(57)【要約】  本発明は、少なくとも１つの新規ヒトＧＬＰ−１ミメティボディまたはアゴニスト、または特定部分またはバリアントに関し、少なくとも１つのＧＬＰ−１ミメティボディまたはアゴニストまたは特定部分またはバリアントをコードする単離された核酸、ＧＬＰ−１ミメティボディまたはアゴニストまたは特定部分またはバリアント、ベクター、宿主細胞、トランスジェニック動物もしくは植物、ならびに糖尿病関連治療用薬および／または診断用組成物、方法およびデバイスを含むそれらの作成および使用法を含む。
2008525477.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディ核酸が、配列番号２または４のアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、またはそれに相補的なポリヌクレオチドを含んでなる上記方法。
【請求項２】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディ核酸が、配列番号７〜１４から選択される少なくとも１つを含んでなるアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、またはそれに相補的なポリヌクレオチドを含んでなる上記方法。
【請求項３】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディ核酸が、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなり、
ここで、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、該リンカー配列はミメティボディに交互の方向性および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができるものであり、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも一部であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも一部であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数である、
上記方法。
【請求項４】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが配列番号２または４の連続するアミノ酸のすべてを含んでなる上記方法。
【請求項５】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディまたはアゴニストが少なくとも１つの配列番号７〜１４の連続するアミノ酸のすべてを含んでなる上記方法。
【請求項６】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触また
は投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、ここで、
Ｐは配列番号１および６から選択される少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−１ペプチドであり、ＬはＧＳ，ＧＧＳ，ＧＧＧＳ（配列番号：１６），ＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１７），ＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１８），ＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：１９）およびＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：２０）から選択され、ＶはＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：２１），ＧＴＬＶＡＶＳＳ（配列番号：２２），ＧＴＡＶＴＶＳＳ（配列番号：２３），ＴＶＳＳ（配列番号：２４）およびＡＶＳＳ（配列番号：２５）から選択され、ＨはＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：２６）であり、ＣＨ２はＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ  ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号：４３）であり、ＣＨ３はＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号：４４）であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項７】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは配列番号６の少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−１ペプチドであり、ＬはＧＳ，ＧＧＳ，ＧＧＧＳ（配列番号：１６），ＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１７），ＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１８），ＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：１９）およびＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：２０）から選択され、ＶはＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：２１），ＧＴＬＶＡＶＳＳ（配列番号：２２），ＧＴＡＶＴＶＳＳ（配列番号：２３），ＴＶＳＳ（配列番号：２４）およびＡＶＳＳ（配列番号：２５）から選択され、ＨはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰ（配列番号：２７）であり、ＣＨ２はＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号：４５）であり、ＣＨ３はＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号：４６）であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項８】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは配列番号６の少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−１ペプチドであり、ＬはＧＳ，ＧＧＳ，ＧＧＧＳ（配列番号：１６），ＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１７），ＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１８），ＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：１９）およびＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：２０）から選択され、ＶはＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：２１），ＧＴＬＶＡＶＳＳ（配列番号：２２），ＧＴＡＶＴＶＳＳ（配列番号：２３），ＴＶＳＳ（配列番号：２４）およびＡＶＳＳ（配列番号：２５）から選択され、ＨはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰ（配列番号：２８）であり、ＣＨ２はＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号：４５）であり、ＣＨ３はＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号：４６）であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
る上記方法。
【請求項９】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ）（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも部分であり、ＣＨ２はＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ  ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号：４３）であり、ＣＨ３はＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号：４４）であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、上記方法。
【請求項１０】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも部分であり、ＣＨ２はＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号：４５）であり、ＣＨ３はＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号：４６）であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項１１】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは配列番号６の少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−１ペプチドであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項１２】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、ＬはＧＳ，ＧＧＳ，ＧＧＧＳ（配列番号：１６），ＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１７）、ＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号：１８），ＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：１９）およびＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号：２０）から選択され、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項１３】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体であり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、ＶはＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：２１），ＧＴＬＶＡＶＳＳ（配列番号：２２），ＧＴＡＶＴＶＳＳ（配列番号：２３），ＴＶＳＳ（配列番号：２４）およびＡＶＳＳ（配列番号：２５）から選択され、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項１４】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、ＨはＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：２６），ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰ（配列番号：２７）およびＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰ（配列番号：２８）から選択され、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項１５】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、ＨはＥＰＫＳＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰ（配列番号：２９），ＥＰＫＳＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＡＧＧＰ（配列番号：３０），ＥＰＫＳＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＬＧＧＰ（配列番号：３１），ＥＰＫＳＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＥＧＧＰ（配列番号：３２），ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰ（配列番号：３３），ＥＰＫＳＡＤＫＴＨＡＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：３４），ＥＰＫＳＡＤＫＡＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：３５），およびＥＰＫＳＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：３６），ＡＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：３７），ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：３８），ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰ（配列番号：３９），ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：４０），ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号：４１）およびＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰ（配列番号：４２）から選択され、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項１６】
細胞、組織、器官または動物のＧＬＰ−１糖尿病関連状態を診断または処置する方法であって、有効量のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ核酸、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つを含んでなる組成物を、該細胞、組織、器官または動物に接触または投与することを含んでなり、ここで該少なくとも１つのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディが、Ｐまたは式（Ｉ）：
（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）で表されるポリペプチドを含んでなり、
ここで、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる、
上記方法。
【請求項１７】
上記ポリペプチドが式Ｉの少なくとも１つのＰポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する、請求項１に記載のＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディ核酸またはＧＬＰ−１
ＣＨ１欠失ミメティボディポリペプチド。
【請求項１８】
上記方法が、治療に有効な量の少なくとも１つの化合物を含んでなる少なくとも１つの組成物、糖尿病薬、インスリン代謝関連薬、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１つの組成物またはポリペプチドを投与することをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
上記の有効量が、上記細胞、組織、器官または動物１キログラムあたり０  ００１−５０ｍｇのＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディまたはアゴニスト、０  ０００００１〜５００ｍｇの該ＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディまたはアゴニスト、または０  ０００１〜１００μｇの該ＧＬＰ−１  ＣＨ１欠失ミメティボディまたはアゴニスト核酸、または等価の濃度である請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
上記接触または上記投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式による、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
上記ＧＬＰ−１関連状態が代謝障害である請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
上記代謝障害が高血糖症である請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
上記代謝障害が糖尿病である請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
上記有効量が、処置が必要な動物の血中グルコースレベルを下げることにより該代謝障害を処置する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
上記有効量が、インスリン生産細胞からのインスリンの分泌を上げることにより該代謝障害を処置する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
上記有効量が、インスリン生産細胞のアポトーシスを防止することにより該代謝障害を処置する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
上記有効量が、インスリン生産細胞の増殖を上げることにより該代謝障害を処置する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
上記ＧＬＰ−１関連状態が糖尿病に関連する請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ＧＬＰ−１ミメティボディ、生物学的に活性なタンパク質に特異的な特定部分およびバリアント、フラグメントまたはリガンドのような哺乳動物のグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アゴニスト、ＧＬＰ−１アゴニストをコードする核酸および相補的核酸、宿主細胞、ならびに糖尿病関連治療用製剤、投与およびデバイスを含むそれらの作成および使用法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景および関連技術
組換えタンパク質は新興している治療薬の種類である。有力な治療薬としての組換えタンパク質の使用は、化学的修飾の使用も含め治療薬であるタンパク質製剤における進歩に好機を与えた。そのような修飾は、血清半減期を上昇させ（例えばタンパク質分解酵素に対してそれらの暴露を遮断することにより）、生物学的活性を強化し、かつ／または望ましくない副作用を減少させるような可能性により、治療用タンパク質の治療的用途を潜在的に強化することができる。１つのそのような修飾は、エンテラセプト（ｅｎｔｅｒａｃｅｐｔ）のようなレセプタータンパク質に融合した免疫グロブリンフラグメントの使用である。また融合タンパク質は、より長い半減期を提供するために、あるいはＦｃ受容体結合、プロテインＡ結合および補体固定化のような機能を包含するために、抗体のＦｃドメインを使用して構築されてきた。
【０００３】
糖尿病は、２０２５年までには３億人以上の人々に影響を与えると予想される増加しつつある流行病であり、有効な製薬学的治癒が切迫している。糖尿病のほとんどの症例は２つの臨床的型に分けられ、１型は若年型糖尿病またはインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）として知られ、そして２型は成人発生糖尿病としても知られ、これがすべての症例の９０〜９５％を占める。
【０００４】
ＩＤＤＭはインスリンを一部、または完全に生産できないことが特徴である。一般に１型糖尿病は進行性の自己免疫応答から生じ、これは遺伝的に素因のある個体のランゲルハンス島のインリン−生産β細胞を選択的に破壊すると認識されている。
【０００５】
２型糖尿病と診断された患者の膵臓はそれでもインスリンを合成し、そして分泌することができる。しかしインスリンがその効果を発揮する組織の感度が傷害を受ける。さらに多くの２型糖尿病は後期にインスリン依存性となり、そしてかれらのインスリン耐性を改善するためにインスリン注射が必要である。
【０００６】
持続的な血漿グルコースレベルの上昇から生じる合併症には、心血管疾患、腎傷害、ニューロパシーおよび網膜症がある。インスリン注射またはインスリンポンプを介するインスリン補充療法は、ＩＤＤＭの標準的処置である。しかしそのようなインスリンの送達は調節されず、そして患者の血中グルコースに標準範囲の上および下の両方の変動を生じる。インスリンを要する糖尿病を処置するために研究中の有力な代替的方法は、正常な供与体から糖尿病患者への膵臓または膵島移植である。臓器拒絶の問題が免疫抑制療法または他の手段を使用してある程度軽減できれば、膵臓または膵島細胞移植は、血中グルコースレベルを標準化し、そしてグルコースに応答して膵島がインスリンを分泌する生理学的様式を回復することができる可能性がある。しかし臓器拒絶を防止するために必要とされる免疫抑制処方に伴う合併症とは別に、この取り組みを制限する主な要因は、ヒト供与体組織の不足である。さらに臓器移植のために生きているドナーを使用する方法では、供与体が糖尿病になるかもしれない。
【０００７】
ほとんどの２型糖尿病患者には、インスリンの感度を一部上げることにより血中グルコースを下げ、インスリン耐性を減少させ、かつ／またはインスリン生産を上げるために経口薬剤が使用される。しかしそのような治療は最終的に効果がなく、例えば多くの場合で経口薬は効果的でないか、または経時的に効果が無くなり、そしてインスリン注射が適切なグルコースレベルを維持するためにある段階で必要となる。  
【０００８】
糖尿病の最新の処置は、低血糖および体重増加を含む様々な悪い副作用を伴う。さらにすべての介入を利用できるにもかかわらず、かなりの患者が彼らの血中グルコースレベルを適切な範囲に維持することができない。したがって１型および／または２型糖尿病、ならびにそれから生じる合併症を処置する代替的な方法を提供する必要がある。
【０００９】
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）は、経口グルコース対抗（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）後に腸のＬ−細胞から分泌される３７アミノ酸ペプチドである。引き続き、第６と第７との間の位置の内的分解で、生物学的活性なＧＬＰ−１（７−３７）ペプチドが生成する。ＧＬＰ−１（７−３７）ペプチド配列は、２つの構造的ドメインに分割することができる。ペプチドのアミノ末端ドメインはシグナリングに関与することができ、一方、ペプチドの残りはヘリックス構造のＧＬＰ−１受容体の細胞外ループに結合するようである。グルコースに応答して、活性なＧＬＰ−１は膵臓上のＧＬＰ−１受容体に結合すると考えられ、そしてインスリン分泌を上昇させる（インスリン分泌刺激作用）。さらにＧＬＰ−１は、循環中に放出され、そして食物の摂取を下げる可能性があるグルコースのボーラスを下げる胃内容排出を縮小することが示された。またＧＬＰ−１はグルカゴン分泌を阻害することが示され、これにより肝臓に貯蔵されたグルコースの内的放出を下げる。これらの作用は単独で、または組合わさって血中グルコースレベルを下げる。またＧＬＰ−１はインビトロおよびインビボの実験で膵臓のβ−細胞のアポトーシスを抑制し、そして増殖を上げることも示された。さらにＧＬＰ−１活性は血中グルコースレベルにより制御されることも示された。血中グルコースレベルが特定の閾値レベルに低下すると、ＧＬＰ−１は活性ではない。したがってＧＬＰ−１の動物への投与に伴う低血糖の危険性はほとんどないと思われる。
【００１０】
しかしＧＬＰ−１は、プロテアーゼであるジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）によりインビボで迅速に不活性化される。したがってＧＬＰ−１ペプチドが関与する治療の潜在的有用性は、ＧＬＰ−１ペプチドの急速なクリアランスおよび短い半減期により限定されてきた。例えばＧＬＰ−１（７−３７）はわずか３〜５分間の血清半減期を有する。ＧＬＰ−１（７−３６）アミドは、皮下投与された場合に約５０分の時間作用を有する。さらに内因性プロテアーゼ分解に耐性の類似体および誘導体でさえ、２４時間にわたる繰り返し投与を回避するために十分に長い半減期を持たない。例えばエクセナチド（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）はＤＰＰ−ＩＶに耐性であるが、それでも短い半減期およびインビボの薬物動態学における有意な変動性により１日２回の食前の投与を要する。ＮＮ２２１１は現在、臨床試験中の別の化合物であり、脂質化ＧＬＰ−１類似体である。これは１日１回の投与が期待される。
【００１１】
治療薬の早いクリアランスは、長期間にわたり薬剤の高い血中レベルを維持することが望まれる場合、繰り返し投与が必要となるので不都合である。さらに長期作用化合物は、過去の処置法に経口薬剤の摂取のみが関与した糖尿病患者に特に重要である。これらの患者は、薬剤の多回注射を含む処方に対して大変難しい時期的移行を有することが多い。半減期が上昇したＧＬＰ−１療法は、他のＧＬＰ−１ペプチドおよび開発中の化合物よりも重要な利点を有する。
【００１２】
したがって当該技術分野で知られている１もしくは複数のこれらのおよび他の問題を克服するＧＬＰ−１治療タンパク質の改善され、かつ／または修飾された変更体を提供することが必要である。
【発明の開示】
【００１３】
発明の要約
本発明は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて、本明細書に記載し、かつ／または本明細書で可能となるような、修飾されたタンパク質、ペプチド、免疫グロブリン、その分解産物および他の特定部分およびそのバリアントを含むヒトのＧＬＰ−１アゴニスト、ならびにＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディ組成物、コードまたは相補的核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、デバイス、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、およびそれらの作成および使用方法を提供する。
【００１４】
また本発明は、本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で知られているような少なくとも１つの単離されたＧＬＰ−１ミメティボディまたは特定部分またはバリアントも提供する。ＧＬＰ−１ミメティボディは任意選択により、少なくとも１つのＧＬＰ−１療用ペプチド（Ｐ）に直接連結した任意選択のリンカー配列（Ｌ）に直接連結した少なくとも１つの部分的可変領域（Ｖ）に直接連結した少なくとも１つのヒンジ領域またはそのフラグメント（Ｈ）の少なくとも一部に直接連結した少なくとも１つのＣＨ２領域に直接連結した少なくとも１つのＣＨ３領域を含んでなることができる。
【００１５】
好適な態様である１対のＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジ−部分Ｖ領域配列−リンカー−治療用ペプチド配列では、この対は場合により例えば限定するわけではないが少なくとも１つのＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合または少なくとも１つのＣＨ４または他の免疫グロブリン配列のような会合もしくは共有結合により連結されている。１つの態様では、ＧＬＰ−１ミメティボディは式（Ｉ）：
（Ｉ）（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）
［式中、Ｐは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の少なくとも１つであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｎは１〜１０の整数であり、そしてｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０の整数であることができる］を含んでなり、免疫グロブリン分子の種々の型、例えば限定するわけではないがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等またはその任意のサブクラス等、またはそれらの組み合わせを模する。
【００１６】
抗体配列の可変領域は、限定するわけではないが少なくとも１つの配列番号４７〜５５の少なくとも部分、またはそのフラグメントであることができ、さらに場合により置換、挿入または欠失の少なくとも１つを含んでなることができる。ＣＨ２、ＣＨ３およびヒンジ領域は、限定するわけではないが少なくとも１つの配列番号５６〜６４の少なくとも一部分、またはそのフラグメントであることができ、さらに場合により置換、挿入または欠失の少なくとも１つを含んでなることができる（Ｋｅｖｉｎ、これらの配列は配列表に含まれ、参照により編入したいかもしれないが、我々はそれらを必要としない）。
【００１７】
すなわち本発明のＧＬＰ−１ミメティボディは、その本来の特性および機能を持つ抗体または免疫グロブリン構造または機能の少なくとも部分を模すると同時に、治療用ペプチ
ドおよびその本来の、または獲得したｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕ特性または活性を提供する。抗体の種々の部分および本発明のＧＬＰ−１ミメティボディの治療用ペプチド部分は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて本明細書に記載するように変動させることができる。
【００１８】
また本発明は、本明細書に記載し、または当該技術分野で知られているような限定するわけではないが少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−１ペプチドまたは式（Ｉ）のＰ部分に対応するポリペプチドの既知の生物学的活性のような、少なくとも１つの活性を有する少なくとも１つの単離されたＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディまたは特定部分またはバリアントを提供する。
【００１９】
１つの観点では、本発明は配列番号１の、または場合により本明細書に記載するような、または当該技術分野で知られているような任意の１もしくは複数の置換、欠失または挿入を含む配列番号１の少なくとも１つのポリペプチド配列を含んでなる単離されたヒトのＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディの少なくとも１つを提供する。別の観点では本発明のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディまたは特定部分またはバリアントの少なくとも１つは、式（Ｉ）のミメティボディのＰ部分に対応する少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチドまたはポリペプチドの、少なくとも１つのリガンドの１〜３個から全アミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのエピトープ、例えば限定するわけではないがＧＬＰ−１受容体、そのフラグメントへの結合を模し、ここでリガンドは配列番号１の少なくとも部分、または場合により本明細書に記載するか、または当該技術分野で知られているような１もしくは複数の置換、欠失もしくは挿入を含む配列番号１の少なくとも部分に結合する。少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディは、場合により少なくとも１０−９Ｍ、少なくとも１０−１０Ｍ、少なくとも１０−１１Ｍまたは少なくとも１０−１２Ｍの親和性でＧＬＰ−１受容体と結合することができる。このようにＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディは、限定するわけではないが受容体またはそのフラグメントに対する結合活性のような既知の方法に従い対応する活性についてスクリーニングすることができる。
【００２０】
本発明はさらに、本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディに対する少なくとも１つの抗−イディオタイプ抗体を提供する。抗−イディオタイプ抗体またはフラグメントは、本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディに特異的に結合する。抗イディオタイプ抗体には、限定するわけではないが、本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディのＧＬＰ−１リガンド結合領域に競合的に結合する重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれらのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、骨格領域、またはそれらの任意の部分のような免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含んでなる分子を含有する任意のタンパク質またはペプチドを含む。本発明のそのようなイディオタイプ抗体は、限定するわけではないがヒト、マウス、ウサギ、ラット、齧歯類、霊長類等のような任意の哺乳動物を含むか、またはそれらに由来することができる。
【００２１】
本発明は１つの観点において、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗−イディオタイプ抗体、あるいは少なくとも１つの特定した配列、それらのドメイン、部分またはバリアントを含んで成る特定部分またはバリアントをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、それと相補的な、有意な同一性を有する、またはハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。本発明はさらに、少なくとも１つの該単離されたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、またはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗−イディオタイプ抗体をコードする核酸分子を含んで成る組換えベクター、そのような核酸および／または組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにそのようなＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗−イディオタイプ抗体核酸、ベクターおよび／または宿主細胞の作成および／または使用法を提供する。
【００２２】
また提供するのは、少なくとも１つの単離された本明細書のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗−イディオタイプ抗体をコードする単離された核酸、単離された核酸を含んでなる単離された核酸ベクター、および／または単離された核酸を含んでなる原核もしくは真核宿主細胞である。宿主細胞は、場合によりＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、ＨｅｐＧ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫もしくはリンパ腫細胞、またはそれらの任意の誘導体、不死化または形質転換した細胞から選択される少なくとも１つであることができる。
【００２３】
また本発明は、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗イディオタイプ抗体、または特定部分またはバリアントを宿主細胞中で発現させる少なくとも１つの方法も提供し、この方法は本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で知られている宿主細胞を、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗イディオタイプ抗体、または特定部分またはバリアントが検出可能かつ／または回収可能な量で発現される条件下で培養することを含んで成る。また本発明で提供されるのは、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗イディオタイプ抗体が検出可能または回収可能な量で発現されるように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｓｉｔｕの条件下で、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗イディオタイプ抗体をコードする核酸を翻訳することを含んでなる、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ抗イディオタイプ抗体の生産法である。
【００２４】
また提供するのは本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１抗−イディオタイプ抗体を生産する方法であり、この方法は回収可能な量でＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはＧＬＰ−１抗−イディオタイプ抗体を発現することができる宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物を提供することを含んでなる。
【００２５】
さらに本発明で提供するのは、上記方法により生産された少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディである。
【００２６】
また本発明は、（ａ）本明細書に記載する単離されたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードする核酸および／またはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、および（ｂ）および適切な担体もしくは希釈剤を含んで成る少なくとも１つの組成物も提供する。担体もしくは希釈剤は、既知の方法に従い任意の製薬学的に許容され得るものである。組成物は場合により少なくとも１つのさらなる化合物、タンパク質または組成物をさらに含むことができる。
【００２７】
また提供するのは、少なくとも１つの単離されたヒトのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディおよび少なくとも１つの製薬学的に許容され得る担体または希釈剤を含んでなる組成物である。組成物は場合により少なくとも１つの糖尿病薬、インスリン代謝関連薬、グルコース代謝関連薬、検出可能な標識もしくはレポーター、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍性薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩剤、麻薬、非−ステロイド系抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、止痒薬、コルチコステロイド、同化性ステロイド、エリスロポエチン、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン代用薬、放射性薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンもしくは類似体、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選択される有効量の少なくとも１つの化合物またはタンパク質をさらに含んでなることができる。
【００２８】
また本発明は、本発明に従い治療的もしくは予防的に有効な量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントを送達するための少なくとも１つの組成物、デバイスおよび／または方法も提供する。
【００２９】
本発明はさらに、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１つのＧＬＰ−１関連状態をモジュレートまたは処置するために、かつ／または当該技術分野で知られ、かつ／または本明細書に記載するような関連状態の前、後または最中に、治療に有効量を投与するための少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ法または組成物を提供する。
【００３０】
さらに本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者における少なくとも１つの免疫、心血管、感染性、悪性および／または神経疾患の症状をモジュレートするために、処置もしくは減少するために治療に有効な量で投与する時、かつ／または限定するわけではないが、当該技術分野で知られているような関連疾患または処置条件の前、後または最中のような多くの異なる条件下で必要に応じて、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、特定部分またはバリアントを方法または組成物に提供する。
【００３１】
本発明はさらに、少なくとも１つの糖尿病もしくはインスリン代謝関連障害、グルコース代謝関連障害、骨および関節障害、心血管障害、歯または経口障害、皮膚学的障害、耳、鼻もしくは喉の障害、内分泌もしくは代謝障害、胃腸管障害、婦人科学的障害、肝臓もしくは胆管障害、産科学的障害、血液学的障害、免疫学的もしくはアレルギー障害、感染性疾患、筋肉骨格障害、癌性障害、神経障害、栄養障害、眼科的障害、小児科学的障害、毒性障害、精神障害、腎臓障害、肺障害または任意の他の障害の症状をモジュレートするために、処置もしくは減少するために治療に有効な量で投与する時に（例えばメルクマニュアル（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ）、第１７版、メルクリサーチラボラトリーズ、メルク社（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ）、ホワイトハウス  ステーション、ニュージャージー州（１９９９）を参照にされたい。これは引用により全部、本明細書に編入する）、限定するわけではないが当該技術分野で知られている関連疾患または処置条件の前、後または最中のような多くの異なる条件において必要に応じて、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、特定部分またはバリアントを方法または組成物に提供する。
また本発明は、ＧＬＰ−１関連状態を診断するために、本発明に従い少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディの少なくとも１つの組成物、デバイスおよび／または送達方法も提供する。
【００３２】
本発明はさらに、細胞、組織、器官、動物または患者の少なくとも１つのＧＬＰ−１関連状態を診断するための、かつ／または当該技術分野で既知であり、かつ／または本明細書に記載するような関連状態の前、後または最中に診断するための少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ法または組成物を提供する。
【００３３】
また提供するのは、（ａ）本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディの有効量を含んで成る組成物を、細胞、組織、器官または
動物に接触または投与することを含んで成る、細胞、組織、器官または動物の疾患状態を診断または処置する方法である。この方法は場合によりさらに、０００１〜５０ｍｇ／キログラムの有効量またはｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｓｉｔｕの細胞、組織、器官または動物で、０〜２４時間に、１〜７日間に、１〜５２週間に、１〜２４カ月の間に、１〜５０年の間になされる場合には等価の濃度またはモル濃度を使用することを含んでなることができる。この方法は場合によりさらに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式による接触または投与を使用することを含んでなることができる。この方法は場合により、（ａ）少なくとも１つの糖尿病薬、インスリン代謝関連薬、グルコース代謝関連薬、検出可能な標識もしくはレポーター、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩剤、睡眠薬、非−ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断剤、抗菌剤、止痒薬、コルチコステロイド、同化性ステロイド、エリスロポエチン、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン代用薬、放射性薬品、抗鬱薬、抗精神薬、刺激物、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入型ステロイド、エピネフリンもしくは類似体、サイトカインもしくはサインカインアンタゴニスト、ビタミン、増殖因子または酸化防止剤から選択される有効量の少なくとも１つの化合物またはタンパク質を含んで成る少なくとも１つの組成物を接触または投与する前に、それと同時にまたは後に投与することをさらに含んでなることができる。
【００３４】
また本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディを含んで成る医療用デバイスも提供し、ここでこのデバイスは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式により、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディを接触または投与するのに適している。
【００３５】
また提供するのは、ヒトの製薬学的または診断的使用のための製品であり、これは包装材料および溶液もしくは凍結乾燥形態の本発明の少なくとも１つの単離されたヒトのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディを含んでなる容器を含んでなる。この製品は場合により構成要素として、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮送達デバイスまたはシステムの容器を有することを含んでなることができる。
【００３６】
本発明は、本明細書に記載する任意の発明をさらに提供する。
【００３７】
発明の説明
本発明は、単離された、組換えおよび／または合成のミメティボディまたは特定部分またはバリアント、ならびに少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなる、組成物およびコード核酸分子を提供する。本発明のそのようなミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、特異的なＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ配列、ドメイン、フラグメントおよびその特定バリアント、ならびに治療用組成物、方法およびデバイスを含む該核酸およびミメティボディまたは特定部分またはバリアントの作成および使用法も提供する。
【００３８】
また本発明は本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知の単離されたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントの少なくとも１つも提供する。ＧＬＰ−１ミメティボディは任意選択により、少なくとも１つのＧＬＰ−１療用ペプチド（Ｐ）に直接連結した任意選択のリンカー配列（Ｌ）に直接連結した少なくとも１つの部分的可変領域（Ｖ）に直接連結した少なくとも１つのヒンジ領域またはそのフラグメント（Ｈ）に直接連結した少なくとも１つのＣＨ２領域に直接連結した少なくとも１つのＣＨ３領域を含んでなることができる。
【００３９】
好適な態様では、ＧＬＰ−１ミメティボディは式（Ｉ）：
（Ｉ）（Ｐｅｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）
［式中、Ｐは少なくとも１つの生物活性ＧＬＰ−１ペプチドであり、Ｌは少なくとも１つのリンカー配列であり、これはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより構造的柔軟性を提供するポリペプチドであることができ、Ｖは免疫グロブリン可変領域のＣ−末端の少なくとも一部分であり、Ｈは免疫グロブリン可変ヒンジ領域の少なくとも一部分であり、ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２定常領域の少なくとも部分であり、ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３定常領域の少なくとも部分であり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓおよびｔは独立して０〜１０を含むその範囲の整数であることができる］
を含んでなり、免疫グロブリン分子の種々の型、例えば限定するわけではないがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはその任意のサブクラス等、またはそれらの組み合わせを模する。
【００４０】
このように本発明のＧＬＰ−１ミメティボディは、その本来の特性および機能を持つ抗体構造を模すると同時に、治療用ペプチドおよびその本来の、または獲得したｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕ特性または活性を提供する。ｔ＝１である好適な態様では、単量体ＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジ−部分Ｊ（Ｊはこれまでに説明されていない）配列−リンカー−治療用ペプチドは、会合または限定するわけではないがＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合のような共有結合により他の単量体と連結することができる。抗体の種々の部分および本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１ミメティボディの治療用ペプチド部分は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて本明細書に記載するように変動させることができる。
【００４１】
ＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジの部分は、サルベージ受容体への結合が維持されるならば徹底的に修飾して本発明に従うバリアントを形成することができる。そのようなバリアントでは、本発明の融合分子により要求されない構造的特徴または機能的活性を提供する１もしくは複数の自然な部位を除去してよい。これらの部位は例えば残基を置換または削除することにより、残基を部位に挿入することにより、または部位を含有する部位を短縮化することにより除去することができる。挿入または置換された残基は、プソイドミメティックスまたはＤ−アミノ酸のような改変されたアミノ酸になることもできる。ＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジのバリアントは、（１）ジスルフィド結合の形成、（２）選択した宿主細胞との不適合性、（３）選択した宿主細胞中の発現での異種性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合、あるいは（７）抗体依存的細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすか、または関与する１もしくは複数の天然の部位または残基を欠いてもよい。ＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジバリアントの例には以下の分子または配列を含む。１．ジスルフィド結合の形成に関与する部位が除去されている。
そのような除去は、本発明の分子を生産するために使用する宿主細胞に存在する他のシステイン含有タンパク質との反応を回避することができる。この目的に、システイン残基は削除するか、または他のアミノ酸（例えばアラニル、セリル）と置換することができる。システイン残基が除去された場合でも、やはり単鎖ＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジドメインは、非共有的に一緒に保持されている二量体のＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジドメインを形成することができる。２．ＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジ領域を、選択した宿主細胞とさらに適合性とするように修飾されている。例えば分子が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のような細菌細胞で組換え的に発現される場合、プロリンイミノペプチダーゼのような大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中の分解酵素により認識され得るヒンジ中のＰＡ配列を除去することができる。３．ヒンジ領域の部分は、選択した宿主細胞で発現される場合、異種性を防止するために除去されるか、または他のアミノ酸と置換される。４．１もしくは複数のグリコシル化部位が除去される。典型的にグリコシル化される残基（例えばアスパラギン）は、細胞分解（ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ）応答を付与することができる。そのような残基は削除するか、非グリコシル化残基（例えばアラニン）と置換することができる。５．Ｃ１ｑ結合部位のような補体との相互作用に関与する部位は除去される。補体集合は本発明の分子に有利とはなり得えないので、そのようなバリアントは回避され得る。６．サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合に影響を及ぼす部位は除去される。ＣＨ３−ＣＨ２−ヒンジ領域は、本発明の融合分子に必要ではない特定の白血球との相互作用に関する部位を有する可能性があるので除去することができる。７．ＡＤＣＣ部位は除去される。ＡＤＣＣ部位は当該技術分野では（例えばＭｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９（５）６３３−９（１９９２））、ＩｇＧ１中のＡＤＣＣ部位に関して知られている。これらの部位も本発明の融合部位には必要ではないので除去することができる。
【００４２】
リンカーポリペプチドは、アゴニストまたはミメティボディに交互の方向および結合特性を持たせることにより、構造的柔軟性を提供する。存在する場合、その化学的構造は重要ではない。リンカーは好ましくは、ペプチド結合により一緒に連結されたアミノ酸から作られる。すなわち好適な態様では、リンカーはペプチド結合により連結された１〜２０個のアミノ酸で作られ、ここでアミノ酸は２０個の自然に存在するアミノ酸から選択される。これらのアミノ酸の幾つかは当業者に十分に理解されているようにグリコシル化され得る。最も好適な態様では、１〜２０個のアミノ酸が、グリシン、アラニン、セリン、プロリン、アスパラギン、グルタミンおよびリシンから選択される。さらにより好ましくは、リンカーはグリシンおよびアラニンのような空間的に制約されていないほとんどのアミノ酸から作られる。すなわち好適なリンカーはポリ（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）、ポリグリシン（特に（Ｇｌｙ）４，（Ｇｌｙ）５）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ）、およびポリアラニンである。他の具体的なリンカーの例は：（Ｇｌｙ）３Ｌｙｓ（Ｇｌｙ）４（配列番号：６５）、（Ｇｌｙ）３ＡｓｎＧｌｙＳｅｒ（Ｇｌｙ）２（配列番号：６６）、（Ｇｌｙ）３Ｃｙｓ（Ｇｌｙ）４（配列番号：６７）、およびＧｌｙＰｒｏＡｓｎＧｌｙＧｌｙ（配列番号：６８）である。
【００４３】
上記の命名について説明するために、例えば（Ｇｌｙ）３Ｌｙｓ（Ｇｌｙ）４はＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙを意味する。ＧｌｙおよびＡｌａの組み合わせも好適である。示したリンカーは例であり、本発明の範囲に入るリンカーはさらに長くてよく、そして他の残基を含んでもよい。
【００４４】
非ペプチド−リンカーも可能である。例えば−ＮＨ−（ＣＨ２）ｓ−Ｃ（Ｏ）−のようなアルキルリンカー（ここでｓ＝２〜２０）を使用することができる。これらのアルキルリンカーはさらに、低級アルキル（例えばＣ１−Ｃ６）、低級アシル、ハロゲン（例えばＣｌ，Ｂｒ）、ＣＮ、ＮＨ２、フェニル等のような空間的に制約の無い基で置換してもよい。非−ペプチドリンカーの例は１００〜５０００ｋＤ、好ましくは１００〜５００ｋＤの分子量を有するＰＥＧリンカーである。ペプチドリンカーは上記と同じ様式で誘導体を
形成するように改変することができる。
【００４５】
本明細書で使用する“ＧＬＰ−１ペプチド”または“ＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体”は、ＧＬＰ−１ペプチド、ＧＬＰ−１フラグメント、ＧＬＰ−１相同体、ＧＬＰ−１類似体、またはＧＬＰ−１誘導体の少なくとも１つであることができる。ＧＬＰ−１ペプチドは天然のＧＬＰ−１（７−３７）と十分な相同性を有する約２  ５〜約４５個の自然に存在する、または自然には存在しないアミノ酸を有するので、それらは膵臓のβ−細胞上のＧＬＰ−１受容体に結合することによりインスリン分泌刺激活性を現す。ＧＬＰ−１（７−３７）は配列番号１５：Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙのアミノ酸配列を有する。
【００４６】
ＧＬＰ−１フラグメントは、ＧＬＰ−１（７−３７）もしくはその類似体もしくは誘導体のＮ−末端および／またはＣ−末端に由来する１もしくは複数のアミノ酸を短縮した後に得られるポリペプチドである。ＧＬＰ−１相同体は、１もしくは複数のアミノ酸がＧＬＰ−１（７−３７）のＮ−末端および／またはＣ−末端に加えられたペプチド、もしくはそのフラグメントもしくは類似体である。ＧＬＰ−１類似体は、ＧＬＰ−１（７−３７）の１もしくは複数のアミノ酸が修飾かつ／または置換されたペプチドである。ＧＬＰ−１類似体はＧＬＰ−１（７−３７）またはＧＬＰ−１（７−３７）のフラグメントと十分な相同性を有するので、類似体はインスリン分泌刺激活性を有する。ＧＬＰ−１誘導体は、ＧＬＰ−１ペプチド、ＧＬＰ−１相同体またはＧＬＰ−１類似体のアミノ酸配列を有する分子と定義されるが、さらにそのアミノ酸側基、α−炭素原子、末端アミノ基または末端カルボン酸基に１もしくは複数の化学修飾を有する。
【００４７】
多数の活性ＧＬＰ−１フラグメント、類似体および誘導体が当該技術分野で知られ、そしてこれらの類似体および誘導体のいずれも本発明のＧＬＰ−１アゴニストまたはミメティボディの一部となることができる。当該技術分野で既知の幾つかのＧＬＰ−１類似体およびＧＬＰ−１フラグメントは米国特許第５，１１８，６６６号、５，９７７，０７１号および５，５４５，６１８号明細書、およびＡｄｅｌｈｏｒｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：６２７５（１９９４）に開示されている。例には限定するわけではないがＧＬＰ−１（７−３４），ＧＬＰ−１（７−３５），ＧＬＰ−１（７−３６），Ｇｌｎ９−ＧＬＰ−１（７−３７），Ｄ−Ｇｌｎ９−ＧＬＰ−１（７−３７），Ｔｈｒ１６−Ｌｙｓ１８−ＧＬＰ−１（７−３７）およびＬｙｓ１８−ＧＬＰ−１（７−３７）がある。
【００４８】
「ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ」、「ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ部分」または「ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディフラグメント」および／または「ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディバリアント」等は、限定するわけではないが、少なくとも１つの配列番号１のような、少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチド、バリアントもしくは誘導体のリガンド結合、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕおよび／または好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏでの活性のような、少なくとも１つの生物学的活性を模するか、有するか、または刺激する。例えば適当なＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、特定部分もしくはバリアントは、少なくとも１つのＧＬＰ−１受容体シグナリングまたは他の測定可能もしくは検出可能な活性をモジュレート、増加、修飾、活性化することもできる。
【００４９】
本発明の方法および組成物に有用なＧＬＰ−１ミメティボディは、タンパク質リガンド、例えばＧＬＰ−１受容体に対する適切な結合親和性を特徴とし、そして場合により、そして好ましくは低い毒性を有する。特にＧＬＰ−１ミメティボディは、可変領域、定常領域（ＣＨ１部分を含まない）および骨格の部分、またはそれらの任意の部分（例えば可変重または軽鎖のＪ、ＤまたはＶ領域の一部、ヒンジ領域、定常重鎖または軽鎖等の少なくとも一部）のような個々の成分が個別に、かつ／または集合的に任意に、そして好ましくは低い免疫原性を有する場合に本発明に有用である。本発明に使用することができるミメティボディは場合により良好から優れた症状の緩和および低毒性で長期間、患者を処置するそれらの能力により特徴付けられる。低い免疫原性および／または高い親和性、ならびに他の不確定な特性は、達成される治療的結果に貢献し得る。本明細書では「低い免疫原性」を、処置した患者の約７５％未満、または好ましくは約５０、４５、４０、３５、３０、３５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２および／または１％未満に有意なＨＡＭＡ、ＨＡＣＡまたはＨＡＨＡ応答を生じ、かつ／または処置した患者に低い力価を生じる（二重抗原酵素イムノアッセイで測定した時、約３００未満、好ましくは約１００未満）と定める（例えばＥｌｌｉｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）を参照にされたい）。
【００５０】
用途
本発明の単離された核酸は、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、そのフラグメントもしくは特定バリアントの生産に使用することができ、これは限定するわけではないが少なくとも１つの糖尿病、インスリン代謝関連障害、グルコース代謝関連障害、免疫障害もしくは疾患、心血管障害もしくは疾患、感染、悪性および／または神経障害もしくは疾患、ならびに他の既知の、または特定されたタンパク質関連状態から選択される少なくとも１つのタンパク質関連状態の症状をモジュレートし、処置し、緩和し、発生の防止を助け、または低減するために、細胞、組織、器官または動物（哺乳動物およびヒトを含む）で行うために使用できる。
【００５１】
そのような方法は少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含んでなる有効量の組成物または製薬学的組成物を、症状、効果もしくはメカニズムにおいてそのようなモジュレーション、処置、緩和、防止または低減が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んでなることができる。有効量は単回または多回投与あたり約０  ０００１〜５００ｍｇ／ｋｇの量、または単回または多回投与あたり約０．０１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を達成する量、（ｉｎ  ｖｉｔｒｏの濃度を含むことが必要）または本明細書に記載する、または関連する技術分野で知られている既知の方法を使用してなされ、そして決定された任意の有効範囲またはその中の値の量を含んでなることができる。
【００５２】
引用
本明細書に引用するすべての刊行物または特許は全部、それらが本発明のこの時点の技術の状況を示し、かつ／または本発明の説明および可能性を提供するので引用することにより本明細書に編入する。刊行物とは任意の科学的もしくは特許公報、またはすべての記録された、電子的または印刷形式を含む任意の媒体形式で入手できる任意の他の情報を称する。以下の参考文献は引用することにより全部、本明細書に編入する：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．編集、分子生物学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ジョン  ウィリー＆サンズ社（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）、ニューヨーク、ニューヨーク州（１９８７−２００５）：Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．、モレキュラークローニング：ア  ラボラトリーマニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、第２版、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、ア  ラボラトリーマニュアル、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．編集、免疫学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ジョン  ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク州（１９９４−２００５）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，タンパク質科学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ジョン  ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク、ニューヨーク州、（１９９７−２００５）。
【００５３】
本発明のミメティボディ
ＧＬＰ−１ミメティボディは任意選択により、少なくとも１つのＧＬＰ−１療用ペプチド（Ｐ）に直接連結した任意選択のリンカー配列（Ｌ）に直接連結した少なくとも１つの部分的可変領域（Ｖ）に直接連結した少なくとも１つのヒンジ領域を含んでなる、少なくとも１つのヒンジ領域フラグメント（Ｈ）の少なくとも一部に直接連結した少なくとも１つのＣＨ２領域に直接連結した少なくとも１つのＣＨ３領域を含んでなることができる。好適な態様では、１対のＣＨ３−ＣＨ２−Ｈ−Ｖ−Ｌ−Ｐが限定するわけではないがＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合のような会合もしくは共有結合により連結され得る。すなわちその本来の特性および機能を持つ抗体構造および機能を模すると同時に、治療用ペプチドおよびその本来の、または獲得したｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕ特性または活性を提供する。抗体の種々の部分および本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１ミメティボディの治療用ペプチド部分は、当該技術分野で知られている事柄と組み合わせて本明細書に記載するように変動させることができる。
【００５４】
このように本発明のミメティボディは、既知のタンパク質に比べて、限定するわけではないが少なくとも１つの増加した半減期、増加した活性、より特異的な活性、増加したアビディティ、増加または減少したオフレイト（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）、選択された、またはより適切な活性のサブセット、低い免疫原性、少なくとも１つの所望する治療効果の増加した質または期間、低い副作用等のような、少なくとも１つの適切な特性を提供する。
【００５５】
式（Ｉ）のミメティボディのフラグメントは、当該技術分野で知られ、かつ／または本明細書に記載するような酵素的分解、合成または組換え技術により生産することができる。またミメティボディは１もしくは複数の終結コドンが天然の終結部位の上流に導入された抗体遺伝子を使用して、種々の短縮形で生成することもできる。ミメティボディの種々の部分は通常の技術により化学的に一緒に連結することができ、または遺伝子工学技術を使用して連続するタンパク質として調製することができる。例えばヒト抗体鎖の少なくとも１つの定常領域をコードする核酸は、本発明のミメティボディに使用するための連続タンパク質を生産するために発現させることができる。例えば単鎖抗体に関してはＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，９４６，７７８号明細書、およびＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６（１９８８）を参照にされたい。
【００５６】
本明細書で使用する「ヒトの抗体」という用語は、実質的にタンパク質の各部分（例えばＧＬＰ−１ペプチド、ＣＨドメイン（例えばＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、Ｖ））がヒトで実質的に非免疫原性であり、わずかな配列の変化（ｃｈａｎｇｅ）または変更（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）を含む抗体を指す。そのような変化または変更は任意に、そして好ましくは非修飾ヒト抗体または本発明のミメティボディに比べて、ヒトにおける免疫原性を保持しているか、または減少している。すなわちヒト抗体および対応する本発明のＧＬＰ−１ミメティボディは、キメラまたはヒト化抗体とは区別される。ＧＬＰ−１ミメティボディは、ヒトの免疫グロブリン（例えば重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物または細胞により生産されることができると指摘することができる。
【００５７】
その少なくとも１つのタンパク質リガンドに特異的なヒトのミメティボディは、単離されたＧＬＰ−１受容体またはそのタンパク質（合成ペプチドのような合成分子を含む）のような適切なリガンドに対して設計することができる。そのようなミメティボディの調製
を既知の技術を使用して行い、そして少なくとも１つのタンパク質またはその部分のリガンド結合領域または配列を同定し、そして特性決定する。
【００５８】
好適な態様では、本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、少なくとも１つの細胞株、混合細胞株、不死化細胞、または不死化および／または培養細胞のクローン群により生産される。不死化したタンパク質生産細胞は、適当な方法を使用して生産することができる。好ましくは少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、機能的に再配列されたか、または機能的な再配列を受けることができ、そしてさらに本明細書に記載するミメティボディ構造、例えば限定するわけではないが式（Ｉ）を含んでなる少なくとも１つのヒト免疫グロブリン座から誘導されるか、またはそれに実質的に類似する配列を有するＤＮＡを含んでなる核酸またはベクターを提供することにより生成され、ここで当該技術分野で知られているようにＣ−末端可変領域の部分はＶに、ヒンジ領域はＨに、ＣＨ２はＣＨ２に、そしてＣＨ３はＣＨ３に使用することができる。
【００５９】
本明細書で使用する用語「機能的に再配列された」とは、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えを受け、それにより免疫グロブリン鎖（例えば重鎖）、またはその任意の部分をコードする免疫グロブリン遺伝子を生産する免疫グロブリン座に由来する核酸のセグメントを指す。機能的に再配列された免疫グロブリン遺伝子は、例えばヌクレオチドシークエンシング、ハイブリダイゼーション（例えばサザンブロッティング、ノーザンブロッティング）のような適切な方法を使用して、遺伝子セグメント間のコーディングジョイント（ｃｏｄｉｎｇ  ｊｏｉｎｔｓ）にアニールすることができるプローブ、または遺伝子セグメント間のコーディングジョイントにアニールすることができるプライマーを用いた免疫グロブリン遺伝子の酵素的増幅（例えばポリメラーゼ連鎖反応）を使用して、直接的または間接的に同定することができる。細胞が特定の可変領域または特定の配列（例えば少なくとも１つのＰ配列）を含んでなる可変領域を含んでなるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは部分もしくはバリアントを生産するかどうかも、適切な方法を使用して決定することができる。
【００６０】
本発明のミメティボディ、特定部分およびバリアントは、そのようなミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを乳の中に生産するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジ等のようなトランスジェニック動物または哺乳動物を提供するために、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードする核酸を使用して調製することもできる。そのような動物は抗体コード配列について応用される既知の方法を使用して提供することができる。例えば限定するわけではないが、米国特許第５，８２７，６９０号；同第５，８４９，９９２号；同第４，８７３，３１６号；同第５，８４９，９９２号；同第５，９９４，６１６号；同第５，５６５，３６２号；同第５，３０４，４８９号明細書等（これらの各々は引用により全部、本明細書に編入する）を参照にされたい。
【００６１】
本発明のミメティボディ、特定部分およびバリアントは、そのようなミメティボディ、特定部分もしくはバリアントを、植物の一部またはそれらから培養した細胞中に生産するトランスジェニック植物および培養植物細胞（例えば限定するわけではないが、タバコおよびトウモロコシ）を提供するために、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードする核酸を使用してさらに調製することができる。非限定的な例として、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコの葉が、例えば誘導性プロモーターを使用して大量の組換えタンパク質を提供するために成功裏に使用されてきた。例えばＣｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０  ９５−１１８（１９９９）および
そこに引用されている技術文献を参照にされたい。またトランスジェニックトウモロコシまたはコーンは、他の組換え系で生産されたものに、または天然の起源から精製されたものに等しい生物学的活性を持つ哺乳動物のタンパク質を工業的生産レベルで発現するために使用されてきた。例えばＨｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９）およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。単鎖ミメティボディ（ｓｃＦｖ’ｓ）のような抗体フラグメントを含め、抗体はタバコ種子およびジャガイモの塊茎を含むトランスジェニック植物の種子からも大量に生産されてきた。例えばＣｏｎｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８）およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。すなわち本発明のミメティボディ、特定部分およびバリアントは、既知の方法に従いトランスジェニック植物を使用して生産することもできる。また例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．，１９９９）、Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）；およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。上記参考文献は引用により全部、本明細書に編入する。
【００６２】
本発明のミメティボディは、広い範囲の親和性（ＫＤ）でヒトのタンパク質リガンドに結合することができる。好適な態様では、本発明の少なくとも１つのヒトＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディは場合により高い親和性で少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。例えば本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディは、約１０−７Ｍ以下のＫＤ、またはより好ましくは約０．１〜９  ９（またはこの中の任意の範囲もしくは値）Ｘ１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０Ｍ、１０−１１、１０−１２または１０−１３以下のＫＤ、またはこの中の任意の範囲もしくは値で少なくとも１つのタンパク質リガンドに結合することができる。
【００６３】
少なくとも１つのタンパク質リガンドに関するＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディの親和性またはアビディティーは、例えば抗体−抗原結合親和性またはアビディティを決定するために使用されるような適当な方法を使用して実験的に定めることができる。（例えばＢｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．，「抗体−抗原相互作用（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）」、基本的免疫学（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）で、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．編集、ラベン（Ｒａｖｅｎ）出版：ニューヨーク、ニューヨーク州（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  免疫学（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、Ｗ．Ｈ．フリーマン  アンド  カンパニー（Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）：ニューヨーク、ニューヨーク州（１９９２）；およびそこに記載されている方法を参照にされたい）。測定された特定のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ−リガンド相互作用の親和性は、異なる条件下（例えば、塩濃度、ｐＨ）で測定すれば変動し得る。すなわち親和性および他のリガンド−結合パラメーター（例えばＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディおよびリガンドの標準化された溶液、および本明細書に記載するか、または当該技術分野で知られているバッファーのような標準化バッファーを用いて作成される。
【００６４】
核酸分子
少なくとも１つの配列番号１および６ならびに抗体の少なくとも１つの部分の連続するアミノ酸の少なくとも９０−１００％をコードするヌクレオチド配列（ここで上記配列は式（Ｉ）のＰ配列として挿入されて、本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディを提供し、さらに特定のフラグメント、バリアントまたはそのコンセンサス配列を含んでなる）、またはこれらの配列の少なくとも１つを含んでなる寄託されたベクターのような本明細書に提供する情報を使用して、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしく
はミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードする本発明の核酸分子は、本明細書に記載する方法または当該技術分野で知られているように得ることができる。
【００６５】
本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡまたは他の任意の形態のようなＲＮＡの形態、あるいは限定するわけではないがクローニングにより得た、または合成的に生成されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを含むＤＮＡの形態、またはそれらの任意の組み合わせであることができる。ＤＮＡは３本鎖、２本鎖もしくは１本鎖、またはそれらの組み合わせであることができる。ＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも１つの鎖の部分はコード鎖（センス鎖としても知られている）であることができ、またはそれは非コード鎖（アンチ−センス鎖とも言われる）であることができる。
【００６６】
本発明の単離された核酸分子は、場合により１もしくは複数のイントロンを含むオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含んでなる核酸分子、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのコード配列を含んでなる核酸分子、および上記のものとは実質的に異なるが、遺伝子暗号の縮重によりそれでも本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディをコードするヌクレオチド配列を含んで成る核酸分子を含むことができる。もちろん遺伝子暗号は当該技術分野では周知である。すなわち当業者には本発明の特異的なＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードするそのような縮重核酸バリアントを生成することは日常的なことである。例えばＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，同上を参照にされたい。そしてそのような核酸バリアントは本発明に包含される。
【００６７】
本明細書に示すように、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードする核酸を含んで成る本発明の核酸分子は、限定するわけではないが自身によりＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディフラグメントのアミノ酸配列をコードするもの、全ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくはそれらの部分のコード配列；ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、フラグメントもしくは部分のコード配列、ならびにスプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含む（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）転写、ｍＲＮＡプロセッシングに役割を果たす、転写された、非翻訳配列のような限定するわけではない非コード５’および３’配列を含むさらなる非コード配列と一緒に、少なくとも１つのイントロンのような前記のさらなるコード配列を含むか、または含まない少なくとも１つのシグナルリーダーまたは融合ペプチドのコード配列のようなさらなる配列、さらなる機能性を提供する配列のようなさらなるアミノ酸をコードするさらなるコード配列を含むことができる。すなわちＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードする配列は、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディフラグメントもしくは部分を含んで成る融合ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの精製を容易にするペプチドをコードする配列のようなマーカー配列と融合させることができる。
【００６８】
本明細書に記載するポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は選択的なハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に開示するポリヌクレオチド、またはその特定バリアントもしくは部分を含む本明細書に開示する他のものとハイブリダイズする単離された核酸を提供する。すなわち本態様のポリヌクレオチドは、そのようなポリヌクレオチドを含んで成る核酸を単離し、検出し、かつ／または定量するために使用することができる。
【００６９】
相補的配列に比べて低下した配列同一性を有する配列に採用する低または中程度のストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件が典型的（しかし排他的ではなく）である
。中および高ストリンジェンシー条件も、より大きな同一性の配列のために場合により使用することができる。低ストリンジェンシー条件は、約４０−９９％の配列同一性を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能とし、そしてオーソロガス（ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ）またはパラロガス（ｐａｒａｌｏｇｏｕｓ）配列を同定するために使用することができる。
【００７０】
場合により本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載するポリヌクレオチドによりコードされるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントの少なくとも一部をコードする。本発明のポリヌクレオチドは、本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードするポリヌクレオチドへの選択的ハイブリダイゼーションに使用できる核酸配列を包含する。例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上；Ｃｏｌｌｉｇａｎ、同上を参照にされたい（各々、引用により全部、本明細書に編入する）。
【００７１】
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、当該技術分野で周知な（ａ）組換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、またはそれらの組み合わせを使用して作成することができる。
【００７２】
核酸は本発明のポリヌクレオチドに加えた配列を都合よく含んで成ることができる。例えばポリヌクレオチドの単離を補助するために、１もしくは複数のエンドヌクレアーゼ制限部位を含んで成るマルチクローニング部位を核酸に挿入することができる。また翻訳可能な配列を、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を補助するために挿入することができる。例えばヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための都合のよい手段を提供する。本発明の核酸（コード配列を除く）は場合により、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプターまたはリンカーである。
【００７３】
クローニングおよび／または発現における機能を至適化するために、ポリヌクレオチドの単離を補助するために、またはポリヌクレオチドの細胞への導入を向上させるために、そのようなクローニングおよび／発現配列にさらなる配列を加えることができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は、当該技術分野では周知である。例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、同上を参照にされたい。
【００７４】
核酸を構築するための組換え法
ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはそれらの任意の組み合わせのような本発明の単離された核酸組成物は、当業者に既知な多数のクローニング法を使用して生物起源から得ることができる。幾つかの態様では、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリー中の所望する配列を同定するために、適切なストリンジェンシー条件下で本発明のポリヌクレオチドと選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを使用する。ＲＮＡの単離、およびｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は、当業者には周知である。（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、同上を参照にされたい）。
【００７５】
核酸分子を構築するための合成法
本発明の単離された核酸は、既知の方法で直接的な化学合成により調製することもできる（例えばＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、同上を参照にされたい）。化学合成は一般に１本鎖オリゴヌクレオチドを生成し、これを相補的配列とのハイブリダイゼーションにより、または１本鎖を鋳型として使用したＤＮＡポリメラーゼによる重合化により２本鎖ＤＮＡに転換することができる。当業者はＤＮＡの化学合成は約１００以上の塩基の配列に限定され得るが、より長い配列は短い配列の連結により得ることができると認識するだろ
う。
【００７６】
組換え発現カセット
本発明はさらに、本発明の核酸を含んでなる組換え発現カセットを提供する。本発明の核酸配列、例えば本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをコードするｃＤＮＡまたはゲノム配列は、少なくとも１つの所望する宿主細胞に導入することができる組換え発現カセットを構築するために使用することができる。組換え発現カセットは典型的には、意図する宿主細胞でポリヌクレオチドの転写を支配する転写開始調節配列に操作可能に連結された本発明のポリヌクレオチドを含んでなる。ヘテロロガスおよび非ヘテロロガス（すなわち内因性）の両方のプロモーターを使用して、本発明の核酸の発現を支配することができる。
【００７７】
幾つかの態様では、プロモーター、エンハンサーまたは他の要素として役立つ単離された核酸は、本発明のポリヌクレオチドの発現をアップまたはダウンレギュレートするように、非ヘテロロガス状態の本発明のポリヌクレオチドの適当な位置（上流、下流またはイントロン中）に導入することができる。例えば内因性プロモーターを当該技術分野で知られているように突然変異、欠失および／または置換によりインビボまたはインビトロで改変することができる。本発明のポリヌクレオチドは、所望によりセンスまたはアンチセンス方向のいずれかで発現することができる。センスまたはアンチセンス方向のいずれかの遺伝子発現の制御は、観察可能な特性に直接的な影響を有することができると考えられる。サプレッションの別の方法はセンスサプレッションである。センス方向に形成された核酸の導入は、標的遺伝子の転写を遮断する効果的な手段であることが示された。
【００７８】
ベクターおよび宿主細胞
また本発明は、本発明の単離された核酸分子を含むベクター、組換えベクターにより遺伝的に操作された宿主細胞、および当該技術分野で周知な組換え法による少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントの生産に関する。例えばＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．、同上；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、同上（各々、引用により全部、本明細書に編入する）を参照にされたい。
【００７９】
ポリヌクレオチドは場合により、宿主中での増殖のための選択可能なマーカーを含むベクターに連結することができる。一般にプラスミドベクターは電気穿孔等のような適当な既知の方法を使用して細胞に導入され、他の既知の方法にはリン酸カルシウム沈殿のような沈殿として、または荷電した脂質との複合体でのベクターの使用を含む。ベクターがウイルスである場合、適当なパッケージング細胞株を使用してインビトロでパッケージングし、そして次いで宿主細胞に形質導入することができる。
【００８０】
ＤＮＡ挿入物は適当なプロモーターに操作可能に連結されるべきである。発現構築物は任意に少なくとも１つの転写開始、終結用の部位、および転写領域中に翻訳のためのリボソーム結合部位をさらに含むだろう。構築物により発現された成熟転写産物のコード部分は、好ましくは最初に翻訳開始、および翻訳されるべきｍＲＮＡの終わりに適切に位置する終結コドン（例えばＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含み、ＵＡＡおよびＵＡＧが哺乳動物または真核細胞の発現には好適である。
【００８１】
発現ベクターは好ましくは、しかし任意に少なくとも１つの選択可能なマーカーを含む。そのようなマーカーには例えば限定するわけではないが、真核細胞培養用のメトトレキセート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、同第４，６５６，１３４号、同第４，９５６，２８８号、同第５，１４９，６３６号、同第５，１７９，０１７号明細書、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、マイコフェノール酸、またはグルタミンシンテターゼ（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号、同第５，７７０，３５９号、同第５，８２７，７３９号細書）耐性、そして大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および他の細菌または原核細胞での培養にはテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含む（上記の特許明細書は引用により全部、本明細書に編入する）。上記の宿主細胞に関する適当な培養基および条件は、当該技術分野では既知である。適当なベクターは当業者には直ちに明らかである。ベクター構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染または他の既知の方法により行うことができる。そのような方法はＳａｍｂｒｏｏｋ、同上、第１〜４および１６〜１８章、Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、第１、９、１３、１５、１６章のように当該技術分野で記載されている。
【００８２】
本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、融合タンパク質のように修飾された形態で発現することができ、そして分泌シグナルだけでなく、さらにヘテロロガスな機能的領域を含むことができる。例えばさらなるアミノ酸の領域、特に荷電したアミノ酸を、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのＮ−末端に付加して、宿主細胞中の、精製中の、あるいは後の取り扱いおよび保存中の安定性および持続性を向上させることができる。またペプチド部分を本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントに付加して、精製を容易することができる。そのような領域は、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはその少なくとも１つのフラグメントの最終調製前に除去することができる。そのような方法は多くの標準的な研究室用マニュアル、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ、同上、第１７．２９〜１７．４２および１８．１〜１８．７４章；Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、第１６、１７および１８章に記載されている。
【００８３】
当業者は本発明のタンパク質をコードする核酸の発現に利用可能な多数の発現系についての知識がある。
【００８４】
ミメティボディ、その特定部分もしくはバリアントの生産に有用な細胞培養の具体例は哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞系は単層状態の細胞であることが多いが、哺乳動物細胞懸濁物またはバイオリアクターも使用することができる。完全なグリコシル化タンパク質を発現することができる多数の適当な宿主細胞株が当該技術分野で開発され、そしてそれにはＣＯＳ−１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ−７（例えばＡＴＣＣ
ＣＲＬ−１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０）、ＣＨＯ（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１０、ＤＧ−４４）およびＢＳＣ−１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６）細胞株、ｈｅｐＧ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、２９３細胞、ＨｅＬａ細胞等を含み、これらは例えばバージニア州マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクションから容易に入手できる。好適な宿主細胞には骨髄腫およびリンパ腫細胞のようなリンパ節起源の細胞を含む。特に好適な宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ寄託番号ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ寄託番号ＣＲＬ−１８５１）である。
【００８５】
これらの細胞用の発現ベクターは、限定するわけではないが１もしくは複数の以下のような発現制御配列を含むことができる；複製起点、プロモーター（例えば後期または初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（例えば米国特許第５，１６８，０６２号；同第５，３８５，８３９号明細書）、ＨＳＶ  ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホリグリセレート  キナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号明細書）、少なくとも１つのヒト免疫グロブリンプロモーター、エンハンサーおよび／またはリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０ラージＴＡｇポリＡ付加部位）および転写終結配列のようなプロセッシング情報部位。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．、同上；Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ｅｔ  ａｌ．、同上を参照にされたい。本発明の核酸またはタンパク質の生産に有用な他の細胞は知られており、かつ／または例えば細胞株およびハイブリドーマのアメリカンタイプカルチャーコレクションカタログ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）あるいは既知の他の市販の供給源から入手可能である。
【００８６】
真核宿主細胞を使用する時、典型的にはポリアデニル化または転写終結配列をベクターに包含する。終結配列の例は、ウシ成長ホルモン遺伝子に由来するポリアデニル化配列である。転写の正確なスプライシングのための配列も含むことができる。スプライシング配列の例は、ＳＶ４０に由来するＶＰ１イントロン（Ｓｐｒａｇｕｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３））である。さらに当該技術分野で既知であるように、宿主細胞中で複製を制御する遺伝子配列をベクターに包含することができる。
【００８７】
ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくはその特定部分もしくはバリアントの精製
ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、限定するわけではないがプロテインＡ精製、硫酸アンモニウムもしくはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンもしくはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ハイドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む周知な方法により、組換え細胞培養物から回収し、そして精製することができる。高性能液体クロマトグラフィー（“ＨＰＬＣ”）も精製に使用することができる。例えばＣｏｌｌｉｇａｎ、免疫学における現在のプロトコール、またはタンパク質科学における現在のプロトコール、ジョン  ウィリー  ＆  サンズ、ニューヨーク、ニューヨーク州（１９９７−２００５）、例えば第１、４、６、８、９、１０章を参照にされたい（各々が全部、引用により本明細書に編入される）。
【００８８】
本発明のミメティボディまたは特定部分またはバリアントには、自然に精製された生成物、化学合成法の生成物、および例えば酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む真核細胞宿主から組換え技術により生産される産物を含む。組換え生産法で使用する宿主に依存して、本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分またはバリアントはグリコシル化されることができ、または非グリコシル化であることができるが、グリコシル化が好適である。そのような方法は：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、同上、第１７．３７〜１７．４２；Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、第１０、１２、１３、１６、１８および２０章、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、タンパク質科学（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、同上、第１２〜１４（すべて引用により本明細書に編入する）のような多くの標準的な研究室マニュアルに記載されている。
【００８９】
ミメティボディ、特定フラグメントおよび／またはバリアント
本発明の単離されたミメティボディは、本明細書でさらに完全に検討する本発明の１つのポリヌクレオチドによりコードされるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント、あるいは任意の単離もしくは調製されたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくはその特定部分もしくはバリアントを含んでなる。
【００９０】
好ましくはＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくはリガンド結合部分またはバリアントは、少なくとも１つのＧＬＰ−１タンパク質リガンドに結合し、そしてこれにより対応するタンパク質またはそのフラグメントの少なくとも１つのＧＬＰ−１生物活性を提供する。種々の治療的または診断的に重要なタンパク質が当該技術分野では周知
であり、そしてそのようなタンパク質の適切なアッセイまたは生物学的活性も当該技術分野では周知である。
【００９１】
本発明に適切なＧＬＰ−１ペプチド、バリアントおよび誘導体の非限定的例は、配列番号１に表される：Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｇｌｙ−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１、ここで：Ｘａａ２はＡｌａ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ３はＧｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ５はＴｈｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ６はＰｈｅ，Ｈｉｓ，ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ７はＴｈｒまたはＡｓｎであり；Ｘａａ８はＳｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ９はＡｓｐまたはＧｌｕであり；Ｘａａ１０はＶａｌ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１１はＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１２はＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１３はＴｙｒ，Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１４はＬｅｕ，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１５はＧｌｕ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１６はＧｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１７はＧｌｎ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１８はＡｌａ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１９はＡｌａ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ２０はＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，ＧｌｕまたはＡｓｐであり；Ｘａａ２１はＧｌｕ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ２３はＩｌｅ，Ａｌａ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｕであり；Ｘａａ２４はＡｌａ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ２５はＴｒｐ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ２６  ｉｓ  Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ  ｏｒ  Ｌｙｓ；Ｘａａ２７はＶａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ２８はＬｙｓ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，ＧｌｕまたはＡｓｐで���り；Ｘａａ２９はＧｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；Ｘａａ３０はＡｒｇ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｇｌｕ，ＡｓｐまたはＬｙｓであり；そしてＸａａ３１はＧｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｙｓである。
【００９２】
別の好適なＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体の群は、配列番号６に例示される：Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｘａａ１２−Ｔｙｒ−Ｘａａ１４−Ｇｌｕ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｌｙｓ−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｇｌｙ−Ｘａａ３０、ここで：Ｘａａ２はＡｌａ，ＧｌｙまたはＳｅｒであり；Ｘａａ３はＧｌｕまたはＡｓｐであり；Ｘａａ
６はＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｘａａ７はＴｈｒまたはＡｓｎであり；Ｘａａ８はＳｅｒ，ＴｈｒまたはＡｌａであり；Ｘａａ９はＡｓｐまたはＧｌｕであり；Ｘａａ１０はＶａｌ，Ｌｅｕ，ＭｅｔまたはＩｌｅであり；Ｘａａ１２はＳｅｒまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１４はＬｅｕ，ＡｌａまたはＭｅｔであり；Ｘａａ１６はＧｌｙ，Ａｌａ，ＧｌｕまたはＡｓｐであり；Ｘａａ１７はＧｌｎまたはＧｌｕであり；Ｘａａ１８はＡｌａまたはＬｙｓであり；Ｘａａ１９はＡｌａ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＭｅｔであり；Ｘａａ２１はＧｌｕまたはＬｅｕであり；Ｘａａ２３はＩｌｅ，Ａｌａ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｕであり；Ｘａａ２７はＶａｌまたはＬｙｓであり；Ｘａａ２８はＬｙｓまたはＡｓｎであり；そしてＸａａ３０はＡｒｇまたはＧｌｕである。
【００９３】
これらのペプチドは開示され、かつ／または当該技術分野で既知の方法により調製することができる。配列中（および他に特別な場合を特定しない限り本明細書中）のＸａａｓは特定のアミノ酸残基、その誘導体または修飾アミノ酸を含む。酵素であるジペプチジル−ペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）は、投与したＧＬＰ−１の生体内で観察される迅速なインビボ不活性化の原因となり得るので、アゴニストもしくはミメティボディの内容においてＤＰＰ−ＩＶの活性から保護されるＧＬＰ−１ペプチド、相同体、類似体および誘導体が好適である。
【００９４】
少なくとも１つのＧＬＰ−１の生物学的活性を一部または好ましくは実質的に提供するＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、またはその特定部分もしくはそのバリアントは、ＧＬＰ−１リガンドに結合し、そしてこれによりＧＬＰ−１受容体のようなＧＬＰ−１の少なくとも１つのリガンドへの結合を介して、または他のタンパク質依存的もしくは媒介型メカニズムを介して媒介される少なくとも１つの活性を提供することができる。本明細書で使用する用語「ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ活性」とは、アッセイに依存して約２０−１０，０００％まで、好ましくは少なくとも約６０，７０，８０，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９，１００，１１０，１２０，１３０，１４０，１５０，１６０，１７０，１８０，１９０，２００，２５０，３００，３５０，４００，４５０，５００，５５０，６００，７００，８００，９００，１０００，２０００，３０００，４０００，５０００，６０００，７０００，８０００，９０００％以上まで、少なくとも１つのＧＬＰ−１依存的活性をモジュレートまたは引き起こすことができるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディを指す。
【００９５】
ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントが少なくとも１つのタンパク質依存的活性を提供する能力は、好ましくは本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知の少なくとも１つの適当なタンパク質生物学的アッセイにより評価される。本発明のヒトＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ等）またはアイソタイプに類似することができ、そして少なくともカッパまたはラムダ軽鎖の部分を含んでなることができる。１つの態様では、ヒトＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントはＩｇＧ重鎖可変フラグメント、ヒンジ領域、ＣＨ２およびＣＨ３、例えば少なくとも１つのアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４を含んでなる。
【００９６】
本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、少なくとも１つのリガンド、サブユニット、フラグメント、部分またはそれらの任意の組み合わせに結合する。本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、特定部分もしくはバリアントの少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチド、バリアントまたは誘導体は、場合によりリガンドの少なくとも１つの特定したエピトープに結合することができる。結合するエピトープは、少なくとも１〜３個のアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸配列から、ＧＬＰ−１受容体またはその部分の
ようなタンパク質リガンドの配列の連続するアミノ酸の全特定部分の組み合わせを含んでなることができる。
【００９７】
そのようなミメティボディは、既知の技術を使用して式（Ｉ）のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディの種々の部分を一緒に連結することにより、組換えＤＮＡ技術の既知の技術を使用してＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディをコードする少なくとも１つの核酸分子を調製し、そして発現させることにより、あるいは化学合成のような他の適切な方法を使用することにより調製することができる。
【００９８】
受容体のようなヒトのＧＬＰ−１リンドに結合し、そして定めた重鎖または軽鎖可変領域のその一部を含んでなるミメティボディは、ファージディスプレイ（Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，１（５）：８６３−８６８（１９９８））、または当該技術分野で知られているようなトランスジェニック動物を使用する方法のような適切な方法を使用して調製することができる。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、特定部分もしくはバリアントは、コード核酸またはその部分を適当な宿主細胞で使用して発現させることができる。
【００９９】
また本発明は、本明細書に記載するアミノ酸配列と実質的に同じ配列中のアミノ酸を含んでなるミメティボディ、リガンド結合フラグメントおよび免疫グロブリン鎖に関する。好ましくはそのようなミメティボディまたはそのリガンド結合フラグメントは、受容体のようなヒトのＧＬＰ−１リガンドと高い親和性で（例えば約１０−７Ｍ以下のＫＤ）で結合できる。本明細書に記載する配列と実質的に同じアミノ酸配列には、保存的アミノ酸置換、ならびにアミノ酸欠失および／または挿入を含んで成る配列を含む。保存的アミノ酸置換とは、第１アミノ酸と類似の化学的および／または物理的特性（例えば、荷電、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第２のアミノ酸に、第１アミノ酸を置き換えることを言う。保存的置換には、以下の群内で１つのアミノ酸が別のアミノ酸に置き換わることを含む：リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパルテート（Ｄ）およびグルタメート（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ。
【０１００】
アミノ酸暗号
本発明のミメティボディまたは特定部分またはバリアントを作るアミノ酸は、しばしば略記される。アミノ酸の命名法は当該技術分野で周知であるような、その１文字暗号、その３文字暗号、名前または３ヌクレオチドコドン（１つまたは複数）によるアミノ酸の命名により示すことができる（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，細胞の分子生物学（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ）、第３版、ガーランド（Ｇａｒｌａｎｄ）出版社、ニューヨーク、１９９４を参照にされたい）：
【０１０１】
本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、本明細書で特定する自然な突然変異またはヒトの操作のいずれかに由来する１もしくは複数のアミノ酸置換、欠失または付加を含むことができる。本発明に使用することができるそのようなまたは他の配列には、限定するわけではないが配列番号４７〜６４に提示する以下の配列を含む。
【０１０２】
もちろん当業者は多くのアミノ酸置換を、上記に記載したものを含む多くの因子に依存して作るだろう。一般に、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディのアミノ酸置換、挿入または欠失の数は、本明細書に特定するように１〜３０またはその中の範囲もしくは値のように４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個のアミノ酸より多くない。
【０１０３】
本発明の式（Ｉ）（（Ｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ））では、式ＩのＶ、Ｈ、ＣＨ２、ＣＨ３部分は、任意の適切なヒトまたはヒトに適合した配列（例えば図１〜１８および表１に提示するような）、または当該技術分野で知られているような配列、またはその組み合わせもしくはコンセンサス配列、またはその任意の融合タンパク質、好ましくはヒトに投与した時に免疫原性を最少にするために操作されたヒト起源のものであることができる。
【０１０４】
Ｐ部分は、限定するわけではないが配列番号１に提示されるような、またはその任意の組み合わせもしくはコンセンサス配列のような当該技術分野で知られ、または本明細書に記載する少なくとも１つのＧＬＰ−１治療用ペプチド、またはその融合タンパク質を含んでなることができる。好適な態様では、Ｐ部分は少なくとも１つの配列番号６の配列、またはその組み合わせもしくはコンセンサス配列を有する少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチド、またはその任意の融合タンパク質を含んでなることができる。
【０１０５】
任意のリンカー配列は、当該技術分野で知られているような任意の適切なペプチドリンカーであることができる。好適な配列にはＧおよびＳの組み合わせ、例えばＸ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−を含む。−Ｘｎ、ここでＸはＧまたはＳであることができ、そしてｎは５〜３０であることができる。非限定的例には、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号１６）、ＧＳＧＧＧＳ（配列番号１７）、ＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１８）、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号１９）およびＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号２０）等を含む。
【０１０６】
機能に必須な本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのアミノ酸は、位置指定突然変異誘発法またはアラニン走査突然変異誘発法（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、同上、第８、１５章；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４  １０８１−１０８５（１９８９））のような当該技術分野で知られている方法により同定することができる。後者の手法は、１つのアラニン突然変異を分子の各残基に導入する。次いで生じた変異体分子は、限定するわけではないが本明細書に特定し、または当該技術分野で知られているような少なくとも１つのタンパク質関連活性のような生物学的活性について試験される。またＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの結合に重要な部位は、結晶化、核磁気共鳴法または光親和性（ｐｈｏｔｏａｆｆｉｎｉｔｙ）標識のような構造的分析により同定することができる（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  ２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ  Ｖｏｓ，ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【０１０７】
本発明のミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、式（Ｉ）のＰ部分として、例えば限定するわけではないが配列番号１および６の少なくとも１つの部分を含んでなることができる。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、さらに式（Ｉ）のＰ部分として少なくとも１つのポリペプチドの少なくとも１つの機能的部分、配列番号１および６の少なくとも１つの少なくとも９０〜１００％を場合により含んでなることができる。上に列挙した活性の少なくとも１つを強化または維持することができる非限定的なバリアントには、限定するわけではないが、該ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディの適切な生物学的活性もしくは機能に有意な影響を及ぼさない置換、挿入もしくは欠失の少なくとも１つに対応する少なくとも１つの突然変異をさらに含んでなる任意の上記ポリペプチドを含む。
【０１０８】
１つの態様では、Ｐアミノ酸配列またはその部分は、配列番号１および６の少なくとも
１つに対応する部分のアミノ酸配列に対応する約９０〜１００％の同一性（すなわち９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはその中の任意の範囲および値）を有する。好ましくは９０〜１００％のアミノ酸同一性（すなわち９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはその中の任意の範囲および値）は、当該技術分野で知られているような適切なコンピューターアルゴリズムを使用して決定される。
【０１０９】
本発明のミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントに由来する任意の数の連続したアミノ酸残基を含んでなることができ、ここでその数はＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ中の連続残基の１０〜１００％の数からなる整数群から選択される。場合により連続するアミノ酸のこの部分列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０以上のアミノ酸長、またはその中の任意の範囲もしくは値である。さらにそのような部分列の数は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上のような１から２０からなる群から選択される任意の整数であることができる。
【０１１０】
当業者は、本発明が少なくとも１つの生物的に活性な本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントを含むと考えるだろう。生物的に活性なミメティボディまたは特定部分またはバリアントは、天然（非−合成）、内因性または関連する、および既知の挿入され、または融合されたタンパク質または特定部分またはバリアントの少なくとも２０％、３０％または４０％、そして好ましくは少なくとも５０％、６０％または７０％、そして最も好ましくは少なくとも８０％、９０％または９５％〜１０００％の比活性を有する。酵素活性および基質特異性を測定するアッセイおよび定量法は、当業者には周知である。
【０１１１】
別の観点では、本発明は有機部分の共有結合により修飾された本明細書に記載するヒトのミメティボディおよびリガンド結合フラグメントに関する。そのような修飾は改善された薬物動態学的特性（例えばインビボ血清半減期の上昇）を持つＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはリガンド結合フラグメントを生じることができる。この有機部分は直鎖または分岐した親水性のポリマー性基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であることができる。特定の態様では親水性のポリマー性基は約８００〜約１２０，０００ダルトンの分子量を有することができ、そしてポリアルカングリコール（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーまたはポリビニルピロリドンであることができ、そして脂肪酸または脂肪酸エステル基は約８〜約４０個の炭素原子を含んで成ることができる。
【０１１２】
本発明の修飾されたミメティボディおよびリガンド結合フラグメントは、直接的または間接的にＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントに共有的に結合した１以上の有機部分を含んで成ることができる。本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはリガンド結合フラグメントに結合する各有機部分は、独立して親水性ポリマー性基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であることができる。本明細書で使用する用語「脂肪酸」は、モノ−カルボン酸およびジ−カルボン酸を包含する。本明細書で使用する用語「親水性のポリマー性基」とは、水中でオクタン中よりも溶解性の有機ポリマーを指す。例えばポリリシンは水中でオクタン中より可溶性である。すなわちポリリシンの共有結合により修飾されたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディは、本発明に包含される。本発明のミメティボディを修飾するために適する親水性ポリマーは直鎖または分岐であることができ、そして例えばポリアルカングリコール（例えば、ＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧ等）、炭水化物（例えばデキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖等）、親水性アミノ酸のポリマー（例えばポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパルテート等）、ポリアルカンオキシド（例えばポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド等）、およびポリビニルピロリドンを含む。好ましくは本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディを修飾する親水性ポリマーは、別個の分子量の物体として約８００〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えばＰＥＧ２５００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ７５００、ＰＥＧ９０００、ＰＥＧ１００００、ＰＥＧ１２５００、ＰＥＧ１５０００およびＰＥＧ２０，０００（ここで下付文字は、ダルトンでのポリマーの平均分子量である）を使用することができる。
【０１１３】
親水性のポリマー性基は１〜約６個のアルキル、脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換される親水性ポリマーは、適当な方法を使用することにより調製することができる。例えばアミン基を含んで成るポリマーは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシレートにカップリングすることができ、そして脂肪酸または脂肪酸エステル上で活性化されたカルボキシレート（例えばＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールにより活性化される）を、ポリマー上のヒドロキシル基にカップリングすることができる。
【０１１４】
本発明のミメティボディを修飾するために適切な脂肪酸および脂肪酸エステルは飽和であることができ、あるいは１もしくは複数の不飽和単位を含むことができる。本発明のミメティボディを修飾するために適切な脂肪酸には、例えばｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（Ｃ４０）、シス−Δ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレート）、オールシス−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸等を含む。適当な脂肪酸エステルには、直鎖もしくは分枝低級アルキル基を含んで成るジカルボン酸のモノ−エステルを含む。低級アルキル基は、１から約１２、好ましくは１から約６個の炭素原子を含んで成ることができる。
【０１１５】
修飾されたヒトミメティボディおよびリガンド結合フラグメントは、１もしくは複数の修飾剤を用いた反応によるような適当な方法を使用して調製することができる。本明細書で使用する用語「修飾剤」は、活性化基を含んで成る適当な有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性化基」は、適当な条件下で第２の化学基と反応し、これにより修飾剤と第２の化学基との間に共有結合を形成することができる化学的部分または官能基である。例えばアミン反応性の活性化基には、トシラート、メシラート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）等のような求電子性基を含む。チオールと反応することができる活性化基には、例えばマレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）等を含む。アルデヒド官能基をアミンまたはヒドラジドを含有する分子にカップリングさせることができ、そしてアジド基を三価のリン基と反応させてホスホルアミデートまたはホスホルイミド結合を形成することができる。活性化基を分子に導入する適当な方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．生物結合法（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、アカデミック出版；サンディエゴ、カリフォルニア州、（１９９６）を参照にされたい）。活性化基は有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接、またはリンカー部分、例えば二価のＣ１−Ｃ１２基（ここで１もしくは複数の炭素原子が酸素、窒素または硫黄のようなヘテロ原子に置き換わることができる）を介して結合させることができる。適当なリンカー部分には、例えばテトラエチレングリコール、−（ＣＨ２）３−、−ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−および−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−を含む。リンカー部分を含んで成る修飾剤は、例えばモノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えばモノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）を、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で脂肪酸と反応させて、遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間にアミド結合を形成することにより生成することができる。Ｂｏｃ保護基はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いた処理により生成物から除去し、記載した別のカルボキシレートにカップリングすることができる１級アミンを露出することができるか、または無水マレイン酸と反応させ、そして生じた生成物を環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成することができる（例えばＴｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９２／１６２２１号パンフレットを参照にされたい（この教示は全部、引用により本明細書に編入する））。
【０１１６】
本発明の修飾したミメティボディは、ヒトＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはリガンド結合フラグメントを修飾剤と反応させることにより生成することができる。例えば有機部分は、アミン−反応性修飾剤（例えばＰＥＧのＮＨＳエステル）を使用することにより、非−部位特異的様式でＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディに結合させることができる。修飾したヒトミメティボディまたはリガンド結合フラグメントは、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはリガンド結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば鎖内ジスルフィド結合）を還元することにより調製することもできる。還元されたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたはリガンド結合フラグメントは、次いでチオール−反応性の修飾剤と反応させて、本発明の修飾されたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディを生成することができる。本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアントの特異的部位に結合する有機部分を含んで成る修飾されたヒトミメティボディおよびリガンド結合フラグメントは、逆タンパク質溶解（Ｆｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）；５９−６８（１９９６）；Ｃａｐｅｌｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３（１９９７））のような適当な方法、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，生物結合法（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、アカデミック出版；サンディエゴ、カリフォルニア州１９９６）に記載されている方法を使用して調製することができる。
【０１１７】
ＧＬＰ−１ミメティボディ組成物
また本発明は、自然には存在しない組成物、混合物または形態で提供される、本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で既知であるような少なくとも１つの、少なくとも２つの、少なくとも３つの、少なくとも４つの、少なくとも５つの、少なくとも６以上のミメティボディまたはその特定部分またはバリアントを含んで成る、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディまたは特定部分またはバリアント組成物を提供する。そのような組成物の割合は、当該技術分野で既知の、または本明細書に記載するような液体もしくは乾燥溶液、混合物、懸濁液、乳液またはコロイドとしての重量、容量、濃度、容量モル濃度または重量モル濃度による。
【０１１８】
そのような組成物の割合は、限定するわけではないが０  ００００１、０  ００００３
、０  ００００５、０  ００００９、０  ０００１、０  ０００３、０．  ０００５、０
０００９、０  ００１、０．  ００３、０  ００５、０  ００９、０  ０１、０  ０２、０  ０３、０  ０５、０．  ０９、０  １、０  ２、０．  ３、０  ４、０  ５、０  ６、０  ７、０  ８、０  ９、１  ０、１  １、１  ２、１  ３、１．  ４、１  ５、１  ６、１  ７、１  ８、１  ９、２  ０、２  １、２．  ２、２  ３、２  ４、２  ５、２  ６、２  ７、２  ８、２  ９、３．  ０、３  １、３  ２、３  ３、３  ４、３  ５、３  ６、３  ７、３  ８、３．  ９、４  ０、４  ３、４  ５、４  ６、４  ７、４  ８、４  ９、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９  １、９９．  ２、９９  ３、９９  ４、９９  ５、９９  ６、９９  ７、９９  ８、９９．９％のような、当該技術分野で既知の、または本明細書に記載するような液体、ガスもしくは乾燥溶液、混合物、懸濁液、乳液またはコロイドとしての重量、容量、濃度、容量モル濃度またはモル重量濃度で０  ００００１〜９９  ９９９９パーセントを含んでなることができる。本発明のそのような組成物は、このように限定するわけではないが０  ００００１〜１００ｍｇ／ｍｌおよび／または０  ００００１〜１００ｍｇ／ｇを含む。
【０１１９】
本発明は、治療に有効な量で投与した時、膵島分化を促進し、β−細胞塊を増やし、かつ／またはインスリン分泌を上げ、そして膵島および／またはインスリン生産細胞のアポトーシスを減らし、グルカゴン分泌を抑制し、胃内容排出を遅らせ、そして食物の摂取を減らす少なくとも１つのＧＬＰ−１ミメティボディ組成物を提供する。また本発明は、治療に有効な量で投与した時、糖尿病になる高い危険性がある患者が糖尿病を発症することを遅らせるか、または防ぐ少なくとも１つのＧＬＰ−１ミメティボディ組成物を提供する。また本発明は、治療に有効な量で投与した時、種々の代謝障害による高血糖をモジュレートまたは処置する少なくとも１つのＧＬＰ−１ミメティボディ組成物を提供する。さらに本発明は、治療に有効な量で投与した時、疾患もしくは障害により引き起こされる少なくとも１つの膵臓の機能不全（限定するわけではないが、糖尿病、膵炎、膵臓腫瘍、膵臓ガンおよび付随する症状）をモジュレートまたは処置する少なくとも１つのＧＬＰ−１ミメティボディ組成物を提供する。
【０１２０】
ＧＬＰ−１ミメティボディ組成物は場合により、さらに少なくとも１つのインスリン代謝関連薬、グルコース代謝関連薬、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所薬、栄養剤等から選択される少なくとも１つの化合物またはタンパク質の有効量を含んでなることができる。そのような薬剤は当該技術分野では周知であり、本明細書で提示するそれぞれについて製剤、適用、投薬および投与を含む（例えばＮｕｒｓｉｎｇ  ２００１  薬剤のハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ）、第２１版、スプリングハウス（Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ）社、スプリングハウス、ペンシルバニア州、２００１：健康の専門家の薬剤ガイド（Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ  Ｄｒｕｇ  Ｇｕｉｄｅ）２００１、編集、Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｔａｎｇ、プレンティス−ホール（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ）社、アッパー  サドル  リバー、ニュージャージー州；薬理治療ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ  、編集、アペルトン＆ランゲ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する））。
【０１２１】
糖尿病関連薬は、グリタゾン、インスリンおよび誘導体、スルホニルウレア、メグリチニド、ビグアニド（ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）、アルファ−グルコシダーゼインヒビター、タ
ンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂ、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３、糖新生インヒビター、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ＰＤＨ）インヒビター、脂肪分解インヒビター、脂肪酸化インヒビター、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩおよび／またはＩＩインヒビター、ベータ−３アドレノレセプターアゴニスト、ナトリウムおよびグルコースコートランスポーター（ＳＧＬＴ）インヒビターの少なくとも１つ、あるいは自己免疫抑制、免疫調節、Ｔ細胞の活性化、増殖、移動および／またはサプレッサー細胞機能、Ｔ細胞受容体／ペプチド／ＭＨＣ−ＩＩ相互作用の阻害、Ｔ細胞アネルギーの誘導、自己反応性Ｔ細胞の欠失、脳血管関門をわたるトラフィッキングの減少、炎症性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）（Ｔｈ１）および免疫調節（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ）（Ｔｈ２）サイトカインのバランスの変化、マトリックスメタロプロテアーゼインヒビターの阻害、神経保護、グリオーシスの減少、再−髄鞘形成の促進の１もしくは複数に作用する化合物の少なくとも１つであることができる。
【０１２２】
抗感染薬は、殺アメーバー薬または抗原虫薬、駆虫薬、抗真菌薬、抗マラリア薬、抗結核薬、または抗癩病薬、アミノグルコシド、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、スルホンアミド、フルオロキノロン、抗ウイルス薬、マクロライド抗感染薬および種々雑多な（ｍｉｓｃｅｌｌａｎｅｏｕｓ）抗感染薬から選択される少なくとも１つであることができる。ＣＶ薬は、強心薬、抗不整脈薬、抗狭心薬、抗高血圧症薬、抗高脂血症薬および種々雑多な心臓薬から選択される少なくとも１つであることができる。ＣＮＳ薬は、非麻酔性鎮痛薬から選択される少なくとも１つ、または解熱薬、非ステロイド系抗炎症薬、麻酔薬、またはオピオイド系鎮痛薬、鎮痛−睡眠薬、鎮痙薬、抗鬱薬、抗不安薬、抗精神薬、中枢神経系刺激物、抗パーキンソン病薬、種々雑多な中枢神経系から選択される少なくとも１つであることができる。ＡＮＳ薬は、コリン作用薬（副交感神経作用薬）、抗コリン作用薬、アドレナリン作用薬（交感神経作用薬）、アドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）、骨格筋弛緩薬、神経筋肉遮断薬から選択される少なくとも１つであることができる。気道薬は抗ヒスタミン薬、気管支拡張薬、去痰薬または鎮咳薬および種々雑多な呼吸薬から選択される少なくとも１つであることができる。ＧＩ管薬は、制酸、吸着薬、抗発張剤（ａｎｔｉｆｌａｔｕｌｅｎｔ）、消化酵素、胆石溶解剤、止瀉薬、緩下薬、制吐薬および抗潰瘍薬から選択される少なくとも１つであることができる。ホルモン薬はコルチコステロイド、アンドロゲン、同化性ステロイド、エストロゲン、プロゲスチン、ゴナドトロピン、抗糖尿病薬から選択される少なくとも１つ、少なくとも１つのグルカゴン、甲状腺ホルモン、甲状腺ホルモンアンタゴニスト、下垂体ホルモン、および副甲状腺様薬であることができる。流体および電解質バランスのための薬剤は、利尿剤、電解質、代替溶液、酸化剤およびアルカリ化剤から選択される少なくとも１つであることができる。血液製剤は造血薬、抗凝固薬、血液誘導体オヨビ血栓溶解酵素から選択される少なくとも１つであることができる。抗腫瘍薬はアルキル化剤、代謝拮抗物質、抗生物質系抗腫瘍薬、ホルモンバランスを改変する抗腫瘍薬、種々雑多な抗腫瘍性薬から選択される少なくとも１つであることができる。免疫調節薬は免疫抑制剤、ワクチン、毒素、抗毒素、抗蛇毒素、免疫血清および生物学的応答モディファイヤーから選択される少なくとも１つであることができる。目、耳および鼻の薬は、目の抗感染薬、目の抗炎症薬、縮瞳薬、散瞳薬、目の血管収縮薬および種々雑多な目、耳、鼻の薬から選択される少なくとも１つであることができる。局所薬は局所用抗感染薬、殺疥癬虫薬、殺シラミ薬および局所用コルチコステロイドから選択される少なくとも１つであることができる。栄養剤はビタミン、無機物または熱量源（ｃａｌｏｒｉｃ）から選択される少なくとも１つであることができる。例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブック（Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、同上を参照にされたい。
【０１２３】
少なくとも１つの殺アメーバー薬または抗原虫薬は、アトバクオン（ａｔｏｖａｑｕｏｎｅ）、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、メトロニダゾール、塩酸メトロニダゾールおよびペンタミジンイセチオネートから選択される少なくとも１つであることができる。
少なくとも１つの駆虫薬は、メベンダゾール、ピランテルパモエートおよびチアベンダゾールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗真菌薬は、アンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ硫酸コレステリル複合体、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテリシンＢリポソーマル、フルコナゾール、フルシトシン、グリセオフルビンマイクロサイズ、グリセオフルビンウルトラマイクロサイズ、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ニスタチンおよび塩酸テルビナファイン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗マラリア薬は、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、ドキシサイクリン、硫酸ヒドロキシクロロキン、塩酸メフロキン、リン酸プリマキン、ピリメタミンおよびスルファドキシンを含むピリメタミンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗結核または抗癩病薬は、クロファジミン、シクロセリン、ダプソン、塩酸エタンブトール、イソニアジド、ピラジナミド、リファブチン（ｒｉｆａｂｕｔｉｎ）、リファンピン、リファペンチン（ｒｉｆａｐｅｎｔｉｎ）および硫酸ストレプトマイシンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアミノグリコシドは、硫酸アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、硫酸ゲンタマイシン、硫酸ネオマイシン、硫酸ストレプトマイシンおよび硫酸トブラマイシンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのペニシリンは、アモキシリン／クラブラネートカリウム、アモキシリン三水和物、アンピシリン、アンピシリンナトリウム、アンピシリン三水和物、アンピシリンナトリウム／スルバクタムナトリウム、クロキサシリンナトリウム、ジクロキサシリンナトリウム、メズロシリンナトリウム、ナフシリンナトリウム、オキサシリンナトリウム、ペニシリンＧベンザチン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＧナトリウム、ペニシリンＶカリウム、ピペラシリンナトリウム、ピペラシリンナトリウム／タゾバクタム（ｔａｚｏｂａｃｔａｍ）ナトリウム、チカルシリン二ナトリウムおよびチカルシリン二ナトリウム／クラブラネートカリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのセファロスポリンは、少なくとも１つのセファクロール、セファドロキシル、セファゾリンナトリウム、セフジニル（ｃｅｆｄｉｎｉｒ）、塩酸セフェピム（ｃｅｆｅｐｉｍｅ）、セフィキシム（ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セフメタゾール（ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ）ナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフォテタンジナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフポドキシム  プロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ  ｐｒｏｘｅｔｉｌ）、セフプロジル（ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）、セフタジジム、セフチブテン（ｃｅｆｔｉｂｕｔｅｎ）、セフチゾキシム（ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ）ナトリウム、セフトリアゾンナトリウム、セフロキシム  アキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ  ａｘｅｔｉｌ）、セフロキシムナトリウム、塩酸セファレキシン、セファレキシン一水和物、セフラジン、ロラカルベフ（ｌｏｒａｃａｒｂｅｆ���から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのテトラサイクリンは、塩酸デメクロサイクリン、ドキシサイクリンカルシウム、ドキシサイクリン  ハイクレート（ｈｙｃｌａｔｅ）、塩酸ドキシサイクリン、ドキシサイクリン一水和物、塩酸ミノサイクリン、塩酸テトラサイクリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのスルホンアミドは、コートリモキサゾール（ｃｏ−ｔｒｉｍｏｘａｚｏｌｅ）、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフィソキサゾール、スルフィソキサゾールアセチルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン（ａｌａｔｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、塩酸ロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン（ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、スパルフロキサシン（ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、メシル酸トロバフロキサシン（ｔｒｏｖａｆｌｏｘａｃｉｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン（ａｌａｔｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、塩酸ロメフロキサシン（ｌｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン（ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、スパルフロキサシン（ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、メシル酸トロバフロキサシン（ｔｒｏｖａｆｌｏｘａｃｉｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗ウイルス薬は、硫酸アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ）、アシクロビルナトリウム、塩酸アマンタジン、アンプレナビル（ａｍｐｒｅｎａｖｉｒ）、シドホビル（ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）、メシル酸デラビルジン（ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ）、ジダノシン（ｄｉｄａｎｏｓｉｎｅ）、エファビレンズ（ｅｆａｖｉｒｅｎｚ）、ファムシクロビル（ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）、フォミビルゼン（ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ）ナトリウム、フォスカルネットナトリウム、ガンシクロビル、硫酸インジナビル、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、ラミブジン／ジドブジン、メシル酸ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ）、ネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）、リン酸オセルタミビル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ）、リバビリン、塩酸リマンタジン、リトナビル（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、サキナビル（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）、メシル酸サキナビル、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、塩酸バラシクロビル（ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、ザナミビル、ジドブジンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのマクロリン抗−感染薬は、アジスロマイシン（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、ジリスロマイシン（ｄｉｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、エリスロマイシン塩基、エリスロマイシンエストレート、エチルコハク酸エリスロマイシン、エリスロマイシンラクトビオネート（ｌａｃｔ��ｂｉｏｎａｔｅ）、エリスロマイシンステアレートから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多な抗感染薬は、アズトレオナム、バシトラシン、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム、塩酸クリンダマイシン、塩酸クリンダマイシンパルミテート、リン酸クリンダマイシン、イミペネムおよびシラスタチンナトリウム、メロペネム（ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ）、ニトロフラントイン  マクロクリスタル（ｍａｃｒｏｃｒｙｓｔａｌ）、ニトロフラントイン  ミクロクリスタル（ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌ）、キヌプリスチン（ｑｕｉｎｕｐｒｉｓｔｉｎ）／ダルホプリスチン（ｄａｌｆｏｐｒｉｓｔｉｎ）、塩酸スペクチノマイシン、トリメトプリム、塩酸バンコマイシンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第２４〜２１４頁を参照にされたい。）
【０１２４】
少なくとも１つの筋収縮薬は乳酸アムリノン、ジゴキシン、乳酸ミルリノンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗不整脈薬はアデノシン、塩酸アミオダロン、硫酸アトロピン、ブレチリウムトシラート、塩酸ジルチアゼム、ジソピラミド、リン酸ジソピラミド、塩酸エスモロール、酢酸フレカイニド、フマル酸イブチリド（ｉｂｕｔｉｌｉｄｅ）、塩酸リドカイン、塩酸メキシレチン、塩酸モリシジン（ｍｏｒｉｃｉｚｉｎｅ）、フェニトイン、フェニトインナトリウム、塩酸プロカインアミド、塩酸プロパフェノン、塩酸プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）、重硫酸キニジン、グルコン酸キニジン、ポリガラクツロン酸キニジン、硫酸キニジン、ソタロール、塩酸トカイニド、塩酸ベラパミルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗狭心症薬は、アムロジピジン（ａｍｌｏｄｉｐｉｄｉｎｅ）ベシレート、アミルニトリット、塩酸ベプリジル（ｂｅｐｒｉｄｉｌ）、塩酸ジルチアゼム、イソソルビドジニトレート、イソソルビドモノニトレート、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニトログリセリン、塩酸プロパノロール、ベラパミル、塩酸ベラパミルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗高血圧症薬は、塩酸アセブトロール、アムロジピンベシレート、アテノロール、塩酸ベナゼプリル（ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌ）、塩酸ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール（ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ）、カンデサルタン  シレキセチル（ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ  ｃｉｌｅｘｅｔｉｌ）、カプトプリル、塩酸カルテオロール（ｃａｒｔｅｏｌｏｌ）、カルベディロール、クロニジン、塩酸クロニジン、ジアゾキシド、塩酸ジルチアゼム、メシル酸ドキサゾシン、エナラプリラート、マレイン酸エナラプリル、メシル酸エプロサルタン（ｅｐｒｏｓａｒｔａｎ）、フェロジピン、メシル酸フェノルドパム（ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ）、フォシノプリル（ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌ）ナトリウム、酢酸グアナベンズ、硫酸グアナドレル、塩酸グアンファシン、塩酸ヒドララジン、イルベサルタン（ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）、イスラジピン（ｉｓｒａｄｉｐｉｎｅ）、塩酸ラベタロール、リジノプリル、ロサルタン（ｌｏｓａｒｔａｎ）カリウム、メチルドパ、塩酸メチルドペート、コハク酸メトプロロール、酒石酸メトプロロール、ミノキシジル、塩酸モエキシプリル（ｍｏｅｘｉｐｒｉｌ）、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、ニトロプルシドナトリウム、硫酸ペンブトロール（ｐｅｎｂｕｔｏｌｏｌ）、ペリンドプリル  エルブミン（ｐｅｒｉｎｄｏｐｒｉｌ  ｅｒｂｕｍｉｎｅ）、メシル酸フェントラミン、ピンドロール、塩酸プラゾシン、塩酸プロパノロール、塩酸キナプリル、ラミプリル（ｒａｍｉｐｒｉｌ）、テルミサルタン（ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）、塩酸テラゾシン、マレイン酸チモロール、トランドラプリル（ｔｒａｎｄｏｌａｐｒｉｌ）、バルサルタン（ｖａｌｓａｒｔａｎ）、塩酸ベラパミルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗高脂血症薬は、アトルバスタチン（ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ）カルシウム、セリバスタチン（ｃｅｒｉｖ���ｓｔａｔｉｎ）ナトリウム、コレスチラミン、塩酸コレスチポール、フェノフィブレート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）（微結晶化）、フルバスタチン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）ナトリウム、ゲムフィブロジル、ロバスタチン、ナイアシン、プラバスタチンナトリウム、シンバスタチンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多なＣＶ薬はアブシキシマブ、アルプロスタジル、塩酸アルブタミン（ａｒｂｕｔａｍｉｎｅ）、シロスタゾル（ｃｉｌｏｓｔａｚｏｌ）、重硫酸クロピドグレル（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ）、ジピリダモール、エプチフィバチド（ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ）、塩酸ミドドリン（ｍｉｄｏｄｒｉｎｅ）、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ）、塩酸チクロピジン（ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎｅ）、塩酸チロフィバン（ｔｉｒｏｆｉｂａｎ）から選択される少なくとも１つであることができる（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第２１５〜３３６頁を参照にされたい。）
【０１２５】
少なくとも１つの非麻酔性鎮痛薬または解熱薬は、アセトアミノフェン、アスピリン、トリサリチル酸マグネシウムコリン、ジフルニサル、サリチル酸マグネシウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの非ステロイド系抗炎症薬は、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク（ｅｔｏｄｏｌａｃ）、フェノプロフェンカルシウム、フルビプロフェン（ｆｌｕｂｉｐｒｏｆｅｎ）、イブプロフェン、インドメタシン、インドメタシンナトリウム三水和物、ケトプロフェン、ケトロラクトロメタミン、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｔｏｎｅ）、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン（ｏｘａｐｒｏｚｉｎ）、ピロキシカム、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、スリンダクから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの麻酔性またはオピオイド系鎮痛薬は、塩酸アルフェンタニル、塩酸ブプレノルフィン、酒石酸ブトルファノール、リン酸コデイン、硫酸コデイン、クエン酸フェンタニル、フェンタニル経皮系、フェンタニル経粘膜系、塩酸ヒドロモルホン、塩酸メペリジン、塩酸メタドン、塩酸モルフィン、硫酸モルフィン、酒石酸モルフィン、塩酸ナルブフィン、塩酸オキシコドン、ペクチン酸オキシコドン、塩酸オキシモルフォン、塩酸ペンタゾシン、塩酸ペンタゾシンおよび塩酸ナロキソン、乳酸ペンタゾシン、塩酸プロポキシフェン、プロポキシフェンナプシレート、塩酸レミフェンタニル（ｒｅｍｉｆｅｎｔａｎｉｌ）、クエン酸サフェンタニル、塩酸トラマドールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの鎮痛−睡眠薬はクラロール水和物、エスタゾラム、塩酸フルラゼパム、ペントバルビタール、ペントバルビタールナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、セコバルビタールナトリウム、テマゼパム、トリアゾラム、ザレプロン（ｚａｌｅｐｌｏｎ）、酒石酸ゾルピデムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの鎮痙剤は、アセタゾルアミドナトリウム、カルバマゼピン、クロナゼパム、ジカリウムクロラゼペート、ジアゼパム、ジバルプロックスナトリウム、エトスクシミド、ホスフェニトインナトリウム、
ガバペンチン、ラモトリジン、硫酸マグネシウム、フェノバルビタール、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、フェニトインナトリウム、フェニトインナトリウム（増量：ｅｘｔｅｎｄｅｄ）、プリミドン、塩酸チアガビン（ｔｉａｇａｂｉｎｅ）、トピラメート（ｔｏｐｉｒａｍａｔｅ）、バルプロ酸ナトリウム、バルプロ酸から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗鬱薬は、塩酸アミトリプチリン、パモ酸アミトリプチリン、アモキサピン（ａｍｏｘａｐｉｎｅ）、塩酸ブプロピオン、臭化水素酸シタロプラム（ｃｉｔａｌｏｐｒａｍ）、塩酸クロミプラミン、塩酸デシプラミン、塩酸ドキセピン、塩酸フルオキセチン、塩酸イミプラミン、パモ酸イミプラミン、ミルタザピン（ｍｉｒｔａｚａｐｉｎｅ）、塩酸ネファゾドン（ｎｅｆａｚｏｄｏｎｅ）、塩酸ノルトリプチリン、塩酸パロキセチン、硫酸フェネルジン、塩酸セルトラリン（ｓｅｒｔｒａｌｉｎｅ）、硫酸トラニルシプロミン、マレイン酸トリミプラミン、塩酸ベンラファキシン（ｖｅｎｌａｆａｘｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗不安薬は、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）、塩酸ブスピロン（ｂｕｓｐｉｒｏｎｅ）、クロルジアゼポキシド、塩酸クロルジアゼポキシド、ジカリウムクロラゼペート（ｃｌｏｒａｚｅｐａｔｅ）、ジアゼパム、塩酸ドキセピン、ヒドロキシジンエンボネート、塩酸ヒドロキシジン、パモ酸ヒドロキシジン、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）、メフロバメート（ｍｅｐｈｒｏｂａｍａｔｅ）、塩酸ミダゾラム（ｍｉｄａｚｏｌａｍ）、オキサゼパムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗精神薬は、塩酸クロルプロマジン、クロザピン、フルフェナジンデカノエート、フルフェナジンエナンテート、塩酸フルフェナジン、フルフェナジン、ハロペリドール、デカン酸ハロペリドール、乳酸ハロペリドール、塩酸ロキサピン、コハク酸ロキサピン、メソリダジンベシレート（ｍｅｓｏｒｉｄａｚｉｎｅ  ｂｅｓｙｌａｔｅ）、塩酸モリンドン（ｍｏｌｉｎｄｏｎｅ）、オランザピン（ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ）、ペルフェナジン、ピモジド（ｐｉｍｏｚｉｄｅ）、プロクロルペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒｐｅｒａｚｉｎｅ）、フマル酸クェチアピン（ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ）、リスペリドン（ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ）、塩酸チオリダジン、チオチキセン，塩酸チオチキセン、塩酸トリフルオペラジンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの中枢神経系刺激物は、硫酸アンフェタミン、カフェイン、硫酸デキストロアンフェタミン、塩酸ドキサプラム、塩酸メタンフェタミン、塩酸メチルフェニデート、モダフィニル、ペモリン、塩酸フェンテルミンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗パーキンソン病薬は、塩酸アマンタジン、メシル酸ベンズトロフィン、塩酸ビペリデン、乳酸ビペリデン、メシル酸ブロモクリプチン、カルビドパ−レボドパ、エンタカポン（ｅｎｔａｃａｐｏｎｅ）、レボドパ、メシル酸ペルゴリド（ｐｅｒｇｏｌｉｄｅ）、プラミペキソールジヒドロクロライド、塩酸ロピニロール（ｒｏｐｉｎｉｒｏｌ）、塩���セレジリン、トルカポン（ｔｏｌｃａｐｏｎｅ）、塩酸トリヘキシフェニジルから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多な中枢神経系薬は、塩酸ブプロピオン、塩酸ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、ドロペリドール、マレイン酸フルボキサミン（ｆｌｕｖｏｘａｍｉｎｅ）、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、塩酸ナラトリプタン（ｎａｒａｔｒｉｐｔａｎ）、ニコチンポラクリレクス（ｐｏｌａｃｒｉｌｅｘ）、ニコチン経皮系、プロポホル（ｐｒｏｐｏｆｏｌ）、安息香酸リザトリプタン（ｒｉｚａｔｒｉｐｔａｎ）、塩酸シブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）一水和物、コハク酸スマトリプタン（ｓｕｍａｔｒｉｐｔａｎ）、塩酸タクリン、ゾルミトリプタン（ｚｏｌｍｉｔｒｉｐｔａｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第３３７〜５３０頁を参照にされたい。）
【０１２６】
少なくとも１つのコリン作用薬（例えば副交感神経作用薬）は、塩化ベタニコール、塩化エドロホニウム、臭化ネオスチグミン、メチル硫酸ネオスチグミン、サリチル酸フィゾスチグミン、臭化ピリドスチグミンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗コリン作用薬は、硫酸アトロピン、塩酸ジシクロミン、グリコピロレ
ート（ｇｌｙｃｏｐｙｒｒｏｌａｔｅ）、ヒヨスチアミン、硫酸ヒヨスチアミン、臭化プロパンセリン（ｐｒｏｐａｎｔｈｅｌｉｎｅ）、スコポラミン、スコポラミンブチルブロミド、スコポラミンヒドロブロミドから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアドレナリン作用薬（交感神経作用薬）は、塩酸ドブタミン（ｄｏｂｕｔａｍｉｎｅ）、塩酸ドーパミン、重酒石酸メタラミノール、重酒石酸ノルエピネフリン、塩酸フェニレフリン、塩酸プソイドエフェドリン、硫酸プソイドエフェドリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）は、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、酒石酸エルゴタミン、マレイン酸メチセルジド、塩酸プロパラノールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの筋弛緩剤は、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、塩酸シクロベンザプリン、ダントロレンナトリウム、メトカルバモール、塩酸チザニジン（ｔｉｚａｎｉｄｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの神経筋遮断薬はアトラクリウムベシレート、シスアトラクリウムベシレート、塩化ドキサクリウム、塩化ミバクリウム、臭化パンクロニウム、臭化ピペクロニウム、臭化ラパクロニウム、臭化ロクロニウム、塩化スクシニルコリン、塩化ツボクラリン、臭化ベクロニウムから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第５３１〜８４頁を参照されたい。）
【０１２７】
少なくとも１つの抗ヒスタミン薬は、マレイン酸ブロモフェニラミン、塩酸セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、マレイン酸クロロフェニラミン、フマル酸クレマスチン、塩酸シプロヘプタジン、塩酸ジフェンヒドラミン、塩酸フェキソフェナジン（ｆｅｘｏｆｅｎａｄｉｎｅ）、ロラタジン（ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、塩酸プロメタジン、プロメタジンテオクレート（ｔｈｅｏｃｌａｔｅ）、塩酸トリプロリジンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの気管支拡張薬は、アルブテロール、硫酸アルブテロール、アミノフィリン、硫酸アトロピン、硫酸エフェドリン、エピネフリン、重酒石酸エピネフリン、塩酸エピネフリン、臭化イプラトロピウム、イソプロテレノール、塩酸イソプロテレノール、硫酸イソプロテレノール、塩酸レバルブテロール（ｌｅｖａｌｂｕｔｅｒｏｌ）、硫酸メタプロテレノール、オキシトリフィリン、酢酸ピルブテロール、ザルメテロール  キシナフエート（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ  ｘｉｎａｆｏａｔｅ）、硫酸テルブタリン、テオフィリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの去痰薬または鎮咳薬は、ベンゾナテート、リン酸コデイン、硫酸コデイン、デキストラメトロファン（ｄｅｘｔｒａｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）ヒドロブロミド、塩酸ジフェンヒドラミン、グアイフェネシン、塩酸ヒドロモルホンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多な呼吸薬は、アセチルシステイン、ベクロメタゾン  ジプロピオネート、ベラクタント（ｂｅｒａｃｔａｎｔ）、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、カルファクタント（ｃａｌｆａｃｔａｎｔ）、クロモリンナトリウム、ドルナーゼ（ｄｏｒｎａｓｅ）アルファ、エポプロステノールナトリウム、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、モンテルカストナトリウム、ネドクロミル（ｎｅｄｏｃｒｏｍｉｌ）ナトリウム、パリビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、トリアムシノロンアセトニド、ザフィルルーカスト、ジロウトン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第５８５〜６４２頁を参照されたい。）
【０１２８】
少なくとも１つの制酸薬、吸着薬または抗発張薬は、炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、マガルドレート、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、シメチコーン、重炭酸ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの消化酵素または胆石溶解薬は、パンクレアチン、パンクレリパーゼおよびウルソジオール（ｕｒｓｏｄｉｏｌ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの止瀉薬はアタパルジャイト、次サリチル酸ビスマス、ポリカルボフィルカルシウム、塩酸ジフェノキシレートもしくは硫酸アトロピン、ロペラミド、酢酸オクト
レオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、オピウムチンキ、オピウムチンキ（樟脳処理）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの緩下薬は、ビソコジル（ｂｉｓｏｃｏｄｙｌ）、ポリカルボフィルカルシウム、カスカラサグラダ、カスカラサグラダ芳香性流エキス剤、カスカラサグラダ流エキス剤、ひまし油、ドキュセートカルシウム、ドキュセートナトリウム、グリセリン、ラクチュロース、クエン酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、メチルセルロース、鉱物油、ポリエチレングリコールもしくは電解質溶液、車前子（ｐｓｙｌｌｉｕｍ）、センナ、リン酸ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの制吐薬は、塩酸クロルプロマジン、ジメンヒドリネート、メシル酸ドラセトロン（ｄｏｌａｓｅｔｒｏｎ）、ドロナビノール、塩酸グラニセトロン（ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ）、塩酸メクリジン、塩酸メトクロプラミド、塩酸オンダンセトロン、ペルフェナジン、プロクロルペラジン、プロクロルペラジンエジシレート（ｅｄｉｓｙｌａｔｅ）、マレイン酸プロクロルペラジン、塩酸プロメタジン、スコポラミン、マレイン酸チエチルペラジン、塩酸トリメトベンザミドから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗潰瘍薬は、シメチジン、塩酸シメチジン、ファモチジン、ランソプラゾール（ｌａｎｓｏｐｒａｚｏｌｅ）、ミソプロストール、ニザチジン、オメプラゾール、ラベプラゾールナトリウム、クエン酸ランチジン（ｒａｎｔｉｄｉｎｅ）ビスマス、塩酸ラニチジン、スクラルフェートから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第６４５〜９５頁を参照されたい。）
【０１２９】
少なくとも１つのコルチコステロイドはベタメタゾン、酢酸ベタメタゾンまたはリン酸ナトリウムベタメタゾン、リン酸ナトリウムベタメタゾン、酢酸コルチゾン、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸ナトリウムデキサメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンシピオネート、リン酸ナトリウムヒドロコルチゾン、コハク酸ナトリウムヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸ナトリウムメチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸ナトリウムプレドニゾロン、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンジアセテートから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのアンドロゲンまたは同化性ステロイドは、ダナゾール、フルオキシメステロン、メチルテストステロン、ナンドロロンデカノエート、ナンドロロンフェンプロピオネート、テストステロン、テストステロンシピオネート、テストステロンエナンタート、テストステロンプロピオネート、テストステロン経皮系から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのエストロゲンまたはプロゲスチンは、エステル化エストロゲン、エストラジオール、エストラジオールシピオネート、エストラジオール／酢酸ノルエチンドロン経皮系、吉草酸エストラジオール、エストロゲン（共役）、エストロピペート（ｅｓｔｒｏｐｉｐａｔｅ）、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオールおよびデソゲストレル（ｄｅｓｏｇｅｓｔｒｅｌ）、エチニルエストラジオールおよびエチノジオールジアセテート、エチニルエストラジオールおよびデソゲストレル、エチニルエストラジオールおよびエチノジオールジアセテート、エチニルエストラジオールおよびレボノルゲストレル（ｌｅｖｏｎｏｒｇｅｓｔｒｅｌ）、エチニルエストラジオールおよびノルエチンドロン、エチニルエストラジオールおよび酢酸ノルエチンドロン、エチニルエストラジオールおよびノルゲスチメート（ｎｏｒｇｅｓｔｉｍａｔｅ）、エチニルエストラジオールおよびノルゲストレル、エチニルエストラジオールおよびノルエチンドロンおよび酢酸およびフマル酸鉄、レボノルゲストレル、酢酸メドロキシプロゲステロン、メストラノールおよびノルエチンドロン、ノルエチンドロン、酢酸ノルエチンドロン、ノルゲストレル、プロゲステロンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのゴナドトロピンは、酢酸ガニレリックス（ｇａｎｉｒｅｌｉｘ）、酢酸ゴナドレリン、酢酸ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）、メノトロピンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗糖尿病薬またはグルカゴンはアカルボース、クロロプロパミド、グリメピリド（ｇｌｉｍｅｐｉｒｉｄｅ）、グリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ）、グルカゴン、グリブリド、インスリン、塩酸メトホルミン、ミグリトール（ｍｉｇｌｉｔｏｌ）、塩酸ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、レパグリニド（ｒｅｐａｇｌｉｎｉｄｅ）、マレイン酸ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、トログリタゾンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの甲状腺ホルモンは、レボチロキシン（ｌｅｖｏｔｈｙｒｏｘｉｎｅ）ナトリウム、リオチロニン（ｌｉｏｔｈｙｒｏｎｉｎｅ）ナトリウム、リオトリックス（ｌｉｏｔｒｉｘ）、チロイド（ｔｈｙｒｏｉｄ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの甲状腺ホルモンアンタゴニストは、メチマゾール、ヨウ化カリウム、ヨウ化カリウム（飽和溶液）、プロピルチオウラシル、放射性ヨウ素（ヨウ化ナトリウム１３１Ｉ）、強いヨウ素溶液から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの下垂体ホルモンは、コルチコトロピン、コシントロピン、酢酸デスモプレシン、酢酸ロイプロリド、呼吸コルチコトロピン、ソマトレム、ソマトロピン、バソプレッシンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの副甲状腺様薬は、カルシフェジオール（ｃａｌｃｉｆｅｄｉｏｌ）、カルシトニン（ヒト）、カルシトニン（サケ）、カルシトリオール、ジヒドロタキステロール（ｄｉｈｙｄｒｏｔａｃｈｙｓｔｅｒｏｌ）、エチドロネート二ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第６９６〜７９６頁を参照されたい。）
【０１３０】
少なくとも１つの利尿剤は、アセタゾラミド、アセタゾラミドナトリウム、塩酸アミロライド、ブメタニド（ｂｕｍｅｔａｎｉｄｅ）、クロルタリドン、エタクリネートナトリウム、エタクリン酸、フロセミド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド（ｉｎｄａｐａｍｉｄｅ）、マンニトール、メトラゾン、スピロノラクトン、トルセミド（ｔｏｒｓｅｍｉｄｅ）、トリアムテレン、尿素から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの電解質または代替溶液は、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、カルシウムグルビオネート、カルシウムグルセプテート、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、リン酸カルシウム（三塩基性）、ゼキストラン（高分子量）、デキストラン（低分子量）、ヘタスターチ、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸カリウム、重炭酸カリウム、塩化カリウム、グコン酸カリウム、リンゲル注入液、リンゲル注入液（乳酸化）、塩化ナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの酸性化剤またはアルカリ性化剤は、重炭酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トロメタミンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第７９７〜８３３頁を参照されたい。）
【０１３１】
少なくとも１つの造血薬は、フマル酸鉄、グルコン酸鉄、硫酸鉄、硫酸鉄（乾燥化）、デキストラン鉄、ソルビトール鉄、多糖−鉄錯体、グルコン酸鉄ナトリウム錯体から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗凝固薬は、アルデパリン（ａｒｄｅｐａｒｉｎ）ナトリウム、ダルテパリン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）ナトリウム、ダナパロイド（ｄａｎａｐａｒｏｉｄ）ナトリウム、エノキサパリン（ｅｎｏｘａｐａｒｉｎ）ナトリウム、ヘパリンカルシウム、ヘパリンナトリウム、ワルファリンナトリウムから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの血液誘導体は、アルブミン５％、アルブミン２５％、抗血友病因子、抗−インヒビター凝固複合体、アンチトロンビンＩＩＩ（ヒト）、第ＩＸ因子（ヒト）、第ＩＸ因子複合体、血漿タンパク質画分から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの血栓溶解酵素はアルテプラーゼ（ａｌｔｅｐｌａｓｅ）、アニストレプラーゼ（ａｎｉｓｔｒｅｐｌａｓｅ）、レテプラーゼ（ｒｅｔｅｐｌａｓｅ）（組換え）、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１ドラッグハンドブックの第８３４〜６６頁を参照されたい。）
【０１３２】
少なくとも１つのアルキル化剤は、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロフォスファミド、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ロムスチン、塩酸メクロレタミン、メルファラン、塩酸メルファラン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、チオテパから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの代謝拮抗物質は、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、シタラビン、フロクスウリジン、リン酸フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、チオグアニンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗生物質系抗腫瘍薬は、硫酸ブレオマイシン、ダクチノマイシン、クエン酸ダウノルビシンリポソーマル、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーマル、塩酸エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎｅ）、塩酸イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マイトマイシン、ペントスタチン、プリカマイシン、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）から選択される少なくとも１つであることができる。ホルモンバランスを改変する少なくとも１つの抗腫瘍薬は、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エグゼメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、酢酸ゴセレリン、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、酢酸ロイプロリド、酢酸メゲストロール、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、クエン酸タモキシフェン、テストラクトン、クエン酸トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多な抗腫瘍薬は、アスパラギナーゼ、桿菌カルメット−ゲラン（ＢＣＧ）（生嚢内）、ダカルバジン、ドセタキセル、エトポシド、リン酸エトポシド、塩酸ジェムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、塩酸イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ミトーテン、塩酸ミトザントロン、パクリタキセル、ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ポルフィマー（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）ナトリウム、塩酸プロカルバジン、リタキシマブ、テニポシド、塩酸トポテカン、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、トレチノイン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、酒石酸ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）から選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第８６７〜９６３頁を参照されたい。）
【０１３３】
少なくとも１つの免疫抑制剤は、アザチオプリン、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、シクロスポリン、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、リンパ球免疫グロブリン、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体、マイコフェノレート  モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）、塩酸マイコフェノレート  モフェチル、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つのワクチンまたは毒素は、ＢＣＧワクチン、コレラワクチン、ジフテリアおよび破傷風毒素（吸着）、ジフテリアおよび破傷風毒素および無細胞百日咳ワクチン吸着、ジフテリアおよび破傷風毒素および全細胞百日咳ワクチン、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉｕｓ）ｂ共役ワクチン、Ａ型肝炎ワクチン（不活化）、Ｂ型肝炎ワクチン（組換え）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価型Ａ＆Ｂ（精製表面抗原）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価型Ａ＆Ｂ（サブビリオンまたは精製ビリオン）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９−２０００三価型Ａ＆Ｂ（全ビリオン）、日本脳炎ウイルスワクチン（不活化）、ライム病ワクチン（組換えＯｓｐＡ）、麻疹およびムンプスおよび風疹ウイルスワクチン（生）、麻疹およびムンプスおよび風疹ウイルスワクチン（弱毒化生）、麻疹ウイルスワクチン（弱毒化生）、髄膜炎菌多糖ワクチン、ムンプスウイルスワクチン（生）、悪疫ワクチン、肺炎球菌ワクチン（多価）、ポリオウイルスワクチン（不活化）、ポリオウイルスワクチン（生、経口、三価）、狂犬病ワクチン（吸着）、狂犬病ワクチン（ヒト二倍体細胞）、風疹およびムンプスウイルスワクチン（生）、風疹ウイルスワクチン（弱毒化生）、破傷風毒素（吸着）、破傷風毒素（流体）、チフスワクチン（経口）、チフスワクチン（非経口）、チフスＶ１多糖ワクチン、水痘ウイルスワクチン、黄熱病ワクチンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの抗毒素はまたは抗蛇毒素は、クロゴケグモ抗毒素、ガラガラヘビ科の抗蛇毒素（多価）、ジフテリア抗毒素（ウマ）、Ｍｉｃｒｕｒｕｓ  ｆｕｌｖｉｕｓ抗蛇毒素から選択される少なくとも１つであることがである。少なくとも１つの免疫血清はサイトメガロウイルス免疫グロブリン（静脈内）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（ヒト）、免疫グロブリン筋肉内、免疫グロブリン静脈内、狂犬病免疫グロブリン（ヒト）、呼吸合胞体ウイルス免疫グロブリン静脈内（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン静脈内（ヒト）、破傷風免疫グロブリン（ヒト）、水痘−帯状疱疹免疫グロブリンから選択される少なくとも１つであることがである。少なくとも１つの生物学的応答モディファイヤーは、アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）、ＧＬＰ−１エチン  アルファ、フィルグラスチム、注射用の酢酸グラチラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）、インターフェロン  アルファコン−１、インターフェロン  アルファ−２ａ（組換え）、インターフェロン  アルファ−２ｂ（組換え）、インターフェロン  ベータ−１ａ、インターフェロン  ベータ−１ｂ（組換え）、���ンターフェロン  ガンマ−１ｂ、塩酸レバミソール、オプレルベキン（ｏｐｒｅｌｖｅｋｉｎ）、サルグラモスチンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第９６４〜１０４０頁を参照されたい。）
【０１３４】
少なくとも１つの目の抗感染薬は、バシトラシン、クロラムフェニコール、塩酸シプロフロキサシン、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、オフロキサシン０．３％、硫酸ポリミキシンＢ、スルファセタミドナトリウム１０％、スルファセタミドナトリウム１５％、スルファセタミドナトリウム３０％、トブラマイシン、ビダラビンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの目の抗炎症薬は、デキサメタゾン、リン酸ナトリウムデキサメタゾン、ジクロフェナクナトリウム０．１％、フルオロメトロン、フルルビプフェンナトリウム、ケトロラク  トロメタミン、酢酸プレドニゾロン（懸濁液）、リン酸ナトリウムプレドニゾロン（溶液）から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの縮瞳薬は、塩化アセチルコリン、カルバコール（眼内）、カルバコール（局所）、ヨウ化エコチオフェート、ピロカルピン、塩酸ピロカルピン、硝酸ピロカルピンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの散瞳薬は硫酸アトロピン、塩酸シクロペントレート、塩酸エピネフリン、硼酸エピネフリル、ホマトロピンヒドロブロミド、塩酸フェニレフリン、スコポラミンヒドロブロミド、トロピカミドから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの目の血管収縮薬は、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドラゾリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの種々雑多な目薬は、塩酸アプラクロニジン（ａｐｒａｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）、塩酸ベタキソロール、酒石酸ブリモニジニン（ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ）、塩酸カルテオロール（ｃａｒｔｅｏｌｏｌ）、塩酸ジピベフリン、塩酸ドルゾラミド（ｄｏｒｚｏｌａｍｉｄｅ）、エメダスチン（ｅｍｅｄａｓｔｉｎｅ）ジフマレート、フルオレセインナトリウム、フマル酸ケトチフェン（ｋｅｔｏｔｉｆｅｎ）、ラタノプロスト（ｌａｔａｎｏｐｒｏｓｔ）、塩酸レボブノロール、塩酸メチプラノロール（ｍｅｔｉｐｒａｎｏｌｏｌ）、塩化ナトリウム（高張性）、マレイン酸チモロールから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの耳の薬は、硼酸、過酸化カルバミド、クロラムフェニコール、オレイン酸トリエタノールアミンポリペプチド−縮合物から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの鼻の薬は、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデゾニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、硫酸エフェドリン、塩酸エピネフリン、フルニゾリド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸フェニレフリン、塩酸テトラヒドロゾリン、トリアムシノロンアセトニド、塩酸キシロメタゾリンから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第１０４１〜９７頁を参照されたい。）
【０１３５】
少なくとも１つの局所抗感染剤は、アシクロビル、アンフォテリシンＢ、アゼラ酸（ａｚｅｌａｉｃ  ａｃｉｄ）クリーム、バシトラシン、硝酸ブトコナゾール、リン酸クリンダマイシン、クロトリマゾール、硝酸エコナゾール、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、ケトコナゾール、酢酸マフェナイド、メトロニダゾール（局所）、硝酸ミコナゾール、ムピロシン（ｍｕｐｉｒｏｃｉｎｅ）、塩酸ナフチファイン、硫酸ネオマイシン、ニトロフラゾン、ニスタチン、銀スルファジアジン、塩酸テルビナファイン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）、テルコナゾール（ｔｅｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、塩酸テトラサイクリン、チオコナゾール、トルナフテートから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの殺疥癬虫薬または殺シラミ薬は、クロタミトン、リンダン、ペルメトリン（ｐｅｒｍｅｔｈｒｉｎ）およびピレトリンから選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの局所コルチコステロイドは、ベタメタゾンジプロピオネート、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、リン酸ナトリウムデキサメタゾン、ジフロラゾンジアセテート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、ハルシオニド（ｈａｌｃｉｏｎｉｄｅ）、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ヒドロコルチゾン、モメタゾンフロエート（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ  ｆｕｒｏａｔｅ）、トリアムシノロンアセトニドから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第１０９８〜１１３６頁を参照されたい。）
【０１３６】
少なくとも１つのビタミンまたは無機物は、ビタミンＡ、ビタミンＢ複合体、シアノコバラミン、葉酸、ヒドロキソコバラミン、ロイコボリンカルシウム、ナイアシン、ナイアシンアミド、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、塩酸チアミン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、ビタミンＤ類似体、ドキセルカルシフェロール（ｄｏｘｅｒｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ）、パリカルシトール（ｐａｒｉｃａｌｃｉｔｏｌ）、ビタミンＥ、ビタミンＫ類似体、フィトナジオン、弗化ナトリウム、弗化ナトリウム（局所）、微量元素、クロム、銅、ヨウ素、マンガン、セレン、亜鉛から選択される少なくとも１つであることができる。少なくとも１つの熱量源は、アミノ酸浸剤（結晶）、デキストロース中のアミノ酸浸剤、電解質とのアミノ酸浸剤、デキストロース中の電解質とのアミノ酸浸剤、肝不全のためのアミノ酸浸剤、高代謝ストレスのためのアミノ酸浸剤、腎不全のためのアミノ酸浸剤、デキストロース、脂肪乳剤、中鎖トリグリセリドから選択される少なくとも１つであることができる。（例えばナーシング  ２００１  ドラッグハンドブックの第１１３７〜６３頁を参照されたい。）
【０１３７】
また本発明は、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含んでなる少なくとも１つの適切かつ／または有効な量の組成物または製薬学的組成物を提供し、さらに場合により少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば限定するわけではないがＴＮＦ化学物質もしくはタンパク質アンタゴニスト、ＴＮＦモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体（例えばｐ５５、ｐ７０もしくはｐ８５）もしくはそのフラグメント、その融合ポリペプチド、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト、例えばＴＮＦ結合タンパク質ＩもしくはＩＩ（ＴＢＰ−１もしくはＴＢＰ−ＩＩ）、ネレリモンマブ（ｎｅｒｅｌｉｍｏｎｍａｂ）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、エンテラセプト（ｅｎｔｅｒａｃｅｐｔ）、ＣＤＰ−５７１、ＣＤＰ−８７０、アフェリモマブ（ａｆｅｌｉｍｏｍａｂ）、レネルセプト（ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）等）、抗リウマチ薬（例えばメトトレキセート、オーラノフィン、オーロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、スルファザルジン（ｓｕｌｆａｓａｌｚｉｎｅ））、筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド系炎症薬（ＮＡＳＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬（例えばアミノグリコシド、抗真菌薬、抗寄生生物薬、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗微生物薬）、止痒薬、コルチコステロイド、同化性ステロイド、糖尿病関連薬、無機類、栄養物質、甲状腺薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止瀉薬、鎮咳薬、制吐薬、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝固薬、エリスロポエチン（例えばエポエチンアルファ）、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えばバシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交換神経作用薬、刺激物質、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリン（ｔａｃｒｉｎｅ）、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストの選択される少なくとも１つの有効量の化合物、タンパク質または組成物を含んでなる。そのようなサイトカインの非限定的例は、限定するわけではないが任意のＩＬ−１〜ＩＬ−２３を含む。適切な投薬用量は、当該技術分野では周知である。例えばＷｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、薬理療法ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第２版、アペルトン  アンド  ラ��ジ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州（２０００）：ＰＤＲ薬局方、タラスコンポケット薬局方（Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）２０００、豪華版、タラスコン出版社、ローマ  リンダ、カリフォルニア州（２０００）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１３８】
そのような組成物は、本発明の少なくとも１つの抗体またはポリペプチドに会合した、結合した、同時に配合（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）される、または一緒に投与される毒素分子も含むことができる。毒素は場合により病原性細胞または組織を選択的に殺すように作用することができる。病原性細胞はガン細胞または他の細胞であり得る。そのような毒素は限定するわけではないが、例えば少なくとも１つリシン、ジフテリア毒素、蛇毒または細菌の毒素から選択される毒素の少なくとも１つの機能的な細胞傷害性ドメインを含んで成る精製された、または組換え毒素または毒素フラグメントであることができる。毒素という用語はまた、死を引き起こし得る毒素ショックを含む任意の病理的状態をヒトまたは他の哺乳動物に引き起こす可能性がある自然に存在する変異体または組換え細菌またはウイルスにより生産されるエンドトキシンおよびエキソトキシンの両方を含む。そのような毒素は限定するわけではないが、腸内毒素生産性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の熱不安定エンテロトキシン（ＬＴ）、熱安定性エンテロトキシン（ＳＴ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）のサイトトキシン、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）のエンテロトキシン、毒素性ショック症候群毒素−１（ＴＳＳＴ−１）、ブドウ球菌のエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）またはＣ（ＳＥＣ）、ブドウ球菌のエンテロトキシン等を含むことができる。そのような細菌には限定するわけではないが、エンテロトキシン生産性の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株（ＥＴＥＣ）、腸内出血性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば血清型０１５７；Ｈ７）、ブトウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種（例えば、黄色ブトウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス  ピロゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種（例えばシゲラ  ジセンテリア（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ  フレキシネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ  ボイディ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）およびシゲラ  ソンネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ））、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種（例えばチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ  コレラ−スイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａ−ｓｕｉｓ）、腸炎菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ））、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種（例えばクロストリジウム  パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム  ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム  ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、カンピロバクター種（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ）種（例えばカンピロバクター  ジェジュニ（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター  フェタス（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓ））、ヘリオバクター（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）種（例えば、ヘリオバクター  ピロリ（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｏｒ ｐｙｌｏｒｉ））、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）種（例えばアエロモナス  ソブリア（Ａｅ���ｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、アエロモナス  ヒドロフィーラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、アエロモナス  カビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ））、プレイソモナス  シゲロイデス（Ｐｌｅｉｓｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、エルシナ  エンテロコリティカ（Ｙｅｒｓｉｎａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ビブリオス（Ｖｉｂｒｉｏｓ）種（例えばコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオス  パラヘモリチカス（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ））、クレブシエーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）およびストレプトコッカイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）を含む。例えばＳｔｅｉｎ、編集、ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第３版、第１〜１３頁、リトル、ブラウン（Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ）社、ボストン（１９９０）：Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、ヒトの細菌感染：疫学および防御（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）、第２版、第２３９〜２５４、プレナム（Ｐｌｅｎｕｍ）医学誌社、ニューヨーク（１９９１）、Ｍａｎｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ，感染性疾患の原理および実際（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、第３版、チャーチルリビングストン（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ）、ニューヨーク（１９９０）；Ｂｅｒｋｏｗ  ｅｔ  ａｌ．、編集、メルクマニュアル（Ｔｈｅ  Ｍｅｒｋ  Ｍｉａｎｕａｌ）、第１６版、メルク社、ラースウェイ、ニュージャージー州、１９９２；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４（１９９１）；Ｍａｒｒａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０）を参照にされたい（この内容は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１３９】
本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物は、さらに限定するわけではないが希釈剤、結合剤、安定化剤、バッファー、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバント等のような少なくとも１つの任意の適切な補助剤を含んで成ることができる。製薬学的に許容される補助剤が好適である。そのような滅菌溶液の非限定的な例および調製法は、限定するわけではないがＧｅｎｎａｒｏ、編集、レミングトンの製薬科学、第１８版、メルク出版社（イーストン、ペンシルバニア州）１９９０のように当該技術分野では周知である。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ組成物の投与様式、溶解性および／または安定性に適する製薬学的に許容され得る担体は日常的に、ならびに当該技術分野で周知であるように、または本明細書に記載するように通常に選択され得る。
【０１４０】
本組成物に有用な製薬学的賦形剤および添加剤には、限定するわけではないがタンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質および炭水化物（例えば単糖、二−、三−、四−およびオリゴ糖、アルジトール、アルドン酸、エステル化糖のような誘導化糖、および多糖または糖ポリマーを含む糖類）を含み、これは単独で、または１〜９９．９９重量もしくは容量％の組み合わせで存在することができる。例示的タンパク質は賦形剤は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＡ）のような血清アルブミン、ゼラチン、カゼイン等を含む。緩衝能においても機能し得る代表的なアミノ酸／ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント成分には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム等を含む。１つの好適なアミノ酸はグリシンである。
【０１４１】
本発明の使用に適する炭水化物賦形剤には、例えばフルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等のような単糖、ラクトース、シュクロース、トレハロース、セルビオース糖の二糖、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、澱粉糖の多糖、およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトール等のアルジトールを含む。本発明の使用に適する好適な炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロースおよびラフィノースである。
【０１４２】
ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ組成物は、バッファーまたはｐＨ調整剤を含むこともでき；典型的にはバッファーは有機酸または塩基から調製される塩である。代表的なバッファーには、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、カルボン酸、酒石酸、コハク酸、酢酸またはフタル酸の塩のような有機酸塩；Ｔｒｉｓ、トロメタミン塩酸塩またはリン酸バッファーを含む。本組成物の使用に好適なバッファーはクエン酸塩のような有機酸塩である。
【０１４３】
さらに本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー性糖）、デキストレート（例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン）、ポリエチレングリコールのようなポリマー性賦形剤／添加剤、風味剤、抗微生物剤、甘味剤、酸化防止剤、帯電防止剤、表面活性剤（例えば“ＴＷＥＥＮ  ２０”および“ＴＷＥＥＮ  ８０”のようなポリソルベート）、脂質（例えばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）およびキレート化剤（例えばＥＤＴＡ）を含むことができる。
【０１４４】
本発明によるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ組成物で使用するために適するこれらのおよびさらに知られている製薬学的賦形剤および／または添加剤は当該技術分野では既知であり、例えば「レミングトン：薬学の科学＆実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第１９版、ウィリアムス＆ウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ）、（１９９５）および「医師の卓上レファレンス（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」、第５２版、メディカル  エコノミックス、モントバレー、ニュージャージー州（１９９８）に列挙され、この開示は引用により全部、本明細書に編入する。好適なキャリアーまたは賦形剤材料は炭水化物（例えば糖およびアルジトール）およびバッファー（例えばクエン酸塩）またはポリマー性剤である。
【０１４５】
製剤
上記のように本発明は安定な製剤を提供し、これは好ましくは食水または選択した塩を含む適当なバッファー、ならびに保存剤を含有する任意選択の保存溶液および製剤、ならびに製薬学的または獣医学的使用に適する多用途保存製剤であり、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを製薬学的に許容される製剤中に含んで成る。保存製剤は少なくとも１つの既知の保存剤または任意に少なくとも１つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マンガン（例えばヘキサヒドレート）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベ
ンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物から成る群から選択される保存剤を水性希釈剤中に含む。適当な濃度または混合物は、０  ００１〜５％のような、または限定するわけではないが０  ００１、０  ００３、０  ００５、０  ００９、０  ０１、０  ０２、０  ０３、０  ０５、０  ０９、０  １、０  ２、０  ３、０  ４、０  ５、０  ６、０  ７、０  ８、０  ９、１  ０、１．１、１  ２、１  ３、１  ４、１  ５、１  ６、１．７、１．８、１  ９、２  ０、２  １、２  ２、２．３、２  ４、２．５、２  ６、２  ７、２  ８、２．９、３  ０、３  １、３  ２、３  ３、３．４、３  ５、３  ６、３．７、３．  ８、３  ９、４  ０、４  ３、４  ５、４．６、４  ７、４．８、４  ９またはこの中の任意の範囲または値のような、当該技術分野で知られているように使用することができる。非限定的な例には、保存剤なし、０  １〜２％  ｍ−クレゾール（例えば０  ２、０  ３、０  ４、０  ５、０  ９、１  ０％）、０  １〜３％ベンジルアルコール（例えば０．５、０．９、１  １、１  ５、１  ９、２  ０、２  ５％）、０  ００１〜０  ５％チメロサール（例えば０  ００５、０  ０１）、０  ００１〜２  ０％フェノール（例えば０  ０５、０  ２５、０  ２８、０  ５、０  ９、１  ０％）、０  ０００５〜１  ０％アルキルパラベン（１つまたは複数）（例えば０  ０００７５、０  ０００９、０  ００１、０  ００２、０  ００５、０  ００７５、０  ００９、０  ０１、０  ０２、０  ０５、０  ０７５、０  ０９、０  １、０  ２、０  ３、０  ５、０  ７５、０  ９、１  ０％）等を含む。
【０１４６】
上記のように、本発明は包装材料および場合により水性希釈剤中に処方されたバッファーおよび／または保存剤を含む少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの溶液を含んで成る少なくとも１つのバイアルを含んで成る製品を提供し、ここで該包装材料は、そのような溶液が１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間以上保持できることを示すラベルを含んで成る。本発明はさらに、包装材料、凍結乾燥した少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含んで成る第１バイアル、および処方されたバッファーまたは保存剤の水性希釈剤を含んで成る第２バイアルを含んで成る製品を含んで成り、ここで該包装材料は患者が少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを水性希釈剤中に再構成して、２４時間以上の期間にわたり保持できる溶液を形成することを指導するラベルを含んで成る。
【０１４７】
本発明に従い使用する少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、哺乳動物細胞または導入遺伝子調製物を含む組換え手段により生産できるか、あるいは本明細書に記載し、または当該技術分野で既知の他の生物起源から精製することができる。
【０１４８】
本発明の生成物中の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの量の範囲は、湿潤／乾燥系である場合、構成時に約１  ０μｇ／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を生じる量を含むが、より低および高濃度も操作可能であり、そして意図する送達賦形剤に依存し、例えば溶液組成は経皮用パッチ、肺、経粘膜または浸透圧もしくはマイクロポンプ法とは異なるだろう。
【０１４９】
好ましくは水性希釈剤は場合によりさらに製薬学的に許容できる保存剤を含んで成る。好適な保存剤には、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物から成る群から選択されるものを含む。製剤中に使用する保存剤の濃度は、抗−微生物効果を生じるために十分な濃度である。そのような濃度は選択した保存剤に依存し、そして当業者により容易に決定される。
【０１５０】
他の賦形剤、例えば張性調整剤、バッファー、酸化防止剤、保存強化剤を場合により、そして好ましくは希釈剤に加えることができる。グリセリンのような張性調整剤は既知の濃度で通常に使用される。生理学的に耐容されるバッファーは好ましくは改善されたｐＨ制御を提供するために加える。製剤は約ｐＨ４〜約ｐＨ１０のような広いｐＨ範囲を網羅することができ、そして好ましい範囲は約ｐＨ５〜約ｐＨ９、そして最も好ましくは約６
０〜約８．０の範囲である。好ましくは本発明の製剤は約６  ８から約７．８の間のｐＨを有する。好適なバッファーにはリン酸バッファー、最も好ましくはリン酸ナトリウム、特にリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。
【０１５１】
Ｔｗｅｅｎ  ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ  ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ポリオキシエチレン  ポリオキシプロピレン  ブロック  コポリマー）およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、あるいはポリソルベート２０もしくは８０、またはポリオキサマー１８４もしくは１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）ポリリス（ｐｏｌｙｌｓ）、他のブロック  コポリマーのような非イオン性表面活性剤のような製薬学的に許容される可溶化剤、およびＥＤＴＡおよびＥＧＴＡのようなキレーターのような他の添加剤を、凝集を減らすために製剤または組成物に場合により加えることができる。これらの添加剤は製剤を投与するためにポンプまたはプラスチック容器が使用される場合に特に有用である。製薬学的に許容される表面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を緩和する。
【０１５２】
本発明の製剤は、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントおよびフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールまたはそれらの混合物から成る群から選択される保存剤を水性希釈剤中で混合することを含んで成る方法により調製することができる。少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントおよび保存剤を水性希釈剤中で混合することは、通例の溶解および混合手順を使用して行う。適切な製剤を調製するために、例えば所望の濃度のタンパク質および保存剤を提供するために十分な量で、バッファー溶液中の計測した量で少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントをバッファー溶液中の所望の保存剤と合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するのかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与手段のために至適化され得るすべての因子である。
【０１５３】
特許請求する製剤は、透明溶液として、または水、保存剤および／または賦形剤、好ましくはリン酸バッファーおよび／または食塩および選択した塩を水性希釈剤中に含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのバイアルを含んで成る２個のバイアルの状態で患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれも複数回、再使用され、そして患者処置の単回または多回サイクルを満たし、そしてこれにより現在利用できるものより都合よい処置法を提供することができる。
【０１５４】
特許請求する製品は、すぐに、そして２４時間以上の期間にわたり投与するために有用である。したがってここで特許請求する製品は、患者に重要な利点を提供する。本発明の製剤は場合により約２〜約４０℃の温度で安全に保存され、そして長期間にわたりタンパ
ク質の生物活性を保持することができ、すなわちその溶液が６、１２、１８、２４、３６、４８、７２または９６時間以上の期間にわたり保持でき、かつ／または使用できることを示す包装ラベルを付すことを可能とする。保存希釈剤を使用する場合、そのようなラベルは１〜１２カ月、半年、１年半および／または２年までの少なくとも１つの使用を含むことができる。
【０１５５】
本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの溶液は、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを水性希釈剤中で混合することを含んで成る方法により調製することができる。混合は通例の溶解および混合手順を使用して行う。適当な希釈剤を調製するためには、例えば所望の濃度のタンパク質および場合により保存剤またはバッファーを提供するために十分な量で、水またはバッファー中に計測した少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント量を合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与の手段のために至適化され得るすべての因子である。
【０１５６】
特許請求する製品は、透明溶液として、または水性希釈剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのバイアルを含んで成る２個のバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれかは多数回、再使用することができ、そして患者処置の単回または多回サイクルを満たし、そしてこれにより現在利用できるものより都合よい処置法を提供する。
【０１５７】
特許請求する製品は、薬局、医院または他のそのような研究所および施設に、透明溶液または水性希釈剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのバイアルを含んで成る２個のバイアルを提供することより、患者に間接的に提供することができる。この場合、透明溶液は１リットルまで、またはそれより大きなサイズであることができ、大きなリザーバーを提供して、そこからより小さいバイアルに移すために、より少量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント溶液が１または多数回引き出され、そして薬局または医院により使用者および／または患者に提供され得る。
【０１５８】
これらの単一バイアル系を含んで成る認識されているデバイスは、Ｈｕｍａｊｅｃｔ（商標）、ＮｏｖｏＰｅｎ（商標）、Ｂ−Ｄ（商標）Ｐｅｎ、ＡｕｔｏＰｅｎ（商標）およびＯｐｔｉＰｅｎ（商標）のような溶液送達用のペン型注入デバイスを含む。２個のバイアル系を含んで成る認識されているデバイスは、ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ（商標）のような再構成された溶液を送達するためのカートリッジ中で、凍結乾燥された薬剤を再構成するためのそれらペン−注入系を含む。
【０１５９】
ここで特許請求する製品には包装材料を含む。包装材料は管理会社が必要とする情報に加えて、製品を使用できる条件を提供する。本発明の包装材料は、２つのバイアルの湿潤／乾燥製品について、患者が水性希釈剤中で少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを再構成して溶液を形成し、そして２〜２４時間以上の期間にわたり溶液を使用するための使用説明を提供する。単一バイアル溶液の製品については、ラベルはそのような溶液が２〜９６時間以上にわたり使用できることを示す。ここで特許請求する製品は、ヒトの医薬品としての使用に有用である。
【０１６０】
本発明の製剤は少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントおよび選択されたバッファー、好ましくは食塩または選択した塩を含むリン酸バッファーを混合することを含んで成る方法により調製することができる。少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントおよびバッファーを水性希釈剤中で混合することは、通例の溶解および混合法を使用して行う。適当な製剤を調製するためには、例えば所望の濃度のタンパク質およびバッファーを提供するために十分な量で、計測した量の少なくとも１つＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは定部分もしくはバリアントを、水中の所望の緩衝剤と水中で合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与の手段のために至適化され得るすべての因子である。
【０１６１】
特許請求する安定な、または保存された製剤は、透明溶液として、または水性希釈剤中に保存剤またはバッファーおよび賦形剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのバイアルを含んで成る２個のバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれも多数回、再使用することができ、そして単回または複数のサイクルで患者を処置するために十分であり、すなわち現在利用できるものよりも都合良い処置法を提供することができる。
【０１６２】
本明細書に記載する安定な、または保存された製剤または溶液のいずれかの中の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは、本発明に従いＳＣまたはＩＭ注射；経皮、肺、経粘膜、インプラント、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプまたは当業者により、あるいは当該技術分野で周知であるような他の手段を含む種々の送達法を介して患者に投与することができる。
【０１６３】
治療的応用
本発明は膵臓の機能を上げる方法を提供し、この方法は有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ組成物を、必要な細胞、組織、器官または個体に投与することを含んでなる。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディは、膵島分化を促進し、β−細胞塊を増やし、かつ／またはインスリン分泌を上げることができる。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで投与することができる。
【０１６４】
例えばＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ処置は、膵臓もしくは膵島移植患者、またはインスリン生産細胞が関与する他の細胞療法に使用することができる。細胞療法は、細胞の生存を強化するか、または免疫拒絶を防止するために設計されたデバイスに支援されるか、またはされずに患者の静脈内に、皮下に、筋肉内に、または腹腔内に送達することができる。またこれは膵臓の一部を外科的に除去した後の患者に使用することもできる。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディは、処置前、または後に生きている膵臓または膵島ドナーに投与してβ−細胞塊および膵臓機能を上げることができる。またこれは移植前にインビトロでβ−細胞の増殖を刺激するために使用することもでき、これによりいったん移植したβ−細胞塊を上げ、そして後の膵島のアポトーシスを防止する。さらにこれはインスリン生産細胞の幹、祖先または前駆細胞の培養に使用して、分化および増殖を刺激し、そしてアポトーシスを防止することができる。
【０１６５】
本発明は、糖尿病になる高い危険性がある個体が糖尿病を発症することを遅らせるか、または糖尿病になることを防止する方法を提供し、この方法は有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ組成物をそれが必要な個体に投与することを含んでなる。
【０１６６】
本発明は、疾患または障害を引き起こす少なくとも１つの膵臓機能不全をモジュレート
または処置する方法を提供し、この方法は有効量の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ組成物をそれが必要な個体に投与することを含んでなる。本発明の方法を使用して処置するために適当な状態および疾患には、限定するわけではないがインスリン耐性、高血糖、低血糖、クッシング症候群、黒色表皮症、脂肪組織萎縮糖尿病、網膜症、ネフロパシー、多発性神経障害、単神経障害、自律性神経障害、潰瘍、足潰瘍、関節の問題、感染（例えば真菌もしくは細菌性）等のような随伴する兆候および症状を含む１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病または若年者の成人発生型糖尿病（ＭＯＤＹ）のような糖尿病を含むがこれに限定されない（例えばメルクマニュアル（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ）、第１２〜第１７版、メルク＆カンパニー（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏｍｐａｎｙ）、ラーウェイ、ニュージャージー州（１９７２、１９７７、１９８２、１９８７、１９９２、１９９９）、薬理療法ハンドブック、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、第２版、アペルトン  アンド  ランジ、スタムフォード、コネチカット州（１９９８、２００１）を参照にされたい。各々、引用により全部、本明細書に編入する）。他の非限定的な膵臓疾患には、膵炎、膵臓腫瘍または膵臓ガンがある。
【０１６７】
本発明は、高血糖を生じる少なくとも１つの代謝障害をモジュレートまたは処置する方法を提供する。そのような障害の非限定的例には、肝硬変および高血圧に伴うグルコース寛容減損がある。またＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ処置は、高血糖および／または糖尿病を誘導することが知られている他の投薬療法に関連して使用することもできる。そのような投薬療法の非限定的例には、臓器移植で与えられるシクロスポリンまたはＦＫ−５０６のような免疫抑制剤、ＡＩＤＳの患者に処方されるプロテアーゼインヒビター、および統合失調症の処置に使用される異例の抗精神薬を含む。
【０１６８】
また本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者の、限定するわけではないが少なくとも１つの心失神（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ）症候群、心筋梗塞、うっ血性心不全、発作、虚血性発作、出血、動脈硬化症、アテローム硬化症、糖尿病性動脈硬化性疾患、高血圧症、動脈性高血圧症、腎血管性高血圧症、失神、ショック、心血管系梅毒、心不全、肺性心、原発性肺高血圧症、心律動異常、心房異所性拍動、心房粗動、心房細動（持続的または発作性）、無秩序もしくは多病巣性心房性頻拍、規則的な細いＱＲＳ心房頻拍、特異的な不整脈、心室細動、ヒス束不整脈、房室ブロック、脚ブロック、心筋虚血性疾患、冠状動脈疾患、狭心症、心筋梗塞、心筋症、拡張型うっ血性心筋症、拘束型心筋症、弁心臓（ｖａｌｖｕｌａｒ  ｈｅａｒｔ）疾患、心内膜炎、心膜疾患、心腫瘍、大動脈および末梢動脈瘤、大動脈切開、大動脈の炎症、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、末梢脈管障害、閉塞性大動脈障害、末梢アテローム硬化症、閉塞性血栓血管炎、機能的末梢動脈障害、Ｒａｙｎａｕｄ現象および疾患、先端チアノーゼ、先端紅痛症、静脈疾患、静脈血栓症、拡張蛇行静脈、動静脈瘻、リンパ水腫、脂肪浮腫、不安定狭心症、再潅流損傷、ポストポンプ症候群、虚血的再潅流損傷等を含む少なくとも１つの心血管疾患を、モジュレートまたは処置するための方法も提供する。そのような方法は場合により、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成る。
【０１６９】
本発明の任意の方法は、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成る。そのような方法は場合よりさらに同時投与または併用療法を含んで成ることができ、ここで該少なくとも１つＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、それらの特定部分もしくはバリアントの投与は、さらに事前、同時および／または後に、少なくとも１つの糖尿病またはインスリン代謝関連薬、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば限定するわけではないが、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、それらの融合タンパク質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬、筋弛緩剤、麻薬、非−ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断剤、抗菌剤（例えばアミノグルコシド、抗菌・カビ剤、駆虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）、セファロスポリン、フルオロルキノロン（ｆｌｕｒｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗微生物剤）、止痒剤、コルチコステロイド、同化性ステロイド、糖尿病関連薬、無機類、栄養、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止冩薬、鎮咳剤、制吐剤、抗潰瘍剤、緩下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン（例えばＧＬＰ−１エチン  アルファ）、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えばバシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交換神経作用薬、刺激物質、ドネゼピル、タクリン、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１つを投与すること含んでなる。適切な投薬用量は、当該技術分野では周知である。例えばＷｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．、編集、薬理療法ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第２版、アペルトン  アンド  ランジ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州（２０００）：ＰＤＲ薬局方、タラスコンポケット薬局方（Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）２０００、豪華版、タラスコン出版社、ローマ  リンダ、カリフォルニア州（２０００）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１７０】
本発明の組成物、併用療法、同時投与、デバイスおよび／または方法に適するＴＮＦアンタゴニスト（さらに本発明の少なくとも１つの抗体、それらの特定部分およびバリアントを含む）には、限定するわけではないが、抗−ＴＮＦ抗体、それらのリガンド結合フラグメント、およびＴＮＦに特異的に結合する受容体分子；サリドマイド、テニダップ（ｔｅｎｉｄａｐ）、ホスホジエステラーゼインヒビター（例えばペントキシフィリンおよびロリプラム（ｒｏｌｉｐｒａｍ））、Ａ２ｂアデノシン受容体アゴニストおよびＡ２ｂアデノシン受容体エンハンサーのようなＴＮＦ合成、ＴＮＦの放出またはその標的細胞に対する作用を防止および／または阻害する化合物；マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼインヒビターのようなＴＮＦ受容体シグナリングを防止および／または阻害する化合物；メタロプロティナーゼインヒビターのような膜ＴＮＦ開裂を遮断および／または阻害する化合物；アンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）インヒビター（例えばカプトプリル）のようなＴＮＦ活性を遮断および／または阻害する化合物；およびＭＡＰキナーゼインヒビターのようなＴＮＦ生産および／または合成を遮断および／または阻害する化合物を含む。
【０１７１】
本明細書で使用する「腫瘍壊死因子抗体」、「ＴＮＦ抗体」、「ＴＮＦα抗体」またはフラグメント等は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕおよび／または好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏでＴＮＦα活性を低下させ、遮断し、阻害し、排除し、または妨害する。例えば本発明の適当なＴＮＦヒト抗体はＴＮＦαに結合することができ、そして抗−ＴＮＦ抗体、それらの抗原結合フラグメント、およびＴＮＦαに特異的に結合するそれらの特定した変異体またはドメインを含む。適当なＴＮＦ抗体またはフラグメントは、ＴＮＦ  ＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質合成、ＴＮＦ放出、ＴＮＦ受容体シグナリング、膜ＴＮＦ開裂、ＴＮＦ活性、ＴＮＦ生産および／または合成を低下させ、遮断し、排除し、妨害し、防止し、および／または阻害することもできる。
【０１７２】
キメラ抗体ｃＡ２は、Ａ２と命名された高親和性の中和マウス抗−ヒトＴＮＦαＩｇＧ抗体の抗原結合可変領域、およびヒトＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンの定常領域から成る。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域は同種抗体エフェクター機能を向上させ、循環血清半減期を上昇させ、そして抗体の免疫原性を低下させる。キメラ抗体ｃＡ２のアビディティおよびエピトープ特異性は、マウス抗体Ａ２の可変領域に由来する。特定の態様では、マウス抗体Ａ２の可変領域をコードする核酸の好適な供給源はＡ２ハイブリドーマ細胞株である。
【０１７３】
キメラＡ２（ｃＡ２）は、天然のおよび組換えヒトＴＮＦαの両方の細胞傷害効果を用量依存的様式で中和する。キメラ抗体ｃＡ２および組換えヒトＴＮＦαの結合アッセイから、キメラ抗体ｃＡ２の親和性定数を１．０４×１０１０Ｍ−１と算出した。モノクローナル抗体の特異性および親和性を競合阻害により決定する好適な方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，抗体：ア  ラボラトリーマニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバーラボラトリー出版、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク、１９８８；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．編集、免疫学における現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、グリーネ出版アソシエイツ  アンド  ウィリー  インターサイエンス（Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、ニューヨーク、（１９９２−２００５）；Ｋｏｚｂｏｒ  ｅｔ
ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４；７２−７９（１９８３）；Ａｕｓｕｂｅｌ
ｅｔ  ａｌ．編集、分子生物学における現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ウィリー  インターサイエンス（  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、ニューヨーク、（１９８７−２００５）；およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９２：５８９−６０１（１９８３）に見いだすことができ、これらは引用により全部、本発明に編入する。
【０１７４】
特定の態様では、マウスモノクローナル抗体Ａ２はｃ１３４Ａと命名された細胞株により生産される。キメラ抗体ｃＡ２はｃ１６８Ａと命名された細胞株により生産される。
【０１７５】
さらに本発明に使用することができるモノクローナル抗−ＴＮＦ抗体の例は、従来技術により記載されている（例えば米国特許第５，２３１，０２４号明細書；Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２（３）：１６２−１６９（１９９０）；米国特許出願第０７／９４３，８５２号明細書（１９９２年９月１１日に出願）；Ｒａｔｈｊｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第９１／０２０７８号パンフレット（１９９１年２月２１日に公開）；Ｒｕｂｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第０２１８８６８号パンフレット（１９８７年４月２２日に公開）；Ｙｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＧＬＰ−１特許公開第０２８８０８８号明細書（１９８８年１０月２６日）；Ｌｉａｎｇ，ｅｔ．ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１３７：８４７−８５４（１９８６）；Ｍｅａｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ６：３０５−３１１（１９８７）；Ｆｅｎｄｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ６：３５９−３６９（１９８７）；Ｂｒｉｎｇｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ６：４８９−５０７（１９８７）；およびＨｉｒａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．９６：５７−６２（１９８７）を参照にされたい（これらの参考文献は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１７６】
ＴＮＦ受容体分子
本発明に有用な好適なＴＮＦ受容体分子は、ＴＮＦαに高親和性で結合するものであり（例えばＦｅｌｄｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、国際公開第９２／０７０７６号パンフレット（１９９２年４月３０日公開）；Ｓｃｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６１：３６１−３７０（１９９０）；およびＬｏｅｔｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６１：３５１−３５９（１９９０）を参照にされたい、これらは引用により全部、本明細書に編入する）、そして場合により低い免疫原性を有するものである。特に５５ＫＤａ（ｐ５５  ＴＮＦ−Ｒ）および７５ｋＤａ（ｐ７５  ＴＮＦ−Ｒ）ＴＮＦ細胞表面受容体が本発明に有用である。受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはその機能的部分を含んで成るこれらの受容体の短縮された形態も（例えばＣｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２３：８３１−８４０（１９９４）を参照にされたい）、本発明に有用である。ＥＣＤを含んで成るＴＮＦ受容体の短縮化形は、尿および血清中に３０ｋＤａおよび４０ｋＤａのＴＮＦα阻害結合タンパク質として検出された（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５３１−１５３６（１９９０））。ＴＮＦ受容体多量体分子およびＴＮＦ免疫受容体融合分子、およびそれらの誘導体およびフラグメントまたは部分は、本発明の方法および組成物に有用なＴＮＦ受容体分子のさらなる例である。本発明で使用できるＴＮＦ受容体分子は、症状の良好から優れた緩和および低い毒性で長期間、患者を処置するためのそれらの能力が特徴である。低い免疫原性および／または高い親和性、ならびに他の不確定な特性は、達成される治療的結果に寄与し得る。
【０１７７】
本発明に有用なＴＮＦ受容体多量体分子は、１もしくは複数のポリペプチドリンカーまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような他の非ペプチドリンカーを介して連結された２以上のＴＮＦ受容体のＥＣＤの全てまたは機能的部分を含んで成る。多量体分子はさらに多量体分子の発現を支配するために、分泌されるタンパク質のシグナルペプチドを含んで成ることができる。これらの多量体分子およびそれらの生産法は、米国特許出願第０８／４３７，５３３号明細書（１９９５年５月９日出願）に記載され、その内容は引用により全部、本明細書に編入する。
【０１７８】
本発明の方法および組成物に有用なＴＮＦ免疫受容体融合分子は、１もしくは複数の免疫グロブリン分子の少なくとも一部および１もしくは複数のＴＮＦ受容体の全てまたは機能的部分を含んで成る。これらの免疫受容体融合分子は、単量体またはヘテロ−もしくはホモ−多量体として集成することができる。この免疫受容体融合分子は、一価または多価であることができる。そのようなＴＮＦ免疫受容体融合分子の例は、ＴＮＦ受容体／ＩｇＧ融合タンパク質である。ＴＮＦ免疫受容体融合分子およびそれらの生産法は従来技術に記載されている（Ｌｅｓｓｌａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：２８８３−２８８６（１９９１）；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１）；Ｐｅｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３−１４８９（１９９１）；Ｋｏｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２１５−２１９（１９９４）；Ｂｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ６（６）：６１６−６２３（１９９４）；Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２０４０−２０４８（１９９４）；Ｂｅｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，４４７，８５１号明細書；および米国特許出願第０８／４４２，１３３号明細書（１９９５年５月１６日に出願）、これら各々は引用により全部、本明細書に編入する）。免疫受容体融合分子の生産法も、Ｃａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，１１６，９６４号明細書；Ｃａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，２２５，５３８号明細書；およびＣａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：５２５−５３１（１９８９）に見いだすことができ、これらの参考文献は引用により全部、本明細書に編入する。
【０１７９】
ＴＮＦ受容体分子の機能的均等物、誘導体、フラグメントまたは領域とは、ＴＮＦ受容体分子の部分、あるいは本発明に使用することができる（例えば高親和性でＴＮＦに結合し、そして低い免疫原性を有する）ＴＮＦ受容体分子に機能的に似ている十分なサイズおよび配列のＴＮＦ受容体分子をコードするＴＮＦ受容体分子の配列の部分を称する。ＴＮＦ受容体分子の機能的均等物には、本発明に使用することができる（例えば高い親和性でＴＮＦαに結合し、そして低い免疫原性を有する）ＴＮＦ受容体分子に機能的に似ている
修飾ＴＮＦ受容体分子も含む。例えばＴＮＦ受容体分子の機能的均等物は、“ＳＩＬＥＮＴ”コドンまたは１もしくは複数のアミノ酸置換、欠失または付加（例えば１つの酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸への置換；または同じかまたは異なる疎水性アミノ酸をコードする１コドンの、疎水性アミノ酸をコードする別のコドンへの置換）を含むことができる。Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、分子生物学における現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、グリーネ出版アソシエイツ  アンド  ウィリー  インターサイエンス、ニューヨーク、（１９８７−２００５）を参照にされたい。
【０１８０】
サイトカインには限定するわけではないが既知のすべてのサイトカインを含む。例えばＣｏｐｅｗｉｔｈＣｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｃｏｍを参照にされたい。サイトカインアンタゴニストには、限定するわけではないが任意の抗体、フラグメントまたは模造物、任意の可溶性受容体、フラグメントまたは模造物、任意の低分子アンタゴニスト、またはそれらの組み合わせを含む。
【０１８１】
本発明の任意の方法はタンパク質が媒介する障害を処置するための方法を含んで成ることができ、この方法は少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、器官、動物または患者に投与することを含んで成る。そのような方法は任意にさらにそのような免疫疾患を処置するための同時投与または併用療法を含んで成ることができ、ここで該少なくとも１つＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ、それらの特定部分もしくはバリアントの投与は、さらに事前に、同時におよび／または後に、ＩＬ−３、ＩＬ−６およびＩＬ−１１、幹細胞因子、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦのような少なくとも１つのサイトカインから選択される少なくとも１つを投与することを含んでなる。
【０１８２】
典型的には病的状態の処置は少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディ組成物の有効量または投薬用量を投与することにより行われ、この量は用量あたり組成物中に含まれる比活性に依存して投与あたり全部で、平均して、範囲で少なくとも約０  ０１から５００ミリグラムの少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント／患者１キログラム、そして好ましくは単回または多回投与あたり少なくとも約０  １〜１００ミリグラムのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分またはバリアント／患者体重である。あるいは効果的な血清濃度は、単回または多回投与あたり０．１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を構成することができる。適当な投薬用量は医師が知っており、そしてもちろん特定の疾患状態、投与する組成物の比活性、および処置を受ける特定の患者に依存する。場合により所望する治療的量を達成するために、繰り返し投与、すなわち特定の監視され、または計量された用量の反復個別投与を提供することが必要となり、ここで個別投与は所望の毎日の用量または効果が達成されるまで繰り返される。
【０１８３】
好適な用量は任意に、０  ０１、０  ０２、０  ０３、０  ０４、０  ０５、０  ０６、０  ０７、０  ０８、０  ０９、０  １、０  ２、０  ３、０  ４、０  ５、０  ６、０  ７、０  ８、０  ９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９および／または３０ｍｇ／ｋｇ投与、あるいはそれらの任意の範囲、値または画分を含むことができ、あるいは単回または多回投与あたり０  １、０  ５、０．９、１  ０、１  １、１  ２、１  ５、１  ９、２．０、２  ５、２  ９、３  ０、３．５、３  ９、４  ０、４  ５、４  ９、５．５、５  ９、６  ０、６  ５，６  ９、７  ０、７  ５、７  ９、８  ０、８．５、８  ９、９  ０、９．５、９  ９、１０、１０  ５、１０．９、１１、１１  ５、１１  ９、２０、１２  ５、１２  ９、１３  ０、１３  ５、１３  ９、１４  ０、１４  ５、４  ９、５  ０、５  ５、５  ９、６  ０、６  ５、６  ９、７  ０、７  ５、７  ９、８  ０、８  ５、８  ９、９  ０、９  ５、９  ９、１０、１０  ５、１０  ９、１１、１１  ５、１１  ９、１２、１２  ５、１２  ９、１３  ０、１３  ５、１３  ９、１４、１４  ５、１５、１５  ５、１５．９、１６、１６  ５、１６  ９、１７、１７  ５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９  ５、１９．９、２０、２０  ５、２０  ９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００および／または５０００μｇ／ｍｌ血清濃度あるいはそれらの任意の範囲、値または画分の血清濃度を達するために含むことができる。
【０１８４】
あるいは投与する投薬用量は、特定の薬剤の薬物動態学的特性、およびその投与の様式および経路；受容体の年齢、健康および体重；症状の性質および程度、現行処置の種類、処置の頻度、および所望する効果のような既知の因子に大変依存し得る。通常、有効成分の投薬用量は、体重１キログラムあたり約０  １〜１００ミリグラムとなり得る。多くは投与あたり１キログラムにつき０  １〜５０、そして好ましくは０  １〜１０ミリグラムであることができ、あるいは徐放性形態が所望の効果を得るために効果的である。
【０１８５】
非限定的な例として、ヒトまたは動物の処置は、１日あたり０  ５、０  ９、１  ０、１  １、１  ５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇのような０  ０１〜１００ｍｇ／ｋｇの本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを１回に、または周期的用量として、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０日に少なくとも１回、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０週に少なくとも１回、あるいはそれらを組み合わせて、単回、注入または反復投与を使用して提供することができる。
【０１８６】
内部投与に適する剤形（組成物）は、一般に単位または容器あたり約０  ０００１ミリグラム〜約５００ミリグラムの有効成分を含む。これらの製薬学的組成物では、有効成分は通常、組成物の総重量に基づき約０  ５〜９５重量％の量で存在するだろう。
【０１８７】
非経口投与には、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは溶液、懸濁液、乳液または凍結乾燥粉末として製剤することができ、一緒にまたは別に製薬学的に許容される非経口賦形剤が提供される。そのような賦形剤の例は、水、塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液および５％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび固定油のような非水性賦形剤を使用することもできる。賦形剤または凍結乾燥粉末は、等張性（例えば塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性（例えばバッファーおよび保存剤）を維持するための添加剤を含むことができる。製剤は既知のまたは適当な技術で滅菌される。
【０１８８】
適当な製薬学的キャリアーは、この分野の標準的な参考書である最新版のレミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。
【０１８９】
治療的投与
多くの既知の、および開発された様式を、製薬学的に有効な量の本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを投与するために使用することができる。本発明のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディは、溶液、乳液、コロイドもしくは懸濁液として、または粉末として、吸入または本明細書に記載し、もしくは当該技術分野で既知の他の様式により投与するために適する種々のデバイスおよび方法を使用することにより担体中で送達することができる。
【０１９０】
非経口製剤および投与
非経口投与用の製剤は、通常の賦形剤として滅菌水または塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレン等を含むことができる。注入用の水性または油性懸濁液は、既知の方法に従い適当な乳化剤または加湿剤および沈殿防止剤を使用して調製することができる。注入用の薬剤は、水溶液または滅菌された注入可能溶液または溶媒中の懸濁液のような非毒性で、非経口投与可能な希釈剤であることができる。使用可能な賦形剤または溶剤として、水、リンゲル溶液、等張性塩水等を利用できる；通例の溶媒、または沈殿防止溶媒として、滅菌された非揮発性油を使用することができる。これらの目的のために、任意の種類の非揮発性油および脂肪酸を使用でき、それらには天然または合成または半合成の脂肪油または脂肪酸；天然または合成または半合成のモノ−もしくはジ−またはトリ−グリセリドを含む。非経口投与は当該技術分野で知られており、そして限定するわけではないが通例の注入手段、米国特許第５，８５１，１９８号明細書に記載されたガスで圧縮した、針を含まない注入デバイス、および米国特許第５，８３９，４４６号明細書に記載されたレーザーパーホレーターデバイスを含む（これらの明細書は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１９１】
代替送達  
本発明はさらに少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの、非経口的、皮下、筋肉内、静脈内、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮的手段による投与に関する。タンパク質、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物は、非経口（皮下、筋肉内もしくは静脈内）投与、特に液体溶液もしくは懸濁液の状態で使用するために；膣または直腸投与、特にクリームおよび坐薬のような半固体形で使用するために；頬内、または舌下投与、特に錠剤またはカプセル形態で；あるいは鼻内、特に粉末、点鼻またはエーロゾルまたは特定薬剤（ｃｅｒｔａｉｎ  ａｇｅｎｔ）の形態で；あるいは皮膚構造をモディファイし、または経皮パッチ中の薬剤濃度を上げるためのジメチルスルフォキシドのような化学的エンハンサー（Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、「薬剤の浸透強化（Ｄｒｕｇ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」；Ｈｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．、編集、第５９−９０頁（マルセルデッカー（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ）社、ニューヨーク  １９９４、引用により全部、本明細書に編入する）を用いて、またはタンパク質およびペプチドを含む製剤の皮膚上への適用を可能にする酸化剤（国際公開第９８／５３８４７号パンフレット）を用いて、または電気穿孔のような一過性の輸送路を作るために電場を適用して、またはイオン導入法のような皮膚を通る荷電した薬剤の移動性を上げるために、またはソノホレシス（ｓｏｎｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）のような超音波を適用して（米国特許第４，３０９，９８９号および同第４，７６７，４０２号明細書）、経皮的に、特にゲル、軟膏、ローション、懸濁液またはパッチ送達系の状態で使用するために調製することができる（上記の刊行物および特許は引用により全部、本明細書に編入する）。
【０１９２】
肺／鼻投与
肺投与には、好ましくは少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物は、肺または洞のより下部気道に到達するために効果的な粒子サイズで送達される。本発明に従い、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントは吸入による治療薬の投与について当該技術分野で既知の種々の吸入または鼻デバイスにより送達することができる。エーロゾル化した製剤を患者の洞腔または肺胞に沈積させることができるこれらのデバイスには、定量吸入器、ネブライザー、乾燥粉末ジェネレーター、噴霧器等を含む。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを肺または鼻投与に向けるための適当な他のデバイスも当該技術分野では既知である。すべてのそのようなデバイスは、エーロゾル中のＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを分配するための投与に適する製剤に使用することができる。そのようなエーロゾルは、溶液（水性または非水性の両方）または固体粒子のいずれかから成ることができる。Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（商標）定量吸入器のような定量呼入器は、多くは推進ガスを使用し、そして吸息中の作動が必要である（例えば国際公開第９４／１６９７０号、同第９８／３５８８８号パンフレットを参照にされたい）。Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（商標）（アストラ：Ａｓｔｒａ）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（商標）（グラクソ：Ｇｌａｘｏ）、Ｄｉｓｋｕｓ（商標）（グラクソ）、Ｓｐｉｒｏｓ（商標）呼入器（ジュラ：Ｄｕｒａ）、インハーレセラピューティクス（Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）により販売されているデバイスおよびＳｐｉｎｈａｌｅｒ（商標）粉末呼入器（フィソンス：Ｆｉｓｏｎｓ）のような粉末吸入器は、混合粉末の呼吸作動を使用する（米国特許第４，６６８，２１８号明細書  アストラ、欧州特許第２３７５０７号明細書  アストラ、国際公開第９７／２５０８６号パンフレット  グラクソ、国際公開第９４／０８５５２号パンフレット  ジュラ、米国特許第５，４５８，１３５号明細書  インハーレ、国際公開第９４／０６４９８号パンフレット  フィソンス、すべて引用により本明細書に編入する）。ＡＥＲｘ（商標）アラディギム（Ａｒａｄｉｇｍ）、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ（商標）ネブライザー（マリンクロッド：Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）、およびＡｃｏｒｎＩＩ（商標）ネブライザー（マークエスト  メディカル  プロダクツ：Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（米国特許第５，４０４，８７１号明細書  アラディギム、国際公開第９７／２２３７６号パンフレット）のようなネブライザー（上記技術文献は引用により全部、本明細書に編入する）は、溶液からエーロゾルを生成するが、定量吸入器、乾燥粉末吸入器等は、小さい粒子のエーロゾルを生成する。市販されている吸入器デバイスのこれらの具体的例は、本発明の実施に適する具体的なデバイスの代表例であることを意図し、そして本発明の範囲を限定するものではない。好ましくは少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含んで成る組成物は、乾燥粉末吸入器または噴霧器により送達される。本発明の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを投与するための吸入デバイスには幾つかの望ましい特徴がある。例えば吸入デバイスによる送達は有利には、信頼性があり、再現性があり、そして正確であることである。吸入デバイスは場合により、良好な呼吸適性のために小さい乾燥粒子（例えば約１０μｍ未満、好ましくは約１〜５μｍ）を送達することができる。
【０１９３】
噴霧としてのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物の投与
ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を含む噴霧は、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの懸濁液または溶液を、加圧下のノズルを通すことにより生成することができる。ノズルのサイズおよび形状、かける圧力および液体供給速度は、所望の出力および粒子サイズを達成するために選択することができる。電気噴霧は例えば毛細管またはノズル供給部に連結した電場により生成できる。有利には噴霧器により送達される少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１〜約５μｍの範囲、そして最も好ましくは約２μｍ〜３μｍの粒子サイズを有する。
【０１９４】
噴霧器で使用するために適当な少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の製剤は、典型的には水溶液中、１ｍｌの溶液あたり約１ｍｇ〜約２０ｍｇの濃度で少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の濃度で、水溶液中にＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を含む。製剤は賦形剤、バッファー、張性調整剤、保存剤、表面活性剤および好ましくは亜鉛のような作用物質（ａｇｅｎｔ）を含むことができる。製剤はまた、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を安定化するために、バッファー、還元剤、バルクタンパク質または炭水化物のような賦形剤または作用物質を含むこともできる。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を製剤するために有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミン等を含む。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を製剤するために有用な典型的な炭水化物には、シュクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコース等を含む。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質製剤は、エーロゾルを形成する溶液の噴霧化により引き起こされるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の表面が誘導する凝集を下げ、または防止することができる表面活性剤を含むこともできる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルのような種々の通例の表面活性剤を使用することができる。量は一般に製剤の０  ００１から１４重量％の間である。本発明の目的に特に好適な表面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０等である。ミメティボディまたは特定部分またはバリアントのようなタンパク質の製剤のために、当該技術分野で既知のさらなる作用物質も製剤に含むことができる。
【０１９５】
ネブライザーによるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物の投与
ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質は、ジェットネブライザーまたは超音波ネブライザーのようなネブライザーにより投与することができる。典型的にはジェットネブライザーでは、圧縮空気源を使用して開口部を通る高速エアジェットを作成する。ガスがノズルを越えて膨張すると低圧領域が作成され、これが液体リザーバーに連結された毛細管を通ってＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の溶液を引き出す。毛細管からの液流は、管から出る時に不安定なフィラメントおよび液滴に剪断され、エーロゾルを作成する。ある範囲の形状、流速、およびそらせ型を使用して、上記のジェットネブライザーから所望の性能特性を達成することができる。超音波ネブライザーでは、高周波電気エネルギーを使用して、典型的には圧電変圧器を使用して、振動的、機械的エネルギーを作成することができる。このエネルギーを直接的に、またはカップリング流体を通すいずれかでＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の製剤に伝え、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を含むエーロゾルを作成する。有利にはネブライザーにより送達されるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍ〜約５μｍの範囲、そして最も好ましくは約２μｍ〜３μｍの粒子サイズを有する。
【０１９６】
ジェットまたは超音波のいずれのネブライザーを用いても、使用するために適当な少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバ
リアントの製剤は、典型的には、１ｍｌの溶液あたり約１ｍｇ〜約２０ｍｇの濃度の少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分またはバリアントタンパク質で、水溶液中にＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク含む。製剤は賦形剤、バッファー、張性調整剤、保存剤、表面活性剤および好ましくは亜鉛のような作用物質を含むこともできる。また製剤は、バッファー、還元剤、バルクタンパク質または炭水化物のような、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を安定化するための賦形剤または作用物質も含むこともできる。少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質を製剤するために有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミン等を含む。少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを製剤するために有用な典型的な炭水化物には、シュクロース、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコース等を含む。少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント製剤はエーロゾルを形成する溶液の噴霧化により引き起こされる少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの表面が誘導する凝集を下げ、または防止することができる表面活性剤も含むこともできる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコールおよびポリオキシエチレンソルビタル脂肪酸エステルのような種々の通例の表面活性剤を使用することができる。量は一般に製剤の０  ００１から４重量％（１４％上）の間の範囲である。本発明の目的に特に好適な表面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０等である。ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントタンパク質のようなタンパク質の製剤のために当該技術分野で既知のさらなる作用物質も製剤に含むことができる。
【０１９７】
定量吸入器によるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物の投与
定量吸入器（ＭＤＩ）では、推進剤、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント、および任意の賦形剤または他の添加剤を、液化圧縮ガスを含む混合物としてキャニスターに含む。定量バルブの作動は好ましくは、約１０μｍ以下、好ましくは約１μｍ〜約５μｍ、そして最も好ましくは約２μｍ〜３μｍの範囲のサイズの粒子を含むエーロゾルとして混合物を放出する。所望のエーロゾル粒子サイズは、ジェット−ミル（ｊｅｔ−ｍｉｌｌｉｎｇ）、噴霧乾燥、臨界点縮合等を含む当業者に既知の様々な方法により生成されるＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物タンパク質の製剤を使用することにより得られる。好適な定量吸入器には、３Ｍまたはグラクソにより製造され、そしてヒドロフルオロカーボン推進剤を採用するものを含む。
【０１９８】
定量吸入器デバイスを用いて使用するための少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの製剤は、一般に少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを含む細かく分割した粉末を、懸濁液として非水性媒質中に、例えば表面活性剤により推進剤に懸濁して含む。推進剤は、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ヒドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ヒドロフルオロアルカン−２２７）等を含むクロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルロカーボンまたは炭化水素のような、この目的に使用される任意の通例の材料であることができる。好ましくは推進剤はヒドロフルオロカーボンである。表面活性剤は、推進剤中の懸濁液として少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを安定化するために、化学分解等に対して活
性剤を保護する等のために選択することができる。適当な表面活性剤にはソルビタントリオレート、ダイズ  レシチン、オレイン酸等を含む。場合により溶液エーロゾルは、エタノールのような溶媒を使用することが好ましい。タンパク質のようなタンパク質の製剤に当該技術分野で既知のさらなる作用物質を、製剤に含むこともできる。
【０１９９】
当業者は、本発明の方法を本明細書に記載していないデバイスを介して少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアント組成物を肺投与することにより達成できることを認識しているだろう。
【０２００】
粘膜製剤および投与
粘膜表面を通して吸収させるために、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを投与する組成物および方法には、複数のミクロン以下の粒子、粘膜接着性高分子、生物活性ペプチドおよび水性の連続相を含んで成る乳液を含み、これは乳液粒子の粘膜接着を達成することにより粘膜表面を通る吸収を促進する（米国特許第５，５１４，６７０号明細書）。本発明の乳液の適用に適する粘膜表面には、角膜、結膜、頬、舌、鼻、膣、肺、胃、腸および直腸経路の投与を含む。膣または直腸投与用の製剤、例えば坐薬は、賦形剤として例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、カカオ脂等を含むことができる。鼻内投与用の製剤は固体であることができ、そして賦形剤として例えばラクトースを含み、または点鼻の水性もしくは油性溶液であることができる。頬内投与には賦形剤は糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、糊化（ｐｒｅｇｅｌｉｎａｔｅｄ）澱粉等を含む（米国特許第５，８４９，６９５号明細書）。
【０２０１】
経口製剤および投与
経口用の製剤は、腸壁の透過性を人工的に上げるための補助剤（例えばレゾルシノールおよびポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルのような非イオン性表面活性剤）の同時投与、ならびに酵素的分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラシロール）の同時投与に依存する。経口投与用の固体型剤形の活性成分化合物を、シュクロース、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、澱粉、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアガム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成ポリマーおよびグリセリドを含む少なくとも１つの添加剤と混合することができる。またこれらの剤形は他の種類（１つまたは複数）の添加剤、例えば不活性な希釈剤、ステアリン酸マグネシウム、パラベンのような潤滑剤、ソルビン酸、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロールのような保存剤、システインのような酸化防止剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味料、風味剤（ｆｌａｖｏｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、香料等も含むことができる。
【０２０２】
錠剤およびピルはさらに腸溶性コート調製物に加工することができる。経口投与用の液体調製物には、医学的使用が可能な乳液、シロップ、エリキシル、懸濁液および溶液調製物を含む。これらの調製物は該分野で通常使用されている不活性希釈剤、例えば水を含むことができる。インスリンおよびヘパリンの薬剤送達系としてリポソームも記載された（米国特許第４，２３９，７５４号明細書）。さらに最近では、混合アミノ酸（プロテイノイド）の人工ポリマーの微小球も、薬剤を送達するために使用された（米国特許第４，９２５，６７３号明細書）。さらに米国特許第５，８７９，６８１号および同第５，５，８７１，７５３号明細書に記載された担体化合物も生物学的に活性な作用物質を経口で送達するために使用され、そして当該技術分野で既知である。
【０２０３】
経皮製剤および投与
経皮投与には、少なくとも１つのＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを、リポソームまたはポリマー性ナノ粒子、マイクロ粒子、マイクロカプセルまたは微小球（特に言及しない限り、集合的にマイクロ粒子と呼ぶ）のような送達デバイスにカプセル化する。多数の適当なデバイスが知られており、それらにはポリ乳酸、ポリグリコール酸およびそれらのコポリマーのようなポリヒドロキシ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリホスファゼンのような合成ポリマー、ならびにコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他のタンパク質、アルギネートおよび他の多糖およびそれらの組み合わせのような天然ポリマーから作られたマイクロ粒子を含む（米国特許第５，８１４，５９９号明細書）。
【０２０４】
持効性（ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ）投与および製剤
本発明の化合物を個体に長期間、例えば単回投与で１週間から１年の期間送達することがしばしば望ましい。種々の緩効性、貯蔵またはインプラント剤形を利用することができる。例えば剤形は、体液中での溶解度が低い化合物の製薬学的に許容される非毒性塩、例えば（ａ）リン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレン  モノ−もしくはジ−スルホン酸、ポリガラクツロン酸等のような多塩基性酸との酸付加塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等のような多価金属カチオン、または例えばＮ，Ｎ’−ジベンジル−エチレンジアミンまたはエチレンジアミンから形成される有機カチオンとの塩；あるいは（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組み合わせ、例えばタンニン酸亜鉛塩を含むことができる。さらに本発明の化合物は、または好ましくは今ちょうど記載したような比較的不溶性の塩をゲル、例えば注入に適するゴマ油を含む例えばモノステアリン酸アルミニウムゲルに配合することができる。特に好適な塩は、亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモ酸塩等である。注入用の別の種類の緩効性貯蔵製剤は、例えば米国特許第３，７７３，９１９号明細書に記載されているようなポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマーのような緩効分解型（ｓｌｏｗ  ｄｅｇｒａｄｉｎｇ）の非毒性、非抗原性ポリマー中にカプセル化するために分散した化合物または塩を含む。化合物または好ましくは上記の比較的不溶性の塩は、特に動物で使用するために、コレステロールマトリックスシラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）ペレット中に配合することもできる。さらなる緩効性の、貯蔵またはインプラント製剤、例えばガスまたは液体リポソームが技術文献で知られている（米国特許第５，７７０，２２２号明細書および「徐放性および放出制御薬剤送達系（Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  編集、マルセルデッカー社、ニューヨーク、１９７８）。
【０２０５】
本発明を一般的に記載してきたが、これは具体的説明により提供され、そして限定を意味しない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解できるだろう。
【実施例】
【０２０６】
実施例１：哺乳動物細胞中でのＧＬＰ−１アゴニストミメティボディのクローニングおよび発現
典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介する少なくとも１つのプロモーター要素、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントのコード配列、および転写の終結および転写産物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなる要素にはエンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列およびＲＮＡスプライシングのための供与および受容部位により挟まれた介在配列を含む。高度に効率的な転写はＳＶ４０に由来する初期および後期プロモーター、レトロウイルス、例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩに由来する長い末端反復配列（ＬＴＲＳ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターにより達成され得る。しかし細胞要素（例えばヒトアクチンプロモーター）も使用することができる。本発明の実施に使用するために適当な
発現ベクターには、例えばｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮまたはｐＬＮＣＸ（クロンテック  ラボズ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｓ）、パロアルト、カリフォルニア州）、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）またはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／−）（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ウプサラ、スウェーデン）、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ３７１４６）およびｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ６７１０９）のようなベクターを含む。使用できた哺乳動物宿主細胞には、ヒトＨｅｌａ  ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７およびＣＶ１、ｑｕａｉｌＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。
【０２０７】
あるいは遺伝子は染色体に組み込まれた遺伝子を含む安定な細胞株で発現させることができる。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシンまたはハイグロマイシンのような選択可能なマーカーを用いたコートランスフェクションにより、トランスフェクトした細胞の同定および単離が可能となる。
【０２０８】
トランスフェクトした遺伝子は、大量のコードされたＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントを発現させるために増幅することもできる。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、数百またはさらに数千の目的遺伝子のコピーを持つ細胞株を開発するために有用である。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）（Ｍｕｒｐｈｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６９−１７５（１９９２））である。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地で成長させ、そして最高の耐性を持つ細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み込まれた増幅した遺伝子（１つまたは複数）を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、ＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの生産によく使用される。
【０２０９】
発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモーター（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えてＣＭＶ−エンハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５））を含む。多クローニング部位、例えば制限酵素開裂部位であるＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８は、目的遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターは３’イントロンに加えて、ラットのプレプロインスリン遺伝子のポリアデニル化および終結シグナルを含む。
【０２１０】
ＣＨＯ細胞中でのクローニングおよび発現
ベクターｐＣ４をＧＬＰ−１アゴニストもしくはミメティボディもしくは特定部分もしくはバリアントの発現に使用する。プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ寄託番号３７１４６）の誘導体である。プラスミドはマウスＤＨＦＲ遺伝子をＳＶ４０初期プロモーターの制御下に含む。これらのプラスミドでトランスフェクトしたジヒドロ葉酸活性を欠くチャイニーズハムスター卵巣または他の細胞は、細胞を化学療法剤であるメトトレキセートを補充した選択培地（例えばアルファマイナスＭＥＭ、ライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ゲチスバーグ、メリーランド州）中で成長させることにより選択することができる。メトトレキセート（ＭＴＸ）に対して耐性の細胞中でＤＨＦＲ遺伝子の増幅が十分に示された（例えば、Ｆ．Ｗ．Ａｌｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｊ．Ｌ．Ｈａｍｌｉｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｍａ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０９７：１０７−１４３（１９９０）；およびＭ．Ｊ．Ｐａｇｅ  ａｎｄ  Ｍ．Ａ．Ｓｙｄｅｎｈａｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：６４−６８（１９９１）を参照にされたい）。ＭＴＸの濃度を上昇させて成長させた細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果として目的酵素であるＤＨＦＲの過剰生産により薬剤への耐性を生じる。第２遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子に連結されている場合、これは通常、同時に増幅され（ｃｏ−ａｍｐｌｉｆｉｅｄ）、そして過剰に発現される。当該技術分野では、この取り組みを使用して１，０００コピー以上の増幅した遺伝子（１つまたは複数）を持つ細胞株を発生できることが知られている。続いてメトトレキセートを離脱する時、宿主細胞の１もしくは複数の染色体（１つまたは複数）に組み込まれた増幅された遺伝子を含む細胞株が得られる。
【０２１１】
プラスミドｐＣ４は目的遺伝子を発現するために、ラウス肉腫ウイルスの長い末端反復配列（ＬＴＲ）の強力なプロモーター（Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えて、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の前初期遺伝子のエンハンサーから単離されたフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５））を含む。プロモーターの下流は、遺伝子の組み込みを可能とするＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８制限酵素開裂部位である。これらのクローニング部位の後に、プラスミドはラットのプレプロインスリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含む。他の高効率プロモーター、例えばヒトｂ−アクチンプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーターまたは他のレトロウイルス（例えばＨＩＶおよびＨＴＬＶＩ）に由来する長い末端反復配列も発現に使用することができる。クロンテックのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および同様な系は、哺乳動物細胞中で調節された様式でＧＬＰ−１を発現させるために使用できる（Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎ，ａｎｄ  Ｈ．Ｂｕｊａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５５４７−５５５１（１９９２））。ｍＲＮＡのポリアデニル化には、他のシグナル、例えばヒト成長ホルモンまたはグロビン遺伝子に由来するシグナルも使用することができる。染色体に組み込まれた目的の遺伝子を持つ安定な細胞株は、ｇｐｔ、Ｇ４１８またはハイグロマイシンのような選択可能マーカーを用いたコ−トランスフェクションでも選択できる。始めに１より多くの選択可能なマーカー（例えばＧ４１８に加えてメトトレキセート）を使用することが有利である。
【０２１２】
プラスミドｐＣ４を制限酵素で消化し、そして次いでウシの腸ホスファターゼを使用して当該技術分野で既知の手法により脱リン酸化する。次いでベクターを１％アガロースゲルから単離する。
【０２１３】
本発明のＧＬＰ−１ミメティボディのＨＣおよびＬＣ可変領域に対応する、完全なＧＬＰ−１ミメティボディまたは特定部分またはバリアントをコードするＤＮＡ配列を、既知の方法の工程に従い使用する。適切なヒト定常領域（すなわちＨＣおよびＬＣ領域）をコードする単離された核酸もこの構築物に使用される。
【０２１４】
単離された可変および定常領域をコードするＤＮＡおよび脱リン酸化ベクターは、次いでＴ４  ＤＮＡリガーゼで連結される。次いで大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＨＢ１０１またはＸＬ−１ブルー細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ４中に挿入されたフラグメントを含む細菌が、例えば制限酵素分析を使用して確認される。
【０２１５】
活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠くチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ４を０  ５μｇのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏを用いてリポフェクチンを使用してコ−トランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは、Ｇ４１８を含む抗生物質群に対する耐性を付与する酵素をコードするＴｎ５に由来するドミナント選択性マーカーであるｎｅｏ遺伝子を含む。この細胞を、１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補充したアルファマイナスＭＥＭにまく。２日後、細胞をトリプシン処理し、そして１０、２５または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキセートに加えて１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補足したアルファマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプレート（グレイナー（Ｇｒｅｉｎｅｒ）、独国）にまく。約１０〜１４日後、１つのクローンをトリプシン処理し、そして異なる濃度のメトトレキセート（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して６−ウェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコにまく。最高濃度のメトトレキセートで成長するクローンを、さらにより高濃度のメトトレキセート（１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新たな６−ウェルプレートに移す。１００〜２００ｍＭ濃度で成長するクローンが得られるまで、同じ手順を繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットにより、または逆相ＨＰＬＣ分析により分析する。
【０２１６】
実施例２：本発明のＧＬＰ−１ミメティボディの非限定的例
ＧＬＰ−１は、経口グルコース対抗後に腸のＬ細胞から分泌される３７アミノ酸ペプチドである。生物学的に活性なＧＬＰ−１（７−３７）ペプチド、バリアントまたは誘導体を包含するミメティボディ構築物は、ペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ寿命を延ばし、そして２型糖尿病患者の血中グルコースを下げるための新規療法を提供すると期待される。天然のＧＬＰ−１（７−３７）ペプチドまたはＤＰＰ−ＩＶ耐性類似体をコードするペプチドは、ミメティボディのスカフォールドに取り込まれることができる。これらの分子の幾つかが作成され、そして生じたミメティボディはｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞に基づくアッセイにおける機能で活性が証明された。種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルをこれらの実験に使用することができ、そして効力は互いに比べることができず、または本明細書に提示する結果と比べることができないことに留意すべきである。
【０２１７】
ＧＬＰ−１ミメティボディバリアントを生成するために、ミメティボディ中のＧＬＰ−１ペプチド、リンカー、ヒンジまたはＣＨ２およびＣＨ３配列を削除し、加え、置換し、変異させ、または修飾して、発現、効力、安定性またはエフェクター機能を改善することができた。
【０２１８】
野生型ＧＬＰ−１配列、ならびにＧＬＰ−１（Ａ２Ｓ）またはＧＬＰ−１（Ａ２Ｇ）のようなＤＰＰ−ＩＶ耐性ＧＬＰ−１バリアントは、ミメティボディのスカフォールドに取り込まれることができる。ペプチドの突然変異はＧＬＰ−１ミメティボディの特性を改善するために作成することができた。例えばアミノ末端残基中の突然変異はシグナリングを改善することができ、一方、ヘリックスドメイン中の突然変異はヘリックスを安定化することができ、これにより受容体への結合および／またはミメティボディの安定性を改善する。
【０２１９】
リンカーの長さおよび組成を変異させて、ＧＬＰ−１ペプチドとＦｃ領域との間の結合の柔軟性または安定性を変動させることができる。種々のアイソタイプを分子のヒンジ領域に取り込むことができる。さらに突然変異をミメティボディのヒンジ領域内に作成して分子を安定化することができる。例えばヒトＩｇＧ４ヒンジを突然変異させて、Ｓｅｒ２２８−＞Ｐｒｏバリアントを作成し、ミメティボディの鎖間ジスルフィド結合を安定化することができる。ミメティボディのＦｃ部分内の変更を作成し、分子の安定性を改善し、そしてＦｃＲ結合のようなエフェクター機能を変えることができた。例えば、Ａｌａ／Ａｌａ突然変異を持つＩｇＧ４のようなヒトまたはマウスのアイソタイプ（またはこれら分子の変更体）を使用することができた。
【０２２０】
本発明のＧＬＰ−１ミメティボディ
本発明の具体的な非限定的例は、式（Ｉ）
（（Ｐ（ｎ）−Ｌ（ｏ）−Ｖ（ｐ）−Ｈ（ｑ）−ＣＨ２（ｒ）−ＣＨ３（ｓ））（ｔ）、のＧＬＰ−１ミメティボディ構築物（配列番号２）であり、ここでＰは生物活性ＧＬＰ−１ペプチド（７−３６）の１つのコピーであり、ＬはＧｌｙ−ＳｅｒまたはＧｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒのいずれかの柔軟性リンカーの直列反復であり、ＶはＶＨ配列のＣ−末端であり、すなわち自然に存在するＩｇＧのＪ領域であり、Ｈは完全なＩｇＧ１ヒンジ領域であり、そしてＣＨ２＆ＣＨ３はＩｇＧ１アイソタイプのサブクラスである。この構築物の半減期は、ＧＬＰ−１ペプチドのみ、またはそのバリアントまたは誘導体の多数倍であり、そしてＩｇＧの半減期に類似している。
【０２２１】
上記の基本的構造に加えて、潜在的に好ましい生物学的特性を持つバリアントを記載する。これらには自己結合（ｓｅｌｆ−ａｓｓｏｃｉａｔｅ）に対する減少した傾向、減少した免疫エフェクター機能または減少した免疫原性を有することができる構築物を含む。生物学的に活性なペプチドの改善された立体配置、および血液脳関門をわたる移動のような望ましい特性を付与する他の修飾も構想する。提案されるバリアントおよび修飾は任意の様式で組み合わせて、望ましい活性を有する構築物を得ることができる。
【０２２２】
組換えＤＮＡ法を使用して、ＧＬＰ−１ペプチドを免疫グロブリンシグナルペプチドとヒトＪ配列との間の中間ベクターに挿入した。これは、ベクター中に存在する制限部位にコンパチブルな末端を持つ相補的な合成オリゴヌクレオチドを使用して行った。これらのオリゴヌクレオチドは、ＧＬＰ−１ペプチドおよび２つのＧＧＧＳ反復からなる柔軟性リンカーのコード配列を含んだ。次いで上記の機能的要素を含有する制限フラグメントを発現ベクターに転移した。このベクターは抗−ＣＤ４免疫グロブリンプロモーターおよびエンハンサー、およびヒトＩｇＧ１ヒンジ配列、ＨＣ定常領域２（ＣＨ２）および定常領域３（ＣＨ３）のコード配列ならびにプラスミドの複製および細菌中での選択および哺乳動物細胞中で安定な発現の選択に必要な要素を含んだ。
【０２２３】
このプラスミドをＨＥＫ２９３Ｅ細胞に導入し、そしてｗｔＧＬＰ−１ミメティボディの発現がトランスフェクトされた細胞中で一時的に達成された。ＧＬＰ−１ミメティボディの精製は、標準的なプロテインＡおよびＳｕｐｅｒｏｓｅ１２アフィニティークロマトグラフィーにより行い、約１  ５ｍｇ／Ｌのトランスフェクトされた細胞を生じた。このタンパク質は以下に記載する実験の出発材料であった。
【０２２４】
ＧＬＰ−１ミメティボディのアミノ酸配列を図１に示す。機能的ドメインはペプチドコード配列の上に注記する。Ｊ配列はさらに一層柔軟性を提供して、ＧＬＰ−１二量体が正しい立体配座を取ることができるようにし、そして二量体が免疫グロブリンの球状構造から突出し、そして２つのＧＬＰ−１受容体の間の開裂に貫通できるようにする。３つのシステインがＩｇＧ１ヒンジ領域にも存在する。第１は通常、免疫グロブリン軽鎖（ＬＣ）と対をなし、そして第２の２つは２つのＨＣ間の鎖内結合に参加する。ＣＨ２およびＣＨ３領域はタンパク質の嵩（ｂｕｌｋ）を構成する。免疫グロブリンが長い血清半減期を有すると考えられている１つの理由は、免疫グロブリンが、飲作用を受けた免疫グロブリンを細胞外空間に戻すことにより血清半減期を延ばすＦｃＲｎに結合する能力を有するからである。ＦｃＲｎの結合部位は、ＣＨ２およびＣＨ３領域の連結部に重なる（Ｓｈｅｉｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ，２７６（９），６５９１−６６０４）。
【０２２５】
２つのＩｇＧ重鎖は細胞プロセッシング中にヒンジ領域に位置するシステイン間のジスルフィド結合を介して集成し、ホモ二量体を形成することがよく知られている。これは修飾されたペプチド間でも起こり、集成されたＧＬＰ−１ミメティボディ構築物を形成すると予想される。さらにＧＬＰ−１ペプチドの２つのシステイン間の鎖内ジスルフィド結合も形成すると予想される。この予想されるＧＬＰ−１ミメティボディの構造は、２つのＧＬＰ−１ペプチドを含む。このペプチドの空間配置は、Ｎ−末端で隣接する配列の柔軟性と一緒にペプチドが生物学的に活性な二量体を形成できるようにするはずである。
【０２２６】
実施例３：ＦＡＣＳ結合アッセイ。ＧＬＰ−１ミメティボディの活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＦＡＣＳ結合アッセイで試験した。ＧＬＰ−１ミメティボディがＧＬＰ−１Ｒに結合するかどうかを測定するために、ＧＬＰ−１Ｒを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（１ｘ１０６細胞）をＧＬＰ−１ミメティボディ（２０ｎＭ）と４℃で２時間、インキュベーションした。細胞を洗浄し、そして蛍光で標識した２次検出抗体（１μｇ／ｍＬのヤギ抗−ヒトＩｇＧ、Ｆｃガンマ特異的）を４℃で３０分間加えた。細胞の蛍光強度はフローサイトメトリーを介して監視した。図２に示すように、ＧＬＰ−１ミメティボディはＧＬＰ−１Ｒを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞に結合するが（図２Ａ）、対照ＨＥＫ２９３細胞には結合しない（図２Ｂ）。ＧＬＰ−１ペプチド類似体（Ａ２Ｓ）がＧＬＰ−１ミメティボディと結合を競合できるので、この結合は特異的である（図２Ｃ）。
【０２２７】
実施例４：ｃＡＭＰアッセイ。ＧＬＰ−１のＧＬＰ−１Ｒへの結合は、シグナリング分子３’，５’−サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）に用量依存的上昇をもたらす。ｃＡＭＰはＧＬＰ−１Ｒを発現している細胞でｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを用いて測定することができる（アプライド  バイオシステムズ：Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）。簡単に説明すると、ＲＩＮｍ細胞（１ｘ１０５細胞）を、ＧＬＰ−１ペプチド（０〜３０ｎＭ）またはＧＬＰ−１ミメティボディ（０〜１００ｎＭ）の濃度を増加させながらインキュベーションした。細胞を溶解し、そしてｃＡＭＰの量は、アルカリホスファターゼ標識ｃＡＭＰ結合体および化学発光基質（Ｔｒｏｐｉｘ（商標）、ＣＤＰＤ（商標））を使用する競合アッセイを使用して測定した。ｗｔＧＬＰ−１ミメティボディに関する濃度依存的ｃＡＭＰ活性（図３Ａ）は、ＧＬＰ−１ペプチドに匹敵する（図３Ｂ）（それぞれＥＣ５０＝１１ｎＭ対０．４ｎＭ））。同様の実験では、ＩｇＧ４のスカフォールド内のＧＬＰ−１（Ａ２Ｇ）ミメティボディ（図３Ｃ）およびＩｇＧ４のスカフォールド内のＧＬＰ−１（Ａ２Ｓ）ミメティボディ（図３Ｄ）が、両方ともＲｉｎｍ細胞中のｃＡＭＰレベルを、ＩｇＧ４のスカフォールド内のｗｔＧＬＰ−１ミメティボディ（図３Ｅ）よりも有意に高レベルまで上げた。
【０２２８】
実施例５：ＤＰＰ−ＩＶ開裂アッセイ。ＧＬＰ−１はＤＰＰ−ＩＶにより急速に不活性化されるので、完全（すなわち非開裂）ＧＬＰ−１ミメティボディを定量するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを確立した。簡単に説明すると、ＧＬＰ−１ミメティボディまたはペプチド（１  ２ｎＭ）を室温でＤＰＰ−ＩＶ（１μｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ  システムズ）とインキュベーションした。種々の時間の後（０、５、１０、１５、２０、３０、４０分）、ＤＰＰ−ＩＶインヒビター（１００μＭ、リンコ（Ｌｉｎｃｏ））を加えて反応をクエンチした。完全なＧＬＰ−１ミメティボディまたはペプチドの量は、ＧＬＰ−１活性ＥＬＩＳＡ（リンコ）およびＧＬＰ−１ミメティボディまたはペプチドを使用して、各々の標準曲線について測定した。図４はＧＬＰ−１ミメティボディがＧＬＰ−１ペプチドに比べてＤＰＰ−ＩＶによる開裂に対して有意により一層耐性であったことを示す。
【０２２９】
実施例６：ヒト血清の安定性アッセイ。血清中のＧＬＰ−１ミメティボディの安定性も測定して、他の血清プロテアーゼがＧＬＰ−１ミメティボディを開裂し、そして不活性化できないことを確認した。簡単に説明すると、ＧＬＰ−１ペプチドまたはＧＬＰ−１ミメティボディ（３０ｎＭ）を３７℃でヒト血清中でインキュベーションした。様々な時間の後、サンプルは完全なペプチドまたはミメティボディの量を測定するために評価した。反応は、ＤＰＰ−ＩＶインヒビター（１００μＭ、リンコ）でクエンチし、そしてサンプルをリンコからのＧＬＰ−１活性ＥＬＩＳＡを使用して分析した。図５は＜５％のＧＬＰ−１ペプチドが４時間後でも完全なままであるのに対し、＞９０％のＧＬＰ−１ミメティボディは２４時間後でも完全なままであったことを示す。
【０２３０】
実施例７：ＧＬＰ−１ミメティボディはＲＩＮｍ細胞にインスリンの分泌を引き起こす。インスリン分泌におけるＧＬＰ−１ミメティボディの効果を試験するために、ＲＩＮｍ細
胞をＧＬＰ−１（７−３６）ペプチド（０〜５ｎＭ）（図６Ａ）、ｅｘｅｎｄｉｎ−４ペプチド（０〜５ｎＭ）（図６Ａ）または種々のＧＬＰ−１ミメティボディ（５または５０ｎＭ）の濃度を上げて処理し、そして分泌するインスリンの量をＥＬＩＳＡを介して測定した。試験したすべてのＧＬＰ−１ミメティボディは、ＲＩＮｍ細胞にインスリン分泌を刺激する活性を有した。５０ｎＭで、ミメティボディは野生型ＧＬＰ−１（７−３６）ペプチド（図６Ｂ）に匹敵する活性を有した。
【０２３１】
実施例８：ＧＬＰ−１ミメティボディの薬物動態学。３種のＧＬＰ−１ミメティボディ（ｗｔ、Ａ２ＳおよびＡ２Ｇ）の薬物動態を測定するために、Ｃ５７Ｂｌｋ／６マウスに０．０６２ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−１ペプチドまたは１０ｍｇ／ｋｇのＡ２Ｓ  ＧＬＰ−１ミメティボディを静脈内投与した。血漿は異なる時点で屠殺したマウスの心穿刺を介して得た。種々のＥＬＩＳＡを使用して、Ｆｃ、全ミメティボディ、活性ミメティボディおよび活性ペプチドをそれらが動物中で経時的に代謝される時に測定した。完全なＧＬＰ−１ペプチドはリンコからのＧＬＰ−１活性ＥＬＩＳＡを使用して定量した。完全なＧＬＰ−１ミメティボディはＧＬＰ−１ペプチド（リンコ）のＮ−末端に特異的な抗体を用いて捕捉され、そしてＦｃに特異的な抗体で検出された。図１２に示すように、ＧＬＰ−１ペプチドのレベルは注射から１５分後にもはや検出できず（図１２Ａ）、一方、ＧＬＰ−１  Ａ２Ｓミメティボディ分子は注射後７２時間にわたり検出された（図１２Ｂ）。
【０２３２】
実施例９：ＧＬＰ−１ミメティボディはｄｂ／ｄｂマウスのグルコースレベルを下げる。６週齢のｄｂ／ｄｂマウスを２時間絶食させ、そして静脈内に賦形剤、ＧＬＰ−１ペプチドまたはＧＬＰ−１（Ａ２Ｓ）ミメティボディを投与した。血中グルコースは投与後、０  ５、１、２、３および４時間目に監視した。ＧＬＰ−１ペプチドは血中グルコースを３０分で下げたが、６０分までに血中グルコースはＧＬＰ−１ペプチドの短い半減期によるように再度上がり始めた（図７Ａ）。これと比較して、ＧＬＰ−１（Ａ２Ｓ）ミメティボディは、ＧＬＰ−１ペプチド用量よりも１００倍低い用量で、全４時間にわたり血中グルコースに減少を誘導した（図７Ａ）。図７Ｂに示す結果は、ＧＬＰ−１ミメティボディが０  ０１９〜１  ９ｎｍｏｌの範囲の用量で対照動物に比べて糖尿病動物の空腹時血中グルコースを下げるのに効果的であったことを示す。さらにＧＬＰ−１の作用機作と合致して、０．１９ｎｍｏｌで達成された最大グルコース低下効果は、より高用量のＧＬＰ−１ミメティボディ（１  ９ｎｍｏｌ）により強化されなかった。最大のグルコース低下効果は、血中グルコース値を標準範囲内に維持した。
【０２３３】
実施例１０：ＧＬＰ−１ミメティボディがラット膵島の増殖に及ぼす効果。体重約２５０グラムの１０匹のオスのＳｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにＮｅｍｂｕｔａｌ（５０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）で麻酔をかけた。足の指をつまんで応答がないことを確かめた後、正中切開を行い、そして総胆管を摘出し、そしてその十二指腸への入り口を締めた。総胆管はその分枝のちょうど遠位から肝臓へ切断した。ハンクスバランス塩溶液（ＨＢＳＳ）に溶解した１０ｍＬのＬｉｂｅｒａｓｅ（商標）ＲＩ（０  ２５ｍｇ／ｍＬ）は、１０ｃｃシリンジに連結したＰＥ−５０を介して総胆管に注入し、膵臓をＬｉｂｅｒａｓｅ（商標）溶液で膨張させた。注入後、膵臓を動物から摘出し、そして５０ｍＬの試験管に入れ、そして膵臓を浸し、そしてすべての動物から回収するまで氷上で保存した。
【０２３４】
浸漬した膵臓を含有する５０ｍＬの試験管を３７℃の水浴に配置し、そして２０分間インキュベーションした。インキュベーション後、試験管を水浴から取り出し、そして振盪し、そして試験管に１０％の新生児ウシ血清（ＮＣＳ）、５ｍＭ  グルコース、１０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／１００μｇペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を補充した冷ＨＢＳＳ（ＨＢＳＳ＋）で満たした。内容物は４２５μｍのステンレス製の篩を通して濾過し、そして２ｘ５０ｍＬの試験管に集めた。フィルターはＨＢＳＳ＋ですすぎ、そして管を遠心した。膵臓の消化物を不連続ポリシュクロース密度勾配に乗せた。１０ｍ
Ｌの１  １０８ｇｍ／ｍＬポリシュクロース溶液をペレットに加え、そして懸濁した。５ｍＬの各１  ０９６、１  ０６８および１  ０３７ｇｍ／ｍＬポリシュクロース溶液を順次加えて不連続勾配を完成した。次いで試験管は４℃で２０００ｒｐｍで１０分間遠心し、ブレーキをかけなかった。遠心後、膵島を含有する界面を集め、そして洗浄した。単離した膵島は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭグルタミン、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１００Ｕ／１００μｇペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を補充したＣＭＲＬ−１０６６培地（ＣＭＲＬ＋）で一晩培養した。翌日、膵島を手で取り出し、そして３種のＧＬＰ−１ミメティボディ構築物の存在下、３連で８時間インキュベーションした。陰性対照の膵島は処理せず、そしてｅｘｅｎｄｉｎ−４は陽性対照として使用した。インキュベーション後、トリチウム化チミジンをカルチャーに加え、そして３７℃に戻して２４〜４８時間の培養した。インキュベーション期間の後、膵島を洗浄し、そしてトリチウム化チミジンの取り込みをベーターカウンターで計数した。図８Ａに示すように、試験したＧＬＰ−１ミメティボディは、試験した両濃度（５ｎＭおよび５０ｎＭ）で、対照レベルよりも上でｅｘｅｎｄｉｎ−４のレベルに匹敵するレベルまでチミジンの取り込みを上昇させた。これは各ＧＬＰ−１ミメティボディがラット膵島の増殖を増加できることを示唆する。
【０２３５】
ＧＬＰ−１  Ａ２Ｓミメティボディをさらに使用して、ラット膵島の増殖に及ぼす用量の効果を試験した。単離し、そして培養した膵島は用量を増加させて（０  ０５〜５００ｎＭ）処理し、そしてチミジンの取り込みを測定した。図８ＢはＡ２Ｓミメティボディ（０  ０５〜５００ｎＭ）がチミジンの取り込みを対照より上に上昇させることを示し、このミメティボディが試験したすべての濃度でラット膵島の増殖を上昇させることができることを示唆している。
【０２３６】
実施例１１：ＧＬＰ−１ミメティボディが非ヒト霊長類（ＮＨＰ）膵島およびヒト膵島の増殖に及ぼす効果。ＮＨＰ膵島は、酵素消化および密度勾配精製を使用して、Ｒａｎｕｎｃｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２００２）９，３，４０９−４１４に詳細に記載されているように単離した。ヒト膵島は、酵素消化および密度勾配精製を使用して、Ｒｉｃｏｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ（１９９８）３７，４，４１３−４２０に詳細に記載されているように単離した。膵島を単離し、そしてマイアミ培地１（マイアミ大学、マイアミ、フロリダ州）で一晩、培養した。トリチウム化チミジンの取り込みは、実施例１０に記載したように評価した。ＧＬＰ−１  Ａ２Ｓミメティボディは、ＮＨＰ膵島の増殖をｅｘｅｎｄｉｎ−４と同レベルまで刺激した（図９）。同様にこれはまたヒト膵島の増殖をｅｘｅｎｄｉｎ−４に匹敵するレベルまで刺激した（図１０Ａ）。図１０ＢはＡ２Ｓミメティボディが０  ０５ｎＭ〜５００ｎＭの範囲の濃度で効果的であることを示した。
【０２３７】
実施例１２：ＧＬＰ−１ミメティボディがラット膵島のインスリン分泌に及ぼす効果。ラット膵島は、実施例１０に記載されたプロトコールに従い単離した。膵島は３  ５または１５ｍＭグルコースのいずれかを含有する培地で培養し、そして膵島により分泌されるインスリンをＥＬＩＳＡを使用して測定した。結果はＧＬＰ−１ミメティボディの多くの構築物が、グルコースに応答してインスリンの分泌を強化することを示す（図１１）。
【０２３８】
実施例１３：ＧＬＰ−１ミメティボディの安定性は種特異的である。ＧＬＰ−１  Ａ２Ｓミメティボディは、マウス、ラット、カニクイザルおよびヒトに由来する全血液中でインキュベーションした。種々の時点で、サンプルを取り出し、そしてＥＬＩＳＡにより完全なミメティボディの量をアッセイした。ミメティボディの安定性は、カニクイザルまたはヒト血清のいずれかからの血液中で、ラットまたはマウスの血液中よりも有意に多かった（図１３）。マウス（図１３Ａ）またはラット（図１３Ｂ）血液中で１８時間のインキュベーション後、ほとんどのミメティボディはもはや完全ではなかった。対照的に、ほぼ１
００％のミメティボディがカニクイザル（図１３Ｃ）またはヒト血液（図１３Ｄ）中で２４時間のインキュベーション後に完全であった。
【０２３９】
実施例１４：カニクイザルにおいてＧＬＰ−１ミメティボディの改善された薬物動態学。カニクイザルに４つのＧＬＰ−１ミメティボディ構築物を１．０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射し、そして血清サンプルは、投与後、１０分から５日の異なる時点で採血した。血清サンプルは完全なミメティボディを定量するためにＥＬＩＳＡにより評価した。図１４に具体的に説明するように、すべての４つのミメティボディは急速な分布期、続いてゆっくりとしたクリアランス期を表す。薬物動態定数を各構築物について算出し、Ｔ＝０からＴ＝１２０時間のＡＵＣにより定められる暴露と同様の約３日のＴ１／２を示す。
【０２４０】
実施例１５：マウスにおけるグルコース対抗後にＧＬＰ−１ミメティボディ処置が血中グルコースに及ぼす効果。８週齢の糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスを、１２時間絶食させた。絶食の６時間目に、マウスにＡ２Ｓミメティボディ構築物を０  ０２〜２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で皮下注射した。ＧＬＰ−１ミメティボディ投与から６時間後、そして絶食１２時間目に、マウスは１ｇ／ｋｇの経口グルコースを受け、そしてそれらの血中グルコースを０、１５、３０、６０、１２０、１５０および１８０分に測定した。図１５Ａに示すように、ＧＬＰ−１  Ａ２Ｓミメティボディすべての用量で、賦形剤対照に比べて血中グルコースを下げるのに効果的であった。類似の実験を、高脂肪食で維持し、そして１２時間絶食させたＣ５７／Ｂ１６マウスで行った。図１５Ｂに示すように、ＧＬＰ−１  Ａ２Ｓミメティボディもすべての用量で、賦形剤対照に比べて血中グルコースを下げるのに効果的であった。
【０２４１】
実施例１６：ＧＬＰ−１ＭＭＢは用量依存的にサイトカインが誘導するアポトーシスを抑制する。ＲＩＮ−ｍ細胞を５０，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートにまき、そして３７℃で一晩インキュベーションした。翌日、細胞を用量範囲のＧＬＰ−１ＭＭＢ（１００ｎＭからの連続希釈）で３０分間処置した後、サイトカインＴＮＦα（１０ｎｇ／ｍＬ）またはＩＬ−１β（４ｎｇ／ｍＬ）を添加した。プレートを３７℃で１６時間インキュベーションした。アポトーシスをアッセイするために、Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ＥＬＩＳＡ−Ｐｌｕｓアッセイキット（ロッシュ  アプライド  サイエンス（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｃａｔ  Ｎｏ．１１９２０６８５００１）を使用した。培地をウェルから吸引し、２００μＬの溶解バッファーを各ウェルに加え、そしてプレートを室温で３０分間、インキュベーションした。インキュベーション後、２０μＬの溶解物をストレプトアビジンでコーティングした９６ウェルのマイクロタイタープレートに移した。８０μＬの免疫試薬（準備されたインキュベーションバッファー中の抗−ヒストン−ビオチンおよび抗−ＤＮＡ−ペルオキシダーゼの１  ２０希釈）も各ウェルに加えた。次いで１００μＬの懸濁液を室温で２時間インキュベーションし、穏やかに振盪した。２時間後、プレートをインキュベーションバッファーで３回洗浄し、そして発色溶液をプレートに加えた。吸収は約５分後に４０５ｎｍで読んだ。データは、ＧＬＰ−１ＭＭＢがＲＩＮ−ｍ細胞をＴＮＦ−αまたはＩＬ−１βにより誘導されるアポトーシスから保護することを示す（図１６）。
【０２４２】
１型糖尿病（ＴＩＤ）では、インスリン分泌膵臓ベータ細胞の特異的破壊が存在する。ベータ細胞の破壊の元にある正確な分子メカニズムは知られていないが、ＴＩＤ患者からの血清はアポトーシスを促進することが示され、アポトーシスが糖尿病の発生に役割を果たすことを示唆した。最近発症した患者（１名はハネムーン期、そして糖尿病になる素因がある患者でさえも）をＧＬＰ−１ＭＭＢで処置することにより、アポトーシスが抑制され、そしてβ−細胞塊を保存できた。
【０２４３】
ＴＩＤでは、β−細胞のアポトーシスは２つの明らかな糖尿病期で糖尿病の発症に役割
を果たす可能性がある。第１は、膵島アポトーシスの発育波（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｗａｖｅ）が、最終的に自己免疫糖尿病の発症に衝撃を与えるＴ−細胞生物学に影響を及ぼす可能性がある。第２に、膵島アポトーシスは、最終的にβ−細胞の大規模な破壊をもたらす細胞死の様式である。したがってβ−細胞のアポトーシスを抑制するためにＧＬＰ−１ＭＭＢの使用は、β−細胞塊を保存することによる糖尿病の自己免疫発症の防止、または明らかな糖尿病への進行を防止するのに有用である。
【０２４４】
ＴＩＤはインスリン分泌ベータ細胞の不可逆的な損失からの結果である。しかしインスリンの分泌は、長期持続のＴＩＤの人々での中で検出可能な場合もあり、生存ベータ細胞の小集団、または進行中の自己免疫破壊にかかっているベータ細胞の連続する再生のいずれかを示す。ＴＩＤは複製後に連続してアポトーシスを受けるβ−細胞を有することが示された。ＴＩＤでベータ細胞のアポトーシスは、対照個体の２倍の頻度である。ほとんどの長期持続のＴＩＤである人は、連続して破壊されるベータ細胞を有する。ベータ細胞死が上がる元にあるメカニズムには、進行中の自己免疫およびグルコース毒性の両方が関与する。進行中のアポトーシスにもかかわらずベータ細胞の存在は、定義によれば、たとえ長期持続ＴＩＤの後でも同時に新しいベータ細胞の形成が起こっていなければならないことを意味する。我々はβ細胞の破壊の標的化されたＧＬＰ−１ＭＭＢ抑制によりＴＩＤが防止されるか、または逆転することができると結論する。
【０２４５】
多臓器供与体では、臓器供与前の臨床的過程で続く死体の臓器供与体の脳死を導く反応（ｅｖｅｎｔ）中に、膵臓の膵島はアポトーシス、および壊死になり易い。さらに膵島は移植用のインスリン生産細胞の調製において、膵島単離プロセス中にアポトーシスを受け易い。さらに膵島が糖尿病受容体の肝臓に移植される場合、サイトカイン活性化、特にＴＮＦα、ＩＬ  １ＢおよびγＩＮＦのカスケードが存在する。単離プロセス中、および移植中および後の供与体において、膵島移植におけるＧＬＰ−１ＭＭＢの使用は、アポトーシスを減らし、そして膵島機能を改善する。また臨床的利益に要する膵島の数も減らし、そして膵島移植において生きている供与体の使用に好機を提供する。
【０２４６】
実施例１７．ＧＬＰ−１ＭＭＢはＩＮＳ−１Ｅ細胞中のグルコース依存的インスリン分泌を上げる。ＩＮＳ−１Ｅ細胞は、２００，０００細胞／ウェルの細胞密度で、２４ウェルプレート中のＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｌ−グルタミン＋１％ピルビン酸ナトリウム＋１％非必須アミノ酸＋５０μＭβ−メルカプトエタノール培地にまいた。細胞は３７℃および５％ＣＯ２で７日間成長させ、そして３または４日、維持された（ｆｅｄ）。細胞を０４ｍｌのＫＲＢＨバッファー／３ｍＭグルコースで２回洗浄し、そしてこのバッファー中で３０〜６０分間インキュベーションした。培地を細胞から取り除き、そして適当量のグルコースを含むＫＲＢＨ中の０４ｍｌの試験品を各ウェルに加えた。インスリン測定のために２０マイクロリットルの上清をウェル毎にＴ＝０時点で、および３７℃および５％ＣＯ２で６０分間インキュベーションした後に取り出した。インスリン濃度は、超高感度ラットインスリン（Ｕｌｔｒａ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｒａｔ  Ｉｎｓｕｌｉｎ）ＥＬＩＳＡキット（クリスタルケム：Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｃｈｅｍ）を用いてラット標準曲線（１２  ８〜０  １ｎｇ／ｍｌ）を使用して決定した。標準曲線上で当てはまる値を得るために、この時点の上清の１  ５０希釈の５マルクロリットルをこのアッセイに使用した。ＥＬＩＳＡプレートは、モレキュラー  デバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）のＳｐｅｃｔｒａＭａｘ３４０ＰＣプレートリーダーで、ＯＤ４５０を読み取り、ＯＤ６３０を引いた。図１７に示すように。ＧＬＰ−１  ＭＭＢはインスリン分泌を用量依存的様式で上げ、しかし上昇したグルコースの存在下でのみ上げた。
【０２４７】
実施例１８．ＧＬＰ−１ＭＭＢは、ラットおよびヒト膵島におけるグルコース依存的インスリン分泌を上昇させる。ラットの膵島はコラゲナーゼ消化、続いてＦｉｃｏｌｌ勾配精製により得た。ヒト膵島は酵素消化および密度勾配精製を使用して、Ｒｉｃｏｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ（１９９８）３７，４，４１３−４２０に詳細に記載されて
いるように単離した。膵島を一晩、２０ｘ１００ｍｍペトリ皿中のＣＭＲＬ−１０６６（ギブコ）、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（５，０００単位／５，０００μｇ）、１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７  ２−７  ４培地にまき、そして３７℃で５％ＣＯ２中、１８〜２４時間培養した。翌日、膵島を皿の中央に渦を巻かせ、そして５０ｍＬのコニカル管に集めた。膵島は重力により約１０〜１５分間、試験管の底に静置させた。上清を回収し、機能性（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）／生存能（Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）培地（メディアテック（Ｍｅｄｉａ  Ｔｅｃｈ）、ｃａｔ＃９９−７８６−ＣＶ）を加え、そして膵島を重力により試験管の底に静置させた。膵島を全部で３回洗浄した。上清を除去し、そして膵島を１％ＢＳＡ、１％Ｌ−グルタミン、１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび０．５ｍＭグルコース溶液を含有する１ｍＬの機能性／生存能培地あたり２０個の膵島密度で再懸濁した。１ｍＬの細胞懸濁液（〜２０個の膵島）を２４ウェルプレートの各ウェルに加え、そして３７℃で５％ＣＯ２中で２時間インキュベーションした。２時間後、１％ＢＳＡ、１％Ｌ−グルタミン、１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ、ＧＬＰ−１ＭＭＢ（５０ｎＭの最終濃度、１００ｎＭの初期濃度）および３  ５ｍＭ（ｎ＝１２）または１５ｍＭ（ｎ＝１２）の最終濃度のグルコースを含有する１ｍＬの機能性／生存能培地を加えた。２５μＬの上清を時間＝０（ベースラインのインスリン）で集め、そして４時間後、処置を加えた。上清はインスリンＥＬＩＳＡを行うまで−２０℃で保存した。ラットのインスリンをクリスタル  ケム（ダウナーズ  グローブ、イリノイ州）の超感度ＥＬＩＳＡアッセイキット（ｃａｔ＃９００６０）を使用して定量した。ヒトインスリンは、リンコリサーチ（Ｌｉｎｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（セントチャールズ、ミシガン州、ｃａｔ＃ＥＺＨＩ−１４Ｋ）からのヒトインスリンＥＬＩＳＡキットを使用して定量した。図１８は、ＧＬＰ−１ＭＭＢがラット（図１８Ａ）およびヒト膵島（図１８Ｂ）からインスリンの分泌を有意に上昇させることを示す。
【０２４８】
１型および２型の両糖尿病は、最終的に個々のβ−細胞により分泌されるインスリンの量が不十分であることによる。糖尿病の個体のインスリン分泌を、ＧＬＰ−１ＭＭＢで処置することにより強化する能力は、患者の糖尿病状態を改善または排除するだろう。重要なことは、インスリン分泌の上昇がグルコース依存的であり、上昇したグルコースレベルでのみ上昇する点である。したがって、危険な低血糖の病歴を体験した患者の危険性は、ＧＬＰ−１ＭＭＢの使用で最少となる。
【０２４９】
同様にインスリン分泌の上昇は、膵島の臓器移植処置にも有利である。移植した膵島によるインスリン分泌能を上げることにより、臨床的利益を提供するために必要な膵島の数を効果的に減らすことができた。膵島移植を支援するために利用することができる限られた量の死体の膵臓で、ＧＬＰ−１ＭＭＢの使用は膵島移植処置から利益を得ることができる患者の数を有意に上げるだろう。さらにインスリン分泌を上げる能力は、ＧＬＰ−１ＭＭＢでの介入無しでは不十分なインスリン分泌能により供与体に糖尿病の発症を導く恐れがある生きている供与体のインスリン分泌能を消耗させる危険性無しに、供与体群を生きている供与体に広げることができた。
【０２５０】
実施例１９．ＧＬＰ−１ＭＭＢが正常マウスの血中グルコースに及ぼす効果。正常なＣ５７ＢＬＫ／６マウスを無作為に２群に分け、各群が１３匹の動物を有した。群１は、ＰＢＳ賦形剤またはＧＬＰ−１ＭＭＢ（０  ５ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内（ＩＰ）投与を毎日受けた。両群とも１０日間処置した。マウスは３２日間、体重を毎日監視され、そして血中グルコースを監視され（ＬｉｆｅＳｃａｎ、カリフォルニア州）、その時点で実験を終了した。
【０２５１】
ＧＬＰ−１ＭＭＢ処置を受けたマウスは、ＰＢＳ処置マウスに比べて１０日間の処置の過程で血中グルコースが下がったことを示した（図１９）。血中グルコースは、いったん処置を終了するとＰＢＳ群のレベルに戻った。両群とも実験の過程を通して同一の体重増
加を示した（データは示さず）。
【０２５２】
高血糖は１型および２型糖尿病の両方に存在し、そして疾患のひどい２次的合併症への進行の原因となる。ＧＬＰ−１ＭＭＢが受容体の全般的な健康状態に悪影響を及ぼすことなく（上記非処置対照群と同一の進行的な体重増加により具体的に説明されるような）血中グルコースを下げる能力は、１型および２型糖尿病の両方に有益となるだろう。
実施例２０．ＧＬＰ−１ＭＭＢは糖尿病マウスのβ−細胞の低下を保護する。マウス（１２週齢ｄｂ／ｄｂ）を一晩絶食させた。実験の１日目に、マウス（４群、ｎ＝５／群）にＧＬＰ−１ＭＭＢ（１  ５ｍｇ／ｋｇ）または陰性対照ミメティボディでｓ．ｃ．投与した。実験の４日目に、空腹時血中グルコースを測定し、そしてＯＧＴＴ（経口ブドウ糖負荷試験）を行った。血中グルコースレベルは、１５、３０、６０、９０、１２０、１５０および１８０分に、尾の静脈血を使用して測定した。マウスを安楽死させ、そして脾臓を摘出し、そして１０％中性緩衝化ホルマリン中に浸漬することにより固定した。各マウスからの膵臓をパラフィンに包埋し、そしてＨ＆Ｅおよび免疫組織化学により染色するために切片化した。インスリン染色の形態測定（ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ）分析では、ＧＬＰ−１  ＭＭＢ処置マウス対対照における有意に強いインスリン染色が示された。実験は、単回投与のＧＬＰ−１ＭＭＢの寿命を評価するために、投与から１４日後に屠殺したマウスで反復した。ここでもインスリン染色の形態測定分析で、単回投与から２週間後にＧＬＰ−１ＭＭＢで処置した動物において、より高い強度のインスリン染色が示された。インスリン染色の強度は、膵島内に貯蔵されたインスリンの量に直接相関し、ＧＬＰ−１ＭＭＢ処置がこの糖尿病の動物モデルの膵島において、インスリン分泌および貯蔵を上げることを示唆している。
【０２５３】
２型糖尿病では、不十分なインスリン合成および貯蔵が２次的合併症の発症および進行の原因である高血糖を導く。ＧＬＰ−１ＭＭＢがインスリン合成および貯蔵を上げる能力は、２型患者の高血糖を下げ、これにより２次的合併症の発症および進行を限定する。
【０２５４】
実施例２１．ＧＬＰ−１ＭＭＢが糖尿病の免疫抑制マウスにおけるヒト膵島の辺縁塊移植（ｍａｒｇｉｎａｌ  ｍａｓｓ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）の効力に及ぼす効果。無胸腺ｎｕ／ｎｕ（ヌード）マウスをハーラン  ラボラトリー（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）から購入した。動物は、マイクロ−隔離ケージ中、ウイルス抗体無し（Ｖｉｒｕｓ
Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒｅｅ）ルームに収容し、滅菌食および水を自由に取らせた。すべての実験は、実験動物の取り扱いおよび使用に関するガイド（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）で説明されている基準に従い行った。
【０２５５】
糖尿病は、クエン酸塩バッファーに新たに溶解したストレプトゾトシン（２００ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与により誘導した。糖尿病の誘導は、誘導後の非空腹時の血糖値を監視することにより確認され、そして動物の値＞３５０ｍｇ／ｄＬを受容体として使用した。即座に受容体を正常血糖とするには不十分な塊を意味する辺縁膵島塊（〜５０ＩＥＱ／ｇ体重）を移植した後、動物を移植片の機能について非空腹時血糖値を、移植後最初の一週間、毎日、その後１週間、３回まで測定することにより監視した。膵島の植え付け（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）、生存能および機能を改善する介入は、辺縁膵島塊を移植した動物において正常血糖に達成するための時間を縮める。辺縁ヒト膵島塊の２群の受容体を含め、１群は毎日ＧＬＰ−１ＭＭＢ（０  ５ｍｇ／ｋｇ）のＩＰ注射を受け、そして対照群は賦形剤ＩＰ注射を受けた。
【０２５６】
動物は非空腹時血糖値が少なくとも２回の連続する読み取りが＜２００ｍｇ／ｄＬである場合、オイグリセミックと考えた。さらに移植機能は、グルコース対抗後のグルコースクリアランスを実験するために、移植から＞３０日後に一晩絶食させた後、処置および対
照動物において行ったブドウ糖負荷試験（１  ５ｇ／ｋｇ）により評価した。正常血糖に達する動物は、自然な膵臓膵島の残存機能を排除するために、移植片の除去を行った。
【０２５７】
図２０に示すように、ＧＬＰ−１ＭＭＢ処置マウスは、膵島の辺縁塊の移植後、対照マウスに比べてより急速に正常血糖に達した。さらにＧＬＰ−１ＭＭＢ処置マウスは、グルコース対抗のより効率的なクリアランスを示した。これらのデータはＧＬＰ−１ＭＭＢ処置が移植したヒト膵島の植え付け、生存能および機能を改善し、そして供与体（生存および脳死を含む）および膵島移植処置を受けた受容体の両方でＧＬＰ−１ＭＭＢの使用を支持することを強力に示唆する。これらの結果は、ＧＬＰ−１ＭＭＢが糖尿病の受容体に移植したヒト膵島に及ぼす有益な効果を証明する。さらにデータはＧＬＰ−１ＭＭＢでの処置が膵島の植え付け、生存および機能を改善し、そして膵島の移植化の設定におい貴重な補助療法となることを示唆している。
【０２５８】
実施例２２．非ヒト霊長類の膵島において、グルコースに応答するインスリンの分泌に及ぼすＧＬＰ−１ＭＭＢの効果。非ヒト霊長類の膵島は、酵素消化および密度勾配精製を使用して分離し、そして２群に分け、そして３７℃で加湿混合９５％空気／５％ＣＯ２中で、非組織化カルチャーで処理した１７５ｃｍ２フラスコ（コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、マサチューセッツ州）で密度＝２０，０００ＩＥで培養した。１群の膵島を単独で培養し、そしてもう１つの群は５０ｎＭＧＬＰ−１ＭＭＢを補充したＭＭ１中で培養した。
【０２５９】
２日間の培養後、膵島を集め、そして膵島のサンプル（対照から２つ、ＧＬＰ−１ＭＭＢ群から１つ）を力学的刺激アッセイにかけて、膵島のインスリン分泌に及ぼすグルコース濃度の効果を評価した。膵島はクロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏ−ｇｅｌ  Ｆｉｎｅ
４５−９０ｎｍ、バイオ−ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ））中で、１２５−ｍＭ  ＮａＣｌ、５９−ｍＭ  ＫＣｌ、１  ２８−ｍＭ  ＣａＣｌ２、１  ２ｍＭ−ＭｇＣｌ２、２５−ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ウシ血清アルブミンおよび３ｍＭ−グルコースを含有するバッファーを用いて３７℃で２０分間、プレペリフューズした（ｐｒｅ−ｐｅｒｉｆｕｓｅｄ）。膵島を１０分間、同じバッファーで灌流し、次いで順次、１１−ｍＭそして３−ｍＭグルコースに暴露した。ペリフューズの画分は３−ｍＭグルコースでのペリフューズ中、２分毎に集め、そして刺激中に毎分集めた。各画分中のインスリン濃度をＥＬＩＳＡによりアッセイした。
【０２６０】
ＧＬＰ−１ＭＭＢの存在下でインキュベーションした膵島は、非処理対照とは反対にグルコースが刺激するインスリン分泌において有意な上昇を示した（図２１）。このデータはＧＬＰ−１ＭＭＢがｉｎ  ｖｉｔｒｏでインスリン合成および分泌に陽性効果を及ぼすことを強力に支持し、さらに膵島移植前のその使用を支持する。ＧＬＰ−１ＭＭＢを用いて移植前に膵島の能力を上げることは、膵島移植処置を受けた１型糖尿病の個体に同じ治療効果を達成するために要する膵島数の減少をもたらすはずである。さらにこれらの結果から、個体をＧＬＰ−１ＭＭＢで処置するとｉｎ  ｖｉｖｏで膵島の能力が上昇することが予想できる。これはさらに膵島移植の供与体（生存および脳死を含む）および受容体の両方が膵島の辺縁塊からの機能を増すために、両者の処置を支持する。
【０２６１】
実施例２３．カニクイザルの辺縁塊モデルにおいて、ＧＬＰ−１ＭＭＢが同種異系の膵島植え付け、および長期生存に及ぼす効果。非ヒト霊長類の辺縁塊モデルの使用により、減少した数の膵島で糖尿病の逆転を可能とする能力を有する移植の取り組みを実験することが可能となる。辺縁塊モデルでは、約５，０００ＩＥＱ／ｋｇ、すなわち正常血糖に達するために必要な数の半分（通常は１０，０００ＩＥＱ／ｋｇ）を移植する。同じ同種異系供与体から得た膵島を使用することにより、供与体および分離の変動を排除することができる。類似の前移植インスリン要件を有するサルの対に移植することにより、膵島機能を強化するために設計された作用物質で処置したサルにおける膵島の強化された植え付けを
観察し、そして作用物質を受けなかったサルに比べて初期の膵島損失を制限することが可能となる。
【０２６２】
受容体は２〜３年齢のモーリシャス起源のカニクイザルであり、供与体は同じ種の＞４年齢であった。糖尿病は１２５０ｍｇ／ｍ２ストレプトゾトシンで誘導した。血中グルコース濃度を１５０〜３００ｍｇ／ｄｌの間に維持する試みでは、糖尿病の動物をＮＰＨインスリンで朝食前に、およびＮＰＨ／Ｌａｎｔｕｓで午後の食事の前に処置した。糖尿病の誘導から４週間で、サルはグルカゴン対抗を受けて、刺激されたｃ−ペプチドが生産されなかったことを確認した。
【０２６３】
供与体の臓器を回収し、そして膵島を実施例Ａおよび実施例Ｂを参照にした半自動化法を介して単離し、二晩の培養期間、最初は３７℃、そして次いで２２℃が続いた。対照のサルの膵島を標準ＭＭ１培地で培養し、そして実験サル用の膵島を５０ｎＭＧＬＰ−１ＭＭＢを補充したＭＭ１で培養した。サルはミニ腹壁切開を受け、そして膵島移植を門脈を介して肝臓へ行った。１対のサルは〜５，０００ＩＥＱ／ｋｇを同じ供与体（上記のように培養した）から受け、１匹のサルはＧＬＰ−１ＭＭＢ（０  ２ｍｇ／ｋｇ）を１週間に２回、皮下に受け、そして対照サルは受けなかった。対照およびＧＬＰ−１ＭＭＢ処置サルの両方について、拒絶は臨床的に使用されるステロイドを含まない免疫抑制剤（ＳＦＩＳと略記する。低用量のＦＫ５０６、高用量のラパマイシン、抗−ＩＬ２Ｒ誘導療法）で抑えられた。動物は１日に２回監視されて、空腹時および食後の血中グルコースレべルを測定し（ヒール  スティック、グルコメーター）、そして移植後に血中グルコースを１００〜２００ｍｇ／ｄｌの範囲に維持するために必要に応じてインスリンで処置した。空腹時ｃ−ペプチドは１週間おきに測定し、そして静脈内のブドウ糖負荷試験（ＩＶＧＴＴ）を８週間毎に行って移植片の機能を評価した。
【０２６４】
ＧＬＰ−１ＭＭＢ処置動物は優れたグルコース制御を有し、外的なインスリン要求が有意に減少した（図２２Ａ）。改善されたグルコース制御は、非処置対照に比べてＧＬＰ−１  ＭＭＢ処置動物でＨｇｂＡ１ｃにおける急速な減少によりさらに具体的に説明された（図２２Ｂ）。この実験は、さらに膵島移植処置を受けた１型糖尿病におけるＧＬＰ−１ＭＭＢの利用を支持する。
【０２６５】
利点：２型糖尿病を処置するための治療薬としてこの新規分子の使用は、他のＧＬＰ−１類似体に優る幾つかの利点を提供する。例えばＧＬＰ−１ペプチドの半減期を延ばすと思われる。またミメティボディのスカフォールド中の野生型ＧＬＰ−１ペプチドは、プロテアーゼ分解、特にＤＰＰ−ＩＶに耐性である。これは変異体ペプチドよりもむしろ野生型ＧＬＰ−１ペプチドで処置ができるようになるかもしれない。ＧＬＰ−１は天然のペプチドであるので、それらは変異したＧＬＰ−１類似体で処置した患者よりも、ＧＬＰ−１ミメティボディで処置した患者において免疫応答が低くなり得る。さらに、大きなサイズのＧＬＰ−１ミメティボディは、血液脳関門を渡ることを妨げる可能性がある。これは脳において悪心および不安がＧＬＰ−１Ｒに結合するＧＬＰ−１Ｒに結びつけられてきたので、利点を提供することができる。さらにミメティボディのプラットフォームは２つのペプチドの各ミメティボディ分子上での発現をもたらす。これはＧＬＰ−１ペプチドが互いに相互作用できるようにし、細胞表面のＧＬＰ−１受容体に対する親和性を上げることができる二量体リガンドを形成する。
【０２６６】
上で提供した実施例は、ＧＬＰ−１ＭＭＢの多くの構築物が膵島の増殖、上昇したグルコースレベルに応答して膵島により分泌されるインスリンの量、およびＧＬＰ−１ＭＭＢで処置した糖尿病動物の改善された血中グルコースに良い効果を及ぼすことを示す。またＧＬＰ−１ＭＭＢは天然のＧＬＰ−１ペプチドまたはその持続型類似体と比べた時、優れた薬物動態学的特性を有することが示される。さらに霊長類対齧歯類に見られる改善され
た薬物動態学的特性は、糖尿病の齧歯類モデルで見られるＧＬＰ−１ＭＭＢ処置の利益が患者で使用された時にＧＬＰ−１ＭＭＢが有する臨床的利益を実際に過小評価する可能性があること示唆する。
【０２６７】
糖尿病および他の代謝障害のすべての患者が体験する高血糖は、インスリンの相対的欠乏に直接関連する。インスリン生産細胞の数およびそれらのインスリン分泌能を上げることにより、生産されるインスリンの量は有意に増加する。故にＧＬＰ−１ＭＭＢ療法は、インスリン生産の上昇が臨床的状態または患者の予後を改善するどの状況にも有用である。ＧＬＰ−１ＭＭＢの改善された薬物動態学的特性は、処置をより一層臨床的に受け入れられるようにし、かつ便利なものとし、したがって既存のＧＬＰ−１様の治療よりも有意に改善されている。ＧＬＰ−１ＭＭＢ療法は、高血糖が糖尿病または他の代謝障害によるものであっても高血糖を体験するすべての患者に有益である。また前糖尿病段階では、膵島の塊を増加させ、そして糖尿病になる素因があると決定された患者における糖尿病の臨床的発症を遅らせるために有用である。同様に移植の状況では、全臓器および膵島の両方で、供与体および受容体の両方に有益である。またｉｎ  ｖｉｔｒｏの状況では、インスリン生産祖先細胞の移植前にインスリン生産細胞の増殖を増し、そしてそれらの分化を刺激するために有用である。
【０２６８】
上記実施例は、本発明のＧＬＰ−１ＭＭＢが高血糖を生じる糖尿病および他の代謝障害の処置において多くの用途を有する証拠を提供する。当業者には本発明のＧＬＰ−１ＭＭＢが、実施例に説明するものを十分に越えた適応症のための理想的な抗糖尿病薬とする特性を有することが明白であるように、実施例はＧＬＰ−１ＭＭＢの潜在的な臨床的使用に限定を設けることを意図しない。
【０２６９】
本発明が前述の記載および実施例に特に記載した以外にも実施できることは明確であろう。
【０２７０】
本発明の多くの修飾および変更が上記の教示に照らして可能であり、したがって本発明の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【０２７１】
【図１】重要な機能的ドメインを示すＩｇＧ１のスカフォールド中のＧＬＰ−１ミメティボディのヌクレオチドおよびペプチド配列を具体的に説明する。
【図２】２Ａ〜２ＣはＧＬＰ−１ミメティボディのＦＡＣＳ結合アッセイを具体的に説明する。  ２ＡはＧＬＰ−１ミメティボディが、ＧＬＰ−１Ｒを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞に結合することを示す。灰色  ＧＬＰ−１ミメティボディ、しかし２次はない；黒  ２次のみ；赤、陰性対照ミメティボディおよび２次；青  ＧＬＰ−１ミメティボディおよび２次を示す。  ２ＢはＧＬＰ−１ミメティボディが、対照ＨＥＫ２９３細胞に結合しないことを示す。灰色  ＧＬＰ−１ミメティボディ、しかし２次はない；黒  ２次のみ；青  ＧＬＰ−１ミメティボディおよび２次。  ２ＣはＧＬＰ−１ペプチド類似体（Ａ２Ｓ）がＧＬＰ−１ミメティボディと、ＧＬＰ−１Ｒを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞への結合を競合できることを示す。灰色  ＧＬＰ−１ミメティボディ、しかし２次ではない；黒  ＧＬＰ−１ミメティボディおよび２次；オレンジ  ＧＬＰ−１ミメティボディ、０．２ｎＭ競合物質、２次；青  ＧＬＰ−１ミメティボディ、２０ｎＭ競合物質、２次；赤  ＧＬＰ−１ミメティボディ、１００ｎＭ競合物質、２次を示す。
【図３】３Ａ〜３ＥはＧＬＰ−１ミメティボディのｃＡＭＰアッセイを具体的に説明する。３Ａ  ＩｇＧ１スカフォールド中のｗｔＧＬＰ−１ミメティボディ；３Ｂ  ＧＬＰ−１ペプチド；３Ｃ  ＩｇＧ４（Ａｌａ／Ａｌａ、Ｓｅｒ−＞Ｐｒｏ）スカフォールド中のＧＬＰ−１（Ａ２Ｇ）ミメティボディ；３Ｄ  ＩｇＧ４（Ａｌａ／Ａｌａ、Ｓｅｒ−＞Ｐｒｏ）スカフォールド中のＧＬＰ−１（Ａ２Ｓ）ミメティボディ；３Ｅ  ＩｇＧ４（Ａｌａ／Ａｌａ、Ｓｅｒ−＞Ｐｒｏ）スカフォールド中のＧＬＰ−１ミメティボディ。
【図４】ＤＰＰ−ＩＶ開裂に対するＧＬＰ−１Ｒミメティボディの耐性を具体的に説明する。
【図５】ヒト血清中のＧＬＰ−１ペプチドと比較したＧＬＰ−１ミメティボディの改善された安定性を示す。
【図６】ＧＬＰ−１ミメティボディはＲＩＮｍ細胞でインスリンの分泌を引き起こすことを示す。６ＡはＧＬＰ−１（７−３６）ペプチドおよびｅｘｅｎｄｉｎ−４ペプチドがＲＩＮｍ細胞中でインスリンの放出を刺激することを示す。６Ｂは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４（Ａｌａ／Ａｌａ、Ｓｅｒ−＞Ｐｒｏ）スカフォールド中のＧＬＰ−１（Ａ２Ｓ）ミメティボディ、あるいはＩｇＧ４（Ａｌａ／Ａｌａ、Ｓｅｒ−＞Ｐｒｏ）スカフォールド中のＧＬＰ−１（Ａ２Ｇ）ミメティボディのいずれかが、ＲＩＮｍ細胞中でインスリン分泌の刺激において活性であることを示す。
【図７】ＧＬＰ−１ミメティボディが糖尿病マウスの空腹時血中グルコースに及ぼす効果を示す。７ＡはＧＬＰ−１ミメティボディが空腹時血中グルコースを下げることを示す。７Ｂは効果が用量依存的であることを示す。
【図８】８Ａはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＧＬＰ−１ミメティボディが単離したラット膵島の増殖に及ぼす効果を示す。８ＢはＧＬＰ−１ミメティボディ投与がラット膵島の増殖に及ぼす効果を示す。
【図９】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＧＬＰ−１ミメティボディが単離した非ヒト霊長類（ＮＨＰ）の膵島の増殖に及ぼす効果を示す。
【図１０】１０Ａはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＧＬＰ−１ミメティボディが単離したヒト膵島の増殖に及ぼす効果を示す。１０ＢはＧＬＰ−１ミメティボディ投与がヒト膵島の増殖に及ぼす効果を示す。
【図１１】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＧＬＰ−１ミメティボディが単離したラット膵島からのインスリン分泌に及ぼす効果を示す。
【図１２】マウスを対象として、ＧＬＰ−１（Ａ２Ｓ）ミメティボディ（１２Ｂ）と比べたＧＬＰ−１ペプチド（１２Ａ）の薬物動態学的プロファイルを示す。
【図１３】マウス（１３Ａ）、ラット（１３Ｂ）、カニクイザル（１３Ｃ）およびヒト（１３Ｄ）に由来する血液中のＧＬＰ−１ミメティボディの安定性を示す。
【図１４】カニクイザルにおけるＧＬＰ−１ミメティボディのｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を示す。
【図１５】ＧＬＰ−１ミメティボディの処置が、ｄｂ／ｄｂマウス（１５Ａ）およびＤＩＯマウス（１５Ｂ）における経口グルコース対抗後の血中グルコースに及ぼす効果を示す。
【図１６】ＧＬＰ−１ミメティボディがサイトカイン誘導型のアポトーシスを用量依存的様式で抑制することを示す。未処置対象に対するアポトーシスの割合は、ＧＬＰ−１ＭＭＢの濃度に対してプロットする。
【図１７】ＧＬＰ−１ミメティボディがＮＩＳ−１Ｅ細胞中のグルコース依存的インスリン分泌を上昇させることを示す。Ａ．棒グラフは５  ５ｍＭグルコースの存在下でＧＬＰ−１ＭＭＢの各濃度で分泌されるインスリンの量を示す。さらに３および７  ５ｍＭグルコースので分泌されるインスリンのみをプロットする。Ｂ．分泌されるインスリンの量をＧＬＰ−１ＭＭＢの濃度に対してプロットする。データをＨｉｌｌ式にあてはめ、０  ０７ｎＭのＥＣ５０を提供する。
【図１８】ＧＬＰ−１ミメティボディはラット（１８Ａ）およびヒト膵島（１８Ｂ）におけるグルコース依存的インスリン分泌を上昇させることを示す。
【図１９】ＧＬＰ−１ＭＭＢ処置が正常Ｃ５７／ＢＬＫ６マウスの血中グルコースレベルに及ぼす効果を示す。
【図２０】ヒト膵島の辺縁塊を移植したＳＴＺ処置した糖尿病ヌードマウスにおいて、ＧＬＰ−１ＭＭＢ処置が血中グルコースレベル（２０Ａ）および耐糖（２０Ｂ）に及ぼす効果を示す。２０Ａでは、ＰＢＳ（Ｘ）で処置した対照マウスおよび毎日ＩＰ注射を受けたＧＬＰ−１ＭＭＢ処置したマウス（■）に関して、血中グルコースを時間（日）に対してプロットした。ヒト膵島の辺縁塊は（５０ＩＥＱ／ｇ）を０日に移植し、そしてその後、動物の血中グルコースを監視した。矢印は移植した膵島を取り出した時、瞬時の糖尿病状態への戻りを示す。図２０Ｂでは、ＰＢＳ（Ｘ）で処置した対照マウスおよびＧＬＰ−１ＭＭＢ（０．５ｍｇ／ｋｇ）（■）に関して、時間（分）に対してプロットした血中グルコース。ＩＶＧＴＴはマウスが毎日、ＩＰ注射を＞３０日受けた後に行った。動物は一晩絶食させ、続いてＩＶグルコース注射（１  ５ｇ／ｋｇ）を行った。マウスの血中グルコースを監視し、そして注射後の時間に対してプロットした。挿入は対照およびＧＬＰ−１ＭＭＢ処置マウスに関する曲線の下の面積を表す。
【図２１】非ヒト霊長類（ＮＨＰ）膵島におけるグルコース誘導型インスリン分泌に及ぼすＧＬＰ−１ＭＭＢの効果を示す。
【図２２】辺縁塊を移植したＳＴＺ糖尿病ＮＨＰｓの外的インスリン要求（２２Ａ）およびヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｇｂＡ１ｃ）（２２Ｂ）に及ぼすＧＬＰ−１ＭＭＢの効果を示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2008525477.tif 000009
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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