(57)【要約】  ヒト癌抑制遺伝子、そこにコードされるタンパク質、その遺伝子を含む発現ベクター、およびそのベクターによって形質転換された微生物が開示される。本発明の遺伝子は、ヒトの癌を診断および予防するために有用であり得る。
2008525046.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２；配列番号６；配列番号１０；配列番号１４；配列番号１８；配列番号２２；配列番号２６；配列番号３０；配列番号３４；配列番号３８；配列番号４２；配列番号４６；配列番号５０；配列番号５４；及び配列番号５８から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質。
【請求項２】
ヒト癌抑制遺伝子が、各々が前記タンパク質をコードする配列番号１；配列番号５；配列番号９；配列番号１３；配列番号１７；配列番号２１；配列番号２５；配列番号２９；配列番号３３；配列番号３７；配列番号４１；配列番号４５；配列番号４９；配列番号５３；及び配列番号５７から成る群より選択されるＤＮＡ配列において定義される、請求項１に記載のヒト癌抑制遺伝子。
【請求項３】
前記癌が肺、心臓、筋肉、腎臓、子宮、乳房、および肝臓から成る群より選択される正常組織に由来する、請求項１に記載のヒト癌抑制タンパク質。
【請求項４】
前記癌が肺、心臓、筋肉、腎臓、子宮、乳房、および肝臓から成る群より選択される正常組織に由来する、請求項２に記載のヒト癌抑制遺伝子。
【請求項５】
請求項２に定義される前記遺伝子の各々を含む発現ベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト癌抑制遺伝子、そこにコードされるタンパク質、およびその遺伝子を含む発現ベクターに関する。
【０００２】
背景技術
腫瘍抑制遺伝子生成物は、正常細胞が特定の癌細胞に形質転換しることを抑制するように機能し、それにより、腫瘍抑制遺伝子生成物のこの機能の喪失は、正常細胞が悪性の形質転換体になることを可能にする（Klein, G., FASEB J, 7, 821-825(1993)）。癌細胞が癌に成長することを可能にするために、細胞は、正常なコピー数の腫瘍抑制遺伝子を制御する機能を喪失することになる。ｐ５３腫瘍抑制遺伝子のコード配列の修飾は、ヒトの癌における最も一般的な遺伝的変化の１つであることがわかった（Bishop, J.M., Cell, 64, 235-248(1991); およびWeinberg, R.A., Science, 254, 1138-1146(1991)）。しかし、報告されたｐ５３変異は子宮頸部癌の２〜１１％の範囲にすぎなかったことから、子宮頸部癌組織のあるもののみがｐ５３変異を示したと推定された（Crook, T. et al., Lancet, 339, 1070-1073(1992)；およびBusby-Earle, R.M.C. et al., Br. j. Cancer, 69, 732-737(1994)）。
【０００３】
一方では、非小細胞肺癌および小細胞肺癌におけるｐ５３腫瘍抑制遺伝子の変異の頻度は、それぞれ、肺癌の約５０％および７０％に達したことが報告された（Takahashi, T. et al, Science, 246, 491-494 1989; Bodner, S.M. et al, Oncogene, 7, 743-749(1992); Mao, L. Lung Cancer, 34, S27-S34(2001)）。喫煙は、肺癌の発生および進行における最も決定的な要因の１つであり、他の腫瘍抑制遺伝子および癌遺伝子は、ｐ５３とともにこれらの変異と関連する（Osada, H. & Takahashi, T. Oncogene, 21, 7421-7434(2002)）。
【０００４】
また、報告されたｐ５３変異は乳癌の３０％の範囲においてであったことから、乳癌組織のあるもののみがｐ５３変異を示したと推定された（Keen, J.C. & Davidson, N. E., Cancer, 97, 825-833(2003)) and Borresen-Dale, A-L., Human Mutation, 21, 292-300(2003)）。
【０００５】
したがって、本発明者らは、肺、子宮頸部、および乳房などの正常組織と、肺癌、子宮頸部癌、および乳癌などの癌組織の間でディファレンシャルに発現した遺伝子を効率的に表示するためのｍＲＮＡディファレンシャルディスプレイ（ＤＤ）を使用して、肺、子宮頸部、および乳房などの正常組織から新規な腫瘍抑制遺伝子を分離することを熱心に試みてきた（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992); およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）。
【０００６】
発明の開示
したがって、本発明は、先行技術の問題を解決することを意図し、それにより、新規なヒト癌抑制遺伝子を提供することが本発明の目的である。
【０００７】
この癌抑制遺伝子によってコードされる癌抑制タンパク質を提供することが、本発明の別の目的である。
【０００８】
この癌抑制遺伝子を含む発現ベクターを提供することが、本発明のさらに別の目的である。
【０００９】
この発現ベクターで形質転換された細胞を提供することが、本発明のなお別の目的である。
【００１０】
上記の目的を達成するために、本発明は、配列番号１のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる増殖阻害遺伝子１；ＧＩＧ１とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１１】
また、本発明は、配列番号５のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる増殖阻害遺伝子３；ＧＩＧ３とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号６のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１２】
また、本発明は、配列番号９のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる増殖阻害遺伝子４；ＧＩＧ４とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１３】
また、本発明は、配列番号１３のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる増殖阻害遺伝子５；ＧＩＧ５とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１４】
また、本発明は、配列番号１７のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる増殖阻害遺伝子１１；ＧＩＧ１１とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１５】
また、本発明は、配列番号２１のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆるヒト移動誘導（migration-inducing）遺伝子２；ＭＩＧ２とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１６】
また、本発明は、配列番号２５のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆるヒト移動誘導遺伝子４；ＭＩＧ４とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号２６のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１７】
また、本発明は、配列番号２９のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆるヒト増殖誘導遺伝子１３；ＰＩＧ１３とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号３０のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１８】
また、本発明は、配列番号３３のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆるヒト増殖誘導遺伝子１５；ＰＩＧ１５とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号３４のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１９】
また、本発明は、配列番号３７のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆるヒト増殖誘導遺伝子８；ＰＩＧ８とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号３８のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００２０】
また、本発明は、配列番号４１のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる移動関連（migration-related）遺伝子１；ＭＲＧ１とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号４２のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００２１】
また、本発明は、配列番号４５のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆるヒト増殖誘導遺伝子２２；ＰＩＧ２２とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号４６のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００２２】
また、本発明は、配列番号４９のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる移動誘導遺伝子９；ＭＲＧ９とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号５０のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００２３】
また、本発明は、配列番号５３のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる移動誘導遺伝子１１；ＭＲＧ１１とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号５４のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００２４】
また、本発明は、配列番号５７のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（いわゆる移動誘導遺伝子１５；ＭＩＧ１５とも呼ばれる）を提供する。本発明は、配列番号５８のアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００２５】
他の目的を達成するために、本発明は、各々の癌抑制遺伝子を含む発現ベクターを提供する。
【００２６】
本発明の好ましい実施態様のこれらおよび他の特徴、局面、および利点は、添付の図面を参照して、上記の詳細な説明においてより完全に説明している。
本明細書において以下では、本発明を添付の図面を参照して詳細に説明する。
【００２７】
１．  ＧＩＧ１
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ２６８８９０で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号１のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子１（ＧＩＧ１）であり、寄託された遺伝子のあるＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿０００３９１でデータベースに寄託されたHomo sapiensセロイド脂褐素沈着症、神経細胞２、後期小児型（ヤンスキー−ビールショースキー病）（ＣＬＮ２）のＤＮＡ配列と同一である。
【００２８】
配列番号１のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の８００〜１７６２位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（１７６０〜１７６２位の塩基は終止コドンを表す）。
【００２９】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は３２０アミノ酸残基からなり、配列番号２のアミノ酸配列および約３４ｋＤａの分子量を有する。
【００３０】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号１に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する３８２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメント（３１０９〜３４９０位の塩基に対応する）が、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号３（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＣＡＧＴＧＣ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３８および配列番号４（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣ−３’）の固定（anchored）オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００３１】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、子宮、骨格筋、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約４．０ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約４．０ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて、約３．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、子宮癌組織および子宮癌細胞株などの癌組織および癌細胞においてわずかに発現し、またはそこでは検出されないが、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。
【００３２】
本発明の遺伝子が導入される子宮癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００３３】
２．  ＧＩＧ３
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７２１で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号５のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子３（ＧＩＧ３）であり、寄託された遺伝子のあるＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿００３８２４でデータベースに寄託されたHomo sapiensデスドメイン経由結合Ｆａｓ（ＴＮＦＲＳＦ６）（ＦＡＤＤ）のＤＮＡ配列と同一である。
【００３４】
配列番号５のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の１〜６２７位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（６２５〜６２７位の塩基は終止コドンを表す）。
【００３５】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は２０８アミノ酸残基からなり、配列番号６のアミノ酸配列および約２３ｋＤａの分子量を有する。
【００３６】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号５に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する１９０ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号７（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＴＴＧＣＡＡ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３２および配列番号８（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００３７】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、腎臓、および肝臓において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約１．３ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約４．０ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて、約０．７ｋｂのサイズを有する転写物もまた発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などの癌組織および癌細胞においてわずかに発現し、またはそこでは検出されないが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００３８】
３．  ＧＩＧ４
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７２２で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号９のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子４（ＧＩＧ４）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿００２８７０でデータベースに寄託されたＲＡＳ癌遺伝子ファミリーのメンバーであるHomo sapiens  ＲＡＢ１３のＤＮＡ配列と同一である。
【００３９】
しかし、以前に報告されたようなＲＡＢ１３の機能に反して、ＧＩＧ４腫瘍抑制遺伝子は肺癌を含む種々のヒト腫瘍においてわずかに発現したのに対して、その発現が種々の正常組織において有意に増加したことが本研究の結果からわかった。
【００４０】
配列番号９のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の２〜６１３位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（６１１〜６１３位の塩基は終止コドンを表す）。
【００４１】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は２０３アミノ酸残基からなり、配列番号１０のアミノ酸配列および約２３ｋＤａの分子量を有する。
【００４２】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号９に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では極めてわずかに発現するが正常組織においてディファレンシャルに増加して発現する１８７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号１１（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＡＧＧＧＣＡ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３５および配列番号１２（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００４３】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、腎臓、および肝臓において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約１．３ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などの癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに増加して発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００４４】
４．  ＧＩＧ５
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７２３で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号１３のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子３（ＧＩＧ３）であり、寄託された遺伝子のあるＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿０１４４１２でデータベースに寄託されたHomo sapiensカルサイクリン結合タンパク質（ＣＡＣＹＢＰ）、転写変異体１のＤＮＡ配列と同一である。
【００４５】
しかし、以前に報告されたようなＳＩＰの機能に反して、ＧＩＧ５腫瘍抑制遺伝子は肺癌を含む種々のヒト腫瘍においてわずかに発現したのに対して、その発現が種々の正常組織において有意に増加したことが本研究の結果からわかった。
【００４６】
配列番号１３のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の２〜６８８位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（６８６〜６８８位の塩基は終止コドンを表す）。
【００４７】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は２２８アミノ酸残基からなり、配列番号１４のアミノ酸配列および約２６ｋＤａの分子量を有する。
【００４８】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号１３に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する２１２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号１５（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３４および配列番号１６（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００４９】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、腎臓、および肝臓において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約１．２ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約１．２ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などの癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに増加して発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００５０】
５．  ＧＩＧ１１
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４５１２３６で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号１７のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子１１（ＧＩＧ１１）であり、寄託された遺伝子のあるＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＣＲ６１４６７９、ＢＣ０００６６６およびＡＦ１３２９６５でそれぞれデータベースに寄託されたHomo sapiens（ヒト）遺伝子の神経芽細胞腫Ｃｏｔ−正常化の全長ｃＤＮＡクローンＣＳ０ＤＤ００８ＹＧ１１、Homo sapiens（ヒト）遺伝子チオレドキシン−関連膜貫通タンパク質２遺伝子及びHomo sapiensＣＧＩ−３１蛋白質ｍＲＮＡのＤＮＡ配列と同一である。
【００５１】
配列番号１７のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の１６〜７６８位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（７６６〜７６８位の塩基は終止コドンを表す）。
【００５２】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は２５０アミノ酸残基からなり、配列番号１８のアミノ酸配列および約２９ｋＤａの分子量を有する。
【００５３】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号１７に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する２９８ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号１９（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＧＡＣＧＣＴ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３６および配列番号２０（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００５４】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、乳房、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、および肺において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約１．５ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、乳房癌組織、乳房癌細胞株ＭＣＦ−７などの癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに増加して発現する。
【００５５】
本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００５６】
６．  ＭＩＧ２
配列番号２１のＤＮＡ配列が米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ２３７６５４で寄託され（公開日：２００４年１２月３１日）、ＤＮＡ配列決定分析は、寄託された遺伝子のＤＮＡ配列が、両方ともアクセッション番号Ｄ４２０４３およびＮＭ＿Ｏ１５１５０  ＸＭ＿０４２８４１でデータベースに寄託されたHomo sapiens  ＫＩＡＡ００８４  ｍＲＮＡおよびHomo sapiens raft連結タンパク質（ＲＡＦＴＬＩＮ）のＤＮＡ配列と同一であること、ならびにその発現したアミノ酸配列もまた、Homo sapiens  ＫＩＡＡ００８４  ｍＲＮＡおよびHomo sapiens raft連結タンパク質（ＲＡＦＴＬＩＮ）のアミノ酸配列と類似することを示した。
【００５７】
配列番号２１のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の２７４〜２０１０位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（２００８〜２０１０位の塩基は終止コドンを表す）。
【００５８】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は５７８アミノ酸残基からなり、配列番号２２のアミノ酸配列および約６３ｋＤａの分子量を有する。
【００５９】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号２１に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する３１１ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメント（２６７１〜２９８１位の塩基に対応する）が、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号２３（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＡＧＧＧＣＡ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３５および配列番号２４（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００６０】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、子宮、心臓、骨格筋、腎臓、および肝臓において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約５．０ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、５．０ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、子宮癌組織および子宮癌細胞株などの癌組織および癌細胞においては、発現しないかまたはわずかに発現するが、正常子宮組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。
【００６１】
本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００６２】
７．  ＭＩＧ４
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ２６０７４５で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号２５のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＭＩＧ４）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿０００６８８でデータベースに寄託されたHomo sapiensアミノレブリン酸，デルタ−，シンターゼ１（ＡＬＡＳ１）、転写変異体１遺伝子のＤＮＡ配列と類似していることが明らかにされた。
【００６３】
配列番号２５のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の３２２〜２２４４位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（３２０〜３２２位の塩基は終止コドンを表す）。
【００６４】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は６４０アミノ酸残基からなり、配列番号２６のアミノ酸配列および約７０ｋＤａの分子量を有する。
【００６５】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号２５に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する３２２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメント（１９０８〜２２２９位の塩基に対応する）が、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号２７（５’−ＡＡＧＣＴＴＧＧＴＧＡＡＣ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３１および配列番号２８（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００６６】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、子宮、心臓、骨格筋、大腸、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、肺および末梢血白血球において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約０．５ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、０．５ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、子宮癌組織および子宮癌細胞株などの癌組織および癌細胞においては、発現しないかまたはわずかに発現するが、正常子宮組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。
【００６７】
本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００６８】
８．  ＰＩＧ１３
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ２５８２８６で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号２９のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＰＩＧ１３）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＡＫ０５６４８７、ＢＣ０２８５６７およびＡＦ３１２８６４でそれぞれデータベースに寄託されたHomo sapiens  ｃＤＮＡ  ＦＬＪ３１９２５  ｆｉｓ，クローンＮＴ２ＲＰ７００５４９３遺伝子、Homo sapiens染色体１オープンリーディングフレーム２１，ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡクローンＭＧＣ：１６１７２  ＩＭＡＧＥ：３６３５５２１）遺伝子およびHomo sapiens  Ｃｌｏｒｆ２１  ｍＲＮＡ遺伝子のＤＮＡ配列と類似していることが明らかにされた。
【００６９】
配列番号２９のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の３９１〜７５６位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（７５４〜７５６位の塩基は終止コドンを表す）。
【００７０】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は１２１アミノ酸残基からなり、配列番号３０のアミノ酸配列および約１４ｋＤａの分子量を有する。
【００７１】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号１に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する２９６ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号３１（５’−ＡＡＧＣＴＴＧＣＡＣＣＡＴ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ６および配列番号３２（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００７２】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、脾臓、腎臓、および肝臓において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約１．０ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、１．０ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて、約４．５ｋｂのサイズを有する転写物もまた発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などのような癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００７３】
９．  ＰＩＧ１５
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ２５８２８５で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号３３のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＰＩＧ１５）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、アクセッション番号Ｌ２０９４１およびＭ９７１６４で両方ともデータベースに寄託されたヒトフェリチン重鎖ｍＲＮＡ遺伝子およびヒトフェリチン重鎖ｍＲＮＡ遺伝子のＤＮＡ配列と類似していることが明らかにされた。
【００７４】
配列番号３３のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の７９４〜１３４５位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（１３４３〜１３４５位の塩基は終止コドンを表す）。
【００７５】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は１８３アミノ酸残基からなり、配列番号３４のアミノ酸配列および約２１ｋＤａの分子量を有する。
【００７６】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号３３に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する３２７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号３５（５’−ＡＡＧＣＴＴＧＣＡＣＣＡＴ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ６および配列番号３６（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００７７】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、脾臓、腎臓、および肝臓において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約１．０ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などのような癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００７８】
１０．  ＰＩＧ８
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ２３９２９２で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号３７のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＰＩＧ８）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、それぞれアクセッション番号Ｄ４２０５４、ＡＰ００１８７７およびＮＭ＿０１４６７９  ＸＭ＿３７４９２５ですべてデータベースに寄託されたHomo sapiens  ＫＩＡＡ００９２  ｍＲＮＡ、Homo sapiensゲノムＤＮＡ，染色体１１クローン：ＣＴＤ−２５６４Ｐ９およびHomo sapiensトランスロキン（ＫＩＡＡ００９２）のＤＮＡ配列と類似していることが明らかにされた。
【００７９】
配列番号３７のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の１４０〜１６４２位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（１６４０〜１６４２位の塩基は終止コドンを表す）。
【００８０】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は５００アミノ酸残基からなり、配列番号３８のアミノ酸配列および約５７ｋＤａの分子量を有する。
【００８１】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号３７に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する３６２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメント（２５８６〜２９４７位の塩基に対応する）が、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号３９（５’−ＡＡＧＣＴＴＧＧＴＧＡＡＣ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３６および配列番号４０（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００８２】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、子宮、脳、心臓、骨格筋、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約４．５ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約２．２ｋｂのサイズを有する転写物もまた、正常肝臓組織においてさらに発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、子宮癌組織および子宮癌細胞株などの癌組織および癌細胞においては、発現しないかまたはわずかに発現するが、正常子宮組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される子宮癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００８３】
１１．  ＭＲＧ１
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７３１で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号４１のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＭＲＧ１）であり、寄託された遺伝子のあるＤＮＡ配列は、それぞれアクセッション番号ＮＭ＿００２４３６およびＢＣ００２３９２で両方ともデータベースに寄託されたHomo sapiens膜タンパク質，パルミトイル化１，５５ｋＤａ（ＭＰＰｌ）遺伝子およびHomo sapiens膜タンパク質，パルミトイル化１，５５ｋＤａ遺伝子のＤＮＡ配列と同一である。
【００８４】
配列番号４１のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の２７〜１４２７位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（１４２５〜１４２７位の塩基は終止コドンを表す）。
【００８５】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は４６６アミノ酸残基からなり、配列番号４２のアミノ酸配列および約５２ｋＤａの分子量を有する。
【００８６】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号４１に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する２７７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメント（１１２３〜１３９９位の塩基に対応する）が、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号４３（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＣＴＣＴＧＧ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ２１および配列番号４４（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００８７】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、子宮、脳、骨格筋、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約５．０ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた、正常組織においてさらに発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、子宮癌組織および子宮癌細胞株などの癌組織および癌細胞においては、発現しないかまたはわずかに発現するが、正常子宮組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される子宮癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００８８】
１２．  ＰＩＧ２２
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７２９で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号４５のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＰＩＧ２２）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、それぞれアクセッション番号ＢＣ０４３２０９、ＡＫ０２３９１３およびＡＢ０８５８２７ですべてデータベースに寄託されたHomo sapiens  ｃＤＮＡクローンＩＭＡＧＥ：５２９５１００遺伝子、Homo sapiens  ｃＡＭＰ−特異的ホスホジエステラーゼ８Ｂ（ＰＤＥ８Ｂ）遺伝子に高度に類似しているHomo sapiens  ｃＤＮＡ  ＦＬＪ１３８５１  ｆｉｓ，クローンＴＨＹＲＯ１０００９２６、およびホスホジエステラーゼ８Ｂ４遺伝子についてのHomo sapiens  ＨＳＰＤＥ８Ｂ４のＤＮＡ配列と同一であることが明らかにされた。しかし、ＰＩＧ２２腫瘍抑制遺伝子は肺癌を含む種々のヒト腫瘍においてわずかに発現したのに対して、その発現は種々の正常組織において有意に増加したことが本研究でわかった。
【００８９】
配列番号４５のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の１１〜１０６３位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（１０６１〜１０６３位の塩基は終止コドンを表す）。
【００９０】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は３５０アミノ酸残基からなり、配列番号４６のアミノ酸配列および約４０ｋＤａの分子量を有する。
【００９１】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号４５に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する２４２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号４７（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＡＣＴＡＧＣ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ２４および配列番号４８（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００９２】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、肝臓、および胎盤において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約５ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約２ｋｂのサイズを有する転写物もまた、５ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などのような癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００９３】
１３．  ＭＩＧ９
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７２４で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号４９のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＭＩＧ９）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、それぞれアクセッション番号ＮＭ＿００５９８０、ＡＦ５３９７３９およびＢＣ００６８１９ですべてデータベースに寄託されたHomo sapiens  Ｓ  １００カルシウム結合タンパク質Ｐ（ＳｌＯＯＰ）遺伝子、Homo sapiens  カルシウム結合Ｓｌ００タンパク質ｍＲＮＡ遺伝子、およびHomo sapiens  Ｓｌ００カルシウム結合タンパク質Ｐ遺伝子のＤＮＡ配列と同一であることが明らかにされた。しかし、ＭＩＧ９腫瘍抑制遺伝子は肺癌を含む種々のヒト腫瘍においてわずかに発現したのに対して、その発現は種々の正常組織において有意に増加したことが本研究でわかった。
【００９４】
配列番号４９のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の５０〜３１６位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（３１４〜３１６位の塩基は終止コドンを表す）。
【００９５】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は８８アミノ酸残基からなり、配列番号５０のアミノ酸配列および約１０ｋＤａの分子量を有する。
【００９６】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号４９に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてディファレンシャルに発現する１７８ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号５１（５’−ＡＡＧＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ１２および配列番号５２（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【００９７】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、腎臓、肝臓、胎盤、および末梢血において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約５ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約２ｋｂのサイズを有する転写物もまた、５ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてのみディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などのような癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【００９８】
１４．  ＭＩＧ１１
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７２６で寄託された（公開日：２００４年１２月３１日）配列番号５３のＤＮＡ配列を有するヒト癌抑制遺伝子（ＭＩＧ１１）であり、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＭ＿００５９４３でデータベースに寄託されたＮＭ＿００５９４３  Homo sapiensモリブデンコファクター合成１（ＭＯＣＳｌ），転写変異体１遺伝子のＤＮＡ配列と類似していることが明らかにされた。しかし、ＭＩＧ１１腫瘍抑制遺伝子は肺癌を含む種々のヒト腫瘍においてわずかに発現したのに対して、その発現は種々の正常組織において有意に増加したことが本研究でわかった。
【００９９】
配列番号５３のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の７〜７５６位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（７５４〜７５６位の塩基は終止コドンを表す）。
【０１００】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は２４９アミノ酸残基からなり、配列番号５４のアミノ酸配列および約２７ｋＤａの分子量を有する。
【０１０１】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号５３に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中ではわずかに発現するが正常組織においてのみディファレンシャルに発現する２１２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントが、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号５５（５’−ＡＡＧＣＴＴＣＧＧＣＡＴＡ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ１３および配列番号５６（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【０１０２】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、肺、心臓、筋肉、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、および末梢血において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約５ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現し、約２ｋｂのサイズを有する転写物もまた、５ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物に加えて発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）などのような癌組織および癌細胞においてわずかに発現するが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【０１０３】
１５．  ＭＩＧ１５
配列番号５７のＤＮＡ配列は、米国国立衛生研究所（U.S. National Institutes of Health）（ＮＩＨ）のＧｅｎＢａｎｋデータベースにアクセッション番号ＡＹ４２３７３０で寄託され（公開日：２００４年１２月３１日）、ＤＮＡ配列決定分析は、この寄託された遺伝子のＤＮＡ配列が、それぞれアクセッション番号ＢＣ０００９６１、ＮＭ＿００３６７６、およびＡＦ４６６３７５ですべてデータベースに寄託されたHomo sapiens変性精母細胞ホモログ１，脂質デサチュラーゼ（Drosophila），転写変異体１，ｍＲＮＡ  （ｃＤＮＡクローンＭＧＣ：５０７９  ＩＭＡＧＥ：３４５０９３６）遺伝子；Homo sapiens変性精母細胞ホモログ１，脂質デサチュラーゼ（Drosophila）（ＤＥＧＳ１），転写変異体１遺伝子；およびHomo sapiensスフィンゴ脂質デルタ４デサチュラーゼタンパク質ＤＥＳｌ  ｍＲＮＡ遺伝子のＤＮＡ配列と類似していることが明らかにされた。
【０１０４】
配列番号５７のＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の７８〜１０４９位の塩基に対応する１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する（１０４７〜１０４９位の塩基は終止コドンを表す）。
【０１０５】
本発明の遺伝子から発現するタンパク質は３２３アミノ酸残基からなり、配列番号５８のアミノ酸配列および約３８ｋＤａの分子量を有する。
【０１０６】
本発明の遺伝子およびタンパク質はヒト組織から分離してもよく、またはＤＮＡもしくはペプチドを合成するための既知の方法に従って合成してもよい。例えば、本発明の遺伝子は、配列番号５７に示されるＤＮＡ配列に関する情報に基づいて従来の方法に従ってスクリーニングおよびクローニングしてもよい。別の例として、癌組織または癌細胞株中では発現しないが正常組織においてのみディファレンシャルに発現する３２７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメント（１６７３〜１９９９位の塩基に対応する）が、正常組織、および癌組織または癌細胞株から抽出した総ＲＮＡに対して、配列番号５９（５’−ＡＡＧＣＴＴＧＧＴＧＡＡＣ−３’）のランダムプライマーＨ−ＡＰ３１および配列番号６０（５’−ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣ−３’）の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用して、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行することによって入手されてもよく、得られたフラグメントを、プローブとして用いて全長ｃＤＮＡクローンを得るためにｃＤＮＡライブラリーとプラーク−ハイブリダイゼーションしてもよい。
【０１０７】
一方、コドンの変性のために、または生きている生物にとっての遺伝子を発現するための優先度を考慮すると、本発明の遺伝子は、コード領域から発現するタンパク質のアミノ酸配列を変化させることなくコード領域中で様々に修飾されてもよく、そしてまた遺伝子発現に影響を与えない範囲でコード領域以外の領域中で様々に修飾もしくは変化してもよい。このような修飾された遺伝子もまた本発明の範囲に含まれる。したがって、本発明はまた、遺伝子および遺伝子のフラグメントと実質的に同じＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドを含む。「実質的に同じポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、および最も好ましくは９５％のＤＮＡ配列の相同性を有するポリヌクレオチドを意味する。
【０１０８】
また、１つ以上のアミノ酸もまた、タンパク質の機能を変化させない範囲内で、そのタンパク質のアミノ酸配列の中で置換、付加、または欠失させてもよく、そしてそれらの用法に依存してタンパク質のある部分のみが使用してもよい。このような修飾されたアミノ酸配列もまた本発明の範囲に含まれる。したがって、本発明はまた、タンパク質およびタンパク質のフラグメントを実質的に同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。「実質的に同じポリペプチド」という用語は、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、および最も好ましくは９５％の配列相同性を有するポリペプチドを意味する。
【０１０９】
このように調製した遺伝子は、発現ベクターを得るために、当該分野においてすでに公知である微生物または動物細胞中での発現のために各ベクターに挿入してもよく、次いで、遺伝子のＤＮＡは大量に複製してもよく、またはそのタンパク質は、各々の発現ベクターを適切な宿主細胞、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、ＨｅＬａ細胞株などに導入することによって市販ベースの量で産生してもよい。発現ベクターを構築する際に、プロモーターおよびターミネーター、自律的複製配列、分泌シグナルなどのＤＮＡ調節配列は、遺伝子またはタンパク質を産生する宿主細胞の種類に依存して、適切に選択および組み合わせしてもよい。
【０１１０】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは、子宮、心臓、骨格筋、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、および末梢血白血球において過剰発現すると見なされている。本発明の遺伝子は、約９．５ｋｂのサイズを有するｍＲＮＡ転写物としてこれらの組織中で主として過剰発現する。とりわけ、本発明の遺伝子は、正常組織においてディファレンシャルに発現する。例えば、本発明の遺伝子は、癌組織および子宮癌細胞株などのような癌組織および癌細胞においては、発現しないかまたはわずかに発現するが、正常子宮組織においてのみディファレンシャルに高度に発現する。本発明の遺伝子が導入される癌細胞株は高い死亡率を示しており、そのことから、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために有効に使用してもよい。
【０１１１】
本明細書中以後では、本発明は好ましい実施例を参照して詳細に説明する。ここでは、、本明細書で提案される説明は例示のみの目的のための好ましい実施例に過ぎず、本明細書の範囲を限定することを意図するものではない。
【０１１２】
参考実施例：総ＲＮＡの分離
総ＲＮＡ試料をＲＮｅａｓｙ総ＲＮＡキット（Qiagen Inc., Germany）を使用して新鮮な組織または培養細胞から分離し、次いで夾雑したＤＮＡをメッセージクリーンキット（GenHunter Corp., MA, U.S.）を使用してＲＮＡ試料から除去した。
【０１１３】
実施例１
総ＲＮＡの分離およびｍＲＮＡのディファレンシャルディスプレイ
１−１．  ＧＩＧ１
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常子宮外頸部組織（normal exocervical tissue）、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株において以下のように測定した。正常子宮外頸部組織試料は子宮筋腫に罹患している患者から子宮摘出の間に入手し、原発性子宮頸部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科手術の前に放射線治療および抗癌剤治療を行っていない子宮癌に罹患している患者から広範子宮全摘術の間に得た。ＣＵＭＣ−６（Kim, J. W. et al, Gynecol. Oncol. 62: 230-240, 1996）をヒト子宮癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１１４】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992）；および Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ０．２μｇを、配列番号４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号３のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３８（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット５、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１１５】
図１は、配列番号３のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３８および配列番号４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図１において、レーン１は正常子宮外頸部組織を表し；レーン２は子宮頸部癌組織を表し；レーン３は転移性腸骨リンパ節腫瘍組織を表し；レーン４は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６を表す。図１に示されるように、３８２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは子宮癌組織、転移性腸骨リンパ節腫瘍組織および子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６において発現しなかったが、正常子宮外頸部組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された。このｃＤＮＡフラグメントをＣＧ３８１と名付けた。
【０１１６】
３８２ｂｐバンド、ＣＧ３８１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＣＧ３８１は、ＴＡクローニングシステム（Promega）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１１７】
１−２．  ＧＩＧ３
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株において以下のように測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を外科手術の間に肺癌患者から得た。Ａ５４９（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＮＣＩ−Ｈ３５８（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−５８０７）をヒト肺癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１１８】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992）；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号７のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３２（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１１９】
図２は、配列番号７のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３２および配列番号８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図２において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図２に示されるように、１９０ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株において発現しなかったが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＧＩＧ３遺伝子配列の４９２〜６８１位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ９３５と名付けた。
【０１２０】
１９０ｂｐバンド、Ｌ９３５フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ９３５は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１２１】
１−３．  ＧＩＧ４
正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を、実施例１−２に記載されるものと同じ様式で外科手術の間に肺癌患者から得た。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１２２】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号１２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号１１のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３５（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１２３】
図３は、配列番号１１のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３５および配列番号１２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図３において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図３に示されるように、１８７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株においてわずかに発現したが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＧＩＧ４遺伝子配列の４３５〜６２１位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ９５１と名付けた。
【０１２４】
１８７ｂｐバンド、Ｌ９５１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ９５１は、ＴＡクローニングシステム（Promega）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Ｓequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１２５】
１−４．  ＧＩＧ５
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株において以下のように測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を外科手術の間に肺癌患者から得た。Ａ５４９（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＮＣＩ−Ｈ３５８（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−５８０７）をヒト肺癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１２６】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992); およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号１６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号１５のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３２（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１２７】
図４は、配列番号１５のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３４および配列番号１６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図４において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図４に示されるように、２１２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株において発現しなかったが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＧＩＧ５遺伝子配列の４９７〜７０８位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ９５２と名付けた。
【０１２８】
２１２ｂｐバンド、Ｌ９５２フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ９５２は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１２９】
１−５．  ＧＩＧ１１
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常乳房組織、原発性乳癌組織、および乳癌細胞株において以下のように測定した。
【０１３０】
正常乳房組織試料は乳癌患者から乳房切除の間に入手し、原発性乳癌組織は外科手術の前に放射線治療および抗癌剤治療を行っていない子宮癌に罹患している患者から根治的乳房切除術の間に得た。ＭＣＦ−７（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＨＴＢ−２２）をヒト乳癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１３１】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992); およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号２０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号１９のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３６（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット５、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１３２】
図５は、配列番号３のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３６および配列番号４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図５において、レーン１、２および３は正常乳房組織を表し；レーン４、５および６は乳癌組織を表し；ならびにレーン７は乳癌細胞株ＭＣＦ−７を表す。図５に示されるように、２９８ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは乳癌組織および乳癌細胞株において極めてわずかに発現したが、正常乳房組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＧＩＧ１１遺伝子配列の７４１〜１０３８位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＢＢＣＣ３１１Ｎと名付けた。
【０１３３】
２９８ｂｐバンド、ＢＢＣＣ３１１Ｎフラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＢＢＣＣ３１１Ｎは、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１３４】
１−６．  ＭＩＧ２
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株において以下のように測定した。正常子宮外頸部組織試料は子宮筋腫に罹患している患者から子宮摘出の間に入手し、原発性子宮頸部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科手術の前に放射線治療および抗癌剤治療を行っていない子宮癌に罹患している患者から広範子宮全摘術の間に得た。ＣＵＭＣ−６（Kim, J. W. et al, Gynecol. Oncol. 62: 230-240, 1996）をヒト子宮癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１３５】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992); およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号２４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号２３のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３５（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット５、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１３６】
図６は、配列番号２３のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３５および配列番号２４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図６において、レーン１は正常子宮外頸部組織を表し；レーン２は子宮頸部癌組織を表し；レーン３は転移性腸骨リンパ節腫瘍組織を表し；レーン４は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６を表す。図６に示されるように、３１１ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは子宮癌組織、転移性腸骨リンパ節腫瘍組織および子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６において発現しなかったが、正常子宮外頸部組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された。このｃＤＮＡフラグメントをＣＡ３５２と名付けた。
【０１３７】
３１１ｂｐバンド、ＣＡ３５２フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＣＡ３５２は、ＴＡクローニングシステム（Promega）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１３８】
１−７．  ＭＩＧ４
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株において以下のように測定した。正常子宮外頸部組織試料は子宮筋腫に罹患している患者から子宮摘出の間に入手し、原発性子宮頸部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科手術の前に放射線治療および抗癌剤治療を行っていない子宮癌に罹患している患者から広範子宮全摘術の間に得た。ＣＵＭＣ−６（Kim, J. W. et al, Gynecol. Oncol. 62: 230-240, 1996）をヒト子宮癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１３９】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号２８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号２７のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３１（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット５、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１４０】
図７は、配列番号２７のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３１および配列番号２８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図７において、レーン１は正常子宮外頸部組織を表し；レーン２は子宮頸部癌組織を表し；レーン３は転移性腸骨リンパ節腫瘍組織を表し；レーン４は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６を表す。図７に示されるように、３２２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは子宮癌組織、転移性腸骨リンパ節腫瘍組織および子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６において発現しなかったが、正常子宮外頸部組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された。このｃＤＮＡフラグメントをＭＡ４１と名付けた。
【０１４１】
３２２ｂｐバンド、ＭＡ４１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＭＡ４１は、ＴＡクローニングシステム（Promega）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System (United States Biochemical Co.)を使用して決定した。
【０１４２】
１−８．  ＰＩＧ１３
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株において以下のように測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を外科手術の間に肺癌患者から得た。Ａ５４９（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection)；  ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＮＣＩ−Ｈ３５８  （アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−５８０７）をヒト肺癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１４３】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992); およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号３２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号３１のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ６（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１４４】
図８は、配列番号３１のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ６および配列番号３２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図８において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図８に示されるように、２９６ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株において発現しないか、またはわずかに発現したが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＰＩＧ１３遺伝子配列の６４３〜９３８位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ５０−２１１と名付けた。
【０１４５】
２９６ｂｐバンド、Ｌ５０−２１１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ５０−２１１は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.)を使用して決定した。
【０１４６】
１−９．  ＰＩＧ１５
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株において以下のように測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を外科手術の間に肺癌患者から得た。Ａ５４９（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＮＣＩ−Ｈ３５８  （アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−５８０７）をヒト肺癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１４７】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992); およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号３６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号３５のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ６（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１４８】
図９は、配列番号３５のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ６および配列番号３６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図９において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図９に示されるように、３２７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株において発現しないか、またはわずかに発現したが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＰＩＧ１５遺伝子配列の１３７３〜１６９９位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ５０と名付けた。
【０１４９】
３２７ｂｐバンド、Ｌ５０フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ５０は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１５０】
１−１０．  ＰＩＧ８
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株において以下のように測定した。正常子宮外頸部組織試料は子宮筋腫に罹患している患者から子宮摘出の間に入手し、原発性子宮頸部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科手術の前に放射線治療および抗癌剤治療を行っていない子宮癌に罹患している患者から広範子宮全摘術の間に得た。ＣＵＭＣ−６（Kim, J. W. et al, Gynecol. Oncol. 62: 230-240, 1996）をヒト子宮癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１５１】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号４０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号３９のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３６（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット５、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１５２】
図１０は、配列番号３９のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３６および配列番号４０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図１０において、レーン１は正常子宮外頸部組織を表し；レーン２は子宮頸部癌組織を表し；レーン３は転移性腸骨リンパ節腫瘍組織を表し；レーン４は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６を表す。図１０に示されるように、３６２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは子宮癌組織、転移性腸骨リンパ節腫瘍組織および子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６において発現しなかったが、正常子宮外頸部組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された。このｃＤＮＡフラグメントをＣＡ３６１と名付けた。
【０１５３】
３６２ｂｐバンド、ＣＧ３６１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＣＡ３６１は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１５４】
１−１１．  ＭＲＧ１
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株において以下のように測定した。正常子宮外頸部組織試料は子宮筋腫に罹患している患者から子宮摘出の間に入手し、原発性子宮頸部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科手術の前に放射線治療および抗癌剤治療を行っていない子宮癌に罹患している患者から広範子宮全摘術の間に得た。ＣＵＭＣ−６（Kim, J. W. et al, Gynecol. Oncol. 62: 230-240, 1996）をヒト子宮癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１５５】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号４４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号４３のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ２１（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット５、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１５６】
図１１は、配列番号４３のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ２１および配列番号４４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図１１において、レーン１は正常子宮外頸部組織を表し；レーン２は子宮頸部癌組織を表し；レーン３は転移性腸骨リンパ節腫瘍組織を表し；レーン４は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６を表す。図１１に示されるように、２７７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは子宮癌組織、転移性腸骨リンパ節腫瘍組織および子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６において発現しなかったが、正常子宮外頸部組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された。このｃＤＮＡフラグメントをＭＧ２１と名付けた。
【０１５７】
２７７ｂｐバンド、ＭＧ２１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＭＧ２１は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１５８】
１−１２．  ＰＩＧ２２
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株において以下のように測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を外科手術の間に肺癌患者から得た。Ａ５４９（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＮＣＩ−Ｈ３５８  （アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−５８０７）をヒト肺癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１５９】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号４８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号４７のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ２４（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１６０】
図１２は、配列番号４７のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ２４および配列番号４８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図１２において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図１２に示されるように、２４２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株においてわずかに発現したが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＰＩＧ２２遺伝子配列の７３８〜９７９位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ９８９と名付けた。
【０１６１】
２４２ｂｐバンド、Ｌ９８９フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ９８９は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１６２】
１−１３．  ＭＩＧ９
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株において以下のように測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を外科手術の間に肺癌患者から得た。Ａ５４９（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＮＣＩ−Ｈ３５８  （アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−５８０７）をヒト肺癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１６３】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号５２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号５１のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ１２（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１６４】
図１３は、配列番号５１のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ１２および配列番号５２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図１３において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図１３に示されるように、１７８ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株においてわずかに発現したが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＭＩＧ９遺伝子配列の１３２〜３０９位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ７４１と名付けた。
【０１６５】
１７８ｂｐバンド、Ｌ７４１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ７４１は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１６６】
１−１４．  ＭＩＧ１１
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株において以下のように測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料、および転移性肺癌組織試料を外科手術の間に肺癌患者から得た。Ａ５４９（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＮＣＩ−Ｈ３５８  （アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）；  ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−５８０７）をヒト肺癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１６７】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号５６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号５５のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ１３（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット１、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１６８】
図１４は、配列番号５５のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ１３および配列番号５６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図１４において、レーン１は正常肺組織を表し；レーン２は肺癌組織を表し；レーン３は転移性肺癌組織を表し；レーン４は肺癌細胞株Ａ５４９を表す。図１４に示されるように、２１２ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌細胞株においてわずかに発現したが、正常肺組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された（全長ＭＩＧ１１遺伝子配列の５６８〜７７９位の塩基）。このｃＤＮＡフラグメントをＬ８６１と名付けた。
【０１６９】
２１２ｂｐバンド、Ｌ８６１フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＬ８６１は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System (United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１７０】
１−１５．  ＭＩＧ１５
目的の遺伝子のディファレンシャルな発現パターンを、正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株において以下のように測定した。正常子宮外頸部組織試料は子宮筋腫に罹患している患者から子宮摘出の間に入手し、原発性子宮頸部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科手術の前に放射線治療および抗癌剤治療を行っていない子宮癌に罹患している患者から広範子宮全摘術の間に得た。ＣＵＭＣ−６（Kim, J. W. et al, Gynecol. Oncol. 62: 230-240, 1996）をヒト子宮癌細胞株として使用した。総ＲＮＡ試料を、参考実施例に記載したものと同じ様式でこれらの組織および細胞から分離した。
【０１７１】
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、開示物に記載されているような修飾方法（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971(1992)；およびLiang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968(1993)）に従って、組織および細胞から分離した総ＲＮＡ試料の各々を使用して以下のように実行した。総ＲＮＡ  ０．２μｇを、配列番号６０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを用いて、キット（ＲＮＡｉｍａｇｅキット、GenHunter）を使用して逆転写し、次いでＰＣＲ反応を、０．５ｍＭ［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰ（１，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、同じ固定オリゴ−ｄＴプライマーおよび配列番号５９のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３１（ＲＮＡｉｍａｇｅプライマーセット５、GenHunter Corporation, U.S.）を使用して実行した。ＰＣＲ反応を以下の条件下で行った：９５℃で４０秒間の変性工程、４０℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で４０秒間の伸長工程から成る全体で４０回の増幅サイクル、続いて７２℃で５分間、１回の伸長工程。増幅したフラグメントは、ＤＮＡ配列決定のために６％ポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフィーを行った。
【０１７２】
図１５は、配列番号５９のランダム５’１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３１および配列番号６０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示す。図１５において、レーン１は正常子宮外頸部組織を表し；レーン２は子宮頸部癌組織を表し；レーン３は転移性腸骨リンパ節腫瘍組織を表し；レーン４は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６を表す。図１５に示されるように、３２７ｂｐ  ｃＤＮＡフラグメントは子宮癌組織、転移性腸骨リンパ節腫瘍組織および子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６においてわずかに発現したが、正常子宮外頸部組織においてのみディファレンシャルに発現したことが確認された。このｃＤＮＡフラグメントをＣＣ３１２と名付けた。
【０１７３】
３２７ｂｐバンド、ＣＣ３１２フラグメントを乾燥させたゲルから取り出し、ｃＤＮＡを溶出させるために１５分間煮沸し、次いでＰＣＲ反応を、［α−35Ｓ］標識ｄＡＴＰおよび２０μＭ  ｄＮＴＰをその中で使用しないこと以外は、ｃＤＮＡを再増幅するために上記に示されるものと同じプライマーセットを使用して同じ上記条件下で実行した。再増幅したｃＤＮＡフラグメントＣＣ３１２は、ＴＡクローニングシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現ベクターｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙにクローニングし、次いで、そのＤＮＡ配列を、Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System(United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１７４】
実施例２
ｃＤＮＡライブラリースクリーニング
２−１：ＧＩＧ１
実施例１−１において得たｃＤＮＡフラグメントＣＧ３８１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＧＩＧ１の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０１７５】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号１と同一であった。このｃＤＮＡ配列は３２０アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号２と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約３４ｋＤａの分子量を有した。
【０１７６】
得られた全長ＧＩＧ１  ｃＤＮＡクローンは、原核生物発現ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ  （Invitrogen, U.S.）のマルチクローニングサイトに挿入し、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＧＩＧ１を得、次いで、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０（Invitrogen, U.S.）を、得られたｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＧＩＧ１で形質転換した。発現させるタンパク質ＨＴ−チオレドキシンをベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏのマルチクローニングサイトの上流に挿入した。形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株は振盪しながらＬＢブロス中でインキュベートし、得られた培養物を１／１００希釈し、次いで再度３時間反応させた。０．５ｍＭ  Ｌ−アラビノース（Sigma, U.S.）をそこに加えて、タンパク質の産生を誘導した。培養培地中のＥ．  ｃｏｌｉ細胞を、Ｌ−アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで、１２％ドデシル硫酸ナトリウムゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を、超音波処理したホモジネートを用いて行った。図１６は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＧＩＧ１で形質転換したＥ．  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０株のタンパク質の発現パターンをＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して示す図であり、約４９ｋＤａの分子量を有する融合タンパク質のバンドがＬ−アラビノース誘導後に明確に観察されたことが明らかにされた。この４９ｋＤａ融合タンパク質は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＧＩＧ１に挿入した約１５ｋＤａのＨＴ−チオレドキシンタンパク質および約３４ｋＤａ  ＧＩＧ１タンパク質を含むタンパク質に一致した。
【０１７７】
図１６はＧＩＧ１タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図１６において、レーン１はＬ−アラビノース誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＬ−アラビノース誘導後のタンパク質試料を表す。
【０１７８】
２−２：ＧＩＧ３
実施例１−２において得たｃＤＮＡフラグメントＬ９３５を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ９３５  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＧＩＧ３の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０１７９】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号５と同一であった。このｃＤＮＡ配列は２０８アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号６と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約２３ｋＤａの分子量を有した。
【０１８０】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株は振盪しながらＬＢブロス中でインキュベートし、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＧＩＧ２遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０１８１】
図１７はＧＩＧ３タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図１７において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＧＩＧ３遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図１７に示すように、発現したＧＩＧ３タンパク質は約２３ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０１８２】
２−３：ＧＩＧ４
実施例１−３において得たｃＤＮＡフラグメントＬ９５１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ９５１  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識Ｌ９５１  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＧＩＧ４の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０１８３】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号９と同一であった。このｃＤＮＡ配列は２０３アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号１０と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約２３ｋＤａの分子量を有した。
【０１８４】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＧＩＧ４遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０１８５】
図１８はＧＩＧ４タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図１８において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＧＩＧ４遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図１８に示すように、発現したＧＩＧ４タンパク質は約２３ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０１８６】
２−４：ＧＩＧ５
実施例１−４において得たｃＤＮＡフラグメントＬ９５２を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ９５２  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識Ｌ９５２  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＧＩＧ５の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０１８７】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号１３と同一であった。このｃＤＮＡ配列は２２８アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号１４と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約２６ｋＤａの分子量を有した。
【０１８８】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＧＩＧ５遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０１８９】
図１９はＧＩＧ５タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図１９において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＧＩＧ５遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図１９に示すように、発現したＧＩＧ５タンパク質は約２６ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０１９０】
２−５：ＧＩＧ１１
実施例１−５において得たｃＤＮＡフラグメントＢＢＣＣ３１１Ｎを、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識ＢＢＣＣ３１１Ｎ  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＢＢＣＣ３１１Ｎ  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＧＩＧ１１の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０１９１】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号１７と同一であった。このｃＤＮＡ配列は２５０アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号１８と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約２９ｋＤａの分子量を有した。
【０１９２】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＧＩＧ１１遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０１９３】
図２０はＧＩＧ１１タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２０において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＧＩＧ５遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図２０に示すように、発現したＧＩＧ１１タンパク質は約２９ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０１９４】
２−６：ＭＩＧ２
実施例１−６において得たｃＤＮＡフラグメントＣＡ３５２を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＭＩＧ２の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０１９５】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号２１と同一であった。このｃＤＮＡ配列は５７８アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号２２と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約６３ｋＤａの分子量を有した。
【０１９６】
得られた全長ＭＩＧ２  ｃＤＮＡクローンは、原核生物発現ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ（Invitrogen, U.S.）のマルチクローニングサイトに挿入し、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ２を得、次いで、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０（Invitrogen, U.S.）を、得られたｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ２で形質転換した。発現させるタンパク質ＨＴ−チオレドキシンをベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏのマルチクローニングサイトの上流に挿入した。形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株は振盪しながらＬＢブロス中でインキュベートし、得られた培養物を１／１００希釈し、次いで再度３時間反応させた。０．５ｍＭ  Ｌ−アラビノース（Sigma, U.S.）をそこに加えて、タンパク質の産生を誘導した。培養培地中のＥ．  ｃｏｌｉ細胞を、Ｌ−アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで、１２％ドデシル硫酸ナトリウムゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を、超音波処理したホモジネートを用いて行った。
【０１９７】
図２１は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ２で形質転換したＥ．  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０株のタンパク質の発現パターンをＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して示す図であり、約７８ｋＤａの分子量を有する融合タンパク質のバンドがＬ−アラビノース誘導後に明確に観察されたことが明らかにされた。この７８ｋＤａ融合タンパク質は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ２に挿入した約１５ｋＤａのＨＴ−チオレドキシンタンパク質および約６３ｋＤａ  ＭＩＧ２タンパク質を含むタンパク質に一致した。
【０１９８】
図２１はＭＩＧ２タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２１において、レーン１はＬ−アラビノース誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＭＩＧ２遺伝子の発現がＬ−アラビノースによって誘導された後のタンパク質試料を表す。
【０１９９】
２−７：ＭＩＧ４
実施例１−７において得たｃＤＮＡフラグメントＭＡ４１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＭＩＧ４の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２００】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号２５と同一であった。このｃＤＮＡ配列は６４０アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号２６と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約７０ｋＤａの分子量を有した。
【０２０１】
得られた全長ＭＩＧ４  ｃＤＮＡクローンは、原核生物発現ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ  （Invitrogen, U.S.）のマルチクローニングサイトに挿入し、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ４を得、次いで、Escherichia coli Top10 (Invitrogen, U.S.)を、得られたｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ４で形質転換した。発現させるタンパク質ＨＴ−チオレドキシンをベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏのマルチクローニングサイトの上流に挿入した。形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株は振盪しながらＬＢブロス中でインキュベートし、得られた培養物を１／１００希釈し、次いで再度３時間反応させた。０．５ｍＭ  Ｌ−アラビノース（Sigma,U.S.）をそこに加えて、タンパク質の産生を誘導した。培養培地中のＥ．  ｃｏｌｉ細胞を、Ｌ−アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで、１２％ドデシル硫酸ナトリウムゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を、超音波処理したホモジネートを用いて行った。図２２は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ４で形質転換したＥ．  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０株のタンパク質の発現パターンをＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して示す図であり、約８５ｋＤａの分子量を有する融合タンパク質のバンドがＬ−アラビノース誘導後に明確に観察されたことが明らかにされた。この８５ｋＤａ融合タンパク質は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ４に挿入した約１５ｋＤａのＨＴ−チオレドキシンタンパク質および約７０ｋＤａ  ＭＩＧ４タンパク質を含むタンパク質に一致した。
【０２０２】
図２２はＭＩＧ４タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２２において、レーン１はＬ−アラビノース誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＭＩＧ４遺伝子の発現がＬ−アラビノースによって誘導された後のタンパク質試料を表す。
【０２０３】
２−８：ＰＩＧ１３
実施例１−８において得たｃＤＮＡフラグメントＬ５０−２１１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ５０−２１１  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識Ｌ５０−２１１  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＰＩＧ１３の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２０４】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号２９と同一であった。このｃＤＮＡ配列は１２１アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号３０と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約１４ｋＤａの分子量を有した。
【０２０５】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＰＩＧ１３遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０２０６】
図２３はＰＩＧ１３タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２３において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＰＩＧ１３遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図２３に示すように、発現したＰＩＧ１３タンパク質は約１４ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０２０７】
２−９：ＰＩＧ１５
実施例１−９において得たｃＤＮＡフラグメントＬ５０を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ５０  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識Ｌ５０  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＰＩＧ１５の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２０８】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号３３と同一であった。このｃＤＮＡ配列は１８３アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号３４と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約２１ｋＤａの分子量を有した。
【０２０９】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＰＩＧ１５遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０２１０】
図２４はＰＩＧ１５タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２４において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＰＩＧ１５遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図２４に示すように、発現したＰＩＧ１５タンパク質は約２１ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０２１１】
２−１０：ＰＩＧ８
実施例１−１０において得たｃＤＮＡフラグメントＣＡ３６１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＰＩＧ８の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２１２】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号３７と同一であった。このｃＤＮＡ配列は５００アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号３８と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約５７ｋＤａの分子量を有した。
【０２１３】
得られた全長ＰＩＧ８  ｃＤＮＡクローンは、原核生物発現ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ（Invitrogen, U.S.）のマルチクローニングサイトに挿入し、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＰＩＧ８を得、次いで、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０（Invitrogen, U.S.）を、得られたｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＰＩＧ８で形質転換した。発現させるタンパク質ＨＴ−チオレドキシンをベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏのマルチクローニングサイトの上流に挿入した。形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株は振盪しながらＬＢブロス中でインキュベートし、得られた培養物を１／１００希釈し、次いで再度３時間反応させた。０．５ｍＭ  Ｌ−アラビノース（Sigma,U.S.）をそこに加えて、タンパク質の産生を誘導した。培養培地中のＥ．  ｃｏｌｉ細胞を、Ｌ−アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで、１２％ドデシル硫酸ナトリウムゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を、超音波処理したホモジネートを用いて行った。図２５は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＰＩＧ８で形質転換したＥ．  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０株のタンパク質の発現パターンをＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して示す図であり、約７２ｋＤａの分子量を有する融合タンパク質のバンドがＬ−アラビノース誘導後に明確に観察されたことが明らかにされた。この７２ｋＤａ融合タンパク質は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＰＩＧ８に挿入した約１５ｋＤａのＨＴ−チオレドキシンタンパク質および約５７ｋＤａ  ＰＩＧ８タンパク質を含むタンパク質に一致した。
【０２１４】
図２５はＰＩＧ８タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２５において、レーン１はＬ−アラビノース誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＰＩＧ８遺伝子の発現がＬ−アラビノースによって誘導された後のタンパク質試料を表す。
【０２１５】
２−１１：ＭＲＧ１
実施例１−１１において得たｃＤＮＡフラグメントＭＧ２１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＦＣ２６  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＭＲＧ１の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２１６】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号４１と同一であった。このｃＤＮＡ配列は４６６アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号４２と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約５２ｋＤａの分子量を有した。
【０２１７】
得られた全長ＭＲＧ１  ｃＤＮＡクローンは、原核生物発現ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ（Invitrogen, U.S.）のマルチクローニングサイトに挿入し、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＲＧ１を得、次いで、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０（Invitrogen, U.S.）を、得られたｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＲＧ１で形質転換した。発現させるタンパク質ＨＴ−チオレドキシンをベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏのマルチクローニングサイトの上流に挿入した。形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株は振盪しながらＬＢブロス中でインキュベートし、得られた培養物を１／１００希釈し、次いで再度３時間反応させた。０．５ｍＭ  Ｌ−アラビノース（Sigma, U.S.）をそこに加えて、タンパク質の産生を誘導した。培養培地中のＥ．  ｃｏｌｉ細胞を、Ｌ−アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで、１２％ドデシル硫酸ナトリウムゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を、超音波処理したホモジネートを用いて行った。図２６は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＲＧ１で形質転換したＥ．  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０株のタンパク質の発現パターンをＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して示す図であり、約６７ｋＤａの分子量を有する融合タンパク質のバンドがＬ−アラビノース誘導後に明確に観察されたことが明らかにされた。この６７ｋＤａ融合タンパク質は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＧＩＧ１に挿入した約１５ｋＤａのＨＴ−チオレドキシンタンパク質および約５２ｋＤａ  ＭＲＧ１タンパク質を含むタンパク質に一致した。
【０２１８】
図２６はＭＲＧ１タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２６において、レーン１はＬ−アラビノース誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＭＲＧ１遺伝子の発現がＬ−アラビノースによって誘導された後のタンパク質試料を表す。
【０２１９】
２−１２：ＰＩＧ２２
実施例１−１２において得たｃＤＮＡフラグメントＬ９８９を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ９８９  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識Ｌ９８９  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＰＩＧ２２の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２２０】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号４５と同一であった。このｃＤＮＡ配列は３５０アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号４６と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約４０ｋＤａの分子量を有した。
【０２２１】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＰＩＧ２２遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０２２２】
図２７はＰＩＧ２２タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２７において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＰＩＧ２２遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図２７に示すように、発現したＰＩＧ２２タンパク質は約４０ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０２２３】
２−１３：ＭＩＧ９
実施例１−１３において得たｃＤＮＡフラグメントＬ７４１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ９３５  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識Ｌ９３５  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＭＩＧ９の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２２４】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号４９と同一であった。このｃＤＮＡ配列は８８アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号５０と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約１０ｋＤａの分子量を有した。
【０２２５】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＭＩＧ９遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０２２６】
図２８はＭＩＧ９タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２８において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＭＩＧ９遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図２８に示すように、発現したＭＩＧ９タンパク質は約１０ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０２２７】
２−１４：ＭＩＧ１１
実施例１−１４において得たｃＤＮＡフラグメントＬ８６１を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識Ｌ９３５  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識Ｌ９３５  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＭＩＧ１１の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２２８】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号５３と同一であった。このｃＤＮＡ配列は２４９アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号５４と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約２７ｋＤａの分子量を有した。
【０２２９】
形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株はＬＢブロス中でインキュベートし、次いで、１ｍＭ  イソプロピル−１−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を培養物に加え、３７℃で３時間反応させてＭＩＧ１１遺伝子を発現した。タンパク質試料を培養物から得、次いで、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、タンパク質試料を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。
【０２３０】
図２９はＭＩＧ１１タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図２９において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＭＩＧ１１遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図２９に示すように、発現したＭＩＧ１１タンパク質は約２７ｋＤａの分子量を有し、これはそのＤＮＡ配列から導かれるタンパク質の分子量に一致する。
【０２３１】
２−１５：ＭＩＧ１５
実施例１−１５において得たｃＤＮＡフラグメントＣＣ３１２を、開示の方法（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13(1983)）に従って標識して32Ｐ−標識ＣＣ３１２  ｃＤＮＡプローブを得、この32Ｐ−標識ＣＣ３１２  ｃＤＮＡプローブを、開示物に記載されているような方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory(1989)）に従って、バクテリオファージλｇｔ１１ヒト肺胚性線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146(1989)）とプラーク−ハイブリダイズして、ヒト癌抑制遺伝子ＭＩＧ１５の全長ｃＤＮＡクローンを得た。
【０２３２】
この全長ｃＤＮＡを配列決定し、その結果、そのＤＮＡ配列は配列番号５７と同一であった。このｃＤＮＡ配列は３２３アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、このオープンリーディングフレームから導かれるアミノ酸配列は配列番号５８と同一であった。この導かれるタンパク質はまた約３８ｋＤａの分子量を有した。
【０２３３】
得られた全長ＭＩＧ１５  ｃＤＮＡクローンは、原核生物発現ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ  （Invitrogen, U.S.）のマルチクローニングサイトに挿入し、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ１５を得、次いで、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０（Invitrogen, U.S.）を、得られたｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ１５で形質転換した。発現させるタンパク質ＨＴ−チオレドキシンをベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏのマルチクローニングサイトの上流に挿入した。形質転換されたＥ．  ｃｏｌｉ株は振盪しながらＬＢブロス中でインキュベートし、得られた培養物を１／１００希釈し、次いで再度３時間反応させた。０．５ｍＭ  Ｌ−アラビノース（Sigma,U.S.）をそこに加えて、タンパク質の産生を誘導した。培養培地中のＥ．  ｃｏｌｉ細胞を、Ｌ−アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで、１２％ドデシル硫酸ナトリウムゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を、超音波処理したホモジネートを用いて行った。図２は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ１５で形質転換したＥ．  ｃｏｌｉ  Ｔｏｐ１０株のタンパク質の発現パターンをＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して示す図であり、約５３ｋＤａの分子量を有する融合タンパク質のバンドがＬ−アラビノース誘導後に明確に観察されたことが明らかにされた。この５３ｋＤａ融合タンパク質は、ベクターｐＢＡＤ／ｔｈｉｏ−Ｔｏｐｏ／ＭＩＧ１５に挿入した約１５ｋＤａのＨＴ−チオレドキシンタンパク質および約３８ｋＤａ  ＭＩＧ１５タンパク質を含むタンパク質に一致した。
【０２３４】
図３０はＭＩＧ１５タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。図３０において、レーン１はＩＰＴＧ誘導前のタンパク質試料を表し、レーン２はＭＩＧ１５遺伝子の発現がＩＰＴＧによって誘導された後のタンパク質試料を表す。
【０２３５】
実施例３
遺伝子のノーザンブロッティング
３−１．  ＧＩＧ１
ＧＩＧ１遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２３６】
３つの正常子宮外頸部組織、３つの原発性子宮頸部癌、および２つの子宮頸部癌細胞株から実施例１−１におけるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、実施例１−１において得られた全長ＧＩＧ１  ｃＤＮＡを使用する32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２３７】
図３１（ａ）は、ＧＩＧ１遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３１（ｂ）はβ−アクチンの発現を示すノーザンブロッティングの結果である。図３１（ａ）および（ｂ）において、レーン１〜３は正常子宮外頸部組織試料を表し、レーン４〜６は子宮頸部癌組織試料を表し、レーン７は子宮頸部癌細胞株ＨｅＬａの試料を表し、そしてレーン８は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６の試料を表す。図３１（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＧＩＧ１遺伝子の発現レベルは正常子宮外頸部組織試料の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは子宮頸部癌組織の３つの試料においては正常組織よりも有意に低く、子宮頸部癌細胞株の２つの試料においては検出されなかった。
【０２３８】
図４６（ａ）はＧＩＧ１遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４６（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図４６（ａ）に示されるように、約４．０ｋｂのサイズを有する優性ＧＩＧ１  ｍＲＮＡ転写物が過剰発現し、約３．０ｋｂのサイズを有する転写物が脳、心臓、骨格筋、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球などの正常組織においてさらに発現した。
【０２３９】
図６１（ａ）は、ＧＩＧ１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６１（ａ）に示されるように、ＧＩＧ１遺伝子は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においてわずかに発現した。このような結果から、本発明のＧＩＧ１遺伝子は、子宮頸部、脳、心臓、骨格筋、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２４０】
３−２．  ＧＩＧ３
ＧＩＧ３遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２４１】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＧＩＧ３  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２４２】
図３２（ａ）は、ＧＩＧ３遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図３２（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＧＩＧ３遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においては検出されなかった。
【０２４３】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０２４４】
図４７（ａ）はＧＩＧ３遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４７（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図４７（ａ）に示されるように、約１．３ｋｂのサイズを有する優性ＧＩＧ２  ｍＲＮＡ転写物が肺、心臓、筋肉、腎臓、および肝臓において高度に過剰発現した。加えて、約０．７ｋｂのサイズを有する転写物もまた正常組織において発現した。
【０２４５】
図６２（ａ）は、ＧＩＧ３遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６２（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約１．３ｋｂの優性ＧＩＧ３  ｍＲＮＡ転写物は全く発現しなかったが、約２．０または０．５ｋｂの異なるサイズを有する転写物は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においてはわずかに発現した。このような結果から、本発明のＧＩＧ３遺伝子は、肺、心臓、筋肉、腎臓、および肝臓などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２４６】
３−３．  ＧＩＧ４
ＧＩＧ４遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２４７】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＧＩＧ４  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２４８】
図３３（ａ）は、ＧＩＧ４遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図３３（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＧＩＧ４遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においては検出されなかった。
【０２４９】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０２５０】
図４８（ａ）はＧＩＧ４遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４８（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図４８（ａ）に示されるように、約１．３ｋｂのサイズを有する優性ＧＩＧ４  ｍＲＮＡ転写物が心臓、筋肉、脾臓、腎臓、および肝臓において高度に過剰発現した。加えて、約０．７ｋｂのサイズを有する転写物もまた、大腸および小腸ならびに胎盤などの正常組織において発現した。
【０２５１】
図６３（ａ）は、ＧＩＧ４遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６３（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約１．３ｋｂの優性ＧＩＧ４  ｍＲＮＡ転写物は、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においてわずかに発現したが、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、およびＳＷ４８０結腸癌細胞などの組織においては全く発現しなかった。このような結果から、本発明のＧＩＧ４遺伝子は、肺、心臓、筋肉、脾臓、腎臓、肝臓、大腸および小腸ならびに胎盤などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２５２】
３−４．  ＧＩＧ５
ＧＩＧ５遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２５３】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＧＩＧ５  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２５４】
図３４（ａ）は、ＧＩＧ５遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図３４（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＧＩＧ５遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においては検出されなかった。
【０２５５】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０２５６】
図４９（ａ）はＧＩＧ５遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４９（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図４９（ａ）に示されるように、約１．２ｋｂのサイズを有する優性ＧＩＧ２  ｍＲＮＡ転写物が高度に過剰発現し、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物がさらに、心臓および筋肉などの正常組織において高度に発現した。また、１．２ｋｂおよび２．０ｋｂ  ｍＲＮＡ転写物は、脳、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、および胎盤などの正常組織においてわずかに発現した。
【０２５７】
図６４（ａ）は、ＧＩＧ５遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６４（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約１．３ｋｂの優性ＧＩＧ５  ｍＲＮＡ転写物および約２．０ｋｂの転写物は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織において極めてわずかに発現したか、または全く発現しなかった。このような結果から、本発明のＧＩＧ５遺伝子は、肺、心臓、および筋肉などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２５８】
３−５．  ＧＩＧ１１
ＧＩＧ１１遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２５９】
３つの正常乳房組織、３つの原発性乳癌組織、および乳癌細胞株ＭＣＦ−７から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＧＩＧ１１  ｃＤＮＡの部分配列ＢＢＣＣ３１１Ｎ  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２６０】
図３５（ａ）は、ＧＩＧ１遺伝子が正常乳房組織、原発性乳癌組織、および乳癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図３５（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＧＩＧ１１遺伝子の発現レベルは正常乳房組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは乳癌組織の２つの試料において正常組織よりも有意に低く、乳癌細胞株の１つの試料においてさえ極めてわずかに検出された。
【０２６１】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０２６２】
図５０（ａ）はＧＩＧ１１遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５０（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５０（ａ）に示されるように、約１．５ｋｂのサイズを有する優性ＧＩＧ１１  ｍＲＮＡ転写物が、乳房、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、および肺などの正常組織において過剰発現した。加えて、１．５ｋｂ  ＧＩＧ１１  ｍＲＮＡ転写物は、大腸および末梢血などの正常組織においてさえ発現した。
【０２６３】
図６５（ａ）は、ＧＩＧ１１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６５（ａ）に示されるように、ＧＩＧ１１遺伝子は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９乳癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織において極めてわずかに発現した。このような結果から、本発明のＧＩＧ１１遺伝子は、乳房、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、大腸、および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２６４】
３−６．  ＭＩＧ２
ＭＩＧ２遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２６５】
３つの正常子宮外頸部組織、３つの原発性子宮頸部癌、および２つの子宮頸部癌細胞株から実施例１におけるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、実施例１において得られた全長ＭＩＧ２  ｃＤＮＡを使用する32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２６６】
図３６（ａ）は、ＭＩＧ２遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３６（ｂ）はβ−アクチンの発現を示すノーザンブロッティングの結果である。図３６（ａ）および（ｂ）において、レーン１〜３は正常子宮外頸部組織試料を表し、レーン４〜６は子宮頸部癌組織試料を表し、レーン７は子宮頸部癌細胞株ＨｅＬａの試料を表し、そしてレーン８は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６の試料を表す。図３６（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＭＩＧ２遺伝子の発現レベルは正常子宮外頸部組織試料の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは子宮頸部癌組織の３つの試料においては正常組織よりも有意に低く、子宮頸部癌細胞株の２つの試料においては検出されなかった。
【０２６７】
図５１（ａ）はＭＩＧ２遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５１（ａ）に示されるように、約５．０ｋｂのサイズを有する優性ＭＩＧ２  ｍＲＮＡ転写物が過剰発現し、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた、心臓、骨格筋、腎臓、および肝臓などの正常組織において発現した。
【０２６８】
図６６は、ＭＩＧ２遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６６（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６６（ａ）に示されるように、ＭＩＧ２遺伝子は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織において発現しなかった。このような結果から、本発明のＭＩＧ２遺伝子は、子宮頸部、脳、心臓、骨格筋、腎臓、肝臓、肺、および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２６９】
３−７．  ＭＩＧ４
ＭＩＧ４遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２７０】
３つの正常子宮外頸部組織、３つの原発性子宮頸部癌、および２つの子宮頸部癌細胞株から実施例１におけるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、実施例１において得られた全長ＭＩＧ４  ｃＤＮＡを使用する32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２７１】
図３７（ａ）は、ＭＩＧ４遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３７（ｂ）はβ−アクチンの発現を示すノーザンブロッティングの結果である。図３７（ａ）および（ｂ）において、レーン１〜３は正常子宮外頸部組織試料を表し、レーン４〜６は子宮頸部癌組織試料を表し、レーン７は子宮頸部癌細胞株ＨｅＬａの試料を表し、そしてレーン８は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６の試料を表す。図３７（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＭＩＧ４遺伝子の発現レベルは正常子宮外頸部組織試料の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは子宮頸部癌組織の３つの試料においては正常組織よりも有意に低く、子宮頸部癌細胞株の２つの試料においては検出されなかった。
【０２７２】
図５２（ａ）はＭＩＧ４遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５２（ａ）に示されるように、約０．５ｋｂのサイズを有する優性ＭＩＧ４  ｍＲＮＡ転写物が過剰発現し、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた、脳、心臓、骨格筋、大腸、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球などの正常組織において発現した。
【０２７３】
図６７は、ＭＩＧ４遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６７（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６７（ａ）に示されるように、ＭＩＧ４遺伝子は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織において発現しなかった。このような結果から、本発明のＭＩＧ４遺伝子は、子宮頸部、脳、心臓、骨格筋、大腸、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２７４】
３−８．  ＰＩＧ１３
ＰＩＧ１３遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２７５】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＰＩＧ１３  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２７６】
図３８（ａ）は、ＰＩＧ１３遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３８（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図３８（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＰＩＧ１３遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においては極めてわずかに発現するかまたは検出されなかった。
【０２７７】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０２７８】
図５３（ａ）はＰＩＧ１３遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５３（ａ）に示されるように、約１．０ｋｂのサイズを有する優性ＰＩＧ１３  ｍＲＮＡ転写物が肺、脳、心臓、筋肉、大腸、脾臓、腎臓、肝臓、および小腸などの正常組織において高度に過剰発現した。加えて、約４．５ｋｂのサイズを有する転写物もまた正常組織において発現した。
【０２７９】
図６８（ａ）は、ＰＩＧ１３遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６８（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６８（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約１．０ｋｂの優性ＰＩＧ１３  ｍＲＮＡ転写物は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においては全く発現しなかった。このような結果から、本発明のＰＩＧ１３遺伝子は、肺、脳、心臓、筋肉、大腸、脾臓、腎臓、肝臓、および小腸などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２８０】
３−９．  ＰＩＧ１５
ＰＩＧ１５遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２８１】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＰＩＧ１５  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２８２】
図３９（ａ）は、ＰＩＧ１５遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図３９（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図３９（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＰＩＧ１５遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においては極めてわずかに発現するかまたは検出されなかった。
【０２８３】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０２８４】
図５４（ａ）はＰＩＧ１５遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５４（ａ）に示されるように、約１．０ｋｂのサイズを有する優性ＰＩＧ１５  ｍＲＮＡ転写物が肺、脳、心臓、筋肉、大腸、脾臓、腎臓、肝臓、および小腸などの正常組織において高度に過剰発現した。
【０２８５】
図６９（ａ）は、ＰＩＧ１５遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６９（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６９（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約１．０ｋｂの優性ＰＩＧ１５  ｍＲＮＡ転写物は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においては全く発現しなかった。このような結果から、本発明のＰＩＧ１５遺伝子は、肺、脳、心臓、筋肉、大腸、脾臓、腎臓、肝臓、および小腸などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２８６】
３−１０．  ＰＩＧ８
ＰＩＧ８遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２８７】
３つの正常子宮外頸部組織、３つの原発性子宮頸部癌、および２つの子宮頸部癌細胞株から実施例１におけるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、実施例１−１において得られた全長ＰＩＧ８  ｃＤＮＡを使用する32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２８８】
図４０（ａ）は、ＰＩＧ８遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４０（ｂ）はβ−アクチンの発現を示すノーザンブロッティングの結果である。図４０（ａ）および（ｂ）において、レーン１〜３は正常子宮外頸部組織試料を表し、レーン４〜６は子宮頸部癌組織試料を表し、レーン７は子宮頸部癌細胞株ＨｅＬａの試料を表し、そしてレーン８は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６の試料を表す。図４０（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＰＩＧ８遺伝子の発現レベルは正常子宮外頸部組織試料の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは子宮頸部癌組織の３つの試料においては正常組織よりも有意に低く、子宮頸部癌細胞株の２つの試料においては検出されなかった。
【０２８９】
図５５（ａ）はＰＩＧ８遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５５（ａ）に示されるように、約４．５ｋｂのサイズを有する優性ＰＩＧ８  ｍＲＮＡ転写物が脳、心臓、骨格筋、肝臓、胎盤、および末梢血白血球などの正常組織において過剰発現し、約２．２ｋｂのサイズを有する転写物もまた正常肝臓組織において発現した。
【０２９０】
図７０（ａ）は、ＰＩＧ８遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図７０（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図７０（ａ）に示されるように、ＰＩＧ８遺伝子は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織において発現しなかった。このような結果から、本発明のＰＩＧ８遺伝子は、子宮頸部、脳、心臓、骨格筋、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２９１】
３−１１．  ＭＲＧ１
ＭＲＧ１遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２９２】
３つの正常子宮外頸部組織、３つの原発性子宮頸部癌、および２つの子宮頸部癌細胞株から実施例１におけるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、実施例１−１において得られた全長ＭＲＧ１  ｃＤＮＡを使用する32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２９３】
図４１（ａ）は、ＭＲＧ１遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４１（ｂ）はβ−アクチンの発現を示すノーザンブロッティングの結果である。図４１（ａ）および（ｂ）において、レーン１〜３は正常子宮外頸部組織試料を表し、レーン４〜６は子宮頸部癌組織試料を表し、レーン７は子宮頸部癌細胞株ＨｅＬａの試料を表し、そしてレーン８は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６の試料を表す。図４１（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＭＲＧ１遺伝子の発現レベルは正常子宮外頸部組織試料の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは子宮頸部癌組織の３つの試料においては検出されず、子宮頸部癌細胞株の２つの試料においてもまた検出されなかった。
【０２９４】
図５６（ａ）はＭＲＧ１遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５６（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５６（ａ）に示されるように、約５．０ｋｂのサイズを有する優性ＭＲＧ１  ｍＲＮＡ転写物が過剰発現し、約２．０ｋｂのサイズを有する転写物もまた、心臓、骨格筋、腎臓、および胎盤などの正常組織において発現した。
【０２９５】
図７１（ａ）は、ＭＲＧ１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図７１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図７１（ａ）に示されるように、ＭＲＧ１遺伝子は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織において発現しなかった。このような結果から、本発明のＭＲＧ１遺伝子は、子宮頸部、心臓、骨格筋、腎臓、肝臓、胎盤、肺、および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０２９６】
３−１２．  ＰＩＧ２２
ＰＩＧ２２遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０２９７】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＧＰＩＧ２２  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０２９８】
図４２（ａ）は、ＰＩＧ２２遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図４２（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＰＩＧ２２遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においては極めてわずかに検出された。
【０２９９】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０３００】
図５７（ａ）はＰＩＧ２２遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５７（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５７（ａ）に示されるように、約５ｋｂのサイズを有する優性ＰＩＧ２２  ｍＲＮＡ転写物が肺、心臓、筋肉、腎臓、および肝臓などの正常組織において高度に過剰発現した。加えて、約２ｋｂのサイズを有する転写物もまた正常組織において発現した。
【０３０１】
図７２（ａ）は、ＰＩＧ２２遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図７２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図７２（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約１．３ｋｂの優性ＰＩＧ２２  ｍＲＮＡ転写物は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においてはいずれも全く発現しないか、またはわずかに発現した。このような結果から、本発明のＰＩＧ２２遺伝子は、肺、脳、心臓、筋肉、肝臓、および胎盤などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０３０２】
３−１３．  ＭＩＧ９
ＭＩＧ９遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０３０３】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＭＩＧ９  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０３０４】
図４３（ａ）は、ＭＩＧ９遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図４３（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＭＩＧ９遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においては極めてわずかに検出された。
【０３０５】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０３０６】
図５８（ａ）はＭＩＧ９遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５８（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５８（ａ）に示されるように、約５ｋｂのサイズを有する優性ＭＩＧ９  ｍＲＮＡ転写物が肺、筋肉、腎臓、肝臓、胎盤、および末梢血などの正常組織において高度に過剰発現した。加えて、約２ｋｂのサイズを有する転写物もまた正常組織において発現した。
【０３０７】
図７３（ａ）は、ＭＩＧ９遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図７３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図７３（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約５ｋｂの優性ＭＩＧ９  ｍＲＮＡ転写物は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においてはいずれも全く発現しないか、またはわずかに発現した。このような結果から、本発明のＭＩＧ９遺伝子は、肺、心臓、筋肉、腎臓、肝臓、胎盤、および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０３０８】
３−１４．  ＭＩＧ１１
ＭＩＧ１１遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０３０９】
３つの正常肺組織、２つの原発性肺癌組織、２つの転移性肺癌組織、および肺癌細胞株（Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ３５８）から実施例１に記載されるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、Rediprime II ランダムプライムラベリングシステム（Amersham, United Kingdom）を使用して全長ＭＩＧ１１  ｃＤＮＡから調製した32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０３１０】
図４４（ａ）は、ＭＩＧ１１遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図４４（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＭＩＧ１１遺伝子の発現レベルは正常肺組織の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは肺癌組織の２つの試料、転移性肺癌組織の２つの試料、および肺癌細胞株の２つの試料においてはわずかに検出された。
【０３１１】
ノーザンブロッティングは正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌細胞株（Clontech）に対して実行した。すなわち、ノーザンブロッティングは、正常組織および癌細胞株から抽出した総ＲＮＡ試料の各々をそこに転写したブロットを、上記と同様の様式でハイブリダイズすることによって実行し、ここで、このブロットはClontech社（U.S.）から市販されており、正常組織は、例えば、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、および末梢血白血球から成る群より選択され、癌細胞株は、例えば、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞から成る群より選択される。
【０３１２】
図５９（ａ）はＭＩＧ１１遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図５９（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図５９（ａ）に示されるように、約５ｋｂのサイズを有する優性ＭＩＧ１１  ｍＲＮＡ転写物が心臓、筋肉、筋肉、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、および末梢血などの正常組織において高度に過剰発現した。加えて、約２ｋｂのサイズを有する転写物もまた正常組織において発現した。
【０３１３】
図７４（ａ）は、ＭＩＧ１１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図７４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図７４（ａ）に示されるように、正常組織中で検出された約５ｋｂの優性ＭＩＧ１１  ｍＲＮＡ転写物は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においては全く発現しないか、またはわずかに発現した。このような結果から、本発明のＭＩＧ１１遺伝子は、肺、心臓、筋肉、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤、および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０３１４】
３−１５．  ＭＩＧ１５
ＭＩＧ１５遺伝子の発現レベルを評価するために、以下のようにノーザンブロッティングを実行した。
【０３１５】
３つの正常子宮外頸部組織、３つの原発性子宮頸部癌、および２つの子宮頸部癌細胞株から実施例１におけるように得られた各々の総ＲＮＡ試料２０μｇを変性させ、１％ホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、得られたアガロースゲルをナイロンメンブレン（Boehringer-Mannheim, Germany）に転写した。次いで、このナイロンメンブレンを、実施例１において得られた全長ＭＩＧ１５  ｃＤＮＡを使用する32Ｐ−標識ランダムプライムプローブと４２℃で一晩ハイブリダイズした。ノーザンブロッティング手順を２回反復した；総ｍＲＮＡを決定するために、１回はデンシトメーターを使用して定量し、他方はβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせた。
【０３１６】
図４５（ａ）は、ＭＩＧ１５遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮頸部癌組織、および子宮頸部癌細胞株中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図４５（ｂ）はβ−アクチンの発現を示すノーザンブロッティングの結果である。図４５（ａ）および（ｂ）において、レーン１〜３は正常子宮外頸部組織試料を表し、レーン４〜６は子宮頸部癌組織試料を表し、レーン７は子宮頸部癌細胞株ＨｅＬａの試料を表し、そしてレーン８は子宮頸部癌細胞株ＣＵＭＣ−６の試料を表す。図４５（ａ）および（ｂ）に示されるように、ＭＩＧ１５遺伝子の発現レベルは正常子宮外頸部組織試料の３つの試料すべてにおいて高度に検出されたが、その発現レベルは子宮頸部癌組織の３つの試料においては正常組織よりも有意に低く、子宮頸部癌細胞株の２つの試料においてはわずかに検出された。
【０３１７】
図６０（ａ）はＭＩＧ１５遺伝子が種々の正常組織中でディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図６０（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図６０（ａ）に示されるように、約９．５ｋｂのサイズを有する優性ＭＩＧ１５  ｍＲＮＡ転写物が心臓、骨格筋、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、および末梢血などの正常組織において過剰発現した。
【０３１８】
図７５（ａ）は、ＭＩＧ１５遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現するノーザンブロッティングの結果を示し、図７５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す。図７５（ａ）に示されるように、ＭＩＧ１５遺伝子は、前骨髄球性白血病ＨＬ−６０、バーキットリンパ腫（Raji）、ＳＷ４８０結腸癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、およびＧ３６１黒色腫細胞などの組織においては発現せず、ＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、慢性骨髄性白血病細胞株Ｋ−５６２、およびリンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４などの組織にいては極めてわずかに発現した。
【０３１９】
このような結果から、本発明のＭＩＧ１５遺伝子は、子宮頸部、心臓、骨格筋、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが明らかにされた。
【０３２０】
実施例４
発現ベクターの構築およびトランスフェクション
４−１．  ＧＩＧ１
ＧＩＧ１のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＧＩＧ１  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ１を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＨｅＬａ子宮頸部癌細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＧＩＧ１  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を対照群として使用した。
【０３２１】
４−２．  ＧＩＧ３
ＧＩＧ３のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＧＩＧ３  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ３を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＧＩＧ３  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３２２】
４−３．  ＧＩＧ４
ＧＩＧ４のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＧＩＧ４  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ４を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＧＩＧ４  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３２３】
４−４．  ＧＩＧ５
ＧＩＧ５のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＧＩＧ５  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ５を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＧＩＧ５  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３２４】
４−５．  ＧＩＧ１１
ＧＩＧ１１のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＧＩＧ１１  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ１１を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＭＣＦ−７乳癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＧＩＧ１１  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＭＣＦ−７細胞を対照群として使用した。
【０３２５】
４−６．  ＭＩＧ２
ＭＩＧ２のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＭＩＧ２  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ２を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＨｅＬａ子宮頸部癌細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＭＩＧ２  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を対照群として使用した。
【０３２６】
４−７．  ＭＩＧ４
ＭＩＧ４のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＭＩＧ４  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ４を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＨｅＬａ子宮頸部癌細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＭＩＧ４  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を対照群として使用した。
【０３２７】
４−８．  ＰＩＧ１３
ＰＩＧ１３のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＰＩＧ１３  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１３を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＰＩＧ１３  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３２８】
４−９．  ＰＩＧ１５
ＰＩＧ１５のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＰＩＧ１５  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１５を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＰＩＧ１５  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３２９】
４−１０．  ＰＩＧ８
ＰＩＧ８のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＰＩＧ８  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ８を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＨｅＬａ子宮頸部癌細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＰＩＧ８  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を対照群として使用した。
【０３３０】
４−１１．  ＭＲＧ１
ＭＲＧ１のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＭＲＧ１  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＲＧ１を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＨｅＬａ子宮頸部癌細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＭＲＧ１  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を対照群として使用した。
【０３３１】
４−１２．  ＰＩＧ２２
ＰＩＧ２２のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＰＩＧ２２  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ２２を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＰＩＧ２２  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３３２】
４−１３．  ＭＩＧ９
ＭＩＧ９のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＭＩＧ９  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ９を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＭＩＧ９  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３３３】
４−１４．  ＭＩＧ１１
ＭＩＧ１１のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＭＩＧ１１  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ１１を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＡ５４９肺癌細胞株にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＭＩＧ１１  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞を対照群として使用した。
【０３３４】
４−１５．  ＭＩＧ１５
ＭＩＧ１５のコード領域を含む発現ベクターを以下のように構築した。最初に、実施例２において調製した全長ＭＩＧ１５  ｃＤＮＡクローンを真核生物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Invitrogen, U.S.）に挿入し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ１５を得た。この発現ベクターを、リポフェクタミン（Gibco BRL）を使用してＨｅＬａ子宮頸部癌細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）にトランスフェクトし、次いで、Ｇ４１８（Gibco）  ０．６ｍｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ培地中でインキュベートし、トランスフェクトした細胞を選択する。この時点で、ＭＩＧ１５  ｃＤＮＡを欠いている発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を対照群として使用した。
【０３３５】
実施例５
遺伝子によってトランスフェクトした細胞の増殖曲線
５−１：ＧＩＧ１
子宮頸部癌細胞の増殖に対するＧＩＧ１遺伝子の効果を決定するために、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＧＩＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３３６】
図７６は、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＧＩＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す。図７６において示されるように、ＧＩＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞および通常のＨｅＬａ細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、通常のＨｅＬａ細胞と比較した場合に、ＧＩＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞の５０％のみが生存した。このような結果から、ＧＩＧ１遺伝子は子宮頸部癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３３７】
５−２：ＧＩＧ３
肺癌細胞の増殖に対するＧＩＧ３遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３３８】
図７７は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図７７において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約７０％のみが生存した。このような結果から、ＧＩＧ３遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３３９】
５−３：ＧＩＧ４
肺癌細胞の増殖に対するＧＩＧ４遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ４によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３４０】
図７８は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ４によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図７８において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ４によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ４によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約７０％のみが生存した。このような結果から、ＧＩＧ４遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３４１】
５−４：ＧＩＧ５
肺癌細胞の増殖に対するＧＩＧ５遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３４２】
図７９は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図７９において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約７０％のみが生存した。このような結果から、ＧＩＧ５遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３４３】
５−５：ＧＩＧ１１
乳癌細胞の増殖に対するＧＩＧ１１遺伝子の効果を決定するために、野生型ＭＣＦ−７細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ１１によってトランスフェクトしたＭＣＦ−７乳癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＭＣＦ−７細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３４４】
図８０は、野生型ＭＣＦ−７細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ１１によってトランスフェクトしたＭＣＦ−７乳癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＭＣＦ−７細胞の増殖曲線を示す。図８０において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ１１によってトランスフェクトしたＭＣＦ−７乳癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＭＣＦ−７細胞および野生型ＭＣＦ−７細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型ＭＣＦ−７細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＧＩＧ１１によってトランスフェクトしたＭＣＦ−７乳癌細胞の５０％のみが生存した。このような結果から、ＧＩＧ１１遺伝子は乳癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３４５】
５−６：ＭＩＧ２
子宮頸部癌細胞の増殖に対するＭＩＧ２遺伝子の効果を決定するために、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＩＧ２遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３４６】
図８１は、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＩＧ２遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す。図８１において示されるように、ＭＩＧ２遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞および通常のＨｅＬａ細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、通常のＨｅＬａ細胞と比較した場合に、ＭＩＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞の２０％のみが生存した。このような結果から、ＭＩＧ２遺伝子は子宮頸部癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３４７】
５−７：ＭＩＧ４
子宮頸部癌細胞の増殖に対するＭＩＧ４遺伝子の効果を決定するために、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＩＧ４遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３４８】
図８２は、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＩＧ４遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す。図８２において示されるように、ＭＩＧ４遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞および通常のＨｅＬａ細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、通常のＨｅＬａ細胞と比較した場合に、ＭＩＧ４遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞の５０％のみが生存した。このような結果から、ＭＩＧ４遺伝子は子宮頸部癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３４９】
５−８：ＰＩＧ１３
肺癌細胞の増殖に対するＰＩＧ１３遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３５０】
図８３は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図８３において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１３によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約３０％のみが生存した。このような結果から、ＰＩＧ１３遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３５１】
５−９：ＰＩＧ１５
肺癌細胞の増殖に対するＰＩＧ１５遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３５２】
図８４は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図８４において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ１５によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約３０％のみが生存した。このような結果から、ＰＩＧ１５遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３５３】
５−１０：ＰＩＧ８
子宮頸部癌細胞の増殖に対するＰＩＧ８遺伝子の効果を決定するために、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＰＩＧ８遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３５４】
図８５は、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＰＩＧ８遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す。図８５において示されるように、ＰＩＧ８遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞および通常のＨｅＬａ細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、通常のＨｅＬａ細胞と比較した場合に、ＰＩＧ８遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞の５０％のみが生存した。このような結果から、ＰＩＧ８遺伝子は子宮頸部癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３５５】
５−１１：ＭＲＧ１
子宮頸部癌細胞の増殖に対するＭＲＧ１遺伝子の効果を決定するために、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＲＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３５６】
図８６は、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＲＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す。図８６において示されるように、ＭＲＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞および通常のＨｅＬａ細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、通常のＨｅＬａ細胞と比較した場合に、ＭＲＧ１遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞の４０％のみが生存した。このような結果から、ＭＲＧ１遺伝子は子宮頸部癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３５７】
５−１２：ＰＩＧ２２
肺癌細胞の増殖に対するＰＩＧ２２遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ２２によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３５８】
図８７は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ２２によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図８７において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ２２によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＰＩＧ２２によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約４０％のみが生存した。このような結果から、ＰＩＧ２２遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３５９】
５−１３：ＭＩＧ９
肺癌細胞の増殖に対するＭＩＧ９遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ９によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３６０】
図８８は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ９によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図８８において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ９によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ９によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約４０％のみが生存した。このような結果から、ＭＩＧ９遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３６１】
５−１４：ＭＩＧ１１
肺癌細胞の増殖に対するＭＩＧ１１遺伝子の効果を決定するために、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ１１によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３６２】
図８９は、野生型Ａ５４９細胞、実施例４において調製したベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ１１によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す。図８９において示されるように、ｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ１１によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＡ５４９細胞および野生型Ａ５４９細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、野生型Ａ５４９細胞と比較した場合に、ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ＭＩＧ１１によってトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞の約３０％のみが生存した。このような結果から、ＭＩＧ１１遺伝子は肺癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３６３】
５−１５：ＭＩＧ１５
子宮頸部癌細胞の増殖に対するＭＩＧ１５遺伝子の効果を決定するために、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＩＧ１５遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、およびベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞を、それぞれＤＭＥＭ培地中１×１０5細胞／ｍｌの細胞密度で９日間インキュベートした。細胞は、各々の培養液中で、それらが接着しているフラスコからトリプシン（Sigma）を用いる処理によって単離し、次いで生存した細胞を、トリパンブルー色素排除法に従って１日目、３日目、５日目、７日目、および９日目に計数した（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York(1987)）。
【０３６４】
図９０は、通常のＨｅＬａ細胞、実施例４において調製したＭＩＧ１５遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってのみトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す。図９０において示されるように、ＭＩＧ１５遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞は、発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１によってトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞および通常のＨｅＬａ細胞の場合と比較して、より高い死滅率を示したことが明らかにされた。９日間のインキュベーション後、通常のＨｅＬａ細胞と比較した場合に、ＭＩＧ１５遺伝子によってトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮頸部癌細胞の約５０％のみが生存した。このような結果から、ＭＩＧ１５遺伝子は子宮頸部癌細胞の増殖を抑制したことが認められる。
【０３６５】
上記に鑑みて、本発明の遺伝子は、ヒトの癌を診断および予防するために有用であり得る。
【図面の簡単な説明】
【０３６６】
図面の説明は以下の通りである。
【図１】配列番号３のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３８および配列番号４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図２】配列番号７のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３２および配列番号８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図３】配列番号１１のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３５および配列番号１２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図４】配列番号１５のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３４および配列番号１６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図５】配列番号１９のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３６および配列番号２０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図６】配列番号２３のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３５および配列番号２４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図７】配列番号２７のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ４１および配列番号２８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図８】配列番号３１のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ６および配列番号３２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図９】配列番号３５のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ６および配列番号３６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図１０】配列番号３９のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３６および配列番号４０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図１１】配列番号４３のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ２１および配列番号４４の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図１２】配列番号４７のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ２４および配列番号４８の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図１３】配列番号５１のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ１２および配列番号５２の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図１４】配列番号５５のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ１３および配列番号５６の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図１５】配列番号５９のランダム５’−１３−ｍｅｒプライマーＨ−ＡＰ３１および配列番号６０の固定オリゴ−ｄＴプライマーを使用するＰＣＲの結果を示すゲルの図である。
【図１６】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図１７】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図１８】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図１９】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２０】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２１】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２２】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２３】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２４】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２５】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２６】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２７】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２８】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図２９】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図３０】図１６〜３０は、ＧＩＧ１、ＧＩＧ３、ＧＩＧ４、ＧＩＧ５、ＧＩＧ１１、ＭＩＧ２、ＭＩＧ４、ＰＩＧ１３、ＰＩＧ１５、ＰＩＧ８、ＭＲＧ１、ＰＩＧ２２、ＭＩＧ９、ＭＩＧ１１およびＭＩＧ１５の遺伝子生成物をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した結果を示す図である。
【図３１ａ】図３１（ａ）はＧＩＧ１遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮癌組織、および子宮癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３１ｂ】図３１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３２】（ａ）はＧＩＧ３遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３３】（ａ）はＧＩＧ４遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３４】（ａ）はＧＩＧ５遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３５ａ】図３５（ａ）はＧＩＧ１１遺伝子が正常乳房組織、原発性乳癌組織、および乳癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３５ｂ】図３５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３６ａ】図３６（ａ）はＭＩＧ２遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮癌組織、および子宮癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３６ｂ】図３６（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３７ａ】図３７（ａ）はＭＩＧ４遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮癌組織、および子宮癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３７ｂ】図３７（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３８】（ａ）はＰＩＧ１３遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図３９】（ａ）はＰＩＧ１５遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４０ａ】図４０（ａ）はＰＩＧ８遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮癌組織、および子宮癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４０ｂ】図４０（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４１ａ】図４１（ａ）はＭＲＧ１遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮癌組織、および子宮癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４１ｂ】図４１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４２】（ａ）はＰＩＧ２２遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４３】（ａ）はＭＩＧ９遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４４】（ａ）はＭＩＧ１１遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、および肺癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図であり、（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４５ａ】図４５（ａ）はＭＩＧ１５遺伝子が正常子宮外頸部組織、原発性子宮癌組織、および子宮癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４５ｂ】図４５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４６ａ】図４６（ａ）はＧＩＧ１遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４６ｂ】図４６（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４７ａ】図４７（ａ）はＧＩＧ３遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４７ｂ】図４７（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４８ａ】図４８（ａ）はＧＩＧ４遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４８ｂ】図４８（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４９ａ】図４９（ａ）はＧＩＧ５遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図４９ｂ】図４９（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５０ａ】図５０（ａ）はＧＩＧ１１遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５０ｂ】図５０（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５１ａ】図５１（ａ）はＭＩＧ２遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５１ｂ】図５１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５２ａ】図５２（ａ）はＭＩＧ４遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５２ｂ】図５２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５３ａ】図５３（ａ）はＰＩＧ１３遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５３ｂ】図５３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５４ａ】図５４（ａ）はＰＩＧ１５遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５４ｂ】図５４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５５ａ】図５５（ａ）はＰＩＧ８遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５５ｂ】図５５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５６ａ】図５６（ａ）はＭＲＧ１遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５６ｂ】図５６（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５７ａ】図５７（ａ）はＰＩＧ２２遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５７ｂ】図５７（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５８ａ】図５８（ａ）はＭＩＧ９遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５８ｂ】図５８（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５９ａ】図５９（ａ）はＭＩＧ１１遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図５９ｂ】図５９（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６０ａ】図６０（ａ）はＭＩＧ１５遺伝子が種々の正常組織においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６０ｂ】図６０（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６１ａ】図６１（ａ）はＧＩＧ１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６１ｂ】図６１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６２ａ】図６２（ａ）はＧＩＧ３遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６２ｂ】図６２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６３ａ】図６３（ａ）はＧＩＧ４遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６３ｂ】図６３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６４ａ】図６４（ａ）はＧＩＧ５遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６４ｂ】図６４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６５ａ】図６５（ａ）はＧＩＧ１１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６５ｂ】図６５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６６ａ】図６６（ａ）はＭＩＧ２遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６６ｂ】図６６（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６７ａ】図６７（ａ）はＭＩＧ４遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６７ｂ】図６７（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６８ａ】図６８（ａ）はＰＩＧ１３遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６８ｂ】図６８（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６９ａ】図６９（ａ）はＰＩＧ１５遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図６９ｂ】図６９（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７０ａ】図７０（ａ）はＰＩＧ８遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７０ｂ】図７０（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７１ａ】図７１（ａ）はＭＲＧ１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７１ｂ】図７１（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７２ａ】図７２（ａ）はＰＩＧ２２遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７２ｂ】図７２（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７３ａ】図７３（ａ）はＭＩＧ９遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７３ｂ】図７３（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７４ａ】図７４（ａ）はＭＩＧ１１遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７４ｂ】図７４（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７５ａ】図７５（ａ）はＭＩＧ１５遺伝子が種々の癌細胞株においてディファレンシャルに発現しているノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７５ｂ】図７５（ｂ）は同じブロットをβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせることによって得られたノーザンブロッティングの結果を示す図である。
【図７６】野生型ＨｅＬａ細胞、ＧＩＧ１遺伝子でトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す図である。
【図７７】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＧＩＧ３遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図７８】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＧＩＧ４遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図７９】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＧＩＧ５遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８０】野生型ＭＣＦ−７細胞、ＧＩＧ１１遺伝子でトランスフェクトしたＭＣＦ−７乳癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＭＣＦ−７細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８１】野生型ＨｅＬａ細胞、ＭＩＧ２遺伝子でトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８２】野生型ＨｅＬａ細胞、ＭＩＧ４遺伝子でトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８３】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＰＩＧ１３遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８４】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＰＩＧ１５遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８５】野生型ＨｅＬａ細胞、ＰＩＧ８遺伝子でトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８６】野生型ＨｅＬａ細胞、ＭＲＧ１遺伝子でトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８７】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＰＩＧ２２遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８８】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＭＩＧ９遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図８９】野生型Ａ５４９肺癌細胞、ＭＩＧ１１遺伝子でトランスフェクトしたＡ５４９肺癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞の増殖曲線を示す図である。
【図９０】野生型ＨｅＬａ細胞、ＭＲＧ１５遺伝子でトランスフェクトしたＨｅＬａ子宮癌細胞、および発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１】
2008525046.tif 000003
【図２】
2008525046.tif 000004
【図３】
2008525046.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2008525046.tif 000009
【図８】
2008525046.tif 000010
【図９】
2008525046.tif 000011
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１ａ】
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【図３１ｂ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５ａ】
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【図３５ｂ】
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【図３６ａ】
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【図３６ｂ】
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【図３７ａ】
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【図３７ｂ】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０ａ】
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【図４０ｂ】
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【図４１ａ】
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【図４１ｂ】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５ａ】
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【図４５ｂ】
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【図４６ａ】
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【図４６ｂ】
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【図４７ａ】
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【図４７ｂ】
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【図４８ａ】
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【図４８ｂ】
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【図４９ａ】
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【図４９ｂ】
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【図５０ａ】
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【図５０ｂ】
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【図５１ａ】
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【図５１ｂ】
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【図５２ａ】
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【図５２ｂ】
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【図５３ａ】
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【図５３ｂ】
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【図５４ａ】
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【図５４ｂ】
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【図５５ａ】
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【図５５ｂ】
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【図５６ａ】
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【図５６ｂ】
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【図５７ａ】
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【図５７ｂ】
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【図５８ａ】
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【図５８ｂ】
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【図５９ａ】
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【図５９ｂ】
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【図６０ａ】
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【図６０ｂ】
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【図６１】
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【図６１ｂ】
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【図６２】
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【図６２ｂ】
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【図６３】
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【図６３ｂ】
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【図６４】
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【図６４ｂ】
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【図６５】
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【図６５ｂ】
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【図６６】
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【図６６ｂ】
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【図６７】
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【図６７ｂ】
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【図６８】
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【図６８ｂ】
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【図６９】
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【図６９ｂ】
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【図７０】
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【図７０ｂ】
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【図７１】
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【図７１ｂ】
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【図７２】
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【図７２ｂ】
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【図７３】
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【図７３ｂ】
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【図７４】
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【図７４ｂ】
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【図７５】
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【図７５ｂ】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
2008525046.tif 000127
【図８９】
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【図９０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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