(57)【要約】  本発明は、インシュリン分泌性ペプチドおよび基礎インシュリンを含む安定な薬学的組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
インシュリン分泌性ペプチド、基礎インシュリン、薬学的に許容可能な保存剤、双性イオン界面活性剤、ポロキサマーまたはポリソルベート20界面活性剤を約10mg/L〜約500mg/Lの濃度で含み、かつ任意的に薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む貯蔵安定的な薬学的組成物であって、前記組成物が、約7.0〜約8.5の範囲であるpHを有する薬学的組成物。
【請求項２】
インシュリン分泌性ペプチド、基礎インシュリン、薬学的に許容可能な保存剤、ポロキサマーまたはポリソルベート20界面活性剤を約10mg/L〜約500mg/Lの濃度で含み、かつ任意的に薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む貯蔵安定的な薬学的組成物であって、前記組成物が、約7.0〜約8.5の範囲であるpHを有する薬学的組成物。
【請求項３】
インシュリン分泌性GLP-1類似体、アシル化GLP-1またはアシル化GLP-1類似体および基礎インシュリン、薬学的に許容可能な保存剤、非イオン界面活性剤を、約10mg/L〜約500mg/Lの濃度で含み、かつ任意的に薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む貯蔵安定的な薬学的組成物であって、前記組成物が、約7.0〜約8.5の範囲であるpHを有する薬学的組成物。
【請求項４】
前記界面活性剤の濃度が、約20mg/L〜約400mg/Lである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記界面活性剤の濃度が、約20mg/L〜約300mg/Lである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記界面活性剤の濃度が、約50mg/L〜約200mg/Lである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記界面活性剤が、ポロキサマー188である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記界面活性剤が、ポロキサマー407、ポロキサマー124、ポロキサマー181、ポロキサマー182、ポロキサマー237、ポロキサマー331およびポロキサマー338からなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記界面活性剤が、ポリソルベート20である請求項１〜６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
インシュリン分泌性ペプチド、インシュリンペプチド、アルキルポリグルコシド、および任意的には薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、約7.0〜約8.5の範囲であるpHを有する請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記インシュリンペプチドが、基礎インシュリンである請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記インシュリンペプチドが、食事関連インシュリンペプチドである請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記アルキルポリグルコシドが、約10mg/Lからの濃度で存在する請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記アルキルポリグルコシドが、約1000mg/Lからの濃度で存在する請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記アルキルポリグルコシドが、約10mg/L〜約15000mg/Lの濃度で存在する請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記アルキルポリグルコシドが、約1000mg/L〜約10000mg/Lの濃度で存在する請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記アルキルポリグルコシドが、約2000mg/L〜約5000mg/Lの濃度で存在する請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記アルキルポリグルコシドが、C10-20-アルキルポリグルコシドである、請求項１０〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記アルキルポリグルコシドが、ドデシルβ-D-グルコピラノシド、ドデシルβ-D-マルトシド、テトラデシルβ-D-グルコピラノシド、デシルβ-D-マルトシド、ドデシルβ-D-マルトシド、テトラデシルβ-D-マルトシド、ヘキサデシルβ-D-マルトシド、デシルβ-D-マルトトリオシド、ドデシルβ-D-マルトトリオシド、テトラデシルβ-D-マルトトリオシド、ヘキサデシルβ-D-マルトトリオシド、n-ドデシル-スクロース、n-デシル-スクロースから選択される、請求項１０〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記インシュリン分泌性ペプチドが、DPP-IV保護ペプチドである請求項１〜２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記インシュリン分泌性ペプチドが、nが4〜38であるCH3（CH2）nCO-およびmが4〜38であるHOOC（CH2）mCO-からなる群より選択される親油性置換基を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記インシュリン分泌性ペプチドが、GLP-1化合物の類似体、アシル化GLP-1またはアシル化GLP-1類似体である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
前記GLP-1類似体がArg34-GLP-1（7-37）、Gly8-GLP-1（7-36）-アミド、Gly8-GLP-1（7-37）、Val8-GLP-1（7-36）-アミド、Val8-GLP-1（7-37）、Aib8-GLP-1（7-36）-アミド、Aib8-GLP-1（7-37）、Val8Asp22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8Asp22-GLP-1（7-37） 、Val8Glu22-GLP-1（7-36）-アミド 、Val8Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Lys22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8Lys22-GLP-1（7-37）、Val8Arg22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8Arg22-GLP-1（7-37）、Val8His22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8His22-GLP-1（7-37）、Val8Trp19Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Glu22Val25-GLP-1（7-37）、Val8Tyr16Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Leu16Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Tyr18Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Glu22His37-GLP-1（7-37）、Val8Glu22Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22Val25Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Glu22Val25Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22Val25-GLP-1（7-37）およびこれらの類似体からなる群より選択される、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
前記インシュリン分泌性ペプチドが、Arg34、Lys26（Nε-（γ-Glu（Nα-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）である請求項１〜２４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
追加の界面活性剤をさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
少なくとも一つの界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
二つの異なる界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である請求項２６または２７に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
全ての界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
ポロキサマー188およびポリソルベート20またはトゥイーン80を含む、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
pHが、約7.4〜約8.0の範囲内にある、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
リン酸緩衝液である緩衝液を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
双性イオン緩衝液である緩衝液を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
前記緩衝液が、グリシルグリシン、TRIS、ビシン、HEPES、MOBS、MOPS、TESおよびこれらの混合物からなる群より選択される、請求項３３に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
前記張度修飾剤が、グリセロール、プロピレングリコールおよびマンニトールからなる群から選択される請求項１〜３４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
前記保存剤が、フェノール、m-クレゾール、メチルp-ヒドロキシベンゾアート、プロピルp-ヒドロキシベンゾアート、2-フェノキシエタノール、ブチルp-ヒドロキシベンゾアート、2-フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、チオメロザールおよびこれらの混合物からなる群より選択される、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
前記インシュリン分泌性ペプチドの濃度が、約0.1 mg/ml〜約25 mg/ml、約1 mg/ml〜約25 mg/ml、約2mg/ml〜約15mg/ml、約3mg/ml〜約10mg/ml、または約3mg/ml〜約5mg/mlの範囲内にある請求項１〜３６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記インシュリン分泌性ペプチドが、エキセンジン-4またはZP-10、すなわち、
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-NH2である請求項１または２および４〜２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
前記インシュリン分泌性ペプチドが、アシル化エキセンジン-4またはアシル化エキセンジン-4類似体である、請求項１または２および４〜２２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
前記インシュリン分泌性ペプチドが、［N-イプシロン(17-カルボキシヘプタデカン酸)20エキセンジン-4(1-39)-アミド
【化１】
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またはN-イプシロン32-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)[Lys32]エキセンジン-4(1-39)アミド
【化２】
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である、請求項３９に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
前記薬学的組成物中の前記インシュリン分泌性ペプチドの濃度が、約5μg/mL〜約10mg/mL、約5μg/mL〜約5mg/mL、約5μg/mL〜約5mg/mL、約0.1mg/mL〜約3mg/mLまたは約0.2mg/mL〜約1mg/mLである、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記基礎インシュリンが、NPHヒトインシュリンである請求項１〜４１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
前記基礎インシュリンが、AspB28-ヒトインシュリンのプロタミン結晶である、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
前記基礎インシュリンが、GlyA21、ArgB31、ArgB32-ヒトインシュリンである請求項１〜４１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４５】
前記基礎インシュリンが、アシル化インシュリンである請求項１〜４１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
前記基礎インシュリンが、NεB29-テトラデカノイルdes(B30)ヒトインシュリンまたはNεB29-（Nα-（HOOC(CH2)14CO）-γ-Glu）desB30ヒトインシュリン、LysB29（Nεリトコリル-γ-Glu）-des(B30)ヒトインシュリンである、請求項４５に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
前記基礎インシュリンの濃度が、約1.6mg/mL〜約5.6mg/mL、または約2.6mg/mL〜約4.6mg/mL、または約3.2mg/mL〜約4.0mg/mLの範囲内にある請求項１〜４６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４８】
前記インシュリン分泌性ペプチドを溶解し、保存剤および張度修飾剤を混合し、かつ最後に溶解した基礎インシュリンを混合することを含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の薬学的組成物の調製のための方法。
【請求項４９】
前記基礎インシュリンを溶解または懸濁し、保存剤および張度修飾剤を混合し、かつ最後に溶解されたインシュリン分泌性ペプチドを混合することを含む請求項１〜４７のいずれか一項に記載の薬学的組成物の調製のための方法。
【請求項５０】
治療を必要とする哺乳動物に請求項１〜４７のいずれか一項に記載の有効量の薬学的組成物を非経口投与することを含む高血糖の治療のための方法。
【請求項５１】
治療を必要とする哺乳動物に請求項１〜４７のいずれか一項に記載の有効量の薬学的組成物を非経口投与することを含む肥満症、β細胞欠乏症、IGTまたは異脂肪血症の治療のための方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、薬学的処方の分野に関する。より具体的には、本発明はインシュリン分泌性ペプチドおよびインシュリンを含む貯蔵安定性の薬学的組成物に関する。
【発明の背景】
【０００２】
真性糖尿病は、グルコースを使用する能力が部分的または完全に失われる代謝性障害である。全人口の約５％が糖尿病を患い、この障害は流行的模様に示しつつある。1920年代のインシュリンの投与以来、真性糖尿病の治療を改善させるための継続的努力が続けられてきた。糖尿病を患う人は数十年にわたって常習的治療を受けるので、インシュリン処方を向上させる安全性、利便性および生活の質についての大きな要求がある。
【０００３】
真性糖尿病の治療において、インシュリン処方の多くの種類が提案され、使用されている。例えば、通常のインシュリン、イソフェンインシュリン（認定NPH）、インシュリン亜鉛懸濁液（例えばSemilente(登録商標)、Lente（登録商標）およびUltralente（登録商標））、および二相性イソフェンインシュリンなどが挙げられる。商業的に利用可能なインシュリン処方の一部は、作用の迅速な開始によって特徴づけられる。また、他の一部の処方は、比較的遅い開始を示すが、多少長い作用を示す。即効作用のあるインシュリン処方は、通常はインシュリンの溶液である。一方、遅延作用のあるインシュリン処方は、結晶状態のインシュリンを含む懸濁液および／または亜鉛塩のみの追加もしくはプロタミンの追加もしくはその両方の組合せによって沈殿するアモルファス形態とすることができる。
【０００４】
通常、インシュリン処方は、皮下注射によって投与される。患者にとって重要なことは、インシュリン処方の作用プロファイル、すなわち、注入からの時間の関数としてのインシュリンのグルコース代謝に対する作用である。このプロファイルにおいて、特に、開始、最大値、作用の全期間についての時間が重要である。異なる作用プロファイルを示す様々なインシュリン処方が患者によって求められている。
【０００５】
ヒトインシュリンは、それぞれ21および30アミノ酸残基を含む、いわゆるＡおよびＢ鎖の２本のポリペプチド鎖からなる。ＡおよびＢ鎖は２つのシステイン ジスルフィド架橋によって相互接続される。大部分の他の種由来のインシュリンは類似構造を有するが、同じ位置に同じアミノ酸残基を含んでいなくてもよい。最近１０年以内で、数多くのヒトインシュリン類似体が開発されてきた。それらは作用の特定のプロファイル、すなわち即効作用または遅延性作用について設計される。
【０００６】
糖尿病の治療において非常に重要になると考えられている他のペプチドは、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）である。ヒトGLP-1は、末端回腸、膵臓および脳内のＬ細胞において合成されるプレプログルカゴンを起源とする37アミノ酸残基のペプチドである。GLP-1は、グルコース代謝および胃腸分泌および代謝における調節機能を有する重要な腸ホルモンである。GLP-1は、グルコース依存性のやり方でインシュリン分泌を刺激し、インシュリン生合成を刺激し、β細胞の働きを促進し、グルカゴンの分泌を減少し、胃を空にすること、および食物の取り込みを減少させる。単純なシステムがペプチドの断片および類似体を表記するために使用されている。すなわち、例えばGly8-GLP-1（7-37）は、8位に天然に存在するアミノ酸残基(Ala)をGlyによって置換することによってGly-1(7-37)から形式的に誘導されたGly-1(7-37)の類似体を示す。同様に、Lys34（Nε-テトラデカノイル）-GLP-1（7-37）は、位置34のLys残基のε-アミノ基が、テトラデカノイル化されたGLP-1（7-37）を示す。PCT刊行物WO 98/08871およびWO 99/43706には、親油性置換基を有するGLP-1類似体の安定な誘導体が開示されている。これらのGLP-1類似体の安定な誘導体は、対応するGLP-1類似体と比較して遅延性の作用プロファイルを示す。GLP-1ペプチドとは別に、トカゲ ペプチドエキセンジン-4もまた強いインシュリン分泌性効果を示す。
【０００７】
２型糖尿病人口が急速に世界が増加してくるにつれて、より効果的かつより単純な投与に対する要求が非常に大きくなっている。GLP-1の効果は、患者に血中グルコースの非常に効果的かつ安全な低下を与えるものと考えられる。しかしながら、一部の患者は、食事後の血中グルコース値の正常化を補助するために薬としての基礎インシュリンから利益を受ける。基礎インシュリンおよびインシュリン分泌性ポリペプチドを含む組み合わせ処方は、非常に効果的な治療であり、患者のより少ない注入を可能にする。なぜなら、低投与量のインシュリンが注射で与えられ、該処方のGLP-1対応物が昼および夜の休息の間にグルコースを調節するからである。そしてGLP-1は低血糖症を導くことなく、非常に安全な治療が可能となる。
【０００８】
従って、一つの組み合わせ処方中においてインシュリン分泌性のペプチドおよび基礎インシュリンを含む貯蔵安定的な薬学的組成物に対する大きな要求が存在する。
【発明の説明】
【０００９】
以下は、本明細書で使用される用語の詳細な定義である。
【００１０】
本明細書で使用される「貯蔵安定的な薬学的組成物」という用語は、治療的タンパク質とともに調節媒体によって必要とされる、少なくともある期間の間安定である薬学的組成物を意味する。好ましくは、貯蔵安定的な薬学的組成物は、5℃にて少なくとも1年間安定である。安定性には、化学的安定性、並びに物理安定性を含む。
【００１１】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、治療なしと比較して、患者の治療が有効であるために十分な投薬量を意味する。
【００１２】
本明細書で使用される「医薬」という用語は、患者に対して薬学的に活性な化合物を投与するために適した薬学的組成物を意味する。
【００１３】
本明細書で使用される「薬学的組成物」という用語は、緩衝液、保存剤および張度修飾剤などの薬学的賦形剤とともに活性化合物またはこれらの塩を含む製品であって、ヒトに対する前記薬学的組成物の投与によって疾患もしくは障害の重症度を治療し、予防し、または減少させるために有用である前記薬学的組成物を意味する。したがって、薬学的組成物は、当該技術分野において薬学的処方としても知られる。再構成される薬学的組成物のpHは、処方された再構成液体に再構成することによって生じる再構成された組成物について室温で測定されるpH値であることが理解されるはずである。
【００１４】
本明細書で使用される「薬学的に許容可能な」という用語は、通常の薬学的適用のために適合されていること、すなわち患者において有害事象を生じさせないことなどを意味する。
【００１５】
本明細書で使用される「緩衝液」という用語は、それがなければ化学反応のために生じるであろう、時間とともに組成物のpHが変化する傾向を減少させる薬学的組成物中の化学物質をいう。緩衝液は、リン酸ナトリウム、TRIS、グリシンおよびクエン酸ナトリウムなどの化学物質を含む。
【００１６】
本明細書で使用される「保存剤」という用語は、微生物活動（増殖および代謝）を予防し、または遅延させるために薬学的組成物に添加される化学物質をいう。薬学的に許容される防腐剤の例には、フェノール、m-クレゾール、並びにフェノールおよびm-クレゾールの混合物がある。
【００１７】
使用される「等張薬／張度修飾剤」という用語は、浸透圧がヒト血漿のものに近くなるように、薬学的組成物の浸透圧を修正する役割を果たす薬学的組成物中の化学物質をいう。等張薬には、NaCl、グリセロール、マンニトールなどが含まれる。
【００１８】
本明細書で使用される「安定剤」という用語は、ペプチドを安定化するために、すなわちこのような組成物の貯蔵寿命および／または使用される期間を増大するために、ペプチド含有薬学的組成物に添加される化学物質をいう。薬学的処方に使用される安定剤の例には、L-グリシン、L-ヒスチジン、アルギニン、ポリエチレングリコールおよびカルボキシメチルセルロースがある。
【００１９】
本明細書で使用される「界面活性物質」という用語は、水溶性（親水性）部分の頭部と脂溶性（親油性）セグメントとで構成される任意の分子またはイオンをいう。界面活性物質は、好ましくは界面に蓄積し、親水性部分は、水（親水性相）の方へ向いており、親油性部分は、油相または疎水性相（すなわち、ガラス、空気、油など）の方へ向いている。界面活性物質がミセルを形成し始める濃度は、臨界ミセル濃度またはCMCとして知られる。さらにまた、界面活性物質は、液体の表面張力を下げる。界面活性物質は、両性化合物としても知られる。「洗浄剤」という用語は、一般の界面活性物質について使用される同義語である。
【００２０】
陰イオン性界面活性物質は、以下の群から選択してもよい：ケノデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸ナトリウム塩、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、デオキシコール酸メチルエステル、ジギトニン、ジギトキシゲニン、N,N-ジメチルドデシルアミン N-オキシド、ドクセートナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸水和物、グリコデオキシコール酸一水和物、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコリトコール酸3-硫酸二ナトリウム塩、グリコリトコール酸エチルエステル、N-ラウロイルザルコシンナトリウム塩、N-ラウロイルザルコシンナトリウム塩、N-ラウロイルザルコシン、N-ラウロイルザルコシン、リチウムドデシル硫酸、ルゴール、1-オクタンスルホン酸ナトリウム塩、1-オクタンスルホン酸ナトリウム塩、 1-ブタンスルホン酸ナトリウム、1-デカンスルホン酸ナトリウム、1-ドデカンスルホン酸ナトリウム、1-ヘプタンスルホン酸ナトリウム、1-ヘプタンスルホン酸ナトリウム、1-ノナンスルホン酸ナトリウム、1-プロパンスルホン酸ナトリウム一水和物、2-ブロモエタンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム水和物、雄ウシまたはヒツジ胆汁、コール酸ナトリウム水和物、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ヘキサスルホン酸ナトリウム、オクチル硫酸ナトリウム、ペンタスルホン酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム塩、タウロデオキシコール酸ナトリウム塩一水和物、タウロリトコール酸3-硫酸二ナトリウム塩、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム塩、Trizma（登録商標）ドデシル硫酸、DSS（ドキュセートナトリウム、CAS登録番号[577-11-7]）、ドキュセートカルシウム、CAS登録番号[128-49-4]）、ドキュセートカリウム、CAS登録番号[7491-09-0]）、SDS（ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム）、ドデシルホスホコリン（FOS-コリン-12）、デシルホスホコリン（FOS-コリン-10）、ノニルホスホコリン（FOS-コリン-9）、ジパルミトイルホスファチジン酸、カプリル酸ナトリウムおよび／またはウルソデオキシコール酸。
【００２１】
陽イオン性界面活性物質は、以下の群から選択してもよい：アルキルトリメチルアンモニウムブロミド、ベンザルコニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムクロライド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムクロライド、ベンジルトリメチルアンモニウムテトラクロロヨーデート、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、ドデシルエチルジメチルアンモニウムブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、エチルヘキサデシルジメチルアンモニウムブロミド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ポリオキシエチレン（10）-N-タロー-1,3-ジアミノプロパン、トンゾニウムブロミドおよび／またはトリメチル（テトラデシル）アンモニウムブロミド。
【００２２】
非イオン性界面活性物質は、以下の群から選択してもよい：BigCHAP、ビス（ポリエチレングリコールビス[イミダゾイルカルボニル]）、ポロキサマー、ポロキサマー188およびポロキサマー407などのポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドブロック共重合体としてのブロック共重合体、Brij（登録商標）35、Brij（登録商標）56、Brij（登録商標）72、Brij（登録商標）76、Brij（登録商標）92V、Brij（登録商標）97、Brij（登録商標）58P、Cremophor（登録商標）EL、デカエチレングリコールモノドデシルエーテル、N-デカノイル-N-メチルグルカミン、n-ドデカノイル-N-メチルグルカミド、アルキル-ポリグルコシド、エトキシル化されたヒマシ油、ヘプタエチレングリコールモノデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、Igepal CA-630、Igepal CA-630、メチル-6-O-（N-ヘプチルカルバモイル）-β-D-グルコピラノシド、ノナエチレングリコールモノドデシルエーテル、N-ノナノイル-N-メチルグルカミン、N-ノナノイル-N-メチルグルカミン、オクタエチレングリコールモノデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、オクチル-β-D-グルコピラノシド、ペンタエチレングリコールモノデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクチルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールエーテルW-1、ポリオキシエチレン10トリデシルエーテル、ポリオキシエチレン100ステアラート、ポリオキシエチレン20イソヘキサデシルエーテル、オレイルポリオキシエチレン20エーテル、ポリオキシエチレン40ステアラート、ポリオキシエチレン50ステアラート、ポリオキシエチレン8ステアラート、ポリオキシエチレンビス（イミダゾリルカルボニル）、ポリオキシエチレン25プロピレングリコールステアラート、キラヤ樹皮からのサポニン、Span（登録商標）20、Span（登録商標）40、Span（登録商標）60、Span（登録商標）65、Span（登録商標）80、Span（登録商標）85、Tergitol、Type 15-S-12、Tergitol、Type 15-S-30、Tergitol、Type 15-S-5、Tergitol、Type 15-S-7、Tergitol、Type 15-S-9、Tergitol、Type NP-10、Tergitol、Type NP-4、Tergitol、Type NP-40、Tergitol、Type NP-7、Tergitol、Type NP-9、テトラデシル-β-D-マルトシド、テトラエチレングリコールモノデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノドデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、トリエチレングリコールモノデシルエーテル、トリエチレングリコールモノドデシルエーテル、トリエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、トリエチレングリコールモノオクチルエーテル、トリエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、Triton CF-21、Triton CF-32、Triton DF-12、Triton DF-16、Triton GR-5M、Triton QS-15、Triton QS-44、Triton X-100、Triton X-102、Triton X-15、Triton X-151、Triton X-200、Triton X-207、Triton（登録商標）X-100、Triton（登録商標）X-114、Triton（登録商標）X-165溶液、Triton（登録商標）X-305溶液、Triton（登録商標）X-405、Triton（登録商標）X-45、Triton（登録商標）X-705-70、TWEEN（登録商標）20、TWEEN（登録商標）40、TWEEN（登録商標）60、TWEEN（登録商標）6、TWEEN（登録商標）65、TWEEN（登録商標）80、TWEEN（登録商標）81、TWEEN（登録商標）85、チロキサポール（Tyloxapol）、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）およびスフィンゴ糖脂質（セラミド、ガングリオシド）、リン脂質および／またはn-ウンデシルβ-D-グルコピラノシド。
【００２３】
双性イオン性界面活性物質は、以下の群から選択してもよい：CHAPS、CHAPSO、3-（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、3-（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、3-（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、3-（N,N-ジメチルミリスチルアンモニオ）プロパンスルホナート、3-（N,N-ジメチルオクタデシルアンモニオ）プロパンスルホナート、3-（N,N-ジメチルオクチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、3-（N,N-ジメチルパルミチルアンモニオ）プロパンスルホナート、N-アルキル-N,N-ジメチルアンモニオ-1-プロパンスルホナート、3-コラミド-1-プロピルジメチルアンモニオ-1-プロパンスルホナート、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリゾホスファチジルコリン、Zwittergent 3-12（N-ドデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホナート）、Zwittergent 3-10（3-（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩）、Zwittergent 3-08（3-（オクチルジメチルアンモニオ）プロパンスルホナート、グリセロリン脂質（レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン）、グリセロ糖脂質（ガラクトピラノシド）、アルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、アルコキシ（アルキルエーテル）-リゾホスファチジルおよびホスファチジルコリンの誘導体、たとえばリゾホスファチジルコリンのラウロイルおよびミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、並びに極性頭基の修飾、すなわちコリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール、リゾホスファチジルセリンおよびリゾホスファチジルスレオニン、アシルカルニチンおよび誘導体、リジン、アルギニンもしくはヒスチジンのNβ-アシル化誘導体またはリジンもしくはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニンもしくはヒスチジンと中性もしくは酸性アミノ酸のいずれかの組み合わせを含むジペプチドのNβ-アシル化誘導体、中性アミノ酸と2つの荷電アミノ酸のいずれかの組み合わせを含むトリペプチドのNβ-アシル化誘導体。また、界面活性物質は、イミダゾリン誘導体、長鎖脂肪酸およびこれらの塩C6-C12（たとえば、オレイン酸およびカプリル酸）、N-ヘキサデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホナート、陰イオン性（アルキル-アリール-スルホナート）一価の界面活性物質、パルミトイルリゾホスファチジル-L-セリン、リゾリン脂質（たとえば、エタノールアミン、コリン、セリンまたはスレオニンの1-アシル-sn-グリセロ-3-リン酸エステル）またはこれらの混合物の群から選択されてもよい。
【００２４】
本明細書で使用される「アルキル-ポリグルコシド」という用語は、直鎖状または分枝のC5-20-アルキル、-アルケニル、またはマルトシド、サッカライドその他などの一もしくは複数のグルコシド部分によって置換された-アルキニル鎖に関する。これらのアルキル-ポリグルコシドの態様には、C6-18-アルキル-ポリグルコシドを含む。これらのアルキル-ポリグルコシドの具体的態様には、C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18およびC20アルキル鎖などの偶数番号をつけた炭素鎖を含む。グルコシド部分の具体的態様には、ピラノシド、グルコピラノシド、マルトシド、マルトトリオシドおよびスクロースを含む。本発明の態様において、6未満のグルコシド部分がアルキル基に付着される。本発明の態様において、5未満のグルコシド部分がアルキル基に付着される。本発明の態様において、4未満のグルコシド部分がアルキル基に付着される。本発明の態様において、3未満のグルコシド部分がアルキル基に付着される。本発明の態様において、2未満のグルコシド部分がアルキル基に付着される。アルキル-ポリグルコシドの具体的態様は、n-デシルβ-D-グルコピラノシド、デシルβ-D-マルトピラノシド、ドデシルβ-D-グルコピラノシド、n-ドデシルβ-D-マルトシド、n-ドデシルβ-D-マルトシド、n-ドデシルβ-D-マルトシド、テトラデシルβ-D-グルコピラノシド、デシルβ-D-マルトシド、ヘキサデシルβ-D-マルトシド、デシルβ-D-マルトトリオシド、ドデシルβ-D-マルトトリオシド、テトラデシルβ-D-マルトトリオシド、ヘキサデシルβ-D-マルトトリオシド、n-ドデシル-スクロース、n-デシル-スクロース、スクロースモノカプラート、スクロースモノラウレート、スクロースモノミリステートおよびスクロースモノパルミタートのようなアルキルグルコシドである。
【００２５】
本明細書で使用される「疾患の治療」という用語は、疾患、状態または障害を発病した患者の管理および看護を意味する。治療の目的は、疾患、状態または障害と戦うことである。治療には、疾患、状態もしくは障害を除去し、または制御するために、並びに疾患、状態もしくは障害と関連した症候または合併症を軽減するために活性化合物を投与することを含む。
【００２６】
本明細書で使用される「疾患の予防」という用語は、疾患が臨床的に発症する前に、疾患を発病するリスクのある個体を管理および看護することとして定義される。予防の目的は、疾患、状態または障害の発症と戦うことであり、症候もしくは合併症の発症を防止し、または遅延させるために、および関連した疾患、状態または障害の発症を防止し、または遅延させるために活性化合物を投与することを含む。
【００２７】
本明細書で使用される「インシュリンペプチド」という用語は、ヒトインシュリンまたは化学的に修飾されたヒトインシュリン、例えばこれらの類似体または誘導体であるペプチドを意味する。
【００２８】
本明細書で使用される「ヒトインシュリン」という用語は、その構造および性質が周知であるヒトホルモンを意味する。ヒトインシュリンは、システイン残基間、すなわちＡ鎖とＢ鎖の間のジスルフィド架橋によって結び付けられた二本のポリペプチド鎖を有する。Ａ鎖は21アミノ酸ペプチドであり、Ｂ鎖は30アミノ酸ペプチドであり、二本の鎖が三つのジスルフィド結合架橋によって結び付けられている：第一の結合はＡ鎖の６位および11位のシステイン間で形成され、第二の結合はＡ鎖の７位のシステインとＢ鎖の７位のシステインとの間に形成され、第三の結合はＡ鎖の20位のシステインとＢ鎖の19位のシステインとの間に形成される。
【００２９】
本明細書で使用される「食事関連インシュリンペプチド」という用語は、糖尿病の標準的モデルにおいて８時間未満の時間作用を示すインシュリンペプチドを意味する。好ましくは、食事関連ヒトインシュリンは、約５時間未満の時間作用を有する。好ましくは、食事関連インシュリンは、０時間〜約４時間の時間作用を示す。好ましくは、食事関連インシュリンは、Actrapid(登録商標)、Novolog(登録商標)、およびHumalog(登録商標)の商業的な薬学的組成物に観察されるのと同様の時間作用を示す。インシュリンの時間作用に関係した用語「約」は、＋または−30分を意味する。
【００３０】
本明細書で使用される「類似体」という用語は、ペプチドに関して、ペプチドの一もしくは複数のアミノ酸残基がその他のアミノ酸残基によって置換されており、および／または一もしくは複数のアミノ酸残基がペプチドから欠失されており、および／または一もしくは複数のアミノ酸残基がペプチドから欠失されており、および／または一もしくは複数のアミノ酸残基がペプチドに付加されている、修飾されたペプチドを意味する。このようなアミノ酸残基の付加または欠失は、ペプチドのN末端にて、および／またはペプチドのC末端にて生じ得る。一つの態様において、類似体は、天然のペプチドと比較して6つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。他の態様において、類似体は、天然のペプチドと比較して5つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。他の態様において、類似体は、天然のペプチドと比較して4つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。他の態様において、類似体は、天然のペプチドと比較して3つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。他の態様において、類似体は、天然のペプチドと比較して2つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。他の態様において、類似体は、天然のペプチドと比較して単一の修飾（置換、欠失、付加）のみを含む。
【００３１】
本明細書で使用される「誘導体」という用語は、親ペプチドに関して、化学的に修飾された親タンパク質またはこれらの類似体であって、少なくとも1つの置換基が親タンパク質またはこれらの類似体に存在しないもの、すなわち、共有結合性に修飾された親タンパク質を意味する。典型的な修飾は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル、PEG化などである。ヒトインシュリンの誘導体の例には、スレオニンメチルエステルB30ヒトインシュリンおよびNεB29-テトラデカノイルdes(B30)ヒトインシュリンがある。
【００３２】
本明細書で使用される「基礎インシュリン」という用語は、糖尿病の標準的モデルにおいて８時間未満の時間作用を示すインシュリンペプチドを意味する。好ましくは、基礎インシュリンは少なくとも９時間の時間作用を示す。好ましくは、基礎インシュリンは少なくとも10時間の時間作用を示す。好ましくは、基礎 食事関連インシュリンは９〜15時間の時間作用を示す。好ましくは、食事関連インシュリンは、NPHインシュリンおよびNεB29-テトラデカノイルデス(B30)ヒトインシュリンの商業的な薬学的組成物について観察されたものと同様の時間作用を示す。
【００３３】
本明細書で使用される「GLP-1化合物」という用語は、GLP-1（7-37）（配列番号1）、これらのインシュリン分泌性類似体およびこれらのインシュリン分泌性誘導体を意味する。GLP-1類似体の非限定的な例には、GLP-1（7-36）アミド、Arg34-GLP-1（7-37）、Gly8-GLP-1（7-37）、Val8-GLP-1（7-36）-アミドおよびVal8Asp22-GLP-1（7-37）がある。GLP-1誘導体の非限定的例には、デスアミノ-His7、Arg26、Lys34（Nε-（γ-Glu（Nα-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）、デスアミノ-His7、Arg26、 Lys34（Nε-オクタノイル）-GLP-1（7-37）、Arg26,34、Lys38（Nε-（ω-カルボキシペンタデカノイル））-GLP-1（7-38）Arg26,34、Lys36（Nε-（γ-Glu（Nα-（N-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-36）およびArg34、Lys26（Nε-（γ-Glu（Nα-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）がある。
【００３４】
インシュリン分泌性ペプチドに関して本明細書で使用される「保護されたジペプチジルアミノペプチダーゼIV」という用語は、天然のインシュリン分泌性ペプチドと比較して、血漿ペプチダーゼであるジペプチジルアミノペプチダーゼIV（DPP-IV）に対してより強い耐性を示すインシュリン分泌性ペプチドを意味する。ジペプチジルアミノペプチダーゼIVによる分解に対するインシュリン分泌性ペプチドの耐性は、以下の分解アッセイ法によって決定される。
【００３５】
インシュリン分泌性ペプチド（5nmol）のアリコートを37℃にて5mUの酵素活性に対応する精製された1μLのジペプチジルアミノペプチダーゼIVと共に100μLの0.1M トリエチルアミン-HCl緩衝液（pH 7.4）中で10〜180分間インキュベートする。5μLの10%のトリフルオロ酢酸を添加することによって酵素反応を終結させ、ペプチド分解生成物を分離し、HPLC解析を使用して定量化する。この解析を行うための1つの方法は、以下のとおりである。Siegel et al., Regul. Pept. 1999；79：93-102およびMentlein et al. Eur. J. Biochem. 1993；214：829-35に従って、混合物をVydac C18 widepore（30nm孔、5μm粒子）250×4.6mmに充填し、アセトニトリルの 0.1%トリフルオロ酢酸溶液（0%のアセトニトリル3分間、0〜24%のアセトニトリル17分間、24〜48%のアセトニトリル1分間）の直線段階勾配で1ml/分の流速で溶出する。ペプチドおよびこれらの分解生成物は、220nm（ペプチド結合）または280nm（芳香族アミノ酸）におけるこれらの吸光度によってモニターしても、また標準のものと比較したこれらのピーク面積の積分によって定量化してもよい。ジペプチジルアミノペプチダーゼIVによるインシュリン分泌性ペプチドの加水分解の割合は、加水分解されたGLP-1化合物が10%未満となるインキュベーション時間において推定する。
【００３６】
ペプチドに関して本明細書で使用される「インシュリン分泌性」という用語は、血漿グルコースレベルの増大に応答してインシュリンの分泌を刺激する能力を意味する。インシュリン分泌性ペプチドおよび化合物は、GLP-1受容体のアゴニストである。化合物のインシュリン分泌特性は、当技術分野において既知のインビトロでまたはインビボでのアッセイ法によって決定してもよい。ペプチドなどの化合物のインシュリン分泌特性を決定するためには、以下のインビトロでのアッセイ法を使用してもよい。好ましくは、インシュリン分泌性化合物は、アッセイ法の下で5nM未満のEC50値、さらにより好ましくは500pM未満のEC50値を示す。
【００３７】
クローン化されたヒトGLP-1受容体を発現するベビーハムスター腎臓（BHK）細胞（BHK 467-12A）を100IU/mL ペニシリン、100μL/mL ストレプトマイシン、10%ウシ胎仔血清および1mg／mLジェネテシンG-418（Life Technologies）を添加したDMEM培地中で培養する。原形質膜は、緩衝液（10mM Tris-HCl、30mM NaClおよび1mMジチオスレイトール（pH 7.4）、加えて5mg/mL ロイペプチン（Sigma）、5mg/L ペプスタチン（Sigma）、100mg/L バシトラシン（Sigma）および16mg/L アプロチニン（Calbiochem-Novabiochem, La Jolla, CA）を含む）中でのホモジナイゼーションによって製造する。ホモジネートを41% W7vスクロースの層の上部にて遠心した。2つの層間の白いバンドを緩衝液中に希釈して、遠心した。原形質膜は、使用するまで-80℃にて貯蔵した。
【００３８】
機能的受容体アッセイ法は、インシュリン分泌性ペプチドまたはインシュリン分泌性化合物による刺激に対する応答としてcAMPを測定することによって行う。96ウェルマイクロタイタープレートにおいて、140mLの総容積で、および以下の終濃度でインキュベーションを行う：50mM Tris-HCl、1mM EGTA、1.5mM MgSO4、1.7mM ATP、20mM GTP、2mM 3-イソブチル-1-メチルキサンチン（IBMX）、0.01% w/v トゥイーン-20、pH 7.4。化合物を溶解し、緩衝液中に希釈する。GTPは、それぞれの実験のために新たに製造する：2.5μg の膜をそれぞれのウェルに添加し、混合物を振盪しながら暗がりで室温にて90分間インキュベートする。反応は、25mLの0.5M HClを添加することによって停止させる。形成されたcAMPは、シンチレーション近接アッセイ法（RPA 542, Amersham, UK）によって測定する。用量反応曲線を化合物に対してプロットし、EC50値をGraphPad Prismソフトウェアを使用して算出する。
【００３９】
薬学的組成物におけるペプチドの濃度に関して本明細書で使用される「約」という用語は、プラスまたはマイナス10％を意味する。従って、濃度「約５mg/mLインシュリン」は、4.5mg/mLインシュリン〜5.5mg/mLインシュリンの濃度を意味する。pHに関して本明細書で使用される「約」という用語は、プラスまたはマイナス0.1pH単位を意味する。従って、用語「約pH 8.0」は7.9〜8.1のpHを意味する。
【００４０】
本発明の実施態様には、インシュリン分泌性ペプチド、基礎インシュリン、薬学的に許容可能な保存剤、双性イオン界面活性剤、ポロキサマーまたはポリソルベート20界面活性剤を、約10mg/L〜約500mg/Lの濃度で含み、かつ任意的には薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む貯蔵安定的な薬学的組成物であって、該組成物が約7.0〜約8.5の範囲のpHを示す組成物が含まれる。
【００４１】
本発明の実施態様には、インシュリン分泌性ペプチド、基礎インシュリン、薬学的に許容可能な保存剤、ポロキサマーまたはポリソルベート20界面活性剤を、約10mg/L〜約500mg/Lの濃度で含み、かつ任意的には薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む貯蔵安定的な薬学的組成物であって、該組成物が約7.0〜約8.5の範囲のpHを示す組成物が含まれる。
【００４２】
本発明の実施態様には、インシュリン分泌性GLP-1類似体、アシル化GLP-1またはアシル化GLP-1類似体および基礎インシュリン、薬学的に許容可能な保存剤、非イオン性界面活性剤を、約10mg/L〜約500mg/Lの濃度で含み、かつ任意的には薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む貯蔵安定的な薬学的組成物であって、該組成物が約7.0〜約8.5の範囲のpHを示す組成物が含まれる。
【００４３】
本発明の実施態様には、インシュリン分泌性ペプチド、インシュリンペプチド、アルキルポリグルコシド、および任意的には薬学的に許容可能な張度修飾剤を含む組成物が含まれる。
【００４４】
本発明の実施態様には、上述の実施態様による組成物であって、前記インシュリンペプチドが基礎インシュリンである組成物が含まれる。
【００４５】
本発明の実施態様には、上述の実施態様による組成物であって、前記インシュリンペプチドが食事関連インシュリンペプチドである組成物が含まれる。
【００４６】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる組成物であって、前記アルキルポリグルコシドが約10mg/Lからの濃度で存在する組成物が含まれる。
【００４７】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる組成物であって、前記アルキルポリグルコシドが約1000mg/Lからの濃度で存在する組成物が含まれる。
【００４８】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる組成物であって、前記アルキルポリグルコシドが約10mg/L〜約15000mg/Lの濃度で存在する組成物が含まれる。
【００４９】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる組成物であって、前記アルキルポリグルコシドが約1000mg/L〜約10000mg/Lの濃度で存在する組成物が含まれる。
【００５０】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる組成物であって、前記アルキルポリグルコシドが約2000mg/L〜約5000mg/Lの濃度で存在する組成物が含まれる。
【００５１】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる組成物であって、前記アルキルポリグルコシドがC10-20-アルキル-ポリグルコシドである組成物が含まれる。
【００５２】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる組成物が含まれる。アルキル-ポリグルコシドは、ドデシルβ-D-グルコピラノシド、ドデシルβ-D-マルトシド、テトラデシルβ-D-グルコピラノシド、デシルβ-D-マルトシド、ドデシルβ-D-マルトシド、テトラデシルβ-D-マルトシド、ヘキサデシルβ-D-マルトシド、デシルβ-D-マルトトリオシド、ドデシルβ-D-マルトトリオシド、テトラデシルβ-D-マルトトリオシド、ヘキサデシルβ-D-マルトトリオシド、n-ドデシル-スクロース、n-デシル-スクロースから選択される。
【００５３】
本発明の実施態様には、上述の実施態様による薬学的組成物であって、界面活性剤の濃度が約20mg/L〜約400mg/Lである組成物が含まれる。
【００５４】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、界面活性剤の濃度が約20mg/L〜約300mg/Lである組成物が含まれる。
【００５５】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、界面活性剤の濃度が約50mg/L〜約200mg/Lである組成物が含まれる。
【００５６】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、界面活性剤がポロキサマー188である組成物が含まれる。
【００５７】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、界面活性剤が、ポロキサマー407、ポロキサマー124、ポロキサマー181、ポロキサマー182、ポロキサマー237、ポロキサマー331およびポロキサマー338からなる群より選択される組成物が含まれる。
【００５８】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、界面活性剤がポリソルベート20である組成物が含まれる。
【００５９】
本発明の実施態様には、上述の実施態様による組成物であって、前記組成物が約7.0〜約8.5の範囲のpHを示す組成物が含まれる。
【００６０】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドがDPP-IV保護ペプチドである組成物が含まれる。
【００６１】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドが、nが4〜38であるCH3（CH2）nCO-およびmが4〜38であるHOOC（CH2）mCO-からなる群より選択される新油性置換基を含む組成物が含まれる。
【００６２】
本発明の実施態様には、上述の実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドがGLP-1化合物の類似体、アシル化GLP-1またはアシル化GLP-1類似体である組成物が含まれる。
【００６３】
本発明の実施態様には、上述した実施態様による薬学的組成物であって、前記GLP-1類似体が、Arg34-GLP-1（7-37）、Gly8-GLP-1（7-36）-アミド、Gly8-GLP-1（7-37）、Val8-GLP-1（7-36）-アミド、Val8-GLP-1（7-37）、Aib8-GLP-1（7-36）-アミド、Aib8-GLP-1（7-37）、Val8Asp22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8Asp22-GLP-1（7-37）、Val8Glu22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Lys22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8Lys22-GLP-1（7-37）、Val8Arg22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8Arg22-GLP-1（7-37）、Val8His22-GLP-1（7-36）-アミド、Val8His22-GLP-1（7-37）、Val8Trp19Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Glu22Val25-GLP-1（7-37）、Val8Tyr16Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Leu16Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Tyr18Glu22-GLP-1（7-37）、Val8Glu22His37-GLP-1（7-37）、Val8Glu22Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22Val25Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Glu22Val25Ile33-GLP-1（7-37）、Val8Trp16Glu22Val25-GLP-1（7-37）およびこれらの類似体からなる群より選択される組成物が含まれる。
【００６４】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドが、Arg34、Lys26（Nε-（γ-Glu（Nα-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）である組成物が含まれる。
【００６５】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、さらに追加の界面活性剤を含む組成物が含まれる。
【００６６】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、少なくとも一つの界面活性剤が非イオン性界面活性剤である組成物が含まれる。
【００６７】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、二つの異なる界面活性剤が非イオン性界面活性剤である組成物が含まれる。
【００６８】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記全ての界面活性剤が非イオン性界面活性剤である組成物が含まれる。
【００６９】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、ポロキサマー188およびポリソルベート20またはトゥイーン80を含む組成物が含まれる。
【００７０】
本発明の実施態様には、先の実施態様によるいずれか一つによる薬学的組成物であって、pHが約7.4〜約8.0の範囲にある組成物が含まれる。
【００７１】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、リン酸塩緩衝液である緩衝液を含む組成物が含まれる。
【００７２】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、双性イオン緩衝液である緩衝液を含む組成物が含まれる。
【００７３】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記緩衝液が、グリシル-グリシン、TRIS、ビシン、HEPES、MOBS、MOPS、TESおよびこれらの混合物からなる群より選択される組成物が含まれる。
【００７４】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記張度修飾剤が、グリセロール、プロピレングリコールおよびマンニトールからなる群より選択される組成物が含まれる。
【００７５】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記保存剤が、フェノール、m-クレゾール、メチルp-ヒドロキシベンゾアート、プロピルp-ヒドロキシベンゾアート、2-フェノキシエタノール、ブチルp-ヒドロキシベンゾアート、2-フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、チオメロザールおよびこれらの混合物からなる群より選択される組成物が含まれる。
【００７６】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドの濃度が、約0.1mg/ml〜約25mg/mlの範囲に、約1mg/ml〜約25mg/mlの範囲に、約2mg/ml〜約15mg/mlの範囲に、約3mg/ml〜約10mg/mlの範囲に、または約3mg/ml〜約5mg/mlの範囲にある組成物が含まれる。
【００７７】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドが、エキセンジン-4またはZP-10、すなわちHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-NH2である組成物が含まれる。
【００７８】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドがアシル化エキセンジン-4またはアシル化エキセンジン-4類似体である組成物が含まれる。
【００７９】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記インシュリン分泌性ペプチドが、［N-イプシロン(17-カルボキシヘプタデカン酸)20エキセンジン-4(1-39)-アミド
【化１】
2008519807.tif 000003
【００８０】
またはN-イプシロン32-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)［Lys32］エキセンジン-4(1-39)アミド
【化２】
2008519807.tif 000004
【００８１】
である組成物が含まれる。
【００８２】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、薬学的組成物中の前記インシュリン分泌性ペプチドの濃度が、約5μg/mL〜約10mg/mL、約5μg/mL〜約5mg/mL、約5μg/mL〜約5mg/mL、約0.1mg/mL〜約3mg/mLまたは約0.2mg/mL〜約1mg/mLである組成物が含まれる。
【００８３】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記基礎インシュリンがNPHヒトインシュリンである組成物が含まれる。
【００８４】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記基礎インシュリンがAspB28-ヒトインシュリンのプロタミン結晶である組成物が含まれる。
【００８５】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記基礎インシュリンが、GlyA21、ArgB31、ArgB32-ヒトインシュリンである組成物が含まれる。
【００８６】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記基礎インシュリンが、アシル化インシュリンである組成物が含まれる。
【００８７】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記基礎インシュリンが、NεB29-テトラデカノイルdes(B30)ヒトインシュリンまたはNεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-γ-Glu)desB30ヒトインシュリン、LysB29（Nεリトコリル-γ-Glu）-des(B30)ヒトインシュリンである組成物が含まれる。
【００８８】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物であって、前記基礎インシュリンの濃度が、約1.6 mg/mL〜約5.6 mg/mL、または約2.6 mg/mL〜約4.6 mg/mL、または約3.2 mg/mL〜約4.0 mg/mLの範囲内にある組成物が含まれる。
【００８９】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物の調製のための方法であって、前記インシュリン分泌性ペプチドを溶解し、保存剤および張度修飾剤を混合し、かつ最後に溶解した基礎インシュリンを混合することを含む方法が含まれる。
【００９０】
本発明の実施態様には、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物の調製のための方法であって、前記基礎インシュリンを溶解または懸濁し、保存剤および張度修飾剤を混合し、最後に溶解されたインシュリン分泌性ペプチドを混合することを含む方法が含まれる。
【００９１】
本発明の実施態様には、治療を必要とする哺乳動物に対して、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物の有効量の非経口的投与を含む、高血糖の治療のための方法が含まれる。
【００９２】
本発明の実施態様には、治療を必要とする哺乳動物に対して、上述した実施態様のいずれか一つによる薬学的組成物の有効量の非経口的投与を含む、肥満症、β細胞欠乏症、IGTまたは異脂肪血症の治療のための方法が含まれる。
【００９３】
薬学的組成物中の賦形剤、例えば保存剤、等張剤および界面活性剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、参照文献には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995がある。
【００９４】
親グルカゴン様ペプチドは、ペプチド合成、例えばt-BocまたはF-Moc化学を使用する固相ペプチド合成または他の十分に確立された技術によって生成することができる。親グルカゴン様ペプチドはまた、ポリペプチドをコードするDNA配列および適切な栄養培地中適切な条件下でペプチドの発現を可能にする宿主細胞を培養することを含む方法によって生成され得る。得られたペプチドは培養液から回収することができる。
【００９５】
細胞を培養するために使用される培養液は、宿主細胞を増殖させるに適した任意の従来培養液、例えば最小培地または適切な補充物質を含む複合培地とすることができる。適切な培地は、商業的供給業者から入手可能であり、公開された調製法により調製してもよい（例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクションのカタログ）。細胞によって生成されたペプチドは、遠心またはろ過によって培地から宿主細胞を分離し、塩（例えば硫酸アンモニウム）によって上清またはろ液のタンパク質様成分を沈殿させ、様々なクロマトグラフィー手順、例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィニィティークロマトグラフィー、またはこれらに類似する手法（対象となるペプチドの種類に応じて選択）によって精製を行うことを含む従来手順によって細胞培養液から回収することができる。
【００９６】
親ペプチドをコードするDNA配列は、適切にはゲノムまたはcDNA起源とすることができ、例えば、ゲノムまたはcDNAライブラリを調製し、かつ合成オリゴヌクレオチドプローブを使用してハイブリダイゼーションによってペプチドの全てまたは一部をコードするDNA配列をスクリーニングすることによって得られる。当該手法は標準的技術に応じて行うことができる（例えば、Sambrook, J, Fritsch, EF and Maniatis, T, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989を参照)。ペプチドをコードするDNA配列はまた、確立された標準的な方法、例えばBeaucage and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869によって記載されたホスホアミダイト方法、またはMatthes et al., EMBO Journal 3 (1984), 801-805によって記載された方法によって合成的に調製することもできる。DNA配列はまた、特定のプライマーを使用してポリメラーゼ連鎖反応法によって調製してもよい（例えば、US 4,683,202またはSaiki et al., Science 239 (1988), 487-491に記載）。
【００９７】
DNA配列は、組換えDNA手順を適宜受けた任意のベクターに挿入することができる。ベクターの選択は導入される宿主細胞にしばしば依存するであろう。ベクターは、自律的に複製するベクターであってもよく、例えばプラスミドのように、染色体外の構造体として存在し、その複製は染色体の複製から独立している。代わりに、ベクターは、宿主細胞に導入されたときに、宿主細胞ゲノム内に統合され、統合された染色体とともに複製されるものであってもよい。
【００９８】
ベクターは、好ましくはペプチドをコードするDNA配列が、DNAの転写に必要とされる追加の断片（例えばプロモーター）に作動可能に連結される発現ベクターである。プロモーターは、選択した宿主細胞において転写活性を示す任意のDNA配列であり、宿主細胞と同種または異種のタンパク質をコードする遺伝子から誘導される。種々の宿主細胞において本発明のペプチドをコードするDNAの転写を方向づけるための適切なプロモーターの例は、当該技術分野において周知であり、例えばSambrook et al., supra.に記載されている。
【００９９】
ペプチドをコードするDNA配列はまた、必要に応じて、適切なターミネーター、ポリアデニル化シグナル、転写増強配列、および翻訳増強配列と作動可能に連結されてもよい。本発明の組換えベクターはさらに、対象の宿主細胞においてベクターを複製できるDNA配列を含んでもよい。
【０１００】
ベクターはまた、選択可能なマーカー、例えば宿主細胞における欠損を補う遺伝子の産物または薬剤耐性を与えるもの、例えば、アンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートを含んでもよい。
【０１０１】
本発明の親ペプチドを宿主細胞の分泌経路に方向づけるために、分泌シグナル配列（リーダー配列、プレプロ配列またはプレ配列として知られている）が、組換えベクター内に提供されてもよい。分泌シグナル配列は、正しい読み取り枠内のペプチドをコードするDNA配列に連結される。分泌シグナル配列は、共通してペプチドをコードするDNA配列の5’位にある。分泌シグナル配列は、ペプチドに普通に付随するものであるかまたは他の分泌タンパク質をコードする遺伝子に由来するものであってもよい。
【０１０２】
本発明のペプチドをコードするDNA配列、プロモーターおよび任意的にはターミネーターおよび／または分泌シグナル配列をそれぞれ結合させるために使用される手順、ならびに複製に必要な情報を含む適切なベクター内にこれらを挿入するために使用される手順は、当業者にとって周知である（例えば、Sambrook et al.., supraを参照されたい）。
【０１０３】
DNA配列または組換えベクターが導入される宿主細胞は、本発明のペプチドを産生できる任意の細胞であり、細菌、酵母、真菌および高等真核生物細胞を含む。周知かつ当該技術分野において使用される適切な宿主細胞の例は、これらに限定されないが、大腸菌（E. coli, Saccharomyces cerevisiae）または哺乳動物BHKまたはCHO細胞株である。
【０１０４】
本発明は、さらに以下の例によって例証されるが、これらの例は本発明の保護の範囲を制限するものではない。前述の記述において開示された特徴および以下の例において開示された特徴は、ともに独立してあるいは任意の組み合わせによって、本発明を多様な形態において現実のものとする材料になり得る。
【例】
【０１０５】
以下の例は、本発明に従って産生された薬学的組成物を例証する。
【０１０６】
デテミル（detemir）は、構造体：NεB29-テトラデカノイルdes(B30)ヒトインシュリンを有する基礎インシュリンを指定する。
【０１０７】
リラグルチド（liraglutide）は、構造体：Arg26、Lys34（Nε-（γ-Glu（Nα-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）を有するインシュリン分泌性ペプチドを指定する。
【０１０８】
チオフラビンT（ThT）線維形成試験：
原理
ペプチドの物理的安定性が低いことにより、アミロイド線維形成を生じる可能性があり、これが試料における秩序立った糸様巨大分子構造として観察され、最終的にゲル形成を生じる。これは、伝統的に試料の目視検査によって測定されてきた。しかし、そういう測定では、非常に主観的で、かつ観察者に依存することとなる。したがって、小分子指標プローブの適用がより有利である。チオフラビンT（ThT）は、このようなプローブであり、原線維に結合しているときに、異なる蛍光サインを有する[Naiki et al. (1989) Anal. Biochem. 177, 244-249； LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274-284]。
【０１０９】
原線維形成に関する時間経過は、以下の式でS字曲線によって記述することができる[Nielsen et al. (2001) Biochemistry 40, 6036-6046]：
【化３】
2008519807.tif 000005
【０１１０】
式中、Fは、時間tのThT蛍光である。定数t0は、最大蛍光の50%に達するために必要な時間である。原線維形成を記述する2つの重要なパラメーターは、t0-2τ によって算出される遅延時間および見かけの速度定数kapp=1/τである。
【０１１１】
線維形成のための一般的開始メカニズムとして、ペプチドの部分的に折り畳まれた中間体の形成が示唆されている。これらの中間体の少数が核形成して鋳型を形成し、その上にさらなる中間体を構築して線維形成が進行する。遅延時間は、核の臨界質量が増大し、かつ見かけの速度定数が原線維自体が形成される速度である期間に対応する。
【０１１２】
試料調製
試料は、それぞれのアッセイの前に新たに調製した。それぞれの試料組成は、レジェンドに記述してある。試料のpHは、適切な量の濃NaOHおよびHClO4を使用して目標値に合わせた。チオフラビンTを保存液のH2O溶液から試料に添加して1μMの終濃度にした。
【０１１３】
200μlの試料アリコートを96ウェルマイクロタイタープレートに配置した（Packard OptiPlate（商標）96、白いポリスチレン）。通常、それぞれの試料の8個の複製（1つの試験条件に対応する）をウェルの1つのカラムに配置した。プレートをScotch Pad（Qiagen）で封着した。
【０１１４】
インキュベーションおよび蛍光測定
所与の温度でのインキュベーション、振盪およびThT蛍光発光の測定は、Fluoroskan Ascent FLまたはVarioskan fluorescence platereader (Thermo Labsystems)のいずれかにおいて行った。温度は、37℃に合わせた。軌道回転振盪は、全ての提示されたデータにおいて、1mmの振幅で960rpmに合わせた。蛍光測定は、444nmフィルターを通した励起および485nmフィルターを通した発光の測定を使用して行った。
【０１１５】
それぞれの工程は、プレートをアッセイ温度にて10分間インキュベートすることによって開始した。プレートは、20分ごとに、典型的には45時間測定した。それぞれの測定の間に、プレートを記述したとおりに振盪し、加熱した。
【０１１６】
データ処理
測定位置は、さらに加工するためにMicrosoft Excel形式で保存して、曲線を描き、GraphPad Prismを使用してフィッティングを行った。原線維の非存在下におけるThTからのバックグラウンド発光は、ごくわずかであった。データポイントは、典型的には8つの試料の平均値であり、標準偏差エラーバーと共に示してある。同じ実験において得られたデータ（すなわち、同じプレート上の試料）だけを同じグラフに示し、異なるアッセイ間の比較ではなく、1回のアッセイ法の個々の試料間の線維形成の相対的測定を確実にしている。
【０１１７】
データセットは、Eq.(1）にフィットさせてもよい。しかし、この場合の完全なS字曲線は、通常測定時間の間に成し遂げられることはないので、線維形成の程度は、8つの試料の平均値として算出される種々の時点でのThT蛍光として表してあり、標準偏差と共に示してある。
【０１１８】
以下の例は本発明を例示する。
【０１１９】
例１
基礎インシュリンおよびリラルグチドの混合物の例は、200ppm ポリソルベート20でpH 7.7の0.5mM Zn酢酸塩、8mM リン酸ナトリウム緩衝液、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル1.2mMおよびリラグルチド1.2mMの製剤とすることができる。
【０１２０】
例２
基礎インシュリンおよびリラルグチドの混合物の他の例は、300ppm ポリソルベート20でpH 7.7の1.2mM Zn酢酸塩、8mM リン酸ナトリウム緩衝液、10mM 塩化ナトリウム、20mM フェノール、20mM m-クレゾールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル2.4mMおよびリラルグチド3.0mMの製剤とすることができる。
【０１２１】
例３
基礎インシュリンおよびリラルグチドの混合物の他の例は、100ppm ポロキサマー188でpH 7.7の0.8mM Zn酢酸塩、8mM グリシルグリシン緩衝液、10mM 塩化ナトリウム、20mM フェノール、20mM m-クレゾールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル1.2mMおよびリラルグチド1.67mMの製剤とすることができる。
【０１２２】
例４
基礎インシュリンおよびリラルグチドの混合物の他の例は、300ppm ポリソルベート20でpH 7.7の2.0mM Zn酢酸塩、8mM リン酸ナトリウム緩衝液、10mM 塩化ナトリウム、20mM フェノール、20mM m-クレゾールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル2.4mMおよびリラルグチド1.2mMの製剤とすることができる。
【０１２３】
例５
pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、5mM グリシルグリシン、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル2.4mMおよびリラグルチド1.2mMの混合物（図１のダイヤモンド）、ならびに同じ処方であって300ppm ポリソルベート20（トゥイーン20）が追加されたもの。ThT蛍光の後に、上述の一般の手順が続いた。この混合物はまた、200ppm ポリソルベート-20または1000ppm ポロキサマー-188の追加によって示される。
【０１２４】
例６
pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、5mM グリシルグリシン、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル2.4mMおよびリラグルチド1.2mMの混合物（図２のダイヤモンド）、ならびに同じ処方であって、三つの異なるpH値で300ppm ポリソルベート20（トゥイーン20）が追加されたもの（三角（図２）がpH 7.4、四角（図２）がpH 7.7および丸（図２）がpH 8.1）。
【０１２５】
ThT蛍光の後に、上述の一般の手順が続いた。
【０１２６】
例７
pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、8mM リン酸ナトリウム緩衝液、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル 2.4mMおよびリラグルチド2.4mMの混合物（図３の四角）、ならびに同じ処方であって星型の図形（図３）で示された300ppm ポリソルベート20を追加したもの。
【０１２７】
ThT蛍光の後に、上述の一般の手順が続いた。
【０１２８】
例８
pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、8mM リン酸ナトリウム緩衝液、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/mlのプロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル 2.4mMおよびリラグルチド2.4mMの混合物（図４の四角）、ならびに同じ処方であってポロキサマー188を100ppm追加したもの（十字（図４）で表示）および500ppm追加したもの（三角（図４）で表示）。
【０１２９】
ThT蛍光の後に、上述の一般の手順が続いた。
【０１３０】
例９
処方Ａは、0.6mM NεB29-（Nα-（HOOC（CH2)14CO）-γ-Glu）desB30ヒトインシュリン、0.3mM Zn2+（インシュリン六量体当り3 Zn2+イオンに相当）、60mM フェノール、14mg/ml プロピレングリコール、5mM リン酸塩pH 7.7および1.2mM リラグルチドからなる。この混合物は、約１時間の短い遅延時間で線維形成を開始する。しかしながら、200ppm ポリソルベート-20または1000ppm ポロキサマー-188の追加は、30時間以上にまで遅延時間を長くする（図5）。
【０１３１】
例１０
処方Ｂは、0.6mM NεB29-（Nα-（HOOC（CH2)14CO）-γ-Glu）desB30ヒトインシュリン、0.5mM Zn2+（インシュリン六量体当り5 Zn2+イオンに相当）、60mM フェノール、14mg/ml プロピレングリコール、5mM リン酸塩 pH 7.7および1.2mM リラグルチドからなる。同じ処方であって500ppm ポリソルベート-20および2000ppm ポロキサマー-188を追加したもの（図６）。
【０１３２】
例１１
処方Ｄは、1.2mM LysB29（Nεリトコリル-γ-Glu）-des（B30）ヒトインシュリンeller NB29 リトコリル-γ-Glu-des（B30）ヒトインシュリン、0.6mM Zn2+（インシュリン六量体当り3 Zn2+イオンに相当）、14mg/ml プロピレングリコール、40mM フェノール、8mM リン酸塩pH 7.7からなる。この処方は、約20時間の遅延時間を有する。1.2mM リラグルチドおよび150ppm ポリソルベート-20が加えられた製剤Ｄがまた示される（図７）。
【０１３３】
例１２
処方Ｅは、1.2mM ヒトインシュリン、0.6mM Zn2+（インシュリン六量体当り3 Zn2+イオンに相当）、14mg/ml プロピレングリコール、40mM フェノール、8mM リン酸塩pH 7.7からなる。1.2mM リラグルチドおよび300ppm ポリソルベート-20が加えられた処方Ｅがまた示される（図８）。
【０１３４】
例１３
三つの処方は全て、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、20mM フェノール、20mM m-クレゾールおよび3mM テトラデシル-β-D-マルトシドで調製される。四角は、8mM リン酸塩緩衝液および14mg/ml プロピレングリコールを含む処方を示す。十字は、8mM グリシルグリシンおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方を示す。三角形は、8mM グリシルグリシンおよび16mg/ml グリセロールを含む処方を示す。図９は、1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの3混合物のThT曲線を示す。
【０１３５】
例１４
三つの処方は全て、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、8mM グリシルグリシン、14mg/mlプロピレングリコール、20mM フェノール、および20mM m-クレゾールmMで調製される。四角は5mM テトラデシル-β-D-マルトシドを含む処方を示し、および十字は10mM テトラデシル-β-D-マルトシドを含む処方を示す。図１０は、1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの2混合物のThT曲線を示す。
【０１３６】
例１５
処方は、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、8mM リン塩緩衝液、14mg/ml プロピレングリコール、20mM フェノール、および20mM m-クレゾールmMを含む1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの6混合物である。図１１は、増加するmM濃度のドデシル-β-D-マルトシドを含む処方の曲線１〜６を示す。
【０１３７】
例１６
処方は、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、8mM リン酸塩緩衝液、14mg/ml プロピレングリコール、20mM フェノール、および20mM m-クレゾールmMを含む1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの6混合物である。図１２は、増加するmM濃度のテトラデシル-β-D-マルトシドを含む処方の曲線１〜６を示す。
【図面の簡単な説明】
【０１３８】
【図１】pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、5mM グリシルグリシン、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル2.4mMおよびリラグルチド1.2mMの混合物（ダイヤモンド）、ならびに同じ処方であって300ppm ポリソルベート20（トゥイーン20）が追加されたもの。
【図２】pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、5mM グリシルグリシン、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル2.4mMおよびリラグルチド1.2mMの混合物（ダイヤモンド）、ならびに同じ処方であって、三つの異なるpH値で300ppm ポリソルベート20（トゥイーン20）が追加されたもの（三角がpH 7.4、四角がpH 7.7および丸がpH 8.1）。
【図３】pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、8mM リン酸ナトリウム緩衝液、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル 2.4mMおよびリラグルチド2.4mMの混合物（四角）、ならびに同じ処方であって星型の図形で示された300ppm ポリソルベート20を追加したもの。
【図４】pH 7.7で1.2mM Zn酢酸塩、8mM リン酸ナトリウム緩衝液、20mM 塩化ナトリウム、60mM フェノールおよび14mg/mlのプロピレングリコールを含む処方中におけるデテミル 2.4mMおよびリラグルチド2.4mMの混合物（四角）、ならびに同じ処方であってポロキサマー188を100ppm追加したもの（十字で表示）および500ppm追加したもの（三角で表示）。
【図５】処方Ａは、0.6mM インシュリンNεB29-（Nα-（HOOC（CH2)14CO）-γ-Glu）desB30ヒトインシュリン、0.3mM Zn2+（インシュリン六量体当り3 Zn2+イオンに相当）、60mM フェノール、14mg/ml プロピレングリコール、5mM リン酸塩pH 7.7および1.2mM リラグルチド、ならびに同じ処方であって200ppmポリソルベート-20または1000ppmポロキサマー-188を追加したものからなる。
【図６】処方Ｂは、0.6mM NεB29-（Nα-（HOOC（CH2)14CO）-γ-Glu）desB30ヒトインシュリン、0.5mM Zn2+（インシュリン六量体当り5 Zn2+イオンに相当）、60mM フェノール、14mg/ml プロピレングリコール、5mM リン酸塩 pH 7.7および1.2mM リラグルチドからなる。また、2000ppm ポロキサマー-188の添加において示される。
【図７】処方Ｄは、1.2mM インシュリンLysB29（Nεリトコリル-γ-Glu）-des（B30）ヒトインシュリン、0.6mM Zn2+（インシュリン六量体当り3 Zn2+イオンに相当）、14mg/ml プロピレングリコール、40mM フェノール、8mM リン酸塩pH 7.7からなる。また、1.2 mMリラグルチドおよび150ppmポリソルベート-20の両方を含む処方Ｄからなるサンプルが示される。
【図８】処方Ｅは、1.2mM ヒトインシュリン、0.6mM Zn2+（インシュリン六量体当り3 Zn2+イオンに相当）、14mg/ml プロピレングリコール、40mM フェノール、8mM リン酸塩pH 7.7からなる。1.2 mM リラグルチドおよび300ppmポリソルベート-20を加えた処方Ｅがまた示される。
【図９】三つの処方は全て、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、20mM フェノール、20mM m-クレゾールおよび3mM テトラデシル-β-D-マルトシドで調製される。四角は、8mM リン酸塩緩衝液および14mg/ml プロピレングリコールを含む処方を示す。十字は、8mM グリシルグリシンおよび14mg/ml プロピレングリコールを含む処方を示す。三角形は、8mM グリシルグリシンおよび16mg/ml グリセロールを含む処方を示す。図９は、1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの3混合物のThT曲線を示す。
【図１０】三つの処方は全て、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、8mM グリシルグリシン、14mg/mlプロピレングリコール、20mM フェノール、および20mM m-クレゾールmMで調製される。四角は5mM テトラデシル-β-D-マルトシドを含む処方を示し、および十字は10mM テトラデシル-β-D-マルトシドを含む処方を示す。図１０は、1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの2混合物のThT曲線を示す。
【図１１】処方は、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、8mM リン塩緩衝液、14mg/ml プロピレングリコール、20mM フェノール、および20mM m-クレゾールmMを含む1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの6混合物である。図１１は、増加するmM濃度のドデシル-β-D-マルトシドを含む処方の曲線１〜６を示す。
【図１２】処方は、pH 7.7で0.6mM Zn酢酸塩、15mM NaCl、8mM リン酸塩緩衝液、14mg/ml プロピレングリコール、20mM フェノール、および20mM m-クレゾールmMを含む1.2mM リラグルチドおよび2.4mM デテミルの6混合物である。図１２は、増加するmM濃度のテトラデシル-β-D-マルトシドを含む処方の曲線１〜６を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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