(57)【要約】標的物質の存在または非存在についてテストされる水性生物学的試料（190）が選択送達時間に上流部位に沈着させられる、水性ウィッキング物質（100）のクロマトグラフィー経路と；標的物質をテスト部位へ下流にウィッキングする際に標的物質上の第一位置に結合する機能性を有する、上流部位の下流のテスト部位でウィッキング物質に結合している捕捉物質と；クロマトグラフィー経路が、視覚的ラベル物質がクロマトグラフィー経路内で水性生物学的試料と混合しないように視覚的ラベル物質が第一送達時間後の既定の時点にウィッキングし始めるテスト部位の上流の部位（170）を有する、標的物質上の第二位置に結合する機能性を有する視覚的ラベル物質とを含む、流体流動テストデバイス。2008534932.tif 000003
2008534932.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的物質の存在または非存在についてテストされる水性生物学的試料が第一送達時間に沈着させられる水性ウィッキング物質の第一ストリップと、
テスト部位の上流の第一位置で水性ウィッキング物質の第一ストリップと流体連通している、標的物質に結合する捕捉物質を含むテスト部位を有する水性ウィッキング物質の第二ストリップと、
第一送達時間後の既定の時点に始まる、テスト部位の上流の位置からテスト部位まで物質の第二ストリップに沿ってウィッキングされる視覚的ラベル物質とを含む、
流体流動テストデバイス。
【請求項２】
デバイスが、テスト部位の上流の第二位置で第二ストリップと流体流動連通している水性ウィッキング物質の第三ストリップを含み、視覚的ラベル物質が、第一送達時間後の既定の時点に、第二ストリップへの水性ウィッキング送達のために第三ストリップから第二ストリップに送達される、請求項1記載の流体流動テストデバイス。
【請求項３】
標的物質が、選択された抗体であり、捕捉物質が、選択された抗体と複合体を形成する選択された抗原である、請求項1記載の流体流動テストデバイス。
【請求項４】
第二位置が、第一位置の上流にある、請求項2記載の流体流動テストデバイス。
【請求項５】
視覚的ラベル物質が、テストデバイスの使用時に物質の第三ストリップにアプライされるか、または視覚的ラベル物質が、物質の第三ストリップに前もってアプライされ、テストデバイスの使用前にそこに組み込まれる、請求項2記載の流体流動テストデバイス。
【請求項６】
水性生物学的試料を第一選択送達時間に水性ウィッキング物質の第一ストリップに送達する段階；
物質の第一ストリップがテスト部位の上流にある第二ストリップ上の第一選択位置で第二ストリップと流体連通している、テスト部位に定常的に位置し標的物質に結合することが可能な選択された捕捉物質を有する水性ウィッキング物質の第二ストリップを提供する段階；
第一選択送達時間後の第二の既定の時点に物質の第二ストリップに送達される視覚的ラベル物質を、テスト部位の上流の物質の第二ストリップに送達する段階を含む、
水性生物学的試料における標的物質の存在または非存在についてテストする方法。
【請求項７】
第二の既定の時点が、第一選択送達時間後、生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるのに十分な長さの後の時点である、請求項6記載の方法。
【請求項８】
標的物質が、生物学的試料に含まれる選択された抗体およびその他の抗体に非選択的に結合する抗原を含む視覚的ラベル物質に結合する選択された抗体である、請求項6記載の方法。
【請求項９】
捕捉物質が、抗体に選択的に結合する抗原を含む、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
視覚的ラベル物質が、第一位置の上流にある第二位置で第二ストリップと流体連通している水性ウィッキング物質の第三ストリップにアプライされる、請求項6記載の方法。
【請求項１１】
分離距離が、視覚的ラベル物質がテスト部位へ下流にウィッキングされる前に、生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるように、第一位置と第二位置との間で選択される、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
視覚的ラベル物質が、第一位置の上流にある第二ストリップ上の第二位置に送達される、請求項6記載の方法。
【請求項１３】
選択された標的物質に結合することが可能な選択された捕捉物質を、ストリップ上の選択されたアプリケーション部位の下流の位置で水性ウィッキング物質のストリップ上のテスト部位に結合させる段階；
水性生物学的試料を、第一選択送達時間に選択されたアプリケーション部位に送達し、生物学的試料がテスト部位に向かって下流にウィッキングされるのを可能にする段階；
第一選択送達時間後に生じる第二の既定の時点に水性ウィッキング物質のストリップに送達される視覚的ラベル物質を、テスト部位への視覚的ラベル物質の下流ウィッキングのために、テスト部位の上流の位置で物質のストリップに送達する段階を含む、
水性生物学的試料における標的物質の存在または非存在についてテストする方法。
【請求項１４】
第二の既定の時点が、第一選択送達時間後、生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるのに十分な長さの後の時点に生じる、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
視覚的ラベル物質が、アプリケーション部位の上流にある第二位置に送達される、請求項13記載の方法。
【請求項１６】
アプリケーション部位と第二位置との間の分離距離が、視覚的ラベル物質がテスト部位へ下流にウィッキングされる前に、生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるように選択される、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
標的物質が、生物学的試料に含まれる選択された抗体およびその他の抗体に非選択的に結合する抗原を含む視覚的ラベル物質に結合する選択された抗体である、請求項13記載の方法。
【請求項１８】
捕捉物質が、抗体に選択的に結合する抗原を含む、請求項14記載の方法。
【請求項１９】
標的物質の存在または非存在についてテストされる水性生物学的試料が第一送達時間に沈着させられる水性ウィッキング物質の第一ストリップと、
テスト部位の上流の第一位置で水性ウィッキング物質の第一ストリップと流体連通している、標的物質に結合する捕捉物質を含むテスト部位を有する水性ウィッキング物質の第二ストリップと、
視覚的ラベル物質が、物質の第二ストリップに沿ったテスト部位へのウィッキングのために第三ストリップ上に沈着させられる、テスト部位の上流の第二位置で第二ストリップと流体流動連通している水性ウィッキング物質の第三ストリップとを含む、
流体流動テストデバイス。
【請求項２０】
第二位置が、第一位置の上流の選択された距離にある、請求項19記載の流体流動テストデバイス。
【請求項２１】
距離が、生物学的試料が第二ストリップへの視覚的ラベル物質の送達と少なくとも同時である時間に第一ストリップ上に沈着させられる場合に、視覚的ラベル物質がテスト部位までウィッキングされることに先行して、生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるように選択される、請求項20記載の流体流動テストデバイス。
【請求項２２】
視覚的ラベル物質が、視覚的ラベル物質がテスト部位までウィッキングされることに先行して生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるのに十分な長さの後の時点である第一送達時間後の既定の時点に、第三ストリップから第二ストリップに送達される、請求項19記載の流体流動テストデバイス。
【請求項２３】
標的物質が、選択された抗体であり、捕捉物質が、選択された抗体と複合体を形成する選択された抗原である、請求項19記載の流体流動テストデバイス。
【請求項２４】
視覚的ラベル物質が、テストデバイスの使用時に物質の第三ストリップにアプライされるか、または視覚的ラベル物質が、物質の第三ストリップに前もってアプライされ、テストデバイスの使用前にそこに組み込まれる、請求項19記載の流体流動テストデバイス。
【請求項２５】
標的物質の存在または非存在についてテストされる水性生物学的試料が選択送達時間に上流部位に沈着させられる、水性ウィッキング物質のクロマトグラフィー経路と、
標的物質がテスト部位へ下流にウィッキングする際に標的物質上の第一位置に結合する機能性を有する、上流部位の下流のテスト部位でウィッキング物質に結合している捕捉物質と、
クロマトグラフィー経路が、視覚的ラベル物質がクロマトグラフィー経路内で水性生物学的試料と混合しないように視覚的ラベル物質が第一送達時間後の既定の時点にウィッキングし始めるテスト部位の上流の部位を有する、標的物質上の第二位置に結合する機能性を有する視覚的ラベル物質とを含む、
流体流動テストデバイス。
【請求項２６】
既定の時点が、選択送達時間後、水性生物学的試料がテスト部位にすでにウィッキングされていることを可能にするのに十分な長さの後の時点であるように選択される、請求項25記載のテストデバイス。
【請求項２７】
クロマトグラフィー経路が、テスト部位と試料がアプライされる上流部位との間に延びる第一経路、およびテスト部位と視覚的ラベル物質がアプライされる上流部位との間に延びる第一経路から少なくとも部分的に物理的に離れた第二経路を含む、請求項25記載のテストデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、選択された物質の存在または非存在について生物学的流体の試料をテストするための方法および装置、より詳しくは、抗体およびそれらに対応する抗原の存在または非存在についてテストすることに関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
生物学的試料において、対象となる選択された物質から細胞、固体物質、特定の巨大分子、および同様のものを分離するための「ラテラルフロー」テクノロジーと呼ばれているものを使用する様々なテストデバイスが公知である。そのような先行デバイスは、典型的には、ウィッキング/クロマトグラフィー物質の連続的なストリップの長さに沿って水性物質をウィッキングする、クロマトグラフィー物質の単一の線状または平面状の薄く細長い概して水平に配置されたストリップまたはカラムを含む。選択された抗原物質の存在または非存在についてテストされる生物学的流体の水性試料は、クロマトグラフィー物質の水平に配置されたカラム/ストリップ上の個々のスポットにアプライされる。次いで、アプライされた試料は、シンクに向かって側方方向においてカラムの長さに沿って側方にウィッキングされる。テスト部位は、水性流体の試料が試料アプリケーション部位にアプライされる場合に、試料が必ず最初に通り過ぎてテスト部位と接触するように、試料アプリケーション部位とシンクとの間に位置する。試料における抗体に対する任意の抗原がテスト部位で捕捉されかつ結合するように、対象となる選択された抗原に対する公知の抗体は、テスト部位でクロマトグラフィー物質のマトリクスに結合している。試料における対象となる抗原に選択的に結合する視覚的に同定可能な物質は、試料がアプライされるのと同じ部位に生物学的流体がアプライされるのと同時に、クロマトグラフィーストリップにアプライされる。あるいは、視覚的ラベルは、試料アプリケーション部位または試料アプリケーション部位/ポジションのわずかに下流の部位で、ストリップ上に前もって沈着させられる。水性バッファーの付加的な液滴は、試料物質および視覚的ラベル物質を、テスト部位に向かって同じ流体で同時に共にウィッキングするために、試料アプリケーション部位にアプライされる。視覚的ラベル物質は、典型的には、視覚的ラベル物質と試料との混合に際して、試料に存在する対象となる抗原に特異的に結合する。結合した抗原/ラベルは、テスト部位へ共に下流にウィッキングされる。視覚的ラベル物質は、対象となる一つの前もって選択された試料抗原に対して反応特異的であり、したがって、生物学的試料に存在し得るその他の化学物質は、視覚的ラベル物質に結合しないかまたは視覚的ラベル物質を消耗しない。
【発明の開示】
【０００３】
発明の概要
本発明は、選択された生物学的物質の存在または非存在についてテストするための装置および方法を含む。選択された生物学的物質は、例えば、互いに重なるウィッキング連結（wicking engagement）に置かれる、一連の別個であるが流体的に連通しているウィッキング構成要素に沿っておよびそれらを介してウィッキングされ得る、前もって選択された抗体、抗原、タンパク質、酵素、または任意の、分子、細胞、または生物学的部分（以後、個々にまとめて「検体」）であり得る。検体は、テスト部位でクロマトグラフィー媒質に結合している捕捉物質によってクロマトグラフィー媒質上に捕捉される。テスト部位は、検体のウィッキング経路に沿った個々の既定位置に位置する。一つの態様において、選択抗体と反応性がある相補的抗原が、テスト部位で捕捉物質として使用される。かつ、逆も同様で、選択抗原は、テスト部位で捕捉物質として選択抗原と反応性がある相補的抗体を使用することによってテストされ得る。
【０００４】
本発明は、二段階クロマトグラフィー、溶出または水性追跡プロセスをさらに提供する。最初に、生物学的試料は、クロマトグラフィー経路上の試料アプリケーション部位に送達され、捕捉テスト部位のポジションに向かってウィッキング/追跡される。次に、試料物質のウィッキングが始められる/開始される時間に続く第二段階において、視覚的ラベル物質は、視覚的ラベル物質が捕捉テスト部位の位置に到達する前の任意の時間に試料物質と接触または関与しないように、テスト部位に向かってクロマトグラフィー経路に沿ってウィッキングされる。視覚的ラベル物質は、その非結合立体配置形式で、または試料物質がそれがテスト部位で捕捉物質と反応した後に取る立体配置形式で、試料と反応する。試料物質は、典型的には、視覚的ラベル物質がクロマトグラフィー経路にアプライされる前に、テスト部位のポジションまでウィッキングされる。
【０００５】
本発明の別の局面において、二つのクロマトグラフィー経路またはウィッキング経路、すなわちテスト部位の位置への試料物質のウィッキングのための一つの経路、およびテスト部位へ視覚的ラベル物質をウィッキングするための、第一経路から少なくとも部分的に物理的に離れている別の経路を有するテストデバイスが提供される。
【０００６】
本発明において、
標的物質の存在または非存在についてテストされる水性生物学的試料が第一送達時間に沈着させられる水性ウィッキング物質の第一ストリップと、
テスト部位の上流の第一位置で水性ウィッキング物質の第一ストリップと流体連通している、標的物質に結合する捕捉物質を含むテスト部位を有する水性ウィッキング物質の第二ストリップと、
第一送達時間後の既定の時点に始まる、テスト部位の上流の位置からテスト部位まで物質の第二ストリップに沿ってウィッキングされる視覚的ラベル物質とを含む、
流体流動テストデバイスが提供される。
【０００７】
デバイスは、テスト部位の上流の第二位置で第二ストリップと流体流動連通している水性ウィッキング物質の第三ストリップを含み得、視覚的ラベル物質が、第一送達時間後の既定の時点に、第二ストリップへの水性ウィッキング送達のために第三ストリップから第二ストリップに送達される。標的物質は、典型的には、選択された抗体であり、捕捉物質は、選択された抗体と複合体を形成する選択された抗原である。視覚的ラベル物質は、テストデバイスの使用時に物質の第三ストリップにアプライされるか、または視覚的ラベル物質は、物質の第三ストリップに前もってアプライされ、テストデバイスの使用前にそこに組み込まれる。
【０００８】
さらに本発明において、
水性生物学的試料を第一選択送達時間に水性ウィッキング物質の第一ストリップに送達する段階；
物質の第一ストリップがテスト部位の上流にある第二ストリップ上の第一選択位置で第二ストリップと流体連通している、標的物質に結合することが可能なテスト部位に定常的に位置する選択された捕捉物質を有する水性ウィッキング物質の第二ストリップを提供する段階；
第一選択送達時間後の第二の既定の時点に物質の第二ストリップに送達される視覚的ラベル物質を、テスト部位の上流の物質の第二ストリップに送達する段階を含む、
水性生物学的試料における標的物質の存在または非存在についてテストする方法が提供される。
【０００９】
第二の既定の時点は、好ましくは、第一選択送達時間後、生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるのに十分な長さの後の時点である。
【００１０】
標的物質は、生物学的試料に含まれる選択された抗体およびその他の抗体に非選択的に結合する抗原を含む視覚的ラベル物質に結合する選択された抗体である。あるいは、視覚的ラベル物質は、標的物質に結合する標的物質に対する抗体を含み得る。捕捉物質は、典型的には、抗体に選択的に結合する抗原を含む。
【００１１】
好ましくは、視覚的ラベル物質は、第一位置の上流にある第二位置で第二ストリップと流体連通している水性ウィッキング物質の第三ストリップにアプライされる。分離距離は、好ましくは、視覚的ラベル物質がテスト部位へ下流にウィッキングされる前に、生物学的試料が確実にテスト部位へ下流にウィッキングされるように、第一位置と第二位置との間で選択される。視覚的ラベル物質は、典型的には、第一位置の上流にある第二ストリップ上の第二位置に送達される。
【００１２】
本発明の別の局面において、
選択された標的物質に結合することが可能な選択された捕捉物質を、ストリップ上の選択されたアプリケーション部位の下流の位置で水性ウィッキング物質のストリップ上のテスト部位に結合させる段階；
水性生物学的試料を、第一選択送達時間に選択されたアプリケーション部位に送達し、生物学的試料がテスト部位に向かって下流にウィッキングされるのを可能にする段階；
第一選択送達時間後に生じる第二の既定の時点に水性ウィッキング物質のストリップに送達される視覚的ラベル物質を、テスト部位への視覚的ラベル物質の下流ウィッキングのために、テスト部位の上流の位置で物質のストリップに送達する段階を含む、
水性生物学的試料における標的物質の存在または非存在についてテストする方法が提供される。
【００１３】
さらに本発明において、
標的物質の存在または非存在についてテストされる水性生物学的試料が第一送達時間に沈着させられる水性ウィッキング物質の第一ストリップと、
テスト部位の上流の第一位置で水性ウィッキング物質の第一ストリップと流体連通している、標的物質に結合する捕捉物質を含むテスト部位を有する水性ウィッキング物質の第二ストリップと、
視覚的ラベル物質が、物質の第二ストリップに沿ったテスト部位へのウィッキングのために第三ストリップ上に沈着させられる、テスト部位の上流の第二位置で第二ストリップと流体流動連通している水性ウィッキング物質の第三ストリップとを含む、
流体流動テストデバイスが提供される。
【００１４】
視覚的ラベル物質は、テストデバイスの使用時に物質の第三ストリップにアプライされ得るか、または視覚的ラベル物質は、物質の第三ストリップに前もってアプライされ、テストデバイスの使用前にそこに組み込まれる。
【００１５】
さらに本発明において、
標的物質の存在または非存在についてテストされる水性生物学的試料が選択送達時間に上流部位に沈着させられる、水性ウィッキング物質のクロマトグラフィー経路と、
標的物質がテスト部位へ下流にウィッキングする際に標的物質上の第一位置に結合する機能性を有する、上流部位の下流のテスト部位でウィッキング物質に結合している捕捉物質と、
クロマトグラフィー経路が、視覚的ラベル物質がクロマトグラフィー経路内で水性生物学的試料と混合しないように視覚的ラベル物質が第一送達時間後の既定の時点にウィッキングし始めるテスト部位の上流の部位を有する、標的物質上の第二位置に結合する機能性を有する視覚的ラベル物質とを含む、
流体流動テストデバイスが提供される。クロマトグラフィー経路は、典型的には、テスト部位と試料がアプライされる上流部位との間に延びる第一経路、およびテスト部位と視覚的ラベル物質がアプライされる上流部位との間に延びる第一経路から少なくとも部分的に物理的に離れた第二経路を含む。
【００１６】
本発明の上記のおよびさらなる利点は、付随する図面と併せて以下の説明を参照することによってより良く理解され得る。
【００１７】
詳細な説明
図1は、本発明に従うテスト装置10の完全に組み立てられた態様を示す。装置10は、上面10および底面ハウジング構成要素を共に堅固に保持するためのピン90および相補的開口部95（図3、4）を介して容易に共にパチンと閉まるかまたはぴったりと合う、上面ハウジング構成要素20および底面ハウジング構成要素60を含む。容易に想像できるように、ピン90は、装置全体が図2において示されるように容易に分解されることを可能にするために、開口部95から容易に離脱可能でもある。示されるように、クロマトグラフィーサブアセンブリ80は、底面ハウジング構成要素60の内蔵部分として形成されるわずかに傾斜した斜面70上でハウジング構成要素10、20の間にマウントされる。斜面70は、上流端、試料アプリケーション端から、クロマトグラフィーサブアセンブリ80の他方の下流端に向かって、水平に対して角度X（図3）で上方に傾斜する。プラスチックハウジング構成要素10、20、および内蔵斜面70は、装置10に構造的安定性を提供し、注入または圧縮成型され得、不活性であり、かつ水、バッファー200、および試料190物質に対して概して耐性がある、弾力性があるが剛性であるプラスチック物質を含む。図4における横断面において示されるように、アセンブリ80は、それぞれ開口部30、40、50を囲む側壁30a、40a、50aの底部表面によって、斜面70の表面上で挟まれかつ堅固に保持され、側壁の深さは、上面ハウジング20が底面ハウジング構成要素60と共にパチンと閉まる場合に、わずかな加圧下でアセンブリ80の上表面の対応する下層部分に合うように選択される。
【００１８】
図5、6において最も良く示されるように、クロマトグラフィーストリップ、カラム、またはアセンブリ80は、その上面側上で多数のその他の構成要素（ストリップ110の上面表面上に接着剤によって適所に保持される）、すなわち、（a）ストリップ110の最上流ポイント/位置に位置する、追跡流体（典型的には、水性バッファー流体）200、アプリケーションウィッキングパッド100、（b）合わせ面104でパッド100と流体連通しているガラスファイバーウィッキングパッド180（パッド100のすぐ下流）、（c）合わせ面182でパッド180と流体連通している、そのマトリクス内に視覚的ラベル-検体結合物質（例えば、テストおよび対照部位T、Cで蓄積する場合に視覚的に同定可能な色を提供する金と連結/接合したタンパク質）を含む第二ガラスファイバーウィッキングパッド170（パッド180のすぐ下流）、（d）合わせ面134でパッド170と流体連通し、かつ合わせ面132でパッド140と下流流体連通してもいる、ウィッキング膜またはパッド130（パッド170のすぐ下流）、（e）合わせ面134の下流にある合わせ面132でウィッキング膜130と流体連通している、不活性耐水性プラスチックの介在ストリップ150によってパッド100または180または170のいずれかとの直接的な流体連通から隔離されている試料または標本190アプリケーションパッド140、（f）合わせ面136で膜130と流体連通している最遠下流に位置するウィッキング上面パッドを支持する、屈曲可能であるが固い不活性プラスチックの細長いベースストリップ110から成る。ウィッキング膜は、典型的には、ニトロセルロース膜物質から成る。
【００１９】
耐水性両面テープのストリップ160は、図5、6において示されるように、試料アプリケーションパッド140を確実にアセンブリ80のその他の下層構成要素に対して適所に堅固に保持するために、試料アプリケーションパッド140とプラスチックバリア150との間に配置される。容易に想像できるように、図6において示される精密な間隔および距離は、本発明の二段階試料アプリケーションおよび視覚的ラベル溶出プロセスを達成するために必要または所望に応じて、選択的に変更され得かつ配置され得る。示されるように、水性の試料/標本190は、パッド140上の試料アプリケーションスポット142にアプライされる。水性試料190は、被験体における選択された条件の存在を示す既定の生物学的分子、分子の複合体、またはその他の分子サイズ部分/物質（「検体」）を通常含むと考えられる血液、尿、汗、涙、またはその他の水性生物学的流体などの生物学的流体を含む。流体が採取される被験体における既定の検体の存在または非存在は、テスト部位Tで検体を捕捉する物質に検体を結合させることによってテストされ得る。捕捉物質は、テスト部位Tで膜130の媒質に結合している。
【００２０】
説明の目的のために図6における特定の態様において示されるように、様々なパッドは、記載されるような流体移動の分離、濾過、およびタイミングを達成する目的に対して図示される距離によって、互いに対して側方におよび垂直に位置付けられる/位置を調整される。容易に想像できるように、位置の調整、長さ、および配置は、使用者およびテストされる特定の検体の選好に適合するために変更され得る。
【００２１】
試料アプリケーションスポット142は、ハウジング構成要素20において提供される試料アプリケーション開口部40下に直接的に位置を調整される。実践において、試料190は、最初に、スポット142にアプライされ、比較的短い時間、例えば1〜10秒間、下流方向にウィッキングすることが可能になる、すなわち、ウィッキングは、図5、6において示されるように右から左へ生じる。スポット142にアプライされると、水性試料190は、パッド140の合わせポイント/合わせ面132を介してウィッキングし、膜130を介して、膜130上のテスト部位Tおよび対照部位Cへかつそれらを介して、下流方向にウィッキングし続ける。ハウジング構成要素20は、アセンブリ80が斜面70上に位置付けられかつ装置10が図1において示されるように完全に組み立てられる場合に開口部50とともに提供され、ここでテスト部位Tおよび対照部位Cは開口部50を通して見るために位置的に調整される。
【００２２】
試料190がスポット142にアプライされた後、好ましくは試料190がテスト部位Tの位置までウィッキングすることが可能になった後の既定の時間、検体物質を含まない水性バッファー200が、上流パッド100上のスポット102にアプライされる。スポット102は、パッド100へのバッファー200の容易かつ精密なアプリケーションのために、ハウジング構成要素20において提供される開口部30と位置的に調整される。アプライされる場合、バッファー200は、最初にパッド100を介して、次いで、合わせ面104を介して、ガラスパッド180へかつそれを介して、次いで、合わせ面182を介して、視覚的ラベル含有パッド170へかつそれを介して、次いで、合わせ面134を介して、膜130へかつそれを介して、テスト部位Tおよび対照部位Cの両方のポジションを過ぎて、次いで、合わせ面136を介してシンクパッド120へ、連続的に下流にウィッキングする。パッド120は、それが、パッド120へと導く段階的クロマトグラフィー経路の上流端でアプライされる水性流体190および200を引き付け、したがって、パッド120が、流体190および200を下流方向に、すなわち、図3、5、6において示されるように右から左へ、移動する傾向にするためのシンクとして作用するように、その他のパッドよりも容積が相対的に大きい。
【００２３】
典型的には、例えば容積が2〜10倍などの、スポット142にアプライされる試料物質190の容積よりも実質的により大きな容積のバッファー200が、スポット102にアプライされる。パッド170は、選択された検体物質に結合することが可能である、すなわち、その遊離非結合形式で検体に直接的に結合することが可能である、またはテスト部位Tに存在する捕捉物質によって捕捉された後にその結合形式で検体に結合することが可能である、選択された量の既定視覚的ラベル物質を含む。視覚的ラベル物質が確実に、完全に溶解するか、そうでなければバッファーに取り込まれてパッド170からテスト部位Tおよび対照部位Cまでクロマトグラフィー経路に沿って完全に下流にウィッキングされるかするために利用できる、過剰ではないとしても十分な量のバッファーがあるように、（試料190の容積に対して）大量のバッファー200が、スポット102にアプライされる。
【００２４】
記載される一連の段階において、試料190は、パッド130を介して最初に下流にウィッキングされる。試料190が、少なくともテスト部位Tの下流位置まで完全にウィッキングされた後のみ、次いで、バッファー200およびパッド170に存在する視覚的ラベル物質が、テスト部位TおよびCの位置までパッド130を介して少なくとも同じクロマトグラフィー経路に沿ってウィッキングされる。試料190およびバッファー200のアプリケーションを順序付ける精密な時間ならびにアプライされる試料190およびバッファー200の精密な容積は、試料アプリケーションスポット142とテスト部位Tとの間および視覚的ラベルパッド170の位置とテスト部位Tとの間にクロマトグラフィー経路を含む別個のパッドの精密な長さおよび数に依存して変化し得る。いずれの場合においても、試料物質190は、試料190がテスト部位Tの位置までウィッキングする時間に先行してクロマトグラフィー経路のマトリクス内でいかなる時も視覚的ラベル物質が試料と混ざらないまたは組み合わさらないような時間において/時間を通じて、そのような経路に沿ってウィッキングされる。
【００２５】
パッド100、120、140、170、180、および膜130を成す物質は、水性流体を容易にウィッキングすることが可能である。合わせ面104、182、134、132、136は、水性流体が一つのパッドからそれが合わせられる別のパッドまで容易にウィッキングすることを可能にするために、それぞれの合わせパッドの反対表面が、互いに十分に連結するように配置される。別個の概して平面状であるが屈曲可能なパッド100、180、170、140、130、120の重なりは、合わせ面104、182、134、132、および136で連続でありかつ水平から垂直に遮断されるかまたは段階化される、パッド間のウィッキング経路またはクロマトグラフィー経路を作り出す。テスト部位Tで検体と視覚的ラベル物質または捕捉物質との間の反応を干渉し得るバッファー200または試料190内に含まれる異物質は、クロマトグラフィーパッド自身のマトリクス、および遮断されたまたは段階化されたクロマトグラフィー経路を作り上げる合わせ面の両方によって、選択的に濾過され得る。試料アプリケーションパッド140は、初めに、テスト部位Tへウィッキングする水性流体から細胞を濾過する。具体的に示されかつ本明細書において記載されるような遮断されたまたは段階化されたクロマトグラフィー経路は、例えば、クロマトグラフィー経路の全体的な立体配置および長さならびに合わせ面の数が、視覚的ラベルからの任意の望ましい程度の試料の濾過または分離を達成するために調整されるように、合わせ面およびクロマトグラフィーパッドの数および長さを変化させることによってなど、多くの手法において変化し得る。図5、6において最も良く示されるように、試料190の下流クロマトグラフィー流動経路は、プラスチックストリップ150ならびに概して水平な流動経路を提供するパッドおよび概して垂直な流動経路を提供する合わせ面の配置によって、視覚的ラベル物質の下流クロマトグラフィー流動経路から物理的に分離され、水平および垂直流動の組み合わせは、流動の段階化されたまたは遮断されたクロマトグラフィー経路を形成する。パッド140は、合わせ面132、膜130、および合わせ面134を介してパッド170と流体連通しているが、パッド130および140を介する流動は、流体流動を引き付けるシンクとして作用するパッド120によって上流ではなく下流に移動する傾向がある。
【００２６】
パッド170に存在する視覚的ラベル物質およびテスト部位Tに存在する捕捉物質は、典型的には、テストされる既定の検体と反応性がありかつ結合するように前もって選択される。あるいは、視覚的ラベル物質は、検体および捕捉物質の反応産物と反応性があるように選択され得る。したがって、視覚的ラベル物質がテスト部位Tの位置までウィッキングされる場合、視覚的ラベル物質は、検体がテスト部位Tで捕捉された場合のみ、テスト部位で捕捉されかつ蓄積すると考えられる（試料における検体の存在を示し、可視的）。視覚的ラベル物質が実際にテスト部位Tでの陽性視覚的存在に確実に関与するために、視覚的ラベル物質と反応しかつ捕捉する対照捕捉物質が、テスト部位Tの下流に位置する対照部位Cで膜130に結合している。視覚的ラベル物質は、テスト部位Tのポイントへの視覚的ラベル物質のウィッキングの際に、過剰な量の視覚的ラベル物質がテスト部位Tを過ぎて対照部位Cの位置まで流動することを保証されるように、テスト部位Tに存在する捕捉物質の最大モル量を上回るモル量で、パッド170上に提供される。視覚的ラベル物質を対照部位Cのポイントまでウィッキングさせるのに十分なバッファー200のアプリケーションの後に、視覚的ラベル物質の陽性視覚的同定が対照部位Cでなされ得る場合、次いで、デバイスの使用者は、テスト部位に存在する視覚的ラベル物質の陽性同定が、テスト部位Tに結合する異物による偽陽性ではないこと、およびデバイスが正しく機能していることを確認する。
【００２７】
本発明におけるテストデバイスの一つの特定の態様において、試料検体は、生物学的被験体に存在する選択された条件または抗原に対する抗体、例えば、免疫グロブリン（IgG、IgM、IgA、IgE、IgD）、およびその変異体を含む；かつ、捕捉物質は、抗体に対する一つまたは複数の抗原を含む。かつ、視覚的ラベル物質は、選択された検体-抗体に対する抗体または抗原を含む。
【００２８】
例えば、検体は、抗カンジダ免疫グロブリンG（「IgG」）などの特異的抗条件X IgGを含み得ると考えられる。そのような例において、テスト部位Tで膜のマトリクスに結合している捕捉物質は、抗カンジダIgGに対する一つまたは複数の抗原（典型的には、タンパク質）を含む。抗カンジダIgG含有試料190が、試料アプリケーション部位142からテスト部位Tまでウィッキングされる場合、テスト部位における少なくとも一つの抗原は、抗体によって認識されかつ抗体が結合するエピトープを有する。抗カンジダ抗体が、テスト部位Tで抗原に結合すると、抗体は展開し、結合抗体上の曝露された反応部位を認識する視覚的ラベルタンパク質と反応性がある抗体上の別の部位を曝露する。そのような場合、視覚的ラベル物質は、抗カンジダIgGと反応性がある別の異なるタンパク質の金複合体を含むように選択され得、典型的には、抗カンジダIgGだけではなく試料に存在し得る任意のIgGとも反応性がある。そのような例において、視覚的ラベル物質は、視覚的ラベル物質の存在または非存在がテストされる特異的抗カンジダIgG（またはその他の特異的抗X IgG）以外のIgGによって消耗されるのを避けるために、試料がテスト部位Tまでウィッキングされることに先行して、クロマトグラフィー経路内での試料190との接触から分離されなければならない。試料190からの概して反応性がある視覚的ラベル物質の分離は、上で記載されるように試料190およびバッファー200のアプリケーションの順序付けられたタイミングによって、ならびに上で記載されるように視覚的ラベル含浸パッド170からのアプリケーションパッド140の物理的な分離によって、達成される。
【００２９】
抗カンジダIgGに関して記載される特定の態様において、テスト部位Tに存在する捕捉物質は、一つまたは複数の特定のカンジダ種（例えば、C. アルビカンス（C. albicans）、C. トロピカリス（C. tropicalis）、C. パラプシローシス（C. parapsilosis）、C. ルシタニエ（C. lusitaneae）、C. グラブラータ（C. glabrata）、およびC. クルセイ（C. krusei））の細胞系に由来する一つまたは複数の抗原の混合物を含み得、そのような種の一つまたは複数またはすべてに対する抗体と反応性がある。抗原は、テスト部位Tで膜にスプレーされ結合する。容易に想像できるように、テスト捕捉物質および対照系捕捉物質は、任意の前もって選択された生物学的被験体の条件に由来しかつそれに特有の抗原を含み得、試料190におけるテストされる物質/検体は、任意のそのような前もって選択された条件に特有な抗原に対する抗体であり得る。検体に反応特異的であるかまたは概して検体の分子のクラスと反応性がある視覚的ラベル物質が使用され得る。
【００３０】
あるいは、テスト部位Tに結合するために選択される物質は、前もって選択された生物学的被験体の条件（抗原の代わりに）に対する一つまたは複数の抗体を含み得、検体は、条件に特有の一つまたは複数の抗原（抗体の代わりに）を含み得る。そのような態様において、視覚的ラベル物質は、例えば抗原に対する別の異なる抗体など、抗原と反応性があるように選択される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明に従う完全に組み立てられたテスト装置の上面斜視図である。
【図２】図1装置の分解図である。
【図３】図1のライン3-3に沿った側面横断面図である。
【図４】図3のライン4-4に沿った断面図である。
【図５】組み立てられた機能配列において示される、図1装置のクロマトグラフィーサブアセンブリの側面図である。
【図６】クロマトグラフィーサブアセンブリの構成要素の正確な相対的な水平および垂直配置の一つの特定の例を示す、図5のクロマトグラフィーサブアセンブリの側面分解図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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