(57)【要約】  本発明は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を調節するのに有用な化合物を同定する方法を提供する。本発明は、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を予防し、抑制し、又は阻害する化合物、及びそのような受容体を再感作する化合物を提供する。医薬組成物、及び治療方法、特に、神経系疾患に関する治療方法も記載されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防する化合物を同定する方法であって、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を候補化合物に暴露すること、（ｉｉ）該細胞を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を引き起こすことができるα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に暴露すること、（ｉｉｉ）該候補化合物がα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を予防するか、又は阻害するかを決定することの工程を含む方法。
【請求項２】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する化合物を同定する方法であって、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の少なくとも１つの作動薬で、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作させること、（ｉｉ）該受容体を候補化合物に暴露すること、そして（ｉｉｉ）作動薬の存在下において、該候補化合物と共に、及び候補化合物無しで、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定することを含む方法。
【請求項３】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作することのできる化合物を同定する方法であって、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を、受容体を脱感作させるに十分な量のα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬と接触させること、（ｉｉ）作動薬の存在下で、該細胞を候補化合物と接触させること、そして（ｉｉｉ）脱感作した受容体が候補化合物によって再感作されるか否かを決定することを含む方法。
【請求項４】
抑制、予防又は阻害を必要とする対象者のα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、予防し、又は阻害する方法であって、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防する十分な量の化合物を投与することを含む方法。
【請求項５】
化合物が、
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）尿素；
Ｎ−（２，４−ジメトキシ−５−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（３−メチルイソオキサゾール−５−イル）尿素；
Ｎ−［２−（２−フリル）−４−メトキシフェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（５−ブロモ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［４−エトキシ−２−（２−フリル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−メトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−［４−メトキシ−２−（１，３−オキサゾール−２−イル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［２−メトキシ−４−（２−メトキシエトキシ）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（６−シアノピリジン−３−イル）−Ｎ’−（５−フルオロ−２，４−ジメトキシフェニル）尿素；
Ｎ−（４−メトキシ−２−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
及び、薬学的に許容されるその塩；
から成るグループから選択される、請求項４記載の方法。
【請求項６】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する化合物の有効量及び薬学的に許容される担体を含む疾患又は状態を治療し、予防し、又は緩和するのに有用な医薬組成物。
【請求項７】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防する化合物の有効量及び薬学的に許容される担体を含む疾患又は状態を治療し、予防し、又は緩和するのに有用な医薬組成物。
【請求項８】
治療される疾患又は状態が精神病性障害である請求項６又は７記載の組成物。
【請求項９】
精神病性障害が、統合失調症障害である請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
治療又は予防を必要とする対象者の疾患や状態を治療し、又は予防する方法であって、少なくとも１つのα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬と組み合わせた第一の化合物の有効量を対象者に投与することを含み、ここで該第一の化合物がα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を予防し、又は阻害するものである、方法。
【請求項１１】
治療を必要とする対象者の疾患や状態を治療し、又は予防する方法であって、少なくとも１つのα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬と組み合わせた効果的な量の第一の化合物を該対象者に投与することを含み、ここで該第一の化合物が脱感作されたα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作するものである、方法。
【請求項１２】
疾患又は状態が、統合失調症又はその他の精神病性障害、肥満症又は神経変性病である請求項１０又は１１記載の方法。
【請求項１３】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体により仲介され得る疾患又は状態の治療のために提供される医薬組成物を製剤化する目的の、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、予防し、若しくは阻害し、又はその再感作を促進する化合物の使用。
【請求項１４】
治療が、更に受容体の作動化合物を提供するものである請求項１３記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を調節するのに役立つ化合物を同定する方法に関する。特に、本発明は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を予防し、抑制し、又は阻害する化合物、及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する化合物に関する。本発明は、更に、本明細書で述べられた方法に基づいて同定された化合物、及びその様な化合物を含む医薬組成物を用いて、疾病を予防、又は治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニコチン性アセチルコリン受容体は、筋肉、神経節及び中枢神経系（ＣＮＳ）などの組織に存在するさまざまな神経伝達物質受容体と定義する。受容体に対する天然の活性化リガンドはアセチルコリンであるが、しかし、受容体はまた、薬物のニコチンに対して感受性である（参照：Alkondon & Albuquerque, Progress in Brain Research 145: 109-120,
2004）。一般的に言って、ニコチン性アセチルコリン受容体には、２つの基本タイプがある。第一のタイプは、α２、α３、α４又はα６などの１つのαサブタイプ、及びβ２又はβ４などの１つのβサブタイプより形成されたヘテロ五量体の受容体から成る（なお、β３及びα５サブタイプもまた、その様な受容体形成に関与しているかも知れない）。
【０００３】
ニコチン性アセチルコリン受容体の第二のタイプは、α７、α８又はα９サブタイプを構成するホモ五量体の受容体から成る。参照： Francis et al., Mol. Pharm. 60: 71-79 (2001), 及び米国特許第６,６９３,１７２号。α１０などのその他のサブタイプはまた、ニコチン性アセチルコリン受容体形成に関係している可能性がある。参照：Elgoyhen et al., 10th Neuropharm Conf. (2000)。
【０００４】
α７アセチルコリン受容体は、カルシウムイオンの流入に対して、高度に透過性のあるリガンド依存性のイオンチャネルである。α７ニコチン性アセチルコリン受容体をコードする遺伝子は、ヒト、マウス、ラット、ニワトリ及びウシを含む多くの生物体からクローン化されている。α７アセチルコリン受容体は、神経系において広範に発現しており、参照：Del Toro et al., J. Comp. Neurol. 349: 325-342 (1994) 、そして神経伝達、認知、感覚ゲーティング及び不安を調節するのに重要な役割を果たしている。例えば、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の発現の低下は、統合失調症に罹っている患者において見い出されている。参照：Mullen et al., J. Med. Chem. 43: 4045-4050 (2000) 。
【０００５】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性化は、多くの疾患及び状態を緩和し、治療し、又は予防する可能性がある。このような疾患及び状態としては、認識機能障害、アルツハイマー病、ダウン症候群、パーキンソン病などの神経変性疾患及び緑内障を挙げることができる。また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を活性化することによって、注意欠陥多動障害、不安、強迫神経症、薬物嗜癖、統合失調症、及びエタノール誘発性神経毒などの神経毒を示す、又はそれに起因するその他の疾患又は状態を、予防し又は緩和する可能性がある。参照：Kem WR, Behav. Brain Res. 113: 169-181; Leonard et al., Schizophr. Bull. 22: 431-445 (1996); De Fiebre et al., Alcohol 31: 149-153 (2003) 。それ故、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物は、多くの治療への応用の可能性を有する。参照：Mullen et al., J. Med. Chem. 43: 4045-4050 (2000) 。
【０００６】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体は、作動薬が結合することによって活性化できる。ニコチンなどの非選択的作動薬、及び３−［２，４−ジメトキシベンジリデン］アナバセイン（ＤＭＸＢ）；De Fiebre et al., Alcohol 31: 149-153 (2003)、及び（−）−スピロ［１−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３，５’−オキサゾリジン−２’−オン；Mullen et al., J. Med. Chem. 43: 4045-4050 (2000)などの選択的作動薬を含む、多数のα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬が同定されてきた。その様な作動薬の更なる実例としては、国際特許出願公開、ＷＯ第９６／０６０９８号、ＷＯ第９７／３０９９８号、ＷＯ第９９／０３８５９号において、見ることができる。α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に加えて、作動薬の活性を正に調節するその他の化合物もまた、同定されてきた。これらの化合物は、作動薬の効力、又は作動薬によって誘発される最大応答を、増大させる可能性がある。その様な化合物としての実例は、米国特許第６,４７９,５１０号、第６,２７７,８７０号及び第６,４９２,３８５号、米国特許出願公開第２００３．０２３６２８７号Ａ１、及び国際特許出願公開、ＷＯ第０１／３２６２０号において見られる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体サブユニットから成るカルシウムチャンネルは、カルシウムイオンに対して高度の透過性があるが、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に対する暴露を延長することは、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の急速な脱感作をしばしば引き起す。結果として、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬による活性化は、しばしば一時的なものとなる。この脱感作の予防（不活化α７ニコチン性アセチルコリン受容体の再感作も同様であるが）が、神経系の疾患又は状態の治療又は予防において新しい治療法を開発することにおける重要な課題を表わしている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物を同定する方法について述べる。特に、本発明は、脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させる化合物を同定する方法について述べる。本発明は、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を、阻害し、抑制し、又は予防する化合物を同定する方法について述べる。本発明の実施によって同定される（換言すれば、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させ、又は脱感作を予防する）化合物は、作動薬の様な、受容体に対して治療上効果のあるその他の化合物、及びまた作動薬の活性に影響を与えるアロステリックモジュレーターを含む受容体のアロステリックモジュレーターと組み合わせて投与することができる（参照：例えば、米国特許第６,２７７,８７０号）。
【０００９】
本発明の更に好ましい実施態様において、個々の化合物についてα７ニコチン性アセチルコリン受容体に対する１つ以上の有用な効果を有するものであること、例えば、個々の化合物が、正のアロステリックモジュレーター（例えば、米国特許出願第２００３／０２３６２８７号）及び再感作薬の両者であるということを確認する。
【００１０】
本発明における好ましい実施例において、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を受容体を脱感作させるために作動薬と接触させること、（ｉｉ）その細胞を有効量の候補化合物と接触させること、及び（ｉｉｉ）脱感作した受容体が候補化合物により再感作されるか否かを測定することの方法を提供する。
【００１１】
本発明は、更に、本明細書において記載された方法を用いて同定され、そしてα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させることが可能な化合物を提供する。
【００１２】
その様な化合物の実例としては、次の化合物：
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）尿素；
Ｎ−（２，４−ジメトキシ−５−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（３−メチルイソオキサゾール−５−イル）尿素；
Ｎ−［２−（２−フリル）−４−メトキシフェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（５−ブロモ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［４−エトキシ−２−（２−フリル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−メトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−［４−メトキシ−２−（１，３−オキサゾール−２−イル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［２−メトキシ−４−（２−メトキシエトキシ）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（６−シアノピリジン−３−イル）−Ｎ’−（５−フルオロ−２，４−ジメトキシフェニル）尿素；
Ｎ−（４−メトキシ−２−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
又はそれらの医薬組成物、薬学的に許容される塩、ラセミ混合物、若しくは純粋エナンチオマーが挙げられるが、それらに限定されない。
【００１３】
本発明は、更に、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防することによって、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する方法を含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体活性の調節法を提供する。本発明は、また、脱感作しているα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させる方法について述べる。これらの方法は、インビトロで行うことができる。それらは、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防することが可能な、及び／又は脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作することが可能な化合物を、それによる治療の必要性のある対象者に投与することにより、インビボで行うこともできる。
【００１４】
既に述べた様に、本発明に述べられた方法は、様々な疾患及び状態を予防し、治療し、又は緩和するのに有用である。これらの疾患及び状態としては、アルツハイマー病の認識及び注意欠陥症候群、アルツハイマー病、初老期痴呆（軽度認識機能障害）、老年痴呆、統合失調症若しくは精神病の様な疾患と関連する神経変性及びそれらと関連する認識欠陥障害、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）、気分及び情動障害、筋委縮性側索硬化症、境界型人格障害、外傷性脳損傷、脳腫瘍に関連する行動及び認知の問題、ＡＩＤＳ痴呆コンプレックス、ダウン症候群関連の痴呆、レヴィー小体に関連する痴呆、ハンチントン病、うつ病、全般性不安障害、加齢黄斑変性症、パーキンソン病、遅発性ジスキネジア、ピック病、外傷後ストレス障害、神経性過食症及び神経性食欲不振症を含む摂食障害、喫煙停止及び麻薬依存の停止に関連する禁断症候群、ジル・ド・ラ・トゥレット病症候群、緑内障、緑内障に関連する神経変性、又は疼痛に関連する症候群が挙げられるが、それらに限定されない。
【００１５】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性化は、また、ＴＮＦ−αレベルを減少させる可能性があり、これは順に、炎症、疼痛、癌若しくは糖尿病（それらに限定されないが）の何れか１つ若しくはそれ以上、又はそれらの組み合わせを含む疾患又は状態からの症状軽減を提供する。治療すべき炎症及び／又は疼痛のタイプとしては、関節リウマチ；リウマチ様脊椎炎；筋肉変性症；骨粗鬆症；骨関節症；乾癬；接触性皮膚炎；骨吸収疾患；アテローム性動脈硬化症；パジェット病；ブドウ膜炎；痛風性関節炎；炎症性腸疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；クローン病；鼻炎；潰瘍性大腸炎；過敏症；喘息；ライター症候群；移植片組織拒絶反応；虚血性再潅流障害；脳外傷；発作；多発性硬化症；大脳マラリア；敗血症；敗血症性ショック；トキシックショック症候群；感染症に起因する発熱及び筋肉痛；ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及びＨＩＶ−３；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；インフルエンザ；アデノウイルス；ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２を含む）、又は帯状疱疹、の何れか１つ又はそれ以上が挙げられるが、それらに限定されない。治療される可能性のある癌のタイプとしては、多発性骨髄腫；急性及び慢性の骨髄性白血病 ；又は癌性悪液質の何れか１つ又はそれ以上を含むが、それらに限定されない。ＴＮＦ−αのレベルはまた、膵臓のβ細胞破壊、Ｉ型、ＩＩ型糖尿病、血管形成；創傷治癒（火傷、及び手術からの傷を含む一般的傷の治癒）、骨折治癒、虚血性心疾患；及び安定狭心症とも関連している。それ故、本発明において述べた方法を用いて同定した化合物は、上記で説明した種々の疾患又は状態を治療、予防、及び緩和するのに有用である。
【００１６】
本発明は、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させる、及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防することが可能な化合物を含む医薬組成物、及びその様な医薬組成物を製造し、投与する方法を述べる。
【００１７】
最後に、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬誘発による活性が、アロステリックモジュレーターによって、２つある方法の内のどちらか１つで影響を及ぼされ得ることが当業者には一般的によく知られている。第一の方法は、作動薬の効力を上昇させることであり、このアロステリックモジュレーター群は、「アロステリック的促進リガンド」（例えば、Schrattenholz et al., 1996）と命名されている。第二の方法は、作動薬によって誘発される最大応答を上昇させることである。この正のモジュレーター群は、Gurely and Lanthornにより、「効力強化剤（efficacy enhancer）」（例えば、Eisele et al., 1993; Quik et al., 1997; Gurley  and Lanthorn, 2001）と命名されている。本発明で記載された方法は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させる化合物及び／又は受容体の脱感作の過程を遅らせる化合物を具体的に同定するという点で、従来技術で記載された方法とは異なる。この新規で、付加された特性は、従来技術では予測されない。例えば、従来、効力強化剤として同定された化合物、５−ヒドロキシインドール（Gurley and Lanthorn, 2001）は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させず、そして、受容体の脱感作の速度を変えることはない（参照：実施例；また、参照：Eisele JL, Bertrand S, Galzi JL, Devillers-Thiery A, Changeux JP, Bertrand D：キメラニコチン−セロトニン受容体は、明確なリガンド結合及びチャネル特異性を結び付ける：Nature. 1993 Dec 2; 366(6454):479-83; Gurley D and Lanthorn T. 2001:米国特許第６，２７７，８７０号Ｂ１；Quik M, Philie J, Choremis J: ニコチン性作動薬によるα７ニコチン性受容体介在のカルシウム流入の調節：Mol Pharmacol. 1997. 51:499-506；及びSchrattenholz A, Pereira EF, Roth U, Weber KH, Albuquerque EX, Maelicke A：神経性アセチルコリン受容体の作動薬応答性は、新しい部類のアロステリック的に働くリガンドにより増大する：Mol Pharmacol. 1996 Jan;49(1):1-6)）。
【００１８】
しかしながら、本発明の実施の基づき、本明細書において定義する様に、再感作薬作用を有すると同定された化合物は、場合により、上述の２つのアロステリック活性の内の１つを証明することになるかもしれない。それ故、本発明の化合物は、複数の効果、そしてしばしば蓄積効果をも、単一の薬物で達成できるという点において、独自で医学上貴重となる可能性があるが、蓄積効果又はこの特性がないとしても本発明の実施に限界を与えるものではない。本発明のスクリーニング方法は、勿論、あらゆる再感作薬化合物を発見するのに有用である。上記の具体的に開示した全ての化合物（ＩＵＰＡＣ形式で命名された）は、また、「効力強化剤」の特性を示すことが測定されている。
【００１９】
本発明の実施によって同定されたさらなる化合物は、
【化１】
2008525785.tif 000002
である。
【００２０】
図１は、化合物１、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に暴露した時の、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を示す。化合物１が存在する場合、化合物２はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する。
図２は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に暴露した時の、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を示す。５−ヒドロキシインドールを添加することによって、脱感作した受容体を再感作することはなかった。
図３は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体が初めに化合物２に暴露されたとき、受容体の作動薬として機能するアセチルコリンによるα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作が、化合物により阻害されることを図示している。
図４は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体が化合物２〜１５の各々に暴露される場合、アセチルコリンによる脱感作が阻害され、一方、α７ニコチン性アセチルコリン受容体のモジュレーターである５−ヒドロキシインドールが、その様な効果を有していなかったことを図示している。
【００２１】
本発明は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物を同定する方法を述べる。特に、本明細書に記載された方法は、脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作することが可能な化合物を同定することができる。それ故、本発明の１つの実施態様は、（ｉ）脱感作薬を用いて、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作すること；（ｉｉ）脱感作した受容体を候補化合物に暴露すること；そして、(ｉｉｉ)候補化合物が存在するとき及び存在しないときの脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体の１つ又はそれ以上の活性を測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物を同定する方法である。
【００２２】
本明細書に記載された方法は、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を阻害し、抑制し、又は予防する化合物を同定するために有用である。それ故、本発明の別の実施態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を、十分な量の候補化合物に暴露すること、（ｉｉ）候補化合物の存在下、受容体を作動薬に暴露すること、そして（ｉｉｉ）候補化合物が存在するとき及び存在しないときのα７ニコチン性アセチルコリン受容体の１つ又はそれ以上の活性を測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物を同定する方法である。
【００２３】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作させるために、種々の方法が用いられる。１つの好ましい方法は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を、十分な量のα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に暴露することである。
【００２４】
本明細書で用いられる用語、「脱感作する」及び「脱感作」は、部分脱感作を含むが、それらに限定されない。同様に、用語「再感作する」又は「再感作」は、部分再感作を含む。本発明の実施によれば、用語は同義的に使っても良いと理解するべきである。即ち、化合物が「再感作薬」である場合、それは、脱感作を予防することができ、そして、脱感作を予防する化合物は、しばしば、再感作剤であり、それ故、用語は、互いに排他的であることを意味せず、そのような化合物を検出するアッセイは、特に、達成された正味の生理学的結果が同じか、又は効果上同じであるので、そのような効果を区別しない。
【００２５】
更に、当然のことながら、アッセイが、α７ニコチン性アセチルコリン受容体に結合可能な試薬の添加、又は該受容体から化合物を置き換え可能な試薬の添加などの、多工程を含む場合、それが作動薬の結合サイト、アロステリックモジュレーターの結合サイト、又は再感作サイトであっても、該工程は、記述のアッセイから一般的には明白であるように、又は当業者が勿論一般的に理解するはずであるように、逐次的に、又は、同時に行われても良い。
【００２６】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作は、勿論、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を、十分な量のα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬と接触させることによっても達成することができる。
【００２７】
本発明の更なる実施態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作する十分な量の脱感作薬と接触させること、（ｉｉ）該細胞を候補化合物と接触させること、そして（ｉｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の１つ又はそれ以上の活性を、候補化合物の存在及び非存在下で測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物を同定する方法である。
【００２８】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体をコードする遺伝子は、当業者によく知られた標準的なクローニング及び単離技法を用いて、取得しそして取り扱うことができる。参照：例、Sambrook et al.  Molecular Cloning (Cold Spring Harbor Press 1989)。α７ニコチン性アセチルコリン受容体をコードする遺伝子は、細菌、イースト又は哺乳類の発現系などの発現系に挿入してもよい。好ましくは、哺乳類の発現系が使われ得る。トランスジェニックマウス又はラットの様なトランスジェニック動物を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現させるために作り出してもよい。α７ニコチン性アセチルコリン受容体は、蛋白質又はペプチドを単離する分野で日常的に使われている標準的方法を用いて、そのような細胞、組織、又は動物から単離し、そして精製することができる、参照：例、Scopes et al. Protein Purification: Principles and Practice (1996)。細胞は、真核生物、又は原核生物の細胞であっても良い。
【００２９】
本発明の別の実施態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現させる細胞を、十分な量の候補化合物と接触させること、（ｉｉ）候補化合物の存在下で、該細胞を脱感作薬と接触させること、そして、（ｉｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物を同定する方法である。
【００３０】
本明細書で記載される様に、脱感作させる化合物は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作させる能力を基に選択することができる。その様な化合物は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体と直接相互作用することができる。それらは、また、直接の相互作用なしで、しかしシグナルカスケード(signalcascade)を通して、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性に影響を与えることができる。その様に感作する化合物の好ましい態様は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の部分作動薬を含む作動薬であるが、それらに限定されない。より好ましい実施態様は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の選択的作動薬である。
【００３１】
ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬の実例としては、非選択性作動薬、ニコチンが挙げられる。α７ニコチン性アセチルコリン受容体のその他の実例は、国際特許出願公開、ＷＯ第９６／０６０９８号、ＷＯ第９７／３０９９８号、ＷＯ第９９／０３８５９号、及び米国特許出願公開第２００３／０２３６２８７号Ａ１において見ることができる。α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作させることが可能なさらなる化合物は、公知の技法を用いて当業者によって同定することができる。例えば、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬は、細胞を基礎にしたカルシウムフラックスアッセイ、ＦＬＩＰＲを用いて同定することができる。その様なアッセイの記述は、例えば、国際特許出願公開、ＷＯ第００／７３４３１号において見られる。
【００３２】
本明細書に記載した方法で使用する、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞は、種々の供給源から得ることができる。それは組織培養から単離できる。それは、また、組織標本又は器官標品から、好ましくは、哺乳類から、そして、より好ましくは、ヒトから、誘導することができ、又はそれらに存在し得る。それは、また、外来性のα７ニコチン性アセチルコリン受容体でトランスフェクトさせた細胞から得ることができる。それ故、１つの好ましい態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現させる細胞を有する組織標本又は器官標品を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬と接触させること、（ｉｉ）その様な組織標本又は器官標品を候補化合物と接触させること、そして、（ｉｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を、候補化合物の存在下で測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する化合物を同定する方法である。
【００３３】
本発明の１つの実施態様は、真核細胞を使用することであり、好ましくは、哺乳類の細胞、そしてより好ましくはヒト細胞を使用することである。種々の細胞は、American Tissue Culture Collection (ここでは 、ATCCと略する)の様な供給源から市販されている。あるいは、胚幹細胞の様な細胞は、自然源から単離、又は取得することができる、参照：Whittemore et al. Int. J. Dev. Neurosci. 11:755-64 (1993)。該細胞はまた、組織標本又は器官標品中に存在し得、好ましくは、哺乳類の脳、又は中枢神経系起源のものである。該細胞は、ラット、ネコ、ウマ、マウス、ハムスター、ニワトリ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウサギ、サル及びヒトから得ることができるが、それらに限定されない。その様にして得られた細胞は、その分野で日常的に実施される様に、更に、組織培養で増やされ、そして採取される。参照：例、Bernice M. Martin, Tissue Culture Techniques (Birkhauser Verlag AG, 1994)。本発明において使用できる細胞の実例としては、ＣＨＯ細胞、ＰＣ−１２細胞、Ｋ−１７７細胞、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞、ＴＥ−６７１細胞、ＨＥＫ−２９３細胞及びアフリカツメガエル卵母細胞（Xenopus oocytes）があげられるが、それらに限定されない。参照：例、Rogers et al. Protein Expr Purif. 2(2-3): 108-16 (1991); Fitch et al. PNAS 100: 4909-4914 (2003) 。
【００３４】
組織標本又は器官標品由来の細胞は、精製し、又は他の成分又は細胞と混合することができる。１つの実施態様において、単離された組織、器官、又は動物由来の、好ましくは哺乳類の中枢神経系由来のその様な組織又は器官のフラグメント又は部分は、その様な組織又は器官がα７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を示す限り、使用される。そのような組織又は器官の実例としては、哺乳類の脳のスライス、又は哺乳類の脳の特定の切片であるが、それらに限定されない。それ故、本発明の別の実施態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を示す組織又は器官を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を感作する十分な量の脱感作化合物と接触させること、（ｉｉ）該組織又は器官を候補化合物と接触させること、そして（ｉｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定することである。
【００３５】
さらにもう一つの好ましい実施態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を候補化合物と混合すること、（ｉｉ）候補化合物の存在下で、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬の少なくとも１つを、該細胞に添加すること、そして（ｉｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防することができる化合物を同定する方法である。
【００３６】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体をコードする遺伝子は、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＮＭ−０１２８３２、Ｓ５３９８７及びＡＦ−３２１２４２（ラット受容体用）；ＡＹ−５００２３９（蜂受容体用）；ＮＭ−１７４５１５（ウシ受容体用）；ＡＦ−２２５９８０（マウス受容体用）；並びに、ＡＦ−０２９８３９及びＡＦ−０２９８３８（ヒト受容体用）において見られる。更なる遺伝子配列は、また、分子クローニング技法を用いて、当業者により入手することができる。欠失、置換、及び付加を含むが、それらに限定されない変異を、そのような変異がα７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を排除せず、又はそのような変異が本明細書に記載された方法の実施を妨げない限り、α７ニコチン性アセチルコリン受容体に対してなすことができる。α７ニコチン性アセチルコリン受容体のある種の突然変異型は、米国特許第６６９３１７２号、及び国際特許出願公開、ＷＯ第００／７３４３１号に見られる、また参照：Broide et al. Mol. Pharm. 61: 695-705 (2002) 。
【００３７】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を得るための標準的アプローチは、α７ニコチン性アセチルコリン受容体をコードする外因的に挿入したＤＮＡ、及び選択されたホスト細胞への発現ベクターのトランスフェクションを含む発現ベクターの構築である。上記で述べたように、α７ニコチン性アセチルコリン受容体をコードするＤＮＡは、化学的合成、及びそのようなＤＮＡを運ぶ細胞からのＤＮＡ精製などの種々の技法を用いて得ることができる。そのようなＤＮＡは、標準的なクローニング技法を用いて発現ベクターに挿入することができる。参照：例、Sambrook et al., in Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, Vol. 1, 2, 3 (1989) 。ｐＧＥＸ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＥＴ、ｐＰＡＣ、ｐＧＥＭ１、及びｐＣＭＶ−ＧＳＴなどのベクターは、発現ベクターを構築するために使ってもよい。それは、しばしば、外因的に挿入されたＤＮＡの、適切なホスト細胞中のポリペプチドへの転写及び／又は翻訳を可能にするのに必要な要素を含む。そのようにして構築された発現ベクターは、その後、ホスト細胞へ、好ましくは真核細胞へ、そして、より好ましくは哺乳類の細胞へトランスフェクトされ、形質転換される。一旦、ホスト細胞においては、発現ベクターは、ホスト染色体のＤＮＡに一体化してもよいし、又は独立にホスト染色体ＤＮＡを複製してもよい。
【００３８】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作させるため、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を、十分な量のα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に暴露することができる。参照：例、Radcliffe et al. J. Neurosci. 18: 7075-7083 (1998), Alkondon et al. Neuropharmacology 39: 2726-2739 (2000)。脱感作のレベルは、一般的には、当業者によって行われるように、作動薬の量と暴露時間に依存する。
【００３９】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作は、脱感作化合物の濃度に依存する。好ましい方法においては、十分な量の脱感作化合物が、使用できるα７ニコチン性アセチルコリン受容体を飽和させるため加えられる。その後は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作させるために必要な脱感作化化合物の量は最早濃度に依存しない。当業者は、化合物の最適量、及び最適暴露時間を決めることができる。
【００４０】
暴露時間は、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作のレベルに影響を与えることになる。使用する脱感作化合物の量に依存して、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作は、暴露数分後、又はもっと早く起こり得る。しかしながら、暴露時間は変えても良く、そして、当業者は最適な結果を得るためにその接続時間を変えることができる。
【００４１】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させることができ、及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制、予防、又は阻害することができる化合物を同定するために、細胞フリーの系を用いることができこの系でα７ニコチン性アセチルコリン受容体がインビトロで再構築される。参照：Briley & Changeux, Int Rev Neurobiol. 20:31-63 (1977)。本発明の１つの実施態様は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体蛋白質を単離し、そして細胞フリーの系において、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再構築する工程を含む、参照：例、Sobel et al., Eur J Biochem. 80: 215-224 (1977); McNamee & Ochoa, Neuroscience 7: 2305-2319 (1982)。種々の物質が、そのような細胞フリー系を構築するために使用することができる、参照：例、Baenziger et al. Biophys J. 61: 983-992 (1992) 。
【００４２】
好ましい実施態様において、単離されたα７ニコチン性アセチルコリン受容体蛋白質は、リポソーム調製物、又はジオレオイルホスファチジルコリンのような脂質成分を用いる他の脂質小胞へ組込まれる。これにより、脂質二重層に埋め込まれたα７ニコチン性アセチルコリン受容体を含む人工膜の構築が可能になる。そのような膜は、本発明に述べたようなα７ニコチン性アセチルコリン受容体を調節することができる化合物を同定するために使用してもよい。リポソーム及びその他の脂質小胞を得たり、又は製造する方法は、当業者に良く知られている。参照：例、Gregoriadis, Liposome Technology: Preparation of Liposomes (1984)。
【００４３】
それ故、本発明の別の実施態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬で脱感作すること、（ｉｉ）脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体を候補化合物に暴露すること、（ｉｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体が細胞フリーの系に存在する候補化合物の存在下、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作することが可能な化合物を同定する方法である。本発明の更なる実施態様は、（ｉ）候補化合物の存在下、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を作動薬に暴露すること、そして（ｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体が細胞フリーの系に存在するα７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定することを含む、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、又は予防することができる化合物を同定する方法である。
【００４４】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体は、カルシウムの恒常性を調節し、アセチルコリンの放出を調節する。その活性は、また、アルツマイマー病の脳におけるアミロイド斑の形成と関連している、参照：Nagele et al., Neuroscience 110: 199-211 (2002)。α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定するために、種々の方法を用いることができる。これらの方法としては、放射性リガンド結合アッセイ、電気生理現象、放射性同位体イオンアッセイ、蛍光アッセイ、ＦＬＩＰＲアッセイ、及びイメージングアッセイが、挙げられるが、それらに限定されない。参照：例、Bertrand et al. Methods Neurosci. 4: 174-193 (1991); Corringer et al. J. Neuroscience 18: 648-657 (1998); Gould et al. Life Sci. 33: 2665-2672 (1983); Fitch et al. PNAS 100: 4909-4914 (2003); Lukas RJ J. Neurochem. 46: 1936-1941 (1986); Connolly & Kennedy, Drugs Pharm. Sci. 89: 107-133 (1998); Connolly & Kennedy, J Recept Signal Transduct Res. 21: 191-214 (2001); Velicelebi et al. Methods Enzymol. 279: 20-47 (1999); Bertrand et al. J. Recept. Sig. Transd. Res. 17: 227-242 (1997); Villarroya et al. Methods Mol. Biol. 114: 137-147 (1999)。
これらの全ての文献は、参照によって、本明細書に組み入れられる。
【００４５】
上記の方法は、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節できる多数の化合物を同定し、スクリーニングするために使用できる。それ故、本発明の別の実施態様は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する少なくとも１つの化合物を同定するための、多数の候補化合物をスクリーニングすることである。本方法の１つの実施態様は、（ｉ）多数の候補化合物を選択すること、（ｉｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する少なくとも１つの細胞に、各々の候補化合物を暴露すること、（ｉｉｉ）各々の候補化合物の存在下、又は非存在の条件下で、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を測定するか、又は比較することを含む。１つの好ましい実施態様は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、若しくは予防し、又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する、１つ又は多くの化合物を同定するためのハイスループットスクリーニングアッセイであり、それは、脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞を、各々の候補化合物と接触させ、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する各々の候補化合物の能力、特に、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、若しくは予防する能力、又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させる能力を比較することから成る。なおより好ましい実施態様は、自動化されたハイスループットスクリーニングアッセイである。
【００４６】
本明細書に記載された方法を用いて、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させ、及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を阻害し、予防し、若しくは抑制することができる幾つかの化合物が同定された。そのような化合物の実例としては、
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）尿素；
Ｎ−（２，４−ジメトキシ−５−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（３−メチルイソオキサゾール−５−イル）尿素；
Ｎ−［２−（２−フリル）−４−メトキシフェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（５−ブロモ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［４−エトキシ−２−（２−フリル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−メトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−［４−メトキシ−２−（１，３−オキサゾール−２−イル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
Ｎ−［２−メトキシ−４−（２−メトキシエトキシ）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素
Ｎ−（６−シアノピリジン−３−イル）−Ｎ’−（５−フルオロ−２，４−ジメトキシフェニル）尿素；
Ｎ−（４−メトキシ−２−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
の化合物、又は、薬学的に許容されるその塩を挙げられるが、それらに限定されない。
【００４７】
上記述べた化合物の製造、使用、及び投与は、米国特許出願公開第２００３０２３６２８７号Ａ１に記載されている。
【００４８】
それ故、本発明の別の実施態様は、細胞中におけるα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させる方法であり、該細胞を、その構造が上記されている少なくとも１つの化合物の有効量と接触させることを含む。さらにもうひとつの本発明の実施態様は、細胞中におけるα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防する方法であり、該細胞を、その構造が上記されている少なくとも１つの化合物の有効量と接触させることから成る。
【００４９】
付加的に述べれば、本発明の実施によって同定された化合物は、受容体が導入された作動薬の、又は天然の作動薬アセチルコリンの、継続した存在下にあるとき、受容体の脱感作を緩やかにすることにより、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を正に調節し、そして作動薬は結合される。同様に、本発明の実施に基づいて同定された化合物は、作動薬が放出されているか、又は受容体に結合されたままになっているかにかかわらず、作動薬によって既に脱感作された受容体の再感作を促進する。結果として、本発明の実施によって、時間平均の作動薬誘発の全電流が増加し（全細胞で測定した場合）、そして個々のα７受容体で電流の持続時間が増加し得る。この方法において、アセチルコリンに対する、又は別の作動薬に対する「応答速度」は上昇し、それは、作動薬結合に応答して流れる全イオン量が増加することを意味する。この点に関して、読者は、刊行された米国特許出願公開第２００３０２３６２８７号Ａ１を参照されたい、ここでは、作動薬誘発の電流値のピークの上昇を測定することを記載している。また、R. Hurst et al.著、「α７ニコチン性アセチルコリン受容体の新規な正のアロステリックモジュレーター：インビトロ及びインビボにおける特性化」：The Journal of Neuorscience, v. 25(17), pp. 4396-4405, 2005において、特に詳しく、全細胞及び個々の受容体における測定の両方の関連において、これらのアッセイを記載している。
【００５０】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性は、多くの生物学的機能及び機構に関係する。α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性化は、種々の疾患及び状態を予防し、治療し、又は緩和するために有用であり得る。これらの疾患及び状態としては、次に示す何れか１つ若しくはそれ以上、又はその組み合わせ：アルツハイマー病の認識及び注意欠陥症候群、アルツハイマー病、初老期痴呆（穏やかな認識機能障害）、老年痴呆、統合失調症若しくは精神病の様な疾患と関連する神経変性、及びそれらと関連する認識欠陥、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）、気分及び情動障害、筋委縮性側索硬化症、境界型人格障害、外傷性脳損傷、及び脳腫瘍に関連する行動及び認知の問題、ＡＩＤＳ痴呆コンプレックス、ダウン症候群関連の痴呆、レヴィー小体に関連する痴呆、ハンチントン病、うつ病、全般性不安障害、加齢黄斑変性症、パーキンソン病、遅発性ジスキネジア、ピック病、外傷後ストレス障害、神経性過食症及び神経性食欲不振症を含む摂食障害、喫煙停止及び麻薬依存の停止に関連する禁断症候群、ジル・ド・ラ・トゥレット病症候群、緑内障、緑内障に関連する神経変性、又は疼痛に関連する症候群が挙げられるが、それらに限定されない。
【００５１】
既に述べたように、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性化は、また、ＴＮＦ−αレベルを減少させ、これは順に炎症、疼痛、癌若しくは糖尿病の何れか１つ、又はそれ以上の組み合わせを含む疾病又は病気からの症候群の軽減を提供するが、それらに限定されない。治療すべき炎症及び／又は疼痛のタイプとしては、関節リウマチ；リウマチ様脊椎炎；筋肉変性症；骨粗鬆症；骨関節症；乾癬；接触性皮膚炎；骨吸収疾患；アテローム性動脈硬化症；パジェット病；ブドウ膜炎；痛風性関節炎；炎症性腸疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；クローン病；鼻炎；潰瘍性大腸炎；過敏症；喘息；ライター症候群；移植片の組織拒絶反応；虚血再潅流障害；脳外傷；発作；多発性硬化症；大脳マラリア；敗血症；敗血症性ショック；トキシックショック症候群；感染症に起因する発熱及び筋肉痛；ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及びＨＩＶ−３；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；インフルエンザ；アデノウイルス；ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２を含む）、又は帯状疱疹の何れか１つ又はそれ以上が挙げられるが、それらに限定されない。治療すべき癌のタイプとしては、多発性骨髄腫；急性及び慢性の骨髄性白血病；又は癌性悪液質の何れか１つ又はそれ以上を含むが、それらに限定されない。最後に、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性化は、また、肥満、過食症、又は、肥満関連の疾患を治療し、又は予防することができる。
【００５２】
それ故、本発明の別の実施態様は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防するに有効量の化合物を対象者に投与することを含む、必要とする対象者におけるα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、予防し、又は阻害する方法である。本発明のさらにもうひとつの実施態様は、脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する有効量の化合物を対象者に投与することを含む、必要とする対象者において脱感作したα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する方法である。
【００５３】
より具体的には、本発明は、必要とする対象者に、好ましくは哺乳類に、より好ましくはヒトに、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する有効量の化合物を投与することを含む、対象者における上記の疾患又は状態を、治療し、緩和し、又は予防する方法を述べる。本発明は、また、それを必要とする対象者に、好ましくは哺乳類に、そしてより好ましくはヒトに、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、予防し、又は阻害する有効量の化合物を投与することを含む、対象者における上記疾患又は状態を治療し、緩和し、又は予防する方法を述べる。
【００５４】
特に、本発明の好ましい実施態様の１つは、それを必要とする対象者に、好ましくは哺乳類に、そして更に好ましくはヒトに、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する有効量の化合物を投与することを含む対象者における統合失調症を治療し、緩和し、又は予防する方法、及び必要とする対象者に、好ましくは哺乳類に、そして更に好ましくはヒトに、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、予防し、又は阻害する有効量の化合物を投与することを含む、対象者における統合失調症を治療し、緩和し、又は予防する方法である。
【００５５】
本発明のさらにもうひとつの実施態様は、必要とする対象者、好ましくは哺乳類、そしてより好ましくはヒトにα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する有効量の化合物を投与することを含む、対象者における肥満を治療し、緩和し、又は予防する方法であり、及びそれを必要とする対象者、好ましくは哺乳類に、そして更に好ましくはヒトに、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、予防し、若しくは阻害する、又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する有効量の化合物を投与することを含む、対象者における肥満を治療し、緩和し、又は予防する方法である。
【００５６】
本明細書に記載した化合物、及び本明細書で記載した方法を用いて同定することのできるその他の化合物は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性状態を維持するのに有用である。それ故、これらの化合物は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬又はそのアロステリックモジュレーターのようなα７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節できるはずの他の薬剤との組み合わせで使用される場合、特に有用である。
【００５７】
代表的な作動薬化合物は、次の米国特許出願公開第２００２−００８６８７１号、米国特許第６,８０９,０９４号、米国特許第６,８８１,７３４号、米国特許出願公開第２００５−０１７６７２０号、米国特許第６,９１１,５４３号、及び米国特許出願公開第２００５−０２２２１９６号Ａ１に開示されている。
【００５８】
そのような組み合わせにおいて有用なα７作動薬化合物の具体的化合物としては、
ｅｘｏ−４（Ｓ）−Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）フロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）フロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）フロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）フロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−［（ｅｘｏ−（４Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル］フロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）フロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）フロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）フロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−２−メチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−２−メチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２−メチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
ｅｘｏ−４（Ｓ）−Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−３−メチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−３−メチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
【００５９】
（ｅｘｏ）−Ｎ−［１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル］−３−メチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
（３Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−［１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル］−３−メチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
ｅｘｏ−４（Ｓ）−Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−３−エチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−３−エチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−３−エチルフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）−チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）−チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
【００６０】
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
ｅｘｏ−４（Ｓ）−Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）−チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
ｅｘｏ−４（Ｓ）−Ｎ−（１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
【００６１】
Ｎ−（１−アザビシクロ［３．２．２］ノナ−３−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−６−カルボキシアミド；
Ｎ−［ｅｘｏ−（４Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル］−３−クロロフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（１−（６−メチル）−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−３−イル）−３−クロロフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
Ｎ−（（３Ｒ，５Ｒ）−１−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−３−クロロフロ［２，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシアミド；
４−ベンゾオキサゾール−２−イル−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナ−４−イル）−１−オキサ−３−アザ−シクロペンタ［ｂ］−ナフタレン；
４−ベンゾチアゾール−２−イル−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−フェニル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−フェニル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナ−４−イル）−３−オキサ−１−アザ−シクロペンタ［ａ］−ナフタレン；
４−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−フルオロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−ニトロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−オキサゾロ［５，４−ｃ］ピリジン−２−イル−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
【００６２】
４−オキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−２−イル−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−ピリジン−３−イル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］−ノナン；
４−（５−ブロモ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−ブロモ−オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］−ノナン；
４−（５−ヨード−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（４−ニトロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−ニトロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−メチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−クロロ−５−ニトロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−クロロ−６−ニトロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
ベンジル−［２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナ−４−イル）−ベンゾオキサゾール−５−イル］−アミン；
［２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナ−４−イル）−ベンゾオキサゾール−５−イル］−（３−フェニル−アリル）−アミン；
［２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナ−４−イル）−ベンゾオキサゾール−５−イル］−ピリジン−３−イルメチル−アミン；
【００６３】
ジベンジル−［２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナ−４−イル）−ベンゾオキサゾール−５−イル］−アミン；
４−（５−ｍ−トリル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−フェニル−オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−［５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−ブロモ−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−フェニル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；及び
４−（５，７−ジクロロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−ブロモ−５−メチルオキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−ブロモ−５−エチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５，６−ジメチルオキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−メチル−５−エチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−メチル−６−ニトロ−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナ−４−イル）−５−メチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−６−イルアミン；
４−（６−フルオロ−５−メチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−クロロ−５−メチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
【００６４】
４−（６−クロロ−５−エチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−メチル−６−フェニルオキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−メチル−６−フェノキシオキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン−４−イル）−５−メチルオキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−６−カルボニトリル；
４−（６−（２−フルオロ−６−メトキシフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−（チアゾール−２−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−（オキサゾール−２−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−（２−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（６−（２−メトキシピリジン−３−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
（２−（２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン−４−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−６−イル）フェニル）メタノール；
４−（６−（２−フルオロフェニル）オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
２−（２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン−４−イル）オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−６−イル）ベンゾニトリル；
４−（６−（２−フルオロ−６−メトキシフェニル）オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
（２−（２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン−４−イル）オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−６−イル）フェニル）メタノール；
【００６５】
４−（６−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−エチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−フェニル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン  ；
４−［５−（４−フルオロ−フェニル）−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル］−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−［５−（３−フルオロ−フェニル）−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル］−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−［５−（２−フルオロ−フェニル）−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル］−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−フェネチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
４−（５−モルホリン−４−イル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イル）−１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．２］ノナン；
（Ｒ）−（−）−  ２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−６−クロロ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−６−ブロモ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−５−メチル［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−６−クロロ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−６−ブロモ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−フェニル［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−（２−フルオロ−６−メトキシフェニル）［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
【００６６】
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−（２−フルオロ−６−メトキシフェニル）［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−（２−フルオロ−６−メチルフェニル）［１，３］オキサゾロ［５．４−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−６−カルボニトリル；  
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−メチル［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−エチル［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−６−クロロ−２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−５−メチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−５−メチル−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−６−カルボニトリル；
（Ｒ）−（−）−６−ブロモ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−５−メチル［１，３］−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−６−フェノキシ［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；
（Ｒ）−（−）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）−５，６−ジメチル［１，３］−オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
（Ｓ）−（＋）−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；
（Ｓ）−（＋）−６−クロロ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；
（Ｓ）−（＋）−６−ブロモ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；
（Ｓ）−（＋）−６−クロロ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン；及び
（Ｓ）−（＋）−６−ブロモ−２−（１，４−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタ−４−イル）［１，３］オキサゾロ［４，５−ｂ］ピリジン；
の化合物、並びに薬学的に許容されるそれらの塩が挙げられる。
【００６７】
それ故、本発明の１つの実施態様は、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、予防し、若しくは阻害する、及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を脱感作させる、有効量の化合物を細胞に接触させること、そして（ｉｉ）該細胞を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬又はモジュレーターと接触させることを含む、細胞中のα７ニコチン性アセチルコリン受容体を活性化させる、又はその活性を増加させる方法である。
【００６８】
それ故、本発明は、必要とする対象者の、好ましくは哺乳類の、そしてより好ましくはヒトの、疾患又は状態を治療し、又は予防する方法を述べており、（ｉ）α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、又は予防する及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させる有効量の少なくとも１つの化合物を、対象者に投与すること、そして（ｉｉ）また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬を、対象者に投与することを含む。
【００６９】
組み合わせ使用では、本発明の化合物は、他の薬剤と同時に又は分離間隔で共投与することができる。他の薬剤と同時に共投与する場合、本発明の化合物及び他の薬剤は、単一の医薬組成物に組み入れることができる。医薬組成物は、本発明の１つの化合物、及びα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬のみならず、治療効果を有する他の成分を含んでいても良い。或いは、本発明の化合物が、他の薬物と別々に投与される場合、二つ以上の組成物、例えば本発明の化合物を含む組成物及び他の薬物を含む他の組成物を投与することができる。
【００７０】
本発明の好ましい一つの実施態様は、必要とする対象者の統合失調症を治療し、又は予防する方法であり、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を阻害し、若しくは抑制する化合物、又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作することができる、有効量の化合物を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬と一緒に、対象者に投与することを含む。更により好ましい実施態様は、また、対象者に１つ又はそれ以上の、用語が一般的に認識されているような抗精神病薬を投与することを更に含む。
【００７１】
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を調節する薬物に加えて、本発明の化合物は、また、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を直接には調節することができない他の薬物と組み合わせて投与することができる。それらは、感染症を治療するためのある種の抗菌薬及び抗ウイルス薬；癌を治療するためのある種の抗癌薬及び／又は制吐薬；糖尿病を治療するためのある種の薬物、又は肥満症を治療するためのある種の薬物などである。本発明の化合物と共投与してもよい他の薬物としては、精神興奮薬及び／又はモノアミン再取り込み阻害薬が挙げられるが、それらに限定されない。
【００７２】
本発明は、また、１つ若しくはそれ以上の上記の化合物、若しくは本発明の実施によって発見され、若しくは同定されるその他の化合物、又は薬学的に許容されるそれらの塩を、当該技術でよく知られたような担体の特性と予測される性能に従う薬学的に許容されるそのような担体を一緒に含む医薬組成物を提供する。１つの実施態様は、必要とする対象者、好ましくは哺乳類、又はより好ましくはヒトの疾患又は状態を治療し、予防し、又は緩和するに適した医薬組成物であり、それはα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を抑制し、阻害し、若しくは予防し、及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作することができる有効量の少なくとも１つの化合物と、薬学的に許容される担体とを含む。１つの非常に好ましい実施態様によると、医薬組成物は、更に、少なくとも１つのα７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬、及び／又はα７ニコチン性アセチルコリン受容体のその他のモジュレーターを含んでもよい。
【００７３】
本明細書で用いられる用語「担体」としては、受容可能な希釈剤、賦形剤、アジュバント、ビヒクル、溶解補助剤、粘度調整剤、保存剤、及び最終医薬組成物における好ましい特性を供与するその他の薬剤を含む。
【００７４】
医薬組成物は、使用しようとするデリバリーシステムに依存し、種々の形態に製剤化することができる。一例として、本発明の医薬組成物は、錠剤若しくはカプセルとして、鼻スプレー又は吸入用のエアゾールとして、摂取可能な溶液として経口的に、又は非経口的に（例えば、組成物が静脈内、筋肉内又は皮下ルートによるデリバリー用としての注射可能な形態に製剤化される）させるために製剤化することができる。或いは、製剤は両方のルートによりデリバリーされるよう設計することができる。
【００７５】
疾患又は状態を治療したり又は予防するのに効果的な、本発明において同定された化合物の投薬量、用量割合は、疾患又は状態の性質、患者のサイズ、治療の目的、治療すべき病理学的性質、用いられる具体的な医薬組成物、及び治療する医師の診断と結論などの種々の要因に依存する。
【００７６】
例えば、投薬形態が、例えば、錠剤又はカプセルのような経口である場合、適切な投薬レベルは、一般的には約０.１μｇ／ｋｇ〜約５０.０ｍｇ／ｋｇ体重／日の間であり、好ましくは約１.０μｇ／ｋｇ〜約５.０ｍｇ／ｋｇ体重／日の間であり、より好ましくは、約１０.０μｇ／ｋｇ〜約１.０ｍｇ／ｋｇ体重／日の間であり、そして、最も典型的には、約２０.０μｇ／ｋｇ〜約０.５ｍｇ／ｋｇ体重／日の間である。
【００７７】
投薬する１日当りの回数は、活性成分の半減期などの薬理学的及び薬物動態学的因子に依存し、それは、その異化速度及びクリアランス速度のみならず、患者において達成される最小及び最適の血漿レベル、又は治療効果のために必要な該活性成分の他の体液レベルを反映する。
【００７８】
実施例１
α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現する細胞の調製
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（出生後３日）を断頭し、脳を取り出し、そして、氷で冷却した、ＮａＣｌ（１３０ｍＭ）、ＮａＨＣＯ3（２６ｍＭ）、ＮａＨ2ＰＯ4（１.２５ｍＭ）、ＫＣｌ（３ｍＭ）、ＣａＣｌ2（１ｍＭ）、ＭｇＣｌ2（５ｍＭ）及びグルコース（１０ｍＭ）を含む、人工的な脳脊髄液（ＡＣＳＦ）中に置いた。海馬領域を穏やかに取り出し、そして小さい切片に切断した。組織を、その後、パパイン（１ｍｇ／ｍｌ）を含むハイバーネートＡ媒体中に、３５℃で６０分間置いた。消化後、組織を、BrainBits, LLC, Springfield, IL（カタログＮｏ．ＨＡ）から得られたハイバーネートＡ媒体中で洗浄し、そして、ハイバーネートＡ媒体で作られた粉砕媒体（２ｍｌ）を含むコニカルチューブ（５０ｍｌ）へInvitrogen, Carlsbad, CAから得られた、２％のＢ２７血清フリーサプリメントと共に移した。
【００７９】
ニューロンは、粉砕によって分離した。海馬は媒体が細胞で濁るまで、ゆっくりと粉砕し、少しばかりの大きい組織は残った。細胞は、その後、Brewer GJ, Mol. Chem. Neuropathol. 31(2): 171-86 (1997)に記載された方法に準拠して、Ｎｙｃｏｐｒｅｐ勾配で精製した。簡単に述べると、Ｎｙｃｏｐｒｅｐ勾配は、粉砕媒体中、３５、２５、２０及び１５％の四段階から成るＮｙｃｏｐｒｅｐ（１ｍｌ）で作られている。細胞懸濁液をその後、遠心分離し、そして、興味ある細胞を含む画分を、ポリＤ−リシン／ラミニンでコートしたカバースリップ上に、密度３００〜７００セル／ｍｍで培養した。細胞をカバースリップに接着させるため、フード内において、室温で、１時間放置した。カバースリップを、その後、温めた培養媒体を含む組織培養プレートに移した。そのプレートは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カタログＮｏ．１０８８８〜０２２）から得られたＮｅｕｒｏｂａｓａｌ−Ａ媒体と、Ｂ２７血清フリーサプリメント（２％）、Ｌ−グルタミン（０.５ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）、及びファンギゾン（０.２５ｍｇ／ｍｌ）で作られたものであった。細胞は、湿気のあるインキュベータ内において、３７℃、そして、ＣＯ2（６％）で、１〜２週間保持した。媒体は、２４時間後に、そしてその後、約３日毎に換えた。
【００８０】
実施例２
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性の測定
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性を、電気生理学的方法で測定した。電流値は、Axon Instruments of Foster City, CAから得たＡｘｏｐａｔｃｈ  ２００Ｂ増幅器が備わった全細胞パッチクランプ技法を用いて、個々のニューロンから記録した、参照：Fenwick et al., J. Physiol. 331: 577-597 (1982) 。信号は、２ｍｓ／ポイントで測定し、１００Ｈｚでフィルターをかけた。全細胞電流は、デジタル化し、保存し、そして、Axon Instruments of Foster City, CAから得られた、ｐＣＬＡＭＰ ソフトウエア (Ｖ８.２)を用いて測定した。細胞を、ｐＨ７.４、２９０〜３００ミリオスモルで、ＮａＣｌ（１４０ｍＭ）；ＫＣｌ（５ｍＭ）；ＭｇＣｌ2（１ｍＭ）；ＣａＣｌ2（２ｍＭ）；ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）；グルコース（１０ｍＭ）を含む外部浴溶液（Internal bath solution)で継続的に灌流した。ビククリン；５μｍｏｌの６−シアノ−７−ニトロ−キノキサリン−２，３−（１Ｈ，４Ｈ）−ジオン（ＣＮＱＸ）の濃度でのＧＡＢＡＡ受容体拮抗薬；濃度５μｍｏｌでのグルタメート受容体拮抗薬；そしてテトロドトキシン（ＴＴＸ）；濃度０.５μｍｏｌでのＮａ+チャネル遮断薬が、自発的なシナプス活性を減少させるために浴に含まれていた。
【００８１】
作動薬としてアセチルコリンを用いた実験においては、全ての溶液にアトロピン硫酸塩（１ｍＭ）が含まれていた。候補化合物は、Warner Instruments of Hamden, CTから得られた多筒高速灌流交換システムによりデリバリーされた。パッチピペットは、ホウケイ酸塩キャピラリーガラスから作られ、そして、ｐＨ７.２で、２８０ミリオスモルで、ＣｓＣＨ3ＳＯ3（１２６ｍＭ）；ＣｓＣｌ（１０ｍＭ）；ＮａＣｌ（４ｍＭ）；ＭｇＣｌ2（１ｍＭ）；ＣａＣｌ2（０.５ｍＭ）；ＥＧＴＡ（５ｍＭ）；ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）；ＡＴＰ−Ｍｇ2+（３ｍＭ）；ＧＴＰ−Ｎａ（０.３ｍＭ）；ホスホクレアチン（４ｍＭ）から成る内部ピペット溶液で充満された。内部溶液で充満されたパッチピペットの電気抵抗は、３〜６ＭＯｈｍの範囲内であった。実験は室温で行われた。
【００８２】
実施例３
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の再感作薬の同定
候補化合物は、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させるその活性を次のようにテストされた：α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬を、α７ニコチン性アセチルコリン受容体を発現させる細胞に３分間作用させた。作動薬の濃度は、先ずα７ニコチン性アセチルコリン受容体を活性化させ、そして、その後、作動薬の継続的存在下で、完全に脱感作する濃度であった。１００ｎＭの作動薬が受容体を完全に脱感作させるに十分ではあるけれど、３μＭの作動薬をこの実験に用いた。これらの実験で用いた作動薬は、（Ｎ−［（３Ｒ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−３−イル］−４−クロロベンズアミド・塩酸塩（化合物１）であり、その製造は、ＰＣＴ出願公開ＷＯ第０２８５９０１号に記載されている。
【００８３】
作動薬の存在下で、候補化合物は、作動薬の濃度が実験中同一で維持されるように加えられた。α７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作させた化合物は、作動薬の継続的存在下、α７ニコチン性受容体が介在した応答を誘発する能力を、電気生理学的方法を用いて測定することによって同定された。この実施例において、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の活性は、全細胞パッチクランプ技法を用いて測定した、参照：Fenwick et al., J. Physiol.  331: 577-597 (1982) 。カルシウムイメージング及び放射性カルシウムの流出（flux）などのその他の方法も、また、使用できた。
【００８４】
実施例４
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の再感作
実施例１に記載された方法に従って、細胞を調製した。α７ニコチン性アセチルコリン受容体の非選択的作動薬であるニコチンを、細胞に３分間継続して作用させた。ニコチンに継続して１分暴露させた後、化合物２、Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）尿素を、ニコチンの継続的存在下で作用させた。ニコチンの添加により、受容体の脱感作により急速にベースラインに下降する初期の内向き電流を引き起こした。化合物２を添加することにより、洗い流しで容易に逆転する大きな持続性のある内向き電流を引き起こした。
【００８５】
実施例５
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作薬及びモジュレーターの比較
実施例１に述べた方法に従って、細胞を調製し、そして、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の選択的作動薬である、化合物１に継続して３分間暴露した。作動薬に継続して６０秒暴露した後、化合物２又は５−ヒドロキシインドールを、化合物１の継続的存在下に作用させた。図１及び図２で示すように、受容体が化合物に暴露されている接続時間は、黒線で示される。作動薬の添加により、受容体の脱感作により、急速にベースラインに下降する初期の内向き電流を引き起こした。化合物２の添加により、洗い流しで容易に逆転する大きな持続性のある内向き電流を引き起こした。５−ヒドロキシインドールの添加は、内向き電流に有意な作用を及ぼさなかった。
【００８６】
実施例６
α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作の阻害
細胞を実施例１述べた方法に従って調製し、以下の化合物を含む種々の候補化合物に暴露した。
化合物２：Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）尿素；
化合物３：Ｎ−（２，４−ジメトキシ−５−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
化合物４：Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
化合物５：Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−（３−メチルイソオキサゾール−５−イル）尿素；
化合物６：Ｎ−［２−（２−フリル）−４−メトキシフェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
化合物７：Ｎ−（５−ブロモ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−５−イル］尿素；
化合物８：Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
化合物９：Ｎ−［４−エトキシ−２−（２−フリル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
化合物１０：Ｎ−（４−メトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
化合物１１：Ｎ−［４−メトキシ−２−（１，３−オキサゾール−２−イル）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
化合物１２：Ｎ−（４−エトキシ−２−ニトロフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）イソオキサゾール−３−イル］尿素；
化合物１３：Ｎ−［２−メトキシ−４−（２−メトキシエトキシ）フェニル］−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素；
化合物１４：Ｎ−（６−シアノピリジン−３−イル）−Ｎ’−（５−フルオロ−２，４−ジメトキシフェニル）尿素；
化合物１５：Ｎ−（４−メトキシ−２−メチルフェニル）−Ｎ’−［５−（トリフルオロメチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］尿素
【００８７】
これらの化合物の製造は、米国特許出願第２００３０２３６２８７号において見られる。
【００８８】
各々の化合物は、継続して５〜１０分間作用させた。候補化合物に継続して約３０秒暴露した後、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬である、アセチルコリン（１ｍＭ）を、候補化合物の継続的存在下で、１秒間作用させた。作動薬アセチルコリンの最低５回の作用に対して、この作業を１分に１回繰り返した。アセチルコリンを各々の作用の間に洗い流し、そしてα７ニコチン性アセチルコリン受容体を１分毎に１秒暴露し、その間、各々の候補化合物に、同時に連続して暴露した。図３に示すように、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の化合物２への暴露は、１秒間の作動薬の作用の間、受容体の脱感作を有意に阻害し、又は低下させる結果をもたらした。更に、図４に示すように、５−ヒドロキシインドールは、アセチルコリン誘発のイオン電流の脱感作の動力学に影響を与えなかった。対照的に、動力学的特性における著しい相違は、化合物２〜１５の各々に暴露された細胞において認められ、それは、これらの化合物により、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作が阻害されることを示した。
【００８９】
実施例７
統合失調症に対する候補化合物の効果
次のプロトコルは、統合失調症障害を患っている患者における、本明細書で同定された候補化合物の効果を測定するために使用される。
【００９０】
無作為二重盲検プラセボ対照試験が実施された。統合失調症の診断を受けた約１００人の、２０〜５０歳の男性及び女性の患者が、研究への参加に募られた。
【００９１】
患者に１２週間、０.１ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日の量の候補化合物、又はプラシーボを無作為に投与した。無作為化の前、患者の統合失調症を、the American Psychological Association's Ethical Principles of Psychologists and Code of Conduct (APA, 1992)により提供された評価ガイドラインを用いて評価した。主要評価項目は、治療グループとプラシーボグループ間での比較である。
【００９２】
実施例８
好ましいα７の構築物
種々の哺乳類のα７ニコチン性アセチルコリン受容体の構築物は、それが適切に細胞に発現する場合、本発明の実施によって使用することができた。例えば、全長野生型のヒト受容体は非常に有用であり、そして、それは、米国特許第５,８３７,４８９号、及び第６,６６４,３７５号に記載されている。
【００９３】
しかしながら、α７ニコチン性アセチルコリン受容体は、有用量を細胞膜に発現させることは難しいと一般的に認識されている。従って、特別な二重突然変異構築物は非常に好ましい、参照：米国特許第６,６９３,１７２号、Vincent Groppi et al。それは参照によって、その全体が本明細書に組み入れられる。この二重突然変異構築物において、２０７位が、スレオニンからプロリンに変更され、そして、２１８位が、システインからセリンに変更された（これらの位置は、米国特許第５,８３７,４８９号における、シグナルペプチドの切断に起因するSeq ID NO 8の、２３０位及び２４１位に対応する）。この構築物は、細胞内で非常に良く発現した。
【００９４】
さらなるα７ニコチン性アセチルコリン受容体の構築物は、α７の全ての構造を欠いており、その結果は患者を治療するための必要な要求事項を正確に比較できるものではないので、あまり好ましくはないが、使用してもよい。例は、α７の細胞外ドメイン、好ましくはヒト由来の、そればかりでなく他の哺乳類由来の、そしてα７／５−ＨＴ３として知られている公知のキメラ構築物の何れかを含み、その好ましい例は、透過膜及びセロトニン受容体である５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ３）受容体の細胞間ドメインに融合したヒトの神経細胞のニコチン性アセチルコリン受容体の、アミノ末端の、細胞外の、又は、リガンド形成ドメイン（ペプチドシグナルは除く）を有している。好ましい例において、５−ＨＴ３ドメインは、ネズミ科であり、そして、そのような構築物の有用性は、遺伝子組み換え細胞における高レベルの発現を容易にすることを含み、その問題は、米国特許第６,６９３,１７２号のヒト「二重突然変異」構築物において、また、十分解決される。参照：Elsele et al., nature, v. 366 pp. 479-483, 1993。勿論、膜−小胞、合成又は天然由来の細胞は、また、受容体構築物を提示するために使用することができ、そして、そのような実施態様は同様に好ましくはないが、表面に結合したα７構築物もまた、使用しても良い。
【００９５】
実施例９
本発明の実施に有用な追加の方法論
本発明を実施するのに有用な、追加の背景資料及び種々のアッセイは、本明細書に付属した付表、８つの図表を含む、ページＡ−１〜Ａ−４１に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】化合物１、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に暴露した時の、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を示す。化合物１が存在する場合、化合物２はα７ニコチン性アセチルコリン受容体を再感作する。
【図２】α７ニコチン性アセチルコリン受容体の作動薬に暴露した時の、α７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作を示す。５−ヒドロキシインドールを添加することによって、脱感作した受容体を再感作することはなかった。
【図３】α７ニコチン性アセチルコリン受容体が初めに化合物２に暴露されたとき、受容体の作動薬として機能するアセチルコリンによるα７ニコチン性アセチルコリン受容体の脱感作が化合物２により阻害されることを図示している。
【図４】α７ニコチン性アセチルコリン受容体が化合物２〜１５の各々に暴露される場合、アセチルコリンによる脱感作が阻害され、一方、α７ニコチン性アセチルコリン受容体のモジュレーターである５−ヒドロキシインドールが、その様な効果を有していなかったことを図示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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