(57)【要約】Ｃ４ＢＰのＣＤ４０への結合により媒介されるＣＤ４０指向性の活性を阻害する組成物と方法が提供される。本発明の組成物は抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、これらは以下の特徴を有する：１）ＣＤ４０抗原に結合したときに有意なＣＤ４０アゴニスト活性がなく、および２）細胞の表面に発現したＣＤ４０抗原に特異的に結合することができ、ＣＤ４０抗原に対するこの結合はＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることにより、一種類以上のＣＤ４０指向性の活性を阻害する。これらのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞関連癌および固形腫瘍等の癌、および器官および組織の移植片拒絶反応等の自己免疫成分および／または炎症性成分を有する疾患または障害等、ＣＤ４０シグナル伝達のＣ４ＢＰ刺激により媒介されるＣＤ４０関連疾患を処置するために効果的に用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の表面に発現するＣＤ４０抗原に特異的に結合し得る抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、有意なＣＤ４０アゴニスト活性を有さず、該ＣＤ４０抗原への該抗体の結合がＣ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記モノクローナル抗体が完全にヒトの抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
モノクローナル抗体がヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項５】
前記モノクローナル抗体が、免疫学的に活性なキメラ抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である、請求項２に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が前記ＣＤ４０抗原に、少なくとも約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体の抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメントおよび単鎖Ｆｖフラグメントからなる群から選択される、請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、Ｃ４ＢＰよりも高い親和性でＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位の少なくとも一部に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＣＤ４０抗原への結合が、前記Ｃ４ＢＰの該ＣＤ４０抗原への結合を立体的に阻害することにより、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ＣＤ４０抗原上のＣ４ＢＰ結合部位の少なくとも一部に対して競合することにより、該Ｃ４ＢＰの該ＣＤ４０抗原への結合を競合的に阻害する、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＣＤ４０抗原への結合が、前記Ｃ４ＢＰリガンドが該ＣＤ４０抗原に結合する場合のＣＤ４０シグナル変換を妨げる、請求項１に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが組換えにより産生された、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
請求項２に記載のモノクローナル抗体を産生し得る、ハイブリドーマ細胞株。
【請求項１４】
ＣＤ４０上のＣ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）結合部位の少なくとも一部に結合する、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体。
【請求項１５】
前記抗体が完全にヒトの抗体である、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体が有意なＣＤ４０アゴニスト活性を有さない、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＣＤ４０抗原への結合が、前記Ｃ４ＢＰの該ＣＤ４０抗原への結合を立体的に阻害することにより、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＣＤ４０抗原上のＣ４ＢＰ結合部位の少なくとも一部に対して競合することにより、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０抗原に対する結合を競合的に阻害する、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＣＤ４０抗原への結合が、前記Ｃ４ＢＰが該ＣＤ４０抗原に結合する場合の該ＣＤ４０シグナル変換を妨げる、請求項１４に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、Ｃ４ＢＰよりも高い親和性でＣＤ４０上の前記Ｃ４ＢＰ結合部位の少なくとも一部に結合する、請求項１４に記載の抗体。
【請求項２１】
ＣＤ４０発現細胞のＣＤ４０指向性の活性の阻害方法であって、該ＣＤ４０指向性の活性は、細胞表面に発現するＣＤ４０抗原にＣ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）の結合により媒介され、該方法は、該細胞を、有効量の該ＣＤ４０抗原に特異的に結合し得る抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程を包含し、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは有意なＣＤ４０アンタゴニスト活性を有さず、該ＣＤ４０を発現する細胞上の該ＣＤ４０抗原への該抗体の結合が、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることにより、該ＣＤ４０指向性の活性を阻害する、方法。
【請求項２２】
前記ＣＤ４０指向性の活性が、細胞増殖、細胞分化、抗体産生、細胞記憶発生、アイソタイプスイッチング、細胞間接着、サイトカインの分泌、メタロプロテアーゼの分泌および細胞接着分子の発現からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＣＤ４０発現細胞が正常Ｂ細胞であり、阻害される前記ＣＤ４０指向性の活性が、細胞増殖、細胞分化および抗体産生からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＣＤ４０発現細胞が悪性Ｂ細胞または固形腫瘍のＣＤ４０発現腫瘍細胞であり、阻害される前記ＣＤ４０指向性の活性が細胞増殖である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＣＤ４０抗原への結合が、前記Ｃ４ＢＰの該ＣＤ４０抗原への結合を立体的に阻害することにより、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル変換をブロックする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ＣＤ４０抗原の前記Ｃ４ＢＰ結合部位の少なくとも一部に対して競合することにより、Ｃ４ＢＰの該ＣＤ４０抗原への結合を競合的に阻害する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの前記ＣＤ４０抗原への結合が、前記Ｃ４ＢＰが該ＣＤ４０抗原に結合する場合のＣＤ４０シグナル変換を妨げる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ＣＤ４０抗体がモノクローナル抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
前記モノクローナル抗体が完全にヒトの抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記モノクローナル抗体がヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記モノクローナル抗体が免疫的に活性なキメラ抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗ＣＤ４０抗体が、前記ＣＤ４０抗原に、少なくとも約１０−６Ｍ〜約１０−１２Ｍの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項２１に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメントおよび単鎖Ｆｖフラグメントからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項３４】
ＣＤ４０関連疾患の処置を必要とする被験体においてＣＤ４０関連疾患を処置する方法であって、該方法は、該被験体に、請求項１〜１２および請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
前記ＣＤ４０関連疾患が癌である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度のＢ細胞リンパ腫、中悪性度のＢ細胞リンパ腫、低悪性度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラズマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小切断リンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小切断リンパ腫、びまん性小切断細胞リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、毛様細胞様白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫症、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫からなる群から選択される癌からなる群から選択されるＢ細胞関連癌である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記癌が、ＣＤ４０抗原を発現する腫瘍細胞を含む固形腫瘍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記固形腫瘍が、肺癌、乳癌、卵巣癌、皮膚癌、結腸癌、膀胱癌、肝臓癌、胃癌、前立腺癌、腎細胞癌、鼻咽頭癌、扁平上皮癌、甲状腺乳頭癌、子宮頸癌、および肉腫からなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記被験体に癌の処置における使用が意図される少なくとも１種類の他の癌療法を施す工程をさらに包含し、該少なくとも１種類の他の療法が、手術、放射線療法、化学療法、他の抗癌モノクローナル抗体療法、低分子ベースの癌療法、ワクチンベースの療法、免疫療法ベースの癌療法およびステロイド療法から選択される、請求項３６〜３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＣＤ４０関連疾患が炎症性疾患または自己免疫疾患である、請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円盤状狼瘡、ループス腎炎、サルコイドーシス、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、器官または組織移植片の拒絶反応、対宿主性移植片病、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発性動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性大腸炎、クローン病、セリアック病（グルテン感受性腸症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、ハシモト甲状腺炎、免疫複合体病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎および皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓溶解、心筋症、尋常性天疱瘡、肺間質性線維症、サルコイドーシス、Ｉ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病、１型遅延型過敏症、２型遅延型過敏症、３型遅延型過敏症および４型遅延型過敏症、アレルギーまたはアレルギー疾患、喘息、チャーグ−ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性および刺激性の接触皮膚炎、蕁麻疹、ＩｇＥ媒介性アレルギー、アテローム性動脈硬化症、脈管炎、突発性炎症性筋障害、溶血性疾患、アルツハイマー病および慢性炎症性脱髄性多発神経障害からなる群から選択される、請求項４０の方法。
【請求項４２】
前記器官または組織移植片が、心臓、肺、腎臓、膵臓、皮膚および骨髄からなる群から選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記処置が、前記被験体に、手術、器官潅流、放射線療法、ステロイド療法、非ステロイド療法、抗生物質療法、抗真菌療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚用薬剤による療法、免疫抑制療法、他の抗炎症性モノクローナル抗体療法からなる群から選択される少なくとも１種類の他の療法をさらに施す工程を包含する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＣＤ４０関連疾患が器官または組織移植片の拒絶反応であり、前記被験体が、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、コルチコステロイド、ＣＴＬＡ４−Ｉｇおよび抗Ｂリンパ球刺激物質抗体もまた投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
Ｃ４ＢＰと、ＣＤ４０に結合する抗体との間の競合結合アッセイを実施する工程を包含する、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０抗原への結合を阻害する抗体の同定方法。
【請求項４６】
ヒトＣＤ４０発現細胞の表面に発現するヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合し得るヒトモノクローナル抗体であって、該モノクローナル抗体は有意なアゴニスト活性を有さず、ＣＤ４０抗原への該抗体の結合が該細胞のＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする、ヒトモノクローナル抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ＣＤ４０細胞表面抗原に結合することで、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることのできる抗体、およびＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０シグナル伝達のＣ４ＢＰ刺激により媒介される疾病の処置の方法等を含む抗体を用いる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ＣＤ４０は、ヒト神経成長因子（ＮＧＦ）レセプター、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）レセプターおよびＦａｓに関連する細胞表面抗原である。ＴＮＦレセプターファミリーのこのメンバーの発現はＢリンパ球上で最初に特徴付けられたが、最近の発見はそれが多くの細胞型で広く発現されていることを示している。造血系において、ＣＤ４０発現細胞として、ＣＤ３４＋造血前駆細胞、Ｂ細胞前駆細胞、成熟Ｂリンパ球（正常および悪性）、血漿細胞、単球、樹状細胞、好酸球（ｅｉｓｏｎｏｐｈｉｌ）、好塩基球および一部のＴリンパ球が挙げられる。非造血ＣＤ４０発現細胞として、内皮細胞、上皮細胞および線維芽細胞が挙げられる。ＣＤ４０発現は、関節リウマチにおける滑膜、活性化血小板、炎症血管平滑筋細胞および真皮線維芽細胞上にも起こる。ＣＤ４０は血管内皮細胞上に低レベルで発現し、局所炎症の領域で上方調節される。その広い発現パターンを考えると、免疫調節において、ＣＤ４０は、Ｔ細胞およびＢ細胞ならびに他の細胞型との相互作用を媒介することにより一般的な役割を果たす可能性がある。例えば、非特許文献１を参照のこと。
【０００３】
そのリガンドであるＣＤ４０ＬまたはＣＤ１５４のＣＤ４０レセプターへの結合により媒介されるＣＤ４０シグナル伝達の活性化の効果は関与する細胞型に依存する。従って、Ｂ細胞上のＣＤ４０シグナル伝達の活性化はＢ細胞増殖および分化、抗体産生、アイソタイプスイッチングおよびＢ細胞記憶発生を促進しながら、樹状細胞および単球上のＣＤ４０シグナル伝達の活性化が副刺激分子の発現および炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−α）の分泌を導き、Ｔリンパ球の効果的な活性化を提供する。アゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体とオリゴマー可溶性ＣＤ４０Ｌの両方がＣＤ４０シグナル伝達経路を促進することができる（例えば、特許文献１および特許文献２を参照のこと）。これらのシグナルの全体的な効果は、Ｔ細胞プライミングを顕著に高めて、ＣＤ４０発現樹状細胞のために、Ｔｈ１細胞免疫応答の発生を助ける。
【０００４】
補体カスケードは、インビボの生来の免疫応答に重要な役割を果たす。例えば、非特許文献２を参照のこと。補体カスケード中に、抗原結合ＩｇＧは、細菌細胞膜を破裂させる細胞膜傷害複合体（ＭＡＣ）を最終的に作る一連の加水分解反応を開始させる。Ｃ４はこの経路で重要な要素である。Ｃ４は血清中で通常不活性であり、抗原−抗体複合体に存在するＣ１により切断され得る。Ｃ１はＣ４をＣ４ａフラグメントとＣ４ｂフラグメントに切断する。Ｃ４ａは弱いアナフィラトキシンとして作用する小さな可溶性タンパク質である。Ｃ４ｂは細菌細胞膜の表面に結合してオプソニンとして独立して作用することができるか、またはＣ３ｂに結合して伝統的な補体固定経路のＣ３コンバターゼを形成することができる。標的結合Ｃ４ｂの生成は非効率的なプロセスであり、わずかに５％〜１０％のＣ４ｂが基質結合性となる。血清調節タンパク質は過剰なＣ４ｂの除去に関与する。
【０００５】
Ｃ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）はＣ４ｂに結合する血清調節タンパク質の１つである。それは肝臓細胞および活性化単球により合成されるので、Ｃ４ｂおよびＣ３ｂの因子Ｉ媒介性異化作用における共同因子である。例えば、非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８を参照のこと。循環内で、Ｃ４ＢＰは、α（７０ｋＤａ）およびβ（４５ｋＤａ）鎖の異なる組み合わせに基づいて３種類のアイソフォームで存在する。主なアイソフォームは７αサブユニットおよび１βサブユニットの８量体（α７β１）である（非特許文献９；非特許文献１０）。報告によれば、Ｃ４ＢＰはＣＤ４０に結合することもでき、Ｂ細胞上のＣＤ４０へのインビトロ結合は、ＣＤ４０Ｌ結合を模倣する様式でこれらの細胞を活性化することができる（非特許文献１１）。さらに、このインビトロ活性は、ＣＤ４０リガンドに対する結合を競合的に阻害しない分子の領域において、ＣＤ４０タンパク質に直接結合するＣ４ＢＰの能力に関連する。ＣＤ４０刺激は自己免疫疾患の主要なメディエーターである。Ｃ４ＢＰはＣＤ４０シグナル伝達を直接に誘導し得、それにより自己免疫疾患と炎症性疾患の開始および進行に寄与し得る。Ｃ４ＢＰはＣＤ４０リガンドと相加的または相乗的に作用することもでき、ＣＤ４０刺激を悪化させ、疾患の開始と進行に寄与することができる。従って、ＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位へのＣ４ＢＰの結合は、ＣＤ４０を発現する細胞に対して、異常または望ましくないシグナルを変換し得る。
【０００６】
ＣＤ４０結合と活性化のブロックは、抗体および細胞媒介性免疫応答を抑制する可能性を有する。抗ＣＤ４０アンタゴニスト抗体は、全身性狼瘡、乾癬、多発性硬化、炎症性大腸炎および関節リウマチ等の自己免疫疾患を処置するために用いることができるだろう。そのような抗体は、自己免疫応答を抑制することにより器官または組織移植片の拒絶反応を妨げ、ＣＤ４０により与えられる活性化シグナルを悪性Ｂリンパ球から奪うことによりリンパ腫を処置し、ＣＤ４０を持つ細胞に毒素を特異的な様式で送達するために用いることもできるだろう。２種類の抗ＣＤ４０アンタゴニストモノクローナル抗体、すなわち、１）ＣＤ４０リガンド媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするモノクローナル抗体および２）Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするモノクローナル抗体は、ＣＤ４０活性化をブロックすることができる。
【０００７】
ＣＤ４０活性化経路でのＣ４ＢＰの推定上の役割を鑑みれば、Ｃ４ＢＰ−ＣＤ４０結合相互作用に関連する疾患を処置できるようにＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を妨害する必要性が存在する。
【特許文献１】国際公開第００／７５３４８号パンフレット
【特許文献２】米国特許第６，０８７，３２９号明細書
【非特許文献１】ＫｏｏｔｅｎおよびＢａｎｃｈｅｒｅａｕ、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９７）２：ｐｐ．１−１１
【非特許文献２】Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｐａｕｌ、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ）（１９９３）、ｐｐ．９２４−９２９
【非特許文献３】ＤａｈｌｂａｃｋおよびＨｉｌｄｅｂｒａｎｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９８３）２０９：ｐｐ．８５７
【非特許文献４】ＬａｐｐｉｎおよびＷｈａｌｅｙ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９９０）２７１：ｐｐ．７６７
【非特許文献５】Ｋｕｓａｄａ−Ｆｕｎａｋｏｓｈｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｅｄ．Ｍｅｔａｂ．Ｂｉｏｌ．（１９９１）４５：ｐｐ．３５０
【非特許文献６】Ｂｌｏｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）２７６：ｐｐ．２７１３６
【非特許文献７】Ｂｌｏｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６６：ｐｐ．６７６４
【非特許文献８】Ｂｌｏｍら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）３９９：ｐｐ．５４７
【非特許文献９】Ｐａｒｄｏ−Ｍａｎｕｅｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０）８７：ｐｐ．４５２９
【非特許文献１０】Ｋａｓｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２）４１：ｐｐ．９３４８
【非特許文献１１】Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００３）１８：ｐｐ．８３７
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の簡単な要旨）
Ｃ４ＢＰのＣＤ４０への結合により媒介されるＣＤ４０指向性の活性を阻害する組成物と方法が提供され、該方法はこのＣ４ＢＰ−ＣＤ４０結合相互作用により媒介されるＣＤ４０関連性疾患の処置方法である。本発明の組成物は、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、これらは以下の特徴を有する：１）ＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合したときに有意なＣＤ４０アゴニスト活性がなく、および２）細胞の表面に発現したＣＤ４０抗原に特異的に結合することができ、ＣＤ４０抗原に対するこの結合はこれらの細胞のＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることにより、１種類以上のＣＤ４０指向性の活性を阻害する。これらの抗ＣＤ４０抗体またはそれらの抗原結合フラグメントはＣＤ４０細胞表面抗原に対して強い単一部位結合親和性を示す。一部の実施形態において、本発明の抗体はＣＤ４０に対して少なくとも１０−５Ｍ、少なくとも３×１０−５Ｍ、好ましくは少なくとも１０−６Ｍ〜１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍの解離平衡定数（ＫＤ）を示す。適当なモノクローナル抗体はヒト定常領域を有し；好ましくは、それらは完全または部分的にヒト化されたフレームワーク領域も有し；および最も好ましくは完全なヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである。組成物はこれらの抗体またはそれらの抗原結合フラグメントを産生するハイブリドーマ細胞株も含み、医薬組成物はこれらの抗体またはそれらの抗原結合フラグメントを含む。
【０００９】
ＣＤ４０を発現する細胞のＣＤ４０指向性の活性を阻害する方法は、有効量の本発明の抗ＣＤ４０抗体または有効量のその抗原結合フラグメントに細胞を接触させることを包含する。阻害することのできるＣＤ４０指向性の活性として、細胞成長および増殖、細胞分化、抗体産生、細胞記憶発生、アイソタイプスイッチング、細胞間接着、サイトカインの分泌、メタロプロテアーゼの分泌および細胞接着分子の発現が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０指向性の活性のＣ４ＢＰ刺激により媒介されるＣＤ４０関連疾患（Ｂ細胞関連癌および固形腫瘍等の癌、および器官および組織の移植拒絶反応等の自己免疫成分および／または炎症性成分を有する疾患または障害が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために用いることができる。ＣＤ４０に対するアンタゴニスト活性を有し、かつＣＤ４０発現細胞においてＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達に干渉する抗体の同定方法も提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（発明の詳細な説明）
本発明は抗ＣＤ４０抗体およびそれらの使用方法に関する。これらの抗ＣＤ４０抗体およびそれらの抗原結合フラグメントは細胞表面に発現したＣＤ４０抗原に特異的に結合することができ、ＣＤ４０抗原に結合したときに有意なＣＤ４０アゴニスト活性を有さない。これらの抗ＣＤ４０抗体、またはその抗原結合フラグメントのＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原への結合は、これらの細胞のＣ４ｂ結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を効果的にブロックする。「Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達」とは、細胞表面に発現したＣＤ４０抗原にＣ４ＢＰが結合する場合に起こるＣＤ４０シグナル伝達の刺激が意図される。「ブロックする」または「ブロックしている」とは、本発明の抗ＣＤ４０抗体等のアンタゴニストが存在しない場合に、Ｃ４ＢＰが、細胞表面に発現したＣＤ４０上のその結合部位へ結合することから通常起こりうるＣＤ４０シグナル伝達の部分的または完全な阻害が意図される。このＣＤ４０シグナル伝達のブロックは、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達から生じる１種類以上のＣＤ４０指向性の活性を部分的（すなわち、活性の低下）または完全（すなわち、活性の防止）のいずれかで阻害する手段を提供する。これらのＣＤ４０指向性の活性の阻害は、以下に説明するように、ＣＤ４０関連疾患（Ｂ細胞関連癌および固形腫瘍等の癌、および器官および組織の移植片拒絶反応等の自己免疫成分および／または炎症性成分を有する疾患または障害が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために有利に用いることができる。
【００１１】
下記の用語は発明の開示全体にわたって現れ、以下にさらに定義される。
【００１２】
本明細書で使用される「腫瘍」とは、悪性、良性にかかわらず、すべての腫瘍細胞の成長および増殖、およびすべての前癌性および癌性の細胞および組織をいう。
【００１３】
「癌」および「癌性」との用語は哺乳動物において制御されない細胞増殖に通常特徴付けられる生理学的状態を言及または説明するものである。癌の例としては、リンパ腫および白血病および固形腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１４】
「抗体」および「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は同一の構造的特徴を有する糖タンパク質である。抗体は抗原に対する結合特異性を示す一方で、免疫グロブリンは、抗体と、抗原特異性を欠如するほかの抗体様分子とを含む。後者の種類のポリペプチドは例えばリンパ系により低レベルで産生され、ミエローマにより増大したレベルで産生される。
【００１５】
「抗体」との用語は最も広い意味で使用され、完全に構築された抗体、抗原に結合することのできる抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ））、および前記のものを含む組換えペプチドを包含する。
【００１６】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」との用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体をいう；すなわち、該集団を構成する個々の抗体は、僅かに存在し得る天然に存在する変異以外は同一である。
【００１７】
「天然の抗体」または「天然の免疫グロブリン」は、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質で、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる。各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合する一方で、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖および軽鎖は規則的に間隔のある鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は一方の末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に多くの定常ドメインが続く。各軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ）を一方の末端に有し、定常ドメインを別の末端に有する；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１定常ドメインに並び、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインに並ぶ。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間で界面を形成すると考えられる。「可変」との用語は、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で配列が広く異なり、特定の各抗体のその特定の抗原への結合と特異性により用いられるという事実をいう。しかし、可変性は抗体の可変ドメイン全体にわたって均一に分布しているわけではない。可変性は、軽鎖および重鎖の可変ドメインの両方において、相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３セグメントに集中している。可変ドメインのさらに高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲ領域を含み、主にβプリーツシート立体配置を採用し、βプリーツシートを連結するループを形成する３つのＣＤＲにより連結され、ある場合では、βプリーツシートの一部を形成する。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域により近接してつなぎ合わされ、他の鎖由来のＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら（１９９１）ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２，Ｖｏｌ．Ｉ，ｐｐ．６４７−６６９）。定常ドメインは抗原に対する抗体の結合に直接には関与しないが、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与、補体依存性細胞毒性の開始および肥満細胞脱顆粒等の多様なエフェクター機能を示す。
【００１８】
「超可変領域」との用語は抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は相補性決定領域由来のアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）および重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）由来のアミノ酸残基；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版；Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）および／または「超可変ループ」由来の残基（すなわち、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）および重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｌｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１）を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【００１９】
「抗体フラグメント」はインタクトな抗体の一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖抗体（Ｚａｐａｔａら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１０：１０５７）；単鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成された多特異的抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化は、容易に結晶化する能力を反映する名称である、残留「Ｆｃ」フラグメントおよび単一の抗体結合部位をそれぞれ有する「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメントを作る。ペプシン処理は、抗原を架橋することのできる２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントを作る。
【００２０】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小抗体フラグメントである。２鎖Ｆｖ種において、この領域は、非共有結合性の堅固な会合内の１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの２量体からなる。単鎖Ｆｖ種において、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインは、軽鎖と重鎖が、２鎖Ｆｖ種と同じように「２量体」構造で会合できるように柔軟なペプチドリンカーにより共有結合され得る。この立体配置において、各可変ドメインの３種類のＣＤＲがＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で抗原結合部位を定めるように相互作用する。集合的に、６つのＣＤＲは抗原結合特異性を抗体に付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含む、Ｆｖの半分）は、完全な結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【００２１】
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂフラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端で２〜３個の残基の付加によりＦａｂ’フラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨはここでは定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の記号表示である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、ヒンジのシステインを間に有するＦａｂ’フラグメントの対として、最初に作られた。抗体フラグメントの他の化学カップリングも公知である。
【００２２】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２種類のクラスの１つに割り当てることができる。
【００２３】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは異なるクラスを含む。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５種類の主要なクラスのヒト免疫グロブリンが存在する。ヒトにおいて、これらのクラスはさらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分類される。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造と三次元立体配置は周知である。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有する。例えば、ヒトＩｇＧ１アイソタイプとヒトＩｇＧ３アイソタイプは抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）活性を有する。
【００２４】
本明細書で使用される「標識」との用語は、「標識された」抗体を作るように抗体に直接的または間接的に結合させる化合物または組成物をいう。標識はそれ自体検出可能であり得る（例えば、放射性同位元素標識または発光標識）か、または酵素標識の場合、検出可能な基質化合物または組成物の化学的変化を触媒し得る。検出可能な標識として機能しうる放射性核種として、例えば、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２およびＰｄ−１０９が挙げられる。標識は毒素等の検出不能な実体であってもよい。
【００２５】
「アンタゴニスト」との用語は最も広い意味で使用され、本明細書において開示された標的タンパク質分子の生物学的活性またはその転写または翻訳を部分的または完全にブロック、阻害または無効にする任意の分子を含む。アンタゴニスト抗体は、シグナルを細胞に変換することなしに、細胞関連抗原に結合する抗体である。シグナルは、増殖および／または生存の誘導、アポトーシスの誘導、他のタンパク質のリン酸化の誘導、カルシウム貯蔵の放出の誘導、およびサイトカイン分泌の誘導等の細胞状態の変化をもたらす任意の生化学的な反応を含み得る。
【００２６】
本明細書で使用される「担体」は、使用される投与量および濃度で曝される細胞または哺乳動物に対して毒性のない薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含む。しばしば、生理学的に許容される担体は水性ｐＨ緩衝溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸等の抗酸化剤；低分子量（約１０アミノ酸残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、および他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールまたはソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰｌｕｒｏｎｉｃｓ等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。１つ以上のさらなる治療剤に「組み合わされた」投与として、任意の順序での同時（同時に起こる）および連続的な投与が挙げられる。
【００２７】
本明細書で使用される「宿主細胞」とは、組換えベクターまたは他の転移ポリヌクレオチドの受容者として使用され得るか、または使用されている単細胞実体として培養される微生物または真核細胞または細胞株をいい、トランスフェクションされた元の細胞の子孫を含む。単一細胞の子孫は、自然、偶然または計画的な変異に起因して、元の親と、形態学的に、またはゲノムＤＮＡもしくは総ＤＮＡにおいて、必ずしも完全に同一である必要はないことが理解される。
【００２８】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を実施する白血球である。好ましくは、細胞は少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好酸球および好中球が挙げられ、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好ましい。ＡＤＣＣ活性を有する抗体は典型的にはＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプである。ＩｇＧ１およびＩｇＧ３抗体の単離に加えて、ＡＤＣＣ媒介性抗体は、非ＡＤＣＣ抗体の可変領域または可変領域フラグメントをＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ定常領域へと操作することにより合成することができる。
【００２９】
「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」との用語は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターをいうために用いられる。好ましいＦｃＲは天然の配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲはＩｇＧ抗体に結合するもの（γレセプター）で、これらとしては、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプター（これらのレセプターの対立遺伝子バリアントまたは可変スプライシングされた形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩレセプターとして、類似のアミノ酸配列（主に、それらの細胞質ドメインで異なる）を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられる。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫レセプターのチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫レセプターのチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｄａｅｒｏｎ（１９９７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３を参照）。ＦｃＲはＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７；Ｃａｐｅｌら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５；およびｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５）Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０に概説がある。将来同定されるものも含めた他のＦｃＲがここでの「ＦｃＲ」の用語に包含される。この用語は、母親のＩｇＧの胎児への移動に関与する新生児レセプターＦｃＲｎも含む（Ｇｕｙｅｒら（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７およびＫｉｍら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９）。
【００３０】
ヒト抗体を合成する多くの方法が存在する。例えば、分泌細胞はエプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）への感染により不死化させることができる。しかし、ＥＢＶ感染細胞はクローニングが困難であり、通常、免疫グロブリンを比較的低い収率でのみ産生する（Ｊａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｂｅｌｌ（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １００：５）。最終的に、ヒトＢ細胞の不死化は癌遺伝子の定義された組み合わせを導入することにより達成され得る。そのような可能性は、ＳＶ４０ラージオンコタンパク質およびＨ−ｒａｓの発癌性対立遺伝子とともにテロメラーゼ触媒サブユニットの発現が正常なヒト上皮細胞と線維芽細胞の腫瘍形成性の変換をもたらしたという最近の証明によって明らかにされている（Ｈａｈｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  ４００：４６４）。トランスジェニック動物（例えば、マウス）は免疫化の際に内因性免疫グロブリン産生がない場合にヒト抗体のレパートリーを産生することができる（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６；Ｇｒｅｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１；Ｔｏｍｉｚｕｋａら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：７２２−７２７；Ｌｉｔｔｌｅら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４における概説）。例えば、キメラおよび生殖細胞系変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子の同型欠失は内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすと記載されている（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１）。そのような生殖細胞系変異マウスにおけるヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は抗原誘発の際にヒト抗体の産生をもたらす（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５）。Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）（Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６）は、抗原により誘発されると、高親和性の完全なヒト抗体を作る一連のトランスジェニックマウスを作った。これは、上記のように、内因性ＪＨセグメントへの欠失を有するマウスへのメガベースのヒト重鎖および軽鎖遺伝子座の生殖細胞系の統合により達成された。これらのマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）ＩＩ技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ、カリフォルニア州））は約６６個のＶＨ遺伝子を含む１，０２０ｋｂのヒト重鎖遺伝子座、完全なＤＨおよびＪＨ領域、および３つの異なる定常領域、および３２個のＶκ遺伝子、ＪκセグメントおよびＣκ遺伝子を含む８００ｋｂのヒトκ遺伝子座を有する。これらのマウスで産生される抗体は、遺伝子再配列、組み立ておよびレパートリー等のすべての点においてヒトに見られるものに酷似する。マウス遺伝子座において遺伝子再配列を妨げる内因性セグメントの欠失のために内因性抗体よりも、ヒト抗体を優先的に発現する。そのようなマウスは特定の目的の抗原により免疫してよい。
【００３１】
そのような免疫動物由来の血清は目的の抗原に対する抗体反応性についてスクリーニングしてよい。リンパ球はリンパ節または脾臓細胞から単離され得、さらにＣＤ１３８陰性およびＣＤ１９陽性細胞を選択することよりＢ細胞のために選んでよい。一態様において、そのようなＢ細胞培養物（ＢＣＣ）をミエローマ細胞と融合して、上記のようなハイブリドーマを作ってよい。
【００３２】
別の態様において、そのようなＢ細胞培養物を好ましくは初回抗原に対する反応性に関してさらにスクリーニングしてよい。そのようなスクリーニングとして、標的／抗原タンパク質によるＥＬＩＳＡ、目的の抗原に結合する公知の抗体による競合アッセイおよび一時的にトランスフェクションしたＣＨＯまたは標的抗原を発現する他の細胞に対するインビトロ結合が挙げられる。
【００３３】
本発明の抗ＣＤ４０抗体およびそれらの使用方法を以下に詳細に説明する。
【００３４】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体
本発明の抗ＣＤ４０抗体およびそれらの抗原結合フラグメントは、好ましくはＣＤ４０に対するアンタゴニスト活性を有するために、ここでは「アンタゴニスト」抗ＣＤ４０抗体と称する。さらに具体的には、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はＣＤ４０発現細胞表面のＣＤ４０抗原に特異的に結合することにより、この結合がＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする。このシグナル伝達プロセスのブロックは、Ｃ４ＢＰ等のアゴニストがＣＤ４０細胞表面抗原に結合した場合に開始される１種類以上のＣＤ４０指向性の活性の阻害をもたらす。
【００３５】
「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」、「ＣＤ４０レセプター」、または「ＣＤ４０」により、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプターファミリーに属する膜貫通型糖タンパク質が意図される（例えば、米国特許第５，６７４，４９２号および米国特許第４，７０８，８７１号；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら（１９８９）ＥＭＢＯ  ８：１４０３；Ｃｌａｒｋ（１９９０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ３６：３３；Ｂａｒｃｌａｙら（１９９７）Ｔｈｅ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ（第２版；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、サンディエゴ）を参照）。この遺伝子の可変スプライシングされた転写バリアントによりコードされたヒトＣＤ４０の２種類のアイソフォームが同定されている。第１のアイソフォーム（「長いアイソフォーム」または「アイソフォーム１」としても知られる）は、２７７アミノ酸前駆体ポリペプチド（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＡ４３０４５として最初に報告され、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１２４１でアイソフォーム１と同定されている；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０によりコードされる））として発現し、最初の１９残基により表されるシグナル配列を有する。第２のアイソフォーム（「短いアイソフォーム」または「アイソフォーム２」としても知られる）は２０３アミノ酸前駆体ポリペプチド（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿６９０５９３；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿１５２８５４によりコードされる）として発現し、これも最初の１９残基により表されるシグナル配列を有する。ヒトＣＤ４０のこれらの２種類のアイソフォームの前駆体ポリペプチドはそれらの最初の１６５残基を共通して有する。短いアイソフォームの前駆体ポリペプチドは、翻訳フレームシフトを導くコードセグメントを欠如する転写バリアントによりコードされる；生じるＣＤ４０アイソフォームはより短いＣ末端（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿６９０５９３の残基１６６〜２０３）を有し、これはＣＤ４０の長いアイソフォームに含まれるＣ末端（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＡ４３０４５の残基１６６〜２７７に示されるＣ末端およびＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１２４１）とは異なる。本発明の目的のために、「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」、「ＣＤ４０レセプター」または「ＣＤ４０」との用語はＣＤ４０の短いアイソフォームと長いアイソフォームを包含する。
【００３６】
ＣＤ４０レセプターは、本明細書の他の部分で記載されているように、多様な細胞型の表面に提示される。「表面に提示される」および「表面に発現する」により、ＣＤ４０抗原のすべてまたは一部が細胞の外側に曝されることが意図される。提示または発現されたＣＤ４０抗原は完全または部分的にグリコシル化され得る。
【００３７】
「Ｃ４ｂ結合タンパク質」または「Ｃ４ＢＰ」とは、可溶性ペプチドまたはそのあらゆるフラグメント、例えば、αサブユニットの少なくとも一部（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００７１５にコードされるＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００７０６；Ｋａｓｋら（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４１：９３４９）またはβサブユニットの一部（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００７１６にコードされるＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００７０７；Ｗｅｂｂら（２００３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：９３）が意図される。本明細書で使用される「Ｃ４ＢＰ」との用語は、個々のαまたはβサブユニット、またはこれらのサブユニットを含む大きなヘテロマー、例えば３種類の血清アイソフォーム、α７β１（血清中の主なアイソフォーム）、α７β０、およびα６β１を含んでよい。「ＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位」とは、Ｃ４ＢＰサブユニットのいずれかの部分が結合するＣＤ４０抗原領域が意図される。例えば、参考としてその全体が本明細書に援用されるＢｒｏｄｅｕｒら（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８３７を参照のこと。結合部位はＣＤ４０上の直鎖状決定基（ｌｉｎｅａｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）を含んでもよく、または二次または三次の立体構造によりＣ４ＢＰ結合部位を形成する不連続アミノ酸により形成される結合領域、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。場合によっては、Ｃ４ＢＰ結合部位はＣ４ＢＰαサブユニットのみと相互作用する。
【００３８】
Ｃ４ＢＰがＣＤ４０発現細胞のＣＤ４０抗原に結合する場合に、それはＣＤ４０シグナル伝達のアゴニストとして働き、ＣＤ４０アゴニスト活性を有すると考えられている。「アゴニスト活性」により、その物質がアゴニストと機能することが意図される。アゴニストは細胞上のレセプターに結合し、レセプターの天然のリガンド（例えば、ＣＤ４０の場合、ＣＤ４０Ｌ）により開始されるものと類似または同一の反応または活性を開始する。ＣＤ４０のアゴニスト（例えば、Ｃ４ＢＰ）は、ＣＤ４０がシグナルを伝達する場合に生じる以下の活性のいずれか、またはそれらの全てを誘導するが、これらに限定されない：抗原提示細胞（ＡＰＣ）の増殖および分化；Ｂ細胞抗体産生；細胞間接着；Ｂ細胞記憶発生；Ｂ細胞アイソタイプスイッチング（特に、ＩＬ−４存在下のＩｇＥアイソタイプスイッチング）；ＡＰＣ中のＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ５４、ＣＤ９５およびＣＤ８０／８６の細胞−表面発現の上方調節；ｂｃｌ−ｘＬ、Ａ２０、ジアシルグリセロールキナーゼα、ｐ３８およびｃ−ｍｙｃ遺伝子発現の上方調節；ＮＦκΒの核内移行；ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＴＮＦα等のサイトカインの分泌；ＭＭＰ−Ｉ／コラゲナーゼおよびＭＭＰ−９／ゼラチナーゼＢ等のメタロプロテアーゼの分泌；およびＥ−セレクチン、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１等の細胞接着分子の発現。本発明の目的のために、そのような活性は「ＣＤ４０指向性の活性」と称され、ＣＤ４０上の結合部位へのＣ４ＢＰの結合による該活性の誘導は「Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達」と称される。
【００３９】
本発明の抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０との結合相互作用に関してアンタゴニスト活性を有する。このアンタゴニスト活性は、抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０に結合したときにＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするか、またはＣＤ４０を介して負のシグナルを送るこれらの抗体の能力に起因する。「アンタゴニスト活性」により、その物質がアンタゴニストとして機能することが意図される。本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、アゴニストリガンド、特にＣ４ＢＰへのＣＤ４０レセプターの結合により誘導されるいずれか１種類以上のＣＤ４０指向性の活性の誘導を妨げるか、減少させる。本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０への結合により誘導されるいずれか１種類以上のＣＤ４０指向性の活性の誘導を、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、好ましくは４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、より好ましくは７０％、８０％、８５％、最も好ましくは９０％、９５％、９９％または１００％減少させ得る。抗ＣＤ４０抗体およびＣ４ＢＰの結合特異性およびアンタゴニスト活性を測定する方法は当業者に公知であり、それらとしては、標準的な競合結合アッセイ、Ｔ細胞増殖の樹状細胞誘導アッセイ、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするためのアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ、抗体産生についてのＴ細胞ヘルパーアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイの同時刺激およびＡＰＣ活性化マーカーの上方調節についてのアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｂｒｏｄｅｕｒら（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８３７、ＷＯ００／７５３４８および米国特許第６，０８７，３２９号（これらは、参考として本明細書に援用される）に開示される、このようなアッセイを参照のこと。一部の実施形態において、ヒト細胞表面に提示されるＣＤ４０への結合はＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックして、これらのヒト細胞の増殖と分化の阻害をもたらす。従って、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する正常または腫瘍性のヒト細胞に対してアンタゴニスト活性を示すことのできる抗体を含む。
【００４０】
本発明の抗ＣＤ４０抗体のアンタゴニスト活性は、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達のブロックにより、例えば、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０上のその結合部位に対する競合障害または立体障害により現れる。「競合的に阻害する」とは、抗ＣＤ４０抗体、またはその抗原結合フラグメントが、天然の可溶性Ｃ４ＢＰとしてのＣＤ４０上の同一のＣ４ＢＰ結合部位か、または少なくともその一部に結合することにより、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０上のその結合部位への結合を阻害することが意図される。「立体的に阻害する」または「立体阻害」とは、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントがＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位の外側または少なくとも部分的に外側に結合して、ＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位の構造の立体障害または破壊、またはそれらの数種の組み合わせにより、該抗体がＣ４ＢＰまたはそのフラグメントをＣＤ４０に結合させないことが意図される。一部の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤ４０抗原への結合は、Ｃ４ＢＰがＣＤ４０抗原に結合するときにＣＤ４０シグナル変換を妨げる。当業者は抗体がＣ４ＢＰのＣＤ４０への結合に競合的または立体的に干渉するかどうか、またはＣ４ＢＰのＣＤ４０上のその結合部位への結合によりＣＤ４０シグナル変換を妨げるかどうかを、当該分野で周知の標準的な方法を用いて決定し得る。
【００４１】
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、正常および腫瘍性のヒトＢ細胞ならびにヒト樹状細胞等のＣＤ４０発現細胞の表面に提示されるＣＤ４０に結合する場合、抗体は、ＣＤ４０に結合するときに有意なアゴニスト活性をもたない。「有意な」アゴニスト活性とは、ＣＤ４０発現細胞の応答のアッセイにより測定される、中立物質または陰性コントロールに誘導されたアゴニスト活性よりも少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％高いアゴニスト活性が意図される。好ましくは、「有意な」アゴニスト活性は、Ｂ細胞応答のアッセイにより測定される、中立物質または陰性コントロールにより誘導されたアゴニスト活性よりも少なくとも２倍高い、または少なくとも３倍高いアゴニスト活性である。従って、例えば、目的のＢ細胞応答がＢ細胞増殖である場合、「有意な」アゴニスト活性は、中立物質または陰性コントロールにより誘導されたＢ細胞増殖レベルよりも少なくとも２倍以上または少なくとも３倍以上であるＢ細胞増殖のレベルの誘導であろう。１つの実施形態において、非特異的な免疫グロブリン、例えば、ＣＤ４０に結合しないＩｇＧ１は陰性コントロールとして役立つ。「有意なアゴニスト活性を有さない」物質とは、中立物質または陰性コントロールにより誘導されたアゴニスト活性よりも約２５％以下のアゴニスト活性、好ましくは、中立物質または陰性コントロールにより誘導されたアゴニスト活性よりも約２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、１％以下、０．５％以下、さらに約０．１％以下のアゴニスト活性を示すだろう。本発明の目的のために、本発明の抗ＣＤ４０抗体のアゴニスト活性はＢ細胞応答のアッセイで測定される。そのようなアッセイは当該分野で周知であり、これらとしては、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするためのアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイの同時刺激が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｂｒｏｄｅｕｒら（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８３７、ＷＯ００／７５３４８および米国特許第６，０８７，３２９号（これらは、参考として本明細書に援用される）に開示される、このようなアッセイを参照のこと。本発明の１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は１種類のＢ細胞応答において有意なアゴニスト活性を有さない。本発明の別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は２種類以上のＢ細胞応答（例えば、増殖および分化、または増殖、分化および抗体産生）のアッセイで有意なアゴニスト活性を有さない。
【００４２】
一部の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はハイブリドーマ細胞株から産生されるＩｇＧ１アイソタイプの完全なヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。これらの細胞株は、米国特許第６，０７５，１８１号およびＰＣＴ国際公開ＷＯ９４／０２６０２に記載されているように、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ、カリフォルニア州）を用いて得られたマウス等の免疫マウス由来の脾細胞を用いて作られる。脾臓細胞をマウスミエローマＳＰ２／０細胞（Ｓｉｅｒｒａ  ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ）と融合させる。得られたハイブリドーマを数回サブクローニングしてモノクローナル細胞株を作る。本発明の他の抗体を、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に関してトランスジェニックであるマウスを用いて同様に調製するか、または当該分野で公知および／または本明細書中に記載される他の方法により調製してもよい。本発明のヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、ＣＤ４０、例えばヒトＣＤ４０に特異的に結合するが、ヒト抗ＣＤ４０抗体が認識するエピトープを有する非ヒト配列にも特異的に結合し得る。
【００４３】
別の実施形態において、ＣＤ４０に対するマウス抗体は、例えば、米国特許第５，７６６、８８６号または米国特許第６，１８０，３７０号に記載された方法を用いてヒト化することができる。さらに、ヒト抗体のファージディスプレイライブラリーをＣ４ＢＰに対してスクリーニングして、本明細書中に記載される結合特性を有する抗ＣＤ４０抗体を同定することができる。
【００４４】
アンタゴニスト活性に加えて、本発明の一部の抗ＣＤ４０抗体は、別の作用機構を有する（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有する抗体）。もしくは、抗ＣＤ４０抗体の可変領域は、ＡＤＣＣ活性を有する別の抗体アイソタイプに発現しうる。細胞障害性毒素と抗ＣＤ４０抗体の天然型、組み換え型または抗原結合フラグメントとを結合体化することも可能である。そのようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０を発現する腫瘍性細胞、例えば、悪性Ｂ細胞またはＣＤ４０を発現する固形腫瘍の腫瘍性細胞を標的とするのに有用である。
【００４５】
一部の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントはＥＬＩＳＡタイプのアッセイで可溶性ＣＤ４０に結合する；他の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、フローサイトメトリーアッセイにより決定されるように、Ｃ４ＢＰの細胞表面ＣＤ４０への結合を阻害することにより、事前に結合したＣ４ＢＰと置き換わる。本発明の方法に使用されるのに適当なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０細胞表面抗原に対する強い単一部位での結合親和性を示す。一部の実施形態において、本発明の抗体は、ＢｉａｃｏｒｅＴＭ等の標準アッセイを用いて測定して、ＣＤ４０に対して少なくとも１０−５Ｍ、少なくとも３×１０−５Ｍ、好ましくは少なくとも１０−６Ｍ〜１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも１０−８Ｍ〜約１０−１２Ｍの解離平衡定数（ＫＤ）を示す。Ｂｉａｃｏｒｅ分析は当該分野で公知であり、その詳細はＢＩＡａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋに提供されている。ＷＯ０１／２７１６０に記載された方法を用いて結合親和性を調節することができる。
【００４６】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の生産
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体およびそれらのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）ならびに親抗ＣＤ４０抗体の抗原結合機能を維持する他のフラグメント等のＣＤ４０細胞表面抗原を特異的に認識する抗体を含む。本発明の方法で特に興味があるのは、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０細胞シグナル伝達をブロックし、かつＣＤ４０に結合した場合に有意なアゴニスト活性を有さない抗ＣＤ４０抗体である。これらの抗体は当業者に公知の任意の抗体生産方法を用いて作ることができ、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックし、かつ組換え生成されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。
【００４７】
ポリクローナル血清を慣用の方法により調製してよい。一般的に、最初に、ＣＤ４０抗原を含む溶液を用いて適当な動物、好ましくは、マウス、ラット、ウサギまたはヤギを免疫する。得られる血清の体積および標識化された抗ウサギおよび抗ヤギ抗体の入手可能性の理由から、ウサギまたはヤギが、ポリクローナル血清の調製に好ましい。
【００４８】
ポリクローナル血清をトランスジェニック動物、好ましくはヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するマウスで調製することができる。好ましい実施形態において、ＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞が免疫原として用いられる。免疫化は、抗原を含有する溶液を、生理食塩水中、好ましくはフロイントの完全アジュバント等のアジュバント中で混合または乳化し、その混合物またはエマルジョンを非経口的（通常、皮下または筋内）に注射することにより実施することもできる。５０〜２００μｇ／注射の投与量が一般的には十分である。免疫化は、一般的に、２〜６週間後に、好ましくはフロイントの不完全アジュバントを用いる生理食塩水中のタンパク質の１回以上の注射により促進する。もしくは、本発明の目的のためにインビボ免疫化と同等と考えられる当該分野で公知の方法を用いるインビトロ免疫化により抗体を作ってもよい。
【００４９】
ポリクローナル抗血清は免疫動物の血液をガラスまたはプラスチック容器に取り、その血液を２５℃で１時間インキュベートした後に、４℃で２〜１８時間インキュベートすることにより得られる。血清を遠心分離（例えば、１，０００×ｇ、１０分間）により回収する。一採血あたり約２０〜５０ｍＬをウサギから得てよい。
【００５０】
Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞の生産は、米国特許第６，００４，５５２号（参考として、本明細書に援用される）に開示されている。簡潔
述べると、ヒトＣＤ４０をコードする配列を、トランスファーベクターを用いてバキュロウイルス中に組み換える。プラスミドを野生型バキュロウイルスＤＮＡとともにＳｆ９細胞に同時トランスフェクションする。組み換えバキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞を同定し、クローンを精製する。
【００５１】
抗体は事実上モノクローナルであることが好ましい。「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を意図する；すなわち、該集団を構成する個々の抗体は、僅かに存在する天然のありうる変異以外は同一である。この用語は抗体の種または供給源に関して限定されない。この用語は完全な免疫グロブリンならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、および抗体の抗原結合機能を保持する他のものを包含する。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一の抗原部位、すなわち本発明のＣＤ４０細胞表面抗原に対して指向される。さらに、通常、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含む慣用（ポリクローナル）の抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原の単一決定基に対して指向される。「モノクローナル」との修飾語は、抗体の実質的に均一な集団から得られた抗体の特徴を示し、いかなる特定の方法による抗体の生産も必要とするは解釈されない。例えば、本発明にしたがって用いられるモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５で最初に記載されたハイブリドーマ法により作られるものであってよく、または組み換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）により作られたものであってよい。「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７；および米国特許第５，５１４，５４８号に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。
【００５２】
「エピトープ」とは、抗原性分子の一部分であることが意図され、この部分に対して抗体が作られ、かつ抗体が結合する。エピトープは直鎖アミノ酸残基（すなわち、エピトープ内の残基は直線的な様式で連続して次々に配置される）、非直鎖アミノ酸残基（ここでは「非直鎖エピトープ」と称される；これらのエピトープは連続して配置されていない）または直鎖または非直鎖の両方のアミノ酸残基を含む。
【００５３】
モノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９６、またはその改変法を用いて調製することができる。通常、マウスを、抗原を含む溶液で免疫する。免疫化は、抗原を含有する溶液を、生理食塩水中、好ましくはフロイントの完全アジュバント等のアジュバント中で混合または乳化し、その混合物またはエマルジョンを非経口的に注射することにより実施することができる。当該分野で公知である任意の免疫方法を用いて本発明のモノクローナル抗体を得てもよい。動物の免疫後、脾臓（および必要に応じて、数個の大型のリンパ節）を取り出し、これを単一の細胞へと分離する。脾臓細胞は、細胞懸濁液を目的の抗原でコーティングしたプレートまたはウェルに適用することによりスクリーニングしてよい。抗原に特異的な膜結合型免疫グロブリンを発現するＢ細胞はプレートに結合し、洗い流されることはない。得られたＢ細胞またはすべての分離した脾臓細胞を次にミエローマ細胞と融合するように誘導してハイブリドーマを形成し、選択培地で培養する。得られた細胞を連続希釈によりプレートし、目的の抗原に特異的に結合する（かつ無関係な抗原には結合しない）抗体の産生についてアッセイする。この選択されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）分泌ハイブリドーマを次にインビトロで（例えば、組織培養ボトルまたは中空のファイバーリアクター）またはインビボで（マウスにおける腹水として）培養する。
【００５４】
組換えＤＮＡ法を用いて、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（すなわち、組換え生産されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体）を調製する場合、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣用の操作を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）容易に単離され、そして配列決定される。本明細書中に記載されるハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。いったん単離されたら、ＤＮＡを発現ベクターに配置し得、次に宿主細胞（例えば、大腸菌細胞、類人猿ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または他に免疫グロブリンタンパク質を産生しないミエローマ細胞）にトランスフェクションし得、組換え宿主細胞でのモノクローナル抗体の合成を取得し得る。抗体をコードするＤＮＡの細菌中の組換え発現に関する総論として、Ｓｋｅｒｒａら（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６およびＰｈｉｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１が挙げられる。
【００５５】
もしくは、抗体は、米国特許第５，５４５，４０３号、同第５，５４５，４０５号および同第５，９９８，１４４号（これらは、参考として、本明細書に援用される）に開示されるように、細胞株（例えば、ＣＨＯ細胞株）で作ることができる。簡潔に述べると、細胞株を、軽鎖と重鎖をそれぞれ発現することのできるベクターでトランスフェクションする。別々のベクターの２つのタンパク質をトランスフェクションすることにより、キメラ抗体を作ることができる。別の利点は抗体の正確なグリコシル化である。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、グルタミンシンテターゼをマーカーとして用いるＧＳ遺伝子発現システム（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ、ニューハンプシャー）を用いてＣＨＯ細胞で作ることができる。米国特許第５，１２２，４６４号、同第５，５９１，６３９号、同第５，６５８，７５９号、同第５，７７０，３５９号、同第５，８２７，７３９号、同第５，８７９，９３６号、同第５，８９１，６９３号および同第５，９８１，２１６号（これらの内容は、その全体が、参考として本明細書に援用される）も参照のこと。
【００５６】
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は当該分野で公知である。例えば、ＭｃＭｉｃｈａｅｌ編（１９８７；１９８９）Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ＩＶ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）のＢ細胞抗原に関するセクション；米国特許第５，６７４，４９２号、同第５，８７４，０８２号、同第５，６７７，１６５号、同第６，０５６，９５９号、国際公開Ｎｏ．ＷＯ００／６３３９５、ＷＯ０２／２８９０５およびＷＯ０２／２８９０４；米国特許出願公開２００２／０１４２３５８Ａ１および２００３／００５９４２７；２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日、２００４年４月２７日に出願され、米国特許出願第６０／５１７，３３７（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、６０／５２５，５７９（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））および６０／５６５，７１０（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））がそれぞれ付与された「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の仮出願に開示されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体；および２００４年１１月４日出願の「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：１４２５；Ｖａｌｌｅら（１９８９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：１４６３；Ｃｌａｒｋら（１９８６）ＰＮＡＳ  ８３：４４９４；Ｐａｕｌｉｅら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５９０；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１５３５；Ｊａｂａｒａら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１８６１；Ｚｈａｎｇら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８３６；Ｇａｓｃａｎら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ３：８；およびＢａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：７０（これらの全ては、参考として本明細書に援用される）を参照のこと。本発明のために特に目的とされるものは、Ｃ４ＢＰ上の結合部位へのＣ４ＢＰの結合を競合的または立体的に阻害するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の能力またはＣＤ４０上の結合部位へのＣ４ＢＰの結合によりＣＤ４０シグナル変換を妨げる能力の結果でありうる、ＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位に結合するか、またはその付近で結合することによりＣＤ４０媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする、本明細書に開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。
【００５７】
本明細書において用いられる「ＣＤ４０抗原エピトープ」との用語は、ＣＤ４０抗原それ自体を含まない本発明の抗ＣＤ４０モノクローナル抗体と免疫反応性であり得る分子をいう。ＣＤ４０抗原エピトープはタンパク質、タンパク質フラグメント、ペプチド、炭水化物、脂質および他の分子を含んでよいが、本発明の目的のためには、最も一般的なタンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチド模倣物（すなわち、ＣＤ４０抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）またはその組み合わせである。適当なオリゴヌクレオチド模倣物はなかでもＰＣＴ出願ＵＳ９１／０４２８２に記載されている。
【００５８】
さらに、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、キメラ抗ＣＤ４０抗体およびヒト化抗ＣＤ４０抗体を含む；本発明のそのようなキメラ抗ＣＤ４０抗体およびヒト化抗ＣＤ４０抗体はＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位に結合するか、またはその付近で結合することによりＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする。「キメラ」抗体とは、最も好ましくは組換えデオキシリボ核酸技術を用いて得られ、ヒト（免疫学的に「関連する」種、例えばチンパンジーを含む）成分と非ヒト成分の両方を含む抗体が意図される。従って、キメラ抗体の定常領域は最も好ましくは天然のヒト抗体の定常領域と実質的に同一である；キメラ抗体の可変領域は最も好ましくは非ヒト供給源に由来し、ＣＤ４０細胞表面抗原に対して所望の抗原特異性を有する。非ヒト供給源は、ヒトＣＤ４０細胞表面抗原またはヒトＣＤ４０細胞表面抗原を含む物質に対する抗体を生成するために用いることのできる、あらゆる脊椎動物供給源であり得る。そのような非ヒト供給源としては、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラット、マウス等；例えば、米国特許第４，８１６，５６７号（参考として、本明細書に援用される）を参照）および非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿等；例えば、米国特許第５，７５０，１０５号および同第５，７５６，０９６号（これらは、参考として、本明細書に援用される）を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）は、マウス可変領域およびヒト定常領域を有するキメラ抗体の１例である。本明細書で使用される場合、句「免疫学的に活性な」は、キメラ抗ＣＤ４０抗体に関連して用いられる場合、ＣＤ４０、特にヒトＣＤ４０に結合するキメラ抗体を意味する。
【００５９】
「ヒト化」とは、非ヒト免疫グロブリン配列から得られる最小配列を含む抗ＣＤ４０抗体の形態が意図される。ほとんどの部分で、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（受容抗体）において、受容抗体の超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとしても知られる）由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基により置き換えられているヒト免疫グロブリンである。句「相補性決定領域」は、生来の免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の結合親和性と特異性をともに定めるアミノ酸配列をいう。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）を参照のこと。「定常領域」との語句はエフェクター機能を付与する抗体分子の一部をいう。ヒト疾患の処置に使用される非免疫原性抗体の産生に関するこれまでの研究において、マウス定常領域をヒト定常領域により置き換えた。対象のヒト化抗体の定常領域をヒト免疫グロブリンから得た。しかし、これらのヒト化抗体はなおもヒトにおいて望まれない潜在的に危険な免疫応答を誘発し、かつ親和性の喪失が存在した。本発明のヒト化抗ＣＤ４０抗体もＣＤ４０に特異的に結合することにより、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックまたは阻害する。
【００６０】
ヒト化は、基本的にはＷｉｎｔｅｒと共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）にしたがって、げっ歯類または変異体げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置き換えることにより実施することができる。米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号および同第５，８５９，２０５号（これらは、参考として本明細書に援用される）もまた参照のこと。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンの１つ以上の可変領域のフレームワーク領域内の残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号を参照のこと）。さらに、ヒト化抗体は、受容抗体やドナー抗体に見られない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練する（例えば、所望の親和性を得る）ために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、全てまたは実質的に全ての超可変領域が非ヒト免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、かつ全てまたは実質的に全てのフレームワーク領域がヒト免疫グロブリン配列のものである少なくとも１つ、通常は２つの実質的にすべての可変ドメインを含むだろう。必要に応じて、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むだろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（これらは、参考として本明細書に援用される）を参照のこと。したがって、そのような「ヒト化された」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的小さい部分が非ヒト種由来の対応する配列により置き換えられた抗体を含んでよい。実際には、ヒト化抗体は、代表的に数個のＣＤＲ残基およびおそらく数個のフレームワーク残基がげっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基に置き換えられたヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号および同第５，８５９，２０５号を参照のこと。また、ヒト化抗体および所定の抗原に対する改善された親和性を有するヒト化抗体の生産技術が開示されている米国特許第６，１８０，３７０号および国際公開第０１／２７１６０も参照のこと。
【００６１】
本発明の抗ＣＤ４０抗体は、非活性化内因性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座により特徴付けられる非ヒト哺乳類宿主（より詳しくは、トランスジェニックマウス）で産生される異種または改変抗ＣＤ４０抗体も含む。そのようなトランスジェニック動物において、宿主免疫グロブリンの軽鎖サブユニット／重鎖サブユニットの発現のための適確な内因性遺伝子が非機能的にされ、類似のヒト免疫グロブリン遺伝子座により置き換えられる。これらのトランスジェニック動物は、宿主の重鎖または軽鎖免疫グロブリンサブユニットが実質的に存在しない場合にヒト抗体を産生する。例えば、米国特許第５，８７７，３９７号および同第５，９３９，５９８号（これらは、参考として本明細書に援用される）を参照のこと。したがって、そのような抗体は、完全なヒト抗ＣＤ４０抗体である。
【００６２】
好ましくは、ＣＤ４０に対する完全なヒト抗体はトランスジェニックマウスを免疫することにより得られる。そのようなマウスはＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ、カリフォルニア州））を用いて得られ、これは、米国特許第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号および同第６，１１４，５９８号（これらは、参考として本明細書に援用される）に開示されている。従って、例えば、１つの実施形態において、ここで開示されるヒトアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座に関してトランスジェニックであるマウスを、ヒトＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞で免疫することにより作ることができる。また、マウスは他のアイソタイプに関してトランスジェニックであってもよい。本発明の完全なヒトアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位またはその近くに結合することによって、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするということによっても特徴付けられる。
【００６３】
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、それらが対応する全長アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の所望の親和性を保持し、対応する全長アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体に類似する特性により特徴付けられる限り、本発明の方法での使用に適当である。すなわち、これらのフラグメントは細胞表面に発現するＣＤ４０抗原、例えば、ヒト細胞表面のヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合するが、ＣＤ４０抗原に結合した場合に有意なアゴニスト活性を有さず、アンタゴニスト活性を示す。したがって、ＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０への該フラグメントの結合はＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることにより１種類以上のＣＤ４０指向性の活性を阻害する。そのようなフラグメントはここでは「抗原結合」フラグメントと称し、本発明のいずれの方法での使用にも適切である。
【００６４】
抗体の適切な抗原結合フラグメントは、全長抗体の一部、一般的にはその抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメントおよび単鎖抗体分子が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｆａｂ」は、軽鎖および重鎖の一部からなる免疫グロブリンの一価抗原結合フラグメントが意図される。Ｆ（ａｂ’）２は、両方の軽鎖と両方の重鎖の一部とを含む免疫グロブリンの二価抗原結合フラグメントが意図される。「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体フラグメントとは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含むフラグメントが意図され、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，２６０，２０３号、同第５，４５５，０３０号および同第５，８５６，４５６号（これらは、参考として本明細書に援用される）を参照のこと。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ｓＦｖに抗原結合のために所望の構造を形成させることを可能とするＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５を参照のこと。下記に説明するように、本明細書で開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の抗原結合フラグメントはまた、細胞毒に結合体化され得、標的細胞（例えば、標的癌細胞）を死滅させることをもたらし得る。
【００６５】
抗体または抗体フラグメントは、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）および米国特許第５，５１４，５４８号に記載された技術を用いて作られた抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７は、それぞれファージライブラリーを用いて、マウスとヒトの抗体の単離を説明している。その後の出版物は、鎖の混合（ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）による高親和性（ｎＭの範囲）のヒト抗体の生産（Ｍａｒｋｓら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３）、ならびに非常に大規模なファージライブラリーを構築するための戦略として無作為感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３）Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６）を記載する。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に代わる実行性のある代案である。
【００６６】
抗体フラグメントの生産のために多様な技術が開発されている。伝統的に、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解により得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１）。しかし、これらのフラグメントは現在では組換え宿主細胞によって直接作ることができる。例えば、抗体フラグメントは上記の抗体ファージライブラリーから単離することができる。もしくは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは大腸菌から直接回収され、化学結合させてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。別の方法にしたがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体フラグメント生産の他の技術は熟練した技術者には明らかであろう。
【００６７】
本発明の方法に有用なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体として、上記の抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ならびにこれらの抗体とは異なるが、該ＣＤＲを保持する抗体；および１つ以上のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する抗体が挙げられ、アンタゴニスト活性はＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることにより１種類以上のＣＤ４０指向性の活性を阻害する抗体の能力により測定される。本発明は、例えば、国際公開ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００３４３１７（これらは、参考として本明細書に援用される）に記載されたように産生され得る脱免疫化（ｄｅ−ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体も含む。この様式において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体内の残基が改変されて、その結果、その抗体をヒトに対して非免疫原性またはより低い免疫原性とする一方で、ヒトＣＤ４０発現細胞に対するそれらのアンタゴニスト活性を保持し、特にＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックして、１種類以上のＣＤ４０指向性の活性の阻害をもたらす。ここで、このような活性は本明細書の他の箇所で記したアッセイにより測定される。特許請求の範囲には、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはそのフラグメントを含む融合タンパク質も含み、この融合タンパク質は、当該分野で公知であるように、合成するか、または対応するポリヌクレオチドベクターから発現させることができる。そのような融合タンパク質は、下記の抗体の結合体化に関して記載される。
【００６８】
本発明の抗体は、例えば、特許公開第ＥＰ０  ９８３  ３０３Ａ１、ＷＯ００／３４３１７およびＷＯ９８／５２９７６（これらは、参考として本明細書に援用される）に記載の方法を用いて作られた配列のバリエーションを有し得る。例えば、ＣＤＲ内の配列をは抗体をＭＨＣクラスＩＩに結合させ得、そして不要なヘルパーＴ細胞応答を引き起こし得ることを示した。保存的置換は、抗体に結合活性を保持させ得、なお不要なＴ細胞応答を引き起こす能力を失わせ得る。任意のそのような保存的置換または非保存的置換は、当分野で認識された方法（例えば、本明細書の他の箇所に記される方法）を用いて行うことができ、得られた抗体は本発明の範囲内にある。改変体抗体はアンタゴニスト活性、親和性および特異性について、本明細書中に記載される方法を用いてごく普通に調べることができる。
【００６９】
上記の方法のいずれか、または本明細書において開示されていない他の方法のいずれかにより作られた抗体は、ＣＤ４０抗原に対する抗体の結合がＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする限り本発明の範囲にある。抗体は、以下の任意の手段（これらに限定されない）により、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることができる：Ｃ４ＢＰのＣＤ４０上のその結合部位への結合を立体阻害することによりＣ４ＢＰの結合を妨げること、ＣＤ４０上のＣ４ＢＰ結合部位の少なくとも一部に対する競合によりＣ４ＢＰの結合を競合阻害すること、およびＣ４ＢＰが細胞表面ＣＤ４０に結合するときにＣＤ４０シグナル変換を妨げること。従って、本発明のアンタゴニスト性抗ＣＤ４０抗体は、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０上のその結合部位への結合により誘導される１種類以上のＣＤ４０指向性の活性（本明細書に開示されたＣＤ４０指向性の活性（例えば、Ｔ細胞により刺激された正常ヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌；Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞により刺激された正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖；Ｃ４ＢＰ発現細胞または可溶性Ｃ４ＢＰにより刺激される正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖；可溶性Ｃ４ＢＰまたは固相Ｃ４ＢＰにより刺激される任意の細胞の「生存」抗アポトーシス細胞内シグナル；可溶性Ｃ４ＢＰまたは固相Ｃ４ＢＰに結合した際の任意の細胞のＣＤ４０シグナル変換；および下記のヒト悪性Ｂ細胞の増殖））を阻害し得る。これらのＣＤ４０指向性の活性を阻害するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の能力を測定するアッセイを、本明細書の実施例に記載のように実施することができる。また、Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：８２００；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９；ならびに米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（これらは、参考として本明細書に援用される）に記載のアッセイも参照のこと。
【００７０】
本明細書で同定される様式で、ＣＤ４０抗原に特異的に結合し、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするアンタゴニスト性抗ＣＤ４０抗体を検出する代表的なアッセイは「競合結合アッセイ」である。競合結合アッセイは、未知物質が、標識された公知リガンド（Ｃ４ＢＰ等）のその特異的レセプター（ＣＤ４０等）への結合を阻害する能力により検出され、定量化される血清学的アッセイである。これは、競合阻害アッセイとも呼ばれる。代表的な競合結合アッセイにおいて、標識されたＣＤ４０ポリペプチドは、例えば、本発明の抗体の１種類以上のエピトープに対して生じたモノクローナル抗体と共同して、試料中の候補抗体により沈殿させられる。目的のエピトープに特異的に結合する抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０タンパク質、または目的のＣＤ４０タンパク質の特定のエピトープを含むタンパク質のフラグメントに対して調製された一連の抗体をスクリーニングすることにより同定することができる。例えば、ヒトＣＤ４０に関して、目的のエピトープとしては、ヒトＣＤ４０の短いアイソフォーム（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿１５２８５４によりコードされるＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿６９０５９３を参照のこと）またはヒトＣＤ４０の長いアイソフォーム（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０によりコードされるＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＡ４３０４５およびＮＰ＿００１２４１を参照のこと）の直鎖および／または非直鎖アミノ酸残基を含むエピトープが挙げられる。もしくは、既に同定された適当なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による競合結合アッセイを用いて、既に同定された抗体に匹敵するモノクローナル抗体を選択することができるだろう。
【００７１】
そのような免疫アッセイに使用される抗体は標識されていても標識されていなくてもよい。未標識抗体は凝集またはＥＬＩＳＡに用いてよい；標識抗体は、多様な標識を用いて多様なアッセイに用いてよい。抗ＣＤ４０抗体と目的のエピトープとの抗体−抗原複合体の形成の検出は、検出可能な物質を抗体に結合させることにより容易にされ得る。適当な検出手段として、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光剤、化学発光剤、色原体、酵素基質または共同因子、酵素阻害剤、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子および色素等の標識の使用が挙げられる。適当な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；適当な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適当な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリスリンが挙げられる；蛍光物質の例はルミノールである；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる；および適当な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。そのような標識物質は、ラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡ、蛍光イムノアッセイ等の多様な周知のアッセイに用いてよい。例えば、米国特許第３，７６６，１６２号、同第３，７９１，９３２号、同第３，８１７，８３７号および同第４，２３３，４０２号を参照のこと。
【００７２】
既に記載したアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれも本発明の方法に使用する前に複合化してよい。複合化抗体の生産方法は当該分野で公知である。従って、抗ＣＤ４０抗体は間接的な標識または間接的な標識アプローチを用いて標識してよい。「間接的な標識」または「間接的な標識アプローチ」とは、キレート剤が抗体に共有結合し、少なくとも１つの放射性核種がキレート剤に挿入されていることが意図される。例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ａｎｄ  Ｍｅａｓｅ（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ．１８：５８９−６０３（参考として、本明細書に援用される）に記載のキレート剤および放射性核種を参照のこと。適当な標識として、フルオロフォア、発色団、放射活性原子（特に３２Ｐおよび１２５Ｉ）、高電子密度試薬、酵素、および特異的な結合パートナーを有するリガンドが挙げられる。酵素は典型的にはそれらの活性により検出される。例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼは３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を青い色素に変換する能力により通常検出され、分光光度計により定量することができる。「特異的な結合パートナー」は、例えば抗原およびそれに特異的なモノクローナル抗体の場合におけるように、リガンド分子に高親和性で結合することのできるタンパク質をいう。他の特異的な結合パートナーとしては、ビオチンおよびアビジンまたはストレプトアビジン、ＩｇＧおよびプロテインＡ、および当該分野で公知の多くのレセプター／リガンドの組が挙げられる。同一の標識が数種類の異なる態様で働くため、上記説明が多様な標識を異なるクラスに分類することを意味するものではないことが理解されるべきである。例えば、１２５Ｉは放射活性標識または高電子密度試薬としても働き得る。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）は酵素またはモノクローナル抗体の抗原としても働き得る。さらに、所望の効果のために多様な標識を組み合わせてもよい。例えば、モノクローナル抗体とアビジンも本発明の実施で標識を必要とする：従って、モノクローナル抗体をビオチンで標識し、その存在を１２５Ｉで標識したアビジンによるか、またはＨＲＰにより標識された抗ビオチンモノクローナル抗体により検出してよい。他の入れ替えおよび可能性は当業者にとって容易に明らかであろうし、本発明の範囲内において等価物とみなされる。
【００７３】
もしくは、放射性核種を抗体に直接（通常はアミノ酸残基を介して）共有結合させる場合、抗ＣＤ４０抗体は「直接的な標識」または「直接的な標識法」を用いて標識してよい。好ましい放射性核種は上記のＳｒｉｖａｇｔａｖａおよびＭｅａｓｅ（１９９１）に提供されている。間接的な標識法が特に好ましい。参考のために本明細書に援用される、放射活性標識を抗体に結合するためにリンカーが用いられる国際公開第ＷＯ００／５２０３１およびＷＯ００／５２４７３；および米国特許第６，０１５，５４２に記載の抗ＣＤ４０抗体の標識形も参照されたい。
【００７４】
さらに、抗体（またはそのフラグメント）を、細胞毒素、処置剤または放射活性金属イオンまたは放射性同位元素等の処置部分に結合させてもよい。細胞毒素または細胞毒性薬として、細胞に有害なあらゆる物質が挙げられる。例として、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンおよびそれらの類似化合物または同族化合物が挙げられる。処置剤として、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよび白金（ＩＩ）シス−ジクロロジアミン（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧称：ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧称：アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））および抗分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。放射性同位元素としては、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｐｄ−１０９、Ｔｃ−９９、Ｉｎ−１１１等が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の複合化抗体は所与の生物学的応答を改変するために用いることができる；医薬部分は伝統的な化学処置剤に限定されるものと解釈されるべきではない。例えば、医薬部分は所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであってよい。そのようなタンパク質としては、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素またはジフテリア毒素等の毒素；腫瘍壊死因子、インターフェロン−α、インターフェロン−β、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター等のタンパク質；または例えばリンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）などの生物反応修飾物質または他の成長因子が挙げられるだろう。
【００７５】
そのような処置部分を抗体に結合させる技術は周知である。例えば、Ａｒｎｏｎら（１９８５）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．），ｐｐ  ２４３−２５６；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら（１９８７）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編（第２版；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．），ｐｐ．６２３−６５３；Ｔｈｏｒｐｅ（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ‘８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら編（Ｅｄｉｔｒｉｃｅ  Ｋｕｒｔｉｓ，Ｍｉｌａｎｏ，Ｉｔａｌｙ，１９８５），ｐｐ．４７５−５０６；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎら編（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５），ｐｐ．３０３−３１６；およびＴｈｏｒｐｅら（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照されたい。
【００７６】
もしくは、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されているように、抗体を第２抗体に結合させて抗体異種複合体を形成することができる。さらに、リンカーを標識と本発明の抗体との間に用いてよい（米国特許第４，８３１，１７５号を参照）。抗体またはその抗原結合フラグメントは、放射性ヨウ素、インジウム、イットリウムまたは当技術分野で公知である他の放射活性粒子で直接標識してよい（米国特許第５，５９５，７２１号）。処置は、同時または続けて投与される複合体化抗体または非複合体抗体による処置の組み合わせからなってよい（国際公開ＷＯ００／５２０３１およびＷＯ００／５２４７３）。
【００７７】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の変異体
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の適当な生物学的活性変異体を本発明の方法に用いることができる。そのような変異体は親アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の所望の結合性を保持するだろう。抗体変異体の製造方法は当技術分野で一般的に利用可能である。
【００７８】
例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体のアミノ酸配列変異体は目的の抗体をコードするクローン化ＤＮＡ配列中の変異により調製することができる。突然変異誘発および核酸配列改変の方法は当技術分野で周知である。例えば、参考のために本明細書に援用されるＷａｌｋｅｒ  ａｎｄ  Ｇａａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；ならびにこれらの文献において引用されている文献を参照されたい。目的のポリペプチドの生物活性に影響を与えない適当なアミノ酸置換に関する手引きは、参考のために本明細書に援用されるＤａｙｈｏｆｆら（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）に見られるだろう。１アミノ酸の、類似の性質を有する別のアミノ酸への変換等の保存的置換が望ましいだろう。保存的置換の例として、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔ＧｌｎおよびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
目的のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ポリペプチドの変異体の構築において、変異体が、所望の活性、すなわち類似の結合親和性を有し続け、ヒト細胞の表面に発現したヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合することによりＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることができ、ヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合したときに有意なアゴニスト活性を有さないが、アンタゴニスト活性を示すように改変を行う。明らかに、変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡになされる変異はその配列をリーディングフレーム外に置くべきではなく、好ましくは、ｍＲＮＡの二次構造を作ることのできる相補性領域を作らないだろう。ＥＰ特許出願公告第７５，４４４号を参照されたい。
【００８０】
さらに、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定常領域を突然変異させて、エフェクター機能を多様に変えてもよい。例えば、Ｆｃレセプターへの抗体の結合を最適化するＦｃ変異を開示する米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願公告第２００４／０１３２１０１Ａ１号を参照されたい。
【００８１】
好ましくは、参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の変異体は、参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体分子のアミノ酸配列に対して、または参照抗体分子の短い一部に対して、少なくとも７０％または７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％または８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％または９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。より好ましくは、分子は少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を分かち合う。本発明の目的のために、配列同一性パーセントは、ギャップオープンペナリティー１２およびギャップエクステンション２を有するアフィンギャップ検索、ＢＬＯＳＵＭマトリックス６２を用いるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムを用いて決定する。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムはＳｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９に教示されている。変異体は、例えば、わずかに１〜１５アミノ酸残基、わずかに１〜１０アミノ酸残基（例えば、６〜１０）、わずかに５、わずかに４、３、２または１アミノ酸残基だけ参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と異なってもよい。
【００８２】
２つのアミノ酸配列の最適配置に関して、変異アミノ酸配列の連続的なセグメントは、参照アミノ酸配列に対してさらなるアミノ酸残基を有してもよいし、アミノ酸残基を欠失してもよい。参照アミノ配列との比較に用いられる連続的なセグメントは少なくとも２０個の連続的なアミノ酸残基を含んでよく、３０個、４０個、５０個またはそれ以上のアミノ酸残基であってよい。保存残基置換またはギャップに関連する配列同一性の補正を行うことができる（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムを参照）。
【００８３】
ＣＤ４０に特異的に結合することができ、特にＣＤ４０抗原に結合した場合にアンタゴニスト活性を保持することのできる抗ＣＤ４０抗体の正確な化学構造は多くの要因に依存する。イオン化可能なアミノ基とカルボキシル基は分子中に存在するため、特定のポリペプチドが酸性または塩基性塩として、または中性の形で得られるだろう。適当な環境条件に置かれた場合に生物活性を保持するそのようなすべての調製物がここで用いられるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定義に含まれる。さらに、ポリペプチドのアミノ酸一次配列は糖部分（グリコシル化）を用いる誘導体化によるか、または脂質、リン酸塩、アセチル基等の他の追加分子により補強されるだろう。糖類に連結しても補強されるだろう。そのような補強の一定の態様は生産宿主の翻訳後処理システムにより達成される；他のそのような改変はインビトロで導入してよい。いずれにしても、抗ＣＤ４０抗体のアンタゴニスト性質が破壊されない限り、そのような改変はここで用いられる抗ＣＤ４０抗体の定義に含まれる。そのような改変は、多様なアッセイにおいて、抗体の活性の強化または減少のいずれかにより活性に対して定量的または定性的に影響を与えることが予想される。さらに、鎖中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元または他の誘導体化により修飾され、抗体を切断して活性を保持するフラグメントを得てもよい。アンタゴニスト活性を壊さないそのような変更は、抗体ポリペプチド配列を、本明細書において用いられる目的の抗ＣＤ４０抗体の定義から排除するものではない。
【００８４】
本技術は調製物に関する実質的な指導および抗体の変異体の使用を提供する。抗ＣＤ４０抗体変異体の調製において、当業者は、天然のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対する修飾が、本発明の方法に使用される医薬組成物の処置活性成分として使用するのに適当な変異体をもたらすのかどうかを容易に決定することができる。
【００８５】
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を使用する処置方法
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする手段を提供するため、これら抗体は上記のように１種類以上のＣＤ４０指向性の活性を阻害するために用いることができる。従って、本発明は、ＣＤ４０発現細胞でＣＤ４０指向性の活性を阻害する方法において、該細胞を、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするのに効果的な量の本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体に接触することからなる方法を提供する。前記のように、抗ＣＤ４０抗体のＣＤ４０への結合がＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を妨げる限り、このシグナル伝達プロセスのブロックは、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０上のその結合部位への結合の競合阻害または立体阻害、またはＣ４ＢＰのＣＤ４０上のその結合部位への結合に対するＣＤ４０シグナル変換の阻止の結果でありうる。
【００８６】
本明細書において開示されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０シグナル伝達のＣ４ＢＰ刺激により媒介る疾患を有する患者を処置するために用いることができる。「ＣＤ４０発現細胞」とは、ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する細胞タイプ、特にＢ細胞および他のＡＰＣ（樹状細胞等）が意図され、正常または悪性ＣＤ４０発現細胞であってよい。細胞中のＣＤ４０発現の検出方法は当技術分野で周知であり、ＰＣＲ技術、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８７】
「悪性Ｂ細胞」とは、低悪性度、中悪性度および高悪性度のＢ細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）誘導リンパ腫およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ならびにＢ細胞急性リンパ芽球性リンパ腫（ＡＬＬ）、骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄芽球性白血病等のリンパ腫に由来するＢ細胞等の、しかし、これらに限定されない腫瘍性Ｂ細胞が意図される。他の実施形態において、ＣＤ４０発現細胞は固形腫瘍細胞である。「ＣＤ４０発現固形腫瘍細胞」とは、ＣＤ４０細胞表面抗原を発現する固形腫瘍の癌性および前悪性細胞が意図される。本発明の目的のために、ＣＤ４０抗原を発現する癌性および前癌性または前悪性細胞を「ＣＤ４０発現腫瘍細胞」と称する。さらに、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）およびＣ４ＢＰがＣＤ４０活性化により相乗的に作用する場合、本発明の抗ＣＤ４０抗体を用いてＣ４ＢＰ媒介性シグナル伝達をブロックすることにより、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ結合により媒介る疾病に対して効果を有しうる。
【００８８】
「処置」は、ここでは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの患者への適用または投与、またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはそのフラグメントの患者の単離組織または細胞系への適用または投与として定義され、ここで該患者は疾病、疾病の症状または疾病になりやすい素質を有し、その目的は、疾病、疾病の症状または疾病になりやすい素質を処置、治癒、緩和、軽減、変更、改善、改良、向上または作用することにある。「処置」とは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物の患者への適用または投与、または抗ＣＤ４０抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物の患者の単離組織または細胞系への適用または投与が意図され、該患者は疾病、疾病の症状または疾病になりやすい素質を有し、その目的は、疾病、疾病の症状または疾病になりやすい素質を処置、治癒、緩和、軽減、変更、改善、改良、向上または作用することにある。
【００８９】
本発明の少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）による処置は、ヒトのＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０シグナル伝達のＣ４ＢＰ促進に関連する疾病（ここでは「ＣＤ４０関連疾患」と称する）の処置に関して有益である生理学的応答を引き起こす。そのようなＣＤ４０関連疾患として、Ｂ細胞関連癌およびＣＤ４０発現腫瘍細胞を含む固形腫瘍等の癌を導く過剰増殖疾患、前悪性状態、および自己免疫疾患および／または炎症性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。従って、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いて、全身性狼瘡、乾癬、多発性硬化、炎症性大腸炎（クローン病）、関節リウマチおよび器官および組織移植片の拒絶反応等の自己免疫疾患および／または炎症性疾病を、自己免疫応答を抑制することにより処置し、ＣＤ４０により提供される活性化シグナルを悪性Ｂリンパ球から奪うことによりリンパ腫を処置し、ＣＤ４０を有する細胞に特異的に毒素を運ぶことができる。
【００９０】
よって、例えば、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、異常で、調節できないＢ細胞増殖または蓄積に関連する非ホジキンリンパ腫の処置に用途がある。本発明の目的のために、そのようなリンパ腫はＷｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキームにしたがって言及される、すなわち、低悪性度、中悪性度、高悪性度と分類されるＢ細胞リンパ腫である（「Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ」（１９８２）Ｃａｎｃｅｒ  ４９：２１１２を参照されたい）。従って、低悪性度のＢ細胞リンパ腫は、小さいリンパ球性濾胞小切断細胞および濾胞混合小切断および大細胞リンパ腫を含み；中悪性度のリンパ腫は、濾胞大細胞、びまん性小切断細胞、びまん性混合小／大細胞、およびびまん性大細胞リンパ腫；および高悪性度リンパ腫は、バーキットおよび非バーキット型の大細胞免疫芽球性、リンパ芽球性および小非切断細胞リンパ腫が挙げられる。
【００９１】
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）（改正欧米リンパ腫分類）システムにしたがって分類されたＢ細胞リンパ腫の処置上の処置に有用である。そのようなＢ細胞リンパ腫としては、前駆体Ｂ細胞新生物、例えばＢリンパ芽球性白血病／リンパ腫；末梢Ｂ細胞新生物、例えばＢ細胞慢性リンパ球白血病／小リンパ球リンパ腫、リンパ形質細胞様リンパ腫／免疫細胞腫、外套細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞中心リンパ腫（甲状腺濾胞腺癌）（びまん性小細胞、びまん性混合小／大細胞およびびまん性大細胞リンパ腫）、辺縁層Ｂ細胞リンパ腫（例えば、節外性、結節性および脾臓タイプ）、毛様細胞様白血病、プラズマ細胞腫／骨髄腫、サブタイプ縦隔（胸腺）原発びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫およびバーキット様高悪性度Ｂ細胞リンパ腫；急性白血病；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；骨髄芽球性白血病；急性骨髄性白血病；骨髄球白血病；骨髄単球性白血病；単球性白血病；赤白血病；顆粒球性白血病（慢性骨髄性白血病）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；真性赤血球増加；多発性骨髄腫；Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍのマクログロブリン血症；重鎖病；および分類できない低悪性度または高悪性度のＢ細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９２】
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は処置中に生じるさらなる腫瘍副産物が生じないようにするのに有用であろうし、低悪性度のＢ細胞リンパ腫を有する被験体、特に標準化学療法後に再発を有する被験体の処置に有用でありうる。低悪性度のＢ細胞リンパ腫は中悪性度または高悪性度のＢ細胞リンパ腫よりも不活性であり、再発／軽減経過により特徴付けられる。従って、これらのリンパ腫の処置は、再発の発見が回数および程度において減少できるために、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いて向上させる。
【００９３】
ＣＤ４０発現腫瘍細胞を含む固形腫瘍としては、卵巣、肺（例えば、扁平上皮癌タイプ、腺癌タイプおよび大細胞癌タイプの非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、胸、結腸、腎臓（例えば、腎臓細胞癌腫）、膀胱（例えば、膀胱癌）肝臓（例えば肝細胞癌）、胃、子宮頚部、前立腺、鼻咽頭、甲状腺（例えば、甲状腺乳頭状癌）およびメラノーマ等の皮膚癌、および肉腫（例えば、骨肉腫およびユーイング肉腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９４】
ＣＤ４０を発現する腫瘍細胞を含む癌を有する被験体に投与される場合、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントは抗腫瘍活性を提供することができる。「抗腫瘍活性」とは、ＣＤ４０発現腫瘍細胞増殖または蓄積の速度の減少、したがって存在する腫瘍または処置中に生じる腫瘍の成長速度の減少、および／または存在する新生（腫瘍）細胞または新しく形成される腫瘍細胞の破壊、したがって処置中の腫瘍の全体的な大きさの減少が意図される。
【００９５】
よって、本発明は、効果的な量の本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、癌を有する被験体に投与することからなる、Ｂ細胞リンパ腫および固形腫瘍等のＣＤ４０発現細胞を含む癌の処置方法を提供する。これらの抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は正の処置応答を促進する。癌処置に関する「正の処置応答」とは、これらの抗体またはそれらのフラグメントの抗腫瘍活性に関連する疾病の改善および／または疾病に関連する症状の改善が意図される。従って、例えば、正の処置応答は、疾病において（１）腫瘍の大きさの減少；（２）癌（すなわち、新生）細胞の数の減少；（３）腫瘍細胞死の増加；（４）腫瘍細胞生存の阻害；（４）腫瘍成長の阻害（すなわち、幾分かの遅延、好ましくは停止）；（５）末梢器官への癌細胞侵入の阻害（すなわち、幾分かの遅延、好ましくは停止）；（６）腫瘍転移の阻害（すなわち、幾分かの遅延、好ましくは停止）；（７）さらなる腫瘍副産物の阻止；（８）増加した患者生存率；および（９）癌に関連した１種類以上の症状からの幾分かの緩和、からなる改善の１つ以上をいうものとする。そのような処置応答は改善度に関してさらに特性付けてよい。従って、例えば、疾病の改善は完全な応答として特性付けてよい。「完全な応答」とは、以前に異常な放射線学的検査、骨髄および脳脊髄液（ＣＳＦ）の正常化による臨床的に検出可能な疾病のないことが意図される。そのような応答は本発明の方法にしたがう処置の後に少なくとも１ヶ月間持続しなければならない。もしくは、癌の改善は部分的な応答として分類されるだろう。「部分的応答」とは、新しい病変がなくて、少なくとも１ヶ月間持続するすべての測定可能な全身腫瘍組織量（すなわち、被験体に存在する腫瘍細胞の数）の少なくとも約５０％の減少が意図される。そのような応答は測定可能な腫瘍のみに適用可能である。
【００９６】
腫瘍応答は、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線写真画像化、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、生物発光画像化、例えば、ルシフェラーゼ画像化、骨のスキャン画像化、および骨髄穿刺（ＢＭＡ）等の腫瘍生検サンプリング等のスクリーニング技術を用いて、腫瘍形態学（すなわち、全体的な全身腫瘍組織量、腫瘍の大きさ等）の変化について評価する。これらの正の処置応答に加えて、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントによる処置を受ける被験体は疾病に関連する症状の改善の有益な結果を経験するだろう。従って、Ｂ細胞腫瘍に関して、被験体はいわゆるＢ症状、すなわち、寝汗、発熱、体重減少および／またはじんましんの減少を経験するだろう。
【００９７】
本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達のブロックが１種類以上のＣＤ４０指向性の活性の阻害をもたらす他のＣＤ４０関連疾患の処置にも用途を見出し、該疾病に対してそのような阻害は疾病の改善をもたらすか、または疾病の１種類以上の望まれない症状を少なくとも低減する。従って、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達が、自己免疫および／または炎症性要素を有する疾病または疾患により起こるような、望まれない免疫応答またはプロセスにインビボで関連する場合、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は危険な状態にある被験体、またはＣＤ４０に関連するこれら疾病の１つ以上の処置の必要がある被験体に投与して、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックすることによりそれぞれのＣＤ４０に関連した疾病に関連する症状を阻害または阻止することができる。
【００９８】
炎症性疾患は炎症または組織破壊、またはそれらの組合せにより特徴付けられる。「炎症性疾患」は、免疫応答の起因事象または標的が、例えば、アロ抗原、異種抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、未知の抗原またはアレルゲン等の非自己抗原をともなう炎症性免疫媒介性プロセスを含む。
【００９９】
さらに、本発明の目的のために、「炎症性疾患」との用語は「自己免疫疾患」を含む。ここで用いられる「自己免疫」との用語は、一般的に、「自己」抗原をともなう炎症性免疫媒介性プロセスを包含すると理解される。自己免疫疾患において、自己抗原はホストの免疫応答を誘発する。
【０１００】
さらに、本発明は、組織移植片拒絶反応に関連する炎症の処置を含む。「移植片拒絶反応」または「組織不適合性」とは、ＨＬＡ抗原、血液型抗原等の、しかし、これらに限定されない移植片に対してホストが開始する免疫応答をいう。
【０１０１】
本発明は、対宿主性移植片病、例えば、骨髄移植に関連する疾患を処置するために用いることもできる。そのような対宿主性移植片病において、ドナーの骨髄として、リンパ球およびリンパ球へと成熟する細胞が挙げられる。ドナーのリンパ球は受容者の抗原を非自己と認識し、炎症性免疫応答を開始する。したがって、ここで用いられる「移植片対宿主病疾患」または「移植片対宿主反応」は、ドナーリンパ球がホストの抗原と反応するＴ細胞媒介性免疫応答をいう。
【０１０２】
よって、本明細書中に記載されるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントは、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円盤状狼瘡、ループス腎炎、サルコイドーシス、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎および痛風性関節炎等の炎症性関節炎、器官または組織移植片の拒絶反応、超急性、急性または慢性拒絶反応および／または対宿主性移植片病、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発性動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性大腸炎、クローン病、セリアック病（グルテン感受性腸症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、ハシモト甲状腺炎、免疫複合体病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎および皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓溶解、心筋症、尋常性天疱瘡、肺間質性線維症、Ｉ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病、１型、２型、３型および４型遅延型過敏症、アレルギーまたはアレルギー疾患、処置タンパク質に対する望まれない／意図されない免疫応答（例えば、米国特許出願第ＵＳ２００２／０１１９１５１およびＫｏｒｅｎら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：３４９−６０を参照されたい）、喘息、チャーグ−ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性および刺激性の接触皮膚炎、蕁麻疹、ＩｇＥ媒介性アレルギー、アテローム性動脈硬化症、脈管炎、突発性炎症性筋障害、溶血性疾患、アルツハイマー病、慢性炎症性脱髄性多発神経障害等の、しかし、これらに限定されない自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置するために、本発明の方法にしたがって使用することができる。一部の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、肺移植片拒絶反応、喘息、サルコイドーシス、気腫、嚢胞性線維症、突発性肺線維症、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎、および肺のアレルギー性疾患、例えば、過敏性肺炎、好酸球肺炎、骨髄および／または肺移植または他の原因による閉塞性細気管支炎、移植片アテローム性動脈硬化症／移植片静脈硬化、ならびにコラーゲンから起こる肺線維症、血管および自己免疫疾患、例えば関節リウマチおよび紅斑性狼瘡等の、しかし、これらに限定されない肺の炎症を処置するために有用である。
【０１０３】
「抗炎症性活性」により、炎症の減少または防止が意図される。本明細書の他の場所で定義されるように、少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０抗原を発現する細胞をともなう自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置に関して有益な生理学的応答を引き起こす。本発明の方法は、増殖、活性化等の細胞内の表現型変化に有用であることが認められる。
【０１０４】
自己免疫疾患および／または免疫疾患に関する「正の処置応答」とは、これらの抗体またはそれらの抗原結合フラグメントの抗炎症活性に関連する疾病の改善および／または疾病に関連する症状の向上が意図される。すなわち、抗増殖効果、ＣＤ４０を発現する細胞のさらなる増殖の防止、免疫サイトカイン、接着分子、プロテアーゼ、（ＣＤ４０を有する細胞がＢ細胞の場合の）免疫グロブリン、それらの組合せ等の減少した分泌等の、しかし、これらに限定されない炎症応答の減少、抗炎症タンパク質の増加した産生、自己反応性細胞の数の減少、免疫耐性の増進、自己反応性細胞生存の阻害、および／またはＣＤ４０発現細胞の促進により媒介される１種類以上の症状の減少を観察することができる。そのような正の処置応答は投与経路に限定されるものではなく、ドナーへの投与、ドナー組織（例えば、器官潅流等）、ホスト、それらの組合せ等より成る。
【０１０５】
自己免疫および／または免疫疾患の処置を受ける被験体について、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線写真画像化、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光細胞分析分離装置（ＦＡＣＳ）分析、組織学、全体的な病変および血液化学（ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、クロマトグラフィーにより検出可能な変化等の、しかし、これらに限定されない変化）等のスクリーニング技術を用いて、臨床応答を評価することができる。これらの正の処置応答に加えて、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントによる処置を受ける被験体は疾患に関連する症状の改善において有益な効果を経験するだろう。
【０１０６】
「処置有効投与量または量」は、投与されたときに、ＣＤ４０関連疾患を有する被験体の処置に関して正の処置応答をもたらすアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合の量が意図される。本発明の一部の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはそのフラグメントの処置有効投与量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇまたは約７ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの範囲にある。処置方法は、処置有効投与量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの処置効果のある単回投与または複数回投与からなってよい。
【０１０７】
本発明のさらなる実施形態は、例えば、所与の処置投薬計画の効能を決定するために、臨床的な試験操作の一部として組織のタンパク質レベルの診断モニタリングのためにアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を使用することである。検出は、抗体を検出可能な物質に結合させることにより容易にすることができる。検出可能な物質の例として、多様な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射活性物質が挙げられる。適当な酵素の例として、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼ；適当な補欠分子族複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適当な蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリスリンが挙げられる；蛍光物質の例として、ルミノールが挙げられる；生物発光物質の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる；および適当な放射活性物質の例として、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０１０８】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０関連疾患の処置のために、公知の化学療法薬、サイトカイン、および／または異なる作用様式を有する他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体等の他のモノクローナル抗体と組み合わせて用いることができる。例えば、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、インターロイキン−２等のサイトカインと組み合わせて用いることができる。別の実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞リンパ腫の処置のために、例えば、リツキシマブ（ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）等の他のモノクローナル抗体と組み合わせて用いることができる。さらに別の実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする抗ＣＤ４０モノクローナル抗体に組み合わせて用いることができる。そのような組み合わせは、器官および組織移植片拒絶反応等の、しかし、これらに限定されない自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置に潜在的に有用であろう。被験体が組織または器官の移植を受けている場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、移植組織／器官の拒絶反応を阻害する他の処置剤と組み合わせて用いることができる。そのような処置剤として、コルチコステロイド、シクロスポリンおよびアザチオプリンが挙げられるが、これらに限定されない。複数の処置剤が組み合わせて用いられる場合、個々の物質を順番通り順次に、または同時に（すなわち、共にまたは同一時間内で）投与することができる。
【０１０９】
このようにして、被験体のＢ細胞関連癌（上記したもの等が挙げられるが、それに限定されない）を処置する場合、手術または外科的処置（例えば、脾臓摘出、肝切除術、リンパ節切除、白血球交換、骨髄移植等）；放射線処置；任意に自家骨髄移植に組み合わされた化学療法等の、しかし、これらに限定されない少なくとも１種類の他の癌処置に組み合されて、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが投与される。ここで適当な化学処置剤として、フルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組合せ、例えば、アントラサイクリンを含む投薬計画、例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド＋ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン＋ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン）、および化学療法に使用される他の細胞毒性薬および／または処置剤、例えばミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、およびシタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネララビン等の、しかし、これらに限定されない代謝拮抗物質；および他の抗癌モノクローナル抗体処置（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性Ｂ細胞のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的とする他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全なヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））または悪性Ｂ細胞のＣＤ２０抗原を標的とする他の処置抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３、二特異性抗体）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒト血管内皮増殖因子を標的とする他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞のＣＤ２２抗原を標的とする抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的とするα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；核因子−κΒのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）を標的とし、多発性骨髄腫に過剰発現する抗体およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）；悪性Ｂ細胞のＣＤ２３抗原を標的とする抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的とする抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性Ｂ細胞のＣＤ３８抗原を標的とする抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞に発現する主要組織適合複合体クラスＩＩレセプターを標的とする抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性Ｂ細胞のＣＤ４０抗原を標的とする他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；および２００４年１１月４日出願の「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄ���ｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２号（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））に開示された他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９およびＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするその抗原結合フラグメント；および腫瘍壊死因子関連アポトーシスを誘導するリガンドレセプター１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）（例えば、アゴニストヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）および造血起源の多くの固形腫瘍および腫瘍に発現するＴＲＡＩＬ−Ｒ２）を標的とする抗体；微小管および／またはトポイソメラーゼ阻害剤等の、しかしこれらに限定されない低分子系癌療法（例えば、分裂抑制剤ドラスタチンおよびドラスタチン類似化合物；チュブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトセシン）、ＳＤＸ−１０５（ベンダムスチン塩酸塩）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも呼ばれるエピチロン類似化合物）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えばミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピキサントロン、エロキサチン（抗腫瘍薬）、ガナイト（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節誘導体（例えば、レブリミド（旧称：レビミド））、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンス阻害剤）、ＳＤＸ−１０１（悪性リンパ球のアポトーシスを誘導するＲ−エトドラク）、クロファラビン等の第二世代のプリンヌクレオシド類似化合物、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリマーセンおよびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソーム阻害剤（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、低分子キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＺＤ−６４７４）、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の低分子阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）、ヒストンデアセチラーゼの低分子阻害剤（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）、例えばスベラニロヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８）およびアポトーシス剤、例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（メテキサフィンガドリニウム）；ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン）、個別免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、正式にはＧＴＯＰ−９９と呼ばれるＭｙＶａｘ（登録商標）個別免疫療法）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９、トール様レセプター９（ＴＬＲ９）の合成アゴニスト）、インターフェロン−α療法、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法およびＩＬ−２１療法等の、しかし、これらに限定されないワクチン／免疫療法系癌処置；ステロイド療法；または他の癌療法等の、しかし、これらに限定されない少なくとも１つの癌処置に組み合わせて、本明細書中に記載されるアンタゴ��スト抗ＣＤ４０抗体、またはその抗原結合フラグメントが投与され、ここで、そうしたさらなる療法がアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による処置の前、処置中または処置に続いて施行される。
【０１１０】
被験体が本明細書で既に開示された固形腫瘍等の、しかし、これらに限定されないＣＤ４０発現腫瘍細胞を有する固形腫瘍について処置される場合、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはそれらの抗原結合フラグメントを、手術、放射線療法、化学療法、サイトカイン療法、または問題の固形腫瘍の処置での使用が意図される他のモノクローナル抗体等の、しかし、これらに限定されない少なくとも１種類の他の癌療法と組み合わせて投与することができ、ここで、そうしたさらなる癌療法が抗ＣＤ４０抗体処置の前、処置中または処置に続いて施行される。
【０１１１】
従って、併用療法が、化学療法、放射線療法、他の抗癌抗体処置、低分子系癌処置、またはワクチン／免疫療法系癌処置と同様に、別の処置剤の投与に組合されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与からなる場合、本発明の方法は、別々の製剤または単一の医薬製剤および／またはどのような順序でもよい連続的な投与を用いる同時投与を含む。本発明の方法が併用療法投与計画を含む場合、これらの療法は同時に実施することができる；すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、他の癌処置と同時または同じ時間内で投与される（すなわち、複数の処置が同時進行中であるが、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは他の癌処置と正確には同時に投与されない）。もしくは、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントも、他の癌処置前または処置に続いて投与してもよい。処置を受けた被験体が最初の処置過程に応答して沈静化または再発の可能性を低下させるか低下させないかにかかわらず、異なる癌処置の順次的な施行を実施してよい。併用療法が、細胞毒性薬に組み合わせたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与からなる場合、好ましくはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞毒性薬の投与前に投与される。
【０１１２】
本発明の一部の実施形態において、被験体はＢ細胞関連癌を有し、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを化学療法に組み合わせて、かつ任意に自家骨髄移植術に組み合されて投与され、ここで、該抗体および化学療法剤は、任意の順序または同時で（すなわち、共にまたは同じ時間内で）順次投与してよい。適当な化学療法剤の例として、フルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組合せ、例えば、アントラサイクリンを含む投薬計画、例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド＋ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン＋ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン）、および化学療法に使用される他の細胞毒性薬および／または処置剤、例えばミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ；およびシタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネララビン等の、しかし、これらに限定されない代謝拮抗物質が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、本明細書において開示されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは化学療法剤による処置前に投与される。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを化学療法剤による処置後に投与される。さらに別の実施形態において、化学療法剤はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に投与される。
【０１１３】
よって、例えば、一部の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、フルダラビンまたはリン酸フルダラビンと組み合わされてＢ細胞関連癌を有する被験体に投与される。そのような１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントはフルダラビンまたは燐酸フルダラビンの投与前に投与される。別の実施多様において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントはフルダラビンまたはリン酸フルダラビンによる処置後に投与される。さらに別の実施形態において、フルダラビンまたはリン酸フルダラビンはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に投与される。
【０１１４】
本発明の別の実施形態において、アルキル化剤であるクロラムブシルは本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わされてＢ細胞関連癌を有する被験体に投与される。そのような１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントをクロラムブシルの投与前に投与する。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントをクロラムブシルによる処置後に投与する。さらに別の実施形態において、クロラムブシルをアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に投与する。
【０１１５】
さらに別の実施形態において、アントラサイクリンを含む投与計画、例えばＣＡＰ（シクロホスファミド＋ドキソルビシン＋プレドニゾン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋プレドニゾン＋ドキソルビシン）を、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与と組み合わせてよい。そのような１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、アントラサイクリンを含む投薬計画の施行前にＢ細胞関連癌を有する被験体に投与される。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、アントラサイクリンを含む投与計画の施行後に被験体に投与する。さらに別の実施形態において、アントラサイクリンを含む投与計画は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に被験体に施される。
【０１１６】
別の実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントをアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｂｅｒｌｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（リッチモンド、カリフォルニア州）から市販）と組み合されてＢ細胞関連癌を有する被験体に投与される。アレムツズマブは、悪性Ｂ細胞に発現したＣＤ５２抗原を標的とする組換えヒト化モノクローナル抗体（Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ）である。そのような１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントはアレムツズマブの投与前に投与される。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントはアレムツズマブによる処置後に投与される。さらに別の実施形態において、アレムツズマブをアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に投与する。
【０１１７】
代わりの実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、悪性Ｂ細胞のＣＤ２０抗原を標的とする処置抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全なヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））またはイブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））に組み合わせてＢ細胞関連癌を有する被験体に投与する。そのような１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、抗ＣＤ２０抗体の投与前に被験体に投与する。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、抗ＣＤ２０抗体による処置後に被験体に投与する。さらに別の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体をアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に被験体に投与する。
【０１１８】
本発明の抗ＣＤ４０抗体と組み合されて使用することのできるＢ細胞関連癌の処置が意図されるモノクローナル抗体の他の例として、２００４年１１月４日出願の「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））に開示されるように、完全にヒトのモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９等のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
代わりの実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、微小管および／またはトポイソメラーゼ阻害剤等の、しかしこれらに限定されない低分子系癌療法（例えば、分裂抑制剤ドラスタチンおよびドラスタチン類似化合物；チュブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトセシン）、ＳＤＸ−１０５（ベンダムスチン塩酸塩）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも呼ばれるエピチロン類似化合物）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えばミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピキサントロン、エロキサチン（抗腫瘍薬）、ガナイト（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節誘導体（例えば、レブリミド（旧称：レビミド））、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンス阻害剤）、ＳＤＸ−１０１（悪性リンパ球のアポトーシスを誘導するＲ−エトドラク）、クロファラビン等の第二世代のプリンヌクレオシド類似化合物、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリマーセンおよびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソーム阻害剤（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、低分子キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＺＤ−６４７４）、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の低分子阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）、ヒストンデアセチラーゼの低分子阻害剤（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）、例えばスベラニロヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８）およびアポトーシス剤、例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（メテキサフィンガドリニウム）等の、しかし、これらに限定されない低分子系癌処置と組み合わせて、Ｂ細胞関連癌を有する被験体に投与される。そのような１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、低分子系癌処置の投与前に被験体に投与する。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、低分子系癌処置剤の投与後に被験体に投与する。さらに別の実施形態において、低分子系癌処置剤はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に被験体に投与する。
【０１２０】
さらに別の実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン）、個別免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、正式にはＧＴＯＰ−９９と呼ばれるＭｙＶａｘ（登録商標）個別免疫療法）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９、トール様レセプター９（ＴＬＲ９）の合成アゴニスト）、インターフェロン−α療法、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法またはＩＬ−２１療法；またはステロイド療法等の、しかし、これらに限定されないワクチン／免疫療法系癌処置と組み合わせてＢ細胞関連癌を有する被験体に投与することができる。そのような１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ワクチン／免疫療法系癌処置剤の投与前に被験体に投与される。別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ワクチン／免疫療法系癌処置剤の投与後に被験体に投与する。さらに別の実施形態において、ワクチン／免疫療法系癌処置剤はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと同時に被験体に投与される。
【０１２１】
そのような１つの実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントはＩＬ−２と組み合わせて用いることができる。処置患者においてナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞の数を増加することが公知である物質であるＩＬ−２は、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの前または同時に投与することができる。本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが別の作用様式として抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有する場合、ＩＬ−２投与によるＮＫエフェクター細胞の増加数は投与されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの増強ＡＤＣＣ活性を導くだろう。別の実施形態において、ＩＬ−２１は、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントに組み合わせて投与させた場合にＮＫ細胞活性を刺激する免疫療法剤として働く。
【０１２２】
本発明の一部の実施形態において、被験体はＣＤ４０発現腫瘍細胞を含む固形腫瘍を有し、本明細書中に記載される抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは化学療法またはサイトカイン療法と組み合されてこの被験体に投与され、ここで抗体と化学療法剤またはサイトカインが順次に、任意の順序で、または同時に（すなわち、共にまたは同一時間内で）投与することができる。ＣＤ４０発現腫瘍細胞を含む固形腫瘍を有する被験体に対して適当な化学療法剤の例として、結腸直腸癌および非小細胞肺癌を処置するために用いることができるＣＰＴ−１１（イリテカン）；例えば、肺癌、乳癌および上皮性卵巣癌を処置するために用いることができるゲムシタビン；および固形腫瘍の処置に適する他の化学療法剤が含むが、これらに限定されない。目的のサイトカインとして、αインターフェロン、γインターフェロン、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）またはこれらサイトカインの生物活性のある変異体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２３】
本発明の別の実施形態において、本明細書中に記載される抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、固形腫瘍の処置が意図される他のモノクローナル抗体と組み合わせて、ＣＤ４０発現腫瘍細胞を含む固形腫瘍を有する患者に投与される。従って、例えば、被験体が、ＣＤ４０発現癌細胞を含む乳癌の処置を受けている場合、処置は、Ｈｅｒ２＋乳癌細胞のＨｅｒ２レセプタータンパク質を標的とするＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サンフランシスコ、カリフォルニア州）の効果的な量の投与と組み合わせた本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与をともないうるだろう。同様に、被験体が、ＣＤ４０発現癌細胞を含む結腸直腸癌の処置を受けている場合、処置は、腫瘍血管新生に重要な役割を果たすタンパク質である血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、それを阻害するヒト化モノクローナル抗体ＡｖａｓｔｉｎＴＭ（ベバシズマブとしても知られる；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サンフランシスコ、カリフォルニア州）の効果的な量の投与と組み合わせた本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与をともないうるだろう。本発明の抗ＣＤ４０抗体と組み合わせて用いることのできる固形腫瘍の処置が意図されるモノクローナル抗体の他の例として、上皮細胞増殖因子レセプターを標的とする抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、ＩＭＣ−Ｃ２２５（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ニューヨーク、ニューヨーク州）（例えば、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ａｎｄ  Ｂａｓｅｌｇａ（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：６５５０−６５６５およびＳｏｌｂａｃｈら（２００２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０１：３９０−３９４）；ＩＧＦ−１レセプタータンパク質を標的とする抗ＩＧＦ−１レセプター抗体（例えば、Ｍａｌｏｎｅｙら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６３：５０７３−５０８３およびＨａｉｌｅｙら（２００２）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ．１：１３４９−１３５３を参照；腫瘍関連抗原ＭＵＣ１を標的とする抗ＭＵＣ１抗体；インテグリンを標的とし、細胞増殖および生存に関与する細胞付着およびシグナル伝達を調節する抗−α５β１、抗−αｖβ５および抗−αｖβ３（例えば、Ｌａｉｄｌｅｒら（２０００）Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  Ｐｏｌｏｎｉｃａ  ４７（４）：１１５９−１１７０およびＣｒｕｅｔ−Ｈｅｎｎｅｑｕａｒｔら（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２（１１）：１６８８−１７０２を参照）；カドヘリンファミリーメンバーを標的とする抗Ｐ−カドヘリン抗体（例えば、同時係属米国特許出願２００３０１９４４０６を参照）；内皮細胞特異的接着分子の血管形成関連機能を標的とする抗ＶＥ−カドヘリン抗体（例えば、Ｌｉａｏら（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：２５６７−２５７５を参照）；および２００４年１１月４日出願の「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２号（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３���７８４／２８２９１６））に開示された、例えば完全にヒトのモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９等のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする他のアゴニスト抗ＣＤ４０抗体等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２４】
併用療法は、自己免疫成分および／または炎症成分を含むＣＤ４０関連疾患を有する被験体のためにも意図される。このようにして、被験体が本明細書において開示の疾病等の、しかし、これらに限定されない自己免疫疾患および／または炎症性疾患について処置される場合、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とする本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、自己免疫疾患および炎症性疾患の処置に有用であることが公知であるか、または使用されてきたか、または現在使用されている物質またはそれら物質の組合せ等、自己免疫疾患および炎症性疾患の公知の処置と組み合わせて投与することができる。そのような処置および処置剤として、手術または外科的処置（例えば、脾臓摘出、リンパ節切除、甲状腺摘出、血漿交換、白血球交換、細胞、組織または器官の移植、腸管操作、器官潅流等）、放射線療法、ステロイド療法および非ステロイド療法等の療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚用薬剤（例えば、アレルギー、接触皮膚炎および乾癬等の皮膚状態を処置するために用いられる局所剤）、免疫抑制剤および他の抗炎症性モノクローナル療法等が挙げられるが、これらに限定されない。このようにして、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、手術、器官潅流、放射線療法、ステロイド療法、非ステロイド療法、抗生物質療法、抗真菌療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚用薬剤による療法（例えば、アレルギー、接触皮膚炎および乾癬等の皮膚状態を処置するために用いられる局所薬）、免疫抑制療法、他の抗炎症性モノクローナル抗体療法、それらの組合せ等の、しかし、これらに限定されない、少なくとも１種類の処置と組み合されて投与される。
【０１２５】
本発明の方法が自己免疫疾患および／または炎症性疾患を有する被験体のための併用処置投与計画を含む場合、これらの療法は同時に実施することができる；すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、他の処置と同時または同じ時間内で投与される（すなわち、複数の処置が同時進行中であるが、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは他の処置と正確には同時には投与されない）。もしくは、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントも、他の処置前または処置に続いて投与してもよい。処置を受けた被験体が最初の処置過程に応答して沈静化または再発の可能性を低下させるか低下させないかにかかわらず、異なる処置の順次的な施行を実施してよい。
【０１２６】
本発明の一部の実施形態において、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは免疫抑制剤または抗炎症医薬に組み合わせて投与され、該抗体および処置剤は、任意の順序または同時（すなわち、共にまたは同じ時間内で）順次投与してよい。本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わせて投与することのできる適当な免疫抑制剤の例として、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、シクロスポリン、例えばエアゾール化シクロスポリン（参考のために全文が本明細書において援用される米国特許出願公告第２００２０００６９０１を参照）、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆＴＭ）、ミコフェノレートモフェチルおよびアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミドおよびそのマロノニトロアミド類似化合物；および免疫抑制タンパク質、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体およびＩｇ融合物、抗Ｂリンパ球刺激物質抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−ＢＴＭ）およびＩｇ融合体（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、抗ＣＤ８０抗体およびエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、ならびに抗Ｔ細胞抗体、例えば抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４等が挙げられるが、これらに限定されない。適当な抗炎症性剤として、コルチコステロイド、例えば、クロベタソール、ハロベタソール、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、フルオシノール、フルシノニド、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン；非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、スルファサラジン、メスラミン（５−ＡＳＡ剤として知られる）を含有する薬物、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、メクロファメート、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サリチレート、スリンダクおよびトルメチン；抗炎症抗体、例えばアダリムマブ（ＴＮＦ−αアンタゴニストであるＨＵＭＩＲＡ（登録商標））およびインフリキシマブ（ＴＮＦ−αアンタゴニストであるＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））等が挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態において、ＣＤ４０発現細胞のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えば、２００４年１１月４日出願の「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））に開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９およびその抗原結合フラグメントと組み合わせて本発明の抗ＣＤ４０抗体またはその適当な抗原結合フラグメントを自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置を受ける被験体に投与する。
【０１２７】
移植片拒絶反応および移植片対宿主病は超急性（体液性）、急性（Ｔ細胞媒介性）または慢性（未知の病因）またはそれらの組み合わせでありうる。従って、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、肝臓、腎臓、膵臓、膵島細胞、小腸、肺、心臓、角膜、皮膚、血管、骨、異種または自己骨髄等の、しかし、これらに限定されない組織の超急性、急性および／または慢性の移植片拒絶反応に関連した拒絶および／または症状の予防および／または緩和するために一部の実施形態に用いられる。移植組織はどのドナーから得てもよく、どの受容ホストに移植してもよいため、移植操作は、動物組織のヒトへの移植（例えば、異種移植片）、あるヒトから別のヒトへ組織の移植（同種移植片）および／またはヒトの体の一部から別の部分への移植（自家移植片）からなってよい。本発明の抗体による処置は、さらに、発熱、食欲不振、異常な血行動態、白血球減少、移植器官／組織の白血球浸潤、ならびに日和見感染等の移植続発症を減少するだろう。
【０１２８】
一部の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、超急性、急性および／または慢性の拒絶反応および／または移植片対宿主病等の移植片拒絶反応を処置および／または予防するために単独または免疫抑制剤と組み合わせて用いてよい。従って、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いて移植片拒絶反応を処置する一部の実施形態において、抗体は、メトトレキサート；シクロホスファミド；ミゾリビン；クロラムブシル；シクロスポリン、例えばエアゾール化シクロスポリン（参考のために全文が本明細書において援用される米国特許出願公告第２００２０００６９０１を参照）、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆＴＭ）、ミコフェノレートモフェチルおよびアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミドおよびそのマロノニトロアミド類似化合物；および免疫抑制タンパク質、例えば、抗ＣＴＬＡ抗体およびＩｇ融合物、抗Ｂリンパ球刺激物質抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−ＢＴＭ）およびＩｇ融合体（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、抗ＣＤ８０抗体およびエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、ならびに抗Ｔ細胞抗体、例えば抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４等；またはＣＤ４０発現細胞のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９抗体またはその抗原結合フラグメント等の、しかし、これらに限定されない適当な免疫抑制医薬と組み合わせて用いられる。
【０１２９】
そのようなものとして、本発明の組成物および方法が、例えば肺移植片を受ける移植片受容者の症状や結果をさらに改善するために他の医薬と組み合わせて用いられる。従って、一部の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０−抗体は単独、または経口および／または非経口で投与されるシクロスポリン、例えば、経口用シクロスポリン、注射可能なシクロスポリン、エアロゾル化（例えば、吸入された）シクロスポリンおよびそれらの組合せと組み合わせて移植片拒絶反応（例えば、肺移植片受容者における超急性、急性および／または慢性の拒絶反応または移植片対宿主病）を処置するために用いられる。一部の実施形態において、療法の少なくとも一成分がエアゾール化シクロスポリンである場合、該シクロスポリンは、例えば、加圧投与装置または噴霧器を用いてエアロゾルスプレーでのシクロスポリンの吸入により受容者の肺に投与される。シクロスポリンは乾燥粉末または湿潤形のいずれかで投与してよい。
【０１３０】
他の一部の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、関節リウマチを処置および／または予防するために、単独、または免疫抑制剤と組み合わせて用いてよい。従って、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が関節リウマチを処置するために用いられる一部の実施形態において、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆＴＭ）、ミコフェノレートモフェチルおよびアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミドおよびそのマロノニトロアミド類似化合物；および免疫抑制タンパク質、例えば、抗ＣＴＬＡ抗体およびＩｇ融合物、抗Ｂリンパ球刺激物質抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−ＢＴＭ）およびＩｇ融合体（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））；完全なヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；抗ＣＤ８０抗体およびエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、ならびに抗Ｔ細胞抗体、例えば抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４等；またはＣＤ４０発現細胞のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９抗体およびその抗原結合フラグメント等の、しかし、これらに限定されない適当な免疫抑制剤と組み合わせて本発明の抗体を用いてよい。上記のように、処置有効性は任意の手段により評価してよく、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｇｙ基準、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｌｅａｇｕｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ基準または他の基準により定義される臨床応答により測定される有効性が挙げられるが、これらに限定されない。Ｆｅｌｓｏｎら（１９９５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｒｈｅｕｍ．３８：７２７−３５およびｖａｎ  Ｇｅｓｔｅｌら（１９９６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．３９：３４−４０を参照されたい。
【０１３１】
さらに他の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、多発性硬化を処置および／または予防するために、単独、または免疫抑制剤と組み合わせて用いてよい。従って、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が多発性硬化を処置するために用いられる場合、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰＲＯＧＲＡＦＴＭ）、ミコフェノレートモフェチルおよびアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミドおよびそのマロノニトロアミド類似化合物；および免疫抑制タンパク質、例えば、抗ＣＴＬＡ抗体およびＩｇ融合物、抗Ｂリンパ球刺激物質抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−ＢＴＭ）およびＩｇ融合体（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））；完全なヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；抗ＣＤ８０抗体およびエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、ならびに抗Ｔ細胞抗体、例えば抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４等；またはＣＤ４０発現細胞のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９抗体およびその抗原結合フラグメント等の、しかし、これらに限定されない適当な免疫抑制剤と組み合わせて本発明の抗体を用いてよい。
【０１３２】
さらに、２種類以上の処置剤および本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による併用療法は、刺激されたＣＤ４０発現細胞、例えば、Ｂ細胞関連癌、固形腫瘍、および自己免疫疾患および／または炎症性疾患を含む病状の処置に用いることもできる。限定するものではないが、実例として三併用療法が挙げられ、ここでは２種類の化学療法剤が本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合されて投与され、化学療法剤および他の抗癌モノクローナル抗体（例えば、アレムツズマブ、リツキシマブ、抗ＣＤ２３抗体、またはＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とするＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９等の別のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体）が、本明細書中に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体に組み合されて投与される。そのような組合せとして、フルダラビン、シクロホスファミドおよび本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの組合せ；フルダラビン、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、サンディエゴ、カリフォルニア州）および本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの組合せ；およびフルダラビン、ＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９および本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または抗Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を標的とするその抗原結合フラグメントの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３３】
さらに、ここの記載のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いて、試薬、例えば、ＣＤ４０を発現する細胞を同定するために用いることができる標識抗体を提供することができる。これは未知の試料の細胞タイプを決定するのに非常に有用でありうるだろう。モノクローナル抗体のパネルを用いて、種により、および／または器官のタイプにより組織を同定することができる。同様に、これらの抗ＣＤ４０抗体を用いて、組織培養細胞を混雑に関してスクリーニングすることができる（すなわち、培養物中のＣＤ４０を発現する細胞とＣＤ４０を発現しない細胞の混合物の存在に関してスクリーニングする）。
【０１３４】
医薬製剤と投与様式
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０関連疾患、例えば、自己免疫、過敏症、炎症、自己抗体産生、器官または組織移植拒絶反応、移植片対宿主病およびＣＤ４０を発現する癌（例えば、Ｂ細胞リンパ腫および固形腫瘍）を予防または処置するために治療上有効である濃度で投与される。この目標を達成するために、抗体は当該分野において公知の多様な許容される賦形剤を用いて処方してよい。典型的には、抗体は、静脈内または腹腔内のいずれかに注射することにより投与される。この投与を達成する方法は当業者に公知である。局所投与または経口投与してよい組成物または粘膜を透過し得る組成物を得ることも可能であり得る。
【０１３５】
静脈内投与は、投与される抗ＣＤ４０抗体に依存して、好ましくは約１〜約１０時間、より好ましくは約１〜約８時間、さらに好ましくは約２〜約７時間、さらにより好ましくは約４〜６時間の期間にわたる注入により行う。医薬組成物の最初の注入は約４〜約６時間にわたってなされ、続いての注入はさらに速く送達されてもよい。続いての注入は、例えば、約１〜約４時間、約１〜約３時間または約１〜約２時間等、約１〜６時間にわたって投与してよい。
【０１３６】
本発明の医薬組成物はその意図する投与経路に適合するように処方される。可能な投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内（ＩＶ）、筋内（ＩＭ）、皮内、皮下（ＳＣ）または注入）、経口および肺（例えば、吸入）、鼻、経皮（局所）、経粘膜および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内または皮下適用に用いられる溶液または懸濁液は下記成分を含むことができる：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、生理食塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩および等張調節剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウム等の酸または塩基により調整することができる。非経口調製物は、アンプル、使い捨て注射器またはガラスまたはプラスチック製の複数回投与バイアルに封入することができる。
【０１３７】
抗ＣＤ４０抗体は典型的には薬学的に許容される緩衝液、例えば、滅菌生理食塩水、滅菌緩衝化水、プロピレングリコール、前記のものの組合せ物等の中に標準技術により提供される。非経口で投与可能な薬剤の調製方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イートン、ペンシルバニア州、１９９０年）（参考として、本明細書に援用される）に記載されている。例えば、本発明の方法での使用に適する安定化抗体医薬製剤を記載する国際公開第ＷＯ９８／５６４１８も参照のこと。
【０１３８】
投与される少なくとも１つのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの量は過度の実験なしに当業者により容易に決定される。投与様式および少なくとも１種類のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）のそれぞれの量に影響を与える要因としては、治療する特定の疾患、疾患の重篤度、疾患の履歴および治療を受ける個体の年齢、身長、体重、健康および体調が挙げられるが、これらに限定されない。同様に、投与されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの量は、投与様式、および被験体がこの抗腫瘍剤の単回投与または複数回投与を受けるかどうかに依存する。一般的に、治療を受ける患者の体重の増加とともに抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントのさらに高い投与量が望ましい。投与される抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与量は約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの範囲にある。従って、例えば、投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇであってよい。
【０１３９】
本発明の他の実施形態において、本方法はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与物の複数回の投与を包含する。本方法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物の治療有効量の１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、３０回、３５回、４０回またはそれ以上の回数の投与を包含する。抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物の複数回用量の投与の頻度および期間は、疾患、疾患の状態および処置を受ける被験体の医学的病歴に依存する。さらに、治療有効量の抗体による被験体の処置は一回の処置を含むことができ、好ましくは一連の処置を含みうる。好ましい例において、被験体を、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントにより、約０．１〜２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲で一週間あたり１回、約１〜１０週間、好ましくは約２〜８週間、さらに好ましくは約３〜７週間、さらに好ましくは約４、５または６週間処置する。処置は再発を妨げるために毎年か、または再発が見られる際に行ってよい。また、処置に用いられる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効な投与量は特定の処置の過程にわたって増加または減少させてよいことも理解される。投与量の変化は、本明細書中に記載される診断アッセイの結果から得られ、明らかとなり得る。
【０１４０】
したがって、１つの実施形態において、投与計画は、処置期間の１日目、７日目、１４日目および２１日目に、治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の投与を含む。別の実施形態において、投与計画は、処置期間の１週間の１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目および７日目に治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の投与を含む。さらなる実施形態は、以下を含む：処置期間の一週間の１日目、３日目、５日目および７日目に治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の投与を有する投与計画；処置期間の一週間の１日目と３日目に治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の投与を含む投与計画；および処置期間の一週間の１日目に治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の投与を含む好ましい投与計画。処置期間は１週間、２週間、３週間、１ヵ月、３ヶ月、６ヶ月または１年間を含んでよい。処置期間は連続しても、または互いに１日、１週間、２週間、１ヵ月、３ヶ月、６ヶ月または１年間離れていてもよい。
【０１４１】
一部の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの範囲である。従って、例えば、任意の１種類の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの投与量は、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇまたは他の量、例えば約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲に入る投与量であり得る。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの同一の治療有効用量を抗体投与の各週にわたって投与することができる。もしくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの異なる治療有効用量を処置期間の過程にわたって投与することができる。
【０１４２】
別の実施形態において、本明細書の他の箇所で定義されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの初期の治療有効用量は、低用量範囲（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）であり得、引き続く用量はそれよりも高い用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）に含まれ得る。
【０１４３】
別の実施形態において、本明細書の他の箇所で定義されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの初期の治療有効用量は、高用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）であり得、引き続く用量はそれよりも低い用量範囲（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）に含まれ得る。従って、一実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの初期の治療有効用量は、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇおよび約３５ｍｇ／ｋｇ等の約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇであり、引き続くアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、約５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇおよび約１５ｍｇ／ｋｇ等の約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇである。
【０１４４】
本発明の一部の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法を必要とする被験体に抗体またはその抗原結合フラグメントの「負荷投与量」を投与することにより開始される。「負荷投与量」とは、被験体に投与されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の量が意図され、投与される抗体またはその抗原結合フラグメントの用量は高用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）の範囲にある。完全な「負荷投与量」が約２４時間の時間内に投与される限り、「負荷投与量」は、単回投与（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが静脈内に投与される単回注入）で、または複数回の投与（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントが静脈内投与される複数回注入）で投与することができる。「負荷投与量」の投与後、次に、被験体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの一回以上のさらなる治療有効用量を投与される。引き続く治療有効用量は、例えば、毎週の投薬スケジュールにしたがって投与され得るか、または２週毎に１回、３週毎に１回または４週毎に１回投与され得る。そのような実施形態において、引き続く治療有効用量は、通常、低用量範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）の範囲にある。
【０１４５】
もしくは、一部の実施形態において、「負荷投与量」の後のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの引き続く治療有効用量は、「維持スケジュール」にしたがって投与され、ここでは、治療有効用量の抗体またはその抗原結合フラグメントが１ヶ月毎に１回、６週毎に１回、２ヶ月毎に１回、１０週毎に１回、３ヶ月毎に１回、１４週毎に１回、４ヶ月毎に１回、１８週毎に１回、５ヶ月毎に１回、２２週毎に１回、６ヶ月毎に１回、７ヶ月毎に１回、８ヶ月毎に１回、９ヶ月毎に１回、１０ヶ月毎に１回、１１ヶ月毎に１回、または１２ヶ月毎に１回投与される。そのような実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効用量は、引き続く用量が頻繁な間隔（例えば、２週毎に１回〜毎月１回）で投与される場合に特に低用量範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）内にあるか、または特に引き続く用量がより頻繁ではない間隔で投与される場合（例えば、引き続く用量が、約１ヶ月〜約１２ヶ月離れて投与される場合）、高用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）内にある。
【０１４６】
本発明の方法に使用される、本明細書に記載の医薬組成物中に存在するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は天然のものでもよいし、組換え技術により得てもよく、任意の供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタおよびヒト等の哺乳動物源が挙げられる）由来であってもよい。好ましくは、そのようなポリペプチドは、ヒト供給源に由来し、さらに好ましくはハイブリドーマ細胞株由来の組換えヒトタンパク質である。
【０１４７】
本発明の方法に有用な医薬組成物は、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の生物学的に活性な改変体を含み得る。そのような改変体は、この改変体抗体を含む医薬組成物が、被験体に投与された場合に、参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物と同じ処置効果を有するように、参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の所望の生物学的活性を保持しなければならない。すなわち、改変体抗ＣＤ４０抗体は、医薬組成物中で、参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体で観察されたと同じような様式で治療活性成分として働く。改変体抗ＣＤ４０抗体が所望の生物学的活性を保持するかどうかを決定するための方法が当該分野で利用可能であり、よって、改変体抗ＣＤ４０抗体は医薬組成物中で治療活性成分として働く。抗体改変体の生物学的活性は、本発明で記載されるアッセイ等、参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の活性を測定するために特に設計されたアッセイを用いて測定され得る。
【０１４８】
治療活性成分として本明細書に記載の結合特性を有するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む任意の医薬組成物は、本発明の方法に用いることができる。従って、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の１種類以上、またはその抗原結合フラグメントを含む液体組成物、凍結乾燥組成物、またはスプレー乾燥組成物は、引き続いて本発明の方法にしたがって被験体に投与されるための、水性または非水性溶液または懸濁液として調製してよい。これら組成物のそれぞれは、治療活性成分または予防的な活性成分として、少なくとも１種類の本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含むだろう。「治療活性成分または予防的な活性成分」とは、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが特に組成物に配合されて、この医薬組成物が被験体に投与された場合に、この被験体内において疾患または状態の処置、予防または診断に関して所望の治療応答または予防的応答をもたらすことが意図される。好ましくは、医薬組成物は、調製および保存中にタンパク質安定性および生物学的活性の損失に関連する問題を最小限にするように、適当な安定剤、充てん剤またはその両方を含む。
【０１４９】
処方剤（ｆｏｒｍｕｌａｎｔ）を本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物に加えてもよい。これらの処方剤としては、油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミン酸、塩、緩衝剤、アルブミン、界面活性剤、または充てん剤が挙げられ得るが、これらに限定されない。好ましくは、炭水化物として、糖および糖アルコール、例えば、単糖、二糖または多糖、または水溶性グルカンが挙げられる。糖類またはグルカンとして、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、α、βおよびγシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンおよびカルボキシメチルセルロースまたはそれらの混合物が挙げられる。「糖アルコール」は、ヒドロキシル基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素と定義され、これらとしては、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロール、およびアラビトールが挙げられる。これらの糖または糖アルコールは個々に用いても組み合わせて用いてもよい。糖または糖アルコールの濃度は１．０％〜７％ｗ／ｖ、より好ましくは２．０％〜６．０％ｗ／ｖである。好ましくは、アミノ酸として、左旋（Ｌ）形態のカルニチン、アルギニンおよびベタインが挙げられる；しかし、他のアミノ酸も加えてよい。好ましいポリマーとして、平均分子量が２，０００〜３，０００のポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）または平均分子量が３，０００〜５，０００のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。製剤に加えることのできる界面活性剤はＥＰ第２７０，７９９号および同第２６８，１１０号に示されている。
【０１５０】
さらに、抗体はポリマーとの共有結合により化学修飾することで、例えばそれらの循環半減期を増大させることができる。それらをペプチドに結合させる好ましいポリマーおよび方法は、米国特許第４，７６６，１０６号、同第４，１７９，３３７号、同第４，４９５，２８５号および同第４，６０９，５４６号（これらの全体が、参考として本明細書に援用される）に示されている。好ましいポリマーはポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは室温で水溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒ（式中、Ｒは水素またはアルキル基もしくはアルカノール基等の保護基であってよい）を有する。好ましくは、保護基は１〜８個の炭素を有し、より好ましくはメチルである。符号ｎは正の整数であり、好ましくは１〜１，０００であり、より好ましくは２〜５００である。ＰＥＧは好ましくは１，０００〜４０，０００、より好ましくは２，０００〜２０，０００、最も好ましくは３，０００〜１２，０００の平均分子量を有する。好ましくは、ＰＥＧは少なくとも１つのヒドロキシ基を有し、より好ましくは末端ヒドロキシ基である。阻害剤上の遊離アミノ基と反応して好ましく活性化されるのはこのヒドロキシ基である。しかし、反応基のタイプおよび量は、共有結合により結合体化されたＰＥＧ／本発明の抗体を得るために変えてもよいことが理解される。
【０１５１】
水溶性ポリオキシエチル化ポリオールも本発明に有用である。それらはポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）等を含む。ＰＯＧが好ましい。その１つの理由は、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格は、例えば、動物およびヒトにおいて天然に存在する、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド中の骨格と同じ骨格であるためである。したがって、この分枝は体内で必ずしも外来性の因子として見なされ得ない。ＰＯＧはＰＥＧと同じ範囲の好ましい分子量を有する。ＰＯＧの構造は、Ｋｎａｕｆら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０に示されており、ＰＯＧ／ＩＬ−２結合体の議論は米国特許第４，７６６，１０６号に見られる（両文献とも、参考として、それらの全体が本明細書に援用される）。
【０１５２】
循環半減期を増大させる別の薬物送達系はリポソームである。リポソーム送達系の調製方法はＧａｂｉｚｏｎら（１９８２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２：４７３４；Ｃａｆｉｓｏ（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ６４９：１２９；およびＳｚｏｋａ（１９８０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｅｎｇ．９：４６７で議論されている。他の薬物送達系は当該分野で公知であり、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙら（１９８０）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ編，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２５３；Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ（１９８４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖｓ．３６：２７７に記載されている。
【０１５３】
医薬組成物に配合される処方剤はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの安定性を提供するはずである。すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントはその物理的および／または化学安定性を保持しなければならず、所望の生物学的活性、すなわち、先に本明細書において規定されるの１種類以上のアンタゴニスト活性（本明細書の他の箇所に示される、Ｔ細胞により刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞により刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；Ｃ４ＢＰ発現細胞または可溶性Ｃ４ＢＰにより刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；可溶性Ｃ４ＢＰまたは固相Ｃ４ＢＰにより刺激される任意の細胞の「生存」抗アポトーシス細胞内シグナルの阻害；可溶性Ｃ４ＢＰまたは固相Ｃ４ＢＰへの結合の際の任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル変換の阻害；ヒト悪性Ｂ細胞の増殖の阻害が挙げられるが、これらに限定されない）を有する。
【０１５４】
タンパク質安定性をモニタリングする方法は当該分野で周知である。例えば、Ｊｏｎｅｓ（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０；Ｌｅｅ，ｅｄ（１９９１）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、ニューヨーク州）を参照のこと。一般的に、タンパク質安定性は特定の時間中に選択された温度で測定される。好ましい実施形態において、安定的な抗体医薬処方物は、室温（約２５℃）で少なくとも１ヶ月、少なくとも３ヶ月、または少なくとも６ヶ月保存されたときにアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの安定性を提供し、および／あるいは約２〜８℃で少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２４ヶ月間安定である。
【０１５５】
医薬組成物に配合された場合、抗体等のタンパク質は、医薬組成物中の析出、凝集および／または変性の視覚的な徴候（すなわち、変色または透明度の欠如）または測定可能な徴候（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）またはＵＶ光分散を用いる）を示さない場合、所与の時点でその物理的安定性を保持すると考えられる。化学安定性に関して、医薬組成物に配合された場合、抗体等のタンパク質は、化学安定性の測定で、タンパク質（すなわち、抗体）が医薬組成物中で目的の生物学的活性を保持することを示す場合、所与の時点でその化学的安定性を保持すると考えられる。化学安定性の変化をモニタリングする方法は、当該分野で周知であり、それらとしては、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣおよび／またはマトリックス支援レーザー脱着イオン化／飛翔時間  質量分析を使用する、切り詰め（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）からの結果等のタンパク質の化学的に変えられた形態を検出する方法；ならびに、例えば、イオン交換クロマトグラフィーを用いる（例えば、脱アミド化に伴う）分子荷電の変化に関連した分解を検出する方法が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、２００４年１１月４日出願の「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））（参考として、この全体が、本明細書に援用される）に開示された方法を参照のこと。
【０１５６】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは医薬組成物に配合された場合、所与の時点での所望の生物学的活性が、所望の生物学的活性に適するアッセイで測定して、医薬組成物が調製された時点で示される所望の生物学的活性の約３０％以内、好ましくは約２０％以内であるときに該時間点で所望の生物学的活性を保持すると考えられる。本明細書で開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントの所望の生物学的活性の測定アッセイは本明細書の実施例に説明されているように実施することができる。また、Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；および米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（これらは、参考として本明細書に援用される）に記載のアッセイも参照のこと。
【０１５７】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が液体処方物として処方される場合、液体医薬組成物は、分解を防ぎ、無菌性を保持するために、好ましくは凍結乾燥される。液体組成物を凍結乾燥する方法は当業者に公知である。使用の直前に、組成物を、さらなる成分を含み得る滅菌希釈剤（例えば、リンガー溶液、蒸留水または滅菌生理食塩水）により再構成してよい。再構成の際に、組成物は好ましくは当業者に公知の方法を用いて被験体に投与される。
【０１５８】
医薬製造におけるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用
本発明はまた、ＣＤ４０を発現する腫瘍細胞を含む癌について被験体を処置する医薬の製造におけるＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達またはその抗原結合フラグメントをブロックする本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用を提供し、ここで、この医薬が、少なくとも１種類の他の癌療法による処置と統合される。一部の実施形態において、癌は新生Ｂ細胞の増殖により特徴付けられる。そのような癌として、本明細書で先に議論されるＢ細胞関連癌、例えば、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度のＢ細胞リンパ腫、中悪性度のＢ細胞リンパ腫、低悪性度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラズマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小切断リンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小切断リンパ腫、びまん性切断細胞リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、毛様細胞様白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫症、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態において、癌は固形腫瘍である。ＣＤ４０発現腫瘍細胞を含む固形腫瘍の例としては、卵巣、肺（例えば、扁平上皮癌タイプ、腺癌タイプおよび大細胞癌タイプの非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、胸、結腸、腎臓（例えば、腎臓細胞癌腫）、膀胱、肝臓（例えば肝細胞癌）、胃、子宮頚部、前立腺、鼻咽頭、甲状腺（例えば、甲状腺乳頭状癌）およびメラノーマ等の皮膚の癌、および肉腫（例えば、骨肉腫およびユーイング肉腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５９】
癌の処置を必要とする被験体の文脈において「統合される」とは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬が、少なくとも１種類の他の癌療法による被験体の処置の前、処置の間または処置の後に使用されることが意図される。Ｂ細胞関連癌を有する被験体の他の癌療法の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：手術；放射線療法；必要に応じて自家骨髄移植を併用する化学療法（ここで適当な化学治療剤として、フルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組合せ（例えば、アントラサイクリンを含む投薬計画（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン）））および化学療法に使用される他の細胞毒性因子および／または治療剤（例えばミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼおよび代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネララビンが挙げられるが、これらに限定されない））が挙げられるが、これらに限定されない）；および他の抗癌モノクローナル抗体処置（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）または悪性Ｂ細胞のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的とする他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全なヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））または悪性Ｂ細胞のＣＤ２０抗原を標的とする任意の他の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３、二特異性抗体）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒト血管内皮増殖因子を標的とする他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞のＣＤ２２抗原を標的とする抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的とするα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫に過剰発現する核因子−κΒのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的とする抗体；悪性Ｂ細胞のＣＤ２３抗原を標的とする抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；悪性Ｂ細胞のＣＤ３８抗原を標的とする抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞に発現する主要組織適合複合体クラスＩＩレセプターを標的とする抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性Ｂ細胞のＣＤ４０抗原を標的とする他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；および２００４年１１月４日出願の「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈ��ｉｒ  Ｕｓｅ」という発明の名称の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２号（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））に開示された他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＤ４０発現細胞においてＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９およびその抗原結合フラグメント；および多くの固形腫瘍および造血起源の腫瘍に発現する腫瘍壊死因子関連アポトーシスを誘導するリガンドレセプター１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）を標的とする抗体（例えば、アゴニストヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）；低分子ベースの癌療法（微小管および／またはトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、分裂抑制剤ドラスタチンおよびドラスタチンアナログ；チュブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトセシン）、ＳＤＸ−１０５（ベンダムスチン塩酸塩）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも呼ばれるエポチロンアナログ）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えばミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピキサントロン、エロキサチン（抗腫瘍薬）、ガナイト（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節誘導体（例えば、レブリミド（旧称：レビミド））、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンス阻害剤）、ＳＤＸ−１０１（悪性リンパ球のアポトーシスを誘導するＲ−エトドラク）、クロファラビン等の第二世代のプリンヌクレオシドアナログ、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリマーセンおよびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソーム阻害剤（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、低分子キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＺＤ−６４７４）、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の低分子阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）、ヒストンデアセチラーゼの低分子阻害剤（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）、例えばスベラニロヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８）およびアポトーシス剤、例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテキサフィンガドリニウム）が挙げられるが、これらに限定されない）；ワクチン／免疫療法ベースの癌療法（ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン）、個人向け免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、正式にはＧＴＯＰ−９９と呼ばれるＭｙＶａｘ（登録商標）個人向け免疫療法）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９、ｔｏｌｌ様レセプター９（ＴＬＲ９）の合成アゴニスト）、インターフェロン−α療法、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法およびＩＬ−２１療法が挙げられるが、これらに限定されない）；ステロイド療法；または他の癌療法。ここで、さらなる療法による処置が、上記のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による被験体の処置の前、��置中または処置に続いて施行される。
【０１６０】
ＣＤ４０を発現する腫瘍細胞を含む固形腫瘍である癌を有する被験体の他の癌処置の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：手術；放射線療法；化学療法（ここで適当な化学治療剤として、フルダラビンまたはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびそれらの組合せ、例えば、アントラサイクリンを含む投薬計画（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン））および化学療法に使用される他の細胞毒性因子および／または治療剤（例えばミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼおよび代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネララビンが挙げられるが、これらに限定されない））が挙げられるが、これらに限定されない）；サイトカイン療法（αインターフェロン療法、γインターフェロン療法、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１による療法、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）またはこれらサイトカインの生物活性改変体による療法が挙げられるが、これらに限定されない）；または目的の固形腫瘍の処置に用いられることが意図される他のモノクローナル抗体、例えば、Ｈｅｒ２＋乳癌細胞のＨｅｒ２レセプタータンパク質を標的とするＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サンフランシスコ、カリフォルニア州）；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、阻害し、かつ結腸癌の処置に用途を有するヒト化モノクローナル抗体ＡｖａｓｔｉｎＴＭ（ベバシズマブとしても知られる；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サンフランシスコ、カリフォルニア州）；上皮成長因子レセプターを標的とする抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、ＩＭＣ−Ｃ２２５（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ニューヨーク、ニューヨーク州）；ＩＧＦ−１レセプタータンパク質を標的とする抗ＩＧＦ−１レセプター抗体；腫瘍関連抗原ＭＵＣ１を標的とする抗ＭＵＣ１抗体；インテグリンを標的とし、細胞増殖および生存に関与する細胞付着およびシグナル伝達プロセスを調節する抗−α５β１、抗−αｖβ５および抗−αｖβ３；カドヘリンファミリーメンバーを標的とする抗Ｐ−カドヘリン抗体（例えば、同時係属米国特許出願公開２００３０１９４４０６を参照）；内皮細胞特異的接着分子の脈管形成関連機能を標的とする抗ＶＥ−カドヘリン抗体；および２００４年１１月４日出願の、発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２号（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））に開示された��うに、他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＤ４０発現腫瘍細胞のＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９およびその抗原結合フラグメント。ここで、さらなる癌療法による処置は、上記のようにアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による被験体の処置前、処置中または処置に続いて行う。
【０１６１】
よって、一部の実施形態において、本発明は、被験体中のＢ細胞リンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫を処置する医薬の製造におけるＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は化学療法、抗癌抗体療法、低分子ベースの癌療法およびワクチン／免疫療法ベースの癌療法からなる群より選択される少なくとも１種類の他の癌療法による処置と統合され、ここでこの医薬は他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられ、複数の併用療法の場合、他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられる。
【０１６２】
よって、例えば、一部の実施形態において、本発明は、被験体中のＢ細胞リンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫を処置する医薬の製造における本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は化学療法による処置と統合され、この化学療法剤はシトキサン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾンおよびそれらの組合せ（例えばＣＨＯＰ）からなる群より選択される。別の実施形態において、本発明は、被験体中のＢ細胞リンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫を処置する医薬の製造における本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性Ｂ細胞のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的とする他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全なヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））または悪性Ｂ細胞のＣＤ２０抗原を標的とする任意の他の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３、二特異性抗体）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒト血管内皮増殖因子を標的とする他の抗癌抗体；完全なヒトモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９、またはＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体；およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種類の他の抗癌抗体による処置と統合され、ここでこの医薬は他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられ、複数の併用療法の場合、他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられる。
【０１６３】
さらに別の実施形態において、本発明は、被験体中のＢ細胞リンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫を処置する医薬の製造における本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は、微小管および／またはトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、分裂抑制剤ドラスタチンおよびドラスタチンアナログ；チュブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトセシン）、ＳＤＸ−１０５（ベンダムスチン塩酸塩）、イキサベピロン（ＢＭＳ−２４７５５０とも呼ばれるエポチロンアナログ）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えばミドスタウリン（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピキサントロン、エロキサチン（抗腫瘍薬）、ガナイト（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、アポトーシス剤、例えば、Ｘｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテキサフィンガドリニウム）、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリマーセンおよびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、ネララビンおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種類の低分子ベースの癌療法と統合され、ここでこの医薬は他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられ、複数の併用療法の場合、他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられる。
【０１６４】
さらに別の実施形態において、本発明は、被験体中のＢ細胞リンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫を処置する医薬の製造におけるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は、ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン）、個人向け免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、正式にはＧＴＯＰ−９９と呼ばれるＭｙＶａｘ（登録商標）個人向け免疫療法）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９、ｔｏｌｌ様レセプター９（ＴＬＲ９）の合成アゴニスト）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法およびＩＬ−２１療法、およびこれらの組合せからなる群より選択される少なくとも１種類の他のワクチン／免疫療法ベースの癌療法による処置と統合され、ここでこの医薬は他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられ、複数の併用療法の場合、他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられる。
【０１６５】
一部の実施形態において、本発明は、被験体中のＢ細胞関連白血病、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）を処置する医薬の製造における本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は化学療法および代謝拮抗物質療法からなる群より選択される少なくとも１種類の他の癌療法による処置と統合され、ここでこの医薬は他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられ、複数の併用療法の場合、他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられる。そのような実施形態の例としては、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬が、シトキサン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、シタラビン、ミトキサントロン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、メトトレキサート、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびそれらの組合せからなる群より選択される化学療法剤または代謝拮抗物質による処置と統合された場合が挙げられるが、これらに限定されず、ここでこの医薬は他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられ、複数の併用療法の場合、他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられる。そのような一例において、医薬は、シタラビン＋ダウノルビシン、シタラビン＋ミトキサントロンおよび／またはシタラビン＋イダルビシンによる処置と統合され；ここでこの医薬は他の癌療法によるＢ−ＡＬＬ被験体の処置前、処置中または処置後に用いられ、複数の併用療法の場合、他の癌療法による被験体の処置前、処置中または処置後に用いられる。
【０１６６】
一部の実施形態において、本発明は、ＣＤ４０抗原を発現する腫瘍細胞を含む固形腫瘍に対して被験体を処置する医薬の製造におけるＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は化学療法による処置と統合され、化学療法剤は、例えば結腸直腸癌および非小細胞肺癌の処置に用いることのできるＣＰＴ−１１（イリノテカン）；例えば、肺癌、乳癌および上皮性卵巣癌の処置に用いることのできるゲムシタビン；および固形腫瘍の処置に適する他の化学治療剤からなる群より選択され；さらなる癌療法による処置が、上記のように、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による被験体の処置前、処置中、または処置に続いて行う。
【０１６７】
他の実施形態において、本発明は、ＣＤ４０抗原を発現する腫瘍細胞を含む固形腫瘍に対して被験体を処置する医薬の製造における本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は、Ｈｅｒ２＋乳癌細胞のＨｅｒ２レセプタータンパク質を標的とするＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サンフランシスコ、カリフォルニア州）；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、阻害し、かつ結腸癌の処置に用途を有するヒト化モノクローナル抗体ＡｖａｓｔｉｎＴＭ（ベバシズマブとしても知られる；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サンフランシスコ、カリフォルニア州）；上皮成長因子レセプターを標的とする抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、ＩＭＣ−Ｃ２２５（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ニューヨーク、ニューヨーク州）；ＩＧＦ−１レセプタータンパク質を標的とする抗ＩＧＦ−１レセプター抗体；腫瘍関連抗原ＭＵＣ１を標的とする抗ＭＵＣ１抗体；各々インテグリンを標的とし、細胞増殖および生存に関与する細胞付着およびシグナル伝達プロセスを調節する抗−α５β１、抗−αｖβ５および抗−αｖβ３；カドヘリンファミリーメンバーを標的とする抗Ｐ−カドヘリン抗体（例えば、同時係属米国特許出願公開２００３０１９４４０６を参照）；内皮細胞特異的接着分子の脈管形成関連機能を標的とする抗ＶＥ−カドヘリン抗体；および完全なヒトモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９、またはＣＤ４０Ｌ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする他のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される少なくとも１種類の他の抗癌抗体による処置と統合され；さらなる癌療法による処置が、上記のように、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による被験体の処置前、処置中、または処置に続いて行う。
【０１６８】
本発明は、ＣＤ４０を発現する腫瘍細胞を含む固形腫瘍、例えば、新生Ｂ細胞増殖により特徴付けられる癌（例えば上記のＢ細胞関連癌、または固形腫瘍を含む）に対して被験体を処置する医薬の製造における本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は少なくとも１種類の他の癌療法で前処置された被験体に用いられる。「前処置された」または「前処置」とは、被験体がアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する前に１種類以上の他の癌処置を受けている（すなわち、少なくとも１種類の他の癌療法で処置されている）ことが意図される。「前処置された」または「前処置」とは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による処置の開始前の２年以内、１８ヶ月以内、１年以内、６ヶ月以内、２ヶ月以内、６週以内、１ヶ月以内、４週以内、３週以内、２週以内、１週以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、さらに１日以内に少なくとも１種類の他の癌療法で処置された被験体を含む。被験体が、先の癌療法による前処置に応答していることは必要ではない。従って、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する被験体は、以前の癌療法による前処置に対して、または前処置が複数回の癌療法からなった１種類以上の先の癌療法に対して応答できるか、または応答できない（すなわち、癌が不応性であった）。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する前に、被験体が前処置を受けることのできる他の癌療法の例としては、手術；放射線療法；任意に自家骨髄移植に組み合わされた化学療法が挙げられるが、これらに限定されない；ここで適当な化学療法剤としては、先に列挙されたもの；他の抗癌モノクローナル抗体療法（先に列挙された抗癌抗体を含むが、これらに限定されない）；低分子ベースの癌療法（先に列挙された低分子を含むが、これらに限定されない）；ワクチン／免疫療法ベースの癌療法（先に列挙されたものを含むが、これらに限定されない）；ステロイド療法；他の癌療法；またはそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６９】
１種類以上の他の癌療法による本明細書中に記載される医薬の統合使用の文脈における「処置」は、医薬または他の癌療法の被験体への適用または投与、または医薬または他の癌療法の被験体から単離した組織または細胞株への適用または投与として定義され、ここで被験体はＣＤ４０発現腫瘍細胞を含む癌（例えば、新生Ｂ細胞成長により特徴付けられる癌または固形腫瘍）、そのような癌に関連する症状、またはそのような癌の発症への素因を有し、その目的は、癌、癌の任意の関連症状または癌の発症への素因を治癒、治療（ｈｅａｌ）、緩和、軽減、変更、治療（ｒｅｍｅｄｙ）、寛解、改善または影響することである。
【０１７０】
本発明はまた、被験体中の自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する医薬の製造におけるＣ４ＢＰリガンド媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、該医薬は少なくとも１種類の他の療法による処置と統合される。自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置を必要とする被験体の文脈において「統合される」とは、少なくとも１種類の他の療法による被験体の処置前、処置中または処置後に医薬が用いられることが意図される。自己免疫疾患および／または炎症性疾患の他の療法の例としては、既に記載したもの、すなわち、手術または外科的手順（例えば、脾臓摘出、リンパ節切除、甲状腺摘出、血漿交換、白血球交換、細胞、組織または器官の移植、腸管手順、器官潅流等）、放射線療法、ステロイド療法および非ステロイド療法等の療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚用薬剤（例えば、アレルギー、接触皮膚炎および乾癬等の皮膚状態を処置するために用いられる局所剤）、免疫抑制療法および他の抗炎症性モノクローナル抗体療法等が挙げられるが、これらに限定されない；さらなる癌療法による処置が、上記のように、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による被験体の処置前、処置中、または処置に続いて行う。そのような１つの実施形態において、本発明は、被験体中の自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する医薬の製造における本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、該医薬は上記の少なくとも１種類の他の療法による処置と統合される。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬は２種類の他の療法による処置と統合される。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬が２種類の他の療法による処置と統合される場合、医薬の使用は他の２種類の療法のいずれか、または両方による処置前、処置中または処置後であってよい。
【０１７２】
本発明はまた、被験体中の自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置する医薬の製造におけるＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここでこの医薬は少なくとも１種類の他の療法で前処置された被験体に用いられる。「前処置された」または「前処置」とは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する前に被験体は１種類以上の他の療法により処置されていることが意図される。「前処置された」または「前処置」とは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬による処置の開始前の２年以内、１８ヶ月以内、１年以内、６ヶ月以内、２ヶ月以内、６週以内、１ヶ月以内、４週以内、３週以内、２週以内、１週以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、さらに１日以内に他の療法で処置された被験体を含む。被験体が、先の癌療法による前処置に応答したことは必要ではない。従って、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する被験体は、以前の療法による前処置に対して、または前処置が複数回の療法を含んだ以前の１種類以上の療法に対して応答できるか、または応答できない。
【０１７３】
自己免疫疾患および／または炎症性疾患に対する１種類以上の他の療法による本明細書中に記載される医薬の統合使用の文脈における「処置」は、医薬または他の療法の被験体への適用または投与、または医薬または他の療法の被験体から単離した組織または細胞株への適用または投与として定義され、ここで被験体は自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患に関連する症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患の発症への素因を有し、その目的は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患の症状または自己免疫疾患および／または炎症性疾患の発症への素因を治癒、治療（ｈｅａｌ）、緩和、軽減、変更、治療（ｒｅｍｅｄｙ）、寛解、改善または影響することである。
【０１７４】
以下の実施例は例示のために提供され、限定のためではない。
【実施例】
【０１７５】
以下の手順を下記の実施例に用いてよい。
【０１７６】
免疫グロブリン定量のＥＬＩＳＡアッセイ
ヒトＩｇＭとＩｇＧの濃度をＥＬＩＳＡにより評価する。９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、０．０５Ｍ炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６）中の２μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂ（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）または２μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＩｇＭ  ｍＡｂ４１０２（Ｂｉｏ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カリフォルニア州）で、１６時間４℃でインキュベートすることにより被覆する。プレートをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で３回洗浄し、ＢＳＡで１時間飽和させる。２回の洗浄後、プレートを２時間、３７℃で試験試料の異なる希釈物とともにインキュベートする。３回の洗浄後、結合したＩｇを、１μｇ／ｍＬペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂまたはヤギ抗ヒトＩｇＭ  ｍＡｂとともに２時間、３７℃でインキュベーションすることにより検出する。プレートを４回洗浄し、結合したペルオキシダーゼ活性を、Ｏ−フェニレンジアミンを基質として加えることにより示す。ヒトＩｇＧまたはＩｇＭ標準（Ｃａｌｔａｑ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、カリフォルニア州）を用いて各アッセイの標準曲線を確立する。
【０１７７】
ヒト末梢血液からの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の単離
５０ｍＬポリスチレンチューブあたり、２０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ溶液（低エンドトキシン；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を、３チューブ中に、血液を加える３０分前に加える。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ溶液を室温に温める。１：１０希釈の３Ｌの漂白剤を調製し、これを使用して、血液に接触させる全てのチューブおよびピペットを洗浄する。Ｆｉｃｏｌｌ層を乱さないようにＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ溶液の上部に、血液を１．５ｍＬ血液／１ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅで上層させる。チューブは、遠心分離機のブレーキを使用せずに１７００ｒｐｍで、３０分間、室温で遠心分離する。最上層（血漿）のできるだけ多くを除去して、第二層の溶液の除去を避けるために陰圧を最小限にする。Ｂリンパ球とＴリンパ球を含む第二層を、滅菌パスツールピペットを用いて集め、２つの５０ｍＬポリスチレンチューブに入れる。集めたものを、３×体積の無添加冷ＲＰＭＩで希釈し、チューブを１０００ＲＰＭで１０分間遠心分離する。媒体を吸引により除去し、両５０ｍＬチューブからの細胞を合計１０ｍＬの冷ＲＰＭＩ（添加物なし）に再懸濁し、１５ｍＬのチューブに移す。細胞をヘマトサイトメーターによりカウントし、次に１０００ＲＰＭで１０分間遠心分離する。媒体を除去し、細胞を４ｍＬのＲＰＭＩに再懸濁する。このフラクションはＰＢＭＣを含む。
【０１７８】
ＰＢＭＣからのＢ細胞の単離
１００μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓ（抗ＣＤ１９）を５ｍＬのプラスチックチューブに入れる。３ｍＬの滅菌ＰＢＳをビーズに加え混合し、磁気ホルダーに置き、次に２分間そのままにしておく。溶液をパスツールピペットで除去する。３ｍＬの滅菌ＰＢＳを加え、混合し、磁気ホルダーに置き、次に２分間そのままにしておく。滅菌ＰＢＳによるこの操作を合計３回の洗浄のためにさらにもう１回繰り返す。ＰＢＭＣをビーズに加え、インキュベートしながら、３０分間、４０℃で混合する。ＰＢＭＣおよびビーズを含むチューブを磁気ホルダーに２分間置き、次に溶液を磁気ホルダー中の新しい５ｍＬチューブに移す。２分後、溶液を新しい１５ｍＬのチューブに移す。この工程をさらに４回繰り返し、最初の４回の溶液を１５ｍＬのチューブに集め、次に１０００ＲＰＭで５分間遠心分離する。この工程はＴ細胞分離用のペレットを作る。
【０１７９】
１００μＬのＲＰＭＩ（添加物なし）を加えて、ビーズを集め、この溶液を０．７ｍＬチューブに移す。１０μＬのＤｙｎａｌ  Ｄｅｔａｃｈａ  Ｂｅａｄを室温で懸濁液に加え、４５分間回転させる。懸濁液を新しい５ｍＬのチューブに加え、３ｍＬのＲＰＭＩ（添加物なし）を加える。チューブを磁気ホルダーに２分間置く。溶液を、ホルダー中の新しい５ｍＬのチューブに２分間移し、次に１５ｍＬのチューブに移す。前の工程をさらに３回繰り返して、溶液を１５ｍＬのチューブに集める。１５ｍＬのチューブを１０００ＲＰＭで１０分間遠心分離して、細胞を１０ｍＬのＲＭＰＩに再懸濁する。洗浄工程をさらに２回繰り返して合計３回洗浄する。細胞を最後の遠心分離前にカウントする。この工程はＢ細胞精製を完結する。細胞を９０％ＦＣＳおよび１０％ＤＭＳＯ中に保存し、−８０℃で凍結する。
【０１８０】
フローサイトメトリーアッセイ
Ｒａｍｏｓ細胞（１０６細胞／試料）を１００μＬの一次抗体（ＰＢＳ−ＢＳＡ中１０μｇ／ｍＬ）中、２０分間、４℃でインキュベートする。ＰＢＳ−ＢＳＡまたはＨＢＳＳ−ＢＳＡによる３回の洗浄後に、細胞を、ヤギ抗（ヒトＩｇＧ）抗体（Ｃａｌｔａｑ）のＦＩＴＣ標識Ｆ（ａｂ’）２フラグメント中１００μＬで、２０分間、４℃でインキュベートする。ＰＢＳ−ＢＳＡによる３回の洗浄とＰＢＳによる１回の洗浄後に、細胞を０．５ｍＬのＰＢＳ中に再懸濁する。分析をＦＡＣＳＣＡＮ  Ｖ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、サンノゼ、カリフォルニア州）を用いて行う。
【０１８１】
ハイブリドーマクローンの産出
免疫マウス由来の脾細胞を、ＳＰ２／０またはＰ３×６３Ａｇ８．６５３マウスミエローマ細胞と、５０％ポリエチレングリコールを用いて１０：１の比で、ｄｅ  Ｂｏｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１１３：１４３に既に記載されたように融合させる。融合細胞を、ヒポキサンチン（０．１ｍＭ）、アミノプテリン（０．０１ｍＭ）、チミジン（０．０１６ｍＭ）および０．５ｎｇ／ｍＬのｈＩＬ−６（Ｇｅｎｚｙｍｅ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を補った完全ＩＭＤＭ培地に再懸濁する。次に、融合細胞を、各ウェルが平均１個の増殖するハイブリドーマを含むように、９６ウェル組織培養プレートのウェルに分配させる。
【０１８２】
１０〜１４日後、ハイブリドーマ集団の上清を特異的な抗体産生についてスクリーニングする。ハイブリドーマクローンによる特異的な抗体産生のスクリーニングのために、各ウェルからの上清をプールし、ＥＬＩＳＡにより抗ＣＤ４０活性の特異性を最初に試験する。次に陽性のものを、上記のＦＡＣＳアッセイについて記載したようにＥＢＶ形質転換Ｂ細胞の蛍光細胞染色のために用いる。陽性ハイブリドーマ細胞を、０．５ｎｇ／ｍＬのｈＩＬ−６を含むＩＭＤＭ／ＦＢＳ中で限界希釈法により２回クローニングする。
【０１８３】
実施例１：抗ＣＤ４０抗体の産生
ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２重鎖遺伝子座およびヒトκ鎖遺伝子座を有するトランスジェニックマウス（Ａｂｇｅｎｉｘ  γ−１  ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ）を用いて、抗ＣＤ４０抗体を作る。ＣＤ４０細胞外ドメインを発現するＳＦ９昆虫細胞を免疫原として用いる。マウス脾臓をマウスミエローマＳＰ２／０細胞と融合させ、ＥＬＩＳＡで組換えＣＤ４０を認識する抗体を作る。平均して、Ａｂｇｅｎｉｘ  ｘｅｎｏｍｏｕｓｅで産生されたハイブリドーマのうちの約１０％は、ヒトκ鎖の代わりにマウスλ軽鎖を含み得る。マウス軽鎖λ鎖を含む抗体を除外する。細胞表面ＣＤ４０に対する結合をも示す一部の抗体をさらに分析するために選択する。一連のサブクローニング手順中に選択される安定なハイブリドーマを結合および機能アッセイでのさらなる特徴付けのために用いる。他のハイブリドーマ由来のクローンはアンタゴニスト活性を有するとさらに同定される。それらの相対的なアンタゴニスト能力およびＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達を阻害し、よってＣＤ４０指向性活性に影響を与える能力に基づいて、ハイブリドーマクローンをさらに評価するために選択する。
【０１８４】
実施例２：選択されたハイブリドーマの結合特性
プロテインＡをアミン結合によりＣＭ５バイオセンサーチップに固定化する。１．５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ４０モノクローナル抗体を１．５分間、１０μＬ／分でこの改変バイオセンサー表面に捕捉する。組換え可溶性ＣＤ４０−ｈｉｓを、多様な濃度でバイオセンサー表面上に流す。抗体および抗原を０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０（ＨＢＳ−ＥＰ）で希釈する。速度定数および親和定数を、１：１相互作用モデル／広範囲適合によるＢｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウエアを用いて決定する。
【０１８５】
実施例３：インビトロでのＣＤ４０／Ｃ４ＢＰ相互作用に対するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の効果
場合によっては、候補抗体はＣ４ＢＰの細胞表面ＣＤ４０への結合を妨げ、事前に結合したＣ４ＢＰに置き換わるだろう。候補抗体を、リンパ腫細胞株（Ｒａｍｏｓ）の表面のＣＤ４０へのＣ４ＢＰ結合を妨げるそれらの能力について調べる。これらの細胞上のＣＤ４０抗原に対する適当なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の結合は、フローサイトメトリーアッセイにより測定されるように、ＰＥ−Ｃ４ＢＰ、ＦＩＴＣ−Ｃ４ＢＰ、ビオチン−Ｃ４ＢＰまたはＡｌｅｘｆｌｕｏｒ−Ｃ４ＢＰの引き続く結合を妨げる。第二セットのアッセイでは、候補抗体を、細胞表面ＣＤ４０に事前に結合したＣ４ＢＰに置き換わるそれらの能力について調べる。
【０１８６】
実施例４：正常な被験体由来のヒトリンパ球のＣＤ４０誘導性増殖のための抗体アンタゴニスト
Ｃ４ＢＰによるＣＤ４０の結合は、正常なヒトＢ細胞の増殖を誘導するＣＤ４０シグナル伝達を刺激する。Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックするアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はこの増殖を阻害することが予期される。
【０１８７】
候補抗体を、Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達および、それに続く正常なヒト被験体由来のＰＢＭＣの増殖を阻害するそれらの能力について調べる。可溶性Ｃ４ＢＰα鎖サブユニットおよびＣ４ＢＰ  α７β１ヘテロマーをアゴニストとして用いる。ＰＢＭＣの増殖をトリチウム化チミジンの取込みにより測定する。実験を、観察された阻害が単一ドナー由来の細胞に特異的ではないことを確かめるためにＰＢＭＣの複数のドナー（ｎ＞１）を用いて実施する。広範囲の抗体濃度（０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ）をこれらのアッセイで用いる。一般的に、目的の抗体はＣ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達に干渉することで、ほとんどの場合で０．１μｇ／ｍＬの濃度の抗体でＣＤ４０誘導性増殖を阻害する。
【０１８８】
Ｂ細胞に加えて、ヒトＰＢＭＣはまた、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介することのできるナチュラルキラー細胞も含む。増殖の抗体媒介性阻害の機構を明らかにするために、ヒトＰＢＭＣから精製したＢ細胞を用いてアッセイを行う。抗体が、Ｃ４ＢＰのＣＤ４０への結合により誘導される精製Ｂ細胞のＣＤ４０誘導性増殖を阻害することができる場合、候補抗体のアンタゴニスト活性が、ＡＤＣＣの機構ではなく、これらのアッセイの増殖阻害を引き起こす。
【０１８９】
実施例５：アンタゴニスト抗体は正常な被験体由来のヒトＢ細胞の強い増殖を引き起こさない
Ｃ４ＢＰは正常なＢ細胞の増殖を誘発する。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体の結合は、正常および悪性Ｂ細胞の増殖に類似の刺激シグナルをもたらすことができる。強いＢ細胞刺激活性を有する抗体は、Ｂ細胞リンパ腫および自己免疫障害の治療処置に適切な候補ではない。Ｃ４ＢＰ媒介性ＣＤ４０シグナル伝達をブロックする候補抗体を、正常なボランティアドナー由来のＢ細胞の増殖を誘導するそれらの能力について調べる。正常なドナーＰＢＭＣから精製したＢ細胞を多様な濃度の候補抗体（０．００１〜１００μｇ／ｍＬ）で合計４日間培養する。Ｂ細胞増殖をトリチウム化チミジンの取込みにより測定する。可溶性Ｃ４ＢＰがＢ細胞の活発な増殖を引き起こす一方で、本発明の方法に適する候補抗体は正常なＢ細胞の弱い増殖のみを引き起こす。
【０１９０】
Ｂ細胞に加えて、ヒトＰＢＭＣは、Ｂ細胞上のＣＤ４０に結合した抗ＣＤ４０抗体の架橋を提供することのできるＩｇＧ１分子に対するＦｃレセプター（ＦｃＲ）を有する細胞型を含む。この架橋は抗ＣＤ４０抗体の刺激活性を強力に向上させ得る。架橋細胞の存在下で候補抗体のＢ細胞刺激活性の欠如を確認するために、Ｂ細胞ならびにＦｃＲ＋細胞を含む全ＰＢＭＣを用いて、増殖実験を実施する。一般的に、これらの候補抗体は、ＦｃＲを有する細胞の存在下でも、コントロールのヒトＩｇＧ１により誘導されたバックグラウンド増殖を超えてＢ細胞を増殖させるように刺激しない。候補ｍＡｂによる刺激活性の欠如は、培養ウェルのプラスチック表面に固定化された候補抗ＣＤ４０抗体に応答するＰＢＭＣ増殖を測定することによりさらに確認される。まとめると、これらのデータは、候補抗ＣＤ４０抗体が強いＢ細胞刺激特性を有さないことを示す。
【０１９１】
実施例６：候補抗体はＣＤ４０を有する標的細胞をＡＤＣＣにより死滅させ得る
ある場合では、候補抗体は、ＣＤ４０を有する標的細胞（リンパ腫系および／または固形腫瘍系）をＡＤＣＣの機構により死滅させ得る。ＩｇＧ１アイソタイプの抗体は、ＡＤＣＣの機構により標的細胞の死滅を誘導する能力を有することが予期される。候補抗ＣＤ４０抗体を、インビトロアッセイで癌細胞株を殺すそれらの能力について調べる。２種類のヒトリンパ腫細胞株（ＲａｍｏｓおよびＤａｕｄｉ）、１種類のヒト結腸癌細胞株（ＨＣＴ１１６）および７種類の他の癌腫細胞株（卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３およびＨＥＹ、皮膚扁平上皮癌細胞株Ａ４３１、乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ２３１およびＭＤＡ−ＭＢ４３５および肺癌細胞株ＮＣＩ−Ｈ４６０およびＳＫ−ＭＥＳ−１を含む）をこれらのアッセイの標的細胞として選択する。正常なボランティアドナー由来のＰＢＭＣまたは濃縮ＮＫ細胞をこれらのアッセイでエフェクター細胞として用いる。
【０１９２】
実施例７：候補抗体はＮＨＬ患者のリンパ節由来の癌細胞の増殖を刺激しない
ＣＤ４０シグナル伝達はＮＨＬ患者由来のリンパ腫細胞の生存と増殖を誘導する。したがって、Ｃ４ＢＰはＮＨＬである役割を果たし得る。一部の抗ＣＤ４０抗体（アゴニスト）の結合は、患者の癌細胞の増殖に類似の刺激シグナルを提供することができる。上記のように、強いＢ細胞刺激活性を有する抗体はＢ細胞リンパ腫の治療処置に適する候補ではない。候補抗体を、患者由来のＮＨＬ細胞の増殖を誘導するそれらの能力について調べる。リンパ節（ＬＮ）生検から単離された細胞を多様な濃度の候補抗体（０．０１〜３００μｇ／ｍＬ）で合計３日間培養する。細胞増殖をトリチウム化チミジンの取込みにより測定する。一般的に、候補ｍＡｂは、試験されるいずれの濃度でも癌細胞のいかなる増殖も誘導すべきではない。抗体は、外因的に加えられたＢ細胞成長因子ＩＬ−４の存在下でさえ、ＮＨＬ細胞の増殖を誘導すべきではない。これらの結果は、候補抗体が非アゴニストＣＤ４０抗体であるかどうか、かつ患者由来のＮＨＬ細胞のインビトロでの増殖を促進しないかどうかを示す。
【０１９３】
実施例８：候補抗体は非ホジキンリンパ腫患者由来の癌細胞のＣ４ＢＰ誘導増殖をブロックすることができる
Ｃ４ＢＰによるＣＤ４０の結合は、ＮＨＬ患者由来の癌細胞の増殖を誘導し得る。候補アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はこの増殖を阻害すると予期される。候補抗ＣＤ４０抗体を、異なる濃度で（０．０１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ）、これらの細胞上のＣＤ４０抗原に対するＣ４ＢＰの結合により誘導されるＮＨＬ細胞のＣＤ４０誘導性増殖を阻害するそれらの能力について調べる。患者由来のＮＨＬ細胞をＩＬ−４の存在下でＣ４ＢＰとともに懸濁液中で培養する。ＮＨＬ細胞増殖を３Ｈ−チミジン取込みにより測定する。阻害効果はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体濃度の増加とともに増加するため、コントロールと比較して、用量依存的な様式で、目的の候補抗体はＮＨＬ細胞の増殖を阻害する。
【０１９４】
実施例９：Ｃ４ＢＰ発現細胞とともに培養したときの多くの生存ＮＨＬ細胞に対する候補抗体の効果
Ｃ４ＢＰのＣＤ４０に対する結合はＣＤ４０発現細胞を刺激する別の方法である。ＣＤ４０シグナル伝達はＢ細胞生存に重要である。このセットの実験は、Ｃ４ＢＰの存在下で、７日目、１０日目および１４日目にＮＨＬ細胞数に対する候補抗ＣＤ４０抗体の効果を評価する。患者由来のＮＨＬ細胞をＩＬ−４の存在下でＣ４ＢＰとともに懸濁液中で培養する。コントロールヒトＩｇＧと候補抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で０日目と７日目に加える。各条件での生存細胞を特定の日にカウントする。コントロールグループ（ＩｇＧ）の細胞数は通常時間と共に増加する。一般的に、細胞の減少数は、コントロールグループと比べて、アンタゴニスト抗体の存在下で回復する。
【０１９５】
本明細書において示された本発明の多くの改良と他の実施形態は、前記の説明と関連する図面に示された教示の利点を有するこれらの発明に関連する当業者に想到されるものである。したがって、本発明は開示された特定の実施形態に限定されず、改良や他の実施形態は本明細書において開示された添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されていることを理解されるべきである。特定の用語がここで用いられているが、それらは一般的で説明の意味でのみ使われており、限定の目的のためではない。
【０１９６】
本明細書で示したすべての刊行物と特許出願は本発明に関する当業者のレベルを示すものである。すべての刊行物および特許出願は、参考のために、あたかもそれぞれの刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参考として援用されることを示されるのと同じ程度に、参考として本明細書に援用される。
【国際調査報告】
2008509080.tif 000002
2008509080.tif 000003
2008509080.tif 000004
2008509080.tif 000005
2008509080.tif 000006