(57)【要約】  本発明は式（Ｉ）【化１】2008536861.tif 000050の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物もしくは薬学的に許容される形態に関する。これらの化合物は細胞増殖を調節し、増殖性疾患を予防および／または処置するために使用することができる。
2008536861.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2008536861.tif 000048
〔式中、
Ｒ１は水素原子、またはアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であって、これはさらに少なくとも１個のハロゲンで置換されていても良く；
Ｒ２はアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アラルキルまたはヘテロアラルキル基であって、これはさらに少なくとも１個のハロゲンで置換されていても良く；
Ｒ３は下記構造：
【化２】
2008536861.tif 000049
の１個から選択され；
ｍは整数１、２または３であり；
ｎは整数１、２、３、４、５または６であり；
Ａ−Ｂはあわせて−ＣＨＲ４−ＣＨ−、−ＣＲ５＝Ｃ−または−ＣＯ−ＣＨ−であり；
各Ｘは、互いに独立して、結合、酸素原子、硫黄原子、式ＣＲ６Ｒ７、ＣＯ、ＮＲ８の基、所望により置換されたシクロアルキレン、所望により置換されたヘテロシクロアルキレン、所望により置換されたアリーレン、または所望により置換されたヘテロアリーレン基であり；
各Ｙは、互いに独立して、結合、酸素原子、硫黄原子、式ＣＲ６Ｒ７、ＣＯ、ＮＲ８の基、所望により置換されたシクロアルキレン、所望により置換されたヘテロシクロアルキレン、所望により置換されたアリーレン、または所望により置換されたヘテロアリーレン基であり；
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
Ｒ５は水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
基Ｒ６は互いに独立して、水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
基Ｒ７は互いに独立して、水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
基Ｒ８は互いに独立して、水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
Ｒ９  Ｒ９は水素であるかまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキル−シクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロ−アラルキル基であり、あるいはＲ２およびＲ９は窒素原子と共にヘテロアリールまたはヘテロアラルキルを形成していても良く；そして
Ｒ１０は水素であるかまたはアルキルもしくはヘテロアルキルである〕
またはその薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物あるいはその薬理学的に許容される製剤。
【請求項２】
Ｒ１がＣ１−１０アルキル基、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−Ｃ３−７−シクロアルキル、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−フェニル、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−ナフチル、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−ヘテロアリールまたは−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−ヘテロシクロアルキルであって、前記シクロアルキル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基が所望により置換されていても良い、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が好ましくはＣ１−１０−アルキル、（ＣＨ２）０−６−Ｃ３−７−シクロアルキル、Ｃ１−１０−アルキルフェニル、Ｃ１−１０−アルキルナフチル、（ＣＨ２）０−６−Ｃ３−７−シクロアルキル、（ＣＨ２）０−６−フェニル、（ＣＨ２）０−４−ＣＨ（（ＣＨ２）０−４−フェニル）２、（ＣＨ２）０−６−ヘテロシクロアルキルまたは（ＣＨ２）０−６−ヘテロアリールであって、該シクロアルキル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基が所望により置換されていても良い、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が所望により置換されたベンジル、フェネチルまたはテトラヒドロナフチル基である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が式ＣＨ３−ＮＨ−ＣＨＲ６−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＲ７−ＣＯ−の基である、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
基Ｒ６およびＲ７が、互いに独立してＣ１−１０−アルキル、Ｃ３−７−シクロアルキルまたはＣ１−１０−ヘテロアルキル基である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ６がメチル基であり、そしてＲ７が式−ＣＨ（ＣＨ３）２または−Ｃ（ＣＨ３）３の基である、請求項５に記載の化合物。
【請求項８】
ｍが整数１である、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
Ａ−Ｂがあわせて式ＣＨ２−ＣＨ、ＣＨ＝ＣまたはＣＯ−ＣＨの基である、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の化合物と、所望により担体および／またはアジュバントを含む医薬組成物。
【請求項１１】
薬学的に許容される担体と、治療上有効量の請求項１〜１０のいずれかに記載の式Ｉの化合物を含む医薬組成物。
【請求項１２】
アポトーシスプロテインインヒビターを阻害する物質としての、請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物または医薬組成物の使用。
【請求項１３】
腫瘍疾患の予防および／または処置における、請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物または医薬組成物の使用。
【請求項１４】
増殖性疾患の処置のための、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
増殖性疾患の処置法であって、かかる処置を必要とする哺乳類に、治療上有効量の請求項１〜１１のいずれかに記載の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる方法。
【請求項１６】
哺乳類がヒトである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
増殖性疾患の処置用薬剤の製造のための、請求項１〜１１のいずれかに記載の式Ｉの化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞増殖を調節し、増殖性疾患を予防および／または処置するための新規化合物に関する。好ましい化合物は“アポトーシスプロテインインヒビター”（ＩＡＰ）の活性を調節するように作用する。最も好ましい化合物はＩＡＰの阻害剤である。
【背景技術】
【０００２】
プログラムされた細胞死（アポトーシス）は、多細胞生物の発生および維持の鍵となる機構である。細胞の新規形成と排除の間に平衡が存在するときのみ、生物は健康に留まる。この平衡が制御を失う結果ががん、肝炎、パーキンソン病、卒中、心筋梗塞等のような病的徴候である。
【０００３】
腫瘍細胞は、とりわけそれらの再生産がチェックされないという点において、他の細胞と区別することができる。それらはアポトーシスを回避する様々な戦略を考案した。ごく最近記述されたある分子機構には、カスパーゼと直接相互作用し、これを中和することによってアポトーシスを阻害するＩＡＰファミリーのメンバーの過剰発現が含まれる。
【０００４】
したがって、アポトーシスプロテインインヒビター（ＩＡＰ）を阻害する物質はがんの制御に対して非常に興味深い。ＩＡＰには、例えばＸＩＡＰおよびＣＩＡＰが含まれる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＩＡＰをブロック（阻害）する新しいタイプの化合物を製造することが本発明の目的である。本発明の化合物は、あるいはアポトーシスプロテインインヒビター阻害剤（ＩＡＰＩ）と称する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2008536861.tif 000003
〔式中、
【０００７】
Ｒ１は水素原子、またはアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であって、これはさらに少なくとも１個のハロゲンで置換されていても良く；
【０００８】
Ｒ２はアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アラルキルまたはヘテロアラルキル基であって、これはさらに少なくとも１個のハロゲンで置換されていても良く；
【０００９】
Ｒ３は下記構造
【化２】
2008536861.tif 000004
の１個から選択され；
【００１０】
ｍは整数１、２または３であり；
【００１１】
ｎは整数１、２、３、４、５または６であり；
【００１２】
Ａ−Ｂはあわせて−ＣＨＲ４−ＣＨ−、−ＣＲ５＝Ｃ−または−ＣＯ−ＣＨ−であり；
【００１３】
各Ｘは、互いに独立して、結合、酸素原子、硫黄原子、式ＣＲ６Ｒ７、ＣＯ、ＮＲ８の基、所望により置換されたシクロアルキレン、所望により置換されたヘテロシクロアルキレン、所望により置換されたアリーレン、または所望により置換されたヘテロアリーレン基であり；
【００１４】
各Ｙは、互いに独立して、結合、酸素原子、硫黄原子、式ＣＲ６Ｒ７、ＣＯ、ＮＲ８の基、所望により置換されたシクロアルキレン、所望により置換されたヘテロシクロアルキレン、所望により置換されたアリーレン、または所望により置換されたヘテロアリーレン基であり；
【００１５】
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
【００１６】
Ｒ５は水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
【００１７】
基Ｒ６は互いに独立して、水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
【００１８】
基Ｒ７は互いに独立して、水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
【００１９】
基Ｒ８は互いに独立して、水素原子、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基であり；
【００２０】
Ｒ９は水素であるかまたはアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロアルキル−シクロアルキル、アラルキルもしくはヘテロ−アラルキル基であり、あるいはＲ２およびＲ９は窒素原子と共にヘテロアリールまたはヘテロアラルキルを形成していても良く；そして
【００２１】
Ｒ１０は水素であるかまたはアルキルもしくはヘテロアルキルである〕
【００２２】
またはその薬理学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物あるいはその薬理学的に許容される製剤に関する。
【００２３】
好ましくは、Ｒ１は例えばＳＯ（０−２）Ｒ４；ＣＯＲ４；ＣＯＯＲ４またはＣＯＮＲ４Ｒ５である。
【００２４】
当業者には明らかであるが、本発明の多くの化合物は不斉炭素原子を含む。したがって、上記式の個々の立体異性体は全て、本発明の範囲に含まれる意図であることを、理解するべきである。具体的に記載がない限り、上記式のＲ基についての記載は、キラリティーまたは立体選択性を示唆しない。
【００２５】
アルキルとの表現は、飽和、直鎖状または分枝鎖状炭化水素基であって、とりわけ１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１２個の炭素原子、最も好ましくは１〜６個の炭素原子を有し、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルブチルまたはｎ−オクチル基を意味する。
【００２６】
アルケニルおよびアルキニルとの表現は、少なくとも部分的に不飽和、直鎖状または分枝鎖状炭化水素基であって、とりわけ２〜２０個の炭素原子、好ましくは２〜１２個の炭素原子、最も好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、例えばエテニル、アリル、アセチレニル、プロパルギル、イソプレニルまたはヘキサ−２−エニル基を意味する。アルケニル基は好ましくは１または２個（最も好ましくは２個）の二重結合を有し、アルキニル基は１または２個（最も好ましくは１個）の三重結合を有する。
【００２７】
さらに、アルキル、アルケニルおよびアルキニルとの表現は、例えば１個以上の水素原子がハロゲン原子（好ましくはＦまたはＣｌ）、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＳＯ（０−２）−Ｒ４、−ＮＨ２、−ＮＯ２、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨによって置換されている基、例えば２，２，２−トリクロロエチルまたはトリフルオロメチル基を意味する。
【００２８】
ヘテロアルキルとの表現は、１個以上（好ましくは１、２または３個）の炭素原子が酸素、窒素、リン、ホウ素、セレン、ケイ素もしくは硫黄原子（好ましくは酸素、硫黄または窒素）によって置換されているアルキル、アルケニルまたはアルキニル基を意味する。さらに、ヘテロアルキルとの表現は、カルボキシ（例えば−Ｃ（Ｏ）−）もしくはカルボン酸、またはカルボン酸に由来する基、例えば−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ（ＣＨ３）３、アシル、アシルアルキル、アルコキシカルボニル、アシルオキシ、アシルオキシアルキル、カルボキシアルキルアミドまたはアルコキシカルボニルオキシを意味する。さらに、ヘテロアルキルは、とりわけ−ＳＯ（０−２）Ｒ４を含む、主鎖または側鎖スルホキシ基を意味する。
【００２９】
ヘテロアルキル基の例は、式Ｒａ−Ｏ−Ｙａ、Ｒａ−Ｓ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｙａ−、−Ｒａ−ＣＯ−Ｙａ−、−Ｒａ−Ｏ−ＣＯ−Ｙａ−、−Ｒａ−ＣＯ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−ＣＯ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＯ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｏ−ＣＯ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＯ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＯ−Ｎ（Ｒｃ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｃ（＝ＮＲｄ）−Ｎ（Ｒｃ）−Ｙａ−、Ｒａ−ＣＳ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｏ−ＣＳ−Ｙａ−、Ｒａ−ＣＳ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−ＣＳ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＳ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｏ−ＣＳ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＳ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＳ−Ｎ（Ｒｃ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｏ−ＣＳ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｓ−ＣＯ−Ｙａ−、Ｒａ−ＣＯ−Ｓ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｓ−ＣＯ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＯ−Ｓ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｓ−ＣＯ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｏ−ＣＯ−Ｓ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｓ−ＣＯ−Ｓ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｓ−ＣＳ−Ｙａ−、Ｒａ−ＣＳ−Ｓ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｓ−ＣＳ−Ｎ（Ｒｂ）−Ｙａ−、Ｒａ−Ｎ（Ｒｂ）−ＣＳ−Ｓ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｓ−ＣＳ−Ｏ−Ｙａ−、Ｒａ−Ｏ−ＣＳ−Ｓ−Ｙａ−の基であり、Ｒａは水素原子、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル−またはＣ２−Ｃ６−アルキニル基であり；Ｒｂは水素原子、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル−またはＣ２−Ｃ６−アルキニル基であり；Ｒｃは水素原子、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル−またはＣ２−Ｃ６−アルキニル基であり；Ｒｄは水素原子、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ２−Ｃ６−アルケニル−またはＣ２−Ｃ６−アルキニル基であり、そしてＹａ−は直接結合、Ｃ１−Ｃ６−アルキレン、Ｃ２−Ｃ６−アルケニレンまたはＣ２−Ｃ６−アルキニレン基であって、各ヘテロアルキル基は少なくとも１個の炭素原子を含み、そして１個以上の水素原子はフッ素または塩素原子によって置換されていても良い。ヘテロアルキル基の具体例は、メトキシ、トリフルオロメトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、メトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエチル、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、イソ−プロピルエチルアミノ、メチル−アミノメチル、エチルアミノメチル、ジ−イソ−プロピルアミノエチル、エノールエーテル、ジメチルアミノメチル、ジメチルアミノエチル、アセチル、プロピオニル、ブチリルオキシ、アセチルオキシ、メトキシカルボニル、エトキシ−カルボニル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルカルバモイルまたはＮ−メチルカルバモイルである。ヘテロアルキル基のさらなる例は、ニトリル、イソニトリル、シアネート、チオシアネート、イソシアネート、イソチオシアネートおよびアルキルニトリル基である。
【００３０】
シクロアルキルとの表現は、飽和または部分不飽和（例えばシクロアルケニル）環状基であって、骨格を形成する１個以上（好ましくは１または２または３個）の環を有し、とりわけ３〜１４個の炭素原子、好ましくは３〜１０個（とりわけ３、４、５、６または７個）の炭素原子を含む。さらに、シクロアルキルとの表現は１個以上の水素原子がフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子、または−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＳＨ、＝Ｓ、−ＮＨ２、＝ＮＨ、−ＮＯ２、アルキルまたはヘテロアルキル基によって置換されている基を意味し、これは例えば環状ケトン、例えばシクロヘキサノン、２−シクロヘキセノンまたはシクロペンタノンを意味する。さらに、シクロアルキル基の具体例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、スピロ［４，５］デカニル、ノルボルニル、シクロヘキシル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、デカリニル、クバニル、ビシクロ［４．３．０］ノニル、テトラリン、シクロペンチルシクロヘキシル、フルオロシクロヘキシルまたはシクロヘキサ−２−エニル基である。
【００３１】
ヘテロシクロアルキルとの表現は、上記定義のシクロアルキル基であって、１個以上（好ましくは１、２または３個）の環炭素原子が酸素、窒素、ケイ素、セレン、リンまたは硫黄原子（好ましくは酸素、硫黄または窒素）によって置換されている基を意味する。ヘテロシクロアルキル基は好ましくは、３〜１０個（とりわけ３、４、５、６または７個）の環原子を有する１または２個の環を有する。さらに、ヘテロシクロアルキルなる表現は１個以上の水素原子がフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子、または−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＳＨ、＝Ｓ、−ＮＨ２、＝ＮＨ、−ＮＯ２、アルキルもしくはヘテロアルキル基によって置換されている基を意味する。例はピペリジル、モルホリニル、ウロトロピニル、ピロリジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロ−フリル、オキサシクロプロピル、アザシクロプロピルまたは２−ピラゾリニル基、ならびにラクタム、ラクトン、環状イミドおよび環状アンヒドリドである。
【００３２】
アルキルシクロアルキルとの表現は、上記定義のとおり、シクロアルキルおよびアルキル、アルケニルまたはアルキニル基を両方含む基、例えばアルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキルおよびアルキニルシクロアルキル基を意味する。アルキルシクロアルキル基は好ましくは、３〜１０個（とりわけ３、４、５、６または７個）の環炭素原子を有する１または２個の環を有するシクロアルキル基と、１もしくは２〜６個の炭素原子を有する１もしくは２個のアルキル、アルケニルまたはアルキニル基を含む。
【００３３】
ヘテロアルキルシクロアルキルとの表現は、上記定義のアルキルシクロアルキル基であって、１個以上（好ましくは１、２または３個）の環炭素原子および／または炭素原子が酸素、窒素、ケイ素、セレン、リンもしくは硫黄原子（好ましくは酸素、硫黄または窒素）によって置換されている基を意味する。ヘテロアルキルシクロアルキル基は、好ましくは３〜１０個（とりわけ３、４、５、６または７個）の環原子を有する１または２個の環と、１もしくは２〜６個の炭素原子を有する１もしくは２個のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはヘテロアルキル基を有する。かかる基の例は、アルキルヘテロシクロアルキル、アルキルヘテロシクロアルケニル、アルケニルヘテロシクロアルキル、アルキニルヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロアルキルヘテロシクロアルキルおよびヘテロアルキルヘテロシクロアルケニルであって、環状基が飽和であるかまたはモノ−、ジ−もしくはトリ−不飽和である基である。
【００３４】
ハロまたはハロゲンとの表現は、好ましくはフルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード、もっとも好ましくはフルオロ、クロロまたはブロモである。
【００３５】
アリールまたはＡｒとの表現は、とりわけ６〜１４個の環炭素原子、好ましくは６〜１０個（とりわけ６個）の環炭素原子を有する１個以上の環を有する芳香族生基を意味する。さらにアリール（またはＡｒ）は、１個以上の水素原子がフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子または−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、＝ＮＨ、−ＮＯ２、アルキルもしくはヘテロアルキル基によって置換されている基を意味する。例は、フェニル、ナフチル、ビフェニル、アニリニル、２−フルオロフェニル、３−ニトロフェニルまたは４−ヒドロキシフェニル基である。
【００３６】
ヘテロアリールとの表現は、とりわけ３〜１４個の環炭素原子、好ましくは５〜１０個（とりわけ５または６個）の環炭素原子を有する１個以上の環と、１個以上（好ましくは１、２、３または４個）の酸素、窒素、リンまたは硫黄環原子（好ましくはＯ、ＳまたはＮ）を有する芳香族生基を意味する。さらにヘテロアリールとの表現は、１個以上の水素原子がフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子または−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、＝ＮＨ、−ＮＯ２、アルキルもしくはヘテロアルキル基によって置換されている基を意味する。例は、４−ピリジル、２−イミダゾリル、３−フェニルピロリル、チアゾリル−オキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、インダゾリル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ピリダジニル、キノリニル、プリニル、カルバゾリル、アクリジニル、ピリミジル、２，３’−ビフリル、３−ピラゾリルおよびイソキノリニル基である。
【００３７】
アラルキルとの表現は、上記定義のとおり、アリールと、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび／またはシクロアルキル基の両方を含む基、例えばアリールアルキル、アルキルアリール、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールシクロアルキル、アリールシクロアルケニル、アルキルアリールシクロアルキルおよびアルキルアリールシクロアルケニル基を意味する。アラルキルの具体例は、トルエン、キシレン、メシチレン、スチレン、ベンジルクロライド、ｏ−フルオロトルエン、１Ｈ−インデン、テトラリン、ジヒドロナフタレン、インダノン、フェニルシクロペンチル、クメン、シクロヘキシルフェニル、フルオレンおよびインダンである。アラルキル基は、好ましくは６〜１０個の環炭素原子を有する１または２個の芳香環と、１または２〜６個の炭素原子を有する１または２個のアルキル、アルケニルおよび／またはアルキニル基、および／または５または６個の環炭素原子を有するシクロアルキル基を含む。
【００３８】
ヘテロアラルキルとの表現は、上記定義のアラルキル基であって、１個以上（好ましくは１、２、３または４個）の環炭素原子および／または炭素原子が酸素、窒素、ケイ素、セレン、リン、ホウ素または硫黄原子（好ましくは酸素、硫黄または窒素）によって置換されている基を意味し、すなわちこれは、上記定義のとおり、アリールまたはヘテロアリールと、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび／またはヘテロアルキルおよび／またはシクロアルキルおよび／またはヘテロシクロアルキル基の両方を含む基を意味する。ヘテロアラルキル基は好ましくは、５または６〜１０個の環炭素原子を有する１または２個の芳香環と、１または２〜６個の炭素原子を有する１または２個のアルキル、アルケニルおよび／またはアルキニル基および／または５または６個の環炭素原子を有するシクロアルキル基を含み、１、２、３または４個のこれらの炭素原子が酸素、硫黄または窒素原子によって置換されている基である。
【００３９】
例はアリールヘテロアルキル、アリールヘテロシクロアルキル、アリールヘテロシクロアルケニル、アリールアルキルヘテロシクロアルキル、アリールアルケニルヘテロシクロアルキル、アリールアルキニルヘテロシクロアルキル、アリールアルキルヘテロシクロアルケニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ヘテロアリールシクロアルキル、ヘテロアリールシクロアルケニル、ヘテロアリールヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールヘテロシクロアルケニル、ヘテロアリールアルキルシクロアルキル、ヘテロアリールアルキルヘテロシクロアルケニル、ヘテロアリールヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキルシクロアルケニルおよびヘテロアリールヘテロ−アルキルヘテロシクロアルキル基であって、環状基が飽和であるかまたはモノ−、ジ−またはトリ−不飽和である基である。具体例はテトラヒドロイソキノリニル、ベンゾイル、２−または３−エチルインドリル、４−メチルピリジノ、２−、３−または４−メトキシフェニル、４−エトキシフェニル、２−、３−または４−カルボキシフェニルアルキル基である。
【００４０】
さらに、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロ−アルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルおよびヘテロアラルキルとの表現は、１個以上の水素原子がフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子またはＯＨ、＝Ｏ、ＳＨ、＝Ｓ、ＮＨ２、＝ＮＨもしくはＮＯ２基によって置換されている基を意味する。
【００４１】
“所望により置換された”なる表現は、１個以上の水素原子が例えばフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子または−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＳＨ、＝Ｓ、−ＮＨ２、＝ＮＨ、−ＮＯ２、アルキルもしくはヘテロアルキル基によって置換されている基を意味する。さらにこの表現は、非置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ２−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ９ヘテロアリール、Ｃ７−Ｃ１２アラルキルまたはＣ２−Ｃ１１ヘテロアラルキル基によって置換されている基を意味する。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物は、それらの置換基に依存して１個以上のキラル中心を有し得る。したがって本発明は、全ての純粋なエナンチオマーと、全ての純粋なジアステレオマー、そして任意の比率でのそれらの混合物の両方を含む。さらに、本発明はまた、全ての一般式（Ｉ）のシス／トランス異性体ならびにそれらの混合物を含む。さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物の全ての互変異性型を含む。
【００４３】
一つの態様において、Ｒ１は親油性（疎水性）基である。他の態様において、Ｒ１は好ましくは、疎油性（親水性）基である。
【００４４】
ある態様において、Ｒ１はＣ１−１０アルキル基、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−Ｃ３−７−シクロアルキル基、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−フェニル基、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−ナフチル基、−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−ヘテロアリール基または−（ＣＯ）０−１−（ＣＨ２）０−６−ヘテロシクロアルキル基であって、シクロアルキル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基が所望により置換されていても良い基である。他の態様において、Ｒ１は例えば、ＳＯ（０−２）Ｒ４；ＣＯＲ４；ＣＯＯＲ４またはＣＯＮＲ４Ｒ５である。
【００４５】
Ｒ２は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル、−（ＣＨ２）０−６−Ｃ３−７−シクロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−フェニル、Ｃ１−１０−アルキル−ナフチル、−（ＣＨ２）０−６−Ｃ３−７−シクロアルキル−（ＣＨ２）０−６−フェニル（この基はまた、縮合シクロアルキル−フェニル環系、例えばインダンまたはテトラヒドロナフタレンを含む）、（ＣＨ２）０−４−ＣＨ（（ＣＨ２）０−４−フェニル）２、−（ＣＨ２）０−６−ヘテロシクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−６−ヘテロアリールであり、シクロアルキル、フェニル、ナフチル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は所望により置換されていても良い基である。
【００４６】
より好ましくは、Ｒ２はＷＯ２００４／００５２４８（出典明示によりその全体を本明細書の一部とする）に定義のアミノ酸残基である。
【００４７】
もっとも好ましくは、Ｒ２は所望により置換されたベンジル、フェネチルまたはテトラヒドロナフチル基である。
【００４８】
Ｒ３は好ましくは、式ＣＨ３−ＮＨ−ＣＨＲ６−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨＲ７−ＣＯ−〔式中、基Ｒ６およびＲ７は上記定義のとおりであり、そして好ましくは、互いに独立して、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ３−７−シクロアルキル−またはＣ１−１０−ヘテロアルキル基であり；この場合Ｒ６はもっとも好ましくはメチル基であり、そしてＲ７は式−ＣＨ（ＣＨ３）２または−Ｃ（ＣＨ３）３の基である〕の基である。
【００４９】
ｍは好ましくは整数１である。
【００５０】
より好ましくは、Ａ−Ｂはあわせて、式ＣＨ２−ＣＨ、ＣＨ＝ＣまたはＣＯ−ＣＨの基である。
【００５１】
本発明の好ましい化合物の具体例を、表１〜３に記載する。
【００５２】
当業者には明らかであろうが、本発明の化合物は塩形、とりわけ酸付加塩または塩基付加塩として存在できる。化合物が塩形で存在することができるとき、当該塩形は本発明の技術的範囲に含まれる。任意の塩形が化学的操作、例えば精製手段において有用であり得るが、薬学的に許容される塩のみが医薬化合物として有用である。
【００５３】
同じ分子内に塩基性基と酸性基が存在するとき、式（Ｉ）の化合物はまた分子内塩を形成することができる。
【００５４】
単離または精製のために、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することもできる。治療的使用のためには、薬学的に許容される塩または（医薬組成物の形態で使用することができる場合）遊離化合物のみを使用し、したがってこれらが好ましい。
【００５５】
遊離形の化合物とそれらの塩形のものとの密接な関係のため、例えば化合物、互変異性体、互変異性体混合物およびそれらの塩の精製または同定において、中間体として使用することができるそれらの塩を含め、本明細書における化合物、とりわけ式Ｉの化合物についてのあらゆる記載は、これらの化合物、とりわけ式Ｉの化合物の対応する互変異性体、これらの化合物、とりわけ式Ｉの化合物の互変異性体の混合物、またはこれらのいずれかの塩についても、適当かつ便宜である場合であって、他に記載がない場合は、記載されているものと理解する。
【００５６】
“化合物・・・、その互変異性体；またはその塩”などと記載されているとき、これは“化合物・・・、その互変異性体、または前記化合物もしくは互変異性体の塩”を意味する。
【００５７】
不斉炭素原子が（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ，Ｓ）−立体配置、好ましくは（Ｒ）−または（Ｓ）−立体配置に存在することがある。飽和結合を有する原子での環での置換基は、可能であれば、シス−（＝Ｚ−）またはトランス（＝Ｅ−）形で存在し得る。したがって、化合物が異性体の混合物として、または好ましくは純粋な異性体として、好ましくはエナンチオマー−純粋なジアステレオマーもしくは純粋なエナンチオマーとして存在し得る。
【００５８】
本発明はまた、インビボで式（Ｉ）の化合物それ自体に変換される式（Ｉ）の化合物のプロドラッグに関する。したがって、式（Ｉ）の化合物に関するあらゆる記載は、適当かつ便宜である場合、式（Ｉ）の化合物の対応するプロドラッグについても記載されているものと理解する。
【００５９】
式（Ｉ）の化合物は有益な薬理学的特徴を有し、そしてキナーゼ依存性疾患の処置において、例えば増殖性疾患の処置用薬剤として有用である。
【００６０】
薬学的に許容される塩には、適当である場合、薬学的に許容される塩基付加塩および酸付加塩、例えばアルカリおよびアルカリ土類金属塩のような金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、およびアミノ酸付加塩、ならびにスルホン酸塩が含まれる。酸付加塩には、塩酸塩、硫酸塩およびリン酸塩のような無機酸塩、ならびにアルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩および乳酸塩のような有機酸付加塩が含まれる。金属塩の例は、リチウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩のようなアルカリ金属塩、マグネシウム塩およびカルシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、ならびに亜鉛塩である。アンモニウム塩の例は、アンモニウム塩およびテトラメチルアンモニウム塩である。有機アミン付加塩の例は、モルホリンとの塩およびピペリジンとの塩である。アミノ酸付加塩の例は、グリシンとの塩、フェニルアラニンとの塩、グルタミン酸との塩およびリジンとの塩である。スルホン酸塩には、メシル酸塩、トシル酸塩およびベンゼンスルホン酸塩が含まれる。
【００６１】
式（Ｉ）の化合物の薬理学的に許容される塩の例は、塩酸、硫酸およびリン酸のような生理的に許容される無機酸の塩；またはメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、乳酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸およびサリチル酸のような有機酸の塩である。式（Ｉ）の化合物は溶媒和物、とりわけ水和物であり得る。水和は、例えば製造プロセスの間に、または最初の式（Ｉ）の無水化合物の吸湿性のために、起こり得る。
【００６２】
本発明の医薬組成物は、有効成分として少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物、そして所望により担体および／またはアジュバントを含む。
【００６３】
同様に本発明の対象であるプロドラッグ（例えばR. B. Silverman, Medizinische Chemie, VCH Weinheim, 1995, chapter 8, pp 361ff）は、式（Ｉ）の化合物と、生理的条件下で切断される少なくとも１種の薬理学的に許容される保護基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アラルキルオキシ、アシルまたはアシルオキシ基、例えばメトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、アセチルまたはアセチルオキシ基からなる。
【００６４】
薬剤の製造におけるこれらの有効成分の使用も、本発明の対象である。一般的に、式（Ｉ）の化合物を既知の許容される方法で、単独または任意の他の治療剤との組合せで投与する。投与は、例えば下記方法の１種で行うことができる：経口的に、例えば糖衣錠、コーティング錠剤、ピル、半固体、軟もしくは硬カプセル剤、溶液、エマルジョンまたは懸濁液として；非経腸的に、例えば注射用溶液として；直腸的に、座薬として；吸入で、例えば粉末製剤またはスプレーとして、あるいは経皮的にまたは経鼻的に。かかる錠剤、ピル、半固体、コーティング錠剤、糖衣錠および硬ゼラチンカプセル剤を製造するために、治療上使用可能な生成物を、薬理学的に不活性な無機もしくは有機担体と、薬剤のために、例えばラクトース、ショ糖、グルコース、ゼラチン、モルト、シリカゲル、デンプンまたはその誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩、乾燥スキムミルク等と混合することができる。軟カプセル剤を製造するために、薬剤の担体、例えば植物油、石油、動物油もしくは合成油、ワックス、脂肪、ポリオールを使用することができる。液体溶液およびシロップを製造するために、薬剤の担体、例えば水、アルコール、塩水溶液、デキストロース水溶液、ポリオール、グリセロール、植物油、石油、動物油もしくは合成油を使用することができる。座薬のために、薬剤の担体、例えば植物油、石油、動物油もしくは合成油、ワックス、脂肪およびポリオールを使用することができる。エアロゾル製剤のために、この目的に適当な圧縮ガス、例えば酸素、窒素および炭酸ジオキシドを使用することができる。薬学的に許容される薬剤、例えば保存および安定添加物、乳化剤、甘味剤、芳香剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝剤、コーティング添加物、および抗酸化剤も、含み得る。
【００６５】
他の治療剤との組合せは、他の有効成分、例えば腫瘍性疾患の予防および／または処置に通常使用されるタキサン類を含み得る。タキサン類には、パクリタキセルおよびドセタキセルのような化合物が含まれる。パクリタキセルはＴＡＸＯＬとして市販され；そしてドセタキセルはＴＡＸＯＴＥＲＥとして市販されている。他のタキサン類には、ビノレルビン、ならびにエポチロンＢおよびパツピロンのようなエポチロンが含まれる。
【００６６】
他の態様において、本発明は本発明の化合物のいずれかを含むキットを提供する。関連する態様において、キットはさらにこれらの化合物の薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。他の関連する態様において、本発明の化合物はキットで存在し、単位投与形態である。さらに他の関連する態様において、キットはさらに対象への投与に使用するための指示書を含む。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物を、K. Rossen, J. Sager, L.M. DiMichele; Tetrahedron Letters, Vol. 38, No. 18, pp 3183-3186, 1997およびA. v. Zychlinski and I. Ugi, HETEROCYCLES, Vol. 49, pp 29-32, 1998に記載の方法によって、対応するＢＯＣ−保護ジペプチドを対応する他の出発物質と反応させることによって製造することができる。次に、ＢＯＣ−保護基を標準的な条件下でトリフルオロ酢酸で除去することができる。精製をＨＰＬＣで行うことができる。例示的合成法を以下に示す。
【化３】
2008536861.tif 000005
【００６８】
【化４】
2008536861.tif 000006
４−ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル−アミノ］カルボニル｝−１，４−ピペラジンジカルボキシレート（２）
【００６９】
（２Ｓ）−４−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−ピペラジンカルボン酸（１、１７．３３ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８００ｍＬ）中に溶解し、これにジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、４１．５ｍＬ、０．２４ｍｏｌ）を加える。この混合物をＲＴで１．５時間攪拌する。Ｒ−（−）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチルアミン（７．００ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）を加え、さらに１時間攪拌を続ける。さらに、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１９．８４ｇ、５２．３ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ、７．０７ｇ、５２．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物全体をＲＴで一晩攪拌する。次いで反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）で希釈し、１Ｍクエン酸、塩水、飽和ＮａＨＣＯ３、塩水、水および塩水（各溶液１Ｌ）で連続的に洗浄する。ＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除去して、粗オフホワイト固体（２３．３４ｇ）を得る。この物質をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（溶離剤として最初ＣＨ２Ｃｌ２、続いて所望の生成物を溶出するために５％Ｅｔ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製する。所望の生成物６を白色泡状物質として単離する（２０．３７ｇ、収率８７％）： 1H NMR δ (CDCl3) 7.27-7.42 (m, 5 H), 7.06-7.19 (m, 4 H), 6.10 (br s, 1 H), 5.11-5.25 (br m, 3 H), 4.46-4.75 (br m, 2 H), 3.77-4.02 (br m, 2 H), 3.00-3.31 (br m, 3 H), 2.68-2.84 (m, 2 H), 1.97-2.07 (br m, 1 H), 1.69-1.84 (br m, 3 H), 1.43 (s, 9 H).  LCMS (APCI+) 494.8 (MH+), 438.5 (MH+-tBu), 394.4 (MH+-BOC).
【００７０】
【化５】
2008536861.tif 000007
ベンジル（３Ｓ）−３−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（３）
【００７１】
アミド２（２０．３５ｇ、４１．２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（６００ｍＬ）とＴＦＡ（１５３ｍｌ、２．０６ｍｏｌ）の混合物中に溶解する。フラスコをＮ２下で密封し、混合物をＲＴで一晩攪拌する。全溶媒を減圧下で除去して油状物を得て、これをＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中に溶解し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３（２×５００ｍＬ）および塩水（５００ｍＬ）で洗浄する。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、そして溶媒を減圧下で除去して、所望の生成物７をオフホワイト泡状物質として得る（１６．２１ｇ、収率１００％）： 1H NMR δ (CDCl3) 7.07-7.39 (m, 10 H), 5.10-5.21 (m, 3 H), 4.18-4.26 (m, 1 H), 3.78-3.88 (m, 1 H), 3.39 (dd, J = 9.2, 3.6 Hz, 1 H), 2.70-3.19 (m, 6 H), 1.97-2.07 (m, 1 H), 1.73-1.86 (m, 3 H); LCMS (APCI+) 394.4 (MH+, 100%).
【００７２】
【化６】
2008536861.tif 000008
ベンジル（３Ｓ）−４−｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタノイル｝−３−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（４）
【００７３】
脱保護したピペラジン３（１６．２０ｇ、４１．２ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（３６．０ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１７．１９ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（６．１２ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）を使用して、ＤＭＦ（７００ｍＬ）中で、上記工程１と同じ条件下でＢＯＣ−Ｌ−バリン（８．９５ｇ、４１．２ｍｍｏｌ）と結合させる。精製をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（溶離剤として最初ＣＨ２Ｃｌ２、続いて所望の生成物を溶出するために１０％Ｅｔ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２）で行う。所望の生成物４を、白色泡状物質として単離する（１５．５１ｇ、収率６４％）： 1H NMR δ (CDCl3) 6.99-7.64 (m, 9 H), 5.99-6.34 (br m, 1 H), 2.68-5.26 (br m, 11 H), 1.51-2.15 (br m, 6 H), 1.42 (s, 9 H), 1.15 (s, 3 H), 0.64-1.02 (br m, 5 H); LCMS (APCI+) 594.2 (MH+), 537.9 (MH+-tBu), 493.7 (MH+-BOC, 100%).
【００７４】
【化７】
2008536861.tif 000009
ベンジル（３Ｓ）−４−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル］−３−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（５）
【００７５】
化合物４（１５．５０ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（９７ｍＬ、１．３１ｍｏｌ）を使用して、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中で、工程２と同じ条件下で、ＢＯＣ−脱保護する。後処理後、所望の遊離アミン５をオフホワイト泡状物質として得る（１２．５７ｇ、収率９７％）： 1H NMR δ (CDCl3) 7.28-7.42 (m, 5 H), 7.03-7.19 (m, 4 H), 6.07-6.35 (br m, 1 H), 5.09-5.27 (br m, 3 H), 3.68-4.81 (br m, 3 H),  2.66-3.53 (br m, 6 H), 1.45-2.04 (br m, 8 H), 0.74-1.00 (br m, 1 H); LCMS (APCI+) 493.7 (MH+, 100%).
【００７６】
【化８】
2008536861.tif 000010
ベンジル（３Ｓ）−４−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）−３−メチルブタノイル］−３−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（６）
【００７７】
アミン５（１２．５７ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（２２．３ｍＬ、０．１３ｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１０．６４ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（３．７９ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）を使用して、ＤＭＦ（５５０ｍＬ）中で、上記工程１と同じ条件下で、ＢＯＣ−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（５．１８ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）と結合させる。精製をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（溶離剤として最初ＣＨ２Ｃｌ２、続いて所望の生成物を溶出するために５０％Ｅｔ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２）で行う。所望の生成物６を白色泡状物質として単離する（１５．３０ｇ、収率８９％）： 1H NMR δ (CDCl3) 7.28-7.38 (br m, 5 H), 7.03-7.19 (br m, 4 H), 6.73 (br s, 1 H), 6.02-6.35 (br m, 1 H), 5.05-5.26 (br m, 4 H), 3.84-4.82 (br m, 5 H), 2.68-3.56 (br m, 9 H), 1.70-2.07 (br m, 5 H), 1.47 (s, 9 H), 0.60-1.33 (br m, 8 H); LCMS (APCI+) 679.0 (MH+), 579.0 (MH+-BOC, 100%); HPLC (C18 column) 99.4%.
【００７８】
【化９】
2008536861.tif 000011
ｔｅｒｔ−ブチルメチル［（１Ｓ）−１−メチル−２−（｛（１Ｓ）−２−メチル−１−［（（２Ｓ）−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］プロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］カルバメート（７）
【００７９】
化合物６（１３．０２ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（６００ｍＬ）中に溶解し、これに５％Ｐｄ／Ｃ（１．８０ｇ）を加える。この混合物を圧力容器中で水素雰囲気（４０ｐｓｉ）下で２時間攪拌する。触媒をセライトでろ過して除去し、得られたろ液から溶媒を除去して粗油状物を得て、これをシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製する。所望の生成物７を白色泡状物質として得る（９．７１ｇ、収率９３％）： 1H NMR δ (CDCl3) 7.02-7.20 (m, 4 H), 6.71 (br s, 1 H), 6.37 (br d, J = 8.8 Hz, 1 H), 4.16-5.13 (br m, 4 H), 3.10-3.71 (br m, 3 H), 2.64-2.84 (br m, 7 H), 1.58-2.11 (br m, 7 H), 1.46 (s, 9 H), 1.30 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 0.86-1.02 (br m, 3 H), 0.75 (d, J = 6.7 Hz, 2 H), 0.53 (br d, J = 6.7 Hz, 2 H); LCMS (APCI+) 544.9 (MH+), 444.6 (MH+-BOC), 260.2 (MH+-ジペプチド, 100%); HPLC (C8カラム) 95.2%．
【００８０】
【化１０】
2008536861.tif 000012
７とアルデヒドの還元的アミノ化の方法例。
【００８１】
ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−２−（｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−４−イソブチル−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝アミノ）−１−メチル−２−オキソエチル（メチル）カルバメート（８、Ｒ＝イソブチル）
【００８２】
中間体７（２５０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン（４ｍＬ）中に溶解し、これにイソ−ブチルアルデヒド（６３μＬ、０．６９ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１４６ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を加える。この混合物をＮ２下で、ＲＴで一晩攪拌する。このポイントでのＬＣＭＳが少量の未反応出発物質を示すので、さらにイソ−ブチルアルデヒド（６３μＬ、０．６９ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１４６ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を加える。ＲＴでさらに４時間撹拌後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、次いで水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。ろ過した後、溶媒を減圧下で除去して油状物を得て、これをシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（１０−５０％Ｅｔ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製する。表題化合物を白色泡状物質として単離する（２５５ｍｇ、収率９２％）： 1H NMR δ (CDCl3) 6.72-7.27 (m, 5 H), 4.37-5.24 br m, 5 H), 3.26-3.90 (br m, 2 H), 2.67-2.96 (br m, 6 H), 1.62-2.19 (m, 11 H), 1.48 (s, 9 H), 1.23-1.34 (m, 3 H), 0.69-0.99 (m, 12 H); LCMS (APCI+) 601.3 (MH+, 100%).
【００８３】
【化１１】
2008536861.tif 000013
７とスルホニルクロライドの反応の方法例。
【００８４】
ｔｅｒｔ−ブチルメチル［（１Ｓ）−１−メチル−２−（｛（１Ｓ）−２−メチル−１−［（（２Ｓ）−４−（フェニルスルホニル）−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］プロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］カルバメート（８、Ｒ＝ベンゼンスルホニル）
【００８５】
中間体７（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中に溶解し、フラスコをＮ２下で密封する。ＤＩＥＡ（９６μＬ、０．５６ｍｍｏｌ）、続いてベンゼンスルホニルクロライド（４６μＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＲＴで２時間攪拌する。反応物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。ろ過後、溶媒を減圧下で除去して油状物を得て、これをシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（２５％Ｅｔ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製する。表題化合物を無色ガラス状物質として単離する（２１６ｍｇ、収率８６％）： 1H NMR δ (CDCl3) 7.51-7.86 (m, 5 H), 7.03-7.25 (m, 4 H), 6.69 (v br s, 1 H), 6.04 (br d, J = 8.2 Hz, 1 H), 5.16-5.25 (m, 1 H), 4.29-4.75 (br m, 3 H), 3.47-4.21 (br m, 3 H), 2.69-2.88 (br m, 5 H), 2.38-2.67 (m, 2 H), 1.81-2.09 (m, 5 H), 1.55 (s, 3 H), 1.46 (s, 9 H), 1.23-1.31 (br m, 2 H), 0.84-0.92 (br m, 3 H), 0.76 (d, J = 6.7 Hz, 2 H); LCMS (APCI+) 685.6 (MH+, 100%).
【００８６】
【化１２】
2008536861.tif 000014
７とイソシアネートの反応の方法例
【００８７】
ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−４−［（ベンジルアミノ）カルボニル］−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝アミノ）−１−メチル−２−オキソエチル（メチル）カルバメート（８、Ｒ＝ベンジルカルバモイル）
【００８８】
中間体７（１３３ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中に溶解し、これにベンジルイソシアネート（３２μＬ、０．２５８ｍｍｏｌ）を加える。溶液を室温で１６時間攪拌し、その後さらにベンジルイソシアネート（１０μＬ、０．０８ｍｍｏｌ）を加え、溶液をさらに５時間、室温で攪拌する。溶媒を減圧下で除去して油状物を得て、これをシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（９５：５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製する。表題化合物を白色泡状物質として単離する（１５２ｍｇ、収率９２％）： 1H NMR δ (CDCl3) 6.05-7.90 (m, 11 H), 3.82-5.24 (m, 9 H), 2.60-3.20 (m, 8 H), 1.60-2.12 (m, 5 H), 1.49 and 1.47 (s, 9 H total), 1.24-1.34 (m, 3 H), 1.11 (d, 1 H, J = 7 Hz), 1.02 (d, 2 H, J = 6.7 Hz), 0.75 (d, 2 H, J = 6.7 Hz), 0.55 (br d, 2 H, J = 6.1 Hz);  LCMS (APCI+) 678.6 (MH+, 100%).  
【００８９】
【化１３】
2008536861.tif 000015
１１とカルボン酸の反応の方法例
【００９０】
ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−２−（｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−４−［４−（アセチルアミノ）ベンゾイル］−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝アミノ）−１−メチル−２−オキソエチル（メチル）カルバメート［８、Ｒ＝４−（アセチルアミノ）ベンゾイル］
【００９１】
中間体７（１９１ｍｇ、０．３５１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、これにＤＩＥＡ（０．３０５ｍＬ、１．７５ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を室温で０．５時間攪拌する。４−アセトアミド安息香酸（６６ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）を加え、攪拌を１時間継続する。ＨＯＢｔ（５２ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（１４６ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ）を加え、混合物全体を室温で２時間攪拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、１Ｍクエン酸、塩水、飽和ＮａＨＣＯ３、塩水、水および塩水で連続的に洗浄する。ＥｔＯＡｃ層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を室温で減圧下で除去して、無色のガム状物質を得る。この物質をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）で精製して表題化合物を白色泡状物質として単離する（２１１ｍｇ、収率８５％）： 1H NMR δ (CDCl3) 6.40-7.62 (m, 11 H), 4.25-5.30 (m, 5 H), 3.93 (“br d”, 1 H, Jobs = 11.9 Hz), 3.47 (“br td”, 1 H, Jobs = 11.4, 3 Hz), 2.65-3.30 (br m, 7 H), 1.70-2.22 (br m, 8 H), 1.48 and 1.46 (s, 9 H total), 1.28-1.34 (m, 3 H), 0.60-1.12 (br m, 7 H);  LCMS (APCI+) 706.7 (MH+, 100%).
【００９２】
【化１４】
2008536861.tif 000016
７とカルバモイルクロライドの反応の方法例
【００９３】
ｔｅｒｔ−ブチルメチル［（１Ｓ）−１−メチル−２−（｛（１Ｓ）−２−メチル−１−［（（２Ｓ）−４−［（メチルアニリノ）カルボニル］−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］プロピル｝アミノ）−２−オキソエチル］カルバメート（８、Ｒ＝Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルカルバモイル）
【００９４】
中間体７（１７５ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）に溶解し、これにＤＩＥＡ（７０μＬ、０．４０ｍｍｏｌ）を加える。溶液を０℃に冷却し、Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルカルバモイルクロライド（６６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温に４時間温める。Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルカルバモイルクロライド（６６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（７０μＬ、０．４０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で１５時間攪拌する。溶液をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３および塩水で洗浄する。溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、溶媒を減圧下で除去して粗生成物を油状物として得る。この物質をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（０−５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製する。表題化合物を白色泡状物質として単離する（１６８ｍｇ、収率７７％）： 1H NMR δ (CDCl3) 6.60-7.60 (m, 10 H), 4.19-5.20 (m, 5 H), 3.62 (“br d”, 1 H, Jobs = 13.2 Hz), 3.52 (“br d”, 1 H, Jobs = 13.4 Hz), 2.56-3.28 (m, 10 H), 1.72-2.10 (m, 5 H), 1.47 and 1.45 (s, 9 H total), 1.24-1.32 (br m, 3 H), 0.88-1.12 (m, 2 H), 1.09 (br d, 1 H, J = 6.7 Hz), 0.90 (dd, 2 H, J = 7.0, 2.6 Hz), 0.78 (br d, 2 H, J = 6.7 Hz), 0.66 (br d, 2 H, 6.7 Hz;  LCMS (APCI+) 678.6 (MH+, 100%).
【００９５】
【化１５】
2008536861.tif 000017
７とボロン酸の反応の方法例
【００９６】
ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−２−（｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−４−（４−フルオロフェニル）−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝アミノ）−１−メチル−２−オキソエチル（メチル）カルバメート（８、Ｒ＝４−フルオロフェニル）
【００９７】
中間体７（４８６ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、４−フルオロフェニルボロン酸（６２５ｍｇ、４．４７ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２（４０６ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（４５１ｍｇ、４．４７ｍｍｏｌ）を全て秤量してフラスコへと入れ、無水ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に溶解する。この混合物を２４時間室温で攪拌し、ＬＣＭＳによればこの時点で所望の生成物がいくらか形成した。さらにボロン酸（６２５ｍｇ、４．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物をさらに２４時間攪拌し、所望の生成物を未反応出発物質とともにメジャーピークにする。この反応混合物を減圧下で濃縮し、シリカのプラグに直接ロードし、これを１０％Ｅｔ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して所望の生成物を単離する。未反応出発物質はこれらの条件下でカラム・ベースラインに残存する。表題化合物をオフホワイト泡状物質として単離する（１８８ｍｇ、収率３３％）： 1H NMR δ (CDCl3) 6.92-7.42 (m, 8 H), 6.74 (v br s, 1 H), 6.09 (br d, J = 8.4 Hz, 1 H), 3.97-5.27 (br m, 6 H), 3.35-3.56 (br m, 2 H), 2.62-3.16 (br m, 7 H), 1.65-2.14 (m, 5 H), 1.47 (s, 9 H), 1.31 (br d, J = 7.1 Hz, 2 H), 1.14 (br d, J = 7.1 Hz, 1 H), 0.98 (br t, J = 7.3 Hz, 2 H), 0.79 (br d, J = 6.7 Hz, 2 H), 0.61 (br d, J = 6.7 Hz, 2 H); LCMS (APCI+) 639.4 (MH+, 100%).
【００９８】
【化１６】
2008536861.tif 000018
１１とクロロホルメートの反応の方法例
【００９９】
４−フルオロフェニル（３Ｓ）−４−［（２Ｓ）−２−（｛（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］−プロパノイル｝アミノ）−３−メチルブタノイル］−３−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル−アミノ］カルボニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（８、Ｒ＝４−フルオロフェニルオキシカルボニル）
【０１００】
中間体７（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中に溶解し、フラスコをＮ２下で密封する。ＤＩＥＡ（９６μＬ、０．５６ｍｍｏｌ）、次いでベンゼンスルホニルクロライド（４６μＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＲＴで２時間攪拌する。反応物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥する（Ｎａ２ＳＯ４）。ろ過後、溶媒を減圧下で除去して油状物を得て、これをシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（２０％Ｅｔ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製する。表題化合物を無色ガラス状物質として単離する（１４６ｍｇ、収率５８％）： 1H NMR δ (CDCl3) 6.97-7.23 (m, 8 H), 6.74 (v br s, 1 H), 6.12-6.29 (br m, 1 H), 5.08-2.25 (m, 2 H), 3.90-4.86 (br m, 5 H), 2.89-3.77 (br m, 4 H), 2.66-2.83 (br m, 5 H), 1.89-2.10 (br m, 2 H), 1.68-1.88 (br m, 3 H), 1.47 (s, 9 H), 1.28-1.36 (br m, 2 H), 0.57-1.05 (br m, 6 H); LCMS (APCI+) 683.7 (MH+, 100%).
【０１０１】
【化１７】
2008536861.tif 000019
（Ｓ）−４−イソブチル−１−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−ブチリル］−ピペラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ）１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）］−アミド（９、Ｒ＝イソブチル、化合物Ａ）。
【０１０２】
ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ）−２−（｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−４−イソブチル−２−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニルアミノ］カルボニル｝ピペラジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝アミノ）−１−メチル−２−オキソエチル（メチル）カルバメート（８、Ｒ＝イソブチル）（２５０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）とＴＦＡ（１．５５ｍｌ）の混合物中に溶解する。この混合物をＮ２下で、ＲＴで一晩攪拌する。全溶媒を減圧下で除去して油状物を得て、これをＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）および塩水（５０ｍＬ）で洗浄する。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、溶媒を減圧下で除去して表題化合物を白色泡状物質として得る（１５７ｍｇ、収率７３％）。この泡状物質（１５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）とＭｅＯＨ（２ｍＬ）の混合物中に溶解し、無水クエン酸（５８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加える混合物を１時間、ＲＴで攪拌し、溶媒を減圧下で除去して白色固体を得て、これを最少量の水（約２〜３ｍＬ）中に取り、ろ過する。この溶液を凍結乾燥して、対応するクエン酸塩を綿状白色固体として得る（１９３ｍｇ）： 1H NMR δ (d6-DMSO) 10.30 (br s, 4H), 8.39-8.64 (m, 1 H), 8.09-8.19 (m, 1 H), 7.05-7.30 (m, 4 H), 4.55-5.03 (br m, 3 H), 3.00-4.20 (br m, 7 H), 2.63-2.82 (br m, 3 H), 2.46 (s, 3 H), 1.78-2.18 (m, 7 H), 1.63-1.76 (br m, 3 H), 1.28-1.32 (br m, 3 H), 0.79-0.96 (br m, 12 H); 13C NMR δ (d6-DMSO) 176.5, 171.1, 170.7, 170.3, 169.0, 168.8, 168.5, 168.0, 137.2, 137.0, 137.0, 128.6, 128.5, 128.4, 128.0, 126.6, 126.5, 125.8, 125.6, 71.2, 65.6, 56.3, 54.6, 53.5, 53.4, 52.3, 46.5, 44.0, 43.3, 31.2, 31.2, 29.7, 29.3, 28.6, 24.9, 20.5, 20.4, 20.4, 20.3, 20.0, 19.9, 19.3, 19.2, 17.5, 17.4, 16.2; LCMS (APCI+) 500.9 (MH+, 100%); HPLC (C18カラム) 98.1%; HRMS MH+に対する計算値C28H46N5O3 500.3601,実測値500.3601.
【０１０３】
【化１８】
2008536861.tif 000020
（Ｓ）−４−ベンゼンスルホニル−１−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−ブチリル］−ピペラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル］−アミド（９、Ｒ＝ベンゼンスルホニル、化合物Ｂ）：化合物Ａの方法に従って製造することができる。
【０１０４】
【化１９】
2008536861.tif 000021
（Ｓ）−４−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−ブチリル］−ピペラジン−１，３−ジカルボン酸１−ベンジルアミド３−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル］｝−アミド］（９、Ｒ＝ベンジルカルバモイル、化合物Ｃ）：化合物Ａの方法に従って製造することができる。
【０１０５】
【化２０】
2008536861.tif 000022
（Ｓ）−４−（４−アセチルアミノ−ベンゾイル）−１−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−ブチリル］−ピペラジン−２−カルボン酸（１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）−アミド（９、Ｒ＝４−（アセチルアミノ）ベンゾイル、化合物Ｄ）：化合物Ａの方法に従って製造することができる。
【０１０６】
【化２１】
2008536861.tif 000023
（Ｓ）−４−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−ブチリル］−ピペラジン−１，３−ジカルボン酸１−（メチル−フェニル−アミド）３−｛［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）−アミド］｝（９、Ｒ＝Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルカルバモイル、化合物Ｅ）：化合物Ａの方法に従って製造することができる。
【０１０７】
【化２２】
2008536861.tif 000024
（Ｓ）−４−（４−フルオロ−フェニル）−１−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）ブチリル］−ピペラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）］−アミド（９、Ｒ＝４−フルオロフェニル、化合物Ｆ）：化合物Ａの方法に従って製造することができる。
【０１０８】
【化２３】
2008536861.tif 000025
（Ｓ）−４−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−ブチリル］−３−［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イルカルバモイル｝−ピペラジン−１−カルボン酸４−フルオロ−フェニルエステル（９、Ｒ＝４−フルオロフェニルオキシカルボニル、化合物Ｇ）：化合物Ａの方法に従って製造することができる。
【０１０９】
一般的に、表Ａの化合物は、一般に入手可能な出発物質から、シリーズＡの方法に従って製造することができる。
【化２４】
2008536861.tif 000026
【０１１０】
【化２５】
2008536861.tif 000027
（Ｓ）−４−ベンジル−ピペラジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（３）：撹拌棒を備えた乾燥した１００．０ｍｌ一首丸底フラスコに（Ｓ）−１−Ｎ−Ｂｏｃ−ピペラジン−２−カルボキシルメチルエステル（８００ｍｇ、３．２７５ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で加える。無水アセトニトリル（２０ｍｌ）を、続いてベンジルクロライド（０．３８ｍｌ、３．２７５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．２８ｍｌ、９．１７ｍｍｏｌ）をフラスコに加える。凝縮器をフラスコに取り付け、反応混合物を７１℃で２０分間加熱する。反応混合物を室温にもどし、減圧下で濃縮する。次いでこれをジクロロメタンで希釈し、水および塩水で洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮する。粗化合物をヘキサンおよび酢酸エチルグラジエント溶媒系を使用して、フラッシュカラム精製し、収率５７０ｍｇ（５２％）の所望の生成物を得る。
【０１１１】
好ましくは、水浴温度は２０℃より上昇させない。そうでないとエピマー化が起こる。
【０１１２】
【化２６】
2008536861.tif 000028
（Ｓ）−４−ベンジル−ピペラジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４）：化合物３（７２０ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）が入っている丸底フラスコにＭｅＯＨ（２０ｍｌ）、続いて１Ｎ  ＮａＯＨ（１２．９ｍｌ、１２．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩攪拌し、この時点でＬＣＭＳは３２１（Ｍ＋Ｈ）で生成物のピークを示す。反応混合物を減圧下で濃縮し、メタノールを除去する。酢酸でｐＨを約３に酸性化する。混合物をＤＣＭで抽出し、有機相を水で２回、塩水で１回洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して白色固体４を得る（６１５ｍｇ、収率８９％）。ＨＰＬＣは化合物４が９８％以上の純度であることを示す。
【０１１３】
【化２７】
2008536861.tif 000029
（Ｓ）−４−ベンジル−２−［（Ｒ）−（１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）カルバモイル］−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６）：無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）を、化合物４（３２５ｍｇ、１．０１４ｍｍｏｌ）が入っている１００ｍｌ丸底フラスコに、Ｎ２下で加える。１０分後、ジイソプロピルアミン（０．８８ｍｌ、５．０７ｍｍｏｌ）をフラスコに加える。室温で１．５時間攪拌する。（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフチルアミン（１４９．３ｍｇ、１．０１４ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、１時間攪拌する。ＨＢＴＵ（４２３．０７ｍｇ、１．１１５ｍｍｏｌ）を、続いてＨＯＢＴ（１５２．１ｍｇ、１．１２６ｍｍｏｌ）反応物に加える。反応混合物を室温で、Ｎ２下で一晩攪拌し、この時点でＬＣＭＳは反応の完了を示す。次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、１．０Ｍクエン酸、塩水、飽和ナトリウムビカルボネート、塩水、水および塩水で連続的に洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮する。粗化合物をヘキサンおよび酢酸エチルグラジエント溶媒系を使用してフラッシュカラム精製して、４２３ｍｇ（９３％）の所望の生成物６を得る。ＨＰＬＣはこの化合物が９９％以上の純度であることを示す。
【０１１４】
【化２８】
2008536861.tif 000030
（Ｓ）−４−ベンジル−ピペラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル］−アミド（７）ジクロロメタン（１５ｍｌ）を化合物６（４２３ｍｇ、０．９４１ｍｍｏｌ）が入っている１００ｍｌ丸底フラスコに、Ｎ２下で入れる。ＴＦＡ（３．８４ｍｌ、４９．８６ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮すると、ＬＣＭＳは反応の完了を示す。次いで、ＤＣＭで希釈し、飽和ナトリウムビカルボネートでｐＨを約１０に塩基性化する。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して白色泡状の化合物７（３２４ｍｇ、収率９９％）を得る。
【０１１５】
【化２９】
2008536861.tif 000031
（（Ｓ）−１−｛（Ｓ）−４−ベンジル−２−［（Ｒ）−（１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）カルバモイル］−ピペラジン−１−カルボニル｝−２−メチル−プロピル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９）：無水ＤＭＦ（１１ｍｌ）を化合物７（１９０ｍｇ、０．５４４ｍｍｏｌ）が入っている１００ｍｌ丸底フラスコに、Ｎ２下で加える。１０分後、ジイソプロピルアミン（０．４７３ｍｌ、２．７２ｍｍｏｌ）をフラスコに加える。室温で１時間攪拌する。Ｂｏｃ−Ｌ−バリン（１１８．１９ｍｇ、０．５４４ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、１時間攪拌する。ＨＢＴＵ（２２７ｍｇ、０．５９８ｍｍｏｌ）を、続いてＨＯＢＴ（８１．６ｍｇ、０．６０４ｍｍｏｌ）を反応物に加える。反応混合物を室温でＮ２下で一晩攪拌し、この時点でＬＣＭＳは反応の完了を示す。ＥｔＯＡｃで希釈し、１．０Ｍクエン酸、塩水、飽和ナトリウムビカルボネート、塩水、水および塩水で連続的に洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して３５６ｍｇ（＞１００％）の所望の生成物９を得る。
【０１１６】
【化３０】
2008536861.tif 000032
（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ブチリル）−４−ベンジル−ピペラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル］−アミド（１０）：ジクロロメタン（１０ｍｌ）を化合物９（３００ｍｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）が入っている１００ｍｌ丸底フラスコに、Ｎ２下で加える。ＴＦＡ（２．２３ｍｌ、２８．９８ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮すると、ＬＣＭＳは反応の完了を示す。次いで、ＤＣＭで希釈し、飽和ナトリウムビカルボネート溶液でｐＨを約１０に塩基性化する。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して白色泡状の化合物１０（２５０ｍｇ、収率＞１００％）。ＨＰＬＣは化合物１０が９５％の純度であることを示す。
【０１１７】
【化３１】
2008536861.tif 000033
［（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１−｛（Ｓ）−４−ベンジル−２−［（Ｒ）−（１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）カルバモイル］−ピペラジン−１−カルボニル｝−２−メチル−プロピルカルバモイル）−エチル］−メチル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２）：無水ＤＭＦ（１２ｍｌ）を化合物１０（２４５ｍｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）が入っている１００ｍｌ丸底フラスコに、Ｎ２下で加える。１０分後、ジイソプロピルアミン（０．４７６ｍｌ、２．７３５ｍｍｏｌ）をフラスコに加える。室温で１時間攪拌する。Ｂｏｃ−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（１１１．１７ｍｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、さらに１時間攪拌する。ＨＢＴＵ（２２８．２２ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ）を、次いでＨＯＢＴ（８２．０５ｍｇ、０．６０７ｍｍｏｌ）を反応物に加える。反応混合物を室温で、Ｎ２下で一晩攪拌し、この時点でＬＣＭＳは反応の完了を示す。次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、１．０Ｍクエン酸、塩水、飽和重炭酸ナトリウム、塩水、水および塩水で連続的に希釈する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮する。粗化合物をヘキサンおよび酢酸エチルグラジエント溶媒系を使用してフラッシュカラム精製し、白色泡状の２９４ｍｇ（８５％）の所望の生成物１２を得る。
【０１１８】
【化３２】
2008536861.tif 000034
（Ｓ）−４−ベンジル−１−［（Ｓ）−３−メチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−ブチリル］−ピペラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル］−アミド
【０１１９】
ジクロロメタン（９．０ｍｌ）を化合物１２（２９４ｍｇ、０．４６４ｍｍｏｌ）が入っている１００ｍｌ丸底フラスコに、Ｎ２で加える。ＴＦＡ（１．８９ｍｌ、２４．５８ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、これを一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮すると、ＬＣＭＳは反応の完了を示す。これを減圧下で濃縮する。さらにヘキサンおよびエーテルと共沸して、オフホワイト固体を得る。この粗化合物を、アセトニトリルおよび水中０．１％ＴＦＡ溶媒系を使用してＨＰＬＣで精製し、最終化合物である実施例１（２９０ｍｇ、９６．５％）を得る。ＨＰＬＣはこの化合物が９９％以上の純度であることを示す。
【０１２０】
【化３３】
2008536861.tif 000035
実施例１−ＴＦＡ塩（２１６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ナトリウムビカルボネート溶液で２回洗浄する。水層のｐＨは約１０である。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮する。さらに高真空下で乾燥して、定量的収率で白色泡状物質を得る。これをＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）およびＥｔＯＨ（０．２ｍｌ）に再溶解する。無水クエン酸塩(sold)（５９ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をフラスコに加え、Ｎ２下で１時間攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して、白色固体を得る。これを高真空下で乾燥する（２２５ｍｇ、９４％）。
【０１２１】
医薬組成物
本発明はさらに、薬学的に有効量の１種以上の上記化合物を有効成分として含む医薬組成物を包含する。本発明の医薬組成物は、腫瘍、とりわけがん性腫瘍、および他のがんを含む増殖性疾患の処置のための、単独で、または１種以上の薬学的に許容される担体との組合せで、ヒトを含む哺乳類への経口または直腸のような経腸、そして非経腸投与に適している。
【０１２２】
本発明の化合物は、有効量の化合物を、経腸もしくは非経腸適用に好適な賦形剤または担体と結合体または混合体で含む医薬組成物の製造に有用である。例えば、（ａ）希釈剤；（ｂ）滑沢剤、（ｃ）結合剤（錠剤）；所望により（ｄ）崩壊剤；および／または（ｅ）吸収剤、着色剤、芳香剤および甘味剤と共に有効成分を含む錠剤およびゼラチンカプセル剤が含まれる。注射用組成物は、好ましくは水性等張溶液または懸濁液であり、座薬は遊離には、脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造される。組成物は滅菌され、そして／または保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶液プロモーター、浸透圧を調節するための塩、および／または緩衝剤のようなアジュバントを含んでいても良い。さらに、組成物はまた、他の治療上有用な物質を含んでいても良い。組成物は常套の混合、造粒またはコーティング方法によってそれぞれ製造し、好ましくは約１〜５０％の有効成分を含む。
【０１２３】
より一般的には、本発明はまた薬剤製造のための、とりわけ増殖性疾患の処置用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用に関する。
【０１２４】
増殖性疾患の処置のための本明細書に記載の医薬組成物の使用も意図する。
【０１２５】
好適な製剤にはまた、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤および製剤の浸透圧を意図する受容者の血液とするための溶質を含み得る水性および非水性滅菌注射用溶液；ならびに懸濁剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液のような非経腸投与用製剤が含まれる。製剤は単位用量または複数用量容器、例えば密封アンプルおよびバイアル中に存在することができ、例えば注射用水に使用の直前に滅菌液体担体を加えるだけでよい凍結−乾燥（凍結乾燥）条件下で貯蔵することができる。
【０１２６】
即時使用型注射用溶液および懸濁液を上記のような滅菌粉末、顆粒および錠剤から製造することができる。
【０１２７】
医薬組成物は、他の薬学的に許容される賦形剤、担体、増量剤、希釈剤などとともに、薬学的に有効量の本活性剤を含む。治療上有効量なる用語は、本明細書において使用するとき、治療結果、とりわけ抗腫瘍効果、例えば悪性がん細胞、良性腫瘍細胞または他の増殖性細胞の増殖阻害を達成するために、宿主に投与する必要がある量を示す。
【発明の効果】
【０１２８】
上記のとおり、本発明の化合物は増殖性疾患の処置に有用である。したがって、本発明はさらに、増殖性疾患の処置法であって、治療上有効量の本発明の化合物を、かかる処置を必要とする哺乳類、好ましくはヒトに投与することを含む方法に関する。
【０１２９】
増殖性疾患は、主に腫瘍疾患（またはがん）（および／または転移）である。
【０１３０】
本発明の化合物はとりわけ、乳癌、泌尿生殖器がん、肺がん、消化器がん、扁平上皮がん、黒色腫、卵巣がん、膵臓がん、神経芽腫、頭部および／または頸部がん、または膀胱がん、あるいはより広い意味で腎臓、脳または胃がん；とりわけ（ｉ）乳がん；扁平上皮腫瘍、例えば扁平上皮頭部および／または頸部腫瘍もしくは口腔腫瘍；肺腫瘍、例えば小細胞性もしくは非小細胞性肺腫瘍；消化器腫瘍、例えば結腸直腸腫瘍；または泌尿生殖器腫瘍、例えば前立腺腫瘍（とりわけホルモン−難治性前立腺腫瘍）；または（ｉｉ）他の化学療法での処置に難治性の増殖性疾患（ｉｉｉ）多剤抵抗性のため他の化学療法での処置に難治性の腫瘍である腫瘍の処置に有用である。本発明のより広い意味において、増殖性疾患はさらに、白血病、過形成、線維症（とりわけ肺、あるいは他のタイプの線維症、例えば腎線維症）、血管形成、乾癬、アテローム性動脈硬化症および血管の平滑筋増殖、例えば狭窄または血管形成後の再狭窄のような過増殖性状態であり得る。
【０１３１】
腫瘍、腫瘍疾患、癌腫またはがんが言及されるとき、腫瘍および／または転移の位置にかかわりなく、原発の臓器もしくは組織、および／またはすべての他の位置における転移が、単独でまたは追加的に意図される。
【０１３２】
本発明の化合物は迅速増殖型細胞に対して通常の細胞よりも、とりわけヒトがん細胞、例えばがん性腫瘍において、選択的に毒性またはより毒性である。化合物は顕著な抗増殖性効果を有しており、分化、例えば細胞サイクルの阻止およびアポトーシスを促進する。
【０１３３】
本発明の化合物は、単独で、または腫瘍増殖を阻害する化合物のような抗がん剤、例えば、プロテアーゼ阻害剤、上皮増殖因子受容体キナーゼ阻害剤、血管内皮増殖因子受容体キナーゼ阻害剤など；細胞毒性薬剤、例えばプリンおよびピリミジンアナログ抗代謝剤のような抗代謝剤；微小管安定化剤および抗有糸分列アルカロイドのような抗有糸分裂薬剤；プラチナ配位錯体；抗腫瘍抗生物質；アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタードおよびニトロソウレア；内分泌系剤、例えばアドレノコルチコステロイド、アンドロゲン、抗−アンドロゲン、エストロゲン、抗−エストロゲン、アロマターゼインヒビター、ゴナドトロピン−放出ホルモンアゴニストおよびソマトスタチンアナログ、過剰発現しているか、および／または腫瘍細胞において制御されていない特定の代謝経路に関与する酵素または受容体を標的とする化合物、例えばＡＴＰおよびＧＴＰホスホジエステラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、プロテインキナーゼ阻害剤、例えばセリン、スレオニンおよびチロシンキナーゼ阻害剤、例えばＡｂｅｌｓｏｎプロテインチロシンキナーゼおよび様々な増殖性因子、それらの受容体およびキナーゼ阻害剤、例えば、上皮増殖因子受容体キナーゼ阻害剤、血管内皮増殖因子Ｉ受容体キナーゼ阻害剤、繊維芽増殖因子阻害剤、インシュリン様増殖因子受容体阻害剤および血小板由来増殖因子受容体キナーゼ阻害剤など；メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ならびにシクロオキシゲナーゼ阻害剤、例えばシクロオキシゲナーゼ−１または−２阻害剤との組合せで投与することができる。
【０１３４】
本発明はさらに、迅速増殖型細胞のアポトーシスを促進する方法であって、迅速増殖型細胞を、アポトーシスを促進するのに有効量のＩＡＰ阻害剤（ＩＡＰＩ）と接触させることを含んでなる方法に関する。好ましくは、ＩＡＰＩ化合物は本発明の式Ｉの化合物である。
【実施例】
【０１３５】
実施例１
下記化合物を文献記載の方法で製造し、ＨＰＬＣ−ＭＳで確認する。
【表１】
2008536861.tif 000036
【表２】
2008536861.tif 000037
【０１３６】
実施例２．    アッセイ
細胞増殖アッセイ
【０１３７】
本発明の化合物のインビトロでの腫瘍細胞増殖を阻害する能力を、CellTiter 96（登録商標）AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して計測した。このアッセイは新規テトラゾリウム化合物［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩；ＭＴＳ］および電子カップリング剤（フェナジンメトスルフェート）ＰＭＳの溶液から構成される。ＭＴＳは細胞によって４９０ｎｍで吸収が測定されるホルマザン生成物へと生体還元される。ＭＴＳのホルマザン生成物水溶液への変換は、代謝的に活性な細胞において見出されるデヒドロゲナーゼ酵素によってなされる。４９０ｎｍ吸収の量におって測定されたホルマザン生成物の量は、直接的に培養液中の生細胞の数に比例する。記載した細胞アッセイにおける表１〜３に列挙した化合物のＩＣ５０値は、＜０．０１ｎＭから＞１０μＭの範囲である。好ましい化合物の値は、０．００５〜１０μＭの範囲である。
【０１３８】
本発明の化合物のＢＩＲ３ペプチド結合ポケットに結合する能力を測定するために、ＦＭＡＴまたはＥＬＩＳＡ技術を基礎とする溶液相アッセイを行う。
【０１３９】
Ｆｍａｔ
【０１４０】
ビオチニル化Ｓｍａｃ７−ｍｅｒペプチド（ＡＶＰＩＡＱＫ、リジンε−アミノ基をビオチニル化）をストレプトアビジン被覆ビーズに不動化する。ＧＳＴ−ＢＩＲ３融合タンパク質をＦＭＡＴビーズで沈殿させ、蛍光タグ抗−ＧＳＴ抗体を使用して検出する。重要なことに、非ビオチニル化ＳｍａｃペプチドはＦＭＡＴビーズから離れたＧＳＴ−ＢＩＲ３と高度に競合する。非ビオチニル化ＳｍａｃのＩＣ５０は４００ｎＭである。上記ＦＭＡＴアッセイにおける表１〜３に列挙した化合物のＩＣ５０値は、０．０２５〜１０μＭ以上の範囲である。
【０１４１】
Ｅｌｉｓａ
【０１４２】
化合物をＧＳＴ−ＢＩＲ３融合タンパク質およびビオチニル化ＳＭＡＣペプチド（ＡＶＰＦＡＱＫ）と、ストレプトアビジン被覆９６ウェルプレート中でインキュベートする。ＸＩＡＰ  ＢＩＲ３  Ｓｍａｃ  Ｅｌｉｓａに、ＸＩＡＰ由来の２４８−３５８アミノ酸を含むＧＳＴ−ＢＩＲ３融合を使用した。ＣＩＡＰ１  ＢＩＲ３  Ｓｍａｃ  Ｅｌｉｓａに、ＣＩＡＰ１由来の２５９−３６４アミノ酸を含むＧＳＴ−ＢＩＲ３融合を使用した。３０分間インキュベーションした後、ウェルを広範囲にわたって洗浄する。残っているＧＳＴ−ＢＩＲ３融合タンパク質を、まずヤギ抗−ＧＳＴ抗体とインキュベーションし、その後洗浄し、アルカリホスファターゼ共役抗ヤギ抗体でインキュベーションすることを含む、ＥＬＩＳＡアッセイで計測する。シグナルをＡｔｔｏｐｈｏｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して増幅し、Ｃｙｔｏｆｌｏｕｒ  Ｅｘ  ４５０ｎｍ／４０およびＥｍ  ５８０ｎｍを使用して読み取る。ＩＣ５０はＧＳＴ−ＢＩＲ３シグナルの半分が消失する化合物の濃度に対応する。非ビオチニル化ＳｍａｃのＩＣ５０は４００ｎＭである。上記ＥＬＩＳＡアッセイにおける表１〜３に列挙した化合物のＩＣ５０値は、０．００５μＭ〜１０μＭ以上の範囲である。
【０１４３】
実施例３
シリーズＡ化合物のＸＩＡＰについてのＩＣ５０値。Ｓｍａｃペプチド−（ＸＩＡＰ）ＢＩＲ３タンパク質−タンパク質相互作用の断絶を測定することができるアッセイを実施例２に記載のように技術的に確立する。このアッセイでは、ＩＡＰ阻害剤化合物は、ＸＩＡＰのＢＩＲ３結合ポケットを占有するため、不動化Ｓｍａｃペプチドと競合する。この戦略の根拠は、Ｃａｓｐａｓｅ９またはＳｍａｃのいずれかがＢＩＲ３結合ポケットに結合する、相互に排他的な性質からもたらされる。
【０１４４】
アッセイを行い、ＩＣ５０値を下記のとおり計算する：
ＩＣ５０計算
インプット    ３×４μＬ  Immobilon膜で停止アッセイ、洗浄せず
バックグラウンド（３ウェル）    酵素に代えてＨ２Ｏでアッセイ
陽性対照（４ウェル）    化合物に代えて３％ＤＭＳＯ
バス対照（１ウェル）    反応混合物なし
【０１４５】
ＩＣ５０値を４種類の濃度（通常１０μＭから出発して３または１０倍連続希釈）での各化合物の阻害パーセンテージを対数回帰分析して計算する。各実験で、参照化合物の実際の阻害を、参照阻害剤の平均値を基礎としてＩＣ５０値の標準化に使用する：
標準化ＩＣ５０＝測定したＩＣ５０平均参照ＩＣ５０／測定した参照ＩＣ５０
【０１４６】
本明細書に記載した当業者に周知の試験方法を使用した本明細書の化合物の活性測定には、下記式（Ｉ）の試験化合物を使用する。表２に示すとおり、シリーズＡ試験化合物はＸＩＡＰに対して活性を示す。“活性”とは、本明細書において使用するとき、１０μＭ未満のＩＡＰ標的阻害のＩＣ５０値を有することと定義する。具体的には、表において：
“Ｘ”はＸＩＡＰに対して１０μＭ未満のＩＣ５０値を意味し；
“−”はＸＩＡＰに対して１０μＭ以上のＩＣ５０値を意味する。
【表３】
2008536861.tif 000038
【表４】
2008536861.tif 000039
【表５】
2008536861.tif 000040
【表６】
2008536861.tif 000041
【表７】
2008536861.tif 000042
【表８】
2008536861.tif 000043
【表９】
2008536861.tif 000044
【０１４７】
実施例４
シリーズＢ化合物のＩＣ５０値をＸＩＡＰについて提供する。アッセイを上記のとおり、当業者に周知の方法を使用して行う。
【０１４８】
本明細書に記載した当業者に周知の試験方法を使用した本明細書の化合物の活性測定には、下記式（Ｉ）の試験化合物を使用する。表３に示すとおり、シリーズＢ試験化合物はＸＩＡＰに対して活性を示す。“活性”とは、本明細書において使用するとき、１０μＭ未満のＩＡＰ標的阻害のＩＣ５０値を有することと定義する。具体的には、表において：
“Ｘ”はＸＩＡＰに対して１０μＭ未満のＩＣ５０値を意味し；
“−”はＸＩＡＰに対して１０μＭ以上のＩＣ５０値を意味する。
【表１０】
2008536861.tif 000045
【表１１】
2008536861.tif 000046
【表１２】
2008536861.tif 000047
【０１４９】
均等性
本明細書には詳細に具体的な態様を記述したが、これは説明のみを目的とする例示によってなしたのであり、特許請求の範囲の技術的範囲をそのように限定することを意図したものではない。とりわけ、様々な置換、改変および修飾を、特許請求の範囲によって定義された発明の精神および範囲から外れることなく、なし得ることを本発明者は意図している。出発物質、合成法または反応条件の選択は、本明細書に記載の態様の知識を有する当業者にとっては通常なし得ることであると考える。他の局面、改良および修飾は、特許請求の範囲の範囲内であると考える。
【国際調査報告】
2008536861.tif 000051
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