(57)【要約】  本発明は、ａ)非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンである第一剤、例えば式Ｉの化合物およびｂ)併用剤を含む、医薬組み合わせ剤に関する。
2008525459.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ)非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンである第一剤およびｂ)１種以上の併用剤またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルを含む、医薬組成物。
【請求項２】
免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンが式Ｉ
【化１】
2008525459.tif 000008
〔式中、
ＷはＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔまたは８’−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔであり；
ＸはαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(ＭｅＯＴｈｒ)であり；
ＲはＳａｒ、(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ、(Ｄ)−ＭｅＡｌａ、または(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ(Ｏアセチルであり)；
ＹはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒ；Ｎ−エチルＶａｌ、Ｎ−エチルＩｌｅ、Ｎ−エチルＴｈｒ、Ｎ−エチルＰｈｅ、Ｎ−エチルＴｙｒまたはＮ−エチルＴｈｒ(Ｏアセチル)であり、
ＺはＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり；そして
ＱはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａである。〕
の化合物である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
併用剤がインターフェロン、インターフェロンの結合体、抗ウイルス剤、ヘリカーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤およびヌクレオシド類似体から成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
併用剤がＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤が２'−Ｃ−メチルリボフラノシルシチジンまたはそのプロドラッグである、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンおよびインターフェロン、インターフェロンの結合体、抗ウイルス剤、ヘリカーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤およびヌクレオシド類似体から成る群から選択される１種以上の併用剤を併用投与する方法。
【請求項７】
免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンが式Ｉ
【化２】
2008525459.tif 000009
〔式中、
ＷがＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔまたは８’−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔであり；
ＸがαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(ＭｅＯＴｈｒ)であり；
ＲがＳａｒ、(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ、(Ｄ)−ＭｅＡｌａ、または(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ(Ｏアセチルであり)；
ＹがＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒ；Ｎ−エチルＶａｌ、Ｎ−エチルＩｌｅ、Ｎ−エチルＴｈｒ、Ｎ−エチルＰｈｅ、Ｎ−エチルＴｙｒまたはＮ−エチルＴｈｒ(Ｏアセチル)であり、
ＺがＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり；そして
ＱがＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａである。〕
の化合物である、請求項１記載の組成物である、請求項６記載の方法。
【請求項８】
併用剤がインターフェロンまたはインターフェロンの結合体である、請求項６記載の方法。
【請求項９】
併用剤がＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤が２'−Ｃ−メチル−リボフラノシルシチジンまたはそのプロドラッグである、請求項９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬化学、特に非免疫抑制性シクロスポリンおよびＣ型肝炎感染症の組み合わせ処置の領域に関する。(本明細書では、“cyclosporin”を“サイクロスポリン”と、そして“Cicrosporine”を“シクロスポリン”と、それぞれ表記する)
【背景技術】
【０００２】
本発明は非免疫抑制性サイクロスポリンの新規使用に関する。
サイクロスポリンは、一般に薬理学的、特に免疫抑制性、または抗炎症性活性を有する、構造的に特徴的な、環状、ポリ−Ｎ−メチル化ウンデカペプチドのクラスを含む。単離された最初のサイクロスポリンは、天然に存在する真菌代謝物シクロスポリンまたはサイクロスポリンＡとしても既知のサイクロスポリンであった。
【０００３】
サイクロスポリンＡがＩＬ−２の転写開始を遮断することによりＴ細胞活性化の工程を妨害することにより作用することはよく確立されている。サイクロスポリンＡは、シクロフィリンと命名された１７ｋＤ細胞質タンパク質と複合体を形成することが示されており、後者は多くの細胞型で生成し、タンパク質折り畳みに関与する酵素であるペプチジル−プロリルｃｉｓ−ｔｒａｎｓイソメラーゼと同じであることが示されている。
【０００４】
しかしながら、シクロフィリンへの結合が免疫抑制性活性に必須ではあるが、十分な判定基準ではないことが判明した。サイクロスポリンＡ／シクロフィリン複合体はまた、ホスファターゼスーパーファミリーに属するカルシニューリン(ＣＮ)と命名された細胞性タンパク質とも会合できる。この結合は、そのホスファターゼ活性を阻止し、転写因子ＮＦ−ＡＴの沈黙をもたらす。ＣＮ／ＮＦ−ＡＴ経路の阻害は、サイクロスポリンＡ仲介免疫抑制の機構に必須である。
【０００５】
シクロフィリンに強く結合するが、免疫抑制性ではないサイクロスポリンが同定されている。サイクロスポリンは、混合リンパ球反応(ＭＬＲ)における活性がサイクロスポリンＡの５％以下、好ましくは２％以下であるとき、非免疫抑制性であると見なされる。混合リンパ球反応はT. Meo in “Immunological Methods”, L. Lefkovits and B. Peris, Eds., Academic Press, N.Y. pp. 227-239 (1979)により記載されている。Ｂａｌｂ／ｃマウス(雌、８−１０週)からの脾臓細胞(０.５×１０６)を、５日間、ＣＢＡマウス(雌、８−１０週)からの０.５×１０６の照射した(２０００ラド)またはマイトマイシンＣ処理した脾臓細胞と共インキュベートする。照射した同種異系細胞はＢａｌｂ／ｃ脾臓細胞において増殖応答を誘発し、これは標識前駆体のＤＮＡへの取り込みにより測定できる。スティミュレーター細胞が照射されている(またはマイトマイシンＣ処理されている)ため、それらはＢａｌｂ／ｃ細胞に対して増殖では応答しないが、それらの抗原性は維持している。ＭＬＲにおいて本試験化合物で見られるＩＣ５０は、並行した実験におけるサイクロスポリンＡと同等である。加えて、非免疫抑制性サイクロスポリンはＣＮおよび下流ＮＦ−ＡＴ経路を阻害する能力を欠く。
【０００６】
ＥＰ０４８４２８１Ａ１および米国特許５,７６７,０６９は、ＡＩＤＳまたはＡＩＤＳ関連障害の処置における非免疫抑制性サイクロスポリンの使用を開示している。出願ＥＰ２００４／００９８０４に開示の通り、シクロフィリンに結合する非免疫抑制性サイクロスポリンはまた、Ｃ型肝炎ウイルス(ＨＣＶ)に対する阻害効果を有することも判明している。
【０００７】
図面の簡単な説明
図１は、本発明のサイクロスポリン(ＮＩＭ８１１)および(Ａ)インターフェロン−α、(Ｂ)ＢＩＬＮ２０６１、(Ｃ)ＬＣＱ９７１または(Ｄ)ＮＭ１０７を使用した組み合わせ処置の効果を説明する。
図２は、ＮＩＭ８１１単独または(Ａ)インターフェロン−αまたは(Ｂ)ＢＩＬＮ２０６１との組み合わせの処置による細胞複製の減少の比較を説明する。
図３は、ウイルスＲＮＡに対するＮＩＭ８１１とＢＩＬＮ２０６１の組み合わせの阻害効果を説明する。
【発明の開示】
【０００８】
発明の要約
非免疫抑制性サイクロスポリンが、フラビウイルス科ウイルス、特に、Ｃ型肝炎ウイルスに対して優れた結果を提供することが発見された。この発見に基づいて、有効量の非免疫抑制性サイクロスポリンを１種以上の併用剤、それらの塩、エステル、プロドラッグまたは誘導体と組み合わせて投与することを含む、Ｃ型肝炎感染症の処置のための組成物、方法および使用が提供される。
【０００９】
詳細な記載
ここに引用する全ての文献は、その全体を引用により本明細書に包含させる。
シクロフィリンに結合する非免疫抑制性サイクロスポリンが、Ｃ型肝炎ウイルス(ＨＣＶ)に対する阻害効果を有し、そして、他の抗ウイルス性薬剤と組み合わせて使用したとき、このような組み合わせが特に有効であることが、驚くべきことに判明した。
【００１０】
非Ａ、非Ｂ肝炎の主要な原因因子として同定されているＨＣＶによる難治性の感染は、慢性肝炎、肝硬変または肝細胞性癌腫のような肝臓疾患に密接に関連していると見なされている。これらの肝臓疾患の発症は、大きな公衆衛生問題である。有効な抗ＨＣＶ治療はインターフェロン・アルファまたはインターフェロン・アルファとリバビリンの組み合わせでの治療に限定されている。しかしながら、該ウイルスがこれらの既知薬剤で処置したＨＣＶ患者の約半数で除去されないため、他の抗ＨＣＶ剤の強い要請が未だに存在している。
【００１１】
従って、本発明は、他の治療剤と組み合わせて使用したときの、Ｃ型肝炎またはＨＣＶ誘発障害の予防または処置における、非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンの使用を提供する。Ｃ型肝炎またはＨＣＶ誘発障害は、例えば慢性肝炎、肝硬変または肝臓癌、例えば肝細胞癌腫である。非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンおよびその他の治療剤との組み合わせは、例えば、ＨＣＶ感染母体から生まれた新生児もしくはこのウイルスに曝されるヘルスケア従事者に、または移植レシピエント、例えば臓器または組織移植レシピエント、例えば肝臓移植に、移植後のＨＣＶ感染再発の可能性を排除するために予防的処置としても使用できる。
【００１２】
サイクロスポリンは、Quesniaux in Eur. J. Immunol. 1987 17 1359-1365に記載の競合ＥＬＩＳＡ試験において、ヒト組み換えシクロフィリンに、サイクロスポリンＡの少なくとも１／５倍結合するとき、シクロフィリン結合性と見なす。本試験において、試験するサイクロスポリンを、シクロフィリンとＢＳＡ−サイクロスポリンＡのインキュベーションの間に添加し、競合剤なしでのコントロール反応の５０％阻害をもたらすのに必要な濃度(ＩＣ５０)を計算する。結果を結合比(ＢＲ)として示し、これは、本試験化合物のＩＣ５０に対するサイクロスポリンＡ自体の同時試験のＩＣ５０の比の底１０の対数である。故に、１.０のＢＲは、本試験化合物がヒトシクロフィリンにサイクロスポリンＡの１／１０倍少ない結合を示し、負の値は、サイクロスポリンＡよりも強い結合を示す。ＨＣＶに対して活性なサイクロスポリンは、０.７未満、好ましくは０以下のＢＲを有する。
【００１３】
非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンは、例えば式Ｉ
【化１】
2008525459.tif 000003
〔式中、
ＷはＭｅＢｍｔ、ジヒドロ−ＭｅＢｍｔまたは８’−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔであり；
ＸはαＡｂｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＮｖａまたはＯ−メチルスレオニン(ＭｅＯＴｈｒ)であり；
ＲはＳａｒ、(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ、(Ｄ)−ＭｅＡｌａ、または(Ｄ)−ＭｅＳｅｒ(Ｏアセチル)であり；
ＹはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＩｌｅ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＡｌａ、ＭｅａＩｌｅまたはＭｅａＴｈｒ；Ｎ−エチルＶａｌ、Ｎ−エチルＩｌｅ、Ｎ−エチルＴｈｒ、Ｎ−エチルＰｈｅ、Ｎ−エチルＴｙｒまたはＮ−エチルＴｈｒ(Ｏアセチル)であり；
ＺはＶａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅＶａｌまたはＭｅＬｅｕであり；そして
ＱはＭｅＬｅｕ、γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕまたはＭｅＡｌａＭｅＡｌａである。〕
の化合物を含む。
【００１４】
基Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＱおよびＲは、独立して、下記の好ましい意味を有する：
Ｗは好ましくはＷ’であり、ここで、Ｗ’はＭｅＢｍｔまたはジヒドロ−ＭｅＢｍｔであり；
Ｘは好ましくはＸ’であり、ここで、Ｘ’はαＡｂｕまたはＮｖａであり、より好ましくはＸ”であり、ここで、Ｘ”はαＡｂｕであり；
Ｒは好ましくはＲ’であり、ここで、Ｒ’はＳａｒであり；
Ｙは好ましくはＹ’であり、ここで、Ｙ’はγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｈｒ、ＭｅＩｌｅ、Ｎ−エチルＩｌｅまたは    Ｎ−エチルＶａｌであり；
Ｚは好ましくはＺ’であり、ここで、Ｚ’はＶａｌまたはＭｅＶａｌであり；そして
Ｑは好ましくはＱ’であり、ここで、Ｑ’はＭｅＬｅｕである。
【００１５】
式Ｉの化合物の好ましいグループは、ＷがＷ’であり、ＸがＸ’であり、ＹがＹ’であり、ＺがＺ’であり、ＱがＱ’であり、ＲがＲ’であるものである。
【００１６】
好ましい式Ｉの化合物の例は、例えば下記である：
ａ)  [ジヒドロ−ＭｅＢｍｔ]１−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−シクロスポリン；ＢＲ＊＝０.１；ＩＲ＜１％
ｂ)  [ＭｅＶａｌ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０.１；ＩＲ＜１％
ｃ)  [ＭｅＩｌｅ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝−０.２；ＩＲ  ＜１％
ｄ)  [ＭｅＴｈｒ]４−シクロスポリン；
ｅ)  [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０.４；ＩＲ＜１％
ｆ)  [エチル−Ｉｌｅ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０.１；ＩＲ  ＜２％
ｇ)  [エチル−Ｖａｌ]４−シクロスポリン；ＢＲ＝０；ＩＲ  ＜２％
ｈ)  [Ｎｖａ]２−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−シクロスポリン；
ｉ)  [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]４−[γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]６−シクロスポリン；
ｊ)  [ＭｅＶａｌ]５−シクロスポリン；ＢＲ＝０.４；ＩＲ＝５.３％
ｋ)  [Ｍｅ０Ｔｈｒ]２−[(Ｄ)ＭｅＡｌａ]３−[ＭｅＶａｌ]５−シクロスポリン；
ｊ)  [８’−ヒドロキシ−ＭｅＢｍｔ]１−シクロスポリン；ＢＲ＝０.３５；ＩＲ＝１.８％
ｋ)  [ＭｅＡｌａ]６−シクロスポリン；ＢＲ＝−０.４；ＩＲ＝３.２
ｌ)  [γ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕ]９−シクロスポリン；ＢＲ＝０.１５；ＩＲ＝２.９
ＩＲ＝免疫抑制性比、サイクロスポリンＡに対する活性パーセントとして表示。
【００１７】
非免疫抑制性サイクロスポリンのさらなる例は、内容を引用により本明細書に包含させるＷＯ９８／２８３３０、ＷＯ９８／２８３２９およびＷＯ９８／２８３２８に記載の化合物、例えば式II
【化２】
2008525459.tif 000004
〔式中、
Ｗａは
【化３】
2008525459.tif 000005
であり、ここで、Ｒａは式ＩｃまたはＩｄ
【化４】
2008525459.tif 000006
の残基であり、ここで、Ｒ４はＣ１−４アルキルチオ、アミノＣ１−４アルキルチオ、Ｃ１−４アルキルアミノＣ１−４アルキルチオ、ジＣ１−４アルキルアミノ−Ｃ１−４アルキルチオ、ピリミジニルチオ、チアゾリルチオ、Ｎ−Ｃ１−４アルキルイミダゾリルチオ、ヒドロキシＣ１−４アルキルフェニルチオ、ヒドロキシＣ１−４アルキルフェノキシ、ニトロフェニルアミノまたは２−オキソピリミジン−１−イルであり、そしてＲ'４はＣ１−４アルキルであり、
ＸａはＡｂｕであり；
Ｒａは−ＮＭｅ−ＣＨ(Ｒｂ)−ＣＯ−であり、ここで、ＲｂはＨまたは−Ｓ−Ａｌｋ−Ｒ０であり、ここで、Ａｌｋ−Ｒ０はメチルであるか；またはＡｌｋは直鎖または分枝鎖Ｃ２−６アルキレンまたはＣ３−６シクロアルキレンであり、そしてＲ０はＨ；ＯＨ；ＣＯＯＨ；Ｃ２−５アルコキシ−カルボニル；ＮＲ１Ｒ２(ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立してＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ３−６シクロアルキルおよびフェニルから選択され、各々所望によりハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ２−５アルコキシカルボニル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノおよび／またはジＣ１−４アルキル−アミノで置換されていてよい)ならびにベンジルおよびヘテロ環式ラジカルから選択され、該ベンジルおよびヘテロ環式ラジカルは、飽和または不飽和であり、５個または６個の環員および１個から３個のヘテロ原子を含むか、またはＲ１およびＲ２は、それらが結合している窒素原子と一体となって、４から６員ヘテロ環を形成し、これは、窒素、酸素および硫黄から選択される他のヘテロ原子を含んでよく、所望によりＣ１−４アルキル、フェニルまたはベンジルで置換されているか；またはＲ１およびＲ２の各々は、式Ｉｂ
【化５】
2008525459.tif 000007
のラジカルであり、ここでＲ１およびＲ２は上記で定義の通りであり、Ｒ３はＨまたはＣ１−４アルキルであり、そしてｎは２から４の範囲の整数であり；
ＹａはＭｅＬｅｕまたはγ−ヒドロキシ−ＭｅＬｅｕであり；
ＺａはＶａｌであり；そして
ＱａはＭｅＬｅｕである。
ただし、ＹａがＭｅＬｅｕであるとき、ＲｂはＨではない。〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００１８】
式IIにおいて、Ｒ１および／またはＲ２がヘテロ環式残基であるとき、それはピリジル、テトラヒドロ−ピリジル、ピペリジル、イミダゾリル、オキサゾリルまたはチアゾリルであり得る。Ｒ１とＲ２がそれらが結合している窒素原子と一体となってヘテロ環式残基を形成するとき、ヘテロ環式残基は、例として、アゼチジニル、ピペリジル、ピペラジニル、Ｎ−メチル−ピペラジニル、Ｎ−フェニルピペラジニル、Ｎ−ベンジルピペラジニル、ピリジル、イミダゾリル、モルホリノ、チオモルホリノ、テトラヒドロピリジル、メチルテトラヒドロピリジル(例えば４−メチル−テトラヒドロピリジル)またはフェニルテトラヒドロピリジル(例えば４−フェニルテトラヒドロピリジル)から選択できる。
【００１９】
式Ｉ、ＩａまたはIIの化合物は：
１)  発酵
２)  生物学的変換
３)  誘導体化
４)  部分合成
５)  全合成
に分類され得る、種々の方法で、例えば引用によりその内容を本明細書に包含させるＥＰ０４８４２８１Ａ１、ＷＯ００／０１７１５、ＷＯ９８／２８３３０、ＷＯ９８／２８３２９またはＷＯ９８／２８３２８に記載の通りに得ることができる。
【００２０】
一連のさらなるまたは他の態様において、本発明はまた下記を提供する：
１.１  処置を必要とする対象におけるＣ型肝炎感染症またはＨＣＶ誘発障害を予防または処置する方法であって、該対象に治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、例えば式Ｉの化合物を１種以上の併用剤と組み合わせて投与することを含む、方法。
【００２１】
１.２  培地中のフラビウイルス科複製を阻害する方法であって、該培地に有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、例えば式Ｉの化合物を１種以上の併用剤と組み合わせて適用することを含む、方法。
【００２２】
１.３  処置を必要とする患者におけるＨＣＶ複製を阻害する方法であって、該対象に治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、例えば式Ｉの化合物を１種以上の併用剤と組み合わせて投与することを含む、方法。
【００２３】
１.４  移植レシピエントにおけるＨＣＶ感染の再発を予防する方法であって、該レシピエントに治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、例えば式Ｉの化合物を１種以上の併用剤と組み合わせて投与することを含む、方法。
【００２４】
２.  上記に定義のいずれかの方法において使用するための医薬組成物の製造における、非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、例えば式Ｉの化合物と、１種以上の併用剤の組み合わせの使用。
【００２５】
３.  非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、例えば式Ｉの化合物と１種以上の併用剤との組み合わせを、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、上記で定義のいずれかの方法において使用するための医薬組成物。
【００２６】
他の局面において、組み合わせ処置または交互の処置に使用できる適当な併用剤は、下記を含むが、これらに限定されない：
(１)インターフェロンまたはインターフェロンの結合体、例えば：
(ａ)Intron-A(登録商標)、インターフェロン・アルファ−２ｂ(Schering Corporation, Kenilworth, NJ)、
(ｂ)PEG-Intron(登録商標)、ペグ化インターフェロン−２ｂ(Schering Corporation, Kenilworth, NJ)、
(ｃ)Roferon(登録商標)、組み換えインターフェロン・アルファ−２ａ(Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ)、
(ｄ)Pegasys(登録商標)、ペグインターフェロン・アルファ−２ａ(Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ)、
(ｅ)Berefor(登録商標)、利用可能なインターフェロン・アルファ２(Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT)、
(ｆ)Sumiferon(登録商標)、天然アルファ・インターフェロンの精製混合物(住友、日本)、
(ｇ)Wellferon(登録商標)、リンパ芽球様インターフェロン・アルファｎ１(GlaxoSmithKline)、
(ｈ)Infergen(登録商標)、コンセンサス・アルファ・インターフェロン(InterMune Pharmaceuticals, Inc., Brisbane, CAおよびAmgen, Inc., Newbury Park, CA)、
(ｉ)Alferon(登録商標)、天然アルファ・インターフェロンの混合物(Interferon SciencesおよびPurdue Frederick Co., CT)、
(ｊ)Viraferon(登録商標)；
(ｋ)例えば、ヒトアルブミンに結合したAlbuferon(Human Genome Science)を含む、結合したインターフェロン。水溶性ポリマーまたはポリアルキレンオキシドホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール(ＰＥＧ)またはポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマーおよびそれらのブロックコポリマーに結合したインターフェロン。ポリアルキレンオキシド骨格のポリマーの代わりに、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、炭水化物骨格のポリマーなどの非抗原性物質を有効に使用できる。インターフェロン−ポリマー結合体は、ＵＳ４７６６１０６、ＵＳ４９１７８８８、ＥＰＡ０２３６９８７、ＥＰＡ０５１０３５６およびＷＯ９５／１３０９０に記載されている。重合修飾が抗原性応答を十分に減少させるため、外来インターフェロンが完全に自己である必要はない。ポリマー結合体の製造に使用されるインターフェロンは、ヒト、反芻動物またはウシインターフェロンのような哺乳動物抽出物から製造でき、または組み換えにより製造する。
【００２７】
インターフェロンの他の形態は、インターフェロン・ベータ、ガンマ、タウおよびオメガ、例えばSeronoのRebif(インターフェロン・ベータ１ａ)、ViragenのOmniferon(天然インターフェロン)またはBoehringer Ingelheimのオメガ・インターフェロン；
Amarillo Biosciencesの経口インターフェロン・アルファのような経口インターフェロンを含む；
他の局面において、インターフェロンのさらなる例は、ペグ化インターフェロン・アルファ、例えばペグ化インターフェロンα−２ａ、ペグ化インターフェロンα−２ｂ、ペグ化コンセンサスインターフェロンまたはペグ化精製インターフェロン−α製品を含む。ペグ化インターフェロンα−２ａは、欧州特許５９３,８６８(その全体を引用により本明細書に包含させる)に記載されており、例えば、PEGASYS(登録商標)(Hoffmann-La Roche)の商品名の下に市販されている。ペグ化インターフェロン−α−２ｂは、例えば欧州特許９７５,３６９(その全体を引用により本明細書に包含させる)に記載されており、例えばPEG-INTRON A(登録商標)(Schering Plough)の商品名の下に市販されている。ペグ化コンセンサスインターフェロンはＷＯ９６／１１９５３(その全体を引用により本明細書に包含させる)に記載されている。
【００２８】
(２)抗ウイルス剤
抗ウイルス剤は、哺乳動物中のウイルスの形成および／または複製の阻害に有効な化合物または生物である。これは、Valeant Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CAのリバビリン(１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−カルボキサミド、Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJのRebetol(登録商標)およびHoffmann-La Roche, Nutley, NJのCopegus(登録商標)、ValeantのLevovirinおよびViramidineような開発中のリバビリン類似体ならびにミゾルビン・モノホスフェートのような、哺乳動物中のウイルスの形成および／または複製に必要な宿主または機構をを妨害する薬剤を含む；
【００２９】
(３)プロテアーゼ阻害剤
ＨＣＶ  ＮＳ３−４Ａセリンプロテアーゼの阻害剤、例えばアルファケトアミドおよびヒドラジノウレアを含む、基質に基づいたプロテアーゼ阻害剤(Attwood et al., Antiviral peptide derivatives, PCT WO 98/22496, 1998; Attwood et al., Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999, 10, 259-273; Attwood et al, Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents, German Patent Pub. DE 19914474; Tung et al. Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus NS3 protease; PCT WO 98/17679)およびボロン酸またはホスホネートのような親電子基で終わる阻害剤(Llinas-Brunet et al. Hepatitis C inhibitor peptide analogus, PCT WO 99/07734)；
ＨＣＶの処置に関して米国特許で開示のプロテアーゼ阻害剤、例えば、ＨＣＶエンドペプチダーゼ２を阻害するシステインプロテアーゼ阻害剤のクラスを開示するSpruce et alの米国特許６,００４,９３３；Ｃ型肝炎ウイルスＮＳ３プロテアーゼの合成阻害剤を開示するZhang et alの米国特許５,９９０,２７６；Reyes et al.の米国特許５,５３８,８６５；Corvas International, Inc.のＷＯ０２／００８２５１、ならびにSchering CorporationのＷＯ０２／０８１８７およびＷＯ０２／００８２５６に開示のＨＣＶのＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤としてのペプチド；Boehringer Ingelheimの米国特許６,５３４,５２３、６,４１０,５３１および６,４２０,３８０ならびにBristol Myers SquibbのＷＯ０２／０６０９２６に開示のＨＣＶ阻害剤トリペプチド(引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる)；Schering CorporationのＷＯ０２／４８１７２に開示のＨＣＶのＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤としてのジアリールペプチド；Schering CorporationのＷＯ０２／１８１９８およびBristol Myers SquibbのＷＯ０２／４８１５７に開示のＨＣＶのＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤としてのイミダゾリジノン(引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる)；Vertex PharmaceuticalsのＷＯ９８／１７６７９およびBristol Myers SquibbのＷＯ０２／４８１１６はまたＨＣＶプロテアーゼ阻害剤もまた開示する(引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる)。
【００３０】
(４)基質に基づかないＮＳ３プロテアーゼ阻害剤、例えばRD3-4082およびRD3-4078を含む２,４,６−トリヒドロキシ−３−ニトロ−ベンズアミド誘導体(Sudo K. et al., Biochemiscal and Biophysical Research Communications, 1997, 238 643-647;Sudo K. et al. Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 1998, 9, 186)；
【００３１】
(５)ストレプトマイセス属の発酵培地から単離されたＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーアッセイでプロテアーゼに対する活性を有するフェナントレンキノン、Sch 68631 (Chu M et al., Tetrahedron Letters 37:7229-7232, 1996)；真菌ペニシリウム・グリセオフルバムから単離されたSch 351633(Chu M. et al., BioorganicおよびMedicinal Chemistry Letters 9:1949-1952)；ヒルから単離され、S. griseusプロテアーゼＡおよびＢ、∀−キモトリプシン、キマーゼおよびサブチリシンのような数種のセリンプロテアーゼの強力な阻害剤である巨大分子eglin c.に基づいて設計された選択的阻害剤(Qasim M.A. et al., Biochemistry 36:1598-1607, 1997)。
【００３２】
(６)Kakiuchi N. et al. J. FEBS Letters 421, 217-220；Takeshita N. et al. Analytical Biochemistry, 1997, 247, 242-246おいて同定されたチアゾリジンおよびベンズアニリド。ＮＳ３／４Ａ融合タンパク質およびＮＳ５Ａ／５Ｂ基質での逆相ＨＰＬＣアッセイで関連する阻害を示すチアゾリジン誘導体(Sudo K. et al., Antiviral Research, 1996, 32, 9-18)。とりわけとりわけ長アルキル鎖で置換された縮合シンナモイル部分を有する化合物化合物RD-16250、RD4 6205およびRD4 6193。
【００３３】
(７)Boehringer IngelheimのBILN 2061、VertexのVX-950、Schering-PloughのSCH-6、SCH-7およびSCH-351633を含むＨＣＶ  ＮＳ３−４Ａセリンプロテアーゼ阻害剤ならびにGlaxoSmithKline、Bristol Myers Squibb、Abbot、Roche、Merck、PfizerおよびGileadにより開発中の前臨床および臨床試験中の他のＨＣＶプロテアーゼ阻害剤；
【００３４】
(８)ヌクレオシド類似体
Idenixのテルビブジン(ＵＳ６４４４６５２、ＵＳ６５９６７００、およびＷＯ０１９６３５３)
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼのヌクレオシドまたは非ヌクレオシド阻害剤、例えばＷＯ２００４／００２４２２に記載の２'−Ｃ−メチル−３'−Ｏ−Ｌ−バリンエステルリボフラノシルシチジン(NM283, Idenix)。
【００３５】
分枝ヌクレオシドは、Idenix Pharmaceuticalによりフラビウイルス(ＨＣＶを含む)の、および国際公開ＷＯ０１／９０１２１およびＷＯ０１／９２２８２でペスチウイルスの処置における使用が記載されている(引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる)。具体的に有効量の生物学的に活性な１’、２’、３’または４’−分枝Ｂ−ＤまたはＢ−Ｌヌクレオシドまたはそれらの薬学的に許容される塩またはプロドラッグを投与投与することを含む(単独で、または他の抗ウイルス剤と共に、所望により薬学的に許容される担体中で投与する)、ヒトおよび他の宿主動物におけるＣ型肝炎感染症(およびフラビウイルスおよびペスチウイルス)の処置法が、Idenixの公報に開示されている。
【００３６】
Ｃ型肝炎ウイルスの処置への使用を開示した他の特許出願におけるヌクレオシド類似体は下記を含む：BioChem Pharma, Inc.(現在Shire Biochem, Inc.)が出願したＰＣＴＣＡ００／０１３１６(ＷＯ０１／３２１５３；２０００年１１月３日出願)およびＰＣＴ／ＣＡ０１／００１９７(ＷＯ０１／６０３１５；２００１年２月１９日出願)；Merck & Co., Inc.が出願したＰＣＴ／ＵＳ０２／０１５３１(ＷＯ０２／０５７４２５；２００２年１月１８日出願)およびＰＣＴ／ＵＳ０２／０３０８６(ＷＯ０２／０５７２８７；２００２年１月１８日出願)、Rocheが出願したＰＣＴ／ＥＰ０１／０９６３３(ＷＯ０２／１８４０４；２００１年８月２１日公開)、およびPharmasset, Ltd. のＰＣＴ公開ＷＯ０１／７９２４６(２００１年４月１３日出願)、ＷＯ０２／３２９２０(２００１年１０月１８日出願)およびＷＯ０２／４８１６５(これらの開示は引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる)
【００３７】
Emory Universityの発明の名称“２'−フルオロヌクレオシド”であるＰＣＴ公開ＷＯ９９／４３６９１に開示の２'−フルオロヌクレオシド；
Eldrup et al. (Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16th International Conference on Antiviral Research (April 27, 2003, Savannah, GA))により開示の２’−修飾ヌクレオシド；
(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16th International conference on Antiviral Research (April 27, 2003, Savannah, Ga); p A75)に開示のヌクレオシド類似体および２’−修飾ヌクレオシド；
Olsen et al. (Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16th International Conference on Antiviral Research (April 27, 2003, Savannah, Ga)p A76)に開示の２’−修飾ヌクレオシド
R803(Rigel)、JTK-003(日本たばこ)、HCV-086(ViroPharma/Wyeth)、R-1479(Roche)を含む、前臨床化合物；
【００３８】
(９)ヌクレオチドポリメラーゼ阻害剤およびグリオトキシン(Ferrari R. et al. Journal of Virology, 1999, 73, 1649-1654)、および天然産物セルレニン(Lohmann V. et al. Virology, 1998, 249, 108-118)；
【００３９】
(１０)ＨＣＶ  ＮＳ３ヘリカーゼ阻害剤、例えばViroPhamaのVP_50406およびVertexの化合物、米国特許５,６３３,３８８およびＰＣＴ  ＷＯ９７／３６５５４に開示の他のヘリカーゼ阻害剤；
【００４０】
(１１)ＨＣＶゲノムまたはウイルス複製に必要な何らかの細胞性成分に対するアンチセンス分子。
ウイルスの５'非コード領域(ＮＣＲ)の配列伸張に相補的なアンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド(Ｓ−ＯＤＮ)(Alt M. et al., Hepatology, 1995, 22, 707-717)、またはＮＣＲの３'末端を含むヌクレオチドおよびＨＣＶ  ＲＮＡのコア・コード領域に位置するヌクレオチド３７１−３８８(Alt M. et al., Archives of Virology, 1997, 142, 589-599; Galderisi U. et al., Journal of Cellular Physiology, 199, 181, 251-257)；例えばIsis Pharm/ElanのISIS 14803、Hybridon、AVI bioPharmaおよび中外のアンチセンスオリゴヌクレオチド、AVI-4065(AVI BioPharma)または治療の効果を高める、ＨＣＶゲノムの任意の部分に相補的なアンチセンス配列；
【００４１】
(１２)ＩＲＥＳ依存翻訳の阻害剤(特開平８−２６８８９０、池田信ら、Ｃ型肝炎の予防・治療剤;特開平１０−１０１５９１、甲斐康信ら、ウイルス感染症の予防・治療剤)；例えば、Isis Pharm/ElanのISIS 14803、PTC Therapeutics、Anadys、Immusol、RiboTargetsおよびSomaGenicsのＩＲＥＳ阻害剤；
【００４２】
(１３)リボザイム、例えば、ヌクレアーゼ抵抗性リボザイム(Maccjak, D.J. et al., Hepatology 1999, 30, abstract 995)およびBarber et al.の米国特許６,０４３,０７７、およびDraper et al.の米国特許５,８６９,２５３および５,６１０,０５４(引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる)、例えば、RPIのHEPTAZYME、およびSirna Therapeutics Inc.；
【００４３】
(１４)ウイルス侵入、集合および成熟を含む、ＨＣＶライフサイクル中の他の標的の阻害剤、例えばCelgosivir(MBI 3253)、Migenixの糖タンパク質処理阻害剤、Trimerisの融合阻害剤、AchillionのACH-0137171；
【００４４】
(１５)免疫調節剤。
受容体アゴニスト、例えばAnadysのANA245、ANA971、ANA975(ＵＳ５０４１４２６、４８８０７８４)を含むtoll様受容体(；ＴＬＲ’)アゴニスト；CpG-10101 TLR-9アゴニスト(Coley Pharmaceuticals)；ＩＭＰＤＨ阻害剤、ミコフェノール酸、その塩またはプロドラッグ、ミコフェノール酸ナトリウムまたはミコフェノール酸モフェチル、またはMerimebodib(VertexのVX-497)；チモシン・アルファ−１(SciCloneのZadaxinまたはその組合せ)；SCV-07(SciClone)、Belerofon(Nautilusの改良型ＩＦＮ−α)；NABIのCIVACIR(Ｃ型肝炎免疫グロブリン)、またはＳ１Ｐ受容体アゴニスト、例えばＦＴＹ７２０または、例えばＥＰ６２７４０６Ａ１、ＥＰ７７８２６３Ａ１、ＥＰ１００２７９２Ａ１、ＷＯ０２／１８３９５、ＷＯ０２／７６９９５、ＷＯ０２／０６２６８、ＪＰ２００２３１６９８５、ＷＯ０３／２９１８４、ＷＯ０３／２９２０５、ＷＯ０３／６２２５２およびＷＯ０３／６２２４８(それらの開示を引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる)に記載の通り所望によりリン酸化しているその類似体；3M PharmaceuticalsのResiquimod[VML 600]、インターフェロン−αおよび他のサイトカインの強力なインデューサーであるイミキモド；
【００４５】
(１６)抗繊維形成剤、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、イマチニブ(Gleevac)、IndevusのIP-501、およびInterMuneのインターフェロン・ガンマ１ｂ、Intermune、Marnac、塩野義のPirfenidone(多機能：ＴＧＦベータ・アゴニスト、ＦＧＦアンタゴニスト、ＰＤＧＦアンタゴニスト)；
【００４６】
(１７)Intercell(治療的ペプチドワクチンIC41 HCV)、Epimmune/Genecor、Merix、Tripep(Chiron-VacC)の治療的ワクチン、Avantの免疫治療(Therapore)、CellExSysのＴ細胞治療、STLのモノクローナル抗体XTL-002、AnadysのANA 246およびANA 246、InnogeneticsのＥ２を指向する治療的ワクチン、XTL BioのＥ２エンベロープタンパク質に対するｍＡｂ, GI-5005(GlobeImmune Inc)、InnoVac-C(WO9967285, Innogenetics)、ＩＣ−４１(Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌ)、インターフェロン・アルファ−ｎ３(Interferon Sciences)、Engerix B(SmithKline Beecham)；
【００４７】
(１８)Ursodiol(EP00269516, Axcan Pharma)、HE-2000(ＤＨＥＡ類似体、Colthurst Ltd)、ＥＨＣ−１８(免疫調節剤、Enzo biochem)、ヒスタミンジヒドロクロライド(Ｈ２アゴニスト、ＷＯ０９１０４０３７、Estero-Anstalt)、１−アミノ−アルキルシクロヘキサン(米国特許６,０３４,１３４)、アルキル脂質(米国特許５,９２２,７５７)、ビタミンＥおよび他の抗酸化剤(米国特許５,９２２,７５７)、胆汁酸(米国特許５,８４６,９９９６４)、Ｎ−(ホスホノアセチル))−Ｌ−アスパラギン酸)(米国特許５,８３０,９０５)、ベンゼンジカルボキサミド(米国特許５,６３３,３８８)、ポリアデニル酸誘導体(米国特許５,４９６,５４６)、２’３’−ジデオキシイノシン(米国特許５,０２６,６８７)、ベンゾイミダゾール(米国特許５,８９１,８７４)、植物抽出物(米国特許５,８３７,２５７、米国特許５,７２５,８５９および米国特許６,０５６,９６１)およびピペリジン(米国特許５,８３０,９０５)；Ｎ−(ホスホノアセチル)−Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンジカルボキサミド、ポリアデニル酸誘導体、グリコシル化阻害剤、およびウイルス感染症が原因の細胞損傷を阻止する非特異的細胞保護剤；
【００４８】
(１９)インターロイキン−１０(Schering-Plough)、Endo Labs Solvayのアマンタジン(Symmetrel)、Idun Pharmaのカスパーゼ阻害剤IDN-6556、ChironのＨＣＶ／ＭＦ５９、MaximのCEPLENE(ヒスタミンジクロライド)、Idun PHARMのIDN-6556、Ｔ６７、Tularikのベータ−チューブリン阻害剤、Fujisawa HealthcareのFK788、IdB1016(Siliphos、経口シリビン−ホスファチジルコリンフィトソーム)、Immtechのジカチオン、Aethlon Medicalのhemopurifier、United TherapeuticsのUT 231B；BayerのHepeX-C SM1、PPVO-Bay55-8800(Parapoxvirus ovis)；AngionのRefanalin(ＨＧＦ摸倣体)、R803(Rigel)、JTK-003、JTK-002、およびJTK-109(全て日本たばこ)、HCV-086(ViroPharma/Wyeth)、ISIS-14803(ISIS Pharmaceuticals)、GS-9132(Achillion Pharmaceuticalsのポリメラーゼ阻害剤)、HCV-793(PharmassetおよびRoche)、R1626(Roche)を含む、ＨＣＶの処置のために現在前臨床または臨床開発中の全ての他の化合物。
前臨床開発中の化合物または薬剤は、例えば、インターネット上の臨床試験情報の検索により、および各社のプレスリリース情報により、当業者には容易に同定できる。
【００４９】
(２０)抗葉酸、５−フルオロピリミジン(５−フルオロウラシルを含む)、β−Ｌ−１,３−ジオキソラニルシチジンまたはβ−Ｌ−１,３−ジオキソラニル５−フルオロシチジンのようなシチジン類似体、代謝拮抗剤(プリン代謝拮抗剤、シタラビン、フルダラビン、フロクスウリジン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、および６−チオグアニンを含む)、ヒドロキシウレア、有糸分裂阻害剤(CPT-11、エトポシド(VP-21)、タキソール、およびビンクリスチンおよびビンブラスチンのようなビンカアルカロイドを含む)、アルキル化剤(ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスアミド、メクロレタミン、メルファラン、およびチオテパを含むが、これらに限定されない)、非古典的アルキル化剤、白金含有化合物、ブレオマイシン、抗腫瘍抗生物質、ドキソルビシンおよびダウノマイシンのようなアントラサイクリン、アントラセンジオン、トポイソメラーゼII阻害剤、ホルモン剤(コルチコステロイド(デキサメサゾン、プレドニゾン、およびメチルプレドニゾン)、フルオキシメステロンおよびメチルテストステロンのようなアンドロゲン、ジエチルスチベステロールのようなエストロゲン、タモキシフェンのような抗エストロゲン、リュープロリドのようなＬＨＲＨ類似体、フルタミド、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール、およびメドロキシプロゲステロンのような抗アンドロゲンを含むが、これらに限定されない)、アスパラギナーゼ、カルムスチン、ロムスチン、ヘキサメチル−メラミン、ダカルバジン、ミトタン、ストレプトゾシン、シスプラチン、カルボプラチン、レバミソール、およびロイコボリンを含む、組み合わせ治療の効果を高める化合物。本発明の化合物はまた、酵素治療剤ならびにインターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、マクロファージ−コロニー刺激因子およびコロニー刺激因子のような免疫系調節剤と組み合わせても使用できる。
【００５０】
上記に具体的に記載した疾患および状態の処置における非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン(以後“本発明のサイクロスポリン”)の有用性は、例えば、下記の方法に従った、標準動物試験または臨床試験において証明できる。
【実施例】
【００５１】
実施例１  インビトロアッセイ：
細胞培養：ＨＣＶレプリコン細胞系、クローンＡをApath, LLCから得る。本細胞を１０％熱不活性化ウシ胎児血清(ＦＢＳ、Gibco)、２mM  Ｌ−グルタミン、１×非必須アミノ酸(Gibco)、および１mg／ml  Ｇ４１８(Invitrogen, Carlsbad, CA)を含むダルベッコ改変イーグル培地(ＤＭＥＭ、Gibco)で培養する。
【００５２】
ＨＣＶレプリコン細胞系、Ｈｕｈ−Ｌｕｃ／ｎｅｏ−ＥＴをReBlikon GmbHから得る。本細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清(ＦＢＳ、Gibco)、２mM  Ｌ−グルタミン、１×非必須アミノ酸(Gibco)、および０.２５mg／ml  Ｇ４１８(Invitrogen, Carlsbad, CA)を含むダルベッコ改変イーグル培地(ＤＭＥＭ、Gibco)で培養する。
【００５３】
ＱＲＴ−ＰＣＲベースのＨＣＶレプリコンアッセイ：化合物の抗ウイルス効果を決定するために、ＨＣＶレプリコン細胞クローンＡを、２％ＦＢＳおよび０.５％ＤＭＳＯを補ったＤＭＥＭで連続的に希釈した化合物で４８時間処理し、次いで総細胞内ＲＮＡを抽出し、ＨＣＶ  ＲＮＡのレベルを、ＨＣＶ特異的プライマー(5’-TCT TCA CGC AGA AAG CGT CTA-3'および5’-CTG GCA ATT CCG GTG TAC T-3’(配列番号１)およびプローブ(5’-6-FAM-TCC TGG AGG CTG CAC GAC ACT CAT A-TAMRA-3’)(配列番号２)を使用した実時間定量的ＲＴ−ＰＣＲ(Taqman)により決定する。各処置に関して、ＨＣＶ  ＲＮＡの量を、Quant-iTアッセイ(Molecular Probe)で測定した抽出した総ＲＮＡに対して標準化する。各データ点は細胞培養の６反復の平均を示す。ＩＣ５０は、レプリコン細胞のＨＣＶ  ＲＮＡレベルが５０％減少する化合物の濃度である。化合物の細胞毒性作用をモニターするために、４８時間化合物処置後のレプリコン細胞の生存能を、テトラゾリウム化合物(ＭＴＳ)ベースのアッセイ(CellTiter 96(登録商標)  AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega, Madison, WI)を使用して決定する。ＣＣ５０は、細胞生存能が５０％減少する化合物の濃度である。
【００５４】
ルシフェラーゼベースのＨＣＶレプリコンアッセイ：ＨＣＶレプリコン細胞系Ｈｕｈ−Ｌｕｃ／ｎｅｏ−ＥＴにおいて、ルシフェラーゼ発現はＨＣＶ  ＲＮＡ複製および翻訳の制御下にあり、故に、抗ウイルス活性は、細胞中のルシフェラーゼ活性の減少の測定により決定できる。ＨＣＶレプリコン細胞(Ｈｕｈ−Ｌｕｃ／ｎｅｏ−ＥＴ)を、１０％ＦＢＳおよび０.５％ＤＭＳＯを補ったＤＭＥＭで連続的に希釈した化合物で４８時間処理する。次いで、ルシフェラーゼ活性をBrightGlo試薬(Promega)およびLMaxIIプレートリーダー(Molecular Probe)を使用して決定する。化合物の細胞毒性を、上記のテトラゾリウム化合物(ＭＴＳ)ベースのアッセイを使用して評価する。
【００５５】
実施例２  組み合わせ分析
薬剤−薬剤組み合わせの効果を、Prichard, M. N. and Shipman, C, 1999, Antivir. Res. 14:181-205により開発された三次元分析法であるBliss Independenceモデルを使用して分析する。このモデルにおいて、理論的相加効果を、式：Ｚ＝Ｘ＋Ｙ(１−Ｘ)(式中、ＸおよびＹは、各々薬剤１または薬剤２単独が産生する効果を示し、そしてＺは薬剤１と薬剤２の組み合わせが産生する効果を示す)を使用して、個々の化合物の用量−応答曲線から計算する。理論的相加面を実際の実験面から減算し、組み合わせが単に相加であるならば０％阻害で水平面として見えるであろう面をもたらす。実験的用量応答面の９５％信頼区間をデータを統計学的に評価するために使用する。
【００５６】
組み合わせ処置の効果の分析を、９日間ウイルスＲＮＡ減少アッセイを使用して試験する。ＨＣＶレプリコン細胞クローンＡを、１０％ＦＢＳおよび０.２％ＤＭＳＯを補ったＤＭＥＭ中の化合物で３日間、６日間、または９日間処理し、次いで総細胞内ＲＮＡを抽出し、ＨＣＶ  ＲＮＡのレベルを、上記のＨＣＶ特異的プライマーおよびプローブを使用して、実時間定量的ＲＴ−ＰＣＲ(Taqman)により決定する。各処置について、ＨＣＶ  ＲＮＡの量を、Quant-iTアッセイ(Molecular Probe)で測定した抽出した総ＲＮＡに対して標準化する。ＨＣＶ  ＲＮＡの対数減少(log reduction)を、化合物処置細胞と未処置細胞のＨＣＶ  ＲＮＡのレベルの比較により計算する。
【００５７】
ＮＩＭ８１１([ＭｅＩｌｅ]４−サイクロスポリン)とＩＦＮ−αの組み合わせの効果を、上記のアッセイ系および数学モデルを使用して試験する。ＨＣＶレプリコン細胞を、種々の濃度のＮＩＭ８１１およびＩＦＮ−αいずれか単独または組み合わせで４８時間処理する。図１Ａに示す通り、本組み合わせで、用量依存的方法でＨＣＶが強く阻害される。重要なことに、試験した濃度で組み合わせを使用して、細胞毒性の有意な増加はない。
【００５８】
他の態様において、ＢＩＬＮ２０６１はＨＣＶ  ＮＳ３−４Ａセリンプロテアーゼの特異的阻害剤である(Lamarre D, et al. 2003. Nature 426:186)。ＮＩＭ８１１とＢＩＬＮ２０６１の組み合わせの効果を、上記のアッセイ系および数学モデルを使用して試験する。ＨＣＶレプリコン細胞を、種々の濃度のＮＩＭ８１１およびＢＩＬＮ２０６１いずれか単独または組み合わせで４８時間処理する。図１Ｂに示す通り、本組み合わせで、用量依存的方法でＨＣＶが強く阻害される。重要なことに、試験した濃度で組み合わせを使用して、細胞毒性の有意な増加はない。
【００５９】
ＬＣＱ９７１はＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤である(WO-00185172, WO-02098424, WO-03059356, Dhanak D. et al. 2002. J. Biol. Chem. 277:38322-7)。ＮＩＭ８１１とＬＣＱ９７１の組み合わせの効果を本レプリコン系で試験し、そこで、細胞を種々の濃度のＮＩＭ８１１およびＬＣＱ９７１いずれか単独または組み合わせで４８時間処理する。図１Ｃに示す通り、２剤を組み合わせて使用したとき、用量依存的方法で、ＨＣＶがさらに阻害される。本組み合わせの効果は、Bliss Independenceモデルを使用して分析して相乗的であると決定される。重要なことに、試験した濃度で組み合わせを使用して、細胞毒性の有意な増加はない。
【００６０】
ヌクレオシド類似体であるＮＭ１０７は、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの特異的阻害剤である。ＮＭ１０７はＮＭ２８３の活性代謝物であり、現在Ｃ型肝炎処置の臨床試験の第II相にある治験薬である。ＮＩＭ８１１とＮＭ１０７の組み合わせの効果を本レプリコン系で試験し、そこで、細胞を種々の濃度のＮＩＭ８１１およびＮＭ１０７いずれか単独または組み合わせで４８時間処理する。図１Ｄに示す通り、２剤を組み合わせて使用したとき、用量依存的方法で、ＨＣＶがさらに阻害される。本組み合わせの効果は、Bliss Independenceモデルを使用して分析して相乗的であると決定される。重要なことに、試験した濃度で組み合わせを使用して、細胞毒性の有意な増加はない。
【００６１】
図２Ａに示す通り、０.５μM  ＮＩＭ８１１は９日間の処置後レプリコン細胞中のＨＣＶ  ＲＮＡの１.２−log減少をもたらし、一方、１μM  ＮＩＭ８１１は３−logを超えるウイルスＲＮＡ減少をもたらす。重要なことに、０.５μM  ＮＩＭ８１１と５Ｕ／ml  ＩＦＮ−αの組み合わせは、ＨＣＶ  ＲＮＡの２.７−log減少をもたらし、これは０.５μM  ＮＩＭ８１１単独または５Ｕ／ml  ＩＦＮ−α単独(１.２−log)よりも有意に良い。さらに、０.５μM  ＮＩＭ８１１と２０Ｕ／ml  ＩＦＮ−αの組み合わせはＨＣＶ  ＲＮＡの３.７−logをもたらし、これはさらに高濃度のＩＦＮ−α単独またはＮＩＭ８１１単独よりも高い。
【００６２】
同様に図２Ｂに示す通り、ＮＩＭ８１１とＨＣＶ  ＮＳ３−４Ａプロテアーゼ特異的阻害剤であるＢＩＬＮ２０６１の組み合わせは、高濃度のＢＩＬＮ２０６１単独またはＮＩＭ８１１単独よりも大きなウイルスＲＮＡ減少をもたらす。
【００６３】
実施例３  耐性頻度分析
ＨＣＶレプリコン細胞クローンＡを種々の濃度のＮＩＭ８１１およびＢＩＬＮ２０６１いずれか単独または組み合わせで、１mg／ml  Ｇ４１８存在下処理する。耐性コロニーが、細胞をＢＩＬＮ２０６１で処理後２週間で形成し始める。処理３週間後に回収した細胞培養は図３に示す通りである。耐性コロニーの数も示す。ＮＩＭ８１１およびＢＩＬＮ２０６１の組み合わせで、いずれかの化合物単独よりも耐性の割合が劇的に減少する。このデータは、組み合わせ治療が耐性の出現の抑制を助けることを示唆する。
【００６４】
実施例４  臨床試験：
概念証明試験として、全１５〜３０名のＣ型肝炎ウイルス感染症の患者が、２〜１２週間の試験に参加する。各患者に、式Ｉの化合物、例えば[ＭｅＩｌｅ]４−サイクロスポリンを、０.５〜２０mg／kg／日の用量で単独で、または標準用量のペグ化ＩＦＮ−αのような併用剤と共に経口投与する。Ｃ型肝炎ウイルスの処置前および処置後の血清レベルを各患者について決定する。本発明のサイクロスポリンは、唯一の成分として、または、他の抗ウイルス剤、とりわけＨＣＶに対して活性の薬剤との組み合わせて、またはそれと交互に投与してよい。組み合わせ治療では、２種以上の薬剤の有効量を一緒に投与するが、交互または連続工程治療では、各薬剤の有効量を連続的または断続的に投与する。一般に、組み合わせ治療が、それがウイルスに対して複数の負荷を同時にかけるため、交互治療よりも典型的に好ましい。投与する量は、薬剤の吸収、不活性化および排泄速度ならびに当業者に既知の他の因子に依存する。投与量はまた緩解すべき状態の重症度により変化することも注意すべきである。任意の特定の対象に関して、具体的な投与レジメンおよびスケジュールを、個々の必要性に従い経時的に調節すべきであり、そして組成物を投与するまたは投与を監督する者の専門的判断に従い調節すべきであることはさらに理解されよう。ウイルス感染に対する薬剤の効果は、薬剤耐性ウイルスにおいて主薬剤によりもたらされるものと異なる変異を誘発する第二の、そしておそらく第三の抗ウイルス化合物との組み合わせまたは交互の投与により延長でき、増強でき、または回復し得る。あるいは、薬剤の薬物動態学、生体内分布または他のパラメータが、このような組み合わせまたは交互の治療により変化し得る。
【００６５】
本発明の方法の実施にサイして必要な１日量は、例えば、用いる非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、宿主、投与形態、処置すべき状態の重症度に依存して変化する。患者への[ＭｅＩｌｅ]４−サイクロスポリンの適当な１日量は、例えば０.５〜２０mg／kg(ｐ.ｏ.またはｉ.ｖ.)、好ましくは１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に２５−７５mg／日、７５−２００mg／日、最も好ましくは２００−４００mg／日の程度である。投与形態中の併用剤の量は、例えば、０.００００１〜１０００mg／kg活性成分で大きく変化し得る。
【００６６】
使用する併用剤の１日は、例えば、用いる化合物、宿主、投与形態、処置すべき状態の重症度に依存して変化する。例えば、ペグ化インターフェロンは、非経腸的に、１週間に１〜３回、例えば１週間に１回、２,０００,０００〜１０,０００,０００ＩＵ、または５,０００,０００〜１０,０００,０００ＩＵ、または８,０００,０００〜１０,０００,０００ＩＵの範囲の１週間の総量で投与し得る。使用できる併用剤が多様であるため、用量は、例えば、０.０００１〜５,０００mg／kg／日の範囲で大きく変化し得る。
【００６７】
Ｃ型肝炎の現在の処置の標準的治療はペグ化インターフェロン・アルファとリバビリンの組み合わせであり、その推奨用量は、遺伝子型Ｉの患者については、４８週間１.５μg／kg／週  ペグインターフェロン・アルファ−２ｂまたは１８０μg／週  ペグインターフェロン・アルファ−２ａと毎日１,０００〜１,２００mgのリバビリン、または遺伝子型２／３の患者については２４週間毎日８００mgのリバビリンを含む。
【００６８】
本発明のサイクロスポリンは任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口で、例えば飲用液、錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば注射用溶液または懸濁液の形で投与できる。好ましい医薬組成物は、例えばＵＫ２,２２２,７７０Ａに記載の通りのマイクロエマルジョンに基づくものである。
【００６９】
前記によって、本発明は下記のさらに別の局面を提供する：
４.  ａ)非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンである第一剤、例えば式Ｉの化合物、およびｂ)併用剤、例えば上記で定義の１種以上の併用剤を含む医薬組み合わせ剤。
【００７０】
５.  治療的有効量の非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリン、例えば式Ｉの化合物、および併用剤、例えば上記で定義の１種以上の併用剤を、例えば同時にまたは連続的に共投与することを含む、上記で定義の方法。
【００７１】
ここで使用する用語“共投与”または“組み合わせ投与”などは、選択した複数の治療剤を一人の患者に投与することを含むことを意味し、薬剤が必ずしも同じ経路でまたは同じ時間に投与されるものではない処置レジメンを含むことを意図する。固定された組み合わせ剤もまた本発明の範囲内である。本発明の医薬組み合わせ剤の投与は、その薬学的に活性な成分の一方のみを適用する単剤療法と比較して、有益な効果、例えば、例えば相乗的または相加的血量効果をもたらす。相乗的組み合わせの例は、非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンとＩＦＮ−αの組み合わせである。
【００７２】
[ＭｅＩｌｅ]４−サイクロスポリン(ＮＩＭ８１１)は、本発明に従い使用するための適当な非免疫抑制性シクロフィリン結合性サイクロスポリンの例である。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】本発明のサイクロスポリン(ＮＩＭ８１１)および(Ａ)インターフェロン−α、(Ｂ)ＢＩＬＮ２０６１、(Ｃ)ＬＣＱ９７１または(Ｄ)ＮＭ１０７を使用した組み合わせ処置の効果を説明する。
【図２】ＮＩＭ８１１単独または(Ａ)インターフェロン−αまたは(Ｂ)ＢＩＬＮ２０６１との組み合わせの処置による細胞複製の減少の比較を説明する。
【図３】ウイルスＲＮＡに対するＮＩＭ８１１とＢＩＬＮ２０６１の組み合わせの阻害効果を説明する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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