(57)【要約】  ムスカリン性アセチルコリン受容体拮抗薬およびその使用方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式：
2008509159.tif 000010
［式中、
トロパン環と結合しているアルキル鎖の配向性はエキソかまたはエンドであり；
Ｒ１は、独立して、ＯＨ、ＣＮまたは水素であり；
Ｒ２およびＲ３は、独立して、好ましくは１ないし６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の低級アルキル基、５ないし６個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６ないし１０個の炭素原子を有するシクロアルキル−アルキル、２−チエニル、置換されていてもよい２−チエニル、３−チエニル、置換されていてもよい３−チエニル、２−ピリジル、フェニルおよび置換されていてもよいフェニルからなる群から選択され；
Ｒ４およびＲ５は、独立して、水素、メチル、（Ｃ２〜Ｃ１２）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−フェニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＣＮ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＣＦ３、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＯＣＨ３および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＯＣＨ３からなる群から選択される：但し、Ｒ４とＲ５が共に水素であることはなく；
Ｘ−はＮ原子の正電荷と結合するアニオンを表す］
で示される式（Ｉ）の化合物。
【請求項２】
Ｘ−がクロリド、ブロミド、ヨージド、スルフェート、ベンゼン、スルホナートおよびトルエンスルホナートからなる群より選択されるところの、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ジ−２−チエニルエタノール；
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジ−２−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
（３−エンド）−３−［２−ヒドロキシ−２，２−ビス（２−メチルフェニル）エチル］−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ビス（２−メチルフェニル）エタノール；
１，１−ジシクロヘキシル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］エタノール；
１，１−ジシクロペンチル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］エタノール；
（３−エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジ−２−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジシクロペンチル−２−ヒドロキシエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジシクロヘキシル−２−ヒドロキシエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジ−３−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−［２−シアノ−２，２−ビス（５−メチル−２−チエニル）エチル］−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；および
（３−エンド）−３−｛２−ヒドロキシ−２，２−ビス［２−（メチルオキシ）フェニル］エチル｝−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
請求項１記載の化合物と、そのための医薬上許容される担体とを含む、ムスカリン性アセチルコリン受容体介在疾患の治療用医薬組成物。
【請求項５】
その必要とする哺乳動物におけるアセチルコリンのその受容体との結合を阻害する方法であって、安全かつ有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項６】
アセチルコリンがそのムスカリン性アセチルコリン受容体と結合するムスカリン性アセチルコリン受容体介在疾患の治療方法であって、安全かつ有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項７】
疾患が、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、喘息、慢性呼吸障害、肺線維症、肺気腫症およびアレルギー性鼻炎からなる群より選択されるところの、請求項６記載の方法。
【請求項８】
投与が口または鼻を介する吸入によりなされる、請求項６記載の方法。
【請求項９】
投与がリザーバ乾燥粉末吸入器、複数回投与用乾燥粉末吸入器または計量吸入器から選択される薬物分配装置を介してなされるところの、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
化合物が２４時間以上の作用持続時間を有するところの、請求項９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン誘導体、その医薬品組成物、および呼吸管のムスカリン性アセチルコリン受容体媒介疾患の治療における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
末梢神経系および中枢神経系中でコリン作動性ニューロンから放出されるアセチルコリンは、２つの主要な部類のアセチルコリン受容体、すなわちニコチン酸アセチルコリン受容体とムスカリン性アセチルコリン受容体との相互作用を介して多くの異なる生物学的プロセスに影響を及ぼす。ムスカリン性アセチルコリン受容体（ｍＡＣｈＲｓ）は７つの膜貫通領域を有するＧ−タンパク質結合受容体のスーパーファミリーに属する。ｍＡＣｈＲｓにはＭ１〜Ｍ５と称される５つのサブタイプがあり、それぞれは別個の遺伝子の産生物である。これら５つのサブタイプはそれぞれ独特の薬理特性を示す。ムスカリン性アセチルコリン受容体は、脊椎器官中に広く分布しており、その脊椎器官において、非常に重要な機能の多くを媒介する。ムスカリン性受容体は抑制作用と興奮作用の両方を媒介することができる。例えば、気道に見られる平滑筋においては、Ｍ３ｍＡＣｈＲは収縮反応を媒介する。総説については、Ｃａｕｌｆｉｅｌｄ（１９９３  Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．５８：３１９〜７９頁）を参照されたい。
【０００３】
肺の中では、ｍＡＣｈＲは、気管および気管支中の平滑筋、粘膜下腺および副交感神経節に局在している。ムスカリン性受容体の密度は副交感神経節の中で最も高く、次いで、粘膜下腺から気管平滑筋へと密度は減少し、さらに気管支平滑筋へと減少する。ムスカリン性受容体は胃小窩にはほとんど存在しない。肺におけるｍＡＣｈＲ発現および機能の総説については、Ｆｒｙｅｒ  ａｎｄ  Ｊａｃｏｂｙ（１９９８  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５８（５，ｐｔ３）Ｓ１５４−６０）を参照されたい。
【０００４】
肺の中では、ｍＡＣｈＲの３つのサブタイプが重要なものとして特定されており、それらはＭ１、Ｍ２およびＭ３のｍＡＣｈＲである。気道平滑筋に存在するＭ３ｍＡＣｈＲは筋肉収縮を媒介する。Ｍ３ｍＡＣｈＲを刺激すると、刺激性Ｇタンパク質Ｇｑ／１１（Ｇｓ）の結合を介して酵素ホスホリパーゼＣが活性化され、ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスリン酸が放出され、収縮性タンパク質のリン酸化がもたらされる。Ｍ３ｍＡＣｈＲは肺の粘膜下腺にも見出される。このＭ３ｍＡＣｈＲの集合体を刺激すると粘液分泌が生じる。
【０００５】
Ｍ２ｍＡＣｈＲは気道平滑筋のコリン作用性受容体の集合体の約５０〜８０％を占める。正確な機能はまだ分かっていないが、これらは、ｃＡＭＰ生成の阻害によって気道平滑筋のカテコールアミン作動性の弛緩を阻害する。ニューロンＭ２ｍＡＣｈＲは節後性交感神経に存在する。正常な生理学的状態のもとでは、ニューロンＭ２ｍＡＣｈＲは、副交感神経からのアセチルコリン放出の厳密な制御を提供する。阻害性Ｍ２ｍＡＣｈＲは、いくつかの種の肺の中の交感神経においても明らかにされている。これらの受容体は、ノルアドレナリンの放出を阻害し、それによって肺への交感神経のインプットを減少させる。
【０００６】
Ｍ１ｍＡＣｈＲは、肺副交感神経節で見出され、そこで、神経伝達を高める働きをする。これらの受容体は末梢肺実質にも局在するが、柔組織におけるその機能は未知である。
【０００７】
肺におけるムスカリン性アセチルコリン受容体機能障害は、様々な異なる病態生理学的状態において認められている。特に、喘息や慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）において、炎症状態は、肺平滑筋を提供する副交感神経に対する阻害性のＭ２ムスカリン性アセチルコリン自己受容体機能の損失を招き、アセチルコリン放出の増大、続く迷走神経刺激を引き起こすことになる（Ｆｒｙｅｒ等、１９９９  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ６４（６−７）４４９〜５５頁）。このｍＡＣｈＲ機能障害は、Ｍ３ｍＡＣｈＲの刺激の増大によって媒介された気道過反応性および過敏反応性をもたらす。したがって、強力なｍＡＣｈＲ拮抗薬の特定は、これらのｍＡＣｈＲ媒介の病態の治療に有用である。
【０００８】
ＣＯＰＤは、慢性気管支炎、慢性細気管支炎および肺気腫を含む様々な進行性の健康障害を包含するあいまいな用語であるが、これは、世界における死亡や罹患の主要な原因である。喫煙はＣＯＰＤの発生の主要な危険因子である。米国だけでも約５０百万人がタバコを吸っており、推定で毎日３，０００人がその習慣に染まっている。その結果、ＣＯＰＤは、世界的な健康負荷として、２０２０年までで世界中で上位５つにランクされると予測されている。現在、吸入による抗コリン作用治療はＣＯＰＤに対する一次治療としての「標準（ｇｏｌｄ  ｓｔａｎｄａｒｄ）」と考えられている（Ｐａｕｗｅｌｓ等、２００１  Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１６３：１２５６〜１２７６頁）。
【０００９】
気道過反応性疾患の処置での抗コリン作用治療の使用を支持する多くの証拠があるにもかかわらず、肺の徴候の診察に用いることができる抗コリン作用性化合物はほとんどない。より具体的には、現在米国では、臭化イプラトロピウム（Ａｔｒｏｖｅｎｔ（登録商標）およびＣｏｍｂｉｖｅｎｔ（登録商標）、アルブテロールと併用して）が、気道過反応性疾患の治療用に販売されている唯一の吸入抗コリン作用性である。この化合物は、強力な抗ムスカリン剤であるが短期作用性であり、したがって、ＣＯＰＤ患者に快方をもたらすためには、日に４回も投与しなければならない。最近ヨーロッパやアジアでは、長期作用性抗コリン作用性臭化チオトロピウム（Ｓｐｉｒｉｖａ（登録商標））が認可されているが、この製品は現在米国では市販されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、長期間作用し、喘息やＣＯＰＤなどの気道過反応性疾患の治療に日に１回投与することができる、ｍＡＣｈＲでの遮断を引き起こすことが可能な新規な化合物が依然として必要とされている。
【００１１】
ｍＡＣｈＲは体内に広く分布しているため、抗コリン作用剤を局部的および／または局所的に呼吸管に施用することができることは、使用する薬物の用量をより少なくできるので特に有利である。さらに、作用の長期持続性を有し、特に、受容体において保持されるか、または肺によって保持される局所的に活性な薬物の設計が可能であることによって、全身的な抗コリン作用薬の使用で見られる望ましくない副作用を回避することが可能になる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、ムスカリン性アセチルコリン受容体（ｍＡＣｈＲ）媒介疾患を治療する方法であって、アセチルコリンがｍＡＣｈＲと結合し、効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬剤として許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００１３】
本発明は、それを必要とする哺乳動物において、その受容体とのアセチルコリンの結合を阻害する方法であって、上記哺乳動物に効果的な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法にも関する。
【００１４】
本発明は、式（Ｉ）の新規な化合物および式（Ｉ）の化合物ならびに薬剤用の担体または希釈剤を含む医薬品組成物も提供する。
【００１５】
本発明による化合物は式（Ｉ）で示される構造を有する。
【００１６】
【化１】
2008509159.tif 000002
（式中、
トロパン環と結合しているアルキル鎖の配向性はエキソかまたはエンドであり、
Ｒ１は独立に、ＯＨ、ＣＮまたは水素であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の低級アルキル基、５〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル基、６〜１０個の炭素原子を有するシクロアルキル−アルキル、２−チエニル、所望により置換２−チエニル、３−チエニル、所望により置換３−チエニル、２−ピリジル、フェニルおよび所望により置換フェニルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ５は独立に、水素、メチル、（Ｃ２〜Ｃ１２）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−フェニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＣＮ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＣＦ３、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＯＣＨ３および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ＯＣＨ３からなる群から選択され、但し、Ｒ４とＲ５が共に水素であることはなく、
Ｘ−は、これらに限定されないが、クロリド、ブロミド、アイオダイド、サルフェート、ベンゼンスルホネートおよびトルエンスルホネートを含む、Ｎ原子の正電荷と結合するアニオンを表す。）
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明の具体的な例は以下のものである。
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ジ−２−チエニルエタノール
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジ−２−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
（３−エンド）−３−［２−ヒドロキシ−２，２−ビス（２−メチルフェニル）エチル］−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ビス（２−メチルフェニル）エタノール
１，１−ジシクロヘキシル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］エタノール
１，１−ジシクロペンチル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］エタノール
（３−エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジ−２−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジシクロペンチル−２−ヒドロキシエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジシクロヘキシル−２−ヒドロキシエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンヨージド；
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジ−３−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；
（３−エンド）−３−［２−シアノ−２，２−ビス（５−メチル−２−チエニル）エチル］−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド；および
（３−エンド）−３−｛２−ヒドロキシ−２，２−ビス［２−（メチルオキシ）フェニル］エチル｝−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
【００１８】
調製方法
式（Ｉ）の化合物は、そのいくつかを以下のスキームで例示した合成手順を適用して得ることができる。これらのスキームで示した合成は、適切に保護された置換基を用いて、それを反応させて本明細書で概要を示す反応との適合性を実現する様々な異なるＲＸ基（Ｘ＝２、３）を有する式（Ｉ）の化合物を作製するのに適用することができる。スキームは、式（Ｉ）の化合物だけを用いて示したが、これは単に例示のためだけに過ぎない。
【００１９】
【化２】
2008509159.tif 000003
【００２０】
スキーム１で概要を示したように、所望の式（Ｉ）の化合物は、エステル１と過剰の有機リチウムまたはグリニャール試薬との反応により調製することができる。第三級窒素とヨウ化メチルかまたは臭化メチルのどちらかとの反応により式（Ｉ）の化合物が得られる。
【００２１】
必要な［３．３．１］二環エステル１は、塩酸塩として市販されているプソイドペレチエリン（２）から調製することができる。スキーム２に示すように、ジエチル（シアノメチル）ホスホネートおよび水素化ナトリウムを用いた２のホーナーエモンズ（Ｈｏｒｎｅｒ−Ｅｍｍｏｎｓ）反応によりアルケン３が得られる。３を水素化するとニトリル４が得られ、次いで加水分解し、そのままエステル化してエステル１を得た。
【００２２】
【化３】
2008509159.tif 000004
【００２３】
あるいは、エステル１のエキソ異性体は、スキーム３で概要を示したようにして調製することも可能である。具体的には、ＭｅＯＨ中のマグネシウムを用いたアルケン３の溶解金属還元によって、エキソ配位の側鎖を得る。次いで、図示したように、ニトリル５を加水分解し、エステル化してエキソエステル６を得る。スキーム１に示したスキームと類似した以下の一連の反応に続いて、次にさらにエステル６を反応させてエキソ側鎖を有する式（Ｉ）の化合物を得る。
【００２４】
【化４】
2008509159.tif 000005
【００２５】
スキーム１に示した第三級アルコールは、一浴法で第三級ニトリルに転換させることができる。具体的には、第三級アミン７を、ＡｌＣｌ３、次いでトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳＣＮ）で逐次処理して式（Ｉ）の化合物（Ｙ＝ＣＮ）を得る。次いでこれを臭化メチルと反応させて対応する第四級アミン塩を得ることができる。
【００２６】
【化５】
2008509159.tif 000006
【００２７】
式（Ｉ）の化合物（Ｒ１＝Ｈである）を得るためには、アルコール７を酸性条件下で脱水してアルケン８（スキーム５）を得る。次いで、化合物８を水添して（Ｉ）（Ｙ＝Ｈ）を得る。次いでこれを臭化メチルかまたはヨウ化メチルのどちらかで処理して第四級窒素塩を得ることができる。
【００２８】
【化６】
2008509159.tif 000007
【００２９】
（合成実施例）
次に、以下の実施例を参照して本発明を説明する。これらの実施例は単に例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。別段の指定のない限り、すべての出発材料は供給業者から入手し、これらをさらに精製することなく使用した。温度はすべて℃である。無水溶媒はＡｌｄｒｉｃｈから購入した。薄層クロマトグラフィー（ｔ．ｌ．ｃ．）はシリカを用いて実施した。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｓｔｉｌｌの手順（Ｓｔｉｌｌ，Ｗ．Ｃ．等、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７８，４３，２９２３〜２９２５頁）によって、別段の指定のない限り、ＥＭＤ（Ｍｅｒｃｋ）９３８５  ４０−６３ｄシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）で指定された溶媒を用いて実施した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルはすべて４００ＭＨｚの装置でとった。ＬＣ／ＭＳ分析は以下の条件下で実施した。
＊液体クロマトグラフ装置：ＳＣＬ−１０Ａコントローラと二元ＵＶ検出器を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ装置
＊オートサンプラー：Ｖａｌｃｏ  ６ポート注入器を備えたＬｅａｐ  ＣＴＣ
＊カラム：１ｍｍ×４０ｍｍ、Ａｑｕａｓｉｌ（Ｃ１８）
＊流速：０．３ｍＬ／分
＊注入容積：２μｌ
＊温度：室温
＊溶媒：          Ａ：０．０２％トリフルオロ酢酸／水
Ｂ：０．０１８％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル
【００３０】
【表１】
2008509159.tif 000008
【００３１】
Ｇｉｌｓｏｎ分取ＨＰＬＣは以下の条件下で実施した。
＊カラム：７５×３３ｍｍＩ．Ｄ．、Ｓ−５μｍ、１２ｎｍ
＊流速：３０ｍＬ／分
＊注入容積：０．８００ｍＬ
＊室温
＊溶媒Ａ：水に０．１％トリフルオロ酢酸
＊溶媒Ｂ：アセトニトリル中に０．１％トリフルオロ酢酸
【００３２】
（±）−（９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イリデン）エタンニトリル（３）
ジエチル（シアノメチル）ホスホネート（５．１２ｍＬ、３１．７ミリモル）を、アルゴン雰囲気下室温で、無水ＴＨＦ（３２ｍＬ）中の９５％ＮａＨ（８００ｍｇ、３１．７ミリモル）の撹拌スラリーに、６分にわたって滴下した。４０分間撹拌した後、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２（９７０ｍｇ、６．３３ミリモル）の溶液を一括して加えた。７０時間撹拌を続行し、次いでＭｅＯＨ（５ｍＬ）を一括して加えた。混合物を減圧下で濃縮し、残留物をＨ２Ｏ／ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）の１：１混合物にとった。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（４×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、Ｂｉｏｔａｇｅ４０＋Ｍカートリッジ（１００ｇシリカゲル）を用いて、４０ｐｓｉで、３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（２Ｌ）で溶出させ、続いて１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１Ｌ）で溶出させて精製して８８６ｍｇ（約７９％）の３を黄色油状物として得た。３の１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）は、３．７から４．３ｐｐｍのいくらかの不純物を示したが、この材料は、一連の反応の次の工程に供するのに適切な純度のものであった。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．１３分  ＭＨ＋１７７
【００３３】
［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］アセトニトリル（４）
塩化アセチル（０．５７ｍＬ、７．４９ミリモル）を室温で撹拌しながらＭｅＯＨ（３．２ｍＬ；注意：発熱）に滴下した。化合物３（８８０ｍｇ、４．９９ミリモル）をこの溶液中に溶解し、次いで減圧下で濃縮した。１０％Ｐｄ−Ｃ（２６６ｍｇ、０．２５ミリモル）を加え、反応フラスコをアルゴンでパージした。次いでＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を加え、フラスコをＨ２バルーンで１５分間パージした（注記：確実に十分パージするために、Ｈ２は４インチの針で反応フラスコ中に導入した。その針の先端は反応混合物の直ぐ上に位置させた）。反応物を室温で２２時間撹拌し、次いで反応混合物を、セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）５２１充てん物を通して濾過した。濾過ケーキをＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）で濯ぎ、合わせた濾液を減圧下で濃縮した。飽和Ｋ２ＣＯ３（１０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を加え、層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、Ｂｉｏｔａｇｅ２５＋Ｍカートリッジ（４０ｇシリカゲル）を用いて、４０ｐｓｉで、５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）で溶出させ、続いて１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１．５Ｌ）で溶出させて精製して５１７ｍｇ（５８％）の４を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ０．７４分  ＭＨ＋１７９
【００３４】
エチル［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］アセテート（１）
濃厚ＨＣｌ（１０ｍＬ）中の４（５１５ｍｇ、２．８９ミリモル）の溶液を還流下で２時間加熱し、次いで減圧下で濃縮した。別のフラスコで、撹拌しながら塩化アセチル（０．７ｍＬ、９．８ミリモル）をＥｔＯＨ（４．３ｍＬ）に滴下して（注意：発熱）、２Ｍ  ＨＣｌ／ＥｔＯＨ（５ｍＬ）の溶液を調製した。次いで、この溶液を４の加水分解により得た粗生成物に加え、反応物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を飽和のＫ２ＣＯ３／ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）の２：１混合物にとった。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して５１６ｍｇ（７９％）の１を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）とＬＣ／ＭＳにより、化合物１は一連の反応の次の工程に供するのに十分であると判断された。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．１７分  ＭＨ＋２２６．２
【００３５】
［（３−エキソ）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］アセトニトリル（５）
Ｍｇ（０）（１１ｇ、４５４ミリモル）を、アルゴン雰囲気下でＭｅＯＨ（１１０ｍＬ）中の３（２ｇ、１１．３５ミリモル）の溶液に加えた。反応物を室温で１０分間撹拌し、０℃（浴温）に冷却し、徐々に室温に加温した。１７時間後、反応物（固体状の塊）を０℃（浴温）に冷却し、濃厚ＨＣｌ（１００ｍＬ）を分割して加えた（発熱）。反応物を室温で１時間撹拌し、固体を濾別した。濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ、次いで２×１５０ｍＬ）で濯いだ。合わせた濾液を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物（６９０ｍｇ）を、中性アルミナ（４０ｇ；Ａｌｄｒｉｃｈ、６０Å）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより、以下の順の溶媒（各２００ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ、０．１％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、０．２％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、０．３％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、０．５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、０．７５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、３％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶出させて精製した。５を含む画分（ＴＬＣで測定して）をプールし、減圧下で濃縮し、６Ｍ  ＮａＯＨ／ＥｔＯＡｃ（６ｍＬ）の１：１混合物にとった。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して３１０ｍｇ（１５％）の５を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．１１分  ＭＨ＋１７９．２
【００３６】
エチル［（３−エキソ）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］アセテート（６）
濃厚ＨＣｌ（３ｍＬ）中の５（３１０ｍｇ、１．７４ミリモル）の溶液を還流下で２時間加熱し、次いでＥｔＯＨ（１０ｍＬ）を加えた。室温で１２時間撹拌を続行し、ＥｔＯＨを減圧下で除去した。ＮａＯＨ（１．６ｇ、４０ミリモル）とＨ２Ｏ（２ｍＬ）を加え、混合物を、すべてのＮａＯＨが溶解するまで撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１×５ｍＬ）で抽出した。ＬＣ／ＭＳによれば、この有機物層は、中間体カルボン酸だけを含んでおり、６は含まれていなかった。水層を濃厚ＨＣｌ（２ｍＬ）で酸性にし、有機物層と合わせて、減圧下で濃縮した。残留物をＨＣｌ／ＥｔＯＨ（５ｍＬ）の２Ｍ溶液にとり、室温で４日間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、飽和Ｋ２ＣＯ３（３ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）の混合物を加えた。固形物を濾別し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（４×５ｍＬ）で濯いだ。合わせた濾液を飽和ＮａＣｌ（１×２ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して２７３ｍｇ（７０％）の６を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）で測定した６の純度は、一連の反応の次の工程に供するのに十分であると判断された。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．０４分  ＭＨ＋２２６．２
【実施例１】
【００３７】
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ジ−２−チエニルエタノール
ＴＨＦ（３ｍＬ）中の１（２７３ｍｇ、１．２１ミリモル）の溶液を、アルゴン雰囲気下、−３０℃（浴温）で撹拌しながらＴＨＦ（４．８ｍＬ、４．８ミリモル）中の２−チエニルリチウムの１Ｍ溶液に滴下した。氷浴を取り外し、５時間撹拌を続行し、次いでＨ２Ｏ（３ｍＬ）を加えた。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を飽和ＮａＣｌ（１×１ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲル（２０ｇ）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより、５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（６００ｍＬ）、続いて１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）で溶出させて精製して１４５ｍｇ（４８％）の実施例１を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．１７分  ＭＨ＋２２６．２
【実施例２】
【００３８】
３−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−２，２−ジ−２−チエニルプロパンニトリル
ＡｌＣｌ３（１７６ｍｇ、１．３３ミリモル）を、２ドラムバイアルのジクロロエタン（５．３ｍＬ）中の実施例１（９５ｍｇ、０．２７ミリモル）のスラリーに加えた。バイアルをテフロン（Ｔｅｆｌｏｎ）ライニングしたスクリューキャップで密封し、反応物を室温で１０分間撹拌した。次いでトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳＣＮ、０．１８ｍＬ、１．３３ミリモル）を加え、バイアルを密封し、反応物を８５℃（浴温）で２０時間撹拌した。反応物を室温で１０分間撹拌し、ＡｌＣｌ３（１７６ｍｇ、１．３３ミリモル）の追加の分を加えた。１０分間撹拌を続行し、次いで追加のＴＭＳＣＮ（０．１８ｍＬ、１．３３ミリモル）を加えた。反応物を８５℃で４０時間撹拌し、撹拌しながら反応物を飽和のＫ２ＣＯ３／ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）の２：１混合物中に注加した。黒色の沈殿物を濾別し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）で濯いだ。濾液の層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、５ｐｓｉで、３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１Ｌ）、続いて１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１Ｌ）で溶出させてＢｉｏｔａｇｅ２５＋Ｓカートリッジ（２０ｇシリカゲル）で精製して４５ｍｇ（４８％）の実施例２を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．６９分  ＭＨ＋３５７．２
【００３９】
（３−エンド）−３−（２，２−ジ−２−チエニルエテニル）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン（７）
シュウ酸（２０７ｍｇ、２．３０ミリモル）を、２−ドラムバイアルのＨ２Ｏ（２ｍＬ）中の実施例１（２００ｍｇ、０．５７６ミリモル）のスラリーに加えた。反応バイアルをテフロンライニングしたスクリューキャップで密封し、反応物を１００℃（浴温）で１時間撹拌した。６Ｍ  ＮａＯＨ（１ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（４×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、５ｐｓｉで、０．２５％（水溶液）ＮＨ４ＯＨ／１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）で溶出させて、Ｂｉｏｔａｇｅ２５＋Ｓカートリッジ（２０ｇシリカゲル）で精製して１３５ｍｇ（７１％）の７を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７３分  ＭＨ＋３２９．６
【実施例３】
【００４０】
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ジフェニルエタノール
ＴＨＦ（７ｍＬ）中の１（３１５ｍｇ、１．４０ミリモル）の溶液を、アルゴン雰囲気下、−３０℃（浴温）で７０：３０シクロヘキサン／Ｅｔ２Ｏ（３．７３ｍＬ、５．６ミリモル）中のＰｈＬｉの１．５Ｍ溶液に加えた。氷浴を取り外し、反応物を３時間撹拌し、次いでＨ２Ｏ（５ｍＬ）を加え、続いてＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を加えた。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（４×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を飽和ＮａＣｌ（１×５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、５ｐｓｉで、０．５％（水溶液）ＮＨ４ＯＨ／１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（２Ｌ）で溶出させてＢｉｏｔａｇｅ２５＋Ｓカートリッジ（２０ｇシリカゲル）で精製して２９５ｍｇ（６３％）の実施例３を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．６６分  ＭＨ＋３３６．２
【実施例４】
【００４１】
３−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−２，２−ジフェニルプロパンニトリル
ＡｌＣｌ３（１５８ｍｇ、１．１９ミリモル）を、２ドラムバイアルのジクロロエタン（４．８ｍＬ）中の実施例３（８０ｍｇ、０．２４ミリモル）のスラリーに加えた。バイアルをテフロンライニングしたスクリューキャップで密封し、反応物を室温で１０分間撹拌した。次いでＴＭＳＣＮ（０．１６ｍＬ、１．１９ミリモル）を加え、バイアルを密封し、反応物を８５℃（浴温）で１５時間撹拌し、次いで室温で１０分間撹拌した。追加のＡｌＣｌ３（１５８ｍｇ、１．１９ミリモル）を加え、１０分間撹拌を続行し、次いで追加のＴＭＳＣＮ（０．１６ｍＬ、１．１９ミリモル）を加えた。反応物を８５℃で２０時間撹拌し、次いで室温で４０時間撹拌した。上記と同様にして追加のＡｌＣｌ３（１５８ｍｇ、１．１９ミリモル）とＴＭＳＣＮ（０．１６ｍＬ、１．１９ミリモル）を加え、反応物を８５℃で２４時間撹拌した。反応物を、撹拌しながら飽和のＫ２ＣＯ３／ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）の２：１混合物に注加した。黒色の沈殿物を濾別し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で濯いだ。濾液の層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、５ｐｓｉで、５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）、続いて１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）で溶出させてＢｉｏｔａｇｅ２５＋Ｓカートリッジ（２０ｇシリカゲル）で精製して５２ｍｇ（６３％）の実施例４を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．８２分  ＭＨ＋３４５．２
【００４２】
（３−エンド）−３−（２，２−ジフェニルエテニル）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン（８）
テフロンライニングしたスクリューキャップで密封した２−ドラムバイアルの濃厚ＨＣｌ（２ｍＬ）中の実施例３（２０８ｍｇ、０．６２ミリモル）の溶液を、撹拌しながら１１０℃（浴温）で１時間加熱した。ＮａＯＨ（１．２ｇ）を分割添加し（注意：発熱）、混合物をＥｔＯＡｃ（４×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、０．２５％（水溶液）ＮＨ４ＯＨ／１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）で溶出させてＢｉｏｔａｇｅ２５＋Ｓカートリッジ（２０ｇシリカゲル）で精製して１９０ｍｇ（９６％）の８を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７０分  ＭＨ＋３１８．０
【実施例５】
【００４３】
（３−エンド）−３−（２，２−ジフェニルエチル）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を、アルゴン雰囲気下で８（８５ｍｇ、０．２６８ミリモル）と１０％Ｐｄ−Ｃ（１４ｍｇ、０．０１３４ミリモル）の混合物に加え、フラスコをＨ２バルーンで１５分間パージした（注記：確実に十分パージするために、Ｈ２は４インチの針で反応フラスコ中に導入した。その針の先端は反応混合物の直ぐ上に位置させた）。反応物を室温で２０時間撹拌し、次いで反応混合物を、セライト５２１充てん物を通して濾過した。濾過ケーキをＭｅＯＨ（４×５ｍＬ）で濯ぎ、合わせた濾液を減圧下で濃縮して８５ｍｇ（１００％）の実施例５を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）とＬＣ／ＭＳで測定した実施例５の純度は、一連の反応の次の工程に供するのに十分であると判断された。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．９１分  ＭＨ＋３２０．２
【実施例６】
【００４４】
２−［３−（エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ジ−チオフェン−３−イル−エタノール
３−ブロモチオフェン（０．３０３ｇ、１．８６ミリモル）をＴＨＦ（４ｍＬ）中に溶解し−７８℃に冷却した。ヘキサン（０．７８ｍＬ、１．９５ミリモル）中のｎ−ブチルリチウムの２．５Ｍ溶液を上記溶液に加え、−７８℃で１時間撹拌した。１（０．２００ｇ、０．８８７ミリモル）の溶液をＴＨＦ（４ｍＬ）中に加え、室温で１８時間撹拌した。反応のＴＬＣ（１．８％ＮＨ４ＯＨ／８％ＭｅＯＨ／９０％ＣＨ２Ｃｌ２）は、ほとんどの出発原料が予想される生成物であることを示していた。別のフラスコで、３−ブロモチオフェン（２．８９ｇ、１７．７ミリモル）とヘキサン（７ｍＬ）中のｎ−ブチルリチウムの２．５Ｍ溶液を用いて３−リチオチオフェンの溶液を調製した。３−リチオチオフェン溶液を、カニューレを用いて−７８℃で反応混合物に移し、室温で５時間撹拌した。反応物のＴＬＣは、化合物１が減少していることを示した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（３０ｍＬ）でクエンチし、ＴＨＦを濃縮し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を加えた。有機物層を、Ｈ２Ｏ（１５０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１５０ｍＬ）で逐次洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。粗材料を、逆相ＨＰＬＣ１０−９０、１５分、ＴＦＡなしで精製して０．０２０ｇ（６％）の化合物実施例６を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．５分  ＭＨ＋３４８
【実施例７】
【００４５】
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）］−１，１−ビス（５−メチル−チオフェン−２−イル）−エタノール
２−ブロモ−５−メチルチオフェン（３．１４ｇ、１７．７ミリモル）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解し−７８℃に冷却した。ヘキサン中のｎ−ブチルリチウムの２．５Ｍ溶液（７．２５ｍＬ、１７．７ミリモル）を加え、−７８℃で４５分間撹拌した。ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１（０．２１０ｇ、０．９３ミリモル）の溶液を加え、室温で７２時間撹拌した。次いで反応物をＨ２Ｏ（１５ｍＬ）でクエンチし濃縮した。水層を酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ（１５０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。粗生成物を、４０ｇの再充てんカラムを備えたＩｓｃｏ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈと、１．８％ＮＨ４ＯＨ／８％ＭｅＯＨ／９０％ＣＨ２Ｃｌ２からなる溶媒系を用いてシリカゲルで精製して０．１７２ｇ（４９％）の実施例７を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７４分  ＭＨ＋３７６．
【実施例８】
【００４６】
３−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）］−２，２−ビス（５−メチル−チオフェン−２−イル）−プロピオニトリル
実施例７（０．１００ｇ、０．２６６ミリモル）を１０ｍＬバイアル中でジクロロエタン（１０ｍＬ）に溶解し、アルゴンでフラッシュした。この溶液にＡｌＣｌ３（０．３５２ｇ、２．６６ミリモル）を加え、反応物を５分間撹拌した。トリメチルシリルシアニド（０．３５５ｍＬ、２．６６ミリモル）を加え、密封したバイアルを８５℃で１８時間加熱した。追加のＡｌＣｌ３（０．３５２ｇ、２．６６ミリモル）とトリメチルシリルシアニド（０．３５５ｍＬ、２．６６ミリモル）を加え、２４時間加熱を続行した。トリメチルシリルシアニド（０．３００ｍＬ、２．２５ミリモル）を加え、５時間撹拌を続行した。次いで反応混合物を室温に冷却し、１５ｍＬの飽和Ｋ２ＣＯ３／１０ｍＬ酢酸エチルの混合物中に注加して１５分間撹拌し、次いでセライト５４５充てん物を通して濾過した。濾液を酢酸エチル（３ｘ）で抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ（１５０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）濃縮した。粗生成物を、１０ｇの再充てんカラムを備えたＩｓｃｏ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈと、１．８％ＮＨ４ＯＨ／８％ＭｅＯＨ／９０％ＣＨ２Ｃｌ２からなる溶媒系を用いてシリカゲルで精製して０．０３０ｇ（２９％）の実施例８を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ２．０１分  ＭＨ＋３８５．
【実施例９】
【００４７】
１，１−ビス（２−メトキシ−フェニル）−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）−エタノール
ＴＨＦ（０．０４８ｍＬ、４８．０ミリモル）中の２−メトキシフェニルマグネシウムブロミドの１Ｍ溶液をアルゴン雰囲気下で０℃に冷却した。化合物１（１．１ｇ、４．８８ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）中の溶液として加え、反応物を還流下で１８時間加熱した。次いで反応物を冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１５０ｍＬ）でクエンチした。ＴＨＦを濃縮し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ（１５０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙの相分離カートリッジ（７０ｍＬ）で乾燥した。粗生成物を、１２０ｇの再充てんカラムを備えたＩｓｃｏ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈと、１．８％ＮＨ４ＯＨ／８％ＭｅＯＨ／９０％ＣＨ２Ｃｌ２からなる溶媒系を用いてシリカゲルで精製して１．３９ｇの実施例９を含む化合物の混合物を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７４分  ＭＨ＋４００
【実施例１０】
【００４８】
２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）−１，１−ビス（２−メチルフェニル）エタノール
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の１（３００ｍｇ，１．３３ミリモル）の溶液に、ＴＨＦ（４ｍＬ、７．９６４６ミリモル）中の２−メチルフェニルマグネシウムブロミドの２Ｍ溶液を加えた。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。水（５ｍＬ）を加えて反応をクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）濃縮した。ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈを用いて９：１ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出させて精製して実施例１０（１３０ｍｇ、２７％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：  ２．００分、Ｍ＋Ｈ：３６４．８
【実施例１１】
【００４９】
１，１−ジシクロヘキシル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）エタノール
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の１（６００ｍｇ、２．６５ミリモル）の溶液に、ＴＨＦ（５．３ｍＬ、１０．６ミリモル）中のシクロヘキシルマグネシウムブロミドの２Ｍ溶液を加えた。反応混合物を６０℃で２時間還流させた。塩化アンモニウム飽和水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応をクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）濃縮した。ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈを用いて９：１ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出させて精製して実施例１１（１４０ｍｇ、１５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：２．１９分、Ｍ＋Ｈ：３４８．２
【実施例１２】
【００５０】
１，１−ジシクロペンチル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）エタノール
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の１（５００ｍｇ、２．２１ミリモル）の溶液に、Ｅｔ２Ｏ（５．３ｍＬ、１０．６２ミリモル）中のシクロペンチルマグネシウムブロミドの２Ｍ溶液を加えた。反応混合物を６０℃で３時間加熱した。塩化アンモニウム飽和水溶液（２０ｍＬ）を加えて反応をクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）濃縮した。ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈを用いて９：１ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出させて精製して実施例１２（１５０ｍｇ、１９％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：１．９５分、Ｍ＋Ｈ：３２０．２
【実施例１３】
【００５１】
２−［（３−エキソ）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル］−１，１−ジ−２−チエニルエタノール
ＴＨＦ（３ｍＬ）中の６（２７３ｍｇ、１．２１ミリモル）の溶液を、アルゴン雰囲気下、−３０℃（浴温）で撹拌しながらＴＨＦ（４．８ｍＬ、４．８ミリモル）中の２−チエニルリチウムの１Ｍ溶液に滴下した。氷浴を取り外し、室温で５時間撹拌を続行し、次いでＨ２Ｏ（３ｍＬ）を加えた。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物層を飽和ＮａＣｌ（１×１ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲル（１６ｇ）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより、０．５％（水溶液）ＮＨ４ＯＨ／１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）で溶出させ、続いて１％（水溶液）ＮＨ４ＯＨ／１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）および１．５％（水溶液）ＮＨ４ＯＨ／１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出させて３２３ｍｇ（７７％）の実施例１３を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．５５分  ＭＨ＋３４８．２
【実施例１４】
【００５２】
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジ−２−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンアイオダイド
ＭｅＩ（０．０３４ｍＬ、０．５４７ミリモル）をアセトン（１ｍＬ）中の実施例１（１９ｍｇ、０．０５４７ミリモル）の溶液に加えた。反応物を室温で２０時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、中位空隙率のガラス焼結漏斗（ｇｌａｓｓ  ｆｒｉｔｔｅｄ  ｆｕｎｎｅｌ）に移し、Ｅｔ２Ｏ（５×１ｍｌ）で濯ぎ、実施例１４を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７０分  ＭＨ＋３６２．２
【実施例１５】
【００５３】
（３−エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジ−２−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１．２６ｍＬ、２．５２ミリモル）中のＭｅＢｒの２Ｍ溶液を、アセトン（１ｍＬ）中の実施例２（４５ｍｇ、０．１２６ミリモル）の溶液に加えた。反応物を室温で４．５日間撹拌し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、中位空隙率のガラス焼結漏斗に移し、Ｅｔ２Ｏ（４×１ｍＬ）、ＣＨ３ＣＮ（１×０．５ｍＬ）およびＣＨＣｌ３（１×１ｍＬ）で濯いだ。濾過ケーキを高真空下で乾燥して１４ｍｇ（２５％）の実施例１５を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７６分  ＭＨ＋３７１．２
【実施例１６】
【００５４】
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１．１９ｍＬ、２．３８ミリモル）中のＭｅＢｒの２Ｍ溶液を、アセトン（１ｍＬ）中の実施例３（４０ｍｇ、０．１１９ミリモル）の溶液に加えた。反応物を室温で４３時間撹拌した。沈殿物を濾別し、Ｅｔ２Ｏ（１×１ｍＬ）で濯ぎ、真空下で乾燥して４３．５ｍｇ（８５％）の実施例１６を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．６２分  ＭＨ＋３５０．０
【実施例１７】
【００５５】
（３−エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１．４８ｍＬ、２．９６ミリモル）中のＭｅＢｒの２Ｍ溶液を、アセトン（１ｍＬ）中の実施例４（５１ｍｇ、０．１４８ミリモル）の溶液に加えた。反応物を室温で８０時間撹拌した。沈殿物を濾別し、Ｅｔ２Ｏ（３×１ｍＬ）で濯ぎ、真空下で乾燥して４４ｍｇ（６８％）の実施例１７を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７８分  ＭＨ＋３５９．０
【実施例１８】
【００５６】
（３−エンド）−３−（２，２−ジフェニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（０．６７ｍＬ、１．３３ミリモル）中のＭｅＢｒの２Ｍ溶液を、アセトン（１ｍＬ）中の実施例５（８５ｍｇ、０．２６６ミリモル）の溶液に加えた。反応物を室温で３８時間撹拌した。沈殿物を濾別し、Ｅｔ２Ｏ（３×１ｍＬ）で濯ぎ、高真空下で乾燥して６９ｍｇ（６３％）の実施例１８を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．８５分  ＭＨ＋３３５．４
【実施例１９】
【００５７】
（３−エキソ）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジ−２−チエニルエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（０．９５ｍＬ、１．９ミリモル）中のＭｅＢｒの２Ｍ溶液をアセトン（２ｍＬ）中の実施例１３（３３ｍｇ、０．０９５ミリモル）の溶液に加えた。反応物を室温で１４時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残留物をＥｔ２Ｏ（２×５ｍＬ）で摩砕した。洗浄物を濾過し、合わせた固形残留物を高真空下で乾燥して３７ｍｇ（８８％）の実施例１９を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．５７分  ＭＨ＋３６２．４
【実施例２０】
【００５８】
（３−エンド）−３−（２−ヒドロキシ−２，２−ジ−チオフェン−３−イル−エチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
実施例６（０．０２０ｇ、０．０５８ミリモル）を１：１ＣＨ３ＣＮ／ＣＨＣｌ３（４ｍＬ）中に溶解した。ｔ−ブチルメチルエーテル（０．１５ｍＬ、０．２９ミリモル）中の臭化メチルの２Ｍ溶液を上記溶液に加えた。反応物を４０℃で９６時間加熱して化合物３を得た。粗生成物を、逆相ＨＰＬＣ１０−９０で１０分間、ＴＦＡなしで精製して０．００５ｇ（２４％）の化合物実施例２０を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．４８分  ＭＨ＋３６２
【実施例２１】
【００５９】
（３−エンド）−３−［２−シアノ−２，２−ビス（５−メチル−チオフェン−２−イル）エチル］−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
実施例８（０．０３０ｇ、０．０７８ミリモル）をＣＨ３ＣＮ／ＣＨＣｌ３（４ｍＬ）の１：１溶液中に溶解した。ｔ−ブチルメチルエーテル（０．１９ｍＬ、０．３９ミリモル）中の臭化メチルの２Ｍ溶液を上記溶液に加えた。反応物を室温で１８時間撹拌して化合物実施例２１を得た。粗生成物を、逆相ＨＰＬＣ１０−９０で、１０分間、ＴＦＡなしで精製して０．００４ｇ（１３％）の化合物実施例２１を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．８４分  ＭＨ＋４００．
【実施例２２】
【００６０】
（３−エンド）−３−［２−ヒドロキシ−２，２−ビス（２−メトキシ−フェニル）エチル］−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンブロミド
実施例９（０．２０ｇ、約０．５０６ミリモル）で調製した粗混合物をＣＨ３ＣＮ／ＣＨＣｌ３（６ｍＬ）の１：１溶液中に溶解した。ｔ−ブチルメチルエーテル（１．２７ｍＬ、２．５３ミリモル）中の臭化メチルの２Ｍ溶液を上記溶液に加えた。反応物を室温で７２時間撹拌して化合物８を得た。粗生成物を、逆相ＨＰＬＣ１０−６０で、１０分間、ＴＦＡなしで精製して０．０５８４ｇ（１３％）の化合物実施例２２を得た。
ＬＣ／ＭＳ  ＥＳＩ  ＲＴ１．７６分  ＭＨ＋４１１．
【実施例２３】
【００６１】
（３−エンド）−３−［２−ヒドロキシ−２，２−ビス（２−メチルフェニル）エチル］−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンアイオダイド
アセトン（５ｍＬ）中の２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）−１，１−ビス（２−メチルフェニル）エタノール（２５ｍｇ、０．０６８ミリモル）の溶液に、ヨウ化メチル（０．５ｍＬ、８．０３ミリモル）を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。濃縮後、実施例２３（２０ｍｇ、７７％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：１．９９分、Ｍ＋：３７８．４
【実施例２４】
【００６２】
（３−エンド）−３−（２，２−ジシクロヘキシル−２−ヒドロキシエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンアイオダイド
アセトン（５ｍＬ）中の１，１−ジシクロヘキシル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）エタノール（２５ｍｇ、０．０７２ミリモル）の溶液に、ヨウ化メチル（０．５ｍＬ、８．０３ミリモル）を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。濃縮後、実施例２４（２０ｍｇ、７７％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：２．２３分、Ｍ＋：３６２．４
【実施例２５】
【００６３】
３−（２，２−ジシクロペンチル−２−ヒドロキシエチル）−９，９−ジメチル−９−アゾニアビシクロ［３．３．１］ノナンアイオダイド
アセトン（５ｍＬ）中の１，１−ジシクロペンチル−２−［（３−エンド）−９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノン−３−イル）エタノール（４０ｍｇ、０．１２５ミリモル）の溶液に、ヨウ化メチル（０．５ｍＬ、８．０３ミリモル）を加えた。反応混合物を２時間撹拌した。濃縮後、実施例２５（３１ｍｇ、８２％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ：１．９４分、Ｍ＋：３３４．４
【００６４】
【表２】
2008509159.tif 000009
【００６５】
（生物学的実施例）
本発明の化合物のＭ３ｍＡＣｈＲでの阻害効果を、以下のインビトロおよびインビボでの機能性アッセイにより測定した。
【００６６】
カルシウム動員による受容体活性化阻害の分析
ＣＨＯ細胞で発現されるｍＡＣｈＲの刺激を、先に記載されているようにして、受容体活性化カルシウム動員をモニターして分析した（Ｈ．Ｍ．Ｓａｒａｕ等、１９９９．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５６，６５７〜６６３頁）。Ｍ３ｍＡＣｈＲを安定的に発現するＣＨＯ細胞を、９６ウェル黒壁／透明底板中で平板培養した。１８〜２４時間後、培地を吸引して、１００μｌのロード培地（アール塩、０．１％  ＲＩＡグレードＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ）を有するＥＭＥＭ、および４μＭ  Ｆｌｕｏ−３−アセトキシメチルエステル蛍光指示薬染料（Ｆｌｕｏ−３ＡＭ、分子プローブ、Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）で置き換え、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、染料含有培地を吸引し、新鮮な培地（Ｆｌｕｏ−３ＡＭなし）で置き換え、細胞を３７℃で１０分間インキュベートした。次いで細胞を３回洗浄し、１００μｌのアッセイ緩衝液（０．１％ゼラチン（Ｓｉｇｍａ）、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、４．６ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、２５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１．０ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１１ｍＭグルコース、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４））中で、３７℃で１０分間インキュベートした。５０μｌの化合物（アッセイで１ｘ１０−１１〜１ｘ１０−５Ｍ、最終）を加え、平板を３７℃で１０分間インキュベートした。次いで平板を蛍光強度プレートリーダー（ＦＬＩＰＲ、分子プローブ）中に置き、そこで、染料をロードした細胞を６ワットのアルゴンレーザーによる励起光（４８８ｎｍ）に曝露した。０．１％ＢＳＡを含む緩衝液中で調製した５０μｌのアセチルコリン（０．１〜１０ｎＭ最終）を５０μｌ／秒で加えて細胞を活性化させた。細胞質カルシウム濃度の変化としてモニターしたカルシウム動員を、５６６ｎｍでの発光強度の変化として測定した。発光強度の変化は、細胞質カルシウムのレベルに直接関係する。９６ウェルすべてからの発光された蛍光は、冷却ＣＣＤカメラで同時に測定する。データポイントは１秒毎に採取する。次いでこのデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭソフトウェアを用いてプロットし解析した。
【００６７】
ムスカリン性受容体放射性リガンド結合アッセイ
ＳＰＡ法での０．５ｎＭ［３Ｈ］−Ｎ−メチルスコポラミン（ＮＭＳ）を用いた放射性リガンド結合の試験を、ムスカリン性拮抗薬とＭ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４およびＭ５のムスカリン性アセチルコリン受容体の結合を評価するのに用いる。９６ウェル平板中で、受容体含有膜を用いてＳＰＡビーズを４℃で３０分間インキュベートする。次いで、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳと試験化合物を加え、室温で（振とうしながら）２時間インキュベートする。次いでビーズを沈降させ、シンチレーションカウンターでカウントする。
【００６８】
分離したモルモット気管中での作用の効能と持続時間の評価
オスの成体ハートレイ系モルモット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ；４００〜６００ｇ）から気管を取り出し、これを修飾したクレブスヘンセライト液中に入れた。溶液の組成は（ｍＭ）：ＮａＣｌ  １１３．０、ＫＣｌ  ４．８、ＣａＣｌ２  ２．５、ＫＨ２ＰＯ４  １．２、ＭｇＳＯ４  １．２、ＮａＨＣＯ３  ２５．０およびデキストロース１１．０であった。これを９５％Ｏ２：５％ＣＯ２のガスで処理し３７℃に保持した。それぞれの気管の付着組織を落とし、長さ方向に開いた。綿を先端に取り付けた塗布器で管腔表面を緩やかに擦って上皮組織を取り除いた。個々の細長い断片を、約２カートリッジリングの幅で切り、クレブスヘンセライト液を含む１０ｍｌの水ジャケット付きのＦＴ０３Ｃ力−変位トランスデューサに連結されたオーガンバス中に絹縫合糸で懸垂した。機械的応答を、Ａｐｐｌｅ  Ｇ４コンピュータで動作させるＭＰ１００ＷＳ／Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅデータ収集システム（ＢＩＯＰＡＣ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｏｌｅｔａ，ＣＡ，ｗｗｗ．ｂｉｏｐａｃ．ｃｏｍ）によって等尺的に記録した。組織を、１．５ｇの静止張力のもとで平衡化させ、長さー張力評価によって最適であると判断し、クレブスヘンセライト液で１５分間毎に１時間洗浄した。平衡化期間の後、肺組織をプラトーに達するまで１０ｕＭカルバコールで収縮させ、これをデータ分析のための標準収縮として供した。次いで、ベースラインに達するまで組織を１５分間毎に１時間かけて濯いだ。次いでその調製物を、少なくとも３０分間放置し、その後実験を開始した。
【００６９】
カルバコールを、１ｎＭで開始して、半対数増分で累積的に加えて濃度反応曲線を得た（Ｖａｎ  Ｒｏｓｓｕｍ，１９６３，Ａｒｃｈ．Ｉｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ．，１４３：２９９）。各濃度で応答がプラトーに達するまで調製物と接触させ、次いで、次のカルバコール濃度分を加えた。対にした組織をｍＡＣｈＲ拮抗薬化合物かまたはビヒクルに３０分間曝し、次いでカルバコール累積濃度反応曲線を得た。すべてのデータは平均±標準誤差（ｓ．ｅ．ｍ．）として示しており、ｎは異なる動物の数である。
【００７０】
灌流（作用の持続期間）試験については、実験の間、組織を、クレブスヘンセライト液を２ｍｌ／分で連続的に灌流させた。作用薬と拮抗薬のストック溶液を、灌流チューブに挿入した２２内径の針で注入した（０．０２ｍｌ／分）。機械的応答を、Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ  Ｇ４コンピュータ（Ａｐｐｌｅ，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ  ｗｗｗ．ａｐｐｌｅ．ｃｏｍ）でインターフェイス接続された市販のデータ収集システム（ＭＰ１００ＷＳ／Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅ；ＢＩＯＰＡＣ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｏｌｅｔａ，ＣＡ，ｗｗｗ．ｂｉｏｐａｃ．ｃｏｍ）を用いて等尺的に記録した。組織を、１．５ｇの最適の静止張力のもとで懸垂した。６０分間の平衡化期間の後、組織を実験の期間カルバコール（１ｕＭ）で収縮させた。持続的な収縮に達したら、イソプロテレノール（１０ｕＭ）を投与して組織を最大限弛緩させ、この変化を標準とした。イソプロテレノール曝露を停止して、カルバコール誘発による張力を回復させた。持続的レベルの阻害が得られるまで、ムスカリン性受容体拮抗薬を組織当たり単一の濃度で注入した。次いで化合物を取り出し、もう一度カルバコール誘発による張力を回復させた。
【００７１】
拮抗薬の各濃度について以下のパラメータを測定し、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ（ｎは個々の動物である）で表した。カルバコール誘発による収縮の阻害を標準応答の割合（イソプロテレノール）として表し、この弛緩の１／２に達するまでに要する時間を測定した（応答の開始）。化合物の取り出しに続く張力の回復度を、最大張力回復の１／２に達するまでに要する時間として測定した（応答の停止）。拮抗薬を取り除いた後６０分および１８０分間で、阻害の残留レベルを測定し、イソプロテレノール標準の割合として表した。
【００７２】
拮抗薬を取り除いた後、０分、６０分および１８０分での最大弛緩データをプロットして拮抗薬濃度反応曲線を得た。回復度（シフトと称される）を、０分阻害曲線ＩＣ５０と、６０分および１８０分で同様の張力回復をもたらす化合物の濃度との比から算出した。
【００７３】
応答の開始と停止の１／２の時間を、対応する濃度に対してプロットし、データを非線形回帰法でフィッティングさせた。これらの値をＩＣ５０（阻害濃度反応曲線から測定した）で外挿して、Ｏｔ５０（ＩＣ５０濃度で、開始応答の半分に達するのに要する時間）およびＲｔ５０（ＩＣ５０濃度で、回復応答の半分に達するのに要する時間）と表示した。
【００７４】
メタコリン誘発気管支収縮―作用の効能および持続期間
メタコリンに対する気道反応性を、覚醒無拘束Ｂａｌｂ  Ｃマウス（ｎ＝６、各グループ）で測定した。気圧プレチスモグラフィーを用いて、強化休止（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐａｕｓｅ）（Ｐｅｎｈ）（メタコリン（２）を用いた気管支挑戦の際に起こる気道抵抗の変化と相関することが分かっている無単位の測定値）を測定した。マウスを、５０μｌのビヒクル（１０％ＤＭＳＯ）中の５０μｌの化合物（０．００３〜１０μｇ／マウス）を用いて経鼻（ｉ．ｎ．）で前処理し、次いで、薬物投与後（１５分〜９６時間）、所与の時間プレチスモグラフィーチャンバー中に置いた。効能測定のためには、所与の薬物に対する用量反応を実施し、すべての測定を、経鼻での薬物投与後１５分で行った。持続期間測定のためには、経鼻での薬物投与後１５分から９６時間の間のどこにおいても測定を行った。
【００７５】
チャンバーに入れたら、マウスを１０分間平衡化させ、続いて５分間ベースラインＰｅｎｈ測定を行った。次いでマウスに、メタコリン（１０ｍｇ／ｍｌ）のエアロゾルで２分間挑戦させた。Ｐｅｎｈを、メタコリンエアロゾルの開始から始めて７分間連続的に記録し、その後５分間続行した。各マウスについてのデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭソフトウェアを用いて解析しプロットした。この実験により、投与した化合物の活性の持続期間の測定が可能になる。
【００７６】
本発明の化合物は、これらに限定されないが、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、喘息、慢性呼吸障害、肺線維症、肺気腫症およびアレルギー性鼻炎などの呼吸管障害を含む様々な症状を治療するのに有用である。
【００７７】
処方物−投与
したがって、本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物、あるいはその薬剤として許容される塩、溶媒和物または生理学的に機能性の誘導体（例えば塩およびエステル）、ならびに薬剤として許容される担体または賦形剤、および所望により１つまたは複数の他の治療成分を含む医薬処方物を提供する。
【００７８】
以下、「活性成分」という用語は、式（Ｉ）の化合物、あるいはその薬剤として許容される塩、溶媒和物または生理学的に機能性の誘導体を意味する。
【００７９】
式（Ｉ）の化合物は、口または鼻を介して吸入により投与される。
【００８０】
吸入により肺に局所デリバリーするための乾燥粉末組成物は、例えば、吸入器または散布器で使用するために、例えばゼラチンでできたカプセルやカートリッジ、または、例えば積層アルミニウムホイルでできたブリスターに入れることができる。粉末配合処方物は一般に、本発明の化合物の吸入のための粉末ミックス、およびモノ−、ジ−もしくはポリ−サッカリド（例えば、乳糖またはデンプン）、有機塩もしくは無機塩（例えば、塩化カルシウム、リン酸カルシウムまたは塩化ナトリウム）、多価アルコール（例えば、マンニトール）またはその混合物などの適切な粉末ベース（担体／希釈剤／賦形剤物質）を含む。あるいは、それらは、以下に示すような、処方物の化学的および／または物理的安定性または性能を改善するために配合処方物中に含める添加剤などの１種または複数の追加の材料またはその混合物を一緒に含む。乳糖の使用が好ましい。それぞれのカプセル剤またはカートリッジは一般に、所望により他の治療用活性成分と併用して、２０μｇ〜１０ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含むことができる。あるいは、本発明の化合物は賦形剤なしで存在することができ、または、共沈もしくはコーティングによるなどによって、化合物、所望により他の治療用活性材料、および賦形剤材料を含む粒子に成形することができる。
【００８１】
医薬品ディスペンサは、リザーバ乾燥粉末吸入器（ＲＤＰＩ）、マルチ用量の乾燥粉末吸入器（ＭＤＰＩ）および定量吸入器（ＭＤＩ）からなる群から選択されるタイプのものが適している。
【００８２】
リザーバ乾燥粉末吸入器（ＲＤＰＩ）は、乾燥粉末形態で複数（非定量）の医薬品を含むのに適したリザーバ型のパックを有し、リザーバからデリバリー部位へ医薬品用量を計量するための手段を含む吸入器を意味する。計量手段は、例えば、リザーバからカップに医薬品を充てんできる第１の位置から、計量した医薬品用量を吸入のために患者が利用できるようにする第２の位置へ移すことができる計量カップまたは多孔板を含むことができる。
【００８３】
マルチ用量乾燥粉末吸入器（ＭＤＰＩ）は、医薬品を乾燥粉末形態で分注するのに適した吸入器を意味する。そこでは、医薬品は、複数の規定（ｄｅｆｉｎｅ）容量（またはその一部）の医薬品を含む（あるいは担持する）複数用量パックの中に含まれる。好ましい態様では、その担体はブリスターパックを有するが、カプセルをベースとしたパック形態、あるいは印刷、塗装および真空吸蔵を含む任意の適切な方法で医薬品をその上に塗布した担体も含むことができる。
【００８４】
処方物は、事前計量するか（例えば、Ｄｉｓｋｕｓ（ＧＢ２２４２１３４参照をされたい）またはＤｉｓｋｈａｌｅｒ（ＧＢ２１７８９６５、２１２９６９１および２１６９２６５を参照されたい）のようにして）、または、使用の際に計量する（例えば、Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（ＥＰ６９７１５を参照されたい）のようにして）ことができる。単位用量デバイスの例はＲｏｔａｈａｌｅｒ（ＧＢ２０６４３３６を参照されたい）である。Ｄｉｓｋｕｓ吸入デバイスは、その長さ方向に沿って間隔をおいて陥凹を有するベースシートと、密閉はするが剥離可能なようにシールして、それぞれが、好ましくは乳糖と一緒に、式（Ｉ）の化合物を含む吸入可能な処方物をその中に有する複数の容器を画成している蓋シートとから形成された細長いストリップを含む。ストリップはロール状に巻けるように十分可撓性であることが好ましい。蓋シートとベースシートは、互いにシールされておらず、前記先導（ｌｅａｄｉｎｇ）末端部分の少なくとも一部は巻き取り手段と連結するように構成されている先導末端部分を有することが好ましい。また、ベースシートと蓋シートとの間の密封はその幅全体にわたって延出していることが好ましい。蓋シートは、前記ベースシートの第１の端部から長手方向に、ベースシートから剥がすことができることが好ましい。
【００８５】
一態様では、複数用量パックは、医薬品を乾燥粉末形態で格納する複数のブリスターを含むブリスターパックである。ブリスターは一般に、医薬品をそこから取り出すのを容易にする通常の方式で配置される。
【００８６】
一態様では、複数用量ブリスターパックは、ディスク型のブリスターパック上に一般に円形状に配置された複数のブリスターを含む。他の態様では、複数用量ブリスターパックは細長い形であり、例えばストリップまたはテープを含む。
【００８７】
複数用量ブリスターパックは、剥離可能なように互いに固定された部材間に画成されることが好ましい。米国特許第５８６０４１９号、同第５８７３３６０号および同第５５９０６４５号は、この一般的なタイプの医薬品パックを記載している。この態様では、デバイスは通常、部材を剥がして各医薬品用量にアクセスするための剥離手段を含む開放ステーションを備えている。そのデバイスは、剥離可能な部材が、その長さ方向に沿って間隔を空けた複数の医薬品容器を画成する細長いシートであるように、使用に適合されていることが適切であり、デバイスが、各容器を順に表示するための表示手段を備えていることが適切である。デバイスは、シートの１つがその中に複数のポケットを有するベースシートであり、シートの他方が蓋シートであり、各ポケットと蓋シートの隣接部分が容器のそれぞれの１つを画成しており、そのデバイスが、開放ステーションで蓋シートとベースシートを引き剥がすための駆動手段を含む、使用に適合されたものであることがより好ましい。
【００８８】
定量吸入器（ＭＤＩ）は、医薬品をエアロゾルの形態で分注するのに適した医薬品ディスペンサを意味し、そこでは、医薬品は、噴射剤をベースとしたエアロゾル医薬品処方物を含むのに適したエアロゾル容器内に含まれる。エアロゾル容器は通常、エアロゾル状の医薬品処方物を患者に放出するための計量弁、例えばスライド弁を備えている。エアロゾル容器は一般に、弁による作動毎に所定用量の医薬品をデリバーするように設計されている。その弁は、容器を固定して保持しながら弁を押すか、または弁を固定して保持しながら容器を押すことによって開けることができる。
【００８９】
吸入により肺へ局所デリバリーするためのスプレー組成物は、例えば水溶液または懸濁液として、あるいは適切な液化噴射剤を用いて定量吸入器などの加圧化したパックからデリバーされるエアロゾルとして処方することができる。吸入に適したエアロゾル組成物は、懸濁液かまたは溶液であってよく、一般に、式（Ｉ）の化合物を、所望により、他の治療活性成分およびフルオロカーボンまたは水素含有クロロフルオロカーボンまたはその混合物、具体的にはヒドロフルオロアルカン、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラ−フルオロエタン、特に１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパンまたはその混合物などの適切な噴射剤と一緒に含むことができる。二酸化炭素または他の適切なガスを噴射剤として用いることもできる。エアロゾル組成物は賦形剤を含まなくてよく、また所望により、界面活性剤例えばオレイン酸またはレシチン、および共溶媒例えばエタノールなどの当業界で周知の追加の処方用賦形剤を含むこともできる。加圧化した処方物は、一般に、弁（例えば計量弁）で閉じられ、口金を備えた作動装置に組み込まれた小型缶（例えばアルミニウム小型缶）の中に保持される。
【００９０】
吸入による投与のための医薬品は、制御された粒子サイズを有していることが望ましい。肺へ局所的にデリバリーするために、気管支内に吸入するのに最適の空気力学的粒子サイズは通常１〜１０μｍ、好ましくは２〜５μｍである。肺への全身デリバリーを実現するために、肺胞領域中に吸入するのに最適の空気力学的粒子サイズは約０．５〜３μｍ、好ましくは１〜３μｍである。２０μｍを超える空気力学的サイズを有する粒子は一般に、吸入される場合、大き過ぎて末梢気道に到達することができない。処方物の平均空気力学的粒子サイズは、例えばカスケードインパクターで測定することができる。平均の幾何学的粒子サイズは、例えばレーザー回折法、光学的方法で測定することができる。
【００９１】
所望の粒子サイズを得るためには、作製する活性成分の粒子は、例えば制御結晶化、微粉化またはナノミリングによる従来の手段によってサイズを小さくすることができる。所望の画分は、空気分級で分離することができる。あるいは、例えばスプレー乾燥を用いて、所望のサイズ範囲の粒子を生成するようにスプレー乾燥パラメータを制御して、所望のサイズの粒子を直接作製することができる。粒子は結晶性であることが好ましいが、望むなら非晶質材料も用いることができる。乳糖などの賦形剤を用いる場合、一般に、「粗大な」担体が吸入されないように賦形剤の粒子サイズは、本発明の吸入される医薬品よりずっと大きくなるようにする。賦形剤が乳糖である場合、それは通常粉砕した乳糖として存在し、乳糖粒子の８５％以下は６０〜９０μｍのＭＭＤを有し、１５％以上は１５μｍ未満のＭＭＤを有する。乾燥粉末配合物中の担体に加えた添加剤は、吸入可能である、すなわち空気力学的に１０ミクロン未満であるか、あるいは吸入不可能である、すなわち空気力学的に１０ミクロン超であってよい。
【００９２】
用いることができる適切な添加剤には、ロイシンなどのアミノ酸；レシチン（例えば、大豆レシチン）および固体状脂肪酸（例えば、ラウリン酸、パルミチン酸およびステアリン酸）ならびにその誘導体（塩およびエステルなど）などの水溶性または水不溶性の、天然または合成の界面活性剤；ホスファチジルコリン；糖エステルが含まれる。添加剤には、着色剤、味覚マスキング剤（例えば、サッカリン）、静電防止剤、滑剤（例えば、公開ＰＣＴ特許出願ＷＯ８７／９０５２１３を参照されたい。その教示を参照により本明細書に組み込む）、化学的安定剤、緩衝剤、保存剤、吸収促進剤、および当業者に周知の他の材料も含むことができる。
【００９３】
活性材料または活性材料含有粒子に、持続放出コーティング材（例えば、ステアリン酸またはポリマー、例えばポリビニルピロリドン、ポリ乳酸）を用いることもできる（例えば、米国特許第３６３４５８２号、英国特許第１２３００８７号、同１３８１８７２号を参照されたい。その教示を参照により本明細書に組み込む）。
【００９４】
鼻腔内スプレー剤は、増粘剤、緩衝塩またはｐＨ調整のための酸もしくはアルカリ、等張性調節剤あるいは酸化防止剤などの薬剤を加えて、水性または非水性のビヒクルを用いて処方することができる。
【００９５】
噴霧による吸入のための液剤は、酸もしくはアルカリ、緩衝塩、等張性調節剤または抗菌剤などの薬剤を加えて、水性ビヒクルを用いて処方することができる。これらは、濾過するかまたはオートクレーブ中で加熱して殺菌することができる。あるいは非殺菌製品として提供することができる。
【００９６】
好ましい単位投与処方物は、本明細書で前述したような効果的な用量の活性成分かまたはその適切な画分を含むものである。
【００９７】
文脈による必要のない限り、本明細書および特許請求の範囲全体にわたって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの派生語は、記載した整数もしくは工程、または整数の群を含むが、他の整数もしくは工程、または整数もしくは工程の群のどれをも排除しないものと理解されたい。
【００９８】
本明細書で引用した、これらに限定されないが、特許および特許出願を含むすべての文献を、完全に説明されているかのようにその開示全体を参照により本明細書に組み込むために、それぞれの個別文献が、具体的かつ個別的に示されているかのように参照により本明細書に組み込む。
【００９９】
上記説明は、その好ましい実施形態を含む本発明を完全に開示する。本明細書で具体的に開示した実施形態の改変および改善は、特許請求の範囲の範囲内である。さらに詳細に述べるまでもなく、当業者は上記説明を用いて、本発明を最大限に利用することができよう。したがって、本明細書の実施例は単なる例示と解釈すべきでなく、また本発明の範囲を限定するものでもないと解釈すべきである。独占的な権利または特典を請求する本発明の実施形態は上記の通り定義される。
【国際調査報告】
2008509159.tif 000011