(57)【要約】  本発明は、新規なケラチン結合性タンパク質有効成分、その調製および使用に関する。【選択図】図１−１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種類のケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）を、化粧品に適合可能な媒体中に含んでなる、ケラチン含有物を処理するための化粧用組成物。
【請求項２】
前記ポリペプチド配列（ｉ）が、ヒト毛髪ケラチン、爪ケラチン、または皮膚ケラチンに対して結合親和性を有する、請求項１に記載の化粧用組成物。
【請求項３】
前記ポリペプチド配列（ｉ）が、以下のポリペプチド配列：
（ａ）  配列番号１、２１９３−２４８１位のポリペプチド配列
（ｂ）  配列番号１、２６０６−２８７１位のポリペプチド配列
（ｃ）  （ａ）と比較して、最大６０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
（ｄ）  （ｂ）と比較して、最大５０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
のうち少なくとも１つを含み、ここで、ポリペプチド配列（ｃ）または（ｄ）のケラチン結合性が、実施例９もしくは１０のものと同様の試験において測定した場合にポリペプチド配列（ａ）または（ｂ）により示される値の少なくとも１０％に相当する、請求項１に記載の化粧用組成物。
【請求項４】
前記ポリペプチド配列（ｉ）を、０．０１〜３０重量％の量で含んでなる、請求項１に記載の化粧用組成物。
【請求項５】
前記ポリペプチド配列（ｉ）の他に、少なくとも１種類の化粧用有効成分を含んでなる、請求項１に記載の化粧用組成物。
【請求項６】
前記化粧用有効成分が、天然または合成ポリマー、顔料、保湿剤、油、ワックス、酵素、鉱物、ビタミン、日焼け止め、色素、香料、酸化防止剤および保存料からなる群より選択される、請求項５に記載の化粧用組成物。
【請求項７】
毛髪のくし通りを改善するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化粧用組成物の使用。
【請求項８】
毛髪のセットを改善するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化粧用組成物の使用。
【請求項９】
皮膚に対するコンディショニング効果のための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化粧用組成物の使用。
【請求項１０】
皮膚、爪および毛髪の化粧用組成物を調製するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化粧用組成物の使用。
【請求項１１】
少なくとも１種類のケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）を、製薬上適合可能な媒体中に含んでなる、ケラチン含有物を処理するための医薬組成物。
【請求項１２】
（ｉ）  ケラチンに対して結合親和性を有する、少なくとも１種類のポリペプチド配列
（ｉｉ）  ポリペプチド配列（ｉ）と天然には連結していない、エフェクター分子
からなる、ケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項１３】
前記ポリペプチド配列（ｉ）が、ヒト毛髪、爪または皮膚のケラチンに対して結合親和性を有する、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項１４】
前記ポリペプチド配列（ｉ）が、以下のポリペプチド配列：
（ａ）  配列番号１、２２６９−２５０８位のポリペプチド配列
（ｂ）  配列番号１、２６０６−２８７１位のポリペプチド配列
（ｃ）  （ａ）と比較して、最大７０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
（ｄ）  （ｂ）と比較して、最大７０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
のうち少なくとも１つ以上を含み、ここで、ポリペプチド配列（ｃ）または（ｄ）のケラチン結合性が、実施例９もしくは１０に記載のアッセイにおいて測定した場合にポリペプチド配列（ａ）または（ｂ）により示される値の少なくとも１０％に相当する、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項１５】
前記エフェクター分子（ｉｉ）がポリペプチド配列を含有する、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項１６】
前記エフェクター分子（ｉｉ）が酵素活性を有する、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項１７】
前記エフェクター分子（ｉｉ）が色素または色素成分である、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項１８】
前記エフェクター分子（ｉｉ）がＵＶ吸収剤である、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項１９】
前記エフェクター分子（ｉｉ）が酸化防止剤である、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２０】
前記エフェクター分子（ｉｉ）がカロテノイドである、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２１】
前記エフェクター分子（ｉｉ）が、殺菌剤、殺虫剤または殺生物剤である、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２２】
前記エフェクター分子（ｉｉ）がビタミンまたはプロビタミンである、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２３】
皮膚、爪および毛髪の化粧用組成物を製造するための、請求項１２に記載のケラチン結合性エフェクター分子の使用。
【請求項２４】
エフェクター分子（ｉｉ）が、共有結合により前記ポリペプチド配列（ｉ）と結合している、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２５】
前記エフェクター分子（ｉｉ）が、（ｉ）および（ｉｉ）に既に存在する２つの化学官能基を利用して、前記ポリペプチド（ｉ）の側鎖、Ｃ末端またはＮ末端の官能基に共有結合している、請求項１２〜１４または２４のいずれか１項に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２６】
１種類以上のエフェクター分子（ｉｉ）が、少なくとも二官能性のリンカーにより、前記ポリペプチド（ｉ）の側鎖、Ｃ末端またはＮ末端の官能基に共有結合している、請求項１２〜１４または２４のいずれか１項に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２７】
エフェクター分子（ｉｉ）とポリペプチド（ｉ）との間にスペーサーエレメントが組み込まれている、請求項１２〜１４、２２または２６のいずれか１項に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２８】
エフェクター分子（ｉｉ）とポリペプチド（ｉ）との間に、プロテアーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、ホスファターゼまたはヒドロラーゼに対する潜在的切断部位を有する、請求項２６または２７に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項２９】
エフェクター分子（ｉｉ）とポリペプチド（ｉ）との融合タンパク質の精製を容易にするさらなるポリペプチド配列を有する、請求項２６、２７または２８のいずれか１項に記載のケラチン結合性エフェクター分子。
【請求項３０】
請求項３に記載のケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）の調製方法。
【請求項３１】
請求項１４に記載のケラチン結合性エフェクター分子の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なケラチン結合性タンパク質活性物質に関し、またその製造および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
先行技術
脊椎動物細胞は線維を含み、線維の１つの群はケラチンから構成される。またケラチンは毛髪、皮膚および爪に存在し、そのケラチンに対して、（例えば、デスモプラキンなどの）特定のタンパク質が、ケラチン結合性ドメインと称される特定の配列モチーフによって結合している（Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May;14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26; Hopkinson SB, Jones JC., The N terminus of the transmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. 2000 Jan;11(1):277-86）。
【非特許文献１】Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Mol Biol Cell. 2003 May;14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26
【非特許文献２】Hopkinson SB, Jones JC., Mol Biol Cell. 2000 Jan;11(1):277-86
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
発明の目的
本発明の目的は、ケラチンまたはケラチン含有物、例えば皮膚もしくは毛髪に対して高い親和性を有する新規ポリペプチドを提供することである。このようなポリペプチドは、特に毛髪および皮膚の、ケラチン含有構造についての美容上の処置および医薬品による処置に適している。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の説明
本発明は、少なくとも１種類のケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）を、化粧品に適合可能な媒体中に含んでなる、ケラチン含有物を処理するための化粧用組成物に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
ポリペプチド配列（ｉ）
ポリペプチド配列（ｉ）はケラチンに対する結合親和性を有する。ケラチンに対するポリペプチド配列（ｉ）の結合は、実施例８、９および１０に記載の条件下でアッセイすることができる。
【０００６】
特に好適なケラチン結合性ポリペプチドはヒトデスモプラキン中に存在する配列であり、あるいはヒトデスモプラキンポリペプチド配列の改変、例えばアミノ酸挿入、置換または欠失によってその配列から誘導される。
【０００７】
ヒトデスモプラキンのポリペプチド配列を配列番号１に示す。好適なケラチン結合性ドメイン（ドメインＢ）は、配列番号１の２１９３−２４８１位のポリペプチド配列、およびその機能的等価物である。別のケラチン結合性ドメイン（ドメインＣ）は、配列番号１の２６０６−２８７１位のポリペプチド配列、およびその機能的等価物である。
【０００８】
ケラチン結合性ドメインを図１に示す。
【０００９】
好ましいポリペプチド配列（ｉ）は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。
【００１０】
また本発明では、具体的に開示されるポリペプチド配列（ｉ）の「機能的等価物」および本発明の方法におけるその使用が同様に含まれる。
【００１１】
本発明の目的のためには、具体的に開示されるポリペプチド（ｉ）の「機能的等価物」またはアナログとは、ポリペプチド（ｉ）とは異なり、さらに、例えば、ケラチン結合性等の所望の生物学的活性を有するポリペプチドである。ゆえに、例えば、「機能的等価物」とは、実施例９もしくは１０に記載の結合アッセイの１つにおいて、配列番号１のドメインＢまたはドメインＣを有するポリペプチドが実施例９もしくは１０に記載の結合アッセイにおいて示す結合性の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、特に好ましくは７５％、特に非常に好ましくは９０％の結合性を示すポリペプチド配列を意味する。
【００１２】
好適なアミノ酸置換の例は以下の表に挙げるものである：
【表１】
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【００１３】
配列番号１の２８４９位に天然に存在するセリンは、この位置でのリン酸化を回避するために、例えばグリシンに置換できることが知られている（Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May;14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26）。
【００１４】
また本発明では、「機能的等価物」とは、特に、上述のアミノ酸配列の少なくとも１ヵ所の位置において、具体的に記載されるアミノ酸以外のアミノ酸を有するが、それにもかかわらず上述の生物学的活性の１つを有する突然変異タンパク質も意味する。ゆえに「機能的等価物」には、１個または数個のアミノ酸付加、置換、欠失および／または転化によって取得可能な突然変異タンパク質が含まれる。前記改変は、その改変によって本発明に記載の特性プロファイルを有する突然変異タンパク質が生じる限り、配列上の任意の位置に起こり得る。
【００１５】
上記意義の「機能的等価物」は、上記ポリペプチドの「前駆体」でもあり、また、該ポリペプチドの「機能的誘導体」および「塩」でもある。
【００１６】
これに関して「前駆体」とは、所望の生物学的活性を有するか、あるいは有さない、ポリペプチドの天然または合成の前駆体である。
【００１７】
用語「塩」とは、本発明のタンパク質分子のカルボキシル基の塩およびアミノ基の酸付加塩の両者を意味する。カルボキシル基の塩はそれ自体は公知の様式で調製することができ、それには無機塩、例えば、ナトリウム、カルシウム、アンモニウム、鉄および亜鉛塩、ならびに例えばアミン（例えばトリエタノールアミン、アルギニン、リシン、ピペリジン等）の有機塩基との塩が含まれる。同様に本発明は、酸付加塩、例えば、塩酸または硫酸等の鉱酸との塩ならびに酢酸およびシュウ酸等の有機酸との塩に関する。
【００１８】
同様に本発明のポリペプチドの「機能的誘導体」は、公知の技術を用いて、機能的アミノ酸側基またはそのＮ末端もしくはＣ末端上で調製することができる。このような誘導体には、例えばカルボン酸基のエステルまたはチオエステル、アンモニアまたは一級もしくは二級アミンと反応させることによって取得可能なカルボン酸基のアミド；アシル化剤と反応させることによって調製される遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体；アルキル化剤と反応させることによって調製される遊離アミノ基のＮ−アルキル誘導体；アシル化剤と反応させることによって調製される遊離メルカプト基のＳ−アシル誘導体；遊離メルカプト基をアルキル化剤と反応させることによるチオエーテル；遊離メルカプト基を、例えばチオールと反応させることによるジスルフィド；アシル化剤と反応させることによって調製される遊離ヒドロキシ基のＯ−アシル誘導体；または遊離ヒドロキシル基をアルキル化剤と反応させることによるエーテルが含まれる。
【００１９】
また、天然の「機能的等価物」には、他の生物から取得可能なポリペプチド、および天然に存在する変異体も含まれる。例えば、配列の比較によって相同配列領域の範囲を確認すること、および本発明の具体的要件に基づいて等価な酵素を確認することが可能である。
【００２０】
同様に「機能的等価物」には、例えば所望の生物学的機能を有する、本発明のポリペプチドの断片、好ましくは単一ドメインまたは配列モチーフが含まれる。
【００２１】
さらに「機能的等価物」は、上述のポリペプチド配列またはそれに由来する機能的等価物の１つ、およびさらに、それらと機能的に異なり、Ｎ末端またはＣ末端に機能的に連結されている（すなわち融合タンパク質のパーツの相互の機能的障害が無視できる状態である）少なくとも１つの非相同配列を含む融合タンパク質である。前記非相同配列の非限定的な例は、例えば、シグナルペプチドまたは酵素である。
【００２２】
また本発明に含まれる「機能的等価物」は、具体的に開示されるタンパク質のホモログである。これらは、具体的に開示されるアミノ酸配列の１つと、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７５％、特に少なくとも８５％、例えば、９０％、９５％または９９％の相同性を有する。この相同性はPearson and Lipman, Proc. Natl. Acad, Sci. (USA) 85(8), 1988, 2444-2448のアルゴリズムによって算出される。本発明の相同ポリペプチドについての相同性のパーセンテージは、特に、本明細書中で具体的に記載するアミノ酸配列の１つの全長に基づくアミノ酸残基の同一性のパーセンテージを意味する。
【００２３】
タンパク質のグリコシル化が起こり得る場合、本発明の「機能的等価物」には、脱グリコシル化型またはグリコシル化型、およびグリコシル化パターンの改変によって取得可能な修飾型の、上記で定義した種類のタンパク質が含まれる。
【００２４】
タンパク質のリン酸化が起こり得る場合、本発明の「機能的等価物」には、脱リン酸化型またはリン酸化型、およびリン酸化パターンの改変によって取得可能な修飾型の、上記で定義した種類のタンパク質が含まれる。
【００２５】
本発明のポリペプチド（ｉ）のホモログはタンパク質の変異誘発、例えば点突然変異またはトランケーションによって作成することができる。
【００２６】
本発明のポリペプチドのホモログは、変異体、例えば、トランケーション変異体のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって特定することができる。例えば、タンパク質変異体のライブラリーは、核酸レベルでのコンビナトリアル変異誘発によって、例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を酵素的にライゲーションすることによって生成することができる。縮重オリゴヌクレオチド配列からホモログ候補のライブラリーを調製するために使用できる多数の方法が存在する。縮重遺伝子配列の化学合成は自動ＤＮＡ合成機で実行することができ、その合成遺伝子を適切な発現ベクター中にライゲーションすることができる。遺伝子の縮重セットの使用により、１つの混合物中で所望のセットのタンパク質配列候補をコードするすべての配列を提供することが可能になる。縮重オリゴヌクレオチドの合成方法は当業者に公知である（例えばNarang, S.A. (1983) Tetrahedron 39:3; Itakuraら (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakuraら, (1984) Science 198:1056; Ikeら (1983) Nucleic Acids Res. 11:477）。
【００２７】
当技術分野では、点突然変異またはトランケーションによって調製されたコンビナトリアルライブラリー中の遺伝子産物をスクリーニングするための技術、および選択された特性を有する遺伝子産物に関してｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための技術が複数知られている。これらの技術は、本発明のホモログのコンビナトリアル変異誘発によって作製された遺伝子ライブラリーの高速スクリーニングに適合させることができる。ハイスループット分析の対象である大規模な遺伝子ライブラリーをスクリーニングするために最も一般的に使用される技術には、複製可能発現ベクター中に遺伝子ライブラリーをクローニングし、得られたベクターライブラリーで適切な細胞を形質転換し、所望の活性の検出が、検出されたものがその産物である対象の遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件下でコンビナトリアル遺伝子を発現させることが含まれる。ライブラリー中の機能的変異体の発生頻度を増大させる技術である帰納的集合変異誘発（Recursive ensemble mutagenesis）（ＲＥＭ）をスクリーニング試験と組み合わせて使用して、ホモログを特定することができる（Arkin and Yourvan (1992) PNAS 89:7811-7815; Delgraveら (1993) Protein Engineering 6(3):327-331）。
【００２８】
本発明の特に有利な実施形態は、少なくとも１種類の下記ポリペプチド配列を含むポリペプチド配列（ｉ）である：
ａ）  配列番号１、２１９３−２４８１位のポリペプチド配列（ドメインＢ）
ｂ）  配列番号１、２６０６−２８７１位のポリペプチド配列（ドメインＣ）
ｃ）  （ａ）と比較して、最大６０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
ｄ）  （ｂ）と比較して、最大５０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
ただし、ポリペプチド配列（ｃ）または（ｄ）のケラチン結合性は、実施例９または１０に記載のアッセイにおいて測定された場合に、ポリペプチド配列（ａ）または（ｂ）が示す値の少なくとも１０％に相当する。これに関して、ドメインＢまたはＣとは、ヒトデスモプラキンの上記ケラチン結合性ドメインを意味する（配列番号１）。これに関してアミノ酸の改変とは、アミノ酸置換、挿入および欠失またはこれらの３種の候補の任意の組み合わせを意味する。
【００２９】
使用するのが好ましいポリペプチド配列（ｉ）は所望の生物に対して非常に特異的な親和性を有する配列である。したがって、皮膚化粧品における適用のためには、採用するのが好ましいポリペプチド配列（ｉ）はヒト皮膚のケラチンに対して特に高い親和性を有する配列である。毛髪化粧品における適用に好ましいポリペプチド配列は、ヒト毛髪のケラチンに対して特に高い親和性を有する配列である。
【００３０】
同様にペット部門での適用では、上記ポリペプチド配列（配列番号１）に加えて、好ましいポリペプチド配列（ｉ）は、対応するケラチン、例えばイヌケラチンまたはネコケラチンに対して特に高い親和性を有する配列である。
【００３１】
しかし、本発明のエフェクター分子において２種類以上のポリペプチド配列（ｉ）を使用することも可能である。例えばヒト皮膚のケラチンに対して高い結合親和性を有する配列（ｉ）をヒト毛髪のケラチンに対して高い親和性を有する配列（ｉ）と併せて使用することが可能である。複数コピーの同一のポリペプチド配列（ｉ）を連続してつなぎ、例えば、より高い結合性を達成することも可能である。
【００３２】
好適なケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）は公知である。例えば、デスモプラキンおよびプレクチンはケラチン結合性ドメインを含む（Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May;14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26; Hopkinson SB, Jones JC., The N terminus of the transmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. 2000 Jan;11(1):277-86）。
【００３３】
例えば、InforMax Inc.から供給されるＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ８（２００２年９月２５日版）等のコンピュータプログラムを使用して、前記の公知タンパク質配列をアライメントすることによって、そのような領域をマッピングし、かつ特定することが可能である。
【００３４】
ヒトケラチンに対する良好な結合性を有する別の好適なポリペプチド配列（ｉ）は、アライメントにおいて高い相同性または配列同一性を示し、ケラチン結合性ドメインのコンセンサス配列とみなすことができる配列領域である。
【００３５】
これらの配列領域のうちでは以下のものが特に好ましい：
ドメインＢ（ＫＢＤ−Ｂ）：配列番号１の２１９３−２４４８位のポリペプチド配列
ドメインＢ（ＫＢＤ−Ｂ）：配列番号１の２２０９−２４４８位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１の２６０６−２８７１位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１の２６１６−２８７１位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１の２６１６−２８１１位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１の２６０６−２８７１位のポリペプチド配列
【００３６】
配列番号１の２８４９位に天然に存在するセリンは、この位置でのリン酸化を回避し、ゆえに対応するケラチンでのドメインＣの結合を確保するために、例えばグリシンに置換できることが知られている（Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May;14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26）。
【００３７】
ポリペプチド配列（ｉ）が、非ヒト生物由来のケラチンに対して特に良好な結合性を有することが望ましい場合、好適であるとして選択される配列モチーフは、好ましくは、適切な生物のケラチン結合性タンパク質、例えばデスモプラキンまたはプレクチン由来の配列モチーフである。
【００３８】
図２はケラチン結合性分子のアライメントを示す。
【００３９】
また、本発明のケラチン結合性ポリペプチド（ｉ）は、所望であれば、ケラチンから容易に再分離することができる。この目的で、例えばケラチンでの洗浄を採用することが可能であり、これによりケラチン結合性ポリペプチド（ｉ）はその既存のケラチン結合から解放され、洗浄液由来のケラチンで飽和する。別法では、高含量の界面活性剤（例えばＳＤＳ）で洗浄して洗い出すことも可能である。
【００４０】
本発明のケラチン結合性ポリペプチド（ｉ）は、ヒト用化粧品、特に皮膚、爪および毛髪のケア、動物のケア、革の手入れおよび革の加工に広範囲な用途を有する。
【００４１】
本発明のケラチン結合性ポリペプチド（ｉ）は好ましくは皮膚化粧品に使用される。これにより、高濃度かつ長期間作用する皮膚のケアまたは皮膚保護用のエフェクターが可能になる。
【００４２】
毛髪化粧用、爪化粧用または皮膚化粧用調製物を製造するのに適した補助物質および添加物は当業者に公知であり、また、化粧品に関する参考書、例えばSchrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentals and formulations of cosmetics], Huthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1に見出すことができる。
【００４３】
本発明の化粧用組成物は、皮膚化粧用、爪化粧用、毛髪化粧用、皮膚科用、衛生用または医薬用の組成物であり得る。
【００４４】
好ましくは、本発明の組成物は、ゲル、フォーム、スプレー、軟膏、クリーム、エマルジョン、懸濁液、ローション、乳液またはペーストの形態である。所望であれば、リポソームまたはミクロスフェアを使用することもできる。
【００４５】
本発明の化粧用または医薬用の活性組成物は化粧用および／または皮膚科用有効成分および補助物質をさらに含むことができる。
【００４６】
好ましくは、本発明の化粧用組成物は、少なくとも１種類の上記で定義したケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）、およびそれと異なる少なくとも１種類の成分を含み、該成分は、化粧用有効成分、乳化剤、界面活性物質、保存料、香油、増粘剤、毛髪用ポリマー、毛髪用および皮膚用コンディショナー、グラフトポリマー、水溶性または分散性シリコン含有ポリマー、光防護剤、漂白剤、ゲル形成剤（gel formers）、ケア用物質、着色剤、ティント剤、日焼け剤（tanning agents）、色素、顔料、粘度調節剤（consistency regulators）、保湿剤、補油剤（re-fatting agents）、コラーゲン、タンパク質加水分解物、脂質、酸化防止剤、消泡剤、静電防止剤、皮膚柔軟化剤および軟化剤から選択される。ケラチン結合性ポリペプチド有効成分は化粧用調製物中のカプセル化形態で存在させてもよい。
【００４７】
有利には、酸化防止剤は、アミノ酸（例えばグリシン、ヒスチジン、チロシン、トリプトファン）およびその誘導体、イミダゾール（例えばウロカニン酸）およびその誘導体、ペプチド、例えばＤ，Ｌ−カルノシン、Ｄ−カルノシン、Ｌ−カルノシンおよびその誘導体（例えばアンセリン）、カロテノイド、カロテン（例えばβ−カロテン、リコペン）およびその誘導体、クロロゲン酸およびその誘導体、リポ酸およびその誘導体（例えばジヒドロリポ酸）、アウロチオグルコース、プロピルチオウラシルおよび他のチオール（例えばチオレドキシン、グルタチオン、システイン、シスチン、シスタミンおよびそのグリコシル、Ｎ−アセチル、メチル、エチル、プロピル、アミル、ブチルおよびラウリル、パルミトイル、オレイル、γ−リノレイル、コレステリルおよびグリセリルエステル）およびその塩、チオジプロピオン酸ジラウリル、チオジプロピオン酸ジステアリル、チオジプロピオン酸およびその誘導体（エステル、エーテル、ペプチド、脂質、ヌクレオチド、ヌクレオシドおよび塩）、およびスルホキシイミン化合物（例えばブチオニンスルホキシイミン、ホモシステインスルホキシイミン、ブチオニンスルホン、ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタチオニンスルホキシイミン）（これは非常に低い許容薬量（例えばｐｍｏｌ〜μｍｏｌ／ｋｇ）である）、同様に（金属）キレート剤（例えばα−ヒドロキシ脂肪酸、パルミチン酸、フィチン酸、ラクトフェリン）、α−ヒドロキシ酸（例えばクエン酸、乳酸、リンゴ酸）、フミン酸、胆汁酸、胆汁抽出物、ビリルビン、ビリベルジン、ＥＤＴＡおよびその誘導体、不飽和脂肪酸およびその誘導体（例えばγ−リノレン酸、リノール酸、オレイン酸）、葉酸およびその誘導体、ユビキノンおよびユビキノールおよびその誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体（例えばアスコルビン酸ナトリウム、パルミチン酸アスコルビル、リン酸アスコルビルＭｇ、酢酸アスコルビル）、トコフェロールおよび誘導体（例えばビタミンＥアセテート、トコトリエノール）、ビタミンＡおよび誘導体（ビタミンＡパルミテート）、およびベンゾイン樹脂の安息香酸コニフェリル、ルチン酸（rutinic acid）およびその誘導体、α−グリコシルルチン、フェルラ酸、フルフリリデングルシトール、カルノシン、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ノルジヒドログアヤシン酸（nordihydroguaiacic acid）、ノルジヒドログアヤレト酸（nordihydroguaiaretic acid）、トリヒドロキシブチロフェノン、尿酸およびその誘導体、マンノースおよびその誘導体、亜鉛およびその誘導体（例えばＺｎＯ、ＺｎＳＯ４）、セレンおよびその誘導体（例えばセレノメチオニン）、スチルベンおよびその誘導体（例えばスチルベンオキシド、トランス−スチルベンオキシド）からなる群から選択される。
【００４８】
前記製剤中の通例の増粘剤は、架橋型ポリアクリル酸およびその誘導体、多糖およびその誘導体、例えばキサンタンガム、寒天、アルギナートまたはチロース（tylose）、セルロース誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースまたはヒドロキシカルボキシメチルセルロース、脂肪アルコール、モノグリセリドおよび脂肪酸、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンである。非イオン性増粘剤を使用するのが好ましい。
【００４９】
好適な化粧用および／または皮膚科用有効成分は、例えば、着色性有効成分、皮膚および毛髪染色剤（pigmentation agents）、ティント剤、日焼け剤、漂白剤、ケラチン硬化剤、抗菌性有効成分、光吸収性（photofilter）有効成分、忌避性有効成分、充血性効果を有する物質、角質溶解性および角質柔軟化（keratoplastic）効果を有する物質、フケ取り性有効成分、消炎剤、角質化効果を有する物質、酸化防止性またはフリーラジカル除去性効果を有する有効成分、皮膚に潤いを与えるかまたは皮膚の水分を保つ物質、補油性有効成分、抗紅斑性（antierythimatous）または抗アレルギー性有効成分、分岐脂肪酸、例えば１８−メチルエイコサン酸、およびそれらの混合物である。
【００５０】
皮膚を人工的に日焼けさせる有効成分および天然または人工の紫外線照射を使用しない皮膚の日焼けに適した有効成分は、例えば、ジヒドロキシアセトン、アロキサンおよびクルミ殻抽出物である。好適なケラチン硬化剤は、通常、制汗剤においても使用されるような有効成分、例えば、硫酸アルミニウムカリウム、アルミニウムヒドロキシクロリド、乳酸アルミニウム、等である。
【００５１】
抗菌性有効成分は、微生物を滅菌するか、またはその成長を阻害するために使用され、ゆえに保存料として、ならびにまた、体臭の生成もしくは強さを低減する脱臭剤としての両用途で役立つ。これには、例えば、当業者に公知の通例の保存料、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、イミダゾリジニル尿素、ホルムアルデヒド、ソルビン酸、安息香酸、サリチル酸、等が含まれる。前記脱臭剤は、例えば、リシノール酸亜鉛、トリクロサン、ウンデシレン酸アルキルオールアミド（undecylenic alkylolamides）、クエン酸トリエチル、クロルヘキシジン等である。
【００５２】
本発明にしたがって有利に使用するのに適した保存料をそのＥ番号とともに以下に列挙する。 
【表２】
2008500301.tif 000004
【００５３】
本発明では、化粧品において通例の保存料または保存性補助物質であるジブロモジシアノブタン（２−ブロモ−２−ブロモメチルグルタロジニトリル）、３−ヨード−２−プロピニルブチルカルバマート、２−ブロモ−２−ニトロプロパン−１，３−ジオール、イミダゾリジニル尿素、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−クロロアセトアミド、塩化ベンザルコニウムおよびベンジルアルコール＋ホルムアルデヒド供与体もまた好適である。
【００５４】
フェニルヒドロキシアルキルエーテル、特にフェノキシエタノールの名称で知られる化合物もまた、多数の微生物に対するその殺菌性および殺真菌性効果によって、保存料として適している。
【００５５】
他の抗菌剤も同様に本発明の調製物中に組み込むのに適している。有利な物質は、例えば、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル（イルガサン）、１，６−ジ（４−クロロフェニルビグアニド）ヘキサン（クロルヘキシジン）、３，４，４’−トリクロロカルバニリド、四級アンモニウム化合物、チョウジ油、ハッカ油、タイム油、クエン酸トリエチル、ファルネソル（３，７，１１−トリメチル−２，６，１０−ドデカトリエン−１−オール）、および特許公開明細書ＤＥ−３７ ４０ １８６、ＤＥ−３９ ３８ １４０、ＤＥ−４２ ０４ ３２１、ＤＥ−４２ ２９ ７０７、ＤＥ−４３ ０９ ３７２、ＤＥ−４４ １１ ６６４、ＤＥ−１９５ ４１ ９６７、ＤＥ−１９５ ４３ ６９５、ＤＥ−１９５ ４３ ６９６、ＤＥ−１９５ ４７ １６０、ＤＥ−１９６ ０２ １０８、ＤＥ−１９６ ０２ １１０、ＤＥ−１９６ ０２ １１１、ＤＥ−１９６ ３１ ００３、ＤＥ−１９６ ３１ ００４およびＤＥ−１９６ ３４ ０１９ならびに特許明細書ＤＥ−４２ ２９ ７３７、ＤＥ−４２ ３７ ０８１、ＤＥ−４３ ２４ ２１９、ＤＥ−４４ ２９ ４６７、ＤＥ−４４ ２３ ４１０およびＤＥ−１９５ １６ ７０５に記載の有効成分または有効成分の組み合わせである。炭酸水素ナトリウムもまた有利に使用される。抗菌性ポリペプチドも同様に使用することができる。
【００５６】
好適な光吸収性有効成分はＵＶ−Ｂおよび／またはＵＶ−Ａ領域の紫外線を吸収する物質である。好適なＵＶ吸収剤は、例えば、２，４，６−トリアリール−１，３，５−トリアジンであり、この場合、アリール基はいずれの場合にも少なくとも１個の置換基を保持してよく、該置換基は、好ましくは、ヒドロキシ、アルコキシ、特にメトキシ、アルコキシカルボニル、特にメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルおよびそれらの混合物から選択される。ｐ−アミノ安息香酸エステル、ケイ皮酸エステル、ベンゾフェノン、カンファー誘導体、および紫外線を阻止する顔料、例えば二酸化チタン、タルクおよび酸化亜鉛もまた適している。
【００５７】
好適なＵＶ吸収剤は任意のＵＶ−ＡおよびＵＶ−Ｂ吸収剤である。以下の例を挙げることができる：
【表３】
2008500301.tif 000005
【００５８】
2008500301.tif 000006
【００５９】
有利には、本発明の化粧用および皮膚科用調製物は、紫外線を阻止する無機顔料をさらに含んでよく、該無機顔料は金属酸化物および／または他の金属化合物に基づき、水に不溶性またはわずかに可溶性であり、以下のものの酸化物：亜鉛（ＺｎＯ）、チタン（ＴｉＯ２）、鉄（例えばＦｅ２Ｏ３）、ジルコニウム（ＺｒＯ２）、ケイ素（ＳｉＯ２）、マンガン（例えばＭｎＯ）、アルミニウム（Ａｌ２Ｏ３）、セリウム（例えばＣｅ２Ｏ３）、対応する金属の混合酸化物および前記酸化物の混合物からなる群より選択される。
【００６０】
無機顔料は、コーティング形式で、すなわち表面処理されて調製物中に存在することができる。この表面処理は、例えば、ＤＥ−Ａ−３３ １４ ７４２に記載のそれ自体公知の方法によって顔料に薄い疎水性層を付与することであり得る。
【００６１】
好適な忌避性有効成分は、特定の動物、特に昆虫をヒトから追い払うか、あるいは追い散らすことができる化合物である。これには、例えば、２−エチル−１，３−ヘキサンジオール、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド等が含まれる。皮膚を通る血流を促進する好適な充血性物質は、例えば精油、例えばマツ抽出物（dwarf pine extract）、ラベンダー抽出物、ローズマリー抽出物、ジュニパーベリー抽出物、セイヨウトチノキ抽出物、カバノキ葉抽出物、ヘイフラワー抽出物、酢酸エチル、カンファー、メントール、ペパーミント油、ローズマリー抽出物、ユーカリ油、等である。好適な角質溶解性および角質柔軟化物質は、例えば、サリチル酸、チオグリコール酸カルシウム、チオグリコール酸およびその塩、硫黄、等である。好適なフケ取り性有効成分は、例えば、硫黄、サルファーポリエチレングリコールソルビタンモノオレアート、サルファーリシノールポリエトキシラート、ジンクピリチオン、アルミニウムピリチオン、等である。皮膚刺激に対抗する好適な抗炎症剤は、例えば、アラントイン、ビサボロール、ドラゴサニトール（dragosantol）、カミツレ抽出物、パンテノール、等である。
【００６２】
本発明の化粧用組成物は、化粧用および／または医薬用の有効成分として（ならびにまた適切であれば補助物質として）、少なくとも１種類の、化粧品に許容されるかまたは製薬上許容し得るポリマーを含むことができる。該ポリマーは、本発明で使用される多価電解質複合体を形成するポリマーとは異なるものである。これには、かなり広く言えば、カチオン性、両性および中性ポリマーが含まれる。
【００６３】
好適なポリマーは、例えば、ＩＮＣＩ名、ポリクオタニウム（Polyquaternium）のカチオン性ポリマー、例えばビニルピロリドン／Ｎ−ビニルイミダゾリウム塩のコポリマー（Luviquat FC, Luviquat HM, Luviquat MS, Luviquat&commat, Care）、ジエチル硫酸で四級化されているＮ−ビニルピロリドン／ジメチルアミノエチルメタクリラートのコポリマー（Luviquat PQ 11）、Ｎ−ビニルカプロラクタム／Ｎ−ビニルピロリドン／Ｎ−ビニルイミダゾリウム塩のコポリマー（Luviquat E Hold）、カチオン性セルロース誘導体（Polyquaternium-4および-10）、アクリルアミドコポリマー（Polyquaternium-7）およびキトサンである。
【００６４】
好適なカチオン性（四級化）ポリマーはまた、Ｍｅｒｑｕａｔ（ジメチルジアリルアンモニウムクロリドに基づくポリマー）、Ｇａｆｑｕａｔ（ポリビニルピロリドンと四級アンモニウム化合物との反応によって生成される四級ポリマー）、ポリマーＪＲ（カチオン基を有するヒドロキシエチルセルロース）および植物ベースのカチオン性ポリマー、例えばRhodia製のＪａｇｕａｒ等級等のグアールポリマーである。
【００６５】
同様に、別の好適なポリマーは、中性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン、Ｎ−ビニルピロリドンと酢酸ビニルおよび／またはプロピオン酸ビニルのコポリマー、ポリシロキサン、ポリビニルカプロラクタム、およびＮ−ビニルピロリドンを含む他のコポリマー、ポリエチレンイミンおよびその塩、ポリビニルアミンおよびその塩、セルロース誘導体、ポリアスパラギン酸塩および誘導体である。これには、例えば、Ｌｕｖｉｆｌｅｘ ０ Ｓｗｉｎｇ（ポリ酢酸ビニルとポリエチレングリコールの部分鹸化コポリマー、BASF製）が含まれる。
【００６６】
同様に、好適なポリマーは、非イオン性、水溶性または水分散性ポリマーまたはオリゴマー、例えばポリビニルカプロラクタム、例えばＬｕｖｉｓｋｏｌ ０ Ｐｌｕｓ（BASF）、またはポリビニルピロリドンおよびそのコポリマー、特に酢酸ビニル等のビニルエステルとのコポリマー、例えばＬｕｖｉｓｋｏｌ ０ ＶＡ ３７（BASF）、ポリアミド、例えば、ＤＥ−Ａ−４３ ３３ ２３８に記載のようなイタコン酸および脂肪族ジアミンに基づくポリアミドである。
【００６７】
同様に、好適なポリマーは、両性または双性イオン性ポリマー、例えばＡｍｐｈｏｍｅｒ（National Starch）の名称で入手可能なオクチルアクリルアミド／メタクリル酸メチル／ｔｅｒｔ−ブチルアミノエチルメタクリラート／ヒドロキシプロピルメタクリラートコポリマー、および例えば、ドイツ特許出願ＤＥ３９ ２９ ９７３、ＤＥ ２１ ５０ ５５７、ＤＥ２８ １７ ３６９およびＤＥ ３７０８ ４５１に開示されているような双性イオン性ポリマーである。アクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド／アクリル酸またはメタクリル酸コポリマーならびにそのアルカリ金属およびアンモニウム塩は好ましい双性イオン性ポリマーである。別の好適な双性イオン性ポリマーは、Ａｍｅｒｓｅｔｔｅ（AMERCHOL）の名称で市販されているメタクロイルエチルベタイン（methacroylethylbetaine）／メタクリラートコポリマー、およびヒドロキシエチルメタクリラート、メタクリル酸メチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリラートおよびアクリル酸のコポリマー（Jordapon (D)）である。
【００６８】
同様に、好適なポリマーは、非イオン性、シロキサン含有、水溶性または水分散性ポリマー、例えばポリエーテルシロキサン、例えばＴｅｇｏｐｒｅｎ ０（Goldschmidt）またはＢｅｓｉ＆ｃｏｍｍａｔ（Wacker）である。
【００６９】
本発明の医薬組成物の製剤化用基剤は好ましくは製薬上許容し得る補助物質を含む。製薬上許容し得る補助物質は、薬学分野、食品工学および関連分野での用途が公知の補助物質であり、特に該当する薬局方（例えばDAB Ph. Eur. BP NF）に列挙されている補助物質およびその特性が生理的適用を妨げない他の補助物質である。
【００７０】
好適な補助物質は以下のものであり得る：滑沢剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、保存料、酸化防止剤、抗刺激剤（antiirritatives）、キレート剤、乳化安定剤、フィルム形成剤、ゲル形成剤、防臭剤（odor-masking agents）、樹脂、親水コロイド、溶媒、溶解性促進剤、中和剤、浸透増強剤、顔料、四級アンモニウム化合物、補油剤および過脂肪化剤、軟膏、クリームまたは油性物質（oil base substances）、シリコン誘導体、安定化剤、滅菌剤、噴射剤、乾燥剤、乳白化剤、増粘剤、ワックス、軟化剤、白色油。これに関して製剤化は、例えば、Fiedler, H.P. Lexikon der Hilfsstoffe fuer Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete [Lexicon of Auxiliaries for Pharmacy, Cosmetics and related fields], 第４版, Aulendorf: ECV-Editio-Kantor-Verlag, 1996に記載の専門知識に基づく。
【００７１】
本発明の皮膚科用組成物を調製するために、有効成分を好適な補助物質（賦形剤）と混合するか、あるいはそれで希釈することができる。賦形剤は、有効成分のビヒクル、担体または媒体として機能し得る、固形状、半固形状または液状物であってよい。所望であれば、当業者に公知の様式で別の補助物質を加える。さらに、ポリマーおよび分散物は、薬学上の補助物質として、好ましくは、固形薬物剤形用のコーティングまたは結合剤として、あるいはそれらの成分として適している。クリーム中で、また、錠剤コーティングおよび錠剤結合剤としてそれらを使用することもできる。
【００７２】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は皮膚洗浄用組成物である。
【００７３】
好ましい皮膚洗浄用組成物は、液体〜ゲル様の粘性の石鹸、例えば透明石鹸、高級石鹸、デオドラントソープ、クリームソープ、ベビーソープ、皮膚保護性石鹸、研磨用石鹸（abrasive soaps）および合成洗剤、練り石鹸、軟石鹸および洗浄用ペースト、角質除去用石鹸、保湿用拭き取り紙、液体洗浄料、シャワーおよび入浴用調製物、例えば洗浄用ローション、シャワー浴およびジェル（ゲル）、泡風呂、油浴およびスクラブ用調製物、シェービングフォーム、ローションおよびクリームである。
【００７４】
別の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、皮膚および毛髪を手入れおよび保護するための化粧用組成物、ネイルケア用組成物または装飾化粧品用の調製物である。
【００７５】
好適な皮膚化粧用組成物は、例えば、フェイストニック、フェイスマスク、デオドラントおよび他の化粧用ローションである。装飾化粧品で使用するための組成物は、例えば、コンシーラースティック、舞台用メイキャップ、マスカラおよびアイシャドウ、リップスティック、コールペンシル、アイライナー、頬紅、おしろいおよびまゆ墨を含む。
【００７６】
さらにまた、毛穴洗浄用の鼻パック、抗座瘡組成物、腫れ物散らし剤（repellent）、シェービング用組成物、アフターシェーブおよびプレシェーブケア用組成物、日焼け後のケア用組成物、脱毛用組成物、ヘアカラー、陰部のケア用組成物、フットケア用組成物、およびベビーケアにおいてポリペプチド配列（ｉ）を使用することができる。
【００７７】
本発明のスキンケア用組成物は、特に、Ｗ／ＯまたはＯ／Ｗスキンクリーム、昼用および夜用クリーム、アイクリーム、顔用クリーム、しわ取りクリーム、日焼け止めクリーム、保湿クリーム、漂白クリーム、セルフタンニング用クリーム、ビタミンクリーム、スキンローション、ケアローションおよび保湿ローションである。
【００７８】
上記の多価電解質複合体に基づく皮膚化粧用および皮膚科用組成物は有利な効果を示す。該ポリマーは、とりわけ、皮膚の保湿およびコンディショニングならびに皮膚の感触の向上に寄与し得る。また、該ポリマーは製剤中の増粘剤としても作用し得る。本発明のポリマーを加えることによって、特定の製剤において皮膚適合性の著しい向上をもたらすことができる。
【００７９】
皮膚化粧用および皮膚科用組成物は、好ましくは、組成物の総重量を基準にして、約０．００１〜３０重量％、好ましくは０．０１〜２０重量％、特に非常に好ましくは０．１〜１２重量％の量の少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）を含む。
【００８０】
特に、ポリペプチド配列（ｉ）に基づく光防護用組成物は、ポリビニルピロリドン等の通例の補助物質と比較して、ＵＶ吸収成分の滞留時間を増加させる特性を有する。
【００８１】
使用する分野に応じて、本発明の組成物は、スキンケアに適した形態で、例えば、クリーム、フォーム、ゲル、スティック、ムース、乳液、スプレー（ポンプスプレーまたは噴射剤含有スプレー）またはローションとして適用することができる。
【００８２】
ポリペプチド配列（ｉ）および適切な担体に加えて、皮膚化粧用調製物は、上記のような皮膚化粧品において通例の別の有効成分および補助物質をさらに含むことができる。これには、好ましくは乳化剤、保存料、香油、化粧用有効成分、例えばフィタントリオール、ビタミンＡ、ＥおよびＣ、レチノール、ビサボロール、パンテノール、光防護剤、漂白剤、着色剤、ティント剤、日焼け剤、コラーゲン、タンパク質加水分解物、安定化剤、ｐＨ調節剤、色素、塩、増粘剤、ゲル形成剤、粘度調節剤、シリコン、保湿剤、補油剤および別の通例の添加物が含まれる。
【００８３】
皮膚化粧用および皮膚科用組成物の好ましい油脂性成分は、上記鉱油および合成油、例えば、パラフィン、シリコン油および、８個を超える炭素原子を有する脂肪族炭化水素、動物および植物油、例えば、ヒマワリ油、ヤシ油、アボカド油、オリーブ油、ラノリン、またはワックス、脂肪酸、脂肪酸エステル、例えば、Ｃ６〜Ｃ３０脂肪酸のトリグリセリド、ワックスエステル、例えば、ホホバ油、脂肪アルコール、ワセリン、水添ラノリンおよびアセチル化ラノリン、およびその混合物である。
【００８４】
また本発明のポリペプチド配列（ｉ）は、特別な特性を達成しようとする場合、慣用のポリマーと混合することができる。
【００８５】
特定の特性、例えば触感、広がり挙動、耐水性および／または有効成分と補助物質（例えば顔料）との結合性の向上を達成するために、皮膚化粧用および皮膚科用調製物はシリコン化合物に基づくコンディショニング剤をさらに含むこともできる。
【００８６】
好適なシリコン化合物は、例えば、ポリアルキルシロキサン、ポリアリールシロキサン、ポリアリールアルキルシロキサン、ポリエーテルシロキサンまたはシリコン樹脂である。
【００８７】
化粧用または皮膚科用調製物は当業者に公知の通例の方法によって調製する。
【００８８】
好ましくは、化粧用および皮膚科用組成物は、エマルジョン、特に油中水型（Ｗ／Ｏ）または水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンの形態である。
【００８９】
しかし、他の種類の製剤、例えばゲル、油、オレオゲル（oleogels）、多層乳剤（例えばＷ／Ｏ／ＷまたはＯ／Ｗ／Ｏエマルジョンの形式の多層乳剤）、無水軟膏または軟膏基剤、等を選択することも可能である。乳化剤を含まない製剤、例えば水分散物（hydrodispersions）、ヒドロゲルまたはＰｉｃｋｅｒｉｎｇエマルジョンも有利な実施形態である。
【００９０】
エマルジョンは公知の方法によって調製する。少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）に加えて、エマルジョンは、一般に、通例の成分、例えば脂肪アルコール、脂肪酸エステルおよび、特に、脂肪酸トリグリセリド、脂肪酸、ラノリンおよびそれらの誘導体、天然または合成油またはワックスおよび乳化剤を水の存在下で含む。エマルジョンの種類に特有の添加物の選択および適切なエマルジョンの調製は、例えば、Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentals and Formulations of Cosmetics], Huthig Buch Verlag, Heidelberg, 第２版, 1989, 第３巻に記載されている。この文献は参照により本明細書中に明示的に組み入れられる。
【００９１】
例えばスキンクリーム等のためのＷ／Ｏエマルジョンとして好適なエマルジョンは、一般的に、適切な乳化剤系を用いて油または脂肪相中に乳化されている水相を含んでなる。水相を提供するために、多価電解質複合体を使用することができる。
【００９２】
エマルジョンの脂肪相中に存在させてよい好ましい脂肪成分は以下のものである：炭化水素油、例えばパラフィン油、ピュアセリンオイル（purcellin oil）、ペルヒドロスクアレン（perhydrosqualene）およびこれらの油中のマイクロクリスタリンワックスの溶液；動物または植物油、例えば甘扁桃油、アボカド油、カロフィルム油（calophylum oil）、ラノリンおよびその誘導体、ヒマシ油、ゴマ油、オリーブ油、ホホバ油、カリテ油、オレンジラフィー油（hoplostethus oil）、鉱油（大気圧下で蒸留開始点が約２５０℃であり、蒸留終点が４１０℃であるもの）、例えば、ワセリン油、飽和または不飽和脂肪酸のエステル、例えばミリスチン酸アルキル、例えばミリスチン酸イソプロピル、ブチルまたはセチル、ステアリン酸ヘキサデシル、パルミチン酸エチルまたはイソプロピル、オクタン酸またはデカン酸トリグリセリドおよびリシノール酸セチル。
【００９３】
また脂肪相は、他の油に可溶性のシリコン油、例えばジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサンおよびシリコングリコールコポリマー、脂肪酸および脂肪アルコールを含むことができる。
【００９４】
ポリペプチド配列（ｉ）に加えて、ワックス、例えば、カルナバワックス、カンデリラワックス、蜜ろう、マイクロクリスタリンワックス、オゾケライトワックスならびにオレイン酸、ミリスチン酸、リノール酸およびステアリン酸Ｃａ、ＭｇおよびＡｌを使用することも可能である。
【００９５】
さらに、本発明のエマルジョンはＯ／Ｗエマルジョンの形態であり得る。このようなエマルジョンは、通常、油相、水相中で油相を安定化する乳化剤、および水相を含み、これは粘稠な形態で通常存在する。好適な乳化剤は、好ましくはＯ／Ｗ乳化剤、例えばポリグリセリンエステル、ソルビタンエステルまたは部分エステル化グリセリドである。
【００９６】
別の好ましい実施形態では、本発明の組成物はシャワージェル、シャンプー製剤または入浴用調製物である。
【００９７】
このような製剤は、少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）および主要界面活性物質としての通例のアニオン性界面活性物質および補助界面活性物質としての両性および／または非イオン性界面活性物質を含む。別の好適な有効成分および／または補助物質は、一般的に、脂質、香油、色素、有機酸、保存料および酸化防止剤、ならびに増粘剤／ゲル形成剤、皮膚コンディショニング剤および保湿剤から選択される。
【００９８】
これらの製剤は、製剤の総重量を基準にして、好ましくは２〜５０重量％、好ましくは５〜４０重量％、特に好ましくは８〜３０重量％の界面活性物質を含む。
【００９９】
洗浄用、シャワー用および入浴用調製物では、身体清浄用組成物で通常使用されるすべてのアニオン性、中性、両性またはカチオン性界面活性物質を使用することが可能である。
【０１００】
好適なアニオン性界面活性物質は、例えば、アルキルスルファート、アルキルエーテルスルファート、アルキルスルホナート、アルキルアリールスルホナート、アルキルスクシナート、アルキルスルホスクシナート、Ｎ−アルコイルサルコシナート、アシルタウラート、アシルイセチオナート、アルキルホスファート、アルキルエーテルホスファート、アルキルエーテルカルボキシラート、α−オレフィンスルホナート、特にアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩（例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、ならびにアンモニウムおよびトリエタノールアミン塩である。アルキルエーテルスルファート、アルキルエーテルホスファートおよびアルキルエーテルカルボキシラートは分子中に１〜１０個の範囲のエチレンオキシドまたはプロピレンオキシド単位、好ましくは１〜３個の範囲のエチレンオキシド単位を有することができる。
【０１０１】
これには、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸アンモニウム、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸アンモニウム、ラウリルサルコシン酸ナトリウム、オレイルコハク酸ナトリウム、スルホコハク酸ラウリルアンモニウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸トリエタノールアミンが含まれる。
【０１０２】
好適な両性界面活性物質は、例えば、アルキルベタイン、アルキルアミドプロピルベタイン、アルキルスルホベタイン、アルキルグリシナート、アルキルカルボキシグリシナート、アルキルアンホアセテートまたはアルキルアンホプロピオナート、アルキルアンホジアセテートまたはアンホジプロピオナートである。
【０１０３】
例えば、ココジメチルスルホプロピルベタイン、ラウリルベタイン、コカミドプロピルベタイン（cocamidopropylbetaine）またはココアンホプロピオン酸ナトリウム（sodium cocamphopropionate）を使用することができる。
【０１０４】
好適な非イオン性界面活性物質は、例えば、アルキル鎖（直鎖または分岐鎖）に６〜２０炭素原子を有する脂肪族アルコールまたはアルキルフェノールと、エチレンオキシドおよび／またはプロピレンオキシドとの反応産物である。アルキレンオキシドの量はアルコール１モルあたり約６〜６０モルである。さらに、アルキルアミンオキシド、モノ−またはジアルキルアルカノールアミド、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステル、エトキシル化脂肪酸アミド、アルキルポリグリコシドまたはソルビタンエーテルエステルが適している。
【０１０５】
さらにまた、洗浄用、シャワー用および入浴用調製物は、通例のカチオン性界面活性物質、例えば、四級アンモニウム化合物、例えばセチルトリメチルアンモニウムクロリドを含むことができる。
【０１０６】
さらに、シャワージェル／シャンプー製剤は、増粘剤、例えば、塩化ナトリウム、ＰＥＧ−５５、プロピレングリコールオレアート、ＰＥＧ−１２０メチルグルコースジオレアート等、ならびに保存料、別の有効成分および補助物質および水を含むことができる。
【０１０７】
別の好ましい実施形態では、本発明の組成物はヘアトリートメント組成物である。
【０１０８】
本発明のヘアトリートメント組成物は、好ましくは、組成物の総重量を基準にして、約０．０１〜３０重量％、好ましくは０．５〜２０重量％の範囲の量の少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）を含む。
【０１０９】
好ましくは、本発明のヘアトリートメント組成物は、セッティングフォーム、ヘアムース、ヘアジェル、シャンプー、ヘアスプレー、ヘアフォーム、仕上げ液（end fluids）、パーマ用の中和剤、ヘアカラーおよびブリーチまたはホットオイルトリートメントの形態である。使用する分野に応じて、毛髪化粧用調製物は、（エアロゾル）スプレー、（エアロゾル）フォーム、ゲル、ゲルスプレー、クリーム、ローションまたはワックスとして適用することができる。ここでヘアスプレーとは、エアロゾルスプレーおよびさらに、噴射ガスを含まないポンプスプレーの両者を含む。ヘアフォームは、エアロゾルフォームおよびさらに、噴射ガスを含まないポンプフォームの両者を含む。ヘアスプレーおよびヘアフォームは、好ましくは、主にまたは専ら、水溶性もしくは水分散性成分を含む。本発明のヘアスプレーおよびヘアフォームにおいて使用される化合物が水分散性である場合、粒径が通常１〜３５０ｎｍ、好ましくは１〜２５０ｎｍの水性微分散物の形態でそれらを適用することができる。ここでは、これらの調製物の固形物含量は、通常、約０．５〜２０重量％の範囲である。これらの微分散物は、一般に、その安定化のために乳化剤または界面活性物質を必要としない。
【０１１０】
好ましい実施形態では、本発明の毛髪化粧用製剤は、ａ）０．０１〜３０重量％の少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）、ｂ）２０〜９９．９５重量％の水および／またはアルコール、ｃ）０〜５０重量％の少なくとも１種類の噴射ガス、ｄ）０〜５重量％の少なくとも１種類の乳化剤、ｅ）０〜３重量％の少なくとも１種類の増粘剤、および２５重量％までの別の成分を含む。
【０１１１】
アルコールとは、化粧品において慣用されるすべてのアルコールを意味するものと理解され、例えばエタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノールである。
【０１１２】
別の成分とは、化粧品において慣用される添加物を意味するものと理解され、例えば噴射剤、消泡剤、界面活性化合物、すなわち界面活性物質、乳化剤、フォーム形成剤および可溶化剤である。使用される界面活性化合物はアニオン性、カチオン性、両性または中性であってよい。また、別の慣用の成分は、例えば、保存料、香油、乳白剤、有効成分、ＵＶ吸収剤、ケア用物質、例えばパンテノール、コラーゲン、ビタミン、タンパク質加水分解物、α−およびβ−ヒドロキシカルボン酸、安定化剤、ｐＨ調節剤、色素、粘性調節剤、ゲル形成剤、塩、保湿剤、補油剤、錯化剤および別の慣用の添加物であってよい。
【０１１３】
また、非常に特別な特性を達成しようとする場合、これには、本発明のポリペプチド配列（ｉ）と組み合わせて使用することができる、化粧品において公知のすべてのスタイリングポリマーおよびコンディショナーポリマーが含まれる。
【０１１４】
好適な慣用の毛髪化粧用ポリマーは、例えば、上記のカチオン性、アニオン性、中性、非イオン性および両性ポリマーであり、それらは参照により本明細書中に組み入れられる。
【０１１５】
特定の特性を達成するために、調製物はシリコン化合物に基づくコンディショニング剤をさらに含むこともできる。適切なシリコン化合物は、例えば、ポリアルキルシロキサン、ポリアリールシロキサン、ポリアリールアルキルシロキサン、ポリエーテルシロキサン、シリコン樹脂またはジメチコンコポリオール（dimethicone copolyols）（ＣＴＦＡ）およびアミノ官能性シリコン化合物、例えばアモジメチコン（amodimethicones）（ＣＴＦＡ）である。
【０１１６】
本発明のポリマーは、ヘアスタイリング調製物、特にヘアスプレー（エアロゾルスプレーおよび、噴射ガスを含まないポンプスプレー）およびヘアフォーム（エアロゾルフォームおよび、噴射ガスを含まないポンプフォーム）中のセッティング剤として特に適している。
【０１１７】
好ましい実施形態では、スプレー調製物は、ａ）０．０１〜３０重量％の少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）、ｂ）２０〜９９．９重量％の水および／またはアルコール、ｃ）０〜７０重量％の少なくとも１種類の噴射剤、ｄ）０〜２０重量％の別の成分を含む。
【０１１８】
噴射剤は、ヘアスプレーまたはエアロゾルフォーム用に通常使用される噴射剤である。プロパン／ブタン混合物、ペンタン、ジメチルエーテル、１，１−ジフルオロエタン（ＨＦＣ−１５２ａ）、二酸化炭素、窒素または圧縮空気が好ましい。
【０１１９】
本発明の好ましいエアロゾルヘアフォーム用製剤は、ａ）０．０１〜３０重量％の少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）、ｂ）５５〜９９．８重量％の水および／またはアルコール、ｃ）５〜２０重量％の噴射剤、ｄ）０．１〜５重量％の乳化剤、ｅ）０〜１０重量％の別の成分を含む。
【０１２０】
使用できる乳化剤は、ヘアフォームにおいて通常使用されるすべての乳化剤である。好適な乳化剤は、非イオン性、カチオン性もしくはアニオン性または両性であってよい。
【０１２１】
非イオン性乳化剤の例（ＩＮＣＩ名）は、ラウレス（laureth）、例えばラウレス−４；セテス（ceteth）、例えばセテス−１（cetheth-1）、ポリエチレングリコールセチルエーテル、セテアレス（ceteareth）、例えばセテアレス−２５（cetheareth-25）、ポリグリコール脂肪酸グリセリド、水酸化レシチン、脂肪酸のラクチルエステル、アルキルポリグリコシドである。
【０１２２】
カチオン性乳化剤の例は、リン酸二水素セチルジメチル−２−ヒドロキシエチルアンモニウム、セチルトリモニウムクロリド、セチルトリモニウムブロミド、メチル硫酸ココトリモニウム（cocotrimonium methyl sulfate）、クオタニウム−１〜ｘ（ＩＮＣＩ）である。
【０１２３】
アニオン性乳化剤は、例えば、アルキルスルファート、アルキルエーテルスルファート、アルキルスルホナート、アルキルアリールスルホナート、アルキルスクシナート、アルキルスルホスクシナート、Ｎ−アルコイルサルコシナート、アシルタウラート、アシルイセチオナート、アルキルホスファート、アルキルエーテルホスファート、アルキルエーテルカルボキシラート、α−オレフィンスルホナート、特にアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩（例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、およびアンモニウムおよびトリエタノールアミン塩）の群から選択することができる。アルキルエーテルスルファート、アルキルエーテルホスファートおよびアルキルエーテルカルボキシラートは分子中に１〜１０個の範囲のエチレンオキシドまたはプロピレンオキシド単位、好ましくは１〜３個の範囲のエチレンオキシド単位を有することができる。
【０１２４】
本発明のスタイリングジェルに好適な調製物は、例えば、以下の組成を有することができる：ａ）０．０１〜３０重量％の少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）、ｂ）８０〜９９．８５重量％の水および／またはアルコール、ｃ）０〜３重量％、好ましくは０．０５〜２重量％のゲル形成剤、ｄ）０〜２０重量％の別の成分。
【０１２５】
一般に、本発明で使用されるポリペプチド配列（ｉ）は「自己粘稠化（self-thickening）」効果を元々有し、したがって、ほとんどの場合、ゲル調製時にゲル形成剤を使用せずに済むことを意味する。しかし、ゲルの特別なレオロジー的または他の適用特性を達成するために、その使用が有利であることもある。使用してよいゲル形成剤は化粧品において慣用のすべてのゲル形成剤である。これには、わずかに架橋されているポリアクリル酸、例えばカルボマー（carbomer）（ＩＮＣＩ）、セルロース誘導体、例えばヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カチオン修飾されているセルロース、多糖、例えばキサンタンガム、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、アクリル酸ナトリウムコポリマー、ポリクオタニウム−３２（および）流動パラフィン（Paraffinum Liquidum）（ＩＮＣＩ）、アクリル酸ナトリウムコポリマー（および）流動パラフィン（および）ＰＰＧ−１トリデセス−６（PPG-1 trideceth-6）、アクリルアミドプロピルトリモニウムクロリド／アクリルアミドコポリマー、ステアレス−１０アリルエーテル、アクリル酸コポリマー、ポリクオタニウム−３７（および）流動パラフィン（および）ＰＰＧ−１トリデセス−６、ポリクオタニウム３７（および）プロピレングリコールジカプラートジカプリラート（および）ＰＰＧ−１トリデセス−６、ポリクオタニウム−７、ポリクオタニウム−４４が含まれる。
【０１２６】
本発明のポリペプチド配列（ｉ）は化粧用調製物中のコンディショナーとして使用することができる。
【０１２７】
本発明のポリペプチド配列（ｉ）を含む調製物は、好ましくは、セッティング剤および／またはコンディショナーとしてシャンプー製剤中で使用することができる。好ましいシャンプー製剤は、ａ）０．０１〜３０重量％の少なくとも１種類のポリペプチド配列（ｉ）、ｂ）２５〜９４．９５重量％の水、ｃ）５〜５０重量％の界面活性物質、ｃ）０〜５重量％の別のコンディショナー、ｄ）０〜１０重量％の別の化粧用成分を含む。
【０１２８】
シャンプー製剤では、シャンプーにおいて通常使用されるすべてのアニオン性、中性、両性またはカチオン性界面活性物質を使用することが可能である。
【０１２９】
好適なアニオン性界面活性物質は、例えば、アルキルスルファート、アルキルエーテルスルファート、アルキルスルホナート、アルキルアリールスルホナート、アルキルスクシナート、アルキルスルホスクシナート、Ｎ−アルコイルサルコシナート、アシルタウラート、アシルイセチオナート、アルキルホスファート、アルキルエーテルホスファート、アルキルエーテルカルボキシラート、α−オレフィンスルホナート、特にアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩（例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、およびアンモニウムおよびトリエタノールアミン塩）である。アルキルエーテルスルファート、アルキルエーテルホスファートおよびアルキルエーテルカルボキシラートは分子中に１〜１０個の範囲のエチレンオキシドまたはプロピレンオキシド単位、好ましくは１〜３個の範囲のエチレンオキシド単位を有することができる。
【０１３０】
例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸アンモニウム、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸アンモニウム、ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、オレイルコハク酸ナトリウム、スルホコハク酸ラウリルアンモニウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸トリエタノールアミンが好適である。
【０１３１】
好適な両性界面活性物質は、例えば、アルキルベタイン、アルキルアミドプロピルベタイン、アルキルスルホベタイン、アルキルグリシナート、アルキルカルボキシグリシナート、アルキルアンホアセテートまたはアルキルアンホプロピオナート、アルキルアンホジアセテートまたはアンホジプロピオナートである。
【０１３２】
例えば、ココジメチルスルホプロピルベタイン、ラウリルベタイン、コカミドプロピルベタインまたはココアンホプロピオン酸ナトリウムを使用することができる。
【０１３３】
好適な非イオン性界面活性物質は、例えば、アルキル鎖（直鎖または分岐鎖）に６〜２０炭素原子を有する脂肪族アルコールまたはアルキルフェノールと、エチレンオキシドおよび／またはプロピレンオキシドとの反応産物である。アルキレンオキシドの量はアルコール１モルあたり約６〜６０モルである。さらに、アルキルアミンオキシド、モノ−またはジアルキルアルカノールアミド、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステル、アルキルポリグリコシドまたはソルビタンエーテルエステルが適している。
【０１３４】
さらにまた、シャンプー製剤は、慣用のカチオン性界面活性物質、例えば、四級アンモニウム化合物、例えばセチルトリメチルアンモニウムクロリドを含むことができる。
【０１３５】
シャンプー製剤では、ポリペプチド配列（ｉ）とともに慣用のコンディショナーを使用して、特定の効果を達成することができる。
【０１３６】
これには、例えば、ＩＮＣＩ名、ポリクオタニウムを有する上記カチオン性ポリマー、特にビニルピロリドン／Ｎ−ビニルイミダゾリウム塩のコポリマー（Luviquat FC, Luviquat&commat, HM, Luviquat MS, Luviquat Care）、ジエチル硫酸で四級化されたＮ−ビニルピロリドン／ジメチルアミノエチルメタクリラートのコポリマー（Luviquat D PQ 11）、Ｎ−ビニルカプロラクタム／Ｎ−ビニルピロリドン／Ｎ−ビニルイミダゾリウム塩のコポリマー（Luviquat D Hold）、カチオン性セルロース誘導体（Polyquaternium-4および-10）、アクリルアミドコポリマー（Polyquaternium-7）が含まれる。さらに、タンパク質加水分解物を使用することができ、また、シリコン化合物に基づくコンディショニング剤、例えばポリアルキルシロキサン、ポリアリールシロキサン、ポリアリールアルキルシロキサン、ポリエーテルシロキサンまたはシリコン樹脂を使用することができる。別の好適なシリコン化合物は、ジメチコンコポリオール（ＣＴＦＡ）およびアミノ官能性シリコン化合物、例えばアモジメチコン（ＣＴＦＡ）である。さらに、カチオン性グアール誘導体、例えばグアールヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド（ＩＮＣＩ）を使用することができる。
【０１３７】
本発明はさらに、以下のものからなるケラチン結合性エフェクター分子に関する：
（ｉ）ケラチンに対して結合親和性を有する、少なくとも１種類のポリペプチド配列
（ｉｉ）ポリペプチド配列（ｉ）と天然には連結していないエフェクター分子。
【０１３８】
好適なポリペプチド配列（ｉ）は上記の通りである。
【０１３９】
本発明の特に有利な実施形態は、少なくとも１種類の以下のポリペプチド配列を含むポリペプチド配列（ｉ）である：
ｉ．  ポリペプチド配列（ドメインＢ）
ｉｉ．  ポリペプチド配列（ドメインＣ）
ｉｉｉ．  （ａ）と比較して、最大７０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
ｉｖ．  （ｂ）と比較して、最大７０％のアミノ酸において改変されているポリペプチド配列
ただし、ポリペプチド配列（ｃ）または（ｄ）のケラチン結合性は、実施例９または１０に記載のアッセイにおいて測定された場合に、ポリペプチド配列（ａ）または（ｂ）が示す値の少なくとも１０％に相当する。これに関して、ドメインＢまたはＣとは、ヒトデスモプラキンの上記および下記頁に記載のケラチン結合性ドメインを意味する（配列番号１）。それに関してアミノ酸の改変とは、アミノ酸置換、挿入および欠失またはこれらの３種類の候補の任意の組み合わせを意味する。
【０１４０】
使用するのが好ましいポリペプチド配列（ｉ）は所望の生物に対して非常に特異的な親和性を有する配列である。したがって、皮膚化粧品における適用に対して、採用するのが好ましいポリペプチド配列（ｉ）はヒト皮膚のケラチンに対して特に高い親和性を有する配列である。毛髪化粧品における適用に好ましいポリペプチド配列はヒト毛髪のケラチンに対して特に高い親和性を有する配列である。
【０１４１】
同様にペット部門での適用では、好ましいポリペプチド配列（ｉ）は、対応するケラチン、例えばイヌケラチンまたはネコケラチンに対して特に高い親和性を有する配列である。
【０１４２】
しかし、本発明のエフェクター分子において２種類以上のポリペプチド配列（ｉ）を使用することも可能である。例えばヒト皮膚のケラチンに対して高い結合親和性を有する配列（ｉ）をヒト毛髪のケラチンに対して高い親和性を有する配列（ｉ）と併せて使用することが可能である。複数コピーの同一ポリペプチド配列（ｉ）を連続してつなぎ、例えば、より高い結合性を達成することも可能である。
【０１４３】
好適なケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）は公知である。例えば、デスモプラキンおよびプレクチンはケラチン結合性ドメインを含む（Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May;14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26; Hopkinson SB, Jones JC., The N terminus of the transmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. 2000 Jan;11(1):277-86）。
【０１４４】
例えば、InforMax Inc.から供給されるＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ８（２００２年９月２５日版）等のコンピュータプログラムを使用して、前記の公知タンパク質配列をアライメントすることによって、そのような領域をマッピングし、かつ特定することが可能である。
【０１４５】
ヒトケラチンに対する良好な結合性を有する別の好適なポリペプチド配列（ｉ）は、アライメントにおいて高い相同性または配列同一性を示し、ケラチン結合性ドメインのコンセンサス配列とみなし得る配列領域である。
【０１４６】
これらの配列領域のうちで以下の配列領域が特に好ましい：
ドメインＢ（ＫＢＤ−Ｂ）：配列番号１、２１９３−２４４８位のポリペプチド配列
ドメインＢ（ＫＢＤ−Ｂ）：配列番号１、２２０９−２４４８位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１、２６０６−２８７１位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１、２６１６−２８７１位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１、２６１６−２８１１位のポリペプチド配列
ドメインＣ（ＫＢＤ−Ｃ）：配列番号１、２６０６−２８７１位のポリペプチド配列
【０１４７】
ポリペプチド配列（ｉ）が非ヒト生物由来のケラチンに対して特に良好な結合性を有することが望ましい場合、好適であるとして選択される配列モチーフは、好ましくは、適切な生物のケラチン結合性タンパク質、例えばデスモプラキンまたはプレクチン由来の配列モチーフである。
【０１４８】
図２はケラチン結合性分子のアライメントを示す。
【０１４９】
エフェクター分子（ｉｉ）
以後、エフェクター分子（ｉｉ）とは、特定の、予測可能な効果を有する分子を意味する。それは、タンパク質性分子、例えば酵素であってよく、あるいは他の非タンパク質原性（non-proteinogenic）分子、例えば色素、日焼け止め、ビタミン、プロビタミン、酸化防止剤および脂肪酸、コンディショナー、または金属イオン含有化合物であってもよい。
【０１５０】
タンパク質性エフェクター分子の中で、酵素および抗体が好ましい。
【０１５１】
酵素の中で、以下の酵素がエフェクター分子（ｉｉ）として好ましい：オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、グルカナーゼ、ムタナーゼ（mutanase）、チロシナーゼ、ラッカーゼ、金属結合性酵素、ラクトペルオキシダーゼ、リゾチーム、アミログリコシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、フォトリアーゼ、Ｔ４エンドヌクレアーゼ、カタラーゼ、チオレドキシン、チオレドキシンレダクターゼ。
【０１５２】
エフェクター分子（ｉｉ）として好ましい、酵素活性を有しないタンパク質性エフェクター分子（ｉｉ）は以下のものである：抗菌性ペプチド、絹タンパク質、ハイドロフォビン、コラーテン（collaten）、カロテノイド結合性タンパク質、重金属結合性タンパク質、臭気物質結合性タンパク質。
【０１５３】
また、タンパク質性エフェクター分子（ｉｉ）として非常に適しているものは、植物および動物供給源由来のタンパク質の加水分解物、例えば海洋起源のタンパク質の加水分解物または絹加水分解物である。
【０１５４】
非タンパク質性エフェクター分子（ｉｉ）の中で、色素、例えば食用色素、半永久的色素または反応性もしくは酸化色素が好ましい。酸化色素の場合、１つの成分がエフェクター分子（ｉｉ）としてケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）にカップリングし、そして作用部位で、すなわち毛髪への結合後に、第二の色素成分に酸化的にカップリングすることが好ましい。酸化色素に関してさらに好ましいのは、ポリペプチド配列（ｉ）に連結する前に着色成分のカップリングを実行することである。
【０１５５】
さらに好ましくは、１つの成分としての反応性色素をエフェクター分子（ｉｉ）としてのケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）に連結した後、毛髪に結合させる。さらに、エフェクター分子（ｉｉ）としてケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）に連結されている前記色素を、爪または皮膚に対する結合を通して、装飾化粧品において使用することが可能である。
【０１５６】
本発明の分子に適した色素はすべての慣用の毛髪用色素である。好適な色素は、化粧品についてのハンドブック、例えばSchrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Huthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1から当業者に公知である。
【０１５７】
特に有利な色素は以下のリストに指定されている色素である。カラーインデックスナンバー（ＣＩＮ）はRowe Colour Index, 第３版, Society of Dyers and Colourists, Bradford, England, 1971に由来する。 
【表４】
2008500301.tif 000007
【０１５８】
2008500301.tif 000008
【０１５９】
2008500301.tif 000009
【０１６０】
2008500301.tif 000010
【０１６１】
2008500301.tif 000011
【０１６２】
2008500301.tif 000012
【０１６３】
また、毛髪染料として非常に適しているのは食用色素である。
【０１６４】
また、皮膚または爪結合性ポリペプチド配列（ｉ）に対するエフェクター分子（ｉｉ）として上記色素を使用して、例えば入れ墨において皮膚または爪を着色することができる。
【０１６５】
また、ケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）に連結されているエフェクター分子（ｉｉ）は、所望であれば、皮膚、毛髪または爪のケラチンから容易に再分離できる。この目的で、例えばケラチンでの洗浄を採用することが可能であり、これによりケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）に連結されているエフェクター分子（ｉｉ）はその既存のケラチン結合から解放され、洗浄液由来のケラチンで飽和する。別法では、高含量の界面活性剤（例えばＳＤＳ）での洗浄により洗い出すことも可能である。
【０１６６】
別の好ましいエフェクター分子（ｉｉ）は、脂肪酸、特にアルキル分岐を保持する飽和脂肪酸、特に好ましくは分岐エイコサン酸、例えば１８−メチルエイコサン酸である。
【０１６７】
別の好ましいエフェクター分子（ｉｉ）はカロテノイドである。本発明では、カロテノイドとは以下の化合物およびそのエステル化またはグリコシル化誘導体を意味するものと理解される：単独または混合物としての、β−カロテン、リコペン、ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、シトラナキサンチン、カンタキサンチン、ビキシン、β−アポ−４−カロテナール、β−アポ−８−カロテナール、β−アポ−８−カロテン酸エステル、ニューロスポレン（neurosporene）、エキネノン、アドニルビン、ビオラキサンチン、トルレン、トルラロジン。使用するのが好ましいカロテノイドは、β−カロテン、リコペン、ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、シトラナキサンチンおよびカンタキサンチンである。
【０１６８】
別の好ましいエフェクター分子（ｉｉ）はビタミン、特にビタミンＡおよびそのエステルである。
【０１６９】
本発明の目的でのレチノイドとは、ビタミンＡアルコール（レチノール）およびその誘導体、例えばビタミンＡアルデヒド（レチナール）、ビタミンＡ酸（レチノイン酸）およびビタミンＡエステル（例えば酢酸レチニル、プロピオン酸レチニルおよびパルミチン酸レチニル）を意味する。これに関して、用語レチノイン酸には、オールトランスレチノイン酸および１３−シス−レチノイン酸の両者が包含される。用語レチノールおよびレチナールには、好ましくは、オールトランス化合物が含まれる。本発明の懸濁液に関して好ましく使用されるレチノイドはオールトランスレチノールであり、これを以後レチノールと称する。
【０１７０】
別の好ましいエフェクター分子（ｉｉ）は、Ａ、Ｃ、ＥおよびＦ群由来のビタミン、プロビタミンおよびビタミン前駆体、特に３，４−ジデヒドロレチノール、β−カロテン（ビタミンＡのプロビタミン）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、およびアスコルビン酸のパルミチン酸エステル、グルコシドまたはリン酸塩、トコフェロール、特にα−トコフェロールおよびそのエステル、例えばアセテート、ニコチナート、ホスファートおよびスクシナート；さらにビタミンＦである。ビタミンＦとは、必須脂肪酸、特にリノール酸、リノレン酸およびアラキドン酸を意味する。
【０１７１】
本発明で採用するのが好ましい、ビタミンＢ群のビタミン、プロビタミンもしくはビタミン前駆体またはそれらの誘導体、および２−フラノンの誘導体としては、とりわけ以下のものが挙げられる：
ビタミンＢ１、慣用名チアミン、化学名３−［（４’−アミノ−２’−メチル−５’−ピリミジニル）メチル］−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−メチルチアゾリウムクロリド。 
ビタミンＢ２、慣用名リボフラビン、化学名７，８−ジメチル−１０−（１−Ｄ−リビチル）−ベンゾ［ｇ］プテリジン−２，４（３Ｈ，１０Ｈ）−ジオン。リボフラビンは例えば乳清中に遊離型で存在し、また、他のリボフラビン誘導体は細菌および酵母から単離することができる。本発明で同様に好適なリボフラビン立体異性体はリキソフラビンであり、これは魚粉または肝臓から単離することができ、Ｄ−リビチルの代わりにＤ−アラビチル基を有する。 
ビタミンＢ３。ニコチン酸およびニコチンアミド（ナイアシンアミド）は、そのように称されることが多い。本発明ではニコチンアミドが好ましい。 
ビタミンＢ５（パントテン酸およびパンテノール）。好ましくはパンテノールが使用される。本発明で使用することができるパンテノール誘導体は、特に、パンテノールのエステルおよびエーテル、およびカチオン誘導体化（cationically derivatized）パンテノールである。本発明の別の好ましい実施形態では、パントテン酸またはパンテノールに加えて、２−フラノンの誘導体を使用することも可能である。特に好ましい誘導体は、同様に市販されている物質、慣用名パントラクトンのジヒドロ−３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２（３Ｈ）−フラノン（Merck）、４−ヒドロキシメチル−γ−ブチロラクトン（Merck）、３，３−ジメチル−２−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトン（Aldrich）および２，５−ジヒドロ−５−メトキシ−２−フラノン（Merck）であり、これらにはすべての立体異性体が明示的に含まれる。 
好都合にも、前記化合物は本発明のケラチン結合性エフェクター分子に対して保湿および皮膚鎮静特性を付与する。 
ビタミンＢ６。これは画一的な物質ではなく、ピリドキシン、ピリドキサミンおよびピリドキサールの慣用名で知られる５−ヒドロキシメチル−２−メチルピリジン−３−オールの誘導体を意味する。 
ビタミンＢ７（ビオチン）。これはビタミンＨまたは「皮膚ビタミン」とも称される。ビオチンは（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロチエノール［３，４−ｄ］イミダゾール−４−吉草酸である。
【０１７２】
本発明では、パンテノール、パントラクトン、ニコチンアミドおよびビオチンが特に非常に好ましい。
【０１７３】
本発明では、好適な誘導体（塩、エステル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび脂質）を使用することが可能である。この群由来の、好ましい親油性の、油溶性酸化防止剤は、トコフェロールおよびその誘導体、没食子酸エステル、フラボノイドおよびカロテノイド、ならびにブチル化ヒドロキシトルエネル／アニソール（butylated hydroxytoIuenel/anisole）である。好ましい水溶性酸化防止剤は、アミノ酸、例えばチロシンおよびシステイン（cysteinee）およびその誘導体、ならびにタンニン、特に植物起源のものである。
【０１７４】
トリテルペン、特にトリテルペン酸、例えばウルソル酸、ロズマリン酸、ベツリン酸、ボスウェリア酸およびブリオノール酸。
【０１７５】
別の好ましいエフェクター分子はリポ酸および好適な誘導体（塩、エステル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび脂質）である。
【０１７６】
別の好ましいエフェクター分子（ｉｉ）は紫外光吸収剤である。これは、紫外線を吸収し、吸収エネルギーを長波長放射、例えば熱の形式で再放出することができる有機物質を意味する。その有機物質は油溶性または水溶性であってよい。
【０１７７】
使用することができる油溶性ＵＶ−Ｂ吸収剤の例は以下の物質である：
３−ベンジリデンカンファーおよびその誘導体、例えば３−（４−メチルベンジリデン）カンファー；
４−アミノ安息香酸誘導体、好ましくは４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−エチルヘキシル、４−（ジメチルアミノ）安息香酸２−オクチルおよび４−（ジメチルアミノ）安息香酸アミル；
ケイ皮酸のエステル、好ましくは４−メトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル、４−メトキシケイ皮酸プロピル、４−メトキシケイ皮酸イソアミル、４−メトキシケイ皮酸イソペンチル、２−シアノ−３−フェニルケイ皮酸２−エチルヘキシル（オクトクリレン）；
サリチル酸のエステル、好ましくはサリチル酸２−エチルヘキシル、サリチル酸４−イソプロピルベンジル、サリチル酸ホモメンチル；
ベンゾフェノンの誘導体、好ましくは２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン；
ベンザルマロン酸のエステル、好ましくは４−メトキシベンザルマロン酸２−エチルヘキシル；
トリアジン誘導体、例えば、２，４，６−トリアニリノ−（ｐ−カルボ−２’−エチル−１’−ヘキシルオキシ）−１，３，５−トリアジン（オクチルトリアゾン）およびジオクチルブタミドトリアゾン（dioctyl butamido triazone）（Ｕｖａｓｏｒｂ（登録商標）ＨＥＢ）：
プロパン−１，３−ジオン、例えば、１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）プロパン−１，３−ジオン。
【０１７８】
好適な水溶性物質は以下のものである：
２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸およびそのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカノールアンモニウムおよびグルクアンモニウム（glucammonium）塩；
ベンゾフェノンのスルホン酸誘導体、好ましくは２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸およびその塩；
３−ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体、例えば、４−（２−オキソ−３−ボルニリデンメチル）ベンゼンスルホン酸および２−メチル−５−（２−オキソ−３−ボルニリデン）スルホン酸およびそれらの塩。
【０１７９】
特に好ましいのは、ケイ皮酸のエステル、好ましくは４−メトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル、４−メトキシケイ皮酸イソペンチル、２−シアノ−３−フェニルケイ皮酸２−エチルヘキシル（オクトクリレン）を使用することである。
【０１８０】
さらに好ましいのは、ベンゾフェノンの誘導体、特に２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンを使用すること、およびプロパン−１，３−ジオン、例えば１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）プロパン−１，３−ジオンを使用することである。
【０１８１】
好適な典型的ＵＶ−Ａ吸収剤は以下の物質である：
ベンゾイルメタンの誘導体、例えば、１−（４’−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）プロパン−１，３−ジオン、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタンまたは１−フェニル−３−（４’−イソプロピルフェニル）プロパン−１，３−ジオン；
ベンゾフェノンのアミノヒドロキシ置換誘導体、例えば、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル−ｎ−ヘキシルベンゾアート。
【０１８２】
当然ながら、ＵＶ−ＡおよびＵＶ−Ｂ吸収剤を混合物として使用することもできる。
【０１８３】
別の好適なＵＶ吸収剤を以下の表に挙げる。 
【表５】
2008500301.tif 000013
【０１８４】
2008500301.tif 000014
【０１８５】
上述の２群の主要な光防護剤に加えて、紫外線が皮膚内に透過すると誘発される光化学反応の連鎖を中断させる酸化防止剤型の二次的な日焼け止めを使用することも可能である。その典型例は、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、トコフェロール（ビタミンＥ）およびアスコルビン酸（ビタミンＣ）である。
【０１８６】
別の群は、紫外光によって損傷した皮膚に対する抗炎症性効果を有する抗刺激剤である。このような物質の例は、ビサボロール、フィトールおよびフィタントリオールである。
【０１８７】
エフェクター分子（ｉｉ）とケラチン結合性ポリペプチド配列（ｉ）との連結
ケラチンに対して結合親和性を有するポリペプチド配列（ｉ）にエフェクター分子（ｉｉ）を連結する。（ｉ）と（ｉｉ）との連結は、共有結合であり、また、イオン性またはファンデルワールス相互作用に基づく結合の両者であり得る。
【０１８８】
共有結合による連結が好ましい。これは、例えばポリペプチド配列（ｉ）の側鎖、特にアミノ官能基またはヒドロキシル官能基またはカルボン酸官能基またはチオール官能基を介して実現することができる。１個またはそれ以上のリシン残基のアミノ官能基、１個またはそれ以上のシステイン残基のチオール基またはポリペプチド（ｉ）のＮ末端またはＣ末端官能基を介する連結が好ましい。ポリペプチド配列（ｉ）に存在するアミノ酸官能基だけでなく、適切な官能基を有するアミノ酸（例えばシステイン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸）を配列に付加するか、あるいはポリペプチド配列（ｉ）のアミノ酸を前記アミノ酸官能基で置換することも可能である。
【０１８９】
エフェクター分子（ｉｉ）とポリペプチド配列（ｉ）との連結は、直接的に、すなわち（ｉ）および（ｉｉ）に既存の２個の化学官能基の共有結合によって実現することができる。例えば、（ｉ）のアミノ官能基を（ｉｉ）のカルボン酸官能基に連結してアミドを得る。しかし、いわゆるリンカー、すなわち少なくとも二官能性の分子を介して連結を行うこともできる。前記リンカーは、１つの官能基が（ｉ）と結合され、１個またはそれ以上の他の官能基によって（ｉｉ）に連結される。
【０１９０】
エフェクター分子（ｉｉ）もポリペプチド配列から構成される場合、いわゆる融合タンパク質、すなわち２種類の部分配列（ｉ）および（ｉｉ）からなる連続したポリペプチド配列にすることによって（ｉ）と（ｉｉ）の連結を行うことができる。
【０１９１】
（ｉ）と（ｉｉ）との間にいわゆるスペーサーエレメントを組み込むことも可能であり、そのスペーサーエレメントは、例えば、プロテアーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、ホスファターゼ、ヒドロラーゼの潜在的切断部位を有するポリペプチド配列であるか、または容易に精製できる融合タンパク質となることを可能にするオリゴおよびポリペプチド配列、例えばいわゆるＨｉｓタグ、すなわちオリゴヒスチジン残基である。
【０１９２】
さらにスペーサーエレメントは、アルキル鎖、エチレングリコールおよびポリエチレングリコールから構成されてよい。
【０１９３】
特に好ましいリンカーおよび／またはスペーサーエレメントは、プロテアーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、ホスファターゼ、ヒドロラーゼの潜在的切断部位を有し、すなわち酵素によって切断可能である。本発明の分子中で使用することができる、酵素によって切断可能なリンカーの例は、例えば、ＷＯ９８／０１４０６に挙げられている。前記文献の内容全体を本明細書において明示的に参照する。
【０１９４】
特に好ましいリンカーおよびスペーサーは、熱によって切断可能、光によって切断可能（photocleavable）なものである。対応する化学構造は当業者に公知であり、分子部分（ｉ）と（ｉｉ）との間に組み込まれる。
【０１９５】
非タンパク質性エフェクター分子の場合のポリペプチド配列（ｉ）に対する連結は、好ましくは、ポリペプチド（ｉ）上の、官能性を持たせることが可能な（functionalizable）残基（側鎖、Ｃ末端またはＮ末端）を用いて行い、その残基はエフェクター分子の化学官能基に共有結合によって連結されている。
【０１９６】
この場合の連結は、好ましくは、ポリペプチド（ｉ）のアミノ、チオールまたはヒドロキシル官能基を介し、その官能基は、適切であれば活性化後に、例えばエフェクター分子（ｉｉ）のカルボキシル官能基との対応するアミド、チオエステルまたはエステル結合を受けることができる。
【０１９７】
ポリペプチド配列（ｉ）とエフェクター分子（ｉｉ）との別の好ましい連結では、状況に応じて用意された（tailored）リンカーが使用される。このようなリンカーは２個またはそれ以上のいわゆるアンカー基を有し、それを用いてポリペプチド配列（ｉ）と１個またはそれ以上のエフェクター分子（ｉｉ）とを連結することができる。例えば、（ｉ）に対するアンカー基はチオール官能基であってよく、それを介して、リンカーは、ポリペプチド（ｉ）のシステイン残基とのジスルフィド結合を行うことができる。（ｉｉ）に対するアンカー基は例えばカルボキシル官能基であってよく、それを介して、リンカーは、エフェクター分子（ｉｉ）のヒドロキシル官能基とのエステル結合を行うことができる。
【０１９８】
このような状況に応じて用意されたリンカーを使用することにより、所望のエフェクター分子に正確に適合する連結が可能になる。さらに、それにより、所定の様式で複数のエフェクター分子をポリペプチド配列（ｉ）に連結することが可能となる。
【０１９９】
使用されるリンカーはカップリング対象の官能性に依存する。適切な例は、ポリペプチド（ｉ）に対して、スルフヒドリル反応基を介してカップリングする分子、例えばマレイミド、ピリジルジスルフィド、α−ハロアセチル、ビニルスルホン、スルファトアルキルスルホン（sulfatoalkyl sulfones）（好ましくはスルファトエチルスルホン）であり、エフェクター分子（ｉｉ）に対して、
−    スルフヒドリル反応基を介してカップリングする分子（例えばマレイミド、ピリジルジスルフィド、α−ハロアセチル、ビニルスルホン、スルファトアルキルスルホン（好ましくはスルファトエチルスルホン）
−    アミン反応基を介してカップリングする分子（例えばスクシンイミジルエステル、カルボジイミド、ヒドロキシメチルホスフィン、イミドエステル、ＰＦＰエステル等）
−    糖または酸化糖反応基を介してカップリングする分子（例えばヒドラジド等）
−    カルボキシ反応基を介してカップリングする分子（例えばカルボジイミド等）
−    ヒドロキシル反応基を介してカップリングする分子（例えばイソシアナート等）
−    チミン反応基を介してカップリングする分子（例えばソラレン等）
−    非選択基を介してカップリングする分子（例えばアリールアジド等）
−    光活性化が可能な基（photoactivatable groups）を介してカップリングする分子（例えばペルフルオロフェニルアジド等）
−    金属錯体形成基（metal-complexing groups）を介してカップリングする分子（例えばＥＤＴＡ、ヘキサｈｉｓ、フェリチン）
−    抗体およびそのフラグメントを介してカップリングする分子（例えば単鎖抗体、抗体のＦ（ａｂ）フラグメント、触媒抗体）である。
【０２００】
別の可能性は、例えばカルボジイミド、グルタールアルデヒド、上記架橋剤または当業者に公知の他の架橋剤を用いる、活性物質／エフェクターとケラチン結合性ドメイン間の直接的なカップリングである。
【０２０１】
また、本発明のケラチン結合性エフェクター分子は、所望であれば、ケラチンから容易に再分離することができる。この目的で、例えばケラチンでの洗浄を採用することが可能であり、これによりケラチン結合性エフェクター分子はその既存のケラチン結合から解放され、洗浄液由来のケラチンで飽和する。ゆえに、複数のエフェクター分子をケラチンに可逆的に付着させることが可能である。別法では、高含量の界面活性剤（例えばＳＤＳ）での洗浄により洗い出すことが可能である。
【０２０２】
本発明のケラチン結合性エフェクター分子は、ヒト用化粧品、特に皮膚および毛髪のケア、動物のケア、革の手入れおよび革の加工に広い適用領域を有する。
【０２０３】
本発明のケラチン結合性エフェクター分子は、好ましくは、皮膚用、爪用および毛髪用化粧品のために使用される。それにより、高濃度かつ長期間作用する、皮膚、爪および毛髪のケアまたは皮膚、爪および毛髪保護用のエフェクターを実現することができる。
【０２０４】
毛髪化粧用または皮膚化粧用調製物を製造するのに適した補助物質および添加物は当業者によく知られており、また、化粧品に関する参考書、例えばSchrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Huthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1に見出すことができる。
【０２０５】
別の実施形態では、本発明の毛髪化粧用または皮膚化粧用調製物は皮膚または毛髪のケアまたは保護に役立ち、エマルジョン、分散物、懸濁液、水性界面活性物質調製物、乳液、ローション、クリーム、バルサム、軟膏、ゲル、顆粒、微粉末、スティック製品、例えば、リップスティック、フォーム、エアロゾルまたはスプレーの形態である。このような製剤は局所用調製物に非常に適している。好適なエマルジョンは水中油型エマルジョンおよび油中水型エマルジョンまたはマイクロエマルジョンである。
【０２０６】
前記毛髪化粧用または皮膚化粧用調製物は、通常、皮膚への（局所的な）適用または毛髪への適用に使用される。これに関して局所用調製物とは、微細な分散状態で、好ましくは皮膚を通して吸収できる形態で、活性物質を皮膚に適用するのに適している調製物を意味する。この目的に適した例は、水性および含水アルコール溶液、スプレー、フォーム、フォームエアロゾル、軟膏、水性ゲル、Ｏ／ＷまたはＷ／Ｏ型のエマルジョン、マイクロエマルジョンまたは化粧用スティック製品である。
【０２０７】
本発明の化粧用組成物の好ましい実施形態では、組成物は担体を含む。好ましい担体は、水、気体、水ベースの液体、油、ゲル、エマルジョンまたはマイクロエマルジョン、分散物またはそれらの混合物である。前記担体は皮膚による耐容性に優れている。局所用調製物に特に好都合なのは、水性ゲル、エマルジョンまたはマイクロエマルジョンである。
【０２０８】
使用することができる乳化剤は、非イオン性界面活性物質、双性イオン性界面活性物質、両性界面活性物質またはアニオン性乳化剤である。乳化剤は、組成物を基準にして、０．１〜１０、好ましくは１〜５重量％の量で本発明の組成物中に存在させてよい。
【０２０９】
非イオン性界面活性物質として、例えば以下の群のうち少なくとも１種類の界面活性物質を使用することが可能である：
８〜２２個のＣ原子を有する直鎖脂肪アルコール、１２〜２２個のＣ原子を有する脂肪酸およびアルキル基中に８〜１５個のＣ原子を有するアルキルフェノールと、２〜３０ｍｏｌのエチレンオキシドおよび／または０〜５ｍｏｌのプロピレンオキシドとの付加物；
１〜３０ｍｏｌのエチレンオキシドとグリセリンとの付加物のＣ１２／１８脂肪酸モノエステルおよびジエステル；
６〜２２個の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪酸ならびにそのエチレンオキシド付加物のグリセリンモノエステルおよびジエステルならびにソルビタンモノエステルおよびジエステル；
アルキル基中に８〜２２個の炭素原子を有するアルキルモノグリコシドおよびオリゴグリコシドならびにそのエトキシル化アナログ；
ヒマシ油および／または硬化ヒマシ油と１５〜６０ｍｏｌのエチレンオキシドとの付加物；
ポリオールエステルおよび特にポリグリセリンエステル、例えば、ポリグリセリンポリリシノラート、ポリグリセリンポリ−１２−ヒドロキシステアラートまたはポリグリセリンダイマラート（dimerate）。同様に、複数の前記物質クラス由来の化合物の混合物も適している；
ヒマシ油および／または硬化ヒマシ油と２〜１５ｍｏｌのエチレンオキシドの付加物；
直鎖、分岐、不飽和または飽和Ｃ６／２２脂肪酸、リシノール酸および１２−ヒドロキシステアリン酸とグリセリン、ポリグリセリン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、糖アルコール（例えばソルビトール）、アルキルグルコシド（例えばメチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド）およびポリグルコシド（例えばセルロース）に基づく部分エステル；
モノ−、ジ−およびトリアルキルホスファートならびにモノ−、ジ−および／またはトリ−ＰＥＧ−アルキルホスファートならびにそれらの塩；
ウールワックスアルコール；
ポリシロキサン−ポリアルキルポリエーテルコポリマーおよび対応する誘導体；
ＤＥ １１６５５７４に開示されているペンタエリスリトール、脂肪酸、クエン酸および脂肪アルコールの混合エステルならびに／または６〜２２個の炭素原子を有する脂肪酸、メチルグルコースおよびポリオール（好ましくはグリセリンまたはポリグリセリン）の混合エステル、および
ポリアルキレングリコール；
ベタイン。
【０２１０】
また、双性イオン性界面活性物質を乳化剤として使用することができる。双性イオン性界面活性物質と称される界面活性化合物は、分子中に少なくとも１個の四級アンモニウム基および少なくとも１個のカルボン酸基または１個のスルホン酸基を有する界面活性物質である。特に好適な双性イオン性界面活性物質は、いわゆるベタイン、例えばＮ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシナート、例えばココアルキルジメチルアンモニウムグリシナート、Ｎ−アシルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムグリシナート、例えばココアシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシナート、および２−アルキル−３−カルボキシルメチル−３−ヒドロキシエチルイミダゾリン（各物質はアルキル基またはアシル基中に８〜１８個のＣ原子を有する）、ならびにココアシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシナートである。特に好ましい脂肪アミド誘導体は、ＣＴＦＡ名、コカミドプロピルベタインとして知られるものである。
【０２１１】
同様に適している乳化剤は両性界面活性物質である。両性界面活性物質とは、Ｃ８，１８−アルキル基または−アシル基だけでなく、分子中に少なくとも１個の遊離アミノ基および少なくとも１個の−ＣＯＯＨまたは−ＳＯ３Ｈ基を含み、内部塩を形成することができる界面活性化合物を意味する。好適な両性界面活性物質の例は、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルプロピオン酸、Ｎ−アルキルアミノ酪酸、Ｎ−アルキルイミノジプロピオン酸、Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−アルキルアミドプロピルグリシン、Ｎ−アルキルタウリン、Ｎ−アルキルサルコシン、２−アルキルアミノプロピオン酸およびアルキルアミノ酢酸であり、各物質はアルキル基中に約８〜１８個のＣ原子を有する。
【０２１２】
特に好ましい両性界面活性物質は、Ｎ−ココアルキルアミノプロピオナート、ココアシルアミノエチルアミノプロピオナートおよびＣ１２／１８−アシルサルコシンである。両性乳化剤に加えて、四級乳化剤も適しており、四級エステル（ester quat）型のものが特に好ましく、好ましくはメチル四級化二脂肪酸トリエタノールアミンエステル塩である。同様に使用できるアニオン性乳化剤は、アルキルエーテルスルファート、モノグリセリドスルファート、脂肪酸スルファート、スルホスクシナートおよび／またはエーテルカルボン酸である。
【０２１３】
好適な油性物質は、６〜１８個、好ましくは８〜１０個の炭素原子を有する脂肪アルコールベースのゲルベ（guerbet）アルコール、直鎖Ｃ６−Ｃ２２脂肪酸と直鎖Ｃ６−Ｃ２２脂肪アルコールとのエステル、分岐Ｃ６−Ｃ１３カルボン酸と直鎖Ｃ６−Ｃ２２脂肪アルコールとのエステル、直鎖Ｃ６−Ｃ２２脂肪酸と分岐アルコール、特に２−エチルヘキサノールとのエステル、直鎖および／または分岐脂肪酸と多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ダイマージオール（dimerdiol）またはトリマートリオール（trimertriol））および／またはゲルベアルコールとのエステル、Ｃ６−Ｃ１０脂肪酸に基づくトリグリセリド、Ｃ６−Ｃ１８脂肪酸に基づく液状モノ／ジ−、トリグリセリド混合物、Ｃ６−Ｃ２２脂肪アルコールおよび／またはガルベアルコールと芳香族カルボン酸、特に安息香酸とのエステル、Ｃ２−Ｃ１２ジカルボン酸と１〜２２個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルコールまたは２〜１０個の炭素原子および２〜６個のヒドロキシル基を有するポリオールとのエステル、植物油、分岐一級アルコール、置換シクロヘキサン、直鎖Ｃ６−Ｃ２２脂肪アルコールカーボナート、ゲルベカーボナート、安息香酸と直鎖および／または分岐Ｃ６−Ｃ２２アルコールのエステル（例えばＦｉｎｓｏｌｖ（登録商標）ＴＮ）、ジアルキルエーテル、エポキシ化脂肪酸のポリオールエステルの開環型生成物、シリコン油および／または脂肪族もしくはナフテン系炭化水素である。使用できる別の油性物質は、シリコン化合物、例えばジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、環状シリコンおよびアミノ−、脂肪酸−、アルコール−、ポリエーテル−、エポキシ−、フッ素−、アルキル−および／またはグリコシド修飾型シリコン化合物であり、これは室温で液状であっても、樹脂の形態であってもよい。前記油性物質は、組成物を基準にして、１〜９０、好ましくは５〜８０、および特に１０〜５０重量％の量で本発明の組成物中に存在させてよい。
【０２１４】
適切な化合物をケラチン結合性ポリペプチド（ｉ）にカップリングさせることによって、皮膚に対する作用の持続時間を大きく延長することができる。カップリングは上記のように行い、製剤化および適用は当業者に公知の方法によって行う。特にデオドラントに適しているエフェクター分子（ｉｉ）は以下のものである：香油、シクロデキストリン、イオン交換体、リシノール酸亜鉛、抗菌性／静菌性化合物（例えばＤＣＭＸ、イルガサン（Irgasan）ＤＰ ３００、ＴＣＣ）。
【０２１５】
制汗剤（antipersipirants）に適しているのは、タンニン、および亜鉛／アルミニウム塩である。
【０２１６】
本発明の物質の別の適用領域は、皮膚および粘膜の特定の障害に関する治療または予防上の使用である。特に口腔、咽頭腔および鼻腔では、ケラチン結合性ドメインを介して、治療／予防用の活性物質をより強くかつ長期間結合させることは有利である。その適用領域は、特に：
−    ウイルス性疾患（例えばヘルペス、コクサッキー、水痘帯状疱疹、サイトメガロウイルス等）
−    細菌性疾患（例えばＴＢ、梅毒等）
−    真菌性疾患（例えばカンジダ、クリプトコッカス、ヒストプラスマ症、アスペルギルス、ムーコル菌症等）
−    新生物疾患（例えば黒色腫、腺腫等）
−    自己免疫疾患（例えば尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、全身性エリテマトーデス等）
−    日焼け
−    寄生虫の繁殖（例えばマダニ、ダニ、ノミ等）
−    昆虫接触（例えばハマダラカ等の吸血昆虫等）
である。
【０２１７】
治療または予防に適した物質（例えばコルチコイド、免疫抑制剤化合物、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス性化合物、昆虫忌避物質等）は、上記リンカー（カップリング対象の官能性に応じて最適化されているリンカー）を介してケラチン結合性ポリペプチド（ｉ）にカップリングすることができる。
【実施例１】
【０２１８】
実施例１：発現ベクターおよび産生株
ケラチン結合性ドメイン（ＫＢＤ）の発現に関して種々の発現ベクターを試験した。この目的で、種々のプロモーター（例えばＩＰＴＧ誘導性、ラムノース誘導性、アラビノース誘導性、メタノール誘導性、構成的プロモーター、等）を使用した。同様に、ＫＢＤを融合タンパク質として（例えばチオレドキシン、またはｅＧＦＰ、またはＹａａＤ［B. subtilis, SWISS-PROT: P37527, PDX1］、等との融合物として）発現する構築物について試験した。ここでは、種々の発現系を使用して、上記ＫＢＤ−Ｂ（ケラチン結合性ドメインＢ）、およびＫＢＤ−Ｃ（ケラチン結合性ドメインＣ）の両者、ならびに２種類のドメインの組み合わせであるＫＢＤ−ＢＣを発現させた。記載されるベクター構築物は特許請求の範囲に関して限定的ではない。
【０２１９】
代表例として、ＩＰＴＧ誘導性ベクターｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂ（図３）、メタノール誘導性ベクターｐＬｉｂ１５（図４）およびｐＬｉｂ１６（図５）、ならびに誘導性ベクターｐＬｉｂ１９（図６）のベクターマップを挙げる。ＫＢＤ−Ｃに関する手順についても、記載されるベクターの構築および発現と同様とすることができる。
【０２２０】
ＫＢＤの発現のためには、種々の産生宿主、例えば大腸菌株を使用した（実施例２を参照のこと；例えばＸＬ１０−Ｇｏｌｄ [Stratagene], ＢＬ２１−ＣｏｄｏｎＰｌｕｓ [Stratagene], 等）。しかし、他の細菌の産生宿主、例えば巨大菌（Bacillus megaterium）または枯草菌（Bacillus subtilis）も使用した。巨大菌でのＫＢＤ発現の場合、Barg, H., Malten, M. & Jahn, D. (2005). Protein and vitamin production in Bacillus megaterium. In Methods in Biotechnology-Microbial Products and Biotransformations (Barredo, J.-L.編) と同様に手順を実行した。
【０２２１】
使用された真菌の産生株はピキア・パストリス（Pichia pastoris）（実施例３を参照のこと；例えばＧＳ１１５およびＫＭ７１ [ともにInvitrogen製]；等）およびアスペルギルス・ニデュランス（Aspergillus nidulans）（実施例４を参照のこと；例えばＲＭＳ０１１ [Stringer, MA, Dean, RA, Sewall, TC, Timberlake, WE (1991) Rodletless, a new Aspergillus developmental mutant induced by direct gene activation. Genes Dev 5:1161-1171] およびSRF200 [Karos, M, Fischer, R (1999) Molecular characterization of HymA, an evolutionarily highly conserved and highly expressed protein of Aspergillus nidulans. Mol Genet Genomics 260:510-521], 等）であった。しかし、他の真菌の産生宿主、例えばクロカビ（Aspergillus niger）（ＥＰ０６３５５７４Ａ１および／またはＷＯ９８／４６７７２と同様のＫＢＤ発現）をＫＢＤ発現に使用することも可能である。
【実施例２】
【０２２２】
実施例２：大腸菌株において、例えば発現プラスミドｐＱＥ３０−ＫＢＤ−ＢによるＩＰＴＧ誘導性プロモーターを用いたＫＢＤ発現
発現には、種々の産生宿主、例えば種々の大腸菌株（例えばＸＬ１０−Ｇｏｌｄ [Stratagene], ＢＬ２１−ＣｏｄｏｎＰｌｕｓ [Stratagene], 等）、巨大菌、枯草菌等を使用した。
【０２２３】
以下、例示的な説明として、ＫＢＤ−ＢのクローニングおよびｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂで形質転換された大腸菌によるＫＢＤ−Ｂの発現について記載する。
【０２２４】
ｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂのクローニング
−    ヒトケラチノサイトのｃＤＮＡバンク（BD Bioscience, Clontech, ヒトケラチノサイトｃＤＮＡ, 包皮, 対数期の初代培養, ベクター：λｇｔ１１）からＬａｍｂｄａ−ＭａｘｉＤＮＡ（DNA-Lambda Maxi Kit, Qiagen）を調製した。 
以下のオリゴヌクレオチドを使用してＰＣＲを行った：
Ｂａｇ４３（５’−ＧＧＴＣＡＧＴＴＡＣＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧ−３’）および
Ｂａｇ４４（５’−ＧＣＴＧＡＧＧＣＴＧＣＣＧＧＡＴＣＧ−３’）
−    約１１０２ｂｐのサイズの得られたＰＣＲ産物をアガロースゲルから切り出して精製した。 
−    精製済みＰＣＲ産物を鋳型として使用して、２回目のＰＣＲを行った：
使用したオリゴヌクレオチド：
Ｂａｇ５３：（５’−ＣＧＣＧＣＣＴＣＧＡＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＴＣＴＧＣ−３’）および
Ｂａｇ５１（５’−ＧＣＴＴＡＧＣＴＧＡＧＧＣＴＧＣＣＧＧＡＴＣＧ−３’）
−    約１０７３ｂｐのサイズの得られたＰＣＲ産物をアガロースゲルから切り出して精製し、以下のベクターにクローニングした：ｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯ（Invitrogen）。 
−    得られたベクターｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯ＋ＫＢＤ−Ｂ（５０２７ｂｐ）を形質導入し、大腸菌中で増幅した後、ＸｈｏＩおよびＥｃｏＲＩで切断し、得られたＫＢＤ−Ｂ断片をｐＢＡＤ／ＨｉｓＡ（Invitrogen；ＸｈｏＩおよびＥｃｏＲＩで同様に切断）にクローニングした。 
−    新たに形成されたベクターｐＢＡＤ／ＨｉｓＡ＋ＫＢＤ−Ｂ（５１７１ｂｐ）をＳａｃＩおよびＳｔｕＩで再度切断し、得られたＫＢＤ−Ｂ断片をｐＱＥ３０（Qiagen；ＳａｃＩおよびＳｍａＩで切断）にクローニングした。得られた発現ベクターｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂ（４３２１ｂｐ；図３も参照のこと）を以下のＫＢＤ−Ｂ発現に使用した。 
ベクターｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂによって大腸菌で発現されたＫＢＤ−Ｂは、配列番号１の２１９３−２４８１位のポリペプチド配列に加えて、Ｎ末端にアミノ酸ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＳＡＣＥＬ、およびＣ末端にアミノ酸ＧＶＤＬＱＰＳＬＩＳをさらに含むものとした。
【０２２５】
ｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂによる大腸菌でのＫＢＤ−Ｂの発現
−    ｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂで形質転換された大腸菌株（例えばＸＬ１０−Ｇｏｌｄ [Stratagene]）をプレートまたはグリセリン培養から前培養に接種した。本培養の規模に応じて、試験管または小型フラスコ中でＬＢ培地に接種した（約１：１００）。 
−    使用する菌株にしたがって抗生物質を使用した（ｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂではアンピシリン１００μｇ／ｍｌ）。 
−    ２５０ｒｐｍ、３７℃でインキュベーションを行った。 
−    本培養に前培養を約１：１００で接種した。本培養：対応する抗生物質を含むＬＢ培地または適切な最少培地。２５０ｒｐｍ、３７℃でインキュベーションを行った。 
−    ＯＤ（６００ｎｍ）が０．５を超えた時点で１ｍＭ ＩＰＴＧを用いて発現誘導した。 
−    ４時間の発現誘導後に、細胞を遠心分離した。 
発酵槽においても手順は同様であったが、はるかに高いＯＤ単位で発現誘導を行うことができ、したがって細胞およびタンパク質収量を大幅に増大させることが可能であった。
【実施例３】
【０２２６】
実施例３：例えば発現プラスミドｐＬｉｂ１５およびｐＬｉｂ１６によってメタノール誘導性プロモーターを使用したピキア・パストリス株によるＫＢＤの細胞内および分泌性発現（振盪フラスコ）
ＫＢＤ発現では、種々のピキア・パストリス株、例えばＧＳ１１５およびＫＭ７１を使用した（Pichia Expression Kit, Version M; Invitrogen Life Technologies）。
【０２２７】
以下、代表例として、ｐＬｉｂ１５（細胞内発現ベクター、図４を参照のこと）またはｐＬｉｂ１６（分泌性発現ベクター、図５を参照のこと）で形質転換したＰ．パストリスによるＫＢＤ−Ｂの発現について記載する。
【０２２８】
−    ｐＬｉｂ１５の構築のために、約９３０ｂｐのサイズの、ＫＢＤ−ＢをコードするＤＮＡ断片をＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲでは、オリゴヌクレオチドＬｉｂ１４８（５’−ＧＣＴＡＡＧＧＡＡＴＴＣＡＣＣＡＴＧＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＧＡＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＴＣＴＧＣＴ−３’）およびＬｉｂ１４９（５’−ＧＣＴＧＧＡＧＡＡＴＴＣＴＣＡＧＣＴＡＡＴＴＡＡＧＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡ−３’）、およびベクターｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂ（実施例２、図３）を鋳型として使用した。このとき、ＥｃｏＲＩ制限部位をＰＣＲ産物の両端に導入した。 
−    ｐＬｉｂ１６の構築のために、約９３０ｂｐのサイズの、ＫＢＤ−ＢをコードするＤＮＡ断片をＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲでは、オリゴヌクレオチドＬｉｂ１４９（５’−ＧＣＴＧＧＡＧＡＡＴＴＣＴＣＡＧＣＴＡＡＴＴＡＡＧＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡ−３’）およびＬｉｂ１５０（５’−ＧＣＴＡＡＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＧＡＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＴＣＴＧＣＴ−３’）およびベクターｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂ（実施例２、図３）を鋳型として使用した。このとき、ＥｃｏＲＩ制限部位をＰＣＲ産物の両端に導入した。 
−    オリゴヌクレオチドＬｉｂ１４８／Ｌｉｂ１４９を用いて増幅したＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩで消化し、ＥｃｏＲＩ切断したベクターｐＰＩＣ３．５（Pichia Expression Kit, Version M, Invitrogen）中にライゲーションした。正しいＫＢＤ−Ｂ増幅を、ライゲーションから得られたベクターｐＬｉｂ１５（図４）のシーケンシングによってチェックした。 
−    オリゴヌクレオチドＬｉｂ１４９／Ｌｉｂ１５０を用いて増幅したＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩで消化し、ＥｃｏＲＩ切断したベクターｐＰＩＣ９（Pichia Expression Kit, Version M, Invitrogen）中にライゲーションした。正しいＫＢＤ−Ｂ増幅を、ライゲーションから得られたベクターｐＬｉｂ１６（図５）のシーケンシングによってチェックした。 
−    Ｐ．パストリス株のエレクトロコンピテント細胞およびスフェロプラストを環状およびＳｔｕＩ線状化ベクターｐＬｉｂ１５およびｐＬｉｂ１６で形質転換した。 
−    染色体ＤＮＡを使用したＰＣＲおよびサザンブロッティングによって形質転換体を分析した。 
−    前培養のために、プレートまたはグリセリン培養からＫＢＤ−Ｂ発現Ｐ．パストリス形質転換体を接種した。本培養の規模に応じて、試験管または小型フラスコ中のＭＧＹ、ＢＭＧまたはＢＭＧＹ培地（Pichia-Expression-Kit, Version M, Invitrogen）（約１：１００）に接種した。 
−    ＯＤ６００＝２〜６まで２５０〜３００ｒｐｍ、３０℃で培養物をインキュベートした。 
−    室温、５分間、１５００〜３０００×ｇで細胞を回収した。 
−    本培養のために、回収した細胞ペレットをメタノール含有ｍＭ、ＢＭＭまたはＢＭＭＹ培地（Pichia-Expression-Kit, Version M, Invitrogen）中にＯＤ６００＝１の濃度で移し、発現を誘導した。 
−    ２５０〜３００ｒｐｍ、３０℃で１〜９６時間、本培養をインキュベートした。 
−    ２４時間毎に１００％メタノールをメタノール最終濃度０．５％で加えることによって発現誘導を維持した。 
−    細胞内発現の場合、本培養の終了後にＭｅｎｔｏｎ−Ｇａｕｌｉｎを用いて細胞の回収および破壊を行った。 
−    分泌性発現の場合、培養上清を回収し、そこからＫＢＤ−Ｂを直接的に精製した。 
−    Ｐ．パストリスの細胞内で発現されたＫＢＤ−Ｂ（ｐＬｉｂ１５）は、配列番号１の２１９３−２４８１位のポリペプチド配列に加えて、Ｎ末端にアミノ酸ＭＨＨＨＨＨＨ、およびＣ末端にアミノ酸ＧＶＤＬＱＰＳＬＩＳをさらに含むものとした。 
−    Ｐ．パストリスで分泌性発現されたＫＢＤ−Ｂ（ｐＬｉｂ１６）は、プロセシング前には、配列番号１の２１９３−２４８１位のポリペプチド配列に加えて、Ｎ末端にアミノ酸ＭＲＦＰＳＩＦＴＡＶＬＦＡＡＳＳＡＬＡＡＰＶＮＴＴＴＥＤＥＴＡＱＩＰＡＥＡＶＩＧＹＳＤＬＥＧＤＦＤＶＡＶＬＰＦＳＮＳＴＮＮＧＬＬＦＩＮＴＴＩＡＳＩＡＡＫＥＥＧＶＳＬＥＫＲＥＡＥＡＹＶＥＦＨＨＨＨＨＨ、およびＣ末端にアミノ酸ＧＶＤＬＱＰＳＬＩＳをさらに含むものとした。Ｐ．パストリスによってプロセシングおよび分泌されたＫＢＤ−Ｂ（ｐＬｉｂ１６）は、配列番号１の２１９３−２４８１位のポリペプチド配列に加えて、Ｎ末端にアミノ酸ＹＶＥＦＨＨＨＨＨＨ、およびＣ末端にアミノ酸ＧＶＤＬＱＰＳＬＩＳをさらに含むものとした。
【実施例４】
【０２２９】
実施例４：例えば発現プラスミドｐＬｉｂ１９によって誘導性ａｌｃＡプロモーターを使用したアスペルギルス・ニデュランス株によるＫＢＤの発現（振盪フラスコ）
発現のために、Ａ．ニデュランス野生型株、例えばＲＭＳ０１１またはＳＲＦ２００を使用した。以下、例示的な説明として、ｐＬｉｂ１９（図６）で形質転換されたＡ．ニデュランスによるＫＢＤ−Ｂの発現について記載する。 
−    ｐＬｉｂ１９の構築のために、約９００ｂｐのサイズの、ＫＢＤ−ＢをコードするＤＮＡ断片をＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲでは、オリゴヌクレオチドＬｉｂ１５１（５’−ＣＡＣＣＡＴＧＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＧＡＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＴＣＴＧＣＴ−３’）およびＬｉｂ１５２（５’−ＧＣＴＡＡＴＴＡＡＧＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡ−３’）、およびベクターｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂ（実施例２、図３）を鋳型として使用した。ＰＣＲ産物をベクターｐＥＮＴＲ／Ｄ（pENTRTM Directional TOPO(登録商標) Cloning Kit, Version E, Invitrogen）中にライゲーションした。シーケンシングによって正しいＫＢＤ−Ｂ増幅をチェックした。 
−    ＫＢＤ−ＢをコードするＤＮＡ断片を組み換えてベクターｐＭＴ−ＯｖＥ中に導入した（Toews MW, Warmbold J, Konzack S, Rischitor P, Veith D, Vienken K, Vinuesa C, Wei H, Fischer R; Establishment of mRFP1 as a fluorescent marker in Aspergillus nidulans and construction of expression vectors for high-throughput protein tagging using recombination in vitro (GATEWAY). (2004) Curr Genet 45: 383-389）。ここでは「Gateway(登録商標) LR clonaseTM enzyme mix」（Invitrogen）を使用した。これによりベクターｐＬｉｂ１９（図６）を得た。 
−    Ａ．ニデュランス野生型株のプロトプラストを環状ベクターｐＬｉｂ１９で形質転換した。染色体ＤＮＡを使用したＰＣＲおよびサザンブロッティングによって形質転換体を分析した。 
−    ＫＢＤ−Ｂ発現Ａ．ニデュランス形質転換体の前培養のために、５００ｍｌフラスコ中の１００ｍｌの最少培地（０．６％ＮａＮＯ３；０．１５２％ＫＨ２ＰＯ４；０．０５２％ＫＣｌ［ｐＨ６．５］；０．８％グルコース；０．０５％ＭｇＳＯ４；１ｍｌ微量元素溶液［１ｇ／ｌ ＦｅＳＯ４×７Ｈ２Ｏ；８．８ｇ／ｌ ＺｎＳＯ４×７Ｈ２Ｏ；０．４ｇ／ｌ ＣｕＳＯ４×５Ｈ２Ｏ；０．１５ｇ／ｌ ＭｎＳＯ４×４Ｈ２Ｏ；０．１ｇ／ｌ Ｎａ２Ｂ４Ｏ７×１０Ｈ２Ｏ；０．０５ｇ／ｌ （ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４×４Ｈ２Ｏ］＋菌株に特有の添加物）または１００ｍｌの完全培地（２％麦芽抽出物；０．１％ペプトン；２％グルコース；＋菌株に特有の添加物）に１０６〜１０７個の胞子を接種し、２００〜２５０ｒｐｍ、３７℃で１６〜２４時間インキュベートした。 
−    前培養の後、ろ過によって真菌の菌糸体を回収し、蒸留水で洗浄し、１００〜５００ｍｌの新鮮な最少培地の入ったフラスコに移した。この本培養培地では、Ｃ供給源としてグルコースの代わりに０．１％フルクトースを使用した。ＫＢＤ発現を誘導するために、エタノール（１％最終濃度）またはグリセリン（５０ｍＭ）または酢酸ナトリウム（５０ｍＭ）またはエチルアミンまたはトレオニンを培地に追加した。発現を誘導するための上記添加物は特許請求の範囲に関して限定的ではない。２００〜２５０ｒｐｍ、３７℃でさらに５〜４８時間、本培養をインキュベートした。 
−    培養の終了後、室温で５分間、１５００〜３０００×ｇで真菌の菌糸体を回収し、Ｍｅｎｔｏｎ−Ｇａｕｌｉｎを用いて破壊した。 
−    配列番号１の２１９３−２４８１位のポリペプチド配列に加えて、Ａ．ニデュランスで発現させたＫＢＤ−Ｂ（ｐＬｉｂ１９）は、Ｎ末端にアミノ酸ＭＨＨＨＨＨＨ、およびＣ末端にアミノ酸ＫＧＧＲＡＤＰＡＦＬＹＫＶＶＭＩＲＬＬＴＫＰＥＲＫＬＬＥＧＧＰＧＴＱＬＬＦＰＬＶＲＶＮＣＡＬＧＶＩＭＶＩＡＶＳＣＶＫＬＬＳＡＨＮＳＴＱＨＴＳＲＫＨＫＶをさらに含むものとした。
【実施例５】
【０２３０】
実施例５：細胞破壊および封入体精製（ｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂ）
可溶性に発現させたＫＢＤは、精製後、そのまま使用することができた。不溶性に発現させた（例えば封入体中の）ＫＢＤは以下のように精製した：
−    発酵槽を遠心し、ペレットを２０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ＝７．４）に懸濁し、Ｍｅｎｔｏｎ−Ｇａｕｌｉｎを用いて破壊した。 
−    破壊された細胞を再度遠心（１５０００ｇ）し、そのペレットを２０ｍＭリン酸、５００ｍＭ ＮａＣｌおよび８Ｍ尿素で処理し、そして撹拌した（封入体の溶解）。 
−    上清のｐＨを７．５に調整した。 
−    再度遠心分離を行い、上清をＮｉキレートセファロースカラムに加えた。
【実施例６】
【０２３１】
実施例６：Ｎｉキレートセファロースでのケラチン結合性ドメインＢの精製
Ｎｉカラム上に結合したＨｉｓタグを介したクロマトグラフィーによってＫＢＤを精製することができた。 
カラム材料：Ni-Sepharose High Performance
Amersham Biosciences 品番：１７−５２６８−０２
上記材料をカラム（例えば直径２．６ｃｍ、高さ１０ｃｍ）中に詰め、バッファーＡ＋４％バッファーＢ（２０ｍＭイミダゾールに相当）で平衡化した。 
Ｓｕｐｅｒｌｏｏｐ（AKTA system）を使用してｐＨ７．５のカラムにタンパク質抽出物（例えば細胞破壊および封入体精製を参照のこと）を加えた（流速約５ｍｌ／分）。 
付加後、バッファーＡ＋２０ｍＭイミダゾールでの洗浄を行った。 
バッファーＢ（バッファーＡ中の５００ｍＭイミダゾール）で溶出を行った。 
フラクションコレクターを使用して溶出液を画分として回収した。 
バッファーＡ：２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム
５００ｍＭ ＮａＣｌ
８Ｍ尿素
ｐＨ＝７．４０
バッファーＢ：２０ｍＭリン酸二水素ナトリウム
５００ｍＭ ＮａＣｌ
８Ｍ尿素
５００ｍＭイミダゾール
ｐＨ＝７．４０
【実施例７】
【０２３２】
実施例７：ケラチン結合性ドメインＢの再生
不溶性に発現した（例えば封入体由来の）ケラチン結合性ドメインは、以下のように再生し、ゆえに活性化することができる。
【０２３３】
方法１：不連続透析
８Ｍ尿素（Ｎｉキレート溶出液, HiTrap）中のＫＢＤ−Ｂ封入体６．５ｍｌに、６．５ｍｌのＣｅｌｌｙｔｉｃ ＩＢ（Sigma, 品番Ｃ５２３６）および５ｍＭ ＤＴＴを加えた。次いで再生対象の溶液を透析チューブ（Spectrum: Spectra Por MWCO:12-14 kD）に注いだ。 
慎重に撹拌しながら、４℃で約１２時間、１Ｌの６Ｍ尿素溶液に対して透析を行った。 
５００ｍｌの２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ＝７．５０を加え、４℃で９時間、同様に透析を行った。次いでさらに２５０ｍｌのＴｒｉｓバッファー（上記参照のこと）を加え、さらに１２時間透析を行った。 
次いで５００ｍｌの２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ＝７．５０を再度加え、４℃で９時間、同様に透析を行った。次いでさらに２５０ｍｌのＴｒｉｓバッファー（上記参照のこと）を加え、さらに１２時間透析を行った。 
次いで５００ｍｌの２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ＝７．５０を再度加え、４℃で９時間、同様に透析を行った。次いで透析物の入った透析チューブを２Ｌの２５ｍＭ Ｔｒｉｓ＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ＝７．５０に入れた。次いで、４℃で１２時間、再度透析を行った。 
次いで透析チューブの内容物を取り出した。
【０２３４】
方法２：連続透析
８Ｍ尿素（Ｎｉキレート溶出液, HiTrap）中のＫＢＤ−Ｂ封入体２０ｍｌを、１０ｍｌのＣｅｌｌｙｔｉｃ ＩＢ（Sigma, 品番Ｃ５２３６）および５ｍＭ ＤＴＴで処理した。次いでその溶液を透析チャンバー（Slide-A-Lyzer Dialyses Cassette PIERCE, MWCO: 10 kD. 品番：６６８３０）に注いだ。 
次いで、４℃で約１時間、６Ｍ尿素溶液１Ｌに対して透析を行った。 
次いで、４８時間にわたり、ペリスタポンプで調節しながら２Ｌの以下のバッファーを連続的に供給した：２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ＝７．５。 
次いで透析物の入った透析チューブを２Ｌの最終バッファー（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．５０）に加え、４℃で約１２時間、透析を行った。 
次いで透析チューブの内容物を取り出した。
【実施例８】
【０２３５】
実施例８：皮膚に対する結合１（定性的）
ＫＢＤが皮膚に結合するかどうかを調べるために、視覚による定性的試験を開発した。 
使用した溶液：
ブロッキング溶液：DIG Wash + Buffer set 1585762 Boehringer MA（１０×溶液）をＴＢＳ中で希釈したもの
ＴＢＳ：２０ｍＭ Ｔｒｉｓ；１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５
ＴＴＢＳ：ＴＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０
第一段階は、皮膚の外側ケラチン層を安定な支持体に移すことである。この目的で、透明な接着テープを脱毛済みのヒト皮膚にしっかりと貼り、そしてはがす。試験は、透明な接着ストリップ上で直接行うことができ、または接着しているケラチン層をガラススライドに再度接着させて移すことができる。以下のように結合を実証する：
−    種々の試薬とインキュベートするために、ファルコンチューブに移す。 
−    適切であれば、脱脂のためにエタノールを加え、エタノールを除去し、スライドを乾燥させる。 
−    ブロッキングバッファーと室温で１時間インキュベートする。 
−    ＴＴＢＳで５分間２回洗浄する。 
−    ＴＢＳで５分間１回洗浄する。 
−    試験対象のＫＢＤ（タグ（例えばＨｉｓ６、ＨＡ等）にカップリングされている）または対照タンパク質とともに、ＴＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０中、室温で２〜４時間インキュベートする。 
−    上清を除去する。 
−    ＴＢＳで３回洗浄する。 
−    ＴＢＳ＋０．０１％ブロッキング中に１：２０００希釈したモノクローナル抗ポリヒスチジン（または特異的ＫＢＤウサギ）抗体と室温で１時間インキュベートする。 
−    ＴＴＢＳで５分間２回洗浄する。 
−    ＴＢＳで５分間１回洗浄する。 
−    ＴＢＳ＋０．０１％ブロッキング中に１：５０００希釈した抗マウスＩｇＧアルカリホスファターゼコンジュゲートとともに室温で１時間インキュベートする。 
−    ＴＴＢＳで５分間２回洗浄する。 
−    ＴＢＳで５分間１回洗浄する。 
−    ホスファターゼ基質を加える（NBT-BCIP；Boehringer MA １錠／水４０ｍｌ、２．５分；水で停止）。 
−    肉眼で、または顕微鏡を使用して、有色沈殿を光学的に検出する。青色沈殿が検出されれば、ＫＢＤが皮膚に結合したことが示される。
【実施例９】
【０２３６】
実施例９：皮膚に対する結合２（定量的）
ＫＢＤの毛髪／皮膚結合強度を非特異的タンパク質と比較することができる、定量的試験を開発した。
【０２３７】
５ｍｍ穿孔器を使用して、毛髪を含まない皮膚の解凍済み乾燥片（ヒトまたはブタ）からの切片に孔をあけた（または、表面試験の場合、皮膚の切片をファルコン蓋中に入れる）。次いで皮膚のサンプルを２〜３ｍｍの厚さにし、存在するすべての組織を除去する。次いで皮膚サンプルをエッペンドルフチューブ（タンパク質低結合性）に移し、結合の実証を行う（図７も参照のこと）：
−    ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で２回洗浄する。 
−    ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ１ｍｌを加え、穏やかに回旋運動（９００ｒｐｍ）させながら、室温で１時間インキュベートする。 
−    上清を除去する。 
−    ０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中のＫＢＤ１００μｇを加える；穏やかに回旋運動（９００ｒｐｍ）させながら、室温で２時間インキュベートする。 
−    上清を除去する。 
−    ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。 
−    穏やかに回旋運動（９００ｒｐｍ）させながら、１ｍｌのモノクローナルマウス抗タグ（Ｈｉｓ６またはＨＡまたは特異的ＫＢＤ）抗体とペルオキシダーゼのコンジュゲート（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中、１：２０００）［Monoclonal AntipolyHistidine Peroxidase Conjugate, マウスで作成, 凍結乾燥粉末, Sigma］とともに室温で２〜４時間インキュベートする。 
−    ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。 
−    ペルオキシダーゼ基質（１ｍｌ／エッペンドルフチューブ；組成は下記参照のこと）を加える。 
−    青色に呈色するまで反応を進行させる（約９０秒）。 
−    １００μｌの２Ｍ Ｈ２ＳＯ４で反応を停止させる。 
−    ４０５ｎｍでの吸収を測定した。 
ペルオキシダーゼ基質（直前に調製）：
０．１ｍｌ ＴＭＢ溶液（ＤＭＳＯ中の４２ｍＭ ＴＭＢ）
＋１０ｍｌ基質バッファー（０．１Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ４．９）
＋１４．７μｌ Ｈ２Ｏ２ ３％濃度
【実施例１０】
【０２３８】
実施例１０：毛髪に対する結合（定量的）
他のタンパク質と比較しての毛髪に対するＫＢＤの結合強度も同様に実証可能にするために、定量的アッセイを開発した（図７も参照のこと）。本試験では、まず毛髪をＫＢＤとともにインキュベートし、過剰のＫＢＤを洗い落とした。次いでＫＢＤのＨｉｓタグを介して抗体−ペルオキシダーゼコンジュゲートをカップリングさせた。結合していない抗体−ペルオキシダーゼコンジュゲートを再度洗い落とした。結合した抗体−ペルオキシダーゼコンジュゲート［Monoclonal AntipolyHistidine Peroxidase Conjugate, マウスで作成, 凍結乾燥粉末, Sigma］は無色の基質（ＴＭＢ）を有色生成物に変換することができ、４０５ｎｍでの光度測定によってその生成物を測定することができる。吸収強度により、結合ＫＢＤまたは比較タンパク質の量が示される。選択された比較タンパク質は、例えば枯草菌由来のＹａａＤであり、本試験で必要であるので、それは検出用のＨｉｓタグを同様に有するものとした。Ｈｉｓタグの代わりに、ペルオキシダーゼとコンジュゲートされている他の特異的抗体を使用することもできる。
【０２３９】
５ｍｇの毛髪（ヒト）を５ｍｍ長の切片に切断し、エッペンドルフチューブ（タンパク質低結合性）に移して、結合の実証を行う：
−    脱脂のために１ｍｌのエタノールを加える。 
−    遠心し、エタノールを除去し、毛髪をＨ２Ｏで洗浄する。 
−    ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ１ｍｌを加え、穏やかに回旋運動させながら、室温で１時間インキュベートする。 
−    遠心し、上清を除去する。 
−    １ｍｌのＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０中の試験対象のケラチン結合性ドメイン（タグ（例えばＨｉｓ６、ＨＡ等）にカップリングされている）または対照タンパク質を加える；穏やかに回旋運動させながら４℃で１６時間（または室温で少なくとも２時間）インキュベートする。 
−    遠心し、上清を除去する。 
−    ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。 
−    穏やかに回旋運動させながら、１ｍｌのモノクローナルマウス抗タグ（Ｈｉｓ６またはＨＡ）抗体とペルオキシダーゼのコンジュゲート（ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０中、１：２０００）［Monoclonal AntipolyHistidine Peroxidase Conjugate, マウスで作成, 凍結乾燥粉末, Sigma］とともに室温で２〜４時間インキュベートする。 
−    ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。 
−    ペルオキシダーゼ基質（１ｍｌ／エッペンドルフチューブ）を加える。 
−    青色に呈色するまで反応を進行させる（約２分）。 
−    １００μｌの２Ｍ Ｈ２ＳＯ４で反応を停止させる。 
−    ４０５ｎｍでの吸収を測定する。 
ペルオキシダーゼ基質（直前に調製）：
０．１ｍｌ ＴＭＢ溶液（ＤＭＳＯ中の４２ｍＭ ＴＭＢ）
＋１０ｍｌの基質バッファー（０．１Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ４．９）
＋１４．７μｌ Ｈ２Ｏ２ ３％濃度
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
ＰＢＳ＝リン酸緩衝食塩水
Ｔｗｅｅｎ２０＝モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン, ｎは約２０
ＴＭＢ＝３，５，３’，５’−テトラメチルベンジジン
【０２４０】
ＫＢＤ−Ｂについて例示的に行った毛髪に対する結合試験では、比較タンパク質ＹａａＤの明らかに不十分な結合性と比較して、ＫＢＤ−Ｂの毛髪に対する結合性が大変優れていることが実証された：
【表６】
2008500301.tif 000015
【０２４１】
実施例１０ａ：ＫＢＤ−Ｂと色素のカップリング
蛍光色素（Alexa Fluor 532, Molecular Probes/Invitrogen）をＫＢＤ−Ｂタンパク質にカップリングさせるため、以下のプロトコルによって、マレイン酸ジイミドリンカーを介してシステインのチオール基に色素をカップリングさせた。この反応を図８に示す。
【０２４２】
−    １ｍｇのAlexa Fluor 532を１５０μｌのＰＢＳバッファー（ｐＨ７．０）に溶解した；その後、短時間遠心してすべての未溶解成分を除去した。 
−    １００μｇのＫＢＤ−Ｂ（１ｍｇ／ｍｌ）に溶解させた色素１０μｌを加えた。 
−    上記混合物を、アルミホイルで覆い、４５０ｐｍのシェーカーで２４℃、１時間インキュベートした。 
−    １０μｌの１Ｍ ＤＴＴを加えて、未反応Alexa Fluor 532のマレイン酸ジイミド官能基を不活性化した。 
−    ４５０ｐｍ、２４℃で３０分間（アルミホイルで覆って）インキュベーションを行った。
【０２４３】
Alexa Fluor 532がカップリングされているＫＢＤ−Ｂの皮膚／毛髪に対する結合は、活性試験によって測定することができる（実施例９および１０を参照のこと）。実施例９または１０と同様に、皮膚または毛髪に結合しているＫＢＤ−Ｂ−Alexa Fluor 532カップリングは、毛髪に関しては蛍光顕微鏡下で（吸収：５３２ｎｍ／蛍光：５９０ｎｍを用いて検出, 図９を参照のこと）、あるいは漂白済みの毛髪に関しては肉眼で、非常に容易に検出することができる。
【実施例１１】
【０２４４】
実施例１１：日中用エマルジョン中でのＫＢＤの使用−Ｏ／Ｗ型
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        1.7   セテアレス-6, ステアリルアルコール
0.7   セテアレス-25
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
2.0   PEG-14ジメチコン
3.6   セテアリルアルコール
6.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   アジピン酸ジブチル
B        5.0   グリセリン
0.2   EDTA二ナトリウム
1.0   パンテノール
適量   保存料
67.8   水(Aqua dem.)
C        4.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アクリレーツコポリマーナトリウム
D        0.2   アスコルビルリン酸ナトリウム
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
1.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アスコルビン酸ナトリウム, トコフェロール, レチノール
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
E       適量   水酸化ナトリウム
【０２４５】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        1.7   セテアレス-6, ステアリルアルコール
0.7   セテアレス-25
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
2.0   PEG-14ジメチコン
3.6   セテアリルアルコール
6.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   アジピン酸ジブチル
B        5.0   グリセリン
0.2   EDTA二ナトリウム
1.0   パンテノール
適量   保存料
63.8   水(Aqua dem.)
C        4.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アクリレーツコポリマーナトリウム
D        0.2   アスコルビルリン酸ナトリウム
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
1.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アスコルビン酸ナトリウム, トコフェロール, レチノール
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
E       適量   水酸化ナトリウム
【０２４６】
調製：相ＡおよびＢを別々に約８０℃に加熱する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。混合相ＡおよびＢに相Ｃを加えて撹拌し、再度ホモジナイズする。撹拌しながら約４０℃に冷却し、相Ｄを加え、相Ｅを使用してｐＨを約６．５に調整し、ホモジナイズし、撹拌しながら室温に冷却する。 
注記：本製剤は保護ガスを用いずに調製する。酸素不透過性パッケージ、例えばアルミニウムチューブ中に詰める必要がある。
【実施例１２】
【０２４７】
実施例１２：日中用保護クリーム中でのＫＢＤの使用−Ｏ／Ｗ型
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        1.7   セテアレス-6, ステアリルアルコール
0.7   セテアレス-25
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
2.0   PEG-14ジメチコン
3.6   セテアリルアルコール
6.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   アジピン酸ジブチル
B        5.0   グリセリン
0.2   EDTA二ナトリウム
1.0   パンテノール
適量   保存料
68.6   水(Aqua dem.)
C        4.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アクリレーツコポリマーナトリウム
D        1.0   アスコルビルリン酸ナトリウム
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
E       適量   水酸化ナトリウム
【０２４８】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        1.7   セテアレス-6, ステアリルアルコール
0.7   セテアレス-25
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
2.0   PEG-14ジメチコン
3.6   セテアリルアルコール
6.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   アジピン酸ジブチル
B        5.0   グリセリン
0.2   EDTA二ナトリウム
1.0   パンテノール
適量   保存料
64.6   水(Aqua dem.)
C        4.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アクリレーツコポリマーナトリウム
D        1.0   アスコルビルリン酸ナトリウム
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
E       適量   水酸化ナトリウム
【０２４９】
調製：相ＡおよびＢを別々に約８０℃に加熱する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。混合相ＡおよびＢに相Ｃを組み込み、ホモジナイズする。撹拌しながら約４０℃に冷却する。相Ｄを加え、相Ｅを使用してｐＨを約６．５に調整し、ホモジナイズする。撹拌しながら室温に冷却する。
【実施例１３】
【０２５０】
実施例１３：フェイスクレンジングローション中でのＫＢＤの使用−Ｏ／Ｗ型
AI 1%:
%    成分(INCI)
A       10.0   セテアリルエチルヘキサノアート
10.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド
1.5   シクロペンタシロキサン, シクロヘキサシロキサン
2.0   PEG-40硬化(hydrogenated)ヒマシ油
B        3.5   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アクリレーツコポリマーナトリウム
C        1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
適量   保存料
適量   香油
D        3.0   ポリクオタニウム-44
0.5   ココトリモニウムメトスルファート
0.5   セテアレス-25
2.0   パンテノール, プロピレングリコール
4.0   プロピレングリコール
0.1   EDTA二ナトリウム
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
60.7   水(Aqua dem.)
【０２５１】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A       10.0   セテアリルエチルヘキサノアート
10.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド
1.5   シクロペンタシロキサン, シクロヘキサシロキサン
2.0   PEG-40硬化ヒマシ油
B        3.5   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド, アクリレーツコポリマーナトリウム
C        1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
適量   保存料
適量   香油
D        3.0   ポリクオタニウム-44
0.5   ココトリモニウムメトスルファート
0.5   セテアレス-25
2.0   パンテノール, プロピレングリコール
4.0   プロピレングリコール
0.1   EDTA二ナトリウム
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
56.7   水(Aqua dem.)
【０２５２】
調製：相Ａを溶解する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌する。混合相ＡおよびＢに相Ｃを組み込む。相Ｄを溶解し、混合相Ａ、ＢおよびＣに加えて撹拌し、ホモジナイズする。その後、１５分間撹拌する。
【実施例１４】
【０２５３】
実施例１４：デイリーケア用ボディースプレー中でのＫＢＤの使用
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        3.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
1.0   ポリクオタニウム-44
3.0   プロピレングリコール
2.0   パンテノール, プロピレングリコール
1.0   シクロペンタシロキサン, シクロヘキサシロキサン
10.0   オクチルドデカノール
0.5   PVP
10.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド
3.0   安息香酸C12-15アルキル
3.0   グリセリン
1.0   酢酸トコフェロール
0.3   ビサボロール
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
59.2   アルコール
【０２５４】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        3.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
1.0   ポリクオタニウム-44
3.0   プロピレングリコール
2.0   パンテノール, プロピレングリコール
1.0   シクロペンタシロキサン, シクロヘキサシロキサン
10.0   オクチルドデカノール
0.5   PVP
10.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド
3.0   安息香酸C12-15アルキル
3.0   グリセリン
1.0   酢酸トコフェロール
0.3   ビサボロール
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
55.2   アルコール
【０２５５】
調製：相Ａの成分を計量し、透明になるまで溶解する。
【実施例１５】
【０２５６】
実施例１５：スキンケアジェル中でのＫＢＤの使用
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        3.6   PEG-40硬化ヒマシ油
15.0   アルコール
0.1   ビサボロール
0.5   酢酸トコフェロール
適量   香油
B        3.0   パンテノール
0.6   カルボマー
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
75.4   水(Aqua dem.)
C        0.8   トリエタノールアミン
【０２５７】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        3.6   PEG-40硬化ヒマシ油
15.0   アルコール
0.1   ビサボロール
0.5   酢酸トコフェロール
適量   香油
B        3.0   パンテノール
0.6   カルボマー
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
71.4   水(Aqua dem.)
C        0.8   トリエタノールアミン
【０２５８】
調製：透明になるまで相Ａを溶解する。相Ｂを膨張させ、相Ｃで中和する。ホモジナイズした相Ｂに相Ａを加えて撹拌し、ホモジナイズする。
【実施例１６】
【０２５９】
実施例１６：アフターシェーブローション中でのＫＢＤの使用
AI 1%:
%    成分(INCI)
A       10.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   酢酸トコフェロール
1.0   ビサボロール
0.1   香油
0.3   アクリレーツ/C10-30アクリル酸アルキルクロスポリマー
B       15.0   アルコール
1.0   パンテノール
3.0   グリセリン
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.1   トリエタノールアミン
63.5   水(Aqua dem.)
【０２６０】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A       10.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   酢酸トコフェロール
1.0   ビサボロール
0.1   香油
0.3   アクリレーツ/C10-30アクリル酸アルキルクロスポリマー
B       15.0   アルコール
1.0   パンテノール
3.0   グリセリン
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.1   トリエタノールアミン
59.5   水(Aqua dem.)
【０２６１】
調製：相Ａの成分を混合する。相Ｂを溶解し、相Ａに組み込み、ホモジナイズする。
【実施例１７】
【０２６２】
実施例１７：日焼け後用ローション中でのＫＢＤの使用
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        0.4   アクリレーツ/C10-30アクリル酸アルキルクロスポリマー
15.0   セテアリルエチルヘキサノアート
0.2   ビサボロール
1.0   酢酸トコフェロール
適量   香油
B        1.0   パンテノール
15.0   アルコール
3.0   グリセリン
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
63.2   水(Aqua dem.)
C        0.2   トリエタノールアミン
【０２６３】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        0.4   アクリレーツ/C10-30アクリル酸アルキルクロスポリマー
15.0   セテアリルエチルヘキサノアート
0.2   ビサボロール
1.0   酢酸トコフェロール
適量   香油
B        1.0   パンテノール
15.0   アルコール
3.0   グリセリン
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
59.2   水(Aqua dem.)
C        0.2   トリエタノールアミン
【０２６４】
調製：相Ａの成分を混合する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。相Ｃで中和し、再度ホモジナイズする。
【実施例１８】
【０２６５】
実施例１８：日焼け止めローション中でのＫＢＤの使用
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        4.5   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
3.0   オクトクリレン
2.5   リンゴ酸ジ-C12-13アルキル
0.5   酢酸トコフェロール
4.0   ポリグリセリル-3メチルグルコースジステアラート
B        3.5   セテアリルイソノナノアート
1.0   VP/エイコセンコポリマー
5.0   イソヘキサデカン
2.5   リンゴ酸ジ-C12-13アルキル
3.0   二酸化チタン, トリメトキシカプリリルシラン
C        5.0   グリセリン
1.0   セテアリル硫酸ナトリウム
0.5   キサンタンガム
59.7   水(Aqua dem.)
D        1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   フェノキシエタノール, メチルパラベン, エチルパラベン, ブチルパラベン, プロピルパラベン, イソブチルパラベン
0.3   ビサボロール
【０２６６】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        4.5   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
3.0   オクトクリレン
2.5   リンゴ酸ジ-C12-13アルキル
0.5   酢酸トコフェロール
4.0   ポリグリセリル-3メチルグルコースジステアラート
B        3.5   セテアリルイソノナノアート
1.0   VP/エイコセンコポリマー
5.0   イソヘキサデカン
2.5   リンゴ酸ジ-C12-13アルキル
3.0   二酸化チタン, トリメトキシカプリリルシラン
C        5.0   グリセリン
1.0   セテアリル硫酸ナトリウム
0.5   キサンタンガム
55.7   水(Aqua dem.)
D        5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   フェノキシエタノール, メチルパラベン, エチルパラベン, ブチルパラベン, プロピルパラベン, イソブチルパラベン
0.3   ビサボロール
【０２６７】
調製：相ＡおよびＢの成分を別々に約８０℃に加熱する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。相Ｃを約８０℃に加熱し、混合相ＡおよびＢに加えて撹拌し、ホモジナイズする。撹拌しながら約４０℃に冷却し、相Ｄを加え、再度ホモジナイズする。
【実施例１９】
【０２６８】
実施例１９：日焼け止めローション中でのＫＢＤの使用−Ｏ／Ｗ型
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
2.0   セテアレス-25
3.0   トリベヘニン
2.0   セテアリルアルコール
2.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
1.0   エチルヘキシルトリアゾン
1.0   VP/エイコセンコポリマー
7.0   ミリスチン酸イソプロピル
B        5.0   酸化亜鉛, トリエトキシカプリリルシラン
C        0.2   キサンタンガム
0.5   アクリル酸ヒドロキシエチル/アクリロイルジメチルタウリンナトリウムコポリマー, スクアラン, ポリソルベート60
0.2   EDTA二ナトリウム
5.0   プロピレングリコール
0.5   パンテノール
60.9   水(Aqua dem.)
D        1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   フェノキシエタノール, メチルパラベン, ブチルパラベン, エチルパラベン, プロピルパラベン, イソプロピルパラベン
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
【０２６９】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
2.0   セテアレス-25
3.0   トリベヘニン
2.0   セテアリルアルコール
2.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
1.0   エチルヘキシルトリアゾン
1.0   VP/エイコセンコポリマー
7.0   ミリスチン酸イソプロピル
B        5.0   酸化亜鉛, トリエトキシカプリリルシラン
C        0.2   キサンタンガム
0.5   アクリル酸ヒドロキシエチル/アクリロイルジメチルタウリンナトリウムコポリマー, スクアラン, ポリソルベート60
0.2   EDTA二ナトリウム
5.0   プロピレングリコール
0.5   パンテノール
56.9   水(Aqua dem.)
D        5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   フェノキシエタノール, メチルパラベン, ブチルパラベン, エチルパラベン, プロピルパラベン, イソプロピルパラベン
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
【０２７０】
調製：相Ａを約８０℃に加熱し、相Ｂに加えて撹拌し、３分間ホモジナイズする。同様に相Ｃを８０℃に加熱し、混合相ＡおよびＢに加えて撹拌し、ホモジナイズする。約４０℃に冷却し、相Ｄに加えて撹拌し、再度ホモジナイズする。
【実施例２０】
【０２７１】
実施例２０：日焼け止めローション中でのＫＢＤの使用−Ｏ／Ｗ型
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        3.5   セテアレス-6, ステアリルアルコール
1.5   セテアレス-25
7.5   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
2.0   シクロペンタシロキサン, シクロヘキサシロキサン
0.5   蜜ろう
3.0   セテアリルアルコール
10.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド
B        5.0   二酸化チタン, シリカ, メチコン, アルミナ
C        3.0   グリセリン
0.2   EDTA二ナトリウム
0.3   キサンタンガム
1.0   デシルグルコシド
2.0   パンテノール, プロピレングリコール
56.3   水(Aqua dem.)
D        1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
適量   香油
適量   保存料
【０２７２】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        3.5   セテアレス-6, ステアリルアルコール
1.5   セテアレス-25
7.5   メトキシケイ皮酸エチルヘキシル
2.0   ジエチルアミノヒドロキシベンゾイルヘキシルベンゾアート
2.0   シクロペンタシロキサン, シクロヘキサシロキサン
0.5   蜜ろう
3.0   セテアリルアルコール
10.0   カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド
B        5.0   二酸化チタン, シリカ, メチコン, アルミナ
C        3.0   グリセリン
0.2   EDTA二ナトリウム
0.3   キサンタンガム
1.0   デシルグルコシド
2.0   パンテノール, プロピレングリコール
52.3   水(Aqua dem.)
D        5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   酢酸トコフェロール
0.2   ビサボロール
適量   香油
適量   保存料
【０２７３】
調製：相Ａを約８０℃に加熱し、相Ｂに加えて撹拌し、３分間ホモジナイズする。同様に相Ｃを８０℃に加熱し、混合相ＡおよびＢに加えて撹拌し、ホモジナイズする。約４０℃に冷却し、相Ｄに加えて撹拌し、再度ホモジナイズする。
【実施例２１】
【０２７４】
実施例２１：フットバルサム中でのＫＢＤの使用
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
2.0   セテアレス-25
5.0   セテアリルエチルヘキサノアート
4.0   セチルアルコール
4.0   ステアリン酸グリセリル
5.0   鉱油
0.2   メントール
0.5   カンファー
B       69.3   水(Aqua dem.)
適量   保存料
C        1.0   ビサボロール
1.0   酢酸トコフェロール
D        1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
5.0   ウィッチヘーゼル抽出物
【０２７５】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
2.0   セテアレス-25
5.0   セテアリルエチルヘキサノアート
4.0   セチルアルコール
4.0   ステアリン酸グリセリル
5.0   鉱油
0.2   メントール
0.5   カンファー
B       65.3   水(Aqua dem.)
適量   保存料
C        1.0   ビサボロール
1.0   酢酸トコフェロール
D        5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
5.0   ウィッチヘーゼル抽出物
【０２７６】
調製：相ＡおよびＢの成分を別々に約８０℃に加熱する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。撹拌しながら約４０℃に冷却し、相ＣおよびＤを加え、その後、簡単にホモジナイズする。撹拌しながら室温に冷却する。
【実施例２２】
【０２７７】
実施例２２：ビサボロールを含むＷ／Ｏエマルジョン中でのＫＢＤの使用
AI 1%:
%    成分(INCI)
A        6.0   PEG-7硬化ヒマシ油
8.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   ミリスチン酸イソプロピル
15.0   鉱油
0.3   ステアリン酸マグネシウム
0.3   ステアリン酸アルミニウム
2.0   PEG-45/ドデシルグリコールコポリマー
B        5.0   グリセリン
0.7   硫酸マグネシウム
55.6   水(Aqua dem.)
C        1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   酢酸トコフェロール
0.6   ビサボロール
【０２７８】
AI 5%:
%    成分(INCI)
A        6.0   PEG-7硬化ヒマシ油
8.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   ミリスチン酸イソプロピル
15.0   鉱油
0.3   ステアリン酸マグネシウム
0.3   ステアリン酸アルミニウム
2.0   PEG-45/ドデシルグリコールコポリマー
B        5.0   グリセリン
0.7   硫酸マグネシウム
51.6   水(Aqua dem.)
C        5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   酢酸トコフェロール
【０２７９】
調製：相ＡおよびＢを別々に約８５℃に加熱する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。撹拌しながら約４０℃に冷却し、相Ｃを加え、簡単に再度ホモジナイズする。撹拌しながら室温に冷却する。
【０２８０】
特許を受けようとするケラチン結合性ドメインに関する製剤のリスト−ヘアケア
【実施例２３】
【０２８１】
実施例２３：セッティング剤を含むフォーム状コンディショナー
AI 1%
%    成分(INCI)
A       10.0   PVP/VAコポリマー
0.2   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
0.2   セテアレス-25
0.5   ジメチコンコポリオール
適量   香油
10.0   アルコール
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
68.1   水(Aqua dem.)
10.0   プロパン/ブタン
【０２８２】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       10.0   PVP/VAコポリマー
0.2   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
0.2   セテアレス-25
0.5   ジメチコンコポリオール
適量   香油
10.0   アルコール
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
64.1   水(Aqua dem.)
10.0   プロパン/ブタン
調製：相Ａの成分を計量してまとめ、すべての成分が溶解するまで撹拌し、容器に詰める。
【実施例２４】
【０２８３】
実施例２４：フォーム状コンディショナー
AI 1%
%    成分(INCI)
A        1.0   ポリクオタニウム-4
0.5   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   香油
適量   保存料
91.5   水(Aqua dem.)
6.0   プロパン/ブタン
【０２８４】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        1.0   ポリクオタニウム-4
0.5   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   香油
適量   保存料
87.5   水(Aqua dem.)
6.0   プロパン/ブタン
【０２８５】
調製：相Ａの成分を計量してまとめ、すべての成分が溶解するまで撹拌して、透明な溶液を得る。そして容器に詰める。
【実施例２５】
【０２８６】
実施例２５：フォーム状コンディショナー
AI 1%
%    成分(INCI)
A        1.0   ポリクオタニウム-11
0.5   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   香油
適量   保存料
91.5   水(Aqua dem.)
6.0   プロパン/ブタン
【０２８７】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        1.0   ポリクオタニウム-11
0.5   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   香油
適量   保存料
87.5   水(Aqua dem.)
6.0   プロパン/ブタン
【０２８８】
調製：相Ａの成分を計量してまとめ、すべての成分が溶解するまで撹拌して、透明な溶液を得る。そして容器に詰める。
【実施例２６】
【０２８９】
実施例２６：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A        0.5   ラウレス-4
適量   香油
B       77.3   水(Aqua dem.)
10.0   ポリクオタニウム-28
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ジメチコンコポリオール
0.2   セテアレス-25
0.2   パンテノール
0.1   PEG-25 PABA
0.2   ヒドロキシエチルセルロース
C       10.0   HFC 152 A
【０２９０】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        0.5   ラウレス-4
適量   香油
B       73.3   水(Aqua dem.)
10.0   ポリクオタニウム-28
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ジメチコンコポリオール
0.2   セテアレス-25
0.2   パンテノール
0.1   PEG-25 PABA
0.2   ヒドロキシエチルセルロース
C       10.0   HFC 152 A
【０２９１】
調製：相Ａの成分を混合する。相Ｂの成分を順に加えて溶解する。相Ｃを加えて容器に詰める。
【実施例２７】
【０２９２】
実施例２７：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A        2.0   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B       78.5   水(Aqua dem.)
6.7   アクリレーツコポリマー
0.6   AMP
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ジメチコンコポリオール
0.2   セテアレス-25
0.2   パンテノール
0.1   PEG-25 PABA
0.2   ヒドロキシエチルセルロース
C       10.0   HFC 152 A
【０２９３】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        2.0   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B       74.5   水(Aqua dem.)
6.7   アクリレーツコポリマー
0.6   AMP
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ジメチコンコポリオール
0.2   セテアレス-25
0.2   パンテノール
0.1   PEG-25 PABA
0.2   ヒドロキシエチルセルロース
C       10.0   HFC 152 A
【０２９４】
調製：相Ａの成分を混合する。相Ｂの成分を順に加えて溶解する。相Ｃを加えて容器に詰める。
【実施例２８】
【０２９５】
実施例２８：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A        2,0   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B       7.70   ポリクオタニウム-44
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   保存料
79.3   水(Aqua dem.)
C       10.0   プロパン/ブタン
【０２９６】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        2.0   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B       7.70   ポリクオタニウム-44
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   保存料
75.3   水(Aqua dem.)
C       10.0   プロパン/ブタン
調製：相Ａの成分を混合する。透明になるまで相Ｂの成分を溶解した後、相Ａに相Ｂを加えて撹拌する。ｐＨを６〜７に調整し、相Ｃを加えて容器に詰める。
【実施例２９】
【０２９７】
実施例２９：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A       2.00   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B      72.32   水(Aqua dem.)
2.00   VP/アクリレーツ/メタクリル酸ラウリルコポリマー
0.53   AMP
1.00   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.20   セテアレス-25
0.50   パンテノール
0.05   ベンゾフェノン-4
0.20   アモジメチコン, 塩化セトリモニウム, トリデセス-12
15.00   アルコール
C       0.20   ヒドロキシエチルセルロース
D       6.00   プロパン/ブタン
【０２９８】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       2.00   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B      68.32   水(Aqua dem.)
2.00   VP/アクリレーツ/メタクリル酸ラウリルコポリマー
0.53   AMP
5.00   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.20   セテアレス-25
0.50   パンテノール
0.05   ベンゾフェノン-4
0.20   アモジメチコン, 塩化セトリモニウム, トリデセス-12
15.00   アルコール
C       0.20   ヒドロキシエチルセルロース
D       6.00   プロパン/ブタン
【０２９９】
調製：相Ａの成分を混合する。相Ｂの成分を順に加えて溶解する。ＡおよびＢの混合物に相Ｃを溶解した後、ｐＨを６〜７に調整する。相Ｄを加えて容器に詰める。
【実施例３０】
【０３００】
実施例３０：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A       2.00   塩化セトリモニウム
適量   香油
B      67.85   水(Aqua dem.)
7.00   ポリクオタニウム-46
1.00   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.20   セテアレス-25
0.50   パンテノール
0.05   ベンゾフェノン-4
0.20   アモジメチコン, 塩化セトリモニウム, トリデセス-12
15.00   アルコール
C       0.20   ヒドロキシエチルセルロース
D       6.00   プロパン/ブタン
【０３０１】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       2.00   塩化セトリモニウム
適量   香油
B      63.85   水(Aqua dem.)
7.00   ポリクオタニウム-46
5.00   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.20   セテアレス-25
0.50   パンテノール
0.05   ベンゾフェノン-4
0.20   アモジメチコン, 塩化セトリモニウム, トリデセス-12
15.00   アルコール
C       0.20   ヒドロキシエチルセルロース
D       6.00   プロパン/ブタン
【０３０２】
調製：相Ａの成分を混合する。相Ｂの成分を順に加えて溶解する。ＡおよびＢの混合物中に相Ｃを溶解した後、ｐＨを６〜７に調整する。相Ｄを加えて容器に詰める。
【実施例３１】
【０３０３】
実施例３１：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A       適量   PEG-40硬化ヒマシ油
適量   香油
85.5   水(Aqua dem.)
B        7.0   ポリスチレンスルホン酸ナトリウム
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   臭化セトリモニウム
適量   保存料
C        6.0   プロパン/ブタン
【０３０４】
スタイリングフォーム
AI 5%
%    成分(INCI)
A       適量   PEG-40硬化ヒマシ油
適量   香油
81.5   水(Aqua dem.)
B        7.0   ポリスチレンスルホン酸ナトリウム
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   臭化セトリモニウム
適量   保存料
C        6.0   プロパン/ブタン
【０３０５】
調製：相Ａを溶解する。相Ｂを計量して相Ａに加え、透明になるまで溶解する。ｐＨを６〜７に調整し、相Ｃを加えて容器に詰める。
【実施例３２】
【０３０６】
実施例３２：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A       適量   PEG-40硬化ヒマシ油
適量   香油
92.0   水(Aqua dem.)
B        0.5   ポリクオタニウム-10
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   臭化セトリモニウム
適量   保存料
C        6.0   プロパン/ブタン
【０３０７】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       適量   PEG-40硬化ヒマシ油
適量   香油
88.0   水(Aqua dem.)
B        0.5   ポリクオタニウム-10
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   臭化セトリモニウム
適量   保存料
C        6.0   プロパン/ブタン
【０３０８】
調製：相Ａを溶解する。相Ｂを計量して相Ａに加え、透明になるまで溶解する。ｐＨを６〜７に調整し、相Ｃを加えて容器に詰める。
【０３０９】
実施例３２：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A       適量   PEG-40硬化ヒマシ油
適量   香油
82.5   水(Aqua dem.)
B       10.0   ポリクオタニウム-16
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
適量   保存料
C        6.0   プロパン/ブタン
【０３１０】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       適量   PEG-40硬化ヒマシ油
適量   香油
78.5   水(Aqua dem.)
B       10.0   ポリクオタニウム-16
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ヒドロキシエチルセチルジモニウムリン酸
適量   保存料
C        6.0   プロパン/ブタン
【０３１１】
調製：相Ａを溶解する。相Ｂを計量して相Ａに加え、透明になるまで溶解する。ｐＨを６〜７に調整し、相Ｃを加えて容器に詰める。
【実施例３３】
【０３１２】
実施例３３：スタイリングフォーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A        2.0   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B       84.0   水(Aqua dem.)
2.0   キトサン
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ジメチコンコポリオール
0.2   セテアレス-25
0.2   パンテノール
0.1   PEG-25 PABA
C       10.0   HFC 152 A
【０３１３】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        2.0   ココトリモニウムメトスルファート
適量   香油
B       80.0   水(Aqua dem.)
2.0   キトサン
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.5   ジメチコンコポリオール
0.2   セテアレス-25
0.2   パンテノール
0.1   PEG-25 PABA
C       10.0   HFC 152 A
【０３１４】
調製：相Ａの成分を混合する。相Ｂの成分を順に加えて溶解する。相Ｃを加えて容器に詰める。
【実施例３４】
【０３１５】
実施例３４：ケア用シャンプー
AI 1%
%    成分(INCI)
A       30.0   ラウレス硫酸ナトリウム
6.0   ココアンホ酢酸ナトリウム
6.0   コカミドプロピルベタイン
3.0   ラウレス硫酸ナトリウム, ジステアリン酸グリコール, コカミドMEA, ラウレス-10
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
7.7   ポリクオタニウム-44
2.0   アモジメチコン
適量   香油
適量   保存料
1.0   塩化ナトリウム
43.3   水(Aqua dem.)
B       適量   クエン酸
【０３１６】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       30.0   ラウレス硫酸ナトリウム
6.0   ココアンホ酢酸ナトリウム
6.0   コカミドプロピルベタイン
3.0   ラウレス硫酸ナトリウム, ジステアリン酸グリコール, コカミドMEA, ラウレス-10
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水性液
7.7   ポリクオタニウム-44
2.0   アモジメチコン
適量   香油
適量   保存料
1.0   塩化ナトリウム
39.3   水(Aqua dem.)
B       適量   クエン酸
【０３１７】
調製：相Ａの成分を混合し、溶解する。クエン酸でｐＨを６〜７に調整する。
【実施例３５】
【０３１８】
実施例３５：シャワー用ジェル
AI 1%
%    成分(INCI)
A       40.0   ラウレス硫酸ナトリウム
5.0   デシルグルコシド
5.0   コカミドプロピルベタイン
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   パンテノール
適量   香油
適量   保存料
2.0   塩化ナトリウム
46.0   水(Aqua dem.)
B       適量   クエン酸
【０３１９】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       40.0   ラウレス硫酸ナトリウム
5.0   デシルグルコシド
5.0   コカミドプロピルベタイン
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   パンテノール
適量   香油
適量   保存料
2.0   塩化ナトリウム
42.0   水(Aqua dem.)
B       適量   クエン酸
【０３２０】
調製：相Ａの成分を混合し、溶解する。クエン酸でｐＨを６〜７に調整する。
【実施例３６】
【０３２１】
実施例３６：シャンプー
AI 1%
%    成分(INCI)
A       40.0   ラウレス硫酸ナトリウム
5.0   C12-15パレス-15スルホン酸ナトリウム
5.0   デシルグルコシド
適量   香油
0.1   フィタントリオール
44.6   水(Aqua dem.)
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.3   ポリクオタニウム-10
1.0   パンテノール
適量   保存料
1.0   ラウレス-3
2.0   塩化ナトリウム
【０３２２】
AI 5%
%    成分(INCI)
A       40.0   ラウレス硫酸ナトリウム
5.0   C12-15パレス-15スルホン酸ナトリウム
5.0   デシルグルコシド
適量   香油
0.1   フィタントリオール
40.6   水(Aqua dem.)
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.3   ポリクオタニウム-10
1.0   パンテノール
適量   保存料
1.0   ラウレス-3
2.0   塩化ナトリウム
【０３２３】
調製：相Ａの成分を混合し、溶解する。クエン酸でｐＨを６〜７に調整する。
【実施例３７】
【０３２４】
実施例３７：シャンプー
AI 1%
%     成分(INCI)
A       15.00   コカミドプロピルベタイン
10.00   ココアンホ二酢酸二ナトリウム
5.00   ポリソルベート20
5.00   デシルグルコシド
適量   香油
適量   保存料
1.00   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.15   グアールヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド
2.00   ラウレス-3
58.00   水(Aqua dem.)
適量   クエン酸
B        3.00   ジステアリン酸PEG-150
【０３２５】
AI 5%
%     成分(INCI)
A       15.00   コカミドプロピルベタイン
10.00   ココアンホ二酢酸二ナトリウム
5.00   ポリソルベート20
5.00   デシルグルコシド
適量   香油
適量   保存料
5.00   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
0.15   グアールヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド
2.00   ラウレス-3
54.00   水(Aqua dem.)
適量   クエン酸
B        3.00   ジステアリン酸PEG-150
【０３２６】
調製：相Ａの成分を計量し、溶解する。ｐＨを６〜７に調整する。相Ｂを加え、約５０℃に加熱する。撹拌しながら室温に冷却する。
【実施例３８】
【０３２７】
実施例３８：保湿性ボディーケアクリーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-25
2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
3.0   セテアリルエチルヘキサノアート
1.0   ジメチコン
4.0   セテアリルアルコール
3.0   ステアリン酸グリセリルSE
5.0   鉱油
4.0   Simmondsia Chinensis (ホホバ)種子油
3.0   鉱油, ラノリンアルコール
B        5.0   プロピレングリコール
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   パンテノール
0.5   ケイ酸アルミニウムマグネシウム
適量   保存料
65.5   水(Aqua dem.)
C       適量   香油
D       適量   クエン酸
【０３２８】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-25
2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
3.0   セテアリルエチルヘキサノアート
1.0   ジメチコン
4.0   セテアリルアルコール
3.0   ステアリン酸グリセリルSE
5.0   鉱油
4.0   Simmondsia Chinensis (ホホバ)種子油
3.0   鉱油, ラノリンアルコール
B        5.0   プロピレングリコール
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
1.0   パンテノール
0.5   ケイ酸アルミニウムマグネシウム
適量   保存料
61.5   水(Aqua dem.)
C       適量   香油
D       適量   クエン酸
【０３２９】
調製：相ＡおよびＢを別々に約８０℃に加熱する。相Ｂを簡単にプレホモジナイズした後、相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、再度ホモジナイズする。約４０℃に冷却し、相Ｃを加え、再度十分にホモジナイズする。クエン酸でｐＨを６〜７に調整する。
【実施例３９】
【０３３０】
実施例３９：保湿性ボディーケアクリーム
AI 1%
%    成分(INCI)
A        6.0   PEG-7硬化ヒマシ油
10.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   ミリスチン酸イソプロピル
7.0   鉱油
0.5   シアバター(Butyrospermum Parkii)
0.5   ステアリン酸アルミニウム
0.5   ステアリン酸マグネシウム
0.2   ビサボロール
0.7   クオタニウム-18-ヘクトライト
B        5.0   ジプロピレングリコール
0.7   硫酸マグネシウム
適量   保存料
62.9   水(Aqua dem.)
C       適量   香油
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
【０３３１】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        6.0   PEG-7硬化ヒマシ油
10.0   セテアリルエチルヘキサノアート
5.0   ミリスチン酸イソプロピル
7.0   鉱油
0.5   シアバター(Butyrospermum Parkii)
0.5   ステアリン酸アルミニウム
0.5   ステアリン酸マグネシウム
0.2   ビサボロール
0.7   クオタニウム-18-ヘクトライト
B        5.0   ジプロピレングリコール
0.7   硫酸マグネシウム
適量   保存料
58.9   水(Aqua dem.)
C       適量   香油
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
【０３３２】
調製：相ＡおよびＢを別々に約８０℃に加熱する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。撹拌しながら約４０℃に冷却し、相Ｃを加え、再度ホモジナイズする。撹拌しながら室温に冷却する。
【実施例４０】
【０３３３】
実施例４０：メイクアップ液−Ｏ／Ｗ型
AI 1%
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
2.0   セテアレス-25
6.0   ステアリン酸グリセリル
1.0   セチルアルコール
8.0   鉱油
7.0   セテアリルエチルヘキサノアート
0.2   ジメチコン
B        3.0   プロピレングリコール
1.0   パンテノール
適量   保存料
61.9   水(Aqua dem.)
C        0.1   ビサボロール
1.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   香油
D        5.7   C. I. 77 891, 二酸化チタン
1.1   酸化鉄
【０３３４】
AI 5%
%    成分(INCI)
A        2.0   セテアレス-6, ステアリルアルコール
2.0   セテアレス-25
6.0   ステアリン酸グリセリル
1.0   セチルアルコール
8.0   鉱油
7.0   セテアリルエチルヘキサノアート
0.2   ジメチコン
B        3.0   プロピレングリコール
1.0   パンテノール
適量   保存料
57.9   水(Aqua dem.)
C        0.1   ビサボロール
5.0   約5%ケラチン結合性ドメイン有効成分を含む水溶液
適量   香油
D        5.7   C. I. 77 891, 二酸化チタン
1.1   酸化鉄
【０３３５】
調製：相ＡおよびＢを別々に約８０℃に加熱する。相Ａに相Ｂを加えて撹拌し、ホモジナイズする。撹拌しながら約４０℃に冷却し、相ＣおよびＤを加え、再度十分にホモジナイズする。撹拌しながら室温に冷却する。
【実施例４１】
【０３３６】
実施例４１
以下の典型的な製剤で使用した有効成分は、５重量％のケラチン結合性ドメインまたはケラチン結合性エフェクター分子の水溶液であった。以下のデータは重量に基づく割合である。
【表７】
2008500301.tif 000016
【表８】
2008500301.tif 000017
【表９】
2008500301.tif 000018
【表１０】
2008500301.tif 000019
【０３３７】
2008500301.tif 000020
【表１１】
2008500301.tif 000021
【表１２】
2008500301.tif 000022
【表１３】
2008500301.tif 000023
【表１４】
2008500301.tif 000024
【０３３８】
2008500301.tif 000025
【表１５】
2008500301.tif 000026
【０３３９】
2008500301.tif 000027
【表１６】
2008500301.tif 000028
【０３４０】
2008500301.tif 000029
【表１７】
2008500301.tif 000030
【０３４１】
2008500301.tif 000031
【表１８】
2008500301.tif 000032
【０３４２】
2008500301.tif 000033
【表１９】
2008500301.tif 000034
【０３４３】
2008500301.tif 000035
【０３４４】
2008500301.tif 000036
【表２０】
2008500301.tif 000037
【表２１】
2008500301.tif 000038
【０３４５】
2008500301.tif 000039
【表２２】
2008500301.tif 000040
【０３４６】
2008500301.tif 000041
【表２３】
2008500301.tif 000042
【０３４７】
2008500301.tif 000043
【表２４】
2008500301.tif 000044
【表２５】
2008500301.tif 000045
【０３４８】
2008500301.tif 000046
【表２６】
2008500301.tif 000047
【０３４９】
2008500301.tif 000048
【表２７】
2008500301.tif 000049
【表２８】
2008500301.tif 000050
【０３５０】
2008500301.tif 000051
【表２９】
2008500301.tif 000052
【図面の簡単な説明】
【０３５１】
【図１−１】デスモプラキンとプレクチンのアミノ酸配列のアライメントである。
【図１−２】デスモプラキンタンパク質の構造に関するデータである。
【図１−３】デスモプラキン翻訳物の構造を表す模式図である。
【図２−１】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−２】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−３】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−４】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−５】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−６】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−７】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−８】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−９】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１０】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１１】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１２】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１３】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１４】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１５】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１６】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１７】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図３】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂのベクターマップである。
【図４】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＬｉｂ１５のベクターマップである。
【図５】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＬｉｂ１６のベクターマップである。
【図６】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＬｉｂ１９のベクターマップである。
【図７】定量的ＫＢＤ活性試験について表す模式図である。
【図８】Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２色素とＫＢＤ−Ｂのシステインチオール基とのカップリングについて表す模式図である。
【図９】ａ）ヒト毛髪にカップリングしたＫＢＤ−Ｂ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２の蛍光顕微鏡写真である。ｂ）毛髪＋Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２の比較対照である。
【図１−１】
2008500301.tif 000053
【図１−２】
2008500301.tif 000054
【図１−３】
2008500301.tif 000055
【図２−１】
2008500301.tif 000056
【図２−２】
2008500301.tif 000057
【図２−３】
2008500301.tif 000058
【図２−４】
2008500301.tif 000059
【図２−５】
2008500301.tif 000060
【図２−６】
2008500301.tif 000061
【図２−７】
2008500301.tif 000062
【図２−８】
2008500301.tif 000063
【図２−９】
2008500301.tif 000064
【図２−１０】
2008500301.tif 000065
【図２−１１】
2008500301.tif 000066
【図２−１２】
2008500301.tif 000067
【図２−１３】
2008500301.tif 000068
【図２−１４】
2008500301.tif 000069
【図２−１５】
2008500301.tif 000070
【図２−１６】
2008500301.tif 000071
【図２−１７】
2008500301.tif 000072
【図３】
2008500301.tif 000073
【図４】
2008500301.tif 000074
【図５】
2008500301.tif 000075
【図６】
2008500301.tif 000076
【図７】
2008500301.tif 000077
【図８】
2008500301.tif 000078
【図９】
2008500301.tif 000079
【配列表】
2008500301000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成19年1月10日(2007.1.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４３】
Alexa Fluor 532がカップリングされているＫＢＤ−Ｂの皮膚／毛髪に対する結合は、活性試験によって測定することができる（実施例９および１０を参照のこと）。実施例９または１０と同様に、皮膚または毛髪に結合しているＫＢＤ−Ｂ−Alexa Fluor 532カップリングは、毛髪に関しては蛍光顕微鏡下で（吸収：５３２ｎｍ／蛍光：５９０ｎｍを用いて検出）、あるいは漂白済みの毛髪に関しては肉眼で、非常に容易に検出することができる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５１】
【図１−１】デスモプラキンとプレクチンのアミノ酸配列のアライメントである。
【図１−２】デスモプラキンタンパク質の構造に関するデータである。
【図１−３】デスモプラキン翻訳物の構造を表す模式図である。
【図２−１】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−２】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−３】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−４】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−５】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−６】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−７】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−８】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−９】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１０】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１１】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１２】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１３】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１４】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１５】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１６】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図２−１７】デスモプラキンアミノ酸配列のアライメントである。
【図３】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＱＥ３０−ＫＢＤ−Ｂのベクターマップである。
【図４】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＬｉｂ１５のベクターマップである。
【図５】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＬｉｂ１６のベクターマップである。
【図６】ケラチン結合性ドメインＢ発現用のｐＬｉｂ１９のベクターマップである。
【図７】定量的ＫＢＤ活性試験について表す模式図である。
【図８】Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２色素とＫＢＤ−Ｂのシステインチオール基とのカップリングについて表す模式図である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【国際調査報告】
2008500301.tif 000096
2008500301.tif 000097
2008500301.tif 000098
2008500301.tif 000099
2008500301.tif 000100
2008500301.tif 000101
2008500301.tif 000102
2008500301.tif 000103
2008500301.tif 000104
2008500301.tif 000105