(57)【要約】  本発明は、このような治療を必要とする患者に、低い経口生体利用率を有する式ＶＩＩのコンジュゲート化合物、またはその医薬上許容される塩、プロドラッグ、または溶媒和物を投与することによる、胃腸管の炎症性疾患、障害、および症状の予防および治療方法を対象としており、2008509899.tif 000112式中、Ｍは炎症性細胞に蓄積する性質を有するマクロライドサブユニットを表し、Ｔはステロイドまたは抗炎症性、鎮痛および／または解熱活性を有する非ステロイド薬物（ＮＳＡＩＤ）に由来する非ステロイド（非ステロイド部分）でよい抗炎症性サブユニットを表し、ＬはＭおよびＴを共有結合しているリンカーを表す。本発明の開示は、低い経口生体利用率を有する、式ＶＩＩのコンジュゲート化合物を含む医薬組成物も対象としている。
2008509899.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
胃腸管の炎症性疾患、障害または症状を維持治療する方法、あるいは該疾患、障害または症状の再発を遅延または防止する方法であって、その維持治療、再発の遅延または防止を必要とするヒトまたはヒト以外の哺乳動物の対象に、有効量の式ＶＩＩ：
【化１】
2008509899.tif 000082
［式中：
Ｍは１２−、１４−、１５−、１６−、１７−および１８−員のラクトン環分子からなる群から選択されるマクロライドサブユニットであり、ここで「員」はラクトン環中の炭素原子またはヘテロ原子の数をいい、該マクロライドは炎症性免疫応答を仲介する哺乳動物の免疫系細胞内に蓄積する性質を有し；
Ｔはステロイドまたは非ステロイド抗炎症性サブユニットであり；
ＬはＭおよびＴの各々が共有結合しているリンカー分子を意味する］
で示される、経口剤形の低い経口生体利用率のコンジュゲート化合物、またはその医薬上許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を投与することを含み、式ＶＩＩのコンジュゲートが１０％未満の経口生体利用率を示すところの、方法。
【請求項２】
式ＶＩＩのコンジュゲートが５％未満の生体利用率を示すところの、請求項１記載の方法。
【請求項３】
式ＶＩＩのコンジュゲートが２％未満の生体利用率を示すところの、請求項１記載の方法。
【請求項４】
Ｍが患者の内部で炎症性免疫応答を仲介する免疫系細胞内に蓄積する性質を有するところの、請求項１記載の方法。
【請求項５】
Ｍが式ＶＩＩＩ：
【化２】
2008509899.tif 000083
［式中：
（ｉ）ＺおよびＷは、独立して、
【化３】
2008509899.tif 000084
または結合手であり、ここで
ＲｔおよびＲｓは、独立して、水素またはアルキルであり、
ＲＭはヒドロキシ、アルコキシ、置換アルコキシまたはＯＲｐであり、
ＲＮは水素、Ｒｐ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、または−Ｃ（＝Ｘ）−ＮＲｔＲｓであり、ここでＸは＝Ｏまたは＝Ｓである：
ただし、ＺおよびＷが共に同時に
【化４】
2008509899.tif 000085
または結合手になることはできず；
（ｉｉ）ＵおよびＹは、独立して、水素、ハロゲン、アルキルまたはヒドロキシアルキルであり；
（ｉｉｉ）Ｒ１はヒドロキシ、ＯＲｐ、−Ｏ−Ｓ２または＝Ｏであり；
（ｉｖ）Ｓ１は水素またはＣ／５位の式：
【化５】
2008509899.tif 000086
［式中：
Ｒ８およびＲ９は、ともに水素であるか、一緒に結合手を形成するか、あるいはＲ９は水素で、Ｒ８は−Ｎ（ＣＨ３）Ｒｙであり、ここで、
ＲｙはＲｐ、Ｒｚまたは−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｚであり、ここで、Ｒｚは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはＣ２−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、アリールまたはヘテロアリールで置換されたアルキルであり、
Ｒ１０は水素またはＲｐである］
の糖部分であり、
（ｖ）Ｓ２は式：
【化６】
2008509899.tif 000087
［式中：
Ｒ３’は水素またはメチルであり；
Ｒ１１は水素またはＲｐであるか、あるいはＯ−Ｒ１１はＲ１２およびＣ／４”炭素原子とともに＞Ｃ＝Ｏまたはエポキシ基を形成する基であり；
Ｒ１２は水素、アルキル、アルキル−Ｒｐ、Ｒｐ、またはＯ−Ｒ１１およびＣ／４”炭素原子とともに＞Ｃ＝Ｏまたはエポキシ基を形成する基である］
の糖部分であり；
（ｖｉ）Ｒ２は水素、ヒドロキシ、ＯＲｐ基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたは置換アルコキシであり；
（ｖｉｉ）Ａは水素またはメチルであり；
（ｖｉｉｉ）Ｂはメチルまたはエポキシであり；
（ｉｘ）Ｅは水素またはハロゲンであり；
（ｘ）Ｒ３はヒドロキシ、ＯＲｐ、アルコキシであるか、Ｒ３はＲ５およびＣ／１１およびＣ／１２炭素原子と一緒になって、環状カルボナートまたはカルバマートを形成する基であるか、ＷまたはＺが＞Ｎ−ＲＮである場合、Ｒ３はＷまたはＺと一緒になって環状カルバマートを形成する基であり；
（ｘｉ）Ｒ４はＣ１−Ｃ４アルキルであり；
（ｘｉｉ）Ｒ５は水素、ヒドロキシ、ＯＲｐ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、またはＲ３およびＣ／１１およびＣ／１２炭素原子と一緒になって環状カルボナートまたはカルバマートを形成する基であり；
（ｘｉｉｉ）Ｒ６は水素またはＣ１−Ｃ４アルキルである］
で示される基であり；
Ｍが結合部位を有しており、その結合部位にある結合基Ｌを介してサブユニットＴに結合する：
ただし、その結合部位は、以下の：
ａ）マクロライド環上の任意の反応性ヒドロキシ、窒素もしくはエポキシ基、糖部分Ｓ１、糖部分Ｓ２、またはＳ１および／もしくはＳ２が開裂されるときのアグリコン酸素もしくは窒素；
ｂ）ＺまたはＷに位置する反応性＞Ｎ−ＲＮまたは−ＮＲｔＲｓまたは基
【化７】
2008509899.tif 000088
ｃ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ５のいずれか１つに位置する反応性ヒドロキシ基；
ｄ）最初にヒドロキシまたは−ＮＲｔＲｓ基に誘導体化され得る他の基
の一または複数の基にあり；
ここで、Ｒｐはヒドロキシルまたはアミノ保護基である、ところの請求項１記載の方法。
【請求項６】
Ｓ１がＨであり、Ｒ１がＯＨであるところの、請求項５記載の方法。
【請求項７】
Ｌが式ＩＸＡまたは式ＩＸＢ：
ＩＸＡ    Ｘ１−（ＣＨ２）ｍ−Ｘ２
ＩＸＢ    Ｘ１−（ＣＨ２）ｍ−Ｑ−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ２
［式中、Ｘ１は、−ＣＨ２、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、＝Ｎ−Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−からなる群より選択され；
Ｘ２は、−ＮＨ−、−ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−ＯＣ（＝Ｏ）−であり；
Ｑは、−ＮＨ−または−ＣＨ２−であり、ここで−ＣＨ２−または−ＮＨ−基は、各々、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｘ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｘ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｘで置換されていてもよく、ＲｘはＣ１−Ｃ７アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
ｍおよびｎは、独立して、０から８までの整数である；ただし、ＱがＮＨの場合には、ｎを０とすることはできない］
で示される基である、ところの請求項１記載の方法。
【請求項８】
Ｔが式ＩＸ：
【化８】
2008509899.tif 000089
［式中、
ＲａおよびＲｂは、独立して、水素またはハロゲンであり；
Ｒｃはヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、チオカルバモイル、カルバモイルまたは鎖ＬのＸ２に結合した原子価結合であり；
ＲｄおよびＲｅは、独立して、水素、ヒドロキシ、メチルまたはＣ１−Ｃ４アルコキシであるか、あるいは各々が、他の基と一緒になって１，３−ジオキソラン環を形成する基、または鎖ＬのＸ２に結合した原子価結合であり；
Ｒｆは水素、ヒドロキシ、塩素であるか、またはそれが結合する炭素原子と一緒になってケト基を形成し；
Ｒｊは水素またはハロゲンである］
で示されるステロイドサブユニットである、ところの請求項１記載の方法。
【請求項９】
Ｔが、アセクロフェナク、アセメタシン、アセトアミノフェン、アセトアミノサロール、アセチルサリチル酸、アセチルサリチル−２−アミノ−４−ピコリン酸、５−アミノアセチルサリチル酸、アルクロフェナック、アミノプロフェン、アンフェナク、アニレリジン、アザチオプリン、ベンダザック、ベノキサプロフェン、ベルモプロフェン、α−ビサボロール、ブロンフェナク、５−ブロモサリチル酸酢酸塩、ブロモサリゲニン、ブクロキス酸、ブチブフェン、カルプロフェン、ＣＣ  １０８８、ＣＣ  ５０１３、ＣＤＣ  ８０１、セレコキシブ、クロモグリケート、シンメタシン、シパムフィリン、クリンダナク、クロピラク、ＣＯＸ−１８９、シクロスポリン、ナトウリムジクロフェナク、ジフルニサル、ジタゾール、エンフェナミン酸、エトドラク、エトフェナメート、エトリコキシブ、フェルビナク、フェンブフェン、フェンクロズ酸、フェンドサール、フェノプロフェン、フェンチアザク、フェプラジノール、ＦＫ−５０６、フルフェナム酸、フルニキシン、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、グルタメタシン、サリチル酸グリコール、イブフェナック、イブプロフェン、イブプロキサム、インドメタシン、インドプロフェン、イソフェゾラク、イソキセパク、イソキシカム、ＪＴＥ−５２２、ケトプロフェン、ケトロラク、Ｌ−７４５３３７、レフルノミド、ロルノキシカム、ロキソプロフェン、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メサラミン、メサラジン、メトトレキセート、メチアジン酸、モフェゾラク、モンテルカスト、マイコフェノール酸、ナプロキセン、ニフルム酸、オルサラジン、オキサセプロール、オキサプロジン、オキシフェンブタゾン、パルサルミド、ペリソキサール、アセチルサリチル酸フェニル、フェニルブタゾン、サリチル酸フェニル、テオフィリン、ピラゾラク、ピロキシカム、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、ラパマイシン、ロフェコキシブ、サラセトアミド、サリチルアミドＯ−酢酸、サリチル硫酸、サリシン、サリチルアミド、サルサラート、スリンダク、スルファサラジン、スプロフェン、スキシブタゾン、テノキシカム、サリドマイド、テトラフルオロサリドマイド、チアプロフェン酸、チアラミド、チノリジン、トルフェナム酸、トルメチン、トモキシプロール、トロペシン、バルデコキシブ（Ｓｅａｒｌｅ）、キセンブシン、キシモプロフェン、ザルトプロフェン、ゾメピラック、ザフィルルカストからなる群より選択されるＮＳＡＩＤサブユニットであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化９】
2008509899.tif 000090
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１１】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１０】
2008509899.tif 000091
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１２】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１１】
2008509899.tif 000092
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１３】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１２】
2008509899.tif 000093
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１４】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１３】
2008509899.tif 000094
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１５】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１４】
2008509899.tif 000095
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１６】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１５】
2008509899.tif 000096
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１７】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１６】
2008509899.tif 000097
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１８】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１７】
2008509899.tif 000098
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項１９】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１８】
2008509899.tif 000099
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項２０】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化１９】
2008509899.tif 000100
で示される、ところの請求項５記載の方法。
【請求項２１】
式ＶＩＩの化合物が、構造式：
【化２０】
2008509899.tif 000101
で示される、ところの請求項１記載の方法。
【請求項２２】
胃腸管の炎症性疾患、障害または症状が炎症性腸疾患であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
炎症性腸疾患がクローン病、潰瘍性大腸炎またはセリアック病であるところの、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
一定量の式ＶＩＩ：
【化２１】
2008509899.tif 000102
［式中：
Ｍは１２−、１４−、１５−、１６−、１７−および１８−員のラクトン環分子からなる群から選択されるマクロライドサブユニットであり、ここで「員」はラクトン環中の炭素原子またはヘテロ原子の数をいい、該マクロライドは炎症性免疫応答を仲介する哺乳動物の免疫系細胞内に蓄積する性質を有し；
Ｔはステロイドまたは非ステロイド抗炎症性サブユニットであり；
ＬはＭおよびＴの各々が共有結合しているリンカー分子を意味する］
で示されるコンジュゲート化合物、またはその医薬上許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を含み、ここで該式ＶＩＩのコンジュゲートが１０％未満の経口生体利用率を示し、その一定量が胃腸管の疾患、障害または症状の部分的または完全な寛解期にある炎症により特徴付けられる該疾患、障害または症状の治療にて有効な量であるところの、医薬組成物。
【請求項２５】
対象がその有効部分としてサブユニットＴを含む活性成分を用いる治療に対して応答すると前もって測定されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
胃腸管の炎症性疾患、障害または症状を維持治療する方法、あるいは該疾患、障害または症状の再発を遅延または防止する方法であって、その維持治療、再発の遅延または防止を必要とするヒトまたはヒト以外の哺乳動物の対象に、有効量の式ＶＩＩ：
【化２２】
2008509899.tif 000103
［式中：
Ｍは式ＸＩＶ：
【化２３】
2008509899.tif 000104
（式中：
（ｉ）ＺおよびＷは、一緒になって、
【化２４】
2008509899.tif 000105
を形成し、ここで
ＲＭはヒドロキシ、アルコキシ、置換アルコキシまたはＯＲｐであり；
ＲＮは水素、Ｒｐまたはアルキルであり；
（ｉｉ）Ｒ１はヒドロキシ、ＯＲｐまたは−Ｏ−Ｓ２であり；
（ｉｉｉ）Ｓ１は水素またはＣ／５位の式：
【化２５】
2008509899.tif 000106
（式中、ＲｙはＨ、アルキルまたはＲｐである）
の糖部分であり；
（ｉｖ）Ｓ２は式：
【化２６】
2008509899.tif 000107
（式中：
Ｒ１２は水素、アルキル、アルキル−ＲｐまたはＲｐであり；
Ｒｐはヒドロキシルまたはアミノ保護基である）
の糖部分である）
で示される基であり；
Ｍは結合部位を有しており、その結合部位にある結合基Ｌを介してサブユニットＴに結合する：
ただし、その結合部位は、以下の：
ａ）マクロライド環上の任意の反応性に富むヒドロキシ、窒素もしくはエポキシ基、糖部分Ｓ１、糖部分Ｓ２、またはＳ１および／もしくはＳ２が開裂されるときのアグリコン酸素もしくは窒素；
ｂ）ＺまたはＷに位置する反応に富む＞Ｎ−ＲＮまたは
【化２７】
2008509899.tif 000108
の一または複数の基にあり；
Ｔはステロイドまたは非ステロイド抗炎症性サブユニットであり；
ＬはＭおよびＴの各々が共有結合しているリンカー分子であり、ここで、
Ｌは式ＩＸＡまたは式ＩＸＢ：
ＩＸＡ    Ｘ１−（ＣＨ２）ｍ−Ｘ２
ＩＸＢ    Ｘ１−（ＣＨ２）ｍ−Ｑ−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ２
（式中、Ｘ１は、−ＣＨ２、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、＝Ｎ−Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−からなる群より選択され；
Ｘ２は、−ＮＨ−、−ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−ＯＣ（＝Ｏ）−であり；
Ｑは、−ＮＨ−または−ＣＨ２−であり、ここで−ＣＨ２−または−ＮＨ−基は、各々、Ｃ１−Ｃ７アルキル、Ｃ２−Ｃ７アルケニル、Ｃ２−Ｃ７アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｘ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｘ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｘで置換されていてもよく、ＲｘはＣ１−Ｃ７アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
ｍおよびｎは、独立して、０から８までの整数である；ただし、ＱがＮＨの場合には、ｎを０とすることはできない］
で示される、経口剤形の低い経口生体利用率のコンジュゲート化合物、またはその医薬上許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を投与することを含み、式ＶＩＩのコンジュゲートが１０％未満の経口生体利用率を示すところの、方法。
【請求項２７】
Ｍが式ＸＶ：
【化２８】
2008509899.tif 000109
［式中：
（ｉ）ＲＮは水素、Ｒｐまたはアルキルであり；
（ｉｉ）Ｒ１はヒドロキシまたは−Ｏ−Ｓ２であり；
（ｉｖ）Ｓ１は水素またはＣ／５位の式：
【化２９】
2008509899.tif 000110
の糖部分であり；
（ｖ）Ｓ２は式：
【化３０】
2008509899.tif 000111
（式中、Ｒｐはアミノ保護基である）
の糖部分であり；
Ｍは結合部位を有しており、その結合部位にある結合基Ｌを介してサブユニットＴに結合する：ただし、その結合部位は、結合基Ｌを介して反応性に富む＞Ｎ−ＲＮである］
で示される基である、ところの請求項２６記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年８月１２日出願の米国仮出願第６０／６０１，０８７号および２００４年８月１９日出願の同第６０／６０３，３１５号の利益を主張するものであり、これらの内容は出典明示により本明細書の一部とされる。
【０００２】
本発明は、経口投与されたときまたは胃腸粘膜に別の方法でデリバリーされたときに低い生体利用率を有する、（ｉ）免疫系細胞に選択的に蓄積するマクロライドサブユニットおよび（ｉｉ）抗炎症薬のコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、またはその医薬上許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物の、被験者の胃腸管の炎症性疾患、障害、および症状の治療および予防のための使用に関する。抗炎症薬は、１種または複数の抗炎症コルチコステロイドまたは非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）から選択することができる。特に、本発明の低い経口生体利用率コンジュゲート化合物は、下の式ＶＩＩで表される。特に、本発明は、完全にまたは部分的に寛解期にあり、かつグルココルチコイドまたはＮＳＡＩＤでの治療に応答する炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、およびセリアック病）の長期間の維持治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヒトの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、腸の抗原に対する異常な免疫応答のために、遺伝学的に影響されやすい個体において発生する症状として一般的に記載されている。ＩＢＤの発現は、内因性抗原に対する応答を減ずる粘膜免疫系の減退に起因すると考えられる。ＩＢＤは、粘膜Ｔ細胞の機能不全、異常なサイトカイン産生、および細胞性炎症によって特徴づけられる、最終的に腸粘膜の損傷をもたらす、慢性、再発性、かつ組織破壊性の疾患の一群である。臨床上、ＩＢＤはクローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を含む（Ｂａｍｆｏｒｄ  Ｋ．Ｄ．、ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１９９９年、２４：１６１−８；Ｍａｙｅｒ他、Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｏｎｃｅｐｔ  ｏｆ  ＩＢＤ：Ｅｔｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｎ「Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ」、第５版２０００年、Ｋｉｒｓｎｅｒ  ＪＢ  ｅｄｉｔｏｒ．Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ、２８０−２９６頁）。
【０００４】
クローン病は、腸のどの部分も襲いうる、未知の病因の慢性炎症性疾患である。病変は皮相的に開始することがあるが、炎症過程は腸壁を通して流入領域リンパ節に広がる。この疾患の経過は、再発性であったり連続性であったり、軽かったり重かったりする。腸の関係している部分の切除によって、これを治療することはできない。クローン病のほとんどの患者は、ある時点で外科手術をおこなうが、続いての再発がよくあり、継続的な内科治療が普通である。
【０００５】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）も、未知の病因の慢性炎症性疾患であるが、それは大腸のみを侵し、非常に重篤な場合を除き腸粘膜に限定される。この疾患の経過も、再発性であったり継続性であったり、軽かったり重かったりする。これは全体の大腸切除術により治すことができるが、これは急性の重篤な疾患または慢性の軽減しない疾患の場合に必要になることがある。潰瘍性大腸炎の大多数の患者は、外科的によりも内科的に管理される。
【０００６】
重篤なクローン病の治療には、グルココルチコイドステロイドが選択される治療法であるが、寛解が達成されるまでに限られ、その後は中断されるべきである。疾患が十分に寛解しない場合、グルココルチコイドは症状の制御を維持するために使用される。より重篤ではない場合に、特に疾患が大腸に関係する場合にスルファサラジンが使用される。クローン病の対症治療には、痛みのための鎮痛剤および下痢の制御のためのアヘン剤も使用される。しかしながら、多くの患者が結局手術を必要とする。
【０００７】
潰瘍性大腸炎の急性の発病の治療には、グルココルチコイドステロイド（プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロンまたはブデソニド）が使用される（Ｍｕｌｄｅｒ  ＣＪおよびＧＮ  Ｔｙｔｇａｔ、Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１９９３年、７：１２５−３０）。寛解が達成された後、ＵＣはまた、寛解の維持のためのスルファサラジンで治療される。スルファサラジンは、大腸からのスルファピリジン部分の吸収による、多くの副作用を有する（Ｓｍｏｌｅｎ  Ｊ．Ｓ．他、Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ、１９９９年；３５３：２５９−２６６）。５−アミノサリチル酸または５−アミノサリチル酸部分を有する化合物のような新たな薬物が最近開発され、スルファサラジン同様に有効であるが、スルファピリジンクラスの薬物に関連した副作用がない。しかしながら、これらの新たな薬物は、下痢などのこれらの固有の副作用を有する（Ａｒｄｉｚｚｏｎｅ  Ｓ  ａｎｄ  ＧＢ  Ｐｏｒｒｏ、Ｄｒｕｇ  Ｓａｆ．２００２年、２５：５６１−８２）。
【０００８】
セリアック病は、小麦およびライ麦たんぱく質に存在するグルテンに反応を表し、小腸粘膜の変化およびグルテンを許容しない患者における栄養素の吸収障害をもたらす慢性の腸疾患である。ＩＢＤに関係しているかは未知であるが、これは共通の一定の総合的症状、例えば、炎症細胞の局部浸潤、大腸組織損傷による吸収不良および栄養不良、局部組織の炎症の増大したメディエータを有する。今日、多くの患者が、タンパク質が高く脂肪が通常の、グルテンを含まない食餌治療で治療されている。しかしながら、このような治療に応答しない患者もいる。これらの患者は、ヒドロコルチゾン、プレドニゾンまたはプレドニゾロンなどのグルココルチコイドで治療される。全身的に活性なステロイドの投与量の長期にわたる投与は重篤な副作用を生じる重大な危険を冒すという事実によって、この治療は結局中断されなければならない。これらは、臨床的な兆候が存在しない長期間（数年）の寛解の後に生じうる急性の再発を伴う疾患であるため、非修飾のステロイドの投与を含む維持治療の使用は正当化することができない。
【０００９】
参照によりその全体を本明細書に組み込んだ国際公開０２／０５５５３１Ａ１号は、式Ｉで表されるコンジュゲート化合物
【００１０】
【化１】
2008509899.tif 000003
（式中、Ｍは炎症性細胞に蓄積する性質を有するマクロライドサブユニットを表し、Ａはステロイドまたは非ステロイドでよい抗炎症性サブユニットを表し、ＬはＭおよびＡを連結するリンカー分子を表す）、（ｂ）その医薬上許容される塩、プロドラッグおよび溶媒和物、（ｃ）その調製のための方法および中間体、ならびに（ｄ）ヒトおよび動物における炎症性疾患および症状の治療におけるその使用を開示している。国際公開０２／０５５５３１Ａ１号においては、コンジュゲートステロイド−マクロライド化合物はほとんど、大部分マクロライド環のＮ／９ａ位でステロイドサブユニットと連結している。
【００１１】
参照によりその全体を本明細書に組み込んだ米国特許出願公開２００４／００１４６８５号は、式ＩＩで表される化合物
【００１２】
【化２】
2008509899.tif 000004
［式中、Ｍは炎症性細胞に蓄積する性質を有するマクロライドに由来するマクロライドサブユニット（マクロライド部分）を表し、Ｓは抗炎症性活性を有するステロイド薬物に由来するステロイドサブユニットを表し、ＬはＭおよびＳを連結するリンカー分子を表す］、その医薬上許容される塩および溶媒和物、その調製のための方法および中間体、ならびにヒトおよび動物における炎症性疾患および症状の治療におけるその使用に関する。参照によりその全体を本明細書に組み込んだ米国特許出願公開２００４／００７７６１２号は、式ＩＩＩで表される新たな化合物
【００１３】
【化３】
2008509899.tif 000005
［式中、Ｍは炎症性細胞に蓄積する性質を有するマクロライドに由来するマクロライドサブユニット（マクロライド部分）を表し、Ｖは抗炎症性ステロイドもしくは非ステロイドサブユニットまたは抗新生物性もしくは抗ウイルス性サブユニットを表し、ＬはＭおよびＶを共有結合する連結基を表す］、その医薬上許容される塩および溶媒和物、その調製のための方法および中間体、ならびにヒトおよび動物における炎症性疾患および症状の治療におけるその使用に関する。
【００１４】
参照によりその全体を本明細書に組み込んだ米国特許出願公開２００４／００９７４３４号は、式ＩＶで表される新たな化合物
【００１５】
【化４】
2008509899.tif 000006
［式中、Ｍは炎症性細胞に蓄積する性質を有するマクロライドに由来するマクロライドサブユニット（マクロライド部分）を表し、Ｄは抗炎症性、鎮痛性および／または解熱性活性を有する非ステロイド薬物（ＮＳＡＩＤ）に由来する非ステロイドサブユニット（非ステロイド部分）を表し、ＬはＭおよびＤを共有結合する連結基を表す］、その医薬上許容される塩および溶媒和物、その調製のための方法および中間体、ならびにヒトおよび動物における炎症性疾患および症状の治療におけるその使用に関する。
【００１６】
参照によりその全体を本明細書に組み込んだ国際公開０４／００５３１０Ａ２号は、式Ｖのコンジュゲートステロイド−マクロライド化合物
【００１７】
【化５】
2008509899.tif 000007
（式中、上記構造中の記号Ｍは炎症性細胞に蓄積する性質を有するマクロライドサブユニットを表し、Ｓは抗炎症性ステロイドサブユニットを表し、ＬはＭおよびＳを共有結合するリンカーを表す）を記載している。国際公開０４／００５３１０Ａ２号は、修飾または脱離した、デソザミン糖のジメチルアミノ基を有するマクロライドのＣ／１１位またはＮ／９ａ位において、１７α−ＯＨ基経由でマクロライドサブユニットと連結したステロイドサブユニットを有する式ＩＩのコンジュゲートステロイド−マクロライド化合物、およびマクロライドラクトン環のＣ／６位経由、またはクラジノース糖のＣ／４”位経由、またはデソザミン糖のＣ／３’位におけるアミン官能基経由でステロイドに連結したマクロライドサブユニットを有するコンジュゲートステロイド−マクロライド化合物も記載している。
【００１８】
参照によりその全体を本明細書に組み込んだ国際公開０４／００５３０９号は、（ａ）式ＶＩで表される新たなコンジュゲート化合物
【００１９】
【化６】
2008509899.tif 000008
［式中、Ｍは炎症性細胞に蓄積する性質を有するマクロライドに由来するマクロライドサブユニット（マクロライド部分）を表し、Ｄは抗炎症性、鎮痛性および／または解熱性活性を有する非ステロイド薬物（ＮＳＡＩＤ）に由来する非ステロイドサブユニット（非ステロイド部分）を表し、ＬはＭおよびＤを共有結合する連結基を表す］、（ｂ）その医薬上許容される塩、プロドラッグおよび溶媒和物、（ｃ）その調製のための方法および中間体、ならびに（ｄ）ヒトおよび動物における炎症性疾患および症状の治療におけるその使用を開示している。
【００２０】
参照によりその全体を本明細書に組み込んだ米国特許出願１０／８３０８５８号は、アグリコン型マクロライドサブユニットのＮ／９ａ位に鎖Ｌ経由で連結したステロイドまたは非ステロイド抗炎症性サブユニットＤを有するコンジュゲート化合物をさらに開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
胃腸管の炎症性の疾患、障害、および症状の維持治療および再発予防のための、経口または経腸経路で投与されたときに低い生体利用率を有する、（ｉｉ）抗炎症性コルチコステロイドまたは非ステロイド系抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）を有する（ｉ）免疫細胞特異性マクロライド化合物のコンジュゲート、および医薬上許容されるその塩、プロドラッグおよび溶媒和物の使用はこれまで記載されていない。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明は、低い経口生体利用率を有する、式ＶＩＩのコンジュゲート化合物、または医薬上許容されるその塩、プロドラッグ、または溶媒和物をこのような治療を必要とする患者に投与することによる、胃腸管の炎症性疾患、障害、および症状の再発の予防方法および治療方法（急性期治療ならびに維持治療を含む）を対象とする。
【００２３】
【化７】
2008509899.tif 000009
［式中、Ｍは炎症細胞に蓄積する性質を有するマクロライドサブユニットを表し、Ｔはステロイド、または抗炎症性、鎮痛性および／または解熱性活性を有する非ステロイド薬物（ＮＳＡＩＤ）に由来する非ステロイド（非ステロイド部分）であることができる抗炎症性サブユニットを表し、ＬはＭおよびＴを共有結合するリンカーを表す］、ならびにこのような障害の治療の維持期におけるまたは維持期を通しての前記投与の継続を対象にしている。換言すれば、これらのＮＳＡＩＤ化合物（非修飾形態における）のいくらかは、これらの消化管の炎症性症状の治療において使用することが提案されているかもしれないが、その使用はコンジュゲートしていないコルチコステロイドの代用品として考えられていた。したがって、このような使用は疾患の急性期に限定され、疾患の長期間の維持治療または再発予防のための長期間の使用に延長されない。非修飾のＮＳＡＩＤの使用が継続された場合、ＮＳＡＩＤの使用から生じる胃腸管の損傷のリスクが増大した。しかるに、先述の本発明のコンジュゲート化合物は、標準のグルココルチコイド治療の代用品になることができ、かつ長期間にわたって、コンジュゲートしていないＮＳＡＩＤの長期間の使用に関連した副作用などのＧＩ副作用のリスクなしに（または減少したリスクで）使用することができる。実質的に吸収されないことによる本発明のＮＳＡＩＤコンジュゲートは、再発予防または再発遅延における長期間の維持治療に適している。さらに、本発明の修飾されたステロイドコンジュゲートは、標準のグルココルチコイドと異なって、実質的に吸収されなく、したがって全身的な効果を示し、長期間の治療に適しており、したがって再発を予防または遅延するための維持治療に有用である。本発明の化合物はまた、特に胃腸管潰瘍ならびに腎臓および呼吸毒性を引き起こすことが知られている長期間の治療に使用されるＮＳＡＩＤに特徴的な仕方で腸粘膜を損傷する可能性が少ない。修飾されていないＮＳＡＩＤの望ましくない副作用は、患部器官、すなわち胃腸管粘膜におけるプロスタグランジンの阻害のせいであるとされてきた。
【００２４】
（図面の簡単な記載）
図１Ａは、ＴＮＢＳにより誘発された大腸への損傷を測定するための、化合物１、２および３またはブデソニド（陽性対照）またはビヒクル（陰性対照）のラットモデルへの投与後の巨視的損傷得点を示す棒グラフである。結果の有意性を、マン−ホイットニー検定法を用いて分析した。
【００２５】
図１Ｂは、ＴＮＢＳにより誘発された大腸への損傷を測定するための、化合物１、２および３またはブデソニド（陽性対照）またはビヒクル（陰性対照）のラットモデルへの投与後の組織学的損傷得点を示す棒グラフである。結果の有意性を、マン−ホイットニー検定法を用いて分析した。
【００２６】
図２は、ＴＮＢＳにより誘発された大腸への損傷を測定するための、化合物１またはブデソニド（陽性対照）またはビヒクル（陰性対照）の様々な用量の投与後の巨視的損傷得点を示す棒グラフである。結果の有意性を、マン−ホイットニー検定法を用いて分析した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明は、経口投与されたときに低い生体利用率を示す式ＶＩＩのコンジュゲート化合物の使用によって、それだけには限らないが、過敏性腸疾患（ＩＢＤ）を含めた、胃腸管の炎症性疾患、障害、および症状の効果的な予防および治療の問題を解決する。低い経口生体利用率を示す式ＶＩＩの化合物は、それらが胃腸管から吸収されて全身循環することはないので、標準のグルココルチコロイドに比べてより少ない副作用を示す。これは標準のステロイドの使用にまさる利点である。本発明の式ＶＩＩの低い経口生体利用率のＭ−Ｌ−Ｔコンジュゲートは、腸の炎症部位に到達し、そこで抗炎症性の効能を発揮するが、それらは吸収されないので全身性の副作用を引き起こさない。したがって、低い経口生体利用率を示す式ＩＶのコンジュゲートは、疾患の急性期のみならず、より重要なことには、高い経口生体利用率の通常のステロイドおよびコンジュゲートの使用が適用ではない、または治療が長期間のために選択される治療法ではない場合に、ＩＢＤの維持治療に安全に使用することができる。治療の維持期は、疾患が部分的にまたは全体的に寛解しているときに始まる。急性の再発などの急性期の通常の治療は、治療薬として５−アミノサリチル酸およびその誘導体が使用された場合に４〜６週間継続し、プレドニゾンまたはヒドロコルチゾンのようなステロイドが使用された場合に２〜３週間継続する。治療に対する応答性は、（検便および血液分析のような）検体検査によって確かめられ、有効性は治療が開始された後に確かめられる。コンジュゲートしていないＮＳＡＩＤは、ＩＢＤは適用ではない。
【００２８】
したがって、本発明は、経口経路で投与されたときに低い生体利用率を示す式ＶＩＩのコンジュゲート化合物またはその医薬上許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、胃腸管の炎症性疾患、障害、および症状の予防および治療の方法を提供する。
【００２９】
本発明はまた、低い経口生体利用率を示す式ＶＩＩのコンジュゲート化合物またはその医薬上許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物の有効量を患者に投与することによる、グルココルチコイドでの治療に応答する、それだけには限らないが、クローン病、潰瘍性大腸炎、およびセリアック病などの炎症性腸疾患の（維持期治療を含めた）再発の予防または遅延の方法を提供する。
【００３０】
本発明の一実施形態においては、式ＶＩＩのコンジュゲート化合物またはその塩、プロドラッグ、または溶媒和物は、１０％未満すなわち約０％から約１０％の経口生体利用率を示す。
【００３１】
本発明の別の実施形態においては、式ＶＩＩのコンジュゲート化合物またはその塩、プロドラッグ、または溶媒和物は、５％未満すなわち約０％から約５％の経口生体利用率を示す。
【００３２】
本発明のさらに別の実施形態においては、式ＶＩＩのコンジュゲート化合物またはその塩、プロドラッグ、または溶媒和物は、２％未満すなわち約０％から約２％の経口生体利用率を示す。
【００３３】
本発明はまた、低い経口生体利用率を示す一般式ＶＩＩのコンジュゲートおよびその医薬上許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物から選択される少なくとも１種の化合物、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物を対象とする。
【００３４】
特定の一実施形態においては、その組成物は、１０％未満の経口生体利用率を示す式ＶＩＩのコンジュゲートの群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。別の特定の実施形態においては、その組成物は、５％未満の経口生体利用率を示す式ＶＩＩのコンジュゲートの群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。さらなる特定の実施形態においては、その組成物は、２％未満の経口生体利用率を示す式ＶＩＩのコンジュゲートの群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。
【００３５】
このコンジュゲートの特異的な性質は、このような分子の非常に高い分子量（＞７００）によるその低い生体利用率である。大多数の薬物により守られている「５の法則（ｒｕｌｅ  ｏｆ  ｆｉｖｅ）」（Ｌｉｐｉｎｓｋｉ  Ｃ．Ａ．他、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、２００１年、４６：３−２６）によれば、経口生体利用率の薬物の分子量は、５００未満であるべきである。この法則に適合できない成功した経口活性薬物はほとんどない。さらに、式ＶＩＩのコンジュゲートの生体利用率は、経口生体利用率の予想用のかなり良いモデルとして受け入れられているＣａｃｏ−２  ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルに基づき予想することができる（「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」１９９９年、Ｗｏｏｌｆ  Ｔ．Ｆ．ｅｄｉｔｏｒ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ．、５０７−５２２頁中のＹｅｅ  ＳおよびＷ．Ｗ．Ｄａｙ、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃａｃｏ−２  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）。さらに、その薬物の経口吸収の要件が、吸収部位において溶液中に存在しなければならない。小胞吸収またはピノサイトーシス（ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ）のみがこれを必要としない。式ＶＩＩのコンジュゲートは低い水溶性を有するので、それらは化合物の可溶性を必要とする従来の機構で消化管から吸収されないことが予見される（経細胞および傍細胞拡散プラス担体輸送）。同時に、ピノサイトーシスおよび／または小胞吸収は、その消化管壁中への浸透および良好な局所抗炎症性活性を可能にする。
【００３６】
特に、本発明は、それだけには限らないがクローン病、潰瘍性大腸炎、およびセリアック病などのグルココルチコイドでの治療に応答する疾患を含めた炎症性腸疾患の再発の遅延または予防用および維持期治療用のヒトおよび獣医薬における使用のための約０％から約１０％の、好ましくは約０％から約５％の、最も好ましくは約０％から約２％の経口を示す、式ＶＩＩのコンジュゲート、その医薬上許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物の群から選択される少なくとも１種の化合物を含む経口性医薬組成物を提供する。
【００３７】
式ＶＩＩのコンジュゲート
本発明の一態様においては、低い生体利用率の式ＶＩＩのコンジュゲート、およびその医薬上許容される塩、プロドラッグ、および溶媒和物は下記のように表され、
【００３８】
【化８】
2008509899.tif 000010
式中、Ｍは１２、１４、１５、１６、１７および１８員のラクトン環からなる群から選択されるマクロライドサブユニットを表し、ここで「員」はラクトン環中の炭素原子またはヘテロ原子の数であり、前記マクロライドは、炎症性免疫応答を仲介する、哺乳類の免疫系細胞内に蓄積する性質を有し、Ｔはステロイドまたは抗炎症性、鎮痛および／または解熱活性を有する非ステロイド薬物（ＮＳＡＩＤ）に由来する非ステロイド（非ステトイド部分）でよい抗炎症性サブユニットを表し、ＬはＭおよびＴと共有結合しているリンカーを表す。
【００３９】
好ましい実施形態においては、本発明は、式ＶＩＩにより表される化合物、およびその塩、プロドラッグおよび溶媒和物の使用に関し、式中、Ｍは特に、最も好ましくは式ＶＩＩＩにより表される１４または１５員のラクトン環マクロライドサブユニットを表す。
【００４０】
【化９】
2008509899.tif 000011
［式中、
（ｉ）ＺおよびＷはそれぞれ独立に
【００４１】
【化１０】
2008509899.tif 000012
または結合であり、式中、ＲｔおよびＲｓは、それぞれ独立にＨまたはアルキル（好ましくはメチルまたはＨ）であり、
ＲＭはＯＨ、ＯＲＰ、アルコキシまたは置換アルコキシ（ＳｙｎもしくはＡｎｔｉ配置またはそれらの混合物のいずれかにおける）であり、
ＲＮはＨ、Ｒｐ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、または−Ｃ（＝Ｘ）−ＮＲｔＲｓであり、
ＸはＯまたはＳであり、
ただし、ＺおよびＷは同時に
【００４２】
【化１１】
2008509899.tif 000013
または結合になることができず、
（ｉｉ）ＵおよびＹは、それぞれ独立にＨ、ハロゲン、アルキル、またはヒドロキシアルキル（好ましくはＨ、メチル、またはヒドロキシメチル）であり、
（ｉｉｉ）Ｒ１はヒドロキシ、ＯＲｐ、−Ｏ−Ｓ２、または＝Ｏであり、
（ｉｖ）Ｓ１はＨまたは次式のＣ／５位（例えば、デソザミン基）のおける糖部分であり、
【００４３】
【化１２】
2008509899.tif 000014
式中、Ｒ８およびＲ９は、ともに水素であるか、一緒に結合を形成するか、Ｒ９が水素でＲ８が−Ｎ（ＣＨ３）Ｒｙであり、ここで、
ＲｙはＲｐ、Ｒｚまたは−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｚであり、式中、Ｒｚは水素またはシクロアルキル（好ましくはシクロヘキシル）またはアルキル（好ましくはＣ１〜Ｃ７アルキル）またはアルケニル（好ましくはＣ２〜Ｃ７アルケニル）またはアルキニル（好ましくはＣ２〜Ｃ７アルキニル）またはアリールまたはヘテロアリールあるいはＣ２〜Ｃ７アルキル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７アルキニル、アリールまたはヘテロアリールで置換されたアルキルであり（Ｒｙは好ましくは水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２−フェニル、またはシクロヘキシルである）、
Ｒ１０は水素またはＲｐであり、
（ｖ）Ｓ２は次式の糖部分（例えば、クラジノーシル基）であり、
【００４４】
【化１３】
2008509899.tif 000015
式中、Ｒ３’はＨまたはメチルでよく、Ｒ１１は水素またはＲｐであるかＯ−Ｒ１１はＲ１２およびＣ／４”炭素原子とともに＞Ｃ＝Ｏまたはエポキシ基を形成する基であり、
Ｒ１２は水素、アルキル、アルキル−Ｒｐ、Ｒｐ、またはＯ−Ｒ１１およびＣ／４”炭素原子とともに＞Ｃ＝Ｏまたはエポキシ基を形成する基であり、
（ｖｉ）Ｒ２はＨ、ヒドロキシ、ＯＲｐ基、アルコキシ（好ましくはＣ１〜Ｃ４アルコキシ、最も好ましくはメトキシ）または置換アルコキシであり、
（ｖｉｉ）ＡはＨまたはメチルであり、
（ｖｉｉｉ）Ｂはメチルまたはエポキシであり、
（ｉｘ）ＥはＨまたはハロゲン（好ましくはフッ素）であり、
（ｘ）Ｒ３はヒドロキシ、ＯＲｐ基またはアルコキシ（好ましくはＣ１〜Ｃ４アルコキシ、最も好ましくはメトキシ）、置換アルコキシであるか、Ｒ３はＲ５と一緒になって「橋」（例えば、環状カルボナートまたはカルバマート）を形成する基であるか、ＷまたはＺが
【００４５】
【化１４】
2008509899.tif 000016
である場合、Ｒ３はＷまたはＺと一緒になって「橋」（例えば環状カルバマート）を形成する基であり、
（ｘｉ）Ｒ４はＣ１〜Ｃ４アルキル（好ましくはメチル）であり、
（ｘｉｉ）Ｒ５はＨ、ヒドロキシ、ＯＲｐ基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、置換アルコキシまたはＲ３と一緒になって橋（例えば環状カルボナートまたはカルバマート）を形成することができる基であり、
（ｘｉｉｉ）Ｒ６はＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキル（好ましくはメチルまたはエチル）であり、
式中、サブユニットＭは、それを通して結合基Ｌ経由でサブユニットＴに結合する結合部位を有し、この結合部位は次の１つまたは複数にある。
ａ）マクロライド環上の任意の反応性ヒドロキシ、窒素もしくはエポキシ基、糖部分Ｓ１、糖部分Ｓ２、またはＳ１および／もしくはＳ２が開裂されたときのアグリコン酸素もしくは窒素
ｂ）ＺまたはＷに位置する反応性＞Ｎ−ＲＮまたは−ＮＲｔＲｓまたは
【００４６】
【化１５】
2008509899.tif 000017
で示される基
ｃ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ５のいずれか１つに位置する反応性ヒドロキシ基
ｄ）最初にヒドロキシまたは−ＮＲｔＲｓ基に誘導体化し、次いでＫ（例えば、ＯＨ→＝Ｏ→エポキシ→
【００４７】
【化１６】
2008509899.tif 000018
（式中、Ｋは結合分子Ｌの部分である）に結合させることができる他の任意の基］。
【００４８】
１つまたは複数のＲｐ基が、式ＶＩＩＩのマクロライドサブユニット中にそれぞれ独立に存在してよく、式中、Ｒｐは、アルキル（好ましくはメチル）、アルカノイル（好ましくはアセチル）、アルコキシカルボニル（好ましくはメトキシカルボニルまたはｔ−ブトキシカルボニル）、アリールメトキシカルボニル（好ましくはベンジルオキシカルボニル）、アロイル（好ましくはベンゾイル）、アリールアルキル（好ましくはベンジル）、アルキルシリル（好ましくはトリメチルシリル）またはアルキルシリルアルコキシアルキル（好ましくはトリメチルシリルエトキシメチル）から選択することができる保護基を表す。
【００４９】
同様に好ましいのは、式ＶＩＩＩのセミグリコン（ｓｅｍｉｇｌｙｃｏｎｅ）化合物であり、ここでＲ１はヒドロキシルであり、Ｓ１は次式（Ｒ１０、Ｒ８、Ｒ９は先に定義されている）の糖部分であり、
【００５０】
【化１７】
2008509899.tif 000019
【００５１】
同様に好ましいのは、式ＶＩＩＩのセミグリコン化合物であり、ここでＳ１はＨであり、Ｒ１はＯ−Ｓ２であり、ここでＳ２は次式（Ｒ３、Ｒ１１およびＲ１２は先に定義されたとりである）の糖部分であり、
【００５２】
【化１８】
2008509899.tif 000020
【００５３】
同様に好ましいのは、式ＶＩＩＩのアグリコン化合物であり、ここでＳ１は水素であり、Ｒ１はヒドロキシルである。
【００５４】
リンカーＬ
Ｌは、式ＩＸＡまたはＩＸＢによって表される結合基とすることができ、
ＩＸＡ        Ｘ１−（ＣＨ２）ｍ−Ｘ２
ＩＸＢ        Ｘ１−（ＣＨ２）ｍ−Ｑ−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ２
式中、Ｘ１は、−ＣＨ２、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、＝Ｎ−Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−から選択され；
Ｘ２は、−ＮＨ−、−ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−ＯＣ（＝Ｏ）−から選択され；
Ｑは、−ＮＨ−または−ＣＨ２−であり；
ここで、−ＣＨ２−または−ＮＨ−基はそれぞれ、所望によりＣ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７アルキニル、Ｃ（＝Ｏ）Ｒｘ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｘ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｘで置換され、ここでＲｘはＣ１〜Ｃ７アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
記号ｍおよびｎは、Ｑ＝ＮＨの場合にｎはゼロではないという条件で、それぞれ独立に０から８までの整数である。
【００５５】
結合基の前述の定義は、ＮＳＡＩＤおよび式ＶＩＩＩのマクロライドのコンジュゲートにとってのみならず、式ＶＩＩ内の任意のコンジュゲートにとっても好ましい。他の結合基を、それらが必要なスペーサーを提供するかぎり使用することができる。好ましいリンカー分子は、１〜２０個の炭素原子の鎖長（鎖中のヘテロ原子を数えず）を有するものであり、２〜１０個の炭素原子の鎖長を有するものが最も好ましい。Ｌのマクロライド部分との結合は、９ａ位における環上窒素原子経由、または１１位および６位におけるヒドロキシ基経由、またはデソザミン糖部分の２’ヒドロキシまたは３’アミノ基経由、またはクラジノース糖の４”ヒドロキシ基経由、またはＭ部分がアグリコン、またはデソザミンおよびクラジノース糖基の欠落した１つの場合に、マクロライド環の５位または３位に生じたＯＨ基経由のいずれかで達成することができる。リンカーは、当分野で周知のように、式ＶＩＩのサブユニットの１つをその他と結合するのに役立ちうる。例えば、参照によりその全体を本明細書に組み込んだ米国特許６２９７２６０号、特に本明細書に引用したその請求項１およびＮＳＡＩＤ部分の詳しい表、およびそれらを窒素酸化物基に結合するのに使用されるスペーサーまたはリンカーを参照されたい。
【００５６】
サブユニットＴ
Ｔは、非ステロイド抗炎症性薬（ＮＳＡＩＤ）に由来する非ステロイドサブユニット、またはサブストラクチャーＩＸで表すことができるステロイドサブユニット
【００５７】
【化１９】
2008509899.tif 000021
［式中、
ＲａおよびＲｂは、互いにそれぞれ独立に、水素またはハロゲンであり、
Ｒｃはヒドロキシ、アルコキシ（好ましくはメトキシ）、置換アルコキシ、アルキル、チオカルバモイル、カルバモイルまたは鎖ＬのＸ２に結合した原子価結合であり、
ＲｄおよびＲｅは、互いにそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、メチルまたはＣ１〜Ｃ４アルコキシ（好ましくはメトキシまたはｎ−プロポキシ）、あるいはそれぞれが、その他（所望によりアルキルまたはアルケニルで一置換または二置換された）（好ましくは２，２−ジメチルまたは２−モノプロピルまたはトランス−プロペニル環）と一緒に１，３−ジオキソラン環を形成する基、または鎖ＬのＸ２に結合した原子価結合であり、
Ｒｆは水素、ヒドロキシ、塩素、またはそれが結合した炭素原子と一緒に＝Ｏを形成するケト基であり、
Ｒｊは水素または塩素である］およびその医薬上許容される塩、プロドラッグ、および溶媒和物を表す。
【００５８】
同様に本発明の中に包含されるのは、参照によりその全体を本明細書に組み込んだ国際公開９４／１４８３４号に開示されたステロイドサブユニットであり、その中で、＞ＣＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒｃの基は＞ＣＨ−Ｓ（Ｏ）ｎ−Ｒｃの基で置換され、ここでｎは０から２の整数である。国際公開９４／１４８３４号、特に２−３頁を参照されたい。
【００５９】
より一般的には、本発明中のステロイドサブユニットのソースとして有用なステロイドには、それだけには限らないが、コルチコステロイド（グルココルチコイドおよび電解質コルチコイドなど）およびアンドロゲンが含まれる。コルチコステロイドの非制限的な例には、コルチゾル、コルチゾン、クロベタゾール、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（ｆｌｕｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルニソリド、フルオシノロン、フルオシノニド、フルオコルトロン、フルオロメトロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、６−α−メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、アルクロメタゾン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、アムシノニド、コルチバゾール、デソニド、デソキシメタゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロロンおよびジクロリゾン、フルペリニデン（ｆｌｕｐｅｒｉｎｉｄｅｎｅ）、フルチカゾン、ハルシノニド、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドナゾリン（ｐｒｅｄｎａｚｏｌｉｎｅ）、プレドニリデン、チキソコルトル、トリアムシノロン、およびそれらの酸誘導体、例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、二プロピオン酸塩、吉草酸塩、リン酸塩、イソニコチン酸塩、メタスルホ安息香酸塩、テブテート、および半コハク線塩が含まれる。
【００６０】
式ＶＩＩにおいて、「非ステロイドサブユニット」という表現は、アセクロフェナク、アセメタシン、アセトアミノフェン、アセトアミノサロール、アセチルサリチル酸、アセチルサリチル−２−アミノ−４−ピコリン酸、５−アミノアセチルサリチル酸、アルクロフェナック、アミノプロフェン、アンフェナク、アニレリジン、アザチオプリン、ベンダザック、ベノキサプロフェン、ベルモプロフェン、α−ビサボロール、ブロンフェナク、５−ブロモサリチル酸酢酸塩、ブロモサリゲニン、ブクロキス酸、ブチブフェン、カルプロフェン、ＣＣ  １０８８（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＣＣ  ５０１３（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＣＤＣ  ８０１（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、セレコキシブ、クロモグリケート、シンメタシン、シパムフィリン（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、クリンダナク、クロピラク、ＣＯＸ−１８９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、シクロスポリン、ナトウリムジクロフェナク、ジフルニサル、ジタゾール、エンフェナミン酸、エトドラク、エトフェナメート、エトリコキシブ（Ｍｅｒｃｋ）、フェルビナク、フェンブフェン、フェンクロズ酸、フェンドサール、フェノプロフェン、フェンチアザク、フェプラジノール、ＦＫ−５０６、フルフェナム酸、フルニキシン、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、グルタメタシン、サリチル酸グリコール、イブフェナック、イブプロフェン、イブプロキサム、インドメタシン、インドプロフェン、イソフェゾラク、イソキセパク、イソキシカム、ＪＴＥ−５２２（日本たばこ産業株式会社）、ケトプロフェン、ケトロラク、Ｌ−７４５３３７（Ｍｅｒｃｋ）、レフルノミド、ロルノキシカム、ロキソプロフェン、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メサラミン、メサラジン、メトトレキセート、メチアジン酸、モフェゾラク、モンテルカスト、マイコフェノール酸、ナプロキセン、ニフルム酸、オルサラジン、オキサセプロール、オキサプロジン、オキシフェンブタゾン、パルサルミド、ペリソキサール、アセチルサリチル酸フェニル、フェニルブタゾン、サリチル酸フェニル、テオフィリン、ピラゾラク、ピロキシカム、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、ラパマイシン、ロフェコキシブ、サラセトアミド、サリチルアミドＯ−酢酸、サリチル硫酸、サリシン、サリチルアミド、サルサラート、スリンダク、スルファサラジン、スプロフェン、スキシブタゾン、テノキシカム、サリドマイド、テトラフルオロサリドマイド（ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、チアプロフェン酸、チアラミド、チノリジン、トルフェナム酸、トルメチン、トモキシプロール、トロペシン、バルデコキシブ（Ｓｅａｒｌｅ）、キセンブシン、キシモプロフェン、ザルトプロフェン、ゾメピラック、ザフィルルカストなどの非ステロイド抗炎症性薬（ＮＳＡＩＤ）および抗炎症性、抗アレルギー性および免疫抑制性を有する他の薬物に由来するサブユニットを意味する。
【００６１】
さらなる一般的なＮＳＡＩＤ構造および特異的なＮＳＡＩＤ化合物が、参照によりその全体を本明細書に組み込んだ米国特許６２９７２６０号に開示されている（特に、その請求項１の一般式およびそれに含まれたＮＳＡＩＤの詳しい表の記載および請求項３中、および同様に参照によりその全体を本明細書に組み込んだ国際出願公開０１／８７８９０号に開示されたチアズリデン（ｔｈｉａｚｕｌｉｄｅｎｅ）ＮＳＡＩＤ。
【００６２】
好ましいＮＳＡＩＳｓは、アセチルサリチル酸、インドメタシン、ナプロキセン、イブプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、スプロフェン、フルニキシン、ナトリウムジクロフェナク、フルフェナム酸、テオフィリン、メクロフェナム酸、メフェナム酸およびトルメチンである。
【００６３】
本発明に従って使用することができる式ＶＩＩの具体的なコンジュゲートは次のとおりである。
【００６４】
【化２０】
2008509899.tif 000022
【００６５】
【化２１】
2008509899.tif 000023
【００６６】
【化２２】
2008509899.tif 000024
【００６７】
【化２３】
2008509899.tif 000025
【００６８】
【化２４】
2008509899.tif 000026
【００６９】
【化２５】
2008509899.tif 000027
【００７０】
【化２６】
2008509899.tif 000028
【００７１】
【化２７】
2008509899.tif 000029
【００７２】
【化２８】
2008509899.tif 000030
【００７３】
【化２９】
2008509899.tif 000031
【００７４】
【化３０】
2008509899.tif 000032
【００７５】
【化３１】
2008509899.tif 000033
【００７６】
式ＶＩＩのコンジュゲートの合成
一般的に、式ＶＩＩの化合物は、次の方法で得ることができる。鎖Ｌの一端を最初にマクロライドサブユニットＭに結合させ、次いでこの鎖のもう一端をサブユニットＴに結合させ、あるいは鎖Ｌの一端を最初にサブユニットＴに結合させ、次いでこの鎖のもう一端をマクロライドサブユニットＭに結合させ、あるいは最後に、鎖Ｌの一部分をマクロライドサブユニットＭに結合させ、鎖のもう１つの部分をサブユニットＴに結合させ、この鎖の部分の端を化学的に結合させて鎖Ｌを形成する。
【００７７】
式ＶＩＩの化合物の調製において使用される保護された中間体の誘導体を使用することが望ましいかもしれないことは当分野の技術者により理解されよう。官能基の保護および脱保護は、当分野で周知の方法で実施することができる。ヒドロキシルまたはアミノ基は、例えば、Ｇｒｅｅｎ  Ｔ．Ｗ．；Ｗｕｔｓ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９年に記載されたように、任意のヒドロキシルまたはアミノ保護基で保護することができる。アミノ保護基は通常の技術により除去することができる。例えば、アルカノイル、アルコキシカルボニルおよびアロイル基などのアシル基は、加溶媒分解によって、例えば、酸性または塩基性条件下での加水分解によって除去することができる。アリールメトキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニル）は炭素担持パラジウムなどの触媒の存在下での加水分解によって開裂させることができる。
【００７８】
別法として、式ＶＩＩ内のコンジュゲート化合物は、それぞれを参照により本明細書にその全体を組み込んだ国際公開０２／０５５５３１号、国際公開０４／００５３１０号および国際公開０４／００５３０９号、およびクロアチア特許出願２００３０３２４号（およびその対応する米国の米国特許出願１０／８３０８５８号）に示された方法により調製することができる。
【００７９】
定義
次の定義は、本発明を記載するのに使用された種々の用語の意味および範囲を説明し定義するために示されている。
【００８０】
本明細書に収容された式中の肉太活字の結合は、紙面から上に高くした結合を意味し、ダッシュで引いた結合は、紙面から下の結合を意味するが、破線は紙面の下または上のいずれかにあってよい結合を表す。平行な実線および破線は単結合または二重結合のどちらかを表す。本明細書に別に明確に記載されない限り、次の用語は以下でそれらに与えられた意味を有する。
【００８１】
「アルキル」は、１から１０個の炭素原子の、より好ましくは１から６個の炭素原子の直鎖または枝分かれした飽和の一価炭化水素基を意味する。好ましい直鎖または枝分かれした鎖のアルキルには、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。メチルが最も好ましい。アルキル基は、ハロゲン（好ましくはフッ素または塩素）、ヒドロキシ、アルコキシ（好ましくはメトキシまたはエトキシ）、アシル、アシルアミノ、シアノ、アミノ、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ（好ましくはＮ−メチルアミノまたはＮ−エチルアミノ）、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）アミノ（好ましくはジメチルアミノまたはジエチルアミノ）、アリール（好ましくはフェニル）またはヘテロアリール、チオカルボニルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミジノ、アルキルアミジノ、チオアミジノ、アミノアシル、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、アリールオキシアリール、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルアルキル、カルボキシル置換アルキル、カルボキシルシクロアルキル、カルボキシル置換シクロアルキル、カルボキシルアリール、カルボキシル置換アリール、カルボキシルヘテロアリール、カルボキシル置換ヘテロアリール、カルボキシル複素環、カルボキシル置換複素環、シクロアルキル、シクロアルコキシ、ヘテロアリルオキシ、ヘテロシクリルオキシ、およびオキシカルボニルアミノを含めた１から５個までの置換基で置換されてよい。このような置換されたアルキル基が、「アルキル」の本発明の定義内である。アルキルの本発明の定義は、アルコキシなどのアルキル部分を有する他の基にも適用される。
【００８２】
「アルケニル」は、少なくとも１つの二重炭素−炭素結合を有する、２から１０個の、好ましくは２から６個の炭素原子の直鎖または枝分かれした一価の炭化水素基を意味する。アルケニル基は、アルキルと同じ基で置換されてもよく、このような所望により置換されたアルケニル基は、「アルケニル」という用語内に包含される。エテニル、プロペニル、ブテニルおよびシクロヘキセニルが好ましい。
【００８３】
「アルキニル」は、２から１０個の、好ましくは２から６個の炭素原子の直鎖または枝分かれした鎖を有し、少なくとも１個かつ好ましくは３個以下の三重炭素−炭素結合を含む、直鎖または枝分かれした一価の炭化水素基を意味する。アルキニル基は、アルキルと同じ基で置換することができ、置換された基はアルキニルの本発明の定義内である。エチニル、プロピニルおよびブチニル基が好ましい。
【００８４】
「シクロアルキル」は、単一の環を有し、所望により縮合してアリールまたはヘテロアリール基になる、３〜８個の炭素原子を有する環式基を意味する。シクロアルキル基は、下記で「アリール」について記載のように置換してよく、置換されたシクロアルキル基は、「シクロアルキル」の本発明の定義内である。好ましいシクロアルキルはシクロペンチルおよびシクロヘキシルである。
【００８５】
「アリール」は、６〜１４個の炭素原子を有し、フェニルなどの単一の環またはナフチルなどの複数の縮合環を有する、不飽和の芳香族の炭素環式基を意味する。アリールは、所望によりさらに縮合して脂肪族またはアリール基にすることもでき、ハロゲン（フッ素、塩素および／または臭素）、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシまたはアリールオキシ、Ｃ１〜Ｃ７アルキルチオまたはアリールチオ、アルキルスルホニル、シアノまたは第一級または非第一級アミノなどの１つまたは複数の置換基で置換することもできる。
【００８６】
「ヘテロアリール」は、２から１０個までの炭素原子およびＯ、ＳまたはＮなどの１から４個までのヘテロ原子を有する単環式または二環式芳香族炭化水素環を意味する。ヘテロアリール環は、所望により縮合して別のヘテロアリール、アリールまたは脂肪族環式基にすることもできる。このタイプの例は、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、インドール、ピリジン、オキサゾール、チアゾール、ピロール、ピラゾール、テトラゾール、ピリミジン、ピラジンおよびトリアジンであり、フラン、ピロール、ピリジンおよびインドールが好ましい。この用語は、上記のアリールについての記載と同じ置換基で置換された基を含む。
【００８７】
「複素環」は、単一または複数の環、および１から１０個の炭素原子、および窒素、硫黄または酸素から選択される１〜４個のヘテロ原子を有する飽和また不飽和基を意味し、ここで、縮合環構造においてその他の１つまたは複数の環はアリールまたはヘテロアリールである。複素環基は、アルキル基についての記載のように置換することができ、こうして置換された複素環基は、本発明の定義内である。
【００８８】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素または臭素（最も好ましくはフッ素または塩素）でよいハロゲン原子を意味する。
【００８９】
「塩」という用語は、酸付加塩または遊離塩基の付加塩を含むことができる。医薬上許容される酸付加塩を形成するのに用いることができる酸の例には、それだけには限らないが、硝酸、リン酸、硫酸、または臭化水素酸、ヨウ化水素酸、フッ化水素酸、亜リン酸などの無毒性の無機酸に由来する塩、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシルアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸、および酢酸、マレイン酸、コハク酸、またはクエン酸などの無毒性の有機酸に由来する塩が含まれる。このような塩の非制限的な例には、ナパジシル酸塩、ベシル酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、リン酸二水素、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などが含まれる。同様に考えられるのは、アルギン酸などのアミノ酸の塩およびグルコン酸塩、ガラクツロン酸塩である（例えば、Ｂｅｒｇｅ  Ｓ．Ｍ．他、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．、１９７７年、６６：１）。
【００９０】
前記塩基性化合物の酸付加塩は、通常の方法で遊離塩基の形を十分な量の所望の酸と接触させて塩を生じることによって調製される。遊離塩基の形は、塩の形を塩基と接触させ通常の方法で遊離塩基を単離することによって再生することができる。遊離塩基の形は、極性溶媒中の溶解性などの特定の物理的性質においていくらかそのそれぞれの塩の形と異なるが、その他の点では、これらの塩は本発明の目的についてそのそれぞれの遊離塩基に等価である。
【００９１】
医薬上許容される塩基付加塩は、アルカリおよびアルカリ土類金属または有機アミンなどの金属またはアミンで形成される。カチオンとして使用される金属の例は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどである。適切なアミンの例は、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、およびプロカインである。
【００９２】
前記酸性化合物の塩基付加塩は、通常の方法で遊離酸の形を十分な量の所望の塩基と接触させて塩を生成することによって調製される。遊離酸の形は、塩の形を酸と接触させ遊離酸を単離することによって再生することができる。
【００９３】
本発明の組成物との関連で使用される「医薬上許容される」という語句は、哺乳類（例えばヒト）に投与した場合に生理的に許容でき一般的に不適当な反応を生じない組成物の分子的実体および他の成分を指す。好ましくは、本明細書で使用される「医薬上許容される」という用語は、米連邦政府または州政府の規制当局によって承認されていること、あるいは米国薬局方または他の一般的に承認された哺乳類、およびとりわけヒトにおける使用のため薬局方の表に含まれていることを意味する。
【００９４】
本発明の医薬組成物に適用される「担体」という用語は、それを用いて活性成分が投与される希釈剤、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような医薬担体は、水、食塩水、ブドウ糖水溶液、グリセリン水溶液、および落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物または合成由来のものを含む油などの無菌の液体でよい。しかしながら、メマンチンは非常に溶けやすいので、水溶液が好ましい。適切な医薬担体は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」第１８版に記載されている。本発明に特に好ましいのは、即時放出、すなわち６０分間以下などの短時間での活性成分の大部分または全部の放出に適し、薬物の急速な吸収を可能にする担体である。
【００９５】
本発明はまた、式ＶＩＩの化合物のプロドラッグ、すなわち哺乳類の対象に投与されたときに式（ＶＩＩ）の活性親薬物を生体中に放出する化合物を含む。式ＶＩＩの化合物のプロドラッグは、その修飾を生体中で開裂して親薬物を放出することができるように、式ＶＩＩの化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製される。プロドラッグは、式ＶＩＩの化合物のヒドロキシ、アミノ、またはカルボキシ基が、生体中で開裂してそれぞれ遊離ヒドロキシル、アミノまたはカルボキシ基を再生することができる任意の基に結合している式ＶＩＩの化合物を含む。プロドラッグの例には、それだけには限らないが、式ＶＩＩの化合物のエステル（例えば、酢酸エステル、ギ酸エステル、および安息香酸エステル誘導体）または生理的ｐＨにされたときにまたは酵素作用によって、活性親薬物に転換される任意の他の誘導体が含まれる。
【００９６】
本発明はまた、式ＶＩＩの化合物の溶媒和物またはその塩を含む。好ましい溶媒和物は水和物である。
【００９７】
式ＶＩＩの化合物は、１つまたは複数のキラリティー中心を有し、個々の物質の性質に応じて、それらは幾何異性体も有しうる。空間でのその原子の配列において異なる異性体は「立体異性体」と呼ばれる。お互いの鏡像ではない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼ばれ、お互いの鏡像を重ね合わせできないものは「エナンチオマー」と呼ばれる。化合物がキラル中心を有するとき、１組のエナンチオマーは可能である。エナンチオマーは、その不斉中心の絶対的な配置によって特徴づけすることができ、ＣａｈｎおよびＰｒｅｌｏｇのＲおよびＳの順位則、または分子が偏光面を回転させる方式によって表されており、右旋性または左旋性（すなわち、それぞれ（＋）または（−）異性体として）として名付けられている。キラル化合物は、個々のエナンチオマーとしてまたはエナンチオマーの混合物として存在することができる。等しい割合のエナンチオマーを含む混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。本発明は、式ＶＩＩの化合物のすべての個別の異性体を含む。本明細書および特許請求の範囲における特定の化合物の記述または命名は、個々のエナンチオマーおよびそのラセミまたはその他の混合物を含むことを意図したものである。立体化学の測定および立体異性体の分割の方法は当分野で周知である。
【００９８】
本発明は、ｓｙｎ−ａｎｔｉ形の立体異性体、およびオキシムまたは類似の基が存在するときに生じるそれらの混合物も含む。末端の二重に結合したオキシムの原子の１個に結合した最高のカーンインゴルドプレローグ順位の基は、オキシムのヒドロキシル基と比較される。立体異性体は、オキシムヒドロキシルが最高優先度の基としてＣ＝Ｎ二重結合を通過する基準平面の同じ側にある場合に、Ｚ（ｚｕｓａｍｍｅｎ＝一緒）またはＳｙｎと呼ばれ、その他の立体異性体はＥ（ｅｎｔｇｅｇｅｎ＝反対）またはＡｎｔｉと呼ばれる。
【００９９】
「医薬上許容される賦形剤」は、一般的に安全な、無毒性の、かつ生物学上またはそれ以外に有害でない医薬組成物の調製に有用である賦形剤を意味し、獣医用途ならびにヒト用医薬用途に許容される賦形剤を含む。本発明の用途に使用される「医薬上許容される賦形剤」は、１種または複数の両方のこのような賦形剤を含む。
【０１００】
「低い経口生体利用率の」および「低い経口生体利用率」は、式ＶＩＩのコンジュゲートが、投与された薬物の胃粘膜を経由した血液またはプラズマ中への１０％未満、好ましくは５％未満、最も好ましくは２％未満の吸収をもたらす経口、経腸または他の粘膜性デリバリーによるその投与後の生体利用率を示すことを意味する。
【０１０１】
病状、障害または症状の「処置」または「治療」は、
（１）病状、障害または症状に悩まされているかもしれない、あるいは罹患しやすくなっているかもしれないが、病状、障害または症状の臨床的または亜臨床的症状を未だ経験あるいは示していない哺乳類に発現している病状、障害または症状の臨床症状の出現の予防または遅延すること、
（２）病状、障害または症状を抑制すること、すなわち、疾患またはその再発（維持治療の場合）またはその少なくとも１つの臨床的または亜臨床的症状の発現を阻止すること、減少させることまたは遅延させること、あるいは
（３）疾患を和らげること、すなわち、病状、障害または症状またはその臨床的または亜臨床的症状の少なくとも１つの退縮を生じさせることを含む。
【０１０２】
治療すべき対象への利益は、統計的に有意であるか、患者または医師に少なくとも知覚できるかのいずれかである。
【０１０３】
容易に定義することができない多数の要因がある。それらには、
例えば潰瘍性大腸炎またはクローン病などの疾患のタイプ
臨床的パラメータで定義される疾患の重篤性
薬理遺伝学的な理由（例えば、グルココルチコイド治療に対する応答性）
対象の治療に対する応答性は、急性期に使用された選択された薬物が以下に記載された１つまたは複数の臨床的な兆候および症状の減少を生じるかによって評価される。
【０１０４】
本発明との関連では、「予防すること」は、この疾患の症状または炎症のマーカーなどの大腸の炎症の何らかの尺度の再発の予防の維持治療に関して使用される。例えば、予防はＩＢＤ（例えば、ＩＬ−１０不全のマウス、ＴＮＦ  ΔＡＲＥまたはＳＡＭＰ１／Ｙｉｔマウス）を自然に発現している動物において実証することができ、治療された動物における疾患の発生の回避または遅延を含む（治療していない対照と比較して）。
【０１０５】
亜臨床的な症状を「和らげること」の例は、炎症誘発性サイトカインまたはリンフォカインを分泌する免疫細胞の数の減少の、またはこのようなリンフォカインまたはサイトカインをエンコードするｍＲＮＡにおける減少の処置した個体における観察である。
【０１０６】
「維持治療」は、１つまたは複数の疾患症状の寛解（全体のまたは部分的な）の達成後の、疾患の次の再発までの疾患、障害または症状の時期の治療である。部分的な寛解は、１つまたは複数の通常疾患症状に関連した症状の消失または軽減である。急性期の顕著な特徴には、悪心、下痢、嘔吐、発熱、腹部圧痛、痛み、さしこみ、場合によっては貧血症および栄養不良のような症状が含まれる。痔瘻が発生することがある。大便に、血がまじることがあり、あるいは不顕性の出血が生じることがあり、検査で診断することができる。白血球は、中程度に増加し、沈降速度はしばしば増加し、活性期から寛解期への移行を監視するのに使用することができる。低カリウム血症、低アルブミン血症、および低カルシウム血症は急性期に生じうる。腹部のＸ線検査およびバリウム浣腸が、粘膜の損傷および炎症組織を検出するのに使用され、Ｘ線断層撮影法および超音波診断法を同様の目的で使用することができる。維持治療は、存在することが以前に診断された異常症状が正常値に戻った時点において始まる。急性期治療は、患者および使用される療法に応じて、通常２から６週間継続する。維持期における本発明の化合物の投与を含む維持治療の長さは、寛解の導入から疾患の再発の発現まで、または疾患が制御された場合は無期限に続く。恐らく、十分な疾患の制御の数年の後には本発明の化合物の投与を中止することが可能になるであろうが、疾患の再発の兆候は注意深く観察されなけらばならない。
【０１０７】
「応答者」は、特定の量の特定の活性物質（または活性物質の組合せ）の投与を含む、潰瘍性大腸炎またはクローン病の治療に以前応答した患者を指す。
【０１０８】
「患者」は、哺乳類、好ましくはヒトまたは家畜、より好ましくはヒトを指す。
【０１０９】
「治療有効量」は、病状、障害または症状を治療のために哺乳類に投与されたときに、このような治療を達成するために十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患およびその重篤性および治療するべき哺乳類の年齢、重量、身体的症状および応答性に応じて異なる。
【０１１０】
セリアック病および炎症性腸疾患（クローン病、および潰瘍性大腸炎）などの胃腸管の障害および症状の症候および兆候には、痛み、下痢、便秘、直腸出血、発熱、および関節痛吸収不良（ｊｏｉｎｔ  ｐａｉｎ  ｍａｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）、慢性ビタミンおよび栄養欠乏が含まれる。
【０１１１】
亜臨床的症状は、制限なしに、その発現が臨床的症状の兆候に先行することがある炎症の診断的マーカーを含む。亜臨床的症状の一クラスは、炎症誘発性リンパ系細胞の器官または組織中の侵襲または集積、または活性化された炎症誘発性リンパ系細胞の局所的なまたは抹消的な存在、および／または炎症誘発性リンフォカインまたはサイトカインプロフィールの出現、または炎症の他の媒介物の遊離などの免疫症状である。これらのパラメータの追跡は、通常の臨床業務ではないが、吐き出された酸化窒素（Ｋｏｅｋ  Ｇ．Ｈ．他、Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．、２００２年、９６：５３０−５）、および消化管炎症が引き起こす透過性の増加を、ラクツロースおよびラムノースの尿排出量の測定により検知できることが、不活性なクローン病における再発を予想するという報告がある（Ａｒｎｏｔｔ  Ｉ．Ｄ．他、Ｓｃａｎ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏ．、２０００年、３５：１１６３−９）。同様に、糞便のα１−アンチトリプシンの排出も炎症性腸疾患の評価に使用される（Ｂｅｃｋｅｒ  Ｋ．他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．、１９９８年、３：６５−７０）。
【０１１２】
医薬組成物
本発明に関する使用のための医薬組成物は、１種または複数の医薬上許容される担体または賦形剤を用いて、通常の方法で処方することができる、経口または経腸投与される（または他の粘膜性投与の）懸濁液、カプセルまたは錠剤の形態でよいことを理解されたい。
【０１１３】
最も好ましい経口組成物は、徐放性、遅延放出性また局所放出（ｐｏｓｉｔｉｏｎｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）の（例えば、経腸の、特に大腸放出）錠剤またはカプセルである。この放出特性は、制限なしに胃の中の条件に耐性で、損傷または炎症部位が認められた大腸またはＧＩ管の他の部分において中身を放出するコーティングの使用により達成することができる。あるいは遅延放出は、崩壊するのが遅いコーティングにより達成することができる。あるいは上記２つの（遅延放出および局所放出）特性は、１種または複数の適切なコーティングの選択により単一の処方に組み合わせることができる。このような処方は、本発明のさらなる特徴を構成する。
【０１１４】
遅延放出および／または腸溶コートした経口処方に適した組成物には、耐水性の、ｐＨ感受性の、腸液で蒸解もしくは乳化される、またはぬらしたときに緩慢であるが一定速度で徐々にくずれる物質でフィルムコートした錠剤処方が含まれる。適切なコーティング材料には、それだけには限らないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸のポリマーおよびそのエステル、およびそれらの組合せが含まれる。それだけには限らないがポリエチレングリコール、フタル酸ジブチル、トリアセチンおよびひまし油などの可塑剤を使用することができる。フィルムを着色するのに色素も使用することができる。座薬は、カカオバターのような担体、Ｓｕｐｐｏｃｉｒｅ  Ｃ、およびＳｕｐｐｏｃｉｒｅ  ＮＡ５０（ドイツ、Ｄ−Ｗｅｉｌ  ａｍ  Ｒｈｅｉｎ市、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ  ＧｍｂＨによって供給される）などの座薬基剤、および他の水素化パーム油およびパーム核油（Ｃ８〜Ｃ１８トリグリセリド）のエステル交換、グリセロールおよび特定の脂肪酸のエステル化、またはポリグリコシル化グリセリドにより得られるＳｕｐｐｏｃｉｒｅタイプの賦形剤、およびｗｈｉｔｅｐｓｏｌ（添加剤を含む水素化植物油誘導体）を使用することにより調製される。浣腸は、本発明による適切な活性化合物および懸濁液用の溶媒または賦形剤を使用することにより処方される。懸濁液は、微粉化した化合物、およびカルボキシメチルセルロースおよびその塩、ポリアクリル酸およびその塩、カルボキシビニルポリマーおよびその塩、アルギン酸およびその塩、アルギン酸プロピレングリコール、キトサン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、Ｎ−ビニルアセトアミドポリマー、ポリビニルメタクリレート、ポリエチレングリコール、ｐｌｕｒｏｎｉｃ、ゼラチン、メチルビニルエーテル−無水マレイン酸コポリマー、溶性デンプン、プルランおよびメチルアクリレートおよび２−エチルヘキシルアクリレートレシチンのコポリマー、レシチン誘導体、プロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン水和ひまし油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、およびｐｌｕｒｏｎｉｃおよび６．５から８のｐＨ範囲の適切な緩衝系などの、懸濁液安定化剤、増粘剤および乳化剤を含む適切なビヒクルを使用することにより生成される。保存料、マスキング剤の使用は適切である。微粉化した粒子の平均直径は、１〜２０μｍでよく、または１μｍ未満でよい。化合物は、その水溶性塩の形態を用いて処方中に組み込むこともできる。
【０１１５】
別法として、材料は、錠剤の基質、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロースまたはアクリルおよびメタクリル酸エステルのポリマー中に組み込むことができる。これらの後者の材料は、圧縮コーティングにより錠剤に塗布することもできる。
【０１１６】
医薬組成物は、治療有効量の活性物質を、投与方法に応じて異なる形態を有しうる、医薬上許容される担体と混合することにより調製することができる。医薬組成物は、通常の医薬品賦形剤および調製方法を用いることにより調製することができる。経口投与用の形態は、カプセル、粉末または錠剤でよく、これに、乳糖、デンプン、ブドウ糖、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、マンニトールを含めた通常の固形ビヒクル、ならびにそれだけには限らないがエタノール、グリセロール、および水を含めた通常の液体経口賦形剤を添加することができる。すべての賦形剤は、崩壊剤、溶媒、造粒剤、保湿剤および結合剤と混合することができる。固形担体が経口組成物（例えば、デンプン、砂糖、カオリン、結合剤、崩壊剤）の調製に使用されるとき、調製物は、制限なしに粉末、顆粒または被覆粒子を収容したカプセル、錠剤、硬質ゼラチンカプセル、または顆粒の形態でよく、この固形担体の量は変わりうる（１ｍｇから１ｇまで）。錠剤およびカプセルが好ましい経口組成物形態である。
【０１１７】
薬物の直腸または膣用の座薬は、本発明の化合物を、通常の温度で固形であるが、直腸の温度で液体であり、したがって直腸中で溶けて化合物を放出する、カカオバターおよびポリエチレングリコールなどの、適切な刺激性のない賦形剤と混合することにより調製することができる。
【０１１８】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、意図した投与方法に適した、例えば、溶液、懸濁液、または乳濁液を含めた任意の形態でよい。液体担体は、一般的に調溶液、懸濁液、および乳濁液の調製に使用される。本発明の実施における使用に考えられる液体担体には、例えば、水、食塩水、医薬上許容される有機溶媒、医薬上許容される油または脂肪など、ならびにそれらの２種以上の混合物が含まれる。液体担体は、可溶化剤、乳化剤、栄養素、緩衝液、保存料、懸濁化剤、増粘剤、粘度調節剤、安定剤などの、他の適切な医薬上許容される添加剤を含むことができる。適切な有機溶剤には、例えば、エタノールなどの一価アルコールおよびグリコールなどの多価アルコールが含まれる。適切な油には、例えば、大豆油、ココナッツ油、オリーブ油、ベニバナ油、綿実油などが含まれる。非経口投与には、担体は、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルなどの油性エステルでもよい。本発明の組成物は、微小粒子、マイクロカプセル、リポソームカプセル（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｓ）など、ならびにそれらの２種以上の組合せの形態でもよい。
【０１１９】
治療有効量の本発明の化合物は、当分野で周知の方法により決定することができる。本発明の化合物は、対応するコンジュゲートしていない抗炎症薬単独に比べて（低い吸収性のために）作用の所望の部位により効率的に送達されるので、コンジュゲートしていない抗炎症薬に比べてモル基準でより少量の化合物を、原理上は同じ治療効果を達成したまま投与することができる。さらに、化合物の投与が、対応するコンジュゲートしていない抗炎症薬に比べてより少ない副作用をもたらすので、抗炎症治療が必要な場所への送達される数量を増加させることができる。したがって、下表は指針としてのみ役立つ。化合物、その医薬上許容される塩、その溶媒和物、またはそのプロドラッグの治療有効量の閾値は、一般的にモル基準でステロイドまたは非ステロイド抗炎症薬またはコンジュゲートの治療有効量に比べて同等以下である。化合物、その医薬的な塩、その溶媒和物、またはそのプロドラッグの広範囲のまた好ましい有効量が下表に示されている。
【０１２０】
【表１】
2008509899.tif 000034
【０１２１】
炎症性腸疾患およびセリアック病の治療用の用量範囲は、患者の症状および疾患の重篤性に応じて１日あたり約１から約５００ｍｇである。本明細書に開示されたグルココルチコイドコンジュゲートの１日あたりの用量は、１０〜１２０ｍｇ／１日１人、１日あたり１度または２度であり、本明細書に開示されたＮＳＡＩＤコンジュゲートは、疾患の急性期において５０〜５００ｍｇ、１日あたり１度または２度である。しかしながら、維持期において、用量は例えば急性期治療の５０％以下の割合に減らすことができ、かつ／または使用数は例えば毎日または１日２度の代わりに２日または３日に１度に減らすことができる。用量および投与頻度は、少なくとも１つまたは複数の、好ましくは複数の当分野の技術者に周知の急性期の臨床的徴候の減少または消滅により、寛解期の維持を確かにする臨床的徴候による。
【０１２２】
治療の継続期間は、利益が持続し、かつ／または副作用が許容されるかぎり、数週間から数カ月、数年にまで渡りうる。
【０１２３】
用量および投与計画は、当分野の技術者に理解されるように、投与対象の年齢、性別、身体症状、ならびに治療にかけられる患者または哺乳類におけるコンジュゲートの利益および副作用、および医師の判断に応じて調節することができる。
【０１２４】
ステロイドコンジュゲートの調製方法
式中、Ｔがステロイドである式ＶＩＩの化合物は、式ＩＸのステロイドサブユニット、および構造式ＶＩＩＩのマクロライドサブユニットのアミノ基の反応によりアミド結合が作られることによって調製される。構造式Ｘの出発ステロイドサブユニットは、対応するハロゲンアルカノイルクロリド（好ましくは３−クロロプロピオニルクロリド）の式ＶＩＩのステロイドサブユニットへの作用により得ることができ、式中、ＲｄはＯＨ基である（Ｐｈｉｌｌｉｐｐｓ  Ｇ．他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９４年、３７、３７１７−３７２９）。
【０１２５】
【化３２】
2008509899.tif 000035
【０１２６】
式ＶＩＩの化合物は、一般的に次の方法で得ることができる。リンカー鎖Ｌの一端を、最初にマクロライドサブユニットＭに結合させ、次いでこの鎖のもう一端を、ステロイドサブユニットに結合させる、または鎖Ｌの一端を、最初にステロイドサブユニットＴに結合させ、次いでこの鎖のもう一端を、マクロライドサブユニットＭに結合させる、または最後に、この鎖の一部を、マクロイドサブユニットＭに結合させるが、この鎖の別の一部を、ステロイドサブユニットＴに結合させ、この鎖の一部の端が次いで化学的に結合して鎖Ｌを形成する。
【０１２７】
本発明の化合物の作製のより一般的なスキームは、前述のことに照らして本発明の分野の技術者に明らかである。式ＶＩＩの化合物は、次のプロセスで調製することができる。
【０１２８】
ａ）式中、リンカーＬ中のＸ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩの化合物は、（ｉ）式ＸＩで表されるステロイド抗炎症性サブユニットを、
【０１２９】
【化３３】
2008509899.tif 000036
［式中、Ｌ１は脱離基（ヒドロキシなどの）を表す］（ｉｉ）式ＸＩＩで表されるマクロライドサブユニットの遊離アミノ基と反応させることにより形成することができる。
【０１３０】
【化３４】
2008509899.tif 000037
【０１３１】
この反応は、一般的にハロゲン化物、混合した無水物および特にカルボジイミド［−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル−カルボジイミド（ＥＤＣ）などの］およびベンゾトリアゾールなどの、ステロイド抗炎症性サブユニットのカルボン酸基を活性化する能力を有する酸誘導体を用いて実施される。この反応は、有機塩基（例えば、トリエチルアミン）などの塩基の存在下で室温において窒素またはアルゴンなどの不活性雰囲気下で進行する。この反応は、完了するまで数時間から数日を必要とすることがある。
【０１３２】
例えば、Ｌが−Ｋ−ＮＨ−であるとき（ここでＫはマクロライドに結合したＬ分子の部分である）、式ＶＩＩの化合物は、マクロライド環上のＮＨ基を誘導体化して−Ｎ−Ｋ−（ＮＨ２）−基にし、この誘導体化されたマクロライドを式ＩＸで表されるステロイド抗炎症性サブユニットと反応させることにより形成することができる。
【０１３３】
【化３５】
2008509899.tif 000038
【０１３４】
このプロセスは、マクロライド中のＮＨ基が、マクロライドの糖環Ｓ１（すなわち、デソザミン糖）の３’位、
【０１３５】
【化３６】
2008509899.tif 000039
または糖環Ｓ２の４位に結合しているときにも実施することができる。
【０１３６】
【化３７】
2008509899.tif 000040
ｂ）式中、Ｘ２が−ＯＣ（＝Ｏ）−である式ＶＩＩで表される化合物は、式ＩＸの化合物を式ＸＩＩＩで表されるマクロライドサブユニットの遊離水酸基と反応させることにより形成することができる。
【０１３７】
【化３８】
2008509899.tif 000041
この反応は、一般的に、ハロゲン化物、混合した無水物および特にカルボジイミドおよびベンゾトリアゾールなどの、カルボン酸基を活性化する能力を有する酸誘導体を用いて実施される。この反応は、一般的に室温において窒素またはアルゴンなどの不活性雰囲気下で実施される。この反応は、完了するまで数時間から数日を必要とすることがある。
【０１３８】
構造式ＶＩＩＩの出発マクロライドサブユニットは、周知の化合物か、参照によりその全体を本明細書に組み込んだＣｏｓｔａ  Ａ．Ｍ．他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２０００年、４１：３３７１−３３７５に記載のものなどの、類似化合物のために記載された手順により得ることができる。両方とも参照によりその全体を本明細書に組み込んだＢｒｉｇｈｔの米国特許４４７４７６８号およびＢｒｉｇｈｔ，Ｇ．Ｍ．他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．、１９８８年、４１：１０２９−１０４７も参照されたい。
【０１３９】
例えば、連結部Ｌが−Ｋ−Ｏ−であるとき、式ＶＩＩの化合物は、（１）マクロライド上のＮＨ基を誘導体化してＮ−Ｋ−ＯＨ基にすること、および（２）誘導体化したマクロライドをステロイドＴ上の遊離カルボン酸基と反応させることにより形成することができる。
【０１４０】
【化３９】
2008509899.tif 000042
【０１４１】
連結基−Ｋ−ＯＨは、次のようにマクロライドサブユニットの第二級窒素原子と結合させることができる。マクロライドサブユニットを、ＣＨ２＝ＣＨ（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（例えば、メチルアクリレート）などのアルケノイル誘導体と反応させる。次いで、エステル基（すなわち、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル）を、無水有機溶剤中における金属水素化物（例えば、ＬｉＡｌＨ４）などで還元して、連結基−Ｋ−ＯＨ（すなわち、Ｍ−Ｋ−ＯＨ）を有するマクロライドサブユニットを得る。この還元は、一般的に低温、好ましくは０℃以下において実施される。
【０１４２】
このプロセスは、ＮＨ基がマクロライド中の糖環の３’位（マクロライドの３位における糖などの）に結合しているときにも実施することができる。
【０１４３】
ｃ）式中、Ｘ１が−ＯＣ（＝Ｏ）−であり、Ｑが−ＮＨ−であり、Ｘ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩによって表される化合物は、次式で表されるマクロライドサブユニットを反応させることにより調製することがでる。
【０１４４】
【化４０】
2008509899.tif 000043
【０１４５】
例えば、このプロセスは、アクリロイル基がマクロライドサブユニットのＣ／６位またはＣ／４”位において、次式で表されるステロイドサブユニットと結合しているときに、
【０１４６】
【化４１】
2008509899.tif 000044
アセトニトリルなどの溶媒中で実施して、
【０１４７】
【化４２】
2008509899.tif 000045
を得ることができる。
【０１４８】
誘導体化したステロイド（すなわち、Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｋ−ＮＨ２）は、適切なアミン（連結基−Ｋ−ＮＨ２を有する）を式ＩＸのステロイドのカルボン酸基またはエステル基と反応させることによって形成することができる。
【０１４９】
ｄ）式中、Ｘ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩによって表される化合物は、マクロライドサブユニットを下記に示された遊離アミノ基を有する誘導化したステロイドと反応させることによって調製することができる。
【０１５０】
【化４３】
2008509899.tif 000046
【０１５１】
ｅ）式中、Ｘ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩで表される化合物は、マクロライドサブユニットを下記に示された遊離カルボン酸基を有するステロイドサブユニットと反応させることによって調製することができる。
【０１５２】
【化４４】
2008509899.tif 000047
【０１５３】
反応体のマクロライドサブユニットは、クラジノース糖の４”位にヒドロキシ置換基を有する対応するマクロライドを酸化して、４”位に＝Ｏ置換基を得て、４”位における
【０１５４】
【化４５】
2008509899.tif 000048
をエポキシ基
【０１５５】
【化４６】
2008509899.tif 000049
に変換し、このエポキシ基を適切な反応体で開裂して、反応体のマクロライドサブユニット（Ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｋ−ＮＨ２）を得ることによって形成することができる。
【０１５６】
ｆ）式ＶＩＩの化合物は、脱離基Ｌ２（臭素などの）を有するマクロライドサブユニットを下記に示されたステロイドと反応させることによって調製することができる。
【０１５７】
【化４７】
2008509899.tif 000050
【０１５８】
出発マクロイドサブユニットは、マクロライド環の３位に結合した糖基を開裂し、次いでマクロライドをＬ２が脱離基である式Ｌ２−Ｌ−Ｌ１の反応物と反応させることによって調製することができる。
【０１５９】
ｇ）式ＶＩＩの化合物は、脱離基Ｌ２（臭素などの）を有するマクロライドサブユニットを下記に示されたステロイドと反応させることによって調製することができる。
【０１６０】
【化４８】
2008509899.tif 000051
【０１６１】
式ＶＩＩにより表される化合物の塩は、例えばエーテル（ジエチルエーテル）またはアルコール（エタノール、プロパノールまたはイソプロパノール）などの、適切な溶媒または溶媒の混合物中において、例えば構造式ＶＩＩの化合物と対応する塩基または酸との反応などの一般的に周知の手順を使用することによって調製することができる。
【０１６２】
１６員環マクロライドは、従来そのアグリコンの置換パターンに基づきサブファミリーに分類されている。このファミリーの主原型は、ロイコマイシン、スピラマイシンおよびチロシンによって代表されうる。
【０１６３】
チロシンは、５−水酸基に結合した二糖に加えて、２つの二重結合（チロノライド）および第三糖置換基（β−Ｄ−マイシノース（ｍｙｃｉｎｏｓｅ））で高度に置換されたアグリコンを有する１６員マクロライドの一典型である。二糖からのミカローゼの加水分解は、デスミカロシル−チロシン（ｄｅｓｍｙｃａｒｏｓｙｌ−ｔｙｌｏｓｉｎ）（デスマイコシン）を生じた。
【０１６４】
【化４９】
2008509899.tif 000052
【０１６５】
例えば、１６員環マクロライドハイブリッドは、Ｃ−２０アルデヒド基の還元的アミノ化により調製することができる。
【０１６６】
【化５０】
2008509899.tif 000053
【０１６７】
この反応は、８ａ−アザ−ホモデスマイコシンおよびその誘導体（ジヒドロおよびテトラヒドロ誘導体などの）のような１７員アザライドも使用することができる。
【０１６８】
【化５１】
2008509899.tif 000054
【０１６９】
別法として、１６員環マクロライド誘導体化は、二重結合を変換し（例えば、エポキシ化により）エポキシ基を適切な反応体（ジアミンなどの）を用いて開裂して反応体マクロライドサブユニット（Ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｋ−ＮＨ２）を得ることにより進行しうる。
【０１７０】
９位のケトンも、ヒドロキシアミン塩酸塩により修飾してオキシムを生じ、次いで還元してアミンにすることができる。
【０１７１】
ステロイドが、１７位において−Ｓ（Ｏ）ｎ−ＲＣである場合、同じ連結スキームを使用することができる。
【０１７２】
ステロイドサブユニットを、このような基を有するステロイド中の２１ヒドロキシ基を経由してマクロライドに結合することができる。２１ヒドロキシステロイドを発端に、環式ケタールを、好ましくは塩化メチレンなどの溶媒中において、第三級アミン塩基またはピリジンの存在下で、低温（−５０℃〜３００℃）において適切なカルボン酸ハロゲン化物または無水物と反応させる。このように作製された中間体は、Ｈ２Ｎ−Ｌ−Ｍと反応させて式ＶＩＩの化合物を形成する。
【０１７３】
【化５２】
2008509899.tif 000055
【０１７４】
ステロイドサブユニットは、ステロイドサブユニットの１７位を経由してマイクロライドに結合させることもできる。このような化合物の調製方法の１つは次のとおりである。
【０１７５】
【化５３】
2008509899.tif 000056
【０１７６】
例えば、Ｌが−Ｋ−ＮＨ−（ここでＫはマクロライドに結合したＬ分子の部分である）であるとき、式ＶＩＩの化合物は、マクロライド環上のＮＨ基を誘導体化して−Ｎ−Ｋ−（ＮＨ２）−基にし、誘導体化したマクロライドを式Ｓａで表されるステロイド抗炎症性サブユニットと反応させることにより形成することができる。
【０１７７】
【化５４】
2008509899.tif 000057
【０１７８】
このプロセスは、マクロライド中のＮＨ基がマクロライドの糖環Ｓ１（すなわち、デソザミン糖）の３’位
【０１７９】
【化５５】
2008509899.tif 000058
または糖環Ｓ２の４”位で結合しているときに実施することもできる。
【０１８０】
【化５６】
2008509899.tif 000059
【０１８１】
式中、Ｘ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩにより表される化合物は、マクロライドサブユニットを、下記に示された−Ｃ＝Ｃ−結合を有するステロイドサブユニットと反応させることにより調製することができる。
【０１８２】
【化５７】
2008509899.tif 000060
【０１８３】
出発ステロイドサブユニットの１７位におけるカルボン酸基は、ＮＨ２−Ｌ−Ｍとの反応前に修飾することができる。
【０１８４】
出発ステロイドサブユニットの１７位におけるカルボン酸基は、ＮＨ２−Ｌ−Ｍとの反応前に保護し、ＮＨ２−Ｌ−Ｍとの反応またはエステル化工程の後に脱保護することもできる。
【０１８５】
式中、Ｔが非ステロイド抗炎症性サブユニットである式ＶＩＩの化合物は、マクロライド中間体を非ステロイド抗炎症性中間体と当分野で周知の方法を用いて反応させることにより合成することができる。
【０１８６】
【化５８】
2008509899.tif 000061
【０１８７】
反応式Ｉによれば、水酸基を有するＮＳＡＩＤ化合物は、別法としてピリジンの存在下における無水コハク酸の作用に次いで、このように生成された中間体をトリエチルアミン、４−ピロロピリジンと塩化メチレン中で反応させて、遊離カルボン酸基を有するＮＳＡＩＤを生成することにより誘導体化することができる（Ｈｕａｎｇ  Ｃ．Ｍ．他、Ｃｈｅｍ．＆Ｂｉｏｌ．２０００年、７、４５３−４６１、Ｈｅｓｓ  Ｓ．他、Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１年、９、１２７９−１２９１）。このように生成されたＮＳＡＩＤ誘導体は、式ＸＩＩなどのリンカーマクロライド化合物、または直接的にマクロライドのいずれかに結合させることができる。
【０１８８】
【化５９】
2008509899.tif 000062
【０１８９】
反応式ＩＩによれば、アミノ基を有するＮＳＡＩＤ化合物は、別法としてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中における水素化ナトリウムおよびｔｅｒｔ−ブチルヨード酢酸の作用で、このＮＳＡＩＤのブトキシカルボニル誘導体を生成し、これを次いでトリフルオロ酢酸と塩化メチレン中で反応させて遊離カルボン酸基を有するＮＳＡＩＤを生成することにより誘導体化することができる（Ｈｅｓｓ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２００１、９：１２７９−９１）。このように生成されたＮＳＡＩＤ誘導体は、式ＸＩＩなどのリンカーマクロライド化合物または直接的にマクロライドのいずれかと結合させることができる。
【０１９０】
【化６０】
2008509899.tif 000063
【０１９１】
別法として、アミノ基を有するＮＳＡＩＤ化合物は、反応式ＩＩＩによりジメチルホルムアミド中において、ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での無水コハク酸の作用で、遊離カルボン酸基を有するＮＳＡＩＤを生成することにより誘導体化することができる（Ｐａｎｄｏｒｉ  Ｍ．Ｗ．他、Ｃｈｅｍ．＆  Ｂｉｏｌ．、２００２年、９：５６７−７３）。このように生成されたＮＳＡＩＤ誘導体は、式ＸＩＩなどのリンカーマクロライド化合物または直接的にマクロライドのいずれかと結合させることができる。
【０１９２】
ＮＳＡＩＤ化合物がスルホンアミド基を含む場合、これらを、米国特許出願公開２００３／００５５０１２Ａ１号に記載の手順に従いブロモ酢酸メチルなどのクロロおよびブロモ酢酸のエステル誘導体を用いて誘導体化することができる。このようなエステルは、例えばＬｉＯＨを用いた塩基条件下で加水分解し、式ＸＩＩなどのリンカーマクロライド化合物または直接にマクロライドのいずれかに結合させることができる遊離酸を生成することができる。
【０１９３】
構造式ＶＩＩＩの出発マクロライドサブユニットの調製は、参照によりその全体を本明細書に組み込んだＰＣＴ／ＨＲ０２／００００１号に記載されている。それぞれ参照によりその全体を組み込んだＢｒｉｇｈｔの米国特許４４７４７６８号およびＢｒｉｇｈｔ  Ｇ．Ｍ．他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．、１９８８年、４１：１０２９−４７も参照されたい。
【０１９４】
例えば、Ｌが−Ｋ−ＮＨ−（式中、Ｋはマクロライドに結合したリンキング分子Ｌの部分である）であるとき、式ＶＩＩの化合物は、マクロライド環上の＞ＮＨ基を誘導体化して＞Ｎ−Ｋ−ＮＨ２基にし、この誘導体化したマクロライドを非ステロイド抗炎症性サブユニットＬ１（Ｃ＝Ｏ）Ｔと反応させることにより形成することができ、式中、Ｌ１は反応式ＩＶの脱離基である。
【０１９５】
【化６１】
2008509899.tif 000064
【０１９６】
このプロセスは、マクロライド中のＮＨ基が、反応式Ｖのマクロライドの糖環Ｓ１（例えば、デソザミン糖）の３’位、
【０１９７】
【化６２】
2008509899.tif 000065
または反応式ＶＩの糖環Ｓ２の４”位に結合しているときにも実施することができる。
【０１９８】
【化６３】
2008509899.tif 000066
【０１９９】
反応体マクロライドサブユニットは、クラジノース糖の４”位にヒドロキシ置換基を有する対応するマクロライドを酸化して４”位に＝Ｏ置換基を得、４”位の
【０２００】
【化６４】
2008509899.tif 000067
を変換してエポキシ基
【０２０１】
【化６５】
2008509899.tif 000068
にし、このエポキシ基を適切な反応体で開裂して反応体マクロライドサブユニット（Ｍ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｋ−ＮＨ２）を得ることにより形成することができる。
【０２０２】
ｂ）式中、Ｘ２が−ＯＣ（＝Ｏ）−である式ＶＩＩにより表される化合物は、非ステロイド抗炎症性サブユニットを式ＸＩＩＩにより表されるマクロライドサブユニットの遊離水酸基と反応させることにより形成することができる。
【０２０３】
【化６６】
2008509899.tif 000069
この反応は、一般的に、ハロゲン化物（ＥＤＣなどの）、混合した無水物、特にカルボジイミドなどの、非ステロイド抗炎症性サブユニットのカルボン酸基を活性化する能力を有する酸誘導体を用いて実施される。この反応は、一般的に室温において窒素またはアルゴンなどの不活性雰囲気下で実施される。この反応は、完了するのに数時間から数日を必要とすることがある。
【０２０４】
構造式ＸＩＩＩの出発マクロライドサブユニットは、周知の化合物であるか、あるいは参照により本明細書に組み込んだＣｏｓｔａ  Ａ．Ｍ．他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２０００年、４１：３３７１−７５に記載のものなどの類似の化合物のために記載された手順に従って得ることができる。
【０２０５】
例えば、連結部Ｌが−Ｋ−Ｏ−であるとき、式ＶＩＩの化合物は、（１）マクロライド上の＞ＮＨ基を誘導体化して＞Ｎ−Ｋ−ＯＨ基にすること、および（２）この誘導体化したマクロライドを反応式ＶＩＩの非ステロイド抗炎症性サブユニットＴの遊離カルボン酸基と反応させることにより形成することができる。
【０２０６】
【化６７】
2008509899.tif 000070
【０２０７】
連結基−Ｋ−ＯＨは、次のようにマクロライドサブユニットの第一級または第二級窒素原子に結合させることができる。マクロライドサブユニットを、ＣＨ２＝ＣＨ（ＣＨ２）ｍＣ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル（例えば、アクリル酸メチル）などの、アルケノイル誘導体と反応させる。エステル基（すなわち、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキル）を、次いで無水有機溶媒中の金属水素化物（例えば、ＬｉＡｌＨ４）などを用いて還元して、連結基−Ｋ−ＯＨ（すなわち、Ｍ−Ｋ−ＯＨ）を有するマクロライドサブユニットを得る。この還元は、一般的に低温、好ましくは０℃以下で実施される。
【０２０８】
このプロセスは、ＮＨ基がマクロライド中の糖環の３’位（マクロライドの５位の糖などの）に結合しているときにも実施することができる。
【０２０９】
ｃ）式中、Ｘ１が−ＯＣ（＝Ｏ）−であり、Ｑが−ＣＨ２−またはＮＨであり、Ｘ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩにより表される化合物は、次式で表されるマクロライドサブユニット、
【０２１０】
【化６８】
2008509899.tif 000071
（式中、４”はクラジノース糖などの、糖Ｓ２の４位である）および次式で表される遊離アミノ基を有する誘導体化した非ステロイド抗炎症性サブユニットを
【０２１１】
【化６９】
2008509899.tif 000072
アセトニトリルなどの溶媒中で反応させて
【０２１２】
【化７０】
2008509899.tif 000073
を得ることにより調製することができる。
【０２１３】
誘導体化した非ステロイド抗炎症性サブユニット（例えば、Ｔ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｋ−ＮＨ２）は、適切なアミン（連結基−Ｋ−ＮＨ２を有する）を非ステロイド抗炎症性薬のカルボン酸基と反応させることにより形成することができる。
【０２１４】
ｄ）式中、Ｘ１が−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、Ｘ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩにより表される化合物は、マクロライドサブユニットを下記に示された遊離アミノ基を有する誘導体化した非ステロイド抗炎症性サブユニットと反応させることにより調製することができる。
【０２１５】
【化７１】
2008509899.tif 000074
【０２１６】
ｅ）式中、Ｘ１が−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、Ｘ２が−ＮＨ−である式ＶＩＩにより表される化合物は、マクロライドサブユニットを下記に示される遊離カルボン酸基を有する非ステロイド抗炎症性サブユニットと反応させることにより調製することができる。
【０２１７】
【化７２】
2008509899.tif 000075
【０２１８】
ｆ）式ＶＩＩの化合物は、脱離基Ｌ２（臭素などの）を有するマクロライドサブユニットを下記に示された非ステロイド抗炎症性薬と反応させることにより調製することができる。
【０２１９】
【化７３】
2008509899.tif 000076
【０２２０】
出発マクロライドサブユニットは、マクロライド環の３位に結合した糖基を開裂し、次いでこのマクロライドをＬ２が脱離基である式Ｌ２−Ｌ−Ｌ１の試薬と反応させることにより調製することができる。
【０２２１】
ｇ）式ＶＩＩの化合物は、脱離基Ｌ２（臭素などの）を有するマクロライドサブユニットを下記に示された非ステロイド抗炎症性薬と反応させることにより調製することができる。
【０２２２】
【化７４】
2008509899.tif 000077
【０２２３】
ｈ）式ＶＩＩの化合物は、脱離基Ｌ２（臭素などの）を有するマクロライドサブユニットを下記に示された非ステロイド抗炎症性薬と反応させることにより調製することができる。
【０２２４】
【化７５】
2008509899.tif 000078
【０２２５】
経口投与用錠剤
錠剤は、直接圧縮法または湿式造粒などの、周知の技法により調製することができる。活性成分は、それだけには限らないが乳糖、クロスカルメロースナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの賦形剤とブレンドすることができる。得られるミックスは、適切なパンチを用いて錠剤に圧縮することができる。
【０２２６】
他の強度の錠剤は、活性成分と賦形剤の比または圧縮重量および適合するパンチの使用を変えることにより調製することができる。
【０２２７】
錠剤は、適切なフィルムコーティング装置を用いてフィルムコーティング懸濁液でフィルムコートして、約５から約１０ｍｇのフィルムコートの重量を得ることができる。処方の放出特徴は、適切なコーティングおよび／または分解性マトリックス（ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ｍａｔｒｉｘ）の選択により改変することができる。別法として、処方技術において放出について同様のことが知られている。
【実施例】
【０２２８】
次の実施例は本発明を例示するが限定するものではない。
経口生体利用率測定の薬物動態学的方法
【０２２９】
【化７６】
2008509899.tif 000079
【０２３０】
体重約２２０ｇの雄性Ｗｉｓｔａｒ  Ｈａｎラットを使用した。体重測定後、各ラットに耳標を付けてケージに置いた。ラットを３組に分け、ラット１５匹の１組を静脈適用のため、ラット（経口）５匹の１組を２４時間内の血液採取のため、ラット２匹の１組を投与後２４時間の糞を集めるためとした。実験中、ラットは１２時間明暗サイクルに保たれ、食料（ＭＵＣＥＤＯＬＡ、イタリア）および水道水を自由に摂取できるようにした。組分け後、ラットは棚の中に置かれたケージに保管した。ラットは体重測定し、経口投与前１２時間絶食させた。
【０２３１】
０．１２５％カルボキシメチルセルロース懸濁液中の化合物１を経口投与した。
【０２３２】
化合物１をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のそのリン酸塩の形態で静脈投与した。
【０２３３】
プラズマおよび血液サンプルを、投与後の１５、４５、６０、１２０、２４０、３６０、７２０および１４４０分の時点で採取した。サンプルを、尾静脈に穴をあけることにより採集した。各サンプル採取時点において２５０μＬの血液を採集し、そのうち５０μＬを１００μＬ脱イオン水を収容したエッペンドルフ試験管（１．５ｍＬ）に添加した。血液を、投与後２４時間まで実験記録中に記載の時点によって採集した。投与後２４時間、最後の血液採集の後、ラットをＣＯ２雰囲気に置き、ラットの小腸および大腸を取り出し、洗浄しペトリ皿に置いた。試料を分析まで−２０℃で保存した。
【０２３４】
生体マトリックス中の化合物１の濃度を、アセトニトリルおよび水（０．１％ギ酸で酸性化された）グラジエントをクロマトグラフ媒体として用いた、タンデム型質量分析検査を備えた高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ／ＭＳ−ＭＳ）により測定した（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、２００１年５月）。
【０２３５】
生体サンプルは、内部標準を含むアセトニトリルを用いた除タンパク質により調製された。上澄み液部分の遠心分離および蒸発後、サンプルをアセトニトリル：０．１％ギ酸を添加した水の中で再構成した。
【０２３６】
ＨＰＬＣ分離を、逆相Ｃ１８分析用カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８（２）ｍ  ５０×２ｍｍ（３μｍ）Ｎｏ  １８２７００−５）上で周囲温度に保たれたガードカラム（ｇｕａｒｄ  ｃｏｌｕｍｎ）を用い、水：アセトニトリルのグラジエント［０分〜２分１０％アセトニトリル、２〜３．５分８０％アセトニトリル、３．５〜５分１０％アセトニトリルを用い０．１％ギ酸を添加して流速０．３ｍｌ／分で実施した。
【０２３７】
ＭＳ−ＭＳ検知を多重解像度モード（ｍｕｌｔｉ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍｏｄｅ）（ＭＲＭ）で実施した。
【０２３８】
生体マトリックス中の投与化合物の濃度は、較正曲線および品質管理サンプルを用いて、化合物１のロキシスロマイシンの内部標準に対するピーク面積比により算出される。ロキシスロマイシンはマクロライド抗生物質（組織内で合成される）でもある。ロキシスロマイシンは、米国、ウイスコンシン州、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ市、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている。
【０２３９】
非コンパートメント解析を、この化合物の薬物動態解析のために様々なマトリックス中で使用したＪａｎｇ他、Ｍｅｄ  ｒｅｄ．Ｒｅｖ．２００１年、２１：３８２−９６。薬物動態パラメータは、ＰＫ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ２．０ソフトウェア（Ｓｕｍｍｉｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して算出された。
【０２４０】
薬物動態パラメータを算出するのに使用される方程式は次のとおりである：
曲線の下の面積（ＡＵＣ）
【０２４１】
【数１】
2008509899.tif 000080
式中、ｎはデータポイントの数である。
ＡＵＣ∞＝ＡＵＣ（０−ｔ）＋Ｃｎ／λｚ、式中、Ｃｎは最終の濃度であり、λｚは消失速度定数である（プラズマ／血液濃度対時間プロフィールの後半部分から予想される）。
【０２４２】
以下のパラメータは、静脈投与後に測定される：
ＣＬｓ［ｍｌ／ｍｉｎ／ｋｇ］：プラズマなどの適切な参照体液中のその濃度に正常化される身体からの薬物の排出の速度（全身からの排出または器官からの排出）。これは次のように算出される：
ＣＬｓ＝用量／ＡＵＣ（０−∞）
Ｖｄ［Ｌ／ｋｇ］：プラズマ中の薬物濃度に基づく末期における分布の見掛け容量。これは次のように算出される：
Ｖｄ＝用量／ＡＵＣ∞＊λｚ、動物体重により正常化される
ｔ１／２［ｈ］：プラズマ／血液の薬物濃度−時間プロフィールの末期中の薬物の半減期。これは次のように算出される：
ｔ１／２＝０．６９３＊Ｖｄ／ＣＬｓ
経口投与後：
Ｃｍａｘ［ｅｘ．μｇ／ｍｌ］：観測された最高薬物プラズマ濃度
Ｔｍａｘ［ｅｘ．ｈ］：Ｃｍａｘが達成される時間
Ｆ（％）：生体利用率
Ｆ＝（ＡＵＣ  ｐ．ｏ．（０−∞）／ＡＵＣ  ｉ．ｖ．（０−∞））／（Ｄｉ．ｖ．／Ｄｐ．ｏ．）
【０２４３】
プラズマおよび血液中に検出された化合物１の量は、検出の限界（ＬＬＯＱ）以下であり、したがって薬物動態パラメータを算出することはできなかった。これらの結果は、化合物１の経口生体利用率は測定できないことを確認し、ヒトに投与されたときに低い生体利用率を有することが予想される。
【０２４４】
大腸における化合物１の局所量を確かめるために、完全な小腸および大腸および２４時間中の糞を一緒に取り出した。続いて、組織および糞の両方を計量し、アセトニトリルおよび内部標準ロキシスロマイシンの９部で均質化し、３０００／ｇで７分間遠心分離した。上澄み液を分離し化合物の全体の濃度を測定した。投与後２４時間のホモジェネート中の薬物の分析は、小腸（０．０６０±０．０４２μｇ／組織サンプルのｇあたりのｇ）に比べて大腸中（０．２５±０．２３μｇ／ｇ）の約４倍高い濃度の化合物１を明らかにした。化合物１の最高の濃度は、２４時間の２匹の動物から採集した糞中に観測され、５４．４±４．６μｇ／ｇであることが見い出された。これはこの化合物の低い吸収と一致する。
【０２４５】
ＩＢＳおよびクローン病の治療における式ＶＩＩのコンジュゲートの有効性試験の動物モデル
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療のための式ＶＩＩの化合物の有効性は、ラットにおけるトリニトロベンゼンスルホン酸塩（ＴＮＢＳ）で誘発された炎症性腸疾患の抗炎病性パラメータに対するステロイド治療の効果（Ｙｕｅ  Ｇ．他、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９６年、２７６：２６５−７０；Ｐａｌｍｅｎ  Ｍ．Ｊ．他、Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．、１９９８年、４３：２５１８−２５；Ｎａｋａｓｅ  Ｈ．他、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２００１年、２９７：１１２２−８；Ｋａｎｋｕｒｉ  Ｅ．他、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、２００１年、２５：３０１−１０）、マウスにおけるＴＮＢＳで誘発されたＩＢＤに対するステロイド治療の効果（Ｆｉｏｒｕｃｃｉ  Ｓ．他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、２００２年、９９：１５７７０−７５）、ラットにおける酢酸で誘発された急性化学的大腸炎に対するステロイド治療の効果（Ｋｉｍ  Ｙ．Ｓ．他、Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．、１９９９年、２２：３５４−６０）、マウスにおけるデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）で誘発された大腸炎に対するステロイド治療の効果（ｖａｎ  Ｍｅｅｔｅｒｅｎ  Ｍ．Ｅ．他、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、２０００年、３５：５１７−２１、Ｎａｋａｓｅ  Ｈ．他、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２０００年、２９２：１５−２１）、クローン病に類似の慢性終末回腸炎を自発的に発現したＳＡＭＰ１／Ｙｉｔマウスにおける疾患に対するステロイド治療の効果（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  Ｓ．他、Ｇｕｔ、１９９８年、４３：７１−７８、Ｒｉｖｅｒａ−Ｎｉｅｖｅｓ  Ｊ．他、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、２００３年、１２４：９７２−８２）、クローン病のＴＮＦ  ΔＡＲＥモデルに対するステロイド治療の効果（Ｋｏｎｔｏｙｉａｎｎｉｓ  Ｄ．他、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９９９年、１０：３８７−９８、Ｐｉｚａｒｒｏ  Ｔ．Ｔ．他、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２０００年、２７８：Ｇ６６５−９）、およびＩＬ−１０不全マウスにおける大腸炎（Ｆａｒｍｅｒ  Ｍ．Ａ．他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、２００１年、９８：１３８２０−２５、Ｒｅｎｎｉｃｋ  Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｍ．Ｍ．Ｆｏｒｔ、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２０００年、２７８：Ｇ８２９−３３）などの様々なｉｎ  ｖｉｖｏモデルを用いて測定することができる。
【０２４６】
大腸炎のＩＬ−１０不全マウスモデル
腸管フローラに対する調節不能な（ｄｉｓｒｅｇｕｌａｔｅｄ）免疫応答はＩＢＤを引き起こしうるという仮説は、破壊されたインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）遺伝子にホモ接合性のマウスによって支持される（Ｋｕｈｎ  Ｒ．他、Ｃｅｌｌ、１９９３年、７５：２６３−７４）。未処置のままのこれらのマウスは常にＩＢＤを発現するので、このモデルは化合物のＩＢＤの発現の予防効果を試験するのに特に適しているが、発現した疾患の治療効果を試験するのにも使用することができる。大腸炎の重篤性は、破壊された遺伝子が置かれる近交系背景による（Ｂｅｒｇ  Ｄ．Ｊ．他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９６年、９８：１０１０−２０）。Ｃ３Ｈ／ＨｅＪＢｉｒ（Ｃ３Ｈ）系統は、いくつかの実験的に誘発されたＩＢＤの形態にかなり影響されやすい遺伝子背景である。破壊されたインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）遺伝子の１０度の戻し交配の後には、大腸病変はＣ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｂ６）マウスに比べてＣ３Ｈマウスにおいて格段に重篤である（Ｆａｒｍｅｒ  Ｍ．Ａ．他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、２００１年、９８：１３８２０−２５）。盲腸および大腸の重篤な病変は、Ｃ３Ｈ．ＩＬ１０−／−マウスにおいて４週間の年齢で検知することができるが、Ｂ６  ＩＬ１０−／−マウスは重篤に進行しない軽い病変を発現する。６週間の年齢のマウスを組織採集のために死体解剖し、大腸炎の進行と正に相関した様々な表現型について分析する。このモデルの利点は、Ｃ３Ｈ遺伝子背景に破壊したＩＬ−１０遺伝子を有するすべてのマウスは、類似の強度の重篤な炎症性腸疾患を最終的に発現することである。ステロイドコンジュゲート（ステロイド）の有効性は、４週間の年齢から１〜１００ｍｇ／ｋｇの出発用量で経口投与し、疾患の発病率および重篤性に対する効果を追跡することにより試験される。これらの活性は、標準のステロイドの活性と比較されるべきである。
【０２４７】
巨視的観察および組織学的評価が、大腸の炎症の程度を測定するのに使用される。巨視的な損傷の評価の基準および数値化評点は、０、潰瘍なし、炎症なし；１、潰瘍なし、局部充血；２、充血のない潰瘍；３、１箇所のみにおける潰瘍および炎症；４、２または３箇所の潰瘍および炎症；および５、２ｃｍを超える潰瘍である。巨視的な組織断面の炎症の程度は、０、白血球浸潤なし；１、低レベルの白血球浸潤；２、中程度レベルの白血球浸潤；３、高い血管密度および大腸壁の肉厚化；および４、経壁の白血球浸潤、杯細胞の損傷、高い血管密度、および大腸壁の肉厚化として採点した。
【０２４８】
マウスにおけるデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）で誘発された大腸炎
デキストラン硫酸ナトリウム（２〜５％ｗ／ｖ）がマウスへの飲用水に与えられる。この手順は次のとおりである。
１．化合物をＤＭＳＯ（最終濃度２％まで）および０．１２５％カルボキシメチルセルロース中に溶解し、最初に２および１０ｍｇ／ｋｇ／日で７日間経口投与された。陽性対照の群はビヒクルの処置を受けた。ＤＳＳ溶液は、同じ時間飲用液体として提供され、マウスは８日目に犠牲にされた。
２．ＤＳＳ溶液は、飲用水中で７日間投与される。化合物の投与は０日に始まり１４、２１または２８日まで継続し、マウスは１５、２２または２９日に犠牲にされた。
３．ＤＳＳ溶液は、飲用水中で７日間投与される。化合物の投与は８日に始まり１４、２１または２８日まで継続し、マウスは１５、２２または２９日に犠牲にされた。
【０２４９】
大腸炎の重篤性は、疾患活動指数（ＤＡＩ）を用いて評価され、体重減少、便の硬さ、便出血に基づいて算出される（Ｃｏｏｐｅｒ  Ｈ．Ｓ．他、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９３年、６９：２３８−４９；Ｈａｒｔｍａｎ  Ｇ．他、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２０００年、２９２：２２−３０）。体重減少なしは０点として、１から５％の体重減少は１点として、５から１０％は２点として、１０から２０％は３点として、および体重減少＞２０％は４点として採点した。便の硬さについては、０点が良好に形成されたペレットに、２点が肛門に付着しないゆるんだ不十分な形の便に、４点が肛門に付着する液状の便に与えられる。出血は、潜血試験において血液が検出されないときを０点、陽性の潜血試験を２点、巨視的出血を４点に採点した。疾患活動指数は、３で割った体重減少、便の硬さおよび便出血の組み合わせた評点の合計であり、０．０（健康）から４．０（大腸炎の最大の活性）にわたるＤＡＩを形成する。組織学的評点は、大腸全体のホルマリン固定組織サンプルにおいて評価される。断片はヘマトキシリン／エオシンで染色され、提供された処置を知らない病理学者が採点した。炎症性細胞の浸潤、組織損傷および陰窩評点（ｃｒｙｐ  ｓｃｏｒｅ）は、別々の評点および合計の評点により主観的に評価される。炎症性細胞の浸潤については、固有層中のまれな炎症性細胞は０として評価され；増加した数量の炎症性細胞は１として評価され；粘膜下組織中に拡大している炎症性細胞の集合は２として；浸潤物の貫壁性の伸長は３として評価される。組織の損傷については、粘膜の損傷がないのは０として規定され、別々のリンパ上皮性病変は１として規定され、表面粘膜びらんは２として規定され、広範囲の粘膜損傷は３として規定される。陰窩評点は次のように実施される：０、無傷の陰窩；１、陰窩の下部の３分の１の損傷；２、陰窩の下部の３分の２の損傷；３、表面上皮が無傷で陰窩全体の損傷；４、表面上皮および陰窩全体の損傷（びらん）。これらの変化は、疾患過程に関与した百分率について定量化される：１、検査した表面積の１〜２５％；２、２６〜５０％；３、５１〜７５％；７６〜１００％。各組織片は、グレードおよび関与面積百分率で評価され、これら２つの積が陰窩評点であった。
【０２５０】
このモデルにおける臨床的な改善は、ＤＡＩにおける改善、炎症性細胞の浸潤の減少、減少した組織損傷および減少した陰窩評点の１つまたは複数により定義される。これらのパラメータは、陽性対照群（ビヒクルを処置したマウス）および標準のステロイドで処置した動物の値に比較される。
【０２５１】
ラットにおけるトリニトロベンゼンスルホン酸塩（ＴＮＢＳ）で誘発された炎症性腸疾患
５０％エタノール０．２５ｍｌ中の１０〜５０ｍｇのＴＮＢＳの大腸内投与により雄性Ｗｉｓｔａｒラットに大腸炎を誘発させる。ＴＮＢＳの投与の２日前から、ＴＮＢＳの投与後１４日間、動物に様々な用量のステロイド（最初はリン酸緩衝食塩水および１％ＤＭＳＯ中の０．１２５％カルボキシメチルセルロース中の０．５から１０ｍｇ／ｋｇの範囲の化合物）またはビヒクル対照（リン酸緩衝食塩水および１％ＤＭＳＯ中の０．１２５％カルボキシメチルセルロース）または例えばブデソニド（１ｍｇ／ｋｇ）などの標準のステロイドを処置した。ラットは犠牲にされ、血液サンプルが採集（ＴＮＢＳ適用後７日および１５日に）されて血清サンプルを得、次いで巨視的な観察および組織学的評価を実施し大腸炎症の程度を測定した。組織損傷の巨視的および組織学的評価は、病理学者によって盲検で実施された。巨視的損傷評価の基準および数値化評点は、０、損傷なし；１、局所的な充血および／または浮腫；２、線状潰瘍＜大腸の幅の半分；３、線状潰瘍＞大腸の幅の半分；４、小さい円形の潰瘍（＜１ｃｍ）；５、１ｃｍから２ｃｍの円形の潰瘍；６、＞２ｃｍの円形の潰瘍である。個々の動物からの評点は、合計され動物の数で割られて平均の巨視的損傷が得られる。大腸損傷の組織学的評価は、各腸がＡ）潰瘍形成：０、潰瘍なし、上皮形成なし；１、小さい潰瘍＜３ｍｍ；２、大きな潰瘍＞３ｍｍ；Ｂ）炎症：０、炎症なし；１、軽い；２、中程度；３、重篤；Ｃ）病変の深さ：０、なし；１、粘膜下層；２、筋固有層；３、漿膜；Ｄ）壊死：０、なし；１、軽い；２、重篤；Ｅ）肉芽腫：いいえ、肉芽腫なし；はい、肉芽腫が存在の基準に従い盲検で採点した。この評点システムにおけるすべての個々の評点の合計として定義される最大評点は１０＋肉芽腫である。ある実験においては、Ｌｅｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ４（ＬＴＢ４）および血清α１酸性糖タンパク質も、炎症性活性のさらなる指標として測定される。同様に、選択された実験においては、潰瘍のある領域に隣接した炎症した組織から全肉厚の試料が、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の測定のために摘出される。
【０２５２】
この実験における改善は、陽性対照の群（ビヒクルの処置のみを受けた動物）に比べてステロイド処理においてより低い平均巨視的損傷およびより低い組織学的評点、ならびにＬＴＢＢ４、血清α１酸性糖タンパク質およびＭＰＯ活性の低下により明確にされる。
【０２５３】
図１Ａは、ＴＮＢＳで誘発された大腸炎（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙテスト）のラットモデルにおける大腸の巨視的損傷評点を記載している。大腸の巨視的損傷評点は、０−損傷なし；１−局所の充血および／または浮腫；２−線状潰瘍＜大腸の幅の半分；３−線状＞大腸の幅の半分または小さい潰瘍（＜１ｃｍ）４−円形潰瘍＜１ｃｍ；５−１から２ｃｍの円形；および６−円形潰瘍＞２ｃｍとして定義される。化合物１、２および３は、治療対照としてブデソニド［ヒトのクローン病の治療に有用な公知の薬物］に対して、非治療対照として単なるビヒクルに対して比較された。非治療対照は、４の評点を示したが、治療対照のブデソニドは、１ｍｇ／ｋｇの用量において２の評点を示した。化合物１（２ｍｇ／ｋｇ）；２（２ｍｇ／ｋｇ）および３（１０ｍｇ／ｋｇ）はすべて、ＴＮＢＳで誘発された大腸炎のラットモデルにおいて標準ステロイドのブデソニド（１ｍｇ／ｋｇ）の効力に比べて匹敵または優れた効力を示した。
【０２５４】
図１Ｂは、ラット（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙテスト）におけるＴＮＢＳで誘発された大腸炎における組織学的損傷評点へのコンジュゲートの効果を記載している。組織学的損傷評点は、Ａ）潰瘍形成：０、潰瘍なし、上皮化なし；１、小さな潰瘍＜３ｍｍ；２、大きな潰瘍＞３ｍｍ；Ｂ）炎症：０、炎症なし；１、軽い；２、中程度；３、重篤；Ｃ）病変の深さ：０、なし；１、粘膜下組織；２、筋固有層；３、漿膜；Ｄ）壊死：０、なし；１、軽い；２、重篤：Ｅ）肉芽腫：いいえ、肉芽腫なし；はい、肉芽腫が存在：の基準により定義される。この評点システムにおけるすべての個々の評点の合計として定義される最大評点は１０＋肉芽腫である。化合物１、２および３は、治療対照としてのブデソニド［ヒトのクローン病の治療に有用な公知の薬物］および非治療対照としての単なるビヒクルに対して比較された。非治療対照は、７．６の評点を示したが、治療対照のブデソニドは、１ｍｇ／ｋｇの用量において、４．５の評点を示した。化合物１（２ｍｇ／ｋｇ）；２（２ｍｇ／ｋｇ）および３（１０ｍｇ／ｋｇ）はすべて、ＴＮＢＳで誘発された大腸炎のラットモデルにおいて標準ステロイドのブデソニド（１ｍｇ／ｋｇ）の効力に比べて匹敵または優れた効力を示した。
【０２５５】
図２は、ラット（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙテスト）におけるＴＮＢＳで誘発された大腸炎モデルにおける化合物１の用量を変えることの効果を示している。巨視的損傷評点は、治療対照および非治療対照同様に図１Ａにある。４ｍｇ／ｋｇから０．５ｍｇ／ｋｇにわたる用量における化合物１は、標準ステロイドのブデソニド（１ｍｇ／ｋｇ）の効力に比べて匹敵または優れた効力を示す。
【０２５６】
マウスにおけるトリニトロベンゼンスルホン酸塩（ＴＮＢＳ）で誘発された炎症性腸疾患
ＴＮＢＳで誘発された大腸炎の予防における効力
ＴＮＢＳを、マウス１匹あたり１から２．５ｍｇの量でＢＡＬＢ／ｃおよび雄性Ｓｗｉｓｓ  Ａｌｂｉｎｏマウス（６〜８週齢）に投与した。マウスを、７日間、ステロイド（リン酸緩衝食塩水および１％ＤＭＳＯ中の０．１２５％カルボキシメチルセルロース中の１から１０ｍｇ／ｋｇの化合物）、ビヒクル対照（リン酸緩衝食塩水および１％ＤＭＳＯ中の０．１２５％カルボキシメチルセルロース）またはブデソニド（１−１０ｍｇ／ｋｇ）またはプレドニゾロン（１−１０ｍｇ／ｋｇ）などの標準ステロイドで処置した。下痢の発現、体重の減少、および全死亡率に関してマウスを監視する。実験の最後に、生存マウスを犠牲にして大腸の断片を巨視的および微視的な損傷評価のために摘出する。この動物モデルは、再出現または再発の予防または遅延を示すために適している。処置しない場合、損傷は３０日を超えて持続するが、最初に（上記のように）処置した場合、再出現は生じない。
【０２５７】
既存の大腸炎の治療
マウスを、ＴＮＢＳ投与後２１日から３５日ステロイドまたはビヒクル対照で治療的に処置する。動物をＴＮＢＳ注射後３５日に殺す。
【０２５８】
組織学的検査のために、肛門管の上２ｃｍに位置する大腸組織のサンプルを採取し、１０％緩衝リン酸ホルマリン中に固定し、パラフィン中に埋め込み、区切り、ヘマトキシリン／エオシンで染めた。微視的な断面の炎症の程度を、半定量的に０から４まで、０、炎症の徴候なし；１、非常に低レベルの炎症；２、低レベルの白血球の炎症；３、高レベルの白血球の炎症、高い血管密度、および大腸壁の厚肉化；および４、貫壁性の浸潤、杯細胞の減少、高い血管密度、および大腸壁の厚肉化；と採点する。このモデルにおける改善は、陽性対照の群（ビヒクルだけを受けた動物）に比べて低いレベルの巨視的損傷および炎症および組織学的評点により定義される損傷によって定義される。
【０２５９】
ワタボウシタマリンにおける潰瘍性大腸炎
ワタボウシタマリンは、ヒトにおける潰瘍性大腸炎の症状と多くの類似を示す大腸炎の自然な形を発現する点においてＩＢＤの動物モデルの中で特徴的な小さな新世界霊長類である。動物は、慢性下痢および体重減少を臨床的に発現し、処置しない場合には死ぬこともある。病状およびある場合はコルチコステロイドと併せた５−アミノサリチル酸化合物での治療への応答の両方とも、ヒトにおける症状と酷似している。ワタボウシタマリンにおける疾患の特異な特徴は、派生的な合併症、すなわち、ヒトの潰瘍性大腸炎にも見られる慢性の腺癌および硬化性胆管炎の発現である。さらに、ワタボウシタマリンは、ブデソニドなどを含む、潰瘍性大腸炎を治療するための潜在的な治療計画を評価するのに使用されてきた（参照によりその全体を本明細書に組み込んだＷａｔｋｉｎｓ  Ｐ．Ｅ．他、Ｇｕｔ、１９９７年、４０：６２８−３３）。したがって、このモデルはヒトにおける薬物の効力の予測として確認されてきた。
【０２６０】
臨床的に明らかにされた、大腸の内視鏡検査ならびに直腸生検試料の組織病理学的検査により確認された潰瘍性大腸炎（下痢および体重減少）を有するワタボウシタマリンがこの研究に使用される。糞のサンプルが、これらの症状の原因として知られる糞の病原体を除去するための培養のために動物から採集される。
【０２６１】
本発明のコンジュゲートの効力は、２カ月まで１〜１０ｍｇ／ｋｇから開始する用量でこれらに経口投与することにより試験される。
【０２６２】
ワタボウシタマリンにおける疾患進行の標準指標が、処置に対する応答を評価するのに使用される。これらは、臨床的徴候、体重、および１４日、２８日、４２日および５６日に採集された直腸生検試料の組織病理学検査である。試料は、病理学者によって炎症性細胞浸潤、陰窩構築および粘膜崩壊（表１）に基づき０（正常）から５（重篤な疾患）の等級に分ける。
【０２６３】
【表２】
2008509899.tif 000081
【０２６４】
コンジュゲート処置の前後の生検評点および体重を、Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｓ  ｔｅｓｔを用いて比較する。ｐ＜０．０５のときに、差異は有意であると見なされる。
【０２６５】
本発明の化合物で処置したワタボウシタマリンは、表１における急性または慢性病変のいずれかに関して組織学的評点システムに基づき少なくとも１つの改善を示した。
【０２６６】
本発明は、本明細書に記載の個別の実施形態によって範囲において制限されるべきではない。本明細書の記載に追加の本明細書の様々な変更形態が、先の記載から当分野の技術者に明らかになるであろう。このような変更形態は、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるものとする。
【０２６７】
本明細書に引用されたすべての特許、特許出願、刊行物、試験方法、文献、およびその他の資料は、あたかも本明細書に完全に記載されたように、参照によりその全体を本明細書に組み込む。
【図面の簡単な説明】
【０２６８】
【図１Ａ】ＴＮＢＳにより誘発された大腸への損傷を測定するための、化合物１、２および３またはブデソニド（陽性対照）またはビヒクル（陰性対照）のラットモデルへの投与後の巨視的損傷得点を示す棒グラフの図である。
【図１Ｂ】ＴＮＢＳにより誘発された大腸への損傷を測定するための、化合物１、２および３またはブデソニド（陽性対照）またはビヒクル（陰性対照）のラットモデルへの投与後の組織学的損傷得点を示す棒グラフの図である。
【図２】ＴＮＢＳにより誘発された大腸への損傷を測定するための、化合物１またはブデソニド（陽性対照）またはビヒクル（陰性対照）の様々な用量の投与後の巨視的損傷得点を示す棒グラフの図である。
【図１Ａ】
2008509899.tif 000113
【図１Ｂ】
2008509899.tif 000114
【図２】
2008509899.tif 000115
【国際調査報告】
2008509899.tif 000116
2008509899.tif 000117
2008509899.tif 000118
2008509899.tif 000119
2008509899.tif 000120
2008509899.tif 000121
2008509899.tif 000122
2008509899.tif 000123
2008509899.tif 000124
2008509899.tif 000125
2008509899.tif 000126