(57)【要約】  本発明は、哺乳動物におけるトロンビン活性に関連した病気および症状を予防または治療するための式Ｉで表される化合物またはこれの製薬学的に許容され得る塩を記述するものである。本発明は、また、窒素含有ヘテロアリールの新規なＮ−オキサイド化方法にも関する。
2008536918.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2008536918.tif 000031
［式中、
Ｘは、
【化２】
2008536918.tif 000032
であり、そして
Ｙは、
【化３】
2008536918.tif 000033
である］
で表される化合物およびこれの製薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
請求項１記載の化合物および製薬学的に許容され得る担体を含んで成る製薬学的組成物。
【請求項３】
更に抗凝血薬、抗血小板薬または血栓溶解薬の中の少なくとも１種も含んで成る請求項２記載の製薬学的組成物。
【請求項４】
化合物が約０．１から約５００ｍｇの範囲の量で存在する請求項２記載の製薬学的組成物。
【請求項５】
深部静脈血栓症、播種性血管内凝血障害、眼内フィブリン形成、心筋梗塞、脳梗塞、または血栓溶解治療または経皮経管冠動脈形成術のいずれかの結果としてもたらされる血栓形成の予防または治療を必要としている哺乳動物におけるそれを予防または治療する方法であって、前記哺乳動物に請求項１記載の化合物を有効量で投与することを含んで成る方法。
【請求項６】
下記の手術：冠動脈血管形成術、冠動脈バイパス術および人工関節置換手術を受ける前または後のヒトを治療する方法。
【請求項７】
哺乳動物におけるトロンビン生成または作用のいずれかが関与する異常な静脈もしくは動脈血栓で特徴づけられる症状を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に請求項２記載の組成物を投与することを含んで成る方法。
【請求項８】
哺乳動物における血小板凝集物の生成を抑制するか、フィブリンの生成を抑制するか、血栓の形成を抑制するか或は塞栓の形成を抑制する方法であって、前記哺乳動物に請求項２記載の組成物を有効量で投与することを含んで成る方法。
【請求項９】
血液採取、血液貯蔵または血液循環で用いるに適した医学デバイスであって、請求項１記載の化合物が埋め込まれているか或は物理的に結合している医学デバイス。
【請求項１０】
カテーテル、ステント、血液透析機、血液採取用シリンジまたは管または血液ラインである医学デバイスであって、請求項１記載の化合物が埋め込まれているか或は物理的に結合している医学デバイス。
【請求項１１】
哺乳動物における不安定狭心症、再狭窄、成人呼吸窮迫症候群、内毒素性ショックまたは化学療法中の凝固性亢進を治療する方法であって、前記哺乳動物に請求項２記載の組成物を有効量で投与することを含んで成る方法。
【請求項１２】
ヒトにおけるパーキンソン病またはアルツハイマー病を治療する方法であって、前記ヒトに請求項２記載の組成物を有効量で投与することを含んで成る方法。
【請求項１３】
酵素がトロンビンである請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
哺乳動物における生体内血栓映像化方法であって、式Ｉで表される化合物を放射線同位体と連結させて用いることを含んで成る方法。
【請求項１５】
ピリジンＮ−オキサイドを合成する方法であって、ピリジンと過炭酸ナトリウムと無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成る方法。
【請求項１６】
温度を−１０℃から１０℃の範囲にする請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ピリミジンのＮ−オキサイドを合成する方法であって、ピリミジンと過炭酸ナトリウムと無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成る方法。
【請求項１８】
キノリンＮ−オキサイドを合成する方法であって、キノリンと過炭酸ナトリウムと無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成る方法。
【請求項１９】
ピラジンＮ−オキサイドを合成する方法であって、ピラジンと過炭酸ナトリウムと無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成る方法。
【請求項２０】
出発ピラジン材料の２位が電子求引基で置換されておりかつ５位がメチル基で置換されている請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
電子求引基が−ＣＯＮＨ２である請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
ピリジンと過酸化水素尿素と無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成るピリジンＮ−オキサイドの合成方法。
【請求項２３】
温度を−１０℃から１０℃の範囲にする請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
ピリミジンと過酸化水素尿素と無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成るピリミジンＮ−オキサイドの合成方法。
【請求項２５】
キノリンと過酸化水素尿素と無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成るキノリンＮ−オキサイドの合成方法。
【請求項２６】
ピラジンと過酸化水素尿素と無水トリフルオロメタンスルホン酸を各々が約半当量から各々が約１０当量の量で温度が約−５０℃から約４０℃の溶媒中で反応させることを含んで成るピラジンＮ−オキサイドの合成方法。
【請求項２７】
出発ピラジン材料の２位が電子求引基で置換されておりかつ５位がメチル基で置換されている請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
電子求引基が−ＣＯＮＨ２である請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドである化合物およびこれの製薬学的に許容され得る塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トロンビン阻害剤として機能する新規な化合物に関し、本発明は、また、窒素含有ヘテロアリールの新規なＮ−オキサイド化方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
セリンプロテアーゼトロンビンが止血および血栓症で中心的な役割を占めており、そして多因子蛋白質として血小板、内皮細胞、平滑筋細胞、白血球、心臓およびニューロンに対していろいろな効果を誘発する。内因性経路（接触活性化）または外因性経路（血漿が内皮以外の表面に接触するか、血管壁が損傷を受けるか或は組織因子が放出させることによって活性化）のいずれかによって凝血カスケードが活性化すると、トロンビンに集中する一連の生化学的イベントがもたらされる。トロンビンはフィブリノーゲンを開裂させ、それによって最終的に止血血栓（血塊形成）がもたらされ、細胞表面のトロンビン受容体がユニークに蛋白質分解によって開裂を起こすことで血小板が強力に活性化され、そしてフィードバック機構によってそれ自身の産生が自己増加する。このように、トロンビンの機能を阻害する阻害剤は、心臓血管病および心臓血管以外の病気にかかっているヒトを治療する効力を有する。
【０００３】
血管内血栓の生体内診断映像化方法が以前に報告された。そのような映像化方法では、検出可能なように放射性もしくは常磁性原子による標識が付けられている化合物が用いられる。例えば、ガンマ放出体であるＩｎ−１１１による標識が付けられている血小板を血栓検出用映像剤として用いることができる。加うるに、常磁性コントラスト剤（ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）であるガドリニウムジエチレントリアミンペンタ酢酸を急性心筋梗塞を血栓溶解で治療した患者の磁気共鳴映像化方法で用いることが報告された。
【０００４】
現在入手可能なプロテアーゼ阻害剤よりも高い生物学的利用能を示しかつ副作用が少ない効力のある選択的プロテアーゼ阻害剤である非ペプチド系化合物の必要性が継続して存在する。従って、強力な阻害能力を有しかつ哺乳動物に対する毒性が低いことで特徴づけられる新規なプロテアーゼ阻害剤はいろいろな病気に効力のある価値有る治療薬であり、そのような治療には、哺乳動物のいろいろな蛋白分解病症状の治療が含まれる。
【０００５】
ピリジンおよび他のＮ含有ヘテロアリール、例えばピリミジン、キノリン、ピラジン、ベンゾオキサジアゾールおよびピリダジノキノリンなどからそれらのＮ−オキサイドを生じさせる酸化が薬剤開発プログラムで時には用いられる。そのような変換を実施する目的で数多くの方法が開発されてきた。多くの場合、そのような変換は過酸、例えばメタ−クロロ過安息香酸、モノ過フタル酸マグネシウムまたはインシトゥで生じさせた過酸（例えば３０％の過酸化水素水溶液と無水トリフルオロ酢酸もしくは無水酢酸などを用いて生じさせた）を用いて達成され得る。電子が不足しているある種のピリジンの酸化は、触媒量のＭＴＯ（ＭｅＲｅＯ３）と３０％のＨ２Ｏ２を共酸化剤として用いることでか、或は無水トリフルオロ酢酸と過酸化水素−尿素複合体（非特許文献１）を用いることでか、或はＯｘｏｎｅ（商標）と硫酸からインシトゥで生じさせたペルオキシ硫酸（非特許文献２）を用いることで実施可能である。この上に示した方法を用いて電子が非常に不足しているピリジンをＮ−オキサイドに変化させる時に困難さに直面することは通常のことである（例えば非特許文献１を参照）。電子が非常に不足している窒素含有ヘテロアリールからこれらのＮ−オキサイドを生じさせる実用的な酸化方法の必要性が存在する。
【非特許文献１】Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．４１：２２９９、２０００
【非特許文献２】Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４２：１８６９、１９７７
【発明の開示】
【０００６】
発明の要約
本発明は式Ｉ（以下）で表される新規な化合物に向けたものである。また、式Ｉで表される化合物の製造方法も提供する。本発明の新規な化合物はトロンビンの強力な阻害剤である。また、式Ｉ
【０００７】
【化１】
2008536918.tif 000003
【０００８】
［式中、
Ｘは、
【０００９】
【化２】
2008536918.tif 000004
【００１０】
であり、そして
Ｙは、
【００１１】
【化３】
2008536918.tif 000005
【００１２】
である］
で表される化合物を有効量で投与することで哺乳動物における血栓症を治療する方法も提供する。
【００１３】
本発明は、また、窒素含有ヘテロアリールに酸化を受けさせることでそれらの相当するＮ−オキサイドを生じさせる一般的方法も包含する。その反応体系は比較的安全な市販の反応体を用いて調製可能である。その上、その反応は中性から酸性条件で起こり、そのような条件は、例えば、酸にいくらか敏感なメチルエステルおよびニトリル基が耐え得る条件である。
【００１４】
本発明は、哺乳動物における血小板凝集物の生成を抑制し、フィブリンの生成を抑制し、血栓の形成を抑制しかつ塞栓の形成を抑制する組成物を包含し、これは、製薬学的に許容され得る担体に入っている本発明の化合物を含んで成る。本組成物に場合により抗凝血薬、抗血小板薬および血栓溶解薬を含有させることも可能である。本組成物を必要な阻害を起こさせる目的で血液、血液製剤または哺乳動物の器官に添加してもよい。
【００１５】
また、心筋梗塞、不安定狭心症、脳梗塞、再狭窄、深部静脈血栓症、外傷または血液透析の汚染によって引き起こされる播種性血管内凝血障害、冠動脈バイパス術、成人呼吸窮迫症候群、内毒素性ショック、化学療法中の凝固性亢進、アルツハイマー病および眼内フィブリン形成を治療する方法も提供する。本発明の化合物の他の使用は、血液採取、血液循環および血液貯蔵で用いられるデバイス、例えばカテーテル、血液透析機、血液採取用シリンジおよび管、血液ラインおよびステントなどの製造で用いられる材料に埋め込まれているか或は物理的に結合している抗凝血薬としての使用である。
【００１６】
本発明は、また、本発明の化合物を哺乳動物のある表面に共有結合または非共有結合のいずれかで結合させることによって前記表面の血栓形成を軽減する方法も包含する。
【００１７】
別の面において、本発明は、哺乳動物における生体内血栓映像化で用いるに有用な組成物を包含し、これは、体の外側から検出可能な本発明の化合物を含んで成る。本発明の化合物と検出可能標識、例えば放射性または常磁性原子などを含んで成る組成物が好適である。
【００１８】
別の面において、本発明は、哺乳動物における生体内血栓映像化で用いるに有用な診断用組成物を包含し、これは、製薬学的に許容され得る担体および診断的に有効な量の本発明の化合物もしくは組成物を含んで成る。
別の面において、本発明は、哺乳動物における生体内血栓映像化で用いるに有用な方法を包含する。
【００１９】
発明の詳細な記述
本発明は、式Ｉ
【００２０】
【化４】
2008536918.tif 000006
【００２１】
［式中、
Ｘは、
【００２２】
【化５】
2008536918.tif 000007
【００２３】
であり、そして
Ｙは、
【００２４】
【化６】
2008536918.tif 000008
【００２５】
である］
で表される化合物に向けたものである。
【００２６】
本発明の好適な態様は、Ｘが
【００２７】
【化７】
2008536918.tif 000009
【００２８】
である態様であり、本発明の別の好適な態様は、Ｙが
【００２９】
【化８】
2008536918.tif 000010
【００３０】
である態様である。
【００３１】
本発明の好適な例は、２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドおよびこれの製薬学的に許容され得る塩である。
【００３２】
本発明の好適な例は、二塩酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドである。
【００３３】
本発明の好適な例は、一臭化水素酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドである。
【００３４】
本発明の好適な例は、スルホン酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドである。
【００３５】
本発明の好適な例は、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドである。
【００３６】
本発明の化合物はまた多形結晶形態も持ち得、あらゆる多形結晶形態物を本発明に包含させる。
【００３７】
また、前記式Ｉで表される化合物は溶媒和、特に水和も起こし得る。水和は本化合物または本化合物を含んで成る組成物を製造している時に起こり得るか、或は水和は本化合物が吸湿性を示すことが理由で経時的に起こる可能性もある。
【００３８】
別の面において、本発明は哺乳動物における生体内血栓映像化で用いるに有用な組成物を包含し、これは体の外側から検出可能な本発明の化合物を含んで成る。本発明の化合物と検出可能標識、例えば放射性または常磁性原子などを含んで成る組成物が好適である。
【００３９】
別の面において、本発明は、哺乳動物における生体内血栓映像化で用いるに有用な診断用組成物を包含し、これは、製薬学的に許容され得る担体および診断的に有効な量の本発明の化合物もしくは組成物を含んで成る。
【００４０】
別の面において、本発明は、哺乳動物における生体内血栓映像化に有用な方法を包含する。
【００４１】
好適な面に従い、有用な化合物は、ジフルオロメチレンに隣接して位置するピリジン置換基が検出可能標識、例えば放射性ヨウ素原子、例えばＩ−１２５、Ｉ−１３１またはＩ−１２３などで置換されている化合物である。そのような検出可能標識はまた放射性もしくは常磁性キレートであってもよく、この場合には、前記ピリジン置換基と適切な配位子（Ｌ）を直接にか或は二価の連結基Ａ”を通して結合させておく。適切な配位子は、放射性もしくは常磁性金属イオンとキレートを形成し得る有機部分を意味する。
【００４２】
そのような化合物における二価の連結基Ａ”には、ピリジルとキレート手段の両方と共有結合し得る基が含まれる。Ａ”は、例えば−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−（ＣＨ２）６−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）６−Ｃ（＝Ｏ）−などであり得る。
【００４３】
また、前記式Ｉで表される化合物におけるキレート配位子Ｌには、放射性もしくは常磁性いずれかの原子と共有結合もしくは非共有結合し得る基も含まれる。キレート化は、これに放射性もしくは常磁性原子と錯体を形成させる目的で通常用いられるそれらを包含させることを意味する。それらには、メチレンホスホン酸基、メチレンカルボヒドロキサム酸基、カルボキシエチリデン基、または特に窒素原子と結合しているカルボキシメチレン基を３から１２、好適には３から８個含有するキレート手段が含まれる。窒素原子と結合している酸基の数が１または２のみの場合、その窒素は場合により置換されていてもよいエチレン基を通してか或は窒素または酸素または硫黄原子で分離されている４個以下の離れて位置するエチレン単位を通して前記基の別の窒素原子と結合している。ジエチレントリイミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−ペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）が完成用手段（ｃｏｍｐｌｅｔｉｎｇ  ｍｅａｎｓ）として好適である。ＤＴＰＡは放射性原子であるインジウム−１１１（Ｉｎ−１１１）、テクネチウム−９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）および常磁性原子であるガドリニウム（Ｇｄ）用のキレート手段として本技術分野で良く知られている。Ｋｈａｗ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０９：２９５（１９８０）；Ｐａｉｋ  Ｃ．Ｈ．他、米国特許第４，６５２，４４０号（１９８７）；Ｇｒｉｅｓ，Ｈ．他、米国特許第４，９５７，９３９号（１９９０）。好適なキレート配位子Ｌは１−（パラ−アミノベンジル）−ジエチレントリアミンペンタ酢酸である。また、スルフヒドリルまたはアミン部分を含有（いずれの組み合わせにおいても全体で少なくとも４である）する化合物もキレート手段として含める。そのようなスルフヒドリルまたはアミン部分は互いに少なくとも原子２個分離れて位置し、そのような原子は炭素、窒素、酸素または硫黄のいずれであってもよい。特に、Ｔｃ−９９ｍ用キレート手段として本技術分野で良く知られているメタロチオネインがキレート手段Ｌとして好適である。
【００４４】
交換反応を用いて前記式Ｉで表される化合物に放射性ヨウ素による標識を付けることができる。熱ヨウ素を冷ヨウ素と交換する方法は本技術分野で良く知られている。別法として、放射性ヨウ素標識付き化合物の調製を相当するブロモ化合物を用いてトリブチルスタニル中間体経由で実施することも可能である。米国特許第５，１２２，３６１号（引用することによって本明細書に組み入れられる）を参照のこと。
【００４５】
本発明は、また、哺乳動物における生体内血栓映像化方法で用いるに有用な組成物も包含し、ここでは、前記組成物を放射性原子と錯体を形成している式Ｉで表される化合物で構成させ、適切な放射性原子にはＣｏ−５７、Ｃｕ−６７、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｒｕ−９７、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｉｎ−１１３ｍ、Ｈｇ−１９７、Ａｕ−１９８、およびＰｂ−２０３が含まれる。ある種の放射性原子は放射化学映像化技術で用いるに適した優れた特性を有する。特に、テクネチウム−９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）はこれの核特性が理由で映像化に理想的な放射性原子である。また、レニウム−１８６および−１８８もガンマ放出性を示すことで映像化可能である。好適な組成物は放射性原子であるＴｃ−９９ｍを含有させた組成物である。
【００４６】
本技術分野で公知のいろいろな技術の中のいずれかを用いて前記式Ｉで表される化合物に標識を付けることで本発明の組成物を生じさせることができる。例えば、キレート化剤、例えばジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）またはメタロチオネイン（両方とも前記式Ｉで表される化合物と共有結合し得る）などを用いて本化合物に標識を付けることができる。
【００４７】
テクネチウム−９９ｍを含有する本発明の組成物の調製を一般的にはテクネチウム−９９ｍと還元剤と水溶性配位子の水性混合物を生じさせた後に前記混合物を式Ｉで表される本発明の化合物と接触させることで実施する。本発明の映像化用化合物の製造では、例えばキレート手段を持たせておいた本発明の化合物とテクネチウム−９９ｍ（酸化された症状）を還元剤の存在下で反応させてそれとテクネチウム−９９ｍの間の安定な錯体を還元症状（原子価がＩＶまたはＶの症状）で生じさせることなどで製造を実施する。
【００４８】
本発明の組成物の１つの態様の調製では、ＤＴＰＡキレート手段を持たせておいた式Ｉで表される化合物にテクネチウム−９９ｍによる標識を付けることで調製を実施する。これは、前以て決めておいた量（５μｇから０．５ｍｇとして）の本発明の化合物をクエン酸塩緩衝剤と第一錫還元剤が入っている水溶液と一緒にした後に放射能を前以て決めたレベル（１５ｍＣｉとして）で含有する過テクネチウム酸ナトリウム（新しく溶離させた）を添加することを通して達成可能である。その混合物を室温でインキュベートした後、その反応混合物を無菌フィルター（０．２−０．２２ミクロン）に通して遮蔽されているシリンジの中に充填し、その後必要ならば、注射用の０．９％食塩水の中に分散させる。
【００４９】
本発明の組成物の別の態様の調製では、メタロチオネインキレート手段を持たせておいた式Ｉで表される化合物にテクネチウム−９９ｍによる標識を付けることで調製を実施する。これは、過テクネチウム酸ナトリウム−９９ｍ水溶液をグルコヘプトン酸第一錫水溶液と一緒にすることでテクネチウム−９９ｍ（還元症状）と２分子のグルコヘプトネート分子の可溶錯体を生じさせた後、この溶液をメタロチオネインを結合させておいた式Ｉで表される化合物と一緒にすることで達成可能である。その混合物を前記グルコヘプトネート錯体のテクネチウム−９９ｍと式Ｉで表される化合物のメタロチオネインの交換が起こる条件下でそれが起こる時間インキュベートすることで本発明のテクネチウム標識付き組成物を生じさせる。
【００５０】
前記方法で用いるに適した還元剤は、テクネチウム−９９ｍに還元を受けさせてそれの酸化症状から原子価がＩＶもしくはＶの症状にするに適するか或はレニウムに還元をそれの酸化症状から受けさせるに適した生理学的に許容され得る還元剤である。使用可能な還元剤は、塩化第一錫、フッ化第一錫、グルコヘプトン酸第一錫、酒石酸第一錫および亜ジチオン酸ナトリウムである。好適な作用剤は第一錫還元剤、特に塩化第一錫またはグルコヘプトン酸第一錫である。そのような還元剤の量を、テクネチウム−９９ｍが還元を受けてそれの放射性同位元素が還元された症状で式Ｉで表される化合物のキレート手段と結合するようになるに必要な量にする。例えば、塩化第一錫（ＳｎＣｌ２）が還元剤の時には、これを１−１，０００μｇ／ｍＬの範囲で用いてもよい。
【００５１】
クエン酸はテクネチウム−９９ｍと迅速に錯体を形成して安定なテクネチウム−９９ｍ−クエン酸錯体を形成する。そのクエン酸錯体を式Ｉで表される化合物と接触させると、それからテクネチウム−９９ｍが式Ｉで表される化合物のキレート手段に実質的に定量的に転移するが、これは穏やかな条件下で迅速に達成される。クエン酸の量（クエン酸ナトリウムとして）は約０．５ｍｇ／ｍｌから当該媒体中に溶解する最大量の範囲であってもよい。クエン酸の好適な量は１５から３０μｇ／ｍｌの範囲である。
【００５２】
キレート手段を持たせた式Ｉで表される化合物の量を０．００１から約３ｍｇ／ｍＬ、好適には約０．０１７から約０．１５ｍｇ／ｍＬの範囲にしてもよい。最後に、過テクネチウム酸塩の形態のテクネチウム−９９ｍを好適には約１−５ｍＣｉの量で用いてもよい。本発明の化合物１ｍｇ当たりのｍＣｉ量を好適には約３０−１５０にする。
【００５３】
式Ｉで表される化合物と前記金属イオン転移配位子錯体（ｍｅｔａｌ  ｉｏｎ−ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｌｉｇａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｘ）の間の反応を好適には式Ｉで表される化合物が安定であるｐＨの水溶液中で実施する。「安定」は、当該化合物が可溶なままでありかつα−トロンビンに対する阻害活性を保持していること意味する。その反応のｐＨを通常は約５から９にするが、好適なｐＨは６−８以上である。前記テクネチウム−９９ｍ−クエン酸錯体と式Ｉで表される化合物を好適には約２０℃から約６０℃、最も好適には約２０℃から約３７℃の温度で金属イオンが前記クエン酸錯体から前記式Ｉで表される化合物のキレート手段に転移するに充分な時間インキュベートする。その転移反応をそのような条件下で完了させるには一般に１時間以内で充分である。
【００５４】
本発明の代替組成物は、Ｉｎ−１１１による標識を付けておいた本発明の化合物を含有させた組成物である。
【００５５】
本発明は、また、哺乳動物における生体内血栓映像化方法で用いるに有用な本発明の化合物を含有させた組成物も包含し、それを、常磁性原子と錯体を形成している式Ｉで表される化合物で構成させる。
【００５６】
好適な常磁性原子は、原子番号が２１から２９、４２、４４および５８から７０の元素の二価もしくは三価イオンである。適切なイオンには、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、プラセオジム（ＩＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）およびイッテルビウム（ＩＩＩ）が含まれる。ガドリニウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）およびエルビウム（ＩＩＩ）がこれらの磁気モーメントが非常に強いことから好適である。特にガドリニウム（ＩＩＩ）が常磁性原子として好適である。
【００５７】
本発明の組成物の調製は、式Ｉで表される化合物と常磁性原子を一緒にすることを通して実施可能である。例えば、適切な常磁性原子の金属酸化物または金属塩（例えば硝酸塩、塩化物または硫酸塩）を水とアルコール、例えばメチル、エチルもしくはイソプロピルアルコールなどで構成させた溶媒に入れて溶解または懸濁させる。その混合物を同様な水性媒体に入れておいた等モル量の式Ｉで表される化合物の溶液に加えて撹拌する。その反応混合物を反応が完了するまで穏やかに加熱してもよい。不溶な組成物が生じた場合にはそれを濾過で単離してもよいが、可溶な組成物の場合には溶媒を蒸発させることでそれを単離してもよい。本発明の組成物に入っているキレート手段上に酸基がまだ存在している場合には、均一な組成物の単離または精製が容易になるように、その酸性錯体を中性の錯体に変化させる目的で無機もしくは有機塩基、そしてアミノ酸さえ添加することも可能である。有機塩基もしくは塩基性アミノ酸ばかりでなく無機塩基、例えばナトリウム、カリウムまたはリチウムなどの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩などを中和剤として用いてもよい。
【００５８】
本発明は、また、哺乳動物における生体内血栓映像化で用いるに有用な診断用組成物も包含し、この組成物は、製薬学的に許容され得る担体を含有しかつ式Ｉで表される化合物から生じさせた組成物を診断に有効な量で含んで成る。
【００５９】
１回分として必要な本組成物の「診断に有効な量」は、投与経路、治療すべき哺乳動物の種類および考慮下の特定の哺乳動物が示す身体的特徴に依存するであろう。そのような要因およびこれらが前記１回分を決定することに対して示す関係は医学診断技術の技術を持つ実施者に良く知られている。また、最適な効果を達成する目的で前記診断に有効な量および投与方法を注文に合わせることも可能であるが、体重、食事、同時に受けている投薬治療および医学技術分野の技術者が理解するであろう他の要因の如き要因に依存するであろう。映像化用の１回分は、当該血栓部位に存在する映像剤を検出するに充分な量でなければならない。放射線による映像化に必要な１回分は、典型的に、本発明の製薬学的組成物の位置が示す線量が約５から２０μＣｉ、好適には約１０μＣｉであるような１回分である。磁気共鳴映像化に必要な１回分は、常磁性原子と錯体を形成している式Ｉで表される化合物が約０．００１から５ミリモル／ｋｇ、好適には約０．０５から０．５ミリモル／ｋｇの量になるような１回分である。いずれの場合にも、実際の１回分は当該血栓の場所に依存することは本技術分野で公知である。
【００６０】
生体内で用いるに適した「製薬学的に許容され得る担体」は製薬学技術で良く知られており、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編集、１９８５）などに記述されている。注射投与に適した無菌の溶液もしくは懸濁液を生じさせようとする時には、製薬学的に許容され得る担体を用いて本発明の製薬学的組成物を調製することができる。特に、注射可能物は、液状の溶液もしくは懸濁液、注射前に液体に入れて溶液または懸濁液を生じさせるに適した固体形態、または乳液のいずれかの通常形態で調製可能である。適切な賦形剤は、例えば水、食塩水、デキストロース、マンニトール、ラクトース、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、塩酸システインなどである。加うるに、必要ならば、注射可能製薬学的組成物に無毒の補助物質、例えば湿潤剤、ｐＨ緩衝剤などを少量入れることも可能である。必要ならば、吸収促進用製剤（例えばリポソーム）を用いることも可能である。
【００６１】
本発明は、また、貯蔵または投与の目的で調製した診断用組成物も包含する。それらに追加的に防腐剤、安定剤および染料を入れることも可能である。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびパラヒドロキシ安息香酸のエステルなどを防腐剤として添加してもよい（１４４９年の同文献）。加うるに、抗酸化剤および懸濁剤を用いることも可能である。
【００６２】
本発明の生体内映像化方法は、また、血栓の存在、大きさ、退行および増加を検出または監視しようとする時に以前の映像化技術に比べていくつかの利点を示す。特に、本発明は、血栓に関連したトロンビンと密に結合することで結合しなかった映像剤によって生じる循環している放射能または常磁性が理由の「バックグラウンド」の度合が低い化合物、組成物および診断用組成物を提供するものである。その上、本発明の化合物、組成物または診断用組成物を冠動脈内に注入することによる生体内映像化はほとんど瞬時に起こると期待する、と言うのは、本映像剤は直ちに血栓と結合しているトロンビンを飽和症状にすると思われるからである。
【００６３】
従って、本発明は、また、哺乳動物における生体内血栓映像化方法も包含し、これは、（１）哺乳動物に本発明の化合物、組成物または診断用組成物を診断的に許容され得る量で投与しそして（２）血管内の血栓を検出する段階を含んで成る。
【００６４】
本明細書で用いる如き用語「生体内映像化」は、哺乳動物における血栓を検出する方法ばかりでなく哺乳動物における血栓の大きさ、場所および数に加えて血栓の溶解または成長を監視する方法に関する。
【００６５】
そのような方法で本化合物、組成物または診断用組成物を生体内で用いる時の「投与」を全身または局所を標的とした様式のいずれかで非経口的に達成する。本発明の化合物、組成物または診断用組成物を便利かつ接近可能な静脈または動脈に注入することで全身投与を達成する。それには、これらに限定するものでないが、肘正中静脈経由投与が含まれる。本発明の化合物、組成物または診断用組成物を注入する部位の遠位に位置していて血栓が中に存在すると疑われる静脈または動脈の流れの中の近位に注入することを通して、局所を標的とした投与を達成する。それには、これらに限定するものでないが、冠動脈に直接注入して冠動脈の血栓を映像化すること、頸動脈に直接注入して脳血管内の血栓を映像化すること、または足の静脈に直接注入して足の深部静脈血栓を映像化することが含まれる。
【００６６】
また、本発明の組成物を血栓部位に送達する様式も用語「投与」の範囲内であると見なす。例えば、キレート手段を結合させておいた式Ｉで表される化合物を哺乳動物に注入し、しばらく経った後、放射性原子を注入することで、放射性原子と錯体を形成した式Ｉで表される化合物を含んで成る組成物を血栓部位に生体内で生じさせてもよい。別法として、放射性原子と錯体を形成している式Ｉで表される化合物を含んで成る組成物を哺乳動物に注入することも可能である。
【００６７】
本発明の方法で用いる本化合物、組成物または診断用組成物の「診断的に有効な量」は、この上で述べたように、投与経路、治療すべき哺乳動物の種類および治療下の具体的な哺乳動物が示す身体的特徴に依存するであろう。そのような要因およびこれらが前記１回分を決定することに対して示す関係は医学診断技術の技術を持つ実施者に良く知られている。生体内映像化用の１回分は、当該血栓部位に存在する映像剤を検出するに充分な量でなければならない。放射線による映像化に必要な１回分は、典型的に、本発明の診断用組成物がもたらす線量が約５から２０μＣｉ、好適には約１０μＣｉであるような１回分である。磁気共鳴映像化に必要な１回分は、本診断用組成物がもたらす量が常磁性原子と錯体を形成している式Ｉで表される化合物が約０．００１から５ミリモル／ｋｇ、好適には約０．０５から０．５ミリモル／ｋｇであるような１回分である。いずれの場合にも、実際の１回分は当該血栓の場所に依存することは本技術分野で公知である。
【００６８】
映像化による血栓の検出は、そのような血栓の所に放射性もしくは常磁性原子を局在させて存在させることで可能になる。
【００６９】
本発明の組成物および診断用組成物に関連した放射性原子の映像化を、好適には、ガンマ放射線を検出し得る放射線検出手段、例えばガンマカメラなどを用いて実施する。放射線映像化用カメラには、典型的に、変換媒体（高エネルギーのガンマ線を吸収し、電子を追い出し、それが基底症状に戻る時に光子を発する）、空間的検出チャンバの中に配置されている光電検出器（出てきた光子の位置を決定）、および前記チャンバ内で検出された光子を分析しかつ映像をもたらす回路が用いられている。
【００７０】
本発明の組成物および診断用組成物に関連した常磁性原子を磁気共鳴映像化（ＭＲＩ）装置で検出する。そのような装置では、患者の体の中の原子の核スピンベクターを整列させる目的で強力な磁場が用いられている。血栓の所に局在して存在する常磁性原子によって前記磁場が乱され、そして核が平衡配列に戻る時に患者の映像を読み取る。
【００７１】
定義
本明細書で用いる如き用語「約」は、これが用いる反応体の量を修飾する場合、±１５％を意味することを意図し、例えば「約１ミリモル」は０．８５ミリモルから１．１５ミリモルの範囲を指す。本明細書で用いる如き用語「約」が温度を指す場合、これは±５℃を意味することを意図し、例えば「約４０℃」は３５℃から４５℃の範囲の温度を指す。
【００７２】
用語「アルキル」を本明細書でそれ自身または別の基の一部として用いる場合、これは炭素数が１２以下の直鎖および分枝鎖両方の基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなどを指す。アルキルの炭素原子数は好適には１から６である。
【００７３】
用語「アルケニル」を本明細書では炭素原子数が２−２０（鎖長をそれに限定するものでないが）の直鎖もしくは分枝鎖基を意味する目的で用い、それには、これらに限定するものでないが、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニルなどが含まれる。アルケニル鎖の長さは好適には炭素原子２から１０個分、より好適には、長さは炭素原子２から８個分、最も好適には、長さは炭素原子２から４個分である。
【００７４】
用語「アルキニル」を本明細書では炭素原子数が２−２０（鎖長をそれに限定するものでないが）の直鎖もしくは分枝鎖基を意味する目的で用いるが、それには、鎖中の炭素原子の中の２個の間に三重結合が少なくとも１個存在し、それには、これらに限定するものでないが、アセチレン、１−プロピレン、２−プロピレンなどが含まれる。アルキニル鎖の長さは好適には炭素原子２から１０個分、より好適には、長さは炭素原子２から８個分、最も好適には、長さは炭素原子２から４個分である。
【００７５】
アルケニルもしくはアルキニル部分が置換基として存在する場合、本明細書におけるあらゆるケースで、不飽和結合、即ちビニレンまたはアセチレン結合は、好適には、窒素部分にも酸素部分にも硫黄部分にも直接には結合していない。
【００７６】
用語「電子求引基」は、他の領域からそれ自身の方向に向かうか或は離れる方向に向かう電子密度を持つ置換基を指す。電子求引基の例はフェニル、ヘテロアリール、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、スルホン、スルホキサイド、エステル、スルホンアミド、カルボキサミド、アルコキシ、アルコキシエーテル、アルケニル、アルキニル、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｏフェニル、−Ｏヘテロアリールおよび−ＣＦ３である。
【００７７】
本明細書で用いる如き用語「ヘテロアリール」は、環原子を５から１４個有し、環状に配列している共有のπ電子を６、１０または１４個有しかつ炭素原子を含有することに加えて酸素、窒素または硫黄ヘテロ原子を１、２または３個含有する基を指す（ヘテロアリール基の例はチエニル、ベンゾ［ｂ］チエニル、ナフト［２，３−ｂ］チエニル、チアントレニル、フリル、ピラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチイニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４αＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、イソチアゾリル、フェノチアジニル、イソオキサゾリル、フラザニルおよびフェノキサジニル基である）。
【００７８】
用語「ヘテロ原子」を本明細書では酸素原子（「Ｏ」）、硫黄原子（「Ｓ」）または窒素原子（「Ｎ」）を意味させる目的で用いる。ヘテロ原子が窒素の場合にはそれがＮＲａＲｂ部分［ここで、ＲａおよびＲｂは、互いに独立して、水素またはＣ１からＣ８アルキルであるか、或はそれらが結合している窒素と一緒になって５員、６員もしくは７員の飽和もしくは不飽和環を形成している］を形成していてもよいことは理解されるであろう。
【００７９】
用語「トリフレート」はアニオンであるトリフルオロメタンスルホネート（ＣＦ３ＳＯ３−）を指し、ＯＴｆ−の省略形で示す。「トリフレート」の形容詞形態は「トリフリック」である。例えば、トリフリックアンハイドライドは無水トリフルオロメタスルホネート［（ＣＦ３ＳＯ２）２Ｏ］を指し、Ｔｆ２Ｏの省略形で示す。
【００８０】
製薬学的に許容され得る塩
前記式Ｉで表される化合物の製薬学的に許容され得る塩（水溶性もしくは油溶性もしくは分散性生成物の形態）には、通常の無毒の塩または第四級アンモニウム塩が含まれ、それらを例えば無機もしくは有機の酸もしくは塩基などから生じさせる。そのような酸付加塩の例には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロ燐酸塩、半硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、しゅう酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、こはく酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩およびウンデカン酸塩が含まれる。塩基塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばナトリウムおよびカリウム塩など、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムおよびマグネシウム塩など、有機塩基との塩、例えばジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩など、およびアミノ酸との塩、例えばアルギニン、リシンなどの塩（グアニジル部分との塩を包含）が含まれる。また、塩基性窒素含有基に低級アルキルハロゲン化物、例えば塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチルなど、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミルの如き硫酸ジアルキル、長鎖ハロゲン化物、例えば塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルなど、臭化ベンジルおよびフェネチルの如きハロゲン化アラルキルなどの如き作用剤を用いた第四級化を受けさせることも可能である。酸付加塩を生じさせるに好適な酸には、ＨＣｌ、ＨＢｒ、硫酸およびナフタレン−１，５−硫酸が含まれる。
【００８１】
用途
最終使用用途として、本発明をいろいろな治療目的で用いることができる。本発明はトロンビンを阻害する。従って、本化合物はトロンビン生成または作用のいずれかが関与する異常な静脈もしくは動脈血栓で特徴づけられる症状を治療または予防する目的で用いるに有用である。そのような症状には、これらに限定するものでないが、深部静脈血栓症、肺塞栓、動脈血栓症、通常は心房細動中の心房に由来するか或は貫壁性心筋梗塞後の左室に由来する全身性塞栓症、不安定狭心症、再狭窄、成人呼吸窮迫症候群、内毒素性ショック、化学療法もしくは放射線療法中もしくは後の凝固性亢進、敗血性ショック、ウイルス感染および癌中に起こる播種性血管内凝血障害、心筋梗塞、脳梗塞、冠動脈バイパス術、眼内フィブリン形成、整形外科手術、例えば人工関節置換手術など、および血栓溶解治療または経皮経管冠動脈形成術（ＰＣＴＡ）のいずれかの結果としてもたらされる血栓形成が含まれる。本発明の好適な使用は、深部静脈血栓症の予防または治療である。
【００８２】
本発明の化合物は、細菌、多発外傷および中毒を包含するいずれかの機構によって引き起こされる播種性血管内凝血障害の治療および予防に有用であると期待する。
【００８３】
本発明の化合物は、凝固性亢進の兆候無しにトロンビンの濃度が高い症状、例えばアルツハイマー病および膵炎などで用いるに有用であると期待する。
【００８４】
他の使用には、血液採取、血液循環および血液貯蔵で用いられるデバイス、例えばカテーテル、血液透析機、血液採取用シリンジおよび管および血液ラインなどの製造で用いられる材料に埋め込まれているか或は物理的に結合している抗凝血薬として前記トロンビン阻害剤を用いることを包含する。本発明の化合物はまた体外血液循環路に入れる抗凝血薬としても使用可能である。
【００８５】
ステントは再狭窄を軽減することが示されているが、血栓を形成させる。ステントが示す血栓形成性を軽減する方策は、トロンビン阻害剤をステントの表面に被覆するか、埋め込むか、吸着させるか或は共有結合させる方策である。本発明の化合物はそのような目的で使用可能である。本発明の化合物を可溶および／または生分解性重合体（ステント材料として、および後でステント材料の上を覆う）に結合または埋め込んでおいてもよい。そのような重合体には、ポリビニルピロリドン、ポリヒドロキシ−プロピルメタアクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルトアミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されているポリエチレンオキサイド−ポリリシン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸の共重合体、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋もしくは両親媒性ブロック共重合体が含まれ得る。ヨーロッパ出願７６１  ２５１、ヨーロッパ出願６０４，０２２、カナダ特許番号第２，１６４，６８４号およびＰＣＴ公開出願番号ＷＯ  ９６／１１６６８、ＷＯ  ９６／３２１４３およびＷＯ  ９６／３８１３６を参照のこと。
【００８６】
本発明の化合物は、追加的に、平滑筋細胞、内皮細胞および好中球の如き種類の細胞宿主に対してトロンビン効果を有することから、成人呼吸窮迫症候群、炎症反応、創傷治癒、再潅流障害、アテローム性動脈硬化症、および傷害、例えばバルーン血管形成術、アテローム切除術および動脈ステント留置術などの後の再狭窄の治療もしくは予防にも使用可能である。
【００８７】
本発明の化合物は神経変性病、例えばアルツハイマー病およびパーキンソン病などの治療で用いるにも有用である。
【００８８】
本発明の化合物は、日に１回または２−４回に分割した用量の療法で体重１ｋｇ当たり約０．１から約５００ｍｇ、好適には０．１から１０ｍｇの範囲の投薬範囲内の有効量で投与可能である。
【００８９】
本発明の化合物を血栓溶解薬、例えば組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼなどと組み合わせて用いてもよい。加うるに、本発明の化合物を他の抗血栓もしくは抗凝血薬、例えばこれらに限定するものでないが、フィブリノーゲン拮抗薬およびトロンボキサン受容体拮抗薬などと組み合わせて用いることも可能である。
【００９０】
また、本発明の化合物を標的可能薬剤担体としての可溶重合体と結合させることも可能である。そのような重合体には、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシ−プロピルメタアクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルトアミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されているポリエチレンオキサイド−ポリリシンが含まれ得る。その上、本発明の化合物を薬剤の徐放の達成に有用な種類の生分解性重合体、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸の共重合体、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋もしくは両親媒性ブロック共重合体などと結合させることも可能である。
【００９１】
本発明の製薬学的組成物は、本発明の化合物の有益な効果を受け得る如何なる動物にも投与可能である。そのような動物の中で最も注目すべき動物はヒトであるが、本発明をそれに限定することを意図するものでない。
【００９２】
本発明の製薬学的組成物はこれらの意図した目的を達成する如何なる手段で投与されてもよい。例えば、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮、口腔または眼経路による投与を行うことができる。別法としてか或は同時に、投与を経口経路で実施することも可能である。投与すべき量は受益者の年齢、健康および体重、同時治療の種類（もしあれば）、治療の頻度および望まれる効果の性質に依存するであろう。
【００９３】
この新規な製薬学的製剤に、本薬理学的に有効な化合物に加えて、適切な製薬学的に許容され得る担体を含有させてもよく、そのような担体には、本活性化合物を製薬学的に使用可能な製剤に加工するのを助長する賦形剤および助剤が含まれる。
【００９４】
本発明の製薬学的製剤の製造では、例えば通常の混合、顆粒、糖衣錠製造、溶解または凍結乾燥工程などによる様式（これ自身公知である）で製造を実施する。このように、本活性化合物を固体状賦形剤と一緒にし、場合によりその結果として得た混合物を粉砕しそして望まれるか或は必要ならば適切な助剤を添加した後に前記混合物の顆粒を加工することで錠剤または糖衣錠の中心部を得ることを通して、経口用途用の製薬学的製剤を得ることができる。
【００９５】
ヒトに投与するに適した本発明の組成物の場合の用語「賦形剤」は、これにこれらに限定するものでないがＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、第２版（１９９４）（これは引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）に記述されている賦形剤を包含させることを意味する。適切な賦形剤は、特に充填材、例えば糖、例えばラクトースまたはスクロース、マンニトールまたはソルビトールなど、セルロース調合物および／または燐酸カルシウム、例えば燐酸トリカルシウムまたは燐酸水素カルシウムなどばかりでなく、結合剤、例えば澱粉ペースト（例えばトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、ジャガイモ澱粉などが用いられている）、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドンなどである。必要ならば、崩壊剤、例えばこの上に記述した澱粉およびまたカルボキシメチル−澱粉、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはこれの塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどを添加することも可能である。助剤は、とりわけ、流動調節剤および滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸もしくはこれの塩、例えばステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウムなど、および／またはポリエチレングリコールなどである。糖衣錠の中心部に適切な被膜、必要ならば胃液に抵抗する被膜を与える。この目的で濃糖溶液を用いてもよく、それに場合によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物などを入れてもよい。胃液に抵抗する被膜を生じさせようとする時には、適切なセルロース調合物、例えばフタル酸アセチルセルロースまたはフタル酸ヒドロキシプロピルメチル−セルロースなどの溶液を用いる。活性化合物の識別または用量の組み合わせを特徴付ける目的などで錠剤または糖衣錠の被膜に染料または顔料を添加することも可能である。
【００９６】
経口で用いることができる他の製薬学的製剤には、ゼラチンで出来ている押し込み型カプセルばかりでなくゼラチンと可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールなどで出来ている密封型のソフトカプセルが含まれる。押し込み型カプセルの場合には、これに本活性化合物を顆粒形態で入れてもよく、それを充填材、例えばラクトースなど、結合剤、例えば澱粉などおよび／または滑剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどおよび場合により安定剤と混合しておいてもよい。ソフトカプセルの場合には、本活性化合物を好適には適切な液体、例えば脂肪油または液状パラフィンなどに溶解または懸濁させておく。加うるに、安定剤を添加することも可能である。
【００９７】
非経口投与に適した製剤には、水溶性形態、例えば水溶性塩の形態の本活性化合物が入っている水溶液、アルカリ溶液およびシクロデキストリン包接錯体が含まれる。特に好適なアルカリ塩は、例えばＴｒｉｓ、水酸化コリン、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓプロパン、Ｎ−メチルグルカミンまたはアルギニンなどを用いて生じさせたアンモニウム塩である。本発明の化合物を安定にしかつそれの水溶性を高める目的で１種以上の修飾もしくは未修飾シクロデキストリンを用いることも可能である。この目的で用いるに有用なシクロデキストリンが米国特許第４，７２７．０６４号、４，７６４，６０４号および５，０２４，９９８号に開示されている。
【００９８】
加うるに、本活性化合物の懸濁液を適切な注入用油状懸濁液として投与することも可能である。適切な親油性溶媒もしくは媒体には、脂肪油、例えば胡麻油など、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリドなど、またはポリエチレングリコール−４００（この化合物はＰＥＧ−４００に可溶である）などが含まれる。注入用水性懸濁液の粘度を高める物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールおよび／またはデキストランなどを前記懸濁液に入れることも可能である。場合により、前記懸濁液にまた安定剤を入れることも可能である。
【００９９】
以下の実施例は本発明の方法および組成物の例示であり、限定するものでない。本分野の技術者に明らかでありかつ通常に見られるいろいろな条件およびパラメーターの他の適切な修飾および適用は本発明の精神および範囲内である。
一般的合成方法
本発明の化合物の合成はスキームＩに従って実施可能である。
【０１００】
【化９】
2008536918.tif 000011
【０１０１】
実施例１ｉで調製する如き（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル）−酢酸４−ニトロ−フェニルエステルを溶媒、例えばＣＨＣｌ３などに入れることで生じさせた−４０℃から１５０℃の温度、好適には室温の混合物に空気下でＨ２Ｎ−ＣＨ２−Ｙを溶媒、例えばＤＣＭまたはＣＨ３ＣＮなどに入れることで生じさせた溶液を加えることで化合物ＩＩＩを生じさせる。式Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−Ｙで表される化合物は商業的に入手可能であるか或は公知方法に従って合成可能である：Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．、８巻、１９２頁、２００４およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４６巻、４６１頁、２００３を参照。次に、化合物ＩＩＩとＸ−ＮＨ２と塩基、例えばジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）などと溶媒、例えばＤＭＳＯなどの混合物を空気下室温から１５０℃、好適には１００℃の温度で撹拌することで化合物Ｉを生じさせる。式Ｘ−ＮＨ２で表される化合物の製造は公知方法を用いて実施可能である；Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．、８巻、１９２頁、２００４、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６８巻、８８３８頁、２００３、ＷＯ  ９９１１２６７、ＷＯ  ２００４０９１６１３、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４６：４６１、２００３およびＣｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８：９８２、２０００を参照。
【０１０２】
本出願は、また、本発明の新規な化合物を製造する実用的な方法ばかりでなくまた非常に電子が不足しているピリジンおよび他のＮ含有ヘテロアリール化合物からこれらのＮ−オキサイドを生じさせる酸化に幅広く一般的に適用可能な方法も提供する。好適なＮ含有ヘテロアリールは、ピリジン、ピリミジン、ピラジンおよびキノリンである。その反応を酸に敏感な特定の官能基が耐える中性から酸性の条件下で行う。その反応をＣＨ３ＣＮまたはＣＨ３ＣＮとＤＣＭ（ジクロロメタン）の混合物中で進行させる。この反応は、また、電子が不足しているピリミジンおよび電子が不足しているキノリンにも適用可能である。一般的反応条件をスキーム２に示す。
【０１０３】
【化１０】
2008536918.tif 000012
【０１０４】
ここで、ＥＷＧは電子求引基、好適にはハロゲン、−ＣＦ３、エステルまたは−ＣＮであり、そして
ｎは１、２、３、４または５である。本分野の技術者は、そのようなヘテロアリールには電子求引基１種または２種以上に加えてアルキル基も存在することを認識するであろう。好適な例をスキーム３に示し、そして特に好適な例はＥＷＧが−ＣＯ２アルキルである例である。
【０１０５】
【化１１】
2008536918.tif 000013
【０１０６】
この反応の最も重要な面は、過炭酸ナトリウムと無水トリフルオロメタンスルホン酸を組み合わせる点にある。本分野の技術者は、反応を３．５時間または１６時間後のいずれかで停止させたが約３０分から１週間に及ぶいずれかの時間を用いて反応を成功裏に実施することができることを認識するであろう。ＴＬＣを用いて出発材料の消失に関して反応を検査することが反応終点の最も信頼できる決定である。また、０℃から室温の範囲以外の温度を用いることも可能であることも認識するであろう。我々は、温度を−５０℃から４０℃の範囲にすると反応が成功裏に起こり得ると期待する。本分野の技術者は、また、アセトニトリル以外の溶媒、特にアセトニトリルと塩化メチレンの混合物などの如き溶媒混合物を用いることも可能であることも認識するであろう（注：我々は、安全の理由でエーテル溶媒を強酸化剤の存在下で用いることを推奨しない）。最後に、反応を消滅させる段階（反応物を砕氷と重炭酸ナトリウムの混合物の中に注ぎ込む段階）、塩化メチレンを用いた抽出段階、余分な過酸化水素をメタ重亜硫ナトリウムで分解させる段階、そしてＩＳＯＬＵＴＥ（商標）シリカカートリッジを用いて生成物を単離する段階は本発明の決定的な面ではないことと本分野の技術を持つ如何なる人も代替方法を用いて前記反応を消滅させて生成物を単離することができることを認識するであろう。
【０１０７】
一般的手順：
オーブンで乾燥させておいた４ドラムの瓶にピリジン（１．０ミリモル）、過炭酸ナトリウム（１５７ｍｇ、１．０当量）および無水ＣＨ３ＣＮ（５．０ｍＬ）を加える。その懸濁液を氷水浴で冷却しながらこれに無水トリフルオロメタンスルホン酸（３３９μＬ、２．０当量）を滴下する。無水トリフルオロメタンスルホン酸を滴下している時に泡が発生する。その混合物の撹拌を０℃で３．５時間継続する。３時間後に大部分の過炭酸ナトリウム固体が消失する。出発材料の消費を監視する目的で処理した一定分量のＴＬＣ（またはＮＭＲスペクトル）を用いて反応を監視してもよく、そしてそのＴＬＣまたはＮＭＲスペクトルがさらなる反応が起こらないことを示した時点で反応を消滅させてもよい。次に、その反応混合物を砕氷（１０ｇ）と飽和重炭酸ナトリウム（４０ｍＬ）の混合物の上に注ぐ。撹拌を３０分間実施した後の混合物にＤＣＭ（３ｘ２０ｍＬ）を用いた抽出を受けさせる。そのＤＣＭ溶液を一緒にして食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させる。その水溶液を１０％のＮａ２Ｓ２Ｏ５溶液で処理する。そのＤＣＭ溶液を濃縮した後に２０ｇのＩＳＯＬＵＴＥ（商標）シリカカートリッジの上に充填して、ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離させる。表１に、電子不足ピリジンの代表的酸化を示す。
【０１０８】
【表１】
2008536918.tif 000014
【０１０９】
別法として、過炭酸ナトリウムの代わりに過酸化水素尿素を用いて、電子不足ピリジン、ピリミジン、キノリンまたはピリダジンの好適な酸化を達成することも可能である。好適な反応条件をスキーム４に示す。
【０１１０】
【化１２】
2008536918.tif 000015
【０１１１】
ここで、ＥＷＧは電子求引基、好適にはハロゲン、−ＣＦ３、エステルまたは−ＣＮであり、そして
ｎは１、２、３、４または５である。この反応の最も重要な面は、過酸化水素尿素と無水トリフルオロメタンスルホン酸を組み合わせることにある。
【実施例１】
【０１１２】
二塩酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミド
【０１１３】
【化１３】
2008536918.tif 000016
【０１１４】
ａ．  ２，５，６−トリフルオロ−ニコチノニトリル
【０１１５】
【化１４】
2008536918.tif 000017
【０１１６】
２，６−ジクロロ−５−フルオロ−ニコチノニトリル（２５．６７ｇ、１３４ミリモル）と噴霧乾燥ＫＦ（２３．６ｇ、４０６ミリモル）（Ａｌｄｒｉｃｈ）［両方とも塊を除去する目的で空気下で新しく粉末状にしておいた］を一緒に振とうすることで完全な混合を確保した後、無水ＤＭＳＯ（３０ｍＬ）を加えた。その混合物をアルゴン下室温で１−２分間効率良く撹拌した後、１００℃のオイルバスの中に置いて５分間撹拌した。次に、温度を１０分かけて１３０℃にまで上昇させた後、その混合物をその温度で４０分間撹拌した。反応物の一定分量が示したＮＭＲスペクトルにより、１３０℃で１０分後の変換率は８６％で４０分後の変換率は＞９５％であることが分かった。次に、その紫色の濃密な混合物を室温に冷却し、氷浴上でＤＣＭ（３０ｍＬ）と一緒に振とうした後、ＤＣＭで前以て平衡症状にしておいたフラッシュシリカカラム（１．０ｋｇのシリカゲル；１２０ｍｍｘ６”）の上に直接充填した。ＤＣＭによる溶離（１４０ｍＬの画分；１０−１９画分を一緒にした）で明黄褐色の透明な油を２０．６５ｇ得た。ＮＭＲスペクトルにより、表題の化合物：ＤＭＳＯが１：０．５８のモル比であることが分かった（表題の化合物が１６．０ｇ；７６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９９（ｍ、１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：計算した質量：１５８．０、測定値：１５９．５（ＭＨ）＋。
ｂ．  ６−ｔ−ブトキシ−２，５−ジフルオロ−ニコチノニトリル
【０１１７】
【化１５】
2008536918.tif 000018
【０１１８】
この上に示した段階で調製したままの２，５，６−トリフルオロ−ニコチノニトリル（１６．０ｇ、１０１ミリモル）［追加的に４．６ｇのＤＭＳＯが混入している］をｔ−ＢｕＯＨ（８０ｍＬ）とＴＨＦ（１５ｍＬ；凍結を防止するための）に入れることで生じさせた溶液を０℃で撹拌しながらこれにＴＨＦ（２０ｍＬ）を前以て混合しておいたｔ−ＢｕＯＨ中１．０４ＭのＫＯｔＢｕ溶液（１１０ｍＬ、１１４ミリモル）を１５分かけて滴下した。その結果として生じた赤色がかった黄褐色の均一な溶液を０℃で更に５分間撹拌した後、氷浴を取り外して、その溶液を室温で更に２０分間撹拌した。次に、５ＭのＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）を用いて反応を消滅させた後、エーテル（２ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を実施した。その有機層を一緒にして水（１ｘ１００ｍＬ）、１ＭのＮａＣｌ（１ｘ１５０ｍＬ）そして４ＭのＮａＣｌ（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、紫色の透明な有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、減圧下で濃縮し、エーテル（５０ｍＬ）で取り上げた後、ケイソウ土の詰め物に通して濾過した。その濾過ケーキをエーテル（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄した後、その濾液を一緒にして減圧下５０−６０℃で濃縮することで紫色の透明な油を２０．８９ｇ得た。ＮＭＲにより、表題の化合物と２，６−ジ−ｔ−ブトキシ−５−フルオロ−ニコチノニトリルが８９：１１のモル比であることが分かった（表題の化合物が１８．２２ｇ；８５％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６０（ｄｄ、１Ｈ）、１．６７（ｓ、９Ｈ）。
ｃ．  マロン酸ｔ−ブチルエステルメチルエステルのナトリウム塩
【０１１９】
【化１６】
2008536918.tif 000019
【０１２０】
ＮａＨ（１．５０ｇ、５９．４ミリモル）をエーテル（５０ｍＬ）に入れることで生じさせた室温の混合物を−７０℃の浴の中に置いた後、直ちに約２ｍＬずつのマロン酸ｔ−ブチルエステルメチルエステル（１０．３３ｇ、５９．４ミリモル）を用いた５回の処理を空気下で間欠的に渦巻き撹拌しながら処理した。発泡も発熱も起こらなかった。前記マロン酸エステルの添加が終了した後直ちにフラスコに緩くキャップをして０℃の浴の中で１−２分間渦巻き撹拌（発泡無し）した後、ヒートガンで間欠的に温めながら室温で注意深く１０分間撹拌した。穏やかな発泡が始まった後の反応物を時折渦巻き撹拌しながら室温に１時間放置し、その時点で濃密なペーストが生じた。次に、ロータリーエバポレーターを用いて揮発物を４０℃で除去した後、高真空下４０℃で除去することで、表題の化合物を取り扱いが容易な本質的に非吸湿性の白色粉末として得た（１１．３７ｇ、９８％）。
ｄ．  ２−（６−ｔ−ブトキシ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−マロン酸ｔ−ブチルエステルメチルエステル
【０１２１】
【化１７】
2008536918.tif 000020
【０１２２】
実施例１ｂで調製したままの６−ｔ−ブトキシ−２，５−ジフルオロ−ニコチノニトリル（１８．２２ｇ、８５．９ミリモル）とこの上に示した段階で調製したままのマロン酸ｔ−ブチルエステルメチルエステルのナトリウム塩（３４．４９ｇ、１７６ミリモル）とジオキサン（１１０ｍＬ）の濃密な混合物をアルゴン下９５℃（オイルバス）で１４時間撹拌した。その結果として生じた暗黄褐色の均一な溶液を室温に冷却し、エーテル（１５０ｍＬ）で希釈した後、２．０Ｍのクエン酸（４０ｍＬ）を入れておいた１．０ＭのＮａＨ２ＰＯ４溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。その水層にエーテル（１ｘ１００ｍＬ）を用いた逆抽出を受けさせ、その有機層を一緒にし、４ＭのＮａＣｌ（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた後、減圧下で濃縮した。その残留物からマロン酸ｔ−ブチルエステルメチルエステルの大部分を高真空下９５℃で１時間かけて除去することで表題の化合物を粘性のある暗褐色の透明な油として得た（３２．３７ｇ、約１００％の粗収率）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．４８（ｄ、１Ｈ）、５．０６（ｓ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、１．６２（ｓ、９Ｈ）、１．４７（ｓ、９Ｈ）。
ｅ．  （３−シアノ−５−フルオロ−６−ヒドロキシ−ピリジン−２−イル）−酢酸メチルエステル
【０１２３】
【化１８】
2008536918.tif 000021
【０１２４】
この上に示した段階で調製したままの２−（６−ｔ−ブトキシ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−マロン酸ｔ−ブチルエステルメチルエステル（３１．８７ｇ、８７ミリモル）にアニソール（６ｍＬ、５５ミリモル）およびＴＦＡ（５８ｍＬ、７５０ミリモル）を加えた後、その均一な溶液を４０℃で１．５時間撹拌した。次に、ロータリーエバポレーターを用いて反応物に濃縮を４０℃で受けさせ、ＴＦＡを再び加え（１３０ｍＬ、１．７４モル）た後、その反応物を室温で一晩撹拌した。再びロータリーエバポレーターを用いて前記反応物に濃縮を≦４０℃で受けさせた後、その結果として生じた濃密な油をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃で撹拌を行いながら２．０ＭのＫ２ＣＯ３（１００ｍＬ）を５−１０分かけて５−１０ｍＬずつ加えることで、最終的に水層のｐＨを９にした。撹拌を０℃で行いながら２．０Ｍのクエン酸（３０ｍＬ）を分割して加えることでｐＨを４にした後、ＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を加えた。その水層にＣＨＣｌ３（２ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を受けさせ、その有機層を一緒にし、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた後、濃縮することで粘性のある暗色の油を得た（１６．６ｇ）。その残留物をシリカフラッシュクロマトグラフィー（９：１→７：３のＤＣＭ／アセトン）にかけることで表題の化合物を黄色の固体として得た（９．１０ｇ、５１％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１２．７３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、２Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）。
ｆ．  （６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−酢酸メチルエステル
【０１２５】
【化１９】
2008536918.tif 000022
【０１２６】
この上に示した段階で調製したままの（３−シアノ−５−フルオロ−６−ヒドロキシ−ピリジン−２−イル）−酢酸メチルエステル（９．１０ｇ、４３．３ミリモル）とＰＯＣｌ３（４０ｍＬ、４３３ミリモル）の混合物を９０℃で７時間撹拌した。次に、その褐色の均一な溶液に濃縮を減圧下で受けさせ、その残留物を氷浴の上に置き、エーテル（２００ｍＬ）で希釈した後、氷水（１００ｍＬ）と一緒にして振とうした。その水層にエーテル（１ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を受けさせ、その有機層を一緒にし、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた後、減圧下４０℃で濃縮することで表題の化合物を暗黄褐色の透明な油として得た（９．４５ｇ、９６％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７５（ｄ、１Ｈ）、４．０６（ｓ、２Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）。
ｇ．  （６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−酢酸
【０１２７】
【化２０】
2008536918.tif 000023
【０１２８】
この上に示した段階で調製したままの（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−酢酸メチルエステル（９．３６ｇ、４０．９ミリモル）と４．０ＭのＨＣｌ（水溶液）（２５６ｍＬ）とジオキサン（５１ｍＬ）の混合物を６５℃で２時間激しく撹拌した。次に、その黄褐色の均一な溶液を室温に冷却し、ＤＣＭ（３ｘ１００ｍＬ）で抽出し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた後、減圧下４５℃で濃縮することで表題の化合物を暗黄褐色の透明な油として得た（７．４０ｇ、８４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７５（ｄ、１Ｈ）、４．１１（ｓ、２Ｈ）。
ｈ．  （６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−酢酸４−ニトロ−フェニルエステル
【０１２９】
【化２１】
2008536918.tif 000024
【０１３０】
この上に示した段階で調製したままの（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−酢酸（２．３７ｇ、１１．０ミリモル）と４−ニトロフェノール（１．８４ｇ、１３．２ミリモル）とＤＣＭ（１１ｍＬ）から生じさせた褐色の均一な溶液をアルゴン下０℃で撹拌しながら１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（１．９０ｍＬ、１２．１ミリモル）を撹拌を伴わせて３分かけて滴下した。そのＤＩＣの滴下が終了した後直ちに氷浴を取り外した後、黄色がかった沈澱物が入っている褐色の混合物を室温で１時間４０分撹拌した。次に、その粗反応物をフラッシュシリカカラムの上に直接充填した後、９６：４のトルエン／ＣＨ３ＣＮで溶離させることで表題の化合物を淡黄色の半透明油として得た（３．１１ｇ、８４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２９（ｍ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、１Ｈ）、７．３５（ｍ、２Ｈ）、４．３５（ｄ、０．７Ｈｚ、２Ｈ）。
ｉ．  （６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル）−酢酸４−ニトロ−フェニルエステル
【０１３１】
【化２２】
2008536918.tif 000025
【０１３２】
手順Ａ
［注：以下に記述する反応は事故無しに進行したが、これを大型のプレキシグラス遮蔽の後方で実施した］。この上に示した段階で調製したままの（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−酢酸４−ニトロ−フェニルエステル（４．８５ｇ、１４．５ミリモル）をＣＨ３ＣＮ（１１０ｍＬ）に入れることで生じさせた淡黄色の溶液を空気下０℃で撹拌しながらこれに過炭酸ナトリウム固体［４．５４ｇ、（Ｈ２Ｏ２を〜２５重量％（〜４３ミリモル）含有）、Ａｌｄｒｉｃｈ）から得た］を一度に添加した。次に、過炭酸ナトリウムの添加後直ちに無水トリフルオロメタンスルホン酸（７．５８ｇ、２６．９ミリモル）を撹拌を０℃で行いながら１１分かけて滴下した後、その結果として生じた黄色の半透明溶液を０℃で３時間撹拌した。次に、その反応物を氷冷ＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、氷冷１ＭのＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）で反応を消滅させた後、その２層を０℃で７分間撹拌した。次に、その有機層を集め、その水層にＤＣＭ（２ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を受けさせ、その有機層を一緒にして乾燥（２ｘＮａ２ＳＯ４）させ、濾過した後、減圧下室温で濃縮することで表題の粗化合物を４．８９ｇ得た（ＮＭＲは表題の化合物が６８モル％で出発材料が２５モル％でニトロフェノールが７モル％であることを示している）。その材料を無水エーテルと一緒にして室温で５分間撹拌することで磨り潰した（１ｘ５０ｍＬ；１ｘ２５ｍＬ）。ＮＭＲにより、表題の化合物が８４モル％で出発材料が１６モル％でありそしてニトロフェノールが完全に除去されたことが分かった。撹拌を室温で実施することによる２０分間の磨り潰しを更に４回（１ｘ５０ｍＬのエーテル、１ｘ５５ｍＬの１０：１エーテル／ＤＣＭ、１ｘ５０ｍＬの１：１エーテル／ＤＣＭそして１ｘ５０ｍＬのＤＣＭ）実施して、各磨り潰し後に透明な上澄み液を除去することで、表題の化合物をオフホワイトの固体として得た（２．９６ｇ、５８％）。ＮＭＲにより、表題の化合物が９６モル％で出発材料が４モル％であることが分かった。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２９（ｍ、２Ｈ）、７．４６（ｄ、１Ｈ）、７．３６（ｍ、２Ｈ）、４．３７（ｄ、０．７Ｈｚ、２Ｈ）。
【０１３３】
手順Ｂ
（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−ピリジン−２−イル）−酢酸４−ニトロ−フェニルエステル（３５．９０ｇ、１０６．９５ミリモル）をアセトニトリル（１７９．５０ｍＬ）に溶解させた後、氷／水浴を用いて０℃に冷却した。この混合物に過酸化水素尿素（２３．１４ｇ、２４５．９８ミリモル）を加えて５分間撹拌した。次に、この反応混合物に０℃で無水トリフルオロメタンスルホン酸（６６．３８ｇ、２３５．２８ミリモル）を温度を３．５℃未満に維持しながら２．２５時間かけて滴下した。滴下後の混合物の撹拌を同じ温度で２時間継続した。その混合物に追加的過酸化水素尿素（２．３ｇ、２４．４ミリモル）、無水トリフルオロメタンスルホン酸（４ｍＬ、２３．８ミリモル）を加えた後、その混合物を０℃で３０分間撹拌した。その混合物に別の分量の過酸化水素尿素（２．３ｇ、２４．４ミリモル）および無水トリフルオロメタンスルホン酸（４ｍＬ、２３．８ミリモル）を加えた。その混合物を０℃で１５分間撹拌すると、ＨＰＬＣにより、反応が９６％完了したことが分かった。その混合物の温度を１０℃未満に維持しながらこれに重亜硫酸ナトリウム溶液（５％、１０００ｍＬ）を注意深く加えた。その反応混合物を氷／水浴の中に置いて０℃で５分間撹拌した後、冷蔵庫の中に一晩貯蔵した。そのスラリーを濾過した後、水（２ｘ１００ｍＬそして５０ｍＬ）で洗浄した。その固体を真空下６０℃で６時間乾燥させることで褐色の固体を得た（３１．７ｇ、８４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ３−アセトニトリル）：８．３２（ｍ、２Ｈ）、７．７５（ｍ、１Ｈ）、７．３７（ｍ、２Ｈ）、４．３２（ｓ、２Ｈ）。１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ、ｄ３−アセトニトリル）：−１１５ｐｐｍ。Ｃ１４Ｈ７Ｎ３Ｏ５ＣｌＦとして計算した元素分析値：Ｃ  ４７．８１、Ｈ  ２．００、Ｎ  １１．９５、Ｆ  ５．４０、Ｃｌ  １０．０８。測定値：Ｃ  ４７．６６、Ｈ  １．７０、Ｎ  １１．８２、Ｆ  ５．８４、Ｃｌ  １０．１６。融点＝１７１．９−１７３．６℃。
ｊ．  （３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−メチルアミン
【０１３４】
【化２３】
2008536918.tif 000026
【０１３５】
二塩酸（３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−メチルアミン（１．３１３ｇ、６．６０ミリモル）（ＷＯ  ００／７５１３４  Ａｌ；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３３：５６５、１９８５）をエーテル（６ｍＬ）と２．５ＭのＮａＯＨ（５ｍＬ；１２．５ミリモル）の間で分離させた。その水層（ｐＨ約８）にＤＣＭ（４ｘ２０ｍＬ）を用いた抽出を受けさせた。次に、その水層を２．５ＭのＮａＯＨでｐＨ〜１２にし、ＤＣＭ（２ｘ２０ｍＬ）で抽出し、そのＤＣＭ層とエーテル層を一緒にし、乾燥（２ｘＮａ２ＳＯ４）させた後、ロータリーエバポレーターを用いて＜３０℃で濃縮することで表題の化合物の遊離塩基を暗褐色の透明な油として得た（７８０ｍｇ、９４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３８（ｄｔ、１Ｈ）、７．３９−７．３２（ｍ、１Ｈ）、７．２４−７．１７（ｍ、１Ｈ）、４．０６（ｄ、２Ｈ）、１．８３（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）。
ｋ．  ２−（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル）−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミド
【０１３６】
【化２４】
2008536918.tif 000027
【０１３７】
実施例１ｉで調製したままの（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル）−酢酸４−ニトロ−フェニルエステル（１．８０１ｇ、５．１２ミリモル）をＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた室温の混合物に空気下でこの上に示した段階で生じさせたままの（３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−メチルアミン（６９８ｍｇ、５．５３ミリモル）をＤＣＭ（３５ｍＬ）とＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）に入れることで生じさせた均一な溶液を加えた。次に、そのフラスコにキャップをした後、その混合物を室温で１０時間撹拌したが、この時点でそれは黄褐色の半透明な溶液になった。［ＮＭＲは、表題の化合物が８５％変化したことに加えて（３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−メチルアミンが全く残存しないことを示していた］。反応を１０時間実施した後、追加的（３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−メチルアミン（６８ｍｇ、０．５３ミリモル）を加え、その反応物を更に１２時間撹拌した後、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮することで黄褐色の半透明な溶液（〜１５ｍＬ）を生じさせたが、これはＥｔＯＡｃで前以て平衡症状にしておいたシリカフラッシュカラムの上に直接充填するに適していた。ＥｔＯＡｃで溶離させることで表題の化合物をオフホワイトの固体として得た（１．２９ｇ、７４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３６（ｄｔ、１Ｈ）、７．５５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．４４−７．３６（ｍ、１Ｈ）、７．４１（ｄ、１Ｈ）、７．３０−７．２３（ｍ、１Ｈ）、４．６６（ｄｄ、２Ｈ）、４．２０（ｓ、２Ｈ）。
ｌ．  ２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミド
【０１３８】
【化２５】
2008536918.tif 000028
【０１３９】
この上に示した段階で生じさせたままの２−（６−クロロ−３−シアノ−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル）−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミド（１．１５６ｇ、３．４２ミリモル）と２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミン（６５１ｍｇ、４．１２ミリモル）（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６：４６１、２００３；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８：９８２、２０００）とＤＩＰＥＡ（６２２μＬ、３．７６ミリモル）とＤＭＳＯ−ｄ６（２．８ｍＬ）の混合物を空気下１００℃で２時間撹拌した。この時点の粗反応物のＮＭＲは変換率が〜９５％であることを示していた。次に、その粗反応物を４：１のＥｔＯＡｃ／アセトンで前以て平衡症状にしておいたシリカフラッシュカラム（６００ｍＬの無水シリカゲル）の上に充填した後、４：１→３：１のＥｔＯＡｃ／アセトンで溶離させることで表題の化合物をベージュ色の固体として得た（９３５ｍｇ、５９％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．６５（ｍ、１Ｈ）、８．３１（ｄｔ、１Ｈ）、８．３１（ｄｔ、１Ｈ）、７．９９（ｍ、２Ｈ）、７．８３（ｔｄ、１Ｈ）、７．６７（ｍ、１Ｈ）、７．４２（ｍ、１Ｈ）、７．３６（ｍ、１Ｈ）、７．３１−７．２０（ｍ、２Ｈ）、４．６３（ｄｄ、２Ｈ）、４．５５（ｄｔ、２Ｈ）、４．１５（ｓ、２Ｈ）。
ｍ．  二塩酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミド
【０１４０】
【化２６】
2008536918.tif 000029
【０１４１】
手順Ａ
この上に示した段階で生じさせたままの２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミド（９２０ｍｇ、２．００ミリモル）を無水ＣＨ３ＣＮ（４２ｍＬ）に入れて穏やかに撹拌することで溶解させた。その温かい均一な溶液を渦巻き撹拌しながらこれに空気下で０．２０２ＭのＨＣｌ／ＣＨ３ＣＮ溶液（２１ｍＬ；４．２４ミリモルのＨＣｌ）を一度に加えた。［風袋を計っておいたメスシリンダーに無水ＣＨ３ＣＮを４７．７ｍＬの最終体積になるまで入れて、それに無水ＨＣｌガスを短時間吹き込むことで、前記０．２０２ＭのＨＣｌ／ＣＨ３ＣＮ溶液を生じさせた）。その均一な溶液にキャップをして、室温に一晩放置すると３０分以内に結晶が生じ始めた。結晶の生成が完了した後、黄褐色の上澄み液を傾斜法で除去し、その結晶を無水ＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）と一緒に渦巻き撹拌し、溶媒を傾斜法で除去した後、結晶をフラスコからＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）の存在下でかき落として、濾過した。次に、その結晶を真空下で短時間乾燥させ、乳鉢と乳棒を用いて粉末にした後、真空下で一晩乾燥させることによる１回の収穫で表題の化合物を一水化物として明ピンク色の結晶性固体として得た（６１２．３ｍｇ、５７％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ８．８２（ｄ、１Ｈ）、８．６５（ｍ、１Ｈ）、８．５１（ｄｔ、１Ｈ）、８．１０−８．００（ｍ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、１Ｈ）、７．７７（ｔｄ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、１Ｈ）、４．８９（ｄ、２Ｈ）、４．５７（ｄｔ、２Ｈ）、４．１５（ｓ、２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：遊離塩基として計算した質量：４６０．１、測定値４６１．１（ＭＨ）＋。遊離塩基・２．０４ＨＣｌ・１．０７Ｈ２Ｏ・０．０４５ＣＨ３ＣＮとして計算した元素分析値：Ｃ  ４５．５７、Ｈ  ３．６８、Ｎ  １５．２３、Ｃｌ  １３．０２。測定値：Ｃ  ４５．４７、Ｈ  ３．４０、Ｎ  １５．１、Ｃｌ  １３．０２。カールフィッシャーによる水％：３．４６。
【０１４２】
手順Ｂ
４００ｍｇの２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドを８．０ｍＬのアセトニトリルに入れることで生じさせた懸濁液を撹拌しながらオイルバスで７５℃に加熱した。固体が７２℃で溶解し始めて７５℃で完全に溶解することで黄色の溶液が生じた。この混合物を前記オイルバスの中でゆっくり冷却して約５３℃にした。その反応混合物を撹拌しながらこれに０．２ｍＬの塩酸（３７％、ＡＣＳ試薬、約９．８Ｍ）を０．３ｍＬのアセトニトリルに入れることで生じさせた溶液を滴下した。ほとんど直ちに沈澱物が生じた。その混合物を激しく撹拌しながら室温になるまで冷却した。その混合物を室温に冷却した。次に、その混合物を冷凍庫に一晩入れた。その結果として生じたスラリーを濾過した後、最少量の冷アセトニトリルで濯いだ。得た固体を乳鉢と乳棒で粉砕した後、真空下２５℃で一晩乾燥させることで白色の結晶性固体を得た（０．４５ｇ、９４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ８．７８（ｄｄ、Ｊ＝１．１４、５．７７Ｈｚ、１Ｈ）、８．６０（ｄｍ、Ｊ＝４．１８Ｈｚ、１Ｈ）、８．４６（ｄｔ、Ｊ＝１．１６、８．７０Ｈｚ、１Ｈ）、８．０２（ｍ、１Ｈ）、７．９７（ｄｔ、Ｊ＝１．６８、７．８１Ｈｚ、１Ｈ）、７．７７（ｄ、Ｊ＝１１．９８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７１（ｔｄ、Ｊ＝７．９５、０．９９Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３（ｄｄ、Ｊ＝４．９１、７．５９Ｈｚ、１Ｈ）、４．８６（ｄ、Ｊ＝４．９４Ｈｚ、２Ｈ）、４．５４（ｔ、Ｊ＝１３．９０Ｈｚ、２Ｈ）、４．１２（ｓ、２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ）：遊離塩基として計算した質量：４６０．１、測定値４６０．９（ＭＨ）＋。遊離塩基・２ＨＣｌ・Ｈ２Ｏとして計算した元素分析値：Ｃ  ４５．７５、Ｈ  ３．６６、Ｎ  １５．２４、Ｃｌ  １２．８６；Ｈ２Ｏ  ３．２７。測定値：Ｃ  ４５．６３、Ｈ  ３．３４、Ｎ  １５．１１、Ｃｌ  １３．０６。カールフィッシャーによる水％：３．１５。
ｎ．  一臭化水素酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミド
【０１４３】
【化２７】
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【０１４４】
２．０ｇの２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドを４０ｍＬのアセトニトリルに入れることで生じさせた懸濁液を撹拌しながらオイルバスで７５℃に加熱した。固体が７２℃で溶解し始めて７５℃で完全に溶解することで黄色の溶液が生じた。この混合物を前記オイルバスの中でゆっくり冷却して約５３℃にした。その混合物を撹拌しながらこれに０．５９ｍＬの臭化水素酸（４８％、ＡＣＳ試薬、約８．８４Ｍ）を２ｍＬのアセトニトリルに入れることで生じさせた溶液を滴下した。ほとんど直ちに沈澱物が生じた。その混合物を激しく撹拌しながら室温になるまで冷却した。次に、その混合物を冷凍庫に一晩入れた。その結果として得た混合物を濾過した後、最少量の冷アセトニトリルで濯いだ。得た固体を乳鉢と乳棒で粉砕した後、真空下７８℃で２時間乾燥させることで淡黄色の結晶性固体を得た（２．１１ｇ、８６％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ８．７６（ｄｄ、Ｊ＝１．１２、５．７１Ｈｚ、１Ｈ）、８．６０（ｄｍ、Ｊ＝４．７３Ｈｚ、１Ｈ）、８．４２（ｄｔ、Ｊ＝１．１１、８．７２Ｈｚ、１Ｈ）、８．００（ｍ、１Ｈ）、７．９６（ｄｔ、Ｊ＝１．６４、７．７９Ｈｚ、１Ｈ）、７．７７（ｄ、Ｊ＝１１．９７Ｈｚ、１Ｈ）、７．７０（ｔｄ、Ｊ＝７．９３、０．８７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５２（ｄｄ、Ｊ＝４．９８、７．４５Ｈｚ、１Ｈ）、４．８５（ｓ、２Ｈ）、４．５４（ｔ、Ｊ＝１４．０５Ｈｚ、２Ｈ）、４．１２（ｓ、２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ）：遊離塩基として計算した質量：４６０．１、測定値４６１．０（ＭＨ）＋。遊離塩基・１．２ＨＢｒ・０．６Ｈ２Ｏとして計算した元素分析値：Ｃ  ４４．３８、Ｈ  ３．２６、Ｎ  １４．７９、Ｂｒ  １６．８７；Ｈ２Ｏ  １．９０。測定値：Ｃ  ４４．４８、Ｈ  ３．０８、Ｎ  １４．７１、Ｂｒ、１７．２１。カールフィッシャーによる水％：１．９９。
【実施例２】
【０１４５】
錠剤製造
活性化合物である二塩酸２−［３−シアノ−６−（２，２−ジフルオロ−２−ピリジン−２−イル−エチルアミノ）−５−フルオロ−１−オキシ−ピリジン−２−イル］−Ｎ−（３−フルオロ−ピリジン−２−イルメチル）−アセトアミドをそれぞれ２５．０、５０．０および１００．０ｍｇ含有する錠剤の調製を以下に示す如く実施する：
１回分の活性化合物含有量が２５−１００ｍｇの錠剤
前記活性化合物とセルロースとコーンスターチの一部（コーンスターチが１０％のペーストが生じる量）の全部を混合した後、顆粒状にする。その結果として得た顆粒をふるい分けし、乾燥させた後、コーンスターチの残りおよびステアリン酸マグネシウムと混合する。次に、その結果として得た顆粒を圧縮することで有効成分が錠剤１個当たりにそれぞれ２５．０、５０．０および１００．０ｍｇ入っている錠剤を生じさせる。
【実施例３】
【０１４６】
静脈内用溶液の調製
この上に示した実施例１の活性化合物の静脈内投薬形態物の調製を下記の如く実施する：
活性化合物                    ０．５−１０．０ｍｇ
クエン酸ナトリウム                ５−５０ｍｇ
クエン酸                          １−１５ｍｇ
塩化ナトリウム                    １−８ｍｇ
注射用水（ＵＳＰ）                １ｍｌにするに必要な量
【０１４７】
この上に示した量を用いて、塩化ナトリウムとクエン酸とクエン酸ナトリウムを注射用水［ＵＳＰ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）（１９９４）出版のＵｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ｆｏｒ  １９９５の１６３６頁を参照］に入れることで前以て生じさせておいた室温の溶液に前記活性化合物を溶解させる。
【実施例４】
【０１４８】
精製酵素のインビトロ阻害
試薬：あらゆる緩衝剤塩をＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手したが、これらは入手可能な最も高い純度のものであった。
【０１４９】
ヒトα−トロンビンをＥｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｏｕｔｈ  Ｂｅｎｄ、Ｉｎｄｉａｎａ）から入手した。
【０１５０】
発色基質を用いた速度解析
化合物にトロンビンに対する阻害活性に関する評価をパラ−ニトロアニリン発色基質を用いた速度解析を４０５ｎｍで監視することを通して受けさせた。用いた検定用緩衝液はＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）が５０ｍＭでＮａＣｌが２００ｍＭで新鮮なｎ−オクチルβ−ｄ−グルコピラノシドが０．０５％であった。前記基質および阻害性化合物のストック溶液に由来するＤＭＳＯの最終濃度は４％であった。低結合性の９６穴ポリスチレン製プレートの中で２８０ｕＬの基質を検定用緩衝液に１０μＬの試験化合物［最終的な試験化合物濃度（Ｋｉを括弧の中に示す）が得られるようにＤＭＳＯに入れておいた］と一緒に入れて３７℃で１５分間前以てインキュベートしておいた。プロテアーゼを１０μＬ添加して反応を開始させ、そして基質が蛋白質分解によって開裂することで起こる吸光度の上昇をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  ３４０プレート読み機を４０５ｎｍで用いて３７℃で速度的に監視した。反応の最初の直線部分を解析することで初期の速度を決定した。阻害剤濃度と対比させたｖ０／ｖｉのプロット（ここで、ｖ０＝阻害無しの時の速度、そしてｖｉ＝抑制された速度）を線形回帰線に適合させ、その傾きの逆数からＩＣ５０を決定した。この検定に特異的なＫｉ係数をＫｉ＝ＩＣ５０ｘＫｉ係数またはＫｉ＝ＩＣ５０ｘ（１／（１＋［Ｓ］／Ｋｍ））［ここで、Ｓは、この検定における基質の濃度であり、そしてＫｍは、基質のミカエリス定数［Ｃｈｅｎｇ  ＹおよびＰｒｕｓｏｆｆ  ＷＨ（１９７３）、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２２：３０９９−３１０８］として用いてＫｉをＩＣ５０から計算した。
【０１５１】
このトロンビン検定に組み込んだ基質はＳｕｃＡＡＰＲｐＮＡ（Ｂａｃｈｅｍ  Ｌ−１７２０、最終的［Ｓ］＝１００ｕＭ、Ｋｍ＝３２０μＭ、Ｋｉ係数＝０．７６）。ＤＭＳＯ中の基質（１０．７ｍＭ）を検定用緩衝液で１００倍に希釈して最終の１００μＭにした。ヒトα−トロンビン（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＨＴ１００２ａ）を検定用緩衝液で１５００倍に希釈して最終的検定濃度である１．１ｎＭにした。
【０１５２】
その結果は、実施例１の化合物がヒトトロンビンに関して示したＫｉ値は９．８から１１ｎＭの範囲であることを示している。
【０１５３】
ここに本発明を詳細に記述してきたが、本分野の通常の技術者は、本発明の範囲にも本発明の如何なる態様にも影響を与えない限り幅広い相当する範囲の条件、配合および他のパラメーターの範囲内で本発明を実施することができることを理解するであろう。本明細書に引用した特許および出版物は全部引用することによって全体が本明細書に詳細に組み入れられる。
【国際調査報告】
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