(57)【要約】  本発明は新規化合物、前記化合物を含有する医薬組成物、特にショック症状の治療用医薬の製造における前記化合物の使用、及び前記化合物を投与する前記症状の治療方法に関する。前記化合物は明細書に詳細に定義する一般式（Ｉ）：2008509221.tif 000015により表される。
2008509221.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）（配列番号５３）：
【化１】
2008509221.tif 000012
［式中、
Ａｒは芳香族炭素環系、５員又は６員複素芳香族環系及び二環式複素芳香族環系から選択されるアリール基であり；
ｍは１、２及び３から選択され；
ｎは０、１、２、３及び４から選択され；
ｐは２、３及び４から選択され；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、Ｏ−アルキル及びＯＣ（Ｏ）−アルキルから選択され；
アルキルはＣ１−６直鎖及びＣ４−８分岐鎖アルキルから選択され、場合により少なくとも１個のヒドロキシル置換基をもち；
及びｎ＝０のとき、Ｒ１とＲ２は場合により一緒になって炭素原子数２ないし５の含窒素環構造を形成し；
但し、Ａｒがフェニルであり、ｍ＝２、ｎ＝０、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈであり、ｐが３又は４であるとき、Ｒ３はＨ以外のものである］の化合物並びにその溶媒和物及び医薬的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ａｒがフェニル、２−又は３−チエニル、２−又は３−フリル、２−、３−又は４−ピリジル及び２−、４−又は５−チアゾリルから選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＨである請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
ｐが２又は３である請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＨ、ＯＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３がＨ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル及びｉ−アミルから選択される請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
化合物が下式（記載順に夫々配列番号１〜７）：
【化２】
2008509221.tif 000013
から構成される群から選択される請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
構造式：
【化３】
2008509221.tif 000014
をもつ請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
医薬用としての請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
医薬的に許容可能なアジュバント、希釈剤又はキャリヤーと共に活性成分として請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項１１】
循環血液減少性又は血管拡張性ショック、出血性食道静脈瘤、肝腎症候群、心肺蘇生、麻酔による血圧低下、起立性低血圧、穿刺による循環機能障害、術中出血又は熱傷デブリドマンに伴う出血及び鼻出血の治療、並びに流涙／涙液生成の増加による各種眼病の治療用医薬の製造における請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
循環血液減少性又は血管拡張性ショック、出血性食道静脈瘤、肝腎症候群、心肺蘇生、麻酔による血圧低下、起立性低血圧、穿刺による循環機能障害、術中出血又は熱傷デブリドマンに伴う出血及び鼻出血の治療、並びに流涙／涙液生成の増加による各種眼病の治療方法であって、ヒトを含む動物患者に治療有効量の請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規化合物、前記化合物を含有する医薬組成物、特にショック症状の治療用医薬の製造における前記化合物の使用、及び前記化合物を投与する前記症状の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
テルリプレッシン等のペプチドバソプレッシンＶ１ａ受容体アゴニスト（例えばＯ’Ｂｒｉａｎら，Ｌａｎｃｅｔ  ３５９（９３１３）：１２０９−１０，２００２年６月４日発行参照）は循環血液減少性（例えば出血性）又は血管拡張性（例えば敗血症性）ショック、出血性食道静脈瘤（ＢＥＶ）、肝腎症候群（ＨＲＳ）、心肺蘇生及び麻酔による血圧低下等の救急疾患及び症状の治療における臨床用として関心が高まっている。また、起立性低血圧、穿刺による循環機能障害、術中出血又は熱傷デブリドマンに伴う出血及び鼻出血の治療や、流涙／涙液生成の増加による各種眼病の治療に臨床利用できることも示されている。
【０００３】
救急症状の治療には、動脈圧を制御することが非常に望ましく、使用される薬剤は一般に静脈内投与される。所望程度の制御を行う実地手段は速度を増減させながら薬剤を静脈内点滴する方法である。薬剤が所謂「定常状態」血漿濃度に達するまでの時間は点滴する薬剤の排泄半減期に依存する。薬剤の排泄半減期の３倍に等しい時間後に定常状態血漿濃度に達すると一般に認められている。臨床条件下で実地に行うためには、約２時間以内、好ましくは１時間以内に定常状態の所望動脈圧に達する必要がある。従って、排泄半減期が１時間よりも長いＶ１ａアゴニストは救急治療に有用であるとは一般に認められない。
【０００４】
多くの救急状況におけるテルリプレッシンの１つの欠点は作用期間が長いため、疾患状態の変化に応じてその効果を変化させにくいという点である。例えば一般に用量を減らすようにヒトＶ１ａ（ｈＶ１ａ）受容体に対するテルリプレッシンの効力を改善することも必要である。
【０００５】
Ｆ１８０として知られる化合物（米国特許第５，４５９，２３６号の実施例３参照）も大半の救急症状の治療には作用時間が長いという欠点がある。
【０００６】
例えば［Ｐｈｅ２，Ｏｒｎ８］ＯＴ（米国特許第３，３５２，８４３号の実施例１ｆ参照）やアルギニン−バソプレッシン（ＡＶＰ）等の他の既存化合物には非特異的受容体アゴニスト活性という大きな欠点がある。Ｖ１ｂ、Ｖ２及びオキシトシン（ＯＴ）受容体等の関連受容体に対する活性は望ましくない副作用と安全性の問題を生じる可能性がある。１例として、Ｖ２受容体活性化は抗利尿作用（デスモプレッシン）、凝血／血栓溶解因子の放出、反射性頻脈を伴う血管拡張／血圧低下を誘発する可能性がある。後者副作用はＯＴ受容体アゴニスト活性により誘発される場合もある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は救急症状の治療に特に有用な化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は一般式（Ｉ）（配列番号５３）：
【０００９】
【化４】
2008509221.tif 000003
［式中、
Ａｒは芳香族炭素環系、５員又は６員複素芳香族環系及び二環式複素芳香族環系から選択されるアリール基であり；
ｍは１、２及び３から選択され；
ｎは０、１、２、３及び４から選択され；
ｐは２、３及び４から選択され；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立してＨ、ＯＨ、アルキル、Ｏ−アルキル及びＯＣ（Ｏ）−アルキルから選択され；
アルキルはＣ１−６直鎖及びＣ４−８分岐鎖アルキルから選択され、場合により少なくとも１個のヒドロキシル置換基をもち；
ｎ＝０のとき、Ｒ１とＲ２は場合により一緒になって炭素原子数２〜５の含窒素環構造を形成し；
但し、Ａｒがフェニル（アミノ酸番号２がＰｈｅ）であり、ｍ＝２、ｎ＝０、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ（アミノ酸番号４がＧｌｎ）であり、ｐが３又は４であるとき、Ｒ３はＨ以外のものである］により表される化合物とその溶媒和物及び医薬的に許容可能な塩に関する。
【００１０】
アミノ酸番号８はＲ３＝Ｈ且つｐ＝３の場合にはＯｒｎであり、Ｒ３＝Ｈ且つｐ＝４の場合にはＬｙｓである。
【００１１】
本発明の目的では、以下の用語を使用する。
【００１２】
芳香族炭素環系としてはフェニルとナフチルが挙げられる。
【００１３】
５員複素芳香族環系とは１、２又は３個の環原子が独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される環原子数５の単環式芳香族環系である。好ましいこのような環系はチエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル及びテトラゾリルから構成される群から選択される。
【００１４】
６員複素芳香族環系とは１、２又は３個の環原子が独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される環原子数６の単環式芳香族環系である。このような環系はピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニル及びピリダジニルから構成される群から選択することが好ましい。
【００１５】
二環式複素芳香族環系とは２個の５員もしくは６員複素芳香族環、又はフェニルと５員もしくは６員複素芳香族環、又はフェニルと複素環、又は５員もしくは６員複素芳香族環と複素環が環縮合により結合しており、１、２又は３個の環原子が独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される環原子数８〜１２の環系である。このような環系はインドール、キノリン、テトラヒドロキノリン、イソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、１，４−ベンゾジオキサン、クマリン、ベンゾフラン、１，２−ベンゾイソオキサゾール、ベンゾチオフェン、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、ピロリジジン及びキノリジジンから構成される群から選択することが好ましい。
【００１６】
ヘテロシクリルないし複素環部分とは１、２又は３個の環原子が独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される環原子数３〜７の飽和又は部分飽和環系である。ヘテロシクリル部分はアジリジン、オキシラン、チイラン、アゼチジン、オキセタン、チエタン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ジオキソラン、テトラヒドロフラニル、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロピラニル、１，４−ジオキサニル、ホモピペリジニル、ホモピペラジニル及びヘキサメチレンオキシドから構成される群から選択することが好ましい。
【００１７】
Ｃ１−６直鎖アルキルなる用語は該当直鎖の結合部位に無関係であるのでこの用語は例えばイソプロピル基や２−ｎ−ブチル基も含むと言うことができる。
【００１８】
Ｃ１−６とは炭素原子数が１〜６であることを意味し、この範囲の任意値を含み、本明細書ではこの命名法を同様に使用する。
【００１９】
医薬的に許容可能な塩の例としては酸付加塩が挙げられ、例えばハロゲン化水素酸（例えば塩酸）、鉱酸（例えば硫酸、リン酸及び硝酸）、及び脂肪族、脂環式、芳香族又は複素環スルホン酸又はカルボン酸（例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、琥珀酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸及びナフタレンスルホン酸）との反応により形成される塩が挙げられる。
【００２０】
Ａｒはフェニル、２−又は３−チエニル、２−又は３−フリル、２−、３−又は４−ピリジル及び２−、４−又は５−チアゾリルから選択することが好ましい。特にＲ１はＨであることが好ましい。
【００２１】
好ましい実施形態ではｐは２又は３である。
【００２２】
Ｒ２はＨ、ＯＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３（両エナンチオマー）、ＯＣＨ３及びＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択することが好ましい。
【００２３】
更に、Ｒ３はＨ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル及びｉ−アミルから選択することが好ましい。
【００２４】
最も好ましい実施形態では、式（Ｉ）をもつ前記化合物は下式（記載順に夫々配列番号１〜７）：
【００２５】
【化５】
2008509221.tif 000004
から構成される群から選択することが好ましい。
【００２６】
括弧内の数字は以下に記載する化合物を表す。
【００２７】
更に、本発明は医薬用としての上記化合物に関する。
【００２８】
従って、本発明は医薬的に許容可能なアジュバント、希釈剤又はキャリヤーと共に活性成分として上記化合物を含有する医薬組成物にも関する。
【００２９】
医薬組成物は経口、静脈内、局所、腹腔内、鼻孔内、口腔、舌下もしくは皮下投与又は例えばエアゾール即ち空気に浮遊させた微粉形態の気道投与に用いることができる。従って、組成物は例えば錠剤、カプセル剤、散剤、微粒子、顆粒剤、シロップ、懸濁液、溶液、経皮パッチ又は座剤の形態とすることができる。
【００３０】
なお、本発明の組成物は場合により上記に概説した化合物の２種以上を加えてもよい。
【００３１】
本発明の医薬組成物は場合により例えば崩壊剤、結合剤、滑沢剤、フレーバー剤、防腐剤、着色剤及びその任意混合物から選択される少なくとも１種の他の添加剤を添加してもよい。前記及び他の添加剤の例は“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ”，Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ編，第３版，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＵＳＡ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ＵＫ，２０００に記載されている。
【００３２】
本発明の医薬組成物は経口投与に用いることが最も好ましい。本発明の医薬組成物は本発明の化合物の滅菌水性製剤とすることができ、レシピエントの血液と等張にすることが好ましい。この水性製剤は適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して公知方法に従って調製することができる。適切な医薬製剤の典型例は注射用水性製剤Ｒｅｍｅｓｔｙｐ（登録商標）（テルリプレッシン）である。製剤は希釈剤又は溶媒中の注射用滅菌溶液又は懸濁液（例えば１，３−ブタンジオール溶液）でもよい。許容可能な希釈剤の典型例は水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液である。滅菌不揮発性油も溶媒又は懸濁媒体として使用することができる。合成モノ又はジグリセリドや脂肪酸（例えばオレイン酸）等の低刺激性不揮発性油も使用できる。
【００３３】
更に、本発明は循環血液減少性又は血管拡張性ショック、ＢＥＶ、ＨＲＳ、心肺蘇生、麻酔による血圧低下、起立性低血圧、穿刺による循環機能障害、術中出血又は熱傷デブリドマンに伴う出血及び鼻出血の治療、並びに流涙／涙液生成の増加による各種眼病の治療用医薬の製造における上記に概説した化合物の使用に関する。
【００３４】
別の実施形態において本発明は循環血液減少性又は血管拡張性ショック、ＢＥＶ、ＨＲＳ、心肺蘇生、麻酔による血圧低下、起立性低血圧、穿刺による循環機能障害、術中出血又は熱傷デブリドマンに伴う出血及び鼻出血の治療、並びに流涙／涙液生成の増加による各種眼病の治療方法として、ヒトを含む動物患者に治療有効量の上記に概説した化合物を投与することを含む方法に関する。
【００３５】
本発明の化合物の典型的投与量は広い範囲をとり、各患者の個々の必要性及び投与経路等の各種因子により異なる。点滴による投与量は一般に０．０１〜２００μｇ／ｋｇ体重／時の範囲内である。当分野の通常の知識をもつ医師は現況に合うように投与量を最適化することができよう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
使用する略語は以下の通りである。
Ａｂｕ  ２−アミノ酪酸
Ｂｏｃ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＯＰ  ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスジメチルアミノホスホニウム
Ｄｂｕ  ２，４−ジアミノ酪酸
ＤＣＣ  Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＨＡ  ジシクロヘキシルアミン
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＩＡＤ  ジアゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＣ  Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＥＡ  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミン
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｆｍ  ９−フルオレニルメチル
Ｆｍｏｃ  ９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｈｇｎ  ホモグルタミン
Ｈｍｐ  ２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロピオン酸
ＨＯＢｔ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ  高性能液体クロマトグラフィー
ｉ  イソ
Ｍｍｔ  ４−メトキシトリチル
Ｍｏｂ  ｐ−メトキシベンジル
ＭＳ  質量分析
Ｏｒｎ  オルニチン
Ｐｈ  フェニル
Ｐｒ  プロピル
ＰｙＢＯＰ  ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスピロリジンホスホニウム
ｏ−ＮＢＳ−Ｃｌ  塩化２−ニトロベンゼンスルホニル
ＯＴ  オキシトシン
Ｒｔ  保持時間
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ  トリイソプロピルシラン
ＴＭＯＦ  オルトギ酸トリメチル
ＴＰＰ  トリフェニルホスフィン
Ｔｒｔ  トリチル
ＶＴ  バソトシン，［Ｉｌｅ３］バソプレッシン。
【００３７】
特に指定しない限り、Ｌ−アミノ酸を使用し、従来のアミノ酸用語に従う。
【００３８】
実験（合成）
アミノ酸誘導体及び樹脂は商業的供給業者（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，Ｂａｃｈｅｍ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ及びＰｅｐＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）から購入した。Ｆｍｏｃ−Ｈｇｎ−ＯＨは文献（Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ，Ｋ．，Ｋｏｌｏｄｚｉｅｊｃｚｙｋ，Ａ．Ｓ．Ｏｒｇ．Ｐｒｅｐ．Ｐｒｏｃｅｄ．Ｉｎｔ．１９９７，２９，３３８−３４１）に従って合成した。他の薬品及び溶媒はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ及びＶＷＲから購入した。
【００３９】
本明細書に記載する化合物はＦｍｏｃ及びＢｏｃ法の両者を使用して固相ペプチド合成化学の標準方法により合成した。特に指定しない限り、全反応は室温で実施した。上記に引用した文献に加え、以下の標準参考文献は一般実験構成や、必要な出発材料及び試薬の入手方法について記載している。
Ｋａｔｅｓ，Ｓ．Ａ．，Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．編，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｂａｓｅｌ，２０００；
Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８４；
Ｂｉｓｅｌｌｏら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８，２７３，２２４９８−２２５０５；及び
Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３，８５，２１４９−２１５４。
【００４０】
合成したペプチドの純度は分析用逆相ＨＰＬＣにより測定することができる。ペプチドの構造的完全性はアミノ酸分析とエレクトロスプレー質量分析を使用して確認することができる。
【００４１】
Ｆｍｏｃ法により合成したペプチドはＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ  ９６／２／２（ｖ／ｖ／ｖ）溶液を使用して開裂させ、Ｂｏｃ法の開裂は９０％ＨＦ／１０％アニソール（ｖ／ｖ）溶液を使用して実施した。ジスルフィド架橋（環）形成は１０％ＴＦＡ（水溶液）に溶かした直鎖ペプチドをヨウ素で酸化することにより実施した。リン酸トリエチルアンモニウム緩衝液（水溶液）中分取ＨＰＬＣによりペプチドを精製した。最後に従来のＨＰＬＣ法を使用して化合物を酢酸塩に変換した。純度が９７％を上回るフラクションをプールして凍結乾燥した。
【００４２】
８位にアルキル化側鎖をもつペプチドの合成：
Ｆｍｏｃ法によりペプチドを合成した。８位のジアミノ酸残基にメトキシトリチル（Ｍｍｔ；Ｂａｒｌｏｓ，Ｋ．ら，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９９２，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，ＣＨ．，Ｅｂｅｒｌｅ，Ａ．Ｎ．編，ＥＳＣＯＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｂ．Ｖ．，１９９３，ｐｐ  ２８３−２８４参照）等の酸レービル（即ち１−２％ＴＦＡ溶液で除去可能な）保護基を導入した。樹脂に結合したペプチドをＤＣＭ／ＴＩＳ／ＴＦＡ  ９３／５／２（ｖ／ｖ／ｖ）溶液で処理し、Ｍｍｔ基を除去した。アセトン／ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３で還元アルキル化し、Ｎ−イソプロピルペプチドを得た。
【００４３】
直鎖アルキルアルデヒドを使用する場合には上記手順の還元アルキル化では望ましくないＮ，Ｎ−ジアルキル化が生じる可能性があるのでこれを避けるために、Ｍｍｔ除去後にアミノ基を先ず塩化２−ニトロベンゼンスルホニル（ｏ−ＮＢＳ−Ｃｌ；Ｆｕｋｕｙａｍａ，Ｔ．；Ｊｏｗ，Ｃ．−Ｋ．；Ｃｈｅｕｎｇ，Ｍ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９５，３６，６３７３−６３７４参照）で誘導体化する別法が開発された。得られたスルホンアミドを次に一般には１，２−ジメトキシエタン中ＴＰＰ／ＤＩＡＤを使用して従来の光延反応条件下で適当なアルコールでアルキル化した（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ，Ｏ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９８１，１−２８）。次にＤＭＦ中５％チオフェノール酸カリウムでｏ−ＮＢＳ−Ｃｌ基を除去した後にペプチドを樹脂から開裂させた。
【００４４】
４位にＮ−アルキル化側鎖をもつペプチドの合成：
Ｂｏｃ法によりペプチドを合成した。４位の残基をＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＦｍ）−ＯＨとして配列に導入した。ペプチド合成の完了後、ＤＭＦ中３０％ピペリジンで側鎖保護基を除去した。得られた遊離カルボン酸基をＰｙＢＯＰ又はＢＯＰ／ＤＩＥＡにより適切なアミンとカップリングすることにより所望アミドに変換した。次にＮ末端Ｂｏｃ基を除去した後にＨＦ開裂、環化及びＨＰＬＣ精製した。
【００４５】
表１は上記手順により製造した化合物を示す。配列番号７ではＲ１をＣＨ３としたが、それ以外の全化合物においてＲ１はＨである。アステリスク「＊」は最も好ましい実施形態を示す。
【００４６】
【表１】
2008509221.tif 000005
2008509221.tif 000006
2008509221.tif 000007
【００４７】
以下、詳細な実施例により合成を更に例証する。
【００４８】
化合物１；［Ｐｈｅ２，Ｈｇｎ４，Ｏｒｎ（ｉ−Ｐｒ）８］ＶＴ：
使用したアミノ酸誘導体はＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｇｎ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｍｍｔ）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨとした。Ｆｍｏｃ−Ｈｇｎ−ＯＨは上記のように合成した。分析用ＨＰＬＣは流速２ｍｌ／分でＶｙｄａｃ  Ｃ１８，５μ  ４．６×２５０ｍｍカラムを使用してＷａｔｅｒｓ  ６００  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈで実施した。分取ＨＰＬＣは流速１００ｍｌ／分でＰｒｅｐａｋ  ４７×３００ｍｍカートリッジを使用してＷａｔｅｒｓ  ２０００  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈで実施した。最終化合物分析は流速０．３ｍｌ／分でＶｙｄａｃ  Ｃ１８，５μ  ２．１×２５０ｍｍカラムを使用して１１００  Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈで実施した。質量スペクトルはＦｉｎｎｉｇａｎ  ＭＡＴスペクトロメーターで記録した。
【００４９】
Ｔｅｎｔａｇｅｌ−Ｓ−ＲＡＭ樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）２ｇ（０．５ｍｍｏｌ）から出発してＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ９０５０  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｅｒで完全保護ペプチド樹脂を合成した。ＤＩＣ／ＨＯＢｔにより４倍量のアミノ酸誘導体と単一カップリングを実施した。ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去した。自動合成が完了したら、樹脂を手動合成容器に移し、ＤＣＭ／ＴＩＳ／ＴＦＡ  ９３／５／２（ｖ／ｖ／ｖ）溶液（３０ｍｌ）で２×１．５時間処理し、Ｍｍｔ基を除去した。樹脂をＤＣＭで十分に洗浄した後、１，２−ジクロロエタン／ＴＭＯＦ  １：１（ｖ／ｖ）１５ｍｌに懸濁した。次にアセトン０．２ｍｌを加えた後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３  ０．６ｇを加えた。懸濁液を一晩振盪し、樹脂をメタノール、ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧乾燥した。次に樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ  ９６／２／２（ｖ／ｖ／ｖ）溶液３０ｍｌで１．５時間処理した後、濾別した。濾液を蒸発させ、粗直鎖ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させた。沈殿をすぐに１０％ＴＦＡ（水溶液）５００ｍｌに溶かし、黄色が持続するまで溶液を磁気撹拌下に０．１Ｍ  Ｉ２メタノール溶液を加えることによりペプチドを酸化した。過剰のヨウ素をアスコルビン酸で還元した。次に反応混合物を砕氷で冷却し、濃アンモニア（水溶液）を加えることによりｐＨを約５に調整した。混合物をＨＰＬＣカラムにロードし、ｐＨ５．２のリン酸トリエチルアンモニウム緩衝液を使用して精製した。化合物をアセトニトリル勾配で溶離した。純度が９７％を上回るフラクションをプールし、得られた溶液を水２容量で希釈した。溶液をカラムに再ロードした後、０．１Ｍ酢酸アンモニウム（水溶液）２リットルで洗浄し、２％酢酸（水溶液）で平衡化した。化合物を高速（３％／分）アセトニトリル勾配で溶離した。所望生成物を含むフラクションをプールし、凍結乾燥した。白色非晶質粉末１６８ｍｇ（〜３０％収率）が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝８．５分，勾配：２０→４０％Ｂ２０分，ｔ＝４０℃，溶媒Ａ  ０．０１％ＴＦＡ（水溶液），溶媒Ｂ  ７０％ＣＨ３ＣＮ，０．０１％ＴＦＡ（水溶液）；純度：９８．８％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予想値１０４８．５，実測値１０４８．５。
【００５０】
化合物４；［Ｐｈｅ２，Ａｓｎ（Ｅｔ）４，Ｄｂｕ８］ＶＴ：
使用したアミノ酸誘導体はＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｍｏｂ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＦｍ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｎ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｄｂｕ（ベンジルオキシカルボニル）−ＯＨ  ＤＣＨＡ塩及びＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨとし、いずれもＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍとＢａｃｈｅｍから購入した。ＨＰＬＣ及びＭＳ操作は化合物１の合成と同様に実施した。
【００５１】
４−メチル−ベンズヒドリルアミン樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）０．６ｇ（０．４ｍｍｏｌ）から出発して完全保護ペプチド樹脂を手動合成した。ＤＣＣ、ＰｙＢＯＰ又はＤＩＣ／ＨＯＢｔにより２．５倍量のアミノ酸誘導体との単一カップリングを使用した。１％ｍ−クレゾールを添加したＤＣＭ中５０％ＴＦＡでＢｏｃ基を除去した。合成が完了したらＤＭＦ中３０％ピペリジンで２×３０分間処理することによりアスパラギン酸のβ−カルボン酸基から９−フルオレニルメチルエステルを除去した。樹脂をＤＭＦ中１Ｍ  ＨＯＢｔ溶液で３０分間洗浄した後、ＤＭＦ単独で洗浄した。遊離カルボン酸基をＤＭＦ中２ｍｍｏｌエチルアミンＰｙＢＯＰ／ＤＩＥＡで一晩処理することによりアミド化した。最終樹脂をメタノール、ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧乾燥した。アニソール３ｍｌを加えた無水ＨＦ３０ｍｌを使用することにより０℃で９０分間ペプチドを樹脂から開裂させた。ＨＦを蒸発させ、粗直鎖ペプチドをジエチルエーテルで洗浄した。ペプチドをすぐに２５％アセトニトリル／１０％ＴＦＡ（水溶液）２００ｍｌに溶かし、上記のように酸化した。得られた混合物をＨＰＬＣカラムに直接ロードし、ｐＨ２．３のリン酸トリエチルアンモニウム緩衝液を使用して精製した。後続精製段階は化合物１の手順と同一とした。白色非晶質粉末４１ｍｇ（〜１０％収率）が得られた。ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１０．０分，勾配：２０→４０％Ｂ２０分，ｔ＝４０℃，溶媒Ａ  ０．０１％ＴＦＡ（水溶液），溶媒Ｂ  ７０％ＣＨ３ＣＮ，０．０１％ＴＦＡ（水溶液）；純度：１００％；ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：予想値９９２．５，実測値９９２．２。
【００５２】
これらの合成手順の同様の変形例により他の化合物を製造した。
【００５３】
実験（生物試験）
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ受容体アッセイ：
ホタルルシフェラーゼの発現を調節する細胞内カルシウム応答性プロモーターエレメントを含むレポーターＤＮＡと共にｈＶ１ａ受容体発現ＤＮＡをＨＥＫ−２９３細胞に一過的にトランスフェクトすることによりｈＶ１ａ受容体に対する化合物のアゴニスト活性を測定した。このアッセイの詳細な手引きについてはＢｏｓｓ，Ｖ．，Ｔａｌｐａｄｅ，Ｄ．Ｊ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９６，Ｍａｙ  ３；２７１（１８），１０４２９−１０４３２参照。用量当たり１０倍に希釈した化合物の連続希釈液に細胞を５時間暴露した後、細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ活性を測定し、化合物効力とＥＣ５０値を非線形回帰により測定した。アルギニン−バソプレッシン（ＡＶＰ）を各実験で内部対照として使用し、少なくとも３回の独立した実験で化合物を試験した。選択性を測定するために、ヒトオキシトシン（ｈＯＴ）受容体を発現するルシフェラーゼ転写レポーターアッセイで化合物を試験した。他の受容体（ｈＶ２，ｈＶ１ｂ，ラットＶ１ａ及びラットＶ２）のアッセイも実施した。
【００５４】
更に比較の目的で他の参照化合物［Ｐｈｅ２，Ｏｒｎ８］ＯＴ、テルリプレッシン及びＦ１８０を使用した。［Ｐｈｅ２，Ｏｒｎ８］ＯＴの構造は以下の通り（配列番号５１）である。
【００５５】
【化６】
2008509221.tif 000008
【００５６】
Ｆ１８０の構造は以下の通り（配列番号５２）である。
【００５７】
【化７】
2008509221.tif 000009
【００５８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの結果を下表２に示す。記載するＥＣ５０値はナノモル／Ｌ（ｎＭ）で表した幾何平均である。選択性値はＥＣ５０比として示す。
【００５９】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ薬理試験：
ＡＶＰの標準用量に対する相対値として化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ作用時間を試験した。麻酔したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雄ラット（体重２７０−３００ｇ）の頸静脈と頸動脈にカテーテルを挿入して血圧測定を実施した。カテーテルを挿入した頸動脈を使用して血圧を連続的にモニターし、頸静脈を使用して試験化合物を投与した。Ｖ１ａ受容体アゴニストに対する応答性を強化するためにラットに投与前にジベナミンを静脈内注射した（Ｄｅｋａｎｓｋｉ，Ｊ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９５２，７，５６７−５７２参照）。投与手順は生理的食塩水の静脈内注射後に標準用量のＡＶＰ（０．１ｎｍｏｌ／ｋｇ，〜ＥＤ７０）を２回続けて注射し、ＡＶＰの標準用量と少なくとも同等の応答が得られるように選択した漸増用量の所与化合物を３〜５回注射した。投与間隔は血圧が安定な基線まで低下する時間として設定した。
【００６０】
作用時間の測定は拡張期動脈圧の一過性上昇の減衰率に基づいて実施した。具体的には、血漿濃度の指数的減衰に関して、分配相を越える応答が測定される場合にはＥＣ５０付近の減衰率は線形であり、排泄半減期に反比例することが明らかである（Ｒｏｗｌａｎｄ，Ｍ．ａｎｄ  Ｔｏｚｅｒ，Ｔ．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，第３版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）。
【００６１】
所与化合物の応答減衰率を測定するために、標準用量のＡＶＰの２回目の注射に対する応答振幅にできるだけ近い応答振幅が得られる用量を選択した。Ｖ１ａ応答性の個体間変動を正規化するために、この参照ＡＶＰ応答の減衰率と各試験ラットの等効力用量の減衰率の比として作用時間を表した。試験化合物で得られた結果を表２に示す。
【００６２】
【表２】
2008509221.tif 000010
2008509221.tif 000011
全引用文献は本明細書の一部とみなす。
【配列表】
2008509221000001.xml
【国際調査報告】
2008509221.tif 000038