(57)【要約】  本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療のための医薬を製造するための新規化合物の使用、ならびに前記化合物を投与するＩＢＤの治療方法に関する。これらの化合物は、本明細書中にさらに規定される一般式（Ｉ）により表される。2008539246.tif 000010
2008539246.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2008539246.tif 000009
［式中、
Ｘは、−ＮＲ１−基および−ＣＨＲ１−基から選択され；
Ｙは、ＯおよびＳから独立して選択され；
Ｚは、Ｃ１−７直鎖状アルキレン鎖またはＣ４−８分枝鎖状アルキレン鎖、Ｃ２−７アルケニレン鎖およびＣ３−８シクロアルキル環構造の一部またはＣ５−８シクロアルケニル環構造の一部から独立して選択され；
Ａｒは、芳香族炭素環系、５員または６員の芳香族複素環系および二環式芳香族複素環系から選択されるアリール基であり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、
（ａ）Ｈ；
（ｂ）Ｃ１−６直鎖状アルキルまたはＣ４−８分枝鎖状アルキル；
（ｃ）Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ５−８シクロアルケニル；および
（ｄ）Ｃ２−６アルケニルまたはアルキニル
からなる置換基（ａ）〜（ｄ）の群から独立して選択され；
ここで、置換基（ｂ）〜（ｄ）は、
（ｅ）Ａｒ、Ｏ−ＡｒまたはＳ−Ａｒ；
（ｆ）ＯＨ、Ｏ−アルキルまたはＳ−アルキル（ここで、アルキルは、置換基（ｂ）〜（ｃ）から選択される。）；
（ｇ）ＮＲ４Ｒ５（ここで、Ｒ４およびＲ５は、置換基（ａ）〜（ｄ）から独立して選択され、または２から５の炭素原子を含む窒素含有環状構造を場合により一緒に形成する。）；
（ｈ）ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−アルキルまたはＳ−Ｃ（Ｏ）−アルキル（ここで、アルキルは、置換基（ｂ）〜（ｃ）から選択される。）；および
（ｉ）Ｆ、ＣｌまたはＢｒ
からなる群（ｅ）〜（ｉ）から独立して選択される少なくとも１つの置換基を場合により有し；
Ｒ６は、Ａｒおよび置換基（ａ）〜（ｃ）からなる群から選択され、ここで、（ｂ）および（ｃ）は、少なくとも１つの置換基（ｅ）〜（ｉ）で場合により置換され；
Ａｒは、置換基（ｂ）〜（ｉ）から独立して選択される少なくとも１つの置換基を場合により有する。］
を有する化合物ならびに互変異性体、溶媒和物および前記化合物の薬学的に許容できる塩の、炎症性腸疾患の治療のための医薬を製造するための使用。
【請求項２】
前記治療が、クローン病のためまたは潰瘍性大腸炎のためである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｘが、−ＮＲ１−基である、請求項１から２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ１が、Ｈである、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
Ｙが、Ｏである、請求項１から４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
Ａｒが、フェニルおよびナフチルから選択される、請求項１から５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
Ｚが、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）５−、−（ＣＨ２）６−、−（ＣＨ２）７−およびトランス−２−シクロヘキシレンから選択される、請求項１から６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
Ｒ６が、イソプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニル、４−ｎ−ブチルフェニル、４−イソプロピルフェニルおよび２−ナフチルから選択される、請求項１から７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
Ｒ２およびＲ３が、Ｈおよび４−クロロベンジルから独立して選択される、請求項１から８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記化合物が、
４−［３−フェニル−１−（６−フェニルヘキシル）ウレイド］酪酸アミド；
４−［１−（４−ブチルベンジル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド；
４−［１−（４−イソプロピルベンジル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド；
４−［１−（４−メチルペンチル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−４−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド；
トランス−２−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−フェニルウレイド］シクロヘキサンカルボキサミド；
４−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−ナフタレン−２−イル−ウレイド］−酪酸アミド；
４−［１−（２−ナフタレン−２−イル−エチル）−３−フェニルウレイド］−酪酸アミド；
４−［１−（２−シクロヘキシルエチル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド；
４−（１−フェネチル−３−フェニルウレイド）酪酸アミド；
４−（１−ベンジル−３−フェニルウレイド）酪酸アミド；
４−［１−（３−シクロペンチルプロピル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド；
４−［３−フェニル−１−（５−フェニルペンチル）ウレイド］酪酸アミド；および
４−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド
からなる群より選択される、請求項１から９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
Ｘが、−ＣＨＲ１−基である、請求項１から２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記−ＣＨＲ１−基が、−ＣＨ２−および（Ｒ）−ＣＨ（ＣＨ３）−から選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
Ｙ、Ｚ、Ａｒ、Ｒ２、Ｒ３およびＲ６が、請求項５から９において定義したものである、請求項１１から１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記化合物が、
（Ｒ）−４−［（３−シクロヘキシルプロピル）−（２−フェニルプロピオニル）アミノ］−酪酸アミド；
４−［（３−シクロヘキシルプロピル）−（２−ナフタレン−２−イル−アセチル）アミノ］酪酸アミド；および
８−［（３−シクロヘキシルプロピル）−（２−ナフタレン−２−イル−アセチル）アミノ］オクタンアミド
からなる群より選択される、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
ヒトを含む動物の患者に、請求項１および３から１４のいずれか１項に記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、炎症性腸疾患の治療方法。
【請求項１６】
前記治療が、クローン病のためまたは潰瘍性大腸炎のためである、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療のための医薬を製造するための新規化合物の使用、ならびに前記化合物を投与するＩＢＤの治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（ＩＢＤとしても知られている）は、周知の疾患である。炎症性腸疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む。後者は、２つの異なる状態であるものの、いずれも消化管壁にわたって、炎症によく見られる特徴を共有している。これらの状態の概説について、例えば、Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｂ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｊａｎ．ｐｐ７９−９４（２００２年）を参照されたい。ＩＢＤの承認治療薬は、メサラジン（例えば、ペンタサ（Ｐｅｎｔａｓａ）（登録商標））、ステロイド（例えば、ブデゾニド）およびごく最近承認された抗ＴＮＦモジュレーター（例えば、インフリキシマブ、レミケード（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）（登録商標））に限られている。既存の薬剤ではごく一部の患者しか症状が十分に緩和されていないため、今なおＩＢＤを治療するための新しい治療薬が必要である。
【０００３】
ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０２／０８５８６６号には、ＣＢ２アゴニストとして有効な化合物および疼痛管理におけるそれらの使用が開示されている。
【０００４】
ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００４／０８５３８５号には、ＩＢＤの治療において効果を有し得る化合物が開示されている。
【発明の開示】
【０００５】
本明細書中に開示される化合物は、ＩＢＤの治療において驚くほど効き目のある特性を示すことがわかっている。さらに具体的に、本発明は、一般式（Ｉ）：
【０００６】
【化２】
2008539246.tif 000003
［式中、
Ｘは、−ＮＲ１−基および−ＣＨＲ１−基から選択され；
Ｙは、ＯおよびＳから独立して選択され；
Ｚは、Ｃ１−７直鎖状アルキレン鎖またはＣ４−８分枝鎖状アルキレン鎖、Ｃ２−７アルケニレン鎖、およびＣ３−８シクロアルキル環構造の一部またはＣ５−８シクロアルケニル環構造の一部から独立して選択され；
Ａｒは、芳香族炭素環系、５員または６員の芳香族複素環系および二環式芳香族複素環系から選択されるアリール基であり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、
（ａ）Ｈ；
（ｂ）Ｃ１−６直鎖状アルキルまたはＣ４−８分枝鎖状アルキル；
（ｃ）Ｃ３−８シクロアルキルまたはＣ５−８シクロアルケニル；および
（ｄ）Ｃ２−６アルケニルまたはアルキニル
からなる置換基（ａ）〜（ｄ）の群から独立して選択され；
ここで、置換基（ｂ）〜（ｄ）は、
（ｅ）Ａｒ、Ｏ−ＡｒまたはＳ−Ａｒ；
（ｆ）ＯＨ、Ｏ−アルキルまたはＳ−アルキル（ここで、アルキルは、置換基（ｂ）〜（ｃ）から選択される。）；
（ｇ）ＮＲ４Ｒ５（ここで、Ｒ４およびＲ５は、置換基（ａ）〜（ｄ）から独立して選択されるか、または２から５の炭素原子を含む窒素含有環状構造を場合により一緒に形成する。）；
（ｈ）ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−アルキルまたはＳ−Ｃ（Ｏ）−アルキル（ここで、アルキルは、置換基（ｂ）〜（ｃ）から選択される。）および
（ｉ）Ｆ、ＣｌまたはＢｒ；
からなる群（ｅ）〜（ｉ）から独立して選択される少なくとも１つの置換基を場合により有し；
Ｒ６はＡｒおよび置換基（ａ）〜（ｃ）からなる群から選択され、ここで、（ｂ）および（ｃ）は、少なくとも１つの置換基（ｅ）〜（ｉ）で場合により置換される；
Ａｒは、置換基（ｂ）〜（ｉ）から独立して選択される少なくとも１つの置換基を場合により有する。］
を有する化合物ならびに互変異性体、溶媒和物および前記化合物の薬学的に許容できる塩の、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療のための医薬を製造するための使用に関する。クローン病および潰瘍性大腸炎の治療が、単独であっても組み合わせであっても、特に好ましい。
【０００７】
本発明の目的のために、以下の用語が、用いられる。
【０００８】
芳香族炭素環系は、フェニルおよびナフチルを含む。
【０００９】
５員のヘテロ芳香族環系は、５つの環原子を有する単環式芳香族環系であり、ここで、１、２または３つの環原子は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される。このような好ましい環系は、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾイル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリルおよびテトラゾリルからなる群から選択される。
【００１０】
６員のヘテロ芳香族環系は、６つの環原子を有する単環式芳香族環系であり、ここで、１、２または３つの環原子は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される。それは、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニルおよびピリダジニルからなる群から選択されるのが好ましい。
【００１１】
二環式芳香族複素環系は、環融合により結合された、２つの５員もしくは６員の芳香族複素環、またはフェニルおよび５員もしくは６員の芳香族複素環、またはフェニルおよび複素環式環、または５員もしくは６員の芳香族複素環および複素環式環を有する環系であり、前記二環式芳香族複素環系は、８から１２の環原子を含んでおり、環原子の１つ、２つまたは３つは、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される。これは、インドール、キノリン、テトラヒドロキノリン、イソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、１，４−ベンゾジオキサン、クマリン、ベンゾフラン、１，２−ベンズイソキサゾール、ベンゾチオフェン、ベンゾキサゾール、ベンズチアゾール、ベンズイミダゾール、ベンズトリアゾール、ピロリジンおよびキノリジンからなる群から好ましくは選択される。
【００１２】
複素環式または複素環部分は、３つから７つの環原子を有する飽和環系または部分飽和環系であり、１、２または３環原子は、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される。複素環式部分は、アジリジン、オキシラン、チイラン、アゼチジン、オキセタン、チエタン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ジオキソラン、テトラヒドロフラニル、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロピラニル、１，４−ジオキサニル、ホモピペリジニル、ホモピペラジニルおよびヘキサメチレンオキシドからなる群から好ましくは選択される。
【００１３】
Ｃ１−６直鎖アルキルという表現は、言及している直鎖の結合部位に関するものではないので、例えばイソプロピル基および２−ｎ−ブチル基も、Ｃ１−６直鎖アルキルという表現に包含されることは、言及に値する。
【００１４】
Ｃ１−６は、１つから６つの炭素原子（その間のいずれかの数を含む）を有しており、この命名法は、本明細書中で同様に使用される。
【００１５】
薬学的に許容できる塩の例には、酸付加塩、例えば、ハロゲン化水素酸（塩酸など）およびの鉱酸（硫酸、リン酸および硝酸など）ならびに脂肪族、脂環式、芳香族または複素環状のスルホン酸またはカルボン酸（蟻酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸など）との反応により形成される塩が含まれる。
【００１６】
前記Ｘが−ＮＲ１−基である化合物（Ｉ）が、好ましい。Ｒ１がＨであることが、特に好ましい。
【００１７】
式（Ｉ）中の前記ＹがＯ、すなわち酸素原子を表すことが、さらに好ましい。
【００１８】
Ａｒ基は、フェニルおよびナフチルから好ましくは選択される。ナフチル基は、１−または２−ナフチル基のいずれかであり得る。
【００１９】
前記Ｚは、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）５−、−（ＣＨ２）６−、−（ＣＨ２）７−およびトランス−２−シクロヘキシレンから好ましくは選択される。
【００２０】
前記Ｒ６は、イソプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニル、４−ｎ−ブチルフェニル、４−イソプロピルフェニルおよび２−ナフチルから好ましくは選択される。
【００２１】
前記Ｒ２およびＲ３がＨおよび４−クロロベンジルから独立して選択されることが、好ましい。
【００２２】
最も好ましい実施形態において、式（Ｉ）を有する前記化合物は、
４−［３−フェニル−１−（６−フェニルヘキシル）ウレイド］酪酸アミド（２）；
４−［１−（４−ブチルベンジル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（３）；
４−［１−（４−イソプロピルベンジル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（４）；４−［１−（４−メチルペンチル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（５）；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−４−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（６）；
トランス−２−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−フェニルウレイド］シクロヘキサンカルボキサミド（７）；
４−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−ナフタレン−２−イル−ウレイド］−酪酸アミド（１０）；
４−［１−（２−ナフタレン−２−イル−エチル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（１１）；
４−［１−（２−シクロヘキシルエチル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（１２）；
４−（１−フェネチル−３−フェニルウレイド）酪酸アミド（１３）；
４−（１−ベンジル−３−フェニルウレイド）酪酸アミド（１４）；
４−［１−（３−シクロペンチルプロピル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（１５）；
４−［３−フェニル−１−（５−フェニルペンチル）ウレイド］酪酸アミド（１６）；および
４−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（１７）からなる群から選択される。
【００２３】
括弧内の数字は、以下で言及される化合物を示す。
【００２４】
化合物１７は、本発明の使用の非常に最も好ましい実施形態である。その構造は、以下に提供される。
【００２５】
【化３】
2008539246.tif 000004
【００２６】
本発明の第２の態様は、Ｘが、−ＣＨＲ１−基である式Ｉを有する化合物の使用に関する。前記−ＣＨＲ１−基は、−ＣＨ２−および（Ｒ）−ＣＨ（ＣＨ３）−から選択されることが好ましい。前記部分Ｙ、Ｚ、Ａｒ、Ｒ２、Ｒ３およびＲ６は、上記のように具体化されるのが、特に好ましい。
【００２７】
本発明のこの第２の態様において、前記化合物が、
（Ｒ）−４−［（３−シクロヘキシルプロピル）−（２−フェニルプロピオニル）アミノ］−酪酸アミド（１）；
４−［（３−シクロヘキシルプロピル）−（２−ナフタレン−２−イル−アセチル）アミノ］酪酸アミド（８）；および
８−［（３−シクロヘキシルプロピル）−（２−ナフタレン−２−イル−アセチル）アミノ］オクタンアミド（９）
からなる群から選択されることが、最も好ましい。
【００２８】
括弧内の数字は、以下で言及される化合物を示す。
【００２９】
本発明の使用は、薬学的に許容できるアジュバント、希釈剤または担体と併せて、有効成分として上記の化合物を含む医薬組成物を通して、通常なされる。
【００３０】
この医薬組成物は、経口投与、経静脈投与、局所投与、腹腔内投与、経鼻投与、口腔内投与、舌下投与もしくは皮下投与または、例えばエアゾール剤もしくは空中浮遊微細粉末剤の形態における気道を介した投与に適応させてよい。かくして、該組成物は、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、微粒子剤、顆粒剤、シロップ剤、懸濁剤、液剤、経皮的パッチまたは坐剤の剤形であってよい。
【００３１】
本明細書中で用いられる組成物は、上で概説した化合物の２種類以上を場合により含む可能性があることに注目されたい。
【００３２】
この医薬組成物は、例えば崩壊剤、結合剤、潤沢剤、香料添加剤、保存剤、着色剤およびこれらのいずれかの混合物から選択される添加剤を少なくともさらに１つを場合により含んでよい。このような添加剤をはじめとする添加剤の例は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」；Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ編、第３版、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＵＳＡおよびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ＵＫ，２０００において見出される。
【００３３】
固体投与形態における医薬組成物は通常、経口投与が可能な錠剤である。錠剤は、当分野で十分に確立された手順により適した顆粒を打錠することにより製造され得る。適した打錠機の例は、Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ−Ｈａｔａ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＵＳＡおよびＣｏｕｒｔｏｙ  ＮＶ，ＢＥにより提供されるロータリープレス式である。医薬錠剤製造の包括的な概説について、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ−Ｔｈｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ  ｄｅｓｉｇｎ」中の「Ｔａｂｌｅｔｉｎｇ」（Ｎ．Ａ．  Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ著）６４７−６６８頁；Ｍ．Ｅ．Ａｕｌｔｏｎ編、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８を参照されたい。
【００３４】
もう１つの実施形態において、本発明は、ＩＢＤの治療方法に関し、前記方法は、ヒトを含む動物の患者に、上で概説した化合物の治療有効量を投与することを含む。クローン病および潰瘍性大腸炎の治療が、単独であっても組み合わせであっても、特に好ましい。
本発明により使用される化合物の代表的な投与量は、広範囲に変化し、患者ひとりひとりの個別要求および投与経路など種々の因子に左右される。投与量は、一般に体重１ｋｇあたり０．０１から１００ｍｇの範囲内である。当分野における通常の技術レベルの医師は、状況に応じて投与量を最適にすることが可能である。
【００３５】
実験、一般
本発明の化合物（ここで、Ｘは−ＮＨ−基であり、Ｒ２およびＲ３は、いずれもＨ、すなわち水素である。）は、以下の一般的な合成スキーム（スキーム１）にしたがって固相合成により調製され得る。ＹはＯであり例示される試薬は反応段階ｉからｖｉｉｉにおいて使用される。ＺおよびＲ６は、上記で規定した代替物の中から選択される。本明細書中のスキームにおいて使用される球の記号は、樹脂を慣習的に表示したものである。この樹脂は通常、ＴｅｎｔａＧｅｌ  Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ樹脂であってよい。
【００３６】
【化４】
2008539246.tif 000005
【００３７】
上記試薬例は、ｉ）２５％ＰＩＰ／ＤＭＦ；ｉｉ）Ｆｍｏｃ−ＮＨ−Ｚ−ＣＯ２Ｈ／ＨＯＢｔ／ＤＩＣ、３当量；ｉｉｉ）２５％ＰＩＰ／ＤＭＦ；ｉｖ）ｏ−ＮＢＳ−Ｃｌ、４当量、コリジン、６当量；ｖ）Ｒ６Ｚ−ＯＨ／ＴＰＰ／ＤＩＡＤ、１０当量；ｖｉ）ＨＳＣＨ２ＣＨ２ＯＨ／ＤＢＵ／ＤＭＦ、１０当量；ｖｉｉ）ＡｒＮＣＯ、１０当量；ｖｉｉｉ）ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＳ、９６／２／２である。
【００３８】
以下の略語を使用する：
Ａｂｕ                  アミノ酪酸残基
ＢＡＬ                  主鎖アミドリンカー
Ｂｏｃ                  ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＢＵ                  １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン
ＤＣＭ                  ジクロロメタン
ＤＩＡＤ                ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
ＤＩＣ                  １，３−ジイソピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ              Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＥ                  １，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ                  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ                ジメチルスルホキシド
ＤＳＳ                  デキストラン硫酸ナトリウム
ｅｑ                    当量
Ｆｍｏｃ                ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ｈ                      時間
ＨＯＢｔ                １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ                高速液体クロマトグラフィー
ＭｅＯＨ                メタノール
ｍｉｎ                  分
Ｍｐ                    融点
ＭＳ                    質量分析法
ｏ−ＮＢＳ−Ｃｌ        ｏ−ニトロベンゼンスルホニルクロリド
Ｐｈ                    フェニル
ＰＩＰ                  ピペリジン
ｒｔ                    室温
ＴＦＡ                  トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ                  トリイソプロピルシラン
ＴＮＢＳ                ２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸
ＴＰＰ                  トリフェニルホスフィン
【００３９】
Ｎ−モノアルキル化アミド（すなわち、ここでＲ２≠ＨおよびＲ３＝Ｈ）を得るために、ｏ−ＮＢＳ基で保護されたＲｉｎｋアミド樹脂（ｏ−ＮＢＳ−ＴｅｎｔａＧｅｌ−Ｓ−ＲＡＭ樹脂）で合成を実施する。樹脂を、光延反応条件下でＲ２ＯＨ／ＴＰＰ／ＤＩＡＤでアルキル化する。次に、ｏ−ＮＢＳ基を、２−メルカプトエタノール／ＤＢＵ／ＤＭＦカクテルで除去する。あるいは、主鎖アミドリンカー（ＢＡＬ）樹脂を、Ｒ２ＮＨ２で還元的にアミノ化する。いずれの場合も、樹脂が結合した第２級アミンを、次いでＦｍｏｃ−ＮＨ−Ｚ−ＣＯ２Ｈ／ＤＩＣでアシル化する。以下の標準的な参考文献は、本発明において使用される化合物の提供に利用される特定の段階において、一般的な実験設備に関する、ならびに必要とされる出発物質および試薬の利用可能性に関するガイドラインをさらに提供するものである。
【００４０】
Ｆｕｋｕｙａｍａ，Ｔ．；Ｊｏｗ，Ｃ．−Ｋ．；Ｃｈｅｕｎｇ，Ｍ．“２−ａｎｄ  ４−Ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ：Ｅｘｃｅｐｔｉｏｎａｌｌｙ  Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  Ｍｅａｎｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  Ａｍｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｉｎｅｓ”Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３６：６３７３−６３７４（１９９５）；
Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ，Ｏ．“Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｄｉｅｔｈｙｌ  Ａｚｏｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ  ａｎｄ  Ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｅ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ”Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １−２８（１９８１）；
Ｍｉｌｌｅｒ，Ｓ．Ｃ．；Ｓｃａｎｌａｎ，Ｔ．Ｓ．“Ｓｉｔｅ−Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｎ−Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｓｕｐｐｏｒｔ”Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１９：２３０１−２３０２（１９９７）；
Ｊｅｎｓｅｎ，Ｋ．Ｊ．；Ａｌｓｉｎａ，Ｊ．；Ｓｏｎｇｓｔｅｒ，Ｍ．Ｆ．；Ｖａｇｎｅｒ，Ｊ．；Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．；Ｂａｒａｎａｙ，Ｇ．“Ｂａｃｋｂｏｎｅ  Ａｍｉｄｅ  Ｌｉｎｋｅｒ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｎｄ  Ｃｙｃｌｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２０：５４４１−５４５２（１９９８）；および
Ｒｉｎｋ，Ｈａｎｓ“Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｔｒｉａｌｋｏｘｙ−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ  ｒｅｓｉｎ”Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２８：３７８７−３７９０（１９８７）。
【００４１】
以下の具体的な実施例は、本発明がどのように実施されるかを限定するものであると解釈されるべきではない。
【００４２】
実験、合成
オリジナルライブラリーの合成（段階ｉおよびｉｉを参照）：
特に指示がない限り、全合成段階を室温で実施した。
【００４３】
Ｆｍｏｃ−ＴｅｎｔａＧｅｌ−Ｓ−ＲＡＭ樹脂の１４部（各部０．２５ｍｍｏｌ／ｇ、２．７５ｇ；Ｒａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅ，Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，ＤＥより入手）を、ＤＭＦ中のＰＩＰの２５％溶液で３０分間処理した。樹脂をＤＭＦ（２回）、ＭｅＯＨ（２回）およびＤＭＦ（２回）で徹底的に洗浄し、次に３倍過剰量の試薬を用いるＤＩＣ／ＨＯＢｔ結合方法論を用いて１４種類のＦｍｏｃ−ω−アミノ酸でアシル化した。反応の進行を、従来のカイザーのニンヒドリン試験でモニターした。
【００４４】
ｏ−ＮＢＳ基の導入（段階ｉｉｉおよびｉｖを参照）：
Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２５％ＰＩＰで３０分間処理して除去し、樹脂を上記のように徹底的に洗浄し、次にｏ−ＮＢＳ−Ｃｌ（４ｅｑ）およびコリジン（６ｅｑ）のＤＣＭ中の溶液で１時間処理した。反応の進行を従来のカイザーのニンヒドリン試験でモニターした。反応完了と同時に、樹脂をＤＭＳＯ／ＣＨＣｌ３（４：１）中に懸濁させ、その懸濁液を混合した。得られたスラリーを１６部（各部約０．６ｍｍｏｌ）に分割し、その樹脂を１６個の手動固相合成容器に入れて乾燥ＤＭＥで洗浄した。
【００４５】
光延アルキル化（段階ｖを参照）：
次いで、各樹脂を、乾燥ＤＭＥ中にアルコールの２０ｅｑを含む溶液６ｍｌ中に懸濁させた。アルコールの選択基準は、アルキル化反応における優れた多様性および収率を提供するための合成の最適化段階における結果に基づいた。次に、各樹脂に、乾燥ＤＭＥ中に溶解してあらかじめ形成しておいたＴＰＰ／ＤＩＡＤ錯体の２０ｅｑを添加して、一晩反応させた。１６種すべての樹脂の一定量を、ＴＦＡで切断し、ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ６００  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）およびＭＳ（Ｆｉｎｎｉｎｇａｎ  ＭＡＴ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）により分析した。
【００４６】
ｏ−ＮＢＳ基の除去（段階ｖｉを参照）：
樹脂を、ＤＭＦ中の２−メルカプトエタノールの１Ｍ溶液およびＤＭＦ中のＤＢＵの１Ｍ溶液の２０ｅｑで１．５時間処理し、反応完了後に徹底的に洗浄した。
【００４７】
最終アシル化（段階ｖｉｉを参照）：
樹脂を、それぞれ９６ウェル有する８個の反応ブロックに移した。次いで、各樹脂を４８部に等分し、横列が同じブロック１から４または５から８にそれぞれ配置した。次いでそのブロックを以下に示すように配置した。
【００４８】
【化５】
2008539246.tif 000006
【００４９】
縦列１から４をＦｍｏｃ−アミノ酸でアシル化し、縦列５から２０をＢｏｃ−アミノ酸でアシル化し、縦列２１から３７を酸の１５ｅｑおよびＤＩＣの１５ｅｑを用いてカルボン酸でアシル化した。縦列３８を無水酢酸／ＤＩＰＥＡの１５ｅｑで処理した。スルホンアミド（縦列３９から４３）の合成に、適切なスルホニルクロリド（１５ｅｑ）およびＤＩＰＥＡ（２２．５ｅｑ）を使用した。最後に、尿素（縦列４４から４８）を適切なＤＭＦ中のイソシアネート（１５ｅｑ）を用いて形成した。全反応を室温で一晩実施した。反応が完了したことを従来のクロラニル試験で確認した（１縦列あたり１試験）。次いで、Ｆｍｏｃ群（縦列１から４）を２５％ＰＩＰ／ＤＭＦで処理して除去し、その後ライブラリー全体をＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＤＣＭで洗浄し、次に真空中で乾燥させた。
【００５０】
切断（段階ｖｉｉｉを参照）：
化合物を、ＴＦＡ中の０．５％Ｈ２Ｏで一晩処理して樹脂から切断した。樹脂を濾過により除去し、濾液をそれぞれ９６ウェル有する８個のプレートに回収した。溶媒を従来のＳａｖａｎｔｈ遠心分離機で蒸発させて除去した。ライブラリーを、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１、ｖ／ｖ）中で再構成し、その溶媒をＳａｖａｎｔｈ遠心分離機中で蒸発させた。最終生成物は、それぞれ１４化合物を含む７６８の混合物からなるオリジナルライブラリーであった。
【００５１】
デコンボリューションライブラリーの合成：
オリジナルライブラリーをｈＣＢ２−Ｒについて選別することにより、１２個の活性ウェルを特定した。各ウェルが１４個の化合物を含んでいたので、デコンボリューションライブラリーは１６８の別個の化合物から成る必要があった。混合段階および分離段階を省略したものの、オリジナルライブラリーのプロトコルに従い、デコンボリューションライブラリーと、続く２つの最適化ライブラリーを得た。
【００５２】
４−［１−（３−シクロヘキシルプロピル）−３−フェニルウレイド］酪酸アミド（化合物１７）の合成：
【００５３】
【化６】
2008539246.tif 000007
【００５４】
Ｆｍｏｃ−ＴｅｎｔａＧｅｌ−Ｓ−ＲＡＭ樹脂（０．２５ｍｍｏｌ／ｇ、２．５ｍｍｏｌ）１０ｇを、ＤＭＦ中のＰＩＰの２５％で３０分間処理した。ＤＭＦ（２回）、ＭｅＯＨ（２回）およびＤＭＦ（２回）で樹脂を洗浄し、次にＤＭＦ中のＦｍｏｃ−γ−Ａｂｕ−ＯＨ／ＤＩＣ／ＨＯＢｔ（３ｅｑ）でアシル化した。反応の完了を、カイザーのニンヒドリン試験で評価した。Ｆｍｏｃ基を除去し、次に樹脂を上述のとおりに洗浄した。室温にて、ｏ−ＮＢＳ基をＤＣＭ中のｏ−ＮＢＳ−Ｃｌ（４ｅｑ）／コリジン（６ｅｑ）で１時間処理することにより導入した。次いで、樹脂を乾燥ＤＭＥ（１５ｍｌ）中に懸濁させ、３−シクロヘキシル−１−プロパノール（３．８ｍｌ、２５ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を添加した。ＴＰＰ／ＤＩＡＤ錯体を、乾燥ＤＭＥ（３０ｍｌ）中にＴＰＰ（６．５５ｇ、２５ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を溶解し、ＤＩＡＤ（４．９２ｍｌ、２５ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を添加することにより、０℃で予め形成した。次いで、錯体を懸濁液に添加して一晩反応させた。樹脂の一定量を切断し、ＨＰＬＣ（カラム：Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、５μ、２５０ｘ４．６ｍｍ；溶媒：Ａ−０．１％ＴＦＡ（水溶液）、Ｂ−８０％ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ（水溶液）；Ｂの直線勾配を使用した）によって分析した。非アルキル化基質の含有量は２％未満であった。次に、ｏ−ＮＢＳ基を、ＤＭＦ中の１Ｍ  ２−メルカプトエタノール／ＤＢＵ（２５ｍｌ）で１時間（２回）処理して除去した。次に、樹脂をＤＭＦ中のＰｈＮＣＯ（１０．９ｍｌ、２５ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）で４時間処理した。反応の完了をネガティブクロラニル試験により確認した。化合物を、室温で１．５時間、ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ  ９６／２／２（１００ｍｌ）で処理して樹脂から切断した。その樹脂を濾過し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製した。純粋な化合物を含む画分を合わせて凍結乾燥した。得られた生成物を、イソプロピルエーテルで処理することにより結晶化合物を得た。収量：４４２．８ｍｇ（５１％、１．２８ｍｍｏｌ）；Ｍｐ．１０４から１０６℃；ＭＳ（イオンスプレー）：［Ｍ＋Ｈ］＋期待値３４６．２、実測値３４６．２；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）、データは化合物１７の構造と一致した。
【００５５】
実験、生物学
【実施例１】
【００５６】
２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）結腸炎誘発モデルにおける化合物１７：
動物を１ケージあたり１０匹収容し、標準的なマウス固形飼料および水道水を自由摂取させた。結腸炎を誘発させるため、Ｃ５７Ｂ１／６マウスに９０から１２０分間麻酔をかけ、０．９％ＮａＣｌと１００％エタノールとの１：１混合液に溶解したＴＮＢＳ（４０μＬ、１５０ｍｇ／ｋｇ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＦＲより入手）を直腸内投与した。同じ手法を用いて、対照マウスに、０．９％ＮａＣｌと１００％エタノールまたは生理食塩水との１：１混合液を投与した。ＴＮＢＳ投与５日目に動物を犠牲にした。結腸炎誘発前日から化合物を１日１回皮下注射投与して、化合物１７の抗炎症性効果を検査した。治験担当者２名により、結腸炎の肉眼的、組織学的および生物学的評価を盲検的に実施した。
【００５７】
個々のマウスの結腸を、解剖顕微鏡下（倍率、５倍）で調べ、確立されたいわゆるＷａｌｌａｃｅ基準により肉眼的病変を評価した。Ｗａｌｌａｃｅスコアは、充血、腸管の肥厚および潰瘍の広がりなどの炎症を示す特徴に基づいて０から１０段階で肉眼的病変を評価する（Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ９６（ｌ）：２９−３６（１９８９））。肛門管から上部２ｃｍの位置にある結腸検体を３片に切り分け、そのうちの１片を４％パラホルムアルデヒドで固定し、パラフィン包埋した。治験担当者２名により、メイ−グリュンワルド−ギムザ法で染色した切片を盲検的に検査し、いわゆるＡｍｅｈｏ基準に従ってスコア化した（Ａｍｅｈｏ，Ｃ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｇｕｔ  ４１（４）：４８７−４９３（１９９７））。この０から６段階の評価は、炎症浸潤の程度、びらん、潰瘍または壊死の存在および病変の深度および表面の広がりを考慮に入れたものである。
【００５８】
５０％エタノールまたは生理食塩水の溶液の投与５日後に犠牲にした対照マウスには、結腸における肉眼的または組織学的病変は認められなかった。ＴＮＢＳ注射を受けたマウスは結腸炎誘発５日後に重篤な病変を有し、結腸に壊死が現れ、マウスの７０％が死に至った。ＴＮＢＳ誘発性結腸炎は、充血および潰瘍病変領域の広がりにより特徴付けられた。これらの病変は、粘膜から筋層深くにまで広がる好中球浸潤により特徴付けられた。
【００５９】
化合物１７がＴＮＢＳ誘発性結腸炎を予防または保護することができることを検査するため、結腸炎誘発前日と、その後動物を犠牲にするまで、化合物１７を１日１回、予防的に皮下投与した。ＴＮＢＳ投与５日後、化合物１７による治療（１０−１ｍｇ／ｋｇ／日）は、ＴＮＢＳ誘発性結腸炎を治療していないマウスと比較すると、Ｗａｌｌａｃｅスコア（３．８±０．８９に対して７．０±０．３７）およびＡｍｅｈｏスコア（３．９±０．６２に対して５．３±０．１５）における減少をもたらした。組織学的病変の改善は、粘膜固有層の好中球数の減少および潰瘍を伴わない粘膜に限局した炎症により特徴付けられた。この用量により死亡率が有意に改善したわけではなかった。
【実施例２】
【００６０】
デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）結腸炎誘発モデルにおける化合物１７：
マウスに５％ＤＳＳ（分子量３０−４０ｋＤａ）を７日間摂取させた。ＤＳＳを滅菌蒸留水に溶解し、実験期間中自由に摂取させた。
【００６１】
実験担当者２名が毎日、軟便度、潜血または肉眼的な直腸出血量の有無を前述のように盲検的に測定した（Ｈａｒｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．，２９２（１）：２２−３０（２０００））。簡潔に、軟便度に関して、十分に形成されたペレット状を０点、肛門に付着しないペースト状および半固形状の便を２点、肛門にこびり付いたままの水様便を４点とした。出血をヘモカルト法で出血なしを０点、ヘモカルト法で陽性を２点、および直腸からの大量出血を４点とスコア化した。これらのスコアを加算したところ、０（健常）から８（結腸炎炎症度最大）の範囲の総合臨床スコアとなった。死後、組織学的解析用に、結腸水平部の環を４％ホルムアルデヒドで固定し、パラフィン包埋した。切片（４μｍ）をメイ−グリュンワルド−ギムザ法で染色し、組織学的にスコア化した。炎症細胞の細胞浸潤に関して、粘膜固有層に炎症細胞ほとんどなしを０とし；粘膜固有層における好中球を含む炎症細胞数増加を１とし；炎症細胞の密集、粘膜下層への広がりを２とし；炎症性細胞浸潤の貫壁性浸潤をスコア３とした。上皮の損傷について、粘膜損傷なしを０とし、限局性巣状リンパ上皮性病変を１とし、粘膜びらん／潰瘍を２とし、広範な粘膜損傷および腸壁の深層構造におよぶ広がりをスコア３とした。２つのサブスコアを加算したところ、複合組織学的スコアは、０（変化なし）から６（広範な細胞浸潤および組織損傷）の範囲となった。
【００６２】
７日間のＤＳＳ経口投与は、５日目から肛門出血、体重減少および下痢を特徴とする急性結腸炎をもたらした。組織学的に、病変は、重篤な上皮損傷、および粘膜から筋層へと奥深く広がる炎症性浸潤に関するものであった。１０−１ｍｇ／ｋｇ／日の用量での化合物１７による予防的治療により、臨床パラメータスコア（３．７±０．１４に対して２．８±０．１３；Ｐ＝０．００３）および組織学的スコア（５．８±０．１３に対して３．９＋０．３９；Ｐ＝０．００１）が有意に低くなった。試験化合物により変化があった主な臨床パラメータは血中濃度および軟便度であった。治療したマウスの組織学的評価では、粘膜に限局した軽度の好中球浸潤、および上皮が損傷されることなく保存されていることにより特徴付けられた。
【実施例３】
【００６３】
化合物１から１７のｈＣＢ２−Ｒ結合：
使用するアッセイは、本質的に、Ｍｕｎｒｏ，Ｓ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ｋ．Ｌ．，Ａｂｕ−Ｓｈａａｒ，Ｍ．の「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄｓ」Ｎａｔｕｒｅ  ３６５：６１−６５（１９９３）に記載されているとおりに設定した。
【００６４】
これまでに、哺乳動物の組織から、２つの異なるカンナビノイド受容体がクローン化されていることは言及に値することであり、これらはＣＢ１およびＣＢ２と表示されている。カンナビノイドの主な効果およびそれを取りまく効果のほとんどが、ＣＢ１活性化によるものである。この受容体は、中枢神経系に豊富に存在し、そこでこの受容体がカンナビノイドの精神活性を仲介している。また、ＣＢ１は、末梢神経端部および非神経部位（精巣、子宮、目、血管内皮細胞および免疫細胞など）にも存在する。ＣＢ２は、免疫機能に関する末梢組織（すなわち、脾臓、扁桃、Ｂ細胞およびマクロファージ）に主に存在するが、ニューロンにおいて検出することができない。
【００６５】
ヒトＣＢ１受容体が安定して発現されるモノクローナルＨＥＫ細胞株およびｈＣＢ２−Ｒが安定して発現されるＣＨＯ−Ｋｌ細胞株を確立した。これらの細胞株から調製した膜を用いて、ＣＢ結合アッセイを実施した。ＣＢ２リガンド結合混合物は、０．３から０．５ｎＭ  ［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０、ＣＢ２膜７μｇおよび１．０ｘ１０−４から１．０ｘ１０−１２Ｍの濃度範囲における試験化合物を含む。アッセイ緩衝液は、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭＭｇＣｌ２、２．５ｍＭＥＤＴＡおよび脂肪酸を有さないウシ血清アルブミン５ｍｇ／ｍｌを含む。結合混合物を３０℃で２時間温置し、９３４ＡＨフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ）にかけて高速濾過（Ｂｒａｎｄｅｌ  ９６ウェル細胞ハーベスター）して反応を停止し、次に氷冷結合緩衝液で６回洗浄する。フィルターを乾燥させ、［３Ｈ］−ＣＰ５５９４０結合放射能を液体シンチレーションカウンターで測定する。非特異的結合を、１０μＭ  ＣＰ５５９４０の存在下で測定する。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍプログラム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡより入手）で、結合データを解析する。表１に示すＫｉ値を得た。
【００６６】
【表１】
2008539246.tif 000008
【００６７】
正常な結腸と比較したところ、病変したヒト消化管組織、すなわち筋層におけるＣＢ２陽性マスト細胞の過剰発現も観察された。通常のｈＣＢ２−Ｒ結合特性は、本化合物の抗−ＩＢＤ効果によるものであると推測される。
【００６８】
上述の生物学的結果は、式（Ｉ）の化合物がクローン病および潰瘍性大腸炎を含むＩＢＤの治療に適していることを確証するものである。
【００６９】
参照される文献はすべて、本明細書と一体化した部分とみなされるものとする。
【国際調査報告】
2008539246.tif 000011