(57)【要約】  サルナシ、特にハーディキウィフルーツの種の新規調製物、および、それを含む組成物が、開示される。また、アレルギー性と非アレルギー性との両方の炎症疾患、ウィルス感染、および癌などの、免疫反応の調節が有効である様々な疾患を予防するならびに／または治療するためのサルナシ調製物も開示される。また、これらの組成物の製造、および、使用に関する方法も記載される。
2008531584.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の免疫反応を調節する方法であって、
哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量のハーディキウィフルーツ調製物を、哺乳類に投与する投与工程を含み、
上記ハーディキウィフルーツ調製物は、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、および、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物からなる群より選ばれ、
当該ハーディキウィフルーツ調製物は、抽出されていない、方法。
【請求項２】
哺乳類の免疫反応を調節する方法であって、
哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量のハーディキウィフルーツ調製物を、哺乳類に投与する投与工程を含み、
上記ハーディキウィフルーツ調製物は、葉の抽出物または濃縮物、および、皮の抽出物または濃縮物からなる群より選ばれる、方法。
【請求項３】
哺乳類の免疫反応を調節する方法であって、
哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量の、
（ａ）ハーディキウィフルーツ調製物、ならびに、
（ｂ）プロバイオティクス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；およびプロアントシアニジンからなる群より選ばれる成分、
を哺乳類に投与する投与工程を含む、方法。
【請求項４】
哺乳類の免疫反応を調節する方法であって、
哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量の、
（ａ）ハーディキウィフルーツ調製物、ならびに、
（ｂ）ステロイド、抗ヒスタミン剤、抗体、抗生物質、シクロスポリン、抗真菌剤、呼吸機能の長期管理薬、鎮痛薬、β‐アゴニスト、ロイコトリエン修飾薬、サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクリミル、カフェイン、テオフィリン、カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン、および、Ｔ細胞機能阻害剤からなる群より選ばれる成分、
を哺乳類に投与する投与工程を含む、方法。
【請求項５】
請求項３または４に記載の方法であって、上記ハーディキウィフルーツ調製物は、果実の抽出物または濃縮物、葉の抽出物または濃縮物、茎の抽出物または濃縮物、皮の抽出物または濃縮物、根の抽出物または濃縮物、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、乾燥果実、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物、０℃から約８０℃までの温度の果実水の抽出によって製造される調製物、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される調製物、蒸留水におけるハーディキウィフルーツの抽出によって製造される調製物、ならびに、水、クロロホルム、および酢酸エチルにおけるハーディキウィフルーツの連続的な抽出によって製造される調製物からなる群より選ばれる、方法。
【請求項６】
請求項３〜５の何れか１項に記載の方法であって、上記ハーディキウィフルーツ調製物が、葉、茎、皮、根、および、それらの任意の組み合わせからなる群より選ばれるハーディキウィフルーツの一部から調製される抽出物または濃縮物である、方法。
【請求項７】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、および、濃縮果実からなる群より選ばれる、請求項１または３〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が乾燥果実である、請求項１または３〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、果実を乾燥する乾燥工程を含む方法によって製造される、請求項１または３〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物である、請求項１または３〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１１】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、約０℃から約２５℃までの温度の水における果実の抽出によって製造される、請求項３〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、室温水における果実の抽出によって製造される、請求項３〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１３】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される、請求項３〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１４】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のＴｈ２およびＴｈ１の免疫反応を調節するのに十分な量で提供される、請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１５】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、ＩｇＥ、ＩｇＧ２ａ、および、ＩｇＧ１からなる群より選ばれる、哺乳類によって製造される抗体のアイソタイプの量を調節するのに十分な量で提供される、請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１６】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のＴｈ２サイトカインの少なくとも１つの産生および／またはレベルを減少させるのに、あるいは、哺乳類のＴｈ１サイトカインの少なくとも１つの産生またはレベルを増加させるのに、十分な量で提供される、請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１７】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のロイコトリエンの少なくとも１つの産生または製造を減少させるのに十分な量で提供される、請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のＧＡＴＡ‐３、Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２からなる群より選ばれる転写因子の発現レベルを減少させるのに十分な量で提供される、請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１９】
上記哺乳類が、Ｔｈ１反応が増強されること、および／または、Ｔｈ２反応が抑制されることが望ましい病気を進行しているという危険な状態にある、請求項１〜１８の何れか１項に記載の方法。
【請求項２０】
上記哺乳類が、アレルギー性疾患または非アレルギー性炎症疾患を進行しているという危険な状態にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
上記アレルギー性疾患が、ロイコトリエンによって調節される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
上記アレルギー性疾患が喘息である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
上記アレルギー性疾患がアトピー性皮膚炎である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
上記哺乳類が、ウィルス感染を進行しているという危険な状態にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
上記哺乳類が、癌を進行しているという危険な状態にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
上記ハーディキウィフルーツが、サルナシ、ミヤママタタビ、および、マタタビからなる群より選ばれる、請求項１〜２５の何れか１項に記載の方法。
【請求項２７】
上記ハーディキウィフルーツが、サルナシである、請求項１〜２５の何れか１項に記載の方法。
【請求項２８】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が組成物に含まれ、当該ハーディキウィフルーツ調製物の量が、当該組成物の総重量に基づいた重量で約０．０１％〜約９５％の間である、請求項１〜２７の何れか１項に記載の方法。
【請求項２９】
上記投与工程は、ハーディキウィフルーツ調製物を担体、アジュバント、または希釈剤と一緒に哺乳類に投与する工程を含む、請求項１〜２８の何れか１項に記載の方法。
【請求項３０】
上記投与工程は、ハーディキウィフルーツ調製物を、錠剤、粉末、発泡錠、発泡散剤、カプセル、液体、懸濁液、顆粒、またはシロップとして哺乳類に提供する工程を含む、請求項１〜２９の何れか１項に記載の方法。
【請求項３１】
上記投与工程は、ハーディキウィフルーツ調製物を健康食品として哺乳類に提供する工程を含む、請求項１〜２９の何れか１項に記載の方法。
【請求項３２】
上記健康食品が、高級ベーカー商品、パン、ロールパン、朝食用シリアル、加工チーズ、非加工チーズ、香辛料、乳製品、プリン、ゼラチンゼザート、炭酸飲料、茶、粉末飲料混合物、魚加工品、果実性飲料、野菜性飲料、チューインガム、ハード・コンフェクショナリー、冷凍乳製品、食肉加工品、ナッツ性スプレッド、パスタ、家禽製造加工食品、グレイビーおよびソース、ポテトチップ、野菜チップ、クリスプ、チョコレート、クッキー、キャンディー、甘草、アイスクリーム、乾燥食品、カット食品、加工食品、薬味、アルコール飲料、麺類、発酵食品、スープ、スープ混合物、大豆性製品、野菜油性スプレッド、ならびに、野菜性飲料からなる群より選ばれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
上記投与工程が、ハーディキウィフルーツ調製物を含む化粧用組成物を哺乳類に塗布する工程を含む、請求項１〜２９の何れか１項に記載の方法。
【請求項３４】
上記化粧用組成物が、ローション、クリーム、美容液、化粧液、エマルジョン、パック、石鹸、シャンプー、リンス、クレンザー、体を洗うための溶液、洗浄液、または、トリートメントからなる群より選ばれる形態で提供される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
上記投与工程が、ハーディキウィフルーツ調製物を食品添加剤として哺乳類に提供する工程を含む、請求項１〜２９の何れか１項に記載の方法。
【請求項３６】
脂肪酸；ポリケチド；有機酸；低有機化合物；芳香族アミノ酸；フェニルプロパノイド；テルペノイド；ステロイド；アルカロイド；コリン；ポルフィリン；直鎖ペプチド；環状ペプチド；デプシペプチド；アミノ酸誘導体；ヌクレオシド；ヌクレオチド；炭化水素；タンパク質；細胞；細胞片；ハーブ調製物；薬味；無機物；滅菌剤；調味料；ビタミン；および、電解質からなる群より選ばれる薬剤を哺乳類に投与する工程をさらに含む、請求項１〜３５の何れか１項に記載の方法。
【請求項３７】
プロバイオティックス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；タウリン；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；ローズマリー；ローズマリー酸；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；プロアントシアニジン；および、β‐カロチンからなる群より選ばれる薬剤を哺乳類に投与する工程をさらに含む、請求項１〜３５の何れか１項に記載の方法。
【請求項３８】
上記脂肪酸が、共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸からなる群より選ばれる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
異なるマタタビ属の種の調製物を哺乳類に投与する工程をさらに含む、請求項１〜３８の何れか１項に記載の方法。
【請求項４０】
上記異なるマタタビ属の種が、Ａ．キネンシス、Ａ．デリシオサ、サルナシ、マタタビ、および、ミヤママタタビからなる群より選ばれる、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
哺乳類の免疫反応を調節するための組成物であって、哺乳類の免疫反応を調節するための、ハーディキウィフルーツ調製物および少なくとも１つの添加活性化合物を含む、組成物。
【請求項４２】
上記添加活性化合物が、哺乳類におけるアレルギー疾患を治療、または、予防するためのものである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
上記添加活性化合物は、ステロイド、抗ヒスタミン剤、抗体、抗生物質、シクロスポリン、抗真菌剤、呼吸機能の長期管理薬、鎮痛剤、β‐アゴニスト、ロイコトリエン修飾薬、サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクリミル、カフェイン、テオフィリン、カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン、および、Ｔ細胞機能阻害剤からなる群より選ばれる、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
上記添加活性化合物は、プロバイオティクス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；およびプロアントシアニジンからなる群より選ばれる、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４５】
上記脂肪酸が、共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸からなる群より選ばれる、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
上記組成物が、薬学的組成物である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４７】
上記組成物が、健康食品である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４８】
上記組成物が、食品添加剤である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４９】
上記組成物が、化粧品である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項５０】
上記ハーディキウィフルーツが、サルナシ、ミヤママタタビ、および、マタタビからなる群より選ばれる、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
上記ハーディキウィフルーツ、サルナシである、請求項４１〜４９に記載の組成物。
【請求項５２】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、果実、葉、茎、皮、根、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選ばれるハーディキウィフルーツの一部から調製される抽出物または濃縮物である、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５３】
上記ハーディキウィフルーツが、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実からなる群より選ばれる、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
上記ハーディキウィフルーツが、乾燥果実である、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５５】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、果実を乾燥する乾燥工程を含む方法によって製造される、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５６】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物である、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、室温水における果実の抽出によって製造される、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５８】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５９】
上記抽出物が、蒸留水におけるハーディキウィフルーツの抽出によって製造される調製される、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
上記調製物が、ハーディキウィフルーツの酢酸エチル抽出物である、請求項４１〜４９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
免疫機能の異常調節に関連する疾患または病気を治療するための組成物の調製における、（ｉ）ハーディキウィフルーツまたはその調製物、ならびに、（ｉｉ）薬剤の使用であって、
当該薬剤は、ステロイド、抗ヒスタミン剤、抗体、抗生物質、シクロスポリン、抗真菌剤、呼吸機能の長期管理薬、鎮痛剤、β‐アゴニスト、ロイコトリエン修飾薬、サイトカインアンタゴニスト、サイトカイン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクリミル、カフェイン、テオフィリン、カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン、および、Ｔ細胞機能阻害剤からなる群より選ばれる、使用。
【請求項６２】
（ｉ）ハーディキウィフルーツまたはその調製物、ならびに、（ｉｉ）薬剤の使用であって、
当該薬剤は、プロバイオティクス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；およびプロアントシアニジンから選ばれる、使用。
【請求項６３】
上記脂肪酸が、共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸からなる群より選ばれる、請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
上記組成物が、ロイコトリエンの産生または活性化に関連する疾患または病気を治療するためのものである、請求項６１〜６３の何れか１項に記載の使用。
【請求項６５】
上記疾患または病気が、アトピー性皮膚炎、喘息、食物アレルギー、アレルギー性鼻炎、および、慢性じんましんからなる群より選ばれる、請求項６１〜６３の何れか１項に記載の使用。
【請求項６６】
上記ハーディキウィフルーツ調製物が、果実の抽出物または濃縮物、葉の抽出物または濃縮物、茎の抽出物または濃縮物、皮の抽出物または濃縮物、根の抽出物または濃縮物、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、乾燥果実、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物、室温水における果実の抽出によって製造される調製物、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される調製物、蒸留水におけるハーディキウィフルーツの抽出によって製造される調製物、ならびに、水、クロロホルム、および酢酸エチルにおけるハーディキウィフルーツの連続的な抽出によって製造される調製物からなる群より選ばれる、請求項６１〜６３の何れか１項に記載の使用。
【請求項６７】
哺乳類の免疫反応を調節する方法であって、哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量の一般的なキウィフルーツ調製物を哺乳類に投与する投与工程を含み、上記一般的なキウィフルーツ調製物は、果実の抽出物または濃縮物、葉の抽出物または濃縮物、茎の抽出物または濃縮物、皮の抽出物または濃縮物、根の抽出物または濃縮物、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、乾燥果実、一般的なキウィフルーツ汁の濃縮物、室温水における果実の抽出によって製造される調製物、酢酸エチルを用いる一般的なキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される調製物、蒸留水における一般的なキウィフルーツの抽出によって製造される調製物、ならびに、水、クロロホルム、および酢酸エチルにおける一般的なキウィフルーツの連続的な抽出によって製造される調製物からなる群より選ばれる、方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔発明の分野〕
本発明は、マタタビ属、特にハーディキウィフルーツ種、および、それらの様々な画分ならびに調製物、ならびに、それらを含む組成物に関する。これら全ては、アレルギー性および非アレルギー性の炎症性疾患、ウィルス感染、および癌を含む、免疫反応の調節が有効である様々な疾患を予防するおよび／または治療する能力を有している。また、これらの組成物の製造、および、使用に関する方法も記載される。
【０００２】
〔発明の背景〕
炎症に関する疾患の特徴は、特定の細胞種および媒介物の流入であり、これらの存在によって、組織の損傷や時には死が引き起こされる。炎症に関連する疾患が、呼吸システムなどの特定の組織およびシステムを苦しめて、呼吸妨害、低酸素血、高炭酸症、および肺組織損傷をもたらすときには、特に有害である。他の疾患または病気において、特定の種類の炎症が進行することは、ウィルス感染などの疾患を制御することにおいて重要な要素となるが、感染部分の組織に損傷を与える危険性が依然として存在する。
【０００３】
アレルギー性疾患は免疫グロブリンＥ（IgE）によって部分的に仲介されるが、一方、タイプ２のヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）、肥満細胞、および好酸球がこの疾患の進行に重要な役割を担っていることが示されている（Maggi E., Immunotechnology, 3:233-244, 1998; Pawankar R., Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol., 1:3-6, 2001; Vercelli D., Clin. Allergy Immunol., 16:179-196, 2002）。循環ＩｇＥは、２つのアイソフォームのＩｇＥ受容体に結合する。高親和性のＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）は、脂肪細胞および好塩基球の表面に存在し、低親和性のＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩＩまたはＣＤ２３）はリンパ球、好酸球、血小板、およびマクロファージの表面に存在する。アレルゲンと遭遇し、それによって肥満細胞が脱顆粒した後に、アレルギー性疾患の発病を統制する重要な因子は、ＩｇＥ受容体の架橋であると信じられている。肥満細胞によって放出される分子には、ヒスタミン、へパリン、プロテアーゼ、および、フリーラジカルが含まれ、これらの分子によって、（ｉ）血管拡張、（ｉｉ）腸および／または気管支の平滑筋の収縮、（ｉｉｉ）粘液分泌、ならびに、（ｉｖ）局所的なタンパク質の分解、を含む様々な生物効果が仲介される。肥満細胞の初期の即時性反応に続いて、６‐２４時間後に好酸球、好塩基球、リンパ球の流入が引き起こされる。この後期の反応によって、抗原に連続的に曝される組織において慢性的な組織炎症が誘発される。
【０００４】
ＩｇＥ依存的な肥満細胞の脱顆粒と、炎症部位における好酸球の蓄積とは、Ｔｈ２細胞の不釣合いな過剰活性化、および、その結果生じるＴｈ２に仲介されるＩｇＥの過剰製造に由来すると考えられている（Abbas et al., 1991, Nature 383:787-93; Vercelli, 2001, Curr Opin Allergy Clin Immunol 2001, 1:61-5）。ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０およびＩＬ‐１３などのＴｈ２の代表的なサイトカインが、これらの反応に重要な役割を担っていると知られている。また、ＩＦＮ‐γおよびＩＬ‐１２などのＴｈ１に仲介されるサイトカインによってＴｈ２経路が負に調節されることが報告されている。例えば、ＩＦＮ‐γは、Ｂ細胞におけるＩｇＧ２ａのアイソタイプの転換を誘導し、一方、ＩＬ‐１２はすでに確立されたＴｈ２反応を特定の状況においてＴｈ１優性に転向する（Umetsu and DeKruyff, 1997, J Allergy Clin Immunol 100:1-6; Coffman and Carty, 1986, J Immunol 136:949-54; Gavett et al., 1995, J Exp Med 182:1527-36）。ＧＡＴＡ３およびＴ‐ｂｅｔなどの様々な細胞転写因子によって、Ｔｈ１およびＴｈ２の分化、ならびに、これらの細胞におけるサイトカインの製造が制御される（Lee et al., 2000, J Exp Med 192:105-15; Ting et al., 1996, Nature 384:474-8; Lighvani et al., 2001, Proc Natl Acad Sci USA 98:15137-42; Szabo et al., 2000, Cell 100:655-69）。
【０００５】
アナフィラキシー、アレルギー性鼻炎、喘息、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、および、じんましんなどのアレルギー性疾患は、多くの国々において２０％に至る人口を苦しませており、さらに患者数は増加している（Wuthrich B., Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 90:3-10, 1989）。
【０００６】
例えば、喘息は、何百万もの人々に世界的な規模で影響を与える重篤な肺疾患である。喘息の一般的な特徴は、周期的な気流の制限および／または様々な刺激に対する過敏反応性であり、これにより、気道が過度に狭くなる結果になる。また、他の特徴には、気道の炎症、好酸球増加症、および、気道の繊維化が含まれる。気道の過剰な反応性は、Ｔリンパ球および好酸球を含むいくつかの細胞種を巻き込む複雑な炎症カスケードによるものであると考えられている。アレルギー性喘息では、Ｔｈ２サイトカインはＴｈ１サイトカインよりも優勢である。
【０００７】
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、再発性の慢性炎症性皮膚疾患であり、その特徴は上昇したＩｇＥレベルを伴う掻痒性および湿疹性の皮膚病変である。アトピー性皮膚炎の発症率は、幼児および子供において世界規模で増加していると考えられる。アトピー性皮膚炎患者の皮膚病変の特徴は、Ｔリンパ球、単球／マクロファージ、好酸球、および、肥満細胞を含む炎症細胞の浸潤である。これらの細胞は、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３、エオタキシン、および、ＴＡＲＣなどの様々なサイトカインならびにケモカインの放出を介して、アトピー性皮膚炎の発症と進行とに関係している。多くの細胞種の中でも、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０および、ＩＬ‐１３を産生するＴｈ２細胞は、疾患の進展の開始段階において決定的な役割を果たす（Leung, 1997, Clin Exp Immunol 107(suppl. l):25-30）。ＩＬ‐４およびＩＬ‐１３は、ＩｇＥを転換する主要なアイソタイプ誘導因子として作用する。また、ＩＬ‐５はエオタキシンなどの様々なケモカインを分泌する好酸球の活性化を誘導する。ＩＬ‐１０は、Ｔｈ２細胞によってＴＡＲＣの産生が増加することと同様に、単球／マクロファージによって産生される。ＴＡＲＣは、Ｔｈ２に特異的なケモカインであり、アトピー性皮膚炎の病変に過剰発現していることが知られている。アトピー性皮膚炎の後期には、皮膚病変においてＩＦＮ‐γなどのＴｈ１に由来するサイトカインも発見されるが、アトピー性皮膚炎の進行は、Ｔｈ２に仲介されるサイトカイン／ケモカインおよびＩｇＥの過剰製造、ならびに、ＩＦＮ‐γおよびＩＬ‐１２が製造されないことによって主に引き起こされると考えられている（Jonathan et al, 1999, J Clin Invest 103:1103-11; Christian et al., 1999, J Clin Invest 104:1097-105; Tomomi et al., 2001, J Allergy Clin Immunol 107:353-8; Weilie et al., 2002, J Clin Invest 109:621-8）。しかしながら、ＩｇＥの過剰製造および不釣合いなＴｈ１／Ｔｈ２の反応に関係する正確なメカニズムは、解明されていない。
【０００８】
多くの証拠によってＴｈ１およびＴｈ２の反応形式が、インビボにおいて相互に調節されているということが示唆されているので、Ｔｈ１／Ｔｈ２の変調が、アレルギー性疾患の治療を発展するための合理的な戦術であると考えられている（Kato et al., 1999, J Immunol 162:7470-9）。例えば、ＩＬ‐１２およびＩＦＮ‐γなどの組み換えサイトカインまたはＩＬ‐４およびＩＬ‐５に対するサイトカイン受容体アンタゴニストが、Ｔｈ１反応とＴｈ２反応との間のバランスを制御するための能力について試験された（Hofstra et al., 1998, J Immunol 161:5054-60; Tomkinson et al., 2001, J Immunol 166:5792-800）。しかしながら、これらの薬剤が直接投与されることによって、望ましくない副作用が頻繁に引き起こされる。
【０００９】
ロイコトリエンも炎症、特にアレルギー性炎症と関連する様々な疾患に関係している。ロイコトリエンはアラキドン酸に由来し、プロスタグランジンの前躯体である。ロイコトリエンには２つのファミリーが存在する。第１のグループは、炎症が嚢胞性線維症、炎症性腸疾患、および乾癬などの好中球に依存する病気において主に作用する。第２のグループ（システイン化ロイコトリエン）は、喘息において好酸球および肥満細胞誘導性の気管支収縮に主に関係している。それらは、気管支の平滑筋の、または、他の気道組織の高選択的な受容体に結合する（O’Byrne et al., Annals of Internal Medicine 1997; 127:472-80）。また、ロイコトリエンはアレルギー性鼻炎、慢性じんましん、および、アトピー性皮膚炎または湿疹の病態生理学において重要であることも知られている。ロイコトリエン合成阻害剤およびシステイン化ロイコトリエン受容体アンタゴニストの両方を含むロイコトリエンアンタゴニストは、これらの炎症媒介物の製造および作用を特異的に抑制するために有用である。
【００１０】
血清中のＩｇＥレベルが減少すれば、アレルギー症状が改善するという仮説が、抗ＩｇＥキメラ抗体（ＣＧＰ‐５１９０１）および組み換えヒト化モノクローナル抗体（ｒｈｕＭＡＢ‐Ｅ２５）を用いた臨床試験によって実証された（Fahy et al., Am. J. Respir. Crit. Care. Med., 155:1828-1834, 1997）。ＩｇＥの合成と分泌とを阻害する、ジアシルベンズイミダゾール類似体および細菌性多糖類が、米国特許第６，３６９，０９１号明細書および米国特許出願第２００２００４１８８５号明細書にそれぞれ記載されている。
【００１１】
韓国特許出願第９２‐１１７５２号明細書には、アレルギーおよび炎症に関連する様々な症状の治療に対して有効性を示す、スイカズラから単離された４’‐Ｏ‐メチルオクナフラボンなどのビフラボノイドを含む、抗炎症、抗アレルギーおよび抗リウマチ薬が開示されている。韓国特許第１００７４４号明細書には、イチョウの葉から単離されたいくつかのビフラボノイド化合物を含む、抗炎症、抗アレルギーおよび抗リウマチ薬が開示されている。また、コメナモミを含むいくつかの漢方薬の処方箋には、ＩｇＥを減少させる活性を有することが報告されている（Kim et al., Phytother. Res., 15:572-576, 2001）。さらに、多くの薬用ハーブは、ヒスタミン放出阻害剤または抗炎症化合物の豊富な供給源であることがわかっている。
【００１２】
アレルギー性疾患を治療するために従来から用いられている他の薬物には、抗ヒスタミン剤、ステロイド系または非ステロイド系の抗炎症薬、および、ロイコトリエンアンタゴニストが含まれる。しかしながら、これらの薬剤には、感染に対する感受性の増加、肝臓毒性、薬物誘導性の肺疾患、および骨髄抑制などを含む重篤な副作用を引き起こす可能性がある。したがって、そのような薬物による炎症、特に、アレルギー性炎症の治療に対する臨床用途は、限られている。抗炎症薬および症状緩和剤の使用は、それらの副作用または失敗によって炎症反応の根本的な原因が攻撃されるので、重要な問題である。炎症を治療するための、より害が少なく、且つ、より効果的な薬剤が依然として必要とされている。このように、炎症の根本的な原因に対して、より副作用プロフールが少なく、より毒性が少なく、より特異的な新製品が、依然として必要とされている。
【００１３】
最終的に、Ｔｈ１型Ｔ細胞の活性化、ＩｇＧ２ａの製造、および、関連性Ｔｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＦＮ‐γ、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１２、ＩＬ‐１）の産生を好む免疫反応の誘発は、上述したアレルギー性炎症に関連する免疫反応と異なっている。この種の免疫反応は強力、全身性、抗腫瘍性、および、抗ウィルス性という特性を持っている。そのような特性を有する製品の提供が、依然として技術的に必要とされている。
【００１４】
〔発明の要旨〕
本発明の１実施の形態は、哺乳類における免疫反応を調節する方法に関する。この方法は、哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量のハーディキウィフルーツ調製物を哺乳類に投与する投与工程を含み、上記ハーディキウィフルーツ調製物は、新鮮果実、粉砕果実（粉砕された果実）、煮沸果実（煮沸された果実）、調理果実（調理された果実）、圧搾果実（圧搾された果実）、濃縮果実（濃縮された果実）、乾燥果実（乾燥された果実）、および、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物から選ばれる。本実施の形態では、ハーディキウィフルーツ調製物は、抽出物ではない。上記実施の形態の１態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、この果実を乾燥する乾燥工程を含む方法によって製造される。
【００１５】
本発明のもう１つ別の実施の形態は、哺乳類の免疫反応を調節する方法に関する。この方法は、哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量のハーディキウィフルーツ調製物を哺乳類に投与する投与工程を含み、上記ハーディキウィフルーツ調製物は、葉の抽出物または濃縮物、および、皮の抽出物または濃縮物からなる群より選ばれる。
【００１６】
本発明のさらにもう１つ別の実施の形態は、哺乳類の免疫反応を調節する方法に関する。この方法は、哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量の（ａ）ハーディキウィフルーツ調製物、ならびに、（ｂ）プロバイオティクス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；およびプロアントシアニジンから選ばれる成分を、哺乳類に投与する投与工程を含む。
【００１７】
上記実施の形態では、ハーディキウィフルーツ調製物には、果実の抽出物または濃縮物、葉の抽出物または濃縮物、茎の抽出物または濃縮物、皮の抽出物または濃縮物、根の抽出物または濃縮物、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、乾燥果実、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物、０℃から約８０℃までの温度の果実水の抽出によって製造される調製物、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される調製物、蒸留水におけるハーディキウィフルーツの抽出によって製造される調製物、ならびに、水、クロロホルム、および酢酸エチルにおけるハーディキウィフルーツの連続的な抽出によって製造される調製物が含まれるが、これらに限定されない。
【００１８】
上記実施の形態の１態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、果実を乾燥する乾燥工程を含む方法によって製造される。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、約０℃〜約２５℃の温度の水における果実の抽出によって製造される。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、室温水における果実の抽出によって製造される。さらにもう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される。
【００１９】
本発明のもう１つ別の実施の形態は、哺乳類の免疫反応を調節する方法に関する。この方法は、哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量の（ａ）ハーディキウィフルーツ調製物、ならびに、（ｂ）ステロイド；抗ヒスタミン剤；抗体；抗生物質；シクロスポリン；抗真菌剤；呼吸機能の長期管理薬；鎮痛薬；β‐アゴニスト；ロイコトリエン修飾薬；サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト；ホスホジエステラーゼ阻害剤；クロモグリク酸ナトリウム；ネドクリミル（nedocrimil）；カフェイン；テオフィリン；カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン；およびＴ細胞機能阻害剤から選ばれる成分を、哺乳類に投与する投与工程を含む。
【００２０】
上記実施の形態では、ハーディキウィフルーツ調製物には、果実の抽出物または濃縮物、葉の抽出物または濃縮物、茎の抽出物または濃縮物、皮の抽出物または濃縮物、根の抽出物または濃縮物、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、乾燥果実、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物、０℃〜約８０℃の温度の果実水の抽出によって製造される調製物、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される調製物、蒸留水におけるハーディキウィフルーツの抽出によって製造される調製物、ならびに、水、クロロホルム、および酢酸エチルにおけるハーディキウィフルーツの連続的な抽出によって製造される調製物が含まれるが、これらに限定されない。
【００２１】
上記実施の形態の１態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、果実を乾燥する乾燥工程を含む方法によって製造される。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、約０℃〜約２５℃の温度の水における果実の抽出によって製造される。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、室温水における果実の抽出によって製造される。さらにもう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物は、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される。
【００２２】
上記実施の形態の何れにおいても、上記ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のＴｈ２およびＴｈ１の免疫反応を調節するのに十分な量で提供される。１つの態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、ＩｇＥ、ＩｇＧ２ａ、およびＩｇＧｌからなる群より選ばれる、哺乳類によって製造される抗体のアイソタイプの量を調節するのに十分な量で提供される。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のＴｈ２サイトカインの少なくとも１つの産生および／またはレベルを減少させるのに、あるいは、哺乳類のＴｈ１サイトカインの少なくとも１つのレベルを増加させるのに十分な量提供される。さらにもう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のロイコトリエンの少なくとも１つの産生またはレベルを減少させるのに十分な量で提供される。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、哺乳類のＧＡＴＡ‐３、Ｔ‐ｂｅｔ、および、ＮＦＡＴｃ２からなる群より選ばれる転写因子の発現を減少させるのに十分な量で提供される。もう１つ別の態様では、哺乳類が、Ｔｈ１反応が増強されること、および／またはＴｈ２反応が抑制されることが望ましい病気が進行しているという危険な状態にある。例えば、哺乳類が、アレルギー性疾患または非アレルギー性炎症疾患を進行しているという危険な状態にある。そのようなアレルギー性疾患は、ロイコトリエンによって調節される疾患であってもよい。そのようなアレルギー性疾患には、喘息およびアトピー性皮膚炎が含まれるが、これらに限定されない。もう１つ別の例として、哺乳類が、ウィルス感染または癌を進行しているという危険な状態にある。
【００２３】
上記実施の形態の何れにおいても、ハーディキウィフルーツには、サルナシ、ミヤママタタビ、および、マタタビなどが含まれ、好ましい実施の形態の１つでは、サルナシである。
【００２４】
上記実施の形態の何れにおいても、ハーディキウィフルーツ調製物が組成物に含まれ、当該ハーディキウィフルーツ調製物の量が、当該組成物の総重量に基づいた重量で約０．０１％〜約９５％の間である。
【００２５】
上記実施の形態の何れかの１つの態様おいて、投与工程は、ハーディキウィフルーツ調製物を担体、アジュバント、または希釈剤と一緒に哺乳類に投与する工程を含む。もう１つ別の態様では、投与工程は、ハーディキウィフルーツ調製物を、錠剤、粉末、発泡錠、発泡散剤、カプセル、液体、懸濁液、顆粒、またはシロップとして哺乳類に提供する工程を含む。もう１つ別の態様では、投与工程は、ハーディキウィフルーツ調製物を健康食品として哺乳類に提供する工程を含む。健康食品には、高級ベーカー商品（fine baker ware）、パン、ロールパン、朝食用シリアル、加工チーズ、非加工チーズ、香辛料、乳製品、プリン、ゼラチンゼザート、炭酸飲料、茶、粉末飲料混合物、魚加工品、果実性飲料、野菜性飲料、チューインガム、ハード・コンフェクショナリー（hard confectionery）、冷凍乳製品、食肉加工品、ナッツ性スプレッド、パスタ、家禽製造加工食品、グレイビーおよびソース、ポテトチップ、野菜チップ、クリスプ、チョコレート、クッキー、キャンディー、甘草、アイスクリーム、乾燥食品、カット食品（cut food product）、加工食品、薬味、アルコール飲料、麺類、発酵食品、スープ、スープ混合物、大豆性製品、野菜油性スプレッド、ならびに、野菜性飲料が含まれるが、これらに限定されない。もう１つ別の態様では、投与工程が、ハーディキウィフルーツ調製物を含む化粧用組成物を哺乳類に塗布する工程を含む。化粧用組成物は、特に限定されないが、ローション、クリーム、美容液、化粧液、エマルジョン、パック、石鹸、シャンプー、リンス、クレンザー、体を洗うための溶液、洗浄液、または、トリートメントを含む形態で提供される。もう１つ別の態様では、投与工程が、ハーディキウィフルーツ調製物を食品添加剤として哺乳類に提供する工程を含む。
【００２６】
上記実施の形態の何れかのもう１つ別の態様では、本発明の方法は、脂肪酸、ポリケチド、有機酸、低有機化合物、芳香族アミノ酸、フェニルプロパノイド、テルペノイド、ステロイド、アルカロイド、コリン、ポルフィリン、直鎖ペプチド、環状ペプチド、デプシペプチド、アミノ酸誘導体、ヌクレオシド、ヌクレオチド、炭化水素、タンパク質、細胞、細胞片、ハーブ調製物、薬味、無機物、滅菌剤、調味料、ビタミン、および、電解質から選ばれる薬剤を哺乳類に投与する工程をさらに含む。
【００２７】
上記実施の形態の何れかのもう１つ別の態様では、本発明の方法は、プロバイオティックス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；タウリン；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；ローズマリー；ローズマリー酸（rosemarinic acid）；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；プロアントシアニジン；β‐カロチンから選ばれる薬剤を哺乳類に投与する工程をさらに含む。脂肪酸には、共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸が含まれるが、これらに限定されない。
【００２８】
上記実施の形態の何れかのもう１つ別の態様では、本発明の方法は、異なるマタタビ属の種の調製物を哺乳類に投与する工程をさらに含む。異なるマタタビ属の種には、Ａ．キネンシス（A. chenensis）、Ａ．デリシオサ（A. deliciosa）、サルナシ、マタタビ、および、ミヤママタタビが含まれるが、これらに限定されない。
【００２９】
本発明のさらにもう１つ別の実施の形態は、哺乳類の免疫反応を調節するための組成物に関する。上記組成物は、哺乳類の免疫反応を調節するための、ハーディキウィフルーツ調製物および少なくとも１つの添加活性化合物を含む。１つの態様では、添加活性化合物が、哺乳類におけるアレルギー疾患を治療、または、予防するためのものである。１つの態様では、添加活性化合物は、ステロイド；抗ヒスタミン剤；抗体；抗生物質；シクロスポリン；抗真菌剤；呼吸機能の長期管理薬；鎮痛剤；β‐アゴニスト；ロイコトリエン修飾薬；サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト；ホスホジエステラーゼ阻害剤；クロモグリク酸ナトリウム；ネドクリミル；カフェイン；テオフィリン；カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン；およびＴ細胞機能阻害剤から選ばれる。さらにもう１つ別の態様では、添加活性化合物は、プロバイオティクス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；およびプロアントシアニジンから選ばれる。脂肪酸には、共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸が含まれるが、これらに限定されない。そのような組成物には、薬学的組成物、健康食品、食品添加剤、または、化粧品が含まれるが、これらに限定されない。
【００３０】
上記組成物では、ハーディキウィフルーツには、サルナシ、ミヤママタタビ、および、マタタビが含まれるが、これらに限定されない。１つの態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、果実、葉、茎、皮、根、およびそれらの任意の組み合わせから選ばれるハーディキウィフルーツの一部から調製される抽出物または濃縮物である。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツが、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実からなる群より選ばれる。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツが、乾燥果実である。さらにもう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、果実を乾燥する乾燥工程を含む方法によって製造される。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物である。もう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、室温水における果実の抽出によって製造される。さらにもう１つ別の態様では、ハーディキウィフルーツ調製物が、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される。もう１つ別の態様では、抽出物は、蒸留水におけるハーディキウィフルーツの抽出によって製造される。もう１つ別の態様では、抽出物は、ハーディキウィフルーツの酢酸エチル抽出物である。
【００３１】
本発明のもう１つ別の実施の形態は、免疫機能の異常調節に関連する疾患または病気を治療するための組成物の調製における、（ｉ）ハーディキウィフルーツまたはその調製物、ならびに、（ｉｉ）薬剤の使用であって、当該薬剤は、ステロイド；抗ヒスタミン剤；抗体；抗生物質；シクロスポリン；抗真菌剤；呼吸機能の長期管理薬；鎮痛剤；β‐アゴニスト；ロイコトリエン修飾薬；サイトカインアンタゴニスト、サイトカイン受容体アンタゴニスト；ホスホジエステラーゼ阻害剤；クロモグリク酸ナトリウム；ネドクリミル；カフェイン；テオフィリン；カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン；およびＴ細胞機能阻害剤からなる群より選ばれる、使用に関する。
【００３２】
本発明のもう１つ別の実施の形態は、（ｉ）ハーディキウィフルーツまたはその調製物、ならびに、（ｉｉ）薬剤の使用であって、当該薬剤は、プロバイオティクス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；アラニン；脂肪酸；脂肪酸エステル；モノグリセリド；ジグリセリド；トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；およびプロアントシアニジンから選ばれる、使用に関する。脂肪酸には、共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸が含まれるが、これらに限定されない。
【００３３】
上記使用の何れかの１つの態様では、上記組成物が、ロイコトリエンの産生または活性化に関連する疾患または病気を治療するために用いられる。上記使用の何れかの１つの態様では、疾患または病気には、アトピー性皮膚炎、喘息、食物アレルギー、アレルギー性鼻炎、および、慢性じんましんが含まれるが、これらに限定されない。上記使用の何れかの１つの態様では、ハーディキウィフルーツ調製物には、果実の抽出物または濃縮物、葉の抽出物または濃縮物、茎の抽出物または濃縮物、皮の抽出物または濃縮物、根の抽出物または濃縮物、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、乾燥果実、ハーディキウィフルーツ汁の濃縮物、室温水における果実の抽出によって製造される調製物、酢酸エチルを用いるハーディキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される調製物、蒸留水におけるハーディキウィフルーツの抽出によって製造される調製物、ならびに、水、クロロホルム、および酢酸エチルにおけるハーディキウィフルーツの連続的な抽出によって製造される調製物が含まれるが、これらに限定されない。
【００３４】
本発明のさらにもう１つ別の実施の形態は、哺乳類の免疫反応を調節する方法に関する。この方法は、哺乳類の免疫反応を調節するのに十分な量の一般的なキウィフルーツ調製物を哺乳類に投与する投与工程を含み、上記一般的なキウィフルーツ調製物は、果実の抽出物または濃縮物、葉の抽出物または濃縮物、茎の抽出物または濃縮物、皮の抽出物または濃縮物、根の抽出物または濃縮物、新鮮果実、粉砕果実、煮沸果実、調理果実、圧搾果実、濃縮果実、乾燥果実、一般的なキウィフルーツ汁の濃縮物、室温水における果実の抽出によって製造される調製物、酢酸エチルを用いる一般的なキウィフルーツの水溶性濃縮物の直接抽出によって製造される調製物、蒸留水における一般的なキウィフルーツの抽出によって製造される調製物、ならびに、水、クロロホルム、および酢酸エチルにおける一般的なキウィフルーツの連続的な抽出によって製造される調製物から選ばれる。
【００３５】
〔図面の簡単な説明〕
図１は、Ｕ２６６Ｂ１細胞のＩｇＥ産生に対する、サルナシに由来する様々な調製物の抑制活性を示す図である。結果は、ＬＰＳのみを用いて処置されたＵ２６６Ｂ１細胞から産生されたＩｇＥレベルの百分率として、３回の独立した実験から、算出された。
【００３６】
図２は、ＯＶＡによって刺激された脾細胞（ＯＶＡ刺激脾細胞）のＩＬ‐４産生に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの用量依存効果を示す図である。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの比活性は、ＩＣ５０値から決定された。
【００３７】
図３Ａ‐３Ｃは、ＩＬ‐４産生Ｔ細胞またはＩＦＮ‐γ産生Ｔ細胞の数（図３Ａ）、ＩｇＥ産生Ｂ細胞の数（図３Ｂ）、および、Ｂ細胞内でのＩｇＥ生合成（図３Ｃ）に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を説明する図である。データは、３回の独立した実験から得られた各母集団の平均百分率である。「＊」は、蒸留水処置マウス（蒸留水を用いて処置されたマウス）と対比してＰ＜０．０５であることを示す。
【００３８】
図４Ａ‐４Ｂは、ウェスタンブロットによる（図４Ａ）および定量的リアルタイムＰＣＲ分析による（図４Ｂ）ＧＡＴＡ３，Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２の発現に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。結果は、３回の独立した実験から、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表されている。「＊」および「＊＊」は、蒸留水処置マウスと対比してそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１であることを示す。β‐アクチンおよびＧＡＰＤＨをローディングコントロールとして用いた。
【００３９】
図５Ａ‐５Ｂは、皮膚炎指数（図５Ａ）および引っかき傷の発生（図５Ｂ）を用いる、ＮＣマウスの皮膚炎の進行に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。値は、５‐６匹の動物の平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表されている。「＊」および「＊＊」は、蒸留水処置マウスと対比してそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１であることを示す。
【００４０】
図６Ａ‐６Ｃは、ＮＣマウスの血しょうの、ＩｇＥ（図６Ａ）、ＩｇＧ１（図６Ｂ）および、ＩｇＧ２ａ（図６Ｃ）のレベルに対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。値は、５匹の動物の平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表されている。「＊」および「＊＊」は、蒸留水処置マウスと対比してそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１であることを示す。
【００４１】
図７Ａ‐７Ｂは、抹消血での、総白血球数および好酸球数（図７Ａ）、ならびに、エオタキシンおよびＴＡＲＣの産生（図７Ｂ）に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。値は、５匹の動物の平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表されている。「＊」および「＊＊」は、蒸留水処置マウスと対比してそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１であることを示す。
【００４２】
図８Ａ‐８Ｂは、背中の皮膚（図８Ａ）および顔の皮膚（図８Ｂ）に由来するＮＣマウスの皮膚病変に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。「＊」および「＊＊」は、蒸留水処置マウスと対比してそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１であることを示す。
【００４３】
図９Ａ‐９Ｂは、ＥＬＩＳＡ（図９Ａ）およびウェスタンブロット（図９Ｂ）によって測定された、皮膚病変のＩＬ‐４、ＩＬ‐５、エオタキシン、ＴＡＲＣ、ＧＡＴＡ３およびｐＳＴＡＴ６の発現に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。値は５匹の動物の平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表されている。「＊」および「＊＊」は、蒸留水処置マウスと対比してそれぞれＰ＜０．０５およびＰ＜０．０１であることを示す。
【００４４】
図１０は、ＰＧ１０２Ｔを大量に製造するために使用される製法の概略図である。この冷凍キウィ濃縮物または他の乾燥キウィ濃縮物もＦＤ００１と称される（ＦＧは食品級の担体のことを言う）。
【００４５】
図１１は、インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウス（ＯＶＡ刺激マウス）の脾細胞から産生されたサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の３つの用量（０．２５、１．０、および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。各点は、１０匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。
【００４６】
図１２は、インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウスの脾細胞から産生されたサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）抽出物の３つの用量（０．２５、１．０、および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。各点は、１０匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。
【００４７】
図１３は、インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウスの脾細胞から産生されたサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の相対次数に対する、サルナシ濃縮果汁の３つの用量（０．２５、１．０、および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。各点は、１０匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。
【００４８】
図１４Ａおよび１４Ｂは、インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γの相対次数に対する、公知の免疫抑制化合物の３つの用量の活性を示す図である。０．００８３、０．０８３、および４．１５μＭのシクロスポリンならびに０．０１、０．１、および１μＭのデキサメタゾンが試験された（図１４Ａ）。なお、各点は、１０匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。また、１．０、１０、および２５μＭのケルセチンが試験された（図１４Ｂ）。なお、なお、各点は、２匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。
【００４９】
図１５Ａおよび１５Ｂは、インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３（図１５Ａ）およびＩＦＮ‐γ（図１５Ｂ）の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）、ＦＤ００１の酢酸エチル抽出物（ＥｔＯＡｃ）、およびこの製法に由来する水性残留物の３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。各点は、８匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。
【００５０】
図１６Ａおよび１６Ｂは、インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３（図１６Ａ）およびＩＦＮ‐γ（図１６Ｂ）の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）および粉末状のＦＤ００１（カプセルにおいて使用されるために作製された）３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。各点は、８匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。
【００５１】
図１７Ａおよび１７Ｂは、インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３（図１７Ａ）およびＩＦＮ‐γ（図１７Ｂ）の相対次数に対する、サルナシの代替的な調製物の効果を示す図である。ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）、濃縮果汁、新鮮果実を水において煮沸することによって調製された抽出物、および果実の室温水の抽出物のそれぞれについて、３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍｌ）が試験された。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。各点は、８匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。
【００５２】
図１８Ａおよび１８Ｂは、インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３（図１８Ａ）およびＩＦＮ‐γ（図１８Ｂ）の相対次数に対する、サルナシの代替的な植物部分の調製物の効果を示す図である。（ｉ）濃縮果汁、（ｉｉ）皮、根、または茎を水において煮沸することによって調製された個々の抽出物、および（ｉｉｉ）ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）のそれぞれについて、３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍｌ）が試験された。サイトカインのレベルはＥＬＩＳＡによって測定された。各点は、８匹の個別のマウスの脾細胞から得られたデータの平均値を表す。
【００５３】
図１９Ａ‐１９Ｃは、医師包括的評価（Physician’s Global Assessment（ＰＧＡ））によって測定されたような（図１９Ｃに採点基準を示す）、被検体がアトピー性皮膚炎（ＡＤ）の治療において前向きに反応するヒトの臨床試験の１日〜１４日の間に起こる分布変化を強調して示す図である。被検体は、偽薬または６００ｍｇのＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）を毎日投与された（それぞれ図１９Ａおよび１９Ｂ）。また、局所的なステロイド治療が併用して行われた。
【００５４】
〔発明の詳細な説明〕
本発明の発明者らは、ハーディキウィフルーツおよび特にそれに由来する特定の抽出物／濃縮物（本明細書では一般的に「ＰＧ１０２」と記載する）が、血清中のＴｈ１サイトカインおよびＩｇＧ２ａのレベルを増加させ、血清中のＴｈ２サイトカインおよびＩｇＥのレベルを減少させて、肥満細胞からのヒスタミンの放出を抑制し、アレルギー性炎症および気道過敏性のアレルゲン感作ネズミならびにラットの手足の浮腫分析を含む、アレルギー性炎症反応を抑制することを以前に発見した（米国特許出願第２００４／００３７９０９号明細書、および、上記参照）。ＰＧ１０２は経口で有効である。
【００５５】
本発明の発明者らは、サルナシから調製された２つの特定の抽出物（「ＰＧ１０２Ｔ」および「ＰＧ１０２Ｅ」と称され、詳細は下記の実施例１および２に記載される。）が、ＩｇＥ産生について抑制活性を示すこと、および、選択的Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカインを調節する能力を示すという証拠を、本明細書においてさらに提供する。この調節活性は、細胞転写因子であるＧＡＴＡ３、Ｔ‐ｂｅｔ、およびＮＦＡＴｃ２を調節することによってほとんど達成されると考えられる。本発明者らによって得られたデータによれば、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、Ｔｈ１およびＴｈ２経路における天然の変調器となる可能性、および、究極的には抗アレルギー剤となる可能性が非常に高いことが示される。これらの抽出物の有用性は、本明細書において、呼吸器系の病気と関連するアレルギー性炎症のモデル、および、アトピー性皮膚炎のモデルにおいてインビボで実証される。
【００５６】
また、本明細書において本発明の発明者らは、果実全体、茎、根、皮、新規抽出物、濃縮物、ジュース、乾燥調製物、および非抽出性調製物の調製物を含むハーディキウィフルーツの他の調製物も記載し、これらのハーディキウィフルーツ調製物がＴｈ１およびＴｈ２サイトカインを調節するそれらの能力と同様の特性を有することを実証する。それ故、本発明の発明者らは、これらのハーディキウィフルーツ調製物が同様の抗アレルギー特性を有することを信じる。
【００５７】
さらに、本発明の発明者らは、本発明のハーディキウィフルーツの調節物が、インビボにおいてロイコトリエンのレベルおよびロイコトリエンのブラント産生（blunt production）を減少させることが実証された。このことは、本発明の組成物が、ロイコトリエンに仲介される疾患などを治療するために用いられることを示している。なお、そのような疾患には、アトピー性皮膚炎、喘息、食物アレルギー、アレルギー性鼻炎、および慢性じんましんがふくまれるが、これらに限定されない。
【００５８】
ハーディキウィフルーツおよびその調製物が、Ｔｈ１反応のエンハンサーとして同定されたことによって、そのような反応から恩恵を受けると考えられる疾患および病気（ウィルス感染および癌などが含まれる）を治療するために、これらの薬剤に特に注目が集まっている。
【００５９】
ハーディキウィフルーツの総水溶性抽出物および酢酸エチル抽出物を製造するために用いられる抽出製法は、米国特許出願第２００４／００３７９０９号明細書ならびに本明細書の実施例１および２に記載されている。さらに、本発明の実施の形態では、本発明の発明者らは、抽出、濃縮、または加工に代わる方法によって製造されるハーディキウィフルーツ調製物から、免疫調節活性、特に抗原（例えばアレルゲン）に反応したサイトカインの産生を抑制する能力を有する組成物が製造されることも発見した。そのような代わりの調製物には、濃縮果汁、新鮮果実の濃縮物、および煮沸された新鮮果実の調製物が含まれるが、これらに限定されない。
【００６０】
また、本明細書において本発明の発明者らは、抽出物またはハーディキウィフルーツの果実自身以外の植物の一部の他の調製物に、果実の水溶性抽出物または酢酸エチル抽出物と比較して同等かそれ以上の免疫調節活性があることも実証する。例えば、本発明の発明者らは、ハーディキウィフルーツ植物の幹、根および皮の抽出物に、アレルゲン感作マウスに由来する抗原によって刺激された脾細胞からサイトカインが産生されることを抑制する効能があることを実証した。
【００６１】
また、本発明の発明者らによって、本明細書に記載されたようなハーディキウィフルーツ調製物が、ステロイドに基づく治療法などを含む様々なアトピー性疾患に対する別の治療法の効果な補助物として機能するという驚きの発見がなされた。例えば、本発明の発明者らによって、本明細書に記載されるようなサルナシの粉末状の水溶性抽出物を、中程度のアトピー性皮膚炎の成人ヒト患者に投与することによって、臨床的徴候の医師包括的評価（physician’s global rating）が大幅に減少するということを発見した。また、患者自身によって評価される特定の臨床的症状（赤み）の減少が達せられた。ステロイドを使用するが、ハーディキウィフルーツ抽出物を受け取らない患者と比較したときに、重症度が減少する傾向が、局所ステロイドを併用して使用する患者における疾患の他の臨床的症状に見られた。小規模の試験的研究において、ステロイドの使用が患者によって中止されたときに、ハーディキウィフルーツ抽出物の効果は、もはや顕著ではなくなった。それ故、１実施の形態において、本発明は、免疫の異常調節に関連するアトピー性疾患または他の疾患を治療するための他の治療薬と併用する、または他の治療薬の補助剤としての、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物の使用に関する。本発明の発明者らは、本発明の組成物が、特に、アトピー性疾患を患う患者において他の治療法および栄養療法の有効性を増強するために用いられることが可能であると信じている。
【００６２】
さらに本発明のもう１つ別の実施の形態では、本発明の発明者らは、驚くことに、ハーディキウィフルーツの乾燥加工が、以前は好ましくはなかったが、ハーディキウィフルーツの生物活性を増強するための重要な要素であることを本明細書において報告する。さらに、本発明の発明者らは、室温水を単独で用いて抽出された乾燥ハーディキウィフルーツが、ハーディキウィフルーツの熱水抽出物、または、有機溶媒抽出物に起因すると以前では考えられている生物活性と同等の生物活性を表すことを本明細書において示す。冷水において抽出された乾燥ハーディキウィフルーツも含まれる。したがって、抽出は０℃〜８０℃の任意の温度に広がる。本発明の発明者らは、抽出されていない乾燥ハーディキウィフルーツ（例えば、ハーディキウィフルーツの乾燥スライス）は、ハーディキウィフルーツの抽出物に起因すると以前では考えられる生物活性を有していることも本明細書において説明する。したがって、本発明は、哺乳類の免疫反応を調節するための薬剤として、または、組成物を調製するための、予め乾燥されたハーディキウィフルーツから製造される抽出物を含む、乾燥ハーディキウィフルーツの任意の形態に関する。本薬剤または組成物のより具体的な使用を以下に記載する。
【００６３】
もう１つ別の実施の形態では、本発明は、さらに、任意のマタタビ科のファミリーのメンバー、および、特に、免疫調節活性を有するキウィフルーツの組成物を提供するようなＡ．キネンシスまたはＡ．デリシオサとして知られる一般的なキウィなどを含む、マタタビ属の任意のメンバーの使用に関する。１実施の形態では、理論に縛られることなく、本発明の発明者らは、マタタビ属の他のメンバーの乾燥加工によって、本明細書に記載のハーディキウィフルーツに認められた生物活性のいくつかを少なくとも有する乾燥マタタビ属の組成物が提供されると信じている。もう１つ別の実施の形態では、本発明の発明者らは、一般的なキウィフルーツ（例えば、Ａ．キネンシスまたはＡ．デリシオサ）の他の調製物が、本明細書に記載のハーディキウィフルーツに認められた生物特性のいくつかを少なくとも有していることを信じている。なお、上記他の調製物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根の調製物など、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物または抽出物が含まれ、当該それらの任意の調製物または抽出物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。
【００６４】
マタタビ科に属するサルナシ、マタタビ、および、ミヤママタタビは、シベリア、中国の北部地域、北朝鮮および韓国に天然に分布する。マタタビ科に属する３０を超える種が報告されている。これらのなかでも、Ａ．キネンシスまたはＡ．デリシオサという果実は、「キウィ」と名づけられ、人気の食用果実である。同じ属であるサルナシおよび他の果実（マタタビおよびミヤママタタビ）は、肝臓疾患、胃腸疾患、および、尿生殖器結石症を毒性なく治療するための、「ミフド」と名づけられた漢方薬の材料として用いられている（ソウル国立大学天然物科学、トラディ‐メディ・データベース、ドンバン・メディア有限責任会社（Seoul National University Natural Products Science, Tradi-Medi Data Base, dongbang media Co. Ltd.） 1999）。しかしながら、米国特許出願第２００４／００３７９０９号明細書に記載の発明よりも以前には、マタタビ属の果実を用いるアレルギー性疾患および非アレルギー性炎症疾患の治療および予防に関する報告または示唆はなかった。さらに、本発明よりも以前には、（ｉ）米国特許出願第２００４／００３７９０９号明細書に記載の抽出物以外のハーディキウィフルーツ調製物の有効性、（ｉｉ）、果実（液果）以外のハーディキウィフルーツの部分から調製された抽出物の有効性、（ｉｉｉ）乾燥などの調製製法における様々な工程、または、哺乳類の免疫システムに関連するアトピー性疾患もしくは他の病気の確立された治療（例えば、ステロイド療法）の有効性に対するハーディキウィフルーツ組成物の効果の重要性に関する報告はなかった。
【００６５】
本発明によれば、「ハーディキウィフルーツ」の参照は、サルナシ、マタタビ、およびミヤママタタビ、または、それらに関係するマタタビ属のもう１つ別の種の何れかをいう。上記別の種は、本明細書に記載のようなサルナシ、マタタビ、およびミヤママタタビの生物活性特性（抗アレルギー特性、および、本明細書において実証されている免疫反応／サイトカイン／ロイコトリエン調節特性（実施例を参照のこと）に関する）を有している。
【００６６】
本明細書に記載の任意の抽出物を含む、本発明の任意の組成物または調製物の調製では、果実（「液果」または「キウィベリー」とも称する。）、ならびに、その葉、茎、皮、および根などを含む、ハーディキウィフルーツまたはマタタビ属の他の種の任意の１以上の部分が用いられてもよい。
【００６７】
本明細書における、抽出物の一般的な参照は、物質（ハーディキウィフルーツ）の濃縮調製物のことであって、適切な溶媒を用いてこの物質から活性なまたは望ましい構成要素を取り出し、それから、当該溶媒のいくらか、全て、もしくは、略全てを蒸発させ、残った塊または粉末を規定の規格に調整することによって典型的に得られる濃縮調製物のことをいう。用語「濃縮物」は、物質の基本要素、すなわち溶媒の大部分を除去された物質の形態のことをいう。したがって、いくつかの実施の形態では、本明細書に開示されているような用語「抽出物」は、用語「濃縮物」と同義に用いられることが明白である。１実施の形態では、本明細書における粗抽出物の参照は、ハーディキウィフルーツの抽出物のことであって、水、低級アルコール（メタノール、エタノールなど）、または、それらの混合物、好ましくは蒸留水もしくは５０％‐９０％エタノール、および、より好ましくは７０％エタノールを用いて、ハーディキウィフルーツ調製物を抽出することによって得られる抽出物のことをいう。その可溶性抽出物に由来する非極性溶媒可溶性抽出物は、ヘキサン、酢酸エチル、またはジクロロメタン溶媒などの非極性溶媒を用いて、当該可溶性抽出物をさらに抽出することによって得ることができる。粗抽出物の製造および評価の具体的な手法は、上述した米国特許出願第２００４／００３７９０９号明細書に記載されており、そのような手法は、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明のハーディキウィフルーツ組成物の好ましい生物活性を追跡、評価または確認するための追加の生物学検定は、本明細書の実施例において述べられており、インビボおよびインビトロの両方の検定が含まれている。
【００６８】
本発明よれば、「ＰＧ１０２Ｔ」の参照は、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ（例えばサルナシ）に由来する総水溶性抽出物（本明細書では濃縮物ともいわれる）のことであって、基本的に上記米国特許出願第２００４／００３７９０９号明細書（例えば、その明細書の実施例１を参照）、もしくは、本明細書の実施例１に記載されているようにして調製される総水溶性抽出物のことをいう。好ましい実施の形態では、総水溶性抽出物はサルナシから調製される。しかし、同等の総水溶性抽出物がマタタビおよびミヤマタタビなどを含む他のハーディキウィフルーツから調製されることは当業者には明らかである。総水溶性抽出物が、実施例３に記載のような、ＰＧ１０２Ｔの調製に関する実質的に同じ基本的工程を用いる大規模な製法によって製造されるとき、生じた調製物のことを、本明細書ではＦＤ００１という。本明細書における「ＰＧ１０２Ｅ」の参照は、従来公知の抽出方法を使用した、クロロホルム、酢酸エチル、ｎ‐ブタノールを用いる上記に記載のＰＧ１０２Ｔ抽出物の連続的溶媒分配から得られる、酢酸エチル画分のことをいう。ＰＧ１０２Ｔ抽出物である抽出物および、ＰＧ１０２Ｅである抽出物を製造するための具体的な方法は、実施例１に記載されている。本発明のもう１つ別の実施の形態では、異なる酢酸エチル抽出物が、酢酸エチルを用いてＦＤ００１（またはＰＧ１０２Ｔ）を直接抽出する（すなわち、酢酸エチル画分よりも前にクロロホルム抽出はない）ことによって製造される。さらに、好ましい実施の形態では、酢酸エチル抽出物はサルナシから調子されるが、同等の抽出物が、マタタビおよびヤママタタビなどを含む他のハーディキウィフルーツから調製されることは、当業者には明白である。
【００６９】
本発明のいくつかの実施の形態では、特に、抽出物、濃縮物もしくは他の調製物の製法または調製における工程のように、果実が乾燥されたとき、本発明の抽出物、濃縮物、もしくは他の調製物は、マタタビ属の任意の種から製造される。しががって、本発明の目的は、薬学的組成物、化粧用組成物、または、健康食品製造物としてもしくは健康食品製造物と一緒に役立つ組成物、健康食品もしくは健康飲料、または食品添加剤（ヒトおよび動物（家庭用ペットを含む）を含む）を含む組成物であって、ハーディキウィフルーツもしくはマタタビ属の他の種の上記抽出物を必要に応じて含有する組成物を提供することである。そのような組成物は、患者（すなわち哺乳類）のＴｈ１およびＴｈ２の免疫反応を選択的に調節することを含む、本発明の任意の方法における使用を意図されている。そのような方法としては、例えば、（ｉ）アレルギー性および非アレルギー性炎症疾患を予防または治療するための、あるいは、（ｉｉ）そのような組成物の投与によって、抗ウィルス性のもしくは抗癌性の薬学的組成物または栄養補助組成物を提供するための方法が挙げられる。本明細書に記載の投薬および投与の計画と同様に、他の添加剤および組成物の成分も、本発明のこの目的に適用される。
【００７０】
具体的に上記に記載の抽出物／濃縮物を含む本明細書に記載の抽出物に加えて、本明細書に記載の任意の組成物の調製において、本発明には、ハーディキウィフルーツの果実全体の使用、あるいは、新鮮果実、粉砕果実（乾燥または新鮮）、煮沸果実（乾燥または新鮮）、調理果実、乾燥果実、圧搾果実、冷凍果実、および、濃縮果実などを含む加工されたが抽出されていない果実の調製物の使用が含まれる。したがって、本発明の目的は、薬学的組成物、化粧用組成物、または、健康食品製造物としてもしくは健康食品製造物と一緒に役立つ組成物、健康食品もしくは健康飲料、または食品添加剤を含む組成物であって、そのようなハーディキウィフルーツの果実全体、あるいは、ある様式で加工され（乾燥、煮沸など）、必ずしも抽出されてはいない果実調製物を含有する組成物を提供することである。それ故、１実施の形態では、本発明は未抽出のハーディキウィフルーツ（および一般的なキウィフルーツ）調製物に関する。本明細書に記載のそのような組成物の何れも、患者（すなわち哺乳類）のＴｈ１およびＴｈ２の免疫反応を選択的に調節することを含む、本発明の任意の方法における使用を意図されている。そのような方法としては、例えば、（ｉ）アレルギー性および非アレルギー性炎症疾患を予防または治療するための、あるいは、（ｉｉ）そのような組成物の投与によって、抗ウィルス性のもしくは抗癌性の薬学的組成物または栄養補助組成物を提供するための方法が挙げられる。本明細書に記載の投薬および投与の計画と同様に、他の添加剤および組成物の成分も、本発明のこの目的に適用される。
【００７１】
また、本明細書に記載の抽出物に加えて、本明細書に記載の任意の組成物の調製において、本発明には、ハーディキウィフルーツの任意の部分から、任意の適切な製法によって製造される、ハーディキウィフルーツ汁の使用が含まれる。ハーディキウィフルーツ汁は、果実（すなわち、希釈または濃縮されていない）から直接製造されるようにして使用され、この汁は希釈されることもできるし、濃縮果汁を形成するために濃縮されることもできる。例えば、実施例３に記載のように、新鮮キウィフルーツは従来の果汁搾り器にかけられる。果汁搾り器は、種、果肉および汁の混合物が得られるように、果実から皮を除去してもよい。それから、この混合物は固体から汁を取り出すために、例えば遠心分離または圧搾によって処置される。この汁は必要に応じて、例えば蒸発、蒸留、限外ろ過などによって濃縮され、濃縮果汁（すなわち果汁濃縮物）が提供される。そのような組成物は、本発明の任意の方法、特に（ｉ）アレルギー性および非アレルギー性炎症疾患を予防または治療するための、あるいは、（ｉｉ）そのような組成物の投与によって、抗ウィルス性のもしくは抗癌性の薬学的組成物または栄養補助組成物を提供するための方法における使用を意図されている。本明細書に記載の投薬および投与の計画と同様に、他の添加剤および組成物の成分も、本発明のこの目的に適用される。
【００７２】
また、米国特許出願第２００４／００３７９０９号明細書に記載の抽出物の代替物としての、本明細書に記載の任意の組成物の調製において、本発明には、（ｉ）乾燥果実を含む果実の室温水抽出物、（ｉｉ）室温よりも低い温度の水において実施されたハーディキウィフルーツの水抽出物、（ｉｉｉ）葉、茎もしくは皮の水抽出物または根他の抽出物、あるいは、（ｉｖ）抽出よりも前に乾燥されていない（例えば新鮮果実が抽出される）、果実、葉、茎もしくは皮の何れかの水抽出物、濃縮物、または他の抽出物などを含む、ハーディキウィフルーツの他の加工製品の使用が含まれる。本発明の発明者らは、本明細書において、ハーディキウィフルーツが室温およびそれよりも低い温度（約０℃から約２５℃）を含む、０℃から８０℃までの範囲の任意の温度の水において抽出されることを提案している。
【００７３】
本発明によれば、「乾燥ハーディキウィフルーツ」または「乾燥キウィフルーツ」の一般的な参照には、任意の製法によって乾燥されたハーディキウィフルーツまたは他のキウィフルーツ（一般的なキウィ）の任意の形態が含まれる。用語「キウィフルーツ」は、マタタビ属の任意のメンバーのことを一般的にいうために本明細書において用いられ、上記において論じたようなハーディキウィフルーツのメンバー、および、上記において論じたような一般的なキウィのメンバーを含む。したがって、乾燥キウィフルーツには、（ｉ）キウィフルーツの任意の乾燥部分（果実、葉、茎、根など）、ならびに、（ｉｉ）キウィフルーツの任意の抽出物と同様に、抽出される材料が抽出よりも前に何よりも乾燥される、乾燥果実全体、乾燥スライス果実、乾燥粉砕果実、乾燥角切りの果実、および、乾燥濃縮果実が含まれている。抽出物をそれ自体さらに乾燥することまたは加工することは必要ではないが、そのことは一般的に、組成物の製剤および保存に関する抽出物の最も有益な形式である。さらに使用するために抽出物をさらに濃縮する好ましい方法には、蒸発、蒸留、限外ろ過、逆浸透、沈殿、固定相への吸着およびそこからの溶出、ならびに、代替溶媒への抽出などが含まれる。さらに使用するために抽出物または濃縮物を乾燥する好ましい方法には、（ｉ）トレイ乾燥、（ｉｉ）噴霧乾燥、（ｉｉｉ）凍結乾燥、（ｉｖ）マルトデキストリン、微結晶性セルロースおよびでんぷんなどの乾燥補助剤または賦形剤を用いる方法、もしくは、それらを用いない方法などが含まれる。１実施の形態では、本明細書における使用のための好ましい乾燥キウィフルーツは、それ以降抽出されない乾燥キウィフルーツ調製物である。
【００７４】
したがって、本明細書に記載される組成物および方法は、任意のハーディキウィフルーツの使用に適用される。そのような任意のハーディキウィフルーツの使用には、（ｉ）ハーディキウィフルーツにおける果実の任意の部分、茎、葉、皮もしくは根、または、それらの任意の抽出物、濃縮物もしくは画分の使用、あるいは、果実全体、加工されているが抽出されていない果実、もしくは、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物もしくは画分の任意の形態の使用、ならびに、（ｉｉ）ハーディキウィフルーツ植物の部分（果実、茎、葉、皮および／または根を含む植物の部分）、および、乾燥工程を含む製法を用いて調製される植物の部分の調製物が、含まれる。
【００７５】
したがって、本発明の目的は、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、を含む、から基本的になる、または、からなる、薬学的組成物、栄養補助組成物、食品添加剤、健康食品（飲料または食品の原料を含む）、もしくは化粧用組成物を含む組成物を提供することである。すなわち、本明細書に記載のハーディキウィフルーツには、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。１実施の形態において、本発明は、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、全水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物を提供する。これらの全ての場合において、ハーディキウィフルーツ調製物は、患者（すなわち哺乳類）のＴｈ１およびＴｈ２の免疫反応を選択的に調節するために用いられる活性成分である。特に、本発明の組成物には、以下の少なくとも１つの活性から選ばれる生物活性がある；
（ａ）患者において、ＩｇＥを産生するＢ細胞の数を減少させる活性；
（ｂ）患者において、（例えば、血清または血しょう中に）産生されるＩｇＥ量を減少させる活性；
（ｃ）少なくとも１つのＴｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０）の産生および／またはレベルを減少させる活性；
（ｄ）少なくとも１つのＴｈ１サイトカイン（例えば、ＩＬ‐１２、ＩＦＮ‐γ）の産生および／またはレベルを増加させる活性；
（ｅ）ＧＡＴＡ‐３、転写因子の発現レベルを減少させる活性；
（ｆ）Ｔ‐ｂｅｔ、転写因子の発現レベルを増加させる活性；
（ｇ）ＮＦＡＴｃ２、転写因子の発現レベルを増加させる活性；
（ｈ）患者において、ＩｇＧ２ａを産生するＢ細胞の数を増加させる活性；
（ｉ）患者において、産生されるＩｇＧ２ａ量を増加させる活性；
（ｊ）Ｔｈ１Ｔリンパ球（例えばＣＤ４＋、ＩＦＮ‐γ＋）の産生または活性を、特に炎症部位において、増強させる活性；
（ｋ）Ｔｈ２Ｔリンパ球（例えばＣＤ４＋、ＩＬ‐４＋）の産生または活性を、特に炎症部位において、減少させる活性；
（ｌ）患者において、ＩｇＧ１を産生するＢ細胞の数を減少させる活性；
（ｍ）患者において、産生されるＩｇＧ１量を減少させる活性；および／または、
（ｎ）患者において、少なくとも１つのロイコトリエンのレベルまたは産生を減少させる活性。
【００７６】
上記組成物は、本明細書において記載された様式で免疫反応を調節することによって、患者にとって有益になるか、もしくは、有利になると予測される任意の疾患または病気を予防するために、および／あるいは、治療するために、用いられる。
【００７７】
本明細書において用いられる、成句「疾患から保護される」は、（ｉ）疾患の症状を軽減すること、（ｉｉ）疾患の発生を減少すること、および／または、（ｉｉｉ）疾患の重症度を軽減することを言う。患者を保護することは、本発明の組成物を患者に投与したときに、疾患の発生を予防する、および／または、疾患の症状、徴候、もしくは原因の少なくとも１つを、好ましくは１以上を、和らげるために治すような本発明の組成物の能力のことを言う。そのような疾患からの患者の保護には、疾患の発生を予防すること（予防的治療）、および、疾患の症状を軽減するために疾患を有する患者を治療すること（治療的処置）の両方が含まれる。特に、有利な効果が得られるような既定の活性を調節することによって、疾患からの患者の保護、または、もう１つ別の治療法の強化を行うことができる。当業者および／または患者の治療に熟練した臨床医によって、有利な効果を簡便に評価することができる。用語「疾患」は、哺乳類の健康が正常なものから任意に逸脱していることを言い、逸脱（感染、遺伝子変異、遺伝子欠陥など）が発生しているが症状は未だ表れていない病気、および、疾患の症状が存在する状態を含む。
【００７８】
一般的に、ハーディキウィフルーツの組成物、ハーディキウィフルーツ抽出物、またはそれらの他の任意の調製物を含む、本明細書に記載の薬剤における生物活性または生物作用は、インビボもしくはインビトロにおいて測定されるまたは観察されるような当該薬剤の天然に発生する形態に起因すると考えられる、薬剤によって現されるあるいは実行される任意の機能（１または複数）のことを言う。なお、インビボは薬剤が用いられる天然の生理学的環境のことであり、インビトロは実験室条件下のことである。例えば、薬剤のプロセシングまたは調製、あるいは薬剤の精製を変えることによって薬剤を改良した場合、天然に発生する薬剤と同じ生物活性を有する薬剤、または、天然に発生する薬剤と比較してより高い生物活性もしくはより低い生物活性を有する薬剤を作製することができる。
【００７９】
それ故、本発明の目的は、哺乳類の免疫反応を調節するための、より具体的には、哺乳類のＴｈ２および／またはＴｈ１の免疫反応を調節するための、さらに具体的には、哺乳類のＴｈ１反応を増強し、哺乳類のＴｈ２反応を抑制するための、活性成分として、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物（本発明の活性成分または本発明のハーディキウィフルーツ調製物としても共同でいうことができる）を含有する、薬学的組成物もしくは栄養補助（栄養学的）組成物を含む組成物を提供することである。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツには、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。そのような活性成分は、アレルギー性疾患、非アレルギー性疾患、ウィルス感染、および癌などを含む様々な病気および疾患を治療する、ならびに／または予防するために有用である。組成物は、上記病気または疾患の何れかを予防する、治療する、および／もしくは、改善するための別の治療薬または栄養補助剤と併用して用いられるか、あるいは、そのような別の治療薬または栄養補助剤をさらに含んでいてもよい。本発明によれば、機能する、成長する、および維持するための食品と液体とを、生物が吸収および用いることによる、ならびに、栄養学的適用を含む、個々の健康もしくは生物の成長過程を、維持する、安定化する、増強する、強化する、または改善するための栄養物および栄養補助剤の提供を対象にする本発明の任意の適用が栄養的適用には含まれる。治療適用には、個々の健康から逸脱する疾患もしくは病気を、予防、治療、管理、回復、緩和、および／または治癒を対象にする本発明の任意の適用が含まれる。本発明の他の適用には、例えば、化粧品としての適用が含まれる。
【００８０】
また、本発明の目的は、哺乳類の免疫反応を調節するための、より具体的には、哺乳類のＴｈ２および／またはＴｈ１の免疫反応を調節するための、さらに具体的には、哺乳類のＴｈ１反応を増強し、哺乳類のＴｈ２反応を抑制するための、治療薬あるいは栄養補助剤を調製するための、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物を提供することである。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、すなわちハーディキウィフルーツ調製物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。そのような活性成分は、アレルギー性疾患、非アレルギー性炎症疾患、ウィルス感染および癌を含む様々な病気の治療および／または予防に有益である。薬剤は、上述した病気または疾患の何れかを予防、治療、および／または改善するための治療薬または栄養補助剤と併用して用いられることが可能である。
【００８１】
本明細書のもう１つ別の目的は、哺乳類の免疫反応を調節するための、より具体的には、哺乳類のＴｈ２および／またはＴｈ１の免疫反応を調節するための、さらに具体的には、哺乳類のＴｈ１反応を増強し、哺乳類のＴｈ２反応を抑制するための任意の許容できる添加剤とともに、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物を含有する健康食品あるいは食品添加剤を提供することである。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、すなわちハーディキウィフルーツ調製物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。そのような健康食品または健康食品添加剤は、アレルギー性疾患、非アレルギー性炎症疾患、ウィルス感染および癌などを含む様々な病気および疾患の治療ならびに／または予防に関して有益である。
【００８２】
本発明のさらにもう１つ別の目的は、哺乳類の免疫反応を調節するための、より具体的には、哺乳類のＴｈ２および／またはＴｈ１の免疫反応を調節するための、さらに具体的には、哺乳類のＴｈ１反応を増強し、哺乳類のＴｈ２反応を抑制するための基本的な構成要素として、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物を含有する動物飼料または飼料添加剤を提供することである。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、すなわちハーディキウィフルーツ調製物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。そのような動物飼料または動物飼料添加剤は、アレルギー性疾患、非アレルギー性炎症疾患、ウィルス感染および癌などを含む様々な病気および疾患の治療ならびに／または予防に関して有益である。
【００８３】
本発明のさらにもう１つ別の目的は、哺乳類の免疫反応を調節するための、より具体的には、哺乳類のＴｈ２および／またはＴｈ１の免疫反応を調節するための、さらに具体的には、哺乳類のＴｈ１反応を増強し、哺乳類のＴｈ２反応を抑制するための、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物を含有する局所組成物または化粧用組成物を提供することである。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ、すなわちハーディキウィフルーツ調製物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。そのような化粧用組成物は、アレルギー性疾患、非アレルギー性炎症疾患、ウィルス感染および癌などを含む様々な病気および疾患の治療ならびに／または予防に関して有益である。
【００８４】
本明細書に記載の組成物、添加剤、または薬剤の何れに、従来の担体、アジュバンド、もしくは、希釈物の少なくとも１つがさらに含まれていてもよい。例えば、本発明の組成物には、ラクトース、デキストロース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、でんぷん、アカシア、ゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニル・ピロリドン、水、メチルヒドロキシ・安息香酸塩、プロピルヒドロキシ・安息香酸塩、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および、鉱物油などの、薬学的に許容可能な担体、アジュバンド、もしくは希釈物が含まれていてもよい。剤形には、賦形剤、抗凝集剤、潤滑性剤、湿潤剤、香料添加剤、乳化剤、および保存剤などがさらに含まれてもよい。本発明の組成物を患者に投与した後に、活性成分が迅速に提供され、持続され、または遅延放出されるように、本発明の組成物は製剤されている。
【００８５】
例えば、本発明の組成物は、油、プロピレン・グリコール、または注入液を製造するために一般的に用いられる他の溶媒に溶解していてもよい。担体の適切な例には、生理食塩水、ポリエチレン・グリコール、エタノール、野菜油、ミチスチン酸イソプロピルなどが含まれるが、これらに限定されない。局所的投与について言えば、本発明の組成物は、軟膏およびクリームの形状において製剤されている。
【００８６】
本発明の組成物または製剤は、経口投薬製剤、局所用製剤、または注射用製剤などの任意の形態で調製されてもよい。経口投薬製剤としては、発泡錠、発泡粉末、粉末、錠剤、カプセル、軟カプセル、水性薬剤、シロップ、エリキシル剤の丸薬、粉末、小袋、顆粒が挙げられる。局所用製剤としては、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、香油、貼付剤、練り物、散布液、噴霧剤などが挙げられる。注射用製剤としては、溶液、懸濁液、乳液が挙げられる。
【００８７】
薬学的剤形における本発明の組成物は、単独で用いられてもよいし、あるいは、他の薬学的に活性な化合物と会合させて、または、組み合わせて用いられてもよい。他の薬学的に活性な化合物には、抗炎症化合物、抗アレルギー化合物、あるいは、免疫反応を調節する、もしくは、患者に有益となる他の任意の化合物または組成物が含まれる。本発明の組成物および剤形に用いられることが、特に望ましい化合物をここでは詳細に記載する。
【００８８】
また、本発明の組成物は、本発明のハーディキウィフルーツ調製物を含む健康食品としても提供される。そのような健康食品としては、例えば、様々な食品、飲料、ガム、複合ビタミン剤、健康改善食品などが挙げられる。健康食品は、食品、粉末、顆粒、錠剤、チューイン錠剤、カプセル、または飲料などとして提供される。また、子供用または幼児用食品も、本発明の組成物に含まれる。子供用または幼児用食品としては、例えば、調製粉乳、特別調製粉乳、調製幼児用または子供用食品が含まれる。
【００８９】
健康食品を製造するために本発明の組成物または薬剤が導入される適切な食品には、高級ベーカー商品、パン、ロールパン、朝食用シリアル、加工チーズ、非加工チーズ、調味料（ケチャップ、マヨネーズなど）、乳製品（ミルク、ヨーグルト）、プリン、ゼラチンゼザート、炭酸飲料、茶、粉末飲料混合物、魚加工品、果実性飲料（果汁を含む）、野菜性飲料（野菜汁を含む）、チューインガム、ハード・コンフェクショナリー（硬い菓子：hard confectionery）、冷凍乳製品、食肉加工品、ナッツ、ナッツ性スプレッド、パスタ、家禽製造加工食品、グレイビー、ソース、ポテトチップ、他のチップまたはクリスプ、チョコレートおよび他の菓子（クッキー、キャンディー、甘草）、アイスクリーム、乾燥食品、カット食品（cut food product）、加工食品（例えば、果実、野菜）、薬味、アルコール飲料、麺類、発酵食品、スープ、スープ混合物、大豆性製品（ミルク、飲料、クリーム、粉末クリーム）、野菜油性スプレッド、ならびに、野菜性飲料が含まれるが、これらに限定されない。また、本発明の組成物を食品と一緒に用いてもよく、例えば、本発明の組成物を給士のときに食品に、添える、注ぐ、または、混ぜてもよい。
【００９０】
上記組成物、特に上記で同定された組成物を含む化粧用製剤は、スキン、ローション、クリーム、美容液、化粧液、乳液、パック、石鹸、シャンプー、リンス、クレンザー、体を洗うための溶液、洗浄液、トリートメント、ゲル、香油、および散布液などを含む任意の形態で調製される。
【００９１】
本発明の上記組成物の何れかに、ラクトース、カゼイン、デキストロース、グルコース、サッカロースおよびソルビトールが１以上さらに含まれていてもよい。
【００９２】
本明細書に記載の組成物、調製物、添加剤、または薬剤の何れかに、活性剤（すなわち、活性化合物、活性成分）が少なくとも１つさらに含まれていてもよい。追加の活性剤は、薬理学的な活性剤（薬理学的に活性な薬剤）および／または栄養的な活性剤（栄養的に活性な薬剤）である。本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物だけでなく、上記活剤は、少なくとも付加的で望ましい、栄養学のおよび／または治療のおよび／または薬理学的な特性を少なくとも１つ、組成物に一般的に付与する。上記活性剤は、組成物、抽出物、添加剤、または、本明細書の他の剤形に任意の効力的な量で含まれている。効果的な量は、薬剤によって与えられる望ましい効果、例えば、被検体の健康または栄養に対する効果（治療効果または栄養上の効果など）、味覚効果、芳香効果、および視覚効果などを達成するのに十分な量のことである。当業者は、本発明の組成物に添加するための追加の薬剤の適切な量を決定することができる。
【００９３】
例えば、本発明によって提供される、または、本発明において有益な組成物の何れかには、活性剤としての天然物が１以上含まれる。この活性剤には、脂肪酸およびポリケチド；有機酸および他の低有機化合物；芳香族アミノ酸およびフェニルプロパノイド；テルペノイドおよびステロイド；アルカロイド、コリンおよびポルフィリン；直鎖ペプチドおよび環状ペプチド、デプシペプチドならびに他のアミノ酸誘導体；ヌクレオシドおよびヌクレオチド；炭化水素；タンパク質、細胞および細胞片；ハーブ調製物および薬味；無機物；滅菌剤；調味料；ビタミン；電解質；ならびに他の天然の薬剤などが含まれる。
【００９４】
本発明の組成物に添加されてもよい他の成分（化合物または薬剤）には、合成香料添加剤、着色剤、加工剤、アルギン酸またはその塩、有機酸、コロイド状の保護剤、ｐＨ調整剤、安定剤、保存剤、グリセリン、アルコール、炭酸化作用剤、または、（任意の投与方法による栄養学的使用または治療的使用のための）剤形の任意の他の基本的な薬剤、あるいは、食品または飲料が含まれる。
【００９５】
本発明のハーディキウィフルーツ調製物と組み合わせるための、または、当該調製物を含有する組成物に添加される、特に好ましい成分（活性剤）には、プロバイオティクス；細菌の細胞壁および細胞片；ホウェイタンパク質；タウリン；アラニン；脂肪酸（共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸）；（上記脂肪酸の任意の組み合わせを含む）モノグリセリド、ジグリセリド、および、トリグリセリド；イノシトール；ウコン；クルクミン；ローズマリー；ローズマリー酸；メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）；朝鮮人参；生姜；プロアントシアニジン；β‐カロチン；ならびに、マタタビ科の任意のメンバー、特に、一般的なキウィ種（例えばＡ．キネンシスまたはＡ．デリシオサ）およびハーディキウィフルーツ種（サルナシ、マタタビ、およびヤママタタビなど）を含むマタタビ属の任意のメンバーを含有する、主な生物活性成分として使用されるもの以外のキウィフルーツの異なる種の任意の調製物などが含まれる。
【００９６】
脂肪酸およびポリケチドには、飽和脂肪酸（α‐リポ酸（Ｒ，Ｓ，またはＲ，Ｓ）など）；不飽和脂肪酸（共役リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、γ‐リノレン酸、α‐リノレン酸、ジホモ‐γ‐リノレン酸、および、ステアリドン酸など）；脂肪酸エステル；（上記脂肪酸の任意の組み合わせを含む）モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド；アセチレン型脂肪酸；分岐鎖脂肪酸；プロスタグランジン；トロンボキサン；ロイコトリエン；芳香族ポリケチド；マクロライドおよびポリエーテル；脂質抽出物（魚油、エキウム油（Echium oil）、ルリヂサ油、オリーブ油など）；ならびに、レシチンなどが含まれる。
【００９７】
有機酸および他の小さい有機化合物には、クエン酸、フマル酸、グアヤコール、メチルサルフォニルメタン（ＭＳＭ）、および、アスコルビン酸が含まれるが、これらに限定されない。
【００９８】
芳香族アミノ酸およびフェニルプロパノイドには、芳香族アミノ酸および安息香酸（例えば、安息香酸、没食子酸、ゲンチシン酸、ｐ‐ヒドロキシ安息香酸、プロトカテク酸、バニリン酸、サリチル酸，シリンガ酸）、桂皮酸（例えば、ヒドロキシチロシル，クルクミン，ロスマリン酸、，αｒ‐ツルメロン，コーヒー酸，ユージノール，クロロゲン酸，ネオクロロゲン酸，桂皮酸，フェルラ酸，ｏ‐クマル酸，ｐ‐クマル酸）；リグナンおよびリグニン；フェニルプロペン；クマリン；スチリルピロン；フラボノイド（例えば、デルフィニジン、プロアントシアニジンなどのアントシアニジン、カテキン、エピカテキンおよびテアフラビンなどのカテキン、アビクラリン（avicularin）、ヒペロシド（hyperoside）、クエルシトリン、イソクエルシトリン、ケンペロール、ミリセチン、ルチンなどのフラボノール；ナリンゲニンなどのフラバノン；ホルレチン（phloretin）などのカルコン；ビテキシン（vitexin）などのイソフラボン）；スチルベン；フラボノリグナン（flavonolignans）；イソフラボノイド；およびテンペノイド・キニーネ（例えば、ビタミンＫ、およびトコトリエノールなどのトコフェノール（ビタミンＥ））が含まれるが、これらに限定されない。
【００９９】
テンペノイドおよびステロイドには、モノテルペン（例えば、β‐ピネン、ボルネオール、カルバクボル（carvacvol）、ゲラニオール、チモール、１，８‐シネオール、テルピネオール）；イリドイド（例えば、モノトロペイン（monotropein））；β‐イオノン（炭素数１３のビタミンＡ前躯体（thirteen carbon precursor to A vitamins）；セスキテルペン（例えば、カリオフィレン、ファルネソール）；ジテルペン（例えば、ビタミンＡ）；セスタテルペン；トリテルペン（例えば、α‐アミリン、ルペオル（lupeol）、ウルソル酸）；テトラテルペン（tetraterpene）；カロチノイド（例えば、リコピン、β‐カロチン、ルテイン、アスタキサンチン、カンタキサンチン）；およびステロイド（ビタミンＤ、β‐シトステロール）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
アルカロイドには、ピロリジン・アルカロイド、トロパン・アルカロイド、ピロリジジン・アルカロイド、ピペリジン・アルカロイド、キノリジジン・アルカロイド、インドリジジン・アルカロイド、ピリジン・アルカロイド、フェニルエチルアミン、テトラヒドロイソキノリン・アルカロイド、ガランタミン、インドール・アルカロイド、β‐カルボリン・アルカロイド、テルペノイド・インドール・アルカロイド、キノリン・アルカロイド、ピロロインドール・アルカロイド、麦角アルカロイド、キナゾリン・アルカロイド、キノリンおよびアクリジン・アルカロイド、イミダゾール・アルカロイド、ピペリジン・アルカロイド、エフェドリン、カプサイシン、ピリジン・モノテンペン・アルカロイド、アコニチン、ステロイド性アルカロイド、プリン・アルカロイド（例えば、アラントイン、カフェイン、テオフィリン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０１】
コリンおよびポルフィリンには、ビタミンＢ、が含まれるが、これに限定されない。
【０１０２】
上記直鎖ペプチドおよび環状ペプチド、デプシペプチド、ならびに、他のアミノ酸誘導体には、単純アミノ酸およびそれらの誘導体（例えば、Ｌ‐アセチル・カルニチン、コリン、タウリン、アラニン）、直鎖ペプチド、環状ペプチド（例えばシクロスポリン）、環状デプシペプチド、β‐ラクタム、青酸グリコシド、グルコシノレート、システイン、スルホキシドが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０３】
炭水化物には、単糖（例えばイノシトール）、多糖（例えば、（任意の鎖長の）イヌリン、などのフラクトオリゴ糖；ガラクトオリゴ糖；キチンおよびキトサン）などが含まれる。
【０１０４】
他の天然物質には、タンパク質（例えば、ホウェイタンパク質およびスーパオキシド・ジスムターゼ）；細胞および細胞片（プロバイオティクス、ミーニング・ライブ（meaning live）、無傷の微生物（例えば、乳酸菌（Lactobacillus spp）、細菌細胞および細菌細胞壁片、ならびに、真菌／酵母細胞および真菌／酵母細胞壁片））；ハーブの調製物および薬味（例えば、朝鮮人参、フアン（huang）、ターメリック、ローズマリー、生姜）；無機物（例えば、Ｋ、Ｍｇ、Ｃａ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｂ、Ｓｉ、Ｓｅ）などが含まれる。これらの化合物の何れかの代謝産物および誘導体も本発明に含まれる。
【０１０５】
本発明の１実施の形態では、本発明の組成物は、病気または疾患のための従来の治療法に関して補助療法として投与される。例えば、本発明の発明者らによって、本発明のハーディキウィフルーツ調製物が、局所的なステロイド療法の補助剤として用いられたときに、アトピー性皮膚炎の患者における臨床結果を改善することが実証された。したがって、本発明の組成物は、１以上の治療薬（例えば、薬）を含んでいてもよい。なお、上記治療薬は、本明細書において活性剤とも称され、免疫反応を調節することによって治療もしくは改善される病気または疾患を治療するために用いられる。そのような治療薬には、ステロイド、抗ヒスタミン剤、抗体、抗生物質、シクロスポリン、抗真菌剤、呼吸機能の長期管理薬、鎮痛薬、β‐アゴニスト、ロイコトリエン修飾薬、サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクリミル、カフェイン、テオフィリン、カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン、Ｔ細胞機能阻害剤、および、他の抗炎症剤などが含まれる。上記ステロイドには、経口型、吸入型、および注射型が含まれ、コルチコステロイドが含まれる。上記抗ヒスタミン剤には、全身型、局所型、吸入型を含む任意の種類が含まれ、Ｈ１およびＨ２ブロッカーが含まれる。上記抗体として、例えば抗ＩｇＥ、抗ＩＬ‐１０が挙げられる。上記β‐アゴニストは、長時間作用型または短時間作用型である。上記ロイコトリエン修飾薬は、阻害剤または受容体アンタゴニストである。
【０１０６】
上記組成物の何れにも、有機酸、リン酸、および／または、天然の酸化防止剤が１以上さらに含まれていてもよい。上記有機酸として、例えばクエン酸、フマル酸、アジピン酸、乳酸、リンゴ酸、アスコルビン酸が挙げられる。上記リン酸として、例えば、リン酸、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、ピロリン酸、ポリリン酸塩が挙げられる。上記天然の酸化防止剤として、例えば、ポリフェノール、カテキン、α‐トコフェノール、ローズマリー抽出物、ビタミンＣ、緑茶抽出物、甘草の根の抽出物、キトサン、タンニン酸、フィチン酸などが挙げられる。
【０１０７】
本発明の組成物、特に、治療用の組成物を含む、（ｉ）化粧品用組成物または（ｉｉ）局所投与のために製剤された組成物などは、水溶性ビタミン、脂溶性ビタミン、ペプチド重合体、多糖重合体、スフィンゴ脂質、グリコサミノグリカン、Ｂ‐グルカン、および海草抽出物などをさらに含んでいてもよい。さらに、本発明の組成物および薬剤に従来公知の化粧品および洗浄液を加えてもよい。そのような組成物は、クリーム、ローション、マッサージパックまたは油、および体を洗うための溶液、石鹸、ならびにシャンプーなどとして用いられる。
【０１０８】
好ましい水溶性ビタミンは、化粧品または他の局所製剤と一緒に混合されることができる任意のものである。しかしながら、そのような水溶性ビタミンとしては、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、ピリドキシン、ピリドキシン・ＨＣｌ、ビタミン１２、パントテン酸、ニコチン酸、ニコチンアミド、葉酸、ビタミンＣ、ビタミンＨなど、それらの塩（チアミン・ＨＣｌ、アスコルビン酸ナトリウム塩など）、またはそれらの誘導体（アスコルビン酸‐２‐ホスホン酸ナトリウム塩、アスコルビン酸‐２‐ホスホン酸マグネシウム塩など）などの様々なビタミンが好ましい。また、それらは、微生物転換法、微生物の培養物から精製する方法、酵素法、または、化学合成法などの従来公知の方法によって得られる。
【０１０９】
好ましい脂溶性ビタミンは、化粧品または他の局所製剤と一緒に混合されることができる任意のものである。しかしながら、ビタミンＡ、Ｄ２、Ｄ３、Ｅ（ｄｌ‐α‐トコフェノール、ｄ‐α‐トコフェノール、ｄ‐δ‐トコフェノール）およびそれらの誘導体（本発明の実施例において用いられる脂溶性ビタミンを含む、パルミチン酸アスコルビン酸塩、ステアリン酸アスコルビン酸塩、ジパルミチン酸アスコルビン酸塩、酢酸‐ｄｌ‐α‐トコフェロール、ニコチン酸ｄｌ‐α‐トコフェロール・ビタミンＥ、ｄｌ‐パントテニル・アルコール、ｄ‐パントテニル・アルコール、パントテニル・エチルエーテルなど）などの様々なビタミンが好ましい。また、それらは、微生物転換法、微生物の培養物から精製する方法、酵素法、または、化学合成法などの従来公知の方法によって得られる。
【０１１０】
好ましいペプチド重合体は、化粧品または他の局所製剤と一緒に混合されることができる任意のものであるが、本発明の実施例において用いられるペプチド重合体を含む、コラーゲン、加水分解型コラーゲン、ゼラチン、エラスチン、加水分解型ゼラチン、またはケラチンなどが好ましい。
【０１１１】
好ましい多糖重合体は、化粧品または他の局所製剤と一緒に混合されることができる任意のものであるが、ヒドロキシ・エチル・セルロース、キサンチン・ガム（xanthin gum）、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸、または、それらの塩（ナトリウム塩など）などが好ましい。例えば、コンドロイチン硫酸またはその塩などは、通常、哺乳類または魚類から精製されることによって用いられる。
【０１１２】
好ましいスフィンゴ脂質は、化粧品または他の局所製剤と一緒に混合されることができる任意のものであるが、スクアレン、セラミド、ピット‐スフィンゴシン（ｐｉｔ‐ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎ）、スフィンゴ‐リポ多糖類などが好ましい。スフィンゴ脂質は、従来公知の方法を用いて、哺乳類、魚類、甲殻類、酵母または植物などから精製することによって得られる。
【０１１３】
好ましい海草抽出物は、化粧品または他の局所製剤と一緒に混合されることができる任意のものであるが、褐藻類、紅藻類、および緑藻類などの抽出物、または、それらから単離された精製カラギーナン、アルギン酸、アルギニン酸、ナトリウム、カリウム、またはグリコサミノグリカンが好ましい。藻類の抽出物は、従来公知の方法を用いて、海草から精製することによって得られる。
【０１１４】
本発明の化粧品および他の局所的組成物は、他の成分と組み合わされてもよいし、または、従来の化粧品もしくは局所的組成物と、必要であれば上記ハーディキウィフルーツ調製物と一緒に、組み合わされてもよい。そのような他の成分には、油成分、保湿剤、軟化剤、界面活性剤、有機または無機染料、有機粉末、紫外線吸収剤、保存剤、防腐剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、顔料、香水、冷却剤、制汗剤、蒸留水などが含まれる。好ましい油成分には、エステル油、炭化水素油、シリコン油、フッ化物油、動物性油、植物性油などが含まれる。
【０１１５】
好ましいエステル油には、グリセリル・トリ‐２‐エチル・へキサン酸、セチル・２‐エチルへキサン酸、イソプロピル・ミリスチン酸、ブチル・ミリスチン酸、イソプロピル・パルミチン酸、エチル・ステアリン酸、オクチル・パルミチン酸、イソセチル・イソステアリン酸、ブチル・ステアリン酸、エチル・リノレン酸、イソプロピル・リノレン酸、エチル・オレイン酸、イソセチル・ミチスチン酸、イソステアリル・ミリスチル酸、，イソステアリル・パルミチン酸，オクチルドデシル・ミリスチン酸，イソセチル・イソステアリン酸，ジエチル・セバシック酸（sebasic acid），イソプロピル・アジピック酸（adipic acid），イソアルキル・ネオペタノイック酸（neopetanoic acid），グリセリル・トリ（カプリル，カプリン酸），トリメチロプロパン・トリ‐２‐エチル・へキサン酸，トリメチロプロパン・トリ・イソステアリン酸，ペンタエリスリトール・テトラ‐２・エチル・へキサン酸、セチル・カプリル酸，デシル・ラウリン酸，ヘキシル・ラウリン酸，デシル・ミリスチン酸，ミリスチル・ミリスチン酸，セチル・ミリスチン酸，ステアリル・ステアリン酸，デシル・オレイン酸，セチル・リシノレイン酸（licinoleic acid），イソステアリル・ラウリン酸，イソトリデシル・ミリスチン酸，イソセチル・パルミチン酸，オクチル・ステアリン酸，イソセチル・ステアリン酸，イソデシル・オレイン酸，オクチルドデシル・オレイン酸，オクチルドデシル・リノール酸，イソプロピル・イソステアリン酸，セトステアリル・２‐エチル・へキサン酸，・ステアリル・２‐エチル・へキサン酸，ヘキシル・イソステアリン酸，エチレン・グリコール・ジオクタン酸，エチレン・グリコール・ジオレイン酸，プロピレン・グリコール・ジカプリン酸，プロピレン・グリコール・ジ（カプリル，カプリン酸），プロピレン・グリコール・ジカプリル酸，ネオペンチルグリコール・ジカプリン酸，ネオペンチルグリコール・ジオクタン酸，グリセリル・トリカプリル酸，グリセリル・トリウンデシル酸，グリセリル・トリイソパルミチン酸，グリセリル・トリイソステアリン酸，オクチルドデシル・ネオペンタン酸，イソステアリル・オクタン酸，オクチル・イソノナン酸，ヘキシルデシル・ネオデカン酸，オクチルドデシル・ネオデカン酸，イソセチル・イソステアリン酸，イソステアリル・イソステアリン酸，オクチルデシル・イソステアリン酸，ポリグリセリン・オレアノイック酸（oleanoic acid）・エステル，ポリグリセリン・イソステアリン酸・エステル，トリイソセチル・クエン酸，トリイソアルキル・クエン酸，トリイソオクチル・クエン酸，ラウリル乳酸，ミリスチル・乳酸，セチル乳酸，オクチルデシル乳酸，トリエチル・クエン酸，アセチルトリエチル・クエン酸，アセチル・トリブチル・クエン酸，トリオクチル・クエン酸，ジイソステアリル・マレイン酸，ジ・２‐エチルヘキシル・ヒドロキシ・ステアリン酸，２‐エチル・ヘキシル・コハク酸，ジイソブチル・アジピック酸，ジイソプロピル・セバシニン酸（sebasinic acid），ジオクチル・セバチニン酸（sebacinic acid），コレステリル・ステアリン酸，コレステリル・イソステアリン酸，コレステリル・ヒドロキシ・ステアリン酸，コレステリル・ヒドロキシ・ステ���リン酸，コレステリル・オレイン酸，ジヒドロコレステリル・オレイン酸，ピットステリル（pitsteryl）・イソステアリン酸，ピットステリル・オレイン酸，イソセチル・１２‐ステアローイル（stealoyl）・ヒドロキシ・ステアリン酸，ステアリル・１２‐ステアローイル・ヒドロキシ・ステアリン酸，イソステアリル・１２‐ステアローイル・ヒドロキシ・ステアリン酸などが含まれる。
【０１１６】
好ましい、上記炭化水素油には、流動パラフィン，α‐オレフィン・オリゴマー，イソパラフィン、，セレシン、パラフィン、流動イソパラフィン、，ポリブデン（polybuden），・マイクロクリスタリン・ワックス，およびワセリンなどが含まれる。
【０１１７】
好ましいシリコン油には、ポリメチルシリコン，メチルフェニルシリコン，メチルシクロポリシリコン，オクタメチルポリシロキサン，デカメチルポリシロキサン，ドデカメチルシクロシロキサン，ジメチルシロキサン・メチル・セチル・オキシシロキサン共重合体，ジメチル・シロキサン‐メチル・スチールオキシシロキサン（stealloxysiloxane）共重合体，アルキル修飾シリコン油、および、アミノ修飾シリコン油などが含まれる。
【０１１８】
好ましいフッ化物油には、ペルフルオロポリエーテルなどが含まれる。
【０１１９】
好ましい動物性油または植物性油には、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、ゴマ油、もみ殻油、ベニバナ油、大豆油、トウモロコシ油、菜種油、キャノーラ油、パーム核油、ヤシ油、ひまわり油、綿実油、ココヤシ油、ククイナッツ油（cucui nut oil）、小麦胚芽油、米胚芽油、シアバター、月見草油、マカダミアナッツ油、ニシン油および他の魚油、卵黄油、ラノリン、麻実油、ミンク油、オレンジ・ラッフィー油、ホホバ油、カルナバ・ワックス、および、液体ラノリンなどが含まれる。
【０１２０】
好ましい保湿剤には、水溶性低分子保湿剤、脂溶性低分子保湿剤、水溶性重合体、および、脂溶性重合体が含まれる。
【０１２１】
より具体的には、好ましい水溶性低分子保湿剤には、セリン（cerin）、グルタミン、ソルビトール、マンニトール、ピロリドン‐カルボン酸・Ｎａ、グリセリン、プロピレン・グリコール、１，３‐ブチレン・グリコール、エチレン・グリコール、ポリエチレン・グリコール（重合指数（polymerization index.）＞２）、ポリプロピレン・グリコール（重合指数＞２）、乳酸、および、乳酸塩などが含まれる。
【０１２２】
好ましい脂溶性低分子保湿剤には、コレステロール、および、コレステリル・エーテルなどが含まれる。
【０１２３】
好ましい水溶性重合体には、カルボキシ・ビニル・重合体、ポリアスパラギン酸塩、トラガカント、シサンチンガム、ＨＭＣ（ヒドロキシ・メチル・セルロース）、ＨＥＣ（ヒドロキシ・エチル・セルロース）、ＨＰＣ（ヒドロキシ・プロピル・セルロース），カルボキシメチルセルロース、水溶性キチン、キトサン、および、デキストリンなどが含まれる。
【０１２４】
好ましい脂溶性重合体には、ポリビニルビロリドン‐エイコセン（eicocene）共重合体、ポリビニルピロリドン‐ヘキサデセン・共重合体、ニトロセルロース、デキストリン・脂肪酸・エステル、および、シリコン重合体などが含まれる。
【０１２５】
好ましい、軟化剤には、長鎖アシルグルタミン酸・コテステリル・エステル、コレステリル・ヒドロキシ・ステアリン酸、１２‐ヒドロキシ・ステアリン酸，ロギック酸（rogic acid）、および、ラノリン脂肪酸・コレステリル・エステルなどが含まれる。
【０１２６】
好ましい界面活性剤には、非イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両親媒性（amphivalent）界面活性剤などが含まれる。
【０１２７】
具体的には、好ましい非イオン性界面活性剤には、自己乳化モノステアリン酸・グリセリン、プロピレン・グリコール・脂肪酸・エステル、グリセリン・脂肪酸・エステル、ポリグリセリン・脂肪酸・エステル、ソルビタン・脂肪酸・エステル、ポリオキシエチレン・（ＰＯＥ）・ソルビタン・脂肪酸・エステル、ＰＯＥ・ソルビタン・脂肪酸・エステル、ＰＯＥ・グリセリン・脂肪酸・エステル、ＰＯＥ・アルキル・エーテル、ＰＯＥ・脂肪酸・エステル、ＰＯＥ・固形ピマジャ油（solid pimaja oil）、ＰＯＥピマジャ油、ＰＯＥ‐ＰＯＰ・共重合体、ＰＯＥ‐ＰＯＰアルキル・エーテル、ポリエーテル修飾シリコン、ラウリン酸・アルカノール・アミド、アルキル・アミン・オキシド、および、水素添加大豆リン脂質（hydrogen addition soybean phospholipid）などが含まれる。
【０１２８】
好ましい陰イオン性界面活性剤には、脂肪酸石鹸、α‐アシル・スルホン酸塩、アルキル・スルホン酸塩、アルキル・アライ（ａｌｌｙ）・スルホン酸、アルキル・ナフタレン・スルホン酸塩、アルキル・スルホン酸塩、ＰＯＥ・アルキルエーテル・硫酸塩、アルキル・アミド硫酸塩、アルキル・リン酸塩、ＰＯＥ・アルキル・リン酸塩、アルキルアミド・リン酸塩、アルキロイルアルキル・タウリン塩、Ｎ‐アシル‐アミノ酸塩、ＰＯＥ・アルキル・エーテル・カルボン酸塩、アルキル・スルホ・コハク酸エイド（ａｉｄ）塩、アルキル・スルフォ‐酢酸塩、アシル化・加水分解型・コラーゲン・ペプチド塩、および、パーフルオロ・アルキル・リン酸・エステルなどが含まれる。
【０１２９】
好ましい陽イオン性界面活性剤には、アルキル・トリメチル・塩化アンモニウム、ステアリルトリメチル・塩化アンモニウム、ステアリル・トリメチル・臭化アンモニウム、セトステアリルトリメチル塩化アンモニウム，ジステアリル・ジメチル塩化アンモニウム，ステアリル・ジメチル・ベンジル・塩化アンモニウム、フェニル・トリメチル・臭化アンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ジエチルアミノ・エチル・アミド・ステアリン酸、ジメチルアミノプロピル・アミド・ステアリン酸、および、ラノリン誘導体・四級アンモニウムなどが含まれる。
【０１３０】
好ましい両親媒性界面活性剤には、カルボキシ・ベタイン型、アミド・ベタイン型、ヒドロキシ・スルホ・ベタイン型、ホスホベタイン型、アミノカルボン酸、イミダゾリン誘導体型、および、アミド・アミン型などが含まれる。
【０１３１】
好ましい有機および無機染料には、無機染料として、ケイ酸，無水ケイ酸，マグネシウムケイ酸，タルク，セラサイト（ceracyte），雲母，カオリン、ベンガラ（bengala），粘土，ベントナイト，チタンフィルム雲母、オキシ・クロライド・ビスマス（oxy chlorine bismuth）、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン（titan oxide）、酸化アルミニウム、硫酸カルシウム、硫酸バリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化第１鉄、酸化クロム、水酸化クロム、および、カーボンブラック、ならびに、それらの組み合わせ；および、有機染料として、ポリアミド、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリウレタン、ビニル樹脂、尿素樹脂、フェノール樹脂、フッ化物樹脂、シリコン樹脂、アクリル樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、ポリカーボネート樹脂、ジビニル・ベンゼン‐スチレン・共重合体、絹の粉、セルロース、ＣＩ・黄色顔料（pigment yellow）、ＣＩ・オレンジ顔料（pigment orange）；ならびに、それらの複合体などが含まれる。
【０１３２】
好ましい有機粉末には、ステアリン酸カルシウムなどの金属石鹸、セチル酸亜鉛ナトリウム，ラウリン酸亜鉛（zinc laurylic acid）、ラウリン酸カルシウムなどのアルキル・ホスホン酸金属塩、カルシウム・Ｎ‐ラウロイル‐β‐アラニン、亜鉛・Ｎ‐ラウロイル‐β‐アラニン、カルシウム・Ｎ‐ラウロイル‐グリシンなどのアシルアミノ酸多価金属塩、カルシウム・Ｎ‐ラウロイル‐タウリン、カルシウム・Ｎ‐パルミトイル‐タウリンなどのアミド・スルホン酸・多価金属塩、Ｎε‐ラウロイル‐Ｌ‐リジン、Ｎε‐パルミトイル‐リジン、Ｎα‐パルミトイル・オルニチン（ornitine）、Ｎα‐ラウロイル・アルギニン、硬化ラノリン（hardened lanolin）・脂肪酸・アシル・アルギニンなどのＮ‐アシル・塩基性アミノ酸、Ｎ‐ラウロイルグリシル・グリシンなどのＮ‐アシルポリペプチド、α‐アミノ・カプリル酸，α‐アミノ・ラウリン酸などのα‐アミノ脂肪酸、ポリエチレン、ポリプロピレン、ナイロン、ポリメチルメタクリ酸塩、ポリスチレン、ジビニルベンゼン‐スチレン・共重合体、エチレン・四フッ化物などが含まれる。
【０１３３】
好ましい紫外線吸収剤には、パラアミノ安息香酸、パラアミオノエチル・安息香酸塩、パラアミノ・アミル・安息香酸塩、パラアミノ・オクチル・安息香酸塩、エチレングリコール・サリチル酸塩、フェニル・サリチル酸塩、オクチル・サリチル酸塩、ベンジル・サリチル酸塩、ブチルフェニル・サリチル酸塩、ホモメチル・サリチル酸塩、ベンジル・桂皮酸、パラメトキシ・２‐エトキシ・エチル・桂皮酸，パラメトキシ・オクチル・桂皮酸、ジパラメトキシ・モノ‐２‐エチルへキサン・グリセリル・桂皮酸、パラメトキシ・イソプロピル・桂皮酸、ジイソプロピル‐ジイソプロピル・桂皮酸エステル混合物、ウロカニン酸（urokanic acid）、エチル・ウロカニン酸、ヒドロキシ・メトキシ・ベンゾフェノン、ヒドロキシ・メトキシ・ベンゾフェノン・スルホン酸およびその塩、ジヒドロキシ・メトキシ・ベンゾフェノン、ジヒドロキシ・メトキシ・ベンゾフェノン・二硫酸塩・Ｎａ、ジヒドロキシ・ベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、４‐ｔｅｒｔ‐ブチル‐４’‐メトキシジベンゾイルメタン、２，４，６‐トリアニリノ‐ｐ‐（カルボ‐２’‐エチルヘキシル‐ｒ‐オキシ）‐ｌ，３，５‐トリアジン、および、２‐（２‐ヒドロキシ‐５‐メチルフェニル）・ベンゾトリアゾールなどが含まれる。
【０１３４】
好ましい保存剤には、ヒノキチオール、三塩素酸（trichloric acid）、三塩素ヒドロキシジフェニルエーテル、クロロヘキシジン（chlorohexidine）グルクロン酸、フェノキシエタノール、レゾルシン（resorcine）、イソプロピルメチルフェノール、アズレン、サリチル酸、亜鉛ピリチオン（zinc pilithione）、ベンズアルコニウム（benzalconium）・ＨＣｌ、光感作物質３０１、モノニトログアヤコール・Ｎａ、ウンデシレン酸などが含まれる。
【０１３５】
好ましい酸化防止剤には、ブチルヒドロキシアニソール、プロピル・没食子酸塩、および、エリソルビン酸塩（ellisorbate）などが含まれる。
【０１３６】
好ましいｐＨ調整剤には、クエン酸，クエン酸ナトリウム、，リンゴ酸，リンゴ酸ナトリウム，  フマル酸、フマル酸ナトリウム、コハク酸、コハク酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、および、リン酸水素ナトリウムなどが含まれる。
【０１３７】
好ましいアルコールには、セチルアルコールなどが含まれる。
【０１３８】
また、他の成分に、上述した化合物のいずれかを添加してもよい。１実施の形態では、他の成分の量は、総組成物の量に対して、０．０１％〜５％の範囲であり、より好ましくは０．０１％〜３％の範囲である。
【０１３９】
水溶性ビタミン、脂溶性ビタミン、ペプチド重合体、多糖類重合体、スフィンゴ脂質、海草抽出物、および、他の成分などの上述した成分は、文献（例えば、Matsumoto Mithio, Manual for the development of transdermal applied preparations. SeisiPress, 1st Ed., 1985参照）に開示されている従来の方法によって得られる。
【０１４０】
本発明のハーディキウィフルーツ調製物は、安全に用いられる。それらは動物に対して無毒であり、実質的な副作用を示さない。
【０１４１】
本発明によれば、上記で特定された組成物のいずれかは、適切な期間にわたって１回以上投与されたときに、本発明のハーディキウィフルーツ調製物の上述のような所望の生物活性に達するのに十分な、本発明のハーディキウィフルーツ調製物の任意の適切な用量または量を用いて、本発明のハーディキウィフルーツ調製物と一緒に製剤される。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、または抽出物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物もしくは画分が含まれる。適切な量または用量は、投与の目的または治療される病気もしくは疾患、被検体の重量、重症度、薬物の形態、経路、および投与期間に依存して変化する。また、適切な量および用量は、当業者によって選択されてもよい。
【０１４２】
１実施の形態において、本発明のハーディキウィフルーツ調製物の適切な量または用量には、患者の体重１ｋｇ当たり約０．１ｇから約１０ｇまでの量であり、好ましくは本発明のハーディキウィフルーツまたは本発明の抽出物の１日当たりの重量に基づいて、１ｋｇ当たり約１ｇから３ｇまでの量である。この用量が、要望どおり、１日当たり１回、１日当たり数回、またはより長い間（例えば、数日おきに、毎週毎に、毎月毎に）投与される。本明細書に記載の用語「組成物」では、本明細書のハーディキウィフルーツ調製物の量は、０．０１％刻みで０．０１％〜１００％の間の任意の量を含む、組成物の総重量に対して約０．０１重量％〜１００重量％の間であり、好ましくは約０．０１重量％〜約９５重量％の間であり、より好ましくは０．５重量％〜８０重量％の間である。１実施の形態では、本発明の薬剤組成物には、本発明のハーディキウィフルーツ調製物が、この組成物の総重量に対して約０．０１重量％〜５０重量％含まれている。
【０１４３】
１実施の形態では、本発明のハーディキウィフルーツ調製物の抽出物または他の調製物は、１％刻みで２０％〜９０％の間の任意の増加を含む、約２０％から９０％までの高濃縮液体、粉末または顆粒という任意の組成で提供されてもよい。
【０１４４】
上記組成物における追加成分の割合は、１％刻みで０ｗ／ｗ％〜１００ｗ／ｗ％の間の任意の増加を含む、組成物１００ｗ／ｗ％当たり約０ｗ／ｗ％から２０ｗ／ｗ％までの一般的な範囲であってもよい。
【０１４５】
１実施の形態では、化粧用組成物には、本発明のハーディキウィフルーツ調製物が、この組成物の総重量に対して、０．０１％刻みで、０．０１％〜３０％の間の任意の増加を含む、約０．０１％から３０％までの量、好ましくは０．０１重量％〜５重量％の量で含まれている。
【０１４６】
もう１つ別の実施の形態では、食品、食品添加剤または飲料に添加される本発明のハーディキウィフルーツ調製物を含む組成物は、０．１ｗ／ｗ％刻みで０．１ｗ／ｗ％〜９５ｗ／ｗ％の間の任意の増加を含む、食品、食品添加剤または飲料の総重量に対して、約０．１ｗ／ｗ％から９５ｗ／ｗ％までの範囲の量、好ましくは１ｗ／ｗ％〜８０ｗ／ｗ％の範囲の量で提供されるか、あるいは、健康飲料の組成物の１ｇ刻みで１００ｍｌ当たり１ｇ〜１００ｍｌ当たり３０ｇの間の任意の増加を含む、１００ｍｌ当たり約１ｇ〜３０ｇ、好ましくは１００ｍｌ当たり３ｇ〜１０ｇの範囲の量で提供される。
【０１４７】
１実施の形態では、本発明の健康食品には、本発明のハーディキウィフルーツ調製物が、組成物の総重量に対して、０．１％刻みで０．０１％〜８０％の間の任意の増加を含む、０．０１重量％〜８０重量％、好ましくは１重量％〜５０重量％で含まれる。
【０１４８】
１実施の形態では、健康飲食品には、本発明のハーディキウィフルーツ調製物が、０．０１％刻みで０．０１％〜２０％の間の任意の増加を含む、組成物の総重量に対して、約０．０１重量％から約２０重量％までの量で含まれる。追加生物には、０．００１重量％〜５重量％のアミノ酸、０．００１重量％〜２重量％のビタミン、０．００１重量％〜２０重量％の糖、０．００１重量％〜１０重量％の有機酸、適量の甘味料および香料が含まれていてもよい。本発明の健康飲料に上記ハーディキウィフルーツ調製物が必須成分として含有されていれば、その他の液体成分は特に限定されず、その他の液体成分は、従来の飲料に添加されるような様々な甘味料および／または香料増強剤である。そのような甘味料または香料増強剤としては、例えば、グルコース、フルクトースなどの単糖、マルトース、サッカロースなどの二糖、デキストリン、シクロデキストリンなどの従来の糖、および、キシリトール、エリスリトールなどの糖アルコールを含む従来のあるいは低減カロリー甘味料などが挙げられるが、これらに限定されない。追加甘味料には、タウマチン（taumatin）、ステビア抽出物、レバウジオシドＡ（levaudioside A）、グリシルリジン、および、それらの誘導体などの天然甘味料、ならびに、サッカリン、スクラロース、アスパルテーム、およびそれらの誘導体などの低減カロリー甘味料が含まれる。上記甘味料または香料増強剤の量は、飲料組成物１００ｍｌの割合において、１ｇ刻みで１００ｍｌ当たり１ｇ〜２０ｇの間の増加を含む、約１ｇ〜２０ｇであり、好ましくは５ｇ〜１２ｇの一般的な範囲である。
【０１４９】
食品添加剤は、蒸着、噴霧、混合によって食品に添加される。総組成物に対する食品添加剤の量は、存在する組成物の１００ｗ／ｗ％当たり、１ｗ／ｗ％刻みで２０ｗ／ｗ％〜１００ｗ／ｗ％の間の任意の増加を含む約０．０１ｗ／ｗ％〜２０ｗ／ｗ％の一般的な範囲である。また、食品添加剤は、動物試料などの試料と一緒に、１ｇ刻みで重量で１ｋｇ当たり５ｇ〜１００ｇの間の任意の増加を含む、試料の総乾燥重量に対して、重量で１ｋｇ当たり約５ｇから１００ｇの量で混合される。
【０１５０】
したがって、本発明の目的は、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物のいずれか、および、１実施の形態では、活性成分としてハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、もしくは酢酸エチル抽出物、を含む、から本質的に成り立つ、または、から成り立つ薬学的組成物、栄養補助組成物、食品添加剤、健康食品（飲料または食品の原料を含む）、もしくは化粧用組成物を投与することまたは提供することによって、患者のＴｈ１およびＴｈ２の免疫反応を選択的に調節する方法を提供することである。本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。本発明の組成物の詳細は、上記されている。特に、本発明の組成物を投与または提供することによって、以下の少なくとも１つの生物活性が生じる；
（ａ）患者において、ＩｇＥを産生するＢ細胞の数を減少させる活性；
（ｂ）患者において、（例えば、血清または血しょう中に）産生されるＩｇＥ量を減少させる活性；
（ｃ）少なくとも１つのＴｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０）の産生および／またはレベルを減少させる活性；
（ｄ）少なくとも１つのＴｈ１サイトカイン（例えば、ＩＬ‐１２、ＩＦＮ‐γ）の産生および／またはレベルを増加させる活性；
（ｅ）ＧＡＴＡ‐３、転写因子の発現レベルを減少させる活性；
（ｆ）Ｔ‐ｂｅｔ、転写因子の発現レベルを増加させる活性；
（ｇ）ＮＦＡＴｃ２、転写因子の発現レベルを増加させる活性；
（ｈ）患者において、ＩｇＧ２ａを産生するＢ細胞の数を増加させる活性；
（ｉ）患者において、産生されるＩｇＧ２ａ量を増加させる活性；
（ｊ）Ｔｈ１Ｔリンパ球（例えばＣＤ４＋、ＩＦＮ‐γ＋）の産生または活性を、特に炎症部位において、増強させる活性；
（ｋ）Ｔｈ２Ｔリンパ球（例えばＣＤ４＋、ＩＬ‐４＋）の産生または活性を、特に炎症部位において、減少させる活性；
（ｌ）患者において、ＩｇＧ１を産生するＢ細胞の数を減少させる活性；
（ｍ）患者において、産生されるＩｇＧ１量を減少させる活性；および／または、
（ｎ）患者において、少なくとも１つのロイコトリエンのレベルまたは産生を減少させる活性。
【０１５１】
好ましい本発明の方法には、患者のロイコトリエン産生を減少する方法が含まれ、これにより、患者におけるロイコトリエンと関連する病気または疾患の症状の少なくとも１つを治療あるいは改善することができる。本発明の方法は、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物の何れか、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物の効果的な量を、それらの薬学的に許容な担体と一緒に、哺乳類に、投与する工程を含む。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ抽出物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。好ましくは、本発明の組成物の投与によって、患者におけるロイコトリエンの産生またはレベルが減少する。ロイコトリエンに関連する疾患および病気には喘息、食物アレルギー、アレルギー性鼻炎、慢性じんましん、およびアレルギー性皮膚炎が含まれるが、これらに限定されない。本実施の形態では、好ましい投与経路には、全身投与経路に加えて、経口、吸入および局所投与が含まれる。
【０１５２】
上記方法は、本明細書において記載された様式で免疫反応を調節することによって、患者にとって、有益になるか、もしくは、有益になると予測される任意の疾患または病気を予防するために、および／あるいは、治療するために、用いられる。
【０１５３】
それ故、本発明の目的は、哺乳類のアレルギー性疾患および非アレルギー性炎症疾患を治療および／または予防するための方法であって、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物の何れか、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物の効果的な量を、それらの薬学的に許容な担体と一緒に、哺乳類に投与する工程を含む。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ抽出物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。
【０１５４】
本発明によれば、アレルギー性疾患には、喘息、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性気管支炎気管支拡張症（bronchitis bronchiectasis）、過敏性肺炎、アレルギー性副鼻腔炎、アナフィラキシー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、伝染性皮膚炎、慢性じんましん、昆虫アレルギー、食物アレルギー、および薬物アレルギーが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５５】
１実施の形態では、アレルギー性皮膚炎はアトピー性皮膚炎である。この実施の形態の１つの態様では、本発明のハーディキウィフルーツ調製物を含む、から本質的に成り立つ、または、から成り立つ、組成物を投与することに加えて、局所ステロイド薬などを含むアトピー性皮膚炎のための従来の治療法を併用して患者は治療される。本発明のこの実施の形態では、ハーディキウィフルーツ調製物は、経口投与または局所投与によって投与されることが最も好ましいが、本発明は、そのような投与経路に限定されない。
【０１５６】
他の実施の形態では、アレルギー性疾患は喘息である。この実施の形態の１つの態様では、本発明のハーディキウィフルーツ調製物を含む、から本質的に成り立つ、または、から成り立つ、組成物を投与することに加えて、ステロイド薬吸入、もしくは他の喘息制御剤などを含む喘息のための従来の治療法を併用して患者は治療される。本発明のこの実施の形態では、ハーディキウィフルーツ調製物は、経口投与または吸入投与によって投与されることが最も好ましいが、本発明は、そのような投与経路に限定されない。
【０１５７】
本発明によれば、非アレルギー性皮膚炎疾患には、特に限定されないが、吹き出物およびにきびなどの炎症によって引き起こされる様々な皮膚不調が含まれる。上記化粧用組成物には、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物のいずれか、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物が含まれており、患者の皮膚の炎症を予防、治療、および／または改善するために利用される。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ抽出物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。
【０１５８】
本明細書に記載の方法および組成物を用いて予防または治療される他の非アレルギー性炎症疾患には、様々な皮膚炎病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、網膜炎症、胃炎、網膜症、肝炎、腸炎、膵炎、腎炎、ならびに、Ｔｈ２型の免疫反応の減少および／またはＴｈ１型の免疫反応の増強が有益となる同様の病気が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５９】
本発明のもう１つ別の目的は、哺乳類のウィルス感染を治療および／または予防する方法であって、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物の何れか、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物の効果的な量を、それらの薬学的に許容な担体と一緒に、哺乳類に投与する工程を含む方法を提供することである。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ抽出物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。
【０１６０】
ウィルス感染を予防または治療することによって哺乳類を保護するための好ましいウィルスには、コクサッキー・ウィルス、サイトメガロ・ウィルス、エプスタイン‐バー・ウィルス、フラビ・ウィルス、肝炎ウィルス、ヘルペス・ウィルス、インフルエンザ・ウィルス、はしか・ウィルス、ムンプス・ウィルス（流行性耳下腺炎ウィルス）、パピローマ・ウィルス、パラインフルエンザ・ウイルス、パルボウィルス、狂犬病ウィルス、呼吸器合胞体ウィルス、レトロウィルス、および、水痘ウイルスが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６１】
これらのウィルスの中でも、レトロウィルス、ヘルペス・ウィルス、および肝炎ウィルスがより好ましく、他の免疫不全ウィルスまたは癌ウィルスとしては、白血病ウィルス、リンパ向性（ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｈｉｃ）ウィルス、肉腫ウィルス、およびレンチウィルスがさらにより好ましい。特に、ウィルス感染を予防または治療することによって哺乳類を保護するための、好ましいリンパ向性ウィルスには、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルス（ＨＴＬＶ‐ＩおよびＨＴＬＶ‐ＩＩなどのＨＴＬＶ）、ウシ白血病ウィルス（ＢＬＶ）、ネコ白血病ウィルスなどのＴ‐リンパ向性ウィルスが含まれる。特に、好ましいレンチウィルスには、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、シミアン免疫不全ウィルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウィルス（ＦＩＶ）、イヌ免疫不全ウィルス（ＣＩＶ）が含まれ、ＨＩＶ‐１およびＨＩＶ‐２がさらにより好ましい。
【０１６２】
本発明のもう１つ別の目的は、哺乳類の癌を治療および／または予防するための方法であって、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ調製物の何れか、ならびに、１実施の形態では、ハーディキウィフルーツの粗抽出物、総水溶性抽出物、または酢酸エチル抽出物の効果的な量を、それらの薬学的に許容な担体と一緒に、哺乳類に投与する工程を含む方法を提供することである。ここで、本明細書に記載のハーディキウィフルーツ抽出物には、（ｉ）果実の任意の部分、果実全体、茎、葉、皮または根、および、（ｉｉ）それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物が含まれ、当該それらの任意の調製物、抽出物、または濃縮物には、乾燥調製物、抽出されていないが加工された調製物、新鮮果実、果汁、または、それらの任意の抽出物、濃縮物、もしくは画分が含まれる。
【０１６３】
本明細書の方法および組成物を用いて治療または予防される癌には、メラノーマ、扁平上皮細胞癌、乳癌、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織の肉腫、骨肉種、精巣癌、前立腺癌、卵巣癌、膀胱癌、皮膚癌、脳腫瘍、脈管腫、血管肉腫、肥満細胞腫、原発性肝癌、肺癌、膵癌、消化管癌、腎細胞癌、造血系腫瘍、および、それらの転移性癌が含まれる。
【０１６４】
病気または疾患を治療または予防する上記方法のいずれにおいても、ハーディキウィフルーツ調製物は、特定の病気の治療に有用なもう１つ別の治療法または組成物と合わせて投与されることができる。これらの実施の形態では、ハーディキウィフルーツは、従来の治療法の補助剤であり、患者の症状の改善、回復、改良を増強すると考えられる。特に、本発明のハーディキウィフルーツ調製物と一緒に用いることのできる、好ましい種類の従来の薬剤または治療法には、ステロイド、抗ヒスタミン剤、抗体、抗生物質、シクロスポリン、抗真菌剤、呼吸機能の長期管理薬、鎮痛薬、β‐アゴニスト、ロイコトリエン修飾薬、サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクリミル、カフェイン、テオフィリン、カルボベンゾキシ・ベータ‐アラニル・タウリン、Ｔ細胞機能阻害剤、および、他の抗炎症剤が含まれるが、これらに限定されない。上記ステロイドには、経口型、吸入型、および注射型が含まれ、コルチコステロイドが含まれる。上記抗ヒスタミン剤には、全身型、局所型、吸入型を含む任意の種類が含まれる。上記抗体として、例えば抗ＩｇＥ、抗ＩＬ‐１０が挙げられる。上記β‐アゴニストは、長時間作用型または短時間作用型である。上記ロイコトリエン修飾薬は、阻害剤または受容体アンタゴニストである。
【０１６５】
本発明の方法では、組成物を、霊長類、げっ歯類、家畜類、および、家庭用ペットなどを含む哺乳類、脊椎動物種のいずれの一員に投与または提供することができる。保護される好ましい患者は、家庭用ペット（例えば、イヌ、ネコ）およびヒトであり、特にヒトが好ましい。投与の全ての様式は熟慮される。本発明によれば、用語「患者」、「被検体」、および、「個々」は、同義に用いられる。
【０１６６】
投与経路には、インビボ経路、インビトロ経路、およびエクスビボ経路が含まれる。エクスビボ経路は、調節工程の一部を患者の外で行うことを言う。インビボ経路には、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、節内投与、冠動脈内投与、動脈内投与（例えば、頚動脈への投与）、皮下投与、経皮的送達、気管内投与、関節内投与、脳室内投与、吸入（エアロゾル）、頭蓋内投与、髄腔内投与、眼内投与、耳投与、鼻腔内投与、経口投与、肺内投与、カテーテルの含浸、皮膚内投与、くも膜下投与、硬膜外投与、脳室内注入、および組織への直接注入などが含まれるが、これらに限定されない。本発明の１実施の形態では、組成物は、非経口経路（例えば、皮下経路、皮膚内経路、静脈内経路、筋肉内経路、および、腹腔内経路）によって投与される。静脈内投与、腹腔内投与、皮膚内投与、皮内投与、および、筋肉内投与は、技術的に標準の方法を用いて行われる。耳からの送達には、点耳剤が含まれ、鼻腔内送達には点鼻剤または鼻腔内注入が含まれ、眼内送達には、点眼剤が含まれる。また、エアロゾル（吸入）送達も、技術的に標準の方法を用いて行われる（例えば、Stribling et al., Proc. Natl. Acad. ScL USA 189:11277-11281, 1992参照。なお、この文献は、参照によって本明細書に完全に組み込まれる）。例えば、１実施の形態では、本発明の組成物またはワクチンは、適切な吸入器または噴霧器を用いて噴霧によって送達されるための適切な組成物に製剤される。経口送達は、本発明の組成物を、食品または飲料製造物の中に製剤されることと同様に、動物の消化管における消化酵素による分解に抵抗できる担体に、（例えば、錠剤またはカプセルのように、）錯化することによって行われる。そのような担体には、例えば、当業者に公知のプラスチックのカプセルまたは錠剤が含まれる。直接注入技術は、化合物の部位特異的な投与を行うときに、特に有益である。経口送達または局所送達は、本発明による送達または投与において特に好ましい経路である。粘膜免疫を変調する投与経路は、ウィルス感染およびいくつかのアレルギー性疾患の治療において有益である。そのような経路には、気管支経路、皮膚内経路、筋肉内経路、鼻腔内経路、他の吸入、直腸経路、皮下経路、局所経路、経皮経路、膣経路、および、尿道経路が含まれる。
【０１６７】
以下の実施例によって、本発明をより具体的に説明する。しかし、本発明は、任意の様式においてこれらの実施例に限定されるわけではない。
【０１６８】
〔実施例〕
〈実施例１〉
以下の実施例では、サルナシから調製された少なくとも２つの特定の抽出物（ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅと示される）に、ＩｇＥの産生を抑制する活性と、選択的なＴｈ１およびＴｈ２サイトカインを調節する能力とが含まれていることが実証された。
【０１６９】
［材料および方法］
‐マウス‐
ＢＡＬＢ／ｃの雌マウス（６週齢）を、ダエハン・バイオリンク有限責任会社（Daehan Biolink, Co. Ltd.（韓国））から取得し、空調が管理されている無菌室で維持し、少なくとも１週間順応させた。以下に記載の実験手法の全ては、ソウル国立大学における動物実験センターの動物の保護および使用のガイドライン制度（institutional animal care and use guidelines）にしたがって実施された。
【０１７０】
‐サルナシに由来するの様々な抽出物の調製‐
本研究に用いられるハーディキウィフルーツを、この果実の栽培を専門的に扱う農場から購入した（ハーストベリー有限責任会社（Hurstberry Co. Ltd.）、オレゴン州、米国）。また、このハーディキウィフルーツの同定は、エラ・イ・コルバシア（Ella I. Kolbasina）博士によって丁寧に確認された（バビロフ植物栽培研究所モスクワ支店（The Moscow Branch of Vavilov Plant Cultivation Research Institute）、ロシア）。乾燥果実（１０ｇ）は蒸留水（ＤＷ）中で加熱によって３回抽出された。その後、その抽出物を濃縮し、凍結乾燥し、そして蒸留水に溶解して、１００ｍｇ／ｍｌのＰＧ１０２Ｔが得られた。蒸留水に溶解しているＰＧ１０２Ｔは、クロロホルム、酢酸エチル、およびｎ‐ブタノールを用いて連続的に抽出され、ＰＧ１０２Ｃ、ＰＧ１０２Ｅ、および、ＰＧ１０２Ｂがそれぞれ得られた。残っている水層をＰＧ１０２Ｗと名づけた。各溶媒可溶性画分および最終水性残渣をろ過し、濃縮し、凍結乾燥し、そして、１００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。この調製物の全てを、必要な時まで、−８０℃で保管した。
【０１７１】
‐Ｕ２６６Ｂ１細胞における生物検定‐
ＬＰＳ刺激ヒトＢリンパ芽球腫細胞（ＬＰＳに刺激されたヒトＢリンパ芽球腫細胞）（Ｕ２６６Ｂ１（ＡＴＣＣ、マナサス、バージニア州））におけるＩｇＥの抑制効果を、キムらによって記載されたものに少し変更を加えた方法によって測定した（Kim et al, Phytother Res 2001; 15:572-6）。培養上清におけるヒトＩｇＥのレベルは、ヒトＩｇＥエライサによって検出され（総ヒトＩｇＥ；ＡｌｅｒＣｈｅｋ、ポートランド、メイン州）、細胞の生存は、ＬＤＨ検出キットによって評価された（タカラ・バイオ、日本）。
【０１７２】
‐ＯＶＡ刺激脾細胞（ＯＶＡに刺激された脾細胞）における想起反応を介したサイトカイン産生に対するインビトロでのＰＧ１０２の効果‐
マウス（７週齢）を個々に免疫し、その後、０日目および１４日目のそれぞれにおいて、２．２５ｍｇの水酸化アルミニウム（ImjectAlum;Pierce、ロックフォード、イリノイ州）に乳化した２０μｇの卵白アルブミン（OVA; grade V；シグマ、セントルイス、ミズーリ州）を腹腔内（ｉ．ｐ．）に注入することによって追加免疫した。未感作（未処置）マウスは、薬剤をまったく受けなかった。２４日日目に、ＯＶＥ感作マウス（ＯＶＡに感作したマウス）および未感作のマウスを犠牲にした（ｎ＝５／群）。その後、各脾臓を単離して、シバタら（Yoshimi et al., J Immunol 2000;164;1314-21）によって記載されているような想起反応を用いた脾細胞におけるサイトカインの産生を研究した。すなわち、単離された脾細胞を２４ウェル培養プレートに播種して、最終濃度を５×１０６細胞／ｍｌ／ウェルに調整した。脾細胞を、（ｉ）ＰＧ１０２Ｔ（１ｍｇ／ｍｌ）、（ｉｉ）ＰＧ１０２Ｃ（０．１ｍｇ／ｍｌ）、（ｉｉｉｉ）ＰＧ１０２Ｅ（０．１ｍｇ／ｍｌ）、（ｉｖ）ＰＧ１０２Ｂ（０．１ｍｇ／ｍｌ）、（ｖ）ＰＧ１０２Ｗ（０．１ｍｇ／ｍｌ）、または、（ｖｉ）対照として培養液の存在下において１００μｇ／ｍｌのＯＶＡと一緒に３日間インキュベートした。インキュベーションの後に、培養上清を回収して、エライサキット（Ｅｎｄｏｇｅｎ，ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を用いてサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１２、および、ＩＦＮ‐γ）のレベルを検出した。実質的に同じ手法を用いて、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの比活性を求めた。
【０１７３】
‐ＯＶＡ感作マウスにおけるサイトカインおよび免疫グロブリンの測定‐
マウスを免疫し、上記のようにして追加免疫した。ＯＶＡによって誘導されるアレルギー反応におけるＰＧ１０２調製物のインビボでの効果を評価するために、ＯＶＡ感作マウス（ｎ＝１０／群）は、デキサメタゾン（ＤＥＸ，０．５ｍｇ／ｋｇ／日）もしくは対照として蒸留水（１００μＬ／マウス／日）を有するＰＧ１０２Ｔ（１５ｍｇ／ｋｇ／日）またはＰＧ１０２Ｅ（１．５ｍｇ／ｋｇ／日）を用いて、１４日目から２４日目まで１日回、経口で処置された。未処置マウスは、蒸留水を用いて経口で処置された。２１日目に、個々のマウスから眼出血によって、血液を採取し、その血液から単離された血しょうを、使用するまで−８０℃で保管した。総ＩｇＥのレベルは、マウスＩｇＥ検出キット（シバヤギ、群馬、日本）を用いて測定された。総ＩｇＧサブタイプおよびＯＶＡ特異的Ｉｇアイソタイプのレベルは、サンドウィッチエライサ法によって測定された（Hirano et al., J Immunol Methods 1989; 119:145-50）。サイトカインの産生を測定するために、脾細胞を２４日目の動物から調製して、培養液（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ‐１６４０）に再懸濁し、２４ウェルプレートに５×１０６細胞／ｍｌ／ウェルで播種し、そして、１００μｇ／ｍｌのＯＶＡだけで３日間インキュベートした。未感作マウスから単離された脾細胞を、ＯＶＡの非存在下で培養した。上清におけるＩＬ‐４，ＩＬ‐５，ＩＬ‐１０，ＩＬ‐１２，ＩＬ‐１３、および、ＩＦＮ‐γのレベルをＥＬＩＳＡ（Endogen and R&D Systems，ミネアポリス、ミネソタ州）によって検出した。
【０１７４】
‐免疫染色分析‐
脾細胞を、細胞内タンパク質輸送阻害剤であるゴルジストップ（ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，サンディエゴ、カリフォルニア州））に４時間曝して、ＩＬ‐４産生細胞またはＩＦＮ‐γ産生細胞を検出するために調製した。キョコら（Kyoko et al., J Derm Science 2002;29: 19-25）に記載されているようにして、細胞を固定して、透過化処置をして、そして、ＰＥもしくはＦＩＴＣが接合した、マウスＣＤ４、ＩＬ‐４またはＩＮＦ‐γに特異的な抗体と一緒にインキュベートした。ＩｇＥの産生を分析するために、ＰＥが接合した抗マウスＣＤ１９（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）、その次に、ＦＩＴＣが接合した抗マウスＩｇＥ（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）と一緒に、細胞をインキュベートした。その後、ＦＡＣＳｏｒｔ分析器およびセル・クエスト・ソフトウェア（Becton Dickinson，サンノゼ、カリフォルニア州）を用いて脾細胞のゲートリンパ球（gated lymphocyte）を分析することによって細胞を調べた。共焦点顕微鏡分析をするために、センパーら（Semper et al., J Allergy CHn Immunol 2003;l 12:141-9）に記載されているように、脾細胞をカバーガラス上でＯＶＡと一緒に２日間培養して、透過化処置をした。そして、ＦＩＴＣが接合した抗マウスＩｇＥおよびＰＥが接合した抗マウスＣＤ１９を用いて染色し、最終的に、MRC-1024レーザー走査共焦点画像システム（Laser Scanning Confocal Image System（バイオラッドラボラトリーズ株式会社（Bio-Rad Laboratories Inc．）、ハーキュリーズ、カリフォルニア州））によって観察した。
【０１７５】
‐ウェスタンブロッティング‐
個々の群のマウスに由来する脾細胞を、ＯＶＡと一緒に２日間培養し、回収し（１０７細胞／群）、それから、タンパク質試料を調製するために溶解した。イムノブロッティングを、マウスＧＡＴＡ‐３、Ｔ‐ｂｅｔ、ＮＦＡＴｃ２（サンタクルーズ・バイオテクノロジー（Santa Cruz Biotechnology），サンタクルーズ、カリフォルニア州）、または、ローディングコントロールとしてβ‐アクチン（シグマ）に特異的な抗体を用いて実施した。
【０１７６】
‐ＲＮＡの調製および定量的リアルタイムＰＣＲ‐
トリゾール試薬（TRIzol Reagent（ギブコBRL（GIBCOBRL）、カールズバッド、カリフォルニア州））を用いて、ＯＶＡと一緒に２日間培養した脾細胞から、総ＲＮＡを単離した。単離された総ＲＮＡをもちいてＡＭＶ  ＲＴシステム（the AMV RT System（Roche，マンハイム、ドイツ）によって逆転写（ＲＴ）‐ＰＣＲを行い、その次に、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００配列検出システム（the ABI PRISM 7700 Sequence Detection System （アプライド・バイオシステム（Applied Biosystems），フォスターシティー、カリフォルニア州）による定量的リアルタイムＰＣＲを行った。マウス遺伝子用のフォワードプライマーおよびリバースプライマーの一式をプライマー・エクスプレス・ソフトウェア（Primer Express Software （Applied Biosystems））を用いて設計した。ヌクレオチド配列を以下に示す：
ＧＡＴＡ３
フォワード  ５’‐ＣＣＴＣＧＧＣＣＡＴＴＣＧＴＡＣＡＴＧ‐３’（配列番号１）
リバース  ５’‐ＣＧＴＡＧＴＡＧＧＡＣＧＧＧＡＣＧＴＧＧ‐３’（配列番号２）
Ｔ‐ｂｅｔ
フォワード  ５’‐ＴＧＴＧＧＡＴＧＴＧＧＴＣＴＴＧＧＴＧＧ‐３’（配列番号３）
リバース  ５’‐ＡＴＡＡＧＣＧＧＴＴＣＣＣＴＧＧＣＡＴ‐３’（配列番号４）
ＮＦＡＴｃ２
フォワード  ５’‐ＧＣＡＣＡＴＡＡＧＧＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＡ‐３’（配列番号５）
リバース  ５’‐ＴＣＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＴＧＧＣＡＡ‐３’（配列番号６）
ＧＡＰＤＨ
フォワード  ５’‐ＴＧＣＡＧＴＧＧＣＡＡＡＧＴＧＧＡＧＡＴＴ‐３’（配列番号７）
リバース  ５’‐ＴＴＧＡＡＴＴＴＧＣＣＧＴＧＡＧＴＧＧＡ‐３’（配列番号８）
マウスの各群の間における細胞遺伝子のｍＲＮＡレベルの違いをΔＣｔ値の換算から計算した。
【０１７７】
‐統計‐
データは平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表されて、平均値の差分は対応のないステゥーデントのｔテストによって分析された。側Ｐ値として計算された、０．０５または０．０１よりも小さいＰ値は、統計的に有意であると考えられる。
【０１７８】
［結果］
‐ＬＰＳ刺激ヒトＵ２６６Ｂ１  Ｂ細胞株、および、ＯＶＡ刺激マウス脾細胞における、サルナシに由来する様々な調製物の効果‐
本発明の発明者らによって、サルナシから総水溶性抽出部（ＰＧ１０２Ｔ）が最初に調製され、それが、クロロホルム（ＰＧ１０２Ｃ）、酢酸エチル（ＰＧ１０２Ｅ）、ｎ‐ブタノール（ＰＧ１０２Ｂ）および水（ＰＧ１０２Ｗ）を用いて抽出されて、異なる極性を有する４つの画分が得られた。ＩｇＥ産生に対するＰＧ１０２Ｔおよびこれらの４つの画分の効果を、ヒトＢリンパ芽球腫Ｕ２６６Ｂ１細胞を用いて調べた（図１）。ＰＧ１０２Ｗを除く４つの調製物は、ＬＰＳ刺激Ｕ２６６１Ｂ１細胞からのＩｇＥ産生を抑制することを発見した。ＰＧ１０２Ｅは、２５μｇ／ｍｌにおいて５０％の抑制効果を示す（ＩＣ５０）、最高の抑制活性を表した。また、ＰＧ１０２Ｔも活性であり、そのＩＣ５０値は、１２６μｇ／ｍｌであった。本分析において試された全ての濃度において、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅのどちらも、Ｕ２６６Ｂ１細胞に対する細胞毒性効果をまったく示さなかった。
【０１７９】
さらに、本発明の発明者らによって、Ｔｈ１およびＴｈ２経路に関係するサイトカインの産生に対するサルナシに由来する様々な調製物の効果が、想起反応モデルを用いて、調べられた。マウスは、０日目にＯＶＡを用いて免疫され、１４日目に追加免疫された。１０日後、マウスは犠牲になり、脾臓が摘出され脾細胞が単離された。ＯＶＡ感作マウスに由来する脾細胞は、ＯＶＡを用いて刺激されて、５つのＰＧ１０２の調製物の存在下において３日間培養された。表Ｉに示されるように、細胞がＯＶＡの存在下において成長したとき、ＩＦＮ‐γ、ＩＬ‐４、および、ＩＬ‐５のレベルは、百ピコグラムまたはナノグラムに増加した。ＩＬ‐１２の場合、バックグラウンドレベルは高かったが、ＯＶＡの刺激によって、そのレベルが、約３分の１の４１５±４８ｐｇ／ｍｌまで減少した。ＰＧ１０２Ｔを用いた処置では、ＩＬ‐１２のレベルが約１５０％増加するという結果になった。ＩＮＦ‐γは異なる挙動を示した。未処置の動物に由来する脾細胞から製造されるＩＦＮ‐γのレベルは検出できながったが、ＯＶＡ刺激脾細胞から分泌されるＩＦＮ‐γのレベルは、約２．５ｎｇ／ｍｌであった。ＰＧ１０２Ｔを用いる処置によって、ＩＦＮ‐γのレベルは４０％だけ減少した。ＯＶＡ刺激脾細胞が、ＰＧ１０２Ｔの存在下において成長したとき、ＩＬ‐４およびＩＬ‐５のレベルはそれぞれ、６２％および３９％だけ減少した。
【０１８０】
【表１】
2008531584.tif 000003
【０１８１】
また、上記実験において最も高いＩｇＥ産生の抑制効果を示したＰＧ１０２Ｅは、ＩＬ‐２０のレベルを２２０％だけ誘導する一方で、ＩＬ‐４およびＩＬ‐５のレベルを７８％および５９％だけ減少させた。対照的に、ＰＧ１０２Ｃは、本研究において測定されたサイトカインの全てのレベルを減少させたが、これは、ＰＧ１０２Ｃの脾細胞に対する細胞毒性効果によるものである。ＰＧ１０２ＢおよびＰＧ１０２Ｗの両方は、ＩＬ‐１２のレベルを増加させて、ＩＦＮ‐γ，ＩＬ‐４およびＩＬ‐５のレベルを減少させたが、統計的に有意なものではなかった。総合すれば、これらの結果は、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２ＥにＩｇＥの産生を抑制して、選択的なＴｈ１およびＴｈ２サイトカインの発現を制御する化合物（１つまたは複数）が含まれていることが示された。上記データに基づいて、本発明の本発明者らは、さらなるインビボでの研究のために、２つの調製物（すなわち、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅ）を用いることを選択した。
【０１８２】
‐ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの比活性の測定‐
免疫システムにおけるＰＧｌ０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの多様な活性に基づけば、植物供給源に由来するＰＧｌ０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅに、１以上の活性化合物が含まれていると考えられる。したがって、更なる実験を定量的に実施するために、本発明の発明者らによって、上述したようなＯＶＡ刺激脾細胞のＩＬ‐４の産生に対するＰＧ１０２の抑制活性に基づく、信頼性のある生物検定が開発された。細胞がＯＶＡを用いて刺激されたときに、ＩＬ‐４のレベルは、不検出のレベルから数百ピコグラムまで誘導された。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの存在下では、ＩＬ‐４の製造は用量依存的な様式で抑制された（図２）。本分析において試された全ての濃度において、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅのどちらも、細胞毒性効果をまったく示さなかった。５０％の抑制活性を有するＰＧ１０２Ｔの濃度（ＩＣ５０）は８０６．９μｇ／ｍｌであり、５０％の抑制活性を有するＰＧ１０２Ｅの濃度（ＩＣ５０）は９１．８μｇ／ｍｌであった。各調製物のＩＣ５０は、１つの活性ユニットとして定義され、総ユニットが得られた。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの比活性が、総ユニットおよび収率を用いて計算されたとき、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅに含まれる比活性は、それぞれ１．２ユニット／ｍｇおよび１０．９ユニット／ｍｇであった。この方法は、サルナシに由来する実験試料の質を制御するために用いられた。
【０１８３】
‐ＯＶＡ感作マウスモデルにおけるＴｈ１およびＴｈ２サイトカインの製造に対するＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの効果‐
動物モデルにおける上記インビトロのデータを確かめるために、ＯＶＡ感作マウスモデルを用いたＴｈ１およびＴｈ２経路の変調に関係する、様々なサイトカインの産生が調べられた。マウスは、０日目にＯＶＡを用いて免疫され、１４日目に追加免疫された。追加免疫の後、動物は、１４日から２４日まで毎日、ＰＧｌ０２Ｔ（１５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ＝１８ユニット／ｋｇ／日）、または、ＰＧｌ０２Ｅ（１．５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ＝１６．４ユニット／ｋｇ／日）、および、対照としてＤＥＸ（０．５ｍｇ／ｋｇ／日）、または、蒸留水を経口で投与された。ＯＶＡを用いて処置されていない未処置マウスは、蒸留水を経口で投与された。これらの実験に用いられたＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの濃度は、予め実施された用量反応実験の通りの最大活性を有する最小用量である。２４日目にマウスは犠牲になり、脾臓単離されて脾細胞が調製された。各群のマウスに由来する脾細胞は、ＯＶＡの存在下で３日間インキュベートされ、培養上清が回収されてサイトカインのレベルが測定された（表ＩＩ）。未処置の脾細胞と比較すると、ＩＬ‐１２のレベルは、蒸留水によって処置されたマウスにおいて減少していた。しかしながら、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが経口で投与されることによって、ＩＬ‐１２のレベルがそれぞれ１．７倍および２．６倍だけ増加していた。ＩＬ‐１２と異なり、ＩＦＮ‐γのレベルはＯＶＡによる刺激によって増強しており、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅによって、ＩＦＮ‐γのレベルもまた増加していた。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅとは反対に、ＤＥＸによってＩＬ‐１２およびＩＦＮ‐γの両方のレベルが抑制された。
【０１８４】
【表２】
2008531584.tif 000004
【０１８５】
本研究において試された全てのＴｈ２サイトカインのレベルが、ＯＶＡ刺激脾細胞において高く増加していた。しかしながら、ＰＧ１０２Ｔを用いて処置することによって、ＯＶＡによって仲介されるＩＬ‐４、ＩＬ‐５およびＩＬ‐１０の過剰産生が、それぞれ４４％、３２％、および、４４％だけ抑制された。また、ＰＧ１０２Ｅを用いて処置することによっても、これらの３つのサイトカインのレベルが、それぞれ６４％、６９％、および、５１％だけ抑制された。ＩＬ‐１３はＰＧ１０２またはＤＥＸのどちらかによって減少したが、統計的に有意なものではなかった。総合すると、これらの結果は、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの両方が、選択的Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカインの産生を制御することができることを示していた。無差別に全てのサイトカインを実質的に抑制するＤＥＸとは異なり、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカインの産生を差別的に変調することができる独特の生物活性を有していると考えられる。
【０１８６】
‐免疫グロブリンのアイソタイプの血しょうレベルに対するＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの効果‐
上記結果は、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが、Ｔｈ２に仲介されるＩｇＥの過剰製造を、インビボにおいて下方調節することを示している。したがって、ＯＶＡ感作マウスにＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅを経口で処置することによって、ＩｇＥおよび他の免疫グロブリンの血しょうレベルが制御されるかどうか調べた。上記のような同じ種類の実験を実施している間の２１日目では、未処置マウスは約１４０ｎｇ／ｍｌの総ＩｇＥを産生したが、ＯＶＡを用いた感作によって、総ＩｇＥのレベルは約２０倍だけ増加した。動物がＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅを用いて処置されたとき、総ＩｇＥの血しょうレベルは、約２分の１だけ減少した。総ＩｇＥの血しょうレベルを下方調節するためのＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの能力は、ＤＥＸのそれと同程度であった。様々なＩｇＧのサブタイプのレベルが測定されたとき、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの両方の投与によって、Ｔｈ２により仲介されるＩｇＧ１のレベルは減少したが、Ｔｈ１により仲介されるＩｇＧ２ａのレベルは、統計的に有意な程度に高度に上昇した。ＩｇＧ２ｂのレベルは、全ての状況においてあまり影響されなかった（表ＩＩＩＡ）。
【０１８７】
ＯＶＡに特異的なＩｇＥおよびＩｇＧのサブタイプのレベルが測定されたとき、実質的に同一の結果が得られた（表ＩＩＩＢ）。ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの経口での処置によって、ＯＶＡ特異的なＩｇＥおよびＩｇＧ１のレベルは減少し、一方、ＯＶＡ特異的なＩｇＧ２ａのレベルは２倍よりも多い分だけ増加した。様々なＴｈ１およびＴｈ２サイトカインのデータに加えて、これらの結果は、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅに、最終的にＩｇＧ２ａのレベルを増加させてＩｇＥおよびＩｇＧ１のレベルを減少させる結果になるように、Ｔｈ１およびＴｈ２の均衡を調節する化合物が含まれていることを示していた。
【０１８８】
【表３】
2008531584.tif 000005
【０１８９】
脾細胞のＴ細胞およびＢ細胞の母集団に対するＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの効果
上記ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの活性の細胞学的根拠を理解するために、本発明の発明者らは、ＰＧ１０２が、脾細胞に存在するＴ細胞およびＢ細胞の個体群に対してどのように影響するのかを調べた。脾細胞が、ＯＶＡ感作マウスおよび未処置マウスから単離され、ＯＶＡの存在下で２日間成長した。その後、ＦＡＣＳおよび共焦点顕微鏡分析が行われた。図３Ａに示されるように、ＯＶＡ刺激によって、ＣＤ４＋ＩＬ‐４＋の細胞の割合が、４．７％から９．３％まで増加した。ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの投与によって、数が３０％よりも多い分だけ減少した。対照的に、動物をＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを用いて処置したとき、ＣＤ４＋ＩＦＮ‐γ＋の細胞は、７．２％から９．２％もしくは９．６％まで微かに増加したが、これは、統計的に有意なものではなかった。ＤＥＸが投与された動物のどちらの細胞の種類の数は、ほとんど変化しなかった。これらの結果は、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、ＩＬ‐４を産生するＴ細胞およびＩＦＮ‐γを産生するＴ細胞の割合を調節することが示された。
【０１９０】
次に、本発明の発明者らは、ＩｇＥ産生Ｂ細胞に対するＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの効果を分析した。蒸留水を用いる処置と比較して、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの経口投与によって、ＣＤ１９＋ＩｇＥ＋のＢ細胞の数が約４０％減少するという結果になった。ＤＥＸによって、そのようなＢ細胞の数が６０％よりも少なくなる分だけ減少した（図３Ｂ）。共焦点顕微鏡分析によって、任意の所定のＢ細胞におけるＩｇＥの産生レベルの著しい減少が明らかになった。Ｂ細胞におけるＩｇＥのシグナル強度は、ＯＶＡ感作マウスにおいて劇的に増加していたが、動物をＰＧ１０２Ｔを用いて処置したとき、そのシグナル強度は非常に減少した。蛍光強度レベルがさらに減少しているので、ＰＧ１０２Ｅの効果は、ＰＧ１０２Ｔの効果よりもさらに強力であると考えられる。これらの結果から、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、ＩｇＥ産生Ｂ細胞の数を減少させるだけでなく、所定のＢ細胞におけるＩｇＥの産生を下方調節するということが示された。
【０１９１】
‐細胞転写因子に対するＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの効果‐
ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの生物活性の基礎となる分子機構を理解するために、これらの２つの調製物が、Ｔｈ１およびＴｈ２経路に関係する細胞転写因子に対して、何らかの効果を有しているのかどうか調査した。このことは、ＰＧ１０２が転写因子（１または複数）を直接的にあるいは間接的に調節していれば、そのような複数のサイトカインおよびＩｇＥに対するＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの効果の説明が、容易につくからである。ＧＡＴＡ‐３、Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２を含む転写因子が、Ｔｈ１／Ｔｈ２反応の均衡に重要な役割を果たしていることがよく知られている（Lee et al., J Exp Med 2000;192:105-15; Ting et al, Nature 1996;384:474-8; Lighvani et al., Proc Natl Acad Sci USA 2001;98:15137-42; Szabo et al., Cell 2000; 100:655-69; Kiani et al., Blood 2001 ;98: 1480-8.）。ＯＶＡ感作マウスから単離された脾細胞が、上記の通り２日間培養され、イムノブロッティング分析のために調製された。ＧＡＴＡ‐３のタンパク質レベルは、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの両方によって、非常に低下したが、一方、Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２のタンパク質レベルは、上方調節された（図４Ａ）。以前に報告されているように、ＤＥＸによって調べられた３つ全ての転写因子は抑制された（Adcock, Pulm Pharmacol Ther 2001;14:211-9）。
【０１９２】
この調節が起こっているレベルを検証するために、それぞれの転写因子のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲ法を用いて決定した（図４Ｂ）。ＰＧ１０２Ｔの処置によってＧＡＴＡ‐３のｍＲＮＡレベルは、約３倍だけ減少した、一方、Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２のｍＲＮＡレベルは、それぞれ約１４倍および２倍だけ増加した。ＩｇＥ抑制効果の観点からより高い生物活性を示したＰＧ１０２Ｅによって変化した、ＧＡＴＡ３、Ｔ‐ｂｅｔ、およびＮＦＡＴｃ２のレベルは、ＰＧ１０２Ｔよりも小さかったことは興味深いことである。ＤＥＸにより、ＧＡＴＡ３およびＮＦＡＴｃ２の両方のレベルは減少し、Ｔ‐ｂｅｔのレベルは微かに上昇した。これらの結果から、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが、ＧＡＴＡ‐３およびＴ‐ｂｅｔなどの転写因子のレベルをＲＮＡレベルで調節することによって、Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカインの産生が制御されるということが示された。
【０１９３】
［考察］
本研究において観察されたＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの生物活性は、サルナシに由来する抽出物が、強力且つ独特な抗アレルギー剤の優れた候補であることを強く示している。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの両方は、最終的に血しょうのＩｇＥレベルが減少するという結果になるように、ＩｇＥ産生Ｂ細胞の数、および、Ｂ細胞において産生されるＩｇＥの量を減少させる。ＰＧ１０２は、選択的なＴｈ２サイトカインのレベルの減少と、Ｔｈ１サイトカインのレベルの増加とを介して、Ｔｈ１およびＴｈ２の均衡を変調することによって、そのような生物活性を有していると考えられる。
【０１９４】
細胞転写因子に対するＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの効果は、２つの調製物が分子レベルでどのように作用するかを説明すると考えられる。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの両方とも、ＧＡＴＡ‐３のレベルを減少させ、Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２ののレベルを増加させた。ＧＡＴＡ‐３は、ＩＬ‐５のプロモーターおよびＩＬ‐４のエンハンサー要素を強くトランス活性化することが知られている（Lee et al., J Exp Med 2000;192:105-15; Ting et al., Nature 1996;384:474-8）。Ｔ‐ｂｅｔは、Ｔｈ１細胞においてＩＮＦ‐γの合成を誘導することによるＴｈ１細胞の傾倒に関連している（Lighvani et al., Proc Natl Acad Sci USA 2001;98:15137-42; Szabo et al., Cell 2000;100:655-69）。最近の研究では、Ｔ‐ｂｅｔがＢ細胞におけるＩｇＧ２ａのアイソタイプ転換およびＩＦＮ‐γ産生を調節していることも報告された（Gerth et al., hit Immunol 2003;15:937-44）。本発明者らのデータは、それぞれの転写因子のこれらの公知の機能、すなわち、ＧＡＴＡ‐３依存的なＩＬ‐４およびＩＬ‐５の発現の下方調節、ならびに、脾細胞におけるＴ‐ｂｅｔ依存的なＩＦＮ‐γおよびＩｇＧ２ａの産生と一致する。Ｔ‐ｂｅｔおよびＧＡＴＡ‐３とは異なり、ＮＦＡＴｃ２は、非選択的に発現される抗原誘導性転写因子である。このタンパク質は、刺激されたＴｈ細胞においてＩＬ‐４のエンハンサーおよびＩＦＮ‐γのプロモーターに結合するが、ＮＦＡＴｃ２は、未処置のＴ細胞を効果Ｔｈ１細胞に至らせることにおいて、より重要な役割を担っていると考えられている。確かに、ＮＦＡＴｃ２−／−マウスに由来するＴ細胞から分泌されるＩＬ‐４のレベルは、野生型Ｔ細胞のそれよりも、より高い（Kiani et al., Blood 2001;98: 1480-8; Erb et al., Infect Immun. 2003;71(l l):6641-7）。本研究によって、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２ＥによりＮＦＡＴｃ２の発現レベルが増加することが示された。
【０１９５】
ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅが、Ｔｈ１反応に有利に働き、ＩｇＥの生合成を抑制するという実際の分子機構は、依然として調査中である。１つの可能性は、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅが、ＩＬ‐１２を含む可溶性因子と、Ｂ７‐１（Ｔｈ１）およびＢ７‐２（Ｔｈ２）などの共刺激分子との分泌を介したＴｈ細胞の分化において重要な役割を担っている、抗原提示細胞に作用することである（Kuchroo et al., Cell 1995;80:707-18）。もう１つ別の可能性は、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅが、Ｔｈ前駆細胞の分化過程、もしくは、ＩｇＥ産生Ｂ細胞の調節に直接作用することである。
【０１９６】
Ｔｈ１およびＴｈ２システムに対するＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの調節効果は、複数の生物活性化合物によるものであると考えられる。信頼性のある様式で異なるＰＧ１０２の調製物を得るために、本発明の発明者らは、ＯＶＡ刺激脾細胞での、ＩＬ‐４（ＩｇＥへ転換するＩｇアイソタイプの主な誘導因子）の産生に対する、ＰＧ１０２の調製物の効果に基づく生物検定システムを考案した。この検定の感度と再現性とは、（ｉ）ＰＧ１０２の比活性を計算すること、ならびに、（ｉｉ）この検定を用いて、サルナシの収穫時期および地理的位置などの、ＰＧ１０２の生物活性に影響を与える様々な因子を研究することに十分である。このＩＬ‐４に基づく検定を、活性化合物（１または複数）の精製、および、多様な実験に用いられるＰＧ１０２薬剤の品質管理にこれから利用することができる。
【０１９７】
本発明の発明者らの毒性データは、ＰＧ１０２が安全であることを示している。反復投与毒性試験において、４‐１２週間のＰＧ１０２Ｔの経口投与（５００，１０００，２０００ｍｇ／ｋｇ／日）では、ラットに副作用は起こらなかった。これらの結果は、ＤＥＸが投与された（０．５ｍｇ／ｋｇ／日）マウスから得られたデータと全く対照的であり、このマウスでは、体重と脾臓の質量との激しい減少が示された（データは示されない）。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの様々な生物活性を表すこれらのデータは、サルナシの抽出物が、様々なアレルギー性疾患の治療に用いられる可能性があり、副作用の危険性が最小限である、安全な天然調製物であることを示している。
【０１９８】
〈実施例２〉
下記の実験によって、サルナシから調製された少なくとも２つの特定の抽出物（ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅと示される）に、アトピー性皮膚炎に対する治療効果があることが実証される。
【０１９９】
ＮＣ／Ｎｇａマウスは、パンダマウス（ニシキネズミ（Japanese fancy mice））に基づいて１９５７に近交系として確立された。特定病原体未感染（ＳＰＦ）条件で維持されたとき、マウスは正常であり健康である。しかしながら、従来の環境に置いたときに、臨床的徴候が８週齢から開始される引っかき癖から始まり、その後、湿疹性の病気の徴候が見られる。早期に進行した湿疹は、一般的に、顔、耳、頸部、および、背中の領域に位置する。罹患マウスは、出血、表在性びらん、深部表皮剥離（deep excoriation）、剥がれ（scaling）、皮膚の乾燥、発育遅延を含む様々な臨床的症状を示す（Hiroshi et al., Int Immunol 1997;9(3):461-466）。皮膚病変では、多くのＣＤ＋４Ｔ細胞および好酸球の浸潤、並びに、脱顆粒化した肥満細胞数の増加が、観察される。さらに、ＩｇＥの血しょうレベルが、８週齢から非常に増加しており、これは、皮膚病変の出現と同時である。皮膚病変に浸潤した細胞は、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、およびＴＡＲＣを発現しているが、ＩＦＮ‐γをほとんどか、もしくは、全く発現していない。これにより、Ｔｈ２優性の免疫反応の徴候が引き起こされる（Masayuki et al., Int Ach Allergy Immunol 2003;132:355-63; Christian et al., MoI Med Today 2000;5:209-10）。これらの発見は、アトピー性皮膚炎の患者に固有の様々な特徴に似ている。これによれば、（ｉ）ＮＣ／Ｎｇａマウスは、ヒトアトピー性皮膚炎に対する優れた動物モデルであることと、（ｉｉ）Ｔｈ１／Ｔｈ２の変調ならびにＩｇＥの生合成の抑制が、ヒトおよびマウスにおけるアトピー性皮膚炎の臨床的症状を根本的に改善することができる治療方針になることとが、示唆される。
【０２００】
［材料および方法］
‐動物‐
特定病原体未感染（ＳＰＦ）の雌ＮＣ／Ｎｇａ（ＮＣ）マウスを、ＳＬＣ（東京、日本）から購入した。５‐６週齢のマウスをＳＰＦ環境において維持し（ＳＰＦ  ＮＣマウス）、使用する前にオートクレーブした食物および水を少なくとも１週間与えた。７週齢のＳＰＦ  ＮＣマウスを、非空気制御性の従来の部屋に移動させた（従来のＮＣマウス）。動物実験は、ソウル国立大学における大学の動物保護および使用の委員会のガイドライン（University Animal Care and Use Committee guidelines at Seoul National University）に記載の基準に従った。
【０２０１】
‐ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの経口投与‐
本研究に用いられたＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、上述のようにしてサルナシから調製された（Park et al., J. Allergy Clin. Immunol., 116:1151-1157, 2005および、実施例１）。従来のＮＣマウスは、３つの群に分割され（ｎ＝６‐８／群）、ＰＧ１０２Ｔ（５０ｍｇ／ｋｇ／日），ＰＧ１０２Ｅ（５ｍｇ／ｋｇ／日），ＤＥＸ（２．５ｍｇ／ｋｇ／日）または蒸留水（１００μＬ／マウス／日）を７週から１４週まで１日に１回、経口で処置された。陰性対照として、ＳＰＦ  ＮＣマウスに蒸留水が与えられた。
【０２０２】
ＮＣ／Ｎｇａマウスの皮膚炎の進行に対するＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの効果
各グループのマウスにおける皮膚炎の重傷度を、７週齢から１４週齢まで１週間に一回、治療割当を知らない２人によって、レオンらに記載された判断基準（Leung et al., J Allergy Clin Immunol 1990;85:927-33）を少し変更した判断基準に従って、評価した。従来のＮＣマウスに見られる臨床的徴候および症状は、掻痒、紅班、および、出血に始まり、それに続いて、浮腫、表在性びらん、深皮膚剥離、剥がれ、および皮膚の乾燥、並びに発育遅延であった。皮膚の病気が採点される前に、マウス１匹当たり２０分間、引っかき癖が観察された。また、掻痒指数は、２０分間における総引っかき時間を測定することによって評価された。アトピー性皮膚炎痒の病変における総臨床的重傷度点数は、５つの徴候および症状（掻痒、紅班／出血、浮腫、表皮剥離／びらん、および、剥がれ／乾燥）を０（なし）、１（軽症）、２（中等症）、３（重症）として格付けされた個々の点数の合計として定義された。
【０２０３】
‐免疫グロブリン、サイトカイン、および、ケモカインの血しょうレベルの測定‐
同時に誘導されたアレルギー反応は、ＩｇＥおよびＩｇＧ２ａを含む免疫グロブリン、サイトカイン、ならびに、ケイモカインの血しょうレベルを測定することによって、観測された。血液は、ガラスキャピラリーを用いて７、１０、１２、および１４週齢のマウスのレトロ・オービタルプレックス（retro-orbital plexus）から、回収された。分離された血しょう試料は、使用されるまで−８０℃で保管された。ＩｇＥのレベルは、マウスＩｇＥ検出キット（シバヤギ、群馬、日本）を用いて測定され、ＩｇＧ２ａのレベルは、ヒラノらに記載されたようなサンドウィッチエライサ法によって測定された（Hirano et al., J Immunol Methods 1989; 119:145-50）。ＩｇＥの検出限界は、１ｎｇ／ｍｇであった。また、マウスのＩＬ‐４、ＩＬ‐１２、エオタキシン、および、ＴＡＲＣの血しょうレベルは、製造業者の取扱説明書に従って、エライサキットによって測定された（Ｅｎｄｏｇｅｎ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州、および、R&D Systems，ミネアポリス、ミネソタ州）。
【０２０４】
‐ＮＣ／Ｎｇａマウスに由来する脾細胞によるＴｈ１／Ｔｈ２サイトカインの産生‐
１４週齢において、ＰＧ１０２Ｔ、ＰＧ１０２Ｅ、ＤＥＸ、または、蒸留水を用いて経口処置された従来のＮＣマウス、および、ＳＰＦ  ＮＣマウスは断頭によって犠牲になった。脾細胞によるサイトカインの産生を研究するために、個々の群の脾臓が獲得された。脾臓から単離された脾細胞は、培養液（熱により非動化されたＦＢＳを１０％含むＲＰＭＩ‐１６４０）に再懸濁された。脾細胞の懸濁液は２４ウェル培養プレートに播種され、最終濃度が５×１０６細胞／ｍｌ／ウェルに調整された。それから、これらの細胞は、２μｇ／ｍｌのＣｏｎＡの存在下または非存在下において、３日間インキュベートされた。ＣｏｎＡの濃度は、予め行われた用量反応実験に基づいて最適化されており、本実験において使用された濃度では、細胞毒性はなかった。インキュベーション後、上清が回収されて、上述のようなエライサによってサイトカイン（ＩＬ‐４，ＩＬ‐５，ＩＬ‐１０，ＩＬ‐１２，ＩＬ‐１３、および、ＩＦＮ‐γ）のレベルが測定された。
【０２０５】
‐末梢血の総白血球および好酸球の分析‐
１４週齢において、個々の群のマウスから血液が回収された。ヘパリン化された血液の総白血球数および好酸球数が、セルディン血球計（Celldyn hemocytometer (Abbott；サンタクララ、カリフォルニア州)。
【０２０６】
アトピー性皮膚炎様皮膚病変の組織学的分析、ならびに、表皮および真皮の厚みの測定
組織学的な試験を実施するために、１４週齢の従来のＮＣマウスおよびＳＰＦ  ＮＣマウスの頭部、頸部、背側の皮膚から生体試料が少しだけ採取された。皮膚部分は、１０％リン酸緩衝ホルマリン（ｐＨ７．２）において固定され、パラフィンに包埋され、４μｍに切断されて、様々な炎症細胞を検出するためにＨ＆Ｅを用いて染色された。上皮組織とパニキュラス・カルモサス（panniculus carrnosus）との間の細胞は、４００×倍の顕微鏡化において観察された。顕微鏡視野が写真に撮られた後、表皮および真皮の両方の厚みが、表皮の角質層から真皮の基底膜まで距離として測定された。この距離は、５つの測定が平均される無作為な領域の３つの平均値として表された。
【０２０７】
‐皮膚生体試料におけるサイトカインおよびケモカインの発現の測定‐
顔に由来する皮膚生体試料におけるＩＬ‐４、ＩＬ‐５、エオタキシン、および、ＴＡＲＣのレベルが、エライサによって測定された。すなわち、顔の皮膚病変に由来する組織が摘出され、溶解緩衝液において均質化された。その後、凍結／融解手法が３回繰り返された。遠心分離後、総細胞タンパク質を含む上清が定量されて、サイトカインおよびケモカインのレベルを検出するために用いられた。結果は、組織溶解物から調製されたタンパク質の総量に正規化された。また、上記のような顔の皮膚組織から調製されたタンパク質溶解物試料は、マウスＧＡＴＡ‐３、ｐＳＴＡＴ６（サンタクルーズ・バイオテクノロジー（Santa Cruz Biotechnology）、サンタクルーズ、カリフォルニア州）、または、ローディングコントロールとしてβ‐アクチン（Ｓｉｇｍａ）に特異的な抗体を用いるウェスタンブロッティングに使用された。
【０２０８】
‐統計‐
データは平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表されて、平均値の差分は対応のないステゥーデントのｔテストによって分析された。片側Ｐ値として計算された、０．０５または０．０１よりも小さいＰ値は、統計的に有意であると考えられる。
【０２０９】
［結果］
‐ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの経口投与により、従来のＮＣマウスに自然発生する皮膚炎の進行が抑制される‐
アトピー性皮膚炎に対するＰＧ１０２の起こりうる効果を検査するために、本発明の発明者らは、ヒトアトピー性皮膚炎のモデルとしてＮＣマウスを用いた。このＮＣマウスでは、従来の条件下において加齢に伴ってアトピー性皮膚炎様の皮膚病変が示される。従来のＮＣマウスに、ＰＧ１０２Ｔ［５０ｍｇ（６０ユニット）／ｋｇ／日］、ＰＧｌ０２Ｅ［５ｍｇ（５４．５ユニット）／ｋｇ／日］、ＤＥＸ（２．５ｍｇ／ｋｇ／日）または蒸留水（１００μＬ／マウス／日）が、７週間毎日、経口投与され、アトピー性皮膚炎の進展が観察された。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの用量は、以前実施された実験（実施例１およびPark et al., J. Allergy Clin. Immunol., 116:1151-1157, 2005参照）に使用された、ＯＶＡ感作マウスモデルに治療効果を示した濃度に基づいていた。蒸留水を用いて処置された従来のＮＣマウスの皮膚炎重傷度点数の増加から、皮膚炎の進行が年齢依存的な様式で進展することが示された（図５Ａ）。しかしながら、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの経口投与によって、９週齢から皮膚炎重傷度点数が著しく減少した。皮膚炎の重傷度の改善は、引っかき傷の発生率の減少を伴った。ＰＧ１０２Ｔを用いる処置によって、９週齢から引っかきの時間が非常に短くなった。同様の結果が、ＰＧ１０２Ｅを用いて処置された動物において観察された。さらに、これらの成果は、マウスの全体的な視覚的臨床徴候の分析を介して行われた観察に一致していた（データは示されない）。また、ＤＥＸも皮膚炎重傷度および引っかき癖を減少させた。これらのデータは、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが、この動物モデルにおいて自然に誘導される皮膚炎を抑制することを示している。
【０２１０】
‐ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、ＩｇＥおよびＩｇＧ１の産生を減少させて、その一方で、血しょうのＩｇＧ２ａの産生を増加させる‐
ヒトのアトピー性皮膚炎に似た視覚的臨床徴候に加えて、従来のＮＣマウスは、皮膚炎の徴候の後に、血しょうのＩｇＥレベルが増加することも示す。したがって、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの経口投与によって、Ｔｈ２に仲介されるＩｇＥおよびＩｇＧ１、ならびにＴｈ１に仲介されるＩｇＧ２ａの血しょうレベルが制御されるかどうかを調べた。７週齢から、動物は、ＰＧ１０２Ｔ、ＰＧ１０２Ｅ、ＤＥＸ、または蒸留水を、１日１回経口で与えられた。７、１０、１２、および、１４週齢において血液試料が採取された。ＳＰＦ条件下において、ＮＣマウスは、約１５０ｎｇ／ｍｌの総ＩｇＥを通常は製造したが、動物を従来の条件下に置いたとき、ＩｇＥのレベルは、加齢とともに徐々に増加して、１４週齢では約１７μｇ／ｍｌであった。ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの投与によって、１０週齢からＩｇＥの血しょうレベルが、統計的に有意に減少し、実験の終わりにＩｇＥのレベルは５分の１になった。ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２ＥのＩｇＥを低下する効果は、陽性対照として用いられたＤＥＸにおけるその効果に匹敵した（図６Ａ）。１２週齢において、もう１つ別のＴｈ２に仲介されるＩｇクラスであるＩｇＧ１のレベルが測定された。従来の条件下において、蒸留水を用いて処置されたマウスから製造されるＩｇＧ１のレベルは、５ｍｇ／ｍｌよりも大きかった。しかしながら、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの投与により、製造されるＩｇＧ１のレベルはそれぞれ、７５％および９０％だけ減少した。Ｔｈ１に仲介されるＩｇクラスに属するＩｇＧ２ａのレベルは、ＰＧ１０２Ｔを用いて処置された従来のＮＣマウスにおいて、約１８０％だけ増加した。ＰＧ１０２Ｅも血しょうのＩｇＧ２ａのレベルを誘導した（図６Ｂ）。これらのデータから、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが、ＩｇＥおよびＩｇＧ１のレベルを下げて、ＩｇＧ２ａのレベルを上げることによって、皮膚炎の進行を抑制することが示された。
【０２１１】
‐ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅは、血しょうおよび脾細胞のＴｈ１／Ｔｈ２サイトカイン産生の均衡を調節すると考えられる‐
上記データから、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが、Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカインの発現に影響することを示された。分子レベルおよび細胞レベルでの、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの活性を理解するために、それぞれＴｈ２およびＴｈ１経路を代表する、ＩＬ‐４およびＩＬ‐１２のレベルを、１２週齢の血しょうから測定した。蒸留水を用いて処置された従来のＮＣマウスと比較すると、ＩＬ‐４のレベルは、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを用いて処置されたマウスにおいて、それぞれ６０％および７６％だけ低下した（表ＶＩＡ）。ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅ経口投与によって、ＩＬ‐１２のレベルが統計的に有意に上昇した。
【０２１２】
また、本発明の発明者らは、ＮＣマウスから単離された脾細胞のＴｈ１およびＴｈ２サイトカイン産生に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの効果を分析した。１４週齢のマウスを犠牲にして、脾臓が摘出されて、脾細胞が単離された。各群のマウスに由来する脾細胞は、Ｔ細胞特異的な細胞分裂誘起物質であるＣｏｎＡを用いて、３日間刺激され、様々なサイトカインのレベルが検出された。ＣｏｎＡの存在下で、Ｔｈ２サイトカインのレベルは、高度に上昇したが、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを用いて処置することによって、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、および、ＩＬ‐１０のレベルは２４％〜７８％だけ減少した（表ＩＶＢ）。また、ＤＥＸは、３つ全てのＴｈ２サイトカインのレベルを抑制したが、ＤＥＸによるＩＬ‐５の減少は統計的に有意ではなかった。ＩＬ‐１３のレベルは、ＰＧ１０２またはＤＥＸの影響を受けなかった。
【０２１３】
【表４】
2008531584.tif 000006
【０２１４】
従来のＮＣマウスに由来する細胞が、ＣｏｎＡの存在下で成長したとき、ＩＬ‐１２およびＩＦＮ‐γのレベルが議論された。ＳＰＦ  ＮＣマウスのＩＬ‐１２のレベルは、１６６ｐｇ／ｍｌであったが、ＣｏｎＡを用いて刺激することのより、そのレベルは４倍だけ増加した。また、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを用いた処置によって、ＩＬ‐１２のレベルが、それぞれ約１５０％または２５０％だけ誘導された。ＩＦＮ‐γのレベルも、ＣｏｎＡの存在下で約１１ｎｇ／ｍｌまで劇的に増加した。ＰＧ１０２Ｔの投与によって、このサイトカインのレベルは約１５０％だけ上昇した。ＰＧ１０２Ｅは、ＰＧ１０２Ｔよりもより強力であると考えられた。ＤＥＸは、ＩＬ‐１２のレベルを強力に抑制したが、ＩＦＮ‐γのレベルには影響を及ぼさなかった。要約すれば、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、Ｔｈ１サイトカインのレベルを増加させ、その一方で、選択的なＴｈ２サイトカインのレベルを減少させた。このことは、本研究において測定されたサイトカインのほぼ全ての発現を無差別に抑制するＤＥＸとは異なっていた。
【０２１５】
‐ＰＧ１０２は、好酸球増加症を防ぐだけでなく、エオタキシンおよびＴＡＲＣのレベルも減少させる‐
好酸球を含む炎症細胞の真皮への浸潤は、ＮＣマウスにおけるアトピー性皮膚炎の重要な徴候である。皮膚病変での炎症細胞の存在は、この炎症細胞の骨髄から血液への流動に起因するので、本発明の発明者らは、１２週齢の抹消血における総白血球数および好酸球数を始めに分析した。図７Ａに示されるように、従来のＮＣマウスの総白血球数は、皮膚炎の徴候に従って増加した。特に、好酸球の数は、従来の条件下で蒸留水を用いて処置されたマウスにおいて非常に増加し、これにより、好酸球増加症が引き起こされた。しかしながら、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの投与によって、総白血球数および好酸球数の両方の数は減少し、このことから、好酸球増加症の防止に貢献したと考えられる。
【０２１６】
循環好酸球数の変化は、炎症に反応して化学誘引を引き起こすケモカインの製造によって明らかになると考えられる（３‐６）。したがって、好酸球およびＴｈ２細胞の代表的な化学誘引物質である、エオタキシンおよびＴＡＲＣの血しょうレベルが測定された。従来の環境における、蒸留水処置マウスでは、エオタキシンおよびＴＡＲＣのレベルは増加したが、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを用いて処置されたマウスでは、これらのレベルは、約２５％〜５０％だけ減少した（図７Ｂ）。ＤＥＸを投与されたマウスでは、変化がほとんどなかった。これらの結果は、ＰＧ１０２が、エオタキシンおよびＴＡＲＣの産生を抑制して、ＮＣマウスの皮膚炎の徴候と一般的に同時に起こる、Ｔｈ２に仲介される好酸球増加症が防止されることが示された。
【０２１７】
‐ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの投与によって、真皮における炎症細胞の浸潤と、表皮および真皮の肥大と、が抑制される‐
また、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅによって、皮膚の臨床的症状の改善と、Ｔｈ２反応の抑制とが、１４週齢のＨ＆Ｅ染色された切片を分析することによって確認された。蒸留水を与えられたマウスは、表皮および真皮の際立った肥大、顕著な過角化、炎症細胞の浸潤、および、出血を示した。形態学的研究により、真皮におけるこれらの浸潤細胞は、好酸球、肥満細胞、および、リンパ球であることが示された。しかしながら、７週間にわたる、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを用いる処置により、表皮および真皮の肥大、および、真皮における炎症細胞の浸潤が抑制され、これにより、組織学的な環境は、ＳＰＦ  ＮＣマウスの組織学的な環境と非常に類似した（図８Ａ）。また、ＤＥＸの投与によって、同じような結果得られたが、脂肪細胞領域が広く拡大していた。表皮および真皮の厚みを測定することにより、ＰＧ１０２ＴならびにＰＧ１０２Ｅの両方が、表皮および真皮の過形成を、統計的に有意に防止することも実証された（図８Ｂ）。これらの結果から、ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを経口で摂取することにより、副作用がほとんどないか、または、まったくなく、ＮＣマウスの皮膚炎の進行を効果的に抑制することが可能であることが示された。
【０２１８】
‐ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅは、ＧＡＴＡ３の下方調節を介してＴｈ２に仲介されるサイトカインおよびケモカインの発現を減少する‐
マウスの皮膚のＴｈ２に仲介されるサイトカインおよびケモカインの産生に対するＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅの効果を調査するために、１４週齢のＩＬ‐４、ＩＬ‐５、エオタキシン、および、ＴＡＲＣのレベルが、エライサによって測定された。ＳＰＦ  ＮＣマウスに由来する皮膚では、４つ全てのタンパク質は弱く発現していたが、従来のＮＣマウスでは、それらのレベルは顕著に増加していた。ＰＧ１０２ＴまたはＰＧ１０２Ｅを投与することにより、ＩＬ‐４、エオタキシン、および、ＴＡＲＣのレベルが、３０％よりも多い分だけ減少した。ＩＬ‐５の発現に対する効果はより顕著であり、そのレベルは約９０％だけ増加した。対照的に、ＤＥＸによって、ＩＬ‐５およびＴＡＲＣのレベルは抑制されたが、ＩＬ‐４およびエオタキシンのレベルは抑制されなかった（図９Ａ）。
【０２１９】
これらの発見に基づき、ＳＴＡＴ６およびＧＡＴＡ３を含む転写因子の発現が、イムノブロッティングによって検出された。ＳＴＡＴ６およびＧＡＴＡ３は、Ｔｈ２細胞の分化とＴｈ２に特異的なサイトカインおよびケモカインの産生とに非常に重要な役割を果たしていることがよく知られている（Arakawa et al., Clin Exp Immunol 2004;135(3):505-10; Gunther et al., J Allergy Clin Immunol 2004; 113:987-94; Konishi et al., Proc Natl Acad Sci 2002;99(17): 11340-5）。図９Ｂに示されるように、ＧＡＴＡ‐３タンパク質のレベルは、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの両方によって低下した。リン酸化ＳＴＡＴ６（ｐＳＴＡＴ６）の発現も、ＰＧ１０２Ｔを用いて処置された従来のＮＣマウスにおいて減少していたが、ＰＧ１０２Ｅを用いた場合は当てはまらないと考えられる。ＤＥＸは、ＧＡＴＡ３およびｐＳＴＡＴ６の両方のレベルを抑制していた。これらの結果は、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが、ＧＡＴＡ‐３の発現を抑制することによって、Ｔｈ２に特異的なサイトカインおよびケモカインのレベルを下方調節することを実証した。
【０２２０】
［考察］
アトピー性皮膚炎は、幼児の間にしばしば始まる主なアレルギー性疾患である。罹患した個人かなりの割合は、以後の人生において、喘息および／またはアレルギー性鼻炎を発現させる（Leung, Clin Exp Immunol 1997;107(suppl. l):25-30）。アトピー性皮膚炎は、異常な免疫反応、特にＴｈ２経路の過剰活性化、によって引き起こされる皮膚炎症に起因する。本発明の発明者らは、ＯＶＡ感作マウスモデルにおいて、サルナシに由来する水溶性画分であるＰＧ１０２ＴならびにＰＧ１０２Ｅが、選択的なＴｈ１およびＴｈ２に仲介されるサイトカインの産生と、ＩｇＥの産生とを、制御することを発見した（実施例１）。これらのデータに基づいて、これらの植物の抽出物が様々なアレルギー性疾患の治療に役立つことが、推論される（Mayaumi et al., J Allergy Clin Immunol 2000;106:159-66; Hisae et al., Phytother Res 2001; 15:506-10）。本実施例では、本発明の発明者らは、モデルシステムとしてのＮＣ／Ｎｇａマウスを用いるアトピー性皮膚炎に対して、ＰＧ１０２が何らかの実際的な治療効果（１または複数）を奏するかどうか調査した。結果は、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅが、理論に縛られることなく、様々なＴｈ１およびＴｈ２に関連する因子の制御を介していると信じられている、自然に誘導される皮膚炎の進行を抑制することを示した。ここで、上記因子の制御は、すなわち、ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、およびＩｇＥの下方調節、ならびに、ＩＬ‐１２およびＩＦＮ‐γの上方調節である。ＮＣ／Ｎｇａマウスにおけるそのような生物化学変化によって、抹消血および皮膚病変における好酸球数の大幅な減少、表皮および真皮の肥大化の抑制、ならびに、様々な炎症細胞の浸潤の抑制を含む生物的結果が生じる。エオタキシン、ＴＡＲＣ、ＩＬ‐４、およびＩＬ‐５の局所的な発現レベルの減少が、特に興味深い。これらのタンパク質のレベルは、従来の環境下で成長したＮＣ／Ｎｇａマウスの皮膚病変において異常なほど高い。しかしながら、動物がＰＧ１０２を投与されたとき、これらのサイトカインおよびケモカインのレベルは、実質的に正常であることが分かった。エオタキシンおよびＩＬ‐５は、好酸球に対する強力な化学誘引物質であることが知られている。一方で、ケラチノサイト（およびＴｈ２細胞）によって産生されるＴＡＲＣは、Ｔｈ２細胞を誘引し、アトピー性皮膚炎に一般的に関連する病理学的反応を誘導すると考えられている。この点について、エオタキシンおよびＴＡＲＣに対する受容体は、それぞれＣＣＲ３およびＣＣＲ４であり、これらは両方ともＴｈ２細胞において高度に発現していることは注目に値する（Christian et al., J Clin Invest 1999;104: 1097-105; Tomomi et al., J Allergy Clin Immunol 2110;107:353-8; Weilie et al., J Clin Invest 2002;109:621-8; Masayuki et al., Int Ach Allergy Immunol 2003;132:355-63）。
【０２２１】
ＮＣ／Ｎｇａマウスモデルに観察された、ＰＧ１０２の詳細な分子機構（１または複数）およびＰＧ１０２の治療効果の基礎をなす正確なシークエンス（sequence）は、依然として調査中である。ＰＧ１０２が初めに細胞転写因子（例えばＧＡＴＡ‐３）に作用し、その後、Ｔｈ１およびＴｈ２システムに関連する重要なサイトカインプレーヤー（ＩＬ‐４およびＩＦＮ‐γなど）の発現に作用して、ＩｇＥおよび各ケモカインのレベルを減少させるカスケード反応が誘導されるという可能性が考えられる（Zhu et al., Nat Immunol. 2004;l 1 : 1157-65）。別の可能性としては、ＰＧ１０２が初めに局所的なレベルに作用することが考えられる。例えば、エオタキシンおよびＴＡＲＣのレベルを減少すること、それらの化学誘引機能を抑制すること、全身レベルと局所的なレベルとにおける好酸球の数を減少すること、および、従来の方法で育てたＮＣ／Ｎｇａマウスにおいて見られる病理組織学的な発育を抑制することが挙げられる。ＰＧ１０２の活性は、アレルギーに関連する生物化学経路の様々なレベルに作用する、複数の化合物によるものであると考えられる。全体的に見て、ＰＧ１０２は、この動物モデルのアトピー性皮膚炎に関係する重要な生物因子に作用して、症状を単に取り除くというよりは、病気をその根源から治療すると考えられる。
【０２２２】
ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅは、食用果実に由来する。本研究に用いられた濃度よりも４０倍濃い２０００ｍｇ／ｋｇ／日を１２週間毎日投与した、反復投与毒性試験では、毒性が発見されなかった。ＯＶＡ感作マウスに関係する前述の実験から得られたデータに加えて、ＮＣ／Ｎｇａマウスから得られた結果は、ＰＧ１０２が、アトピー性皮膚炎を含む様々なアレルギー性疾患を治療するための安全で且つ効果的な薬剤であることが実証された。アトピー性疾患の罹患率が、主要先進国の全てにおいて増加しており、アトピー性皮膚炎の根本的な治療に利用可能な薬剤がないということを考えると、本明細書に記載されているような調製物は、その分野における進歩を象徴している。
【０２２３】
〈実施例３〉
以下の実施例において使用されたサルナシを含む様々な調製物の調製を、以下の実施例に示す。
【０２２４】
‐植物材料‐
サルナシ（(Sieb. Et Zucc.)、Planch, ex Miq. (Actinidaceae)  品種「アナナスナヤ（Ananasnaya）」）の、茎（籐および果実の突き出た枝（fruiting spur）からなる）、根、および皮は、オレゴン州シェリダンのハーストベリー農場で収穫された。証拠標本（＃５１８６４０）は、コロラド州ボールダーにあるコロラド大学、コロラド大学植物標本室の収集管理者であるティム・ホーガン氏によって、認証されて、同所に寄託された。植物材料は、４８時間乾燥され、抽出または他の加工の前まで室温で保存された。
【０２２５】
完熟の、すなわち食べ頃のサルナシは、ハーストベリー農場において収穫され、すぐに冷凍され、輸送され、そして、抽出または他の加工の前まで−２０℃で冷凍されて保存された。
【０２２６】
‐抽出および他の加工‐
粉末茎（１２６．６ｇ）、粉末根（７９．０ｇ）、および、微粉化した皮（１２６．２ｇ）は、蒸留水（１Ｌ）を用いて９４℃で４時間抽出された。その後、混合物はろ過され、ろ液は回転式蒸発によって乾燥するまで濃縮されて、茎抽出物（９．９ｇ）、根抽出物（８．６ｇ）、および、皮抽出物（２．４ｇ）が得られた。
【０２２７】
２０の冷凍サルナシ液果（１５４．４ｇ）は室温で融解され、圧搾され、そして、蒸留水（１Ｌ）を用いて９１℃で５時間抽出された。混合物はろ過され、ろ液は濃縮されて、「煮沸された」新鮮果実の抽出物（１２．８ｇ）が得られた。
【０２２８】
さらに新鮮な冷凍キウィフルーツ（３４１．６ｇ）が融解され、果汁搾り器によって処置された。果汁搾り器は、果実から皮を除去して、これにより、種、果肉、および、ジュースの混合物が得られた。この混合物を３０分、〜３５００ｒｐｍで遠心分離することにより、１５０ｍＬのジュースが得られた。このジュースは、回転式蒸発によって乾燥するまで濃縮されて、濃縮果汁（２４．２）が得られた。
【０２２９】
実施例１に記載されたＰＧ１０２Ｔと同等の抽出物をより多量に製造するために、キウィフルーツのプロセススケールでの抽出が実施された（スンギ・バイオエクス有限責任会社（Sungil Bioex Co., Ltd.）、Ｂｉｂｏｎｇ、韓国）。冷凍キウィフルーツ（１２４２ｋｇ）が、１／４〜３／８の厚みにスライスされ、５〜２０％の含水率になるまで対流乾燥器（６５℃〜８０℃）において乾燥された。乾燥果実（２３９ｇ）のバッチ抽出（batch extraction；図１０）が、抽出の積荷（extraction load）を支持するための内部フィルターを備えるジャケット付きステンレス鋼の反応炉において実施された。外部復水器は、抽出の間の水の損失を防ぐために使用された。抽出溶媒（水）の量は、抽出される乾燥果実の重量の５〜１０倍に基づいていた。抽出容器の中身は、反応炉のジャケットの中に水流を導入することによって０℃から９０℃まで２時間にわたって加熱された。その後、水（９０℃）は、外部再循環ループを用いるバイオマスを通して４‐１２時間再循環された。その次に、使用済みのバイオマスは、処分のために除去されて、水性の抽出物が１０μｍのろ紙を通してろ過された。その後、ろ液は、外部復水器と蒸留液受取器とを備える攪拌型ステンレス鋼反応炉において、真空下（〜６００ｍｍＨｇ）５５℃‐６０℃で濃縮された。材料がいったん濃縮されれば、抽出物を滅菌するために３０分間８０℃でさらに保持された。ＰＧ１０２Ｔと同等の得られた材料（１０１ｋｇ）は、ＦＤ００１と名づけられた。この材料のうち、３ｋｇがさらなる検査のために取り置かれた。よい製造の実践が、この製法の至るところに用いられた。
【０２３０】
カプセル化に最適で、且つ、本明細書に記載の臨床適用に有利な粉末材料を作製するために、上記で製造されるＦＤ００１濃縮物（９８ｋｇ）が、水平パドル混合器に供給され、計算された固形分に基づいて、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）と同重量で混合された。その後、固形混合物が、強制熱風乾燥器（７０℃‐８０℃）に２４時間設置される、ステンレス鋼トレイに移された。それから、乾燥した塊の多い固体は、フィツミル型ハンマー・ミル（Fitzmill type hammer mill）において粉砕され、４０メッシュの粉末（１１８ｋｇ）が得られた。この材料は、３００ｍｇまたは６００ｍｇの大きさのカプセルにカプセル化された（GMP Laboratories of America, Inc.、アナハイム、カリフォルニア州）。各カプセルは、イヌおよびヒトの臨床試験に使用されるためにＦＤ００１およびＭＣＣが１：１で混合された混合物を含んでいた。
【０２３１】
上記の最初の段階のようにスライスされ乾燥されたが、バッチ抽出は実施れされていない、プロセススケール材料に由来する乾燥サルナシ果実（７．０ｇ）は、粉末化され、そして、この材料は水（２５０ｍｌ）を用いて２５℃で４時間抽出された。混合物は、ろ過され、ろ液は回転式蒸発によって乾燥するまで濃縮され、乾燥果実の室温水抽出物（４．２）が得られた。
【０２３２】
ＦＤ００１（７９．９ｇ）と蒸留水（１．５Ｌ）とが混合され、この溶液は、１回当たり５００ｍｌの酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を用いて連続的に４回抽出された。組み合わせられた有機層と水層とは、減圧下で乾燥するまで濃縮され、これにより、酢酸エチル抽出物（７．４ｇ）と水性の残留物（４１．５ｇ）が得られた。
【０２３３】
〈実施例４〉
サルナシの調製物における免疫変調活性のインビトロでの検査が、下記の実施例に記載されている。
【０２３４】
本研究の目的は、卵白アルブミン（OVA; grade V；シグマ）感作マウスに由来する脾細胞培養物のサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の産生を変調するという、サルナシに由来する様々な抽出物および調製物の相対活性を、エライサ(Quantikine kits, R&D systems)分析を用いて比較することである。上記実施例３に記載されているようにして調製された、下記の試料が検査された：ＦＤ００ｌ（ＰＧ１０２Ｔ）、濃縮果汁、および酢酸エチル抽出物。
【０２３５】
‐脾細胞の単離および培養‐
Ｂａｌｂ／ｃの雌マウス（Harlan、インディアナポリス、インディアナ州）は、０日目および１４日目に２０μｇのＯＶＡを腹腔内（ＩＰ）に注射することによって感作され、その後、頚椎脱臼によって安楽死した。そして、個々のマウスから脾臓が無菌状態で採取され、滅菌手法を用いる脾細胞の培養を発達するための製法がすぐに実施された。１０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝ＲＰＭＩ‐１６４０の存在下で、３ｃｃのシリンジからのプランジャーを用いて、組織に穏やかに力を加えて、７０μｍのナイロンメッシュの格子を通すことにより、脾臓は解離された。大きい細胞の塊は、生じた懸濁物からＦＣＳ‐勾配を用いて除去された。それから脾細胞は遠心分離（１５００ｒｐｍ、５分）され、生じた細胞沈殿物をＲＢＣ溶解緩衝液で処置（室温、１０分）することにより、含有される赤血球が除去された。その後、遠心分離（１５００ｒｐｍ、５分）によって、ＲＢＣ溶解緩衝液の大部分が除去され、脾細胞沈殿物は、１０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝ＲＰＭＩ‐１６４０を用いて３回洗浄された。最後の洗浄の後、脾細胞沈殿物は、最終細胞密度が５×１０６細胞／ｍｌになるように量が調整された、１０％ＦＣＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ‐１６４０（完全培地）に再懸濁された。各分析のために、５×１０６の脾細胞が２４ウェルプレートの個々のウェルに播種された。３日目に、これらのウェルの上清が回収され、実験結果の測定に備えて冷凍された。
【０２３６】
対照の脾細胞培養物も、上記様式で未処置（未感作）マウスから樹立され、最終細胞密度が５×１０６細胞／ｍｌになるように２４ウェルプレートの各ウェルに播種された。これらの脾細胞は、１０％ウシ胎仔血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＩＭＩ‐１６４０において樹立され、他の処置は受けなかった。３日目に、これらのウェルの上清が回収され、未処置の実験対照として用いられるために冷凍された。
【０２３７】
‐サルナシ調製物を有する脾細胞培養物の刺激‐
各調製物を検査するために、１０匹のＯＶＡ感作マウスが用いられた。各マウスに由来する脾細胞は、１００μｇ／ｍｌのＯＶＡ、０．５％ＤＭＳＯ、および、検査される選ばれた濃度の特定の検査調製物のそれぞれか、または、それがないことを含むＲＰＭＩ‐１６４０完全培地が存在する２４ウェルプレートのうちの８の各ウェルに、５×１０６細胞／ｍｌで播種された。８ウェルのうちの６が、２組の３ウェルに分割された。一組の３ウェルの各ウェルは、０．２５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、または１０ｍｇ／ｍｌのどれかの濃度のサルナシ調製物を用いて処置された。陽性対照として機能させるために、７番目のウェルが、強力な抗炎症性のグルココルチコイドである、２μＭのデキサメタゾン（ＤＥＸ）を用いて処置された。８番目のウェルは追加の処置を受けず、ＯＶＡだけの実験対照として機能した。培養から３日後に、ＯＶＡ感作マウスにつき１つしかない８ウェルのそれぞれから上清が回収され、冷凍された。これらの上清は、培地に存在するサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）のレベルを測定するために用いられた。
【０２３８】
‐培養上清におけるサイトカインのレベルの測定‐
サルナシ調製物を用いて処置された脾細胞、ＤＥＸを用いて処置された脾細胞、ＯＶＡだけで処置された脾細胞、および、未感作対照マウスにに由来する未処置の脾細胞に由来する培養上清のサイトカインのレベルが、エライサ検定によって測定された。各サイトカインのレベルを測定するために、エライサプレートの２つの複製されたウェルが利用された。
【０２３９】
［結果］
このインビトロの研究により、ＰＧ１０２Ｔと同等のＦＤ００１（図１１）、酢酸エチル抽出物（図１２）、サルナシの濃縮果汁（図１３）の活性が確認された。１０ｍｇ／ｍｌにおける３つの調製物の全てが、様々な程度で、サイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮγ）を実質的に抑制することが観察された。試験された試料の全てに関して最も顕著な効果が、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γに見られ、このことは、先のインビトロでの研究（表Ｉ、実施例１）と一致する。活性が酢酸エチル抽出物において観察されるので、ＦＤ００１に存在する活性成分は有機溶媒に抽出可能であり、これまでのクロマトグラフィーの方法によってさらに精製されることが明らかになった。注目に値すべきなのは、濃縮果汁も、脾細胞に従ってサイトカインの産生を抑制したことであり、このことは、実施例１および２に示されたキウィフルーツの抽出が、ハーディキウィフルーツの活性な調製物を製造するために唯一必要とされるわけではではないことを示している。なお、濃縮果汁のサイトカインの抑制は比較的弱いことが明らかであり、このことは、ＦＤ００１を調製するために用いられる乾燥加工または加熱加工が、活性の増強に重要であることを示唆している。
【０２４０】
〈実施例５〉
サルナシの代替果実調製物、および、サルナシの果実ではない部分の抽出物のインビトロにおける活性の比較が以下の実施例に記載されている。
【０２４１】
本研究の目的は、卵白アルブミン感作マウスに由来する脾細胞培養物のサイトカイン（ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の産生を変調するという、果実以外の植物部分、または、果実の代替調製物（すなわち、実施例１および２に記載の抽出物以外）が起源であるサルナシの抽出物の活性を、エライサ分析を用いて評価することである。上記のようにして調製された以下の試料が検査された。実施例３に記載されているようにして調製されたサルナシの茎、根、および、皮の水抽出物。「煮沸した」新鮮果実調製物。実施例３に記載されているようにして調製された濃縮果汁。実施例３に記載されているようにして調製されたＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔと同等の大規模なもの）。実施例３に記載されているようにして調製されたＦＤ００１粉末（下記の臨床試験に用いられる）。乾燥サルナシの室温水抽出物。実施例３に記載されているようにして調製された酢酸エチル抽出物。および実施例３に記載されている水性残留物。さらに、シクロスポリン、デキサメタゾン、および、ケルセチンといった３つの公知の免疫抑制化合物の活性が、対照として評価された。
【０２４２】
‐脾細胞の単離および培養‐
脾細胞の調製は、上記実施例４に記載されている調製と同一の様式で実施された。
【０２４３】
サルナシ抽出物を有する脾細胞培養物の刺激
８匹のＯＶＡ感作マウスに由来する脾細胞（８の複製（replicate））が、検査される各抽出物または調製物の分析のために用いられた。各マウスに由来する５×１０６の細胞の脾細胞が、２４ウェルプレートの個々のウェルに播種された。このウェルには、１００μｇ／ｍｌのＯＶＡおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を含むＲＰＭＩ‐１６４０完全培地が１ウェル当たり１ｍｌ加えられていた。１．０ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、および１０ｍｇ／ｍＬの濃度のキウィフルーツ調製物が、試験された。
【０２４４】
‐シクロスポリン、ケルセチン、およびデキサメタゾンの分析‐
８匹のＯＶＡ感作マウスに由来する脾細胞（８の複製）が、検査される各化合物（ケルセチンを除く）の分析のために用いられた。ケルセチンの分析の場合、２匹のＯＶＡ感作マウスに由来する脾細胞が試験された。各マウスに由来する５×１０６の細胞の脾細胞が、２４ウェルプレートの個々のウェルに播種された。このウェルには、１００μｇ／ｍｌのＯＶＡおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を含むＲＰＭＩ‐１６４０完全培地が１ウェル当たり１ｍｌ加えられていた。０．００８３μＭ、０．０８３μＭ、および４．１５μＭの濃度のシクロスポリンが、試験された。０．０１μＭ、０．１μＭ、および１μＭの濃度のデキサメタゾンが、試験された。１μＭ、１０μＭ、および２５μＭの濃度のケルセチンが、試験された。強力な抗炎症性グルココルチコイドであるデキサメタゾンを１μＭ用いて処置されたウェルは、実験の陽性対照として機能した。１００μｇ／ｍｌのＯＶＡおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を含むＲＰＭＩ‐１６４０完全培地のみを受けたウェルは、ＯＶＡだけで実験された対照として機能した。培養から３日後に、上清が回収され冷凍された。これらの上清は、試験された実験条件下の様々な培養液に存在するＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γのレベルを測定するために用いられた。
【０２４５】
‐培養上清におけるサイトカインのレベルの測定‐
処置ウェルおよび対照ウェルの全てに由来する培養上清におけるサイトカインのレベルが、エライサ測定法によって測定された。エライサプレートの２つの複製ウェルが、各サイトカインのレベルを測定するために用いられた。
【０２４６】
実施例４に記載のインビトロにおける検査の結果に基づいて、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γの発現だけが、検査される材料に存在する活性のレベルを評価するために分析された。
【０２４７】
［結果］
先に実証したように、サルナシの検査材料の濃度が高くなるにつれ、試験されたサイトカインの抑制が強くなることが観察された。一般的に、ＩＦＮ‐γに対する抑制がより顕著であった。本検定における、所定の免疫抑制化合物の活性は、サルナシの調製物と同様であった。ペプチドであるシクロスポリン、および、グルココルチコイドステロイドであるデキサメタゾンは、図１４Ａに示すように強力な活性を示した（＜１μＭ）。フラボノイドであるケルセチンは、図１４Ｂに示すように少し高い濃度域を超えて強い活性を示した（１‐２５μＭ）。また、ＦＤ００１に由来する調製物の活性への酢酸エチルの能力の確認が、図１５Ａおよび１５Ｂにおいて実証された。興味深いことに、水性残留物にも活性が存在することが確認された。このことは、極性および非極性の成分の両方がインビトロにおける免疫抑制効果に関与することを示している。下記に記載のイヌおよびヒトの両方の臨床試験に用いられた材料である、ＦＤ００１粉末は、図１６Ａおよび１６Ｂに示されたように、活性であると本検定において確認された。
【０２４８】
実施例１および２に記載の手法以外の実施例４に記載されたようなキウィフルーツ抽出物を調製する代替方法が、探索された。乾燥していようと新鮮であろうと、または、抽出が熱水で行われようと室温水で行われようと、果実に由来する抽出物の全ては、図１７Ａおよび１７Ｂに示されるように同様の活性を示した。この分析に基づいて、本発明の発明者らは、治療を目的とするキウィフルーツを調製するための実行可能な代替方法がいくつか存在すると信じている。
【０２４９】
興味深いことに、サルナシの皮、根および茎から調製した熱水抽出物は、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）および濃縮果汁と比較して、同等かまたはより優れた活性を本検定において示した（図１８Ａおよび１８Ｂ）。これらの結果は、これらの他の植物の部分が、免疫マーカーの変調または炎症性サイトカインの抑制に関して、治療上興味のある化合物の代替供給源の代表例であることを示している。
【０２５０】
〈実施例６〉
アトピー性皮膚炎が中等症である大人の被検体における、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の有効性の、外来患者による二重盲検式の偽薬対照研究の結果が下記の実施例に記載されている。
【０２５１】
本研究の目的は、アトピー性皮膚炎が中等症の少数の大人の志願者において、４２日間にわたって経口投与されたときの、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の有効性の予備的証拠を得ることである。本研究の第２の目的は、ＦＤ００１に対する反応の忍容性および変動性を評価することである。
【０２５２】
‐研究デザイン‐
被検体は、６００ｍｇカプセルに入ったＦＤ００１粉末（実施例３に記載されているようにして調製された）を２つ朝に、または、ＭＣＣからなる偽薬のカプセルを２つ、本研究の１日目から４２日間、摂取した。被検体は、１４日後にステロイド系の薬の使用を中止するように指導された。血液は、４つの時点（適格性選考訪問、１、１４、および４２日目）において血液学およびルーチンの生物化学盤のために採取された。ＩｇＥおよびＣ‐反応性タンパク質が、１、１４および４２日目に測定された。尿が、ルーチンの尿検査を実施するために４つの日のすべてにおいて回収された。選考後の各訪問考において、有効性が評価された。被検体は、一般的に良好な健康状態の１９〜６５歳の男性または女性であった。被検体は、０〜４の重傷度の尺度における３の医師包括的評価（Feldman and Krueger, Annals of the Rheumatic Diseases, 64:ii65-ii68, 2005）点数によって定義された中症度の活性なアトピー性皮膚炎を有していた。被検体の体表面積（ＢＳＡ）の最低１０％にアトピー性皮膚炎が発症していた。被検体はこれまでアトピー性皮膚炎を治療するために局所ステロイドを用いており、授乳または妊娠していなかった。安全性および忍容性が有害反応の報告、ならびに、標準の血液化学、血液学、および尿検査を用いて評価された。
【０２５３】
‐統計的方法‐
有効性の主用評価項目（primary efficacy variable）は、コクラン・マンテル‐ハエンゼル検査（Cochran Mantel-Haenszel test (Armitage et al, Statistical Methods in Medical Research, 4th Ed., Blackwell, Oxford, 2002)）を用いる分析によれば、４２日目において医師包括的評価の基準から変化した。副次的評価項目は、アトピー性皮膚炎の徴候（紅斑、硬化、にじみ出（ｏｏｚｉｎｇ）／外皮の覆い（crusting）、および、掻痒の重傷度点数）および、２標本ｔ検定を用いて分析されたような総体表面積の基準からの４２日の変化であった。記述統計は、１、１４、２８および４２日目における治療群による全ての基準ならびにポスト基準研究のために提示された。これらの統計には、必要に応じて、試料の大きさ、手段、標準偏差、頻度、割合、および信頼区間が含まれている。被検体の自己評価質問表からの結果は、治療群によって集計され提示された。研究の間に生じたどのような有害事項も記録した。有害事項の記述には、着手の日付、有害事項の終わりまたは継続の日付、有害事項の重傷度、帰属、生じた作用、行われた治療、成果が含まれる。これらのデータは、被検体の報告される有害事項の数、体のシステム、重傷度、深刻度、および、被検物質との関係性によって分類された。治療群の間の比較は、研究の間にMedDRA terms (Medical Dictionary for Regulatory Activities, http://www.meddramsso.com）に分類された１以上の有害事項と一緒に、被検体の頻度を表にすることによって作成された。
【０２５４】
実験室での値の記述的な要約統計、および、基準（１日）からのそれらの関連する変化は、全ての臨床の実験室での評価のために測定された。正常範囲の外の値は、データの一覧表において目印がつけられている。さらに、研究中に実験室のパラメーターにおける変化（実験室の参照範囲に基づく、正常から高値への変化など）を経験した被検体の数または割合を示す「シフト・表（shift table）」が、作成された。
【０２５５】
【表５】
2008531584.tif 000007
【０２５６】
‐有効性の結果‐
研究を完成させるために１７人の第１被検体に実施された中間解析は、２つの有効性の副次的評価項目において強い統計的傾向に帰着した：紅斑（ｐ＝０．１３，ＩＴＴ１７）および硬化（ｐ＝０．０９，ＩＴＴ１７）。中間解析の時点において、この小さい試料の大きさにおける有効性の主用評価項目には、統計的差異は見られなかった。
【０２５７】
４２日目の最終解析では、有効性の主用評価項目（医師包括的評価）または有効性の副次的評価項目（アトピー性皮膚炎の徴候における基準からの変化および体表面積の割合の変化）における治療群（treatment arms）の間に、統計的差異がないことが実証された。しかしながら、１４日目では、有効性の主用評価項目において顕著な分布の変遷が観察された。この１日目から１４日目の間に起こる変遷は、それぞれ偽薬および被検物質の受容者の反応のための図１９Ａおよび１９Ｂ（（ＰＧＡ得点基準が示されている）において観察される。被検体が１４日目の分析のための反応群および非反応群（表Ｖ、群Ａ）に仕分けされたとき、反応者のより高い割合は、ＦＤ００１の治療群において観察され、非反応者のより高い割合は、偽薬の群において観察される。これらの結果は、より強力なステロイドを使用する被検体（群Ｂ）、中程度〜軽度のステロイド治療のみを使用する被検体（群Ｃ）を除いたときに、比較的一致していた。この後の補助的な分析によって、ＰＧＡの主用評価項目（ｐ＝００．２）、および、１４日目にける被検体の赤みの自己評価（ｐ＝０．０３）に関して統計的有意性が明らかになった。さらに、強い統計的傾向が、１４日目における、掻痒に関する自己評価、および、にじみ出／外皮の覆いに関する臨床的徴候評価（それぞれ、ｐ＝０．０８、および、ｐ＝０．０７）において見られた。治療群の観察された有用性は、４２日目まで分散されたＰＧＡ評価項目を介して１４日目における偽薬群と比較された。これらの結果は、局所コルチコイドステロイド治療の補助剤としてのＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の使用は、アトピー性皮膚炎の治療において有益であることを示す。１、１４および４２日目の実験室での検査結果は、臨床化学、差異のある完全血球算定、凝固、間接型ビリルビン、および、肉眼的尿検査を含む任意の実施される検査のための傾向に関連する安全性を示さなかった。治療群の間において、ＩｇＥ、Ｃ‐反応性蛋白質または好酸球の総数に差異は見られなかった。
【０２５８】
‐安全性の結果‐
深刻な有害事項は、ＦＤ００１治療または偽薬のどちらかにおいて報告されなかった。ＦＤ００１においては１２の、偽薬においては１３の深刻ではない事項が報告された。これらのうち、ＦＤ００１においては軽度事項〜中程度事項が１０、および、重度事項が２であり、偽薬においては軽度事項〜中程度事項が１３であった。有害事項のどれも本研究の被検物質または偽薬の可能性はないか、あるいは、それらに関連していないと考えられた。
【０２５９】
［結論］
計画された分析の結果、４２日目における主用評価項目または副次的評価項目の治療群の間に統計的有意性がないことが実証された。しかしながら、強い分布の変遷が、１４日目の主用評価項目（ＰＧＡ）において指摘された。このため、この後の分析は、１４日目の時点における治療群の間に統計的に有意な差異が明らかになったこの時点に関して実施された。さらに、いくつかの副次的評価項目は、統計的有意性（自己評価において紅斑ｐ＝０．０３）または統計的な強い傾向（自己評価において掻痒の改善ｐ＝０．０８、および、アトピー性皮膚炎の徴候において、にじみ出／外皮の覆いｐ＝０．０７）のどちらかを実証した。本臨床試験では、深刻な有害事項は報告されなかった。被検物質および偽薬の群の両方において報告された有害事項の数は、同程度であり、被検物質に起因する物ではなかった。臨床的な実験室の値において、安全上の懸念事項は見出されなかった。これらのデータによって、サルナシの果実抽出物が安全であり、受容者によって良好な忍容性であることを示す前臨床の小型哺乳類および事例ヒト研究が再確認される。
【０２６０】
〈実施例７〉
無作為に選ばれた、アトピー性のイヌのＣＡＤＥＳＩ点数を減少させるハーディキウィフルーツ抽出物を評価するための二重盲検式の偽薬対照研究が下記の実施例に記載される（Olivry et al, Vet. Dermatol, 13:77-87, 2002; Hanifin et al, Exp. Dermatol, 10:11-18, 2001; Kunz et al., Dermatology, 1997, 195, 10-19）。
【０２６１】
本研究の目的は、イヌにおけるアトピー性皮膚炎（ＡＤ）のための標準のステロイド治療の補助治療としてのサルナシ果実抽出物ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の有効性を評価することであった。治療の反応性は、オーナーズ・プルリチス評価（owner’s Pruritis assessments）およびＣＡＤＥＳＩ尺度を組み込む調査員の包括的評価（investigator’s global evaluation）を用いて評価された。本研究のさらなる目的は、アトピー性皮膚炎の徴候の管理においてステロイドを使用する必要性を減少させるための単剤療法としてのキウィフルーツ抽出物の有効性を評価すること、および、安全性を評価することである。
【０２６２】
‐研究デザイン‐
アトピー性皮膚炎の残留症状が保持されている間、低用量（０．２ｍｇ／ｋｇ）のステロイド（プレドニゾロン）のみを２週間、イヌに投与して、イヌにおけるステロイドの反応性を測定した。全てのイヌは、季節に関係なくアトピー性皮膚炎の皮膚疾患を患っていること以外は、健康であった。アトピー性皮膚炎の診断には、皮膚内の皮膚アレルギーテストに対する少なくとも３つの陽性反応が含まれていた。イヌは、ノミ制御処置（Advantage）を受けており、総体的徴候の主な原因としての食物アレルギーを排除するような食事試験を経験していた。イヌは、抗ヒスタミン剤、および、長時間作用性の注射可能なステロイドなどの併用薬、ならびに、任意の２次感染から免れていた。ＣＡＤＥＳＩ尺度における２５点の最小基準（１日目）が、試験対象患者基準（inclusion）には必須であった。
【０２６３】
補助療法の間（１４日‐４２日）、イヌは、被検物質に加え、プレドニゾロン（０．２ｍｇ／ｋｇ）を１日おきに経口投与された。研究の被検体（６０の標的登録数）は、２８日間、実施例４に記載されているようにして調製されたＦＤ００１粉末を、１日１回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、または、偽薬（ＭＣＣ）を消費した。被検体は、１：１の比で被検物質群および偽薬群に無作為に選抜された。被検体は、ＣＡＤＥＳＩ尺度を用いて、１週間に一回の日記におけるオーナーズ・プルリチス格付け（the owner’s Pruritis rating）によって、評価されている。血液標本は回収され、研究の１日目および２８日目、ならびに、ステロイドのみの期間の１日目における、安全性と２次評価項目とが評価される。これらの試料の分析には、完全血球算定、臨床化学、総ＩｇＥ、アレルゲン特異的ＩｇＥ、およびケモカインＴＡＲＣが含まれている。
【０２６４】
補助療法の処置期間の終わりには、包括的評価における改善を実証している任意のイヌは、アトピー性皮膚炎のための単剤療法としてのＦＤ００１被検物質からなる、非盲検で本研究の第２段階である２８日目まで進む。アトピー性皮膚炎の徴候の再発を経験しているか、または、救助薬剤を必要としている被験体は、第２段階の治療の失敗であると考えられ、本研究を中断した。第２段階において改善を維持している被検体は、治療に反応するものであると考えられる。ＣＡＤＥＳＩ尺度およびプルリチス日記による評価は、７日に一度行われる。血液標本は、第２段階の１４日目と２８日目との間に回収される。実験室の血液盤は、本研究の第１段階のものと同じである。
【０２６５】
‐統計的方法‐
第１有効性分析は、カイ２乗検定を用いる調査員の包括的評価に基づく治療に陽性反応を示す被検体の割合である。中間分析は、標的登録数の初めの半分が、研究を完了するとき実施される。ｐ＜０．０５は、有意であると考えられる。
【０２６６】
［結論］
アトピー性皮膚炎は、イヌにおいて２番目に最も一般的なアレルギーであり、イヌの固体群の約１０％において起こっている（Scott et al., Small Animal Dermatology, 5th Ed., WB Saunders, 500-518, 1995）。一般的に、イヌにおけるアトピー性皮膚炎は、加齢とともに悪くなる傾向がある。罹患した動物は、生活の質を著しく低下する再発性の皮膚および耳の感染を患う。アトピー性皮膚炎が非常に一般的な疾患であるという事実にもかかわらず、利用可能にある医療法の選択肢は限られている。グルココルチコイドおよび経口のシクロスポリンのような全身性の治療は効果的であるが、副作用のおそれが付きまとっている（Olivry et al., Vet. Dermatol, 13:77-87, 2002; Ryffel, et al., Arch. Toxicol., 53:107-141, 1983）。グルココルチコイドは慢性的な使用とともに効果が薄れる傾向があり、シクロスポリンは大規模なイヌの飼育においては法外な費用がかかるようであり、抗ヒスタミン剤の成功率は、たいていの場合、低い（Scott et al., Small Animal Dermatology, 5th Ed., WB Saunders, 500-518, 1995）。イヌのアトピー性皮膚炎の徴候および症状を減少させるための、安全且つ効果的な治療法の同定は、非常に有益である。補助療法または単剤療法のどちらかとしてのＦＤ００１の有効性は、イヌのアトピー性皮膚炎の管理に用いられるステロイドの使用の必要性を減少させる。また、キウィフルーツ抽出物は、使用されるステロイドの効能を減少させるために補助療法として使用されることが想定される。抽出物はカプセル、食品に混合される粉末、および、食品の成分として投与されることが考えられる。キウィフルーツ調製物を有する食事補給は、単独でまたは低用量のステロイドと一緒に組み合わせて用いられたときに、アトピーを患うイヌの皮膚を健康的に支援する効果があると考えられる。
【０２６７】
〈実施例８〉
アレルギー性疾患および非アレルギー性疾患における免疫反応を調節するための、サルナシおよびその抽出物の使用が、以下の実施例に記載されている。
【０２６８】
本研究の目的は、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、喘息、または中等症のアレルギー性鼻炎などのアレルギー性疾患を患う大人の志願者において、２８日間にわたって経口投与されたときの、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の有効性の予備的証拠を得ることである。本研究の第２の目的は、送達の代替形態を用いる製造物の生物学的利用能を測定することである。代替形態としては、例えば、カプセル、飲料に添加される濃縮物、乳液、または、食品添加剤が挙げられる。本研究のもう１つ別の目的は、骨髄性細胞の増殖、ならびに、関連する遺伝子発現および転写因子における炎症性血液マーカーのレベルに対するＦＤ００１の効果を測定することである。ここで、上記骨髄性細胞としては、例えば白血球、マクロファージ、肥満細胞などが挙げられ、上記炎症性血液マーカーとしては、例えばサイトカイン、ケモカイン、ロイコトリエンまたは抗体が挙げられる。
【０２６９】
外来患者による二重盲式プラセボ対照試験は、被験体が被検物質または偽薬としてのＦＤ００１を投与されるようにして、実施された。本研究の治療群は、単剤療法としての、または、強さが軽微〜中程度の経口ステロイドの補助療法としてのＦＤ００１を含んでいてもよい。代案として、アトピー性皮膚炎を患う被検体の治療のためのステロイドは、局所性であってもよい。ステロイドの使用は、それぞれ喘息およびアレルギー性鼻炎の被験体については、鼻腔内噴霧器または吸引器のようなものであってもよい。被検体の試験対象患者基準、有効性の評価、安全性、および、忍容性、ならびに、統計的分析は、実施例６に記載されているものと同様の方法を用いて評価される。
【０２７０】
アレルギーの症状の１つであるアトピー性皮膚炎は、子供における一般的な皮膚疾患であり、生後６ヶ月間にたいてい観察される（Spergel and Paller, J. Allergy Clin. Immunol., 112:S128-S139, 2003）。アトピー性皮膚炎の罹患率は、喘息を含む他のアトピー性疾患と同様に、世界規模で増加していると考えられる（Larsen and Hanikin, Immunology and Allergy Clinics of North America, 22:1-25, 2002; Wollenberg et al., Clin. Exp. Dermatol, 25:530-534, 2000; Mannino et al., Mor Mortal Wkly Rep CDC Surveill Summ., 47:1-27, 1998; Linneberg et al., Allergy, 55:767-772, 2000）。アトピー性皮膚炎の患者は、生活の質においてひどい悪影響を経験しており、現在のところ利用可能な治療は、（ｉ）有害な副作用の供給源、および、（ｉｉ）家庭と社会との両方への財政負担という２面性がある。アトピーの皮膚症状は、アトピーマーチの始まりをしばしば表す。いくつかの長期間にわたる研究によれば、アトピー性皮膚炎の患者の約半数は、喘息を発症し、特に、アトピー性皮膚炎が酷い患者の場合は、その３分の２がアレルギー性鼻炎を発症する（Leung et al., J. Clin. Invest., 113:651-657, 2004; Spergel et al., J. Clin. Invest., 101:1614-1622, 1998）。アトピー性皮膚炎に対する安全且つ効果的な治療の同定は、大変歓迎されるものである。また、ＦＤ００１の有用性は、ステロイド、または、他の薬剤（アトピー性皮膚炎、喘息、もしくは、アレルギー性鼻炎の管理に使用されている）の量あるいは効能を減少させる。
【０２７１】
より後の試験の被検体のように、アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー性鼻炎、または、植物アレルギーおよび慢性じんましんなどのロイコトリエンに仲介される別の病気に対する、補助療法のためのあるいは単剤療法としての、キウィフルーツ抽出物、濃縮物、他の調製物、または、植物の他の部分の抽出物（例えば、皮、茎、根、葉）の使用が思い描かれる。本研究の論理的延長として、小型哺乳類（例えば、イヌ、実施例７も参照のこと）におけるアレルギー性疾患の治療としてのキウィフルーツ製造物の使用が、さらに探索されている。
【０２７２】
本明細書に記載されている各参考文献または刊行物は、参照によってその全てを本明細書に組み込まれる。
【０２７３】
本発明の様々な実施の形態が、詳細に記載されているが、それらの実施の形態の変更および改作を、当業者は思いつくと考えられる。しかしながら、そのような変更および改作は、典型的な特許請求の範囲に記載されているような、本発明の範囲内においてされるものである。
【図面の簡単な説明】
【０２７４】
【図１】Ｕ２６６Ｂ１細胞のＩｇＥ産生に対する、サルナシに由来する様々な調製物の抑制活性を示す図である。
【図２】ＯＶＡによって刺激された脾細胞（ＯＶＡ刺激脾細胞）のＩＬ‐４産生に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧ１０２Ｅの用量依存効果を示す図である。
【図３Ａ】ＩＬ‐４産生Ｔ細胞またはＩＦＮ‐γ産生Ｔ細胞の数に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を説明する図である。
【図３Ｂ】ＩｇＥ産生Ｂ細胞の数に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を説明する図である。
【図３Ｃ】Ｂ細胞内でのＩｇＥ生合成に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を説明する図である。
【図４Ａ】ウェスタンブロットによるＧＡＴＡ３，Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２の発現に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図４Ｂ】定量的リアルタイムＰＣＲ分析によるＧＡＴＡ３，Ｔ‐ｂｅｔおよびＮＦＡＴｃ２の発現に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図５Ａ】皮膚炎の指標を用いる、ＮＣマウスの皮膚炎の進行に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図５Ｂ】引っかき傷の発生を用いる、ＮＣマウスの皮膚炎の進行に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図６Ａ】ＮＣマウスの血しょうのＩｇＥのレベルに対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図６Ｂ】ＮＣマウスの血しょうのＩｇＧ１（図６Ｂ）のレベルに対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図６Ｃ】ＮＣマウスの血しょうのＩｇＧ２ａ（図６Ｃ）のレベルに対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図７Ａ】抹消血での総白血球数および好酸球数に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図７Ｂ】抹消血でのエオタキシンおよびＴＡＲＣの産生（図７Ｂ）に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図８Ａ】背中の皮膚に由来するＮＣマウスの皮膚病変に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図８Ｂ】顔の皮膚に由来するＮＣマウスの皮膚病変に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図９Ａ】ＥＬＩＳＡによって測定された、皮膚病変のＩＬ‐４、ＩＬ‐５、エオタキシン、および、ＴＡＲＣの発現に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図９Ｂ】ウェスタンブロット（図９Ｂ）によって測定された、皮膚病変のＧＡＴＡ３およびｐＳＴＡＴ６の発現に対する、ＰＧ１０２ＴおよびＰＧｌ０２Ｅの効果を示す図である。
【図１０】ＰＧ１０２Ｔを大量に製造するために使用される製法の概略図である。
【図１１】インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウス（ＯＶＡ刺激マウス）の脾細胞から産生されたサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の３つの用量（０．２５、１．０、および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。
【図１２】インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウスの脾細胞から産生されたサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）の酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）抽出物の３つの用量（０．２５、１．０、および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。
【図１３】インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウスの脾細胞から産生されたサイトカイン（ＩＬ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γ）の相対次数に対する、サルナシ濃縮果汁の３つの用量（０．２５、１．０、および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。
【図１４Ａ】インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γの相対次数に対する、シクロスポリンおよびデキサメタゾンの３つの用量の活性を示す図である。
【図１４Ｂ】インビトロにおいて３日間、ＯＶＡによって刺激されたマウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３およびＩＦＮ‐γの相対次数に対する、ケルセチンの３つの用量の活性を示す図である。
【図１５Ａ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）、ＦＤ００１の酢酸エチル抽出物（ＥｔＯＡｃ）、およびこの製法に由来する水性残留物の３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。
【図１５Ｂ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＦＮ‐γの相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）、ＦＤ００１の酢酸エチル抽出物（ＥｔＯＡｃ）、およびこの製法に由来する水性残留物の３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。
【図１６Ａ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３の相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）および粉末状のＦＤ００１（カプセルにおいて使用されるために作製された）３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。
【図１６Ｂ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＦＮ‐γの相対次数に対する、ＦＤ００１（ＰＧ１０２Ｔ）および粉末状のＦＤ００１（カプセルにおいて使用されるために作製された）３つの用量（１．０、３．０および１０ｍｇ／ｍＬ）の効果を示す図である。
【図１７Ａ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３の相対次数に対する、サルナシの代替的な調製物の効果を示す図である。
【図１７Ｂ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＦＮ‐γの相対次数に対する、サルナシの代替的な調製物の効果を示す図である。
【図１８Ａ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＬ‐１３の相対次数に対する、サルナシの代替的な植物部分の調製物の効果を示す図である。
【図１８Ｂ】インビトロにおいて３日間ＯＶＡによって刺激された、マウスの脾細胞から産生されたＩＦＮ‐γの相対次数に対する、サルナシの代替的な植物部分の調製物の効果を示す図である。
【図１９Ａ】医師包括的評価によって測定されたような、被検体がアトピー性皮膚炎の治療において前向きに反応するヒトの臨床試験の１日〜１４日の間に起こる分布変化を強調して示す図である。
【図１９Ｂ】医師包括的評価によって測定されたような、被検体がアトピー性皮膚炎の治療において前向きに反応するヒトの臨床試験の１日〜１４日の間に起こる分布変化を強調して示す図である。
【図１９Ｃ】医師包括的評価の採点基準を示す図である。
【図１】
2008531584.tif 000008
【図２】
2008531584.tif 000009
【図３Ａ】
2008531584.tif 000010
【図３Ｂ】
2008531584.tif 000011
【図３Ｃ】
2008531584.tif 000012
【図４Ａ】
2008531584.tif 000013
【図４Ｂ】
2008531584.tif 000014
【図５Ａ】
2008531584.tif 000015
【図５Ｂ】
2008531584.tif 000016
【図６Ａ】
2008531584.tif 000017
【図６Ｂ】
2008531584.tif 000018
【図６Ｃ】
2008531584.tif 000019
【図７Ａ】
2008531584.tif 000020
【図７Ｂ】
2008531584.tif 000021
【図８Ａ】
2008531584.tif 000022
【図８Ｂ】
2008531584.tif 000023
【図９Ａ】
2008531584.tif 000024
【図９Ｂ】
2008531584.tif 000025
【図１０】
2008531584.tif 000026
【図１１】
2008531584.tif 000027
【図１２】
2008531584.tif 000028
【図１３】
2008531584.tif 000029
【図１４Ａ】
2008531584.tif 000030
【図１４Ｂ】
2008531584.tif 000031
【図１５Ａ】
2008531584.tif 000032
【図１５Ｂ】
2008531584.tif 000033
【図１６Ａ】
2008531584.tif 000034
【図１６Ｂ】
2008531584.tif 000035
【図１７Ａ】
2008531584.tif 000036
【図１７Ｂ】
2008531584.tif 000037
【図１８Ａ】
2008531584.tif 000038
【図１８Ｂ】
2008531584.tif 000039
【図１９Ａ】
2008531584.tif 000040
【図１９Ｂ】
2008531584.tif 000041
【図１９Ｃ】
2008531584.tif 000042
【配列表】
2008531584000001.app
【国際調査報告】
2008531584.tif 000043