(57)【要約】緩衝溶液中に合成モチリン様ペプチドを含む安定した薬学的組成物が開示される。この組成物は、長期保存中及び蒸気滅菌後に安定した状態を維持し、その初期効力を実質的に保持するペプチドを提供する。一態様において、本発明は、１６個以下のアミノ酸及び以下に記載の構造を有する約０．５μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの合成モチリン様ペプチドを含む薬学的組成物を提供する。このような組成物は更に、５〜２５０ｍＭの緩衝液を含み、ｐＨが３〜９で、浸透圧重量モル濃度が約１０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇである。
2008546689.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
（ａ）１６個以下のアミノ酸及び以下の構造を有する約０．５μｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの合成モチリン様ペプチド：
【化１】
2008546689.tif 000005
式中、
Ａは親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
ＢはＬ−ピロリン又はＬ−アラニンであり；
Ｄは、親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｅは芳香族、親油性脂肪族又は脂環式アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｆは芳香族又は複素環式芳香族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｇはグリシン又はＤ−アラニンであり；
ＨはＬ−グルタミン酸又はＬ−グルタミンであり；
ＩはＬ−グルタミン又はＬ−アラニンであり；
Ｊは、Ｚ、Ｚ−Ｌｅｕ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ及びＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓからなる群から選択され、式中、ＺはＤ−アルギニン、Ｄ−ホモアルギニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アスパラギン及びＤ−アラニンからなる群から選択され；
Ｒ１は低級アルキル又はアリルであり；
Ｒ２は、水素、低級アルキル、プロパルギル及びアリルからなる群から選択され；
Ｒ３は、水素、低級アルキル及びアリルからなる群から選択され；
Ｒ４は、置換されない場合もあれば、水素、ヒドロキシ及び低級アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換される場合もあるシクロアルキル又はアリールであり；
Ｒ５は、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、１〜３個の炭素原子を含有するアミノアルキル基、及び２個又は３個の炭素原子を含有するグアニジノアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ６は−ＣＯＯＨ又は−ＣＯＮＨ２であり；
記号＊は、Ｄ又はＬ−立体配置である場合がある不斉炭素原子を表わし；
各低級アルキル基は、１〜４個の炭素原子を含有するが、但し、
（ｉ）ＪがＺ−Ｌｅｕ又はＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙである場合にのみ、Ｒ５が−ＣＨ２ＣＯＮＨ２であることを条件とする；及び
（ｂ）５〜２５０ｍＭの緩衝液
を含む薬学的組成物であって、該組成物は、ｐＨが３〜９であり、浸透圧重量モル濃度が約１０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇである、組成物。
【請求項２】
前記合成モチリン様ペプチドが１４個のアミノ酸を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記合成モチリン様ペプチドが、（Ｍｅ３Ｎ）＋Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記モチリン様ペプチドの１２位のアミノ酸がＤ−アルギニンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記緩衝液が酢酸ナトリウム／酢酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
（ａ）１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの前記合成モチリン様ペプチド；及び
（ｂ）１０〜１００ｍＭの前記緩衝液
を含み、ｐＨが約４．５〜５．５である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記合成モチリン様ペプチドが、４℃〜５℃にて保存した場合に、少なくとも１８ヶ月間にわたり安定した状態を維持する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
約１２１℃〜１２８℃の温度でのオートクレーブ処理によって滅菌されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
５５℃にて少なくとも３ヶ月間Ｉ型バイアルに保存し、少なくとも９０％のペプチド効力を保持することができる、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
１２０℃〜１２８℃の蒸気滅菌により滅菌した酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液中に１６個以下のアミノ酸を有する合成モチリン様ペプチドを含む水性薬学的組成物であって、前記ペプチドが、前記滅菌後に少なくとも約９５％の初期効力を保持する、組成物。
【請求項１１】
最高５５℃の温度で最長約３ヶ月間保存され、前記保存後に少なくとも９０％の初期効力を保持することができる、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液中に１６個以下のアミノ酸を有する合成モチリン様ペプチドを含む安定した水性薬学的組成物であって、約５℃〜３７℃にて少なくとも９ヶ月間保存され、少なくとも約９０％の初期効力を保持することができる、組成物。
【請求項１３】
１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの前記モチリン様ペプチドを約１０ｍＭの前記緩衝液中に含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
再構成された前記組成物の凍結乾燥製剤から調製され、増量剤を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
ショ糖、グリシン及びマンニトールからなる群から選択される増量剤を更に含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記増量剤が１％ｗ／ｖ以下の濃度で存在する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
グリシン及びマンニトールの組み合わせを含む増量剤を更に含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
蒸気処理したシリカ被覆バイアルに保存される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１９】
環状オレフィンコポリマーを含む材料で作られたプラスチック容器に保存される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２０】
希釈されている前記合成モチリン様ペプチド及び前記緩衝液の濃縮溶液から調製される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記濃縮溶液が、前記ペプチド及び前記緩衝液の量の最高１０倍を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
（ａ）１６個以下のアミノ酸及び以下の構造を有する選択量の合成モチリン様ペプチド：
【化２】
2008546689.tif 000006
式中、
Ａは親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
ＢはＬ−ピロリン又はＬ−アラニンであり；
Ｄは親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｅは芳香族、親油性脂肪族又は脂環式アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｆは芳香族又は複素環式芳香族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｇはグリシン又はＤ−アラニンであり；
ＨはＬ−グルタミン酸又はＬ−グルタミンであり；
ＩはＬ−グルタミン又はＬ−アラニンであり；
Ｊは、Ｚ、Ｚ−Ｌｅｕ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ及びＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓからなる群から選択され、式中、ＺはＤ−アルギニン、Ｄ−ホモアルギニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アスパラギン及びＤ−アラニンからなる群から選択され；
Ｒ１は低級アルキル又はアリルであり；
Ｒ２は、水素、低級アルキル、プロパルギル及びアリルからなる群から選択され；
Ｒ３は、水素、低級アルキル及びアリルからなる群から選択され；
Ｒ４は、置換されない場合もあれば、水素、ヒドロキシ及び低級アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換される場合もあるシクロアルキル又はアリールであり；
Ｒ５は、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、１〜３個の炭素原子を含有するアミノアルキル基、及び２個又は３個の炭素原子を含有するグアニジノアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ６は、−ＣＯＯＨ又は−ＣＯＮＨ２であり；
記号＊は、Ｄ又はＬ−立体配置である場合がある不斉炭素原子を表わし；
各低級アルキル基は、１〜４個の炭素原子を含有するが、但し、
（ｉ）ＪがＺ−Ｌｅｕ又はＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙである場合にのみ、Ｒ５が−ＣＨ２ＣＯＮＨ２であることを条件とする）；及び
（ｂ）選択量の緩衝液
を含む濃縮水性薬学的組成物であって、それにより希釈時に、前記希釈された水性薬学的組成物が、
ｉ）０．５μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの前記ペプチド；及び
ｉｉ）１０〜１００ｍＭの前記緩衝液を含み；
ｉｉｉ）３〜９のｐＨ及び約１０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧重量モル濃度を有する、組成物。
【請求項２３】
（ａ）１６個以下のアミノ酸及び以下の構造を有する合成モチリン様ペプチドを含む凍結乾燥薬学的組成物：
【化３】
2008546689.tif 000007
式中、
Ａは親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
ＢはＬ−ピロリン又はＬ−アラニンであり；
Ｄは親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｅは芳香族、親油性脂肪族又は脂環式アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｆは芳香族又は複素環式芳香族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｇはグリシン又はＤ−アラニンであり；
ＨはＬ−グルタミン酸又はＬ−グルタミンであり；
ＩはＬ−グルタミン又はＬ−アラニンであり；
Ｊは、Ｚ、Ｚ−Ｌｅｕ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ及びＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓからなる群から選択され、式中、ＺはＤ−アルギニン、Ｄ−ホモアルギニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アスパラギン及びＤ−アラニンからなる群から選択され；
Ｒ１は低級アルキル又はアリルであり；
Ｒ２は、水素、低級アルキル、プロパルギル及びアリーからなる群から選択され；
Ｒ３は、水素、低級アルキル及びアリルからなる群から選択され；
Ｒ４は、置換されない場合もあれば、水素、ヒドロキシ及び低級アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換される場合もあるシクロアルキル又はアリールであり；
Ｒ５は、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、１〜３個の炭素原子を含有するアミノアルキル基、及び２個又は３個の炭素原子を含有するグアニジノアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ６は、−ＣＯＯＨ又は−ＣＯＮＨ２であり；
記号＊は、Ｄ又はＬ−立体配置である場合がある不斉炭素原子を表わし；
各低級アルキル基は、１〜４個の炭素原子を含有するが、但し、
（ｉ）ＪがＺ−Ｌｅｕ又はＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙである場合にのみ、Ｒ５が−ＣＨ２ＣＯＮＨ２であることを条件とし、
これにより再構成時に、前記再構成された水性組成物が、
ｉ）０．５μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの前記ペプチド；及び
ｉｉ）１０〜２００ｍＭの緩衝液を含み；
ｉｉｉ）３〜９のｐＨ及び約１０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧重量モル濃度を有する、
組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００５年６月１７日に出願された米国仮特許出願番号第６０／６９１，５５５（この内容は、参考として援用される。）の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、モチリン様ペプチドを含む薬学的組成物に関する。より具体的には、本発明は、長期保存期間後に安定した状態を維持し、その効力及び結合親和性を保持するモチリン様ペプチドを含む薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ペプチドモチリンは、哺乳類における胃腸の自発運動量を刺激する胃腸線形ポリペプチドホルモンである。モチリンは、内部消化筋電複合体を調節することによって胃の運動性を高める役割を果たす。モチリンをヒト対象に投与することによって、腸の通過が早められ、胃を空にする働きが促進される［Ｃｈｒｉｓｔｏｆｉｄｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７６，９０３−９０７（１９７９）（非特許文献１）］。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験により、モチリンはヒト及びウサギの十二指腸平滑筋片及び摘出胃腸平滑筋細胞の収縮を刺激することが分かっている。モチリンは、糖尿病性胃不全麻痺の患者において、固形物及び液体を空にするのを刺激することが報告されており［Ｐｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １００，Ａ４８０（１９９１）（非特許文献２）］、胃腸管癌が原因となる麻痺性腸閉塞の患者の処置に使用されている［Ｍｅｙｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｋｌｉｎ．８６，５１５−５１７（１９９１）（非特許文献３）］。
【０００４】
モチリンの欠点の一つは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける比較的短い半減期であり［Ｃｈｒｉｓｔｏｆｉｄｅｓ，１９７９，ｏｐ．ｃｉｔ．］、このため、連続注入によってホルモンを投与して治療効果をもたらすことが必要となる。この欠点に対応して、高い代謝安定性を有しながらモチリン活性に類似する合成モチリン様ペプチドが開発された。これらのペプチドは、参考として本明細書に組み入れられている、米国特許第５，４２２，３４１号（特許文献１）において報告され、記載されている。
【０００５】
米国特許第５，４２２，３４１号（特許文献１）に記載の合成モチリン様ペプチドは、胃腸活性の刺激に有効であり、関連する臓器組織ホモジェネートにおける生分解に対する安定性を高めることが明らかになっている。しかしながら、天然のモチリンと同様に、合成モチリン様化合物は、投与前に、加水分解、酸化又はその他の化学プロセスにより、ペプチドの急激な分解を受ける可能性がある。低濃度で溶液中に含有されるモチリン及びモチリン様合成化合物は、密閉容器中に保存した場合でも保存中に不安定になる場合がある。
【０００６】
ペプチドを水性組成物として調製することにより、保存中に分解してしまう傾向がある特定のペプチドを安定化させることができ、そのため生物活性を損なわずに長期間保存できることが知られている。例えば、米国特許第５，４８２，９３１号（特許文献２）には、オキシトシン、バソプレシン等のペプチド、並びにその類似体及び誘導体を投与するための水性組成物であって、室温にて長期にわたり安定性を維持できる水性組成物が開示されている。この溶液は緩衝液、４級アミンの防腐剤又は殺菌剤、及び浸透圧調節剤を含有する。米国特許第５，４８２，９３１号（特許文献２）によれば、水性ペプチド組成物は、室温にて数週間保存した後に有用な保存寿命を保持した。
【０００７】
安定した水性ペプチド製剤のその他の例は、米国特許第５，９１６，５８２号（特許文献３）及び同第６，０６８，８５０号（特許文献４）に開示されている。これらの特許には、高濃度の黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）の水性ペプチド製剤であって、長期間高温（例えば、３７℃）にて保存できる水性ペプチド製剤が記載されている。
【０００８】
「安定した」モチリン組成物の一例は、欧州特許出願公開第４３７，６２１号（特許文献５）に記載されている。モチリン組成物及び凍結乾燥組成物の水溶液は、ｐＨ４．０〜５．５の溶液中で安定性を示した。その中に記載されるモチリンには、イヌのモチリン、ブタのモチリン、ヒトのモチリン、及び特定のモチリン誘導体（例えば、１３ロイシン−ブタモチリン）が含まれる。これらのモチリン及びモチリン誘導体は、６０℃にて７日間保存した後、約９４％のモチリン含有量を保持した。
【０００９】
先行技術では、選択されたペプチドに対する特定の溶液の安定化効果が認識されており、欧州特許出願公開第４３７，６２１号（特許文献５）では、天然（全長）モチリンを安定した水性組成物又は凍結乾燥組成物として調製できることが示唆されているが、その結果では、他のモチリン誘導体又はモチリン様ペプチドが類似の水溶液又は凍結乾燥組成物中でどのように作用するかは予測されていない。これは、ペプチド構造における特定の相違点、及び任意のペプチドの荷電官能基及び酸／塩基官能基の有無が、溶解性、ｐＨ／溶解性プロフィール、等電点、及びｐＫａ値に大きな影響を及ぼす可能性があることから、１つのペプチドをその他の関連するペプチドと大きく異なるものにしてしまうためである。従って、モチリン誘導体の安定した水性製剤又は凍結乾燥製剤が調製できるかどうかを確実に予測することはできない。
【００１０】
米国特許第５，４２２，３４１号（特許文献１）に記載の通り、モチリン様ペプチドは、天然のモチリンと構造的に区別される。これらの構造的な相違点については以下に詳述するが、これらにより、モチリン様ペプチドが水溶液又は凍結乾燥溶液中で安定性を保持するかどうかの判断が難しくなる。
【００１１】
モチリン様ペプチドによりもたらされる上述の利点により、このようなモチリン様ペプチドを含む水性の薬学的組成物を提供することが望ましいと思われる。又、長期保存後に患者に投与することができるこのようなモチリン様ペプチドを含む組成物を提供することも望ましいと思われる。更には、モチリン様ペプチドの分解を実質的に防ぐ組成物であるが、化合物の効力の最大レベルを保存期間中に維持する組成物を提供することが望ましいと思われる。
【００１２】
又、周囲温度条件下で保存した後、並びに蒸気滅菌温度を含むがこれに限定されない高温にさらした後に安定した状態を維持する（且つ効力を維持する）、すぐに使用可能な水性ペプチド組成物を提供することも望ましいと思われる。そして、このような合成モチリン様ペプチドを水性組成物として、種々の濃度で又は凍結乾燥形態で提供することも望ましいと思われる。最後に、必要に応じて数種の容器の１つに長期間保存して、安定した状態を維持することができる合成モチリン様ペプチドを含む組成物を提供することも望ましいと思われる。
【特許文献１】米国特許第５，４２２，３４１号明細書
【特許文献２】米国特許第５，４８２，９３１号明細書
【特許文献３】米国特許第５，９１６，５８２号明細書
【特許文献４】米国特許第６，０６８，８５０号明細書
【特許文献５】欧州特許出願公開第４３７，６２１号明細書
【非特許文献１】Ｃｈｒｉｓｔｏｆｉｄｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７６，９０３−９０７（１９７９）
【非特許文献２】Ｐｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １００，Ａ４８０（１９９１）
【非特許文献３】Ｍｅｙｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｋｌｉｎ．８６，５１５−５１７（１９９１）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
発明の要旨
一態様において、本発明は、１６個以下のアミノ酸及び以下に記載の構造を有する約０．５μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの合成モチリン様ペプチドを含む薬学的組成物を対象とする。このような組成物は更に、５〜２５０ｍＭの緩衝液を含み、ｐＨが３〜９で、浸透圧重量モル濃度が約１０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇである。
【００１４】
更なる態様において、本発明は、１２０℃〜１２８℃の蒸気滅菌により滅菌できる合成モチリン様ペプチドを含む組成物であって、該ペプチドが初期効力を少なくとも約９５％保持する組成物を対象とする。
【００１５】
更なる態様において、本発明は、合成モチリン様ペプチドを含むすぐに使用可能な薬学的組成物であって、該ペプチドが４℃〜３７℃にて少なくとも１８ヶ月間保存でき、初期効力を少なくとも約９０％保持することができる組成物を対象とする。
【００１６】
尚更なる態様において、本発明は、以下に記載の構造を有し、１６個以下のアミノ酸を含む合成モチリン様ペプチドを含む組成物であって、選択量のペプチド及び緩衝液を含む濃縮形態で提供され、これによって、希釈時に、水性組成物が約０．５μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌのペプチド、１０〜１００ｍＭの緩衝液を含み、３〜９のｐＨ及び約１０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧重量モル濃度を有する組成物を対象とする。
【００１７】
尚更なる態様において、本発明は、以下に記載の構造を有し、１６個以下のアミノ酸を含む合成モチリン様ペプチドを含む凍結乾燥組成物であって、これによって、再構成時に、再構成された組成物が０．５μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌのペプチドを含み、３〜９のｐＨ及び約１０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧重量モル濃度を有する凍結乾燥組成物を対象と。場合により、該組成物は又、１０〜２００ｍＭの緩衝液を含む場合もある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
詳細な説明
本発明の薬学的組成物は、術後腸閉塞、糖尿病性胃不全麻痺、及び麻痺性腸閉塞を含むがこれらに限定されない胃腸疾患の処置に有効な合成モチリン様ペプチドを含む。本発明の薬学的組成物は、合成モチリン様ペプチド又はその薬学的に許容される塩を、選択された緩衝液中に選択された濃度で含む。薬学的組成物は、長期間にわたりペプチドの安定性を維持するために選択されたｐＨ及び浸透圧重量モル濃度を有する。
【００１９】
本発明の薬学的組成物は、例えば、約４℃〜約３０℃を含むがこれに限定されない、保存時に通常生じる温度にて、少なくとも１２ヶ月間、好ましくは少なくとも１８ヶ月間、及び最長２４ヶ月間等の長期間の保存中に、安定した状態を維持する。本発明の薬学的組成物は、このような温度にてこのような期間にわたりペプチドの効力の分解及び損失が最小限となる。本発明の薬学的組成物のモチリン様ペプチドは、蒸気滅菌温度（例えば、１２１℃）を含むがこれに限定されない高温にさらした後でも、化学的に安定した状態を維持し、生物学的な効力を有する。本明細書で使用される安定性とは、生物学的試験によって測定されるペプチドの分解及びペプチドの残留効力の程度を指す。
【００２０】
例えば、化学純度分析により測定される、保存後９５％が分解されないモチリン様ペプチドは、生物学的試験において９５％の効力を保持する。本発明の薬学的組成物において、モチリン様ペプチドは実質的に分解せず、胃腸疾患の処置において実質的に有効及び効果的な状態を維持する。
【００２１】
本発明の薬学的組成物は、一般的に選択量の合成モチリン様ポリペプチドを含む。合成ペプチドは、胃腸の自発運動量の処置又は刺激において有効なモチリン様ペプチドである場合がある。
【００２２】
胃腸の自発運動量を刺激するモチリン様ペプチドは、モチリン受容体に対して高い親和性を示す。このようなモチリン様ポリペプチドの例は、合成モチリン様ペプチドのアミノ酸配列を開示し、既に参考として本明細書に組み入れられている、米国特許第５，４２２，３４１号に記載されている。
【００２３】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物中に含有される合成モチリン様ペプチドは、その先端が切断されている。好ましくは、合成モチリン様ペプチドは、一般的に１６個以下のアミノ酸、より好ましくは１１〜１６個のアミノ酸を含む。
【００２４】
一実施形態において、モチリン様ペプチドは、以下の構造を有し：
【００２５】
【化４】
2008546689.tif 000003
式中、
Ａは親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
ＢはＬ−ピロリン又はＬ−アラニンであり；
Ｄは親油性脂肪族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｅは芳香族、親油性脂肪族又は脂環式アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｆは芳香族又は複素環式芳香族アミノ酸のＬ−立体異性体であり；
Ｇはグリシン又はＤ−アラニンであり；
ＨはＬ−グルタミン酸又はＬ−グルタミンであり；
ＩはＬ−グルタミンであり；
Ｊは、Ｚ、Ｚ−Ｌｅｕ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ及びＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ（式中、ＺはＤ−アルギニン、Ｄ−ホモアルギニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アスパラギン及びＤ−アラニンからなる群から選択される）からなる群から選択され；
Ｒ１は低級アルキル又はアリルであり；
Ｒ２は、水素、低級アルキル、プロパルギル及びアリルからなる群から選択され；
Ｒ３は、水素、低級アルキル及びアリルからなる群から選択され；
Ｒ４は、置換されない場合もあれば、水素、ヒドロキシ及び低級アルコキシからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換される場合もあるシクロアルキル又はアリールであり；
Ｒ５は、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、１〜３個の炭素原子を含有するアミノアルキル基、及び２個又は３個の炭素原子を含有するグアニジノアルキル基からなる群から選択され；
Ｒ６は、−ＣＯＯＨ又は−ＣＯＮＨ２であり；
記号＊は、Ｄ又はＬ−立体配置である場合がある不斉炭素原子を表わし；
各低級アルキル基は、１〜４個の炭素原子を含有するが、但し、
（ｉ）ＪがＺ−Ｌｅｕである場合にのみ、Ｒ５が−ＣＨ２ＣＯＮＨ２であることを条件とする。
【００２６】
好ましい一実施形態において、本発明の薬学的組成物中に含有されるペプチドは、更に１２位にＤ−アルギニンを含む場合もある。本発明のペプチドは又、アルキル化Ｎ−末端、好ましくはトリアルキル化（例えば、メチル化）Ｎ−末端を含む場合もある。更に、合成モチリン様ペプチドは、ポリペプチド鎖のＣ末端カルボン酸官能基にアミド（−ＣＯＮＨ２）基を含む場合もあり、該アミド基は、モチリン様ペプチドのｐＫａプロフィール及び電荷を（天然のモチリンに比べて）変化させ、溶解性に影響を及ぼすとも考えられている。
【００２７】
本発明の特に好ましい実施形態は、配列番号１を含み、以下の式で表わされる合成モチリン様ペプチド受容体作動薬を含み：
（Ｍｅ３Ｎ）＋Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
式中、以下の略号はアミノ酸を表す：
Ｐｈｅ：  Ｌ−フェニルアラニン
Ｔｙｒ：  Ｌ−チロシン
Ｌｅｕ：  Ｌ−ロイシン
Ｖａｌ：  Ｌ−バリン
Ｐｒｏ：  Ｌ−プロリン
Ｉｌｅ：  Ｌ−イソロイシン
Ｔｈｒ：  Ｌ−スレオニン
Ｇｌｙ：  グリシン
Ｇｌｕ：  Ｌ−グルタミン酸
Ｇｌｎ：  Ｌ−グルタミン
Ｄ−Ａｒｇ：  Ｄ−アルギニン
Ｌｙｓ：  Ｌ−リジン。
【００２８】
配列番号１を含むモチリン様ペプチドは、本発明の組成物に含まれると、特に有効であり、高い安定性、長期の効力、及びオートクレーブ処理による滅菌に対する適性（以下に記載）を示す。又、上で特定するペプチドの薬学的に許容される塩も全て、本発明の適用範囲内に含まれる。
【００２９】
本明細書に記載の配列番号１を含むペプチドと実質的に類似するその他のペプチドも又、米国特許第５，４２２，３４１号に開示されるものを含め、本発明の組成物中で高い安定性を示す場合がある。これには、例えば、ヒトのモチリンペプチドのＮ−末端配列との実質的な（即ち、５０％を超える、好ましくは少なくとも６０％〜７０％）相同性を有する、引用特許に記載のその他の合成モチリン様ペプチドが含まれる場合がある。
【００３０】
本発明の組成物中に含まれるモチリン様ペプチドは、約０．５μｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの量で提供される。組成物が「すぐに使用可能な」（即ち、更に希釈又は再構成を必要としない）場合、モチリン様ペプチドの量は、より好ましくは約１μｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ、更により好ましくは約１μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌ、一般的には１μｇ／ｍｌ〜３０μｇ／ｍｌの範囲である場合がある。
【００３１】
ペプチドのこの効力により、低濃度の組成物は、所望量のペプチドの調節投与に好都合な場合がある。無論、本発明を尚具体化するペプチドのより濃縮した組成物を希釈して、投与に便利な溶液を生成する場合もある。
【００３２】
一実施形態において、組成物が「すぐに使用可能な」形態で提供される場合、モチリン様ペプチドを緩衝溶液中に溶解して、水性組成物を提供する。緩衝液は、ペプチドが実質的に高い安定性及び効力の保持を示す約３〜９のｐＨに薬学的組成物のｐＨを維持するように選択される。薬学的組成物のｐＨは、好ましくは約４〜６、より好ましくは約４．５〜５．５、最も好ましくは約４．８〜５．２である。これらのｐＨ値では、モチリン様ペプチドの好ましい例である配列番号１のペプチドだけが、保存中の分解が最小限となる（本組成物の好ましいｐＨは、以下で考察するように、組成物が水性組成物又は凍結乾燥製剤として調製されるかどうかに基づいて、ある程度決定される場合がある）。
【００３３】
本発明の薬学的組成物との使用に好適な緩衝溶液には、酢酸ナトリウム／酢酸、リン酸水素ナトリウム緩衝液、及びクエン酸ナトリウム／クエン酸等の緩衝液が含まれる。酒石酸塩、コハク酸塩、ＴＲＩＳ、ヒスチジン及びグリシンを含むがこれらに限定されない、当業者に既知のその他の緩衝液系も又、上で特定するｐＨ範囲内で組成物の適切な緩衝作用をもたらす場合がある。
【００３４】
上述の通り、一実施形態においては、酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液をモチリン様ペプチドと混合して、水性組成物を提供する。すぐに使用可能な溶液として提供される場合、薬学的組成物中における緩衝液の濃度は、５〜２５０ｍＭ、より好ましくは５〜５０ｍＭ、多くの実施形態で最も好ましくは約５〜２５ｍＭの濃度で、好ましいｐＨを達成及び維持する場合がある。
【００３５】
希釈を必要とする濃縮溶液として組成物が提供される場合、緩衝液の濃度は、有意に高く（最高１０倍又は最高２〜３Ｍを含むがこれらに限定されない）なる場合がある（このような濃縮溶液では、それに対応してペプチドの濃度も高くなる）。次に、濃縮組成物は希釈液で希釈され、投与に好適な張度で、好ましい濃度並びに緩衝液（例えば、５〜２５０ｍＭ）及びペプチド（例えば、１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ）の量に達する。好適な薬学的に許容される希釈液には、滅菌水、滅菌塩化ナトリウム溶液、デキストロースの滅菌溶液（例えば、５％）及びその他の糖類等が含まれるが、これらに限定されない。
【００３６】
本発明の水性薬学的組成物は、１０〜５００ｍＯｓｍの浸透圧重量モル濃度を有する、低張性、実質的に等張性、又は高張性の何れかである場合がある。しかし、より好ましくは、組成物は、等張性、弱低張性、又は弱高張性であるが、浸透圧重量モル濃度が１００ｍＯｓｍ未満、更には５０ｍＯｓｍ未満の低張性組成物も効果的な場合がある。しかし、薬学的組成物の張度は、一般的に２７０〜３２０ｍＯｓｍである場合がある。薬学的組成物の張度は、必要に応じて塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、或いはグリセリン、マンニトール、ショ糖及びその他の還元糖等のその他の張度調節添加剤、或いは当業者に既知のその他の薬剤を使用して調整される場合がある。
【００３７】
すぐに使用可能な形態及び濃縮形態両方の本発明の薬学的組成物の好ましい構成成分及び条件を、以下の表１に要約する。
【００３８】
【化５】
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すぐに使用可能な好ましい実施形態において、本発明の水性薬学的組成物は、約４．８〜５．２のｐＨ及び約３００±２０ｍＯｓｍの浸透圧重量モル濃度で、約１０ｍＭの酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液中に配列番号１の合成モチリン様ペプチドを１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ含む。
【００３９】
すぐに使用可能な水性組成物又は希釈を必要とする濃縮組成物の他に、本発明の組成物は凍結乾燥形態で保存される場合もある。凍結乾燥形態の組成物には、上の表１に記載の相対量のペプチド及び緩衝液が（他の薬剤と同様に）含まれる場合がある。組成物を凍結乾燥形態で保存した場合は、再構成時にすぐに組成物を投与することで、再構成した組成物の長期保存安定性が重要にならないようにし、それによって緩衝液の有無を任意のものにする場合があることが理解されるであろう。何れにしても、凍結乾燥製剤の一実施形態において、任意の緩衝液は、好ましくは約４．７、より好ましくは６．０のｐＨのクエン酸塩／クエン酸である場合がある。更に、凍結乾燥製剤は、ショ糖、マンニトール及びグリシン及び／又はそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない１つ以上の増量剤を更に含む場合がある。増量剤は０．５〜１５％ｗ／ｖの濃度で含まれる場合もある。
【００４０】
本発明の水性薬学的組成物は、これまで知られていないベネフィットをもたらす。本発明の薬学的組成物のモチリン様ペプチドは、広い温度範囲で長期間保存された場合に、安定した状態を維持する。例えば、室温、又は４℃〜５℃の好ましい低保存温度で保存した場合に、有意な期間にわたって実質的な安定性が維持される。例えば、約２５℃の保存温度では、本発明の組成物中に含有されるペプチドは、少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも約１８ヶ月間、更により好ましくは最長約２４ヶ月間にわたり、或いは更にこの期間を超えても、安定した状態を維持し、例えば図１に示す通り９０％以上の効力を保持する。５℃の保存温度では、少なくとも１８ヶ月間までの保存で、極僅かな分解（及び少なくとも９０〜９５％の効力）が一様に観察されている。
【００４１】
本発明の薬学的組成物の更なる利点としては、組成物を蒸気滅菌温度等の高温にさらした場合のペプチドの安定性がある。多くのペプチドは元来不安定であり、熱を加えると、極めて急激に、一般的には２、３分以内に分解することが知られている。一方、本発明の組成物において、組成物を、（１）（約１００℃〜１２８℃の温度、一般的には１２１℃の温度で、少なくとも１０分間、最長６０分間にわたり）蒸気滅菌にかけ、（２）その後、約４℃〜５℃から約２５℃等の薬学的組成物が通常さらされる低温で、好適な容器（以下に記載）に保存した後でも、ペプチドは実質的に安定性を保持する（即ち、実質的に分解されない状態を維持し、初期効力を実質的な割合保持する）。図２に示し、以下の実施例１に記載する通り、Ｉ型ガラスバイアル容器中で蒸気滅菌にかけた後に、このような容器に保存した本発明の薬学的組成物の試料において、ペプチドは、５℃、２５℃、４０℃、更には５５℃にて長期保存した後、初期効力（及び結合親和性）を有意な割合保持した。
【００４２】
本発明の組成物を好適な容器に保存することによって、ペプチドの分解を防止し、それによって効力及び結合親和性を保持する作用が更に高められる。多くの種類のガラスや特定のプラスチックは、長期保存に満足できることがわかっているが、蒸気処理したケイ素バイアルが好ましい。このような１型プラス蒸気処理ケイ素バイアルは、例えば、Ｓｃｈｏｔｔ１型プラスシリカ被覆バイアルの製品名で、Ｓｃｈｏｔｔ（米国ペンシルベニア州レバノン）から販売されている。その他の好適な保存容器には、１型米国薬局方バイアル、１型ガラスアンプル及びプレパックドガラス注射器が含まれる。
【００４３】
特定のプラスチックも又、ペプチド組成物の滅菌を助けるのに有効であることが分かっている。これに関して、好ましいプラスチックは、例えば、ＣＺ樹脂バイアルの製品名でＷｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから、或いはＴｏｐＰａｃバイアルの製品名でＳｃｈｏｔｔから、或いはＴｉｃｏｎａ  Ｔｏｐａｓ血清バイアルの製品名でＡｌｃａｎ  ｐａｃｋａｇｉｎｇから販売されている環状オレフィンコポリマーである。本発明の組成物は又、ＰＶＣ並びに非ＰＶＣの可撓性バッグに保存される場合もある。上記のガラス容器又はプラスチック容器に保存した場合は、上記の保存期間を上記の保存温度で達成することができるが、少なくとも１８ヶ月間の保存期間の場合には、Ｉ型プラス（蒸気処理ケイ素）バイアル及びＩ型プラスガラスアンプルが好ましい。例えば、図３及び図４に示す通り、配列番号１の合成モチリン様ペプチドを約５μｇ／ｍｌ（図３）又は約３０μｇ／ｍｌ（図４）含む本発明の水性組成物を、Ｓｃｈｏｔｔ１型バイアルに保存したところ、５℃〜５５℃の温度で保存した場合に、数ヶ月間、安定性（及び高レベルの効力）を維持することが立証された。４０℃以上のような高温で測定した薬学的組成物の安定性は、例えば２０℃〜２５℃又は４℃〜８℃といったより一般的な保存温度における長期間の安定性を予測する基となる場合があることが、当業者により理解されるであろう。このような「加速保存」試験は、本発明の分野で一般的なものである。
【実施例】
【００４４】
（実施例１）
オートクレーブ処理及び保存後のモチリン様ペプチドの安定性
配列番号１のモチリン様ペプチドを、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に３０μｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。Ｉ型ガラス容器に保存したペプチド溶液の試料を１２１℃にて１５分間、オートクレーブ処理し、オートクレーブ処理した試料を５℃、２５℃、４０℃又は５５℃にてインキュベートした。各温度で保存後のペプチドの効力を、１週間、２週間、３週間、１ヶ月間及び３ヶ月間インキュベートした後に試料を試験することで、経時的に測定した。ＨＰＬＣを使用して効力を測定し、各試料中の分解していないペプチドの残量を測定した。
【００４５】
図２に示す通り、ペプチドは、オートクレーブ処理して５５℃の高保存温度で３ヶ月間保存した後に、９０％を超える効力を保持した。本発明の薬学的組成物は、高温の保存温度でも保存期間にわたり顕著な安定性を示す。このような高温（即ち、加速保存条件）で得られた安定性のデータを使用して、長期間にわたりより低く、より一般的な保存温度における安定性を予測する場合があることが、当業者により理解されるであろう。
（実施例２）
モチリン様ペプチド組成物の凍結乾燥製剤の安定性
配列番号１を含むモチリン様ペプチドを、ｐＨ６．０の１０ｍＭクエン酸緩衝液及び１％ｗ／ｖのショ糖（増量剤）中に３０μｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。この組成物を標準的な技法によって凍結乾燥させ、２０ｍｌのバイアルに４０℃にて保存した。この組成物を水中で再構成させることにより、モチリン様ペプチドの効力を図５に示す時間間隔で測定した。効力はＨＰＬＣを使用して測定し、各試料中の分解していないペプチドの残量を測定した。図５に示す通り、凍結乾燥させたモチリン様ペプチドは、有意なレベル（即ち、９０％を超える）の効力を数ヶ月間保持した。ショ糖増量剤を、０．０４％ｗ／ｖグリシン及び０．４％ｗ／ｖマンニトールを組み合わせた増量剤に代えても、同様の結果が得られた。更に、図５の４０℃のような高温における薬学的組成物の安定性は、例えば約２０℃〜２５℃又は４℃〜８℃といったより一般的な保存温度における長期間の安定性を予測する基となる場合があることが、当業者により理解されるであろう。
【００４６】
後で再構成される緩衝水溶液、すぐに使用可能な組成物、又は濃縮組成物、又は凍結乾燥組成物として何れに調製され、保存されようとも、本発明の薬学的組成物は、長期間の保存中に効力を維持する。本発明の薬学的組成物は、５℃、２５℃、４０℃及び５５℃にて少なくとも１８ヶ月間の保存中に、約９０〜１００％、場合により９５％を超えるペプチドの効力を維持することにより、モチリン様ペプチドの治療的送達の手段として好ましいものとされる。
【００４７】
以上において、本発明を好ましい実施形態の文脈中において記載してきたが、添付の特許請求の範囲に記載される本発明の趣旨から逸脱することなく、このような実施形態の変形が数多く可能である。  
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、本発明を具体化する組成物中のペプチドを最長２４ヶ月間保存した際の安定性を示すグラフである。
【図２】図２は、本発明を具体化する組成物中のペプチドをオートクレーブで処理した後の安定性を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明を具体化する組成物中の濃度５μｇ／ｍｌの合成モチリン様ペプチドを、選択したガラス容器に保存した場合における安定性プロフィールを示すグラフである。
【図４】図４は、本発明を具体化する組成物中の濃度３０μｇ／ｍｌの合成モチリン様ペプチドを、選択したガラス容器に保存した場合における安定性プロフィールを示すグラフである。
【図５】図５は、本発明を具体化する組成物中のペプチドの保存後における安定性を示すグラフであり、この組成物は凍結乾燥され、その凍結乾燥形態で保存した後、再構成される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2008546689.tif 000014
2008546689.tif 000015