(57)【要約】  治療上有効な量のＧＤＦ−８阻害剤と、目的とする症候群を治療する治療上有効な量の少なくとも１種のその他の治療薬とを対象に投与することを含む、対象の肥満、心臓血管疾患、およびインスリン代謝障害を治療する方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効な量の少なくとも１種のＧＤＦ−８阻害剤と、治療上有効な量の標的症候群を治療する少なくとも１種の他の治療薬とを投与することを含む、対象における標的症候群の治療方法。
【請求項２】
標的症候群が肥満、心臓血管疾患およびインスリン代謝の障害の少なくとも一つから選択される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項３】
ＧＤＦ−８阻害剤が、ＧＤＦ−８に対する抗体、ＧＤＦ−８受容体に対する抗体、修飾された可溶性受容体、ＧＤＦ−８に結合するタンパク質、ＧＤＦ−８受容体に結合するタンパク質、ＧＤＦ−８小潜在複合体のプロテアーゼ活性化の阻害剤、およびそのＧＤＦ−８阻害模倣体の少なくとも一つより選択される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項４】
ＧＤＦ−８阻害剤が成熟ＧＤＦ−８タンパク質に特異的に結合する、ところの請求項３記載の方法。
【請求項５】
治療薬が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、スルホニル尿素剤、抗脂血症剤、ビグアニド剤、チアゾリジンジオン剤、インスリン、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤またはＰＴＰａｓｅ阻害剤の少なくとも一つより選択される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項６】
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤が、キナプリル、ラミプリル、ベラパミル、カプトプリル、ジルチアゼム、クロニジン、ヒドロクロルチアジド、ベナゼプリル、プラゾシン、フォシノプリル、リシノプリル、アテノロール、エナラプリル、ペリンドロプリル、ペリンドロプリルｔ−プチルアミン、トランドラプリル、およびモエキシプリル、およびその適当な医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項７】
スルホニル尿素剤が、グリピジド、グリブリド（グリベンクラミド）、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、およびグリメプリリド、またはその医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項８】
抗脂血症剤が、胆汁酸金属イオン封鎖剤、フィブリック酸誘導体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、およびニコチン酸化合物、およびその医薬上許容される塩の少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項９】
ビグアニド剤がメトホルミンおよびその医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項１０】
チアゾリジンジオン剤がピオグリタゾンまたはロシグリタゾン、ならびにその医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項１１】
インスリンが、即時作用型インスリン、中時間作用型インスリン、長時間作用型インスリン、中時間および即時作用型インスリンの組合せの少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項１２】
アルファ−グルコシダーゼ阻害剤が、ミグリトールおよびアカルボース、ならびにその医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項１３】
アルドースレダクターゼ阻害剤が、
ａ）スピロ−イソキノリン−ピロリジンテトロン化合物；
ｂ）２−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−６−フルオロ−（９Ｃｌ）；
ｃ）トルレスタット；
ｄ）ソルビニル；
ｅ）メトソルビニル；
ｆ）ゾポルレスタット；
ｇ）エパルレスタット；
ｈ）ゼナレスタット；
ｉ）イミレスタット；
ｊ）ポナルレスタット；
ｋ）ＯＮＯ−２２３５；
ｌ）ＧＰ−１４４７；
ｍ）ＣＴ−１１２；
ｎ）ＢＡＬ−ＡＲＩ８；
ｏ）ＡＤ−５４６７；
ｐ）ＺＤ５５２２；
ｑ）３，４−ジヒドロ−２，８−ジイソプロピル−３−チオキソ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸；
ｒ）１−［（３−ブロモ−２−ベンゾフラニル）スルホニル］−２，４−イミダゾリジンジオン（Ｍ−１６２０９）：ＮＺ−３１４であって、１−イミダゾリジン酢酸，３−［（３−ニトロフェニル）メチル］−２，４，５−トリオキソ−（９Ｃｌ）であるもの；
ｓ）１−フタラジン酢酸，３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３−［［５−トリフルオロメチル］−２−ベンゾチアゾリル］メチル］−；
ｔ）Ｍ−７９１７５；
ｕ）ＳＰＲ−２１０；
ｖ）スピロ［ピロリジン−３，６’（５’Ｈ）−ピロロ［１，２，３−ｄｅ］［１，４］ベンゾキサジン］−２，５，５’−トリオン，８’−クロロ−２’，３’−ジヒドロ−（９Ｃｌ）；
ｗ）６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−２’，５’−ジオキソ−（２Ｓ−ｃｉｓ）−スピロ［４Ｈ−Ｉ−ベンゾピラン−４，４’−イミダゾリジン］−２−カルボキシアミド；および
ｘ）そのアナログまたは医薬上許容される塩
の少なくとも一つより選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項１４】
ＰＴＰａｓｅ阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１】
2008509927.tif 000008
［式中：
Ｒ１はＣ（Ｏ）ＯＲ７、５−ないし６−員の複素環、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ２はＣ（Ｏ）ＺＲ４またはＣＮであり；
Ｚは−Ｏ−または−ＮＲ５−であり；
Ｘは−Ｏ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＮＲ８−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｃ１〜４アルキレン−、−Ｃ２〜４アルケニレン−、または−Ｃ２〜４アルキニレン−であり、そのアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＨＮ＝、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｒ４、またはＱで置換されていてもよく；
各Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、およびＹ５は、独立して、ＣＲ３、Ｎ、Ｓ、またはＯであり、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、およびＹ５の１つまたは２つは不存在とすることができ；
各Ｒ３は、独立して、Ｈ、アリール、５−ないし８−員のヘテロシクリル、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＱであり、そのアリール、複素環、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、Ｒ４、またはＱで置換されていてもよく；
各Ｑは、独立して、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ４、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（＝Ｎ−ＯＨ）Ｒ４、−ＮＲ４Ｒ５、−Ｎ＋Ｒ４Ｒ５Ｒ６、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ４Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１６アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、シクロアルキルＣ１〜６アルキル、５−ないし８−員の複素環、複素環式Ｃ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ２〜６アルケニル、またはアリールＣ２〜６アルキニルであり、各Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、１つまたは複数のＣ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＯＲ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ＋Ｒ７Ｒ８Ｒ９、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＮＲ７Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−ＳＲ７、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８で置換されていてもよく；
各Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、アリール、またはアリールＣ１〜１２アルキルであり、各Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されていてもよく；
環系が１−ベンゾチオフェンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ（Ｏ）ＯＣＨ３以外の基であり；
環系が１−ベンゾチオフェンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ（Ｏ）ＯＨ以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ１〜３アルキルエステル以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキルであり、Ｘが−ＯＣＨ２−または−ＯＣＨ（ＣＨ３）−である場合、Ｒ２はＣＮ以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＳＣＨ２ＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣＮ以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＳＣＨ２−である場合、Ｒ２はイソプロピルエステル以外の基である］
で示される少なくとも１種の化合物から選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項１５】
ＰＴＰａｓｅ阻害剤が、式（ＩＩ）
【化２】
2008509927.tif 000009
［式中：
Ｒ１はＲ５、ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）Ｒ５またはＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６であり；
Ｒ２はＲ５であり；
Ｘは−Ｏ−Ｃ１〜３アルキレン、−ＮＲ８−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｃ１〜４アルキレン、−Ｃ２〜４アルケニレン−、またはＣ２〜４アルキニレン−であり、そのアルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、イミド、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＱで置換されていてもよく；
Ｙは存在しないか、−Ｏ−または−ＮＲ６−であり；
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜４シクロアルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、またはアリールであり；
Ｒ４は、Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄであり、ここでＡは存在しないか、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニルジイル、またはＣ２〜６アルキニルであり、各ＡはＣ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＮＯ２、またはＱの１つまたは複数で置換されていてもよく、そのアルキル、アルケニル、またはアルキニル基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、またはＱで置換されていてもよく；
各Ａは１つまたは複数のアリーレン、アルキレン、またはアルケニレンで終結されていてもよく；
Ｂは存在しないか、あるいは−ＮＲ５−、−ＮＲ７−、−Ｎ（Ｒ５）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｒ９）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｎ（Ｒ９）ＳＯ２−、−Ｎ（Ｒ９）ＳＯ２Ｃ（Ｒ１０）（Ｒ１１）−、−Ｎ（Ｒ９）（Ｒ１０）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｏ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−Ｏ−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ（Ｒ９）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｓ−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＳＣ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、または−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＳＯ２Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−であり；
Ｅは存在しないか、あるいはＣ３〜１２シクロアルキレン、３−ないし１２−員のヘテロシクジイル、アリーレン、Ｃ１〜１２アルキレン、Ｃ２〜１２アルケニレン、またはＣ２〜１２アルキニレンであり、ここで各Ｅは１つまたは複数のＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されていてもよく；
Ｄは１つまたは複数のＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、またはＱであり；
Ａ、Ｂ、およびＥが存在せず、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨまたはＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたは塩素である場合、ＤはＨまたは塩素以外の基であり；Ａ、Ｂ、およびＥが存在せず、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨまたはＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたは臭素である場合、ＤはＨまたは臭素以外の基であり；
各Ｑは、独立して、−Ｒ５、−Ｒ７、−ＯＲ５、−ＯＲ７、−ＮＲ５Ｒ６、−ＮＲ５Ｒ７、−Ｎ＋Ｒ５Ｒ６Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｎＲ５、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲ７であり、ｎは０、１、または２であり；
各Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ１〜１２アルコキシＣ１〜１２アルキル、シクロアルキルＣ１〜６アルキル、３−ないし８−員のヘテロシクイル、ヘテロシクイルＣ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ２〜６アルケニル、またはアリールＣ２〜６アルキニルであり、各Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は１つまたは複数のＲ９、−ＯＲ９−、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ９、−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−ＳＲ９、−Ｓ（Ｏ）Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−ＮＲ９Ｒ１０、−Ｎ＋Ｒ９Ｒ１０Ｒ１１、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＮＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−ＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＣＦ３、ＯＨ、またはＮＯ２で置換されていてもよく；
Ｒ７は−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−Ｓ（Ｏ）Ｒ５、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５Ｒ６であり；
各Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、アリール、またはアリールＣ１〜１２アルキルであり、そのアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されていてもよい］
で示される少なくとも一種の化合物より選択される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項１６】
連続的に投与される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１７】
同時に投与される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも一つの治療薬が経口的に投与される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１９】
非経口的に投与される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項２０】
非経口投与が静脈内投与である、ところの請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
治療上有効な量のＧＤＦ−８阻害剤と、治療上有効な量の標的症候群を治療する少なくとも１種の他の治療薬とを組み合わせて含む、標的症候群を治療するのに有用な医薬組成物。
【請求項２２】
ＧＤＦ−８阻害剤がＧＤＦ−８に対する抗体、ＧＤＦ−８受容体に対する抗体、修飾された可溶性受容体、ＧＤＦ−８に結合するタンパク質、ＧＤＦ−８受容体に結合するタンパク質、ＧＤＦ−８小潜在複合体のプロテアーゼ活性化の阻害剤、およびそのＧＤＦ−８阻害模倣体の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ＧＤＦ−８に結合するタンパク質が配列番号６５のＧＤＦ−８プロペプチド、変異したＧＤＦ−８プロペプチド、フォリスタチン、フォリスタチン−ドメイン含有タンパク質、およびそのＦｃ融合体の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２２記載の医薬組成物。
【請求項２４】
ＧＤＦ−８阻害剤が成熟ＧＤＦ−８タンパク質に特異的に結合する、ところの請求項２２記載の医薬組成物。
【請求項２５】
治療薬が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、スルホニル尿素剤、抗脂血症剤、ビグアニド剤、チアゾリジンジオン剤、インスリン、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤またはＰＴＰａｓｅ阻害剤の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２６】
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤が、キナプリル、ラミプリル、ベラパミル、カプトプリル、ジルチアゼム、クロニジン、ヒドロクロルチアジド、ベナゼプリル、プラゾシン、フォシノプリル、リシノプリル、アテノロール、エナラプリル、ペリンドロプリル、ペリンドロプリルｔ−プチルアミン、トランドラプリル、およびモエキシプリル、またはこれら化合物の１つまたは複数の医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
スルホニル尿素剤が、グリピジド、グリブリド（グリベンクラミド）、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、およびグリメプリリド、またはその医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２８】
抗脂血症剤が、胆汁酸金属イオン封鎖剤、フィブリック酸誘導体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、およびニコチン酸化合物、およびその医薬上許容される塩の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ビグアニド剤がメトホルミンおよびその医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３０】
チアゾリジンジオン剤がピオグリタゾンまたはロシグリタゾン、ならびにその医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３１】
インスリンが、即時作用型インスリン、中時間作用型インスリン、長時間作用型インスリン、中時間および即時作用型インスリンの組合せの少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３２】
アルファ−グルコシダーゼ阻害剤が、ミグリトールおよびアカルボース、ならびにこれらの化合物の１つまたは複数の医薬上許容される塩の形態の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３３】
アルドースレダクターゼ阻害剤が、
ａ）スピロ−イソキノリン−ピロリジンテトロン化合物；
ｂ）２−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−６−フルオロ−（９Ｃｌ）；
ｃ）トルレスタット；
ｄ）ソルビニル；
ｅ）メトソルビニル；
ｆ）ゾポルレスタット；
ｇ）エパルレスタット；
ｈ）ゼナレスタット；
ｉ）イミレスタット；
ｊ）ポナルレスタット；
ｋ）ＯＮＯ−２２３５；
ｌ）ＧＰ−１４４７；
ｍ）ＣＴ−１１２；
ｎ）ＢＡＬ−ＡＲＩ８；
ｏ）ＡＤ−５４６７；
ｐ）ＺＤ５５２２；
ｑ）３，４−ジヒドロ−２，８−ジイソプロピル−３−チオキソ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸；
ｒ）１−［（３−ブロモ−２−ベンゾフラニル）スルホニル］−２，４−イミダゾリジンジオン（Ｍ−１６２０９）：ＮＺ−３１４であって、１−イミダゾリジン酢酸，３−［（３−ニトロフェニル）メチル］−２，４，５−トリオキソ−（９Ｃｌ）であるもの；
ｓ）１−フタラジン酢酸，３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３−［［５−トリフルオロメチル］−２−ベンゾチアゾリル］メチル］−；
ｔ）Ｍ−７９１７５；
ｕ）ＳＰＲ−２１０；
ｖ）スピロ［ピロリジン−３，６’（５’Ｈ）−ピロロ［１，２，３−ｄｅ］［１，４］ベンゾキサジン］−２，５，５’−トリオン，８’−クロロ−２’，３’−ジヒドロ−（９Ｃｌ）；
ｗ）６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−２’，５’−ジオキソ−（２Ｓ−ｃｉｓ）−スピロ［４Ｈ−Ｉ−ベンゾピラン−４，４’−イミダゾリジン］−２−カルボキシアミド；
および
そのアナログおよび医薬上許容される塩
の少なくとも一つより選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３４】
ＰＴＰａｓｅ阻害剤が、式（Ｉ）：
【化３】
2008509927.tif 000010
［式中：
Ｒ１はＣ（Ｏ）ＯＲ７、５−ないし６−員の複素環、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ２はＣ（Ｏ）ＺＲ４またはＣＮであり；
Ｚは−Ｏ−または−ＮＲ５−であり；
Ｘは−Ｏ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＮＲ８−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｃ１〜４アルキレン−、−Ｃ２〜４アルケニレン−、または−Ｃ２〜４アルキニレン−であり、そのアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＨＮ＝、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｒ４、またはＱで置換されていてもよく；
各Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、およびＹ５は、独立して、ＣＲ３、Ｎ、Ｓ、またはＯであり、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、およびＹ５の１つまたは２つは不存在とすることができ；
各Ｒ３は、独立して、Ｈ、アリール、５−ないし８−員のヘテロシクリル、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＱであり、そのアリール、複素環、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、Ｒ４、またはＱで置換されていてもよく；
各Ｑは、独立して、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ４、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（＝Ｎ−ＯＨ）Ｒ４、−ＮＲ４Ｒ５、−Ｎ＋Ｒ４Ｒ５Ｒ６、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ４Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５であり；
各Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１６アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、シクロアルキルＣ１〜６アルキル、５−ないし８−員の複素環、複素環式Ｃ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ２〜６アルケニル、またはアリールＣ２〜６アルキニルであり、各Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、１つまたは複数のＣ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＯＲ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ＋Ｒ７Ｒ８Ｒ９、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＮＲ７Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−ＳＲ７、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８で置換されていてもよく；
各Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、アリール、またはアリールＣ１〜１２アルキルであり、各Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されていてもよく；
環系が１−ベンゾチオフェンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ（Ｏ）ＯＣＨ３以外の基であり；
環系が１−ベンゾチオフェンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ（Ｏ）ＯＨ以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ１〜３アルキルエステル以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキルであり、Ｘが−ＯＣＨ２−または−ＯＣＨ（ＣＨ３）−である場合、Ｒ２はＣＮ以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＳＣＨ２ＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣＮ以外の基であり；
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＳＣＨ２−である場合、Ｒ２はイソプロピルエステル以外の基である］
で示される少なくとも１種の化合物から選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３５】
ＰＴＰａｓｅ阻害剤が、式（ＩＩ）
【化４】
2008509927.tif 000011
［式中：
Ｒ１はＲ５、ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）Ｒ５またはＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６であり；
Ｒ２はＲ５であり；
Ｘは−Ｏ−Ｃ１〜３アルキレン、−ＮＲ８−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｃ１〜４アルキレン、−Ｃ２〜４アルケニレン−、またはＣ２〜４アルキニレン−であり、そのアルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、イミド、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＱで置換されていてもよく；
Ｙは存在しないか、−Ｏ−または−ＮＲ６−であり；
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜４シクロアルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、またはアリールであり；
Ｒ４は、Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄであり、ここでＡは存在しないか、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニルジイル、またはＣ２〜６アルキニルであり、各ＡはＣ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＮＯ２、またはＱの１つまたは複数で置換されていてもよく、そのアルキル、アルケニル、またはアルキニル基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、またはＱで置換されていてもよく；
各Ａは１つまたは複数のアリーレン、アルキレン、またはアルケニレンで終結されていてもよく；
Ｂは存在しないか、あるいは−ＮＲ５−、−ＮＲ７−、−Ｎ（Ｒ５）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｒ９）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｎ（Ｒ９）ＳＯ２−、−Ｎ（Ｒ９）ＳＯ２Ｃ（Ｒ１０）（Ｒ１１）−、−Ｎ（Ｒ９）（Ｒ１０）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｏ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−Ｏ−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ（Ｒ９）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｓ−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＳＣ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、または−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＳＯ２Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−であり；
Ｅは存在しないか、あるいはＣ３〜１２シクロアルキレン、３−ないし１２−員のヘテロシクジイル、アリーレン、Ｃ１〜１２アルキレン、Ｃ２〜１２アルケニレン、またはＣ２〜１２アルキニレンであり、ここで各Ｅは１つまたは複数のＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されていてもよく；
Ｄは１つまたは複数のＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、またはＱであり；
Ａ、Ｂ、およびＥが存在せず、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨまたはＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたは塩素である場合、ＤはＨまたは塩素以外の基であり；Ａ、Ｂ、およびＥが存在せず、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨまたはＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたは臭素である場合、ＤはＨまたは臭素以外の基であり；
各Ｑは、独立して、−Ｒ５、−Ｒ７、−ＯＲ５、−ＯＲ７、−ＮＲ５Ｒ６、−ＮＲ５Ｒ７、−Ｎ＋Ｒ５Ｒ６Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｎＲ５、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲ７であり、ｎは０、１、または２であり；
各Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ１〜１２アルコキシＣ１〜１２アルキル、シクロアルキルＣ１〜６アルキル、３−ないし８−員のヘテロシクイル、ヘテロシクイルＣ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ２〜６アルケニル、またはアリールＣ２〜６アルキニルであり、各Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は１つまたは複数のＲ９、−ＯＲ９−、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ９、−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−ＳＲ９、−Ｓ（Ｏ）Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−ＮＲ９Ｒ１０、−Ｎ＋Ｒ９Ｒ１０Ｒ１１、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＮＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−ＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＣＦ３、ＯＨ、またはＮＯ２で置換されていてもよく；
Ｒ７は−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−Ｓ（Ｏ）Ｒ５、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５Ｒ６であり；
各Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、アリール、またはアリールＣ１〜１２アルキルであり、そのアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基のいずれも、１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されていてもよい］
で示される少なくとも一つの化合物より選択される、ところの請求項２５記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、その内容が出典明示により本明細書の一部とされる、２００４年８月１２日出願の米国仮出願第６０／６００７８４号の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、併用療法を使用して、肥満、心臓血管疾患、および糖尿病やＸ症候群などのインスリン代謝異常の少なくとも１つを治療する方法に関する。新規な併用療法は、成長分化因子−８（ＧＤＦ−８）の少なくとも１種の阻害剤、および少なくとも１種のその他の治療薬を用いる。
【背景技術】
【０００３】
ミオスタチンとしても知られる成長分化因子−８（ＧＤＦ−８）は、分泌タンパク質であり、また構造上関連ある成長因子のトランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーの構成要素であり、これらの全ては、生理学的に重要な成長調節および形態形成の性質を有する（Ｋｉｎｇｓｌｅｙ他，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．８：１３３〜１４６（１９９４）；Ｈｏｏｄｌｅｓｓ他，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２８：２３５〜２７２（１９９８））。ＴＧＦ−βと同様に、ヒトＧＤＦ−８は、３７５アミノ酸長の前駆タンパク質として合成される。前駆ＧＤＦ−８タンパク質はホモダイマーを形成する。処理中、アミノ末端プロペプチドはＡｒｇ−２６６で切断される。「潜伏関連ペプチド」（ＬＡＰ）として知られる切断されたプロペプチドは、ホモダイマーに対して非共有結合のままであり、それによって複合体を不活性化することができる（Ｍｉｙａｚｏｎｏ他，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：６４０７〜６４１５（１９８８）；Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ他，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：７６４６〜７６５４（１９８８）；Ｂｒｏｗｎ他，Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ３：３５〜４３（１９９０）；およびＴｈｉｅｓ他，Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  １８：２５１〜２５９（２００１））。成熟ＧＤＦ−８とプロペプチドとの複合体を、一般に、「小潜在複合体（ｓｍａｌｌ  ｌａｔｅｎｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＳＬＣ）」と呼ぶ（Ｇｅｎｔｒｙ他，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９：６８５１〜６８５７（１９９０）；Ｄｅｒｙｎｃｋ他，Ｎａｔｕｒｅ，３１６：７０１〜７０５（１９９５）；およびＭａｓｓａｇｕｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：５９７〜６４１（１９９０））。その他のタンパク質も成熟ＧＤＦ−８に結合し、その生物活性を阻害することが知られている。そのような阻害タンパク質には、フォリスタチンおよびフォリスタチン関連タンパク質が含まれる（Ｇａｍｅｒ他，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，２０８：２２２〜２３２（１９９９））。
【０００４】
様々な種からの推定されるアミノ酸配列のアライメントは、ＧＤＦ−８がその進化の全体を通して高度に保存されることを実証している（ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：１２４５７〜１２４６１（１９９７））。実際に、ヒト、マウス、ラット、ブタ、およびニワトリのＧＤＦ−８の配列は、Ｃ末端領域で１００％同一であり、一方、ヒヒ、ウシ、およびヒツジの場合は３つ以下のアミノ酸が異なっている。ゼブラフィッシュＧＤＦ−８が最も異なっているが、それでもヒトに対して８８％が同一である。
【０００５】
高度な保存は、ＧＤＦ−８が必須の機能を有することを示唆している。ＧＤＦ−８は、発育中および成体の骨格筋で高度に発現し、筋肉および骨形成における極めて重要な生物学的プロセスの調節に関与することがわかった。例えば、ＧＤＦ−８ノックアウトトランスジェニックマウスは、骨格筋の著しい肥大および過形成（ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ他，Ｎａｔｕｒｅ  ３８７：８３〜９０（１９９７））と、変性した皮質骨構造（Ｈａｍｒｉｃｋ他，Ｂｏｎｅ  ２７：３４３〜３４９（２０００））とを特徴とする。同様に、骨格筋の質量の増加は、ウシにおけるＧＤＦ−８の天然に生ずる変異で明らかである（Ａｓｈｍｏｒｅ他，Ｇｒｏｗｔｈ，３８：５０１〜５０７（１９７４）；Ｓｗａｔｌａｎｄ他，Ｊ．Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．３８：７５２〜７５７（１９９４）；ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：１２４５７〜１２４６１（１９９７）；およびＫａｍｂａｄｕｒ他，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．７：９１０〜９１５（１９９７））。研究は、ＨＩＶ感染に関連した筋萎縮が、ＧＤＦ−８発現の増加を伴うことを示していた（Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｃａｄａｖｉｄ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５：１４９３８〜１４９４３（１９９８））。ＧＤＦ−８は、筋特異的酵素（例えばクレアチンキナーゼ）の生成および筋芽細胞の増殖（ＷＯ  ００／４３７８１）にも関係する。その成長調節および形態形成の性質に加えて、ＧＤＦ−８は、２型糖尿病の発症におけるグルコースホメオスタシス、耐糖能異常、代謝症候群（例えばＸ症候群）、火傷や窒素不均衡などの外傷により誘発されたインスリン抵抗症候群、および脂肪組織障害（例えば肥満）を含めたその他の生理学的プロセスのいくつかにも関わると考えられる（Ｋｉｍ  他，ＢＢＲＣ  ２８１：９０２〜９０６（２００１））。
【０００６】
その他の研究は、脂質生成およびグルコースホメオスタシスにおけるＧＤＦ−８の役割を広げている。例えば、マウスへのＧＤＦ−８分泌腫瘍細胞の注射によって、その血糖値が増加し（高血糖症）、その体重および筋肉質量が低下する。またＧＤＦ−８は、ＧＬＵＴ４のインスリン誘発性発現も阻止し、前脂肪細胞のインスリン媒介性分化も阻止する。まとめると、ＧＤＦ−８の研究は、ＧＤＦ−８の阻害によって血糖および体脂肪が減少し、グルコースのインスリン媒介性輸送が増加することが示唆され、即ちこの状態は、２型糖尿病またはＸ症候群、あるいはグルコースヘモスタシスに関わるその他の症候群に罹っておりまたは最終的にはこれらの症候群になる患者の利益になり得る。
【０００７】
肥満、心臓血管疾患、および／または糖尿病および／またはＸ症候群などのインスリン代謝障害は、いくつかの異なる療法を使用して治療してきた。これらの療法は、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、スルホニル尿素剤、抗脂血剤、ビグアニド剤、チアゾリジンジオン剤、インスリン、α−グルコシダーゼ阻害剤、およびアルドースレダクターゼ阻害剤を含むが、全ての療法が、記述される全ての疾患および障害の治療に認められているとは限らない。これらの療法は、いずれもＧＤＦ−８に関係していない様々なメカニズムによって作用する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、有効量のＧＤＦ−８を少なくとも１種のその他の治療薬と併せて投与することによって、肥満と、心臓血管疾患と、糖尿病およびＸ症候群を含めたインスリン代謝障害との少なくとも１つを治療する方法に関する。
【０００９】
肥満と、心臓血管疾患と、糖尿病やＸ症候群などのインスリン代謝障害との少なくとも１つは、これらの標的とされた症候群を治療するその他の治療薬と組み合わせたＧＤＦ−８の阻害剤で治療することができる。この治療の手法を、併用療法と呼ぶ。グルコース輸送を刺激する薬剤（例えばインスリン、スルホニル尿素剤、ビグアニド剤、チアゾリジンジオン剤）、血糖を制御する薬剤（例えばα−グルコシダーゼ阻害剤）、心臓血管の健康を改善する薬剤（例えば抗脂血剤およびＡＣＥ阻害剤）、眼および神経における毒性ソルビトール生成を低下させる薬剤（例えばアルドースレダクターゼ阻害剤）を含む様々なその他の療法が、これら標的とされた症候群に関連した種々の原因および疾患を治療するのに使用されている。したがって本発明の主な目的は、ＧＤＦ−８阻害剤と、標的とされた症候群を治療する少なくとも１種のその他の治療薬とを組み合わせて使用した、肥満と、心臓血管疾患と、糖尿病やＸ症候群などのインスリン代謝障害との少なくとも１つのための、併用療法の形をとる改善された治療を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の１つの目的は、対象に、治療上有効な量のＧＤＦ−８阻害剤と、治療上有効な量の、標的とされた症候群を治療する少なくとも１種のその他の治療薬とを投与することを含む、対象の肥満、心臓血管疾患、およびインスリン代謝障害の少なくとも１つを治療する方法を作り出すことである。
【００１１】
本発明の別の目的は、対象に、治療上有効な量のＧＤＦ−８阻害剤と、治療上有効な量の、標的とされた症候群を治療する少なくとも１種のその他の治療薬とを投与することを含む、対象の肥満、心臓血管疾患、およびインスリン代謝障害の少なくとも１つを治療するための医薬組成物を生成することである。
【００１２】
本発明の追加の目的および利点は、その一部については以下の記述で示し、一部についてはその記述から明らかになるであろうし、または本発明の実施によって学ぶことができる。本発明の目的および利点は、添付の特許請求の範囲で特に指摘された要素および組合せによって、理解されかつ実現されるであろう。
【００１３】
前述の全体的な記述および以下の詳細な記述の両方は、単に例示的および説明的なものであり、特許請求の範囲で主張されるように、本発明を限定するものではないことを理解すべきである。
【００１４】
本明細書に組み込まれ本明細書の一部を構成する添付図面は、その説明と一緒に、本発明の原理を説明するのに役立つ。
【００１５】
配列の簡単な説明
【００１６】
【表１】
2008509927.tif 000002
【００１７】
【表２】
2008509927.tif 000003
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
Ｉ．定義
本発明をより容易に理解することができるように、ある用語について最初に定義する。追加の定義は、詳細な説明の全体を通して示す。
【００１９】
「抗体」という用語は、免疫グロブリンまたはその断片を指し、抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。この用語は、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多特異性、非特異性、ヒト化、ヒト、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異、移植、および生体外生成抗体を含むが、これらに限定するものではない。前に「無傷」という用語がない限り、「抗体」という用語は、ＦａｂやＦ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、および抗体結合機能を保持するその他の抗体断片などの抗体断片を含む。典型的な場合、そのような断片は、抗原結合を含むと考えられる。
【００２０】
「有効量」という用語は、併用療法を使用して、肥満、心臓血管疾患、および糖尿病やＸ症候群などのインスリン代謝障害の少なくとも１つに罹っている個体の臨床症状を回復させるのにまたは所望の生物学的結果を実現するのに十分な、投薬または量を指す。
【００２１】
「ＧＤＦ−８」という用語は、特定の成長分化因子−８を指し、適切な場合には、構造的または機能的にＧＤＦ−８に関係する因子、例えばＢＭＰ−１１およびＴＧＦ−βスーパーファミリーに属するその他の因子を指す。この用語は、完全長未処理前駆形態のＧＤＦ−８、ならびに翻訳後切断から得られる成熟およびプロペプチド形態を指す。この用語は、本明細書で論じられるように、修飾された配列を含む成熟ＧＤＦ−８に関連した少なくともいくつかの生物活性を維持するＧＤＦ−８の任意の断片および変種も指す。成熟ヒトＧＤＦ−８のアミノ酸配列は、配列番号１で示される。本発明は、ヒト、ウシ、ニワトリ、マウス、ラット、ブタ、ヒツジ、シチメンチョウ、ヒヒ、および魚を含むがこれらに限定することのない、全ての脊椎動物種からのＧＤＦ−８に関する（配列情報に関しては、例えばＭｃＰｈｅｒｒｏｎ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：１２４５７〜１２４６１（１９９７）参照）。
【００２２】
「ＧＤＦ−８阻害剤」という用語は、ＧＤＦ−８の活性、発現、プロセッシング、または分泌を阻害することが可能な任意の薬剤、あるいは医薬上許容されるその誘導体を含む。そのような阻害剤には、ＧＤＦ−８に対する抗体（Ｍｙｏ−２９やＭｙｏ−２８、Ｍｙｏ−２２、およびＪＡ−１６など）や、ＧＤＦ−８受容体に対する抗体、修飾された可溶性受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合などの受容体融合を含む）、ＧＤＦ−８に結合するその他のタンパク質（ＧＤＦ−８プロペプチドやＧＤＦ−８プロペプチドの変異体、フォリスタチン、フォリスタチン−含有タンパク質、およびこれらタンパク質のＦｃ融合など）、ＧＤＦ−８受容体に結合するタンパク質およびこれらタンパク質のＦｃ融合、および前述の全ての模倣体などの、ＧＤＦ−８阻害剤が含まれる。非タンパク質様阻害剤（核酸など）も、ＧＤＦ−８阻害剤という用語に包含される。そのような阻害剤は、活性ＧＤＦ−８タンパク質に関連した生理学的成長調節または形態形成活性の少なくとも１つを「阻害し」、「中和し」、または「低下させる」と言われる。例えばＧＤＦ−８は、血糖値を上昇させる可能性があり（高血糖症）、あるいは体重または筋肉質量を低下させる可能性がある。ＧＤＦ−８は、ＧＬＵＴ４のインスリン誘導性発現も阻止し、前脂肪細胞のインスリン媒介性分化を阻止する。活性の低下は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上でよい。
【００２３】
「特異的結合」という用語は、ＧＤＦ−８阻害剤という文脈で使用する場合、阻害剤が少なくとも１つのＧＤＦ−８抗原に結合することを意味する。この用語は、例えば抗体またはその他の阻害剤の抗原結合ドメインが、いくつかの抗原上に示される特定のエピトープに特異的である場合に適用可能であり、抗原結合ドメインを保持する特異的結合阻害剤は、エピトープを保持する様々な抗原に結合することができる。典型的な場合、結合は、親和定数Ｋａが１０８Ｍ−１よりも高い場合に特異的であると考えられる。抗体またはその他の阻害剤は、適切に選択された条件下でそのような結合が十分に阻害されず、それと同時に非特異的結合が阻害される場合、抗原に「特異的に結合する」と言われる。
【００２４】
「高度にストリンジェントな」または「高ストリンジェンシー」という用語は、核酸−核酸相互作用を決定するのに使用されるハイブリダイゼーションおよび洗浄のための状態について述べている。そのような状態は当業者に知られており、例えば、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，”Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．６．３．１〜６．３．６（１９８９）に見出すことができる。当技術分野で記述されるように、水性および非水性の両方の状態を使用することができる。高度にストリンジェントはハイブリダイゼーション条件の一例は、約４５℃の６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でハイブリダイゼーションした後、少なくとも１回、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で５０℃で洗浄することである。高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の第２の例は、約４５℃の６×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーションした後、少なくとも１回、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で５５℃で洗浄することである。高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、約４５℃の６×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーションした後、少なくとも１回、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で６０℃で洗浄することである。高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、約４５℃の６×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーションした後、少なくとも１回、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で６５℃で洗浄することである。高度にストリンジェントな条件には、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中で、６５℃でハイブリダイゼーションした後に、少なくとも１回、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で６５℃で洗浄することが含まれる。
【００２５】
「中程度にストリンジェントな」または「中程度のストリンジェンシー」ハイブリダイゼーションという文言は、核酸と、この核酸に対して少なくとも約６０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％同一であり、またはこの核酸に対して少なくとも約９０％同一である相補核酸とを結合させる条件を指す。中程度にストリンジェントな条件は、例えば５０％ホルムアミド、５×デンハート液、５×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で、４２℃でハイブリダイゼーションした後に、０．２×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で６５℃で洗浄することを含むが、これに限定するものではない（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ他，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）参照）。
【００２６】
「実質的に同一」または「実質的に類似」という文言は、本発明のＧＤＦ−８阻害剤の場合のような関連あるアミノ酸またはヌクレオチド配列が、開示される配列に対して同一でありまたは開示される配列と比べて非実質的な相違（保存アミノ酸置換を通して）を有することを意味する。本発明のヌクレオチドおよびポリペプチドは、例えば、開示される核酸分子およびポリペプチドに対して、配列が少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるものを含む。
【００２７】
ポリペプチドの場合、少なくとも２０、３０、５０、１００、またはそれ以上のアミノ酸について、元のポリペプチドと、この元のポリペプチドに実質的に同一な変種ポリペプチドとの間で比較する。核酸の場合、少なくとも５０、１００、１５０、３００、またはそれ以上のヌクレオチドについて、元の核酸と、この元の核酸に実質的に同一な変種核酸との間で比較する。したがって、ある変種は、１つまたは複数の領域で実質的に同一であるがその他の領域では異なっており、それでも依然として「実質的に同一」の定義を満たす。２つの配列間の同一性％は、例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ他，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０（１９９０）に記載されているＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）や、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ他，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４〜４５３（１９７０）のアルゴリズム、またはＭｅｙｅｒｓ他，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１〜１７（１９８８）のアルゴリズムなどの、標準的なアライメントアルゴリズムによって決定される。
【００２８】
「治療」という用語は、治療または予防の手段を指す。治療は、障害または再発する障害の１つまたは複数の症状を予防し、治癒させ、遅延させ、その重症度を低下させ、または回復させるために、あるいはそのような治療がない場合に予想されるよりも長く対象を生存させるために、医学的障害を有しまたは最終的に障害を持つ可能性のある対象に施すことができる。
【００２９】
「標的とされる症候群」という用語は、本明細書に開示される方法および組合せによって治療される、肥満、心臓血管疾患、およびインスリン代謝障害の少なくとも１つを指す。
【００３０】
心臓血管障害の例には、冠動脈疾患（アテローム性動脈硬化症）、狭心症（急性狭心症および不安定狭心症を含む）、心臓発作、卒中（虚血性卒中を含む）、心臓血管疾患、冠動脈疾患、高血圧症関連の心臓血管疾患、冠動脈疾患、高血圧症、高脂血症、末梢動脈疾患、および末梢血管疾患が含まれる。インスリン代謝障害の例には、２型糖尿病、Ｘ症候群、耐糖能異常、火傷や窒素不均衡などの外傷によって誘発されるインスリン抵抗性、代謝症候群、糖尿病前症、耐糖能異常、および異脂肪血症が含まれる。
【００３１】
「治療薬」という用語は、医学的障害を治療しまたは治療を補助する物質である。
【００３２】
本明細書で使用する、ＧＤＦ−８阻害剤および治療薬の「治療上有効な量」は、障害または再発する障害の少なくとも１つを治療し、予防し、治癒させ、遅延させ、その重症度を低下させ、回復させ、またはそのような治療がない場合に予想されるよりも長く対象を生存させる際、対象（ヒト患者など）に１回または複数回投与したときに有効な量を指す。
【００３３】
「変種」という用語は、提供されたＧＤＦ−８阻害剤（ならびにＧＤＦ−８そのもの）のヌクレオチドおよびアミノ酸配列に対してそれぞれ実質的に同一または類似のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を指す。変種は、天然に生ずることができ、例えば天然に生ずるヒトおよび非ヒトヌクレオチド配列であり、または人工的に生成することができる。変種の例は、３’および５’スプライス変種の両方を含むｍＲＮＡの選択的スプライシング、点変異およびその他の変異、またはタンパク質のタンパク質分解性切断から得られるものである。変種は、核酸分子またはその断片とアミノ酸配列およびその断片とであって、その他の核酸（または適切な挿入または欠失に合わせて最適に配列させた場合のその相補鎖）またはアミノ酸配列にそれぞれ実質的に同一でありまたは類似するものを含む。一実施形態では、本発明の核酸分子またはタンパク質と別の核酸分子またはタンパク質との間では、最適に整列させた場合、それぞれ少なくとも約５０％同一、少なくとも約５５％同一、少なくとも約６０％同一、少なくとも約６５％同一、少なくとも約７０％同一、少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一である。さらに変種は、本出願で論じられるように、ＧＤＦ−８活性を示しまたはＧＤＦ−８活性を阻害するタンパク質またはポリペプチドを含む。
【００３４】
ＩＩ．ＧＤＦ−８阻害剤
ＧＤＦ−８阻害剤は、肥満、心臓血管疾患、および糖尿病やＸ症候群などのインスリン代謝障害の治療に有用である。これらの阻害剤の使用は、本発明の併用療法で特に有用である。ＧＤＦ−８阻害剤には、抗体（ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−８受容体に対する）、修飾された可溶性受容体、その他のタンパク質（ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−８受容体に結合するものを含む）、プロペプチド、ペプチド、およびこれら阻害剤の全ての模倣体が含まれる。非タンパク質様阻害剤には、例えば核酸が含まれる。
【００３５】
ＧＤＦ−８とＡｃｔＲＩＩＢ（ＧＤＦ−８受容体）との結合を阻止する阻害剤は、ＡｃｔＲＩＩＢアッセイを使用して試験することができる。ＧＤＦ−８は、ＥＺ−結合スルホ−ＮＨＳ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，Ｃａｔ．Ｎｏ．２１２１７）が２０モルとＧＤＦ−８が１モルという比で、氷上で２時間、ビオチニル化することができる。反応は、０．５％ＴＦＡを使用してｐＨを低下させることにより終了させることができ、複合体を、Ｃ４Ｊｕｐｉｔｅｒ２５０×４．６ｍｍカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）上でクロマトグラフィにかけて、成熟ＧＤＦ−８をＧＤＦ−８プロペプチドから分離することができる。ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮで溶出したビオチニル化成熟ＧＤＦ−８画分を溜め、濃縮し、ＭｉｃｒｏＢＣＡタンパク質アッセイ試薬キット（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，Ｃａｔ．Ｎｏ．２３２３５）により定量した。
【００３６】
組換えＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３３９−ＲＢ／ＣＦ）は、４℃で一晩、０．２Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液中１μｇ／ｍｌで、９６ウェル平底アッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ，ＮＹ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３５９０）に被覆することができる。次いでプレートを、１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンで遮断し、標準的なＥＬＩＳＡプロトコルに従って洗浄することができる。様々な濃度（１０ｎｇ／ｍｌなど）のビオチニル化ＧＤＦ−８の一定分量１００μｌを、ＧＤＦ−８阻害剤と共にまたはこの阻害剤無しで（１０−１１Ｍから１０−７Ｍに及ぶ濃度など）、遮断されたＥＬＩＳＡプレートに添加し、１時間インキュベートし、洗浄し、結合したＧＤＦ−８の量をストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＳＡ−ＨＲＰ，ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，Ｃａｔ．Ｎｏ．１３０４７Ｅ）により検出し、その後、ＴＭＢ（ＫＰＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，Ｃａｔ．Ｎｏ．５０−７６−０４）を添加することができる。比色測定を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓマイクロプレートリーダで、４５０ｎＭで行うことができる。
【００３７】
本発明の阻害剤は、レポーター遺伝子アッセイを使用して試験をすることもできる。Ｔｈｉｅｓ他，Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  １８：２５１〜２５９（２００１）を参照されたい。例えば、ＧＤＦ−８の活性を実証するために、ルシフェラーゼを発現するレポーターベクターｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２を使用したレポーター遺伝子アッセイ（ＲＧＡ）が開発されている。ＣＡＧＡ配列は、ＴＧＦ−β誘発遺伝子ＰＡＩ−１のプロモーター内のＴＧＦ−β応答配列であることが、以前報告された（Ｄｅｎｎｅｒ他，ＥＭＢＯ  Ｊ．１７：３０９１〜３１００（１９９８））。
【００３８】
１２個のＣＡＧＡボックスを含有するレポーターベクターは、塩基性ルシフェラーゼレポータープラスミドｐＧＬ３（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して作製される。ＴＡＴＡボックスおよびアデノウイルス主後期プロモーターからの転写開始部位（−３５／＋１０）を、ＢＧＩＩＩ部位とＨｉｎｄＩＩＩ部位との間に挿入する。ＣＡＧＡボックスＡＧＣＣＡＧＡＣＡの１２の反復単位を含有するオリゴヌクレオチドをアニールし、ＸｈｏＩ部位にクローニングする。次いでヒトラブドミオサルコーマ細胞系Ａ２０４（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−８２）を、ＦｕＧＥＮＥ６トランスフェクション試薬（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｈｅｉｍ，ドイツ）を使用して、ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２で一時的にトランスフェクトする。トランスフェクションの後、細胞を、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン、１００μｇ／ｍｌペニシリン、および１０％ウシ胎児血清が補われたＭｃＣｏｙの５Ａ培地４８ウェルプレート上で１６時間培養する。次いで細胞を、グルタミン、ストレプトマイシン、ペニシリン、および１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを含むＭｃＣｏｙの５Ａ培地中で、３７℃で６時間、阻害剤のタイプに依存する試験を行うために１０ｎｇ／ｍｌのＧＤＦ−８でまたはこのＧＤＦ−８無しで、かつ様々な濃度ＧＤＦ−８阻害剤でまたはこの阻害剤無しで処理する。阻害剤の濃度は、例えば、約５０ｎＭから５０μＭまでの中から選択される。例示的な濃度には、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、５μＭ、１０μＭ、および５０μＭのＧＤＦ−８阻害剤が含まれる。ルシフェラーゼは、ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、処理された細胞内で定量することができる。ＧＤＦ−８活性のそのようなアッセイは、ＧＤＦ−８阻害剤が効果的に機能するかどうかを実証することになる。
【００３９】
Ｐａｒｋ他，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０４：８１５〜８１９（２００１）に記載されている肥満Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病ラットなどの動物をベースにした試験を使用することができる。肥満Ｚｕｃｋｅｒラットは、過体重、インスリン抵抗性、高インスリン血症、および中度高血糖症によって特徴付けられ、２型糖尿病の十分に確立されたモデルである。例えば、８から９週齢の肥満Ｚｕｃｋｅｒラットを糖尿病モデルとして使用し、１１から１４週齢の痩せたＺｕｃｋｅｒラットを対照として使用する。本発明の併用療法は、評価されることが求められる治療計画に従ってラットに施すことができる。次いで研究者等は、例えば血液の化学作用および形態の変化を経時的に追跡して、ＧＤＦ−８阻害剤の有効性を評価する。
【００４０】
Ａ．ＧＤＦ−８阻害剤
ＧＤＦ−８の活性を遮断することができるＧＤＦ−８阻害剤は、本発明で有用である。そのような阻害剤は、ＧＤＦ−８そのものと相互に作用することができる。あるいは阻害剤は、例えば、ＧＤＦ−８受容体（ＡｃｔＲＩＩＢなど）またはその他の結合パートナーと相互に作用することができる。阻害剤は、ＧＤＦ−８とその受容体との結合、および／またはＧＤＦ−８の結合後の受容体活性を低下させまたは阻止することができる。阻害剤は、当然ながら、ＧＤＦ−８およびその受容体などの第２の要素の両方と、相互に作用することができる。これに関して、ＧＤＦ−８阻害剤には、抗体（ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−８受容体）、修飾された可溶性受容体、その他のタンパク質（ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−８受容体と結合するものを含む）、修飾形態のＧＤＦ−８またはその断片、プロペプチド、ペプチド、およびこれら阻害剤の全ての模倣体が含まれる。非タンパク質様阻害剤には、例えば核酸が含まれる。
【００４１】
本発明のＧＤＦ−８阻害剤は、症状の重症度および疾患の進行に応じて、約１μｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与することができる。適切な有効用量は、下記の範囲、例えば約１μｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／約１ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／約１ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約１００μｇ／ｋｇ、約１００μｇから約１ｍｇ／ｋｇ、および約５００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの範囲から、治療臨床医によって選択される。ＧＤＦ−８阻害剤は、局所、経口、静脈内、腹膜内、筋肉内、腔内、皮下、または経皮手段を介して投与することができる。
【００４２】
当業者なら、任意のタンパク質の配列中のあるアミノ酸を、そのタンパク質の活性に悪影響を及ぼすことなく、他のアミノ酸の代わりに用いることができることが理解されよう。したがって、本発明のＧＤＦ−８阻害剤の配列のアミノ酸配列、またはそのようなＧＤＦ−８阻害剤をコード化するＤＮＡ配列には、その生物活性または有用性に目に見える損失を与えることなく様々な変化を加えることができると考えられる。そのような変化には、欠失、挿入、切断、および置換を含めることができるが、これらに限定するものではない。
【００４３】
ＧＤＦ−８阻害剤は、所望によりグリコシル化され、ペグ化され、または別の非タンパク質様ポリマーに結合される。本発明のＧＤＦ−８阻害剤は、変性グリコシル化パターンを有するように（即ち元のまたは天然のグリコシル化パターンから変性される）修飾することができる。本明細書で使用する「変性」は、元の阻害剤と比較した場合、添加されまたは欠失した１つまたは複数の炭水化物部分を有すること、および／または添加されまたは欠失した１つまたは複数のグリコシル化部位を有することを意味する。ＧＤＦ−８阻害剤へのグリコシル化部位の付加は、当技術分野で周知のグリコシル化部位コンセンサス配列が含有されるようにアミノ酸配列を変化させることによって実現することができる。炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、グリコシドと阻害剤のアミノ酸残基との化学結合または酵素結合による。これらの方法は、ＷＯ  ８７／０５３３０およびＡｐｌｉｎ他，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：２５９〜３０６（１９８１）に記載されている。受容体上に存在する炭水化物部分の除去は、Ｓｏｊｅｒ他，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２〜５７（１９８７）；Ｅｄｇｅ他，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１〜１３７（１９８１）；およびＴｈｏｔａｋｕｒａ他，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０〜３５９（１９８７）に記載されるように、化学的にまたは酵素作用によって実現することができる。
【００４４】
本発明のＧＤＦ−８阻害剤は、検出可能なまたは機能的な標識で標識してもよい。検出可能な標識には、当技術分野で知られている従来の化学作用を使用してＧＤＦ−８阻害剤に結合させることができる、１３１Ｉや９９Ｔｃなどの放射能標識が含まれる。標識には、ホースラディッシュペルオキシダーゼやアルカリホスファターゼなどの酵素標識も含まれる。標識にはさらに、特定の同種の検出可能な部分、例えば標識されたアビジンとの結合を介して検出することができる、ビオチンなどの化学部分が含まれる。
【００４５】
１．抗体
ＧＤＦ−８活性を阻害する抗体は、本発明の範囲内である。抗体は、例えば、伝統的なハイブリドーマ技法（Ｋｏｈｌｅｒ他，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９９（１９７５））、組換えＤＮＡ法（米国特許第４８１６５６７号）、または抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ技法（Ｃｌａｃｋｓｏｎ他，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ他，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７（１９９１））によって作製することができる。様々なその他の抗体生成技法については、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ他編，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）；およびＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，第２版，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ編，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（１９９５）を参照されたい。抗体は、完全にまたは部分的にヒトまたはヒト化されてよい。ある実施形態では、抗体は、後続のセクションで記述されるように、変性または変異Ｆｃ領域を有することができる。
【００４６】
本明細書で述べる併用療法で使用される抗体の親和性は、モル当たり１０６とモル当たり１０１１との間でよく、モル当たり１０８とモル当たり１０１０との間でよい。ある場合には、抗体は、例えばＡｃｔＲＩＩＢ結合の阻害およびレポーター遺伝子アッセイによって実証されるように、生体外および／または生体内でＧＤＦ−８活性を阻害することができる。開示される抗体は、骨格筋質量および骨密度の負の調節に関連したＧＤＦ−８活性を阻害することができる。ＧＤＦ−８配列に対する抗体は、例えば米国特許第５８２７７３３号および第６０９６５０６号で論じられている。
【００４７】
ａ．ＧＤＦ−８に対する抗体
上述の方法によれば、ＧＤＦ−８タンパク質そのものに結合する抗体を発生させることができる。これらの抗体は、ＧＤＦ−８の活性を阻害する場合、例えばＧＤＦ−８とその受容体との結合を阻止する場合に、本発明で有効になる。本発明で最も有効な抗体は、ＧＤＦ−８またはＧＤＦ−８／ＧＤＦ−８受容体の複合体に特異的に結合する性質を有することになる。そのような抗体は、高親和性を有する成熟ＧＤＦ−８を結合することが可能と考えられ、モノマー形態で、活性ダイマー形態で、かつ／またはＧＤＦ−８潜伏複合体の一部として、成熟タンパク質を結合することができる。
【００４８】
ｉ．Ｍｙｏ−２９、Ｍｙｏ−２８、およびＭｙｏ−２２
その関連ある部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００４／０１４２３８２−Ａ１号（出願第１０／６８８９２５号）に記載されているＭｙｏ−２９、Ｍｙｏ−２８、およびＭｙｏ−２２抗体は、本発明の方法で使用することができる。これらの抗体は、高親和性の成熟ＧＤＦ−８を結合し、例えばＡｃｔＲＩＩＢ結合の阻害およびレポーター遺伝子アッセイによって実証されるようにＧＤＦ−８活性を生体外および生体内で阻害し、骨格筋質量および骨密度の負の調節に関連したＧＤＦ−８活性を阻害することが可能である。
【００４９】
Ｍｙｏ−２９、Ｍｙｏ−２８、およびＭｙｏ−２２抗体、それらのｓｃＦｖ断片、ＶＨおよびＶＬドメイン、およびＣＤＲの例示的なＤＮＡおよびアミノ酸（ＡＡ）配列を配列表に示し、表１に示されるように列挙する。ＶＨおよびＶＬドメインを除く重鎖および軽鎖の配列は、Ｍｙｏ−２９、Ｍｙｏ２８、およびＭｙｏ２２と同一である。
【００５０】
ｉｉ．ＪＡ−１６
その両方の関連部分が参照により本明細書に援用されるＷｈｉｔｔｅｍｏｒｅ他，Ｂｉｏｃｈ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３００：９６５〜９７１（２００３）ならびに米国特許公開第２００３／０１３８４２２−Ａ１号（出願第１０／２５３５３２号）に、さらに詳述されるＪＡ−１６抗体は、配列番号１に示される成熟ＧＤＦ−８タンパク質に結合する。
【００５１】
ｂ．ＧＤＦ−８受容体に対する抗体
上述の方法によれば、ＧＤＦ−８受容体に結合する抗体を発生させることができる。これらの抗体は、ＧＤＦ−８とその受容体との結合を阻止する場合、またはＧＤＦ−８の結合後に受容体の活性を阻止する場合に、本発明で有用になる。抗体は、受容体タンパク質全体に対して、または細胞外ドメインだけに対して発生させることができる。抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＢ変種、およびＧＤＦ−８に対するその他の受容体に対して発生させることができる（例えば、米国特許公開第２００４／０２２３９６６−Ａ１号；米国特許公開第２００４／００７７０５３−Ａ１号；ＷＯ  ００／４３７８１参照）。
【００５２】
２．修飾可溶性受容体
ＧＤＦ−８の修飾可溶性受容体を、本発明で使用することができる。可溶性受容体は、ＡｃｔＲＩＩＢなどの、ＧＤＦ−８受容体の細胞外ドメインの全てまたは一部を含むことができる。細胞外ドメインの記述を含むＡｃｔＲＩＩＢ受容体、この受容体の特定の断片および変種の配列は、例えば、米国特許第６６５６４７５号に記載されている。さらなるＧＤＦ−８受容体の構造的および機能的特性に関しては、米国特許第６６９６２６０号および米国特許公開第２００４／００７７０５３−Ａ１号も参照されたい。
【００５３】
そのような受容体は、組換えによって、あるいは無傷の受容体の化学的なまたは酵素作用による切断によって、生成することができる。本発明の修飾可溶性受容体は、血流中でＧＤＦ−８を結合し、このＧＤＦ−８が体内の未変性ＧＤＦ−８受容体と結合する能力を低下させることになる。そのような方法で、これらの修飾可溶性受容体は、ＧＤＦ−８活性を阻害する。
【００５４】
ａ．受容体融合
本発明の修飾可溶性受容体は、別のタンパク質または別タンパク質の一部に融合することによって、より安定にすることができる。高い安定性は、より低い用量でまたは頻度の少ない間隔で投与することができるので、治療に有利である。免疫グロブリンの少なくとも一部、例えば抗体の定常領域など、即ち所望により疫グロブリンのＦｃ断片との融合は、修飾可溶性受容体または本発明のその他のタンパク質の安定性を高めることができる（例えば、Ｓｐｉｅｋｅｒｍａｎｎ他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９６：３０３〜３１０（２００２）参照）。
【００５５】
ｉ．ＡｃｔＲＩＩＢ  Ｆｃ融合
その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００４／０２２３９６６−Ａ１号（出願第１０／６８９６７７号）にさらに詳述されるＡｃｔＲＩＩＢ  Ｆｃ融合阻害剤は、ＧＤＦ−８に結合しその活性を生体外および生体内で阻害する修飾アクチビンＩＩ型受容体ＡｃｔＲＩＩＢからなる。特に、ＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドは、骨格筋質量および骨密度の負の調節に関連するＧＤＦ−８活性を阻害する。本明細書に記述されるＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドは、可溶性であり、治療の用途に適したものにする薬物動態特性を有し、例えば、循環半減期が延長され、かつ／またはタンパク質分解による劣化に対する保護が改善される。
【００５６】
本発明の組成物および方法で使用されるＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインから得られる第１のアミノ酸配列と、安定部分または第２のアミノ酸配列、例えば抗体の定常領域から得られる配列などを含む。ＡｃｔＲＩＩＢ融合タンパク質の特定の例示的な実施形態の、完全アミノ酸およびＤＮＡ配列を、配列番号６０および配列番号６１にそれぞれ示す。
【００５７】
第１のアミノ酸配列は、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインの全てまたは一部から得られ、ＧＤＦ−８に特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、そのようなＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインの一部を、ＢＭＰ−１１および／またはアクチビン、あるいはその他の成長因子に結合してもよい。ある実施形態では、第１のアミノ酸配列は、アミノ酸（ａａ）２３あたりからａａ１３８あたりまで配列番号６０と同一または配列番号６０に実質的に示される通りであり、あるいはａａ１９あたりからａａ１４４あたりまで配列番号６２と同一または配列番号６２に実質的に示される通りである。配列番号６２と配列番号６０との相違は、配列番号６２のａａ６４がＡｌａであるのに対し、対応する配列番号６０のａａ６８がＡｒｇであることである。さらに、ＡｃｔＲＩＩＢの配列中のその他の変異が可能であり、例えば配列番号６２のａａ１６およびａａ１７は、それぞれＣｙｓおよびＡｌａで置換することができる。いくつかのその他の実施形態では、第１のアミノ酸配列は、配列番号６０のａａ２３あたりからａａ１３８あたりまで、または配列番号６２のａａ１９あたりからａａ１４４あたりまで、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、または１２０の隣接するアミノ酸を含む。そのような配列は、切断された配列がＧＤＦ−８に特異的に結合することが可能である限り、切断することができる。
【００５８】
第２のアミノ酸配列は、抗体の定常領域、特にＦｃ部分から得られ、またはそのような配列の変異である。いくつかの実施形態では、第２のアミノ酸配列は、ＩｇＧのＦｃ部分から得られる。関連する実施形態では、Ｆｃ部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、または別のＩｇＧイソタイプであるＩｇＧから得られる。特定の実施形態では、第２のアミノ酸配列は、配列番号６０に示されるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（アミノ酸１４８から３７８）を含み、このヒトＩｇＧ１のＦｃ部分は、Ｆｃ部分のエフェクター機能が最小限に抑えられるように修飾されたものである。そのような修飾には、Ｆｃ受容体結合などのエフェクター機能を変化させる可能性のある特定のアミノ酸残基の変化（Ｌｕｎｄ他，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１４７：２６５７〜２６６２（１９９１）およびＭｏｒｇａｎ他，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６：３１９〜３２４（１９９５））、または定常領域がそこから得られる化学種の変化が含まれる。抗体は、重鎖のＣＨ２領域中に、エフェクター機能、即ちＦｃ受容体結合および補体活性化を低下させる変異を有することができる。例えば抗体は、米国特許第５６２４８２１号および第５６４８２６０号に記載されるような変異を有することができる。例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２重鎖では、そのような変異を、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２の完全長配列中のアミノ酸２３４から２３７に対応するアミノ酸残基で作製することができる。抗体は、Ａｎｇａｌ他，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５〜１０８（１９９３）に開示されているように、ＩｇＧ４のヒンジ領域中の変異など、免疫グロブリンの２つの重鎖間のジスルフィド結合を安定させる変異を有することもできる。
【００５９】
ある実施形態では、第２のアミノ酸配列は、リンカー配列によって結合されまたは結合しない状態で、第１のアミノ酸配列のＣ末端またはＮ末端に結合する。リンカーの正確な長さおよび配列と、結合した配列に対するその向きは、様々でよい。リンカーは、例えば（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）２（配列番号６３）でよい。リンカーは、２、１０、２０、３０、またはそれ以上のアミノ酸を含むことができ、溶解度、長さおよび立体分離、免疫原性などの所望の性質に基づいて選択される。ある実施形態では、リンカーは、エンテロキナーゼ切断部位Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号６４）などのタンパク質分解切断部位の配列、あるいは例えば融合タンパク質の精製、検出、または修飾に有用なその他の機能的配列を含むことができる。
【００６０】
３．その他のタンパク質
ＧＤＦ−８活性を阻害するその他のタンパク質は、本発明の組成物および方法に使用することができる。そのようなタンパク質は、ＧＤＦ−８そのものと相互に作用して、その活性またはその受容体との結合を阻害することができる。あるいは阻害剤は、ＧＤＦ−８受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ）と相互に作用することができ、ＧＤＦ−８とその受容体との結合を阻害する場合、またはＧＤＦ−８の結合後に受容体の活性を阻止する場合に、組成物または方法に役立てることができる。阻害剤は、当然ながら、ＧＤＦ−８とその受容体との両方と相互に作用することができる。阻害剤は、成熟ＧＤＦ−８に結合しかつその活性を阻害する、プロペプチドを切断するメタロプロテアーゼを阻害するなど、その他の方法でＧＤＦ−８活性に影響を及ぼすこともできる（例えば米国特許公開第２００４／０１３８１１８−Ａ１号参照）。
【００６１】
ａ．ＧＤＦ−８とのタンパク質結合
ＧＤＦ−８に結合しかつその活性を阻害する（またはその受容体に結合する）タンパク質は、本発明の組成物および方法での使用に受け入れられる。いくつかのタンパク質が知られているが、追加のタンパク質を、上述のスクリーニング技法、ＡｃｔＲＩＩＢ結合アッセイ、またはレポーター遺伝子アッセイを使用して単離することができる。タンパク質のサンプルは、タンパク質のライブラリーと同様にスクリーニングすることができる。
【００６２】
ｉ．ＧＤＦ−８プロペプチド
ＧＤＦ−８プロペプチドは、ＧＤＦ−８の阻害剤として使用することができる。天然に生ずるＧＤＦ−８プロペプチドは、短い生体内半減期を有し、それによって、ＧＤＦ−８活性の薬理学的阻害剤としてのプロペプチドの有効性が低下するので、ＧＤＦ−８プロペプチド阻害剤は、薬物動態特性が改善された、特に循環半減期が改善された、修飾され安定化したＧＤＦ−８プロペプチドを含む。その関係ある部分が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００３／０１０４４０６−Ａ１号を参照されたい。
【００６３】
そのような修飾ＧＤＦプロペプチドは、ＧＤＦプロペプチドおよびＩｇＧ分子のＦｃ領域を含む（安定化タンパク質として）融合タンパク質を含む。これらのＧＤＦ阻害剤は、ＧＤＦプロペプチド（例えば配列番号５または１１で述べたように）、あるいはＧＤＦプロペプチドの１つまたは複数の生物活性を保持する前記プロペプチドの断片または変種を含むことができる。本発明で使用されるＧＤＦ−８プロペプチドは、合成により生成することができ、天然に生ずる（未変性の）ＧＤＦ−８プロペプチドから得ることができ、あるいは、遺伝子工学の分野で周知の様々な試薬、宿主細胞、および方法使用する組換えによって生成することができる。一実施形態では、修飾ＧＤＦ−８プロペプチドは、ＩｇＧ分子またはその断片に共有結合したヒトＧＤＦ−８プロペプチドを含む。ＧＤＦ−８プロペプチドは、ＩｇＩ分子のＦｃ領域に直接結合することができ、またはリンカーペプチドを介してＩｇＧ分子のＦｃ領域に結合することができる。ＧＤＦ−８のプロペプチドを含めたＧＤＦ−８に結合するその他のタンパク質は、ＷＯ  ００／４３７８１に示されている。
【００６４】
ｉｉｉ．フォリスタチンおよびフォリスタチン−ドメイン含有タンパク質
少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含むタンパク質は、成長分化因子−８（ＧＤＦ−８）のレベルまたは活性を調節し、ＧＤＦ−８のレベルまたは活性の調節に関する障害を治療するのに使用することができる。フォリスタチンそのものおよびフォリスタチンドメイン含有タンパク質の両方（その両方の関連ある部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００３／０１６２７１４−Ａ１号および第２００３／０１８０３０６−Ａ１号（出願第１０／３６９７３６号および第１０／３６９７３８号）に記載されている）は、本発明の組成物および方法で使用することができる。
【００６５】
少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含有するタンパク質は、ＧＤＦ−８に結合し阻害する。少なくとも１つのフォリスタチンドメインを有するタンパク質の例には、フォリスタチン、フォリスタチン様関連遺伝子（ＦＬＲＧ）、ＦＲＰ（ｆｌｉｋ、ｔｓｃ３６）、アグリン、オステオネクチン（ＳＰＡＲＣ、ＢＭ４０）、ヘビン（ＳＣ１、ｍａｓｔ９、ＱＲ１）、ＩＧＦＢＰ７（ｍａｃ２５）、およびＵ１９８７８が含まれるが、これらに限定するものではない。ＧＡＳＰ１およびＧＡＳＰ２は、少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含むタンパク質のその他の例である。
【００６６】
上述のフォリスタチンドメインは、システインリッチな反復単位を特徴とする、アミノ酸ドメインまたはアミノ酸ドメインをコード化するヌクレオチドドメインと定義される。フォリスタチンドメインは、典型的には６５〜９０アミノ酸スパンを包含し、１０個の保存システイン残基と、Ｋａｚａｌセリンプロテアーゼ阻害剤ドメインに類似した領域を含有する。一般に、システイン残基間のループ領域は、フォリスタチンドメイン内の配列のばらつきを示すが、いくらかの保存は明らかである。第４と第５のシステイン間のループは、通常は小さく、１または２アミノ酸しか含有しない。第７と第８のシステイン間のループ内のアミノ酸は、一般に最も高度に保存され、（Ｇ，Ａ）−（Ｓ，Ｎ）−（Ｓ，Ｎ，Ｔ）−（Ｄ，Ｎ）−（Ｇ，Ｎ）のコンセンサス配列の後に（Ｔ，Ｓ）−Ｙモチーフが続くものを含有している。第９と第１０のシステイン間の領域は、一般に、別のアミノ酸によって切り離された２つの疎水性残基（特にＶ、Ｉ、またはＬ）を含有するモチーフを含有する。
【００６７】
フォリスタチンドメイン含有タンパク質は、少なくとも１つであるが可能なら複数のフォリスタチンドメインを含むことになる。この用語は、未変性タンパク質に関連した既知の生物活性を維持するようなタンパク質の任意の変種（断片；置換、付加、または欠失変異を有するタンパク質；および融合タンパク質を含む）、特に、ＧＤＦ−８結合活性に関与するものであって、アミノ酸配列に対して保存または非保存変化で修飾された配列も指す。これらのタンパク質は、天然または合成の任意の供給源から得ることができる。タンパク質は、ヒトでよく、またはウシ、ニワトリ、マウス、ラット、ブタ、ヒツジ、シチメンチョウ、ヒヒ、および魚を含めた動物源から得ることができる。
【００６８】
ＧＤＦ−８に結合することができる、少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含むタンパク質は、様々な方法を使用して単離することができる。例えば、ＧＤＦ−８を使用したアフィニティー精製を使用することができる。さらに、ｃＤＮＡライブラリーの低ストリンジェンシースクリーニングを使用することができ、またはフォリスタチンドメインに向けたプローブを使用した縮重ＰＣＲ技法を使用することができる。ゲノムデータがより利用可能になるにつれて、ＭｏｔｉｆＳｅａｒｃｈ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）やＰｒｏｆｉｌｅＳｅａｒｃｈ（ＧＣＧ）、ＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ）などのいくつかの配列プロファイリングおよび分析プログラムを使用した類似性検索を使用することにより、既知のフォリスタチンドメインに対して著しい相同性を有する新規なタンパク質を見出すことが可能になる。
【００６９】
当業者なら、少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含むＧＤＦ−８またはタンパク質、ならびに本明細書に記載されるその他のタンパク質は、この生物学的性質を変化させることなく、このそれぞれのアミノ酸配列に対して任意の数の保存変化を含むことができることを理解するであろう。そのような保存アミノ酸修飾は、アミノ酸鎖置換の相対的な類似性、例えばその疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づいている。様々な前述の特徴が考慮される例示的な保存置換は、当業者に周知であり、アルギニンおよびリジン；グルタメートおよびアスパルテート；セリンおよびトレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；バリン、ロイシン、およびイソロイシンが含まれる。さらに、少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含むタンパク質を使用して、少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含む機能的断片を生成することができる。そのような断片は、ＧＤＦ−８に結合し阻害することが予想される。本発明の実施形態では、少なくとも１つのフォリスタチンドメインを含むタンパク質は、それがモノマー形態であろうと、活性ダイマー形態であろうと、またはＧＤＦ−８潜在複合体であろうと、０．００１から１００ｎＭの間、または０．０１から１０ｎＭの間、または０．１から１ｎＭの間の親和性で、成熟ＧＤＦ−８またはその断片に特異的に結合する。
【００７０】
ｂ．ＧＤＦ−８受容体とのタンパク質結合
ＧＤＦ−８受容体（ＡｃｔＲＩＩＢなど）に結合し、ＧＤＦ−８と受容体との結合または受容体そのものの活性を阻害するタンパク質は、本発明の範囲内での使用に受け入れられる。そのようなタンパク質は、スクリーニング技法および上述のＡｃｔＲＩＩＢ結合アッセイまたはレポーター遺伝子アッセイを使用して単離することができる。タンパク質のサンプルは、タンパク質のライプラリーと同様にスクリーニングすることができる。
【００７１】
ｃ．ＧＤＦ−８またはＧＤＦ−８受容体に結合するタンパク質のいずれかとの融合
ＧＤＦ−８またはＧＤＦ−８受容体に結合するタンパク質のいずれかの融合タンパク質は、別のタンパク質または別のタンパク質の一部と融合することによって、より安定にすることができる。安定性の増大は、より低い用量またはそれほど頻度の高くない間隔で投与することができるので、療法に有利である。免疫グロブリンの少なくとも一部、例えば定常領域などであって、所望により免疫グロブリンのＦｃ断片との融合は、これらタンパク質の安定性を増大させることができる。そのような融合タンパク質の調製は、当技術分野で周知であり、容易に実施することができる（例えば、Ｓｐｉｅｋｅｒｍａｎｎ他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９６：３０３〜３１０（２００２）参照）。
【００７２】
その関連ある部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００３／０１０４４０６−Ａ１号（出願第１０／０７１４９９号）に、より詳細に記述されているＧＤＦ−８プロペプチドＦｃ融合阻害剤は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域またはその断片に共有結合したＧＤＦ−８前駆タンパク質のアミノ末端ドメインから切断されたポリペプチドを含む。
【００７３】
ＧＤＦ−８プロペプチドＦｃ融合阻害剤は、ヒトＧＤＦ−８プロペプチドまたはＧＤＦ−８プロペプチドの変異体と、ＩｇＧ１（配列番号６６）、ＩｇＧ４、または低下したエフェクター機能用に修飾されたＩｇＧ１（配列番号６７）のＦｃ領域を含む。ＧＤＦ−８プロペプチドは、修飾を安定化させることを含むように修飾することができる。
【００７４】
ＧＤＦ−８プロペプチド阻害剤のそれぞれは、治療上有効な量で投与することができる。本明細書で使用するＧＤＦ−８プロペプチド阻害剤の「有効量」は、骨格筋質量の増加など所望の生物学的結果を実現させるため、ＧＤＦ−８タンパク質の活性を低下させるのに十分な投薬量である。一般に、治療上有効な量は、対象の年齢、体重、身体状態、および性別、ならびに対象の医学的状態の重症度に応じて変化してよい。投薬量は、医師により決定することができ、必要に応じて観察される治療効果に適合するよう調節することができる。組成物は、約５０μｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、例えば約５０μｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、および約５ｍｇ／から約１０ｍｇ／ｋｇなどの用量で与えることができる。ＧＤＦ−８プロペプチド阻害剤は、投薬後の最長時間にわたってＧＤＦ−８プロペプチドの循環レベルを最大限にするために、大量瞬時用量として与えることができる。
【００７５】
ｄ．ＧＤＦ−８小潜伏複合体のプロテアーゼ活性の阻害剤
ＧＤＦ−８小潜伏複合体のプロテアーゼ活性の阻害剤は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００４／０１３８１１８−Ａ１号（出願第１０／６６２４３８号）に記載されている。あるプロテアーゼは、遊離形態でまたは成熟ＧＤＦ−８ダイマーに結合したときにプロペプチドを切断し、それによって成熟ＧＤＦ−８ダイマーに結合できないように、かつこのダイマーの活性が阻害されないようにする。したがって、プロテアーゼは、小潜伏複合体（プロペプチドに結合し、プロペプチドによって阻害される成熟ＧＤＦ−８）を、活性ＧＤＦ−８に変換することができる。プロペプチドが切断されると、成熟ＧＤＦ−８ダイマーに結合することができず、このダイマーを不活性化することができない。ＧＤＦ−８小潜伏複合体のプロテアーゼ活性化の阻害剤は、成熟ＧＤＦ−８ダイマーとのプロペプチド結合を高め、ＧＤＦ−８活性を阻害することになる。これらの阻害剤は、プロテアーゼに競合的に結合して、未変性の小潜伏複合体に結合するのを防ぐことができ、またはこれらの阻害剤は、成熟ＧＤＦ−８ダイマーにも結合して、不活性でありかつ所望によりプロテアーゼ切断に対して抵抗することができる、阻害剤−成熟ダイマーの複合体を生成することができる。
【００７６】
メタロプロテアーゼは、４種の哺乳類タンパク質、即ちそれぞれが参照により本明細書に組み込まれるＢＭＰ−１（Ｗｏｚｎｅｙ他，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：１５２８〜１５３４（１９８８））；哺乳類Ｔｏｌｌｏｉｄ（ｍＴＬＤ）（Ｔａｋａｈａｒａ他，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３２５７２〜３２５７８（１９９４））；哺乳類Ｔｏｌｌｏｄ−ｌｉｋｅ−１（ｍＴＬＬ−１）（Ｔａｋａｈａｒａ他，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３４：１５７〜１６５（１９９６））；および哺乳類Ｔｏｌｌｏｉｄ−ｌｉｋｅ−２（ｍＴＬＬ−２）（Ｓｃｏｔｔ他，Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．２１３：２８３〜３００（１９９９））を含む、メタロプロテアーゼのＢＭＰ−１／ＴＬＤファミリーによって例示される。
【００７７】
メタロプロテアーゼのＢＭＰ−１／ＴＬＤファミリーは、より大きいタンパク質ファミリー、即ちアスタシンファミリーの構成要素であり、例えば、アフリカツメガエル（Ｘｏｌｌｏｉｄ；ＵＶＳ．２）、魚（コリオリシンＨおよびＬ；ゼブラフィッシュＴｏｌｌｏｉｄ）、ウニ（ＢＰ−１０およびＳｐＡＮ）、およびヒドラ（ＨＭＰ−１；例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬｉ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ９３：５１２７〜５１３０（１９９６）参照）を含めた様々な脊椎動物および非脊椎動物で発現するプロテアーゼが含まれる。
【００７８】
ＧＤＦ−８小潜在複合体のプロテアーゼ活性の阻害剤は、本発明による障害の治療に使用することができる。様々なメタロプロテアーゼ阻害剤ＧＤＦ−８調節剤は、抗体、核酸、およびペプチドベースの薬剤も含めて米国特許公開第２００４／０１３８１１８−Ａ１号に記載されている。メタロプロテアーゼ活性を阻害する薬剤は、例えば、ペプチド、ペプチドヒドロキサメートやホスフィン酸ペプチドなどのペプチド誘導体、またはペプトイドを含めた任意のタイプの分子を含むことができ、例えば、米国特許公開第２００４／０１３８１１８−Ａ１号のスクリーニングアッセイを通して同定することができる（米国特許公開第２００５／００４３２３２−Ａ１号も参照）。
【００７９】
ＧＤＦ−８小潜在複合体のプロテアーゼ活性を阻害する特定の薬剤は、メタロプロテアーゼ酵素を得ようとしてプロペプチドＧＤＦ−８と競合するペプチドを含む。これらのペプチドは、プロペプチドの一部、プロペプチド部分を含有する完全長ＧＤＦ−８ポリペプチドの一部、またはメタロプロテアーゼに関する切断部位の変異を有するＧＤＦ−８ポリペプチドの誘導体を含むことができる。一実施形態では、ＧＤＦ−８のペプチド部分の誘導体は、ＧＤＦ−８プロペプチドに対応するペプチドである。この実施形態の一態様では、誘導体は、メタロプロテアーゼ切断部位の変異、例えばアミノ酸の置換、欠失、または挿入を、このメタロプロテアーゼがペプチド剤に対して切断活性を変化させた切断部位に、またはそのような切断部位に十分近接して有するプロペプチドである。一態様では、メタロプロテアーゼ切断に抵抗する薬剤は、メタロプロテアーゼで媒介されるＧＤＦ−８活性を阻害しまたは調節する。この実施形態の別の態様では、ＧＤＦ−８のペプチド部分の誘導体は、１つまたは複数のＤ−アミノ酸および／またはＬ−アミノ酸；および／または１つまたは複数のアミノ酸類似体、例えば誘導体化されまたはその他の方法でその反応性側鎖またはそのペプチド結合が修飾されたアミノ酸を含有することができるペプチド剤である。誘導体または修飾ペプチドは、プロテアーゼ、酸化剤、またはペプチドが生物学的環境で遭遇する可能性のあるその他の反応性材料に対して、改善された安定性を有することができる。
【００８０】
天然に生ずるプロペプチドのメタロプロテアーゼ切断を調節する薬剤は、第２の分子に動作可能に結合することができ、それによって薬剤の動作または活性が促進し、薬剤の生物学的局在性が変化し、または特定の環境における薬剤の安定性が増す。例えばペプチド剤は、このペプチド剤を、異種ペプチドなどのポリペプチドに動作可能に結合させることによって安定化させることができる。例えば、抗体分子のＦｃドメインに結合することができ、それによって生体内でのペプチド剤の半減期が延びる。
【００８１】
メタロプロテアーゼ酵素に対する遮断抗体も、本発明で使用することができ、当技術分野で知られている技法によって容易に生成することができる。
【００８２】
ペプチド剤は、その長さが１０、２０、３０、４０、または５０アミノ酸残基であって野生型または変異体配列を含有するもの、あるいはその誘導体でよい。例えば、Ｐ１位置（切断部位のまさに上流）またはＰ１’位置（切断部位のまさに下流）に１つまたは複数のアミノ酸変化を有するペプチドは、変化させることができる。Ｐ１’位置でのアスパラギン酸からアラニンへの置換を、野生型ＧＤＦ−８プロペプチド配列に関連する長さが１０、２０、３０、４０、および５０アミノ酸の一連のペプチドで試験した。さらに、Ｐ１位置でアルギニンからグルタミンへの置換を有するペプチドは、野生型ＧＤＦ−８プロペプチド配列のように、生体外または生体内阻害剤に役立てることができる。特に、プロテアーゼ切断に対して高い安定性および／または抵抗力を有する変性および誘導体ペプチド剤が、考えられる。
【００８３】
メタロプロテアーゼ酵素の個々のペプチド阻害剤には、
（１）
ＫＤＶＩＲＱＬＬＰＫＡＰＰＬＲＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＡＤＳＳＤＧＳＬＥＤＤＤＹＨＡＴＴＥＴＩＩＴＭＰＴ  （配列番号６８）；
ＱＬＬＰＫＡＰＰＬＲＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＡＤＳＳＤＧＳＬＥＤＤＤＹＨＡＴＴＥＴＩ  （配列番号６９）；
ＡＰＰＬＲＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＡＤＳＳＤＧＳＬＥＤＤＤＹＨＡ  （配列番号７０）；
ＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＡＤＳＳＤＧＳＬＥＤ  （配列番号７１）；および
ＹＤＶＱＲＡＤＳＳＤ  （配列番号７２）
などの、Ｐ１’位置にアスパラギン酸からアラニンへの置換を有するペプチド、
（２）
ＫＤＶＩＲＱＬＬＰＫＡＰＰＬＲＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＤＤＳＳＤＧＳＬＥＤＤＤＹＨＡＴＴＥＴＩＩＴＭＰＴ  （配列番号７３）；
ＱＬＬＰＫＡＰＰＬＲＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＤＤＳＳＤＧＳＬＥＤＤＤＹＨＡＴＴＥＴＩ  （配列番号７４）
ＡＰＰＬＲＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＤＤＳＳＤＧＳＬＥＤＤＤＹＨＡ  （配列番号７５）；
ＥＬＩＤＱＹＤＶＱＲＤＤＳＳＤＧＳＬＥＤ  （配列番号７６）；および
ＹＤＶＱＲＤＤＳＳＤ  （配列番号７７）
などの、Ｐ１およびＰ１’位置に野生型メタロプロテアーゼ切断配列を有するペプチド
が含まれるが、これらに限定するものではない。
【００８４】
４．ＧＤＦ−８阻害剤の模倣体
本発明のＧＤＦ−８阻害剤の模倣体を、使用することができる。これらＧＤＦ−８阻害剤の任意の合成類似体、特に、より長い半減期を有し、または消化系によってそれほど容易には分解されないような、改善された生体外特性を有するものが有用である。
【００８５】
ＧＤＦ−８に対する抗体の模倣体、ＧＤＦ−８受容体に対する抗体、修飾された可溶性受容体および受容体融合、およびＧＤＦ−８に結合するその他のタンパク質であって、ＧＤＦ−８プロペプチドや変異ＧＤＦ−８プロペプチド、フォリスタチンおよびフォリスタチン−ドメイン含有タンパク質、これらのＦｃ融合などは、全て本発明で使用することができる。
【００８６】
これらの模倣体は、ＧＤＦ−８の活性を阻止する場合、即ちＧＤＦ−８とその受容体との結合を阻止する場合、本発明で有効になる。本発明で最も有効な模倣体は、ＧＤＦ−８またはＧＤＦ−８／ＧＤＦ−８受容体複合体に、特異的に結合する性質を有することになる。そのような模倣体は、高親和性を有する成熟ＧＤＦ−８に結合することが可能であり、モノマー形態であろうと、活性ダイマー形態であろうと、またはＧＤＦ−８潜伏複合体として複合体形成していようと、成熟タンパク質に結合することができる。本発明の模倣体は、例えばＡｃｔＲＩＩＢ結合の阻害およびレポーター遺伝子アッセイによって実証されるように、生体外および生体内のＧＤＦ−８活性を阻害することができる。さらに、開示された模倣体は、骨格筋質量および骨密度の負の調節に関連したＧＤＦ−８活性を阻害することができる。
【００８７】
Ｂ．非タンパク質様阻害剤
非タンパク質様阻害剤は、例えば核酸を含む。
【００８８】
１．核酸
「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、および「核酸」という用語はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を指し、適切な場合には、リボ核酸（ＲＮＡ）、またはペプチド核酸（ＰＮＡ）を指す。この用語は、ヌクレオチド類似体、および１本鎖または２本鎖ポリヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ）も含むと理解すべきである。ポリヌクレオチドの例には、プラスミドＤＮＡまたはその断片、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡなどが含まれるが、これらに限定するものではない。「プラスミドＤＮＡ」という用語は、環状の２本鎖ＤＮＡを指す。本明細書で使用する「アンチセンス」は、配列相補性によってｍＲＮＡのコードおよび／または非コード領域の一部とハイブリダイズし、それによってｍＲＮＡからの翻訳を妨げることが可能な核酸を指す。「ｓｉＲＮＡ」および「ＲＮＡｉ」という用語は、ｍＲＮＡの分解を引き起こすことができ、それによって遺伝子発現をサイレンシングさせる２本鎖ＲＮＡである核酸を指す。典型的な場合、ｓｉＲＮＡは、その長さが少なくとも１５〜５０ヌクレオチドであり、例えばその長さは２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチドである。
【００８９】
ＧＤＦ−８の活性を阻止することができる核酸は、本発明で有用である。そのような阻害剤は、ＧＤＦ−８そのものと相互に作用するタンパク質を、コード化することができる。あるいは、そのような阻害剤は、ＧＤＦ−８受容体（ＡｃｔＲＩＩＢなど）と相互に作用することができるタンパク質をコード化することができ、コード化されたタンパク質がＧＤＦ−８とその受容体との結合を阻止する場合、またはＧＤＦ−８の結合後に受容体の活性を阻止する場合に、本発明に役立てることができる。阻害剤は、当然ながら、ＧＤＦ−８およびその受容体と相互に作用するタンパク質をコード化することができる。そのような核酸は、本発明のＧＤＦ−８阻害剤を発現させるのに使用することができる。
【００９０】
あるいは、アンチセンス核酸を使用して、ＧＤＦ−８またはＧＤＦ−８の受容体（ＡｃｔＲＩＩＢなど）の生成を阻害することができる。アンチセンス配列は、相補的コード配列と相互に作用して機能を低下させることができ、それによって、ＧＤＦ−８またはＧＤＦ−８受容体の生成を阻害するのに役立てることができる。
【００９１】
本発明で使用される核酸は、上述のＡｃｔＲＩＩＢ結合アッセイおよびレポーター遺伝子アッセイを使用して同定することができる。
【００９２】
核酸は、実質的に純粋なまたは均質な形で、その天然の環境から得ることができ、単離することができ、かつ／または精製することができる。様々な異なる宿主細胞でポリペプチドをクローニングし発現させるための系は、周知である。適切な宿主細胞には、細菌、哺乳類細胞、および酵母、およびバキュロウイルス系が含まれる。異種ポリペプチドを発現させるために当技術分野で利用可能な哺乳類細胞系には、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳ０マウスメラノーマ細胞、および多くのその他のものが含まれる。一般的な細菌宿主はイー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。核酸からタンパク質を生成するのに適したその他の細胞に関しては、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｅｄｓ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ他，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９９）を参照されたい。
【００９３】
プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、選択またはマーカー遺伝子、およびその他の配列を必要に応じて含む、適切な調節配列を含有する適切なベクターを、選択しまたは構成することができる。ベクターは、必要に応じてプラスミドまたはウイルス、例えばファージまたはファージミドでよい。さらなる詳細に関しては、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ他，第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照されたい。核酸を処理するための多くの知られている技法およびプロトコル、例えば核酸構成体の調製、ＤＮＡの変異誘発、配列決定、細胞への導入、および遺伝子発現、およびタンパク質の分析は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．Ａｕｓｕｂｅｌ他，第２版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９２）に詳述されている。
【００９４】
核酸は、別のポリペプチド配列、例えばマーカーまたはレポーターとして機能する配列をコード化するその他の配列と融合することができる。マーカーまたはレポーター遺伝子の例には、β−ラクタマーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ（ネオマイシン（Ｇ４１８）抵抗性の原因）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、ヒグロマイシン−Ｂ−ホスホトランスフェラーゼ（ＨＰＨ）、チミジンキナーゼ（ＴＫ）、ｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼをコード化する）、キサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＸＧＰＲＴ）、ルシフェラーゼ、および当技術分野で知られている多くのその他のものが含まれる。
【００９５】
本発明の方法は、免疫応答を高めるために、Ｂ７−Ｈ３の発現を低下させるための短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉ  ＲＮＡ）およびアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用も包含する。ｓｉＲＮＡは、Ｈａｎｎｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：２４４〜２５１（２００２）；ＭｃＭａｎｕｓ他，Ｎａｔ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３：７３７〜７４７（２００２）；Ｈｅａｓｍａｎ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２４３：２０９〜２１４（２００２）；Ｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０８：６４１〜６４４（２００１）；およびＺａｍｏｒｅ，Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，８：７４６〜７５０（２００１）に記載されるような標準的な技法を使用して生成することができる。アンチセンス核酸は、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，第１版，Ｅｄ．Ｃｒｏｏｋｅ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ（２００１）に記載されている標準的な技法を使用して生成することができる。
【００９６】
核酸は、症状の重症度および疾患の進行に応じて、約１μｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの剤形で投与することができる。適切な有効用量は、下記の範囲から、即ち約１μｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇから約１００μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ、および約５００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの範囲から、治療臨床医によって選択される。核酸阻害剤は、局所、経口、静脈内、腹膜内、筋肉内、腔内、皮下、または経皮手段を介して投与することができる。
【００９７】
ＩＩＩ．ＧＤＦ−８阻害剤と組み合わせて使用されるその他の治療薬
Ａ．インスリン
本発明の方法および組合せで有用なインスリンには、即時作用型インスリン、中時間作用型インスリン、長時間作用型インスリン、中時間および即時作用型インスリンの組合せが含まれる。インスリン療法は、身体により生成されないインスリンの代わりになる。即時または短時間作用型と、中時間または長時間作用型のインスリンの組合せは、正常なまたは正常により近いレベル内に血糖値を保つ助けをする。これらの薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００２／０１８７９８０−Ａ１号（出願第１０／１６４２３５号）に、さらに詳述されている。
【００９８】
即時作用型の市販のインスリン製品には、ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）Ｂｒａｎｄ  Ｌｉｓｐｒｏ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（ｒＤＮＡ由来）、ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｒ  Ｒｅｇｕｌａｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｊｅｃｓｉｏｎ、ＵＳＰ［ｒＤＮＡ由来］、ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｒ  Ｒｅｇｕｌａｒ  Ｕ−５００  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ＵＳＰ［ｒＤＮＡ由来］、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．から入手可能なＲＥＧＵＬＡＲ  ＩＬＥＴＩＮ（登録商標）ＩＩ（インスリン注射、ＵＳＰ、精製ポーク）、およびＮＯＶＯＬＩＮ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ＩｎｊｅｃｔｉｏｎおよびＶＥＮＯＳＵＬＩＮ（登録商標）ＢＲ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎであって、それぞれがＮｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なものが含まれる。
【００９９】
本発明で有用な市販の中時間作用型インスリンには、ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）ＬブランドＬＥＮＴＥ（登録商標）ヒトインスリン（組換えＤＮＡ由来）亜鉛懸濁液、ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｎ  ＮＰＨヒトインスリン（組換えＤＮＡ由来）イソファン懸濁液、ＬＥＮＴＥ（登録商標）ＩＬＥＴＩＮ（登録商標）ＩＩインスリン亜鉛懸濁液、ＵＳＰ、精製ポーク、およびＮＰＨ  ＩＬＥＴＩＮ（登録商標）ＩＩイソファンインスリン懸濁液、ＵＳＰ、精製ポーク、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能、ＬＡＮＴＵＳ（登録商標）インスリングラルギン（組換えＤＮＡ由来）注射液、Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能、およびＮＯＶＯＬＩＮ  Ｌ  Ｌｅｎｔｅ（登録商標）ヒトインスリン亜鉛懸濁液（組換えＤＮＡ由来）、およびＮＯＶＯＬＩＮ（登録商標）Ｎ  ＮＰＨヒトインスリンイソファン懸濁液（組換えＤＮＡ由来）製品であって、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙから入手可能なものが含まれるが、これらに限定するものではない。
【０１００】
同様に本発明の方法および処方で有用なものは、ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）Ｍｉｘ  ７５／２５（商標）（インスリンリスプロプロタミン懸濁液７５％およびインスリンリスプロ注射液２５％）やＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）５０／５０（登録商標）（ヒトインスリンイソファン懸濁液５０％およびヒトインスリン注射液５０％）、およびＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）７０／３０（登録商標）（ヒトインスリンイソファン懸濁液７０％およびヒトインスリン注射液３０％）などであって、それぞれがＥｌｉ  Ｌｉｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能である、中時間作用型と即時作用型インスリンの組合せである。また、ＮＯＶＡＬＩＮ（登録商標）７０／３０（７０％ＮＰＨ、ヒトインスリンイソファン懸濁液と、３０％Ｒｅｇｕｌａｒ、ヒトインスリン注射液）系の組合せ製品であって、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能な中時間作用型および即時作用型のインスリンも有用である。
【０１０１】
本発明で使用される、例示的な市販の長時間作用型インスリンは、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能なＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｕ  Ｕｌｔｒａｌｅｎｔｅ（登録商標）ヒトインスリン（組換えＤＮＡ由来）持続型亜鉛懸濁液である。
【０１０２】
本発明の方法では、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．およびＡｖｅｎｔｉｓ  ＳＡによって開発された、ＥＸＵＢＥＲＡ（登録商標）吸入型インスリン製品などの吸入型インスリン製品も有用である。
【０１０３】
これらのインスリン製品のそれぞれは、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれるＭｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）から出版されている医師用処方薬参考書、第５５版、２００１に、各製品ごとに公表されているような、当技術分野で知られている投与、投薬、および治療計画を使用して医療の専門家が指示するように投与することができる。
【０１０４】
Ｂ．スルホニル尿素剤
スルホニル尿素剤は、膵臓により生成されたインスリンの量を増やす。このスルホニル尿素剤は、インスリン受容体の機能性を増大させ、より多くのインスリン受容体の生成を刺激することによって、全身のインスリン有効性も増大させる。これらの薬剤は、インスリン抵抗性も低下させ、肝臓により作製される糖の量を減少させることができる。
【０１０５】
本発明の方法および組成物で有用なスルホニル尿素剤には、グリピジド、グリブリド（グリベンクラミド）、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、およびグリメプリリド、またはその医薬上許容される塩の形が含まれる。これらの薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００３／００８８６９−Ａ１号（出願第１０／１６３７８３号）に、さらに詳述されている。
【０１０６】
本発明のスルホニル尿素剤は、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）から出版されている医師用処方薬参考書、第５５版、２００１の関連化合物に列挙されるような、当技術分野で知られている用量および治療計画で投与することができる。例えば、Ａｖｅｎｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからＡＭＡＲＹＬ（登録商標）錠剤として入手可能なグリメピリドは、成人において、１日当たり約１から約２ｍｇの初期日用量で与えることができる。この投薬量は、１日当たり約８ｍｇまで徐々に増やすことができるが、通常の維持用量は、１日当たり約２から４ｍｇの間である。グリブリドは、Ａｖｅｎｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからＤＩＡβＥＴＡ（登録商標）錠剤として入手可能であり、１日当たり約２．５から約５ｍｇに及ぶ初期用量を有し、通常の維持用量は、１日当たり約１．２５から約２０ｍｇである。クロルプロパミドは、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．からＤＩＡＢＩＮＥＳＥ（登録商標）錠剤として入手可能であり、ヒトにおいては、レシピエントの個々の特徴に応じて約１００から約５００ｍｇの日用量を有することができる。グリピジドは、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．からＧＬＵＣＯＴＲＯＬ（登録商標）錠剤およびＧＬＵＣＯＴＲＯＬ  ＸＬ（登録商標）持続放出錠剤として市販されている。約２．５から約５ｍｇの初期日用量で投与することができ、１日当たり約１５から４０ｍｇの間の維持用量になるまで２．５から５ｍｇずつ増やすことができる。トラザミンは、一般に、１日当たり約１００ｍｇから５００ｍｇの間の日用量で投与され、平均維持用量は、１日当たり約２５０ｍｇから５００ｍｇの間であり、これを毎日１回、または１日のうちに複数回に分けて摂取する。２５０ｍｇから５００ｍｇのトラザミド錠剤と、５００ｍｇのトルブタミド錠剤は、Ｍｙｌａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．，Ｍｏｒｇａｎｔｏｗｎ，ＷＶ，米国から入手可能である。
【０１０７】
Ｃ．ビグアニド剤
ビグアニド剤は、糖新生の際に肝臓から生成される糖の量を減少させることによって、血糖を低下させる。ビグアニド剤は、筋肉細胞により吸収される糖の量も増やし、インスリン抵抗性を低下させる。これらの薬剤は、血液中のトリグリセリドレベルを低下させ、ある異常な凝固因子、およびアテローム性動脈硬化症をもたらす可能性のある炎症のマーカーを低下させることができる。
【０１０８】
本発明の方法および組成物に有用なビグアニド剤は、メトホルミンおよびその医薬上許容される塩の形を含む。これらの薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００３／００１８０２８−Ａ１号（出願第１０／１６３７０７号）に、さらに詳述されている。
【０１０９】
方法および組合せで有用な塩酸メトホルミンは、Ｂｒｉｓｔｏｌ  ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂからｍＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）という商標名で、５００ｍｇ、８５０ｍｇ、および１０００ｍｇの錠剤として市販されている。塩酸メトホルミンは、５００ｍｇから約８００ｍｇの初期日用量でヒトに投与することができ、必要に応じて、２５５０ｍｇという最大日用量まで増やすことができる。
【０１１０】
Ｄ．チアゾリジンジオン剤
チアゾリジンジオン剤は、インスリン抵抗性を低下させることによって、体内の細胞がインスリンに応答する方法を改善する。チアゾリジンジオン剤は、悦液中のトリグリセリドを減少させ高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を増やすことによって、高コレステロールの治療を助けることもできる。
【０１１１】
本発明の方法および組成物に有用なチアゾリジンジオン剤は、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾンの限定されない群、あるいはこれら薬剤の医薬上許容される塩の形である。これら薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００２／０１９８２０３−Ａ１号（出願第１０／１６４２３３号）に、さらに詳述されている。これらの薬剤のそれぞれは、当技術分野で知られている方法により生成することができる。これらの薬剤は、これら生成物のそれぞれについて記述する関連部分が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．から出版された医師用処方薬参考書、２００１、第５５版、著作権２００１に記述されるような化合物に関して、当技術分野で知られている医薬品としてまたは治療上有効な投薬または量で投与することもできる。
【０１１２】
ピオグリタゾンは、Ｓｗｉｓｓ  Ｂｉｏｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｌｔｄ．から、１５ｍｇ、３０ｍｇ、および４５ｍｇのＡＣＴＯＳ（登録商標）ブランドの塩酸ピオグリタゾン錠剤の形で入手可能である。ピオグリタゾンおよびその医薬上許容される塩の形は、約１５ｍｇまたは３０ｍｇの初期日用量でヒトに投与することができ、必要に応じて約４５ｍｇという最大日用量まで増やすことができる。
【０１１３】
ロシグリタゾンは、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから、２ｍｇ、４ｍｇ、および８ｍｇのＡＶＡＮＤＩＡ（登録商標）マレイン酸ロシグリタゾン錠剤の形で入手可能である。ロシグリタゾンは、約４ｍｇの初期日用量を単回投与または分割投与によってヒトに投与することができ、必要に応じて、８ｍｇという最大日用量まで増やすことができる。
【０１１４】
Ｅ．α−グルコシダーゼ阻害剤
α−グルコシダーゼ阻害剤は、体内での炭水化物の消化を遅延させ、腸が食物からグルコースを吸収する速度を遅くする。これは、食事の後に血液を通過する糖の量を減少させ、高血糖の期間を妨げる。
【０１１５】
本明細書に記述される本発明の方法および組成物と共に使用することができるα−グルコシダーゼ阻害剤は、ミグリトールまたはアカルボースであり、あるいは、これら化合物の１種または複数の、医薬上許容される塩の形である。これら薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００３／００１３７０９−Ａ１号（出願第１０／１６４２３２号）に、さらに詳述されている。
【０１１６】
アカルボース錠剤は、ＰＲＥＣＯＳＥ（登録商標）という商標名でＢａｙｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能であり、これは、毎日１回から３回に分けて投与される約２５ｍｇの初期用量でヒトに投与することができ、時間と共に、１日当たり３回に分けて投与される約５０から１００ｍｇの範囲まで、増やすことができる。
【０１１７】
２５ｍｇ、５０ｍｇ、および１００ｍｇ用量のミグリトール錠剤は、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  ＵｐｊｏｈｎからＧＬＹＳＥＴ（商標）という商標名で入手可能であり、１日当たり約２５ｍｇの初期用量で投与することができ、必要に応じて、毎日３回に分けて投与される最大用量１００ｍｇまで増やすことができる。
【０１１８】
Ｆ．ＰＴＰａｓｅ阻害剤
タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰａｓｅ）は、広く様々な細胞応答を調節する際に、重要な役割を演ずる多様な分子の大きいファミリーである。ＰＴＰａｓｅファミリーは、３つの主なサブクラス、即ち古典的なＰＴＰａｓｅ、低分子量ＰＴＰａｓｅ、および２重特異性ＰＴＰａｓｅに分割される。古典的なＰＴＰａｓｅは、さらに２つのクラスに分類することができ、即ち細胞内ＰＴＰａｓｅ（例えばＰＴＰ１Ｂ、ＴＣ−ＰＴＰ、ラット脳ＰＴＰａｓｅ、ＳＴＥＰ、ＰＴＰＭＥＧ１、ＰＴＰＨ１、ＰＴＰＤ１、ＰＴＰＤ２、ＦＡＰ−１／ＢＡＳ、ＰＴＰ１Ｃ／ＳＨ−ＰＴＰ１／ＳＨＰ−１、およびＰＴＰ１Ｄ／Ｓｙｐ／ＳＨ−ＰＴＰ２／ＳＨＰ２）と、受容体型ＰＴＰａｓｅ（例えばＣＤ４５、ＬＡＲ、ＰＴＰＩ、ＰＴＰε、ＰＴＰΛ、ＰＴＰＭ、ＰＴＰΚ、ＳＡＰ−１、およびＤＲＰ−１）に分類することができる。２重特異性ホスファターゼは、セリン／トレオニンおよびチロシン残基の両方からリン酸基を除去する能力を有する。ＰＴＰファミリーのＰＴＰａｓｅの構成要素は、インスリンシグナル伝達、レプチンシグナル伝達、Ｔ細胞活性化およびＴ細胞媒介性シグナル伝達カスケード、線維芽細胞の増殖、血小板凝集、および骨芽細胞増殖の調節を含めた広く様々な細胞プロセスの、重要なモジュレーターまたはレギュレーターであると意味付けられる。
【０１１９】
あるＰＴＰａｓｅ阻害剤は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第６０／５４７０７１号および第６０／５４７０４９号に詳述されている。その他のＰＴＰａｓｅ阻害剤も同様に、本発明で使用することができる。
【０１２０】
一態様では、ＰＴＰａｓｅ阻害剤は、式（Ｉ）を有する
【０１２１】
【化１】
2008509927.tif 000004
（式中、Ｒ１は、Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、５から６員複素環、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８であり、
Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）ＺＲ４またはＣＮであり、
Ｚは、−Ｏ−または−ＮＲ５−であり、
Ｘは、−Ｏ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＮＲ８−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｃ１〜４アルキレン−、−Ｃ２〜４アルケニレン−、または−Ｃ２〜４アルキニレン−であり、アルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基のいずれかは、所望により１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＨＮ＝、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｒ４、またはＱで置換することができるものであり、
各Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、およびＹ５は、独立に、ＣＲ３、Ｎ、Ｓ、またはＯであり、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、およびＹ５の１つまたは２つは無くすことができるものであり、
各Ｒ３は、独立に、Ｈ、アリール、５から８員ヘテロシクリル、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＱであり、アリール、複素環、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基のいずれかは、所望により１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、Ｒ４、またはＱで置換されるものであり、
各Ｑは、独立に、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−ＯＲ４、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯＯＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｃ（＝Ｎ−ＯＨ）Ｒ４、−ＮＲ４Ｒ５、−Ｎ＋Ｒ４Ｒ５Ｒ６、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−ＮＲ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ４Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−ＳＲ４、−Ｓ（Ｏ）Ｒ４、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ４Ｒ５であり、
各Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１６アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、シクロアルキルＣ１〜６アルキル、５から８員複素環、複素環式Ｃ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ２〜６アルケニル、またはアリールＣ２〜６アルキニルであり、各Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、所望により１つまたは複数のＣ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＯＲ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−ＣＯＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ＋Ｒ７Ｒ８Ｒ９、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＮＲ７Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−ＳＲ７、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８で置換することができるものであり、
各Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、アリール、またはアリールＣ１〜１２アルキルであり、各Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、所望により１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換できるものであり、
環系が１−ベンゾチオフェンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ（Ｏ）ＯＣＨ３ではなく、
環系が１−ベンゾチオフェンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ（Ｏ）ＯＨではなく、
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＯＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣ１〜３アルキルエステルではなく、
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキルであり、Ｘが−ＯＣＨ２−または−ＯＣＨ（ＣＨ３）−である場合、Ｒ２はＣＮではなく、
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＳＣＨ２ＣＨ２−である場合、Ｒ２はＣＮではなく、
環系がチエノ［２，３−ｂ］ピリジンであり、Ｒ１がイソプロピルエステルであり、Ｘが−ＳＣＨ２−である場合、Ｒ２はイソプロピルエステルではない）。
【０１２２】
ある実施形態では、Ｒ１が５または６員複素環である。好ましい５員複素環は、下記の基を含むことができる。
【０１２３】
【化２】
2008509927.tif 000005
【０１２４】
ある実施形態では、Ｒ１およびＲ２が、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキルである。別の態様では、Ｘは、−Ｏ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＮＲ８−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキレン−、または−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキレン−であり、任意のアルキレン基は、所望により１つまたは複数のＦ、Ｃｌ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、ＣＨＯ、またはＱで置換される。ある実施形態では、Ｘは−Ｏ−ＣＨ２−である。別の態様では、縮合複素環がベンゾチオフェンまたはチエノピリジンである。
【０１２５】
式（Ｉ）の化合物は、塩にすることができる。この化合物は、医薬上許容される塩またはそのプロドラッグとして、医薬上許容される賦形剤または担体と併せて医薬組成物に含めてもよい。この化合物は、ＰＴＰ１ＢなどのＰＴＰａｓｅを阻害することができる。
【０１２６】
本発明の別の実施形態では、ＰＴＰａｓｅ阻害剤は、式（ＩＩ）を有する化合物でもよい
【０１２７】
【化３】
2008509927.tif 000006
（式中、Ｒ１は、Ｒ５、ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）Ｒ５またはＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６であり、
Ｒ２は、Ｒ５であり、
Ｘは、−Ｏ−Ｃ１〜３アルキレン、−ＮＲ８−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキレン−、−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキレン−、−Ｃ１〜４アルキレン、−Ｃ２〜４アルケニレン−、またはＣ２〜４アルキニレン−であり、アルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン基のいずれかは、所望により１つまたは複数のハロゲン、オキソ、イミド、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＱで置換することができ、
Ｙは、存在しないか、−Ｏ−または−ＮＲ６−であり、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜４シクロアルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、またはアリールであり、
Ｒ４は、Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄであり、但しＡは、存在しないか、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニルジイル、またはＣ２〜６アルキニルであり、各Ａは、所望によりＣ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＮＯ２、またはＱの１つまたは複数で置換することができ、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基のいずれかは、所望により１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｎ３、またはＱで置換され、各Ａは、所望により１つまたは複数のアリーレン、アルキレン、またはアルケニレンで終結することができ、
Ｂは、存在せず、あるいは−ＮＲ５−、−ＮＲ７−、−Ｎ（Ｒ５）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｒ７）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｒ９）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｎ（Ｒ９）ＳＯ２−、−Ｎ（Ｒ９）ＳＯ２Ｃ（Ｒ１０）（Ｒ１１）−、−Ｎ（Ｒ９）（Ｒ１０）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−、−Ｏ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）−Ｏ−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ（Ｒ９）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｎ（Ｒ９）Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）Ｓ−、−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＳＣ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−、または−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＳＯ２Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−であり、
Ｅは、存在せず、あるいはＣ３〜１２シクロアルキレン、３から１２員ヘテロシクジイル、アリーレン、Ｃ１〜１２アルキレン、Ｃ２〜１２アルケニレン、またはＣ２〜１２アルキニレンであり、但し各Ｅは、所望により１つまたは複数のＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されるものであり、
Ｄは、１つまたは複数のＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、またはＱであり、
Ａ、Ｂ、およびＥが存在せず、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨまたはＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたは塩素である場合、ＤはＨまたは塩素ではなく；Ａ、Ｂ、およびＥが存在せず、Ｒ１がＣ（Ｏ）ＯＨまたはＣ（Ｏ）ＯＣＨ３であり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたは臭素である場合、ＤはＨまたは臭素ではなく、
各Ｑは、独立に、−Ｒ５、−Ｒ７、−ＯＲ５、−ＯＲ７、−ＮＲ５Ｒ６、−ＮＲ５Ｒ７、−Ｎ＋Ｒ５Ｒ６Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｎＲ５、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲ７であり、ｎは０、１、または２であり、
各Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ１〜１２アルコキシＣ１〜１２アルキル、シクロアルキルＣ１〜６アルキル、３から８員ヘテロシクイル、ヘテロシクイルＣ１〜６アルキル、アリール、アリールＣ１〜６アルキル、アリールＣ２〜６アルケニル、またはアリールＣ２〜６アルキニルであり、各Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、所望により１つまたは複数のＲ９、−ＯＲ９−、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ９、−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ９、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−ＳＲ９、−Ｓ（Ｏ）Ｒ９、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−ＮＲ９Ｒ１０、−Ｎ＋Ｒ９Ｒ１０Ｒ１１、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＮＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−ＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＣＦ３、ＯＨ、またはＮＯ２で置換することができ、
Ｒ７は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−Ｓ（Ｏ）Ｒ５、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５Ｒ６であり、
各Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、アリール、またはアリールＣ１〜１２アルキルであり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキル基のいずれかは、所望により１つまたは複数のハロゲン、オキソ、ＣＮ、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換されるものである）。
【０１２８】
ある実施形態では、Ｒ１は、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＣ（Ｏ）ＮＨ２である。その他の実施形態では、Ｒ２は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、またはｔ−ブチルである。ある実施形態では、Ｘは、−Ｏ−Ｃ１〜３アルキル−、−Ｎ−Ｃ１〜３アルキル−、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキル−、−ＳＯ−Ｃ１〜３アルキル−、または−ＳＯ２−Ｃ１〜３アルキル−である。その他の実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、メチル、またはＣＦ３である。
【０１２９】
一実施形態では、Ａは、Ｂで置換されたアリール基であり、さらに所望により、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＱの１つまたは複数で置換することができ、Ｂは、無くすことができ、あるいは、Ｃ１〜Ｃ３アルキルや、Ｃ２〜Ｃ３アルケニル、ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＯＮＨ、ＮＨＳＯ２、ＮＨＳＯ２ＣＨ２、ＮＨＣＨ２、ＮＨＣＨ２ＣＨ２、Ｏ、ＯＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２Ｏ、ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＮＨ、ＣＨ２ＮＨＣＨ２、ＣＨ２Ｓ、ＣＨ２ＳＣＨ２、またはＣＨ２ＳＯ２ＣＨ２などの１〜３原子リンカーにすることができる。
【０１３０】
下記の実施例において、Ｂ−Ｅ−ＤとＡとの接続については、Ａが６員アリール基である場合、Ａとチオフェン環との間の接続に対するメタ位（Ｃ−３またはＣ−５）が好ましいことが示されている。Ａが５員アリール基である場合、Ａとチオフェン環との間に対してＣ−３またはＣ−４位が好ましい。
【０１３１】
【化４】
2008509927.tif 000007
【０１３２】
別の実施形態では、Ｅは、存在せず、あるいはＣ３〜８シクロアルキレン、Ｃ３〜８ヘテロシクジイル、アリーレン、Ｃ１〜６アルキレン、Ｃ２〜６アルケニレン、またはＣ２〜６アルキニレンであり、所望により１つまたは複数のＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２で置換される。ある実施形態では、Ｅは、シクロペントジイル、シクロヘキスジイル、シクロヘプトジイル、ピペリジンジイル、ピペラジンジイル、ピロリジンジイル、テトラヒドロフランジイル、モルホリンジイル、フェニレン、ピリジンジイル、ピリミジンジイル、チオフェンジイル、フランジイル、イミダゾルジイル、ピロルジイル、ベンズイミダゾルジイル、テトラヒドロチオピランジイル、またはテトラヒドロピランジイルにすることができる。
【０１３３】
一実施形態では、Ｄは、１つまたは複数のＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、アリール、またはＱである。ある実施形態では、Ｄは、ＳＯ２Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−ＯＲ７、−ＣＯＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、ピリミジニル、またはピリジニルである。
【０１３４】
式（ＩＩ）の化合物は、塩にすることができる。この化合物は、医薬上許容される塩またはそのプロドラッグとして、医薬上許容される賦形剤または担体と併せて医薬組成物中に含めてもよい。この化合物は、ＰＴＰ１ＢなどのＰＴＰａｓｅを阻害することができる。
【０１３５】
これら化合物の有効な投与は、例えば、約１ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇの日用量で与えることができ、例えば、単回投与、または２回以上に分割した用量で与えることができる。そのような用量は、経口、移植、非経口（静脈内、腹膜内、および皮下注射を含む）、経直腸、経膣、および経皮を含めた、本明細書の活性化合物をレシピエントの血流に向けるのに有用な任意の手法で投与することができる。この開示において、経皮投与は、身体の表面と、上皮および粘膜組織を含んだ身体経路の内層との全体を通した全ての投与を含むと理解される。そのような投与は、本発明の化合物、またはその医薬上許容される塩を、ローション、クリーム、フォーム、パッチ、懸濁液、溶液、および坐薬（経直腸、経膣）にしたものを使用して実施することができる。
【０１３６】
Ｇ．抗脂血剤
本明細書に記述される本発明の方法および組成物で利用することができる、抗高脂血剤としても知られる抗脂血剤は、胆汁酸金属イオン封鎖剤、フィブリック酸誘導体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、およびニコチン酸化合物である。抗脂血剤は、いくつかのメカニズムを通して、血液中のコレステロールおよび脂肪の量を低下させる。例えば胆汁酸金属イオン封鎖剤は、腸内で胆汁酸と結合し、血液中に再吸収されるのを防止する。次いで肝臓が、より多くの胆汁を生成して、失われた胆汁に取って代わる。身体は、胆汁を形成するのにコレステロールを必要とするので、肝臓は血液中のコレステロールを使い果たし、血液中を循環するＬＤＬコレステロールの量が低下する。
【０１３７】
本発明で有用な胆汁酸金属イオン封鎖剤は、コレスチポールおよびコレセベラムと、その医薬上許容される塩の形を含む。本発明と共に使用することができるフィブリック酸誘導体には、クリフォフィブレート、ゲムフィブロジル、およびフェノフィブレートが含まれる。本発明で有用な、スタチンとしても知られるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤には、セリバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、およびシムバスタチン、またはその医薬上許容される塩の形が含まれる。ナイアシンは、本発明の方法と共に使用することができるニコチン酸化合物の例である。オルリスタットなどのリパーゼ阻害剤も有用である。これらの薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００２／０１９８２０２−Ａ１号（出願第１０／１６４２３１号）に、さらに詳述されている。
【０１３８】
本発明で有用な胆汁酸金属イオン封鎖剤には、コレスチポールおよびコレセベラムと、その医薬上許容される塩の形が含まれる。コレスチポールは、１ｍｇ  ＣＯＬＥＳＴＩＤ（登録商標）微粉化塩酸コレスチポール錠剤として、Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎから入手可能であり、その推奨される初期用量は１日当たり約２ｇであるが、必要に応じて１日当たり２から１６ｇまで増やし、これを分割した用量で摂取することができる。塩酸コレセバラムは、６２５ｍｇ  ＷＥＬＣＨＯＬ（登録商標）錠剤として、Ｓａｎｋｙｏ  Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．から入手可能であり、その推奨される開始用量は、食事と共に１日２回３錠であり、または食事と共に１日１回６錠を摂取する。必要に応じて、この投与を１日７錠に増加することができる。錠剤は、液体と共に投与することが推奨される。
【０１３９】
本発明と共に使用することができるフィブリック酸誘導体には、クリフォフィブレート、ゲムフィブロジル、およびフェノフィブレートが含まれる。クリフォフィブレートは、５００ｍｇのＡＴＲＯＭＩＤ−Ｓ（登録商標）カプセルの形でＷｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから市販されており、その推奨される日用量は、分割用量で投与される約２ｇである。ゲムフィブロゾイルは、６００ｍｇのＬＯＰＩＤ（登録商標）錠剤としてＰａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓから入手可能であり、成人に推奨されるその用量は、１日当たり約１２００ｍｇを２回に分けて、朝食前および夕食前の３０分に投与する。フェノフィブレートは、６７ｍｇ、１３４ｍｇ、および２００ｍｇのＴＲＩＣＯＲ（登録商標）錠剤としてＡｂｂｏｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．から入手可能であり、その推奨される初期用量は、１日当たり６７ｍｇから２００ｍｇであり、最大の日用量は、１日当たり２００ｍｇまでである。
【０１４０】
本発明で有用なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤には、セリバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、およびシムバスタチン、または医薬上許容されるこれらの塩の形が含まれる。ＢＡＹＣＯＬ（登録商標）セリバスタチンナトリウム錠剤は、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、および０．８ｍｇの錠剤用量でＢａｙｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能であり、その推奨される開始用量は、１日１回、晩に摂取される４ｍｇであり、維持用量の範囲は、１日当たり０．２ｍｇから０．８ｍｇである。２０ｍｇまたは４０ｍｇのフルバスタチンに相当するフルバスタチンナトリウムを含有するＬＥＳＣＯＬ（登録商標）フルバスタチンナトリウムカプセルは、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能であり、その推奨される開始用量は、１日１回就寝時に摂取される２０ｍｇから４０ｍｇであり、推奨される毎日の維持用量は、２０ｍｇから８０ｍｇであり、日用量８０ｍｇは分割した用量で摂取される。ＬＩＰＴＯＲ（登録商標）アトルバスタチンカルシウム錠剤は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、または８０ｍｇの用量でＰａｒｋｅ  ＤａｖｉｓまたはＰｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．から入手可能であり、その推奨される開始用量は、１日１回摂取される１０ｍｇであり、最終的な用量範囲は、１日１回、１０ｍｇから８０ｍｇである。ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）ロバスタチン錠剤は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、および４０ｍｇ錠剤としてＭｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．から入手可能であり、その推奨される開始用量は、１日１回夕食と共に摂取される２０ｍｇであり、推奨される用量範囲は、単回でまたは２回に分けて投与される１日当たり１０ｍｇから８０ｍｇである。ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）プラバスタチンナトリウム状態は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙから１０ｍｇ、２０ｍｇ、または４０ｍｇの錠剤として入手可能であり、その推奨される開始用量は、１日１回摂取される１０ｍｇ、２０ｍｇ、または４０ｍｇである。ＺＯＣＯＲ（登録商標）シムバスタチン錠剤は、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、または８０ｍｇの用量としてＭｅｒｃｋ＆Ｃｏ．から入手可能であり、その推奨される開始用量は１日当たり２０ｍｇであり、維持用量範囲は１日当たり５ｍｇから８０ｍｇである。
【０１４１】
ナイアシンは、本発明の方法および組成物と共に使用することができるニコチン酸物質の例である。これは、５００ｍｇ、７５０ｍｇ、および１０００ｍｇの持続放出錠剤として、ＮＩＡＳＰＡＮ（登録商標）という商標名でＫｏｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（１００１  Ｂｒｉｃｋｅｌｌ  Ｂａｙ  Ｄｒｉｖｅ，２５ｔｈ  Ｆｌｏｏｒ，Ｍｉａｍｉ，Ｆｌｏｒｉｄａ  ３３１３１）から市販されている。
【０１４２】
オルリスタットは、１２０ｍｇカプセルとして、ＸＥＮＩＣＡＬ（登録商標）という商標名でＲｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なリパーゼ阻害剤である。推奨される用量は、脂肪を含有する主要な食事それぞれの後に、１日３回、１２０ｍｇの錠剤が１錠である。
【０１４３】
Ｈ．アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤
ＡＣＥ阻害剤は、心臓がポンプ送出する血液の量を改善し、血圧を低下させるために、血管を拡張する。ＡＣＥ阻害剤は血流も増大させ、それによって、心臓が行わなければならない動作量を減少させる助けをする。
【０１４４】
本明細書に開示される方法および組成物に有用なＡＣＥ阻害剤には、キナプリル、ラミプリル、ベラパミル、カプトプリル、ジルチアゼム、クロニジン、ヒドロクロルチアジド、ベナゼプリル、プラゾシン、フォシノプリル、リシノプリル、アテノロール、エナラプリル、ペリンドロプリル、ペリンドロプリルｔ−プチルアミン、トランドラプリル、およびモエキシプリル、あるいは、医薬上許容されるこれら化合物の１つまたは複数の塩の形が含まれる。これら薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００３／００５５０５８−Ａ１号（出願第１０／１６３７０４号）に、さらに詳述されている。
【０１４５】
その例には、ＡＣＣＵＰＲＩＬ（登録商標）という商標名でＰａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓから販売されている塩酸キナプリルが含まれ、これは、１日当たり約１０から約２０ｍｇの初期用量でヒトに投与することができ、時間と共に、１日当たり約２０から８０ｍｇの範囲まで増やすことができる。活性成分として１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ−プロリンを含有するカプトプリル錠剤は、２５から５０ｍｇの用量を１日２回または３回投与することができる。ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＬＰからＺＥＳＴＲＩＬ（登録商標）錠剤として入手可能なリシノプリルは、１日当たり約１０ｍｇの用量から開始し、その日用量を約２０から４０ｍｇにまで増やすことができる。ラミプリルは、ＡＬＴＡＣＥ（登録商標）カプセルとして入手可能であり、１日当たり約２．５から約２０ｍｇの通常の維持用量を、単回または分割用量で投与することができる。ベラパミルＨＣｌ錠剤は、Ｇ．Ｄ．Ｓｅａｒｌｅ＆Ｃｏ．からＣＡＬＡＮ（登録商標）という商標名で、４０ｍｇ、８０ｍｇ、および１２０ｍｇの強度で入手可能であり、約４０ｍｇの用量を１日３回投与することから始まり、合計の１日の投与は約４８０ｍｇまで増やすことができる。ジリタゼムＨＣｌカプセルは、ＣＡＲＤＩＺＥＭ（登録商標）という商標名でＡｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能である。
【０１４６】
Ｉ．アルドースレダクターゼ阻害剤
アルドースレダクターゼ阻害剤は、糖尿病に罹っている人間の眼および神経の損傷を予防する。アルドースレダクターゼは、眼に通常存在する酵素であり、グルコースからソルビトールへの代謝を引き起こし、それが眼に損傷を与える可能性がある。アルドースレダクターゼ阻害剤は、このプロセスを遅くする。
【０１４７】
本発明の方法および組成物に有用なアルドースレダクターゼ阻害剤は、当技術分野で知られているものを含む。これらには、
ａ）その内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４９２７８３１号（Ｍａｌａｍａｓ）に開示された、スピロ−イソキノリン−ピロリジンテトロン化合物であって、ＡＲＩ−５０９が含まれかつミナルレスタットまたはスピロ［イソキノリン−４（１Ｈ），３’−ピロリジン］−１，２’，３，５’（２Ｈ）−テトロン，２−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−６−フルオロ−（９Ｃｌ）としても知られるもの；
ｂ）その内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４４５９６１７号の化合物であって、トルレスタットが含まれかつグリシン、Ｎ−［［６−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）−１−ナフタレニル］チオキソメチル］−Ｎ−メチル−（９Ｃｌ）、またはＡＹ−２７７７３としても知られるもの；
ｃ）スピロ［４Ｈ−１−ベンゾピラン−４，４’−イミダゾリジン］−２’，５’−ジオン、６−フルオロ−２，３−ジヒドロ、（４Ｓ）−（９Ｃｌ）、またはＣＰ４５６３４としても知られるソルビニル（登録番号６８３６７−５２−２）；
ｄ）メトソルビニル；
ｅ）１−フタラジン酢酸，３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３−［［５−（トリフルオロメチル）−２−ベンゾチアゾリル］メチル］−（９Ｃｌ）（登録番号１１０７０３−９４−１）であるゾポルレスタット；
ｆ）３−チアゾリジン酢酸，５−［（２Ｅ）−２−メチル−３−フェニル−２−プロペニリデン］−４−オキソ−２−チオキソ−，（５Ｚ）−（９Ｃｌ）（登録番号８２１５９−０９−９）であるエパルレスタット；
ｇ）ゼナレスタット（登録番号１１２７３３−４０−６）、または３−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−７−クロロ−３，４−ジヒドロ−２，４−ジオキソ−１（２Ｈ）−キナゾリン酢酸；
ｈ）２，７−ジフルオロスピロ（９Ｈ−フルオレン−９，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオンとしても知られるイミレスタット；
ｉ）１−フタラジン酢酸，３−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−（９Ｃｌ）であり、スタチル（ＳｔａｔｉｌまたはＳｔａｔｙｌ）としても知られるポナルレスタット（登録番号７２７０２−９５−５）；
ｊ）３−チアゾリジン酢酸，５−［（２Ｅ）−２−メチル−３−フェニル−２−プロペニリデン］−４−オキソ−２−チオキソ−，（５Ｚ）−（９Ｃｌ）であるＯＮＯ−２２３５；
ｋ）｛３−［（４，５，７−トリフルオロベンゾチアゾール−２−イル）メチル］−５−メチルフェニル酢酸であるＧＰ−１４４７；
ｌ）５−（３−エトキシ−４−ペンチルオキシフェニル）−２，４−チアゾリジンジオンであるＣＴ−１１２；
ｍ）グリシン，Ｎ−［（７−フルオロ−９−オキソ−９Ｈ−キサンテン−２−イル）スルホニル］−Ｎ−メチル−（９Ｃｌ）であるＢＡＬ−ＡＲＩ  ８（登録番号１２４０６６−４−６）；
ｎ）２，３−ジヒドロ−２，８−ビス（１−メチルエチル）−３−チオキソ−４Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸、または塩化物の塩の形（４Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸，２，３−ジヒドロ−２，８−ビス（１−メチルエチル）−３−チオキソ−（９Ｃｌ）であるＡＤ−５４６７；
ｏ）（３’，５’−ジメチル−４’−ニトロメチルスルホニル−２−（２−トルイル）アセトアニリド）であるＺＤ５５２２；
ｐ）３，４−ジヒドロ−２，８−ジイソプロピル−３−チオキソ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸；
ｑ）１−［（３−ブロモ−２−ベンゾフラニル）スルホニル］−２，４−イミダゾリジンジオン（Ｍ−１６２０９）：ＮＺ−３１４であって、１−イミダゾリジン酢酸，３−［（３−ニトロフェニル）メチル］−２，４，５−トリオキソ−（９Ｃｌ）であるもの（登録番号１２８０４３−９９−２）；
ｒ）１−フタラジン酢酸，３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３−［［５−トリフルオロメチル］−２−ベンゾチアゾリル］メチル］−；
ｓ）スピロ［４Ｈ−１−ベンゾピラン−４，４’−イミダゾリジン］−２’，５’−ジオン，６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−２−メチル−，（２Ｒ，４Ｓ）−（９Ｃｌ）であるＭ−７９１７５（登録番号１０２９１６−９５−０）；
ｔ）２Ｈ−１，４−ベンゾチアジン−２−酢酸，３，４−ジヒドロ−３−オキソ−４−［（４，５，７−トリフルオロ−２−ベンゾチアゾリル）メチル］−（９Ｃｌ）であるＳＰＲ−２１０；
ｕ）スピロ［ピロリジン−３，６’（５’Ｈ）−ピロロ［１，２，３−ｄｅ］［１，４］ベンゾキサジン］−２，５，５’−トリオン，８’−クロロ−２’，３’−ジヒドロ−（９Ｃｌ）（ＡＤＮ１３８または８−クロロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［ピロリジン−３，６’（５，Ｈ）−ピロロ［１，２，３−ｄｅ］−［１，４］ベンゾキサジン］２，５，５’−トリオンとしても知られる）；
ｖ）６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−２’，５’−ジオキソ−（２Ｓ−ｃｉｓ）−スピロ［４Ｈ−Ｉ−ベンゾピラン−４，４’−イミダゾリジン］−２−カルボキシアミド（ＳＮＫ−８６０としても知られる
という非限定的なリスト、
これらの類似体、および医薬上許容されるこれら化合物の１つまたは複数の塩の形が含まれる。これら薬剤の使用は、その関連部分が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００２／０１９８２０１−Ａ１号（出願第１０／１６４２１４号）に、さらに詳述されている。
【０１４８】
本発明のアルドースレダクターゼ阻害剤の中には、ミナルレスタット、トルレスタット、ソルビニル、メトソルビニル、ゾポルレスタット、エパルレスタット、ゼナレスタット、イミレスタット、およびポナルレスタット、またはその医薬上許容される塩の形がある。
【０１４９】
本発明で有用なアルドースレダクターゼ阻害剤は、当技術分野で知られている投薬量および治療計画で投与することができる。例えば、ミナルレスタット（ＡＲＩ−５０９）は、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約１．０ｍｇ／ｋｇ体重という経口投薬量で投与することができる。トルレスタットは、１日１回の経口用量２００ｍｇ（Ｔｒｏｙ他，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．５１：２７１〜２７７（１９２））、または１日２回で２００ｍｇ（ｖａｎ  Ｇｒｉｅｎｓｖｅｎ他，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．５８：６３１〜６４０（１９９５））を、ヒト患者に投与している。ソルビニルは、日用量５０ｍｇおよび２００ｍｇ（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ他，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ  ７１：１６４〜１６７（１９８５））でヒトに投与している。ゾポルレスタットは、１日当たり５０ｍｇから１２００ｍｇに及ぶ用量でヒトに投与している（Ｉｎｓｋｅｅｐ他，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３４：７６０〜７６６（１９９４））。ゼナルレスタットは、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、および６００ｍｇの用量をヒト患者に投与しており、それぞれ１日２回与えられる（Ｇｒｅｅｎｅ他，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５３：５８０〜５９１（１９９９））。イミレスタットは、１日当たり２ｍｇから５０ｍｇの用量でヒトに投与している（Ｂｒａｚｚｅｌｌ他，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８：１１２〜１１８（１９９１））。ポナルレスタットは、６００ｍｇの日用量でヒトに投与している（Ａｉｒｅｙ他，Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６：８０４〜８０８（１９８９））。
【０１５０】
ＩＶ．併用療法
Ａ．肥満、心臓血管疾患、またはインスリン代謝障害の治療
本明細書で述べる併用療法では、少なくとも１種のＧＤＦ−８阻害剤を、上述の少なくとも１種のその他の治療薬と共に投与する。併用療法は、複数のＧＤＦ−８阻害剤および／または複数の治療薬の組合せを含んでもよい。
【０１５１】
併用療法は、同時にまたは逐次投与することができる。同時投与では、ＧＤＦ−８阻害剤および少なくとも１種の治療薬のそれぞれの、少なくとも１回の用量を、１回または複数回同時に投与することを必要とする。逐次投与は、ＧＤＦ−８阻害剤の大量瞬時投与の後、経時的に少なくとも１種の治療薬の複数回投与を含むことができ、この逐次投与は、両方の化合物の複数回投与を含んでもよい。投薬パターンを変えることによって、所望の治療目的を達成する際の結果を変えることができる。
【０１５２】
Ｂ．併用療法の評価
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトに使用される投薬量の範囲を製剤するのに使用することができる。そのような化合物の投薬量は、毒性が少ししか無いかまたは全く無い、ＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に有る。投薬量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変えることができる。本発明で使用される任意の化合物では、治療上有効な用量を、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。用量は、細胞培養で決定されるように、ＩＣ５０（即ち、症状の最大半量阻害が実現される、１種または複数の試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を実現するために、動物モデルで製剤することができる。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィによって測定することができる。任意の特定の投薬量の作用を、適切なバイオアッセイによってモニタすることができる。適切なバイオアッセイの例には、ＤＮＡ複製アッセイ、転写ベースのアッセイ、ＧＤＦ−８タンパク質／受容体結合アッセイ、クレアチンキナーゼアッセイ、前脂肪細胞の分化に基づいたアッセイ、前脂肪細胞に取り込まれるグルコースに基づいたアッセイ、および免疫学的アッセイが含まれる。
【０１５３】
患者への投与の前に、所与の併用療法を、Ｐａｒｋ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０４：８１５〜８１９（２００１）に記載されている肥満Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病ラットなどの治療動物モデルで評価することができる。肥満Ｚｕｃｋｅｒラットは、過体重、インスリン抵抗性、高インスリン血症、および軽度高血糖症によって特徴付けられ、十分に確立された２型糖尿病モデルである。８から９週齢の肥満Ｚｕｃｋｅｒラットを糖尿病モデルとして使用し、１１から１４週齢の痩せたＺｕｃｋｅｒラットを対照として使用する。併用療法は、評価されることが求められる治療計画の後に、ラットに施すことができる。次いで調査員は、血液の化学作用および形態変化を経時的に追跡して、有効性を評価することができる（Ｐａｒｋ，８１８）。
【０１５４】
任意の所与の患者ではまたは臨床研究の一部として、併用療法の有効性を、血漿ＬＤＬコレステロール濃度、全コレステロール濃度、トリグリセリド濃度、インスリン摂取、血圧、および血糖値を含めたパラメータを使用して測定することができる。そのような試験は、任意の感謝を評価し追跡調査する臨床治療計画の一部として、容易に着手される。併用療法での各治療投薬量は、評価を踏まえて調節することができる。
【実施例】
【０１５５】
（実施例１）
糖尿病を治療するための併用療法
糖尿病の患者を、４週間にわたり毎週１ｍｇ／ｋｇボーラスで投与されるＭｙｏ−２９などのＧＤＦ−８に対する抗体と、１日２回投与される５００ｍｇのメトホルミンとの組合せで治療する。
【０１５６】
（実施例２）
肥満を治療するための併用療法
肥満の患者を、４週間にわたり毎週１ｍｇ／ｋｇボーラスで投与されるＪＡ−１６などのＧＤＦ−８に対する抗体と、１日当たり１０ｍｇ投与されるリピトールとの組合せで治療する。
【０１５７】
（実施例３）
糖尿病を治療するための併用療法
糖尿病の患者を、４週間にわたり毎週１００μｇ／ｋｇで投与されるＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合などの修飾可溶性受容体融合と、１日２回、５０ｍｇが投与されるピオグリタゾンとで治療する。
【０１５８】
（実施例４）
心臓血管疾患を治療するための併用療法
２型糖尿病に２次的なものである心臓血管疾患の患者を、１日２回、６００ｍｇのＬＯＰＩＤと、４週間にわたって毎週５ｍｇ／ｋｇボーラスで投与されるＧＤＦ−８プロペプチドＦｃ融合阻害剤との組合せで治療する。
【０１５９】
（実施例５）
２型糖尿病を治療するための併用療法
４週間にわたって毎週１０ｍｇ／ｋｇボーラスで投与される変異ＧＤＦ−８プロペプチドであって、例えば少なくとも１つのアミノ酸に変異を有し、それによって配列番号６５のＡｓｐ−１９に対応するアスパラギン酸残基でのプロペプチドのタンパク質分解切断が未修飾ＧＤＦ−８プロペプチドに対応する場合に比べて減少しているプロペプチドなどの変異ＧＤＦ−８プロペプチドと、１日当たり１ｍｇのＡＭＡＲＹＬと、必要に応じて摂取されるインスリンとの組合せで、２型糖尿病の患者を治療する。
【０１６０】
本明細書は、本明細書内で引用される参考文献の教示に照らして最も完全に理解される。本明細書内の実施形態は、本発明の実施形態の例示を提供し、本発明の範囲を限定すると解釈すべきではない。当業者なら、多くのその他の実施形態が本発明に包含されることが、容易に理解される。この開示で引用された全ての文献および特許は、その全体を参照により組み込む。参照により組み込まれた資料が本明細書と矛盾しまたは一致していない範囲では、本明細書がそのような全ての資料に取って代わることになる。本明細書のどの参考文献の引用も、そのような参考文献が本発明の従来技術であると認めるものではない。
【０１６１】
他に特に示さない限り、特許請求の範囲を含めた本明細書で使用される、成分の量および反応状態などを表す全ての数は、「約」という用語によって、全ての場合に変更が加えられたと理解すべきである。したがって、反対のことを他に特に示さない限り、数値パラメータは近似であり、本発明によって得られることが求められる所望の性質に応じて変えることができる。最低限でも、また特許請求の範囲に対する均等物の原理の適用を限定しようとするものではないが、各数値パラメータは、有効桁数および丸めの手法に照らして解釈すべきである。
【０１６２】
他に特に示さない限り、一連の要素の前に付く「少なくとも」という用語は、一連の各要素を指すと理解すべきである。当業者なら、本明細書に記載された発明の特定の実施形態の多くの均等物を理解し、または通常の実験しか使用せずに確かめることができよう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【配列表】
2008509927000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成19年4月10日(2007.4.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2008509927000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成19年9月19日(2007.9.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
第１のアミノ酸配列は、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインの全てまたは一部から得られ、ＧＤＦ−８に特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、そのようなＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインの一部を、ＢＭＰ−１１および／またはアクチビン、あるいはその他の成長因子に結合してもよい。ある実施形態では、第１のアミノ酸配列は、アミノ酸（ａａ）２３あたりからａａ１３８あたりまで配列番号６０と同一または配列番号６０に実質的に示される通りであり、あるいはａａ１９あたりからａａ１３４あたりまで配列番号６２と同一または配列番号６２に実質的に示される通りである。配列番号６２と配列番号６０との相違は、配列番号６２のａａ６４がＡｌａであるのに対し、対応する配列番号６０のａａ６８がＡｒｇであることである。さらに、ＡｃｔＲＩＩＢの配列中のその他の変異が可能であり、例えば配列番号６２のａａ１６およびａａ１７は、それぞれＣｙｓおよびＡｌａで置換することができる。いくつかのその他の実施形態では、第１のアミノ酸配列は、配列番号６０のａａ２３あたりからａａ１３８あたりまで、または配列番号６２のａａ１９あたりからａａ１３４あたりまで、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、または１２０の隣接するアミノ酸を含む。そのような配列は、切断された配列がＧＤＦ−８に特異的に結合することが可能である限り、切断することができる。
【国際調査報告】
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2008509927.tif 000057
2008509927.tif 000058
2008509927.tif 000059