【事件の表示】
　特許第３０４６３０３号「Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ除菌性飲食品」の請求項１、２、４ないし６に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　本件特許異議の申立てを却下する。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本件特許第３０４６３０３号に係る発明についての出願は、平成１１年６月２４日に特願平１１−１７８３７７号として出願され、平成１２年３月１７日にその特許の設定登録がなされ、その後、西澤利夫より請求項１、２及び４乃至６に係る発明に対して特許異議申立がなされ、取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１３年４月２３日に訂正請求がなされたものである。
　
II．訂正の適否についての判断
１．訂正の内容
(1)特許請求の範囲の請求項１及び請求項２を削除する。
(2)特許請求の範囲の請求項３乃至７を、それぞれ次のように訂正する。
「【請求項１】Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ除菌能の高いＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６に属する乳酸菌、該乳酸菌含有物、その処理物の少なくとも一つを含有してなること、を特徴とするＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉの除菌性及び／又は感染防御性飲食品。
【請求項２】乳酸菌含有物が、乳酸菌懸濁液、乳酸菌培養物、乳酸菌培養液、乳酸菌発酵乳から選ばれる少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１に記載の飲食品。
【請求項３】処理物が、濃縮物、ペースト化物、乾燥物（噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物から選ばれる少なくともひとつ）、液状物、希釈物から選ばれる少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１に記載の飲食品。
【請求項４】飲食品が健康食品であること、を特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の飲食品。
【請求項５】Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ−６９９９）。」
　
２．訂正の目的の適否、新規事項の有無及び拡張・変更の存否
　上記訂正事項(1)は、請求項を削除するものであるから特許請求の範囲の減縮に該当し、訂正事項(2)は、訂正事項(1)に伴う訂正である。
　そして、上記いずれの訂正も新規事項に該当せず、また、実質上特許請求の範囲を拡張し、または変更するものではない。
　
３．むすび
　以上のとおりであるから、本件訂正請求は、特許法１２０条の４,２項、及び同条３項で準用する１２６条２項及び３項の規定に適合するので、請求のとおり当該訂正を認める。
　
III．特許異議の申立てについての判断
　請求項１及び請求項２に係る発明は、訂正の結果削除され、また、請求項４乃至請求項６に係る発明は、特許異議の申立ての対象となっていない請求項３のみを引用するものであるから、特許異議の申立ての対象が存在しないので、この特許異議の申立ては、不適法な申立であって、その補正をすることができないものである。
　したがって、本件特許異議の申立ては、特許法１２０条の６，１項で準用する１３５条の規定によって却下すべきものである。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１３年５月１６日（２００１．５．１６）
【訂正の要旨】
（訂正の要旨）
（１）特許請求の範囲の請求項１及び請求項２を特許請求の範囲の減縮を目的として削除する。
（２）（１）の訂正にともない特許請求の範囲の請求項３乃至７を、それぞれ次のように訂正する。
「【請求項１】Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ除菌能の高いＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６に属する乳酸菌、該乳酸菌含有物、その処理物の少なくとも一つを含有してなること、を特徴とするＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉの除菌性及び／又は感染防御性飲食品。
　【請求項２】乳酸菌含有物が、乳酸菌懸濁液、乳酸菌培養物、乳酸菌培養液、乳酸菌発酵乳から選ばれる少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１に記載の飲食品。
　【請求項３】処理物が、濃縮物、ペースト化物、乾燥物（噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物から選ばれる少なくともひとつ）、液状物、希釈物から選ばれる少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１に記載の飲食品。
　【請求項４】飲食品が健康食品であること、を特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の飲食品。
　【請求項５】Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６（ＦＥＲＭ　ＢＰ−６９９９）。」
（５４）【発明の名称】
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ除菌性飲食品
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項
１
ＯＬＬ　２７１６
　【請求項
２
１に
　【請求項
３
１に
　【請求項
４
３
　【請求項
５
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　【発明の属する技術分野】
　本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ：以下、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉあるいはピロリ菌ということもある）の除菌及び／又は感染防御効果を有するラクトバチルス・ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ：以下、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉということもある）、ならびに、該乳酸菌を含有する飲食品に関する。
　【０００２】
　【従来の技術】
　１９８３年にＷａｒｒｅｎら（Ｌａｎｃｅｔ，Ｉ．１２７３（１９８３））によって胃内に棲息する細菌としてＨ．ｐｙｌｏｒｉが発見されて以来、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉと慢性胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍との関係につき注目されるようになった。最近では、スナネズミにＨ．ｐｙｌｏｒｉを感染させると発ガン物質の投与なしで胃腺ガンが発生する事実が認められており（Ｗａｔａｎａｂｅ　ｅｔ　ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１１５；６４２（１９８８））、胃ガンの起因菌としてもＨ．ｐｙｌｏｒｉとの関連が指摘されている。
　【０００３】
　一方、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ陽性の消化性潰瘍患者に対してＨ．ｐｙｌｏｒｉの除菌を行うと消化性潰瘍の再発が抑制されることが明らかになりつつあり、欧米では積極的なＨ．ｐｙｌｏｒｉの除菌療法が実施されている。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉの除菌法としては、抗生物質（β−ラクタム剤系、アミノ−配糖体系、マクロライド系、テトラサイクリン系等）と抗潰瘍剤を併用する方法が一般的であり、例えば、抗生物質２種（クラリスロマイシン−メトロニダゾールまたはアモキシシリン）と胃酸の分泌を抑制するプロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）を投与する３剤併用法が臨床的に実施されている。しかし、除菌治療を目的に抗生物質等の薬剤を投与することの最大の問題点は、薬剤耐性を有するＨ．ｐｙｌｏｒｉの出現頻度の増加と高用量の薬剤を多剤併用することによる下痢やアレルギー等の重篤な副作用の出現である。
　【０００４】
　そこで、抗生物質に代わる胃内Ｈ．ｐｙｌｏｒｉの除菌を目的に、ラクトフェリンを投与する方法（特開平１０−１３０１６４）、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのウレアーゼ、鞭毛を抗原として鶏に免疫して得た特異抗原を用いる方法（特開平１０−２８７５８５）、ならびに、乳酸菌を用いた方法として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｒｅｖｉｓおよび／又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（特開平９−２４１１７３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ（特開平６−９８７８２）それぞれの特定菌株の生菌を投与する方法につき検討がなされている。しかしながら、満足すべきものは未だ報告されていない。
　【０００５】
　一方、乳酸菌は好ましい香味物質を産生するとともに乳酸やバクテリオシン等の抗菌性物質産生能を有していることから、古来より発酵乳等を介して世界各地で食されてきた極めて安全性の高い微生物である。従って、乳酸菌の有する抗菌力を利用してＨ．ｐｙｌｏｒｉの除菌を行うことは、副作用を伴わずに手軽で有効な方法といえるのである。
　【０００６】
　しかし、既存の発明、特にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｒｅｖｉｓおよび／又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（特開平９−２４１１７３）については、乳酸菌株の選定に際して、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのターゲット部位である胃内環境（低ｐＨ下での環境に耐性を有する）という特性が考慮されていないのみならず、該乳酸菌株を使用した発酵乳等の食品としての特性（乳酸菌株の生残性、香味、物性）についても何ら考慮されていない。また、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓについては、臨床試験に用いた結果、有効性が認められなかった旨報告されている（Ｂａｚｚｏｌｉ　ｅｔ　ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１０２，Ｎｏ．４，Ａ３８，（１９９２））。一方、特開平６−９８７８２号公報に開示された菌株Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　Ｌａ１の培養上清を臨床試験に用いた結果、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉの除菌の可能性は示唆されたものの、その持続効果については明らかにされていない。（Ｍｉｃｈｅｔｔｉ　ｅｔ　ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１０８，Ｎｏ．４，Ａ１６６，（１９９５））。上記のように、既存の乳酸菌では、目的とするＨ．ｐｙｌｏｒｉ除菌用組成物を調製するには未だ改良の余地が多く残されているのが現状である。
　【０００７】
　【発明が解決しようとする課題】
　本発明者らは、抗胃炎や抗胃潰瘍等の面からも、ピロリ菌の除菌／感染防御システムの確立が希求されている当業界の現状に鑑み、安全性、経口摂取等の面から再度乳酸菌に着目し、乳酸菌を用いるピロリ菌の除菌／感染防御システムを新たに開発することとした。
　【０００８】
　すなわち、本発明が解決しようとする課題は、ピロリ菌の除菌および感染防御を目的に、胃内での生残性と定着性が高く、モデル動物試験において明らかに抗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ活性を有しており、発酵乳等の食品に利用した際の特性（乳酸菌株の生残性、香味、物性）が高い乳酸菌株を選定し、該乳酸菌株を用いた安価で日常的摂取が可能な飲食品を新たに提供することである。
　【０００９】
　【課題を解決するための手段】
　本発明は、上記した課題を解決するためになされたものであって、本発明者らは、目的とする乳酸菌をスクリーニングするに際し、次のような基準を新たに設定し、鋭意選定作業を行った。すなわち、本発明者らは、ヒト腸内由来の数多くの乳酸桿菌のうち、▲１▼胃酸耐性が高い、▲２▼低ｐＨ条件下での生育が良好である、▲３▼Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのヒト胃癌細胞ＭＫＮ４５付着抑制能が高い、▲４▼Ｈ．ｐｙｌｏｒｉと混合培養した際にＨ．ｐｙｌｏｒｉ増殖阻害能が高い、▲５▼Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染モデルマウスに投与した際にＨ．ｐｙｌｏｒｉの除菌能が高い、▲６▼食品に適用した際に生残性が高く、香味、物性も優れている菌株の選定につき鋭意研究を重ねた結果、これらの条件に合致する菌株としてＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株（本菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ　ＢＰ−６９９９として寄託されている。）を見出した。本菌株の菌学的性質は、以下のとおりである。
　【００１０】
Ａ．形態的性状
　細胞形態：桿菌
　運動性：なし
　胞子の有無：なし
　グラム染色性：陽性
　【００１１】
Ｂ．生理学的性状（陽性：＋、陰性：−、弱陽性：ｗ）
　カタラーゼ　　　　　　　−
　ガス産生　　　　　　　　−
　１５℃での生育　　　　　−
　グルコン酸資化性　　　　−
　乳酸旋光性　　　　　　　ＤＬ
　好気性発育　　　　　　　＋
　【００１２】
Ｃ．炭水化物発酵性（陽性：＋、陰性：−、弱陽性：ｗ）
　アラビノース　　　　　　−
　キシロース　　　　　　　−
　ラムノース　　　　　　　−
　リボース　　　　　　　　−
　グルコース　　　　　　　＋
　マンノース　　　　　　　＋
　フルクトース　　　　　　＋
　ガラクトース　　　　　　＋
　シュクロース　　　　　　＋
　セロビオース　　　　　　＋
　ラクトース　　　　　　　＋
　トレハロース　　　　　　＋
　メリビオース　　　　　　−
　ラフィノース　　　　　　−
　メリチトース　　　　　　−
　スターチ　　　　　　　　ｗ
　マンニトール　　　　　　−
　ソルビトール　　　　　　−
　デキストリン　　　　　　ｗ
　【００１３】
Ｄ．遺伝学的特性
　ＤＮＡ中のグアニン（Ｇ）＋シトシン（Ｃ）含量は３６．４％である。また、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６をＴａｎｎｏｃｋらの方法（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ｅｃｏｌ．Ｈｅａｌｔｈ　Ｄｉｓ．，８：７９−８４，１９９５；Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，６２：４６０８−４６１３，（１９９６））に準じて、培養後に菌体をアガロースプラグに固定し、溶解後、ゲノムＤＮＡを制限酵素（Ａｐａ　Ｉ）で分解して、パルスフィールドゲル電気泳動（ＣＨＥＦ−ＤＲ　ＩＩ　ＢＩＯ−ＲＡＤ）を行ったところ、図１のバンドパターンを示した。図中、ＡはＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株を示し、Ｂはサイズマーカーを示す。
　【００１４】
Ｅ．胃酸耐性
　胃酸耐性試験は以下の通りに実施した。すなわち、ろ過滅菌したｐＨ２．０の人工胃液〔０．２％ＮａＣｌ、０．３５％ペプシン（１：５０００）を精製水で溶解〕９ｍｌにＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ）で２回賦活培養（３７℃、１８時間）し、生理食塩水で２回洗浄したＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の菌体懸濁液１ｍｌを添加し、好気的に３７℃で２時間接触後、１ｍｌをｐＨ６．５のリン酸緩衝液（６７ｍＭ）９ｍｌに添加し反応を停止させた。次に、初発菌数および人工胃液に接触後の菌数をＭＲＳ　ａｇａｒを用いて計測し、生残率を算出した。本法によりヒト腸内由来の乳酸桿菌（１５０株）のなかで最も高い胃酸耐性を示したＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株につき、他の菌株の胃酸耐性とを比較したところ、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の胃液耐性が最も高かった（表１）。
　【００１５】
（表１）各種乳酸桿菌の人工胃液耐性
　【００１６】
Ｆ．低ｐＨ条件下での生育
　ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈで２回賦活培養（３７℃、１８時間）したＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株を変法ＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈ〔０．２％ＮａＣｌ、０．３５％ペプシン（１：５０００）をＭＲＳ　Ｂｒｏｔｈで溶解後、ｐＨ４．０に調整〕に１０μｌ接種し、好気的に３７℃で培養した。培養９時間後に増殖度として培地の濁度（ＯＤ６５０）を測定した。その結果、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株は、低ｐＨ条件下において最も良好な生育を示した（表２）。
　【００１７】
（表２）低ｐＨ条件下での各種乳酸桿菌の生育
　【００１８】
Ｇ．ヒト胃癌細胞（ＭＫＮ４５）に対する付着能
　Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株ならびにＬ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＣＮＣＭ　Ｉ−１２２５のヒト胃癌細胞ＭＫＮ４５への付着能を、乳酸菌のヒト大腸癌細胞への付着能を調べたＧｒａｎａｔｏらの方法（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，６５（３）、１０７１−１０７７，（１９９９））に準じて検討した。ＭＫＮ４５を、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＲＰＭＩ、日水製薬）１０ｍｌを用いて３７℃で３日間培養した。培養後、細胞を剥がし、ＲＰＭＩで洗浄後、細胞濃度が５×１０４個／ｍｌになるようにＲＰＭＩに懸濁させ、９６穴マイクロプレートに１穴あたり０．１ｍｌ分注した。さらに３７℃で３日間培養後、マイクロプレートに付着したＭＫＮ４５を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）で洗浄し、ＭＫＮ４５の単層を調製した。この単層にＭＲＳ　ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ）で培養後、１０９ＣＦＵ／ｍｌとなるように０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）に懸濁したＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株もしくはＬ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＣＮＣＭＩ−１２２４懸濁液０．１ｍｌを加えて、３７℃、３０分間インキュベートした。ＭＫＮ４５の単層を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）で３回洗浄して、付着しなかった乳酸菌を除去した後、グラム染色し、顕微鏡を用いて、ＭＫＮ４５に付着した乳酸菌数をカウントした。その結果、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株のＭＫＮ４５への付着菌数は、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＣＮＣＭ　Ｉ−１２２５より高いことを認めた。すなわち、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉＯＬＬ２７１６株は、ヒト胃癌細胞に対して高い付着能を有することが確認された（表３）。
　【００１９】
（表３）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６株のヒト胃癌細胞に対する付着能
　【００２０】
　Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株は、ヒト胃内環境において胃酸耐性が高く、かつ低ｐＨ条件下での生育が良好であり、該菌株の生菌を医薬品（抗胃炎剤、抗潰瘍剤）又は食品（発酵乳、液状、ペースト状、乾燥品）としてヒトに投与した際に、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉの除菌および宿主への感染を防御することによって胃炎または胃・十二指腸潰瘍の発症または再発を防止することが可能な菌株として選択したものである。そこで、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の抗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ活性、ヨーグルトとしての製造特性（保存性、風味、物性）、ならびにＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染モデルマウスにＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株を投与した際のＨ．ｐｙｌｏｒｉの除菌効果を、例を挙げて詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　【００２１】
　すなわち本発明は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ（ピロリ菌）除菌能の高いＬａｃｔｏｂａｃｉｎｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉに属する乳酸菌、該乳酸菌含有物、その処理物の少なくともひとつを含有してなること、を特徴とするピロリ菌の除菌性及び／又は感染防御性食品に関するものである。
　【００２２】
　乳酸菌含有物としては、乳酸菌懸濁液；乳酸菌培養物（菌体、培養上清液、培地成分を含む）；乳酸菌培養物から固形分を除去した乳酸菌培養液；乳酸菌飲料、酸乳、ヨーグルト等乳酸菌発酵した飲食品からなる乳酸菌発酵乳；等が挙げられる。
　【００２３】
　処理物としては、乳酸菌、乳酸菌含有物、発酵乳の濃縮物、ペースト化物、乾燥物（噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物等）、液状物、希釈物等が挙げられる。また、乳酸菌としては、生菌体、湿潤菌、乾燥菌等が適宜使用可能である。
　【００２４】
　本発明に係る飲食品は、乳酸菌、含有物、処理物の少なくともひとつを有効成分として含有してなるものであって健康食品としても有用である。
　【００２５】
　有効成分の飲食品への配合量は、任意でよいが、使用目的（予防、保健、又は治療）、に応じて適宜定めればよく、通常、０．０００１〜１０％の範囲が適当である。しかしながら、長期間に亘って保健上ないし健康維持の目的で摂取する場合には、上記範囲よりも少量であってもよいし、また本有効成分は、安全性について問題がないので、上記範囲よりも多量に使用しても一向にさしつかえない。現にマウスを用いた１０日間の急性毒性試験の結果、５０００ｍｇ／ｋｇ／日の経口投与でも死亡例は認められなかった。
　【００２６】
　飲食品には、本有効成分をそのまま、使用したり、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常法にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明に係る組成物は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される各種成分を用いて、健康ドリンクに製品化すると好適である。
　【００２７】
　本発明において、例えば、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の生菌をヨーグルト（プレーンヨーグルト、フルーツヨーグルト、デザートヨーグルト、ドリンクヨーグルト、フローズンヨーグルト）を中心とした発酵乳、乳酸菌飲料、粉末食品、顆粒状食品、ペースト状食品等として摂取することが可能である。特に、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株は、後述するように発酵乳を調製した際の製造特性（保存性、風味、物性）に優れており、発酵乳の形態で投与する方法が最も望ましい。発酵乳を調製する際のスターターは、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６株とともに、Ｌａｃｔｏｂａｃｌｌｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属等の乳酸菌やＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ｂｒｅｖｅ、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ等のビフィズス菌や酵母等を用いる方法が有効である。また、発酵乳調製用のＬ．ｇａｓｓｅｒｉＯＬＬ　２７１６株は、ストックカルチャーからマザースターター、次にバルクスターターをそれぞれ順次に調製する方法とマザースターターの調製工程を経ずに直接バルクスターター用もしくは製品製造用に接種する高菌数の濃縮スターター（凍結品又は凍結乾燥品）の利用が可能である。
　【００２８】
　【試験例１】
　Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株によるＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株のヒト胃癌細胞（ＭＫＮ４５）付着抑制を、Ｋａｂｉｒらの方法（Ｇｕｔ，４１（１）；４９−５５，（１９９７））に準じて実施した。
　【００２９】
　はじめに、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ　ＣＮＴＣ１１６３７株の蛍光標識菌液を調製するために、微好気条件下で、５％ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ　Ｃａｌｆ　Ｓｅｒｕｍ）を含むＢｒｕｃｅｌｌａ　ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ）を用い、２回賦活培養（３７℃、７２時間）したＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株をＰＢＳで洗浄後、細胞蛍光標識キットＰＫＨ−２（大日本製薬）のＤｉｌｕｅｎｔ　ＡにＯＤ６５０が２．０となるように懸濁した。微好気培養は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ培養用ガス発生袋アネロパック・ヘリコ（三菱ガス化学）を用いて実施した。この懸濁液１ｍｌに蛍光標識色素ＰＫＨ−２を５０μｌ添加し、室温で１５分間反応させた後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）によって菌体を回収し、ハンクス平衡塩溶液（ＨＧＳ）で洗浄後、ＨＧＳ　１ｍｌに懸濁し、蛍光標識菌液とした。次に、ＭＫＮ４５の細胞浮遊液（１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）０．８ｍｌにＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ１１６３７株の蛍光標識菌液（ＯＤ６５０＝２．０）０．１ｍｌおよびＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の菌液（ＯＤ６５０＝４．０）０．１ｍｌを同時に添加し、３７℃で好気的に１時間振とうした。ブランクにはＭＫＮ４５の細胞浮遊液を単独で（ＭＫＮ４５細胞浮遊液０．８ｍｌ＋ＨＧＳ０．２ｍｌ）、陰性対照にはＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の菌液の代わりにＨＧＳを添加したものを用いた。振とう後、１５％ｓｕｃｒｏｓｅを含むＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（組織培養の技術（第６刷）、朝倉書店、ｐｐ２０（１９９１））を９ｍｌ添加し、遠心分離（１０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）によって細胞を回収し、ＨＧＳで遠心洗浄（１０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）後、再度ＨＧＳ　１ｍｌに懸濁し、９６穴の蛍光測定用マイクロプレートのウェルに懸濁液を２５０μｌ添加し、蛍光プレートリーダーで蛍光強度（励起波長：４９０ｎｍ、測定波長：５３０ｎｍ）を測定した。
　【００３０】
　その結果、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株単独での胃癌細胞への付着率を１００％としたとき、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株を添加した系でのＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株の付着率は、９２．８％となり、本菌株がＨ．ｐｙｌｏｒｉの胃癌細胞への付着抑制効果を有することが確認された。
　【００３１】
　【試験例２】
　Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株によるＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株の増殖抑制試験として、５％ＦＣＳを含むＢｒｕｃｅｌｌａ　ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ）２００ｍｌに２回賦活培養したＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株およびＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６株をそれぞれ１０６ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｕｎｉｔｓ（ＣＦＵ）／ｍｌおよび１０５ＣＦＵ／ｍｌとなるように接種し、３７℃、微好気条件下で培養した。培養開始０、２４、４８時間後のＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株およびＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の生菌数を計測した。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株およびＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の検出にはそれぞれ変法Ｓｋｉｒｒｏｗ培地（ＨｏｒｓｅＢｌｏｏｄ（７％）、ＢＨＩ　ａｇａｒ（５２ｇ）、Ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ（５ｍｇ／ｌ）、Ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ　Ｂ（２５００Ｕ／ｍｌ）、Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ（１０ｍｇ／ｌ）、Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ（５ｍｇ／ｌ）、精製水（１０００ｍｌ）（３７℃、７日間、微好気培養）およびＭＲＳ　ａｇａｒ（３７℃、４８時間、嫌気培養）を用いた。
　【００３２】
　その結果、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株の単独では培養４８時間後に生菌数が約５倍に増殖したのに対し、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株が共存すると、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株の菌数が１０分の１程度に減少し、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株はＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株の増殖抑制能を有することが確認された（表４）。
　【００３３】
（表４）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株によるＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株の増殖抑制効果
　【００３４】
　【試験例３】
　Ｈ．ｐｙｌｏｒｉは尿素を分解してアンモニア産生能を有することから強い酸性条件下でも生残し得ることが明らかとなっている。そこで、尿素存在下でのＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株によるＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株の増殖抑制能を調べるため、低ｐＨ条件下での本菌株ならびにＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＣＮＣＭ　Ｉ−１２２５のＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株に対する増殖抑制効果について検討した。５％ＦＣＳおよび５ｍＭ尿素を含むＢｒｕｃｅｌｌａ　ｂｒｏｔｈ（ｐＨ４．０）２００ｍｌに２回賦活培養したＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株およびＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株もしくはＬ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＣＮＣＭ　Ｉ−１２２５株をそれぞれ１０５ＣＦＵ／ｍｌおよび１０７ＣＦＵ／ｍｌとなるように接種し、３７℃、微好気条件下で培養した。培養開始０、６、１２時間後のＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＣＮＣＭ　Ｉ−１２２５株それぞれの生菌数を測定した。
　【００３５】
　その結果、培養６時間と培養１２時間後において、尿素存在下でのＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６のＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７に対する増殖抑制能は、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＣＮＣＭＩ−１２２５株よりも高いことを認めた。すなわち、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株は、尿素存在下においてもＨ．ｐｙｌｏｒｉに対して高い増殖抑制能を有することが確認された（表５）。
　【００３６】
（表５）尿素存在下でのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６によるＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉの増殖抑制効果
　【００３７】
　【実施例１】
　Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株を用いてプレーンヨーグルトの調製を行った。すなわち、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＪＣＭ　１００２Ｔ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ　ＡＴＣＣ１９２５８をそれぞれ１０％脱脂粉乳培地に１％宛て接種し、３７℃で１５時間培養してバルクスターターを調製した。９５℃で５分間加熱処理したヨーグルトミックス（ＳＮＦ：９．５％、ＦＡＴ：３．０％）に、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＪＣＭ　１００２Ｔ及びＳ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ　ＡＴＣＣ　１９２５８のスターターを各１％、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株のスターターを５％接種して、４３℃で４時間発酵させた。発酵・冷却直後のＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＪＣＭ　１００２Ｔ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ　ＡＴＣＣ　１９２５８それぞれの生菌数は９．０×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、６．４×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、１１．０×１０８ＣＦＵ／ｍｌであり、風味、物性は何れも良好であった。また、このヨーグルトを１０℃で２週間保存した際のＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＪＣＭ　１００２Ｔ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ　ＡＴＣＣ　１９２５８それぞれの生菌数は、３．７×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、２．７×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、１０．８×１０８ＣＦＵ／ｍｌであり、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の生菌数の低下は僅かであった。保存品の風味、物性も良好であった。
　【００３８】
　【比較例１】
　Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株を用いてプレーンヨーグルトの調製を行った。すなわち、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の代わりに、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株を用いた以外は上記実施例１と同様の操作を行った。発酵・冷却直後のＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＪＣＭ　１００２Ｔ、Ｓ．ｔｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ＡＴＣＣ　１９２５８それぞれの生菌数は、５．３×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、６．０×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、１２．５×１０８ＣＦＵ／ｍｌであり、風味、物性はいずれも良好であった。また、このヨーグルトを１０℃で２週間保存した際のＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＪＣＭ　１００２Ｔ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ　ＡＴＣＣ　１９２５８それぞれの生菌数は、０．１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、４．５×１０７ＣＦＵ／ｍｌ、８．８×１０８ＣＦＵ／ｍｌでありＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株の生菌数は約１／５０に低下した。保存品の風味は、酸味がやや強かった。
　【００３９】
　実施例１、比較例１をまとめると下表のようになる。
　【００４０】
　【試験例４】
　Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）の生菌投与によるＨ．ｐｙｌｏｒｉの除菌効果をｉｎ　ｖｉｖｏ系で調べる目的で、無菌マウス（ＢＡＬＢ／ｃ）１個体当たりＨ．ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７株を１×１０９ＣＦＵ感染させて４週間経過したＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染モデルマウスに、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株それぞれを１×１０９ＣＦＵ／１個体を１週目に３回、２週目から７週目までは各週に１回それぞれ投与した。Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株又はＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株の生菌投与８週間後に、マウス胃内のＨ．ｐｙｌｏｒｉ数、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株数又はＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株数をそれぞれ変法Ｓｋｉｒｒｏｗ培地、ＭＲＳａｇａｒで計測するとともに、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）にて血清中の抗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗体価（４９２ｎｍにおける吸光度）を調べた。
　【００４１】
　その結果、対照マウス（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉのみを投与）の胃内Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ数が８週間後に１０５ＣＦＵ／ｇ以上検出されたのに対し、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株それぞれを生菌投与したマウスは、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ数は検出限界値以下（１０３ＣＦＵ／ｇ以下）に減少した。しかし、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株投与マウスの抗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗体価は対照マウスに比較して１／５以下に低下し、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ　１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株の抗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗体価に比較しても１／４以下であった。（表６）。従って、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株によるＨ．ｐｙｌｏｒｉの除菌効果は、Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　ＷＢ１００４（ＦＥＲＭ　Ｐ−１５３６０）株に比較して高いことを認めた。一方、Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ２７１６株の投与８週目のマウスの胃内から投与したＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６が１０６／ｇ以上検出されたことから、本菌株は胃内定着能を有することを確めた。
　【００４２】
（表６）乳酸桿菌の胃内定着数とＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ＮＣＴＣ　１１６３７の除菌効果
　【００４３】
　【参考例１】
　Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株をＭＲＳ液体培地（Ｄｉｆｃｏ社製）５Ｌに接種後、３７℃、１８時間静置培養を行った。培養終了後、７，０００ｒｐｍ、１５分間遠心分離を行い、培養液の１／５０量の濃縮菌体を得た。次いで、この濃縮菌体を脱脂粉乳１０％（重量）、グルタミン酸ソーダ１％（重量）を含む分散媒と同量混合し、ｐＨ７に調整後、凍結乾燥を行った。得られた凍結乾燥物を６０メッシュのフルイで粉体化し、凍結乾燥菌末を得た。
　【００４４】
　【参考例２】
　第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例で得られたＬ．ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６株の凍結乾燥菌末１ｇにラクトース（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、散剤を製造した。
　【００４５】
　【実施例２】
　脱脂乳を８０〜８５℃で２０〜３０分間殺菌した後、ホモゲナイズし、冷却した。これにスターターとして本菌株（ＦＥＲＭ　Ｐ−１７３９９）の純培養物を２〜５％加え、３７〜４０℃で１６時間発酵させ、乳酸含量２％の酸乳（脱脂乳培地における培養物）を得た。ついで、生じたカードを砕きながら、５℃に冷却し、これを酸乳とした。
　別に、しょ糖１５％のほかに適量の酸味料、香料、色素を含有する糖液を調合し、ホモジナイズし、７０〜８０℃で２０〜３０分間殺菌した後、５℃に冷却し、糖液とした。
　このようにして得た酸乳３５に対して糖液６５の割合で混合して酸乳飲料を得た。
　【００４６】
　【実施例３】
　ビタミンＣ４０ｇまたはビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇに、上記実施例１で得た本菌株の脱脂乳培地における培養物の凍結乾燥物を４０ｇ加えて十分に混合した。混合物を袋に詰め、１袋１．５ｇのステック状栄養健康食品を１５０袋製造した。
　【００４７】
　【参考例３】
　次の配合により抗潰瘍剤を製造した。（１）本菌株の脱脂粉乳培地における培養物の凍結乾燥物５０ｇ、（２）ラクトース９０ｇ、（３）コーンスターチ２９ｇ、（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇ。
　先ず、（１）、（２）、（３）（但し１７ｇ）を混合し、（３）（但し７ｇ）から調製したペーストとともに顆粒化した。得られた顆粒に（３）（但し５ｇ）と（４）を加えてよく混合し、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮して、１錠あたり有効成分を４０ｍｇ含有する錠剤１００個を製造した。
　【００４８】
　【発明の効果】
　本発明によれば、ピロリ菌の除菌及び／又は感染防御が副作用を伴うことなく効率的に実施できる。本発明に係る組成物は、安全性には全く問題はなく、乳製品その他各種飲食品の形態に自由に調製することができるので、健常者はもとより、乳幼児、老齢者、病弱者、病後の人等も長期間に亘って摂取することができ、胃炎や胃潰瘍等に特にすぐれた予防及び／又は治療効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
　【図１】
　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ　ＯＬＬ　２７１６ゲノムのＤＮＡのＡｐａ　Ｉ分解パターン（パルスフィールト電気泳動）を示す。