(57)【要約】本発明は、新規な非セコステロイド性の式Ｉのフェニルベンゾキサゾール化合物、その調製、医薬組成物、及び使用方法に関する。2008524260.tif 000077［式中、変数Ｒ、Ｒ’、ＲＰ、ＲＰ３、ＬＰ１、ＬＰ２、ＺＰ、ＲＢ、ＲＢ’、ＬＸＢ、及びＺＸＢは、本願明細書に定義するとおりである。］
2008524260.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容できる塩もしくはプロドラッグ誘導体、或いは、それらの薬理学的に許容できる塩、溶媒和物、プロドラッグ、鏡像異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、又はジアステレオマーの混合物。
【化１】
2008524260.tif 000060
［式中、Ｒ及びＲ’は、独立してＣ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキルであるか、或いは、Ｒ及びＲ’は、３〜８個の炭素原子を有する置換又は非置換或いは飽和又は不飽和のシクロアルキル環を共に形成し、
ＲＰ３及びＲＢは、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、アセチル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、及びＣ３−Ｃ５シクロアルケニルから独立して選択され、
ＲＰ及びＲＢ’は、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、アセチル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、又はＣ３−Ｃ５シクロアルケニルから独立して選択され、
（ＬＰ１）、（ＬＰ２）、及び（ＬＸＢ）は、結合、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（ＯＨ）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ（Ｏ）２−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ（Ｒ４０）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｒ４０）（Ｒ４１）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ４０）−Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ＝ＣＨ−、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ≡Ｃ−からなる群から独立して選択される二価の結合基であり、
ｍが、０〜５であり、
Ｒ４０及びＲ４１の各々が、水素、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルケニルから独立して選択され、
ＺＰは、分枝鎖状のＣ３−Ｃ５アルキル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシアルケニル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシアルキニル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシシクロアルキル、Ｃ４−Ｃ１０ヒドロキシシクロアルケニル、及びオキソシクロアルキルから選択され、
ＺＸＢは、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルケニル、Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ５アルキルアリール、Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキルアリール、Ｃ０−Ｃ５アルキル−ＣＯ２Ｈ、Ｃ０−Ｃ３アルキル−シクロアルキル−ＣＯ２Ｈ、Ｃ０−Ｃ３アルキル（シクロアルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨＳＯ２Ｍｅ、Ｃ０−Ｃ３アルキル（シクロアルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、Ｃ０−Ｃ３アルキル（シクロアルキル）ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、Ｃ０−Ｃ５アルキル−Ｎ（Ｒ４０）（Ｒ４１）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５アルケニル）、−Ｘ−（Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル）、−Ｘ−（Ｃ３−Ｃ５シクロアルケニル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５アルキルアリール）、−Ｘ（ＯＣ１−Ｃ５アルキル）、−ＸＮ（Ｒ４０）（Ｒ４１）、−ＸＮ（Ｒ４０）アリール、−Ｎ（ＣＨ３）（ＯＣＨ３）、−Ｎ（ＯＨ）（ＣＨ３）、−Ｎ（Ｒ４２）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）ＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｒ４２）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−Ｎ（Ｒ４２）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）Ｃ（Ｏ）（ＯＣ１−Ｃ５アルキル）、−Ｎ（Ｒ４２）−ＳＯ２−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−ＮＲ（４２）−Ｓ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−Ｐ（Ｏ）−（ＯＣ１−Ｃ５アルキル）２、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、及び−Ｎ＝Ｃ（Ｒ４０）Ｎ（Ｒ４０）（Ｒ４１）から選択され、
Ｒ４２が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、及びＣ１−Ｃ３ハロアルキルから選択され、
Ｘが、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、及びＳＯ２から選択され、
但し、ＲＢが、ベンゾキサゾール環の６又は７位で置換されるが、ＺＸＢが６位にある場合は、ベンゾキサゾール環の７位のみで置換され、
−（ＬＸＢ）−ＺＸＢが、ベンゾキサゾール環の５又は６位のいずれかで置換され、
ＲＢが、ベンゾキサゾール環の６又は７位で置換されるが、−（ＬＸＢ）−ＺＸＢ基が６位にある場合は、ベンゾキサゾール環の７位のみで置換され、
ＲＢ’が、ベンゾキサゾール環の４又は５位で置換されるが、−（ＬＸＢ）−ＺＸＢ基がフェニル環の６位にある場合は、ベンゾキサゾール環の５位のみで置換され、
ＲＰが、フェニル環の２、５、６位のいずれかで置換される。］
【請求項２】
Ｒ及びＲ’が、独立してメチル又はエチルであり、
ＲＰが、水素又はメチルであり、
ＲＰ３及びＲＮが、独立して水素、メチル、エチル、−Ｏ−メチル、又はシクロプロピルであり、
（ＬＰ１）が、結合であり、
（ＬＰ２）が、結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−、又は−Ｃ（Ｍｅ）ＯＨであり、
（ＬＮＰ）が、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、又は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）−であり、
ＺＰが、１，１−ジメチルエチル、１−ヒドロキシシクロペンチル、１−ヒドロキシシクロヘキシル、３−エチル−３−ヒドロキシペンチル、３−エチル−３−ヒドロキシペンテニル、及び３−エチル−３−ヒドロキシペンチニルからなる群から選択され、
ＺＮＰが、−ＣＯ２Ｈ，−  −ＣＯ２（Ｒ４０）、−Ｎ（Ｒ４０）（Ｒ４１）、−ＮＨ−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＥｔ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯｉＰｒ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ｔＢｕ、−シクロプロピル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）Ｓ（Ｏ）（Ｒ４２）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）ＳＯ２Ｒ４２、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ４０）−５−テトラゾリル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）−Ｓ（Ｏ）Ｒ４２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４２、及び−ＣＨ２ＣＯ２Ｈである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
構造式（Ｃ１）から（Ｃ１６）で表される化合物、又はその薬理学的に許容できる塩若しくはプロドラッグ誘導体。
Ｃ１）
【化２】
2008524260.tif 000061
Ｃ２）
【化３】
2008524260.tif 000062
Ｃ３）
【化４】
2008524260.tif 000063
Ｃ４）
【化５】
2008524260.tif 000064
Ｃ５）
【化６】
2008524260.tif 000065
Ｃ６）
【化７】
2008524260.tif 000066
Ｃ７）
【化８】
2008524260.tif 000067
Ｃ８）
【化９】
2008524260.tif 000068
Ｃ９）
【化１０】
2008524260.tif 000069
Ｃ１０）
【化１１】
2008524260.tif 000070
Ｃ１１）
【化１２】
2008524260.tif 000071
Ｃ１２）
【化１３】
2008524260.tif 000072
Ｃ１３）
【化１４】
2008524260.tif 000073
Ｃ１４）
【化１５】
2008524260.tif 000074
Ｃ１５）
【化１６】
2008524260.tif 000075
Ｃ１６）
【化１７】
2008524260.tif 000076
［式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、又はエチルであり、Ｒ２は、Ｈ又はＭｅであり、Ｒ３は、Ｈ、メチル、又はエチルであり、Ｒ４は、Ｈ又はメチルである。］
【請求項４】
Ｒ１が、メチル又はエチルであり、Ｒ２が、Ｈ又はメチルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
構造式（Ｃ２）で示される請求項３に記載の化合物又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項６】
構造式（Ｃ１）で示される請求項３に記載の化合物又はその薬学的に許容できる塩。
【請求項７】
前記プロドラッグが、メチルエステル、エチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジエチルグリコールアミドエステル、又はモルホリニルエチルエステルである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物のプロドラッグ誘導体。
【請求項８】
前記塩が、ナトリウム又はカリウムである、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物の塩誘導体。
【請求項９】
薬学的に許容できる担体又は希釈剤とともに、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物を含む医薬製剤。
【請求項１０】
骨粗鬆症を治療するための製剤であって、
請求項１〜８にいずれかに記載の式Ｉの化合物と、
エストロゲン、アンドロゲン、カルシウム補助剤、ビタミンＤ代謝物、チアジド利尿薬、カルシトニン、ビスホスホネート、ＳＥＲＭＳ、フッ化物からなる群から選択される１種類以上の共剤と、
任意に担体又は希釈剤と、を含む製剤。
【請求項１１】
式Ｉの化合物及び前記１種類以上の共剤の重量比が、１０：１〜１：１０００である、請求項９に記載の製剤。
【請求項１２】
乾癬症を治療するための製剤であって、請求項１〜８のいずれかに記載の式Ｉの化合物と、局所的なグルココルチコイド、サリチル酸、粗コールタールとからなる群から選択される１種類以上の共剤と、任意に担体又は希釈剤と、を含む製剤。
【請求項１３】
式Ｉ及び前記１種類以上の共剤の重量比が、１：１０〜１：１０００である、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１４】
骨粗鬆症の治療用医薬の製造における請求項１〜８のいずれかに記載の式１の化合物の使用。
【請求項１５】
骨粗鬆症を治療するための請求項１〜８のいずれか記載の式１の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１６】
哺乳類を治療して、座瘡、紫外線角膜炎、脱毛症、アルツハイマー病、無重力状態での骨維持、骨折治癒、乳癌、癌の化学的予防、クローン病、大腸癌、Ｉ型糖尿病、宿主−移植片拒絶、高カルシウム血症、ＩＩ型糖尿病、白血病、多発性硬化症、骨髄異形成症候群、脂分泌不足、骨軟化症、骨粗鬆症、皮膚硬度不足、皮膚加湿不足、乾癬性関節炎、前立腺癌、乾癬症、腎性骨ジストロフィー、関節リウマチ、強皮症、皮膚癌、全身性エリテマトーデス、マスタード糜爛からの皮膚細胞の保護、潰瘍性大腸炎、白斑、又は皺の病理学的効果を予防又は改善する方法であって、薬理学的有効量の少なくとも１種類の請求項１〜８のいずれかに記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１７】
前記乾癬症を治療する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記骨粗鬆症を治療する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳類を治療して、マスタード糜爛による皮膚細胞障害を予防又は改善する、請求項１５の方法。
【請求項２０】
哺乳類を治療して、前立腺肥大症又は膀胱癌の病理学的効果を予防又は改善する方法であって、薬理学的有効量の少なくとも１種類の請求項１〜８にいずれかに記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項２１】
ビタミンＤ受容体が媒介する病理学的効果を治療又は予防する方法であって、それを必要とする哺乳類に、薬理学的有効量の請求項１〜８のいずれかに記載の化合物を投与する方法。
【請求項２２】
座瘡、紫外線角膜炎、脱毛症、アルツハイマー病、無重力状態での骨維持、骨折治癒、乳癌、癌の化学的予防、クローン病、大腸癌、Ｉ型糖尿病、宿主−移植片拒絶、高カルシウム血症、ＩＩ型糖尿病、白血病、多発性硬化症、骨髄異形成症候群、脂分泌不足、骨軟化症、骨粗鬆症、皮膚硬度不足、皮膚加湿不足、乾癬性関節炎、前立腺癌、乾癬症、腎性骨ジストロフィー、関節リウマチ、強皮症、皮膚癌、全身性エリテマトーデス、マスタード糜爛からの皮膚細胞の保護、潰瘍性大腸炎、白斑、又は皺の病理学的効果を予防又は改善するための哺乳類を治療において使用するための請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項２３】
ビタミンＤ受容体が媒介する病状の治療又は予防に使用するための請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項２４】
哺乳類を治療して、前立腺肥大症又は膀胱癌の病理学的効果を予防又は改善において使用するための請求項１〜８にいずれか記載の化合物。
【請求項２５】
実施例のいずれかを参照して本願明細書に記載される、請求項１〜８のいずれかに実質的に記載される化合物。
【請求項２６】
実施例のいずれかを参照して本願明細書に記載される、請求項１〜８のいずれかに実質的に記載される化合物を調製する方法。
【請求項２７】
ビタミンＤ受容体を媒介するための、アッセイ及び表のいずれかを参照して本願明細書に記載される、請求項１〜８のいずれかに実質的に記載される化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年１２月２１日に出願された仮出願第６０／６３８，０２９号の米国法典第３５編第１１９条（ｅ）項における優先権の利益を請求し、本願明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）は、核内ホルモン受容体のスーパーファミリーに属するリガンド依存性転写因子である。ＶＤＲタンパク質は、約５０ｋＤａの分子量を有する４２７アミノ酸である。ＶＤＲのリガンドである１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ３（ビタミンＤのホルモン活性型）は、ビタミンＤ受容体（「ＶＤＲ」）として知られる核内受容体との相互作用を介して作用を有する。ＶＤＲリガンド、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３）は、カルシウム及びリン酸ホメオスタシスの双方に関連する又は関連しない多種多様な組織及び細胞に作用する。
【０００３】
種々の系の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の活性は、様々な臨床応用を示唆している。しかしながら従来のＶＤＲリガンドの使用は、その関連する毒性、すなわち高カルシウム血症（高い血清カルシウム）によって阻止される。これまでは、ロカルトール（Ｒｏｃａｌｔｒｏｌ）（登録商標）医薬品（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅの製品）として市販されている１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３を、長期間にわたる腎臓透析を受けている腎不全患者に投与して、低カルシウム血症及びその結果として生ずる代謝性骨疾患の治療がおこなわれている。他の治療薬、例えばカルシポトリオール（Ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｏｌ）（登録商標）（１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３の合成類似体）は、高カルシウム血症活性とＶＤＲに対する結合親和性とのさらなる分離を示す。
【０００４】
１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３の化学修飾によって、カルシウム動員効果が弱まる類似体が得られた（Ｒ．Ｂｏｕｉｌｌｏｎら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖ．１９９５，１６，２００−２５７）。そのような類似体の１種であるドボネクス（Ｄｏｖｏｎｅｘ）（登録商標）医薬品（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社）の製品）は、中軽度の乾癬症の局所治療として欧州及び米国で現在使用されている（Ｋ．  Ｋｒａｇｂａｌｌｅ）他，Ｂｒ．  Ｊ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８８、１１９、２２３〜２３０）。
【０００５】
他のビタミンＤ３類似体は、Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  Ａｎａｌｏｇｓ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｂｙ  Ｎａｇｐａｌ，Ｓ．；Ｌｕ，Ｊ．；Ｂｏｅｈｍ，Ｍ．Ｆ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，８，１６６１−１６７９という出版物に記載されている。
【０００６】
有益な作用とカルシウム上昇（カルシウム血症）効果が、このＶＤＲリガンドによってある程度分離されるが、現在、骨粗鬆症、癌、白血病、及び重度の乾癬症のような病気の治療のために経口投与できるまで不十分に分離されていない。
【０００７】
高カルシウム血症でない場合、ＶＤＲが媒介する生物学的効果から利益を受ける主な障害群の例には骨粗鬆症がある。骨粗鬆症は、骨の脆弱性、並びに腰部、脊椎及び手首の骨折のしやすさを増大させる骨質量減少及び骨組織の微細構造の劣化を特徴とする全身性障害である（世界保健機関１９９４年）。骨粗鬆症は、合衆国、ヨーロッパ、及び日本において推定７５００万人を襲っている。
【０００８】
過去数年以内に、数種の吸収阻害治療が導入されてきた。この治療には、ビスホスホネート、ホルモン補充療法（ＨＲＴ）、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、及びカルシトニンが含まれる。この治療は、骨吸収、骨形成を減少させ、かつ骨密度を増加させる。しかしながら、この治療によって、真の骨体積は増加せず、欠損した骨構造は修復できない。
【０００９】
ＶＤＲ媒介の生物学的活性の利益がある別の主な障害は、乾癬症である。乾癬症は、最も一般的な皮膚病の１種であって、紅斑性であり境界の極めて明瞭である丘疹及び銀色の雲母性鱗屑で覆われた円形斑を特徴とする慢性炎症性の皮膚状態である。
【００１０】
カルシウム血症の潜在性が減少した合成ＶＤＲリガンドが、合成された。例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３類似体であると提示しているビスフェニル化合物のクラスが、米国特許第６，２１８，４３０号明細書と、Ｍａｒｃｕｓ  Ｆ．Ｂｏｅｈｍ，ら，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９９，Ｖｏｌ  ６，Ｎｏ．５，ｐｇｓ．２６５−２７５による論文「新規な非セコステロイド性ビタミンＤ模倣体によって、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３よりカルシウム流動が少ないＶＤＲの調節活性が得られる」という記事に記載されている。
【００１１】
アリールチオフェン核を有する合成ＶＤＲリガンドが、２００２年５月２９日に出願された米国仮特許出願第６０／３８４，１５１号明細書（国際公開第０３／１０１，９７８号パンフレット）に記載されており、アリール−ナフタリン核を有する合成ＶＤＲリガンドが、２００４年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６０／６３７，９３０号明細書に記載されている。
【００１２】
骨形成を刺激し、骨質を修復し、かつ高カルシウム血症の不利益を伴わずに他の疾患を治療するためには、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３模倣体の代用又は改良された薬剤を使用する改良された治療の必要性が残っている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
式（ＸＰ）のフェニル−ベンゾキサゾール核を有する新規な化合物が、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲＭ）モジュレーターとして有効であることがわかった。
【００１４】
【化１】
2008524260.tif 000003
【００１５】
ＶＤＲの調節活性を有する本発明の化合物を式（Ｉ）に示す。
【００１６】
【化２】
2008524260.tif 000004
［式中、変数Ｒ、Ｒ’、ＲＰ、ＲＰ３、ＬＰ１、ＬＰ２、ＺＰ、ＲＢ、ＲＢ’、ＬＸＢ、及びＺＸＢは、本願明細書の以下に定義するとおりである。］
【００１７】
別の態様において、本発明の目的は、薬理学的に許容できる担体及び／又は補助剤と共に、薬理学的に効果的な量の化学式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容できる塩若しくはプロドラッグを単独又は組み合わせて含む医薬組成物である。
【００１８】
本発明の別の態様は、骨粗鬆症の治療又は予防用医薬製剤であって、薬理学的有効量の式（Ｉ）のビタミンＤ受容体モジュレーター化合物を単独、又は薬理学的有効量の従来から使用されている薬理学的に許容できる骨粗鬆症の治療用の共剤と組み合わせて含む医薬製剤である。
【００１９】
本発明の別の態様は、乾癬症の治療又は予防用医薬製剤であって、薬理学的有効量の式（Ｉ）のビタミンＤ受容体モジュレーター化合物を単独、又は薬理学的有効量の従来から使用されている薬理学的に許容できる乾癬症の治療用の共剤と組み合わせて含む医薬製剤である。
【００２０】
本発明の別の態様は、前立腺癌の治療又は予防用医薬製剤であって、薬理学的有効量の式（Ｉ）のビタミンＤ受容体モジュレーター化合物を単独、又は薬理学的有効量の従来から使用されている薬理学的に許容できる前立腺癌の治療用の共剤と組み合わせて含む医薬製剤である。
【００２１】
本発明の別の態様は、ビタミンＤ受容体リガンドに対する応答を示す症状を治療するための式Ｉの化合物の使用である。
【００２２】
本発明の別の態様は、座瘡、紫外線角化症、脱毛症、アルツハイマー病、自己免疫誘導糖尿病、良性前立腺肥大症、膀胱癌、骨折治癒、乳癌、クローン病、前立腺癌、大腸癌、Ｉ型糖尿病、宿主−移植片拒絶、高カルシウム血症、ＩＩ型糖尿病、白血病、多発性硬化症、皮脂分泌不足、骨軟化症、骨粗鬆症、皮膚硬度不足、歯周疾患、皮膚水分補給不足、脊髄形成異常性症候群、乾癬性関節炎、乾癬症、腎性骨ジストロフィー、リウマチ様関節炎、強皮症、脂漏性皮膚炎、皮膚癌、全身性紅斑性狼瘡、マスタード糜爛による皮膚細胞損傷、潰瘍性大腸炎及びしわの予防及び治療であって、薬理学的有効量の式Ｉの化合物を必要とする哺乳動物に投与することによる予防及び治療である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
定義：
「膿瘍」という用語は、被包性のバクテリア、リンパ球、マクロファージ等による膿瘍形成を起こしやすくなる、外科手術、トラマ又は疾病に関連する有害な合併症を意味する。
【００２４】
「癒着」という用語は、炎症過程で生じる新しい線維組織の形成により、通常分離している表面が結合した有害かつ異常な状態を意味する。
【００２５】
「本発明の化合物」という用語は、式Ｉで表されるか、或いは本願明細書に記載される実施例又は合成スキームの生成物として示される化合物を意味する。
【００２６】
「活性成分」という用語は、本発明の化合物を意味する。
【００２７】
「マスタード」という用語は、サルファマスタード及びナイトロジェンマスタードの両方、いずれか単独、又は組み合わせを含む。このような化合物の例としては、糜爛剤；
ビス（２−クロロエチル）スルフィド（化学薬品記号ＨＤ）、Ｃｌ（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ２）２Ｃｌ  １，２−ビス（２−クロロエチルチオ）エタン（化学薬品記号Ｑ）、Ｃｌ（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ２）２Ｃｌ、ビス（２−クロロエチルチオエチル）エーテル、Ｃｌ（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ２）Ｏ（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ２）２Ｃｌ（化学薬品記号Ｔ）、トリス（２−クロロエチル）アミン（化学薬品記号ＨＮ３）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）３、Ｎ−メチル−２，２’−ジクロロジエチルアミン（化学薬品記号ＮＨ２）、及び２，２’−ジクロロトリエチルアミン、ＣＨ３ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２（化学薬品記号ＮＨ１）が、かかる化合物の代表例である。
【００２８】
本願明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、以下で例示されるヘテロアリールを意味する。
【００２９】
【化３】
2008524260.tif 000005
【００３０】
【化４】
2008524260.tif 000006
【００３１】
【化５】
2008524260.tif 000007
実線記号に交差する点線は、遊離基の原子と他の分子との間の付加結合を示す。
【００３２】
「（酸性基）」という用語は、水素結合が可能なプロトン供与体を担う有機基を意味する。（酸性基）の例は、カルボン酸、アシルスルホンアミド、テトラゾリル、酸性の水素、すなわち水酸基で置換されるヘテロアリールから選択される群である。
【００３３】
「哺乳類」という用語は、人間を含む。
【００３４】
「ハロ」という用語は、フッ素塩素、臭素、及びヨウ素を意味する。本発明の好ましいハロゲンはフッ素を含む。
【００３５】
化学用語は、本願明細書において特定されない限り、当業者に理解される慣習的な用法で用いられる。
【００３６】
「Ｃ１−３アルキル」という用語は、メチル、エチル、ｎ‐プロピル、及びイソプロピルから選択されるアルキル基を意味する。略語「Ｍｅ」は、メチルを意味し、「Ｅｔ」は、エチルを意味し、「ｉＰｒ」又は「ｉ−Ｐｒ」は、１−メチルエチルを意味し、「ｔＢｕ」又は「ｔ−Ｂｕ」は、１，１−ジメチルエチルを意味する。単独、或いは他の置換基と組み合わせて用いられるアルキル基は、言及される化合物にアルキル基の炭素原子を介して結合する。
【００３７】
「分岐鎖Ｃ３−Ｃ５アルキル」という用語は、１‐メチルエチル、１‐メチルプロピル、２‐メチルプロピル、１，１‐ジメチルエチル、１，１‐ジメチルプロピル、１，２‐ジメチルプロピル、又は２，２‐ジメチルプロピルから選択されるアルキル基を意味する。好ましい分枝Ｃ３−Ｃ５アルキル基は、２−メチルプロピル、及び１，１−ジメチルエチル基であり、１，１−ジメチルエチル基が最も好ましい。
【００３８】
「アルケニル」という用語は、付加位置が炭素−炭素二重結合、ビニル、１−プロペニル、及び１−シクロヘキセニル基等の脂肪族基を意味する。アルケニル基は、直鎖、分岐鎖、環式、又はそれらの組合せであってよく、任意に置換されてもよい。アルケニル基は、１個以上の二重結合を含むことができることが理解されよう。更に、アルケニル基は、二重結合を有する位置異性体、すなわちトランス（Ｚ）又はシス（Ｅ）異性体を含むことができる。適切なアルケニル基は、２〜２０個の炭素原子を有する。
【００３９】
「Ｃ１−Ｃ５アルキル」という用語は、直鎖、分岐鎖、環式、及びそれらの組み合わせを含む飽和脂肪族基を意味する。Ｃ１−Ｃ５アルキル基の例には、ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ｎ−アミルｌ、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、及び２，２−ジメチルプロピルが含まれる。
【００４０】
「シクロアルキル」という用語には、３〜８個の炭素原子を有する環員の有機ラジカルが含まれる。例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルが含まれる。置換される場合、置換基は、ハロ、ヒドロキシル、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＳＨ、−ＯＣ１−Ｃ３アルキル、及び−ＳＣ１−Ｃ３アルキルから選択されてもよい。
【００４１】
「シクロアルキル」という用語には、３〜８個の炭素原子を有する環員の有機ラジカルが含まれ、非限定的な例として、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、及びシクロヘキセニエルが含まれる。
【００４２】
「Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル」という用語は、１個以上のハロゲン原子を含むアルキル基である。「Ｃ１−Ｃ５フルオロアルキル」という用語は、フッ素を含むアルキル基であり、‐ＣＦ３、‐ＣＨＦ２、‐ＣＨ２Ｆ、‐ＣＦ２ＣＦ３、‐ＣＨＦＣＦ３、‐ＣＨ２ＣＦ３、‐ＣＨ２ＣＨＦ２、及び‐ＣＨ２ＣＨ２Ｆ等の有機基を含み、好ましくは‐ＣＦ３である。
【００４３】
「ヒドロキシアルキル」という用語は、少なくとも１個の水酸基を有するアルキル基を意味する。非限定的な例として、３−メチル−３−ヒドロキシペンチル、３−メチル−３−ヒドロキシペンテニル、３−メチル−３−ヒドロキシペンチニル、３−エチル−３−ヒドロキシペンチル、３−エチル−３−ヒドロキシペンテニル、３−エチル−３−ヒドロキシペンチニル、３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンチル、３−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチルペンテニル、３−エチル−３−ヒドロキシ−４−ｍｅｔｈｙｌｐｅｎｔｙｎｙｌ、３−プロピル−３−ヒドロキシペンチル、３−プロピル−３−ヒドロキシペンテニル、３−プロピル−３−ヒドロキシペンチニル、１−ヒドロキシ−２−メチル−１−（メチルエチル）プロピル、２−メチル−３−ヒドロキシ−４，４−ジメチルペンチル、２−メチル−３−ヒドロキシ−３−エチルペンチル、２−エチル−３−ヒドロキシ−３−エチルペンチル、２−エチル−３−ヒドロキシ−４，４−ジメチルペンチル、１−ヒドロキシシクロアルケニル、及び１−ヒドロキシシクロアルキルが含まれる。
【００４４】
「ヒドロキシシクロアルキル」という用語は、下の一般構造式を有する基を意味する。
【００４５】
【化６】
2008524260.tif 000008
ｗは、１〜６の整数であり、水酸基は、任意の環炭素原子にも置換される。例として、２−ヒドロキシシクロヘキシルメチル、３−メチル−２−ヒドロキシシクロヘキシルオキシ、３−メチル−２−ヒドロキシシクロヘキシルメチル、及び３，３−ジメチル−２−ヒドロキシシクロヘキシルオキシが含まれる。
【００４６】
「１‐ヒドロキシシクロアルキル」は、下の一般構造式を有する基を意味する。
【００４７】
【化７】
2008524260.tif 000009
ｗは、上記で定義されるとおりである。１−ヒドロキシシクロアルキル基の例には、１−ヒドロキシシクロプロピル、１−ヒドロキシシクロブチル、１−ヒドロキシシクロペンチル、１−ヒドロキシシクロヘキシルメチル、１−ヒドロキシシクロヘプチル、及び１−ヒドロキシシクロオクチルである。
【００４８】
「オキソシクロアルキル」という用語は、一般の構造式を有する遊離基をいう。
【００４９】
【化８】
2008524260.tif 000010
ｗは、上記で定義されるとおりである。言及される分子へのオキソシクロアルキルの付加結合は、カルボニル炭素に隣接する炭素に制限される必要はないが、環を形成している炭素原子のいずれかを介して結合することができる。オキソシクロアルキル基の非限定的な例には、２−オキソシクロヘキシルオキシ、２−オキソシクロヘキシルメチル、３−メチル−２−オキソシクロヘキシルオキシ、３−メチル−２−オキソシクロヘキシルメチル、３，３−ジメチル−２−オキソシクロヘキシルオキシ、３，３−ジメチル−２−オキソシクロヘキシルメチル、及び２−ヒドロキシシクロヘキシルオキシが含まれる。
【００５０】
本発明の特定の化合物は、キラル中心、すなわち、ジアステレオマー及び鏡像異性体を有する異性体構造中に存在する。互変異性型の化合物の各々は、本発明の範囲内に含まれることが意図される。各種異性体の各々を、１種類の異性体として調製でき、及び／又は当業者に周知の技術によって、１種類の異性体に分離することができる。従って、本発明の化合物を、１種類の異性体又は異性体形として、或いは、本発明の化合物は、異性体の混合物として用いることができる。以下に例示される「ギザギザの」結合は、結合する炭素が、すなわちＲ又はＳのいずれの構造として存在できることを表すのに用いられる。
【００５１】
【化９】
2008524260.tif 000011
本発明の化合物が２種類以上の互変異性型で存在できることは、当業者に理解される。このような互変異性型は全て、本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００５２】
本発明の化合物：
ビタミンＤ受容体モジュレーター（ＶＲＤＭ）活性を有する本発明の化合物は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容できる塩若しくはプロドラッグ誘導体、或いはその薬理学的に許容できる塩、溶媒和物、プロドラッグ、鏡像異性体、ラセミ化合物、ジアステレオマー、若しくはジアステレオマーの混合物である。
【００５３】
【化１０】
2008524260.tif 000012
式中、Ｒ及びＲ’は、独立してＣ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキルであるか、或いは、Ｒ及びＲ’は、３〜８個の炭素原子を有する置換又は非置換或いは飽和又は不飽和のシクロアルキル環を共に形成し、
ＲＰ３及びＲＢは、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、アセチル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、及びＣ３−Ｃ５シクロアルケニルからなる群から独立して選択され、
ＲＰ及びＲＢ’は、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、アセチル、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、又はＣ３−Ｃ５シクロアルケニルから独立して選択され、
（ＬＰ１）、（ＬＰ２）、及び（ＬＸＢ）は、結合、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（ＯＨ）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ（Ｏ）２−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ（Ｒ４０）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｒ４０）（Ｒ４１）−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ４０）−Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ＝ＣＨ−、及び−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ≡Ｃ−からなる群から独立して選択される二価の結合基であり、
ｍが、０〜５であり、
Ｒ４０及びＲ４１の各々が、水素、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルケニルから独立して選択され、
ＺＰは、分枝鎖状のＣ３−Ｃ５アルキル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシアルケニル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシアルキニル、Ｃ３−Ｃ１０ヒドロキシシクロアルキル、Ｃ４−Ｃ１０ヒドロキシシクロアルケニル、及びオキソシクロアルキルから選択され、
ＺＸＢは、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ２−Ｃ５アルケニル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ５シクロアルケニル、Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ５アルキルアリール、Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキルアリール、Ｃ０−Ｃ５アルキル−ＣＯ２Ｈ、Ｃ０−Ｃ３アルキル−シクロアルキル−ＣＯ２Ｈ、Ｃ０−Ｃ３アルキル（シクロアルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨＳＯ２Ｍｅ、Ｃ０−Ｃ３アルキル（シクロアルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロアリール、Ｃ０−Ｃ３アルキル（シクロアルキル）ＮＨＳＯ２（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、Ｃ０−Ｃ５アルキル−Ｎ（Ｒ４０）（Ｒ４１）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５アルケニル）、−Ｘ−（Ｃ３−Ｃ５シクロアルキル）、−Ｘ−（Ｃ３−Ｃ５シクロアルケニル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５ハロアルキル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５ヒドロキシアルキル）、−Ｘ−（Ｃ１−Ｃ５アルキルアリール）、−Ｘ（ＯＣ１−Ｃ５アルキル）、−ＸＮ（Ｒ４０）（Ｒ４１）、−ＸＮ（Ｒ４０）アリール、−Ｎ（ＣＨ３）（ＯＣＨ３）、−Ｎ（ＯＨ）（ＣＨ３）、−Ｎ（Ｒ４２）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）ＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｒ４２）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−Ｎ（Ｒ４２）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）Ｃ（Ｏ）（ＯＣ１−Ｃ５アルキル）、−Ｎ（Ｒ４２）−ＳＯ２−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−ＮＲ（４２）−Ｓ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）、−Ｐ（Ｏ）−（ＯＣ１−Ｃ５アルキル）２、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、及び−Ｎ＝Ｃ（Ｒ４０）Ｎ（Ｒ４０）（Ｒ４１）から選択され、
Ｒ４２が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、及びＣ１−Ｃ３ハロアルキルから選択され、
Ｘが、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、及びＳＯ２から選択され、
但し、ＲＢが、ベンゾキサゾール環の６又は７位で置換されるが、ＺＸＢが６位にある場合は、ベンゾキサゾール環の７位のみで置換され、
−（ＬＸＢ）−ＺＸＢが、ベンゾキサゾール環の５又は６位のいずれかで置換され、
ＲＢが、ベンゾキサゾール環の６又は７位で置換されるが、−（ＬＸＢ）−ＺＸＢ基が６位にある場合は、ベンゾキサゾール環の７位のみで置換され、
ＲＢ’が、ベンゾキサゾール環の４又は５位で置換されるが、−（ＬＸＢ）−ＺＸＢ基がフェニル環の６位にある場合は、ベンゾキサゾール環の５位のみで置換され、
ＲＰが、フェニル環の２、５、６位のいずれかで置換される。
【００５４】
二価のリンカー（（ＬＰ１）（ＬＰ２）及び、（（ＬＸＢ））の本願明細書に列挙される個々の基が、ベンゾキサゾール核の両端で結合できることは、当業者によく理解されている。例えば、リンカー基、−Ｎ（Ｒ４０）−Ｃ（Ｏ）−に対して、窒素はベンゾキサゾール核に結合でき、カルボニル炭素はベンゾキサゾール核に結合できる。
【００５５】
好ましい実施形態において、本発明の化合物は、好ましい置換基を有する式Ｉの化合物を含む。
Ｒ及びＲ’は、独立してメチル又はエチルであり、
ＲＰが、水素又はメチルであり、
ＲＰ３及びＲＮが、独立して水素、メチル、エチル、−Ｏ−メチル、又はシクロプロピルであり、
（ＬＰ１）が、結合であり、
（ＬＰ２）が、結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−、又は−Ｃ（Ｍｅ）ＯＨであり、
（ＬＸＢ）が、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、又は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｍｅ）−であり、
ＺＰが、１，１−ジメチルエチル、１−ヒドロキシシクロペンチル、１−ヒドロキシシクロヘキシル、３−エチル−３−ヒドロキシペンチル、３−エチル−３−ヒドロキシペンテニル、及び３−エチル−３−ヒドロキシペンチニルであり、
ＺＸＢが、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｒ４０）、−Ｎ（Ｒ４０）（Ｒ４１）、ＮＨ−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＥｔ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯｉＰｒ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ｔＢｕ、−シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＭｅ−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）Ｓ（Ｏ）（Ｒ４２）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）ＳＯ２Ｒ４２、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ４０）−５−テトラゾリル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）−Ｓ（Ｏ）Ｒ４２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４０）−（Ｃ１−Ｃ５アルキル）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４２、及び−ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
【００５６】
特に本発明の好ましい化合物、塩、及びプロドラッグ誘導体は以下の構造式Ｃ１〜Ｃ１６で表される。
Ｃ１）
【００５７】
【化１１】
2008524260.tif 000013
Ｃ２）
【００５８】
【化１２】
2008524260.tif 000014
Ｃ３）
【００５９】
【化１３】
2008524260.tif 000015
Ｃ４）
【００６０】
【化１４】
2008524260.tif 000016
Ｃ５）
【００６１】
【化１５】
2008524260.tif 000017
Ｃ６）
【００６２】
【化１６】
2008524260.tif 000018
Ｃ７）
【００６３】
【化１７】
2008524260.tif 000019
Ｃ８）
【００６４】
【化１８】
2008524260.tif 000020
Ｃ９）
【００６５】
【化１９】
2008524260.tif 000021
Ｃ１０）
【００６６】
【化２０】
2008524260.tif 000022
Ｃ１１）
【００６７】
【化２１】
2008524260.tif 000023
Ｃ１２）
【００６８】
【化２２】
2008524260.tif 000024
Ｃ１３）
【００６９】
【化２３】
2008524260.tif 000025
Ｃ１４）
【００７０】
【化２４】
2008524260.tif 000026
Ｃ１５）
【００７１】
【化２５】
2008524260.tif 000027
Ｃ１６）
【００７２】
【化２６】
2008524260.tif 000028
Ｒ１は、Ｈ、Ｍｅ、又はＥｔであり、Ｒ２は、Ｈ又はＭｅであり、Ｒ３は、Ｈ、Ｍｅ、又はＥｔであり、Ｒ４は、Ｈ又はＭｅである。特に好ましい化合物は、式Ｃ１−Ｃ１６で表される化合物を含み、Ｒ１が、Ｍｅ又はＥｔであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が、個々にＨ又はＭｅである。
実施例
【００７３】
一般的な実験条件：
明記されない限り、出発原料／中間体は、直前の実験からの化合物である。
【００７４】
明記されない限り、全ての反応は、窒素／アルゴン雰囲気下において、撹拌反応器中かつ室温で行われる。
【００７５】
特に明記しない限り、「有機層はＭｇＳＯ４／Ｎａ２ＳＯ４で乾燥される」「ＭｇＳＯ４／Ｎａ２ＳＯ４で乾燥される」は、乾燥剤（ＭｇＳＯ４及び／又はＮａ２ＳＯ４）５−１５ｍで撹拌し、次いで乾燥剤を濾過して除去し、無水の濾液を得ることを定義する。
【００７６】
類似の多段階反応手順において、収率は、示される最終段階又は全体的な多段階に対して得られる。
【００７７】
溶液は、減圧（０．０５〜１ｍｍ）下で、２５〜７５℃の範囲で「濃縮」される。
【００７８】
特に明記しない限り、「残渣をクロマトグラフィーにかける」とは、粗生成物に対し約１０〜１００倍のシリカゲルを用いた、穏やかな窒素加圧下での残渣のシリカゲルクロマトグラフィー（フラッシュクロマトグラフィー）又はシリカゲルカラムを用いた中圧クロマトグラフィーのことであると定義される。
【００７９】
ＨＰＬＣにおいて、列挙された条件は、専ら分析追跡用である。分取ＨＰＬＣにおいて、溶離液は、分析ＨＰＬＣ溶離液に類似である。
【００８０】
薄層クロマトグラフィーは、ＵＶ及び／又は適切な染色溶液で、シリカゲルプレートを用いて行われる。
【００８１】
ＮＭＲスペクトルは、３００又は４００ｍＨｚ分光計によって得られる。ＮＭＲスペクトルデータの表記は、スペクトルがアサインされた構造と一致することを意味する。データのない「ＮＭＲ」の表記は、スペクトルがアサインされた構造と一致することを意味する。
ＨＲＭＳ−高分解能質量スペクトル
ＥＳ−ＭＳ−エレクトロスプレー質量スペクトル
略語：
Ａｑ−水溶液
ｄ−日
ｅｑ−当量
ｈ−時
ｍ−分
ｓａｔｄ−飽和
ｄｉｓｐ−分散
ｑｕａｎｔ−定量
ｒｔ−保持時間（ＲＴとの混同を最小限にするため両方とも小文字で）
ＲＴ−室温
【００８２】
化学用語
【００８３】
【表１】
2008524260.tif 000029
【表２】
2008524260.tif 000030
【表３】
2008524260.tif 000031
【００８４】
一般手順
スキームＩ
【００８５】
【化２７】
2008524260.tif 000032
【００８６】
スキームＩ
２−置換−４−ヨードフェノールを、極性非プロトン溶媒、例えばアセトン又はアセトニトリル中の炭酸カリウム等の塩基中のハロゲン化ベンジルを用いて室温から反応混合物の還流温度で保護して、ベンジル保護されたフェノール中間体を得る。ＬｉＨＭＤＳを使用し、この中間体を、パラジウム触媒の存在下の１００〜１６０℃で、α−アルキルアルカノアートのα−アニオンにカップリングしてエステルＡを得る。エステルＡは、室温〜混合物の還流温度で、アルカノール中で、水酸化リチウム又は水酸化ナトリウムで鹸化して酸Ｂを得る。酸Ｂを、例えば、ホスゲン又はホスゲン／ＤＭＦでハロゲン化物に変換し、塩基（例えばＴＥＡ）の存在下で、置換ｏ−ヒドロキシアニリンと反応させて、カルボキシアニリドＣを得る。カルボキシアニリドＣを、例えば酸／トルエンを用い、混合物の還流温度で脱水して、ベンゾキサゾールＤを得る。ベンジル保護基を、例えば、パラジウム触媒Ｐｄ−Ｃで水素化して、ベンゾキサゾールＤから除去して、ベンゾキサゾールＥを得る。ベンゾキサゾールＥの遊離のヒドロキシルを、極性非プロトン溶媒（例えばアセトン又はアセトニトリル）中の塩基（炭酸カリウム等）中のα−ハロケトン（ｚ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ｈａｌ、ｚがアルキル基又は置換アルキル基である）を用い、室温から反応混合物の還流温度でアルキル化して、アルキル化されたベンゾキサゾールＦを得る。ベンゾキサゾールＦを、室温〜混合物の還流温度で、アルカノール中の水酸化リチウム、水酸化カリウム、又は水酸化ナトリウムで鹸化して、酸Ｇを得る。酸Ｇを、アルカノール又はＴＨＦ中の水素化ホウ素リチウム又は水素化ホウ素ナトリウム、若しくはシアノホウ化水素で還元して、カルビノールＨを得る。当該技術で周知のように、酸Ｇ及びＨを、例えばＥＤＣを使用して、１級アミン又は２級アミンにカップリングし、式Ｉのカルボキサミド又はカルビノール誘導体を生成する。
【００８７】
スキームＩＩ
【００８８】
【化２８】
2008524260.tif 000033
【００８９】
スキームＩＩ
カルビノールＨを、共通結合剤（ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、及びＮ−メチルモルホリン等）を用いてアミノ酸エステルＪでカップリングして、アミドエステルＫを得る。環式アミノ酸エステルＪ（Ｒ’’’’及びＲ’’’’は環を形成する）でカルビノールＨをカップリングして、対応する環式アミド−エステルＫを得る。アミドエステルＫを水酸化アルカリ及びアルカノールで処理して、アミド酸にＬを得る。
【００９０】
スキームＩＩＩ
【００９１】
【化２９】
2008524260.tif 000034
【００９２】
スキームＩＩＩ
カルビノールＨをアルキルスルホンアミド、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰでカップリングして、アシルスルホンアミドＭを得る。カルビノールＨを５−アミノテトラゾール、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰでカップリングして、アシルアミノテトラゾールＭを得る。カルビノールＨを、１００℃でホルムアミド及びＮａＯＭｅと反応させてアミドＯを生成する。アミドＯを、Ｅｔ３Ｎ、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリニウム六フッ化リン酸、及びＴＦＡで反応させ、ニトリルＰを得る。ニトリルＰを、８０℃でＢｕ３ＳｎＮ３と反応させ
てテトラゾールＱを得る。
実施例
【００９３】
実施例１．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸の調製
【００９４】
【化３０】
2008524260.tif 000035
【００９５】
Ａ．  １−ベンジルオキシ−４−ヨード−２−メチル−ベンゼン
【００９６】
【化３１】
2008524260.tif 000036
４−ヨード−２−メチルフェノール（１．６２ｍｏｌ；３９１ｇ）、炭酸セシウム（１．９９ｍｏｌ；６５０ｇ）、及び１．７５Ｌのアセトンの混合物を機械的に撹拌し、臭化ベンジル（１．７０ｍｏｌ；２０３ｍＬ；２９１ｇ）で１５分かけて処理する。反応混合物を室温で２１時間撹拌し、濾過した。濾過ケーキを１Ｌのアセトンで洗浄し、混合濾液を濃縮する。粗半固体をペンタンから再結晶し、白色固体の所望の生成物を４７５グラム（９０％）得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：  ７．４０  （ｍ，  ７Ｈ），  ６．６４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０６  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．２４  （ｓ，  ３Ｈ）
Ｂ．  ２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル酪酸メチルエステル
【００９７】
【化３２】
2008524260.tif 000037
２５０ｍｌのトルエン中の１−ベンジルオキシ−４−ヨード−２−メチル−ベンゼン  （４９４ｍｍｏｌ；１６０ｇ）及びリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．２０ｍｏｌ；２００ｇ）の混合物に、２５０ｍｌのトルエン中の２−エチル−酪酸メチルエステル（９８８ｍｍｏｌ；１２９ｇ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  １９８５  （３），  ３２０）の溶液を加え、１８℃に加熱して反応させる。濁黄色溶液を室温まで昇温させ２０分間撹拌する。２００ｍｌのトルエン中のトリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン（４．９４ｍｍｏｌ；１．３０ｍＬ；１．００ｇ）、及びビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（７．９０ｍｍｏｌ；４．５４ｇ）を順に加え、その濃色混合物を大気温度で６２時間撹拌する。混合物を１ＬのＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈｙｆｌｏのベッドで濾過し、１ＬのＥｔＯＡｃですすぐ。濾液を濃縮する。濃オレンジ色の油（約２００ｇ）をフラッシュクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１ｋｇのシリカ）で精製して、淡オレンジ色油状の標記化合物（７２．４ｇ）を得る。混合画分を混合し、同一のクロマトグラフィーの条件で再精製して、別の黄色油状の標記化合物（５０．６ｇ）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ  ７．４０  （ｍ，  ５Ｈ），  ７．０２  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．８３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０６  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．６４  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２７  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．０２  （ｍ，  ４Ｈ），  ０．７３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ６Ｈ）
【００９８】
Ｃ．  ２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル酪酸
【００９９】
【化３３】
2008524260.tif 000038
２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−酪酸  （２６５ｍｍｏｌ；８６．４ｇ）、８６０ｍｌの９５％エタノール、及び３００ｍｌの水の混合物に、水酸化カリウム（２．０５ｍｏｌ；１１５ｇ）を加える。濁黄色溶液を、７０℃で一晩加熱する。混合物を濃縮し、残渣を１．５ＬのＭＴＢＥ及び１．５Ｌの１Ｎ  ＨＣｌとの間に分離する。有機層を１Ｌの１Ｎ  ＨＣで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮する。粗生成物（約８０ｇ）をヘキサン（３５０ｍｌ）中でスラリー化する。１時間撹拌後、その固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、３５℃で真空乾燥させて、白色固体の標記化合物を５７．２ｇ（６９％）得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ  ７．３８  （ｍ，  ５Ｈ），  ７．０９  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．８４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０６  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．２８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．０４  （ｍ，  ４Ｈ），  ０．７７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ）
【０１００】
Ｄ．  ４−［２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリルアミノ］−３−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル
【０１０１】
【化３４】
2008524260.tif 000039
０℃のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリル酸（５．２０ｇ，１６．６ｍｍｏｌ）の溶液を、（ＣＯＣｌ）２（６．３４ｇ，４９．９ｍｍｏｌ）で処理し、次いでＤＭＦ（０．２ｍＬ）を加える。反応混合物を１０分撹拌し、冷浴を除去する。混合物を室温で２時間撹拌し続け、中間体２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリルクロリド（５．４０ｇ，９８％）に濃縮する。
【０１０２】
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の酸塩化物（５．４０ｇ，１６．３ｍｍｏｌ）の溶液を、４−アミノ−３−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル（３．２７ｇ，１９．６ｍｍｏｌ）に加える。混合物を、ＴＥＡ（６．９０ｍｌ、４８．９ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１００ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）に加え、室温で２時間撹拌する。反応物を水（１００ｍＬ）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（２５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製して、標題化合物（５．３０ｇ，７０％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４６２．３  （Ｍ＋１），  ４６０．２  （Ｍ−１）
【０１０３】
Ｅ．  ２−［１−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−１−エチル−プロピル］−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸メチルエステル
【０１０４】
【化３５】
2008524260.tif 000040
トルエン（５０ｍＬ）中の４−［２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリルアミノ］−３−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル（２．１５ｇ，４．６６ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴｓＯＨ−Ｈ２Ｏ（４４３ｍｇ，２．３３ｍｍｏｌ）で処理する。反応物を１６０℃で６０ｍ加熱する。反応混合物を放冷し、トルエンを真空除去する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製し、油状の標題化合物（１．５０ｇ，７２％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４４４．２  （Ｍ＋１）
【０１０５】
Ｆ．  ２−［１−エチル−１−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−プロピル］−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸メチルエステル
【０１０６】
【化３６】
2008524260.tif 000041
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の２−［１−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−１−エチル−プロピル］−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸メチルエステル（１．５０ｇ，３．３８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）のＰｄ−Ｃ（１５０ｍｇ，１０％）のスラリーに室温で加える。得られた混合物を、水素バルーン圧力下で１２時間撹拌する。混合物をセライトのパッドで濾過し、濾液を濃縮する。残渣を２０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘで精製して、標記化合物（１．２０ｇ，１００％）を得る。Ｈ−ＮＭＲ  （ｐｐｍ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ８．１１  （１  Ｈ，  ｓ），  ８．０３  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１．８，  ８．４  Ｈｚ），  ７．７３  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ），  ６．９７  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝２．２  Ｈｚ），  ６．９２  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝２．２，  ８．４  Ｈｚ），  ６．７０  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ），  ３．９３  （３  Ｈ，  ｓ），  ２．４０  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．３０  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．２０  （３  Ｈ，  ｓ），  ０．７６  （６  Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ）
Ｇ．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸メチルエステル
【０１０７】
【化３７】
2008524260.tif 000042
アセトン（４０ｍＬ）中の２−［１−エチル−１−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−プロピル］−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸メチルエステル（１．２０ｇ，３．３８ｍｍｏｌ）を、１−ブロモピナコロン（０．７３ｇ，４．０６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（０．９３ｇ，６．７６ｍｍｏｌ）で処理する。懸濁液を室温で４時間撹拌する。混合物を濾過し、濾液を濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）を用いて精製して、標題化合物（１．５０ｇ，９８％）を得る。Ｈ−ＮＭＲ  （ｐｐｍ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ８．１４  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝２．４  Ｈｚ），  ８．０７  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１．２，  ８．４  Ｈｚ），  ７．７８  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ），  ７．０５  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１．６  Ｈｚ），  ７．００  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝２．４，  ８．４  Ｈｚ），  ６．５６  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ），  ４．８７  （２  Ｈ，  ｓ），  ３．９６  （３  Ｈ，  ｓ），  ２．４０  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．３０  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．２８  （３  Ｈ，  ｓ），  １．２７  （９  Ｈ，  ｓ），  ０．７７  （６  Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ）
【０１０８】
Ｈ．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸
【０１０９】
【化３８】
2008524260.tif 000043
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及びＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸メチルエステル（１．５０ｇ，３．３２ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（２．０Ｍ，２０．０ｍＬ）で処理する。得られた混合物を、室温で１６時間撹拌する。混合物を濃縮し、ＨＣｌ（５Ｎ）で、ｐＨが約３になるまで酸性にし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ次いで５０ｍＬ）で抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥後濃縮して、標題化合物が得られる（１．４０ｇ，９７％）。Ｈ−ＮＭＲ  （ｐｐｍ，  ＣＤＣｌ３）  δδ：  ８．１６  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１．３  Ｈｚ），  ８．１１  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１．３，  ８．４  Ｈｚ），  ７．７８  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ），  ７．０２  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１．８  Ｈｚ），  ６．９７  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝２．２，  ８．４  Ｈｚ），  ６．５４  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ），  ４．８５  （２  Ｈ，  ｓ），  ２．４０  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．３０  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．２６  （３  Ｈ，  ｓ），  １．２５  （９  Ｈ，  ｓ），  ０．７７  （６  Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ）
ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４３８．２  （Ｍ＋１），  ４３６．２  （Ｍ−１）
【０１１０】
実施例２．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸アミドの調製
【０１１１】
【化３９】
2008524260.tif 000044
ＣＨ２Ｃｌ２（５．０ｍＬ）中の２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸（１５０ｍｇ，０．３４３ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＡＰ（１２５ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（９９ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を、水酸化アンモニウム水溶液（１．０ｍＬ，３０％）を加える前に、室温で１５分撹拌する。反応物を１８時間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５．０ｍＬ）でクエンチする。有機層をシリカゲルカラムにロードし、５０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘで精製して、標題化合物（４０ｍｇ，２７％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４３７．３  （Ｍ＋１）
【０１１２】
実施例３．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸ジメチルアミドの調製
【０１１３】
【化４０】
2008524260.tif 000045
ＣＨ２Ｃｌ２（５．０ｍＬ）中の２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸（１５０ｍｇ，０．３４３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＡＰ（１２５ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（９９ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を室温で１５分間撹拌し、ジメチルアミン塩酸塩（４２ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）を加える。反応物を１８時間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５．０ｍＬ）でクエンチする。有機層をシリカゲルカラムにロードし、５０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘで精製して、標題化合物を（２８０ｍｇ，９１％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４６５．３  （Ｍ＋１）
【０１１４】
実施例４．  ［（２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボニル）−アミノ］−酢酸の調製
【０１１５】
【化４１】
2008524260.tif 000046
ＣＨ２Ｃｌ２（５．０ｍＬ）中の２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸（１５０ｍｇ，０．３４３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＡＰ（１２５ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（９９ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を室温で１５分間撹拌し、グリシンメチルエステル塩酸塩（６４ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を１８時間撹拌後、ＮＨ４Ｃｌ（５．０ｍＬ）でクエンチする。有機層をシリカゲルカラムにロードし、２０〜５０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘで精製して、アミドエステル中間体が得られる。
【０１１６】
中間体を、メタノール（２．０ｍＬ）及びＴＨＦ（２．０ｍＬ）に溶解し、ＮａＯＨ（２．０Ｍ，５．０ｍＬ）で処理する。得られた混合物を、室温で３時間撹拌する。混合物を濃縮後、ＨＣｌ（１Ｎ）でｐＨ約３になるまで酸性にし、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、標題化合物（９５ｍｇ，５６％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４９５．２  （Ｍ＋１），  ４９３．３  （Ｍ−１）
【０１１７】
実施例５．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸の調製
【０１１８】
【化４２】
2008524260.tif 000047
【０１１９】
Ａ．  ３−［２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリルアミノ］−４−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル
【０１２０】
【化４３】
2008524260.tif 000048
０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリル酸（４．６０ｇ，１４．７ｍｍｏｌ）の溶液を、（ＣＯＣｌ）２（６．７３ｇ，３５．３ｍｍｏｌ）で処理し、次いでＤＭＦ（０．２ｍＬ）を加える。反応混合物を１０分撹拌し、冷浴を除去する。混合物を室温で２時間撹拌し続け、２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリル塩化物（５．４０ｇ，９８％）に濃縮する。
【０１２１】
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の酸塩化物（５．４０ｇ，１６．３ｍｍｏｌ）の溶液を、３−アミノ−４−ヒドロキシ−安息香酸メチルエステル（２．９５ｇ，１７．７ｍｍｏｌ）．に加える。混合物を、ＴＥＡ（６．１８ｍｌ，４４．１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１００ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）に加え、室温で２時間撹拌する。反応物を水（１００ｍＬ）でクエンチし、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出する。混合有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（２５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製して、標題化合物（５．８０ｇ，８６％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４６２．３  （Ｍ＋１），  ４６０．２  （Ｍ−１）
【０１２２】
Ｂ．  ２−［１−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−１−エチル−プロピル］−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸メチルエステル
【０１２３】
【化４４】
2008524260.tif 000049
実施例１、工程Ｅの類似の方法で、トルエン（１００ｍＬ）中の３−［２−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−２−エチル−ブチリルアミノ］−４−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル（５．８０ｇ，１２．６ｍｍｏｌ）、ＴｓＯＨ−Ｈ２Ｏ（４７８ｍｇ，２．５１ｍｍｏｌ）を反応させ、標記生成物（５．０８ｇ，９１％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４４４．２  （Ｍ＋１）
【０１２４】
Ｃ．  ２−［１−エチル−１−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−プロピル］−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸メチルエステル
【０１２５】
【化４５】
2008524260.tif 000050
実施例１、工程Ｆの類似の方法で、２−［１−（４−ベンジルオキシ−３−メチル−フェニル）−１−エチル−プロピル］−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸メチルエステル（３．２８ｇ，７．３９ｍｍｏｌ）及びＰｄ−Ｃ（３００ｍｇ，１０％）を水素化する。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ３５４．２  （Ｍ＋１），  ３５２．２  （Ｍ−１）
【０１２６】
Ｄ．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸メチルエステル
【０１２７】
【化４６】
2008524260.tif 000051
実施例１、工程Ｇの類似の方法で、２−［１−エチル−１−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−プロピル］−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸メチルエステル（２．１０ｇ，５．９４ｍｍｏｌ）及び１−ブロモピナコロン（１．５９ｇ，８．８７ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（２．０４ｇ，１４．８ｍｍｏｌ）を反応させ、淡黄色油状の標記生成物（２．５５ｇ，９５％）を得る。Ｈ−ＮＭＲ  （ｐｐｍ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ８．４３  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１．３  Ｈｚ），  ８．０１  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１．８，  ８．８  Ｈｚ），  ７．４２  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ），  ７．０１  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝２．２  Ｈｚ），  ６．９６  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝２．２，  ８．４  Ｈｚ），  ６．５１  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．８  Ｈｚ），  ４．８４  （２  Ｈ，  ｓ），  ３．９５  （３  Ｈ，  ｓ），  ２．３８  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．３２  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．２５  （３  Ｈ，  ｓ），  １．２５  （９  Ｈ，  ｓ），  ０．７６  （６  Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ）
【０１２８】
Ｅ．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸
【０１２９】
【化４７】
2008524260.tif 000052
実施例１、工程Ｈの類似の方法で、２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸メチルエステル（２．５５ｇ，５．６５ｍｍｏｌ）を加水分解する。Ｈ−ＮＭＲ  （ｐｐｍ，  ＣＤＣｌ３）  δ：  ８．５１  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１．８  Ｈｚ），  ８．０８  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１．８，  ８．４  Ｈｚ），  ７．４５  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．８  Ｈｚ），  ７．０２  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝２．２  Ｈｚ），  ６．９６  （１  Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝２．２，  ８．４  Ｈｚ），  ６．５２  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．８  Ｈｚ），  ４．８４  （２  Ｈ，  ｓ），  ２．３８  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．３２  （２  Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ），  ２．２６  （３  Ｈ，  ｓ），  １．２５  （９  Ｈ，  ｓ），  ０．７６  （６  Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５  Ｈｚ）
ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４３８．２  （Ｍ＋１），  ４３６．２  （Ｍ−１）
【０１３０】
実施例６．  ２−｛１−エチル−１−［４−（２−ヒドロキシ−３，３−ジメチル−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸の調製
【０１３１】
【化４８】
2008524260.tif 000053
室温で、ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸（０．５８ｇ，１．３３ｍｍｏｌ）を、ＮａＢＨ４（１００ｍｇ，２．６５ｍｍｏｌ）で処理する。得られた混合物を、１時間撹拌する。反応物をＨＣｌ（１．０Ｎ、５．０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、標題化合物（０．５８ｇ，１００％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４４０．３  （Ｍ＋１），  ４３８．２  （Ｍ−１）
【０１３２】
実施例７．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸アミドの調製
【０１３３】
【化４９】
2008524260.tif 000054
実施例２の類似の方法で、２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸（１５０ｍｇ，０．３４３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１２５ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（９９ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）及び水酸化アンモニウム水溶液（１．０ｍＬ，３０％）を反応させ、標記生成物（１０ｍｇ，７％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４３７．３  （Ｍ＋１）
【０１３４】
実施例８．  ２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸ジメチルアミドの調製
【０１３５】
【化５０】
2008524260.tif 000055
実施例３の類似の方法で、２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸（１５０ｍｇ，０．３４３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１２５ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９９ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）、及びジメチルアミン塩酸塩（４２ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）を反応させ、標記生成物（８０ｍｇ，５０％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４６５．３  （Ｍ＋１）
【０１３６】
実施例９．  ［（２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボニル）−アミノ］−酢酸の調製
【０１３７】
【化５１】
2008524260.tif 000056
実施例４の類似の方法で、２−｛１−［４−（３，３−ジメチル−２−オキソ−ブトキシ）−３−メチル−フェニル］−１−エチル−プロピル｝−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸（１５０ｍｇ，０．３４３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１２５ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９９ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）、及びグリシンメチルエステル塩酸塩（６４ｍｇ，０．５１４ｍｍｏｌ）を反応させて加水分解し、標記生成物（１３０ｍｇ，７６％）を得る。ＭＳ  （ＥＳ）  ｍ／ｅ：  ４９５．３  （Ｍ＋１），  ４９３．３  （Ｍ−１）
【０１３８】
本発明の化合物−塩、立体異性体及びプロドラッグ：
式Ｉで表わされる化合物の塩は、本発明の更なる態様である。また、式Ｉの化合物群として酸性及び塩基性のものが含まれ、本発明がその薬理学的に許容できる塩を含むことは当業者に理解される。
【０１３９】
本発明の化合物が酸性官能基又は塩基性官能基を有する場合、親化合物よりも高い水溶性でかつ生理的に適した種々の塩が形成される。代表的な薬理学的に許容できる塩には、限定されないが、リチウム、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、亜鉛等のようなアルカリ及びアルカリ土類塩が含まれる。ナトリウム及びカリウム塩が、特に好まれる。塩は、塩基を用いて溶液中の酸を処理して、又はイオン交換樹脂に酸を露出させて遊離酸から適宜調製される。例えば、式Ｉの化合物のカルボン酸置換基は、−ＣＯ２Ｈとして選択され、塩は、適切な塩基（例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ）との反応によって形成され、対応するナトリウム及びカリウム塩を生じさせる。
【０１４０】
薬理学的に許容できる塩の定義には、本発明の化合物の比較的毒性のない無機塩基性添加塩及び有機塩基性添加塩であり、例えば本発明の化合物によって塩を形成するために十分な塩基性度を有する窒素塩基から誘導されるアンモニウム、第４アンモニウム、及びアミンカチオンが含まれる（例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」，Ｊ．Ｐｈａｒ．Ｓｃｉ．，６６：１−１９（１９７７）を参照）。更に、本発明の化合物の塩基性基は、適切な有機酸又は無機酸と反応し、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、カンシラート、炭酸塩、塩化物、コリン、クラブラン酸塩、クエン酸塩、塩化物、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、二塩酸塩、二リン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、エチレンジアミン、フッ化物、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドロバミン、臭化物、塩化物、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マルセエート、マンデル酸塩、メグルミン、メシレート、メスビエート、臭化メチル、硝酸メチル、硫酸メチル、ムケート、ナプシル酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモエート、パントテン酸塩、リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、プロカイン、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシレート、トリフルオロ酢酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、及び吉草酸塩のような塩を形成する。
【０１４１】
本発明のある種の化合物は、１個以上のキラル中心を有してもよく、光学活性形状で存在できる。同様に、化合物がアルケニル又はアルケニレン基を含む場合、化合物のシス及びトランス異性体形状の可能性が存在する。本発明には、Ｒ及びＳ異性体、及びラセミ混合物と、シス及びトランス異性体の混合物とを含むその混合物が包含される。アルキル基のような置換基中に、不斉炭素原子を更に存在させることができる。このような異性体並びにその混合物の全てが本発明に含まれることが意図される。特定の立体異性体を必要とする場合、不斉中心を含み、既に分離された出発原料による立体特異的反応を用い、当該技術分野で周知の方法、或いは立体異性体の混合物及び公知の方法によって後に分離させる方法によって調製することができる。例えば、キラルカラムを用いてもよく、
例としてキラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＡＤ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＡＳ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＤ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＪ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＡ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＢ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＣ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＦ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＧ、キラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＯＫ、及びキラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ）ＣＡ−１という登録商標によって認識されるダイセル化学工業（ＤａｉｃｅｌＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）のものが挙げられる。
【０１４２】
他の従来の方法によって、ラセミ混合物を、他の化合物の単一の鏡像異性体と反応させることができる。つまり、ラセミ形状をジアステレオマー混合物に変換する。このジアステレオマーは、異なる融点、沸点及び溶解度を有するため、結晶化のような従来の手段によって分離することができる。
【０１４３】
プロドラッグは、化学的又は代謝的に開裂可能な基を有し、加溶媒分解、生理的な条件下においてインビボで薬理学的に活性を有する本発明の化合物となる本発明の化合物の誘導体である。本発明の化合物の誘導体は、酸性及び塩基性の誘導体の形状の両方において活性を有するが、酸性の誘導体の形状では、溶解度、組織適合性、又は哺乳類生物の遅延放出において利点が得られる場合がある（Ｂｕｎｄｇａｒｄ，Ｈ．，Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｐｐ．７−９，２１−２４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８５を参照）。プロドラッグには、例えば適切なアルコールとの親酸性化合物の反応によって調製されたエステル、又は適切なアミンとの親酸性化合物の反応によって調製されたアミドのような当業者に周知の酸性の誘導体が含まれる。本発明の化合物に付随する酸性基から誘導された単純な脂肪族又は芳香族エステルは、好ましいプロドラッグである。場合によって、（アシルオキシ）アルキルエステル又は（（アルコキシカルボニル）オキシ）アルキルエステルのような二重エステル型のプロドラッグを調製することが望ましい。プロドラッグとして使用するために特に好ましいエステルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎブチル、イソブチル、モルホリノエチル、及びＮ，Ｎジエチルグリコールアミドである。
【０１４４】
Ｎ，Ｎ−ジエチルグリコールアミドエステルのプロドラッグを、式（Ｉ）の化合物のナトリウム塩（ジメチルホルムアミド等の媒体中で）を２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルアセトアミド  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＵＳＡから入手可能；品目番号２５，０９９−６）と反応させて調製することができる。
【０１４５】
ホルホリノエチルエステルのプロドラッグは、式Ｉの化合物のナトリウム塩（ジメチルホルムアミド等の媒体中で）を４−（２−クロロエチル）モルホリン塩酸塩（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）、米国ウイスコンシン州ミルウオーキーから入手可能；品目番号５，２２０−３）と反応させることによって調製される。例えば、該プロドラッグは、式Ｉの化合物のナトリウム塩、下式で表される化合物
【０１４６】
【化５２】
2008524260.tif 000057
、及びヨウ化ナトリウムとの反応により製造し、下式のペンダント基を有するエステルプロドラッグを得ることができる。
【０１４７】
【化５３】
2008524260.tif 000058
【０１４８】
また、低級アルキル（すなわち、Ｃ１〜Ｃ８）エステルのプロドラッグを、例えばナトリウムもしくはカリウム塩（本発明の任意の酸性化合物を形成することによって、すなわちＫＯＨ等の塩基と−ＣＯ２Ｈ等の酸性基との反応によって誘導）をヨウ化メチル、ｎ−ヨウ化プロピル、ヨウ化イソプロピル等の任意のヨウ化アルキルと反応させる等の従来の手段によって、調製してもよい。
【０１４９】
本発明の新規な化合物を含む薬理学的に許容できる医薬製剤
本発明の医薬製剤は、治療上有効量の本発明の化合物（式Ｉの化合物）を薬理学的に許容できる担体又は希釈剤と組み合わせ（例えば、混合させ）て調製される。この医薬製剤は、周知かつ簡単に入手可能な成分を使用する公知の方法によって調製される。
【０１５０】
本発明の組成物を作製する際、通常、本発明の化合物を、担体と混合するか、或いは担体で希釈するか、若しくはカプセル、小袋、紙又は他の容器の形状でありうる担体中に封入する。担体が希釈剤を担う場合、ビヒクルとして作用する、或いは、例えば１０重量％以下の化合物を含む、錠剤、丸薬、粉末、ロゼンジ、エリキシル剤、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル（固体又は液体媒体中）、又は軟膏であってよく、固体、半固体、又は液体材料であってよい。本発明の化合物は、好ましくは投与前に配合される。
【０１５１】
本発明の化合物を、経皮パッチ中に含まれる適切な製剤によっても送達することができる。或いは、本発明の化合物を、舌下投与によって患者に送達することができる。
【０１５２】
医薬製剤には、当該技術分野で公知の担体を使用することができる。このような製剤において、担体は、固体、液体、又は固体と液体との混合物であってよい。固体形状製剤は、粉末、錠剤及び、カプセルを含む。固体担体は、香料添加剤、潤滑剤、可溶化剤、懸濁剤、結合剤、錠剤崩壊剤、及びカプセル化材料として作用する１種類以上の物質であってよい。
【０１５３】
経口投与用の錠剤は、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムのような適切な賦形剤を、トウモロコシ、デンプン、又はアルギン酸のような崩壊剤、並びに／又は結合剤、例えばゼラチン又はアカシア、及びステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクのような潤滑剤と共に含むことができる。
【０１５４】
粉末において、担体は、微粉活性成分と混合した微粉固体である。錠剤において、本発明の化合物は、必要な結合性を有するキャリアと適切な比率で混合され、かつ所望の形状及び寸法に圧縮される。粉末及び錠剤は、好ましくは、約１〜約９９重量パーセントの本発明の化合物を含む。適切な固体担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、及びカカオ脂である。
【０１５５】
滅菌液体形状の製剤には、懸濁液、エマルジョン、シロップ及びエリキシル剤が含まれる。
【０１５６】
活性成分を、滅菌水、滅菌有機溶媒、又はそれらの混合物のような薬理学的に許容できる担体に溶解又は懸濁することができる。化合物は、適切な有機溶媒、例えばプロピレングリコール水溶液に溶解される場合がある。他の組成物は、本発明の微粉化合物をデンプン水溶液又はカルボキシメチルセルロースナトリウム、若しくは適切な油中に分散させて作製することができる。
【０１５７】
本発明の化合物の使用法：
多くの病状は、化学式Ｉの化合物を用いた治療によって利益を受け、限定されないが、カルシウム異常調節、異常細胞増殖、異常細胞分化、異常免疫反応、皮膚の異常状態、神経変性状態、炎症、ビタミンＤ敏感症及び／又は過剰増殖異常を特徴とする病状である。
【０１５８】
式Ｉの化合物を用いた治療によって利益を受ける特定の疾患は、限定されないが、座瘡、日光性角化症、脱毛症、アルツハイマー病、前立腺肥大症、膀胱癌、無重力の骨維持、骨折治療、乳癌、癌の化学治療、クローン病、大腸癌、Ｉ形糖尿病、移植片対宿主病、高カルシウム血症、ＩＩ型糖尿病、白血病、多発性硬化症、骨髄異形成症候群、脂分泌不全、骨軟化症骨粗鬆症、皮膚強度の不足、歯周疾患、皮膚水分不足、乾癬性関節炎、前立腺癌、乾癬症、腎性骨形成異常症、慢性関節リウマチ、強皮症、皮膚癌、全身性エリテマトーデス、マスタード糜爛、潰瘍性大腸炎、白斑、及び皺による皮膚細胞障害を含む。
【０１５９】
特に好ましくは、治療上有効量の式Ｉの化合物を哺乳類（ヒトを含む）に投与して、乾癬症及び／又は骨粗鬆症を治療する。「薬理学的有効量」とは、ヒトを含む哺乳類の症状における有害作用を予防、除去、又は軽減させる式Ｉに対応する医薬品の量を意味する。
【０１６０】
治療又は予防的効果を得るために、本発明に従って投与される化合物の特定の用量は、例えば投与される化合物、投与経路、及び治療される状態を含む症例を取り囲む特定の状況によって必然的に決定される。一般的な１日量は、通常、体重の約０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の薬理学的有効量の本発明の活性化合物を含む。好ましくは、本発明の化合物の用量は、体重に対して０．０００１〜５ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１６１】
好ましくは、本発明の化合物又はこの化合物を含む医薬製剤は、哺乳動物への投与に適した単位剤形である。単位剤形は、カプセル又は錠剤自体、若しくは適当な数のいずれかであってよい。組成物の単位量の活性成分の量は、関与する特定の治療に応じて約０．０００１から約１０００ミリグラム以上に変更又は調節することができる。患者の年齢及び状態に応じて投薬量に定期的に変化させる必要性を認識することができる。投薬量は、投与経路にも依存する。本発明の化合物は、経口、エアロゾル、直腸、経皮、舌下、皮下、静脈、筋肉内、及び鼻腔内等を含む様々な経路によって投与されてもよい。本発明の化合物を含む軟膏製剤による乾癬症の治療が、特に好ましい。必要に応じて、軟膏製剤を通常、１日あたり１〜６回塗布することができる。
【０１６２】
好ましくは、乾癬症の治療は、治療上有効量の本発明の化合物を含むクリーム、油、エマルジョン、ペースト又は軟膏形状の製剤を局所塗布して行われる。局所治療用の製剤は、０．５〜０．００００５重量パーセント、好ましくは．０５〜０．０００５重量パーセント、最も好ましくは０．０２５〜０．００１の活性成分を含む。
【０１６３】
例えば、乾癬症の治療及び予防におけるＶＤＲモジュレーターのビヒクルとして有用な２種類の半固体状の局所製剤の調合は、以下のとおりである。
ポリエチレングリコール軟膏ＵＳＰ（ｐ．２４９５）
ポリエチレングリコール軟膏を以下のように調合する。
ポリエチレングリコール３３５０    ４００ｇ
ポリエチレングリコール４００      ６００ｇ
合計                            １０００ｇ
【０１６４】
２種類の成分を水浴で６５℃に加熱する。放冷し、凝固するまで撹拌する。硬質の製剤を所望とする場合、１００ｇ以下のポリエチレングリコールを同量のポリエチレングリコール３３５０と置換する。
親水性軟膏ＵＳＰ（ｐ．１２１６）
親水性軟膏を以下のように調合する。
メチルパラベン          ０．２５ｇ
プロピルパラベン        ０．１５ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム      １０ｇ
プロピレングリコール      １２０ｇ
ステアリルアルコール      ２５０ｇ
白色ワセリン              ２５０ｇ
精製水                    ３７０ｇ
合計                  約１０００ｇ
【０１６５】
ステアリルアルコール及び白色ワセリンを蒸気浴で融解し、約７５℃で加熱する。予め水に溶解した他の成分を加え、７５℃に加熱し、その混合物を凝固するまで撹拌する。
【０１６６】
上記の各製剤において、活性成分は、加熱工程中に添加され、全軟膏重量の０．５〜０．００００５重量パーセント、好ましくは．０５〜０．０００５重量パーセント、最も好ましくは０．０２５〜０．００１重量パーセントのＵＳＰである（情報源：−Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  ２４、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ、１９９９）。
【０１６７】
従来の骨粗鬆症の治療法は、（ｉ）エストロゲン、（ｉｉ）アンドロゲン、（ｉｉｉ）カルシウム補助剤、（ｉｖ）ビタミンＤ代謝物、（ｖ）チアジド利尿薬、（ｖｉ）カルシトニン、（ｖｉｉ）二リン酸、（ｖｉｉｉ）ＳＥＲＭ、（ｉｘ）フッ化物、及び（ｘ）副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）を含む（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｐｕｂｌ．によって出版された、ハリソンのＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１３ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９４，ＩＳＢＮ  ０−０７−０３２３７０−４，ｐｇｓ．２１７２−７７；参考文献の開示内容は本願明細書に参照して組み込まれる）。この従来の治療法の１種類又は組み合わせを、本願明細書に教示される式Ｉの化合物を用いる治療方法と組み合わせて使用することができる。例えば、骨粗鬆症の治療法において、本発明のビタミンＤ受容体モジュレーター化合物を、別個に又は従来の治療法と同時に投与することができる。或いは、ビタミンＤ受容体モジュレーター化合物は、下記に示すような骨粗鬆症治療用の製剤において、従来の治療薬と組み合わせることができる。
【０１６８】
骨粗鬆症を治療するための製剤は、成分（Ａ１）：式Ｉで表されるビタミンＤ受容体モジュレーター、又はその薬理学的に許容できる塩若しくはプロドラッグ誘導体と、成分（Ｂ１）：エストロゲン、アンドロゲン、カルシウム補助剤、ビタミンＤ代謝物、チアジド利尿薬、カルシトニン、二リン酸、ＳＥＲＭ、フッ化物、及びＰＴＨ成分（Ｃ１）と、任意に担体又は希釈剤と、を含む。
【０１６９】
一般的に有用な製剤は、（Ａ１）対（Ｂ１）の重量比が、１０：１〜１：１０００、かつ好ましくは１：１〜１：１００である。
【０１７０】
乾癬症の併用療法：
従来の乾癬症の治療法は、局所的なグルココルチコイド、サリチル酸、粗コールタール、紫外線、及びメトトレキセートを含む（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｐｕｂｌ．によって出版された、ハリソンのＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１３ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９４，ＩＳＢＮ０−０７−０３２３７０−４，ｐｇｓ．２１７２−７７を参照）。従来の治療法のいずれか又は組み合わせを、本願明細書に教示される式Ｉの化合物を用いる治療方法と組み合わせて使用することが可能である。例えば、乾癬症の治療法において、（例えば式Ｉによって定義される）本発明のビタミンＤ受容体モジュレーター化合物を、別個に又は従来の治療法と同時に局所投与することができる。或いは、ビタミンＤ受容体モジュレーター化合物は、下記に示す乾癬症治療用の局所塗布用製剤において、従来の治療薬と組み合わせられる。
【０１７１】
乾癬症治療用製剤は、成分（Ａ２）：式（Ｉ）で表されるビタミンＤ受容体モジュレーター、又はその薬理学的に許容できる塩若しくはプロドラッグと、成分（Ｂ２）：局所的なグルココルチコイド、サリチル酸、又は粗コールタールからなる群から選択される乾癬症の治療用の従来の１種類以上の共剤と、成分（Ｃ２）：任意に担体又は希釈剤と、を含む。
【０１７２】
一般的に有用な製剤は、（Ａ２）対（Ｂ２）の重量比が、１：１０から１：１０００００、かつ好ましくは１：１００から１：１００００のものである。
【０１７３】
実験結果：
表２  実験結果一覧
【０１７４】
【表４】
2008524260.tif 000059
【０１７５】
表２中の上付き数字の説明：
１．試験化合物番号は、実施例番号に対応する生成物、すなわち本発明の範囲内の化合物を指す。
２．ＲＸＲ−ＶＤＲヘテロ二量化（ＳａＯＳ−２細胞）検定は、本願明細書の「アッセイ」で記載される。
３．ＯＣＮプロモーター検定は、本願明細書の「アッセイ」で記載される。
４．ケラチノサイト増殖アッセイは、明細書の後記「アッセイ」の部に記載する。
【０１７６】
アッセイ法
アッセイ法の使用：
骨粗鬆症及び他の関連疾患に関する本発明の新規な化合物は、複数の検定結果から評価される。（ｉ）ビタミンＤ受容体に対する活性化が高く、（ｉｉ）高カルシウム血症を予防するという特性が組み合わされることにより、疾患の治療が効果的となることが好ましく、また、本発明の態様であることから複数のアッセイを用いることが有益となる。以下の検定のいくつかは、他の検定に関連すると考えられ、化合物の関連特性を測定する。従って、化合物が、上記検定の受入基準の全部でないにせよ、少なくとも１基準、好ましくは２基準以上を満たす場合に、本発明の実施において有用的であると考えることができる。
【０１７７】
乾癬症に関する本発明の新規な化合物の評価は、末梢血中単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＩＬ−２生成の阻害及びＩＬ−１０生成の刺激を測定する他のアッセイと組み合わせたケラチノサイト増殖アッセイを用いて行われる。
【０１７８】
アッセイ法の簡単な記載、有用性、及び受入基準：
１．ＲＸＲ−ＶＤＲヘテロ二量化アッセイ：
このアッセイによって試験化合物のＶＤＲ活性が得られる。このアッセイの化合物のＥＣ５０値は低いことが求められる。化合物のＥＣ５０値が低いほど、ＶＤＲアゴニストとして活性が高くなる。望ましい検定結果は、ＥＣ５０値が６００ｎＭ以下である。好ましい検定結果は、２５０ｎＭ未満、最も好ましくは１５０ｎＭ未満である。
【０１７９】
（１）ＲＸＲ−ＶＤＲヘテロ二量化アッセイトランスフェクションの材料及び方法：
試薬：ＦｕＧＥＮＥ  ６トランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｃａｔ  ＃  １  ８１４  ４４３）；Ｄ−ＭＥＭ高グルコース（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｃａｔ１１０５４−０２０＃）、１０％熱不活性ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｃａｔ＃  １００９２−１４７）、１％抗生物質−抗真菌剤（Ａｂ−Ａｍ）；（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｃａｔ  ＃  １５２４０−０６２  ）
【０１８０】
細胞：５−６×１０５細胞／ｍｌで密度を維持する増殖培地中、Ｔ−１５２ｃｍ２培養フラスコ内でＳａＯｓ−２細胞を増殖させる。１週間に２回、１：３で細胞を継代する。トリプシンＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｃａｔ＃２５３００−０２０）を添加し、インキュベートする。プレート培地中の細胞を再懸濁し、増殖培地に移す。
【０１８１】
洗浄培地：フェノールレッド非含有ＨＢＳＳ低グルコース（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｃａｔ＃１４１７５−０９５）、１％Ａｂ−Ａｍ
プレート培地：フェノールレッド非含有Ｄ−ＭＥＭ低グルコース（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｃａｔ＃１１０５４−０２０）、１％Ａｂ−Ａｍ；Ｄ−ＭＥＭ；  ストリップされたＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｃａｔ＃ＳＨ３００６８．０３  Ｌｏｔ＃ＡＨＭ９３７１）
【０１８２】
トランスフェクション／処理培地：  フェノールレッド非含有Ｄ−ＭＥＭ低グルコースのみ；  Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＣｏａｓｔａｒＴ−１５２ｃｍ２培養びん（Ｃａｔ＃４３０８２５）を使用して細胞を培養する。
【０１８３】
ルシフェラーゼアッセイ試薬：
Ｅ２５３３検定基質、凍結乾燥産物、及びＥ２５４３検定緩衝液からなるプロメガ製Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬（カタログ番号Ｅ２５５０）を使用する。室温で解凍して保存する。
【０１８４】
細胞収集／計数：  培養フラスコから培地を吸引し、ＨＢＳＳで細胞をすすぎ、吸引する。トリプシンを添加してインキュベートする。細胞が分離した判断したら、増殖培地中で細胞を再懸濁する。細胞の継代のために、新鮮な増殖培地が入った新たなびんに移す。
【０１８５】
９６プレートウェルプレート及び２つの予備プレートをプレート培養する。ピペットを使用して細胞懸濁液を混合する。血球計算器を使用して細胞を計算する。
【０１８６】
プレート播種：プレート培地１０％ストリップされたＦＢＳ含むＤ−ＭＥＭ低グルコース、フェノールレッド非含有、１％Ａｂ−Ａｍを使用する。１４プレート＠１６５μ／ウェルをプレート培養する。無菌のフラスコ中のプレート培地に細胞懸濁液を加え、混合する。細胞／ウェルを添加する。インキュベーター中に細胞を入れる。細胞は、トランスフェクション前に約７５％コンフルエントにする。
【０１８７】
２日目：トランスフェクション
工程１：ＤＮＡ及び培地
単純なＤＭＥＭ培地を試験管に加えてＤＮＡを混合し、レポーター遺伝子ｐＦＲ−ＬＵＣを添加し、Ｇａｌ４−ＲＸＲ−ＤＥＦ及びＶＰ１６−ＶＤＲ−ＬＢＤを添加する。
工程２、ＦｕＧＥＮＥ及び培地：
試験管中で純粋なＤＭＥＭ媒体を調製してＦｕＧＥＮＥ及び媒体ＦｕＧＥＮＥを混合し、ＦｕＧＥＮＥ６トランスフェクション試薬を添加し、インキュベートする。
工程３：ＦｕＧＥＮＥ、ＤＮＡ、及び媒体複合体
工程１のＤＮＡ媒体複合体に工程２のＦｕＧＥＮＥ媒体複合体を添加し、インキュベートする。
工程４：９６ウェルプレートへＦｕＧＥＮＥ、ＤＮＡ及び媒体複合体
各プレートに工程３のＦｕＧＥＮＥ−ＤＮＡ−媒体複合体を添加する。インキュベートする。
【０１８８】
３日目：投薬：処理製剤
トランスフェクション時間を検討する。ＤＭＳＯ中で化合物の原液を作製し、全ての化合物が溶解するまでボルテックスする。Ｄ−ＭＥＭ（低グルコース−フェノールレッド非含有）に更に希釈する。化合物を４回に分けて加えて最終量を求めてからインキュベートする。
【０１８９】
４日目：ルシフェラーゼアッセイ：
薬剤処理後にプレートを読み取る。全てのウェルから媒体の一部を除去し、残留物を残す。Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬混合物／ウェルを添加してインキュベートする。ルミネッセンスカウンター、ＰａｃｋａｒｄによるＴｏｐ  Ｃｏｕｎｔ  ＮＸＴを使用して各ウェルを計数し、好ましくは、プレート間の遅延を設定してバックグラウンドを減少させる。
【０１９０】
Ｃａｃｏ‐２細胞同時トランスフェクションアッセイ：
Ｃａｃｏ−２細胞アッセイは、高カルシウム血症の望ましくない状態の指標である。この同時トランスフェクションアッセイは、ＶＤＲリガンドのインビボカルシウム血性活性に関する代用アッセイである。このアッセイの試験化合物のＥＣ５０値は高いことが望ましい。化合物のＥＣ５０値が高いほど、インビボでカルシウム血性が低くなる。望ましい検定結果は、ＥＣ５０が３００ｎＭ以上である。好ましい検定結果は、１０００ｎＭ超である。
【０１９１】
１０％チャーコールストリップされたＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を含むフェノールレッド非含有ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で培養されたＣａｃｏ−２細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ６試薬によってトランスフェクト（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）する。細胞（５０００／ウェル）を、９６ウェルプレート中のトランスフェクション前に、１８時間プレート培養する。Ｆｕｇｅｎｅ６試薬（０．２μｌ／ウェル）と共に、Ｇａｌ４−応答性レポーターｐＦＲＬｕｃ（１５０ｎｇ，Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  ＣＡ）及び受容体発現ベクターｐＧａｌ４−ＶＤＲ−ＬＢＤ（１０ｎｇ）で細胞をトランスフェクトする。混合物を室温で３０分インキュベートしてＤＮＡ−Ｆｕｇｅｎｅ複合体を生成する。細胞を３回に分けて５時間トランスフェクトし、トランスフェクション後１８時間、種々のＶＤＲリガンド濃度（０．０１ｎＭ〜１００００ｎＭ濃度範囲）で処理する。Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ試薬キット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用し、製造元の説明に従ってルシフェラーゼ活性を定量する。
【０１９２】
ＯＣＮ（オステオカルシン）プロモーターアッセイ
ＯＣＮプロモーターアッセイは、骨粗鬆症の指標及びマーカーである。望ましい検定結果は、ＥＣ５０が３２５ｎＭ以下である。好ましい検定結果は、５０ｎＭ未満である。
【０１９３】
ＤＶＲリガンドによるオステロカルシンの活性を、ルシフェラーゼレポーター遺伝子と融合させたラットオステロカルシンプロモーターを安定して発現するラット骨芽細胞様細胞系統ＲＧ−１５（ＲＯＳ１７／２．８）において評価する。既に報告されているように、安定培養細胞株を確立させる。（オステオカルシン転写の活性化はプロテインキナーゼＡ及びプロテインキナーゼＣ依存型経路の相互作用を伴う（Ｂｏｇｓｌａｗｓｋｉ，Ｇ．，Ｈａｌｅ．，Ｌ．Ｖ．，Ｙｕ，Ｘ．Ｐ．，Ｍｉｌｅｓ，Ｒ．Ｒ．，Ｏｎｙｉａ，Ｊ．Ｅ．，Ｓａｎｔｅｒｒｅ，Ｒ．Ｆ．，Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒ，Ｓ．Ｊ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５、９９９〜１００６、２０００）。３７℃、５％ＣＯ２・９５％大気雰囲気下で５％ＦＢＳ、３００μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８を含むＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地（３：１）で維持されたコンフルエントなＲＧ−１５細胞を白色不透明の９６ウェル細胞培養プレート（２５０００細胞／ウェル）に被覆する。２４時間後、（ＤＭＥＭ／Ｆ−１２媒体＋２％ＦＢＳ中の）細胞を、種々の濃度の化合物をＤＭＳＯに溶解して処理する。最終ＤＭＳＯ濃度は、０．０１％（ｖ／ｖ）となる。４８時間の処理後、培地を除去し、細胞は５０μｌの溶解緩衝液（ルシフェラーゼレポーター検定システム，Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用して溶解し、ベーリンガーマンハイムのルシフェラーゼレポーター遺伝子検定キットを使用し、製造元の説明に従ってルシフェラーゼ活性を検定する。
【０１９４】
マウスの高カルシウム血症アッセイ
マウスの高カルシウム血症アッセイは、毒性及び選択性に関する６日間の高カルシウム血症検定である。許容できる検定結果は、３０μｇ／ｋｇ／日より高いレベルである。好ましい検定結果は、３００μｇ／ｋｇ／日より高いレベルである。
【０１９５】
離乳した、ウイルス−抗体のない生後５から６週間の雌ＤＢＦマウス（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を全ての研究に使用する。動物を、２日間、現地の動物施設において環境順化させる。マウスには、食物（１．２％Ｃａ及び０．９％Ｐを有するＴＤ５００１、Ｔｅｋｌａｄ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）及び水が随意に入手させ、２２℃で１２時間の昼／夜周期で維持させる。次に動物は、４〜５匹のマウスの群に分ける。１０％エタノール及び９０％ゴマ油、又はラウリル酸ナトリウムの懸濁水溶液で調製された様々な用量の試験化合物を、胃管栄養法によりマウスに６日間経口投与する。１α−２５（ＯＨ）２Ｄ３を、正の対照として１群のマウスに０．５μｇ／ｋｇ／日で与えた。最後の投薬６時間後に、血清イオン化カルシウムを、Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａ＋＋／ＰＨ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｍｏｄｅｌ  ６３４、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．Ｅａｓｔ  Ｗａｌｐｏｌｅ、ＭＡ）を用いてイソフルラン麻酔下で評価する。群ごとに異なる生データを、有意レベルがＰ＜０．０５であるフィッシャーの保護最小有意差（ＰＬＳＤ）を用いた分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって評価する。高カルシウム血症が発症しない最大投与量は、対照群の９７．５％標準分布によって定義されるように「無効レベル」と考えられる。
【０１９６】
ケラチン生成細胞増殖検定：
このアッセイは、乾癬症治療の指標である。許容できる検定結果は、ＩＣ５０値が３００ｎＭ以下である。好ましい検定結果は、ＩＣ５０値が１００ｎＭ未満である。
【０１９７】
ＫＥＲｔｒ細胞（ヒト皮膚ケラチノサイト）をレトロウイルスベクターによって変換し、（ＡＴＣＣから得て、ＥＧＦが欠失するウシ下垂体抽出物（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）が添加された１００μｌケラチノサイト無血清媒体中において、９６ウェル平底プレート（３０００細胞／ウェル）でプレート培養し、３７℃で２日間インキュベートする。種々のＶＤＲリガンド濃度（１０倍希釈を連続３回、１００００ｎＭから０．１ｎＭ）で細胞を処理し、ＥＧＦが欠失するウシ下垂体抽出物が添加された１００μｌケラチノサイト無血清媒体に溶解し、３７℃で７２時間インキュベートする。ＢｒｄＵ（５−ブロモ−２’−デオキシウリジン）摂取量を、ＤＮＡ複製の測定（細胞増殖ＥＬＩＳＡキット、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）として分析し、吸光度４０５ｎｍにおいて測定する。効力値（ＩＣ５０）値が最大半減応答となった化合物の濃度（ｎＭ）を求める。
【０１９８】
ＩＬ‐１０誘導アッセイ
これは、乾癬症、膿瘍及び癒着に関するインビトロ効果アッセイである。乾癬症は、ケラチノサイト及び免疫細胞の両方に影響を及ぼす。ＩＬ−１０は、抗炎性及び免疫抑制性により、唯一のサイトカインとなる。このアッセイによって、ＶＤＲＭが、ＰＢＭＣ（一次血中単核細胞）中でアゴニストとして機能できるか否かが示される。ＥＣ値が低い化合物は、ＰＢＭＣ中の良好なアゴニストとなるため、ＥＣ５０値が低いことがこのアッセイにおいて望ましい。許容できる検定結果は、ＥＣ５０値が２００ｎＭ以下である。好ましい検定結果は、ＥＣ５０値が１００ｎＭ未満である。
【０１９９】
末梢血中単核細胞（ＰＢＭＣ）の単離：
ヒト血液を５０ｍｌ収集し、媒体ＲＰＭＩ−１６４０で希釈する。希釈された血液を試験管に入れる。試験管を遠心分離する。最上層を除去し、中間層から細胞を収集する。細胞を４本の試験管に分割し、培地を添加する。遠心分離し、培地を吸引し、細胞を再懸濁する。全ての細胞を収集する。１２００ｐｍで１０分遠心分離する。２％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ−１６４０に再懸濁し、細胞を計数する
【０２００】
ＰＢＭＣの刺激：
ＤＭＳＯ中でＴＰＡを調製する。水中にＰＨＡを溶解する。ウェルプレートにおいてＴＰＡ／ＰＨＡで処理されたＰＢＭＣをプレート培養する。細胞をインキュベートする。
【０２０１】
処理：
プレーンなＲＰＭＩ−１６４０倍地中で全ての化合物の希釈液を調製する。希釈された化合物全てを添加し、インキュベートする。
【０２０２】
サンプル収集及びアッセイ：
遠心分離で全ての細胞を除去し、製造者（Ｌｉｎｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ，ＭＯ）の説明に従い、抗ヒトＩＬ−１０抗体被覆ビードを使用し、イムノアッセイを用いてＩＬ−１０の上澄み液を分析する。
他の化合物アッセイ
【０２０３】
基準骨粗鬆症の治療するための本発明の化合物の治療指数（骨の有効性対高カルシウム血症）の代用測定値は、以下のとおり計算される数値比である。
高カルシウム血症の誘導に必要な用量閾値を、骨の有効性に必要な用量閾値で除算する。
【０２０４】
乾癬症を治療するための本発明の化合物の治療指数（インビボケラチノサイト増殖対高カルシウム血症）の他の測定値は、以下のとおり計算される数値比である。
高カルシウム血症の誘導に必要な用量閾値を、ケラチノサイト増殖の誘導に必要な用量閾値で除算する。
【０２０５】
上記の比に対して、用量閾値を、用量反応曲線データから求める。
【０２０６】
ＣａＴ１（カルシウム輸送体１）アッセイ
ＣａＴ１アッセイは、高カルシウム血症の望ましくない状態の指標である。化合物のＥＣ５０値が高いほど、インビボでカルシウム血性が低くなる。望ましい検定結果は、ＥＣ５０が５００ｎＭ以上である。好ましい検定結果は、１０００ｎＭ超である。
【０２０７】
１０％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を添加されたＤＭＥＭ（高グルコース、２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液添加、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に保持したヒト結腸ガン細胞株であるＣａｃｏ−２細胞を、全体積１００μｌ／ウェルで９６ウェルプレート中に１ウェルあたり５５００細胞でプレーティングする。細胞を、カルシウム輸送体、ＣａＴ１を発現する小腸細胞とそれらを区別するために、９６ウェルプレート中に６日間保持する。プレート培養後、３日目に、古い媒体は除去され、新鮮な媒体（１５０μｌ／ウェル）に置換する。６日目に古い培地を除去し、（低グルコース、フェノールレッド非含有；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）ＤＭＥＭ中に１０％チャーコールストリップされたＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を含む、処理培地（１８０μｌ／ウェル）中に細胞を保持し、新鮮な媒体に置換する。細胞を、処理培地（２０μｌ／ウェル）中で調製された種々のＶＤＲリガンド濃度（０．０１ｎＭから１００００ｎＭの濃度範囲）で処理する。処理２０時間後、全ＲＮＡを、製造元（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）の説明に従ってＲＮｅａｓｙ９６方法を用いて調製する。そのＲＮＡを、逆転写し、製造者（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｒｓｔｅｒ  ｃｉｔｙ，ＣＡ）の使用説明書に従って、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００ＨＴ  配列検出システムを使用した定量的ＲＴ−ＰＣＲで、ヒトＣａＴ１とＧＡＰＤＨ（対照）のメッセージ対して増幅する。ヒトＣａＴ１及びＧＡＰＤＨ遺伝子の最適化されたプライマー対及びプローブは、市販されている（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）。３８４ウェルのＴａｑｍａｎ  ＰＣＲプレート中の各２０μｌの定量ＲＴ−ＰＣＲ反応液は、フォワード及びリバースプライマー（９００ｎＭ）、Ｔａｑｍａｎプローブ（２００ｎＭ）、全ＲＮＡ（９６ウェル培養プレートの各ウェルから４μｌ）、及び１０μｌ  Ｔａｑｍａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）からなる。反応液を、３０分４８℃で、その後９５℃で１０分インキュベートし、ＰＣＲ（１５秒９５℃、その後１分６０℃）を４０サイクルさせる。ＧＡＰＤＨを内部対照として使用し、そのプライマー及びプローブセットは、市販されている（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）。
【国際調査報告】
2008524260.tif 000078
2008524260.tif 000079