【事件の表示】
　特許第２７３０８６５号「コンタクトレンズの洗浄剤成分」の特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第２７３０８６５号の特許を維持する。
【理　由】
１．手続の経緯
　本件特許第２７３０８６５号の特許請求の範囲に係る発明は、昭和６１年９月９日に出願された特許出願（特願昭６１−２１３６９６号（パリ条約による優先権主張、１９８５年９月９日、米国））の一部を、平成６年１０月１２日に分割出願されたものであり、平成９年１２月１９日にその特許の設定登録がなされ、その後、特許異議申立人株式会社オフテクス（以下「申立人」という。）より特許異議の申立がなされ、取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１１年５月２４日に一旦訂正請求がなされたものであるが、新たな取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１２年１月６日に先の訂正請求に係る取下書が提出されると同時に新たな訂正請求がなされ、さらに当該訂正請求について訂正拒絶理由通知がなされ、その指定期間内である平成１２年３月１５日に当該新たな訂正請求書に係る手続補正書が提出されたものである。
　
２．訂正の適否についての判断
（１）訂正請求書の補正の適否
　上記訂正請求書の補正では、訂正請求書の（３）の訂正の要旨における各訂正事項の「洗浄用製剤」、「洗浄消毒用製剤」等の表現を、「洗浄剤成分」なる統一された表現に補正するものであるから、明りょうでない記載の釈明に該当するものであり、そして、当該補正が、訂正に係る全文訂正明細書に記載された事項の範囲内で行われていることは明らかであるから、訂正の要旨を変更するものではない。
　
（２）訂正の内容
　上記補正された訂正請求は、以下の点について訂正を求めるものである。
（ａ）訂正事項ａ
　特許請求の範囲の（旧）請求項１を削除する。
　これに伴い、発明の名称を「コンタクトレンズの洗浄消毒用製剤」を「コンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正する。さらに、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、段落【０００１】第２行の「コンタクトレンズの洗浄消毒用製剤」を「コンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正し、段落【０００１】第４〜５行の「洗浄および消毒するための過酸化水素及び過酸化物活性タンパク質分解酵素」を「洗浄および消毒する方法において洗浄剤成分として用いられる過酸化物活性タンパク質分解酵素」と訂正する。
（ｂ）訂正事項ｂ
特許請求の範囲の請求項１（旧請求項２）中の「コンタクトレンズ」を「ヒドロゲルコンタクトレンズ」と訂正する。
　これに伴い、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、段落【００１０】第３〜４行および第８行、段落【００１１】第４行の「コンタクトレンズ」を「ヒドロゲルコンタクトレンズ」と訂正し、段落【００１１】第１行の「コンタクトレンズ（特に、表面が親水性のもの）」を「ヒドロゲルコンタクトレンズ（以下、単にコンタクトレンズということもある。）」と訂正する。
（ｃ）訂正事項ｃ
　特許請求の範囲の請求項１（旧請求項２）中の「消毒に有効な量」を「３％」と訂正する。
　これに伴い、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、段落【００１１】第１行の「消毒に有効な量」を「３％」と訂正し、段落【００２０】第３〜８行の「過酸化水素の場合には、・・・上限がない。」を「過酸化水素の場合には、３％（ｗ／ｖ）過酸化水素溶液を使用することが好ましい。」と訂正する。
（ｄ）訂正事項ｄ
　特許請求の範囲の請求項１（旧請求項２）中の「過酸化水素と一緒に用いる過酸化物活性タンパク質分解酵素」を、「過酸化水素と一緒に用いる、過酸化物活性ズブチリシンおよび過酸化物活性パンクレアチンからなる群から選択される過酸化物活性タンパク質分解酵素からなる、ヒドロゲルコンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正する。
　これに伴い、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、段落【００１１】第４〜６行の「過酸化物活性タンパク質分解酵素と一緒に用いる過酸化水素、および過酸化水素と一緒に用いる過酸化物活性タンパク質分解酵素」を「過酸化水素と一緒に用いる、過酸化物活性ズブチリシンおよび過酸化物活性パンクレアチンからなる群から選択される過酸化物活性タンパク質分解酵素からなる、ヒドロゲルコンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正する。
（ｅ）訂正事項ｅ
　特許請求の範囲の（旧）請求項３を削除する。
　
（３）訂正の目的の適否、新規事項の有無および拡張・変更の存否
　上記ａないしｄの各訂正事項は、特許請求の範囲の請求項１を削除するか、構成に欠くことができない事項を付加することにより限定を加えるものであるから、特許請求の範囲の減縮に該当するものであり、また、当該特許請求の範囲の減縮に伴い、発明の名称および発明の詳細な説明の欄との整合を単に図ったものであるから、明りょうでない記載の釈明に該当するものである。
　訂正事項ｅは、旧請求項３に記載の発明の構成に欠くことができない事項を旧請求項２に組み込み新請求項１を構成したことにより、重複した内容となる請求項を単に削除したに過ぎないものであるから、明りょうでない記載の釈明に該当するものである。
　そして、上記各訂正事項は本件の訂正前の特許明細書に実質上記載されている事項のみであるから、新規事項の追加に該当せず、実質的に特許請求の範囲を拡張又は変更するものではない。
　
（４）独立特許要件に係る判断
（本件異議申立に係る各甲号証に記載の発明）
（Ａ）訂正明細書の特許請求の範囲の請求項１に記載の発明（以下「本件発明」という。）に対して、当審が通知した取消理由で引用した甲第１号証（米国特許第３５５３１３９号明細書（１９７１））には、以下の事項が記載されている。
（ａ）従って、本発明の目的はマイルドな酵素含有洗剤組成物を提供することにある。本発明は改善されたマイルドな特性を持つ洗剤組成物に関する。この洗剤組成物は過ホウ酸ナトリウムの如き過酸化化合物および酵素の組合せを含有する。そのようなマイルドな組成物は過ホウ酸ナトリウムの如き過酸化化合物および酵素のみを含有してなることができるが、通常の使用では、他の洗剤成分例えば有機洗剤化合物およびビルダー塩がこの組合せに添加される。
（第１欄第５６行〜第６６行）
（ｂ）スルフヒドリル基またはジスルフィド結合を含有する酵素例えばペプシン、トリプシン、パパイン、リパーゼ、ジアスターゼおよびウレアーゼは、ここに記載された高濃度のペル化合物によって不活化されるおそれがある。スルフヒドリル基またはジスルフィド結合を含有しない、アルカリ性領域で至適活性を持つタンパク質分解酵素類はこれらのペル化合物によってさほどには不活性化されずそしてそれ故このマイルドな洗剤組成物に用いるために非常に望ましい。スルフヒドリル基またはジスルフィド結合を含有しないアルカリ性領域で至適活性を持つタンパク質分解酵素は、例えばズブチリシン科の酵素例えばＢＰＮ’、ノボバクテリア由来のプロテイナーゼ、アルカラーゼおよびＣＲＤプロテアーゼのアルカリ性タンパク質分解酵素部位である。
　マイルド洗剤組成物の活性酵素含量は、好ましくは、洗剤組成物の約０．００５重量％から約４．０重量％であるべきでありそして最も好ましくは約０．００６％から約０．１２％である。
（第２欄第８行〜第２５行）
（ｃ）本発明のこの側面で用いられる過酸化化合物は、好ましくはこのマイルドな洗剤組成物の約５％から約３０％からなり、最も好ましくは約８％から約２５％である。他の過酸化化合物例えば過炭酸ナトリウムおよび過硫酸ナトリウムは、好ましい過ホウ酸ナトリウムの代わりに用いられる。他の陽イオン例えばカリウム、アンモニウムおよびリチウムも、ナトリウムの代わりに用いられる。
（第２欄第２６行〜第３３行）
（ｄ）非常に好ましいタンパク質分解酵素は中性からアルカリ性のｐＨ領域で活性がありそして細菌、真菌または糸状菌の如き微生物から産生されるセリンタンパク質分解酵素である。
（第３欄第５８行〜第６１行）
（ｅ）本発明の洗剤組成物で用いるのに好ましい他の酵素産生物は、数多くの実施例に含まれている、アルカラーゼの商品名で販売されている蛋白分解酵素、セリンタンパク質分解酵素である。ノボ　インダストリＡ／Ｓによって公表されたある商業誌中では、アルカラーゼはバチルススブチリスの特定菌株の液体培養によって産生されたタンパク質分解酵素調製物として掲載されている。アルカラーゼの主たる酵素成分はズブチリシンである。
（第４欄第６６行〜第７４行）
（Ｂ）次に、上記取消理由で引用した甲第２号証（Journal　of　the　American　Optometric　Association，Vol．40，No．11，ｐ.1106−1109）には、以下の事項が記載されている。
（ａ）コンタクトレンズ用洗浄溶液に関する研究
（第１１０６〜１１０７頁、題名）
（ｂ）１２種類の異なる市販コンタクトレンズ洗浄溶液、４種類の実験用洗浄溶液および４種類の酵素含有洗剤がテストされた。
　レンズにひっかき傷や反りが生ずる可能性を減らすために、機械的攪拌器”Ｈｙｄｒａ−Ｍａｔ”が洗浄用具として選ばれた。この攪拌器の使用はコンタクトレンズの全機械的洗浄に関与するいくつかの変数を除去するのに役立つ。”Ｈｙｄｒａ−Ｍａｔ”を選択する前に、”Ｈｙｄｒａ−Ｍａｔ”を用いる洗浄と、指やＱ−チップを用いて洗浄液を適用する手作業法との間に関連があるかどうかを決定するための実験が行われた。その関連はすばらしく、それ故機械的攪拌機が手作業洗浄に関与する変数を除去するために用いられた。さらに、コンタクトレンズの手作業洗浄は、レンズひっかき傷や反りを誘発するだけでなく、レンズの両表面を均一に洗浄するのに問題があるため望ましくない。
　コンタクトレンズくもりの自然原因をシミュレートするため、レンズの両表面にヒト血漿で汚れ付けをし、一晩乾燥した。ヒト血漿はそれが涙や脂肪分泌物の普通の成分中に存在するのと同じ成分すなわちアルブミン、グロブリン、ムコタンパク質および油分を含有するので用いられた。
（第１１０７頁左欄第１５行〜右欄第１１行）
（ｃ）これらの調製物は文字によって符号付けされそして表１に不規則な様式で報告されている。上記リストと表１の文字の付されたリストとの間には何ら関連がない。探索用途のため市販光学品製造業者によっておよび我々の実験室で調製された実験用洗浄溶液は１〜４の番号および接頭語ＥＸが符号付けされた（これらの溶液は市販品として入手できない）。
　４種類の酵素含有洗剤が表ＩＩにブランド名で記載されて報告されている。
　　　　　　　　　表ＩＩ
　　　　　　　　酵素含有洗剤
　　　　　　　　　結果＊　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　血漿　マーカー
　　　　　　　　　　　　　　　　　ｐＨ＊＊　　汚れ　　汚れ
ＴＩＤＥ　ＸＫ　　　　　　　　　　９．９　　６　　　１
（プロクターアンドギャンブル社）
ＢＩＺ　　　　　　　　　　　　　　９．８　　５　　　１
（プロクターアンドギャンブル社）
ＧＡＩＮ　　　　　　　　　　　　１０．１　　４　　　１
（プロクターアンドギャンブル社）
ＡＸＩＯＮ　　　　　　　　　　　　９．９　　４　　　１
（コルゲート−パーモリブ社）
＊＊　２％ｗ／ｖ溶液のｐＨ
＊　　３０分間の浸漬、手による３分間の洗浄（１８０回）後の結果。
洗浄の度合は０〜１０の数で表現されている。ここで用いられた方法では、０は効果がないことを意味し、１０は１００％洗浄を意味している。
（第１１０８頁右欄第１８行〜第１１０９頁左欄中段）
（ｄ）結論
　この予備的研究に基づく結論を引き出すにはやや早すぎるきらいはあるが、ある種の事実が明らかである。表ＩおよびＩＩのデータは、コンタクトレンズの最終的な清浄化は結果欄に示されているように改善されたことを示している。ＥＸ−４を除いて、全ての実験的調製物は市販調製物よりも、より良好に異物沈積物を清浄化することを可能とした。全体としてみると、実験用調製物１、２、および３は最も効果的な洗浄剤であった。それでも、体内有機堆積物（血漿でシュミレートした）からなる通常の沈積物と異物沈積物（マーカー汚れでシュミレートした）の両方の洗浄力評価を完全に満足するものではなかった。さらに、他の避けられない刺激で眼の汚染を誘発しないように、洗浄液の涙液との相溶性がチェックされかつ調整されるべきである。最後に、これらの実験において、”Ｈｙｄｒａ−Ｍａｔ”は製造業者が推奨した攪拌時間よりも長く約１５分間機械的に攪拌した。これはテストした洗浄剤で最適な洗浄を発現させるために一層好適な手法であることがわかった。
（第１１０９頁左欄中段〜右欄第７行）
（Ｃ）また、本件異議申立に係る本件特許に係る出願の日前に頒布された刊行物である甲第３号証（化学大辞典編集委員会編「化学大辞典８（縮刷版）」昭和３９年２月１５日、共立出版株式会社発行、第４１５頁）には、ペルオクソ硼酸塩およびペルオクソ硼酸ナトリウム（過ホウ酸ナトリウム）について記載されており、ペルオクソ硼酸塩が水溶液中で過酸化水素を発生させる点も記載されている。
（Ｄ）さらに、申立人が提示した参考資料１（１９８８年７月１２日にＣ．Ｂ．ＭｃＣａｒｔｙにより作成され、後に米国デラウェア地区裁判所に提出された宣誓供述書の写し）には、以下の事項が記載されている。
（ａ）６．１９６７〜１９７０年までの棒石けん部課長としての私の立場において、私の職責の１つはタンパク質分解酵素含有洗剤に関する研究にあった。その役割において、私は１９７１年１月５日に発行された、米国特許第３，５５３，１３９に記載された発明をなした。その写しを証拠Ａとして添付した。私は名前を挙げられた発明者としてこの特許に記載さ
れたチャールズ　ブルース　マッカーテイ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｂｒｕｃｅ　ＭｃＣａｒｔｙ）である。
７．私の米国特許第３，５５３，１３９は１９６８〜１９６９年の期間内で、商標ＢＩＺ（登録商標）としてプロクターアンドギャンブル社によって販売された商品組成を記載している。
８．１９６８年〜１９６９年の期間内で、ＢＩＺ（登録商標）は、実質的な量の過酸化物放出性化合物、すなわち過ホウ酸ナトリウム４水和物をも含有する、タンパク質分解酵素含有洗剤であった。
９．私は、１９６８年と１９６９年に米国中で販売された商品ＢＩＺ（登録商標）に精通しておりそしてそれは下記の概略配合であった。
成分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　重量％
非イオン性界面活性剤　　　　　　　　　　　　　　　４
獣脂アルキルエトキソレート（ＴＡＥ‐２０）
過ホウ酸ナトリウム４水和物　　　　　　　　　　　２５
蛋白分解酵素（アルカラーゼ）　　　　　　　　　　　１．２
−商標　ＮＯＶＯ（登録商標）
増白剤（スチルベントリアジン）　　　　　　　　０．１〜０．２
青味付剤（極性ブリリアントブルー）              ４０〜５０ｐｐｍ
トリポリリン酸ナトリウム                        ｐＨ調節剤
（第２頁第１４行〜第３頁下から第８行）
　
（対比・判断）
　そこで、本件発明と上記甲第１号証ないし甲第３号証の各甲号証記載の発明とを対比すると、次の点で明らかに相違している。
　本件発明は、３％の過酸化水素と一緒に用いる過酸化物活性を有する特定のタンパク質分解酵素からなるヒドロゲルコンタクトレンズ洗浄剤成分に係るものであるのに対して、上記各甲号証には、３％の過酸化水素とタンパク質分解酵素を一緒に用いる点に係る記載がない点。
　そこで、上記相違点について検討すると、本件発明は、当該相違点に係る構成事項を有することにより、本件特許明細書に記載の所期の優れた効果を奏するものであり、当該相違点は、実質的なものと認められる。
　してみると、本件発明は、上記甲第１号証ないし甲第３号証の各甲号証に記載の発明ないし当該各発明に参考資料１の記載事項を付加したものから当業者が容易に発明し得たものではないから、本件発明は、特許法第２９条第２項の規定により、特許を受けることができないものではない。
　したがって、本件特許に係る明細書の特許請求の範囲に記載の発明は、特許出願の際独立して特許を受けることができるものである。
（５）むすび
　以上のとおりであるから、上記訂正は、特許法の一部を改正する法律（平成６年法律第１１６号、以下「平成６年法」という。）附則第６条第１項の規定によりなお従前の例によるとされる、平成１１年改正前の特許法第１２０条の４第３項で準用する平成６年法による改正前の特許法第１２６条第１項ただし書、第２項ないし第３項の訂正についての規定に適合するものであるから、当該訂正を認める。
　
３．特許異議の申立についての判断
（１）申立の理由の概要
　特許異議申立人は、証拠として上記２．（４）で示した甲第１号証ないし甲第３号証および参考資料１を提示し、本件特許に係る明細書の特許請求の範囲に記載の発明が、特許法第２９条第２項の規定により、特許を受けることができない旨主張し、特許を取り消すべきものである旨主張している。
　
（２）判断
　本件特許に係る明細書の特許請求の範囲に記載の発明は、上記２．（４）で示した理由により、申立人が提示した特許異議申立の理由および証拠方法によって、特許法第２９条第２項の規定により、特許を受けることができないものとすることができず、当該発明に係る本件特許を取り消すことはできない。
　また、他に本件発明についての特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１２年３月２３日（２０００．３．２３）
【訂正の要旨】
訂正の要旨
▲１▼訂正事項ａ
特許請求の範囲の（旧）請求項１を削除する。これは、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　これに伴い、発明の名称を「コンタクトレンズの洗浄消毒用製剤」を「コンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正する。さらに、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、明りょうでない記載の釈明を目的として、段落【０００１】第２行の「コンタクトレンズの洗浄消毒用製剤」を「コンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正し、段落【０００１】第４〜５行の「洗浄および消毒するための過酸化水素及び過酸化物活性タンパク質分解酵素」を「洗浄および消毒する方法において洗浄剤成分として用いられる過酸化物活性タンパク質分解酵素」と訂正する。
▲２▼訂正事項ｂ
　特許請求の範囲の請求項１（旧請求項２）中の「コンタクトレンズ」を請求の範囲の減縮を目的として、「ヒドロゲルコンタクトレンズ」と訂正する。
　これに伴い、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、明りょうでない記載の釈明を目的として、段落【００１０】第３〜４行および第８行、段落【００１１】第４行の「コンタクトレンズ」を「ヒドロゲルコンタクトレンズ」と訂正し、段落【００１１】第１行の「コンタクトレンズ（特に、表面が親水性のもの）」を「ヒドロゲルコンタクトレンズ（以下、単にコンタクトレンズということもある。）」と訂正する。
▲３▼訂正事項ｃ
　特許請求の範囲の請求項１（旧請求項２）中の「消毒に有効な量」を請求の範囲の減縮を目的として、「３％」と訂正する。
　これに伴い、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、明りょうでない記載の釈明を目的として、段落【００１１】第１行の「消毒に有効な量」を「３％」と訂正し、段落【００２０】第３〜８行の「過酸化水素の場合には、………上限がない。」を「過酸化水素の場合には、３％（ｗ／ｖ）過酸化水素溶液を使用することが好ましい。」と訂正する。
▲４▼訂正事項ｄ
　特許請求の範囲の請求項１（旧請求項２）中の「過酸化水素と一緒に用いる過酸化物活性タンパク質分解酵素」を、明りょうでない記載の釈明および請求の範囲の減縮を目的として、「過酸化水素と一緒に用いる．過酸化物活性ズブチリシンおよび過酸化物活性パンクレアチンからなる群がら選択される過酸化物活性タンパク質分解酵素からなる、ヒドロゲルコンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正する。
　これに伴い、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るため、明りょうでない記載の釈明を目的として、段落【００１１】第４〜６行の「過酸化物活性タンパク質分解酵素と一緒に用いる過酸化水素、および過酸化水素と一緒に用いる過酸化物活性タンパク質分解酵素」を「過酸化水素と一緒に用いる、過酸化物活性ズブチリシンおよび過酸化物活性パンクレアチンからなる群がら選択される過酸化物活性タンパク質分解酵素からなる、ヒドロゲルコンタクトレンズの洗浄剤成分」と訂正する。
▲５▼訂正事項ｅ
特許請求の範囲の（旧）請求項３を削除する。これは、明りょうでない記載の釈明を目的とするものである。
（５４）【発明の名称】
コンタクトレンズの洗浄剤成分
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　ヒドロゲルコンタクトレンズを、３％の過酸化水素および有効量の過酸化物活性タンパク質分解酵素から実質的に成る溶液と充分な時間接触させて、実質的にすべてのタンパク質付着物を除去し、かつレンズを消毒するヒドロゲルコンタクトレンズの同時洗浄消毒方法において、過酸化水素と一緒に用いる、過酸化物活性ズブチリシンおよび過酸化物活性パンクレアチンからなる群から選択される過酸化物活性タンパク質分解酵素からなる、ヒドロゲルコンタクトレンズの洗浄剤成分。
【発明の詳細な説明】
　　　【０００１】
　　【産業上の利用分野】
　本発明は、コンタクトレンズの洗浄剤成分に関する。とりわけ、本発明は、過酸化物および過酸化物活性酵素、特にタンパク質分解酵素の混合物を含有する溶液によって、コンタクトレンズを同時に洗浄および消毒する方法において洗浄剤成分として用いられる過酸化物活性タンパク質分解酵素に関する。
　　　【０００２】
　　【従来技術】
　ガラスから親水性高分子材料系の現在の長時間装用レンズに至るコンタクトレンズの改良に伴って、そのようなレンズ材料を洗浄および消毒して、光学的透明度および装用性を保持し、感染物質が眼に入るのを防ぐための、より有効な新しい手段が必要となってきている。
　ガラスおよびポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）のような初期のポリマーのレンズは、硬く、疎水性であるので、洗剤を用いて手で容易に洗浄することができる。このような材料は、眼の上に自然に生じる水層および涙によってある程度湿潤するが、親油性であるので、洗剤を用いて手で洗浄することによってすべての汚れ（脂質は例外であり得る）を容易に除去できる。親水性材料、特にポリペプチドおよび酵素、たとえばリゾチームは、そのような材料にあまり付着せず、付着しても、界面活性剤および洗剤で洗浄することによって容易に除去される。
　　　【０００３】
　ガラスおよびＰＭＭＡ系コンタクトレンズは、洗剤洗浄法によって容易に消毒することもできる。物理的な洗浄によって、付着した感染物質を容易に除去できる。更に、このような材料は非孔質であるので、洗浄保存溶液中に化学消毒剤を添加しても、消毒剤がレンズに吸収されず、装用時に消毒剤が眼に入ることも無い。すなわち、感染物質の物理的除去、並びに保存中の化学的手段による無菌性の保持、および洗浄・湿潤・保存溶液の無菌性の保持に関する考慮は最小限でよい。
　　　【０００４】
　ポリマー技術の進歩によって、装用者の快適さおよび眼の健康が大きく向上したが、そのような材料の洗浄および消毒について新しい問題が生じた。
　眼の体液および涙によって表面が湿潤するレンズは、眼に最も快適である。現在使用されているすべてのコンタクトレンズポリマーは、ＰＭＭＡレンズを除いては、レンズ表面は本来親水性であるか、または処理によって親水性にされている。これは、多くの陰電荷（通例カルボキシレートの形）および中性基によって角膜を覆う体液層で容易に湿潤する親水性環境を提供することによって達成される。このような陰荷電親水性表面は、ヒドロゲルレンズ上に存在するだけでなく、より硬いレンズ、例えばオルガノシロキサン−メタクリレートレンズ（ポリコン（Ｐｏｌｙｃｏｎ、商標））およびシリコンエラストマー系レンズの上にも存在する。後者のシリコンエラストマーレンズ場合、疎水性表面を被覆し、または他の処理によって表面を親水性とする。
　　　　【０００５】
　毎日の装用の間に、タンパク質が親水性レンズ表面に吸着する。純粋なＰＭＭＡレンズ以外では、吸着は非常に強力で、硬質ポリシロキサン／メチルメタクリレートコポリマーのようなレンズにおいても、手による洗剤洗浄方法は、この付着物を除去するのに不充分である。いわゆるヒドロゲルレンズ（ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシエチルメチルメタクリレート、ビニルピロリドンおよびグリセロールメタクリレートモノマーおよびメタクリル酸または酸エステルから調製され、大量（すなわち３５〜８０％）の水を吸収する）は、非常に脆いので、汚れ、特に強力に付着したタンパク質を除去する物理的洗浄方法は実用的ではない。
　長期間のうちにそのような物質が付着すると、装用者は不快感を覚え、より重要なことには、レンズの光学的性質が損なわれ、特に光透過性が低下し、光反射が高まり得る。また、タンパク質の付着によって、眼の炎症、視力の喪失、レンズの損傷が起こり、巨大乳頭状結膜炎と呼ばれる状態になる場合もある。
　　　【０００６】
　研究の結果、タンパク質付着の主因はリゾチーム酵素であることが判った。更に、リポタンパク質およびムコ多糖類が、レンズ表面に吸着し得るが、タンパク質自体、特にリゾチーム物質がレンズのタンパク質付着の主因である。このような酵素は、少量の同様のタンパク質、リポタンパク質およびムコ多糖類と共に、親水性レンズ材料の表面に付着する。
　これまでに見出されている唯一の安全で有効な付着除去方法は、酵素を使用し、その加水分解性によってタンパク質を水溶性の小さいサブユニットに分解する方法である。特に有用なものは、アミド結合を加水分解して、タンパク質をアミノ酸および非常に小さいポリペプチドに分解するタンパク質分解酵素（プロテアーゼ）である。これらのタンパク質フラグメントは通例水溶性であり、すなわち水性環境によって容易に可溶化される。米国特許第３，９１０，２９６号には、プロテアーゼをコンタクトレンズの洗浄に使用することが開示されている。米国特許第４，２８５，７３８号も参照できる。脂質分解性および／または粘液分解性の酵素も、任意の量でタンパク質分解酵素と共にレンズの洗浄に使用される。
　　　【０００７】
　ガス透過性コンタクトレンズ、特にヒドロゲル、またはＨＥＭＡ、ＶＰおよびＧＭＡモノマーから製造される高含水コンタクトレンズの第２の問題は、レンズおよびレンズ保存溶液の消毒および無菌性の保持に関する。
　レンズの消毒のために多くの方法が発明され、その中には、高温、無菌生理食塩液洗剤および化学薬品（例えば殺菌性薬物）または酸化を使用するものがある。
　加熱は実質的に有効であったが、追加の洗浄をより困難にする、すなわち、タンパク質の変性並びにタンパク質およびレンズ上の他の沈積物の凝固を起こすという欠点を有する。
　無菌生理食塩液を、レンズの洗浄および浸漬に使用し得る。このような溶液は必ずしも滅菌されていない。もっとも、ある微生物は生理食塩液環境中で生存し得、芽胞は無菌生理食塩液によっても完全には不活性化されない。
　化学的な手段において、いわゆる薬物、すなわち重金属系殺菌剤（例えばチメリソールおよびハロゲン化トリアルキルアンモニウム）、および塩化ベンザルコニウムような化合物または同様の化合物の使用に関しては、不適切に使用した場合、装用者に不快感を与える可能性がある。そのような薬物は、それが良好な殺菌剤たり得る性質の故に、眼の炎症を起こす可能性もある。薬物がレンズ中に蓄積し、次いで装用中に眼に放出されるので、この現象は特にヒドロゲル型レンズ材料に起こる。そのような薬物によって、人によっては眼に不快感が起こり得、そのため、代わりのレンズ滅菌方法が当然必要となる。
　　　【０００８】
　薬物、熱および生理食塩液による無菌性の保持に伴う問題への対応において、酸化体を使用してコンタクトレンズを消毒することに、実質的に興味がもたれるようになった。過酸化物を用いる数種の２段階および１段階系が、コンタクトレンズの消毒のために開発された。例えば、米国特許第３，９１２，４５１号、同第４，４７３，５５０号に説明されている。
　過酸化物およびプロテアーゼは、洗濯用洗剤において、および義歯の洗浄のために組み合わせられている。例えば、米国特許第３，７３２，１７０号は、酵素および過酸化物源、特にアルカリ金属モノ過硫酸三重塩を含んで成る生物学的洗浄組成物に関する。該発明の本質は、「タンパク質性」血痕を材料（洗濯物）から洗浄する方法である。この組み合わせば、アニオン性洗剤と配合することが好ましいと記載されている。
　他の例として、米国特許第４，１５５，８６８号には、酵素および活性酸素化合物を含んで成る水溶発泡性義歯クレンザー錠剤が記載されている。該発明の本質は、貯蔵中に酸化剤によって酵素が速く失活してしまうことを防ぐように錠剤を処方することである。
　過ホウ酸ナトリウムおよび酵素は、近年の洗濯用洗剤の既知の成分である。このことは、オルデンロート，オー（Ｏｌｄｅｎｒｏｔｈ，Ｏ．）、フェッチ・ザイフェン・アンストリッヒミッテル（Ｆｅｔｔｅ　Ｓｅｉｆｅｎ　Ａｎｓｔｒｉｃｈｍｉｔｔｅ１）、１９７０（７２（７））、５８２〜７に記載されている。この文献には、細菌プロテアーゼによって繊維製品から変性卵黄を除去することができるが、過ホウ酸塩が存在すると、プロテアーゼの作用が低下したと記載されている。
　　　【０００９】
　　【発明が解決しようとする課題】
　これらの開示のいずれにも、そのような組成物をコンタクトレンズの洗浄および消毒に使用すること、または一方の成分が他方の成分の効果を増強することは教示または意図されていない。
　本発明は、コンタクトレンズを同時に洗浄および消毒するために用いる製剤を提供しようとするものである。
　　　【００１０】
　　【課題を解決するための手段】
　消毒のための過酸化物、特に過酸化水素および洗浄のための過酸化物活性酵素、特に過酸化物活性タンパク質分解酵素を組み合わせて用いることによって、ヒドロゲルコンタクトレンズの洗浄および消毒を同時に行い得ることが分かった。驚くべきことに、組み合わせると個々の成分の効果が高まる。すなわち、過酸化物の存在によってタンパク質の除去力は数倍増強され、過酸化物活性酵素が存在すると消毒率が高くなる。総合的な結果として、１段階で、２成分を独立して使用する場合よりも効果的にヒドロゲルコンタクトレンズを洗浄および滅菌し得る。
　　　　【００１１】
　本発明は、ヒドロゲルコンタクトレンズ（以下、単にコンタクトレンズということもある。）を、３％の過酸化水素および有効量の過酸化物活性タンパク質分解酵素から実質的に成る溶液と充分な時間接触させて、実質的にすべてのタンパク質付着物を除去し、かっレンズを消毒するヒドロゲルコンタクトレンズの同時洗浄消毒方法において、過酸化水素と一緒に用いる、過酸化物活性ズブチリシンおよび過酸化物活性パンクレアチンからなる群がら選択される過酸化物活性タンパク質分解酵素からなる、ヒドロゲルコンタクトレンズの洗浄剤成分を提供する
。
　　　【００１２】
　過酸化物活性酵素は、比色アッセイ、例えばアゾコール（Ａｚｏｃｏｌｌ）法（トマレリ，アール・エム（Ｔｏｍａｒｅｌｌｉ，Ｒ．Ｍ．）ら、ジャーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．）、３４、４２８（１９４９））、またはタンパク質分解活性を測定するジメチルカゼイン法（ヤン・リン（Ｙａｕｎ　Ｌｉｎ）ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ．）、２４４：（４）７８９〜７９３、（１９６９））によって、水溶液中の過酸化水素濃度が３ｗ／ｖ％である場合に、常温常圧で測定可能な活性を有するいずれの酵素でもよい。　酵素は、微生物およびホ乳動物を含むいずれの動植物に由来してもよい。中性、酸性またはアルカリ性酵素のいずれであってもよい。
　　　【００１３】
　タンパク質分解酵素は、一部または全部、ペプチドアミド結合を加水分解できる。そのような酵素は、タンパク質分解活性に関連して脂質分解活性および／またはデンプン分解活性をも有していてよい。
　好ましいタンパク質分解酵素は、実質的にスルフヒドリル基またはジスルフィド結合（これらが存在すると、活性酸素と反応して活性酸素の活性を低下させ、酵素の不活性化を早める）を有さない酵素である。２価金属イオンを含んで成る酵素、例えばカルシウム、マグネシウムまたは亜鉛がタンパク質に結合している酵素であるメタロ−プロテアーゼを使用してもよい。
　　　【００１４】
　タンパク質分解酵素のより好ましい群は、特にバチルスおよびストレプトミセス並びにアスペルギルス属から誘導されるセリンプロテアーゼである。この群において、より好ましい酵素は、通例ズブチリシン酵素と呼ばれるバチルス由来アルカリ性プロテアーゼである。キー，エル（Ｋｅａｙ，Ｌ．）、モサー，ピー・ダブリュー（Ｍｏｓｅｒ，Ｐ．Ｗ．）およびウィルデイ，ビー・エス（Ｗｉｌｄｉ，Ｂ．Ｓ．）、「プロテアーゼズ・オブ・ザ・ジーナス・バチルス．ＩＩアルカライン・プロテアーゼズ（Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｇｅｎｕｓ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ．ＩＩ　Ａｌｋａｌｉｎｅ　Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ．）」、バイオテクノロジー・アンド・バイオエンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｌｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）、第ＸＩＩ巻、２１３〜２４９頁、（１９７０）、並びにキー，エルおよびモサー，ピー・ダブリュー、「ディファレンシエイション・オブ・アルカリン・プロテアーゼズ・フォーム・バチルス・スピーシーズ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｌｋａｌｉｎｅ　Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｐｅｃｉｅｓ）」、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍ）、第３４巻、第５号、６００〜６０４頁、（１９６９）参照。
　　　【００１５】
　ズブチリシン酵素は、２種のサブクラス（ズブチリシンＡおよびズブチリシンＢ）に分類される。ズブチリシンＡに分類される酵素は、枯草菌、バチルス・リヘニフォルミス（ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）およびバチルス・プミリス（ｐｕｍｉｌｉｓ）のような種から誘導される酵素である。このサブクラスの微生物は、中性のプロテアーゼまたはアミラーゼをあまり、または全く産生しない。ズブチリシンＢサブクラスは、枯草菌、枯草菌変異アミロサッカリチクス（ａｍｙｌｏｓａｃｃｈａｒｉｔｉｃｕｓ）、バチルス・アミロリキファシエンス（ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）および枯草菌ＮＲＲＬ　Ｂ３４１１のような微生物に由来する酵素から成る。これらの微生物は、そのアルカリ性プロテアーゼ産生にほぼ匹敵するレベルで、中性プロテアーゼおよびアミラーゼを産生する。
　更に、他の好ましい酵素は、パンクレアチンである。
　　　【００１６】
　酵素の同定、分離および精製は、従来の方法で行う。多くの同定および単離方法が、タンパク質分解活性およびタンパク質分解／デンプン分解活性またはタンパク質分解／脂質分解活性を有する酵素を含む酵素を単離するための通常の科学文献に記載されている。本発明に関する過酸化物安定酵素を、植物、動物または微生物から既知の方法で容易に得ることができる。
　ＤＮＡ組み替え技術の出現によって、新しい過酸化物安定タンパク質分解酵素およびその原料が入手可能となると考えられる。そのような酵素は、それが前記安定性および活性の基準を満たすならば本発明の範囲内に含まれると考えるべきである。例えば日本国特許出願公開第６０−０３０６８５号（枯草菌のＤＮＡ組み替えによるプロテアーゼ製造）参照。
　　　【００１７】
　本発明の実施において、酵素を有効量使用すべきである。このような量は、適当な時間（例えば一晩）で、通常の装用によるタンパク質沈積物を実質的にすべてレンズから除去するのに有効な量である。この標準は、通常のタンパク質付着パターンを示してきたコンタクトレンズ装用者に関して当てはまり、これまでタンパク質沈積速度が非常に大きく、２〜３日毎に洗浄を行うことが好ましいなどの非常に少数の装用者には適用できない。
　　　【００１８】
　効果的なクリーナーを製造するのに必要な酵素の量は、酵素の本来の活性を含む幾つかの因子、特に、過酸化物との相乗相互作用の程度を考慮して決める。
　基本的な基準として、使用溶液は、レンズ１枚当たり約０．０００１〜０．５、好ましくは約０．０００３〜０．０５アンソン（Ａｎｓｏｎ）単位／ｍｌ溶液の活性を提供するのに充分な酵素を含有すべきである。それよりも高い、または低い量で使用してもよい。しかし、この濃度よりも低くてもレンズを洗浄し得るが、レンズの洗浄に時間がかかり、特に有用ではない。酵素をより多量に含有する溶液は、急速な洗浄には効果的であるが、物質の量が多すぎて扱いにくい。
　酵素製剤はまず純粋ではないので、酵素源を最終的な使用溶液に対して約０．００３〜１５ｗ／ｖ％の量で使用する。正確な量は、酵素の純度によって様々であり、最終的にロット毎の基準を決めることが必要である。
　　　【００１９】
　酵素活性はｐＨ依存性であり、いずれの酵素についても酵素が最も良く機能する特定のｐＨ範囲が存在する。そのような範囲の決定は、既知の方法によって容易に行い得る。使用溶液を処理して酵素の至適ｐＨ範囲にすることが好ましいが、これは絶対的な必要条件ではない。
　過酸化物源は、溶液中で活性酸素を与える１種またはそれ以上の化合物であってよい。そのような化合物の例には、過酸化水素およびそのアルカリ金属塩、過ホウ酸塩、特に一水和物および四水和物、過硫酸塩、過炭酸塩、二過イソフタル酸、パーオキシニリン酸塩およびアミノヒドロ過酸化アルミニウムが含まれる。過酸化水素および過ホウ酸塩および過硫酸塩であるアルカリ金属塩、特にナトリウム塩およびカリウム塩が最も好ましい。　過酸化物の消毒有効量とは、３時間で微生物量を１対数オーダー減少させる量を意味する。より好ましくは、過酸化物濃度は、微生物量が１時間で１対数オーダー減少する量である。１０分間またはそれよりも短時間で微生物量を１対数単位減少させる過酸化物濃度が最も好ましい。
　　　【００２０】
　過酸化物と活性酸素との割合は実質的に様々なので、ある過酸化物の濃度をすべての過酸化物に適用することはできない。
　過酸化水素の場合には、３％（Ｗ／ｖ）過酸化水素溶液を使用することが好ましい。
　他の過酸化物を使用する場合、その濃度は、所定濃度の過酸化物安定酵素との組み合わせにおいて、洗浄および消毒に関して相乗効果を示すことによってのみ制限される。例えば、０．０２ｗ／ｖ％の濃度の過ホウ酸ナトリウムが、コンタクトレンズからのタンパク質の酵素的除去を増強することがわかった。いずれの過酸化物についても、その適当な濃度は、ルーチン試験によって容易に決定し得る。
　　　【００２１】
　過酸化物／酵素溶液のｐＨを上げると、溶液の消毒効果が影響を受けることがわかった。アスペルギルス・ニガー（ｎｉｇｅｒ）に対して測定した３％過酸化水素溶液のＤ値は、ｐＨ５．２２では８．０４、ｐＨ７．３２では３．５７並びにｐＨ８．２２および９．２３では１．７９であった。従って、最も好ましいｐＨ範囲は、これらの溶液では６〜１０、特に７．５〜９．０である。このように、中性またはアルカリ性ｐＨで活性な過酸化物安定酵素を使用することが好ましい。
　　　【００２２】
　酵素および／または過酸化物処方の錠剤または溶液に追加の物質を加えてよい。例えば、等張化剤、発泡剤、安定剤、結合剤、緩衝剤、酵素補因子、ジスルフィド結合還元剤（例えば水溶性メルカプタンおよびジチオニトなど）、残留過酸化物不活性化剤などである。
　過酸化物および酵素の処方に、安定剤を加えて両成分の早期の不活性化を防止することが必要である。特に金属誘導性触媒性分解に対して過酸化物を安定化する物質を溶液に加えることが必要または適当である。このような溶液に緩衝剤を加えてｐＨを特定の範囲内に保持することも適当である。塩または他の物質、例えば多価アルコールなどを加えて、溶液の浸透圧値（ｔｏｎｉｃ　ｖａｌｕｅ）を改良してもよい。
　錠剤または散剤において、剤を溶解した時に適当なｐＨおよび浸透圧値が得られるように、塩、緩衝剤および安定剤を加えることが有効であり得る。錠剤および散剤の場合、発泡剤を加えることも適当である。更に、結合剤、錠剤製造用滑沢剤、および散剤、錠剤などの製造に通例使用されるいずれの他の成分をそのような処方に組み合わせてもよい。指示剤（過酸化物が存在するか否かを示す着色剤）をこのような処方に組み合わせてもよい。
　　　　【００２３】
　本発明にしたがって、過酸化物および酵素の溶液を調製し、レンズを、好ましくはこの溶液に浸漬することによってこの溶液と接触させる。実質的にすべてのタンパク質がレンズから除去され、レンズが消毒されるのに充分な時間、レンズを溶液と接触させたまま放置する。
　本質的な成分を組み合わせて、レンズと接触させる溶液とする方法または手順は、用いる成分の物理的性質によって様々であるが、添加の順序は本発明の実施において重要なことではない。例えば、過酸化水素を使用する場合、全成分を含む錠剤または散剤を処方することはできない。すなわち、過酸化水素が過酸化物源である場合、酵素および他の乾燥成分を水性過酸化物と混合することが必要である。酵素および他の乾燥成分を散剤または錠剤として処方し、そのような物質を過酸化物溶液に溶解し、次いでレンズをこの溶液中に入れることが最も好都合である。酵素を加える前にレンズを過酸化物溶液中に入れておくこともできるが、先の方法の方が実際には好ましい。
　　　【００２４】
　このような物質の製造に特に好ましい方法というものはない。２種の実質的な成分を、個々の成分として乾燥形または水性形に処方し得る。これらを組み合わせて単一の散剤もしくは錠剤とするか、または一方を乾燥形とし、他方を水溶液とし得る。
　最終的形態は、処方に使用する過酸化物源の種類に部分的に依存する。本発明の散剤または錠剤形は、発泡形でもあり、錠剤が崩壊しやすく、成分の溶解速度が大きいことが望ましい。顆粒状過酸化物を使用する場合、本発明の幾つかの成分から散剤および／または錠剤を調製することが可能である。過酸化物が溶液形である場合は、酵素の長時間の分解を防ぐために酵素を別の原料から提供する必要である。
　　　【００２５】
　溶液の洗浄および消毒効果を増強するために他のエネルギー源を使用してもよい。例えば、前記のような条件でコンタクトレンズを洗浄する場合のプロテアーゼの作用速度を上げるために超音波装置を使用することが既知である。量および時機によっては、加熱することも、洗浄および消毒に対して良好な効果を有する。
　使用する酵素のタンパク質分解能力を、タンパク質付着物が充分に加水分解される前に実質的に不活性化する温度でなければ、どのような温度で本発明を実施してもよい。酵素活性は温度と相関性があり、幾つかの酵素は、他の酵素よりも、極端な温度（特に高温）に対して感受性が高い。他の酵素は耐熱性であり、７０℃またはそれ以上の温度でもかなり活性を保つ。他の酵素は、水の凍結温度またはその程度の温度でも実質的な活性を保つ。本発明の実施に好ましい温度範囲は、２０〜３７℃、特に約２２〜２５℃であるが、特定の過酸化物活性酵素を使用して約５〜１００℃で本発明を実施することも可能である。
　　　　【００２６】
　本発明の一態様においては、酵素および過酸化物の室温の溶液を調製し、この溶液をコンタクトレンズと共にコンタクトレンズ加熱消毒装置に入れ、この装置を、通常の熱サイクルで作動させる。しかし、この場合も温度は限定されない。
　成分が長時間経過後に放出されるように、または錠剤および散剤の調製時およびその後の貯蔵中に成分１と成分２が相互作用するのを防ぐように、成分を個々に調製することも考えられる。例えば、錠剤の製造工程中またはその後の貯蔵中の相互作用を防ぐか、または軽減するように、過酸化物および酵素を個々に調製することが適当である。
　　　【００２７】
　更に、洗浄、消毒および最終的に残留過酸化物を除去する全段階の一部として、溶液または散剤は残留過酸化物を無毒化する剤を含有し得る。過酸化物の酸素および水への変換を触媒する酵素をこのような処方に導入して、眼に戻すレンズに存在すると考えられる残留過酸化物を除去することができる。例えば、カタラーゼ（過酸化物の分解を触媒する有機酵素）を錠剤および散剤に、遅延放出形として導入することができる。更に、過酸化物の酸素および水への変換を触媒する重金属遷移元素のような金属を、散剤または錠剤処方に、好ましくは遅延放出形として導入し、所定の時間後に溶液中に残る過酸化物レベルを無毒性レベルに低下させる方法を提供することができる。過酸化物の分解のための遷移金属触媒をコンタクトレンズ消毒溶液中に使用することは、米国特許第３，９１２，４５１号に開示されており、ここに引用する。
　　　【００２８】
　　【実施例】
　以下の実施例は、本発明を説明するものであって、本発明を制限するものではない。
　
実施例１
　
比較洗浄効果
　ハイドロカーブ（Ｈｙｄｒｏｃｕｒｖｅ、商標）ＩＩ５５％含水レンズ（バーンズ−ハインド社（Ｂａｒｎｅｓ−Ｈｉｎｄ　Ｉｎｃ．）製）２０個を、リン酸緩衝生理食塩液に入れ、次いで０．１重量％溶液とするのに充分な量のリゾチームを加えることによって熱変性リゾチームで被覆した。リゾチームは、卵白から得られたものであった。個々のバイアルに、リゾチーム溶液５ｍｌおよび完全に水和したレンズ１個を入れた。次いで、バイアルを約３０分間約９５℃に加熱した。次いでレンズを取り出し、冷却後、蒸留水ですすぎ、リゾチームの付着を観察した。　沈積物の分類：まず、通常の生理食塩液でレンズを湿潤させ、親指と他の指でこすり、次いでプラスチック製ピンセットで端をつかみ、再び生理食塩液ですすいだ。レンズの前表面（凸表面）を、顕微鏡で１００倍で観察した。この条件で検出されたフィルムまたは沈積物を、フィルムに覆われた表面積の割合に従って分類した。
　前記の処理を行った後には、すべてのレンズの前表面の１００％がタンパク質沈積物の薄いフィルムで覆われていることがわかった。
　　　【００２９】
　これらのレンズを、次いで、過酸化物および以下の酵素の処方を主成分とする溶液で処理した：
　
パパイン錠
　成　　分　　　　　　　　　　　　割合（Ｗ／Ｗ）
　ホウ酸ナトリウム・二水和物　　　　１３．０３％
　炭酸ナトリウム　　　　　　　　　　２１．２５％
　ポリエチレングリコール３３５０　　　２．７４％
　パパイン　　　　　　　　　　　　　　６．２８％
　酒石酸　　　　　　　　　　　　　　１３．７１％
　Ｌ−システイン・ＨＣｌ　　　　　　　６．８６％
　ＥＤＴＡ　　　　　　　　　　　　　　５．０４％
　塩化ナトリウム　　　　　　　　　　３０．６４％
　
ズブチリシンＡ錠
　成　　分　　　　　　　　　　　　割合（Ｗ／Ｗ）
　ソルビトール　　　　　　　　　　　２９．９９％
　Ｎ−アセチルシステイン　　　　　　２２．４９％
　炭酸ナトリウム　　　　　　　　　　３８．９８％
　ポリエチレングリコール３３５０　　　３．００％
　ズブチリシンＡ　　　　　　　　　　　０．３０％
　酒石酸　　　　　　　　　　　　　　　５．２４％
　ズブチリシンＡは、ノボ・インダストリーズ（Ｎｏｖｏ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）社製のものであった。
　　　【００３０】
　レンズを５個ずつ４群に分けた。第１の群は、３％過酸化水素で処理した。第２の群は、市販の生理食塩液製品（アラーガン社（Ａｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃ．）製レンズリンス（Ｌｅｎｓｒｉｎｓ、商標））１０ｍｌ中のズブチリシンＡ含有処方（１３３．４ｍｇ、０．４ｍｇズブチリシンＡ）で処理した。第３の群は、ズブチリシンＡ錠を３％過酸化水素１０ｍｌに溶解したもので処理し、第４の群は、パパイン酵素錠（１４６．８ｍｇ）を含有する３％過酸化水素（１０ｍｌ）で処理した。
　レンズを３．５時間浸漬した。次いで、各群のレンズを適当に処理して試験溶液を除去し、顕微鏡で観察してタンパク質除去の程度を測定した。洗浄表面％とは、１００倍で観察した場合にタンパク質フィルムで覆われていない表面の割合を示す。
　　　【００３１】
　結果を以下に示す。
　　　
　　３％過酸化水素＊　
　　　
レンズ
洗浄表面％
　　　Ａ１　　　　　　　０
　　　Ａ２　　　　　　　１
　　　Ａ３　　　　　　　０
　　　Ａ４　　　　　　　０
　　　Ａ５　　　　　　　１
　　　
ズブチリシンＡ／生理食塩液
　　　
レンズ
洗浄表面％
　　　Ｂ１　　　　　　３０
　　　Ｂ２　　　　　　２０
　　　Ｂ３　　　　　　２５
　　　Ｂ４　　　　　　１５
　　　Ｂ５　　　　　　３０
　　　
ズブチリシンＡ／３％Ｈ２Ｏ２＊
　　　
レンズ
洗浄表面％
　　　Ｃ１　　　　　　５０
　　　Ｃ２　　　　　　６０
　　　Ｃ３　　　　　　７０
　　　Ｃ４　　　　　　６０
　　　Ｃ５　　　　　　５０
　　　
パパイン／３％Ｈ２Ｏ２＊
　　　
レンズ
洗浄表面％
　　　Ｅ１　　　　　　　０
　　　Ｅ２　　　　　　　０
　　　Ｅ３　　　　　　　０
　　　Ｅ４　　　　　　　０
　　　Ｅ５　　　　　　　０
　＊アラーガン社製　オキシセプト（Ｏｘｙｓｅｐｔ、商標）、３％過酸化水素溶液
　　　【００３２】
　過酸化水素およびパパイン／過酸化水素には実質的に洗浄活性は無いが、３％過酸化水素と組み合わせたズブチリシンは、コンタクトレンズ表面積の５０〜７０％を洗浄した。さらに、過酸化物無しにズブチリシンＡ単独では、レンズ表面は１５〜３０％しか洗浄されないが、これと比較して、３％過酸化物と組み合わせたズブチリシンＡは、レンズ表面の５０〜７０％を洗浄した。ズブチリシンＡ／過酸化物は、ズブチリシン単独よりも洗浄力が約２倍高い。
　　　【００３３】
　
実施例２
　
過酸化物／酵素活性
　ハイドロカーブ（Ｈｙｄｒｏｃｕｒｖｅ、商標）ＩＩレンズ（バーンズ−ハインド社）１５個を、実施例１に記載のように、リゾチームに接触させ、確実にＩＶ型タンパク質を付着させた。
　５個のレンズを各々以下の溶液に８時間浸漬した：３％過酸化水素（アラーガン社製オキシセプト１）；生理食塩液（アルコン（Ａｌｃｏｎ）社製ボイル−’ｎ−ソーク（Ｂｏｉｌ−’ｎ−Ｓｏａｋ、商標）、通常の生理食塩液）１０ｍｌに溶解した市販のパンクレアチン含有酵素錠（オプティ−ザイム（Ｏｐｔｉ−Ｚｙｍｅ、商標）錠）；および３％過酸化水素（オキシセプト１）１０ｍｌ中のパンクレアチン酵素（オプティ−ザイム）２錠の溶液。　８時間浸漬後、実施例１に記載のように、レンズを処理して、残留浸漬溶液を除去し、タンパク質除去の割合を測定した。
　　　【００３４】
　結果を以下に示す：
　　　
　　３％過酸化水素　　
　　　
レンズ
洗浄表面％
　　　Ａ１　　　　　　　０
　　　Ａ２　　　　　　　０
　　　Ａ３　　　　　　　０
　　　Ａ４　　　　　　　０
　　　Ａ５　　　　　　　０
　　　
パンクレアチン／過酸化物溶液
　　　
レンズ
洗浄表面％
　　　Ｂ１　　　　　　９０
　　　Ｂ２　　　　　　８５
　　　Ｂ３　　　　　　８５
　　　Ｂ４　　　　　　９０
　　　Ｂ５　　　　　　８０
　　　
パンクレアチン／通常の生理食塩水
　　　
レンズ
洗浄表面％
　　　Ｃ１　　　　　　　０
　　　Ｃ２　　　　　　　０
　　　Ｃ３　　　　　　　０
　　　Ｃ４　　　　　　　０
　　　Ｃ５　　　　　　　０
　８時間の浸漬の内に、パンクレアチン含有酵素錠および３％過酸化物の組み合わせば洗浄に実質的に有効であったが、過酸化物単独および酵素単独では顕著なタンパク質除去効果は無かった。
　　　【００３５】
　
実施例３
　
過酸化物濃度の影響
　実施例１に記載のように、ハイドロカーブレンズをリゾチームで被覆した。ここで使用したズブチリシン錠処方は、Ｎ−アセチルシステインを含まないことを除いては実施例１と同じ物であった。過酸化水素濃度は、０．５ｗ／ｖ％から始めて５段階にした。対照は、塩化ナトリウムで浸透圧値を０．５％過酸化物／酵素溶液にほぼ匹敵するように調節した、過酸化物を含まない錠剤の溶液であった。各溶液のｐＨを、塩酸で約９．０〜９．０３に調節した。各溶液１０ｍｌを用い、５個のレンズを室温で３時間処理した。レンズ表面から除去されたタンパク質の量（割合）を表１に示す。
　　　【００３６】
　【表１】
　　　【００３７】
　
実施例４
　
３％過酸化水素／ズブチリシンの抗菌性の評価
　ズブチリシンＡ含有錠剤処方（実施例１に記載）を３％過酸化水素（アラーガン社製レンサン（Ｌｅｎｓａｎ）Ａ）に溶解した場合の、過酸化水素の抗菌性に及ぼす効果を、コンタクトレンズ溶液の消毒効果の試験のための米国ＦＤＡガイドラインに要求される微生物に対して試験した。標準的な培養方法、採取および微生物的定量分析方法を用いた。用いた微生物は、霊菌、ＡＴＣＣ１４７５６または１４０４１；黄色ブドウ球菌、ＡＴＣＣ６５３８；緑膿菌、ＡＴＣＣ９０２７または１５４４２；大腸菌、ＡＴＣＣ８７３９、カンジダ・アルビカンス、ＡＴＣＣ１０２３１およびアスペルギルス・ニガー、ＡＴＣＣ１６４０４。実施例１に記載のズブチリシンＡ処方の１３３．４ｍｇ錠剤（ズブチリシン０．４ｍｇ／錠）を使用した。
　この試験の結果を表２に示す。同様に同じ手順で行った第２の試験の結果も表２に示す。
　　　【００３８】
　【表２】
※Ｄ値は、１ｍｌ当たり５×１０５の生菌数が、９０％
または１対数オーダー減少するのに要した時間である。
　　　【００３９】
　対照（生理食塩液中の酵素錠）は、２４時間の間に抗菌性を示さなかった。
　表３には、表２のデータの平均殺菌速度を示す。
　　　【００４０】
　【表３】
　　　【００４１】
　Ｄ値が低いほど抗菌性が高いので、これらの各試験の結果により、３％過酸化水素およびズブチリシンＡを共に用いると、２種の成分を個々に使用するよりも実質的に消毒に効果的であることがわかる。
　　　【００４２】
　
実施例５
　
殺菌効果試験
　３種の微生物（第１はＵＳＰＸＸＩの微生物、第２はＦＤＡによってコンタクトレンズ消毒製品の抗菌性試験に要する微生物例、および第３は通例人体または環境中に天然株として存在し、コンタクトレンズに沈積し得るか、またはコンタクトレンズ溶液内に侵入し得る微生物から選択された「アイソレート（ｉｓｏｌａｔｅｓ）」微生物）を用いて、３％過酸化水素（アラーガン社製オキシセプトＩ）の外挿Ｄ値の、ズブチリシンＡの有無による差を試験した。試験した微生物を表に挙げる。
　微生物は、標準的な微生物技術によって調製した。各サンプルについて２回ずつ試験した。アッセイの第１段階として、３％過酸化水素１０ｍｌをピペットでねじキャップ付き試験管に入れた。選択した試験管に、ズブチリシンＡ（組成は実施例１に記載）を１錠加えた。ズブチリシン含有試験管を約２分間撹拌してズブチリシン錠を溶解した。直ちに微生物を試験管に加えた。所定の時間間隔毎に、生菌数を測定した（ＣＦＵ／ｍｌ）。
　　　【００４３】
　好気性プレートカウント法を用い、殺菌速度曲線から外挿によってＤ値を計算した。この方法は、実質的に次のように行った：
　所定の接触時間後直ぐに試験溶液のサンプルを採り、二分し、２本の試験管中の中和系に分散させた。中和系を連続１０倍希釈して所望の回収レベルを達成するように調製した。回収レベルを低くするために、少量のサンプルを中和寒天プレートに直接移した。他の３つの連続の希釈試験管に対しても、同量（体積）のサンプルを中和寒天プレートに置いた。
　全プレートを３５〜３７℃で２〜７日間（または要すればそれ以上の期間）インキュベートした。次いで、コロニー数を記録し、以下のようにＤ値を計算した：各時間について、全プレートのコロニー数を平均した。平均したデータを、生菌数を縦軸、接触時間を横軸として片対数グラフ用紙にプロットした。原点（接種物レベル）を、１ｍｌ当たりの菌数が初めて１０を下回った点と直線で結んだ。この線をゼロに外挿し、その傾きをＤ値とした。この方法は、「端点分析」とも呼ばれる。
　　　【００４４】
　【表４】
　
　　　【００４５】
　
実施例６
　
酵素の有無による過酸化物活性の比較
　種々の３％過酸化水素溶液の殺菌速度は、ズブチリシン酵素の添加によって高められる。表５の数値は、特定の過酸化物溶液＋実施例１のズブチリシン錠のＤ値が、特定の過酸化物溶液単独のＤ値よりも低下している割合を示す。米国特許第３，９１２，４５１号に記載のように、ＡＯ−Ｓｅｐｔシステムには、重金属触媒（プラチナ被覆ディスク）を使用して、バイアル中で過酸化物を分解した。
　　　【００４６】
　【表５】
　　
　　　【００４７】
　これらの数値は、各３％過酸化物溶液は、ズブチリシンＡが存在すればより有効な消毒剤であることを示す。効果は、ＡＯ−Ｓｅｐｔシステムで特に顕著である。
　　　【００４８】
　
実施例７
　
過酸化物濃度の酵素活性に及ぼす影響
　実施例１に記載のズブチリシンＡ錠およびトリプシンの酵素活性を、モディファイド・アゾコール（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ａｚｏｃｏｌｌ）法（シグマ・カタログ（Ｓｉｇｍａ　Ｃａｔａｌｏｇ））を用い、種々の過酸化水素濃度で測定した。ベイカー・ケミカル社（Ｂａｋｅｒ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）製３０％過酸化水素を使用した。ｐＨ約８．４の０．０２Ｍホウ酸緩衝液で適当に希釈した。アゾコール基質およびトリプシンは、シグマ社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）製のものを使用した。
　まず、過酸化物を緩衝液で適当な濃度に希釈し、希釈された過酸化物溶液各１ｍｌにアゾコール基質５０ｍｇを加えた。ズブチリシン酵素錠１錠を、アゾコール５０ｍｇが添加された緩衝液１０ｍｌに溶解した。次いで、この溶解１ｍｌを、過酸化物／アゾコール溶液各１．０ｍｌに加えた。酵素緩衝液１．０ｍｌを、過酸化水素を含まないホウ酸塩緩衝液１．０ｍｌと合わせ、これを対照とした（過酸化水素０％）。混合後、室温で２分間反応を行い、次いで１０％トリクロロ酢酸２ｍｌで反応を停止し、酵素を沈澱させた。５２０ｎｍで測色した。ズブチリシンによる結果を表６に、トリプシンによる結果を表７に示す。
　　　【００４９】
　【表６】
　
　　【００５０】
　【表７】
＊トリプシン粉末１０ｍｇをＨ２Ｏ２溶液に加えた。
　　　【００５１】
　表６により、アゾコールアッセイにおいて、広範な過酸化物濃度でズブチリシンＡは活性であることがわかる。３０％過酸化物における活性は、８％濃度の場合とほぼ同じである。ズブチリシンＡの酵素活性は、２〜６％の過酸化物濃度においてあまり変化がないようである。表７は、トリプシンが過酸化水素内で活性であることを示す。