(57)【要約】  本発明は、例えば、正常なptc経路をアゴナイズする、smoothened又はヘッジホッグ活性をアンタゴナイズするために、異常な成長状態に対して十分な量の、式（Ｉ）のヘッジホッグアンタゴニストと細胞を接触させることによって、機能獲得ヘッジホッグ、機能喪失ptc又は機能獲得smoothenedに起因する異常な成長状態を抑制するための、適当な方法及び試薬を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）で表わされる化合物：
2008519044.tif 000082
式（I）
但し、原子価と安定性が許容する時、X及びZはそれぞれ独立に、-N(R7)-、-O-、-S-、-(R7)N-N(R7)-、-ON(R7)-、又は直接結合を表わし、Yは-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=NR7)-、SO2、あるいはSOを表わし、AはO、S、又はNR7を表わす。Gはシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又は、それが付いている環に融合するヘテロアリール環を表わし、
Arは、置換又は非置換のアリール又はヘテロアリール環を表わし；
R1は2置換のピリジン環；
R2は、それが付いている環の0-4個の置換基を表わし；
R7はそれぞれ独立に、H、低級アルキル、J-シクロアルキル、
J-ヘテロサイクリル、J-アリール、J-ヘテロアリールを表わし；
R8はそれぞれ独立に、H、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はヘテロアリールを表わし；
Jはそれぞれ独立に、CK2、NK、O及びSから選択される0-8個の単位を有する鎖を表わす。但し、上記Kはそれぞれ独立に、H又は低級アルキルを表わす。
【請求項２】
Z及びXの少なくとも一方は直接結合ではない、請求項1に記載された化合物。
【請求項３】
X-Y-Zが、アミド、尿素又はスルフォンアミドを含む、請求項1に記載された化合物。
【請求項４】
Xが-N(R8)-、-O-、-S-から選択され、好ましくはNHである、請求項1に記載された化合物。
【請求項５】
R1がメチル又はトリフルオロメチル基で置換されている、請求項1に記載された化合物。
【請求項６】
R1が6-(トリフルオロメチル)-2-メチルピリジン-3-イルである、請求項1に記載された化合物。
【請求項７】
X、及び、Aからなる環がArのメタの関係になるように配置されている、請求項1に記載された化合物。
【請求項８】
R2が、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基、チオカルボニル、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフォニル、スルフォキシド、サルフェート、スルフォネート、スルファモイル、スルフォンアミド、フォスフォリル、フォスフォネート、フォスフィネート、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH、J-NH2、これらの保護された形、から選択される1〜4個の置換基、又は、単環若しくは多環構造に2以上現れる場合には、一緒になって4〜8員環のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールを形成してもよい、請求項1に記載された化合物。
【請求項９】
R2が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ(例えばR8-C(=O)NH-)、置換又は非置換のシクロアルキル基、ヘテロ環、アリール又はGに融合するヘテロアリール、及び置換又は非置換の低級アルキルから選択される1〜4個の置換基である、請求項8に記載された化合物。
【請求項１０】
ヘッジホッグシグナル伝達を阻害するに十分な量の、請求項1に記載された化合物を細胞に接触させることを含む、細胞中のヘッジホッグ経路の活性を阻害する方法。
【請求項１１】
前記細胞が、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ獲得又は機能獲得smoothenedの表現型を有する、請求項10に記載された方法。
【請求項１２】
前記化合物が、1μM以下のED50で、シグナル伝達が介在する機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedを阻害する、請求項10に記載された方法。
【請求項１３】
前記化合物が、1nM以下のED50で、シグナル伝達が介在する機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedを阻害する、請求項10に記載された方法。
【請求項１４】
前記細胞がin vitroでヘッジホッグアンタゴニストと接触する、請求項10に記載された方法。
【請求項１５】
前記細胞がin vivoでヘッジホッグアンタゴニストと接触する、請求項10に記載された方法。
【請求項１６】
前記化合物が治療又は美容上応用の一部として施される、請求項10に記載された方法。
【請求項１７】
前記治療又は美容上応用が、神経組織の調整、骨及び軟骨形成並びに修復、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓及びその他の原腸由来の臓器、造血機能の調整、及び、皮膚並びに髪の毛の成長の調整から選択される、請求項16に記載された方法。
【請求項１８】
無精子症の薬学的賦形剤及び請求項1に記載された化合物を含む医薬品製剤。
【請求項１９】
基底細胞癌の進行を阻止するに十分な量の、請求項18に記載された医薬品製剤を患者に投与することを含む、基底細胞癌の治療又は予防方法。
【請求項２０】
一般式（I）によって表される化合物；
2008519044.tif 000083
式（I）
但し、原子価及び安定性が許容する時、
X及びZはそれぞれ独立に、-N(R7)-、-O-、-S-、-(R7)N-N(R7)-、-ON(R7)-又は直接結合を表わし、
Yは-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=NR7)-、SO2、又はSOを表わし、
AはO、S、又はNR7を表わし、
Gはシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又は、それが付いている環に融合するヘテロアリール環を表わし、
Arは、置換又は非置換のアリール又はヘテロアリール環を表わし；
R1は、少なくとも1個の置換基が、ニトロ、シアノ、低級アルキル、ハロゲン化低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アミド、ヒドロキシル、アルコキシ、アシロキシ、カルボニル、スルフヒドリル又はスルフォニルから選択される、1以上の置換基を有するピリジン環を表わし、
R2は、それがつく環上の、0-4個の置換基を表わし、
R7は、それぞれ独立に、H、低級アルキル、J-シクロアルキル、J-ヘテロサイクリル、J-アリール、J-ヘテロアリールを表わし、
R8は、それぞれ独立に、H、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、ヘテロアリールを表わし、
Jは、それぞれ独立に、CK2、NK、0及びSから選択された0〜8の単位を有する鎖を表わし、ここでKはそれぞれ独立に、H又は低級アルキルを表わす。
【請求項２１】
Z及びXの少なくとも一方は直接結合ではない、請求項20に記載された化合物。
【請求項２２】
X-Y-Zがアミド、尿素又はスルフォンアミドを含む請求項20に記載された化合物。
【請求項２３】
Xが-N(R8)-、-O-、-S-から選択され、好ましくはNHである、請求項20に記載された化合物。
【請求項２４】
R1がメチル又はトリフルオロメチル基で置換されている、請求項20に記載された化合物。
【請求項２５】
R1が、6-(トリフルオロメチル)-2-メチルピチジン-3-イルである、請求項20に記載された化合物。
【請求項２６】
X、及び、Aからなる環がAr上のメタ位の関係になるように配置されている、請求項20に記載された化合物。
【請求項２７】
R2が、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基、チオカルボニル、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフォニル、スルフォキシド、サルフェート、スルフォネート、スルファモイル、スルフォンアミド、フォスフォリル、フォスフォネート、フォスフィネート、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH、J-NH2、これらの保護された形、から選択される1〜4個の置換基、又は、単環若しくは多環構造に2以上現れる場合には、一緒になって4〜8員環のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールを形成してもよい、請求項20に記載された化合物。
【請求項２８】
R2が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ(例えばR8-C(=O)NH-)、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロ環、アリール又はGに融合するヘテロアリール、及び置換又は非置換の低級アルキルから選択される1〜4個の置換基である、請求項27に記載された化合物。
【請求項２９】
ヘッジホッグシグナル伝達を阻害するに十分な量の、請求項20に記載された化合物を細胞に接触させることを含む、細胞中のヘッジホッグ経路の活性を阻害する方法。
【請求項３０】
前記細胞が、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得のsmoothenedの表現型を有する、請求項29に記載された方法。
【請求項３１】
前記化合物が、1μM以下のED50で、シグナル伝達が介在する機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedを阻害する、請求項29に記載された方法。
【請求項３２】
前記化合物が、1nM以下のED50で、シグナル伝達が介在する機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedを阻害する、請求項29に記載された方法。
【請求項３３】
前記細胞がin vitroでヘッジホッグアンタゴニストと接触する、請求項29に記載された方法。
【請求項３４】
前記細胞がin vivoでヘッジホッグアンタゴニストと接触する、請求項29に記載された方法。
【請求項３５】
前記化合物が治療又は美容上応用の一部として施される、請求項29に記載された方法。
【請求項３６】
前記治療又は美容上応用が、神経組織の調整、骨及び軟骨形成並びに修復、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓及びその他の原腸由来の臓器、造血機能の調整、及び、皮膚並びに髪の毛の成長の調整から選択される、請求項35に記載された方法。
【請求項３７】
無精子症の薬学的賦形剤及び請求項20に記載された化合物を含む医薬品製剤。
【請求項３８】
基底細胞癌の進行を阻止するに十分な量の、請求項37に記載された医薬品製剤を患者に投与することを含む、基底細胞癌の治療又は予防方法。
【請求項３９】
一般式（I）によって表される化合物；
2008519044.tif 000084
式（I）
但し、原子価及び安定性が許容する時、
X及びZはそれぞれ独立に、-N(R7)-、-O-、-S-、-(R7)N-N(R7)-、-ON(R7)-又は直接結合を表わし、
Yは-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=NR7)-、SO2、又はSOを表わし、
AはO、S、又はNR7を表わし、
Gはシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又は、それが付いている環に融合するヘテロアリール環を表わし、
Arは、置換又は非置換のアリール又はヘテロアリール環を表わし；
R1は、窒素原子に対してメタ位となる如くJに結合した置換ピリジン環を表わし、
R2は、それがつく環上の、0-4個の置換基を表わし、
R7は、それぞれ独立に、H、低級アルキル、J-シクロアルキル、J-ヘテロサイクリル、J-アリール、J-ヘテロアリールを表わし、
R8は、それぞれ独立に、H、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はヘテロアリールを表わし、
Jは、それぞれ独立に、CK2、NK、O及びSから選択された0〜8の単位を有する鎖を表わし、ここでKはそれぞれ独立に、H又は低級アルキルを表わす。
【請求項４０】
Z及びXの少なくとも一方は直接結合ではない、請求項39に記載された化合物。
【請求項４１】
X-Y-Zがアミド、尿素又はスルフォンアミドを含む請求項39に記載された化合物。
【請求項４２】
Xが-N(R8)-、-O-、-S-から選択され、好ましくはNHである、請求項39に記載された化合物。
【請求項４３】
R1がメチル又はトリフルオロメチル基で置換されている、請求項39に記載された化合物。
【請求項４４】
R1が、6-(トリフルオロメチル)-2-メチルピリジン-3-イルである、請求項39に記載された化合物。
【請求項４５】
X、及び、Aからなる環がAr上のメタ位の関係になるように配置されている、請求項39に記載された化合物。
【請求項４６】
R2が、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基、チオカルボニル、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフォニル、スルフォキシド、サルフェート、スルフォネート、スルファモイル、スルフォンアミド、フォスフォリル、フォスフォネート、フォスフィネート、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH、J-NH2、これらの保護された形、から選択される1〜4個の置換基、又は、単環若しくは多環構造に2以上現れる場合には、一緒になって4〜8員環のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールを形成してもよい、請求項39に記載された化合物。
【請求項４７】
R2が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ(例えばR8-C(=O)NH-)、置換又は非置換のシクロアルキル基、ヘテロ環、アリール又はGに融合するヘテロアリール、及び置換又は非置換の低級アルキルから選択される1〜4個の置換基である、請求項46に記載された化合物。
【請求項４８】
ヘッジホッグシグナル伝達を阻害するに十分な量の、請求項1に記載された化合物を細胞に接触させることを含む、細胞中のヘッジホッグ経路の活性を阻害する方法。
【請求項４９】
前記細胞が、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedの表現型を有する、請求項48に記載された方法。
【請求項５０】
前記化合物が、1μM以下のED50で、シグナル伝達が介在する機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedを阻害する、請求項48に記載された方法。
【請求項５１】
前記化合物が、1nM以下のED50で、シグナル伝達が介在する機能ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedを阻害する、請求項48に記載された方法。
【請求項５２】
前記細胞がin vitroでヘッジホッグアンタゴニストと接触する、請求項48に記載された方法。
【請求項５３】
前記細胞がin vivoでヘッジホッグアンタゴニストと接触する、請求項48に記載された方法。
【請求項５４】
前記化合物が治療又は美容上応用の一部として施される、請求項48に記載された方法。
【請求項５５】
前記治療又は美容上応用が、神経組織の調整、骨及び軟骨形成並びに修復、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓及びその他の原腸由来の臓器、造血機能の調整、及び、皮膚並びに髪の毛の成長の調整から選択される、請求項54に記載された方法。
【請求項５６】
無精子症の薬学的賦形剤及び請求項39に記載された化合物を含む医薬品製剤。
【請求項５７】
基底細胞癌の進行を阻止するに十分な量の、請求項56に記載された医薬品製剤を患者に投与することを含む、基底細胞癌の治療又は予防方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願では、2004年11月3日に米国に出願された出願番号60/624536の利益を主張し、当該出願の内容は引用することによりここに組み込まれているものとする。
【０００２】
本発明は、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の活性化を阻害するための、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の伝達物質、調合物、及び、それらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヘッジホッグ・タンパク質（Hh）は、最初、キイロショウジョウバエにおいて、胚のパターン形成に関与する体節-極性遺伝子として同定された（非特許文献1）。ショウジョウバエのヘッジホッグの3種類のオルソログ（ソニック、デザート及びインディアン）は、後に魚、鳥、及び哺乳類を含む全ての脊椎動物に存在していることが確認された。デザートヘッジホッグ（DHh）は、マウス胎児発生、及び成体の齧歯動物及びヒトなどの主に精巣に発現しており、インディアンヘッジホッグ（IHh）は、発生段階における骨発生及び成体における骨形成に関与し、また、ソニックヘッジホッグ（SHh）は、発生過程の脊椎動物胎児の脊索及び原始神経管床板に高濃度に発現する。トランスジェニック動物におけるSHhの異所発現と同様に、in vitroにおける移植片検定において、SHhが神経管のパターン形成において重要な役割を果たすことが示された（非特許文献2〜7）。Hhは、また手足（非特許文献8及び9）、体節（非特許文献10及び11）、肺（非特許文献12）及び皮膚（非特許文献13）の発生に重要な役割を果たす。同様に、IHh及びDHhは、骨、内臓及び胚芽細胞発生に関与する（非特許文献14〜17）。
【非特許文献１】Nusslein-Volhard他、Roux.Arch.Dev.Biol.193：267-282（1984）
【非特許文献２】Echelard他、上記；Ericson他、Cell 81：747-56（1995）
【非特許文献３】Marti他、Nature 375：322-5（1995）
【非特許文献４】Krauss他、Cell 75，1432-44（1993）
【非特許文献５】Riddle他、Cell 75：1401-16（1993）
【非特許文献６】Roelink他、Cell 81：445-55（1995）
【非特許文献７】Hynes他、Neuron 19：15-26（1997）
【非特許文献８】Krauss他、Cell 75：1431-44（1993）
【非特許文献９】Laufer他、Cell 79，993-1003（1994）
【非特許文献１０】Fan及びTassier-Lavigne，Cell 79，1175-86（1994）
【非特許文献１１】Johnson他、Cell 79：1165-73（1994）
【非特許文献１２】Bellusci他、Develop.124：53-63（1997）
【非特許文献１３】Oro他、Science 276：817-21（1997）
【非特許文献１４】Apelqvist他、Curr.Biol.7：801-4（1997）
【非特許文献１５】Bellusci他、Dev.Suppl.124：53-63（1997）
【非特許文献１６】Bitgood他、Curr.Biol.6：298-304（1996）
【非特許文献１７】Roberts他、Development 121：3163-74（1995）
【０００４】
ヒトSHhは、45kDaの前駆体タンパク質として合成され、この前駆体が自己触媒切断反応により、正常のヘッジホッグ・シグナル伝達活性を担う20kDaのN-末端断片を作り出し、また、N-末端断片がコレステロールの一部と結合する、自己処理活性を担う25kDaのC-末端断片を作り出す（非特許文献18〜20）。このN-末端断片は、全長の前駆体配列における24番目から197番目のアミノ酸残基から成り、C-末端でコレステロールを介して膜に結合している（非特許文献21及び22）。コレステロールとの結合はヘッジホッグ・シグナルの組織局在性にかかわる。
【非特許文献１８】Lee，J.J.，他（1994）Science 266，1528-1536
【非特許文献１９】Bumcrot，D.A.，他（1995）Mol.Cell.Biol.15，2294-2303
【非特許文献２０】Porter，J.A.，他（1995）Nature 374，363-366
【非特許文献２１】Porter，J.A.，他（1996）Science 274，255-258
【非特許文献２２】Porter，J.A.他（1995）Cell 86，21-34
【０００５】
細胞表面において、Hhシグナルは、12個の膜貫通領域を有するタンパク質Patched（Ptc）（非特許文献23及び24）及びG-タンパク質連結類似受容体Smoothened（Smo）（非特許文献25及び26）により受け継がれていると考えられている。Ptc及びSmoは複数成分受容体複合体の部分であるという受容体モデルが、遺伝学的及び生化学的証拠により支持される（非特許文献27〜29）。HhがPtcに結合すると、PtcがSmoに対して通常有する阻害効果が軽減され、細胞膜を通してSmoがHhシグナルを伝達することが可能となる。しかしながら、PtcがSmo活性を制御する正確な機構は未だ明らかではない。
【非特許文献２３】Hooper及びScott，Cell 59：751-65（1989）
【非特許文献２４】Nakano他、Nature341：508-13（1989）
【非特許文献２５】Alcedo他、Cell 86：221-232（1996）
【非特許文献２６】van den Heuvel及びIngham、Nature 382；547-551（1996）
【非特許文献２７】Chen及びStrulh，Cell 87：553-63（1996）
【非特許文献２８】Marigo他、Nature 384：176-9（1996）
【非特許文献２９】Stone他、Nature 384：129-34（1996）
【０００６】
Smoから開始したシグナルカスケードは、標的遺伝子の転写を制御するために核に移動する複数のGli転写因子の活性化をもたらす。Gliは、適切な細胞分化及び組織形成のために、Hh経路活性の厳格なコントロールが要求されているネガティブフィードバックループにおける、Ptc及びHip1のようなHh経路阻害剤の転写に影響を与えることが知られている。Hhシグナル伝達経路の無制御な活性化は、血管新生と関係し、同様に、特に脳、皮膚及び筋肉の悪性化に関係する。これに対する説明としては、Hh経路は、G1-S移行にかかわるサイクリンDのような、細胞周期進行に関連する遺伝子の活性化により、成体における細胞増殖を制御するとの報告がある。また、SHhは、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤であるp21が介在する、細胞周期停止を阻害する。さらに、Hhシグナル伝達は、血管新生に関連するPDGF（PDGFα）及びVEGF経路の構成要素を誘導するのと同様に、増殖に関連するEGFR経路（EGF，Her2）における構成要素を誘導することによって癌を引き起こすと考えられている。Ptc遺伝子の突然変異による機能喪失が、多発性基底細胞癌（BCCs）により特徴づけられる遺伝子病である、基底細胞母斑症候群（BCNS）の患者で確認されている。機能障害性Ptc遺伝子突然変異は、また、散発性の基底細胞癌腫の多くと関係している（非特許文献30〜35）。Ptc機能の喪失が、基底細胞癌における無制御のSmoシグナル伝達の原因と考えられている。同様に、Smo活性化突然変異が、散発性BCC腫瘍において確認されており（非特許文献36）、SHhの受容体複合体におけるシグナル伝達・サブユニットとしてのSmoの役割を際立たせる。
【非特許文献３０】Chidambaram他，Cancer Research 56：4599-601（1996）
【非特許文献３１】Gailani他，Nature Genet.14：78-81（1996）
【非特許文献３２】Hahn他，Cell85：841-51（1996）
【非特許文献３３】Johnson他，Science272：1668-71（1996）
【非特許文献３４】Unden他，Cancer Res. 56：4562-5
【非特許文献３５】Wicking他，Am.J.Hum.Genet.60：21-6（1997）
【非特許文献３６】Xie他、Nature 391：90-2（1998）
【０００７】
ヘッジホッグ・シグナル伝達の様々な阻害物質が研究されており、天然アルカロイドであるシクロパミンは、細胞周期をG0-G1で停止させること、及びSCLCのアポトーシスを誘導することが報告されている。シクロパミンは、Smoの7重ラセン束に結合することにより阻害すると信じられている。フォルスコリンは、Gli転写因子を不活性に保つタンパク質キナーゼA（PKA）を活性化することによって、Smoの下流のHh経路を阻害すると報告されている。これらの化合物及び他の化合物についての進歩にも拘わらず、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路における強力な阻害物質の要求が続いている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、例えば、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedのような表現形質に由来する異常な増殖状態を阻害するというような、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の活性化を阻害するために、異常増殖状態を元に戻す又は調整するに十分な量、例えば小分子の試薬と細胞を接触させて、正常ptc活性をアゴナイズする、正常ヘッジホッグ活性をアンタゴナイズするか、又はsmoothened活性をアンタゴナイズすることからなる有効な方法及び試薬を作り上げる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、一態様として、一般式（I）で表される化合物を提供する：
2008519044.tif 000002
式（I）
ここで、原子価と安定性が許容する限りにおいて、
X及びZは、独立に、-N（R7）-，-O-，-S-，-(R7)N-N(R7)-，-ON(R7)-又は直接結合を表わし；
Yは、-C(=O)-，-C(=S)-，-C(=NR7)-，SO2，又はSOを表わし；
Aは、O，S，又はNR7を表わし；
Gは、それが結合している環に融合する、シクロアルキル環、複素環、アリール環又はヘテロアリール環を表わす。
【００１０】
Arは、置換した、又は無置換のアリール又はヘテロアリール環を表わし；
R1は、二置換性のピリジン環を表わし；
R2は、0から4個のG環の置換体を表わし；
R7は、それぞれ独立に、H原子，低級アルキル、J-シクロアルキル、J-複素環、J-アリール、J-ヘテロアリールを表わし；
R8は、それぞれ独立に、H原子，低級アルキル、シクロアルキル、複素環、アリール、又はヘテロアリールを表わし；また
Jは、それぞれ独立に、CK2，NK，O及びSから選択された0から8単位を有する鎖を表わし、ここでKはそれぞれ独立に、H又は低級アルキル基を表わす。
【００１１】
ある態様においては、Z及びXの少なくとも1つは直接結合ではない。
ある態様においては、X-Y-Zはアミド、尿素、又はスルホンアミドを含む。
ある態様においては、Xは、-N（R8）-，-O-，-S-，から選択され、また好ましくはNHを表わす。
ある態様においては、R1は、メチル基又は、例えば6-（トリフルオロメチル）-2-メチルピリジン-3-イルのようなトリフルオロメチル基で置換される。
ある態様においては、X、及びAからなる環は、メタの関係でAr上に配置する。
【００１２】
ある態様においては、R2は、ハロゲン原子、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基、チオカルボニル、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルホキシド、硫酸エステル、スルホン酸エステル、スルファモイル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH、J-NH2から選択された1から4個の置換体、及びこれらの保護型を表わす。環状又は多環構造において、R2が1個以上ある場合は、何れか2個のR2は、互いに連携して、4から8員環のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール環を形成する。
ある態様においては、R2は、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ、（例えば、R8-C(=O)NH-）、置換した、又は無置換のシクロアルキル、複素環、アリール、又はGと融合したヘテロアリールから選択した1から4個の置換体、及び置換した又は無置換の低級アルキルを表わす。
【００１３】
他の態様においては、本発明は、ヘッジホッグ・シグナル伝達を阻害するに十分な量の上記化合物と、細胞を接触させることから構成される、細胞中のヘッジホッグ経路の活性化を阻害する方法を提供する。
この様なある態様においては、細胞は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの表現形質を持つ。
この様なある態様においては、この化合物は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedが媒介するシグナル伝達を1μM又はそれ以下、又は1nM又はそれ以下のED50で阻害する。
ある態様においては、細胞はヘッジホッグアンタゴニストとin vitro又はin vivoで接触する。
ある態様においては、化合物は、神経組織、骨及び軟骨形成及び修復の調整、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓、原腸から生ずる他の器官の調整、造血機能の調整、及び、皮膚及び毛髪成長の調整のような、治療上又は美容上の応用の一部として投与される。
【００１４】
他の態様においては、本発明は殺菌した薬剤の賦形剤及び上記の化合物からなる医薬品製剤を提供する。
他の態様においては、本発明は、上記の化合物又は医薬品製剤を、基底細胞癌の進行を阻害するに十分量を、患者に投与することからなる基底細胞癌の治療又は予防のための方法を提供する。
【００１５】
他の態様においては、本発明は一般式（I）で表される化合物を提供する：
2008519044.tif 000003
式（I）
ここで、原子価と安定性が許容する限りにおいて、
X及びZは、独立に、-N(R7)-，-O-，-S-，-(R7)N-N(R7)-，-ON(R7)-又は直接結合を表わし；
Yは、-C(=O)-，-C(=S)-，-C(=NR7)-，SO2，又はSOを表わし；
Aは、O，S，又はNR7を表わし；
Gは、それが結合している環に融合する、シクロアルキル環、複素環、アリール環又はヘテロアリール環を表わす。
【００１６】
Arは、置換した、又は無置換のアリール又はヘテロアリール環を表わし；
R1は、1又は2以上の置換基を有し、少なくとも1個の置換体はニトロ、シアノ、低級アルキル、ハロゲン化低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アミド、ヒドロキシ、アルコキシ、アシロキシ、カルボニル、スルフヒドリル又はスルホニルから選択された、ピリジン環を表わし；
R2は、0から4個のG環の置換体を表わし；
R7は、それぞれ独立に、H原子，低級アルキル、J-シクロアルキル、J-複素環、J-アリール、J-ヘテロアリールを表わし；
R8は、それぞれ独立に、H，低級アルキル、シクロアルキル、複素環、アリール、又はヘテロアリールを表わし；また
Jは、それぞれ独立に、CK2，NK，O及びSから選択された0から8単位を有する鎖を表わし、ここでKはそれぞれ独立に、H原子又は低級アルキルを表わす。
【００１７】
ある態様においては、Z及びXの少なくとも1つは直接結合ではない。
ある態様においては、X-Y-Zはアミド、尿素、又はスルホンアミドを含む。
ある態様においては、Xは、-N(R8)-，-O-，-S-，から選択され、また好ましくはNHを表わす。
ある態様においては、R1は、メチル又はトリフルオロメチル基で置換され、例えばR1は6-（トリフルオロメチル）-2-メチルピリジン-3-イルである。
ある態様においては、X、及びAからなる環は、メタの関係でAr上に配置する。
【００１８】
ある態様においては、R2は、ハロゲン原子、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基、チオカルボニル、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルホキシド、硫酸エステル、スルホン酸エステル、スルファモイル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、J-R8，J-OH，J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8，J-SH，J-NH2から選択された1から4個の置換体、これらの保護型を表わす。環状又は多環構造において、R2が1個以上ある場合は、何れか2個のR2は、互いに連携して、4から8員のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール環を形成する。
ある態様においては、R2は、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ、（例えば、R8-C(=O)NH-）、置換した、又は無置換のシクロアルキル、複素環、アリール、又はGと融合したヘテロアリールから選択した1から4個の置換体、及び置換した又は無置換の低級アルキルを表わす。
【００１９】
他の態様においては、本発明は、ヘッジホッグ・シグナル伝達を阻害するに十分な量の上記化合物と、細胞を接触させることから構成される、細胞中のヘッジホッグ経路の活性化を阻害する方法を提供する。
この様なある態様においては、細胞は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの表現形質を持つ。
この様なある態様においては、この化合物は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedが媒介するシグナル伝達を1μM又はそれ以下、又は1nM又はそれ以下のED50で阻害する。
ある態様においては、細胞はヘッジホッグアンタゴニストとin vitro又はin vivoで接触する。
ある態様においては、化合物は、神経組織、骨及び軟骨形成及び修復の調整、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓、原腸から生ずる他の器官の調整、造血機能の調整、及び、皮膚及び毛髪成長の調整のような、治療上又は美容上の応用の一部として投与される。
【００２０】
他の態様においては、本発明は殺菌した薬剤の賦形剤及び上記の化合物からなる医薬品製剤を提供する。
他の態様においては、本発明は、上記の化合物又は医薬品製剤を、基底細胞癌の進行を阻害するに十分量を、患者に投与することからなる、基底細胞癌の治療又は予防のための方法を提供する。
【００２１】
他の態様においては、本発明は一般式（I）で表される化合物を提供する：
2008519044.tif 000004
式（I）
ここで、原子価と安定性が許容する限りにおいて、
X及びZは、独立に、-N(R7)-，-O-，-S-，-(R7)N-N(R7)-，-ON（R7）-又は直接結合を表わし；
Yは、-C(=O)-，-C(=S)-，-C(=NR7)-，SO2，又はSOを表わし；
Aは、O，S，又はNR7を表わし；
Gは、それが結合している環に融合する、シクロアルキル環、複素環、アリール環又はヘテロアリール環を表わす。
【００２２】
Arは、置換した、又は非置換のアリール又はヘテロアリール環を表わし；
R1は、窒素原子に対しメタの位置でJに結合する置換したピリジン環を表わし；
R2は、0から4個のG環の置換体を表わし；
R7は、それぞれ独立に、H原子，低級アルキル、J-シクロアルキル、J-複素環、J-アリール、J-ヘテロアリールを表わし；
R8は、それぞれ独立に、H原子，低級アルキル、シクロアルキル、複素環、アリール、又はヘテロアリールを表わし；また
Jは、それぞれ独立に、CK2，NK，O及びSから選択された0から8単位を有する鎖を表わし、ここでKはそれぞれ独立に、H原子又は低級アルキルを表わす。
【００２３】
ある態様においては、Z及びXの少なくとも1つは直接結合ではない。
ある態様においては、X-Y-Zはアミド、尿素、又はスルホンアミドを含む。
ある態様においては、Xは、-N(R8)-，-O-，-S-，から選択され、また好ましくはNHを表わす。
ある態様においては、R1は、メチル又はトリフルオロメチル基で置換される。
ある態様においては、R1は6-（トリフルオロメチル）-2-メチルピリジン-3-イル基である。
ある態様においては、X、及びAからなる環は、メタの関係でAr上に配置する。
【００２４】
ある態様においては、R2は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基、チオカルボニル、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルホキシド、硫酸エステル、スルホン酸エステル、スルファモイル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、J-R8，J-OH，J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8，J-SH，J-NH2から選択された1から4個の置換体、及びこれらの保護型を表わす。環状又は多環構造において、R2が1個以上ある場合は、何れか2個のR2は、互いに連携して、4から8員のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール環を形成する。
ある態様においては、R2は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ、（例えば、R8-C(=O)NH-）、置換した、又は非置換のシクロアルキル、複素環、アリール、又はGと融合したヘテロアリールから選択した1から4個の置換体、及び置換した又は非置換の低級アルキルを表わす。
【００２５】
他の態様においては、本発明は、ヘッジホッグ・シグナル伝達を阻害するに十分な量の上記化合物と、細胞を接触させることから構成される、細胞中のヘッジホッグ経路の活性化を阻害する方法を提供する。
この様なある態様においては、細胞は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの表現形質を持つ。
この様なある態様においては、この化合物は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedが媒介するシグナル伝達を1μM又はそれ以下、又は1nM又はそれ以下のED50で阻害する。
ある態様においては、細胞はヘッジホッグアンタゴニストとin vitro又はin vivoで接触する。
ある態様においては、化合物は、神経組織、骨及び軟骨形成及び修復の調整、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓、原腸から生ずる他の器官の調整、造血機能の調整、及び、皮膚及び毛髪成長の調整のような、治療上又は美容上の応用の一部として投与される。
【００２６】
他の態様において、本発明は殺菌した薬剤の賦形剤及び上記の化合物からなる医薬品製剤を提供する。
他の態様において、本発明は、上記の化合物又は医薬品製剤を、基底細胞癌の進行を阻害するに十分量を、患者に投与することからなる、基底細胞癌の治療又は予防のための方法を提供する。
【発明の効果】
【００２７】
本発明によれば、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedのような表現形質に由来する異常な増殖状態を阻害する、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の活性化を阻害するために、異常増殖状態を元に戻す又は調整するに十分な量、例えば小分子の試薬と細胞を接触させて、正常ptc活性をアゴナイズするか、正常ヘッジホッグ活性をアンタゴナイズするか、又はsmoothened活性をアンタゴナイズすることからなる有効な方法及び試薬を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
I.概要
本発明は、ヘッジホッグ、patched（ptc）、gli及び/又はsmoothenedで調整されるシグナル伝達経路が、少なくとも部分的に、小分子により阻害されるという発見に関連する。特別な理論と結びつけることは意図しないが、受容体の活性化は、これらの試薬が作用するその作用機構であると考えられる。
例えば、これらの試薬による機能喪失patched（ptclof）細胞の増殖阻害能は、これらの試薬のヘッジホッグ、patched又はsmoothenedとの相互作用能によるか、又は少なくともこれらのタンパク質のヘッジホッグ、ptc及び/又はsmoothenedシグナル伝達経路の活性化能を妨害することによると思われる。
【００２９】
従って、ヘッジホッグ、patched又はsmoothenedシグナル伝達活性の性質を妨害するこれらの小分子は、同様に、正常細胞、又は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの表現形質を持つ細胞の増殖（又は他の生物学的結果）を阻害することができると、特に考えることができる。従って、ある態様においては、これらの化合物は、例えばヘッジホッグ経路を活性化する遺伝的突然変異を有しない、正常細胞におけるヘッジホッグ活性を阻害するために有用であると考えられる。好ましい態様においては、本発明の阻害剤は、分子量が2500amu以下、より好ましくは1500amu以下、更に好ましくは、750amu以下の有機分子であり、これらは、ヘッジホッグ・タンパク質の生物活性の少なくとも幾つかを、より好ましくは標的細胞内において、特異的に阻害する。
【００３０】
この様に、本発明の方法には、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの表現形質を持つ細胞、組織及び器官ばかりではなく、正常細胞、組織及び器官を含め、広い範囲の細胞、組織及び器官の修復の調整及び/又は機能遂行において、smoothened又はシグナル経路の下流成分の活性化を阻害するように、ヘッジホッグ・シグナル伝達のptc阻害を引き起こす、小分子の使用が含まれる。
例えば、本発明の方法には、治療上及び美容上の応用があり、神経組織、骨及び軟骨形成及び修復の調整、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓、原腸から生ずる他の器官の調整、造血機能の調整、及び、皮膚及び毛髪成長の調整等のような広がりがある。更に、本発明の方法は、培養（in vitro）で提供される細胞、又は動物全体（in vivo）の細胞に対して適用される。例えば、PCT刊行物WO95/18856及びWO96/17924（これらの明細書については本参考文献に組み込まれている）を参照。
【００３１】
好ましい態様においては、本発明の方法は、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの表現形質をもつ上皮細胞を処理することができる。例えば、本発明の方法は、基底細胞癌又は他のヘッジホッグ経路関連の疾患の治療又は予防に使用することができる。
ある態様においては、本発明のアンタゴニストは、smoothenedに結合することによりヘッジホッグ経路の活性化を阻害する。ある態様においては、本発明のアンタゴニストは、patchedに結合することによってヘッジホッグ経路の活性化を阻害する。
【００３２】
他の好ましい態様においては、本発明の方法は、悪性髄芽細胞腫及び他の原発性CNS悪性神経外胚葉性腫瘍に対する、治療投薬計画の一部として使用される。
【００３３】
他の側面として、本発明は、活性のある構成要素として、ここで述べたように、in vivoでの増殖、又は機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの他の生物学的結果を阻害するに十分な量のヘッジホッグアンタゴニスト、ptcアゴニスト又はsmoothenedアンタゴニストからなる、医薬品製剤を提供する。
本発明のヘッジホッグアンタゴニスト、ptcアゴニスト又はsmoothenedアンタゴニストを用いた処理は、ヒト及び動物両者の被検体に有効である。本発明が適用できる動物被検体は、飼育動物から畜産動物にまで広げられ、ペット又は商業目的にまでもたらされる。例として、犬、猫、牛、馬、羊、豚、及び山羊がある。
【００３４】
II.定義
便宜のために、明細書、実施例、及び添付した請求の範囲で使われる特定の用語をここに集める。
遺伝子の「異常な修飾又は突然変異」とは、例えば、遺伝子の大規模な染色体組み換え、及び/又は遺伝子の異常なメチル化ばかりではなく、欠失、置換又は遺伝子へのヌクレオチドの付加のような、遺伝子障害を表わす。同様に、遺伝子の誤発現は、遺伝子から転写されたmRNAの非野生型スプライシングばかりでなく、同様な条件下での正常細胞の転写レベルと比較した時の、異常なレベルの遺伝子転写を表わす。
【００３５】
「基底細胞癌」は、結節潰瘍状、表在性、色素沈着性、限局性、繊維上皮腫及び母斑症候群の様に、色々な臨床的及び組織学的外観を持っている。基底細胞癌は、ヒトで見出された最も普通の皮膚腫瘍である。非黒色腫皮膚癌の新しい症例の大部分は、このカテゴリーに含まれる。
「火傷」は、皮膚の広い表面領域が熱及び/又は化学物質により個体から取り除かれたり、失われた症例を表わす。
【００３６】
「癌腫」とは、周囲の組織に浸潤し、転移を引き起こしやすい上皮細胞から構成される悪性新生物を表わす。典型的癌腫としては、皮膚の上皮性腫瘍であり、ほとんど転移せず、局所的な浸潤と崩壊を起こしうる「基底細胞癌」、扁平上皮に由来する癌腫であり、立方型細胞からなる「扁平上皮癌」、癌及び肉腫組織からなる悪性腫瘍を含む「癌肉腫」、乳腺、唾腺及び気道の粘膜に生ずる、小上皮細胞の巣又は帯で分離又は囲まれた、ヒアリン又は粘液性間質の帯又は円柱で特徴づけられた癌腫乳腺である「腺・嚢癌腫」、表皮と同じように分化する癌細胞、即ち、有棘細胞を形成し角化する「表皮様癌腫」、鼻の後部の空間に並ぶ上皮細胞に生ずる悪性腫瘍である「鼻咽喉癌」、様々な配列の管状細胞からなる腎臓実質の癌腫である「腎細胞癌」を含む。他の癌腫様の上皮性増殖としては、上皮由来の良性腫瘍であり、原因物質として乳頭腫ウィルスを持つ「乳頭腫」や、神経溝閉鎖の際、外胚葉性成分を取り込むことで作られる脳腫瘍又は髄膜腫瘍に関する「表皮様腫」である。
【００３７】
「真皮」又は「皮膚」とは、血管結合組織の密集したベッドから成り、神経及び感覚の末端組織を含む、表皮までの深さの皮膚層を表わす。毛嚢、及び皮脂腺及び汗腺は、真皮に深く埋め込まれた表皮の構造体である。
「歯組織」は、歯茎組織のような、上皮組織に似た口内の組織を表わす。本発明の方法は歯周病の治療に有用である。
【００３８】
「真皮皮膚潰瘍」は、通常炎症を伴い、組織の表面的な喪失によって引き起こされた皮膚の損傷を表わす。本発明の方法により治療可能な真皮皮膚潰瘍としては、褥瘡性潰瘍、糖尿病性潰瘍、静脈鬱滞及び動脈潰瘍がある。褥瘡性外傷は、長期間皮膚のある範囲に圧力が加わって生ずる、慢性的潰瘍を表わす。この種の外傷はしばしば褥瘡又は床ずれと呼ばれる。静脈鬱滞は、障害のある静脈からの体液又は血液のよどみに起因する。動脈潰瘍は、血流が乏しい動脈の周囲部分における壊死した皮膚を表わす。
【００３９】
「ED50」と言う用語は、最大応答又は効果の50％をもたらす薬剤量を意味する。
本発明の治療法に関係して、例えば、ヘッジホッグアンタゴニストの「有効量」とは、薬剤調合におけるアンタゴニストの量を表わし、その量は、好ましい投薬計画の一部として適用された時、治療される疾患、又は美容目的のために臨床的に許容される標準に従い、例えば、細胞増殖速度の変化及び/又は細胞分化の状態及び/又は細胞の生存率の変化をもたらす。
【００４０】
「上皮」、「上皮性」及び「上皮組織」とは、内部及び外部の（皮膚、粘膜及び漿液の）体表面を覆う細胞を表わし、分泌腺及びこれらに由来する他の構造物、例えば、角膜、食道、表皮性及び毛嚢上皮細胞などがある。他の典型的な上皮組織としては以下の組織がある：嗅上皮、鼻腔の嗅覚領域を内張する多列上皮であり、嗅覚のための受容体を有する；腺上皮、分泌細胞からなる上皮を表わす；扁平上皮、平らなプレート状の細胞からなる上皮である。上皮という用語はまた、収縮及び拡張による大きな機械的変化を受ける内張りの中空器官、例えば、層状の扁平上皮と円柱上皮の間を移行する組織に特徴的に見られる移行上皮を表わす。
【００４１】
「上皮形成」とは、裸にされた表面を覆って増殖する上皮組織による治癒を表わす。
「表皮性腺」とは、通常の代謝的必要性とは無関係に物質を分泌及び排出することに特化した、表皮と結合した細胞の集合体を表わす。例えば、「脂腺」は、油性物質及び皮脂を分泌する真皮のポロクリン腺である。「汗腺」は、真皮又は皮下組織に存在し、体表に管路広げ汗を分泌する腺を表わす。
【００４２】
「表皮」とは、胚の外胚葉に由来し、厚さは0.07-1.4mmで、皮膚の最も外側で、非血管層を表わす。手のひら及び足の裏の表面で、表皮は、内側より外側に向かって、5層よりなる：基底層、垂直に並んだ柱状細胞から構成される；有棘細胞層又は棘層、短い突起又は棘を持つ平らな多面体細胞からなる；顆粒層、平らな顆粒細胞からなる；淡明層、核が不鮮明又は欠如した、数層の透明感のある、透き通った細胞からなる；
角質層、平らな、角質化した核のない細胞からなる。一般的体表面の真皮では、淡明層は通常存在しない。
【００４３】
「切除創傷」には、皮膚上皮の裂き傷、擦り傷、切り傷、刺し傷又は裂傷があり、皮層、皮下脂肪層を超えることもある。切除創傷は外科的処置に依ることもあり、又は事故による皮膚への貫入ということもある。
細胞の「増殖状態」とは、細胞の増殖速度及び/又は細胞の分化の状態を表わす。「変化した増殖状態」とは、異常な増殖速度で特徴づけられた増殖状態を表わし、例えば、正常細胞に比べて増殖速度が増加又は減少した状態の細胞である。
【００４４】
「毛」という用語は、糸状の構造であり、ケラチンから構成され、真皮に陥入した突起から発生し、哺乳動物のみに作られ、哺乳動物に特徴的な、特に特化した表皮構造を表わす。また、「毛」は、上記の毛の集合体を表わしても良い。「毛嚢」は、表皮の管状陥入の一種を指し、毛を包み込み、そこから毛が成長する。「毛嚢上皮細胞」とは、毛嚢内の毛乳頭を取り囲んだ上皮細胞を表わし、例えば、幹細胞、毛根外鞘細胞、マトリックス細胞、及び毛根内鞘細胞である。これらの細胞は、正常の非悪性細胞、又はトランスフォーム/不死化細胞である。
【００４５】
「ヘッジホッグアンタゴニスト」は、標的遺伝子の転写を抑制する様な、patchedの生物活性を上昇又は回復させる試薬を表わす。好ましいヘッジホッグアンタゴニストは、機能喪失ptc及び/又は機能獲得smoothenedを克服するために用いられ、後者はsmoothenedアンタゴニストとも表される。ここでは、「ヘッジホッグアンタゴニスト」は、ヘッジホッグタンパク質の正常な機能を直接阻害することによって働くすべての試薬ばかりではなく、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路を阻害するすべての試薬を表わし、このようにしてptcの機能を回復させる。
【００４６】
「機能獲得ヘッジホッグ」は、ptc遺伝子、ヘッジホッグ遺伝子、又はsmoothened遺伝子の異常な修飾又は突然変異、又は上記遺伝子の発現レベルの減少（又は喪失）を表わし、その結果、例えばヘッジホッグ経路の異常な活性化の様に、ヘッジホッグタンパク質と細胞が接触した場合に似た表現形質を示す。機能獲得は、例えば、Gli1，Gli2，及びGli3の様な、Ci遺伝子の発現レベルを制御するptc遺伝子産物の活性喪失を含む。「機能獲得ヘッジホッグ」は、ここではまた、ヘッジホッグそれ自体の修飾又は突然変異を含み、しかしながら、それに限定されず、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の何処かの変化により生ずる、すべての上記同様の表現形質（例えば、過剰増殖の阻害のような）を表わす。例えば、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の活性化による、異常に高い増殖速度をもつ腫瘍細胞は、細胞内でヘッジホッグに突然変異が無くとも、「機能獲得ヘッジホッグ」表現形質を持つであろう。
【００４７】
ここで用いるように、「不死細胞」は化学物質及び/又は組み換え手段により改変され、培養中において無限に細胞分裂することによって増殖しうる細胞を表わす。
「内部上皮組織」とは、皮膚の表皮層に類似した特徴を持つ、体内部の組織を表わす。例えば、腸の内層である。本発明の方法は、例えば、手術に起因する傷のような、ある種の内部的創傷の回復促進にも有用である。
【００４８】
「角化症」という用語は、表皮の角質層の過形成に特徴づけられる、増殖的皮膚疾患である。典型的な角化疾患としては、毛包性角化症、手掌・足底角化症、咽頭角化症、毛孔性角化症、及び光線性角化症が挙げられる。
「LD50」という用語は、被検体の50％致死の薬剤量を表わす。
「爪」という用語は、手又は足指の遠位末端の背表面にある角化した皮膚板を表わす。
【００４９】
「機能喪失patched」という用語は、ptc遺伝子の異常な修飾又は突然変異、又は該遺伝子の発現レベルの低下を表わし、これにより、例えば、ヘッジホッグ経路の異常活性化のように、ヘッジホッグ・タンパク質と細胞が接触すると同様の表現形質をもたらす。機能喪失としては、Gli1，Gli2及びGli3の様な、Ci遺伝子の発現レベルを制御するptc遺伝子産物の活性喪失も含まれる。ここで用いる「機能喪失ptc」は、ptcそれ自体の修飾又は突然変異を含み、しかしながら、それに限定されず、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の何処かの変化により生ずる、すべての上記同様の表現形質（例えば、過剰増殖の阻害のような）を表わす。例えば、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の活性化による、異常に高い増殖速度を持つ腫瘍細胞は、ptcが細胞内で突然変異していなくとも、「機能喪失ptc」表現形質を有するであろう。
本発明の方法で治療される「患者」又は「被検体」は、ヒト又はヒト以外の動物を意味する。
【００５０】
よく知られた「予防する」という用語は、局所的な再発（例えば、痛み）、癌の様な病気、症候群複合体（心疾患又は他の病気の容態）のような、病態との関係で用いられる場合には、本技術分野で良く理解されており、被検体が病態の始まる前に調合物を受けとらない場合と比較して被検体の病気症状の発生頻度が減少、重度が減少、又は開始の遅延を起こす調合物を、病態開始前に投与することが含まれる。従って、癌の予防としては、例えば、予防薬処理された患者群が、非処理対照群と比べ、検出可能な癌の増殖数を減らすこと、及び/又は処理患者群が、非処理対照群と比べ、検出可能な癌増殖の出現を、例えば、統計的に及び/又は臨床的に有意な量だけ、遅らすことである。感染予防には、例えば、非処理対照群と比較し、処理群における感染との診断数が減少することであり、及び/又は処理患者群が、非処理対照群と比べ、感染の兆候の開始を遅らせることである。苦痛の予防としては、例えば、非処理対照群と比べ、処理患者群が経験する苦痛感覚の頻度の減少、重度の減少、又は代わりとして、遅らすということが挙げられる。
【００５１】
「医薬的に許容された塩類」という言い回しは、酸及び塩基が加えられた塩類を含む。「医薬的に許容された酸添加の塩類」は、遊離塩基の生物的有効性及び特徴を維持し、また生物学的に、又は生物学的でなくとも好ましい塩類を表わし、これらは塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等の無機酸で作られ；及び、脂肪酸、環状脂肪酸、芳香族酸、芳香脂肪族酸、複素環酸、カルボン酸、及びギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロネイン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エムボニン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸の様なスルホン酸クラスの有機酸から選択した有機酸で作られる。
【００５２】
「医薬的に許容された塩基添加による塩類」とは、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などの無機塩基由来の塩が挙げられる。特に好ましい塩は、アンモニア、カリウム、ナトリウム、カルシウム、及びマグネシウム塩である。医薬的に許容された有機無毒性塩基由来の塩類としては、1級、2級、3級アミンの塩、置換されたアミン類があり、置換されたアミン類としては、天然にある置換されたアミン類、サイクリックアミン類、塩基性イオン交換樹脂があり、塩基性イオン交換樹脂としては、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、2-ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロへキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ビテイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルコサミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、N-エチルピペリジン、ポリアミン樹脂等がある。特に好ましい有機無毒性塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロへキシルアミン、コリン及びカフェインである。
【００５３】
「プロドラッグ」とは、生理的状態下で、本発明に記載された治療上活性な試薬に変換される化合物を含むことを意図している。プロドラッグ作成の一般的方法としては、例えば、生理的状態で加水分解されて、所望する分子に変わるような選択部分が挙げられる。他の態様においては、プロドラッグは宿主動物の酵素活性により変換される。
ここで用いられている、「増殖する」及び「増殖」とは、分裂を行う細胞である。
【００５４】
本出願において、「増殖的皮膚疾患」とは、皮下組織の不要又は異常な増殖により特徴づけられた皮膚のすべての病気/疾患を表わす。上記の状態は、典型的に、表皮細胞増殖又は不完全細胞分化として特徴付けられ、また例えば、X-連鎖型の魚鱗癬、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、表皮剥離性角質増殖症、及び脂漏性皮膚炎がある。例えば、表皮異形性は表皮の誤った発生の一例である。他の例としては、「表皮剥離」があり、これは自然発生又は外傷の位置でブレブ又は大水疱の形成を伴う表皮の剥がれた状態を表わす。
【００５５】
ここで用いたように、「乾癬」は、皮膚の制御機構を変えた過形成状態の皮膚疾患を表わす。特に、病変は、真皮増殖、皮膚の炎症応答、及びリンフォカイン及び炎症因子のような制御分子発現の原発性及び派生的変化を伴って生ずる。乾癬状の皮膚は、表皮細胞の代謝回転の増加、肥厚した表皮の増加、異常なケラチン化の増加により形態的に特徴づけられ、炎症細胞は真皮層に浸潤し、多核白血球は表皮層に浸潤し、基底細胞のサイクルを早める。更に、過角化及び不完全角化細胞が存在する。
【００５６】
ここで用いる「それらの塩と溶媒和したもの」という用語は、本発明の化合物が、1種類の塩及び溶媒したもの又はこれらの混合物として存在するということを意味する。例えば、本発明の化合物は、ある一種の塩あるいは溶媒和したものとしては十分に純粋で、そうでなければ2種又は3種以上の塩又は溶媒和したものの混合物である。
「皮膚」という用語は、身体の外側の防御的覆いを表わし、真皮と表皮からなり、また、毛嚢構造ばかりでなく、汗腺及び脂腺も含むと理解されている。本出願を通して、形容詞「皮膚の」が用いられ、それが用いられる文脈に応じて、一般的に皮膚に起因することを表わすと理解すべきである。
【００５７】
「機能獲得smoothened」という用語は、smo遺伝子の異常な修飾又は突然変異、又は遺伝子発現レベルの増加を表わし、これにより細胞にヘッジホッグ・タンパク質との接触に類似した、例えば、ヘッジホッグ経路の異常な活性化などの、表現形質をもたらす。特別な理論に縛られることは意図しないが、恐らくptcは直接細胞内に入るシグナルではなく、ヘッジホッグシグナル伝達におけるptcの下流に位置する別の膜結合タンパク質である、smoothenedと相互作用するということが知られている（Marigo他(1996), Nature 384:177-179）。
smo遺伝子はショウジョウバエの各体節の正しいパターン化のために要求される体節―極性遺伝子である（Alcedo他(1996), Cell 86:221-232）。smoのヒトホモログが確認されている。例えば、Stone他(1996), Nature 384:129-134及びGenbank受託番号U84401を参照。Smoothened遺伝子は、ヘテロ三量体G-タンパク質結合型受容体の特徴を持つ、内在性膜タンパク質、言い換えれば7-膜貫通型領域をコード化する。このタンパク質は、ウィングレス経路に属する、ショウジョウバエのFrizzled（Fz）タンパク質に相同性がある。smoはもともとHhシグナルの受容体をコード化すると考えられていた。しかしながら、この示唆はptcがHh受容体であるという証拠が得られるに従い、しばしば反証された。Smoを発現する細胞はHhと結合できず、smoはHhとは直接に相互作用しないと示唆された（Nusse(1996), Nature 384:119-120）。むしろ、ソニック・ヘッジホッグ（SHH）の受容体PTCHへの結合は、PTCHによる正常の、7スパン膜貫通タンパク質、smoothened（SMO）阻害を妨げると考えられている。
【００５８】
最近、散発的基底細胞癌腫、Xie他（1998），Nature 391：90-2，及び中枢神経系の原発性神経外胚葉性腫瘍、Reifenberger他(1998), Cancer Res 58:1798-803,に生じた活性化したsmoothened突然変異が報告された。
【００５９】
「治療指数」という用語は、LD50/ED50として定義される薬剤の治療指数を表わす。
ここで用いるように、「トランスフォーム（形質転換）細胞」は、無制限の増殖状態に自然に変換した細胞を表わし、これらの細胞は、培養系において無限の細胞分裂を行い、増殖する能力を獲得した。トランスフォーム細胞は、増殖調整の喪失に関して、新生物、未分化、及び/又は過形成と言う用語で特徴づけられる。
【００６０】
ここで用いる「治療」という用語には、名づけられた状態の予防、又はかつて確立した状態の回復又は除去を含める。
「アシル」という用語は、化学式-C(O)-Rで表される置換体を含むカルボニル基を意味し、ここでRはアルキル、炭素環、複素環、炭素環に置換したアルキル又は複素環に置換したアルキルであり；アルキル、炭素環及び複素環はここで定義したものである。アシル基としては、アルカノイル（例えば、アセチル）、アロイル（例えば、ベンゾイル）及びヘテロアロイルが挙げられる。
【００６１】
「アシルアミノ」という用語は周知であり、次の一般的化学式で示される部分を表わす：
2008519044.tif 000005
ここで、R9は既に定義され、またR'11は水素原子、アルキル、アルケニル、又は-(CH2)m-R8を表わし、ここでm及びR8は既に定義されている。
【００６２】
「アシロキシ」は周知であり、次の一般的化学式で示される部分を表わす：
2008519044.tif 000006
ここで、R'11は水素原子、アルキル、アルケニル、又は-(CH2)m-R8を表わし、ここでm及びR8は既に定義されている。
【００６３】
ここにおいて、「脂肪族基」という用語は、直鎖、分枝鎖、又は環状脂肪族炭化水素基を表わし、またアルキル基、アルケニル基、及びアルキニル基の様な、飽和及び不飽和脂肪族属基も含む。
「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、それぞれ、少なくとも1個の二重結合又は三重結合を含み、既に述べたアルキルに対する鎖長及び可能な置換に類似する不飽和脂肪族基を表わす。
【００６４】
ここで用いている「アルコキシル」又は「アルコキシ」は、上記定義のアルキル基にオキシラジカルが付加したものである。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、3級ブトキシ等がある。「エーテル」は2個の炭化水素が酸素に共有結合したものである。従って、アルキルをエーテルにするアルキル基の置換体は、アルコキシルであるかアルコキシルに類似する、例えば、-O-アルキル、-O-アルケニル、-O-アルキニル、-O-(CH2)m-R8の一つで代表され、ここでm及びR8は既に定義されている。
【００６５】
「アルキル」という用語は、飽和脂肪族の基を表わし、直鎖型アルキル基、分枝型アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換したシクロアルキル基、及びシクロアルキル置換したアルキル基がある。好ましい態様では、直鎖又は分枝型アルキルは、その骨格に30又は29個以下（直鎖型ではC1-C30，分枝型ではC3-C30）、またより好ましくは20又は19個以下の炭素原子を持つ。同様に、好ましいシクロアルキルは、その環構造に3-10個の、より好ましくは、5，6又は7個の炭素原子を有する。
【００６６】
更に、本明細書、実施例、請求の範囲で用いる「アルキル」（又は、「低級アルキル」）という用語は、「非置換型アルキル」及び「置換型アルキル」を含み、後者は、アルキル基部分で、炭化水素骨格の1以上の炭素原子上の水素を、置換で置き換えたものを表わす。この様な置換基としては、例えば、ハロゲン原子、ヒドロキシ、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、又はアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、酢酸チオエステル又はギ酸チオエステル）、アルコキシル、ホスホリル、リン酸エステル、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、硫酸エステル、スルホン酸エステル、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、複素環、アラルキル、又は芳香族又はヘテロ芳香族分子がある。当業者は炭化水素鎖で置換された部分は、もし適切なら、それ自体置換され得ることを理解する。例えば、置換されたアルキルの複数の置換体は、複数のエーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボン酸塩、及びエステルを含む）、-CF3，-CN等ばかりでなく、複数の置換型又は非置換型のアミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステルを含む）、スルホニル（硫酸エステル基、スルホンアミド基、スルファモイル、及びスルホン酸エステルを含む）、及び複数のシリル基がある。典型的な、置換されたアルキル類を以下に述べる。シクロアルキル類は、更に複数のアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノアルキル、カルボニル置換されたアルキル、-CF3，-CN等により置換される。
【００６７】
炭素数を特に指定しなければ、ここで用いる「低級アルキル」は、既に定義されたように、ここではアルキル基を意味するが、その骨格に1から10個、より好ましくは1から6個の炭素原子を有する。同様に、「低級アルケニル」及び「低級アルキニル」は、同様の鎖長を有する。本出願を通して、好ましいアルキル基は、低級アルキルである。好ましい態様においては、ここで示されるアルキルとしての置換体は低級アルキルである。
【００６８】
「アルキルチオ基」という用語は、既に定義されたアルキル基を表わすが、これにイオウ遊離基が付加したものである。好ましい態様においては、「アルキルチオ基」部分は、-S-アルキル、-S-アルケニル、-S-アルキニル、及び-S-(CH2)m-R8の中の1つであり、ここでm及びR8は既に定義されている。代表的アルキルチオ基としては、メチルチオ、エチルチオ等がある。
【００６９】
「アミン」及び「アミノ」は周知であり、置換型及び非置換型アミン類を表わす、例えば、次の化学式で表される部分である：
2008519044.tif 000007
ここで、R9，R10及びR'10はそれぞれ独立に、水素原子、アルキル基、アルケニル基、-(CH2)m-R8-又はR9及びR10にはN原子が付加し、4から8個の原子で環構造を持つ複素環を完成する；R8はアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、複素環又は多環を表わし；mは0又は1から8までの間の整数である。好ましい態様においては、R9及びR10のうち一方はカルボニルであってもよく、例えば、R9，R10及び窒素原子は一緒になってイミドを形成することはない。このようなある種の態様においては、R9もR10もカルボニルを介してNに結合することはない。例えば、アミン基はアミド又はイミドではなく、アミンは好ましくは塩基性であり、例えば、結合した酸のpKaは7以上である。更に好ましい態様において、各R9及びR10（及び適宜R'10）は独立に、1個の水素原子、アルキル、アルケニル、又は-(CH2)m-R8を表わす。従って、「アルキルアミン」という用語は、ここでは、既に定義されたアミン基に、置換又は非置換アルキルが付加したアミンを意味する。すなわち、R9及びR10の少なくとも1つはアルキルである。
【００７０】
ここで用いる「アミノ保護基」という用語は、反応が化合物の他の官能基で行われる間、アミノ基を封鎖又は保護するために一般的に使われる置換基の誘導体を表わす。この様な保護基の例としては、望みのアミン基を再生するために除去することのできる、多くのN-ヘテロ原子誘導体の他に、カルバミン酸塩、アミド、アルキル、アリール基及びイミンがある。好ましいアミノ基の保護基としては、Boc、Fmoc及びCbzがある。このような保護基の他の例は、T.W.Greene及びP.G.M.Wuts,「有機合成における保護基」,第2版,John Wiley & Sons,Inc.,New York,NY,1991,第7章、E.Haslam,「有機化学における保護基」,J.G.W.McOmie,編,Plenum Press,New York,NY,1973,第5章、及び、T.W.Greene,「有機合成における保護基」,John Wiley and Sons,New York,NY,1981にある。「保護されたアミノ基」という用語は、上記のアミノ保護基の一つで置換されたアミノ基である。
【００７１】
「アミド基」という用語は、アミノ置換されたカルボニルとして周知であり、次の一般式で表わすことができる部分を持つ:
2008519044.tif 000008
ここで、R9，R10は既に定義されている。アミドの好ましい態様には、不安定なイミドは含まれない。
【００７２】
「アミジン基」という用語は、-C(NH)-NHRで表され、ここで、RはH、アルキル又はアラルキルである。好ましいアミジンとしては、-C(NH)-NH2がある。ここで用いる「アラルキル」という用語は、アリール（例えば、芳香族又はヘテロ芳香族基）で置換されたアルキルを表わす。
【００７３】
ここで用いる「アリール基」という用語には、0から4個のヘテロ原子を持つ、5-、6-、及び7-員単環芳香族基を表わし、例えば、ベンゼン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、及びピリミジン等がある。環構造にヘテロ原子を有するアリール基は、「アリールヘテロ環」又は「ヘテロ芳香族」とも呼ばれる。芳香族環は1以上の環上の位置で、上述した置換基で置換され、置換基としては例えば、ハロゲン原子、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、リン酸エステル、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、カルボニル、カルボキシ、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、複素環、芳香族又はヘテロ芳香族部分、-CF3，-CN等がある。「アリール」という用語にはまた、2以上の環を有する多環リング系も含まれ、多環リング系では、1以上の炭素原子が2つの隣接した環に共通であって（環は「融合した環」である）、ここで少なくとも一つの環は芳香族環であり、他の環状リングはシクロアルキル類、シクロアルケニル類、シクロアルキニル類、アリール類、及び/又は複素環類であってもよい。
【００７４】
ここで用いる「炭素環」という用語は、各原子が炭素原子である芳香族性又は非芳香属性環である。
ここで用いる「カルボキシ保護基」という用語は、反応自体はその化合物上の他の官能基で行われる間、カルボン酸基を封鎖又は保護するために一般的に使われる、カルボン酸基のエステル誘導体の一つを表わす。この様なカルボン酸の保護基の例としては、4-ニトロベンジル、4-メトキシベンジル、3，4-ジメトキシベンジル、2，4-ジメトキシベンジル、2，4，6-トリメトキシベンジル、2，4，6-トリメチルベンジル、ペンタメチルベンジル、3，4-メチレンジオキシベンジル、ベンズヒドリル、4，4’-ジメトキシベンズヒドリル、2，2’，4，4’-テトラメトキシベンズヒドリル、t-ブチル、又はt-アミルのようなアルキル、トリチル、4-メトキシトリチル、4，4’-ジメトキシトリチル、4，4’，4’’-トリメトキシトリチル、2-フェニルプロプ-2-イル、トリメチルシリル、t-ブチルジメチルシリル、フェナンシル、2，2，2-トリクロロエチル、β-（トリメチルシリル）エチル、β-（ジ（n-ブチル）メチルシリル）エチル、p-トルエンスルホニルエチル、4-ニトロベンジルスルホニルエチル、アリル、シンナミル、1-（トリメチルシリルメチル）プロプ-1-エン-3-イル等の部分である。用いたカルボキシ保護基の種類は重要ではなく、用いた誘導化されたカルボン酸が、分子上の他の位置における次の反応（複数）条件に対して安定であり、また分子の残りの部分を破壊することなく適宜除くことができさえすればよい。特に、カルボキシ保護された分子を、水酸化リチウム又はNaOHのような強い求核的塩基、又は、LiAlH4の様な非常に活性な金属水素化物を用いた、還元状態に曝さないことが重要である。（既に述べた、アミノ保護基及びヒドロキシ保護基を除く際も、そのような厳しい除去条件を避けるべきである）。好ましいカルボン酸の保護基としては、アルキル（例えば、メチル、エチル、t-ブチル）、アリル、ベンジル、及びp-ニトロベンジル基がある。セファロスポリン、ペニシリン、及びペプチド技術で用いられる同様のカルボキシ保護基は、またカルボキシ基置換基の保護に使われる。これらの置換基の更なる例については、T.W.Greene及びP.G.M.Wuts,「有機合成における保護基」,第2版,John Wiley & Sons,Inc.,New York,N.Y.,1991,第5章、E.Haslam,「有機化学における保護基」,J.G W.McOmie,編,Plenum Press,New York,N.Y.,1973,第5章、及び、T.W.Greene,「有機合成における保護基」,John Wiley and Sons,New York,NY,1981,第5章に記載されている。「保護されたカルボキシ」という用語は、上述のカルボキシ基保護基の一つによって置換されたカルボキシ基を表わす。
【００７５】
「カルボニル」という用語は周知であり、次の一般的化学式で表される分子が含まれる：
2008519044.tif 000009
ここで、Xは単結合であるか、又は酸素又はイオウ原子を表わし、R11は、水素原子、アルキル、アルケニル、-(CH2)m-R8、又は医薬的に許容された塩類を表わし、R'11は、水素原子、アルキル、アルケニル、又は-(CH2)m-R8を表わし、ここでm及びR8は既に定義されている。Xが酸素原子であり、R11又はR'11が水素原子でなければ、この化学式は「エステル」を表わす。Xが酸素原子で、R11が上で定義されたものとすると、この部分は、ここでは、カルボキシル基と呼び、特に、R11が水素原子の場合、化学式は「カルボン酸」を表わす。Xが酸素原子であり、R'11が水素原子の場合、化学式は「ギ酸エステル」を表わす。一般的に、上記化学式で、酸素原子がイオウ原子に置換された場合、化学式は、「チオカルボニル」基を表わす。Xがイオウ原子であり、R11又はR'11が水素原子でなければ、化学式は「チオエステル」を表わす。Xがイオウ原子であり、R11が水素原子の場合、化学式は「チオカルボン酸」を表わす。Xがイオウ原子であり、R'11が水素原子の場合、化学式は「チオギ酸エステル」を表わす。他方、Xが単結合であり、R11が水素原子でない場合、上記化学式は、「ケトン」基を表わす。Xが単結合で、R11が水素原子の場合、上記化学式は「アルデヒド」基を表わす。
【００７６】
「グアニジン」という用語は、-NH-C(NH)-NHRを表わし、ここでRはH又はアルキル、又はアラルキルである。特別のグアニジンは-NH-C（NH）-NH2を表わす。
ここで用いる「ヘテロ原子」という用語は、炭素原子、又は水素原子以外のすべての元素原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、ホウ素原子、窒素原子、酸素原子、リン原子、イオウ原子、及びセレン原子である。
【００７７】
「ヘテロサイクル」、「ヘテロサイクリル」又は「ヘテロサイクリックグループ」という用語は、3乃至10員環構造、より好ましくは3乃至7員環であり、環構造は1から4のヘテロ原子を含む。複素環は多環であってもよい。複素環としては、例えば、チオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンチン、フェノキサチイン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノクサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルサジン、フェノチアジン、フラザン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソレン、チオレン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルフォリン、ラクトン、アゼチジノン及びピロリジノンのようなラクタム、スルタム、スルトン等である。複素環は、1又は2以上の位置で、例えば、ハロゲン原子、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、リン酸エステル、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロサイクリル、芳香属又はヘテロ芳香族部分、-CF3，-CN等が、上記の置換基により置換しうる。
【００７８】
ここで使われる「ヒドロキシ保護基」という用語は、反応自体はその化合物上の他の官能基で行われる間、ヒドロキシ基を封鎖又は保護するために一般的に使われるヒドロキシ基の誘導体を表わす。この様な保護基の例としては、テトラヒドロピラニロキシ、ベンゾイル、アセトキシ、カルバモイルオキシ、ベンジル、及びシリルエーテル（例えば、TBS，TBDPS）がある。これらの置換体の例については、T.W.Greene及びP.G.M.Wuts,「有機合成における保護基」,第2版,John Wiley & Sons,Inc.,New York,N.Y.,1991,第2-3章、E.Haslam,「有機化学における保護基」,J.G W.McOmie,編,Plenum Press,New York,N.Y.,1973,第5章、及び、T.W.Greene,「有機合成における保護基」,John Wiley and Sons,New York,NY,1981に記載されている。「保護されたヒドロキシ」という用語は、上述したヒドロキシ保護基の1つにより、置換された水酸基を表わす。
【００７９】
ここで用いたように「ニトロ」という用語は、-NO2を意味し；「ハロゲン原子」という用語は、-F，-Cl，-Br又は-Iを表わし；「スルフヒドリル」という用語は、-SHを意味し；「ヒドロキシ」という用語は、-OHを意味し；「スルホニル」という用語は、-SO2-を意味する。
「ホスホンアミダイト」は次の一般的化学式で表される：
2008519044.tif 000010
ここで、R9及びR10は、既に定義されており、Q2はO，S又はNを表わし、R48は低級アルキル、又はアリールを表わし、Q2はO，S，又はNを表わす。
【００８０】
「ホスホルアミダイト」は次の一般式で表される：
2008519044.tif 000011
ここで、R9及びR10は既に定義されており、Q2はO，S又はNを表わす。
【００８１】
「ホスホリル」は次の一般式で表される：
2008519044.tif 000012
ここで、Q1はS又はOを表わし、R46は水素原子、低級アルキル、又はアリールを表わす。例えばアルキルの置換に用いた場合、ホスホリルアルキルのホスホリル基は次の一般式で表される：
2008519044.tif 000013
ここで、Q1はS，又はOを表わし、また各R46はそれぞれ独立に、水素原子、低級アルキル、又はアリールを表わし、Q2はO、S又はNを表わす。Q1がSの場合、ホスホリル部分は、「ホスホロチオエート」である。
【００８２】
「ポリシクリル」又は「多環式基」という用語は、2以上の環を表わし（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール及び/又は複素環）、ここで2以上の炭素原子は、例えば環が「融合した環」である、2個の隣接した環に共通である。隣接していない原子を通して結合する環は「ブリッジした」環と呼ばれる。ポリサイクルの各環は、既に述べた置換体により置換可能であり、例えば、ハロゲン原子、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、リン酸、ホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、複素環、芳香族又はヘテロ芳香族部分、-CF3，-CN等である。
【００８３】
ここで用いる「保護する置換基」という用語は、一時的置換基を意味し、これは反応性の高い官能基を、意図しない化学的変換から保護するものである。この様な保護する置換基の例として、カルボン酸エステル、アルコールのシリルエーテル、アルデヒド及びケトンのアセタール類及びケタール類がある。保護する置換基化学の分野の総説がある(Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.「有機合成における保護基」,第2版,Wiley,New York,1991)。
【００８４】
「セレノアルキル基」は、アルキル基に置換型のセレノ基が付加したものを表わす。アルキル基を置換する典型的な「セレノエーテル」は、-Se-アルキル、-Se-アルケニル、-Se-アルキニル、及び-Se-(CH2)m-R8の一つから選ばれたものであり、m及びR8は既に定義されている。
【００８５】
ここで用いたように、「置換した」とは、有機化合物の全ての可能な置換基を含むと考えられる。広い意味で、可能な置換基としては、有機化合物の非環状及び環状、分枝型及び非分枝型、炭素環式及び複素環式、芳香族型及び非芳香族型置換体がある。置換体の実例としては、例えば、ここで既に記載したものが含まれる。許容される置換体は、適切な有機化合物に対して、1以上であってもよく、同一又は異なるものでよい。本発明の目的のためには、チッソ原子のようなヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価が許す限りにおいて、水素置換体及び/又はここで記載した全ての可能な有機化合物の置換体で置換される。本発明は、如何なる意味でも有機化合物の可能な置換体によって制限されることを意図しない。
【００８６】
「置換」又は「による置換」は、このような置換が、置換された原子及び置換基の許容された結合価及び置換に従って、例えば再配列、環化、脱離等の変化を自然に起こすことがないような安定な化合物を作り出すという、暗黙の条件下にあることを理解すべきである。
【００８７】
「スルファモイル」という用語は周知であり、次の一般式で表される部分を有する：
2008519044.tif 000014
ここで、R9及びR10は既に定義されている。
【００８８】
「硫酸エステル」という用語は周知であり、次の一般式で表される部分を有する：
2008519044.tif 000015
ここで、R41は既に定義されている。
【００８９】
「スルホンアミド」と言う用語は周知であり、次の一般式で表される部分を有する：
2008519044.tif 000016
ここでR9及びR'11は既に定義されている。
【００９０】
「スルホン酸エステル」という用語は周知であり、次の一般式で表される部分を有する：
2008519044.tif 000017
ここで、R41は電子対、水素原子、アルキル、シクロアルキル又はアリールである。
【００９１】
ここで用いる「スルホキシド」又は「スルフィニル」という用語は、次の一般式で表される：
2008519044.tif 000018
ここでR44は水素原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、アラルキル、又はアリールからなる基から選択される。
【００９２】
類似した置換基がアルケニル、アルキニル基に付加して、例えば、アミノアルケニル、アミノアルキニル、アミドアルケニル、アミドアルキニル、イミノアルケニル、イミノアルキニル、チオアルケニル、チオアルキニル、カルボニル置換したアルケニル又はアルキニルを生成する。
ここで用いたように、例えば、アルキル、m、n等の各表示の定義は、どの構造も2回以上出てきた場合、同じ構造で他の箇所で定義されたものとは独立である。
【００９３】
トリフリル、トシル、メシル、及びノナフリルという用語は周知であり、それぞれ、トリフルオロメタンスルホニル、p-トルエンスルホニル基、メタンスルホニル、及びノナフルオロブタンスルホニル、及びこれら各々の基を意味する。トリフラート、トシレート、メシレート、及びノナフラートは周知であり、それぞれ、トルフルオロメタンスルホン酸エステル、p-トルエンスルホン酸エステル、メタンスルホン酸エステル、及びノナフルオロブタンエスルホン酸エステル、及び、該置換基を有する分子を表わす。
【００９４】
Me，Et，Ph，Tf，Nf，Ts，Msの略語は、それぞれ、メチル基、エチル基、フェニル基、トリフルオロメタンスルホニル基、ノナフルオロブタンスルホニル基、p−トルエンスルホニル基及びメタンスルホニル基を表わす。通常の有機化学で用いられる略語の更に総合的なリストは、Journal of Organic Chemistryの各巻の第1号に掲載されており、このリストは通常略語の標準的リスト（Standard List of Abbreviations）という表に出ている。上記リストに含まれている略語及び周知の有機化学で用いられる全ての略語は、本明細書において、参考文献として組み込まれている。
【００９５】
本発明におけるある種の化合物は、特定の幾何学的又は立体異性体型として存在する。本発明は、シス及びトランス異性体、R-及びS-光学異性体、ジアステレオマー、（D）-異性体、（L）-異性体、それらのラセミ混合物及びこれらの異なる混合物を含め、全てのその様な化合物が本発明の範囲に入るものとして検討した。更に、アルキル基のような置換基には、非対称炭素原子が存在しうる。全てのこの様な異性体は、これらの混合物も含め、本発明に含まれることが意図されている。
【００９６】
例えば、本発明の化合物の特定の光学異性体が要求された場合には、非対称的合成、又は、キラル補助分子の誘導体を用いて調整することができ、後者の場合には、得られたジアステレオマー混合物は分離され、補助分子を切断して純粋な所望の光学異性体を得ることができる。あるいは、分子が、アミノ基のような塩基性の官能基、又はカルボキシルのような酸性の官能基を含む場合には、適切な光学活性のある酸又は塩基を用いて、ジアステレオマー塩が合成され、次に、この様に合成されたジアステレオマーを、周知の分別晶出、又は、クロマトグラフィー手段によって分割することが可能であり、純粋な光学異性体を回収することができる。
【００９７】
上述の化合物と同等と考えられる化合物としては、異なる環境で対応する化合物、および同一の一般的性質（例えば、ヘッジホグ・シグナル伝達の阻害能のような）を持つ化合物であって、置換体の1又は2以上の単純な変化により、化合物の有効性に大きな影響を与えないように作られた化合物なども含まれる。一般的に、本発明の化合物は、直ちに手に入る出発物質、試薬及び従来の合成方法を用いて、例えば、以下に述べる方法、又はそれ等の変形による、一般的反応スキームで説明される方法によって調製することができる。これらの反応については、反応自体は知られているが、ここでは述べなかった変形物を用いることも可能である。
【００９８】
本発明の目的のために、化学元素の同定は、元素の周期律表、CASバージョン、化学と物理のハンドブック、67版、1986-87に従って行った。更に、本発明の目的のために、「炭化水素」は少なくとも1個の水素原子と1個の炭素原子を持つ全ての可能な化合物を含むことを意図した。広い観点では、可能な炭化水素としては、置換又は非置換の、非環式及び環式、分枝型及び直鎖型、炭素環式及び複素環式、芳香族型及び非芳香族型有機化合物を含む。
【００９９】
III  本発明における典型的化合物
下記でさらに詳しく述べるように、本発明の方法は、例えば、ここで述べられているような薬剤スクリーニング分析法によって即座に確認される、異なる小分子を用いて実行されることが意図される。例えば、本発明の方法に有用な化合物は、一般式（I）で表される化合物を含む：
2008519044.tif 000019
式I
【０１００】
ここで、原子価と安定性が許す限り、
XとZは独立に、-N(R7)-、-O-、-S-、-(R7)N-N(R7)-、-ON（R7）-、又は直接結合、好ましくは-N(R7)-、-O-、-S-、又は直接結合を表わす。
Yは、-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=NR7)-、SO2、又はSO、好ましくは、-C(=O)-、SO2、又は-C(=S)-を表わす。
Aは、O、S、又はNR7、好ましくは、O又はNH、及び最も好ましくはNHを表わす。
Gはシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又は、結合する環に融合するヘテロアリール環、好ましくはアリール又はヘテロアリール環を表わす。
Arは、置換又は非置換のフェニル環のような、置換又は非置換のアリール又はヘテロアリール環を表わす。
【０１０１】
R1は、置換又は非置換のピリジン環を表わす。
R2は、結合する環上の0-4個の置換基を表わす。その置換基の例としては、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基（例えば、エステル、カルボキシル又はホルミル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオカルボキシレート又はチオホルメート）、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフォニル、スルフォキシド、サルフェート、スルフォネート、スルファモイル、スルフォンアミド、フォスフォリル、フォスフォネート、フォスフィネート、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH,J-NH2,上記のものの保護された形が挙げられ、このとき、環状又は多環構造において、R2が1個以上ある場合は、何れか2個のR2は、互いに連携して、4から8員のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール環を形成する。
【０１０２】
R7は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、J-アリール（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。
R8は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、アリール（例えば、置換又は非置換の）、又はヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。及び
Jは、それぞれ独立に、CK2、NK、O及びSから選択される、0-8単位（好ましくは0-4）をもつ鎖を表わす。ここで、Kは、それぞれ独立に、H又は低級アルキルを表わす。
【０１０３】
ある態様においては、Z及びXの少なくともひとつは、直接結合ではない。ある態様においては、X-Y-Zは、アミド、尿素、又はスルフォンアミドを含む。ある態様においては、Xは、-N(R8)-、-O-、-S-から選択され、NHが好ましい。
【０１０４】
ある態様においては、R1は、以下のような1-5の置換基によって適宜置換されたピリジン環である；該置換基の例としては、ニトロ、ハロゲン、シアノ、低級アルキル（メチル又はハロゲン化された低級アルキル（トリフルオロメチルのような）のような）、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ（例えば、R8-C(=O)NH-）、アミド、ヒドロキシル、アルコキシ、アシロキシ（例えば、R8-C(=O)-O-）、カルボニル、フォスフォリル、スルファモイル、サルフェート、スルフォンアミド、スルフォネート、スルフォキシド、スルフィドリル、スルフォニル、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はピリジン環に融合されたヘテロアリールが挙げられる。ある態様においては、R1は、以下のような1-5の置換基によって適宜置換されたピリジン環である；該置換基は、例えば、ニトロ、シアノ、低級アルキル（メチル又はハロゲン化された低級アルキル（トリフルオロメチルのような）のような）、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ（例えば、R8-C(=O)NH-）、アミド、ヒドロキシル、アルコキシ、アシロキシ（例えば、R8-C(=O)-O-）、カルボニル、フォスフォリル、スルファモイル、サルフェート、スルフォンアミド、スルフォネート、スルフォキシド、スルフィドリル、又はスルフォニルが挙げられる。ある態様においては、ピリジン環上の１以上の置換基は、保護基に結合される。いくつかの態様においては、ピリジン環は、メチル、トリフルオロメチル又はこの両者で置換される。
【０１０５】
R1であるピリジン環は、ピリジン環の窒素原子に対して、例えばオルト、メタ又はパラのように、環のどの位置でも置換され得る。いくつかの態様においては、ピリジン環は、Jに加えて、二つの置換基で置換される（2置換）。これら二つの置換基は、ピリジン環によって許容される互いの、いかなる位置関係をも持つことができる。例えば、これらの置換基は、互いにオルトとの関係において存在する（例えば、2,3;3,4;4,5；又は5,6）。それらは互いにメタ関係をもつことができる（例えば、2,4;2,6;3,5;又は4,6）。あるいは、それらは、パラ関係を持つことができる（例えば、2,5；又は3,6）。他の態様においては、ピリジン環は、Jに加えて3個の置換基で置換される（3置換）。これらの置換基はまたピリジン環によって許容される互いの、いかなる位置関係をも持つことができる。さらに他の態様においては、ピリジン環は、Jに加えて4個の置換基で置換される（4置換）。これらの置換基はまたピリジン環によって許容される互いの、いかなる位置関係をも持つことができる。
【０１０６】
ある態様においては、R1のピリジン環は窒素原子に対して、一箇所のオルト位置で、置換され得る。さらなる態様においては、ピリジン環は窒素原子に対して両方のオルト位置で置換され得る。ピリジン環は、メチル又はトリフルオロメチルによって置換される窒素原子に対して、どちらのオルト位置をも持つことができる。もう一つの態様においては、ピリジン環の窒素に対する1個のオルト位置は、メチルで置換され、窒素に対する他のオルト位置は、トリフルオロメチルで置換される。
【０１０７】
R1であるピリジン環は、環のどの位置でも、Jに結合され得る。例えば、ピリジン環は、ピリジン環の窒素原子に対するオルト（例えば2-ピリジル環のようなC2位置）、ピリジン環の窒素原子に対するメタ（例えば3-ピリジル環のようなC3位置）、又はピリジン環の窒素原子に対するパラ（例えば4-ピリジル環のようなC4位置）の位置で、Ｊに結合され得る。Ｊに結合する異なった位置には、上記に開示された多様な置換可能性がある。例えば、ひとつの態様においては、ピリジン環は、窒素原子に対するメタの位置でＪに結合され、環は、メチル及びトリフルオロメチルのような、さらに二つの置換基で置換される（2置換）。
【０１０８】
R1であるピリジン環の窒素原子はまた、酸素（例えばニトロン又はN-酸化物をつくる）のようなヘテロ原子で置換されても良い。ピリジン環の窒素原子の置換は、ピリジン環へのさらなる置換と組み合わされてもよい。
【０１０９】
ある態様においては、X、及び、Aからなる環は、メタの関係（例えば1，3）でAr上に配置される。
ある態様においては、Gはフェニル又はピペリジン環を表わす。
ある態様においては、Jは無しである。
【０１１０】
ある態様においては、R2は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ（例えば、R8-C(=O)NH-）、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はGに融合されたヘテロアリール、及び置換又は非置換の低級アルキルから選択された1〜4個の置換基を表わす。
【０１１１】
ある態様においては、本発明に有用な化合物は、一般式（II）によって表わされる：
2008519044.tif 000020
式  II
【０１１２】
ここで、原子価及び安定性が許す限り、
XとZは独立に-N(R7)-、-O-、-S-、-(R7)N-N(R7)-、-ON(R7)-、又は直接結合、好ましくは-N(R7)-、-O-、-S-、又は直接結合を表わす。
Yは、-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=NR7)-、SO2、又はSO、好ましくは、-C(=O)-、SO2、又は-C(=S)-を表わす。
Aは、O、S、又はNR7、好ましくは、O又はNH、及び最も好ましくはNHを表わす。
Gはシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又は、結合する環に融合するヘテロアリール環、好ましくはアリール又はヘテロアリール環を表わす。
【０１１３】
R1は、置換又は非置換のピリジン環を表わす。
R2は、結合する環上の0-4個の置換基を表わす。その置換基の例としては、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基（例えば、エステル、カルボキシル又はホルミル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオカルボキシレート又はチオホルメート）、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフォニル、スルフォキシド、サルフェート、スルフォネート、スルファモイル、スルフォンアミド、フォスフォリル、フォスフォネート、フォスフィネート、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH,J-NH2,上記のものの保護された形が挙げられ、このとき、環状又は多環構造において、R2が1個以上ある場合は、何れか2個のR2は、互いに連携して、4から8員のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール環を形成する。
R3は、結合する環上の0〜4個の置換基を表わす。その置換基の例としては、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、ニトロ、置換又は非置換の低級アルキル、及びアシルが挙げられるが、好ましくはハロゲン、低級アルコキシ、あるいは置換又は非置換の低級アルキルが挙げられる。
【０１１４】
R7は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、J-アリール（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。
R8は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、アリール（例えば、置換又は非置換の）、又はヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。及び
Jは、それぞれ独立に、CK2、NK、O及びSから選択される、0-8単位（好ましくは0-4）をもつ鎖を表わす。ここで、Kは、それぞれ独立に、H又は低級アルキルを表わす。
【０１１５】
ある態様においては、Z及びXの少なくともひとつは、直接結合ではない。ある態様においては、X-Y-Zは、アミド、尿素、又はスルフォンアミドを含む。ある態様においては、Xは、-N(R8)-、-O-、-S-から選択され、NHであることが好ましい。
【０１１６】
ある態様においては、R1は、1-5個の置換基で適宜置換されたピリジン環を含む。その置換基の例としては、ニトロ、ハロゲン、シアノ、低級アルキル、アシルアミノ（例えば，R8-C(=O)NH-）、アルコキシ、アルキルアミノ、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はピリジン環に融合されたヘテロアリールが挙げられる。いくつかの態様においては、ピリジン環は、C3位置(例えば3-ピリジル環)でJに結合される。いくつかの態様においては、ピリジン環は、C2位置又はC6位置若しくは両方の位置で置換される。いくつかの態様においては、ピリジン環は、メチル基又はトリフルオロメチル基若しくはこの両基で置換される。
ある態様においては、Gはフェニル又はピペリジン環を表わす。
ある態様においては、Jは無しである。
【０１１７】
ある態様においては、R2はハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ（例えば、R8-C(=O)NH-）、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はGに融合されたヘテロアリール、及び置換又は非置換の低級アルキルから選択された1〜4個の置換基を表わす。
ある態様においては、R3は、X、又は、Aを含む環のどちらかに対するパラ位置で結合する、置換又は非置換のアルキル又はハロゲンのような置換基を含む。
【０１１８】
下記でさらに詳しく述べられるように、本発明の方法は、例えば、ここで述べられているような薬剤スクリーニング分析法によって即座に確認される、異なる小分子を用いて実行されることが意図される。例えば、本発明の方法に有用な化合物は、一般式（III）で表される化合物を含む：
2008519044.tif 000021
式（III）
【０１１９】
ここで、原子価と安定性が許す限り、
XとZは独立に-N(R7)-、-O-、-S-、-（R7）N-N(R7)-、-ON(R7)-、又は直接結合、好ましくは-N(R7)-、-O-、-S-、又は直接結合を表わす。
Yは、-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=NR7)-、SO2、又はSO、好ましくは、-C(=O)-、SO2、又は-C(=S)-を表わす。
Aは、O、S、又はNR7、好ましくは、O又はNH、及び最も好ましくはNHを表わす。
Gはシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又は、結合する環に融合するヘテロアリール環、好ましくはアリール又はヘテロアリール環を表わす。
Qは、無し又は、CK2、NK、O及びSを表わす。ここではKは、それぞれ独立にH又は低級アルキルを表わす。
【０１２０】
Arは、置換又は非置換のフェニル環のような、置換又は非置換のアリール又はヘテロアリール環を表わす。
R1は、置換又は非置換のピリジン環を表わす。
R2は、結合する環上の0-4個の置換基を表わす。その置換基の例としては、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基（例えば、エステル、カルボキシル又はホルミル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオカルボキシレート、又はチオホルメート）、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフォニル、スルフォキシド、サルフェート、スルフォネート、スルファモイル、スルフォンアミド、フォスフォリル、フォスフォネート、フォスフィネート、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH,J-NH2,上記のものの保護された形が挙げられ、このとき、環状又は多環構造において、R2が1個以上ある場合は、何れか2個のR2は、互いに連携して、4から8員のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール環を形成する。
【０１２１】
R7は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、J-アリール（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。
R8は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、アリール（例えば、置換又は非置換の）、又はヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。及び
Jは、それぞれ独立に、CK2、NK、O及びSから選択される、0-8単位（好ましくは0-4）をもつ鎖を表わす。
【０１２２】
ある態様においては、Z及びXの少なくともひとつは、直接結合ではない。ある態様においては、X-Y-Zは、アミド、尿素、又はスルフォンアミドを含む。ある態様においては、Xは、-N(R8)-、-O-、-S-から選択され、NHであることが好ましい。
【０１２３】
ある態様においては、R1は、1-5の置換基で適宜置換されたピリジン環を含む。その置換基の例としては、ニトロ、ハロゲン、シアノ、低級アルキル、アシルアミノ（例えば、R8-C(=O)NH-）、アルコキシ、アルキルアミノ、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はピリジン環に融合されたヘテロアリールが挙げられる。いくつかの態様においては、ピリジン環は、C3位置でJに結合される（例えば3-ピリジル環）。いくつかの態様においては、ピリジン環はさらに、C2位置又はC6位置若しくは両位置で置換されても良い。いくつかの態様においては、ピリジン環は、メチル基又はトリフルオロメチル基若しくは両基で置換される。
【０１２４】
ある態様においては、X、及び、Aからなる環は、メタの関係（例えば1，3）でAr上に配置される。
ある態様においては、Gはフェニル又はピペリジン環を表わす。
ある態様においては、Jは無しである。
ある態様においては、R2は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ（例えばR8-C(=O)NH-）、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はGに融合されたヘテロアリール、及び置換又は非置換の低級アルキルから選択される、1〜4個の置換基を表わす。
【０１２５】
ある態様においては、本発明に有用な化合物は、一般式（IV）で表わされる：
2008519044.tif 000022
式（IV）
【０１２６】
ここで、原子価及び安定性が許す限り、
XとZは独立に-N(R7)-、-O-、-S-、-(R7)N-N(R7)-、-ON(R7)-、又は直接結合、好ましくは-N(R7)-、-O-、-S-、又は直接結合を表わす。
Yは、-C(=O)-、-C(=S)-、-C(=NR7)-、SO2、又はSO、好ましくは、-C(=O)-、SO2、又は-C(=S)-を表わす。
Aは、O、S、又はNR7、好ましくは、O又はNH、及び最も好ましくはNHを表わす。
Gはシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又は、結合する環に融合するヘテロアリール環、好ましくはアリール又はヘテロアリール環を表わす。
Qは無し、又は、CK2，NK，O及びSを表わし、ここでKは、それぞれ独立にH又は低級アルキルを表わす。
【０１２７】
R1は、置換又は非置換のピリジン環を表わす。
R2は、結合する環上の0-4個の置換基を表わす。その置換基の例としては、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル基（例えば、エステル、カルボキシル又はホルミル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオカルボキシレート又はチオホルメート）、ケトン、アルデヒド、アミノ、アシルアミノ、アミド、アミジノ、シアノ、ニトロ、アジド、スルフォニル、スルフォキシド、サルフェート、スルフォネート、スルファモイル、スルフォンアミド、フォスフォリル、フォスフォネート、フォスフィネート、J-R8、J-OH、J-低級アルキル、J-低級アルケニル、J-R8、J-SH,J-NH2,上記のものの保護された形が挙げられ、このとき、環状又は多環構造において、R2が1個以上ある場合は、何れか2個のR2は、互いに連携して、4から8員のシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリール環を形成する。
R3は、結合する環上の0〜4個の置換基を表わす。その置換基の例としては、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、ニトロ、置換又は非置換の低級アルキル、及びアシルが挙げられるが、好ましくはハロゲン、低級アルコキシ、又は置換又は非置換の低級アルキルが挙げられる。
【０１２８】
R7は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、J-アリール（例えば、置換又は非置換の）、J-ヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。
R8は、それぞれ独立に、H、低級アルキル（例えば、置換又は非置換の）、シクロアルキル（例えば、置換又は非置換の）、ヘテロサイクリル（例えば、置換又は非置換の）、アリール（例えば、置換又は非置換の）、又はヘテロアリール（例えば、置換又は非置換の）を表わす。及び
Jは、それぞれ独立に、CK2、NK、O及びSから選択される、0-8単位（好ましくは0-4）をもつ鎖を表わす。
【０１２９】
ある態様においては、Z及びXの少なくともひとつは、直接結合ではない。ある態様においては、X-Y-Zは、アミド、尿素、又はスルフォンアミドを含む。ある態様においては、Xは、-N(R8)-、-O-、-S-から選択され、NHであることがが好ましい。
【０１３０】
ある態様においては、R1は、1-5個の置換基で適宜置換されたピリジン環を含む。その置換基の例としては、ニトロ、ハロゲン、シアノ、低級アルキル、アシルアミノ（例えば，R8-C(=O)NH-）、アルコキシ、アルキルアミノ、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はピリジン環に融合されたヘテロアリールが挙げられる。いくつかの態様においては、ピリジン環は、C3位置(例えば3-ピリジル環)でJに結合される。いくつかの態様においては、ピリジン環はさらに、C2位置又はC6位置若しくは両方の位置で置換されてもよい。いくつかの態様においては、ピリジン環は、メチル基又はトリフルオロメチル基若しくはこの両基で置換される。
ある態様においては、Gはフェニル又はピペリジン環を表わす。
ある態様においては、Jは無しである。
【０１３１】
ある態様においては、R2は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アミノ、アシルアミノ（例えばR8-C(=O)NH-）、置換又は非置換のシクロアルキル、ヘテロサイクリル、アリール、又はGに融合されるヘテロアリール、及び置換又は非置換の低級アルキルから選択される、1〜4個の置換基を表わす。
ある態様においては、R3は、X、又は、Aを含む環のどちらかに対するパラ位置で結合する、置換又は非置換のアルキル、又はハロゲンのような置換基を含む。
【０１３２】
ある態様においては、本発明のアンタゴニストは、ヘッジホッグ経路に対するそれらの選択性に基づいて選択される。この選択性は、ヘッジホッグ経路対他の経路であってもよいし、又はptc-1，ptc-2などの特別なヘッジホッグ経路の間での選択であってもよい。
【０１３３】
特定の好ましい態様においては、本発明の阻害剤は、シグナル伝達を介在して、機能欠失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedを、1mM以下の、より好ましくは1μM以下の、そしてさらに好ましくは1nM以下のED50で阻害する。同様に、特定の好ましい態様においては、本発明の阻害物は、10nM以下の、好ましくは1nM以下の、さらに好ましくは0.1nM以下のKiでヘッジホッグ経路の活性を阻害する。
特別の態様においては、使用するために小分子を選択する。なぜなら、小分子は、一つのpatchedアイソフォームに対して、次のアイソフォームよりも選択性が高い、例えば、一つのpatched経路（ptc-1，ptc-2）に対して10倍、好ましくは少なくとも100倍、或は1000倍、他のpatched経路に対するよりも高い選択性があるからである。
【０１３４】
ある態様においては、例えば、他のプロテインキナーゼの活性を調節するよりも、少なくとも1桁強力に、好ましくは少なくとも2桁、更に好ましくは少なくとも3桁、さらに強力にヘッジホッグ経路の活性を調節する化合物である、PKCのようなPKA以外のプロテインキナーゼ以上にヘッジホッグ活性を選択的にアンタゴナイズするために、ヘッジホッグ経路のアンタゴニストである化合物が選択される。
このように、例えば、ヘッジホッグ経路の好ましい阻害物質は、PKCを阻害するために、そのKiより、少なくとも1桁低い、好ましくは少なくとも2桁低い、更に好ましくは3桁Kiでヘッジホッグ活性を阻害する。ある態様においては、PKA阻害のためのKiは、10nMより少なく、好ましくは1nMより少なく、更に好ましくは、0．1nMより少ない。
【０１３５】
以上開示された態様で示された特徴のいずれかの、及びすべての組み合わせが、本発明の範囲内にある。
【０１３６】
IV.方法及び組成物の典型な用途
本発明の他の態様は、環境が保全されるように本発明の方法に従い、ヘッジホッグアンタゴニストと細胞を接触させることによって、ptc機能喪失型、ヘッジホッグ機能獲得型、又は、smoothened機能獲得型を持つ細胞の増殖及び/又は、生存、分化状態を調節する方法に関する。
【０１３７】
例えば、脊椎動物の分化組織において要求された空間的配置の形成に対し、ヘッジホッグ、ptc及びsmoothenedが、一見明確に関与しているという研究結果を考慮すると、本発明の方法を、in vitro及びin vivoの双方で、種々の脊椎動物における組織の配置を維持及び/又は発生させるプロセスの一部として使用することができると期待される。ヘッジホッグアンタゴニストは、よく知られた組織の分化又は増殖に関する誘導又は非誘導の如何を問わず、適宜、上記した製剤の何れかであってもよい。
【０１３８】
例えば本発明の方法は、細胞培養技術に適用することができ、該細胞培養技術においては、遺伝学又は生物学的な理由かどうかに関わらず、前記細胞は、ptc機能喪失型、ヘッジホッグ機能獲得型又はsmoothened機能獲得型の表現形を有する。in vitroにおいて、神経細胞の培養方法は、例えば、神経成長因子（NGF）、毛様体栄養因子（CNTF）、脳由来神経栄養因子（BDNF）等の神経栄養因子の同定と同様に、神経発生の研究に関する基本的で不可欠なツールとされている。本発明の方法の一つの使用は、神経幹細胞の培養液中、例えば、新しい神経細胞や神経膠の発生のための培養液中における使用などである。本発明のこのような態様においては、培養された細胞は、培養液中で神経幹細胞の増殖率を変化させるため、及び/又は、分化率を変化させるために、若しくは、特定の最終分化神経細胞の培養液を完全状態で維持するために、本発明のヘッジホッグのアンタゴニストと接触させることができる。典型的な態様として、本発明の方法は、例えば、感覚神経又は、その代わりに運動神経を培養するのに使用することができる。このような神経細胞の培養は、治療用の処置のために移植可能な細胞の供給源としてだけでなく、便利な分析システムとしても使用することができる。
【０１３９】
本発明によれば、多数の発癌性を示さない神経前駆細胞は、in vitroで保持することができ、それらの増殖及び/又は分化の割合は、本発明のヘッジホッグアンタゴニストとの接触によって影響されうる。一般に、動物由来の神経前駆細胞を分離し、好ましくは、成長因子の存在下でこれらの細胞をin vitro又はin vivoで保持し、細胞をヘッジホッグアンタゴニストと接触させることによって、例えば、神経細胞や神経膠等の一般的な神経系の表現型へのこれらの細胞の分化を調整する手順から構成される方法が提供される。
【０１４０】
前駆細胞は、それらの分化が要求されるまで、抑圧された状態で前駆体を維持する、持続性の阻害的影響下にあると考えられている。しかしながら、最近、これらの前駆細胞が増殖するのを可能にする技術が提供されており、それらは最終分化され、従って増殖しなくなった神経細胞とは異なり、神経変性病を持つ異種及び自己宿主への移植のための高い適合性があり、数量無制限に生産することができる。
【０１４１】
「前駆細胞」としては、特定の条件下において、制限なしに分裂することができる、少能性又は多能性幹細胞を意味しており、例えば、神経細胞や神経膠などに最終分化する娘細胞を産生することができるものである。
これらの細胞は、異種又は自己宿主への移植のために使用することができる。
異種とは、前駆細胞が最初に生成された動物以外の宿主を意味する。自己とは、細胞が最初に生成された同一の宿主であることを意味する。
【０１４２】
細胞は、動物の胚、出生後の、若年又は成体の神経組織から得ることができる。動物は、神経組織を含む多細胞動物を意味する。特に、魚類、爬虫類、鳥類、両生類又は哺乳類などを意味する。最も好ましいドナーは、哺乳類であり、特に、マウスとヒトである。
【０１４３】
異種ドナー動物の場合には、動物は安楽死させることが好ましく、脳及び関係のある特定の領域を、無菌操作によって除去する。特に興味深い脳の領域は、宿主の脳の悪化した領域にその機能を回復させる前駆細胞が得られる領域を含む。これらの部位は、大脳皮質、小脳、中脳、脳幹、脊髄及び脳室組織を含む中枢神経（CNS）の領域や、頚動脈小体及び副腎髄質を含む末梢神経系（PNS）の領域を含有する。より詳しくは、これらの領域は、基底核内の部位、好ましくは、尾状核及び被殻から構成される線条体や、淡蒼球、視床下核、アルツハイマー病患者で変質していることが分かった基底核、又は、パーキンソン病で変質していることが分かった黒質ち密部などの様々な細胞群を含む。
【０１４４】
ヒト異種神経前駆細胞は、人工中絶から得られた胎生組織、出生後、幼年、成人の臓器提供者に由来する。自己神経組織は、生検によって、又は、神経組織を除去する脳外科的手術を受けた患者から、特に、てんかんの手術の間、より詳しくは、側頭葉切除術や海馬切除術の間に得ることが可能である。
【０１４５】
細胞は、組織の接着細胞外マトリックスから個々の細胞を分離することによって、ドナーの組織から得ることができる。分離は、トリプシン、コラゲナーゼ等のような酵素による処理、鈍器を使用するような物理的な分離方法、又は、組織から特定の細胞種類の増殖を可能とするための外科用メスによる細分化処理を含む、公知の手段を使用することによって得ることができる。胎生細胞の分離は、細胞増殖培地中で行なうことが可能であり、幼若細胞及び成熟細胞の分離に好適な培地は、人工脳髄液（aCSF）である。標準aCSFは、124mM NaCl、5mM KCl、1.3mM MgCl2、2mM CaCl2、26mM NaHCO3及び10mM D-グルコースを含有する。低Ca2+ aCSFは、MgCl2濃度3.2mM及びCaCl2濃度0.1mMで含有することを除いては、同じ成分を含有する。
【０１４６】
分離された細胞は、MEM、DMEM、RPMI、F-12などを含有し、グルタミンや他のアミノ酸、ビタミン、ミネラル及びトランスフェリンのような有用なタンパク質など、細胞の代謝に必要なサプリメントを含有する、細胞の成長を助ける効果のある公知の培養液に入れられる。培地は、酵母、細菌及び糸状菌による汚染を防ぐために、ペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシンなどのような抗生物質を含有してもよい。場合によっては、培地は、牛、馬、トリ等由来の血清を含有しても良い。細胞用の培地はDMEM及びF-12の混合物であることが、特に好ましい。
【０１４７】
培養条件は、生理的に近い条件にすべきである。培養液のpHは、生理的に近いpHにすべきであり、好ましくはpH6-8の間、より好ましくはpH7付近、更に好ましくは、おおよそpH7.4である。細胞は、生理的に近い温度で培養されるべきであり、好ましくは30℃-40℃の間、より好ましくは32℃-38℃、更に好ましくは、35℃-37℃の間である。
【０１４８】
細胞は、浮遊状態又は固定された基質上で成長させることができるが、前駆細胞の増殖は、「神経球」を形成させることにより多数の細胞を生成させるため、浮遊状態で行なわれることが好ましい（例えば、Reynolds他(1992),Science255:1070-1709、並びに、PCT公報WO93/01275,WO94/09119,WO94/10292及びWO94/16718参照）。
増殖（分裂）している浮遊細胞の場合は、フラスコをよく振とうし、神経球をフラスコの角の底に定着させることができる。それから、神経球は、50mlの遠心チューブに移され、低速で遠心分離される。培地は吸引され、細胞は、少量の成長因子を加えた培地に再懸濁され、そして、細胞は機械的に分離し、一定分量の培地に再懸濁される。
【０１４９】
培養液中の細胞懸濁液は、前駆細胞を増殖させる成長因子が補充された後、細胞を保持する能力がある上記したようなレセプタクル、好ましくは、培養フラスコ又はローラーボトルに播種される。特に、細胞は、3-4日間、37℃のインキュベーター内で増殖した後は、いつでも、細胞の分裂や、成長因子を含む新しい培地に再懸濁することによって、再び増殖を開始することができる。
【０１５０】
基質がない場合は、細胞はフラスコの底から外れて、未分化細胞の中空球を形成する懸濁液中で増殖を続ける。in vitroで、約3-10日経過後、増殖塊（神経球）は、2-7日毎に栄養供給がされる。詳述すれば、2-4日毎に軽度の遠心及び成長因子を含む培養液中への再懸濁が行なわれる。
【０１５１】
in vitroで6-7日経過後、神経球中の個々の細胞は、鈍器を用いた神経球の物理的な分離によって分離され、詳しくは、ピペットで神経球を粉砕することによって分離される。分離された神経球由来の単細胞は、成長因子を含有する培養液に懸濁され、ヘッジホッグアンタゴニストの存在下で細胞をプレーティング（又は再懸濁）することによって、培養における細胞の分化がコントロールされる。
【０１５２】
本発明のヘッジホッグアンタゴニストの他の使用を更に説明すると、大脳内移植が、中枢神経系の更なる治療方法として浮上してきていることが知られている。例えば、損傷した脳組織を修復する一つの試みとして、成人の脳に胎生又は新生動物由来の細胞を移植する方法が提供されている（Dunnett他(1987),J Exp Biol 123:265-289及びFreund他(1985),J Neurosci 5:603-616）。様々な脳の領域由来の胎生神経細胞が、成人の脳に組み込まれて成功している。そして、そのような移植片は、行動異常を和らげることができる。例えば、基底核へのドーパミン作動性投射の障害によって引き起こされる運動障害は、胎児のドーパミン作動性神経細胞の移植によって抑えることができる。新皮質の損傷後に正常な機能が損なわれた複合認知機能も、胎児の皮質細胞の移植によって部分的に回復する。本発明の方法は、培養液中において成長状態を調整するために使用することができ、また、特に神経幹細胞のような胎生組織が使用されるところで、幹細胞の分化速度を調整するために使用することができる。
【０１５３】
本発明において使用される幹細胞は、一般的に公知のものである。例えば、いくつかの神経堤細胞の存在が確認されており、多能性で未分化神経堤細胞に相当する神経堤細胞がいくつか存在する。他の神経堤細胞としては、感覚細胞のような唯一の細胞種を発生させることができる、分化した前駆細胞に相当するものが存在する。このような幹細胞を培養する本発明の方法で使用されるヘッジホッグアンタゴニストの役割は、未分化前駆体の分化を調整できることであり、最終分化した神経細胞となる、分化した前駆細胞の発生運命の制限を調整しうることである。例えば、本発明の方法は、in vitroにおいて、ペプチド作用性又はセロトニン作用性神経細胞だけでなく、グリア細胞、シュワン細胞、クロム親和細胞、コリン作用性の交換神経又は副交感神経への神経堤細胞の分化を調整するために、使用することができる。ヘッジホッグアンタゴニストは単独で使用することもできるが、より詳しくは、神経前駆体細胞の特有の分化の最終結果を良いものにする役割を果たす、他の神経栄養因子と組み合わせて使用することも可能である。
【０１５４】
本発明のヘッジホッグアンタゴニストの存在下において培養された細胞の移植に加え、更に本発明のもう一つの側面は、中枢神経系と末梢神経系の双方における、神経細胞及び他の神経細胞の成長状態を調整するためのヘッジホッグアンタゴニストの治療への応用に関連する。ptc、ヘッジホッグ及びsomoothenedの神経分化を調整するための、神経系の発達の間、恐らく、成熟状態における活性は、場合によっては、本発明のヘッジホッグアンタゴニストが、正常細胞の維持、機能的遂行及び老化；化学的又は機械的に損傷した細胞の修復及び再生方法；ある病的状態における変性の治療などに関しては、成熟神経細胞の制御を容易にすることが期待されると示唆している。この理解を考慮すると、本発明は、以下の(i)〜(iv)から派生する神経状態（予防及び/又は重症度の減少）の治療プロトコールへの、本発明の方法の適用を特に意図している。(i)伝染性/炎症性及び腫瘍による損傷に加えて、外傷、化学障害、血管外傷及び欠損（例えば、脳卒中に起因する虚血）を含む、神経系に対する急性、亜急性、又は慢性障害、(ii)アルツハイマー病を含む神経系の老化、(iii)脊髄小脳変性症のみならず、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症などを含む神経系の慢性神経変性疾患、(iv)多発性硬化症を含む神経系又は神経系に影響する慢性的な免疫疾患。
【０１５５】
必要に応じて、本発明の方法は、中枢及び末梢神経のダメージを修復するための人工神経の生成に使用することもできる。特に、破砕又は切断された軸索が、人工器官を使用して挿管される場合、ヘッジホッグアンタゴニストを人工器官に添加することによって、成長速度や樹状突起の再生を調整することができる。典型的な神経誘導経路は、米国特許5,092,871及び4,955,892に記載されている。
【０１５６】
他の態様においては、本発明の方法は、中枢神経系において起こり得るような、腫瘍性又は増殖性の変化の治療に使用することができる。例えば、ヘッジホッグアンタゴニストは、このような形質転換細胞が、有糸分裂終了又はアポトーシス性となるように、使用することができる。従って、本発明の方法は、例えば、悪性神経膠腫、髄膜腫、髄芽細胞腫、神経外胚葉性腫瘍及び上衣腫の治療の一部に使用しても良い。
【０１５７】
好適な態様においては、本発明の方法は、悪性髄芽細胞腫及び他の原発性CNS悪性神経性腫瘍についての治療計画の一部として使用することができる。
【０１５８】
ある態様においては、本発明の方法は、髄芽細胞種の治療計画の一部として使用することができる。髄芽細胞種、すなわち原発性脳腫瘍は、小児において、最も多い脳腫瘍である。髄芽細胞種は、後頭蓋窩に生じる原発性神経外胚葉性腫瘍である。それらは、全小児脳腫瘍の約25％を占める（ミラー）。組織学的には、それらは、一般的に真性ロゼット状に配列した小円形細胞腫瘍であるが、星状細胞、上衣細胞又は神経細胞へ、いくつかの分化を示すこともある（ローク，クライフス）。PNETは、松果体（松果体芽細胞腫）及び大脳を含む他の領域の脳で生じることもある。テント上の領域に生じるこれらは、一般的に、それらのPF対象者よりも悪い方向へ向かう。
【０１５９】
髄芽細胞種/PNETは、切除後にCNSの何処でも再発することが知られており、骨に転移することさえありうる。従って、前治療は、「ドロップ型転移（dropped metastases）」の可能性を排除するために、脊髄の検査を含む。大部分は、ガドリニウム増強MRIが、この目的のための脊髄造影に代わっており、CSF細胞診断は、常法として、術後に行われている。
【０１６０】
他の態様においては、本発明の方法は、上衣腫の治療計画の一部として使用される。上衣腫は、子供の小児脳腫瘍の約10％を占める。それらは、肉眼で見て脳室の上衣膜由来の腫瘍であり、顕微鏡的にはロゼット、管及び血管周囲性ロゼットを形成している。上衣腫に関する、小児51名のCHOP母集団について報告がなされており、3/4が組織学的に良性であった。約2/3は、第4脳質の領域から生じていた。3分の1は、テント上領域に存在した。CHOPのデータと同様にSEERのデータで証明されたように、診察時の年齢は、誕生及び4歳の間で頂点に達する。年齢の中心値は約5歳である。この疾患の子供たちの多くは乳児であり、しばしば、集学的治療が求められる。
【０１６１】
更に、上記のように、形態形成シグナルは、上記の神経分化に加えて、中胚葉性及び内胚葉性の分化過程と同様に、他の内胚葉性パターン形成においても明確な役割を持って脊椎動物の他の組織発生経路に関与しているが、本発明の他の態様は、ptc、ヘッジホッグ及び/又はsmoothenedが、このような形態形成シグナルに関与しているという、従来の所見に関連する。従って、ヘッジホッグアンタゴニストからなる組成物を、細胞培養及び産生を伴う治療方法の両方、並びに非神経組織の維持のために用いることも、本発明の目的とされる。
【０１６２】
ある態様において、本発明は、消化管、肝臓及び原腸に由来するその他の臓器の形成に関与する幹細胞の分化の制御に、ptc、ヘッジホッグ及びsmoothenedが関連するという知見を利用する。shhは、消化管の形態形成に絶対不可欠である、内胚葉から中胚葉への誘導シグナルとして機能している。従って、例えば、本発明の方法のヘッジホッグアンタゴニストは、正常な肝臓の多面的代謝機能を備えることのできる、人工肝臓の維持や発達を調整するために用いることができる。典型的な態様においては、本発明の方法は、植え込み型及び体外の人工肝臓を形成するために、細胞外マトリックスへの集合に使用できる、又は、生体適合性のあるポリマーに封入できる、肝細胞を形成する消化管の幹細胞の増殖及び分化を調整するために使用することができる。
【０１６３】
他の態様としては、腹腔内移植取り込み、血管新生、in vivoにおける移植された肝組織の分化及び維持を調整するために、ヘッジホッグアンタゴニストの治療用組成を、前記人工肝臓や胎児の肝臓組織の移植と併せて用いることができる。
【０１６４】
更に他の態様としては、本発明の方法は、物理的、化学的、又は病的な損傷の後、そのような組織を調整するために、治療的に用いることができる。例えば、ヘッジホッグアンタゴニストからなる治療的組成物は、部分的な肝切除術の後、肝臓の修復に用いることができる。
【０１６５】
未発達の原腸からの膵臓及び小腸の発生は、腸の内胚葉及び中胚葉間における細胞内情報伝達に依存する。特に、腸の中胚葉の平滑筋への分化は、付近の内胚葉細胞からのシグナルに依存することが示唆されている。未発達の後腸における内胚葉由来シグナルの候補伝達物質の一つは、ソニックヘッジホッグである。例えば、Apelqvist他(1997),Curr Biol 7:801-4を参照。Shh遺伝子は、膵芽内胚葉を除く、初期の腸管内胚葉の至る所で発現しており、代わりに、膵芽内胚葉は、ホメオドメイン・タンパク質 Ipf1/Pdx1(insulin promoter factor 1/pancreatic and duodenal homeobox 1)、すなわち、初期の膵臓の発達に不可欠な調整因子を高レベルで発現している。Apelqvist他supraは、未発達の腸管におけるShhの差次的発現が、周囲の中胚葉から、特殊な小腸及び膵臓の中胚葉派生物への分化をコントロールするかどうかについて検討している。これを検証するため、膵臓上皮細胞の発生において、Shhを選択的に発現させるために、Ipf1/Pdx1遺伝子のプロモーターを使用した。Ipf1/Pdx1-Shhトランスジェニックマウスにおいては、膵臓の中胚葉は、膵臓の間充組織や脾臓よりは、むしろ腸特有の特徴である平滑筋及びカハール間質細胞に進化した。また、Shhに曝された膵臓の移植片は、腸の分化における類似の生体プログラムを経る。これらの結果は、内胚葉由来のShhの差次的発現が、腸管の様々な領域で、隣接した中胚葉の運命を左右することを証明している。
【０１６６】
従って、本発明との関連において、本発明のヘッジホッグアンタゴニストは、in vivo及びin vitroの両方において、膵臓組織の増殖及び/又は分化をコントロール若しくは調整するために使用することができる。
【０１６７】
多種多様の病的細胞の増殖及び分化の状態が存在し、一般戦略と共に、本発明の阻害物質は、例えば、インシュリンの異常発現の修正又は分化の変調という治療上の利益をもたらす。しかしながら、さらに一般的には、本発明は、本発明の阻害物質と細胞を接触させることによって、分化状態を誘導及び/又は維持し、膵臓細胞の増殖への影響及び/又は生存率を増加させる方法に関する。例えば、要求された膵臓組織の空間的配置の形成における、ptc、ヘッジホッグ、smoothenedの明らかな関与を考慮に入れると、本発明の方法は、in vitro及びin vivoの双方における、このような組織の発生及び/又は維持のための技術の一部として使用することが意図されている。例えば、ヘッジホッグ機能の変調は、β-細胞、及び、多分、消化管、脾臓、肺、泌尿生殖器（例えば、膀胱）及び原腸から派生する他の器官に由来する組織の発生及び維持のコントロールのような、非膵臓組織の発生及び維持を伴う細胞培養及び治療方法の両方に使用することができる。
【０１６８】
ある態様においては、本発明の方法は、膵臓組織に影響を与える過形成性疾患及び腫瘍性疾患の治療に用いることができ、特に、これらの疾患は、膵臓細胞の異常増殖によって特徴づけられる。例えば、膵臓癌は、膵臓のインシュリン分泌能力の変化をもたらす、膵臓細胞の異常な増殖によって特徴づけられる。例えば、膵臓癌のようなある種の膵臓の過形成は、β-細胞又は減少した島細胞集団の機能異常に起因する、低インシュリン血症をもたらす。ptc、ヘッジホッグ、smoothenedの異常なシグナル伝達が、疾患の進行を示す限り、本発明の抑制物質は、抗腫瘍療法後における組織の再生を高めるために使用することができる。
【０１６９】
さらに、異なるポイントにおける、ヘッジホッグシグナル伝達の性質の操作は、in vivo及びin vitroの双方における、膵臓組織の再生/修復のための方法の一部として使用することもできる。一つの例としては、本発明は、膵臓組織の発生の調整における、ptc、ヘッジホッグ及びsmoothenedの外見上の関与を利用することができる。一般に、本発明の方法は、物理的、化学的又は病理学的な損傷が生じた後、膵臓を治療的に調整するのに用いることができる。更に、他の態様においては、本発明の方法は、細胞培養技術に適用することができ、特に、人工膵臓組織の初期発生を高めるのに用いても良い。例えば、ヘッジホッグ活性を変えることによる膵臓組織の分化及び増殖の操作は、培養組織の特徴をより慎重にコントロールする手段を、提供することができる。ある態様においては、本発明の方法は、カプセル封入品などに使用されるような、β-島細胞を必要とする人工器官の生産を、増加させるために使用することができる。前記カプセル封入品は、例えば、the Aebischer他,米国特許4,892,538、the Aebischer他,米国特許5,106,627、the Lim,米国特許4,391,909、及びthe Sefton,米国特許4,353,888に記載されている。膵島となる初期の前駆細胞は多能性であり、それらが最初に出現した時点から、全ての小島特有の遺伝子を同時活性化すると思われる。発生過程の際、インシュリンのような小島特有のホルモンの発現は、成熟島細胞の発現特性のパターンに限定される。しかしながら、成熟島細胞の表現型は培養液中では安定ではなく、成熟β-細胞において胎生期の形質の再出現が見られる。本発明のヘッジホッグアンタゴニストを利用することによって、細胞の分化経路又は増殖率が調整される。
【０１７０】
さらに、膵臓組織の分化状態の操作は、移植、脈管化、及びin vivoにおける移植された組織の分化及び維持を促進するために、人工膵の移植手術と共に利用することができる。例えば、組織の分化に作用するヘッジホッグ機能の操作は、移植片の生存率を維持する方法として使用することができる。
【０１７１】
Bellusci他(1997),Development,124:53は、ソニック・ヘッジホッグが、in vivoにおいて、肺の間葉細胞の増殖を調整していると報告している。従って、本発明の方法は、例えば、気腫や呼吸窮迫症候群の治療において、肺組織の再生を調整するために使用することができる。
【０１７２】
Fujita他(1997),Biochem Biophys Res Commun,238:658は、ソニック・ヘッジホッグが、ヒトの肺扁平上皮癌及び腺癌の細胞で発現していると報告している。ソニック・ヘッジホッグの発現は、ヒトの肺扁平上皮癌の組織でも検出されるが、同じ患者の正常肺組織では発現していない。彼等は、ソニック・ヘッジホッグが癌細胞へのBrdUの取り込みを活性化し、それらの細胞成長を活性化しており、更に、抗-Shh-Nが、それらの細胞成長を抑制することにも気付いた。これらの結果は、ptc、ヘッジホッグ及び/又はsmoothenedが、そのような変形した肺組織の細胞成長に関連していることを示唆しており、その結果、本発明の方法が、肺の癌腫及び腺癌、並びに肺上皮を含む他の増殖性疾患における治療の一部として使用することができることを示唆している。
【０１７３】
これらの腫瘍におけるヘッジホッグ経路の関与、又は、検出されたヘッジホッグの発現、若しくは、発生の期間におけるヘッジホッグ若しくはこれら組織におけるその受容体などの証拠に基づけば、その他多くの腫瘍が、本発明の化合物を用いた治療により影響される。その様な腫瘍は、ゴーリン症候群に関連した腫瘍（例えば、基底細胞癌、髄芽細胞腫、髄膜腫等）、pctノックアウトマウスで証明された腫瘍（例えば、血管腫、横紋筋肉腫等）、gli-1増幅に起因する腫瘍（例えば、膠芽細胞腫、肉腫等）、TRC8、ptcホモログと関連する腫瘍（例えば、腎癌、甲状腺癌等）、Ext-1に関連する腫瘍（例えば、骨肉腫等）、Shh誘発の腫瘍（例えば、肺癌、軟骨肉腫等）、その他の腫瘍（例えば、乳癌、泌尿生殖器癌（例えば、腎臓、膀胱、尿管、前立腺等）、副腎癌、消化管癌（例えば、胃、腸等）等）を含むが、これらに限定されるものではない。
【０１７４】
更に本発明の他の態様においては、ヘッジホッグ・アンタゴニストからなる組成物は、骨格組織欠損のin vivoにおける治療だけでなく、in vitroにおける骨格の幹細胞のような骨格組織の発生に使用することができる。本発明は、特に、軟骨形成速度及び/又は骨形成の速度を調整するためのヘッジホッグ・アンタゴニストの使用を意図している。「骨格組織の欠損」に関しては、例えば、外科的介入、腫瘍の除去、潰瘍形成、移植、骨折、又は他の外傷若しくは変性状態の結果を問わず、どのような欠損がもたらされているにしても、骨又は骨格結合組織を修復することが期待される部位の骨又は骨格結合組織における欠損を意味する。
【０１７５】
例えば、本発明の方法は、結合組織としての軟骨組織の機能を回復するための治療計画の一部として使用することができる。その様な方法は、例えば、組織の損傷によって引き起こされる可能性のある他の機械的異常だけでなく、関節炎をもたらすような変性した磨耗の結果による、軟骨組織の欠損又は損傷の修復に有用である。組織の損傷としては、例えば、損傷した半月板組織の置換術、ひざ関節半月板切除術、損傷靭帯による関節のゆるみ、関節の悪化、骨折、又は遺伝的疾患が挙げられる。本発明の回復方法は、例えば、歯根膜手術だけでなく、形成外科又は再建外科における、軟骨基質の組織修復にも有用である。本発明の方法は、例えば、半月板、靭帯又は軟骨組織の外科的な修復のような、前の回復方法を改善するために使用しても良い。さらに、外傷後十分早期に使用された場合、変性疾患の発症又は悪化を防止しうる。
【０１７６】
本発明の一つの態様は、本発明の方法は、組織に取り込まれている軟骨細胞の分化、及び/又は増殖の速度を管理することによって、結合組織における軟骨組織の修復反応を調整するために、治療的に十分な量のヘッジホッグ・アンタゴニスト、特に、インディアン・ヘッジホッグシグナル伝達のために選択されたアンタゴニストを用いて、悪化した結合組織を処理することからなる。関節軟骨、関節間の軟骨（半月板）、肋軟骨（真性肋骨と胸骨を連結している）、靭帯及び腱のような前記軟骨組織は、特に、本発明の方法を使用する再建及び/又は再生治療における治療に適している。ここで使用されるように、再生治療は、変性が最も初期の段階、又は切迫状態である組織の予防治療だけでなく、組織の機能的な障害が明らかに顕在化している変性状態の治療を含む。
【０１７７】
ある態様においては、本発明の方法は、例えば、ひざ、くるぶし、ひじ、腰、手首、指又は足指の指関節、若しくは、側頭下顎骨の関節などのような、可動間接の軟骨の治療における治療的介入の一部に用いることができる。本治療は、関節の半月板、関節の関節軟骨、又はその両方を対象とすることができる。更に説明すると、本発明の方法は、ひざの変性疾患を治療するために使用することができる。ひざの変性疾患としては、外傷（例えば、スポーツ損傷や過剰磨耗）又は骨関節炎によるものが挙げられる。本発明のアンタゴニストは、例えば、関節鏡検査の針を用いた関節への注射によって投与してもよい。ある症例では、注射剤は、ヒドロゲル又は処理組織と製剤との、長時間で一定の接触が可能となるように、上記した他の持続放出媒体とすることができる。
【０１７８】
本発明は、更に、軟骨組織の移植及び人工器官治療の分野における本発明の使用を意図している。しかしながら、軟骨組織や線維軟骨の特徴が、例えば、関節、半月板軟骨、靭帯及び腱の間、同じ靭帯又は腱の両端の間、組織の表面部と深部の間のような異なる組織間で異なるため、問題が生じている。これらの組織の帯状配列は、力学的性質において段階的な変化を示す可能性があり、そのような条件下で分化しなかった移植組織が、適切な応答をする能力を欠く場合には不具合が生じる。例えば、半月板軟骨が、前十字靭帯を修復するために使用された場合には、組織は純粋な線維組織へ化生した。軟骨形成の速度を調整することにより、新しい環境に移植された細胞が順応するように制御し、効率的に、組織の初期発生段階の肥大性軟骨細胞に生き写しとなるように助けることによって、特にこの問題に対処するために本発明の方法を使用することができる。
【０１７９】
同様に、本発明の方法は、人工軟骨組織の分化と、それらの着床を共に高めることに使用することができる。改良された治療の必要性は、新しい軟骨組織を作り出すことを目的とした研究に動機を与えている。上記新しい軟骨組織は、コラーゲン-グルコサミノグリカン鋳型（Stone他(1990),Clin Orthop Relat Red 252:129）、単離軟骨細胞（Grande他(1989),J Orthop Res 7:208;及び Takigawa他(1987),Bone Miner 2:449）、及び、天然又は合成ポリマーに結合された軟骨細胞（Walitani他(1989),J Bone Jt Surg 71B:74; Vacanti他(1991),Plast Reconstr Surg 88:753; von Schroeder他(1991),J Biomed Mater Res 25:329; Freed他(1993),J Biomed Mater Res 27:11;及びthe Vacanti他,米国特許5,041,138）に基づいている。例えば、軟骨細胞は、培養液中において、ポリマーから形成された、生分解性、生体適合性の高い多孔性の足場上で成長させることができる。該ポリマーとしては、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、アガロースゲル、又は、高分子骨格の加水分解機能として、刺激のないモノマーに時間をかけてゆっくり分解される他のポリマーなどが挙げられる。生着が起こるまで、細胞に十分な栄養とガス交換ができるように基質が設計される。移植細胞に対して、適切な十分な細胞量及び濃度となるまで、in vitroにおいて細胞を培養することができる。基質の一つの利点は、最終生産物が患者自身の耳や鼻（一例として）とほぼ同じになるように、個個人における所望の形に鋳造又は型押し成型可能であるということにあり、又は、関節などの場合のように、移植時に上手に取り扱えるような柔軟な基質を使用することができるということである。
【０１８０】
本発明の方法の一態様においては、軟骨細胞の分化速度及び培養液中における肥大軟骨細胞の形成を管理するために、培養工程におけるある状態の間、移植片がヘッジホッグアンタゴニストと接触させられる。
【０１８１】
他の態様においては、埋め込みデバイスが、移植される基質を活発に再構築し、それを意図された機能に、より一層適合させるためにヘッジホッグアンタゴニストを用いて処理される。移植組織について上記したように、人工の移植片は、基質が移植される実際の機械的環境に相当する環境で得られていないという、同様の欠陥に悩まされる。本発明の方法による基質内での軟骨細胞の調整能力は、交換が意図された組織に類似する特徴を、移植片が獲得することを可能にすることができる。
【０１８２】
さらに他の態様においては、本発明の方法が、人工器官の装着を高めるのに使用される。例えば、本発明の方法は、歯周補綴の移植に使用することができ、
周囲の結合組織の治療によって、人工器官に関する歯周靭帯の形成が促進される。
【０１８３】
さらなる態様においては、本発明の方法は、骨格組織が欠損した動物の部位において骨が発生（骨形成）するための、治療計画の一部として使用することができる。インディアン・ヘッジホッグは、特に、最終的に造骨細胞によって置換される肥大軟骨細胞と関連している。例えば、本発明のヘッジホッグアンタゴニストの投与は、骨量の減少速度を調整するための方法の一部として使用することができる。例えば、ヘッジホッグアンタゴニストからなる組成物は、例えば、骨化「モデル」の形成過程における軟骨内骨化をコントロールするために使用することができる。
【０１８４】
本発明のさらなる態様においては、ヘッジホッグアンタゴニストは、精子形成を調整するために使用することができる。ヘッジホッグ・タンパク質、特に、Dhhは、精巣の生殖細胞の分化及び/又は増殖及び維持に関与することが明らかにされている。Dhhの発現は、Sry（精巣決定遺伝子）の活性化後間もなく、セルトリ細胞の前駆体において起こり、大人になるまで精巣で持続する。男性は生存能力はあるが、成熟精子の完全欠損により生殖能力がない。異なる遺伝的背景における発生途上の精巣の検査によれば、Dhhが、初期及び後期の双方における精子形成を調整していることが示唆されている。Bitgood他(1996), Curr Biol 6:298。好ましい態様としては、ヘッジホッグアンタゴニストは、避妊薬として使用することができる。同様に、本発明の方法のヘッジホッグアンタゴニストは、場合によっては、正常な卵巣機能を調整するために役立つ。
【０１８５】
また本発明の方法は、化粧品としての使用のみならず、上皮組織を冒す疾患の治療又は予防に幅広く適用される。一般に、該方法は処理された上皮組織の成長状態を変えるのにに有効な量のヘッジホッグアンタゴニストを、動物に投与するステップを含むものとして特徴付けられる。投与方法及び投与量は、処理される上皮組織によって様々である。例えば、局所製剤は、治療組織が皮膚又は粘膜組織のような上皮組織であることが好ましい。
【０１８６】
「創傷の治癒を促進する」方法は、治療がない場合における同様の創傷の治癒よりも、治療の効果として、より速やかな創傷治癒をもたらす。「創傷治癒の促進」は、該方法が、特に、ケラチノサイトの増殖及び/又は成長を調整することを意味し、又は、創傷が、より少ない瘢痕、より少ない創傷の収縮、より少ないコラーゲン沈着、及びより見かけ上大きな表面積で治癒することも意味する。場合によっては、「創傷治癒の促進」は、ある創傷治癒の方法が、本発明の方法と併用された場合の成功率（例えば、皮膚移植の生着率）を向上させることも意味する。
【０１８７】
外科的再建手術における著しい進歩にも関わらず、瘢痕は、正常な機能の回復及び治癒した皮膚の外観において重要な障害となりうる。ケロイドや、手又は顔の肥厚性瘢痕のような病的な瘢痕は、機能障害や肉体的奇形を引き起こす場合には、特にそうである。最も厳しい状況において、そのような瘢痕が、心理社会的苦難と経済的窮乏の生活を促進することもありうる。創傷修復は、止血、炎症、増殖及び修復の段階を含む。増殖段階は、繊維芽細胞、及び、内皮若しくは上皮細胞の増殖を伴う。本発明の方法の使用を介して、創傷の閉鎖及び/又は瘢痕組織形成の最小化を促進するために、創傷内又は創傷に近接した上皮細胞の増殖速度を制御することができる。
【０１８８】
本発明の治療は、例えば、放射線療法及び/又は化学療法に起因する、口頭及び口腔傍の潰瘍の治療における治療計画の一部としても効果がある。一般に、そのような潰瘍は、化学療法又は放射線療法後数日以内に発生する。通常、小さく、痛い、不揃いな形の病変であるこれらの潰瘍は、大抵、デリケートな灰色の壊死性の膜組織によって覆われており、炎症組織によって取り囲まれている。多くの場合、治療不足は、炎症を伴って、病変の周囲を取り囲む組織の増殖をもたらしている。例えば、潰瘍を縁取りしている上皮は、通常、増殖活性を示し、結果として、表層上皮の連続性が失われる。これらの病変は、そのサイズと、上皮の完全性が失われるため、身体を二次感染しやすくしている。日常的な食事や水の摂取は、非常に痛みを伴う事象となり、もし、潰瘍が消化管の至るところに増えた場合には、その全ての複雑な要因から、通常、下痢することは明らかである。本発明によれば、ヘッジホッグアンタゴニストの使用を含むそのような潰瘍の治療は、病気に冒された上皮の異常な増殖及び分化を減少させることができ、その結果生じた炎症性事象の重症度を軽減するのに役立つ。
【０１８９】
本発明の方法及び組成物は、例えば、乾癬のような自己免疫疾患に由来する病変などの、皮膚科学的な疾患に起因する創傷を治療するために使用することもできる。アトピー性皮膚炎は、例えば、花粉、食品、鱗屑、昆虫毒、及び植物性毒素のようなアレルゲンによって引き起こされる、免疫応答と関連するアレルギーに起因する皮膚の外傷性障害を指す。
【０１９０】
他の態様においては、水晶体嚢外摘出術の術後合併症を防ぐために、ヘッジホッグアンタゴニストの抗増殖性の組成物を、水晶体上皮細胞の増殖を抑制するために使用することができる。白内障は、難治性の目の疾患であり、白内障の治療に関する種々の研究がなされている。しかしながら、今のところ、白内障の治療は、外科的手術で行なわれている。白内障の手術は、長い間行なわれており、様々な手術方法が検討されている。嚢外水晶体摘出は、白内障を取り除くために選択される方法となっている。嚢外摘出よりも優れた本発明の技術の重要な医学的な優位性は、無水晶体症の嚢胞状黄斑浮腫及び網膜剥離の発生率低下にある。嚢外摘出は、ほとんど場合で選択されるレンズである後眼房型の眼内レンズの移植にも必要である。
【０１９１】
しかしながら、水晶体嚢外摘出術のデメリットは、手術後3年以内に最大で50％の患者に生じる可能性があり、しばしば、後発白内障と呼ばれる水晶体後嚢における混濁の発生率が高いことである。後発白内障は、嚢外レンズ摘出後に残った、赤道部及び前面の嚢における水晶体上皮細胞の増殖に起因する。後嚢に沈着し発生する繊維芽細胞に加えて、サマーリング・リング（Sommerling ring）を引き起こすこれらの細胞の増殖は、視力を低下させる後嚢の混濁を引き起こす。後発白内障の予防には、治療を施すことが好ましい。二次的な白内障形成を抑制するために、本発明の方法は、残存している水晶体上皮細胞の増殖を抑制する方法を提供する。例えば、レンズ除去後の眼前室に、ヘッジホッグアンタゴニスト製剤を含む溶液を注入することによって、沈静期の状態が続くように、前記細胞を誘導することができる。更に、上記溶液は、眼前室に注入された場合に、最低有効量を供給するように、浸透圧的にバランスがとれたものとすることが可能であり、それによって、ある特異性もって被膜下の上皮の成長を抑制することができる。
【０１９２】
本発明の方法は、例えば、上皮の下方への増殖や眼表面のへん平上皮癌等の眼球の上皮性疾患のような、角膜上皮細胞の増殖が特徴的な、角膜混濁の治療に使用することもできる。
【０１９３】
Levine他(1997),J Neurosci 17:6277は、ヘッジホッグ・タンパク質が、脊椎動物の網膜における有糸分裂生起及び光受容体の増殖を調整することができることを示唆しており、Ihhが、網膜の前駆細胞の増殖及び光受容体の分化を促進する、色素上皮由来の候補因子であることを示唆している。同様に、Jensen他(1997),Development 124:363は、ソニック・ヘッジホッグ・タンパク質のアミノ末端断片を用いた周産期におけるマウスの網膜細胞の培養処理が、ブロモデオキシウリジンを取り込む細胞の比率、総細胞数、桿体視細胞、アマクリン細胞及びミュラーグリア細胞の増加をもたらすことを立証し、ソニック・ヘッジホッグが、網膜前駆細胞の増殖を促進することを示唆した。従って本発明の方法は、網膜細胞の増殖性疾患の治療に使用すること、及び、光受容体の分化を調整することができる。
【０１９４】
更に、本発明の他の態様は、発毛をコントロールする本発明の方法の使用である。毛髪は、一般的に、ケラチン、すなわち硬い不溶性のタンパク質からなり、その主な強度は、シスチンのジスルフィド結合にある。それぞれ個々の毛髪は、円筒型の軸及び根元からなり、毛包、すなわち皮膚のフラスコ様くぼみに包み込まれている。毛包の底は、乳頭と呼ばれる指状の突起を含み、該乳頭は、血管が細胞に栄養を供給し毛髪が成長する結合組織からなる。前記軸は、皮膚表面から外側へ伸びる部分であり、前記根元は、毛髪の埋もれた部分である。根元の基部は、毛球へ広がっており、乳頭上に存在する。毛髪が作られる細胞は毛包の球内で成長し、細胞が毛包内で増殖するにつれて、それらは繊維組織の形で押出される。毛髪の「成長」は、分裂細胞による毛髪繊維の形成及び伸張を指す。
【０１９５】
当技術分野で周知のように、一般の毛周期は、3段階、すなわち成長期、退行期及び休止期に分けられる。活動期（成長期）の間、毛乳頭の表皮幹細胞が急速に分裂する。娘細胞が上方に移動し、同心円層の毛髪そのものを形成するように増殖する。移行期、すなわち退行期は、毛包における幹細胞の有糸分裂休止を特徴とする。休眠期は、休止期として知られており、その下で出現する新しい毛髪が発達する前の数週間の間、毛髪が頭皮の中に保持されている場合は、その毛包から休止期の軸を取り除く。このモデルから、有毛細胞に分化する分裂幹細胞のプールが大きくなればなるほど、更なる毛髪の成長が生じることが明らかにである。従って、毛の成長を増加又は減少させる方法は、これらの幹細胞の増殖を、それぞれ増強又は抑制することによって実施することができる。
【０１９６】
ある態様においては、本発明の方法は、カット、シェービング又は脱毛による通常の除去の代わりに、ヒトにおける毛髪の成長を減少させる方法として使用することができる。例えば、本発明の方法は、多毛症などの、異常に早い又は濃い発毛という性質を持つ多毛症の治療として使用することができる。ある典型的な態様においては、ヘッジホッグアンタゴニストは、多毛症、すなわち異常な多毛により特徴付けられる疾患を管理するために、使用することができる。本発明の方法は、脱毛期間を延長する方法としても提供される。
【０１９７】
更に、ヘッジホッグアンタゴニストは、細胞障害性よりは、しばしば上皮細胞に対して細胞増殖抑制性であることがあり、そのような試薬は、例えば、放射線誘発死のような効果に対し、細胞周期におけるS期への進行を要求する細胞毒性試薬から、毛包細胞を保護するために使用することができる。本発明による治療は、毛包細胞を静止状態とすることによる毛包細胞の保護、たとえば、細胞がS期に進行することを阻止することによって、毛包細胞が、分裂期細胞死又はプログラム化された細胞死を起こすことを阻止するという保護を提供することができる。例えば、ヘッジホッグアンタゴニストは、通常、抜け毛を引き起こす化学療法又は放射線療法を受ける患者に用いることができる。そのような治療の間における細胞周期の進行を抑制することによって、本発明の治療は、それ以外に細胞死プログラムの活性化に起因するであろう死から、毛包細胞を保護することができる。治療が完了した後は、本発明の方法は、毛包細胞増殖の抑制を同時に取り除くすることによって除去することもできる。
【０１９８】
本発明の方法は、脱毛性毛包炎、網状痕跡性紅斑性毛嚢炎又はケロイド性毛嚢炎のような、毛嚢炎の治療に使用することもできる。例えば、ヘッジホッグアンタゴニストの化粧料組成物を、偽性毛嚢炎、殆どの場合、首の顎下腺部位に起こる慢性疾患やシェービングと関連する慢性疾患、紅斑性丘疹や埋もれた毛を含む吹出物のような特徴的病変に、局所的に使用することができる。
【０１９９】
本発明の他の態様においては、上皮性派生組織の分化を誘導するために及び/又は増殖を抑制するために、本発明の方法を使用することができる。これらの分子のこのような形態は、上皮組織に関連している過形成及び/又は新生物の状態の治療に関する、分化の治療の基礎を提供することができる。例えば、このような製剤は、皮膚の細胞の異常な分化又は成長がある、皮膚疾患の治療に利用することができる。
【０２００】
例えば、本発明の医薬品製剤は、例えば、基底細胞癌やへん平上皮細胞癌のような、高増殖率の種々の皮膚癌によって特徴づけられるような表皮性新生物の状態を治療するだけでなく、角化症のような表皮性過形成の状態の治療を対象としている。本発明の方法は、特に、例えば乾癬又はアトピー性皮膚炎によって引き起こされるような、表皮の病的な増殖及び/又は角質化を伴う、皮膚疾患の皮膚に影響を及ぼす自己免疫疾患の治療に使用することもできる。
【０２０１】
乾癬、へん平上皮細胞癌、角化棘細胞腫、光線性角化症のようなよく見られる多くの皮膚疾患は、局部的な異常な分化及び成長という性質を持っている。例えば、皮膚上のうろこ状で赤い隆起した斑によって特徴付けられる乾癬においては、ケラチノサイトが、通常よりも更に急速に増殖することが知られており、不完全に分化することが知られている。
【０２０２】
一つの態様としては、本発明の組成物は、皮膚細胞の異常増殖に起因する角質化疾患に関係がある皮膚疾患の治療に適しており、疾患は、炎症性又は非炎症性構成要素によって特徴づけられる。例えば、静止又は分化を促進するヘッジホッグアンタゴニストの治療製剤は、それらが皮膚、粘膜又は爪であろうと、乾癬の各種形態を治療するために使用することができる。上記したように乾癬は、一般的には、著しい増殖活性化及び「再生」経路に沿った分化を示す、表皮角化細胞によって特徴づけられる。本発明の抗増殖性物質の実施例を使用した治療は、病的な表皮の活性化を逆行させるために使用することができ、疾患の持続的な緩和のための基礎を提供することができる。
【０２０３】
さまざまな他の角化病変は、本発明の方法を用いた治療候補でもある。例えば、光線性角化症は、日光露光部又は照射皮膚に生じる、表層性で炎症性の前癌性腫瘍である。病変は、可変性の外皮を伴う茶色くなった紅斑である。現在の治療としては、切除及び凍結外科手術がある。これらの治療は痛みを伴い、また一方で、しばしば、美容上受け入れられない傷を生じる。従って、光線性角化症のような角化症の治療は、病変における表皮性/類表皮性細胞の過剰増殖を抑制するに十分な量のヘッジホッグアンタゴニスト組成物の利用、好ましくは、局所的な利用を含む。
【０２０４】
にきびは、本発明の方法によって治療され得る、更なる他の皮膚科学的病気である。尋常性座瘡は、例えば、十代の若者及び若年成人に、通常起こる多因子疾患であり、顔及び上幹への炎症性及び非炎症性の病変の出現に特徴づけられる。尋常性座瘡を生じる基本的な欠陥は、異常に活発な脂線管における角化異常である。角化異常は、皮膚及び毛包微生物の正常な動きを阻止し、その際、プロピオニバクテリウム・アクネス菌、スタフィロコッカス・エピデルミディス菌、及び、ピチロスポルム・オバレ、つまり酵母菌による、リパーゼの放出を促進する。抗増殖性物質であるヘッジホッグアンタゴニスト、特に局所製剤を用いた治療は病変形成を引き起こす管の移行期の特徴、例えば角化異常を予防するのに有用である。本発明の治療には、さらに、抗生物質、レチノイド及び抗男性ホルモンを含んでもよい。
【０２０５】
本発明は、様々な皮膚炎を治療する方法も提供する。皮膚炎は、そう痒性、紅斑性、うろこ状、疱疹、滲出、亀裂又は痂皮である、不完全に区切られた病変についての記述用語である。これらの病変は、幅広い様々な原因の何れかから生じる。最も一般的な皮膚炎は、アトピー性、接触性、おむつ皮膚炎である。例えば、脂漏性皮膚炎は、紅斑、乾燥性、湿性又は脂性の落屑、様々な範囲に、黄色の表面が硬い斑点、特に、過量の乾燥鱗屑の剥離によるフケを伴う、慢性で、一般的にはそう痒性の皮膚炎である。本発明の方法は、通常慢性であって、一般的には湿疹様皮膚炎であるうっ滞性皮膚炎の治療に、使用することもできる。光線性皮膚炎は、太陽、紫外線又はX-又はガンマ-線ような化学線にさらされることに起因する皮膚炎である。本発明によれば、上皮細胞の不必要な増殖に起因する、ある種の皮膚炎の兆候に対する治療及び/又は予防に、本発明の方法を使用することができる。様々な皮膚炎のためのそのような治療には、外用及び全身性のコルチコステロイド、かゆみ止め及び抗生物質も含むこともできる。
【０２０６】
例えば、本発明の方法が血管形成を抑制するために使用されてもよいことが意図されている。ヘッジホッグは、血管形成を促進することが知られている。ヘッジホッグ・タンパク質を含浸しマウスに挿入したマトリゲル・プラグが、十分な新血管形成を証明したが、ヘッジホッグを伴わないマトリゲル・プラグは、脈管化を殆ど示さなかった。ヘッジホッグ・タンパク質は、通常は、血液が供給されていないマウスの角膜の脈管化を増加させることもできる。ptc-1遺伝子は、大動脈の内皮細胞、血管平滑筋細胞、大動脈の外膜の繊維芽細胞、冠状動脈の脈管構造及び心房や心室の心筋細胞を含む、正常な脈管組織内で発現している。これらの組織は、ヘッジホッグ・タンパク質にも感受性を示す。外因性ヘッジホッグを用いた治療は、ptc-1発現の上方制御を引き起こす。加えて、ヘッジホッグ・タンパク質は、in vivoにおいて、血管平滑筋細胞の増殖を促進する。ヘッジホッグ・タンパク質は、VEGF、bFGF、Ang-1及びAng-2のような血管由来の成長因子の発現を増加させる繊維芽細胞をもたらす。最後に、ヘッジホッグ・タンパク質は、虚血性の損傷からの回復を促進し、側副血管の形成を促進することが知られている。
【０２０７】
ヘッジホッグが血管形成を促進するならば、特に、ヘッジホッグ・シグナル伝達の或るレベルが血管形成に必要である状況において、ヘッジホッグアンタゴニストが、血管形成阻害薬として作用することが期待される。
血管形成は、多くの疾患において重要である。持続性で無秩序な血管形成は、一連の病状、すなわち腫瘍の転移及び内皮細胞による異常な増殖において発生する。脈管構造は、これらの状態の下で見られる病理学的損傷をサポートする血管形成プロセスの結果として、作られる。無秩序な血管形成に起因して作られたさまざまな病理学的状態は、血管形成に依存する疾患や血管形成に関連する疾患として、一緒に分類されている。血管形成プロセスのコントロールのための治療は、これらの疾患の抑止又は緩和につなげることができる。
【０２０８】
血管形成により引き起こされ、血管形成によりサポートされ、又は血管形成と関連する疾患は、眼血管新生疾患、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶反応、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖症、流行性結膜炎、ビタミンA欠乏症、コンタクトレンズの過剰装用、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎、翼状片乾性角膜炎、シェーグレン、酒さ性座瘡、小フリクテン性角膜炎、梅毒、マイコバクテリア感染、脂質変性、化学的熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染、帯状ヘルペス感染、原虫感染症、カボジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン辺縁変性症（Terrien's marginal degeneration）、辺縁表皮剥離（marginal keratolysis）、関節リウマチ、全身性狼瘡、多発性動脈炎、外傷性傷害、ヴェグナー・サルコイドーシス（Wegeners sarcoidosis）、強膜炎、スティーブンス・ジョンソン・疾患（Stevens Johnson disease）、類天疱瘡放射状角膜切除術、角膜組織不適合性、関節リウマチ、変形関節炎慢性炎症（例えば、潰瘍性大腸炎、クーロン病）、血管腫、オスラー・ウェーバー・ランデュ・疾患（Osler-Weber-Rendu disease）及び遺伝性出血性末梢血管拡張症がある。
【０２０９】
さらに、血管形成は、癌においても重要な役割を果たしている。腫瘍は、栄養を供給するため、及び、細胞の老廃物の除去をするための血液の供給なしには、大きくなることはできない。血管形成が重要とされる腫瘍は、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、神経芽細胞腫、骨肉腫のような固形腫瘍、及び、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマ及び化膿性肉芽腫のような良性腫瘍を含む。発見されている血管形成因子は、いくつかの固形腫瘍と関連している。血管形成の予防は、これらの腫瘍の成長、及び、腫瘍の存在に起因する、動物に生じた損傷を食い止めることができる。血管形成は、白血病、すなわち白血球の無制限な増殖が起こり、一般的に、貧血、血液凝固能の低下、及び、リンパ節肝臓及び脾臓の腫大を伴う、骨髄のさまざまな急性又は慢性腫瘍性疾患の何れかのような、血液由来の腫瘍とも関連している。血管形成は、白血病様腫瘍を生じさせる骨髄における異常性に、重要な役割を果たしていると考えられている。
【０２１０】
腫瘍成長に加え、血管形成は転移において重要である。最初に、血管形成が重要であるのは、癌細胞が血流に入り、体中の至るところに循環することを可能とする、腫瘍の脈管化にある。腫瘍細胞が原発部位を離れて、続発の転移部位に定着した後、新しい腫瘍が成長及び拡大する前に、血管形成が起こる必要がある。従って、血管形成の予防は、原発部位における腫瘍性成長を含むこともある、腫瘍の転移の予防をもたらす。
【０２１１】
血管形成は、生殖や創傷治癒のような、正常な生理的プロセスにも関連する。血管形成は、排卵において、及び受精後の胞胚着床においても重要なステップでもある。血管形成の予防は、無月経の誘発、排卵阻害又は胞胚着床の防止のために使用することができる。
【０２１２】
本発明は、呼吸窮迫症候群、又は、不適切な肺の表面張力に起因する他の疾患の治療及び/又は予防に、有用であると期待されている。呼吸窮迫症候群は、肺の肺胞の不適切な表面に起因する。脊椎動物の肺は、表面活性剤、すなわち、表面張力が肺の膨張時に上昇し、肺の収縮時に減少する原因となる、脂質とタンパク質の混合複合物を含有する。肺の収縮時において、表面活性剤は、他の方法で肺胞虚脱を促進する表面張力がなくなるように減少する。呼気時に虚脱しない含気肺胞は、血管と肺胞ガスの間の持続的な酸素と二酸化炭素の運搬を可能にし、次の吸気時に膨らむ力はそれほど必要とされない。膨張の間、肺の表面活性剤は、肺胞の表面領域が増加するに伴って表面張力を増加させる。肺胞を拡張することによって上昇した表面張力は、これらの気腔における過膨張を阻止し、吸い込まれた空気を、あまり含気していない肺胞に回そうとし、その結果、均一な肺含気を促進する。
【０２１３】
呼吸窮迫症候群は、特に、未熟児の間に良く見られる。肺表面活性剤は、通常、胎生期の終わりの6週間までに、非常に遅い速度で合成される。正常な妊娠期間より6週間以上早く生まれた乳幼児は、不適正な量の肺表面活性剤と不適正な表面活性剤の合成速度を伴って生まれるリスクが高い。乳幼児が生まれるのが早ければ早いほど、表面活性剤欠乏はより深刻である。深刻な表面活性剤欠乏は、出生後の数分又は数時間以内に呼吸不全を引き起こす可能性がある。最大限の呼気努力にもかかわらず、拡張する肺の能力が減少するため、表面活性剤の欠損は、進行性の肺胞虚脱（肺拡張不全）を引き起こす。結果として、不十分な量の酸素が、乳幼児の血液に到達する。RDSは、特に、表面活性剤の生合成における障害の結果として、成人でも同様に、起こる可能性がある。
【０２１４】
未熟児の肺組織は、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路において高い活性を示す。ヘッジホッグアンタゴニストを使用したこの経路の抑制は、層状体の形成を増加させ、表面活性剤の生合成に関連する遺伝子の発現を増加させる。層状体は、表面活性剤の生合成に関連するサブセルラー構造である。このような理由によって、ヘッジホッグアンタゴニストを使用した未熟児の治療は、表面活性剤の生合成を促してRDSを改善する。成人RDSがヘッジホッグ経路の活性化に関与する場合は、ヘッジホッグアンタゴニストを用いた治療も有効である。
【０２１５】
更に、ヘッジホッグアンタゴニストの使用は、特に、冒された組織及び/又は細胞がヘッジホッグ経路の高い活性化を示す疾患を対象とすることが意図されている。gli-1、gli-2及びgli-3を含むgli遺伝子の発現は、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路によって活性化される。gli-1の発現は、広範な組織や疾患の至るところにおいて、ほとんど一貫して、ヘッジホッグ・シグナル伝達活性と相互に関係があるが、gli-3はそれより関連は少ない。gli遺伝子は、ヘッジホッグ・シグナル伝達の最大効果を発現させるために必要である多くの遺伝子の発現を始動させる、転写調節因子としてコード化されている。しかしながら、Gli-3転写因子は、ヘッジホッグエフェクター遺伝子のリプレッサーとしても作用しているため、gli-3の発現は、ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の効果の減少を引き起こす。Gli-3が転写活性化因子又はリプレッサーとして働くかどうかは、翻訳後の事象に依存するため、Gli-3タンパク質の活性化型（抑制型に対して）を検出するための方法が、ヘッジホッグ経路活性化の信頼できる測定方法ともなるであろうと期待されている。gli-2遺伝子の発現が、ヘッジホッグ経路活性化の信頼できるマーカーを提供するとして期待されている。gli-1遺伝子は、幅広い癌、過形成及び未熟肺において強く発現しており、ヘッジホッグ経路の相対的な活性化に関するマーカーとして有用である。更に、gli遺伝子が高発現している未熟肺のような組織は、ヘッジホッグ抑制物質によって強く影響される。従って、gli遺伝子の発現の検出が、特に、ヘッジホッグアンタゴニストを用いた治療の恩恵を受ける組織及び疾患を、同定するための強力な検出手段として使用されることが期待される。
【０２１６】
好ましい態様としては、転写産物の直接検出、又は、タンパク質レベル若しくは活性の検出によって、gli-1の発現レベルが検出される。転写産物は、gli-1の転写産物やそれから合成されたcDNAに対するプローブのハイブリダイゼーションによるような、幅広い技術の何れかを使用して検出してもよい。周知の技術には、ノーザンブロッティング、逆転写PCR及び転写レベルのマイクロアレイ解析が含まれる。Gli蛋白質レベルを検出するための方法には、ウエスタンブロッティング、免疫沈降、二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（2D SDS-PAGE）（Gliタンパク質の位置が既に決定されたスタンダードと比較することが好ましい。）、及び質量分析が含まれる。質量分析は、特定のサンプルにおける、数多くの異なるタンパク質レベルのハイスループットな同定ができる一連の精製ステップと一緒に、行なってもよい。質量分析及び2D SDS-PAGEは、タンパク質分解の事象、ユビキチン化、リン酸化反応、脂質修飾等を含む、たんぱく質の転写後の修飾を同定するために使用することもできる。Gli活性は、基質DNAへの結合、又は、in vitroにおける標的プロモーターの転写活性を分析することによって判断することもできる。ゲルシフト解析、DNAフットプリント法及びDNA-タンパク質架橋法は、DNA上のGli結合部に結合するタンパク質の存在を、判断するために使用することができる。
【０２１７】
好ましい態様においては、Gli転写レベルが測定され、異常な高gliレベルを示す疾患或は病的組織が、ヘッジホッグアンタゴニストを用いて治療される。未熟肺組織、肺癌（例えば、腺癌、気管支肺胞腺癌、小細胞癌）、乳癌（例えば、劣性腺管癌、劣性小葉癌、管状腺癌）、前立腺癌（例えば、腺癌）、及び良性の前立腺肥大は、特定の場合に、すべてgli-1発現レベルの強い上昇を示す。従って、gli-1発現レベルは、ヘッジホッグアンタゴニストを用いて治療されるべきこれらの組織を決定するための有力な、診断デバイスである。さらに、尿路上皮細胞（例えば、膀胱癌や他の泌尿生殖器）の癌は、同様に、特定の場合にgli-1レベルを上昇させることがあるという、十分相関性のある証拠が存在する。例えば、染色体9q22上の異型接合性の喪失が、膀胱癌に共通していることが知られている。ptc-1遺伝子はここに位置し、ptc-1機能喪失は、その他たくさんの癌型において見られるように、恐らく、過剰増殖の部分的原因であろう。従って、そのような癌は、同様に、高いgli発現を示し、ヘッジホッグアンタゴニストを用いた治療に、特に敏感に反応する。
【０２１８】
ptc-1及びptc-2の発現もまた、ヘッジホッグ・シグナル伝達によって活性化されるが、これらの遺伝子は、ヘッジホッグ経路活性化のマーカーとしては、gli遺伝子より劣っている。ある組織においては、ヘッジホッグ経路が高活性であっても、ptc-1又はptc-2の1つだけが発現している。例えば、精巣の発達においては、インディアン・ヘッジホッグが重要な役割を果たし、ヘッジホッグ経路は活性化されるが、ptc-2だけが発現している。従って、両方の遺伝子の同時測定が、ヘッジホッグアンタゴニストを用いた治療のための有用な組織指標として期待されているが、これらの遺伝子は、ヘッジホッグ経路活性化に関するマーカーとして単独では信頼できない。
【０２１９】
本発明の方法によって治療される病気は、疥癬のような、非ヒトに特有の疾患である。
更に、本発明の他の態様においては、本発明の方法は、ヒトの癌の治療において使用することができ、特に、基底細胞癌及び皮膚のような他の上皮組織の腫瘍が挙げられる。例えば、ヘッジホッグアンタゴニストは、本発明の方法において、基底細胞母斑症候群（BCNS）及び他のヒトの癌腫、腺癌、肉腫などの、治療の一部として使用することができる。
【０２２０】
本発明の化合物は、放射線療法又は化学療法のような他の抗癌治療の実施より前に、同時に、又はその後に投与してもよい。適当な細胞増殖抑制性化学療法の化合物としては、(i)シタラビン、フルダラビン、5-フルオロ-2’-デオキシウリジン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア又はメトトレキサートのような代謝拮抗剤、(ii)ブレオマイシンのようなDNA−断片化剤、(iii)クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド又はナイトロジェン・マスタードのようなDNA-架橋剤、(iv)アドリアマイシン（ドキソルビシン）又はミトキサントロンのような挿入剤、(v)L-アスパラギナーゼ、シクロヘキシミド、ピューロマイシン又はジフテリア毒素のようなタンパク質合成阻害剤、(vi)カンプトセシン又はトポテカンのようなトポイソメラーゼI毒素、(vii)エトポシド（VP-16）又はテニポシドのようなトポイソメラーゼII毒素、(viii)コルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチン又はビンクリスチンのような微小管作用薬、(ix)フラボピリドール、スタウロスポリン、STI571（CPG57148B）又はUCN-01（7-ヒドロキシスタウロスポリン）のようなキナーゼ阻害剤、(x)チオプラチン、PS-341、フェニルブチレート、ET-18-OCH3又はファーネシル転移酵素阻害剤（L-739749，L-744832）のような種々の治験薬、ケルセチン、レスベラトロル、ピセタノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸及びそれらの誘導体のようなポリフェノール類、(xi)糖質コルチコイド又はフェンレチニドのようなホルモン類、(xii)タモキシフェン、フィナステライド、LHRHアンタゴニストのようなホルモンアンタゴニスト類が含まれるが、制限されるものではない。ある態様においては、本発明の化合物は、シスプラチン、タキソール、タキソテール及びマイトマイシンCから選択される、細胞増殖抑制性化合物と同時に投与される。
【０２２１】
本発明において使用することができる活性化合物の他の群は、細胞死受容体に結合することによって、アポトーシスに対する、感受性を増加させるか誘引するもの（細胞死受容体アゴニスト）である。そのような細胞死受容体のアゴニストは、腫瘍壊死因子ａ（TNF-α）、腫瘍壊死因子β（TNF-β，リンフォトキシン-α）、LT-β（リンフォトキシン-β）、TRAIL（Apo2L，DR4リガンド）、CD95（Fas，APO-1）リガンド、TRAMP（DR3，Apo-3）リガンド、DR6リガンド、同様に前記リガンドのいずれかの誘導体及び断片のような、細胞死レセプターリガンドを含む。ある態様においては、細胞死レセプターリガンドは、TNF-αである。他のある態様においては、細胞死レセプターリガンドは、Apo2L/TRAILである。更に、細胞死レセプターアゴニストは、抗-CD95抗体、抗-TRAIL-R1（DR4）抗体、抗-TRAIL-R2（DR5）抗体，抗-TRAIL-R3抗体、抗-TRAIL-R4抗体、抗-DR6抗体、抗-TNF-Rl抗体及び抗-TRAMP（DR3）抗体、同様に、前記抗体の断片及び誘導体のような細胞死レセプターに対するアゴニスティック抗体からなる。
【０２２２】
細胞がアポトーシスを起こしやすくするために、本発明の化合物は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。「放射線療法」という用語は、新生組織形成の治療における、電磁波放射線又は微粒子放射線の使用を意味する。放射線療法は、腫瘍及び正常組織において再生細胞の死が生じるであろう標的領域に、高線量放射線を照射するという原理に基づいている。線量計画は、一般的に、放射線吸収量（rad）、照射時間及び分割照射の点から決められ、癌専門医によって慎重に決められる。患者が受ける放射線量は、体の他の臓器との関連における腫瘍の位置及び腫瘍の広がりを含む、種々の検討材料に依存する。放射線治療薬としては、放射線治療及び技術的に公知なもの（Hellman, Principles of Radiation Therapy, Cancer, in Principles I and Practice of Oncology, 24875 (Devita他,4th ed., vol 1, 1993））が挙げられるが、これによって限定されるものではない。放射線療法における最近の進歩は、三次元原体・外照射療法、強度変調放射線治療（IMRT）、定位的放射線治療、及び、近接照射法（組織内照射）、後者は、埋込型「シード」として腫瘍の中に直接放射物の根源を配置することを含む。これらの最新の治療様式は、腫瘍に対してより高い放射線量で行い、標準の外照射療法と比較してそれらの効率を高める。
【０２２３】
β線放出核種による電離放射線は、電離粒子（電子）の穏やかな線エネルギー付与（LET）や、中間的な飛距離（典型的には、組織中で数ミリメートル）のために、放射線治療用途に最も有用であると考えられている。より低レベルのガンマ線はより遠方まで作用する。アルファ粒子は全く正反対であり、非常に高いLETで照射されるが、極めて範囲が限定されるため、治療を受ける組織の細胞と密接に接触させなければならない。更に、アルファ放射体は、通常、重金属であって、可能な化学種が限定され、処置領域から放射性核種が漏れる危険性がある。取り扱われる腫瘍に応じて、全ての放射体が、本発明の範囲に含まれる。さらに、本発明は、紫外（UV）線、高エネルギー可視光線、マイクロ波放射（温熱治療）、赤外線（IR）及びレーザーのような非電離放射線のタイプを包含する。本発明の特定の態様においては、UV線が適用される。
【０２２４】
好ましい態様においては、本発明の方法は、基底細胞癌の治療（又は予防）に関する予防計画の治療の一部として使用することができる。ヘッジホッグ・シグナル伝達経路の調整解除は、ptc突然変異によって引き起こされる基底細胞癌の一般的特徴である。一貫したヒトptc mRNAの過剰発現は、家族性や散発性のBCCの腫瘍で説明されており、in situハイブリッド形成法によって測定することができる。ptcは、負の自動調節を示すため、ptcを不活性化する変異は、変異Ptcの過剰発現を引き起こすことが予想されうる。先の調査は、ヘッジホッグ・タンパク質の過剰発現が腫瘍形成の原因ともなると証明している。ソニック・ヘッジホッグ（Shh）が、そのマウスにおける腫瘍形成において役割を果たしていることが研究によって示唆されており、その研究においては、トランスジェニックマウスが、たった2〜3日の皮膚発達の後、全皮膚表面にわたって多発性BCC様の表皮性増殖を含むBCNSの外観に発達した皮膚において、Shhを過剰に発現する。BCCからのShhヒト遺伝子における変異についても説明され、ヒトのShh又は他のHh遺伝子がヒトにおける優性癌遺伝子として働く可能性があることが示唆された。散発的なptc突然変異は、いくつかのUV-特有の変異である、他の正常人由来のBCCにおいても見られる。散発性BCCにおける最近のある研究においては、CT又はCCTTの何れかが変化する5つのUV-特別型変異が15の腫瘍から発見され、ptcの変異を含むことが決定された。BCC及び神経外胚葉性腫瘍における散発性ptc変異についての、最近の別の分析は、BCCで見つかった3つのptc変異の一つにおける、あるCTの変化を明らかにしている。例えば、Goodrich他(1997),Science 277:1109-13; Xie他(1997),Cancer Res 57:2369-72; Oro他(1997),Science 276:817-21; Xie他(1997),Genes Chromosomes Cancer 18:305-9; Stone他(1996), Nature 384:129-34;及びJohnson他(1996),Science 272:1668-71参照。
【０２２５】
本発明の方法は、BCNSを伴う患者の治療、例えば、BCC、又は、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ若しくは機能獲得smoothenedに起因する疾患の他の影響を予防するために使用することができる。基底細胞母斑症候群は、幼齢で発症する多発性BCCによって特徴づけられる、めずらしい常染色体の優性疾患である。BCNSの患者は、これらの腫瘍の進行に非常に影響を受けやすく、10代において、多くの数の腫瘍が、主に皮膚の日光露出部に現れる。これらの疾患は、肋骨、頭及び顔の変化、及び、時々、多指症、多合指症、及び二分脊椎を含む、多くの発育異常も引き起こす。それらは、卵巣及び心臓の線維腫、皮膚及びあごの嚢胞、及び、中枢神経系における髄芽細胞腫及び髄膜腫のようなBCCに加えて、多くの腫瘍も発達させる。本発明の方法は、BCNS及び非-BCNSにおける前記腫瘍タイプを予防又は治療するために使用することができる。BCNS患者の研究は、彼等が、ptc遺伝子におけるゲノム変異のみならず散発的な変異を持つことを示しており、これらの腫瘍が、この疾患の根本的な原因であることを示唆している。
【０２２６】
もう一つの側面においては、本発明は、ヘッジホッグアンタゴニストからなる医薬品製剤を提供する。本発明の方法に使用されるヘッジホッグアンタゴニストは、例えば、水、緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）、又は、適切なそれらの混合物のような、生物学的に許容できる媒体と共に投与するために、従来法によって調合してもよい。選択された媒体における活性剤の最適な濃度は、医薬品化学者によく知られた手順に従って、経験的に決定される。ここで使用される「生物学的に許容される媒体」には、所望される医薬品製剤の投与経路にふさわしい、分散媒などのありとあらゆる溶媒が含まれる。このような薬学的な活性物質のための媒体の使用は、当技術分野において周知である。従来の媒体又は活性物質がヘッジホッグアンタゴニストの活性と相反する場合を除いて、本発明の医薬品製剤において使用することができる。適切な賦形剤及び他のタンパク質を含む処方は、例えば、書籍Remington's Pharmaceutical Sciences (Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, Easton, Pa., USA 1985)に、記載されている。これらの処方は、注射可能な「沈殿物の形態」を含む。
【０２２７】
本発明の医薬品製剤は、動物用組成物、例えば、犬などの飼育動物又は畜産動物の治療のような動物用用途に適した、ヘッジホッグアンタゴニストの医薬品製剤を含むこともできる。
【０２２８】
注入の方法は、再装薬又は生分解可能な装置によって提供することもできる。さまざまな徐放性のポリマー装置が、タンパク質に関連する生物医薬品を含む薬剤の輸送を制御するために、近年、in vivoにおいて、開発及び試験が行なわれている。生分解性及び非分解性ポリマーの双方を含む、さまざまな生体適合性ポリマー（ヒドロゲルを含む）が、特定の標的部位でヘッジホッグアンタゴニストを持続的に放出するための埋設物を形成するために使用される。
【０２２９】
本発明の組成物は、処方され、投薬され、有効な医療行為と調和する方法で投与される。このような状況において考慮する要因としては、治療される特定の疾患、処理される特定の哺乳類、個々の患者の臨床症状、疾患の原因、薬剤の輸送部位、投与方法、投与スケジュール及び薬学化学者に周知の他の要因が含まれる。投与される化合物の「有効量」は、このような考慮すべき要因によって決定され、ヘッジホッグ経路のシグナル伝達を減少させるために必要な最小量、又は、ヘッジホッグ・シグナル伝達に応答する腫瘍の大きさ、体積、質量、若しくは、本発明の化合物を投与しない場合に対応する増加に対して、これらの腫瘍の大きさ、容積、質量の減少を引き起こすのに必要な最小量である。また、化合物の「有効量」は、悪性細胞の数の減少、又は、悪性細胞の数の増加における速度の減少に必要な量を意味する。あるいは、「有効量」は、抗-ヘッジホッグ経路感受性腫瘍に苦しむ患者の生存期間を増加させるために要求される、本発明の化合物の量である。このような量は、哺乳類全体として、又は正常細胞に対して毒性のある量を下回っても良い。良性症状に対しては、「有効量」は、その特定の兆候や症状の重症度を減少させるために要求される、本発明の化合物の量を意味する。
【０２３０】
一般に、1回につき非経口で投与される本発明の化合物の、初期の薬学的に効果的な量は、一日あたり、患者の体重当りおよそ0.01〜100mg/kg、例えばおよそ0.1〜20mg/kg、例えば、0.3〜15mg/kg/dayである。タブレット及びカプセルのような経口単位の投与剤型は、およそ25から1000mgの本発明の化合物を含有する。
【０２３１】
本発明の組成物は、経口、局所、経皮、非経口、皮下、直腸、腹腔内、肺内、及び経鼻、並びに、局所療法を望む場合には、病巣内投与を含む好適な方法によって投与してもよい。もちろん、それらは、それぞれの投与経路に適した形態で投与される。例えば、それらは、タブレット又はカプセルの形状、注射、吸入、目薬、軟膏、座薬、制御された放出パッチ等によって投与され、注射、注入又は吸入による投与、ローション又は軟膏による局所的な投与、及び座薬による直腸内投与である。経口及び局所投与が好ましい。非経口の注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与が含まれる。適当な経口投与形態の例は、およそ25mg、50mg、100mg、250mg又は500mgを含む、およそ90〜30mgの無水ラクトース、およそ5〜40mgのクロスカルメロースナトリウム、およそ5〜30mgのポリビニルピロリドン（PVP）K30、及びおよそ1〜10mgのステアリン酸マグネシウムと調合されたタブレットである。粉末成分が最初に混合され、次いでPVP溶液と混合される。結果として生じる組成物は、乾燥したり、粒状にしたり、リン酸マグネシウムと混合したり、従来の機器を用いて、タブレットの形状に固めることができる。エアロゾル製剤は、リン酸緩衝液のような適切な緩衝溶液に、本発明の化合物、例えば、5-400mgを、溶解することによって調製することが可能であり、必要に応じて、例えば、塩化ナトリウムのような塩である強壮化剤（tonicifier）を加えることができる。溶液は、一般的には、不純物や混入物質を除去するために、例えば0.2ミクロンのフィルターを使用して濾過される。局所製剤は、軟膏、クリーム、液剤、粉末、溶剤、ペッサリー、スプレー、噴霧剤及びカプセル剤が含まれる。軟膏及びクリームは、増粘剤及び/又はゲル化剤及び/又は溶剤を添加した、適切な水溶性基材又は油性基剤を用いて処方してもよい。このような基材は、水、及び/又は、流動パラフィンのような油、又は、落花生油若しくはヒマシ油のような植物油、又は、ポリエチレングリコールのような溶液などの油を含有する。使用される増粘剤は、軟パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリル・アルコール、ポリエチレングリコール、マイクロクリスタリン・ワックス及び蜜ろうを含有する。液剤は、水溶性基材又は油性基材を用いて処方してもよく、乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤又は増粘剤の1種以上を含有してもよい。外用の粉末は、例えば、タルク、乳糖又は澱粉などの適切な粉末基剤を用いて処方してもよい。点滴は、分散剤、溶解補助剤又は懸濁化剤の一種以上からなる、水溶性基剤又は非水溶性基剤を用いて処方してもよい。
【０２３２】
ここで使用される「非経口投与」及び「静脈投与」の用語は、腸内投与及び局所投与以外の投与方法を意味し、一般的に、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内及び胸骨内注入及び注射を含む注入による投与方法を意味する。
【０２３３】
ここで使用される「全身投与」、「全身投与される」、「末梢投与」及び「末梢血管から投与される」の用語は、化合物、薬剤又は直接中枢神経系に入るもの以外の他の物質を投与することを意味し、それが患者の体系に入り、代謝作用及び皮下投与等他の類似したプロセスの対象となるような投与を意味する。
【０２３４】
これらの化合物は、経口、例えば、スプレーによるような経鼻、直腸、膣内、非経口、嚢内、及び、局所を含む投与方法によって、治療のためにヒト及び他の動物に投与してもよく、局所には、粉末、軟膏、又は、口腔及び舌下を含む液滴によるようなものが挙げられる。
【０２３５】
選択された投与方法に関わらず、適切な水和物の形で使用することもできる本発明の化合物、及び/又は、本発明の医薬品組成物は、以下に示す又は技術的に周知である従来の方法のような、薬学的に許容される投与形態に処方される。
【０２３６】
本発明の医薬品組成物における実際の活性成分の用量は、患者に対する毒性がなければ、個々の患者、組成物及び投与方法に対して期待される治療反応を実現するために、効果的な活性成分の量が得られるように変化させてもよい。
【０２３７】
選択された用量は、使用された本発明の特定の化合物又はエステル、塩若しくはそれらのアミドの活性、投与経路、投与の時間、使用された特定の化合物の排出速度、治療の持続期間、使用された特定のヘッジホッグアンタゴニストと組み合わせて使用された他の薬剤、化合物及び/又は物質、年齢、性別、体重、状態、治療された患者の全体的な健康及び前の治療歴、並びに医術においてよく知られた要因を含む、さまざまな要因に依存する。
【０２３８】
技術において通常の技量を有する医者又は獣医は、直ぐに、要求される医薬品組成物の有効量を決定し、処方することができる。例えば、医者及び獣医は、所望の治療的効果を得るために、要求されるより低いレベルで、医薬品組成物で用いられる本発明の化合物の服用を開始し、所望の効果が得られるまで、徐々に投与量を増加してもよい。
【０２３９】
一般に、本発明の化合物の適切な一日の量は、治療効果が生じるために効果的な最低限の化合物の量である。このような有効量は、一般的に上記の要因に起因する。一般的に、患者に対する、静脈内、脳室内及び皮下への本発明の化合物の投与は、一日当り、体重のおよそ0.0001〜100mgの範囲である。
【０２４０】
必要に応じて、活性化合物の効果的な一日の量は、一日中適切な間隔をあけて投与される、2，3，4，5，6回投与又はさらにそれ以上の回数の投与（sub-doses）、適宜、ユニット投与形態として、投与してもよい。
【０２４１】
この治療を受ける患者は、霊長類特にヒト、並びに、馬、牛、豚及びヒツジのような他の動物、並びに家禽及びペット全般を含む、必要としている動物である。
【０２４２】
本発明の化合物は、そのように、又は、薬学的に許容しうる及び/又は無菌の単体を用いた混合剤として投与することができ、ペニシリン、セファロスポリン、アミノグルコシド抗生物質及び糖ペプチドのような他の抗生物質と同時に処方することもできる。従って、連結治療には、逐次経口避妊剤、活性化合物の同時、及び、後のものが投与された場合に、最初に投与されたものの治療的効果が全くなくなることがない方法による分離投与が含まれる。
【０２４３】
V.薬剤組成物
本発明の化合物は、単独で投与することが可能であり、該化合物を、製剤（組成物）として投与することが好ましい。本発明のヘッジホッグアンタゴニストは、医療用又は獣医用薬剤として、使用に便利な方法で処方することができる。具体的な態様において、調製薬剤内に含有される前記化合物は、活性化しているか、又は例えば、生理学上の活性化合物に変化することが可能な、プロドラックであっても良い。
【０２４４】
このように、本発明のその他の特徴は、治療上効果的な量の、1以上の上記化合物を含有する、薬学上この許容し得る組成物を提供することである。このような組成物は、1以上の薬学上許容し得る担体（添加剤）及び/又は希釈剤を加えて調合される。
以下に詳述するように、本発明の薬剤組成物は、以下の経口投与又は非経口投与等に適応する投与を含む、固形又は液体の形態での投与のために特別に処方することができる。例えば、(1)経口投与としては、例えば、水薬（水系又は非水系の溶液又は懸濁液）、錠剤、丸薬、粉末、顆粒、舌に塗布するためのペースト剤が挙げられ、(2)皮下、筋肉又は静脈注射などによる非経口投与としては、例えば、殺菌溶液又は懸濁液が挙げられ、(3)局部適用としては、例えば、皮膚用のクリーム、軟膏又はスプレー等が挙げられ、(4)膣内又は直腸内投与としては、例えば、ペッサリー、クリーム又はフォーム等が挙げられる。また、ある態様では、本発明の化合物は容易に滅菌水中に溶解又は懸濁させることができる。また、ある態様では、調製薬剤は、非発熱性である。即ち、患者の体温を上昇させることがない。
【０２４５】
ここで使用される「治療上効果的な量」という文言は、少なくとも動物細胞の亜集団において、ptc型機能喪失、ヘッジホッグ機能獲得又はsmoothened機能獲得を克服することによって、及び、その結果、如何なる医療処理にも適応可能な利益/危険性の合理的な比率で、処理細胞内の経路の生物学的影響を遮断することによって、期待される治療効果を生み出すのに有効な本発明の化合物を含有する化合物、原材料又は組成物の量を意味する。
【０２４６】
ここで、「薬学上許容し得る」という文言は、これらの化合物、原材料、組成物及び/又は投与形態に関して使用され、利益/危険性の合理的のないなしにヒト又は動物の組織に接触する使用に適しており、医学的な見解で理に叶った範囲内であることをいう。
【０２４７】
ここで、使用される「薬学上許容し得る担体」という文言は、薬学上許容し得る原材料、組成物又は媒体、例えば、液体、固体充填物、希釈剤、賦形剤、液剤又は封入材料を意味し、組織又は身体の一部から他の組織又は身体の一部への、本発明のアンタゴニストの輸送又は運搬に関与する。個々の担体は、製剤の他の成分との共存している状態で、「許容し得る」ものである必要があり、患者に有害であってはならない。薬学上許容し得る担体としての役割を果たす原材料のいくつかの例として、(1)ラクトース、グルコース及びスクロース等の糖類；(2)コーンスターチ、ジャガイモでんぷん等のデンプン類；(3)セルロース、及びカルボキシセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース等のセルロース誘導体；(4)トラガント末；(5)麦芽；(6)ゼラチン；(7)タルク；(8)ココアバター、座薬用ワックス等の賦形剤；(9)ピーナッツオイル、コットンオイル、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油等のオイル類；(10)プロピレングリコール等のグリコール；(11)グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール等の多価アルコール；(12)オレイン酸エチル、ラウリル酸エチル等のエステル；(13)寒天；(14)水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤；(15)アルギン酸；(16)発熱剤を含有しない水；(17)等張食塩水；(18)リンガー液；(19)エチルアルコール；(20)リン酸塩緩衝液；及び(21)製剤処方に使用されるその他の非毒性の適合材料材料が挙げられる。
【０２４８】
上述したように、本発明のヘッジホッグアンタゴニストの一例では、アミノ基又はアルキルアミノ基等の塩基性基を有してもよく、これによって、薬学上許容し得る酸と反応して薬学上許容し得る塩を形成させることができる。このような観点から、「薬学上許容し得る塩」という用語は、本発明の化合物の、相対的に非毒性の無機及び有機の酸付加塩を指す。このような塩は、本発明の化合物を最終的に単離する間及び本発明の化合物を精製する間に、自然に調製することができ、又は、遊離塩基として精製された本発明の化合物を、有機酸又は無機酸と個別に反応させて、形成させた塩を単離することによって調製することができる。典型的な塩として、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフタル酸塩、メチルスルホン酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩等が挙げられる（Berge他,(1977) 「Pharmaceutical Salts」, J. Pharm. Sci. 66:1-19）。
【０２４９】
本発明の化合物の薬学上許容し得る塩としては、例えば非毒性有機酸又は無機酸のような、該化合物の従来の非毒性塩又は4級アンモニウム塩が挙げられる。このような従来の非毒性塩としては、塩酸、臭化水素、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸のような無機酸に由来するもの、及び酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、2-アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸等の有機酸から調製されるものが挙げられる。
【０２５０】
その他の場合において、本発明の化合物は、1以上の酸性基を有してもよく、このようにすることにより、薬学上許容し得る塩基と反応して薬学上許容し得る塩を形成することが可能になる。ここで、「薬学上許容し得る塩」という用語は、本発明の化合物の、相対的に非毒性の有機及び無機塩基の付加塩をいう。このような塩は、本発明の化合物の最終的な単離及び精製の間に、自然に調製される。又は、遊離酸として精製された化合物を適当な塩基と個別に反応させることによって調製することができる。適当な塩基としては、アンモニア又は薬学的に許容し得る有機1級、2級若しくは3級アミンを含有する、薬学的に許容し得る金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩又は炭酸水素塩等がある。典型的なアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアルミニウム塩等が挙げられる。好適な塩基付加塩を形成する典型的な有機アミンとしては、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等がある（Berge 他,supra等参照）。
【０２５１】
着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、フレーバー及び香料、保存料及び酸化防止剤は勿論のこと、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムのような湿潤剤、乳化剤及び潤滑剤も、本発明の組成物中に存在してよい。
【０２５２】
薬学的に許容し得る酸化防止剤の例として、(1)アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等の水溶性酸化防止剤、(2)アスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール（BHA）、ブチルヒドロキシトルエン（BHT）、レシチン、没食子酸プロピル、α-トコフェロール等の油溶性酸化防止剤、(3)クエン酸、エチレンジアミン4酢酸（EDTA）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤が挙げられる。
【０２５３】
本発明の剤形は、経口投与、径鼻投与、局所投与（口腔及び舌下を含む）、直腸投与、膣投与及び/又は非経口投与に適するものである。その剤型は、投与形態単位で存在し、薬学の分野において周知の技術により調合される。活性物質の量は、治療されるホストや個々の投与方法により異なる。単剤を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性物質の量は、通常、化合物の治療効果が生じる量である。一般的に、活性物質の量は、100％中約1％〜約99％の範囲内であり、約5％〜70％であることが好ましく、約10％〜30％であることが最も好ましい。
【０２５４】
これらの製剤又は組成物の調製方法は、担体、及び、任意成分として1以上の副成分と共に、本発明の化合物の会合させる工程が含まれる。一般的に、製剤は、本発明に関する化合物を、液状担体、微粉化した個体担体又はその両方との均一及び密に会合させることにより、次いで、必要があれば、成形することにより調製される。
【０２５５】
経口投与に好適な本発明の製剤としては、カプセル、カシェ、ピル、タブレット、薬用キャンディー（通常、スクロース及びアカシア又はトラガカントのようなフレーバー成分が使用されているもの）、粉末、顆粒、又は水性若しくは非水性液の液剤若しくは懸濁液、若しくは油中水若しくは水中油乳液、エリキシル、シロップ、又はトローチ（通常、ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアのような不活性材料が使用されているもの）及び/又は洗口剤等があり、それぞれ、活性成分として、所定量の本発明の化合物を含有する。本発明の化合物はボーラス，舐剤又はペーストとして投与してもよい。
【０２５６】
本発明の経口投与のための個体製剤（カプセル、タブレット、ピル、ドラジェ、粉末、顆粒等）において、有効成分を、1以上の薬学的に許容し得る担体と混合する。薬学的に許容し得る担体とは、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウム、及び/又は以下の物質の何れかの物質である。
(1)デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び/又は珪酸のような賦形剤又は増量剤；(2)例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び/又はアカシアのような結合剤；(3)グリセロールのような保湿剤；(4)寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ若しくはタピオカデンプン、アルギン酸、種々の珪酸塩及び炭酸ナトリウムのような崩壊剤；(5)パラフィンのような溶解遅延剤；(6)4級アンモニウム化合物のような吸収促進剤；(7)セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールのような湿潤剤；(8)カオリン及びベントナイト粘土のような吸収剤；(9)タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物のような潤滑剤；及び(10)着色剤。カプセル、タブレット及びピルの場合、薬剤組成物は緩衝剤を含有させてもよい。これに類似する形状の個体組成物においては、軟及び硬ゼラチンカプセル内の充填剤として、高分子量ポリエチレングリコール等と同様に、ラクトース又は乳糖のような賦型剤を使用してもよい。
【０２５７】
タブレットは、適宜1以上の副成分を混合し、圧縮成形、型押し成形によって調製することができる。圧縮成型タブレットは、結合剤（例えば、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存料、錠剤分解物質（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム又は架橋型カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤又は分散剤を用いて調製することができる。型押し成形タブレットは、不活性の希釈剤により湿らせた粉末状組成物の混合物を、専用の機械で成型することによって製造することができる。
【０２５８】
本発明の薬剤組成物のタブレットや、ドラジェ、カプセル、ピル及び顆粒等のその他の固体製剤は、適宜、腸溶コーティング及びその他の薬剤成形技術において周知のコーティングのような、コーティング及び外郭成形をすることにより、調製する又は得ることができる。これらの製剤は、有効成分を持続放出又は制御放出させるために処方される。成形には、例えば、有効成分の放出の側面から、種々の割合で配合するヒドロキシプロピルメチルセルロースを他のポリマーマトリックス、リポソーム及び/又はミクロスフィアを用いることができる。例えば、バクテリアリテイニングフィルターを用いる濾過、又は、滅菌水若しくはその他の注入可能な滅菌された媒体に、溶解することが可能な殺菌済みの組成物に、滅菌剤を添加することにより、これらの製剤の滅菌をすることができる。これらの組成物は、適宜、不透明化剤を含有してもよく、それから、有効成分のみを放出するようにすることも、又は、消化器官の一定部分に、選択的に有効成分を、遅延させて放出するようにすることもできる。使用可能な埋め込み型組成物の例としては、例えば、高分子基材及びワックスを含有するものである。必要により、1以上の上記した賦型剤と共に有効成分をマイクロカプセル化することもできる。
【０２５９】
本発明の組成物における経口投与のための液状の剤形としては、薬学的に許容し得る乳液、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁液、シロップ及びエリキシリルがある。有効成分に加えて、液状剤形は、例えば水又は他の溶媒のような通常使用される不活性な希釈剤、溶解補助剤及び乳化剤を含有してもよい。これらの溶解補助剤及び乳化剤として、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、1，3-ブチレングリコール、オイル類（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブオイル、ひまし油、及びごま油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタン脂肪酸エステル、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０２６０】
経口剤組成物は、前記不活性希釈剤の他、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味料、フレーバー、着色料、香料、保存料等の補助剤を含有してもよい。
懸濁液においては、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、トラガカント及びこれらの混合物を、更に有効成分に添加してもよい。
【０２６１】
コレステロール等のステロールは、シクロデキストリンと複合体を形成することが知られている。従って、好ましい態様においては、抑制剤がステロール性アルカロイドである場合には、α-、β-及びγ-シクロデキストリン、ジメチル-βシクロデキストリン及び2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンのようなシクロデキストリンと共に処方しても良い。
【０２６２】
直腸又は膣内投与のための本発明の薬剤組成物の製剤は、1以上の本発明の化合物、及び1以上の適切刺激性の少ない賦型剤又は担体を混合することによって調製される座薬として提示することができる。賦型剤又は担体は、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、座薬成形用ワックス又はサリチル酸塩から構成され、これらは室温では固体であるが体温では液状であるので、直腸内又は膣口内で融解し、活性ヘッジホッグアンタゴニストを放出する。
【０２６３】
膣内投与に適した本発明の製剤としては、周知の適切な担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト剤、フォーム又はスプレー製剤がある。
本発明の化合物の局所投与又は経皮的投与のための剤形としては、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、溶液、パッチ及び吸入剤がある。活性化合物は、滅菌状態下において、薬学上許容し得る担体及び種々の保存料、緩衝剤又は高圧ガスと混合しても良い。
【０２６４】
軟膏、ペースト、クリーム及びジェルは、本発明の活性物質に加えて、動物性脂肪、植物性脂肪、オイル類、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸塩、タルク、酸化亜鉛、又はこれらの混合物等の賦型剤を含有してもよい。
粉末剤及びスプレー剤は、本発明の活性物質に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末、又はこれらの基材の混合物等の賦型剤を含有してもよい。スプレー剤は、付加的に、ブタン及びプロパンのような非置換の揮発性炭化水素、及び、クロロフルオロ炭化水素のような通常の高圧ガスを含むことができる。
【０２６５】
経皮貼付剤は、本発明の化合物の伝搬を調節して身体に供給することに好都合である。このような剤形は、ヘッジホッグアンタゴニストを、適当な媒体中に溶解又は分散させて製造することができる。吸収促進剤は、ヘッジホッグアンタゴニストが皮膚を通過する流動性を増加させるために用いることができる。このような流動率は、制御膜を使用するか、又は化合物をポリマーマトリクス若しくはゲル中に分散させることにより制御することができる。
【０２６６】
眼薬、眼軟膏、粉末薬、及び液剤等も、本発明の範囲内に属する。
非経口投与に適応させた本発明の薬剤組成物は、1以上の薬学上許容し得る滅菌済みの水系又は非水系の等張液、分散液、懸濁液若しくは乳液と1以上の本発明の化合物を組み合わせてなる、又は滅菌済みの粉末と1以上の本発明の化合物を組み合わせてなる。粉末は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、受容者の血液に対する等張製剤を提供するための溶質、乳化剤又は造粘剤を含む、滅菌済みの注射用液又は分散液に、使用直前に再構成することができるものである。
【０２６７】
本発明の組成物に使用することのできる適切な水系及び非水系担体の例としては、水、エタノール、ポリオール類（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、及びこれらの適切な混合物、オリーブオイル等の植物油、及びオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルがある。
適当な溶液性は、例えば、レシチンのようなコーティング剤を使用することにより、分散液の場合において所望される粒径を調整することにより、及び、界面活性剤を使用することにより維持される。
【０２６８】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤のような補助剤を含有してもよい。パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等の種々の抗菌剤及び抗真菌剤を含有させることにより微生物の活性の抑制を確実に行うことができる。また、所望により、糖類、塩化ナトリウムのような等張剤を組成物中に含有してもよい。更に、注射用薬剤の吸収期間を長期化させるために、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンような吸収を遅延させる薬剤を含有させてもよい。
【０２６９】
いくつかの場合においては、薬剤の効果を長期化させるために、皮下注射又は筋肉注射からの、薬剤の吸収を遅くすることが望ましい。このような要望は、水に難溶な、結晶性又は非結晶性物質の液体懸濁液を使用することによりなすことができる。薬剤の吸収度は、その水溶性に依存し、次いでその結晶のサイズ、次ぎに結晶形状に依存する。また、非経口投与薬剤の吸収遅延化は、油性媒体中に薬剤を溶解又は懸濁することによりなされる。
【０２７０】
持続性注射薬は、ポリラクチド-ポリグリコリドのような、生分解性高分子中に本発明の化合物が存在するマイクロエンカプセルマトリックスを形成させることにより製造する。薬剤の高分子に対する比率、及び使用する特定の高分子の性質により、薬剤の放出を制御することができる。その他の生分解性高分子の例として、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。持続性注射薬は、薬剤を身体の組織に適応するリポソーム又はマイクロエマルション中に取り込むことにより調製することもできる。
【０２７１】
本発明の化合物を、医薬としてヒトや動物に投与するときは、それ自体又は例えば、0.1〜99.5％（好ましくは0.5〜90％）の有効成分と薬学上許容し得る担体と組み合わせた、薬剤組成物として投与することができる。
【０２７２】
本発明の活性物質の動物の飼料への添加は、効果的な量の有効成分を含有する適当な仕込み用プリミックスを調製し、該プリミックスをできあがった飼料中に添加してなされることが好ましい。
【０２７３】
また、活性成分を含有する中間濃縮物又は仕込み用サプリメントを飼料中に配合することもできる。このような仕込み用プリミックス及び飼料を調製し投与する方法は、参考図書に記載されている（「Applied Animal Nutrition」, W.H. Freedman and CO., San Francisco, U.S.A., 1969 or 「Livestock Feeds and Feeding」 O and B books, Corvallis, Ore., U.S.A., 1977、等）。
【０２７４】
VI．有効成分の合成及び同定
本発明のステロイド性アルカロイド及びこれらの同種の化合物は、鈴木、スティル等のクロス-カップリング技術により、速やかに調製することができる。これらのカップリング反応は比較的穏やかな条件で達成されると共に、広範なスペクテーターとしての官能性を許容する。
【０２７５】
a．組み合わせライブラリー
本発明の化合物、特に、様々な置換基類を有する変種のライブラリーは、コンビナトリアル・ケミストリー及び他のパラレル合成スキームに影響を受けやすい（PCT WO 94/08051等参照)。その結果として、例えば、上に代表された化合物の変化されられたライブラリーのような、関連する化合物の膨大なライブラリーは、リード化合物の特異性、毒性及び/細胞毒性の動的プロフィールを絞り込むだけでなく、潜在的ヘッジホッグアンタゴニストリード化合物を同定するために、ハイスループットな分析によって迅速にスクリーニングされる。例えば、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ又は機能獲得smoothenedを有する細胞を発育させるかもしれない、ptc、ヘッジホッグ又はsmoothened生物活性分析は、ptcに対するアゴニスト活性又は、ヘッジホッグ又はsmoothenedに対するアンタゴニスト活性を有する本発明の化合物のライブラリーをスクリーニングすることができる。
【０２７６】
簡単な例として、本発明の目的のための組み合わせライブラリーは、所望の特性のために同時にスクリーニングされる、化学的関連物質の混合物である。一反応によって多様な関連化合物を調製することは、達成されるまでに要する多大なスクリーニング過程を大幅に削減し、単純化する。適切な物理的性質のスクリーニングは、従来の方法で行なうことができる。
【０２７７】
多様なライブラリーは、多種の異なるレベルにおいて創出され得る。例えば、コンビナトリアル反応に用いられる置換アリール基は、核アリール部分に関して多様であり、例えば、環構造の点では多様であり、及び/又は、他の置換基に関して変更可能である。
【０２７８】
本発明のヘッジホッグアンタゴニストのような有機小分子の組み合わせライブラリーを作り出すためには、公知の多種多様な技術を用いることができる（例えば、Blondelle他(1995), Trends Anal. Chem. 14:83; the Affymax 米国特許 5,359,115 及び 5,362,899: the Ellman 米国特許5,288,514: the Still他, PCT公報WO 94/08051; the ArQule 米国特許5,736,412 及び 5,712,171; Chen他(1994), JACS 116:2661: Kerr他(1993), JACS 115:252; PCT公報 WO92/10092, WO93/09668 及び WO91/07087;並びにthe Lerner他, PCT公報 WO93/20242参照)。従って、本発明のヘッジホッグ・アンタゴニストに対する、100〜1,000,000又はそれ以上のダイバーソマー（diversomers）に関する種々のライブラリーは合成され、特有の活性又は性質がスクリーニングされる。
【０２７９】
典型的な態様においては、ヘッジホッグアンタゴニストダイバーソマーの候補のライブラリーは、Still他PCT公報WO94/08051に記載された技術で採用されたスキームを用いて合成される；例えば、適宜、アンタゴニスト候補又は合成された中間物の置換基の一つの位置に位置に局在する、加水分解性又は光分解性基によってポリマービーズに結合する。スティル等の手法によると、ライブラリーは、一連のビーズ上で合成され、該ビーズは、ビーズ上の特有のダイバーソマーを特徴付ける一連のタグを含む各々のビーズからなる。このように、ビーズライブラリーは、ヘッジホッグアンタゴニストを探査するために、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothened細胞により「コーティング」することができる。ダイバーソマーは、加水分解などにより、ビーズから解離させることができる。
【０２８０】
本発明に有用な化合物の構造は、化合物自体を、容易且つ効率的に合成するのに役立つ。通常、式I〜IIにより記載される構造の性質は、上述したようにAr、R1、X、Y及びZ部分のいくつかの組み合わせを用いた、このような化合物のコンビナトリアル集合体を許容する。例えば、これらの部分単位は、一般的なアシル化反応又はアルキル化反応を通して、核となる環に結合する。このような反応の大部分は、非常に穏やかであり、非常に信頼性がある反応であり、コンビナトリアル化学に最適なものである。このようなコンビナトリアル法は、以下に開示する手段の1つの変形である。
【０２８１】
上記の多くの変形及び関連する方法は、ヘッジホッグ機能の阻害物質として検証をされた化合物の、広く多種のライブラリーの合成を可能にする。
【０２８２】
b．スクリーニング分析
ptc機能をアゴナイズすること、又はsmoothened若しくはヘッジホッグ機能をアンタゴナイズするための、化合物の活性を決定するのに好都合な様々な分析方法がある。これらの多くの分析方法は、ハイスループットな構成をもって配置することができる。化合物及び天然抽出物のライブラリーを検査する多くの薬剤スクリーニングプログラムにおいて、ハイスループット分析は、与えられた期間内に探査される化合物の数を最大にするために好ましい。このように、合成物及び天然物のライブラリーは、ヘッジホッグアンタゴニストであるその他の試料として抽出することができる。
【０２８３】
無細胞分析に加えて、試料化合物は、細胞を基盤とした分析の試験にもかけられる。ある一態様においては、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、又は機能獲得smoothenedの表現型を有する細胞は、例えば、検査薬の存在下において細胞増殖を抑制する等、スコアリング分析を用いて、関連する検査薬に接触させられる。
【０２８４】
多数の遺伝子産物は、Patched、キュービタス・インタラプタス(ci)ファミリーの転写調節因子、セリン/トレオリンキナーゼfused（fu)、並びにfusedのcostal-2、smoothened及びサプレッサーの遺伝子産物を含む、Patched-介在のシグナル変換に関わる。
【０２８５】
ヘッジホッグタンパク質による細胞の誘導は、下流側のエフェクターの活性化又は阻害を誘発する、カスケードのような動きを設定し、ある場合には、その究極的な結果は、遺伝子の転写又は翻訳における検出可能な変化である。ヘッジホッグが介在する、シグナル伝達の潜在的な転写ターゲットは、patched遺伝子(Hidalgo及びIngham,1990 Development 110,291-301;Marigo他,1996)、及びdrosophila cubitus遮断遺伝子、GLI遺伝子(Hui他(1994),Dev Biol 162:402-413)である。Patched遺伝子の発現は、肢芽の細胞及びShhに敏感な神経板の細胞中において誘発されていることが判っている(Marigo他(1996),PNAS 93:9346-51; Marigo他,(1996) Development 122:1225-1233)。Gli遺伝子は、ジンク・フィンガーDNA束縛領域を有する推定転写因子をコード化する(Orenic他(1990),Genes & Dev 4:1053-1067; Kinzler他(1990),Mol Cell Biol 10:634-642)。Gli3遺伝子がヘッジホッグ誘導に対する反応を下方制御する一方、Gli遺伝子の転写は、肢芽中のヘッジホッグに反応して上方制御されることが報告されている(Marigo他(1996),Development 122:1225-1233)。このようなターゲット遺伝子、例えばpatched又はGli遺伝子から、ヘッジホッグシグナル伝達に応答してこれらの遺伝子の上方または下方制御をおこなう、転写調節にかかわる塩基配列を選択し、これらのプロモーターをレポーター遺伝子に結合させることによって、特定の試験化合物が有する、ヘッジホッグが介在するシグナル伝達経路を変化させる活性に高感度な、転写にもとづく分析法を導くことができる。このように、レポーター遺伝子の発現は、ヘッジホッグアンタゴニストとしての役割を果たす化合物の開発に対する、価値あるスクリーニングツールを提供する。
【０２８６】
本発明のレポーター遺伝子基礎分析は、例えば、転写調節のような、上述の事象のカスケードの末期を測定する。従って、分析の一態様の実施において、レポーター遺伝子構築物は、機能喪失ptc、機能獲得ヘッジホッグ、機能獲得smoothened、又は、Shh自身による刺激、に依存する検出シグナルを発生するため、試薬細胞（reagent cell）に挿入される。レポーター遺伝子からの転写量は、当業者には公知である、適切な如何なる方法によっても計測することができる。例えば、レポーター遺伝子からのmRNA発現は、RNAseプロテクション又はRNAに基づくPCRを用いて検出することができ、或は、レポーター遺伝子のタンパク質生成物は、特有の染色又は本来の生物学的活性によって同定される。レポーター遺伝子からの発現の量は、次に、試料化合物がない細胞の発現の量と比較するか、又は、標的受容タンパク質が欠如した実質的に同じ細胞における転写の量と比較することができる。任意の統計的な又は重要な、転写量の減少は、試料化合物が、ある意味で、通常のptcシグナルをアゴナイズしたこと（又は機能獲得ヘッジホッグ又はsmoothenedシグナルがアンタゴナイズした）を示し、その例としては、試料化合物が、潜在的ヘッジホッグアンタゴニストであることである。
【０２８７】
c．例示化合物
表1は、式I、II、II及びIVの化合物の、いくつかの例を表わす。
表1
2008519044.tif 000023
2008519044.tif 000024
2008519044.tif 000025
2008519044.tif 000026
2008519044.tif 000027
2008519044.tif 000028
2008519044.tif 000029
2008519044.tif 000030
【０２８８】
VII．ビジネス方法
本発明の1つの態様は、ここ記載されているように、患者、特にヒトの基底細胞癌の治療又は予防のための、ヘッジホッグアンタゴニストからなるキット、及び、基底細胞癌の治療又は予防への使用の定形を記載する説明書（文書又は図）、並びに、適宜、起こりうる副作用並びに薬物-薬物間及び薬物-食物間の相互関係の注意書きに関する。
【０２８９】
その他の本発明の態様は、ここで記載される、ヘッジホッグアンタゴニストが、上述した治療的又は美容的応用の一部（例えば、神経組織の調整、骨及び軟骨の形成及び修復、精子形成、平滑筋の調整、肺、肝臓及びその他の原腸に起因する臓器、造血機能の調整、並びに皮膚の調整及び育毛等）として投与される、ヘッジホッグアンタゴニストのキット、治療的又は美容的応用を記載する説明書（文書又は図）、並びに、適宜、起こりうる副作用並びに薬物-薬物間及び薬物-食物間の相互関係の注意書きに関する。
【０２９０】
本発明は、更に、（a）及び（b）からなる、医薬事業を実施する方法を意図する。
（a）殺菌された医薬賦型剤及びヘッジホッグアンタゴニストからなる医薬製剤の製造。
（b）基底細胞癌の治療又は予防のための調整薬剤を使用する利益を、医者、病院、クリニック等のヘルスケア提供者へマーケティングすること（例えば、（陳列、テレマーケティング、及び講義のような）販売促進及び/又は情報の提供、（製剤の試供品のような）生産品、及び/又は（リーフレット、パンフレット、ウェブサイト、ポスター等を含む）書類）。
【０２９１】
本発明のその他の態様は、（a）、（b）からなる、医薬事業を実施する方法に関する。
（a）殺菌された医薬賦型剤及びヘッジホッグアンタゴニストからなる医薬製剤の製造。
（b）神経組織の調整、骨及び軟骨の形成及び修復、精子形成、平滑筋の調整、肺、肝臓及びその他の原腸に起因する臓器、造血機能の調整、並びに皮膚の調整及び育毛等のような、治療的又は美容的応用の一部として医薬品製剤を使用する利益を、医者、病院、クリニック等のヘルスケア提供者へマーケティングすること（例えば、（陳列、デモンストレーション、テレマーケティング、及び講義のような）販売促進及び/又は情報の提供、（製剤の試供品のような）生産品、及び/又は（リーフレット、パンフレット、ウェブサイト、ポスター等を含む）書類）。
【０２９２】
本発明のその他の態様は、（a）及び（b）からなる、医薬事業を実施する方法を提供する。
（a）殺菌された医薬賦型剤及びヘッジホッグアンタゴニストからなる薬剤組成物の販売のための流通機構の提供。
（b）基底細胞癌の治療又は予防のための調整薬剤を使用する患者又は医者への、教育資料の提供。
【０２９３】
本発明のその他の態様は、（a）及び（b）からなる、医薬事業を実施する方法を提供する。
（a）殺菌された医薬賦型剤及びヘッジホッグアンタゴニストからなる薬剤組成物の販売のための流通機構の提供。
（b）上述した治療的又は美容的応用の一部（例えば、神経組織の調整、骨及び軟骨の形成及び修復、精子形成、平滑筋の調整、肺、肝臓及びその他の原腸に起因する臓器、造血機能の調整、並びに皮膚の調整及び育毛等）として、薬剤組成物を使用する患者又は医者への教育資料の提供。
【０２９４】
本発明のその他の態様は、（a）〜（c）及び適宜（d）からなる、医薬事業を実施する方法を提供する。
（a）基底細胞癌の治療又は予防のための、ヘッジホッグアンタゴニストの適切な製剤及び投与量の決定。
（b）動物における有効性及び毒性に対する、薬剤組成物の治療プロファイリングの実施。
（c）治療上許容されるプロファイルを有する薬剤組成物の販売のための流通機構の提供。
（d）ヘルスケア提供者への薬剤の売買のための販売グループの提供。
【０２９５】
本発明のその他の態様は、（a）〜（c）及び、適宜（d）からなる、医薬事業を実施する方法を提供する。
（a）上述した治療的又は美容的状態の治療又は予防のための、ヘッジホッグアンタゴニストの適切な製剤及び投与量の決定。
（b）前記状態の治療又は予防における、動物における有効性及び毒性に対する薬剤組成物の治療プロファイリングの実施。
（c）前記状態の治療又は予防のために、許容される治療プロファイルを有する薬剤組成物の販売のための流通機構の提供。
（d）前記状態の治療又は予防のためのヘルスケア提供者への薬剤の売買のための販売グループの提供。
【０２９６】
また、本発明のその他の態様は、（a）及び（b）からなる医薬事業を実施する方法を提供する。
（a）基底細胞癌の治療又は予防のための適切な薬剤組成物、及びヘッジホッグアンタゴニストの投与量の決定。
（b）第三者への、さらなる開発をする権利及び薬剤組成物の販売のライセンス供与。
【０２９７】
また、本発明のその他の態様は、（a）及び（b）からなる医薬事業を実施する方法を提供する。
（a）上記した治療的又は美容的状態の治療又は予防のための適切な薬剤組成物及びヘッジホッグアンタゴニスト投与量の決定。
（b）第三者への、さらなる開発をする権利及び該治療又は防止のための薬剤組成物の販売のライセンス供与。
【実施例】
【０２９８】
本発明は一般的に記述されたが、以下の実施例を参照することにより容易に理解されよう。これらの実施例は、本発明の目的及び態様を例証するために単に含められたものであって、本発明を限定するものではない。
【０２９９】
実験
〔例示阻害剤の合成〕
ルート1
2008519044.tif 000031
【０３００】
＜例示化合物24＞
＜化合物24＞
2008519044.tif 000032
【０３０１】
2-メチル-6-トリフルオロメチルニコチン酸（4.77g、23mmol）のジメチルホルムアミド（100ml）溶液に1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3-エチルカルボジイミドハイドロクロライド（4.46g、23mmol）と1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（3.17g、23mmol）を加え、得られた溶液を室温で30分間攪拌した。これに、メチル5-アミノ-2-クロロべンゾエート（3.6g、19mmol）のジメチルホルムアミド（25ml）溶液を加え、室温で18時間攪拌した。反応混合物に水を（200ml）加え、次いで酢酸エチルを用いて抽出した（3×200ml）。一緒にされた有機層を飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した（2×300ml）。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、濾過した後溶媒をとばして2-クロロ-5-［（2-メチル-6-トリフルオロメチル-ピリジン-3-カルボニル）アミノ］-安息香酸メチルエステル（6.6g，94％）を得た。
【０３０２】
2008519044.tif 000033
2-クロロ-5-［（2-メチル-6-トリフルオロメチル-ピリジン-3-カルボニル）-アミノ］-安息香酸メチルエステル（6.68g、18mmol）のテトラヒドロフラン（100ml）溶液を0℃に冷やした。リチウムボロハイドライド（0.98g；45mmol）を少しずつ加えて反応混合物を室温まで温め、次いで45℃で4時間加熱した。反応が室温まで下がるにまかせ重炭酸ナトリウムの飽和溶液（100ml）を加えた。これを酢酸エチルで抽出した（3×50ml）。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、ろ過した後溶媒をとばした。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し（50％酢酸エチルのヘプタン溶液）、N-（4-クロロ-3-ヒドロキシメチル-フェニル）-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（3.29g、54％）を得た。
【０３０３】
2008519044.tif 000034
N-（4-クロロ-3-ヒドロキシメチル-フェニル）-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（3.29g、9.56mmol）のジクロロメタン（300ml）懸濁液に、二酸化マンガン（8.31g、95.6mmol）を添加し、得られた混合物を室温で30分間攪拌した。この操作の後の分析によると60％が生成物に転換していた。更に、二酸化マンガン（8g、92mmol）を3回に分け、90分かけて添加した。次に、セライトを用いて反応混合物をろ過し、ろ液を蒸散させてN-（4-クロロ-3-フォルミル-フェニル）-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（3.2g、97％）を得た。
【０３０４】
2008519044.tif 000035
N-（4-クロロ-3-フォルミル-フェニル）-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（152mg、0.44mmol）及びベンゾ［1，3］ジオキソール-5，6-ジアミン（100mg、0.44mmol）のN-メチルピロリドン（3ml）溶液に、トリエチルアミン（0.12ml；0.88mmol）を加えた。得られた溶液を100℃で1時間加熱した。冷めた反応混合物に水（10ml）を加え、次いで酢酸エチルで抽出した（3×10ml）。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、ろ過した後溶媒をとばし、未精製残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィー（30％酢酸エチルのヘプタン溶液）によって精製し、化合物24（146mg、70％）を得た。
1H NMR(400MHz、MeOD)δ：8.45(s、1H)、8.0(d、1H)、7.65-7.75(m、3H)、7.2(s、2H)、6.1(s、2H)、2.65(s、3H)；
MS(ES+)：475(35Cl)、477(37Cl)[M++1]
【０３０５】
ルート2
2008519044.tif 000036
【０３０６】
〔化合物5の実施例〕
＜化合物5＞
2008519044.tif 000037
5-クロロ-2-ニトロアニリン（1g、5.8mmol）及びピリジン（0.64ml、8.1mmol）をジクロロメタン（10ml）に溶解し、0℃に冷却した。これに、2-クロロ-5-ニトロベンゾイルクロライド（1.34g、6.1mmol）のジクロロメタン（5ml）溶液を5分以上かけて滴下した。72時間、室温で攪拌して反応させた後、更に塩酸（1.34g）及びピリジン（0.64ml）を加えた。30分後、溶媒をとばし、ビスアシル化された残渣を1：1濃アンモニア/アセトニトリル（10ml）で処理した。5分後に全ての溶媒を除去し、残渣を1：1クロロホルム/ヘプタン（30ml）から再結晶させて、2-クロロ-N-（5-クロロ-2-ニトロ-フェニル）-5-ニトロ-ベンズアミド（1.78g，86％）を得た。
【０３０７】
2008519044.tif 000038
2-クロロ-N-（5-クロロ-2-ニトロ-フェニル）-5-ニトロ-ベンズアミド（1.78g、5mmol）を氷酢酸（30ml）に溶解し、70℃に加熱した。亜鉛粉（3.3g、50mmol）を少しずつ加えた。2時間後反応物をろ過し、固体をアセトニトリルで洗浄した。溶媒をとばした後、残渣をジクロロメタン/トリエチルアミンを用いたシリカゲルクロマトグラフィーカラムにかけた。20％酢酸エチルのヘプタン溶液を用いた溶離物から、4-クロロ-3-（5-クロロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-フェニルアミンをオレンジ粉末として得た（0.22g、16％）。
【０３０８】
2008519044.tif 000039
4-クロロ-3-（5-クロロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-フェニルアミン（80mg、0.29mmol）及びトリエチルアミン（23μl、0.32mmol）をテトラヒドロフラン（2ml）に溶解した。2-メチル-6-トリフルオロメチルニコチノイルクロライド（58mg、0.26mmol）のテトラヒドロフラン（1ml）溶液を、5分以上かけて加えた。室温で6時間攪拌した後溶媒をとばし、残渣をジクロロメタン/メタノール混合液を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。10％メタノールのジクロロメタン溶液を用いた溶離物から、化合物5を遊離の塩基として得た。これをメタノールに溶解し（1ml）濃塩酸を2滴加えた。溶媒をとばして塩酸塩を得た（56mg、43％）。
1H NMR(400MHz、d6DMSO)：δ11.1(s、1H)、8.45(s、1H)、8.25(d、1H)、7.9(m、2H)、7.85(s、1H)、7.75(m、2H)、7.45(d、1H)、2.65(s、3H)；
MS(ES+)：465(35Cl)、467(37Cl)[M++1]
【０３０９】
＜化合物2＞
2008519044.tif 000040
5-クロロ-2-ニトロアニリン（50g、0.29mol）を5リットルの容器に入れ、次いでエタノール（1.1L）を0-5℃で添加した。ジメチルアミンハイドロクロライド（130g；1.59mmol）を一気に入れ、トリエチルアミン（260ml）を加えて素早く容器を密閉した。容器を130℃に加熱し、4バールで20時間攪拌した。反応混合物を室温に冷やし、真空下でエタノールを除去した。2Mの水酸化ナトリウム溶液（1L）を非精製残渣に加えた後、酢酸エチル（1×1.3L次いで2×500ml）で抽出した。一緒にされた有機層を塩水（150ml）で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）、ろ過し、溶媒をとばして5-ジメチルアミノ-2-ニトロアニリン（50.1g、96％）を得た。
【０３１０】
2008519044.tif 000041
ルート2を用い、5-ジメチルアミノ-2-ニトロアニリンから化合物2を調製した。
1H NMR(400MHz、d6DMSO)δ：11.35(brs、1H)、8.6(s、1H)、8.4(d、1H)、8.1(m、3H)、7.95(d、1H)、7.6-7.7(brm、1H)、3.3(s、6H)、2.85(s、3H)；
MS(ES+)：474(35Cl)、476(37Cl)[M++1]
【０３１１】
＜化合物3＞
2008519044.tif 000042
2-アミノフェノール（300mg；2.75mmol）及び2-クロロ-5-ニトロベンゾイルクロライド（606mg；2.75mmol）をN-メチルピロリドン（6ml）に溶解し、100℃で24時間加熱した。反応物を室温まで冷まし、酢酸エチル層と飽和重炭酸ナトリウム層に区分けして、有機層を乾燥した（硫酸ソーダ）。ろ過した後溶媒をとばし、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーによって精製した。酢酸エチル40％のヘプタン溶液を用いて、2-（2-クロロ-5-ニトロフェニル）-ベンゾオキサゾールを流出させた（320mg、42％）。
【０３１２】
2008519044.tif 000043
2-（2-クロロ-5-ニトロ-フェニル）-ベンゾオキサゾールを化合物16で記載されたように、アニリンに還元し、そのアニリンをルート2の工程3と同様にして化合物3に転換した。
1H NMR(400MHz、d6DMSO)δ：11.25(s、1H)、8.95(s、1H)、8.55(d、1H)、8.1-8.2(m、4H)、8.0(d、1H)、7.7-7.8(m、2H)、2.95(s、3H);
MS(ES+)：432(35Cl)、434(37Cl)[M++1]
【０３１３】
＜化合物6＞
2008519044.tif 000044
化合物11で記載された方法で2-ニトロ-5-（1-ピロロ）アニリンを調製した。
【０３１４】
2008519044.tif 000045
ルート2を用いて、2-ニトロ-5-（1-ピロロ）アニリンから化合物6を調製した。
1H NMR(400MHz、MeOD)δ：8.55(s、1H)、8.05(d、1H)、7.85(dd、2H)、7.75(d、2H)、7.7(dd、2H)、7.25(s、2H)、6.25(s、2H)、2.65(s、3H)；
MS(ES+)：496(35Cl)、498(37Cl)[M++1]
【０３１５】
＜化合物7＞
2008519044.tif 000046
0℃で発煙硝酸（3.6g）を無水酢酸（12ml）に滴下し、15分間攪拌した。次に、N-（3-アセチル-フェニル）-アセタマイド（2g、11.3mmol）を少しずつ加え、反応混合物を室温まで温めた。15分間室温で攪拌した後、反応混合物を氷（200ml）の上に注いだ。ジクロロメタン（200ml）を加え、有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）、ろ過し、溶媒をとばして未精製残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィーで精製してN-（5-アセチル-2-ニトロ-フェニル）-アセタマイド（515mg）を得た。これを6M塩酸（15ml）中で、80℃、2時間加熱して直接加水分解した。冷やした反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液を用いて塩基性にし、次いで酢酸エチル（6×30ml）を用いて抽出した。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、ろ過した後溶媒をとばし、未精製残渣を得た。これをカラムクロマトグラフィー（50％酢酸エチルのヘプタン溶液）を用いて精製し、3-アミノ-4-ニトロアセトフェノン（226mg、11％）を得た。
【０３１６】
2008519044.tif 000047
ルート2を用い、3-アミノ-4-ニトロアセトフェノンから化合物7を調製した。
1H NMR(400MHz、MeOD)δ：8.2-8.3(brs、1H)、8.15(s、1H)、8.05(d、1H)、7.95(d、1H)、7.85(d、1H)、7.7(d、1H)、7.65(brs、1H)、7.55(d、1H)、2.65(s、3H)、2.60(s、3H)；
MS(ES+)：473(35Cl)、475(37Cl)[M++1]
【０３１７】
＜化合物8＞
2008519044.tif 000048
次いでマイクロ波チューブ中で、4-アミノ-2-クロロ-5-ニトロピリジン（化合物9と同様に調製された）（200mg、1.16mmol）のエタノール溶液（2ml）を、ジメチルアミンハイドロクロライド（471mg、5.78mmol）及びトリメチルアミン（781μl、6.96mmol）で処理した。前記チューブを素早く密閉し、マイクロ波を照射した（CEM Discover、150W、85℃、10分）。エタノールをとばし、生成物を溶解するためにジクロロメタン（15ml）を加え、次いで、溶液を1Mの苛性ソーダ溶液（2×10ml）で洗浄した。有機層を乾燥し（硫酸ソーダ）、混合物をろ過し、ろ液の溶媒をとばして乾燥し、N2，N2-ジメチル-5-ニトロピリジン-2，4-ジアミン（240mg、114％）を得た。
【０３１８】
2008519044.tif 000049
N2，N2-ジメチル-5-ニトロピリジン-2，4-ジアミンを、ルート2に記載された方法によって化合物8に転換した。
1H NMR(400MHz、MeOD)δ：8.44(s、1H)、8.13(s、1H)、8.00(d、1H)、7.78(d、1H)、7.64(d、1H)、7.52(d、1H)、6.55(bs、1H)、3.04(s、6H)及び2.58(s、3H)；
MS(ES+)：475(35Cl)、477(37Cl)[M++1]
【０３１９】
＜化合物9＞
2008519044.tif 000050
4℃の濃硫酸（100ml）に2-クロロ-4-アミノピリジン（35.0g、0.273モル）を少しずつ加えた。発煙硝酸（26ml）を20分以上かけて滴下し、氷（1L）に注ぐ前に、4℃で混合物を1時間攪拌した。得られた混合物を6MのNaOHを用いてpH2にしたところ、濃い沈殿物が生じた。これをろ過し、水洗した後空気中で乾燥して、それ以上精製することなく、次工程で使用するニトラミン中間体を得た。
ニトラミン（42g）の濃硫酸（100ml）溶液を85℃で2時間加熱し、次いで、110℃で更に1時間加熱した。混合物を冷却し、氷（1L）に注ぎ、濃アンモニア溶液でpH9のアルカリ性にした。得られた懸濁液をろ過し、固形分を水洗した。熱トルエン（3×250ml）を用いて固形分を抽出し、一緒にされた抽出物から溶媒をとばし、クロマトグラフにかけて（ヘプタン：酢酸エチル＝9：2）、2-クロロ-4-アミノ-5-ニトロピリジンを白色の固体として得た（4.57g，10％）。
1H NMR(400MHz、DMSO)δ：8.85(1H、d)、7.90-8.22(2H、bs)及び6.90(1H、d)
【０３２０】
2008519044.tif 000051
ルート2によって、4-アミノ-2-クロロ-5-ニトロピリジンを化合物9に転換した。
1H NMR(400MHz、MeOD)δ：8.64(s、1H)、8.21(s、1H)、8.03(d、1H)、7.82(d、1H)、7.65(d、1H)、7.58-7.56(m、2H)及び2.60(s、3H)；
MS(ES+)：466(35Cl、35Cl)、468(35Cl、37C)、470(37Cl、37C)[M++1].
【０３２１】
＜化合物10＞
2008519044.tif 000052
ルート1ステップ4に記載された方法によって、2-アミノチオフェノールから化合物10を調製した。
1H NMR (400MHz，MeOD) δ 8.45(s、1H)、8-8.05(m、3H)、7.8(d、1H)、7.65(d、1H)、7.5-7.55(m、2H)、7.4(dd、1H)、2.65(s、3H)；
MS(ES+):448(35Cl)、450(37Cl)[M++1].
【０３２２】
＜化合物11＞
2008519044.tif 000053
カリウムtert-ブトキサイド（865mg；7.08mmol）及び塩化銅（I）（23mg；0.24mmol）のジメチルホルムアミド（4ml）溶液に、4-メチルチオニトロベンゼン（400mg；2.36mmol）とメトキシアミンハイドロクロライド（247mg；2.96mmol）のジメチルホルムアミド（4ml）溶液を、窒素雰囲気下に加えた。得られた溶液を1.5時間かけて40℃に加熱した。次いで、反応混合物を飽和アンモニウムクロライド溶液（10ml）に加え、ジクロロメタン（3×10ml）で抽出した。一緒にした有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、ろ過及び脱溶媒して未精製残渣を得、カラムクロマトグラフィー（30％酢酸エチルのヘプタン溶液）で精製して、5-メチルチオ-2-ニトロアニリン（190mg，44％）を得た。
【０３２３】
2008519044.tif 000054
5-メチルチオ-2-ニトロアニリン（50mg；0.27mmol）の酢酸溶液（2ml）を85℃に加熱した。次いで亜鉛粉末（71mg；1.09mmol）を15分かけて少しずつ加え、得られた溶液を85℃で2時間保持した。次いで、熱い反応混合物をセライトでろ過し、得られたケーキを加熱した酢酸で洗浄した（10ml）。ろ液から溶媒をとばして乾燥し、未精製の4-メチルチオ-1，2-フェニレンジアミン（42mg，100％）を得た。これを精製することなく直接次工程に使用した。
【０３２４】
2008519044.tif 000055
ルート1を用い、4-メチルチオ-1，2-フェニレンジアミンから化合物11を調製した。
1H NMR(400 MHz,MeOD) δ 8.55(s、1H)、8.05(d、1H)、7.65-7.75(m、4H)、7.6(s、1H)、7.5(d、1H)、2.65(s、3H)、2.55(s、3H)；
MS(ES+):477(35Cl)、479(37Cl)[M++1].
【０３２５】
＜化合物12＞
2008519044.tif 000056
2-（2-クロロ-5-ニトロフェニル）ベンズイミダゾール（100mg；0.37mmol）をジメチルホルムアミド（1ml）に溶かし、60％の水酸化ナトリウムオイル（19mg、0.85mmol）を加えた。これを40℃で20分間加熱する一方、4-（2-クロロエチル）モルフォリンハイドロクロライド（136mg；0.73mmol）をジメチルホルムアミド（1ml）に懸濁させて塩基を除去したのち、60％の水酸化ナトリウムオイル（19mg、0.85mmol）を加えた。20分後に両溶液を一緒にし、45℃で75分、次いで85℃で1.5時間加熱した。大量の溶媒を除去し、残渣を酢酸エチルと水に分配した。有機層を乾燥（硫酸ナトリウム）し、ろ過及び脱溶媒した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、40％酢酸エチルヘプタン溶液（83mg，58％）を用いて、2-（2-クロロ-5-ニトロ-フェニル）-1-（2-モルフォリン-4-イル-エチル）-1H-ベンゾイミダゾールを流出させた。
【０３２６】
2008519044.tif 000057
化合物16で記載された方法を用いてニトロ基を水素化し、次いでルート1工程1と同様にしてこれをキャップし、化合物12を得た。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.15(s、1H)、8.1(d、1H)、7.85(d、1H)、7.75(d、1H)、7.7(d、1H)、7.65(m、2H)、7.3-7.4(m、2H)、4.25-4.35(brs、2H)、3.45-3.5(brm、4H)、2.7(s、3H)、2.6-2.7(brm、2H)、2.2-2.25(brm、4H)；
MS (ES+): 544 (35Cl), 546 (37Cl) [M++1].
【０３２７】
＜化合物13＞
2008519044.tif 000058
化合物1（50mg；0.12mmol）をアセトン（2ml）中に懸濁させた。2Mのヨウ化メチルのt-ブチルメチルエーテル（70μl；0.14mmol）を加え、次いで1Mの水酸化ナトリウム水溶液（0.1ml）を加えた。反応液を室温で1.5時間攪拌した後、更にアルカリを加えて更に2時間攪拌を続けた。水（3ml）を加え、混合物を酢酸エチル（2×3ml）で抽出した。一緒にした有機層を水で洗浄（2×2ml）し、乾燥（硫酸ナトリウム）、ろ過した後溶媒をとばした。残渣をシリカゲルコロマトグラフにかけ、25％酢酸エチルのヘプタン溶液（21mg，41％）を用いて化合物13を流出させた。
これを、ルート2の工程3に記載されたように塩酸塩に転換した。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.4(s、1H)、8.1(d、1H)、7.95(d、1H)、7.9(d、1H)、7.85(d、1H)、7.75(d、1H)、7.73(d、1H)、7.65-7.7(m、2H)、3.95(s、3H)、2.65(s、3H)；
MS(ES+):445(35Cl)、447(37Cl)[M++1].
【０３２８】
＜化合物14＞
2008519044.tif 000059
N-BOCピペリジン-4-メタノール（1g；46.5mmol）及び四臭化炭素（1.7g；51.3mmol）をジクロロメタン（20ml）に溶かし、0℃に冷やした。トリフェニルフォスフィン（0.98g；37.3mmol）を加え、反応物を室温で16時間攪拌した。更にトリフェニルフォスフィン（0.4g；15.7mmol）及び四臭化炭素（0.24g；7.2mmol）を加えて、6時間攪拌を継続した。溶媒をとばし、残渣をシリカクロマトにかけた。N-BOCピペリジン-4メチルブロマイドを、20％酢酸エチルのヘプタン（1.22g、94％）溶液を用いて流出させた。
【０３２９】
2008519044.tif 000060
化合物12に記載された方法によってN-BOCピペリジン-4メチルブロマイドを化合物14に転換した。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.2(d、1H)、8.1(s、1H)、7.95(d、1H)、7.8(d、1H)、7.75(d、1H)、7.7-7.75(m、2H)、7.35-7.45(m、2H)、4.1-4.2(brm、2H)、4.0(brd、2H)、2.75(s、3H)、2.6-2.7(brm、4H)、2.0-2.15(brm、1H)、1.45(s、9H)、1-1.15(brm、4H)；
MS (ES+):628(35Cl)、630(37Cl)[M++1].
【０３３０】
＜化合物15＞
2008519044.tif 000061
化合物14（26mg；0.041mmol）をエタノール（1ml）に溶解し、濃塩酸（0.5ml）を加えた。室温で2.5時間攪拌した後、溶媒を除去して化合物15を2塩酸塩として得た(16mg,73%)。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.05(d、1H)、7.95(s、1H)、7.8(d、1H)、7.67(d、1H)、7.62(d、1H)、7.55(m、2H)、7.25-7.35(m、2H)、3.95-4.05(brm、2H)、2.85(brd、2H)、2.65(s、3H)、2.35(brt、2H)、1.9(brm、1H)、1.3-1.4(brm、2H)、0.95-1.05(brm、2H)；
MS (ES+)：528(35Cl)、530(37Cl)[M++1]
【０３３１】
＜化合物16＞
2008519044.tif 000062
ルート1の工程4に記載された方法を用いて、1，2-ジアミノ-4-ニトロベンゼンをルート1の工程3で得られるアルデヒドと反応させ、N-［4-クロロ-3-（5-ニトロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-フェニル］-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミドを得た。
【０３３２】
2008519044.tif 000063
N-［4-クロロ-3-（5-ニトロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-フェニル］-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（212mg、0.45mmol）を、濃塩酸2滴と共にエタノール（4ml）に溶解した。これをチャーコール（42mg、20重量％）に担持した5％パラジュームに添加し、反応物を水素雰囲気下で3時間攪拌した。セライトを用いたろ過によって触媒を除き、溶媒をとばしてN-［3-（5-アミノ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-4-クロロ−フェニル］-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（198mg、100％）を分離した。
【０３３３】
2008519044.tif 000064
N-［3-（5-アミノ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-4-クロロ-フェニル］-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（198mg；0.45mmol）をテトラヒドロフラン（2ml）に溶解して0℃に冷却した。60％水素化ナトリウム油（80mg、2.0mmol）を加え、30分後にアセチルクロライド（156mg；2.0mmol）を加えた。反応物を室温で48時間攪拌し、1.2Mの塩酸（4ml）を加え、4.5時間攪拌を継続した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液を用いてアルカリ性にし、酢酸エチルを用いて抽出し、乾燥（硫酸ナトリウム）、ろ過し、溶媒をとばした。シリカゲルコロマトにかけ、100％酢酸エチルを用いて流出させ、化合物16を得た（46mg，21％）。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.43(m、1H)、8.39(s、1H)、8.04(d、1H)、7.74(d、1H)、7.65(m、3H)、7.45(d、1H)、2.61(s、3H)及び2.10(s、3H)；
MS(ES+):488(35Cl)、490(37Cl) [M++1]
【０３３４】
＜化合物17＞
2008519044.tif 000065
2-ヒドロキシニコチン酸（25g；0.18moles）を少しずつ加える前に濃硫酸（73ml）を0℃に冷却した。発煙硝酸（17.5ml）を0℃で滴下し、反応物を50℃で4時間加熱した。混合物を室温に冷却してから氷り/水に注いだ。生じた2-ヒドロキシ-5-ニトロニコチン酸の沈殿物をろ過し、水で洗浄し、次いで乾燥した（29g，88％）。
【０３３５】
2008519044.tif 000066
2-ヒドロキシ-5-ニトロニコチン酸（29g；0.16moles）を、攪拌しながら少しずつオキシ塩化リン（90ml）に加えた。温度を100℃に上げ、室温に冷やす前に3時間加熱を継続した。氷で冷やしたメタノール（100ml）に添加する前に、大量の溶媒を除去した。混合物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液を用いてpH9のアルカリ性にし、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を乾燥 （硫酸ナトリウム）し、シリカゲルを用いたドライフラッシュクロマトグラフィーで精製する前にろ過し、溶媒をとばした。メチル-2-クロロ-5-ニトロニコチネートを67％酢酸エチルのヘプタン溶液（31g，90％）で流出させた。
【０３３６】
2008519044.tif 000067
メチル-2-クロロ-5-ニトロニコチネートはルート2の工程2に記載された条件でアミンに還元されると共に、ルート1に記載された方法によって化合物17から取り出されたメチル-5-アミノ-2-クロロニコチネートに還元された。
1H NMR （400 MHz, MeOD) δ 9.02(s、1H)、8.73(s、1H)、8.08(d、1H)、7.86(m、2H)、7.69(d、1H)、7.62(d、2H)及び2.60(s、3H)；
MS(ES+)：432(35Cl)、434(37Cl)[M++1]
【０３３７】
＜化合物18＞
2008519044.tif 000068
エチル-2-アミノチアゾール-4-カルボキシレートを、Tet. Lett. 2002， 43 （39）， 7051-7053 （J. F. Okonya and F. Al−Obeidi）に記載されているように塩素化した。次いで、ルート1を用いてこれを化合物18に転換した。
1H NMR (400MHz, MeOD) 8.14(d、1H)、7.60(d、1H)、7.55(m、2H)、7.20(m、2H)及び2.65(s、3H)；
MS(ES+)：438(35Cl)、440(37Cl)[M++1]
【０３３８】
＜化合物19＞
2008519044.tif 000069
2-ニトロ-3-メトキシアニリン（90mg；0.54mmol）のエタノール（3ml）溶液に、炭素に担持された5％パラジウム（18mg、20重量％）を添加した。得られた懸濁液を水素雰囲気下の室温で、18時間攪拌した。セライトを用いて懸濁液をろ過し、ろ液から溶媒をとばし、3-メトキシ-1，2-フェニレンジアミン（73mg，100％）を得た。
【０３３９】
2008519044.tif 000070
3-メトキシ-1，2-フェニレンジアミンを、ルート1を用いてN-［4-クロロ-3-（7-メトキシ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-フェニル］-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミドに転換した。
2008519044.tif 000071
N-［4-クロロ-3-（7-メトキシ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-フェニル］-2-メチル-6-トリフルオロメチル-ニコチンアミド（80mg；0.18mmol）のエタノール（5ml）溶液を-78℃に冷却し、ボロントリブロマイド（130mg；0.52mmol）を滴下した。反応物の温度を室温まで上がるにまかせ、18時間攪拌した。水（5ml）を加え、飽和重炭酸ナトリウム溶液を用いて反応混合物をアルカリ性にした。次に、これをジクロロメタン（3×5ml）で抽出し、一緒にした有機層を乾燥（硫酸マグネシウム）し、ろ過し、溶媒をとばして未精製の残渣を得た。これを熱アセトニトリルから再結晶させて化合物19（10mg，14％）を得た。
1H NMR (400MHz, MeOD) δ 8.15(m、2H)、7.95(dd、1H)、7.75(d、1H)、7.65(d、1H)、7.15(m、2H)、6.7(dd、1H)、2.75(s、3H)；
MS(ES+)：447(35Cl)、449(37Cl)[M++1].
【０３４０】
＜化合物20＞
2008519044.tif 000072
化合物19に記載された方法によって、4-メトキシ-2-ニトロアニリンから化合物20を調製した。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.15(m、2H)、7.9(d、1H)、7.75(d、1H)、7.6(d、1H)、7.45(brs、1H)、7.90(brs、1H)、6.85(d、1H)、2.75(s、3H)；
MS(ES+)：447(35Cl)、449(37Cl)[M++1].
【０３４１】
＜化合物25＞
2008519044.tif 000073
水素化リチウムアルミニウム（43mg、1.14mmol）をテトラヒドロフラン（5ml）に溶かして-78℃に冷却した。化合物1（490mg；1.14mmol）もまたテトラヒドロフラン（5ml）に溶解し、最初の溶液に滴下して加えた。反応物を室温で攪拌した後、t-ブチルメチルエーテル（2.3ml）に溶解した1 Mの水素化リチウムアルミニウムを半分ずつ加え、50℃で16時間加熱した。水（0.13ml）、15％苛性ソーダ（0.13ml）及び水（0.39ml）を用いて反応を停止させ、ろ過した後固体を酢酸エチルで洗浄した。溶媒を除去して化合物25を得た（237mg，50％）。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.8-7.9(m、3H)、7.65-7.7(M、2H)、7.6(d、1H)、7.45(d、1H)、7.05(s、1H)、6.95(d、1H)、4.5(s、2H)、2.65(s、3H)：
MS(ES+):417(35Cl)、419(37Cl)[M++1]
【０３４２】
＜化合物30＞
2008519044.tif 000074
化合物19の場合と同様に4-アミノ-3-ニトロベンゾニトリルを4-シアノ-1，2-フェニレンジアミンに還元した。これをルート1の工程4に記載されているように2-クロロ-5-ニトロベンズアルデヒドと反応させ、2-（2-クロロ-5-ニトロ-フェニル）-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボニトリルを得た。
【０３４３】
2008519044.tif 000075
密閉できるチューブ中で攪拌された2-（2-クロロ-5-ニトロ-フェニル）-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボニトリル（2.00g；6.70mmol）のエタノール（20ml）溶液にトリエチルアミン（1.90ml；13.4mmol）を加えた。ヒドロキシルアミンハイドロクロライド（933mg；13.4mmol）の水（4ml）溶液を加えてチューブを密閉し、混合物を75℃で2時間攪拌した。室温に冷却した後水（100ml）を加え、沈殿物をろ過し、更に水で洗浄し、2-（2-クロロ-5-ニトロ-フェニル）-N-ヒドロキシ-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボキシアミジンを得た（1.76g，82％）。
【０３４４】
2008519044.tif 000076
攪拌した2-（2-クロロ-5-ニトロ-フェニル）-N-ヒドロキシ-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボキシアミジン（5.29g；16.0mmol）のトリエチルオルトギ酸エステル溶液（50ml）を80℃に加熱した。濃塩酸（3滴）を加え、更に2時間加熱した。室温に冷却した後ヘプタン（50ml）を加えて沈殿を生じさせた。固体をろ過して取り出し、更にヘプタンで洗浄して、2-（2-クロロ−5-ニトロ-フェニル）-5-［1，2，4］オキサジアゾール-3-イル-1H-ベンゾイミダゾール（3.30g，62％）を得た。
【０３４５】
2008519044.tif 000077
2-（2-クロロ-5-ニトロ-フェニル）-5-［1，2，4］オキサジアゾール-3-イル-1H-ベンゾイミダゾールを、ルート2の工程2次いでルート1の工程1によって化合物30に転換した。
1H NMR (400MHz, MeOD) δ 9.4(s、1H)、8.65(d、1H)、8.6(s、1H)、8.45(d、1H)、8.15(d、1H)、8.05(d、1H)、7.75-7.85(m、3H)、2.75(s、3H)；
MS(ES+)：499(35Cl)、501(37Cl)[M++1].
【０３４６】
＜化合物34＞
2008519044.tif 000078
Eur. J. Org. Chem. 2001, 1371-1376 （E. Marzi, A. Bigi, M. Schlosser ）に記載された方法によって2.5-ジクロロピリジンから3，6-ジクロロピリジン-2-カルボキシアルデヒドを調製し、ルート1の工程4の方法によって2-（3，6-ジクロロ−ピリジン-2-イル）-1H-ベンゾイミダゾールに転換した。
【０３４７】
2008519044.tif 000079
2-（3，6-ジクロロ-ピリジン-2-イル）-1H-ベンゾイミダゾール（20mg；0.076mmol）を圧力チューブのエタノール（1.5ml）及び濃アンモニア（2ml）に溶解した。140℃、200psiの条件下、1000分マイクロ波を照射した後、溶液を除去し、残渣を、上記のようにマイクロ波照射するまえに、イソプロピルアルコール（1ml）及び濃アンモニア（1ml）に溶解した。溶媒をとばし、80％酢酸エチルのヘプタン溶液を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、6-（1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-5-クロロ−ピリジン-2-イルアミン（4mg，21％）を得た。
【０３４８】
2008519044.tif 000080
ルート1工程1の方法を用いて、6-（1H-ベンゾイミダゾール-2-イル）-5-クロロ-ピリジン-2-イルアミンから化合物34を調製した。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.55(d、1H)、8.2(d、1H)、8.1(d、1H)、7.85(m、2H)、7.7(d、1H)、7.6(m、2H)、2.65(s、3H);
MS(ES+):432(35Cl)、434(37Cl)[M++1].
【０３４９】
＜化合物38＞
2008519044.tif 000081
Eur. J. Org. Chem. 2001、1371-1376（E. Marzi、A. Bigi、M. Schlosser）に記載された方法を用いて、2,5-ジクロロピリジンから2，5-ジクロロピリジン-4-カルボキシアルデヒドを調製し、次いでルート1工程4の方法を用いて2-（2，5-ジクロロ-ピリジン-3-イル）-1H-ベンゾイミダゾールに転換した。これを化合物34で記載されたようにアミノ化し、得られたアミノピリジンを、ルート1工程1の方法を用いて化合物38に転換した。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.75(s、1H)、8.45(s、1H)、8.05(d、1H)、7.5-7.75(brm、3H)、7.2-7.3(brm、2H)、2.65(s、3H);
MS(ES+):432(35Cl)、434(37Cl)[M++1].
【０３５０】
生物学的試験
リード化合物の発見/ハイスループットなスクリーニング分析
試験化合物を濃度が10mMとなるようにDMSOに溶解し、-20℃で保存した。試験細胞中のヘッジホッグ経路を活性化するために、ソニック・ヘッジホッグタンパク質のN末端断片がオクチル化された（脂質が変性された）もの（OCT-SHH）を使用した。このN末端SHH断片はバクテリアを用いて製造された。例えば、Taylor FR他、Biochemistry 2001，40，4359-71参照。
【０３５１】
細胞株10T1/2（s12）を用い、下記の「Gli-Luc」アッセイで化合物をテストすることができる。上記細胞株において、細胞は、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼを利用したヘッジホッグ応答性レポーター構築物を含む。このようにして、ヘッジホッグ経路シグナル伝達活性を、Gli-Luc応答を介して測定することができる。
【０３５２】
10T1／2（s12）細胞を、96穴マイクロタイタープレートに、完全培地中〔10％FBS含有DMEM〕に、20，000細胞／ウェルとなるように蒔く。次いで、一晩（O／N）37℃、5％CO2の条件で培養するためにプレートを培養器に入れる。24時間後に、培地を、ルシフェラーゼアッセイ培地（0.5％FBS含有DMEM）で交換する。
化合物を融解し、アッセイ培地中で3：1000（約300倍）に希釈し、初期濃度を約0.0003mMから30μMとする。
【０３５３】
次いで、150μlの各試料を第1のウェルに添加する（3連）。そこでMTP試料を3倍に希釈して全部で7ウェル、最終的に各化合物について、3連で7希釈物の群にした。次に、ルシフェラーゼ−アッセイ培地中にタンパクリガンドOCT-SHHを希釈し、各ウェルに最終濃度が0.3μg／mlとなるように添加する。次いで、一晩37℃、5％CO2でさらに培養するためにプレートを培養器に戻す。約24時間後、プレートを培養器から取り出し、培地を吸引して廃棄する。ウェルを一度検査バッファー ［PBS＋1mM Mg2+及び1mM Ca2+］で洗浄する。次いで各ウェルに検査バッファー50mlを添加する。ベンダー（パッカード社提供のルクライトキット）が記載したようにルシフェラーゼアッセイ試薬を調製し、各ウェルに50μlを添加する。プレートを30分間室温で培養し、その後Topcount（パッカード社）上でシグナルが室温で読まれる。
【０３５４】
ひと細胞株（特に、上記したGli-Lucで変性した人間の胎児の間充組織細胞）を用いて、MEM/ナトリウムピルベートw/10％FBSの成長培地中、及びMEM/ナトリウムピルベートw/0.5％ FBS検査培地中で、同様の検査を行った。OCT-SHHを、最終濃度が1mg/mlとなるように添加した。
【０３５５】
上記の検査で同定された化合物を表1に示した。ここで、上記した全ての文献は本発明の一部をなすものとする。
【０３５６】
同等物
さらにルーチンな実験をやらなくても、当業者であれば、ここに記載された本発明の格別な態様と同等な発明を理解し或いは確認できるであろう。このような同等な発明は、下記のクレームに包含されるものとする。
【産業上の利用可能性】
【０３５７】
本発明の化合物は、神経組織、骨及び軟骨形成及び修復の調整、精子形成の調整、平滑筋の調整、肺、肝臓、原腸から生ずる他の器官の調整、造血機能の調整、及び、皮膚及び毛髪成長の調整のような、治療上又は美容上の応用の一部として有効であり、賦形剤を用いて医薬品製剤とすることができるので産業上有用である。
【国際調査報告】
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