(57)【要約】  本発明は、哺乳動物における逆コレステロール輸送を増強するように適合させた組成物を提供する。前記組成物は経口送達に適し、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症及び関連心臓血管疾患の治療及び／または予防において有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
【化１】
2008509228.tif 000075
［式中、Ａ、Ｂ及びＣはいかなる順序であってもよく、及び
Ａは、酸性基またはその生物学的等価体を含むアミノ酸またはその類似体を含み；
Ｂは、親油性基を含むアミノ酸またはその類似体を含み；及び
Ｃは、塩基性基またはその生物学的等価体を含むアミノ酸またはその類似体を含み；
αアミノまたはαカルボキシ基の少なくとも１個は、それらのそれぞれのアミノまたはカルボキシ末端アミノ酸またはその類似体から除去されている］
を含む、逆コレステロール輸送のメディエイタ。
【請求項２】
除去されていない場合、αアミノ基が、アセチル、フェニルアセチル、ベンゾイル、ピボリル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル、２−ナフチル酸、ニコチン酸、ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−［式中、ｎは１−２０の範囲である］、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール及び置換飽和へテロアリールから成る群より選択される保護基でキャップされている、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項３】
除去されていない場合、αカルボキシ基が、ＲＮＨ［式中、Ｒ＝Ｈ、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール及び置換飽和へテロアリール］などのアミンから成る群より選択される保護基でキャップされている、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項４】
酸性基の生物学的等価体が、
【化２】
2008509228.tif 000076
から成る群より選択される、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項５】
塩基性基の生物学的等価体が、
【化３】
2008509228.tif 000077
から成る群より選択される、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項６】
メディエイタが半裸出されており、構造：
【化４】
2008509228.tif 000078
［式中、Ｘは、
【化５】
2008509228.tif 000079
［式中、Ｘ１は、
【化６】
2008509228.tif 000080
であり；
Ｘ２は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ０−６アルキル、ＯＣＨ３、ＣＦ３またはＯＣＦ３で
あり；
Ｘ３は、Ｃｌ、Ｃ０−６アルキル、ＯＣＨ３であり；及び
ｎは１または２である］
から成る群より選択される］
を有する、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項７】
メディエイタが半裸出されており、グルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、Ａｃ−Ｅ−ＢＩＰ−アグマチン、Ａｃ−ｅ−ｂｉｐ−アグマチン、Ａｃ−Ｒ−ＢＩＰ−ＧＡＢＡ、Ａｃ−ｒ−ｂｉｐ−ＧＡＢＡ、４−グアニジノブタン酸−ＢＩＰ−Ｅ−ＮＨ２、４−グアニジノブタン酸−ｂｉｐ−ｅ−ＮＨ２、グルタル酸−ＢＩＰ−Ｋ−ＮＨ２及びグルタル酸−ｂｉｐ−ｋ−ＮＨ２から成る群より選択される、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項８】
メディエイタが半裸出されており、２，２−ジメチルグルタル酸−ｆ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ｆ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−ｆ−ｒ−ＮＨ２、コハク酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、コハク酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、コハク酸−Ｆ−Ｒ−ＮＨ２、コハク酸−ｆ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、コハク酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、コハク酸−ｆ−ｋ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−ｆ−ｋ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−ｆ−ｋ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、コハク酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２、テトラゾールアミドグルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、３，３−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２及び２，２−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２から成る群より選択される、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項９】
メディエイタが完全裸出されており、
【化７】
2008509228.tif 000081
【化８】
2008509228.tif 000082
【化９】
2008509228.tif 000083
【化１０】
2008509228.tif 000084
【化１１】
2008509228.tif 000085
【化１２】
2008509228.tif 000086
【化１３】
2008509228.tif 000087
【化１４】
2008509228.tif 000088
【化１５】
2008509228.tif 000089
から成る群より選択される、請求項１に記載のメディエイタ。
【請求項１０】
グルタル酸−ｂｉｐ−ｒ、Ｅ−ＢＩＰ−アグマチン、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ＢＩＰ−Ｅ、グルタル酸−ｂｉｐ−ｋ、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ｂｉｐ−ＧＡＢＡ、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ＢＩＰ−ＧＡＢＡ、グルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ｐｈｅ−ＧＡＢＡ、４，４−ジメチルグルタル酸−ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ、グルタル酸−Ｆ−Ｒ、グルタル酸−ｆ−ｒ、コハク酸−ｂｉｐ−ｒ、コハク酸−ＢＩＰ−Ｒ、コハク酸−ｆ−ｒ、ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−ｒ、ジメチルグルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ、ジメチルコハク酸−ＢＩＰ−Ｒ、コハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ジメチルコハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ジメチルコハク酸−Ｐｈｅ−Ｋ、３，３−ジメチルグルタル酸−ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−ｒ、グルタル酸−ｆ−（エタノ）アグマチン、グルタル酸−Ａｉｃ−ｒ、コハク酸−Ａｉｃ−ｒ、グルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ、（１Ｈ−テトラゾール−５−５−イル）グルタルアミド−ＢＩＰ−Ｒ、２，２−ジメチルコハク酸−Ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−Ｒ、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ｐｈｅ−アグマチン、３，３−ジメチルグルタル酸−Ｆ−アグマチン、グルタル酸−Ｐｈｅ−アグマチン（ビス−Ｂｏｃ）、グルタル酸−ｆ−シアノアグマチン、グルタル酸（テトラゾールアミド）−ＢＩＰ−アグマチン（ピリミジン）、コハク酸−ＢＩＰ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロヘキシルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ｐｈｅ−３−（ジメチルアミノ）ブタン、４，４−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、及び３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−ｂｉｐ−３−（ジメチルアミノ）プロパンから成る群より選択される化合物を含み、非誘導体化アミノ及び／またはカルボキシ末端アミノ酸が保護基でキャップされている、逆コレステロール輸送のメディエイタ。
【請求項１１】
ｋが保護基をさらに含む、化合物ジメチルコハク酸−ｐｈｅ−ｋ。
【請求項１２】
Ｒが保護基をさらに含む、化合物ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ。
【請求項１３】
Ｒが保護基をさらに含む、化合物グルタル酸−Ｆ−Ｒ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下に、全体が参照してここに組み込まれる、２００５年４月１日出願の米国特許仮出願第６０／６６７，３６８号及び２００４年６月９日出願の米国特許仮出願第６０／５７８，２２６号の優先権を主張する。
【０００２】
発明の背景
技術分野
本発明は、高コレステロール血症及び関連する心臓血管疾患及び他の疾患を治療するための逆コレステロール輸送（ＲＣＴ）の低分子メディエイタに関する。
【背景技術】
【０００３】
関連技術の説明
高い血清コレステロール（「高コレステロール血症」）が、動脈壁内のコレステロールの進行性蓄積であるアテローム性動脈硬化症発症の原因因子であることは今や広く確立されている。高コレステロール血症及びアテローム性動脈硬化症は、高血圧、冠状動脈疾患、心臓発作及び卒中を含む心臓血管疾患の主要原因である。米国だけで毎年約１１０万人が心臓発作を発症しており、その費用は１，１７０億ドルを超えると推定される。血液中のコレステロールレベルを低下させるための数多くの医薬戦略が存在するが、これらの多くは望ましくない副作用が有しており、安全性の懸念を生じさせてきた。さらに、市販されている薬剤治療のいずれもが、体内からコレステロールを除去する重要な代謝経路である逆コレステロール輸送を十分に刺激しない。
【０００４】
循環コレステロールは血漿リポタンパク質−血液中の脂質を輸送する複雑な脂質とタンパク質組成物の粒子−によって運搬される。低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は主要なコレステロール運搬体である。ＬＤＬは、肝（ここでコレステロールが合成されるかまたは食事ソースから得られる）から体内の肝外組織へのコレステロールの供給送達の役割を担うと考えられる。「逆コレステロール輸送」という用語は、肝外組織から、コレステロールが異化されて排泄される肝への、コレステロールの輸送を表わす。血漿ＨＤＬ粒子は逆輸送工程において主要な役割を果たし、組織コレステロールのスカベンジャーとして働くと考えられる。
【０００５】
有力な証拠が、アテローム性動脈硬化症病変において沈着する脂質は主として血漿ＬＤＬに由来するという概念を裏付けている：それ故、ＬＤＬは一般に「悪玉」コレステロールとして知られるようになってきた。これに対し、血漿ＨＤＬレベルは冠状動脈心臓病と逆相関する−実際に、ＨＤＬの高い血漿レベルは負の危険因子とみなされている。血漿ＨＤＬの高レベルは冠状動脈疾患に対して防護的であるのみならず、実際にアテローム斑の後退を誘導し得ると仮定される（例えばＢａｄｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８６（Ｓｕｐｐｌ．  ＩＩＩ）：８６−９４参照）。そこで、ＨＤＬは一般に「善玉」コレステロールとして知られるようになってきた。
【０００６】
ＬＤＬから放出される細胞内コレステロールの量が細胞コレステロール代謝を制御する。ＬＤＬに由来する細胞コレステロールの蓄積は３つの工程を制御する：（１）コレステロール生合成経路において鍵となる酵素、ＨＭＧＣｏＡレダクターゼの合成を停止させることによって細胞コレステロール合成を低下させる；（２）入ってきたＬＤＬ由来のコレステロールは、コレステロールを、貯蔵小滴中に沈積するコレステリルエステルへと変換
する細胞酵素、ＬＣＡＴを活性化することによってコレステロールの貯蔵を促進する；及び（３）細胞内のコレステロールの蓄積は、新しいＬＤＬ受容体の細胞合成を抑制するフィードバック機構を駆動する。細胞は、それ故、過負荷を伴わずに、代謝要求に応じるために十分なコレステロールが持ち込まれるようにＬＤＬ受容体の補充を調節する。（総説については、Ｂｒｏｗｎ  ＆  Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｉｎ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９０，Ｃｈ．３６，ｐｐ．８７４−８９６参照）。
【０００７】
逆コレステロール輸送（ＲＣＴ）は、末梢細胞コレステロールを、肝外組織に再循環させるために肝に戻すまたは胆汁として腸に排泄することができる経路である。ＲＣＴ経路は、大部分の肝外組織からコレステロールを排泄する唯一の手段である。ＲＣＴは主として３つの段階から成る：（１）末梢細胞からのコレステロールの初期除去である、コレステロール流出；（２）流出したコレステロールの末梢細胞への再流入を防ぐ、レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）の作用によるコレステロールエステル化；及び（３）ＨＤＬコレステリルエステルの肝細胞への取り込み／送達。ＬＣＡＴはＲＣＴ経路における鍵となる酵素であり、主として肝で生産され、ＨＤＬ分画に結合して血漿中を循環する。ＬＣＡＴは細胞由来コレステロールをコレステリルエステルに変換し、それらは除去を運命付けられたＨＤＬ中で分離される。ＲＣＴ経路はＨＤＬによって媒介される。
【０００８】
ＨＤＬは、高密度を特徴とするリポタンパク質粒子の一般名である。ＨＤＬ複合体の主要脂質成分は、様々なリン脂質、コレステロール（エステル）及びトリグリセリドである。最も顕著なアポリポタンパク質成分は、ＨＤＬの機能特徴を決定するＡ−Ｉ及びＡ−ＩＩである。
【０００９】
各々のＨＤＬ粒子は、少なくとも１コピー（及び通常は２−４コピー）のアポリポタンパク質Ａ−１（アポＡ−Ｉ）を含む。アポＡ−Ｉは、肝及び小腸によってプレプロアポリポタンパク質として合成され、それがプロタンパク質として分泌され、速やかに切断されて２４３アミノ酸残基を有する成熟ポリペプチドを生成する。アポＡ−Ｉは、主として、しばしばプロリンであるリンカー成分によって間隔をあけた６−８個の異なる２２アミノ酸反復配列から成り、一部の場合は、いくつかの残基で構成された一続きから成る。アポＡ−Ｉは脂質と３つのタイプの安定な複合体を形成する：プレ−β−１  ＨＤＬと称される小さな脂質欠乏複合体；プレ−β−２  ＨＤＬと称される、極性脂質（リン脂質及びコレステロール）を含む扁平な盤状粒子；及び球状または成熟ＨＤＬ（ＨＤＬ２及びＨＤＬ３）と称される、極性と非極性の両方の脂質を含む球状粒子。循環中の大部分のＨＤＬはアポＡ−Ｉ及びアポＡ−ＩＩを含むが、アポＡ−Ｉだけを含むＨＤＬの分画（ＡＩ−ＨＤＬ）はＲＣＴにおいてより効率的であると思われる。疫学的試験は、ＡＩ−ＨＤＬが抗アテローム形成性であるという仮説を裏付ける。（Ｐａｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．１２：７０１−７０７；Ｄｅｃｏｓｓｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２７：２９９−３０７）。
【００１０】
インビボで得られたデータに基づくいくつかの系列の証拠が、ＨＤＬ及びその主要タンパク質成分、アポＡ−Ｉを、アテローム性動脈硬化症病変の予防、及び潜在的に、プラークの後退に関係付けており、これらを治療介入のための魅力的な標的にしている。第１に、ヒトにおいて血清アポＡ−Ｉ（ＨＤＬ）濃度とアテローム発生の間には逆相関が存在する（Ｇｏｒｄｏｎ  ＆  Ｒｉｆｋｉｎｄ，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：
１３１１−１３１６；Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ７９：８−１５）。実際に、ＨＤＬの特定小個体群はヒトにおけるアテローム性動脈
硬化症の危険度低下に結び付けられてきた（Ｍｉｌｌｅｒ，１９８７，Ａｍｅｒ．Ｈｅａｒｔ  １１３：５８９−５９７；Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３２：３８３−３９４）；Ｆｒｕｃｈａｒｔ  ＆  Ａｉｌｈａｕｄ，１９９２，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３８：７９）。
【００１１】
第２に、動物試験はアポＡ−Ｉ（ＨＤＬ）の防護的役割を裏付ける。コレステロールを給餌したウサギのアポＡ−ＩまたはＨＤＬによる処置は、コレステロール給餌ウサギにおけるプラーク（脂肪線条）の発現と進行を低下させた（Ｋｏｉｚｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，
１９８８，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．２９：１４０５−１４１５；Ｂａｄｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．６０：４５５−４６１；Ｂａｄｉｍｏｎ
ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８５：１２３４−１２４１）。しかし、効果はＨＤＬのソースに依存して異なった（Ｂｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ  ４７：１４９−１５２；Ｍｅｚｄｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １１３：２３７−２４６）。
【００１２】
第３に、アポＡ−Ｉの役割についての直接の証拠が、トランスジェニック動物を含む実験から得られた。食餌誘発性アテローム性動脈硬化症への遺伝的素因があるマウスに移入したアポＡ−Ｉについてのヒト遺伝子の発現は、大動脈病変の発現から保護した（Ｒｕｂｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５３：２６５−２６７）。アポＡ−Ｉ導入遺伝子はまた、アポＥ欠損マウス及びアポ（ａ）トランスジェニックマウスにおいてアテローム性動脈硬化症を抑制することが示された（Ｐａｓｚｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：８９９−９０３；Ｐｌｕｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ．ＵＳＡ  ９１：９６０７−９６１１；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３５：２２６３−２２６６）。同様の結果が、ヒトアポＡ−Ｉを発現するトランスジェニックウサギにおいて（Ｄｕｖｅｒｇｅｒ，１９９６，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９４：７１３−７１７；Ｄｕｖｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１６：１４２４−１４２９）、及び高レベルのヒトアポＡ−Ｉがアテローム性動脈硬化症に対して保護し、バルーン血管形成術後の再狭窄を抑制したトランスジェニックラットにおいて認められた（Ｂｕｒｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉ，８６：１−４７２，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．１８７６；Ｂｕｒｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３６：１４６３−１４７３）。
【００１３】
高コレステロール血症及び他の異常脂質血症のための現在の治療
過去２０年ほどの間に、コレステロール性化合物がＨＤＬとＬＤＬ調節剤に分離されたこと及びＬＤＬの血中レベルを低下させることの望ましさが認識されたことは、多くの薬剤の開発へと導いた。しかし、これらの薬剤の多くは望ましくない副作用を有しており及び／またはある種の患者では、特に他の薬剤と併用投与されるとき、禁忌である。これらの薬剤及び治療戦略は以下を含む：
（１）胆汁酸結合樹脂、腸から肝への胆汁酸の再循環を妨げる［例えばコレスチラミン（ＱＵＥＳＴＲＡＮ  ＬＩＧＨＴ，Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及び塩酸コレスチポール（ＣＯＬＥＳＴＩＤ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  Ｕｐｊｏｈｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ）］；
（２）スタチン、コレステロール生合成に関与するキー酵素であるＨＭＧＣｏＡをブロックすることによってコレステロール合成を阻害する［例えばアスペルギルス菌株から誘導される天然産物、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ，Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ，Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏ．）、及びアトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ，Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）］
；
（３）ナイアシンは、ＶＬＤＬの産生を低減する水溶性ビタミンＢ複合体であり、ＬＤＬを低下させるのに有効である；
（４）フィブレートは、ＶＬＤＬ分画を低減することによって血清トリグリセリドを低下させるために使用され、一部の患者母集団では、同じ機序によって血漿コレステロールの軽度の低下も生じさせ得る［例えばクロフィブレート（ＡＴＲＯＭＩＤ−Ｓ，Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、及びゲンフィブロジル（ＬＯＰＩＤ，Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）］；
（５）エストロゲン補充療法は、閉経後女性においてコレステロールレベルを低下させ得る；
（６）長鎖α、ω−ジカルボン酸は、血清トリグリセリド及びコレステロールを低下させることが報告されている（例えばＢｉｓｇａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３９：１７−３０；ＷＯ９８／３０５３０号；米国特許第４，６８９，３４４号；ＷＯ９９／００１１６号；米国特許第５，７５６，３４４号；米国特許第３，７７３，９４６号；米国特許第４，６８９，３４４号；  米国特許第４，６８９，３４４号；米国特許第４，６８９，３４４号；及び米国特許第３，９３０，０２４号参照）；
（７）エーテル（例えば米国特許第４，７１１，８９６号；米国特許第５，７５６，５４４号；米国特許第６，５０６，７９９号参照）、ドリコールのリン酸塩（米国特許第４，６１３，５９３号）、及びアゾリジンジオン誘導体（米国特許第４，２８７，２００号）を含む他の化合物は、血清トリグリセリド及びコレステロールレベルを低下させると開示されている。
【００１４】
コレステロールを低下させるためのこれらの現在使用可能な薬剤のいずれもが、ＨＤＬレベルを安全に上昇させず、またＲＣＴを刺激しない。実際に、これらの現行治療戦略の大部分は、コレステロールの食事摂取、再循環、合成を調節する、コレステロール輸送経路、及びＶＬＤＬ個体群に作用すると思われる。
【００１５】
高コレステロール血症の治療のためのアポＡ−Ｉアゴニスト
ＨＤＬ、すなわちアポＡ−Ｉとその関連リン脂質の両方の、アテローム性動脈硬化性疾患に対する保護における潜在的役割を考慮して、組換え生産されたアポＡ−Ｉを使用したヒト臨床試験が、ＵＣＢ  Ｂｅｌｇｉｕｍによって開始され、中断され、おそらく再開されており（Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ，１９９５年１０月２７日；ＩＭＳ  Ｒ＆Ｄ  Ｆｏｃｕｓ，１９９７年６月３０日；Ｄｒｕｇ  Ｓｔａｔｕｓ  Ｕｐｄａｔｅ，１９９７，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２（６）：２６１−２６５）；Ｍ．Ｅｒｉｋｓｓｏｎ  ａｔ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，“Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＨＤＬ  ｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，”１９９６年１１月７−９日、Ｆｏｒｔ  Ｗｏｒｔｈ；Ｌａｃｋｏ  ＆  Ｍｉｌｌｅｒ，１９９７，Ｊ．Ｌｉｐ．Ｒｅｓ．３８：１２６７−１２７３；及びＷＯ９４／１３８１９号も参照のこと）、またＢｉｏ−Ｔｅｃｈによって開始され、中止された（Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ，１９８９年４月７日）。敗血症性ショックを治療するためにアポＡ−Ｉを使用する治験も試みられた（Ｏｐａｌ，“Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ  ＨＤＬ  ａｓ  ａ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  Ｓｅｐｓｉｓ，”ＩＢＣ’ｓ  ７ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｓｅｐｓｉｓ，１９９７年４月２８−３０日、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．；Ｇｏｕｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．９４：１３９−１４６；Ｌｅｖｉｎｅ，ＷＯ９６／０４９１６号）。しかし、アポＡ−Ｉの生産と使用に関連する多くの落とし穴があり、この物質を薬剤としてあまり理想的でないものにしており：例えばアポＡ−Ｉは生産が難しく、費用のかかる大型タンパク質であり；保存中の安定性、活性産物の供給送達及びインビボでの半減期に関して重要な製造上及び再現性の問題が克服されねばならない。
【００１６】
これらの難点を考慮して、アポＡ−Ｉを模倣するペプチドを作製する試みが為されてきた。アポＡ−Ｉの鍵となる活性は、このタンパク質における独自の二次構造特徴−クラスＡ両親媒性αヘリックス（Ｓｅｇｒｅｓｔ，  １９７４，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３８：  ２４７−２５３；  Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  ＰＲＯＴＥＩＮＳ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：１０３−１１７）−の多数の反復配列の存在に帰せられるため、アポＡ−Ｉの活性を模倣するペプチドを設計するための努力の大半は、クラスＡ型両親媒性αヘリックスを形成するペプチドを設計することに集中してきた（例えばその全体が参照してここに組み込まれる、米国特許第６，３７６，４６４号及び同第６，５０６，７９９号の中の背景技術の考察参照）。
【００１７】
ある研究において、Ｆｕｋｕｓｈｉｍａらは、等しい親水性及び疎水性面を有する両親媒性αヘリックスを形成するように周期的に配置された、もっぱらＧｌｕ、Ｌｙｓ及びＬｅｕから成る２２残基のペプチド（「ＥＬＫペプチド」）を合成した（Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０１（１３）：３７０３−３７０４；Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：１０６５１−１０６５７）。ＥＬＫペプチドはアポＡ−Ｉの１９８−２１９フラグメントと４１％の配列相同性を共有する。ＥＬＫペプチドは、リン脂質と有効に結合し、アポＡ−Ｉの物理的及び化学的性質の一部を模倣することが示された（Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８０：１１３７−１１４０；Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２３：２４９−２５５；Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，前出；Ｎａｋａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７：７０８７−７０９２）。その後、この２２残基ペプチドの２量体は単量体よりも一層密接にアポＡ−Ｉを模倣することが認められた；これらの結果に基づき、ヘリックスブレーカ（ＧｌｙまたはＰｒｏのいずれか）によって中央で中断されている４４量体がアポＡ−Ｉの最小機能ドメインであることが示唆された（Ｎａｋａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，前出）。
【００１８】
もう１つの研究は、「ＬＡＰペプチド」と呼ばれるモデル両親媒性ペプチドを含んだ（Ｐｏｗｎａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ７７（６）：３１５４−３１５８；Ｓｐａｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｉｎ：Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｈ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｅｄｓ．，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，２５３−２５６）。天然アポリポタンパク質のフラグメントに関する脂質結合の研究に基づき、いくつかのＬＡＰペプチドが設計され、ＬＡＰ−１６、ＬＡＰ−２０及びＬＡＰ−２４（それぞれ１６、２０及び２４アミノ酸残基を含む）と命名された。これらのモデル両親媒性ペプチドはアポリポタンパク質と配列相同性を共有せず、アポリポタンパク質と結合するクラスＡ型両親媒性ヘリックスドメインとは異なって構成された親水性面を有するように設計された（Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３３：１４１−１６６）。これらの研究から、著者は、モデル両親媒性ペプチドに脂質結合特性を付与するためには２０残基の最小長が必要であると結論した。
【００１９】
配列内の異なる位置にプロリン残基を含むＬＡＰ２０の突然変異体に関する研究は、脂質結合とＬＣＡＴ活性化の間には直接関係が存在するが、ペプチド単独のヘリックス電位（ｈｅｌｉｃａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）はＬＣＡＴ活性化を導かないことを指示した（Ｐｏｎｓｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１（２０）：９２０２−９２０５）。さらに、ペプチドの中央に近いこのヘリックスブレーカ（Ｐｒｏ）の存在は、リン脂質表面に対するその親和性並びにＬＣＡＴを活性化するその能力を低下させた。ある種のＬＡＰペプチドはリン脂質に結合することが示されたが（Ｓｐａｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，前出）、ＬＡＰペプチドが脂質の存在下でどの程度らせん状であるか
に関しては論議がある（Ｂｕｃｈｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（６）：３０３９−３０４５；Ｚｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７（２）：９９−１０６）。
【００２０】
Ｓｅｇｒｅｓｔらは、アポＡ−Ｉのヘリックスと配列相同性を共有しない１８−２４アミノ酸残基から成るペプチドを合成した（Ｋａｎｎｅｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｊ．  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５（３）：１１４６４−１１４７２；Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８：２２９０−２２９５）。配列は、特に疎水性モーメント（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，  Ｎａｔｕｒｅ  ２９９：３７１−３７４）及び電荷分布（Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ８：１０３−１１７；米国特許第４，６４３，９８８号）の見地からクラスＡの交換可能なアポリポタンパク質の両親媒性ヘリックスドメインを模倣するように設計された。１つの１８残基ペプチド、「１８Ａ」ペプチドは、モデルクラス−Ａαヘリックスであるように設計された（Ｓｅｇｒｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，前出）。これらのペプチド及び「１８Ｒ」ペプチドのような電荷逆転分布を有する他のペプチドに関する研究は、電荷分布が活性のために決定的に重要であることを一貫して示した；電荷逆転分布を有するペプチドは、１８Ａクラス−Ａミミックに対する脂質親和性の低下及び脂質の存在下でのより低いらせん含量を示した（Ｋａｎｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：１１４６４−１１４７２；Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１０２４８−１０２５５；Ｃｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１０２５６−１０２６２；Ｅｐａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：９３８９−９３９６；Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２８５：１３１−１４０）。
【００２１】
ヒトアポＡ−Ｉのヘリックスの配列に基づく２２アミノ酸残基を含む「コンセンサス」ペプチドも設計されている（Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １０（１）：９５−１０５；Ｖｅｎｋａｔａｃｈａｌａｐａｔｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｍｏｌ．Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ
Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，Ｉｎｄｉａｎ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｂ：５８５−５９６）。配列は、ヒトアポＡ−Ｉの仮定上のヘリックスの各々の位置で最も頻度の高い残基を特定することによって構築された。上述したペプチドと同様に、このペプチドによって形成されるヘリックスは、親水性−疎水性界面にクラスタ形成する正に荷電したアミノ酸残基、疎水性面の中心に集まる負電荷を有するアミノ酸残基及び１８０°未満の疎水性角度（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  ａｎｇｌｅ）を有する。このペプチドの２量体はＬＣＡＴを活性化する上である程度有効であるが、単量体は低い脂質結合特性を示した（Ｖｅｎｋａｔａｃｈａｌａｐａｔｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，前出）。
【００２２】
主として上述したペプチドに関するインビトロでの研究に基づき、アポＡ−Ｉの機能を模倣するペプチドを設計するための一組の「規則」が明らかになった。重要な点として、親水性−疎水性界面にクラスタ形成する正に荷電したアミノ酸残基及び疎水性面の中心にクラスタ形成する負に荷電したアミノ酸残基を有する両親媒性αヘリックスが、脂質親和性及びＬＣＡＴ活性化のために必要であると思われる（Ｖｅｎｋａｔａｃｈａｌａｐａｔｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，前出）。Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈらも、αヘリックスの疎水性面内に位置する、コンセンサス２２量体ペプチドの１３位の負電荷を有するＧｌｕ残基がＬＣＡＴ活性化において重要な役割を果たすことを指示した（Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，前出）。さらに、Ｂｒａｓｓｅｕｒは、１８０°未満の疎水性角度（ｐｈｏ角度）が最適の脂質−アポリポタンパク質複合体安定性のために必要であり、同時に脂質二重層の辺縁付近にペプチドを有する盤状粒子の形成も説明すると指示した（Ｂｒａｓｓｅｕｒ，１９９１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．６６（２
４）：１６１２０−１６１２７）。Ｒｏｓｓｅｎｅｕらも、１８０°未満の疎水性角度がＬＣＡＴ活性化のために必要であると主張した（ＷＯ９３／２５５８１号）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
しかし、アポＡ−Ｉアゴニストを設計するための「規則」を明らかにする上での進歩にもかかわらず、現在までのところ、最良のアポＡ−Ｉアゴニストは無傷アポＡ−Ｉの活性の４０％未満を有すると報告されている。文献に述べられているペプチドアゴニストのいずれもが、薬剤として有用であることは明らかにされなかった。それ故、アポＡ−Ｉの活性を模倣し、生産が比較的簡単で、費用効率の高い安定な分子の開発が求められている。好ましくは、候補分子は間接及び直接ＲＣＴを媒介する。そのような分子は、既存のペプチドアゴニストよりも低分子量であり、より広い機能スペクトルを有する。しかし、ＲＣＴの有効なメディエイタを設計するための「規則」は十分には解明されておらず、アポＡ−Ｉの機能を備える有機分子を設計するための原理は不明である。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
発明の要旨
構造：
【００２５】
【化１】
2008509228.tif 000002
【００２６】
［式中、Ａ、Ｂ及びＣはいかなる順序であってもよく、及び
Ａは、酸性基またはその生物学的等価体を含むアミノ酸またはその類似体を含み；
Ｂは、親油性基を含むアミノ酸またはその類似体を含み；及び
Ｃは、塩基性基またはその生物学的等価体を含むアミノ酸またはその類似体を含み；
αアミノまたはαカルボキシ基の少なくとも１個は、それらのそれぞれのアミノまたはカルボキシ末端アミノ酸またはその類似体から除去されている］
を含む、逆コレステロール輸送のメディエイタを開示する。
【００２７】
除去されていない場合、αアミノ基は、好ましくはアセチル、フェニルアセチル、ベンゾイル、ピボリル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル、２−ナフチル酸、ニコチン酸、ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−［式中、ｎは１−２０の範囲である］、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール及び置換飽和へテロアリールから成る群より選択される保護基でキャップされている。
【００２８】
除去されていない場合、αカルボキシ基は、好ましくはＲＮＨ［式中、Ｒ＝Ｈ、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフ
ェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール及び置換飽和へテロアリール］などのアミンから成る群より選択される保護基でキャップされている。
【００２９】
酸性基の生物学的等価体は、
【００３０】
【化２】
2008509228.tif 000003
【００３１】
から成る群より選択され得る。
塩基性基の生物学的等価体は、
【００３２】
【化３】
2008509228.tif 000004
【００３３】
から成る群より選択され得る。
１つの実施形態では、半裸出されたメディエイタは、構造：
【００３４】
【化４】
2008509228.tif 000005
【００３５】
［式中、Ｘは、
【００３６】
【化５】
2008509228.tif 000006
【００３７】
［式中、Ｘ１は、
【００３８】
【化６】
2008509228.tif 000007
【００３９】
であり；
Ｘ２は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ０−６アルキル、ＯＣＨ３、ＣＦ３またはＯＣＦ３であり；
Ｘ３は、Ｃｌ、Ｃ０−６アルキル、ＯＣＨ３であり；及び
ｎは１または２である］
から成る群より選択される］
を有し得る。
【００４０】
１つの実施形態では、半裸出されたメディエイタは、グルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、Ａｃ−Ｅ−ＢＩＰ−アグマチン、Ａｃ−ｅ−ｂｉｐ−アグマチン、Ａｃ−Ｒ−ＢＩＰ−ＧＡＢＡ、Ａｃ−ｒ−ｂｉｐ−ＧＡＢＡ、４−グアニジノブタン酸−ＢＩＰ−Ｅ−ＮＨ２、４−グアニジノブタン酸−ｂｉｐ−ｅ−ＮＨ２、グルタル酸−ＢＩＰ−Ｋ−ＮＨ２及びグルタル酸−ｂｉｐ−ｋ−ＮＨ２から成る群より選択され得る。
【００４１】
もう１つの実施形態では、半裸出されたメディエイタは、２，２−ジメチルグルタル酸−ｆ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ｆ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−ｆ−ｒ−ＮＨ２、コハク酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、コハク酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、コハク酸−Ｆ−Ｒ−ＮＨ２、コハク酸−ｆ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−ｂｉｐ−ｒ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、コハク酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、コハク酸−ｆ−ｋ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−ｆ−ｋ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−ｆ−ｋ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−Ｆ−Ｋ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、２，２−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、コハク酸−Ａｉｃ−ｒ−ＮＨ２、グルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２、テトラゾールアミドグルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ−ＮＨ２、３，３−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２及び２，２−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ−ＮＨ２から成る群より選択され得る。
【００４２】
本発明の好ましい実施形態に従った完全裸出されたメディエイタは、
【００４３】
【化７】
2008509228.tif 000008
【００４４】
【化８】
2008509228.tif 000009
【００４５】
【化９】
2008509228.tif 000010
【００４６】
【化１０】
2008509228.tif 000011
【００４７】
【化１１】
2008509228.tif 000012
【００４８】
【化１２】
2008509228.tif 000013
【００４９】
【化１３】
2008509228.tif 000014
【００５０】
【化１４】
2008509228.tif 000015
【００５１】
【化１５】
2008509228.tif 000016
【００５２】
から成る群より選択され得る。
好ましい実施形態では、本発明のメディエイタは、グルタル酸−ｂｉｐ−ｒ、Ｅ−ＢＩＰ−アグマチン、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ＢＩＰ−Ｅ、グルタル酸−ｂｉｐ−ｋ、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ｂｉｐ−ＧＡＢＡ、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ＢＩＰ−ＧＡＢＡ、グルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ｐｈｅ−ＧＡＢＡ、４，４−ジメチルグルタル酸−ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ、グルタル酸−Ｆ−Ｒ、グルタル酸−ｆ−ｒ、コハク酸−ｂｉｐ−ｒ、コハク酸−ＢＩＰ−Ｒ、コハク酸−ｆ−ｒ、ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−ｒ、ジメチルグルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ、ジメチルコハク酸−ＢＩＰ−Ｒ、コハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ジメチルコハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ジメチルコハク酸−Ｐｈｅ−Ｋ、３，３−ジメチルグルタル酸−ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−ｒ、グルタル酸−ｆ−（エタノ）アグマチン、グルタル酸−Ａｉｃ−ｒ、コハク酸−Ａｉｃ−ｒ、グルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ、（１Ｈ−テトラゾール−５−５−イル）グルタルアミド−ＢＩＰ−Ｒ、２，２−ジメチルコハク酸−Ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−Ｒ、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ｐｈｅ−アグマチン、３，３−ジメチルグルタル酸−Ｆ−アグマチン、グルタル酸−Ｐｈｅ−アグマチン（ビス−Ｂｏｃ）、グルタル酸−ｆ−シアノアグマチン、グルタル酸（テトラゾールアミド）−ＢＩＰ−アグマチン（ピリミジン）、コハク酸−ＢＩＰ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロヘキシルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ｐｈｅ−３−（ジメチルアミノ）ブタン、４，４−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、及び３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−ｂｉｐ−３−（ジメチルアミノ）プロパンから成る群より選択され得、但し非誘導体化アミノ及び／またはカルボキシ末端アミノ酸は保護基でキャップされている。
【００５３】
他の好ましい実施形態では、メディエイタは、ジメチルコハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ、またはグルタル酸−Ｆ−Ｒから選択され得る。
【００５４】
必ずしも示していないが、好ましいメディエイタの上記リスト中の非誘導体化アミノ及
び／またはカルボキシ末端アミノ酸残基は保護基でキャップされている。それ故、除去されていない場合、αアミノ基は、アセチルまたはジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニルなどの保護基でキャップされている。同様に、除去されていない場合、αカルボキシ基は、アミンまたはジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニルなどの保護基でキャップされている。言うまでもなく、ここで開示するいかなる他の保護基も使用し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５５】
好ましい実施形態の詳細な説明
本発明の好ましい実施形態におけるＲＣＴのメディエイタは、アポＡ−Ｉの機能及び活性を模倣する。広い態様では、これらのメディエイタは、３つの領域、すなわち酸性領域、親油性（例えば芳香族）領域及び塩基性領域を含む分子である。前記分子は、好ましくは正電荷を有する領域、負電荷を有する領域及び無電荷の親油性領域を含む。互いに対する領域の位置は分子の間で異なり得る；そこで、好ましい実施形態では、前記分子は、各々の分子内の３つの領域の相対位置に関わりなくＲＣＴを媒介する。一部の好ましい実施形態では、分子鋳型またはモデルは、ＲＣＴのメディエイタを形成するように何らかの順序で連結された、酸性アミノ酸由来残基、親油性アミノ酸由来残基及び塩基性アミノ酸由来残基を含むが、他の好ましい実施形態では、分子モデルは、例えばアミノ酸、フェニルアラニンのような、酸性、親油性及び塩基性領域を有する単一残基によって具現され得る。
【００５６】
一部の好ましい実施形態では、ＲＣＴの分子メディエイタは、天然Ｄ−またはＬ−アミノ酸、アミノ酸類似体（合成または半合成）及びアミノ酸誘導体の３量体を含む。例えば３量体は、残基がペプチドまたはアミド結合によって連結されている、酸性アミノ酸残基またはその類似体、芳香族または親油性アミノ酸残基またはその類似体、及び塩基性アミノ酸残基またはその類似体を含み得る。例えば３量体配列ＥＦＲは、酸性残基（グルタミン酸）、芳香族残基（フェニルアラニン）及び塩基性残基（アルギニン）を含む。ＲＣＴの分子メディエイタは、直接及び／または間接ＲＣＴ経路を増強すること（すなわちコレステロール流出を上昇させること）、ＬＣＡＴを活性化する能力、及び血清ＨＤＬ濃度を上昇させる能力を通して血清コレステロールを低下させるという共通の態様を共有する。
【００５７】
もう１つの好ましい実施形態では、逆コレステロール輸送のメディエイタは、好ましくは酸性基、親油性基及び塩基性基を含み、配列：Ｘ１−Ｘ２−Ｙ３、Ｙ１−Ｘ２−Ｘ３またはＹ１−Ｘ２−Ｙ３［式中、Ｘ１は酸性アミノ酸またはその類似体であり；Ｘ２は芳香族または親油性アミノ酸またはその類似体であり；Ｘ３は塩基性アミノ酸またはその類似体であり；Ｙ１は、αアミノ基を持たない酸性アミノ酸類似体であり；Ｙ３は、αカルボキシ基を持たない塩基性アミノ酸類似体である］を含む。アミノ末端αアミノ基が存在するとき（例えばＸ１）は、第１保護基をさらに含み、カルボキシ末端αカルボキシ基が存在するとき（例えばＸ３）は、第２保護基をさらに含む。第１（アミノ末端）保護基は、好ましくはアセチル、フェニルアセチル、ピボリル、２−ナフチル酸、ニコチン酸、ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−［式中、ｎは１−２０の範囲である］、及びアセチル、フェニルアセチル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール及び置換飽和へテロアリール等のアミドから成る群より選択される。第２（カルボキシ末端）保護基は、好ましくはＲＮＨ２［式中、Ｒ＝ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール及び置換飽和へテロアリール等］などのアミンから成る群より選択される。酸性、親油性及び塩基性アミノ酸（またはその類似体）の順序は、分子モデルの基本特徴を保持する化合物
を提供するようにありとあらゆる可能な方法で配置され得る。
【００５８】
もう１つの実施形態では、メディエイタは、約３−１０アミノ酸のペプチドまたは分子のような、より大きな実体に組み込まれ得る。
【００５９】
本発明においては、「アミノ酸」という用語はまた、一般式ＮＨ２−ＣＨＲ−ＣＯＯＨの分子またはその親アミノ酸を担持するペプチド内の残基［式中、「Ｒ」は多くの異なる側鎖の１つである］も表わすことができる。「Ｒ」は、２０個の遺伝的にコード化されたアミノ酸の１個を指す置換基であり得る。「Ｒ」はまた、２０個の遺伝的にコード化されたアミノ酸ではないものを指す置換基であり得る。本発明においては、「アミノ酸残基」という用語は、もう１つ別のアミノ酸に連結されたとき水分子を喪失した後に残存するアミノ酸の部分を指す。本発明においては、「アミノ酸類似体」という用語は、例えば酸性Ｒ基がその生物学的等価体で置換されたαアミノ基または酸性アミノ酸などの、少なくとも１個のエレメントによってアミノ酸親化合物と異なる、アミノ酸親化合物の構造誘導体を指す。本発明の「半裸出」及び「裸出」実施形態は、それ自体、これらの形態がαアミノまたはカルボキシ基などの少なくとも１個のエレメントを喪失しているという点で従来のアミノ酸構造とは異なるため、アミノ酸類似体を包含する。「修飾アミノ酸」という用語は、より特定すると、２０個の遺伝的にコード化されたアミノ酸の１個に対応しない「Ｒ」置換基を担持するアミノ酸を指し、修飾アミノ酸はそれ自体、より広いクラスのアミノ酸類似体に属する。
【００６０】
本発明においては、「完全に保護された」という用語は、アミノ及びカルボキシル末端の両方が保護基を含む好ましい実施形態を指す。
【００６１】
本発明においては、「半裸出された」という用語は、αアミノ基またはαカルボキシ基の１個がそれぞれのアミノまたはカルボキシ末端アミノ酸残基またはその類似体から失われている好ましい実施形態を指す。残りのαアミノまたはαカルボキシ基は保護基でキャップされている。
【００６２】
本発明においては、「裸出された」または「完全に裸出された」という用語は、αアミノ及びαカルボキシ基の両方がそれぞれのアミノまたはカルボキシ末端アミノ酸残基またはその類似体から除去されている好ましい実施形態を指す。
【００６３】
ある種の化合物は互変異性体として存在し得る。ジアステレオマー及び鏡像異性体を含むそのような全ての異性体は、本発明の実施形態によって包含される。ある種の化合物は互変異性体またはその混合物のいずれかとして存在すると推測される。
【００６４】
ＲＣＴ媒介
現在まで、アポＡ−Ｉアゴニストを設計する努力は、脂質の存在下で両親媒性αヘリックスを形成することができる、２２量体単位構造、例えばＡｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ
ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １０（１）：９５−１０５；Ｖｅｎｋａｔａｃｈａｌａｐａｔｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｍｏｌ．Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，  Ｉｎｄｉａｎ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｂ：５８５−５９６の「コンセンサス２２量体」に集中してきた。（例えばコンセンサス２２量体の修飾から誘導されるペプチドミメティックを対象とする米国特許第６，３７６，４６４号参照）。より長い２２量体に比べてそのような比較的短いペプチドを使用することにはいくつかの利点がある。例えば、ＲＣＴのより短いメディエイタは、生産が容易でコストもかからず、化学的及び立体配座的により安定であって、好ましい立体配座が比較的堅固なままであり、ペプチド鎖内でほとんどあるいは全く分子内相互作用が起こらず、そしてより短いペプチドはより高い度合の経口アベイラビリティを
示す。これらの短いペプチドの多数のコピーがＨＤＬまたはＬＤＬに結合して、より抑制された大型ペプチドと同じ作用を生じ得る。アポＡ−Ｉの多機能性はその多数のαヘリックスドメインの寄与に基づくと考えられるが、アポＡ−Ｉの単一機能でも、例えばＬＣＡＴ活性化でさえも、２つ以上のαヘリックスドメインによって冗長に媒介され得ることも可能である。そこで、本発明の好ましい態様では、アポＡ−Ｉの多数の機能が、単一サブドメインを対象とするＲＣＴの開示メディエイタによって模倣され得る。
【００６５】
アポＡ−Ｉの３つの機能特徴は、アポＡ−Ｉアゴニスト設計のための主要判定基準として広く認められている：（１）リン脂質と結合する能力；（２）ＬＣＡＴを活性化する能力；及び（３）細胞からのコレステロールの流出を促進する能力。好ましい実施形態の一部の様式に従ったＲＣＴの分子メディエイタは、最後の機能特徴−ＲＣＴを上昇させる能力−だけを示し得る。しかし、しばしば見過ごされる、アポＡ−Ｉのかなりの数の他の特徴は、アポＡ−Ｉを治療介入のための特に魅力的な標的にする。例えばアポＡ−Ｉは、受容体を介した工程によって肝へのコレステロール流入を指令し、ＰＬＴＰが駆動する反応によってプレβ−ＨＤＬ（末梢組織からのコレステロールの一次受容体）産生を調節する。しかし、これらの特徴は、アポＡ−Ｉミメティック分子の潜在的有用性の拡大を可能にする。アポＡ−Ｉミメティック機能を考慮することへのこの全く新しいアプローチは、直接ＲＣＴ（ＨＤＬ経路による）並びに間接ＲＣＴ（すなわち肝への流入を再指令することによってＬＤＬを循環から捕捉し、清掃する）を促進するための、ここで開示するペプチドまたはアミノ酸由来低分子の使用を可能にする。間接ＲＣＴを増強することを可能にするに、好ましい実施形態の分子メディエイタは、好ましくはリン脂質と会合して、肝に結合する（すなわち肝リポタンパク質結合部位のためのリガンドとして働く）ことができる。
【００６６】
それ故、好ましい実施形態へと導く研究努力のゴールは、選択的脂質結合立体配座を示し、直接及び／または間接逆コレステロール輸送を促進することによって肝へのコレステロール流入を上昇させ、血漿リポタンパク質プロフィールを改善し、その後アテローム性動脈硬化症病変の進行を防ぐまたは／及びさらには後退を促進する、ＲＣＴのメディエイタを特定し、設計し、合成することであった。
【００６７】
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタは、インビボでの使用の前に再溶解できるまたは再製剤できる、安定なバルクまたは単位投与形態、例えば凍結乾燥生成物として製造することができる。好ましい実施形態は、医薬製剤及び高脂血症、高コレステロール血症、冠状動脈心臓病、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、肥満、アルツハイマー病、多発性硬化症、炎症などの高脂血症に関連する状態、及び敗血症性ショックを引き起こす内毒素症のような他の状態の治療におけるそのような製剤の使用を含む。
【００６８】
好ましい実施形態を、ＲＣＴのメディエイタが血漿のＨＤＬ及びＬＤＬ成分と結合して、ＨＤＬ及びプレβ−ＨＤＬ粒子の濃度を上昇させ、ＬＤＬの血漿レベルを低下させ、それ故直接及び間接ＲＣＴを促進することができることを明らかにする実施例によって説明する。好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタは、ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２細胞）におけるヒトＬＤＬ媒介性コレステロール蓄積を上昇させる。ＲＣＴのメディエイタはまた、ＰＬＴＰを活性化する上で効率的であり、それ故プレβ−ＨＤＬ粒子の形成を促進する。ＨＤＬコレステロールの上昇は、ＲＣＴへのＬＣＡＴの関与の間接的証拠であった（ＬＣＡＴ活性化は直接には（インビトロでは）示さなかった）。動物モデルにおけるインビボでの好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタの使用は、血清ＨＤＬ濃度の上昇を生じさせる。
【００６９】
好ましい実施形態を以下の章でより詳細に述べるが、それらは、半裸出形態及び裸出形態；ＲＣＴのメディエイタの構造内で使用できる修飾アミノ酸；構造及び機能特徴；バル
ク及び単位投与製剤の製造の方法；及び使用方法を含む、ＲＣＴのメディエイタの組成物及び構造を説明する。
【００７０】
メディエイタの構造と機能
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタは一般に、アポＡ−Ｉの活性を模倣する、少なくとも１個のアミノ酸類似体を含むペプチド様分子である。一部の実施形態では、ペプチド内の少なくとも１つのアミド結合が、置換アミド、アミドの等価体またはアミドミメティックで置換されている。加えて、１またはそれ以上のアミド結合が、メディエイタの構造または活性に有意に干渉しないペプチドミメティックまたはアミドミメティック成分で置換され得る。適切なアミドミメティック成分は、例えばＯｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６：３０３９−３０４９に述べられている。他の好ましい実施形態では、酸性及び／または塩基性Ｒ基がその生物学的等価体で置換されている。
【００７１】
本発明においては、遺伝的にコード化されたＬ−鏡像異性体アミノ酸についての略語は従来通りであり、以下の通りである：Ｄ−アミノ酸は小文字で表わす、例えばＤ−アラニン＝ａ等。
【００７２】
【表１】
2008509228.tif 000017
【００７３】
ＲＣＴのメディエイタにおけるある種のアミノ酸残基は、メディエイタの活性に有意に有害な影響を及ぼさずに、さらには多くの場合活性を増強して、他のアミノ酸残基またはその類似体で置換することができる。それ故、構造内の少なくとも１個の規定アミノ酸残基がもう１つ別のアミノ酸残基またはその誘導体及び／または類似体で置換されている、ＲＣＴのメディエイタの変化した形態または突然変異形態も、好ましい実施形態によって考慮される。本発明の好ましい実施形態では、アミノ酸置換は保存的である、すなわち置換するアミノ酸残基またはその類似体は、置換されるアミノ酸残基と類似の物理的及び化学的性質を有することが認識される。
【００７４】
保存的アミノ酸置換を決定するために、主としてアミノ酸側鎖の物理−化学的性質に依存して、アミノ酸を２つの主要カテゴリ−親水性と疎水性−に好都合に分類することができる。これら２つの主要カテゴリは、アミノ酸側鎖の性質をより明白に定義する小カテゴリにさらに分類することができる。例えば親水性アミノ酸のクラスは、酸性、塩基性及び極性アミノ酸にさらに細分することができる。疎水性アミノ酸のクラスは、非極性及び芳香族アミノ酸にさらに細分することができる。アポＡ−Ｉを定義するアミノ酸の様々なカテゴリの定義は以下の通りである：
「親水性アミノ酸」という用語は、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７９：１．２５−１４２の正常化コンセンサス疎水性スケールに従ってゼロ未満の疎水性を示すアミノ酸を指す。遺伝的にコード化された親水性アミノ酸は、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｌｙｓ（Ｋ）及びＡｒｇ（Ｒ）を含む。
【００７５】
「疎水性アミノ酸」という用語は、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７９：１２５−１４２の正規化コンセンサス疎水性スケールに従ってゼロより大きい疎水性を示すアミノ酸を指す。遺伝的にコード化された疎水性アミノ酸は、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、  Ｍｅｔ（Ｍ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｙ（Ｇ）及びＴｙｒ（Ｙ）を含む。
【００７６】
「酸性アミノ酸」という用語は、７未満の側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を指す。酸性アミノ酸は、典型的には水素イオンの喪失の故に生理的ｐＨで負に荷電した側鎖を有する。遺伝的にコード化された酸性アミノ酸は、Ｇｌｕ（Ｅ）及びＡｓｐ（Ｄ）を含む。
【００７７】
「塩基性アミノ酸」という用語は、７より大きい側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を指す。塩基性アミノ酸は、典型的にはヒドロニウムイオンとの会合の故に生理的ｐＨで正に荷電した側鎖を有する。遺伝的にコード化された塩基性アミノ酸は、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ａｒｇ（Ｒ）及びＬｙｓ（Ｋ）を含む。
【００７８】
「極性アミノ酸」という用語は、生理的ｐＨで無電荷であるが、２個の原子によって共有される電子対が一方の原子により近接して保持される少なくとも１つの結合を持つ側鎖を有する、親水性アミノ酸を指す。遺伝的にコード化された極性アミノ酸は、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）及びＴｈｒ（Ｔ）を含む。
【００７９】
「非極性アミノ酸」という用語は、生理的ｐＨで無電荷であるが、２個の原子によって共有される電子対が一般に２個の原子の各々によって等しく保持される結合を持つ側鎖を有する（すなわち側鎖は極性ではない）、疎水性アミノ酸を指す。遺伝的にコード化された非極性アミノ酸は、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ｇｌｙ（Ｇ）及びＡｌａ（Ａ）を含む。
【００８０】
「芳香族アミノ酸」という用語は、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を有する側鎖を持つ疎水性アミノ酸を指す。芳香環またはヘテロ芳香環は、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＮ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＮＯ、−ＮＨ２、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ等［式中、各々のＲは独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルケニル、置換（Ｃ１−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキニル、置換（Ｃ１−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ５−Ｃ２０）アリール、置換（Ｃ５−Ｃ２０）アリール、（Ｃ６−Ｃ２６）アルクアリール、置換（Ｃ６−Ｃ２６）アルクアリール、５−２０員へテロアリール、置換５−２０員へテロアリール、６−２６員アルクヘテロアリールまたは置換６−２６員アルクヘテロアリールである］のような
１またはそれ以上の置換基を含み得る。遺伝的にコード化された芳香族アミノ酸は、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｙｒ（Ｙ）及びＴｒｐ（Ｗ）を含む。
【００８１】
「脂肪族アミノ酸」という用語は、脂肪族炭化水素側鎖を有する疎水性アミノ酸を指す。遺伝的にコード化された脂肪族アミノ酸は、Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）及びＩｌｅ（Ｉ）を含む。
【００８２】
アミノ酸残基Ｃｙｓ（Ｃ）は、他のＣｙｓ（Ｃ）または他のスルファニル含有アミノ酸とジスルフィド架橋を形成することができるという点で特異である。Ｃｙｓ（Ｃ）残基（及び−ＳＨ含有側鎖を有する他のアミノ酸）が、低い遊離−ＳＨまたは酸化ジスルフィド架橋形態のいずれかのペプチドとして存在し得ることは、Ｃｙｓ（Ｃ）残基がペプチドに正味の疎水性または親水性特徴を与えるかどうかに影響を及ぼす。Ｃｙｓ（Ｃ）は、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇの正規化コンセンサススケール（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，１９８４，前出）によれば０．２９の疎水性を示すが、好ましい実施形態のためには、Ｃｙｓ（Ｃ）は、上記で定義した一般的分類にもかかわらず、極性親水性アミノ酸として分類されることが理解されねばならない。
【００８３】
当業者に認識されるように、上記で定義したカテゴリは相互に排他的ではない。それ故、２またはそれ以上の物理−化学的性質を示す側鎖を有するアミノ酸は多数のカテゴリに含まれ得る。例えばＴｙｒ（Ｙ）などの極性置換基でさらに置換された芳香族部分を有するアミノ酸側鎖は、芳香族疎水特性と極性または親水特性の両方を示すことがあり、それ故芳香族と極性カテゴリの両方に含まれ得る。アミノ酸の適切な分類は、特にここで提供する詳細な開示に照らして、当業者に明白である。
【００８４】
上記で定義したカテゴリを遺伝的にコード化されたアミノ酸によって例示したが、アミノ酸置換は遺伝的にコード化されたアミノ酸に限定される必要はなく、ある種の実施形態では、好ましくは遺伝的にコード化されたアミノ酸に限定されない。実際に、ＲＣＴの好ましいメディエイタの多くは遺伝的にコード化されないアミノ酸を含む。それ故、天然に生じる遺伝的にコード化されたアミノ酸に加えて、ＲＣＴのメディエイタ内のアミノ酸残基は、天然に生じる非コード化アミノ酸及び合成アミノ酸で置換され得る。
【００８５】
ＲＣＴのメディエイタのために有用な置換を提供する、一部の一般的に遭遇されるアミノ酸は、β−アラニン（β−Ａｌａ）及び３−アミノプロピオン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、４−アミノ酪酸等のような他のω−アミノ酸；α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）；ε−アミノヘキサン酸（Ａｈａ）；δ−アミノ吉草酸（Ａｖａ）；Ｎ−メチルグリシンまたはサルコシン（ＭｅＧｌｙ）；オルニチン（Ｏｒｎ）；シトルリン（Ｃｉｔ）；ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ＢｕＡ）；ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ＢｕＧ）；Ｎ−メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；フェニルグリシン（Ｐｈｇ）；シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；ノルロイシン（Ｎｌｅ）；ナフチルアラニン（Ｎａｌ）；４−フェニルフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））、２−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（２−Ｆ））；３−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｆ））；４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））；ペニシラミン（Ｐｅｎ）；１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）；β−２−チエニルアラニン（Ｔｈｉ）；メチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；ホモアルギニン（ｈＡｒｇ）；Ｎ−アセチルリシン（ＡｃＬｙｓ）；２，４−ジアミノ酪酸（Ｄｂｕ）；２，３−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）；ｐ−アミノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（ｐＮＨ２））；Ｎ−メチルバリン（ＭｅＶａｌ）；ホモシステイン（ｈＣｙｓ）；ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅ）及びホモセリン（ｈＳｅｒ）；ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、ホモプロリン（ｈＰｒｏ）、Ｎ−メチル化アミノ酸及びペプトイド（Ｎ−置換グリシン）を含むが、これらに限定されない。
【００８６】
ここで特に言及しない他のアミノ酸残基は、ここで提供する定義に照らして、それらの観察される物理的及び化学的性質に基づいて容易に分類することができる。
【００８７】
上記で定義したカテゴリに従った遺伝的にコード化された及び一般的な非コード化アミノ酸の分類を以下の表２に要約する。表２は、例示だけを目的とするものであり、ここで述べるＲＣＴのメディエイタを置換するために使用できるアミノ酸残基及び誘導体の網羅的リストを意味しないことは理解されるべきである。
【００８８】
【表２】
2008509228.tif 000018
【００８９】
ここで特に言及しない他のアミノ酸残基は、ここで提供する定義に照らして、それらの観察される物理的及び化学的性質に基づいて容易に分類することができる。
【００９０】
ほとんどの場合、ＲＣＴのメディエイタのアミノ酸はＤ−鏡像異性体アミノ酸で置換されるが、置換はＤ−鏡像異性体アミノ酸に限定されない。それ故、Ｄ−アミノ酸が同一のＬ−アミノ酸（例えばＤ−Ａｒｇ→Ｌ−Ａｒｇ）または同じカテゴリまたは小カテゴリのＬ−アミノ酸（例えばＤ−Ａｒｇ→Ｄ−Ｌｙｓ）で置換されている状態、及びその逆の状態も、「突然変異した」または「変化した」形態の定義に包含される。メディエイタは、好都合には少なくとも１個のＤ−鏡像異性体アミノ酸から成り得る。そのようなＤ−アミノ酸を含むメディエイタは、もっぱらＬ−アミノ酸からなるペプチドよりも口腔、腸または血清中での分解に対してより安定であると思われる。
【００９１】
リンカー
ＲＣＴのメディエイタは、頭部−尾部様式（すなわちＮ末端−Ｃ末端）、頭部−頭部様式（すなわちＮ末端−Ｎ末端）、尾部−尾部様式（すなわちＣ末端−Ｃ末端）、またはそれらの組合せで、結合または連結され得る。リンカーは、２個のアミノ酸またはその類似体を互いに共有結合することができる何らかの二官能性分子であり得る。そこで、適切なリンカーは、官能基がペプチドのＮ及び／またはＣ末端に共有結合することができる二官能性分子である。ペプチドのＮまたはＣ末端への結合に適する官能基は、そのような共有結合形成を生じさせるための適切な化学と同様に、当技術分野において周知である。
【００９２】
十分な長さと柔軟性のリンカーは、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｃｙｓ−Ｃｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ［式中、ｎは１−１２、好ましくは４−６である］；Ｈ２Ｎ−アリール−ＣＯＯＨ及び炭水化物を含むが、これらに限定されない。しかし、一部の実施形態では、本来別々のリンカーを使用しない。その代わりに、酸性
、親油性及び塩基性成分が全て単一分子の部分である。
【００９３】
ＲＣＴのメディエイタの構造内で使用される修飾アミノ酸
好ましい実施形態では、保護された、半裸出された及び裸出された形態は、修飾アミノ酸、すなわち２０個の遺伝的コード化されたＲ基の１個に対応しないＲ置換基を担持するアミノ酸をさらに含む。
【００９４】
ここで使用する「生物学的等価体」、「生物学的等価性置換」、「生物学的等価性」という用語及び密接に関連する用語は、当技術分野で一般的に認識されているのと同じ意味を有する。生物学的等価体は、電子の周辺層（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｌａｙｅｒｓ  ｏｆ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｓ）が同一とみなし得る原子、イオンまたは分子である。生物学的等価体という用語は通常、全体的分子そのものに対して、全体的分子の部分を意味するために使用される。生物学的等価性置換は、最初の生物学的等価体の生物活性を維持するまたはわずかに改変することを予想して、１個の生物学的等価体を、もう１つ別の生物学的等価体を置換するために使用することを含む。この場合の生物学的等価体は、それ故、類似の大きさ、形状及び電子密度を有する原子または原子の群である。生物学的等価性は、提案される生物学的等価性置換が類似の生物学的性質の維持をもたらすという妥当な予想から生じる。そのような妥当な予想は、構造的類似性だけに基づき得る。これは、生物学的等価体が結合しているまたは何らかの方法で生物学的等価体に作用する、関与する受容体の特徴的ドメイン等に関して多くの詳細が公知である場合に特に当てはまる。
【００９５】
カルボン酸およびグアニジンの生物学的等価体の実施例を下記に示す。
【００９６】
【化１６】
2008509228.tif 000019
【００９７】
【化１７】
2008509228.tif 000020
【００９８】
構造及び機能の分析
活性化合物を選択するために、上述した多量体を含む、好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタの構造及び機能を検定することができる。例えばペプチドまたはペプチド類似体を、脂質に結合する、脂質と複合体を形成する、ＬＣＡＴを活性化する、及びコレステロール流出を促進する等の能力に関して検定することができる。
【００９９】
ペプチドの構造及び／または機能を分析するための方法及びアッセイは当技術分野において周知である。好ましい方法を以下の実施例で提供する。例えば以下で述べる核磁気共鳴（ＮＭＲ）アッセイは、ペプチドまたはペプチド類似体の構造、特に脂質の存在下でのらせん度を分析するために使用できる。脂質に結合する能力は、以下で述べる蛍光分光測定法を用いて判定することができる。ＬＣＡＴを活性化するペプチド及び／またはペプチド類似体の能力は、以下で述べるＬＣＡＴ活性化を用いて容易に測定できる。以下で述べるインビトロ及びインビボアッセイは、半減期、分布、コレステロール流出及びＲＣＴへの作用を評価するために使用できる。
【０１００】
ＲＣＴのメディエイタは、好ましい実施形態によってさらに定義することができる。
１つの好ましい実施形態では、３つの独立した領域：酸性領域、芳香族または親油性領域、及び塩基性領域を有するアミノ酸ベースの組成物を含む分子が存在する。互いに対する領域の相対位置は分子メディエイタの間で異なり得る；前記分子は、各々の分子内の３つの領域の位置に関わりなくＲＣＴを媒介する。
【０１０１】
もう１つの好ましい実施形態では、３量体の芳香族領域は、酸性または塩基性側鎖を有するニコチン酸で構成され得る。
【０１０２】
もう１つの好ましい実施形態では、３量体の芳香族領域は、４−フェニルフェニルアラニンで構成され得る。
【０１０３】
もう１つの好ましい変法では、アミノ酸ベースの３量体構造を含む分子メディエイタは、場合によりＲＣＴの分子メディエイタの物理化学的性質を改善し、脂肪または親油性物質の体内への天然または活性輸送（吸収）系を利用するために、アミノまたはカルボキシル末端上の親油性基によって一方の末端または両端でキャップすることができる。キャッピング基は、ＤまたはＬ鏡像異性体または非鏡像異性体分子または基であり得る。好ましい実施形態では、Ｎ末端キャッピング基は、アセチル、フェニルアセチル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール、置換飽和へテロアリール等から成る群より選択される。Ｃ末端は、好ましくはＲＮＨ２［式中、Ｒ＝ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール、置換飽和へテロアリール等］のようなアミンでキャップされる。
【０１０４】
遺伝的にコード化されたアミノ酸のＤ−鏡像異性体のために使用される略語は、表１に示す１文字表記の小文字等価物である。例えば「Ｒ」はＬ−アルギニンを指示し、「ｒ」はＤ−アルギニンを指示する。異なる規定（例えば「ＯＨ」）がない限り、Ｎ−末端はアセチル化されており、Ｃ末端はアミド化されている。
【０１０５】
ＰｈＡｃは、フェニルアセチル化を表わす。
ＢＩＰは、ビフェニルアラニンを表わす。
【０１０６】
アミノ酸置換は、遺伝的にコード化されたアミノ酸に限定される必要はなく、ある種の実施形態では、好ましくは遺伝的にコード化されたアミノ酸に限定されない。それ故、天然に生じる遺伝的にコード化されたアミノ酸に加えて、ＲＣＴのメディエイタ内のアミノ酸残基は、天然に生じる非コード化アミノ酸及び合成アミノ酸で置換され得る。
【０１０７】
代謝的に保護された形態
ＲＣＴメディエイタの好ましい代謝的に保護された形態の例を以下に示す。酸に対して置換されたα炭素を有する化合物は、脱離反応に対して安定であり得る。置換されたグアニジンは、脱離反応を防ぐのに役立ち得る。
【０１０８】
【化１８】
2008509228.tif 000021
【０１０９】
半裸出されたメディエイタ
ＲＣＴメディエイタの好ましい半裸出された実施形態の例を、合成スキームと共に以下に示す。
【０１１０】
【化１９】
2008509228.tif 000022
【０１１１】
【化２０】
2008509228.tif 000023
【０１１２】
ＡＡ１はビフェニルを示し、ＡＡ２はアルギニンまたはリシンを示す。
【０１１３】
【化２１】
2008509228.tif 000024
【０１１４】
スキーム２
【０１１５】
【化２２】
2008509228.tif 000025
【０１１６】
【化２３】
2008509228.tif 000026
【０１１７】
【化２４】
2008509228.tif 000027
【０１１８】
裸出形態
ＲＣＴメディエイタの好ましい裸出形態の例を以下に示す。
【０１１９】
【化２５】
2008509228.tif 000028
【０１２０】
【化２６】
2008509228.tif 000029
【０１２１】
ＲＣＴメディエイタの好ましい裸出形態のさらなる例を以下に示す。酸の代わりにテトラゾールアミドを有する化合物は、脱離反応に対して安定であり得る。
【０１２２】
【化２７】
2008509228.tif 000030
【０１２３】
合成スキームを含む、ＲＣＴメディエイタの好ましい裸出形態の例を以下に示す。
スキーム３
【０１２４】
【化２８】
2008509228.tif 000031
【０１２５】
スキーム４
【０１２６】
【化２９】
2008509228.tif 000032
【０１２７】
スキーム５
【０１２８】
【化３０】
2008509228.tif 000033
【０１２９】
ＲＣＴメディエイタにおいて使用できる、一部の生物学的に等価の修飾アミノ酸の例を以下に示す。
【０１３０】
【化３１】
2008509228.tif 000034
【０１３１】
好ましいメディエイタ
ある種の好ましい実施形態では、メディエイタは、グルタル酸−ｂｉｐ−ｒ、Ｅ−ＢＩＰ−アグマチン、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ＢＩＰ−Ｅ、グルタル酸−ｂｉｐ−ｋ、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ｂｉｐ−ＧＡＢＡ、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ＢＩＰ−ＧＡＢＡ、グルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン、（４−カルバモイルブチル）グアニジン−ｐｈｅ−ＧＡＢＡ、４，４−ジメチルグルタル酸−ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ、グルタル酸−Ｆ−Ｒ、グルタル酸−ｆ−ｒ、コハク酸−ｂｉｐ−ｒ、コハク酸−ＢＩＰ−Ｒ、コハク酸−ｆ−ｒ、ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−ｒ、ジメチルグルタル酸−ＢＩＰ−Ｒ、ジメチルコハク酸−ＢＩＰ−Ｒ
、コハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ジメチルコハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ジメチルコハク酸−Ｐｈｅ−Ｋ、３，３−ジメチルグルタル酸−ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−ｒ、グルタル酸−ｆ−（エタノ）アグマチン、グルタル酸−Ａｉｃ−ｒ、コハク酸−Ａｉｃ−ｒ、グルタル酸−Ａｉｃ−Ｒ、（１Ｈ−テトラゾール−５−５−イル）グルタルアミド−ＢＩＰ−Ｒ、２，２−ジメチルコハク酸−Ｐｈｅ−アグマチン、ジメチルコハク酸−Ａｉｃ−Ｒ、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ｐｈｅ−アグマチン、３，３−ジメチルグルタル酸−Ｆ−アグマチン、グルタル酸−Ｐｈｅ−アグマチン（ビス−Ｂｏｃ）、グルタル酸−ｆ−シアノアグマチン、グルタル酸（テトラゾールアミド）−ＢＩＰ−アグマチン（ピリミジン）、コハク酸−ＢＩＰ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロヘキシルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−ジメチルグルタル酸−Ａｉｃ−アグマチン（ピリミジン）、３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−Ｐｈｅ−３−（ジメチルアミノ）ブタン、４，４−ジメチルグルタル酸−ｂｉｐ−アグマチン（ピリミジン）、及び３，３−スピロシクロペンチルグルタル酸−ｂｉｐ−３−（ジメチルアミノ）プロパンから成る群より選択され、非誘導体化アミノ及び／またはカルボキシ末端アミノ酸は保護基でキャップされている。他の好ましいメディエイタは、ジメチルコハク酸−ｐｈｅ−ｋ、ＭｅＯ２Ｃ−フェニル−ｆ−フェニル−ＮＨ２、ジメチルグルタル酸−Ｆ−Ｒ、またはグルタル酸−Ｆ−Ｒから選択され得る。
【０１３２】
必ずしも示していないが、好ましいメディエイタの上記リスト中の非誘導体化アミノ及び／またはカルボキシ末端アミノ酸残基は保護基でキャップされている。それ故、除去されていない場合、αアミノ基は、アセチルまたはジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニルなどの保護基でキャップされている。同様に、除去されていない場合、αカルボキシ基は、アミンまたはジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニルなどの保護基でキャップされている。言うまでもなく、いかなる他の保護基も使用し得る。例えばアミノ末端保護基は、好ましくはアセチル、フェニルアセチル、ピボリル、２−ナフチル酸、ニコチン酸、ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−［式中、ｎは１−２０の範囲である］、及びアセチル、フェニルアセチル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール及び置換飽和へテロアリール等のアミドから選択され、一方カルボキシ末端保護基は、ＲＮＨ２［式中、Ｒ＝ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−フェニル、ナフチル、置換ナフチル、ＦＭＯＣ、ビフェニル、置換フェニル、置換ヘテロ環、アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、縮合シクロアルキル、飽和へテロアリール、置換飽和へテロアリール等］のようなアミンから成る群より選択される。
【０１３３】
合成方法
好ましい実施形態のメディエイタは、ペプチドの製造のための実質的にいかなる技術分野で公知の手法を用いても製造し得る。例えばペプチドは、従来の段階的溶解法または固相ペプチド合成法を用いて製造し得る。
【０１３４】
ＲＣＴの半裸出メディエイタは、従来の段階的溶解法または固相ペプチド合成法を用いて製造し得る（例えばＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ
ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，１９９７，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ  Ｆｌａ．、及びその中で引用される参考文献；Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ａｔｈｅｒｔｏｎ  ＆  Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｅｄｓ．，１９８９，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ、及びその中で引用される参考文献参照）。
【０１３５】
従来の固相合成法では、第一アミノ酸の結合は、オリゴペプチドのカルボキシル末端を形成するためにそのカルボキシル末端（Ｃ末端）を誘導体化樹脂と化学反応させることを必要とする。アミノ酸のαアミノ末端は、典型的には、さもなければ反応し得るアミノ基がカップリング反応に加わるのを防ぐためにｔ−ブトキシ−カルボニル基（Ｂｏｃ）または９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基でブロックされる。アミノ酸の側鎖基も、反応性である場合は、エーテル、チオエーテル、エステル及びカルバメートの形態の様々なベンジル由来の保護基によってブロック（または保護）される。
【０１３６】
次の工程及びその後の反復サイクルは、αアミノ保護基を除去するためにアミノ末端（Ｎ末端）樹脂結合アミノ酸（またはペプチド鎖の末端残基）を脱保護し、その後、次のブロックされたアミノ酸を化学的に付加（カップリング）することを含む。この工程を反復するが、対象とするペプチド鎖全体を合成するためには多くのサイクルが必要である。各々のカップリング及び脱保護工程の後、残留反応物を除去するために樹脂結合ペプチドを十分に洗浄した後、次の工程に進む。固体支持体粒子は、樹脂及び樹脂結合ペプチドを多孔性開口部を有するカラムまたは装置内に保持しながら容易にろ過及び洗浄することができるため、所与の工程での試薬の除去を容易にする。
【０１３７】
合成ペプチドは、そのＣ末端アミノ酸上にアミドまたはカルボキシル基を残して樹脂からペプチドを開裂する、酸触媒作用（典型的にはフッ化水素酸またはトリフルオロ酢酸による）によって樹脂から放出し得る。酸分解切断はまた、合成ペプチド内のアミノ酸の側鎖から保護基を除去するためにも役立つ。完成したペプチドは、その後様々なクロマトグラフィ法のいずれかによって精製することができる。
【０１３８】
好ましい実施形態に従って、ＲＣＴのペプチド及びペプチド誘導体メディエイタを、Ｎａ−ＦＭＯＣ化学を用いた固相合成法によって合成した。Ｎａ−ＦＭＯＣ保護アミノ酸及びリンクアミドＭＢＨＡ樹脂及びＷａｎｇ樹脂は、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）またはＣｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｌ（Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬ）より購入した。他の化学物質及び溶媒は以下のソースから購入した：トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、アニソール、１，２−エタンジチオール、チオアニソール、ピペリジン、無水酢酸、２−ナフトエ酸及びピバル酸（ｐｉｖａｌｏｉｃ  ａｃｉｄ）（Ａｌｄｒｉｃｈ，
Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  ＷＩ）、ＨＯＢｔ及びＮＭＰ（Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｌ，Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬ）、ジクロロメタン、メタノール及びＨＰＬＣグレードの溶媒はＦｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡより。ペプチドの純度はＬＣ／ＭＳによって検査した。ペプチドの精製は、Ｃ１８結合シリカカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｐｅｃ分取カラム、ＯＤＳ−８０ＴＭ、寸法：２１．５ｍｍｘ３０ｃｍ）での分取ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ）を用いて実施した。ペプチドを勾配系［Ｂ溶媒（アセトニトリル：０．１％ＴＦＡを含む水  ６０：４０、）５０％−９０％］で溶出した。
【０１３９】
全てのペプチドを、リンクアミドＭＢＨＡ樹脂（０．５−０．６６ｍｍｏｌ／ｇ）またはワン樹脂（１．２ｍｍｏｌ／ｇ）を用いて、固相法によって段階的に合成した。側鎖の保護基は、Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）及びＡｓｐ（ＯｔＢｕ）であった。各々のＦＭＯＣ保護アミノ酸を、１．５−３倍過剰の保護アミノ酸を用いてこの樹脂に結合した。カップリング試薬はＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）及びジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）であり、カップリングをニンヒドリン試験によって観測した。ＦＭＯＣ基を、ＮＭＰ中２０％ピペリジンによる３０−６０分間の処理、次にＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｃｌ２中１０％ＴＥＡ、メタノール及びＣＨ２Ｃｌ２での連続洗浄によって除去した。カップリング工程の後に、必要に応じてアセチル化または他のキャッピング基による処理を実施した。
【０１４０】
ペプチドをペプチド樹脂から開裂し、側鎖保護基を全て除去するために、ＴＦＡ、チオアニソール、エタンジオール及びアニソール（９０：５：３：２、ｖ／ｖ）の混合物を使用した（室温で４−５時間）。粗ペプチド混合物を半融ガラス漏斗からろ過し、ＴＦＡで洗った（２−３回）。ろ液を濃厚シロップに濃縮し、低温エーテルに添加した。一晩冷蔵庫内に保持し、遠心分離した後、ペプチドが白色固体として沈殿した。溶液を傾瀉し、固体をエーテルで十分に洗った。生じた粗ペプチドを緩衝液（０．１％ＴＦＡを含む、アセトニトリル：水  ６０：４０）に溶解し、乾燥した。粗ペプチドを、４０分間で５０％−９０％Ｂの勾配系［緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含む水、緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含む、アセトニトリル：水（６０：４０）］で分取Ｃ−１８カラム（逆相）を用いるＨＰＬＣによって精製した。純粋な分画を、例えばＳｐｅｅｄｖａｃまたは凍結乾燥によって真空中で濃縮した。収率は５％−２０％の範囲であった。
【０１４１】
あるいは、好ましい実施形態のペプチドは、例えばその開示全体が参照してここに組み込まれる、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３７（７）：９３３−９３６；Ｂａｃａ，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：１８８１−１８８７；Ｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４５：２０９−２１６；Ｓｃｈｎｏｌｚｅｒ  ａｎｄ  Ｋｅｎｔ，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：２２１−２２５；Ｌｉｕ  ａｎｄ  Ｔａｍ，１９９４，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６（１０）：４１４９−４１５３；ａｎｄ  Ｔａｍ，１９９４，ＰＮＡＳ．ＵＳＡ  ９１：６５８４−６５８８；Ｙａｍａｓｈｉｒｏ  ａｎｄ  Ｌｉ，１９８８，Ｉｎｔ．Ｊ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３１：３２２−３３４；Ｎａｋａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ａｍ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７：７０８７−７０８３；Ｎｏｋｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９８８：１６６−１６８；Ｋｎｅｉｂ−Ｃｏｒｄｏｎｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３５：５２７−５３８に述べられているように、セグメント縮合、すなわちより大きなペプチド鎖を形成するように小さな成分ペプチド鎖を連結することによって製造し得る。好ましい実施形態のペプチドを合成するために有用な他の方法は、Ｎａｋａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７：７０８７−７０９２に述べられている。
【０１４２】
セグメント縮合によって生産されるペプチドに関して、カップリング時間を上昇させることによって縮合工程のカップリング効率を有意に高めることができる。典型的には、カップリング時間を上昇させることは、生成物のラセミ化の上昇をもたらす（Ｓｉｅｂｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，１９７０，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  ５３：２１３５−２１５０）。Ｎ及び／またはＣ末端保護基を含むＲＣＴのメディエイタは、有機化学の標準手法を用いて製造し得る。例えば、ペプチドのＮ末端をアシル化するまたはペプチドのＣ末端をアミド化またはエステル化するための方法は、当技術分野において周知である。Ｎ及び／またはＣ末端における他の修飾を実施する様式は、末端保護基を結合するために必要に応じて何らかの側鎖官能基を保護する様式と同様に、当業者には明白である。
【０１４３】
同様に、例えばペプチドのＮ末端またはペプチドのＣ末端上の保護基の脱保護のための方法は当技術分野において周知である。Ｎ及び／またはＣ末端における他の修飾を実施する様式は、末端保護基を除去するために必要に応じて何らかの側鎖官能基を脱保護する様式と同様に、当業者には明白である。
【０１４４】
医薬上許容される塩（対イオン）は、イオン交換クロマトグラフィまたは当技術分野において周知の他の方法によって好都合に製造できる。
【０１４５】
付加的な化学合成アミノ酸由来の保護された化合物を以下の表３に示す。
【０１４６】
【表３】
2008509228.tif 000035
【０１４７】
医薬製剤及び治療の方法
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタは、限定を伴わずに、血清ＨＤＬ濃度を上昇させること、ＬＣＡＴを活性化すること及びコレステロール流出を促進することが有益である状態を含む、血清コレステロールを低下させることが有益である、動物、特にヒトを含む哺乳動物における何らかの疾患を治療するために使用することができる。そのような状態は、高脂血症、特に高コレステロール血症、及びアテローム性動脈硬化症（アテローム性動脈硬化症の治療及び予防を含む）及び冠状動脈疾患などの心臓血管疾患；再狭窄（例えばバルーン血管形成術などの医学的処置の結果として発現するアテローム硬化性プラークを予防するまたは治療する）；及び虚血、及びしばしば敗血症性ショックを生じさせる内毒素症のような他の疾患を含むが、これらに限定されない。ＲＣＴのメディエイタは、単独でまたは前記状態を治療するために用いられる他の薬剤との併用療法において使用することができる。そのような療法は、関係薬剤の同時または連続投与を含むが、これらに限定されない。
【０１４８】
例えば高コレステロール血症またはアテローム性動脈硬化症の治療において、ＲＣＴの分子メディエイタの製剤は、現在使用されているコレステロール低下治療、例えば胆汁酸樹脂、ナイアシン及び／またはスタチン、のいずれか１つまたはそれ以上と共に投与することができる。そのような併用治療レジメンは、各々の薬剤がコレステロール合成及び輸送における異なる標的に作用するため、特に有益な治療効果を生じ得る；すなわち胆汁酸樹脂はコレステロール再循環、カイロミクロン及びＬＤＬ個体群に作用を及ぼす；ナイアシンは主としてＶＬＤＬ及びＬＤＬ個体群に作用する；スタチンは、コレステロール合成を阻害し、ＬＤＬ個体群を低下させる（及びおそらくＬＤＬ受容体発現を上昇させる）；一方ＲＣＴのメディエイタはＲＣＴに影響を及ぼし、ＨＤＬを上昇させ、ＬＣＡＴ活性を上昇させ、コレステロール流出を促進する。
【０１４９】
ＲＣＴのメディエイタは、高脂血症、高コレステロール血症及び／またはアテローム性動脈硬化症などの心臓血管疾患を治療するためにフィブレートと組み合わせて使用し得る。
【０１５０】
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタは、内毒素によって誘発される敗血症性ショックを治療するために現在使用される抗菌薬及び抗炎症薬と組み合わせて使用することができる。
【０１５１】
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタは、ＲＣＴのメディエイタを循環中に送達するために様々な方法で、好ましくは経口投与によって、被験者に投与することができる、ペプチドベースの組成物としてまたはペプチド−脂質複合体として製剤することができる。例示的な製剤及び治療レジメンを以下で述べる。
【０１５２】
もう１つの好ましい実施形態では、高コレステロール血症及び／またはアテローム性動脈硬化症の１またはそれ以上の症状を改善する及び／または予防するための方法を提供する。前記方法は、好ましくは生物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトに、好ましい実施形態のメディエイタ（またはそのようなペプチドのミメティック）の１またはそれ以上を投与することを含む。メディエイタは、ここで述べるように、注射、坐薬、鼻内噴霧、徐放性薬剤移植、経皮パッチ等を含むが、これらに限定されない、多くの標準方法のいずれかに従って投与することができる。１つの特に好ましい実施形態では、メディエイタを経口的に（例えばシロップ、カプセルまたは錠剤として）投与する。
【０１５３】
前記方法は、好ましい実施形態の単一ポリペプチドの投与あるいは２またはそれ以上の異なるポリペプチドの投与を含む。ポリペプチドは、単量体としてあるいは二量体、オリゴマーまたはポリマー形態で提供され得る。ある種の実施形態では、多量体は会合した単量体（例えばイオンによってまたは疎水結合によって）を含み得るが、ある種の他の多量体は共有結合した単量体（直接結合またはリンカーを通して）を含む。
【０１５４】
好ましい実施形態をヒトにおける使用に関して述べるが、動物用、例えば獣医学的使用にも適する。それ故好ましい生物は、ヒト、非ヒト霊長動物、イヌ、ウマ、ネコ、ブタ、有蹄動物、ｌａｒｇｏｍｏｒｐｈｓ等を含むが、これらに限定されない。
【０１５５】
好ましい実施形態の方法は、高コレステロール血症及び／またはアテローム性動脈硬化症の１またはそれ以上の症状（例えば高血圧、プラークの形成及び断裂、心臓発作、狭心症または卒中などの臨床事象の低減、高レベルの低密度リポタンパク質、高レベルの超低密度リポタンパク質、または炎症性タンパク質等）を示すヒトまたは非ヒト動物に限定されず、予防に関して有用である。そこで、好ましい実施形態のメディエイタ（またはそのミメティック）は、高コレステロール血症及び／またはアテローム性動脈硬化症の１またはそれ以上の症状の発症／発現を予防するために生物に投与し得る。これに関して特に好ましい被験者は、アテローム性動脈硬化症についての１またはそれ以上の危険因子（例えば家族歴、高血圧、肥満、高いアルコール消費量、喫煙、高い血中コレステロール、高い血中トリグリセリド、高い血中ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＩＤＬまたは低いＨＤＬ、糖尿病、または糖尿病の家族歴、高い血中脂質、心臓発作、狭心症または卒中等）を示す被験者である。好ましい実施形態は、医薬製剤及び高脂血症、高コレステロール血症、冠状動脈心臓病、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、肥満、アルツハイマー病、多発性硬化症、炎症などの高脂血症に関連する状態、及び敗血症性ショックを引き起こす内毒素症のような他の状態の治療におけるそのような製剤の使用を含む。
【０１５６】
１つの好ましい実施形態では、ＲＣＴのメディエイタは、ＲＣＴのメディエイタの合成と精製に関する先の章で述べた何らかの手法を用いて合成または製造することができる。長い貯蔵寿命を有する安定な製剤は、再製剤のためのバルクを製造するため、あるいは被験者への投与の前に滅菌水または適切な滅菌緩衝液での再水和によって再溶解できる個別アリコートまたは投与単位を製造するために、メディエイタを凍結乾燥することによって作製し得る。
【０１５７】
もう１つの好ましい実施形態では、ＲＣＴのメディエイタは、ペプチド−脂質複合体として製剤し、投与し得る。特に複合体がＨＤＬ、特にプレβ−１またはプレβ−２  ＨＤ
Ｌ個体群と類似の大きさ及び密度を備えるとき、複合体は循環中で長い半減期を有するはずであるため、このアプローチにはいくつかの利点がある。ペプチド−脂質複合体は、以下で述べる多くの方法のいずれかによって好都合に製造できる。長い貯蔵寿命を有する安定な製剤は、凍結乾燥−好ましいアプローチである、以下に述べる共凍結乾燥手順−によって作製し得る。凍結乾燥したペプチド−脂質複合体は、医薬再製剤のためのバルクを製造するため、あるいは被験者への投与の前に滅菌水または適切な緩衝液での再水和によって再溶解できる個別アリコートまたは投与単位を製造するために使用することができる。
【０１５８】
当業者に周知の様々な方法が、ペプチド−脂質小胞または複合体を製造するために使用できる。このために、リポソームまたはプロテオリポソームを製造するための多くの使用可能な手法を利用し得る。例えば複合体を形成するためにメディエイタを適切な脂質と共超音波処理することができる（浴またはプローブ超音波処理器を使用して）。あるいは、ペプチドをあらかじめ形成した脂質小胞と組み合わせて、ペプチド−脂質複合体の自然形成を生じさせることができる。さらにもう１つの選択的方法では、界面活性剤透析法によってペプチド−脂質複合体を形成することができる；例えばメディエイタ、脂質及び界面活性剤の混合物を透析して界面活性剤を除去し、ペプチド−脂質複合体を再溶解するまたは形成する（例えばＪｏｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２８：５５３−５８２参照）。
【０１５９】
前記アプローチは実施可能であるが、各々の方法は、コスト、収率、再現性及び安全性の見地からそれ自体固有の生産上の問題を提起する。１つの好ましい方法に従って、メディエイタと脂質を、各々の成分を共可溶化する溶媒系において組み合わせ、凍結乾燥によって完全に除去することができる。このためには、両親媒性ペプチドと脂質の両方の共溶解性を確保するように溶媒対を慎重に選択すべきである。１つの実施形態では、粒子に組み込むタンパク質、ペプチドまたはその誘導体／類似体を、水性または有機溶媒あるいは溶媒の混合物（溶媒１）に溶解することができる。（リン）脂質成分を、溶媒１と混和性である水性または有機溶媒あるいは溶媒の混合物（溶媒２）に溶解し、２つの溶液を混合する。あるいは、メディエイタと脂質を共溶媒系、すなわち混和性溶媒の混合物に組み込むことができる。メディエイタ対脂質の適切な比率は、最初に、生じる複合体が適切な物理的及び化学的性質を有するように、すなわち通常は（しかし必ずではない）ＨＤＬと類似の大きさであるように、経験的に決定される。生じた混合物を冷凍し、凍結乾燥して乾固する。時として凍結乾燥を容易にするために付加的な溶媒を混合物に添加しなければならない。この凍結乾燥生成物は長期間保存することができ、安定なままである。
【０１６０】
前記凍結乾燥生成物は、ペプチド−脂質複合体の溶液または懸濁液を得るために再溶解することができる。このために、凍結乾燥粉末を水溶液で適切な容量（しばしば静脈内注射のために好都合な５ｍｇペプチド／ｍＬ）に再水和し得る。好ましい実施形態では、リン酸緩衝食塩水または生理食塩水で凍結乾燥粉末を再水和する。再水和を促進するために混合物を攪拌またはボルテックスしなければならないことがあるが、ほとんどの場合、再溶解工程は、複合体の脂質成分の相転移温度に等しいかまたはそれより高い温度で実施すべきである。数分以内に、再溶解されたペプチド−脂質複合体の透明な製剤が生じる。
【０１６１】
製剤中の複合体が所望サイズ分布を、例えばＨＤＬのサイズ分布を有することを確認するために生じた再溶解製剤のアリコートを特徴づけることができる。ゲルろ過クロマトグラフィがこのために使用できる。例えばＰｈａｒｍａｃｉａ  Ｓｕｐｅｒｏｓｅ  ６  ＦＰＬＣゲルろ過クロマトグラフィシステムが使用できる。使用する緩衝液は、５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４中１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含む。典型的な試料容量は、５ｍｇペプチド／ｍＬを含む複合体２０−２００μＬである。カラム流速は０．５ｍＬ／分である。公知の分子量及びストークス径の一連のタンパク質並びにヒトＨＤＬが、カラムを検定するための標準品として好ましく使用される。波長２５４または２８０ｎｍの光の吸光度
または散乱によってタンパク質及びリポタンパク質複合体を観測する。
【０１６２】
ＲＣＴのメディエイタは、飽和、不飽和、天然及び合成脂質及び／またはリン脂質を含む、様々な脂質と複合することができる。適切な脂質は、小さなアルキル鎖のリン脂質、卵ホスファチジルコリン、ダイズホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリンジオレオホスファチジルエタノールアミン、ジラウロイルホスファチジルグリセロールホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、脳ホスファチジルセリン、脳スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、ホスファチジン酸、ガラクトセレブロシド、ガングリオシド、セレブロシド、ジラウリルホスファチジルコリン、（１，３）−Ｄ−マンノシル−（１，３）ジグリセリド、アミノフェニルグリコシド、３−コレステリル−６’−（グリコシルチオ）ヘキシルエーテル糖脂質、及びコレステロール及びその誘導体を含むが、これらに限定されない。
【０１６３】
好ましい実施形態の医薬製剤は、インビボでの投与及び送達に適した医薬上許容される担体中に、ＲＣＴのメディエイタまたはペプチド−脂質複合体を有効成分として含有する。メディエイタは酸性及び／または塩基性末端及び／または側鎖を含み得るため、それらは、遊離酸または塩基の形態で、あるいは医薬上許容される塩の形態で、製剤中に含まれ得る。
【０１６４】
注射用製剤は、水性または油性媒質中に有効成分の滅菌懸濁液、溶液または乳剤を含む。組成物はまた、懸濁化剤、安定剤及び／または分散剤などの配合剤も含み得る。注射用製剤は、単位投与形態、例えばアンプルまたは多回投与用容器の体裁であってもよく、添加防腐剤を含み得る。
【０１６５】
あるいは、注射用製剤は、使用前に、滅菌発熱物質不含水、緩衝液、デキストロース溶液等を含むがこれらに限定されない適切な媒質で再溶解するための粉末形態で提供され得る。このために、ＲＣＴのメディエイタを凍結乾燥し得るか、または共凍結乾燥したペプチド−脂質複合体を製造し得る。保存製剤は、単位投与形態で供給し、インビボでの使用の前に再溶解することができる。
【０１６６】
持続的な送達のために、有効成分を移植による投与、例えば皮下、皮内または筋肉内注射による投与のためのデポー製剤として製剤することができる。そこで、例えば有効成分は、適切なポリマーまたは疎水性材料（例えば許容される油中の乳剤として）またはイオン交換樹脂と共に；または難溶性誘導体として、例えばＲＣＴのメディエイタの難溶性塩形態として、製剤し得る。
【０１６７】
あるいは、経皮吸収のために有効成分を緩やかに放出する接着ディスクまたはパッチとして製造される経皮送達システムを使用し得る。このために、有効成分の経皮浸透を促進
するために透過促進剤を使用し得る。好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタまたはペプチド−脂質複合体を、虚血性心臓病及び高コレステロール血症の患者における使用のためにニトログリセリンパッチに組み込むことによって特別な恩恵を達成し得る。
【０１６８】
経口投与に関しては、医薬組成物は、例えば、結合剤（例えばプレゼラチン化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えばラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、滑石またはシリカ）；崩壊剤（例えばジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）などの医薬上許容される賦形剤と共に従来の手段によって製造される錠剤またはカプセルの形態をとりうる。錠剤は、当技術分野で周知の方法によって被覆し得る。経口投与用の液体製剤は、例えば溶液、シロップまたは懸濁液の形態をとり得るか、または使用前に水または他の適切な媒質で溶解するための乾燥生成物として提供され得る。そのような液体製剤は、懸濁化剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用脂）；乳化剤（例えばレシチンまたはアカシア）；非水性媒質（例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分画植物油）；及び防腐剤（例えばメチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの医薬上許容される添加物と共に従来の手段によって製造され得る。製剤はまた、適宜に緩衝剤塩、着香料、着色料及び甘味料を含み得る。経口投与用の製剤は、活性化合物の制御放出を与えるために適切に製剤され得る。
【０１６９】
口腔投与に関しては、組成物は、従来のように製剤される錠剤またはロゼンジの形態をとり得る。直腸または膣経路の投与に関しては、有効成分は、溶液（停留浣腸用）、坐薬または軟膏として製剤され得る。
【０１７０】
吸入による投与に関しては、有効成分は、適切な推進薬、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスを使用して、加圧パックまたはネブライザからのエーロゾル噴霧の形態で好都合に送達することができる。加圧エーロゾルの場合、投与単位は、定量を送達するための弁を備えることによって決定され得る。化合物の粉末混合物及びラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤を含む、例えば吸入器またはガス注入器における使用のためのゼラチンのカプセル及びカートリッジを製剤し得る。
【０１７１】
組成物は、所望する場合は、有効成分を含有する１またはそれ以上の単位投与形態を含み得るパックまたは配薬装置中で提供され得る。パックは、例えばブリスターパックのような金属またはプラスチック箔を含み得る。パックまたは配薬装置は、投与のための指示書を伴い得る。
【０１７２】
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタ及び／またはペプチド−脂質複合体は、循環中でのバイオアベイラビリティを確実にする何らかの適切な経路によって投与し得る。これは、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内、皮下（ＳＣ）及び腹腔内（ＩＰ）注射を含む、非経口経路の投与によって達成できる。しかし、他の投与経路も使用し得る。例えば胃腸管を通しての吸収は、例えば口腔粘膜、胃及び小腸の過酷な環境における、有効成分の分解を回避するまたは最小限に抑えるために適切な製剤（例えば腸溶剤皮）を使用することを条件として、経口経路の投与（経口摂取、口腔及び舌下経路を含むがこれらに限定されない）によって達成できる。経口投与は、使用の容易さ、そしてそれ故高いコンプライアンスという利点を有する。あるいは、膣または直腸様式の投与のような粘膜組織を通しての投与は、胃腸管における分解を回避するまたは最小限に抑えるために使用し得る。さらにもう１つの選択的実施形態では、好ましい実施形態の製剤は、経皮的に（例えば経真皮的に）または吸入によって投与することができる。好ましい経路は、受容者の状態
、年齢及びコンプライアンスによって異なりうることは認識される。
【０１７３】
使用するＲＣＴのメディエイタまたはペプチド−脂質複合体の実際の用量は投与経路によって異なり、１．０ｍｇ／Ｌ−２ｇ／Ｌの循環血漿濃度を達成するように調節すべきである。ここで述べる動物モデル系で得られたデータは、好ましい実施形態のアポＡ−ＩアゴニストがＨＤＬ成分と結合すること、及び約５日間のヒトにおける推定半減期を有することを示す。そこで、１つの実施形態では、ＲＣＴのメディエイタは、週に１回０．５ｍｇ／ｋｇ−１００ｍｇ／ｋｇの用量で注射によって投与することができる。もう１つの実施形態では、望ましい血清レベルは、０．１ｍｇ／ｋｇ／時−１００ｍｇ／ｋｇ／時を提供する持続注入または間欠注入によって維持し得る。
【０１７４】
ＲＣＴのメディエイタの毒性及び治療効果は、ＬＤ５０（母集団の５０％に対する致死用量）及びＥＤ５０（母集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するための細胞培養または実験動物において標準製薬手順を用いて測定することができる。毒性作用と治療効果の間の用量比が治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表わすことができる。大きな治療指数を示すアポＡ−Ｉペプチドアゴニストが好ましい。
【０１７５】
他の用途
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタは、例えば診断を目的として、血清ＨＤＬを測定するためにインビトロでのアッセイにおいて使用することができる。ＲＣＴのメディエイタは血清のＨＤＬ及びＬＤＬ成分と結合するため、アゴニストはＨＤＬ及びＬＤＬ個体群のための「マーカ」として使用できる。さらに、アゴニストは、ＲＣＴにおいて有効なＨＤＬのサブ個体群のためのマーカとして使用できる。このために、アゴニストを患者血清試料に添加するまたは患者血清試料と混合することができる；適切なインキュベーション時間後、組み込まれたＲＣＴのメディエイタを検出することによってＨＤＬ成分を検定することができる。これは、標識アゴニスト（例えば放射能標識、蛍光標識、酵素標識、染料等）を用いて、またはアゴニストに特異的な抗体（または抗体フラグメント）を使用する免疫測定法によって達成できる。
【０１７６】
あるいは、循環系を視覚化するため、またはＲＣＴを観測するため、または脂肪線条、アテローム性動脈硬化症病変等（ＨＤＬがコレステロール流出に関して活性であるはずの部位）におけるＨＤＬの蓄積を視覚化するために、標識メディエイタを画像化処理（例えばＣＡＴスキャン、ＭＲＩスキャン）において使用することができる。
【０１７７】
逆コレステロール輸送のメディエイタの分析のためのアッセイ
ＬＣＡＴ活性化アッセイ
好ましい実施形態に従ったＲＣＴのメディエイタは、様々なインビトロアッセイによって、例えばインビトロでＬＣＡＴを活性化するそれらの能力によって、潜在的臨床効果に関して評価することができる。ＬＣＡＴアッセイでは、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）または１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）及び放射能標識コレステロールから成る基質小胞（小さな１枚膜リポソームまたは「ＳＵＶ」）を、等価質量のペプチドまたはアポＡ−Ｉ（ヒト血漿から単離した）のいずれかと共にプレインキュベートする。ＬＣＡＴ（ヒト血漿から精製した）の添加によって反応を開始させる。陽性対照として使用した天然アポＡ−Ｉは、１００％の活性化作用を示す。分子メディエイタの「比活性」（すなわち活性（ＬＣＡＴ活性）単位／質量単位）は、最大のＬＣＡＴ活性化を達成するメディエイタの濃度として算定することができる。例えばメディエイタについての「比活性」−アッセイの特定時点（例えば１時間）で最大のＬＣＡＴ活性化（すなわちコレステロールからコレステロールエステルへの変換パーセンテージ）を達成する濃度−を測定するために、一連の濃度のペプチド（例えば限界希釈）を検定することができる。使用したペプチドの濃度に対して、例えば１時間目のコレステロールの変換
パーセンテージをプロットしたとき、描画した曲線上でプラトーを達成するメディエイタの濃度として「比活性」を特定することができる。
【０１７８】
基質小胞の作製
ＬＣＡＴアッセイにおいて使用する小胞は、２０：１のモル比の、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）または１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）及びコレステロールから成るＳＵＶである。４０回のアッセイに十分な小胞原液を調製するために、ＥＰＣ７．７ｍｇ（またはＰＯＰＣ７．６ｍｇ；１０μｍｏｌ）、４−１４Ｃ−コレステロール７８μｇ（０．２μｍｏｌ）コレステロール１１６μｇ（０．３μｍｏｌ）をキシレン５ｍＬに溶解し、凍結乾燥する。その後アッセイ緩衝液４ｍＬを乾燥粉末に添加し、窒素雰囲気下に４℃で超音波処理する。超音波処理条件：Ｂｒａｎｓｏｎ
２５０超音波処理装置、１０ｍｍチップ、６×５分間；アッセイ緩衝液：１０ｍＭトリス、０．１４Ｍ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４。超音波処理した混合物を、チタン粒子を除去するために１４，０００ｒｐｍ（１６，０００×ｇ）で各々５分間ずつ６回遠心分離する。生じた透明溶液を酵素アッセイのために使用する。
【０１７９】
ＬＣＡＴの精製
ＬＣＡＴ精製のために、ヒト血漿の硫酸デキストラン／Ｍｇ２＋処理を用いてリポタンパク質欠損血清（ＬＰＤＳ）を得、それをフェニルセファロース、アフィゲルブルー、コンカナバリンＡセファロース及び抗アポＡ−Ｉアフィニティクロマトグラフィで連続的にクロマトグラフィを行う。
【０１８０】
ＬＰＤＳの作製
ＬＰＤＳを作製するために、血漿５００ｍＬを硫酸デキストラン（分子量＝５００，０００）溶液５０ｍＬに添加する。２０分間攪拌する。４℃、３０００ｒｐｍ（１６，０００×ｇ）で３０分間遠心分離する。上清（ＬＰＤＳ）をさらなる精製のために使用する（約５００ｍＬ）。
【０１８１】
フェニルセファロースクロマトグラフィ
フェニルセファロースクロマトグラフィのために以下の材料及び条件を使用した。固相：フェニルセファロース高速流、高物質グレード、Ｐｈａｒｍａｃｉａｃｏｌｕｍｎ：ＸＫ２６／４０、ゲル床高：３３ｃｍ、容積＝約１７５ｍＬ、流速：２００ｍＬ／時、（試料）洗浄：２００ｍＬ／時、（緩衝液）溶出：８０ｍＬ／時、（蒸留水）緩衝液：１０ｍＭトリス、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４、０．０１％アジ化ナトリウム。
【０１８２】
トリス緩衝液中でカラムを平衡させ、ＬＰＤＳ  ５００ｍＬにＮａＣｌ  ２９ｇを添加してカラムに適用する。２８０ｎｍ波長での吸収がほぼ基線値になるまで多量のトリス緩衝液で数回洗浄し、その後蒸留水での溶出を開始する。タンパク質を含む分画をプールし（プールサイズ：１８０ｍＬ）、アフィゲルブルークロマトグラフィのために使用する。
【０１８３】
アフィゲルブルークロマトグラフィ
フェニルセファロースプールを、２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．０１％アジ化ナトリウムに対して４℃で一晩透析する。限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ  ＹＭ３０）によってプール容量を５０−６０ｍＬに低減し、アフィゲルブルーカラムに負荷する。固相：アフィゲルブルー、Ｂｉｏｒａｄ、１５３−７３０１カラム、ＸＫ２６／２０、ゲル床高：約１３ｃｍ；カラム容積＝約７０ｍＬ。流速：負荷：１５ｍＬ／時、洗浄：５０ｍＬ／時。トリス緩衝液中でカラムを平衡させる。フェニルセファロースプールをカラムに適用する。並行して分画の収集を開始する。トリス緩衝液で洗浄する。プールした分画（１７０ｍＬ）をＣｏｎＡクロマトグラフィのために使用した。
【０１８４】
ＣｏｎＡクロマトグラフィ
アフィゲルブループールをＡｍｉｃｏｎ（ＹＭ３０）によって３０−４０ｍＬに低減し、ＣｏｎＡ開始緩衝液（１ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４；１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ
ＭｎＣｌ２、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．０１％アジ化ナトリウム）に対して４℃で一晩透析した。固相：ＣｏｎＡセファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カラム：ＸＫ２６／２０、ゲル床高：１４ｃｍ（７５ｍＬ）。流速：負荷：４０ｍＬ／時、洗浄（開始緩衝液による）：９０ｍＬ／時、溶出：５０ｍＬ／時、１ｍＭトリス、ｐＨ７．４中０．２Ｍメチル−α−Ｄ−マンノシド。マンノシド溶出のタンパク質分画を収集し（１１０ｍＬ）、容量を限外ろ過（ＹＭ３０）によって４４ｍＬに低減した。ＣｏｎＡプールを２ｍＬアリコートに分け、それを−２０℃で保存する。
【０１８５】
抗アポＡ−Ｉアフィニティクロマトグラフィ
抗アポＡ−Ｉ抗体を共有結合させたアフィゲル−Ｈｚ材料（Ｂｉｏｒａｄ）に関して抗アポＡ−Ｉアフィニティクロマトグラフィを実施した。カラム：ＸＫ  １６／２０、容量＝１６ｍＬ。カラムをＰＢＳ、ｐＨ７．４で平衡させた。ＣｏｎＡプール２ｍＬをＰＢＳに対して２時間透析した後、カラムに負荷した。流速：負荷：１５ｍＬ／時、洗浄（ＰＢＳ）：４０ｍＬ／時。プールしたタンパク質分画（容量＝１４ｍＬ）をＬＣＡＴアッセイのために使用する。カラムを０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）で再生して結合Ａ−Ｉ（１００ｍＬ）を溶出し、この手順の直後にＰＢＳで再平衡させる。
【０１８６】
ＲＣＴのメディエイタの薬物動態
ＲＣＴのメディエイタが循環中で安定であり、血漿のＨＤＬ成分と結合することを明らかにするために、以下の実験プロトコールを使用することができる。
【０１８７】
ペプチドアゴニストの合成及び／または放射能標識
１２５Ｉ標識ＬＤＬを、一塩化ヨウ素法によって５００−９００ｃｐｍ／ｎｇの比活性に作製した（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  １９７４  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４９：５１５３−５１６２）。培養ヒト線維芽細胞による低密度リポタンパク質の結合と分解を、記述されているように（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  １９７４  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４９：５１５３−５１６２）５００−９００ｃｐｍ／ｎｇの最終比活性で測定した。いずれの場合も、１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）と共に４℃でのリポタンパク質のインキュベーションによって＞９９％の放射能が沈殿可能であった。Ｔｙｒ残基を、その放射性ヨウ素化を可能にするために各々のメディエイタのＮ末端に結合した。メディエイタを、Ｉｏｄｏ−Ｂｅａｄｓ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を使用し、製造者のプロトコールに従って、Ｎａ１２５Ｉ（ＩＣＮ）で８００−１０００ｃｐｍ／ｎｇの比活性に放射性ヨウ素化した。透析後、ペプチドの沈殿可能な放射能（１０％  ＴＣＡ）は常に＞９７％であった。
【０１８８】
あるいは、１４Ｃ標識ＦＭＯＣ−ＰｒｏをＮ末端アミノ酸として結合することによって放射能標識メディエイタを合成することができた。Ｌ−［Ｕ−１４Ｃ］Ｘ、比活性９．２５ＧＢｑ／ｍｍｏｌを、Ｘを含む標識アゴニストの合成のために使用することができる。合成は、Ｌａｐａｔｓａｎｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８３，６７１−１７３に従って実施し得る。簡単に述べると、非標識Ｌ−Ｘ２５０μＭ（２９．６ｍｇ）を９％Ｎａ２ＣＯ３溶液２２５μＬに溶解し、１４Ｃ標識Ｌ−Ｘ  ９．２５ＭＢｑ（２５０μＭ）の溶液（９％Ｎａ２ＣＯ３）に添加する。この液体を０℃に冷却し、ＤＭＦ０．７５ｍＬ中の９−フルオレニルメチル−Ｎ−スクシニミジルカルボネート（ＦＭＯＣ−ＯＳｕ）６００μＭ（２０２ｍｇ）と混合して、室温で４時間振とうする。その後、混合物をジエチルエーテル（２×５ｍＬ）及びクロロホルム（１×５ｍＬ）で抽出し、残りの水相を３０％ＨＣｌで酸性にして、クロロホルム（５×８ｍＬ）で抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾
燥し、ろ取して、容積を窒素流下で５ｍＬに低減する。純度を、紫外吸収検出を伴うＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：Ｈａｃ、９：１：０．１ｖ／ｖ／ｖ、定常相ＨＰＴＬＣシリカゲル６０、Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって、例えば放射性化学物質純度：Ｌｉｎｅａｒ  Ａｎａｌｙｚｅｒ，Ｂｅｒｔｈｏｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ；によって評価し、反応収率は約９０％（ＬＳＣによって測定したとき）であり得る。
【０１８９】
１４Ｃ−ペプチドＸを含むクロロホルム溶液をペプチド合成のための直接使用する。アミノ酸２−２２を含むペプチド樹脂を上述したように自動合成し、前記合成のために使用することができる。ペプチドの配列をエドマン分解によって決定する。カップリングを、ＴＢＴＵの代わりにＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）１−，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを好ましく使用することを除いて、先に述べたように実施する。非標識ＦＭＯＣ−Ｌ−Ｘとの二次カップリングは手操作で実施する。
【０１９０】
マウスにおける薬物動態
各々の実験において、放射能標識メディエイタ３００−５００μｇ／ｋｇ（０．３−０．５ｍｇ／ｋｇ）［または２．５ｍｇ／ｋｇのようにそれ以上］を、標準マウス飼料またはアテローム発生性Ｔｈｏｍａｓ−Ｈａｒｃｒｏｆｔ改変飼料（著しく高いＶＬＤＬ及びＩＤＬコレステロールを生じさせる）を給餌したマウスに腹腔内注射し得る。血漿中の放射能の評価のために時間間隔をおいて多数回血液試料を採取する。
【０１９１】
ヒト血清中での安定性
標識メディエイタ１００μｇを新鮮ヒト血漿（３７℃）２ｍＬと混合し、直ちに（対照試料）または３７℃で８日間のインキュベーション後（被験試料）に脱脂し得る。脱脂は、等容量の２：１（ｖ／ｖ）クロロホルム：メタノールで脂質を抽出することによって実施する。試料を逆相Ｃ１８ＨＰＬＣカラムに負荷し、アセトニトリル（０．１％ｗ  ＴＦＡを含む）の直線勾配（３３分間で２５−５８％）で溶出する。溶出プロフィールを吸光度（２２０ｎｍ）及び放射能によって追跡する。
【０１９２】
プレβ様粒子の形成
ヒトＨＤＬを、上部分画を得るために密度ｄ＝１．２１ｇ／ｍＬでのＫＢｒ密度超遠心分離によって単離し、次にＳｕｐｅｒｏｓｅ  ６ゲルろ過クロマトグラフィによって他のリポタンパク質からＨＤＬを分離し得る。単離したＨＤＬを、ブラッドフォードタンパク質アッセイによって決定したタンパク質含量に基づき生理食塩水で１．０ｍｇ／ｍＬの最終濃度に調整する。３００μＬのアリコートを単離ＨＤＬ試料から取り、標識メディエイタ１００μＬ（０．２−１．０μｇ／μＬ）と共に３７℃で２時間インキュベートする。生理食塩水１００μＬを含有するブランク及び４つの希釈の標識メディエイタを含む、多数の別々のインキュベーション試料を分析する。例えば：（ｉ）０．２０μｇ／μＬペプチド：ＨＤＬ比＝１：１５；（ｉｉ）０．３０μｇ／μＬペプチド：ＨＤＬ比＝１：１０；（ｉｉｉ）０．６０μｇ／μＬペプチド：ＨＤＬ比＝１：５；及び（ｉｖ）１．００μｇ／μＬペプチド：ＨＤＬ比＝１：３。２時間のインキュベーション後、試料（総容量＝４００μＬ）の２００μＬアリコートをリポタンパク質の分離と分析のためにＳｕｐｅｒｏｓｅ  ６ゲルろ過カラムに負荷し、１００μＬを、負荷した総標識放射能を測定するために使用する。
【０１９３】
ヒトリポタンパク質とメディエイタの結合
ヒトリポタンパク質分画とメディエイタの結合は、標識メディエイタを各々のリポタンパク質クラス（ＨＤＬ、ＬＤＬ及びＶＬＤＬ）及び種々のリポタンパク質クラスの混合物と共にインキュベートすることによって測定できる。ＨＤＬ、ＬＤＬ及びＶＬＤＬを、ｄ＝１．２１ｇ／ｍＬでのＫＢｒ密度勾配超遠心分離によって単離し、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ  
６Ｂカラムサイズ排除カラムでのＦＰＬＣによって精製する（クロマトグラフィは、０．７ｍＬ／分の流速、及び１ｍＭトリス（ｐＨ８）、１１５ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．０％ＮａＮ３）のランニング緩衝液で実施する）。標識メディエイタを、１：５（質量比）のメディエイタ：リン脂質比でＨＤＬ、ＬＤＬ及びＶＬＤＬと共に３７℃で２時間インキュベートする。必要量のリポタンパク質（１０００μｇを生成するために必要な量に基づく容量）をメディエイタ原液（１ｍｇ／ｍＬ）０．２ｍＬと混合し、その溶液を、０．９％ＮａＣｌを用いて２．２ｍＬにする。
【０１９４】
３７℃で２時間インキュベートした後、総放射能の測定のために（例えば標識同位体に依存して液体シンチレーション計数またはγ線計数によって）アリコート（０．１ｍＬ）を取り、残りのインキュベーション混合物の密度をＫＢｒで１．２１ｇ／ｍＬに調整して、試料を、Ｂｅｃｋｍａｎ小型超遠心機を用いてＴＬＡ  １００．３ローターにおいて４℃で２４時間、１００，０００ｒｐｍ（３００，０００ｇ）で遠心分離する。生じた上清を、各々の試料の上部から０．３ｍＬアリコートを取って分画し、合計５分画として、各々の分画０．０５ｍＬを計数のために使用する。上部の２分画は浮遊リポタンパク質を含み、その他の分画（３−５）は、溶液中のタンパク質／ペプチドに対応する。
【０１９５】
ＨＤＬ脂質への選択的結合
ヒト血漿（２ｍＬ）を、３７℃で２時間、標識メディエイタ２０、４０、６０、８０及び１００μｇと共にインキュベートする。リポタンパク質を、密度を１．２１ｇ／ｍＬに調整し、ＴＬＡ  １００．３ローターにおいて４℃で３６時間、１００，０００ｒｐｍ（３００，０００ｇ）で遠心分離することによって分離する。上部９００μＬ（３００μＬ分画中）を分析のために採取する。各々の３００μＬ分画から５０μＬを放射能に関して計数し、各々の分画から２００μＬをＦＰＬＣ（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ  ６／Ｓｕｐｅｒｏｓｅ  １２組合せカラム）によって分析する。
動物モデル系におけるメディエイタの使用
好ましい実施形態のＲＣＴのメディエイタの効果を、ウサギまたは他の適切な動物モデルにおいて明らかにすることができる。
【０１９６】
リン脂質／ペプチド複合体の作製
リン脂質（ＤＰＰＣ）とペプチドから成る小さな円盤状粒子をコール酸透析法に従って作製する。リン脂質をクロロホルムに溶解し、窒素流の下で乾燥する。ペプチドを１−２ｍｇ／ｍＬの濃度で緩衝液（食塩水）に溶解する。脂質膜を、コール酸を含む緩衝液（４３℃）に再溶解し、ペプチド溶液を３：１のリン脂質／ペプチド重量比で添加する。その混合物を４３℃で一晩インキュベートし、４３℃（２４時間）、室温（２４時間）及び４℃（２４時間）で、温度変化点で緩衝液（大容量）を３回交換して、透析する。複合体は、注射及び４℃での保存のためにろ過滅菌（０．２２μｍ）し得る。
【０１９７】
ペプチド／リン脂質粒子の単離及び特徴づけ
粒子をゲルろ過カラム（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ  ６  ＨＲ）で分離し得る。粒子を含むピークの位置を、各々の分画中のリン脂質濃度を測定することによって特定する。溶出容量から、ストークス半径を決定することができる。複合体中のメディエイタの濃度を、１６時間の酸加水分解後にフェニルアラニン含量を測定する（ＨＰＬＣによって）ことによって決定する。
【０１９８】
ウサギにおける注射
雄性ニュージーランド白色ウサギ（２．５−３ｋｇ）に、１０−１５ｍＬを超えない単回ボーラス注射で一定用量のリン脂質／メディエイタ複合体（ペプチドとして表わすと、５または１０ｍｇ／ｋｇ体重）を静脈内注射する。操作の前に動物を少しだけ鎮静させる。注射の前及び５、１５、３０、６０、２４０及び１４４０分後に血液試料（ＥＤＴＡで
収集）を採取する。各々の試料についてヘマトクリット値（Ｈｃｔ）を測定する。試料をアリコートに分け、分析まで−２０℃で保存する。
【０１９９】
ウサギ血清の分析
総血漿コレステロール、血漿トリグリセリド及び血漿リン脂質を、市販のアッセイを用いて、例えば製造者のプロトコールに従って（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ及びＢｉｏｍｅｒｉｅｕｘ，６９２８０，Ｍａｒｃｙ−Ｌ’ｅｔｏｉｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）、酵素的に測定する。
【０２００】
血漿をそのリポタンパク質分画に分離した後に得られた分画の血漿リポタンパク質プロフィールは、スクロース密度勾配で遠心することによって決定し得る。例えば分画を収集し、ＶＬＤＬ、ＩＬＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬリポタンパク質密度に対応する分画における従来の酵素分析によってリン脂質及びコレステロールのレベルを測定することができる。
【０２０１】
修飾アミノ酸を担持するＲＣＴメディエイタの合成
親油性基修飾ペプチド配列の合成：（固体支持体での鈴木カップリング）
【０２０２】
【化３２】
2008509228.tif 000036
【０２０３】
Ａ１Ａは、グルタミン酸またはアルギニン（逆配列）のいずれかを示す。
ＡＡ３は、アルギニンまたはグルタミン酸（逆配列）のいずれかを示す。
【０２０４】
Ｒは、様々な置換、フェニル、置換フェニル、ハロゲン、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３、ピリジン等を示す。
【０２０５】
バラジウム触媒の例は、例えばＰｄ（ＰＰｈ３）４／Ｎａ２ＣＯ３及びＰｄ（ＰＰｈ３）Ｃｌ２／ＫＯＨを含む。
【０２０６】
丸底フラスコに樹脂結合ヨード化合物（１Ｇ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃ１２（１４ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）または等価のＰｄ（ＰＰｈ３）４及び過剰のフェニルボロン酸（３．０ｍｍｏｌ）を添加した。固体をアルゴンで洗った後、無水ＤＭＦを添加し、室温で数分間攪拌して、ＫＯＨ水溶液５０μＬを添加した。攪拌を８０℃で一晩続けた。
【０２０７】
反応の完了後、半融ガラス漏斗を通してろ過し、反応しなかった出発物質を除去するためにＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＯＨ、水及びＣＨ２Ｃｌ２で洗った。樹脂を真空で乾燥し、最終生成物を得るための次の工程に使用した。
【０２０８】
樹脂及び側鎖保護基の開裂とそれに続くＨＰＬＣ精製：
ペプチドをペプチド樹脂から開裂し、側鎖保護基を全て除去するために、ＴＦＡ、チオアニソール、エタンジオール及びアニソール（９０：５：３：２、ｖ／ｖ）の混合物を使用した（室温で４−５時間）。粗ペプチド混合物を半融ガラス漏斗からろ過し、ＴＦＡで洗った（２−３回）。ろ液を濃厚シロップに濃縮し、低温エーテルに添加した。一晩冷蔵庫内に保持し、遠心分離した後、ペプチドが白色固体として沈殿した。溶液をデカントし、固体をエーテルで十分に洗った。生じた粗ペプチドを緩衝液（０．１％ＴＦＡを含む、アセトニトリル：水  ６０：４０）に溶解し、乾燥した。粗ペプチドを、３３分間で（１２ｍＬ／分）３５％−５０％Ｂの勾配系［緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含む水、緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含むアセトニトリル］で分取Ｃ−１８カラム（逆相）を用いるＨＰＬＣによって精製した。純粋な分画を凍結乾燥した。
【０２０９】
半裸出（正規シリーズ）化合物の合成
樹脂結合ジペプチドをグルタル酸またはコハク酸無水物（２．０ｍｍｏｌ）と反応させ、ＤＭＡＰ（０．２５ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１０ｍＬ）中室温で２時間静かに混合した。樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２、メタノール、次いでＣＨ２Ｃｌ２（各々１５ｍＬ）で連続的に洗った。アミノ酸の側鎖脱保護及び合成されたペプチドの樹脂からの開裂のためにＴＦＡ／チオアニソール／ＥＤＴ／アニソール（９０：５：３：２）の混合物を使用した。低温ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）の添加によって粗ペプチドを沈殿させた。一晩冷蔵庫内に保持し、遠心分離した後、ペプチドが白色固体として沈殿した。溶液を傾瀉し、固体をエーテルで十分に洗った。生じた粗ペプチドを緩衝液（０．１％ＴＦＡを含む、アセトニトリル：水  ６０：４０）に溶解し、乾燥した。粗ペプチドを、３０分間で（１２ｍＬ／分）３５％−５０％Ｂの勾配系［緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含む水、緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含むアセトニトリル］で分取Ｃ−１８カラム（逆相）を用いるＨＰＬＣによって精製した。また、Ｐｏｓｔ ｒｕｎを３分行った。純粋な分画を凍結乾燥した。
【０２１０】
合成した化合物の例は、以下の化合物を含む。
【０２１１】
【化３３】
2008509228.tif 000037
【０２１２】
合成した化合物の他の例は、以下の表４に示す以下の化合物を含む。
【０２１３】
【表４】
2008509228.tif 000038
【０２１４】
化合物のさらなる例は、合成スキームと共に下記に示す以下の化合物を含む。
半裸出
【０２１５】
【化３４】
2008509228.tif 000039
【０２１６】
一般的スキーム
【０２１７】
【化３５】
2008509228.tif 000040
【０２１８】
ＡＡ１はビフェニルを示し、ＡＡ２はアルギニンまたはリシンを示す。
半裸出（正規シリーズ）化合物の合成
樹脂結合ジペプチド［Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ｂｉｐ−樹脂］をＣＨ２Ｃｌ２中の１％ＴＦＡで２時間処理して、側鎖保護された粗ジペプチドを得た。このジペプチド（０．５ｍｍｏｌ）をＨＯＢｔ（０．５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０．５ｍｍｏｌ）と共に０℃
で１５−２０分間攪拌し、保護されたアグマチン（０．５ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温に温め、３時間攪拌した。水（１５ｍＬ）で反応を停止させた。水相をＣＨ２Ｃｌ２（２×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗い、Ｍｇ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、濃縮した。ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（３：７）の混合物をアミノ酸の側鎖脱保護のために使用した。低温ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）の添加によって粗ペプチドを沈殿させた。上記条件を使用して粗ペプチドを精製した。
【０２１９】
一般的スキーム：
【０２２０】
【化３６】
2008509228.tif 000041
【０２２１】
ＡＡ１はグルタミン酸を示し、ＡＡ２はビフェニルを示す。
合成した化合物の例は、以下の化合物を含む：
【０２２２】
【化３７】
2008509228.tif 000042
【０２２３】
化合物のさらなる例は、以下の化合物を含む：
半裸出
【０２２４】
【化３８】
2008509228.tif 000043
【０２２５】
半裸出（逆シリーズ）化合物の合成：
これらの化合物は、ワン樹脂及びリンクアミドＭＢＨＡ樹脂を用いて標準ＳＰＰＳプロトコールを使用することによって製造した。
【０２２６】
【表５】
2008509228.tif 000044
【０２２７】
【表６】
2008509228.tif 000045
【０２２８】
合成した化合物の例は、以下の化合物を含む：
【０２２９】
【化３９】
2008509228.tif 000046
【０２３０】
一般的分析方法
全ての試薬は市販品質のものであった。溶媒は、標準方法によって乾燥し、精製した。アミノ酸誘導体はＢａｃｈｅｍ  Ｆｅｉｎｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ  ＡＧより入手した。分析ＴＬＣは、シリカゲル６０Ｆ２５４、Ｍｅｒｃｋの０．２ｍｍ層で被覆したアルミニウムシートで実施し、分取ＴＬＣは、シリカゲルＰＦ２５４、Ｍｅｒｃｋの２ｍｍ層で被覆した２０ｃｍ×２０ｃｍガラスプレートで実施した。シリカゲル６０（２３０−４００メッシュ）、Ｍｅｒｃｋをフラッシュクロマトグラフィのために使用した。分取円形クロマトグラフィは、シリカゲルＰＦ２５４、Ｍｅｒｃｋの２ｍｍ層で被覆した直径２０ｃｍのガラスプレートで実施した。融点はミクロホットステージ装置で読み取り、補正していない。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、ＴＭＳまたは溶媒を標準品として使用して、４００ＭＨｚで操作するＢｒｕｃｋｅｒ  ４００スペクトロメータで記録した。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、５０または１００ＭＨｚで操作するＢｒｕｃｋｅｒ  ４００スペクトロメータで記録した。元素分析はＣＨ−Ｏ−ＲＡＰＩＤ装置で得た。分析ＲＰ  ＨＰＬＣは、流速１ｍＬ／分で、２１４ｎｍに設定した波長可変紫外吸収検出器を用いて、Ｗａｔｅｒｓ
Ｂｏｎｄａｐａｋ（登録商標）  Ｃ１８（３．９ｍｍ×３００ｍｍ、４μｍ）またはＮｏｖａｐａｋ  Ｃ１８（３．９ｍｍ×１５０ｍｍ、４μｍ）カラムで実施した。ＣＨ３ＣＮ（溶媒Ａ）とＨ２Ｏ中０．０５％ＴＦＡ（溶媒Ｂ）の混合物を移動相として使用した。最終生成物の分析及び分取ＨＰＬＣは、流速１５ｍＬ／分で、２５４ｎｍに設定した波長可変紫外吸収検出器を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）（６０ｍｍ×２１．２ｍｍ）カラムで実施した。ＣＨ３ＣＮとＨ２Ｏの混合物を勾配モードでの移動相として使用した。ＥＳＩ−ＭＳ実験は、正イオンモードで、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  １１００  ＭＳＤ装置で実施した。
【０２３１】
【化４０】
2008509228.tif 000047
【０２３２】
方法Ａ１
ＦＭＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ−ビス−Ｂｏｃ−アグマチン（Ａ−３）
ＦＭＯＣ−Ｄ−フェニルアラニン（１．１２５ｇ、２．９ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、２．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に懸濁した；その後ＥＤＡＣを添加して透明な溶液を得、それを室温で３０分間攪拌した。次にその溶液を、カニューレを通してＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解したビスＢＯＣ−アグマチン（０．５６ｇ、２．９ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を５時間攪拌し、その後水（５０ｍＬ）でクエンチングした。水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。併合有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を次の工程に直接使用した。
【０２３３】
ＮＨ２−Ｄ−Ｐｈｅ−ビス−Ｂｏｃ−アグマチン（Ａ−４）
粗ＦＭＯＣ保護アミノ酸アミドをＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、次にピペリジン（２．９ｍＬ、１０当量）で処理して、反応物を室温で８時間攪拌し、その後減圧下で溶媒を除去した。純粋なアミノアミド（０．９５ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を得るためにカラムクロマトグラフィ（シリカゲル  １５：１；ＣＨＣｌ３：ＴＥＡ）によって精製した後、生成物を６９％の収率で得た。
【０２３４】
グルタル酸アミド−Ｄ−Ｐｈｅ−アグマチン（Ａ−６）
アミノアミド（０．５４４ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次に無水グルタル酸（０．２６９ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）で処理した；反応混合物を一晩攪拌し、その後溶媒を除去した。粗混合物をＤＣＭ：ＴＦＡの１：１混合物（１０ｍＬ）に溶解し、２時間攪拌した。次に粗生成物を逆相ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ：水：ＴＦＡ；２０分間で３５：６５：０．５−５０：５０：０．５、凍結乾燥機によって溶媒を除去した）によって精製し、所望生成物（２０６ｍｇ）をＴＦＡ塩として得た。
【０２３５】
方法Ａ２
４−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）ブタン酸
ジクロロメタン（１４ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンＡ−１（０．５０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の溶液に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．１９ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を添加し、次にそれをＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．２７ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物は透明な溶液を生じ、それを室温で３０分間攪拌した。溶液を０℃に冷却し、次にＮ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアグマチンＡ−２（０．４７ｇ、１．４ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を放置して室温に温め、６時間攪拌した。水（２５ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×７ｍＬ）で抽出した。併合有機相をブライン（２５ｍＬ）で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮してＡ−３を得た。粗Ａ−３を次の工程に直接使用した。中間体Ａ−３をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次にピペリジン（１．４ｍＬ、１４．１ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で５時間攪拌し、その後減圧下で溶媒を除去した。カラムクロマトグラフィ（シリカゲル  ２０：１；ＣＨＣｌ３：ＴＥＡ）によって精製した後、純粋なアミンＡ−４（０．５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を得た。アミンＡ−４をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次に無水グルタル酸（０．１５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を一晩攪拌し、その後溶媒を除去した。粗生成物Ａ−５をＤＣＭ：ＴＦＡ（５ｍＬ：５ｍＬ）の１：１混合物に溶解し、４時間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、エーテルを添加して、このエーテル混合物を−２０℃で一晩保存し、その後白色固体Ａ−６からエーテルをデカントした。粗生成物Ａ−６を水（２ｍＬ）に溶解し、次にＮａＨＣＯ３で処理して（泡立ちが起こった）、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製した。凍結乾燥機によって溶媒を除去して、所望生成物（７５ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.35-2.25 (series of m, 11H), 2.70 (dd, J= 10.8, 13.6 Hz, 1H), 2.85-3.00 (m, 2H), 3.05-3.20 (m, 2H), 3.25-3.40 (m, 1H), 4.35-4.45 (m, 1H), 7.06 (br s, 1H), 7.10-7.30 (m, 7H), 8.20 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 4.8 Hz, 1H); EIMS: 392.5 (MH)+. Anal.(C19H29N5O4・0.28CF3COOH・0.65 H2O) C, H, N。
【０２３６】
４−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−（４−（フェニル）フェニル）エチルカルバモイル）ブタン酸
ジクロロメタン（４ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−ビフェニルアラニンＡ−１（０．２１ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．０６４ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加し、次にＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．１０９ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＮ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアグマチンＡ−２（０．４７ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を添加して、その混合物を一晩攪拌した。水（２０ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ａ−３を次の工程に直接使用した。生成物Ａ−３をＤＭＦ（２．８ｍＬ）に溶解し、次にピペリジン（０．４ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で４時間攪拌し、その後減圧下で溶媒を除去してＡ−４を得た。粗アミンＡ−４をＤＣＭ（７．５ｍＬ）に溶解し、次に無水グルタル酸（０．１１ｇ、０．９９ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を一晩攪拌し、中間体Ａ−５を得て、次にＴＦＡ（１．３ｍＬ）で処理し、一晩攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、粗生成物Ａ−６を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水：ＴＦＡ）によって精製した。凍結乾燥機で溶媒を除去して、所望生成物（７０ｍｇ）を得た。ＥＩＭＳ：４６８．６（ＭＨ）＋。
【０２３７】
４−（（Ｒ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−（４−（フェニル）フェニル）エチルカルバモイル）ブタン酸
一般手順、方法Ａ２に従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−ビフェニルアラニン（０．２１ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）から出発して、所望生成物（５７ｍｇ）を得た。ＥＩＭＳ：４６８．６（ＭＨ）＋。
【０２３８】
方法Ａ１またはＡ２を使用して合成した化合物の例は以下を含む：
【０２３９】
【化４１】
2008509228.tif 000048
【０２４０】
方法Ｂ１
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｂｉｐ−（４−アミノブタン酸ベンジルエステル）（Ｂ−３）
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｂｉｐ−（４，４）フェニルアラニン（０．６８２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、次にトリエチルアミン（０．８４ｍＬ）、次いでＰｙＢＯＰ（１．１４ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１０分間攪拌し、次にベンジル４−アミノブタノエート（０．７７ｇ、２．１ｍｍｏｌ）のｐＴｓＯＨ塩を添加した。反応混合物を４時間攪拌し、その後水（４０ｍＬ）で反応を停止させた。水相をＤＣ
Ｍ（３×２０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（８０ｍＬ）、水（８０ｍＬ）及びブライン（８０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗混合物をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、ＤＣＭ−ＤＣＭ：ＭｅＯＨ  ４５：１）によって精製して、所望生成物（０．９２ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を９０％の収率で得た。
【０２４１】
ＮＨ２−Ｄ−Ｂｉｐ−（４−アミノブタン酸ベンジルエステル）（Ｂ−４）
Ｂｏｃ保護アミノアミド（０．９２ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を含むフラスコを氷浴で冷却し、次にＴＦＡ（４．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を放置して室温に温め、１時間攪拌し、その後過剰のＴＦＡを減圧下で除去して残留物を得た。粗残留物にエーテルを添加し、−２０℃で一晩保存して、混合物を超音波処理し、ろ過によって収集した白色固体（ＴＦＡ塩）として所望生成物（０．７６ｇ）を得た。
【０２４２】
ビス−Ｃｂｚ−５−グアニジノペンタン酸アミド−Ｄ−Ｂｉｐ−（４−アミノブタン酸ベンジルエステル）（Ｂ−６）
ビス−Ｃｂｚ−５−グアニジノペンタン酸（０．７３５ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３ｍＬ）に溶解し、次にＣＤＩ（０．２７９ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を添加した；数分後、泡立ちが認められた。泡立ちが止まった後、反応混合物をさらに２０分間攪拌した。上述したＴＦＡアミノアミド塩（０．７６ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、数分後に溶液は透明になった。形成された沈殿物のためにそれ以上攪拌することが不可能になるまで反応混合物を攪拌した。固体をろ過によって収集し、エーテルと水で洗浄した。残留溶媒を除去するために生成物（１．１６ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を高真空上に置いた。
【０２４３】
５−グアニジノペンタン酸アミド−Ｄ−Ｂｉｐ−（４−アミノブタン酸）（Ｂ−７）
最終生成物前駆体（１．１６ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７ｍＬ）に懸濁し、その後１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１７５ｍｇ）、次いでメタンスルホン酸（０．０９５ｍＬ）を添加した。攪拌した懸濁液を水素雰囲気（バルーン）下に置き、２０時間攪拌した。ろ過によって固体を除去し、溶媒を除去した。粗生成物を逆相ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ：水；１５分間で５：９５−８５：１５、凍結乾燥機によって溶媒を除去した）によって精製し、所望生成物（０．３０ｇ）を得た。
【０２４４】
方法Ｂ２
４−［（Ｒ）−３−ビフェニル−４−イル−２−（５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−プロピオニルアミノ］−酪酸
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンＢ−１（０．６８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．８４ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）、次いでＰｙＢＯＰを添加し、生じた混合物を１０分間攪拌した。反応混合物をベンジル４−アミノブチレート・パラ−トルエンスルホン酸Ｂ−２（０．７７ｇ、２．１ｍｍｏｌ）で処理し、４時間攪拌した。水（４０ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（８０ｍＬ）、水（８０ｍＬ）及びブライン（８０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｂ−３をフラッシュクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）によって精製した。固体Ｂ−３（０．９２ｇ）を、丸底フラスコ中、氷浴で冷却し、その後ＴＦＡ（４．５ｍＬ）で処理して、１時間攪拌した。過剰のＴＦＡを除去し、残留物をエーテルで粉砕した。固体Ｂ−４を−２０℃で一晩保存し、その後ろ過によって収集した。ＴＦＡ塩Ｂ−４を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。ＴＨＦ（３ｍＬ）中の５−Ｎ，Ｎ’−ジベンジルオキシカルボニルグアニジノペンタン酸Ｂ−５（０．７５ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の溶液をＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（０．２９ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）で処理し、３０分間攪拌した（泡立ちが止まるまで）。攪拌溶液にあらかじめ作製しておいたＢ−
４を添加し、その混合物を、攪拌がもはや不可能になるまで２時間攪拌した。固体Ｂ−６をろ過によって収集し、エーテルで洗浄して、その後さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。固体Ｂ−６をＤＭＦ（５．９ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下に置いて、その後１０％Ｐｄ／Ｃ、次いでメタンスルホン酸（０．０８５ｍＬ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を水素下に置き、一晩攪拌した。水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。減圧下で溶媒を除去し、粗生成物Ｂ−７を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製した。凍結乾燥によって溶媒を除去し、所望生成物（２１４ｍｇ）を得た。融点：２６９℃で分解；1H-NMR (DMSO-d6): d 1.30-1.70 (series of m, 6H),
1.85-1.95 (m, 1H), 2.02 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.15-2.25 (m, 1H), 2.77 (dd, J= 10.2, 13.8 Hz, 1H), 2.85-3.35 (series of m, 5H), 4.35-4.45 (m, 1H), 7.06 (br s, 1H), 7.25-7.4 (m, 3H), 7.44 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 7.55 (d, 1= 8.4 Hz, 2H), 7.64 (d, J= 8.4 Hz) 8.18 (t, J= 5. 0 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 9.93 (br s, 1H); EIMS: 468.7 (MH)+. Anal.(C25H33N5O4・2.0 H2O) C, H, N。
【０２４５】
４−［（Ｓ）−３−ビフェニル−４−イル−２−（５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−プロピオニルアミノ］−酪酸
一般手順、方法Ｂに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−ビフェニルアラニン（０．６８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）から出発して、所望化合物（３０３ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.30-1.70 (series of m, 6H), 1.85-1.95 (m, 1H), 2.02 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.15-2.25 (m, 1H), 2.77 (dd, J= 10.2, 13.8 Hz, 1H), 2.85-3.35 (series of m, 5H), 4.35-4.45 (m, 1H), 7.06 (br s, 1H), 7.25-7.4 (m, 3H), 7.44 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 7.55 (d, J=
8.4 Hz, 2H), 7.64 (d, J= 8.4 Hz) 8.18 (t, J= 5.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 9.81 (br s, 1H); EIMS: 468.7 (MH)+. Anal. (C25H33N5O4・1.8 H2O) C, H, N。
【０２４６】
４−［（Ｒ）−３−フェニル−２−（５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−プロピオニルアミノ］−酪酸
一般手順、方法Ｂに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フェニルアラニン（０．５３ｇ、２．０ｍｍｏｌ）から出発して、所望化合物（１５２ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.25-1.65 (series of m, 6H), 1.85-2.00 (m, 1H), 2.03 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.10-2.20 (m,
1H), 2.72 (dd, J= 10.0, 13.6 Hz, 1H), 2.85-3.25 (series of m, 6H), 4.33-4.43 (m, 1H), 7.10-7.30 (m, 7H), 8.11 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 8.16 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 9.17
(br s, 1H); EIMS: 392.5 (MH)+. Anal.(C19H29N5O4・0.5 MeSO3H・0.5 H2O) C, H, N。
【０２４７】
４−［（Ｓ）−３−フェニル−２−（５−グアニジノ−ペンタノイルアミノ）−プロピオニルアミノ］−酪酸
一般手順、方法Ｂに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン（０．５３ｇ、２．０ｍｍｏｌ）から出発して、所望化合物（１４０ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.25-1.65 (series of m, 6H), 1.95-2.15 (m, 4H), 2.03 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.10-2.20 (m,
1H), 2.72 (dd, J= 10.0, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (series of m, 6H), 4.35-4.50 (m, 1H), 7.10-7.30 (m, 5H), 7.50 (br s, 1H), 8.07 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.60 (br s, 1H); EIMS: 392.5 (MH)+. Anal.(C19H29N5O4・0.55 MeSO3H・0.5 H2O) C, H, N。
【０２４８】
方法Ｂを用いて合成した化合物の例は、以下を含む：
【０２４９】
【化４２】
2008509228.tif 000049
【０２５０】
【化４３】
2008509228.tif 000050
【０２５１】
方法Ｃ
４−（２−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）ブタン酸
ジクロロメタン（５ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−２−アミノインダン−２−カルボン酸Ｃ−１（０．２０ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の懸濁液にＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．１０ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。その溶液をＮ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアグマチンＣ−２（０．１７４ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）で処理し、３時間攪拌した。水（１５ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（１５ｍＬ）及びブライン（１５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｃ−３を直接次の工程に使用した。固体Ｃ−３をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン、４−ＡＭＰ、（０．５４ｇ、４．７ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で一晩攪拌し、その後クロロホルム（９ｍＬ）で希釈した。有機相をリン酸緩衝液ｐＨ５．５
（３×１５ｍＬ）、水（１５ｍＬ）、ブライン（１５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｃ−４を直接次の工程に使用した。アミンＣ−４（０．１７２ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．５ｍＬ）に溶解し、次に無水グルタル酸（０．１４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）で処理して、室温で４．５時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去して残留物Ｃ−５を得、それをＴＦＡで処理した。混合物を２時間攪拌し、その後過剰のＴＦＡを減圧下で除去した。粗生成物Ｃ−６をＤＭＦと水に溶解し、ＮａＨＣＯ３で処理した（０．１０ｇ、泡立ちが起こった）。粗生成物Ｃ−６を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製し、その後凍結乾燥によって溶媒を除去して、所望生成物（４６ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): 1.45-1.75 (series of m, 6H), 2.00 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.10 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.00-3.15 (m, 4H), 3.20 (d, J= 16.4 Hz, 2H), 3.43 (d, J= 16.8 Hz, 2H), 7.0-7.2 (m, 6H), 8.21 (s, 1H); EIMS: 404.5 (MH)+. Anal.(C201H29N5O4・0.5 CF3COOH H2O・0.5 H2O) C, H, N。
【０２５２】
【化４４】
2008509228.tif 000051
【０２５３】
方法Ｄ
３−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）プロパン酸
０℃のジクロロメタン（５ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンＤ−１（０．３８７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の懸濁液にトリエチルアミン（０．１５ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は透明になり、次にそれをＴＢＴＵ（０．３２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を放置して室温に温め、１．５時間攪拌した。その溶液をＮ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアグマチンＤ−２（０．３３０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）で処理し、１時間２０分間攪拌した。水（１０ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（１５ｍＬ）及びブライン（１５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｄ−３を直接次の工程に使用した。固体Ｄ−３をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン（１．２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で２時間攪拌し、その後クロロホルム（２０ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（２×３０ｍＬ）、リン酸緩衝液ｐＨ５．５（３×３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｄ−４を直接次の工程に使用した。アミンＤ−４（０．２２８ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５ｍＬ）に懸濁し、次に無水コハク酸（０．０５５ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）で処理して、室温で１．０時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去してゴム状残留物Ｄ−５を得た。残留物Ｄ−５をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却して、ＴＦＡ（２ｍＬ）で処理した。混合物を３時間
攪拌し、その後溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｄ−６を水（２ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３で処理した（０．０５５ｇ、泡立ちが起こった）。粗生成物を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製し、その後凍結乾燥によって溶媒を除去して、所望生成物（５７ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.40-1.68 (series of m, 4H), 1.75-1.85
(m, 1H), 2.05-2.40 (series of m, 3H), 2.72 (dd, J= 10.8, 14.0 Hz, 1H), 2.95-3.25 (series of m, 5H), 4.23-4.35 (m, 1H), 7.03 (br s, 2H), 7.15-7.30 (m, 5H), 7.90
(t, J= 4.6 Hz, 1H), 8.20 (d, J= 8.4 Hz, 1H); EIMS: 378.5 (MH)+. Anal. (C18H27N5O4・0.07 CF3COOH・2.10 H2O) C, H, N。
【０２５４】
４−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−２，２−ジメチルブタン酸
２，２−ジメチルグルタル酸無水物を環状無水物として使用する一般手順、方法Ｄに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンから出発して、所望化合物（４０ｍｇ）を生成した。1H-NMR (DMSO-d6): d 0.96 (s, 6H), 1.30-2.15 (series of m, 8H), 2.73 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.35 (series of m, 6H), 4.30-4.45 (m, 1H), 7.03 (br s,
2H), 7.10-7.35 (m, 7H), 7.81 (br s, 1H), 8.09 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 9.41 (br s, 1H); EIMS: 420.5 (MH)+. Anal.(C21H33N5O4・0.47CF3COOH・0.2 H2O) C, H, N。
【０２５５】
３−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−２，２−ジメチルプロパン酸
２，２−ジメチルグルタル酸無水物を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｄに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンから出発して、所望化合物（５４ｍｇ）を生成した。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.01 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.40-1.65 (m, 4H), 1.74 (d, J= 13.6Hz, 1H), 2.37 (d, J= 13.6Hz, 1H), 2.71 (dd, J= 10.6, 13.8 Hz, 1H), 2.90-3.25 (m, 5H), 4.20-4.21 (m, 1H), 7.01 (br s, 2H), 7.12-7.28 (m, 5H), 8.09 (d,, J= 8.4Hz, 2H), 9.7 (br s, 1H); EIMS: 406.5 (MH)+. Anal. (C20H31N5O4・0.2 CF3COOH・1.0 H2O) C, H, N。
【０２５６】
３−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−ジメチルプロパン酸
２，２−ジメチルグルタル酸無水物を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｄに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンから出発して、所望化合物（３０ｍｇ）を生成した。1H-NMR (DMSO-d6): d 0.80 (s, 3H), 0.84 (s, 3H), 1.40-1.70 (m, 4H), 2.04 (d, J= 14.8Hz, 1H), 2.56 (d, J= 14.8Hz, 1H), 2.83 (dd, J= 12.0, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.35 (series of m, 5H), 4.3-4.4 (m, 1H), 6.90 (s, 2H), 7.1-7.3 (m, 5H), 7.56 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 8.28 (s, 1H), 10.19 (br s, lH); EIMS: 406.5 (MH)+. Anal. (C20H31N5O4・0.2 CF3COOH・1.0 H2O) C, H, N。
【０２５７】
【化４５】
2008509228.tif 000052
【０２５８】
方法Ｅ
３−（（Ｒ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−２，２−ジメチルプロパン酸
０℃のＴＨＦ（５ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルＥ−１（０．５５６ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）、次いでＮ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアグマチンＥ−２（０．３３０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加し、３０分間攪拌した。反応物を放置して室温に温め、４時間攪拌した。水（１５ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（３０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮して固体Ｅ−３を得た。この固体をヘキサンに懸濁し、−２０℃に冷却して、その後ろ過によって収集した。生成物Ｅ−３を直接次の工程に使用した。固体Ｅ−３をＤＣＭ（８ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン（１．２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で１時間攪拌し、その後クロロホルム（１７ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（３５ｍＬ）、リン酸緩衝液ｐＨ５．５（３×３０ｍＬ）、ブライン（２４ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。アミンＥ−４（０．３５ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．０ｍＬ）に懸濁し、次に２，２−ジメチルコハク酸無水物（０．１１８ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）で処理して、室温で１．５時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去して白色残留物Ｅ−５を得、さらなる精製を行わずに直接次の工程に使用した。残留物をイソプロピルアルコール（５ｍＬ）に溶解した。混合物を氷浴で冷却し、ＨＣｌガスをこの溶液に通して５分間泡立たせ、その後同じ温度でさらに４５分間攪拌した。混合物を放置して室温に温め、１５分間攪拌して、その後溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｅ−６を水（２．５ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３で処理した（０．０６５ｇ、泡立ちが起こった）。粗生成物Ｅ−６を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製し、その後凍結乾燥によって溶媒を除去して、所望生成物（５６ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.00 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.40-1.65 (m, 4H), 1.78 (d, J= 13.6Hz, 1H), 2.37 (d, J= 13.6Hz, 1H), 2.71 (dd, J= 10.6, 13.8 Hz, 1H), 2.90-3.25 (m, 5H), 4.20-4.21 (m, 1H), 7.06 (br s, 2H), 7.12-7.28 (m, 5H), 8.05-8.14 (m, 2H); EIMS: 406.5 (MH)+. Anal. (C20H3lN5O4・2.0 H2O) C, H, N。
【０２５９】
４−（（Ｒ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）ブタン酸
０℃のＴＨＦ（４．５ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−フェニルアラニンペンタフルオロ
フェニルエステルＥ−１（０．５６ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を添加し、その後Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアグマチンＥ−２（０．３４３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を０℃で１時間攪拌し、その後水（１５ｍＬ）で反応を停止させた。水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（２５ｍＬ）、ブライン（２５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物Ｅ−３をエーテルで沈殿させ、次にエーテルを除去して、残った固体をヘキサンで粉砕した。固体をろ過によって収集し、さらなる精製を行わずに直接次の工程で使用した。固体Ｅ−３をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン（１．０ｇ、８．８ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で１時間攪拌し、その後クロロホルム（１８ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（３０ｍＬ）、リン酸緩衝液ｐＨ５．５（３×３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｅ−４の一部を直接次の工程に使用した。粗アミンＥ−４（０．２２ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２．５ｍＬ）に溶解し、次に無水グルタル酸（０．１１ｇ、０．９９ｍｍｏｌ）で処理して、室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去してガラス状残留物Ｅ−５を得た。この残留物をエーテルで超音波処理して固体を得、それを−２０℃で一晩保存した。エーテルを除去し、次に固体Ｅ−５をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解して、０℃に冷却し、ＴＦＡで処理した。混合物を放置して室温に温め、１時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、生じた残留物Ｅ−６を水（２ｍＬ）に溶解して、次にＮａＨＣＯ３で処理した（泡立ちが起こった）。粗生成物Ｅ−６を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製し、その後凍結乾燥機によって溶媒を除去して、所望生成物（８１ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.35-2.25 (series of m, 11H), 2.70 (dd, J= 10.8, 13.6 Hz, 1H), 2.85-3.00 (m,
2H), 3.05-3.20 (m, 2H), 3.25-3.40 (m, 1H), 4.35-4.45 (m, 1H), 7.10-7.30 (m, 7H), 8.15-8.25 (m, 2H), 9.57 (br s, 1H); EIMS: 392.5 (MH)+. Anal. (C19H29N5O4・2.0 H2O) C, H, N。
【０２６０】
３−（（Ｒ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）プロパン酸
無水コハク酸を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｅに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発して、所望化合物９０ｍｇを生成した。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.40-1.85 (series of m, 5H), 2.05-2.40 (series
of m, 3H), 2.71 (dd, J= 11.6, 14.0 Hz, 1H), 2.95-3.35 (series of m, 6H), 4.20-4.35 (m, 1H), 6.95 (br s, 2H), 7.10-7.30 (m, 5H), 7.89 (t, J= 4.4 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 10. 0 (s, 1H); EIMS: 378.5 (MH)+. Anal. (C18H27N5O4・0.11 CF3COOH・1.44 H2O) C, H, N。
【０２６１】
４−（（Ｒ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−２，２−ジメチルブタン酸
２，２−ジメチルグルタル酸無水物を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｅに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発して、所望化合物（７２ｍｇ）を生成した。融点１６９℃；1H-NMR (DMSO-d6): d 0.939 (s, 3H), 0.942 (s, 3H), 1.25-2.15 (series of m, 8H), 2.73 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.85-3.35 (series of m, 6H), 4.30-4.45 (m, 1H), 7.03 (br s, 2H), 7.0-7.3 (m, 8H), 7.74 (s, 1H), 8.09 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 10.02 (s, 1H); EIMS: 420.5 (MH)+. Anal. (C21H33N5O4・2.0 H2O) C, H, N。
【０２６２】
４−（（Ｒ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−ジメチルブタン酸
３，３−ジメチルグルタル酸無水物を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｅに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発し
て、所望化合物（４６ｍｇ）を生成した。1H-NMR (DMSO-d6): d 0.85 (s, 3H), 0.99 (s,
3H), 1.35-1.65 (m, 4H), 1.93 (s, 2H), 2.02 (d, J= 12.8, 1H), 2.13 (d, J= 12.8Hz, 1H), 2.70-3.20 (series of m, 5H), 2.56 (d, J= 14.8Hz, 1H), 2.83 (dd, J= 12.0, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.35 (series of m, 5H), 4.40 (dd, J= 7.8, 13.8 Hz, 1H), 7.0 (br s, 2H), 7.1-7.3 (m, 5H), 8.10 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 9.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 10.1 (br s, 1H); EIMS: 420.5 (MH) +. Anal. (C21H33N5O4・0.25 CF3COOH・2.04 H2O) C,
H, N。
【０２６３】
４−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−テトラメチレンブタン酸
３，３−テトラメチレングルタル酸無水物を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｅに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発して、所望化合物（６４ｍｇ）を生成した。1H-NMR (DMSO-d6): 1.10-1.70 (series of m, 12H), 1.97 (dd, J= 11.4, 19.8Hz, 2H), 2.04 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 2.22 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 2.77 (dd, J= 8.8, 13.6Hz, 1H), 2.80-3.20 (series of m, 4H) 4.35-4.45 (m, 1H), 6.95 (s, 2H), 7.1-7.3 (m, 5H), 8.26 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 8.77 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 10.0 (br s, 1H); EIMS: 446.5 (MH)+. Anal.(C23H35N5O4・2.0 H2O) C,
H, N。
【０２６４】
４−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−ペンタメチレンブタン酸
１，１−シクロヘキサンニ酢酸無水物を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｅに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発して、所望化合物（２４ｍｇ）を生成した。1H-NMR (DMSO-d6): 1.10-1.60 (series of m, 14H), 1.95-2.10 (m, 3H), 2.19 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 2.70-3.15 (series of, 5H), 4.40 (dd, J= 7.8, 14.2Hz, 1H), 6.96 (s, 2H), 7.1-7.3 (m, 5H), 8.13 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 9.24 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 10.0 (br s, 1H); EIMS: 460.6 (MH)+. Anal. (C24H37N5O4・2.0 H2O) C, H, N。
【０２６５】
４−（（Ｓ）−１−（４−グアニジノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−ジメチルブタン酸
３，３−ジメチルグルタル酸無水物を無水物として使用する、一般手順、方法Ｅに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発して、所望化合物（７６ｍｇ）を生成した。1H-NMR (DMSO-d6): 0.85 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 1.35-1.60 (m, 4H), 1.93 (s, 2H), 2.02 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 2.12 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 2.70-3.15 (series of, 5H), 4.40 (dd, J= 8.0, 14.0Hz, 1H), 6.95 (s, 2H), 7.1-7.3 (m, 5H), 8.05-8.15 (m, 1H), 9.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 10.09 (s, 1H); EIMS: 420.5 (MH)+. Anal. (C21H33N5O4・1.3 H2O) C, H, N。
【０２６６】
【化４６】
2008509228.tif 000053
【０２６７】
方法Ｆ
４−（（Ｓ）−１−（４−（２，３−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグアニジノ）ブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）ブタン酸
０℃のＴＨＦ（１．５ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルＦ−１（０．１８５ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（０．０５ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、その後Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアグマチンＦ−２（０．１１１ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を０℃で１５分間攪拌し、その後反応物を放置して室温に温め、２時間攪拌した。水（５ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮して中間体Ｆ−３を得、それを次の工程で直接使用した。固体Ｆ−３をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン（０．２９ｇ、２．５ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で３時間攪拌し、その後クロロホルム（８ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（２×１０ｍＬ）、リン酸緩衝液ｐＨ５．５（３×１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｆ−４を直接次の工程に使用した。アミンＦ−４をＴＨＦ（１．０ｍＬ）に溶解し、次に無水グルタル酸（０．０３ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）で処理して、室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去して粗生成物を得た。粗生成物Ｆ−５を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物を白色固体として得た（１７ｍｇ）。融点８６℃；lH-NMR (DMSO-d6): 1.35-1.45 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 1.47 (s, 9H), 1.50-1.65
(m, 2H), 2.00-2.15 (m, 4H), 2.60-3.35 (series of, 7H), 4.40-4.45 (m, 1H), 6. 95
(s, 2H), 7.1-7.3 (m, 5H), 7. 96 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.06 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.26 (t, J= 5.4 Hz, 1H); EIMS: 592.7 (MH)+. Anal. (C29H45N5O8・0.55 H2O) C, H, N。
【０２６８】
【化４７】
2008509228.tif 000054
【０２６９】
方法Ｇ
Ｎ−（４−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イルアミノ）ブチル）−２−（４−（ホルミル−４−メチルペンタンアミド）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−カルボキサミド
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−２−アミノインダン−２−カルボン酸Ｇ−１（０．５５ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の懸濁液にＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．３９ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。その溶液をＮ−カルボベンズオキシ−１，４−ジアミノブタン塩酸塩Ｇ−２（０．５２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、次いでトリエチルアミン（０．２８ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）で処理し、一晩攪拌した。水（６０ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｇ−３を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。固体Ｇ−３を酢酸エチル（１０ｍＬ）とエタノール（１０ｍＬ）の混合物に溶解し、窒素雰囲気下に置いて、その後１０％Ｐｄ／Ｃ（０．４４ｇ）を添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、６時間攪拌した。水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をヘキサン：エーテルで超音波処理して白色固体Ｇ−４を得、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。中間体アミンＧ−４（０．４２ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（８．５ｍＬ）に溶解し、２−メチルチオ−２−イミダゾリンヨウ化水素酸塩Ｇ−５（０．３０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）で処理して、３時間還流した。溶媒を減圧下で除去し、次にエーテルを添加して、再び減圧下で除去し、Ｇ−６を白色泡として得た。生じた白色泡Ｇ−６をイソプロピルアルコール（８ｍＬ）に溶解した。生じた溶液を氷浴で冷却し、次にＨＣｌガスをこの溶液に通して５分間泡立たせ、混合物をさらに１５分間攪拌して、その後減圧下で溶媒を除去した。残留物Ｇ−７をＤＭＦ（８．５ｍＬ）に溶解し、次にトリエチルアミン（０．１８ｍＬ、１．２９ｍｍｏｌ）、次いで２，２−ジメチルグルタル酸無水物を添加して、混合物を一晩攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物Ｇ−８を水（１ｍＬ）に溶解して、ＮａＨＣＯ３（０．２ｇ）で処理した。粗生成物Ｇ−８を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製し、その後凍結乾燥機で溶媒を除去して、所望生成物（７９ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 0.95 (s, 6H), 1.40 (br s, 4H), 1.59 (t, J= 7.8Hz, 2H), 2.07 (t, J= 7.8Hz, 2H), 3.06 (br s, 4H), 3.13 (d, J= 16.8 Hz, 2H), 3.43 (d, J= 16.8 Hz, 2H), 3.54 (br
s, 4H), 7.05-7.20 (m, 4H), 7.56 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 8.09 (br s, 1H), 11.0 (br s, 1H), 11.1 (br s, 1H); EIMS: 458.5 (MH)+. Anal. (C24H35N5O4・2.l2
H2O) C, H, N。
【０２７０】
【化４８】
2008509228.tif 000055
【０２７１】
方法Ｈ
Ｎ−（（Ｒ）−１−（４−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２−フェニルエチル）−４−ホルミルブタンアミド
０℃のＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フェニルアラニンＨ−１（０．２７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液にＰｙＢＯＰ（０．５２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加し、生じた混合物を５分間混合して、その後放置して室温に温め、さらに３０分間攪拌した。反応混合物をＮ−カルボベンズオキシ−１，４−ジアミノブタン塩酸塩Ｈ−２（０．２６ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、次いでトリエチルアミン（０．４４ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）で処理し、４時間攪拌した。水（２０ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をエーテル：ヘキサンで粉砕し、固体Ｈ−３をろ過によって収集した。生じた固体Ｈ−３を酢酸エチル（２ｍＬ）とエタノール（４ｍＬ）の混合物に溶解し、窒素雰囲気下に置いて、その後１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１０ｇ）を添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、６時間攪拌した。水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をヘキサン：エーテルで超音波処理して白色固体Ｈ−４を得、それをろ過によって収集して、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。中間体アミンＨ−４（０．１４５ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に溶解し、２−メチルチオ−２−イミダゾリンヨウ化水素酸塩Ｈ−５（０．１０ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）で処理して、２時間還流した。混合物を室温に放置冷却し、溶媒を減圧下で除去した。残留物エーテルで処理し、次に減圧下でエーテルを除去して、Ｈ−６を白色泡として得た。中間体Ｈ−６をメチルアルコール（５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却して、次にＨＣｌガスをこの溶液に通して５分間泡立たせた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物Ｈ−７を直接次の工程で使用した。残留物Ｈ−７をＴＨＦ（２．５ｍＬ）、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）及びＤＣＭ（２ｍＬ）の混合物に溶解し、次にトリエチルアミン（０．１２ｍＬ、０．８６ｍｍｏｌ）、次いで無水グルタル酸を添加した。混合物を４時間攪拌し、その後溶媒を減圧下で除去した。残留物を水（２ｍＬ）及びＤＭＳＯ（数滴）に溶解して、ＮａＨＣＯ３（０．０８８ｇ、泡立ちが起こった）で処理した。粗生成物Ｈ−８を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製し、その後凍結乾燥によって溶媒を除去して、所望生成物（２２ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): 1.25-2.25 (series of m, 11H), 2.69 (dd, J= 10.8, 13.6Hz, 1H), 2.85-3.20 (series of m, 5H), 3.54 (s, 4H), 4.35-4.45 (m, 1H), 7.1-7.3 (m, 5H), 8.09 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 8.19 (d, 1= 8.8 Hz, 1H), 10.8 (br s, 1H), 10.9 (br s, 1H); EIMS: 418.5 (MH)+. Anal.(C21H31N5O4・2.0 H2O) C, H, N。
【０２７２】
【化４９】
2008509228.tif 000056
【０２７３】
方法Ｉ
４−（２−（４−アミノブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）ブタン酸
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−２−アミノインダン−２−カルボン酸Ｉ−１（０．５５ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の懸濁液にＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．４０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。この溶液をＮ−カルボベンズオキシ−１，４−ジアミノブタン塩酸塩Ｉ−２（０．５３ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、次いでトリエチルアミン（０．２８ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）で処理し、一晩攪拌した。水（４０ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（４０ｍＬ）及びブライン（４０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。生じた残留物を酢酸エチル：ヘキサンで処理して白色固体Ｉ−３を得、それをろ過によって収集して、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。固体Ｉ−３をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却して、ＴＦＡ（１０ｍＬ）で処理した。反応混合物を３０分間攪拌し、放置して室温に温め、３時間攪拌して、その後減圧下で溶媒を除去した。残留物をクロロホルム（３０ｍＬ）に溶解し、次に有機溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｉ−４を次の工程に直接使用した。アミンＩ−４（０．６２ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６．６ｍＬ）に溶解し、次に無水グルタル酸（０．１８６ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）で処理して、室温で一晩攪拌した。さらなる無水グルタル酸（０．００９ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０５ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を一晩攪拌して、その後減圧下で溶媒を除去した。残留物をＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解し、１Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）で分配した。水相をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（２５ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｉ−５を直接次の工程で使用した。中間体Ｉ−５を窒素下でＴＨＦに溶解し、次に１０％Ｐｄ／Ｃ、次いでメタノールを添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、一晩攪拌した。混合物を窒素下に置き、次に固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｉ−６を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物を白色固体として得た（１５１ｍｇ）。融点１３２℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.40-1.50 (m, 2H), 1.50-1.60 (m, 2H), 1.60-1.70 (m, 2H), 1.98 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.08 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.71 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 3.07 (dd, 1= 5.4, 11.0 Hz, 2H), 3.17 (d, J= 16.8 Hz, 2H), 3.43
(d, J= 16.8 Hz, 2H), 7.1-7.2 (m, 4H), 8.17 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 8.30-8.40 (m, 1H); EIMS: 362.7 (MH)+. Anal.(C19H27N3O4・3.75 H2O) C, H, N。
【０２７４】
【化５０】
2008509228.tif 000057
【０２７５】
方法Ｊ
４−（２−（４−（２−シアノグアニジノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）ブタン酸
イソプロピルアルコール（５ｍＬ）中のＩ−８（０．１４０ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液をシアノカルボンイミド酸ジフェニルＪ−１（０．０９３ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）で処理し、３時間加熱還流した。混合物を室温に放置冷却し、その後減圧下で溶媒を除去した。粗物質Ｊ−２を直接次の工程に使用した。残留物Ｊ−２をエチルアルコール（６ｍＬ）に溶解し、次に０℃に冷却して、アンモニアガスを溶液に通して泡立たせた。反応容器を密閉し、混合物を室温で１７時間攪拌した。次に容器をフード内で開放し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｊ−３を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（２２ｍｇ）を白色固体として得た。融点１０５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.38 (s, 4H), 1.60-1.70 (m, 2H), 2.05-2.20 (m, 4H), 2.95-3.08 (m, 4H), 3.13 (d, J=
16.8 Hz, 2H), 3.44 (t, J= 16.8 Hz, 2H), 6.75 (br s, 2H), 7.05-7.20 (m, 5H), 7.78 (br s, 1H), 8.20 (s, 1H); EIMS: 429.5 (MH)+. Anal. (C21H28N6O4・1.00 H2O) C, H, N。
【０２７６】
【化５１】
2008509228.tif 000058
【０２７７】
方法Ｋ
４−（（Ｓ）−１−（４−アミノブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）ブタン酸
０℃のＴＨＦ（４．５ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルＫ−１（０．５６ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＮ−（４−アミノブチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルＫ−２（０．１９５ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を放置して室温に温め、３時間攪拌した。水（１５ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をエーテルで沈殿させ、その後エーテルを除去して、残った固体を酢酸エチル：ヘキサンで粉砕した。固体Ｋ−３をろ過によって収集し、さらなる精製を行わずに直接次の工程で使用した。固体Ｋ−３をＤＣＭ（１１ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン（１．０ｇ、８．８ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で１時間攪拌し、その後クロロホルム（２５ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（２×３０ｍＬ）、リン酸緩衝液ｐＨ５．５（３×３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｋ−４を直接次の工程に使用した。アミンＫ−４（０．３０ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３．５ｍＬ）に懸濁し、次に無水グルタル酸（０．１１ｇ、０．９９ｍｍｏｌ）で処理して、室温で３時間攪拌した。エーテルと酢酸エチルを添加して生成物Ｋ−５を沈殿させた。固体Ｋ−５をろ過によって収集した。固体Ｋ−５をＤＣＭ（３．５ｍＬ）に懸濁し、０℃に冷却して、ＴＦＡ（３．５ｍＬ）で処理した。混合物を０℃で３０分間攪拌し、その後放置して室温に温め、２時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｋ−６を水（１ｍＬ）及びＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、次にＮａＨＣＯ３で処理して（０．０６３ｇ、泡立ちが起こった）、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（１２ｍｇ）を白色固体として得た。融点１９２〜２０６℃；1H-NMR (DMSO-d6 and D2O): 1.25-1.60 (series of m, 6H), 1.92 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.00-2.10 (m, 2H) 2.65-2.80 (m, 3H), 2.90-3.05 (m, 3H), 4.31 (dd, J=
5.6, 9.6 Hz, 1H), 7.10-7.30 (m, 5H); EIMS: 350.5 (MH)+. Anal.(C18H27N3O4・0.55 CF3COOH・0.45 H2O) C, H, N。
【０２７８】
【化５２】
2008509228.tif 000059
【０２７９】
方法Ｌ
４−（（Ｒ）−１−（４−（２−シアノグアニジノ）ブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）ブタン酸
一般手順、方法Ｋに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発して、中間体Ｋ−６を得た。中間体Ｋ−６（０．１９２ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（８ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．０８ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）に溶解し、次にシアノカルボンイミド酸ジフェニルＬ−１（０．１３ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加して、攪拌混合物を加熱還流した。混合物を還流で一晩攪拌し、その後室温に放置冷却した。追加分のシアノカルボンイミド酸ジフェニルＬ−１（０．０７２ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０５ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、その後混合物を一晩加熱還流した。混合物を室温に放置冷却し、その後減圧下で溶媒を除去した。粗物質Ｌ−２を直接次の工程に使用した。残留物Ｌ−２をエチルアルコール（８．５ｍＬ）に溶解し、次に０℃に冷却して、アンモニアガスを溶液に通して３分間泡立たせた。反応容器を密閉し、混合物を室温で２２時間攪拌した。次に容器をフード内で開放し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｌ−３を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（１０ｍｇ）を白色固体として得た。融点63℃；1H-NMR (DMSO-d6): 0.9-1.0 (m, 3H), 1.2-1.4 (m, 5H), 1.5-1.7 (m, 2H), 1.9-2.2 (m, 4H), 2.6-2.8 (m, 1H), 2.85-3.15 (m, 6H), 4.3-4.5 (m, 1H), 6.82 (br s, 2H), 7.1-7.3 (m, 6H), 7.95-8.15 (m, 2H); EIMS: 417.5 (MH)+. Anal. (C20H28N6O4・0.4 EtOH・1.20 H2O) C, H, N。
【０２８０】
【化５３】
2008509228.tif 000060
【０２８１】
方法Ｍ
４−（（Ｓ）−１−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２
−フェニルエチルカルバモイル）ブタン酸
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニンＭ−１（０．５３ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．２７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．３９ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。この溶液をＮ−カルボベンズオキシ−１，４−ジアミノブタン塩酸塩Ｍ−２（０．５２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、次いでトリエチルアミン（０．３ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）で処理して、５時間攪拌した。水（３０ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｍ−３を酢酸エチル：ヘキサンで粉砕して、白色固体を得、それをろ過によって収集した。生成物Ｍ−３を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。固体Ｍ−３をＴＨＦ（４．５ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下に置いて、その後１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０８４ｇ）、次いでメタノール（８．５ｍＬ）を添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、一晩攪拌した。その後水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去して固体Ｍ−４を得、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。中間体Ｍ−４（０．２８５ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をエチルアルコール（４ｍＬ）に溶解し、次に２−クロロピリミジンＭ−５（０．１９６ｇ、１．７ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を２２時間還流し、室温に放置冷却した。溶媒を減圧下で除去して生成物Ｍ−６を得た。残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、次に水（２５ｍＬ）で分配した。水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（２５ｍＬ）及びブライン（２５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｍ−６を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。固体Ｍ−６をＤＣＭ（３．５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却して、ＴＦＡ（３．５ｍＬ）で処理した。反応混合物を３０分間攪拌し、その後放置して室温に温め、２時間攪拌して、その後溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｍ−７を直接次の工程に使用した。アミンＭ−７をＴＨＦ（３．５ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．２２ｍＬ）に溶解し、次にその混合物を無水グルタル酸（０．０９４ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）で処理して、室温で一晩攪拌した。粗生成物Ｍ−８を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（４５ｍｇ）を白色固体として得た。融点１８６℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.30-1.70 (series of m, 6H), 1.95-2.15 (m, 4H), 2.71 (br t, J=11.8 Hz, 1H), 2.85-3.15 (m, 3H), 3.21 (br d, J=6.0 Hz, 2H), 4.35-4.50 (m, 1H), 6.45-6.55 (m,
1H), 7.10-7.30 (m, 6H), 7.96 (br s, 1H), 8.05 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.23 (br d, J= 4.4 Hz, 2H); EIMS: 428.5 (MH)+. Anal. (C22H29N5O4) C, H, N。
【０２８２】
４−｛（Ｓ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（５６ｍｇ）を白色固体として得た。融点 ２２８℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.35-1.50
(m, 4H), 1.55-1.65 (m, 2H), 2.00-2.15 (m, 4H), 2.77 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 4H), 3.21 (dd, J= 6.6, 12.6 Hz, 2H), 4.40-4.55 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.35 (m, 3H), 7.43 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.62 (d, J= 7. 2 Hz, 2H), 8.01 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.2-8.3 (m, 2H); EIMS: 504.3 (MH)+. Anal.(C28H33N5０4) C, H. N。
【０２８３】
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（５０ｍｇ）を白色固体として得た。融点２２７℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.30-1.70 (series of m, 6H), 2.00-2.15 (m, 4H), 2.77 (dd, J= 9.6, 13.2 Hz, 1 H), 2.90-3.15
(m, 3H), 3.21 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 4.40-4.55 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.12 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.43 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.62 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 8.00 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.10 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 4.8 Hz, 2H); EIMS: 504.3 (MH)+. Anal.(C28H33N5O4・0.20 H2O) C, H, N。
【０２８４】
４−｛（Ｒ）−１−４−［（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−２−フェニルエチルカルバモイル｝−２，２−ジメチル酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（６０ｍｇ）を白色固体として得た。1H-NMR (DMSO-d6): 1.01 (s, 6H), 1.30-1.60 (m, 6H), 1.90-2.10 (m, 2H), 2.71 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.80-3.15 (series of
m, 3H), 3.21 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 4.35-4.45 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 7.05-7.25 (m, 6H), 7.95 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 4.8 Hz, 1H); EIMS: 456.5 (MH)+. Anal. (C24H33N5O4・0.08 CF3COOH) C, H, N。
【０２８５】
４−（（Ｒ）−１−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−ジメチルブタン酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フェニルアラニンから出発して、所望化合物（６４ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): 0.83 (s, 3H), 0.86 (s, 3H), 1.30-1.50 (m, 4H), 2.05-2.20 (m, 4H), 2.71 (dd, J= 9.8, 13.8 Hz, 1H), 2.85-3.15 (series of m, 3H), 3.21 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 4.40-4.55 (m, 1H), 6.51 (I, J= 4.6 Hz, 1H), 7.05-7.30 (m, 6H), 7.96 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 4.8
Hz, 1H); EIMS: 456.5 (MH)+. Anal.(C24H33N5O4・0.08 CF3COOH・0.02 MeCN) C, H, N。
【０２８６】
Ｎ−｛（Ｓ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチル｝−スクシンアミド酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（７２ｍｇ）を得た。融点２００−２０５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.30-1.60 (m, 4H), 2.20-2.40 (m, 4H), 2.70-3.15 (series of m, 4H), 3.21 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 4.40-4.50 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 7.12 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 8.4
Hz, 2H), 7.34 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.63 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.93 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 8.15-8.30 (m, 3H); EIMS: 490.6 (MH)+. Anal. (C27H31N5O4) C, H, N。
【０２８７】
４−｛（Ｓ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−テトラメチレン酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（７２ｍｇ）を得た。融点９５−１０２℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.10-1.60 (m, 12H), 2.10-2.40 (m, 4H), 2.76 (dd, J=10, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 3H), 3.22 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 4.45-4.60 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.12 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.61 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.99 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.15-8.30 (m, 2H); EIMS: 558.5 (MH)+. Anal. (C32H39N5O4・0.25 H2O) C, H, N。
【０２８８】
４−｛（Ｓ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−ペンタメチレン酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（９７ｍｇ）を得た。融点９６−１１０℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.00-1.60 (m, 14H), 2.10-2.40 (m, 4H), 2.76 (dd, J= 10.4, 13.6 Hz, 1H), 2.95-3.15 (m, 3H), 3.22 (q
, J= 6.4 Hz, 2H), 4.50-4.60 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.12 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.61
(d, J= 7.6 Hz, 2H), 8.01 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.17 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.20-8.30
(m, 2H); EIMS: 572.8 (MH)+. Anal. (C33H41N5O4・0.30 H2O) C, H, N。
【０２８９】
４−｛（Ｓ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−ジメチル酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（７２ｍｇ）を得た。融点６６−８９℃；1H-NMR (DMSO-d6): 0.84 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 1.30-1.60 (m, 4H), 2.0-2.2 (m, 4H), 2.77 (dd, J= 10.0, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 3H), 3.22 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 4.40-4.60 (m, 1H), 6.53 (t, 1= 4.8 Hz, 1H), 7.15-7.25 (m, 1H), 7.28-7.37 (m, 3H), 7.43 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.57-7.65 (m, 2H), 8.00 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.10 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.27 (d, J= 4.8 Hz, 2H); EIMS: 532.5 (MH)+ . Anal.(C30H37N5O4・1.00 H2O) C, H,
N。
【０２９０】
４−｛（Ｓ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−２，２−ジメチル酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（９１ｍｇ）を得た。融点７６−１０１℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.01 (s, 6H), 1.30-1.70 (series of m, 6H), 1.95-2.10 (m, 2H), 2.76 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 3H), 3.21 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 4.40-4.50 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.37 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.63 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.99 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 4.6 Hz, 2H); EIMS: 532.5 (MH)+. Anal.(C30H37N5O4・0.5 H2O) C, H, N。
【０２９１】
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−ペンタメチレン酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（９７ｍｇ）を得た。融点８８−１０５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.00-1.60 (series of m, 14H), 2.10-2.40 (m, 4H), 2.74 (dd, J= 10.2, 13.8 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 3H), 3.20 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 4.50-4.60 (m, 1H), 6.49 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 7.11 (t,
J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.35 (m, 3H), 7.42 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.53 (d, J= 8.0 Hz,
2H), 7.60 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.99 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 8.4 Hz, 1H),
8.20-8.30 (m, 2H); EIMS: 572.7 (MH)+. Anal. (C33H41N5O4・0.50 H2O) C, H, N。
【０２９２】
Ｎ−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチル｝−スクシンアミド酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（７０ｍｇ）を得た。融点２００−２０７℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.30-1.60 (m, 4H), 2.20-2.40 (m, 4H), 2.74 (dd, J= 9.2, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 3H), 3.21 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 4.40-4.50 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.11 (I, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.35 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.63
(d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.94 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8. 18 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.20-8.30 (m, 2H); EIMS: 490.6 (MH)+. Anal. (C27H31N5O4・0.50 H2O) C, H, N。
【０２９３】
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−テトラメチレン酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化
合物（８５ｍｇ）を得た。融点８５−９８℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.10-1.60 (series of
m, 12H), 2.10-2.40 (m, 4H), 2.76 (dd, J= 10.0, 13.6 Hz, 1H), 2.95-3.15 (m, 3H),
3.22 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 4.45-4.60 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.61 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 7.99 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.20-8.30 (m, 2H); EIMS: 490.6 (MH)+. Anal. (C27H31N5O4・0.50 H2O) C, H, N。
【０２９４】
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−ジメチル酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（８５ｍｇ）を得た。融点７７−９５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 0.84 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 1.30-1.60 (m, 4H), 2.00-2.20 (m, 4H), 2.77 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 3H), 3.21 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 4.45-4.60 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz,
1H), 7.11 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.43 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.61 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.99 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.20-8.30 (m, 2H); EIMS: 532.5 (MH)+. Anal.(C30H37N5O4・0.50 H2O)
C, H, N。
【０２９５】
４−（２−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−３，３−テトラメチレンブタン酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−２−アミノインダン−２−カルボン酸から出発して、所望化合物（８５ｍｇ）を得た。融点７７−９５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.30-1.60 (m, 12H), 2.23 (s, 2H), 2.29 (s, 2H), 3.06 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 3.12 (d, J= 16.4 Hz, 2H), 3.22 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 3.43 (d, J= 16.8 Hz, 2H), 6.52 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.05-7.20 (m, 5H), 7.64 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.20-8.30 (m, 3H); EIMS: 532.5 (MH)+. Anal. (C30H37N5O4・0.50 H2O) C, H, N。
【０２９６】
４−（２−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−３，３−ジメチルブタン酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−２−アミノインダン−２−カルボン酸から出発して、所望化合物（２１ｍｇ）を得た。７０−８３℃；1H-NMR (DMSO-d6): 0.93 (s, 6H), 1.30-1.60 (m, 4H), 2.07 (s, 1H), 2.11 (s, 2H), 2.16 (s, 2H), 3.06 (q, J= 6. 8 Hz, 2H), 3.13 (d, J= 16.4 Hz, 2H), 3.22 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 3.43 (d, J= 16.8 Hz,
2H), 6.52 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.05-7.20 (m, 5H), 7.64 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.20-8.30 (m, 3H); EIMS: 468.6 (MH)+. Anal.(C25H33N5O4・1.10 H2O) C, H, N。
【０２９７】
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−２，２−ジメチル酪酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（６２ｍｇ）を得た。融点８５−９８℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.01 (s, 6H), 1.30-1.70 (series of m, 6H), 1.90-2.10 (m, 2H), 2.76 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 3H), 3.21 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 4.40-4.50 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.62 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.98 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 4.8 Hz, 2H); EIMS: 532.5 (MH)+. Anal.(C30H37N5O4・0.75 H2O) C, H, N。
【０２９８】
４−（２−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−３，３−ペンタメチレンブタン酸
一般手順、方法Ｍに従ってＮ−Ｂｏｃ−２−アミノインダン−２−カルボン酸から出発
して、所望化合物（４０ｍｇ）を得た。融点８９−９８℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.20-1.55 (m, 15H), 2.21 (s, 2H), 2.27 (s, 2H), 3.06 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 3.13 (d, J= 16.
4 Hz, 2H), 3.22 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 16.8 Hz, 2H), 6.52 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 7.05-7.20 (m, 5H), 7.65 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.20-8.30 (m, 3H); EIMS: 508.6 (MH)+. Anal. (C28H37N5O4・0.80 H2O) C, H, N。
【０２９９】
【化５４】
2008509228.tif 000061
【０３００】
方法Ｎ
ペンタン二酸｛（Ｓ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチル｝−アミド（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のＭ−８（０．２０３ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の懸濁液をＮ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（０．０７１ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）で処理し、３０分間６０℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、その後ＤＭＦ（０．５ｍＬ）を加えて透明な溶液を得た。溶液を１５分間６０℃に加熱し、その後室温に放置冷却し、トリエチルアミン（０．０６３ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）、次いで５−アミノテトラゾール（０．０３５ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を５時間加熱還流し、その後放室温に放置冷却した。溶媒を減圧下で除去し、次に１０％クエン酸を添加して、生じた沈殿物をろ過によって収集した。粗生成物Ｎ−１を逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望化合物（２３ｍｇ）を白色固体として得た。融点２３７℃で分解; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.3-1.5 (m, 4H), 1.65-1.80 (m, 2H), 2.05-2.15 (m, 2H), 2.20-2.40 (m, 2H), 2.77 (dd, J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.90-3.15 (m, 4H), 3.21 (dd, J= 6.4, 12.8 Hz, 2H), 4.40-4.55 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 7.25-7.35 (m, 3H), 7.39 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.58 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 8.02 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.2-8.3 (m, 2H); EIMS: 571.5 (MH)+. Anal. (C29H34N10O3・0.21 citric acid) C,H,N。
【０３０１】
【化５５】
2008509228.tif 000062
【０３０２】
方法Ｏ
（Ｒ）−４−（２−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−４−アセトアミドブタン酸
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−２−アミノインダン−２−カルボン酸Ｏ−１（０．５６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の懸濁液にＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．３８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。その溶液をＮ−カルボベンズオキシ−１，４−ジアミノブタン塩酸塩Ｏ−２（０．５２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、次いでトリエチルアミン（０．３ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）で処理し、一晩攪拌した。水（３０ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｏ−３を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。固体Ｏ−３をＴＨＦ（８．８ｍＬ）に溶解し、次に窒素雰囲気下で１０％Ｐｄ／Ｃ（０．４４ｇ）を添加し、次いでメタノール（１７．５ｍＬ）を添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、一晩攪拌した。その後水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去して白色固体Ｏ−４を得、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。中間体Ｏ−４（０．６５３ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）をエチルアルコール（８．８ｍＬ）に溶解し、２−クロロピリミジンＯ−５（０．４２ｇ、３．６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．６３ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を一晩還流し、その後室温に放置冷却した。溶媒を減圧下で除去した。残留物をＤＣＭ（４０ｍＬ）に溶解し、次に水（５０ｍＬ）で分配した。水相をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｏ−６を、さらなる精製を行わずに
次の工程で使用した。固体Ｏ−６をＤＣＭ（７．５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却して、ＴＦＡ（７．５ｍＬ）で処理した。反応混合物を３０分間攪拌し、その後放置して室温に温め、３時間攪拌して、その後溶媒を減圧下で除去した。粗混合物をクロロホルム（４０ｍＬ）に溶解し、その溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）で分配した。水相をクロロホルム（２×４０ｍＬ）で抽出した。併合有機相をブライン（６０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｏ−７を次の工程で使用した。ジクロロメタン（３．５ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−グルタミン酸５−ｔｅｒｔ−ブチルエステルＯ−８（０．３０ｇ、０７１ｍｍｏｌ）の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．０９５ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．１４ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。その溶液を、カニューレを通してＤＣＭ（２ｍＬ）中のアミンＯ−７（０．２３ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）で処理し、一晩攪拌した。水（１０ｍＬ）で反応を停止させ、水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（２０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｏ−９を次の工程で使用した。粗物質Ｏ−９をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、次にピペリジン（０．７ｍＬ）で処理した。反応混合物を２時間攪拌し、その後減圧下で溶媒を除去した。粗物質Ｏ−１０をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（０．１５ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を２時間攪拌し、次に追加分の無水酢酸（０．０５ｍＬ、０．５３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．１ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を一晩攪拌し、その後クロロホルム（７ｍＬ）で希釈した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。生じた残留物をエーテル：ヘキサンで粉砕し、粗物質Ｏ−１１を直接次の工程で使用した。中間体Ｏ−１１をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、次に０℃に冷却して、ＴＦＡ（２ｍＬ）で処理した。反応混合物を放置して室温に温め、１時間１５分間攪拌した。溶媒を減圧下で除去して粗生成物Ｏ−１２を得た。粗生成物Ｏ−１２を水（２．５ｍＬ）及びＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）に溶解し、次に泡立ちが止まるまでＮａＨＣＯ３を添加した。粗生成物Ｏ−１２を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（４１ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): 1.35-1.75 (series of m, 6H), 1.79 (s, 3H), 1.80-2.00 (m, 2H), 3.00-3.30 (series of
m, 7H), 3.44 (d, J= 3.2 Hz, 2H), 3.80-3.90 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 7.05-7.25 (m, 5H), 7.86 (t, J=5.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 8.66 (s, 1H); EIMS: 497.6 (MH)+. Anal.(C25H32N6O5・1.0 Na・0.1 CF3COOH・2.0 H2O) C, H, N。
【０３０３】
（Ｓ）−４−（２−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−４−アセトアミドブタン酸
一般手順、方法Ｏに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−グルタミン酸５−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを使用して、所望化合物（２０ｍｇ）を得た。融点７５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.35-1.55 (m, 4H), 1.60-1.80 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 2.00-2.25 (m, 2H), 3.05 (q, J= 6.0 Hz, 2H), 3.10-3.30 (m, 5H), 3.52 (d, J= 16.8 Hz, 2H), 3.95-4.05 (m, 1H), 6.54
(t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.10-7.30 (m, 5H), 7.53 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 6.0
Hz, 1H), 8.26 (d, J= 4.4 Hz, 2H), 8.51 (s, 1H); EIMS: 497.6 (MH)+. Anal. (C25H32N6O5・2.0 H2O) C, H, N。
【０３０４】
【化５６】
2008509228.tif 000063
【０３０５】
方法Ｐ
ペンタン二酸｛（Ｓ）−２−フェニル−１−［４−（ピリミジン−２−イルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチル｝−アミド（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−アミド
ＤＭＦ（４．２ｍＬ）中の４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イルカルバモイル）ブタン酸Ｐ−１の溶液に、ＤＩＣ（０．１２ｍＬ、０７７ｍｍｏｌ）、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．１０ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５分間攪拌し、その後カニューレを通してＤＭＦ（４．２ｍＬ）中のＭ−７で処理した。反応混合物を一晩攪拌し、その後減圧下で溶媒を除去した。粗生成物Ｐ−２を水に懸濁し、次に１Ｍ  ＮａＯＨ（０．８ｍＬ）で処理して、残りの固体をろ過によって除去した。その水溶液を酸性にし、固体をろ過によって除去した。粗生成物Ｐ−２を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（１８ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): d 1.30-1.5 (m, 4H), 1.65-1.75 (m, 2H), 2.00-2.15 (m, 2H), 2.33 (t, J=7.4 Hz, 1H), 2.72 (dd, J= 9.2, 13.6 Hz, 1H), 2.85-3.15 (m, 3H), 3.20 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 4.40-4.50 (m, 1H), 6.51 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 7.05-7.25 (m, 6H), 7.97 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 4.4 Hz, 2H); EIMS: 495.6 (MH)+。
【０３０６】
【化５７】
2008509228.tif 000064
【０３０７】
方法Ｑ
（Ｓ）−４−（２−（４−（グアニジノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−４−アセトアミドブタン酸アミド
ジクロロメタン（３ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−Ｎδ−トリチル−グルタミンＱ−１（０．３０５ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．０７０ｇ、０．５ｍｍｏｌ）、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．０９８ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。その溶液を、カニューレを通してＤＣＭ（２ｍＬ）中のＣ−４（０．２４ｇ、０．５ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を３
時間攪拌した。水（１０ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（１５ｍＬ）及びブライン（１５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｑ−２を次の工程に使用した。固体Ｑ−２をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン（０．５７ｇ、５．０ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を２時間攪拌し、その後ＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（２×１５ｍＬ）、リン酸緩衝液ｐＨ５．５（２×１５ｍＬ）、ブライン（２５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮してＱ−３を得た。粗物質Ｑ−３をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶解し、次にトリエチルアミン（０．１１ｍＬ、０．７９ｍｍｏｌ）、次いで無水酢酸（０．０９ｍＬ、０．９５ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を一晩攪拌し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈した。有機溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で分配した。水相をＤＣＭ（５ｍＬ）で抽出した。併合有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗物質Ｑ−４を直接次の工程で使用した。中間体Ｑ−４をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶解し、次にトリイソプロピルシランを添加した。その後混合物を０℃に冷却し、ＴＦＡ（１ｍＬ）で処理した。反応混合物を放置して室温に温め、３時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去してＱ−５を得、それを水、ＤＭＦ及びＤＭＳＯに溶解し、次にＮａＨＣＯ３（３２ｍｇ、泡立ちが起こった）を添加した。粗生成物Ｑ−５を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（８９ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): 1.42 (br s, 5H), 1.60-1.80 (m, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.90-2.10 (m, 2H), 3.00-3.60 (series of m, 10H), 3.90-4.00 (m, 1H), 6.80 (br s, 3H), 7.10-7.40 (m, 8H), 7.49 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 7.59 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H); EIMS: 460.5 (MH)+. Anal. (C25H32N6O5・1.04 CF3COOH・1.50 H2O) C, H, N。
（Ｒ）−４−（２−（４−（グアニジノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−４−アセトアミドブタン酸アミド
一般手順、方法Ｑに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｄ−Ｎδ−トリチル−グルタミンを使用することによって化合物を製造し、所望化合物９５ｍｇを生成した。1H-NMR (DMSO-d6): 1.42
(br s, 5H), 1.60-1.80 (m, 2H), 1.79 (s, 1H), 1.83 (s, 3H), 1.90-2.10 (m, 2H), 3.00-3.60 (series of m, 10H), 3.90-4.00 (m, 1H), 6.80 (br s, 3H), 7.10-7.40 (m, 9H), 7.50 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 7.59 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.21 (d, = 5.6 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H); EIMS: 460.5 (MH)+. Anal.(C25H32N6O5・1.2 CF3COOH・0.7 H2O) C, H, N。
【０３０８】
【化５８】
2008509228.tif 000065
【０３０９】
方法Ｒ
４−（（Ｓ）−１−（３−（ジメチルアミノ）プロピルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−テトラメチレンブタン酸
０℃のＴＨＦ（９ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルＲ−１（１．１１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に３−ジメチルアミノ−１−プロピルアミンＲ−２（０．２６ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５分間攪拌し、その後放置して室温に温め、２時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２５ｍＬ）で反応を停止させた。水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｒ−３を、さらなる精製を行わずに直接次の工程で使用した。残留物Ｒ−３をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、次にピペリジン（２．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を室温で２時間攪拌し、その後溶媒を除去した。粗生成物Ｒ−４の一部を次の工程に使用した。粗アミンＲ−４（０．１ｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次に３，３−テトラメチレングルタル酸無水物（０．０６７ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）で処理して、２時間攪拌し、その後追加分の３，３−テトラメチレングルタル酸無水物（０．０６７ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を一晩攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物Ｒ−５を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製した。溶媒を凍結乾燥機で除去して所望生成物（５８ｍｇ）を得た。1H-NMR (DMSO-d6): 0.93 (s, 6H), 1.20-1.60 (series of m, 11H), 2.12 (dd, J= 6.6, 13.8 Hz,
2H), 2.19 (s, 6H), 2.20-2.40 (m, 4H), 2.72 (dd, J=9.8, 13.8 Hz, 1H), 2.95-3.15 (m, 3H), 4.28 (br s, 2H), 4.40-4.50 (m, 1H), 7.10-7.30 (m, 5H), 8.04 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 8.4 Hz, 1H); EIMS: 418.5 (MH)+. Anal. (C23H35N3O4・0.75 H2O) C, H, N。
【０３１０】
４−（（Ｓ）−１−（３−（ジメチルアミノ）プロピルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル）−３，３−ペンタメチレンブタン酸
１，１−シクロヘキサンニ酢酸無水物を無水物として使用する、一般手順、方法Ｒに従ってＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステルから出発して、所望化合物（７８ｍｇ）を生成した。融点５９−７５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.10-1.60 (series of m, 13H), 2.0-2.4 (series of m, 7H), 2.18 (s, 6H), 2.72 (dd, J= 10.2, 13.8 Hz, 1H), 2.90-3.20 (m, 3H), 4.40-4.50 (m, 1H), 7.10-7.30 (m, 5H), 8.03 (t, J=5.6 Hz, 1H), 8.28 (d, J= 8.0 Hz, 1H); EIMS: 432.5 (MH)+.Anal. (C24H37N3O4・1.75 H2O) C, H, N。
【０３１１】
【化５９】
2008509228.tif 000066
【０３１２】
方法Ｓ
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［３−（ジメチルアミノ）−プロピルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−テトラメチレン酪酸
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のＮ−Ｃｂｚ−Ｄ−ビフェニルアラニンＳ−１（０．３
７５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．１３５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．１９２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。この溶液を３−ジメチルアミノ−１−プロピルアミンＳ−２（０．１３ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を２時間攪拌した。水（２０ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）及びブライン（２５ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｓ−３を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。生じた固体Ｓ−３をＴＨＦ（５．０ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下に置いて、その後１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０６５ｇ）、次いでメタノール（１０．０ｍＬ）を添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、一晩攪拌した。その後水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物Ｓ−４を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。粗アミンＳ−４（０．１１ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次に３，３−テトラメチレングルタル酸無水物（０．０６１ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）で処理して、一晩攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物Ｓ−５を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製した。溶媒を凍結乾燥機で除去して所望生成物（６２ｍｇ）を得た。
【０３１３】
融点６２−７３℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.20-1.60 (series of m, 12H), 2.1-2.2 (m, 2H), 2.20 (s, 6H), 2.25-2.40 (m, 4H), 2.77 (dd, J=10.0, 13.6 Hz, 1H), 3.00-3.15 (m, 4H), 4.45-4.55 (m, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.55 (d,
J= 8.4 Hz, 2H), 7.62 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 8.04 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.17 (d, J= 8.4 Hz, 1H); EIMS: 494.8 (MH)+. Anal.(C29H39N3O4・2.05 H2O) C, H, N。
【０３１４】
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［３−（ジメチルアミノ）−プロピルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−ペンタメチレン酪酸
１，１−シクロヘキサンニ酢酸無水物を環状無水物として使用する、一般手順、方法Ｓに従ってＮ−Ｃｂｚ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（７６ｍｇ）を生成した。融点８５−９５℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.10-1.60 (series of m, 13H), 2.1-4.2 (series of m, 7H), 2.17 (s, 6H), 2.25-2.40 (m, 4H), 2.77 (dd, J=10.0, 13.6 Hz, 1H), 3.00-3.15 (m, 3H), 4.45-4.55 (m, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6
Hz, 2H), 7.55 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.62 (d, J=7.2 Hz, 2H), 8.05 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 8.29 (d, J= 8.0 Hz, 1H); EIMS: 508.6 (MH)+. Anal.(C30H41N3O4・2.0 H2O) C, H,
N。
【０３１５】
４−｛（Ｒ）−２−ビフェニル−４−イル−１−［３−（ジメチルアミノ）−プロピルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−ジメチル酪酸
３，３−ジメチルグルタル酸無水物を無水物として使用する、一般手順、方法Ｓに従ってＮ−Ｃｂｚ−Ｄ−ビフェニルアラニンから出発して、所望化合物（５０ｍｇ）を生成した。融点８４−９２℃；1H-NMR (DMSO-d6): 0.87 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 1.40-1.60 (m, 2H), 2.06 (d, J= 13.6 Hz, 2H), 7H], 2.14 (s, 6H), 2.15-2.35 (m, 4H), 2.78 (dd,
J= 9.6, 13.6 Hz, 1H), 2.95-3.10 (m, 3H), 4.45-4.55 (m, 1H), 7.25-7.40 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.62 (d, J=6.8 Hz, 2H), 8.02 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 8.22 (br d, J= 8.4 Hz, 1H); EIMS: 468.5 (MH)+. Anal.(C27H37N3O4・0.25 HCI・0.5 H2O) C, H, N。
【０３１６】
【化６０】
2008509228.tif 000067
【０３１７】
方法Ｔ
４−｛（Ｓ）−２−フェニル−１−［４−（ジエチルアミノ）−ブチルカルバモイル］−エチルカルバモイル｝−３，３−テトラメチレン酪酸
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＮ−Ｃｂｚ−Ｌ−フェニルアラニンＴ−１（０．５９８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．２７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．３８４ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。この溶液を４−ジエチルアミノ−１−ブチルアミンＴ−２（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を２．５時間攪拌した。水（４０ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（１００ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｔ−３を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。生じた固体Ｔ−３をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下に置いて、その後１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１０ｇ）、次いでメタノール（２０ｍＬ）を添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、一晩攪拌した。その後水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物Ｔ−４を、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。粗アミンＴ−４（０．１８ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３．０ｍＬ）及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）に溶解し、次に３，３−テトラメチレングルタル酸無水物（０．１０ｇ、０．６ｍｍｏｌ）で処理して、一晩攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物Ｔ−５を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製した。溶媒を凍結乾燥機で除去して所望生成物（３２ｍｇ）を得た。融点６２−６８℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.01 (t, J= 7.2 Hz, 6H), 1.20-1.60 (series of m, 13H), 2.05-2.30 (series
of m, 4H), 2.45-2.55 (m, 4H), 2.62 (q, J= 7.2 Hz, 4H), 2.73 (dd, J= 9.4, 13.8 Hz, 1H), 2.90-3.20 (series of m, 3H), 4.12 (br s), 4.40-4.50 (m, 1H), 7.10-7.30 (m, 5H), 8.02 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 8.43 (d, J= 8.4 Hz, 1H); EIMS: 460.6 (MH)+.Anal. (C26H41N3O4・1.10 H2O) C, H, N。
【０３１８】
【化６１】
2008509228.tif 000068
【０３１９】
方法Ｕ
（Ｓ）−４−（２−（４−（ピリミジン−２−イルアミノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−４−アセトアミドブタン酸アミド
ジクロロメタン（１１ｍＬ）中のＮ−ＦＭＯＣ−Ｌ−Ｎδ−トリチル−グルタミンＵ−１（１．１２ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．２５ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（０．３５３ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を添加すると、混合物は３０分間で透明になった。その溶液を、カニューレを通してＤＣＭ（７ｍＬ）中のアミンＩ−４（０．７０ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）で処理し、一晩攪拌した。水（２５ｍＬ）で反応を停止させ、その後水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物Ｕ−２を直接次の工程に使用した。固体Ｕ−２をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、次に４−（アミノメチル）ピペリジン（２．１ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）で処理して、反応混合物を２時間攪拌し、その後クロロホルム（４０ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（６０ｍＬ）、リン酸緩衝液ｐＨ５．５（３×６０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６０ｍＬ）、ブライン（６０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗物質Ｕ−３をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、次にトリエチルアミン（０．５３ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ）、次いで無水酢酸（０．４４ｍＬ、４．７ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を一晩攪拌し、その後ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈した。有機溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）で分配した。水相をＤＣＭ（１０ｍＬ）で抽出した。併合有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗物質Ｕ−４を直接次の工程で使用した。中間体Ｕ−４をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次にトリイソプロピルシラン（０．２６ｍＬ、１．２７ｍｍｏｌ）を添加した。次に混合物を０℃に冷却し、ＴＦＡ（４ｍＬ）で処理した。反応混合物を放置して室温に温め、２時間攪拌した。粗物質をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、勾配１０：０．５：０．１−１０：１：０．２；ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ト
リエチルアミン）によって精製して、次の工程のための中間体Ｕ−５を得た。残留物Ｕ−５（０．５９ｇ，１．０７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下に置いて、その後１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０６５ｇ）、次いでメタノール（１０ｍＬ）を添加した。混合物を水素（バルーン）下に置き、一晩攪拌した。その後水素雰囲気を窒素に置き換え、固体をろ過によって除去した。溶媒を減圧下で除去して固体Ｕ−６を得、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。中間体Ｕ−６（０．１８ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をエチルアルコール（３ｍＬ）に溶解し、次に２−クロロピリミジンＵ−７（０．０９６ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．１５ｍＬ、０．８６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を一晩還流し、その後室温に放置冷却した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物Ｕ−８を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製した。溶媒を凍結乾燥機で除去して所望生成物（６１ｍｇ）を得た。融点７６−８９℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.3-1.6 (m, 4H), 1.6-1.80 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 1.90-2.10 (m, 2H), 3.05 (q, J=5.8 Hz, 2H), 3.10-3.30 (m, 4H), 3.53 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 3.90-4.05 (m, 1H), 6.52 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 6.77 (br s, 1H), 7.05-7.30 (m, 6H), 7.53 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.15-8.35 (m, 3H), 8.54 (s, 1H); EIMS: 496.6 (MH)+. Anal.(C25H33N7O4.0.25 HCl.0.05 EtOH.1.15 H2O) C, H, N。
【０３２０】
【化６２】
2008509228.tif 000069
【０３２１】
方法Ｖ
（Ｓ）−４−（２−（４−（２−シアノグアニジノ）ブチルカルバモイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イルカルバモイル）−４−アセトアミドブタン酸アミド
Ｕ−６（０．１９２ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（２０ｍＬ）に溶解し、次にジフェニルシアノカルボンイミド酸塩Ｖ−１（０．２２ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を添加して、加熱還流した。混合物を一晩攪拌した。追加分のジフェニルシアノカルボンイミド酸塩（０．０７２ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０５ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、その後混合物を１．５時間加熱還流した。混合物を室温に放置冷却し、その後減圧下で溶媒を除去した。粗物質Ｖ−２を直接次の工程に使用した。残留物Ｖ−２をエチルアルコール（２０ｍＬ）に溶解し、次に０℃に冷却して、この溶液にアンモニアガスを通して１分間泡立たせた。反応容器を密閉し、混合物を５０℃で５時間攪拌した。次に容器をフード内で開放し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物Ｖ−３を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水）によって精製して、所望化合物（２７ｍｇ）を白色固体として得た。融点１２２−１３３℃；1H-NMR (DMSO-d6): 1.37 (br
s, 4H), 1.6-1.80 (m, 2H), 1.83 (s, 3H), 1.90-2.10 (m, 2H), 2.95-3.10 (m, 4H), 3.19 (t, J=15.4 Hz, 2H), 3.53 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 3.90-4.05 (m, 1H), 6.52 (t, J=
4.8 Hz, 1H), 6.78 (br s, 2H), 7.10-7.30 (m, 5H), 7.55 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H); EIMS: 485.5 (MH)+. Anal.(C23H32N8O4・0.16 CF3COOH・0.5 H2O) C, H, N。
【０３２２】
当業者には明白であるように、ここで述べる実施形態の多くの修正及び変法をその範囲から逸脱することなく実施し得る。ここで述べる特定実施形態は単に例として提供するものである。
【０３２３】
引用した（及び参照してここに組み込まれる）参考文献
【０３２４】
【表７】
2008509228.tif 000070
【０３２５】
【表８】
2008509228.tif 000071
【０３２６】
【表９】
2008509228.tif 000072
【０３２７】
【表１０】
2008509228.tif 000073
【０３２８】
【表１１】
2008509228.tif 000074
【国際調査報告】
2008509228.tif 000090
2008509228.tif 000091