【事件の表示】
　特許第２５８３２５７号「インシュリン向性ホルモン」の特許請求の範囲第１〜４項及び第５〜９項に記載の発明の特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第２５８３２５７号の特許請求の範囲第１〜２項及び第３〜５項に記載された発明についての特許を維持する。
【理　由】
 I　手続きの経緯
　本件特許２５８３２５７号発明は、昭和６２年５月５日（国際出願日１９８７年５月５日、優先権主張１９８６年 ５月５日、米国）に特許出願され、平成８年１１月２１日に設定登録がなされ、その後、日本セラテック株式会社及び渡辺和子より特許異議の申立てがなされ、取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１１年１月１４日に訂正請求がなされ、特許権者より平成１１年２月１９日付け上申書が提出され、更に取消理由通知がなされ平成１２年９月２９日に２回目の訂正請求がなされたものである。（なお、平成１１年１月１４日付け訂正請求書は取り下げられた。）
　　
II　訂正の適否についての判断
１　訂正明細書の特許請求の範囲第１項及び第３項に記載の発明
　訂正明細書の特許請求の範囲第１項及び第３項に記載の発明は、その特許請求の範囲の第１項及び第３項に記載された次のとおりのものである 。
　「１．式：
ＮＨ２−Ｘ−ＣＯ−Ｒ１［式中、Ｘは、式：
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-
Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-
Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-
Lys-Gly-Arg-Gly
で示される配列を有しインシュリン向性活性を有する、実質上、天然の不純物を含有しないペプチドであって、Ｘの両側のＮＨ２−及び−ＣＯ−の各基は、該ペプチドのアミノ及びカルボキシ末端側に位置するアミノ酸に由来する基を表している。Ｒ１はＯＨ、ＯＭまたはＮＲ２Ｒ３であって、Ｍは薬学的に許容し得る陽イオンまたは低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基、Ｒ２およびＲ３は水素および低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基からなる群から選択される互いに同一または異なる基を表す。）
で示される化合物、その酸付加塩、並びに保護された、または部分的に保護されたペプチド化合物。」
「３．式：
ＮＨ２−Ｘ−ＣＯ−Ｒ１［式中、Ｘは、式：
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-
Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-
Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-
Lys-Gly-Arg-Gly
で示される配列を有しインシュリン向性活性を有する、実質上、天然の不純物を含有しないペプチドであって、Ｘの両側のＮＨ２−及び−ＣＯ−の各基は、該ペプチドのアミノ及びカルボキシ末端側に位置するアミノ酸に由来する基を表している。Ｒ１はＯＨ、ＯＭまたはＮＲ２Ｒ３であって、Ｍは薬学的に許容し得る陽イオンまたは低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基、Ｒ２およびＲ３は水素および低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基からなる群から選択される互いに同一または異なる基を表す。）
で示される化合物、その酸付加塩、並びに保護された、または部分的に保護されたペプチド化合物の有効量と、インシュリン向性医薬としての使用に適した薬学上許容し得る担体とを含有する膵Ｂ型島細胞におけるインシュリンの発現を刺激または促進するための医薬組成物。」
　　
２　訂正の目的の適否、新規事項の有無及び拡張・変更の存否
　本件訂正請求は、本件特許第２５８３２５７号発明の明細書を訂正明細書のとおりに訂正することを求めるものであり、訂正の内容は次のとおりである。
（ａ）特許請求の範囲第１、５項に記載の「−（Ｇｌｙ）ｎ（式中、ｎは０又は１を表す）」を「−Ｇｌｙ」と訂正する。
（ｂ）特許請求の範囲第２，３，７及び８項を削除し、第４，５，６及び９項の番号を順次繰り上げ、第１項〜第５項とすると共に、これら請求項の各項で引用する請求項の番号を、繰り上げた請求項の番号に整合するようにする。
　　
（ｃ）願書に添付した明細書１４頁８行記載の「いずれををも」を「いずれをも」と訂正する。
（ｄ）同明細書２７頁下から２行に記載の「あるり」を「あり」と訂正する。
　そこで、これらの訂正事項について検討すると、前記の（ａ）の訂正は、（Ｇｌｙ）ｎのｎを１に限定するものであり特許請求の範囲の減縮を目的とするものと認められる。
（ｂ）の訂正は、請求項を削除するものであるから特許請求の範囲の減縮を目的とするものと認められ、また第４，５，６及び９項の番号の順次繰り上げは、請求項２，３，７及び８を削除することに伴い不連続となった請求項の番号を訂正するものであるから明りょうでない記載の釈明を目的とするものと認められる。
　各項で引用する請求項の訂正は、請求項の削除に伴い不明瞭となった請求項番号を、繰り上げ後の請求項番号に整合させるための訂正であるから、明りょうでない記載の釈明を目的とする訂正である。
（ｃ）、（ｄ）の訂正は、誤記であることが明らかな記載を正すもので誤記の訂正を目的とするものである。
　そして、上記訂正に係る（ａ）の点は、願書に添付した明細書の１１頁１行〜１２頁６行（本件特許公報７欄７〜３９行）の「本発明は・・・でもある。」の記載等に基づくものであり、願書に添付した明細書に記載の事項の範囲内のものであり、（ｃ）、（ｄ）の訂正は願書に最初に添付した明細書に記載の事項の範囲内のものである。また、上記各訂正は実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものでない。
　　
３　独立特許要件の判断
　そこで、上記訂正後の特許請求の範囲に記載されている事項により構成される発明が独立して特許を受けることができるか否かについて以下検討する。
　　
（１）異議申立人の主張
（ａ）異議申立人日本セラテック株式会社（以下「申立人日本セラテック」と言う。）は、甲第１号証の１〜甲第１号証の４、甲第２号証〜甲第５号証を提出し、訂正前の本件の特許請求の範囲第１、５項に記載の発明は、甲第２号証に記載された発明に該当し、または同第１、５項に記載の発明は甲第２号証に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第１項第３号又は第２項の規定により特許を受けることができず、また本件明細書の記載が不備であるから特許法第３６条第３項及び第４項に規定する要件を満たしていないものであり、本件特許は取り消されるべきである旨主張している。
　同申立人は、本件特許が重大な瑕疵を有することは、本件特許に対応する米国特許出願５１２０７１２号の出願経過記録、米国特許明細書（甲第１号証の１〜甲第１号証の４）及び本件特許に対応するヨーロッパ特許第３０５３８７　Ｂ2号明細書（甲第３号証）に照らして明らかであるから、本件特許は取消を免れないものである旨の主張（以下、該主張を「日本セラテックの取消申立ａ−１」という。）もしている。
（ｂ）異議申立人渡辺和子（以下「申立人渡辺和子」と言う。）は、甲第１〜８号証、参考資料１，２を提出し、訂正前の本件の特許請求の範囲第１項に記載の発明は、甲第１号証に記載された発明に該当し、又甲第１〜４号証に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであり、訂正前の同第５項に記載の発明は、第１〜５号証に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第１項第３号及び第２項の規定により特許を受けることができず、また本件明細書の記載が不備であるから特許法第３６条第３項及び第４項に規定する要件を満たしていないものであり、本件特許は取り消されるべきである旨主張している。
　　
（２）当審においては、刊行物１〜４を提示し、本件の訂正前の特許請求の範囲第１項に記載の発明は、刊行物１、２及び４に記載の発明に基いて、同第５項記載の発明は、刊行物１〜３に記載の発明に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本件特許は特許法第２９条第２項の規定に違反してなされたものであり、また本件明細書の記載が不備であるから特許法第３６条に違反してなされたものである旨の取消理由通知（２回目）を通知した。
　　　
（３）各証拠、刊行物の記載事項
(i）申立人日本セラテックの提出した証拠
　甲第２号証（Diabetologia，Ｖｏｌ．２８，ｐｐ７０４〜７０７，１９８５）（刊行物１。取消理由で引用。）には、ＧＩＰ、グルカゴン及びＧＬＰ−１の具体的アミノ酸配列と共に、ＧＬＰ−１（１〜３７）のペプチドにおいて７〜３７位のアミノ酸配列は、その７位から始まる配列においてグルカゴン及びＧＩＰのアミノ酸配列と高い共通性があることが明確に記載（７０６頁、図４）されている。また７０６頁には、グルカゴンと比較すると、広い濃度範囲にわたって、高グルコースレベル下においてのみ、ＧＬＰ−１は約４０〜６０％のインシュリン放出の増加に達すること、ＧＬＰ−１はグルコース依存性様式でインシュリン放出を刺激するガストリック・インヒビトリー・ポリペプタイド（ＧＩＰ）の生物学的作用と類似していること、ＧＬＰ−１はＧＩＰによってもたらされる最大インシュリン応答の約４０％に達すること、ＧＬＰ−１は２．５ｎｍｏｌ／ｌの濃度でインシュリン放出の有意な刺激を示すこと、ＧＬＰ−１のグルカゴン及びＧＩＰに対する実質的に近似する配列の相同性により、元のままのペプタイドと比較して、生成するＧＬＰ−１（７−３６）のより強力なグルカゴン−及び／又はＧＩＰ様生物学的活性を予期することができる（さらに実験においてテストされるべき仮説）ことがそれぞれ記載されている。
　甲第１号証の１（米国特許第５１２０７１２号明細書）は、本件特許の対応する米国特許出願Serial　No.８５９９２８号の特許明細書である。該明細書のクレームにはＧＬＰ−１（７−３７）が記載されているが、ＧＬＰ−１（７−３６）は示されていない。
　甲第１号証の２は、米国特許第５１２０７１２号の特許出願（Serial　No.８５９９２８）に関する１９８８年９月２８日（発送日）付けオフィス・アクション（Paper　No.１９）である。これには、出願人が提出した宣誓書は本願の最初に提出された明細書にＧＬＰ−１（７−３６）が開示されていなかったという事実を減じるものではないということ等、が記載されている。
　甲１第号証の３は、上記米国特許の１９８９年１月３０日（発送日）付一部継続出願（Serial　No.３０３９８２）の訂正書である。訂正書のクレーム３６等にはＧＬＰ−１（７−３６）の化合物に係る発明が記載されている。
　甲第１号証の４は、上記米国特許出願の一部継続出願（Serial　No.３０３９８２）に関する１９８９年５月９日（発送日）付けオフィス・アクション（Paper　No.２３）である。これにはＧＬＰ−１（７−３６）に関するクレーム３６等を拒絶する旨記載されている。
　甲第３号証（ヨーロッパ特許第３０５３８７　Ｂ２号明細書）は、本件特許の対応するヨーロッパ特許出願の特許明細書である。該明細書のクレームにはＧＬＰ−１（７−３７）が記載されているが、ＧＬＰ−１（７−３６）は記載されていない。
　甲第４号証の１（特表平１−５０２７４６号公報）は、本件特許出願の公表公報である。
　甲第４号証の２（特許第２５８３２５７公報）は、本件特許出願の特許掲載公報である。　
　甲第５号証（ＷＯ８７／０６９４１）は、本件特許出願の基礎をなす国際出願ＰＣＴ／ＵＳ８７／０１００５号の国際公開である。
　　　　
(ii)異議申立人渡辺和子の提出した証拠
　甲第１号証（Diabetologia，Ｖｏｌ．２８，ｐｐ．７０４〜７０７，１９８５）（申立人日本セラテック提出の甲第２号証（刊行物１）と同じ。）
　甲第２号証（Regulatory　Peptides、Ｖｏｌ．１３（１）ｐ．１０１，１９８５）（以下「刊行物５」という。）には、ＧＬＰ−１（１〜３７）が単離したラット島細胞でグルコース依存性のインシュリン向性効果を示すことが記載（１０１頁）されている。
　甲第３号証（The　Journal　of　Biological　Chemistory、Ｖｏｌ．２６０，Ｎｏ．７、ｐｐ．３９１０〜３９１４、１９８５）（刊行物４。取消理由で引用。）には、ヒト及びあんこうのプレプログルカゴンにはＧＬＰ−１が含まれること（３９１０頁、図１）、ハムスター由来のＧＬＰ−１（１−３７）の１−６位に相当するアミノ酸はナマズとあんこうにはないことが記載（３９１１頁、図７）され、ハムスター由来のＧＬＰ−１（１−３７）、あんこう由来のＧＬＰ−１との間の配列の共通性についても記載（同頁、図７）されている。
　甲第４号証（Acta　Endocrinologica、７０，ｐｐ．４８７〜５０９，１９７２）（以下「刊行物６」という。）には、インシュリン向性活性を確認するためのアッセイ方法が記載されている。
　甲第５号証（生化学辞典、第１版、１９８５年、東京化学同人　８６８頁）（以下「刊行物７」という。）には、インシュリン非依存型（成人型）はインシュリンの分泌を刺激する物質の投与によって治療できることが記載されている。
　甲第６号証（生化学辞典、第１版、１９８５年、東京化学同人　９７〜９８頁）には、アンギオテンシンIIはアンギオテンシンＩのＣ末端からHis-Leuが除かれたオクタペプチドであること、アンギオテンシンIIには強い血圧上昇活性があるが、同Iにはこのような活性がないことが記載されている。
　甲第７号証（Journal　of　Experimental　Medicine、１０４，ｐｐ．１８３〜１９１，１９５６）には、ハイパーテンシンI及びIIのアミノ酸配列と活性の相関が記載され、ハイパーテンシンIIのＣ末端のPheをカルボキシペプチダーゼで切断すると全ての血管収縮性がなくなること（１９０頁、要約の項）が記載されている。
　甲第８号証（Petide　Chemistory、１９８４，Ｎ．Izumiya(Ed.)，Protein　Research　Foundation，ｐｐ．２２９〜２３４，１９８５）には、α−ｈＡＮＰ（α−ヒト心房性ナトリウム利尿ペプチド）は２８アミノ酸からなるペプチドであり、その生物活性をＣ末端アミノ酸を１つずつ欠失させたペプチドと比較したとき、各ペプチドの生物活性にはきわめて大きな違いがあることが観察されたことが記載（２３４頁、表３）されている。
　参考資料１は、米国特許第５１２０７１２号明細書）本件特許の対応する米国特許出願の特許明細書である。
　参考資料２（ヨーロッパ特許第０３０５３８７　Ｂ２号明細書）は、本件特許の対応するヨーロッパ特許出願の特許明細書である。
　　　
(iii)申立人提出以外の刊行物
　J　Clin　Endocrinol　Metabol，Ｖｏｌ．３７，ｐｐ．８６２〜８２９，１９７３（刊行物２。取消理由で引用。）には、ＧＩＰ（ガストリック・インヒビトリー・ポリペプタイド）は強力なインシュリン向性ホルモンであり、インシュリンの放出を刺激する作用を有していることが記載されている。
　渋谷編「新薬理学入門」１９８１年１１月２０日　（株）南山堂　４７０頁（刊行物３。取消理由で引用。）には、グルカゴンがインシュリンの放出を促進する因子であることが記載されている。
　　　
（４）引用刊行物１〜４記載の発明及び刊行物５〜７記載の発明とのとの対比、判断
（ａ）訂正明細書の特許請求の範囲第１項に記載の発明（以下「本件第１発明」という）について
　当審が通知した取消理由（２回目）で引用した刊行物１には、ＧＬＰ−１（７−３６）は元のペプチドに比しより強力なグルカゴン及び／又はＧＩＰ様生物学的活性を持つことが予期されると記載されているが、ＧＬＰ−１（７−３６）のＣ末端に更にＧｌｙを付加したＧＬＰ−１（７−３７）のペプチドについては言及されておらず、このようなペプチドが有用な生物学的活性を有することを示唆する記載もない。
　また、該刊行物７０６頁、図４に記載の各ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＬＰ−１（１−３７）ペプチドの７−３７位の配列部分にグルカゴン及びＧＩＰ−１のアミノ酸配列と共通する部分があることを示しているが、ＧＬＰ−１（７−３７）のペプチドが有用な生物学的活性を有することを示唆するものではない。
　刊行物２は、ＧＩＰがインシュリン向性ホルモンでありインシュリンの放出を刺激する作用を有することを示しているだけである。
　刊行物４には、ハムスターのＧＬＰとの比較においてその１〜６位の配列に対応する配列を欠くＧＬＰ（ナマズ等が由来。３９１１頁、表７中Ａ参照）が存在する旨の記載があるが、それらはアミノ酸３４のペプチドであるので、ＧＬＰ−１（１−３７）において７位から始まる３１のアミノ酸からなるペプチドが有用であること、又はその提供を示唆するものではない。
　刊行物５には、ＧＬＰ−１（１−３７）ペプチドがインシュリン向性活性を有することが記載されているだけであり、ＧＬＰ−１（１−３７）において７位から始まる３１のアミノ酸からなるペプチドが有用であること、又はその提供を示唆する記載はない。
　刊行物６には、インシュリン向性活性を確認する分析方法が、刊行物７には、インシュリン非依存型（成人型）の糖尿病はインシュリンの分泌を刺激する物質の投与によって治療できることが記載されているだけである。
　更に刊行物５の記載に、刊行物１，２，４，６及び７の上記記載を合わせて考慮しても、これらの記載事実から本件第１発明が容易になし得たものであるとはいえない。
　そして、本件第１発明では、特許請求の範囲第１項記載のインシュリン向性活性を有するペプチドが得られるという効果を奏するものと認められる。
　したがって、本件第１発明は、刊行物１（申立人日本セラテック提出の甲第２号証）に記載の発明ではなく、刊行物１、２、４〜７に記載された発明から当業者が容易に発明をすることができたものであるとは言えない。
（ｂ）訂正明細書の特許請求の範囲第３項に記載の発明（以下「本件第２発明」という）について
　本件第２発明は、本件第１発明の「ペプチド化合物」の有効量と、「インシュリン向性医薬としての使用に適した薬学上許容し得る担体」とを含有させてなる「膵Ｂ型島細胞におけるインシュリンの発現を刺激または促進するための医薬組成物」である。
　本件第２発明は、本件第１発明の構成をすべて有するので上記（ａ）と同様な理由により刊行物１，２，４〜７に記載された発明からは容易に発明をすることができたものであるとは言えない。
　刊行物３は、グルカゴンがインシュリン放出を促進する因子であることを示しているが、ＧＬＰ−１（７−３７）ペプチドが有用であることを示唆するものではない。
　更に、刊行物１の記載内容に、刊行物３における該記載及び刊行物２，４〜７の上記記載を合わせ考慮しても、これらの記載から本件第２発明が容易になし得たものであるとは認められない。
　そして、本件第２発明では、その構成を採用することにより、インシュリンの発現を刺激または促進するための医薬組成物が提供されるという明細書記載の効果を奏するものと認められる。
　したがって、本件第２発明は、刊行物１〜７に記載された発明から当業者が容易に発明をすることができたものであるとは言えない。
　なお、申立人渡辺和子が提出した甲第６〜８号証、参考資料１、同２も検討したが上記判断を左右するものではない。
　申立人日本セラテックが提出した甲第１号証の１〜甲第１号証の４、甲第３号証、甲第４号証の１、甲第４号証の２、甲第５号証は、本願の優先権主張の日前に頒布された刊行物ではないので、特許法第２９条に関する証拠としては採用できない。
　「日本セラテックの取消申立ａ−１」の主張が採用できない理由は後述（III．１）のとおりである。
　　
（５）特許法第３６条違反について
（異議申立人の主張）
　申立人日本セラテックは、次の（ａ）、（ｂ）点で、申立人渡辺和子は、次の（ｃ）〜（ｆ）点で、本件明細書の記載が不備であるので特許法第３６条第３項及び第４項に規定する要件を満たしていない旨主張している。
　　　　　　　　　　　　　　記
（ａ）本件明細書の発明の詳細な説明にはＧＬＰ−１（７−３６）のペプチドについて何等具体的開示がない。
（ｂ）本件明細書の特許請求の範囲には発明の詳細な説明に記載した発明の構成に欠くことができない事項のみを記載したものとはいえない。
（ｃ）ＧＬＰ−１（７−３６）のペプチドにＧＬＰ−１（７−３７）のペプチドに匹敵するインシュリン向性活性があるかどうか確認できない。
（ｄ）実施例で使用されているペプチドが不明確であり、ＧＬＰ−１（１−３６）にインシュリン向性活性があることが明細書中で確認できない。
（ｅ）本件発明のペプチド化合物のＣ末端修飾体について容易に実施できる程度に記載されていない。ＧＬＰ−１（７−３７）ＮＨ２がインシュリン向性活性を有するという開示がない。
（ｆ）ＧＬＰ−１（７−３６）はＧＬＰ−１（７−３７）の機能的誘導体ではない。
　以下これらの点について検討する。
（ａ）について
　平成１２年９月２９日付けの訂正請求により、ＧＬＰ−１（７−３６）は本件第１、２発明から削除された。したがって、該ペプチドの開示がないことを理由に本件明細書の記載が不備であるとすることはできない。
（ｂ）について    
　同訂正請求により、本件発明は訂正明細書の特許請求の範囲第１，３項に記載されたとおりのものとなった。同第１，３項には、本件第１、２発明の構成に欠くことのできない事項は全て記載されていると認められる。
（ｃ）について
　同訂正請求により、ＧＬＰ−１（７−３６）は本件第１発明から削除され、又該ペプチドを含有する医薬組成物は本件第２発明から削除された。したがって、本件明細書の記載がこの点で不備であるとすることはできない。
　なお、申立人は、主張（ｃ）の根拠として甲第６〜８号証を提出しているが、ＧＬＰ−１（７−３６）が本件第１、２発明に係るペプチドではなくなった以上（訂正により削除）、これらの証拠に基づいて明細書が記載不備であるとすることはできない。
（ｄ）について
　ＧＬＰ−１（１−３６）のペプチドと該ペプチドを含有する医薬組成物は、本件第１発明または第２発明には含まれない。また本件明細書の実施例での使用ペプチドの表記は不明瞭とは言えない（「des・・・」は削除されたアミノ酸を意味し、数字はＮ末端を１としたときのアミノ酸の位置を示す。）。したがって、この点で本件明細書の記載が不備であるとすることはできない。
（ｅ）について
　ペプチドのＣ末端修飾体を得ることはこの分野では周知技術であるから、そのことが詳しく書かれてないという理由で直ちに明細書が記載不備になるというものではない。そして申立人も容易に実施できないと言うのみで、そのことを裏付ける根拠を具体的に示していない。
　ＧＬＰ−１（７−３７）ＮＨ２は、本件発明においてインシュリン向性活性を有するものとして具体的に挙げられているので、アミド体についてもこのような活性がもたらされると言わざるを得ない。
（ｆ）について
　同訂正請求により、ＧＬＰ−１（７−３６）は本件第１発明から削除され、該ペプチドを含有する医薬組成物は本件第２発明から削除された。該ペプチドは、本件第１，２発明の実施において関係がないものとなったので、ＧＬＰ−１（７−３６）が同（７−３７）の機能的誘導体でないということを理由に本件明細書の記載が不備であるとすることはできない。
（取消理由通知の理由）
　当審が通知した取消理由で指摘した点は、「(i)本件第１発明のペプチド化合物において、ペプチドがＧＬＰ−１（７−３６）、その修飾体等（以下「ＧＬＰ−１（７−３６」という。）である場合については、当業者が容易に実施できる程度に発明の目的、構成、効果が記載されていない。また第２発明においてもペプチドがＧＬＰ−１（７−３６）である場合は、容易に実施できる程度に記載されていない。」というものである。
　この点についてであるが、上記したように訂正請求により本件第１、２発明は訂正明細書の特許請求の範囲第１，３項に記載のとおりのものとなった（「ＧＬＰ−１（７−３６）」は本件発明から削除された。）。したがって、(i)の点で本件明細書の記載が不備であるとすることはできない。
　　
（６）　独立要件のまとめ
　本件第１、２発明は特許出願の際独立して特許を受けることができない発明とすることはできない。
　　
４　訂正の適否についての結論
　以上のとおりであるから、上記訂正請求は、特許法第１２０条の４第２項、及び同条第３項で準用する第１２６条第２〜４項の規定に適合するので、請求のとおり当該訂正を認める。
　　
III　特許異議申立てについての判断
１　異議申立理由
（ｉ）異議申立理由は上記II３（１）（ａ）、（ｂ），（２）のとおりであり、本件第１発明及び本件第２発明が、異議申立理由によって取り消され得ないことは上記II３（４）〜（６）に記載したとおりである。
　なお、申立人日本セラテックと申立人渡辺和子は訂正前の特許請求の範囲第４，６，９項（それぞれ訂正後の第２，４、５項に対応）に記載のもの（本件発明の実施態様）に対しても「容易」になし得たものであるから取り消されるべきである旨主張（訂正前の特許請求の範囲第２，３，７，８項は削除された。）しているが、いずれも本件第１発明又は第２発明を技術的に限定するものであるから上記したのと同じ理由により容易になし得たものであるとすることはできない。
（ii）「日本セラテックの取消申立ａ−１」について
　申立人日本セラテックの主張は、「（ａ）本件特許については、訂正前の特許請求の範囲第１項の式にＧＬＰ−１（７−３６）のペプチドが含まれるが、該ペプチドは本件出願後に特許請求の範囲に加入されたものであり、本件特許は重大な瑕疵を有し、取消を免れないものである。（ｂ）本件特許のこのような瑕疵は、本件特許に対応する米国特許５１２０７１２号の出願審査経過記録、米国特許明細書（甲第１号証の１〜甲第１号証の４）及び本件特許に対応するヨーロッパ特許第３０５３８７号明細書（甲第３号証）に照らして明らかである。」というものである。　
（ａ）について
　本件第１、２発明はＧＬＰ−１（７−３６）を含まないので（訂正請求により該ペプチドは削除された。）、本件特許に重大な瑕疵があるという申立人の主張は採用できない。
（ｂ）について
　上記したようにＧＬＰ−１（７−３６）は削除され、本件発明は該ペプチドを含まない。申立人日本セラテックの（ｂ）での主張は、本件発明がＧＬＰ−１（７−３６）を含むことを前提とするものであるから、該ペプチドが削除された以上、該主張を根拠に本件発明の特許を取り消すことはできない。
　　
IV　むすび
　以上のとおりであるから、異議申立の理由及び証拠、取消理由通知の理由によっては、本件第１発明及び第２発明の特許を取り消すことができない。　
　また、他に本件第１発明及び第２発明の特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１２年１１月２７日（２０００．１１．２７）
【訂正の要旨】
訂正の要旨
（ａ）特許請求の範囲、第１、５項に記載の「−（Ｇｌｙ）ｎ（式中、ｎは０又は１を表す）」を「−Ｇｌｙ」と訂正する。
（ｂ）特許請求の範囲、第２，３，７及び８項を削除し、第４，５，６及び９項の番号を順次繰り上げ、第１項〜第５項とすると共に、これら請求項の各項で引用する請求項の番号を、繰り上げた請求項の番号に整合するようにする。
（ｃ）願書に添付した明細書１４頁８行記載の「いずれををも」を「いずれをも」と訂正する。
（ｄ）同明細書２７頁下から２行に記載の「あるり」を「あり」と訂正する。
（５４）【発明の名称】
インシュリン向性ホルモン
【発明の詳細な説明】
発明の背景
　産業上の利用分野
　本発明は、プレホルモン、プログルカゴンのある種のペプチドフラグメントがホルモン様活性を有し、ホルモン、即ちインシュリンの合成および分泌を刺激するのに使用し得るという発見に関するものである。これらのペプチドフラグメントは、糖尿病の治療に有用である。
　
従来技術と発明が解決すべき課題
　膵臓の島（ランゲルハンス島）細胞における内分泌は血液−骨代謝（グルコース、アミノ酸、カテコールアミン等）のみならず、局所のパラクリンの影響等、複雑なコントロール下にある。主な膵島ホルモン（グルカゴン、インシュリンおよびソマトスタチン）は、それらに特異的な細胞型（夫々、Ａ、ＢおよびＤ型細胞）の間で相互作用し、代謝物質によって伝達（ｍｅｄｉａｔｅ）される分泌応答を変調（ｍｏｄｕｌａｔｅ）する。インシュリン分泌は、血中の糖（グルコース）濃度によって優先的にコントロールされているが、グルカゴンおよびソマトスタチンもグルコースによって伝達されるインシュリンの分泌応答を、夫々、刺激および抑制する。既に提案されているインシュリン分泌に対する島内のパラクリン制御以外に、腸内にもインシュリン向性因子が存在することを示す証拠がある。この概念は、経口摂取されたグルコースのインシュリン分泌刺激作用が、同等量の静脈内投与されたグルコースに比べてはるかに強いという観察結果に基いている。
　ヒトホルモン、グルカゴンは、膵Ａ細胞で産生される２９アミノ酸のペプチドホルモンである。このホルモンは、セクレチン、胃酸抑制性ペプチド、血管作用性腸ペプチドおよびグリセンチン等、構造上、似通ったペプチドの、マルチ遺伝子ファミリーに属している。これらのペプチドは、炭水化物代謝、胃腸の運動性、および分泌工程等を様々に制御している。しかしながら、膵グルカゴンの基本的な作用として認識されているのは、グリコーゲン分解と糖新生の促進作用であり、その結果としての血中糖濃度上昇作用である。このことに関連し、グルカゴンの作用はインシュリンと反対の制御効果
を顕し、糖尿病を伴った高血糖症をもたらすことになる［Ｄｉａｂｅｔｅｓ　ｍｅｌｌｉｔｕｓ、ルンドら（Ｌｕｎｄ，Ｐ．Ｋ．）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ
７９
　グルカゴンは、インシュリン産生細胞の表面に存在する特異的リセプターと結合し得ることが見出された。これらのリセプターと結合すると、グルカゴンは該細胞を刺激してｃＡＭＰの迅速な合成をもたらす。次いで、ｃＡＭＰが、インシュリン発現を刺激することが見出された［コーマンら（Ｋｏｒｍａｎ，Ｌ．Ｙ．）、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、
３４
２８２
Ｉｃｔａｌｕｒｕｓ
ｐｕｎｃｔａｔａ
２６０
８０
１１５
２７
　ロペツらのＧＬＰ−１の大きさに関する結論はウテンタルら（Ｕｔｔｅｎｔｈａｌ，Ｌ．０．）（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｃｒｉｎｏ１．Ｍｅｔａｂｏｌ．、
６１
　ＧＬＰ−１とグルカゴンとの類似性は、多くの初期の研究者に、ＧＬＰ−１にも生物学的活性が存在し得るという示唆を与えていた。ある研究者達は、ＧＬＰ−１がラット脳細胞のｃＡＭＰ合成を誘発し得ることを見出した［フーサインら（Ｈｏｏｓｅｉｎ，Ｎ．Ｍ．）Ｆｅｂｓ．Ｌｅｔｔ．
１７８
　結局、従来技術では、グルカゴンホルモンの前駆体がプロッセシングされて、広範囲にわたってホモロジーな１組のペプチドが生じることが認識されたことになる。当該技術分野における多くの人々が、これらの高度に関連しているグルカゴン様ペプチドには当然生物学的活性があると考えていた。にもかかわらず、これら分子の生物学的作用の解明を目指した多くの研究者が不成功に終ったのである。
　
発明の要約
　ホルモングルカゴンは、高分子量の前駆体として合成され、それがタンパク分解的に開裂されて３つのペプチド、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）およびグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）となることが知られている。ＧＬＰ−１は、プロッセシングされない状態では３７アミノ酸からなる。本発明は、未プロッセシングＧＬＰ−１が自然に、ＧＬＰ−１の７−３７アミノ酸を有する３１アミノ酸長のペプチド（７−３７ペプチド）に変換されることを開示するものである。このプロッセシングは、膵臓および腸管内で起こる。この７−３７ペプチドはこれまで報告されたことのないインシュリン向性（インシュリノトロピック）ホルモンである。このホルモンの作用は膵β細胞に特異的であり、該細胞のインシュリン生合成を誘導すると思われる。プロッセシングされていないＧＬＰ−１は、本質的に、インシュリンの生合成の誘発を伝達することができない。このインシュリン向性ホルモンは、インシュリン分泌の動力学が異常になっている、成年期発現性の糖尿病の病因研究に有用である。
　
図面の簡単な記述
　第１図は、ヒト、ラットおよびハムスターのプレプログルカゴンのＤＮＡ構造および対応するアミノ酸配列を示す模式図である。プレプログルカゴンは、丸で示した部位でタンパク分解的に開裂される。
　第２図はラット島細胞種の細胞内ｍＲＮＡレベルに対するＧＬＰ−１ペプチドの影響を示す図である。
　第３図はラット島細胞種の細胞内アンギオテンシノーゲンｍＲＮＡレベルに対するＧＬＰ−１ペプチドの影響を示す図である。
　第４図はラット島細胞種の細胞内アクチンｍＲＮＡレベルに対するＧＬＰ−１の影響を示す図である。
　第５図は、ＧＨ４細胞内プロラクチンｍＲＮＡレベルに対するＧＬＰ−１（１−３７）の影響を示すＸ線図である。
　第６図は、ＡｔＴ−２０細胞内ＡＣＴＨｍＲＮＡレベルに対するＧＬＰ−１（１−３７）の影響を示す図である。
　
好ましい実施態様
　決定されたヒトＧＬＰ−１のアミノ酸配列から選択されたペプチド部分（断片）は本発明を含む開発の出発物質である。ＧＬＰ−１のアミノ酸配列は、数人の研究者によって報告されている［ロペツら（１９８３）、ベルら（Ｂｅｌｌ，Ｇ．Ｉ．）Ｎａｔｕｒｅ、
３０２
　１つの実施態様では、ペプチド断片は、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｍ．）［Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、
８５
　本発明は、天然に存在するアミノ酸配列から誘導された、インシュリン向性のペプチド断片を提供するものである。
　本発明は、式：
　Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−
　Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−
　Ａｌａ−ＬｙＳ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａ１−
　Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ
で示される配列、または１またはそれ以上のアミノ酸が該配列に付加されるか該配列から欠失されてなる配列を有し、天然の不純物を実質的に含有せず、上記アミノ酸配列を有するペプチドと、実質上同様のインシュリン向性活性を有するペプチドまたはその化学的誘導体を提供するものである。なお、ここで、化学的誘導体とは、上記の式で示されるペプチドまたはそのアミノ酸の付加または欠失による誘導体の両末端のアミノ酸残基が化学的に修飾され、酸付加塩を形成しまたは保護されてなる誘導体である。特に興味深い化学的誘導体は、式：
　　Ｈ２Ｎ−Ｘ−ＣＯ−Ｒ１
　［式中、Ｒ１はＯＨ、ＯＭまたは−ＮＲ２Ｒ３であって、ここにＭは薬学的に許容し得る陽イオンまたは低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基、Ｒ３およびＲ２は水素および低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基からなる群から選択される互いに同一または異なる基であり、Ｘは上記のアミノ酸配列またはペプチドを表す）
で示されるペプチド誘導体、
　（２）その酸付加塩、並びに
　（３）保護された、または部分的に保護された誘導体である。
　本発明は、インシュリンの発現を促進する方法であって、哺乳類の膵Ｂ型島細胞に、有効量の上記インシュリン向性ペプチドを与えることからなる方法を提供するものでもある。
　本発明範囲には、インシュリン向性ホルモンとして機能し得る上記ペプチド中のアミノ酸配列も含まれる。また、担体タンパク質、またはインシュリン向性効果を向上するために加えられるアミノ酸残基類との結合（カップリング）を促進するのに用いられる付加的なアミノ酸も包含される。ある物質は、正常な天然状態で該物質に随伴して見出される物質から精製されていれば、それは、「実質上、天然の不純物を含有しない」と言われる。ＧＬＰ−１（７−３７）に伴う天然の不純物の例として、他のペプチド、炭水化物、グリコシル化されたペプチド、脂質および膜物質等がある。また、ある物質の試料（サンプル）中にこれらの不純物が含有されていないときにも、その物質は、実質上、天然の不純物を含有しないと表される。
　相互に交換可能な語句、「ペプチド断片」と「ペプチド部分」は、いずれも、天然に存在するアミノ酸配列から導かれる、合成および天然に存在するアミノ酸配列誘導体の両方を包含する意味で用いられる。
　ペプチドは、それを天然に存在する配列を断片化して得ることができる場合、あるいは天然に存在するアミノ酸配列の配列に関する知識、または該配列をコードしている遺伝物質（ＤＮＡまたはＲＮＡ）に関する知識に基いて合成し得る場合には、「天然に存在する配列から誘導された」と表現される。
　さらに本発明は、選択された配列のもの以外に、天然に存在する配列中には含まれていない１またはそれ以上のアミノ酸が付加された、あるいは欠失されたポリペプチドであって、選択されたポリペプチドと同様の機能を有するポリペプチドにも関するものである。それら本発明のポリペプチドはＧＬＰ−１（７−３７）と実質上、同様のインシュリン向性活性を示すことを条件として、「機能的誘導体」と表現される。
　「インシュリン向性活性（作用）」とは、ホルモンインシュリンの合成または発現を刺激する能力、あるいは、刺激を引き起こす能力に関連する語句である。
　当業者ならば分かることであるが、アミノ酸残基は、適当なアミノ保護基またはカルボキシ保護基を用いて、保護された形または保護されていない形の
いずれをも
　様々な長さのペプチドは、遊離アミン形（Ｎ末端）またはその酸付加塩の形であってよい。一般的な酸付加塩は、ハロゲン化水素の塩、即ち、ＨＢｒ、ＨＩより好ましくは、ＨＣｌの塩である。
　化合物のインシュリン向性は、該化合物を動物細胞に与えるか、動物に注射し、それぞれ、培地または動物の循環系への免疫反応性のインシュリン（ＩＲＩ）の放出を監視することにより決定される。ＩＲＩの存在は、インシュリンを特異的に検出し得るラジオイムノアッセイを用いて検出することができる。ＩＲＩの存在を検出し得るラジオイムノアッセイであれば、どれを採用してもよいが、アルバノら（Ａｌｂａｎｏ，Ｊ．Ｍ．Ｄ．）［Ａｃｔａ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．
７０
　化合物のインシュリン向性特性は、膵浸出によっても求められる。灌流したラット膵標品を自体そのままで単離して、改良ペンホス法（Ｐｅｎｈｏｓ，Ｊ．Ｃ．）［Ｄｉａｂｅｔｅｓ、
１８
５４
　本発明の化合物は、既知の薬学的に有用な組成物調製法に従い、ＧＬＰ−１（７−３７）またはその機能的な誘導体を薬学的に許容し得る担体賦形剤と混合して製剤化することができる。適当な賦形剤およびその製剤としては、他のヒトペプチド、例えば、ヒト血清アルブミン等がレミントンの薬学［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１６版オスロ（Ａ．Ｏｓｌｏ）編、Ｍａｃｋ，Ｅａｓｔｏｎ　ＰＡ（１９８０）］に記載されている。効果的な投与に適した薬学上許容し得る組成物が得られれば、そのような組成物は、ＧＬＰ−１（７−３７）またはその機能的な誘導体を適量の担体賦形剤と一緒に含有しているであろう。
　ＧＬＰ−１（７−３７）またはその機能的な誘導体を含有する組成物は、静脈内、筋肉内、または皮下から、約１ｐｇ／ｋｇ（体重）〜１，０００ｕｇ／ｋｇ（体重）の範囲の用量で投与されるが、それ以下またはそれ以上の用量を用いることもできる。必要とされる用量は、患者の症状の重篤度、および患者の身長、体重、性、年令、および病歴等の判断基準により左右される。
　非経口投与のためには、ＧＬＰ−１（７−３７）含有組成物を蒸留水に溶かし、ｐＨ値を約６−８に調節する。凍結乾燥工程を促進して適当な生産物を得るためには、ラクトースを溶液に加えるとよい。次いで、得られた溶液を滅菌濾過し、バイアルに入れ、凍結乾燥する。これらの組成物中のＧＬＰ−１（７−３７）の濃度は１０−１２Ｍから１０−５Ｍの間で変化し得る。
　さらに他の薬学的手法を用いて作用の持続性をコントロールすることもできる。放出コントロール製剤は、ＧＬＰ−１（７−３７）またはその機能的な誘導体とコンプレックスを形成するか、それを吸着するポリマーを用いて得ることができる。到達のコントロールは、放出をコントロールするための、適当な高分子（例えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、エチレン酢酸ビニル、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、および硫酸プロタミン等）、高分子の濃度、および導入方法を選択することにより実行される。放出コントロール製剤によって作用の持続性をコントロールするための別法は、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）、またはエチレンと酢酸ビニルの共重合体等のポリマー原料の粒子にＧＬＰ−１（７−３７）を導入することからなる。別法として、これらのポリマー粒子にＧＬＰ−１（７−３７）を導入する代りに、例えば、夫々、ヒドロキシメチルセルロース、またはゼラチン−マイクロカプセルおよび（メチルメタクリレート）マイクロカプセル等の、コアセルベーション技術または界面重合法によって調製されたマイクロカプセルにＧＬＰ−１（７−３７）を捕獲させるか、あるいは、リポソーム、アルブミン微粒子（マイクロスフェアー）、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル等のコロイド状薬物供給系（デリバーリーシステム）、またはマクロエマルジョン中に取り込ませることができる。そのような方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）に記載されている。
　
具体的実施例
　
実施例１
　移植可能なラットの島細胞腫［ガザーら（Ｇａｚｄａｒ，Ａ．Ｆ．）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．
７７
６９
　この実験の結果を第２図に示す。レーン１−３（対照細胞）、４−６（ＧＬＰ−１（１−３７））、７−９（ＧＬＰ−１（７−３７））、１０−１２（ＧＬＰ−１（１−３６ｄｅｓ−ｇｌｙ　ａｒｇ−ａｍｉｄｅ））は、産生されたインシュリン特異的ｍＲＮＡの量を示している。各ペプチドについて、３回の繰り返し実験の結果が示されている。
　マイクロデンシトメーターを用い、インシュリン特異的ｍＲＮＡの相対量を求めた。この実験により、同一ペプチド濃度において、ＧＬＰ−１（７−３７）は、対照（非処理）細胞より３倍以上高く、インシュリン遺伝子の発現を刺激することが分かった。
　
実施例２
　細胞系統ＲＩＮ−３８のラット島細胞腫細胞を実施例１記載のごとく、ＤＭＥ培地中で培養した。１０−７ＭのＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（７−３７）およびＧＬＰ−１（１−３６）と一緒にインキュベートした後、細胞培養培地中のインシュリン濃度をラジオイムノアッセイ（既述）によって測定した。６時間インキュベートした後、インシュリンタンパク質濃度を測定した。実験結果を表１に示す。
　
表１
　　　　　　　　　　　　　　　インシュリン生産量
　
加えられたペプチド　　　（マイクロユニット／ｍｌ）
　　　　なし　　　　　　　　　　　２８００
　ＧＬＰ−１（１−３７）　　　　　５０００
　
実施例３
　生存ラットの膵臓を、上記のごとく、様々な濃度のＧＬＰ−１（１−３７）およびＧＬＰ−１（７−３７）で灌流した。１分間隔で、ラジオイムノアッセイ（上記）によってラットの血清インシュリン濃度（ピコグラム／ｍｌ、ｐｍ／ｍｌ）を測定した。この実験の結果を表２に示す。灌流は、ペプチド濃度、５×１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、５×１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、および５×１０−１２Ｍで行った。０分の血清中濃度測定後、ペプチドを加えた。
　ＧＬＰ−１（１−３７）は、濃度５×１０−７Ｍでラットの膵臓に灌流すると、血清中のインシュリン濃度の３．４倍増を伝達することが分かった。このペプチドは、濃度５×１０−８Ｍでは、血清中インシュリン濃度の２倍増を伝達し得たにすぎない。また、濃度５×１０−１０Ｍでは、このペプチドは血清中インシュリン濃度を２０％増加させただけである。
　ＧＬＰ−１（７−３７）は、濃度５×１０−７Ｍでラットの膵臓に供給されると、血清中のインシュリン濃度の１３２倍増を刺激することが分かった。１０倍低い濃度（５×１０−８Ｍ）では、このペプチドは、インシュリンの血清中濃度の２１倍増を命令することができるにすぎなかった。濃度１０×１０−１０Ｍでは、ＧＬＰ−１（７−３７）は、血清中インシュリン濃度の増加を伝達することができた（３２倍）。５×１０−１１Ｍでも、ＧＬＰ−１（７−３７）は、インシュリン濃度を１５倍増加させることができたが、ＧＬＰ−１（１−３７）は無効であった。
　この実験は、ＧＬＰ−１（７−３７）が、インシュリンのインビボ発現の刺激作用に関してＧＬＰ−１（１−３７）の１，０００倍以上の効力を有することを示している。しかも、これらの同じ実験において、ＧＬＰ−１ペプチドは、ペプチドホルモングルカゴンおよびソマトスタチンの放出に何の作用も示さなかった。このように、ＧＬＰ−１の刺激作用は、ベータ細胞に特異的であり、膵臓のアルファまたはデルタ細胞には作用しないといえる。
　
実施例４
　グルカゴン様タンパク質が細胞性ｃＡＭＰ濃度に影響を及ぼし得るか否かを調べるために、ＲＩＮＳ−３８島細胞腫細胞におけるｃＡＭＰ濃度に対するＧＬＰ−１（７−３７）およびＧＬＰ−１（１−３７）の影響を調べた。実施例１記載のごとくにして２６ウエルの培養皿中で細胞を培養した。培養ウエルに、種々の量のグルカゴン様ペプチドを加え、３回繰り返した。１０分間インキュベーションを行った後、全細胞培地をｃＡＭＰについて検査し、ｃＡＭＰ濃度を測定した。この実験の結果を表３に示す。各培養液２０ｕｌを分析した。
　
表３
　　　　　　　　　　　産生されたｃＡＭＰのピコモル
　
ペプチド濃度（Ｍ）　　　　実験１　　　実験ＩＩ
　　　　０　　　　　　　　　１４０　　　　９１
　　　１０−６　　　　　　　４００　　　１７０
　　　１０−７　　　　　　　３７０　　　１２０
　　　１０−８　　　　　　　４９４　　　１６０
　　　１０−９　　　　　　　５１５　　　１００
　　　１０−１０　　　　　　２５３　　　　９０
　　　１０−１１　　　　　　５３３　　　　９０
この実験により、ＧＬＰ−１（７−３７）は、濃度１０−１１Ｍで存在する場合にも、ｃＡＭＰ濃度を刺激することが分かった。ｃＡＭＰ濃度の増加はＧＬＰ−１（７−３７）が細胞リセプターと相互作用し得ることを示唆するものである。
　
実施例５
　ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（１−３６）およびＧＬＰ−１（７−３７）の作用がインシュリンに特異的で
あり
　
実施例６
　ＧＬＰ−１（１−３７）が、インシュリン以外のホルモンの生合成を誘導するか否かを決定するために実験した。即ち、ＧＬＰ−１（１−３７）（濃度１０−７Ｍ）をラットのグルカゴン産生性の島細胞系統および、夫々、ホルモンであるプロラクチンおよびＡＣＴＨを産生する２つの脳下垂体細胞系統（ＧＨ４およびＡｔＴ−２０）に加え、実施例１記載のごとく、２４時間後に産生されたホルモン特異的ｍＲＮＡの量を測定した。ＧＬＰ−１ペプチドと一緒にインキュベーションした後の、ＧＨ４脳下垂体細胞内のプロラクチンｍＲＮＡ濃度を第５図に示す。また、ＧＬＰ−１ペプチドと一緒にインキュベーションした後の、ＡｔＴ−２０脳下垂体細胞内のＡＣＴＨｍＲＮＡ濃度を第６図に示す。これらの実験の結果、ＧＬＰ−１（１−３７）は、これらのペプチドホルモンをコードしているｍＲＮＡの量になんらの検出可能な影響を及ぼさないことが分かった。
　
実施例７
　ＧＬＰ−１（７−３７）のＲＩＮＳ−３８島細胞腫細胞におけるインシュリン遺伝子およびアクチン遺伝子の転写に及ぼす影響を調べた。遺伝子の転写速度は、対照およびＴＰＡ処理細胞由来の核内での発生期のグルカゴンおよびべ一夕ーアクチンのＲＮＡ転写物を定量することによって決定された。核性ＲＮＡを、ニトロセルロースに結合させた、過剰量のクローニングした特異的ＤＮＡとハイブリザイズさせ、フィルターを洗浄した［マックナイトら（ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｃ．Ｓ．）、Ｊ．Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ．
２５４
１１５
　
表５
　グルカゴン様ペプチドＩ（７−３７）の、ＲＩＮＳ−３８島細胞腫細胞中でのインシュリンおよびアクチン遺伝子の転写に及ぼす影響
　　
時間（時間）
インシュリン遺伝子
アクチン遺伝子
　　　　０　　　　　　　　１７．４　　　　　　　３４．１
　　　　１　　　　　　　　７６．２　　　　　　　２９．９
　　　　４　　　　　　　　　９．０　　　　　　　２５．０
　本明細書には本発明の全容が記載されているので、当該技術分野における通常の技術者が僅かな修飾を施して同様のことを行うことができ、それらも本発明の技術思想に包含されることは明らかである。
（５７）【特許請求の範囲】
１．式：
　ＮＨ２−Ｘ−ＣＯ−Ｒ１
［式中、Ｘは、式：
　Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−
　Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−
　Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−
　Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
Ｇｌｙ
で示される配列を有しインシュリン向性活性を有する、実質上、天然の不純物を含有しないペプチドであって、Ｘの両側のＮＨ２−及び−ＣＯ−の各基は、該ペプチドのアミノ及びカルボキシ末端側に位置するアミノ酸に由来する基を表している。Ｒ１はＯＨ、ＯＭまたはＮＲ２Ｒ３であって、Ｍは薬学的に許容し得る陽イオンまたは低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基、Ｒ２およびＲ３は水素および低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基からなる群から選択される互いに同一または異なる基を表す。）
で示される化合物、その酸付加塩、並びに保護された、または部分的に保護されたペプチド化合物。
　
２
　
３
　ＮＨ２−Ｘ−ＣＯ−Ｒ１
［式中、Ｘは、式：
　Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−
　Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−
　Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−
　Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
Ｇｌｙ
で示される配列を有しインシュリン向性活性を有する、実質上、天然の不純物を含有しないペプチドであって、Ｘの両側のＮＨ２−及び−ＣＯ−の各基は、該ぺプチドのアミノ及びカルボキシ末端側に位置するアミノ酸に由来する基を表している。Ｒ１はＯＨ、ＯＭまたはＮＲ２Ｒ３であって、Ｍは薬学的に許容し得る陽イオンまたは低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基、Ｒ２およびＲ３は水素および低級の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基からなる群から選択される互いに同一または異なる基を表す。）
で示される化合物、その酸付加塩、並びに保護された、または部分的に保護されたペプチド化合物の有効量と、インシュリン向性医薬としての使用に適した薬学上許容し得る担体とを含有する膵Ｂ型島細胞におけるインシュリンの発現を刺激または促進するための医薬組成物。
　
４
３
　
５
３または４
【図面】