(57)【要約】本発明は、凍結保護物質としてトレハロースを使用して調製される、ＰＥＧ化インターフェロンの凍結乾燥処方物に関する。この処方物は、室温での処方物の保存の間、ＰＥＧ化インターフェロンを安定化させるのに役立つ低い水分を有する。さらに、これらの処方物を調製するための方法が提供される。このような方法は、凍結保護物質、緩衝剤、安定剤および注射用滅菌水の存在下でＰＥＧ化インターフェロンを凍結乾燥する工程を包含し、ここで、トレハロースは、凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成する。凍結乾燥は、水分を３％未満にする条件下で実行される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結乾燥粉末処方物を調製するための溶液であって、該溶液は、ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤、安定剤および注射用水を含み、ここで、トレハロースは、該凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成し、該緩衝剤は、該処方物のｐＨを４．５と７．１との間に維持する、溶液。
【請求項２】
前記凍結保護物質がスクロースをさらに含む、請求項１に記載の溶液。
【請求項３】
トレハロースが、前記凍結保護物質のうちの少なくとも７０重量％を構成する、請求項１に記載の溶液。
【請求項４】
トレハロースが、前記凍結保護物質のうちの少なくとも８０重量％を構成する、請求項１に記載の溶液。
【請求項５】
前記凍結保護物質がトレハロースからなる、請求項１に記載の溶液。
【請求項６】
９０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む、請求項５に記載の溶液。
【請求項７】
前記緩衝剤が、前記溶液のｐＨを６．５と７．１との間に維持する、請求項１に記載の溶液。
【請求項８】
前記緩衝剤が、無水リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム一水和物からなる、請求項７に記載の溶液。
【請求項９】
前記安定剤がポリソルベートである、請求項１に記載の溶液。
【請求項１０】
前記ポリソルベートがポリソルベート８０である、請求項９に記載の溶液。
【請求項１１】
前記ＰＥＧ化インターフェロンが、ＰＥＧ分子とインターフェロンα分子との間の共有結合性の結合体からなる、請求項１に記載の溶液。
【請求項１２】
前記ＰＥＧ分子が、ウレタン結合により前記インターフェロン分子へ結合される、請求項１１に記載の溶液。
【請求項１３】
前記結合されたＰＥＧ分子のうちの少なくとも１５％が、前記インターフェロンα分子のヒスチジン残基に結合される、請求項１２に記載の溶液。
【請求項１４】
前記ＰＥＧ化インターフェロンαがＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂである、請求項１３に記載の溶液。
【請求項１５】
１００μｇ／ｍｌと３００μｇ／ｍｌとの間のＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂ、９０ｍｇ／ｍｌ  トレハロースデハイドレート、１．５ｍｇ／ｍｌ  無水リン酸水素二ナトリウム、１．５ｍｇ／ｍｌ  リン酸二水素ナトリウム一水和物、０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０および注射用水からなる、請求項１４に記載の溶液。
【請求項１６】
溶液の凍結乾燥により作製される凍結乾燥粉末であって、該溶液は、ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤、安定剤および注射用水を含み、
ここで、トレハロースは、該該凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成し、該緩衝剤は、該溶液のｐＨを４．５と７．１との間に維持し、そして該凍結乾燥粉末は、３％未満の水分を有する、粉末。
【請求項１７】
２％未満の水分を有する、請求項１６に記載の粉末。
【請求項１８】
４０℃で３０日間の保存後に、１０％未満の非ＰＥＧ化インターフェロンを有する、請求項１７に記載の粉末。
【請求項１９】
カートリッジ内で凍結乾燥される、請求項１７に記載の粉末。
【請求項２０】
前記溶液が、１００μｇ／ｍｌと３００μｇ／ｍｌとの間のＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂ、９０ｍｇ／ｍｌ  トレハロースデハイドレート、１．５ｍｇ／ｍｌ  無水リン酸水素二ナトリウム、１．５ｍｇ／ｍｌ  リン酸二水素ナトリウム一水和物、０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０および注射用水から本質的になる、請求項１９に記載の粉末。
【請求項２１】
前記凍結乾燥が、以下の工程および条件値：
【表１】
2008509919.tif 000006
を含む凍結乾燥サイクルを使用して実行される、請求項２０に記載の粉末。
【請求項２２】
凍結乾燥ＰＥＧ化インターフェロン処方物を調製するためのプロセスであって、該プロセスは：
ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤、安定剤および注射用水を含む溶液を提供する工程であって、ここで、トレハロースは、該凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成し、そして該緩衝剤は該処方物のｐＨを４．５と７．１との間に維持する、工程；
該溶液をガラス容器内に配置する工程；ならびに、
３％未満の水分を有する凍結乾燥粉末を生成する凍結乾燥サイクルを使用して、該溶液を凍結乾燥する工程、
を包含する、プロセス。
【請求項２３】
前記ガラス容器がバイアルである、請求項２２に記載のプロセス。
【請求項２４】
請求項２２に記載のプロセスであって、前記凍結乾燥サイクルが：
周囲圧力および−５５℃と５℃との間の温度で、凍結乾燥機に前記ガラス容器を装填する工程；
周囲圧力で、１時間〜４時間、−５５℃と−４０℃との間の温度で該ガラス容器をインキュベートし、該ガラス容器内の前記溶液を凍結させる工程；
周囲圧力で、４時間〜８時間、−２５℃と−１５℃との間の温度で、該凍結溶液を含む該ガラス容器をインキュベートし、該溶液中の前記ＰＥＧ化インターフェロンをアニールさせる工程；
該凍結およびアニールさせた溶液を、第一乾燥工程および第二乾燥工程を使用して、８ミリトル（ｍＴｏｒｒ）と１００ミリトル（ｍＴｏｒｒ）との間の圧力で減圧下乾燥させる工程であって、ここで、該第一乾燥工程は、１５時間〜３５時間、−３０℃と−１５℃との間の温度で実行され、該第二乾燥工程は、５時間〜１０時間、０℃〜５℃で開始し、該第二乾燥期間の間、４０℃まで上昇させる温度で実行される、工程；ならびに、
周囲圧力および２５℃以下の温度で該凍結乾燥機から該ガラス容器を取り出す工程、
を包含する、プロセス。
【請求項２５】
前記ガラス容器がカートリッジであり、前記凍結乾燥サイクルが、以下の工程および条件値：
【表２】
2008509919.tif 000007
を含む、請求項２４に記載のプロセス。
【請求項２６】
ガラス容器内に凍結乾燥粉末を含むＰＥＧ化インターフェロン薬物製品であって、該凍結乾燥粉末は、ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤および安定剤を含み、ここで、トレハロースは、該凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成し、そして該緩衝剤は、該処方物のｐＨを４．５と７．１との間に維持する、ＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項２７】
トレハロースが、前記凍結保護物質のうちの少なくとも８０重量％を構成する、請求項２６に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項２８】
前記凍結保護物質がトレハロースからなる、請求項２７に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項２９】
前記ガラス容器がバイアルである、請求項２７に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３０】
前記緩衝剤が、無水リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム一水和物からなり、前記安定剤がポリソルベートである、請求項２７に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３１】
前記ポリソルベートがポリソルベート８０である、請求項３０に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３２】
請求項３０に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品であって、前記ＰＥＧ化インターフェロンが、ＰＥＧ分子とインターフェロンα分子との間の共有結合性の結合体からなり、ここで、該ＰＥＧ分子は、ウレタン結合によってインターフェロンα分子に結合される、ＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３３】
前記結合されたＰＥＧ分子のうちの少なくとも１５％が、前記インターフェロンα分子のヒスチジン残基に結合される、請求項３２に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３４】
前記ガラス容器が、第一のチャンバーと第二のチャンバーとを有するカートリッジであって、ここで、該凍結乾燥粉末は該第一のチャンバー内にあり、該第二のチャンバーは注射用水を含む、請求項３３に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３５】
前記ＰＥＧ化インターフェロンαがＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂである、請求項３４に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３６】
前記凍結乾燥粉末が、６７．５μｇのＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂ、６０．７８０ｍｇ  トレハロース二水和物、１．０１３ｍｇ  無水リン酸水素二ナトリウム、１．０１３ｍｇ  リン酸二水素ナトリウムデハイドレート、および０．０６７５ｍｇ  ポリソルベート８０から本質的になる、請求項３５に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３７】
前記凍結乾燥粉末が、１０８μｇのＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂ、６０．７８０ｍｇ  トレハロース二水和物、１．０１３ｍｇ  無水リン酸水素二ナトリウム、１．０１３ｍｇ  リン酸二水素ナトリウムデハイドレート、および０．０６７５ｍｇ  ポリソルベート８０から本質的になる、請求項３５に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３８】
前記凍結乾燥粉末が、１６２μｇのＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂ、６０．７８０ｍｇ  トレハロース二水和物、１．０１３ｍｇ  無水リン酸水素二ナトリウム、１．０１３ｍｇ  リン酸二水素ナトリウムデハイドレート、および０．０６７５ｍｇ  ポリソルベート８０から本質的になる、請求項３５に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【請求項３９】
前記凍結乾燥粉末が、２０２．５μｇのＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂ、６０．７８０ｍｇ  トレハロース二水和物、１．０１３ｍｇ  無水リン酸水素二ナトリウム、１．０１３ｍｇ  リン酸二水素ナトリウムデハイドレート、および０．０６７５ｍｇ  ポリソルベート８０から本質的になる、請求項３５に記載のＰＥＧ化インターフェロン薬物製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２００４年８月１２日に出願された米国仮出願番号６０／６００，８４６の利益を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ＰＥＧ化インターフェロン結合体の安定する処方物に関し、この処方物は、インターフェロン療法が有益である種々の状態を処置するのに有用である。詳細には、活性薬学的成分のＰＥＧ化インターフェロンおよびトレハロースを含有する処方物が提供され、この処方物は、凍結乾燥される場合に室温で安定性である。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
インターフェロンは、ウイルス複製を阻害し、細胞増殖を阻害し、そして免疫応答を調節する、高度に相同性のタンパク質のファミリーである。ヒトインターフェロンは、その細胞起源および抗原性に基づいて３つのクラスに分類される：α−インターフェロン（白血球）、β−インターフェロン（線維芽細胞）およびγ−インターフェロン（Ｂ細胞）。各群の組換え形態が開発され、それらは市販されている。
【０００４】
これらの種々の生物学的活性に起因して、多くの状態（ウイルス感染および種々の癌が挙げられる）を処置するためのインターフェロンの使用が提唱されている。しかしながら、他のタンパク質と同様に、医薬品としてのインターフェロンの使用は、一般的に、以下を含む数個の欠点により制限されている：抗原性（これは、中和抗体の形成および臨床的応答の喪失をもたらす）および短い半減期（これは、タンパク質の治療的に有効な濃度を維持するために、高頻度の投与が必要とされることを意味する）。
【０００５】
これらの問題は、インターフェロンをポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）に結合体化することによって克服され得る。しかしながら、インターフェロン−ポリマー結合体は臨床的に有益であるが、臨床的な実施におけるこのような結合体の広範な使用は、製造および健康管理提供者への配布の間の長期間にわたって保存することのできる処方物を必要とする。しかしながら、いくつかのインターフェロン−ポリマー結合体は、凍結溶液中であっても急速に劣化する。凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）（凍結−乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）としても公知である）は、インターフェロン−ポリマー結合体をこの欠陥を克服し得る形態にすることができるプロセスである。
【０００６】
凍結乾燥は、組成物が凍結された後で、その組成物から水が昇華されるプロセスである。このプロセスにおいて、一定期間にわたって水溶液中で比較的不安定な薬剤および生物学的製剤は、容易に加工された液体状態で投薬容器内に配置され得、損傷を与える熱を使用することなく乾燥され得、そして乾燥状態で長期間保存され得る。凍結乾燥のために設計される処方物は、しばしば、固体材料の量を増加させる増量成分、ならびに凍結乾燥中および凍結乾燥後の損傷から活性成分を保護する凍結保護物質（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、凍結保護物質（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）および他の安定剤を含む。
【０００７】
特許文献１は、ＰＥＧ化−インターフェロンα結合体の凍結乾燥が、インターフェロンαへのＰＥＧの結合体化の性質および程度に変化をもたらし得ることを開示する。このような変化としては、結合体が遊離のＰＥＧおよびインターフェロンαへ分解し、それに続いて、別のＰＥＧ化−インターフェロン分子へ遊離のＰＥＧが結合すること、または同一の分子内で一つの結合体化部位から別の結合体化部位へとＰＥＧ分子が分子内移動することが挙げられる。上記特許は、凍結乾燥中および凍結乾燥後のＰＥＧ化−インターフェロンα結合体の安定性が、このような結合体を緩衝剤、安定剤、凍結保護物質および溶媒中で凍結乾燥することにより達成されることを開示する。特許文献１は、数種類の凍結保護物質（二糖類が挙げられる）が使用され得ることを言及するが、スクロースは、上記特許で具体的に例示される唯一の処方物に使用される、唯一の凍結保護物質である。
【０００８】
Ｐｅｇインターフェロンα−２ｂ、無水リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム二水和物、スクロースおよびポリソルベート８０を含む凍結乾燥処方物が、ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎ（登録商標）バイアルおよびＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎ（登録商標）ＲｅｄｉｐｅｎとしてＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ、ＮＪにより市販されている（ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎ（登録商標）製品情報、Ｒｅｖ．２／０５を参照のこと）。Ｒｅｄｉｐｅｎ（登録商標）は、一方のチャンバーに凍結乾燥ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎを、他方のチャンバーに注射用滅菌水を含む二重チャンバーのガラスカートリッジである。製造者は、ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎバイアルについては室温保存（すなわち、２５℃）、そしてＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎ  Ｒｅｄｉｐｅｎカートリッジについては冷蔵保存（すなわち、２℃〜８℃）を推奨する。
【０００９】
凍結乾燥中および凍結乾燥後の損傷からＰＥＧ化インターフェロン結合体を保護するだけではなく、またガラスカートリッジ内で凍結乾燥される場合に室温での長期保存も可能にするさらなる処方物に対して、現存する必要性が存在する。理想的には、このような処方物は、スクロースベースの処方物のために使用されるプロセスよりも対費用効果が高い製造プロセスに耐えられるべきである。
【特許文献１】米国特許第６，１８０，０９６号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、ＰＥＧ化インターフェロンα２ｂの凍結乾燥の間に唯一の凍結保護物質としてトレハロースを使用するか、または他の凍結保護物質と組み合わせてトレハロースを使用することにより、水分が少なく、それゆえ、室温においてより安定性が高い凍結乾燥粉末を生成しながらも、唯一の凍結保護物質としてスクロースを使用する場合と比べて著しく短い凍結乾燥サイクルを可能にするという驚くべき発見に基づく。水分が低減させることは、凍結乾燥処方物中の特定のＰＥＧ化インターフェロンの室温安定性を著しく増大させることが見出されている。
【００１１】
トレハロースのこれらの有益な効果は予想外であった。なぜなら、唯一の凍結保護物質としてトレハロースを含む凍結ＰＥＧ化インターフェロン溶液の崩壊温度（Ｔｃ）およびガラス転移温度（Ｔｇ’）（それぞれ、−２９．５℃および−２７℃）は、トレハロースの代わりにスクロースを唯一の凍結保護物質として使用した同一の溶液のＴｃおよびＴｇ’（それぞれ、−３２．７℃および−３２℃）と比べてそれほど高くはないからである。理論上では、ＰＥＧ化インターフェロン処方物を凍結乾燥することにおける最初の乾燥工程は、ＴｃおよびＴｇ’よりも十分低く実行されるべきである；さもなければ、ケーキは産物の加温によって崩壊し得、このことは、ケーキがより高い水分を含むことを引き起こし得、より高い水分は、ＰＥＧ化インターフェロンの安定性の低下をもたらし得る。したがって、ガラスカートリッジ内のスクロースベースのＰＥＧ化インターフェロン処方物の水分を低下させることを探求する当業者は、スクロースのＴｃまたはＴｇ’よりも高いＴｃまたはＴｇ’を有する凍結保護物質を使用することは考慮しなかった。しかしながら、以下により詳細に記載されるように、本明細書において、本発明者らは、凍結保護物質としてトレハロースを使用することにより、低い水分および最小限のケーキの欠陥の両方を有する凍結乾燥産物を達成しながらも、最初の乾燥工程を凍結溶液のＴｃおよびＴｇ’よりも高い温度で実行することを可能にするという驚くべき発見をした。
【００１２】
したがって、本発明の処方物は、活性薬学的成分としてＰＥＧ化インターフェロンおよび凍結保護物質としてトレハロースを含む。本発明の処方物は、凍結保護物質作用を果たす１種以上の他の因子を含み得るが、ただし、トレハロースは、存在する全てのこのような因子のうちの少なくとも６０重量％を構成する。二重チャンバーのガラスカートリッジ内でＰＥＧ化インターフェロンを凍結乾燥する間のトレハロースの存在は、比較的短い凍結乾燥サイクル（例えば、唯一の凍結保護物質としてスクロースを含む同一の処方物については＞５日間であるのに対して、＜３日間）を使用して、低い初期水分および低い吸湿性の凍結乾燥粉末を生成し、ケーキの崩壊、縮み（ｓｈｒｕｎｋｅｎｎｅｓｓ）、蓋をされた状態（ｌｉｄｄｅｄｎｅｓｓ）またはメルトバック（ｍｅｌｔｂａｃｋ）に起因する不良品を最小限にすることを可能にすることが見出された。
【００１３】
一実施形態において、本発明は、凍結乾燥粉末処方物を調製するための溶液を提供する。この溶液は、ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤、安定剤および注射用滅菌水を含み、ここで、トレハロースは、凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成する。
【００１４】
本発明の別の特定の実施形態は、ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤および安定剤を含む凍結乾燥粉末であり、ここで、トレハロースは、凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成し、そして凍結乾燥粉末は、３％未満の水分を有する。
【００１５】
本発明のなお別の実施形態は、ガラス容器を含むＰＥＧ化−インターフェロン薬物製品である。このガラス容器は、ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤および安定剤を含有する凍結乾燥粉末を含み、ここで、トレハロースは、凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成し、そしてこの粉末は、３％未満の水分を有する。好ましい実施形態において、このガラス容器は、第一のチャンバーおよび第二のチャンバーを有するカートリッジであり、この第一のチャンバーは凍結乾燥粉末を含み、この第二のチャンバーは、この粉末を注射用溶液へ再構成するために使用される注射用滅菌水を含む。
【００１６】
さらに、本発明は、凍結乾燥ＰＥＧ化インターフェロン処方物を調製するための方法を提供する。このような方法は、凍結保護物質、緩衝剤、安定剤および注射用滅菌水の存在下でＰＥＧ化インターフェロンを凍結乾燥する工程を包含し、ここで、トレハロースは、凍結保護物質のうちの少なくとも６０重量％を構成する。凍結乾燥は、水分を３％未満にする条件下で実行される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、室温での長期保存の間およびこれらの処方物を調製するためのプロセスの間、安定性であるＰＥＧ化インターフェロンの新規の凍結乾燥処方物を提供する。この節は、これらの処方物、それらの調製およびそれらの適用についての詳細な説明を示す。この説明は、詳細と具体性とを増した、本発明の種々の実施形態の数例の例示的な説明による。これらの実施例は非限定的であり、当業者に明らかな関連する改変型は、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【００１８】
本発明がより容易に理解され得るように、特定の技術用語および科学用語は、この節において具体的に定義される。本明細書で使用される全ての他の技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味を有する。
【００１９】
本明細書で使用される場合、用語「ＰＥＧ化インターフェロン」は、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子と１つ以上のインターフェロン分子との共有結合性の結合体を意味する。本発明の処方物における使用のために好ましい結合体は、インターフェロン分子１個あたり１個〜４個のＰＥＧ分子を有し、より好ましくは、結合体は、単一のＰＥＧ分子と単一のインターフェロン分子との間のものである。ＰＥＧ化インターフェロンは、単一の位置異性体（ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｉｓｏｍｅｒ）または結合体の位置異性体の混合物を含み得る（例えば、ＰＥＧ分子は、個々のインターフェロン分子上の異なるアミノ酸残基に共有結合される）。例えば、米国特許第５，９５１，９７４号は、ＰＥＧ−インターフェロンα結合体の位置異性体の混合物の調製を記載する。この混合物において、ある異性体はＰＥＧとインターフェロン分子のヒスチジン残基との間の結合体であり、混合物中の他の異性体はＰＥＧとインターフェロンのリジン残基との間の結合体であり、そしてなお他の異性体はＰＥＧとインターフェロン分子のアミノ末端との間の結合体である。好ましくは、本発明の処方物のＰＥＧ化インターフェロン成分は、位置異性体の混合物を含み、ここで、混合物中の結合体のうち、少なくとも１５％、そしてより好ましくは少なくとも３０％が、単一のＰＥＧ分子と単一のインターフェロン分子のヒスチジン残基との間の結合体である。
【００２０】
結合体中のＰＥＧ分子は、異なる分子量を有し得る。好ましくは、ＰＥＧ分子は、１，０００と１５，０００との間の範囲の平均分子量を有する。特に好ましい実施形態において、結合体は、ＰＥＧ１２０００（すなわち、このことは、結合体中のＰＥＧ分子が約１２，０００の平均分子量を有することを意味する）を使用して調製される。
【００２１】
本発明で使用されるＰＥＧ化インターフェロン結合体のインターフェロン部分は、当業者に公知である、任意の天然に存在するインターフェロンまたは組換えインターフェロンであり得る。本発明の処方物に使用され得る天然のα−インターフェロンおよび組換えα−インターフェロンとしては、以下が挙げられる：インターフェロンα−ｎ１（例えば、Ｓｕｍｉｆｅｒｏｎ（登録商標）、Ｓｕｍｉｔｏｍｏ）、インターフェロンα−ｎ３、インターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ（登録商標）Ａ、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｉｎｃ．）、インターフェロンα−２ｂ（ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）Ａ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ  Ｃｏｒｐ．）、インターフェロンα−２ｃ（Ｂｅｒｏｆｏｒ（登録商標）、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，Ｉｎｃ．）およびコンセンサスインターフェロン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）、ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ，Ｉｎｃ．）。本発明を実施するのに適切なβ−インターフェロンおよびγ−インターフェロンとしては、以下が挙げられる：インターフェロンβ−１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、インターフェロンβ−１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、Ｂｅｒｌｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）およびインターフェロンγ−１ｂ（ＡＣＴＩＭＭＵＮＥ（登録商標）、ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ，Ｉｎｃ．）。好ましいインターフェロンは、インターフェロンα−２ａおよびインターフェロンα−２ｂである。最も好ましくは、インターフェロンα−２ｂが、本発明の処方物の活性成分を調製するために使用される。
【００２２】
ＰＥＧとインターフェロン分子との結合体化は、当業者に公知である、あらゆる結合体化反応により（例えば、米国特許第５，６１２，４６０号、同第５，７１１，９４４号および同第５，９５１，９７４号に記載される通りに）実行され得る。好ましくは、ＰＥＧ分子は、ウレタン結合によりインターフェロン分子に共有結合される。より好ましくは、ＰＥＧ化インターフェロンは、米国特許第５，９５１，９７４号に記載されるように、ｐＨ６．５で、インターフェロンとメトキシポリ（エチレングリコール）−スクシンイミジルカーボネート（ＳＣ−ＰＥＧ）とを反応させることにより生成される。
【００２３】
本発明の処方物において使用するための最も好ましいＰＥＧ化インターフェロンは、ＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂである。
【００２４】
ＰＥＧ化インターフェロンに加えて、本発明の処方物は、凍結乾燥で使用される減圧に由来する損傷、吸着および損失からＰＥＧ化インターフェロンを保護する凍結保護物質を含む。凍結保護物質はまた、凍結−乾燥プロセスの間および生じる凍結乾燥粉末においてＰＥＧ化インターフェロンを安定化させる役割を果たし、そして容易に再構成可能なケーキを形成するための増量剤として役割を果たす。使用される凍結保護物質の量は、代表的に、処方物の総重量に基づく。一実施形態において、凍結保護物質は、総重量の０．０５％〜９０％の量で存在する。好ましい実施形態において、処方物は、処方物の総重量の０．０５％と５０％との間の量の凍結保護物質、そしてより好ましくは、処方物の総重量の０．１５％と１０％との間の量の凍結保護物質を含む。
【００２５】
トレハロースは、処方物中の凍結保護物質の総重量のうち、少なくとも６０％を構成する。凍結保護物質は、６０重量％と１００重量％との間の任意の百分率（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％）のトレハロースを含み得る。好ましくは、トレハロースは、凍結保護物質の総重量のうち、少なくとも７５％を構成する。より好ましくは、凍結保護物質のうちの少なくとも８０重量％がトレハロースであり、最も好ましくは、トレハロースは、凍結保護物質のうち、１００％を構成する。
【００２６】
トレハロースは、α，α−１，１結合で結合された２つのグルコース分子を含む二糖類である。あらゆる形態のトレハロースが、本発明の処方物を調製するために使用するのに適している。好ましい形態のトレハロースは、トレハロース二水和物である。
【００２７】
凍結保護物質中でトレハロースとともに使用され得る他の物質は、炭水化物（例えば、糖類、スクロース）、糖アルコール（例えば、マンニトール）、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ）ならびにグリセロールおよびジメチルスルホキシドである。好ましい凍結保護物質は、炭水化物である。好ましい炭水化物は、二糖類である。好ましい二糖類は、スクロースである。
【００２８】
好ましい一実施形態において、処方物は、凍結保護物質として６０ｍｇ／ｍｌ  トレハロース二水和物および４０ｍｇ／ｍｌ  スクロースを含む溶液を凍結乾燥することによって調製される。より好ましい実施形態において、この溶液は、凍結保護物質として８０ｍｇ／ｍｌ  トレハロース二水和物および２０ｍｇ／ｍｌ  スクロースを含む。なおより好ましい実施形態において、凍結保護物質は、溶液中で９０ｍｇ／ｍｌ  トレハロースで存在するトレハロースデハイドレート（ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）からなる。
【００２９】
本発明の処方物はまた、処方物のｐＨを４．５〜７．１の範囲に維持するための緩衝剤も含む。好ましくは、緩衝剤は、ｐＨを６．５と７．１との間に維持し、最も好ましくは、ｐＨを６．８に維持する。好ましい緩衝剤は、等しい質量の無水リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム一水和物を含み、処方物中でのこれらの化合物の総濃度は、０．００５モル濃度と０．１モル濃度との間である。所望のｐＨ範囲を維持する他の適切な緩衝剤系としては、クエン酸ナトリウム／クエン酸および酢酸ナトリウム／酢酸が挙げられる。
【００３０】
本発明の処方物はまた、処方物を凍結乾燥および保存するために使用される装置および容器のステンレス鋼表面およびガラス表面に、ＰＥＧ化−インターフェロンが吸着することを防止する安定剤も含む。さらに、安定剤は、凍結乾燥および保存の間、空気−水の界面および氷−水の界面へのＰＥＧ化インターフェロンの曝露を最小限にすることにより、ＰＥＧ化インターフェロンを安定化し得る。一例として、ポリソルベートが、安定剤として有用である。ポリソルベート８０が好ましい安定剤である。ポリソルベート８０を使用する場合、好ましい濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌである。他の適切な安定剤は、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）およびＰＥＧ３００のような界面活性剤であり、これらは、凍結乾燥処方物のために使用される溶液の体積のうち、＜２％で使用され得る。
【００３１】
本発明の処方物を調製するために、ＰＥＧ化インターフェロン、凍結保護物質、緩衝剤および安定剤は、注射用水により溶解され、この注射用水の量は、凍結乾燥に適する固体成分の濃度を達成するように選択される。本明細書で使用される場合、用語「注射用水」は、微粒子物、溶解固形物、有機物、無機物、微生物および内毒素夾雑物についての規制の基準を満たす、無菌の純水を意味する。
【００３２】
一旦、全ての処方物成分が溶解すると、この溶液は、凍結乾燥機（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒ）での使用、および得られる凍結乾燥粉末の保存に適したガラス容器へ等分される。好ましい容器はバイアルおよびカートリッジである。本明細書で使用される場合、用語「バイアル」は、平らな底部またはわずかに湾曲した底部、短いくびおよび栓をするために設計された平らなフランジを備える、小さなガラス容器をいう。バイアルは、通常、直接的な熱伝達のために凍結乾燥機チャンバーのトレイまたは棚の上に直接配置される。本明細書で使用される場合、用語「カートリッジ」および「二重チャンバーのカートリッジ」は、（中栓によって隔てられた）２つのチャンバーを有するチューブ様ガラス容器をいうために交換可能に使用される。一方のチャンバー（活性物質（ａｃｔｉｖｅ）チャンバー）は細いくびを有し、スナップ式（ｓｎａｐ−ｏｎ）閉鎖により閉じられる。他方のチャンバー（希釈剤チャンバー）は、より広く、端部の栓によって閉じられる。カートリッジは、通常マガジン内に配置され、これはカートリッジを直立させて保持する。次に、マガジンは、凍結乾燥機のトレイ／棚の上に直接配置される。カートリッジは、熱伝達のために凍結乾燥機のトレイ表面／棚表面と直接接触していても、直接接触していなくてもよい。
【００３３】
本発明のＰＥＧ化インターフェロン処方物を含むガラス容器は、３％未満の水分を有する凍結乾燥粉末を生成するのに適切な条件下で、凍結乾燥に供される。好ましくは、凍結乾燥粉末は、０．５％と２．５％との間の水分、より好ましくは１％と２％との間の水分を有する。
【００３４】
凍結乾燥条件はまた、受容可能なレベルのケーキの欠陥を達成しながら、所望の低い水分を維持するように選択される。本明細書で使用される場合、句「ケーキの欠陥」は、１つ以上の物理的欠陥（例えば、崩壊、収縮、蓋をされた状態またはメルトバック）を有するケーキをいう。崩壊したケーキ（これは、通常、凍結−乾燥の間の処方物の過剰な加温に起因する）は、製品の優美さの喪失および乏しい安定性に結びつく。収縮（これは、不十分な凍結−乾燥サイクルにより引き起こされる）は、部分的な崩壊または微小な崩壊の徴候であり得、保存時のＰＥＧ化インターフェロンの乏しい安定性をもたらし得る。蓋をされた状態は、ケーキの頂部が、ケーキの大部分から離れた薄いフィルムまたは皮を形成する物理的な欠陥である。メルトバックは、ケーキの崩壊の一般的な形態をいい、これは、主に、処方物の不完全な昇華（固体状態から蒸気状態への変化）に起因する。メルトバックは、ＰＥＧ化インターフェロンまたは水分ポケット（ｍｏｉｓｔｕｒｅ  ｐｏｃｋｅｔ）の物理的な形態の変化に関連し、ＰＥＧ化インターフェロンの不安定性および脱ＰＥＧ化（ｄｅｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）をもたらし得る。好ましくは、凍結乾燥粉末における、これらの型のケーキの欠陥の百分率は、５０％未満であり、より好ましくは１０％未満であり、なおより好ましくは２％未満であり、そして最も好ましくは１％未満である。
【００３５】
本発明の処方物においてトレハロースを使用することは、所望の低い水分および最小限のケーキの欠陥を有する凍結乾燥粉末を達成する、活動的な凍結乾燥条件を可能にする。凍結乾燥機へガラス容器を装填することは、周囲圧力、−５５℃と５℃との間で実行され得る。装填された容器は、周囲圧力、１時間〜４時間、−５５℃と−４０℃との間の温度での凍結に供され得、続いて、周囲圧力で、４時間〜８時間、−２５℃と−１５℃との間の温度でアニール（ａｎｎｅａｌ）され得る。凍結溶液は、８ミリトル（ｍＴｏｒｒ）と１００ミリトルとの間の圧力、好ましくは１５ｍＴｏｒｒと３０ｍＴｏｒｒとの間の圧力での減圧下で、２つの工程により乾燥される。第一乾燥工程は、１５時間〜３５時間、−３０℃と−１５℃との間の温度で実行され得、一方で、第二乾燥工程は、５時間〜１０時間、乾燥期間の間、０℃〜５℃の低い温度から開始し、４０℃まで温度を上げて実行され得る。凍結乾燥粉末を含むガラス容器の抜き取りは、周囲圧力かつ室温以下で実行され得る。
【００３６】
本発明は、これらの凍結乾燥条件のバリエーションが所望の特徴を有する凍結乾燥粉末を生成することを企画する。当業者は、当該分野で公知の考察に基づいて、代替的な凍結乾燥プロセスを容易に設計および試験し得る。例えば、ＴａｎｇおよびＰｉｋａｌ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２１（２）：１９１〜２００（２００４）を参照のこと。本発明の凍結乾燥ＰＥＧ化インターフェロン処方物を調製するための好ましい凍結乾燥サイクルを、以下の表１にまとめる。
【００３７】
【表３】
2008509919.tif 000002
この好ましい凍結乾燥サイクルは、完了するのに４８時間未満（工程間に、チャンバーの温度を適用可能であるように変化させるのに必要とされる時間を含む）を必要とする。
【００３８】
上記の説明にしたがって調製されるＰＥＧ化インターフェロン処方物は、室温以上での保存の間、安定性がきわめて高い。一実施形態において、４０℃で３０日間の保存後の、凍結乾燥粉末中の非ＰＥＧ化インターフェロンの量は、１０％未満、好ましくは７．５％未満、そして最も好ましくは５％未満である。
【００３９】
本発明の好ましい処方物は、カートリッジ内で凍結乾燥され、そしてこの処方物は、６７．５μｇ、１０８μｇ、１６２μｇまたは２０２．５μｇの量でのＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂ、８０ｍｇ  トレハロース二水和物、１．０１３ｍｇ  無水リン酸水素二ナトリウム、１．０１３ｍｇ  リン酸二水素ナトリウムデハイドレートおよび０．０６７５ｍｇ  ポリソルベート８０から本質的になる。本明細書で使用される場合、用語「から本質的になる」は、凍結乾燥粉末が、指定される物質と、処方物の生物学的活性または安定性に実質的に影響せず、かつ処方物のあらゆる特許請求される特性（例えば、水分またはケーキの欠陥の量）に実質的に影響しない他の物質のみを含むことを意味する。特に好ましい処方物は、この段落に列挙される成分からなる。
【００４０】
本発明のＰＥＧ化インターフェロン処方物は、インターフェロン療法に好都合に応答する疾患または状態（例えば、癌および他の細胞増殖障害ならびにウイルス感染）を処置するのに有用である。本発明の処方物を投与するために、凍結乾燥粉末は、無菌の希釈剤（好ましくは、注射用水）により再構成され、続いて、治療有効量の再構成された処方物が、処置される患者に注射される。
【実施例】
【００４１】
凍結保護物質として種々の量のトレハロースおよびスクロースを含むＰＥＧ化インターフェロン溶液を調製し、ガラスカートリッジ内で種々の条件下で凍結乾燥した。そして生じた凍結乾燥粉末を、ＰＥＧ化インターフェロンのケーキの欠陥、水分および安定性について試験した。以下の表２は、４つのこれらの溶液の組成を記載する。これらの溶液は、上記の表１に示される凍結乾燥条件を使用して凍結乾燥させた。
【００４２】
【表４】
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凍結乾燥（表１に示される凍結乾燥サイクルを使用する）後、崩壊したケーキ、蓋をしたケーキ、ひどく縮んだケーキおよびメルトバックにより通常不良品とされるケーキの数を決定し、水分を測定した。結果を表３に示す。
【００４３】
【表５】
2008509919.tif 000004
表３のデータにより証明されるように、凍結保護物質としてトレハロースを単独でか、またはスクロースと組み合わせて使用することは、ケーキの欠陥（例えば、崩壊、収縮、蓋をされた状態およびメルトバック）の減少に起因して、ケーキの不良品のより低い割合をもたらした。
【００４４】
さらに、トレハロースの種々の濃度がＰＥＧ化インターフェロンの安定性に与える影響を、遊離のインターフェロンの％を測定することにより評価した。遊離のインターフェロンの％は、脱ＰＥＧ化（すなわち、加水分解）のレベルに相当し、脱ＰＥＧ化は、凍結乾燥粉末を３０日間、４０℃で保存した場合に存在した。結果を表４に示す。
【００４５】
【表６】
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表４のデータにより証明されるように、凍結保護物質としてトレハロースを使用することは、凍結乾燥粉末中のＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂの脱ＰＥＧ化（加水分解）の減少をもたらした。
【００４６】
種々の刊行物が本明細書で引用され、これらの開示は、それらの全体が参考として援用される。
【国際調査報告】
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