(57)【要約】被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法が提供され、この方法は、被験体に潮紅を軽減させるのに有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程を含む。加えて、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法が提供され、この方法は、被験体に潮紅を軽減させるのに有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストおよび脂質の量を変化させるのに有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。さらに、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減させる方法が提供され、この方法は、被験体に潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程と、その後被験体に脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体のナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法であって、該被験体に、潮紅を軽減するために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記潮紅がナイアシンによって誘導される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記潮紅がナイアシンアナログによって誘導される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ナイアシンアナログがナイアシンの構造的アナログである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ナイアシンアナログがナイアシンの機能的アナログである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ナイアシン受容体部分的アゴニストが式（Ｉ）：
【化１】
2008519080.tif 000102
またはその薬学的に受容可能な塩を含み、
式中：
Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；
Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そして
Ｒ２はＨであるか；
あるいは、
Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、以下：
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；
５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；
５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および
５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；
からなる群より選択される化合物、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩を含む、請求項６に記載のナイアシン受容体部分的アゴニスト。
【請求項８】
被験体のナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法であって、該被験体に、潮紅を軽減するために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストと、脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログとを投与する工程を含む、方法。
【請求項９】
前記潮紅がナイアシンによって誘導される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記潮紅がナイアシンアナログによって誘導される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ナイアシンアナログがナイアシンの構造的アナログである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記ナイアシンアナログがナイアシンの機能的アナログである、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記脂質を変化させるためのナイアシンまたはナイアシンアナログの量が、１日あたり少なくとも５００ｍｇである、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記ナイアシン受容体部分的アゴニストが式（Ｉ）：
【化２】
2008519080.tif 000103
またはその薬学的に受容可能な塩を含み、
式中：
Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；
Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そして
Ｒ２はＨであるか；
あるいは、
Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する、
請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、以下：
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；
５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；
５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および
５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；
からなる群より選択される化合物、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩を含む、請求項１４に記載のナイアシン受容体部分的アゴニスト。
【請求項１６】
被験体の脂質関連障害を予防または処置するための方法であって、該被験体に、潮紅を軽減するために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストと、脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む、方法。
【請求項１７】
前記潮紅がナイアシンによって誘導される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記潮紅がナイアシンアナログによって誘導される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ナイアシンアナログがナイアシンの構造的アナログである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ナイアシンアナログがナイアシンの機能的アナログである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記脂質を変化させるためのナイアシンまたはナイアシンアナログの量が、１日あたり少なくとも５００ｍｇである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記ナイアシン受容体部分的アゴニストが式（Ｉ）：
【化３】
2008519080.tif 000104
またはその薬学的に受容可能な塩を含み、
式中：
Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；
Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そして
Ｒ２はＨであるか；
あるいは、
Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する、
請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、以下：
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；
５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；
６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；
５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および
５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；
からなる群より選択される化合物、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩を含む、請求項２２に記載のナイアシン受容体部分的アゴニスト。
【請求項２４】
前記被験体に、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤を投与する工程をさらに含む、請求項１６に記載の方法：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【請求項２５】
被験体の潮紅反応を引き起こす能力が低い、脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログの投与のための組成物であって、
（ａ）脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログ、および
（ｂ）潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを含む、
組成物。
【請求項２６】
脂質関連障害を予防または処置するためにキットであって、少なくとも１投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログを含み、ここで、該ナイアシン受容体部分的アゴニストは、該被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、かつ該ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する、キット。
【請求項２７】
脂質関連障害を予防または処置するためにキットであって、少なくとも１投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１つの別の投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログを含み、ここで、該ナイアシン受容体部分的アゴニストは、該被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして該ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する、キット。
【請求項２８】
脂質関連障害を予防または処置するためのキットであって、少なくとも１プレ投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１つの別の投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログを含み、ここで、該ナイアシン受容体部分的アゴニストは、該被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして該ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、アテローム性動脈硬化症のような脂質関連障害の処置に関し、より具体的には、ナイアシン治療によって誘導される潮紅の予防のための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
アテローム性動脈硬化症は、脂肪質の物質、コレステロール、および他の物質の蓄積が動脈の内層に積み重なるプロセスである。この集積はプラークと呼ばれる。破裂したプラークは血塊を生じ、これは心臓（心臓麻痺）または脳（脳卒中）への血流をブロックする可能性がある。心臓麻痺は、米国においては、男性および女性の両方についての第１位の死亡原因であり、脳卒中は、第３位の死亡原因である（例えば、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，（２００２）８：１２０９−１２６２）。異常に高い循環している脂質レベルが、アテローム性動脈硬化症の発症の主要な誘発要因である。低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールレベルの上昇、トリグリセリドレベルの上昇、または高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールの低いレベルは、アテローム性動脈硬化症および関連する病状についての、独立する危険要素である。
【０００３】
ナイアシン（ニコチン酸、ピリジン−３−カルボン酸、ビタミンＢ３）は、健康、成長、および再生のためにヒトが必要とする水溶性ビタミンである。ナイアシンはまた、脂質関連障害の処置のために最も古くから使用されている薬剤の１つでもある。これは、ナイアシンが上記に列挙された脂質パラメーターの実質的に全てに対して好ましい影響を与えるという点で有用な薬剤である（非特許文献１）。アテローム性動脈硬化症の処置または予防におけるナイアシンの利点は、６回の重要な臨床試験において報告されている（非特許文献２）。ナイアシンのアナログまたは誘導体の構造と合成は、非特許文献３の至るところで議論されている。
【０００４】
残念なことに、血清での脂質レベルを変化させるために必要なナイアシンの用量は極めて多量であり得、そしてこれらの投与量では有害な副作用が頻繁に生じる。副作用としては、胃腸障害、肝臓毒性、ならびに、グルコースの代謝および尿酸レベルの混乱を挙げることができる。しかし、ナイアシン治療の最も頻度が高く突出した副作用は、極めて強い潮紅であり、多くの場合に、皮膚の痒み、チクチク感、および熱感が伴う。潮紅の反応は一般的には問題はないが、これは十分に不愉快であり、患者のコンプライアンスは著しく低下する。多くの場合、３０〜４０％の患者が、治療の開始後数日以内にナイアシン治療を停止する。
【０００５】
治療効力を保ったまま皮膚の潮紅反応を最少に抑えるナイアシンアナログ、投与形態、および処置プロトコールを開発するための努力が行われてきた。しかし、今日までには、これらの努力によっては、皮膚の潮紅反応を部分的にしか軽減させることができない化合物または方法しか得られていない。加えて、これらの化合物または方法は、他の副作用も生じ得る。例えば、アスピリンのような化合物は、潮紅の軽減させるための試みにおいて、ナイアシンを投与する前に投与することができる。しかし、よくても、アスピリンは一部の患者において潮紅の部分的な軽減しか生じず、アスピリンの消化管への副作用によってその使用は制限される。加えて、ナイアシンの持続放出型処方物または徐放型処方物が開発されており、これは、潮紅の発生率が低いことが報告されている。しかし、これらの持続放出型処方物または徐放型処方物は、潮紅よりも重篤な副作用である肝臓毒性を生じることが示されている。
【非特許文献１】Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｈａｒｍｏｎ  ＪＧ  ａｎｄ  Ｌｉｍｂｉｒｄ  ＬＥ，編，第３６章，Ｍａｈｌｅｙ  ＲＷ  ａｎｄ  Ｂｅｒｓｏｔ  ＴＰ（２００１）９７１−１００２頁
【非特許文献２】Ｇｕｙｔｏｎ  ＪＲ，Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ（１９９８）８２：１８Ｕ−２３Ｕ
【非特許文献３】Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，Ａｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，第１０版（１９８３）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を安全に軽減するかまたは解消できる化合物および方法が必要とされている。本発明は、この必要性を満たし、そしてさらに関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明により、被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減させる方法が提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０００８】
【化４】
2008519080.tif 000002
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。
【０００９】
本発明により、さらに、被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法が提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストと、脂質を変化させるための有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００１０】
【化５】
2008519080.tif 000003
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。
【００１１】
加えて、本発明により、被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法が提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程と、その後、上記被験体に脂質を変化させるための有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００１２】
【化６】
2008519080.tif 000004
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。
【００１３】
本発明により、また、被験体の脂質関連障害を予防または処置するための方法も提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストと、脂質を変化させるための有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００１４】
【化７】
2008519080.tif 000005
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記方法はさらに、上記被験体に、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤を投与する工程を含む：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【００１５】
本発明により、さらに、被験体の脂質関連障害を予防または処置するための方法も提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程と、その後、上記被験体に脂質を変化させるための有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００１６】
【化８】
2008519080.tif 000006
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記方法はさらに、上記被験体に、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤を投与する工程を含む：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【００１７】
加えて、本発明により、脂質を変化させるために有効な量の被験体の潮紅反応を引き起こす能力が低いナイアシンまたはナイアシンアナログの投与のための組成物も提供される。この組成物には、（ａ）脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログと、（ｂ）潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストが含まれる。１つの実施形態においては、上記組成物には脂質を変化させるために有効な量のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記組成物には脂質を変化させるために有効な量のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００１８】
【化９】
2008519080.tif 000007
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記組成物にはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【００１９】
本発明により、また、脂質関連障害を予防または処置するためにキットも提供される。このキットには、少なくとも１投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログが含まれる。この場合、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、上記被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして上記ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する。１つの実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記のナイアシンまたはナイアシンアナログの投薬単位は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００２０】
【化１０】
2008519080.tif 000008
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記キットにはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【００２１】
本発明により、さらに、脂質関連障害を予防または処置するためのキットが提供される。このキットには、少なくとも１投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１つの別の投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログが含まれる。この場合、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、上記被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして上記ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する。１つの実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記のナイアシンまたはナイアシンアナログの投薬単位は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００２２】
【化１１】
2008519080.tif 000009
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記キットにはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【００２３】
加えて、本発明により、脂質関連障害を予防または処置するためのキットが提供される。このキットには、少なくとも１プレ投薬単位（ｐｒｅ−ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ）のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１つの別の投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログが含まれる。この場合、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、上記被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして上記ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する。１つの実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記のナイアシンまたはナイアシンアナログの投薬単位は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００２４】
【化１２】
2008519080.tif 000010
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記キットにはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
（詳細な説明）
出願人らは、ナイアシン受容体部分的アゴニストが、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を著しく軽減させることができることを発見した。本明細書中に開示されるように、ナイアシン受容体部分的アゴニストのマウスへの投与によって、ナイアシンによって誘導される潮紅が著しく軽減された（実施例１および２を参照のこと）。これらのマウスは、ＰＧＤ２の投与によって示されるように、潮紅させる能力をなおも有していた（実施例２を参照のこと）。加えて、本明細書中に開示されるように、潮紅を軽減させるナイアシン受容体部分的アゴニストは、遊離の脂肪酸の放出のナイアシンによって誘導される減少を妨害することはなかった（実施例３を参照のこと）。
【００２６】
ナイアシンは、ここ数年間、脂質関連障害の治療として使用されてきたが、ナイアシンがそれを通じて作用する受容体は最近まで知られていなかった。最初に、ナイアシンが特異的ＧＰＣＲを介して作用しているであろうと示唆された（Ｌｏｒｅｎｚｅｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５９：３４９−３５７）。最終的には、ＨＭ７４ａと呼ばれる既知の孤立したＧＰＣＲが、ニコチン酸受容体として同定された（例えば、米国特許出願番号１０／３１４，０４８を参照のこと）。ヒトのナイアシン受容体のヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿１７７５５１に、そして本明細書中では配列番号１として見ることができる。
【００２７】
本発明により、被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減させる方法が提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、潮紅は、完全に軽減されるかまたは解消される。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【００２８】
【化１３】
2008519080.tif 000011
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。
【００２９】
一般的には、潮紅はいくつかの方法で引き起こされ得る。例えば、潮紅は、社会的ストレスまたは不安神経症、ホルモンの変化、発熱、または息を止めることによって誘導され得、これらの全てによって、顔面の一時的な紅潮が生じる可能性がある。目的とする適応症は、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅に関する。
【００３０】
本明細書中で使用される場合は、用語「ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅」は、十分な用量のナイアシンまたはナイアシンアナログの投与によって引き起こされる検出可能な皮膚の潮紅反応を意味する。潮紅反応は皮膚の発赤を特徴とし、これには他の症状（例えば、皮膚の痒み、チクチク感、熱感、または頭痛）も含まれる場合がある。潮紅反応は皮膚のどこでも（例えば、顔面、頸、または胴体で）起こり得、そして１箇所または１箇所以上の位置で起こり得る。ヒトにおいては、潮紅反応は数分間から数時間持続し得る。一般的には、ヒトにおいては、十分な用量のナイアシンまたはナイアシンアナログの経口投与によって引き起こされた潮紅反応は、どこでも２０分間から８時間、またはそれ以上持続し得る。マウスまたはラットにおいては、潮紅反応は、通常、ナイアシンの投与（注射による）後約３分でピークとなり、約３０分後にはかなり減少する。
【００３１】
ナイアシンまたはナイアシンアナログが潮紅を誘導する本発明の任意の実施形態においては、ナイアシンまたはナイアシンアナログは検出可能な潮紅を生じるために十分な用量で存在する。検出可能な潮紅反応を生じるために必要なナイアシンまたはナイアシンアナログの量はいくつかの変数（例えば、化合物の処方物および個々の被験体）に依存して変化する。特に、検出可能な潮紅反応を生じるために必要なナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、例えば、個体の体重、個体の遺伝子構造、または個体の全体的な健康状態に応じて変化し得る。ヒトにおいて潮紅反応を引き起こすことができるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の量を低下させるために必要な量未満であり得、例えば、１日あたり少なくとも１７５ｍｇ、１日あたり少なくとも２００ｍｇ、１日あたり少なくとも２５０ｍｇ、１日あたり少なくとも５００ｍｇ、１日あたり少なくとも７５０ｍｇ、１日あたり少なくとも１ｇ、１日あたり少なくとも１．５ｇ、１日あたり少なくとも２ｇ、１日あたり少なくとも２．５ｇ、１日あたり少なくとも３ｇ、１日あたり少なくとも３．５ｇ、１日あたり少なくとも４ｇ、１日あたり少なくとも４．５ｇ、１日あたり少なくとも５ｇ、１日あたり少なくとも５．５ｇ、１日あたり少なくとも６ｇ、１日あたり少なくとも６．５ｇ、１日あたり少なくとも７ｇ、１日あたり少なくとも７．５ｇ、１日あたり少なくとも８ｇ、１日あたり少なくとも８．５ｇ、１日あたり少なくとも９ｇ、またはそれ以上を挙げることができる。例えば、１日あたり５００ｍｇから２ｇ、またはそれ以上のナイアシンによって、ほとんどのヒトにおいて潮紅反応を生じることができる。
【００３２】
本明細書中で使用される場合は、「被験体」は任意の動物を意味し、これには、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、あるいは霊長類（例えば、ヒト））が含まれる。１つの実施形態においては、被験体はヒトである。
【００３３】
本明細書中で使用される場合には、「ナイアシン」は以下の化学式を有しているニコチン酸を意味する：
【００３４】
【化１４】
2008519080.tif 000012
当業者によって理解されているように、ナイアシンはその薬物動態特性が変更されるように、他の化合物とともに処方することができる。例えば、ナイアシンは、ナイアシンに対して添加される他の化合物に依存して、即時放出型（ＩＲ）形態として、あるいは、持続放出型形態または徐放（ＳＲ）形態として処方することができる。１つの実施形態においては、ナイアシンはＩＲ形態である。１つの実施形態においては、ナイアシンは１日に１回の単回用量のナイアシンの持続放出型形態ではない。
【００３５】
持続放出型処方物または徐放型処方物は、錠剤またはカプセル剤から有効成分をゆっくりと放出するように設計される。これによって、通常の形態または即時放出型形態に伴う典型的な投与頻度と比較して、投与頻度を少なくすることができる。ゆっくりとした薬剤の放出は、薬剤の血液中でのレベルを低下させそして持続させるために設計され、これによって、通常放出型または即時放出型のナイアシン産物に伴う潮紅の副作用が最小となるか、または少なくなる。しかし、脂質関連障害を有している患者においての研究により、いくつかの持続放出型または徐放型の産物は、即時放出型ナイアシンと同じである脂質を変化させる有効な作用は有しておらず、実際には、即時放出型産物と比較すると、一層悪い副作用プロフィールを有している。例えば、持続放出型または徐放型ナイアシン処方物は、Ｈｅｎｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，：Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ，９１：１９９１（１９９１）およびＤａｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ，９３：１０２（１９９２）に記載されているように、肝臓毒性のより大きな罹患率を引き起こすことが知られている。ナイアシンの持続放出型処方物または徐放型処方物（例えば、Ｎｉｃｏｂｉｄ．ＲＴＭ．カプセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）、Ｅｎｄｕｒ−ａｃｉｎ．ＲＴＭ．（Ｉｎｎｏｖｉｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、および米国特許第５，１２６，１４５号と同第５，２６８，１８１号（これらには、２種類の異なるタイプのヒドロキシプロピルメチルセルロースと１種類の疎水性成分を含む徐放型ナイアシン処方物が記載されている）に記載されている処方物）が開発されている。
【００３６】
本明細書中で使用される場合は、「ナイアシンアナログ」は、ナイアシンと構造的または機能的に関係しているが、ナイアシンとは異なる化合物を意味する。例えば、ナイアシンアナログは、ナイアシンと構造的に関係している場合がある。ナイアシンのいくつかの構造的アナログが当該分野で公知であり、例が本明細書中に記載される。いくつかの実施形態においては、ナイアシンの構造的アナログには、少なくとも１つの酸性官能基（例えば、カルボキシル、テトラゾリルなど）が含まれる。いくつかの実施形態においては、ナイアシンの構造的アナログには、少なくとも１つの環窒素原子（例えば、ピリジニル、ピラゾリル、イソキサゾリルなどの中に存在している窒素）が含まれる。いくつかの実施形態においては、ナイアシンの構造的アナログには、少なくとも１つの酸性官能基と少なくとも１つの環窒素原子が含まれる。これらの基には、例えば、血液中での加水分解により、インビボで変換されて酸性官能基または環窒素を生じるプロドッラグ基が含まれる。完全な議論は、Ｔ．Ｈｉｇｈｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓの第１４巻、および“Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，”ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７（いずれも、引用により本明細書中に組み入れられる）に提供されている。
【００３７】
ナイアシンアナログは、ナイアシンと機能的に関係している場合もあり、例えば、ナイアシンアナログは、ナイアシン受容体への特異的結合、またはナイアシン受容体との結合に応答した細胞内シグナルの開始のような、ナイアシンの機能を有し得る。例えば、本発明の任意の実施形態においては、ナイアシンアナログは、ナイアシン受容体アゴニストでありえる。ナイアシンアナログは、ナイアシンの構造的アナログまたは機能的アナログのいずれかであり得るか、あるいは、ナイアシンアナログは、ナイアシンの構造的かつ機能的の両方のアナログであり得る。
【００３８】
ナイアシンのいくつかのアナログまたは誘導体は当該分野で公知であり、例えば、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，Ａｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，第１０版（１９８３）に見ることができる。ナイアシンアナログとしては、例えば、酒石酸ニコチニルアルコール、ｄ−グルシトールヘキサニコチネート、ニコチン酸アルミニウム、ニセリトール、ｄ，１−α−トコフェリルニコチネート、６−ＯＨ−ニコチン酸、ニコチナリア酸（ｎｉｃｏｔｉｎａｒｉａ  ａｃｉｄ）、ニコチンアミド、ニコチンアミド−Ｎ−酸化物、６−ＯＨ−ニコチンアミド、ＮＡＤ、Ｎ−メチル−２−ピリジン−８−カルボキサミド、Ｎ−メチル−ニコチンアミド、Ｎ−リボシル−２−ピリドン−５−カルボキシド、Ｎ−メチル−４−ピリドン−５−カルボキサミド、ブラジリアン（ｂｒａｄｉｌｉａｎ）、ソルビニカート（ｓｏｒｂｉｎｉｃａｔｅ）、ヘキサニサイト（ｈｅｘａｎｉｃｉｔｅ）、ロニトール、およびニコチン酸の低級アルコールエステルを挙げることができる。ナイアシンについて上記に記載されたように、ナイアシンアナログは、それらの薬物動態特性を変化させるために様々な方法で処方することができる。
【００３９】
上記に記載されたように、ナイアシンアナログにはナイアシン受容体アゴニスト（ナイアシン以外）が含まれる。いくつかのナイアシン受容体アゴニストが当該分野で公知であり、これらは例えば、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，Ａｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，第１０版（１９８３）に見ることができる。本明細書中でナイアシンアナログとみなされるナイアシンアゴニストの特定の例は、以下の実施形態と以下の特許出願に列挙される：６０／４１８，０５７および６０／４７８，６６４（これらはそれらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。
【００４０】
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは以下の化学式のもの、またはそのＮ−酸化物である：
【００４１】
【化１５】
2008519080.tif 000013
式中：
Ｒ１は、ハロゲン、水酸基、アセチルアミノ、アミノ、アルコキシ、カルボアルコキシ、アルキルチオ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、Ｎ−アルキルカルバミル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルバミル、アルキルスルホニル、１個から４個までの炭素を含む上記アルキル基、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルチオ、メトキシメチル、カルボキシ、カルバミル、４個までの炭素原子を含むアルカノイルオキシ、フェニル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メチルフェニル、およびｐ−アミノフェニルからなる群より選択され；
Ｒ２は、ハロゲン、１〜４個までの炭素原子を含むアルカノイルオキシ、２個から５個までの炭素原子を含むカルボアルコキシ、カルバミル、Ｎ−アルキルカルバミル、およびＮ，Ｎ−ジアルキルカルバミル（この場合、上記アルキル基には、１〜４個までの炭素原子とトリフルオロメチルが含まれる）からなる群より選択され；そして
ｎは０から４までの整数である。
【００４２】
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは以下の化学式のもの、またはそのＮ−酸化物である：
【００４３】
【化１６】
2008519080.tif 000014
式中：
Ｒ３とＲ４は、水素、１個から４個までの炭素原子を含むアルキル、または３個から７個までの炭素原子を含むシクロアルキルであり；そして
ｎは０から４までの整数である。
【００４４】
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは以下の化学式のもの、またはそのＮ−酸化物である：
【００４５】
【化１７】
2008519080.tif 000015
式中：
Ｒ５とＲ６は、それぞれ、Ｈ、ハロゲン、水酸基、アミノ、アルキルオキシ、アルキルチオ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、Ｎ−アルキルカルバミル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルバミル、アルキルスルホキシ、アルキルスルホニル、１個から４個までの炭素を含む上記アルキル基、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルチオ、カルボキシ、カルバミル、４個までの炭素原子を含むアルカノイルオキシ、フェニル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メチルフェニル、およびｐ−アミノフェニルからなる群より選択され；そして
ｎは０から４までの整数である。
【００４６】
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは以下の化学式のものであるか、または、Ｒ１０が水酸基（ｈｙｄｏｘｙ）である場合には、薬学的に受容可能な塩基との化合物の塩、あるいは、その４−Ｎ−酸化物である：
【００４７】
【化１８】
2008519080.tif 000016
式中：
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９の少なくとも１つがＣ１−６アルキルであり、他は水素原子であり；Ｒ１０は、水酸基またはＣ１−６アルコキシである。Ｎ−酸化物の位置は、以下の番号付けによって指定され、そして４−Ｎ−酸化物の構造は以下の構造を有する：
【００４８】
【化１９】
2008519080.tif 000017
１つの特定の４−Ｎ−酸化物は５−メチルピラジン−２−カルボン酸−４−酸化物（Ａｃｉｐｉｍｏｘ（登録商標））であり、これは以下の構造を有する：
【００４９】
【化２０】
2008519080.tif 000018
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは以下の化学式のもの、またはその４−Ｎ−酸化物である：
【００５０】
【化２１】
2008519080.tif 000019
式中：
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９の少なくとも１つがＣ１−６アルキルであり、他は水素原子であり；Ｒ１１およびＲ１２のそれぞれ（これらは同じである場合も、異なる場合もある）は、水素またはＣ１−６アルキルである。Ｎ−酸化物の位置は本明細書中上記に記載されるものと同じである。
【００５１】
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは以下の化学式のもの、および薬学的に受容可能な担体である：
【００５２】
【化２２】
2008519080.tif 000020
式中
Ｒ１３の少なくとも１つが７〜１１個の炭素原子のアルキル基を示し、Ｒ１４はＨまたは２個までの炭素原子の低級アルキル基を示す。
【００５３】
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００５４】
【化２３】
2008519080.tif 000021
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは、５−クロロ−ピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００５５】
【化２４】
2008519080.tif 000022
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−アミノ−ピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００５６】
【化２５】
2008519080.tif 000023
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−ベンジル−ピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００５７】
【化２６】
2008519080.tif 000024
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは６−クロロ−ピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００５８】
【化２７】
2008519080.tif 000025
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは６−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００５９】
【化２８】
2008519080.tif 000026
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは３−クロロ−ピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００６０】
【化２９】
2008519080.tif 000027
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは３−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００６１】
【化３０】
2008519080.tif 000028
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはピラジン−２−カルボン酸エチルアミドであり、これは以下の構造を有する：
【００６２】
【化３１】
2008519080.tif 000029
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはモルホリン−４−イル−ピラジン−２−イルメタノンであり、これは以下の構造を有する：
【００６３】
【化３２】
2008519080.tif 000030
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２カルボン酸（６−メチル−ピラジン−２−イル）−アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００６４】
【化３３】
2008519080.tif 000031
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸（５−メチル−ピラジン−２−イル）アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００６５】
【化３４】
2008519080.tif 000032
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸（３−メチル−ピラジン−２−イル）アミドであり、これは以下の構造を有する：
【００６６】
【化３５】
2008519080.tif 000033
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは（５−メチル−ピラジン−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノンであり、これは以下の構造を有する：
【００６７】
【化３６】
2008519080.tif 000034
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸ヒドロキシアミドであり、これは以下の構造を有する：
【００６８】
【化３７】
2008519080.tif 000035
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはピラジン−２−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００６９】
【化３８】
2008519080.tif 000036
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−アミノ−ピラジン−２−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００７０】
【化３９】
2008519080.tif 000037
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−ベンジル−ピラジン−２−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００７１】
【化４０】
2008519080.tif 000038
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは６−クロロ−ピラジン−２−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００７２】
【化４１】
2008519080.tif 000039
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは６−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００７３】
【化４２】
2008519080.tif 000040
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは３−ヒドロキシ−ピラジン−２−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００７４】
【化４３】
2008519080.tif 000041
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸２−ヒドロキシ−エチルエステルであり、これは以下の構造を有する：
【００７５】
【化４４】
2008519080.tif 000042
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸アリルエステルであり、これは以下の構造を有する：
【００７６】
【化４５】
2008519080.tif 000043
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸フェニルエステルであり、これは以下の構造を有する：
【００７７】
【化４６】
2008519080.tif 000044
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸エトキシカルボニルメチルエステルであり、これは以下の構造を有する：
【００７８】
【化４７】
2008519080.tif 000045
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはピラジン−２−カルボン酸メチルエステルであり、これは以下の構造を有する：
【００７９】
【化４８】
2008519080.tif 000046
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは２−メチル−５−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−ピラジンであり、これは以下の構造を有するか、または本明細書中で上記に記載されたようなその４−Ｎ−酸化物である：
【００８０】
【化４９】
2008519080.tif 000047
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−（５−メチル−イソキサゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾールであり、これは以下の構造を有する：
【００８１】
【化５０】
2008519080.tif 000048
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−（３−メチル−イソキサゾール−５−イル）−１Ｈ−テトラゾールであり、これは以下の構造を有する：
【００８２】
【化５１】
2008519080.tif 000049
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−（３−キノリル）テトラゾールであり、これは以下の構造を有する：
【００８３】
【化５２】
2008519080.tif 000050
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはニコチン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００８４】
【化５３】
2008519080.tif 000051
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはピリダジン−４−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００８５】
【化５４】
2008519080.tif 000052
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは３−ピリジン酢酸であり、これは以下の構造を有する：
【００８６】
【化５５】
2008519080.tif 000053
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは５−メチルニコチン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００８７】
【化５６】
2008519080.tif 000054
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは６−メチルニコチン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００８８】
【化５７】
2008519080.tif 000055
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはニコチン酸−１−酸化物であり、これは以下の構造を有する：
【００８９】
【化５８】
2008519080.tif 000056
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは２−ヒドロキシニコチン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００９０】
【化５９】
2008519080.tif 000057
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログはフラン−３−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００９１】
【化６０】
2008519080.tif 000058
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは３−メチルイソキサゾール−５−カルボン酸であり、これは以下の構造を有する：
【００９２】
【化６１】
2008519080.tif 000059
いくつかの実施形態においては、本発明のナイアシンアナログは以下の化学式のものである：
【００９３】
【化６２】
2008519080.tif 000060
式中
Ｒ１５は、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ウンデシル、フェニル、３−クロロフェニル、４−クロロフェニル、ベンジル、４−ベンジル、４−メトキシベンジル、２−フェニルエチル、および３−フェニルプロピルからなる群より選択され；そして
Ｒ１６はＨであるか；あるいは、
Ｒ１５とＲ１６が一緒になって、−ＯＣＨ２ＣＨ２−、−Ｃ３Ｈ６−、または−Ｃ４Ｈ８−基を形成する（ただし、上記−ＯＣＨ２ＣＨ２−基の酸素原子がピラゾール環の５位に結合しているという条件）。
【００９４】
ナイアシンアナログにはナイアシンの機能的アナログが含まれるので、ナイアシンアナログにはナイアシン受容体アゴニストが含まれる。したがって、本発明によってまた、被験体においてナイアシンまたはナイアシン受容体アゴニストによって誘導される潮紅を軽減する方法も提供され、この方法は、上記被験体に、潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程を含む。
【００９５】
一般的には、リガンドがその受容体に結合する（多くの場合に、受容体の活性化と呼ばれる）と、受容体の立体構造に変化が生じ、これによって細胞内領域と細胞内Ｇタンパク質との間での結合が促進される。他のＧタンパク質も存在しているが、現在までのところ、Ｇｑ、Ｇｓ、Ｇｉ、Ｇｚ、およびＧｏが同定されているＧタンパク質である。ホスホリパーゼＣ経路に対していくつかのクラスのＧＰＣＲ（例えば、Ｇα１５またはＧα１６）を結合させるようである雑多なＧタンパク質（Ｏｆｆｅｒｍａｎｎｓ  ＆  Ｓｉｍｏｎ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（１９９５）２７０：１５１７５−８０））、あるいは、同じ経路に多数の異なるＧＰＣＲを結合させるように設計されたキメラＧタンパク質（Ｍｉｌｌｉｇａｎ  ＆  Ｒｅｅｓ，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９９）２０：１１８−２４）もまた存在している。リガンドによって活性化されるＧＰＣＲのＧタンパク質との結合によってシグナル伝達と呼ばれるシグナル伝達カスケードのプロセスが開始される。通常の条件では、シグナル伝達は最終的に、細胞の活性化または細胞の阻害を生じる。
【００９６】
生理学的条件下では、ＧＰＣＲは細胞膜の中に、２種類の異なる立体構造（不活性な状態と活性な状態）の間の平衡状態で存在する。不活性な状態の受容体は、細胞内シグナル伝達経路に結合して生物学的応答を導くシグナル伝達を開始することはできない。受容体の立体構造が活性な状態へと変化すると、（Ｇタンパク質を介して）シグナル伝達経路に導くことができ、生物学的応答が生じる。受容体は、リガンドまたは薬剤のような化合物によって、活性な状態で安定化させることができる。加えて、最近の発見によって、活性な状態の立体構造になるように受容体を促進し、そのような状態で受容体を安定化させるための、リガンドまたは薬剤以外の手段が提供された。これらの手段は、受容体に対するリガンドの結合の作用を刺激することによって、活性な状態で受容体を効率よく安定化させる。このようなリガンドに依存する手段による安定化は、構成的な受容体の活性化と呼ばれる。
【００９７】
細胞内シグナルの開始は、例えば、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、サイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、およびカルシウムのような二次メッセンジャーのレベルの測定によって決定することができる。これらの二次メッセンジャーを測定するためのいくつかのアッセイが当該分野で周知であり、例えば、ＦＬＩＰＲアッセイ、メラニン保有細胞アッセイ、またはＣＲＥ−レポーターアッセイである（例えば、本明細書中の実施例７、１０、１１、および１２を参照のこと）。
【００９８】
アゴニストは、例えば、それが受容体に結合すると細胞内応答を活性化する物質であり、例えば、リガンドまたは候補の化合物である。細胞内応答によっては、例えば、膜に対するＧＴＰの結合の促進、あるいは、ｃＡＭＰまたはＩＰ３のような二次メッセンジャーのレベルの調節が可能である。いくつかの実施形態においては、アゴニストは、それが受容体に結合すると細胞内応答を活性化する（例えば、膜に対するＧＴＰγＳの結合を促進するか、または細胞内ｃＡＭＰレベルを下げる）ことがこれまでは知られていなかった物質である。部分的アゴニストは、例えば、それが受容体に結合すると細胞内応答を活性化させるが、完全なアゴニストよりもその程度または範囲が小さい物質であり、例えば、リガンドまたは候補の化合物である。
【００９９】
本明細書中で使用される場合は、「ナイアシン受容体部分的アゴニスト」は、それがナイアシン受容体に結合すると細胞内応答を活性化させるが、ナイアシン受容体の完全なアゴニストであるナイアシンよりもその程度が小さい物質である。技術的には、用語部分的アゴニストは相対的な用語である。なぜなら、部分的アゴニストによっては、完全なアゴニストと比較して部分的な応答しか生じないからである。時間が経つにつれて新しい化合物が発見されつつあるので、完全なアゴニストは変わる可能性があり、これまでの完全なアゴニストは部分的アゴニストとなる可能性がある。明確にするために、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、本明細書中で使用される場合には、完全なアゴニストとしてのナイアシンと比較される。ナイアシン受容体部分的アゴニストは、ナイアシンと比較して検出可能なほどに小さい程度の細胞内応答の活性化を有する。すなわち、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、最大応答よりも小さい程度に誘発する。このように、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、ナイアシンよりも効率が良くない。例えば、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、ナイアシンと比較すると９０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると８５％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると８０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると７５％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると７０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると６５％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると６０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると５５％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると５０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると４５％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると４０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると３５％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると３０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると２５％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると２０％またはそれ未満の効率、ナイアシンと比較すると１５％またはそれ未満の効率、あるいは、ナイアシンと比較すると１０％またはそれ未満の効率を有する。例えば、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、ナイアシンと比較すると１０％から９０％の効率、ナイアシンと比較すると２０％から８０％の効率、ナイアシンと比較すると３０％から７０％の効率、ナイアシンと比較すると４０％から６０％の効率、ナイアシンと比較すると４５％から５５％の効率を有し得る。効率は測定される応答の大きさであり、これは、定義された応答を誘発するために要する化合物の量である効力とは異なる。したがって、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、アゴニスト、アンタゴニスト、または逆アゴニストと比較した場合には、より強力、より弱い、または同等の効力であり得る。
【０１００】
ナイアシン受容体部分的アゴニストは、当該分野で周知であり、本明細書中に開示されるアッセイを使用して決定することができる。例えば、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、ｃＡＭＰアッセイを使用して決定することができる。
【０１０１】
代表的なナイアシン受容体部分的アゴニストが表Ａに示される：
【０１０２】
【表１−１】
2008519080.tif 000061
【０１０３】
【表１−２】
2008519080.tif 000062
【０１０４】
【表１−３】
2008519080.tif 000063
本発明の化合物は、種々の互変異性体の形態で存在し得る。ピラゾールが少なくとも２種類の互変異性体形態で存在し得ることは当業者に周知である。式（Ｉ）は１つの形態を示しているが、全ての互変異性体形態が本発明に含まれることが理解される。例として、式（Ｉ）のピラゾールについての２つの可能な互変異性体が以下に示される：
【０１０５】
【化６３】
2008519080.tif 000064
加えて、Ｘがテトラゾール−５−イル基である式（Ｉ）については、テトラゾールが少なくとも２種類の互変異性体形態で存在し得ることもまた当業者に周知であり、テトラゾール基についての全ての互変異性体形態が本発明に含まれることが理解される。例として、Ｘがテトラゾール−５−イル基である式（Ｉ）についての２つの可能な互変異性体が以下に示される：
【０１０６】
【化６４】
2008519080.tif 000065
さらに、Ｘがテトラゾール−５−イル基である場合には、ピラゾール環と、そして結合したテトラゾール環のいずれについても、互変異性体が存在し得ることが理解される。本明細書中に開示される化合物について存在し得る全ての互変異性体が本発明の範囲に含まれる。
【０１０７】
用語「カルボキシ」または「カルボキシル」は、基−ＣＯ２Ｈと対応する共役塩基−ＣＯ２−を示し、これはまたカルボン酸基とも呼ばれる。
【０１０８】
用語「５員炭素環」は、５個の環炭素と、必要に応じて１つまたは２つの環内二重結合を含む芳香族ではない環を示し、いくつかの実施形態においては、５員炭素環の２つの環炭素はピラゾール環によって共有されている。例えば、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、以下の化学構造を有している５員炭素環を形成する場合であるが、これに限定はされない：
【０１０９】
【化６５】
2008519080.tif 000066
用語「５員複素環」は、４個の環炭素と、酸素およびイオウから選択される１つのヘテロ原子と、必要に応じて１つの環内二重結合を含む、芳香族ではない環を示す。いくつかの実施形態においては、５員炭素環の２つの環炭素はピラゾール環によって共有されている。例えば、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、以下の化学構造を有している５員複素環を形成する場合であるが、これに限定はされない：
【０１１０】
【化６６】
2008519080.tif 000067
用語「テトラゾール−５−イル」は、以下に示される基と対応する互変異性体を意味する：
【０１１１】
【化６７】
2008519080.tif 000068
ナイアシン受容体に関して、いくつかのナイアシン受容体配列が当該分野で公知である。例えば、ヒトナイアシン受容体のヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿１７７５５１に見ることができ、本明細書中では配列番号１として列挙される。ナイアシン受容体に対する限定された修飾を、ナイアシンに結合するナイアシン受容体の能力を損なうことなく行うことができることもまた理解される。例えばナイアシン受容体は、他のナイアシン受容体ポリペプチド（例えば、ヒトナイアシン受容体ポリペプチドの種ホモログ（配列番号２））を含むように意図される。ヒトナイアシン受容体の種ホモログの配列はデータベースの中に存在しており、例えば、ナイアシン受容体のラットホモログは、ＧｅｎＢａｎｋに、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＢＡＣ５８００９に見ることができる。加えて、ナイアシン受容体には、完全なナイアシン受容体ポリペプチドのナイアシン受容体結合機能を実質的に保持しているナイアシン受容体のスプライシング変異体および対立遺伝子変異体が含まれる。
【０１１２】
さらに、ナイアシン受容体には、変異した受容体が野生型のナイアシン受容体ポリペプチドのナイアシン受容体結合機能を実質的に保持している限りにおいて、野生型受容体と比較してアミノ酸変化（例えば、保存的アミノ酸変化）が含まれてよい。アミノ酸配列への保存的アミノ酸変化および非保存的アミノ酸変化、アミノ酸ギャップ、およびアミノ酸の挿入は、利用できるアルゴリズム、ならびにデフォルト設定を使用するＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（“ＢＬＡＳＴ”）のようなプログラムを使用して参照配列と比較することができる（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０）８７：２２６４−８；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９９０）２１５：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９３）３：２６６−７２；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ（１９９７）２５：３３８９−３４０２を参照のこと）。
【０１１３】
ナイアシン受容体はナイアシンに特異的に結合する。用語特異的に結合するはポリペプチドが標的ポリペプチドに対して親和性を有しており、これが、無関係なポリペプチドに対するその親和性よりも測定できるほどに高いことを意味するように意図される。受容体の結合を検出または測定するためのいくつかの方法が当該分野で周知であり、例えば、放射性リガンド結合試験、またはＦＬＩＰＲアッセイのような機能の読み取りを用いるアッセイである。
【０１１４】
ポリペプチド全体のナイアシン受容体結合機能を実質的に保持しているナイアシン受容体の断片を、ポリペプチド全体の代わりに使用できることが理解される。例えばナイアシン受容体のリガンド結合ドメインを、ナイアシン受容体に対する部分的アゴニストの結合を決定するために、ポリペプチド全体の代わりに使用することができる。
【０１１５】
本明細書中で使用される場合は、ナイアシン受容体部分的アゴニストの「潮紅を軽減するために有効な量」は、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅の軽減を生じるに十分な量を意味する。
【０１１６】
本明細書中で使用される場合は、「軽減する」は、測定可能な量または特定の活性の低下を意味し、そして用語「低下させる」、「小さくする」、「下げる」、および「弱くする」と同じ意味で使用される。潮紅の量についての言及においては、潮紅の軽減は、例えば、潮紅の減少、または潮紅の解消であり得る。例えば、潮紅を、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または、少なくとも約９９％軽減させることができる。加えて、潮紅は、１００％軽減する、すなわち、解消することができ、その結果、潮紅は検出されない。１つの実施形態においては、潮紅は、少なくとも約８０％軽減する。別の実施形態においては、潮紅の軽減は、潮紅の完全な軽減または解消である。
【０１１７】
潮紅を検出し定量化するためのいくつかの方法を使用することができる。例えば、潮紅は、視覚的に検出し定量化することができる。潮紅を検出し、定量化するための１つの方法は、レーザードップラ（Ｌａｓｅｒ  Ｄｏｐｐｌｅｒ）により、例えば、Ｐｉｒｉｍｅｄ  ＰｉｍＩＩレーザードップラーが使用される。加えて、被験体の調査を、潮紅と、チクチク感または熱感のような潮紅に伴う可能性がある症状の重篤度を評価するために行うことができる。潮紅を検出し定量化するための別の方法には、被験体に由来する生物学的試料（例えば、血液または尿）の中でのプロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）またはプロスタグランジンＦ２（ＰＧＦ２）のレベルの測定が含まれ得る。加えて、例えば、ＰＧＤ２の主要な尿代謝産物であるＰＧＤ−Ｍのレベルは、被験体の尿から測定することができる。プロスタグランジンレベルを測定するためのアッセイは市販されており、例えば、ＰＧＤ２についての酵素免疫アッセイをＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から入手することができる。
【０１１８】
当業者によって理解されているように、潮紅の軽減を達成するために必要なナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、例えば、特定の化合物、その処方、投与経路、および個々の被験体によって変化するであろう。
【０１１９】
被験体への投与に適している経路としては、当該分野で公知の方法を使用する、経口、局所、鼻腔、直腸、経粘膜、または腸投与、非経口投与（筋肉内注射、皮下注射、髄内注射、ならびに、髄腔内注射、直接的な脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射、肺内注射（吸入）、または眼内注射を含む）が挙げられる。他の投与経路は、エアゾールおよびデポー処方物である。１つの実施形態においては、投与経路は経口である。
【０１２０】
本発明によりさらに、被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法が提供される。この方法は、上記被験体に、潮紅を軽減するために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストと、脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。さらなる実施形態においては、潮紅は、完全に軽減されるかまたは解消される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１２１】
【化６８】
2008519080.tif 000069
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。
【０１２２】
本明細書中で使用される場合には、用語「脂質を変化させるために有効な量」は、ナイアシンまたはナイアシンアナログについての言及においては、アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の量を検出できるほどに変化（例えば、被験体中のＬＤＬ−コレステロール、ＶＬＤＬ−コレステロール、またはトリグリセリドの量の減少、あるいは、ＨＤＬ−コレステロール量の増加）させるために十分なこれらの化合物の量を意味する。例えば、脂質を変化させるために有効な量のナイアシンによって、ＨＤＬ−コレステロールの量を増加させるか、またはＬＤＬ−コレステロールの量を減少させることができる。加えて、例えば、脂質を変化させるために有効な量のナイアシンは、ＨＤＬ−コレステロールの量を増加させ、なおかつＬＤＬ−コレステロールの量をも減少させることができる。血液中のこれらの脂質の量を測定するための標準的な実験室でのアッセイは当該分野で周知である（例えば、本明細書中の実施例６を参照のこと）。
【０１２３】
コレステロール（例えば、ＶＬＤＬ−コレステロール、ＬＤＬ−コレステロール、および高密度リポタンパク質−コレステロール（ＨＤＬ−コレステロール））は、リポタンパク質複合体によって血液の中を輸送される。ＬＤＬは血液の中で、血管壁の内皮細胞下空間にコレステロールを運ぶ。血管壁の内皮細胞下空間でのＬＤＬ−コレステロールの過酸化によってアテローム性動脈硬化症のプラークの形成が導かれると考えられている。一方、ＨＤＬ−コレステロールは、プラークの形成に対抗し、循環器疾患およびアテローム性動脈硬化症の症状の発症を遅らせるまたは妨げると考えられている。ＨＤＬ−コレステロールのいくつかのサブタイプ（例えば、ＨＤＬ１−コレステロール、ＨＤＬ２−コレステロール、およびＨＤＬ３−コレステロール）が今日までに同定されている。
【０１２４】
ＨＤＬがアテローム性動脈硬化症の進行から防御するであろういくつかの機構が存在している。インビトロでの研究によって、ＨＤＬが細胞からコレステロールを除去することができることが示されている（Ｐｉｃａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，６：４３４−４４１）。この性質についてのデータは、ＨＤＬの１つの抗アテローム特性が、過剰の遊離のコレステロールの組織を枯渇させ、最終的には、このコレステロールの肝臓への送達を導くその能力によるであろうことを示唆している（Ｇｌｏｍｓｅｔ，（１９６８）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．，９，１５５−１６７）。これは、ＨＤＬから肝臓へのコレステロールの効率的な移動を示す実験によってサポートされている（Ｇｌａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５８：７１６１−７１６７；ＭｃＫｉｎｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６，２５４８−２５５２）。加えて、ＨＤＬは、グリセリドを多く含むリポタンパク質の迅速な代謝に不可欠なアポタンパク質の循環においてレザーバーとしての役割を担うことができる（Ｇｒｏｗ  ａｎｄ  Ｆｒｉｅｄ，（１９７８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｈｍ．，２５３，１８３４−１８４１；Ｌａｇｏｃｋｉ  ａｎｄ  Ｓｃａｎｕ，（１９８０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５５，３７０１−３７０６；Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．，（１９８２）２３，１２５９−１２７３）。
【０１２５】
一般的には、総コレステロール／ＨＤＬ−コレステロール（すなわち、ＴＣ／ＨＤＬ）比は、アテローム性動脈硬化症、心疾患、または脳卒中のような症状の発症についての個体のリスクに関して有用な予測判断材料を示し得る。血漿脂質レベルの現在の分類が表Ｂに示される。
【０１２６】
【表２】
2008519080.tif 000070
２００１年の全米コレステロール教育プログラムの指針による。
【０１２７】
したがって、推奨される総コレステロール／ＨＤＬ−Ｃ（すなわち、ＴＣ／ＨＤＬ）比は、３．５未満かまたはそれに等しい比が理想的であり、４．５より大きい比は「危険性がある」とみなされることを示している。ＴＣ／ＨＤＬ比を決定する値は、個体が「正常な」ＬＤＬと総コレステロールを示すが、低いＨＤＬ−コレステロールを有している状況においては明確な証拠である。ＬＤＬと総コレステロールに基づいて個体が処置を変えることはできない場合があるが、ＨＤＬ−コレステロールレベルをファクタリングすると、より正確なリスク評価を得ることができる。したがって、個体のＨＤＬ−コレステロールのレベルが４．５より大きな比である場合には、治療的介入または予防的介入が必要であり得る。
【０１２８】
ＬＤＬ−コレステロールレベルに関して、米国心臓協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）は、現在、１００ｍｇ／ｄＬ未満のＬＤＬ−コレステロールレベルが最適であると考えており、１００〜１２９ｍｇ／ｄＬが最適に近く、１３０〜１５９ｍｇ／ｄＬは高境界値、１６０〜１８９ｍｇ／ｄＬは高い、そして１９０ｍｇ／ｄＬは非常に高いＬＤＬ−コレステロールレベルと考えられている。トリグリセリドレベルに関して、米国心臓協会は、現在、１５０ｍｇ／Ｌ未満を正常と考えており、１５０〜１９９ｍｇ／ｇＬは高境界値、２００〜４９９ｍｇ／ｄＬは高い、そして５００ｍｇ／ｄＬは非常に高いトリグリセリドレベルと考えられている。
【０１２９】
アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の量を変化させるために必要なナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、化合物の処方および個体に応じて変化するであろう。具体的には、アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の量を変化させるために必要なナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、例えば、個体の体重、個体の遺伝子構造、または個体の全体的な健康状態に応じて変化し得る。アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の量を変化させることができるナイアシンまたはナイアシンアナログの量としては、例えば、１日あたり少なくとも５００ｍｇ、１日あたり少なくとも７５０ｍｇ、１日あたり少なくとも１ｇ、１日あたり少なくとも１．５ｇ、１日あたり少なくとも２ｇ、１日あたり少なくとも２．５ｇ、１日あたり少なくとも３ｇ、１日あたり少なくとも３．５ｇ、１日あたり少なくとも４ｇ、１日あたり少なくとも４．５ｇ、１日あたり少なくとも５ｇ、１日あたり少なくとも５．５ｇ、１日あたり少なくとも６ｇ、１日あたり少なくとも６．５ｇ、１日あたり少なくとも７ｇ、１日あたり少なくとも７．５ｇ、１日あたり少なくとも８ｇ、１日あたり少なくとも８．５ｇ、１日あたり少なくとも９ｇ、またはそれ以上を挙げることができる。１つの実施形態においては、上記脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、１日あたり少なくとも５００ｍｇのナイアシンである。別の実施形態においては、上記脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、１日あたり１から３グラムである。
【０１３０】
加えて、本発明により、被験体におけるナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減する方法が提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減するために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程と、それに続いて、上記被験体に脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。さらなる実施形態においては、潮紅は完全に軽減されるかまたは解消される。なおさらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１３１】
【化６９】
2008519080.tif 000071
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。
【０１３２】
本明細書中に開示される方法について、ナイアシン受容体部分的アゴニストと、ナイアシンまたはナイアシンアナログは一緒に投与することができ、また、同時にもしくは異なるタイミングで別々に投与することもできる。例えば、ナイアシンまたはナイアシンアナログは、ナイアシン受容体部分的アゴニストと同じ処方物になるように混合することができ、また別の処方物であってもよい。ナイアシンまたはナイアシンアナログとナイアシン受容体部分的アゴニストが別々の処方物である場合には、これらは、一緒に投与することができ、また、別々に、例えば、同じ設定で行われる場合のように、１分未満の差で別々に、もしくは、異なる設定で行われる場合のように、より長時間の差で別々に投与することもできる。
【０１３３】
ナイアシン受容体部分的アゴニストが被験体投与され、その後に続いて、ナイアシンまたはナイアシンアナログが投与される本発明の方法においては、ナイアシン受容体部分的アゴニストの投与とその後のナイアシンまたはナイアシンアナログの投与の間の時間は、例えば、少なくとも約１分、少なくとも約５分、少なくとも約１０分、少なくとも約２０分、少なくとも約３０分、少なくとも約４５分、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約３時間、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１４時間、少なくとも約２０時間、または少なくとも約２４時間、あるいはそれ以上であり得る。
【０１３４】
本発明により、また、被験体における脂質関連障害を予防または処置するための方法も提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減するために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストと、脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログは、ナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、潮紅は完全に軽減されるかまたは解消される。なおさらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１３５】
【化７０】
2008519080.tif 000072
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記方法には、上記被験体に、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤を投与する工程がさらに含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【０１３６】
本明細書中で使用される場合は、用語「処置する」は、障害についての言及においては、特定の障害に関係している１つ以上の症状の重篤度の低下を意味する。したがって、障害の処置は、必ずしも、障害に伴う全ての症状の重篤度の低下を意味するのではなく、また、必ずしも、障害に関係している１つ以上の症状の重篤度の完全な低下を意味するのでもない。同様に、用語「予防する」は、特定の障害に関係している１つ以上の症状の発生または発症の予防を意味し、必ずしも、障害の完全な予防を意味するのではない。本発明の方法は、例えば、以下に記載される脂質関連障害を含む、ナイアシン応答性の障害を処置するために使用することができる。
【０１３７】
本明細書中で使用される場合は、用語「脂質関連障害」は、被験体の中での、アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質（例えば、ＬＤＬ−コレステロール、ＶＬＤＬ−コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、またはトリグリセリド）の最適ではないレベルに関係している任意の障害を意味する。したがって、脂質関連障害は、例えば、ＬＤＬ−コレステロールレベルの上昇、ＨＤＬ−コレステロールレベルの低下であり得るか、あるいは、少なくとも一部、アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の最適ではないレベルによって引き起こされる障害（例えば、アテローム性動脈硬化症、心臓発作（心筋梗塞）、または脳卒中）である。アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の最適なレベルは上記で議論されており、これらの脂質の最適ではないレベル、またはこれらの脂質の最適には満たない比が、脂質関連障害と見なされる。
【０１３８】
高脂血症は、血漿中の任意の脂質（例えば、コレステロール、トリグリセリド、およびリポタンパク質）または脂質の全ての濃度の上昇についての一般的な用語であり、脂質関連障害である。高脂血症は急性である場合も、また先天性である場合もある。高脂血症の特定の形態としては、例えば、高コレステロール血症、家族性A型高脂血症（ｄｙｓｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉａ）、糖尿病性異常脂質血症、ネフローゼ異常脂質血症、および家族性混合型高脂血症を挙げることができる。高コレステロール血症は、血清の低密度リポタンパク質−コレステロールと血清総コレステロールの上昇を特徴とする。家族性A型高脂血症はＩＩＩ型高脂血症としても知られており、β−ＶＬＤＬと呼ばれる非常に低い密度のリポタンパク質−コレステロール（ＶＬＤＬ−コレステロール）粒子の血清の中での蓄積を特徴とする。正常なアポリポタンパク質Ｅ３の異常なイソ型のアポリポタンパク質Ｅ２での置き換えもまた、この症状に関係している。糖尿病性異常脂質血症は複数のリポタンパク質の異常（例えば、ＶＬＤＬ−コレステロールの過剰生産、異常なＶＤＬＤトリグリセリド脂肪分解、ＬＤＬ−コレステロール受容体活性の低下）と、場合によっては、ＩＩＩ型高脂血症を特徴とする。ネフローゼ異常脂質血症は治療することが難しく、多くの場合には、高コレステロール血症と高トリグリセリド血症が含まれる。家族性混合型高脂血症は複数の高脂血症の表現形、すなわち、ＩＩａ型、ＩＩｂ型、ＩＶ型、Ｖ型、または家族性A型高脂血症を特徴とする。
【０１３９】
アテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の最適ではないレベルによって少なくとも一部引き起こされる障害は、脂質関連障害の定義に含まれる。このような障害としては、例えば、冠動脈疾患（ＣＡＤ）または冠状動脈性心臓病、うっ血性心不全、狭心症、動脈瘤、虚血性心疾患、心筋梗塞、および脳卒中が挙げられる。脂質関連障害としては、冠状動脈性心臓病のような心疾患を挙げることができ、これには、心臓に血液を供給する小さい血管の狭窄、および心臓が血液を効率よく供給するその能力を失っているうっ血性心不全が含まれる。脂質関連障害としては、血管の部分的または完全な遮断が原因である組織または臓器への血流の減少によって引き起こされる障害を挙げることができる。このような障害としては、例えば、狭心症、虚血性心疾患、心筋梗塞、および脳卒中が挙げられる。脂質関連障害としては、弱くなった血管によって引き起こされる障害、例えば、動脈瘤を挙げることができ、これは血管の中の弱くなった領域にあり、アテローム性動脈硬化症によってしばしば引き起こされる。
【０１４０】
本発明の方法、組成物、およびキットを、被験体の脂質関連障害を予防または処置するために使用することができる。脂質関連障害を予防するために使用される場合は、被験体は、最適なレベルの脂質を有している可能性があるが、他の理由（例えば、脂質関連障害についての家族歴）から、脂質関連障害についてのリスクがある場合がある。本発明の方法、組成物、およびキットは、任意の年齢の被験体（例えば、脂質関連障害を発症する危険要素がある肥満または糖尿病の小児または成人）において脂質関連障害を予防するために予防的に使用することができる。
【０１４１】
本発明によってはまた、ナイアシン受容体部分的アゴニストと、ナイアシンまたはナイアシンアナログに加えて、別の治療用化合物（単数または複数）が含まれる併用療法のための方法も提供される。他の治療用化合物としては、例えば、潮紅をさらに軽減するために使用することができる化合物、または、被験体のアテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の量をさらに低下させるために使用することができる化合物を挙げることができる。
【０１４２】
ナイアシン受容体部分的アゴニストおよびナイアシンまたはナイアシンアナログと組み合わせることができる治療用化合物としては、例えば、プロスタグランジンの合成（例えば、ＰＧＤ２の合成）を減少させる化合物を挙げることができる。このような化合物には、例えば、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が含まれ得る。ＮＳＡＩＤＳの例としては、アスピリン、サリチル酸塩、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、ケトプロフェン、フェノプロフェン、オキサプロジン、スリンダック、フルルビプロフェン、エトドラッグ、ジクロフェナク、ケトロラック、トルメチン、ナブメトン、スプロフェン、ベノキサプロフェン、カルプロフェン、アクロフェナク（ａｃｌｏｆｅｎａｃ）、フェンクロフェナク（ｆｅｎｃｌｏｆｅｎａｃ）、ゾメピラク、メクロフェナメート（ｍｅｃｌｏｆｅｎａｍａｔｅ）、メフェナム酸、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、およびピロキシカムが挙げられる。ＣＯＸ−１阻害因子との組み合わせに加えて、治療用化合物は、選択的ＣＯＸ−２阻害因子（例えば、セレコキシブまたはロフェコキシブ）と組み合わせることができる。
【０１４３】
ナイアシン受容体部分的アゴニストおよびナイアシンまたはナイアシンアナログと組み合わせることができる治療用化合物としては、例えば、被験体のアテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の量を減少させる化合物を挙げることができる。このような化合物としては、例えば、α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオンが挙げられる。
【０１４４】
α−グルコシダーゼ阻害剤は、膵臓および／または小腸の消化酵素（例えば、α−アミラーゼ、マルターゼ、α−デキストリナーゼ、スクラーゼなど）を競合的に阻害する薬剤のクラスに属する。α−グルコシダーゼ阻害剤による可逆的な阻害によって、デンプンおよび糖類の消化が遅れる、減少する、または別の方法でデンプンおよび糖類の消化が遅くなることによって血中グルコース濃度が下がる。α−グルコシダーゼ阻害剤のいくつかの代表的な例としては、アカルボース、Ｎ−（１，３−ジヒドロキシ−２−プロピル）バリオールアミン（属名；ボグリボース）、ミグリトール、および当該分野で公知のα−グルコシダーゼ阻害剤が挙げられる。
【０１４５】
アルドースレダクターゼ阻害剤は、ポリオール経路の第１段階の律速酵素を阻害する薬剤である。アルドースレダクターゼ阻害剤の例としては、トルリスタット（ｔｏｌｕｒｅｓｔａｔ）；エパルレスタット（ｅｐａｌｒｅｓｔａｔ）；３，４−ジヒドロ−２，８−ジイソプロピル−３−チオキソ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸；２，７−ジフルオロスピロ（９Ｈ−フルオレン−９，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（属名：イミリスタット（ｉｍｉｒｅｓｔａｔ））；３−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−７−クロロ−３，４−ジヒドロ−２，４−ジオキソ−１（２Ｈ）−キナゾリン酢酸（属名：ゼナリスタット（ｚｅｎａｒｅｓｔａｔ））；６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−２’，５’−ジオキソ−スピロ［４Ｈ−１−ベンゾピラン−４，４’−イミダゾリジン］−２−カルボキサミド（ＳＮＫ−８６０）；ゾポルリスタット（ｚｏｐｏｌｒｅｓｔａｔ）；ソルビニル；および１−［（３−ブロモ−２−ベンゾフラニル）スルホニル］−２，４−イミダゾリジンジオン（Ｍ−１６２０９）、および当該分野で公知のアルドースレダクターゼ阻害剤が挙げられる。
【０１４６】
ビグアニドは、嫌気的解糖を刺激し、末梢組織中のインシュリンに対する感度を増大させ、腸からのグルコースの吸収を阻害し、肝臓での糖新生を抑制し、そして脂肪酸の酸化を阻害する薬剤のクラスである。ビグアニドの例としては、フェンホルミン、メトホルミン、ブホルミン、および当該分野で公知のビグアニドが挙げられる。
【０１４７】
スタチン化合物は、ヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）レダクターゼを阻害することによって血中コレステロール濃度を下げる薬剤のクラスに属する。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼは、コレステロールの生合成における律速酵素である。このレダクターゼを阻害するスタチンは、ＬＤＬ受容体の活性をアップレギュレートし、そして血液からのＬＤＬのクリアランスに反応することによって血清ＬＤＬ濃度を下げる。スタチン化合物の例としては、ロスバスタチン、プラバスタチンおよびそのナトリウム塩、シムバスタチン、ロバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、および当該分野で公知のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が挙げられる。
【０１４８】
スクアレン合成阻害剤は、スクアレンの合成を阻害することによって血中コレステロール濃度を下げる薬剤のクラスに属する。スクアレン合成阻害剤の例としては、（Ｓ）−α−［ビス［２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ）メトキシ］ホスフィニル］−３−フェノキシベンゼンブタンスルホン酸、モノカリウム塩（ＢＭＳ−１８８４９４）および当該分野で公知のスクアレン合成阻害剤が挙げられる。
【０１４９】
フィブレート化合物は、肝臓でのトリグリセリドの合成と分泌を阻害し、そしてリポタンパク質リパーゼを活性化させることによって血中コレステロール濃度を下げる薬剤のクラスに属する。フィブレートは、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体を活性化させ、リポタンパク質リパーゼの発現を誘導することが知られている。フィブレート化合物の例としては、ベンザフィブレート、ベクロブレート、ビニフィブレート、シプロフィブレート、クリノフィブレート、クロフィブレート、クロフィブリン酸、エトフィブレート、フェノフィブレート、ジェムフィブレート、ニコフィブレート、ピリフィブレート、ロニフィブレート、シムフィブレート、テオフィブレート、および当該分野で公知のフィブレートが挙げられる。
【０１５０】
ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）代謝エンハンサーは、ＬＤＬ受容体の数を増加させることによって血中コレステロール濃度を下げる薬剤のクラスに属し、例としては、当該分野で公知のＬＤＬ異化エンハンサーが挙げられる。
【０１５１】
アンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害剤は、アンギオテンシン転換酵素を阻害することによって血中グルコース濃度を部分的に低下させ、さらに血圧も下げる薬剤のクラスに属する。アンギオテンシン転換酵素阻害剤の例としては、カプトプリル、エナラプリル、アラセプリル、デラプリル、ラミプリル、リシノプリル、イミダプリル、ベナゼプリル、セロナプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、モベルトプリル、ペリンドプリル、キナプリル、スピラプリル、テモカプリル、トランドラプリル、および当該分野で公知のアンギオテンシン転換酵素阻害剤が挙げられる。
【０１５２】
インシュリン分泌エンハンサーは、膵臓のβ細胞からのインシュリンの分泌を促進する特性を有している薬剤のクラスに属する。インシュリン分泌エンハンサーの例としては、スルホニル尿素（ＳＵ）が挙げられる。スルホニル尿素（ＳＵ）は、ＳＵ受容体を介してインシュリン分泌のシグナルを細胞膜に伝達することによって、膵臓のβ細胞からのインシュリンの分泌を促進する薬剤である。スルホニル尿素の例としては、トルブタミド；クロルプロパミド；トラザミド；アセトヘキサミド；４−クロロ−Ｎ−［（１−ピロリジニルアミノ）カルボニル］−ベンゼンスルホンアミド（属名：グリコピラミド）またはそのアンモニウム塩；グリベンクラミド（ｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）（グリブライド（ｇｌｙｂｒｉｄｅ））；グリクラジド（ｇｌｉｃｌａｚｉｄｅ）；１−ブチル−３−メタニリル尿素；カルブタミド；グリボヌライド（ｇｌｉｂｏｎｕｒｉｄｅ）；グリピザイド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ）；グリキドン（ｇｌｉｑｕｉｄｏｎｅ）；グリソキセピド（ｇｌｉｓｏｘｅｐｉｄ）；グリブチアゾール（ｇｌｙｂｕｔｈｉａｚｏｌｅ）；グリブゾール（ｇｌｉｂｕｚｏｌｅ）；グリヘキサミド；グリミジン；グリピナミド；フェノブタミド；トルシクラミド；グリメピライド；および当該分野で公知の他のインシュリン分泌エンハンサーが挙げられる。他のインシュリン分泌エンハンサーとしては、Ｎ−［［４−（１−メチルエチル）シクロヘキシル］カルボニル］−Ｄ−フェニルアラニン（ナテグリド（Ｎａｔｅｇｌｉｄｅ））；カルシウム（２Ｓ）−２−ベンジル−３−（シス−ヘキサヒドロ−２−イソインドリニルカルボニル）プロピオン酸二水和物（ミチグリニド、ＫＡＤ−１２２９）；および当該分野で公知の他のインシュリン分泌エンハンサーが挙げられる。チアゾリジンジオンは、ＴＺＤとしてより一般的に知られている薬剤のクラスに属する。チアゾリジンジオンの例としては、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、および当該分野で公知のチアゾリジンジオンが挙げられる。
【０１５３】
本発明の方法、キット、および組成物は、例えば、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有用であり得る。ナイアシンまたはナイアシンアナログは、例えば、ナイアシン反応性障害を予防または処置するために、被験体に投与することができる。ナイアシン反応性障害は、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって予防または処置することができる障害または疾患である。ナイアシン反応性障害としては、例えば、本明細書中に記載されるような脂質関連障害を挙げることができる。例えば、脂質関連障害は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）−コレステロール量の減少、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）−コレステロールの量の増加、トリグリセリドの量の増加、または、アテローム性動脈硬化症、心疾患、もしくは脳卒中のようなアテローム性動脈硬化症に関係している血清脂質の最適ではないレベルによって少なくとも一部引き起こされる障害であり得る。
【０１５４】
ナイアシン反応性障害の別の例は、月経困難症または痛みを伴う月経である。１つの報告では、痛みを伴う月経痛に罹患している８０人の女性のグループに、１００ｍｇのナイアシンを１日に２回補い、月経の開始の７日から１０日前に開始して、その後、重い月経痛の間は２から３時間おきに補った（Ｈｕｄｇｉｎｓ，（１９５２）Ａｍ  Ｐｒａｃｔ  Ｄｉｇ  Ｔｒｅａｔ  ３：８９２−８９３；Ｈｕｄｇｉｎｓ（１９５４）Ｗｅｓｔ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  ６２：６１０−６１１）。約９０％の被験体が有意な緩和を経験した。重い月経痛の間に必要な投与量（２から３時間ごとに１００ｍｇ）は、一部の女性においては潮紅を引き起こすに十分に多量である。この場合、本発明の方法、キット、および組成物を、ナイアシンによって誘導される潮紅を軽減するために使用できる。
【０１５５】
本発明により、さらに、被験体の脂質関連障害の予防または処置のための方法が提供される。この方法は、上記被験体に潮紅を軽減するために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストを投与する工程と、その後、上記被験体に脂質を変化させるための有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログを投与する工程を含む。１つの実施形態においては、上記潮紅はナイアシンによって誘導され、別の実施形態においては、上記潮紅はナイアシンアナログによって誘導される。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、潮紅は完全に軽減されるかまたは解消される。なおさらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１５６】
【化７１】
2008519080.tif 000073
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記方法はさらに、上記被験体に、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤を投与する工程を含む：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【０１５７】
上記で議論されたように、ナイアシン受容体部分的アゴニストの投与とその後のナイアシンまたはナイアシンアナログの投与の間の時間は、例えば、少なくとも約１分、少なくとも約５分、少なくとも約１０分、少なくとも約２０分、少なくとも約３０分、少なくとも約４５分、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約３時間、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１４時間、少なくとも約２０時間、または少なくとも約２４時間、あるいはそれ以上であり得る。
【０１５８】
加えて、本発明により、脂質を変化させるために有効な量の被験体の潮紅反応を引き起こす能力が低いナイアシンまたはナイアシンアナログの投与のための組成物も提供される。この組成物には、（ａ）脂質を変化させるために有効な量のナイアシンまたはナイアシンアナログと、（ｂ）潮紅を軽減させるために有効な量のナイアシン受容体部分的アゴニストが含まれる。１つの実施形態においては、上記組成物には脂質を変化させるために有効な量のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記組成物には脂質を変化させるために有効な量のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、上記の脂質を変化させるナイアシンまたはナイアシンアナログの量は１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１５９】
【化７２】
2008519080.tif 000074
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記組成物にはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【０１６０】
本明細書中で使用される場合は、「組成物」は、少なくとも１つの成分を含む物質を意味する。薬学的組成物は組成物の一例である。薬学的組成物は、少なくとも１つの有効成分を含む組成物を意味する。この場合、組成物は、哺乳動物（例えば、ヒト）での特定の有効な結果のための研究がしやすい。当業者は、有効成分が当業者のニーズに応じた望ましい有効な結果を有しているかどうかを決定するために適している技術を理解し、そして正しく認識しているであろう。
【０１６１】
本明細書中に記載される処方物には、薬学的または生理学的に受容可能な担体が含まれ得る。適切な薬学的に受容可能な担体は、当業者が利用できるものである。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２０版，２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｏｎｓ，（Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，編）を参照のこと。予防または処置での使用については、本発明の化合物は、加工されていない化合物または純粋な化合物としての代替使用が可能であるが、薬学的処方物または組成物として化合物または有効成分を提示することもまた望ましい場合がある。
【０１６２】
したがって、本発明によりさらに、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくは誘導体を、それについての１つ以上の薬学的に受容可能な担体および／または予防的成分と共に含む薬学的処方物が提供される。担体（単数または複数）は、処方物の他の成分と適合性であり、そしてそのレシピエントに対して過度に有害ではないという意味で「受容可能」である。
【０１６３】
薬学的処方物としては、経口、直腸、鼻腔、局所（口腔および舌下を含む）、膣、または非経口（筋肉内、皮下、および静脈内を含む）投与に適しているもの、あるいは、吸入または吹送による投与に適している形態が挙げられる。
【０１６４】
本発明の化合物は、通常のアジュバント、担体、または希釈剤と共に、薬学的処方物の形態、またはその単位投与量形態にすることができ、そしてこのような形態で、錠剤または充填されたカプセル剤のような固体として、あるいは、液剤、懸濁剤、乳化剤、エリキシル剤、ゲル剤、または液体が充填されたカプセル剤のような液体として、経口での使用のための全て、直腸投与のための坐剤の形態で；局所での使用のための液剤、ゲル剤、ローション、または軟膏において、あるいは、非経口（皮下を含む）での使用のための滅菌の注射可能な溶液の形態で使用することができる。このような薬学的組成物およびその単位投与量形態には、通常の割合で、通常の成分が、別の活性のある化合物または成分（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ）と共にまたはそれらを伴わずに含まれ得、そしてそのような単位投与量形態には、使用されるように意図される１日量の範囲に見合った有効成分の任意の適切な有効量が含まれ得る。
【０１６５】
本発明の化合物から薬学的組成物を調製するためには、薬学的に受容可能な担体は固体であっても、また液体であってもよい。固体の形態の調製物としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散可能な顆粒剤が挙げられる。個体の担体は、１つ以上の物質であってもよく、これはまた、希釈剤、香味剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としても作用する場合がある。散剤においては、担体は、細かく砕かれた有効成分との混合物である、細かく砕かれた固体であり得る。錠剤においては、有効成分は、適切な割合で必要な結合能力を有している担体と混合され、そして所望される形状および大きさに圧縮することができる。
【０１６６】
散剤および錠剤には、様々な比率（％）の活性のある化合物を含めることができる。散剤または錠剤の中での代表的な量には、０．５から約９０％の活性のある化合物が含まれ得る。しかし、当業者であれば、この範囲を超える量が必要である場合があることを知っているであろう。散在および錠剤に適している担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖類、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターなどである。用語「調製」は、担体としてのカプセル化材料と一緒に活性のある化合物の処方物を含め、それによって有効成分（担体を伴うかまたは伴わない）が担体によってまわりを囲まれている（したがって、これはそれと一緒になっている）カプセル剤を提供することが意図される。同様に、カシェ剤および薬用キャンディーが含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、および薬用キャンディーは、経口投与に適している固体形態として使用することができる。
【０１６７】
坐剤の調製については、低融点ワックス（例えば、脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物）が最初に溶かされ、そして有効成分は攪拌によってその中に均質に分散させることができる。その後、溶かされた均質な混合物は通常の大きさの型に注がれ、冷却され、それにより固化させることができる。膣投与に適している処方物は、有効成分に加えて、適切であることが当該分野で知られているそのような担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、発泡体、またはスプレーとして提示することができる。
【０１６８】
液体形態の調製物としては、液剤、懸濁剤、およびエマルジョン（例えば、水溶液または水−プロピレングリコール溶液）が挙げられる。例えば、非経口用の注射用液体調製物は、水性のポリエチレングリコール溶液中の溶液として処方することができる。注射可能な調製物（例えば、滅菌の注射可能な水溶液または油性懸濁液）を、適切な分散剤または湿潤剤と懸濁剤を使用して当該分野で公知であるように処方することができる。滅菌の注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口で受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌の注射可能な溶液または懸濁液（例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液）でもあり得る。特に、使用することができる受容可能な媒体および溶媒は、水、リンガー溶液、および等張性塩化ナトリウム溶液である。加えて、滅菌の不揮発性油が、通常、溶媒または懸濁媒体として使用される。この目的のためには、任意の混合不揮発油を使用することができ、これには、モノグリセリドまたはジグリセリドが含まれる。加えて、脂肪酸（例えば、オレイン酸）は、注射可能なものの調製において使用が見出されている。
【０１６９】
したがって、本発明の組成物は、非経口投与（すなわち、注射（例えば、ボーラス注射または持続注入）による）のために処方することができ、そして、保存剤が添加された、アンプル、予め充填された注射器、少量の注入用容器もしくは多用量の容器の中に、単位用量形態で提示され得る。組成物は、油性または水性の媒体中の懸濁剤、液剤、またはエマルジョンのような形態とすることができ、これには、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤のような処方剤を含めることができる。あるいは、有効成分は、適切な媒体（例えば、滅菌の発熱物質を含まない水）での使用前の構成のための、滅菌固体の無菌的な単離によるかまたは溶液からの凍結乾燥による粉末形態であり得る。
【０１７０】
経口での使用に適している水溶液は、水中に有効成分を溶解させ、そして適切な着色剤、香味剤、安定化剤、および増粘剤を要望に応じて加えることによって調製することができる。経口での使用に適している水性懸濁剤は、細かく砕かれた有効成分を、粘性のある物質（例えば、自然界に存在しているゴムまたは合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、または他の周知の懸濁剤）を含む水の中に分散させることによって作成することができる。使用の直前に経口投与のための液体形態の調製物に変換されることが意図される固体形態の調製物も含まれる。このような液体形態としては、液剤、懸濁剤、およびエマルジョンが挙げられる。これらの調製物には、有効成分に加えて、着色剤、香味剤、安定化剤、緩衝液、人工甘味剤および天然の甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含めることができる。
【０１７１】
表皮への局所投与については、本発明の組成物は、軟膏、クリーム剤、またはローションとして、あるいは、経皮パッチとして処方することができる。軟膏およびクリーム剤は、例えば、適切な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性の基剤を用いて処方することができる。ローション剤は、水性または油性の基剤を用いて処方することができ、一般的には、乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、または着色剤の１つ以上も含まれる。
【０１７２】
口への局所投与に適している処方物としては、香味付けされた基剤（通常は、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント）；の中に有効成分を含む薬用キャンディー；不活性な基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシア）の中に有効成分を含むトローチ剤；ならびに、適切な液体の担体の中に有効成分を含む歯磨き剤が挙げられる。
【０１７３】
液剤または懸濁剤は、通常の手段（例えば、点滴器、ピペット、またはスプレー）によって鼻腔に直接投与することができる。処方物は、単回用量形態で提供することができ、また、多用量形態で提供することもできる。点滴器またはピペットの後者の場合には、これは、液剤または懸濁剤の適切な予め決定された容量を個別に投与することによって行うことができる。スプレーの場合は、これは、例えば、定量噴霧式スプレーポンプによって行うことができる。呼吸器への投与はまた、有効成分が適切な推進剤とともに加圧されたパックの中に提供されるエアゾール処方物の手段によっても行うことができる。薬学的組成物がエアゾールとして（例えば、鼻腔エアゾール）または吸入によって投与される場合は、これは、例えば、スプレー、ネブライザー、ポンプ型ネブライザー、吸入装置、定量吸入器、または乾燥粉末吸入器を使用して行うことができる。エアゾールとしての本発明の組成物の投与のための薬学的形態は、当業者に周知のプロセスによって調製することができる。それらの調製には、例えば、水、水／アルコール混合物、または適切な整理食塩溶液中の本発明の化合物の溶液または分散液を、通常の添加剤（例えば、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、生体利用性を高めるための吸収促進剤、可溶化剤、分散剤など、ならびに、適切である場合には、通常の推進剤（例えば、二酸化炭素、ＣＦＳ、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、またはジクロロテトラフルオロエタン）などを使用して、使用することができる。エアゾールには、通常、レシチンのような界面活性剤も含まれる。薬剤の用量は、定量バルブを配置することによって制御することができる。
【０１７４】
鼻腔内処方物を含む、呼吸器への投与のために意図される処方物においては、化合物は通常、例えば、１０ミクロンまたはそれ未満の程度の、小さい粒子の大きさを有する。このような粒子の大きさは、当該分野で公知の手段によって（例えば、微粉化によって）得ることができる。所望される場合には、有効成分の徐放を生じるように適応させられた処方物を使用することができる。
【０１７５】
あるいは、有効成分は、乾燥粉末の形態（例えば、適切な粉末基剤（例えば、乳糖、デンプン、デンプン誘導体（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））の中の化合物の粉末混合物）で提供することができる。通常、散剤の担体は鼻腔内ではゲルを形成することができる。散剤組成物は、単位投与量形態で、例えば、（例えばゼラチンの）カプセルまたはカートリッジの中に、あるいは、粉末を吸入器によって投与することができるブリスターパックの中に、提示することができる。
【０１７６】
先に記載された処方物に加えて、化合物は、デポー調製物としても処方することもできる。このような長期間作用する処方物は、移植（例えば、皮下または筋肉内）によって、あるいは、筋肉内注射によって投与することができる。したがって、例えば、化合物は、適切な高分子材料もしくは疎水性材料とともに（例えば、受容可能な油の中にエマルジョンとして）、またはイオン交換樹脂と共に、あるいは、難溶性誘導体として（例えば、難溶性の塩として）処方することができる。加えて、組成物は、ポンプのような徐放システムを介して送達することができる。
【０１７７】
さらに、組成物は、徐放システム（例えば、治療薬を含む固体の疎水性ポリマーの半透性マトリックス）を使用して送達することができる。種々の徐放材料が確立されており、当業者に周知である。徐放カプセルは、それらの化学的な性質に応じて、数週間から１００日以上にわたって化合物を放出することができる。治療用の試薬の化学的な性質および生物学的安定性に応じて、モジュレーターの安定化のためのさらなるストラテジーを使用することができる。
【０１７８】
本発明により、脂質関連障害を予防または処置するための、消費者によって使用されるキットが提供される。このキットには、本発明の薬学的組成物と、脂質関連障害を予防または処置するために薬学的組成物を使用する方法が記載されている説明書が含まれ得る。例えば、キットには、少なくとも１投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１つの別の投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログが含まれ得る。加えて、キットには、本発明の組成物と組み合わせて使用される他の治療薬も含まれ得る。
【０１７９】
本発明により、脂質関連障害を予防または処置するためのキットが提供される。このキットには、少なくとも１投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログが含まれる。この場合、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、上記被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして上記ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する。１つの実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、潮紅は完全に軽減されるか、または解消される。なおさらなる実施形態においては、上記のナイアシンまたはナイアシンアナログの投薬単位は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１８０】
【化７３】
2008519080.tif 000075
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記キットにはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【０１８１】
本発明の組成物は、多種多様な経口、局所、または非経口投与量形態で投与することができる。投与量形態に、有効成分として、本発明の化合物または本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩のいずれかを含めることができることは、当業者に明らかであろう。
【０１８２】
予防または処置における使用に必要な有効成分またはその活性のある塩もしくは誘導体の投与量は、選択される特定の塩だけでなく、投与経路、処置される症状の性質、ならびに個体の年齢および症状にも伴って変わり、そして最終的には、かかりつけの医師または臨床医の判断が行われるであろう。一般的には、当業者は、モデルシステム（通常は、動物モデル）で得られたインビボでのデータから別のもの（例えば、ヒト）を推定する方法を理解している。例示的な、限定とは意図されないインビボの動物モデルが、以下の実施例に提供される。いくつかの状況では、これらの推定は、別のもの（例えば、哺乳動物、好ましくは、ヒト）と比較した動物モデルの体重に単純に基づいて行われ得るが、より多くの場合には、これらの推定は、体重だけではなく、種々の要因が組み込まれる。代表的な要因としては、個体のタイプ、年齢、体重、性別、食事療法、および医学的症状、疾患の重篤度、投与経路、使用される特定の化合物の活性、効力、薬物動態プロフィールおよび毒性プロフィールのような薬理学的考慮、薬物送達システムが利用されるかどうか、急性または慢性の疾患状態のどちらが処置されるか、あるいは、予防が行われるのかどうか、あるいは併用療法が使用されているかどうかが挙げられる。本発明の化合物および／または組成物で疾患の症状を予防または処置するための投与レジュメは、上記のような種々の要因にしたがって選択される。したがって、使用される実際の投与レジュメは広く異なり、したがって、好ましい投与レジュメはから外れる可能性がある。当業者は、これらの一般的な範囲から外れた投与量および投与レジュメを試験することができ、適切である場合には、本発明の方法に使用できることを認識するであろう。
【０１８３】
所望される用量は、通常、単回用量で、または適切な間隔で投与される分けられた用量（例えば、１日に２回、３回、４回、またはそれ以上に分けられた用量）で提示することができる。分けられた用量自体を、例えば、連続しない大まかに間隔をあけられた多数回の投与にさらに分けることができる。１日量は、特に、比較的多量が投与されることが適切である場合には、数回に（例えば、２回、３回、または４回の投与）分けることができる。適切である場合には、個体の行動に応じて、示された１日量から上に、または下に外れることが不可欠であり得る。
【０１８４】
本出願で使用されるキットには、本発明の薬学的組成物を含むための容器が含まれ、これには、分けられたボトルまたは分けられたホイルの小さい包みのような分けられた容器も含まれ得る。容器は、任意の通常の形状であり得、また、薬学的に受容可能な材質から作られた当該分野で公知の形態、例えば、紙またはダンボールの箱、ガラス製またはプラスチック製のボトルまたは瓶、再度密封することができるバッグ（例えば、様々な容器に入れるための錠剤の「リフィル」を保つため）、あるいは、治療スケジュールにしたがってパックから押し出される個々の投与量を含むブリスターパックでもあり得る。使用される容器は、含められる実際の投与量形態に応じて様々であり得、例えば、通常のダンボール箱は、液体懸濁液を保持するためには一般的には使用されない。１つの投与量形態を販売するために、１つのパッケージの中で１つ以上の容器を一緒に使用できることが実行可能である。例えば、錠剤は、ボトルの中に含めることができ、これはその後、箱の中に入れられる。
【０１８５】
このようなキットの一例は、いわゆるブリスターパックである。ブリスターパックは包装産業では周知であり、薬学的な単位投与量形態（錠剤、カプセル剤など）のパッケージに広く使用されている。ブリスターパックは、通常、好ましくは透明なプラスチック製の材質のホイルでカバーされた比較的硬い材質のシートから構成される。パッケージングプロセスの間に、凹所がプラスチックホイルの中に形成される。この凹所は、パッケージされる個々の錠剤またはカプセル剤の大きさと形状を有しているか、あるいは、パッケージされる複数の錠剤および／またはカプセル剤に順応する大きさと形状を有している場合もある。次に、錠剤またはカプセル剤がそれに沿って凹所に入れられ、そして比較的硬い材質のシートは、凹所が形成された方向とは反対のホイルの表面でプラスチックホイルに対してシールされる。結果として、錠剤またはカプセル剤は、プラスチックホイルとシートの間の凹所に、個別にシールされるか、または、所望される場合にはまとめてシールされる。通常、シートの強度は、錠剤またはカプセル剤を、凹所に手で圧力を加え、それによって、凹所の位置でシートに開口部が形成されることによってブリスターパックから取り出すことができる程度である。その後、錠剤またはカプセル剤を、上記開口部を通じて取り出すことができる。
【０１８６】
書面による記憶補助を提供することが所望される場合がある。この場合、書面による記憶補助は、医師、臨床医、または被験体のための情報および／または説明を含むタイプのものであり、例えば、錠剤またはカプセル剤の隣に番号（この場合、番号は、そのように特定された錠剤またはカプセル剤が摂取されるべきレジュメの日に対応する）、あるいは、同じタイプの情報を含むカードの形態である。このような記憶補助の別の例は、カード上に印刷されたカレンダーであり、例えば、「第１週、月曜日、火曜日、」．．．など．．．、「第２週、月曜日、火曜日」などである。記憶補助の他のバリエーションは容易に明らかであろう。
【０１８７】
キットの別の特異的な実施形態は、１つずつの一日量を分配するように設計されたディスペンサーである。ディスペンサーには、記憶補助を備えることができ、その結果、レジュメを遵守することがさらに容易になる。このような記憶補助の例は、分配されている一日量の数を示す機械的計数器である。このような記憶補助の別の例は、液体の結晶の読み出しと組み合わせた電池式マイクロチップメモリ、または警報つきリマインダーシグナル（例えば、最後の一日量を摂取した日を読み出し、そして／または次の用量を摂取するときを警告する）である。
【０１８８】
本発明により、さらに、脂質関連障害を予防または処置するためのキットが提供される。このキットには、少なくとも１投薬単位のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１つの別の投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログが含まれる。この場合、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、上記被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして上記ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する。１つの実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、潮紅は完全に軽減されるか、または解消される。なおさらなる実施形態においては、上記のナイアシンまたはナイアシンアナログの投薬単位は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１８９】
【化７４】
2008519080.tif 000076
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記キットにはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【０１９０】
加えて、本発明により、脂質関連障害を予防または処置するためのキットが提供される。このキットには、少なくとも１プレ投薬単位（ｐｒｅ−ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ）のナイアシン受容体部分的アゴニストと、少なくとも１つの別の投薬単位のナイアシンまたはナイアシンアナログが含まれる。この場合、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストは、上記被験体においてナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅を軽減するために有効な量で存在し、そして上記ナイアシンまたはナイアシンアナログは脂質を変化させる量で存在する。プレ投薬単位は、いくつかの他の投薬単位の前に投与されることが意図される、ナイアシン受容体部分的アゴニストの用量である。１つの実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンが含まれ、別の実施形態においては、上記キットには１投薬単位のナイアシンアナログが含まれる。１つの実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの構造的アナログであり、別の実施形態においては、上記ナイアシンアナログはナイアシンの機能的アナログである。さらなる実施形態においては、潮紅は完全に軽減されるか、または解消される。なおさらなる実施形態においては、上記のナイアシンまたはナイアシンアナログの投薬単位は、１日あたり少なくとも５００ｍｇである。１つの実施形態においては、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには以下の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩が含まれる：
【０１９１】
【化７５】
2008519080.tif 000077
式中、Ｘはカルボキシルまたはテトラゾール−５−イル基であり；Ｒ１はイソ−プロピル、３−フルオロ−ベンジル、３−クロロ−ベンジル、または３−ブロモ−ベンジルであり；そしてＲ２はＨであるか；あるいは、Ｒ１とＲ２が、それらが結合している２つのピラゾール環炭素と一緒になって、必要に応じてエチルで置換された５員炭素環または必要に応じてメチルで置換された５員複素環を形成する。例えば、上記ナイアシン受容体部分的アゴニストには、以下からなる群より選択される化合物が含まれ得る：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸；６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール；３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，６−ジヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール；５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール；および５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール；あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩。別の実施形態においては、上記キットにはさらに、以下からなる群より選択される少なくとも１つの薬剤が含まれる：α−グルコシダーゼ阻害剤、アルドースレダクターゼ阻害剤、ビグアニド、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレン合成阻害剤、フィブレート、ＬＤＬ異化エンハンサー、アンジオテンシン転換酵素阻害剤、インシュリン分泌エンハンサー、およびチアゾリジンジオン。
【０１９２】
「例えば」および「含む」のような一般的な用語が本明細書中で使用されており、それらの標準的な意味にしたがって本明細書中で定義される。用語「例えば」および「〜のような」は、限定ではない例示と意図される。
【０１９３】
本発明の１つの態様は、治療によるヒトまたは動物の体の処置の方法で使用される、本明細書中に記載される、ナイアシン受容体部分的アゴニストとナイアシンまたはナイアシンアナログに関する。
【０１９４】
本発明の別の態様は、治療によるヒトまたは動物の体の、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅の処置の方法で使用される、本明細書中に記載されるナイアシン受容体部分的アゴニストに関する。本発明の別の態様は、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅の処置のための方法に関する。この方法は、上記症状に罹患している被験体に、本明細書中に記載される、治療有効量のナイアシン受容体部分的アゴニストを、好ましくは、薬学的組成物の形態で投与する工程を含む。
【０１９５】
本発明の１つの態様は、脂質関連障害の処置のための方法に関する。この方法は、上記症状に罹患している被験体に、本明細書中に記載される、治療有効量のナイアシン受容体部分的アゴニストとナイアシンまたはナイアシンアナログを、好ましくは、薬学的組成物の形態で投与する工程を含む。本発明の別の態様は、治療によってヒトまたは動物の体の脂質関連障害の処置の方法で使用される、本明細書中に記載される、ナイアシン受容体部分的アゴニストとナイアシンまたはナイアシンアナログに関する。
【０１９６】
本発明の１つの態様は、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅の処置に使用される医薬品の製造のための、本明細書中に記載される、ナイアシン受容体部分的アゴニストとナイアシンまたはナイアシンアナログの使用に関する。本発明の別の態様は、ナイアシンまたはナイアシンアナログによって誘導される潮紅の処置に使用される医薬品の製造のための、本明細書中に記載されるナイアシン受容体部分的アゴニストの使用に関する。加えて、本発明の１つの態様は、脂質関連障害の処置に使用される医薬品の製造のための、本明細書中に記載される、ナイアシン受容体部分的アゴニストとナイアシンまたはナイアシンアナログの使用に関する。
【実施例】
【０１９７】
以下の実施例は、限定のためではなく、説明の目的のために提供される。当業者は、本明細書中の開示に基づいて同等のアッセイおよび方法を設計することができる。その全てが本発明の一部を形成する。
【０１９８】
（実施例１）
ナイアシン受容体部分的アゴニストはナイアシンによって誘導される潮紅をブロックする
本実施例は、ナイアシン受容体部分的アゴニストがナイアシンによって誘導される潮紅をブロックできることを示す。表Ａから、いくつかのナイアシン受容体部分的アゴニストを、マウスにおいてナイアシンによって誘導される潮紅をブロックする能力について試験した。潮紅は、レーザードップラーを使用して測定した。
【０１９９】
これらの実験では、対照グループには、ナイアシンだけを投与した麻酔したマウスを含め、ベースラインを上回る潮紅を経時的に測定した。実験グループには、ナイアシン受容体部分的アゴニストを、ナイアシンの投与の約１０分前に投与した、麻酔したマウスを含めた。その後、ナイアシンの投与後のベースラインを上回る潮紅を経時的に測定し、ナイアシンだけで処置したマウスと比較した。
【０２００】
典型的なデータ：
ナイアシンだけで処置した対照マウスは、１．５分後に顔面が紅潮し始め、３分でベースラインの約１５０％のピークの潮紅を有し、そして約１５分以内にベースラインの約３０％に戻った。
【０２０１】
化合物２：ナイアシンだけで処置したマウスは、１．５分後に顔面が紅潮し始め、３分でベースラインの約１００％から約１５０％のピークの潮紅を有し、そして約１５分以内にベースラインの約３０％から４５％に戻った。ナイアシンの投与前の化合物２でのマウスの処置によっては、３分ではベースラインから０％の変化が生じ、１５分以内に、ベースラインからベースラインを約１５％上回るまでにゆっくりと上昇する変化があった。ナイアシンの投与前の化合物３でのマウスの処置によっては、３分ではベースラインから約１８％の変化が生じ、１５分でベースラインからベースラインを約１３％上回るまでにゆっくりと低下する変化があった。ナイアシンの投与前の化合物４でのマウスの処置によっては、３分ではベースラインから１５％の変化が生じ、１５分以内にベースラインからベースラインを約３０％上回るまでにゆっくりと上昇する変化があった。
【０２０２】
（実施例２）
ナイアシン受容体部分的アゴニストで処置したマウスはＰＧＤ２の投与に反応して潮紅する能力を保持している
実施例１に示したように、ナイアシン受容体部分的アゴニストでのマウスの処置によってナイアシンによって誘導される潮紅がブロックされる。本実施例は、ナイアシン受容体部分的アゴニストで処置したマウスが、既知の潮紅を誘導する因子であるＰＧＤ２を投与した場合に、潮紅する能力を保持していることを示す。
【０２０３】
この実験では、マウスを、ナイアシンの投与の約１０分前に化合物１で処置し、実験は実施例１のように行った。ベースラインを再度確立した後、ＰＧＤ２を投与し、潮紅を記録した。具体的には、この実験では、ナイアシンだけで処置したマウスは１．５分後に顔面が紅潮し始め、３分でベースラインの約６０％の潮紅のピークを有し、そして約１５分以内にベースラインの約２０％に戻った。ナイアシンの投与の約１０分前の化合物１でのマウスの処置によっては、３分ではベースラインから１０％の変化が生じ、１５分以内にベースラインからベースラインを約２０％上回るまでにゆっくりと上昇する変化があった。その後、ベースラインをベースラインの２０％上に再度確立し、ＰＧＤ２を投与した。潮紅は約１．５分後に始まり、ＰＤＧ２の投与後、約６分で、もとのベースラインの約７０％のピークに達した。この実験は、ＰＧＤ２を投与した場合の、マウスの潮紅させる能力は、ナイアシン受容体部分的アゴニストによっては低下しなかったが、ナイアシンによって誘導される潮紅は明らかに軽減したことを示している。
【０２０４】
（実施例３）
ＮＥＦＡ競合
本実施例は、ナイアシン受容体部分的アゴニストである化合物１が、ナイアシンによって誘導される遊離の脂肪酸の還元を妨害しないことを示す。
【０２０５】
マウスに、以下のいずれかを投与した：媒体、媒体とナイアシン、または化合物１とナイアシン。１０分後、マウスを安楽死させ、血液を回収した。血液試料を処理し、非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）アッセイ（Ｗａｃｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＵＳＡ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＶＡによるＮＥＦＡ−Ｃアッセイキット）を使用して遊離の脂肪酸の放出について試験した。ＮＥＦＡアッセイは、製造業者によって示されているプロトコールにしたがって行った。媒体試料について測定した遊離の脂肪酸の濃度は０．９ｍＭであり、媒体とナイアシンについては０．４ｍＭ、そして化合物１とナイアシンについては０．３８ｍＭであった。したがって、ナイアシン受容体部分的アゴニストは、ナイアシンによって誘導される遊離の脂肪酸の還元を妨害しなかった。
【０２０６】
（実施例４）
ラットでの遊離の脂肪酸レベルとヒト含脂肪細胞中での脂肪分解の測定
本実施例は、遊離の脂肪酸レベルをラットにおいて測定できることを示す。本実施例はまた、遊離の脂肪酸レベルをヒトの含脂肪細胞においても測定できることを示す。
【０２０７】
ラットでのアッセイ
カテーテルを、雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットの頸静脈に外科手術によって挿入した。ラットを、数日間、カテーテルの埋め込み手術から回復させ、翌日、ラットを絶食させ、およそ１６時間後に、媒体、または、１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、もしくは４５ｍｇ／ｋｇ体重のナイアシン［ＮＡ］のいずれかの腹腔内（ＩＰ）注射を投与した。ナイアシンアナログは同じ形式で試験することができる。血液（約２００ｍｌ）を種々の時点で採取し、血漿を遠心分離後に単離した。その後、血漿ＦＦＡをＮＥＦＡ  Ｃキットによって、製造業者の説明書（Ｗａｋｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ）にしたがって測定した。
【０２０８】
ヒトの含脂肪細胞の脂肪分解アッセイ
含脂肪細胞はＺｅｎＢｉｏ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）から入手し、脂肪分解アッセイを製造業者のプロトコールにしたがって行った。細胞内ｃＡＭＰレベルの上昇と、それに付随するホルモン感受性リパーゼによる脂肪分解の活性化は、経験によって決定した濃度およびタイミングでイソプロテレノールを使用して達成した。脂肪分解は、目的の化合物（例えば、ナイアシンまたはナイアシンアナログ）の存在下、またはそれらが存在しない条件下で、所望される時間の間継続させた。少なくとも５種類の化合物濃度を試験して、非線形回帰分析とＥＣ５０値の決定を行った。グリセロールの生産の割合を比色分析で測定し、標準物（ＺｅｎＢｉｏ）に対して比較した。
【０２０９】
（実施例５）
マウスのアテローム性動脈硬化症モデル
アディポネクチン遺伝子をノックアウトすることによって作成したアディポネクチン欠損マウスは、アテローム性動脈硬化症、およびインシュリン耐性になりやすいことが示されている。このマウスはまた、虚血性心疾患についても適しているモデルである（Ｍａｔｓｕｄａ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００２）７月、およびその中で引用されている参考文献、これらの開示はそれらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。
【０２１０】
アディポネクチンノックアウトマウスを、２２℃および５０％の相対湿度の標準的な実験室条件で飼育した（７〜９匹のマウス／ゲージ）。マウスに、イソフルラン麻酔を使用して挿入した微量浸透圧ポンプによって、本発明の化合物、生理食塩水、または無関係な化合物をマウスの皮下（ｓ．ｃ．）に投薬した。新生内膜の厚みと虚血性心疾患を、様々な時間の間隔で屠殺したマウスの様々なグループについて決定した。グループ間での有意な差（生理食塩水での処置に対して本発明の化合物を比較する）を、Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を使用して評価した。
【０２１１】
上記のアテローム性動脈硬化症のマウスモデルは、例として提供され、限定ではない。さらなる例により、アディポネクチンＥ欠損マウスもまた、アテローム性動脈硬化症になりやすいことが示されている（Ｐｌｕｍｐ  ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９２）７１：３４３−３５３；その開示はその全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。
【０２１２】
使用することができる別のモデルは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの食餌によって誘導されたアテローム性動脈硬化症のモデルであり、これは、食餌によって誘導されたアテローム性動脈硬化症の病変を形成しやすいことが知られている同系交配株である。このモデルは、当業者に周知である（Ｋａｍａｄａ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ（２００１）８：１−６；Ｇａｒｂｅｒ  ＤＷ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ（２００１）４２：５４５−５２；Ｓｍｉｔｈ  ＪＤ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ（１９９７）２４２：９９−１０９；これらの個々の開示は、その全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。
【０２１３】
（実施例６）
ＨＤＬ−コレステロールおよびアテローム性動脈硬化症のインビボブタモデル
脂質関連障害の予防または処置における医薬品としての本発明の化合物の有用性は、例えば、インビボブタモデルにおいて、ＨＤＬ−コレステロールに対する総コレステロールの比を下げる、ＨＤＬ−コレステロールを上昇させる、またはアテローム性動脈硬化症から防御する化合物の活性によって明らかにされる。ブタを動物モデルとして使用した。なぜなら、ブタはヒトの生理学、特に、脂質の代謝を、ほとんどの他の動物モデルよりもより正確に反映するからである。限定とは意図されない例示的なインビボブタモデルが本明細書中に示される。
【０２１４】
Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ  ａｌｂｉｎｏブタ（体重２５．５±４ｋｇ）に、２％のコレステロールと２０％の牛脂を補充した標準的な食餌からなる、飽和脂肪酸を多く含みそしてコレステロールを多く含む（ＳＦＡ−ＣＨＯ）食餌を、５０日間与えた（１ｋｇの食餌／３５ｋｇのブタの体重）（Ｒｏｙｏ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ（２０００）３０：８４３−５２；この開示はその全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。不飽和脂肪酸に対する飽和脂肪酸の比は、通常のブタの食餌における０．６からＳＦＡ−ＣＨＯ食餌においては１．１２にまで変更した。動物を２つのグループにわけ、一方のグループ（ｎ＝８）には、ＳＦＡ−ＣＨＯ食餌を与え、プラセボで処置し、そして他方のグループ（ｎ＝８）にはＳＦＡ−ＣＨＯ食餌を与え、モジュレーター（３．０ｍｇ／ｋｇ−１）で処置した。対照動物には、５０日間、標準の食餌を与えた。血液試料をベースライン（動物の収容の２日後）と、食餌の開始から５０日後に採取した。血液中の脂質を分析した。動物を屠殺し、死体解剖した。
【０２１５】
あるいは、上記の分析には、種々の用量の目的の化合物でそれぞれ処置した、複数のグループが含まれる。用量としては、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ−１、０．３ｍｇ／ｋｇ−１、１．０ｍｇ／ｋｇ−１、３．０ｍｇ／ｋｇ−１、１０ｍｇ／ｋｇ−１、３０ｍｇ／ｋｇ−１、および１００ｍｇ／ｋｇ−１が挙げられる。あるいは、上記の分析は、複数の時点、例えば、１０週間、２０週間、３０週間、４０週間、および５０週間で行われる。
【０２１６】
ＨＤＬ−コレステロール
血液を、クエン酸３ナトリウム（３．８％、１：１０）の中に回収した。血漿は遠心分離後（１２００ｇ、１５分間）に得られ、すぐに処理した。総コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、およびＬＤＬ−コレステロールを、自動分析装置Ｋｏｄａｋ  Ｅｋｔａｃｈｅｍ  ＤＴ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ，ＵＳＡ）を使用して測定した。範囲を上回るパラメーター値を有していた試料は製造業者によって供給された溶液で稀釈し、その後、再度分析した。総コレステロール／ＨＤＬ−コレステロール比を決定した。グループ間で、ＨＤＬ−コレステロールのレベルの比較を行った。グループ間で、総コレステロール／ＨＤＬ−コレステロール比の比較を行った。
【０２１７】
目的の化合物を投与した際のＨＤＬ−コレステロールの増加または総コレステロール／ＨＤＬ−コレステロール比の低下は、上記有用性を有している化合物の指標と受け止めた。
【０２１８】
アテローム性動脈硬化症
胸部大動脈と腹部大動脈を完全なまま取り出し、腹部表面に沿って縦方向に開き、そして組織学的試験と、脂質組成および合成の実験のために胸部大動脈および腹部大動脈の標準的な部位から試料を切除した後、中性の緩衝化ホルマリンの中に固定した。固定後、動脈全体をＳｕｄａｎ  ＩＶで染色し、平坦になるようにピンで留め、そしてコンピューターによる画像分析システム（Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ；Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ，ＭＤ）に繋いだＴＶカメラでデジタル画像を撮影して、アテローム性動脈硬化症の病変を含む大動脈の表面の割合を決定した（Ｇｅｒｒｉｔｙ  ＲＧ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ（２００１）５０：１６５４−６５；Ｃｏｒｎｈｉｌｌ  ＪＦ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，およびＶａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８５）５：４１５−２６；これらの開示はそれらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。グループ間で、アテローム性動脈硬化症の病変を含む大動脈の表面の割合の比較を行った。
【０２１９】
目的の化合物を投与した際のアテローム性動脈硬化症の病変を含む大動脈表面の割合の減少を、上記有用性を有している化合物の指標と受け止めた。
【０２２０】
血漿の遊離の脂肪酸
上記のインビボブタモデルを、血漿の遊離の脂肪酸を減少させる化合物の活性（これに限定はされない）を取り扱うために容易に改良することができることは、当業者には容易に明らかであろう。
【０２２１】
（実施例７）
ＧＰＣＲの活性化の決定のためのアッセイ
ヒトＧＰＣＲの活性化を評価するために、種々のアプローチを利用することができる。以下は例である：当業者は、当業者のニーズに特に効果的であるそのような技術を決定する能力があると認められる。
【０２２２】
１．膜結合アッセイ：［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアッセイ
Ｇタンパク質結合受容体がその活性な状態である（リガンドの結合の結果、または構成的な活性化としてのいずれか）場合には、受容体はＧタンパク質に結合し、ＧＤＰの放出を刺激し、その後、Ｇタンパク質へのＧＴＰの結合を刺激する。Ｇタンパク質−受容体複合体のαサブユニットは、ＧＴＰａｓｅとして作用し、ＧＴＰをＧＤＰへとゆっくりと加水分解する。この時点で、受容体は通常は不活化される。活性化された受容体は、ＧＴＰをＧＤＰに変換し続ける。加水分解することができないＧＴＰアナログである［３５Ｓ］ＧＴＰγＳは、活性化された受容体を発現する膜に対する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合の促進を明らかにするために利用することができる。活性化を測定するために［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合を使用することの利点は：（ａ）これが一般的には、全てのＧタンパク質結合受容体に対して適用できること；（ｂ）これは膜表面に近く、このために、細胞内カスケードに影響を与える分子を拾い上げる可能性が低くなることである。
【０２２３】
このアッセイは、関連する受容体を発現する膜に対する［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合を刺激するＧタンパク質結合受容体の能力を利用する。したがって、このアッセイは、内因性ＧＰＣＲ、および内因性ではない構成的に活性化されているＧＰＣＲに対して候補の化合物をスクリーニングするための直接的な同定方法において使用することができる。このアッセイは一般的であり、全てのＧタンパク質結合受容体で薬剤の発見に応用される。
【０２２４】
［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアッセイは、２０ｍＭのＨＥＰＥＳと、１から約２０ｍＭの間のＭｇＣｌ２（この量は、結果の最適化のために調整することができるが、２０ｍＭが好ましい）、ｐＨ７．４、約０．３から約１．２ｎＭの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを含む結合緩衝液（この量は、結果の最適化のために調整することができるが、１．２が好ましい）、および１２．５から７５μｇの膜タンパク質（例えば、ＧＰＲ３５を発現する２９３細胞；この量は最適化のために調整することができる）、および１０μＭのＧＤＰ（この量は最適化のために変えることができる）の中で１時間インキュベートされる。その後、小麦胚芽アグルチニンビーズ（２５μｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ）が加えられ、混合物は室温でさらに３０分間インキュベートされる。その後、チューブが１５００×５分間、室温で遠心分離され、次いで、シンチレーションカウンターでカウントされる。
【０２２５】
２．アデニリルシクラーゼ
細胞をベースとするアッセイのために設計されたＦｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅ（登録商標）  Ａｄｅｎｙｌｙｌ  Ｃｙｃｌａｓｅキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ；カタログ番号ＳＭＰ００４Ａ）は、粗血漿膜とともに使用するために改良することができる。Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅのウェルには、キラキラ光るコーティングを含めることができ、これには、ｃＡＭＰを認識する特異的な抗体もまた含まれる。ウェルの中に作られたｃＡＭＰは、ｃＡＭＰ抗体に対する放射活性ｃＡＭＰトレーサーの結合についての直接的な競合によって定量することができる。以下に、受容体を発現する細胞全体の中でのｃＡＭＰレベルの変化の測定のための簡単なプロトコールを提供する。
【０２２６】
一時的なトランスフェクションのおよそ２４時間後に、トランスフェクトされた細胞が回収される。培地は注意深く吸引され、廃棄される。１０ｍｌのＰＢＳが個々の細胞皿に静かに添加され、その後、注意深く吸引される。１ｍｌのＳｉｇｍａ細胞解離緩衝液と３ｍｌのＰＢＳが、個々のプレートに添加される。細胞は、ピペッティングによってプレートから剥がされ、細胞懸濁液が５０ｍｌの円錐型の遠心分離チューブに回収される。その後、細胞は、１，１００ｒｐｍで５分間、室温で遠心分離される。細胞のペレットは適切な容量のＰＢＳ（約３ｍｌ／プレート）の中に注意深く再懸濁される。その後、細胞が血球計を使用してカウントされ、さらなるＰＢＳが、適切な細胞数となるように添加される（約５０μｌ／ウェルの最終容量）。
【０２２７】
ｃＡＭＰ標準物および検出緩衝液（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ）（１μＣｉのトレーサー［１２５Ｉ］ｃＡＭＰ（５０μｌ）から１１ｍｌの検出緩衝液を含む）が調製され、製造業者の説明書にしたがって維持される。アッセイ緩衝液はスクリーニングのために新たに調製され、これには、５０μｌの刺激緩衝液（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ）、３μｌの候補の化合物（１２μＭの最終アッセイ濃度）、および５０μｌの細胞が含まれる。アッセイ緩衝液は、利用されるまで氷上で保存される。好ましくは、アッセイは、例えば、９６ウェルプレートの中で行われ、５０μｌのｃＡＭＰ標準物の適切なウェルへの添加、その後の５０μｌのＰＢＳＡのウェルＨ１１およびＨ１２への添加によって開始される。５０μｌの刺激緩衝液が全てのウェルに添加される。ＤＭＳＯ（または選択された候補の化合物）が、１２μＭの候補の化合物の最終アッセイ濃度を有している３μｌの化合物溶液を分散させることができるピンツールと、１００μｌの全アッセイ容量を使用して、適切なウェルに添加される。その後、細胞がウェルに添加され、室温で６０分間インキュベートされる。その後、トレーサーｃＡＭＰを含む１００μｌの検出混合物（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｍｉｘ）がウェルに添加される。その後、プレートはさらに２時間インキュベートされ、続いて、Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンターでカウントされる。その後、ｃＡＭＰ／ウェルの値が、個々のアッセイプレートに含まれる標準ｃＡＭＰ曲線から推定される。
【０２２８】
３．Ｇｉ結合標的ＧＰＣＲについての細胞をベースとするｃＡＭＰ
ＴＳＨＲはＧｓ結合ＧＰＣＲであり、これは、活性化されるとｃＡＭＰの蓄積を引き起こす。ＴＳＨＲは、アミノ酸残基６２３を変異させる（すなわち、アラニン残基をイソロイシン残基に変化させる）ことによって構成的に活性化させることができる。Ｇｉ結合受容体は、アデニリルシクラーゼを阻害し、したがって、ｃＡＭＰの生産レベルを低下させると予想される。これによって、ｃＡＭＰレベルのチャレンジの評価を行うことができる。Ｇｉ結合受容体の活性化の指標としてｃＡＭＰの生産の減少を測定するための有効な技術は、「シグナルエンハンサー」としての内因性ではない構成的に活性化されているＴＳＨＲ（ＴＳＨＲ−Ａ６２３Ｉ）（あるいは、内因性の、構成的に活性であるＧｓ結合受容体）を、Ｇｉ結合標的ＧＰＣＲと一緒に同時トランスフェクションして、ｃＡＭＰのベースラインレベルを確立することによって行うことができる。内因性または内因性ではないバージョンのＧｉ結合受容体が作成されると、その後、標的ＧＰＣＲが、シグナルエンハンサーと一緒に同時トランスフェクションされる。これは、スクリーニングに使用することができる材料である。いくつかの実施形態においては、このアプローチが、Ｇｉ結合受容体に対する候補の化合物の直接の同定に使用されることが好ましい。Ｇｉ結合ＧＰＣＲについては、このアプローチが使用されると、標的ＧＰＣＲの逆アゴニストによってはｃＡＭＰシグナルが増大し、そしてアゴニストはｃＡＭＰシグナルを下げることに留意されたい。
【０２２９】
１日目に、２×１０４個の２９３細胞／ウェルがプレートされる。２日目には、２つの反応チューブが準備される（それぞれのチューブについて、後に、１枚のプレートの割合とする）：チューブＡは、１．２ｍｌの無血清ＤＭＥＭ（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）中の４μｇのＤＮＡの合計（例えば、ｐＣＭＶベクター；変異したＴＳＨＲを有しているｐＣＭＶベクター（ＴＳＨＲ−Ａ６２３Ｉ）；ＴＳＨＲ−Ａ６２３ＩおよびＧＰＣＲなど）について、哺乳動物細胞にトランスフェクトされた個々の受容体の２μｇのＤＮＡを混合することによって調製される；チューブＢは、１．２ｍｌの無血清ＤＭＥＭ中に１２０μｌのリポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を混合することによって調製される。その後、チューブＡとＢは反転（数回）によって混合され、続いて、室温で３０〜４５分間インキュベーションされる。混合物は、「トランスフェクション混合物」と呼ばれる。プレートされた２９３細胞は１×ＰＢＳで洗浄され、その後、１０ｍｌの無血清ＤＭＥＭが添加される。その後、２．４ｍｌのトランスフェクション混合物が細胞に添加され、続いて、３７℃／５％のＣＯ２で４時間インキュベーションされる。トランスフェクション混合物は、その後、吸引によって除去され、２５ｍｌのＤＭＥＭ／１０％のウシ胎児血清が添加される。その後、細胞は３７℃／５％のＣＯ２でインキュベートされる。２４時間のインキュベーションの後、細胞が回収され、分析に利用される。
【０２３０】
Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅ（登録商標）  Ａｄｅｎｙｌｙｌ  Ｃｙｃｌａｓｅキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ；カタログ番号ＳＭＰ００４Ａ）は細胞をベースとするアッセイのために設計されたものであるが、当業者のニーズに応じて粗血漿膜とともに使用するために改良することができる。Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅのウェルには、キラキラ光るコーティングを含めることができ、これには、ｃＡＭＰを認識する特異的な抗体もまた含まれる。ウェルの中に作られたｃＡＭＰは、ｃＡＭＰ抗体に対する放射活性ｃＡＭＰトレーサーの結合についての直接的な競合によって定量することができる。以下に、目的の受容体を発現する細胞全体の中ｄｅｎｃＡＭＰレベルの変化の測定のための簡単なプロトコールを提供する。
【０２３１】
一時的なトランスフェクションのおよそ２４時間後に、トランスフェクトされた細胞が回収される。培地は注意深く吸引され、廃棄される。１０ｍｌのＰＢＳが個々の細胞皿に静かに添加され、その後、注意深く吸引される。１ｍｌのＳｉｇｍａ細胞解離緩衝液と３ｍｌのＰＢＳが、個々のプレートに添加される。細胞は、ピペッティングによってプレートから剥がされ、細胞懸濁液が５０ｍｌの円錐型の遠心分離チューブに回収される。その後、細胞は、１，１００ｒｐｍで５分間、室温で遠心分離される。細胞のペレットは適切な容量のＰＢＳ（約３ｍｌ／プレート）の中に注意深く再懸濁される。その後、細胞が血球計を使用してカウントされ、さらなるＰＢＳが、適切な細胞数となるように添加される（約５０μｌ／ウェルの最終容量）。
【０２３２】
ｃＡＭＰ標準物および検出緩衝液（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ）（１μＣｉのトレーサー［１２５Ｉ］ｃＡＭＰ（５０μｌ）から１１ｍｌの検出緩衝液を含む）が調製され、製造業者の説明書にしたがって維持される。アッセイ緩衝液はスクリーニングのために新たに調製されるべきであり、これには、５０μｌの刺激緩衝液（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ）、３μｌの候補の化合物（１２μＭの最終アッセイ濃度）、および５０μｌの細胞が含まれる。アッセイ緩衝液は、利用されるまで氷上で保存することができる。好ましくは、アッセイは、５０μｌのｃＡＭＰ標準物の適切なウェルへの添加、その後の５０μｌのＰＢＳＡのウェルＨ１１およびＨ１２への添加によって開始される。５０μｌの刺激緩衝液が全てのウェルに添加される。選択された化合物（例えば、ＴＳＨ）が、１２μＭの候補の化合物の最終アッセイ濃度を有している３μｌの化合物溶液を分散させることができるピンツールと、１００μｌの全アッセイ容量を使用して、適切なウェルに添加される。その後、細胞がウェルに添加され、室温で６０分間インキュベートされる。その後、トレーサーｃＡＭＰを含む１００μｌの検出混合物（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｍｉｘ）がウェルに添加される。その後、プレートはさらに２時間インキュベートされ、続いて、Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンターでカウントされる。ｃＡＭＰ／ウェルの値が、個々のアッセイプレートに含まれる標準ｃＡＭＰ曲線から推定される。
【０２３３】
４．レポーターをベースとするアッセイ
ａ．ＣＲＥ−ＬＵＣレポーターアッセイ（Ｇｓ結合受容体）
２９３細胞または２９３Ｔ細胞が、２×１０４個の細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートにプレートされ、製造業者の説明書にしたがって、翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＲＬ）を使用してトランスフェクトされる。ＤＮＡ／脂質混合物が以下のようにそれぞれの６ウェルトランスフェクションのために調製される：１００μｌのＤＭＥＭ中の２６０ｎｇのプラスミドＤＮＡが、１００μｌのＤＭＥＭ中の２μｌの脂質と穏やかに混合される（２６０ｎｇのプラスミドＤＮＡは２００ｎｇの８×ＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミド、内因性受容体もしくは内因性ではない受容体を含む５０ｎｇのｐＣＭＶまたはｐＣＭＶのみ、および１０ｎｇのＧＰＲＳ発現プラスミド（ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中のＧＰＲＳ）から構成されている）。８×ＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミドは以下のように調製される：ベクターＳＲＩＦ−β−ｇａｌは、ラットのソマトスタチンプロモーター（−７１／＋５１）をｐβｇａｌ−Ｂａｓｉｃベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＢｇｌＶ−ＨｉｎｄＩＩＩ部位にクローニングすることによって得られる。８コピーのｃＡＭＰ応答エレメントが、アデノウイルス鋳型ＡｄｐＣＦ１２６ＣＣＲＥ８からＰＣＲによって得られ（Ｓｕｚｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ７：１８８３−１８９３（１９９６）を参照のこと；この開示はその全体が引用により本明細書中に組み入れられる）、そしてＳＲＩＦ−β−ｇａｌベクターのＫｐｎ−ＢｇｌＶ部位にクローニングされて、８×ＣＲＥ−β−ｇａｌレポーターベクターが得られる。８×ＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミドは、ｐＧＬ３−ベーシックベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩ部位から得られたルシフェラーゼ遺伝子で、８×ＣＲＥ−β−ｇａｌレポーターベクターのβ−ガラクトシダーゼ遺伝子を置き換えることによって作成される。室温で３０分のインキュベーションの後、ＤＮＡ／脂質混合物が４００μｌのＤＭＥＭで稀釈され、１００μｌの稀釈された混合物がそれぞれのウェルに添加される。細胞培養インキュベーターの中での４時間のインキュベーションの後、１０％のＦＣＳを含む１００μｌのＤＭＥＭが、それぞれのウェルに添加される。翌日、トランスフェクトされた細胞が、１０％のＦＣＳを含む２００μｌ／ウェルのＤＭＥＭに換えられる。８時間後、ウェルが、ＰＢＳで１回の洗浄後に、フェノールレッドを含む１００μｌ／ウェルのＤＭＥＭに換えられる。ルシフェラーゼ活性が、製造業者の説明書にしたがって、ＬｕｃＬｉｔｅ（登録商標）レポーター遺伝子アッセイキット（Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して翌日測定され、１４５０  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）シンチレーションおよび蛍光カウンター（Ｗａｌｌａｃ）で読み取られる。
【０２３４】
ｂ．ＡＰ１レポーターアッセイ（Ｇｑ結合受容体）
Ｇｑ刺激を検出するための方法は、Ｇｑ依存性ホスホリパーゼＣの既知の特性に依存し、それらのプロモーターの中のＡＰ１エレメントを含む遺伝子の活性化を引き起こす。Ｐａｔｈｄｅｔｅｃｔ（登録商標）ＡＰ−１  ｃｉｓ−Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，カタログ番号２１９０７３）を、リン酸カルシウム沈殿の成分が、４１０ｎｇのｐＡＰ１−Ｌｕｃ、８０ｎｇのｐＣＭＶ−受容体発現プラスミド、および２０ｎｇのＣＭＶ−ＳＥＡＰであることを除いて、ＣＲＥＢレポーターアッセイに関して上記に示したプロトコールにしたがって使用することができる。
【０２３５】
ｃ．ＳＲＦ−ＬＵＣレポーターアッセイ（Ｇｑ結合受容体）
Ｇｑ刺激を検出するための１つの方法は、Ｇｑ依存性ホスホリパーゼＣの既知の特性に依存し、それらのプロモーターの中の血清応答因子を含む遺伝子の活性化を引き起こす。Ｐａｔｈｄｅｔｅｃｔ（登録商標）ＳＲＦ−Ｌｕｃ−Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を、例えば、ＣＯＳ７細胞中でのＧｑ結合活性についてアッセイするための使用することができる。細胞は、システムのプラスミド成分と、内因性または内因性ではないＧＰＣＲをコードする示された発現プラスミドで、製造業者の説明書にしたがって哺乳動物トランスフェクション（Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）（登録商標）キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，カタログ番号２００２８５）を使用してトランスフェクトされる。簡単に説明すると、４１０ｎｇのＳＲＦ−Ｌｕｃ、８０ｎｇのｐＣＭＶ−受容体発現プラスミド、および２０ｎｇのＣＭＶ−ＳＥＡＰ（分泌型のアルカリホスファターゼ発現プラスミド；アルカリホスファターゼ活性は、試料間のトランスフェクション効率のバリエーションについての対照に対してトランスフェクトされた細胞の培地の中で測定される）が、製造業者の説明書にしたがってリン酸カルシウム沈殿の中で混合される。沈殿の半分が、９６ウェルプレートの３つのウェルに均等に分配され、２４時間、無血清培地の中で細胞上で維持される。細胞の５時間は、細胞は、例えば、１μＭの候補の化合物とともにインキュベートされる。その後、細胞が溶解させられ、そしてルシフェラーゼ活性について、Ｌｕｃｌｉｔｅ（登録商標）キット（Ｐａｃｋａｒｄ，カタログ番号６０１６９１１）および「Ｔｒｉｌｕｘ  １４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ」液体シンチレーションおよび蛍光カウンター（Ｗａｌｌａｃ）を製造業者の説明書にしたがって使用することによってアッセイされる。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）２．０ａ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．）を使用して分析することができる。
【０２３６】
ｄ．細胞内でのＩＰ３の蓄積についてのアッセイ（Ｇｑ結合受容体）
１日目に、目的の受容体（内因性のものまたは内因性ではないもの）を含む細胞が、２４ウェルプレート上に、通常は、１×１０５個の細胞／ウェル（しかし、この数は最適化することができる）でプレートされ得る。２日目には、細胞は、５０μｌの無血清ＤＭＥＭ中の０．２５μｇのＤＮＡ／ウェルと、５０μｌの無血清ＤＭＥＭ中の２μｌのリポフェクタミン／ウェルを最初に混合することによってトランスフェクトされ得る。溶液は穏やかに混合され、室温で１５〜３０分間インキュベートされる。細胞は０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄され、４００μｌの無血清培地がトランスフェクション培地と混合され、細胞に添加される。その後、細胞は、３７℃／５％のＣＯ２で３〜４時間インキュベートされ、その後、トランスフェクション培地が除去され、１ｍｌ／ウェルの通常の増殖培地に置き換えられる。３日目には、細胞は、３Ｈ−ｍｙｏ−イノシトールで標識される。簡単に説明すると、培地が除去され、そして細胞は０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄される。その後、０．５ｍｌのイノシトールを含まない／無血清培地（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）／ウェルが、０．２５μＣｉの３Ｈ−ｍｙｏ−イノシトール／ウェルとともに添加され、そして細胞が、３７℃／５％のＣＯ２で１６〜１８時間インキュベートされる。４日目には、細胞が０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄され、０．４５ｍｌのアッセイ培地（イノシトールを含まない／無血清培地、１０μＭのパルギリン（ｐａｒｇｙｌｉｎｅ）、１０ｍＭの塩化リチウム、または０．４ｍｌのアッセイ培地を含む）と、セロトニン受容体を含む対照構築物が使用される場合には、１０μＭの最終濃度となるような５０μｌの１０×ケタンセリン（ｋｅｔ）が添加される。その後、細胞が３７℃で３０分間インキュベートされる。その後、細胞は０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄され、２００μｌの新鮮な／氷冷された停止溶液（１ＭのＫＯＨ；１８ｍＭのホウ酸Ｎａ；３．８ｍＭのＥＤＴＡ）／ウェルが添加される。溶液は５〜１０分間、または細胞が溶解するまで氷上で維持され、その後、新鮮な／氷冷された中和溶液（７．５％のＨＣＬ）によって中和される。その後、溶解物は１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに移され、１ｍｌのクロロホルム／メタノール（１：２）／チューブが添加される。溶液は１５秒間ボルテックスされ、上相がＢｉｏｒａｄ  ＡＧ１−Ｘ８（登録商標）陰イオン交換樹脂（１００〜２００メッシュ）に載せられる。最初に樹脂は１：１．２５Ｗ／Ｖの水で洗浄され、そして０．９ｍｌの上相がカラムに載せられる。カラムは、１０ｍｌの５ｍＭのｍｙｏ−イノシトールおよび１０ｍｌの５ｍＭのホウ酸Ｎａ／６０ｍＭのギ酸Ｎａで洗浄される。トリスリン酸イノシトールは、１０ｍｌのシンチレーション混合物を含むシンチレーションバイアルの中で、２ｍｌの０．１Ｍのギ酸／１Ｍのギ酸アンモニウムで溶出させられる。カラムは、１０ｍｌの０．１Ｍのギ酸／３Ｍのギ酸アンモニウムで洗浄することによって再生され、ｄｄＨ２Ｏで２回リンスされ、そして水中で４℃で保存される。
【０２３７】
（実施例８）
融合タンパク質の調製
ａ．ＧＰＣＲ：Ｇｓ融合体の構築
ＧＰＣＲ−Ｇタンパク質融合構築物の設計は以下のように行うことができる：ラットのＧタンパク質Ｇｓα（長い形態；Ｉｔｏｈ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８３：３７７６（１９８６））の５’末端と３’末端の両方は、その上にＨｉｎｄＩＩＩ配列を含むように操作される。正確な配列の確認（隣接してＨｉｎｄＩＩＩ配列を含む）の後、配列全体は、ｐｃＤＮＡ３．１（−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号Ｖ７９５−２０）の中に、そのベクターのＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を使用してサブクローニングすることによってシャトルされる。Ｇｓα配列の正確な方向は、ｐｃＤＮＡ３．１（−）へのサブクローニングの後に決定される。次に、ラットのＧｓα遺伝子をＨｉｎｄＩＩＩ配列の位置に含む修飾されたｐｃＤＮＡ３．１（−）が確認される；このベクターは、現在、「ユニバーサル（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）」Ｇｓαタンパク質ベクターとして入手することができる。ｐｃＤＮＡ３．１（−）ベクターには、ＨｉｎｄＩＩＩ部位の上流に種々の周知の制限部位が含まれており、したがって、Ｇｓタンパク質の上流に、目的の受容体のコード配列を挿入する能力を効果的に提供する。この同じアプローチは、他の「ユニバーサル」Ｇタンパク質ベクターを作成するために利用することができ、もちろん、他の市販されているか、または独自に開発された当業者に公知のベクターを利用することができる。重要な基準は、ＧＰＣＲの配列が上流にあり、そしてＧタンパク質の配列がインフレームにあることである。
【０２３８】
ｂ．Ｇｑ（６アミノ酸の欠失）／Ｇｉ融合構築物
Ｇｑ（欠失）／Ｇｉ融合構築物の設計は以下のように行うことができる：Ｇαｑ−サブユニットのＮ末端の６個のアミノ酸（アミノ酸２から７、ＴＬＥＳＩＭ（配列番号３）の配列を有している）が欠失させられ、Ｃ末端の５個のアミノ酸（配列ＥＹＮＬＶ（配列番号４）を有している）が、Ｇαｉタンパク質の対応するアミノ酸（配列ＤＣＧＬＦ（配列番号５）を有している）で置き換えられる。この融合構築物は、以下のプライマーとプラスミド６３３１３（これには、鋳型としてヘマグルチニンタグを有しているマウスＧαｑの野生型バージョンが含まれている）を使用してＰＣＲによって得ることができる：
５’−ｇａｔｃＡＡＧＣＴＴＣＣＡＴＧＧＣＧＴＧＣＴＧＣＣＴＧＡＧＣＧＡＧＧＡＧ−３’（配列番号６）、
および
５’−ｇａｔｃＧＧＡＴＣＣＴＴＡＧＡＡＣＡＧＧＣＣＧＣＡＧＴＣＣＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＴＧＧＴＧ−３’（配列番号７）、
小文字のヌクレオチドはスペーサーとして含まれる。
【０２３９】
ＴａｑＰｌｕｓ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を、工程２から４が３５回繰り返される、以下のサイクルによる増幅に利用することができる：９５℃で２分間；９５℃で２０秒間；５６℃で２０秒間；７２℃で２分間；そして７２℃で７分間。ＰＣＲ産物は、ｐＣＲＩＩ−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングすることができ、そしてＡＢＩ  Ｂｉｇ  Ｄｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒキット（Ｐ．Ｅ．Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して配列決定することができる。融合構築物の配列を含むＴＯＰＯクローンに由来する挿入断片は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＢａｍＨＩ部位に、２工程のクローニングプロセスによってシャトルすることができる。２００２年９月６日にＷＯ０２０６８６００として公開されたＰＣＴ出願番号ＰＣＲ／ＵＳ０２／０５６２５もまた参照のこと（この開示はその全体が引用により本明細書中に組み入れられる）。
【０２４０】
（実施例９）
［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアッセイ
Ａ．膜の調製
いくつかの実施形態においては、候補の化合物（例えば、アゴニスト、逆アゴニスト、またはアンタゴニスト）の同定に使用される目的の標的ＧＰＣＲを含む膜は以下のように調製される：
ａ．材料
「膜擦り取り緩衝液（Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｓｃｒａｐｅ  Ｂｕｆｆｅｒ）」は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳと１０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）からなる。「膜洗浄緩衝液（Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒ）」は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳと０．１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）からなる。「結合緩衝液（Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ）」は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ、および１０ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）からなる。
【０２４１】
ｂ．手順
全ての材料は手順の間を通じて氷上で維持される。最初に、培地が細胞のコンフルエントな単層から吸引され、その後、１０ｍｌの冷却されたＰＢＳでリンスされ、続いて吸引される。その後、５ｍｌの膜擦り取り緩衝液が細胞を擦り取るために添加される。この後、５０ｍｌの遠心分離チューブに細胞抽出物が移される（４℃で１７分間、２０，０００ｒｐｍで遠心分離される）。その後、上清が吸引され、ペレットは３０ｍｌの膜洗浄緩衝液の中に再度懸濁され、続いて、４℃で１７分間、２０，０００ｒｐｍで遠心分離される。その後、上清が吸引され、ペレットは結合緩衝液の中に再度懸濁される。続いてこれは、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（登録商標）ホモジナイザーを使用してホモジナイズされる（全ての材料が懸濁物となるまで１５〜２０秒間の破裂）。これは、本明細書中では「膜タンパク質（Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）」と呼ばれる。
【０２４２】
Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイ
ホモジナイゼーションの後、膜のタンパク質濃度が、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを使用して決定される（タンパク質は、約１．５ｍｇ／ｍｌに稀釈することができ、アリコートにされ、後で使用されるまで凍結（−８０℃）させられる。凍結させられている場合には、使用のためのプロトコールは以下である：アッセイの日に、凍結させられている膜タンパク質が室温で融解させられ、その後、ボルテックスされ、次いで、Ｐｏｌｙｔｒｏｎとともに約１２×１，０００ｒｐｍで約５〜１０秒間ホモジナイズされる。複数の調製物については、ホモジナイザーは、異なる調製物のホモジナイゼーションの間に十分に洗浄されなければならないことに留意されたい）。
【０２４３】
ａ．材料
結合緩衝液（上記のとおり）；Ｂｒａｄｆｏｒｄ色素試薬（Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｄｙｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ）；Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質標準物（Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔａｎｄａｒｄ）が、製造業者の説明書（Ｂｉｏｒａｄ，カタログ番号５００−０００６）にしたがって利用される。
【０２４４】
ｂ．手順
２連のチューブが準備され、一方には膜が、そして他方には対照としての「ブランク」が含まれる。個々のチューブには、８００μｌの結合緩衝液が含まれる。その後、１０μｌのＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質標準物（１ｍｇ／ｍｌ）がそれぞれのチューブに添加され、次いで、１０μｌの膜タンパク質が、一方のチューブ（ブランクではない）だけに添加される。その後、２００μｌのＢｒａｄｆｏｒｄ色素試薬がそれぞれのチューブに添加され、その後、それぞれのチューブがボルテックスされる。５分後、チューブは再度ボルテックスされ、その中の材料がキュベットに移される。キュベットは、ＣＥＣＩＬ  ３０４１分光光度計を使用して５９５の波長で読まれる。
【０２４５】
同定アッセイ
ａ．材料
ＧＤＰ緩衝液は、３７．５ｍｌの結合緩衝液および２ｍｇのＧＤＰ（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ｇ−７１２７）と、それに続く、０．２μＭのＧＤＰ（個々のウェルの中のＧＤＰの最終濃度は０．１μＭのＧＤＰである）とするための結合緩衝液の希釈系列からなる。候補の化合物が含まれる個々のウェルには、１００μｌのＧＤＰ緩衝液（最終濃度、０．１μＭのＧＤＰ）、結合緩衝液中の５０μｌの膜タンパク質、および結合緩衝液中の５０μｌの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．６ｎＭ）（１０ｍｌの結合緩衝液あたり２．５μｌの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ）からなる、２００μｌの最終容量が含まれる。
【０２４６】
ｂ．手順
候補の化合物は、９６ウェルプレート形式を使用してスクリーニングすることができる（これらは、−８０℃で凍結させることができる）。膜タンパク質（または対照としての、標的ＧＰＣＲを除く発現ベクターを含む膜）が、懸濁物となるまで軽くホモジナイズされる。タンパク質濃度は、上記のＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを使用して決定することができる。膜タンパク質（および対照）は、結合緩衝液の中に０．２５ｍｇ／ｍｌとなるように希釈される（最終アッセイ濃度、１２．５μｇ／ウェル）。その後、１００μｌのＧＤＰ緩衝液が、Ｗａｌｌａｃ  Ｓｃｉｎｔｉｓｔｒｉｐ（登録商標）（Ｗａｌｌａｃ）のそれぞれのウェルに添加される。５μｌのピンツールが使用され、５μｌの候補の化合物がこのようなウェルに移される（すなわち、２００μｌの全アッセイ容量のうちの５μｌは１：４０の割合であり、その結果、候補の化合物の最終スクリーニング濃度は１０μＭである）。ここでもまた、混入を回避するために、個々の移動工程の後にピンツールは、水（１回）、エタノール（１回）、および水（２回）の３種類のレザーバーの中でリンスされなければならず、過剰の液体は、それぞれのリンスの後、ツールから振り落とされ、紙とキムワイプ（ｋｉｍｗｉｐｅ）で乾燥させられる。その後、５０μｌの膜タンパク質がそれぞれのウェルに添加され（標的ＧＰＣＲを含まない膜を含む対照ウェルもまた利用される）、室温で５〜１０分間プレインキュベートされる。その後、結合緩衝液中の５０μｌの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．６ｎＭ）が各ウェルに添加され、続いて、室温で６０分間震盪装置の上でインキュベーションされる（プレートはホイルで覆われる）。次いで、アッセイは、２２℃で１５分間の４０００ＲＰＭでプレートを回転させることによって停止させられる。プレートは８チャンネルの連結管で吸引され、プレートカバーでシールされる。プレートは、Ｗａｌｌａｃ  １，４５０上で、「Ｐｒｏｔ．＃３７」の設定を使用して読みとされる（製造業者の説明書にしたがって）。
【０２４７】
（実施例１０）
サイクリックＡＭＰアッセイ
候補の化合物（例えば、アゴニスト、逆アゴニスト、またはアンタゴニスト）を同定するための別のアッセイアプローチは、シクラーゼをベースとするアッセイを利用することによって行うことができる。直接的な同定に加えて、このアッセイアプローチは、上記の実施例に示された［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアプローチによる結果の確認を提供するための独立したアプローチとして利用することができる。
【０２４８】
改良型のＦｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅ（登録商標）アデニリルシクラーゼ（Ａｄｅｎｙｌｙｌ  Ｃｙｃｌａｓｅ）キット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ；カタログ番号ＳＭＰ００４Ａ）を、以下のプロトコールにしたがって目的の受容体の逆アゴニストおよびアゴニストとしての候補の化合物の直接的な同定に利用することができる。
【０２４９】
トランスフェクトされた細胞は、トランスフェクションのおよそ３日後に回収される。膜は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および１０ｍＭのＭｇＣｌ２を含む緩衝液の中での懸濁させられた細胞のホモジナイゼーションによって調製される。ホモジナイゼーションは、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（登録商標）を使用して、およそ１０秒間氷上で行われる。得られたホモジネートは、４℃で１５分間、４９，０００×ｇで遠心分離される。その後、得られたペレットが、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および０．１ｍＭのＥＤＴＡを含む緩衝液の中に再度懸濁させられ、１０秒間ホモジナイズされ、続いて、４℃で１５分間、４９，０００×ｇで遠心分離される。得られたペレットは、その後、利用されるまで−８０℃で保存される。直接の同定スクリーニングの日に、膜ペレットは室温でゆっくりと融解させられ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および１０ｍＭのＭｇＣｌ２を含む緩衝液の中に再懸濁させられて、０．６０ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度とされる（再懸濁させられた膜は使用されるまで氷上に置かれる）。
【０２５０】
ｃＡＭＰ標準物と検出緩衝液（１１ｍｌの検出緩衝液に対して２μＣｉのトレーサー［１２５Ｉ］ｃＡＭＰ（１００μｌ）が含まれる）は、製造業者の説明書にしたがって調製され、維持される。アッセイ緩衝液はスクリーニングのために新しく調製され、これには、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２０ｍＭのホスホクレアチン（Ｓｉｇｍａ）、０．１単位／ｍｌのクレアチンホスホキナーゼ（Ｓｉｇｍａ）、５０μＭのＧＴＰ（Ｓｉｇｍａ）、および０．２ｍＭのＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ）が含まれる。アッセイ緩衝液は、その後、利用されるまで氷上で保存される。
【０２５１】
候補の化合物は、例えば、９６ウェルプレートのウェルに（３μｌ／ウェル；１２μＭの最終アッセイ濃度）、４０μｌの膜タンパク質（３０μｇ／ウェル）および５０μｌのアッセイ緩衝液とともに添加される。次いで、この混合物は室温で３０分間、穏やかに攪拌されながらインキュベートされる。
【０２５２】
インキュベーション後、１００μｌの検出緩衝液が個々のウェルに添加され、その後、２〜２４時間インキュベーションされる。次いで、プレートが、Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）プレートリーダーで、「Ｐｒｏｔ．＃３１」を使用してカウントされる（製造業者の説明書にしたがって）。
【０２５３】
（実施例１１）
細胞内カルシウム濃度の測定のための蛍光画像プレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）アッセイ
それぞれのクローン株に由来する標的受容体（実験）およびｐＣＭＶ（ネガティブ対照）で安定にトランスフェクトされた細胞が、翌日のアッセイのために、ポリ−Ｄ−リジンで予め処理された９６ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，＃３５６６４０）に、５．５×１０４個の細胞／ウェルで、完全培養培地（１０％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ）とともに播種される。ナイアシン受容体がＧｉに結合しているので、ナイアシン受容体を含む細胞にはさらに、Ｇα１５、Ｇα１６、またはキメラＧｑ／Ｇｉαサブユニットが含まれ得る。Ｆｌｕｏ４−ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ，＃Ｆ１４２０２）インキュベーション緩衝液ストックを調製するために、１ｍｇのＦｌｕｏ４−ＡＭが４６７μｌのＤＭＳＯおよび４６７μｌのＰｌｕｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ，＃Ｐ３０００）の中に溶解させられて、１ｍＭのストック溶液が得られる。これは、１ヶ月間−２０℃で保存することができる。Ｆｌｕｏ４−ＡＭは蛍光カルシウム指示色素である。
【０２５４】
候補の化合物は、洗浄緩衝液（１×ＨＢＳＳ／２．５ｍＭのプロベニシド（Ｐｒｏｂｅｎｉｃｉｄ）／２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４））の中に調製される。
【０２５５】
アッセイ時には、培養培地がウェルから除去され、細胞は、１００μｌの４μＭのＦｌｕｏ４−ＡＭ／２．５ｍＭのプロベニシド（Ｓｉｇｍａ，＃Ｐ８７６１）／２０ｍＭのＨＥＰＥＳ／完全培地（ｐＨ７．４）とともにロードされる。３７℃／５％のＣＯ２でのインキュベーションが、６０分間行われる。
【０２５６】
１時間のインキュベーション後、Ｆｌｕｏ４−ＡＭインキュベーション緩衝液が除去され、そして細胞は１００μｌの洗浄緩衝液で２回洗浄される。各ウェルに１００μｌの洗浄緩衝液が残される。プレートは、３７℃／５％のＣＯ２で６０分間、インキュベーターに戻される。
【０２５７】
ＦＬＩＰＲ（蛍光画像プレートリーダー；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）は、５０μｌの候補の化合物を３０秒で添加し、さらに１５０秒間、候補の化合物によって引き起こされる細胞内カルシウム濃度（［Ｃａ２＋］）の一時的な変化を記録するようにプログラムされる。全ての蛍光の変化のカウントが、ＦＬＩＰＲソフトウェアを使用してアゴニスト活性を決定するために使用される。機器のソフトウェアは、同等の最初の読み取りがゼロとなるように、蛍光読み取りが較正される。
【０２５８】
上記によって、安定にトランスフェクトされた細胞を使用するアゴニスト活性についてのＦＬＩＰＲアッセイが提供されるが、当業者は、アンタゴニスト活性を特性決定するようにアッセイを改良することを容易に行うことができる。当業者はまた、別の一時的にトランスフェクトされた細胞を使用することができることも容易に理解するであろう。
【０２５９】
（実施例１２）
受容体結合アッセイ
本明細書中に記載される方法に加えて、候補の化合物を評価するための別の手段は、ナイアシン受容体に対する結合親和性を決定することによる。このタイプのアッセイには、通常、ナイアシン受容体に対する放射標識されたリガンドが必要である。
【０２６０】
放射標識された化合物（例えば、放射標識されたナイアシン）を、化合物を同定／評価するためのスクリーニングアッセイに使用することができる。一般的な用語においては、新しく合成された、または同定された化合物（すなわち、候補の化合物）は、ナイアシン受容体に対する放射標識されたナイアシンの結合を減少させるその能力について評価することができる。したがって、ナイアシン受容体に対する結合について放射標識されたナイアシンと競合する能力は、ナイアシン受容体に対する候補の化合物の結合親和性と直接関係している。
【０２６１】
ナイアシン受容体について受容体結合を決定するためのアッセイプロトコール：
Ａ．ナイアシン受容体の調製
例えば、ＨＥＫ２９３細胞（ヒト腎臓、ＡＴＣＣ）は、本明細書中に記載されるナイアシン受容体で一時的に、または安定にトランスフェクトすることができる。例えば、２９３細胞は、１０μｇのヒトナイアシン受容体と６０μＬのリポフェクタミン（１５ｃｍの皿あたり）で一時的にトランスフェクトされ、皿の中で、培地を交換しながら２４時間増殖させられる（７５％の細胞集密度）。細胞は、１０ｍｌ／皿のＨｅｐｅｓ−ＥＤＴＡ緩衝液（２０ｍＭのＨｅｐｅｓ＋１０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で取り出される。その後、細胞は、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ遠心分離機で、１７，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離される（ＪＡ−２５．５０ローター）。続いて、ペレットが２０ｍＭのＨｅｐｅｓ＋１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）に再懸濁され、５０ｍｌのＤｏｕｎｃｅホモジナイザーでホモジナイズされ、再び遠心分離される。上清が除去された後、ペレットは、結合アッセイで使用されるまで−８０℃で保存される。アッセイで使用される際には、膜は、２０分間氷上で融解させられ、その後、１０ｍＬのインキュベーション緩衝液（２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）が添加される。その後、膜はボルテックスされて粗膜ペレットが再度懸濁され、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ  ＰＴ−３１００  Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーで、６の設定で１５秒間ホモジナイズされる。膜タンパク質の濃度は、ＢＲＬ  Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを使用して決定される。
【０２６２】
Ｂ．結合アッセイ
全ての結合について、５０μｌの全容量の適切に稀釈された膜（５０ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および１ｍＭのＥＤＴＡ；５〜５０μｇのタンパク質を含むアッセイ緩衝液中に稀釈された）が、９６ウェルポリプロピレンマイクロタイタープレートに添加され、その後、１００μｌのアッセイ緩衝液と５０μｌの放射標識されたナイアシンが添加される。非特異的結合については、５０μｌのアッセイ緩衝液が１００μｌの代わりに添加され、さらに５０μｌの１０μＭの冷却されたナイアシン受容体が添加され、その後、５０μｌの放射標識されたナイアシンが添加される。次いで、プレートが室温で６０〜１２０分間インキュベートされる。結合反応は、Ｂｒａｎｄｅｌｌ  ９６ウェルプレート回収装置を備えたＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＧＦ／Ｃ  Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ濾過プレートを通じてアッセイプレートを濾過し、その後、０．９％のＮａＣｌを含む冷却された５０ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ７．４）で洗浄することによって停止させられる。次いで、濾過プレートの底がシールされ、５０μｌのＯｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘが各ウェルに添加され、プレートの上部がシールされ、そしてプレートがＴｒｉｌｕｘ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンターでカウントされる。化合物の競合実験には、１００μｌのアッセイ緩衝液が添加される代わりに、１００μｌの適切に希釈された候補の化合物が適切なウェルに添加され、その後、５０μｌの放射標識されたナイアシンが添加される。
【０２６３】
Ｃ．計算
候補の化合物は、最初、１μＭおよび０．１μＭでアッセイされ、その後、中央の用量で放射標識されたナイアシンの結合の約５０％の阻害を生じるように選択された濃度（すなわち、ＩＣ５０）でアッセイされる。候補の化合物が存在しない条件での特異的結合（ＢＯ）は、結合全体（ＢＴ）から非特異的結合（ＮＳＢ）が減算された差であり、同様に、特異的結合（候補の化合物の存在下）（Ｂ）は、置き換えられた結合（ＢＤ）から非特異的結合（ＮＳＢ）が減算された差である。ＩＣ５０は、候補の化合物の濃度に対するＢ／ＢＯのロジット−ログプロットである阻害応答曲線から決定される。
【０２６４】
Ｋｉは、Ｃｈｅｎｇ  ａｎｄ  Ｐｒｕｓｔｏｆｆ変換によって計算される：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／ＫＤ）
式中、［Ｌ］は、アッセイに使用された放射標識されたナイアシンの濃度であり、ＫＤは、同じ結合条件で別々に決定された放射標識されたナイアシンの解離定数である。
【０２６５】
（実施例１３）
本発明の化合物の調製
実施例１３．１：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール（化合物１）の調製
【０２６６】
【化７６】
2008519080.tif 000078
方法Ａ：化合物１の調製
１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボニトリル（０．０２２ｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）とアジ化ナトリウム（０．０８６ｇ、１．３０ｍｍｏｌ）を、１７５℃で２０分間のマイクロ波照射下で加熱されているＤＭＦ（３ｃｍ３）の中に入れた。溶液を室温に冷却し、濾過し、そして濾過された固体を酢酸エチルで洗浄した。混合した溶液を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｃｍ３）に添加し、酢酸エチルで洗浄した。水層を、１Ｍの塩酸水溶液の添加によってｐＨ１に酸性化させ、酢酸エチルの中に抽出した。酢酸エチル洗浄液を混合し、減圧下で溶媒を除去し、得られた固体を分配ＨＰＬＣによって精製すると、３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾールが白色固体として得られた（０．０１２ｇ、０．０６８ｍｍｏｌ、４１％）。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  （ＣＤ３ＯＤ）：  ２．８８  （ｔ様，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．０），  ２．８２  （ｔ様，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．３），  ２．６４  （五重線様，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．１）；  ｍ／ｚ  （ＥＳ＋）：  １７７  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６７】
中間体１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボニトリルを以下の手順を使用して調製した。
【０２６８】
工程Ａ：１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステル
【０２６９】
【化７７】
2008519080.tif 000079
シクロペンタノン（１０．０ｇ、１１８．９ｍｍｏｌ）を無水エタノール（３０ｃｍ３）に入れ、そしてナトリウム・エトキシド（５３ｃｍ３、エタノール中２１％、１４３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を１０分間アルゴン下で攪拌し、次いで、シュウ酸ジエチル（１９．１ｇ、１３１ｍｍｏｌ）を添加した。さらに、エタノール（１０ｃｍ３）を添加し、溶液を７５℃で３時間加熱し、そして室温に冷却した。水（２０ｃｍ３）中にとった塩酸ヒドラジン（８．１５ｇ、１１９ｍｍｏｌ）を加え、そして溶液を７５℃で一晩加熱した。減圧下で溶媒を除去し、得られたものを酢酸エチル（２００ｃｍ３）にいれ、そして水（２００ｃｍ３）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去すると、１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルがオフホワイトの固体として得られた（１６．１６ｇ、９０．０ｍｍｏｌ、７６％）。δＨ  （ＣＤ３ＯＤ）：  ４．３４  （ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．１，  ＯＣＨ２ＣＨ３），  ２．７８  （ｔ様，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．０），  ２．７２  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ），  ２．４９  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ），  １．３６  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ＝７．１，  ＯＣＨ２ＣＨ３）．    ｍ／ｚ  （ＥＳ＋）：  １８１  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７０】
工程Ｂ：１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド
【０２７１】
【化７８】
2008519080.tif 000080
１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステル（０．８０８ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）をメタノールアンモニア（ｃａ  ７Ｍ、１２ｃｍ３）にとり、９５℃で一晩攪拌した。得られた溶液を冷却し、沈殿した１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドを、吸引濾過によって白色の結晶固体として回収した（０．４３８ｇ、２．９０ｍｍｏｌ、６５％）。δＨ  （ＣＤ３ＯＤ）：  ２．７９  （ｔ様，  ２Ｈ，  Ｊ＝６．９），  ２．７３  （ｔ様，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．３），  ２．５５  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳ＋）：  １５２  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７２】
工程Ｃ：１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボニトリル
【０２７３】
【化７９】
2008519080.tif 000081
１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（０．２１０ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（１２ｃｍ３）に添加し、８０℃に加熱し、そして塩化ナトリウム（２．０ｇ、３４ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後、オキシ塩化リン（０．１２８ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を８０℃で一晩加熱し、冷却し、濾過し、そして回収した固体をアセトニトリルで洗浄した。溶媒を混合した溶液から減圧下で除去し、得られた固体を分配ＨＰＬＣによって精製すると、１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボニトリルが、深紫色の固体として得られた（０．０３１ｇ、０．２３ｍｍｏｌ、１７％）。dＨ  （ＣＤ３ＯＤ）：  ２．７９  （ｔ様，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．３），  ２．７３  （ｔ様，  ２Ｈ，  Ｊ＝７．１），  ２．６５−２．５５  （ｍ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳ＋）：  １３４  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７４】
方法Ｂ：化合物１の調製
【０２７５】
【化８０】
2008519080.tif 000082
ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール（１．９２ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）およびＫＯｔ−Ｂｕ（ＴＨＦ中の１Ｍの溶液の６５ｍＬ）の溶液の攪拌により、２．０時間、空気を泡立てた。反応を、ＨＣｌ（３Ｍ  ａｑ）の添加によってｐＨ＝２となるように酸性化させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して揮発性物質を除去した。材料を逆相ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム（１０μ、２５０×５０ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％（ｖ／ｖ）のＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）から５０％のＨ２Ｏまでの勾配、６０ｍｌ／分、λ＝２１４ｎｍ）によって精製した。生成物をさらに、Ｖａｒｉａｎ  ＢｏｎｄＥｌｕｔ（登録商標）６０ｍＬ、１０ｇのＳＣＸカートリッジ上にこの物質をロードすることによって精製した。ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）を、カラムに通過させて結合していない不純物を除去した。その後、生成物を、カラムにＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の２ＮのＮＨ３の溶液を通過させることによって溶出した。溶出物の濃縮によって、化合物１のアンモニウム塩（９４７ｍｇ、５．３８ｍｍｏｌ、７５％の収率）が白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ  （アンモニウム塩，  ４００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：    d  ２．８８  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ２．７４  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ２．５２  （２Ｈ，  五重線，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ）．    ＨＰＬＣ／ＭＳ：  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ１８カラム（５μ，５０×２．１ｍｍ）、
Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、０．７５ｍＬ／分、ｔｒ＝１．２２分、ＥＳＴ＋＝１７７．３（Ｍ＋Ｈ）。Ｃ７Ｈ８Ｎ６についての分析計算値（中性化合物）：Ｃ，４７．７２；Ｈ，４．５８。実測値：Ｃ，４７．２７；Ｈ，４．１６。Ｃ７Ｈ１１Ｎ７についての分析計算値（アンモニウム塩）：Ｃ，４３．５１；Ｈ，５．７４。実測値：Ｃ，４２．９４；Ｈ，５．３０。
【０２７６】
中間体１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾールは以下の手順を使用して調製した。
【０２７７】
工程Ａ：１−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドおよび２−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドの調製
【０２７８】
【化８１】
2008519080.tif 000083
２５℃のＤＭＦ（３４ｍＬ）中の１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（２．５７ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５．８７ｇ、４２．５ｍｍｏｌ）を添加し、その後、臭化ベンジル（４．３６ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応を環境温度で１６時間攪拌し、この時点で混合物をＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）で稀釈し、濾過した。濾液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で洗浄し、水相をＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍＬ）で逆抽出した。混合した有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。シルカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の５０％のＥｔＯＡｃからヘキサン中の９５％のＥｔＯＡｃまでの勾配）による精製により、２−ベンジル−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（７３９ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ、１８％の収率）が、白色固体として単離され、続いて、１−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（３．２４ｇ、１３．４ｍｍｏｌ、７９％の収率）が白色固体として単離された。
【０２７９】
１−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：    d  ７．３７−７．３０  （３Ｈ，  ｍ），  ７．１９  （２Ｈ，  ｍ），  ６．６７  （１Ｈ，  ｂｓ），  ５．３４  （１Ｈ，  ｂｓ），  ５．１９  （２Ｈ，  ｓ），  ２．８２  （２Ｈ，  ｍ），  ２．５１  （４Ｈ，  ｍ）．    １３Ｃ  ＡＰＴ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：      d  ｕｐ：  １６４．８，  １５５．２，  １３９．０，  １３６．０，  １２９．５，  ５５．３，  ３１．２，  ２４．１；  ｄｏｗｎ：  １２９．０，  １２８．３，  １２７．８。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ａｌｌｔｅｃｈ（登録商標）Ｐｒｅｖａｉｌ  Ｃ１８カラム（５μ、５０×４．６ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、３．５ｍＬ／分、ｔｒ＝２．１３分、ＥＳＩ＋＝２４２．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０２８０】
２−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：    d  ７．３４−７．２１  （５Ｈ，  ｍ），  ５．７６  （２Ｈ，  ｓ），  ５．７０−５．３８  （２Ｈ，  ｂｓ），    ２．７８  （４Ｈ，  ｍ），  ２．４９  （２Ｈ，  ｍ）．    １３Ｃ  ＡＰＴ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：      d  ｕｐ：  １６１．９，  １６０．１，  １３８．３，  １２８．３，  １２７．１，  ５５．１，  ２９．９，  ２４．８，  ２４．７；  ｄｏｗｎ：  １２８．６，  １２８．０，  １２７．６。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ａｌｌｔｅｃｈ（登録商標）Ｐｒｅｖａｉｌ  Ｃ１８カラム（５μ、５０×４．６ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、３．５ｍＬ／分、ｔｒ＝１．９８分、ＥＳＩ＋＝２４２．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２８１】
工程Ｂ：１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾールの調製
【０２８２】
【化８２】
2008519080.tif 000084
室温のＤＭＦ（２５ｍＬ）中の１−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（３．０２ｇ、１２．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化チオニル（１．９４ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応を１８時間攪拌し、この時点で、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、６ｍＬ）を添加して過剰の塩化チオニルをクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で稀釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、１００ｍＬ）と食塩水（１００ｍＬ）で連続して洗浄した。水性洗浄液をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で逆抽出し、混合した有機物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮すると、粗い黄色の油が得られた。
【０２８３】
濃縮物をＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解させ、肉厚の密閉型反応容器に入れた。この時点で、ＺｎＢｒ２（４．７０ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）とＮａＮ３（２．７３ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）を連続して添加した。容器を密閉し、１２０℃で１８時間加熱した。混合物を室温に冷却し、ＨＣｌ（３Ｍの水溶液、２ｍＬ）を添加し、５分間攪拌を続けた。混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で稀釈し、ＨＣｌ（１Ｍの水溶液、１００ｍＬ）で洗浄した。有機物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（５０：５０：０．２のヘキサン：ＥｔＯＡｃ：ＡｃＯＨから１００：０．２のＥｔＯＡｃ：ＡｃＯＨまでの勾配）による精製によって、１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール（２．０６ｇ、７．７４ｍｍｏｌ、６２％の収率）が白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：    d  ７．３６−７．２５  （５Ｈ，  ｍ），  ５．３０  （２Ｈ，  ｓ），  ２．８４  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ），  ２．６２−２．５６  （４Ｈ，  ｍ）．    １３Ｃ  ＡＰＴ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：      d  ｕｐ：    １５３．８，  １５１．９，  １３７．６，  １３１．５，  １２８．９，  ５５．８，  ３１．９，  ２４．８，  ２４．６；  ｄｏｗｎ：    １２９．９，  １２９．１，  １２９．０。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ１８カラム（５μ、５０×２．１ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、０．７５ｍＬ／分、ｔｒ＝２．１８分、ＥＳＩ＋＝２６７．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２８４】
方法Ｃ：化合物１の調製
【０２８５】
【化８３】
2008519080.tif 000085
１０％のギ酸／ＭｅＯＨ（ｖｏｌ／ｖｏｌ、９００ｍＬ）中の１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール（５９．４ｇ、２２３ｍｍｏｌ）の溶液に、パラジウム黒（３９．８ｇ、３７４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ-２大気下で２４時間機械的に攪拌した。反応物を濾過し、濃縮した。生成物をさらに精製して、Ｂｏｎｄｅｓｉｌ  ＳＣＸ  ＳＰＥ樹脂（７５０ｇ）を含むカラム上に材料（ＭｅＯＨ中の溶液として）をロードすることによりアンモニウム塩に変換させた。カラムをＭｅＯＨ（２．０Ｌ）でフラッシュして、結合していない不純物を除去した。生成物を２ＮのＮＨ３／ＭｅＯＨ（約１．５Ｌ）を使用して溶出させた。テトラゾールのアンモニウム塩（３９．３ｇ、２０３ｍｍｏｌ、９１％の収率）を濃縮すると、白色の固体が得られた。
【０２８６】
中間体１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾールは以下の手順を使用して調製した。
【０２８７】
工程Ａ：１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルの調製
【０２８８】
【化８４】
2008519080.tif 000086
Ｎ２下の室温の、ＥｔＯＨ（２．５Ｌ）中のシクロペンタノン（４２．０ｇ、０．５０ｍｏｌ）およびシュウ酸ジエチル（７３．１ｇ、０．５０ｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中のＫＯｔ−Ｂｕ（５００ｍＬの１Ｍの溶液、０．５０ｍｏｌ）の溶液を、添加用じょうご（ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｆｕｎｎｅｌ）から０．５時間かけて添加した。反応物を３．５時間攪拌し、その時点で、フラスコを０℃に冷却した。Ｈ２Ｏ（２５０ｍＬ）中の塩酸ヒドラジン（３７．６ｇ、０．５５ｍｏｌ）を、添加用じょうごから０．５時間かけて添加した。反応物を室温に温め、１６時間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去し、得られた固体をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、５００ｍＬ）とＨ２Ｏ（５００ｍＬ）で洗浄した。減圧下でのさらなる濃縮によって、純粋な１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステル（６３．６ｇ、０．３５ｍｏｌ、７１％の収率）が黄色い固体として得られた。
【０２８９】
工程Ｂ：１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドの調製
【０２９０】
【化８５】
2008519080.tif 000087
１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステル（６３．５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を７ＮのＮＨ３／ＭｅＯＨ（１．０Ｌ）の溶液に溶解させた。溶液を４つの等量に分け、これらのそれぞれを３５０ｍＬの肉厚の密閉型反応容器に移した。容器を９５℃に加熱し、２０時間攪拌した。反応物を室温に冷却し、その際、固形物が沈殿した。溶液を濾過し、固体をＮａＯＨ（１Ｎの水溶液、２００ｍＬ）で洗浄すると、純粋な１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（４２．０ｇ、０．２０ｍｏｌ、８０％の収率）が白色固体として得られた。
【０２９１】
工程Ｃ：１−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドおよび２−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドの調製
【０２９２】
【化８６】
2008519080.tif 000088
室温のＴＨＦ（４６０ｍＬ）中の１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（４１．５ｇ、２７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＨ（５Ｎの水溶液、１１０ｍＬ、０．５４ｍｏｌ）の溶液を添加した。５分間の攪拌の後、臭化ベンジル（４９．２ｇ、０．２９ｍｏｌ）を添加し、反応物を１６時間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去し、得られた固体をＨ２Ｏ（３×２５０ｍＬ）で洗浄した。さらなる濃縮により、１−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドと２−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（６５．３ｇ、２７０ｍｍｏｌ、９８％の収率）の位置異性体が２０：１混合物として得られた。これは分離せずに使用した。
【０２９３】
工程Ｄ：１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾールの調製
【０２９４】
【化８７】
2008519080.tif 000089
Ｎ２大気下の乾燥チューブに取り付けたフラスコを無水ＤＭＦ（２５０ｍＬ）でチャージした。フラスコを０℃に冷却し、塩化チオニル（３６．７ｇ、３０９ｍｍｏｌ）を、５分かけて注射器を通じて添加した。さらに１０分の攪拌の後、ＤＭＦ（３１０ｍＬ）中の１−ベンジル−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（６７．７ｇ、２８１ｍｍｏｌ）の溶液を、添加用じょうごを使用して５分かけて添加した。混合物をゆっくりと室温に温め、１６時間攪拌した。ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、１００ｍＬ）を添加し、混合物を１０分間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、７００ｍＬ）で稀釈した。層を分離させ、水相をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で逆抽出した。混合した有機物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、６００ｍＬ）および食塩水（６００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮すると、６３．１ｇのニトリルが茶色の固体として得られた。
【０２９５】
ＤＭＦ（５６０ｍＬ）中のニトリル（上記による）の溶液に、ＺｎＢｒ２（９５．６ｇ、４２５ｍｍｏｌ）を添加し、その後、ＮａＮ３（５５．２ｇ、８４９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１２０℃に加熱し、そして１４時間攪拌した。反応物を室温に冷却し、ＤＭＦを減圧下で除去した。ＨＣｌ（２Ｎの水溶液、８００ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間攪拌し、その後濾過した。固体をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）およびＨＣｌ（５Ｎの水溶液、３００ｍＬ）の２層混合物に添加し、０．５時間攪拌した。溶液を濾過し、層分離させた。残っている固体を再びＥｔＯＡｃおよびＨＣｌ（５Ｎの水溶液）で、上記のように処理し、このプロセス（攪拌、濾過、分離）を、全ての固体が溶解するまで繰り返した。混合した有機濾液を濃縮すると、１−ベンジル−３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール（６１．０、２２９ｍｍｏｌ、アミドから８１％の収率）が明るい茶色の固体として得られた。
【０２９６】
実施例１３．２：本発明のピラゾールカルボン酸の調製のための一般的方法：
エタノール中に溶解させた対応するケトン（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に、シュウ酸ジエチル（１．２等量）およびＴＨＦ中の１Ｍのｔ−ＢｕＯＫ溶液（１．１等量）を添加した。混合液を３０分間７５℃で加熱し、その後、氷浴の中で４℃に冷却した。ヒドラジンの水溶液（２等量、２ｍＬ／ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合液を７５℃で１時間加熱した。エタノールを減圧下で除去し、そのままのものをＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で稀釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして濃縮すると、対応するピラゾールエステル誘導体が得られた。続いて、エステルの加水分解を、５ＮのＮａＯＨ水溶液を使用して塩基性条件下で、９５℃で２時間行った。溶液のｐＨは、１２ＮのＨＣｌを使用して約１になるように調整し、混合物をＡｃＯＥｔで抽出し、有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして濃縮した。粗生成物を結晶化またはＨＰＬＣによって精製して、ピラゾールカルボン酸誘導体とした。
【０２９７】
実施例１３．３：５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（化合物２）の調製
【０２９８】
【化８８】
2008519080.tif 000090
５−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸を、実施例１３．２に記載した一般的手順を使用して調製した。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ，  ４００ＭＨｚ）  d  （ｐｐｍ）：  ７．３４  （１Ｈ，  ｍ），  ７．０７  （２Ｈ，  ｍ），  ６．５０  （１Ｈ，ｓ），  ３．９８  （２Ｈ，  ｓ）。質量スペクトル：ｍ／ｚ：２１１（Ｍ＋１）１。
【０２９９】
実施例１３．４：５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（化合物３）の調製
【０３００】
【化８９】
2008519080.tif 000091
５−（３−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸を、実施例１３．２に記載した一般的手順を使用して調製した。
【０３０１】
実施例１３．５：５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（化合物４）の調製
【０３０２】
【化９０】
2008519080.tif 000092
５−（３−ブロモ−ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸を、実施例１３．２に記載した一般的手順を使用して調製した。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ，  ４００ＭＨｚ）  d  （ｐｐｍ）：  ７．４６  （１Ｈ，  ｓ），  ７．４２  （１Ｈ，  ｍ），  ７．２７  （２Ｈ，  ｍ），  ６．５１  （１Ｈ，ｓ），  ３．９７  （２Ｈ，  ｓ）。質量スペクトル：ｍ／ｚ：２８１（Ｍ＋１）＋、２８３（Ｍ＋１）＋。
【０３０３】
実施例１３．６：６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール（化合物５）の調製
【０３０４】
【化９１】
2008519080.tif 000093
６−メチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾールを、実施例１３．１に記載した様式と同様の様式で調製した。位置異性体のカラムクロマトグラフィーによる分離を、ピラゾールの形成後に行った。化合物５をＮＭＲとＭＳによって特性決定した；１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）：  δ５．２０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．９４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ３４．７，  １０．３  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  １．３９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．４  Ｈｚ，  ３  Ｈ）。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ａｌｌｔｅｃｈ（登録商標）Ｐｒｅｖａｉｌ  Ｃ１８カラム（５μ、５０×４．６ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、３．５ｍＬ／分、ｔｒ＝１．０３分、ＥＳＩ＋＝１９２（Ｍ＋Ｈ）。
【０３０５】
実施例１３．７：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾール（化合物６）の調製
【０３０６】
【化９２】
2008519080.tif 000094
３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｃ］ピラゾールを、実施例１３．１に記載した様式と同様の様式で調製し、ＮＭＲとＭＳによって特性決定した；１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）：    d  ４．００  （２Ｈ，  ｍ），  ３．９５  （２Ｈ，  ｍ）。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｃ１８カラム（５μ、５０×４．６ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、３．５ｍＬ／分、ｔｒ＝１．２７分、ＥＳＩ＋＝１９４（Ｍ＋Ｈ）。
【０３０７】
実施例１３．８：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール（化合物７）および３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール（化合物８）の調製
【０３０８】
【化９３】
2008519080.tif 000095
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の異性体混合物としての化合物１３．８Ａ（５０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（８６．５ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）、および臭化亜鉛（３００ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）の溶液に、２００℃で６時間、マイクロ波照射を行った。室温に冷却した後、反応混合物を２ＮのＨＣｌ溶液で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｈ２Ｏで洗浄し、そして減圧下で濃縮した。ＨＰＬＣによって分離（Ｃ１８カラム、Ｈ２Ｏ中の５％から９９％のＣＨ３ＣＮ）すると、４０．３ｍｇ（６１％）の所望される生成物が、オレフィン異性体の２：１混合物として得られた。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １７５  （Ｍ＋１）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ６．９４  （ｍ，  ０．５  Ｈ），  ６．８７  （ｍ，  １  Ｈ），  ６．７６  （ｍ，  １  Ｈ），  ６．４０  （ｍ，  ０．５  Ｈ），  ３．３５  （ｍ，  ３  Ｈ）。
【０３０９】
異性体を逆相ＨＰＬＣによって分離した：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｌｕｎｅ  Ｃ１８カラム（１０μ、２５０×２１．２ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％（ｖ／ｖ）のＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）から７０％のＨ２Ｏまでの勾配、２０ｍｌ／分、λ＝２８０ｎｍ。
【０３１０】
あるいは、異性体を順相ＨＰＬＣによって分離した：Ｄｙｎａｍａｘ  Ｍｉｃｏｒｓｏｒｂ  Ｓｉ（ｐｒｅｐ）カラム（８μ、２５０×１０ｍｍ）、ヘキサン（２％ｖ／ｖのＡｃＯＨを含む）中の８０％（ｖ／ｖ）のＥｔＯＡｃ（２％ｖ／ｖのＡｃＯＨを含む）から９９％のＥｔＯＡｃまでの勾配、７．５ｍｌ／分、λ＝２８０ｎｍ）。
【０３１１】
異性体の溶出の順序は、順相カラムおよび逆相カラムの両方について同じである。
【０３１２】
異性体１（高Ｒｆ異性体）：
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）：    d  ６．７９  （２Ｈ，  ｍ），  ３．４２  （２Ｈ，  ｍ）。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ１８カラム（５μ、５０×２．１ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、０．７５ｍＬ／分、ｔｒ＝１．１０分、ＥＳＩ＋＝１７４．９（Ｍ＋Ｈ）。
【０３１３】
異性体２（低Ｒｆ異性体）：
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  ＭｅＯＤ）：    d  ６．９８  （１Ｈ，  ｍ），  ６．４４  （１Ｈ，  ｍ），  ３．３３  （２Ｈ，  ｍ）。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ１８カラム（５μ、５０×２．１ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、０．７５ｍＬ／分、ｔｒ＝１．１１分、ＥＳＩ＋＝１７５．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０３１４】
中間体化合物１３．８Ａを、異性体混合物として、以下の工程を使用して調製した：
工程Ａ：２，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルおよび２，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸エチルエステル（混合物）の調製
【０３１５】
【化９４】
2008519080.tif 000096
化合物１３．８Ｂは、ピラゾールエステルの調製について本明細書中に記載した方法と同様の方法を使用して対応するケトンから調製した（実施例１３．１および１３．２を参照のこと）。フェニルエーテル（２５ｍＬ）中の化合物１３．８Ｂ（２．０ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で潅流（２５０〜２６０℃）させながら２時間加熱した。
【０３１６】
溶液を室温に冷却した後、これをＳｉＯ２カラムに載せ、ＤＣＭでフラッシュしてフェニリガンドエーテルを洗い流し、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ（１／３）で溶出させると、１．０５ｇ（７２％）の化合物１３．８Ｃがオレフィン異性体の混合物として得られた。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １７９（Ｍ＋１）。
【０３１７】
工程Ｂ：２，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミドおよび２，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボン酸アミド（混合物）の調製
【０３１８】
【化９５】
2008519080.tif 000097
異性体混合物としての化合物１３．８Ｃ（１．０ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）を、最少量のジオキサン（＜５ｍＬ）に溶解させ、堅く密閉した容器の中で２８％の水酸化アンモニウム溶液（１００ｍＬ）と混合した。溶液を室温で２４時間攪拌し、減圧下で濃縮すると、化合物１３．８Ｄが異性体混合物として、定量的収量の固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １５０（Ｍ＋１）。
【０３１９】
工程Ｃ：２，４−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボニトリルおよび２，６−ジヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−カルボニトリル（混合物）の調製
【０３２０】
【化９６】
2008519080.tif 000098
アセトニトリル（３０ｍＬ）中の異性体混合物としての化合物１３．８Ｄ（０．８０ｇ、５．３６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．４４５ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＰＯＣｌ３（０．７８５ｍＬ，８．５８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を、還流させながら２時間加熱した。減圧下での濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で稀釈し、Ｈ２Ｏおよび食塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、そして濃縮すると、１４１ｍｇ（２０％）の化合物１３．８Ａが異性体混合物として得られた。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３２（Ｍ＋１）。
【０３２１】
実施例１３．９：３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４，６−ジヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］ピラゾール（化合物９）の調製
【０３２２】
【化９７】
2008519080.tif 000099
化合物９を、実施例１３．１に記載した様式と同様の様式で調製し、ＮＭＲとＭＳによって特性決定した；ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １７９  （Ｍ＋１）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ５．０７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ４．９２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ，  ２  Ｈ）。
【０３２３】
実施例１３．１０：５−エチル−３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール（化合物１０）の調製
【０３２４】
【化９８】
2008519080.tif 000100
化合物１０を、実施例１３．１に記載した様式と同様の様式で調製し、ＮＭＲとＭＳによって特性決定した；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＭｅＯＤ，  ４００  ＭＨｚ）：    d  ３．０７  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １４．８，  ７．６  Ｈｚ），  ２．９４−２．８２  （２Ｈ，  ｍ），  ２．５１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．２，  ６．８  Ｈｚ）  ２．４１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １３．６，  ５．６  Ｈｚ），  １．６  （２Ｈ，  ｍ），  １．０２  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ）。ＨＰＬＣ／ＭＳ：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ１８カラム（５μ、５０×２．１ｍｍ）、Ｈ２Ｏ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）中の５％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ（１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）からＨ２Ｏ中の９９％ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮまでの勾配、０．７５ｍＬ／分、ｔｒ＝１．４２分、ＥＳＩ＋＝２０５．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０３２５】
実施例１３．１１：５−（５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−テトラゾール（化合物１１）の調製
【０３２６】
【化９９】
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化合物１１を、本明細書中に記載した様式と類似の様式で、または当該分野で公知の方法によって調製した。
【０３２７】
出願人らは、本発明の任意の実施形態から任意の１つ以上の化合物を排除する権利を留保する。出願人らはまた、例えば、ナイアシン、ナイアシンアナログ、もしくはナイアシン受容体アゴニスト、任意のナイアシン受容体部分的アゴニストの任意の処方物または量、あるいは任意の併用療法を排除する権利も留保する。
【０３２８】
本出願を通じて、様々な刊行物、特許、および公開特許出願が引用される。本出願で引用されるこれらの刊行物、特許、および公開特許出願の開示は、それらの全体が引用により本開示の中に組み入れられる。刊行物、特許、または公開特許出願の出願人によるその中での引用は、上記刊行物、特許、または公開特許出願の出願人による先行技術としての承認ではない。
【０３２９】
当業者の範囲である開示される発明の改良および拡大は、上記開示と以下特許請求の範囲に含まれる。
【配列表】
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【国際調査報告】
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