(57)【要約】【課題】１３−デオキシアントラサイクリン類調製用の組成物及び方法の提供。【解決手段】本発明は、１３−デオキシアントラサイクリン類の合成収率改善に有用な１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類、及び、還元反応が撹拌又は震盪されずに約５５〜６４℃に保たれる１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類の１３−デオキシアントラサイクリン類への還元方法に関する。反応は重炭酸水溶液を添加して１３−デオキシアントラサイクリン及び沈殿物を形成して完了する。沈殿はろ過され、沈殿とろ液は有機溶媒で別々に抽出される。粗１３−デオキシアントラサイクリンは、アンモニア水のメタノール溶液と反応させて５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリンに変換できる。反応は、反応液の中和又は生成物の抽出が不要な酸性ピリジニウム塩を強酸に替えて用いて精製を容易にできる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2008519060.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ又はＯＨであり；
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、アルキル又はＯ−アルキルであり；
Ｒ５は、Ｏ又はＮＨであり；かつ、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ又は糖部位である）
によって表される化合物。
【請求項２】
前記化合物は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アナマイシン及びカルミノマイシンからなる群より選択されるアントラサイクリンの誘導体である
ことを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物の調製方法であって、
アルコール溶媒中で１３−ケトアントラサイクリン又はその酸の塩とベンゼンスルホニルヒドラジドとを約３５〜５０℃で１０〜２４時間反応させることを含む
ことを特徴とする方法。
【請求項４】
１３−デオキシアントラサイクリン類の調製方法であって、
以下：
１）  １３−ベンゼン−又は置換されたベンゼン−スルホニルヒドラゾンアントラサイクリンのアルコール溶液を作成する工程；
２）  還元剤及び酸を前記溶液に添加する工程；
３）  震盪又は撹拌せずに前記溶液を加熱して、前記１３−ベンゼン−又は置換されたベンゼン−スルホニルヒドラゾンアントラサイクリンを還元する工程；並びに、
４）  水性塩基で前記溶液を中和し、これによって前記１３−デオキシアントラサイクリン及び沈殿を形成する工程：を含む
ことを特徴とする方法。
【請求項５】
前記沈殿をろ過し、前記沈殿から前記１３−デオキシアントラサイクリンを抽出して、ろ液から前記１３−デオキシアントラサイクリンを抽出する工程を更に含む
ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記加熱は約５５℃〜約６４℃であり、前記還元剤はシアノボロハイドライドであり、かつ、前記酸はｐ−トルエンスルホン酸である
ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記加熱は約５９℃〜約６０℃である
ことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記１３−ベンゼン−又は置換されたベンゼン−スルホニルヒドラゾンアントラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アナマイシン及びカルミノマイシンからなる群より選択されるアントラサイクリンの誘導体である
ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項９】
５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン類の調製方法であって、
以下：
１）  請求項４に記載の１３−デオキシアントラサイクリンを調製する工程；
２）  前記１３−デオキシアントラサイクリンをアルコール中に溶解する工程；及び、
３）  前記１３−デオキシアントラサイクリンを、アンモニアを使用して約２０℃未満で、対応する５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリンに変換する工程：を含む
ことを特徴とする方法。
【請求項１０】
前記１３−デオキシアントラサイクリンをアンモニアを使用して対応する５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリンに変換する工程は、約１℃〜約４℃で１〜４日間で実施される
ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記１３−デオキシアントラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アナマイシン及びカルミノマイシンの１３−デオキシ型からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記１３−デオキシアントラサイクリンは、対応する１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンから合成される
ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
１３−デオキシアントラサイクリン類の調製方法であって、
以下：
１）  １３−ベンゼン−又は置換されたベンゼン−スルホニルヒドラゾンアントラサイクリンのアルコール溶液を作成する工程；
２）  前記溶液に還元剤及び酸性ピリジニウム塩を添加する工程；並びに、
３）  前記溶液を加熱して前記１３−ベンゼン−又は置換されたベンゼン−スルホニルヒドラゾンアントラサイクリンを還元する工程：を含む
ことを特徴とする方法。
【請求項１４】
前記酸性ピリジニウム塩はピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネートであり、かつ、前記還元剤はシアノボロハイドライドである
ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記還元型の１３−ベンゼン−又は置換されたベンゼン−スルホニルヒドラゾンアントラサイクリンを加水分解することによって、前記１３−デオキシアントラサイクリンを形成する工程を更に含む
ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記加熱は約６５℃〜約７５℃である
ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記１３−ベンゼン−又は置換されたベンゼン−スルホニルヒドラゾンアントラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アナマイシン及びカルミノマイシンからなる群より選択されるアントラサイクリンの誘導体である
ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン類の調製方法であって、
以下：
１）  請求項１３に記載の１３−デオキシアントラサイクリンを調製する工程；及び、
２）  前記１３−デオキシアントラサイクリンを、アンモニアを使用して約２０℃未満で、対応する５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリンに変換する工程：を含む
ことを特徴とする方法。
【請求項１９】
前記１３−デオキシアントラサイクリンをアンモニアを使用して対応する５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリンに変換する工程は、約１℃〜約４℃で１〜４日間で実施される
ことを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記１３−デオキシアントラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アナマイシン及びカルミノマイシンの１３−デオキシ型からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記１３−デオキシアントラサイクリンは、対応する１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンから合成される
ことを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、１３−デオキシアントラサイクリン類を調製するための組成物及び方法に関し、より詳細には、１３−デオキシアントラサイクリン類の合成及び単離のための１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン中間体の使用、並びに、１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類の調製方法に関する。本開示はまた、新規１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾン中間体、及び、これらの中間体の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最もよく知られているアントラサイクリン系抗癌剤は、１３−ケト基を含むドキソルビシン及びダウノルビシンである。ドキソルビシンは特許文献１に開示されていて、抗癌作用についての広範なスペクトルを有し、白血病、リンパ腫及び固形腫瘍の治療に使用される。ダウノルビシンは特許文献２に開示されていて、急性白血病の治療に有用である。しかし、これらの薬物には重大な心毒性の副作用があるため、患者に投与可能な薬物の総量は５５０ｍｇ／Ｍ２以下に制限される（非特許文献１）。推奨される最大総累積投与量（４３０〜６５０ｍｇ／Ｍ２）ちょうど又はそれに近い量では患者の６０％に重大かつ持続性の心機能不全が生じ、１４％ではうっ血性心不全を発症する（非特許文献２）。従って、これらの薬物は、癌性腫瘍の増殖を阻害するのに有用であるが、患者は、薬物による重篤な心毒性の副作用によってうっ血性心不全で死に至る可能性がある。
【０００３】
これらのアントラサイクリン類の心毒性は、１３−ケト部位が代謝により還元されて１３−ジヒドロアルコール代謝産物となることによって生じるということも見出されている（非特許文献３）。ドキソルビシンの１３−ジヒドロアルコール代謝産物（ドキソルビシノール）への代謝量が多量でないような試験システムにおいては、重大な心毒性は観察されない（非特許文献４及び５）。これとは対照的に、１３−ジヒドロ代謝産物であるドキソルビシノール及びダウノルビシノールは、上記のような試験システムにおいて比較的低濃度で心毒性を引き起こす（１〜２μｇ／ｍｌ、非特許文献６及び７）。
【０００４】
ドキソルビシンが、たとえ短時間とはいえ試験システム内に残存する可能性がある場合、代謝変換が起きて１３−ジヒドロ代謝産物が心毒性の発症開始に十分な量形成される可能性がある（非特許文献８及び９）。このように、ドキソルビシン及びダウノルビシンなどの薬物の心毒性は、その１３−ジヒドロ代謝産物によって引き起こされる強力な心毒性作用によるものであるという実質的な証拠が蓄積されてきた（非特許文献１０〜１２）。
【０００５】
最近では、ドキソルビシン、ダウノルビシン又は他の類似のアントラサイクリン類の１３−デオキシ型は代謝変換されて心毒性の１３−ジヒドロ型になることはないこと、及び、５−ケト基が修飾されて遊離基生成の可能性が低いであろう形態になる可能性があり、これにより安全性が更に改善され得るということが発見された。特に、特許文献３〜６を参照のこと。これらの開示は、本明細書中に参考により援用される。
【０００６】
１３−ｐ−メチルベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類から特定の１３−デオキシアントラサイクリン類を調製するための方法として最初に実証された方法は、収率が約１０％と比較的低いものであった（非特許文献１３参照）。１３−ｐ−メチルベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類から１３−デオキシアントラサイクリン類を合成するための改善された高収率の方法が、特許文献３及び４に開示されている。しかし、これらの方法では、使用する試薬の量がやや過剰であり、実施時間がやや長い。更に、収率は増加するが、量産に最適な量には満たない。また、１３−ｐ−メチルベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類を使用すると、１３−デオキシアントラサイクリン生成物中に本出発物質が約３％以上残る。１３−ｐ−Ｆ−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類の使用は公知であるが、これらの親にあたる１３−ケトアントラサイクリン類からの１３−ｐ−Ｆ−、１３−ｐ−Ｃｌ−又は１３−ｐ−ニトロベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類の合成は、１３−ｐ−メチルベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類よりも収率が低く、更に１３−デオキシアントラサイクリン類の生成収率も低い。
【特許文献１】米国特許第３，５９０，０２８号
【特許文献２】米国特許第３，６１６，２４２号
【特許文献３】ＰＣＴ特許ＷＯ９９／０８６８７号
【特許文献４】米国特許第５，９８４，８９６号
【特許文献５】米国特許第５，９４２，６０５号
【特許文献６】ＰＣＴ特許ＵＳ９９／０４７０４
【非特許文献１】Ｅ．Ａ．Ｌｅｆｒａｋら、Ｃａｎｃｅｒ，３２：３０２，１９７３
【非特許文献２】Ａ．Ｄｒｅｓｄａｌｅら、Ｃａｎｃｅｒ，５２：５１，１９８３
【非特許文献３】Ｐ．Ｓ．Ｍｕｓｈｌｉｎら、Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ，４５：８０９，１９８６
【非特許文献４】Ｐ．Ｓ．Ｍｕｓｈｌｉｎら、Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．，４４：１２７４，１９８５
【非特許文献５】Ｒ．Ｄ．Ｏｌｓｏｎら、Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．，４５：８０９，１９８６
【非特許文献６】Ｒ．Ｄ．Ｏｌｓｏｎら、Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２６：２２７，１９８５
【非特許文献７】Ｒ．Ｄ．Ｏｌｓｏｎら、Ｐｒｏｃｅｅｄ  Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２８：４４１，１９８７
【非特許文献８】Ｌ．Ｒｏｓｓｉｎｉら、Ａｒｃｈ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｕｐｐｌ．，９：４７４，１９８６
【非特許文献９】Ｍ  Ｄｅｌ  Ｔｏｃｃａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７：１０７３，１９８５
【非特許文献１０】Ｐ．Ｍｕｓｈｌｉｎら、ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２：Ａ１１３３，１９８８
【非特許文献１１】Ｒ．Ｂｏｕｃｅｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：１５８５１，１９８７
【非特許文献１２】Ｒ．Ｏｌｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８５：３５８５，１９８８
【非特許文献１３】Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９７８  ２１，２８０−２８３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本開示の組成物及び方法によって、対応する１３−ケトアントラサイクリン類から高収率及び高純度の１３−ドキシアントラサイクリン類（１３−ｄｏｘｙ  ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ）が提供される。本開示の一態様は、式：
【０００８】
【化１】
2008519060.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ又はＯＨであり；
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、アルキル又はＯ−アルキルであり；
Ｒ５は、Ｏ又はＮＨであり；かつ、
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ又は糖部位である）
によって表される化合物に関する。
【００１０】
本開示はまた、アルコール溶液中で１３−ケトアントラサイクリン又はその酸の塩とベンゼンスルホニルヒドラジドとを反応させることを含むことを特徴とする、上記で開示した１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンの調製方法に関する。
【００１１】
本開示の更に他の態様は、１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類からの１３−デオキシアントラサイクリン（１３−メチレンアントラサイクリン）誘導体の調製方法であって、
以下：
１．１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンと、水素化シアノホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ）などの還元剤及びパラ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）などの強酸とをメタノールなどのアルコール中で混合することによって反応混合物を形成する工程；
２．撹拌又は震盪せずに上記反応混合物を加熱する工程；
３．炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）水溶液などの水性塩基で上記反応混合物を中和し、これによって１３−デオキシアントラサイクリン生成物を形成して、反応混合物中に塩を沈殿させる工程；
４．沈殿塩を反応混合物からろ過し、有機溶媒を用いて沈殿塩から生成物を抽出して、有機溶媒を用いてろ液から生成物を抽出する工程：を含む
ことを特徴とする方法に関する。
【００１２】
本開示の更に他の態様は、１３−デオキシアントラサイクリンをアンモニア水のメタノール溶液に供することによる、１３−デオキシアントラサイクリン類からの５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン誘導体の調製方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本開示によって、１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンを対応する１３−デオキシアントラサイクリンに完全に還元することができる。
【００１４】
本開示によれば、１３−デオキシアントラサイクリンを比較的単純な方法で単離することができる。
【００１５】
本開示により、粗１３−デオキシ生成物から５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン類を生成することができる。
【００１６】
本開示により、１６〜２０時間でベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンを合成することができる。
【００１７】
本開示によると、粗１３−デオキシアントラサイクリン生成物から５−イミノ類似物を、アンモニア水のメタノール溶液を使用して、糖アミン基を保護する必要なく合成することができる。
【００１８】
本開示によると、強酸の代わりに酸性ピリジニウム塩を使用して出発物質の還元を促進することができるため、反応物を中和又は抽出する必要がなく、従って、分取ＨＰＬＣによる生成物の精製が容易になることが見出された。
【００１９】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
好ましい実施形態を以下の詳しく記載するが、本開示は他の実施形態であってよくかつ様々な方法で実施することができるため、付属の図面で図解される部分の詳細な構造及び配置の用途に本開示が限定されないということが理解されるであろう。
【００２０】
一実施形態は、式：
【００２１】
【化２】
2008519060.tif 000003
【００２２】
（式中、各Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、独立してＨ又はＯＨであり；
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、アルキル及びＯ−アルキルからなる群より選択され；
Ｒ５は、Ｏ又はＮＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ又は糖からなる群より選択される）
によって表される化合物に関する。
【００２３】
アルキル基は、典型的には１〜５個の炭素原子を含み、より典型的には１〜３個の炭素原子を含む。
【００２４】
Ｏ−アルキル基は、典型的には１〜５個の炭素原子を含み、より典型的には１〜３個の炭素原子を含み；かつ、
Ｒ４は、典型的にはＯＣＨ３である。
【００２５】
上記の化合物は、抗癌剤として有用な１３−デオキシアントラサイクリン化合物及び５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン誘導体を生成するための前駆体である。本開示の方法において使用されるアントラサイクリン化合物の例は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、エピルビシン、イダルビシン及びアナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）であり、ドキソルビシン及びダウノルビシンが好ましい。
【００２６】
１３−ケトアントラサイクリン類は、まず１３−ケトアントラサイクリンを１３−パラ置換ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンに変換することによって１３−デオキシアントラサイクリン類に変換され得る。１３−デオキシアントラサイクリン類の合成において出発物質として有用であることが知られる１３−パラ置換ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類は、１３−ｐ−メチルベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン及び１３−ｐ−Ｆ−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンである。例としては、１３−ｐ−メチルベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシン（Ｉ）及び１３−ｐ−Ｆ−ベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシン（ＩＩ）である：
【００２７】
【化３】
2008519060.tif 000004
【００２８】
【化４】
2008519060.tif 000005
【００２９】
化合物Ｉは、１３−ｐ−メチルベンゼンスルホニルヒドラゾン部位のベンゼン環に電子供与基を有し、還元反応で完全に１３−デオキシドキソルビシン生成物に還元されることはない。化合物Ｉは１３−デオキシドキソルビシン生成物から分離するのが困難であり、化合物Ｉから生成される１３−デオキシドキソルビシン生成物を精製するためにはシリカカラムクロマトグラフィ及び分取ＨＰＬＣの両方が必要とされる。
【００３０】
化合物ＩＩは、１３−ｐ−Ｆ−ベンゼンスルホニルヒドラゾン部位のベンゼン環に電子吸引基を有し、本発明の還元反応において１３−デオキシドキソルビシン生成物に完全に還元される。しかし、ドキソルビシン及びｐ−Ｆ−ベンゼンスルホニルヒドラジンからの化合物ＩＩの合成の収率は、化合物Ｉの合成の場合よりも低い。また、化合物ＩＩのメタノール中への溶解度は比較的低く、化合物ＩＩの溶解には温度及び所望の濃度に応じて数時間かかる可能性がある。これは、ｐ−Ｃｌ及びｐ−ニトロ類似物を含む場合にも同様である。メタノール中の化合物ＩＩは２０℃未満の温度でゼラチン状になり、反応溶液の処理が２０℃未満になるのを防止する。化合物ＩＩからの１３−デオキシドキソルビシン生成物の収率は、結果的に低下する。他の例としては、例えば、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アナマイシン及びカルミノマイシンの１３−ｐ−置換ベンゼンスルホニルヒドラゾン類似物が挙げられる。
【００３１】
１３−ｐ−置換ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類は、ｐ−置換ベンゼンスルホニルヒドラジンと１３−ケトアントラサイクリンとをアルコール中で混合し、その溶液を室温で５日間静置することによって合成される。１３−デオキシアントラサイクリン類の合成のためのより効果的な出発物質についての本発明者らの研究において、本発明らは、ベンゼン環がパラ置換されていない１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシン（化合物ＩＩＩ）が、驚くべきことに、化合物Ｉ及びＩＩのようなｐ−置換ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類に関する問題がないことを発見した。
【００３２】
【化５】
2008519060.tif 000006
【００３３】
更に、本発明者らは、１３−ベンゼン−（又はｐ−置換１３−ベンゼン−）スルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類が、室温で５日間反応を実施して得られるのに等しい収率及び純度で、メタノール中で１０〜２４時間、約３５〜６０℃、好ましくは約４０〜４５℃で合成され得ることも発見した。ベンゼンスルホニルヒドラジンとドキソルビシン（ＩＶ）との反応による化合物ＩＩＩの取得、その後の１３−デオキシドキソルビシン生成物（化合物Ｖ）への還元は、以下に示される：
【００３４】
【化６】
2008519060.tif 000007
【００３５】
１３−ｐ−置換ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリン類は、還元剤及び強酸、多くの場合はメタノール中のシアノボロハイドライド及びｐ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）を用いて１３−ｐ−置換ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンの反応混合物を形成することによって、１３−デオキシアントラサイクリン類に変換される。ヒドラゾンはおそらく、酸に由来する水素及びシアノボロハイドライドに由来する水素を受け取ることによって還元される。しかし、酸はシアノボロハイドライドを中和することもできるため、１３−デオキシアントラサイクリン生成物を最適に生成させる際には反応物の濃度及び反応の温度がいくらか重要であるようである。メタノール中の反応混合物を加熱することによって混合物を還流して反応混合物を撹拌することが一般に許容される。反応終了後に水性塩基を添加して混合物を中和し、これによって強酸が中和され、還元されたヒドラジンが１３位から切断されて、１３位のメチレン基が残る。
【００３６】
水性塩基を反応混合物に添加することによって、１３−デオキシアントラサイクリン生成物が結合した塩の沈殿物が生成される。沈殿した塩に生成物を結合させるためには、酸抽出並びにシリカゲル及びＨＰＬＣクロマトグラフィを用いた複数の分離といった、複雑な生成物回収手順が必要である。本発明者らの観察によれば、加熱中に反応混合物を少しでも震盪すると、酸（ＰＴＳＡ）によってシアノボロハイドライドが過度に中和され、その後アントラサイクリン類から糖が過度に切断されて、生成物の総収率が低くなった。本発明者らは、撹拌又は震盪せずに試薬を混合することによって、及び、震盪又は撹拌せずに反応混合物を加熱することによって、収率が実質的により高くなるということも発見した。撹拌又は震盪しない場合の最適温度は５５〜６４℃であるということが分かった。本発明者らは、水性塩基を添加した後に反応混合物をろ過し、塩残渣をクロロホルムとメタノールの混合物などの有機溶媒で洗浄することによって、沈殿した塩から１３−デオキシアントラサイクリン生成物を容易に取り出すことができるということも発見した。本方法を以下に概説する。例えば、化合物ＩＩＩ及び水素化シアノホウ素ナトリウムなどの出発物質を無水メタノールに溶解し、反応混合物の温度を０〜４℃に下げる。ＰＴＳＡを無水メタノールに溶解し、冷却した反応混合物に添加する。そして反応混合物を、１〜４時間、好ましくは２時間、撹拌又は震盪せずに、５５〜６４℃、好ましくは５９〜６０℃に加熱する。そして反応混合物を好ましくは０℃以下に冷却し、冷却した（０〜１０℃）飽和重炭酸水溶液を冷却した反応混合物に添加することよって、酸を中和し、生成物である化合物Ｖを形成させる。
【００３７】
【化７】
2008519060.tif 000008
【００３８】
水とメタノールの混合物中の塩沈殿物並びに水とメタノールの混合物を、ブフナー漏斗及び真空フラスコを使用して真空下でろ過する。ブフナー漏斗の濾紙上の塩を約３．５：１のＣＨＣｌ３：メタノールを用いて真空下で洗浄することによって、生成物である塩に付着した化合物Ｖを抽出する。この抽出物を重炭酸水溶液／メタノール混合物と同じ真空フラスコに回収してもよい、又は、別の真空フラスコに別々に回収してもよい。重炭酸水溶液／メタノール混合物を入れたフラスコに十分量のＣＨＣｌ３を添加し、クロロホルム及びメタノールの約３．５：１混合物を作る。その後、生成物である化合物Ｖを、重炭酸水溶液からクロロホルム／メタノール中に抽出する。有機抽出物を水から分けて、蒸発ささせて乾燥させる。生成物である化合物Ｖを含む残渣を、メタノールに溶解する。化合物Ｖを、従来公知のクロマトグラフィ法によって精製してもよい、又は、エーテルを添加することによって沈殿させてもよい。
【００３９】
アンモニア水のメタノール溶液の冷却したものの中で５−ケトアントラサイクリン類を反応させることによって、５−ケトアントラサイクリン類から５−イミノアントラサイクリン類を形成できるということが一般に知られている。１３−ケト−１４−ＯＨアントラサイクリン類は、糖においてアミン基を保護することが必要であることも知られている。１３−デオキシアントラサイクリン類の５−イミノ類似物はアンモニア水のメタノール溶液の冷却したものと反応させることによっても容易に形成できるが、本発明者らは、糖アミンの保護は必要でないことを発見した。本開示において、粗１３−デオキシアントラサイクリン生成物をアンモニア水のメタノール溶液に溶解してもよく、反応が完了するまで通常１〜５日間、約２０℃未満、好ましくは約０〜４℃に維持してもよい。１３−デオキシアントラサイクリン類の５−イミノ類似物は、１３−デオキシ化合物のＨＣｌ塩を形成する前又はその後、かつ、精製又は沈殿の前又は後に形成され得る。５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン類は、従来周知のクロマトグラフィ法によって容易に精製することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン、５−イミノ−１３−デオキシドキソルビシン（ＶＩＩＩ）の例を、以下に示す。
【００４１】
【化８】
2008519060.tif 000009
【実施例１】
【００４２】
＜１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシンＨＣｌ（ＩＩＩ）の調製＞
化合物ＩＩＩの合成を化合物Ｉ及びＩＩ並びに１３−ｐ−メトキシベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシン（ＶＩ）及び１３−ｐ−ニトロベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシン（ＶＩＩ）の合成と比較した。対応するベンゼン−又はｐ−置換ベンゼンスルホニルヒドラジン３７５ｍｇ及びドキソルビシンＨＣｌ（ＩＶ）５００ｍｇを無水メタノール１５ｍｌに溶解した。この溶液を、約１６〜２０時間、４０〜４５℃に加熱した、又は、約５日間室温（約２３〜２８℃）に維持した、又は、約１０日間約０〜４℃に冷却した。反応後、ジエチルエーテル１００ｍｌをメタノール反応混合物に添加して、生成物を沈殿させた。沈殿物をジエチルエーテルで洗浄してメタノールを除去し、その後この沈殿物をデシケーター内で真空下において乾燥させた。生成物を純度９０％以上で回収し、ＨＰＬＣによって測定した。ドキソルビシンＨＣｌ（ＩＶ）を基準にした収率は、以下のとおりであった：
【００４３】
【表１】
2008519060.tif 000010
【００４４】
反応温度に拘らず一貫して収率の高い化合物ＩＩＩと、一貫して収率の比較的低い化合物ＩＩとを比較した。結果から、４０〜４５℃で短時間で合成を実施することによって、低温で長時間かけた場合と同程度の良好な収率にできるということが示される。
【００４５】
化合物ＩＩＩ
質量スペクトル：Ａｌｉｇｅｎｔイオントラップ質量分光光度計（ＥＮ８２４）（ＥＳＩ陽イオン化）において実施。
構造：
【００４６】
【化９】
2008519060.tif 000011
式：Ｃ３３Ｈ３６Ｎ３Ｏ１２Ｓ
分子量：遊離塩基として６９７．７；ＨＣｌ塩として７３４．２
ＵＶ：Ａｌｉｇｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ８４５３  ＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計（ＥＮ−２４６）において実施。サンプルをメタノール中で調製した。
【００４７】
【表２】
2008519060.tif 000012
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ．ＤＭＳＯ−ｄ６、δ）：Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００において実施。シフトは、ＴＭＳ（テトラメチルシラン）から低磁場側である。
【００４８】
【表３】
2008519060.tif 000013
【実施例２】
【００４９】
＜１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシンＨＣｌ（ＩＩＩ）からの１３−デオキシドキソルビシンＨＣｌ（Ｖ）の調製＞
化合物Ｖを化合物ＩＩＩから合成した、化合物ＩＩＩは２３〜２７℃（室温）、０〜４℃（低温）又は４０〜４５℃（高温）で合成した。比較のため、化合物Ｖは同様の条件下で化合物ＩＩからも合成した。化合物ＩＩＩ（又は化合物ＩＩ）１００ｍｇをＮａＣＮＢＨ３  １００ｍｇを含む無水メタノール６ｍｌに溶解した。反応混合物を氷浴に置いた。ＰＴＳＡ  ２７５ｍｇを無水メタノール２ｍｌに溶解した後、冷却した反応混合物に撹拌又は震盪せずに添加し、総量８ｍｌのメタノールを得た。次いで反応混合物を５９〜６０℃で２時間、撹拌又は震盪せずに加熱した。２時間後、反応混合物を冷凍庫に入れて、反応混合物の温度を０℃以下とした。水１２ｍｌを重炭酸ナトリウムで飽和させ、温度１〜４℃で、冷却したメタノール反応混合物８ｍｌに添加した。水／メタノール混合物を、ブフナー漏斗を用いて真空フラスコ中にろ過した。ブフナー漏斗の濾紙上の塩を真空下で３．５：１のクロロホルム：メタノール  ２０〜４０ｍｌで洗浄することによって、水／メタノール混合物のろ液の入った真空フラスコ中の塩から生成物を抽出した。所望であれば、塩を別の真空フラスコで洗浄してもよい。クロロホルム２８ｍｌを水／メタノールろ液に添加し、クロロホルム：メタノール比を３．５：１とした。添加されたクロロホルムを含む水／メタノールろ液を分液漏斗に移し、生成物（化合物Ｖ）をクロロホルム：メタノール中に抽出した。水と有機溶媒とを分け、有機層を除去してろ過した。有機層を真空下において３０℃以下で蒸発させた。生成物を含む残渣をメタノール２ｍｌに溶解し、その後、氷浴中に置いた。１Ｍ  エーテルＨＣｌ  ０．２ｍｌを無水メタノール１ｍｌ及びジエチルエーテル１ｍｌに添加し、その後、これを氷浴中で冷メタノール２ｍｌに添加することによって、化合物ＶのＨＣｌ塩を形成させた。ジエチルエーテル３０ｍｌを冷メタノールに添加し、生成物である１３−デオキシドキソルビシンＨＣｌ（Ｖ）を沈殿させた。沈殿物をジエチルエーテルで洗浄し、メタノールを除去して、デシケーター内で真空下において乾燥させた。純度は、ＨＰＬＣによって測定した。反応物からの生成物の収率を、ドキソルビシンＨＣｌ（ＩＶ）と比較して、以下に示す。
【００５０】
様々な温度で合成された出発物質化合物ＩＩＩ又は化合物ＩＩから合成された１３−デオキシドキソルビシンＨＣｌ（Ｖ）の回収率、純度及び収率。
【００５１】
【表４】
2008519060.tif 000014
【００５２】
出発物質を合成した温度に関係なく、出発物質として化合物ＩＩを使用した場合よりも、出発物質として化合物ＩＩＩを使用した場合の方が、化合物Ｖの収率は一貫して高い。化合物ＩＩＩを出発物質とした場合３回を平均した化合物Ｖの収率は４７．３％±２．３（ＳＥ）であり、これは化合物ＩＩを出発物質とした場合３回を平均した収率より３５％高い；３５．０％±１．０（ＳＥ）、ｐ＜０．０５。高温条件下で合成された化合物ＶＩＩを用いた同様の実験では、化合物Ｖの収率は３４％であった。化合物Ｉ及びＶＩを用いた実験から、これらの化合物が沈殿した化合物Ｖ生成物中に相当量残存していて、低純度及び低収率となっていることが確認された。
【実施例３】
【００５３】
＜１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシンＨＣｌ（ＩＩＩ）からの５−イミノ−１３−デオキシドキソルビシンＨＣｌ（ＶＩＩＩ）の調製＞
化合物ＩＩＩ  ２００ｍｇを用いて開始し、実施例１に従って化合物Ｖを合成した。反応により、純度６７．５％の粗化合物Ｖ生成物が収率５６．７％で得られた。この物質１００ｍｇを無水メタノール２ｍｌに溶解し、氷浴中に置いた。２Ｍ  アンモニア水のメタノール溶液６ｍｌを添加した。反応混合物を４日間、０〜４℃で維持した。その後、メタノールを真空下において３０℃以下で蒸発させた。残渣を４：１クロロホルム：メタノール  １５ｍｌに溶解し、溶液を蒸発させることによって、微量のアンモニアを除去した。これを２回繰り返した。残渣を無水メタノール４ｍｌに溶解し、生成物である化合物ＶＩＩＩをジエチルエーテル６０ｍｌを添加することによって沈殿させた。沈殿物をジエチルエーテルで洗浄し、デシケーター内で真空下において乾燥させた。回収率８１％で、純度６７％、収率８０％であった。
【００５４】
シアノボロハイドライドの存在下で出発物質１３−ヒドラゾンアントラサイクリンを還元する反応において強酸が必要であることは、従来一般に公知である。これはおそらく、１３−デオキシアントラサイクリン生成物を分解させないためにやや低温（１００℃未満）で反応を実施する必要があるためであろう。強酸を、反応終了後に塩基を添加して急冷又は中和することによって、あるいは、例えばハロカーボン溶媒を添加して１３−デオキシアントラサイクリン生成物から分離することによって、生成物の分解を防止する必要がある。反応混合物を乾燥できる場合、処理することにより分取ＨＰＬＣで精製できる場合、又は、反応混合物を分取ＨＰＬＣに直接適用できる場合、最終生成物の精製は非常に容易になるであろう。強酸が存在すると、分取ＨＰＬＣの間に不純物からの生成物の分離が妨げられて、純粋な生成物の収率がやや低くなるようである。反応終了後に反応混合物を乾燥させようとすると、強酸が濃縮されて生成物が破壊される。
【００５５】
多量の生成物を生成し得るが中和又は分離を必要としない弱酸について本発明者らが研究したところ、驚くべきことに、ｐ−トルエンスルホン酸のピリジニウム塩がこの点に関して効果的であることを本発明者らは見出した。反応終了後の反応溶液は室温において安定であり、溶媒を除去して安定な乾燥残渣を生成することができる。残渣を保存してその後に精密に検査することができる、又は、適切な溶媒に溶解させて分取ＨＰＬＣ精製に直接適用することができる。好ましくは反応を約６５℃〜７５℃で約４５分間実施し、そして出発物質ヒドラゾン１００ｍｇあたり約６６ｍｇのｐ−トルエンスルホン酸をピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネートに置き換える以外は、上記のように反応を実施してよい。従来、酸性ピリジニウム塩が本発明の還元反応において有用であり得ること、そして上記利点を提供し得ることは未知であった。
【実施例４】
【００５６】
＜ｐ−トルエンスルホン酸の代わりにピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネートを使用した１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンドキソルビシンＨＣｌ（ＩＩＩ）からの１３−デオキシドキソルビシンＨＣｌ（Ｖ）の調製＞
化合物ＩＩＩ  １００ｍｇをＮａＣＮＢＨ３  １００ｍｇを含む無水メタノール６ｍｌに溶解した。反応混合物を氷浴に置いた。ピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネート６６ｍｇを無水メタノール２ｍｌに溶解し、そして冷却した反応混合物に添加し、総量８ｍｌのメタノールを得た。反応混合物を約７２℃で４５分間加熱した。４５分経過後、反応混合物を３０℃未満に冷却し、水０．０５ｍｌを反応混合物に添加して、還元されたヒドラゾンの加水分解を促進させて、生成物である１３−デオキシドキソルビシンＨＣｌ（Ｖ）を得た。ＨＰＬＣ分析により、１３−デオキシドキソルビシンＨＣｌ（Ｖ）の収率５５％がドキソルビシンＨＣｌ（ＩＶ）に対して示された。この反応混合物は分取ＨＰＬＣで直接精製することができ、メタノールは除去することができ、そして残渣はクロマトグラフィに適した媒質に溶解させて、反応混合物は上記のように中和及び抽出することができ、そして反応混合物は上記のようにアンモニアを添加することによって５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン誘導体を形成するために使用することができる。
【００５７】
前述の説明は、特定の実施形態に限定される。しかし、開示された実施形態の利点の一部又は全部を達成するため、かつ、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、開示された実施形態を当業者が変更及び改変してもよいということは明らかであろう。例えば、水／メタノール反応混合物又はろ過された塩の抽出に、９：１〜２：１の範囲のハロカーボン：アルコールの溶媒混合物を使用することができる。様々なハロカーボン溶媒として、クロロホルムのほかに、例えばジクロロメタンを使用することができる。様々なアルコールとして、メタノールのほかに、例えばエタノールを使用することができる。様々なエーテルとして、ジエチルエーテルのほかに、例えば第３級メチルブチルエーテルを使用することができる。様々な酸として、パラ−トルエンスルホン酸のほかに、例えばＨＣｌ又はカンファースルホン酸を使用することができる。メタノールＨＣｌを、エーテルＨＣｌに加えて使用することができる。ベンゼン−又はパラ−置換ベンゼン−、スルホニルヒドラゾンアグリコン類を１３−デオキシアグリコン類の生成において使用することができ、これをその後、糖の添加による１３−デオキシアントラサイクリン類の合成に使用することができる。ＨＣｌ塩は、５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン類の合成の前又は後に形成されてよい。１３−デオキシ又は５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン類は、ＨＣｌ塩形成の前又は後にクロマトグラフィによって精製することができる。１３−ベンゼンスルホニルヒドラゾンアントラサイクリンのベンゼン環での置換は、オルト位及びメタ位並びにパラ位であってよい。他の酸性ピリジニウム（ｐｙｒｉｄｉｎｉｉｕｍ）塩を、ピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネートのほかに使用することができる。
【００５８】
本開示の性質を説明するために、上記で説明し例証した部分の詳細、物質及び計画の様々な変更が、以下の特許請求の範囲で列挙される信条及び範囲から逸脱することなく、当業者によってなされ得るということが理解されるであろう。
【国際調査報告】
2008519060.tif 000016