(57)【要約】  本発明は皮膚のコレステロールを非侵襲的に計測する方法と器具を提供する。更に具体的に言えば、本発明は一つの観点で見ると、皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布するデバイスを提供している。別の観点では、本発明は皮膚に結着した検出試薬の分量に対応する可視的な変化をつくる標示デバイスを提供する。本発明の方法と器具は実施に際してなんらの他の器具を必要としないので、例示であって限定するのではないが、家庭環境で自分で試験するのに適している。そのようなものであるから本発明で粥状硬化症とそれに関連の血管疾患の危険性を個人で評定することができる。
2008532020.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）皮膚の選択区域に検出試薬を塗布して皮膚に存在するコレステロールへ結着させ、
ｂ）皮膚の選択区域に標示面を当て、この標示面は皮膚の選択区域に接触すると検出試薬に反応する溶液を有していて、その反応によって皮膚のコレステロールに結着した検出試薬の量に対応する可視的な色の変化をつくりだし、そして
ｃ）その標示面に生じた色を分析して皮膚コレステロールを測定する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法。
【請求項２】
検出試薬を毛細管作用により皮膚の選択区域に塗布する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
検出試薬を少なくとも一つの吸上げ要素により皮膚の選択区域に塗布する請求項２に記載の方法。
【請求項４】
吸上げ要素は検出試薬で飽和している請求項３に記載の方法。
【請求項５】
吸上げ要素は検出試薬を解放するよう調整された程度だけ変形する請求項３もしくは４に記載の方法。
【請求項６】
吸上げ要素は適切なアプリケーターによって保持されている請求項３〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
皮膚に存在するコレステロールが所定の閾値を越えるとき工程ｂで可視的な色変化が生じるように検出試薬の濃度を選定する請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
検出試薬の塗布は、皮膚の選択区域内の離れた２つの区域にコントロール検出試薬とテスト検出試薬とを塗布することから成る請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
コントロール検出試薬はテスト検出試薬よりも濃度が高い請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
皮膚に存在するコレステロールが所定の閾値を越えるとき工程ｂで可視的な色変化が生じるようにテスト検出試薬の濃度を選定する請求項８もしくは９に記載の方法。
【請求項１１】
皮膚のコレステロールに結着しなかった余分の検出試薬を除去する工程を、工程ａの後で工程ｂの前に含んでいる請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
適切な吸収媒体により余分な検出試薬を取除く請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
標示面は検出試薬内のレポーター成分と反応する基質溶液を含んでいる請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
標示面は基質溶液で飽和されている吸収材料のパッドであり、その基質溶液は検出試薬中のレポーター成分と反応する請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
生じた色を反射分光光度法により分析する請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
生じた色を比色計により分析する請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
比色計はカラーバンドの階調列である請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ａ）ボデーと、
ｂ）このボデーに一端で保持されていて、第２の端で皮膚の選択区域に接触し、この第２の端で皮膚の選択区域へ検出試薬を移すようにした少なくとも一つのアプリケーターと
を備えることを特徴とした皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する器具。
【請求項１９】
アプリケーターが毛細管作用を利用して皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する請求項１８に記載の器具。
【請求項２０】
アプリケーターが吸上げ要素を含んでいる請求項１８もしくは１９に記載の器具。
【請求項２１】
ボデーが吸上げ要素の一端を受ける少なくとも一つの凹所を含んでいる請求項２０に記載の器具。
【請求項２２】
凹所の深さは吸上げ要素を受け入れるに足り、吸上げ要素の第２の端はその凹所を越えることはない請求項２１に記載の器具。
【請求項２３】
凹所の一部分の周辺は吸上げ要素の周辺よりも大きい請求項２１もしくは２２に記載の器具。
【請求項２４】
凹所の大きな周辺の部分は吸上げ要素の第２の端を包囲している請求項２３に記載の器具。
【請求項２５】
凹所の大きな周辺の部分は吸上げ要素の第２の端を包囲してその周りに間隙をつくっている請求項２４に記載の器具。
【請求項２６】
吸上げ要素は繊維プラグである請求項２０ないし２５のいずれかに記載の器具。
【請求項２７】
吸上げ要素は不活性のポリオレフィンである請求項２０〜２５のいずれかに記載の器具。
【請求項２８】
アプリケーターはゲルである請求項１８〜２５のいずれかに記載の器具。
【請求項２９】
アプリケーターは円筒形である請求項１８〜２８のいずれかに記載の器具。
【請求項３０】
２つのアプリケーターを用意し、これらのアプリケーターは相互から離れていて、一方のアプリケーターはコントロール検出試薬を塗布し、第２のアプリケーターはテスト検出試薬を塗布するようになっている請求項１８〜２９のいずれかに記載の器具。
【請求項３１】
各アプリケーターの第２の端の横断面はそれぞれ異なっている請求項３０に記載の器具。
【請求項３２】
アプリケーターは検出試薬で飽和されている請求項１８〜３１のいずれかに記載の器具。
【請求項３３】
皮膚のコレステロールに結着する検出試薬の量に対応する可視的な色の変化を生じる標示器具であって、この器具のボデーが標示面をつくっていて、その標示面は皮膚の選択区域に接触することができ、その標示面は皮膚の選択区域のコレステロールに結着する検出試薬と接触すると反応するに足るだけの溶液を含んでいて、その標示面の少なくとも一部分へ可視的な色の変化を生じさせることを特徴とした標示器具。
【請求項３４】
溶液は検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液である請求項３３に記載の標示器具。
【請求項３５】
標示面が吸収材料から成る請求項３３もしくは３４に記載の標示器具。
【請求項３６】
吸収材料は溶液で飽和されている請求項３５に記載の標示器具。
【請求項３７】
吸収材料はパッドである請求項３５〜３６のいずれかに記載の標示器具。
【請求項３８】
パッドは織成されている請求項３７に記載の標示器具。
【請求項３９】
パッドは押圧された繊維シート構造である請求項３７に記載の標示器具。
【請求項４０】
パッドは親水性材料である請求項３７に記載の標示器具。
【請求項４１】
パッドがセルロースをベースとした吸収シートである請求項３７に記載の標示器具。
【請求項４２】
パッドがガラスファィバー材料から構成されている請求項３７に記載の標示器具。
【請求項４３】
ａ）ボデーと、
ｂ）このボデーに一端で保持されていて、第２の端で皮膚の選択区域に接触し、この第２の端で皮膚の選択区域へ検出試薬を移すようにした少なくとも一つのアプリケーターと、
ｃ）ボデーがつくっている標示面と
を備え、その標示面は皮膚の選択区域に接触することができ、その標示面は皮膚の選択区域のコレステロールに結着した検出試薬と接触すると反応するに足るだけの溶液を含んでいてその標示面の少なくとも一部分へ可視的な色の変化を生じさせることを特徴とした皮膚のコレステロールを測定する器具。
【請求項４４】
毛細管作用を利用してアプリケーターは皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する請求項４３に記載の器具。
【請求項４５】
アプリケーターは吸上げ要素を含んでいる請求項４３もしくは４４に記載の器具。
【請求項４６】
ボデーの外面の少なくとも一つの凹所が吸上げ要素の一端を受け入れる請求項４５に記載の器具。
【請求項４７】
ボデーの外面の凹所は吸上げ要素の一端を受け入れるに足る深さを有していて、吸上げ要素の第２の端がボデーの外面を越えることがない請求項４６に記載の器具。
【請求項４８】
凹所の周辺部は吸上げ要素の周辺よりも大きい請求項４６もしくは４７に記載の器具。
【請求項４９】
周辺の大きい凹所の部分が吸上げ要素の第２の端を包囲している請求項４８に記載の器具。
【請求項５０】
周辺の大きい凹所の部分が吸上げ要素の第２の端を、その周りに間隙を残して包囲している請求項４９に記載の器具。
【請求項５１】
吸上げ要素は繊維プラグである請求項４５〜５０のいずれかに記載の器具。
【請求項５２】
吸上げ要素は不活性のポリオレフィン材料である請求項４５〜５０のいずれかに記載の器具。
【請求項５３】
アプリケーターはゲルである請求項４３〜５０のいずれかに記載の器具。
【請求項５４】
吸上げ要素は円筒形である請求項４５〜５０のいずれかに記載の器具。
【請求項５５】
２つのアプリケーターは相互に離れていて一方のアプリケーターはコントロール検出試薬を塗布し、第２のアプリケーターはテスト検出試薬を塗布する請求項４３〜５４のいずれかに記載の器具。
【請求項５６】
各アプリケーターの第２の端の横断面は異なっている請求項５５に記載の器具。
【請求項５７】
アプリケーターは検出試薬で飽和している請求項４３〜５６のいずれかに記載の器具。
【請求項５８】
溶液は検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液である請求項４３〜５７のいずれかに記載の器具。
【請求項５９】
標示面は吸収材料から成る請求項４３もしくは５８に記載の器具。
【請求項６０】
吸収材料は溶液で飽和されている請求項５９に記載の器具。
【請求項６１】
吸収材料はパッドである請求項５９もしくは６０に記載の器具。
【請求項６２】
パッドは織成されている請求項６１に記載の器具。
【請求項６３】
パッドは押圧された繊維シート構造となっている請求項６１に記載の器具。
【請求項６４】
パッドは親水性材料から構成されている請求項６１に記載の器具。
【請求項６５】
パッドはセルロースをベースとした吸収シートである請求項６１に記載の器具。
【請求項６６】
パッドはガラスファィバー材料から構成されている請求項６１に記載の器具。
【請求項６７】
ボデーの両側が少なくとも一つのアプリケーターと標示面を呈している請求項４３〜６６のいずれかに記載の器具。
【請求項６８】
吸収媒体をさらに備え、吸収媒体はボデーに設けられていて、前記の少なくとも一つのアプリケーターと標示面とから離れている請求項４３ないし６７のいずれかに記載の器具。  
【請求項６９】
吸収媒体は親水性材料から構成されている請求項６８に記載の器具。
【請求項７０】
前記の少なくとも一つのアプリケーターを呈するボデーの表面に少なくとも一つのマーカーを備えており、この少なくとも一つのマーカーは検出試薬が移されている皮膚区域に隣接した皮膚の選択区域に圧痕をつくるような形となっている請求項６７，６８もしくは６９のいずれかに記載の器具。
【請求項７１】
標示面に少なくとも一つの第２のマーカーを備え、この少なくとも一つの第２のマーカーは前記の少なくとも一つのマーカーと形が一致している請求項７０に記載の器具。
【請求項７２】
ａ）検出試薬源と、
ｂ）皮膚の選択区域に検出試薬を塗布するアプリケーターと、
ｃ）検出試薬と接触するとき反応する溶液源と、
ｄ）溶液を受け入れる標示面と
を備え、皮膚の選択区域に標示面が接触するとき皮膚のコレステロールに結着した検出試薬と溶液は反応して標示面の少なくとも一つの部分に可視的な色の変化をつくることを特徴とする皮膚のコレステロールを測定するキット。
【請求項７３】
アプリケーターは毛細管作用を利用して検出試薬を皮膚の選択区域に塗布する請求項７２に記載のキット。
【請求項７４】
アプリケーターは吸上げ要素を含んでいる請求項７２もしくは７３に記載のキット。
【請求項７５】
吸上げ要素は繊維プラグである請求項７４に記載のキット。
【請求項７６】
吸上げ要素は不活性のポリオレフィン材料から成る請求項７４に記載のキット。
【請求項７７】
アプリケーターはゲルである請求項７２，７３もしくは７４に記載のキット。
【請求項７８】
２つのアプリケーターを設け、これらのアプリケーターは相互に離されていて、一つのアプリケーターはコントロール検出試薬を塗布し、第２のアプリケーターはテスト検出試薬を塗布する請求項７２〜７７のいずれかに記載のキット。
【請求項７９】
各アプリケーターの第２の端は異なる横断面を呈している請求項７８に記載のキット。
【請求項８０】
アプリケーターは検出試薬の源となっている請求項７２〜７９のいずれかに記載のキット。
【請求項８１】
アプリケーターは検出試薬で飽和されている請求項８０に記載のキット。
【請求項８２】
溶液は検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液である請求項７２〜８１のいずれかに記載のキット。
【請求項８３】
標示面は吸収材料から成る請求項７２〜８２のいずれかに記載のキット。
【請求項８４】
吸収材料は溶液の源である請求項８３に記載のキット。
【請求項８５】
吸収材料は溶液で飽和されている請求項８４に記載のキット。
【請求項８６】
吸収材料はパッドである請求項８３、８４もしくは８５に記載のキット。
【請求項８７】
パッドは織成されている請求項８６に記載のキット。
【請求項８８】
パッドは圧縮された繊維シート構造である請求項８６に記載のキット。
【請求項８９】
パッドは親水性材料から構成されている請求項８６に記載のキット。
【請求項９０】
パッドはセルロースをベースにした吸収シートである請求項８６に記載のキット。
【請求項９１】
パッドはガラスファイバー材料から構成されている請求項８６に記載のキット。
【請求項９２】
吸収媒体をさらに備えている請求項７２〜９１のいずれかに記載のキット。
【請求項９３】
吸収媒体は親水性材料から構成されている請求項９２に記載のキット。
【請求項９４】
アプリケーターと標示面が器具の反対面に設けられているキット。
【請求項９５】
アプリケーター、標示面そして吸収媒体を器具に設けた請求項９２もしくは９３に記載のキット。
【請求項９６】
つくられた色を分析する反射分光光度計をさらに備える請求項７２〜９５のいずれかに記載のキット。
【請求項９７】
つくられた色を分析する比色計をさらに備える請求項７２〜９５のいずれかに記載のキット。
【請求項９８】
比色計がカラーバンドの階調列である請求項９７に記載のキット。
【請求項９９】
皮膚に存在するコレステロールに結着させるため皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する方法において、
ａ）十分な量の検出試薬を含んでいて、毛細管作用を利用して皮膚の選択区域へ検出試薬を移す少なくとも一つのアプリケーターを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域をアプリケーターに接触させて皮膚を検出試薬で湿らす
ことを特徴とした方法。
【請求項１００】
少なくとも一つの吸上げ要素により皮膚の選択区域に検出試薬を塗布する請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
吸上げ要素を検出試薬で飽和させる請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
吸上げ要素が調整された量だけ変形して検出試薬を解放する請求項１００もしくは１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
吸上げ要素は適切なアプリケーターに保持されている請求項９９ないし１０２のいずれかに記載の方法。
【請求項１０４】
検出試薬を塗布するとは、コントロール検出試薬とテスト検出試薬とを皮膚の選択区域内の２つの離れた区域へ塗布することである請求項９９〜１０３のいずれかに記載の方法。
【請求項１０５】
コントロール検出試薬はテスト検出試薬よりも濃度が高い請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０６】
皮膚のコレステロールを測定するため皮膚に存在するコレステロールに結着する検出試薬の分量に対応する可視的な色変化をつくる方法であって、
ａ）標示面が皮膚の選択区域に接触するとき検出試薬と反応する溶液を有する標示面を皮膚の選択区域へ当て、その皮膚のコレステロールに定着した検出試薬の量に対応する可視的な色変化をつくり、そして
ｂ）標示面につくられた色を分析して皮膚のコレステロールを測定する
ことを特徴とする方法。
【請求項１０７】
標示面は検出試薬内のレポーター成分と反応する基質溶液を含んでいる請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
標示面は基質溶液で飽和させた吸収材料のパッドであり、基質溶液は検出試薬内のレポーター成分と反応する請求項１０６もしくは１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
つくられた色は反射分光光度計で分析する請求項１０６〜１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１０】
つくられた色は比色計を使って分析される請求項１０６〜１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１１】
比色計はカラーバンドの階調列である請求項１１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は２００５年２月２８日に出願した米国仮出願６０／６５６、３８１に基づく利益を請求し、そしてその全内容を本文に参照により取り込むものとする。
【０００２】
本発明は皮膚、もしくは皮膚組織のコレステロールを非侵襲的に測定する方法と器具に係るものである。さらに、具体的には本発明は、典型的には器具を使用することなく、自己検査に好都合であるような、皮膚サンプルのコレステロールを直接分析検査することに係るものである。一つの観点から見れば本発明は皮膚の選択区域に検出試薬を塗布するデバイスを提供しており、別の観点から見れば本発明は皮膚に結着した検出試薬の分量に対応する可視的な変化をつくる標示デバイスを提供している。
【背景技術】
【０００３】
粥状硬化症になっていたり、もしくはその疾患を進行させていたりする危険性のある人や高コレステロール・レベルに起因する同様の病気または他の病気に罹っている危険がある人を特定するには皮膚コレステロールの高い人を識別するのが有用である。
【０００４】
粥状硬化症により生じる冠状動脈疾患が北米におけるそして世界の多くの地域で罹患率と死亡率の原因の第１位である。予防と診療にはその病気に罹っている人達ばかりでなくその病気が進行している人達を費用効果的に検出することが必要である。それ故、粥状硬化症の危険性を予知できるマーカー分子のレベル決定が目下の大きな関心事である。
【０００５】
血漿全コレステロール・レベルの測定は粥状硬化症の危険性を決定する最も広く使われている方法の一つである。しかしながら、血漿全コレステロール・レベルだけでは危険予測は正確ではなく、血漿リポタンパク質を測定して初めてよい結果が得られる。低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）と高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）との両方でコレステロールを測定するのが全コレステロール・レベルを測定する上で効果的である。これらの測定は食事のコレステロールの介入を避けるため長期の断食後に血液を採取して行うことが必要である。さらに、血液採取は愉快なものではなく、感染の危険も多少はある。さらに、しばしば分析は複雑で高価な設備を必要とする。
【０００６】
ユーザーにコレステロール・レベルを測定させるデバイスの一例が米国特許５，３４０，５３９に示されている。この特許は医師や診療所を訪ねることに関わる問題の中幾つかをないものにし、絶食を簡易にする。しかしながら、ランセットで指先を刺して血液サンプルを採取しなければならず、そのことは多くの人達にとっては嫌なことである。
【０００７】
多くの場合血漿コレステロールとリポ蛋白のレベルは粥状硬化症の進展程度と関連していない。それ故、粥状硬化症の程度を反映して心疾患の危険度を知る他のマーカー分子を分析検査することが望ましい。
【０００８】
例えば、血漿内に見出されるコレステロールに加えて、組織内に有意の量のコレステロールが発生し、そしてその組織内のコレステロールのレベルが増大すると、それは粥状硬化症の進展において大きな役割を果たしていることを示している。皮膚を含めて組織内のコレステロールの蓄積は動脈壁沈着に見出されるコレステロールの量と密接に関連していることが立証されている。それ故皮膚のコレステロールの測定は粥状硬化症の程度を反映することとなる。事実、皮膚生検試料のサンプルのコレステロール・レベルは粥状硬化症の程度と関連しており、そして虚血性心臓病の患者の危険程度の評価となることが判っている（ボイソ  エィチ  デェー  グラーヴ  ジェイ等  アン  ビオル  クリン  第４０巻、３６４−３６５、１９８２）。また、凍結乾燥皮膚生検試料のサンプルからのコレステロールの測定は健常者と虚血性心臓病の患者とにおける血清脂質指数に関連する（ワイ．ピー．ニキティン等  カーディオロジアＩＩ、４８−５１、１９８７）。
【０００９】
粥状硬化症の危険度を評定するのに皮膚コレステロールを測定するため皮膚生検試料のサンプルを採取することの欠点は皮膚サンプルの採取に痛みを伴うことである。さらに、生検場所での感染の危険もあり得る。皮膚サンプルを得るには訓練された専門家を普通必要とする。加えて、そのようなサンプルは皮下脂肪と皮膚の幾つかの層を含んでいて、それらのあるものは高度に血管新生化している。従って、これらのサンプルはコレステロールの異質源を含んでおり、再現性のある、信頼できるコレステロール評定結果を出すものではない。
【００１０】
皮膚直下の血液内の様々な物質もしくは皮膚表面の様々な物質を分析評価する一つの方法が米国特許４，４５８，６８６に開示されている。この特許は発生酸素濃度の電気化学的計測に基礎を置いている。しかしながら、皮膚を通って分散しない非揮発性物質があるので皮膚表面で酸素変化を起こさせるため皮膚の下に酵素を埋め込むことが必要である。この特許はコレステロールを測定するための酵素コレステロールオキシダーゼ（酸化酵素）の使用を開示しているが、それは測定されている皮膚コレステロールではなくて血液コレステロールであると思われる。
【００１１】
従って、他の源からのコレステロールによって影響を受けない皮膚内のコレステロールの非侵襲測定のための簡単な方法と器具とが必要とされている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は皮膚のコレステロールの非侵襲的測定法と器具を提供する。具体的には、一つの観点から見れば、本発明は皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布するデバイスを提供している。別の観点から見れば、本発明は皮膚に結着した検出試薬の分量に対応する可視的変化をつくりだす標示デバイスを提供する。本発明の方法と器具とは実施するのに器具の使用を必要とせず、限定すると言うのではないが例えば家庭での使用である自己検査に適している。そのように本発明は個人で粥状硬化症と関連血管性疾患の危険を評定するのに役立つ。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
一つの観点から見れば、本発明は、
ａ）皮膚の選択区域に検出試薬を塗布して皮膚に存在するコレステロールへ結着させ、
ｂ）皮膚の選択区域に標示面を当て、この標示面は皮膚の選択区域に接触すると検出試薬に反応する溶液を有していて、その反応によって皮膚のコレステロールに結合した検出試薬の分量に対応する可視的な色の変化をつくりだし、そして
ｃ）その標示面に生じた色を分析して皮膚コレステロールを測定する
ことを特徴とする皮膚コレステロールの測定法である。
【００１４】
検出試薬を毛細管作用により皮膚の選択区域に塗布できる。本発明の好ましい実施形態においては少なくとも一つの吸上げ要素により皮膚の選択区域に検出試薬を塗布する。吸上げ要素は検出試薬で飽和している。本発明の好ましい実施形態では、吸上げ要素は適切なアプリケーターによって保持されている。
【００１５】
さらに、吸上げ要素は検出試薬を解放するよう調整された程度だけ変形する。
【００１６】
皮膚に存在するコレステロールが所定の閾値を越えるとき工程ｂで可視的な色変化が生じるように検出試薬の濃度を選定する。
【００１７】
検出試薬の塗布は、皮膚の選択区域内の離れた２つの区域にコントロール検出試薬とテスト検出試薬とを塗布することから成る。コントロール検出試薬はテスト検出試薬よりも濃度が高くなっている。この場合、皮膚に存在するコレステロールが所定の閾値を越えるとき工程ｂで可視的な色変化が生じるようにテスト検出試薬の濃度を選定する。
【００１８】
さらに、皮膚のコレステロールに結着しなかった余分の検出試薬を除去する工程を、工程ａの後で工程ｂの前に含んでいる。適切な吸収媒体により余分な検出試薬を取除く。
【００１９】
標示面は検出試薬中のレポーター成分と反応する基質溶液を含んでいる。標示面は基質溶液で飽和されている吸収材料のパッドであり、その基質溶液は検出試薬中のレポーター成分と反応する。
【００２０】
更に、この方法は、反射分光光度法による生じた色の分析を含んでいる。または、生じた色を比色計により分析する。比色計は例えばカラーバンドの階調列でもよいが、これに限定するものではない。
【００２１】
本発明を別の観点から見ると、それは
ａ）ボデーと、
ｂ）このボデーに一端で保持されていて、第２の端で皮膚の選択区域に接触し、この第２の端で皮膚の選択区域へ検出試薬を移すようにした少なくとも一つのアプリケーターと
を備えることを特徴とした皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する器具である。
【００２２】
好ましくは、毛細管作用を利用してアプリケーターが皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する。一つの態様としてアプリケーターは吸上げ要素を含んでいる。
【００２３】
ボデーは吸上げ要素の一端を受ける少なくとも一つの凹所を含んでいる。凹所の深さは吸上げ要素を受け入れるに足り、吸上げ要素の第２の端はその凹所を越えることはない。さらに、好ましい本発明の実施形態では、凹所の一部分の周辺は吸上げ要素の周辺よりも大きくなっている。凹所の大きな周辺の部分は吸上げ要素の第２の端を包囲してその周りに間隙をつくっているのが好ましい。
【００２４】
本発明の好ましい実施形態では吸上げ要素は繊維プラグである。吸上げ要素はまた不活性のポリオレフィンであってもよい。
【００２５】
アプリケーターはゲルでもよい。
【００２６】
アプリケーターは円筒形であるのが好ましく、そこでは２つのアプリケーターを設けてあって、これらのアプリケーターは相互から離れており、一方のアプリケーターはコントロール検出試薬を塗布し、第２のアプリケーターはテスト検出試薬を塗布するようになっている。各アプリケーターの第２の（もしくは上方の）端の横断面はそれぞれ異なっている。
【００２７】
アプリケーターは検出試薬で飽和されている。
【００２８】
さらに別の観点でみれば、本発明は皮膚のコレステロールに定着する検出試薬の分量に対応する可視的な色の変化を生じる標示器具であって、この器具のボデーがつくっている標示面は皮膚の選択区域に接触することができ、その標示面は皮膚の選択区域のコレステロールに結着する検出試薬と接触すると反応するに足るだけの溶液を含んでおり、その標示面の少なくとも一部分へ可視的な色の変化を生じさせる。
【００２９】
溶液は検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液である。
【００３０】
標示面が吸収材料から成り、好ましくはその吸収材料は溶液で飽和されている。一つの実施形態では、吸収材料はパッドであって、そのパッドは織成されていたり、またはパッドは押圧された繊維シート構造である。パッドは親水性材料であり、もしくはパッドはセルロースをベースとした吸収シートであり、またパッドはガラスファィバー材料から構成されている。
【００３１】
さらに別の観点から見れば本発明は、
ａ）ボデーと、
ｂ）このボデーに一端で保持されていて、第２の端で皮膚の選択区域に接触し、この第２の端で皮膚の選択区域へ検出試薬を移すようにした少なくとも一つのアプリケーターと、
ｃ）ボデーがつくっている標示面と
を備え、その標示面は皮膚の選択区域に接触することができ、標示面は皮膚の選択区域のコレステロールに結着する検出試薬と接触すると反応するに足るだけの溶液を含んでいてその標示面の少なくとも一部分へ可視的な色の変化を生じさせることを特徴とした皮膚のコレステロールを測定する器具である。
【００３２】
毛細管作用を利用してアプリケーターは皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する。一つの実施形態ではアプリケーターは吸上げ要素を含んでいる。
【００３３】
ボデーの外面の少なくとも一つの凹所が吸上げ要素の一端を受け入れている。ボデーの外面の凹所は吸上げ要素の一端を受け入れるに足る深さを有していて、吸上げ要素の第２の端はボデーの外面を越えることがない。さらに、凹所の周辺部は吸上げ要素の周辺よりも大きくなっていて、その周辺が吸上げ要素の第２の端を包囲し、好ましい実施形態ではその周りに間隙を残している。
【００３４】
一つの実施形態では、吸上げ要素は繊維プラグである。または、吸上げ要素は不活性のポリオレフィン材料である。
【００３５】
別の実施形態ではアプリケーターはゲルである。
【００３６】
好ましい実施形態では吸上げ要素は円筒形であり、２つのアプリケーターが設けられていて、それらは相互に離れていて一方のアプリケーターにはコントロール検出試薬を塗布し、第２のアプリケーターにはテスト検出試薬を塗布している。この実施形態では、各アプリケーターの第２の端の横断面は異なっている。
【００３７】
アプリケーターは検出試薬で飽和することができる。
【００３８】
さらに、標示面上の溶液は検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液である。
【００３９】
標示面は吸収材料から成り、好ましい実施形態では吸収材料は溶液で飽和されている。
【００４０】
吸収材料はパッドであり、パッドは織成されている。またはパッドは押圧された繊維シート構造となっているか、もしくはパッドは親水性材料から構成されている。パッドはセルロースをベースとした吸収シートであり、もしくはパッドはガラスファィバー材料から構成されている。
【００４１】
好ましい実施形態では、ボデーの両側が少なくとも一つのアプリケーターと標示面となっている。
【００４２】
吸収媒体をさらに備え、この吸収媒体はボデーに設けられていて、少なくとも一つのアプリケーターと標示面とから離れている。一つの態様では、吸収媒体は親水性材料から構成されている。
【００４３】
少なくとも一つのアプリケーターを呈するボデーの表面に少なくとも一つのマーカーを備えており、この少なくとも一つのマーカーは検出試薬が移されている皮膚区域に隣接した皮膚の選択区域に圧痕をつくるような形となっている。標示面に少なくとも一つの第２のマーカーを備え、この少なくとも一つの第２のマーカーは前記の少なくとも一つのマーカーと形が一致している。
【００４４】
さらに別の観点から見れば、本発明は
ａ）検出試薬源と、
ｂ）皮膚の選択区域に検出試薬を塗布するアプリケーターと、
ｃ）検出試薬と接触するとき反応する溶液源と、
ｄ）皮膚の選択区域に標示面が接触すると溶液を受け入れる標示面と
を備え、皮膚のコレステロールに結着した検出試薬と溶液は反応して標示面の少なくとも一つの部分に可視的な色の変化をつくることを特徴とする皮膚のコレステロールを測定するキットである。
【００４５】
好ましくは。キットのアプリケーターは毛細管作用を利用して検出試薬を皮膚の選択区域に塗布する。アプリケーターは吸上げ要素を含んでおり、この吸上げ要素は繊維プラグであるか、もしくは吸上げ要素は不活性のポリオレフィン材料から成っている。さらに、アプリケーターはゲルであってよい。
【００４６】
キットには２つのアプリケーターを設け、これらのアプリケーターは相互に離されていて一つのアプリケーターにはコントロール検出試薬を塗布し、第２のアプリケーターにはテスト検出試薬を塗布する。各アプリケーターの第２の端は異なる横断面を呈している。
【００４７】
さらに、アプリケーターは検出試薬の源となっている。好ましくは、アプリケーターは検出試薬で飽和されている。
【００４８】
さらに、容液は検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液であり、好ましくは、標示面は吸収材料から成る。さらに、好ましい実施形態では吸収材料は溶液の源である。吸収材料は溶液で飽和されている。
【００４９】
一つの態様では本発明のキットの吸収材料はパッドである。このパッドは織られている、もしくはパッドは圧縮された繊維シート構造である、もしくはパッドは親水性材料から構成されている、もしくはパッドはセルロースをベースにした吸収シートである、もしくはパッドはガラスファイバー材料から構成されている。
【００５０】
キットは吸収媒体をさらに備えている。その吸収媒体は親水性材料から構成されている。
【００５１】
さらに、キットのアプリケーターと標示面とは器具の反対面に設けられている。または、
アプリケーター、標示面そして吸収媒体を器具に設けてもよい。
【００５２】
キットはつくられた色を分析する反射分光光度計をさらに備えている。または、つくられた色を分析する比色計をさらに備え、その比色計は、カラーバンドの階調列であってよいが、これに限定するのではない。
【００５３】
皮膚に存在するコレステロールに結着させるため皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する方法が提供され、その方法は、
ａ）十分な量の検出試薬を含み、毛細管作用を利用して皮膚の選択区域へ検出試薬を移す少なくとも一つのアプリケーターを用意し、
ｂ）皮膚の選択区域をアプリケーターに接触させて皮膚を検出試薬で湿らす
ことを特徴としている。
【００５４】
少なくとも一つの吸上げ要素により皮膚の選択区域に検出試薬を塗布する。さらに、その吸上げ要素を検出試薬で飽和させる。
【００５５】
吸上げ要素が調整された量だけ変形して検出試薬を解放する。
【００５６】
吸上げ要素は適切なアプリケーターに保持されている。
【００５７】
さらに、検出試薬を塗布する方法とは、コントロール検出試薬とテスト検出試薬とを皮膚の選択区域内でこれらの検出試薬を塗布する２つの離れた区域へそれぞれ塗布することである。一つの態様としては、コントロール検出試薬は高濃度のテスト検出試薬である。
【００５８】
本発明は、皮膚のコレステロールを測定するため皮膚に存在するコレステロールに結着する検出試薬の分量に相当する可視的な色変化をつくる方法を提供し、その方法は
ａ）検出試薬と反応する溶液を有する標示面を皮膚の選択区域へ当て、標示面が皮膚の選択区域に接触するとその皮膚のコレステロールに結着した検出試薬の分量に相当する可視的な色変化をつくり、そして
ｂ）標示面につくられた色を分析して皮膚のコレステロールを測定する
ことを特徴とする。
【００５９】
標示面は検出試薬内のレポーター成分と反応する基質溶液を含んでいる。その標示面は基質溶液で飽和させた吸収材料のパッドであり、基質溶液は検出試薬内のレポーター成分と反応する。
【００６０】
つくられた色は反射分光光度計で分析、または比色計を使って分析され、この比色計は例えばカラーバンドの階調列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６１】
本発明をよりよく理解するため本発明がどのように実施されるかを明示する添付図を参照して本発明の好ましい実施形態を説明する。図面を簡単に説明する。
【００６２】
図１は、皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する本発明のデバイスの部分の横断面図である。
【００６３】
図２は図１のデバイスの平面図である。
【００６４】
図３は本発明の標示デバイスの部分の平面図である。
【００６５】
図４は図１のデバイスと図２の標示デバイスとを含む本発明の器具の斜視図である。
【００６６】
図５は図４の器具の平面図である。
【００６７】
図６は図４の器具の底面図である。
【００６８】
図７ないし図１２は図４の器具を使用した本発明の方法の一つの実施形態を示す。
【００６９】
図７ａは図７の７ａ―７ａ線に沿う横断面図である。
【００７０】
本発明は皮膚コレステロールの非侵襲的測定の方法と器具とを提供するものである。さらに具体的には、本発明をその一面から見れば皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布するデバイスを提供している。本発明を別の面から見れば皮膚に結着した検出試薬の分量に対応する可視的な変化をつくる標示デバイスを提供している。本発明の方法と器具とは設備を必要としないので、自分で検査できる、例えば、限定するのではないが家庭内で実施することができる。そうであるから本発明は以下に明らかとなるように粥状硬化症とその関連の血管疾患の危険性を個人が評定するのに有用である。
【００７１】
一般的には、本発明は皮膚コレステロールを測定する方法を提供する。その方法とは、皮膚の選択区域に検出試薬を塗布して皮膚に存在するコレステロールへ結着させ、その試薬はレポーター成分を含んでおり、必要なときには適切な吸収媒体で余分の検出試薬を取除き、皮膚の選択区域へ標示面を当て、この標示面は、それが皮膚の選択区域に接触するとそのレポーター成分と反応する溶液を有しており、その反応とはレポーター成分が皮膚のコレステロールに結着している検出試薬の分量に対応する可視的な色変化をつくることであり、そしてその標示面に生じた色を分析して皮膚コレステロールを測定するのである。
【００７２】
皮膚のどこでもテストすることはできるのであるが、最も適している区域は手のひらであることが判っている。手のひらの皮膚には脂肪腺がない。そのような脂肪腺があるとそれからの分泌が結果に影響することのあるコレステロールを含んでいるからである。また、手のひらは後で説明するように場所を選んで本発明の器具を当てやすいのである。以下の説明では、検査する皮膚の区域は手のひらとしている。しかし、当業者であれば本発明は手のひらでの使用に限定されるものではなく、他の皮膚の区域に当てられることは理解されよう。
【００７３】
皮膚区域のコレステロールの分析はコレステロールを特定する検出試薬を使用することにより達成される。さらには、検出試薬はリポーター成分とリンクしていて、この成分が適切な基質溶液と反応するとき測定できる信号を発生する。
【００７４】
皮膚の選択区域に検出試薬を当てると皮膚に存在するコレステロール成分へ結着してこれを特定する。検定の一つの形では、検出試薬はタイプＡ‐Ｃ‐Ｂの化合物であり、ここでＡは特定性コレステロール結合成分、Ｂはレポーター成分そしてＣはリンク成分である。このタイプの試薬は米国特許５，４８９，５１０に説明されており、本文で参照することにより含めることとする。
【００７５】
Ａ成分は皮膚のコレステロールへ結合して識別し特定できるようにする成分ならば何でもよいが、ステロイド・グリコシド、トリテルペン・グリコシド、疎水性蛋白、ポリエン抗生物質、抗コレステロール抗体であるが、これらに限定するものではない。
【００７６】
Ｂが酵素であるＡ‐Ｃ‐Ｂタイプの成分が使える。適切な酵素の例は、限定するのではないが、ペルオキシダーゼ、アルカリ・フォスファターゼ、ウレアーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコース・オキシダーゼそしてアセチル・コリンエステラーゼである。
【００７７】
さらに、レポーター成分Ｂへ特定性のコレステロール結合成分Ａを結合する適切なリンク成分Ｃは、限定するのではないが、例えばゼロレングス架橋剤、同質二元機能性架橋剤そして異質二元機能性架橋剤を含む。ゼロレングス架橋剤はＡ分子とＢ分子との間に余分の原子を含まない結合によりそれらの分子の結合を果たしている。同質二元機能性架橋剤はＡ分子とＢ分子を結合するのに使用される２つの同じ反応基を有し、それらの分子の間に使用されるその特定性の同質二元機能性剤の長さに応じて異なる数の原子をそれらの間に有するリンクを形成する。同様に、異質二元機能性架橋剤はＡ分子とＢ分子を結合するのに使用される２つの異なる官能基を有し、それらの分子の間に使用されるその特定性の異質二元機能性剤の長さに応じて異なる数の原子を有するリンクを形成する。Ｃ成分は同じタイプの、もしくは異なるタイプの多元機能性グループを有する高分子の架橋剤であり、ＡとＢの多くの分子がポリマーバックボーンにリンクすることを可能にする。
【００７８】
Ａ‐Ｃ‐Ｂタイプの有用な試薬は例えば、Ａはジギトニン、Ｂはワサビダイコン・ペルオキシダーザ、そしてＣは無水マレイン酸-Ｎ‐ビニルピロリドン・コポリマーである。
【００７９】
本発明の器具と方法とを様々な観点から詳述する。以下に例示としてのデバイスと器具を用いている本発明の方法を説明する。
【００８０】
図１，２は本発明を一つの観点から見ての、皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布するデバイスを示している。デバイス１０はボデー１２と少なくとも一つのアプリケーター１４を含んでいる。図１，２ではボデー１２の一部分だけを示している。ボデーの形状は変わるものと理解されたい。さらに、ボデーはユーザーが容易に掴んで本発明の方法を実施するためデバイスを使えるようにする様々な形のハンドル（図示せず）を持っている。
【００８１】
アプリケーター１４はそれの一端１６で（図１に示すアプリケーターでは下端で）ボデー１２に支えられている。第２の端１８で（図１に示すアプリケーターでは上端で）皮膚の選択区域に接触するようになっている（図７ａ参照）。以下に説明するようにして、アプリケーター１４の第２の端１８を使って検出試薬で皮膚の選択区域を湿らす。
【００８２】
本発明の好ましい実施形態ではアプリケーター１４は毛細管作用を使って皮膚の選択区域へ検出試薬を移している。例えば家庭環境において自分で検査するには被験者の皮膚へ検出試薬を実際に塗布する手段を必要とし、その他には何も測定用具を必要とはしない。本発明者は、皮膚のはっきりした区域へ検出試薬をいつも同じように塗布するのに毛細管作用を利用するのがよいことを確認した。図１，２の実施形態では吸上げ要素２０を使って毛細管作用を利用している。
【００８３】
図示の実施形態ではボデー１２はアプリケーター１４を受ける凹所２２を含んでいる。特に、凹所２２は低い部分２４と上方部分２６とを有している。アプリケーター１４の端１６は、限定するのではないが例えば摩擦嵌めにより凹所２２の低い方の部分２４に保持される形にされている。
【００８４】
凹所２２の上方部分２６の周辺はアプリケーター１４の周辺よりも大きい。図に示されたように、ボデー１２内の凹所２２の上方部分２６はアプリケーター１４の第２の端１８を包囲していて、環状空間の形の間隙２８をその周りにつくっている。
【００８５】
さらに、好ましい実施形態ではアプリケーター１４はボデー１２内で窪まされていて、アプリケーター１４の第２の端１８の接触面１７はボデーの表面３０よりも高くなってはいない。
【００８６】
好ましい実施形態ではアプリケーター１４は検出試薬で飽和していて接触させるとその検出試薬を皮膚へ移す。検出試薬のこの移しは接触させて皮膚を湿らせるときに起こらなければならず、オペレーターが加える圧力とは関係なく起きる。アプリケーターを飽和させておくのが好ましいけれども、当業者には明らかなことであるが、アプリケーターを飽和させる必要はない。接触時に皮膚の区域を湿らせるに足るだけの量の検出試薬を含ませる必要はある。
【００８７】
様々な形のアプリケーター１４を本発明で使用できる。例えば、アプリケーターは、ゲルでもあっても、毛細管作用で液体を保持する繊維プラグであってもよい。不活性ポリオレフィン材料のプラグが有用である。それらは親水性であり、それにより検出試薬のような水をベースとする液体を吸収しやすい形で使いやすいからである。強化された壁を持ち、繊維要素が長さ方向に向いているプラグが有用である。それらは軸方向の強度が十分であり、そして軸に沿って液体を容易に通して、接触時に液体を皮膚に移すからである。
【００８８】
さらに、アプリケーター１４の横断面は様々な形状、幅そして長さであってもよい。円筒形プラグがアプリケーター１４として使用するのに便利である。直径が皮膚に移される検出試薬の面積を決定し、従って標示面につくられる色つきスポットの面積を決めるからであって、このことは後述する。例えば、限定するのではないが、適切なプラグの直径は約３ｍｍから約１５ｍｍであって、好ましくは約４ｍｍから約１０ｍｍである。さらに、そのようなプラグの高さは、約４ｍｍから約１０ｍｍである。
【００８９】
前に述べたように、好ましくはアプリケーター１４はボデー１２内に入り込んでいて、アプリケーター１４の第２の端１８がボデー１２の表面３０よりも高くならないようにする。このことは、手のひらもしくは他の皮膚区域に接触するときオペレーターによるアプリケーター１４の第２の端１８へ加えられる力の大きさを制限するようにする。あまり強い力だと検出試薬の過剰の分量を押し出して皮膚の大きな調整されない区域を湿らしてしまうからである。逆に、力が弱すぎると皮膚との接触が不十分になって皮膚の湿潤も不十分となる。それ故、アプリケーターへ加える圧力を調整し、しかも皮膚との接触は十分となるようにする必要がある。
【００９０】
好ましい実施形態ではこの調整は、アプリケーター１４の第２の端１８がボデー１２の表面３０の下に凹んでいるよう示している図１に示すようにアプリケーター１４をボデー１２の凹所２２内に入れることによって実施できる。アプリケーター１４は限定するのではない例示として、約０．２ｍｍから約２ｍｍ程度、好ましくは約０．５ｍｍから約１ｍｍ程度低くなっている。こうして、手もしくは他の皮膚区域により加えられる過剰な力は大体がボデー１２の周面へ移されていき、アプリケーター１４へかかることはない（図７ａ）。一般に、アプリケーター１４が皮膚の選択区域と接触するとその皮膚の選択区域とその下の肉質の領域は容易に変形してアプリケーター１４の第２の端１８との適切な接触をつくる。手のひらの小指球領域の肉質部（図７）は特に適していて、簡単に変形してアプリケーター１４の第２の端１８と十分な接触をつくる。
【００９１】
間隙２８もしくは環状空間もアプリケーター１４が手のひらに接触するとき過剰な検出試薬が皮膚に搾り出されるのを防ぐ。アプリケーター１４の第２の端１８へ加えられる過剰な圧力はアプリケーター１４を外へ変形させる。この外への変形は間隙２８に収容される。アプリケーター１４の第２の端１８は凹所２２の上方部分２６の壁３２により阻止されないからである。
【００９２】
間隙２８がなければアプリケーターと同じ直径の凹所内に、アプリケーターへの過剰圧力を加えることで、アプリケーターから抑えることのできない過剰な検出試薬を押し出して皮膚の過剰な湿潤をもたらすことになる。実際、間隙２８もしくは環状リングが、アプリケーターから搾り出された過剰な検出試薬を溜める貯蔵所となっている。この間隙２８の幅は限定ではなく、例示として約０．２ｍｍから約２ｍｍ程度、最も好ましくは約０．５ｍｍから約１ｍｍ程度である。
【００９３】
アプリケーターのための上述した寸法は本発明の実施形態の説明のためであって、これらの寸法に本発明を限定するものではなく、他にも適切な形や寸法はある。
【００９４】
皮膚のコレステロールへ結着した検出試薬の分量に対応する可視的な色変化をつくる標示デバイス５０を図３に示す。標示デバイスのボデー５２が標示面５４を呈している。標示面５４はボデー５２の上になっていて皮膚の選択区域に接触できる。さらに、以下に説明するように、標示面５４は十分な分量の溶液を含んでいて、その溶液が皮膚の選択区域のコレステロールに結着した検出試薬と接触すると反応して少なくとも標示面の一部分に可視的な色変化をつくる。
【００９５】
図３に示す実施形態において、標示面５４はパッド５６の形の吸収材であって、好ましくは溶液、例えば検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液で飽和されている。具体的には、特定性の結着検出試薬の検出は、検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液もしくは発信化合物を介して行われる。このことは、検出試薬のレポーター成分が酵素であるときに最も達成しやすい。その場合、その基質溶液は酵素に対して色をつくる発色基質である。過酸化基質例えば、過酸化水素を発色酸化還元レポーター成分と組み合わせて使用するシステムではワサビダイコン・ペルオキシダーゼが普通使われている酵素である。
【００９６】
多くの臨床分析と免疫測定では酵素成分は流体相で基質と反応して色つき溶液をつくり、その溶液の色の強さを分光測定する。または、酵素レポーター成分が固体相で固定化されている検定、例えば免疫ブロットではその固定した酵素の上に沈殿性の色形成基質の溶液を塗る。これが結着酵素の箇所で沈着して色つき生成物を生じる。
【００９７】
本発明の方法では検出試薬の特定性コレステロール結着成分を介して皮膚へ固定化酵素が結着する。流体相で使用され、そして上に述べた免疫ブロット検定で使用されるような基質溶液を使う従来の検出法には固定化酵素は受け入れられるものではない。
【００９８】
本発明での新規に判明したことは、十分な分量の基質溶液を含んだ（好ましくはそのような溶液で飽和させた）吸収材のパッド５６をレポーター成分の結着した皮膚区域へ接触させると色発現（color  development）を生じることである。この色発現は本質的に流体相であるが、免疫ブロット法でつくられるのと同じ仕方で基質パッドに色発現を生じる。酵素反応から生じる可溶性もしくは不溶性の色つきレポーター成分はパッド５６の組織間スペース（図示しない）に捕捉され、そして緩慢に分散し、それにより色つき領域をつくる。
【００９９】
発現した色領域は塗布された皮膚に固定化された酵素検出試薬の面積に対応する。例えば、図１，２を参照して上に説明したようにアプリケーター１４を使って、皮膚へ検出試薬を塗布したとき、以下の一層詳しい説明から明らかとなるように、対応する円形色つきスポット５８がパッド５６上に得られる。
【０１００】
特定性の結着検出試薬に面積で対応している色つきスポット５８を発生することに加えて色つきスポット５８のインテンシティもしくは強さは使用した検出試薬の濃度に対応する。スポットの色の強さは、限定するのでなく例として、反射分光光度法により簡単便利に測定でき、そして彩度、反射もしくは光学的密度として色の定量記録をつくれる。
【０１０１】
基質溶液を吸収するのに適切なパッド５６として使用できる幾つもの種類の材料がある。パッドを構成する材料とそれの組織間スペースの開度とが基質溶液がどのように吸収されるかに影響し、そしてそのことが色つきスポット５８をどれだけ明確につくれるかの決め手となる。
【０１０２】
薄い、織成したもしくはプレスした繊維状シート材料が最適であり、そして親水性材料は水をベースとした基質溶液を用いるパッド５６には特に有用である。セルロースをベースとした吸収シートは容易に入手でき、そしてパッド５６として使用すると十分に色をつけたスポット５８をつくる。ガラスファイバー材料の薄いシートはフィルターとして使用するのに最適である。ガラスファイバーは高度に親水性であり、そしてフィルター・グレード材料の詰まった、蛇行状毛細管は、色の分散が殆どない非常にはっきりとしたスポット５８を生じる。さらに、ガラスファイバーは非常に白く、そして色つきスポット５８を示すのに、特に薄い色のスポットの良好な背景となる。
【０１０３】
十分に色をつけたスポット５８をつくるのに適した基質溶液にパッド５６を浸すことも望ましい。例えば、検出試薬がＡ‐Ｃ‐Ｂタイプであって、ワサビダイコン・ペルオキシダーゼを酵素成分としていると、その場合高度に敏感な、市販されている基質試薬をレポーター成分として使用できる。これらのレポーター成分は典型的に過酸化水素とベンジジンをベースとした酸化還元標示色素、例えば３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジンであり、そしてペルオキシダーゼ酵素と反応して青色を呈する。これらの液体をベースとした試薬は標示デバイスのパッド５６を浸して色つきスポットをつくるのに特に有利である。
【０１０４】
過酸化物があってもなくても、乾いた試薬片とパッドが標示色素と一緒になって、ペルオキシダーゼもしくは疑似ペルオキシダーゼの活性を検出する。乾いた試薬パッドの一つのタイプはペルオキシダーゼのレポーターを採用しているが、過酸化物もしくはペルオキシドはなく、そして便内のヘモグロビン（疑似ペルオキシダーゼ）の検出に使用される。ヘモグロビンは潜血のマーカーであり、そして結腸癌の検出に試薬パッドを使う。このシステムにおいて酸化還元レポーターは通常グアヤク脂であり、多孔性マトリックスに吸収されている。糞便物質を多孔性パッドの一側に塗布して試験所に送る。試験所では過酸化水素溶液をパッドの第２の側に塗布し、その溶液はマトリックスを通って分散してヘモグロビンがあるとそれと反応する。グアヤク脂とのその後の反応でヘモグロビンの存在を示す青色の反応物を生じる。当業者であればグアヤク脂以外のペルオキシダーゼのための酸化還元レポーターもそのようなパッドに使用でき、それらも含んでいることを理解されよう。
【０１０５】
第２のタイプの乾いた試薬パッドを使用してペルオキシダーゼの活動を検出する、例えば尿浸漬棒を使ってヘモグロビンを検出する。一般に、これらのシステムは有機ヒドロ過酸化物（例えば、クメンヒドロ過酸化物、ブチル過酸化物もしくは同様の化合物）並びに酸化還元標示色素（ｏ−・トリジン，３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジン、もしくは同様の酸化還元標示材）を採用している。これらの試薬の溶液は安定剤、緩衝剤そして他の成分と一緒に多孔性マトリックスに吸収され、それから乾燥されて適切な標示パッドを形成する。例えば、米国特許４，０７１，３１８と５，３１８，８９４は本文に参照して取り込むものとし、これらの文献はそのような乾燥試薬材料を調製する方法を示している。
【０１０６】
本発明をさらに別の観点から見れば、上述のタイプの乾燥試薬パッドの両方とも皮膚コレステロールに結着した検出試薬の過酸化物の活動を発信する標示システムとして使用できる。第１の場合においてはグアヤク脂もしくは他の過酸化物標示剤を含む乾燥パッドを希釈過酸化水素溶液で湿らせ、そして本発明の方法では検出試薬の結着した手のひらをその湿らせたパッドに当てる。皮膚のコレステロールへ結着したペルオキシダーゼは結着検出試薬の区域に対応する色の変化を標示パッド上に生じさせる。
【０１０７】
第２の場合には、ヒドロ過酸化物と標示薬との両方を含む乾燥パッドを水で湿らせる。検出試薬が結着した手のひらを湿ったパッドに当てる。特に、皮膚のコレステロールに結着した検出試薬は結着したペルオキシダーゼに対応する区域でパッドに色変化を生じる。
【０１０８】
すべての場合において、基質浸漬の吸収パッド５６を本発明に従って使用すると皮膚へ基質溶液を直接塗布しなくて済み、そしてそのことが引き起こす非常に限定的な包含問題を回避する。
【０１０９】
図１，２に示す検出試薬を塗布するデバイス１０と図３に示す標示デバイス５０とは図４，５，６に最もよく示されている一つの器具１００に容易に組み合わせられる。単一の器具１００の中に標示デバイス５０とデバイス１０のアプリケーター１４を組み合わせることにより、本発明ではコレステロール・レベルを自分で検査する比較的簡単な方法を与えており、それによって限定するのではなく例示として、特に家庭環境で自分で検査できる。
【０１１０】
図１，２でデバイス１０に対して、そして図３で標示デバイス５０に対して使用したのと同じ参照文字の先頭に「１」を付けて器具１００を参照する。例えば、図４では図１のアプリケーター１４を１１４としており、そして図６では図３の標示面５４を１５４としている。新しい素子には、先頭に「２」を付けて、例えば器具１００はボデー２０２を含み、その一端にハンドル２０４を、そして他端に皮膚接触部（もしくは端）２０６を有し、この皮膚接触部はアプリケーター１１４と標示面１５４とを支持している。器具１００は検出試薬を塗布するデバイス１０と標示デバイス５０とを組み合わせる実施形態を表していることを理解されたい。図示の器具１００は、端２０６の一面上にアプリケーター１１４を、そしてそれの他面に標示面１５４を示している。当業者には自明な他の形態も本発明の範疇のものである。例えば、器具１００は必要なら、過剰の検出試薬をふき取る付加的な吸収媒体（図示せず）のためのスペースをつくってもよい。吸収媒体はアプリケーターと標示面とから離してある。
【０１１１】
図１，２について上に述べた検出試薬を塗布するデバイス１０の説明は、器具１００を使って検出試薬を塗布する限り、器具１００の説明ともなっている。具体的には、器具１００では少なくとも一つのアプリケーター１１４（図示の実施形態では２つ示されている）が凹所１２２内に設けている（図５参照）。さらに、アプリケーター１１４は凹所に収められていて、その第２の端１１８は器具１００のボデー２０２の表面１３０よりも高くない。
【０１１２】
器具１００の表面１３０には幾つものロケーター・マーカー２０８ａが端２０６の部分２０６の周りに間隔をあけて配置されている。これらのマーカーの目的は以下に説明するように、検出試薬を塗布するとき器具１００が接触する皮膚の区域に圧痕を残すことである。
【０１１３】
本発明の好ましい実施形態である器具１００では図５に示すように２つのアプリケーター１１４が相互から離してある。一方のアプリケーターは皮膚区域へコントロール検出試薬を塗布し、第２のアプリケーターはテスト検出試薬を塗布する。図４，５の器具１００の実施形態は横断面が同じであるアプリケーター１１４を示しているけれども、皮膚に接触する各アプリケーターの第２の端の横断面は異なっていてもよい。こうしておくと一目でどちらがコントロール検出試薬で、どちらがテスト検出試薬かが判る。
【０１１４】
同様に、図３を参照して上に述べた標示デバイス５０の説明は、器具１００が標示デバイスとして使用される限り、器具１００の説明でもある。具体的に言えば、器具１００は少なくとも一つの標示面１５４（図６の実施形態では２つになっている）を有する。標示面１５４は、それが皮膚の選択面に接触するとき皮膚のコレステロールへ結着した検出試薬の分量に対応する可視的な色変化をつくれる。図３の標示デバイス５０について以前説明したように、標示面１５４はパッド１５６の形の吸収材であって、このましくは溶液、例えば器具１００のアプリケーター１１４が塗布する検出試薬のレポーター成分と反応する基質溶液で飽和している。
【０１１５】
同様に、端２０６の表面２１０は間隔をあけて幾つかのロケーター・マーカー２０８ｂを器具１００の表面１３０の周りに配している。これらのマーカーの目的は以下に説明するように、検出試薬を塗布するときマーカー２０８ａが皮膚に残すそれに対応する圧痕に一致させて、パッド１５６が皮膚の同じ区域に重なるようにすることである。
【０１１６】
本発明の好ましい実施形態である器具１００では図６に示すように２つのパッド１５６が相互から離してある。各パッド１５６はアプリケーター１１４の一つに対応する。しかし、一つのパッドの大きさを器具１００に対して示されている２つのパッド１５６の面積と同じ面積としてもよい。パッドの他の形状や形態は当業者には明らかであろう。
【０１１７】
試験目的のため皮膚はコントロール検出試薬とテスト検出試薬との両方に接触し、各検出試薬は別個のアプリケーター１１４により塗布される。実際には、同じ検出試薬を両方のアプリケーターで使い、コントロールには高濃度の検出試薬を使う。高濃度のコントロール検出試薬を選び、次いで色発現すれば標示面１５４で、皮膚コレステロール・レベルとは関係なく、試験したすべてが個々にはっきりと見える色つきスポットをつくる。コントロール検出試薬で簡単に区別できる色つきスポットを与えることは、皮膚の区域例えば手のひらが検出試薬と十分良好な接触をすることを個々に確実にする。
【０１１８】
テスト検出試薬を移すアプリケーターは、コントロール検出試薬と同じ検出試薬であって低濃度のものを含んでいる。テスト検出試薬濃度を選定して、標示面で色発現した後皮膚のコレステロールのレベルを色の強さが反映している色つきスポットをつくる。
【０１１９】
本発明を別の観点から見れば、検出試薬濃度を選定して、皮膚のコレステロールの設定閾値レベルでは標示面に色つきスポットをつくらないようにする。この閾値レベル以上の皮膚のコレステロール・レベルを持つ人では、その人の皮膚のコレステロール・レベルを反映する強度のスポットをつくる。このようにして、皮膚のコレステロール・レベルが選定値以上である人を識別する簡単なテストが提供され（すなわち、認識できる色つきスポットがつくられる）、それ故所定の閾値量を超えている人については粥状硬化症と他の関連心臓血管の疾患の危険が増大していると考えられる。
【０１２０】
本発明を別の観点から見れば、試験されたすべての人に色つきスポットを生じ、それの強度がその人の皮膚のコレステロール・レベルに比例しているように検出試薬の濃度を選定することもできる。皮膚のコレステロールのレベルが高い人は、皮膚のコレステロールのレベルが低い人よりも所与の時間が経過すると多くの検出試薬と結合し、そして発現した色は結着した検出剤の分量に比例する。このタイプの検定では色つきスポットの色の強さは以下に説明するように、比色カードの幾つかの規定の色の一つと合うことになる。つくられるスポットの色で個人の皮膚のコレステロールを準定量的に決定でき、例えば低、正常、高と言ったような幾つかの危険グループの一つのどれかに決められる。  
【０１２１】
色量測定器を使ってこれらの検定で色発現された色つきスポットの強度を更に正確に測定できる。例えば、簡単な反射分光光度計を使って、参照し本文に取り込んでいる国際特許出願公開ＷＯ０１／０１１３５９Ａ３に開示しているようにして、色の属性例えば、彩度、反射、そして光学的密度を使って色の分量を決定できる。
【０１２２】
図７、７ａ、８、９、１０、１１、１２を参照し、そして本発明の器具１００を例にとって以下に本発明の方法を詳細に説明する。同じ方法が別のデバイス１０と標示デバイス５０を使っても以下の工程を経ることにより実施できる。
【０１２３】
先ず、器具１００を使って検出試薬を皮膚の選択区域に、例えば手のひら３００へ塗布する。この例では、アプリケーター１１４は２つの丸い、吸収性のポリオレフィン・フィルター１１４ａ、１１４ｂであって、直径５ｍｍ、長さ５ｍｍであって、これらはフィルトローナ・インコーポレテッド（リッチモンド、ＶＡ）から入手できる。カートリッジ内に摩擦嵌めしてフィルターを保持するようになっている注入モールドしたポリプロピレンのカートリッジにフィルターを嵌め込むと、第２の端１１８は器具の表面１３０の約５ｍｍ下に位置する。加えて、各フィルターの第２の端１１８は幅約０．７５ｍｍの環状空間に包囲されている。ジギトニン（Ａ）と、無水マレイン酸‐Ｎ‐ビニルピロリドン・コポリマー（Ｃ）に結合したワサビダイコン・ペルオキシダーゼ（Ｂ）のＡ‐Ｃ‐Ｂ複合体の検出試薬で各フィルターは飽和している。一つのフィルター１１４ａはポジチブ・コントロールと称し、高濃度の検出試薬で飽和しており、第２のフィルター１１４ｂはテスト・フィルターと称して低濃度の検出試薬で飽和している。典型的には、そのポジチブ・コントロールは約５０−１００ｕｇ／ｍＬの検出試薬を有し、そしてテスト検出試薬は約１−１０ｕｇ／ｍＬである。
【０１２４】
手のひら３００の小指球を選んで、清潔にし、乾かし、それから器具１００の端２０６に当てて、アプリケーター１１４ａと１１４ｂの検出試薬と接触させる。このことにより検出試薬は図８の３０４ａと３０４ｂに示すように皮膚のコレステロールに結着する。図８では３０４ａはアプリケーター１１４ａからのコントロール検出試薬を表し、そして３０４ｂはアプリケーター１１４ｂからのテスト検出試薬を表す。または、器具を手のひら３００と接触させることもできる。一分ほどアプリケーター１１４ａと１１４ｂとに接触させてから手のひら３００と器具１００とを図８に示すように離す。また、図８に示すように、マーカー２０８ａは手のひら３００に圧痕３０６を残し、検出試薬が塗布された皮膚の区域の輪郭を描く。所望であれば、マーカー２０８ａは皮膚に適切な言葉、例えば、「コントロール」もしくは「テスト」を、３０４ａと３０４ｂの傍で、コントロール検出試薬とテスト検出試薬が皮膚のコレステロールに結着した処に記すラベルでもよい。
【０１２５】
結着しなかった余分の検出試薬があると、図９に示すように吸収媒体もしくはふき取りパッド３０２を当ててふき取る。セルロース材料の新しいところを手のひらに当てることにより２度拭き取りをする。すべての拭き取り工程は拭き取りパッド３０２で手のひら３００の小指球区域にしっかり押し付けて行う。皮膚を一回拭き取るだけで殆ど全部の結着しない余分の検出試薬を取除けるが、三回拭き取るのが最もよいことがわかった。三回以上は通常不必要であって、結着しない検出試薬をそれ以上取除けると言うことはない。
【０１２６】
もしあれば、過剰の検出試薬を除去することは必要であると言うのは、結着した検出試薬だけが意味のある信号を発生するからである。洗浄は、非特定性の結着検出試薬の除去の代替的で均等的な手段ではあるけれども、この例では器具１００のような器具によってその後に続く工程を行うので、簡単迅速なテストでは、洗浄は不便ではある。  
【０１２７】
様々なタイプの吸収媒体３０２のどれでも拭き取り材料として適している。綿やセルロースをベースとしたティッシューのような高度に吸収性のある織成された親水性材料が特に適している。使い捨てのキッチンタオルや他の同様のシート材料が好ましく、そして手のひらに糸屑を残さないものが最も好ましい。
【０１２８】
器具１００の説明に関連して先に述べたように、吸収媒体３０２はアプリケーター１１４を保持する面１３０に隣接した器具の部分である。このようにして検出試薬の塗布後簡単なやり方で、非特定性の結着検出試薬を除去するため吸収媒体３０２へ手のひらを当てる。別の形の仕方では、図９に示すように、吸収剤媒体は検出試薬を塗布するのに使う器具から分離されていて、そして拭き取り工程ではその分離吸収媒体３０２へ手のひらを持っていく。
【０１２９】
新しく準備されたパッド１５６、例えば基質溶液で飽和させた図１０に示すパッド１５６ａと１５６ｂに特定性結着検出試薬を持つ小指球手のひら区域３００を当てる。ファイバーガラス材料９３４ＡＨ（ホワットマン  インコーポレーテッド）とケイ‐ブルー・マックス基質溶液（ネオゲン  コーポレーション）を使用するのが典型である。または、器具１００を手のひら３００に接触させることができる。どちらでも、パッド１５６ａと１５６ｂは、図８にそれぞれ３０４ａと３０４ｂとで示されている皮膚のコレステロールへ検出試薬が結着しているところに揃う。従って、器具１００の端２０６の面２１０のマーカー２０８ｂを使って、端２０６をマーカー２０８ａが手のひら３００に残した圧痕３０６に揃える。
【０１３０】
パッド１５６ａと１５６ｂで基質溶液に一分ほど接触させてから図１１に示すように手のひらを退かす。
【０１３１】
パッド１５６ａと１５６ｂから手のひら３００を退けると、ほぼ直径が５ｍｍ位の１つ、もしくは２つの丸い、青いスポット１５８ａと１５８ｂとがパッドに出ている。これらのスポット１５８ａと１５８ｂはアプリケーター１１４ａと１１４ｂからの検出試薬が３０４ａと３０４ｂとして手のひらに結着しているところに対応する。
【０１３２】
ポジティブ・コントロールアプリケーターに対応する位置にすべての人が青いスポットを持つことになる。もしも低閾値濃度の検出試薬をテスト・アプリケーターで使用したら、第２のスポットは被試験者の皮膚のコレステロール・レベルによって見えたり見えなかったりする。皮膚のコレステロールのレベルが低い、もしくは正常である人は第２のテスト・スポットをつくることはなく、皮膚のコレステロールのレベルが高い人は第２のテスト・スポットをつくる。
【０１３３】
非閾値レベルの検出試薬を第２のテスト・アプリケーターで使うと、そのときはすべての人が２つの青いスポットをつくる。強い青のポジティブ・コントロールスポットに加えて、強さの変わる第２の青いスポットが見られる。この第２のスポットの強度はテストされた人の皮膚のコレステロール・レベルにより異なり、図１２に示すように比色カード３０８を使ってその強度を測ることができる。
【０１３４】
強度の変わる青色色素の帯３１０を有する比色カード３０８で試験スポットの色強度を測定する。一つの実施形態では、各帯の中心に直径約４ｍｍの孔３１２をあけておく。この実施形態では、比色カード３０８はパッド１５６ｂ上でテスト・スポット１５８ｂの上を案内され、色の各帯３１０の中心の孔３１２にテスト・スポットが現れるようにする。テスト・スポットとそれを包囲する色つき帯３１０との間で強度が一致するまで各帯３１０の孔３１２をそのテスト・スポットの上に載せていく。
【０１３５】
対応する皮膚のコレステロール・レベルに基づいて危険指標を反映するスコアを各色つきバンド３１０に付けておくことができる。皮膚のコレステロールレベルの高い人は強い青色スポットをつくり、スコアが高くなり、そして粥状硬化症が発症もしくは進行中であると言う大きな危険性と高レベルのコレステロールに起因する同様の他の疾患を持っている危険性がある。
【０１３６】
正常と危険占有率における皮膚のコレステロール・レベルの範囲は比色カード３０８の帯３１０の強度もしくはインテンシティを決定するけれども、使用した基質溶液により帯３１０の色が決まる。３，３’，５，５’‐テトラメチルベンジジン基質なら色発現スポットは水色である。この基質を使って色発現した色調と彩度の範囲に基づいて適切な比色計をつくる。他の基質では異なる色が発現され、そしてそれに対応する比色カードが必要とされる。
【０１３７】
パッド１５６ａおよび１５６ｂにおけるバックグラウンドのベースとなる着色の協働によって、発現色と強度の範囲は変わってくる。乾いた試薬パッドでは黄色もしくは橙色の着色が青発色標示剤で生じる。低レベルの基質変換においては色つきスポットは黄色もしくは橙色のままである。中間レベルではスポットは緑っぽく、そして高レベルでスポットは緑がかった青色となる。このことにより強度比較に代えて可変色で比較でき、色発現スポットの選択可能で有利な読み取りが簡便にできる。
【０１３８】
器具１００を使って本発明の方法を説明してきたけれども、幾つもの他のデバイスも使うことができ、そのような器具としては検出試薬を塗布するデバイスと標示デバイスとが別々になっているものがある。従って、本発明は皮膚のコレステロールを自分で計測する、限定するのではなく例示である家庭環境で実施できるキットに適している。
【０１３９】
そのキットは検出試薬源、皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布するアプリケーター、検出試薬と接触すると反応する溶液源そして溶液を受ける標示面とを含み、その標示面が皮膚の選択区域に接触すると、皮膚のコレステロールに結着した検出試薬と溶液が反応して標示面の少なくとも一部に可視的な色変化をつくる。
【０１４０】
キットのアプリケーターは、前述のデバイス１０に、もしくは器具１００にあるのと同じでよい。好ましい実施形態では、アプリケーターは検出試薬の源となっている（すなわち、それは検出試薬で予め飽和されている）。しかしながら、本発明が意図しているのは、キットでは検出試薬が別になっており、そのためユーザーはアプリケーターを浸漬することになる。
【０１４１】
同様に、キットの標示面は前述のデバイス５０に、もしくは器具１００にあるのと同じでよい。それ故、標示面は溶液の源である（すなわち、基質溶液に事前に浸漬されている）。しかしながら、本発明がここでも意図しているのは、キットでは基質溶液を別にしていて、そのためユーザーは標示面（パッド）を浸漬しなければならない。
【０１４２】
本発明のキットは必要なら拭き取りのための吸収媒体も含んでいる。
【０１４３】
例えば器具１００で既に説明したように、同じ器具にアプリケーターと標示面とを（例えば、それぞれ一方の面と他方の面とに）設けることができ、キットにそのように組み合わされる。
【０１４４】
さらに、キットではアプリケーター、標示面そして吸収媒体を同じ器具につくってもよい。
【０１４５】
最後に、方法が実施されるときつくられた色を分析する手段をキットが提供する。例えば、キットはつくられた色を分析する比色計を含むことができる。前に説明したように、比色計はカラーバンドの階調列でよい。または、キットはつくられた色を分析する反射分光光度計を含んでよい。
【０１４６】
以下の説明はそれに限定するものではなく、例示である。本発明の他の実施形態はこの説明から当業者には明らかであろう。
【０１４７】
開示した本発明の実施形態は好ましいものと考えられているけれども、本発明の思想から逸脱することなく様々に変更して実施できる。開示は例示であって、これに尽きているものではない。本書の説明は当業者に対して多くの変形態様を示唆している。それらすべての変形態様は特許請求の範囲に含まれる。当業者であれば開示された実施形態以外の均等物も特許請求の範囲に包含されることを認めるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１４８】
【図１】皮膚の選択区域へ検出試薬を塗布する本発明のデバイスの部分の横断面図である。
【図２】図１のデバイスの平面図である。
【図３】本発明の標示デバイスの部分の平面図である。
【図４】図１のデバイスと図２の標示デバイスとを含む本発明の器具の斜視図である。
【図５】図４の器具の平面図である。
【図６】図４の器具の底面図である。
【図７】図４の器具を使用した本発明の方法の一つの実施形態を示す。
【図８】図４の器具を使用した本発明の方法の一つの実施形態を示す。
【図９】図４の器具を使用した本発明の方法の一つの実施形態を示す。
【図１０】図４の器具を使用した本発明の方法の一つの実施形態を示す。
【図１１】図４の器具を使用した本発明の方法の一つの実施形態を示す。
【図１２】図４の器具を使用した本発明の方法の一つの実施形態を示す。
【図７ａ】図７の７ａ―７ａ線に沿う横断面図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図７ａ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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