(57)【要約】非常に細胞毒性であり、合成的に入手可能であり、抗体および他のリガンドに結合することができるオーリスタチン型ペプチドについて開示する。2008519863.tif 000093
2008519863.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Iaを有する共役化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
2008519863.tif 000071
式中、
L-はリガンド単位であり;
-Aa-Ww-はリンカー単位(LU)であり、ここで:
-A-はストレッチャー単位であり、
aは0または1であり、
各-W-は独立して、アミノ酸単位であり、
wは0から12までの範囲の整数であり、
pは1から約20までの範囲の整数であり;および
-Dは下記式
2008519863.tif 000072
の薬物単位であり、
式中、各位置において独立に、
R2は、-水素、-C1-C8アルキル、-O-(C1-C8アルキル)、-ハロゲン、-NO2、-COOH、および-C(O)OR11から選択され;
各R3は、-水素および-C1-C8アルキルから独立に選択され;
Iは、0〜10の範囲の整数であり;
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立して選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項２】
リンカー単位が下記一般式1bを有する、請求項1記載の共役化合物:
2008519863.tif 000073
式中、
R17は、-C1-C10アルキレン-、-C3-C8カルボシクロ、-O-(C1-C8アルキル)、-アリーレン-、-C1-C10-アルキレン-アリーレン-、-アリーレン-C1-C10アルキレン-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8カルボシクロ)-、-(C3-C8カルボシクロ)-C1-C10アルキレン-、-C3-C8ヘテロシクロ-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8ヘテロシクロ)-、-(C3-C8ヘテロシクロ)-C1-C10アルキレン-、-(CH2CH2O)r-、および-(CH2CH2O)r-CH2-から選択され;ならびにrは1〜100の範囲の整数である。
【請求項３】
薬物単位が下記式を有する、請求項1記載の共役化合物:
2008519863.tif 000074
式中、各位置において独立に、
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立に選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項４】
薬物単位が下記式を有する、請求項3記載の共役化合物:
2008519863.tif 000075
式中、各位置において独立に、
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項５】
薬物単位が下記式を有する、請求項4記載の共役化合物:
2008519863.tif 000076
式中、
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項６】
薬物単位が下記式を有する、請求項5記載の共役化合物:
2008519863.tif 000077
【請求項７】
リガンド単位が抗体である、請求項1記載の共役化合物。
【請求項８】
抗体がモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二特異性抗体、またはこれらの機能的活性フラグメントである、請求項7記載の共役化合物。
【請求項９】
抗体が、CD70、CD30、CD33、CD40、またはルイス(Lewis)Yに免疫特異的に結合する、請求項8記載の共役化合物。
【請求項１０】
抗体が、該抗体のシステイン残基を通してリンカー単位に結合する、請求項7記載の共役化合物。
【請求項１１】
pが2〜8である、請求項7記載の共役化合物。
【請求項１２】
pが4である、請求項11記載の共役化合物。
【請求項１３】
下記式を有する、請求項7記載の共役化合物:
2008519863.tif 000078
式中、Abは抗体である。
【請求項１４】
下記式を有する、請求項7記載の共役化合物:
2008519863.tif 000079
式中、Abは抗体である。
【請求項１５】
下記式を有する、請求項7記載の共役化合物:
2008519863.tif 000080
式中、Abは抗体である。
【請求項１６】
下記式を有する、請求項16記載の共役化合物:
2008519863.tif 000081
式中、Abは抗体である。
【請求項１７】
抗体が、AC10、S2C6、BR96、1F6、および2F2から選択される、請求項7記載の共役化合物。
【請求項１８】
下記式の薬物リンカー単位が抗体に共役されている、請求項7記載の共役化合物:
2008519863.tif 000082
【請求項１９】
下記式の薬物リンカー単位が抗体に共役されている、請求項7記載の共役化合物:
2008519863.tif 000083
【請求項２０】
腫瘍細胞または癌細胞を殺傷するか、またはその増殖を阻害するための方法であって、腫瘍細胞または癌細胞を殺傷するか、またはその増殖を阻害するために有効である、請求項7記載の共役化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有効量を用いて、腫瘍細胞または癌細胞を処理する工程を含む、方法。
【請求項２１】
癌を治療するために有効である、請求項7記載の共役化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量を患者に投与する工程を含む、癌を治療するための方法。
【請求項２２】
さらなる抗癌剤、免疫抑制剤、または抗感染剤の有効量を投与する工程をさらに含む、請求項21記載の方法。
【請求項２３】
共役化合物および薬学的に許容される希釈剤、キャリア、または賦形剤を含む薬学的組成物を投与する工程を含む、請求項21記載の方法。
【請求項２４】
患者に投与される共役化合物の量が患者の体重の約0.1〜約15mg/kgの範囲である、請求項21記載の方法。
【請求項２５】
共役化合物が約3週間間隔で投与される、請求項21記載の方法。
【請求項２６】
共役化合物が非経口的または静脈内に投与される、請求項21記載の方法。
【請求項２７】
共役化合物が薬学的に許容される非経口媒体とともに製剤化される、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
共役化合物が注射用単位剤形で製剤化される、請求項21記載の方法。
【請求項２９】
自己免疫疾患を治療するために有効である量の請求項7記載の共役化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を患者に投与する工程を含む、自己免疫疾患を治療するための方法。
【請求項３０】
請求項1記載の共役化合物;
容器;および
該化合物が癌を治療するために使用することができることを示す添付文書またはラベル
を含む、薬学的組成物。
【請求項３１】
共役化合物が、CD70、CD30、CD33、CD40、CD70、またはルイスYに結合するリガンド単位を含む、請求項30記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
下記式Iを有する薬物化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物:
2008519863.tif 000084
式中、各位置において独立に、
R2は、-水素、-C1-C8アルキル、-O-(C1-C8アルキル)、-ハロゲン、-NO2、-COOH、および-C(O)OR11から選択され;
各R3は、-水素およびC1-C8アルキルから独立に選択され;
Iは、0〜10の範囲の整数であり;
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
R5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立に選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項３３】
下記式を有する、請求項32記載の薬物化合物:
2008519863.tif 000085
式中、各位置において独立に、
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
R5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立に選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項３４】
下記式を有する、請求項33記載の薬物化合物:
2008519863.tif 000086
式中、各位置において独立に、
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項３５】
下記式を有する、請求項34記載の薬物化合物:
2008519863.tif 000087
式中、
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【請求項３６】
下記式を有する、請求項35記載の薬物化合物:
2008519863.tif 000088
【請求項３７】
下記式を有する、リンカー薬物共役物:
2008519863.tif 000089
【請求項３８】
下記式を有する、リンカー薬物共役物:
2008519863.tif 000090
【請求項３９】
下記式を有する、リンカー薬物共役物:
2008519863.tif 000091
【請求項４０】
下記式を有する、リンカー薬物共役物:
2008519863.tif 000092
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
継続出願
本願は2004年11月12日に出願された米国仮特許出願第60/627,207号の恩典を主張し、この開示は参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
背景
癌および他の疾患の治療のための標的細胞または組織への薬物および他の薬剤の送達は、何年もの間、少なからぬ研究の焦点であった。現在、非経口的に患者に投与されている多くの薬剤は標的とされておらず、必要とされていない、およびしばしば所望されていない身体の細胞および組織に、薬剤の全身性送達を生じている。このことは、薬物の有害な副作用を生じる可能性があり、しばしば、投与することができる薬物(例えば、化学療法剤(抗癌剤)、細胞毒性剤、酵素阻害剤、および抗ウイルス薬物または抗微生物薬物)の用量を制限する。薬物の経口投与は、投与の便利かつ経済的な様式であると見なされているが、一旦、薬物が全身の循環に吸収されたら、経口投与は、非標的細胞への非特異的な毒性についての同じ懸念を共有する。さらに厄介な問題には、薬物への腸のさらなる露出、およびそれゆえに腸毒性のリスクをもたらす、腸における薬物の経口的な生物学的利用能および薬物の耐性に関わる問題が含まれる。
【０００３】
従って、主要な目的は、細胞および組織に薬剤を特異的に標的化するための方法を開発することであった。このような処理の恩典には、他の細胞および組織、例えば、非感染細胞へのこのような薬剤の不適切な送達の一般的な生理学的効果を回避することが含まれる。細胞内標的化は、細胞内部への薬剤、すなわち、細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤の蓄積および保持を可能にする、方法、化合物、および製剤によって達成されてもよい。細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤(例えば、癌の治療において腫瘍細胞を殺傷または阻害する薬物)の局所的送達のための抗体-薬物結合体の使用は、腫瘍への薬物部分の標的化された送達、およびそこへの細胞内蓄積を許容し得る。対照的に、結合体化されていない薬物製剤の全身投与は、抹殺することが求められている腫瘍細胞と同様に、正常細胞に対して、受け入れがたいレベルの毒性を生じる可能性がある。
【０００４】
抗体-薬物結合体において、薬物は、直接的に(例えば、システイン残基を介して)、またはリンカーを介して間接的に抗体に連結することができる。抗原結合後の標的抗体の内在化は、薬物を標的細胞に運ぶ。一旦内在化されると、薬物は、リソソーム(lysozme)中での切断または他の細胞メカニズムによって、抗体から放出することができる。薬物放出を容易にするために、切断可能な部位は、リンカーに含めることができる。ある結合体において、リンカーの部分は、切断後に薬物に結合されたままである可能性がある。このことを回避するために、自己犠牲的スペーサーがリンカーに含まれてきた。この自己犠牲的スペーサーは、2つの間隔をあけた化学部分を、通常は安定である三成分分子(例えば、抗体-リンカー-薬物結合体)に一緒に共有結合することが可能である二官能性化学部分である。切断後、このスペーサーは、分子の残りから、該間隔をあけた化学部分の他の部分を放出するためにそれ自体を自発的に切断する(米国特許第6,214,345号(特許文献1)を参照されたい)。例えば、1つの自己犠牲的スペーサー単位は、p-アミノベンジルカルバモイル(PABC)である。
【０００５】
しかし、酵素的に切断可能なリンカーを通して連結された場合、抗体薬物結合体からの効率的な薬物放出のために、自己犠牲的スペーサーを要求しない抗体薬物結合体についての必要性が存在する。過去のこれらおよび他の制限は、本発明によって解決される。本願における任意の参考文献の引用は、参考文献が本願に対する先行技術であることの認可ではない。
【０００６】
【特許文献１】米国特許第6,214,345号
【発明の開示】
【０００７】
発明の簡単な概要
本発明は、一般式Ia:
2008519863.tif 000003
の共役化合物、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和物を提供し、式中、
L-はリガンド単位であり;
-Aa-Ww-はリンカー単位(LU)であり、ここで、リンカー単位は以下を含む:
-A-はストレッチャー単位であり、
aは0または1であり、
各-W-は独立して、アミノ酸単位であり、
wは0から12までの範囲の整数であり、
pは1から約20までの範囲であり;および
-Dは下記式
2008519863.tif 000004
の薬物単位であり、
式中、各位置において独立に、
R2は、-水素、-C1-C8アルキル、-O-(C1-C8アルキル)、-ハロゲン、-NO2、-COOH、および-C(O)OR11から選択され;
各R3は、-水素およびC1-C8アルキルから独立に選択され;
Iは、0〜10の範囲の整数であり;
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立に選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、または-NR12-であり、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【０００８】
ある態様において、リンカー単位は一般式Ib:
2008519863.tif 000005
を有し、式中、R17は、-C1-C10アルキレン-、-C3-C8カルボシクロ、-O-(C1-C8アルキル)、-アリーレン-、-C1-C10-アルキレン-アリーレン-、アリーレン-C1-C10アルキレン-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8カルボシクロ)-、-(C3-C8カルボシクロ)-C1-C10アルキレン-、-C3-C8ヘテロシクロ-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8ヘテロシクロ)-、-(C3-C8ヘテロシクロ)-C1-C10アルキレン-、-(CH2CH2O)r-、および-(CH2CH2O)r-CH2-から選択され;ならびにrは1〜100の範囲の整数である。
【０００９】
別の局面において、一般式I:
2008519863.tif 000006
の薬物化合物、ならびにその薬学的に許容される塩、または溶媒和物が提供され;
式中、各位置において独立に、
R2は、-水素、-C1-C8アルキル、-O-(C1-C8アルキル)、-ハロゲン、-NO2、-COOH、および-C(O)OR11から選択され;
各R3は、-水素およびC1-C8アルキルから独立に選択され;
Iは、0〜10までの範囲の整数であり;
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立に選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-であり、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【００１０】
別の局面において、共役化合物または薬物化合物および薬学的に許容されるキャリアまたは媒体の有効量を含む組成物が提供される。
【００１１】
さらに別の局面において、腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するための方法が提供される。この方法は、共役化合物、薬物リンカー化合物、または薬物化合物の有効量を、その必要がある患者に投与する工程を含む。
【００１２】
さらに別の局面において、自己免疫抗体を発現する細胞を殺傷し、またはその複製を阻害するための方法が提供される。この方法は、共役化合物、薬物-リンカー化合物、または薬物化合物の有効量を、その必要がある患者に投与する工程を含む。
【００１３】
さらに別の局面において、感染性疾患を治療するための方法が提供される。この方法は、共役化合物、薬物-リンカー化合物、または薬物化合物の有効量を、その必要がある患者に投与する工程を含む。
【００１４】
別の局面において、本発明は、共役化合物、薬物-リンカー化合物、または薬物-リンカーフラグメントなどの共役化合物の細胞内代謝物を提供する。
【００１５】
本発明は、添付の図、図面、およびスキームとともに提供される、以下の例示的な態様の詳細な説明を参照してさらに理解される。以下の議論は、説明的、例証的、および例示的であり、いくつかの添付の請求項によって定義される範囲を制限するものとして取られるべきではない。
【００１６】
定義および略語
他に言及されない限り、本明細書で使用される以下の用語および語句は、以下の意味を有することが意図される。商標名が本明細書で使用される場合、本出願人らは、商標名製剤、ジェネリック医薬品、および商標名製品の活性な医薬品成分を独立して含むことを意図する。
【００１７】
「抗体」という用語は、本明細書では、その最も広い意味で使用され、所望の生物学的活性を示す限り、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つの無傷の抗体から形成された多特異的抗体(例えば、二特異的抗体)、および抗体フラグメントを具体的に網羅する。「抗体」という用語は、全長免疫グロブリン分子または全長免疫グロブリン分子の機能的に活性な部分、すなわち、関心対象の標的の抗原またはその部分を免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子をいう。本明細書に開示される免疫グロブリンは、任意の型(IgG、IgE、IgM、IgD、およびIgA)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2)、または免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来することができる。1つの局面において、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、またはウサギ起源である。別の局面において、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多特異的抗体(例えば、二特異的)抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、直鎖抗体、単鎖抗体、ジアボディー、マキシボディー、ミニボディー、Fv、Fabフラグメント、F(ab')フラグメント、F(ab')2フラグメント、Fab発現ライブラリーによって産生されるフラグメント、抗イディオタイプ(抗-Id)抗体、CDR、および標的抗原に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントである。
【００１８】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体をいい、すなわち、この集団を含む個々の抗体は、わずかな量で存在するかもしれない、可能性がある天然に存在する変異以外は同一である。モノクローナル抗体には、重鎖および/または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、またはある特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と、同一であるかまたはそれと相同であるが、鎖の残りが、別の種に由来する抗体、または別の抗体のクラスもしくはサブクラス、ならびにこのような抗体のフラグメントに属する抗体中の対応する配列と、同一であるかまたはそれに対して相同である、「キメラ」抗体が含まれる(例えば、米国特許第4,816,567号;およびMorrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 :6851-6855を参照されたい)。モノクローナル抗体はまた、ヒト化抗体を含み、これは、ヒト定常領域および非ヒト供給源からのCDRを完全に含んでもよい。
【００１９】
「無傷」抗体は、抗原結合可変領域、ならびに軽鎖定常ドメイン(CL)および重鎖定常ドメイン、CH1、CH2およびCH3を含むものである。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン(例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン)またはそのアミノ酸配列改変体であってもよい。
【００２０】
無傷抗体は、抗体のFc領域(ネイティブ配列Fc領域またはアミノ酸配列改変体Fc領域)に起因する生物学的活性をいう、1つまたは複数の「エフェクター機能」を有してもよい。抗体エフェクター機能の例には、C1q結合;補体依存性細胞毒性(CDC_;Fc受容体結合;抗体依存性細胞媒介細胞毒性(ADCC);食作用;細胞表面受容体のダウンレギュレーション(例えば、B細胞受容体;BCR)などが含まれる。ある態様において、抗体は、エフェクター機能を欠いている。
【００２１】
「抗体フラグメント」には、無傷抗体の一部が含まれ、好ましくは、その抗原結合領域または可変領域が含まれる。抗体フラグメントの例には、Fabフラグメント、Fab'フラグメント、F(ab')2フラグメント、およびFvフラグメント;ジアボディー;直鎖抗体;単鎖抗体分子;マキシボディー;ミニボディー;および抗体フラグメントから形成された多特異的抗体が含まれる。
【００２２】
「単離された」抗体は、その天然の環境の成分から、同定され、および分離され、および/または回収されたものである。その天然の環境の夾雑成分は、抗体のための診断的または治療的使用と干渉する物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含んでもよい。ある態様において、抗体は、(1)ローリー(Lowry)法によって決定されるように、重量で抗体の95%より上、最も好ましくは重量で99%より上まで、(2)回転カップシークエネーターの使用によってN末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも15残基を得るために十分な程度まで、または(3)クーマシーブルー(Coomassie blue)または好ましくは、銀染色を使用して、還元条件下もしくは非還元条件下で、SDS-PAGEによって均一にまで精製される。単離された抗体は、インサイチューで組換え細胞中にある抗体を含む。なぜなら、抗体の天然の環境の少なくとも1つの成分が存在しないからである。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも1つの精製工程によって調製される。
【００２３】
関心対象の抗原を「結合する」抗体は、抗体が、抗原を発現する細胞を標的とする際に有用であるような十分な親和性で、抗原を結合することが可能であるものである。
【００２４】
「ネイティブ配列」ポリペプチドは、天然に由来するポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するものである。このようなネイティブ配列ポリペプチドは、天然から単離することができ、または組換え的もしくは合成的な手段によって産生することができる。従って、ネイティブ配列ポリペプチドは、天然に存在するヒトポリペプチド、マウスポリペプチド、または任意の他の哺乳動物種からのポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。
【００２５】
「アミノ酸配列改変体」という用語は、ネイティブ配列ポリペプチドからある程度まで異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。通常、アミノ酸改変体は、ネイティブリガンドの少なくとも1つの受容体結合ドメインと、またはネイティブ受容体の少なくとも1つのリガンド結合ドメインと、少なくとも約70%の相同性を有し、好ましくは、この相同性は、このような受容体ドメインまたはリガンド結合ドメインと、少なくとも約80%、より好ましくは少なくとも約90%の相同性である。アミノ酸配列改変体は、ネイティブアミノ酸配列のアミノ酸配列中の特定の位置において、置換、欠失、および/または挿入を有する。
【００２６】
「配列同一性」とは、最大配列同一性パーセントを達成するために、配列をアラインし、および必要な場合、ギャップを導入した後で同一であるアミノ酸配列改変体中の残基のパーセンテージとして定義される。アラインメントのための方法およびコンピュータプログラムは、当技術分野において周知である。2つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877において改変されたような、Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410のNBLASTおよびXBLASTプログラムに取り込まれている。BLASTヌクレオチド検索は、関心対象のタンパク質をコードする核酸に対して相同であるヌクレオチド配列を得るために、NBLASTプログラム、スコア=100、ワード長=12を用いて実施することができる。BLASTタンパク質検索は、関心対象のタンパク質に対して相同であるアミノ酸配列を得るために、XBLASTプログラム、スコア=50、ワード長=3を用いて実施することができる。比較目的のためにギャップ付きアラインメントを得るために、ギャップ付きBLASTは、Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402において記載されるようにして用いることができる。または、PSI-Blastが、分子間の遠い関連性を検出する繰り返し検索を実施するために使用することができる(同上)。BLAST、ギャップ付きBLASTプログラム、およびPSI-Blastプログラムを利用するとき、それぞれのプログラム(例えば、XBLASTおよびNBLAST)のデフォルトパラメーターを使用することができる(例えば、インターネットウェブサイトアドレス:www.ncbi.nlm.nih.gov.を参照されたい)。
【００２７】
「障害」には、本発明の治療から恩典を得る任意の状態である。これには、哺乳動物を問題の障害にかかりやすくする病理学的状態を含む、慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本発明における治療される障害の非限定的な例には以下が含まれる:良性および悪性の腫瘍;白血病およびリンパ性悪性疾患、特に、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌、または膀胱癌;神経細胞、グリア、星状細胞、視床下部および他の腺、マクロファージ、上皮、間質、および胞胚腔の障害;ならびに炎症性、血管形成性、および免疫原性の障害。
【００２８】
「有効量」という用語は、存在している癌細胞の増殖を阻害し、および/またはそれを殺傷するために有効な薬物の量をいう。癌治療のために、効力は、例えば、疾患の進行までの時間(TTP)を評価すること、および/または応答速度(RR)を決定することによって測定することができる。
【００２９】
「治療的有効量」という用語は、哺乳動物における疾患または障害を治療するために有効な薬物の量をいう。癌の場合においては、薬物の治療的有効量は、癌細胞の数を減少し;腫瘍サイズを減少し;末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害し(すなわち、ある程度まで遅延し、好ましくは停止し);腫瘍の転移を阻害し(すなわち、ある程度まで遅延し、好ましくは停止し);腫瘍の増殖をある程度まで阻害し;および/または癌と関連する1つまたは複数の徴候をある程度まで軽減する。薬物が、存在している癌細胞の増殖を予防し、および/またはそれを殺傷することが可能な程度まで、この薬物は、細胞増殖抑制性および/または細胞毒性であり得る。癌治療のために、効力は、例えば、疾患の進行までの時間(TTP)を評価すること、および/または応答速度(RR)を決定することによって測定することができる。
【００３０】
「実質的な量」という用語は、集団の、収集物または試料の大多数、すなわち、>50%をいう。
【００３１】
「細胞内代謝物」という用語は、共役化合物(例えば、抗体薬物結合体(ADC))に対する、細胞の内部での代謝プロセスまたは反応から得られる化合物をいう。代謝的プロセスまたは反応は、共役化合物のペプチドリンカーのタンパク質分解性切断のような酵素的プロセス、またはヒドラゾン、エステル、もしくはアミドのような官能基の加水分解であってもよい。細胞内代謝物には、細胞への侵入、拡散、取り込み、または輸送の後で細胞内切断を受ける、抗体および遊離の薬物が含まれるがこれらに限定されない。
【００３２】
「細胞内切断される」および「細胞内切断」という用語は、それによって、共有結合、例えば、薬物部分(D)とリガンド(例えば、抗体)との間のリンカーが破壊され、細胞内部で抗体から解離した遊離の薬物を生じる、共役化合物に対する細胞の内部での代謝的プロセスまたは反応をいう。従って、共役化合物の切断された部分は、細胞内代謝物である(例えば、リガンド-リンカーフラグメント、薬物-リンカーフラグメント、または薬物)である。
【００３３】
「生物学的利用能」という用語は、患者に投与される所定の量の薬物の全身的な利用能(すなわち、血液/血漿レベル)をいう。生物学的利用能は、投与された剤形から全体の循環に到達する薬物の時間(速度)と全体の量(程度)の両方の測定を示す絶対項である。
【００３４】
「細胞毒性活性」という用語は、共役化合物、薬物化合物、または細胞内代謝物の、細胞殺傷、細胞増殖抑制性、または抗増殖効果をいう。細胞毒性活性は、細胞の半分が生存する、単位体積あたりの濃度(モル濃度または質量)であるIC50値として表現されてもよい。
【００３５】
「細胞毒性剤」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の機能を阻害もしくは妨害するか、および/または細胞の破壊を引き起こす物質をいう。この用語は、放射性同位元素(例えば、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、60C、およびLuの放射性同位元素)、化学療法剤、ならびに、その合成アナログおよび誘導体を含む低分子毒素または細菌、真菌、植物、動物起源の酵素的に活性な毒素などの毒素を含むことが意図される。ある態様において、細胞毒性剤は、放射性同位元素ではない。
【００３６】
「化学療法剤」は、癌の治療において有用である化学化合物である。
【００３７】
「サイトカイン」という用語は、細胞内メディエーターとして別の細胞上で働く、1つの細胞集団によって放出されるタンパク質のための総称である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および従来的なポリペプチドホルモンである。以下のものがサイトカインの中に含まれる:ヒト成長ホルモン、N-メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン;副甲状腺ホルモン;チロキシン;インスリン;プロインスリン;レラキシン;プロレラキシン;卵胞刺激ホルモン(FSH)、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、および黄体形成ホルモン(LH)などの糖タンパク質ホルモン;肝臓増殖因子;線維芽細胞増殖因子;プロラクチン;胎盤性ラクトゲン;腫瘍壊死因子αおよびβ;ミューラー阻害物質;マウスゴナドトロピン関連ペプチド;インヒビン;アクチビン;血管内皮増殖因子;インテグリン;トロンボポエチン(TPO);NGF-βなどの神経成長因子;血小板増殖因子;TGF-αおよびTGF-βなどのトランスフォーミング成長因子;インスリン様成長因子-Iおよび-II;エリスロポエチン(EPO);骨誘導性因子;インターフェロンα、β、およびγなどのインターフェロン;マクロファージ-CSF(M-CSF)などのコロニー刺激因子(CSF);顆粒球マクロファージ-CSF(GM-CSF);および顆粒球-CSF(G-CSF);IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12などのインターロイキン(IL);TNF-αまたはTNF-βなどの腫瘍壊死因子;ならびにLIFおよびkitリガンド(KL)を含む他のポリペプチド因子。本明細書で使用される場合、サイトカインという用語は、天然の供給源または組換え細胞培養からのタンパク質、およびネイティブ配列のサイトカインの生物学に活性な等価物を含む。
【００３８】
「単離された」分子は、その天然の供給源において通常付随する少なくとも1種の夾雑分子から、同定されかつ分離されている分子である。単離された分子は、その分子が天然に見い出される型または設定以外のものである。それゆえに、単離された分子は、その天然の細胞中に存在する場合の分子から区別される。
【００３９】
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物中の機能的に連結されたコード配列の発現のために必要であるDNA配列をいう。原核生物のために適切である制御配列には、例えば、プロモーター、任意に、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核生物は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することが知られている。
【００４０】
核酸は、それが別の核酸配列との機能的な関連に配置されるときに、「機能的に連結される」。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのDNAは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのためのDNAに機能的に連結される;プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を与える場合に、コード配列に機能的に連結される;またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を容易にするように配置される場合に、コード配列に機能的に連結される。一般的に、「機能的に連結される」とは、連結されるDNA配列が連続していること、および分泌リーダーの場合においては、連続しかつリーディングフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、便利な制限部位におけるライゲーションによって達成することができる。このような部位が存在しない場合、合成ヌクレオチドのアダプターまたはリンカーを、慣習的な実施に従って使用することができる。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、および「細胞培養」という用語は交換可能に使用され、すべてのこのような表示は子孫を含む。従って、「形質転換体」および「形質転換細胞」という語は、移入の数に関わらず、初代の対象の細胞およびそこから誘導された培養物を含む。すべての子孫は、故意のまたは故意でない変異に起因して、DNA含量が正確に同一でなくてもよいこともまた理解される。もともと形質転換された細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能的または生物学的活性を有する変異体子孫が含まれる。別の表示が意図される場合、それは文脈から明白である。
【００４２】
「癌」および「癌性」という用語は、典型的には、調節されていない細胞増殖によって特徴付けられる、哺乳動物における生理学的条件をいうか、またはそれを説明する。「腫瘍」は、1つまたは複数の癌性細胞を含む。
【００４３】
「自己免疫疾患」は、本明細書では、個体自体の組織もしくは同時分離物から生じかつそれに対して指向される疾患もしくは障害、またはその徴候またはそこから生じる状態である。
【００４４】
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わすことができない特性を有する分子をいうのに対して、「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーに対して重ね合わすことができる分子をいう。
【００４５】
「立体異性体」という用語は、同一の化学的構成を有するが、空間における原子または基の配置に関して異なる化合物をいう。
【００４６】
「ジアステレオマー」という用語は、2つ以上のキラル中心を有し、それらの分子が互いの鏡像ではない立体異性体をいう。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動およびクロマトグラフィーなどの高分解能分離技術の下で分離してもよい。
【００４７】
「エナンチオマー」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の2つの立体異性体をいう。
【００４８】
本明細書で使用される立体化学的な定義および慣例は、一般的に、S. P. Parker編, McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; およびEliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New Yorkに従う。多くの有機化合物は光学活性型で存在し、すなわち、これらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際に、接頭辞DおよびL、またはRおよびSが、そのキラル中心に関する分子の絶対配置を示すために使用される。接頭辞dおよびlまたは(+)および(-)は、化合物による平面偏光の回転の記号を示すために利用され、(-)または1は、その化合物が左旋性であることを意味する。(+)またはdの接頭辞を有する化合物は右旋性である。所定の化学構造について、これらの立体異性体は、これらが互いの鏡像であること以外は同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーと呼ばれてもよく、このような異性体の混合物は、しばしば、エナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの50:50混合物は、ラセミ混合物またはラセミ化合物と呼ばれ、これは、化学反応またはプロセスにおいて、立体選択性または立体特異性が存在しなかった場合に起こる可能性がある。「ラセミ混合物」および「ラセミ化合物」という用語は、光学活性を欠いている、2つのエナンチオマー種の等モル濃度の混合物をいう。
【００４９】
「患者」の例には、ヒト、ラット、マウス、モルモット、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、鳥類、および家禽が含まれるがこれらに限定されない。1つの例示的な態様において、患者はヒトである。
【００５０】
「アリール」という用語は、炭素環芳香族基をいう。アリール基の例には、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが含まれるがこれらに限定されない。炭素環式芳香族基または複素環式芳香族基は、置換されないか、または、-C1-C8アルキル、-0-(C1-C8アルキル)、-アリール、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2、および-CNを含むがこれらに限定されない1つまたは複数の基で置換することができ; ここで、各R'は、H、C1-C8アルキル、およびアリールから独立して選択される。
【００５１】
「C1-C8アルキル」という用語は、直鎖または分枝鎖の、飽和または不飽和の、1個から8個までの炭素原子を有する炭化水素をいう。代表的な「C1-C8アルキル」基には以下が含まれるがこれらに限定されない:-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、-n-へキシル、-n-ヘプチル、-n-オクチル、-n-ノニル、および-n-デシル;一方、分枝鎖C1-C8アルキルには以下が含まれるがこれらに限定されない:-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、2-メチルブチル;不飽和C1-C8アルキルには以下が含まれるがこれらに限定されない:-ビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニル、1-へキシル、2-へキシル、3-へキシル、-アセチレニル、-プロピニル、-1-ブチニル、-2-ブチニル、-1-ペンチニル、-2-ペンチニル、-3-メチル-1 ブチニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、n-へキシル、イソへキシル、2-メチルペンチル、3-メチルペンチル、2,2-ジメチルブチル、2,3-ジメチルブチル、2,2-ジメチルペンチル、2,3-ジメチルペンチル、3,3-ジメチルペンチル、2,3,4-トリメチルペンチル、3-メチルへキシル、2,2-ジメチルへキシル、2,4-ジメチルへキシル、2,5-ジメチルへキシル、3,5-ジメチルへキシル、2,4-ジメチルペンチル、2-メチルヘプチル、3-メチルヘプチル、n-ヘプチル、イソヘプチル、n-オクチル、およびイソオクチル。C1-C8アルキル基は、置換されないか、または、-C1-C8アルキル、-0-(C1-C8アルキル)、-アリール、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-SO3R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2、および-CNを含むがこれらに限定されない1つまたは複数の基で置換することができ; ここで、各R'は、H、-C1-C8アルキル、およびアリールから独立して選択される。
【００５２】
「C3-C8炭素環」という用語は、3員環、4員環、5員環、6員環、7員環、または8員環の飽和または不飽和非芳香族性炭素環をいう。代表的なC3-C8炭素環には以下が含まれるがこれらに限定されない:-シクロプロピル、-シクロブチル、-シクロペンチル、-シクロペンタジエニル、-シクロヘキシル、-シクロヘキセニル、-1,3-シクロヘキサジエニル、-1,4-シクロヘキサジエニル、-シクロヘプチル、-1,3-シクロヘプタジエニル、-1,3,5-シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル、および-シクロオクタジエニル。C3-C8炭素環基は、置換されないか、または、-C1-C8アルキル、-0-(C1-C8アルキル)、-アリール、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2、および-CNを含むがこれらに限定されない1つまたは複数の基で置換することができ; ここで、各R'は、H、-C1-C8アルキル、およびアリールから独立して選択される。
【００５３】
「C3-C8カルボシクロ」とは、炭素環基の1つの水素原子が結合で置き換えられている、上記に定義したC3-C8炭素環基をいう。
【００５４】
「C1-C10アルキレン」という用語は、化学式-(CH2)1-10-の、直鎖飽和炭化水素基をいう。C1-C10アルキレンの例には、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、およびデカレンが含まれる。
【００５５】
「アリーレン」という用語は、2つの共有結合を有し、かつ以下の構造式:
2008519863.tif 000007
において示されるオルト、メタ、またはパラ配置にあり得るアリール基をいい、ここで、フェニル基は、置換されないか、または、-C1-C8アルキル、-0-(C1-C8アルキル)、-アリール、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2、および-CNを含むがこれらに限定されない4個までの基で置換することができ; ここで、各R'は、H、C1-C8アルキル、およびアリールから独立して選択される。
【００５６】
「C3-C8複素環」という用語は、環の炭素原子の1個〜4個が、O、S、およびNからなる群からのヘテロ原子で独立して置き換えられている、芳香族または非芳香族C3-C8炭素環をいう。C3-C8複素環の代表的な例には以下が含まれるがこれらに限定されない:ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、およびテトラゾリル。C3-C8複素環は、置換されないか、または、-C1-C8アルキル、-0-(C1-C8アルキル)、-アリール、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2、および-CNを含むがこれらに限定されない7個までの基で置換することができ; ここで、各R'は、H、C1-C8アルキル、およびアリールから独立に選択される。
【００５７】
「C3-C8ヘテロシクロ」とは、複素環基の1つの水素原子が結合で置き換えられている、上記に定義したC3-C8複素環基をいう。C3-C8ヘテロシクロは、置換されないか、または、-C1-C8アルキル、-0-(C1-C8アルキル)、-アリール、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2、および-CNを含むがこれらに限定されない6個までの基で置換することができ; ここで、各R'は、H、-C1-C8アルキル、およびアリールから独立して選択される。
【００５８】
「ヒドロキシル保護基」の例には以下が含まれるがこれらに限定されない:メトキシメチルエーテル、2-メトキシエトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、ベンジルエーテル、p-メトキシベンジルエーテル、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリイソプロピルシリルエーテル、t-ブチルジメチルシリルエーテル、トリフェニルメチルシリルエーテル、酢酸エステル、置換酢酸エステル、ピバロン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、およびp-トルエンスルホン酸。
【００５９】
「遊離基」とは、別の官能基によって置換できる官能基をいう。このような遊離基は当技術分野で周知であり、例としては以下が含まれるがこれらに限定されない:ハロゲン化物(例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物)、メタンスルホニル(メシル)、p-トルエンスルホニル(トシル)、トリフルオロメチルスルホニル(トリフレート)、およびトリフルオロメチルスルホン酸。
【００６０】
「薬学的に許容される塩」とは、例えば、共役化合物、リンカー薬物結合体、または薬物の、薬学的に許容される有機塩または無機塩をいう。例示的な塩には以下が含まれるがこれらに限定されない:硫酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酸性酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩(すなわち、1,1'-メチレン-ビス-(2-ヒドロキシ-3-ナフトエ酸塩))。薬学的に許容される塩には、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他のカウンターイオンなどの他の分子を含めることが含まれてもよい。カウンターイオンは、親の化合物の上の電荷を安定化する任意の有機部分または無機部分であってもよい。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に1つより多くの荷電した原子を有してもよい。複数の荷電した原子が薬学的に許容される塩の一部である例は、複数のカウンターイオンを有することができる。それゆえに、薬学的に許容される塩は、1つもしくは複数の荷電した原子および/または1つもしくは複数のカウンターイオンを有することができる。
【００６１】
「薬学的に許容される溶媒和物」または「溶媒和物」という用語は、1種または複数の溶媒和分子、および本発明の化合物、例えば、共役化合物、リンカー-薬物結合体、または薬物の会合をいう。薬学的に許容される溶媒和物を形成する溶媒の例には、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、DMSO、酢酸エチル、酢酸、およびエタノールアミンが含まれるがこれらに限定されない。
【００６２】
「治療する」または「治療」という用語は、文脈において他に示されない限り、治療的処置と、予防的または防止的手段の両方をいい、ここで、目的は、癌の発生または伝播などの望ましくない生理学的な変化または障害を予防するか、または遅延する(減少する)ことである。本発明の目的のために、恩典を受けるかまたは望ましい臨床的結果には、検出可能であるか、または検出可能でないかに関わらず、徴候の軽減、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定(すなわち、悪化させないこと)、疾患の進行の遅延または遅くすること、疾患状態の改善または寛解、および緩解が含まれるがこれらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けない場合に予測される生存と比較して、延長した生存を意味することができる。治療の必要があるものには、状態もしくは障害をすでに有するもの、ならびに状態もしくは障害を有する傾向があるもの、または状態もしくは障害が予防されるものが含まれる。
【００６３】
癌の文脈において、「治療する」という用語は、腫瘍細胞、癌細胞、または腫瘍の増殖を予防すること;腫瘍細胞または癌細胞の複製を予防すること、全身腫瘍組織量を軽減することまたは癌性細胞の数を減少すること、および疾患と関連する1つまたは複数の徴候の改善することのいずれかあるいはすべてを含む。
【００６４】
自己免疫疾患の文脈において、「治療する」という用語は、自己免疫抗体を産生する細胞を含むがこれに限定されない、自己免疫疾患状態と関連する細胞の複製を予防すること、自己免疫抗体負荷を軽減すること、および自己免疫疾患の1つまたは複数の徴候を改善することのいずれかあるいはすべてを含む。
【００６５】
感染性疾患の文脈において、「治療する」という用語は、感染性疾患を引き起こす病原体の成長、増殖、または複製を予防すること、および感染性疾患の1つまたは複数の徴候を改善することのいずれかあるいはすべてを含む。
【００６６】
以下の略称が本明細書で使用され、示される定義を有する:BocはN-(t-ブトキシカルボニル)、citはシトルリン、dapはドラプロイン、DEPCはジエチルホスホリルシアニジン酸塩、DIADはジイソプロピルアゾジカルボン酸塩、DIEAはN,N-ジイソプロピルエチルアミン、dilはドライソロイシン、DMAPは4-ジメチルアミノピリジン、DMEはエチレングリコールジメチルエーテル(または1,2-ジメトキシエタン)、DMFはN,N-ジメチルホルムアミド、DMSOはジメチルスルホキシド、doeはドラフェニン、dovはN,N-ジメチルバリン、DTNBは5,5'-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸)、DTPAはジエチレントリアミン五酢酸、DTTはジチオスレオトール、EDClは1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩、EEDQは2-エトキシ-1-エトキシカルボニル-1,2-ジヒドロキノリン、ES-MSは電子スプレー質量分析、EtOAcは酢酸エチル、FmocはN-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)、glyはグリシン、HATUはO-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸、HOBtは1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、HPLCは高速液体クロマトグラフィー、ileはイソロイシン、lysはリジン、MeCN(CH3CN)はアセトニトリル、MeOHはメタノール、Mtrは4-アニシルジフェニルメチル(または4-メトキシトリチル)、norは(1S,2R)-(+)-ノルエフェドリン、PABはp-アミノベンジル、PBSはリン酸緩衝化生理食塩水(pH 7.4)、PEGはポリエチレングリコール、Phはフェニル、Pnpはp-ニトロフェニル、MCは6-マレイミドカプロイル、pheはL-フェニルアラニン、PyBropはブロモトリス-ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸、SECはサイズ排除クロマトグラフィー、Suはスクシンイミド、TBTUはO-ベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N,N-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸、TFAはトリフルオロ酢酸、TLCは薄層クロマトグラフィー、UVは紫外線、およびvalはバリンである。
【００６７】
以下のリンカーの略称が本明細書で使用され、示される定義を有する:Val Citは、プロテアーゼ切断可能リンカーにおけるバリン-シトルリンジペプチド部位;(Me)vcは、リンカーペプチド結合がカテプシンBによるその切断を妨害するように修飾された、N-メチル-バリンシトルリン;MC(PEG)6-OHはマレイミドカプロイル-ポリエチレングリコール;SPPはN-スクシンイミジル 4-(2-ピリジルチオ)ペンタン酸;およびSMCCはN-スクシンイミジル 4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1カルボン酸である。
【００６８】
以下の細胞毒性薬物の略称が本明細書で使用され、示される定義を有する:MMAEはモノ-メチルオーリスタチン(auristatin)E(MW 718);MMAFはN-メチルバリン-バリン-ドライソロイシン-ドラプロイン-フェニルアラニン(MW 731.5);MMAF-DMAEAは、C末端フェニルアラニンへのアミド結合中にある、DMAEA(ジメチルアミノエチルアミン)を有するMMAF(MW 801.5);MMAF-TEGは、フェニルアラニンにエステル化された、テトラエチレングリコールを有するMMAF;およびMMAF-NtBuは、MMAFのC末端にアミドとして結合されたN-t-ブチルである。
【００６９】
発明の詳細な説明
本発明は、アミノ安息香酸単位を含む薬物化合物を提供する。薬物化合物を含む、共役化合物およびリンカー薬物化合物もまた提供される。
【００７０】
ある態様において、共役化合物は、一般式Ia:
2008519863.tif 000008
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を有し、
式中:
L-はリガンド単位であり;
-Aa-Ww-はリンカー単位(LU)であり、ここでリンカー単位は以下を含む:
-A-はストレッチャー単位であり、
aは0または1であり、
各-W-は独立して、アミノ酸単位であり、
wは0から12までの範囲の整数であり、
pは1から約20までの範囲であり;および
-Dは下記式
2008519863.tif 000009
の薬物単位であり、
式中、各位置において独立に、
R2は、-水素、-C1-C8アルキル、-O-(C1-C8アルキル)、-ハロゲン、-NO2、-COOH、および-C(O)OR11から選択され;
各R3は、-水素および-C1-C8アルキルから独立して選択され;
lは、0〜10の範囲の整数であり;
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立に選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、または-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【００７１】
ある態様において、薬物単位は下記式Ic:
2008519863.tif 000010
であり、
式中、各位置において独立に、
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立して選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立して選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリールまたは-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、または-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【００７２】
ある態様において、薬物単位は下記式Id:
2008519863.tif 000011
であり、
式中、各位置において独立に、
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、または-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【００７３】
ある態様において、薬物単位は下記式Ie:
2008519863.tif 000012
であり、
式中、
Zは、-O-、-S-、-NH-、または-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【００７４】
ある態様において、薬物単位は下記式If:
2008519863.tif 000013
である。
【００７５】
ある態様において、下記式IIa:
2008519863.tif 000014
のリンカー-薬物化合物が提供される。
【００７６】
ある態様において、下記式IIb:
2008519863.tif 000015
のリンカー-薬物化合物が提供される。
【００７７】
ある態様において、下記式IIc:
2008519863.tif 000016
のリンカー-薬物化合物が提供される。
【００７８】
関連する態様において、Brは別のハロゲンによって置換される。
【００７９】
ある態様において、式IIdのリンカー-薬物化合物が提供される。
【００８０】
関連する態様において、Brは別のハロゲンによって置換される。
【００８１】
リガンド単位
共役化合物のリガンド単位(L-)は、受容体、抗原、または所定の標的細胞集団と関連する他の受容性部分と、結合し、または反応性に結合し、または複合体を形成するリガンド(L)の任意の単位をその範囲に含む。リガンドは、標的とされることが追求される細胞集団の部分と、結合し、複合体を形成し、または反応する分子である。1つの局面において、リガンド単位は、リガンド単位が反応する特定の標的細胞集団に薬物単位を送達するように作用する。このようなリガンドには以下が含まれるがこれらに限定されない:例えば、全長抗体、抗体フラグメントなどの大きな分子量のタンパク質、より小さな分子量のタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチド、レクチン、糖タンパク質、非ペプチド、ビタミン、栄養物輸送分子(トランスフェリンなどであるがこれに限定されない)、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質。
【００８２】
リガンド単位は、リンカー単位または薬物単位への結合を形成することができる。リガンド単位は、リガンドのヘテロ原子を介してリンカー単位への結合を形成することができる。リガンド単位上に存在してもよいヘテロ原子には、硫黄(1つの態様において、リガンドのスルフヒドリル基から)、酸素(1つの態様において、リガンドのカルボニル基、カルボキシル基、またはヒドロキシル基から)、および窒素(1つの態様において、リガンドの一級または二級アミノ基から)が含まれる。これらのヘテロ原子は、リガンドの天然の状態にあるリガンド、例えば、天然に存在する抗体上に存在することができ、または化学修飾を介してリガンドに導入することができる。
【００８３】
1つの態様において、リガンドは、スルフヒドリル基、およびスルフヒドリル基の硫黄原子を介するリンカー単位へのリガンド結合を有する。別の態様において、リガンドは、1つまたは複数のスルフヒドリル基を導入するために化学修飾できる1つまたは複数のリジン残基を有する。リガンド単位は、スルフヒドリル基を介してリンカー単位に結合する。リジンを修飾するために使用することができる試薬には、N-スクシンイミジルS-アセチルチオ酢酸(SATA)および2-イミノチオラン塩酸塩(トラウト(Traut's)試薬)が含まれるがこれらに限定されない。
【００８４】
別の態様において、リガンドは、1つまたは複数のスルフヒドリル基を有するように化学修飾することができる1つまたは複数の炭水化物基を有することができる。リガンド単位は、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカー単位に結合する。なお別の態様において、リガンドは、アルデヒド基(-CHO)を提供するために酸化することができる、1つまたは複数の炭水化物基を有することができる(例えば、Laguzza et al., 1989, J. Med. Chem. 32(3):548-55を参照されたい)。対応するアルデヒドは、リンカー単位の部分上の反応性部位と結合を形成することができる。リガンド上のカルボニル基と反応することができる反応性部位には、ヒドラジンおよびヒドロキシアミンが含まれるがこれらに限定されない。薬物単位の結合または会合のためのタンパク質の修飾のための他のプロトコールは、参照により本明細書に組み入れられる、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002)に記載されている。
【００８５】
リガンド単位は、例えば、タンパク質、ポリペプチドを含むことができ、これには以下が含まれるがこれらに限定されない:トランスフェリン、上皮増殖因子(「EGF」)、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、血小板由来増殖因子、IL-2、IL-6、TGF-αまたはTGF-βなどのトランスフォーミング増殖因子(「TGF」)、ワクシニア増殖因子(「VGF」)、インスリンならびにインスリン様増殖因子IおよびII、レクチン、ならびに低密度リポタンパク質からのアポタンパク質。
【００８６】
リガンド単位はまた、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体などの抗体を含むことができる。この抗体は、例えば、癌細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸、またはそのフラグメントを含む、特定の抗原決定基に指向することができる。ポリクローナル抗体を製造するための方法は当技術分野において公知である。関心対象の抗原に対するモノクローナル抗体(mAb)は、当技術分野において公知の任意の技術によって調製することができる。これらには、Koehler and Milstein によってもともと記載されたハイブリドーマ技術(1975, Nature 256, 495-497)、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術(Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4:72)、およびEBV-ハイブリドーマ技術(Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96)が含まれるがこれらに限定されない。このような抗体は、IgG、IgM、IgE、IgA、およびIgDを含む任意の免疫グロブリンクラス、ならびにその任意のサブクラスであってもよい。本発明において有用なmAbを産生するハイブリドーマは、インビトロまたはインビボで培養されてもよい。
【００８７】
モノクローナル抗体は、例えば、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメント、またはキメラ抗体(例えば、ヒト-マウス抗体)であり得る。ヒトモノクローナル抗体は、当技術分野で公知である多数の技術のいずれか(例えば、Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:7308-7312; Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4:72-79; およびOlsson et al., 1982, Meth. Enzymol. 92:3-16)によって作製されてもよい。
【００８８】
抗体はまた、二特異性抗体であり得る。二特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野において公知である。全長二特異性抗体の伝統的な作製は、2つの鎖が異なる特異性を有する、2つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の同時発現に基づく(例えば、Milstein et al., 1983, Nature 305:537-539; 国際公開WO 93/08829, Traunecker et al., 1991 , EMBO J. 10:3655-3659を参照されたい)。
【００８９】
異なるアプローチに従って、所望の結合特異性(抗体-抗原の組み合わせ部位)を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。この融合物は、好ましくは、ヒンジ領域、CH2領域、およびCH3領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖定常ドメインを伴う。少なくとも1つの融合物中に存在する、軽鎖結合のために必要である部位を含む第1の重鎖定常領域(CH1)を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物、および所望される場合、免疫グロブリン軽鎖をコードする配列を有する核酸は別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時トランスフェクトされる。これは、構築物中で使用される3つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率を提供する態様において、3つのポリペプチドフラグメントの相互比率を調整する際の柔軟性を提供する。しかし、等しい比率の少なくとも2つのポリペプチド鎖の発現が高収率を生じる場合、または比率が特に重要でない場合には、1つの発現ベクター中に2つまたは3つすべてのポリペプチド鎖についてのコード配列を挿入することが可能である。
【００９０】
例えば、二特異性抗体は、一方のアームに第1の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖を、および他方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対(第2の結合特異性を提供する)を有することができる。この非対称構造は、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせから、所望されない二特異的化合物の分離を容易にする。なぜなら、二特異的分子の半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在は、分離の容易な方法を提供するからである(国際公開WO 94/04690、これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる)。
【００９１】
二特異性抗体を生成するためのさらなる詳細については、例えば、Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology 121 :210; Rodrigues et al., 1993, J. Immunology 151 :6954-6961 ; Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167; Carter et al., 1995, J. Hematotherapy 4:463-470; Merchant et al., 1998, Nature Biotechnology 16:677-681を参照されたい。このような技術を使用して、二特異性抗体は、本明細書に定義されるような疾患の治療または予防における使用のために調製することができる。
【００９２】
二機能性抗体はまた、欧州特許公報EPA 0 105 360に記載されている。この文献に開示されているように、ハイブリッド抗体または二官能性抗体は、生物学的に、すなわち、細胞融合技術によって、または化学的に、とりわけ、架橋剤もしくはジスルフィド架橋形成試薬を用いてのいずれかで導き出すことができ、そして全体の抗体またはそのフラグメントを含んでもよい。このようなハイブリッド抗体を得るための方法は、例えば、国際公開WO 83/03679および欧州特許公報EPA 0217 577号に開示され、これらの両方は参照により本明細書に組み入れられる。
【００９３】
抗体はまた、標的抗原(例えば、癌抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、または細胞もしくはマトリックスに結合する他の抗体)に免疫特異的に結合する抗体の機能的に活性なフラグメント、誘導体、またはアナログであり得る。この点に関して、「機能的に活性な」は、フラグメント、誘導体、またはアナログがそこから導き出される抗体が認識したのと同じ抗原を、そのフラグメント、誘導体、またはアナログが認識することが可能であることを意味する。具体的には、例示的な態様において、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、抗原を特異的に認識するCDR配列に対してC末端である、フレームワーク配列およびCDR配列の欠失によって増強することができる。どのCDR配列が抗原を結合するかを決定するために、CDR配列を含む合成ペプチドは、当技術分野において公知である任意の結合アッセイ法による抗原との結合アッセイ法(例えば、BIAコアアッセイ法)において使用することができる(例えば、Kabat et al., 1991 , Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md; Kabat et al., 1980, J. Immunology 125(3):961-969を参照されたい)。
【００９４】
他の有用な抗体には、F(ab')2フラグメント、Fabフラグメント、Fab'、Fvフラグメントならびに抗体の重鎖および軽鎖のダイマー、またはFvまたは単鎖抗体(SCA)などの任意の最小限のフラグメント(例えば、米国特許第4,946,778号; Bird, 1988, Science 242:423-42; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; およびWard et al., 1989, Nature 334:544-54に記載されるもの)などであるがこれらに限定されない抗体のフラグメントが含まれる。
【００９５】
標準的な組換えDNA技術を使用して作製することができる、ヒト部分と非ヒト部分の両方を含む、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体などの組換え抗体もまた使用することができる(例えば、米国特許第4,816,567号; および同第4,816,397号を参照されたい)。ヒト化抗体は、非ヒト種からの1つまたは複数の相補性決定領域(CDR)、およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する、非ヒト種からの抗体分子である(例えば、米国特許第5,585,089号を参照されたい)。キメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、例えば、以下に記載される方法を使用して、当技術分野において公知である組換えDNA技術によって産生することができる:国際公開WO 87/02671号; 欧州特許公報第0 184 187号; 欧州特許公報第0 171 496号; 欧州特許公報第0 173 494号; 国際公開WO 86/01533; 米国特許第4,816,567号; 欧州特許公報第012 023号; Berter et al., 1988, Science 240:1041-1043; Liu et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Cancer. Res. 47:999-1005; Wood et al., 1985, Nature 314:446-449; Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559; Morrison, 1985, Science 229:1202-1207; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; 米国特許第5,225,539号; Jones et al., 1986, Nature 321 :552-525; Verhoeyan et al., 1988, Science 239:1534; およびBeidler et al., 1988, J. Immunol. 141:4053-4060。
【００９６】
完全なヒト抗体を使用することができる。ヒト抗体は、例えば、内因性の免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子を発現することが不可能であるが、ヒトの重鎖および軽鎖の遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用して調製することができる。トランスジェニックマウスは、選択した抗原、例えば、本発明のポリペプチドのすべてまたは一部を用いて、通常の様式で免疫される。抗原に対して指向されるモノクローナル抗体は、従来的なハイブリドーマ技術を使用して得ることができる。トランスジェニックマウスによって保有されたヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、B細胞分化の間に再配列され、続いて、クラスの切り換えおよび体細胞変異を受ける。従って、このような技術を使用すると、治療的に有用なIgG、IgA、IgM、およびIgE抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概観については、Lonberg and Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93)を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、およびこのような抗体を産生するためのプロトコールの詳細な議論については、例えば、米国特許第5,625,126号; 同第5,633,425号; 同第5,569,825号; 同第5,661,016号; および同第5,545,806号を参照されたい。他のヒト抗体は、例えば、Abgenix, Inc.(Freemont, CA)およびGenpharm (San Jose, CA)から、市販されている。
【００９７】
選択されたエピトープを認識するヒト抗体はまた、「ガイド付き選択(guided selection)」と呼ばれる技術を使用して生成することができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体は、同じエピトープを認識する完全なヒト抗体の選択をガイドするために使用される(例えば、Jespers et al., 1994, Biotechnology 12:899-903を参照されたい)。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で公知の種々の技術を使用して産生することができる(例えば、Hoogenboom and Winter, 1991 , J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581; Quan and Carter, 2002,「The rise of monoclonal antibodies as therapeutics」Anti-IgE and Allergic Disease, Jardieu, P. M. and Fick Jr., R. B.編, Marcel Dekker, New York, NY, Chapter 20, pp. 427-469を参照されたい)。
【００９８】
他の態様において、抗体は、抗体の融合タンパク質、またはその機能的に活性なフラグメントである。例えば、抗体は、抗体ではない別のタンパク質(またはその部分、例えば、そのタンパク質の少なくとも10、20、または50アミノ酸の部分)のアミノ酸配列に対して、N末端またはC末端のいずれかで、共有結合(すなわち、ペプチド結合)を介して融合させることができる。
【００９９】
このような共有結合が、抗体にその抗原結合の免疫特異性を保持することを許容する限り、抗体はまた、どこかが修飾されている、すなわち、任意の型の分子の共有結合による、アナログおよび誘導体を含む。例えば、しかし限定目的ではなく、抗体の誘導体およびアナログは、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基/ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞の抗体単位または他のタンパク質への結合などによってさらに修飾されているものを含む。任意の多数の化学修飾は、公知の技術によって実行することができ、これには、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、チュニカマイシンの存在下での代謝的合成などが含まれるがこれらに限定されない。加えて、アナログまたは誘導体は、1つまたは複数の非天然アミノ酸を含むことができる。
【０１００】
抗体は、Fc受容体と相互作用するアミノ酸残基中に修飾(例えば、置換、欠失、または付加)を有することができる。特に、抗体には、抗FcドメインとFcRn受容体との間の相互作用に関与することが同定されているアミノ酸残基の修飾を有する抗体が含まれる(例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開WO 97/34631を参照されたい)。標的抗原に対して免疫特異的である抗体は、商業的に、または他の供給源から入手でき、または例えば、化学合成もしくは組換え発現技術などの、当業者に公知の任意の方法によって産生することができる。癌細胞抗原に対して免疫特異的である抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、GenBankデータベースもしくはそれと同様のデータベースから、文献の刊行物から、または日常的なクローニングおよび配列決定によって、入手することができる。
【０１０１】
癌の治療のために利用可能である抗体の例には以下が含まれるがこれらに限定されない:ヒト化抗HER2モノクローナル抗体、HERCEPTIN(登録商標)(トラスツズマブ;Genentech);非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療のためのキメラ抗CD20モノクローナル抗体であるRITUXAN(登録商標)(リツキシマブ;Genentech);卵巣癌の治療のためのマウス抗体であるオヴァレックス(OvaRex)(AltaRex Corporation, MA);結腸直腸癌の治療のためのマウスIgG2a抗体であるパノレックス(Panorex)(Glaxo Wellcome, NC);頭頚部癌などの上皮増殖因子陽性癌の治療のための抗EGFR IgGキメラ抗体であるセツキシマブ エルビタックス(Cetuximab Erbitux)(Imclone Systems Inc., NY);肉腫の治療のためのヒト化抗体であるビタキシン(Vitaxin)(Medlmmune, Inc., MD);慢性リンパ性白血病(CLL)の治療のためのヒト化IgG1抗体であるカムパス(Campath)I/H(Leukosite, MA);急性骨髄性白血病(AML)の治療のためのヒト化抗CD33 IgG抗体であるスマート(Smart)MI95(Protein Design Labs, Inc., CA);非ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗CD22 IgG抗体であるリンホシド(LymphoCide)(Immunomedics, Inc., NJ);非ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗HLA-DR抗体であるスマート(Smart)ID10 (Protein Design Labs, Inc., CA);非ホジキンリンパ腫の治療のための放射性標識マウス抗HLA-Dr10抗体であるオンコリム(Oncolym)(Techniclone, Inc., CA);ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗CD2 mAbであるアロミュン(Allomune)(BioTransplant, CA);肺癌および結腸直腸癌の治療のための抗VEGFヒト化抗体であるアバスチン(Avastin)(Genentech, Inc., CA);非ホジキンリンパ腫の治療のための抗CD22抗体であるエプラツザマブ(Epratuzamab)(Immunomedics, Inc., NJ and Amgen, CA);および結腸直腸癌の治療のためのヒト化抗CEA抗体であるセアサイド(CEAcide)(Immunomedics, NJ)。
【０１０２】
癌の治療において有用である他の抗体には、以下の抗原(例示的な癌が括弧内に示される)に対する抗体が含まれるがこれらに限定されない:CA125(卵巣)、CA15-3(癌腫)、CA19-9(癌腫)、L6(癌腫)、Lewis Y(癌腫)、Lewis X (癌腫)、アルファフェトプロテイン(癌腫)、CA 242(結腸直腸)。胎盤アルカリホスファターゼ(癌腫)、前立腺特異的膜抗原(前立腺)、前立腺酸性ホスファターゼ(前立腺)、上皮増殖因子(癌腫)、MAGE-1(癌腫)、MAGE-2(癌腫)、MAGE-3(癌腫)、MAGE-4(癌腫)、抗トランスフェリン受容体(癌腫)、p97(黒色腫)、MUC1-KLH(乳癌)、CEA(結腸直腸)、gp100(黒色腫)、MART1(黒色腫)、前立腺特異的抗原(PSA)(前立腺)、IL-2受容体(T細胞白血病およびリンパ腫)、CD20(非ホジキンリンパ腫)、CD52(白血病)、CD33(白血病)、CD22(リンパ腫)、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン(癌腫)、CD38(多発性骨髄腫)、CD40(リンパ腫)、ムチン(癌腫)、P21(癌腫)、MPG(黒色腫)、およびNeuオンコジーン産物(癌腫)。いくつかの特異的な有用な抗体には以下が含まれるがこれらに限定されない:BR96 mAb(Trail et al., 1993, Science 261 :212-215)、BR64(Trail et al., 1997, Cancer Research 57:100-105)、CD40抗原に対するmAb、例えば、S2C6 mAb(Francisco et al., 2000, Cancer Res. 60:3225-3231)ならびにそのキメラおよびヒト化改変体、cD33抗体に対するmab;EphA2抗原に対するmab;CD70抗原に対するmAb、例えば、1F6 mAbおよび2F2 mAbならびにそのヒト化改変体、ならびにAC10などのCD30抗原に対するmAb(Bowen et al., 1993, J. Immunol. 151 :5896-5906; Wahl et al., 2002, Cancer Res. 62(13):3736-42 )ならびにそのキメラおよびヒト化改変体。腫瘍関連抗原に結合する多くの他の内在化抗体を使用することができ、これらは概説されている(例えば、Franke et al., 2000, Cancer Biother. Radiopharm. 15:459 76; Murray, 2000, Semin. Oncol. 27:64 70; Breitling et al., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998を参照されたい)。
【０１０３】
ある態様において、自己免疫疾患の治療または予防のための公知の抗体が、本発明の組成物および方法に従って使用される。自己免疫抗体を産生する原因である細胞の抗原に特異的な抗体は、商業的もしくは他の供給源から入手することができ、または当業者に公知の任意の方法、例えば、化学合成もしくは組換え発現技術などによって産生させることができる。
【０１０４】
ある態様において、抗体は、自己免疫疾患の治療のために免疫特異的であり、例えば、これは以下である:抗核抗体;抗dsDNA;抗ssDNA;抗カルジオリピン抗体IgM、IgG;抗リン脂質抗体IgM、IgG;抗SM抗体;抗ミトコンドリア抗体;甲状腺抗体;ミクロソーム抗体;サイログロブリン抗体;抗SCL70;抗Jo;抗U1 RNP;抗La/SSB;抗SSA;抗SSB;抗周皮細胞(perital cell)抗体;抗ヒストン;抗RNP;C ANCA;P ANCA;抗動原体;抗フィブリラリン、および抗GBM抗体。1つの態様において、リガンドは、自己免疫疾患と関連する活性化リンパ球に結合する。
【０１０５】
特定の態様において、抗体は、標的細胞(例えば、活性化リンパ球)上で発現された受容体または受容体複合体に結合することができる。この受容体または受容体複合体は、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、TNF受容体スーパーファミリーメンバー、インテグリン、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、主要組織適合タンパク質、レクチン、または補体制御タンパク質を含むことができる。適切な免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーの非限定的な例は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD22、CD28、CD79、CD90、CD152/CTLA 4、PD 1、およびICOSである。適切なTNF受容体スーパーファミリーメンバーの非限定的な例は、CD27、CD40、CD95/Fas、CD134/OX40、CD137/4 1 BB、TNF R1、TNFR 2、RANK、TACl、BCMA、オステオプロテゲリン(osteoprotegerin)、Apo2/TRAIL R1、TRAIL R2、TRAIL R3、TRAIL R4、およびAPO 3である。適切なインテグリンの非限定的な例は、CD11a、CD11b、CD11c、CD18、CD29、CD41、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e、CD49f、CD103、およびCD104である。適切なレクチンの非限定的な例は、C型、S型、およびI型のレクチンである。
【０１０６】
別の特定の態様において、ウイルスまたは微生物抗原について免疫特異的である有用なリガンドは、モノクローナル抗体である。これらの抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒトモノクローナル抗体であってもよい。本明細書で使用される場合、「ウイルス抗原」という用語には、免疫応答を誘発することができる、任意のウイルスペプチド、ポリペプチドタンパク質(例えば、HIV gp120、HIV nef、RSV F糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルスヘマグルチニン、HTLV tax、単純ヘルペスウイルス糖タンパク質(例えば、gB、gC、gD、およびgE)およびB型肝炎表面抗原)が含まれるがこれに限定されない。本明細書で使用される場合、「微生物抗原」という用語には、免疫応答を誘発することができる、任意の微生物ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、サッカリド、ポリサッカリド、または脂質分子(例えば、微生物、真菌、病原性原生動物、または酵母のポリペプチド、例えば、LPSおよび莢膜ポリサッカリド5/8を含む)が含まれるがこれらに限定されない。
【０１０７】
ウイルスまたは微生物抗原について免疫特異的な抗体は、例えば、BD Biosciences (San Francisco, CA)、Chemicon International, Inc. (Temecula, CA)、またはVector Laboratories, Inc. (Burlingame, CA)から市販されているか、または例えば、化学合成もしくは組換え発現技術などの、当業者に公知である任意の方法によって産生することができる。ウイルスまたは微生物抗原について免疫特異的である抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、GenBankデータベースもしくはそれと同様のデータベースから、文献の刊行物から、または日常的なクローニングおよび配列決定によって、入手することができる。
【０１０８】
特定の態様において、有用なリガンドは、本明細書に開示される方法に従うウイルスまたは微生物感染の治療または予防のために有用であるものである。ウイルス感染または微生物感染の治療のために有用である利用可能な抗体の例には、以下が含まれるがこれらに限定されない:RSV感染を有する患者の治療のために有用であるヒト化抗呼吸器合胞体ウイルス(RSV)モノクローナル抗体であるSYNAGIS(MedImmune, Inc., MD);HIV感染の治療のために有用であるCD4融合抗体であるPRO542(Progenies);B型肝炎ウイルスの治療のために有用であるヒト抗体であるOSTAVIR (Protein Design Labs, Inc., CA);サイトメガロウイルス(CMV)の治療のために有用であるヒト化IgG1抗体であるPROTOVIR(Protein Design Labs, Inc., CA);および抗LPS抗体。
【０１０９】
感染性疾患の治療において有用である他の抗体には、病原性株の細菌(例えば、化膿連鎖球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)、淋菌(Neisseria gonorrheae)、髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)、ジフテリア菌(Corynebacterium diphtheriae)、ボツリヌス菌(Clostridium botulinum)、ウェルシュ菌(Clostridium perfringens)、破傷風菌(Clostridium tetani)、インフルエンザ菌(Hemophilus influenzae)、肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)、臭鼻菌(Klebsiella ozaenas)、鼻硬腫菌(Klebsiella rhinoscleromotis)、黄色ブドウ球菌(Staphylococc aureus)、コレラ菌(Vibrio colerae)、大腸菌(Escherichia coli)、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)、カンピロバクター(ビブリオ)フィタス(Campylobacter (Vibrio) fetus)、アエロモナス ヒドロフィラ(Aeromonas hydrophila)、バチルス セレウス(Bacillus cereus)、エドワードシエラ ターダ(Edwardsiella tarda)、腸炎エルシニア(Yersinia enterocolitica)、ペスト菌(Yersinia pestis)、偽結核エルシニア菌(Yersinia pseudotuberculosis)、志賀赤痢菌(Shigella dysenteriae)、フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)、ソンネ赤痢菌(Shigella sonnei)、ネズミチフス菌(Salmonella typhimurium)、梅毒トレポネーマ(Treponema pallidum)、フランベジアトレポネーマ(Treponema pertenue)、トレポネーマ カラテネウム(Treponema carateneum)、ボレリア ビンセンチ(Borrelia vincentii)、ボレリア ブルグドルフェリー(Borrelia burgdorferi)、レプトスピラ イクテロヘモラジアエ(Leptospira icterohemorrhagiae)、ヒト型結核菌(Mycobacterium tuberculosis)、ニューモシスティス カリニ(Pneumocystis carinii)、野兎病菌(Francisella tularensis)、ウシ流産菌(Brucella abortus)、ブタ流産菌(Brucella suis)、マルタ熱菌(Brucella melitensis)、マイコプラズマ種(Mycoplasma spp.)、発疹チフスリケッチア(Rickettsia prowazeki)、ツツガムシ病リケッチア(Rickettsia tsutsugumushi)、クラミジア種(Chlamydia spp.)；病原性真菌(例えば、コクシジオイデス イミティス(Coccidioides immitis)、アスペルギルス フミガーツス(Aspergillus fumigatus)、カンジダ アルビカンス(Candida albicans)、ブラストミセス デルマチチジス(Blastomyces dermatitidis)、クリプトコックス ネオフォルマンス(Cryptococcus neoformans)、ヒストプラスマ カプスラーツム(Histoplasma capsulatum));原生動物(エントモエバ ヒストリティカ(Entamoeba histolytica)、トキソプラズマ ゴンジー(Toxoplasma gondii)、口腔トリコモナス(Trichomonas tenas)、トリコモナス ホミニス(Trichomonas hominis)、膣トリコモナス(Trichomonas vaginalis)、ガンビアトリパノソーマ(Tryoanosoma gambiense)、ローデシアトリパノソーマ(Trypanosoma rhodesiense)、クルーズトリパノソーマ(Trypanosoma cruzi)、ドノバンリーシュマニア(Leishmania donovani)、熱帯リーシュマニア(Leishmania tropica)、ブラジルリーシュマニア(Leishmania braziliensis)、ニューモシスティス肺炎(Pneumocystis pneumonia)、三日熱マラリア原虫(Plasmodium vivax)、熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、四日熱マラリア原虫(Plasmodium malaria));または蠕虫(Helminiths)(ヒトギョウチュウ(Enterobius vermicularis)、ヒト鞭虫(Trichuris trichiura)、アスカリス ルムビコイデス(Ascaris lumbricoides)、旋毛虫(Trichinella spiralis)、糞線虫(Strongyloides stercoralis)、日本住血吸虫(Schistosoma japonicum)、マンソン住血吸虫(Schistosoma mansoni)、ビルハルツ住血吸虫(Schistosoma haematobium)、および鉤虫))からの抗原に対する抗体が含まれるがこれらに限定されない。
【０１１０】
ウイルス疾患の治療のための本発明において有用である他の抗体には、例として以下を含むがこれらに限定されない病原性ウイルスの抗原に対する抗体が含まれるがこれらに限定されない:ポックスウイルス(Poxviridae)、ヘルペスウイルス(Herpesviridae)、単純ヘルペスウイルス(Herpes Simplex virus)1、単純ヘルペスウイルス2、アデノウイルス(Adenoviridae)、パポバウイルス(Papovaviridae)、エンテロウイルス(Enteroviridae)、ピコナウイルス(Picornaviridae)、パルボウイルス(Parvoviridae)、レオウイルス(Reoviridae)、レトロウイルス(Retroviridae)、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎、はしか、呼吸器合胞体ウイルス、風疹、アルボウイルス(Arboviridae)、ラブドウイルス(Rhabdoviridae)、アレナウイルス(Arenaviridae)、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、非A/非B型肝炎ウイルス、ライノウイルス(Rhinoviridae)、コロナウイルス(Coronaviridae)、ロタウイルス(Rotoviridae)、およびヒト免疫不全ウイルス。
【０１１１】
抗体はまた、標的細胞または標的細胞集団上に存在する抗体であり得る。例えば、膜貫通ポリペプチドおよび他のマーカーは、1つまたは複数の正常細胞(例えば、非癌性細胞)と比較して、1つまたは複数の特定の型の標的細胞(例えば、癌細胞)の表面上で特異的に発現することができる。頻繁に、このようなマーカーは、正常細胞の表面上のマーカーと比較して、標的細胞の表面上でより豊富に発現され、またはより高い免疫原性を示す。このような細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体ベースの治療を介する破壊のために細胞を特異的に標的化する能力を生じた。従って、ある態様において、抗体は、腫瘍関連抗原(TAA)に対する抗体を含むがこれらに限定されない。このような腫瘍関連抗原は当技術分野において公知であり、当技術分野において周知である方法および情報を使用して抗体を生成する際の使用のために調製することができる。
【０１１２】
リンカー単位
共役化合物は、典型的には、リンカー単位をさらに含む。「リンカー単位」(LU)は、薬物単位およびリガンド単位を連結するために使用して、共役化合物を形成することができる二官能性化合物である。このような結合体は、標的細胞(例えば、腫瘍細胞)への薬物の選択的送達を可能にする。リンカーは、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイルなどの二価基、-(CR2)nO(CR2)n-、アルキルオキシ(例えば、ポリエチレンオキシ、PEG、ポリメチレンオキシ)およびアルキルアミノ(例えば、ポリエチレンアミノ、ジェフアミン(Jeffamine)(商標))の反復単位;ならびにコハク酸、スクシンアミド、ジグリコール酸、マロン酸、およびカプロアミドを含む二価酸のエステルおよびアミドなどの部分を含む。
【０１１３】
共役化合物は、薬物単位およびリガンドへの結合のための反応部位を有するリンカー単位を使用して調製することができる。ある態様において、リンカーは、リガンド上に存在する求核基と反応性である求電子基を有する反応部位を有する。リガンド上の有用な求核基には、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、およびアミノ基が含まれるがこれらに限定されない。リガンドの求核基のヘテロ原子は、リンカー上の求電子基と反応性であり、リンカー単位と共有結合を形成する。有用な求電子基には、マレイミド基およびハロアセトアミド基が含まれるがこれらに限定されない。リガンド上の求電子基は、リンカーへの結合のために好都合な部位を提供する。
【０１１４】
別の態様において、リンカーは、リガンド上に存在する求電子基と反応性である求核基を有する有する反応部位を有する。リガンド上の有用な求電子基には、アルデヒドおよびケトンのカルボニル基が含まれるがこれらに限定されない。リンカーの求核基のヘテロ原子は、リガンド上の求電子基と反応し、リガンド単位と共有結合を形成することができる。リンカー上の有用な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、カルボン酸ヒドラジン、およびアリールヒドラジドが含まれるがこれらに限定されない。リガンド上の求電子基は、リンカーへの結合のための好都合な部位を提供する。
【０１１５】
カルボン酸官能基およびクロロギ酸官能基もまた、これらが薬物のアミノ基と反応してアミド結合を形成することができるので、リンカーのための有用な反応部位である。例えば、薬物のアミノ基と反応してカルバメート結合を形成することができるp-ニトロフェニルカルボネートであるがこれに限定されないリンカー上の炭酸官能基もまた、反応部位として有用である。
【０１１６】
1つの態様において、リンカー単位は、下記式:
2008519863.tif 000017
を有し、式中:
-A-はストレッチャー単位であり;
aは0または1であり;
各-W-は、独立してアミノ酸単位であり;および
wは、独立して、0から12までの範囲の整数である。
【０１１７】
ストレッチャー単位(-A-)は、存在する場合、アミノ酸単位(-W-)にリガンド単位を連結することが可能である。このことに関連して、リガンド(L)は、ストレッチャーの官能基と結合を形成することができる官能基を有する。天然に、または化学的操作を介してのいずれかで、リガンド上に存在することができる有用な官能基には、スルフヒドリル(-SH)、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシル、炭水化物のアノマー水酸基、およびカルボキシルが含まれるがこれらに限定されない。1つの局面において、リガンド官能基は、スルフヒドリルおよびアミノである。スルフヒドリル基は、リガンドの分子内ジスルフィド結合の還元によって生成することができる。または、スルフヒドリル基は、2-イミノチオラン(トラウト(Traut's)試薬)または別のスルフヒドリル生成試薬を使用する、リガンドのリジン部分のアミノ基の反応によって生成することができる。
【０１１８】
1つの態様において、ストレッチャー単位は、リガンドの硫黄原子と結合を形成する。硫黄原子は、リガンドのスルフヒドリル基から誘導することができる。この態様の代表的なストレッチャー単位は、下記式IIIaおよびIIIbの角括弧中に示され、式中、L-、W-、-D、wは上記に定義された通りであり、R17は、-C1-C10アルキレン-、-C3-C8カルボシクロ、-O-(C1-C8アルキル)、-アリーレン-、-C1-C10-アルキレン-アリーレン-、-アリーレン-C1-C10アルキレン-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8カルボシクロ)-、-(C3-C8カルボシクロ)-C1-C10アルキレン-、-C3-C8ヘテロシクロ-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8ヘテロシクロ)-、-(C3-C8ヘテロシクロ)-C1-C10アルキレン-、-(CH2CH2O)r-、および-(CH2CH2O)r-CH2-から選択され;ならびにrは1〜10の範囲の整数である。III〜VIなどの、化学式Iaの例示的な態様から、明確に示さない場合でさえ、1個〜20個の薬物部分がリガンドに連結されることが理解される(p=1〜20)。
2008519863.tif 000018
【０１１９】
例示的なストレッチャー単位は、R17が-(CH2)5-である化学式IIIaのそれである:
2008519863.tif 000019
【０１２０】
別の例示的なストレッチャー単位は、R17が-(CH2H2O)r-CH2-であり;rが2である化学式IIIaのそれである:
2008519863.tif 000020
【０１２１】
さらに別の例示的なストレッチャー単位は、R17が-(CH2)5-である化学式IIIbのそれである:
2008519863.tif 000021
【０１２２】
別の態様において、ストレッチャー単位は、リガンド単位の硫黄原子とストレッチャー単位の硫黄原子の間のジスルフィド結合を介して、リガンド単位に連結される。この態様の代表的なストレッチャー単位は、R17、L-、-W-、-D、wが上記に定義した通りである下記式IVの角括弧中に示される。
2008519863.tif 000022
【０１２３】
さらに別の態様において、ストレッチャーの反応基は、リガンドの一級または二級アミノ基と結合を形成することができる反応部位を含む。これらの反応部位の例には、スクシンイミドエステル、4-ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、およびイソチオシアネートなどの活性化エステルが含まれるがこれらに限定されない。この態様の代表的なストレッチャー単位は、R17、L-、-W-、-D、およびwが上記に定義した通りである下記式VaおよびVbの角括弧中に示される;
2008519863.tif 000023
【０１２４】
さらに別の局面において、ストレッチャーの反応基は、リガンド上に存在することができる修飾された炭化水素の(-CHO)基に対して反応性である反応部位を含む。例えば、炭化水素は、過ヨウ素酸ナトリウムなどの試薬を使用して穏やかに酸化することができ、酸化された炭化水素の得られる(-CHO)単位は、ヒドラジン、オキシム、一級または二級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、カルボン酸ヒドラジン、およびアリールヒドラジドなどの官能基、例えば、Kaneko, T. et al. (1991) Bioconjugate Chem 2:133-41に記載されるようなものを含むストレッチャーと縮合することができる。この態様の代表的なストレッチャー単位は、R17、L-、-W-、-Y-、-D、wおよびyが上記に定義した通りである下記式VIa、VIb、およびVIcの角括弧中に示される。
2008519863.tif 000024
【０１２５】
アミノ酸単位(-W-)は、存在する場合、薬物部分にストレッチャー部分を連結し、ストレッチャー部分が存在しない場合には、薬物単位にリガンド単位を連結する。
【０１２６】
Ww-は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチド、またはドデカペプチド単位である。各-W-単位は、独立して、角括弧中以下に示される化学式を有し、wは0から12までの範囲の整数である:
2008519863.tif 000025
式中、R19は、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、sec-ブチル、ベンジル、p-ヒドロキシベンジル、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(=NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、-(CH2)3NHCHO、-(CH2)4NHC(=NH)NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、-(CH2)3NHCONH2、-(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-ピリジルメチル-、3-ピリジルメチル-、4-ピリジルメチル-、フェニル、シクロヘキシル、
2008519863.tif 000026
である。
【０１２７】
アミノ酸単位は、1種または複数の酵素(例えば、リソソーム酵素、腫瘍関連プロテアーゼ、細胞内酵素)によって酵素的に切断されて、薬物単位(-D)を遊離することができ、この薬物単位は、放出の際にインビボでプロトン化されて薬物(D)を提供する。
【０１２８】
例示的なWw単位は、下記式(VII)〜(IX)によって表される:
2008519863.tif 000027
式中、R20およびR21は以下の通りである:
2008519863.tif 000028
2008519863.tif 000029
式中、R20、R21、およびR22は以下の通りである:
2008519863.tif 000030
2008519863.tif 000031
式中、R20、R21、R22、およびR23は以下の通りである:
2008519863.tif 000032
【０１２９】
例示的なアミノ酸単位には、化学式(VII)の単位が含まれるがこれらに限定されず、式中:R20はベンジルでありかつR21は-(CH2)4NH2であり;R20はイソプロピルでありかつR21は-(CH2)4NH2であり;またはR20はイソプロピルでありかつR21は-(CH2)3NHCONH2である。別の例示的なアミノ酸単位は化学式(VIII)の単位であり、式中、R20はベンジルであり、R21はベンジルであり、かつR22は-(CH2)4NH2である。
【０１３０】
有用な-Ww-単位は、特定の酵素、例えば、リソソーム酵素、腫瘍関連プロテアーゼ、または細胞内酵素による酵素的切断のために、それらの選択性を設計しかつ最適化することができる。1つの態様において、-Ww-単位は、それらの切断が、カテプシンB、C、およびD、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒されるものである。
【０１３１】
1つの態様において、-Ww-単位は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、またはペンタペプチドである。
【０１３２】
R19、R20、R21、R22、またはR23が水素以外である場合、R19、R20、R21、R22、またはR23が結合される炭素はキラルである。
【０１３３】
R19、R20、R21、R22、またはR23が結合される各々の炭素原子は、独立して、(S)または(R)配置である。
【０１３４】
1つの態様において、アミノ酸単位はバリン-シトルリンである。別の態様において、アミノ酸単位は、フェニルアラニン-リジン(すなわち、fk)である。なお別の態様において、アミノ酸単位は、5-アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニンリジン、テトライソキノリンカルボン酸リジン、シクロヘキシルアラニンリジン、イソネペコチック(isonepecotic)酸リジン、β-アラニンリジン、グリシンセリンバリングルタミン、およびイソネペコチック酸である。
【０１３５】
特定の態様において、アミノ酸単位は、天然アミノ酸を含むことができる。他の態様において、アミノ酸単位は、非天然アミノ酸を含むことができる。
【０１３６】
薬物化合物
薬物化合物は、微小管の動態、GTP加水分解、ならびに/または核および細胞の分裂に干渉することが示されており、かつ抗癌活性ならびに/または抗真菌活性を有するドラスタチン(dolastatin)/オーリスタチン(auristatin)型のものである。Dは、アミノ酸単位もしくはストレッチャー単位、またはリガンド単位と結合を形成することができる窒素原子を有する薬物単位(部分)である。「薬物単位」および「薬物部分」という用語は同義語であり、本明細書で交換可能に使用されることが理解される。
【０１３７】
ある態様において、薬物化合物は、下記式I:
2008519863.tif 000033
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を有し、
式中、各位置において独立して、
R2は、-水素、-C1-C8アルキル、-O-(C1-C8アルキル)、-ハロゲン、-NO2、-COOH、および-C(O)OR11から選択され;
各R3は、-水素および-C1-C8アルキルから独立に選択され;
Iは、0〜10までの範囲の整数であり;
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立して選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【０１３８】
ある態様において、薬物化合物は、下記式:
2008519863.tif 000034
を有し、式中、各位置において独立して、
R4は、-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;ならびにR5は、-Hおよび-メチルから選択され;またはR4およびR5は一緒になって化学式-(CRaRb)n-を有し、ここで、RaおよびRbは、-H、-C1-C8アルキル、および-C3-C8炭素環から独立に選択され、nは2、3、4、5、および6から選択され、これらが結合する炭素原子とともに環を形成し;
R6は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R7は、-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-(C3-C8炭素環)、-C3-C8複素環、および-C1-C8アルキル-(C3-C8複素環)から選択され;
各R8は、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-O-アルキル-(C1-C8炭素環)、および-O-(C1-C8アルキル)から独立に選択され;
R9は、-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【０１３９】
ある態様において、薬物化合物は、下記式:
2008519863.tif 000035
を有し、式中、各位置において独立して、
R10は、アリール基または-C3-C8複素環から選択され;
Zは、-O-、-S-、-NH-、および-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【０１４０】
ある態様において、薬物化合物は、下記式:
2008519863.tif 000036
を有し、式中、
Zは、-O-、-S-、-NH-、または-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキルまたはアリールであり;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、-(CH2CH2O)r-CH3、および-(CH2CH2O)r-CH2CH2C(O)OHから選択され;ここで、rは1〜10の範囲の整数である。
【０１４１】
ある態様において、薬物化合物は、下記式を有する:
2008519863.tif 000037
【０１４２】
典型的には、ペプチドベースの薬物は、2つ以上のアミノ酸および/またはペプチドフラグメントの間でペプチド結合を形成することによって調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野において周知である液相合成法(Schroder and K. Lubke「The Peptides」volume 1 , pp 76-136, 1965, Academic Pressを参照されたい)に従って調製することができる。
【０１４３】
非天然アミノ酸Boc-ドラプロイン(Boc-Dap)、ドライソロイシン-OtBu(Dil-OtBu)、およびジペプチドCbz-Val-Dil-OtBuは、米国特許第5,635,483号およびPettit et al., 1998, Anti-Cancer Drug Des. p.243において記載されるように調製することができる。
【０１４４】
一般式Iの例示的な薬物化合物(エステル10または遊離酸10a)の合成は、以下のスキーム1に示される。
2008519863.tif 000038
ここで、Zは、-O-、-S-、-NH-、または-NR12-から選択され、ここで、R12はC1-C8アルキル;ならびに
R11は、-H、C1-C8アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-(CH2CH2O)r-H、および-(CH2CH2O)r-CH3から選択され;rは1〜10の範囲の整数である。
【０１４５】
1つの局面において、化合物10は、Z=O、R11=メチルを有する。別の局面において、Z=O、R11=tert-ブチルである。さらに別の局面において、薬物化合物10は、Z=O、R11=OHを有する(化合物10a)。
【０１４６】
求電子マレイミド基を有する例示的なストレッチャーの合成は、スキーム2〜3に図示される。リンカーの合成のために有用である一般的な合成方法は、スキーム4に記載される。スキーム5は、薬物-リンカー化合物の合成についての一般的な概要を提示するのに対して、スキーム6は、共役化合物を調製するための代替経路を提示し、スキーム7は、例えば、リガンドあたり2個または4個の薬物を有するがこれに限定されない共役化合物の合成を図示する。
2008519863.tif 000039
式中、Xは-CH2-または-CH2OCH2-であり;nは、Xが-CH2-の場合に0〜10、またはXが-CH2OCH2-である場合に1〜10のいずれかの範囲の整数である。
【０１４７】
スキーム3に示される方法は、ミツノブ(Mitsunobu)条件下でグリコールとマレイミドを合わせて、ポリエチレングリコールマレイミドストレッチャーを作製し(例えば、Walker, J. Org. Chem. 1995, 60, 5352-5を参照されたい)、続いて、p-ニトロフェニルカーボネート反応部位基の導入を行う。
2008519863.tif 000040
式中、Eは-CH2-または-CH2OCH2-であり;eは0〜100の範囲の整数である。ある態様において、eは0〜8の範囲の整数である。他の態様において、eは0〜10の範囲の整数である。
【０１４８】
または、PEG-マレイミドおよびPEG-ハロアセトアミドストレッチャーは、Frisch et al., 1996, Bioconjugate Chem. 7:180-186によって記載されるように調製することができる。
【０１４９】
スキーム4は、マレイミドストレッチャー基を含む例示的なリンカー単位の一般的な合成を図示する。
2008519863.tif 000041
【０１５０】
有用なストレッチャーは、有機合成の公知の技術を利用することによって以下に記載される、Molecular Biosciences (Boulder, CO)からの市販されている中間体を使用して、リンカーに取り込まれてもよい。
【０１５１】
化学式(IIIa)のストレッチャーは、スキーム7および8に示されるアミノ酸単位のN末端と、下記の中間体を反応させることによってリンカーに取り込むことができる:
2008519863.tif 000042
式中、nは1〜10の範囲の整数であり、Tは-Hまたは-SO3Naである;
2008519863.tif 000043
式中、nは0〜3の範囲の整数である;
2008519863.tif 000044
【０１５２】
化学式(IIIb)のストレッチャー単位は、アミノ酸単位のN末端と下記の中間体を反応させることによってリンカーに導入することができる:
2008519863.tif 000045
式中、Xは-Brまたは-Iである;および
2008519863.tif 000046
【０１５３】
化学式(IV)のストレッチャー単位は、アミノ酸単位のN末端と下記の中間体を反応させることによってリンカーに導入することができる:
2008519863.tif 000047
【０１５４】
化学式(Va)のストレッチャー単位は、アミノ酸単位のN末端と下記の中間体を反応させることによってリンカーに導入することができる:
2008519863.tif 000048
【０１５５】
他の有用なストレッチャーは、公知の手順に従って合成されてもよい。これらのストレッチャーは、一般式Ib:
2008519863.tif 000049
を有してもよく、
式中、R17は、-C1-C10アルキレン-、-C3-C8炭素環、-O-(C1-C8アルキル)、-アリーレン-、-C1-C10-アルキレン-アリーレン-、-アリーレン-C1-C10アルキレン-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8カルボシクロ)-、-(C3-C8カルボシクロ)-C1-C10アルキレン-、-C3-C8ヘテロシクロ-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8ヘテロシクロ)-、-(C3-C8ヘテロシクロ)-C1-C10アルキレン-、-(CH2CH2O)r-、および-(CH2CH2O)r-CH2-から選択され;ならびにrは1〜100の範囲の整数である。
【０１５６】
下記に示される化学式のアミノオキシストレッチャーは、Jones et al., 2000, Tetrahedron Letters 41(10):1531-1533;および Gilon et al., 1967, Tetrahedron 23(11):4441-4447に記載されている手順に従って、N-Boc-ヒドロキシルアミンを用いてハロゲン化アルキルを処理することによって調製することができる。
2008519863.tif 000050
式中、R17は、-C1-C10アルキレン-、-C3-C8カルボシクロ、-O-(C1-C8アルキル)、-アリーレン-、-C1-C10-アルキレン-アリーレン-、-アリーレン-C1-C10アルキレン-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8カルボシクロ)-、-(C3-C8カルボシクロ)-C1-C10アルキレン-、-C3-C8ヘテロシクロ-、-C1-C10アルキレン-(C3-C8ヘテロシクロ)-、-(C3-C8ヘテロシクロ)-C1-C10アルキレン-、-(CH2CH2O)r-、および-(CH2CH2O)r-CH2-から選択され;ならびにrは1〜100の範囲の整数である。
【０１５７】
下記に示される化学式のイソチオシアネートストレッチャーは、Angew. Chem., 1975, 87(14):517に記載されるイソチオシアネート酸塩化物から調製されてもよい。
2008519863.tif 000051
式中、R17は本明細書に記載される通りである。
【０１５８】
スキーム5に示されるように、リンカーは、薬物化合物10のアミノ基と反応して、リンカー単位に薬物を連結するアミド基またはカルバメート基を含む薬物-リンカー化合物を形成することができる。リンカー29に示されるように、反応部位1がカルボン酸基である場合、カップリング反応は、HATU、DEPC、またはPyBropおよび適切なアミン塩基を使用して実施することができ、薬物とリンカー単位の間のアミド結合を含む、薬物-リンカー化合物30を生じる。リンカー31におけるように、反応部位1が炭酸である場合、このリンカーは、DMF/ピリジンの混合物中のHOBtにカップリングされて、薬物単位とリンカー単位の間のカルバメート結合を含む、薬物-リンカー化合物32を提供することができる。
【０１５９】
または、反応部位1がリンカー70におけるような良好な遊離基である場合、このリンカーは、求核置換プロセスを経由して薬物のアミン基とカップリングされ、薬物単位とリンカー単位の間にアミン結合(71)を有する薬物-リンカー化合物を提供する。
【０１６０】
薬物が遊離酸である薬物-リンカーを調製するために、薬物-リンカー化合物30、31、または71のエステル結合は切断される。酸性条件下で切断可能である有用なエステルには、tert-ブチルエステルが含まれるがこれに限定されない。薬物10aまたは薬物-リンカーは、薬物が遊離酸である場合に、一般的手順1に従って、対応するtert-ブチルエステルから調製することができる。
【０１６１】
薬物をリガンドに連結して薬物-リンカー化合物を形成するために有用な例示的な方法はスキーム5に示され、一般的手順G〜Hに概説される。
2008519863.tif 000052
【０１６２】
一般的手順G:HATUを使用するアミド形成
薬物10(1.0等量)およびカルボン酸反応部位を含むN-保護化リンカー(1.0等量)を、ジクロロメタンなどの適切な有機溶媒中で希釈し、得られる溶液をHATU(1.5等量)および有機塩基、好ましくはピリジン(1.5等量)で処理する。この反応混液を、不活性雰囲気、好ましくはアルゴン下で6時間攪拌させ、その時間の間、反応混液をHPLCを使用してモニターする。この反応混液を濃縮し、得られる残渣をHPLCで精製して、アミド30を得る。
【０１６３】
手順H:HOBtを使用するカルバメート形成
p-ニトロフェニル炭酸反応部位を有するリンカー31(1.1等量)および薬物10(1.0等量)の混合物を、DMFなどの非プロトン性溶媒で希釈して、50〜100mMの濃度を有する溶液を提供し、得られる溶液をHOBt(2.0等量)で処理し、不活性雰囲気、好ましくはアルゴン下に配置する。この反応混液を15分間攪拌させ、次いで、ピリジン(1/4 v/v)などの有機塩基を加え、反応プロセスをHPLCを使用してモニターする。リンカーは、典型的には、16時間以内に消費される。次いで、反応混合液を真空中で濃縮し、得られる残渣を、例えばHPLCを使用して精製し、カルバメート32を得る。
【０１６４】
一般的手順I:tert-ブチルエステルの酸切断
薬物10またはリンカー-薬物-10(100mg)を、CH2Cl2(4mL)、TFA(2mL)に懸濁する。この反応混合液を、不活性雰囲気、好ましくはアルゴン下で2〜4時間攪拌させ、その時間の間、反応混合液をHPLCを使用してモニターする。反応は、典型的には、2時間以内に完了する。この反応混合液をトルエンで希釈し(20mL)、真空中で濃縮する。残渣を、トルエン(2 x 10ml)とともに同時エバポレートし、真空中で乾燥させる。生成物を、必要な場合、調製用RP-HPLCによって精製し、薬物10aまたはリンカー-薬物-10aを得る。
【０１６５】
薬物-リンカー化合物を調製する代替方法は、スキーム6に概説される。スキーム6の方法を使用して、薬物は、結合されたストレッチャー単位を有さない部分リンカー単位(例えば、19a)に結合される。これは、Fmoc-保護化N-末端を有するアミノ酸単位を有する中間体35を提供する。次いで、Fmoc基は除去され、次いで、得られるアミン中間体36は、PyBropまたはDEPCを使用して触媒されるカップリング反応を介してストレッチャー単位に結合される。次いで、Fmoc基が除去され、次いで、得られるアミン中間体36は、PyBropまたはDEPCを使用して触媒されるカップリング反応を介してストレッチャー単位に結合される。ブロモアセトアミドストレッチャー37またはPEGマレイミドストレッチャー38のいずれかを含む薬物-リンカー化合物の構築は、スキーム6において図示される。
2008519863.tif 000053
【０１６６】
共役化合物において、薬物の負荷は、化学式Iaの分子中のリガンド単位(例えば、抗体)あたりの薬物の平均数であるpによって表される。抗体については、薬物負荷は、抗体(AbまたはmAb)あたり1個〜20個の範囲であってもよい。化学式Iaの組成物は、1個〜20個の範囲の薬物で結合体化された抗体のコレクションを含む。結合体化反応からのリガンド単位あたりの薬物の平均数は、UV/可視光スペクトル測定、質量スペクトル測定、ELISAアッセイ法、およびHPLCなどの好都合な手段によって特徴付けされてもよい。pの観点からの共役化合物の定量的分布もまた決定されてもよい。ある例において、他の薬物負荷を有する共役化合物からの、pが特定の値を有する均質な共役化合物の分離、精製、および特徴付けは、逆相HPLCまたは電気泳動などの手段によって達成されてもよい。
【０１６７】
ある共役化合物については、pは、リガンド上の結合部位の数によって制限されてもよい。例えば、結合がシステインのチオールである場合、抗体は、1つもしくはいくつかのシステインのチオール基のみを有してもよく、またはリンカーがそれを通して結合してもよい、1つもしくはいくつかの十分に反応性であるチオール基を有してもよい。
【０１６８】
典型的には、理論的な最大数よりも少ない数の薬物部分が、結合体化反応の間にリガンドに結合体化される。抗体は、例えば、薬物-リンカー中間体またはリンカー試薬を反応しない多くのリジン残基を含んでもよい。最も反応性であるリジン基のみが、アミン-反応性リンカー試薬と反応する可能性がある。一般的に、抗体は、たとえあったとしても、薬物部分に連結される可能性がある遊離のおよび反応性のシステインチオール基を多くは含まない。本発明の化合物の抗体における大部分のシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在し、ジチオスレイトール(DTT)などの還元剤を用いて還元されなければならない。加えて、抗体は、リジンまたはシステインなどの反応性求核基をさらけ出す変性条件に供されなければならない。抗体薬物結合体の負荷(薬物/抗体比率)は、以下を含むいくつかの異なる様式で制御されてもよい:(i)抗体と比較した、薬物-リンカー中間体またはリンカー試薬の過度のモル濃度を制限すること、(ii)結合体化の反応時間または温度を制限すること、および(iii)システインチオールの修飾のための還元条件を部分的にするかまたは制限すること。
【０１６９】
1つより多くの求核基が薬物-リンカー中間体またはリンカー試薬と反応し、続いて、薬物部分試薬と反応する場合、得られる生成物は、抗体に結合した1つまたは複数の薬物部分の分布を伴う化合物の混合物であることが理解される。抗体あたりの薬物の平均数は、抗体について特異的でありかつ薬物について特異的である二重ELISA抗体アッセイ法によって、混合物から計算されてもよい。個々の分子は、質量分析によって混合物から同定され、HPLC、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離されてもよい(「Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate」 Hamblett, K.J., et al, Abstract No. 624, American Association for Cancer Research; 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004;「Controlling the Location of Drug Attachment in Antibody-Drug Conjugates」Alley, S. C, et al, Abstract No. 627, American Association for Cancer Research; 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Hamblett et al., 2004, Clin Cancer Res. 10(20):7063-70)。従って、単一の負荷値を有する均質なADCは、電気泳動またはクロマトグラフィーによって、結合体混合物から単離されてもよい。
【０１７０】
スキーム7は、リガンドが抗体を含む場合、リガンドあたり約2個〜約4個の薬物を有する共役化合物を作製するために有用な方法を図示する。
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【０１７１】
部分的に還元された抗体に対する薬物-リンカーの減少および結合体化は、その全体が参照により本明細書に組み入れられるPCT/US03/24209およびPCT/US05/07239において記載されている。共役化合物およびその要素を合成する他の方法は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国公報第2005-0238649号において開示されている。
【０１７２】
共役化合物および薬物化合物についての活性アッセイ法
トランスジェニック動物および細胞株は、タンパク質の過剰発現を含む、疾患または障害の予防的または治療的処置としての潜在能力を有する共役化合物をスクリーニングする際に特に有用である。有用な共役化合物のスクリーニングは、一定の用量の範囲にわたってトランスジェニック動物に候補共役化合物を投与する工程、および疾患または障害に対する候補化合物の評価される効果について、種々の時点でアッセイを行う工程を含んでもよい。代替として、または加えて、薬物は、適用可能である場合、疾患の誘導因子への曝露の前に、またはそれと同時に投与することができる。候補共役化合物は、中程度または高い処理能力のスクリーニング様式下で、連続的にかつ個々に、または並行してスクリーニングされてもよい。疾患または障害の予防的または治療的処置のための有用性について共役化合物がスクリーニングされてもよい速度は、データの検出/測定/分析を含む、合成またはスクリーニングの方法論の速度によってのみ制限される。
【０１７３】
1つの態様は、(a)安定な癌細胞株(例えば、腎細胞癌細胞株)からの細胞を非ヒト動物に移植する工程、(b)非ヒト動物に共役化合物候補を投与する工程、および(c)その候補が、移植された細胞株からの腫瘍の形成を阻害する能力を決定する工程を含むスクリーニング方法である。
【０１７４】
別の態様は、(a)安定なホジキン病細胞株からの細胞を、共役化合物候補を接触させる工程、および(b)CD40のリガンド活性化を遮断する候補の能力を評価する工程を含むスクリーニング方法である。
【０１７５】
別の態様は、(a)安定なホジキン病細胞株からの細胞を、共役化合物候補と接触させる工程、および(b)細胞死を誘導する候補の能力を評価する工程を含むスクリーニング方法である。1つの態様において、候補がアポトーシスを誘導する能力が評価される。
【０１７６】
1つの態様は、(a)安定な癌細胞株からの細胞を非ヒト動物に移植する工程、(b)非ヒト動物に共役化合物候補を投与する工程、および(c)その候補が、移植された細胞株からの腫瘍の形成を阻害する能力を決定する工程を含むスクリーニング方法である。
【０１７７】
別の態様は、(a)安定な癌細胞株からの細胞を、共役化合物候補と接触させる工程、および(b)標的分子のリガンド活性化を遮断する候補の能力を評価する工程を含むスクリーニング方法である。
【０１７８】
別の態様は、(a)安定な癌細胞株からの細胞を、共役化合物候補と接触させる工程、および(b)細胞死を誘導する候補の能力を評価する工程を含むスクリーニング方法である。1つの態様において、候補がアポトーシスを誘導する能力が評価される。
【０１７９】
1つの態様において、候補共役化合物は、一定の用量の範囲にわたってトランスジェニック動物に候補共役化合物を投与すること、および化合物に対する動物の生理学的な応答を経時的に評価する工程によってスクリーニングされる。投与は、評価される化合物の化学的性質に依存して、経口的、または適切な注入によってであり得る。ある場合において、化合物の効果を増強するコファクターとともにその化合物を投与することが適切であり得る。対象のトランスジェニック動物から誘導される細胞株が、種々の障害を治療する際に有用である化合物についてスクリーニングするために使用される場合、試験化合物は適切な時点で細胞培養培地に加えられ、化合物に対する細胞応答は、適切な生化学的および/または組織学的アッセイを使用して経時的に評価される。ある場合において、関心対象の化合物を、化合物の効力を増強するコファクターとともに培養培地に適用することが適切であり得る。
【０１８０】
従って、その存在が異常な細胞機能と相関し、腫瘍の発生に原因として関連する細胞の増殖および/または分化の病因である、標的タンパク質を特異的に標的とし、かつこれに結合する候補化合物が本発明で提供される。
【０１８１】
関心対象の抗原を特異的に標的とする増殖阻害化合物を同定するために、トランスジェニック動物に由来する、関心対象の抗原を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する化合物をスクリーニングしてもよい。ある態様において、米国特許第5,677,171号に記載されるアッセイ法を実施することができる。このアッセイ法に従うと、関心対象の抗原を過剰発現する癌細胞は、10%ウシ胎仔血清、グルタミン、およびペニシリンストレプトマイシンを補充した、F12およびDMEM培地の1:1混合物中で増殖させる。細胞は35mm細胞培養ディッシュ(2ml/35mmディッシュ)に20,000細胞でプレーティングし、試験化合物を種々の濃度で加える。6日後、未処理細胞と比較した細胞の数を、COULTER(登録商標)電子的細胞カウンターを使用して計数する。約20〜100%または約50〜100%細胞増殖を阻害するこれらの化合物は、増殖阻害化合物として選択されてもよい。
【０１８２】
細胞死を誘導する化合物を選択するために、例えば、PI、トリパンブルー、または7AADによって示されるような膜の完全性の喪失が、対照と比較して評価されてもよい。PI取り込みアッセイ法は、トランスジェニック動物の関心対象の腫瘍組織から単離された細胞を使用する。このアッセイに従って、細胞は、10%熱不活化FBS(Hyclone)および2mM L-グルタミンで補充したダルベッコ改変イーグル培地(D-MEM):Ham's F-12(50:50)中で培養する。従って、このアッセイ法は、補体および免疫エフェクター細胞の非存在下で実施される。細胞を、100×20mmディッシュ中で、ディッシュあたり3×106の密度でまき、一晩結合させる。次いで、培地を除去し、新鮮な培地単独、または種々の濃度の化合物を含む培地で置き換える。細胞を、3日間の間インキュベートする。各処理後、単層をPBSで洗浄し、トリプシン処理によって脱離させる。次いで、細胞を、1200rpmで5分間、4℃で遠心分離し、ペレットを、3mlの冷Ca2+結合緩衝液(10mM Hepes、pH 7.4、140mM NaCl、2.5mM CaCl2)中に再懸濁し、細胞クランプの除去のために、35mmストレーナーキャップ付き12×75mmチューブ(チューブあたり1ml、処理群あたり3チューブ)中でアリコートとする。次いで、チューブにPI(10μg/ml)を入れる。試料は、FACSCAN(登録商標)フローサイトメーターおよびFACSCONVERT(登録商標)CellQuestソフトウェア(Becton Dickinson)を使用して分析されてもよい。PI取り込みによって決定されるような統計学的に有意なレベルの細胞死を誘導する化合物は、細胞死誘導化合物として選択されてもよい。
【０１８３】
アポトーシスを誘導する化合物を選択するために、トランスジェニック動物の関心対象の腫瘍組織から樹立された細胞を使用するアネキシン結合アッセイ法を実施する。細胞を培養し、先の段落において議論されたようにディッシュ中にまく。次いで、培地を除去し、新鮮な培地単独または10μg/mlの共役化合物を含む培地で置き換える。3日間のインキュベーション時間後、単層をPBSで洗浄し、トリプシン処理によって脱離させる。次いで、細胞を遠心分離し、Ca2+結合緩衝液中に再懸濁し、細胞死アッセイのために上記に議論したようにチューブ中でアリコートとする。次いで、チューブにアネキシン(例えば、アネキシンV-FITC)(1μg/ml)を入れる。試料は、FACSCAN(登録商標)フローサイトメーターおよびFACSCONVERT(登録商標)CellQuestソフトウェア(Becton Dickinson)を使用して分析されてもよい。対照と比較して統計学的に有意なレベルのアネキシン結合を誘導する化合物は、アポトーシス誘導化合物として選択される。
【０１８４】
一般的に、共役化合物の細胞毒性活性または細胞増殖抑制性活性は、細胞培養培地中で、共役化合物のリガンド(例えば、抗体)に、受容体タンパク質を有する哺乳動物細胞を曝露する工程;この細胞を約6時間〜約5日間の間培養する工程;および細胞生存度を測定する工程によって測定される。細胞ベースのインビトロアッセイは、この共役化合物による生存度(増殖)、細胞毒性、およびアポトーシスの誘導(カスパーゼ活性化)を測定するために使用された。
【０１８５】
共役化合物のインビトロ効力は、細胞増殖アッセイ法によって測定することができる。セルタイター(CellTiter)-Glo(登録商標)発光細胞生存度アッセイ法(Luminescent Cell Viability Assay)は商業的に利用可能であり(Promega Corp., Madison, Wl)、コレオプテラ(Coleoptera)ルシフェラーゼの組換え発現に基づく均質なアッセイ方法である(米国特許第5,583,024号;同第5,674,713号および同第5,700,670号)。この細胞増殖アッセイ法は、代謝的に活性な細胞のインジケーターである、存在するATPの定量に基づいて細胞中の生存可能細胞の数を決定する(例えば、Crouch et al., 1993, J. Immunol. Meth. 160:81-88;米国特許第6,602,677号を参照されたい)。セルタイター(CellTiter)-Glo(登録商標)アッセイ法は、96ウェル形式で実施することができ、これを自動化高処理能力スクリーニング(HTS)に受け入れ可能にする(例えば、Cree et al., 1995, Anticancer Drugs 6:398-404を参照されたい)。均質アッセイ手順は、血清補充した培地中で培養した細胞に、単一の試薬(セルタイター(CellTiter)-Glo(登録商標)試薬)を直接的に加える工程を含む。細胞の洗浄、培地の除去、および複数のピペッティング工程は必要ではない。このシステムは、試薬の添加および混合の10分後に、384ウェル形式で、わずか15細胞/ウェルを検出する。細胞は、共役化合物を用いて連続的に処理されてもよく、またはこれらは処理されかつ共役化合物から分離されてもよい。一般的に、手短に、すなわち、3時間処理された細胞は、連続して処理された細胞と同じ効力の効果を示した。
【０１８６】
均質な「添加-混合-測定」形式は、細胞溶解および存在するATPの量に比例する発光シグナルの生成を生じる。ATPの量は、培養中に存在する細胞の数に直接比例する。セルタイター(CellTiter)-Glo(登録商標)アッセイ法は、ルシフェラーゼ反応によって産生される「グロー型」発光シグナルを生成し、これは、使用する細胞型および培地に依存して、一般的に5時間より長い半減期を有する。生存可能細胞は、相対的発光単位(RLU)の中に反映される。基質であるビートルルシフェリンは、付随するAMPへのATPの転換およびフォトンの生成を伴って、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱炭酸される。半減期の延長は、試薬のインジェクターを使用する必要を除外し、複数のプレートの連続様式またはバッチ様式のための柔軟性を提供する。この細胞増殖アッセイ法は、種々のマルチウェル様式、例えば、96ウェル様式または384ウェル様式で使用することができる。データは、ルミノメーターまたはCCDカメラ画像化装置によって記録することができる。発光出力は、経時的に測定される相対的光単位(RLU)として提示される。
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【０１８７】
薬学的組成物
共役化合物または薬物化合物および薬学的に許容されるキャリアまたは媒体を含む薬学的組成物が提供される。この組成物は、獣医学的投与またはヒト投与のために適切である。医用製剤の調製における共役化合物または薬物化合物の使用もまた提供される。
【０１８８】
本発明の組成物は、この組成物が患者に投与されることを可能にする任意の型であり得る。例えば、この組成物は、固体、液体、または気体(エアロゾル)の型、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル、液体含有カプセル、散剤、持続放出製剤、坐剤、スプレー、または使用のために適切な任意の他の型であり得る。適切な薬学的キャリアの他の例は、E.W. Martinによる「Remington's Pharmaceutical Sciences」に記載されている。 
【０１８９】
投与の典型的な経路には、非限定的に、非経口的、経口的、局所的、舌下、直腸、膣、眼、腫瘍内、および鼻内が含まれる。非経口投与には、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内の注射または注入の技術が含まれる。1つの局面において、組成物は非経口的に投与される。1つの局面において、組成物は静脈内投与される。
【０１９０】
薬学的組成物は、患者への組成物の投与の際に、共役化合物または薬物化合物を生物的に利用可能にすることを許容するように製剤化することができる。薬学的組成物を調製する際に使用される材料は、使用する量では非毒性であり得る。薬学的組成物中の活性成分の最適な投薬量が種々の要因に依存することは、当業者には明白である。関連する要因には、非限定的に、動物の型(例えば、ヒト)、共役化合物または薬物化合物の特定の型、投与の様式、および利用される組成物が含まれる。
【０１９１】
ある態様において、この組成物は、液体、例えば、エマルジョン、溶液、溶液、エリキシル、またはシロップの型である。注射による投与のための組成物中で、1種または複数の界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝剤、安定剤、および等張剤を含めることができる。液体は、経口投与のため、または注射による送達のために有用であり得る。
【０１９２】
液体組成物はまた、それらが溶液、懸濁液、または他の同様の型であるかに関わらず、以下の1つまたは複数を含むことができる:注射のための水などの滅菌希釈剤、生理食塩水溶液、好ましくは、生理食塩水、リンガー液、等張性塩化ナトリウム、固定油、例えば、溶媒または懸濁媒体として働くことができる合成モノグリセリドまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒;ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤;アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤;エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤;酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性の調整のための薬剤。非経口組成物は、ガラス製、プラスチック製、または他の材質のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数用量バイアル中に封入することができる。生理食塩水は例示的なアジュバントである。注射用組成物は好ましくは生理食塩水である。
【０１９３】
経口投与のために意図される場合、組成物は、好ましくは、固体型または液体型であり、ここで、半固体、半液体、懸濁液、およびゲル型が、固体型または液体型のいずれかとして本明細書で考慮される型の中に含まれる。経口投与のために意図される場合、組成物は、1種または複数の甘味料、保存剤、色素/着色料、および香料を含めることができる。
【０１９４】
固体組成物として、本発明の組成物は、散剤、顆粒剤、圧縮錠、丸薬、カプセル、チューインガム、ウェハーなどの型に製剤化することができる。このような固体組成物は、典型的には、1種または複数の不活性希釈剤を含む。加えて、以下の1つまたは複数が存在してもよい:カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロース、またはゼラチンなどの結合剤;デンプン、ラクトース、またはデキストリンなどの賦形剤、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモゲル(Primogel)、コーンスターチなどのような崩壊剤;ステアリン酸マグネシウムまたはステロテックス(Sterotex)などの滑沢剤;コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤;スクロースまたはサッカリンなどの甘味料、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料などの香料、および着色料。
【０１９５】
組成物がカプセル、例えば、ゼラチンカプセルの形態である場合、これは、上記の型の材料に加えて、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、または脂肪油などの液体キャリアを含むことができる。
【０１９６】
特定の障害または状態の治療において有効である共役化合物または薬物化合物の量は、障害または状態の性質に依存し、これは標準的な臨床的技術によって決定することができる。加えて、インビトロアッセイ法またはインビボアッセイ法は、最適な投薬量範囲を同定することを補助するために、任意に利用することができる。組成物中で利用される正確な用量もまた、投与の経路および疾患または障害の深刻さに依存し、実務者の判断および各々の患者の状況に従って決定されるべきである。
【０１９７】
本発明の組成物は、適切な投薬量が得られるように、共役化合物または薬物化合物の有効量を含む。典型的には、この量は、組成物の重量で、共役化合物または薬物化合物の少なくとも約0.01%である。経口投与のために意図される場合、この量は、組成物の重量で約0.1%〜約80%の範囲まで変化させることができる。1つの局面において、経口組成物は、組成物の重量で、共役化合物および/または薬物化合物の約4%〜約50%までを含むことができる。なお別の局面において、本発明の組成物は、非経口投薬量単位が、共役化合物または薬物化合物の重量で少なくとも約0.01%〜約2%またはそれ以上を含むように調製される。
【０１９８】
静脈内投与のために、本発明の組成物は、動物の体重のkgあたり、約0.01〜約100mgの共役化合物または薬物化合物を含むことができる。1つの局面において、この組成物は、動物の体重のkgあたり、約1〜約100mgの共役化合物または薬物化合物を含むことができる。別の局面において、投与される量は、体重のkgあたり、約0.1〜約25mgの範囲の共役化合物または薬物化合物である。
【０１９９】
一般的に、患者に投与される共役化合物または薬物化合物の投薬量は、典型的には、動物の体重kgあたり、約0.01mg/kg〜約2000mg/kgである。1つの局面において、患者に投与される投薬量は、動物の体重kgあたり、約0.01kg/mg〜約20mg/kgの間である。別の局面において、患者に投与される投薬量は、動物の体重kgあたり、約0.1mg/kg〜約250mg/kgの間である。なお別の局面において、患者に投与される投薬量は、動物の体重kgあたり、約0.1mg/kg〜約20mg/kgの間である。なお別の局面において、投与される投薬量は、動物の体重kgあたり、約0.1mg/kg〜約15mg/kgの間であり、なお別の局面において、投与される投薬量は、動物の体重kgあたり、約1mg/kg〜約15mg/kgの間であり;なお別の局面において、投与される投薬量は、動物の体重kgあたり、約1mg/kg〜約10mg/kgの間である。
【０２００】
共役化合物または薬物化合物は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚の裏層(例えば、口腔粘膜、直腸および腸の粘膜など)を通しての吸収によって投与することができる。投与は全身性または局所性であり得る。種々の送達系、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなどの中でのカプセル化が公知であり、共役化合物または薬物化合物を投与するために使用することができる。
【０２０１】
特定の態様において、1種より多くの共役化合物または薬物化合物が患者に投与される。
【０２０２】
特定の態様において、1種または複数の共役化合物または薬物化合物が、治療の必要のある領域に局所的に投与されることが所望され得る。このことは、例えば、手術の間の局所的注入;例えば、手術後の創傷包帯と併せた局所的適用;注射によって;カテーテルによって;坐剤によって;または、例えば、シアル酸(sialactic)膜または線維などの膜を含む、多孔質性、非多孔質性、またはゼラチン状材料である移植物によって達成することができるが、これらに限定されない。1つの態様において、投与は、癌、腫瘍、または新生物もしくは前新生物組織の部位(または以前の部位)への直接的注射であり得る。別の態様において、投与は、自己免疫疾患の徴候の部位(または以前の部位)における直接的注射であり得る。
【０２０３】
特定の態様において、脳室内およびくも膜下腔内注射を含む、任意の適切な経路によって中枢神経系に1種または複数の共役化合物または薬物化合物を導入することを所望することができる。脳室内注射は、例えば、Ommayaリザーバーなどのリザーバーに結合された脳室内カテーテルによって容易にすることができる。
【０２０４】
肺投与はまた、例えば、吸入器もしくは噴霧器、およびエアロゾル剤を伴う製剤の使用によって、またはフルオロカーボンもしくは合成肺界面活性物質中での灌流を介して利用することができる。
【０２０５】
なお別の態様において、共役化合物または薬物化合物は、制御放出系中で送達することができ、例えば、ポンプまたは種々のポリマー性材料を使用することができるが、これらに限定されない。なお別の態様において、制御放出系は、共役化合物または薬物化合物の標的、例えば、脳の近位に配置することができ、従って、全身用量のごく一部のみを必要とする(例えば、Goodson, Medical Applications of Controlled Release, 前出, vol. 2, pp. 115-138 (1984)を参照されたい)。Langer (Science 249:1527-1533 (1990))による概説において議論されている他の制御放出系を使用することができる。
【０２０６】
「キャリア」という用語は、共役化合物または薬物化合物がそれとともに投与される希釈剤、アジュバント、または賦形剤をいう。このような薬学的キャリアは、水および油などの液体であり得、これらには、石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などが含まれる。このキャリアは、生理食塩水、アカシアガム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであり得る。加えて、補助剤、安定剤、濃厚剤、潤滑剤、および着色料を使用することができる。1つの態様において、患者に投与される場合、共役化合物または薬物化合物および薬学的に許容されるキャリアは滅菌されている。水は、共役化合物または薬物化合物が静脈内投与されるときの例示的なキャリアである。生理食塩水溶液およびデキストロース水溶液およびグリセロール溶液もまた、液体キャリアとして、特に注射溶液として利用することができる。適切な薬学的なキャリアはまた、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどのような賦形剤を含む。本発明の組成物はまた、所望される場合、わずかな量の湿潤剤または乳化剤、またはpH緩衝剤を含むことができる。
【０２０７】
1つの態様において、共役化合物または薬物化合物は、動物、特にヒトへの静脈内投与のために適合された薬学的組成物として、日常的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のためのキャリアまたは媒体は、滅菌等張性緩衝溶液である。必要な場合、この組成物はまた、安定剤を含むことができる。静脈内投与のための組成物は、任意に、注射の部位における痛みを緩和するためのリグノカインなどの局所麻酔剤を含むことができる。一般的に、成分は、別々に供給されるか、または単位剤形で、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルもしくは小袋などの密封した容器中の凍結乾燥粉末もしくは水を含まない濃縮物として、一緒に混合されるかのいずれかである。共役化合物または薬物化合物が注入によって投与される場合、これは、例えば、滅菌した薬学的グレードの水または生理食塩水を含む注入ボトルを用いて分配することができる。共役化合物または薬物化合物が注射によって投与される場合、成分が投与の前に混合できるように、注射のための滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０２０８】
経口送達のための組成物は、例えば、錠剤、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁物、顆粒剤、散剤、エマルジョン、カプセル、シロップ、またはエリキシルの形態であり得る。経口投与される組成物は、1種または複数の任意の薬剤、例えば、フルクトース、アスパルテーム、またはサッカリンなどの甘味料;ペパーミント、ウィンターグリーンのオイル、またはチェリーなどの香料;着色料;および保存料を含み、薬学的に口当たりのよい調製物を提供することができる。さらに、錠剤または丸薬の形態である場合、組成物は、崩壊および胃腸管における吸収を遅延させ、それによって、延長された時間の間にわたって持続作用を提供するように被覆することができる。浸透圧的に活性な駆動化合物を取り囲む選択的に透過性の膜もまた、経口投与される化合物のために適切である。これらの後者のプラットフォームにおいて、カプセルを取り囲む環境からの液体が、駆動化合物によって吸収され、これは膨潤して、開口部を通して薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時型放出製剤の急上昇プロフィールとは反対に、本質的にゼロ次送達プロフィールを提供することができる。モノステアリン酸グリセロールまたはステアリン酸グリセロールなどの時間遅延材料もまた使用することができる。
【０２０９】
本発明の組成物は、局所的投与のために意図することができ、この場合、キャリアは、溶液、エマルジョン、軟膏、またはゲルベースの形態であってもよい。経皮投与が意図される場合、この組成物は、経皮パッチまたはイオン泳動装置の形態であり得る。局所的製剤は、約0.05%〜約50% w/v(組成物の単位体積あたりの重量)、別の局面において、0.1%〜10% w/vの共役化合物または薬物化合物の濃度を含むことができる。
【０２１０】
本発明の組成物は、直腸投与のために意図することができ、これは、例えば、直腸で溶解し、かつ共役化合物または薬物化合物を放出する坐剤の形態である。
【０２１１】
本発明の組成物は、固体または液体の物理的な単位剤形を修飾する種々の材料を含むことができる。例えば、この組成物は、活性成分の周囲に被覆殻を形成する材料を含むことができる。被覆殻を形成する材料は、典型的には不活性であり、例えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択することができる。または、活性成分は、ゼラチンカプセル中に入れることができる。
【０２１２】
本発明の組成物は、ガス状投薬量単位からなることができ、例えば、これは、エアロゾルの形態であり得る。エアロゾルという用語は、コロイド状性質のものから、加圧パッケージからなる系までの範囲の種々の系を示すために使用される。送達は、活性成分を分配する、液化もしくは圧縮ガスによって、または適切なポンプ系によってであり得る。
【０２１３】
本発明の共役化合物または薬物化合物は、患者における癌、自己免疫疾患、感染性疾患、または他の疾患もしくは障害を治療するために有用である。
【０２１４】
ある態様において、本発明の共役化合物または薬物化合物は、腫瘍細胞もしくは癌細胞の増殖を阻害するために、腫瘍もしくは癌細胞においてアポトーシスを引き起こすために、または患者における癌を治療するために有用である。従って、この薬物化合物または薬物化合物は、動物の癌の治療のための種々の設定において使用することができる。この共役化合物は、腫瘍細胞または癌細胞に、薬物または薬物単位を送達するために使用することができる。理論によって束縛されることはないが、1つの態様において、共役化合物のリガンド単位は、癌細胞または腫瘍細胞関連抗原に結合するか、またはそれに付随し、この共役化合物は、受容体媒介性エンドサイトーシスを通して、腫瘍細胞または癌細胞の内部に取り込まれることができる。この抗原は、腫瘍細胞もしくは癌細胞に結合することができ、または腫瘍細胞もしくは癌細胞と関連する細胞外マトリックスタンパク質であり得る。一旦細胞の内部に入ると、リンカー単位中の1つまたは複数の特異的ペプチド配列が、1つまたは複数の腫瘍細胞または癌細胞関連プロテアーゼによって加水分解的に切断され、薬物、薬物-リンカー化合物、または薬物-リンカーフラグメント(これはリガンド単位の一部を含んでもよい)の放出を生じる。次いで、放出された薬物、薬物-リンカー化合物、薬物-リンカーフラグメントは、細胞内で自由に移動し、細胞毒性または細胞増殖抑制性活性を誘導する。1つの代替的な態様において、薬物または薬物単位は、腫瘍細胞または癌細胞の外側で共役化合物から切断され、続いて、薬物、薬物-リンカー化合物、または薬物-リンカーフラグメントは細胞に浸透する。
【０２１５】
1つの態様において、リガンド単位は、腫瘍細胞または癌細胞に結合する。
【０２１６】
別の態様において、リガンド単位は、腫瘍細胞または癌細胞の表面上にある腫瘍細胞または癌細胞抗原に結合する。
【０２１７】
別の態様において、リガンド単位は、腫瘍細胞または癌細胞に付随する細胞外マトリックスタンパク質である、腫瘍細胞または癌細胞抗原に結合する。
【０２１８】
特定の腫瘍細胞または癌細胞についてのリガンド単位の特異性は、最も有効に治療される腫瘍または癌を決定するために重要であり得る。例えば、BR96リガンド単位を有する共役化合物は、肝臓癌、肺癌、乳癌、結腸癌、卵巣癌、直腸癌、および膵臓癌を含む抗原陽性の癌腫を治療するために有用であり得る。抗CD30、抗CD33、抗CD19、または抗CD40リガンド単位を有する化合物は、血液学的な悪性腫瘍を治療するために有用であり得る。
【０２１９】
本発明の共役化合物または薬物化合物を用いて治療することができる他の特定の癌の型には、表1に開示されるものが含まれるがこれらに限定されない。
【０２２０】
（表１）
固形腫瘍、以下を含むがこれらに限定されない:
肉腫
線維肉腫
粘液肉腫
脂肪肉腫
軟骨肉腫
骨原性肉腫
脊索腫
血管肉腫
内皮肉腫
リンパ管肉腫
リンパ管内皮肉腫
滑膜腫
中皮腫
ユーイング腫瘍
平滑筋肉腫
横紋筋肉腫
結腸癌
結腸直腸癌
腎臓癌
膵臓癌
骨肉腫
乳癌
卵巣癌
前立腺癌
食道(esophogeal)癌
胃癌(例えば、消化管癌)
口腔癌
鼻腔癌
咽喉癌
扁平上皮癌(例えば、肺の)
基底細胞癌
腺癌(例えば、肺の)
汗腺癌
脂腺癌
乳頭状癌
乳頭腺癌
嚢胞腺癌
髄様癌
気管支原性癌
腎細胞癌
肝臓癌
胆管癌
絨毛癌
精上皮腫
胎生期癌
ウィルムス腫瘍
頚部腫瘤
子宮癌
睾丸癌
小細胞肺癌
膀胱癌
肺癌
非小細胞肺癌
上皮癌
神経膠腫
多形性膠芽腫
星状細胞腫
髄芽腫
頭蓋咽頭腫
上衣細胞腫
松果体腫
血管芽細胞腫
聴神経腫
乏突起膠腫
髄膜腫
皮膚癌
黒色腫
神経芽細胞腫
網膜芽細胞腫
血液由来の癌、以下を含むがこれらに限定されない:
急性リンパ性白血病「ALL」
急性リンパ性B細胞白血病
急性リンパ性T細胞白血病
急性骨髄芽球性白血病「AML」
急性前骨髄球性白血病「APL」
急性単芽球性白血病
急性赤白血病性白血病
急性巨核芽球性白血病
急性骨髄単球性白血病
急性非リンパ球性白血病
急性未分化白血病
慢性骨髄性白血病「CML」
慢性リンパ球性白血病「CLL」
ヘアリー細胞白血病
多発性骨髄腫
急性慢性白血病:
リンパ芽球性白血病
骨髄性白血病
リンパ性白血病
骨髄性白血病
リンパ腫:
ホジキン病
非ホジキンリンパ腫
多発性骨髄腫
ヴァルデンストレームマクログロブリン血症
重鎖病
真性赤血球増加症
その他の癌:
腹膜癌
肝細胞癌
肝臓癌
唾液腺癌
外陰癌
甲状腺癌
陰茎癌
肛門癌
頭頚部癌
腎細胞癌
急性未分化大細胞癌
皮膚未分化大細胞癌
【０２２１】
腫瘍、転移、または制御されない細胞増殖によって特徴付けられる他の疾患もしくは障害を含むがこれらの限定されない癌は、共役化合物または薬物化合物の投与によって、治療または予防することができる。
【０２２２】
他の態様において、有効量の共役化合物または薬物化合物および化学療法剤を、その必要がある患者に投与する工程を含む、癌を治療または予防するための方法が提供される。1つの態様において、化学療法剤は、癌の治療がそれを用いて難治性であることが見い出されていないものである。別の態様において、化学療法剤は、癌の治療がそれを用いて難治性であることが見い出されているものである。共役化合物または薬物化合物は、癌のための治療として外科手術もまた受けている患者に投与することができる。
【０２２３】
1つの態様において、治療のさらなる方法は放射線治療である。
【０２２４】
特定の態様において、共役化合物は、化学療法剤または放射線治療と同時に投与される。別の特定の態様において、化学療法剤または放射線治療は、共役化合物の投与の前またはその後に投与され、1つの局面において、共役化合物の投与の前またはその後、少なくとも1時間、5時間、12時間、1日、1週間、1ヶ月、さらなる局面において、共役化合物の投与の前またはその後、数ヶ月(例えば、3ヶ月まで)に投与される。
【０２２５】
化学療法剤は、一連のセッションにわたって投与することができる。表2に列挙される化学療法剤の任意の1つまたは組み合わせを投与することができる。放射線に関しては、任意の放射線治療プロトコールを、治療される癌の型に依存して使用することができる。例えば、限定としてではなく、x腺照射を投与することができ;特に、高エネルギーメガボルト(1MeVエネルギーよりも大きな照射)を深い腫瘍のために使用することができ、電子ビームおよび常用電圧x線照射を皮膚癌のために使用することができる。γ線を照射する放射性同位元素、例えば、ラジウム、コバルト、および他の元素の放射性同位元素もまた、投与することができる。
【０２２６】
加えて、共役化合物または薬物化合物を用いる癌の治療の方法は、化学療法または放射線治療が毒性が強すぎると判明したかまたはその可能性があり、例えば、治療される被験体にとって、受け入れがたいかまたは耐えられない副作用を生じる場合に、化学療法または放射線治療に対する代替として提供される。治療される動物は、治療が受け入れがたいかまたは耐えられないことが見い出されているか否かに依存して、外科手術、放射線治療、または化学療法などの別の癌治療を用いて、任意に治療することができる。
【０２２７】
共役化合物または薬物化合物はまた、例えば、白血病およびリンパ腫を含むがこれらに限定されない特定の癌の治療のために、インビトロまたはエクスビボ様式で使用することができ、このような治療は、自系幹細胞移植を含む。これは、動物の自系造血幹細胞が収集され、すべての癌細胞を追放する多段階プロセスを含むことができ、次いで、動物の残っている骨髄細胞集団が、高線量の放射線治療を伴って、または伴わずに、高用量の共役化合物または薬物化合物の投与を介して根絶され、そして幹細胞移植物が動物に再注入される。次いで、骨髄機能が回復し、動物が回復する間、支持療法が提供される。
【０２２８】
有効量の共役化合物および抗癌剤である別の治療剤を、その必要がある患者に投与する工程をさらに含む、癌を治療するための方法が開示される。適切な抗癌剤には以下が含まれるがこれらに限定されない:メトトレキサート、タキソール、L-アスパラギナーゼ、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、デカルバジン、プロカルビジン、トポテカン、ナイトロジェンマスタード、サイトキサン(cytoxan)、エトポシド、5-フルオロウラシル、BCNU、イリノテカン、カンプトテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンD、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、パクリタキセル、およびドセタキセル。
【０２２９】
化学療法剤の他の例には以下が含まれる:チオテパおよびサイトキサン(CYTOXAN)(登録商標)シクロホスファミドなどのアルキル化剤;ブスルファン、トレオスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル;ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパなどのアジリジン;アルトレタミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチラメラミン(methylamelamine);TLK286(テルサイタ(TELCYTA(商標)));アセトゲニン(とりわけブラタシン(bullatacin)およびブラタシノン(bullatacinone));デルタ-9-テトラヒドロカンナビノール(ドロナビノール;マリノール(MARINOL)(登録商標));ベータ-ラパコン(lapachone);ラパコール(lapachol);コルヒチン;ベツリン酸;カンプトテシン(合成アナログトポテカン(ハイカムチン(HYCAMTIN)(登録商標))、CPT-11(イリノテカン、カンプトサール(CAMPTOSAR)(登録商標))、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および9-アミノカンプトテシンを含む);ブリオスタチン;カリスタチン(callystatin);CC-1065(そのアドゼレシン(adozelesin)、カーゼレシン(carzelesin)、およびビゼレシン(bizelesin)合成アナログを含む);ポドフィロトキシン;ポドフィロン酸;テニポシド(teniposide);クリプトフィシン(特にクリプトフィシン1およびクリプトフィシン8);ドラスタチン;デュオカルマイシン(duocarmycin)(合成アナログ、KW-2189およびCB1-TM1を含む);エレウテロビン(eleutherobin);パンクラチスタチン(pancratistatin);サルコジクチイン(sarcodictyin);スポンジスタチン(spongistatin);クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキサイド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン(novembichin)、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、およびウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード;デカルバジンなどのトリアジン;カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン(ranimnustine)などのニトロソウレア;エトポシド、テニポシド、トポテカン、9-アミノカンプトテシン、カンプトテシン オリクリスタノール(orcrisnatol)などのエピポドフィリン;クロドロネートなどのビホスホネート;エンジイン抗生物質(例えば、カリチアマイシン(calicheamicin)、とりわけ、カリチアマイシンガンマ1およびカリチアマイシンオメガ1)などの抗生物質)(例えば、Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)を参照されたい)およびアンナマイシン、AD32、アルカルビシン、ダウノルビシン、デキストラゾキサン、DX-52-1、エピルビシン、GPX-100、イダルビシン、KRN5500、メソガリル、ダイネマイシン(dynemicin)Aを含むダイネマイシン、およびエスペラマイシンなどのアントラサイクリン、ネオカルジノスタチン(neocarzinostatin)発色団および関連する発色団タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン(例えば、A2およびB2)、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、デトルビシン、6-ジアゾ-5-オキソ-L-ノルロイシン、アドリアマイシン(ADRIAMYCIN)(登録商標)ドキソルビシン(モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、2-ピロリノ-ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む)、エソルビシン、マーセロマイシン、マイトマイシンCなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チューバーシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシン;ベルテポルフィン(vertoporfin)(BPD-MA)、フタロシアニン、光増感剤Pc4、およびデメトキシ-ヒポクレリン(hypocrellin)A(2BA-2-DMHA)などの光線力学療法剤;ダノプテリン、プテロプテリン、およびトリメトトレキサートなどの葉酸アナログ;フルダラビン、6-メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニンなどのプリンアナログ;アンシタビン、アザシチジン、6-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、シトシンアラビノシド、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタラビン、およびフロクスウリジンなどのピリミジンアナログ;カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、およびテストラクトンなどのアンドロゲン;アミノグルテチミド、ミトタン、およびトリロスタンなどの抗副腎剤;フォリン酸(ロイコボリン)などの葉酸補充物;アセグラトン;アリムタ(ALIMTA)(登録商標)、LY231514ペメトレキセドなどの抗葉酸抗新生物剤、メトトレキサートおよびトリメトレキサートなどのジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤;5-フルオロウラシル(5-FU)およびそのプロドラッグ、例えば、UFT、S-1およびカペシタビン、フロクスウリジン、ドキシフルリジン、およびラチトレキセド(ratitrexed)などの代謝拮抗剤;チミジル酸シンターゼ阻害剤およびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ラチトレキセド(トムデキサーム(TOMUDEXRM)、TDX);ジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼの阻害剤、例えば、エニルウラシル(eniluracil);アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;アムサクリン;ベストラブシル;ビサントレーン(bisantrene);エダトラキサート(edatraxate);デフォファミン(defofamine);デメコルシン;ジアジコン;エルフォニチン(elfonithine);酢酸エリプチニウム;エポチロン;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシウレア;レンチナン;ロニダイニン;メイタンシンおよびアンサミトシンなどのメイタンシノイド;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダンモール;ニトラエリン;ペントスタチン;フェナメット;ピラルビシン;ロサキサントロン;2-エチルヒドラジド;プロカルバジン;PSK(登録商標)ポリサッカリド複合体(JHS Natural Products, Eugene, OR);ラゾキサン;リゾキシン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テヌアゾン酸;トリアジコン;2,2',2''-トリクロロトリエチルアミン;トリコテシン(とりわけ、T-2トキシン、ベラクリンA、ロリジンA、およびアングイジン(anguidine));ウレタン;ビンデシン(エルジシン(ELDISINE)(登録商標)、フィデシン(FILDESIN)(登録商標));デカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン;アラビノシド(「Ara-C」);シクロホスファミド;チオテパ;タキソイドおよびタキサン、例えば、タキソール(TAXOL)(登録商標)パクリタキセル(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、アブラキサンTM(ABRAXANETM)クレモホールなし、アルブミン操作したパクリタキセルのナノ粒子製剤(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)、およびタキソテレ(TAXOTERE)(登録商標)ドセタキセル(Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France);クロランブシル(chloranbucil);ゲムシダビン(ゲムザー(GEMZAR)(登録商標));6-チオグアニン;メルカプトプリン;白金;シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチンなどの白金アナログまたは白金ベースのアナログ;ビンブラスチン(ベルバン(VELBAN)(登録商標));エトポシド(VP-16);イホスファミド;ミトキサントロン;ビンクリスチン(オンコビン(ONCOVIN)(登録商標));ビンカアルカロイド;ビノレルビン(ナベルビン(NAVELBINE)(登録商標));ベルケード(velcade);レブリミド(revlimid);サリドマイド;IMiD3;ロバスタチン;ベラパミル;タプシガルジン;1-メチル-4-フェニルピリジニウム;スタウロスポリンなどの細胞周期阻害剤;ノバントロン;エダトレキサート;ダウノルビシン;ミトキサントロン(mtoxantrone);アミノプテリン;ゼローダ;イバンドロネート(ibandronate);トポイソメラーゼ阻害剤RFS2000;ジフルオロメチルオルニチン(difluorometlhylornithine)(DMFO);ビタミンD3アナログ、例えば、EB 1089、CB 1093、およびKH 1060;レチノイン酸などのレチノイド;上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体;ならびにシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの組み合わせ治療の略号であるCHOP、ならびに5-FUおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン(エロキサチンTM(ELOXATINTM))を用いる治療レジメンの略号であるFOLFOXなどの、上記の2つ以上の組み合わせ。
【０２３０】
抗ホルモン剤は、腫瘍に対するホルモンの作用を調節または阻害するように作用し、これは、例えば以下を含む、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター(SERM)など:タモキシフェン(ノルバデックス(NOLVADEX)(登録商標)タモキシフェンを含む)、ラロキシフェン、メガスロトール、ドロロキシフェン、4-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストン、およびファレストン(FARESTON)(登録商標)トレミフェン;副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、4(5)-イミダゾール、アミノグルテチミド、メガース(MEGASE)(登録商標)酢酸メガストロール、アロマシン(AROMASIN)(登録商標)エキセメスタン、ホルメスタニー(formestanie)、ファドロゾール、リビソール(RIVISOR)(登録商標)ボロゾール、フェマーラ(FEMARA)(登録商標)レトロゾール、およびアリミデックス(ARIMIDEX)(登録商標)アナストロゾールなど;ならびに、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤;ならびにトロキサシタビン(1,3-ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ);アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子、例えば、PKC-アルファ、Raf、H-Ras、および上皮増殖因子受容体(EGF-R)などの発現を阻害するもの;遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、アロベクチン(ALLOVECTIN)(登録商標)ワクチン、ロイベクチン(LEUVENCTIN)(登録商標)ワクチン、およびバキシド(VAXID)(登録商標)ワクチン;プロロイキン(登録商標)rIL-2;ルートテカン(LURTOTECAN)(登録商標)トポイソメラーゼ1阻害剤;アバレリックス(ABARELIX)(登録商標)rmRH;ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体。
【０２３１】
癌の治療のために利用可能である抗体の例には以下が含まれるがこれらに限定されない:ヒト化抗HER2モノクローナル抗体、ハーセプチン(登録商標)(トラスツズマブ;Genentech);非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療のためのキメラ抗CD20モノクローナル抗体であるリツキサン(登録商標)(リツキシマブ;Genentech);卵巣癌の治療のためのマウス抗体であるオバレックス(OvaRex)(AltaRex Corporation, MA);結腸直腸癌の治療のためのマウスIgG2a抗体であるパノレックス(Panorex)(Glaxo Wellcome, NC);頭頚部癌などの上皮増殖因子陽性癌の治療のための抗EGFR IgGキメラ抗体であるセツキシマブ エルビタックス(Cetuximab Erbitux)(Imclone Systems Inc., NY);肉腫の治療のためのヒト化抗体であるビタキシン(Vitaxin)(MedImmune, Inc., MD);慢性リンパ性白血病(CLL)の治療のためのヒト化IgG1抗体であるカムパス(Campath)I/H(Leukosite, MA);急性骨髄性白血病(AML)の治療のためのヒト化抗CD33 IgG抗体であるスマート(Smart)MI95(Protein Design Labs, Inc., CA);非ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗CD22 IgG抗体であるリンホシド(LymphoCide)(Immunomedics, Inc., NJ);非ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗HLA-DR抗体であるスマート(Smart)ID10 (Protein Design Labs, Inc., CA);非ホジキンリンパ腫の治療のための放射性標識マウス抗HLA-Dr10抗体であるオンコリム(Oncolym)(Techniclone, Inc., CA);ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗CD2 mAbであるアロミュン(Allomune)(BioTransplant, CA);肺癌および結腸直腸癌の治療のための抗VEGFヒト化抗体であるアバスチン(Avastin)(Genentech, Inc., CA);非ホジキンリンパ腫の治療のための抗CD22抗体であるエプラツザマブ(Epratuzamab)(Immunomedics, Inc., NJ and Amgen, CA);および結腸直腸癌の治療のためのヒト化抗CEA抗体であるセアサイド(CEAcide)(Immunomedics, NJ)。
【０２３２】
癌の治療において有用である他の抗体には、以下の抗原(例示的な癌が括弧内に示される)に対する抗体が含まれるがこれらに限定されない:CA125(卵巣)、CA15-3(癌腫)、CA19-9(癌腫)、L6(癌腫)、Lewis Y(癌腫)、Lewis X (癌腫)、アルファフェトプロテイン(癌腫)、CA 242(結腸直腸癌)、胎盤アルカリホスファターゼ(癌腫)、前立腺特異的膜抗原(前立腺)、前立腺酸性ホスファターゼ(前立腺)、上皮増殖因子(癌腫)、MAGE-1(癌腫)、MAGE-2(癌腫)、MAGE-3(癌腫)、MAGE-4(癌腫)、抗トランスフェリン受容体(癌腫)、p97(黒色腫)、MUC1-KLH(乳癌)、CEA(結腸直腸癌)、gp100(黒色腫)、MART1(黒色腫)、前立腺特異的抗原(PSA)(前立腺)、IL-2受容体(T細胞白血病およびリンパ腫)、CD20(非ホジキンリンパ腫)、CD52(白血病)、CD33(白血病)、CD22(リンパ腫)、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン(癌腫)、CD38(多発性骨髄腫)、CD40(リンパ腫)、ムチン(癌腫)、P21(癌腫)、MPG(黒色腫)、およびNeuオンコジーン産物(癌腫)。いくつかの特異的な有用な抗体には以下が含まれるがこれらに限定されない:BR96 mAb(Trail et al., 1993, Science 261 :212-215)、BR64(Trail et al., 1997, Cancer Research 57:100-105)、CD40抗原に対するmAb、例えば、S2C6 mAb(Francisco et al., 2000, Cancer Res. 60:3225-3231)ならびにそのキメラおよびヒト化改変体、cD33抗原に対するmab;EphA2抗原に対するmab;CD70抗原に対するmAb、例えば、1F6 mAbおよび2F2 mAbならびにそのヒト化改変体、ならびにAC10などのCD30抗原に対するmAb(Bowen et al., 1993, J. Immunol. 151 :5896-5906; Wahl et al., 2002, Cancer Res. 62(13):3736-42)ならびにそのキメラおよびヒト化改変体。腫瘍関連抗原に結合する多くの他の内在化抗体を使用することができ、これらは概説されている(例えば、Franke et al., 2000, Cancer Biother. Radiopharm. 15:459 76; Murray, 2000, Semin. Oncol. 27:64 70; Breitling et al., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998を参照されたい)。
【０２３３】
本発明の共役化合物または薬物化合物は、自己免疫疾患を生じる細胞を殺傷し、もしくはその増殖を阻害するために、または自己免疫疾患を治療するために有用である。従って、この薬物化合物または薬物化合物は、患者における自己免疫疾患の治療のための種々の設定において使用することができる。この共役化合物は、標的細胞に薬物を送達するために使用することができる。理論によって束縛されることはないが、1つの態様において、共役化合物は、標的細胞の表面上の抗原に結合し、この共役化合物は、受容体媒介性エンドサイトーシスを通して、標的細胞の内部に取り込まれることができる。一旦細胞の内部に入ると、リンカー単位中の1つまたは複数の特異的ペプチド配列が、酵素的または加水分解的に切断され、薬物、薬物-リンカー化合物、または薬物-リンカーフラグメントなどの細胞内代謝物の放出を生じる。次いで、放出された細胞内代謝物は、細胞質中で自由に移動し、細胞毒性または細胞増殖抑制性活性を誘導する。1つの代替的な態様において、薬物は、標的細胞の外側で共役化合物から切断され、続いて、薬物は細胞に浸透する。
【０２３４】
1つの態様において、リガンド単位は、自己免疫抗原に結合する。1つの局面において、この抗原は、自己免疫状態に関与する細胞の表面上にある。
【０２３５】
別の態様において、リガンド単位は、細胞の表面上にある自己免疫抗原に結合する。
【０２３６】
1つの態様において、リガンドは、自己免疫疾患状態と関連する活性化リンパ球に結合する。
【０２３７】
さらなる態様において、共役化合物および薬物化合物は、特定の自己免疫疾患と関連する自己免疫抗体を産生する細胞を殺傷するか、またはその増殖を阻害する。
【０２３８】
共役化合物を用いて治療することができる特定の型の自己免疫疾患には以下が含まれるがこれらに限定されない:Th2リンパ球関連障害(例えば、アトピー性皮膚炎、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身性硬化症、および移植片対宿主病);Th1リンパ球関連障害(例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群(Sjorgren's syndrome)、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変症、ヴェグナー肉芽腫症、および結核);活性化Bリンパ球関連障害(例えば、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、関節リウマチ、およびI型糖尿病);および表2に開示されるもの。
【０２３９】
（表２）
活動性慢性肝炎
アジソン病
アレルギー性肺胞炎
アレルギー反応
アレルギー性鼻炎
アルポート(Alport's)症候群
アナフィラキシー(Anaphlaxis)
強直性脊椎炎
抗リン脂質症候群
関節炎
回虫症
アスペルギルス症
アトピー性アレルギー
アトピー性皮膚炎
アトピー性鼻炎
ベーチェット病
鳥飼育者肺
気管支喘息
カプラン症候群
心筋症
セリアック病
シャーガス病
慢性糸球体腎炎
コーガン症候群
寒冷凝集素症
先天性風疹感染
CREST症候群
クローン病
クリオグロブリン血症
クッシング症候群
皮膚筋炎
円板状狼瘡
ドレスラー症候群
イートン-ランバート症候群
エコーウイルス感染
脳脊髄炎
内分泌性眼障害
エプスタイン-バーウイルス感染
ウマ細胞性肺気腫
エリテマトーデス
エバンズ症候群
フェルティ症候群
線維筋痛
フックス毛様体炎
胃萎縮症
消化管アレルギー
巨細胞性動脈炎
糸球体腎炎
グッドパスチャー症候群
移植片対宿主病
グレーブス病
ギラン-バレー病
橋本甲状腺炎
溶血性貧血
ヘーノホ-シェーンライン紫斑病
特発性副腎萎縮
特発性肺線維症
IgA腎症
炎症性腸疾患
インスリン依存性真性糖尿病
若年性関節炎
若年型糖尿病(I型)
ランバート-イートン症候群
蹄葉炎
扁平苔癬
ルポイド肝炎
狼瘡
リンパ球減少症
メニエール病
混合結合組織病
多発性硬化症
重症筋無力症
悪性貧血
多内分泌腺症候群
初老期痴呆
原発性無ガンマグロブリン血症
原発性胆汁性肝硬変症
乾癬
乾癬性関節炎
レーノー現象
反復流産
ライター症候群
リウマチ熱
関節リウマチ
サムプター症候群
住血吸虫症
シュミット症候群
強皮症
シャルマン症候群
シェーグレン(Sjorgen's)症候群
スティフ-マン症候群
交感性眼炎
全身性エリテマトーデス(Systemic Lupus Erythematosis)
高安動脈炎
側頭動脈炎
甲状腺炎
血小板減少症
甲状腺中毒症
中毒性表皮壊死症
B型インスリン抵抗性
I型真性糖尿病
潰瘍性大腸炎
ブドウ膜炎
白斑
ヴァルデンストレームマクログロブリン血症
ヴェーゲナー肉芽腫症
【０２４０】
有効量の共役化合物または薬物化合物および自己免疫疾患の治療のための公知である別の治療剤を、その必要がある患者に投与する工程を含む、自己免疫疾患を治療するための方法もまた開示される。1つの態様において、抗自己免疫疾患剤には、表3に列挙される薬剤が含まれるがこれらに限定されない。
【０２４１】
（表３）
シクロスポリン
シクロスポリンA
ミコフェニレート モフェチル(mycophenylate mofetil)
シロリムス
タクロリムス
エナナーセプト(enanercept)
プレドニゾン
アザチオプリン
メトトレキサート シクロホスファミド
プレドニゾン
アミノカプロン酸
クロロキン
ヒドロキシクロロキン
ヒドロコルチゾン
デキサメタゾン
クロラムブシル
DHEA
ダナゾール
ブロモクリプチン
メロキシカム
インフリキシマブ
【０２４２】
本発明の共役化合物は、感染性疾患を生じる細胞を殺傷し、もしくはその増殖を阻害するために、または感染性疾患を治療するために有用である。従って、この薬物化合物は、患者における感染性疾患の治療のための種々の設定において使用することができる。この共役化合物は、標的細胞に薬物を送達するために使用することができる。1つの態様において、リガンド単位は、感染性疾患細胞に結合する。
【０２４３】
1つの態様において、この共役化合物は、特定の感染性疾患を生じる細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害する。
【０２４４】
共役化合物および薬物化合物を用いて治療することができる特定の型の感染性疾患には、表4に開示されるものが含まれるがこれらに限定されない。
【０２４５】
（表４）
細菌性疾患:
ジフテリア
百日咳
潜在性菌血症
尿路感染症
胃腸炎
蜂巣炎
喉頭蓋炎
気管炎
アデノイド肥大
咽後膿瘍
膿痂疹
膿瘡
肺炎心内膜炎
敗血症性関節炎
肺炎球菌
腹膜炎
菌血症(bactermia)
髄膜炎
急性化膿性髄膜炎
尿道炎
子宮頚管炎
直腸炎
咽頭炎
卵管炎
精巣上体炎
淋病
梅毒
リステリア症
炭疽
ノカルジア症
サルモネラ
腸チフス
赤痢
結膜炎
副鼻腔炎
ブルセラ症
野兎病(Tullaremia)
コレラ
腺ペスト
破傷風
壊死性腸炎
放線菌症
混合型嫌気性細菌感染
梅毒
回帰熱
レプトスピラ症
ライム病
鼠咬症
結核
リンパ節炎
ハンセン病
クラミジア感染症
クラミジア肺炎
トラコーマ
封入体結膜炎
全身性真菌疾患:
ヒストプラスマ症(Histoplamosis)
コクシジオイデス症
ブラストミセス症
スポロトリクム症
クリプトコッカス症
全身性カンジダ症
アスペルギルス症
ムコール菌症
足菌腫
クロモミコーシス
リケッチア症:
発疹チフス
ロッキー山発疹熱
エールリヒア症
東部ダニ媒介リケッチア症
リケッチア痘
Q熱
バルトネラ症
寄生虫症:
マラリア
バベシア症
アフリカ睡眠病
シャーガス病
リーシュマニア症
ダムダム熱
トキソプラズマ症
髄膜脳炎
角膜炎
アメーバ症
ランブル鞭毛虫症
クリプトスポリジウム症
イソスポーラ症
シクロスポリン症(cyclosporiasis)
微胞子虫症
回虫症
鞭虫感染
鉤虫感染
線虫感染
眼幼虫移行症
旋毛虫病
糸状虫症
リンパ管フィラリア症
ロア糸状虫症
河川盲目症
イヌ糸状虫感染
住血吸虫症
水泳者かゆみ症
東洋肺吸虫症
東洋肝吸虫
肝蛭症
肥大吸虫症
オピストルキス症
条虫感染
包虫症
多包虫症
ウイルス性疾患:
麻疹
亜急性硬化性全脳炎
感冒
流行性耳下腺炎
風疹
バラ疹
第5病
水痘
呼吸器合胞体ウイルス感染
クループ
細気管支炎
感染性単核球症
ポリオ
ヘルパンギナ
手足口病
ボーンホールム病
陰部ヘルペス
性器いぼ
無菌性髄膜炎
心筋炎
心膜炎
胃腸炎
後天性免疫不全症候群(AIDS)
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)
ライ症候群
川崎症候群
インフルエンザ
気管支炎
ウイルス「ウォーキング」肺炎
急性発熱性呼吸器疾患
急性咽頭結膜熱
流行性角結膜炎
単純ヘルペスウイルス1(HSV-1)
単純ヘルペスウイルス2(HSV-2)
帯状ヘルペス
巨細胞封入体症
狂犬病
進行性多病巣性白質脳障害
クールー
致死性家族性不眠症
クロイツフェルト-ヤコブ病
ゲルストマン-シュトロイスラー-シャインカー病
熱帯性痙性不全対麻痺症
西部ウマ脳炎
カリフォルニア脳炎
セントルイス脳炎
黄熱病
デング熱
リンパ球性脈絡髄膜炎
ラッサ熱
出血熱
ハンタウイルス肺症候群
マールブルグウイルス感染
エボラウイルス感染
天然痘
【０２４６】
共役化合物および抗感染性疾患剤である別の治療剤をその必要がある患者に投与する工程を含む、感染性疾患を治療するための方法が開示される。1つの態様において、抗感染性疾患剤は、表5に列挙される薬剤であるがこれらに限定されない。
【０２４７】
（表５）
β-ラクタム系抗生物質:
ペニシリンG
ペニシリンV
クロキサシリン
ジクロキサシリン
メチシリン
ナフシリン
オキサシリン
アンピシリン
アモキシシリン
バカンピシリン
アズロシリン
カルベニシリン
メズロシリン
ピペラシリン
チカルシリン
アミノグリコシド:
アミカシン
ゲンタマイシン
カナマイシン
ネオマイシン
ネチルマイシン
ストレプトマイシン
トブラマイシン
マクロライド:
アジスロマイシン
クラリスロマイシン
エリスロマイシン
リンコマイシン
クリンダマイシン
テトラサイクリン:
デメクロサイクリン
ドキシサイクリン
ミノサイクリン
オキシテトラサイクリン
テトラサイクリン
キノロン:
シノキサシン
ナリジクス酸
フルオロキノロン:
シプロフロキサシン
エノキサシン
グレパフロキサシン(Grepafloxacin)
レポフロキサシン
ロメフロキサシン
ノルフロキサシン
オフロキサシン
スパルフロキサシン
トロバフロキシシン(Trovafloxicin)
ポリペプチド:
バシトラシン
コリスチン
ポリミキシンB
スルホンアミド:
スルフイソキサゾール
スルファメトキサゾール
スルファジアジン
スルファメチゾール
スルファセタミド
その他の抗菌剤:
トリメトプリム
スルファメタゾール
クロラムフェニコール
バンコマイシン
メトロニダゾール
キヌプリスチン
ダルフォプリスチン
リファンピン
スペクチノマイシン
ニトロフラントイン
抗ウイルス剤:
一般的な抗ウイルス剤:
イドクスウリジン
ビダラビン
トリフルリジン
アシクロビル
ファンシシクロビル(famcicyclovir)
ペンシシクロビル(pencicyclovir)
バラシクロビル
ガンシクロビル
フォスカーネット
リバビリン
アマンタジン
リマンタジン
シドフォビル(cidofovir)
アンチセンスオリゴヌクレオチド
免疫グロブリン
インターフェロン
HIV感染のための薬物:
テノホビル
エントリシタビン(emtricitabine)
ジドブジン
ジダノシン
ザルシタビン
スタブジン
ラミブジン
ネビラピン
デラビルジン
サキナビル
リトナビル
インジナビル
ネルフィナビル
【０２４８】
本発明は、以下の実施例においてさらに説明され、これは本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０２４９】
実施例1
4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu(化合物100)の調製
2008519863.tif 000056
無水DMF(5mL)中のVal-Dil-OtBu(1.17 g、2.7 mmol)およびFmoc-4-Abz-OHの室温懸濁液に、DEPC(0.82 mL、5.4 mmol)およびDIEA(1.88 mL、10.8 mmol)を加えた。HPLC分析は、1時間後に反応が完了したことを示した。この反応混合液を、酢酸エチル(350 mL)で希釈し、0.1 M HCl(450 mL×2)およびH2O(450 mL)で連続的に抽出した。有機相を真空中で濃縮し、シリカゲルの小さな栓を通して濾過した。Fmoc-4-Abz-Val-Dil-OtBuを、Phenomenex C12 Synergi Max-RP 80Åカラム(250×50.00 mm)を使用して、調製用RP- HPLCによって単離した。溶離液:20分間にわたる10%〜90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)の直線勾配、次いで、さらに30分間の同一組成の90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)。全体で1.39 gの純粋なFmoc-4-Abz-Val-Dil-OtBu(1.99 mmol、74%収率)を得た。
【０２５０】
無水CH2Cl2(40 mL)中のFmoc-4-Abz-Val-Dil-OtBu(1.39 g、1.99 mmol)の室温懸濁液に、TFA(10 mL)を加えた。HPLC分析は、3.5時間後に反応が完了したことを示した。揮発性の有機物を真空中でエバポレートした。このようにして調製したFmoc-4-Abz-Val-Dilを、精製なしで次の段階で使用した。
【０２５１】
フェニルアラニンt-ブチルエステルHCl塩(868 mg、3 mmol)、N-Boc-ドラプロイン(Dolaproine)(668 mg、1等量)、DEPC(820μl、1.5等量)、およびDIEA(1.2 mL)をジクロロメタン(3 mL)で希釈した。室温(約28℃)にて2時間後、この反応混合液をジクロロメタン(20 mL)で希釈し、飽和水性NaHCO3(水溶液)(2×10 mL)、飽和NaCl水溶液(2×10 mL)で連続的に洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られる残渣を酢酸エチルに再懸濁し、酢酸エチル中のフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。該当する画分を合わせ、濃縮して、ジペプチドを白色固体として得た:684 mg (46%収率)。ES-MS m/z 491.3 [M+H]+。
【０２５２】
t-ブチルエステルの存在下での選択的Boc切断のために、上記のジペプチド(500 mg、1.28 mmol)をジオキサン(2 mL)で希釈した。4M HCl/ジオキサン(960μL、3等量)を加え、この反応混合液を室温で一晩攪拌した。最小限の量のt-ブチルエステル切断を伴って、ほぼ完全なBoc脱保護をRP-HPLCによって観察した。この混合液をアイスバス上で冷却し、トリエチルアミン(500 μL)を加えた。10分後、この混合液を冷却バスから取り出し、ジクロロメタン(20 mL)で希釈し、飽和NaHCO3水溶液(2×10 mL)、飽和NaCl水溶液(2×10 mL)で連続的に洗浄した。有機層を濃縮して、黄色泡状物を得た:287 mg(57%)。この中間体を、さらなる精製なしで使用した。
【０２５３】
無水CH2Cl2(20 mL)中のFmoc-4-Abz-Val-Dil(0.96 g、1.49 mmol)およびDap-Phe-OtBu(0.58 g、1.49 mmol)の室温懸濁液に、DEPC(0.34 mL、2.98 mmol)およびDIEA(1.04 mL、5.96 mmol)を加えた。この反応混合液を84時間攪拌させ、次いで揮発性有機物を真空中でエバポレートし、粗残渣を酢酸エチル(200 mL)で希釈し、0.1 M HCl(300 mL×2)で抽出した。有機相を真空中で濃縮し、粗残渣を、0-1-2% MeOH/CH2Cl2段階勾配を使用して遠心TLCによって精製し、0.73 g(0.72 mmol、48%収率)のFmoc-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBuを得た。ES-MS m/z 1016.39 [M+H]+。
【０２５４】
Fmoc-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu(700 mg、0.689 mmol)を無水CH2Cl2(10 mL)に懸濁し、これにジエチルアミン(DEA、5 mL)を加えた。この混合液を〜16時間攪拌した。揮発性有機物を真空中でエバポレートした。粗生成物を、遠心TLC(0〜5% 勾配:MeOH/CH2Cl2)によって部分精製し、fmoc関連化合物を除去した。豊富化された生成物を、Phenomenex C12 Synergi Max-RP 80Åカラム(250×50.00 mm)を使用して、調製用RP-HPLCによって精製した。溶離液:20分間にわたる10%〜90% MeCN/0.1% ギ酸(水溶液)の直線勾配、次いで、さらに30分間の同一組成の90% MeCN/0.1% ギ酸(水溶液)。全体で0.35 gの純粋な4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu(化合物100、0.44 mmol、64 %収率)を得た。ES-MS m/z 794.38 [M+H]+; 816.73 [M+Na]+。
【０２５５】
実施例2
MC-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu(化合物101)の調製
2008519863.tif 000057
無水CH2Cl2(10 mL)中の化合物100(150 mg、0.189 mmol)およびマレイミドカプロン酸(MC-OH、44 mg、0.208 mmol、Molecular Biosciences, Inc., Boulder CO)の室温懸濁液に、HATU(101 mg、0.265 mmol、1.4等量)およびDIEA(0.13 mL、0.756 mmol)を加えた。16時間後、反応は完了していなかったので、さらなる試薬(0.567 mmolのMC-OH;1.7 mmolのHATU;および2.84 mmolのDIEA)を、次の72時間にわたって加えた。生成物を、Phenomenex C12 Synergi Max-RP 80Åカラム(250×21.20 mm)を使用して、調製用RP-HPLCによって単離した。溶離液:20分間にわたる10%〜90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)の直線勾配、次いで、さらに30分間の同一組成の90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)。MC-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBuを42%収率(78 mg、0.079 mmol)で得た。ES-MS m/z 987.19 [M+H]+; 985.26 [M-H]-。
【０２５６】
実施例3
MC-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe(化合物102)の調製
2008519863.tif 000058
無水CH2Cl2(4 mL)中の化合物101(70 mg、0.071 mmol)の室温懸濁液に、TFA(2 mL)を加えた。2時間後、揮発性有機物を真空中でエバポレートし、紫白色固体(66 mg、0.071 mmol)を生じ、これを精製なしで使用した。ES-MS m/z 931.26 [M+H]+; 929.33 [M-H]-。
【０２５７】
実施例4
4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe(化合物103)の調製
2008519863.tif 000059
アセトニトリル(20 mL)中の化合物100(50 mg、0.063 mmol)の室温懸濁液に、HCl(ジオキサン中4 M、5 mL)を加えた。この反応物を72時間攪拌し、次いで、揮発性有機物を真空中でエバポレートした。生成物をHCl塩として得た(48 mg、0.063 mmol)。ES-MS m/z 738.37 [M+H]+; 736.50 [M-H]-。
【０２５８】
実施例5
MC-Val-Cit(化合物104)の調製
2008519863.tif 000060
無水DMF(10 mL)中のFmoc-Val-Cit(2.18 g、4.4 mmol、Firestoneらへの米国特許第6,214,345号)の室温溶液にDEA(10 mL)を加えた。この反応混合液を、大気温度にて20分間攪拌した。この反応溶液を、濃厚な油状物まで真空中で濃縮し、次いで、ジエチルエーテル(〜500 mL)を含むフラスコに滴下して加え、粗生成物を沈殿させた。白色沈殿を濾過によって収集し、酢酸エチル(2×250 mL)で洗浄した。真空中での物質の乾燥後、これをDMSO(30 mL)に溶解し、マレイミドカプロン酸-N-ヒドロキシスクシンイミド(hydrohysuccinimide)エステル(1.42 g、1.05等量、Molecular Biosciences, Inc., Boulder CO)を加え、続いてDIEA(0.843 mL、1.1等量)の添加を行った。この反応混合液を〜6時間攪拌し、DMSO溶液を真空中で〜2mLの体積まで濃縮した。生成物を、半調製用HPLC系(固定相:C12、移動相:0.1% TFA/H2O/MeCN)で精製して、1.19 g(2.55 mmol、58%収率)を得た。ES-MS m/z 468.23 [M+H]+。
2008519863.tif 000061
【０２５９】
実施例6
MC-Val-Cit-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu(化合物105)の調製
2008519863.tif 000062
4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu(化合物100、97 mg、0.122 mmol)およびMC-Val-Cit-OH(化合物104、69 mg、0.146 mmol)を、無水DMF(3 mL)中に懸濁した。HATU(70 mg、0.183 mmol、1.5等量)を加え、続いてピリジン(0.04 mL、0.488 mmol)を加えた。室温にて16時間後、反応は完了していなかったので、さらなる試薬(0.024 mmolのMC-Val-Cit-OH;および0.024 mmolのHATU)を加え、この反応混合液をさらに16時間攪拌した。この溶液をCH2Cl2(60 mL)で希釈し、0.1 M HCl(水溶液)(2×100 mL)で洗浄した。有機相を真空中で濃縮し、粗残渣を、0-5-10% MeOH/CH2Cl2段階勾配を使用してラジアルクロマトグラフィー(Chromatotron)によって精製し、80 mg (0.064 mmol、53%収率)の化合物105を得た。ES-MS m/z 1243.26 [M+H]+; 1265.13 [M+Na]+; 1241.35 [M-H]-。
【０２６０】
実施例7
MC-Val-Cit-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe(化合物106)の調製
2008519863.tif 000063
化合物105(80 mg、0.064 mmol)を、無水CH2Cl2(5 mL)およびTFA(5 mL)に懸濁した。この反応混合液を室温で3時間攪拌した。揮発性有機物を真空中でエバポレートし、生成物を、Phenomenex C12 Synergi Max-RP 80Åカラム(250×21.20 mm)を使用して、調製用RP-HPLCによって単離した。溶離液:8分間にわたる10%〜90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)の直線勾配、次いで、さらに12分間の同一組成の90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)。生成物を白色固体として得た(69 mg、0.058 mmol、91 %収率)。ES-MS m/z 1187.41 [M+H]+; 1185.63 [M-H]-。
【０２６１】
実施例8
4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OMe(化合物107)の調製
2008519863.tif 000064
無水CH2Cl2(100 mL)中のBoc-Dap-OH(6.31 g、22 mmol)の室温懸濁液に、HCl×Phe-OMe(5.2 g、24.2 mmol)、DEPC(6.7 mL、44 mmol)、およびDIEA(11.5 mL、65.9 mmol)を加えた。この反応混合液を16時間攪拌し、酢酸エチル(500 mL)で希釈し、そして0.1 M HCl(2×300 mL)、H2O(300 mL)、飽和NaHCO3(2×300 mL)およびH2O(300 mL)で連続的に洗浄した。有機層を無水MgSO4上で乾燥させ、濾過し、そして真空中で濃縮した。この粗油状物を、20〜100%酢酸エチル/ヘキサン勾配を使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。Boc-Dap-Phe-OMeを、白色泡状物として得た(8.85 g、19.7 mmol、90%収率)。
【０２６２】
無水CH2Cl2(10 mL)中のCbz-Val-Dil-OH (3.35 g、7.68 mmol)およびBoc-Dap-Phe-OMe(3.44 g、7.68 mmol)の懸濁液にTFA(10 mL)を加えた。この反応混合液を室温で2時間攪拌させた。この反応混合液をトルエンおよびキシレン(1:1、50 mL)で希釈し、すべての揮発性有機物を真空中でエバポレートした。粗残渣を無水CH2Cl2で希釈し、続いてDIEA(5.35 mL、30.7 mmol)およびDEPC(1.75 mL、11.5 mmol)の添加を行った。この混合液を室温で16時間攪拌し、揮発性有機物を真空中で除去し、粗残渣を酢酸エチル(250 mL)で希釈した。この粗溶液を、0.1 M HCl水溶液(2×300 mL)、H2O(300 mL)、飽和NaHCO3水溶液(2×300 mL)、およびH2O(300 mL)で連続的に洗浄した。有機層を無水MgSO4上で乾燥させ、濾過し、そして真空中で濃縮した。この粗油状物を、20〜100%酢酸エチル/ヘキサン勾配を使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。Cbz-Val-Dil-Dap-Phe-OMeを、明黄色泡状物として得て(3.5 g、4.56 mmol、59%収率)、以下の段階において直接的に使用した。
【０２６３】
Cbz-Val-Dil-Dap-Phe-OMe(3.5Og、4.56 mmol)を無水エタノール(100 mL)中に溶解し、これに10%パラジウム/炭素(〜1 g)を加えた。フラスコ中の空気を水素ガスで置換し、この室温混合液を16時間攪拌させた。次いで、この混合液をセライト(メタノールで前洗浄したもの)を通して濾過し、真空中で濃縮して、白色泡状物を得た(2.81 g、4.44 mmol、97%収率)。ES-MS m/z 633.47 [M+H]+。
【０２６４】
無水CH2Cl2(2 mL)中のVal-Dil-Dap-Phe-OMe(59 mg、0.093 mmol)の懸濁液に、Boc-4-Abz-OH(24 mg、0.103 mmol)、DEPC(0.028 ml、0.186 mmol)、およびDIEA(0.057 mL、0.326 mmol)を加えた。この反応物を室温で16時間反応させた。生成物をラジアルクロマトグラフィー(Chromatotron、0〜5%勾配:MeOH/CH2Cl2)によって精製した。ES-MS m/z 852.56 [M+H]+; 874.54 [M+Na]+; 850.66 [M-H]-。
【０２６５】
Boc-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OMeを無水CH2Cl2(2 mL)で希釈した。ジオキサン中の4 M HCl(1 mL)を加え、反応物を3時間攪拌した。揮発性有機物を真空中でエバポレートし、残渣をラジアルクロマトグラフィー(Chromatotron、0〜5%勾配:MeOH/CH2Cl2)によって精製した。4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OMe(化合物107)を白色固体として単離した(31 mg、0.0393 mmol, 42%収率)。ES-MS m/z 752.52 [M+H]+; 774.49 [M+Na]+; 750.63 [M-H]-。
【０２６６】
実施例9
MC-Val-Cit-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OMe(化合物108)の調製
2008519863.tif 000065
4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OMe(化合物107、31 mg、0.039 mmol)およびMC-Val-Cit-OH(18 mg、0.039 mmol)を無水DMF(0.5 mL)に懸濁した。 HATU(18 mg、0.047 mmol、1.2等量)を加え、続いてピリジン(0.01 mL、0.12 mmol)およびDIEA(0.007 mL、0.039 mmol)を加えた。16時間後、この反応混合液を真空中で濃縮し、残渣を最初にラジアルクロマトグラフィー(Chromatotron、0-5-10% MeOH/CH2Cl2段階勾配)によって、次いで、Phenomenex C12 Synergi Max-RP 80Åカラム(250×21.20 mm)を使用して、調製用RP-HPLCによって精製した。溶離液:8分間にわたる10%〜90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)の直線勾配、次いで、さらに12分間の同一組成の90% MeCN/0.05% TFA(水溶液)。MC-Val-Cit-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OMe(化合物108)をガラス様固体として得た(1.34 mg、0.001 mmol、2.8%収率)。ES-MS m/z 1201.46 [M+H]+; 1223.43 [M+Na]+; 1199.55 [M-H]-。
【０２６７】
実施例10
3-Abz-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu(化合物109)の調製
2008519863.tif 000066
化合物109は、Fmoc-3-Abz-OHを使用して、実施例1に記載されるのと同様に調製した。ES-MS m/z 794.38 [M+H]+。
【０２６８】
実施例11
3-Abz-Val-Dil-Dap-Phe(化合物110)の調製
2008519863.tif 000067
化合物110は、実施例4に記載されるのと同様に、化合物109から調製した。ES-MS m/z 738.37 [M+H]+。
【０２６９】
実施例12
MC-Val-Cit-4-Abz-Val-Dil-Dap-Phe(化合物111)の調製
2008519863.tif 000068
化合物111は、実施例6および7に記載される手順に従って、化合物109から調製した。ES-MS m/z 1187.41 [M+H]+。
【０２７０】
実施例13
薬物についてのインビトロ細胞毒性データ
表6は、H3396ヒト乳癌およびカルパス-299未分化大細胞リンパ腫の細胞株に対する、アッセイされたMMAF、100、103、107の細胞毒性活性を要約する。化合物100、103、および107の細胞毒性を評価するために、細胞は、アッセイの開始の際に4連で、等級付けられた用量の化合物100、103、および107を含む150μlの培養培地中、ウェルあたり約10,000でまいた。細胞毒性アッセイ法は、通常、96時間実行した。50μlのアラマーブルー(alamarBlue)(商標)色素を、インキュベーションの最後の4〜6時間の間に各ウェルに加えて、培養の最後における生存細胞を評価した。色素の減少は、530nmおよび590nmの励起波長および発光波長をそれぞれ使用して、蛍光スペクトル測定法によって決定した。分析のために、処理された細胞によるアラマーブルー(alamarBlue)(商標)の減少の程度は、未処理の対照細胞のそれと比較した。
【０２７１】
データは、本発明の薬物が、対応するMMAF誘導体と同様の効力を有することを示す。
【０２７２】
（表６）
2008519863.tif 000069
【０２７３】
実施例14
結合体についてのインビトロ細胞毒性データ
表7は、CD30+細胞株カルパス299に対して上記のようにアッセイした、抗体あたり平均4個の薬物を有するcAC10結合体の細胞毒性効果を示す。
【０２７４】
（表７）
2008519863.tif 000070
【０２７５】
実施例15
cAC10-108結合体についてのマウス毒性データ
図1は、マウスにおけるcAC10-108結合体の毒性を示す。マウスの群(3匹/群)を抗体あたり平均4個の薬物を有するcAC10-Val-Cit-PABC-MMAFおよびcAC10-108の100 mg/kg抗体成分で処理した。図に示されるように、cAC10-108はマウスにおいて毒性はほとんどなかった。
【０２７６】
実施例16
cAC10-108結合体についてのインビボ効力データ
図2は、SCIDマウスにおける、抗体あたり平均4個の薬物を有するcAC10結合体の効力を示す。サイズが平均約100mm3の皮下カルパス299ヒトALCL腫瘍(cAC10 Ag+)を有するマウスの群(4匹/群)を、1 mg/kgの抗体成分にて、cAC10-Val-Cit-PABC-MMAEまたはcAC1O-108で処理した。図に示されるように、cAC1O-108を用いる処理は、未処理対照と比較した場合に、腫瘍サイズを減少する。
【０２７７】
本明細書で引用されるか、または本明細書に組み入れられる任意の特許または特許出願に対して、許諾は明確にまたは暗黙に認可されない。上記の議論は説明的、例証的、および例示的であり、任意の添付の特許請求の範囲によって定義される範囲を限定するものとして取られるべきではない。
【０２７８】
特許出願、特許、および科学刊行物を含む種々の参考文献が本明細書で引用され、それらの各々の開示は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【０２７９】
【図１】マウスにおけるcAC10-108結合体の毒性を示す。
【図２】SCIDマウスにおける、抗体あたり平均4個の薬物を有するcAC10結合体の効力を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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