(57)【要約】式（Ｉ）によって表される化合物（式中、Ｒ1はシクロアルキルスルホニル基）またはこれらの薬学的に許容される塩は、高血糖および糖尿病の予防的または治療的処置に有用である。2008509898.tif 000023
2008509898.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【化１】
2008509898.tif 000016
ここで、
Ｖは、（ＣＨ2）kであり、式中、１つのＣＨ2基は、ＣＨ（ＯＨ）、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＯＨ、Ｃ＝ＮＯＣＨ3、ＣＨＸ、ＣＸＸ1、ＣＨ（ＯＣＨ3）、ＣＨ（ＯＣＯＣＨ3）、ＣＨ（Ｃ1-4アルキル）、またはＣ（ＯＨ）（Ｃ1-4アルキル）によって置換されており、
ＸおよびＸ1は、独立してフルオロおよびクロロから選択され、
Ｒ1は、ＳＯ2Ｒ4であり、
Ｔは、それが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にヘテロアリール環を形成するか、またはＮ＝Ｃ結合が不飽和の部位のみである場合は複素環式の環を形成し、
Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＣＦnＨ3-n、メトキシ、ＣＯ2Ｒ5、シアノ、ニトロ、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ6Ｒ7、ＣＯＮ（ＯＣＨ3）ＣＨ3、または任意に１〜５個の独立したハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、メトキシ、−ＮＨＣＯ2ＣＨ3、もしくは−Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）置換基で置換されたＣ1-2アルキル、ヘテロアリール、もしくはＣ3-7シクロアルキルであるか、またはＲ2およびＲ3は、共に５〜８員の芳香族、複素環式芳香族化合物、炭素環式もしくは複素環式の環を形成し、ただし、Ｔが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にＴによって形成される環は、５−フルオロチアゾール−２−イルではなく、
Ｒ4は、Ｃ3-7シクロアルキル基であり、
Ｒ5は、水素、または式中、任意の基が１〜６個の独立したハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ1-2アルコキシ、−Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、Ｃ1-2アルキル、Ｃ3-7シクロアルキル、４〜７員の複素環式の環、ＣＦnＨ3-n、アリール、ヘテロアリール、ＣＯ2Ｈ、−ＣＯＣ1-2アルキル、−ＣＯＮ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、ＳＯＣＨ3、ＳＯ2ＣＨ3、もしくは−ＳＯ2Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）置換基で任意に置換されているＣ1-4アルキル基、Ｃ2-4アルケニル基、Ｃ2-4アルキニル基、Ｃ3-7シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、もしくは４〜７員の複素環基であり、
Ｒ6およびＲ7は、それぞれ独立して、水素、または式中、任意の基が１〜６個の独立したハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ1-2アルコキシ、−Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、Ｃ1-2アルキル、Ｃ3-7シクロアルキル、４〜７員の複素環式の環、ＣＦnＨ3-n、アリール、ヘテロアリール、ＣＯＣ1-2アルキル、−ＣＯＮ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、ＳＯＣＨ3、ＳＯ2ＣＨ3、もしくは−ＳＯ2Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）置換基で任意に置換されているＣ1-4アルキル基、Ｃ3-7シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、もしくは４〜７員の複素環基であるか、またはＲ6およびＲ7は、共に６〜８員のヘテロ二環式の環系または１〜２個の独立したＣ1-2アルキル、ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＯＣ0-2アルキル、ヒドロキシ、もしくはＳＯ2ＣＨ3置換基で任意に置換されている４〜８員の複素環式の環を形成し、
ｎは、１、２、または３であり、
ｋは、２〜７の整数であり、
ｍは、０または１であり、
点線は、実線と共に任意に二重結合を形成し、Δは、二重結合が（Ｅ）−配置を有することを示す。
【請求項２】
点線が実線と共に単結合を形成する、請求項１記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項３】
点線が実線と共に単結合を形成し、不斉中心αにおけるアミドカルボニル炭素に対する絶対配置が（Ｒ）である、請求項２記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項４】
ｍが０である、請求項１から３のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項５】
ｋが４または５である、請求項１から４のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項６】
−ＨＣ＜および＞Ｖ−によって形成される基が、３−オキソシクロペンチル、４−オキソシクロヘキシル、または３−ヒドロキシシクロペンチルである、請求項５記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項７】
−ＨＣ＜および＞Ｖ−によって形成される基が３−オキソシクロペンチルである、請求項６記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ4がＣ3-4シクロアルキルである、請求項１から７のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｔが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にＴによって形成される環が、５または６員の単環式のヘテロアリール基である、請求項１から８のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｒ2およびＲ3が、独立して水素、ハロゲン、およびメチルから選択される、請求項１から９のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｔが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にＴによって形成される環が、１−メチルピラゾール−３−イル、ピラジン−２−イル、および６−メチルピリダジン−３−イルから選択される、請求項９または１０記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
２（Ｒ）−２−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−Ｎ−（１−メチルピラゾール−３−イル）−３−（（Ｒ）−３−オキソシクロペンチル）プロピオンアミド、
２（Ｒ）−２−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３−（（Ｒ）−３−オキソシクロペンチル）プロピオンアミド、および、
２（Ｒ）−２−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−Ｎ−（６−メチルピリダジン−３−イル）−３−（（Ｒ）−３−オキソシクロペンチル）プロピオンアミド、
から選択される化合物、またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩と、薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１から１２のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効量を投与する工程を含む、ＧＫの活性化が望ましい状態の予防的または治療的処置方法。
【請求項１５】
請求項１から１２のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効量を投与する工程を含む、高血糖または糖尿病の予防的または治療的処置方法。
【請求項１６】
請求項１から１２のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩が、１つもしくは複数のその他の抗高血糖薬または抗糖尿病薬と組み合わせて投与される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
請求項１から１２のいずれか記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効量を投与する工程を含む、プレ糖尿病性高血糖またはグルコース耐性障害を示すヒトにおける糖尿病の予防方法。
【請求項１８】
式（Ｉａ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の製造方法であって、
【化２】
2008509898.tif 000017
式（ＩＶ）の化合物
【化３】
2008509898.tif 000018
を式（Ｖ）の化合物またはその塩と縮合することを含み、
【化４】
2008509898.tif 000019
Ｖ、Ｔ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、ｍ、及びΔは、請求項１で定義された通りである方法。
【請求項１９】
式（Ｉｂ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の製造方法であって、
【化５】
2008509898.tif 000020
式（ＶＩＩＩ）の化合物
【化６】
2008509898.tif 000021
を式（Ｖ）の化合物またはその塩と縮合することを含み、
【化７】
2008509898.tif 000022
Ｖ、Ｔ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、及びｍは、請求項１で定義された通りである方法。
【請求項２０】
請求項１８または１９で定義された式（ＩＶ）または式（ＶＩＩＩ）の化合物もしくはその保護誘導体、またはこれらの塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリ（シクロ）置換されたアミド化合物に関する。特に、本発明は、グルコキナーゼのモジュレーターであり、かつ高血糖および糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防的または治療的処置に有用である、ｉ）カルボニル炭素にて、フェニル環および環状炭素に結合したエチル／エテニルで置換された、並びにｉｉ）アミノにて、窒素を有するヘテロアリールまたは不飽和のヘテロシクリル環で置換されたアミド化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルコキナーゼ（「ＧＫ」）は、体内の血漿グルコースレベルの制御に重要であると考えられている。主に肝臓および膵臓で確認されるＧＫは、グルコースの初期代謝を触媒する４つのヘキソキナーゼのうちの１つである。ＧＫ経路は、その他のヘキソキナーゼ経路よりも高いグルコースレベルにて飽和する（Ｒ．Ｌ．  Ｐｒｉｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｎｕｔｒ．，  １３：４６３−４９６（１９９３）を参照されたい）。ＧＫは、哺乳類におけるグルコースバランスの維持に重要である。ＧＫを発現しない動物は、出生後すぐに糖尿病で死亡するが、一方、ＧＫを過剰発現する動物は、グルコース耐性を向上させてきた。ＧＫの活性化は、高インスリン性低血糖を引き起こし得る（たとえば、Ｈ．Ｂ．Ｔ．  Ｃｈｒｉｓｔｅｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，  ５１：１２４０−１２４６（２００２）を参照されたい）。加えて、若者におけるＩＩ型若年発症型成人型糖尿病は、ＧＫ遺伝子の機能喪失突然変異によって生じ、ＧＫがヒトにおけるグルコースセンサーとして作動することを示唆している（Ｙ．  Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．，  ３０９：１６７−１７３  （１９９５））。したがって、ＧＫを活性化する化合物は、ＧＫ感覚系の感受性を増大し、高血糖、特にＩＩ型糖尿病と関連する高血糖の治療において有用である。したがって、糖尿病を治療するために、ＧＫを活性化する新規化合物を提供することが望ましい。
【０００３】
国際特許公開第ＷＯ２００１／０４４２１６号および米国特許第６，３５３，１１１号では、ＧＫ活性化剤として、（Ｅ）−２，３−二置換−Ｎ−ヘテロアリールアクリルアミドが開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００２／０１４３１２号、並びに米国特許第６，３６９，２３２号、第６，３８８，０８８号、および第６，４４１，１８０号では、テトラゾリルフェニルアセトアミドＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２０００／０５８２９３号、欧州特許出願第ＥＰ１１６９３１号、および米国特許第６，３２０，０５０号では、アリールシクロアルキルプロピオンアミドＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００２／００８２０９号および米国特許第６，４８６，１８４号では、抗糖尿病薬としてのα−アシルおよびα−ヘテロ原子置換されたベンゼンアセトアミドＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００１／０８３４７８号では、ヒダントイン含有ＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００１／０８３４６５号および米国特許第６，３８８，０７１号では、アルキニルフェニル複素環式芳香族化合物ＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００１／０８５７０７号および米国特許第６，４８９，４８５号では、パラアミン置換されたフェニルアミドＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００２／０４６１７３号、並びに米国特許第６，４３３，１８８号、第６，４４１，１８４号、および第６，４４８，３９９号では、縮合された複素環式芳香族化合物ＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００２／０４８１０６号および米国特許第６，４８２，９５１号は、イソインドリン−１−オンＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００１／０８５７０６号では、ＩＩ型糖尿病を治療するための、置換されたフェニルアセトアミドＧＫ活性化剤が開示されている。米国特許第６，３８４，２２０号では、パラアリールまたはヘテロアリール置換されたフェニルＧＫ活性化剤が開示されている。フランス特許第２，８３４，２９５号では、ヒトＧＫの精製方法および結晶構造が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３／０９５４３８号では、ＩＩ型糖尿病の治療のためのＧＫ活性化剤としてＮ−ヘテロアリールフェニルアセトアミドおよび関連化合物が開示されている。米国特許第６，６１０，８４６号では、ＧＫ活性化剤としてのシクロアルキルヘテロアリールプロピオンアミドの調製が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３／０００２６２号では、ビニルフェニルＧＫ活性化剤が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３／０００２６７号では、ＧＫモジュレーターとしてのアミノニコチン酸塩誘導体が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３／０１５７７４号では、ＧＫモジュレーターとしての化合物が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３０４７６２６号では、ＩＩ型糖尿病を治療するためにＧＫ活性化剤をグルカゴンアンタゴニストと組み合わせて使用することが開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３／０５５４８２号では、ＧＫ活性化剤としてのアミド誘導体が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３／０８０５８５号では、��尿病および肥満症の治療のための、ＧＫ活性をもつアミノベンズアミド誘導体が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００３／０９７８２４号では、ヒト肝臓ＧＫ結晶およびこれらの構造に基づいたドラッグデザインのための使用が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００４／００２４８１号では、ＧＫ活性化剤としてのアリールカルボニル誘導体が開示されている。国際特許公開第ＷＯ２００４／０７２０３１号およびＷＯ２００４／０７２０６６号（本出願の優先日以後に公開された）では、ＧＫ活性化剤としてのトリ（シクロ）置換されたアミド化合物が開示されている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
式（Ｉ）によって表される化合物またはこれらの薬学的に許容される塩は、高血糖および糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防的または治療的処置に有用である。
【化１】
2008509898.tif 000003
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明は、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。
【化２】
2008509898.tif 000004
ここで、
Ｖは、（ＣＨ2）kであり、式中、１つのＣＨ2基は、ＣＨ（ＯＨ）、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＯＨ、Ｃ＝ＮＯＣＨ3、ＣＨＸ、ＣＸＸ1、ＣＨ（ＯＣＨ3）、ＣＨ（ＯＣＯＣＨ3）、ＣＨ（Ｃ1-4アルキル）、またはＣ（ＯＨ）（Ｃ1-4アルキル）によって置換されており、
ＸおよびＸ1は、独立してフルオロおよびクロロから選択され、
Ｒ1は、ＳＯ2Ｒ4であり、
Ｔは、それが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にヘテロアリール環を形成するか、またはＮ＝Ｃ結合が不飽和の部位のみである場合は複素環式の環を形成し、
Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ＯＣＦnＨ3-n、メトキシ、ＣＯ2Ｒ5、シアノ、ニトロ、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ6Ｒ7、ＣＯＮ（ＯＣＨ3）ＣＨ3、または任意に１〜５個の独立したハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、メトキシ、−ＮＨＣＯ2ＣＨ3、もしくは−Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）置換基で置換されたＣ1-2アルキル、ヘテロアリール、もしくはＣ3-7シクロアルキルであるか、またはＲ2およびＲ3は、共に５〜８員の芳香族、複素環式芳香族化合物、炭素環式もしくは複素環式の環を形成し、ただし、Ｔが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にＴによって形成される環は、５−フルオロチアゾール−２−イルではなく、
Ｒ4は、Ｃ3-7シクロアルキル基であり、
Ｒ5は、水素、または式中、任意の基が１〜６個の独立したハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ1-2アルコキシ、−Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、Ｃ1-2アルキル、Ｃ3-7シクロアルキル、４〜７員の複素環式の環、ＣＦnＨ3-n、アリール、ヘテロアリール、ＣＯ2Ｈ、−ＣＯＣ1-2アルキル、−ＣＯＮ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、ＳＯＣＨ3、ＳＯ2ＣＨ3、もしくは−ＳＯ2Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）置換基で任意に置換されているＣ1-4アルキル基、Ｃ2-4アルケニル基、Ｃ2-4アルキニル基、Ｃ3-7シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、もしくは４〜７員の複素環基であり、
Ｒ6およびＲ7は、それぞれ独立して、水素、または式中、任意の基が１〜６個の独立したハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ1-2アルコキシ、−Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、Ｃ1-2アルキル、Ｃ3-7シクロアルキル、４〜７員の複素環式の環、ＣＦnＨ3-n、アリール、ヘテロアリール、ＣＯＣ1-2アルキル、−ＣＯＮ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）、ＳＯＣＨ3、ＳＯ2ＣＨ3、もしくは−ＳＯ2Ｎ（Ｃ0-2アルキル）（Ｃ0-2アルキル）置換基で任意に置換されているＣ1-4アルキル基、Ｃ3-7シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、もしくは４〜７員の複素環基であるか、またはＲ6およびＲ7は、共に６〜８員のヘテロ二環式の環系または１〜２個の独立したＣ1-2アルキル、ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＯＣ0-2アルキル、ヒドロキシ、もしくはＳＯ2ＣＨ3置換基で任意に置換されている４〜８員の複素環式の環を形成し、
ｎは、１、２、または３であり、
ｋは、２〜７の整数であり、
ｍは、０または１であり、
点線は、実線と共に任意に二重結合を形成し、Δは、二重結合が（Ｅ）−配置を有することを示す。
【０００６】
点線が実線と共に単結合を形成する場合、アリール環を連結する炭素原子、およびアミドカルボニル炭素に対する−ＨＣ＜＞Ｖ−含有側鎖、すなわち「＊」で標識した炭素原子は、キラル中心である。したがって、この中心にて、化合物は、ラセミ化合物として、または（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−配置の単一の鏡像異性体としてのいずれかで存在し得る。（Ｒ）−鏡像異性体が好ましい。
【０００７】
また、「＃」で標識された炭素原子は、キラルであり得る。したがって、この中心にて、化合物は、ラセミ化合物として、または（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−配置の単一の鏡像異性体としてのいずれかで存在し得る。点線が実線と共に単結合を表すときは、（Ｒ）−鏡像異性体が好ましい。点線が実線と共に二重結合を形成するときは、（Ｓ）−鏡像異性体が好ましい。
【０００８】
第１の側面において、本発明は、式（Ｉａ）によって表される化合物またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。
【化３】
2008509898.tif 000005
式中、Ｖ、Ｔ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、ｍ、およびΔは、上記式（Ｉ）で定義された通りである。
【０００９】
第２の、好ましい側面において、本発明は、式（Ｉｂ）によって表される化合物またはこれらの薬学的に許容される塩に関する。
【化４】
2008509898.tif 000006
式中、Ｖ、Ｔ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびｍは、上記式（Ｉ）で定義された通りである。
【００１０】
式（Ｉ）の化合物の分子量は、好ましくは８００未満、より好ましくは６００未満、最も好ましくは５００未満である。
【００１１】
式（Ｉ）の化合物において、−ＨＣ＜および＞Ｖ−によって形成される基は、好ましくはオキソシクロアルキルまたはヒドロキシシクロアルキル、たとえば３−オキソシクロペンチル、４−オキソシクロヘキシル、または３−ヒドロキシシクロペンチル、特に（Ｒ）−３−オキソシクロペンチルまたは４−オキソシクロヘキシル、より好ましくは（Ｒ）−３−オキソシクロペンチルを表す。
【００１２】
本発明において、Ｔが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にＴによって形成される環は、好ましくは５または６員の単環式のヘテロアリール基であり、好ましくは１つのさらなる窒素原子を含む。このようなヘテロアリール基の例は、ピラゾール、ピラジン、およびピリダジンを含む。
【００１３】
Ｒ2およびＲ3は、好ましくは独立して水素、ハロゲンおよびメチルから選択され、より好ましくは、Ｒ2およびＲ3は、独立して水素およびメチルから選択される。好ましくはＲ2およびＲ3のうちの一方は水素であり、他方は水素またはメチルである。
【００１４】
Ｔが結合する−Ｎ＝Ｃ−と共にＴによって形成される具体的な環としては、１−メチルピラゾール−３−イル、ピラジン−２−イル、および６−メチルピリダジン−３−イルが挙げられる。
【００１５】
Ｒ4は、好ましくはＳＯ2Ｃ3-4シクロアルキル、特にＳＯ2シクロプロピルである。
【００１６】
Ｒ5は、好ましくは水素またはＣ1-4アルキル基である。
【００１７】
Ｒ6およびＲ7は、好ましくはそれぞれ独立して水素またはＣ1-4アルキル基である。
【００１８】
本発明において、ｍは、好ましくは０である。
【００１９】
本発明において、ｋは、好ましくは４または５である。
【００２０】
挙げることができる本発明の具体的な化合物は、
２（Ｒ）−２−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−Ｎ−（１−メチルピラゾール−３−イル）−３−（（Ｒ）−３−オキソシクロペンチル）プロピオンアミド、
２（Ｒ）−２−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−Ｎ−（ピラジン−２−イル）−３−（（Ｒ）−３−オキソシクロペンチル）プロピオンアミド、および、
２（Ｒ）−２−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−Ｎ−（６−メチルピリダジン−３−イル）−３−（（Ｒ）−３−オキソシクロペンチル）プロピオンアミド、
またはこれらのいずれかの薬学的に許容される塩である。
【００２１】
一般的に、それぞれの変更可能な基について、好ましい基が別々に上記のリストに記載されているものの、本発明において好ましい化合物には、式（Ｉ）の変更可能な基のいくつかまたはそれぞれが、好ましく、より好ましく、最も好ましく、とりわけ、または特に列挙された基から選択されるものが含まれる。したがって、本発明は、好ましく、より好ましく、最も好ましく、とりわけ、または特に列挙された基の全ての組み合わせを含むことが企図される。
【００２２】
本明細書で使用される、「アルキル」、並びにたとえばアルコキシ、アルケニル、アルキニルなどの接頭辞「ａｌｋ」を有するその他の基は、特に明記しない限り、直鎖状、分枝鎖状、またはこれらの組み合わせであってもよい炭素鎖を意味する。アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−ブチルなどが含まれる。「アルケニル」、「アルキニル」、およびその他の同様の用語には、少なくとも１つの不飽和の炭素−炭素結合を有する炭素鎖を含む。
【００２３】
本明細書で使用される、たとえば「Ｃ0-2アルキル」は、０〜２個の炭素、すなわち０、１、または２つの炭素を有するアルキルを意味する。炭素を有さないアルキルは、アルキルが末端基であるときは水素である。
【００２４】
「シクロアルキル」および「環状炭素」という用語は、ヘテロ原子を含んでいない炭素環式化合物を意味し、一、二、および三環系の飽和した炭素環式化合物、並びに縮合された系、および架橋された系を含む。このような縮合環系は、ベンゾ縮合された炭素環式化合物などの縮合環系を形成するように、ベンゼン環などの部分的または完全に不飽和である一つの環を含むことができる。シクロアルキルは、スピロ縮合環系としてこのような縮合環系を含む。シクロアルキルおよび環状炭素の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキルを含む。
【００２５】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素原子を含む。
【００２６】
「アリール」および「芳香環」という用語は、たとえばフェニルおよびナフチルを含み、好ましいアリール基はフェニルである。
【００２７】
特に明記しない限り、「複素環式環」という用語は、酸素、硫黄、および窒素から選択される１または２のヘテロ原子を含む４〜８員の飽和した環を含む。ヘテロ原子は、互いに直接結合しない。複素環式環の例には、オキセタン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、オキセパン、オキソカン、チエタン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピラン、チエパン、チオカン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、アゼパン、アゾカン、［１，３］ジオキサン、オキサゾリジン、ピペラジンなどが含まれる。複素環式環のその他の例は、硫黄含有環の酸化された形態を含む。したがって、テトラヒドロチオフェン１−オキシド、テトラヒドロチオフェン１，１−ジオキサン、テトラヒドロチオピラン１−オキシド、およびテトラヒドロチオピラン１，１−ジオキサンも、複素環式環とみなされる。
【００２８】
特に明記しない限り、「ヘテロアリール」および「芳香族複素環」という用語は、酸素、硫黄、および窒素から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５または６員のヘテロアリール環を含む。このようなヘテロアリール環の例は、フリル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、およびトリアジニルである。
【００２９】
上記の式は、一定の位置における限定的な立体化学とすることなく示してある。本発明は、具体的に描かれたか、またはさもなければ明言した場合を除き、全ての立体異性体（たとえば幾何異性体、光学異性体、ジアステレオマーなど）およびこれらの薬学的に許容される塩を含む。さらに、具体的に描かれたか、またはさもなければ明言した場合を除き、立体異性体の混合物、並びに単離された特定の立体異性体も含まれる。このような化合物を調製するために使用される合成手順の過程において、または当業者に公知のラセミ化もしくはエピマー化法を使用する際に、このような手順の生成物は、立体異性体の混合物であることができる。上記の式の化合物の互変異性体が存在するときは、本発明は、具体的に描かれたか、またはさもなければ明言した場合を除き、任意の可能な互変異性体およびこれらの薬学的に許容される塩、並びにこれらの混合物を含む。上記式の化合物およびこれらの薬学的に許容される塩が溶媒和化合物の形態または多形形態で存在するときは、本発明は、任意の可能な溶媒和化合物および多形形態を含む。溶媒和化合物を形成する溶媒のタイプは、溶媒が薬理学的に許容される限り、特に限定されない。たとえば、水、エタノール、プロパノール、アセトンなどを使用することができる。
【００３０】
式（Ｉ）の化合物は、薬学的使用が企図されるので、これらは、好ましくは実質的に純粋、たとえば少なくとも６０％純粋、より最適には少なくとも７５％純粋、少なくとも９５％純粋、特には少なくとも９８％純粋（％は、質量基準である）な形態で提供される。
【００３１】
また、本発明は、薬学的に許容されるキャリアと組み合わせて、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩で構成される医薬組成物を包含する。
【００３２】
好ましくは、組成物は、薬学的に許容されるキャリアと、無毒かつ治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩とで構成される。
【００３３】
さらに、この態様において、本発明は、薬学的に許容されるキャリアと、無毒かつ治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩とを含む、ＧＫの活性化による高血糖および糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防または治療のための薬学的組成物を包含する。
【００３４】
また、本発明は、医薬品としての、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３５】
本発明の化合物および組成物は、たとえばヒトなどの哺乳類における高血糖および糖尿病、特にＩＩ型糖尿病を治療するために有効である。
【００３６】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物もしくはこれらの薬学的に許容される塩の有効量を投与する工程を含む、ＧＫの活性化が望ましい状態の予防的または治療的処置の方法を提供する。
【００３７】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効量を投与する工程を含む、高血糖または糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防的または治療的処置の方法を提供する。
【００３８】
また、本発明は、プレ糖尿病性高血糖またはグルコース耐性障害を示すヒトにおいて、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な予防量を投与する工程を含む、糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防のための方法を提供する。
【００３９】
また、本発明は、ＧＫ活性化剤としての、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００４０】
また、本発明は、高血糖または糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防的または治療的処置のための、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００４１】
また、本発明は、プレ糖尿病性高血糖またはグルコース耐性障害を示すヒトにおける糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防のための、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００４２】
また、本発明は、ＧＫの活性化のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００４３】
また、本発明は、高血糖または糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防的または治療的処置のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００４４】
また、本発明は、プレ糖尿病患者高血糖またはグルコース耐性障害を示すヒトにおける糖尿病、特にＩＩ型糖尿病の予防のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００４５】
本発明の化合物および組成物は、任意に１つもしくは複数のその他の抗糖尿病薬または抗高血糖薬と組み合わせて使用してもよい。これらには、たとえばスルホニル尿素（たとえば、グリブリド、グリメピリド、グリピリド、グリピジド、クロルプロパミド、グリクラジド、グリソキセピド、アセトヘキサミド、グリボルヌリド、トルブタミド、トラザミド、カルブタミド、グリキドン、グリへキサミド、フェンブタミド、トルシクラミド、その他）、ビグアナイド（たとえば、メトホルミン、フェンホルミン、ブホルミン、その他）、グルカゴンアンタゴニスト（たとえば、ペプチドまたは非ペプチドグルカゴンアンタゴニスト）、グルコシダーゼ阻害剤（たとえば、アカルボース、ミグリトール、その他）、インスリン分泌促進物質、インスリン感作物質（たとえば、トログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、その他）など、または抗肥満症薬（たとえば、シブトラミン、オルリスタット、その他）などが含まれる。本発明の化合物および組成物、並びにその他の抗糖尿病薬または抗高血糖薬は、同時に、連続して、または別々に投与してもよい。
【００４６】
「薬学的に許容される塩」という用語は、薬学的に許容される非毒性の塩基または酸から調製される塩をいう。本発明の化合物が酸性のときは、その対応する塩は、無機塩基および有機塩基を含む薬学的に許容される非毒性の塩基から簡便に調製することができる。このような無機塩基に由来する塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、第二銅、第一銅、三価鉄、二価鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン酸、二価マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛などの塩が含まれる。アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、およびナトリウム塩が特に好ましい。薬学的に許容される有機非毒性塩基に由来する塩は、一級、二級、および三級アミン、並びに天然に存在するアミンおよび合成のアミンなどの環状アミン並びに置換アミンの塩が含まれる。塩を形成することができるその他の薬学的に許容される有機非毒性塩基には、たとえばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ’，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどが含まれる。
【００４７】
本発明の化合物が塩基性のときは、その対応する塩は、無機酸および有機酸を含む薬学的に許容される非毒性の酸から簡便に調製することができる。このような酸には、たとえば酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、樟脳スルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが含まれる。クエン酸、臭化水素酸、塩酸、マレイン酸、リン酸、硫酸、メタンスルホン酸、および酒石酸が特に好ましい。
【００４８】
本発明の医薬組成物は、活性成分としての式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩、薬学的に許容されるキャリア、および任意にその他の治療的成分またはアジュバントを含む。組成物には、経口、直腸、局所的、および非経口的（皮下、筋肉内、および経静脈を含む）投与、並びに吸入を介した投与に適した組成物が含まれるが、任意の所与の症例に最も適した経路は、特定の宿主、並びに活性成分が投与される状態の性質および重症度に依存する。医薬組成物は、単位剤形として簡便に提供してもよく、薬学分野において周知の任意の方法によって調製してもよい。
【００４９】
本発明の医薬組成物は、好ましくは経口投与される。
【００５０】
実施に際して、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩は、従来の薬学的配合技術に従って、薬学的キャリアとの混合物中に活性成分として組み合わせることができる。キャリアは、投与、たとえば経口または非経口（経静脈を含む）のために望まれる製剤の形態に応じて、多種多様な形態をとってもよい。したがって、本発明の医薬組成物は、それぞれが活性成分の予め定められた量を含むカプセル、カシェ剤、または錠剤などの経口投与のために適した別々の単位として提供することができる。さらに、組成物は、粉末として、顆粒として、溶液として、水性液体中の懸濁液として、非水性液体として、水中油型乳剤として、または油中水型液状乳剤として提供することができる。また、上記した共通の剤形に加えて、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩は、徐放性手段および／またはデリバリー装置によって投与してもよい。組成物は、任意の調剤法によって調製してもよい。一般に、このような方法は、活性成分を、１つまたは複数の必須成分を構成するキャリアと混合する工程を含む。一般に、組成物は、活性成分を液体キャリアもしくは微粉固体キャリアまたはその両方と一様かつ均質に混合することによって調製される。次いで、混合物は、所望の形態に簡便に成形することができる。
【００５１】
したがって、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容されるキャリアと式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩とを含んでいてもよい。また、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩は、１つまたは複数のその他の治療活性を有する化合物と組み合わせて、医薬組成物に含めることができる。
【００５２】
本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容されるリポソーム製剤を含む。
【００５３】
使用される薬学的キャリアは、たとえば固体、液体、または気体であることができる。固体キャリアの例には、乳糖、白土、ショ糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸が含まれる。液体キャリアの例は、糖シロップ、落花生油、オリーブ油、および水である。気体キャリアの例には、二酸化炭素および窒素が含まれる。
【００５４】
経口剤形のための組成物を調製する際に、任意の簡便な薬学的媒体を使用してもよい。たとえば、水、グリコール、油、アルコール、香料、防腐剤、着色剤などを、懸濁液、エリキシル、および溶液などの形態の経口液状製剤に使用してもよく、デンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などのキャリアを、粉末、カプセル、および錠剤などの経口固形製剤を形成するために使用してもよい。錠剤およびカプセルは、投与が容易なため好ましい経口用量単位であり、これにより固体薬学的キャリアが使用される。任意に、錠剤は、標準的な水系または非水系の技術によってコーティングしてもよい。
【００５５】
本発明の組成物を含む錠剤は、任意に１つもしくは複数の付属の成分またはアジュバントと共に圧縮または成形によって調製してもよい。圧縮錠剤は、適切な機械において、粉末または顆粒などの流動性の形態の活性成分を圧縮し、任意に結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、表面活性剤、もしくは分散剤、またはその他のこのような賦形剤と混合することによって調製することができる。これらの賦形剤は、たとえば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤、顆粒化剤、および崩壊剤、たとえばコーンスターチまたはアルギン酸、結合剤、たとえばデンプン、ゼラチン、またはアカシア、並びに滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクであってもよい。錠剤は、コーティングされていなくてもよく、これらは、胃腸管における崩壊および吸収を遅延させ、これにより長期にわたる作用の持続をもたらす公知の技術によってコーティングしてもよい。たとえば、グリセリンモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなどの時間遅延材料を使用してもよい。
【００５６】
硬ゼラチンカプセルでは、活性成分は、不活性固体希釈剤、たとえば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合される。軟ゼラチンカプセルでは、活性成分は、水または油性媒体、たとえば落花生油、流動パラフィン、またはオリーブ油と混合される。すりこみ錠剤は、適切な機械において、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を成形することによって調製してもよい。それぞれの錠剤は、好ましくは約０．０５ｍｇ〜約５ｇの活性成分を含み、それぞれのカシェ剤またはカプセルは、好ましくは約０．０５ｍｇ〜約５ｇの活性成分を含む。
【００５７】
たとえば、ヒトに経口投与することが企図される製剤は、適切かつ簡便な量のキャリア物質（総組成物に対して約５〜約９５％の範囲で変更可能である）と共に配合された約０．０５ｍｇ〜約５ｇの活性成分を含んでいてもよい。単位剤形には、一般に約１ｍｇ〜約２ｇの間、典型的には２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ、または１０００ｍｇの活性成分が含まれる。
【００５８】
非経口投与のために適した本発明の医薬組成物は、活性化合物の水溶液または懸濁液として調製してもよい。たとえば、ヒドロキシプロピルセルロースなどの適切な界面活性物質を含めることができる。また、分散剤は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの油中混合物中で調製することができる。さらに、微生物の有害な増殖を防止するために保存剤を含めることができる。
【００５９】
注射用に使用するために適した本発明の医薬組成物は、無菌水溶液または分散剤を含む。さらにまた、組成物は、このような無菌注射用溶液または分散剤を即座に調製するための無菌粉末の形態とすることができる。全ての場合において、最終的な注射用形態は、無菌でなければならず、かつ簡単な注射器操作のためには効率的に液体にならなければならない。医薬組成物は、製造条件および貯蔵下で安定であり、したがって、好ましくは細菌および真菌などの微生物が混入しないように保存されるべきである。キャリアは、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、植物油、およびこれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒体であることができる。
【００６０】
本発明の医薬組成物は、たとえばエアロゾル、クリーム、軟膏、ローション、散布剤などの局所的使用のために適した形態とすることができる。さらに、組成物は、経皮装置に使用するために適した形態とすることができる。これらの製剤は、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩を利用して、従来の加工方法を経て調製してもよい。たとえば、クリームまたは軟膏は、親水性材料と水とを、約５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物と共に混合して、所望の粘稠性を有するクリームまたは軟膏を製造することによって調製される。
【００６１】
本発明の医薬組成物は、キャリアが固体である直腸投与のために適した形態とすることができる。混合物が単位投与量坐薬を形成することが好ましい。適切なキャリアは、カカオ脂および当技術分野において一般に使用されるその他の材料を含む。坐薬は、最初に組成物を柔らかくしたキャリアまたは溶解したキャリアと混合し、続いて型の中で冷却して成形することによって簡便に形成することができる。
【００６２】
本発明の医薬組成物は、吸入投与のために適した形態とすることができる。このような投与では、たとえば、１）Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｄｒｙ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ，  Ｘｉａｎ  Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ，  ２０００，  Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｉｓ、２）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ａｅｒｏｓｏｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ａｎｔｈｏｎｙ  Ｈｉｃｋｅｙ，  １９９２，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、３）Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  １９９０，  Ｅｄｉｔｏｒ：  Ｐ．Ｒ．  Ｂｙｒｏｎ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓで開示された形態とし、また、キャリアを使用することができる。
【００６３】
上述したキャリア成分に加えて、上記した医薬組成物は、適宜、希釈剤、緩衝液、香料、結合剤、表面活性剤、濃化剤、潤滑剤、防腐剤（抗酸化剤を含む）などの１つまたは複数のさらなるキャリア成分を含んでいてもよい。さらにまた、企図されるレシピエントの血液と等張性の製剤を与えるために、その他のアジュバントを含めることができる。また、式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩を含む組成物は、粉末または液体の濃縮物形態で調製してもよい。
【００６４】
一般に、おおよそ１日につき体重あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇの投薬量レベル、または１日につき患者あたり約０．５ｍｇ〜約１０ｇが、上に示された状態の治療に有用である。たとえば、ＩＩ型糖尿病は、体重１ｋｇあたり約０．０１〜１００ｍｇ、または１日につき患者あたり約０．５ｍｇ〜約７ｇの化合物の投与によって効率的に治療され得る。
【００６５】
しかし、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、特定の療法を受けている糖尿病患者の年齢、体重、一般的な健康、性、食餌、投与時間、投与経路、排出速度、複合製剤、および疾患の重症度を含む種々の因子に依存すると理解される。さらに、本発明の化合物およびこれらの塩は、高血糖性の症状を予想して予防的に治療量以下のレベルにて投与することができることが理解される。
【００６６】
式（Ｉ）の化合物は、公知のグルコキナーゼ活性化剤と比較して有利な特性を示し得るし、このような特性は、本明細書に記述したアッセイ法で、または当業者に公知のその他のアッセイ法で例証され得る。特に、本発明の化合物は、公知のＧＫ活性化剤と比較して、Ｋm、Ｖmax、ＥＣ50、最大活性化（グルコース濃度＝５ｍＭ）、基礎血糖値に対する最大血糖減少、および／または経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）における食後グルコースピークの減少、または水溶解度の増強、血漿タンパク結合の減少、および／または代謝安定性の増強などのその他の有利な薬理学的性質について改善された値を示し得る。
【００６７】
［実験］
本発明によれば、式（Ｉａ）の化合物は、下記のスキーム１に図示したプロトコルに従って合成することができる。
スキーム１
【化５】
2008509898.tif 000007
式中、Ｖ、Ｔ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、ｍ、およびΔは、上記の通りであり、Ｒ11は、Ｃ1-4アルキルである。
【００６８】
アルデヒドＩＩおよびフェニル酢酸エステルＩＩＩは、市販されており、または公知の技術を用いて容易に合成することができる。たとえばテトラヒドロフラン中で−７８℃にて、強塩基、たとえばリチウムジイソプロピルアミドによって生成されるフェニル酢酸エステルＩＩＩ（Ｒ11＝Ｃ1-4アルキル）のαカルボアニオンをＩＩと縮合してα，β−不飽和エステルを生じさせ（Ｔ．  Ｓｅｖｅｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｂｅｒ．，  １９８５，  １１８，  ４７６０−４７７３）、これをたとえば水酸化ナトリウムを使用して鹸化してＩＶを生成させてもよい（Ｗ．  Ｌ．  Ｃｏｒｂｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ０１／４４２１６号）。必要に応じて、中間化合物内の任意の官能基、たとえば式ＩＩの化合物のオキソまたはヒドロキシ基を保護し、従来の手段を使用して保護基を除去してもよい。たとえば、オキソ基は、ケタールとして、およびヒドロキシ基は、エーテル、たとえばメトキシメチル（ＭＯＭ）エーテルとして保護されていてもよい。
【００６９】
α，β−不飽和カルボン酸ＩＶを、多様なカップリング条件、たとえば２０℃にて重合体被支持カルボジイミド−１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を使用して（代表的手順については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｒｇｏｔｅｃｈ．ｃｏｍ／ＰＤＦ／ｒｅｓｉｎｓ／ｐｓ＿ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ．ｐｄｆを参照されたい、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから入手可能である）、アミンＶまたはこれらの塩、たとえば塩酸塩と縮合させて（Ｉａ）を得てもよい。
【００７０】
本発明によれば、式（Ｉｂ）の化合物は、下記のスキーム２に図示したプロトコルに従って合成することができる。
スキーム２
【化６】
2008509898.tif 000008
式中、Ｖ、Ｔ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびｍは、上記の通りであり、Ｙは、ＣＯ2Ｒ12であり、Ｒ12は、水素、Ｃ1-4アルキル、またはベンジルであり、Ｘは、クロロ、ブロモ、ヨード、または−ＯＳＯ2Ｒ13であり、Ｒ13は、任意に１つもしくは複数のフッ素で置換されたＣ1-4アルキルまたは任意に置換されたアリールである。
【００７１】
ハライドおよびスルホナートエステルＶＩ、並びにフェニル酢酸およびエステルＶＩＩは、市販されており、またはたとえば国際特許公開第ＷＯ２０００／０５８２９３号、ＷＯ２００１／０４４２１６号、およびＷＯ２００３／０９５４３８号に記載されているように公知の技術を使用して容易に合成することができる。これらのアルキル化剤を、−７８℃にてテトラヒドロフラン中で２当量以上の強塩基、たとえばリチウムジイソプロピルアミドで生成させたフェニル酢酸ＶＩＩのジアニオンと反応させて、直接ＶＩＩＩを生成させてもよい（Ｆ．  Ｔ．  Ｂｉｚｚａｒｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ２０００／５８２９３）。あるいは、−７８℃にてテトラヒドロフラン中でリチウムビス（トリメチルシリル）アミドなどの強塩基によって生成させたフェニル酢酸エステルＶＩＩのα−カルボアニオン（Ｌ．  Ｓｎｙｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．，  １９９４，  ５９，  ７０３３−７０３７）をＶＩによってアルキル化してα置換されたエステルを得ることができる。たとえば、２０℃にて還流するために水酸化ナトリウムの水性メタノール溶液を使用するこれらのエステルの鹸化により、カルボン酸ＶＩＩＩを生じる。必要に応じて、中間化合物内の任意の官能基、たとえば式ＶＩの化合物のオキソまたはヒドロキシ基を保護し、従来の手段を使用して保護基を除去してもよい。たとえば、オキソ基は、ケタールとして、およびヒドロキシ基は、エーテル、たとえばメトキシメチル（ＭＯＭ）エーテルとして保護されていてもよい。
【００７２】
カルボン酸ＶＩＩＩを、多様なカップリング条件、たとえば２０℃にて重合体被支持カルボジイミド−１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を使用して（代表的手順については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｒｇｏｔｅｃｈ．ｃｏｍ／ＰＤＦ／ｒｅｓｉｎｓ／ｐｓ＿ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ．ｐｄｆを参照されたい、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから入手可能である）、アミンＶまたはこれらの塩、たとえば塩酸塩と縮合させて（Ｉｂ）を得てもよい。
【００７３】
式（Ｉｂ）の化合物は、アミドカルボニル炭素を連結する不斉炭素原子、アリール環、および−ＨＣ＜＞Ｖ含有側鎖を有する。本発明によれば、不斉中心の好ましい立体配置は、（Ｒ）である。
【００７４】
式（Ｉｂ）の化合物の純粋な（Ｒ）−または（Ｓ）−立体異性体を単離することが望まれる場合、キラルカルボン酸前駆体ＶＩＩＩのラセミ混合物を任意の従来の化学的手段によって分離し、次いでごくわずかなラセミ化を生じさせる試薬を使用して、エナンチオ純粋カルボン酸をアミンＶまたはこれらの塩と縮合させることができる。例証として、ラセミＶＩＩＩをキラルオキサゾリジノンエステル誘導体と縮合させて（たとえばＦ．  Ｔ．  Ｂｉｚｚａｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ２０００／５８２９３号を参照されたい）、ジアステレオ異性体イミドの混合物を生成し、任意の従来法、たとえばカラムクロマトグラフィーによって分離することができる。純粋イミドの加水分解により、立体純粋（Ｒ）−および（Ｓ）−カルボン酸を与え、次いでこれを、キラル中心のラセミ化を最小にする試薬、たとえばベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを使用してアミンＶまたはこれらの塩と縮合させ（Ｊ．  Ｃｏｓｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，  １９９０，  ３１，  ２０５−２０８）、式（Ｉｂ）のエナンチオ純粋（Ｒ）−または（Ｓ）−アミドを与えることができる。あるいは、式（Ｉｂ）のアミドのラセミ混合物は、たとえばＤａｉｃｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｌｔｄ，  Ｔｏｋｙｏ，  Ｊａｐａｎから購入することができるキラル固定相を使用するキラル高速液体クロマトグラフィーによって分離することができる。
【００７５】
式（Ｉ）の化合物およびこれらの調製に使用するための中間体に存在する種々の官能基は、当業者に公知の官能基変換によって生成してもよい。たとえば、式ＶＩＩＩの化合物において、スルホニル基は、たとえばｍＣＰＢＡを使用して対応するスルファニル基の酸化によって生成してもよい。
【００７６】
式（Ｉ）の化合物の調製に関するさらなる詳細は、実施例において見いだされる。
【００７７】
式（Ｉ）の化合物は、単独で、または式（Ｉ）の少なくとも２つ、たとえば５〜１，０００個の化合物およびより好ましくは１０〜１００個の化合物を含む化合物ライブラリーとして調製してもよい。化合物ライブラリーは、コンビナトリアル「分割および混合」アプローチによって、または当業者に公知の手順を使用する溶液もしくは固相化学のいずれかを使用した複数並列合成によって調製してもよい。
【００７８】
式（Ｉ）の化合物の合成の間、中間化合物の不安定官能基、たとえばヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、およびアミノ基を保護してもよい。保護基は、式（Ｉ）の化合物の合成におけるいずれの段階にて除去してもよく、または式（Ｉ）の最終化合物上に存在していてもよい。種々の不安定官能基が保護され得る方法および生じる保護された誘導体を切断するための方法の包括的考察は、たとえばＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  および  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  （１９９１）  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ２nd  ｅｄｉｔｉｏｎにおいて与えられる。
【００７９】
また、いずれの新規中間体も、上記記載の通りの本発明の範囲内に含まれる。したがって、本発明は、また、上記記載の通り式（ＩＶ）もしくは（ＶＩＩＩ）の化合物、またはこれらの保護された誘導体もしくは塩を提供する。
【００８０】
本明細書に引用した特許および特許出願を含むがこれらに限定されるわけではない全ての刊行物は、個々の刊行物が具体的および個々に示されて完全に記載されたかのように、本明細書に参照として組み入れられる。
【００８１】
＜材料および方法＞
カラムクロマトグラフィーは、特に明記しない限り、ＳｉＯ2（４０−６３メッシュ）で行ってもよい。ＬＣＭＳデータは、２つの方法のうちの一方を使用して得てもよい。方法Ａ：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  ３．５μＣ18カラム（２．１×３０．０ｍｍ、流速＝０．８ｍＬ／分）を０．１％のＨＣＯ2Ｈを含む、（５％ＭｅＣＮ水溶液）−ＭｅＣＮ溶液で６分にわたって溶出し、２２０ｎｍにてＵＶ検出する。勾配情報：０．０−１．２分：１００％（５％ＭｅＣＮ水溶液）、１．２−３．８分：１０％（５％ＭｅＣＮ水溶液）−９０％ＭｅＣＮまで増加させる、３．８−４．４分：１０％（５％ＭｅＣＮ水溶液）−９０％ＭｅＣＮにて保持する、４．４−５．５分：１００％ＭｅＣＮに増加させる、５．５−６．０分：１００％（５％ＭｅＣＮ水溶液）に戻す。方法Ｂ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｌｕｎａ  ３μＣ18カラム（２．０×１０．０ｍｍ、流速＝１．５ｍＬ／分）を０．１％のＨＣＯ2Ｈを含む（５％ＭｅＣＮ水溶液）−ＭｅＣＮ溶液（４：１から１：４）で２．９５分にわたって溶出し、ダイオードアレイ検出を使用する。方法ＡおよびＢのためのマススペクトルは、陽（ＥＳ+）イオンまたは陰イオン（ＥＳ-）モードのいずれかのエレクトロスプレーイオン化供与源を使用して得てもよい。大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）スペクトルは、ＦｉｎｎｉｇａｎＭａｔ  ＳＳＱ  ７０００Ｃ装置で得てもよい。
【００８２】
以下の化合物の合成は、以前に報告されている：
７（Ｓ）−ヨードメチル−２（Ｓ），３（Ｓ）−ジフェニル−１，４−ジオキサスピロ［４，４］ノナン：ＷＯ２００３／０９５４３８号。
【００８３】
略語および頭字語：Ａｃ：アセチル、ＡＴＰ：アデノシン５’−三リン酸エステル、ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＰＵ：１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、Ｅｔ：エチル、ＦＡ：活性化倍数、ＧＫ：グルコキナーゼ、Ｇｌｃ：グルコース、Ｇ６Ｐ：グルコース−６−リン酸、Ｇ６ＰＤＨ：グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ＧＳＴ−ＧＫ：グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ−グルコキナーゼ融合タンパク質、ＩＨ：イソヘキサン、ＬＨＭＤＳ：リチウムビス（トリメチルシリル）アミド、ＮＡＤＰ（Ｈ）：β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（還元型）、ＲＴ：保持時間、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン。
【００８４】
調製１：（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）オキソ酢酸
【化７】
2008509898.tif 000009
２ＭのＮａＯＨ（１６３ｍｌ）水溶液をエチル（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）オキソアセテート（４０．６２ｇ、１６２．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２００ｍｌ）溶液に添加して、撹拌した混合物を６０℃にて２時間加熱した。冷却後、混合物を１５０ｍｌまで濃縮して、エーテル（２×１００ｍｌ）で洗浄した。次いで、ｐＨを１に調整するために十分な濃ＨＣｌを添加し、生じる沈殿物をＥｔＯＡｃ（２×３００ｍｌ）に抽出した。合わせた有機層を水（３×１００ｍｌ）、ブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒の除去により、標記化合物を得た：ｍ／ｚ（ＥＳ-）＝２２１．０［ｍ−Ｈ+］-。
【００８５】
調製２：（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）酢酸
【化８】
2008509898.tif 000010
水和ヒドラジン（１４．１９ｇ、２８３．５ｍｍｏｌ）を−５０℃に冷却し、（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）オキソ酢酸（調製１、１２．６ｇ、５６．７ｍｍｏｌ）を一部に添加した。勢いよく撹拌したスラリーを最初に室温に、次いで８０℃にて５分間温めた。固体のＫＯＨ（８．７６ｇ、１５６．５ｍｍｏｌ）を４等分のものに添加して、生じる溶液を１００℃にて２０時間加熱した。室温に冷却すると同時に水（２５ｍｌ）を添加して、水相をＥｔ2Ｏ（２０ｍｌ）で洗浄した。エーテルの相をそれ自体水で洗浄し（２×１５ｍｌ）、十分な濃ＨＣｌを合わせた水相に添加してｐＨを１に合わせた。次いで、生じる沈殿物をＥｔＯＡｃ（２×３００ｍｌ）中に抽出し、合わせた有機層を水（３×１００ｍｌ）、ブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、次いで乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒の蒸発により、標記化合物を得た：ｍ／ｚ（ＥＳ-）＝２０７．１［ｍ−Ｈ+］-。
【００８６】
調製３：２−（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）−Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｒ）−メチル−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチルアセトアミド
【化９】
2008509898.tif 000011
アセトン無水物（１４８ｍｌ）を（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）酢酸（調製２、１６．４１ｇ、７８．８ｍｍｏｌ）およびＫ2ＣＯ3（３２．６７ｇ、２３６．４ｍｍｏｌ）に添加してスラリーを形成し、これを攪拌しながら−１０℃に冷却した。純粋なトリメチルアセチルクロライド（１０．２ｍｌ、８２．７４ｍｍｏｌ）を滴状に導入し、確実に添加の間に温度が−１０℃を超えないようにした。反応混合物を−１０℃にて２０分間撹拌し、０℃に２０分間温め、次いで−１５℃に冷却して、固体の（１（Ｒ），２（Ｒ））−（−）−シュードエフェドリン（１９．５３ｇ、１１８．２ｍｍｏｌ）を一部分に添加した。１０分後、反応混合物を室温にして、攪拌を１．５時間続けた。水（１００ｍｌ）を添加して、混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で抽出した。有機相を水（２×１００ｍｌ）で洗浄し、合わせた水層をＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍｌ）で再び抽出した。次いで、合わせた有機層をブライン（１００ｍｌ）で洗浄して、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を除去して、固体の黄色の残渣をＥｔＯＡｃ−ＩＨから再結晶し、標記化合物を得た：ｍ／ｚ（ＥＳ+）＝３５６．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【００８７】
調製４：２（Ｒ）−（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）−３−（３（Ｒ）−オキソシクロペンチル）プロピオン酸
【化１０】
2008509898.tif 000012
ＬＨＭＤＳ（１６２ｍｌの１ＭのＴＨＦ溶液、１６２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ無水物（１６１ｍｌ）で希釈し、攪拌しながら−２０℃に冷却した。２−（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）−Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｒ）−メチル−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチルアセトアミド（調製３、３０ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ無水物（２４５ｍｌ）溶液を１０分にわたってカニューレを経て添加し、確実に反応温度を添加の間を通じて−１５℃以下のままにした。反応を３０分にわたって−７℃に温め、次いで−１２℃に冷却し、７（Ｓ）−ヨードメチル−２（Ｓ），３（Ｓ）−ジフェニル−１，４−ジオキサスピロ［４，４］ノナン（２７ｇ、６４．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ無水物（１１１ｍｌ）およびＤＭＰＵ（１８．９ｍｌ）の混合物の溶液を１０分にわたってカニューレを経て添加し、確実に反応温度を、全体を通じて−７℃以下のままにした。反応を２℃に温め、４．５時間撹拌後、トルエン（７７０ｍｌ）および２０％のＮＨ4Ｃｌ水溶液（５５０ｍｌ）の混合物に注いだ。勢いよく攪拌後、有機層を分離して、２０％のＮＨ４Ｃｌ水溶液（５５０ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄した。水相を合わせて、ＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で抽出し、これを分離後、ブライン（１００ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過して、蒸発させて、生じる油をフラッシュクロマトグラフィー（ＩＨ−ＥｔＯＡｃ、９：１から増大して１：１に変更する）によって精製し、２（Ｒ）−（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）−３−（２（Ｓ），３（５）−ジフェニル−１，４−ジオキサスピロ［４．４］ノン−７（Ｒ）−イル）−Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｒ）−メチル−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチルプロピオンアミドを得た：ｍ／ｚ（ＥＳ+）＝６４８．３［Ｍ＋Ｈ］+。このアミド（３０．７ｇ、４７．３８ｍｍｏｌ）の撹拌１，４−ジオキサン（６２ｍｌ）溶液を４．５ＭのＨ2ＳＯ4水溶液（６１．５ｍｌ）で希釈し、生じる混合物を穏やかな還流下で１８時間加熱した。氷上で冷却後、水（１６２ｍｌ）を添加して、混合物をＥｔＯＡｃ（２５０ｍｌ）で抽出した。水層を分離して、さらにＥｔＯＡｃ（２ｘ１５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機層を水（３×２００ｍｌ）で洗浄して確実に最終洗浄液をｐＨ中性にし、ブライン（１００ｍｌ）で洗浄した。乾燥（ＭｇＳＯ4）および濾過後、溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し（ＣＨ2Ｃｌ2、次いでＣＨ2Ｃｌ2−ＴＨＦ、５：１から３：１に変更する）、標記化合物を得た：ｍ／ｚ（ＥＳ+）＝３０５．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【００８８】
調製５：２（Ｒ）−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−３−（３（Ｒ）−オキソシクロペンチル）プロピオン酸
【化１１】
2008509898.tif 000013
２（Ｒ）−（４−シクロプロピルスルファニルフェニル）−３−（３（Ｒ）−オキソシクロペンチル）プロピオン酸（調製４、５．０ｇ、１６．４３ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（２５０ｍｌ）の撹拌溶液を氷上で１℃に冷却し、７０％のｗＣＰＢＡ（８．０９９ｇ、３２．８５ｍｍｏｌ）を一部に添加して、３℃以下の温度を維持した。６時間後、溶媒を除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１％ＡＣＯＨのＣＨ2Ｃｌ2溶液、次いでＴＨＦ）によって精製し、標記化合物を得た：ｍ／ｚ（ＥＳ+）＝３３７．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【００８９】
実施例１：２（Ｒ）−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−３−（３（Ｒ）−オキソシクロペンチル）−Ｎ−ピラジン−２−イルプロピオンアミド
【化１２】
2008509898.tif 000014
２（Ｒ）−（４−シクロプロパンスルホニルフェニル）−３−（３（Ｒ）−オキソシクロペンチル）−プロピオン酸（調製５、２５０ｍｇ、０．７４３ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2無水物（１０ｍｌ）溶液を０℃に冷却し、塩化オキサリル（０．１１４ｇ、０．８９９ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2無水物（２ｍｌ）溶液を滴状に添加し、添加の間に温度を０℃に維持した。乾燥ＤＭＦ（０．０５ｍｌ）を添加して、反応混合物を２．５時間撹拌した。固体の２−アミノピラジン（７８ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を一部分に迅速に添加し、続いてピリジン（０．１２ｍｌ、１．４５ｍｍｏｌ）および混合物を０℃にて２時間、次いで室温にて一晩撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）で希釈して、５％  ｗ／ｖクエン酸水溶液（２×２０ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（２×２０ｍｌ）、水（２０ｍｌ）、およびブライン（２０ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥させて（ＭｇＳＯ4）、蒸発し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＩＨ−ＥｔＯＡｃ、１：４）によって精製して、標記化合物を得た：ＲＴ＝３．１４分；ｍ／ｚ（ＥＳ+）＝４１４．２［Ｍ＋Ｈ］+。
【００９０】
表１のアミドは、実施例１に記述ものと同様の方法を使用して調製した。
【表１】
2008509898.tif 000015
【００９１】
［アッセイ法］
＜インビトロでのＧＫ活性＞
ＷＯ２０００／５８２９３号に記述されたものと同様のプロトコルを使用し、ＧＳＴ−ＧＫによるＧ６Ｐの産生を、共役酵素としてＧ６ＰＤＨを用いて、ＮＡＤＰＨの産生に連関することによってＧＫ活性をアッセイしてもよい。
【００９２】
ＧＫアッセイ法は、３０℃にてＣｏｓｔａｒからの平底９６ウェルアッセイプレートにおいて１００μＬの最終インキュベーション体積で行われる。アッセイ緩衝液には、２５ｍＭのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４）、１２．５ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＤ−Ｇｌｃ、５ｍＭのＡＴＰ、６．２５ｍＭのＮＡＤＰ、２５ｍＭのＭｇＣｌ2、１ｍＭのジチオスレイトール、試験化合物または５％のＤＭＳＯ、３．０単位／ｍＬのＧ６ＰＤＨ、および０．４μＬ／ｍＬのヒト肝臓ＧＫに由来するＧＳＴ−ＧＫを含む。ＡＴＰ、Ｇ６ＰＤＨ、およびＮＡＤＰは、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから購入してもよい。その他の試薬は、＞９８％純粋であり、Ｋａｎｔｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入してもよい。試験化合物を、ＡＴＰを含まないアッセイ緩衝液に添加する前にＤＭＳＯに溶解する。この混合を温度制御したＳＰＥＣＴＲＡｍａｘ  ２５０マイクロプレート分光光度計のチャンバー内で１０分間プレインキュベートし（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，  ＣＡ）、次いで、１０μＬのＡＴＰ溶液を添加によって反応を開始した。
【００９３】
反応開始後、ＧＫ活性の測定として３４０ｎｍの光学濃度（ＯＤ）の増加を１０分間のインキュベーション期間にわたってモニターした。十分なＧＳＴ−ＧＫを添加して１０分間のインキュベーション期間にわたって５％のＤＭＳＯを含むが試験化合物を含まないウェルにおいてＯＤ340の増加を生じさせた。予備実験では、ＧＫ反応が、ＧＫ活性の８倍の増大を生じる活性化剤の存在下においてさえも、この期間にわたって直線状であることを証明した。対照ウェルにおけるＧＫ活性を、試験ＧＫ活性化剤を含むウェルにおける活性と比較する。ＧＫ活性の５０％の増加を生じた化合物濃度（すなわち、ＦＡ１．５）を算出する。ＧＫ活性化剤は、≦３０μＭにてＦＡ１．５を達成する。
【００９４】
＜インビボのＧＫ活性（Ｉ）＞
１８時間の絶食期間に続いて、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスには５０ｍｇ／ｋｇ体重にてＧＫ活性化剤を伴った胃管栄養法を経て経口的に投与する。用量研究期間の６時間後に血液Ｇｌｃ決定を５回行った。
【００９５】
マウス（ｎ＝５）の体重を量り、経口投与の１８時間前に絶食させた。ＧＫ活性化剤は、ＷＯ２０００／５８２９３号で報告されたＧｅｌｕｃｉｒｅ媒体に（ＥｔＯＨ：Ｇｅｌｕｃｉｒｅ４４／１４：ＰＥＧ４００ｑ．ｓ．４：６６：３０ｖ／ｖ／ｖ）１３．３ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解する。マウスには、５０ｍｇ／ｋｇ用量と同等の体重のｋｇあたり７．５ｍＬの製剤を経口的に投与する。投薬の直前に、プレ用量（時刻ゼロ）血液Ｇｌｃの読みを、動物の尾部のわずかな部分（＜１ｍｍ）を切り取ることによって得て、解析のために１５μＬの血液を収集する。ＧＫ活性化剤による処置後、さらなる血液Ｇｌｃの読みを投与１、２、４および６時間に同じ尾部創傷から採取する。結果は、６時間の研究期間にわたって媒体処置したマウス５匹の平均血液Ｇｌｃ値をＧＫ活性化剤で処置したマウス５匹と比較して解釈する。化合物は、これらが２つの連続したアッセイ時点について媒体と比較して血液Ｇｌｃにおいて統計学的に有意な減少を示すときに、活性であるとみなされる。
【００９６】
＜インビボのＧＫ活性（ＩＩ）＞
本発明のＧＫ活性化剤の実施例における抗高血糖効果は、７〜８週間齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６  ｏｂ／ｏｂマウスにおける経口グルコース負荷試験において評価した。簡単には、マウス（ｎ＝６）の体重を量り、これらの基礎血糖値を尾部切断（Ｔ−２７時間）から取り除いた２０μＬの血液から決定した。２２時間（Ｔ−５時間）後、食物を除いて、マウスを自由に水にアクセスさせて新鮮なケージに置いた。血糖値は、Ｔ−０．７５時間にて尾部創傷から取り除いた２０μＬの血液から決定した。ＧＫ活性化剤をＧｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４−水（１：９  ｖ／ｖ）混合物に０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、次いでＴ−０．５時間に、５ｍｇ／ｋｇ用量と同等のｋｇ体重あたり１０ｍＬ製剤で経口的にマウスに投与した。Ｔ＝０時間にて、血糖値の解析のためにマウスから血を抜き（２０μＬ）、次いでグルコース（２ｇ／ｋｇ）を経口的に直ちに投与した。グルコースレベルの解析のために、さらなる血液試料（２０μＬ）をＴ＝＋０．５、＋１．０、＋１．５、＋２．０、＋３．０および＋４．０ｈにてそれぞれの動物から採取した。本発明の代表的ＧＫ活性化剤は、グルコースの投与の２時間後に少なくとも２０％までグルコース曲線下の面積を減少させた。
【国際調査報告】
2008509898.tif 000024
2008509898.tif 000025
2008509898.tif 000026