(57)【要約】非侵襲的投薬形式は、非経口投与形式に比べて患者にとりより便利である。しかしながら、癌の治療に用いる化学療法薬の様な多くの種類の薬剤は、その粘膜を通す吸収が、ｐ−糖タンパク質の様な排出ポンプにより大きく低減させられるため、非経口的にしか投与することができない。既に開発されている調剤形式の効果は、多くの場合非常に低く、そのため殆んどの細胞増殖抑制剤は未だ非経口的に投与されねばならない。本発明は、排出ポンプのため粘膜より余り吸収されない薬剤に対する医薬上の調剤形式を提供する。本発明は薬剤に加えて少なくとも一つの賦形剤を含む完全に新しい調剤形式に基づくものであり、賦形剤はその化学構造中に多くのチオール基を含んでいる。その効果はグルタチオンを加えることにより更に増進される。更に、グルタチオンはそれ自身で排出ポンプの粘膜に対する作用に極めて大きい抑制効果を示す。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬（medicament）を生産するために排出ポンプ（efflux  pump）を抑制する薬理的に受け入れられるチオール基を含む化合物の使用であり、前記医薬はチオール基を含む化合物が存在しない場合に、排出ポンプのために粘膜からのその摂取が抑制される薬剤(drug)を含む、前記化合物の使用。
【請求項２】
前記チオール基を含む化合物が少なくとも250ｇ/モルの分子量を持つ、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記チオール基を含む化合物が1000ｇ/モルの分子量当り少なくとも一つのチオール基を持ち、特に500ｇ/モルの分子量当り少なくとも一つのチオール基を持つ、請求項1又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記チオール基を含む化合物が、100μMより低い濃度で用いられた場合に、排出比率を50％より多く、特に100％より多く低減する、請求項1乃至3のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５】
前記チオール基を含む化合物が一分子当り少なくとも10チオール基を持つ、請求項１乃至４のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６】
前記チオール基を含む化合物が10を超えない異なるサブユニットよりなる請求項１乃至５のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７】
前記チオール基を含む化合物が、チオール化されたカルボマー(thiolated  carbomer),  チオール化されたポリ(メタ)アクリル酸(thiolated  poly(meth)acrylic  acid),  チオール化されたセルロース(thiolated  cellulose),  チオール化されたポリグルコサミン(thiolated  polyglucosamine),  チオール化されたポリリシン(thiolated  polylysine),  チオール化されたポリアルギニン(thiolated  polyarginine)  又はグルタチオン(glutathione)から選択される、請求項１乃至６のいずれか1項に記載の使用。
【請求項８】
前記薬剤が化学療法薬(chemotherapeutic),  不整脈治療剤(antiarrhythmic),  抗生物質(antibiotic),  抗炎症薬(anti-inflammatory  drug),  局部麻酔剤(local  anesthetic  drug),  ホルモン(hormone),  抗真菌剤(antimycotic),  抗凝固剤(anticoagulant),  抗マラリヤ剤(antimalarial  drug)、カルシウム  チャンネル遮断剤  (calcium  channel  blocker),  免疫抑制剤(immunosuppressive  drug)  ,  及び  蛍光マーカー(fluorescence  marker)から選択される、請求項１乃至７のいずれか1項に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬がナノ粒子、微小粒子、マトリクス錠剤、乳化剤、溶液、懸濁液、点眼薬又は、カプセルである、請求項１乃至８のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１０】
前記医薬が、口腔、鼻腔、肺、膣、頬、直腸、眼球への投与のための調剤形式である、請求項１乃至９のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１１】
前記医薬が、グルタチオンを除いては、その他のチオール基を含む化合物を含まない、請求項１乃至４及び６乃至１０のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１２】
前記医薬が、一分子当り少なくとも10のチオール基を持つチオール基を含む化合物を除いては、その他のチオール基を含む化合物を含まない、請求項５乃至１０のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１３】
前記医薬が、グルタチオン、及び一分子当り少なくとも10のチオール基を持つチオール基を含む化合物の組合せを含む、請求項１乃至１０のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１４】
請求項１乃至７のいずれか一項、９又は１０に規定のチオール基を含む化合物、及び請求項１、又は８乃至１０のいずれか一項に規定の排出ポンプのためその粘膜からの摂取が抑制される薬剤を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
非侵襲的投薬形式は、非経口投与形式に比べて患者にとりより便利である。例えば、錠剤又は鼻腔用スプレーによる投与により、注射及び輸液に関連する痛み及びリスクを避けることができる。そのため、非侵襲的投薬形式に従う場合が多い。しかしながら、癌の治療に用いる化学療法薬の様な多くの種類の薬剤は、その粘膜を通す吸収が、例えば、ｐ−糖タンパク質の様な種々の排出ポンプにより大きく低減させられるため、非経口的にしか投与することができない。
【０００２】
（Hunter,  J.及びHirst,  B.H.  (1997)、薬剤の腸内分泌（Intestinal  secretion  of  drugs）。経口薬の吸収を制限するｐ−糖タンパク質及び関連する薬剤排出システムの役割（The  role  of  P-glycoprotein  and  related  drug  efflux  Systems  in  limiting  oral  drug  absorption）。Adv.  Drug  Deliv.  Rev.,  25,  129-157）。更に、不整脈治療剤(antiarrhythmic),抗生物質(antibiotics),  抗真菌剤  (antimycotic),  抗凝固剤(anticoagulant)、抗マラリヤ薬(antimalaria),  カルシウム遮断薬(calcium  channel  blocker)及び免疫抑制薬（immunosupressive  drug）等の種々の薬剤では、粘膜を通して投与する場合にも、その生物学的利用能（bioavailability）は排出ポンプにより強く低減される。例えば、エリスロマイシン(erythromycin)の角膜(corneal)での吸収は、ｐ−糖タンパク質により大きく低減される（Dey  S,  Gunda  S,  Mitra  AK.  単一輸液投与によるウサギの角膜におけるエリトロマイシンの薬物動態学（Pharmacokinetics  of  Erythromycin  in  Rabbit  Corneas  Following  Single-Dose  Infusion）。インビボでの目薬の吸収に対する障壁としてのｐ−糖タンパク質の役割（Role  of  P-Glycoprotein  as  a  Barrier  to  in  vivo  Ocular  Drug  Absorption）。  J  Pharmacol  Exp  Ther.  2004,  in  press;  Dey  S,  Patel  J,  Anand  BS,  Jain-Vakkalagadda  B,  Kaliki  P,  Pal  D,  Ganapathy  V,  Mitra  AK。ヒト及びウサギの角膜及び角膜上皮細胞株におけるｐ−糖タンパク質の分子的証拠及び機能表現  （Molecular  Evidence  and  Functional  Expression  of  P-Glycoprotein  (MDRl)  in  Human  and  Rabbit  Cornea  and  Corneal  Epithelial  Cell  Lines）、  Invest  Ophthalmol  Vis  Sei.  2003  JuI;  44  (7)  :2909-18））。したがって、これらの排出ポンプ作用を克服する調剤形式を開発することは、多年に亙り強い関心を引く研究活動の対象であった。
【０００３】
自己ミクロ乳化調剤形式によるパクリタキセル（paclitaxel）の投与により、例えば、その経口生物学的利用能が28.6%から52.7%に改善された（Yang,  S.,  Gursoy  R.N.,  Lambert  G.  及びBenita  S。新しい自己ミクロ乳化薬剤送達システムにおけるｐ−糖タンパク質抑制剤の付随的使用（conemitant  use）、あるいは不使用の場合のパドリタキセルの強化された経口吸収（Enhanced  oral  absorption  of  padlitaxel  in  a  novel  self-microemulsifying  drug  delivery  System  with  or  without  use  of  P-glycoprotein  inhibitors）。  Pharm.  Res.  21  (20024)  261-270）。他の研究によると、例えば、シクロスポリン（cyclosporin）の経口生物学的利用能がナノ粒子調剤形式の使用により極めて大きく改善された（Beckerman  T.,  Golenser  J.  及び  Domb  A.,  経口投与のためのシクロスポリンナノ粒子脂肪球（Cyclosporin  nanoparticulate  lipospheres  for  oral  administration.  J.  Pharm.  Sei.  93  (2004)  1264-1270）。これらの問題を解決するための更なる試みにより、胃腸排出ポンプの種々の抑制因子を同定することができた（例えば、Dintaman,  J.M.  及びSilverman,  J.A.  (1999)。
【０００４】
Ｄ−アルファ−トコフェリル  ポリエチレン  グリコール  1000琥珀酸によるｐ−糖タンパク質の抑制（Inhibition  of  P-glycoprotein  by  D-alpha‐tocopheryl  polyethylene  glycol  1000  succinate）  (TPGS)。Pharm.  Res.  16,  1550-1556.;  Senior,  A.E.,  Gros,  P.,  及びUrbatsch,  I.L.  (1998)。
【０００５】
７−クロロ−４−ニトロベンゾ−2−オキサル、３−ジアゾル抑制剤と反応するｐ−糖タンパク質触媒部位における残基（Residues  in  P-glycoprotein  catalytic  sites  that  react  with  the  inhibitor  7-chloro-4-nitrobenzo-2-oxal,  3-diazole）、  Arch.  Biochem.  Biophys.  ,  357,  121-125）。
【０００６】
しかしながら、既に開発されている調剤形式の効果は、多くの場合非常に低く、そのため、例えば、殆んどの細胞増殖抑制剤は未だ非経口的に投与されねばならない。したがって、排出ポンプのため粘膜より余り吸収されない薬剤に対する医薬上の調剤形式を提供することが本発明の目的であり、その場合新しい調剤形式は吸収が低減することを中和する様に作用する。
【発明の開示】
【０００７】
本発明は調剤薬の分野の技術に関する。本発明は薬剤（drug）に加えて少なくとも一つの賦形剤(excipient)を含む完全に新しい調剤形式に基づくものであり、賦形剤はその化学構造中に多くのチオール基を含んでいる。透過研究によると、その様なポリチオールを加えることによって、排出ポンプの粘膜に対する作用を非常に効果的に抑制することが、全く予期せず見られた。この効果はグルタチオン（glutathione）を加えることにより更に増進される。更に、グルタチオンはそれ自身で排出ポンプの粘膜に対する作用に極めて大きい抑制効果を示す。例えば、胃腸管での余りに急速なポリチオール化合物の吸収、又は希釈を起さない様に、これらの化合物の分子量は好ましくは２kDより大きく、典型的には100kDaより大きい分子量を持つべきである。グルタチオンは通常粘膜から再吸収されることは殆んどない（Langoth  N.,  ペプチド薬剤のための口腔薬剤送達システムの開発（Development  of  buccal  drug  delivery  Systems  for  peptide  drugs）、論文、University  Vienna,  2003）。調剤はマトリックス錠を形成するため、薬剤に加えてポリチオール化合物及び/又はグルタチオンを含む点眼薬及び微小粒子が開発された。薬剤及び賦形剤を適当な調剤形式で組合せて使用することによってのみ意図した効果を達成することが出来る。
【０００８】
経口投与は別として、これらの新しい調剤形式での眼、鼻腔、肺及び直腸投与も市場の関心の対象である。安定化剤としてのグルタチオンを含む薬剤組成物については、例えば、WO  95/19177  A,  JP  1/203336  A,  JP  1/022817  A  及びJP  57/058616  Aに記載されている。
【０００９】
したがって、本発明は又、薬剤の吸収が向上した調剤形式に関し、この薬剤形式には以下を含む：
排出ポンプのため、粘膜を通して摂取が制限される一以上の薬剤、グルタチオン又はそれらの誘導体、及び/又は賦形剤として使用される少なくとも一つの化合物を含み、その賦形剤は10を超えない異なるサブユニットより成り、及びその化学構造に少なくとも10の共有結合したチオール基を持つ。
【００１０】
好ましい実施の形態においては、本発明の調剤薬の形式には、グルタチオン又はその誘導体及び/又はポリチオール化合物を別として、追加のチオール化合物を含まない。
【００１１】
グルタチオン又はその誘導体とポリチオール化合物との組合せは、特に高い排出ポンプ抑制効果を示すため、本発明の特に好ましい実施の形態である。
【００１２】
本発明は、その吸収が排出ポンプにより抑制され又は少なくとも低減される全ての薬剤に有用である。本発明は、薬剤が排出ポンプの基質である全ての薬剤、及びその非経口投与が患者にとり不利又は不都合である薬剤について、特に有用である。本発明の好ましい調剤形式は、したがって、以下の群から選択される一以上の薬剤を含む：
化学療法薬(chemotherapeutics),  不整脈治療剤(antiarrhythmics),  抗生物質(antibiotics),  抗炎症薬(anti-inflammatory  drugs),  局部麻酔剤(local  anesthetic  drugs),  ホルモン(hormone),  抗真菌剤(antimycotics  drug),  抗凝固剤(anticoagulant),  抗マラリヤ剤(antimalarial  drug)、カルシウムチャチャンネル遮断剤  (calcium  channel  blocker),  免疫抑制剤(immunosuppressive  drug)  ,及び  蛍光マーカー(fluorescence  marker)、及び特にタクソール  (taxol),  シクロスポリン(cyclosporine),サクイナビル  (saquinavir)  又はリトナビル(ritonavir)を含む薬剤。ポリチオール化合物として、チオール基を含むカルボマー（carbomer）の誘導体、ポリメタアクリル酸（poly（meth）acrylic  acid）、ポリ（Ｄ）−グルコサミン（poly(D-  glucosamine)、セルロース(cellulose)、ポリリシン（polylysine）  又はポリアルギニン  (polyarginine)であり、その化学構造に10を超える、及び典型的には100を超えるチオール基を持つ調剤形式が、本発明の好ましい実施の形態である。これらは排出ポンプに対し優れた抑制効果を示すからである。その結果、その様な調剤形式により投与される薬剤は特に吸収が良く、又多量に吸収される。好ましくは、使用されるポリチオール化合物は、その分子量が2kDaより多く、典型的には100kDaより大きいのが良い。
【００１３】
本発明の好ましい調剤形式には、口腔、鼻腔、肺、膣、頬、直腸、眼球への応用のみならずナノ粒子、微小粒子、マトリクス錠剤、乳化剤、溶液、懸濁液、点眼薬及びカプセルでの応用を含む。
【００１４】
本発明のある特徴では、本発明は排出ポンプを抑制するための医薬の製造のための化合物を含む、薬理的に受け入れられるチオール基の使用に関し、医薬は、チオール基を含む化合物が存在しない場合に、その粘膜からの摂取が排出ポンプにより抑制される薬剤を含んでいる。そのため、本発明による製剤は、少なくとも二つの活性成分を含む医薬の組み合せとみなされうる：第一の活性成分は、個体のある種の疾病又は機能障害の予防又は治療のための薬剤を含み、第二の活性成分は、個体の体内から第一の活性成分が効果的に取り出される様な方法で、第一の活性成分の摂取を妨げる排出ポンプの抑制作用を行うものである。本発明により抑制することのできる好ましい排出ポンプは、薬理的に関連するとされるものである。その場合、ｐ−糖タンパク質、ABCG2,  ABCCl  及びABCC2、中でも特にｐ−糖タンパク質が抑制されるのが特に好ましい。本発明では、第一の活性成分の効果的な調剤量を体内で増加させることができ、又は第一の活性成分の量は、効果を損なうことなくある種の医薬において減らすことができる。
【００１５】
本発明によると、第一の活性成分は一種の薬剤（又は、複数の薬剤の組合せ）、であり、その摂取は通常（すなわち、本発明で使用されるチオール基を含む化合物が存在しない場合）排出ポンプにより低減される（すなわち、粘膜を通して又は、排出ポンプを持つ他の生物学的障壁（例えば、血液脳関門、癌細胞等）により個体に供給されずに、直ちに分泌される）（全身又は局部））。薬剤のこの流出は第二の活性成分（一以上のチオール基を含む化合物）により抑制され、又は低減され、薬剤の吸収度を向上させることを保証する（チオール基を含む化合物がない場合の吸収に比べて）。  本発明によると、第一の活性成分は、排出ポンプの活性により粘膜からの吸収が制限される全ての薬剤又はそれらの組合せであっても良い。その様な薬剤は、例えば、流出比率（分泌透過係数/吸収透過係数）が1.5より大きく、好ましくは2.0、及び特に好ましくは2.5より大きいのが良い（例えば、実施例1に記載の様に37℃におけるテストシステムにおいて）。
【００１６】
本発明に非常に適したチオール基を含む化合物は少なくとも250  g/モルの分子量を持つ。より小さい分子量を持つ化合物は、そのチオール基依存の排出ポンプ抑制特性に関しては、優位性が小さい。
【００１７】
本発明の好ましいチオール基を含む化合物は、一方では1000  g/モル分子量当り少なくとも一つのチオール基の存在を示し、特に500  g/モル分子量当り一つのチオール基の存在を示す。他方、特により大きい分子が利用されるのであれば、チオール基を含む化合物は分子当り少なくとも10チオール基を持つべきである。
【００１８】
より好ましいのは、一以上のモノマー単位より成る化合物を使用することであり、その場合は少なくとも一つのモノマー単位がチオール化されていることがあっても良い。しかし、本発明のチオール基を含む化合物は、好ましくは10を超えない異なるサブユニットから成るのが良い。通常、それらは1、2又は3つの異なるモノマー単位より成るべきである。既に周知であり、及び文献に記載されている薬剤成分として応用されている化合物、又は、生理学的に受け入れられるそれらのチオール化された誘導体、すなわち、チオール基を導入した薬剤の調整剤を用いて作られるこれらの化合物は特に有用である。
【００１９】
本発明による好ましいチオール基を含む化合物は、
チオール化されたカルボマー(thiolated  carbomer),  チオール化されたポリメタアクリル酸(thiolated  poly（meth）acrylic  acid),  チオール化されたセルロース(thiolated  cellulose),  チオール化されたポリグルコサミン(thiolated  polyglucosamine),  チオール化されたポリリシン(thiolated  polylysine),  チオール化されたポリアルギニン(thiolated  polyarginine)  又はグルタチオン(glutathione)  又は、グルタチオン誘導体(glutathione-derivatives),  特に,  -SH  及び-  COOH-基、特に両-COOH基を持つグルタチオン誘導体(glutathione-derivatives)（例えば、Glu-Cys-Val-Gly,  Glu-Cys-Lys-Gly,  GIu-  Cys-Ala-Cys-Glyの様な化合物）ものから選択される。
【００２０】
記載された組合せ医薬は、通常また、薬剤及びチオール基を含む化合物の混合物として投与することもできる。両化合物とも、一方では意図される治療効果を保証するために、及び他方で排出ポンプを十分抑制する効果を保証するために十分に高い投与量が用いられるべきである。しかしながら、薬剤と排出ポンプ抑制化合物を別々に、又は、例えば、キットとして投与することも可能である。
【００２１】
本発明は以下の実施例及び図面により更に詳細に説明されるが、これらに限定されるものではない。
【００２２】
実施例
実施例１：
グルタチオンによる粘膜に対する排出ポンプの抑制
(Inhibition  of  efflux  pump  on  the  mucosa  by  glutathione)
ギニアピッグが殺された後、その小腸が直ちに除去され、縦長方向に切断され、そして0.9％の殺菌された塩化ナトリウム溶液で洗浄された。その後Ussing室に入れられた。培養媒体は250  mM  NaCl,  2.6  mM  MgSO4,  10  mM  KCl,  40  mM  グルコース,  50  mM  NaHCO3を含む50  mM  Bis-Tris  （ビス−[2−ヒドロオキシエチル]イミノ−トリ[ヒドロオキシメチル]メタン、（bis-[2-hydroxyethyl]  imino-tris[htdroxymethl]methane））pH  6,0緩衝液であった。Ussing室は95%  O2及び  5%  CO2の混合ガスにより充填され  37°Cに保たれた。30分の平衡時間の後、ローダミン123、これは文献によると排出ポンプｐ−糖タンパク質の基質として報ぜられている（例えば、Tang  F,  Ouyang  H,  Yang  JZ,  Borchardt  RT.,  MDCKMDRlの細胞単層を超えるローダミン123及び  Hoechst  33342の双方向移送、ｐ−糖タンパク質上の結合部位の蛍光試験（Bidirectional  transport  of  rhodamine  123  and  Hoechst  33342,fluorescence  probes  of  the  binding  sites  on  P-glycoprotein,  across  MDCK-  MDRl  cell  monolayers）、J  Pharm  Sei.  2004  May;  93  (5)  :1185-94）、が、最終濃度0.001％（m/v）中で頂点区画（apical  compartment）に加えられた。事前に決められた時間に、粘膜の基底部位に向いている受容室からサンプルが取り出され、新しい培養媒体に取り換えられた。
【００２３】
透過したローダミン123の濃度が蛍光光度計によって決定された。更に、上に記載された全ての透過研究は、粘膜が逆方向に置かれた状態で実施され、そのため供与者区画は粘膜の基底部位に向く。平行して、同じ実験が行われたが、唯一の違いは供与者及び受容者区画が、更に0.5％濃度のグルタチオンを含むことであった。
【００２４】
これらの透過研究の結果を図１に示す。この図1は、0.5％（m/v）濃度のグルタチオンの不存在（■、○）又は、存在（◆、△）でのローダミン123の吸収方向（頂点から基底外側に対し；黒印）及び分泌方向（基底外側より頂点に対し；白印）の粘膜を超える移送を示す。示された数値は使用されたローダミンの全調剤量の％(0.001%;  m/v)として表され、粘膜を透過することのできたものである。示された数値は少なくとも3つに実験の平均値±ＳＤである。この研究において、グルタチオンの存在下で、ローダミンの吸収方向での透過は極めて改善されており、一方グルタチオン存在下で、ローダミンの分泌方向での透過は極めて低減しておりグルタチオンの、統計的に重要な（p<0.05）排出ポンプの抑制効果が示された。
【００２５】
上に記載の様に4℃の実験においては、グルタチオンの効果は極めて低く、これは排出ポンプによる抑制を示す。
【００２６】
実施例２
ポリチオール化合物による粘膜に対する排出ポンプの抑制
(Inhibition  of  efflux  pump  on  the  mucosa  by  a  polythiol  compound)
ポリチオール化合物の存在下での透過研究は実施例1に記載の通りに実施された。しかしながら、排出ポンプ抑制剤グルタチオンは、最終濃度0.5%  (m/v)のポリチオール化合物、ポリ（Ｄグルコサミン）−システイン(MucoBiomer  GmbH,  Leobendorf,  A)により代替された。
【００２７】
図２では、0.5％（m/v）濃度のポリ（Ｄグルコサミン）−システインの不存在（■、○）又は、存在（◆、△）下でのローダミン123の吸収方向（頂点から基底外側に対し；黒印）及び分泌方向（基底外側より頂点に対し；白印）の粘膜を超える移送が示されている。示された数値は使用されたローダミンの全調剤量の％(0.001%;  m/v)として表され、粘膜を透過することのできたものである。示された数値は少なくとも3つに実験の平均値±ＳＤである。この研究において、ポリチオール化合物の存在下で、ローダミンの吸収方向での透過は極めて改善されており、一方ポリチオール化合物の存在下で、ローダミンの分泌方向での透過は極めて低減しており、ポリチオール化合物の統計的に重要な（p<0.05）排出ポンプ抑制剤効果が示された。
【００２８】
上に記載の様に4℃の実験においては、ポリチオール化合物の効果は極めて低く、これは排出ポンプによる抑制を示す。
【００２９】
実施例３
グルタチオンとポリチオール化合物の組み合わせによる粘膜に対する排出ポンプの抑制（Inhibition  of  efflux  pumps  on  the  mucosa  by  the  combined  use  of  glutathione  with  a  polythiol  compound）
グルタチオンとポリチオール化合物の存在下での透過研究は実施例1に記載の通りに実施された。しかしながら、排出ポンプの抑制剤グルタチオンは別として、最終濃度0.5%  (m/v)のポリチオール化合物、ポリ（Ｄグルコサミン）−システイン(MucoBiomer  GmbH,  Leobendorf,  A)も加えられた。
【００３０】
図3には、共に0.5％（m/v）濃度のグルタチオン及びポリ（Ｄグルコサミン）−システインの不存在（■、○）及び存在（◆、△）でのローダミン123の吸収方向（頂点から基底外側に対し；黒印）及び分泌方向（基底外側より頂点に対し；白印）での粘膜を超える移送を示す。
【００３１】
示された数値は使用されたローダミンの％(0.001%;  m/v)を表し、粘膜を透過することのできたものである。示された数値は少なくとも3つに実験の平均値±ＳＤである。この研究において、グルタチオン及びポリチオール化合物の組み合わせたものの存在下で、ローダミンの吸収方向での透過は極めて改善されており、グルタチオン及びポリ（Ｄグルコサミン）−システインの組み合わせたものの存在下で、ローダミンの分泌方向での透過は極めて低減しており、グルタチオン及びポリチオール化合物の組み合わせの統計的に重要な（p<0.05）排出ポンプ抑制効果が示された。
【００３２】
上に記載の様に4℃の実験においては、この組み合わせの効果は極めて低く、排出ポンプの抑制効果を示している。
【００３３】
実施例４：周知の排出ポンプ抑制物質との比較
(Comparison  with  well-known  efflux  pump  inhibitor)
グルタチオン及び/又はポリチオール化合物の抑制効果を、周知の抑制物質の胃腸粘膜に対する排出ポンプと比較するために、これらを並行的にテストした。研究は実施例1に記載の条件で行った。調整された温度、各テストされた化合物の濃度及び粘膜に対する効果は以下の表1に記載する。表はローダミン123の吸収及び分泌透過係数（Papp）、及び記載の化合物の存在及び不存在下での排出効果の比較を示す。示した数値は各々3つの実験の平均値である。
【表１】
2008506750.tif 000002
【００３４】
実施例５：マトリックス錠の生産
（Preparation  of  matrix-tablets）
１ｇのポリ（Ｄ‐グルコサミン）−システイン（MucoBiomer  GmbH,  Leobendorf,  A）が0.5ｇのグルタチオン(Sigma,  Vienna,  A)  及び0.5ｇのタクソール(Sigma,  Vienna,  A)と均質に混合され、そして直接錠剤に固められた（直径：８mm;  厚み：4mm）。これらの錠剤を用いて、水/DMSO混合液を放出媒体として使用した溶解研究では、この薬剤送達システムから、薬剤及びグルタチオンの両方が制御して放出されることが示された。
【００３５】
実施例６  微小粒子の生産
(Preparation  of  micro-particles)
0.3ｇのシクロスポリン及び1ｇのポリチオール化合物カルボマー-システイン(MucoBiomer,  Leobendorf,  A)を脱塩水中で膨張させた。その後、この溶液100mlを１リットルのアセトン中で沈殿させ、沈殿物はアセトンで数回洗浄された。沈殿物はその後凍結乾燥され、そして臼で粉末にされた。できた微小粒子は中程度のμm範囲のサイズであり、良好な薬剤の放出状態を示した。
【００３６】
実施例７：  点眼薬の生産
（Preparation  of  eye  drops）
0.3gのエリスロマイシン（erythromycin）、0.1gのポリ（Ｄ‐グルコサミン）−システイン(MucoBiomer  GmbH,  Leobendorf,  A)及び0.5gのグルタチオン(Sigma,  Wien,  A)が100mlの殺菌水に溶解され、その後、アイソトニー（isotony）は塩化ナトリウムと加えることにより調整された。溶液は濾過され各10mlの点眼容器に入れられた。
【００３７】
実施例８  鼻腔用ゲルの生産
（Preparation  of  nasal  gel）:
1gのチオール化合物  カルボマー  システイン  (MucoBiomer,  Leobendorf,  A)を脱塩及び脱気した水で膨張させた。その後、0.01-0.5  gのロイーエンケファリン（Leu-enkephaline）及び5ｇのグルタチオンが加えられ、そしてpHが5.4に調整された。鼻腔用ゲルが各5ｇのチューブに詰められ、そして不活性の状態でシールされた。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ローダミン123を用いた透過研究の結果を示す；0.5％（m/v）濃度のグルタチオンの不存在（■、○）又は、存在（◆、△）での吸収方向（頂点から基底外側に対し；黒印）及び分泌方向（基底外側より頂点に対し；白印）での粘膜を超える移送を示す。
【図２】ローダミン123を用いた透過研究の結果を示す；0.5％（m/v）濃度のポリ（Ｄグルコサミン）−システインの不存在（■、○）又は、存在（◆、△）での吸収方向（頂点から基底外側に対し；黒印）及び分泌方向（基底外側より頂点に対し；白印）での粘膜を超える移送を示す。
【図３】ローダミン123を用いた透過研究の結果を示す；0.5％（m/v）濃度のポリ（Ｄグルコサミン）−システイン、及び0.5％（m/v）濃度のグルタチオンの不存在（■、○）又は、存在（◆、△）での吸収方向（頂点から基底外側に対し；黒印）及び分泌方向（基底外側より頂点に対し；白印）での粘膜を超える移送を示す。
【図１】
2008506750.tif 000003
【図２】
2008506750.tif 000004
【図３】
2008506750.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成18年9月12日(2006.9.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬（medicament）を生産するために排出ポンプ（efflux  pump）を抑制する薬理的に受け入れられるチオール基を含む化合物の使用であり、前記医薬は、チオール基を含む化合物が存在しない場合に、排出ポンプのために粘膜からのその摂取が抑制される薬剤(drug)を含み、前記チオール基を含む化合物が、
−  少なくとも250ｇ/モルの分子量を持つチオール基を含む化合物；
−  一分子当り少なくとも10のチオール基を持つチオール基を含む化合物；及び、
−  チオール基を含む化合物が、チオール化されたカルボマー(thiolated  carbomer),チオール化されたポリ(メタ)アクリル酸(thiolated  poly(meth)acrylic  acid),  チオール化されたセルロース(thiolated  cellulose),チオール化されたポリグルコサミン(thiolated  polyglucosamine),  チオール化されたポリリシン(thiolated  polylysine),  チオール化されたポリアルギニン(thiolated  polyarginine)  又はグルタチオン(glutathione)
から選択される、前記化合物の使用。
【請求項２】
前記チオール基を含む化合物が1000ｇ/モルの分子量当り少なくとも一つのチオール基を持ち、特に500ｇ/モルの分子量当り少なくとも一つのチオール基を持つ、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
前記チオール基を含む化合物が、100μMより低い濃度で用いられた場合に、排出比率を50％より多く、特に100％より多く低減する、請求項1に記載の使用。
【請求項４】
前記チオール基を含む化合物が10を超えない異なるサブユニットよりなる請求項１乃至３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５】
前記薬剤が化学療法薬(chemotherapeutic),  不整脈治療剤(antiarrhythmic),  抗生物質(antibiotic),  抗炎症薬(anti-inflammatory  drug),  局部麻酔剤(local  anesthetic  drug),  ホルモン(hormone),  抗真菌剤(antimycotics),  抗凝固剤(anticoagulant),  抗マラリヤ剤(antimalarial  drug)、カルシウム  チャンネル遮断剤  (calcium  channel  blocker),  免疫抑制剤(immunosuppressive  drug)、及び蛍光マーカー(fluorescence  marker)から選択される、請求項１乃至４のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６】
前記医薬がナノ粒子、微小粒子、マトリクス錠剤、乳化剤、溶液、懸濁液、点眼薬又は、カプセルである、請求項１乃至５のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７】
前記医薬が、口腔、鼻腔、肺、膣、頬、直腸、眼球への投与のための調剤形式である、請求項１乃至６のいずれか1項に記載の使用。
【請求項８】
前記医薬が、グルタチオンを除いては、その他のチオール基を含む化合物を含まない、請求項１乃至７のいずれか1項に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬が、一分子当り少なくとも10のチオール基を持つチオール基を含む化合物を除いては、その他のチオール基を含む化合物を含まない、請求項１乃至７のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１０】
前記医薬が、グルタチオン、及び一分子当り少なくとも10のチオール基を持つチオール基を含む化合物の組合せを含む、請求項１乃至７のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１１】
請求項３又は４に規定のチオール基を含む化合物、及び請求項１、又は５乃至７のいずれか一項に規定の排出ポンプのためその粘膜からの摂取が抑制される薬剤を含むキット。
【請求項１２】
化学療法薬(chemotherapeutic),  不整脈治療剤(antiarrhythmic),  抗生物質(antibiotic),  抗炎症薬(anti-inflammatory  drug),  局部麻酔剤(local  anesthetic  drug),  ホルモン(hormone),  抗真菌剤(antimycotic),  抗凝固剤(anticoagulant),  抗マラリヤ剤(antimalarial  drug)、カルシウム  チャンネル遮断剤  (calcium  channel  blocker),  又は免疫抑制剤(immunosuppressive  drug)から選択される医薬（medicament）を生産するために、排出ポンプ（efflux  pump）を抑制する薬理的に受け入れられるチオール基を含む化合物の使用であって、前記医薬は、チオール基を含む化合物が存在しない場合に、排出ポンプのために粘膜からのその摂取が抑制される薬剤(drug)を含み、前記チオール基を含む化合物が、
−  少なくとも250ｇ/モルの分子量を持つチオール基を含む化合物；
−  一分子当り少なくとも10のチオール基を持つチオール基を含む化合物；及び、
−  チオール基を含む化合物が、チオール化されたカルボマー(thiolated  carbomer)、チオール化されたポリ(メタ)アクリル酸(thiolated  poly(meth)acrylic  acid)、チオール化されたセルロース(thiolated  cellulose),チオール化されたポリグルコサミン(thiolated  polyglucosamine)、チオール化されたポリリシン(thiolated  polylysine),  チオール化されたポリアルギニン(thiolated  polyarginine)  又はグルタチオン(glutathione)
から選択される、前記化合物の使用。
【国際調査報告】
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