(57)【要約】本発明の一態様は、少なくとも１つのアラルキルリガンドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドに関する。或る実施形態においては、アラルキルリガンドが、該２本鎖オリゴヌクレオチドを含む２つのオリゴヌクレオチドストランドのうちの一方のみに結合されている。或る実施形態では、アラルキルリガンドが、該２本鎖オリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドストランドの両方に結合されている。或る実施形態では、該オリゴヌクレオチドストランドは少なくとも１つの修飾された糖部分を含む。或る実施形態では、オリゴヌクレオチド内の少なくとも１つのリン酸塩連結はホスホロチオアート連結で置き換えられている。好ましい実施形態では、該アラルキルリガンドはナプロキセン又はイブプロフェンである。本発明の別の態様は、少なくとも１つのアラルキルリガンドを含む少なくとも１本鎖のオリゴヌクレオチドに関する。或る実施形態においては、該オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾された糖部分を含む。或る実施形態では、該オリゴヌクレオチド内の少なくとも１つのリン酸塩連結がホスホロチオアート連結で置き換えられている。好ましい実施形態では、該アラルキルリガンドはナプロキセン又はイブプロフェンである。該アラルキルリガンドは該オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のストランドと第２のストランドを含み、該第１のストランド及び第２のストランドが独立して下記の化学式Ｉで表されることを特徴とする２本鎖オリゴヌクレオチド。
【化１】
2008501319.tif 000094
（式中
Ｘは、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、又は−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｘ１は
【化２】
2008501319.tif 000095
又は−Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｚ１は、各出現について独立してＯ又はＳを表わし；
Ｚ２は、各出現について独立して−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、又はアルキルを表わし；
Ｒ１及びＲ２は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（ＣＲ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ−Ａ１０−［Ａ１１−（Ａ５）ｗ］ｙを表わし；
Ｒ３及びＲ４は、Ｈ又はアルキルを表わすか；そうでなければＲ３及びＲ４は一緒になって３−、４−、５−、６−又は７−員環を形成し；
Ｒ５は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２を表わし；
Ｒ６は、各出現について独立してＨ、アルキル又は−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表わし；
Ｒ７は、各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＢ３を表わし；
Ｒ８は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし；
Ｒ９は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし；
Ｒ１０はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ１１は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし；
ｎ１及びｎ２は独立して０以上２１以下を表わし；
ｍは各出現について独立して１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｍ１は各出現について独立して０、１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｖは各出現について独立して１、２、３、又は４を表わし；
ｗは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２又は３を表わし；
ｙは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２、３、４又は５を表わし；
Ｍは各出現について独立して＋１という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし；
Ａ１は各出現について独立して
【化３】
2008501319.tif 000096
を表わし；
Ａ２は各出現について独立して
【化４】
2008501319.tif 000097
を表わし；
Ａ３は各出現について独立して
【化５】
2008501319.tif 000098
を表わし；
Ａ４は各出現について独立して１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ２）Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表わすか又は、
【化６】
2008501319.tif 000099
という式を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４の間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５の間の結合であり；
Ｒは各出現について独立して水素又はアルキルを表わし；
Ａ５はアラルキルであり；
Ａ６は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−であるか又は
【化７】
2008501319.tif 000100
という式を有し；
Ｂ３は、Ａ６とＡ７の間の結合であり；
Ｂ４は、Ａ６とＡ１の間の結合であり；
ｎ３は、各出現について独立して１以上１５以下を表わし；
ｎ４は、原子価の法則に合致して１、２、３、４又は５であり、
Ａ７は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２であるか又は、
【化８】
2008501319.tif 000101
という式を有し；
ｐは各出現について独立して１、２、３又は４を表わし；
Ｂ５はＡ５とＡ７の間の結合であり；
Ａ８は、
【化９】
2008501319.tif 000102
（式中Ｒ１４はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＡ８とＡ９の間の結合である）
という式、又は
【化１０】
2008501319.tif 000103
という式を有し；
Ｘ２は１つの結合であるか又は式
【化１１】
2008501319.tif 000104
を有し；
Ｂ６はＡ８とＡ１の間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＡ９の間の結合であり；
Ａ９は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ７Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ７Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ７Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ７Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ７Ｎ（Ｂ８）２であるか又は、
【化１２】
2008501319.tif 000105
という式を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９の間の結合であり；
Ａ１０は１つの結合であるか又は、
【化１３】
2008501319.tif 000106
という式を有し；
Ｒ１２及びＲ１３は各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はＢ９を表わし；
Ｂ９はＡ１０とＡ１１の間の結合であり；
Ｂ１０はＡ１０とＯの間の結合であり；
Ａ１１は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ９Ｃ（Ｒ２）Ｂ１１、Ｂ９Ｃ（Ｒ）（Ｂ１１）２、Ｂ９Ｃ（Ｂ１１）３、Ｂ９Ｎ（Ｒ）（Ｂ１１）、Ｂ９Ｎ（Ｂ１１）２であるか又は
【化１４】
2008501319.tif 000107
という式を有し；
Ｂ１１はＡ５とＡ１１の間の結合であり；かつ
Ａ５が少なくとも１回出現することを条件とする。）
【請求項２】
Ａ５が、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であり、式中Ａ９９は任意には置換されているフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、又はテトラゾリルであることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
Ａ５が、以下の化学式IIを有することを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【化１５】
2008501319.tif 000108
（式中
Ｒ１−IIＡ、Ｒ１−IIＢ、Ｒ２−II及びＲ３−IIが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ又は−ＣＯ２Ｒを表わす。）
【請求項４】
Ｒ１−IIＡがアルキルであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
Ｒ１−IIＡが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
Ｒ１−IIＡがメチルであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
Ｒ１−IIＢが水素であることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
Ｒ１−IIＡがメチルであり、Ｒ１−IIＢが水素であることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
Ｒ２−IIが、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
Ｒ２−IIがＨであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
Ｒ３−IIがアルコキシルであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
Ｒ３−IIが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ又はｔｅｒｔ−ブトキシであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
Ｒ３−IIがメトキシであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
Ｒ１−IIＡがメチル、Ｒ１−IIＢがＨ、Ｒ２−IIがＨ、及びＲ３−IIがメトキシであることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
Ｒ１−IIＡがメチル、Ｒ１−IIＢがＨ、Ｒ２−IIがＨ、Ｒ３−IIがメトキシであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−であることを特徴とする請求項３記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
Ａ５が以下の式IIIで表されることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【化１６】
2008501319.tif 000109
（式中
Ｒ１−IIIＡ、Ｒ１−IIIＢ、Ｒ２−III、及びＲ３−IIIが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ又は−ＣＯ２Ｒを表わす。）
【請求項１７】
Ｒ１−IIIＡがアルキルであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
Ｒ１−IIIＡが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
Ｒ１−IIIＡがメチルであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
Ｒ１−IIIＢが水素であることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
Ｒ１−IIIＡがメチルであり、Ｒ１−IIIＢが水素であることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
Ｒ２−IIIが、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
Ｒ２−IIIがＨであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
Ｒ３−IIIがアルキルであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
Ｒ３−IIIが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル又はヘプチルであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
Ｒ３−IIIがイソブチルであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２７】
Ｒ１−IIIＡがメチルであり、Ｒ１−IIIＢがＨ、Ｒ２−IIIがＨ、Ｒ３−IIIがイソブチルであることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２８】
Ｒ１−IIIＡがメチル、Ｒ１−IIIＢがＨ、Ｒ２−IIIがＨ、Ｒ３−IIIがイソブチルであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−であることを特徴とする請求項１６記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２９】
Ｒ２が各出現について独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル又は−Ｎ（Ｒ１１）２を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３０】
Ｒ２が各出現について独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３１】
Ｒ２が各出現について独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３２】
Ｒ５が各出現について独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３３】
Ｒ５が各出現について独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又はＮ（Ｈ）ＣＨ３を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３４】
Ｚ２が各出現について独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール又はＯアラルキルを表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３５】
Ａ４が各出現について独立して
【化１７】
2008501319.tif 000110
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３６】
Ａ４が各出現について独立して
【化１８】
2008501319.tif 000111
を表わし、
Ａ５が各出現について独立して
【化１９】
2008501319.tif 000112
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３７】
Ａ４が各出現について独立して
【化２０】
2008501319.tif 000113
を表わし、
Ａ５が各出現について独立して
【化２１】
2008501319.tif 000114
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３８】
Ａ６が各出現について独立して
【化２２】
2008501319.tif 000115
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３９】
Ａ７が各出現について独立して
【化２３】
2008501319.tif 000116
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４０】
Ａ９が各出現について独立して
【化２４】
2008501319.tif 000117
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４１】
Ａ１０が各出現について独立して
【化２５】
2008501319.tif 000118
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４２】
Ａ１１が各出現について独立して
【化２６】
2008501319.tif 000119
を表わしていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４３】
ｎ１とｎ２の和が１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３であることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４４】
ｎ１とｎ２の和が２０であることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４５】
ｎ１とｎ２の和が２０であり、第１のストランドと第２のストランドは、前記第１のストランドと前記第２のストランドの上に２つのハイブリッド形成されていないヌクレオチドが存在するような形でハイブリッド形成されていることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４６】
ｎ１とｎ２の和が前記第１のストランドについては２０であり、ｎ１とｎ２の和が前記第２のストランドについて２２であることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４７】
前記第１のストランド及び前記第２のストランドが各々少なくとも１回のＡ５の出現を含んでいることを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４８】
前記第１のストランドが少なくとも１回のＡ５の出現を含み、前記第２のストランドがこれを含まないことを特徴とする請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４９】
以下の式IVで表わされる１本鎖オリゴヌクレオチド。
【化２７】
2008501319.tif 000120
（式中
Ｘは、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、又は−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり、
Ｘ１は
【化２８】
2008501319.tif 000121
又は−Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｚ１は、各出現について独立してＯ又はＳを表わし；
Ｚ２は、各出現について独立して−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、又はアルキルを表わし；
Ｒ１及びＲ２は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（ＣＲ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ−Ａ１０−［Ａ１１−（Ａ５）ｗ］ｙを表わし；
Ｒ３及びＲ４は、Ｈ又はアルキルを表わすか；そうでなければＲ３及びＲ４は一緒になって３−、４−、５−、６−又は７−員環を形成し；
Ｒ５は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２を表わし；
Ｒ６は、各出現について独立してＨ、アルキル又は−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表わし；
Ｒ７は、各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＢ３を表わし；
Ｒ８は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし；
Ｒ９は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし；
Ｒ１０はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ１１は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし；
ｎ１及びｎ２は独立して０以上２１以下を表わし；
ｍは各出現について独立して１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｍ１は各出現について独立して０、１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｖは各出現について独立して１、２、３、又は４を表わし；
ｗは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２又は３を表わし；
ｙは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２、３、４又は５を表わし；
Ｍは各出現について独立して＋１という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし；
Ａ１は各出現について独立して
【化２９】
2008501319.tif 000122
を表わし；
Ａ２は各出現について独立して
【化３０】
2008501319.tif 000123
を表わし；
Ａ３は各出現について独立して
【化３１】
2008501319.tif 000124
を表わし；
Ａ４は各出現について独立して１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ２）Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表わすか又は、
【化３２】
2008501319.tif 000125
という式を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４の間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５の間の結合であり；
Ｒは各出現について独立して水素又はアルキルを表わし；
Ａ５はアラルキルであり；
Ａ６は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−であるか又は
【化３３】
2008501319.tif 000126
という式を有し；
Ｂ３は、Ａ６とＡ７の間の結合であり；
Ｂ４は、Ａ６とＡ１の間の結合であり；
ｎ３は、各出現について独立して１以上１５以下を表わし；
ｎ４は、原子価の法則に合致して１、２、３、４又は５であり、
Ａ７は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２であるか又は、
【化３４】
2008501319.tif 000127
という式を有し；
ｐは各出現について独立して１、２、３又は４を表わし；
Ｂ５はＡ５とＡ７の間の結合であり；
Ａ８は、
【化３５】
2008501319.tif 000128
（式中Ｒ１４はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＡ８とＡ９の間の結合である）
という式、又は
【化３６】
2008501319.tif 000129
という式を有し；
Ｘ２は１つの結合であるか又は式
【化３７】
2008501319.tif 000130
を有し；
Ｂ６はＡ８とＡ１の間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＡ９の間の結合であり；
Ａ９は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ７Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ７Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ７Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ７Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ７Ｎ（Ｂ８）２であるか又は、
【化３８】
2008501319.tif 000131
という式を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９の間の結合であり；
Ａ１０は１つの結合であるか又は、
【化３９】
2008501319.tif 000132
という式を有し；
Ｒ１２及びＲ１３は各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はＢ９を表わし；
Ｂ９はＡ１０とＡ１１の間の結合であり；
Ｂ１０はＡ１０とＯの間の結合であり；
Ａ１１は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ９Ｃ（Ｒ２）Ｂ１１、Ｂ９Ｃ（Ｒ）（Ｂ１１）２、Ｂ９Ｃ（Ｂ１１）３、Ｂ９Ｎ（Ｒ）（Ｂ１１）、Ｂ９Ｎ（Ｂ１１）２であるか又は、
【化４０】
2008501319.tif 000133
という式を有し；
Ｂ１１はＡ５とＡ１１の間の結合であり；かつ
Ａ５が少なくとも１回出現することを条件とする。）
【請求項５０】
Ａ５が、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であり、式中Ａ９９は任意には置換されているフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、又はテトラゾリルであることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５１】
Ａ５が下記の化学式Ｖを有することを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【化４１】
2008501319.tif 000134
（式中
Ｒ１−ＶＡ、Ｒ１−ＶＢ、Ｒ２−Ｖ及びＲ３−Ｖが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ又は−ＣＯ２Ｒを表わす。）
【請求項５２】
Ｒ１−ＶＡがアルキルであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５３】
Ｒ１−ＶＡが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５４】
Ｒ１−ＶＡがメチルであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５５】
Ｒ１−ＶＢが水素であることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５６】
Ｒ１−ＶＡがメチルであり、Ｒ１−ＶＢが水素であることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５７】
Ｒ２−Ｖが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５８】
Ｒ２−ＶがＨであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５９】
Ｒ３−Ｖがアルコキシルであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６０】
Ｒ３−Ｖが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ又はｔｅｒｔ−ブトキシであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６１】
Ｒ３−Ｖがメトキシであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６２】
Ｒ１−ＶＡがメチル、Ｒ１−ＶＢがＨ、Ｒ２−ＶがＨ、及びＲ３−Ｖがメトキシであることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６３】
Ｒ１−Ｖがメチル、Ｒ１−ＶＢがＨ、Ｒ２−ＶがＨ、Ｒ３−Ｖがメトキシであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−であることを特徴とする請求項５１記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６４】
Ａ５が、下記の式VIで表されることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【化４２】
2008501319.tif 000135
（式中
Ｒ１−VIＡ、Ｒ１−VIＢ、Ｒ２−VI、及びＲ３−VIが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ又は−ＣＯ２Ｒを表わす。）
【請求項６５】
Ｒ１−VIＡがアルキルであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６６】
Ｒ１−VIＡが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６７】
Ｒ１−VIＡがメチルであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６８】
Ｒ１−VIＢが水素であることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６９】
Ｒ１−VIＡがメチルであり、Ｒ１−VIＢが水素であることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７０】
Ｒ２−VIが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７１】
Ｒ２−VIがＨであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７２】
Ｒ３−VIがアルキルであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７３】
Ｒ３−VIが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル又はヘプチルであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７４】
Ｒ３−VIがイソブチルであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７５】
Ｒ１−VIＡがメチルであり、Ｒ１−VIＢがＨ、Ｒ２−VIがＨ、Ｒ３−VIがイソブチルであることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７６】
Ｒ１−VIＡがメチル、Ｒ１−VIＢがＨ、Ｒ２−VIがＨ、Ｒ３−VIがイソブチルであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−であることを特徴とする請求項６４記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７７】
Ｒ２が各出現について独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル又は−Ｎ（Ｒ１１）２を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７８】
Ｒ２が各出現について独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７９】
Ｒ２が各出現について独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８０】
Ｒ５が各出現について独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８１】
Ｒ５が各出現について独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又はＮ（Ｈ）ＣＨ３を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８２】
Ｚ２が各出現について独立して、−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール又は−Ｏアラルキルを表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８３】
Ａ４が各出現について独立して
【化４３】
2008501319.tif 000136
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８４】
Ａ４が各出現について独立して
【化４４】
2008501319.tif 000137
を表わし、
Ａ５が各出現について独立して
【化４５】
2008501319.tif 000138
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８５】
Ａ４が各出現について独立して
【化４６】
2008501319.tif 000139
を表わし、
Ａ５が各出現について独立して
【化４７】
2008501319.tif 000140
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８６】
Ａ６が各出現について独立して
【化４８】
2008501319.tif 000141
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８７】
Ａ７が各出現について独立して
【化４９】
2008501319.tif 000142
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８８】
Ａ９が各出現について独立して
【化５０】
2008501319.tif 000143
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８９】
Ａ１０が各出現について独立して
【化５１】
2008501319.tif 000144
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９０】
Ａ１１が各出現について独立して
【化５２】
2008501319.tif 000145
を表わしていることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９１】
ｎ１とｎ２の和が、１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３であることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９２】
ｎ１とｎ２の和が２０であることを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９３】
Ａ５が少なくとも２回出現することを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９４】
Ａ５が少なくとも５回出現することを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９５】
Ａ５が少なくとも１０回出現することを特徴とする請求項４９記載の１本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９６】
望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経系疾患及びヘテロ接合性の喪失を特徴とする障害より成る群から選択された疾患を患う患者を治療する方法であって、治療上有効な量の請求項１又は４９記載のオリゴヌクレオチドを、それを必要とする患者に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項９７】
前記疾患が望ましくない細胞増殖であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項９８】
前記疾患が、睾丸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、扁平上皮細胞癌腫、膵癌、白血病、黒色腫、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、食道癌、子宮頸癌、基底細胞癌腫、腺癌腫、肝細胞癌腫、直腸結腸腺癌、肝癌、男性乳癌、食道の腺癌、胃の腺癌、結腸の腺癌、直腸の腺癌、胆嚢癌、過誤腫、神経膠腫、子宮内膜癌、急性白血病、慢性白血病、小児急性白血病、ユーイング肉腫、粘液性脂肪肉腫、脳腫瘍又は上皮由来の腫瘍であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項９９】
前記疾患が、関節リウマチ又は網膜血管新生であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１００】
前記疾患がウイルス感染であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０１】
前記疾患が、ヒト乳頭腫ウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、Ｈ型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヘルペスサイトメガロウイルス、ヘルペスエプスタインバールウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＪＣウイルス、ミクソウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、シミアンウイルス４０、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、脳心筋炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、黄熱病ウイルス、ポリオウイルス又はポックスウイルスを媒介とする障害であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０２】
前記疾患が、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染又は真菌感染であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０３】
前記疾患が、マラリア原虫（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又は肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を媒介とする障害であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０４】
前記疾患が、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症又は糖尿病であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０５】
前記疾患が、虚血、再潅流傷害、移植臓器又は組織に対する応答、再狭窄又は炎症性大腸炎であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０６】
前記疾患が、急性疼痛又は慢性疼痛であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０７】
前記疾患が神経系疾患であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０８】
前記疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病又は神経変性トリヌクレオチド反復障害であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１０９】
前記疾患が、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする障害であることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１１０】
前記オリゴヌクレオチドが、請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項９６記載の方法。
【請求項１１１】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１又は４９記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物細胞に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子遺伝子、成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１１２】
前記オリゴヌクレオチドが請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項１１１記載の方法。
【請求項１１３】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１又は４９記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物細胞に投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ライノウ���ルス遺伝子、ライノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１１４】
前記オリゴヌクレオチドが請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項１１３記載の方法。
【請求項１１５】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１又は４９記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子又は成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１１６】
前記オリゴヌクレオチドが請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項１１５記載の方法。
【請求項１１７】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項１又は４９記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物に投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ライノウ���ルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１１８】
前記哺乳動物が霊長類、ウマ、イヌ又はネコであることを特徴とする請求項１１７記載の方法。
【請求項１１９】
前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求項１１７記載の方法。
【請求項１２０】
前記オリゴヌクレオチドが請求項１記載の２本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項１１７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本出願は、その両方の内容が参照により本明細書に援用されている２００４年４月２７日付けの米国仮特許出願第６０／５６５，６２７号及び２００４年９月２０日付けの米国仮特許出願第６０／６１１，５３２号に対する優先権の利益を請求するものである。
【背景技術】
【０００２】
オリゴヌクレオチド化合物は、医学において重要な治療的利用分野を有する。オリゴヌクレオチドは特定の疾患の原因となる遺伝子をサイレンシングするために使用可能である。遺伝子サイレンシングは、翻訳を阻害することによってタンパク質の形成を防止する。重要なことに、遺伝子サイレンシング剤は、その疾病に結びつけられたタンパク質の機能を阻害する従来の小さな有機化合物に対する見込みある代替物である。ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ及びマイクロＲＮＡが、遺伝子サイレンシングによりタンパク質の形成を防ぐオリゴヌクレオチドである。
【０００３】
ｓｉＲＮＡ
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、当初線虫シノラブディス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）の研究において発見された革新的に保存された遺伝子サイレンシング機序である（非特許文献１；非特許文献２）である。それは、適切な分子機序を発現する細胞内にｄｓＲＮＡを導入することによってひき起こされ、これが次に対応する内因性ｍＲＮＡを分解する。該機序には、相同のｍＲＮＡ標的にリボヌクレアーゼを導く短かいＲＮＡへのｄｓＲＮＡの転換が関与する（要約あり、非特許文献３）。このプロセスは、ウイルスに対する正常な防御及びトランスポゾンの動員に関連するものである。
【０００４】
２本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）は天然には稀であり、酵母又はウイルスといった或る種の微生物の中のみに発見されてきた。最近の報告書は、ｄｓＲＮＡが発現の調節現象ならびに細胞によるインターフェロンの合成の開始に関与するということを示している（非特許文献４；非特許文献５）。さらに、ｄｓＲＮＡは、抗増殖特性を有するものと報告されてきており、このことは同様に治療的利用分野を考慮することをも可能にしている（非特許文献６）。例えば、合成ｄｓＲＮＡは、マウス体内の腫瘍成長を阻害すること（非特許文献７）、白血病性マウスの治療において活性であること（非特許文献８）、及びマウスの皮膚内の化学的に誘発された腫瘍形成を阻害すること（非特許文献９）が示されてきている。
【０００５】
ｄｓＲＮＡでの治療は無脊椎生体における遺伝子機能を分析するために重要な方法となった。例えばジトヴェヴァ（Ｄｚｉｔｏｖｅｖａ）らは、麻酔したキイロショウジョウバエの腹部内にｄｓＲＮＡを注入することにより成虫ショウジョウバエの体内でＲＮＡｉが誘発され得ることそしてこの方法が同じく中枢神経系内で発現された遺伝子をもターゲティングできることを示した（非特許文献１０）。トランス遺伝子及び内因性遺伝子の両方がそのそれぞれのｄｓＲＮＡの腹部内注射により成虫キイロショウジョウバエの中で首尾よくサイレンシングされた。さらにエルバシャー（Ｅｌｂａｓｈｉｒ）らは、ｄｓＲＮＡプロセシングの方向が、小さい干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）タンパク質複合体によりセンス又はアンチセンスのいずれの標的ＲＮＡが切断され得るかを決定することの証拠を提供した（非特許文献１１）。
【０００６】
２つの近年の報告書が、線虫シノラブディス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）内の遺伝子の機能をテストするための迅速な方法をＲＮＡｉが提供することを明らかにしており、Ｃ．エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）染色体Ｉ及びIII上の遺伝子の大部分が現在ＲＮＡｉ表現型について試験されてきている（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。機能喪失情報を得るための迅速なアプローチとして使用される場合、ＲＮＡｉは無作為な一連の卵巣写しを分析するために使用されており、Ｃ．エレガンスの胚形成において基本的な役割をもつ８１の遺伝子を同定してきた（非特許文献１５）。ＲＮＡｉは同様にヒゼンダニのサナギの血球タンパク質を分断するためにも使用されてきた（非特許文献１６）。
【０００７】
無脊椎動物におけるＲＮＡｉと同様に、植物における転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）は１つのＲＮＡ分解機序である。植物においては、これは転写及び転写後の両レベルで発生し得る。しかしながら、無脊椎動物では、これまでに転写後ＲＮＡｉしか報告されていない（非特許文献１７）。実際、両方共に、小さい干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の蓄積と相関するべく局在化された開始部域から生体内に拡がった２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が関与しており、両方共が推定上のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡヘリカーゼ及びＰＡＺ及びＰｉｗｉドメインを含む未知の機能をもつタンパク質を必要とする。
【０００８】
ＲＮＡｉとＰＴＧＳの間の明白ないくつかの差異が非特許文献１８で報告された。まず第１に植物の体内のＰＴＧＳは、Ｃ．エレガンスには不在であり従ってＲＮＡｉには必要とされない少なくとも２つの遺伝子すなわちＳＧＳ３（コイル−コイル型ドメインを含む未知の機能をもつタンパク質をコードするもの）及びＭＥＴ１（ＤＮＡ−メチルトランスフェラーゼをコードするもの）を必要とする。第２に、正常な機能が損なわれたＰＴＧＳを示すシロイヌナズナ突然変異体は全て、ククモウイルスＣＭＶによる感染に対し超感受性をもち、ＰＴＧＳがウイルスに対する植物の耐性の機序に参与していることを表わしている。ＲＮＡｉを媒介とする腫瘍遺伝子サイレンシングも又、根頭がんしゅ病に対する耐性を付与するものとして報告されてきた（非特許文献１９）。
【０００９】
ＲＮＡｉはサイレンシングトリガーと相同な伝令ＲＮＡを破壊する配列特異的な多構成要素ヌクレアーゼである、ＲＮＡにより誘発されるサイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって媒介される。ＲＩＳＣは、２本鎖ＲＮＡトリガーから誘導される短かいＲＮＡ（およそ２２ヌクレオチド）を含有するものとして知られているが、この活性のタンパク質構成要素は未知のままである。非特許文献２０では、培養したキイロショウジョウバエの細胞からのＲＮＡｉエフェクタヌクレアーゼの生化学的精製について報告されており、活性画分リボ核タンパク質複合体のタンパク質マイクロ配列決定は、この複合体の１つの構成成分がシノラブディス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）、アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）及びシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）における遺伝子サイレンシングにとって不可欠であるタンパク質のアルゴノート（Ａｒｇｏｎａｕｔｅ）ファミリーの成員であることを示した。この観察事実は、さまざまな生体からのＲＮＡｉの遺伝子分析とキイロショウジョウバエインビトロシステムから発生するＲＮＡｉの生化学モデルの間の結びつきを示唆している。
【００１０】
スヴォボダ（Ｓｖｏｂｏｄａ）らは、非特許文献２１の中で、ＲＮＡｉがマウス卵母細胞内での休眠母系ｍＲＮＡの機能を研究する適切かつしっかりしたアプローチを提供することを報告した。（もともとｃ−ｍｏｓとして知られている）Ｍｏｓ及び組織プラスミノーゲンアクチベータｍＲＮＡは、卵母細胞の突然変異の間に補充される休眠母系ｍＲＮＡであり、ＭｏｓｍＲＮＡの翻訳は結果としてＭＡＰキナーゼの活性化をもたらす。マウス卵母細胞内でＭｏｓ又はＴＰＡｍＲＮＡに向けて導かれたｄｓＲＮＡは、時間及び濃度の両方に依存する形でターゲティングされたｍＲＮＡを特異的に削減し、ＭＡＰキナーゼ活性の出現を阻害した（非特許文献２２も参照のこと）。
【００１１】
干渉ＲＮＡ技術の進歩にも関わらず、改善された薬理学的特性をもつｓｉＲＮＡ接合体に対するニーズは存在している。特にオリゴヌクレオチド配列は、低い血清溶解度、低い細胞分布及び摂取しか示さず、腎臓を通して急速に排泄される。未変性ホスホジエステル（Ｐ＝Ｏ）主鎖を担持するオリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ媒介型分解に対する感受性を有することがわかっている。非特許文献２３を参照のこと。オリゴヌクレオチドの安定性は、インビボでのヌクレアーゼによる分解に対する感受性の低いＰ＝Ｓ連結に対するＰ＝Ｏ連結の転換により増大した。代替的には、リン酸基を、未変性リン酸塩ほど酵素分解傾向をもたないホスホルアミダートに転換させることができる。非特許文献２４を参照のこと。オリゴヌクレオチドの糖基に対する修飾は、酵素分解に対し安定性を付与することができる。例えば、リボ核酸を含むオリゴヌクレオチドは、糖の２’−ＯＨ基がメトキシエトキシ基に転換された場合、ヌクレアーゼ（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）分解傾向が低い。非特許文献２５及びその中で引用されている参考文献を参照のこと。
【００１２】
ｓｉＲＮＡ化合物は、さまざまな診断的及び治療的目的のための将来性ある作用物質である。ｓｉＲＮＡ化合物は、遺伝子の機能を同定するために使用可能である。さらに、ｓｉＲＮＡ化合物は、疾病をひき起こす遺伝子をサイレンシングすることにより作用する新しいタイプの薬学作用物質として多大な潜在性を提供する。現在、中枢神経系疾患、炎症性疾患、代謝障害、腫瘍学、感染性疾患及び眼疾患を含めた数多くの疾病の治療のための干渉ＲＮＡ治療薬を開発するために研究が行なわれている。
【００１３】
オリゴヌクレオチドの細胞送達及び接合体を介した膜貫通性の増大を含め、１本鎖オリゴヌクレオチドの細胞摂取の増大について幾分かの進歩がなされてきた。特許文献１の中で、Ｍ．マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）は、血清、血管又は細胞タンパク質を結合させるリガンドが、オリゴヌクレオチド上の１つ以上の部位に対し任意の連結部位を介して付着され得る組成物について記載している。これらの部位には、あらゆるヌクレオチド残基の核酸塩基原子、２’位、３’位、５’位、ヌクレオチド間連結のうちの１つ以上のものが含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【００１４】
アンチセンスＲＮＡ
アンチセンス方法論は、細胞内核酸のタンパク質合成といったような正常な基本的な機能が分断されるような形でのｍＲＮＡ又はＤＮＡに対する比較的短かいオリゴヌクレオチドの相補的ハイブリダイゼーションである。ハイブリダイゼーションは、ＲＮＡ又は１本鎖ＤＮＡに対するオリゴヌクレオチドのワトソン・クリック塩基対を介した配列特異的水素結合である。かかる塩基対は、互いに相補的であると言われている。
【００１５】
コーエン（Ｃｏｈｅｎ）（非特許文献２６）により論述されている核酸機能の分断を提供する天然に発生する事象には２つのタイプがあると考えられている。まず第１に、ハイブリダイゼーション停止は、オリゴヌクレオチド阻害物質が標的核酸に結合しかくして単純な立体障害により、リボソームであることが最も多い必須タンパク質の該核酸に対する結合を防止する、終結事象を描いている。ホスホン酸メチルオリゴヌクレオチド（非特許文献２７）及びα−アノマーオリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション拘束により核酸機能を分断すると思われている２つの最も網羅的に研究されているアンチセンス作用物質である。
【００１６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが核酸機能を分断する別の手段は、標的ｍＲＮＡに対するハイブリダイゼーションとそれに続く細胞内ＲＮアーゼＨによるターゲティングされたＲＮＡの酵素的切断によるものである。２’−デオキシリボフラノシルオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド類似体は、ターゲティングされたＲＮＡとハイブリッド形成し、この２重鎖はＲＮアーゼＨ酵素を活性化してＲＮＡストランドを切断し、かくしてＲＮＡの正常な機能を破壊する。ホスホロチオアートオリゴヌクレオチドは、このタイプのアンチセンス終結事象により操作するアンチセンス作用物質の最も卓越した例である。
【００１７】
診断、研究利用分野及び潜在的治療目的のためのアンチセンス作用物質としてのオリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド類似体の利用分野に対し多大な研究が行われている。インビボで部分的にしか克服されていない主たる障害の１つは、オリゴヌクレオチドの急速な分解及び排泄によりひどく阻止される、効率の良い細胞摂取である。細胞摂取の一般的に受容されたプロセスは、血清及び血管外流体中のオリゴヌクレオチドの温度及び濃度に左右されるレセプタ媒介型のエンドサイドシスによるものである。
【００１８】
核酸及びオリゴヌクレオチドの膜貫通送達を改善することを目的とした研究努力では、タンパク質担体、抗体担体、リポソーム送達系、電気穿孔、直接注射、細胞融合、ウイルスベクター、及びリン酸カルシウム媒介型形質転換が利用されてきた。しかしながら、これらの技術の多くは、膜貫通輸送が可能となっている細胞のタイプ及びかかる輸送を達成するのに必要とされる条件によって限定される。オリゴヌクレオチドの膜貫通送達にとって特に魅力ある代替案は、オリゴヌクレオチドの物理化学的特性の修飾である。
【００１９】
マイクロＲＮＡ
マイクロＲＮＡは、生体の中で天然に産生される小さいＲＮＡの大群であり、そのうちの少なくとも一部分は標的遺伝子の発現を調節する。マイクロＲＮＡは、およそ７０ヌクレオチドの１本鎖ヘヤピン前駆体写しからＤｉｃｅｒによって形成される。非特許文献２８。数多くのケースにおいて、マイクロＲＮＡは、以前いかなる既知の機能も有していなかったＤＮＡ配列の一部分から転写される。マイクロＲＮＡはタンパク質へと翻訳されず、むしろ翻訳を遮断する特定の伝令ＲＮＡに結合する。マイクロＲＮＡは、翻訳を阻害するべくその標的と不精確に塩基対合すると考えられている。最初に発見されたマイクロＲＮＡファミリーの成員はｌｅｔ−７及びｌｉｎ−４である。ｌｅｔ−７遺伝子は、蠕虫の発達中内因性タンパク質コーティング遺伝子の発現を調節する小さなきわめて保存度の高いＲＮＡ種をコードする。活性ＲＮＡ種は、最初約７０ｎｔの前駆体として転写され、これは転写後に成熟した約２１ｎｔの形態へとプロセシングされる。ｌｅｔ−７及びｌｉｎ−４は両方共、Ｄｉｃｅｒ酵素によりその成熟形態へとプロセシングされるヘヤピンＲＮＡ前駆体として転写される（非特許文献２９）。
【非特許文献１】リー（Ｌｅｅ）ら、Ｃｅｌｌ、７５：８４３（１９９３年）
【非特許文献２】ラインハルト（Ｒｅｉｎｈａｒｔ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、４０３：９０１（２０００年）
【非特許文献３】ラヴクン（Ｒｕｖｋｕｎ）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９４：７９７（２００１年）
【非特許文献４】デクレルク（Ｄｅｃｌｅｒｑ）ら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、７８：２９１（１９８１年）
【非特許文献５】ウーリ（Ｗｕ−Ｌｉ）、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６５：５４７０（１９９０年）
【非特許文献６】オーベル（Ａｕｂｅｌ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８８：９０６（１９９１年）
【非特許文献７】レビー（Ｌｅｖｙ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、６２：３５７−３６１（１９６９年）
【非特許文献８】ゼレズニック（Ｚｅｌｅｚｎｉｃｋ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．、１３０：１２６〜１２８（１９６９年）
【非特許文献９】ゲルボイン（Ｇｅｌｂｏｉｎ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１６７：２０５〜２０７（１９７０年）
【非特許文献１０】ジトヴェヴァ（Ｄｚｉｔｏｖｅｖａ）ら、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、６（６）：６６５〜６７０（２００１年）
【非特許文献１１】エルバシャー（Ｅｌｂａｓｈｉｒ）ら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、１５（２）：１８８〜２００（２００１年）
【非特許文献１２】バーステッド（Ｂａｒｓｔｅａｄ）、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．、５（１）：６３−６６（２００１年）
【非特許文献１３】タベルナラキス（Ｔａｖｅｒｎａｒａｋｉｓ）、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．、２４（２）：１８０−１８３（２０００年）
【非特許文献１４】ザモアー（Ｚａｍｏｒｅ）、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、８（９）：７４６〜７５０（２００１年）
【非特許文献１５】ピアノ（Ｐｉａｎｏ）ら、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．、１０（２４）：１６１９−１６２２（２０００年）
【非特許文献１６】ニシカワ（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２６８（２０）：５２９５〜５２９９（２００１年）
【非特許文献１７】ベルンスタイン（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、４０９（６８１８）：２９５−２９６（２００１年）
【非特許文献１８】ヴォーシュレ（Ｖａｕｃｈｅｒｅｔ）ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．、１１４（Ｐｔ１７）：３０８３〜３０９１（２００１年）
【非特許文献１９】エスコバール（Ｅｓｃｏｂａｒ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８（２３）：１３４３７〜１３４４２（２００１年）
【非特許文献２０】ハモンド（Ｈａｍｍｏｎｄ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９３（５５３２）：１１４６〜１１５０（２００１年８月）
【非特許文献２１】スヴォボダ（Ｓｖｏｂｏｄａ）ら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１２７（１９）：４１４７〜４１５６（２０００年）
【非特許文献２２】スヴォボダ（Ｓｖｏｂｏｄａ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２８７（５）：１０９９〜１１０４（２００１年）
【非特許文献２３】Ｌ．Ｌ．カミンズ（Ｃｕｍｍｉｎｓ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９５年、２３、２０１９
【非特許文献２４】ウールマン（Ｕｈｌｍａｎｎ）、Ｅ．、ペイマン（Ｐｅｙｍａｎ）、Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、１９９０年、９０、５４４
【非特許文献２５】Ｍ．マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）、ＣｈｅｍＢｉｏ  Ｃｈｅｍ．、２００２年、３、１２５７
【非特許文献２６】コーエン（Ｃｏｈｅｎ）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８９年、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．
【非特許文献２７】ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）ら、（１９８７年）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、２：１１７〜１２８
【非特許文献２８】Ｖ．アンブロス（Ａｍｂｒｏｓ）ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００３年、１３、８０７
【非特許文献２９】ラゴス・キンタナ（Ｌａｇｏｓ−Ｑｕｉｎｔａｎａ）ら、２００１年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
従って、改善された血清溶解度、細胞分布及び摂取及びインビボ安定性をもつ修飾されたオリゴヌクレオチド化合物に対するニーズが存在する。該発明のアラルキルリガンド担持オリゴヌクレオチド化合物はこのニーズを満たしその他の関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明の１つの態様は、少なくとも１つのアラルキルリガンドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態においては、アラルキルリガンドは２本鎖オリゴヌクレオチドを含む２つのオリゴヌクレオチドストランドのうちの一方のみに結合している。一部の実施形態においては、アラルキルリガンドが、２本鎖オリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドストランドの両方に結合されている。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドストランドは少なくとも１つの修飾済み糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド内のリン酸塩連結はホスホロチオアート連結で置換された。好ましい実施形態においては、アラルキルリガンドはナプロキセン又はイブプロフェンである。本発明の別の態様は、少なくとも１つのアラルキルリガンドを含む１本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態においては、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾された糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド内のリン酸塩連結は、ホスホチオアート連結で置換された。好ましい一実施形態では、アラルキルリガンドはナプロンキセン又はイブプロフェンである。アラルキルリガンドはオリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は、改善された薬物動態特性を有するアラルキルリガンド抱合されたオリゴヌクレオチド化合物及びそれらの調製方法を提供する。該発明のオリゴヌクレオチドは１本鎖及び２本鎖オリゴヌクレオチドを内含する。抱合されたオリゴヌクレオチド作用物質は、例えばｐｒｅ−ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍｉ−ＲＮＡ前駆体（プレ−ｍｉＲＮＡ）又はＤＮＡといった核酸又はタンパク質にターゲティングし結合することにより遺伝子発現を修飾してこれらを阻害又はアップレギュレートすることができる。該発明のオリゴヌクレオチド作用物質は、修飾されたｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、デコイＲＮＡ、ＤＮＡ又はアプタマーを含む。かかるリガンド接合した化合物は、オリゴヌクレオチドに対しアラルキルリガンドを共有結合により付着させることによって調製される。アラルキルリガンド、例えばナプロキセンは、それが１つ以上の血清、血管又は細胞タンパク質に可逆的に結合することから、オリゴヌクレオチドの薬理学的特性を改善する。この可逆的結合は、尿中排泄を減少させ、血清半減期を延長し、かくして抱合されたオリゴマー化合物の分配を大幅に増大させるものと予想されている。さらに、オリゴヌクレオチドの主鎖は、オリゴヌクレオチド化合物の安定性を改善するべく修飾される。例えば、一部のケースでは、Ｐ＝Ｏ連結は、インビボでのヌクレアーゼによる分解に対する感受性をさほどもたないＰ＝Ｓ連結に変えられる。一部のケースでは、ヌクレオチドの糖部分の２’−位はアルキル又はヘテロアルキルエーテルに転換される。この修飾はオリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ分解傾向を低減させる。
【００２３】
オリゴヌクレオチドにリガンドを接合させることでその細胞吸収を強化させることができる。一部のケースでは、疎水性リガンドがオリゴヌクレオチドに抱合されて細胞膜の直接的浸透を容易にする。代替的には、オリゴヌクレオチドに抱合されたリガンドはレセプタ媒介型エンドサイトーシスのための基質である。これらのアプローチは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞浸透を容易にするために使用されてきた。例えばコレステロールがさまざまなアンチセンスオリゴヌクレオチドに抱合されて、その非接合類似体に比べ実質的にさらに活性の高い化合物を結果としてもたらした。Ｍ．マノハラン、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２００２年、第１２号、１０３頁を参照のこと。オリゴヌクレオチドに抱合されたその他の脂肪親和性化合物としては１−ピレン酪酸、１．３−ビス−Ｏ−（ヘキサデシル）グリセロール及びメントールが含まれる。レセプタ媒介型エンドサイトーシスのためのリガンドの１例は、葉酸である。葉酸は、葉酸塩−レセプタ−媒介型エンドサイトーシスによって細胞内に入る。葉酸を担持するオリゴヌクレオチド化合物は、葉酸塩−レセプタ−媒介型エンドサイトーシスを介して細胞内に効率良く輸送されることになる。リー（Ｌｉ）及び共同研究者は、オリゴヌクレオチドの３’末端に対する葉酸の付着が結果としてオリゴヌクレオチドの細胞摂取を８倍増加させたということを報告している。リー（Ｌｉ）、Ｓ．；デシュムーク（Ｄｅｓｈｍｕｋｈ）、Ｈ．Ｍ．；ホアン（Ｈｕａｎｇ）、Ｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９９８年、第１５号、１５４０頁。オリゴヌクレオチドに抱合されたその他のリガンドは、ポリエチレングリコール、炭水化物クラスタ、架橋剤、ポルフィリン接合体及び送達ペプチドを内含する。
【００２４】
一部のケースでは、オリゴヌクレオチドに対するカチオンリガンドの接合が往々にしてヌクレアーゼに対する耐性の改善という結果をもたらす。カチオンリガンドの代表的例はプロピルアンモニウム及びジメチルプロピルアンモニウムである。興味深いことに、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、カチオンリガンドがオリゴヌクレオチド全体を通して分散させられた場合にｍＲＮＡに対するその高い結合親和性を保持することが報告された。Ｍ．マノハラン、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２００２年、第１２号、１０３頁及びその中の参考文献を参照のこと。
【００２５】
オリゴヌクレオチドの治療効果は、それが特定の細胞核酸と相互作用し有効にその機能を打ち消したときに実現される。好ましい標的は、疾病状態の原因であるタンパク質コードするＤＮＡ又はｍＲＮＡである。ｍＲＮＡ機能とのかかる干渉の全体的効果は、タンパク質の発現の変調にあり、ここで「変調」というのは、タンパク質の発現の増大（刺激）又は減少（阻害）のいずれかを意味する。本発明に関しては、阻害が遺伝子発現の変調の好ましい形態である。それでも究極的目的は、かかるタンパク質の量を調節することにある。
【００２６】
投与後に標的核酸に達するためには、オリゴヌクレオチドは、血清内での急速な分解、血清中の短かい半減期及び腎臓による迅速なろ過とその後の尿中排泄といった固有の要因を克服することができなくてはならない。これらの固有の要因を克服するオリゴヌクレオチドが、血清半減期、分配、細胞摂取を増大させ、ひいては効力を改善してきた。
【００２７】
これらの薬物動態パラメータの増強が、血漿タンパク質を結合させる選択された薬物分子について示されてきた（オルソン（Ｏｌｓｏｎ）及びクリスト（Ｃｈｒｉｓ）、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９６年、第３１号：３２７頁）。最も多く研究されてきた２つのタンパク質はヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とα−１−酸糖タンパク質である。ＨＳＡは一般的に１０４〜１０６Ｍ−１の範囲内の会合定数でさまざまな内因性及び外因性リガンドを結合させる。α−１−酸糖タンパク質とのリガンドの会合定数はＨＳＡについてのものと類似である。
【００２８】
該発明の好ましい実施形態においては、リガンド抱合されたオリゴヌクレオチドによりターゲティングされるタンパク質は血清タンパク質である。抱合されたオリゴマー化合物によりターゲティングされる血清タンパク質は免疫グロブリン（抗体）であることが好ましい。好ましい免疫グロブリンは免疫グロブリンＧ及び免疫グロブリンＭである。免疫グロブリンは、脊椎動物の血清及び組織内に現われることがわかっている。
【００２９】
該発明の別の実施形態においては、リガンド抱合されたオリゴヌクレオチドによりターゲティングされる血清タンパク質はリポタンパク質である。リポタンパク質は脂質を担持する一般に２０，０００超の分子量をもつ血液中のタンパク質であり、特異的細胞表面レセプタによって認識される。血清中のリポタンパク質との会合は最初、半減期及び分配といったような薬物動態パラメータを増大させることになる。二次的考慮事項は、レセプタ媒介型エンドサイトーシスを介した細胞摂取を増強させるリポタンパク質の能力である。
【００３０】
さらに別の実施形態においては、リガンド抱合されたオリゴヌクレオチドによりターゲティングされる血清タンパク質はα−２マクログロブリンである。さらなる実施形態においては、リガンド抱合されたオリゴマー化合物によりターゲティングされる血清タンパク質はα−１−糖タンパク質である。
【００３１】
少なくとも治療目的では、オリゴヌクレオチド化合物は、分配及び細胞摂取を可能にするだけの血清中の安定度を有しているべきである。血清中でアンチセンス作用物質の治療レベルを長時間維持することは、分配及び細胞摂取に有意な効果を与えることになり、特定の細胞レセプタをターゲティングする接合体基とは異なり、血清安定性の増大効果が全ての細胞にもたらされることになる。
【００３２】
本発明に関しては、ｓｉＲＮＡは２本鎖オリゴヌクレオチドを含んでおり、ここで「オリゴヌクレオチド」という用語は、リボ核酸又はデオキシリボ核酸のオリゴマー又はポリマーを意味する。この用語は、天然に発生する核酸塩基、糖及び共有結合的糖間（主鎖）連結から成るオリゴヌクレオチドならびに類似の要領で機能する非天然発生部分をもつ修飾されたオリゴヌクレオチドを内含する。かかる修飾又は置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば細胞摂取の増大、標的に対する結合の増大及びヌクレアーゼの存在の安定性の増大といったような望ましい特性のため、往々にして未変性形態よりも好まれる。本発明のオリゴヌクレオチドは好ましくは約５〜約５０のヌクレオシドを含む。かかるオリゴヌクレオチドが約８個〜約３０個のヌクレオシドを含むことがより好ましく、１５〜２５個のヌクレオシドが特に好まれる。
【００３３】
オリゴヌクレオチドというのは、総称的にヌクレオチド又はヌクレオシドとして知られている反復する単位のポリマーである。未修飾（天然に発生する）ヌクレオチドは３つの構成要素、すなわち（１）その窒素原子の１つで５−炭素環状糖に連結された含窒素塩基、（２）５炭素環状糖及び（３）糖の炭素５にエステル化されたリン酸塩を有する。オリゴヌクレオチド鎖の中に取込まれた時点で、第１のヌクレオチドのリン酸塩は同様に第２の隣接するヌクレオチドの糖の炭素３にエステル化される。未修飾オリゴヌクレオチドの「主鎖」は（２）と（３）、すなわち第１のヌクレオチドの糖のＣＳ（５’）位と第２の隣接するヌクレオチドのＣ３（３’）位の間のホスホジエステル連結により合わせて連結される糖から成る。「ヌクレオシド」は、リン酸塩部分が不在の状態での（１）核酸塩基と（２）糖の組合せである（コルンバーグ（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ）、ＤＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、１９８０年、４〜７頁）。オリゴヌクレオチドの主鎖は一連の塩基を特定の順番に位置づけする。従来５’から３’の順で書かれるこの一連の塩基の記載表示は、ヌクレオチド配列として知られている。
【００３４】
オリゴヌクレオチドは、特定の核酸との特異的ハイブリダイゼーションをもたらすのに充分な同一性及び数のヌクレオシド又はヌクレオチド配列を含み得る。遺伝子のセンスストランドの一部分に対し特異的にハイブリッド形成するかかるオリゴヌクレオチドは一般に「アンチセンス」として記載される。該発明に関しては、「ハイブリダイゼーション」というのは、相補的ヌクレオシド又はヌクレオチドの間のワトソン・クリック、フーグスティーン又は逆フーグスティーン水素結合であり得る水素結合を意味する。例えば、アデニン及びチミンは水素結合の形成を通して対合する相補的核酸塩基である。本明細書で用いられている「相補的」というのは、２つのヌクレオチドの間の精確な対合の能力を意味する。例えば、オリゴヌクレオチドの或る１つの位置にあるヌクレオチドがＤＮＡ又はＲＮＡ分子の同じ位置にあるヌクレオチドと水素結合する能力をもつ場合には、該オリゴヌクレオチド及びＤＮＡ又はＲＮＡはその位置で互いに相補的であるとみなされる。オリゴヌクレオチドとＤＮＡ又はＲＮＡは、各分子内の充分な数の対応する位置が互いに水素結合し得るヌクレオチドにより占有される場合に互いに相補的である。かくして「特異的にハイブリッド形成可能な」及び「相補的」というのは、オリゴヌクレオチドとＤＮＡ又はＲＮＡ標的の間に安定した特異的結合が発生するように充分な度合の相補性又は精確な対合を表わすために用いられる用語である。当該技術分野では、オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリッド形成できるものであるためにその標的ＤＮＡ配列に対し１００％相補的である必要はないということがわかっている。オリゴヌクレオチドは、標的ＤＮＡ又はＲＮＡ分子に対するそのオリゴヌクレオチドの結合が標的ＤＮＡ又はＲＮＡの正常な機能と干渉して機能の減少又は喪失をひき起こし、特定の結合が望まれる条件下、すなわちインビボアッセイ又は治療的処置の場合には生理学的条件下、又インビトロアッセイの場合にはアッセイが実施される条件下で、非標的配列に対する該オリゴヌクレオチドの非特異的結合を回避するのに充分な相補性度が存在する場合に、特異的にハイブリッド形成可能である。
【００３５】
該発明のリガンド抱合されたオリゴヌクレオチドは、単量体例えばオリゴヌクレオチド作用物質中に組込まれた化学的に修飾された単量体を通してオリゴヌクレオチドにリガンドを付着させることによって調製可能である。好ましい実施形態においては、カップリングは以下で記載されるようなテザー又はリンカー（又はその両方）によるものであり、複合体は、
リガンド−［リンカー］ｏｐｔｉｏｎａｌ−［テザー］ｏｐｔｉｏｎａｌ−オリゴヌクレオチド作用物質、
という式により表わされる式を有する。
【００３６】
大部分の場合において、実施形態は一定数のヌクレオチドを含めたオリゴヌクレオチドに関して記載されているが、該発明は同様に、
リガンド−［リンカー］ｏｐｔｉｏｎａｌ−［テザー］ｏｐｔｉｏｎａｌ−単量体
という構造をもつ単量体サブユニットをも内含している。
【００３７】
単量体を作りオリゴヌクレオチド作用物質内に取込む方法及びこれらの作用物質の使用方法が該発明の中に含まれている。好ましい実施形態においては、例えばオリゴヌクレオチド作用物質のサブユニットであるヌクレオチドのうちの１つ以上のもの（例えばリボヌクレオチド、デオキシヌクレオチド、又は修飾ヌクレオチド）のリボース糖といった糖を別の部分例えば非炭水化物担体で交換することができる。一部のケースでは、非炭水化物は環状である。その糖がこのように交換されたヌクレオチドサブユニットはここでは糖交換修飾サブユニット（ＳＲＭＳ）と呼ばれる。これは往々にしてテザーと呼ばれる。環状担体は炭素環系であり得る。すなわち、全ての環原子は炭素原子又は複素環系である、すなわち１つ以上の環原子がヘテロ原子例えば窒素、酸素又は硫黄であり得る。環状担体は、単環系であり得、そうでなければ２つ以上の環例えば融合環を含有し得る。環状担体は、完全に飽和した環系であり得、そうでなければ、１つ以上の２重結合でもあり得る。
【００３８】
該発明のオリゴヌクレオチド作用物質は、核酸ターゲティング（ＮＡＴ）オリゴヌクレオチド作用物質及びタンパク質ターゲティング（ＰＴ）オリゴヌクレオチド作用物質を内含する。ＮＡＴ及びＰＴオリゴヌクレオチド作用物質は、リボ核酸（ＲＮＡ）又はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はＤＮＡとＲＮＡの組合された（キメラ）修飾の１本鎖オリゴマー又はポリマーを意味する。この用語には、天然に発生する核酸塩基、糖及び共有結合ヌクレオシド間（主鎖）連結ならびに類似の要領で機能する非天然発生部分を有するオリゴヌクレオチドで構成されるオリゴヌクレオチドが含まれている。かかる修飾又は置換されたオリゴヌクレオチドは往々にして、ヌクレアーゼの存在下での細胞摂取の増強、核酸標的親和性の増強及び／又は安定性の増加といった望ましい特性のため、未変性形態よりも好まれる。特定のＲＮＡ又はＤＮＡ標的に結合するように設計されたＮＡＴは、例えば標的核酸の少なくとも１０、２０又は３０以上の塩基との少なくとも７０、８０、９０又は１００％の相補性といった実質的な相補性を有し、発現を変調できるアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びその他の非２重鎖構造を内含する。その他のＮＡＴオリゴヌクレオチド作用物質としては、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、ＤＮＡザイム、及びリボザイムを内含する。これらのＮＡＴは、その標的に対し相補的であるワトソン−クリックを介して結合してもしなくてもよい。ＰＴオリゴヌクレオチド作用物質はタンパク質標的に対し、好ましくは３次元相互作用によって結合しタンパク質活性を変調させる。これらにはデコイＲＮＡ、アプタマーなどが含まれる。
【００３９】
該発明の１本鎖オリゴヌクレオチド化合物は好ましくは約８〜約５０個の核酸塩基を含む（すなわち、約８〜約５０の結合したヌクレオシド）。ＮＡＴオリゴヌクレオチド作用物質は好ましくは長さが約１５ヌクレオチドであるか、又はより好ましくは約３０ヌクレオチドである。ＰＴオリゴヌクレオチド作用物質は好ましくは長さが約１８ヌクレオチド又はより好ましくは約２３ヌクレオチドである。特に好ましい化合物はｍｉＲＮＡ及びアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、より一層好ましくは約１２〜約３０の核酸塩基を含むものである。
【００４０】
理論により束縛されることは望まないものの、オリゴヌクレオチド作用物質は、切断依存性又は切断非依存性の機序を含めた数多くの機序のうちの１つ以上のものにより作用し得る。切断ベースの機序はＲＮＡｓｅＨ依存性であり得、ＲＩＳＣ複合体機能を内含することができる。切断依存性機序には、ｍｉＲＮＡにより媒介されるような占有度ベースの翻訳停止、又はアプタマーが行なうようなタンパク質に対するオリゴヌクレオチド作用物質の結合が含まれる。オリゴヌクレオチド作用物質は同様に予めｍＲＮＡ内のスプライス部位の選択を変更することにより遺伝子の発現を改変するために使用することもできる。スプライシングの阻害は同様に、不適切にプロセシングされたメッセージの劣化をもたらし、かくして遺伝子発現をダウンレギュレートする可能性がある。コール（Ｋｏｌｅ）及び共同研究者（シエラコフスカ（Ｓｉｅｒａｋｏｗｓｋａ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９６年、第９３号：１２８４０〜１２８４４頁）は、２’−Ｏ−Ｍｅホスホロチオアートオリゴヌクレオチドが細胞系内で異常なベータグロビンスプライシングを矯正できるということを示した。完全に修飾された２’−メトキシエチルオリゴヌクレオチド及びペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＩＬ−５レセプタ−αプレ−ｍＲＮＡのスプライシングを再度導くことができた（カラス（Ｋａｒｒａｓ）ら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００年、第５８号：３８０〜３８７頁；カラス、ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００１年、第４０号：７８５３〜７８５９頁）。
【００４１】
マイクロＲＮＡ
オリゴヌクレオチド作用物質はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を内含する。マイクロＲＮＡは、翻訳の阻害によってか又は標的されたｍＲＮＡの分解を通してといった方法により、細胞内の特定の遺伝子の転写後サイレンシングをひき起こす能力をもつ小さい非コーディングＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは完全に相補的であり得、そうでなければ標的核酸との非相補性領域を有し、その結果非相補性領域において「バルジ」をもたらし得る。非相補性領域（バルジ）は、２重鎖形成を可能にするのに充分な相補性、好ましくは完全な相補性をもつ領域によりフランキングされ得る。好ましくは、相補性領域は少なくとも長さが８〜１０ヌクレオチド（例えば８、９又は１０ヌクレオチド）である。ｍｉＲＮＡは、ミクロＲＮＡが標的核酸に対して完全な相補性をもたない場合といったように翻訳をサイレンシングすることにより、或いは又ｍｉＲＮＡが完全な相補性でその標的を結合させる場合にのみ起こると考えられている標的ＲＮＡ分解をひき起こすことによって、遺伝子の発現を阻害することができる。該発明は同様にその標的に結合された場合にバルジを形成してもしなくてもよいｍｉＲＮＡの２本鎖前駆体をも含んでいる。
【００４２】
ｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡは、長さが約１８〜１００ヌクレオチド、より好ましくは約１８〜８０ヌクレオチドであり得る。成熟ｍｉＲＮＡは、約１９〜３０ヌクレオチド、好ましくは約２１〜２５ヌクレオチド、特に２１、２２、２３、２４又は２５ヌクレオチドの長さを有し得る。マイクロＲＮＡ前駆体は、約７０〜１００ヌクレオチドの長さを有し得、ヘヤピン形態を有することができる。マイクロＲＮＡは、特異的に長いプレ−ｍｉＲＮＡを機能的ｍｉＲＮＡにプロセシングするＤｉｃｅｒ及びＤｒｏｓｈａと呼ばれる酵素によりプレ−ｍｉＲＮＡからインビボで生成され得る。該発明の特徴であるミクロＲＮＡ又は前駆体ｍｉＲＮＡは、細胞ベースの系によりインビボで合成され得、そうでなければ化学的に合成可能である。ミクロＲＮＡは、所望の特徴を付与する修飾を内含するように合成され得る。例えば、修飾は、例えばエンドサイトーシス依存性又は非依存性機序により安定性、特定の組織又は細胞型に対しターゲティングする標的核酸とのハイブリダイゼーション熱力量、又は細胞透過性を改善することができる。修飾は同様に配列特異性を増大させ、その結果としてオフサイトターゲティングを減少させることもできる。合成及び化学的修飾の方法が以下でより詳細に記載されている。
【００４３】
特に、本発明の特徴であるｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡは、標的核酸と非相補性をもつ内部（すなわち非末端）領域内のヌクレオチド上に化学的修飾を有する可能性がある。例えば修飾されたヌクレオチドを、バルジを形成するｍｉＲＮＡの領域内に取込むことができる。修飾は、例えばリンカーなどによりｍｉＲＮＡに付着したリガンドを含み得る。修飾は例えば、治療用ｍｉＲＮＡの薬物動態又は安定性を改善するか又は、標的核酸に対するｍｉＲＮＡのハイブリダイゼーション特性（例えばハイブリダイゼーション熱力学）を改善し得る。一部の実施形態においては、ｍｉＲＮＡのバルジ領域内に取込まれた又はテザーされた修飾又はリガンドの配向がバルジ領域内の空間を占有するように方向づけされることが好ましい。この配向は、ハイブリダイゼーション特性の改善又はそうでなければ望まれるｍｉＲＮＡの特徴を容易にする。例えば、該修飾は、インターカレータとして機能するリガンド又は核酸ストランド上の修飾された塩基又は糖を内含し得る。これらは好ましくはバルジ内に位置設定されている。インターカレータは芳香族例えば多環式芳香族又は複素環式芳香族化合物であり得る。多環式インターカレータは積み重ね能力を有し、２、３又は４個の融合環を伴う系を含み得る。ｍｉＲＮＡ内にユニバーサル塩基を取込むこともできる。
【００４４】
一実施形態においては、ｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡに改善されたハイブリダイゼーション特性又は改善された配列特異性を付与することのできるアミノグリコシルリガンドを含むことができる。アミノグリコシドの例としてはグリコシル化ポリリジン；ガラクトシル化されたポリリジン；ネオマイシンＢ；トブラマイシン；カナマイシンＡ；及びアミノグリコシドのアクリジン抱合体、例えばネオ−Ｎ−アクリジン、ネオ−Ｓ−アクリジン、ネオ−Ｃ−アクリジン、トブラ−Ｎ−アクリジン及びカナＡ−Ｎ−アクリジンが含まれる。アクリジン類似体を使用することで配列特異性を増大させることができる。例えばネオマイシンＢは、ＤＮＡに比べてＲＮＡに対する高い親和性を有するが、配列特異性は低い。アクリジン類似体であるネオ−Ｓ−アクリジンは、ＨＩＶ−Ｒｅｖ−応答要素（ＲＲＥ）に対する増大した親和性を有する。一部の実施形態では、アミノグリコシドリガンドのグアニジン類似体（グアニジノグリコシド）は、オリゴヌクレオチド作用物質に対しテザーされている。グアニジノグリコシドにおいては、アミノ酸上のアミン基はグアニジン基と交換されている。グアニジン類似体の付着はオリゴヌクレオチド作用物質の細胞透過性を増強させることができる。
【００４５】
一実施形態においては、リガンドは、標的核酸の切断により遺伝子阻害をターゲティングするのに貢献する切断基を含み得る。好ましくは切断基は、それが標的ＲＮＡにアクセスし切断できるバルジ領域の中に位置づけされるような形でｍｉＲＮＡにテザーされる。切断基は例えばグレオマイシン（例えばブレオマイシン−Ａ５、ブレオマイシン−Ａ２又はブレオマイシン−Ｂ２）、ピレン、フェナントロリン（例えばＯ−フェナントロリン）、ポリアミン、トリペプチド（例えばｌｙｓ−ｔｙｒ−ｌｙｓトリペプチド）又は金属イオンキレート基であり得る。金属イオンキレート基は、例えば、Ｌｕ（III）などといった遊離金属イオンによりバルジの部位で標的ＲＮＡの選択的切断を促進できるＬｕ（III）又はＥＵ（III）大環状複合体、Ｚｎ（II）２．９−ジメチルフェノントロリン誘導体、Ｃｕ（II）テルピリジン又はアクリジンを含むことができる。一部の実施形態においては、バルジ領域などにおいて標的ＲＮＡの切断を促進するべくｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡに対してペプチドリガンドをテザーすることができる。例えば、標的ＲＮＡ切断を促進するため（例えばアミノ酸誘導体により）ペプチドに対し１．８−ジメチル−１，３，６，８，１０，１３−ヘキサアザシクロテトラデカン（サイクラム）を接合させることができる。該発明を特徴づける方法及び組成物には、切断依存性又は非切断依存性の機序により標的遺伝子発現を阻害するｍｉＲＮＡが含まれる。
【００４６】
ｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡは２重鎖を形成するのに充分な相補性をもつ領域（例えば長さが７、８、９、１０又は１１ヌクレオチドの領域）によりフランキングされた非相補性領域（例えば長さが３、４、５又は６ヌクレオチドである領域）を含むように設計又は合成され得る。ヌクレアーゼ耐性及び／又は標的に対する結合親和性の増大のためには、ｍｉＲＮＡ配列は２’−Ｏ−メチル、２’−フッ素、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−アミノ、及び／又はホスホロチオアート連結を含むことができる。オリゴヌクレオチド主鎖の中にフラノース糖を内含させることで、エンドヌクレアーゼ切断を減少させることも可能である。３’カチオン基を内含させること又は３’−３’連結を用いて３’末端でヌクレオシドを逆転させることによりｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡをさらに修飾することが可能である。別の変形形態においては、３’末端をアミノアルキル基例えば３’−Ｃ５−アミノアルキルｄＴで遮断することが可能である。別の３’接合体が３’−５’エキソヌクレアーゼ（ｅｘｏｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）切断を阻害することができる。理論による束縛を望むわけではないが、ナプロキセン又はイブプロフェンといったような３’−接合体は、エキソヌクレアーゼがオリゴヌクレオチドの３’末端に結合するのを立体的に遮断することにより、エキソヌクレアーゼ切断を阻害し得る。小さなアルキル鎖、アリール基又は複素環接合体又は修飾された糖（Ｄ−リボース、デオキシリボース、グルコースなど）でさえ、３’−５’−エキソヌクレアーゼを遮断することができる。
【００４７】
一実施形態においては、ｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡは、ターゲティングを改善する修飾例えば上述のターゲティング修飾を含んでいる。ｍｉＲＮＡ分子を特定の細胞型にターゲティングする修飾の例としては、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトースアミン、マンノースといったような炭水化物糖；葉酸塩といったビタミン、ＲＧＤ及びＲＧＤ模擬体といったようなその他のリガンド；及びナプロキセン、イブプロフェン又はその他の既知のタンパク質結合分子を含む小分子が含まれる。
【００４８】
当該技術分野において既知の手順を用いた酵素ライゲーション反応及び／又は化学合成を用いて、ｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡを構築することができる。例えば、天然に発生するヌクレオチドを用いてｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡを化学的に合成することができ、そうでなければ、分子の生物学的安定性を増大させるか又はｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡと標的核酸例えばホスホロチオアート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチドの間で形成された２重鎖の物理的安定性を増大させるように設計されたさまざまに修飾されたヌクレオチドを用いることが可能である。その他の適切な核酸修飾が本明細書で記載されている。代替的には、核酸がアンチセンス配向で中にサブクローニングされた発現ベクターを用いてｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡ核酸を生物学的に産生することもできる。すなわち挿入された核酸から転写されたＲＮＡが、目的の標的核酸に対しアンチセンス配向のものとなる。
【００４９】
アンチセンス核酸配列
該発明の特徴である１本鎖オリゴヌクレオチドは、アンチセンス核酸を含んでいる。「アンチセンス」核酸は、遺伝子発現産物をコードする「センス」核酸に対し相補的な、例えば２本鎖ｃＤＮＡ分子のコーディングストランドに相補的な、又は例えばｐｒｅ−ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡといったＲＮＡ配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。従って、アンチセンス核酸は、センス核酸標的と水素結合を形成することができる。
【００５０】
ｃＤＮＡ分子のセンスストランドの配列といったようなコーディングストランド配列から考えて、アンチセンス核酸をワトソン及びクリック塩基対合の法則に従って設計することができる。アンチセンス核酸分子はＲＮＡ、例えばｐｒｅ−ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡのコーディング又は非コーディング領域の部分に対し相補的であり得る。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば５’ＵＴＲといったｐｒｅ−ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡの翻訳開始部位をとり囲む領域に対し相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さが約１０〜２５ヌクレオチドでありうる（例えば１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４ヌクレオチドの長さ）。アンチセンスオリゴヌクレオチドは同様に、ｍｉＲＮＡ又はプレ−ｍｉＲＮＡに対し相補的であり得る。
【００５１】
当該技術分野において既知の手順を用いる酵素的ライゲーション反応及び／又は化学合成を用いてアンチセンス核酸を構築することができる。例えば、天然に発生するヌクレオチドを用いてアンチセンス核酸を化学的に合成することができ、そうでなければ、分子の生物学的安定性を増大させるか又はアンチセンス核酸と標的核酸例えばホスホロチオアート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチドの間で形成された２重鎖の物理的安定性を増大させるように設計されたさまざまに修飾されたヌクレオチドを用いることが可能である。その他の適切な核酸修飾が本明細書で記載されている。代替的には、核酸がアンチセンス配向で中にサブクローニングされた発現ベクターを用いてアンチセンス核酸を生物学的に産生することもできる。すなわち挿入された核酸から転写されたＲＮＡが、目的の標的核酸に対しアンチセンス配向のものとなる。
【００５２】
アンチセンス作用物質はリボヌクレオチドのみ、デオキシリボヌクレオチドのみ（例えばオリゴデオキシヌクレオチド）又はデオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドの両方を含むことができる。例えば、リボヌクレオチドのみから成るアンチセンス作用物質は相補的ＲＮＡに対しハイブリッド形成することができ、標的ＲＮＡ写しに対する翻訳メカニズムのアクセスを防止しかくしてタンパク質合成を防止することができる。例えばアンチセンス作用物質の５’及び３’末端でＲＮＡ配列によりフランキングされたＤＮＡ配列といった、デオキシリボヌクレオチドのみ又はデオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドを含むアンチセンス分子は、相補的ＲＮＡに対しハイブリッド形成することができ、それに続いてＲＮアーゼＨといった酵素によりＲＮＡ標的を切断することができる。標的ＲＮＡの分解が翻訳を防止する。フランキングＲＮＡ配列は、２’−Ｏ−メチル化ヌクレオチド及びホスホロチオアート連結を含むことができ、内部ＤＮＡ配列はホスホロチオアートヌクレオチド間連結を含むことができる。内部ＤＮＡ配列は好ましくは、ＲＮアーゼＨ活性によるターゲティングが望まれる場合、少なくとも５ヌクレオチドの長さを有する。
【００５３】
ヌクレアーゼ耐性の増大のためには、３’−３’連結を用いて３’末端でヌクレオシドを逆転させることによりアンチセンス作用物質をさらに修飾することができる。別の変形形態においては、３’末端をアミノアルキル基で遮断することができる。一部のケースでは、アンチセンスオリゴヌクレオチド作用物質には、ターゲティングを改善する修飾、例えばターゲティング修飾が含まれる。
【００５４】
デコイ核酸
該発明の特徴であるオリゴヌクレオチド作用物質は、デコイＲＮＡといったようなデコイ核酸であり得る。デコイ核酸は天然の核酸に似ているが、天然核酸の活性を阻害又は中断するために修飾される。例えば、デコイＲＮＡはリガンドのための天然結合ドメインを模擬し、特定のリガンドの結合のために天然結合標的と競合し得る。ＨＩＶ転写促進応答（ＴＡＲ）ＲＮＡの過剰発現が「デコイ」として作用し、ＨＩＶｔａｔタンパク質と効率良く結合してそれがＨＩＶＲＮＡ内でコードされたＴＡＲ配列に結合するのを防ぐことができるということが示されてきた。一実施形態においては、デコイＲＮＡは、ターゲティングを改善させる修飾を内含する。ｍｉＲＮＡ及びアンチセンスＲＮＡについて上記で記載され本明細書の他の箇所で記載されている化学的修飾は同様に、デコイ核酸において使用するためにも適切である。
【００５５】
アプタマー
該発明のオリゴヌクレオチド作用物質は同様にアプタマーも内含する。アプタマーは、例えば転写又は翻訳因子などの小さい有機分子又はタンパク質といった非核酸リガンドに結合し、その後その活性を修飾する。アプタマーは非核酸リガンド上のターゲティングされた結合部位の認識を導く特異的構造へと折畳むことができる。アプタマーは、本明細書に記載されている修飾のいずれかを含有することができる。一部のケースでは、アプタマーはターゲティングを改善する修飾、例えばターゲティング修飾を含む。ｍｉＲＮＡ及びアンチセンスＲＮＡについて上記で記載され本明細書の他の箇所で記載された化学的修飾は、同様に、デコイ核酸において使用するためにも適している。
【００５６】
該発明のオリゴヌクレオチドの付加的な特徴
ＮＡＴ（「核酸ターゲティング」）性あるオリゴヌクレオチド作用物質は、標的遺伝子に対する充分な相補性をもつ領域を含み、ヌクレオチドに関し充分な長を有し、かくして標的核酸と１つの２重鎖を形成するようになっている。オリゴヌクレオチド作用物質は、ターゲティングされた分子の機能を変調させることができる。例えば、ターゲティングされた分子がｍＲＮＡ又はｐｒｅ−ｍＲＮＡである場合、ＮＡＴは遺伝子発現を阻害することができる。標的がｍｉＲＮＡである場合、ＮＡＴはｍｉＲＮＡ機能を阻害しかくして特定のｍｉＲＮＡによりターゲティングされるｍＲＮＡの発現をアップレギュレートすることになる。代替的には標的がスプライシングに影響するｐｒｅ−ｍＲＮＡの１領域である場合、ＮＡＴはスプライス部位ひいてはｍＲＮＡ配列の選択を改善することができる。ＮＡＴがｍｉＲＮＡとして機能する場合、ターゲティングされたｍＲＮＡの発現が阻害される。説明を容易にするため、ヌクレオチド又はリボヌクレオチドといった用語は本明細書において時としてオリゴヌクレオチド作用物質の１つ以上の単量体サブユニットに関係して使用されている。「リボヌクレオチド」又は「ヌクレオチド」という用語は、修飾ＲＮＡ又はヌクレオチドの代理の場合に、１つ以上の位置における修飾ヌクレオチド又は代理交換部分をも意味し得ると理解されることになる。
【００５７】
ＮＡＴオリゴヌクレオチド作用物質は、標的ＲＮＡに対し少なくとも部分的にそして一部の実施形態においては完全に相補的である領域であるか又はそれを含んでいる。オリゴヌクレオチド作用物質と標的の間に完璧な相補性が存在する必要はないが、対応はオリゴヌクレオチド作用物質又はその切断産物が標的遺伝子発現を変調させる（例えば阻害する）ことができるようにするのに充分なものでなくてはならない。
【００５８】
オリゴヌクレオチド作用物質は好ましくは以下の特性のうちの１つ以上のものを有することになる：（１）それは１つ以上のリン酸塩基又はリン酸塩基の１つ以上の類似体を含む５’修飾を有することになる；（２）それは、ひじょうに多数の塩基に対するものでさえある修飾にも関わらず、特異的に塩基対合し、ターゲティングされたＲＮＡの活性の変調を可能にするのに充分な熱力学的安定性をもつ相同な標的ＲＮＡとの２重鎖構造を形成することになる；そして（３）それは、非常に多数の又は全てのヌクレオシドに対するものでさえある修飾にも関わらず、なお「ＲＮＡ様」の特性を有することになる、すなわちそれは、リボヌクレオチドベースの含有量の、排他的にではないにしても、又部分的でさえも、ＲＮＡ分子の全体的な構造、化学及び物理的特性を有することになる。例えば、ヌクレオチド糖の全ては、２’−ヒドロキシルの代りに例えば２’−フルオロを含有し得る。このデオキシリボヌクレオチド含有作用物質はなおもＲＮＡ様の特性を示すものと予想され得る。理論による束縛を望むわけではないものの、電気陰性フッ素は、リボースのＣ２’−位に付着した場合、軸方向配位を好む。フッ素のこの空間的選好は糖に強制的にＣ３’−ｅｎｄｏパッカーを採用させ得る。これは、ＲＮＡ分子で見られるものと同じパッカリングモードであり、ＲＮＡ特徴的なＡ−ファミリータイプのらせんを生み出す。さらに、フッ素は優れた水素結合アクセプタであることから、それはＲＮＡ構造を安定化させるものとして知られている水分子と同じ水素結合相互作用に参加することができる。一般に、２’糖位にある修飾済み部分は、デオキシリボヌクレオチドの２’−Ｈ部分よりもリボヌクレオチドの２’−ＯＨ部分の方の特徴である水素結合に入ることができるようになるのが好ましい。好ましいオリゴヌクレオチド作用物質は、その糖の全て又は少なくとも約５０、７５、８０、８５、９０又は９５％の中でＣ３’−ｅｎｄｏパッカーを示し、ＲＮＡ特徴的なＡファミリータイプのらせんを生み出すことのできる充分な量のその糖の中でＣ３’−ｅｎｄｏパッカーを示し、一般に、Ｃ３’−ｅｎｄｏパッカー構造でない約２０、１０、５、４、３、２又は１以下の糖を有することになる。一部のケースでは、オリゴヌクレオチドはＣ３’−ｅｎｄｏ糖パッカーを示し、２’位で修飾されることになる。修飾例には２’−ＯＨ、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−Ｆ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨＭｅ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（Ｍｅ）２及びＬＮＡが含まれる。一部のケースでは、該修飾の性質の如何に関わらず、そしてたとえ該オリゴヌクレオチド作用物質がデオキシヌクレオチド又は修飾デオキシヌクレオチドを含有し得る場合でも、ＤＮＡ分子又は、中のヌクレオチドの５０、６０又は７０％超がデオキシリボヌクレオチドであるあらゆる分子又は２’位でデオキシである修飾デオキシリボヌクレオチドがオリゴヌクレオチド作用物質の定義から除外されることが好ましい、Ｃ２−ｅｎｄｏ糖パッカーを示す糖部分での一部の好ましい２’−修飾には、２’−Ｈ、２’−Ｍｅ、２’−Ｓ−Ｍｅ、２’−エチニル及び２’−アラ−Ｆが含まれる。付加的な糖修飾には、Ｌ−糖及び２’−５’連結された糖が含まれる。
【００５９】
本明細書で使用される通り、「特異的にハイブリッド形成可能な」及び「相補的な」というのは、該発明の化合物と標的ＲＮＡ分子の間に安定した特異的な結合が発生するのに充分な度合の相補性を表わすのに用いられる用語である。この用語法は、同じく、ＮＡＴオリゴヌクレオチド作用物質が標的ＲＮＡに結合するケースにも適用される。特異的結合には、特異的結合が望まれる条件下すなわちインビボアッセイ又は治療的処置の場合の場合には生理学的条件下、又はインビトロアッセイの場合にはそのアッセイが実施される条件の下で、非標的配列に対する相補性の充分な欠如が必要とされる。ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡターゲティングのための区別を提供するには、ターゲティングされた配列とターゲティングされていない配列の間の単一のミスマッチがあれば充分であるということが示されてきた（ブルメルカンプ（Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ）ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、２００２年、第２号：２４３頁）。
【００６０】
一部のケースでは、ＮＡＴオリゴヌクレオチド作用物質は、標的ＲＮＡに対する「充分な相補性を有し」、かくして標的ｍＲＮＡによりコードされたタンパク質の産生を阻害することになる。標的ＲＮＡは、対象に対し内因性のｐｒｅ−ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ又はｍｉＲＮＡであり得る。別の実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、標的ＲＮＡに対して「正確に相補的であり（サブユニットを含有するＳＲＭＳを除外する）、例えば該標的ＲＮＡ及びオリゴヌクレオチド作用物質はアニールして正確な相補性の領域内に専らワトソン−クリック塩基対で作られたハイブリッドを形成することができる。「充分に相補的な」標的ＲＮＡは、標的ＲＮＡに対する正確な相補性をもつ領域（例えば少なくとも約７ヌクレオチドのもの）を含み得る。さらに、一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド作用物質は特異的に単一ヌクレオチドの差を区別する。この場合、オリゴヌクレオチド作用物質は、単一ヌクレオチドの差の領域内に正確な相補性が見られた場合に、遺伝子発現をダウンレギュレートするにすぎない。
【００６１】
論述されているオリゴヌクレオチド作用物質は、その他の点では未修飾のＲＮＡ及びＤＮＡならびにすでに修飾されたＲＮＡ及びＤＮＡを含む。修飾済みＲＮＡ及びＤＮＡの例には、ヌクレオシド代理のポリマー及び効能を改善するための修飾が含まれる。未修飾ＲＮＡというのは、核酸の成分すなわち糖、塩基及びリン酸塩部分が、自然に発生するものと同じ、好ましくは人体内で天然に発生するのと同じか又は基本的に同じである分子を意味する。当該技術分野では、稀な又は普通でないものの天然に発生するＲＮＡを修飾ＲＮＡと呼んできた。リムバッハ（Ｌｉｍｂａｃｈ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９４年、第２２号、２１８３〜２１９６頁を参照のこと。往々にして修飾ＲＮＡと呼ばれるこのような稀な又は普通でないＲＮＡは、一般的に転写後修飾の結果であり、本明細書で使用される未修飾ＲＮＡという用語の範囲内に入る。本明細書で使用される修飾ＲＮＡは、核酸の成分、すなわち糖、塩基及びリン酸塩部分のうちの１つ以上のものが天然に発生するものと異なっている、好ましくは人体内で発生するものと異なっている分子を意味する。それらは「修飾ＲＮＡ」とも呼ばれるものの、当然のことながら、該修飾を理由として、厳密に言うとＲＮＡでない分子を含む。ヌクレオシド代理は、ハイブリダイゼーションが例えばリボリン酸塩主鎖の非電荷模擬体といったリボリン酸塩主鎖について見られるものと実質的に類似するような正しい空間的関係で塩基が提示されうるようにする非リボリン酸塩構成体でリボリン酸塩主鎖が交換されている分子である。
【００６２】
糖交換単量体サブユニット（ＳＲＭＳ）
サブユニットの糖がこのように交換されたヌクレオチドサブユニットはここでは糖交換修飾サブユニット（ＳＲＭＳ）と呼ばれている。ＳＲＭＳは２つの「主鎖付着点」（ヒドロキシル基）、「テザー付着点」及び介入するテザーを介してＳＲＭＳに対し間接的に連結されているリガンドを含む。ＳＲＭＳは、オリゴヌクレオチド作用物質の５’又は３’末端サブユニットであり得、２つ以上の未修飾又は修飾リボヌクレオチドに隣接して位置設定されている。代替的には、ＳＲＭＳは、１つ以上の未修飾又は修飾リボヌクレオチドに隣接して位置設定された内部位置を占有し得る。２つ以上のＳＲＭＳがオリゴヌクレオチド作用物質内に存在し得る。１部分（例えばコレステロールといった脂肪親和性部分）にテザーされたＳＲＭＳの内含のために好ましい位置は、３’末端、５’末端又は内部位置にある。
【００６３】
リガンド
さまざまな実体をオリゴヌクレオチド作用物質に対しテザーすることができる。オリゴヌクレオチド作用物質に対してテザーされたリガンドは作用物質に対し有利な効果を及ぼすことができる。例えば、該リガンドは、エンドサイトーシス依存性又は非依存性機序により、安定性、標的核酸とのハイブリッド形成熱力学、特定の組織又は細胞型に対するターゲティング又は細胞透過性を改善することができる。リガンド及びそれに付随する修飾は同じく、配列の特異性を増大させ、その結果としてオフサイトターゲティングを減少させることができる。テザーされたリガンドは、インターカレータとして機能し得る１つ以上の修飾された塩基又は糖を内含することができる。これらはｍｉＲＮＡ／標的２重鎖のバルジ内といったような内部領域内に位置設定される。インターカレータは、多環式芳香族又は複素環芳香族基を含めた芳香族基であり得る。多環式インターカレータは、積み重ね能力をもち得、２、３又は４個の融合環をもつ系を含み得る。リガンド上にユニバーサル塩基を内含することが可能である。
【００６４】
一実施形態においては、リガンドは、標的核酸の切断により標的遺伝子の阻害に貢献する切断基を含む。切断基はブレオマイシン（例えばブレオマイシン−Ａ５、ブレオマイシン−Ａ２又はブレオマイシン−Ｂ２）、ピレン、フェナントロリン（例えばＯ−フェナントロリン）、ポリアミン、トリペプチド（例えばｌｙｓ−ｔｙｓ−ｌｙｓトリペプチド）又は金属イオンキレート基であり得る。金属イオンキレート基は、Ｌｕ（III）又はＥＵ（III）大環状複合体、Ｚｎ（II）２，９−ジメチルフェナントロリン誘導体、Ｃｕ（II）テルピリジン、又はアクリジンであり得、これらはＬｕ（III）といったような遊離金属イオンによりバルジの部位で標的ＲＮＡの選択的切断を促進することができる。一部のケースでは、ペプチドリガンドをｍｉＲＮＡにテザーして、標的ＲＮＡの切断を促進することができる。一部のケースでは、切断はバルジ領域で発生し得る。例えば、標的ＲＮＡ切断を促進するべくアミノ酸誘導体などを介してペプチドに対し１．８−ジメチル−１，３，６，８，１０，１３−ヘキサアザシクロテトラデカン（サイクラム）を接合させることができる。
【００６５】
テザーされたリガンドは、オリゴヌクレオチド作用物質が改善されたハイブリダイゼーション特性又は改善された配列特異性を有するようにすることのできるアミノグリコシドリガンドであり得る。アミノグリコシドの例としてはグリコシル化ポリリジン、ガラクトシル化されたポリリジン、ネオマイシンＢ、トブラマイシン、カナマイシンＡ及びアミノグリコシドのアクリジン抱合体、例えばネオ−Ｎ−アクリジン、ネオ−Ｓ−アクリジン、ネオ−Ｃ−アクリジン、トブラ−Ｎ−アクリジン及びカナＡ−Ｎ−アクリジンが含まれる。アクリジン類似体を使用することで配列特異性を増大させることができる。例えばネオマイシンＢは、ＤＮＡに比べてＲＮＡに対する高い親和性を有するが、配列特異性は低い。アクリジン類似体であるネオ−Ｓ−アクリジンは、ＨＩＶ−Ｒｅｖ−応答要素（ＲＲＥ）に対する増大した親和性を有する。一部の実施形態では、アミノグリコシドリガンドのグアニジン類似体（グアニジノグリコシド）は、オリゴヌクレオチド作用物質に対しテザーされている。グアニジノグリコシドにおいては、アミノ酸上のアミン基はグアニジン基と交換されている。グアニジン類似体の付着はオリゴヌクレオチド作用物質の細胞透過性を増強させることができる。テザーされたリガンドは、オリゴヌクレオチド作用物質の細胞摂取を増強できるポリ−アルギニンペプチド、ペプトイド又はペプチドミメティックであり得る。
【００６６】
好ましい部分は、好ましくはＳＲＭＳ担体に対し直接的にか又は介入するテザーを介して間接的に好ましくは共有結合的にカップリングされるリガンドである。好ましい実施形態では、リガンドは介入するテザーを介して担体に付着される。上述のように、リガンド又はテザーされたリガンドは、ＳＲＭＳ単量体が成長するストランド内に取込まれた時点でＳＲＭＳ単量体上に存在し得る。一部の実施形態においては、該リガンドは、「前駆体」ＳＲＭＳ単量体が成長するストランド内に取込まれた後、「前駆体」ＳＲＭＳ内に取込まれ得る。例えば、アミノ終端テザーを有するＳＲＭＳ単量体（すなわち会合したリガンドを全くもたないもの）、又はＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＮＨ２を成長するオリゴヌクレオチドストランドの中に取込むことが可能である。後続する作業においては、求電子基をもつリガンドをその後、前駆体ＳＲＭＳテザーの末端求電子基と該リガンドの求電子基とのカップリングによって前駆体ＳＲＭＳに付着させることができる。代表的な求電子基はペンタフルオロフェニルエステル又はアルデヒドを含む。本発明に従ったその他の求電子基は、当業者であれば容易に判定することができる。
【００６７】
ペプチド接合体を担持するオリゴヌクレオチドの調製
ペプチド接合体を担持するオリゴヌクレオチドは、アラルキル基を担持するオリゴヌクレオチドの調製のために以下で記載するものと類似の手順を用いて調製可能である。オリゴヌクレオチドペプチド接合体の合成及び精製は、確立された方法により実施可能である。各々参照により本明細書に援用されているツルファート（Ｔｒｕｆｅｒｔ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９６年、第５２号、３００５頁；及びマノハラン、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ中、Ｓ．Ｔ．クルーク（Ｃｒｏｏｋｅ）編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、２００１年を参照のこと。一部のケースでは、ペプチドの効力及び選択性を増大させ得る１つの全く異なる特異的な好ましい立体構造を採用する制約されたペプチドを作り出すようにペプチドミメティックを修飾することができる。例えば制約されたペプチドはアザペプチドであり得る（ガント（Ｇａｎｔｅ）  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ中、１９８９年、４０５−４１３）。アザペプチドは、アミノ酸側鎖の構造を変えることなくアミノ酸のα−炭素を窒素原子で交換させることによって合成される。例えば、フェニルクロロホルマートといった「カネボニル供与体」でヒドラジンを反応させることなどによって、従来のペプチド合成カップリング方法においてヒドラジンを使用することにより、アザペプチドを合成することができる。
【００６８】
細胞内への進入を促進するためのリガンドとの接合
細胞内への進入例えばエンドサイトーシス又は非エンドサイトーシス機序を増強させるためにオリゴヌクレオチド作用物質を修飾させることができる。細胞透過性を増大させるリガンドを、数多くのやり方でオリゴヌクレオチド作用物質に付着させることができる。リガンド付着の一例は、ＳＲＭＳ例えばピロリンベースのＳＲＭＳに対する結合によるものである。
【００６９】
一実施形態においては、広範囲の細胞型内への摂取を増強させることになるポリアルギニンに対してオリゴヌクレオチドを接合させることができる。理論により束縛されることはないものの、摂取の増強は非エンドサイトーシス経路によるものと考えられている。別の実施形態においては、細胞透過性を促進するためアミノグリコシドのグアニジウム類似体に対してオリゴヌクレオチドを接合させることができる。
【００７０】
別の実施形態においては、脂肪親和性部分とオリゴヌクレオチドを接合させることができる。脂肪親和性部分をピロリンベースのＳＲＭＳの窒素原子に付着させることができる。脂肪親和性部分の例としてはコレステロール、脂質、オレイル、レチニル又はコレステロール残基が含まれる。その他の脂肪親和性部分には、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール、Ｏ３−（オレオイル）コールエン酸、ジメトキシトリチル又はフェノキサジンが含まれる。コレステロールが最も好ましい例である。
【００７１】
細胞透過性を増強するリガンドは３’末端、５’末端に、又は内部的に付着され得る。リガンドは、ＳＲＭＳ、例えば３’末端、５’末端又は内部連結にあるピロリンベースのＳＲＭＳに付着され得る。該付着は、直接的なもの又はテザー分子を通したものであり得る。本明細書で論述されているテザー、スペーサ又はリンカーを用いて、ＳＲＭＳに該部分を付着させることができる。
【００７２】
該発明のアラルキル−リガンド−接合型オリゴヌクレオチドの合成
該発明のオリゴヌクレオチド化合物は溶液相又は固相有機合成を用いて調製可能である。有機合成は、核酸塩基に対しテザーされたアラルキルリガンドを含むオリゴヌクレオチドストランドを容易に調製できるという利点を提供する。核酸塩基にテザーされたアラルキルリガンドを含む該発明の２本鎖オリゴヌクレオチド化合物は、２段階手順を用いて調製可能である。まず第１に２本鎖分子の個々のストランドを別々に調製する。次に構成要素ストランドをアニールする。
【００７３】
該発明のリガンド抱合されたオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチド上への連結分子の付着から誘導されるもののようなペンダント反応性官能基を担持するオリゴヌクレオチドの使用によって合成され得る。この反応性オリゴヌクレオチドを、市販のリガンド、さまざまな保護基のいずれかを担持する合成されたリガンド又は、連結用部分が付着されているリガンドと直接反応させることができる。本発明の方法は、一部の好ましい実施形態においてはリガンドと適切に抱合され固体−支持体材料にさらに付着され得るヌクレオシド単量体を使用することによって、リガンド−抱合されたオリゴヌクレオチドの合成を容易にする。任意には固体−支持体材料に付着されたこのようなリガンド−ヌクレオシド接合体は、ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの５’位上に位置設定された連結部分と選択された血清結合リガンドとの反応を介して、本発明の方法の一部の好ましい実施形態に従って調製される。一部のケースでは、該オリゴヌクレオチドの３’末端に付着されたアラルキルリガンドを担持するオリゴヌクレオチドが、長鎖アミノアルキル基を介して細孔性ガラス支持体に対し単量体構築ブロックをまず最初に共有結合により付着させることによって調製される。その後標準的な固相合成技術を介して、固体支持体に結合させられた単量体構築ブロックに対しヌクレオチドが結合される。該単量体構築ブロックはヌクレオシド又は固相合成と相容性あるその他の有機化合物であり得る。
【００７４】
本発明の接合体の中で使用されるオリゴヌクレオチドは、固相合成の周知の技術を通して便利な形でかつ日常的に作ることのできるものである。かかる合成のための機器は、例えばアプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州）を含めた複数の製造供給元により販売されている。当該技術分野において既知のかかる合成のためのその他のあらゆる手段を付加的に又は代替的に利用することができる。ホスホロチオアート及びアルキル化誘導体といったようなその他のオリゴヌクレオチドを調製するために類似の技術を使用することも知られている。
【００７５】
特定の修飾オリゴヌクレオチドの合成に関する教示は以下の米国特許の中に見い出すことができる：ポリアミン接合型オリゴヌクレオチドに関する米国特許第５，１３８，０４５号明細書及び同第５，２１８，１０５号明細書；キラルリン連結をもつオリゴヌクレオチドの調製用の単量体に関する米国特許第５，２１２，２９５号明細書；修飾された主鎖をもつオリゴヌクレオチドに関する米国特許第５，３７８，８２５号明細書及び同第５，５４１，３０７号明細書；主鎖修飾オリゴヌクレオチド及び還元カップリングを通したその調製に関する米国特許第５，３８６，０２３号明細書；３−デアゼプリン環系に基づく修飾核酸塩基及びその合成方法に関する米国特許第５，４５７，１９１号明細書；Ｎ−２置換プリンに基づく修飾核酸塩基に関する米国特許第５，４５９，２５５号明細書；キラルリン連結をもつオリゴヌクレオチドを調製するためのプロセスに関する米国特許第５，５２１，３０２号明細書；ペプチド核酸に関する米国特許第５，５３９，０８２号明細書；β−ラクタム主鎖をもつオリゴヌクレオチドに関する米国特許第５，５５４，７４６号明細書；オリゴヌクレオチドの合成のための方法及び材料に関する米国特許第５，５７１，９０２号明細書；ヌクレオシドのさまざまな位置のうちのいずれかに付着されたその他の部分に対するリンカーとして使用可能でアラルキルチオ基を有するヌクレオシドに関する米国特許第５，５７８，７１８号明細書；高キラル純度のホスホチオアート連結をもつオリゴヌクレオチドに関する米国特許第５，５８７，３６１号明細書及び同第５，５９９，７７７号明細書；２．６−ジアミノプリン化合物を含む２’−Ｏ−アルキルグアノシン及び関連する化合物を調製するためのプロセスに関する米国特許第５，５０６，３５１号明細書；Ｎ−２置換プリンを有するオリゴヌクレオチドに関する米国特許第５，５８７，４６９号明細書；３−デアザプリンを有するオリゴヌクレオチドに関する米国特許第５，５８７，４７０号明細書；抱合された４’−デスメチルヌクレオシド類似体に関するものである米国特許第５，２２３，１６８号明細書及び米国特許第５，６０８，０４６号明細書；主鎖修飾オリゴヌクレオチド類似体に関する米国特許第５，６０２，２４０号明細書及び同第５，６１０，２８９号明細書、特に２’−フルオロ−オリゴヌクレオチドを合成する方法に関する米国特許第６，２６２，２４１号明細書及び同第５，４５９，２５５号明細書。
【００７６】
本発明の配列特異的結合を受けたヌクレオシドを担持するリガンド抱合されたオリゴヌクレオチド及びリガンド分子においては、オリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオシドは、標準的なヌクレオチド又はヌクレオシド前駆体又はすでに連結部分を担持するヌクレオチド又はヌクレオシド接合体前駆体、リガンド分子をすでに担持するリガンドヌクレオチド又はヌクレオシド接合体前駆体又は非ヌクレオシド担持構築ブロックを利用して、適切なＤＮＡ合成装置上で組立て可能である。
【００７７】
連結部分をすでに担持するヌクレオチド接合体前駆体を使用する場合、配列特異的連結ヌクレオシドの合成は一般的に完了させられ、次にリガンド分子は該連結部分と反応させられてリガンド抱合されたオリゴヌクレオチドを形成する。ステロイド、ビタミン、脂質及びレポータ分子といったさまざまな分子を担持するオリゴヌクレオチド接合体がこれまでに記載されてきた（マノハランら、ＰＣＴ出願国際公開第９３／０７８８３号パンフレットを参照のこと）。好ましい実施形態においては、本発明のオリゴヌクレオチド又は連結ヌクレオシドは、市販されオリゴヌクレオチド合成において日常的に用いられる標準的ホスホルアミダイト及び非標準的ホスホルアミダイトに加えてリガンド−ヌクレオシド接合体から誘導されたホスホルアミダイトを用いて自動合成装置により合成される。
【００７８】
オリゴヌクレオチドのヌクレオシド中への２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−エチル、２’−Ｏ−プロピル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｏ−アミノアルキル又は２’−デオキシ−２’−フルオロ基の取込みは増強されたハイブリダイゼーションをオリゴヌクレオチドに付与する。さらに、ホスホロチオアート主鎖を含有するオリゴヌクレオチドは、増強されたヌクレアーゼ安定性を有する。かくして、機能化された状態で、該発明の連結ヌクレオシドは、ホスホロチオアート主鎖又は２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−エチル、２’−Ｏ−プロピル、２’−Ｏ−アミノアルキル、２’−Ｏ−アルキル又は２’−デオキシ−２’−フルオロ基のいずれか又は両方を含むように増大され得る。
【００７９】
一部の好ましい実施形態においては、５’末端にアミノ基を有する該発明の官能化されたヌクレオシド配列がＤＮＡ合成装置を用いて調製され、次に選択されたリガンドの活性エステル誘導体と反応させられる。活性エステル誘導体は当業者にとって周知である。代表的な活性エステルとしては、Ｎ−ヒドロスクシンイミドエステル、テトラフルオロフェノールエステル、ペンタフルオロフェノールエステル及びペンタクロロフェノールエステルが含まれる。アミノ基と活性エステルの反応は、連結基を通して５’位に選択されたリガンドが付着されているオリゴヌクレオチドを生成する。５’末端におけるアミノ基は、５’−アミノ修飾物質Ｃ６試薬を利用して調製することができる。好ましい実施形態においては、リガンドが直接又はリンカーを介して間接的に５’−ヒドロキシ基に連結されているリガンド−ヌクレオシドホスホルアミダイトを使用することにより５’位でオリゴヌクレオチドにリガンド分子を接合させることができる。このようなリガンド−ヌクレオシドホスホルアミダイトは一般的に、自動合成手順の終りに使用され、５’末端にリガンドを担持するリガンド抱合されたオリゴヌクレオチドを提供する。
【００８０】
該発明の１つの好ましい実施形態においては、リガンド抱合されたオリゴヌクレオチドの調製は、リガンド分子をその上に構築すべき適切な前駆体分子の選択から始まる。一般的には、該前駆体は、一般に使用されているヌクレオシドの適切に保護された誘導体である。例えば、本発明のリガンド抱合されたオリゴヌクレオチドの合成のための合成前駆体には、分子の核酸塩基部分の中で保護され得る２’−アミノアルコキシ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、２’−６−アミノアルキルアミノ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、５’−６−アミノアルコキシ−２’−デオキシ−ヌクレオシド、５’−６−アミノアルコキシ−２−保護−ヌクレオシド、３’−６−アミノアルコキシ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド及び３’−アミノアルキルアミド−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシドが含まれるがこれらに限定されるわけではない。このようなアミノ結合型の保護されたヌクレオシド前駆体の合成の方法は、当業者にとって既知のものである。
【００８１】
数多くの場合において、該発明の化合物の調製中に保護基が使用される。本明細書で使用されるように、「保護された」という用語は、指示された部分がその上に付加された保護基を有することを意味する。該発明の一部の好ましい実施形態においては、化合物は１つ以上の保護基を含有する。該発明の方法においては、さまざまな保護基を利用することができる。一般に、保護基は、化学的官能基を特定の反応条件に対し不活性なものにし、分子の残りの部分を実質的に損傷することなく分子内でかかる官能基に付加されたり又はそれから除去されたりし得る。
【００８２】
例えば代表的ヒドロキシル保護基が、ボーカージュ（Ｂｅａｕｃａｇｅ）ら、（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９２年、第４８号：２２２３〜２３１１頁）により開示されている。さらなるヒドロキシル保護基ならびにその他の代表的保護基がグリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）及びワッツ（Ｗｕｔｓ）、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２章、第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、及び「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、エクスタイン（Ｅｋｓｔｅｉｎ）、Ｆ．編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ、１９９１年内で開示されている。
【００８３】
ヒドロキシル保護基の例としては、ｔ−ブチル、ｔ−ブトキシメチル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、１−エトキシエチル、ｌ−（２−クロロエトキシ）エチル、２−トリメチルシリルエチル、ｐ−クロロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ'−ジニトロベンズヒドリル、ｐ−ニトロベンジル、トリフェニルメチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリフェニルシリル、ベンゾイルホルマート、酢酸塩、クロロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ピバル酸塩、安息香酸塩、ｐ−フェニル安息香酸、炭酸９−フルオレニルメチル、メシル酸塩及びトシル酸塩が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【００８４】
酸処理に安定しているアミノ保護基は、塩基処理を用いて選択的に除去され、反応性アミノ基を選択的に置換に利用できるようにするために用いられる。かかる基の例としてはＦｍｏｃ（Ｅ．アサートン（Ａｔｈｅｒｔｏｎ）及びＲ．Ｃ．シェパード（Ｓｈｅｐｐａｒｄ）、Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ中、Ｓ．ユーデンフレンド（Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ）、Ｊ．メイエンホッファ（Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ）編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、１９８７年、第９巻、１頁）及びＮｓｃ基によって例示されるさまざまな置換スルホニルエチルカルバマート（サムコフ（Ｓａｍｕｋｏｖ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９９４年、３５：７８２１；フェルハート（Ｖｅｒｈａｒ）及びテッサー（Ｔｅｓｓｅｒ）、Ｒｅｃ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．Ｐａｙｓ−Ｂａｓ、１９８７年、１０７：６２１）がある。
【００８５】
付加的なアミノ保護基には、カルバマート保護基、例えば２−トリメチルシリルエトキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エトキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、及びベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）；アミド保護基、例えばホルミル、アセチル、トリハロアセチル、ベンゾイル、及びニトロフェニルアセチル；スルホンアミド保護基、例えば２−ニトロベンゼンスルホニル；及びイミン及び環状イミド保護基、例えばフタルイミド及びジチアスクシノイルが含まれるがこれらに限定されるわけではない。これらのアミノ保護基の等価物も同様に本発明の化合物及び方法により包含されている。
【００８６】
数多くの固体支持体が市販されており、当業者であれば、固相合成段階の中で使用すべき固体支持体を容易に選択することができる。一部の実施形態においては、ユニバーサル支持体が用いられる。ユニバーサル支持体は、オリゴヌクレオチドの３’末端にある普通でない又は修飾済みのヌクレオチドをもつオリゴヌクレオチドの調製を可能にする。Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  ５００及びＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  IIは、グレン・リサーチ（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２２８２５  Ｄａｖｉｓ  Ｄｒｉｖｅ、Ｓｔｅｒｌｉｎｇ、バージニア州から市販されているユニバーサル支持体である。ユニバーサル支持体に関するさらなる詳細については、スコット（Ｓｃｏｔｔ）ら、「Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第３回国際シンポジウム、１９９４年、Ｅｄ．Ｒｏｇｅｒ  Ｅｐｔｏｎ、Ｍａｙｆｌｏｗｅｒ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ、１１５〜１２４頁；アザイェヴ（Ａｚｈａｙｅｖ）、Ａ．Ｖ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９９年、第５５号、７８７〜８００頁；及びアザイェヴ及びアントポルスキー（Ａｎｔｏｐｏｌｓｋｙ）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２００１年、第５７号、４９７７〜４９８６頁を参照のこと。さらに、オリゴヌクレオチドは、より容易に塩基性加水分解を受けるｓｙｎ−１，２−アセトキシホスファート基を介して固体支持体に結合されている場合に、より穏やかな反応条件下でユニバーサル支持体から切断され得るということが報告された。グザエフ（Ｇｕｚａｅｖ）、Ａ．Ｌ；マノハラン、Ｍ．Ｊ  Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３年、第１２５号、２３８０頁を参照のこと。
【００８７】
該発明の化合物の治療的使用
本発明の好ましい実施形態においては、ヌクレオシドに付着されたリガンドは、オリゴヌクレオチド治療又は診断薬の薬物動態特性を増強させる。好ましい実施形態においては、該オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。かかる改良型薬物動態特性には、血清タンパク質に対するアンチセンス化合物の結合の増加、アンチセンス化合物の血漿濃度の増加、組織分配の増加、血清タンパク質に対するアンチセンス化合物の結合能力の増加、及び半減期の増加が含まれる。
【００８８】
本発明は、血清中のオリゴヌクレオチドの濃度を増大させるための方法を提供する。かかる方法に従うと、アラルキルリガンドはオリゴヌクレオチドに抱合され、かくして接合オリゴヌクレオチドを形成する。この接合オリゴヌクレオチドは次に血清に添加される。
【００８９】
本発明はさらに、オリゴヌクレオチドのために血清の容量を増大させるための方法を提供する。かかる方法に従うと、アラルキルリガンドはオリゴヌクレオチドに抱合され、かくして接合オリゴヌクレオチドを形成する。この接合オリゴヌクレオチドはその後血清に添加される。
【００９０】
本発明は同様に、血管系の一部分に対するオリゴヌクレオチドの結合を増大させるための方法をも提供する。かかる方法に従うと、一部は循環する血清中、又一部は血管系の非循環部分中に常駐する血管タンパク質が選択される。その後、例えばナプロキセンといったアラルキルリガンドは１つのオリゴヌクレオチドに接合して接合オリゴヌクレオチドを形成し、これは次に血管系に添加される。
【００９１】
本発明はさらに、細胞内のオリゴヌクレオチドの細胞摂取を促進するための方法を提供する。かかる方法に従うと、細胞タンパク質が選択される。この細胞タンパク質は、細胞膜上に常駐するタンパク質であり、部分的に細胞外に拡がって、この細胞タンパク質の一部分が細胞膜の外部側面上に拡がるようになっている。次に、アラルキルリガンドが１つのオリゴヌクレオチドと接合させられて接合オリゴヌクレオチドを形成する。この接合オリゴヌクレオチドはその後、オリゴヌクレオチドの細胞摂取が促進されなくてはならない細胞と接触させられる。好ましい実施形態においては、該オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。
【００９２】
本発明は同様に、該発明のオリゴヌクレオチドと１つの生体を接触させる工程を含み、前記オリゴヌクレオチドがアラルキルリガンドに抱合されている、オリゴヌクレオチドの細胞摂取を増大させる方法をも提供する。
【００９３】
該発明の１つの好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチドによりターゲティングされるタンパク質は血清タンパク質である。リガンド抱合されたオリゴヌクレオチド化合物によりターゲティングされる血清タンパク質が免疫グロブリン（抗体）であることが好ましい。好ましい免疫グロブリンは、免疫グロブリンＧ及び免疫グロブリンＭである。免疫グロブリンは、脊椎動物の血中血清及び組織内に現われることがわかっている。
【００９４】
該発明の別の実施形態では、オリゴヌクレオチドによりターゲティングされる血清タンパク質はリポタンパク質である。リポタンパク質は、脂質を運び特異的細胞表面リセプタにより認識される、一般に２０，０００超の分子量を有する血中タンパク質である。血清中のリポタンパク質との会合は、最初半減期及び分配といった薬物動態パラメータを増大させることになる。二次的考慮事項は、レセプタ媒介型エンドサイトーシスを介して細胞摂取を増大させるリポタンパク質の能力である。
【００９５】
さらに別の実施形態においては、アラルキル−リガンド接合型オリゴヌクレオチド化合物によりターゲティングされる血清タンパク質のα−２−マクログロブリンである。さらに別の実施形態においては、リガンド接合オリゴヌクレオチドによりターゲティングされる血清タンパク質はα−１−糖タンパク質である。
【００９６】
遺伝子及び疾病
該発明の１つの態様は、望ましくない細胞増殖例えば悪性又は非悪性細胞増殖のリスクのある又はそれを患っている対象の治療方法に関する。該方法は、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子と相同でありかつこの遺伝子をオリゴヌクレオチドが切断などによりサイレンシングできる、アラルキル−リガンド接合型オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程；及び対象、好ましくはヒトの対象に対し治療上有効な用量のアラルキル−リガンド接合型オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含んでいる。
【００９７】
好ましい実施形態においては、遺伝子は、成長因子又は成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ、例えばタンパク質チロシン、セリン又はトレオニンキナーゼ遺伝子、アダプタタンパク質遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、又は転写因子をコードする遺伝子である。
【００９８】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＰＤＧＦベータ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば睾丸癌及び肺癌といった望ましくないＰＤＧＦベータ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【００９９】
別の好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＥｒｂ−Ｂ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１００】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、Ｓｒｃ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば結腸癌といった望ましくないＳｒｃ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０１】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＣＲＫ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば結腸癌及び肺癌といった望ましくないＣＲＫ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０２】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＧＲＢ２遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば扁平上皮細胞ガンといった望ましくないＧＲＢ２発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０３】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＲＡＳ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば膵臓、結腸及び肺癌及び慢性白血病といった望ましくないＲＡＳ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０４】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＭＥＫＫ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば扁平上皮細胞癌、黒色腫又は白血病といった望ましくないＭＥＫＫ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０５】
別の好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ＪＮＫ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば膵癌又は乳癌といった望ましくないＪＮＫ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０６】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＲＡＦ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば腫癌又は白血病と言った望ましくないＲＡＦ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０７】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、Ｅｒｋ１／２遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば肺癌といった望ましくないＥｒｋ１／２発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０８】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば肺癌といった望ましくないＰＣＮＡ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１０９】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＭＹＢ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば結腸癌又は慢性骨髄性白血病といった望ましくないＭＹＢ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１０】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ｃ−ＭＹＣ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えばバーキットリンパ腫又は神経芽細胞腫といった望ましくないｃ−ＭＹＣ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１１】
別の好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ＪＵＮ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば卵巣、前立腺又は乳癌といった望ましくないＪＵＮ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１２】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＦＯＳ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば皮膚又は前立腺癌といった望ましくないＦＯＳ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１３】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＢＣＬ−２遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば肺又は前立腺癌又は非ホジキンリンパ腫といった望ましくないＢＣＬ−２発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１４】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＣｙｃｌｉｎＤ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば食道及び結腸癌といった望ましくないＣｙｃｌｉｎＤ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１５】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＶＥＧＦ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば食道及び結腸癌といった望ましくないＶＥＧＦ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１６】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＥＧＦＲ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＥＧＦＲ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１７】
別の好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ＣｙｃｌｉｎＡ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば肺及び子宮頸癌といった望ましくないＣｙｃｌｉｎＡ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１８】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＣｙｃｌｉｎＥ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば肺及び乳癌といった望ましくないＣｙｃｌｉｎＥ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１１９】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＷＮＴ−１遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば基底細胞癌といった望ましくないＷＮＴ−１発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２０】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ベータカテニン遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば腺癌又は肝細胞癌といった望ましくないベータカテニン２発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２１】
別の別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ｃ−ＭＥＴ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば肝細胞癌といった望ましくないｃ−ＭＥＴ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２２】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＰＫＣ遺伝子とサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＰＫＣ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２３】
好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ＮＦＫＢ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＮＦＫＢ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２４】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＳＴＡＴ３遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば前立腺癌といった望ましくないＳＴＡＴ３発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２５】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、サービビン（ｓｕｒｖｉｖｉｎ）遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば子宮頸癌及び膵癌といった望ましくないサービビン発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２６】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＨｅｒ２／Ｎｅｕ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２７】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、トポイソメラーゼＩ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば卵巣癌及び結腸癌といった望ましくないトポイソメラーゼ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２８】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌及び結腸癌といった望ましくないトポイソメラーゼII発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１２９】
好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ｐ７３遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば結腸直腸腺癌といった望ましくないｐ７３発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３０】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば肝臓癌といった望ましくないｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３１】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば肝臓癌といった望ましくないｐ２７（ＫＩＰ１）発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３２】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＰＰＭ１Ｄ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３３】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＲＡＳ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３４】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異とサイレンシングし、かくして、例えば食道扁平上皮細胞癌といった望ましくないカベオリンＩ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３５】
別の好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば男性乳癌（ＭＢＣ）といった望ましくないＭＩＢＩ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３６】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば卵巣癌といった望ましくないＭＴＡＩ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３７】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、Ｍ６８遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば食道、胃、結腸及び直腸内のヒト腺癌といった望ましくないＭ６８発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１３８】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、化学療法と組合せた形でアポトーシス活性を促進する方法として使用され得る。
【０１３９】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば胆嚢、膵臓及び肺癌といった望ましくないｐ５３発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４０】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異とサイレンシングし、かくして、例えば扁平上皮細胞癌といった望ましくないＤＮ−ｐ６３発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４１】
別の好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ｐＲｂ腫瘍遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば口腔扁平上皮細胞癌といった望ましくないｐＲｂ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４２】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば結腸癌といった望ましくないＡＰＣ１発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４３】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば乳癌といった望ましくないＢＲＣＡ１発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４４】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異をサイレンシングし、かくして、例えば過誤腫、神経膠腫及び前立腺及び子宮内膜細胞癌といった望ましくないＰＴＥＮ発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４５】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＭＬＬ融合遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば急性白血病といった望ましくないＭＬＬ融合遺伝子発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４６】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子とサイレンシングし、かくして、例えば急性及び慢性白血病といった望ましくないＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４７】
別の好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば小児急性白血病といった望ましくないＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４８】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＥＷＳ／ＦＬＩ１遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えばユーイング肉腫といった望ましくないＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１４９】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＴＬＳ／ＦＵＳ１遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば粘液性脂肪肉腫といった望ましくないＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１５０】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば粘液性脂肪肉腫といった望ましくないＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１５１】
別の好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば急性白血病といった望ましくないＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子発現により特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１５２】
該発明の別の態様は、例えば癌などの、血管形成阻害による恩恵を受け得る疾病又は障害のリスクをもつ又はそれを患っている例えばヒトといった対象を治療する方法に関する。該方法は、血管形成を媒介する遺伝子に相同でかつ切断などによりこの遺伝子をサイレンシングできるアラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程；及び好ましくはヒトである対象に対して治療上有効な投薬量の前記アラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含む。
【０１５３】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、アルファｖインテグリン遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば脳腫瘍又は上皮由来の癌といった望ましくないアルファインテグリンレセプタにより特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１５４】
好ましい実施形態では、該オリゴヌクレオチド作用物質は、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば癌及び関節リウマチといった望ましくないＦｌｔ−１レセプタにより特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１５５】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、チューブリン遺伝子をサイレンシングし、かくして、例えば癌及び網膜血管新生といった望ましくないチューブリンにより特徴づけされる障害を有するか又はそのリスクをもつ対象を治療するのに使用され得る。
【０１５６】
該発明の別の態様は、ウイルスに感染した対象又はウイルス感染に付随する障害又は疾病のリスクを有する又はかかる障害又は疾病を患う患者を治療する方法に関する。該方法は、例えば進入又は成長などのウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子の相同でありかつ例えば切断などによりこの遺伝子をサイレンシングできるアラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程；及び好ましくはヒトである対象に対して治療上有効な投薬量の前記アラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含む。
【０１５７】
かくして、該発明は、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）に感染した患者又は例えば子宮頸ガンといった、ＨＰＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法を提供する。ＨＰＶは頸癌の９５％と結びつけられ、かくして抗ウイルス療法は、これらの癌及びウイルス感染のその他の症候を治療するための魅力ある方法である。
【０１５８】
好ましい実施形態においては、ＨＰＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態においては、ＨＰＶ遺伝子は、Ｅ２、Ｅ６又はＥ７の群のうちの１つである。
【０１５９】
ＨＰＶ複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６０】
該発明は同様に、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者又は、例えば後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）といったＨＩＶにより媒介される障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態では、ＨＩＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態においては、ＨＩＶ遺伝子はＣＣＲ５、Ｇａｇ又はＲｅｖである。好ましい実施形態においては、ＨＩＶ複製のために必要とされるヒト遺伝子の発現は削減される。別の好ましい実施形態では、該遺伝子はＣＤ４又はＴｓｇ１０１である。
【０１６１】
該発明は同様に、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の感染を受けた患者又は例えば肝硬変及び肝細胞癌などのＨＢＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法をも含む。好ましい実施形態においては、ＨＢＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態では、ターゲティングされたＨＢＶ遺伝子は、ＨＢＶコアタンパク質のテイル領域、前ｃｒｅｇｉｏｕｓ（ｐｒｅ−ｃ）領域、又はｃｒｅｇｉｏｕｓ（ｃ）領域の群のうちの１つをコードする。別の好ましい実施形態では、ターゲティングされたＨＢＶ−ＲＮＡ配列はポリ（Ａ）テイルから成る。
【０１６２】
好ましい実施形態においては、ＨＢＶ複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６３】
該発明は同様に、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）に感染した患者又はＨＡＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法をも提供する。好ましい実施形態においては、ＨＡＶ複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６４】
本発明は同様に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の感染を受けた患者又は例えば肝硬変などのＨＣＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法をも提供する。好ましい実施形態においては、ＨＣＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態では、ＨＣＶ複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６５】
本発明は同様に、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ又はＨ型肝炎を含む肝炎ウイルス菌株の群のいずれかに感染した患者又はこれらの肝炎菌株のいずれかを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法をも提供する。好ましい実施形態においては、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ又はＨ型肝炎遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態おいては、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、又はＨ型肝炎複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６６】
該発明は方法は同様に、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に感染した患者又は例えば小児における下気導感染及び小児喘息、例えば高齢者における肺炎及びその他の合併症などのＲＳＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供している。好ましい実施形態おいては、ＲＳＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態おいては、ターゲティングされたＨＢＶ遺伝子は、遺伝子Ｎ、Ｌ又はＰの群のうちの１つをコードする。好ましい実施形態おいては、ＲＳＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６７】
該発明の方法は同様に、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に感染した患者又は例えば陰部ヘルペス及びヘルペスならびに主として免疫障害をもつ患者における生死に関わる又は視覚障害を伴う疾病などのＨＳＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供している。好ましい実施形態おいては、ＨＳＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態おいては、ターゲティングされたＨＳＶ遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼ又はヘリカーゼ−プリマーゼをコードする。好ましい実施形態おいては、ＨＳＶ複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６８】
該発明は同様に、ヘルペスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の感染を受けた患者又は例えば免疫障害をもつ患者における先天性ウイルス感染及び病的状態などのＣＭＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療するための方法をも提供する。好ましい実施形態おいては、ＣＭＶ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ＣＭＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１６９】
該発明の方法は同様に、ヘルペスイプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）に感染した患者又は例えばＮＫ／Ｔ−細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫及びホジキン病などのＥＢＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法を提供する。好ましい実施形態おいては、ＥＢＶ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ＥＢＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７０】
該発明の方法は同様に、ヒトヘルペスウイルス８とも呼ばれるカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）に感染した患者、又は例えばカポジ肉腫、多中心性キャッスルマン病及びＡＩＤＳ関連原発性滲出液リンパ腫などのＫＳＨＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態においては、ＫＳＨＶ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ＫＳＨＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７１】
該発明は同様に、ＪＣウイルス（ＪＣＶ）に感染した患者又は、例えば進行性多発性白質脳症（ＰＭＬ）などのこのウイルスに付随する疾病又は障害を治療するための方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、ＪＣＶ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態においては、ＪＣＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７２】
該発明の方法は同様に、ミクソウイルスに感染した患者又は、例えばイルフルエンザなどのミクソウイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、ミクソウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ミクソウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７３】
該発明の方法は同様に、ライノウイルスに感染した患者又は、例えば感冒などのライノウイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、ライノウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいてはライノウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７４】
該発明の方法は同様に、コロナウイルスに感染した患者又は、例えば感冒などのコロナウイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、コロナウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、コロナウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７５】
該発明の方法は同様に、西ナイルフラビウイルスに感染した患者又は、西ナイルイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、西ナイルイルス遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態おいては、西ナイルイルス遺伝子は、Ｅ、ＮＳ３又はＮＳ５を含む群のうちの１つである。好ましい実施形態おいては西ナイルイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７６】
該発明の方法は同様に、セントルイス脳炎フラビウイルスに感染した患者又は例えばウイルス性出血熱又は神経系疾患などのこのウイルスに付随する疾病又は障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、セントルイス脳炎遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、セントルイス脳炎ウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７７】
該発明は同様に、ダニ媒介性脳炎フラビノウイルスに感染した患者又は、例えばウイルス性出血熱及び神経系疾患などのダニ媒介性脳炎ウイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７８】
該発明の方法は同様に、一般にウイルス性出血熱及び神経系疾患を結果としてもたらすマリーバレー脳炎フラビウイルスに感染した患者を治療する方法をも提供する。好ましい実施形態おいては、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１７９】
該発明は同様に、デングフラビウイルスに感染した患者又は例えばデング出血熱などのこのウイルスに付随する疾病又は障害を治療するための方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、デングウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、デングウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８０】
該発明の方法は同様に、シミアンウイルス（ＳＶ４０）に感染した患者又は、例えば腫瘍形成などのＳＶ４０を媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、ＳＶ４０遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ＳＶ４０の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８１】
該発明は同様に、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）に感染した患者又は、例えば白血病及び脊髄症などのこのウイルスに付随する疾病又は障害を治療するための方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、ＨＴＬＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態おいては、ＨＴＬＶ１遺伝子はＴａｘ転写活性化因子である。好ましい実施形態においては、ＨＴＬＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８２】
該発明の方法は同様に、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ−ＭｕＬｖ）に感染した患者又は、例えばＴ細胞白血病などのＭｏ−ＭｕＬｖを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、Ｍｏ−ＭｕＬｖ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、Ｍｏ−ＭｕＬｖの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８３】
該発明の方法は同様に、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）に感染した患者又は例えば心筋炎といったＥＭＣＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。ＥＭＣＶはマウス及びブタにおいて心筋炎を導き、ヒト心筋細胞を感染させる能力をもつ。従ってこのウイルスは、異種移植を受ける患者にとって１つの関心事である。好ましい実施形態おいては、ＥＭＣＶ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ＥＭＣＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８４】
該発明は同様に、麻疹ウイルス（ＭＶ）に感染した患者又は、例えば麻疹などのＭＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者を治療する方法をも提供する。好ましい実施形態おいては、ＭＶ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ＭＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８５】
該発明は同様に、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）に感染した患者又は例えば水痘又は帯状ヘルペス（帯状疱疹とも呼ぶ）を媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療方法をも含む。好ましい実施形態おいては、ＶＺＶ遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ＶＺＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８６】
該発明は同様に、アデノウイルスに感染した患者又は例えば気道感染症などのアデノウイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、アデノウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、アデノウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８７】
該発明は、黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）に感染した患者又は例えば気道感染症などのＹＦＶを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、ＹＦＶ遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態おいては、好ましい遺伝子は、Ｅ、ＮＳ２Ａ又はＮＳ３遺伝子を含む群のうちの１つである。好ましい実施形態においては、ＹＦＶの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８８】
該発明の方法は同様に、ポリオウイルスに感染した患者又は例えば小児麻痺などのポリオウイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、ポリオウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ポリオウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１８９】
該発明の方法は同様に、ポックスウイルスに感染した患者又は例えば天然痘などのポックスウイルスを媒介とする障害のリスクを有するか又はそれを患う患者の治療をも提供する。好ましい実施形態おいては、ポックスウイルス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ポックスウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９０】
別の態様においては、該発明は、例えば細菌、アメーバ、寄生虫又は真菌病原体などの病原体に感染した対象を治療する方法に関する。該方法は、病原体遺伝子と相同でありかつそれを、その切断などによって該オリゴヌクレオチドがサイレンシングできるアラルキル−リガンド−接合オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程及び、好ましくはヒトの対象である対象に対して治療上有効な用量の前記アラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含む。
【０１９１】
標的遺伝子は、成長、細胞壁合成、タンパク質合成、転写、エネルギー代謝、例えばクレブス回路又は毒素産生に関与するものであり得る。かくして、本発明は、マラリアをひき起こすマラリア原虫に感染した患者を治療する方法を提供する。好ましい実施形態においては、マラリア原虫遺伝子の発現は低減される。別の好ましい実施形態おいては、該遺伝子は頂側膜抗原１（ＡＭＡ１）である。好ましい実施形態おいては、マラリア原虫の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９２】
該発明は同様に、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）に感染した患者又は、例えばブルーリ潰瘍などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態においては、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９３】
該発明は同様に、ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に感染した患者又は、例えば結核などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、ヒト型結核菌遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ヒト型結核菌の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９４】
該発明は同様に、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｐｒａｅ）に感染した患者又は、例えばハンセン病などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、ハンセン菌遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、ハンセン菌の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９５】
該発明は同様に、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に感染した患者又は、例えば皮膚及び粘膜の感染症などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、黄色ブドウ球菌遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９６】
該発明は同様に、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に感染した患者又は、例えば肺炎又は小児下気道感染などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、肺炎連鎖球菌遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９７】
該発明は同様に、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に感染した患者又は、例えば連鎖球菌喉又はしょう紅熱などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、化膿連鎖球菌遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、化膿連鎖球菌の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９８】
該発明は同様に、クラミジア肺炎菌（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍａｎｉａｅ）に感染した患者又は、例えば肺炎又は小児下気道感染などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、クラミジア肺炎菌遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、クラミジア肺炎菌の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０１９９】
該発明は同様に、マイコプラズマ肺炎菌（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に感染した患者又は、例えば肺炎又は小児下気道感染などのこの病原体に付随する疾病又は障害を治療する方法をも含んでいる。好ましい実施形態おいては、マイコプラズマ肺炎遺伝子の発現は低減される。好ましい実施形態おいては、マイコプラズマ肺炎の複製に必要とされるヒト遺伝子の発現は低減される。
【０２００】
該発明の別の態様は、例えば炎症性疾患又は障害又は自己免疫疾患又は障害などの望ましくない免疫応答によって特徴づけされる疾患又は障害のリスクを有するか又はそれを患っている対象例えばヒトを治療する方法に関する。該方法は、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子と相同でありかつ例えば切断によりそれをサイレンシングできるアラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程；及び好ましくはヒトである対象に対して前記リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含む。好ましい実施形態おいては、該疾患又は障害は、虚血又は再潅流傷害、例えば急性心筋梗塞、不安定狭心症、心肺バイパス、外科手術例えば血管形成術、例えば経皮経管冠動脈形成術、移植された臓器又は組織例えば移植された心臓又は血管組織に対する応答に付随する虚血又は再潅流傷害、又は血栓症である。好ましい実施形態おいては、該疾患又は障害は、動脈再狭窄、例えば、外科手術例えば、血管形成術例えば経皮経管冠動脈形成術に付随する動脈再狭窄である。好ましい実施形態おいては、該疾患又は障害は、炎症性大腸炎例えばクローン病又は潰瘍性大腸菌である。好ましい実施形態おいては、該疾患又は障害は、感染又は損傷に付随する炎症である。好ましい実施形態おいては、該疾患又は障害は、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、例えばII型糖尿病、関節炎、例えば関節リウマチ又は乾癬性関節炎である。特に好ましい実施形態おいては、該オリゴヌクレオチド作用物質はインテグリン又はそのコリガンド例えばＶＬＡ４、ＶＣＡＭ、ＩＣＡＭをサイレンシングする。特に好ましい実施形態おいては、該オリゴヌクレオチド作用物質はセレクチン又はそのコリガンド例えばＰ−セレクチン、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ）、Ｉ−セレクチン、Ｐ−セレクチン糖タンパク質−１（ＰＳＧＬ−１）をサイレンシングする。特に好ましい実施形態おいては、該オリゴヌクレオチド作用物質は、例えばＣ３、Ｃ５、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、Ｃ３コンバーターゼ、Ｃ５コンバーターゼといった補体系の構成要素をサイレンシングする。
【０２０１】
特に好ましい実施形態おいては、該オリゴヌクレオチド作用物質は、例えばＴＮＦＩ、ＴＮＦＪ、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１Ｊ、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦＲＩ、ＴＮＦＲII、ＩｇＥ、ＳＣＹＡ１１、ＣＣＲ３などのケモカイン又はそのレセプタをサイレンシングする。
【０２０２】
その他の実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、ＧＣＳＦ、Ｇｒｏ１、Ｇｒｏ２、Ｇｒｏ３、ＰＦ４、ＭＩＧ、プロ血小板塩基性タンパク質（ＰＰＢＰ）、ＭＩＰ−１Ｉ、ＭＩＰ−１Ｊ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＣＭＢＫＲ１、ＣＭＢＫＲ２、ＣＭＢＫＲ３、ＣＭＢＫＲ５、ＡＩＦ−１、Ｉ−３０９をサイレンシングする。
【０２０３】
該発明の別の態様は、急性疼痛又は慢性疼痛のリスクを有するか又はそれを患う例えばヒトなどの対象を治療する方法に関する。該方法は、リガンドが芳香族基でありオリゴヌクレオチドが疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子と相同でありかつそれを切断などによってサイレンシングできるリガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程；及び好ましくはヒトの対象である対象に対し、治療上有効な用量の前記アラルキルリガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含む。特に好ましい実施形態おいては、該オリゴヌクレオチド作用物質はイオンチャンネルの構成要素をサイレンシングする。特に好ましい実施形態おいては、該オリゴヌクレオチド作用物質は神経伝達物質レセプタ又はリガンドをサイレンシングする。
【０２０４】
該発明の別の態様は、神経系疾患又は障害のリスクを有するか又はそれを患う例えばヒトなどの対象を治療する方法に関する。該方法は、リガンドが芳香族基でありオリゴヌクレオチドが神経系疾患又は障害を媒介する遺伝子と相同でありかつそれを切断などによってサイレンシングできるリガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程；及び好ましくはヒトである対象に対し、治療上有効な用量の前記アラルキルリガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含む。好ましい実施形態おいては、疾患又は障害はアルツハイマー病又はパーキンソン病である。特に好ましい実施形態おいては、オリゴヌクレオチド作用物質は、アミロイドファミリー遺伝子例えばＡＰＰ；プレセニリン遺伝子、例えばＰＳＥＮ１及びＰＳＥＮ２又はＩ−シヌクレインをサイレンシングする。好ましい実施形態おいては、該疾患又は障害は、神経変性トリヌクレオチド反復障害例えばハンチントン病、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症又は脊髄小脳失調例えばＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３（マッカド・ジョゼフ病）、ＳＣＡ７又はＳＣＡ８である。
【０２０５】
特に好ましい実施形態おいては、オリゴヌクレオチド作用物質はＨＤ、ＤＲＰＬＡ、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ１、ＣＡＣＮＬ１Ａ４、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８をサイレンシングする。
【０２０６】
ヘテロ接合性の喪失（ＬＯＨ）は結果として、例えば遺伝子などの配列についてＬＯＨ部域内での半接合をもたらし得る。その結果、正常な細胞と疾病状態の細胞例えば癌細胞の間に著しい遺伝子的差異が存在し得ることになり、正常細胞と疾病状態の細胞例えば癌細胞の間の有用な差異を提供する。この差異は、遺伝子又はその他の配列が正倍数体細胞内で異型接合であるもののＬＯＨを有する細胞内では半接合であることから発生し得る。ＬＯＨの領域は往々にして遺伝子を含むことになり、その喪失は望ましくない増殖、例えば腫瘍抑制遺伝子及び例えば成長などの正常な機能にとって不可欠であるその他の複数の遺伝子、一部のケースでは１つの遺伝子を含めたその他の配列を促進する。該発明の方法は、一部には、該発明のリガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質で不可欠遺伝子の１つの対立遺伝子を特異的に切断又はサイレンシングすることに依存している。オリゴヌクレオチド作用物質は、それがＬＯＨを有する細胞内に見い出される不可欠遺伝子の単一の対立遺伝子をターゲティングするもののＬＯＨを示さない細胞内に存在する別の対立遺伝子をサイレンシングしないような形で選択される。基本的に、それは２つの対立遺伝子を弁別し、選択された対立遺伝子を優先的にサイレンシングする。基本的に多型、例えばＬＯＨの影響を受けている不可欠遺伝子のＳＮＰなどの多型が、ＬＯＨを有する細胞例えばＬＯＨを有する癌細胞によって特徴づけされる障害のための標的として使用される。例えば、当業者であれば、腫瘍抑制遺伝子の近くにありかつ腫瘍抑制遺伝子を含むＬＯＨ領域内にある不可欠遺伝子を同定することができる。腫瘍抑制遺伝子ｐ５３にきわめて近接したところに位置設定されている遺伝子である、ヒトＲＮＡポリメラーゼIIの大きなサブユニットをコードする遺伝子、ＰＯＬＲ２Ａがこのような遺伝子である。それは癌細胞内のＬＯＨの領域内で発生することが多い。ＬＯＨ領域内で発生し数多くの癌細胞型の中で失なわれているその他の遺伝子としては、複製タンパク質Ａ７０−ｋＤａサブユニット、複製タンパク質Ａ３２−ｋＤ、リボヌクレオチドレダクターゼ、チミジラートシンターゼ、ＴＡＴＡ関連因子２Ｈ、リボソームタンパク質Ｓ１４、真核イニシエーション因子５Ａ、アラニルｔＲＮＡシンテターゼ、システイニルｔＲＮＡシンテターゼ、ＮａＫＡＴＰアーゼ、アルファ−１サブユニット、及びトランスフェリンレセプタを含む群が含まれる。
【０２０７】
従って、該発明の別の態様は、ＬＯＨにより特徴づけられる障害例えば癌を治療する方法に関する。該方法は任意には、ＬＯＨの領域内の１遺伝子の対立遺伝子の遺伝子型を判定する工程そして好ましくは正常な細胞内の遺伝子の両方の対立遺伝子の遺伝子型を判定する工程；ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子を優先的に切断又はサイレンシングするアラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程；及び好ましくはヒトである対象に対して治療上有効な用量の前記リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含む。
【０２０８】
該発明は同様に、本明細書で開示されているアラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質例えば多型性遺伝子の１つの対立遺伝子を優先的にサイレンシング例えば切断できるオリゴヌクレオチド作用物質をも含む。
【０２０９】
別の態様では、該発明は、アラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質で２つ以上の遺伝子を切断又はサイレンシングする方法を提供する。これらの実施形態においては、オリゴヌクレオチド作用物質は、それが２つ以上の遺伝子内に見い出される配列に対し充分な相同性を有するような形で選択される。例えばＡＡＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＡＧＡＴという配列はマウスラミンＢ１、ラミンＢ２、ケラチン複合体２−遺伝子１及びラミンＡ／Ｃの間で保存されている。かくして、この配列にターゲティングされたオリゴヌクレオチド作用物質が、遺伝子コレクション全体を有効にサイレンシングすると思われる。
【０２１０】
該発明は同様に、２つ以上の遺伝子をサイレンシングできるアラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチド作用物質をも含んでいる。
【０２１１】
好ましい実施形態においては、オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。
【０２１２】
該発明の化合物
該発明の化合物は、少なくとも１つのアラルキルリガンドを担持するオリゴヌクレオチドに関係する。アラルキルリガンドは該オリゴヌクレオチド化合物を血清、肝臓、脳及び眼の中に存在するヌクレアーゼによる分解を受けにくいものにする。一部の実施形態においては、該発明の化合物は、アラルキルリガンドが２つのストランドのうちの１つのみに結合されている２本鎖オリゴヌクレオチド配列に関する。一部の実施形態においては、該発明の化合物は、少なくとも１つのアラルキルリガンドが両方のストランドに結合されている２本鎖オリゴヌクレオチド配列に関するものである。一部の実施形態においては、該オリゴヌクレオチドの主鎖はオリゴヌクレオチド化合物の治療又は診断特性を改善させるべく修飾されている。一部の実施形態においては、オリゴヌクレオチド化合物の治療又は診断特性を改善させるべく、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの糖又は少なくとも１つの塩基が修飾された。オリゴヌクレオチド化合物の２つのストランドは相補的又は部分的に相補的である。いずれかのストランド又は両方のストランドがキメラオリゴヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態においては、２本鎖オリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡである。本発明の別の態様は、少なくとも１つのアラルキルリガンドを含む１本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾された糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド内のリン酸塩連結はホスホロチオアート連結で置換されてきた。好ましい実施形態においては、アラルキルリガンドはナプロキセン又はイブプロフェンである。
【０２１３】
オリゴヌクレオチドがｓｉＲＮＡであるケースでは、オリゴヌクレオチドは標的遺伝子に対する充分な相同性をもつ領域を内含すべきであり、ｓｉＲＮＡ作用物質又はそのフラグメントが標的遺伝子のダウンレギュレーションを媒介できるような形で、ヌクレオチドに関して充分な長さを有する。「リボヌクレオチド」又は「ヌクレオチド」という用語は修飾されたＲＮＡ又はヌクレオチド代用物の場合に同じく１つ以上の位置における代用物交換部分又は修飾されたヌクレオチドをも意味するというように理解されることになる。かくして、ｓｉＲＮＡ作用物質は、標的ＲＮＡに対し少なくとも部分的相補性をもつか又はもつ領域を含んでいる。一部の実施形態においては、ｓｉＲＮＡ作用物質は標的ＲＮＡに対し完全に相補的である。ｓｉＲＮＡ作用物質と標的の間には完全な相補性が存在する必要はないが、ｓｉＲＮＡ作用物質又はその切断産物が例えば標的ＲＮＡのＲＮＡｉ切断などによって配列特異的サイレンシングを導くことができるようにするのに充分な対応がなければならない。標的ストランドとの相補性又は相同性度は、アンチセンスストランドにおいて最も重要である。特にアンチセンスストランドにおいて完全な相補性が往々にして望まれるものの、一部の実施形態は、１つ以上、ただし好ましくは６、５、４、３、２個又はそれ未満のミスマッチを標的ＲＮＡに対し含み得る。ミスマッチは末端領域で最も寛容され、存在する場合には、好ましくは１つ以上の領域内例えば５’及び／又は３’末端の６、５、４又は３個のヌクレオチド内部にある。センスストランドは、分子の全体的２本鎖特性を維持するためにアンチセンスストランドと充分相補的であることしか必要でない。
【０２１４】
さらに、ｓｉＲＮＡ作用物質は往々にして修飾されるか又はヌクレオシド代用物を含むことになる。ｓｉＲＮＡ作用物質の１本鎖領域は往々にして修飾されるか又はヌクレオシド代用物を含むことになり、例えば２つの相補的領域を連結する領域であるヘヤピン構造の領域又は未対合領域は、修飾又はヌクレオシド代用物を有することができる。例えばエキソヌクレアーゼに対しｓｉＲＮＡ作用物質の１つ以上の３’−又は５’−末端を安定化させるため又はアンチセンスｓｉＲＮＡ作用物質がＲＩＳＣ内に入るよう有利に作用するための修飾も同様に有利と考えられる。修飾には、Ｃ３（又はＣ６、Ｃ７、Ｃ１２）アミノリンカー、チオールリンカー、カルボキシルリンカー、非ヌクレオチドスペーサ（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１２、非塩基性、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール）、ホスホルアミダイトとして来て別のＤＭＴ−保護されたヒドロキシル基を有しＲＮＡ合成中の多重カップリングを可能にする特別なビオチン又はフルオロセイン試薬が含まれ得る。
【０２１５】
ｓｉＲＮＡ作用物質には、（Ｄｉｃｅｒ（ダイサー）（ベルンスタインら、２００１年、Ｎａｔｕｒｅ、第４０９号：３６３〜３６６頁により切断され得ＲＩＳＣ（ＲＮＡｉ誘発されたサイレンシング複合体）に進入し得る）インターフェロン応答をひき起こすのに充分長いものである分子；及び（同じくＤｉｃｅｒにより切断されかつ／又はＲＩＳＣに進入し得る分子である）インターフェロン応答をひき起こさないように充分短かいものである分子、例えばＤｉｃｅｒ−切断産物に似た分子といったＲＩＳＣ内への進入を可能にするサイズの分子が含まれる。充分短かくてインターフェロン応答をひき起こさない分子は、本明細書ではｓｉＲＮＡ作用物質又は短ｉＲＮＡ作用物質と呼ばれる。使用されている通りの「ｓｉＲＮＡ作用物質又は短ｓｉＲＮＡ作用物質」は、ヒトの細胞中に有害なインターフェロン応答を誘発しないほど充分に短かいｓｉＲＮＡ作用物質を意味し、例えばそれは６０未満ただし好ましくは５０、４０又は３０未満のヌクレオチド対を有する。ｓｉＲＮＡ作用物質又はその切断産物は例えば標的ＲＮＡ好ましくは内因性又は病原体標的ＲＮＡとの関係においてＲＮＡｉを誘発することにより標的遺伝子をダウンレギュレートすることができる。
【０２１６】
ｓｉＲＮＡ作用物質の各ストランドは長さが３０、２５、２４、２３、２２、２１又は２０ヌクレオチド以下であり得る。該ストランドは、好ましくは長さが少なくとも１９ヌクレオチドである。例えば各ストランドの長さは２１〜２５ヌクレオチドの間であり得る。好ましいｓｉＲＮＡ作用物質は１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、又は２５ヌクレオチド対の２重鎖領域、及び２〜３ヌクレオチドの１つ以上のオーバーハング、好ましくは１つ又は２つの３’オーバーハングを有する。
【０２１７】
標的ＲＮＡに対する相同性及び標的遺伝子をダウンレギュレートする能力に加えて、ｓｉＲＮＡ作用物質は以下の特性のうちの１つ以上を有することになる。
【０２１８】
（１）たとえ非常に多数の又は全てのヌクレオシドに対するものであっても、その修飾に関わらず、それは適切な３次元枠組内で塩基（又は修飾済み塩基）を提示して適正な塩基対合を形成し、例えば標的ＲＮＡの切断などにより標的のダウンレギュレーションを可能にするのに充分な相同標的ＲＮＡと２重鎖構造を形成することができるようにし得るアンチセンスストランドを有することになる；
（２）たとえ非常に多数の又は全てのヌクレオシドに対するものであっても、その修飾に関わらず、それはなおも「ＲＮＡ様の」特性を有することになる、すなわちそれは、たとえ排他的でなくても、又は部分的でさえあっても、リボヌクレオチドベースの含有率のＲＮＡ分子の全体的な構造的、化学的及び物理的特性を有することになる。例えば、ｓｉＲＮＡ作用物質は、例えば、全てのヌクレオチド糖が２’ヒドロキシルの代りに例えば２’フルオロを含んでいるようなセンス及び／又はアンチセンスストランドを含有することができる。このデオキシリボヌクレオチド含有作用物質はさらに、ＲＮＡ様の特性を示すものと予想され得る。理論による束縛は望まないものの、電気陰性フッ素は、リボースのＣ２’位に付着させれられた時点で軸方向の配向を好む。フッ素のこの空間的選択性は、それ自体糖に強制的にＣ３’−ｅｎｄｏパッカーを採用させる。これは、ＲＮＡ分子内に見られるものと同じパッカリングモードであり、ＲＮＡ−特徴的Ａ−ファミリータイプらせんを発生させる。さらに、フッ素は、優れた水素結合アクセプタであることから、ＲＮＡ構造を安定化させるものとして知られている水分子と同じ水素結合相互作用に参加できる。一般的に、２’糖位にある修飾された部分が、デオキシリボヌクレオチドのＨ部分よりもさらにリボヌクレオチドのＯＨ部分に特徴的であるＨ結合の中に進入できることが好ましい。好ましいｓｉＲＮＡ作用物質は、その糖の全て又は少なくとも５０、７５、８０、８５、９０又は９５％においてＣ３’−ｅｎｄｏパッカーを示し；ＲＮＡ特徴的Ａ−ファミリタイプらせんを発生させ得るほどの充分な量のその糖の中でＣ３’−ｅｎｄｏパッカーを示し；Ｃ３’−ｅｎｄｏパッカー構造でない２０、１０、５、４、３、２又は１以下の糖を有することになる。
【０２１９】
本明細書で用いられている「１本鎖ｉＲＮＡ作用物質」というのは、単一の分子で作られているｉＲＮＡ作用物質である。これは、ストランド内対合により形成された２重鎖領域を内含でき、例えばそれはヘヤピン又はパン−ハンドル構造であるか又はそれを含み得る。１本鎖ｉＲＮＡ作用物質は好ましくは標的分子との関係においてアンチセンスである。１本鎖ｉＲＮＡ作用物質は、充分に長いため、ＲＩＳＣ内に進入し標的ｍＲＮＡのＲＩＳＣ媒介型切断に参加することができる。１本鎖ｉＲＮＡ作用物質の長さは少なくとも１４、より好ましくは少なくとも１５、２０、２５、２９、３５、４０又は５０ヌクレオチドである。その長さは好ましくは２００、１００又は６０未満のヌクレオチドである。
【０２２０】
ヘヤピンｉＲＮＡ作用物質は、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４又は２５ヌクレオチド対以上の２重鎖領域を有することになる。２重鎖領域は、長さが好ましくは２００、１００又は５０以下となる。２重鎖領域のための好ましい範囲は、長さが１５〜３０、１７〜２３、１９〜２３、及び１９〜２１ヌクレオチド対である。ヘヤピンは好ましくは１本鎖オーバーハング又は好ましくは３’そして好ましくはヘヤピンのアンチセンス側の末端未対合領域を有することになる。好ましいオーバーハングは長さが２〜３ヌクレオチドである。
【０２２１】
キメリックオリゴヌクレオチドつまり「キメラ」は各々少なくとも１つの単量体単位すなわちオリゴヌクレオチド化合物の場合にはヌクレオチドから成る２つ以上の化学的に全く異なる領域を含むオリゴヌクレオチドである。これらのオリゴヌクレオチドは一般的には、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加、細胞摂取の増加そして／又は標的核酸に対する結合親和性の増加を付与するべくオリゴヌクレオチドが修飾されている少なくとも１つの領域を含有している。従ってキメリックオリゴヌクレオチドが使用された場合、より短かいオリゴヌクレオチドで匹敵する結果を得ることができる。該発明のキメリックオリゴヌクレオチドは、上述のように２つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド及び／又はオリゴヌクレオチドミメティックスの複合構造として形成され得る。かかるオリゴヌクレオチドは同様に当該技術分野においてハイブリッド又はギャップマーとも呼ばれてきた。かかるハイブリッド構造の調製について教示する代表的な米国特許としては、各々参照により本明細書に援用されている米国特許第５，０１３，８３０号明細書；同第５，１４９，７９７号明細書；同第５，２２０，００７号明細書；同第５，２５６，７７５号明細書；同第５，３６６，８７８号明細書；同第５，４０３，７１１号明細書；同第５，４９１，１３３号明細書；同第５，５６５，３５０号明細書；同第５，６２３，０６５号明細書；同第５，６５２，３５５号明細書；同第５，６５２，３５６号明細書；同第５，７００，９２２号明細書；及び同第５，９５５，５８９号明細書が含まれるがこれらに限定されるわけではない。一部の実施形態では、キメリックオリゴヌクレオチドはＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡ又はＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡであり、ここでオリゴヌクレオチドの長さは５〜６０ヌクレオチドである。
【０２２２】
例示を目的として、アラルキルリガンドを担持するオリゴヌクレオチドをリガンド、テザー、リンカー及びオリゴヌクレオチドの４つの領域に分けることができる。本発明においては、変数「ｎ」は少なくとも１つであり、リガンドはアラルキル基である。アラルキル基はテザー及びリンカーを介してオリゴヌクレオチドに結合されている。テザーの目的はリガンド又は構造的誘導体をリンカーに対し共有結合により付着させることにある。テザーの構造はリガンドを結合するのに用いられる官能基により指示される。他方では、リンカーはテザーに対しオリゴヌクレオチドを共有結合により結び付けるのに役立つ。好ましい実施形態においては、リンカーは固相合成技術に適している。可変的領域の各々についてのさらに詳細な論述が以下に提示されている。
【０２２３】
2008501319.tif 000002
リガンド
本発明では、リガンドはアラルキル基例えば２−アリールプロパノイル部分である。リガンドの構造的特徴は、リガンドがインビボで少なくとも１つのタンパク質に結合することになるような形で選択される。一部の実施形態においては、リガンドの構造的特徴は、血清、血管又は細胞タンパク質にリガンドが結合するような形で選択される。一部の実施形態においては、リガンドの構造的特徴は、アルブミン、免疫グロブリン、リポタンパク質、α−２−マクログロブリン又はα−１−糖タンパク質に対する結合を促進する。
【０２２４】
該発明のリガンド接合オリゴヌクレオチドは、リガンドに結合されている少なくとも１つのヌクレオシドを含有する。一部のケースでは、別々のアラルキルリガンドに対し個別に共有結合している３、４、５、１０又は１５のヌクレオチドが存在する。一部のケースでは、リガンドは末端ヌクレオシドの５’位又は３’位に結合される。一部のケースでは、アラルキルリガンドは末端ヌクレオシドの５’位と３’位の両方に結合される。一部のケースでは、リガンドが、オリゴヌクレオチドの３’末端にあるヌクレオシドの３位の両方に結合されている。一部のケースでは、リンカーは２つのヌクレオシドの間の共有結合連結を形成し、該リンカーは同様にテザーを介してリガンドにも結合されている。一部のケースでは、リンカーが２つのヌクレオシドの間に共有結合連結を形成し該リンカーがテザーを介してリガンドにも結合されている場合、ヘヤピン構造が形成される。一部のケースでは、２つ以上のリガンドがテザーに結合されている。図１及び１０は、リガンドをオリゴヌクレオチドに付着できる複数の方法を例示している。
【０２２５】
一部の実施形態では、リガンドはナプロキセン又はその構造的誘導体である。ナプロキセンの合成のための手順は、米国特許第３，９０４，６８２号明細書及び米国特許第４，００９，１９７号明細書内に見い出すことができる。ナプロキセンは、（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸という化学名を有し、構造は以下に示されている。
【化１】
2008501319.tif 000003
【０２２６】
一部の実施形態では、リガンドはイブプロフェン又はイブプロフェンの構造的誘導体である。イブプロフェンの合成のための手順は米国特許第３，２２８，８３１号明細書内に見い出すことができる。イブプロフェンの構造は以下に示されている。
【化２】
2008501319.tif 000004
【０２２７】
さまざまな付加的なリガンドが図３−９に提示されている。
【０２２８】
オリゴヌクレオチド及びリンカー
ヌクレオシドは、含リン又は非含リンの共有結合によるヌクレオシド間連結によって連結される。同定を目的として、かかる接合ヌクレオシドをリガンド担持ヌクレオシド又はリガンドヌクレオシド接合体として特徴づけすることができる。その配列内部でヌクレオシドに抱合されたアラルキルリガンドを有する連結されたヌクレオシドは、抱合されていない同様のオリゴヌクレオチドと比較した場合に、増強されたオリゴヌクレオチド活性を示すことになる。
【０２２９】
本発明のアラルキル−リガンド接合オリゴヌクレオチドは同様に、リガンドがリンカー基の仲介なくヌクレオシド又はヌクレオチドに対し直接付着されている、連結ヌクレオシドとオリゴヌクレオチドの接合体をも含んでいる。リガンドは好ましくは、そのカルボキシル、アミノ又はオキソ基において連結基を介して付着され得る。標準的な連結基はエステル、アミド又はカルバマート基であり得る。
【０２３０】
本発明のリガンド接合オリゴヌクレオチド内で使用するように想定された好ましい修飾オリゴヌクレオチドの特定的な例としては、修飾された主鎖又は非天然ヌクレオシド間連結を含むオリゴヌクレオチドが含まれる。ここで定義されているように、修飾された主鎖又はヌクレオシド間連結を有するオリゴヌクレオチドには、主鎖内にリン原子を保持するもの及び主鎖内にリン原子を有していないものが含まれる。該発明の目的では、その糖間主鎖内にリン原子をもたない修飾オリゴヌクレオチドは同様に、オリゴヌクレオシドであるとみなすこともできる。
【０２３１】
特異的オリゴヌクレオチド化学修飾について以下で記載する。既定の化合物内の全ての位置が均等に修飾される必要はない。換言すると、単一のオリゴヌクレオチド化合物又はさらにはその単一のヌクレオチドの中に、２つ以上の修飾を取込むことができる。
【０２３２】
好ましい修飾されたヌクレオシド間連結又は主鎖としては、例えば、ホスホロチオアート、キラルホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及び３’−アルキレンホスホナート及びキラルホスホナートを含むその他のアルキルホスホナート、ホスフィナート、３’−アミノホスホルアミダート及びアミノアルキルホスホラミダードを含むホスホルアミダート、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、正常な３’−５’連結を有するボラノホスファート、これらの２’−５’連結類似体、及びヌクレオシド単位の隣接する対が３’−５’から５’−３’に又は２’−５’から５’−２’に連結されている逆転した極性をもつものが含まれる。さまざまな塩、混合塩及び遊離酸形態も同様に内含される。
【０２３３】
上述のリン原子含有連結の調製に関する代表的な米国特許には、各々参照により本明細書に援用されている米国特許第３，６８７，８０８；同第４，４６９，８６３号明細書；同第４，４７６，３０１号明細書；同第５，０２３，２４３号明細書；同第５，１７７，１９６号明細書；同第５，１８８，８９７号明細書；同第５，２６４，４２３号明細書；同第５，２７６，０１９号明細書；同第５，２７８，３０２号明細書；同第５，２８６，７１７号明細書；同第５，３２１，１３１号明細書；同第５，３９９，６７６号明細書；同第５，４０５，９３９号明細書；同第５，４５３，４９６号明細書；同第５，４５５，２３３号明細書；同第５，４６６，６７７号明細書；同第５，４７６，９２５号明細書；同第５，５１９，１２６号明細書；同第５，５３６，８２１号明細書；同第５，５４１，３０６号明細書；同第５，５５０，１１１号明細書；同第５，５６３，２５３号明細書；同第５，５７１，７９９号明細書；同第５，５８７，３６１号明細書；同第５，６２５，０５０号明細書；及び同第５，６９７，２４８号明細書が含まれるがこれらに限定されるわけではない。
【０２３４】
中にリン原子を含まない好ましい修飾されたヌクレオシド間連結又は主鎖（すなわちオリゴヌクレオシド）は、短鎖アルキル又はシクロアルキル糖間連結、混合型ヘテロ原子及びアルキル又はシクロアルキル糖間連結又は１つ以上の短鎖ヘテロ原子又は複素環式糖間連結により形成されている主鎖を有している。これらには、モルフォリノ連結（一部ヌクレオシドの糖部分で形成されているもの）を有するもの；シロキサン主鎖；スルフィド、スルホキシド及びスルホン主鎖；ホルムアセチル及びチオホルムアセチル主鎖；メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル主鎖；アルケン含有主鎖；スルファマート主鎖；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ主鎖；スルホナート及びスルホンアミド主鎖；アミド主鎖；及び混合型Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２構成要素部分を有するその他のものが含まれる。
【０２３５】
上述のオリゴヌクレオシドの調製に関する代表的な米国特許としては、参照により本明細書に援用されている米国特許第５，０３４，５０６号明細書；５，１６６，３１５号明細書；５，１８５，４４４号明細書；５，２１４，１３４号明細書；５，２１６，１４１号明細書；５，２３５，０３３号明細書；５，２６４，５６２号明細書；５，２６４，５６４号明細書；５，４０５，９３８号明細書；５，４３４，２５７号明細書；５，４６６，６７７号明細書；５，４７０，９６７号明細書；５，４８９，６７７号明細書；５，５４１，３０７号明細書；５，５６１，２２５号明細書；５，５９６，０８６号明細書；５，６０２，２４０号明細書；５，６１０，２８９号明細書；５，６０２，２４０号明細書；５，６０８，０４６号明細書；５，６１０，２８９号明細書；５，６１８，７０４号明細書；５，６２３，０７０号明細書；５，６６３，３１２号明細書；５，６３３，３６０号明細書；５，６７７，４３７号明細書及び５，６７７，４３９号明細書が含まれるがこれらに限定されるわけではない。
【０２３６】
その他の好ましいオリゴヌクレオチドミメティクスにおいては、ヌクレオシド単位の糖及びヌクレオシド間連結すなわち主鎖は両方共、新規の基で交換されている。核酸塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されてきた、かかるオリゴヌクレオチドの１つであるオリゴヌクレオチドミメティクスは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物内では、オリゴヌクレオチドの糖−主鎖はアミド含有主鎖特にアミノエチルグリシン主鎖で交換される。核酸塩基は保持され主鎖のアミド部分の原子に対し直接的又は間接的に結合される。ＰＮＡ化合物の調製について教示する代表的な米国特許としては、各々参照により本明細書に援用されている米国特許第５，５３９，０８２号明細書；同第５，７１４，３３１号明細書及び同第５，７１９，２６２号明細書が含まれるがこれらに限定されるわけではない。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、ニールセン（Ｎｉｅｌｓｅｎ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９１年、第２５４号、１４９７頁に見い出すことができる。
【０２３７】
本発明の一部の好ましい実施形態は、ホスホロチオアート連結を伴うオリゴヌクレオチド及びヘテロ原子主鎖を伴うオリゴヌクレオシドそして特に、上述の米国特許第５，４８９，６７７号明細書の−ＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−［メチレン（メチルイミノ）又はＭＭＩ主鎖として知られているもの］、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、及び−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２［なおここで未変性ホスホジエステル主鎖は−Ｏ−Ｐ−Ｏ−ＣＨ２−として表わされている］、及び上述の米国特許第５，６０２，２４０号明細書のアミド主鎖を利用している。同様に好ましいのは、上述の米国特許第５，０３４，５０６号明細書のモルフォリノ主鎖構造をもつオリゴヌクレオチドである。
【０２３８】
本発明のリガンド接合オリゴヌクレオチドの中で利用されるオリゴヌクレオチドは、付加的に又は代替的に核酸塩基（往々にして当該技術分野においては単に「塩基」と呼ばれる）の修飾又は置換を含み得る。本明細書で使用されているように、「未修飾」又は「天然」の核酸塩基には、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、及びピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を内含する。修飾された核酸塩基には、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ハイポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル及びアデニン及びグアニンのその他のアルキル誘導体、２−プロピル及びアデニン及びグアニンのその他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシン、５−プロピニルウラシル及びシトシン、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及びその他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル及びその他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニン及び３−デアザグアニン及び３−デアザアデニンといったようなその他の合成及び天然核酸塩基が含まれる。
【０２３９】
さらなる核酸塩基には、米国特許第３，６８９，８０８号明細書内に開示されているもの、「Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、８５８〜８５９頁、クロシュヴィッツ（Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ）、Ｊ．Ｌ、編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９０年、中で開示されているもの、エングリッシュ（Ｅｎｇｌｉｓｃｈ）ら、「Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１年、第３０号、６１３頁により開示されているもの、及びサンヴィ（Ｓａｎｇｈｖｉ）Ｙ．Ｓ．１５章、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、２８９〜３０２頁、クルック（Ｃｒｏｏｋｅ）、Ｓ．Ｔ．及びルブルー（Ｌｅｂｌｅｕ）、Ｂ．編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９３年により開示されているものが含まれる。これらの核酸塩基のうちのいくつかは、該発明のオリゴヌクレオチドの結合親和性を増大させるために特に有用である。これらには、５−置換ピリミジン、６−アゼピリミジン及びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン（２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンを含む）が含まれる。５−メチルシトシン置換は、核酸２重鎖の安定性を０．６〜１．２℃だけ増大させることが示されてきており（前掲書、２７６〜２７８頁）、現在好まれている塩基置換であり、２’−メトキシエチル糖修飾と組合わされる場合にはさらに一層好ましい。
【０２４０】
上述の修飾された核酸塩基ならびにその他の修飾された核酸塩基のうちのいくつかの調製に関する代表的米国特許としては、全て参照により本明細書に援用されている上述の米国特許第６８７，８０８号明細書ならびに米国特許第４，８４５，２０５号明細書；同第５，１３０，３０２号明細書；同第５，１３４，０６６号明細書；同第５，１７５，２７３号明細書；同第５，３６７，０６６号明細書；同第５，４３２，２７２号明細書；同第５，４５７，１８７号明細書；同第５，４５９，２５５号明細書；同第５，４８４，９０８号明細書；同第５，５０２，１７７号明細書；同第５，５２５，７１１号明細書；同第５，５５２，５４０号明細書；同第５，５８７，４６９号明細書；同第５，５９４，１２１号明細書；同第５，５９６，０９１号明細書；同第５，６１４，６１７号明細書；同第５，６８１，９４１号明細書及び同第５，８０８，０２７号明細書が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０２４１】
一部の実施形態においては、本発明のリガンド接合オリゴヌクレオチドにおいて利用されるオリゴヌクレオチドは付加的に又は代替的に１つ以上の置換された糖部分を含み得る。好ましいオリゴヌクレオチドは、２’位にＯＨ；Ｆ；Ｏ−；Ｓ−又はＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−又はＮ−アルケニル又はＯ、Ｓ又はＮ−アルキニルのうちの１つを含み、ここでアルキル、アルケニル及びアルキニルは、置換又は未置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、又はＣ２〜Ｃ１０アルケニル及びアルキニルであり得る。特に好ましいのはＯ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］］２、であり、ここでｎ及びｍは１〜約１０である。その他の好ましいオリゴヌクレオチドは２’位に、Ｃ１〜Ｃ１０低アルキル、置換低アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル又はＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポータ基、挿入物、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善するための基又はオリゴヌクレオチドの薬力学特性を改善するための基及び類似の特性を有するその他の置換基のうちの１つを含む。好ましい修飾には、２’−メトキシエトキシ［２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）又は２’−ＭＯＥとしても知られている２’−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３］（マルタン（Ｍａｒｔｉｎ）ら、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、１９９５年、第７８号、４８６頁）すなわち１つのアルコキシアルコキシ基が含まれる。さらに好ましい修飾には、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、その内容が参照により援用されている１９９８年１月３０日出願の米国特許第６，１２７，５３３号明細書中に記載されている通りの２’−ＤＭＡＯＥとしても知られているＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基が含まれる。
【０２４２】
その他の好ましい修飾には、２’−メトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）及び２’−フルオロ（２’−Ｆ）が含まれる。類似の修飾は、オリゴヌクレオチド上のその他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上の糖の３’位又は２’−５’連結されたオリゴヌクレオチド内でも行なうことができる。
【０２４３】
本明細書で使用される「糖置換基」又は「２’置換基」という用語は、酸素原子を伴う又は伴わないリボフラノシル部分の２’位に付着された基を含む。糖置換基は、フルオロ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアルコキシ、保護されたＯ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアミノアルキル、Ｏ−アルキルイミダゾール及び式（Ｏ−アルキル）ｍのポリエステル（式中ｍは１〜約１０である）を含むが、これらに限定されるわけではない。これらのポリエーテル中好ましいのは、線形及び環状ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び（ＰＥＧ）含有基例えばクラウンエーテル及び、各々その全体が参照により本明細書に援用されているオオウチ（Ｏｕｃｈｉ）ら、（Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、１９９２年、第９号：９３頁）；ラヴァシオ（Ｒａｖａｓｉｏ）ら、（Ｊ  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９１年、第５６号：４３２９頁）；及びＤｅｌｇａｒｄｏら、（Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  １９９２年、第９号：２４９頁により開示されているものである。さらなる糖修飾は、クック（Ｃｏｏｋ）（Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、１９９１年、第６号：５８５〜６０７頁によって開示されている。フルオロ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルイミダゾール、Ｏ−アルキルアミノアルキル及びアルキルアミノ置換は、その全体が参照により本明細書に援用されている「２’及び５’置換を伴うピリミジンヌクレオチドを有するオリゴマー化合物」という題の米国特許第６，１６６，１９７号明細書の中で記載されている。
【０２４４】
本発明に適したさらなる糖置換基としては、Ｒが独立して水素、保護基又は置換又は未置換アルキル、アルケニル又はアルキニルである２’−ＳＲ及び２’−ＮＲ２基が含まれる。２’−ＳＲヌクレオシドは、その全体が参照により本明細書に援用されている米国特許第５，６７０，６３３号明細書の中で開示されている。２’−ＳＲ単量体シントンの取込みについては、ハム（Ｈａｍｍ）ら、（Ｊ  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９７年、第６２号：３４１５〜３４２０頁によって開示されている。２’−ＮＲヌクレオシドは、ゲッティンゲン（Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ）、Ｍ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９６年、第６１号、６２７３〜６２８１頁；及びポルシン（Ｐｏｌｕｓｈｉｎ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９９６年、第３７号、３２２７〜３２３０頁により開示されている。本発明に適したさらなる代表的２’−置換基には、式Ｉ又はIIのうちの一方を有するものが含まれる。
【化３】
2008501319.tif 000005
式中、
ＥはＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｎ（Ｑ３）（Ｑ４）又はＮ＝Ｃ（Ｑ３）（Ｑ４）であり、各Ｑ３及びＱ４は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ジアルキルアミノアルキル、窒素保護基、テザーされた又はテザーされていない接合体基、固体支持体に対するリンカーであるか、又はＱ３とＱ４は合わさって窒素保護基又は場合によってＮ及びＯから選択された少なくとも１つの付加的ヘテロ原子を含む環状構造を形成し；
ｑ１は１〜１０の整数であり；
ｑ２は１〜１０の整数であり；
ｑ３は０又は１であり；
ｑ４は０、１又は２であり；
各Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は独立してＣ４−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ５−Ｃ１４アリール又はＣ３−Ｃ１５ヘテロシクリルであって、ここで前記ヘテロシクリル基内のヘテロ原子は酸素、窒素及び硫黄の中から選択されており；
Ｚ４はＯＭ１、ＳＭ１又はＮ（Ｍ１）２であり；各々のＭ１は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８ハロアルキル、Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２又はＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２であり、Ｍ２はＨ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｚ５はＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、Ｎ（Ｑ３）（Ｑ４）、ＯＱ３、ハロ、ＳＱ３又はＣＮである。
【０２４５】
式Ｉの代表的な２’−Ｏ−糖置換基は、全体が参照により本明細書に援用されている「キャップド２’−オキシエトキシオリゴヌクレオチド」という題の米国特許第６，１７２，２０９号明細書の中で開示されている。式IIの代表的な環式２’−Ｏ−糖置換基は、全体が参照により本明細書に援用されている「立体構造的に予備組織されているＲＮＡターゲティングされた２’修飾オリゴヌクレオチド」という題の米国特許第６，２７１，３５８号明細書の中で開示されている。
【０２４６】
リボシル環上にＯ置換を有する糖も同じく本発明に適している。環Ｏのための代表的な置換には、Ｓ、ＣＨ２、ＣＨＦ及びＣＦ２が含まれているがこれらに限定されるわけではない。例えば、セクリスト（Ｓｅｃｒｉｓｔ）ら、Ａｂｓｔｒａｃｔ  ２１、Ｐｒｏｇｒａｍ  ＆  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ、Ｔｅｎｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｏｕｎｄｔａｂｌｅ、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ、Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐａｒｋ  Ｃｉｔｙ、Ｕｔａｈ、９月、１６〜２０頁、１９９２年を参照のこと。
【０２４７】
オリゴヌクレオチドは同様に、ペントフラノシル糖の代りにシクロブチル部分といったような糖ミメティクスをも有することができる。かかる修飾糖の調製に関する代表的な米国特許としては、全て参照により本明細書に援用されている米国特許第４，９８１，９５７号明細書；同第５，１１８，８００号明細書；同第５，３１９，０８０号明細書；同第５，３５９，０４４号明細書；同第５，３９３，８７８号明細書；同第５，４４６，１３７号明細書；同第５，４６６，７８６号明細書；同第５，５１４，７８５号明細書；同第５，５１９，１３４号明細書；同第５，５６７，８１１号明細書；同第５，５７６，４２７号明細書；同第５，５９１，７２２号明細書；同第５，５９７，９０９号明細書；同第５，６１０，３００号明細書；同第５，６２７，０５３１号明細書；同第５，６３９，８７３号明細書；同第５，６４６，２６５号明細書；同第５，６５８，８７３号明細書；同第５，６７０，６３３号明細書；同第５，７００，９２０号明細書；及び同第５，８５９，２２１号明細書が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０２４８】
オリゴヌクレオチド上のその他の位置特に３’末端ヌクレオチド上の糖の３’位置で付加的な修飾を行なうこともできる。例えば、本発明のリガンド接合オリゴヌクレオチドの１つの付加的な修飾には、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布又は細胞摂取を増強させる１つ以上の付加的な非リガンド部分又は接合体をオリゴヌクレオチドに化学的に連結させることが関与する。かかる部分には、脂質部分、例えばコレステロール部分レッシンガー（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９年、第８６号、６５５３頁）、コール酸（マノハランら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ、１９９４年、第４号、１０５３頁）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（マノハランら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９２年、第６６０号、３０６頁；マノハランら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、１９９３年、第３号、２７６５頁）、チオコレステロール（オーベルハウザー（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ）ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９２年、第２０号、５３３頁）、脂肪族鎖、例えばドデカンジオール又はウンデシル残渣（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９９１年、第１０号、１１１頁；カバノフ（Ｋａｂａｎｏｖ）ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、１９９０年、第２５９号、３２７頁；スヴィナルチャク（Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ）ら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ、１９９３年、第７５号、４９頁）、ホスホリピド、例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロール又はトリエチルアンモニウムｌ，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホナート（マノハランら．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９９５年、第３６号、３６５１頁；シーア（Ｓｈｅａ）ら．、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９０年、１８、３７７７）、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖（マノハランら．、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９５年、第１４号、９６９頁）、又はアダマンタン酢酸（マノハランら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、１９９５年、第３６号、３６５１頁）、パルミチル部分（ミシュラ（Ｍｉｓｈｒａ）ら．、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１９９５年、第１２６４号、２２９頁）、又はオクタデシルアミン又はヘキシルアミノカルボニルオキシコレステロール部分（クルークら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９６年、第２７７号、９２３頁）が含まれるがこれらに限定されるわけではない。
【０２４９】
かかるオリゴヌクレオチド接合体の調製に関する代表的な米国特許には、各々参照により本明細書に援用されている米国特許第４，８２８，９７９号明細書；同第４，９４８，８８２号明細書；５，２１８，１０５号明細書；同第５，５２５，４６５号明細書；同第５，５４１，３１３号明細書；同第５，５４５，７３０号明細書；同第５，５５２，５３８号明細書；同第５，５７８，７１７号明細書、同第５，５８０，７３１号明細書；同第５，５８０，７３１号明細書；同第５，５９１，５８４号明細書；同第５，１０９，１２４号明細書；同第５，１１８，８０２号明細書；同第５，１３８，０４５号明細書；同第５，４１４，０７７号明細書；同第５，４８６，６０３号明細書；同第５，５１２，４３９号明細書；同第５，５７８，７１８号明細書；同第５，６０８，０４６号明細書；同第４，５８７，０４４号明細書；同第４，６０５，７３５号明細書；同第４，６６７，０２５号明細書；同第４，７６２，７７９号明細書；同第４，７８９，７３７号明細書；同第４，８２４，９４１号明細書；同第４，８３５，２６３号明細書；同第４，８７６，３３５号明細書；同第４，９０４，５８２号明細書；同第４，９５８，０１３号明細書；同第５，０８２，８３０号明細書；同第５，１１２，９６３号明細書；同第５，２１４，１３６号明細書；同第５，０８２，８３０号明細書；同第５，１１２，９６３号明細書；同第５，２１４，１３６号明細書；同第５，２４５，０２２号明細書；同第５，２５４，４６９号明細書；同第５，２５８，５０６号明細書；同第５，２６２，５３６号明細書；同第５，２７２，２５０号明細書；同第５，２９２，８７３号明細書；同第５，３１７，０９８号明細書；同第５，３７１，２４１号明細書、同第５，３９１，７２３号明細書；同第５，４１６，２０３号明細書；同第５，４５１，４６３号明細書；同第５，５１０，４７５号明細書；同第５，５１２，６６７号明細書；同第５，５１４，７８５号明細書；同第５，５６５，５５２号明細書；同第５，５６７，８１０号明細書；同第５，５７４，１４２号明細書；同第５，５８５，４８１号明細書；同第５，５８７，３７１号明細書；同第５，５９５，７２６号明細書；同第５，５９７，６９６号明細書；同第５，５９９，９２３号明細書；同第５，５９９，９２８号明細書及び同第５，６８８，９４１号明細書が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０２５０】
本発明は同様に、オリゴヌクレオチドの内部の特定の位置に関して実質的にキラル的に純粋であるオリゴヌクレオチドを利用する組成物をも含んでいる。実質的にキラル的に純粋であるオリゴヌクレオチドの例としては、少なくとも７５％のＳｐ又はＲｐであるホスホチオアート連結を有するもの（クック（Ｃｏｏｋ）ら、米国特許第５，５８７，３６１号明細書）及び実質的にキラル的に純粋である（Ｓｐ又はＲｐ）アルキルホスホナート、ホスホルアミダイト又はホスホトリエステル連結を有するもの（クック、米国特許第５，２１２，２９５号明細書及び５，５２１，３０２号明細書）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０２５１】
本発明はさらに、リボザイムを利用するリガンド抱合されたオリゴヌクレオチドを包含する。きわめて特異的なエンドリボヌクレアーゼ活性を触媒する合成ＲＮＡ分子及びその誘導体がリボザイムとして知られている（一般に、ハーゼルオフ（Ｈａｓｅｌｏｆｆ）らに対する米国特許第５，５４３，５０８号明細書及びグッドチャイルド（Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ）らに対する米国特許第５，５４５，７２９号明細書を参照のこと）。切断反応は、ＲＮＡ分子自体により触媒される。天然に発生するＲＮＡ分子においては、自己触媒型切断の部位は、ＲＮＡ二次構造の高度に保存された領域内に位置設定されている（ブザヤン（Ｂｕｚａｙａｎ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９８６年、第８３号、８８５９頁；フォースター（Ｆｏｒｓｔｅｒ）ら、Ｃｅｌｌ、１９８７年、第５０号、９頁）。天然に発生する自己触媒ＲＮＡ分子が、高度の特異性をもって特定の細胞又は病原性ＲＮＡ分子に対しターゲティングされ得るリボザイムを生成するべく修飾されてきた。かくして、リボザイムはアンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ一般的目的（すなわち特異的遺伝子の発現変調）に役立ち、オリゴヌクレオチドと同様に、有意な１本鎖部分を有する核酸である。すなわち、リボザイムはオリゴヌクレオチドと実質的な化学的及び機能的同一性を有し、かくして本発明の目的にとって等価であるとみなされる。
【０２５２】
一部のケースでは、オリゴヌクレオチドは非リガンド基により修飾され得る。数多くの非リガンド分子が、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布又は細胞摂取を増強するためにオリゴヌクレオチドに抱合されてきており、かかる接合を実施するための手順が科学文献の中で利用可能である。かかる非リガンド部分は脂質部分例えばコレステロール（レッシンガーら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９年、第８６号：６５５３頁）、コール酸（マノハランら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９９４年、第４号：１０５３頁）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（マノハランら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９２年、第６６０号：３０６頁；マノハランら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、１９９３年、第３号：２７６５頁）、チオコレステロール（オーベルハウザー（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ）ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９２年、第２０号：５３３頁）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオール又はウンデシル残渣（セゾン・ベモラス）ら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９９１年、第１０号：１１１頁；カバノフ（Ｋａｂａｎｏｖ）ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、１９９０年、第２５９号：３２７頁；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ、１９９３年、７５：４９）、リン脂質、例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロール又はトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホナート（マノハランら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、１９９５年、第３６号：３６５１頁；シーアら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、１９９０年、第１８号：３７７７頁）、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖（マノハランら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９５年、第１４号：９６９頁）、又はアダマンタン酢酸（マノハランら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、１９９５年、第３６号：３６５１頁）、パルミチル部分（ミシュラら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１９９５年、第１２６４号：２２９頁）、又はオクタデシルアミン又はヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（クロークら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９６年、第２７７号：９２３頁）を内含していた。かかるオリゴヌクレオチド接合体の調製を教示する代表的な米国特許が上記で列挙された。標準的な接合プロトコルには、配列の１つ以上の位置にアミノリンカーを担持するオリゴヌクレオチドの合成が関与する。このときアミノ基は、適切なカップリング又は活性化試薬を用いて抱合されつつある分子と反応させられる。抱合反応は、溶液相でオリゴヌクレオチドの切断の後か又は固体支持体になおも結合しているオリゴヌクレオチドを用いて実施可能である。ＨＰＬＣによるオリゴヌクレオチド接合体の精製は一般的に、純粋な抱合体を提供する。
【０２５３】
代替的には、抱合されつつある分子を、その分子の中に存在するアルコール基を介して、又はホスフィチル化され得るアルコール基を担持するリンカーの付着により、ホスホルアミダイトといったような構築ブロックへと転換させることができる。
【０２５４】
重要なことに、これらのアプローチの各々をリガンド抱合オリゴヌクレオチドの合成のために使用することが可能である。アミノ連結されたオリゴヌクレオチドを、カップリング試薬の使用を介してリガンドと直接的にか又はＮＨＳ又はペントフルオロフェノラートエステルとしてのリガンドの活性化の後に、カップリングさせることができる。リガンドホスホルアミダイトは、カルボキシル基のうちの１つに対するアミノヘキサノールリンカーの付着とそれに続く末端アルコール官能基のホスフィチル化を介して合成され得る。システアミンといったその他のリンカーも同様に、合成オリゴヌクレオチド上に存在するクロロアセチルリンカーに対する抱合のために利用し得る。
【０２５５】
テザー
該発明の好ましい実施形態においては、アラルキルリガンドは、リガンド接合オリゴヌクレオチドを形成するべくテザー及び連結基を介してオリゴヌクレオチドに付着される。該発明の好ましいテザーとしては、６−アミノアルコキシリンカー、６−アミノアルキルアミノリンカー、システアミン、ヘテロ２官能リンカー、ホモ２官能リンカー及びユニバーサルテザー（３−ジメトキシトリチルオキシ−２−アミノプロパノールから誘導されたもの）が含まれるが、これらに限定されるわけではない。該発明のリガンド接合オリゴヌクレオチドの合成のための特に好ましいテザーは、６−アミノヘキシルオキシ基である。さまざまなヘテロ２官能及びホモ２官能テザーがピアス社（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．）（イリノイ州、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ）から入手可能である。このようなヘテロ２官能及びホモ２官能テザーは、ヌクレオシドに対してリガンドを連結させるために有用な拡張されたテザーを形成させる目的で６−アミノアルコキシ及び６−アミノアルキルアミノ部分と併わせて特に有用である。市販されているさらなる有用なテザーは、共にグレン・リサーチ・コーポレーション（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ、ヴァージニア州）から入手可能である５’−Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ  Ｃ６及び３’−Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ試薬である。５’−Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ  Ｃ６は同様に、Ａｍｉｎｏｌｉｎｋ−２としてＡＢＩ  （アプライド・バイオシステムズ  Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州からも入手可能であり、一方３’−Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒは、クローンテック・ラボラトリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ）Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、カリフォルニア州）からも入手可能である。さらに、ヌクレオシドに予め付着されたテザーを担持するヌクレオチド類似体がグレン・リサーチ・コーポレーションから「Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ−ｄＴ」という商標名で市販されている。このヌクレオシド−テザー試薬つまり、ピリミジン環の５位に［Ｎ−（７−トリフルオロアセチルアミノ−ヘプチル）−３−アクリルアミド］置換基を有するウリジン誘導体は、ヤブロンスキー（Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ）ら、（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９８６年、１４：６１１５）の手順に従って合成される。
【０２５６】
一部のケースでは、リガンド分子の接合は、ヌクレオシド上のアミノテザーに対するリガンドの接合により達成される。これは複数のやり方で行なうことができる。例えば、該発明のリガンド−ヌクレオシド接合体は、ヌクレオシド上の連結基のアミノ官能基とリガンドのカルボキシラート官能基を接合させるべくＥＤＣ／スルホＮＨＳ（すなわち１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド）を用いてヌクレオシドに対しリガンド分子を接合させることによって調製可能である。
【０２５７】
本発明のリガンド接合オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド配列上のテザー基のアミノ官能基に対しリガンド分子上の求核位置を連結させるため、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）又はスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロ−ヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）といったようなヘテロ２官能テザーを介してヌクレオシド配列にリガンド（例えばナプロキセン）分子を接合させることによって調製可能である。この機序により、ＭＢＳ又はＳＭＣＣマレイミドリンカーとの連結ヌクレオシド上のテザーのアミノ基の反応によって、オリゴヌクレオシド−マレイミド接合体が形成される。該接合体は次いでリガンドと反応させられる。
【０２５８】
代替的には、オリゴヌクレオチド配列上のテザーのアミノ基に対しリガンド上のアミノ官能基を連結させるため、ジスクシンイミジルスベラート（ＤＳＳ）といったようなホモ２官能テザーを介してオリゴヌクレオチド又はヌクレオシドにリガンド分子を接合させることによって、リガンド接合オリゴヌクレオチドを調製することができる。この機序によって、ジスクシンイミジルスベラートテザーとのヌクレオシド配列上のテザーのアミノ基の反応により、オリゴヌクレオシドスクシンイミジル接合体が形成される。このジスクシンイミジルスベラートテザーはヌクレオシド上のアミンテザーとカップリングしてテザーのサイズを拡張させる。このとき拡張されたテザーはリガンド分子のアミノ基と反応させられる。
【０２５９】
該発明の一部の化合物について以下でさらに詳細に記載する。重要なことは、以下で記載する実施形態が本発明のいくつかの態様及び実施形態を例示するためのものにすぎず、該発明を限定することを意図したものではないという点である。
【０２６０】
本発明の一態様は、第１のストランドと第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドにおいて、前記第１のストランド及び前記第２のストランドが独立して
【化４】
2008501319.tif 000006
という式Ｉで表わされ、
式中
Ｘは、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、又は−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｘ１は
【化５】
2008501319.tif 000007
又は−Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｚ１は、各出現について独立してＯ又はＳを表わし；
Ｚ２は、各出現について独立して−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、又はアルキルを表わし；
Ｒ１及びＲ２は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（ＣＲ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ−Ａ１０−［Ａ１１−（Ａ５）ｗ］ｙを表わし、
Ｒ３及びＲ４は、Ｈ又はアルキルを表わすか；そうでなければＲ３及びＲ４は一緒になって３−、４−、５−、６−又は７−員環を形成し；
Ｒ５は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２を表わし；
Ｒ６は、各出現について独立してＨ、アルキル又は−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表わし；
Ｒ７は、各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＢ３を表わし；
Ｒ８は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし；
Ｒ９は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし；
Ｒ１０はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ１１は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし；
ｎ１及びｎ２は独立して０以上２１以下を表わし；
ｍは各出現について独立して１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｍ１は各出現について独立して０、１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｖは各出現について独立して１、２、３、又は４を表わし；
ｗは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２又は３を表わし；
ｙは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２、３、４又は５を表わし；
Ｍは各出現について独立して＋１という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし；
Ａ１は各出現について独立して
【化６】
2008501319.tif 000008
を表わし；
Ａ２は各出現について独立して
【化７】
2008501319.tif 000009
を表わし；
Ａ３は各出現について独立して
【化８】
2008501319.tif 000010
を表わし；
Ａ４は各出現について独立して１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ２）Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表わすか又は、
【化９】
2008501319.tif 000011
という式を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４の間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５の間の結合であり；
Ｒは各出現について独立して水素又はアルキルであり；
Ａ５はアラルキルであり；
Ａ６は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−であるか又は
【化１０】
2008501319.tif 000012
という式を有し；
Ｂ３は、Ａ６とＡ７の間の結合であり；
Ｂ４は、Ａ６とＡ１の間の結合であり；
ｎ３は、各出現について独立して１以上１５以下であり；
ｎ４は、原子価の法則に合致して１、２、３、４又は５であり、
Ａ７は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２であるか又は、
【化１１】
2008501319.tif 000013
という式を有し；
Ｐは各出現について独立して１、２、３又は４を表わし；
Ｂ５はＡ５とＡ７の間の結合であり；
Ａ８は、
【化１２】
2008501319.tif 000014
（式中Ｒ１４はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＡ８とＡ９の間の結合である）
という式、又は
【化１３】
2008501319.tif 000015
という式を有し；
Ｘ２は１つの結合であるか又は式
【化１４】
2008501319.tif 000016
を有し；
Ｂ６はＡ８とＡ１の間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＡ９の間の結合であり；
Ａ９は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ７Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ７Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ７Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ７Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ７Ｎ（Ｂ８）２であるか又は、
【化１５】
2008501319.tif 000017
という式を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９の間の結合であり；
Ａ１０は１つの結合であるか又は、
【化１６】
2008501319.tif 000018
という式を有し；
Ｒ１２及びＲ１３は各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はＢ９を表わし；
Ｂ９はＡ１０とＡ１１の間の結合であり；
Ｂ１０はＡ１０とＯの間の結合であり；
Ａ１１は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ９Ｃ（Ｒ２）Ｂ１１、Ｂ９Ｃ（Ｒ）（Ｂ１１）２、Ｂ９Ｃ（Ｂ１１）３、Ｂ９Ｎ（Ｒ）（Ｂ１１）、Ｂ９Ｎ（Ｂ１１）２であるか又は、
【化１７】
2008501319.tif 000019
という式を有し；
Ｂ１１はＡ５とＡ１１の間の結合であり；かつ
Ａ５が少なくとも１回出現することを条件とする、２本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
【０２６１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であり、式中Ａ９９は任意には置換されているフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル又はテトラゾリルである前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が
【化１８】
2008501319.tif 000020
という式IIを有し、式中
Ｒ１−IIＡ、Ｒ１−IIＢ、Ｒ２−II及びＲ３−IIが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ又は−ＣＯ２Ｒを表わす、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIＡがアルキルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIＡがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIＡがメチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIＡがメチルでありＲ１−IIＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−IIが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２６９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−IIがＨである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−IIがアルコキシルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−IIがメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ又はｔｅｒｔ−ブトキシである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−IIがメトキシである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIＡがメチル、Ｒ１−IIＢがＨ、Ｒ２−IIがＨ、及びＲ３−IIがメトキシである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIＡがメチル、Ｒ１−IIＢがＨ、Ｒ２−IIがＨ、Ｒ３−IIがメトキシであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が、
【化１９】
2008501319.tif 000021
という式IIIを有し、式中
Ｒ１−IIIＡ、Ｒ１−IIIＢ、Ｒ２−III、及びＲ３−IIIが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ又は−ＣＯ２Ｒを表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIIＡがアルキルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIIＡがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIIＡがメチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２７９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIIＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIIＡがメチルであり、Ｒ１−IIIＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−IIIが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−IIIがＨである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−IIIがアルキルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−IIIがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル又はヘプチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−IIIがイソブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIIＡがメチルであり、Ｒ１−IIIＢがＨ、Ｒ２−IIIがＨ、Ｒ３−IIIがイソブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−IIIＡがメチル、Ｒ１−IIIＢがＨ、Ｒ２−IIIがＨ、Ｒ３−IIIがイソブチルであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２が各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル又は−Ｎ（Ｒ１１）２を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２８９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２が各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２が各出現について独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ５が各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ５が各出現について独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｚ２が各出現について独立して−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール又はＯアラルキルを表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ４が各出現について独立して
【化２０】
2008501319.tif 000022
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ４が各出現について独立して
【化２１】
2008501319.tif 000023
を表わし、Ａ５が各出現について独立して
【化２２】
2008501319.tif 000024
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ４が各出現について独立して
【化２３】
2008501319.tif 000025
を表わし、Ａ５が各出現について独立して
【化２４】
2008501319.tif 000026
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ６が各出現について独立して
【化２５】
2008501319.tif 000027
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ６が各出現について独立して
【化２６】
2008501319.tif 000028
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０２９９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ７が各出現について独立して
【化２７】
2008501319.tif 000029
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３００】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ９が各出現について独立して
【化２８】
2008501319.tif 000030
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ１０が各出現について独立して
【化２９】
2008501319.tif 000031
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ１０が各出現について独立して
【化３０】
2008501319.tif 000032
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ１１が各出現について独立して
【化３１】
2008501319.tif 000033
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０４】
一部の実施形態においては、本発明は、前記ｎ１とｎ２の和が１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０５】
一部の実施形態においては、本発明は、前記ｎ１とｎ２の和が２０である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０６】
一部の実施形態においては、本発明は、前記ｎ１とｎ２の和が２０であり、前記第１のストランドと前記第２のストランドは、該第１のストランドと第２のストランドの上に２つのハイブリッド形成されていないヌクレオチドが存在するような形でハイブリッド形成されている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０７】
一部の実施形態においては、本発明は、前記ｎ１とｎ２の和が前記第１のストランドについては２０であり、前記ｎ１とｎ２の和が前記第２のストランドについて２２である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０８】
一部の実施形態においては、本発明は、ｎ１とｎ２の和が１９である上述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３０９】
一部の実施形態においては、本発明は、ｎ１とｎ２の和が１９であり、第１のストランド及び第２のストランドは、それらの上に２つのハイブリッド形成されていないヌクレオチドが存在しているような形でハイブリッド形成されている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１０】
一部の実施形態においては、本発明は、ｎ１とｎ２の和が前記第１のストランドについて１９、前記第２のストランドについて２１である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１１】
一部の実施形態においては、本発明は、前記第１のストランド及び前記第２のストランドが各々少なくとも１回のＡ５の出現を含んでいる、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１２】
一部の実施形態においては、本発明は、前記第１のストランドが少なくとも１回のＡ５の出現を含み、前記第２のストランドがこれを含まない前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１３】
本発明の別の態様は、
【化３２】
2008501319.tif 000034
という式IVで表わされる１本鎖オリゴヌクレオチドにおいて、式中
Ｘは、Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、又は−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｘ１は
【化３３】
2008501319.tif 000035
又は−Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｚ１は、各出現について独立してＯ又はＳを表わし；
Ｚ２は、各出現について独立して−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＨ、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ３）Ｒ４、−（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）（Ｃ（Ｒ１１）２）ｍＮ（Ｒ１１）２、又はアルキルを表わし；
Ｒ１及びＲ２は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（ＣＲ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ−Ａ１０−［Ａ１１−（Ａ５）ｗ］ｙを表わし；
Ｒ３及びＲ４は、Ｈ又はアルキルを表わすか；そうでなければＲ３及びＲ４は一緒になって３−、４−、５−、６−又は７−員環を形成し；
Ｒ５は各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳＲ１１、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（Ｒ１１）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、又は−Ｏ（Ｃ（Ｒ１１）２）ｖＯＮ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２を表わし；
Ｒ６は、各出現について独立してＨ、アルキル又は−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表わし；
Ｒ７は、各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＢ３を表わし；
Ｒ８は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし；
Ｒ９は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし；
Ｒ１０はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ１１は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし；
ｎ１及びｎ２は独立して０以上２１以下を表わし；
ｍは各出現について独立して１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｍ１は各出現について独立して０、１、２、３、４、５、６、７又は８を表わし；
ｖは各出現について独立して１、２、３、又は４を表わし；
ｗは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２又は３を表わし；
ｙは、原子価の法則に合致して各出現について独立して１、２、３、４又は５を表わし；
Ｍは各出現について独立して＋１という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし；
Ａ１は各出現について独立して
【化３４】
2008501319.tif 000036
を表わし；
Ａ２は各出現について独立して
【化３５】
2008501319.tif 000037
を表わし；
Ａ３は各出現について独立して
【化３６】
2008501319.tif 000038
を表わし；
Ａ４は各出現について独立して１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ２）Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表わすか又は、
【化３７】
2008501319.tif 000039
という式を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４の間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５の間の結合であり；
Ｒは各出現について独立して水素又はアルキルであり；
Ａ５はアラルキルであり；
Ａ６は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ２）−であるか又は、
【化３８】
2008501319.tif 000040
という式を有し；
Ｂ３は、Ａ６とＡ７の間の結合であり；
Ｂ４は、Ａ６とＡ１の間の結合であり；
ｎ３は、各出現について独立して１以上１５以下であり；
ｎ４は、原子価の法則に合致して１、２、３、４又は５であり、
Ａ７は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２であるか又は
【化３９】
2008501319.tif 000041
という式を有し；
Ｐは各出現について独立して１、２、３又は４を表わし；
Ｂ５はＡ５とＡ７の間の結合であり；
Ａ８は、
【化４０】
2008501319.tif 000042
（式中Ｒ１４はＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はＡ８とＡ９の間の結合である）
という式、又は
【化４１】
2008501319.tif 000043
という式を有し；
Ｘ２は１つの結合であるか又は式
【化４２】
2008501319.tif 000044
を有し；
Ｂ６はＡ８とＡ１の間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＡ９の間の結合であり；
Ａ９は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ７Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ７Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ７Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ７Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ７Ｎ（Ｂ８）２であるか又は
【化４３】
2008501319.tif 000045
という式を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９の間の結合であり；
Ａ１０は１つの結合であるか又は、
【化４４】
2008501319.tif 000046
という式を有し；
Ｒ１２及びＲ１３は各出現について独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はＢ９を表わし；
Ｂ９はＡ１０とＡ１１の間の結合であり；
Ｂ１０はＡ１０とＯの間の結合であり；
Ａ１１は１つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ９Ｃ（Ｒ２）Ｂ１１、Ｂ９Ｃ（Ｒ）（Ｂ１１）２、Ｂ９Ｃ（Ｂ１１）３、Ｂ９Ｎ（Ｒ）（Ｂ１１）、Ｂ９Ｎ（Ｂ１１）２であるか又は、
【化４５】
2008501319.tif 000047
という式を有し；
Ｂ１１はＡ５とＡ１１の間の結合であり；かつ
Ａ５が少なくとも１回出現することを条件とする、１本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
【０３１４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であり、式中Ａ９９は任意には置換されているフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、又はテトラゾリルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が
【化４６】
2008501319.tif 000048
という式Ｖを有し、
式中
Ｒ１−ＶＡ、Ｒ１−ＶＢ、Ｒ２−Ｖ及びＲ３−Ｖが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、又は−ＣＯ２Ｒを表わす、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−ＶＡがアルキルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−ＶＡがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−ＶＡがメチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３１９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−ＶＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−ＶＡがメチルであり、Ｒ１−ＶＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−Ｖが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−ＶがＨである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−Ｖがアルコキシルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−Ｖがメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ又はｔｅｒｔ−ブトキシである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−Ｖがメトキシである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−ＶＡがメチル、Ｒ１−ＶＢがＨ、Ｒ２−ＶがＨ、及びＲ３−Ｖがメトキシである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−ＶＡがメチル、Ｒ１−ＶＢがＨ、Ｒ２−ＶがＨ、Ｒ３−Ｖがメトキシであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が、
【化４７】
2008501319.tif 000049
という式VIを有し、式中
Ｒ１−VIＡ、Ｒ１−VIＢ、Ｒ２−VI、及びＲ３−VIが各出現について独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ又は−ＣＯ２Ｒを表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３２９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−VIＡがアルキルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−VIＡがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−VIＡがメチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−VIＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−VIＡがメチルであり、Ｒ１−VIＢが水素である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−VIが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２−VIがＨである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−VIがアルキルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−VIがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル又はヘプチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ３−VIがイソブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−VIＡがメチルであり、Ｒ１−VIＢがＨ、Ｒ２−VIがＨ、Ｒ３−VIがイソブチルである、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ１−VIＡがメチル、Ｒ１−VIＢがＨ、Ｒ２−VIがＨ、Ｒ３−VIがイソブチルであり、ｗが１、ｙが１、Ａ６が結合、Ａ８がＢ６−［Ｃ（Ｒ１４）２］ｎ３−Ｂ６、ｎ３が１、Ｒ１４がＡ８とＡ９の間の結合、Ａ１０が結合、Ａ７が−ＣＨ２−、Ａ９が結合、そしてＡ１１が−ＣＨ２−である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２が各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル又は−Ｎ（Ｒ１１）２を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２が各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ２が各出現について独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ５が各出現について独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１１、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１１）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、又は−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｒ５が各出現について独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２又はＮ（Ｈ）ＣＨ３を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ｚ２が各出現について独立して−ＯＨ、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール又はＯアラルキルを表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４７】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ４が各出現について独立して
【化４８】
2008501319.tif 000050
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４８】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ４が各出現について独立して
【化４９】
2008501319.tif 000051
を表わし、Ａ５が各出現について独立して
【化５０】
2008501319.tif 000052
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３４９】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ４が各出現について独立して
【化５１】
2008501319.tif 000053
を表わし、Ａ５が各出現について独立して
【化５２】
2008501319.tif 000054
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ６が各出現について独立して
【化５３】
2008501319.tif 000055
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ６が各出現について独立して
【化５４】
2008501319.tif 000056
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ７が各出現について独立して
【化５５】
2008501319.tif 000057
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５３】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ９が各出現について独立して
【化５６】
2008501319.tif 000058
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５４】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ１０が各出現について独立して
【化５７】
2008501319.tif 000059
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５５】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ１０が各出現について独立して
【化５８】
2008501319.tif 000060
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５６】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ１１が各出現について独立して
【化５９】
2008501319.tif 000061
を表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５７】
一部の実施形態においては、本発明は、前記ｎ１とｎ２の和が１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５８】
一部の実施形態においては、本発明は、前記ｎ１とｎ２の和が２０である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３５９】
一部の実施形態においては、本発明は、前記ｎ１とｎ２の和が１９である、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３６０】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が少なくとも２回出現する、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３６１】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が少なくとも５回出現する、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３６２】
一部の実施形態においては、本発明は、Ａ５が少なくとも１０回出現する、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
【０３６３】
該発明の方法
本発明の一態様は、望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経系疾患及びヘテロ接合性の喪失を特徴とする障害より成る群から選択された疾患を患う患者を治療する方法であって、治療上有効な量のオリゴヌクレオチドを、それを必要とする患者に対し投与する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上述の通りの式IVにより表された１本鎖オリゴヌクレオチドであるかそうでなければ前記オリゴヌクレオチドは第１のストランドと第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドであり、ここで前記第１のストランドと第２のストランドは独立して上述の式Ｉにより表わされている方法に関する。
【０３６４】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が望ましくない細胞増殖である上述の方法に関する。
【０３６５】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が睾丸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、扁平上皮細胞癌腫、膵癌、白血病、黒色腫、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、食道癌、子宮頸癌、基底細胞癌腫、腺癌腫、肝細胞癌腫、直腸結腸腺癌、肝癌、男性乳癌、食道の腺癌、胃の腺癌、結腸の腺癌、直腸の腺癌、胆嚢癌、過誤腫、神経膠腫、子宮内膜癌、急性白血病、慢性白血病、小児急性白血病、ユーイング肉腫、粘液性脂肪肉腫、脳腫瘍又は上皮由来の腫瘍である上述の方法に関する。
【０３６６】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が関節リウマチ又は網膜血管新生である前述の方法に関する。
【０３６７】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患がウイルス感染である前述の方法に関する。
【０３６８】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患がヒト乳頭腫ウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、Ｈ型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヘルペスサイトメガロウイルス、ヘルペスエプスタインバールウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＪＣウイルス、ミクソウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、シミアンウイルス４０、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、脳心筋炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、黄熱病ウイルス、ポリオウイルス又はポックスウイルスを媒介とする障害である前述の方法に関する。
【０３６９】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染又は真菌感染である前述の方法に関する。
【０３７０】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患がマラリア原虫、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又は肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を媒介とする障害である前述の方法に関する。
【０３７１】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症又は糖尿病である前述の方法に関する。
【０３７２】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が虚血、再潅流傷害、移植臓器又は組織に対する応答、再狭窄又は炎症性大腸炎である前述の方法に関する。
【０３７３】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が急性疼痛又は慢性疼痛である前述の方法に関する。
【０３７４】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患が神経系疾患である前述の方法に関する。
【０３７５】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病又は神経変性トリヌクレオチド反復障害である前述の方法に関する。
【０３７６】
一部の実施形態においては、本発明は、前記疾患がヘテロ接合性の喪失を特徴とする障害である前述の方法に関する。
【０３７７】
一部の実施形態においては、本発明は、前記オリゴヌクレオチドが第１ストランド及び第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドであり、ここで前記第１ストランド及び前記第２のストランドが上述の通りの式Ｉにより独立して表わされている、前述の方法に関する。
【０３７８】
本発明の別の態様は、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子遺伝子、成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子、又は多型遺伝子の対立遺伝子をサイレンシングするべく哺乳動物細胞に対しオリゴヌクレオチドを治療上有効な量だけ投与する工程を含み前記オリゴヌクレオチドが上述の通りの式IVにより表わされた１本鎖オリゴヌクレオチドであるかそうでなければ前記オリゴヌクレオチドは前述の通りの式Ｉにより現された第１のストランド及び第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドである、遺伝子サイレンシング方法に関する。
【０３７９】
一部の実施形態においては、本発明は、前記オリゴヌクレオチドが第１のストランド及び第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第１のストランド及び前記第２のストランドが独立して上述の通りの式Ｉにより表わされている前述の方法に関する。
【０３８０】
本発明の別の態様は、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、Ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファＶ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナ���イルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子をサイレンシングするために哺乳動物細胞に対しオリゴヌクレオチドを治療上有効な量だけ投与する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上述の通りの式IVにより表わされた１本鎖オリゴヌクレオチドで��るかそうでなければ前記のオリゴヌクレオチドは上述の通りの式Ｉにより表わされた第１のストランド及び第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドである遺伝子サイレンシング方法に関する。
【０３８１】
一部の実施形態においては、本発明は、前記オリゴヌクレオチドが第１のストランド及び第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第１のストランド及び第２のストランドが独立して上述の通りの式Ｉにより表わされる前述の方法に関する。
【０３８２】
本発明の別の態様は、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子又は成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子又は多型遺伝子の対立遺伝子をサイレンシングするべく哺乳動物細胞に対しオリゴヌクレオチドを治療上有効な量だけ投与する工程を含み、前述のオリゴヌクレオチドが上述の通りの式IVにより表わされた１本鎖オリゴヌクレオチドであるかそうでなければ前記のオリゴヌクレオチドは上述の通りの式Ｉにより表わされた第１のストランドと第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドである、遺伝子サイレンシング方法に関する。
【０３８３】
一部の実施形態においては、本発明は、前記オリゴヌクレオチドが第１のストランド及び第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第１のストランド及び第２のストランドが独立して上述の通りの式Ｉにより表わされている、前述の方法に関する。
【０３８４】
本発明の別の態様は、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、Ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファＶ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイ���スの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子をサイレンシングするために哺乳動物細胞に対しオリゴヌクレオチドを治療上有効な量だけ投与する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上述の通りの式IVにより表わされた１本鎖オリゴヌクレオチドである��そうでなければ前記のオリゴヌクレオチドは上述の通りの式Ｉにより表わされた第１のストランド及び第２のストランドを含むである、遺伝子サイレンシング方法に関する。
【０３８５】
一部の実施形態においては、本発明は、前記哺乳動物が霊長類、ウマ、イヌ又はネコである前述の方法に関する。
【０３８６】
一部の実施形態においては、本発明は、前記哺乳動物がヒトである前述の方法に関する。
【０３８７】
一部の実施形態においては、本発明は、前記オリゴヌクレオチドが第１のストランド及び第２のストランドを含む２本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第１のストランド及び第２のストランドが独立して上述の通りの式Ｉにより表わされる前述の方法に関する。
【０３８８】
定義
便宜上、該明細書、実施例及び添付クレームの中で使用されているいくつかの用語をここにまとめる。
【０３８９】
「サイレンシングする」という用語は、少なくとも部分的に抑圧することを意味する。例えば一部のケースでは、遺伝子は、該発明の２本鎖オリゴヌクレオチドの投与により少なくとも約２５％、３５％又は５０％だけ抑圧される。好ましい実施形態においては、遺伝子は、該発明の２本鎖オリゴヌクレオチドの投与により少なくとも約６０％、７０％又は８０％だけ抑圧される。より好ましい実施形態においては、遺伝子は該発明の２本鎖オリゴヌクレオチドの投与により少なくとも約８５％、９０％又は９５％だけ抑圧される。最も好ましい実施形態においては、遺伝子は該発明の２本鎖オリゴヌクレオチドの投与により少なくとも約９８％又は９９％だけ抑圧される。
【０３９０】
上述の化合物の考慮対象の等価物としては、その他の点ではそれに対応しかつそれと同じ一般的特性（例えば鎮痛薬として機能する）を有し、シグマレセプタに対する結合における該化合物の効力に不利な影響を及ぼさない置換基の１つ以上の単純な変動が行なわれている化合物が含まれる。一般に本発明の化合物は、例えば以下で記載されているような一般的反応スキームに例示されている方法によって、又は容易に入手可能な出発材料、試薬及び従来の合成手順を用いたその修飾により調製可能である。これらの反応では、それ自体既知であるもののここでは言及されていない変異体を用いることも可能である。
【０３９１】
本発明の一部の化合物は、特定の幾何的又は立体異性形状で存在し得る。相反する規定の無い限り、本発明では、該発明の範囲内に入るものとして、シス及びトランス異性体、Ｒ及びＳ−鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、そのラセミ混合物及びそのその他の混合物を含めた全てのこのような化合物が考慮されている。アルキル基といったような置換基の中に付加的な非対称炭素原子が存在していてもよい。全てのこのような異性体ならびにその混合物が、本発明の中に内含されるべきものとして意図される。
【０３９２】
例えば、本発明の化合物の特定の鏡像異性体が望まれるならば、それは非対称合成又はキラル補助物での誘導により調製され、ここで結果としてのジアステレオマー混合物が分離され補助基が切断されて純粋な所望の鏡像異性体を提供する。代替的には、分子がアミノといった塩基性官能基又はカルボキシルといった酸性官能基を含有する場合、ジアステレオマー塩は適切な光学活性酸又は塩基で形成され、その後このように形成されたジアステレオマーは、当該技術分野において周知の分別晶出又はクロマトグラフィ手段により分解され、その後純粋な鏡像異性体が回収される。
【０３９３】
本発明の目的では、化学元素は、元素周期表、ＣＡＳバージョン、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、第６７版、１９８６〜８７年、内部カバー、に従って同定される。
【０３９４】
「ヘテロ原子」という用語は、当該技術分野において認知されたものであり、炭素及び水素以外のあらゆる元素の原子を意味する。ヘテロ原子の例としては、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄及びセレンを含む。
【０３９５】
「アルキル」という用語は、当該技術分野において認知されたものであり、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基及びシクロアルキル置換アルキル基を含めた飽和脂肪基を内含する。一部の実施形態においては、直鎖又は分枝鎖アルキルは、その主鎖の中に約３０以下の炭素原子（例えば直鎖についてはＣ１〜Ｃ３０、分枝鎖についてはＣ３〜Ｃ３０）そして代替的には約２０以下の炭素原子を有する。同様にして、シクロアルキルはその環構造内に約３〜約１０個の炭素原子、そして代替的には環構造中に約５、６又は７個の炭素を有する。
【０３９６】
炭素数が別途に規定されているのでないかぎり、「低アルキル」というのは、１〜約１０個の炭素、代替的には１〜約６個の炭素原子をその主鎖構造に有する上記で定義したアルキル基を意味する。同様にして、「低アルケニル」及び「低アルキニル」は類似の鎖長を有する。
【０３９７】
「アラルキル」という用語は、当該技術において認知されたものであり、（例えば芳香族又は複素環式芳香族基などの）アリール基で置換されたアルキル基を意味する。
【０３９８】
「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、当該技術において認知されたものであり、長さ及び考えられる置換において上述のアルキルと類似しているもののそれぞれ少なくとも１つの２重又は３重結合を含有する不飽和脂肪族基を意味する。
【０３９９】
「アリール」という用語は、当該技術において認知されたものであり、例えばベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ピレン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン及びピリミジンなどといったゼロから４つのヘテロ原子を内含し得る５、６及び７員の単環芳香族基を意味する。環構造内にヘテロ原子をもつこれらのアリール基は、同様に「アリール複素環」又は「複素環式芳香族化合物」とも呼ぶことができる。芳香族環は例えばハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族又は複素環式芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮなどといった上述のような置換基で１つ以上の環位置で置換され得る。「アリール」という用語は同様に、２つ以上の炭素が２つの隣接する環（環は「融合環」である）に共通であり、ここで該環のうちの少なくとも１つが芳香族であり、例えばもう一方の環状環がシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール及び／又はヘテロシクリルである、２つ以上の環状環を有する多環式環系をも内含する。
【０４００】
オルト、メタ及びパラという用語は当該技術において認知されたものであり、それぞれ、１，２−、１，３−及び１，４二置換ベンゼンを意味する。例えば、１，２−ジメチルベンゼン及びオルト−ジメチルベンゼンという名称は同義である。
【０４０１】
「ヘテロシクリル」、「ヘテロアリール」又は「複素環基」という用語は、当該技術において認知されたものであり、３〜約１０員の環構造、代替的には１〜４個のヘテロ原子を含む環構造をもつ３〜約７員の環を意味する。複素環は同様に多環であっても良い。ヘテロシクリル基は例えばチオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンテン、フェノキサンテン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルサジン、フェノチアジン、フラザン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソラン、チオラン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ラクトン、ラクタム例えばアゼチジノン及びピロリジノン、スルタム、スルトンなどを含む。複素環は１つ以上の位置で例えばハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族又は複素環式芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮなどといった上述のとおりの置換基と置換され得る。
【０４０２】
「ポリサイクリル」又は「多環式基」という用語は、当該技術において認知されたものであり、２つ以上の炭素が２つの隣接環に共通である、例えば環が「融合環」である２つ以上の環（例えばシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール及び／又はヘテロシクリル）を意味する。非隣接原子を通して抱合される環は、「架橋」環と呼ばれる。多環の環の各々は、例えばハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族又は複素環式芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、などのかかる置換基で置換され得る。
【０４０３】
「炭素環」という用語は、当該技術において認知されたものであり、環の各原子が炭素である芳香族又は非芳香族環を意味する。
【０４０４】
「ニトロ」という用語は当該技術において認知されたものであり、−ＮＯ２を意味し；「ハロゲン」という用語は、当該技術において認知されたもの、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ又は−Ｉを意味し；「スルフヒドリル」という用語は当該技術において認知されたものであり、−ＳＨを意味し；「ヒドロキシル」という用語は−ＯＨを意味し；「スルホニル」という用語は当該技術において認知された−ＳＯ２−を意味する。「ハロゲン化物」は、ハロゲンの対応するアニオンを呼称し、「擬ハロゲン化物」は、コットン（Ｃｏｔｔｏｎ）及びウィルキンソン（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ）により「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」の５６０頁に記された定義を有する。
【０４０５】
「アミン」及び「アミノ」という用語は、当該技術において認知されたものであり、未置換及び置換アミンの両方、例えば、一般式
【化６０】
2008501319.tif 000062
（式中Ｒ５０、Ｒ５１及びＲ５２が各々独立して水素、アルキル及びアルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表わすか又は、Ｒ５０及びＲ５１はそれらが付着させられるＮ原子と一緒になって環構造内の４〜８個の原子をもつ複素環を補完し；Ｒ６１がアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、複素環、又は多環を表わし、ｍがゼロ又は１〜８の範囲内の整数を表わす）
により表わすことができる一つの部分を意味する。その他の実施形態においては、Ｒ５０及びＲ５１（そして任意にはＲ５２）は各々独立して水素、アルキル、アルケニル又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表わす。かくして、「アルキルアミン」という用語には、置換又は未置換アルキルが付着された、すなわちＲ５０とＲ５１のうちの少なくとも１つがアルキル基である上記で定義づけした通りのアミン基が含まれる。
【０４０６】
「アシルアミノ」という用語は当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６１】
2008501319.tif 000063
（式中、Ｒ５０は上記で定義された通りであり、Ｒ５４は水素、アルキル、アルケニル又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表わし、ここでｍ及びＲ６１は上記で定義された通りである）
により表わすことができる一つの部分を意味する。
【０４０７】
「アミド」という用語は、アミノ置換されたカルボニルとして当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６２】
2008501319.tif 000064
（式中、Ｒ５０及びＲ５１は上記で定義づけされた通りである）
により表わすことのできる１つの部分を含む。本発明におけるアミドの一部の実施形態は、不安定なものであり得るイミドを含まない。
【０４０８】
「アルキルチオ」という用語は、付着された硫黄ラジカルを有する、上記で定義づけされた通りのアルキル基を意味する。一部の実施形態においては、「アルキルチオ」部分は、Ｓ−アルキル、−Ｓ−アルケニル、−Ｓ−アルキニル及び−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１の１つにより代表され、ここでｍ及びＲ６１は上記で定義されている。代表的なアルキルチオ基としては、メチルチオ、エチルチオなどが含まれる。
【０４０９】
「カルボキシル」という用語は、当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６３】
2008501319.tif 000065
（式中、Ｘ５０は１つの結合であるか又は酸素又は硫黄を表わし、Ｒ５５及びＲ５６は水素、アルキル、アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１又は薬学的に受容可能な塩を表わし、Ｒ５６は水素、アルキル、アルケニル又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表わし、ここでｍとＲ６１は上記で定義されている）
により表され得るような部分を含む。Ｘ５０が酸素でＲ５５又はＲ５６が水素でない場合、該一般式は「エステル」を表わす。Ｘ５０が酸素でありＲ５５が上記で定義された通りである場合、該部分は本明細書ではカルボキシ基と呼ばれ、特にＲ５５が水素である場合、該一般式は「カルボン酸」を表わす。Ｘ５０が酸素で、Ｒ５６が水素である場合、該一般式は「ギ酸塩」を表わす。一般に、上述の一般式の酸素原子が硫黄によって置換されている場合には、該一般式は「チオールカルボニル」基を表わす。Ｘ５０が硫黄であり、Ｒ５５又はＲ５６が水素でない場合、該一般式は「チオールエステル」を表わす。Ｘ５０が硫黄でありＲ５５が水素である場合、該一般式は「チオールカルボン酸」を表わす。Ｘ５０が硫黄でありＲ５６が水素であり、該一般式が「チオールギ酸塩」を表わす。一方、Ｘ５０が１つの結合でありＲ５５が水素である場合、上述の一般式は「ケトン」基を表わす。Ｘ５０が１つの結合でありＲ５５が水素である場合、上述の一般式は「アルデヒド」基を表わす。
【０４１０】
「カルバモイル」という用語は、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲＲ’を意味し、ここでＲ及びＲ’は独立してＨ、脂肪族基、アリール基又はヘテロアリール基である。
【０４１１】
「オキソ」という用語はカルボニル酸素（＝Ｏ）を意味する。
【０４１２】
「オキシム」及び「オキシムエーテル」という用語は当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６４】
2008501319.tif 000066
（式中、Ｒ７５は水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１である）
により表わされる部分を意味する。該部分は、ＲがＨである場合に「オキシム」であり、Ｒがアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１である場合「オキシムエーテル」である。
【０４１３】
「アルコキシル」又は「アルコキシ」という用語は当該技術において認知されたものであり、酸素ラジカルが付着された、上記で定義づけされた通りのアルキル基を意味する。代表的なアルコキシル基としては、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどが含まれる。「エーテル」は、酸素により共有結合により連結された２つの炭化水素である。従って、そのアルキルをエーテルにするアルキル置換基は、ｍ及びＲ６１が上述の通りであるものとして−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−アルキニル、−Ｏ−−Ｃ（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１のうちの１つにより表わされ得るようなアルコキシルであるか又はそれに似ている。
【０４１４】
「スルホン酸塩」という用語は当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６５】
2008501319.tif 000067
（式中、Ｒ５７は電子対、水素、アルキル、シクロアルキル又はアリールである）
により表わすことのできる一部分を意味する。
【０４１５】
「硫酸塩」という用語は当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６６】
2008501319.tif 000068
（式中Ｒ５７は上記で定義された通りである）
によって表わすことのできる一部分を意味する。
【０４１６】
「スルホアミド」という用語は、当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６７】
2008501319.tif 000069
（式中Ｒ５０及びＲ５６は上記で定義された通りである）
により表わすことのできる一部分を意味する。
【０４１７】
「スルファモイル」という用語は当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６８】
2008501319.tif 000070
（式中Ｒ５０及びＲ５１は上記で定義された通りである）
によって表わすことのできる一部分を意味する。
【０４１８】
「スルホニル」という用語は当該技術において認知されたものであり、一般式
【化６９】
2008501319.tif 000071
（式中、Ｒ５８は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールのうちの１つである）
により表わすことのできる一部分を意味する。
【０４１９】
「スルホキシド」という用語は、当該技術において認知されたものであり、一般式
【化７０】
2008501319.tif 000072
（式中Ｒ５８は上記で定義されている）
により表わすことのできる一部分を意味する。
【０４２０】
「ホスホリル」という用語は当該技術において認知されたものであり、概して、一般式
【化７１】
2008501319.tif 000073
（式中、Ｑ５０はＳ又はＯを表わし、Ｒ５９は水素、低アルキル又はアリールを表わす）
により表わされ得る。例えばアルキルを置換するために使用される場合、ホスホリルアルキルのホスホリル基を、一般式
【化７２】
2008501319.tif 000074
（式中、Ｑ５０及びＲ５９は各々独立して上記で定義されており、Ｑ５１はＯ、Ｓ又はＮを表わす）により表わされ得る。Ｑ５０がＳである場合、ホスホリル部分は「ホスホロチオアート」である。
【０４２１】
「ホスホルアミダイト」という用語は、当該技術において認知されたものであり、一般式
【化７３】
2008501319.tif 000075
（式中Ｑ５１、Ｒ５０、Ｒ５１及びＲ５９は上記で定義された通りである）
で表わされ得る。
【０４２２】
「ホスホンアミダイト」という用語は、当該技術において認知されたものであり、一般式
【化７４】
2008501319.tif 000076
（式中Ｑ５１、Ｒ５０、Ｒ５１、及びＲ５９は上記で定義された通りであり、Ｒ６０は低アルキル又はアリールを表わす）
により表され得る。
【０４２３】
例えばアミノアルケニル、アミノアルキニル、アミドアルケニル、アミドアルキニル、イミノアルケニル、イミノアルキニル、チオアルケニル、チオアルキニル、カルボニル置換アルケニル又はアルキニルを生成するためにアルケニル及びアルキニル基に対して類似の置換を行なうことができる。
【０４２４】
例えばアルキル、ｍ、ｎなどといった各表現の定義は、それが任意の構造内で一回以上発生する場合、同じ構造中のその他の場所でのその定義とは独立したものとなるように意図される。
【０４２５】
「セレノアルキル」という用語は当該技術において認知されたものであり、置換セレノ基が付着したアルキル基を意味する。アルキル上に置換され得る「セレノエーテル」の例は、−Ｓｅ−アルキル、−Ｓｅ−アルケニル、−Ｓｅ−アルキニル、及び−Ｓｅ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１（ｍ及びＲ６１は上記で定義されている）のうちの１つから選択される。
【０４２６】
トリフリル、トシル、メシル及びノナフリルという用語は、当該技術において認知されたものであり、それぞれトリフルオロメタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、メタンスルホニル及びノナフルオロブタンスルホニル基を意味する。トリフラート、トシラート、メシラート及びノナフラートという用語は当該技術において認知されたものであり、トリフルオロメタンスルホナートエステル、ｐ−トルエンスルホナートエステル、メタンスルホナートエステル及びノナフルオロブタンスルホナートエステル官能基及び前記基を含有する分子を意味する。
【０４２７】
略号Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｈ、Ｔｆ、Ｎｆ、Ｔｓ及びＭｓは、それぞれメチル、エチル、フェニル、トリフルオロメタンスルホニル、ノナフルオロブタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル及びメタンスルホニルを表わす。当業者である有機化学者により利用される略号のさらに網羅的なリストは、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙの各巻の第１版の中に記されている。このリストは一般的に、Ｓｔａｎｄａｒｔ  Ｌｉｓｔ  ｏｆ  Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓという題の表中に提示されている。
【０４２８】
本発明の組成物中に含有されている一部の化合物は、特定の幾何形態又は立体異性形態で存在し得る。さらに、本発明のポリマーは、光学的に活性でもあり得る。本発明は、該発明の範囲内に入るものとして、シス及びトランス−異性体、Ｒ及びＳ−鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、そのラセミ混合物及びそれらの他の混合物を含めた全てのかかる化合物を考慮している。アルキル基といったような置換基の中に付加的な非対称炭素原子が存在していてもよい。かかる異性体ならびにそれらの混合物は全て、本発明の中に含まれるよう意図されている。
【０４２９】
例えば、本発明の化合物の特定の鏡像異性体が望まれるならば、それは非対称合成又はキラル補助物での誘導により調製され、ここで結果としてのジアステレオマー混合物が分離され補助基が切断されて純粋な所望の鏡像異性体を提供する。代替的には、分子がアミノといった塩基性官能基又はカルボキシルといった酸性官能基を含有する場合、ジアステレオマー塩は適切な光学活性酸又は塩基で形成され、その後このように形成されたジアステレオマーは、当該技術分野において周知の分別晶出又はクロマトグラフィ手段により分解され、その後純粋な鏡像異性体が回収される。
【０４３０】
「置換」又は「〜で置換された」という語には、かかる置換が置換された原子及び置換基の許容された価数に従っていること及び該置換が結果として、例えば再配置、環化、除去又はその他の反応などによる変換を自然発生的に受けない安定した化合物をもたらすことという暗黙の条件が含まれることがわかるだろう。
【０４３１】
「置換された」という語は、同様に有機化合物の全ての許容可能な置換基を含むものとして考慮されている。広義の態様においては、許容可能な置換基は、有機化合物の非環式及び環式、分枝及び非分枝、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族置換基を含む。置換基の例としては例えば本明細書の上記で記載されたものが含まれる。許容可能な置換基は、適切な有機化合物について同じ又は異なる１つ以上のものであり得る。本発明の目的において、窒素といったようなヘテロ原子は、水素置換基及び／又は、ヘテロ原子の価数を満たす本明細書で記載された有機化合物のあらゆる許容可能な置換基を有し得る。本発明は、有機化合物の許容可能な置換基によりいかなる形でも限定されるように意図されてはいない。
【０４３２】
本明細書で使用される「保護基」という語句は、潜在的に反応性の官能基を望ましくない化学的形質転換から保護する一時的置換基を意味する。かかる保護基の例としては、カルボン酸のエステル、アルコールのシリルエーテル並びにアルデヒド及びケトンのそれぞれアセタール及びケタールが含まれる。保護基化学の分野は再検討されてきた（グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）、Ｔ．Ｗ．；ワッツ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版；Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年）。本発明の化合物の保護形態が、本発明の範囲内に含まれている。
【０４３３】
薬学組成物
別の態様においては、本発明は、１つ以上の薬学的に受容可能な担体（添加剤）及び／又は希釈剤と共に処方される上述の化合物のうちの１つ以上のものを治療上有効な量だけ含む薬学的に受容可能な組成物を提供する。以下で詳述されるように、本発明の薬学組成物は、（１）例えば飲薬（水性又は非水性溶液又は懸濁液）、錠剤例えば口腔、舌下及び全身的吸収を標的としたもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌に塗布するためのペーストといった経口投与向け、（２）例えば無菌溶液又は懸濁液又は持続放出型処方物といった皮下、筋内、静脈内又は硬膜外注射による非経口投与向け；（３）皮膚に塗布されたクリーム、軟こう又は制御放出パッチ又はスプレーといった局所施用向け；（４）例えばペッサリ、クリーム又はフォームとしての膣内又は直腸内向け；（５）舌下向け  （６）眼科向け；（７）経皮向け又は（８）経鼻向けに適合されたものを含めた固体又は液体形態での投与のため特別に処方され得る。
【０４３４】
本明細書で使用される「治療上有効な量」という語句は、あらゆる医療に適用可能な適正な損益比で、動物の体内の細胞の少なくとも亜集団において幾分かの所望の治療効果を生み出すのに有効である、本発明の化合物、材料又はその化合物を含む組成物の量を意味する。
【０４３５】
「薬学的に受容可能な」という語句は、本明細書では、健全な医学的判断の範囲内で適正な損益比に相応して過度の毒性、刺激、アレルギー反応又はその他の問題又は合併症無くヒト及び動物の組織と接触して用いるのに適したものである化合物、材料、組成物及び／又は剤形を意味するように用いられている。
【０４３６】
本明細書で使用される「薬学的に受容可能な担体」という語句は、１つの器官又は体の一部分から別の器官又は体の一部分まで対象化合物を搬送又は輸送することに関与する液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、製造補助剤（例えば潤滑剤、タルクマグネシウム、カルシウム又は亜鉛のステアリン酸塩又はステアリン酸）又は溶剤封入材料といった薬学的に受容可能な材料、組成物又はビヒクルを意味する。各々の担体は、その処方物のその他の成分と相容性があり患者にとって有害でないという意味で「受容可能」でなくてはならない。薬学組成物担体として役立ち得る材料のいくつかの例としては、（１）糖、例えばラクトース、グルコース及びスクロース；（２）でんぷん、例えばコーンスターチ及びジャガイモでんぷん、（３）セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤例えばカカオバター及び座薬用ワックス；（９）油、例えばピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、とうもろこし油及び大豆油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マニントール及びポリエチレングリコール；（１２）エステル例えば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボナート及び／又はポリ無水物；及び（２２）薬学処方物中に用いられるその他の非毒性で相容性ある物質が含まれる。
【０４３７】
上述の通り、当該化合物の一部の実施形態は、アミノ又はアルキルアミノといったような塩基性官能基を含有することができ、かくして薬学的に受容可能な酸と薬学的に受容可能な塩を形成する能力をもつ。ここで「薬学的に受容可能な塩」という用語は、本発明の比較的非毒性、無機及び有機酸付加塩を意味する。これらの塩は、投与ビヒクル又は剤形製造プロセスにおいてインサイチュで、又は適切な有機又は無機酸とその遊離塩基形態の該発明の精製済み化合物を別々に反応させこのように形成された塩をその後の精製中に単離することによって、調製可能である。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチラート、メシル酸塩、グルコヘプタン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリル硫酸塩など（例えば、ベルグ（Ｂｅｒｇｅ）ら、（１９７７年）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ、第６６号：１〜１９頁を参照）が含まれる。
【０４３８】
対象化合物の薬学的に受容可能塩には、例えば非毒性有機又は無機酸といった、該化合物の従来の非毒性塩又は第４アンモニウム塩が含まれる。例えば、かかる従来の非毒性塩には、塩酸塩、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などといった無機酸から誘導されたもの；及び酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシル安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸などといった有機酸から調製される塩が含まれる。
【０４３９】
その他のケースでは、本発明の化合物は１つ以上の酸性官能基を含有することができ、かくして薬学組成物塩基と薬学的に受容可能な塩を形成する能力をもつ。これらのケースにおける「薬学的に受容可能な塩」という用語は、本発明の化合物の非毒性、無機及び有機塩基付加塩を意味する。これらの塩は同様にして、投与ビヒクル又は剤形製造プロセスにおいてインサイチュで、又は薬学的に受容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩又は重炭酸塩といったような適切な塩基、又はアンモニア又は薬学的に受容可能な有機一級、二級又は三級アミンと、その遊離酸形態での精製済み化合物を別々に反応させることによって、調製可能である。代表的アルカリ又はアルカリ土類塩には、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアルミニウム塩などが含まれる。塩基付加塩の形成にとって有用な代表的有機アミンにはエチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなど（例えば、ベルグら、前掲書参照）が含まれる。
【０４４０】
湿潤剤、乳化剤及び潤滑剤例えばラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、着香剤及び芳香剤、防腐剤及び酸化防止剤も同様に組成物中に存在し得る。
【０４４１】
薬学的に受容可能な酸化防止剤の例としては、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどといった水溶性酸化防止剤；（２）パルミチン酸アスコルビン、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没子酸プロピル、アルファトコフェロールなどといった油溶性酸化防止剤；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などといった金属キレート化剤が含まれる。
【０４４２】
本発明の処方物には、経口、経鼻、局所（口腔及び舌下を含む）、直腸、膣及び／又は非経口投与に適したものが含まれる。該処方物は、便利には単位剤形の体裁をとり、薬学技術分野で周知のあらゆる方法により調製可能である。単一剤形を生産するのに担体材料と組合わせることのできる活性成分の量は、処置対象の宿主、特定の投与様式に応じて変動することになる。単一剤形を生産するために担体材料と組合わせることのできる活性成分の量は一般に治療的効果を生成する化合物の量となる。一般に、１００パーセントのうち、この量は約０．１〜約９９パーセント、好ましくは約５〜約７０パーセント、最も好ましくは約１０〜約３０パーセントの範囲の活性成分ということになる。
【０４４３】
一部の実施形態においては、本発明の処方物は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成作用物質例えば胆汁酸及びポリマー担体例えばポリエステル及びポリ無水物から成る群の中から選択された賦形剤そして本発明の化合物を含む。一部の実施形態においては、上述の処方物は本発明の化合物を経口的に生体利用可能なものにする。
【０４４４】
これらの処方物又は組成物を調製する方法には、本発明の化合物を担体及び任意には１つ以上の副成分と会合させる工程が含まれる。一般に、該処方物は、本発明の化合物を液体担体又は細分した固体担体又はその両方と均等にかつ密に会合させ、次に必要とあらばこの生成物を整形することによって調製される。
【０４４５】
経口投与に適した該発明の処方物は、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、口中錠（通常はスクロース及びアカシア又はトラガカントといった着香された基剤を用いる）、粉末、顆粒の形で、或いは又、水性又は非水性液体中の溶液又は懸濁液として又は水中油又は油中水液体エマルジョンとして又はエレキシル剤又はシロップとして又はパステル剤として（スクロース及びアカシア、又はゼラチン及びグリセリンといった不活性基剤を用いる）及び／又は、うがい薬などとして各々活性成分として予め定められた量の本発明の化合物を含有する形態をとり得る。本発明の化合物は同様に、ボーラス、舐剤又はペーストとしても投与され得る。
【０４４６】
経口投与のための該発明の固体剤形（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチなど）においては、活性成分は、クエン酸ナトリウム又は第二リン酸カルシウムといった１つ以上の薬学的に受容可能な担体及び／又は次のもののいずれかと混合される；（１）でんぷん、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及び／又はケイ酸といった充填剤又は増量剤；（２）例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアカシアといった結合剤；（３）グリセロールといった保湿剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカでんぷん、アルギン酸、一部のケイ酸塩及び炭酸ナトリウムといった崩壊剤；（５）パラフィンといった溶解遅延剤；（６）第４アンモニウム化合物といった吸収促進剤及びポロキサマー及びラウリル硫酸ナトリウムといった表面活性剤；（７）例えばセチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール及び非イオン表面活性剤といった湿潤剤；（８）カオリン及びベントナイトクレイといった吸収剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸及びその混合物といった潤滑剤；（１０）着色剤及び（１１）クロスポビドン及びエチルセルロースといった制御放出剤。カプセル、錠剤及び丸薬の場合、薬学組成物は同様に緩衝剤をも含むことができる。類似のタイプの固体組成物を同様に、ラクトース又は乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いたソフト及びハードゼラチンカプセル中の充填剤として利用することもできる。
【０４４７】
錠剤は、任意には１つ以上の副成分と共に、圧縮又は成形により作ることができる。圧縮錠は、結合剤（例えばゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性稀釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えばグリコール酸ナトリウムでんぷん又は架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース）、表面活性又は分散剤を用いて調製することができる。成形（湿製）錠剤は、不活性液体稀釈剤で加湿した粉末化合物の混合物を適切な機械の中で成形することにより作ることができる。
【０４４８】
錠剤、及び本発明の薬学組成物のその他の固体剤形例えば糖衣錠、カプセル、丸薬及び顆粒は、任意には、薬学処方技術分野において周知の腸溶性コーティング及びその他のコーティングといったようなコーティング及びシェルを伴って調製又は入手することができる。これらは又、例えば、所望の放出プロファイルを提供するためのさまざまな割合でのヒドロキシプロピルメチル、その他のポリマーマトリクス、リポソーム及び／又はミクロスフェアなどを用いて、その中での活性成分の徐放又は制御放出を提供するようにも処方され得る。これらを高速放出用に処方すること、例えば凍結乾燥させることも可能である。例えば細菌保持フィルタを通したろ過によってか又は使用直前に無菌水又はその他の何らかの無菌注射用媒質の中に溶解させることのできる無菌固体組成物の形で殺菌剤を取込むことにより、これらを滅菌することができる。これらの組成物は又、任意には、不透明化剤を含有することもでき、任意には遅延した形で胃腸管の或る部分の中でのみ又はその中で優先的に活性成分を放出する組成のものであり得る。使用可能な包埋組成物の例としては、ポリマー物質及びろうが含まれる。活性成分は同様に、該当する場合、上述の賦形剤のうちの１つ以上のものでマイクロ封入された形態を呈し得る。
【０４４９】
該発明の化合物の経口投与用の液体剤形としては、薬学的に受容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエレキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、当該技術分野において一般に用いられる不活性稀釈剤、例えば水又はその他の溶剤、可溶化剤及び乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に綿実、ラッカセイ、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタン脂肪酸エステル及びそれらの混合物を含有し得る。
【０４５０】
不活性稀釈剤の他に、経口組成物は同様に、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、着香剤、着色剤、芳香剤及び防腐剤といったようなアシュバントを含むこともできる。
【０４５１】
活性化合物に加えて、懸濁液は、例えばエトキシル化イソステアリル酸アルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微晶質セルロース、アルミニウムメタ水酸化物、ベントナイト、寒天及びトラガカント、及びそれらの混合物といった懸濁剤を含有し得る。
【０４５２】
直腸又は膣投与向けの該発明の薬学組成物の処方物は、該発明の１つ以上の化合物を例えばカカオバター、ポリエチレングリコール、座薬ワックス又はサリチル酸塩などを含む１つ以上の適切な非刺激性賦形剤又は担体と混合することによって調製でき、かつ室温では固体であるものの体温では液体であり従って直腸又は膣腔内で融解し活性化合物を放出することになる座薬の体裁をとり得る。
【０４５３】
膣投与のために適切な本発明の処方物は同様に、当該技術分野において適切であることがわかっているような担体を含むペッサリ、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォーム又はスプレー処方物をも内含する。
【０４５４】
本発明の化合物の局所的又は経皮的投与のための剤形には、粉末、スプレー、軟こう、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、溶液、パッチ及び吸入薬が含まれる。活性化合物は、薬学的に受容可能な担体、及び必要となり得るあらゆる防腐剤、緩衝液又は推進剤と無菌条件下で混合可能である。
【０４５５】
軟こう、ペースト、クリーム及びジェルは、本発明の活性化合物に加えて、動物及び植物性油脂、ろう、パラフィン、でんぷん、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク及び酸化亜鉛又はその混合物といった賦形剤を含有し得る。
【０４５６】
粉末及びスプレーは、本発明の化合物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末、又はこれらの物質の混合物を含有し得る。スプレーはさらに、ブタン及びプロパンといった揮発性未置換炭化水素及びクロロフルオロハイドロカーボンといったような慣習的な噴射剤を含有することができる。
【０４５７】
経皮パッチは本発明の化合物の体内への制御送達を提供するという付加的な利点を有する。かかる剤形は、適切な媒質内で化合物を溶解又は分散させることによって作ることができる。吸収促進薬も同様に、皮膚を横断して化合物の流束を増大させる目的で使用可能である。かかる流束の速度は、速度制御膜を具備するか又はポリマーマトリクス又はゲル内に化合物を分散させることによって制御可能である。
【０４５８】
眼科用処方物、眼科用軟こう、粉末、溶液なども同様に、本発明の範囲内に入るものとして考慮されている。
【０４５９】
非経口投与に適した本発明の薬学組成物は、糖、アルコール、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、処方物を意図されたレシピエントの血液と等張にする溶質又は懸濁又は増粘剤を含有し得る１つ以上の薬学的に受容可能な無菌等張水溶液又は非水溶液、分散、懸濁液又はエマルジョン又は使用直前に無菌の注射溶液又は分散液へと戻すことのできる無菌粉末と組合わせた形で、本発明の１つ以上の化合物を含む。
【０４６０】
該発明の薬学組成物の中で利用可能な適切な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びその適切な混合物、オリーブ油などの植物油そしてオレイン酸エチルといった注射用有機エステルが含まれる。例えば、レシチンといったコーティング材料の使用、分散の場合の所要粒度の維持及び表面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。
【０４６１】
これらの組成物は同様に、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤といったようなアシュバントを含有し得る。対象化合物に対する微生物の作用の防止は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などのさまざまな抗菌及び抗真菌剤を内含させることにより確保できる。組成物の中に糖、塩化ナトリウムなどといった等張剤を内含することも望ましい可能性がある。さらに、注射用薬学形態の長時間吸収を、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンといった吸収を遅延させる作用物質の内含によりもたらすことができる。
【０４６２】
一部のケースでは、薬物の効果を延長させるために、皮下又は筋内注射からの薬物の吸収を緩慢にすることが望まれる。このことは、低い水溶性を有する結晶性又は無晶質材料の液体懸濁物を使用することにより達成できる。このとき、薬物の吸収速度は、それ自体結晶サイズ及び結晶形態によって左右され得るその溶解速度によって変わる。代替的には、非経口投与された剤形の遅延吸収が、油ビヒクル内への薬物の溶解又は懸濁によって達成される。
【０４６３】
注射用デポ−剤形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドといったような生体分解性ポリマー内の対象化合物のマイクロカプセル封入マトリクスを形成することによって作られる。ポリマーに対する薬物の比率及び利用される特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御することができる。その他の生物分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が含まれる。デポ−注射用処方物も同じく、体の組織と相容性あるリポソーム又はマイクロエマルジョン中に薬物を捕捉することにより調製される。
【０４６４】
本発明の化合物がヒト及び動物に対し調合剤として投与される場合、それ自体で又は例えば薬学的に受容可能な担体との組合せの形で０．１〜９９％（より好ましくは１０〜３０％）の活性成分を含有する薬学組成物として、それらを与えることができる。
【０４６５】
本発明の調製物は、経口的、非経口的、局所的又は直腸経由で投与され得る。これらは当然のことながら、各投与経路に適した形態で与えられる。例えばそれらは、錠剤又はカプセルの形で、注射、吸入、点眼薬、軟こう、座薬などにより；注射、輸液又は吸入による投与；ローション又は軟こうによる局所投与及び座薬により直腸経由で投与される。経口投与が好まれる。
【０４６６】
本明細書で使用される「非経口投与」及び「非経口的に投与される」という語句は、通常は注射による経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、限定的な意味なく、静脈内、筋内、動脈内、くも膜下腔、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、髄腔内及び胸骨内注射及び輸液を含む。
【０４６７】
本明細書で用いる「全身投与」、「全身的に投与される」、「腹腔内投与」及び「腹腔に投与される」という語句は、患者の系の中に入りかくして代謝及びその他の同様のプロセス例えば皮下投与の対象となるように、中枢神経系内に直接投与以外の形で化合物、薬物又はその他の材料を投与することを意味する。
【０４６８】
これらの化合物は、例えばスプレーなどにより経口的又は経鼻的に、口腔及び舌下を含め粉末、軟膏又は点滴などにより直腸経由、膣内、非経口的、槽内及び局所的にといったものを含め、任意の適切な投与経路によって治療のためヒト及びその他の動物に投与することができる。
【０４６９】
選択された投与経路に関わらず、適切な水和した形で使用され得る本発明の化合物及び／又は本発明の薬学組成物は、当業者にとって既知の従来の方法により薬学的に受容可能な剤形に処方される。
【０４７０】
本発明の薬学組成物内の活性成分の実際の投薬量レベルは、患者にとって有毒となることなく、特定の患者、組成物及び投与様式について所望の治療的応答を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変動され得る。
【０４７１】
選択される投薬量レベルは、利用される本発明の特定の化合物又はそのエステル、塩又はアミドの活性、投与経路、投与時間、利用される特定の化合物の排せつ又は代謝速度、吸収速度及び吸収の程度、処置期間の長さ、利用される特定の化合物と組合わせた形で用いられる化合物及び／又は材料、治療対象の患者の年令、性別、体重、身体条件、全身健康状態及び既往症そして医療分野で周知の同様の因子といったさまざまな因子によって左右されることになる。
【０４７２】
当業者である医師又は獣医であれば、必要とされる薬学組成物の有効量を容易に判定し処方することができる。例えば、医師又は獣医は、薬学組成物内で使用される該発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するのに必要とされるものよりも低いレベルから開始し、所望の効果が達成されるまで該投薬量を漸進的に増大させることができる。
【０４７３】
一般に、該発明の化合物の適切な日用量は、治療効果を生み出すのに有効な最低用量である化合物の量となる。このような有効用量は、一般に上述の因子によって左右されることになる。一般に、指示された鎮痛効果のために用いられる場合の１人の患者のための本発明の化合物の経口、静脈内、脳室内及び皮下用量は、一日につき体重１キロあたり約０．０００１〜約１００ｍｇの範囲内となる。
【０４７４】
望ましい場合、一日を通して適当な間隔で、任意には単位剤形で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回又はそれ以上の小用量として、活性化合物の有効日用量を投与することができる。好ましい投薬は、一日１回投与である。
【０４７５】
本発明の化合物を単独で投与することも可能であるものの、該化合物を薬学処方物（組成物）として投与することが好ましい。
【０４７６】
該発明に従った化合物は、その他の調合薬から類推してヒトの医療又は獣医療で使用するためあらゆる適切な形での投与向けに処方することができる。
【０４７７】
別の態様においては、本発明は、１つ以上の薬学的に受容可能な担体（添加剤）及び／又は希釈剤と共に処方される上述の通りの対象化合物のうちの１つ以上のものを治療上有効な量だけ含む薬学的に受容可能な組成物を提供する。以下で詳述されるように、本発明の薬学組成物は、（１）例えば飲薬（水性又は非水性溶液又は懸濁液）、錠剤、ボーラス、粉末、顆粒、舌に塗布するためのペーストといった経口投与向け、（２）例えば無菌溶液又は懸濁液といった皮下、筋内又は静脈内注射による非経口投与向け；（３）皮膚、肺又は粘膜に塗布されたクリーム、軟こう又はスプレーといった局所施用向け；（４）例えばペッサリ、クリーム又はフォームとしての膣内又は直腸内向け；（５）舌下又は口腔向け  （６）眼科向け；（７）経皮向け又は（８）経鼻向けに適合されたものを含めた固体又は液体形態での投与のため特別に処方され得る。
【０４７８】
「治療」という用語は、予防、治療及び養生をも包含するように意図されている。
【０４７９】
この治療を受ける患者は、霊長類特にヒト及びその他の哺乳動物例えばウマ、ウシ、ブタ及びヒツジ及び家禽そしてペット全般を含めた、それを必要としているあらゆる動物である。
【０４８０】
該発明の化合物は、そのままの形でか又は薬学的に受容可能な担体との混和物の形で投与され得、同様にペニシリン、セファロスポリン、アミノグリコシド及びグリコペプチドといった抗菌剤と併用して投与することもできる。併用療法は、かくして、最初に投与されたものの治療的効果が、後続するものの投与時に完全に消滅していないような形での活性化合物の逐次的、同時及び分離投与を含んでいる。
【０４８１】
動物飼料に対する該発明の活性化合物の添加は好ましくは、活性化合物を有効量含有する適切な飼料プレミックスを調製し、それを完全配給量内に取込むことによって達成される。
【０４８２】
代替的には、活性成分を含有する中間濃縮物又は飼料サプリメントを飼料の中に配合することもできる。かかる飼料プレミックス及び完全配給料を調製し投与する方法は、参考本（例えば「Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ」、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ａｎｄ  ＣＯ．、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、米国、１９６９年又は「Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ  Ｆｅｅｄｓ  ａｎｄ  Ｆｅｅｄｉｎｇ」Ｏ  ａｎｄ  Ｂ  ｂｏｏｋｓ、Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ、Ｏｒｅ．、米国、１９７７年）の中に記載されている。
【０４８３】
ミセル
近年、薬学業界は、一部の脂肪親和性（不水溶性）薬学作用物質の生物学的利用能を改善させるべくマイクロ乳化技術を導入した。例としてはトリメトリン（ドルドヌー（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ）、Ｓ．Ｋ．、ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１７（１２）号、１６８５〜１７１３頁、１９９１年）及びＲＥＶ５９０１（シーン（Ｓｈｅｅｎ）、Ｐ．Ｃ、ら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  第８０（７）号、７１２〜７１４頁、１９９１年）が含まれる。なかでもマイクロ乳化は、循環系の代りにリンパ系に吸収を優先的に誘導し、かくして肝臓を迂回して肝胆道循環内の化合物の破壊を防止することによって、生物学的利用能を増強した。
【０４８４】
本発明の一態様においては、該処方物は本発明の化合物から形成されたミセル及び少なくとも１つの両親媒性担体を含有し、ここで該ミセルは約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。より好ましい実施形態は、約５０ｎｍ未満の平均直径をもつミセルを提供し、さらに一層好ましい実施形態は、約３０ｎｍ未満又はさらに約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。
【０４８５】
適切な両親媒性担体の全てが考慮されているものの、現在好まれている担体は、一般に、安全食品認定（ＧＲＡＳ）状態を有ししかも本発明の化合物を可溶化できると同時に溶液が複合水相（例えばヒトの胃腸管内に見られるようなもの）と接触するその後の段階でマイクロ乳化することのできるものである。通常、これらの必要条件を満たす両親媒性成分は２〜２０のＨＬＢ（親水性・親油性バランス）値を有し、その構造は、Ｃ−６〜Ｃ−２０の範囲内の直鎖脂肪族ラジカルを含有する。例としては、ポリエチレン−グリコール化脂肪質グリセリド及びポリエチレングリコールがある。
【０４８６】
特に好ましい両親媒性担体は、完全に又は部分的に水素化されたさまざまな植物油から得られるものといったような飽和及び一価不飽和ポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリドである。かかる油は有利には、トリ、ジ及びモノ脂肪酸グリセリド及び対応する脂肪酸のジ及びモノ−ポリエチレングリコールエステルから成り得、特に好ましい脂肪酸組成物には、カプリン酸４−１０、カプリン酸３−９、ラウリン酸４０−５０、ミリスチン酸１４−２４、パルミチン酸４−１４及びステアリン酸５−１５％が含まれる。別の有用な種類の両親媒性担体には、飽和又は一価不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮ−シリーズ）又は対応するエトキシル化類似体（ＴＷＥＥＮ−シリーズ）を伴う、部分的にエステル化されたソルビタン及び／又はソルビトールが含まれる。
【０４８７】
Ｇｅｌｕｃｉｒｅシリーズ、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｌａｂｒａｓｏｌ又はＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（全て、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｉｎｔ  Ｐｒｉｅｓｔ、フランス、が製造販売している）、ＰＥＧ−モノオレイン酸塩、ＰＥＧ−ジオレイン酸塩、ＰＥＧ−モノラウリン酸塩、及びジラウリン酸塩、レシチン、ポリソルビン酸塩８０など（米国及び世界中の数多くの会社により製造販売されている）を含めた市販されている両親媒性担体が特に考慮されている。
【０４８８】
ポリマー
本発明において使用するのに適した親水性ポリマーは、容易に水溶性を示し、小胞形成性脂質に対し共有結合により付着され得、しかも毒性効果無くインビボで寛容される（すなわち生体適合性ある）ものである。適切なポリマーとしては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとも呼ばれる）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも呼ばれる）ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー及びポリビニルアルコールが含まれる。好ましいポリマーは、約１００又は１２０ダルトンから最高約５，０００又は１０，０００ダルトンまで、そしてより好ましくは約３００ダルトンから約５，０００ダルトンまでの分子量をもつものである。特に好ましい実施形態においては、該ポリマーは、約１００〜約５，０００ダルトンの分子量をもつ、そしてより好ましくは約３００〜約５，０００ダルトンの分子量をもつポリエチレングリコールである。特に好ましい実施形態においては、ポリマーは７５０ダルトン（ＰＥＧ（７５０））のポリエチレングリコールである。ポリマーは、その中の単量体の数によって定義づけすることもできる。本発明の好ましい実施形態は、少なくとも約３つの単量体のポリマー、例えば３つの単量体から成るＰＥＧポリマー（約１５０ダルトン）を利用する。
【０４８９】
本発明において使用するのに適したものであり得るその他の親水性ポリマーとしてはポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド及び誘導体化セルロース、例えばヒドロキシメチルセルロース又はヒドロキシエチルセルロースが含まれる。
【０４９０】
一部の実施形態では、本発明の処方物は、ポリアミド、ポリカルボナート、ポリアルキレン、アクリル及びメタクリルエステルのポリマー、ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタン及びそのコポリマー、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸及びグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリブチリル酸、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリサッカリド、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリラート及びそれらのブレンド、混合物又はコポリマーより成る群から選択された生体適合性ポリマーを含む。
【０４９１】
シクロデキストリン
シクロデキストリンは、それぞれアルファ、ベータ又はガンマと呼称される６、７又は８個のグリコース単位から成る環式オリゴ糖である。６個未満のグリコース単位を有するシクロデキストリンの存在は分かっていない。グルコース単位は、アルファ−１，４−グリコシド結合により連結される。糖単位のいす形配座の結果として、全ての二次的ヒドロキシル基（Ｃ−２、Ｃ−３にある）は、環の片側に位置設定され、一方Ｃ−６にある全ての一次的ヒドロキシル基はもう一方の側に位置づけられている。その結果、外部面は親水性であり、シクロデキストリンを水溶性にしている。これとは対照的に、シクロデキストリンのキャビティは、原子Ｃ−３及びＣ−５の水素及びエーテル様の酸素によりライニングされているため、疎水性である。これらのマトリクスは、例えば１７−ベータエストラジオールといったようなステロイド化合物を含めたさまざまな比較的疎水性の化合物との複合体形成を可能にする（例えばヴァン・ウーデン（ｖａｎ  Ｕｄｅｎ）ら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．第３８号：１〜３〜１１３頁（１９９４年）参照）。複合体形成は、ファンデルワールス相互作用によって及び水素結合形成によって起こる。シクロデキストリン化学の一般的再考についてはウェンツ、Ａｇｎｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、第３３号：８０３〜８２２頁（１９９４年）を参照のこと。
【０４９２】
シクロデキストリン誘導体の物理化学的特性は、置換の種類及び度合に強く依存している。例えば、その水溶性は、不溶性（例えばトリアセチル−ベーターシクロデキストリン）から１４７％（ｗ／ｖ）の可溶性（Ｇ−２−ベータシクロデキストリン）の範囲内にある。さらに、これらは多くの有機溶剤中で可溶である。シクロデキストリンの特性は、その溶解度を増減させることによりさまざまな処方構成要素の溶解度を制御できるようにする。
【０４９３】
数多くのシクロデキストリン及びその調製方法が記載されてきた。例えば、パルメータ（Ｐａｒｍｅｔｅｒ）（Ｉ）ら（米国特許第３，４５３，２５９号明細書）及びグラメラ（Ｇｒａｍｅｒａ）ら（米国特許第３，４５９，７３１号明細書）が、電気的中性シクロデキストリンについて記載した。その他の誘導体としては、カチオン特性をもつシクロデキストリン［パルメータ（II）、米国特許第３，４５３，２５７号］、不溶性架橋シクロデキストリン（ソルムス（Ｓｏｌｍｓ）、米国特許第３，４２０，７８８号明細書）及びアニオン特性を伴うシクロデキストリン［パルメータ（III）、米国特許第３，４２６，０１１号］が含まれる。アニオン特性を伴うシクロデキストリン誘導体のうち、カルボン酸、亜リン酸、ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸、チオホスホン酸、チオスルフィン酸及びスルホン酸が、親シクロデキストリンに付加されてきた［パルメータ（III）前掲書を参照のこと］。その上、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン誘導体がステラ（Ｓｔｅｌｌａ）ら（米国特許第５，１３４，１２７号明細書）によって記載されてきた。
【０４９４】
リポソーム
リポソームは、水性内部区画をとり囲む少なくとも１つの脂質２重層から成る。リポソームは膜のタイプ及びサイズにより特徴づけされ得る。小さな単層小胞（ＳＵＶ）は単一の膜を有し、一般的に直径が０．０２〜０．０５μｍの範囲内にある。大きい単層小胞（ＬＵＶＳ）は一般的に０．０５μｍ超のオリゴ層状の大きな小胞であり、多層状の小胞は多数の通常は同心的な膜層を有し、一般的には０．１μｍより大きい。複数の非同心膜すなわちより大きな小胞内に収納された複数のより小さな小胞を伴うリポソームは多胞性小胞と呼ばれる。
【０４９５】
本発明の１つの態様は、リポソーム膜が、搬送能力の高くなったリポソームを提供するように処方されている場合の本発明の化合物を含有するリポソームを含む処方物に関する。代替的には又は付加的には、本発明の化合物はリポソームのリポソーム２重層内に含有されていてもよいし又その上に吸着されてもよい。本発明の化合物は、脂質表面活性剤と凝集されリポソーム内部空間内で搬送され得る。このような場合、リポソーム膜は、活性作用物質−界面活性剤凝集体の分断効果に抵抗するように処方される。
【０４９６】
本発明の一実施形態に従うと、リポソームの脂質２重層はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で誘導体化された脂質を含有し、このため、ＰＥＧ鎖は、脂質２重層の内部表面からリポソームにより封入された内部空間の中まで延び、脂質２重層の外部から周囲の環境まで延びるようになっている。
【０４９７】
本発明のリポソーム内に含有された活性作用物質は、可溶化された形態をとる。表面活性剤及び活性作用物質（例えば目的の活性作用物質を含有するエマルジョン又はミセル）の凝集体を本発明に従ってリポソームの内部空間内に捕捉することができる。表面活性剤は活性作用物質を分散させ可溶化させるように作用し、（例えば約Ｃ１４〜約Ｃ２０の）さまざまな鎖長の生体適合性あるリソホスファチジルコリン（ＬＰＣ）を含む（ただしこれに限定されるわけではない）適切なあらゆる脂肪族、環式脂肪族又は芳香族表面活性剤の中から選択可能である。ＰＥＧ−脂質といったようなポリマー誘導体化脂質はミセル／膜融合を阻害するように作用することになり、又表面活性剤分子に対する重合の付加が表面活性剤のＣＭＣを減少させミセル形成を補助することから、これらも又利用可能である。好ましいのは、ミクロモル範囲内のＣＭＣをもつ表面活性剤である。さらに高いＣＭＣの表面活性剤を、本発明のリポソーム内部に捕捉されたミセルを調製するために利用することもできるが、ミセル表面活性剤単量体はリポソーム２重層の安定性に影響を及ぼす可能性があり、所望の安定性をもつリポソームを設計する上で１つの因子になると思われる。
【０４９８】
本発明に従ったリポソームは、当該技術分野において既知のさまざまな技術のいずれかによって調製され得る。例えば米国特許第４，２３５，８７１号明細書；ＰＣＴ出願国際公開第９６／１４０５７号パンフレット；Ｎｅｗ  ＲＲＣ、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０年）、３３〜１０４頁；ラシック（Ｌａｓｉｃ）ＤＤ、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｓｉｃｓ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  ＢＶ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９９３年を参照のこと。
【０４９９】
例えば、本発明のリポソームは、例えばリポソーム内で望まれる誘導体化された脂質の最終モル百分率に対応する脂質濃度で、脂質移植されたポリマーから成るミセルに対し予め形成されたリポソームを曝露することなどによって、予め形成されたリポソーム内に親水性ポリマーで誘導体化された脂質を拡散させることにより調製可能である。親水性ポリマーを含有するリポソームも同様に、当該技術分野において既知のとおりに、均質化、脂質、電界水和又は押出し加工技術により形成可能である。
【０５００】
別の処方手順の例においては、活性作用物質をまず第１に音波処理により、リソホスファチジルコリン又は、疎水性分子を容易に可溶化するその他の低ＣＭＣ表面活性剤（ポリマー移植された脂質）の中に分散させる。結果として得られた活性作用物質のミセル懸濁液はこのとき、適切なモルパーセントのポリマー移植脂質又はコレステロールを含有する乾燥した脂質試料を再水和させるために用いられる。このとき、脂質及び活性作用物質の懸濁液は、当該技術分野において既知のとおりの押出し加工技術を用いてリポソームへと形成され、結果として得られたリポソームは標準カラム分離により、未封入溶液から分離される。
【０５０１】
本発明の一態様においては、リポソームは選択されたサイズ範囲内の実質的に均質なサイズを有するように調製される。１つの有効なサイズ決定方法には、選択された均等な細孔径をもつ一連のポリカーボネート膜を通してリポソームの水性懸濁液を押出し加工することが関与する。該膜の細孔径は、その膜を通した押出し加工により生成されるリポソームの最大サイズにほぼ対応することになる。米国特許第４，７３７，３２３号明細書を参照のこと。
【０５０２】
放出修飾物質
本発明の処方物の放出特性は、封入材料、封入された薬物の濃度、及び放出修飾物質の存在によって左右される。例えば、放出は、胃内といった低ｐＨで又は腸内といった高ｐＨでのみ放出するｐＨ感応性コーティングを用いて、ｐＨ依存性となるように操作可能である。胃内を通過してしまうまで放出が起こらないようにするため、腸溶性コーティングを使用することができる。異なる材料の中に封入されたシアンアミドの多重コーティング又は混合物を用いて、胃内の初期放出とそれに続く腸内の晩期放出を得ることができる。放出は同様に、カプセルからの拡散により薬物の放出又は水摂取を増大させることのできる塩又は細孔形成剤の内含によって操作することもできる。放出速度を制御するために、薬物の溶解度を修飾する賦形剤を使用することもできる。マトリクスの分解又はマトリクスからの放出を増強させる作用物質も取込むことができる。これらは、化合物に応じて、薬物に添加するか又は別の相として（すなわち微粒子として）添加するか、又はポリマー相に同時溶解させることができる。あらゆるケースにおいて、その量は０．１〜３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）であるべきである。分解エンハンサのタイプには、硫酸アンモニウム及び塩化アンモニウムといったような無機塩、クエン酸、安息香酸及びアスコルビン酸といったような有機酸、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛、及び水酸化亜鉛といった無機塩基及び硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン及びトリエタノールアミンといったような有機塩基、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）及びＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）といった表面活性剤が含まれる。マトリクスに微細構造を添加する細孔形成剤（すなわち無機塩及び糖といった水溶性化合物）が、微粒子として添加される。その範囲は１〜３０パーセント（ポリマーｗ／ｗ）の間とするべきである。
【０５０３】
摂取は同じく、消化管内の粒子の滞留時間を改変することによって操作可能である。これは例えば粘膜接着性ポリマーで粒子をコーティングすることによってか又は封入材料として粘膜接着性ポリマーを選択することによって達成できる。例としては、キトサン、セルロース、及び特にポリアクリラートといったような遊離カルボキシル基を伴う大部分のポリマーが含まれる（本明細書で使用される通り、ポリアクリラートというのは、アクリラート基及びシアノアクリラート及びメタクリラートといったような修飾されたアクリラート基を含むポリマーを意味する）。
【実施例】
【０５０４】
一般的に記載されてきた本発明について、本発明の一部の態様及び実施形態の例示のみを目的として包含し、本発明を限定するものとして意図しない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解できるであろう。
【０５０５】
実施例１
ナプロキセン担持テザーの合成
【化７５】
2008501319.tif 000077
（ｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉ）ＬｉＯＨ／ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ；（ｉｉｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタン；（ｉｖ）セリノール、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｖ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン及び（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固体支持体及び（ｖｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン又は２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（又はテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０５０６】
Ｎ−ナプロキシル−６−アミノヘキサン酸メチルエステル（３ａ）：
文献（Ｏｒｇ．Ｓｙｎ．、１９８４年、第６３号、１８３頁）由来の報告済み手順に従ってエステル３ａを調製した。ナプロキセン（１ａ、１０．００ｇ、４３．４２７ｍｍｏｌ、アルドリッチから購入）及び４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、０．５３ｇ、４．３３８ｍｍｏｌ、アルドリッチから購入）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣＣ、６．８ｍＬ、４３．９１４ｍｍｏｌ、アルドリッチから購入）を溶液中に加えて５分間周囲温度で撹拌した。６−アミノヘキサン酸メチルエステルヒドロクロリド（２、１０．００ｇ、５７．４０８ｍｍｏｌ、フルカから購入）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、１０ｍＬ、アルドリッチから購入）を、ＤＩＣＣ添加の５分後に撹拌溶液中に加え一晩周囲温度で撹拌した。ＤＭＦを真空下で反応から除去し、生成物を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、２００ｍＬ）中に抽出し、ＫＨＳＯ４水溶液、水、重炭酸ナトリウム溶液及び水で連続的に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）上で乾燥させ、ろ過した。ヘキサンを添加することによってＥｔＯＡｃ抽出物から白色固体を沈殿させ所望の化合物３ａ１１．２０ｇ（７２．１４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．９５−７．９２（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．２＆５．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．７６−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．４３−７，４０（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝１．６及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５−７．２４（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３−７．１１（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝２．４及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．７０−３．６５（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８及び７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．５４（ｓ、３Ｈ）、３．００−２．９７（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．２１−２．１７（ｔ、２Ｈ）、１．４８−１．２９（ｍ、７Ｈ）、１．１９−１．１３（ｍ、２Ｈ）。
【０５０７】
Ｎ−ナプロキシル−６−アミノヘキサン酸（４ａ）：
エステル３ａの加水分解を、以前に報告された通り（ラジーブ（Ｒａｊｅｅｖ）ら、２００２年、第４号、４３９５頁）に実施した。化合物３ａ（１０．８０ｇ、３０．２４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン−水（ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ）混合物（４：１、４０ｍＬ）中に懸濁させ、ＬｉＯＨ（１．６５ｇ、３９．３２ｍｍｏｌ）と共に周囲温度で４時間撹拌した。ＴＨＦを真空下で反応から除去し、濃ＫＨＳＯ４溶液を添加することによって水から遊離酸を沈殿させ、水で徹底的に洗浄し、焼結フィルタを通してろ過し、ジエチルエーテルと共に研和しＰ２Ｏ５上で一晩真空下にて乾燥させて酸４ａを白色固体、１０．２２ｇ（９８．４％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１１．９６（ｂｓ、１Ｈ）、７．９５−７．９２（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７Ｈｚ、１Ｈ）、７．７７−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．４３−７．４１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５−７．２４（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２．４４Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３−７．１１（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝１．９５、２．４４及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．７９、９．２７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．７１−３．６５（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４、７．３３Ｈｚ、１Ｈ）、３．０２−２．９７（ｍ、２Ｈ）、２．１３−２．０９（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、１．４６−１．３０（ｍ、７Ｈ）、１．２１−１．１５（ｍ、２Ｈ）。
【０５０８】
Ｎ−ナプロキシル−６−アミノヘキサン酸ペンタフルオロフェニルエステル（５ａ）：
化合物４ａ（５．００ｇ、１４．５７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１８ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）及びペンタフルオロフェノール（３．５０ｇ、１９．０２ｍｍｏｌ、アルドリッチから購入）をジクロロメタン（４０ｍＬ）中に取り込み、ＤＣＣ（３．００ｇ、１４．５４ｍｍｏｌ）を溶液中に加えた。反応混合物を周囲温度で８時間撹拌した。ＥｔＯＡｃを添加することにより該反応混合物を１００ｍＬまで希釈し、沈殿したＤＣＵをろ過により除去した。続いてシリカゲルカラム（溶離剤ヘキサン／ＥｔＯＡｃ４：１）を通して残渣をろ過しろ液を組合せ、真空下で溶媒を蒸発させ、所望のエステル５ａ及び反応由来の余剰のペンタフルオロフェノールの混合物（７．９０ｇ）を得た。かくして得られた粗製生成物をさらなる精製なく実験を継続するために直接使用した。
【０５０９】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノール抱合体（６ａ）：
ペンタフルオロフェノールエステル５ａをＴＥＡの存在下でセリノールと共に撹拌し化合物６ａを得た（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９１年、第５６号、１７１３頁）。化合物５ａ（４．００ｇ、７．８６ｍｍｏｌ）とセリノール（１．５ｇ、１６．４６ｍｍｏｌ、アルドリッチから購入）をジクロロメタン（３０ｍＬ）中で懸濁させて、トリエチルアミン（ＴＥＡ、２．３ｍＬ、アルドリッチから購入）を懸濁液中に加え、周囲温度で２時間撹拌した。反応の進行中に白色の沈殿物が形成された。２時間後、焼結フィルタを通して沈殿物をろ過し、余剰のジクロロメタン、水及びジエチルエーテルで連続的に洗浄して所望の生成物６ａ（２．８２ｇ、８６．２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．９５−７．９２（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．４９Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．７７−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．４３−７．３９（ｍ、２Ｈ、Ｄ２Ｏ交換後の１Ｈについて計上）、７．２６−７．２５（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２．１４Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３−７．１１（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝２．４４及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．８５Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８−４．５５（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．４９Ｈｚ、２Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．７１−３．６５（ｍ、２Ｈ）、３．３７−３．３５（ｔ、Ｄ２Ｏ交換後にダブレットになった、４Ｈ）、３．０２−２．９５（ｍ、２Ｈ）、２．０３−２．０１（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３２、７．６３Ｈｚ、２Ｈ）、１．４６−１．３０（ｍ、７Ｈ）、１．２０−１．１２（ｍ、２Ｈ）。
【０５１０】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノールモノＤＭＴ（７ａ）：
報告済の文献の手順（ラジーブ（Ｒａｊｅｅｖ）ら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、２００３年、第５号、３００５頁）を修正することによって化合物６ａを調製した。化合物６ａ（２．５０ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（０．０７５ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）の固体混合物をＰ２Ｏ５上で一晩真空下にて乾燥させた。該固体混合物をアルゴン下で無水ピリジン（１００ｍＬ）中に懸濁させ、加熱して均質な溶液を得た。混合物の温度を室温にしてから撹拌した。４，４’−ジ−Ｏ−メチルトリチルクロリド（２．２４ｇ、６．６１ｍｍｏｌ、ケム・ジーン・コーポレーション（Ｃｈｅｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）から購入）を２０ｍＬの無水ジクロロメタン中に別途溶解させ、撹拌ピリジン溶液中にアルゴン下で４５分間にわたり滴下により加えた。反応混合物をさらに一晩撹拌した。溶媒を該反応混合物から除去し、生成物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中に抽出し、水、ＮａＨＣＯ３溶液及び水で連続的に洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて固体塊になるまで蒸発させた。所望の生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製した：（ａ）溶離剤：ジクロロメタン中の１％メチルアルコール（ＭｅＯＨ）−１．６０ｇの望ましくないビスＤＭＴ誘導体（２６．１％）及び（ｂ）ジクロロメタン中の５％ＭｅＯＨ−２．５０ｇの所望の生成物７ａ（５７．９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．９４−７．９１（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．４９Ｈｚ、ＩＨ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．７−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．６０−７．５８（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．５５Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．４３−７．１０（ｍ、１２Ｈ）、６．８６−６．８４（ｄ、４Ｈ）、４．６２−４．５９（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．１８、５．４９Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、４．０１−３．９６（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７１−３．６５（ｍ、７Ｈ）、３．４４−３．４２（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．１９、５．４９Ｈｚ、２Ｈ）、３．０３−２．８７（ｍ、４Ｈ）、２．０５−２．０１（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３、７．６３Ｈｚ、２Ｈ）、１．４８−１．３０（ｍ、７Ｈ）、１．２１−１．１４（ｍ、２Ｈ）。
【０５１１】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノールＣＰＧ（８ａ）：
報告済みの手順（スクシニル化についての参考文献：ラジーブら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、２００３年、第５号、３００５頁、及びＣＰＧへの抱合についての参考文献：クマール（Ｋｕｍａｒ）ら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９６年、第１５号、８７９頁）に従って所望の固体支持体８ａを調製した。化合物７ａ（１．００ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（０．１７ｇ、１．６９ｍｍｏｌ、アルドリッチから購入）及びＤＭＡＰ（０．２１ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の混合物を、７ｍＬの無水エチレンジクロリド中に２４時間懸濁させた。ジクロロメタンを添加することによって反応混合物を５０ｍＬまで希釈させ、希クエン酸水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて乾燥状態に至るまで蒸発させた。得られた残渣をさらにＰ２Ｏ５上で真空下にて乾燥させて、ほぼ純粋であるが粗製のモノスクシナートを白色固体として得た（１．１０ｇ、９６．５％）。得られた生成物をさらなる精製なく後続の反応用のために直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．９４−７．９１（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．１９、５．４９Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．８３−７．８１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．９４Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．７６−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．４２−７．１０（ｍ、１２Ｈ）、６．８８−６．８６（ｄ、４Ｈ）、４．１８−４．１２（ｍ、２Ｈ）、４．０７−３．９８（ｍ、２Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７１−３．６６（ｍ、７Ｈ）、３．００−２．９１（ｍ、４Ｈ）、２．４０（ｓ、４Ｈ）、２．０４−２．００（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３２Ｈｚ、２Ｈ）、１．４４−１．２２（ｍ、７Ｈ）、１．１９−１．１５（ｍ、２Ｈ）。
【０５１２】
２，２’−ジチオビス（５−ニトロピリジン）（０．３８ｇ、１．２２ｍｍｏｌ、Ａｄｒｉｃｈから購入）を、アセトニトリルとエチレンジクロリドの１：１混合物（５ｍＬ）中に溶解させて、２ｍＬの無水アセトニトリル中のナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノール抱合モノＤＭＴモノスクシナート（１．００ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（０．１６ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の懸濁液中に加えた。トリフェニルホスフィン（Ｐｈ３Ｐ、０．３２ｇ、１．２２ｍｍｏｌ、アルドリッチから購入）を該反応混合物中に加え、３〜４分間振盪した。５００’サイズ及び１１２．７μＭ／ｇの投入量で長鎖アミノアルキル多孔性ガラス（ＣＰＧ）５．５ｇ（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から購入）、及び余剰のアセトニトリル（ＣＰＧを完全に浸漬するため）を反応混合物中に加え、該懸濁液を周囲温度で４５分間振盪（撹拌）させた。焼結漏斗を通してＣＰＧをろ過し、アセトニトリル、ジクロロメタン及びジエチルエーテルで徹底的に洗浄し、その後ピリジン−ジクロロメタン中に再懸濁させ、ＤＩＥＡの存在下で無水酢酸を用いて処置し、ＣＰＧ上の未反応アミノ基をキャッピングした。１０分後、ＣＰＧをろ過し、ジクロロメタン、アセトニトリル及びジエチルエーテルで徹底的に洗浄し、その後に真空下で乾燥させ５４．１２μＭ／ｇの投入量で所望のＣＰＧ８ａを得た。文献（プラカッシュ（Ｐｒａｋａｓｈ）ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００２年、第６７号、３５７頁及び同書中で引用されている参照文献）中で報告されている通りに投入量を判定した。
【０５１３】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノールモノＤＭＴホスホルアミダイト（９ａ）：
文献（ラジーブら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、２００３年、第５号、３００５頁及び同書中で引用されている参照文献）中で報告されている通りにホスホルアミダイトを調製した。化合物７ａ（１．００ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（０．１２ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）をＰ２Ｏ５上で一晩真空にて乾燥させ、その後アルゴン大気下で無水アセトニトリル（５ｍＬ）中で懸濁させた。２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン（０．６９ｍＬ、２．０９ｍｍｏｌ）を該懸濁液中に加え、周囲温度で１４時間撹拌した。溶媒を真空下で反応から除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中で懸濁させ、希ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、それに続けて標準的な処理を行った。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより所望のアミダイト９ａを精製した；溶離剤：ＥｔＯＡｃ；収量０．７９ｇ（６１．８％）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６１．８ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、２５℃）：δ１４６．０１、１４５．６９。
【０５１４】
ナプロキセンペンタフルオロフェノールエステル（Ｉｃ）：
ナプロキセン（１、１１．２５ｇ、４８．８６ｍｍｏｌ）、ペンタフルオロフェノール（１０．００ｇ、５４．３３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．６０ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）中に溶解させて周囲温度で撹拌した。ｌ，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１１．００ｇ、５３．３１ｍｍｏｌ）を該溶液中に加え、撹拌を一晩継続した。反応の進行中に１，３−ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）が沈殿した。該沈殿したＤＣＵをろ過し、ＤＭＦで洗浄し、ろ液を組合せて真空下でＤＭＦを除去した。得られた油性の残渣を、シリカゲルの小カラム（溶離剤：ヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ）を通してろ過して溶解したＤＣＵを除去し、所望のエステル１ｃと余剰のペンタフルオロフェノールの混合物を得た（２０．３０ｇ）。かくして得られた粗製生成物を実験を進めるためにさらなる精製なく直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．８５−７．８１（ｍ、３Ｈ）、７．４８−７．４６（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝１．５３及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．５５Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２−７．３１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２．４４Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８−７．１６（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝２．４４及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．８５Ｈｚ、１Ｈ）、４．４７−４．４４（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．０２Ｈｚ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、１．６３−１．６１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３４Ｈｚ、３Ｈ）。
【０５１５】
実施例２
イブプロフェン担持テザーの合成
【化７６】
2008501319.tif 000078
（ｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉ）ＬｉＯＨ／ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ；（ｉｉｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタン；（ｉｖ）セリノール、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｖ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン及び（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固体支持体及び（ｖｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン又は２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（又はテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０５１６】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸メチルエステル（３ｂ）：
イブプロフェン（１ｂ、５．０ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ、アクロス・オーガニック（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃ）から購入）、メチル６−アミノヘキサン酸モノヒドロクロリド（２、６．６０ｇ、３６．３３ｍｍｏｌ、フルカから購入）及びＤＭＡＰ（０．３０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ））を２００ｍＬの丸底フラスコ内でジクロロメタン（６０ｍＬ）中に懸濁させ、ＤＣＣ（５．００ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ）を懸濁液中に加えて３分間撹拌した。３分後、３．６ｍＬ（２５．８３ｍｍｏｌ）のＴＥＡを該反応中に加え１８時間周囲温度で撹拌を続けた。溶媒及び余剰のＴＥＡを真空下で反応から除去し、得られた残渣をジエチルエーテルで研和し、焼結漏斗を通してろ過してＤＣＵを除去した。ろ液を組合せ、回転蒸発器上で蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中に再溶解させ、ＫＨＳＯ４溶液、水、ＮａＨＣＯ３溶液及び水で連続的に洗浄し、その後に無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で溶媒を蒸発させて化合物３ｂの黄色味がかった粘性残渣を得た（８．０ｇ）。かくして得られた粗製生成物を後続の反応のためにさらなる精製なく直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．８６−７．８４（ｂｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３９、５．００Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．１９−７．０３（ｍ、４Ｈ）、３．５６（ｓ、３Ｈ）、３．５３−３．４７（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．０５Ｈｚ、１Ｈ）、３．００−２．９５（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．６４、５．８１Ｈｚ、２Ｈ）、２．３９−２．３７（ｍ、２Ｈ、回転異性体の混合物）、２．２３−２．２０（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．４５、７．０５Ｈｚ、２Ｈ）、１．８１−１．７４（ｍ、１Ｈ）、１．４９−１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．３６−１．２６（ｍ、５Ｈ）、１．１９−１．１１（ｍ、２Ｈ）、０．８４−０．８２（ｍ、６Ｈ、回転異性体の混合物）。
【０５１７】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸（４ｂ）：
化合物３ｂ（８．００ｇ、２４．０１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ（４：１、４０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１．２１ｇ、２８．８４ｍｍｏｌ）と共に４時間撹拌した。該反応混合物から溶媒を真空下で除去し、残渣を濃ＫＨＳＯ４溶液で洗浄した。対応するナプロキセン類似体４ａとは異なり、遊離酸４ｂは水相から沈殿せず、従って該水相をＥｔＯＡｃを用いて繰り返し抽出し、抽出物を組合せ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、かつ真空下で蒸発させて僅かに黄色味がかったの粘性残渣６．６０ｇ（８６．１％）を得た。かくして得られた酸４ｂをその後の実験のためにさらなる精製なく直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１１．９６（ｂｓ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．８７−７．８４（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３９Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．１９−７．０４（ｍ、４Ｈ）、４．０４−３．９９（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．０５Ｈｚ、１Ｈ）、３．６２−３．５７（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．０５Ｈｚ、０．１Ｈ、小回転異性体）、３．５３−３．４７（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．０５Ｈｚ、１．９Ｈ）、３．００−２．９５（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．２２Ｈｚ、２Ｈ）、２．４１−２．３７（ｍ、２Ｈ、回転異性体の混合物）、２．１４−２．１０（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．４７、７．０５Ｈｚ、２Ｈ）、１．８１−１．７４（ｍ、１Ｈ）、１．４６−１．４０（ｍ、２Ｈ）、１．３６−１．２６（ｍ、５Ｈ）、１．２０−１．１２（ｍ、２Ｈ）、０．８５−．８２（ｍ、６Ｈ、回転異性体の混合物）。
【０５１８】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸セリノール抱合体（６ｂ）：
化合物４ｂ（６．６０ｇ、２０．６７６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．２６ｇ、２．１２８ｍｍｏｌ）及びペンタフルオロフェノール（５．７０ｇ、３０．９７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）中に溶解させ、撹拌溶液中にＤＣＣ（４．２７ｇ、２０．７０ｍｍｏｌ）を加えた。該反応混合物を８時間撹拌させた。沈殿したＤＣＵをろ過により除去し、ろ液を蒸発させて所望のエステル５ｂを含有する粗製油を得た。かくして得られた粗製の５ｂを、ＴＥＡ（８ｍＬ）の存在下でジクロロメタン中のセリノール（３．５ｇ、３８．４２ｍｍｏｌ）と共に２時間撹拌した。反応の進行中に白色の沈殿物が形成され、これをろ過し、ジクロロメタン、水及びジエチルエーテルで連続的に洗浄し、Ｐ２Ｏ５上で乾燥させて２．４ｇの生成物６ｂを得た。ＥｔＯＡｃを用いた水相の抽出により、さらに１．０５ｇの所望の生成物６ｂを得た。組合せ収量は４２．５％であった。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．８７−７．８４（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．８６、５．３７Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．４２−７．４０（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．８１Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．１９−７．１７（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．３０Ｈｚ、２Ｈ）、７．０６−７．０４（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．３０Ｈｚ、２Ｈ）、４．５７（ｂｓ、２Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、３．６９−３．６３（ｍ、１Ｈ）、３．５３−３．４７（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８３Ｈｚ、１Ｈ）、３．３６−３．３４（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７Ｈｚ、４Ｈ）、３．０２−２．９１（ｍ、２Ｈ）、２．３９−２．３７（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３４Ｈｚ、２Ｈ）、２．０４−２．００（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、１．８１−１．７５（ｍ、１Ｈ）、１．４４−１．２６（ｍ、７Ｈ）、１．１８−１．１２（ｍ、２Ｈ）、０．８４−０．８３（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．３５Ｈｚ、６Ｈ）。
【０５１９】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸セリノールモノＤＭＴ（７ｂ）：
化合物６ｂ（３．００ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（２．８５ｇ、８．４１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．２０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）の固体混合物を２００ｍＬのＲＢ中に取り込み、Ｐ２Ｏ５上で一晩真空下にて乾燥させた。アルゴン下で該混合物中に無水ピリジン（４０ｍＬ）を加え、一晩撹拌した。ピリジンを反応から除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中で懸濁させ、標準的な処理を続けた。所望のモノＤＭＴ及びビスＤＭＴ生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより分離した（溶離剤：ジクロロメタン中の２〜３％メタノール、１７０ｇ（２２．３％、ビスＤＭＴ誘導体）及び溶離剤：ジクロロメタン中の４％メタノール、１．８９ｇ（３５．６％、所望のモノＤＭＴ生成物７ｂ））。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．８３−７．８０（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．５８−７．５５（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．３４−７．３２（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２６−７．１４（ｍ、９Ｈ）、７．０２−７．００（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．８１Ｈｚ、２Ｈ）、６．８３−６．８１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ、４Ｈ）、４．５８−４．５６（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７、４．８８Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、３．９５−３．９３（ｍ、１Ｈ）、３．６８（ｓ、６Ｈ）、３．４８−３．４５（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３４Ｈｚ、１Ｈ）、３．４１−３．３８（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７Ｈｚ、２Ｈ）、２．９６−２．８４（ｍ、４Ｈ）、２．３４−２．３３（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、２．０２−１．９８（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３、７．８１Ｈｚ、２Ｈ）、１．７６−１．６９（ｍ、１Ｈ）、１．４４−１．３６（ｍ、２Ｈ）、１．３３−１．２３（ｍ、５Ｈ）、１．１６−１．０８（ｍ、２Ｈ）、０．８０−０．７８（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．３５Ｈｚ、６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１７４．０、１７２．８、１５８．３、１４５．４、１３９．９、１３９．７、１３６．２、１３０．１、１２９．２、１２８．２、１２８．１、１２７．３、１１３．５、８５．５、６１．０、５５．４、５１．１、４５．１、４４．６、３５．７、３０．０、２９．１、２６．３、２５．４、２２．５、１８．８。
【０５２０】
イブプロフェン−６−アミノヘキサン酸−セリノールＣＰＧ（８ｂ）：
対応するナプロキセン誘導体について記載される通りに、対応する前駆体７ｂ（１．００ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．２７ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）及び無水コハク酸（０．２２ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）から所望のスクシナート（０．９８ｇ、８５．７％）を合成した。コハク酸誘導体を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤：ジクロロメタン中の５％メタノール）により精製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．８６−７−８０（ｍ、２Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．３４−７．３２（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、７．２８−７．１３（ｍ、９Ｈ）、７．０２−７．００（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．３０Ｈｚ、２Ｈ）、６．８５−６．８３（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ、４Ｈ）、４．１４−１．１０（ｂｍ、２Ｈ）、４．０２−３．９８（ｍ、１Ｈ）、３．６８（ｓ、６Ｈ）、３．５０−３．４４（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３、６．８３Ｈｚ、２Ｈ）、２．９６−２．８７（ｍ、２Ｈ）、２．３５−２．３３（ｍ、６Ｈ）、２．５１−２．４５（ｍ、７Ｈ、２Ｈ及びＤＭＳＯ−ｄ６）、２．０１−１．９６（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３２Ｈｚ、２Ｈ）、１．７７−１．６９（ｍ、１Ｈ）、１．４２−１．２２（ｍ、７Ｈ）、１．１５−１．０７（ｍ、２Ｈ）、０．８０−０．７８（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６，３５Ｈｚ、６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１７４．９、１７４．３、１７３．２、１５８．５，１４５．３、１３９．９、１３９．８、１３６．０、１３０．２、１２９．３、１２８．４、１２８．１、１２７．４、１１３．６、８５．８、５５．５、４６．１、４６．１、４５．３、４４．７、３５．６、３０．１、２９．０、２６．２、２５．４、２２．６、１８．８。
【０５２１】
対応するナプロキセン類似体８ａの調製について記載された通りに、５００’サイズ及び１６２．５μＭ／ｇの投入量で、かくして得られた０．９２ｇ（１．１６ｍｍｏｌ）のイブプロフェンスクシナート、２，２’−ジチオビス（５−ニトロピリジン）（０．３７ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１５ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、Ｐｈ３Ｐ（０．３１ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）及び長鎖アミノアルキル多孔性ガラス（ＣＰＧ）から８５．６２μＭ／ｇの充填能力を持つ所望のＣＰＧ８ｂ（４．５０ｇ）を、調製した。
【０５２２】
イブプロフェンペンタフルオロフェノールエステル（１ｄ）：
イブプロフェンペンタフルオロフェノールエステル（１ｄ）を、イブプロフェン（１ｂ、５．００ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ）、ペンタフルオロフェノール（５．４ｇ、２９．０２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（５．００ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．３０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）から、ナプロキセン（１ａ）のペンタフルオロフェノールエステル（１ｃ）の合成について記載された通りに調製した。
【０５２３】
実施例３
ナプロキセン担持リンカーの合成
【化７７】
2008501319.tif 000079
（ｉ）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ／ジクロロメタン−ＤＭＦ；（ｉｉ）ペンタフルオロフェノール、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ／ジクロロメタン；（ｉｉｉ）セリノール、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｖ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖ）Ｐｄ−Ｃ（１０％）、ギ酸アンモニウム；（ｖｉ）ナプロキセン−ＮＨＳエステル（１４）、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｖｉｉ）イブプロフェン−ＮＨＳエステル（１５）、ＴＥＡ／ジクロロメタン。
【０５２４】
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸ペンタフルオロフェノールエステル１１ｂ：
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸（１０、３０．３１ｇ、１１４．２５ｍｍｏｌ、ノババイオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）から購入）、ペンタフルオロフェノール（２５．００ｇ、１３５．８３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１．５４ｇ、１２．６０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）中に取り込み、これに対してＤＣＣ（２６．００ｇ、１２１．０１ｍｍｏｌ）を撹拌下でゆっくりと加えた。添加中に、該反応の温度が上昇し、ジクロロメタンは沸騰し始め、従ってこれを室温まで冷却して、一晩撹拌させた。反応混合物にジエチルエーテルを添加して２００ｍＬまで希釈し、その後に焼結漏斗を通してろ過してＤＣＵを除去し、残渣をジエチルエーテルで洗浄し、洗浄液を組合せ、乾燥状態まで蒸発させた。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２：１）により所望の生成物１１ｂを精製した（収量４３．５４ｇ（８８．４％））。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．３６−７．２３（ｍ、６Ｈ）、４．９９（ｓ、２Ｈ）、３．０１−２．９６（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．３５Ｈｚ、２Ｈ）、２．７８−２．５２（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、１．６９−１．６１（ｍ、２Ｈ）、１．４７−１．２９（ｍ、４Ｈ）。
【０５２５】
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸セリノール（１２）：
化合物１１ｂ（２６．００ｇ、６０．３１ｍｍｏｌ）及びセリノール（５．００ｇ、５４．８８ｍｍｏｌ）を２００ｍＬのジクロロメタン中に懸濁させて、ＴＥＡ（１７ｍＬ、１２１．９７ｍｍｏｌ）の存在下で一晩周囲温度にて撹拌した。反応中に濃厚な白色沈殿物が形成された。ジエチルエーテル２００ｍＬを添加することによって該反応混合物を希釈し、研和させかつろ過した。沈殿物をジエチルエーテルで徹底的に洗浄し、Ｐ２Ｏ５上で真空下にて乾燥させて、１６．５１ｇ（８１．０％）の所望の化合物１２を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．４４−７．４２（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．８１Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．３７−７．２７（ｍ、５Ｈ）、７．２４−７．２０（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．８６、５．３７Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、４．９９（ｓ、２Ｈ）、４．５８−４．５５（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７Ｈｚ、２Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、３．７０−３．６５（ｍ、１Ｈ）、３．３７−３．３４（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．８６、３．３７Ｈｚ、Ｄ２Ｏ交換後ダブレットに変った、Ｊ（Ｈ、Ｈ、Ｄ２Ｏ交換後）＝５．３７Ｈｚ、４Ｈ）、２．９８−２．９２（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４、６．３５Ｈｚ、２Ｈ）、２．０６−２．０２（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、１．４９−１．３３（ｍ、４Ｈ）、１．２４−１．１６（ｍ、２Ｈ）。
【０５２６】
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸セリノールモノＤＭＴ（１３）：
化合物１２（１４．１０ｇ、４１．６６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．６０ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）を２００ｍＬのＲＢ中に取り込み、Ｐ２Ｏ５上で真空下にて乾燥させた。次に固体混合物を、アルゴン下で５０ｍＬの無水ピリジン中で懸濁させた。４，４−ジメトキシトリチルクロリド（１５．５ｇ、４４．２７ｍｍｏｌ）を別途４０ｍＬの無水ジクロロメタン中に溶解させ、アルゴン下で撹拌ピリジン溶液に加えた。該反応混合物を一晩周囲温度で撹拌させた。該反応混合物から溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡＣ（２００ｍＬ）中に抽出させ、ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、その後、標準的な処理を行った。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより所望の生成物１３を精製した（溶離剤：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ３：２、８．６２ｇ（２８．０％、ビスＤＭＴ誘導体）及びクロロホルム中の３−４％ＭｅＯＨ、１５．２８ｇ（５７．３％、所望のモノＤＭＴ誘導体１３））。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．６３−７．６０（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．３８−７．１７（ｍ、１５Ｈ、Ｄ２Ｏ交換後１４Ｈについて計上）、６．８７−６．８４（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ、４Ｈ）、４．９８（ｓ、２Ｈ）、４．６２−４．５９（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、４．００−３．９５（ｍ、１Ｈ）、３．７２（ｓ、６Ｈ）、３．４６−３．４１（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝５．３７Ｈｚ、２Ｈ）、３．００−２．８７（ｍ、４Ｈ）、２．０８−２．０４（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）１．５０−１．３３（ｍ、４Ｈ）、１．２５−１．１６（ｍ、２Ｈ）。
【０５２７】
化合物１３からの化合物７ａの合成：
周囲温度で８０ｍＬのＤＭＦ中のナプロキセン（１５．００ｇ、６５．１４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．８０ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１０．００ｇ、８６．８２ｍｍｏｌ）の撹拌混合物中にＤＣＣ（１４．８０ｇ、７１．７３ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を一晩継続した。沈殿したＤＣＵを該反応からろ過し、ＤＭＦで洗浄し、該洗浄液を組合せ、乾燥状態まで真空下で蒸発させた。得られた残渣をジエチルエーテルで研和し、ろ過し、該残渣をジエチルエーテルで徹底的に洗浄し、乾燥させて白色固体のナプロキセンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、２２．００ｇ（理論値２１．３１ｇ）を得た。１Ｈ  ΝＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．８３−７．７８（ｍ、３Ｈ）、７．４６−７．４３（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝１．９５、１．４６及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．７９、８．３０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２−７．３１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２．４４Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７−７．１５（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝２．４４及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１−４．３５（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４、７．３３Ｈｚ、１Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、２．７４（ｓ、４Ｈ）、１．５９−１．５７（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４Ｈｚ、３Ｈ）。
【０５２８】
化合物１３ａ：
化合物１３及びギ酸アンモニウムを、メタノール−ＥｔＯＡｃの１：１混合物中で懸濁させ、１０重量％のＰｄ−Ｃ（１０％）を該懸濁液中に加え、ヒートガンを用いて該反応混合物を僅かに暖め、２時間周囲温度で撹拌させた。ろ過によりＰｄ−Ｃ及び不溶性ギ酸アンモニウムを除去し、ろ液を組合せかつ蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ中で懸濁させ、ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄して化合物１３ａを得た。
【０５２９】
化合物１３からの化合物７ａの合成：
実施例１中で対応するペンタフルオロフェノールエステル１ｃの合成について記載された通りに、ＤＭＡＰ（０．８０ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）の存在下で、カップリング剤としてＤＣＣ（１４．８０ｇ、７１．７３ｍｍｏｌ）を用いて、ナプロキセン（１ａ、１５．００ｇ、６５．１４ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１０．００ｇ、８６．８２ｍｍｏｌ）からナプロキセンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２１．０ｇ）を調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．８３−７．７８（ｍ、３Ｈ）、７．４６−７．４３（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝１．９５、１．４６及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．７９、８．３０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２−７．３１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２．４４Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７−７．１５（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝２．４４及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１−４．３５（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４、７．３３Ｈｚ、１Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、２．７４（ｓ、４Ｈ）、１．５９−１．５７（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４Ｈｚ、３Ｈ）。ナプロキセンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを化合物１３ａと共に撹拌し、化合物７ａを得た。分析データについては実施例１を参照のこと。
【０５３０】
化合物１３からの化合物７ｂの合成：
３０ｍＬのＤＭＦ中のイブプロフェン（６．００ｇ、２９．０９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４０ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（４．４０ｇ、３８．２３ｍｍｏｌ）の撹拌混合物中にＤＣＣ（６．６０ｇ、３１．９９ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌させた。対応するナプロキセン誘導体の合成について記載された通りにＤＣＵをろ過した。得られた残渣をジエチルエーテルと共に研和しろ過して、生成物をエーテル中に溶解させた。ろ液を組合せて、回転蒸発器上で小さい体積まで減量した。ヘキサンを濃縮された溶液中に加えて所望の生成物を沈殿させ、これをろ過し、ヘキサンで洗浄し乾燥させて所望のエステル７．４８ｇを得た（収量８４．８％）。１Ｈ  ΝＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．２８−７．２５（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．３０Ｈｚ、２Ｈ）、７．１６−７．１３（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．３０Ｈｚ、２Ｈ）、４．２４−４．１８（ｑ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４、７．３２Ｈｚ、１Ｈ）、２．７７（ｓ、４Ｈ）、２．４３−２．４１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３２Ｈｚ、２Ｈ）、１．８４−１．７７（ｍ、１Ｈ）、１．４９−１．４７（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３２Ｈｚ、３Ｈ）、０．８５−０．８３（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．８４Ｈｚ、６Ｈ）。ナプロキセンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを化合物１３ａと共に撹拌して化合物７ｂを得た。分析データについては実施例２を参照のこと。
【０５３１】
実施例４
固体支持体に結合したナプロキセンの合成
【化７８】
2008501319.tif 000080
（ｉ）ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉ）（ａ）ＬｉＢＨ４／ＭｅＯＨ及び（ｂ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｉｉｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン及び（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固体支持体及び（ｉｖ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン又は２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（又はテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０５３２】
化合物６ｃ：
化合物５ａ（２．９０ｇ、５．７０ｍｍｏｌ）及び市販のトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンメチルエステルヒドロクロリド（１．２５ｇ、６．８８ｍｍｏｌ、ＣＮＨテクノロジー（ＣＮＨ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）から入手）をジクロロメタン（３０ｍＬ）中に懸濁させ、余剰のＴＥＡを該懸濁液中に加えて２時間周囲温度で撹拌した。溶媒及び余剰のＴＥＡを真空下で該反応混合物から除去し、生成物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中で抽出した。有機層をＫＨＳＯ４水溶液、水、ＮａＨＣＯ３溶液及び水で連続的に洗浄し、その後標準的な後処理を行った。得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤ジクロロメタン中の５％ＭｅＯＨ）により精製して、化合物６ｃを得た（２．１ｇ（７８．４％））。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．９４−７．９２（ｂｔ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．７７−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．４３−７．４１（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝１．６６、１．４０及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．３０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６−７．２５（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２．１０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１４−７．１１（ｄｄ、Ｊ’（Ｈ、Ｈ）＝２．４９及びＪ’’（Ｈ、Ｈ）＝８．７１Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６−５．１５（ｄ、０．８５Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能、主回転異性体）、５．０９−５．０８（ｄ、０．１５Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能、小回転異性体）、４．５９−４．５７（ｍ、０．１５Ｈ）、４．３０−４．２０（ｍ、１．８５Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．６９−３．５２（ｍ、６Ｈ、溶媒由来のＨ２Ｏを含む）、３．３４−３．３２（ｂｄ、２．５Ｈ、Ｄ２Ｏ交換後１Ｈについて計上した）、３．０２−２．９７（ｍ、２Ｈ）、２．１５−２．０４（ｍ、３Ｈ）、１．８９−１．８２（ｍ、１Ｈ）、１．４４−１．３０（ｍ、７Ｈ）、１．１５−１．１４（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１７３．９、１７３．０、１７１．７、１５７．３、１３７．８、１３３．４、１２９．４、１２８．７、１２６．９、１２６．７、１２５．５、１１８．９、１０６．０、６９．１、５７．５、５５．５、５５．０、５２．１、４５．５、３８．７、３３．７、２９．０、２６．１、２４．１、１８．７。
【０５３３】
化合物７ｃ：
化合物６ｃをメタノール中のＬｌｉＢＨ４で処置して対応するジオールを得る（ラジーブら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９７年、第６２号、５１６９頁）。かくして得られたジオールを、ＤＭＡＰの存在下で無水ピリジン中でＤＭＴ−Ｃｌと共に撹拌して化合物７ｃを得る。
【０５３４】
固体支持体８ｃ：
化合物８ａの合成について実施例１中に記載された通りに、所望のＣＰＧ８ｃを化合物７ｃから調製する。
【０５３５】
ホスホルアミダイト９ｃ：
化合物９ａの合成について実施例１中に記載された通り、所望のホスホルアミダイト９ｃを化合物７ｃから調製する。
【０５３６】
実施例５
固体支持体に結合されたナプロキセンの合成
【化７９】
2008501319.tif 000081
（ｉ）グリオキサル酸エチル、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ；（ｉｉ）ブロモプロピオン酸エチル、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉｉ）ＫＯｔＢｕ／トルエン：（ｉｖ）パン酵母／Ｈ２Ｏ；（ｖ）ＬｉＢＨ４／ＭｅＯＨ；（ｖｉ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖｉｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン及び（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固体支持体及び（ｖｉｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン又は２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（又はテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０５３７】
化合物１５：
文献中で報告されている通りに化合物１４を調製する。アミン１５を合成するための一般手順（参：アベル・マギッド（Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄ）ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６年、第６１（１１）号、３８４９−３８６２頁）。この還元アミノ化の代表例が、アミン１４とグリオキサル酸エチルの反応を用いて示されている。すなわち、グリオキサル酸エチル（トルエン中の４５％溶液；１当量）及びアミン（１当量）を無水ＴＨＦ中で混合し、次にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．５当量）で処置する。該混合物を周囲温度で２４時間撹拌する。該反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液の添加によって急冷し、生成物をＥｔＯＡｃ中に抽出する。有機層の濃縮によりアミン１５を得る。
【０５３８】
化合物１６：
ジエステル１６の合成（参：サンドニ（Ｓｔ−Ｄｅｎｉｓ）ら．Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．２０００年、７７６頁）。すなわちトルエン中の調製されたばかりのアミン１５（１当量）の溶液に対して、トルエン中のエチル３−ブロモプロピオナート（１．２当量）を加える。該懸濁液を６時間６０℃で加熱し、炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ込む。クロロホルムを用いて該水相を抽出し、濃縮してジエステル１６を得る。
【０５３９】
化合物１７及び１８：
ケトエステル１７及び１８の合成（参：ブレーク（Ｂｌａｋｅ）ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９６４年、５２９３頁）。
【０５４０】
窒素下で０℃のトルエン中のカリウムｔ−ブトキシド（１．５当量）の懸濁液に対して、３０分間にわたりのトルエン中の１当量のジエステル１６を加える。出発材料が消失するまで該溶液を０℃で撹拌し、氷酢酸を加え、その直後に氷水中のＮａＨ２ＰＯ４−Ｈ２Ｏ溶液を加える。結果としての混合物をクロロホルムを用いて抽出し、組合さった有機抽出物をｐＨ７．０のリン酸緩衝液で２回洗浄し、乾燥させ残渣に至るまで蒸発させる。残渣をトルエン中に溶解させ、０℃まで冷却し、ｐＨ９．５の低温炭酸緩衝液の分量で抽出する。リン酸の緩慢な添加によって水性抽出物をｐＨ３まで転換させ、クロロホルム（３×１００ｍＬ）を用いて抽出する。組合さった有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させてケトエステル１８を得る。トルエン層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥状態まで蒸発させてケトエステル１７を得る。
【０５４１】
化合物１９：
化合物１９を得るための１８のパン酵母還元（参：サンドニら、Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．２０００年、７７６頁）。蒸留水中のスクロースの溶液（２重量当量）に対して、パン酵母（１．５重量当量）を加える。該懸濁液を回転蒸発器内で３２℃で加熱する。次にフラスコの中身をジエステル１８（１重量当量）中に注ぎ込む。撹拌を一日間継続し、その後に暖かい（４０℃）蒸留水中の追加のスクロースを加える。２日後に混合物に対してセライトを加え、焼結ガラス漏斗を通してろ過する。該ろ液を珪藻土パッドを通してを再ろ過する。洗浄の後、水性層をジクロロメタンで抽出する。有機層を組合せ、蒸発させてエステルアルコール１９を得る。
【０５４２】
ジオール２０：
化合物１９（１当量）を無水ＴＨＦ中に溶解させ、０℃で無水ＴＨＦ中の１Ｍの水素化ホウ素リチウム（１当量）に加える。該反応混合物を出発材料が消失するまで０℃で撹拌する。余剰の水素化ホウ素リチウムを水の添加により急冷する。該反応混合物を減圧下で濃縮する。該残渣に対して３Ｎの塩酸を加え３時間撹拌する。結果としての水性層を酢酸エチルを用いて抽出する。組合さった有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮しジオール２０を生成し、カラムクロマトグラフィによりこれを精製する。
【０５４３】
化合物２１：
ジオール６ａからの化合物７ａの調製について実施例１中で記載された通りに、ジオール２０から化合物２１を得る。
【０５４４】
固体支持体２２：
化合物７ａからの化合物８ａの調製について実施例１中で記載された通りに、化合物２１から化合物２２を得る。
【０５４５】
ホスホルアミダイト２３：
化合物７ａからの化合物９ａの調製について実施例１中で記載された通りに、化合物２１からホスホルアミダイト２２を得る。
【０５４６】
実施例６
固体支持体に結合されたナプロキセンの合成
【化８０】
2008501319.tif 000082
（ｉ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｉｉ）（ａ）ピペリジン／ＤＭＦ（ｂ）１１ａ、ＴＥＡ／ジクロロメタン（ｉｉｉ）Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ又はギ酸アンモニウム、Ｐｄ−Ｃ；（ｉｖ）１ｃ、ＴＥＡ／ジクロロメタン（ｖ）ＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタノール、ＣＤＩ／ＴＨＦ（ｖｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン及び（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固体支持体及び（ｖｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン又は２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（又はテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０５４７】
化合物２５：
文献（フィリチェフ（Ｆｉｌｉｃｈｅｖ）及びペダーセン（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、２００１年、第５７号、９１６３−６８頁）中で報告されている通りに化合物２４を調製する。化合物６ａからの化合物７ａの調製について実施例１で記載された通りに、化合物２４からモノＤＭＴ化合物２５を調製する。
【０５４８】
化合物２６：
文献（アサートン（Ａｔｈｅｒｔｏｎ）及びシェパード（Ｓｈｅｐｐａｒｄ）、Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１９８７年、第９号、１頁、ユーデンフレンド（Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ）及びメイアンホッファー（Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ）編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）中で報告されている通りに、ピペリジンで処置することによってＦｍｏｃ基を化合物２５から除去する。Ｆｍｏｃの除去後、得られた遊離アミンをＴＥＡの存在下で化合物１１ａと共に撹拌し、化合物２６を得る。
【０５４９】
化合物２７：
化合物２６の接触水素化により化合物２７を得る。
【０５５０】
化合物２８：
化合物２７を、ＴＥＡの存在下でエステル１ｃ（スキーム１）と共に撹拌し、化合物２８を得る。
【０５５１】
化合物２９：
７ａからのホスホルアミダイト９ａの調製について実施例１中で記載された通りに、化合物２８からホスホルアミダイト２９を調製する。
【０５５２】
化合物３０：
７ａからの支持体８ａの調製について実施例１中で記載された通りに、２８から固体支持体３０を得る。
【０５５３】
化合物３１：
文献中で報告されている通りに、ＴＨＦ中の１，１’−カルボニルジイミダゾール及び市販のＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタノール（アクロス・オルガニックス（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ））で化合物２７を処置し、化合物３１を得る（ヘルナンデス（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ）及びホッジス（Ｈｏｄｇｅｓ）、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９７年、第６２号、３１５３頁）。
【０５５４】
化合物３２：
化合物７ａからの化合物９ａの調製について実施例１中で記載された通りに化合物３１からホスホルアミダイト３２を調製する。
【０５５５】
化合物３３：
化合物７ａからの支持体８ａを調製する目的で実施例中に記載される通りに、化合物３１から該固体支持体３３を得る。
【０５５６】
実施例７
固体支持体に結合されたナプロキセンの合成
【化８１】
2008501319.tif 000083
（ｉ）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、イミダゾール／ピリジン；（ｉｉ）Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ；（ｉｉｉ）３６ａについては、ＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタンアミン、ＣＤＩ／ＴＨＦそして３６ｂについては、ＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタノール、ＣＤＩ／ＴＨＦ；（ｉｖ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン及び（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固体支持体及び（ｖ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン又は２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（又はテトラゾールジイソプロピルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０５５７】
化合物３４：
化合物１３（１２．９１ｇ、２０．１６ｍｍｏｌ）を、６時間アルゴン下で周囲温度にてイミダゾール（６．３０ｇ、９２．５４ｍｍｏｌ）の存在下でピリジン中のＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（４．６０ｇ、３０．５２ｍｍｏｌ）と共に撹拌した。ピリジンを真空下で反応混合物から除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中に抽出し、ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、その後標準的な処理を行った。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して化合物３４を得た（溶離剤：２〜３％ジクロロメタン中のメタノール、収量：１５．１０ｇ（９９．３％））。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．６５−７．６３（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．３０Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、７．３８−７．１７（ｍ、１５Ｈ、Ｄ２Ｏ交換後の１４Ｈについてを計上）、６．８６−６．８４（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．７９Ｈｚ）、４．０１−３．９６（ｍ、１Ｈ）、３．７１（ｓ、６Ｈ）、３．５８−３．５４（ｍ、２Ｈ）、３．０４−２．８８（ｍ、４Ｈ）、２．０８−２．０４（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝７．３３Ｈｚ、２Ｈ）、１．４９−１．３１（ｍ、４Ｈ）、１．２３−１．１７（ｍ、２Ｈ）、０．７２（ｓ、９Ｈ）、−０．０８（ｓ、３Ｈ）、−０．１０（ｓ、３Ｈ）。
【０５５８】
化合物３５：
化合物１３からの化合物１３ａの調製について実施例３中で記載された通りに、化合物３４をギ酸アンモニウム及びＰｄ−Ｃと共に撹拌して、化合物３５を得る。
【０５５９】
化合物３６ａ：
化合物２７からの化合物３１の調製について実施例６中で記載された通りに、化合物３５を１，１’−カルボニルジイミダゾール及びＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタンアミンで処置する。文献（ウォルバー（Ｗｏｌｂｅｒ）及びルーチャート（Ｒｕｅｃｈａｒｄｔ）、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．、１９９１年、第１２４号、１６６７頁）の手順に従ってＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタンアミンを調製する。完全に保護された尿素誘導体を作製した後、得られた生成物を、余剰のＴＨＦ中のＴＥＡ存在下で、ＴＥＡ．３ＨＦ（ニストロム（Ｎｙｓｔｒｏｍ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、１９８５年、第２６号、５３９３頁）を用いて処置し、化合物３６ａを得る。
【０５６０】
化合物３６ｂ：
化合物２７からの化合物３１の調製について実施例６中で記載された通りに、化合物３５を１，１’−カルボニルジイミダゾール及び市販のＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタノール（アクロス・オーガニックス）で処置する。完全に保護されたカルバマート誘導体を作製した後、得られた生成物を、余剰のＴＨＦ中のＴＥＡの存在下で、ＴＥＡ．３ＨＦ（ニストロームら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９８５年、第２６号、５３９３頁）を用いて処置し、化合物３６ｂを得る。
【０５６１】
化合物３７ａ：
７ａからのホスホルアミダイト９ａの調製について実施例１中で記載された通りに、化合物３６からホスホルアミダイト３７ａを調製する。
【０５６２】
化合物３８ａ：
７ａからの支持体８ａの調製について実施例１中で記載された通りに、３６ａから固体支持体３８ａを得る。
【０５６３】
化合物３７ｂ：
化合物７ａからの化合物９ａの調製について実施例１中で記載された通りに、化合物３６ｂからホスホルアミダイト３７ｂを調製する。
【０５６４】
化合物３８ｂ：
化合物７ａからの支持体８ａの調製について実施例中に記載された通りに、化合物３６ｂから固体支持体３８ｂを得る。
【０５６５】
実施例８
固体支持体に結合されたナプロキセンの合成
【化８２】
2008501319.tif 000084
【０５６６】
化合物４２ａ：
化合物３９をケム・ジーン・コーポレーションから購入した。化合物３９（１．５０ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）及び化合物１ｃ（１．３０ｇ、３．２８ｍｍｏｌ、１ｃの調製についての実施例１を参照）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中で４時間余剰のＴＥＡの存在下で撹拌した。その後、さらなるジクロロメタンを加わえることによって該反応混合物を８０ｍＬまで希釈し、ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、有機層を乾燥状態まで蒸発させた。得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して化合物４２ａを得た（０．８５ｇ、４３．５％、溶離剤：ジクロロメタン中の４％ＭｅＯＨ）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１１．６１（ｓ、ＩＨ、Ｄ２Ｏで交換可能）、８．００−７．９１（ｂｍ、３Ｈ、部分的にＤ２Ｏで交換可能）、７．７６−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．４３−７．０１（ｍ、１５Ｈ）、６．８７−６．８３（ｍ、４Ｈ）、６．１７−６．１４（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．４１、６．７１Ｈｚ、１Ｈ）、５．２８−５．２７（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝４．８８Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、４．２３−４．１９（ｍ、１Ｈ）、３．８９−３．８２（ｍ、４Ｈ）、３．７１−３．６５（ｍ、８Ｈ）、３．３２（ｓ、３Ｈ）、３．３２−２．９０（ｍ、６Ｈ）、２．４９−２．３１（ｍ、１Ｈ）、２．２９−２．１３（ｍ、１Ｈ）、１．３８−１．１８（ｍ、９Ｈ）。
【０５６７】
化合物４３ａ：
化合物４２ａ（０．６５ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の３’−Ｏ−スクシナート（０．６７ｇ、９２．８％）を実施例１中で記載される通りに調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ１２．１９（ｂｓ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、１１．６４−１１．６０（ｂｍ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）、８．０３−７．７５（ｍ、３Ｈ）、７．７６−７．６７（ｍ、３Ｈ）、７．４２−７．０１（ｍ、１５Ｈ）、６．８７−６．７６（ｍ、４Ｈ）、６．１６−６．１２（ｔ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝６．７１、７．０２Ｈｚ、１Ｈ）、５．１７−５．１５（ｍ、１Ｈ）、４．０８−３．９９（ｍ、２Ｈ）、３．８４−３．８２（ｍ、３Ｈ）、３．７１−３．６５（ｍ、９Ｈ）、３．３０−３．１９（ｍ、２Ｈ）、３．１１−２．９８（ｍ、６Ｈ）、２．６５−２．４０（１１Ｈ）、２．３４−２．２８（ｍ、１Ｈ）、１．３７−１．２８（ｍ、９Ｈ）、１．１７−１．１３（ｍ、１０Ｈ）。
【０５６８】
かくして得られた３’−Ｏ−スクシナート（０．５１ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を、化合物８ａの調製について実施例１中で記載された通りにＣＰＧに対して抱合させて、所望のＣＰＧを得た。１２μＭ／ｇという投入量は、文献（プラカッシュ（Ｐｒａｋａｓｈ）ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００２年、第６７号、３５７頁及び同書中で引用されている参照文献）中で記載された通りに判定された。
【０５６９】
実施例９
オリゴヌクレオチドの合成、精製及び分析
合成：
以下に記載される通り幾つかの待機工程に対する修正を加えた上でメーカーが記した標準の９３工程サイクルを用いて、３９４ＡＢＩ機上でＲＮＡ分子を合成した。該固体支持体は社内で入手可能であり、該単量体はピアース・ニュークレイック・アッシド・テクノロジー（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）製の高速保護基（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル  Ｎ６−フェノキシアセチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルアデノシン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−シアノエチルホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルメチルシリルシチジン−３’−Ο−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−  シアノエチルホスホルアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−ｐ−イソプロピルフェノキシアセチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルグアノシン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホルアミダイト、及び５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルウリジン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホルアミダイトを伴うＲＮＡホスホルアミダイトであった。全ての２’−Ｏ−Ｍｅアミダイトはグレン・リサーチ（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）から受領した。全てのアミダイトは、アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）中で０．１５Ｍの濃度及び１２〜１５分のカップリング時間で使用した。活性化剤は５−（エチルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（０．２５Ｍ）であり、ＰＯ−酸化についてはイオジン／水／ピリジンを使用し、ＰＳ−酸化については、無水アセトニトリル中の２％ボーケージ（Ｂｅａｕｃａｇｅ）試薬（アイアー（Ｉｙｅｒ）ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９９０年、第１１２号、１２５３頁）を用いた。硫化時間は約６分であった。
【０５７０】
脱保護−Ｉ（核酸塩基脱保護）：
合成の完了後、支持体を、ねじ蓋式バイアル（ＶＷＲカタログ番号２０１７０−２２９）又はねじ蓋式のＲＮアーゼを含まないマイクロフュージュ試験管に移した。５５℃で１５時間にわたりエタノール中のアンモニア混合物［アンモニア：エタノール（３：１）］１．０ｍＬを用い、塩基及びリン酸基の同時脱保護を伴って、オリゴヌクレオチドを支持体から切断させた。バイアルを氷上で手短に冷却し、次にエタノール中のアンモニア混合物を新しいマイクロフュージュ試験管に移した。ＣＰＧを２×０．１ｍＬ分量のＲＮアーゼを含まない脱イオン水で洗浄した。洗浄液を組合せ、ドライアイス浴上で１０分間冷却し、その後にスピードバック内で乾燥させた。
【０５７１】
脱保護−II（２’ＴＢＤＭＳ基の除去）：
得られた白色の残渣をトリエチルアミン、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（ＴＥＡ．３ΗＦ）及びＮＭＰ（４：３：７）４００μｌ中に再懸濁させ、一晩５０℃で加熱し、２’位でｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基を除去した（ウィンコット（Ｗｉｎｃｏｔｔ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９５年、第２３号、２６７７頁）。次に該反応を４００μｌのイソプロポキシトリメチルシラン（ｉＰｒＯＭｅ３Ｓｉ、アルドリッチから購入）で急冷し、さらにキャップを開放状態にしたまま加熱ブロック上で１０分間インキュベートした（これにより揮発性イソプロポキシトリメチルシリルフルオリドアダクツが蒸発した）。残留する急冷試薬をスピードバック内での乾燥によりにより除去した。ジエチルエーテル中の３％トリエチルアミン１．５ｍＬを加え、遠心分離により沈殿させた。沈殿物を混乱させずに上清をピペット採取し、沈殿物をスピードバック内で乾燥させた。粗製ＲＮＡを、マイクロフュージュ試験管中において白色の綿毛状の材料として得た。
【０５７２】
粗製オリゴマーの定量又は粗分析：
ＲＮアーゼを含まない脱イオン水（１．０ｍＬ）中に試料を溶解させ、以下の通り定量した。最初に水単独（１ｍＬ）でブランキングを実施し、マイクロフュージュ試験管中で２０μＬの試料と９８０μＬの水を充分に混合し、キュベットに移して２６０ｎｍで吸光度の読取値を得た。該粗製材料を乾燥させて−２０℃で保存した。
【０５７３】
オリゴマーの精製：
ＰＡＧＥ精製
合成オリゴマーのＰＡＧＥ精製をサンブルックらにより報告された通りに実施した（「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９年）。未修飾及び修飾オリゴリボヌクレオチドの精製のために１２％変性ゲルを調製した。１２０ｍＬの濃縮液＋１０５ｍＬの希釈剤＋２５ｍＬの緩衝液（ナショナル・ダイアグノースティックス（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ））を取り上げ、次に５０μＬのＴＥＭＥＤ及び１．５ｍＬの１０％ＡＰＳを加えた。ゲルを注ぎ込み、１／２時間放置して重合させる。ＲＮＡを水２０μＬ及びホルムアミド８０μＬ中に懸濁させた。左レーン上にゲル追跡染料を投入し、続いてゲル上にゆっくりと試料を投入した。ゲルを、４〜６時間３６Ｗで１倍ＴＢＥ緩衝液上にランさせる。ひとたびランが完了したら、ゲルを分取ＴＬＣプレート上に移し、ＵＶ光下で見る。バンドを切断する。水中に浸し圧壊させる。一晩振盪器内に放置する。溶離剤を除去する、スピードバック内で乾燥させる。
【０５７４】
精製オリゴマーの脱塩：
次に精製された乾燥オリゴマーをＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５Ｍ（アマーシャム・バイオサイエンシーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））を用いて脱塩した。１０ｍＬのＲＮアーゼを含まない脱イオン水を用いてカートリッジを３回状態調節した。最後に、精製オリゴマーを２．５ｍＬのＲＮアーゼを含まない水中に溶解させ、非常に緩慢な滴下溶離で共にカートリッジを通過させた。塩を含まないオリゴマーを３．５ｍＬのＲＮアーゼを含まない水を用いてねじ蓋式バイアル中に直接溶離させた。
【０５７５】
分析：
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）及び電気スプレーＬＣ／Ｍｓ
およそ０．１０ＯＤのオリゴマーを最初に乾燥させ、次に水（５０μＬ）中に再溶解させて、その後ＣＧＥ及びＬＣ／ＭＳ分析用の特殊バイアル中にピペット採取する。ナプロキセン−抱合されたオリゴリボヌクレオチドのＣＧＥ分析については図１６を参照のこと。ナプロキセン−抱合されたオリゴリボヌクレオチドのＬＣ−ＭＳ電気スプレー分析については図１７を参照のこと。
【０５７６】
アラルキルリガンド抱合されたｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド（センス及びアンチセンスストランド）のリストについては図１９を参照のこと。
【０５７７】
以下のインビトロ活性及び安定性研究について図１９中に示されたセンス及びアンチセンスストランドで構成されたｓｉＲＮＡ２重鎖リストについては図２０を参照のこと。
【０５７８】
実施例１０
デュアルルシフェラーゼ遺伝子サイレンシングアッセイ
アッセイ：
ハイスループット９６−ウェル平板フォーマットルシフェラーゼサイレンシングアッセイを用いてｓｉＲＮＡインビトロ活性を判定した。可能な２つのフォーマットのうちの１つでアッセイを実施した。第１のフォーマットでは、先ず最初に、蛍（標的）及びウミシイタケ（対照）ルシフェラーゼをコードするプラスミドを用いてＨｅＬａＳＳ６細胞を過渡的にトランスフェクトする。リポフェクタミン２０００（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びプラスミドｇＷｉｚ−Ｌｕｃ（アルデブロン（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）、Ｆａｒｇｏ、ノースダコタ州）（２００ｎｇ／ウェル）及びｐＲＬ−ＣＭＶ（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州）（２００  ｎｇ／ｗｅｌｌ）用いてＤＮＡトランスフェクションを実施した。２時間後、該プラスミドトランスフェクション媒体を除去し、該蛍ルシフェラーゼターゲティングｓｉＲＮＡを、細胞に対して様々な濃度で加えた。第２のフォーマットでは、ＨｅＬａデュアル−ｌｕｃ細胞（蛍及びウミシイタケルシフェラーゼの両方を安定して発現）に蛍ルシフェラーゼターゲティングｓｉＲＮＡを直接トランスフェクトした。メーカーのプロトコルに従ってＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯ（ミラス（Ｍｉｒｕｓ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州）又はリポフェクタミン２０００のいずれかを用いてＳｉＲＮＡトランスフェクションを実施した。２４時間後、プレートルミノメータ（ＶＩＣＴＯＲ２、パーキンエルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）、Ｂｏｓｔｏｎ、マサチューセッツ州）及びデュアル−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイキット（プロメガ）を用いて、蛍及びウミシイタケルシフェラーゼ発現の両方について細胞を分析した。擬似処置された（ｓｉＲＮＡ無し）対照との関係におけるパーセント遺伝子サイレンシングを判定するために蛍／ウミシイタケルシフェラーゼ発現率を使用した。
【０５７９】
結果：
図２０及び２１を参照。
【０５８０】
要約：
ｓｉＲＮＡの全遺伝子サイレンシング活性を保持しながら、センス及びアンチセンスストランドのいずれか又は両方の３’ナプロキセン抱合を達成することが可能である。同様に、イブプロフェンは、活性の喪失無くｓｉＲＮＡに対して抱合され得る。
【０５８１】
実施例１１
アラルキルリガンド抱合されたｓｉＲＮＡの血清安定性
アッセイ：
センス（Ｓ）又はアンチセンスストランド（ＡＳ）のいずれかが５’−３２Ｐ標識された微量の材料（例えば、３２Ｐ−Ｓ／ＡＳ及びＳ／３２Ｐ−ＡＳ）を含有するｓｉＲＮＡ２重鎖を、１μＭの貯蔵濃度で調製する。末端標識されたセンス又はアンチセンスストランドの存在によって、ｓｉＲＮＡ２重鎖との関連において個々のストランドを監視することが可能になる。従ってテストされた各ｓｉＲＮＡ配列について２つの２重鎖調製物が作られる。１００ｎＭの２重鎖最終濃度でｓｉＲＮＡ２重鎖を９０％ヒト血清中でインキュベートする。簡単にいうと、１μＭのｓｉＲＮＡ２重鎖２μｌを３７℃で１８μｌの１００％凝血塊外ヒト血清と混合させる。標準的な経時変化について、２μｌアリコートを１０秒、１５分、３０分、１時間、２時間及び４時間で取り出し、９０％のホルムアミド、５０ｍＭのＥＤＴＡ、１０ｍＭのＤＴＴ及び染料キシレンシアノール及びブロモフェノールブルーを含有する１８μｌの停止混合物内で直ちにこれを急冷する。試料を、対照試料（緩衝液単独で４時間のインキュベーション）と共に変性ポリアクリルアミドゲル上で分離し、部分的アルカリ加水分解ラダーをマーカーとして用いる。該ゲルを放射線標識されたｓｉＲＮＡ及びその分解フラグメントの検出を可能にするフジイメージプレートに曝露する。
【０５８２】
結果：
図２２−２８を参照のこと。
【０５８３】
未修飾２重鎖１１１は９０％のヒト血清中で急速に分解する（図を参照のこと）。ｓｉＲＮＡの３’末端の３’−５’エキソヌクレアーゼ分解（赤い円）は、インキュベーションの最初の５分以内に発生する。さらに、早くも１０秒で出現するアンチセンスストランド内部のエンドヌクレアーゼ切断の主要部位が存在する。１時間後ヒト血清中に全長ｓｉＲＮＡは全く残留していない。これと対照的に、センス及びアンチセンスストランド（１１４）の３’末端におけるナプロキセンの抱合が、ｓｉＲＮＡの３’末端を３’−５’エキソヌクレアーゼ分解から保護している。全長材料は４時間の時点でもまだ９０％のヒト血清中に存在している。３’−５’エキソヌクレアーゼ分解からの類似の保護が、ｓｉＲＮＡ２重鎖１１６の３’末端に対して抱合されたイブプロフェンを含有するｓｉＲＮＡについても観察された（データ示さず）。
【０５８４】
実施例１２
ナプロキセン抱合されたｓｉＲＮＡ
方法：
ｓｉＲＮＡに対するナプロキセンの抱合が、血清アルブミンに対するｓｉＲＮＡの結合親和力に及ぼす効果が評価されてきた。該抱合体は、ｓｉＲＮＡ薬物の薬物動態分布を改善するための化学的解決法を提供している。
【０５８５】
血清及び細胞タンパク質とｓｉＲＮＡの相互作用が、それらの薬物動態特性（標的組織への輸送とその中での分布）及び薬力学特性（ｍＲＮＡ標的に対する結合）、ひいてはそれらの最終的な薬効薬理を決定する。［１］一般に、血流中の血清アルブミン、α２−マクログロブリン、免疫グロブリン及びリポタンパク質に対する薬物の結合が、それらの輸送及び組織分布を支配する［２］。第１世代アンチセンス化合物である２’−デオキシホスホルチオアートオリゴヌクレオチドは、血清及び細胞タンパク質に対して急速に結合し、従って有利な薬物動態特性を有してする［１，３〜６］。しかしながら、これらのホスホルチオアート（Ｐ＝Ｓ）オリゴヌクレオチドは、トロンビン、ＩＸ因子及びＨ因子といったタンパク質にも同様に結合する。この結合は、長い凝血時間及び補体の活性化といった臨床的設定におけるこれらの化合物望ましくない用量−限定的な副作用に寄与するものと思われる［７，８］。より安全で効果的なオリゴヌクレオチド薬物を作製するためには、輸送及び吸収に関与するタンパク質とこれらの分子の相互作用を増強すること及びそれらの副作用の原因となるタンパク質との相互作用を最小限にすることが有益であると思われる。
【０５８６】
Ｐ＝Ｓ連結を未変性ホスホジエステル（Ｐ＝Ｏ）連結に変更することで、上述の副作用は克服され、かつ標的ＲＮＡに対する結合親和力も増大される［９’１０］；しかしながら、この変更はヌクレアーゼ耐性の喪失、従って薬物のより急速な分解という結果ももたらす［１１］。残念なことに、Ｐ＝Ｏ連結によるＰ＝Ｓ連結の置き換えは、血清タンパク質に対する結合の欠落に起因すると推定されるより早い尿除去及び器官に対する限定的な分布などといった低い薬物動態特性という結果をもたらす［１５］。
【０５８７】
ｓｉＲＮＡ２重鎖は、２重鎖構造に起因する固有の安定性を有している。ホスホルチオアート連結は、ｓｉＲＮＡ安定性を有意に強化せず、未修飾ＲＮＡと比較して２重鎖融解温度を低下させた［４０］。ホスホルチオアート修飾も同様にｓｉＲＮＡ活性を低下させた［４１］。その一方で、ホスホルチオアート修飾が薬物動態特性の調節において有用であることが判明する可能性がある。従って、ヒト血清アルブミン用の非ホスホルチオアート化合物の結合親和力を改善することが極めて望ましいと思われる。
【０５８８】
６６ｋＤの分子量を有する５８５アミノ酸の水溶性タンパク質であるヒト血清アルブミンは、血漿中で最も豊富に存在するタンパク質（血漿内１００ｍＬ中３．５〜５．０ｇ）であるが、血管外流体中にも同様により低濃度で存在している。これは、血漿ｐＨ７．４で−１５の正味マイナス電荷と５．０の等電点をもつ、多数の荷電アミノ酸（約１００のマイナス電荷と１００のプラス電荷）を有しており、アニオンとカチオンの両方を引き付ける［１６−１８］。
【０５８９】
抗炎症性小分子薬物ナプロキセンは、１０−６Ｍの結合親和力でヒト血清アルブミンのIIＡドメインに対して結合する（アンジェラコウ（Ａｎｇｅｌａｋｏｕ）ＡＴ、シデリス（Ｓｉｄｅｒｉｓ）ＥＥ、バルサミ（Ｖａｌｓａｍｉ）ＧＮ、クパリス（Ｋｏｕｐｐａｒｉｓ）ＭＡ、マチェラス（Ｍａｃｈｅｒａｓ）ＰＥ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．１９９４年８月；第８３（８）号：ｌ１５０〜４頁、「Ｇｅｎｅｒａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｓ  ａｐｐｌｉｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｏｎ  ｐｒｏｂｅ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ  ｗｉｔｈ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ」）。我々は、ナプロキセンをｓｉＲＮＡに対して化学的に抱合させることによって、血清アルブミンに対するｓｉＲＮＡの結合親和力を改善しようと試みてきた。
【０５９０】
結合親和力の測定：
アルブミンに対するｓｉＲＮＡの結合親和力を測定するために、標準的手順を用いＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを使用してｓｉＲＮＡ２重鎖のセンスストランドの５’末端に３２Ｐで標識する。表Ｉ中に示されているｓｉＲＮＡ２重鎖の各々をこのアッセイにおいて試験することになる。取り込まれていない標識を、Ｇ２５カラムを用いて除去し、標識付けをポリアクリルアミドゲル電気泳動により確認する。標識されたＲＮＡ（５０ｎＭ）及び相補的ストランド（５０ｎＭ）の固定濃度を、増大するアルブミン濃度でインキュベートし（脂肪酸を含まないヒト血清アルブミン、シグマＡ３７８２、ロット番号９４Ｈ９３１８、シグマケミカル、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ミズーリ州）かつ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ及び０．００５％のＴｗｅｅｎ８０を含有するリン酸緩衝生理食塩緩衝液中において１時間２５℃でインキュベートする。インキュベーションの後、試料を、３０，０００の分子量カットオフを伴う低結合再生セルロースろ過膜（ミリポア）上に投入する。試料を、マイクロフュージュ（ＮＹセントリフュージュ（ＮＹＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）５４１５Ｃ；エッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ニューヨーク州）中で３〜６分間３０００ｒｐｍ（７３５ｇ）で穏やかに回転させ、ろ液中に投入された体積の約２０％の収集を可能にする。
【０５９１】
ろ液及び初期（未ろ過）溶液由来のアリコート中に存在する放射線活性を、シンチレーション計数器（ＬＳ６０００ＩＣ型、ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、カリフォルニア州）用いて測定する。ろ液アリコート中で得られた計数は、遊離（非結合）ＲＮＡを表わしており、遊離ＲＮＡの濃度を得るために適切な計算を実施する。さらなる計算から、タンパク質に結合したＲＮＡの濃度を得る［２２，２３］。
【０５９２】
アルブミンに対するｓｉＲＮＡ結合の程度を、平衡ろ過方法を用いて判定する。結合ＲＮＡの画分を合計アルブミン濃度に対比してプロットする。平衡定数Ｋｄを結合したｓｉＲＮＡ画分（ｆｂｏｕｎｔ）の非線形回帰分析から、遊離アルブミン単量体濃度（ｆｆｒｅｅ）の関数として判定する。単量体−二量体平衡についてのＫｄ＝１５０μＭを用いて、溶解状態のアルブミン単量体の濃度を計算する［１６，１７］。アルブミンに比較してｓｉＲＮＡが低濃度であることから、アルブミンの最も緊密な結合部位のみに対する結合の検出が可能になる。かくして、データを２状態モデルに適合させることができる。すなわち
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式中、Ｏは未結合ｓｉＲＮＡ、Ａは未結合アルブミン、ＯＡはｓｉＲＮＡ−アルブミン複合体そしてＫＡは平衡会合定数である。試験対象のオリゴヌクレオチドは表Ｉ中に列記されている。
【０５９３】
結合能力の測定
ナプロキセンは、アルブミンに対するｓｉＲＮＡの結合能力に対しても同様に効果を有するはずである。アルブミンの固定濃度（５０μＭ）を利用しかつ標識されたｓｉＲＮＡ２重鎖の濃度を変動させるという点を除き、結合曲線用に用いられたものと類似の技術を用いて容量曲線を測定する。
【０５９４】
ＨＳＡのためのナプロキセン抱合されたｓｉＲＮＡが示す増強された結合は、血漿タンパク質トロンビンを用いて実験を反復実施した場合には観察されないであろうと予想されている。トロンビンは、低いｎＭ親和力でホスホロチオアートオリゴデオキシヌクレオチドに結合することが知られている血漿タンパク質である［２４］。トロンビンとアンチセンスオリゴヌクレオチドとの間の相互作用は、ホスホルチオアートオリゴデオキシヌクレオチドでの治療後に観察される凝血の延長の原因であるものと想定されてきた［２５］。
【０５９５】
ナプロキセンは、小分子上のカルボキシル基を介してｓｉＲＮＡに抱合されている。この基がナプロキセンとアルブミンとの間の相互作用にとって極めて重要であるとすると、該抱合体は、遊離ナプロキセンの場合に比べてさほど密にアルブミンに結合しないものと予想されるであろう。類似の小分子であるイブプロフェンのアルブミンによる分子認識は、イブプロフェンの芳香環とアルブミン上の脂肪族置換基の間の疎水性相互作用によって支配されるものと思われる［２６］。かくして、ナプロキセンのｓｉＲＮＡに対する抱合は、アルブミンに対する結合にいかなる大きな影響も及ぼさないであろうと仮定されている。
【０５９６】
アルブミンに対するｓｉＲＮＡ結合の能力及び親和力の改善は、ｓｉＲＮＡ配列とは無関係であるべきであり、ナプロキセン及びアルブミン間の特定の分子認識事象に起因し、結果としてもたらされるｓｉＲＮＡの疎水性の小さな変化に起因するものではないはずである。
【０５９７】
これは、血清アルブミンに対するｓｉＲＮＡの結合を変調させ小分子抱合体の最初の例である。血清アルブミンは主要な輸送タンパク質であることから、ナプロキセン抱合はｓｉＲＮＡの組織分布を劇的に改変させるものと予想されている。この仮説を確認するために、インビボ薬物動態分析及び組織分布実験が現在進行中である。しかしながら、ナプロキセン−オリゴヌクレオチド抱合体結合部位に関するさらなる詳細、相互作用の機序、かかる相互作用の特異性、並びに抱合体の毒性は目下のところ未知である。観察された結合親和力はマイクロモル範囲であることから、タンパク質からのｓｉＲＮＡの放出も同様に争点ではない。３’−末端抱合体であることから、エキソヌクレアーゼ耐性が増大することになっても標的ＲＮＡに対するＴｍは影響を受けるはずはない［３５］。ペプチド核酸（ＰＮＡ）［２７〜２９］、メチルホスホナート［３０］、モルホリノ［３１］、メチレン（メチルイミノ）主鎖修飾［３２］及びホスホルアミダート［３３］及びＬＮＡ［３４］を含むその他の非ホスホルチオアートオリゴマー構成体に対するナプロキセンの抱合が、これらの新規の構成体の薬物動態及び組織分布特性をも同様に増強し得ると予想することには合理性がある。
【表１】
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ａ  センスストランドは上の行で５’から３’に書かれている。アンチセンスストランドは下に３’から５’に書かれている。オリゴヌクレオチドは、配列中でｄＴによって示されている２つの３’デオキシチミジンを除きホスホジエステルＲＮＡである。ナプロキセンは、アンチセンスストランドの３’末端に抱合されている。スクランブル配列は、センスストランドの配列を無作為化することによって生成された。  
ｂ  ＰＴＥＮ配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において（３’ｄＴｄＴを例外として）同一である［３６］。  
ｃ  ｃ−ｒａｆ配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において（３’ｄＴｄＴを例外として）同一である［３７］。  
ｄ  Ｈ−ｒａｓ配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において（３’ｄＴｄＴを例外として）同一である［３８］。  
ｅ  Ａｐｏ−Ｂ配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において（３’ｄＴｄＴを例外として）同一である［３８］。
【参考文献】
【０５９８】
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2008501319.tif 000088
2008501319.tif 000089
ｓｉＲＮＡで処置したＢａｌｂ−ＣマウスにおけるｍＲＮＡ発現の阻害：
メスのＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、ハーラン・スプラーグ・ドーレイ（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、インディアナ州）を、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）規則に合致する条件下で１ケージあたり３匹収容した。抱合されていない及びスクランブルされた対照を含むｓｉＲＮＡ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ１〜１６）、及びｓｉＲＮＡを全く含有しないビークルを、指示された用量レベルで１日１回３日間、０．９％ＮａＣｌ中で腹腔内投与し、分析用に組織を収獲する。
【０５９９】
４Ｍのグアジニウムイソチオシアナート中での組織の急速な均質化とそれに続く塩化セシウム勾配上での遠心分離によって、総ｍＲＮＡをマウスの肝臓から抽出する。ＲＮＡ（２０〜４０μｇ）を１．１％ホルムアルデヒドを含有する１．２％アガロースゲル中で分解して、ナイロン膜に移す。ブロットを放射線標識されたヒトｃＤＮＡプローブを用いてハイブリッド形成させる。ｍＲＮＡ写しにハイブリッド形成されたプローブをホスホルイメージャ（ＰｈｏｓＰｈｏｒｌｍａｇｅｒ）（モレキュラー・ダイナミクス）を用いて視覚化しかつ数量化する。放射線標識されたプローブのブロットをストリッピングした後、それらをＧ３ＰＤＨｃＤＮＡで再プローブして等しい投入量に確認する。
【０６００】
ヌードマウス内のヒト腫瘍細胞のｓｉＲＮＡ処置−腹腔内注入：
ヒト肺癌腫Ａ５４９細胞を収獲し、５×１０６の細胞（２００μＬ）をヌードマウスの内腿に皮下注入する。およそ１ヶ月で蝕知可能な腫瘍が発達する。ナプロキセン抱合されたＲＮＡ及びスクランブルされた対照（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ５〜１２）を含めた、ｃ−ｒａｆ及びＨ−ｒａｓメッセージをターゲティングするｓｉＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡを全く含有しないビークルを、およそ１０週の間隔日に体重１ｋｇあたり２０ｍｇの投薬量でマウスに腹腔内投与する。この期間中、腫瘍の成長についてマウスを監視する。
【０６０１】
ヌードマウス中におけるヒト乳房腫瘍細胞のｓｉＲＮＡ処置：
ヒト乳癌腫ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を収獲し、５×１０５細胞（２００μＬ）を胸腺欠損ヌードマウスの乳房体脂肪中に皮下注入する。およそ１ヶ月で蝕知可能な腫瘍が発達する。ナプロキセン抱合されたＲＮＡ及びスクランブルされた対照（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ５〜１２）を含めた、ｃ−ｒａｆ及びＨ−ｒａｓメッセージをターゲティングするｓｉＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡを全く含有しないビークルを、体重１ｋｇあたり１日５、１０及び２５ｍｇの投薬量で毎日およそ２０日間マウスに腹腔内投与する。この期間中、腫瘍の成長についてマウスを監視する。
【０６０２】
ヌードマウス中におけるヒト肺腫瘍細胞のｓｉＲＮＡ処置：
ヒト肺癌腫Ａ５４９細胞を収獲し、５×１０６細胞（２００μＬ）をヌードマウスの内腿に皮下注入する。およそ１ヶ月で触知可能な腫瘍が発達する。ナプロキセン抱合されたＲＮＡ及びスクランブルされた対照（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ５〜１２）を含めた、ｃ−ｒａｆ及びＨ−ｒａｓメッセージをターゲティングするｓｉＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡを含有しないビークルを、腫瘍部位でマウスに皮下投与する。薬物処置は腫瘍細胞接種の１週間後に開始し、週に２回４週間にわたり行う。合計で９週間、腫瘍成長についてマウスを監視する。
【０６０３】
ｓｉＲＮＡで処置されたＢａｌｂ−Ｃマウス及びＨｅｐＧ−２細胞におけるＡｐｏ−ＢｍＲＮＡ発現の阻害：
ｓｉＲＮＡによるＡｏｐ−ＢｍＲＮＡ発現の阻害（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ１３〜１６）をインビトロ及びインビボで評価することになる。（ヨー（Ｙａｏ）ＺＱ、シュー（Ｚｈｏｕ）ＹＸ、グォ（Ｇｕｏ）Ｊ、フェン（Ｆｅｎｇ）ＺＨ、フェン（Ｆｅｎｇ）ＸＭ、チェン（Ｃｈｅｎ）ＣＸ、ジョー（Ｊｉａｏ）ＪＺ、ワン（Ｗａｎｇ）ＳＱ  Ａｃｔａ  Ｖｉｒｏｌ．１９９６年２月；第４０（１）号：３５〜９頁。「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」の手順に従った）処置の後、ＨＥＰ−Ｇ２細胞内のメッセージレベルに及ぼすｓｉＲＮＡ処置の影響を分析する。
【０６０４】
メスのＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、ハーラン・スプラーグ・ドーレイ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、インディアナ州）を、国立衛生研究所規則に合致する条件下で１ケージあたり３匹収容した。抱合されていない及びスクランブルされた対照を含めたｓｉＲＮＡ（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ１３〜１６）、及びｓｉＲＮＡを全く含有しないビークルを、指示された用量レベルで１日１回３日間、０．９％ＮａＣｌ中で腹腔内投与し、分析用に組織を収獲する。
【０６０５】
４Ｍのグアジニウムイソチオシアナート中での組織の高速均質化とそれに続く塩化セシウム勾配上での遠心分離によって、総ｍＲＮＡをマウスの肝臓から抽出する。ＲＮＡ（２０〜４０μｇ）を、１．１％ホルムアルデヒドを含有する１．２％アガロースゲル中で分解して、ナイロン膜に移す。ブロットを放射線標識されたヒトＡｐｏ−ＢｃＤＮＡプローブを用いてハイブリッド形成させる。ｍＲＮＡ写しにハイブリッド形成されたプローブをホスホルイメージャ（モレキュラー・ダイナミクス）を用いて視覚化しかつ数量化する。放射線標識されたプローブのブロットをストリッピングした後、それらをＧ３ＰＤＨｃＤＮＡで再プローブして等しい投入量を確認する。
【０６０６】
実施例１３
ナプロキセン−ヒドロキシプロリノール・構築ブロックの合成
【化８３】
2008501319.tif 000090
（ｉ）ＤＩＣＣ、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉ）ＬｉＢＨ４／ＴＨＦ；（ｉｉｉ）ＤＭＴ−Ｃｌ／Ｐｙ；（ｉｖ）Ｈ２、Ｐｄ−Ｃ（１０％）／酢酸エチル−ＭｅＯＨ；（ｖ）化合物１ｃ、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｖｉ）ａ．無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ＥＤＣ及びｂ．ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、ｌｃａａＣＰＧ；（ｖｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディック（ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｍｉｄｉｃ）クロリド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン。
【０６０７】
化合物１００３：
６−ベンジルオキシアミノヘキサン酸（１００１、１３．２５ｇ、５０ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中に溶解させ、０℃まで冷却した。該溶液に対して、ジイソプロピルカルボジイミド（６．３１ｇ、７．７ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１０．２ｇ、１３．７ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で２０分間撹拌した後、４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンメチルエステルヒドロクロリド（１００２、９．６ｇ、５０ｍｍｏｌ）を加え、一晩アルゴン下で室温にて撹拌を継続した。反応混合物を乾燥状態まで蒸発させた。残渣に酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、ろ過してジイソプロピル尿素を除去した。沈殿物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で洗浄した。組合さった有機層を２ＮのＨＣｌ、飽和重炭酸ナトリウム及び水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過して乾燥状態まで蒸発させた。化合物１００３（Ｒｆ＝１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３中０．６、２２ｇ）を得、それをさらなる精製なく次の段階用に直接使用した。
【０６０８】
化合物１００４：
無水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中のリチウムボロヒドリド（１．３４ｇ）の溶液に対して、０℃で３０分間にわたりＴＨＦ（５０ｍＬ）中のメチルエステル１００３の溶液を加えた。添加後、反応混合物を室温にし、アルゴン下でさらに撹拌した。反応の完了を４時間後にＴＬＣにより確認した。（Ｒｆ＝１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３中０．４）。反応混合物を乾燥状態まで蒸発させ、０℃に冷却した。残渣に対して３ＮのＨＣｌ（１００ｍＬ）をゆっくりと加えた。３０分間撹拌した後、生成物をジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出した。組合わさった有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機層をろ過し、乾燥状態まで蒸発させた。化合物１００４を、最初に不純物を除去するため酢酸エチルで溶離することによって精製し、次にジクロロメタン／メタノール（５％）で溶離することにより、カラムクロマトグラフィを用いて精製し１４．３ｇ（７０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：環におけるアミド結合に起因する観察された回転異性体。δ７．３５（ｍ、５Ｈ）、５．０（ｓ、２Ｈ）、４．９２（ｄ、ＯＨ、Ｄ２Ｏ交換可能、４．７８（ｔ、ＯＨ、Ｄ２Ｏ交換可能）４．２８（ｍ、１Ｈ）、３．９５（ｍ、１Ｈ）、３．２−３．４８（ｍ、５Ｈ）、２．９２−３．０（ｍ、２Ｈ）、２．１−２．３（ｍ、２Ｈ）、１．７−２．０（２Ｈ）、１．３４−１．５２（ｍ、４Ｈ）、１．２−１．３（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１７１．３、１７１．１（８０℃での実施の間に消失する回転異性体に起因する小規模）、１５６．１、１３７．３、１２８．３、１２７．７、６８．２、６５．１、６１．９、５７．５、５５．１、３６．１、３４．２、２９．３、２６．１、２５．９、２４．６、２４．１、２０．７７、１４．０９。
【０６０９】
化合物１００５：
化合物１００４（１４ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）を無水ピリジンと共に３回同時蒸発させ、次にピリジン（６０ｍＬ）中に溶解させた。この溶液に対して、ジメチルアミノピリジン（０．４８８ｇ、４ｍｍｏｌ）及びＤＭＴ−Ｃｌ（１３．６ｇ、４０．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）を室温で加えた。反応混合物を１６時間室温で撹拌した。余剰のＤＭＴ−Ｃｌをメタノール（２５ｍＬ）の添加により急冷した。溶液を減圧下で乾燥させた。残渣を酢酸エチル（３００ｍＬ）中に懸濁させて、飽和重炭酸溶液、塩水及び水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し蒸発させた。溶媒の除去後に２４．２ｇの粗製生成物を得た。２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いたシリカゲル上での精製時点で、白色の泡状固体として化合物１００５を得た（２１．３ｇ、８３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．１８−７．３８（ｍ、１４Ｈ）、６．２−６．５（ｍ、４Ｈ）、５．０（ｓ、２Ｈ）、４．９（ｄ、−ＯＨ、Ｄ２Ｏで交換可能）、４．４（ｍ、１Ｈ）、４．１５（ｍ、１Ｈ）、３．７（ｓ、６Ｈ）、３．５６（ｍ、１Ｈ）、３．３２（ｍ、１Ｈ）、３．１４（ｍ、１Ｈ）、２．９−３．０（ｍ、４Ｈ）、２．１８（ｍ、２Ｈ）、１．８−２．１（ｍ、２Ｈ）、１．１−１．５（ｍ、６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１７４．７、１７２．７、１７１．９、１７１．３、１７１．２、１５８．８、１５８．７、１５８．６、１５８．５、１５８．４、１５８．３、１５６．７、１５６．７、１５６．６、１４７．５、１４５．８、１４５．２、１４４．９、１４４．７、１４４．４、１３９．６、１３７．１、１３７．０４、１３７．０１、１３６．９、１３６．８２、１３６．７８、１３６．５５、１３６．４７、１３６．４５、１３６．３、１３６．２８、１３５．９３、１３５．８５、１３５．８１、１３０．２、１３０．１、１３０．０、１２９．９、１２９．３、１２８．６９、１２８．６６、１２８．２２、１２８．１６、１２８．０、１２７．９９、１２７．９４、１２７．９１、１２７．７７、１１３．５２、１１３．４３、１１３．３５、１１３．３、１１３．２４、１１３．１９、１１３．０３、８６．８、８６．１、８５．９、７３．０、７１．６、７１．５、７０．５、６９．３、６７．３、６７．１、６８．７６、６８．７１、６４．３８、６３．７、６０．５８、６０．０、５６．４、５５．８、５５．７、５５．４５、５５．４１、５５．３５、５５．３３、４０．９７、４０．８７、４０．７７、３７．１３、３６．８３、３５．１３、３５．００、３４．８１、３４．６、３３．３、２９．８、２６．７３、２５．５、２６．４、２６．２、２４．９、２４．６、２４．５、２４．３、２４．２、２１．１、１４．３。
【０６１０】
化合物１００６：
化合物１００５（４．９０ｇ、７．３５３ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル−メタノール（９：１、４０ｍＬ）中に溶解させ、アルゴンでパージした。該溶液に対して１０％の炭素上のパラジウム（０．５ｇ、湿潤デグサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）タイプＥ１０１ＮＥ／Ｗ）を加えた。フラスコを水素で２回パージし、２時間水素雰囲気下において室温でさらに撹拌した。出発材料の消失をＴＬＣによって確認した。反応混合物をセライトのパッドを通してろ過し、酢酸エチル−メタノール（９：１）で洗浄した。組合わさった有機層を減圧下で濃縮させ、白色の固体として化合物１００６を得た（３．８０ｇ、９７％）。これをそのまま次の段階のために使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．１６−７．３２（ｍ、９Ｈ）、６．８６（ｍ、４Ｈ）、５．０（ｂｓ、１Ｈ）、４．４（ｍ、１Ｈ）、３．９−４．２５（ｍ、２Ｈ）、３．７２（ｓ、６Ｈ）、３．５６（ｍ、１Ｈ）、３．３２（ｍ、１Ｈ）、３．１４（ｍ、１Ｈ）、２．９８−３．０（ｍ、２Ｈ）、２．４５（ｍ、２Ｈ）、２．２（ｍ、２Ｈ）、１．８−２．０４（ｍ、３Ｈ）、１．１−１．４５（ｍ、４Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１７．９、１５７．９、１４５．１、１４４．７６、１３５．８、１３５．７、１２９．５、１２７．８、１２７．７、１２７．５、１２６．５、１１３．２、１１３．１、８５．７、８５．０、６８．５、６７．４、６３．３、５４．９、４１．６、３６．２、３４．２、３３．３、３２．５、２６．２、２４．７、２４．４。
【０６１１】
化合物７ｃ：
化合物１００６（３．８０ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）を、１時間トリエチルアミンの存在下でジクロロメタン中の化合物１ｃ（３．１ｇ、７．８３ｍｍｏｌ）と共に撹拌した。標準的な後処理の後、残渣を、溶離剤として３〜４％メタノールを含有するジクロロメタンを用いたフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し白色の発泡体として化合物７ｃを得た（５．４５ｇ、９９．５６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、２５℃）：δ７．９１−７．８９（ｂｍ、１Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）；７．７６−７．６８（ｍ、３Ｈ）、７．４３−７．４１（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）；７．３１−７．１５（ｍ、１０Ｈ）；７．１１−７．０９（ｍ、１Ｈ）；６．８６−６．８３（ｍ、４Ｈ）；５．９５（ｄ、０．７Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）；４．８９（ｄ、０．３Ｈ、Ｄ２Ｏで交換可能）；４．３９−４．３７（ｍ、０．７Ｈ）；４．２９−４．２７（ｍ、０．３Ｈ）；４．１４−４．１０（ｍ、０．７Ｈ）、４．０３−４．００（ｍ、０．３Ｈ）；３．８３−３．８２（ｄ、Ｊ（Ｈ、Ｈ）＝２Ｈｚ、３Ｈ）；３．７１−３．６７（ｍ、７Ｈ）；３．５２−３．５０（ｍ、０．７Ｈ）：３．４４−３．４０（ｍ、０．３Ｈ）；３．２９−３．２１（ｍ、１．４Ｈ）；３．１２−３．１０（ｍ、０．７Ｈ）；３．００−２．９４（ｍ、３Ｈ）；２．１１−１．７９（ｍ、４Ｈ）；１．４１−１．１４（ｍ、９Ｈ）。
【０６１２】
化合物８ｃ：
化合物７ｃ（１．０４ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＡＰ（０．５２ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）の存在下でエチレンジクロリド（１０ｍＬ）中の無水コハク酸（０．２１ｇ、２．０９ｍｍｏｌ）と共に４８時間周囲温度で撹拌した。ジクロロメタンを添加することによって反応混合物を２０ｍＬまで希釈し、氷冷クエン酸溶液で洗浄した。真空下で溶媒を除去して粗製スクシナートを得、それをさらなる精製なく直接使用した。かくして得られたスクシナートをアセトニトリル（１０ｍＬ）を中に取り込み、これに対してＤＭＡＰ（０．１７ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）及びＰｈ３Ｐ（０．３６ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を加え、その後エチレンジクロリド（３ｍＬ）中のＤＴＮＰ（０．４３ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。結果としての混合物をその後、１５５μＭ／ｇという投入量、平均細孔サイズ４８４Ａ（５．８ｇ）でミリポア製のｌｃａａ  ＣＰＧを用いて、実施例１中に記載される通りに処置し、５８．３４μＭ／ｇという投入量で所望のＣＰＧ８ｃを得た。
【０６１３】
化合物９ｃ：
化合物７ｃ（２．６１ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１５ｍＬ）中に取り込み、ＤＩＥＡ（２．０ｍＬ、１１．４８ｍｍｏｌ）をアルゴン大気下周囲温度で該溶液中に加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド（ケム・ジーン・コーポレーションから購入）（１．３ｇ、５．４９ｍｍｏｌ）を滴下により該撹拌中の溶液に加え、撹拌を３時間継続した。さらなるジクロロメタンを加えることによって反応混合物を４０ｍＬまで希釈し、有機層を希ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、その後標準的な後処理を行う。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶離剤：ヘキサン／酢酸エチル（１：２））の後に、所望の化合物９ｃを白色の発泡体として得た（２．４７ｇ、７４．８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（１６０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、２５℃）：δ１４５．８７、１４５．７８、１４５．４０、１４４．９９。
【表２】
2008501319.tif 000091
表II中で、「Ｑ２１」は、ヒドロキシプロリノールリンカーを伴うナプロキセンを表わし；「Ｌ１０」はヒドロキシプロリノールリンカーを伴うコレステロールを表わし；小文字の「ｓ」は、ホスホロチオアート連結を表わし；小文字の「ｄ」は、デオキシを表わし；下付き文字「Ｆ」は２’−フルオロ糖を表わし；「ＭｅＵ」は５−メチル−ウリジンを表わし；「Ｌ１」はセリノールリンカーと通してオリゴヌクレオチドに対して抱合されたナプロキセンを表わし；下付き文字「ｏ」は２’−Ｏメチル（２’−ＯＭｅ）を表す。
【０６１４】
実施例１４
ナプロキセン抱合されたｓｉＲＮＡを用いたインビボＡｐｏＢ遺伝子サイレンシング
アッセイ：
マウス−メスＣ５７／ＢＬ６；投薬量−単回静脈内注入；断首−注入後７２時間；グループ−１グループあたり６匹。投薬から７２時間後に血液、肝臓及び空腸の収集し、その後ｂＤＮＡアッセイによりｍＲＮＡレベルを監視する。
【０６１５】
結果：
結果は以下の表III及び表IVに示されている。
【表３】
2008501319.tif 000092
表III中で「Ｑ２１」は、ヒドロキシプロリノールリンカーを伴うナプロキセンを表わし；かつ「Ｌ１０」は、ヒドロキシプロリノールリンカーを伴うコレステロールを表わし；小文字の「ｓ」は、ホスホロチオアート連結を表わし；かつ下付き文字「ｏ」は、２’−Ｏメチル（２’−ＯＭｅ）を示す。
【表４】
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表IVにおいて、２重鎖のアンチセンスストランドは３’から５’に示されており；小文字の「ｓ」は、ホスホロチオアート連結を表わし；小文字の「ｄ」は、デオキシを表わし；下付き文字「Ｆ」は２’−フルオロ糖を表わし；「ＭｅＵ」は５−メチル−ウリジンを表わし；かつ「Ｌ１」はセリノールリンカーを通してオリゴヌクレオチド抱合されたナプロキセンを表す。
【０６１６】
参照として内含
本明細書中で引用されている全ての特許文献及び刊行物は、参照として本明細書中に内含される。
【０６１７】
等価物
当業者であれば、本明細書中に記載されている該発明の特定の実施形態に対する数多くの等価物を認識するか、又は日常的なものを超えない実験を用いてそれを認識できることであろう。かかる等価物は以下の特許請求の範囲により包含されるよう意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０６１８】
【図１】リガンドに接合されるさまざまなオリゴヌクレオチドを描いている。ＮＡは、ＲＮＡ又はＤＮＡ又はキメラＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ又はＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡのいずれかから成るオリゴヌクレオチド（又は核酸）であるという点に留意されたい。Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３のうちの少なくとも１つが芳香族又は置換された芳香族であり、Ｒ１が芳香族又は置換芳香族である場合、Ｒ２はＨ又は任意の有機置換基のいずれかであり、Ｒ３はＨ又は任意の有機置換基のいずれかである。
【図２】１つのリガンドに接合されるさまざまなオリゴヌクレオチドを描いている。注：Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１つは芳香族又は置換芳香族である。行Ａ−ＥについてはＮＡ＝ＤＮＡ又はＲＮＡである。行Ａについては、ラセミ及びＲ及びＳ異性体、行Ｂ及びＣについてはラセミ及び全４つの立体異性体（ＲＲ、ＲＳ、ＳＲ及びＳＳ）である。行Ｄ及びＥについてはＲ＝Ｈ又はＯＨである。
【図３】アルキル及びＰＥＧテザーを通して連結されたアラルキルリガンドを有するセリノールリンカー（図２中の行Ａを参照）を伴うさまざまなＮＡ構築ブロックを描いている。図示された各々のリガンドはラセミ又は任意には富化された又は純粋なＲ又はＳ異性体のいずれかである。
【図４】アルキル及びＰＥＧテザーを通して連結されたアラルキルリガンドを有するピロリジンリンカー（図２中の行Ｂを参照のこと）を伴うさまざまなＮＡ構築ブロックを描く。図示された各々のリガンドはラセミ又は任意には富化された又は純粋なＲ又はＳ異性体のいずれかである。
【図５】アルキル及びＰＥＧテザーを通して連結されたアラルキルリガンドを有するヒドロキシプロリノールリンカー（図２中の行Ｃを参照）を伴うさまざまなＮＡ構築ブロックを描いている。図示された各々のリガンドはラセミ又は任意には富化された又は純粋なＲ又はＳ異性体のいずれかである。
【図６】選択されたテザーを通して連結されたアラルキルリガンドを有するヌクレオシドリンカー（図２中の行Ｄを参照のこと）を伴うさまざまなＮＡ構築ブロックを描く。図示された各々のリガンドはラセミ又は任意には富化された又は純粋なＲ又はＳ異性体のいずれかである。
【図７】選択されたテザーを通して連結されたアラルキルリガンドを有するヌクレオシドリンカー（図２中の行Ｄを参照）を伴うさまざまなＮＡ構築ブロックを描いている。図示された各々のリガンドはラセミ又は任意には富化された又は純粋なＲ又はＳ異性体のいずれかである。
【図８】選択されたテザーを通して連結されたアラルキルリガンドを有するヌクレオシドリンカー（図２中の行Ｅを参照のこと）を伴うさまざまなＮＡ構築ブロックを描く。図示された各々のリガンドはラセミ又は任意には富化された又は純粋なＲ又はＳ異性体のいずれかである。
【図９】選択されたテザーを通して連結されたアラルキルリガンドを有するヌクレオシドリンカー（図２中の行Ｅを参照）を伴うさまざまなＮＡ構築ブロックを描いている。図示された各々のリガンドはラセミ又は任意には富化された又は純粋なＲ又はＳ異性体のいずれかである。
【図１０】リガンドに接合されるさまざまなオリゴヌクレオチドを描いている。ＮＡは、ＲＮＡ又はＤＮＡ又はキメラＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ又はＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡのいずれかから成るオリゴヌクレオチド（又は核酸）である。Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３のうちの少なくとも１つが芳香族又は置換された芳香族であり、Ｒ１が芳香族又は置換芳香族である場合、Ｒ２はＨ又は任意の有機置換基のいずれかであり、Ｒ３はＨ又は任意の有機置換基のいずれかである。
【図１１】ナプロキセンと接合されたさまざまなｓｉＲＮＡ２重鎖を描いている。I：各ストランドの３’末端にオーバーハングを伴う未修飾ｓｉＲＮＡ。II：センスストランドの３’末端にナプロキセンを伴うｓｉＲＮＡ２重鎖。III：アンチセンスストランドの３’末端にナプロキセン接合を伴うｓｉＲＮＡ２重鎖。IV：センス及びアンチセンスストランドの３’末端にナプロキセン接合を伴うｓｉＲＮＡ２重鎖。V：センスストランドの３’及び５’末端でナプロキセン接合を伴うｓｉＲＮＡ。VI：センスストランドの５’末端でナプロキセン接合を伴うｓｉＲＮＡ２重鎖。VII：センスストランドの５’末端及びアンチセンスストランドの３’末端にナプロキセン接合を伴うｓｉＲＮＡ２重鎖。
【図１２】固相オリゴヌクレオチド合成のための手順を描く。
【図１３】内部位置に非ヌクレオチド／非ヌクレオシド部分を取込んでいる固相オリゴヌクレオチド合成のための手順を描く。
【図１４】３’末端で非ヌクレオチド／非ヌクレオシド部分を取込んでいる固相オリゴヌクレオチド合成のための手順を描いている。
【図１５】５’末端で非ヌクレオチド／非ヌクレオシド部分を取込んでいる固相オリゴヌクレオチド合成のための手順を描いている。
【図１６】ナプロキセン接合されたオリゴリボヌクレオチドのＣＧＥ分析を描いている。
【図１７】ナプロキセン接合されたオリゴリボヌクレオチドのＬＣ−ＭＳエレクトロスプレー分析を描く。
【図１８】アラルキルリガンド接合されたｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド（センス及びアンチセンスストランド）のリストを描いている。
【図１９】以下のインビトロ活性及び安定性研究のためのセンス及びアンチセンスストランド（図１８に示されている）から構成されたｓｉＲＮＡ２重鎖のリストを描く。
【図２０】未接合ｓｉＲＮＡ２重鎖（１１１）との関係における３’−ナプロキセン接合ｓｉＲＮＡ２重鎖（１１２、センスのみ；１１３、アンチセンスのみ；１１４センスとアンチセンスの両方）のインビトロルシフェラーゼ遺伝子サイレンシング活性を描く。
【図２１】未接合ｓｉＲＮＡ２重鎖（１１１）との関係における３’−イブプロフェン接合ｓｉＲＮＡ２重鎖（１１５、アンチセンスストランド上の接合）のインビトロルシフェラーゼ遺伝子サイレンシング活性を描いている。
【図２２】ｓｉＲＮＡ２重鎖１１１（未修飾ＬｕｃｓｉＲＮＡ）及び１１４（３’−ナプロキセン接合されたＬｕｃｓｉＲＮＡ）についてのヒト血清安定性の経時変化の変性ゲル分析を描いている。Ｃは、ＰＢＳ緩衝液単独にの中でインキュベートされたｓｉＲＮＡ２重鎖についての４時間時点であり、ＯＨ−は部分的アルカリ加水分解マーカーであり、＊ｓ／ａｓは５’末端標識されたセンスＲＮＡを含むｓｉＲＮＡ２重鎖を表わし、ｓ／＊ａｓは５’末端標識されたアンチセンスＲＮＡを含む２重鎖を表わす。試料は９０％のヒト血清中でインキュベートされ、１１１については１０秒、５分、１５分、３０分、１時間、２時間及び４時間の時点でアッセイされ、１１４については１０秒、１５分、３０分、１時間、２時間及び４時間でアッセイされた。円で囲んだ部分は、未修飾ＬｕｃｓｉＲＮＡ（１１１）について３’−５エキソヌクレアーゼ分解が観察されるｓｉＲＮＡ２重鎖の領域を表わしている。
【図２３】マウス血清及び組織ホモジェネートの中のｓｉＲＮＡの安定性アッセイを描いている。
【図２４】３’末端におけるナプロキセンを用いたマウス血清内のｓｉＲＮＡの安定化を描いている。
【図２５】３’末端でナプロキセンを用いる肝臓内のｓｉＲＮＡの安定化を描いている。
【図２６】ナプロキセン接合を用いた脳内のｓｉＲＮＡの安定化を描いている。
【図２７】ナプロキセン接合を用いた眼内のｓｉＲＮＡの安定化を描いている。
【図２８】ナプロキセン接合を用いたマウス血清中のｓｉＲＮＡの安定化を描いている。
【図２９】ナプロキセン接合されたｓｉＲＮＡ（４３３５）及び対応する対照２重鎖（４０１４）のインビトロＶＥＧＦサイレンシングを描いている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【国際調査報告】
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