することが示された。反応混合物をDCMおよびH2Oにより希釈した。水層を分離して（分液ロートを振らずに）、凍結乾燥器により乾燥して、22を軽量の黄色の固体(53.9 mg、75 %)として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO)δ7.42 (dd, 2H, J = 1.5, 4.7 Hz, Harom), 7.33-7.30 (m, 6H, Harom), 6.53 (s, 2H, H9), 5.30 (d, 2H, J = 3.8 Hz, NH), 4.35-4.29 (m, 2H, H11a), 4.12-4.06 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.95 (d, 2H, J = 10.3 Hz, H11), 3.72 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.53-3.19 (m, 4H, H1), 2.23-2.21 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。  
【実施例４】
【０２０５】
(a) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(キノリン-6-イル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (23) 
【化４０】
2008536905.tif 000044
【０２０６】
TEA (0.12 mL、0.84 mmol、6.0当量)のH2O (0.8 mL)およびEtOH (5 mL)中の溶液を、室温で、トリフレート13 (202 mg、0.14 mmol)のトルエン(5 mL)溶液に加えた。この混合物に、6-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)キノリン(93.0 mg、0.36 mmol、2.6当量)およびPd(PPh3)4 (6.5 mg、6 μmol、0.04当量)を加えた。反応混合物をマイクロ波照射により100℃に15分間加熱した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰の溶媒を除去して、残渣をEtOAc (20 mL)に溶解し、H2O (15 mL)および食塩水(15 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで50:50 v/v ヘキサン/EtOAcまでの勾配)により精製して、23を黄色のガラス状物質(126 mg、64%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ8.88 (dd, 2H, J = 1.6, 4.2 Hz, Harom ), 8.14 (d, 2H, J = 7.6 Hz, Harom), 8.07 (d, 2H, J = 9.0 Hz, Harom), 7.85 (dd, 2H, J = 1.8, 8.9 Hz, Harom ), 7.66 (s, 2H, H3), 7.55 (d, 2H, J = 1.8 Hz, Harom), 7.41 (dd, 2H, J = 4.3, 8.3 Hz, Harom ), 7.31 (s, 2H, H6), 6.82 (s, 2H, H9), 5.98 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H11), 5.25 (d, 2H, J = 12.1 Hz, Troc CH2), 4.34-4.31 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 4.21-4.15 (m, 4H, Troc CH2およびOCH2CH2CH2O), 4.09-4.03 (m, 2H, H11a), 3.97 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.48 (ddd, 2H, J = 1.6, 10.4, 16.1 Hz, H1), 2.98 (dd, 2H, J = 2.4, 16.1 Hz, H1), 2.50-2.47 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.95 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.32および0.28 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4)。
【０２０７】
(b) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(キノリン-6-イル)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (24)
【化４１】
2008536905.tif 000045
【０２０８】
10% Cd/Pbカップル(516 mg、4.21 mmol、25当量)を、急速に撹拌した23 (234 mg、0.17 mmol)、THF (5 mL)および1 N NH4OAc (5 mL)の混合物に加えた。反応混合物を5時間攪拌した後、TLCにより出発物質の不完全な消費および少量の副産物の生成が示された。固体を濾過してH2Oおよび大量のMeOHにより洗浄した。過剰な溶媒を除去して、残渣をH2O (35 mL)およびCHCl3(35 mL)により希釈した。水層をCHCl3 (3 x 30 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、食塩水(100 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.5:0.5 v/v CHCl3/MeOH、次いで96:4 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、24を黄色のガラス状物質(44 mg、33%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ8.85 (dd, 2H, J = 1.6, 4.2 Hz, Harom ), 8.09 (d, 2H, J = 7.6 Hz, Harom), 8.03 (d, 2H, J = 9.0 Hz, Harom), 7.88 (d, 2H, J = 3.9 Hz, H11), 7.82 (dd, 2H, J = 1.8, 8.9 Hz, Harom), 7.24 (s, 2H, H3), 7.59 (s, 2H, Harom), 7.52 (s, 2H, H6), 7.48 (dd, 2H, J = 4.3, 8.3 Hz, Harom), 6.88 (s, 2H, H9), 4.48-4.42 (m, 2H, H11a), 4.39-4.28 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.94 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.76-3.63 (m, 2H, H1), 3.09-2.98 (m, 2H, H1), 2.46-2.43 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。
【実施例５】
【０２０９】
(a) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(3-メトキシベンゼン)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (25)
【化４２】
2008536905.tif 000046
【０２１０】
TEA (0.071 mL、0.51 mmol、6.0当量)のH2O (0.6 mL)およびEtOH (3.5 mL)中の溶液を、室温で、トリフレート13 (122 mg、0.085 mmol)のトルエン(3.5 mL)溶液に加えた。この混合物に、3-メトキシフェノールボロン酸(33.5 mg、0.22 mmol、2.6当量)およびPd(PPh3)4 (3.9 mg、3.4 μmol、0.04当量)を加えた。反応混合物をマイクロ波照射により100℃に5分間加熱した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰の溶媒を除去して、残渣をEtOAc (10 mL)に溶解し、H2O (10 mL)および食塩水(10 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで60:40 v/v ヘキサン/EtOAcまでの勾配)により精製して、25を黄色のガラス状物質(66 mg、57%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.23 (s, 2H, H3), 7.05-7.00 (m, 4H, H6およびHarom), 6.70 (d, 2H, J = 8.7 Hz, Harom), 6.64 (s, 2H, Harom), 6.67-6.64 (m, 4H, HaromおよびH9), 5.67 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H11), 4.98 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.08-4.02 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 3.92-3.84 (m, 4H, Troc CH2およびOCH2CH2CH2O), 3.74-3.66 (m, 8H, H11aおよびOCH3 x 2), 3.68 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.10 (dd, 2H, J = 10.8, 16.6 Hz, H1), 2.60 (d, 2H, J = 16.5 Hz, H1), 2.22-2.19 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.68 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.02および0.00 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4)。 
(b) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(3-メトキシベンゼン)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (26)  
【化４３】
2008536905.tif 000047
【０２１１】
10% Cd/Pbカップル(269 mg、2.20 mmol、25当量)を急速に撹拌した25 (119 mg、0.088 mmol)、THF (3 mL)および1 N NH4OAc (3 mL)の混合物に加えた。反応混合物を3.5時間攪拌した後、TLCにより出発物質が完全に消費されたことが示された。固体を濾過して、H2OおよびMeOHにより洗浄した。過剰な溶媒を除去して、残渣をH2O (20 mL)およびDCM (20 mL)により希釈した。水層をDCM (3 x 20 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、H2O (50 mL)および食塩水(50 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH、次いで98:2 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、26を黄色のガラス状物質(35 mg、54%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.79 (d, 2H, J = 3.9 Hz, H11), 7.44 (s, 2H, H3), 7.42 (s, 2H, H6), 7.21-7.16 (m, 2H, Harom), 6.90 (d, 2H, J = 8.7 Hz, Harom), 6.84-6.83 (m, 2H, Harom), 6.80 (s, 2H, H9), 4.33-4.17 (m, 6H, OCH2CH2CH2OおよびH11a), 3.86 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.75 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.44 (dd, 2H, J = 11.8, 16.2 Hz, H1), 3.30 (d, 2H, J = 16.2 Hz, H1), 2.39-2.33 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。 
(c) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(3-メトキシベンゼン)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (27) 
【化４４】
2008536905.tif 000048
【０２１２】
亜硫酸水素ナトリウム(7.6 mg, 0.073 mmol, 2.0当量)のH2O (1.7 mL)溶液を、化合物26 (27.0 mg, 0.036 mmol)のDCM (1.7 mL)溶液に加えた。反応混合物を2時間攪拌した。TLC (EtOAc)により出発物質が完全に消費されたことおよびベースライン上に生成物のスポットが存在することが示された。反応混合物をDCM (5 mL)およびH2O (5 mL)により希釈した。水層を分離して凍結乾燥し、27を軽量の白色の固体(12.1 mg, 35 %)として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO)δ7.61 (s, 2H, H3), 7.27-7.23 (m, 2H, Harom), 7.08-6.99 (m, 6H, HaromおよびH6), 6.81-6.78 (m, 2H, Harom), 6.54 (s, 2H, H9), 5.30 (s, 2H, NH), 4.37-4.30 (m, 2H, H11a), 4.17-4.08 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.84 (d, 2H, J = 10.4 Hz, H11), 3.78 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.62 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.52-3.20 (m, 4H, H1), 2.26-2.20 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。  
【実施例６】
【０２１３】
(a) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(3,4-メチレンジオキシフェニル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (28)
【化４５】
2008536905.tif 000049
【０２１４】
TEA (0.066 mL、0.47 mmol、6.0当量)のH2O (0.6 mL)およびEtOH (3.5 mL)中の溶液を、室温で、トリフレート13 (122 mg、0.085 mmol)のトルエン(3.5 mL)溶液に加えた。この混合物に、3,4-メチレンジオキシフェニルボロン酸(34.2 mg、0.21 mmol、2.6当量)およびPd(PPh3)4 (3.6 mg、3.2 μmol、0.04当量)を加えた。反応混合物をマイクロ波照射により100℃に5分間加熱した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰の溶媒を除去して、残渣をEtOAc (10 mL)に溶解し、H2O (10 mL)および食塩水(10 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を除去して粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで65:35 v/v ヘキサン/EtOAcまでの勾配)により精製して、28を黄色のガラス状物質(84 mg、77%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.34 (s, 2H, H6), 7.26 (s, 2H, H3), 6.89 (s, 2H, H9), 6.78-6.76 (m, 4H, Harom), 5.98 (s, 2H, OCH2O), 5.89 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H11), 5.23 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.32-4.27 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 4.18-4.09 (m, 4H, Troc CH2およびOCH2CH2CH2O), 3.97-3.91 (m, 8H, H11aおよびOCH3 x 2), 3.30 (dd, 2H, J = 10.8, 16.6 Hz, H1), 2.76 (d, 2H, J = 16.6 Hz, H1), 2.46-2.44 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.88 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.28および0.25 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4)。  
(b) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(3,4-メチレンジオキシフェニル)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (29)  
【化４６】
2008536905.tif 000050
【０２１５】
10% Cd/Pbカップル(307 mg、2.51 mmol、25当量)を急速に撹拌した28 (139 mg、0.101 mmol)、THF (3.5 mL)および1 N NH4OAc (3.5 mL)の混合物に加えた。反応混合物を5時間攪拌した後、TLCにより出発物質が完全に消費されたことおよび少量の副産物が生成したことが示された。固体を濾過してH2OおよびMeOHにより洗浄した。過剰な溶媒を除去して、残渣をH2O (25 mL)およびDCM (25 mL)により希釈した。水層をDCM (3 x 40 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、H2O (80 mL)および食塩水(80 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH、次いで98:2 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、26を黄色のガラス状物質(30 mg、39%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.86 (d, 2H, J = 3.9 Hz, H11), 7.60 (s, 2H, H6), 7.36 (s, 2H, H3), 6.91 (d, 2H, J = 0.9 Hz, Harom), 6.86 (s, 2H,  ), 6.82-6.78 (m, 4H, H9およびHarom), 5.97 (s, 2H, OCH2O), 4.36-4.25 (m, 6H, H11aおよびOCH2CH2CH2O), 3.93 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.52 (dd, 2H, J = 10.8, 16.6 Hz, H1), 3.33 (d, 2H, J = 16.6 Hz, H1), 2.46-2.40 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。  
(c) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(3,4-メチレンジオキシフェニル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (30) 
【化４７】
2008536905.tif 000051
【０２１６】
亜硫酸水素ナトリウム(2.2 mg, 0.021 mmol, 2.0当量)のH2O (0.5 mL)溶液を、化合物29 (8.1 mg, 0.0105 mmol)のDCM (0.5 mL)溶液に加えた。反応混合物を5時間攪拌した。TLC (EtOAc)により出発物質が完全に消費されたことおよびベースライン上に生成物のスポットが存在することが示された。反応混合物をDCM (1.5 mL)およびH2O (1.5 mL)により希釈した。水層を分離して凍結乾燥し、30を軽量の白色の固体(3.5 mg, 34 %)として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO)δ7.47 (s, 2H, H3), 6.98 (s x 2, 2H, H6), 7.06-6.78 (m, 6H, Harom), 6.51 (s x 2, 2H, H9), 5.27 (s, 2H, NH), 4.32-4.26 (m, 2H, H11a), 4.17-4.07 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.93 (d, 2H, J = 10.4 Hz, H11), 3.72 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.50-3.20 (m, 4H, H1), 2.27-2.20 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。 
【実施例７】
【０２１７】
(a) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(4-フルオロベンゼン)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (31)
【化４８】
2008536905.tif 000052
【０２１８】
TEA (0.072 mL、0.52 mmol、6.0当量)のH2O (0.6 mL)およびEtOH (3.5 mL)中の溶液を、室温で、トリフレート13 (125 mg、0.086 mmol)のトルエン(3.5 mL)溶液に加えた。この混合物に、4-フルオロベンゼンボロン酸(31.6 mg、0.22 mmol、2.6当量)およびPd(PPh3)4 (4.0 mg、3.4 μmol、0.04当量)を加えた。反応混合物をマイクロ波照射により100℃に5分間加熱した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰の溶媒を除去して、残渣をEtOAc (10 mL)に溶解し、H2O (10 mL)および食塩水(10 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc、次いで65:35 v/v ヘキサン/EtOAcまでの勾配)により精製して、31を黄色のガラス状物質(82 mg、71%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.40 (s, 2H, H3), 7.42 (dd, 4H, J = 5.2, 8.7 Hz, Harom), 7.28 (s, 2H, H6), 7.06 (dd, 4H, J = 8.7 Hz, Harom), 6.70 (s, 2H, H9), 5.92 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H11), 5.22 (d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.32-4.29 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 4.19-4.10 (m, 4H, Troc CH2およびOCH2CH2CH2O), 4.00-3.92 (m, 8H, H11aおよびOCH3 x 2), 3.33 (dd, 2H, J = 10.8, 16.5 Hz, H1), 2.84 (d, 2H, J = 16.5 Hz, H1), 2.49-2.44 (m, 2H, OCH2CH2CH2O), 0.92 (s, 18H, TBS CH3 x 6), 0.30および0.27 (s x 2, 12H, TBS CH3 x 4)。
【０２１９】
(b) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(4-フルオロベンゼン)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (32) 
【化４９】
2008536905.tif 000053
【０２２０】
10% Cd/Pbカップル(342 mg、2.80 mmol、25当量)を、急速に撹拌した31 (149 mg、0.112 mmol)、THF (4.5 mL)および1 N NH4OAc (4.5 mL)の混合物に加えた。反応混合物を5時間攪拌した後、TLCにより出発物質が完全に消費されたことが示された。固体を濾過して、H2OおよびMeOHにより洗浄した。過剰な溶媒を除去して、残渣をH2O (30 mL)およびDCM (30 mL)により希釈した。水層をDCM (3 x 30 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、H2O (80 mL)および食塩水(80 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH、次いで98:2 v/v CHCl3/MeOHまでの勾配)により精製して、32を黄色のガラス状物質(60 mg、75%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.88 (d, 2H, J = 3.9 Hz, H11), δ 7.51 (s, 2H, H6), 7.43 (s, 2H, H3), 7.34 (dd, 4H, J = 5.3, 8.6 Hz, Harom), 7.06 (dd, 4H, J = 8.7 Hz, Harom), 6.87 (s, 2H, H9), 4.41-4.25 (m, 6H, H11aおよびOCH2CH2CH2O), 3.93 (s, 3H, OCH3 x 2), 3.55 (dd, 2H, J = 10.8, 16.5 Hz, H1), 3.37 (d, 2H, J = 16.5 Hz, H1), 2.46-2.42 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。  
(c) 1,1’-[[(プロパン-1,3-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(4-フルオロベンゼン)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (33) 
【化５０】
2008536905.tif 000054
【０２２１】
亜硫酸水素ナトリウム(13.9 mg, 0.134 mmol, 2.0当量)のH2O (3 mL)溶液を、化合物32 (48.0 mg, 0.067 mmol)のDCM (3 mL)溶液に加えた。反応混合物を2時間攪拌した。TLC (EtOAc)により出発物質が完全に消費されたことおよびベースライン上に生成物のスポットが存在することが示された。反応混合物をDCM (8 mL)およびH2O (8 mL)により希釈した。水層を分離して凍結乾燥し、33を軽量の白色の固体(35.5 mg, 58 %)として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO)δ7.56 (s, 2H, H3), 7.49 (dd, 4H, J = 5.3, 8.6 Hz, Harom), 7.17 (dd, 4H, J = 8.7 Hz, Harom), 7.07 (s, 2H, H6), 6.53 (s, 2H, H9), 5.28 (s, 2H, NH), 4.36-4.30 (m, 2H, H11a), 4.17-4.09 (m, 4H, OCH2CH2CH2O), 3.95 (d, 2H, J = 10.4 Hz, H11), 3.73 (s, 6H, OCH3 x 2), 3.53-3.22 (m, 4H, H1), 2.27-2.19 (m, 2H, OCH2CH2CH2O)。  
【実施例８】
【０２２２】
(a) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-(5-メトキシ-2-ニトロ-1,4-フェニレン)カルボニル]]ビス[2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシメチル)-4-ヒドロキシアセチルピロリジン] (36)
【化５１】
2008536905.tif 000055
【０２２３】
触媒量のDMF (2滴)を、撹拌したニトロ酸34 (15.0 g、30.4 mmol)および塩化オキサリル(13.5 mL、19.3 g、152 mmol)の無水THF (300 mL)溶液に加えた。反応混合物を室温で16時間攪拌し、溶媒を減圧蒸発により除去した。得られた残渣を無水THF (225 mL)に再度溶解し、この酸塩化物溶液を、0℃（氷／アセトン）、窒素雰囲気下で撹拌したアミン35 (20.7 g、76.0 mmol)およびTEA (84 mL、61.52 g、608 mmol)のTHF (150 mL)中の混合物に滴下した。反応混合物を室温に温め、さらに16時間攪拌した。過剰なTHFをロータリーエバポレーターにより除去し、得られた残渣をH2O (400 mL)およびEtOAc (400 mL)により分配した。層を分離させ、水層をEtOAc (3 x 130 mL)により抽出した。有機層を合わせて、飽和NH4Cl (200 mL)、飽和NaHCO3 (200 mL)および食塩水(200 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて、粗生成物を暗色のオイルとして得た。フラッシュクロマトグラフィー（勾配溶離：60:40 v/v ヘキサン/EtOAc〜40:60 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、純粋なアミド36を淡黄色のガラス状物質(23.56 g、77%)として単離した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) (回転異性体)δ7.66 (s, 2H), 6.71 (s, 2H), 5.21-5.17 (m, 2H), 4.57-4.53 (m, 2H), 4.21-4.08 (m, 6H), 3.91 (s, 6H), 3.76-3.72 (m, 2H), 3.46 (dd, 2H, J = 11.8, 4.6 Hz), 3.21 (d, 2H, J = 11.9 Hz), 2.44-2.37 (m, 2H), 2.24-2.18 (m, 2H), 2.03-1.94 (m, 10H), 1.75-1.67 (m, 2H), 0.91-0.84 (m, 18H), 0.11- -0.05 (m, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ171.0, 166.4, 154.4, 148.5, 137.5, 127.7, 109.2, 108.3, 72.9, 69.3, 62.6, 57.4, 56.5, 54.8, 33.0, 28.5, 25.8, 22.5, 21.0, 18.2, -5.4および-5.5; LC/MS 2.93分 (ES+) m/z (相対強度) 1006 ([M + H]+., 100)。
【０２２４】
(b) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-(5-メトキシ-2-アミノ-1,4-フェニレン)カルボニル]]ビス[2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシメチル)-4-ヒドロキシアセチルピロリジン] (37)
【化５２】
2008536905.tif 000056
【０２２５】
10% Pd-C (550 mg)のEtOAc (20 mL)中のスラリーを、ニトロ化合物36 (5.5 g、5.47 mmol)のEtOAc (73 mL)溶液に加えた。混合物を、Parr装置を用いて30 psiで合計24時間水素化した。混合物を脱ガスし、TLC (EtOAc)により分析して、出発物質が完全に消費されたことが観察された。Whatman GF/F濾紙を用いた減圧濾過により触媒を除去し、濾液を蒸発させて、アニリン37を灰色の泡状物質(5.17 g、100%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ6.71 (s, 2H), 6.22 (s, 2H), 5.25-5.23 (m, 2H), 4.58-4.30 (m, 6H), 4.14-4.05 (m, 2H), 3.99 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 3.79-3.73 (m, 8H), 3.69-3.54 (m, 4H), 2.40-2.33 (m, 2H), 2.16-2.08 (m, 2H), 2.00 (s, 6H), 1.94-1.87 (m, 4H), 1.68-1.60 (m, 2H), 0.89 (s, 18H), 0.05および0.04 (s x 2, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ170.6, 170.0, 151.5, 141.7, 141.2, 113.1, 111.0, 102.0, 73.5, 68.5, 62.6, 57.0, 56.2, 32.9, 28.7, 25.6, 22.6, 21.1, 18.1, -5.1および-5.4; LC/MS 2.78分 (ES+) m/z (相対強度) 946 ([M + H]+., 52), 672 (30), 399 (20), 274 (65), 166 (20)。
【０２２６】
(c) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-[5-メトキシ-1,4-フェニレン-2-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニルアミノ)]カルボニル]]ビス[2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシメチル)-4-ヒドロキシアセチルピロリジン] (38)
【化５３】
2008536905.tif 000057
【０２２７】
2,2,2-トリクロロエチルクロロホルメート(2.63 mL、4.05 g、19.1 mmol)の無水DCM (45 mL)溶液を、-10℃（液体窒素／エタンジオール）で撹拌したアミン37 (8.21 g、8.70 mmol)および無水ピリジン(2.81 mL、2.75 g、34.8 mmol)の無水DCM (120 mL)溶液に滴下した。室温で16時間攪拌した後、TLC (50:50 v/v ヘキサン/EtOAc)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。反応混合物を飽和NH4Cl (2 x 70 mL)、飽和CuSO4 (70 mL)、H2O (70 mL)および食塩水(70 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて、Troc-カルバメート38を黄色の泡状物質(11.25 g、99%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ9.48 (br s, 1H), 7.85 (s, 2H), 6.79 (s, 2H), 5.28-5.24 (m, 2H), 4.86-4.76 (m, 4H), 4.70-4.53 (m, 2H), 4.12 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 4.14-4.10 (m, 2H), 3.80 (s, 6H), 3.76 (dd, 2H, J = 12.2, 3.8 Hz), 3.69-3.62 (m, 4H), 2.44-2.37 (m, 2H), 2.16 (dd, 2H, J = 14.1, 8.1 Hz), 2.10-1.92 (m, 10H), 1.72-1.65 (m, 2H), 0.90 (s, 18H), 0.06および0.04 (s x 2, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ170.5, 169.3, 152.0, 151.1, 144.2, 132.4, 114.4, 111.8, 105.2, 95.3, 74.4, 73.4, 68.7, 62.3, 57.3, 57.2, 56.5, 32.6, 28.7, 25.8, 22.6, 21.1, 18.1, -5.4および-5.5; LC/MS 3.23分 (ES+/ES-) m/z (M+. 観察されなかった), 472 (30), 416 (15), 302 (85), 274 (60), 198 (20), 170 (100), 142 (50), 110 (80)。
【０２２８】
(d) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(2S,4R)-[5-メトキシ-1,4-フェニレン-2-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニルアミノ)]カルボニル]]ビス(2-ヒドロキシメチル-4-ヒドロキシアセチルピロリジン) (39)
【化５４】
2008536905.tif 000058
【０２２９】
氷酢酸(90 mL)を、撹拌した38 (5.06 g、3.91 mmol)のH2O (30 mL)およびTHF (30 mL)中の溶液に加えた。反応混合物を室温で16時間攪拌した後、TLC (95:5 v/v CHCl3/MeOH)により反応の完了を確認した。酸性の溶液を、0℃（氷／アセトン）で撹拌したNaHCO3 (132 g)のH2O (1.3 L)溶液に滴下した。水層をEtOAc (3 x 200 mL)により抽出し、有機層を合わせて、H2O (200 mL)および食塩水(200 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を減圧蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(98:2 v/v CHCl3/MeOH)により精製して、ビスアルコール39を白色のガラス状物質(4.04 g、97%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ9.01 (br s, 2H), 7.66 (s, 2H), 6.79 (s, 2H), 5.23-5.20 (m, 2H), 4.84 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.77 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.63-4.55 (m, 2H), 4.10 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 4.08-4.01 (m, 2H), 3.82 (s, 6H), 3.75 (dd, 2H, J = 12.6, 3.7 Hz), 3.70-3.58 (m, 4H), 2.26 (dd, 2H, J = 14.1, 7.6 Hz), 2.15-2.06 (m, 2H), 2.01 (s, 6H), 1.98-1.92 (m, 4H), 1.74-1.65 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ170.6, 170.4, 152.1, 150.9, 144.8, 131.0, 115.6, 111.3, 105.7, 95.3, 74.3, 72.5, 68.7, 64.3, 58.8, 56.6, 56.5, 33.6, 28.5, 22.6. 21.1.
【０２３０】
(e) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS,2R)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-ヒドロキシ-7-メトキシ-2-ヒドロキシアセチル-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (40)
【化５５】
2008536905.tif 000059
【０２３１】
TEMPO (234 mg、1.50 mmol)およびBAIB (5.31 g、16.5 mmol)を、撹拌したビスアルコール39 (4.0 g、3.75 mmol)のDCM (140 mL)溶液に加えた。反応混合物を窒素雰囲気下で24時間攪拌した後、TLC (95:5 v/v CHCl3/MeOH)により出発物質が生成物に変換したことを確認した。混合物をDCM (30 mL)により希釈し、飽和NaHSO3水溶液 (2 x 30 mL)、飽和NaHCO3水溶液 (2 x 30 mL)および食塩水(30 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(勾配溶離：CHCl3〜99.5:0.5 v/v CHCl3/MeOH)により精製して、環化生成物40を淡黄色のガラス状物質(1.99 g、50%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.27 (s, 2H), 6.78 (s, 2H), 5.68 (d, 2H, J = 9.7 Hz), 5.41-5.35 (m, 2H), 5.24 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.23 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.14-3.97 (m, 6H), 3.93 (s, 6H), 3.77-3.69 (m, 4H), 2.46-2.33 (m, 4H), 2.05 (s, 6H), 2.03-1.87 (m, 4H), 1.70-1.62 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ170.4, 167.5, 154.4, 150.6, 149.0, 127.3, 124.5, 113.7, 110.8, 95.0, 87.5, 75.0, 71.4, 68.8, 58.3, 56.2, 51.1, 35.8, 28.5, 22.4, 21.0.
(f) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS,2R)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-ヒドロキシアセチル-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (41)
【化５６】
2008536905.tif 000060
【０２３２】
TBSOTf (1.27 mL、1.47 g、5.54 mmol)を、撹拌したビスアルコール40 (1.96 g、1.85 mmol)および2,6-ルチジン(0.86 mL、0.79 g、7.39 mmol)の無水DCM (40 mL)溶液に加えた。反応混合物をN2雰囲気下で5時間攪拌した後、TLC (EtOAc)により出発物質が消費されたことを確認した。DCM (50 mL)により希釈した後、有機混合物を飽和CuSO4 (30 mL)、飽和NaHCO3 (30 mL)および食塩水(50 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を減圧蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(40:60 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、生成物41を白色のガラス状物質(1.31 g、55%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.27 (s, 2H), 6.72 (s, 2H), 5.76 (d, 2H, J = 9.0 Hz), 5.37 (br s, 2H), 5.24 (d, 2H, J = 12.1 Hz), 4.17 (d, 2H, J = 12.1 Hz), 4.14-3.96 (m, 6H), 3.93 (s, 6H), 3.75-3.66 (m, 4H), 2.40-2.33 (m, 2H), 2.28-2.18 (m, 2H), 2.04 (s, 6H), 1.98-1.90 (m, 4H), 1.69-1.62 (m, 2H), 0.86 (s, 18H), 0.23および0.22 (s x 2, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ170.4, 168.0, 153.6, 150.5, 149.1, 127.9, 125.3, 113.9, 110.7, 95.2, 88.2, 74.7, 71.7, 68.7, 60.5, 56.2, 51.2, 36.3, 28.7, 25.6, 22.7, 21.1, 17.8, -4.2および-5.2。
【０２３３】
(g) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS,2R)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-ヒドロキシ-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (42)
【化５７】
2008536905.tif 000061
【０２３４】
K2CO3 (685 mg、4.96 mmol)のH2O (15 mL)溶液を、撹拌した酢酸エステル化合物41 (1.28 g、0.99 mmol)のMeOH (15 mL)溶液に加えた。最初の無色の溶液は、最終的に黄色になり、白色の沈殿の形成が観察された。反応混合物を5時間加熱還流した後、TLC (EtOAc)により出発物質が完全に生成物に変換したことを確認した。過剰な溶媒をロータリーエバポレーターにより除去し、混合物を1N HClにより注意深く中和してpH 7とした。得られた混合物をDCM (5 x 20 mL)により抽出し、有機層を合わせて、食塩水(50 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過した後、溶媒を減圧蒸発により除去して生成物42を白色の固体(982 mg、82%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.19 (s, 2H), 6.72 (s, 2H), 5.75 (d, 2H, J = 9.0 Hz), 5.22 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.58-4.56 (m, 2H), 4.18 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.11-3.95 (m, 6H), 3.85 (s, 6H), 3.75-3.69 (m, 2H), 3.59 (dd, 2H, J = 12.7, 4.2 Hz), 2.55 (br s, 2H), 2.38-2.25 (m, 2H), 2.14-2.03 (m, 2H), 1.97-1.85 (m, 4H), 1.74-1.62 (m, 2H), 0.86 (s, 18H,), 0.22および0.21 (s x 2, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ168.5, 153.6, 150.6, 149.1, 127.9, 125.3, 114.0, 110.8, 95.3, 88.3, 74.7, 69.5, 68.8, 60.8, 56.0, 54.0, 38.8, 28.8, 25.6, 22.7, 17.8, -4.2および-5.2。
【０２３５】
(h) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-オキソ-1,2,3,10,11,11a-ヘキサヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (43)
【化５８】
2008536905.tif 000062
【０２３６】
無水DMSO (0.34 mL、0.37 g、4.78 mmol)の無水DCM (4 mL)溶液を、窒素雰囲気下、-60℃（液体N2/CHCl3）で撹拌した塩化オキサリル(2M DCM溶液を1.20 mL、2.39 mmol)に、5分以上かけて滴下した。-55℃で15分間撹拌した後、基質42 (962 mg、0.80 mmol)の無水DCM (8 mL)中のスラリーを10分以上かけて反応混合物に滴下した。-55℃でさらに1時間攪拌した後、TEA (1.56 mL、1.13 g; 11.2 mmol)の無水DCM (4 mL)溶液を、5分以上かけて反応混合物に滴下した。反応混合物を0℃に温めた後、DCM (50 mL)により希釈した。有機溶液を冷1 N HCl (20 mL)、H2O (20 mL)および食塩水(30 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を減圧蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(50:50 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、ビスケトン43を泡状物質(550 mg、57%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.25 (s, 2H), 6.76 (s, 2H), 5.82 (d, 2H, J = 9.3 Hz), 5.22 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.32 (d, 2H, J = 20.4 Hz), 4.22 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.17-4.08 (m, 4H), 4.03-3.89 (m, 10H), 2.96 (dd, 2H, J = 19.6, 10.2 Hz), 2.56 (dd, 2H, J = 19.6, 2.8 Hz), 1.99-1.92 (m, 4H), 1.72-1.64 (m, 2H), 0.86 (s, 18H), 0.24および0.23 (s x 2, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 207.7, 168.0, 153.8, 151.0, 149.5, 127.9, 124.4, 114.1, 110.8, 95.2, 87.5, 74.8, 68.8, 58.9, 56.2, 52.9, 40.4, 28.7, 25.6, 22.8 17.8, -4.12および-5.31。
【０２３７】
(i) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-[[(トリフルオロメチル)スルホニル]オキシ]-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (44)
【化５９】
2008536905.tif 000063
【０２３８】
開けたばかりのアンプルから取り出した無水トリフルオロメタンスルホン酸無水物(1.61 mL、2.71 g、9.60 mmol)を、0〜5℃（氷）、窒素雰囲気下で激しく撹拌したケトン43 (525 mg、0.44 mmol)および無水ピリジン(0.78 mL、759 mg、9.60 mmol)の無水DCM (25 mL)溶液に、素早く一度に加えた。反応混合物をすぐに室温に温めると、これは最終的に暗赤色になった。反応混合物を合計28時間攪拌した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。混合物を冷飽和NaHCO3 (50 mL)中に注ぎ、DCM (3 x 20 mL)により抽出した。有機層を合わせて、飽和CuSO4 (30 mL)および食塩水(30 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を減圧蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(80:20 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、トリフレート44を黄色の泡状物質(249 mg、39%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.23 (s, 2H), 7.17 (s, 2H), 6.73 (s, 2H), 5.93 (d, 2H, J = 8.9 Hz), 5.22 (d, 2H, J = 12.1 Hz), 4.21 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.15-4.07 (m, 2H), 4.02-3.86 (m, 8H), 3.33 (ddd, 2H, J = 16.6, 10.7, 2.3 Hz), 2.82 (dd, 2H, J = 16.7, 2.6 Hz), 1.98-1.91 (m, 4H), 1.71-1.63 (m, 2H), 0.88 (s, 18H), 0.28および0.25 (s x 2, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ164.9, 153.6, 151.3, 149.6, 136.0, 127.8, 123.7, 121.0, 118.6 (q, J = 321.5 Hz), 114.2, 111.0, 95.1, 86.4, 74.9, 68.8, 60.6, 56.2, 34.4, 28.7, 25.6, 22.8, 17.8, -4.2および-5.4。
【０２３９】
(j) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(p-メトキシフェニル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (45)
【化６０】
2008536905.tif 000064
【０２４０】
Pd(PPh3)4 (7.43 mg、6.43 μmol)を、室温で、トリフレート44 (236 mg、0.16 mmol)、4-メトキシフェニルボロン酸(63 mg、0.42 mmol)、TEA (0.13 mL、98 mg、0.97 mmol)のH2O (0.8 mL)、EtOH (5 mL)およびトルエン(5 mL)中の溶液に加えた。反応混合物を電子レンジ中で100℃に30分間加熱した後、TLC (80:20 v/v EtOAc/ヘキサン)により出発物質が完全に消費されたことを確認した。過剰な溶媒を減圧蒸発により除去し、得られた残渣をEtOAc (50 mL)に溶解し、H2O (20 mL)および食塩水(20 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー (勾配溶離：80:20 v/v ヘキサン/EtOAc〜50:50 v/v ヘキサン/EtOAc)により精製して、C2-アリール生成物45を黄色のガラス状物質(117 mg、52%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.35 (s, 2H), 7.31 (s, 2H), 7.31-7.27 (m, 6H), 6.90 (d, 4H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 2H), 5.92 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 5.23 (d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.20 (d, 2H, J = 12.1 Hz), 4.14-4.05 (m, 4H), 4.04-3.95 (m, 2H), 3.93 (s, 6H), 3.83 (s, 6H), 3.34 (ddd, 2H, J = 16.3, 10.4, 2.0 Hz), 2.86-2.75 (m, 2H), 2.02-1.94 (m, 4H), 1.72-1.66 (m, 2H), 0.93および0.86 (s x 2, 18H), 0.28および0.25 (s x 2, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ163.7, 159.1, 153.7, 150.8, 149.3, 127.8, 126.3, 126.1, 125.4, 122.3, 122.2, 114.3, 114.2, 110.9, 95.3, 87.3, 74.8, 68.8, 61.5, 56.2, 55.4, 35.3, 28.8, 25.7, 22.8, 17.9, -4.0および-5.1。
【０２４１】
(k) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(p-メトキシフェニル)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (46)
【化６１】
2008536905.tif 000065
【０２４２】
10% Cd/Pbカップル(192 mg、1.55 mmol)を急速に撹拌した45 (107 mg、77.3 μmol)、THF (2.5 mL)および1N NH4OAc (2.5 mL)の混合物に加えた。反応混合物を3時間攪拌した後、TLC (95:5 v/v CHCl3/MeOH)により目的のPBDおよび副産物の生成が示された。固体を濾過により収集し、H2OおよびDCMにより洗浄した。水層をDCM (3 x 10 mL)により抽出し、有機抽出物を合わせて、食塩水(50 mL)により洗浄し、乾燥した(MgSO4)。濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(勾配溶離：CHCl3〜99:1 v/v CHCl3/MeOH)により精製して、イミン46を黄色のガラス状物質(32.5 mg、55%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.89 (d, 2H, J = 3.9 Hz), 7.53 (s, 2H), 7.39 (s, 2H), 7.34 (d, 4H, J = 8.8 Hz), 6.90 (d, 4H, J = 8.8 Hz), 6.82 (s, 2H), 4.43-4.38 (m, 2H), 4.18-4.05 (m, 4H), 3.95 (s, 6H), 3.83 (s, 6H), 3.58 (ddd, 2H, J = 16.2, 11.5, 1.9 Hz), 3.38 (ddd, 2H, J = 16.3, 5.1, 1.6 Hz), 2.01-1.94 (m, 4H), 1.73-1.66 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)δ162.6, 161.3, 159.2, 151.3, 148.1, 140.3, 126.2, 126.0 (x2), 123.2, 122.0, 119.1, 114.3, 111.9, 110.9, 68.8, 56.2, 55.4, 53.9, 35.6, 28.7, 22.6。
【０２４３】
(j) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(p-メトキシフェニル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (47)
【化６２】
2008536905.tif 000066
【０２４４】
亜硫酸水素ナトリウム(4.90 mg、47.2 μmol)の水(3 mL)溶液を、撹拌した46 (18.11 mg、23.6 μmol)のジクロロメタン(1.5 mL)溶液に加えた。反応混合物を24時間激しく撹拌した後、有機層と水層を分離した。水層のTLC分析(95:5 v/v CHCl3/MeOH)により、46 (Rf〜0.3)が存在せず、ベースライン上に強いUV吸収を有する物質が存在することが示された。水層を凍結乾燥して亜硫酸水素塩付加物47を軽量の固体(10 mg、43%)として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ7.41 (s, 2H), 7.37 (d, 4H, J = 8.7 Hz), 7.04 (s, 2H), 6.91 (d, 4H, J = 8.9 Hz), 6.47 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 4.31-4.21 (m, 2H), 4.06-3.86 (m, 6H), 3.76 (s, 6H), 3.71 (s, 6H), 3.51-3.21 (m, 4H), 1.90-1.70 (m, 4H), 1.62-1.51 (m, 2H)。
【実施例９】
【０２４５】
in vitroの細胞毒性の測定
K562細胞系（MTTアッセイ）
1時間の曝露
K562ヒト慢性骨髄性白血病細胞を、10%ウシ胎仔血清および2 mMグルタミンを補足したRPM1 1640培地中で、5% CO2を含有する加湿雰囲気下、37℃で維持し、特定の用量の薬物を加えて37℃の暗所で1時間インキュベートした。遠心分離(5分、300 g)によりインキュベーションを終了し、薬物を含まない培地により細胞を1回洗浄した。適切な薬物処理の後、細胞を96ウェルマイクロタイタープレートに移した（ウェルあたり104細胞、サンプルあたり8ウェル）。次に、プレートを5% CO2を含有する加湿雰囲気下、37℃の暗所で維持した。アッセイは、生存細胞の、黄色の可溶性テトラゾリウム塩、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニル-2H-テトラゾリウムブロミド(MTT, Aldrich-Sigma)を還元して不溶性の紫色のホルマザン沈殿を生成する能力に基づく。プレートを4日間インキュベートした後（対照の細胞がおよそ10倍の数に増殖するまで）、それぞれのウェルに20μLのMTT溶液（リン酸緩衝生理食塩水中、5 mg/mL）を加えて、プレートをさらに5時間インキュベートした。次にプレートを300 gで5分間遠心分離し、ウェルあたり10〜20μLを残して一定量の培地を細胞ペレットからピペットで取った。それぞれのウェルにDMSO (200μL)を加え、サンプルを撹拌して、完全に混合させた。次に、Titertek Multiscan ELISAプレートリーダーにより波長550 nmの光学濃度を測定し、用量反応曲線を作図した。それぞれの曲線について、最終光学濃度を対照値の50%に減少させるのに必要な用量としてIC50値を求めた。
【０２４６】
96時間の曝露
上記の方法を修正して、5×104個のK562細胞（上記の通り）を、10%ウシ胎仔血清(Sigma)および20 mM L-グルタミン(Sigma)を補足したRPMI 1640培地(Sigma)中で維持し、この溶液190μLに特定の用量の薬物(10μL)を加えて、5% CO2中、37℃で96時間インキュベートした。それぞれのウェルに250μg/ml（最終濃度）のMTTを加えて、プレートをさらに4時間インキュベートした。Envisionプレートリーダー(Applied Biosystems)を用いて450 nmの吸収を測定した。次にデータをGraphpad PRISMにより分析して、IC50（細胞集団を半分に減らすのに必要な化合物濃度と定義される）を得た。
【０２４７】
結果
【表１】
2008536905.tif 000067
【０２４８】
a 1時間のインキュベーション
b 96時間のインキュベーション
K562細胞系（Alamar Blueアッセイ）
試験する化合物を100% Biotech grade DMSO (Sigma)に溶解した後、2% DMSOにより2μMまたは200 nMの保存濃度に希釈した。100μlの保存濃度を、中間ポリスチレン96ウェル細胞培養プレート(Nunc)中で、2% DMSOにより1対3に連続希釈した。2% DMSOを、ブランクとして使用するために外側の列に、および対照として使用するために第2列または第11列（アッセイプレートの上または下のいずれを使用するかに応じて）に入れた。次に、中間プレートの行全体を、蛍光適合性ポリスチレン96ウェル細胞培養プレート(Greiner BioOne)の行B〜DまたはE〜Gのいずれかに、それぞれのウェルに10μlずつで、同じ検体を3個ずつ作るように移した。10%ウシ胎仔血清(Sigma)および20 mM L-グルタミン(Sigma)を補足したフェノールレッドを含まないRPMI 1640(Sigma)中に5×104細胞/mlを含有する細胞溶液を作った。アッセイプレートの列2〜11のそれぞれのウェルに190μlの細胞溶液を加えた。列1および12に190μlの培地を加えた。プレートを5% CO2中、37℃で96時間インキュベートした。それぞれのウェルに1μM（最終濃度）のレザズリン(rezasurin)（生存細胞により蛍光性のレソフリンに変化する）を加えて、プレートをさらに4時間インキュベートした。Envisionプレートリーダー(Applied Biosystems)を用いて、530〜570nm励起、580〜620nm発光で蛍光を測定した。次に、データをGraphpad PRISMにより分析して、IC50（細胞集団を半分に減らすのに必要な化合物濃度と定義される）を得た。
【０２４９】
結果
【表２】
2008536905.tif 000068
【０２５０】
LOXIMVIおよびOVCAR-5細胞系
10%ウシ胎仔血清(Sigma)および20 mM L-グルタミン(Sigma)を補足したフェノールレッドを含まないRPMI 1640(Sigma)中に、LOXIMVIヒト黒色腫細胞またはOVCAR-5ヒト卵巣腫瘍細胞のいずれかを5×104細胞/ml含有する細胞溶液を作った。190μlの細胞溶液を、蛍光適合性ポリスチレン96ウェル細胞培養プレート(Greiner BioOne)の第2〜11列のそれぞれのウェルに加えた。第1列および第12列に190μlの培地を加えた。プレートを5% CO2中、37℃で一晩インキュベートした。化合物を100% Biotech grade DMSO (Sigma)に溶解した後、2% DMSOにより保存濃度に希釈した。100μlの保存濃度を、中間ポリスチレン96ウェル細胞培養プレート(Nunc)中で、2% DMSOにより1対3に連続希釈した。2% DMSOを、ブランクとして使用するために外側の列に、および対照として使用するために第2列または第11列（アッセイプレートの上または下のいずれを使用するかに応じて）に入れた。次に、中間プレートの行全体を、細胞プレートの行B〜DまたはE〜Gのいずれかに、それぞれのウェルに10μlずつで、同じ検体を3個ずつ作るように移した。プレートを5% CO2中、37℃で96時間インキュベートした。それぞれのウェルに1μM（最終濃度）のレザズリン（生存細胞により蛍光性のレソフリンに変化する）を加えて、プレートをさらに4時間インキュベートした。Envisionプレートリーダー(Applied Biosystems)を用いて、530〜570nm励起、580〜620nm発光で蛍光を測定した。次に、データをGraphpad PRISMにより分析して、IC50（細胞集団を半分に減らすのに必要な化合物濃度と定義される）を得た。
【０２５１】
結果
【表３】
2008536905.tif 000069
【実施例１０】
【０２５２】
抗腫瘍活性
次の実験を、内務省（ロンドン、英国）により認可された事業免許の下に実施し、全体を通してUK CCCRガイドライン(Workman, P., et al.,  British Journal of Cancer, 77, 1-10 (1998))に従った。
【０２５３】
LOX IMVI（ヒト黒色腫）をヌードマウス(B&K Universal, Hull, UK)の皮下で増殖させた。腫瘍を、トロカールにより単一の腫瘍断片として脇腹に移植した。8匹の腫瘍を有するマウスの群に、媒体として5% DMA/生理食塩水を用いて、あらかじめ確立された単回静脈内投与(iv)最大耐量(MTD)である3mgkg-1で、ZC423を投与した。対照のマウス(n=8)には媒体のみを投与した。
【０２５４】
投与は、腫瘍がキャリパーにより確実に測定することができるようになった時に（平均寸法4×4 mm）開始し、毎日のキャリパーによる腫瘍の大きさの測定およびマウスの体重により治療効果を評価した。腫瘍の体積は、式a2×b/2（ここで、aは腫瘍の小さい方の直径であり、bは大きい方の直径である）により決定した。結果を、時間に対する相対的な腫瘍の体積のグラフとして図1に示す（■ ZC423; ◆ 対照-溶媒のみ）。ZC423の活性は、Mann-Whitney分析（たとえば、「基本統計学」(Essential Statistics)、第2版、 (1989), D.G.Rees, ISBN 0 412 32030 4, Chapman and Hall, Londonに記載される通りの）により評価した場合、統計的に有意であることが示された。
【０２５５】
図2は同じ試験（● ZC423; ◆ 対照-溶媒のみ）であるが、より長期間で、かつより大きいスケールで平均RTVを求めた結果を示す。対照群では腫瘍のないマウスが存在しなくなった時点の第16日で実験を止めたのに対して、投与群ではすべての動物において第68日に腫瘍がなかった。
【０２５６】
上記と同じ条件で、OVCAR-5（ヒト卵巣腫瘍）を用いて研究をおこなった。結果を図3（● ZC423; ◆ 対照-溶媒のみ）に示す。この研究において、対照群は第32日で実験を止めた。
【実施例１１】
【０２５７】
架橋および溶解度
DNA架橋
閉環puc18 DNAをHindIIIにより線形化した後、脱リン酸化し、最後にポリヌクレオチドキナーゼを用いて[γ32P]-ATP により5’末端を標識した。10 ngのDNAおよび薬物を含む反応を、水性1×TEOA (25 mMトリエタノールアミン、1 mM EDTA、pH 7.2)緩衝液中、50μLの最終体積で、37℃で実施した。同量の終止溶液(0.6 M NaOAc、20 mM EDTA、100 μg/mL tRNA)を加えることにより反応を終了した後、エタノールにより沈殿をおこなった。サンプルを遠心分離した後、上清を捨て、ペレットを凍結乾燥により乾燥した。サンプルを10μLのアルカリ変性緩衝液(4 mgブロモフェノールブルー、600 mgスクロースおよび40 mg NaOH)中に再懸濁し、室温で3分間ボルテックスミキサーにかけた。非変性の対照を10μLの標準スクロース負荷染料(2.5 mgブロモフェノールブルー、2.5 mgキシレンシアノールブルーおよび4 gスクロース)中に再懸濁した。サンプルおよび対照の両方をアガロースゲルに直接載せた。
【０２５８】
電気泳動は、長さ20 cmの0.8%水中水平アガロースゲル上で、1×TAE泳動用緩衝液(2.42 g Tris Base、0.372 g EDTA、0.571ml氷酢酸)中、 38〜40 Vで16時間実施した。ゲルをSavant SG210D SpeedGelゲル乾燥器で、DE81濾紙を下に敷いた一層のWhatman 3MM 上に載せて80℃で80分間減圧乾燥した。FujiRX X線フィルム上に一晩曝して、オートラジオグラフを得た。BioRad GS-670イメージングレーザー濃度計を用いてフィルムのバンドを定量した。二本鎖バンド単独の濃度の量と比較した、それぞれの線の総DNA（二本鎖および一本鎖バンドの濃度の合計）を測定することにより架橋のパーセンテージを計算した。測定された架橋したDNAのパーセンテージに対して薬物濃度をプロットすることにより用量反応曲線が得られ、それによりDNAの50%を架橋するのに必要な量(XL50)が得られる。
【０２５９】
溶解度
試験化合物を飽和溶液を作るための最小量の水に溶解することにより溶解度を測定した。
【０２６０】
結果
DNAの架橋
【表４】
2008536905.tif 000070
【０２６１】
溶解度
【表５】
2008536905.tif 000071
【図面の簡単な説明】
【０２６２】
【図１】腫瘍を移植したマウスに被検化合物を投与し、腫瘍の大きさの測定およびマウスの体重により治療効果を評価した結果を示す。
【図２】腫瘍を移植したマウスに被検化合物を投与し、腫瘍の大きさの測定およびマウスの体重により治療効果を評価した結果を示す。
【図３】腫瘍を移植したマウスに被検化合物を投与し、腫瘍の大きさの測定およびマウスの体重により治療効果を評価した結果を示す。
【図１】
2008536905.tif 000073
【図２】
2008536905.tif 000074
【図３】
2008536905.tif 000075
【手続補正書】
【提出日】平成19年1月29日(2007.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３９】
(j) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11S,11aS)-10-(2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル)-11-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-7-メトキシ-2-(p-メトキシフェニル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (45)
【化６０】
2008536905.tif 000076
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４１】
(k) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-7-メトキシ-2-(p-メトキシフェニル)-1,11a-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]] (46)
【化６１】
2008536905.tif 000077
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４３】
(j) 1,1’-[[(ペンタン-1,5-ジイル)ジオキシ]ビス[(11aS)-11-スルホ-7-メトキシ-2-(p-メトキシフェニル)-1,10,11,11a-テトラヒドロ-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン]]ナトリウム塩 (47)
【化６２】
2008536905.tif 000078
【国際調査報告】
2008536905.tif 000079
2008536905.tif 000080