(57)【要約】  本発明は、全身性肥満細胞症の処置のための薬剤の製造を目的とした、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
全身性肥満細胞症の処置または予防のための医薬の製造を目的とした、式（Ｉ）：
【化１】
2008540420.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、水素、低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルコキシカルボニル−低級アルキル、またはフェニル−低級アルキルを示し；
Ｒ２は、水素、所望により１個以上の同じまたは異なるラジカルＲ３により置換されていてよい低級アルキル、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または０、１、２もしくは３個の環窒素原子および０もしく１個の酸素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む単環または二環式ヘテロアリール基（それぞれの場合に、該基は、非置換か、または一置換もしくは多置換される。）を示し；
そして、Ｒ３は、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アシルオキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル、アミノ、一もしくは二置換アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または０、１、２もしくは３個の環窒素原子および０もしくは１個の酸素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む単環または二環式ヘテロアリール基（それぞれの場合に、該基は、非置換か、または一置換もしくは多置換される。）を示すか；
または、Ｒ１およびＲ２は、一体となって、所望により、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、一もしくは二置換アミノ、オキソ、ピリジル、ピラジニルまたはピリミジニルにより一置換または二置換されていてよい、４、５または６個の炭素原子を有するアルキレン；４もしくは５個の炭素原子を有するベンゾアルキレン；１個の酸素および３もしくは４個の炭素原子を有するオキサアルキレン；または、１個の窒素および３もしくは４個の炭素原子を有するアザアルキレン（ここで、窒素は、非置換か、または低級アルキル、フェニル−低級アルキル、低級アルコキシカルボニル−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、カルバモイル−低級アルキル、Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル−低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシカルボニル、カルボキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジニル、ピリミジニルまたはピラジニルにより置換される。）を示し；
Ｒ４は、水素、低級アルキルまたはハロゲンを示す。］
で示されるピリミジルアミノベンズアミド誘導体、およびかかる化合物のＮ−オキシドまたは薬学的に許容される塩の使用。
【請求項２】
該全身性肥満細胞症がイマチニブに対して耐性を有する、請求項１記載の使用。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）：
【化２】
2008540420.tif 000005
で示される４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］−Ｎ−［５−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド、およびそのＮ−オキシドまたは薬学的に許容される塩である、請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
該全身性肥満細胞症がＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαと関係する、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
全身性肥満細胞症の処置または予防のための、式（Ｉ）：
【化３】
2008540420.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、水素、低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルコキシカルボニル−低級アルキル、またはフェニル−低級アルキルを示し；
Ｒ２は、水素、所望により１個以上の同じまたは異なるラジカルＲ３により置換されていてよい低級アルキル、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または０、１、２もしくは３個の環窒素原子および０もしくは１個の酸素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む単環または二環式ヘテロアリール基（それぞれの場合に、該基は、非置換か、または一置換もしくは多置換される。）を示し；
そして、Ｒ３は、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アシルオキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル、アミノ、一もしくは二置換アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または０、１、２もしくは３個の環窒素原子および０もしくは１個の酸素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む単環または二環式ヘテロアリール基（それぞれの場合に、該基は、非置換か、または一置換もしくは多置換される。）を示すか；
または、Ｒ１およびＲ２は、一体となって、所望により、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、一もしくは二置換アミノ、オキソ、ピリジル、ピラジニルまたはピリミジニルにより一置換または二置換されていてよい、４、５または６個の炭素原子を有するアルキレン；４もしくは５個の炭素原子を有するベンゾアルキレン；１個の酸素および３もしくは４個の炭素原子を有するオキサアルキレン；または、１個の窒素および３もしくは４個の炭素原子を有するアザアルキレン（ここで、窒素は、非置換か、または低級アルキル、フェニル−低級アルキル、低級アルコキシカルボニル−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、カルバモイル−低級アルキル、Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル−低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシカルボニル、カルボキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジニル、ピリミジニルまたはピラジニルにより置換される。）を示し；
Ｒ４は、水素、低級アルキルまたはハロゲンを示す。］
で示される化合物から選択されるピリミジルアミノベンズアミド誘導体、およびかかる化合物のＮ−オキシドまたは薬学的に許容される塩の使用。
【請求項６】
該ピリミジルアミノベンズアミド誘導体が、式（ＩＩ）：
【化４】
2008540420.tif 000007
で示される化合物、またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩である、請求項４記載の使用。
【請求項７】
ＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲα−融合遺伝子と関係する全身性肥満細胞症の処置のための、請求項５または６記載の使用。
【請求項８】
全身性肥満細胞症を有する哺乳動物の処置方法であって、かかる処置を必要とする哺乳動物に、式（ＩＩ）：
【化５】
2008540420.tif 000008
で示される化合物、またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩の、ＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαにより誘導される疾患の阻止量を投与することを含む、方法。
【請求項９】
式（ＩＩ）：
【化６】
2008540420.tif 000009
で示される化合物、またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩を含む、ＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαにより誘導される全身性肥満細胞症を処置するための医薬品。
【請求項１０】
全身性肥満細胞症を有するヒトを含む哺乳動物の処置方法であって、かかる処置を必要とする哺乳動物に、式（ＩＩ）：
【化７】
2008540420.tif 000010
で示される化合物、またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の概要
本発明は、全身性肥満細胞症の処置のための薬剤の製造を目的とした、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体の使用に関する。本発明はまた、全身性肥満細胞症の処置方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
全身性肥満細胞症（ＳＭ）は、緩慢性ＳＭ（臓器機能障害の証拠がほとんどないまたは全くない）、侵攻性ＳＭ（臓器機能障害の存在）、ＳＭ関連血液学的非肥満細胞疾患（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）および肥満細胞白血病に分類され得る。成人型ＳＭの臨床所見は多様であり、皮膚疾患（通常、色素性蕁麻疹）、肥満細胞のメディエーター放出症状（頭痛、紅潮、立ちくらみ、失神、アナフラキシーなど）、および直接的または間接的臓器損傷（溶解性骨病変、骨粗鬆症または骨折による骨痛、肝脾腫大症、骨髄への浸潤による血球減少）が含まれる。加えて、ＳＭを有する患者の約２０％が、有意にしばしば孤立性血中好酸球増多症を示し得る（Tefferi and Pardanani 2004）。
【０００３】
一般的に、肥満細胞白血病は、余命数ヶ月の末期疾患であり、現在有効な治療薬は存在しない。緩慢性ＳＭの自然史は、平均余命数十年とより長く、侵攻性ＳＭおよびＳＭ−ＡＨＮＭＤへの進行はほとんど起こらない。ＳＭ−ＡＨＮＭＤの予後は、関連するＡＨＮＭＤにより決定され、ＡＨＮＭＤを伴わないＳＭよりもかなり悪い。ＡＨＮＭＤを伴わない緩慢性および侵攻性ＳＭの両方において、増加した骨髄肥満細胞数および好酸球数、増加した血清アルカリホスファターゼ、貧血、および肝脾腫大症が、予後不良と関係している（Tefferi and Pardanani 2004）。完全な組織学的および臨床的緩解が、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）で処置した時、ＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲα融合遺伝子と関係するＳＭを有する患者で達成されている（Pardanani 2003a、Pardanani 2003b）。
【０００４】
現在、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体が、ＳＭに対して、とりわけＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲα融合遺伝子と関係するＳＭに対して有効であることが見出されている。
【０００５】
本発明により解決されるべき課題は、とりわけ全身性肥満細胞症の、とりわけＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲα融合遺伝子と関係するＳＭの処置において有用なピリミジルアミノベンズアミド誘導体に対してである。
【発明の開示】
【０００６】
発明の概要
本発明は、全身性肥満細胞症およびＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲα融合遺伝子と関係するＳＭの処置のための医薬組成物の製造を目的とした、式（Ｉ）：
【化１】
2008540420.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、水素、低級アルキル、低級アルコキシ−低級アルキル、アシルオキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルコキシカルボニル−低級アルキル、またはフェニル−低級アルキルを示し；
【０００７】
Ｒ２は、水素、所望により１個以上の同じまたは異なるラジカルＲ３により置換されていてよい低級アルキル、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または０、１、２もしくは３個の環窒素原子および０もしく１個の酸素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む単環または二環式ヘテロアリール基（それぞれの場合に、該基は、非置換か、または一置換もしくは多置換される。）を示し；
そして、Ｒ３は、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アシルオキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル、アミノ、一もしくは二置換アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または０、１、２もしくは３個の環窒素原子および０もしくは１個の酸素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む単環または二環式ヘテロアリール基（それぞれの場合に、該基は、非置換か、または一置換もしくは多置換される。）を示すか；
【０００８】
または、Ｒ１およびＲ２は、一体となって、所望により、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、一もしくは二置換アミノ、オキソ、ピリジル、ピラジニルまたはピリミジニルにより一置換または二置換されていてよい、４、５または６個の炭素原子を有するアルキレン；４もしくは５個の炭素原子を有するベンゾアルキレン；１個の酸素および３もしくは４個の炭素原子を有するオキサアルキレン；または、１個の窒素および３もしくは４個の炭素原子を有するアザアルキレン（ここで、窒素は、非置換か、または低級アルキル、フェニル−低級アルキル、低級アルコキシカルボニル−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、カルバモイル−低級アルキル、Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル−低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシカルボニル、カルボキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジニル、ピリミジニルまたはピラジニルにより置換される。）を示し；
【０００９】
Ｒ４は、水素、低級アルキルまたはハロゲンを示す。］
で示されるピリミジルアミノベンズアミド化合物（以下：“ピリミジルアミノベンズアミド誘導体”）、およびかかる化合物のＮ−オキシドまたは薬学的に許容される塩の使用に関する。本発明はさらに、全身性肥満細胞症の処置または予防のための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００１０】
上記および下記で用いる一般用語は、他に特に記載がない限り、好ましくは本開示の文脈中、下記の意味を有する：
【００１１】
接頭語“低級”は、最大７個まで（７個を含む）の、とりわけ最大４個まで（４個を含む）の炭素原子を有するラジカルを示し、当該ラジカルは、直鎖または単一もしくは多数の枝分かれを有する分枝鎖のどちらかである。
【００１２】
複数形が化合物、塩などに用いられるとき、これは、単一の化合物、塩なども意味する。
【００１３】
全ての不斉炭素原子は、（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ，Ｓ）−配置で存在し、好ましくは（Ｒ）−または（Ｓ）−配置で存在し得る。故に、化合物は、異性体の混合物としてまたは純粋な異性体として、好ましくはエナンチオマー−純粋なジアステレオマーとして存在し得る。
【００１４】
本発明は、式Ｉの化合物の可能性のある互変異性体にも関する。
【００１５】
低級アルキルは、好ましくは、１個（１個を含む）ないし７個（７個を含む）の、好ましくは１個（１個を含む）ないし４個（４個を含む）の炭素原子を含むアルキルであり、直鎖または分枝鎖である；好ましくは、低級アルキルは、ブチル、例えばｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、例えばｎ−プロピルまたはイソプロピル、エチルまたはメチルである。好ましくは、低級アルキルは、メチル、プロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。
【００１６】
低級アシルは、好ましくは、ホルミルまたは低級アルキルカルボニルであり、特にアセチルである。
【００１７】
アリール基は、ラジカルの芳香環炭素原子に存在する結合を介して分子に結合する芳香族性ラジカルである。好ましい態様において、アリールは、６ないし１４個の炭素原子を有する芳香族性ラジカル、とりわけフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、フルオレニルまたはフェナントレニルであり、非置換か、または１個以上の、好ましくは３個までの、とりわけ１個または２個の置換基により、とりわけアミノ、一もしくは二置換アミノ、ハロゲン、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、フェニル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、ベンゾイル、カルバモイル、Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、ウレイド、メルカプト、スルホ、低級アルキルチオ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、低級アルキルフェニルチオ、低級アルキルスルフィニル、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、低級アルキルフェニルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルキルスルホニル、低級アルキルフェニルスルホニル、ハロゲン−低級アルキルメルカプト、ハロゲン−低級アルキルスルホニル、例えばとりわけ、トリフルオロメタンスルホニル、ジヒドロキシボラ（−Ｂ（ＯＨ）２）、ヘテロシクリル、環の隣接Ｃ原子に結合する単環もしくは二環式ヘテロアリール基、および低級アルキレンジオキシ、例えばメチレンジオキシから選択される置換基により置換される。アリールは、より好ましくは、フェニル、ナフチルまたはテトラヒドロナフチルであり、それぞれの場合に、非置換か、またはハロゲン、とりわけフッ素、塩素または臭素を含む基；ヒドロキシ；低級アルキル、例えばメチルにより、ハロゲン−低級アルキル、例えばトリフルオロメチルにより、またはフェニルによりエーテル化されたヒドロキシ；２個の隣接Ｃ原子と結合した低級アルキレンジオキシ、例えばメチレンジオキシ、低級アルキル、例えばメチルまたはプロピル；ハロゲン−低級アルキル、例えばトリフルオロメチル；ヒドロキシ−低級アルキル、例えばヒドロキシメチルまたは２−ヒドロキシ−２−プロピル；低級アルコキシ−低級アルキル、例えばメトキシメチルまたは２−メトキシエチル；低級アルコキシカルボニル−低級アルキル、例えばメトキシカルボニルメチル；低級アルキニル、例えば１−プロピニル；エステル化カルボキシ、とりわけ低級アルコキシカルボニル、例えばメトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニルまたはイソ−プロポキシカルボニル；Ｎ−モノ−置換カルバモイル、特に低級アルキル、例えばメチル、ｎ−プロピルまたはイソ−プロピルにより一置換されたカルバモイル；アミノ；低級アルキルアミノ、例えばメチルアミノ；ジ−低級アルキルアミノ、例えばジメチルアミノまたはジエチルアミノ；低級アルキレン−アミノ、例えばピロリジノまたはピペリジノ；低級オキサアルキレン−アミノ、例えばモルホリノ；低級アザアルキレン−アミノ、例えばピペラジノ；アシルアミノ、例えばアセチルアミノまたはベンゾイルアミノ；低級アルキルスルホニル、例えば、メチルスルホニル；スルファモイル；または、フェニルスルホニルから選択される１個または２個の置換基により独立して置換される。
【００１８】
シクロアルキル基は、好ましくはシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルであり、非置換か、または１個以上の、とりわけ１個または２個の、アリールの置換基について上記の基から選択される置換基により、最も好ましくは低級アルキル、例えばメチルにより、低級アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシまたはヒドロキシにより、さらにオキソにより置換され得るか、または例えばベンゾシクロペンチルまたはベンゾシクロヘキシルにおけるベンゾ環に縮合し得る。
【００１９】
置換アルキルは、直ぐ前に定義された通りのアルキル、とりわけ低級アルキル、好ましくはメチルであり；ここで、１個以上の、とりわけ３個までの置換基、主に、ハロゲン、とりわけフッ素、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、Ｎ−低級アルカノイルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、およびフェニル−低級アルコキシカルボニルから選択される基が存在し得る。トリフルオロメチルが、とりわけ好ましい。
【００２０】
一もしくは二置換アミノは、とりわけ、低級アルキル、例えばメチル；ヒドロキシ−低級アルキル、例えば２−ヒドロキシエチル；低級アルコキシ低級アルキル、例えばメトキシエチル；フェニル−低級アルキル、例えばベンジルまたは２−フェニルエチル；低級アルカノイル、例えばアセチル；ベンゾイル；置換ベンゾイル（ここで、フェニルラジカルは、とりわけニトロ、アミノ、ハロゲン、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイル、およびカルバモイルから選択される１個以上の、好ましくは１個または２個の置換基により置換される。）；および、フェニル−低級アルコキシカルボニル（ここで、フェニルラジカルは、非置換か、またはとりわけニトロ、アミノ、ハロゲン、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイル、およびカルバモイルから選択される１個以上の、好ましくは１個または２個の置換基により置換される。）から互いに独立して選択される１個または２個のラジカルにより置換されるアミノであり；好ましくは、Ｎ−低級アルキルアミノ、例えばＮ−メチルアミノ、ヒドロキシ−低級アルキルアミノ、例えば２−ヒドロキシエチルアミノまたは２−ヒドロキシプロピル、低級アルコキシ低級アルキル、例えばメトキシエチル、フェニル−低級アルキルアミノ、例えばベンジルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、Ｎ−フェニル−低級アルキル−Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキルフェニルアミノ、低級アルカノイルアミノ、例えばアセチルアミノ、またはベンゾイルアミノおよびフェニル−低級アルコキシカルボニルアミノを含む基から選択される置換基（ここで、それぞれの場合に、フェニルラジカルは、非置換か、またはとりわけ、ニトロもしくはアミノにより、またはまた、ハロゲン、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイル、カルバモイルまたはアミノカルボニルアミノにより置換される。）である。二置換アミノはまた、低級アルキレン−アミノ、例えば、ピロリジノ、２−オキソピロリジノまたはピペリジノ；低級オキサアルキレン−アミノ、例えばモルホリノ；低級アザアルキレン−アミノ、例えばピペラジノ；またはＮ−置換ピペラジノ、例えばＮ−メチルピペラジノまたはＮ−メトキシカルボニルピペラジノである。
【００２１】
ハロゲンは、とりわけフッ素、塩素、臭素またはヨウ素、とりわけフッ素、塩素または臭素である。
【００２２】
エーテル化ヒドロキシは、とりわけＣ８−Ｃ２０アルキルオキシ、例えばｎ−デシルオキシ、低級アルコキシ（好ましくは）、例えばメトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシもしくはｔｅｒｔ−ブチルオキシ、フェニル−低級アルコキシ、例えばベンジルオキシ、フェニルオキシ、ハロゲン−低級アルコキシ、例えばトリフルオロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシもしくは１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ、または１個もしくは２個の窒素原子を含む単環もしくは二環式ヘテロアリールにより置換される低級アルコキシ、好ましくは、イミダゾリル、例えば１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピロリル、ベンゾイミダゾリル、例えば１−ベンゾイミダゾリル、ピリジル、とりわけ２−、３−もしくは４−ピリジル、ピリミジニル、とりわけ２−ピリミジニル、ピラジニル、イソキノリニル、とりわけ３−イソキノリニル、キノリニル、インドリルもしくはチアゾリルにより置換される低級アルコキシである。
【００２３】
エステル化ヒドロキシは、とりわけ低級アルカノイルオキシ、ベンゾイルオキシ、低級アルコキシカルボニルオキシ、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシ、またはフェニル−低級アルコキシカルボニルオキシ、例えばベンジルオキシカルボニルオキシである。
【００２４】
エステル化カルボキシは、とりわけ低級アルコキシカルボニル、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソ−プロポキシカルボニル、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニル、フェニル−低級アルコキシカルボニル、またはフェニルオキシカルボニルである。
【００２５】
アルカノイルは、主にアルキルカルボニル、とりわけ低級アルカノイル、例えばアセチルである。
【００２６】
Ｎ−一置換もしくはＮ，Ｎ−二置換カルバモイルは、とりわけ、低級アルキル、フェニル−低級アルキルおよびヒドロキシ−低級アルキル、または低級アルキレン、所望により末端窒素原子で置換されていてよいオキサ−低級アルキレンもしくはアザ−低級アルキレンから独立して選択される１個または２個の置換基により置換される。
【００２７】
０、１、２もしくは３個の環窒素原子および０もしくは１個の酸素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む単環または二環式ヘテロアリール基（ここで、それぞれの場合に、該基は、非置換か、または一置換もしくは多置換される。）は、式Ｉの分子の残りの部分にヘテロアリールラジカルを結合する不飽和環であるヘテロ環式部分を意味し、好ましくは、結合環の、また所望により全てのアニール化した環の、少なくとも１個の炭素原子が、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子により置換される環であり；ここで、結合環は、好ましくは、５ないし１２個の、より好ましくは５個または６個の環原子を有し；それらは、非置換か、または１個以上の、とりわけ１個または２個の、アリールの置換基として上記の基から選択される置換基により、最も好ましくは低級アルキル、例えばメチル、低級アルコキシ、例えばメトキシもしくはエトキシ、またはヒドロキシにより置換されていてよい。好ましくは、単環または二環式ヘテロアリール基は、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、インダゾリル、プリニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、キノリニル、プテリジニル、インドリジニル、３Ｈ−インドリル、インドリル、イソインドリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フラザニル、ベンゾ［ｄ］ピラゾリル、チエニルおよびフラニルから選択される。より好ましくは、単環または二環式ヘテロアリール基は、ピロリル、イミダゾリル、例えば１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ベンゾイミダゾリル、例えば１−ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、とりわけ５−インダゾリル、ピリジル、とりわけ２−、３−または４−ピリジル、ピリミジニル、とりわけ２−ピリミジニル、ピラジニル、イソキノリニル、とりわけ３−イソキノリニル、キノリニル、とりわけ４−または８−キノリニル、インドリル、とりわけ３−インドリル、チアゾリル、ベンゾ［ｄ］ピラゾリル、チエニル、およびフラニルからなる群から選択される。本発明の１つの好ましい態様において、ピリジルラジカルは、オルト位で窒素原子をヒドロキシにより置換され、故に、少なくとも部分的に対応する互変異性体の形態で存在し、それは、ピリジン−（１Ｈ）２−オンである。別の好ましい態様において、ピリミジニルラジカルは、２位および４位の両方でヒドロキシにより置換され、故に、いくつかの互変異性体形態で、例えば、ピリミジン−（１Ｈ，３Ｈ）２，４−ジオンとして存在する。
【００２８】
ヘテロシクリルは、とりわけ窒素、酸素および硫黄を含む群から選択される１個または２個のヘテロ原子を有する５員、６員または７員のヘテロ環式系であって、不飽和であるか、または完全にまたは部分的に飽和であってよく、非置換か、またはとりわけ、低級アルキル、例えばメチル、フェニル−低級アルキル、例えばベンジル、オキソ、またはヘテロアリール、例えば２−ピペラジニルにより置換される；ヘテロシクリルは、とりわけ２−または３−ピロリジニル、２−オキソ−５−ピロリジニル、ピペリジニル、Ｎ−ベンジル−４−ピペリジニル、Ｎ−低級アルキル−４−ピペリジニル、Ｎ−低級アルキル−ピペラジニル、モルホリニル、例えば、２−または３−モルホリニル、２−オキソ−１Ｈ−アゼピン−３−イル、２−テトラヒドロフラニル、または２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イルである。
【００２９】
塩は、とりわけ式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩である。
【００３０】
かかる塩は、例えば、好ましくは、塩基性窒素原子を有する式Ｉの化合物から、有機酸または無機酸と共に酸付加塩として形成され、とりわけ薬学的に許容される塩である。適する無機酸は、例えばハロゲン酸、例えば塩酸、硫酸またはリン酸である。適する有機酸は、例えばカルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アミノ酸、例えばグルタミン酸またはアスパラギン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、アダマンタンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、桂皮酸、メタン−もしくはエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１，５−ナフタレン−ジスルホン酸、２−、３−または４−メチルベンゼンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−もしくはＮ−プロピル−スルファミン酸、または他の有機プロトン酸、例えばアスコルビン酸である。
【００３１】
負荷電ラジカルの、例えばカルボキシまたはスルホの存在下、塩はまた、塩基と共に形成され、例えば、金属またはアンモニウム塩、例えばアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウムもしくはカルシウム塩、またはアンモニアもしくは適する有機アミン、例えば３級モノアミン、例えばトリエチルアミンもしくはトリ（２−ヒドロキシエチル）アミンと共にアンモニウム塩、またはヘテロ環式塩基、例えばＮ−エチル−ピペリジンもしくはＮ，Ｎ’−ジメチルピペラジンと共に形成され得る。
【００３２】
塩基性基および酸性基が同じ分子内に存在するとき、式Ｉの化合物はまた、分子内塩を形成し得る。
【００３３】
分離または精製目的に関しては、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を用いることもできる。治療的使用を目的としては、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみが用いられ（医薬的製剤の形態で適用可能）、故に、これらが好ましい。
【００３４】
遊離形態の新規化合物と、例えば新規化合物の精製または同定において中間体として用いられ得る塩を含むそれらの塩形態の新規化合物との密接な関係を考慮して、本明細書中上記および下記の遊離化合物の全ての言及は、適当にかつ便宜上、対応する塩についても言及されると理解される。
【００３５】
式Ｉの範囲内の化合物およびそれらの製造方法は、２００４年１月１５日発行のＷＯ０４／００５２８１に開示され、それは、参照により本明細書中に包含される。好ましい化合物は、式（ＩＩ）：
【化２】
2008540420.tif 000003
で示される４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］−Ｎ−［５−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミドおよびその薬学的に許容される塩である。
【００３６】
特許出願または科学文献の引用が、特にピリミジルアミノベンズアミド誘導体化合物について与えられるそれぞれの場合において、最終生成物、医薬的製剤および特許請求の範囲の内容は、これらの文献を参照することにより本明細書中に包含される。
【００３７】
コード番号、一般名または商品名により同定される活性成分の構造は、標準的コンペンジュウム“The Merck Index”の現行版またはデータベース、例えば、Patents International（例えば、IMS World Publications）から入手され得る。その対応する内容は、参照により本明細書中に包含される。
【００３８】
現在、驚くべきことに、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体が治療的特性を有することが見出されており、とりわけ、全身性肥満細胞症のようなＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαにより誘導される疾患の処置および予防を目的として、特に、ＰＤＧＦＲα（血小板由来増殖因子α、またＰＤＧＲＡとも略される）の阻害剤として有用であることが示される。
【００３９】
本明細書中上記および下記で用いるＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαは、ＦＩＰ１Ｌ１（ＦＩＰ１様１）遺伝子とＰＤＧＦＲαとの融合産物を示す。
【００４０】
故に、本発明は、ＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαにより誘導される全身性肥満細胞症の、またはＦＩＰＬ１−ＰＤＧＦＲαもしくはＰＤＧＦＲαを活性化する同様の変異体と関係する他の疾患の処置のための薬剤の製造を目的とした、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体の使用に関する。
【００４１】
全身性肥満細胞症（ＳＭ）には、緩慢性ＳＭ、侵攻性ＳＭ、ならびにＳＭ関連血液学的非肥満細胞疾患および肥満細胞白血病が含まれる。
【００４２】
別の態様において、本発明は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーもしくは食物アレルギー、血管浮腫、蕁麻疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、多発性硬化症、または肥満細胞症の処置において、より特には、アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーもしくは食物アレルギー、血管浮腫、蕁麻疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、多発性硬化症、またはイマチニブに対して耐性を有する肥満細胞症の処置を目的として使用するための医薬組成物の製造を目的とした、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体の使用に関する。
【００４３】
本明細書で用いる用語“アレルギー性鼻炎”は、鼻粘膜の何らかのアレルギー反応を意味する。かかるアレルギー反応は、例えば通年的に（例えば春季結膜炎）または季節的に（例えば枯草熱）起こり得る。
【００４４】
本明細書で用いる用語“アレルギー性皮膚炎”は、とりわけアトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を意味するが、例えば、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、蕁麻疹および座瘡も含まれる。本明細書で定義のアトピー性皮膚炎は、より下層の皮膚から掻痒になりやすい遺伝的素因を有する個体に見られる慢性炎症性皮膚疾患である。それは、順次、湿疹の典型的な損傷に至る引っ掻きおよび擦ることによりもたらされる、主に極度の痒みにより特徴付けられる。本明細書で定義のアレルギー性接触性皮膚炎は、アレルゲンに対して獲得性過敏症を有するヒトの皮膚における、それに前もって暴露することによる結果としての炎症性反応を生じる様々な物質に対するアレルギー感作による皮膚炎の形態である。
【００４５】
本明細書で用いる用語“薬物アレルギーもしくは食物アレルギー”は、薬物または摂取抗原、例えば、イチゴ、ミルクまたは卵により生じるアレルギー性反応に関係する。
【００４６】
用語“気管支肺アスペルギルス症”は、アスペルギルスの肺への感染に関係する。
【００４７】
本明細書で用いる用語“肥満細胞症”は、全身性肥満細胞症、例えば肥満細胞腫に関係し、イヌの肥満細胞新生物にも関係する。肥満細胞症は、治療の選択肢が限られており一般的に予後不良な骨髄増殖性疾患である。肥満細胞症の原因は、受容体チロシンキナーゼＫＩＴの構成的活性化に起因している。大半の肥満細胞症患者において、ＫＩＴの脱制御されたチロシンキナーゼ活性は、インビトロおよびインビボで、イマチニブまたはメシル酸イマチニブ（後者は、米国でＧｌｅｅｖｅｃ（登録商標）または他でＧｌｉｖｅｃ（登録商標）として市販されている。）に対する耐性を与える、タンパク質のコドン８１６内の変異（Ｄ８１６Ｖ）による。
【００４８】
肥満細胞は、本明細書に記載のアレルギー性疾患において主なエフェクター細胞として重要な役割を果たす。抗原特異的ＩｇＥにより仲介される肥満細胞の脱顆粒は、次いで、化学伝達物質および多数のサイトカインの放出、ならびにロイコトリエン合成をもたらす。さらに、肥満細胞は、多発性硬化症の病因に関与する。
【００４９】
肥満細胞新生物は、ヒトおよび動物の両方で起こる。イヌにおいて、肥満細胞新生物は肥満細胞腫と称され、該疾患は、通常、イヌ腫瘍の７％−２１％を占める。通常、一過性または緩慢性であるヒト肥満細胞症と、予測不可能な経過をたどり、しばしば侵攻性かつ転移性であるイヌ肥満細胞新生物との差異が示されるに違いない。例えば、ヒトのみに起こる肥満細胞腫は、しばしば転移しない；対照的に、イヌ肥満細胞腫の５０％が、９３８匹のイヌにおける腫瘍の４６報の刊行された報告の後にHottendorf ＆ Nielsen (1969)により評価された、悪性種を示す。
【００５０】
ペット集団の癌は、自然疾患である。彼らの動物の生活の質を延長したいと思うペットの飼い主らは、しばしば、私的に紹介される国中の動物病院および大学付属動物病院の動物癌専門医の特殊なケアおよび処置を探す。癌の動物の治療法は、外科治療、化学療法、放射線治療および生物学的療法を含む、ヒトと同様の方法である。アメリカ合衆国において４２００万匹のイヌおよび約２０００万匹のネコがいることが概算されている。癌の発生率の粗概算を用いて、毎年、およそ４００万匹のイヌおよび同様の数のネコが新たに癌と診断されている。
【００５１】
イヌの皮膚肥満細胞腫は、よく起こる問題である。ほとんどの肥満細胞腫は良性であり、簡単な切除により治療される；しかしながら、遠い部位へ再発または転移するとき、治療法の選択肢は限られる。再発病変の治療法の選択肢には、外部照射治療が含まれ得る。遠方の転移または播腫性疾患に関して、化学療法プロトコールを含むロムスチン（登録商標）およびビンブラスチンの使用が、いくつかの利点を証明されている。肥満細胞腫の転移部位には、皮膚、局所リンパ節、脾臓、肝臓および骨髄が含まれる。
【００５２】
肥満細胞症の原因へのＫＩＴ受容体の関与が、ＫＩＴの構成的活性化をもたらすいくつかの変異が多くの肥満細胞株で検出されているという観察から示唆される。例えば、ホスホトランスフェラーゼドメインにおけるＡｓｐ８１６のＶａｌへの置換および受容体自己活性化を起こすヒトｃ−ＫＩＴにおける点変異が、長期ヒト肥満細胞白血病株（ＨＭＣ−１）で起こり、２種のげっ歯動物肥満細胞株における対応するコドンで起こる。さらに、この活性化変異が、いくつかのヒト肥満細胞症でインサイチュウで同定されている。２つの他の活性化変異、すなわちヒトＨＭＣ−１肥満細胞株におけるＶａｌ５６０Ｇｌｙ置換、およびＦＭＡ３と称されるげっ歯動物肥満細胞株における７個のアミノ酸欠失（Ｔｈｒ５７３−Ｈｉｓ５７９）が、ＫＩＴの細胞内膜近傍領域で見出されている。
【００５３】
本発明は、より特に、全身性肥満細胞症の処置のための薬剤の製造を目的とした、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体の使用に関する。
【００５４】
別の態様において、本発明は、全身性肥満細胞症の処置方法であって、かかる処置の必要な哺乳動物に、治療的有効量のピリミジルアミノベンズアミド誘導体、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを投与することを含む方法を提供する。
【００５５】
好ましくは、本発明は、全身性肥満細胞症を有する哺乳動物、とりわけヒトの処置方法であって、かかる処置を必要とする哺乳動物に、ＦＩＰ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲαの阻害量の４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］−Ｎ−［５−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド（化合物（ＩＩ））またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００５６】
本明細書中、用語“処置する”には、疾患にかかる危険があるかまたは疾患にかかっていると予期される患者、ならびに罹患患者の処置を含む、予防的または防止的処置の両方、ならびに治療的または疾患抑制的処置が含まれる。本用語にはさらに、疾患の進行を遅延させるための処置が含まれる。
【００５７】
本明細書で用いる用語“治療的”は、全身性肥満細胞症を伴う進行性症状の処置に効果的であることを意味する。
【００５８】
用語“予防的”は、全身性肥満細胞症を伴う疾患の発症または再発の予防を意味する。
【００５９】
本明細書で用いる用語“進行の遅延”は、処置すべき疾患の前段階または初期にある患者、例えば、対応する疾患の予備段階にあると診断される患者か、またはその状態にある患者、例えば、対応する疾患が発症しそうな状態下、薬物療法中または事故によりその状態にある患者に、活性化合物を投与することを意味する。
【００６０】
この予測不可能な範囲の特性は、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体の使用が、全身性肥満細胞症の処置のための医薬の製造を目的として、特に興味深いことを意味する。
【００６１】
この効果は、とりわけ、全身性肥満細胞症を有する患者に関して臨床的に意義があり得る。
【００６２】
ピリミジルアミノベンズアミド誘導体が、良好な治療的利益および他の利点を含む全身性肥満細胞症の処置に特に適することを証明するため、臨床試験を当業者に公知の方法で行うことができる。
【００６３】
全身性肥満細胞症を阻止するために用いるべきピリミジルアミノベンズアミド誘導体の正確な投与量は、宿主、処置すべき状態の性質および重症度、投与方法を含むいくつかの因子に依存する。式Ｉの化合物を、経口、非経腸的、例えば腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内もしくは直腸内、または経腸的を含む何らかの経路により投与できる。好ましくは、式Ｉの化合物を、好ましくは体重１ｋｇ当たり１−３００ｍｇの日用量で、またはほとんどのより大きな霊長動物について、５０−５０００ｍｇ、好ましくは５００−３０００ｍｇの日用量で経口的に投与する。好ましい経口的日用量は、単回投与かまたは１日２回投与のような多回分割投与で、体重１ｋｇ当たり１−７５ｍｇか、またはより大きな霊長動物について、１０−２０００ｍｇの日用量である。
【００６４】
通常、少量の用量を最初に投与し、該投与量を、処置中の宿主に最適な投与量が決定されるまで徐々に増加する。投与量の上限は、副作用により与えられるものであり、処置すべき宿主の試験により決定され得る。
【００６５】
式Ｉの化合物を、１種以上の薬学的に許容される担体、および所望により１種以上の他の常套的な薬学的アジュバントと併用してよく、錠剤、カプセル、カプレットなどの形態で経腸的、例えば経口的に、または、滅菌注射可能溶液もしくは懸濁液の形態で非経腸的に、例えば腹腔内または静脈内に投与される。経腸的および非経腸的組成物を、常套手段で製造することができる。
【００６６】
該ピリミジルアミノベンズアミド誘導体を、単独で、または少なくとも１個の他の、それらの病理学における使用に関して薬学的に活性な化合物と組み合わせて用い得る。これらの活性化合物は、同じ医薬的製剤の組み合わせであり得るか、または、組み合わせパートナーを、独立して投与し得るか、または、異なる量の組み合わせパートナーを含む異なる固定された組み合わせの使用、すなわち、同時にまたは異なる時間点での使用により投与し得るという意味で、組み合わせた製剤の形態の“複数部分のキット”であり得る。故に、複数部分のキットの部分を、例えば同時に、または複数部分のキットの任意の一部を、異なる時間点で、同じかまたは異なる時間間隔で、時差をつけて順番に投与することができる。ピリミジルアミノベンズアミド誘導体との組み合わせの使用について引用され得る化合物の非限定例は、シトシンアラビノシド、ダウノルビシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ＶＰ−１６またはイマチニブなどのような細胞毒性化学療法剤である。さらに、ピリミジルアミノベンズアミド誘導体を、シグナル伝達の他の阻害剤、または有意な相乗作用をもたらすであろうことが期待される他の癌遺伝子を標的とする薬剤と併用し得る。
【００６７】
本発明はさらに、上記の疾患および状態の処置のための、上記のピリミジルアミノベンズアミド誘導体とイマチニブとの組み合わせに関する。かかる組み合わせの投与を、例えば固定した、組み合わせた医薬組成物または製剤の形態で同時に、または連続してもしくは適時与えることができる。上記の投与量形態のピリミジルアミノベンズアミド誘導体およびＵＳでのＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）／欧州でのＧＬＩＶＥＣ（登録商標）の市販形態のイマチニブと、これらの投与量形態に想定される投与量の投与が、現在好ましい。
【００６８】
上記の組み合わせを用いる全身性肥満細胞症の処置は、いわゆる一次治療、すなわち何らかの前化学療法などなしに新しく診断された疾患の処置であり得るか、または、いわゆる二次治療、すなわち疾患の重症度または段階ならびに患者の全体にわたる状態などに依存して、イマチニブ（imatrinib）またはピリミジルアミノベンズアミド誘導体を用いる前処置後の疾患の処置でもあり得る。
【００６９】
全身性肥満細胞症の処置のためのピリミジルアミノベンズアミド誘導体の効果を、下記の例の結果により説明する。これらの例は、いかなる方法でもその範囲を限定することなく本発明を説明する。
【００７０】
ＩＬ−３非依存性細胞増殖アッセイ：
細胞の生存および増殖における化合物の効果を、供給者の指示書に従い、Perkin Elmer Life Sciencesから供される発光性ＡＴＰ検出アッセイキットであるＡＴＰＬｉｔｅ（商標）（カタログ番号：６０１６９４７）を用いて決定する。このアッセイ系は、ＡＴＰと付加したルシフェラーゼおよびＤ−ルシフェリンとの反応により生じる光（発光）の産生に基づく。
【００７１】
１０％ウシ胎仔血清（Amimed、カタログ番号：２−０１Ｆ８６−Ｉ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン（Gibco）を添加したＲＰＭＩ１６４０（Invitromex、カタログ番号：Ｌ０５０１）懸濁液中で増殖させたＢａ／Ｆ３ ＦＩＰ−ＰＤＧＦＲα、Ｂａ／Ｆ３キットＤ−８１６−Ｖ、Ｂａ／Ｆ３キットＤ−８１６−Ｙ、Ｂａ／Ｆ３キットｄｅｌＶＶ、Ｂａ／Ｆ３キットＲ−６３４−Ｗ細胞株を、５０μＬの完全培地中、１ウェル当たり１００００細胞の密度で黒色９６ウェル組織培養プレート（Packard）中に播種し、直後に、１ウェル当たり５０μＬの２×濃度の化合物の連続２倍希釈物を添加する（デュプリケート）。化合物なしの細胞を対照として用い、細胞なしの培地をアッセイのバックグラウンドシグナルを決定するために用いる。７０時間のインキュベーション（３７℃、５％ＣＯ２）後、細胞を、１ウェル当たり５０μＬの哺乳動物細胞溶解溶液（キットと共に供される）の添加により溶解し、オービタルプレートシェーカーで７００ｒｐｍにて５分間振とうする。その後、５０μＬの基質溶液（ルシフェラーゼおよびＤ−ルシフェリン）を添加し、５分間振とう後、１０分間プレートを暗順応させ、発光をPackard TopCountを用いて測定する。
【００７２】
化合物の活性を、細胞培養物の全成長の阻害（ＴＧＩ）として決定し、下記の通りに計算する：バックグラウンドシグナルを減算後、対照細胞について得られたシグナルを１００％とする。化合物の効果を、対照シグナルの減少パーセントとして表す。ＴＧＩ５０値を、グラフ外挿（graphical extrapolation）により用量応答曲線から決定する。
【００７３】
ＧＩＳＴ８８２は、ＫＩＴ活性化変異体（エキソン１３、Ｋ−６４２−Ｅ）を発現するヒト消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）細胞株である（Tuveson DA, Willis NA, Jacks T, Griffin JD, Singer S, Fletcher CD, Fletcher JA, Demetri GD, STI571 inactivation of the gastrointestinal stromal tumor c−KIT oncoprotein: biological and clinical implications, Oncogene, 2001 Aug 16;20(36):5054−8）。ＧＩＳＴ８８２細胞を、１５％ＦＣＳおよび２ｍＭグルタミン（Gibco）を添加したＲＰＭＩ１６４０（Invitromex、カタログ番号：Ｌ０５０１）中で培養する。細胞培養フラスコおよび９６ウェル組織培養プレートを、接着および細胞増殖を改善するため、ナノピュア水中１．５％ゼラチン溶液で３７℃にて３０−６０分間処理後に細胞を播く。ゼラチン（ＢＩＯＲＡＤ、ＥＩＡ純度試薬、カタログ番号１７０−６５３７）を、使用前に加熱（オートクレーブ）により滅菌する。
【００７４】
ＧＩＳＴ８８２細胞を、５０μＬの完全培地中、１ウェル当たり１００００細胞の密度で黒色９６ウェル組織培養プレート（Packard）に播種し、細胞を接着させるために１日インキュベートする。２×濃度の化合物の連続２倍希釈物（１ウェル当たり５０μＬ）を、デュプリケートで添加する（最終容量：１ウェル当たり１００μＬ）。化合物なしの細胞を対照として用い、細胞なしの培地をアッセイのバックグラウンドシグナルを決定するために用いる。７０時間インキュベート（３７℃、５％ＣＯ２）後、細胞を、１ウェル当たり哺乳動物細胞溶解溶液（キットと共に供される）５０μＬの添加により溶解し、オービタルプレートシェーカーで７００ｒｐｍにて５分間振とうする。その後、５０μＬの基質溶液（ルシフェラーゼおよびＤ−ルシフェリン）を添加し、５分間振とう後、１０分間プレートを暗順応させ、発光をPackard TopCountを用いて測定する。
【００７５】
化合物の活性を、細胞培養物の全成長の阻害（ＴＧＩ）として決定し、下記のとおり計算する：バックグラウンドシグナルを減算後、対照細胞について得られたシグナルを１００％とする。化合物の効果を、対照シグナルの減少パーセントとして表す。ＴＧＩ５０値を、グラフ外挿により用量応答曲線から決定する。
【００７６】
化合物（ＩＩ）は、平均ＩＣ５０値が＜２００ｎＭでＧＩＳＴ８８２細胞の増殖を阻害する。
【００７７】
細胞におけるＫｉｔ自己リン酸化の影響を決定するためのアッセイ：
非処理または化合物で処理した細胞からの溶解物における細胞標的のリン酸化状態を、ｃａｐｔｕｒｅ ＥＬＩＳＡで決定する。接着細胞を、９６ウェル平底組織培養プレート中、コンフルエント付近まで増殖させる。懸濁液中の増殖細胞を、１ウェル当たり１０００００−１５００００細胞で播種する。化合物の連続希釈物で処理後、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、次いで、１００ないし１５０μＬの溶解緩衝液（５０ｍＭトリス／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１％ＮＰ−４０、２ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム、１ｍＭ ＰＭＳＦ、５０μｇ／ｍＬアプロチニンおよび８０μｇ／ｍＬロイペプチン）で細胞溶解を行う。細胞溶解物を直ちに使用するか、または−２０℃で保存する。５０μＬの溶解物を、Diaclone（＃８５４．５１０．０００）から入手したモノクローナル抗ＣＤ１１７抗体を用いて予めコーティングされる黒色ＥＬＩＳＡプレート（ＮＵＮＣ−Ｍａｘｉｓｏｒｐ、カタログ番号：４３７１１１）にトランスファーする。コーティングに関して、抗体をＰＢＳで希釈し、該プレートを４℃で一晩インキュベートする（５０μＬ／ウェル）。ｃａｐｔｕｒｅｄ Ｋｉｔのリン酸化を、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）（ZymedのＰＹ２０ ＡＰ）で標識した市販の抗Ｐ−Ｔｙｒ Ａｂを、１：３０００ないし１：１００００（０．１ないし０．３３μｇ／ｍｌ）の範囲の最終濃度で用いて検出する。二次Ａｂを、細胞溶解物の除去後に添加する。最後に、１ウェル当たり９０μＬの化学発光ＡＰ基質（Applied BiosystemsのＥｍｅｒａｌｄ ＩＩを備えるＣＤＰＳｔａｒ ＲＴＵ（カタログ番号：Ｔ２３８８Ｃ）)を添加し、暗闇で室温にて４５分間インキュベートする。プレートを、Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＳｅａｌＴＭ−Ａプレートシーラー（カタログ番号６００５１８５）を用いて密封し、発光を、Ｐａｃｋａｒｄ Ｔｏｐ Ｃｏｕｎｔマイクロプレートシンチレーションカウンター（Top Count）を用いてカウント毎秒（ＣＰＳ）で測定することにより定量する。
【００７８】
非処理細胞の溶解物から得られるＥＬＩＳＡ読み出し値（ＣＰＳ）と、アッセイバックグラウンド（全ての成分であるが、細胞溶解物なし）からの読み出し値との相違を計算し、これらの細胞中に存在する構成的にリン酸化したＫｉｔタンパク質を１００％反射とする。Ｋｉｔキナーゼ活性における化合物の活性を、Ｋｉｔリン酸化の減少パーセントとして表す。ＩＣ５０値およびＩＣ９０値を、グラフ外挿により用量応答曲線から決定する。
【実施例】
【００７９】
実施例１
フェーズＩＩ、非盲検治験を、化合物（ＩＩ）の安全性および効果を、１日２回、経口的に４００ｍｇを投与して評価するように設計した。特定の疾患基準に合い、処置の臨床的適応症を有するＳＭ患者を登録した。結果は、この治験における最初の２３名の患者に関する予備データに基づく。結果：平均年齢が、４９歳（３３−７８歳の範囲）であり、ＳＭ診断からの平均期間が、２７ヶ月（１ないし２９２ヶ月）である。データを利用可能なものに関して、１３／１７名の患者が、骨髄細胞にｃ−ｋｉｔ Ｄ８１６Ｖ変異を有していた。化合物（ＩＩ）への暴露の平均は、１４４日であった。処置を、１８名（７８％）の患者が継続し；５名（２２％）が中断し、３名（１３％）が有害事象を有し、２名（９％）が同意を取り消した。血清トリプターゼ、骨髄肥満細胞数および臨床症状の改善に基づき、３名（１３％）の応答が報告された（２名が、不完全寛解であり、１名がやや応答した）。ベースライン変化データを、３名の応答患者のうち２名に利用可能であり、ｃ−ｋｉｔ Ｄ８１６Ｖ変異が明らかにされた。これらのデータは、化合物（ＩＩ）が、臨床的活性を有し、ＳＭを有する患者において許容される安全性および耐容性プロフィールを有することを示唆する。
【国際調査報告】
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