(57)【要約】  移植される患者の血清における、移植前のＭＩＧの濃度を測定することにより、移植臓器の拒絶のリスクを確立し得る診断方法について、開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植前のＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）の血清レベルを測定することで、移植された臓器の欠損を予測することを特徴とする診断方法。
【請求項２】
移植された臓器の急性の拒絶を予測することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
移植された臓器の慢性の拒絶を予測することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記の移植された臓器は、腎臓、心臓、肝臓、骨髄、肺、膵臓又は膵島、及び腸であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記血清レベルは、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により、測定されることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、診断に使用する血清マーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
臓器の移植を受け入れるのに計画された主体（ｓｕｂｊｅｃｔ）の免疫反応を予測し得る新規の血清マーカーの探索は、臨床上の関心として重要な標的である。
【０００３】
患者に対する免疫抑制治療を制御する試みにおいて現在も使用される唯一のパラメーターは、反応性抗体のパネル（ｐａｎｅｌ  ｏｆ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；ＰＲＡ）である。
【０００４】
急性及び慢性の臓器拒絶の病態において重要な役割を演じるケモカインであるＩＰ−１０／ＣＸＣＬ１０の移植前における血清レベルが増加することが異種片の欠損のリスクに厳密に関連することは、公知である（非特許文献１）。
【０００５】
他のＣＸＣＲ３のケモカインの受容体リガンドとともに、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、及びＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ）は、異種片の拒絶において、二重の生物学的役割を演じる。
【０００６】
これらのケモカインは、白血球、樹状細胞、マクロファージ、及びその他の免疫細胞の移動を誘導し、且つその他の重要な炎症成分である血管形成を調節する。
【０００７】
上述のケモカインの生物学的機能は、臓器の拒絶の基本である。
【非特許文献１】Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、２００４年、４巻、ｐ．１４６６〜１４７４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
臓器の移植を行った主体の免疫反応を予知することを付与し得る血清マーカーの利用可能性が重要であることは、明らかであって、より感度を向上させ得ることが可能であれば、従前から利用されているマーカーよりも、重要である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ケモカインであるＣＸＣＬ９の血清レベルが上昇すると、臓器の拒絶のリスクが極端に増加することを見出した。このリスクは、ＩＰ−１０の血清レベルの上昇よりも、統計学的に高いものである。従って、ＣＸＣＬ９は、臓器移植の拒絶を予知するための最良の血清のマーカーを代表する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
その他の「娘（ｓｉｓｔｅｒ）」のケモカインであるＣＸＣＬ１１の血清レベルは、移植の拒絶を予知することが不可能であることを、指摘したい。
【００１１】
本発明に使用する試薬及び方法は公知であって、例えば、抗ＣＸＣＬ９抗体を用いた、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）が挙げられる。
【００１２】
（実験部）
５年間の間に追跡調査した２１３人の被検者について、１７人の健常人をコントロールとして、ＣＸＣＬ９及びＣＸＣＬ１１の移植前の血清レベルを測定した。同じ被検者において、ＣＸＣＬ１０について、比較として、測定した。コントロールにおいて、ＣＸＣＬ９の血清レベルは、５２．４±１５．３ｐｇ／ｍＬであった一方で、移植された被検者では、移植前の血清レベルは、２５５．６±１４．９９ｐｇ／ｍＬであった。ＣＸＣＬ９のレベルについては、臓器を保持し続けたものと比較して、異種片を欠損した移植を受けた患者においては、より高かった（４５３．２７±６１．５対２４１．７±１５．０１）。患者の大部分において、上述のケモカインが検出し得なかったため、ＣＸＣＬ１１は、臓器の拒絶の予知には使用し得ない結果を得た。
【００１３】
ＣＸＣＬ９の血清レベルに基づいて４つのグループに分割した３００人の被検者について、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒに従った生存曲線を検討したところ、０〜２５百分率（ｃｅｎｔｉｌｅ）では、１２１．４ｐｇ／ｍＬ以下（ｎ＝５３）であり、２５〜５０百分率では、１２１．４〜１９４．３ｐｇ／ｍＬ（ｎ＝６４）であり、５０〜７５百分率では、１９４．３〜３１２．３ｐｇ／ｍＬ（ｎ＝５３）であり、７５〜１００百分率では、３１２．３ｐｇ／ｍＬ以上（ｎ＝５３）であった。これらの曲線が示すのは、ＣＸＣＬ９の移植前のレベルに比例して、移植された臓器の５年間の間の生存が、進行的に低下するものであって、グループ１では、９８．１％であり、グループ２では、１００％であり、グループ３では、９６．２％であり、グループ４では、７９．２％であった（全体として、ｐ＜０．００１であり、グループ１対グループ４では、ｐ＜０．００１であり；グループ２対グループ４では、ｐ＜０．００１であり；グループ３対グループ４では、ｐ＜０．００１であった）。
【００１４】
移植前におけるＣＸＣＬ９のレベルの上昇（３１２．３ｐｇ／ｍＬ）を伴った被検者における低下する臓器の機能の相対的なリスクを確立するため、変量に依存するものとして異種片の欠損を考慮したＣｏｘによる多変量解析を行った。この解析において、共変量（ｃｏ−ｖａｒｉａｂｌｅｓ）として、被提供者の年齢及び性別、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−ＤＲのミスマッチの数、原始的な疾病、免疫抑制のタイプ、移植の数、冷虚血（ｃｏｌｄ  ｉｓｃｈｅｍｉａ）の時間、拒絶の数、並びに提供者の年齢及び性別について、考慮した。
【００１５】
その結果、患者において、ＣＸＣＬ９の血清レベルが３１２．３ｐｇ／ｍＬよりも大きい場合、拒絶のリスクが有意に増加することが、判明した（リスク比１０．３９０；Ｃ．Ｉ．１．６４６〜６５．５７５；ｐ＝０．０１３）。
【００１６】
共変量として、ＣＸＣＬ１０を含むその他の共変量分析を行った。再び記するが、ＣＸＣＬ９の移植前の血清レベルが３１２．３ｐｇ／ｍＬよりも大きい場合を、患者における臓器を欠損するリスクが増加するものと同定した（リスク比１０．４３３；ＣＪ．１．５９７〜６８．１４６；ｐ＝０．０１）。その他の共変量は、ＣＸＣＬ９の不在を考慮した場合、臓器の欠損のリスクが増大するが、ＣＸＣＬ９で得られるものよりも有意に低いものであるという移植前のＣＸＣＬ１０の血清レベルを除いては、統計学的な有意性を与えなかった。上述の結果に基づくと、ＣＸＣＬ９の移植前の血清レベルは、急性及び／又は慢性の拒絶に発展する最も高いリスクを選択することが可能となり、従って、最も高い臓器の欠損のリスクを選択することが可能となる。これらの患者は、臓器の欠損を回避するために、最も能力の高い免疫抑制療法で処置されるべきである。
【００１７】
本発明による診断方法は、急性及び／又は慢性の拒絶を予測するのに有用であり、従って、腎臓、心臓、肝臓、骨髄、肺、膵臓又は膵島、及び腸の移植における臓器の欠損を予測するのに有用である。
【手続補正書】
【提出日】平成18年9月22日(2006.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植前に上昇したＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）の血清レベルを測定することで、移植された臓器の欠損を予測することを特徴とする診断方法。
【請求項２】
移植された臓器の急性の拒絶を予測することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
移植された臓器の慢性の拒絶を予測することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記の移植された臓器は、腎臓、心臓、肝臓、骨髄、肺、膵臓又は膵島、及び腸であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記血清レベルは、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により、測定されることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【国際調査報告】
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