(57)【要約】  本発明は、3−位にsec-ブチル基を置換基として有する部分的に還元されたイソキノリン誘導体化合物であって、カルパインインヒビター活性を有する該誘導体化合物に関する。本発明による該化合物には、（3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1Ｈ-イソキノリン-4-イリデン）-酢酸及び（3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1Ｈ-イソキノリン-4-イリデン）-酢酸から誘導されるエステル又はアミドが含まれる。一般式 I 又は II で表される化合物は、変性疾患の予防処置又は治療処置に使用することができる。
2008524170.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
3−位にsec-ブチル基を置換基として有する部分的に還元されたイソキノリン構造を有することを特徴とする次式 I 又は II で表される化合物：
【化１】
2008524170.tif 000041
式中、
Ｘは相互に独立して酸素原子（Ｏ）又は硫黄原子（Ｓ）を示し、
アステリスク（＊）は相互に独立して立体配置（Ｒ）又は（Ｓ）の立体中心を示し、
Ｒ１は相互に独立して、ＮＨ２、ＮＨＲ４（式中、Ｒ４はアルキル基、アリール基、アミノ酸誘導体又はペプチド誘導体を示す。）、ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は相互に独立して、アルキル基、アリール基、アミノ酸誘導体及びペプチド誘導体から成る群から選択される基を示すか、又はＲ５とＲ６は環状系を形成する。）、ＯＨ及びＯＲ７（式中、Ｒ７はアルキル基又はアリール基を示す。）から成る群から選択される基を示し、
Ｒ２及びＲ３は同一又は異なっていてもよく、相互に独立して酸素原子（Ｏ）、ＮＨ又はＮＲ８（式中、Ｒ８はアルキル基又はアリール基を示す。）から成る群から選択される基を示し、
Ｚは、炭素原子数が２〜８のアルキル基、アリール基、アリールアルキル基、相互に独立して１〜３個の酸素原子及び２〜１０個の炭素原子を有するオキシアルキル鎖、及びアミノ酸又はペプチドから誘導されるフラグメントから成る群から選択される基を示す。
【請求項２】
化合物が、下記の群から選択される化合物及びこれらの異性体から成る群から選択される化合物である請求項１記載の化合物：
-メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(7),
-(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(8),
-iso-プロピル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(9),
-1-ブチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(10),
-ベンジルl(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(11),
-(S,S,S,S,Z,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-ブタ-2-エニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(12),
-(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-ブタ-2-イニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(13),
-(S,S,S,S,Z,Z)-4-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-ベンジル(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(14),
-(S,S,Z)-N-ベンジル-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(15),
-(S,S,Z)-N-(3-アセチル-フェニル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(16),
-(S,S,Z)-N-(2'-アミノ-ビフェニル-2-イル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(17),
-(S,S,S,S,Z,Z)-2,2'-ビス-[(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]ビフェニル(18),
-(S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-プロピル)-カルバメート(19),
-(S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-フェニル-エチル)-カルバメート(20),
-(S,S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-ブチル)-カルバメート(21),
-(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ブチルアミド(22),
-(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-フェニル-プロピオンアミド(23),
-(S,S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ペンタンアミド(24),
-メチル(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-iイソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミド]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノエート(25),
-メチル(S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノイルアミノ)-3-メチル-ペンタノエート(26),
-メチル(S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ブチリルアミノ}-3-フェニル-プロピオネート(27),
-メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(28),
-(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(29),
及び
-メチル(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノエート(30)。
【請求項３】
請求項１記載の式 I 又は II で表される化合物の合成方法であって、（3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸のいずれかの異性体である中間体化合物をアミド又はエステルへ変換させることを特徴とする該合成方法。
【請求項４】
請求項１記載の式 I 又は II で表される化合物の合成方法であって、（3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-メチルアセテートのいずれかの異性体である中間体化合物を加水分解によって変換させることを特徴とする該合成方法。
【請求項５】
請求項１記載の式 I 又は II で表される化合物の合成方法であって、メチル4-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-5-メチル-2-ヘプテノエートのいずれかの異性体である中間体化合物をイソキノリン誘導体へ変換させることを特徴とする該合成方法。
【請求項６】
メチル4-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-5-メチル-2-ヘプテノエートのいずれかの異性体である化合物。
【請求項７】
請求項１記載の式 I 又は II で表される化合物の合成方法であって、Ｎ-[(1-ヒドロキシメチル-2-メチル)-ブチル]-2-ヨード-ベンズアミドのいずれかの異性体である中間体化合物をα,β-不飽和エステルへ変換させることを特徴とする該合成方法。
【請求項８】
Ｎ-[(1-ヒドロキシメチル-2-メチル)-ブチル]-2-ヨード-ベンズアミドのいずれかの異性体である化合物。
【請求項９】
請求項１記載の式 I 又は II で表される化合物の合成方法であって、メチル2-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-3-メチル-ペンタノエートのいずれかの異性体である中間体化合物をアルコールへ還元させることを特徴とする該合成方法。
【請求項１０】
メチル2-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-3-メチル-ペンタノエートのいずれかの異性体である化合物。
【請求項１１】
3−位にsec-ブチル基を置換基として有する部分的に還元されたイソキノリン構造を有することを特徴とする次式 I 又は II で表される化合物のカルパインインヒビターとしての使用：
【化２】
2008524170.tif 000042
式中、
Ｘは相互に独立して酸素原子（Ｏ）又は硫黄原子（Ｓ）を示し、
アステリスク（＊）は相互に独立して立体配置（Ｒ）又は（Ｓ）の立体中心を示し、
Ｒ１は相互に独立して、ＮＨ２、ＮＨＲ４（式中、Ｒ４はアルキル基、アリール基、アミノ酸誘導体又はペプチド誘導体を示す。）、ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は相互に独立して、アルキル基、アリール基、アミノ酸誘導体及びペプチド誘導体から成る群から選択される基を示すか、又はＲ５とＲ６は環状系を形成する。）、ＯＨ及びＯＲ７（式中、Ｒ７はアルキル基又はアリール基を示す。）から成る群から選択される基を示し、
Ｒ２及びＲ３は同一又は異なっていてもよく、相互に独立して酸素原子（Ｏ）、ＮＨ又はＮＲ８（式中、Ｒ８はアルキル基又はアリール基を示す。）から成る群から選択される基を示し、
Ｚは、炭素原子数が２＝８のアルキル基、アリール基、アリールアルキル基、相互に独立して１〜３個の酸素原子及び２〜１０個の炭素原子を有するオキシアルキル鎖、及びアミノ酸又はペプチドから誘導されるフラグメントから成る群から選択される基を示す。
【請求項１２】
カルバインインヒビターとしての式 I 又は II で表される化合物が下記の群から選択される化合物である請求項１１記載の使用：
-メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(7),
-ベンジルl(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(11),
-(S,S,S,S,Z,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-ブタ-2-エニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(12),
-(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-ブタ-2-イニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(13),
-(S,S,S,S,Z,Z)-4-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-ベンジル(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(14),
-(S,S,Z)-N-ベンジル-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(15),
-(S,S,Z)-N-(3-アセチル-フェニル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(16),
-(S,S,Z)-N-(2'-アミノ-ビフェニル-2-イル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(17),
-(S,S,S,S,Z,Z)-2,2'-ビス-[(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]ビフェニル(18),
-(S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-プロピル)-カルバメート(19),
-(S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-フェニル-エチル)-カルバメート(20),
-(S,S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-ブチル)-カルバメート(21),
-(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ブチルアミド(22),
-(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-フェニル-プロピオンアミド(23),
-(S,S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ペンタンアミド(24),
-メチル(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-iイソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミド]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノエート(25), 
-メチル(S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノイルアミノ)-3-メチル-ペンタノエート(26), 
-メチル(S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ブチリルアミノ}-3-フェニル-プロピオネート(27), 及び
-メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(28)。
【請求項１３】
変性疾患の予防薬又は治療薬を製造するための請求項１１又は１２記載の式 I 又は II で表される化合物のカルパインインヒビターとしての使用。
【請求項１４】
変性疾患が脳虚血、心臓虚血、脳発作、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋ジストロフィー、白内障及び脱髄疾患である請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
脱髄疾患が多発性硬化症である請求項１４記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療活性を有する酵素インヒビター、特にカルパイン（calpain）インヒビターの技術分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
カルパイン、又はＣａ２＋−活性化中性プロテアーゼ（ＣＡＮＰ；E.C. 3.4.22.17）は、非常に活性な代謝的役割を果たすシステインプロテアーゼの一族である。この種のプロテアーゼの天然の基質は明確には決定されていないが、これらの酵素は、シグナル変換、細胞骨格の再造形、細胞周期の調節及びアポプトシスに含まれる種々のタンパク質の加水分解を触媒する（Adv. Pharmacol.、第３７巻、第１１７頁、１９９６年）。哺乳類においては、カルパイン族には数種の組織特異的イソ型（tissue-specific isoform）及び偏在する２種のイソ酵素、即ち、μ-カルパイン（カルパイン I ）及びm-カルパイン（カルパイン II ）が含まれ、該酵素が生体外で活性化するためにはそれぞれマイクロモル量及びミリモル量のＣａ２＋を必要とする。Ｘ線回折による構造研究によれば、次のことが判明した。即ち、各々のイソ型は約８０kDaの大きなサブユニット（該サブユニットは、パパイン型のシステインプロテアーゼ領域を提供する）と約３０kDaの小さなサブユニット（該サブユニットは各々のイソ酵素に共通するものである）から成る。各々のサブユニットのＣ−末端はＣａ２＋と結合しうる領域（カルモジュリン型領域）を有する（FEBS Lett.、２００１年、第５０１巻、第１１１頁参照）。
【０００３】
Ｃａ２＋の細胞内濃度が増加するときに発生するカルパインの過活性（overactivation）は多数の疾患、例えば、脳虚血、心臓虚血、脳発作、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋ジストロフィー、白内障、脱髄疾患（例えば、多発性硬化症）及びその他の変性疾患等に関連している（パソフィジオロジー、第６巻、第９１頁、１９９９年；Brain Res. Rev. 、第４２巻、第１６９頁、２００３年）
【０００４】
カルパインの選択的インヒビターの主要な用途は神経保護剤である。神経保護に関連する治療分野においては、今までのところ種々の方策手段が用いられている。膜消極（membrane depolarisation）及び細胞内へのＣａ２＋の侵入に対して作用する薬剤、遊離基（抗酸化剤）の生成を防止する薬剤、又は神経伝達物質の作用に対して拮抗薬となる薬剤が使用されている（J. Clinical Neurosci.、第９巻、第４頁、２００２年）。
【０００５】
最近になって、グルタメートに対するＮＭＤＡレセプターを遮断する薬剤に多大の注目が集まっているが、刺激性アミノ酸のイオノトロピー性（ionotropic）レセプターの遮断は、刺激毒性作用（excitotoxic action）を防止するための理想的な方法ではない。何故ならば、この種の遮断剤は精神異常発現性副作用をもたらすからである（Pharmacol. Ther. 、第８１巻、第１６３頁、１９９９年；Neurobiol. Diseases、第１２巻、第８２頁、２００３年）。
【０００６】
神経を保護するための重要な代替法は、生理学的には注目されていない「ポスト−レセプター（post-receptor）」細胞現象を遮断する方法である。換言すれば、刺激毒性剤によって誘発される代謝カスケードの選択的遮断剤を開発することである。細胞内作用を示す潜在的な薬剤は、神経変性中に活性化される代謝経路に作用するとき、より効率的で選択的な神経保護剤として作用し、このことは予測可能である。
【０００７】
カルパインの過活性には、Ｃａ２＋の細胞内濃度の絶え間のない増加が必要であり、この酵素は休止状態（即ち、Ｃａ２＋の濃度が正常なとき）では細胞内に潜伏する。従って、神経変性疾患においては、カルパインのインヒビターは適当な処置剤として投与される。カルパインのインヒビターは、その特性から予測されるように、ヒトの治療においては、グルタメートやアスパルテートのＮＭＤＡレセプターの拮抗作用の場合のように、病理過程中の活性化の前の代謝過程の遮断の場合に比べて、より少ない副作用をもたらすに過ぎない。このことは、カルパインは正常な生理的条件下では活性化されず、また、刺激性アミノ酸の作用が神経系の正常な機能にとって重要であるという事実に起因する。
【０００８】
さらに、カルパインの強力で選択的なインヒビターは、このプロテアーゼの作用機構と特定の生理的条件下でのその役割を研究するための有用な手段である。
【０００９】
また、置換様式の異なるイソキノリン誘導体が、種々の生物学的活性を有する薬剤として使用されている（米国特許第５５７６４３５号明細書；Eur. J. Pharmacology、第５０１巻、第１１１頁、２００４年）。さらにまた、アミノ酸と関連化合物、例えば、アミノカルボニル化合物等は種々の生物学的特性を有する（J. Med. Chem.、第４５巻、第４７６２頁、２００２年；Bioorg. Med. Chem. Lett.、第１０巻、第１４９７頁、２０００年）。
【００１０】
カルパインの可逆的又は不可逆的インヒビターも知られている（Trends Mol. Medicine、第７巻、第３５５頁、２００１年；米国特許（ＵＳ）６１０３７２０；ＷＯ−９６４１６３８；ＵＳ−５５４１２９０；ＥＳ−２００３０１１２５；ＥＳ−２００４０１１０４；Bioorg. Med. Chem. Lett.、第１４巻、第２７５３頁、２００４年；ケミストリー＆バイオディヴァーシティー、第１巻、第４４２頁、２００４年）。この種のインヒビターの最も一般的な構造的特徴は、これらが２〜６個のアミノ酸を有すると共に、疎水性とある程度の求電子的官能性を有するペプチド又は疑似ペプチドであり、この種の化合物としては、α−ケトホホネート、α−ケトホフィネート、α−ケトホフィンオキシド、α−ケトエステル、α−ケト酸、α−ケトアミド、トリフルオロメチルケトン、アルデヒド、メチルスルホニウム塩及びエポキシド等が例示される。
【００１１】
明らかに、これらの化合物は、比較的低い選択性へ導くカルパインのパパイン型領域へ作用する。このためこの種の化合物は、しばしばその他のシステインプロテアーゼ（例えば、パパイン等）及びセリンプロテアーゼのインヒビターとなる。また、この種の化合物がペプチド誘導体であるという事実は、該化合物が、場合によっては、特定の望ましくない薬理学的特性（例えば、細胞膜を通る不十分な輸送又はペプチダーゼによる分解等）を示すということを意味する。部分的にはこれらの欠点に起因して、治療的有用性を有するカルパインインヒビターは見出されていない。
【００１２】
最近になって、本願発明者の研究グループによって、イソキノリン誘導体であるということによって特徴づけられる種々のカルパインインヒビターが調製された（Adv. Synth. Catal.、第３４４巻、第８５５頁、２００２年）。しかしながら、この種のイソキノリン誘導体がカルパインインヒビターとして活性を示すためには、ペプチド鎖の存在が必要であり（例えば、下記の化合物１及び２；これらの化合物は一般的にはペプチド−ヘテロ環ハイブリッドと呼ばれる。）、また、化合物１及び２のＩＣ５０値から明らかなように、これらの化合物の生物学的活性はペプチドフラグメントの長さに大きく依存する。それにもかかわらず、本願発明者の当初の研究結果によれば、ペプチド鎖を含まないイソキノリンの単純な誘導体（例えば、下記の化合物３）はカルパインインヒビターではなかった。
【００１３】
【化１】
2008524170.tif 000003
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
カルパインインヒビターとしてのイソキノリン誘導体に関する研究の拡張により、次の知見が見出された。即ち、イソキノリン環の3−位の置換基がsec-ブチル基の場合には、カルパインの抑制活性が劇的に増大すると共に、このような生物学的活性を達成するためにはペプチド鎖の存在は絶対に必要なものではないということが判明した。この種の化合物においてペプチド鎖の存在が必要でないという事実は、これらの化合物の酵素インヒビターとしての有用な治療的効能が著しく増大するということを意味する。即ち、ペプチド鎖を含まないこの種のイソキノリン誘導体は、ペプチド−ヘテロ環ハイブリッドよりも代謝的に安定であって、これらの細胞輸送がより効率的におこなわれることが期待できる。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、カルパインインヒビターとしての活性を有する部分還元されたイソキノリンから誘導される化合物に関する。本発明による化合物としては、（3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン）-酢酸及び（3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン）-酢酸から誘導されるエステル又はアミドが例示される。この種の化合物には、イソキノリンフラグメントの４−位の置換基が、カルボニルメチリデン基によってイソキノリンフラグメントへ結合したアミノ酸（アミノカルボニル化合物のフラグメントを含む）に関連する構造を有する置換基である化合物も包含される。
【００１６】
即ち本発明は、3−位にsec-ブチル基を置換基として有する部分的に還元されたイソキノリン構造を有することを特徴とする次式 I 又は II で表される化合物に関する：
【化２】
2008524170.tif 000004
【００１７】
式中、
Ｘは相互に独立して酸素原子（Ｏ）又は硫黄原子（Ｓ）を示し、
アステリスク（＊）は相互に独立して立体配置（Ｒ）又は（Ｓ）の立体中心を示し、
Ｒ１は相互に独立して、ＮＨ２、ＮＨＲ４（式中、Ｒ４はアルキル基、アリール基、アミノ酸誘導体又はペプチド誘導体を示す。）、ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５及びＲ６は相互に独立して、アルキル基、アリール基、アミノ酸誘導体及びペプチド誘導体から成る群から選択される基を示すか、又はＲ５とＲ６は環状系を形成する。）、ＯＨ及びＯＲ７（式中、Ｒ７はアルキル基又はアリール基を示す。）から成る群から選択される基を示し、
Ｒ２及びＲ３は同一又は異なっていてもよく、相互に独立して酸素原子（Ｏ）、ＮＨ又はＮＲ８（式中、Ｒ８はアルキル基又はアリール基を示す。）から成る群から選択される基を示し、
Ｚは、炭素原子数が２〜８のアルキル基、アリール基、アリールアルキル基、相互に独立して１〜３個の酸素原子及び２〜１０個の炭素原子を有するオキシアルキル鎖、及びアミノ酸又はペプチドから誘導されるフラグメントから成る群から選択される基を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
上記の化合物としては、以下に例示する化合物及びこれらのいずれかの異性体が好ましい化合物である：
-メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(7),
-(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(8),
-iso-プロピル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(9),
-1-ブチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(10),
-ベンジルl(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(11),
-(S,S,S,S,Z,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-ブタ-2-エニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(12),
-(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-ブタ-2-イニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(13),
-(S,S,S,S,Z,Z)-4-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-ベンジル(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(14),
-(S,S,Z)-N-ベンジル-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(15),
-(S,S,Z)-N-(3-アセチル-フェニル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(16),
-(S,S,Z)-N-(2'-アミノ-ビフェニル-2-イル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(17),
-(S,S,S,S,Z,Z)-2,2'-ビス-[(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]ビフェニル(18),
-(S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-プロピル)-カルバメート(19),
-(S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-フェニル-エチル)-カルバメート(20),
-(S,S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-ブチル)-カルバメート(21),
-(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ブチルアミド(22),
-(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-フェニル-プロピオンアミド(23),
-(S,S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ペンタンアミド(24),
-メチル(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-iイソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミド]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノエート(25),
-メチル(S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノイルアミノ)-3-メチル-ペンタノエート(26),
-メチル(S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ブチリルアミノ}-3-フェニル-プロピオネート(27),
-メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(28),
-(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(29),
及び
-メチル(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノエート(30)。
【００１９】
下記の合成中間体も本発明による特に好ましい化合物である：
-メチル(S,S)-3-メチル-2-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-ペンタノエート(4),
-(S,S)-N-[(1-ヒドロキシメチル-2-メチル)-ブチル]-2-ヨード-ベンズアミド(5),
及び
-メチル(S,S,E)-5-メチル-4-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-2-ヘプタノエート(6),
並びにこれらのいずれかの異性体。
【００２０】
本発明による一般式 I 及びII で表される化合物の合成は、有機合成における標準的な方法を用いることによっておこなわれた。これらの標準的な方法は当業者にとっては既知の方法であり、例えば、下記の文献を参照されたい：
「ペプチドとタンパク質の合成に対する化学的アプローチ」、CRC プレス, ボカ・ラトン, 1997年;
「コンプレヘンシブ・オーガニックシンセシズ」、パーガモンプレス, 1991年;
Synlett 2000年, 第509頁;
Adv. Synth. Catal. 2001年,第343巻,第360頁;
「トピックス・カレント・ケミストリー」、 1999年,第 204巻,第127頁;
Bull. Soc. Chim. Belg. 1978年,第87巻,第229頁。
【００２１】
例えば、特に限定的ではないが、本件特許明細書に記載の化合物は、(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(III)の対応する異性体又は(3-sec-ブチル-1-チオキサ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(IV)の対応する異性体を出発原料として調製された。
【００２２】
化合物（III）及び（IV）の合成に関しては、以下において、中間体として下記の化合物を用いることによって説明するが、これらの化合物も本発明の対象である：
-メチル(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(A)のいずれかの異性体,
-メチル 5-メチル-4-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-2-ヘプタノエート(B)のいずれかの異性体,
-N-[(1-ヒドロキシメチル-2-メチル)-ブチル]-2-オキソ-ベンズアミド(C)のいずれかの異性体,
及び
-メチル 2-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-3-メチル-ペンタノエート(D)のいずれかの異性体。
【００２３】
【化３】
2008524170.tif 000005
【００２４】
化合物 I 及び II に含まれる主要な官能基（置換基Ｒ１、Ｒ２及びＲ３によって示される）がアミド又はエステルであるという事実に起因して、このタイプの化合物 I 及び II の調製における主要な反応は、求電子試薬としての酸又は酸誘導体と求核試薬としてのアミン又はアルコールとの間のアシル化反応である。一般式 I 及び II で表される化合物の合成は、置換基Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の構造によって左右されると共に、これらの置換基の異同によっても左右される。
【００２５】
一般式 I 及び II で表される化合物の特別なタイプの化合物は下記の一般式Ｖで表される化合物であり、該化合物も本発明の対象となる。一般式Ｖにおいては、アミノ酸、ペプチド及びこれらの関連化合物の連鎖が存在しており、これらの連鎖は、アセチルメチリデン基を介してイソキノリンフラグメントと結合する。この種の化合物は、有機合成においては常套手段として用いられている当業者に既知の反応であって、アミノ酸、ペプチド及びこれらの関連化合物の適当な誘導体を用いる転位（transformation）反応によって調製される。
【００２６】
【化４】
2008524170.tif 000006
【００２７】
一般式 I 及び II で表される化合物の合成に使用されたアルコール、アミン、アミノ酸、ペプチド及びこれらの誘導体は、市販品として入手するか、又は有機合成における標準的な方法によって調製した。場合によっては（特に、Ｄ−シリーズの非天然アミノ酸及びこれらの関連化合物を使用する場合）、生体触媒として酵素アシラーゼを用いる生体触媒法を適用した（テトラヘドロン：アシメトリー、1998年, 第9巻, 第1951頁〜第1965頁)。
【００２８】
一般式 I 及び II で表される化合物の合成において求核試薬又は求電子試薬を使用する場合、該合成はアミノ酸／ペプチド化学における標準的方法によっておこなった。アミノ酸の保護基としては、tert-ブトキシカルボニル（Boc）、ベンジルオキシカルボニル(Cbz)及びフルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）を使用した。カルボキシ基は脂肪族エステル（メチルエステル、エチルエステル又はベンジルエステル）として保護した。
【００２９】
求核試薬として用いたこの種のペプチドを合成するためのカップリング反応は標準的な方法、例えば、酸クロリドとしてのカルボニル基の活性化による方法、活性エステル（例えば、ペンタフルオロフェニルエステル）を形成させる方法、混合酸無水物を用いる方法、又はカルボニル基の「その場（in situ）」活性化（カルボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを併用して酸を処理する方法又はこれに関連する方法によっておこなう）による方法等によっておこなった（「ペプチドとタンパク質の合成に対する化学的アプローチ」、CRC プレス, ボカ・ラトン, 1997年）。
【００３０】
本発明による化合物の重要な特徴は、該化合物がカルパインインヒビターであるということである。カルパインには、相互に構造的に非常に類似する種々のイソ型（isoform）が存在しており、また、これらのイソ型が同じ作用機構を分担していることが知られている。２種の主要なものは、ミクロ−カルパイン（又はカルパインI）及びミリ−カルパイン（又はカルパイン II）であり、これらは、これらの活性化に必要なＣａ２＋の濃度に関する生体外試験において区別される。この酵素の２種のイソ型は相互に非常に類似しているために、文献中の多くの実施例によれば、カルパインインヒビターは両方のイソ酵素のインヒビターであることが知られている (Adv. Synth. Catal 、2002年, 第344巻、第855頁)。このため、本発明においては、カルパインに言及する場合には、カルパインの定義に含まれる上記の２種のイソ型（又はイソ酵素）が関連する。
従って、本発明の別の目的は、一般式 I 及び II で表される化合物のカルパインインヒビターとしての使用である。
【００３１】
カルパインの抑制能は、ＩＣ５０値によって定量化することができる。該値は、酵素の触媒活性を半減させるインヒビターの濃度によって定義される。ＩＣ５０値が低いほど、インヒビターはより強力になる。本発明による一部の化合物のカルパイン I （生理学的な観点からは最も関連するカルパインである。）に対する抑制効果を以下の表１及び図１に示す。ミリ−カルパインとしても知られているカルパイン II がその活性化のためにより多量のＣａ２＋を必要とすると仮定するならば、該カルパインは生理学的な役割を果たさない可能性がある。何故ならば、Ｃａ２＋のこのような濃度は、ミリ−カルパインが活性化される前に細胞の死滅がもとらされるからである。このため、抑制試験はカルパイン I に関しておこなったが、該抑制試験はカルパイン II に対しても推定的に適用することができる。
【００３２】
【表１】
2008524170.tif 000007
【００３３】
図１に示す化合物の一部は非常に強力なカルパインインヒビターであるので、治療的用途を有する化合物の設計において有用である。カルパインの過活性が多数の変性疾患（degenerative disease）に含まれるという事実が判明しているので、本発明のさらに別の目的は、一般式 I 及び II で表される化合物を変性疾患の処置又は予防のために使用すること、及び変性疾患の予防的処置又は治療的処置のための薬剤を調製するために該化合物を使用することである。特に、脳虚血、心臓虚血、脳発作、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋ジストロフィー、白内障及び脱髄疾患から選択される変性疾患が適用対象となり、就中、脱髄疾患が多発性硬化症である場合である（パソフィジオロジー、1999年, 第6巻、第91頁; Brain Res. Rev. 2003年, 第42巻、第169頁）。
【００３４】
図１は、本発明に含まれる(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H -イソキノリン-4-イリデン)-酢酸の誘導体及び(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H -イソキノリン-4-イリデン)-酢酸の誘導体及びこれらのカルパイン I のインヒビターとしての生物学的活性に関する試験結果を示す。
【実施例】
【００３５】
以下の実施例は本発明を例示的に説明するものであって、本発明の範囲を制限するものではない。以下の実施例においては、一般式 I 及び II で表される一部のイソキノリン誘導体の実験的な合成手順と分光学的データ及び分析データと共に、これらの誘導体の生物学的活性に関する試験について説明する。
【００３６】
実施例1
メチル(S,S)-3-メチル-2-(2-iヨードベンジルアミノ)-ペンタノエート(4)の合成
【化５】
2008524170.tif 000008
L-イソロイシメチルエステヒドロクロリド（13.07g, 72.0mmol）をTHF（300mL）とH2O （300mL)との混合溶剤に溶解させた溶液にK2CO3（39.80g, 288mmol）を添加した。この混合物を0℃まで冷却させ、撹拌処理を５分間おこなった後、2-ヨードベンゾイルクロリド(19.18g, 72.0mmol）を添加した。この混合物を0℃で30分間撹拌した後、室温までゆっくりと冷却させて一夜放置した。THFを除去した後、EtOAc（3×50mL）を用いて水性相を抽出した。ブラインを用いて有機相を洗浄した後、MgSO4を用いて乾燥させた。溶剤を真空下で除去することによって粗生成物を得た。この粗生成物を、EtOAc/ヘキサンから再結晶させて精製することによって上記化合物4を白色固体として得た（16.7g；収率62%）。
【００３７】
化合物４の物性値は以下の通りである。
m.p.： 67-70℃
[α]D = ＋9.2（c = 1.0, CHCl3）.
IR (KBr) ν: 3436, 3294, 2964, 1743, 1644, 1585, 1525, 1463, 1201, 1015 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.87 (m, 1 H, H-C (3')); 7.41 (m, 2 H, H-C (5')), H-C (6'); 7.11 (m, 1 H, H-C (4')); 6.33 (ブロードな d, J = 8.1, 1 H, NH); 4.83 (dd, J = 8.1, 4.6, 1 H, H-C (2)); 3.78 (s, H, CO2Me), 2.06 (m, 1 H, H-C (3)); 1.52 (m, 1 H, Ha-C (4)); 1.29 (m, 1 H, Hb-C (4)); 1.03 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(3)); 0.97 (t, J = 7.6, 3 H, H-C(5)) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 171.9 (CO2Me); 168.7 (CONH); 141.7 (C(1')); 139.9 (C(3')); 131.2 (C(4')); 128.3, 128.0 (C(5')), (C(6')); 92.2 (C(2')); 56.7 (C(2)); 52.1 (CO2Me); 38.0 (C(3)); 25.2 (C(4)); 15.6 (Me-C(3)); 11.6 (C(5)) ppm.
MS (ES+) m/e: 376 ([M + H]+), 398 ([M + Na]+), 773 ([2M + H]+).
EA: C14H18INO３に対する計算値：C 44.82, H 4.84, N 3.73.
実測値：C 45.12, H 5.10, N 4.00.
【００３８】
実施例2
(S,S)-N-[(1-ヒドロキシメチル-2-メチル)-ブチル]-2-ヨード-ベンズアミド(5)の合成
【化６】
2008524170.tif 000009
化合物4（8.44g, 22.5mmol）をTHF（50mL）に溶解させた溶液へ、-10℃において、LiBH4（1.47g, 67.5mmol）を添加した後、直ちにMeOH（45mL）をゆっくりと添加し、この混合物を-10℃で10分間撹拌した後、室温になるまで放置した。次いで、H2Oを添加した。THFを真空下で除去した後、EtOAc（3×50mL）を用いて水性相を抽出した。有機相をブラインで洗浄した後、MgSO4を用いて乾燥させた。溶剤を真空下で除去することによって粗生成物を得た。該粗生成物はカラムクロマトグラフィーによって精製した。この場合、溶離液としては、最初にヘキサン/EtOAc（1：1〜1.9）を使用し、次いでEtOAcを使用した。上記化合物5を白色固体として得た（6.6g；収率85％）。
【００３９】
化合物５の物性値は以下の通りである。
m.p.: 125-126℃
[α]D = -27.8 (c = 1.0, CHCl3).
IR (KBr) ν: 3410, 3295, 1628, 1544, 1076, cm-1.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3, 配座異性体（conformer）M とmの 4:1混合物) δ: 7.81 (m, 0.7 H, H-C (3'), M); 7.72 (m, 0.3 H, H-C (3'), m); 7.50-7.31 (m, 2 H, H-C (5') H-C (6'), M+m); 7.10-7.04 (m, 1 H, H-C (4'), M+m); 6.42 (d, J = 8.1, 0.2 H, NH, m); 6.06 (ブロードな d, J = 8.1, 0.8 H, NH, M); 3.99-3.85 (m, 1 H, H-C (2), M+m); 3.85-3.72 (m, 2 H, H-C (1), M+m); 2.88 (ブロードな t, J = 5.4, 0.2 H, OH, m); 2.62 (ブロードな t, J = 5.4, 0.8 H, OH, M); 1.80-1.50 (m, 2 H, H-C (4), M+m); 1.28-1.14 (m, 1 H, H-C (3), M+m); 0.97 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(3)); 0.92 (t, J = 7.5, 3 H, H-C(5)) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 170.0 (CONH); 142.7 (C(1')); 139.7 (C(3')); 131.1 (C(4')); 128.5, 128.1 (C(5'), (C(6')); 92.3 (C(2')); 36.2 (C(1)); 56.4 (C(2)); 35.5 (C(3)); 25.6 (C(4)); 15.6 (Me-C(3)); 11.3 (C(5)) ppm.
MS (ES+) m/e: 348 ([M + H]+), 370 ([M + Na]+), 717 ([2M + Na]+).
EA: C13H18INO2:に対する計算値：C 44.97, H 5.23, N 4.03.
実測値：C 45.11, H 5.26, N 4.18.
【００４０】
実施例3
メチル(S,S,E)-5-メチル-4-(2-ヨードベンゾイルアミノ)-2-ヘプタノエート(6)の合成
【化７】
2008524170.tif 000010
【００４１】
無水CH2Cl2（10.33mL, 20.8mmol）を溶媒とする市販のオキサリルクロリドの２Ｍ溶液を該溶媒（12mL）で希釈した溶液（-78℃）中へ、無水DMSO 溶液（2.9mL, 41.0mmol）（溶媒：無水 CH2Cl2（30mL））を滴下した。得られた混合物を-78℃で30分間撹拌した後、該混合物中へカニューレを用いてアルコール（5）(4.44g, 12.8mmol）の溶液（溶媒：CH2Cl2（25mL））を滴下した。この混合物を-78℃で１時間撹拌した後、Et3N（10.26ml, 74.0mmol)を滴下した。-78℃で約１時間撹拌した後、アルデヒドの酸化反応が完結したときに（該酸化反応の完結はtlcで確認した。）、Ph3P=CHCO2Me（6.0g, 19.0mmol）を添加し、反応混合物を室温までゆっくりと冷却させ、一夜放置した。最後に、溶媒を真空下で除去することによって粗生成物を得た。該粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン/EtOAc（4：1〜1.1）を用いて精製することによって、不飽和 N-ベンゾイルアミノエステル6を白色固体として得た（4.1g；収率 80%）。
【００４２】
得られた生成物の物性値は以下の通りである。
m.p.: 124-125℃
[α]D = + 1.7 (c = 1.0, CHCl3).
IR (KBr) ν: 3347, 3275, 2958, 1721, 1640, 1531 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.85 (d, J = 7.8, 1 H, H-C (3')); 7.37 (m, 2 H, H-C (5'), H-C (6')); 7.10 (m, 1 H, H-C (4')); 6.92 (dd, J = 15.8, 5.9, 1 H, H-C(3)); 6.05 (dd, J = 15.8, 1.7, 1 H,  H-C (2)); 5.93 (ブロードなd, J = 8.8, 1 H, NH); 4.79 (m, 1 H, H-C (4)); 3.72 (s, 3 H, CO2Me); 1.79 (m, 1 H, H-C(5)); 1.54 (m, 1 H, Ha-C (6)); 1.22 (m, 1 H, Hb-C (6)); 0.97 (m, 6 H, Me-C(5), H-C(7)) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 168.7 (CONH); 166.5 (CO2Me); 145.9 (C(3)); 142.0 (C(1')); 139.9 (C(3')); 131.2 (C(4')); 128.3, 128.2 (C(5'), C(6')); 122.0 (C(2)); 92.1 (C(2')); 54.8 (C(4)); 51.7 (CO2Me); 38.7 (C(5)); 25.4 (C(6)); 15.4 (Me-C(5)); 11.6 (C(7)) ppm.
MS（ES+）m/e：402（[M + H]+）, 424（[M + Na]+）, 803（[2M + H]+）, 825（[2M + Na]+）.
EA: C16H20INO3に対する計算値：C 47.89, H 5.02, N 3.49.
実測値：C 48.11, H 5.13, N 3.61.
【００４３】
実施例4
メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(7)の合成
【化８】
2008524170.tif 000011
【００４４】
エステル6（4.17g, 10.4mmol)、Pd(OAc)2（80mg, 0.035mmol)、Ph3P（288mg, 1.08mmol）及び Et3N（3.2mg, 20.6mmol)との混合物を無水CH3CN（250mL）中において、アルゴン雰囲気下で激しく撹拌しながら３日間還流させた。得られた反応混合物を室温まで放置した後、H2O（250mL）を添加し、次いで得られた混合物をCHCl3 (3×50mL）で抽出した。有機相をブラインで洗浄した後、MgSO４を用いて乾燥させた。真空下で溶媒を除去することによって粗生成物を得た。該粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン/EtOAc（4:1 〜 2:3）を用いる精製処理に付すことによって、上記の化合物7を白色の非晶質固体として得た（2.4 g；収率 85%）。
【００４５】
得られた生成物の物性値は以下の通りである。
[α]D = -365.8（c = 0.5, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3434, 1715, 1669, 1568, 1195, 1167, 774 cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.13 (m, 1 H, H-C (8')); 7.57 (m, 3 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 6.60 (ブロードなd, J = 3.4, 1 H, NH); 6.34 (s, 1 H, H-C(2)); 5.45 (m, 1 H,  H-C (3')); 3.77 (s, 3 H, CO2Me); 1.61 (m, 1 H, H-C(1'')); 1.45 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.15 (m, 1 H, Hb-C (2'')); 0.87 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(1'')); 0.81 (t, J = 7.6, 3 H, H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 165.4 (CONH); 164.0 (CO2Me); 150.7 (C(4')); 135.3 (C(4a')); 132.7, 130.5 (C(5) または C(6') または C(7')); 128.4 (C(8a'); 127.9 (C(8')); 123.8 (C(5') または (C(6') または C(7')); 116.4 (C(2)); 55.8 (C(3')); 51.5 (CO2Me); 41.5 (C(1'')); 24.4 (C(2'')); 15.1 (Me-C(1')); 11.0 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 274 ([M + H]+), 296 ([M + Na]+), 547 ([2M + H]+), 569 ([2M + Na]+).
EA:C16H19NO3に対する計算値：C 70.31, H 7.01, N 5.12.
実測値：C 70.15, H 7.02, N 5.04.
【００４６】
実施例5
(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(8)の合成
【化９】
2008524170.tif 000012
【００４７】
化合物7（273mg, 1.0mmol）をTHF-H2O の１：１混合溶剤(10mL)に溶解させた溶液へ、室温下において、LiOH（83.9 mg, 2.0mmol）をH2O（2mL）に溶解させた溶液を添加した。得られた混合物を室温で一夜撹拌した後、5% HClを用いて混合物を酸性化させた（pH = 2）。THFを真空下で除去した後、水性相をEtOAc（3×50mL）を用いて抽出した。有機相をブラインで洗浄した後、MgSO4を用いて乾燥させた。溶剤を真空下で除去することによって粗生成物を得た。該粗生成物をEtOAc/ヘキサンから再結晶させることによって上記の酸8を白色固体として得た（140mg；収率 54%）。
【００４８】
得られた生成物の物性値は以下の通りである。
m.p.: 215-216℃（前軟化を伴った）
[α]D  = -333.8（c = 0.49, DMF）.
IR (KBr) ν: 3435, 2966, 1674, 1306 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.46 ブロードなs, 1 H, CO2H); 8.60 (d, J = 4.9, 1 H, NH); 7.91 (dd, J = 7.3, 1.5, 1 H, H-C(8')); 7.75 (dd, J = 7.9, 1.3, 1 H, H-C(5')); 7.64-7.53 (m, 2 H, H-C(6'), H-C(7')); 6.36 (s, 1 H, H-C(2)); 5.24 (dd, J = 7.7, 4.9, 1 H, H-C(3')); 1.47 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.45 (m, 1 H, H-C (1'')); 1.16 (m, 1 H, Hb-C (2'')); 0.74 (m, 6 H, Me-C(1''), H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, DMSO-d6) δ: 166.7 (CONH); 162.5 (CO2H); 149.1 (C(4')); 135.1 (C(4a')); 132.6, 130.3 (C(6'), C(7')); 128.7 (C(8a'); 127.0 (C(8')); 124.4 (C(5')); 117.6 (C2)); 53.9 (C(3')); 41.2 (C(1'')); 24.3 (C(2'')); 15.0, 10.9 (Me-C(1'), C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 260 ([M + H]+), 282 ([M + Na]+), 519 ([2M + H]+), 541 ([2M + Na]+).
EA: C16H17NO3に対する計算値： C 69.48, H 6.61, N 5.40.
実測値： C 69.25, H 7.00, N 5.41.
【００４９】
実施例6
酸8とアルコール及びジオールとの反応（一般的方法I）
酸8のエステルの合成
酸8（100mg, 0.38mmol）を無水CH2Cl2（2.5mL）に懸濁させた懸濁液中へ、0℃においてSOCl2（0.28mL, 3.8mmol）を滴下した。この混合物を室温になるまで撹拌した後、還流を約１時間おこなった。溶剤を減圧下で除去することによって得られた油状物を無水CH2Cl2 （2.5mL）に溶解させ、該溶液中へ、対応するアルコール（0.76mmolのモノアルコールと0.15mmolのジオールとの混合物）を無水CH2Cl2（2.5mL）に溶解させた溶液をアルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物をCH2Cl2（50mL）で希釈した後、NaHCO3（3×50mL）の飽和水溶液を用いて抽出した。有機相をブラインで洗浄した後、MgSO4を用いて乾燥させた。溶剤を真空下で除去することによって、粗生成物を得た。該粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン/EtOAc（4:1 〜 1:1）を用いる精製処理に付した。以下に示す収率は、２種の反応(即ち、酸クロリドの調製とエステルの合成）から成る全行程を通しての値である。
【００５０】
実施例7
iso-プロピル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(9)の合成
上記の一般的方法Ｉに従って、下記の化合物9を無色の油状物として得た（81mg、収率71%）。
【化１０】
2008524170.tif 000013
【００５１】
化合物９の物性値は以下の通りである。
[α]D = -341.8（c = 0.25, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3429, 2968, 2876, 1708, 1672, 1372, 1181, 1107, 775 cm-1.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.09 (m, 1 H, H-C (8')); 7.55 (m, 3 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 6.97 (ブロードな s, 1 H, NH); 6.28 (s, 1 H, H-C(2)); 5.44 (dd, J= 4.5, 2.4, 1 H,  H-C (3')); 5.07 (sep, J = 6.2 1 H, CHMe2); 1.58 (m, 1 H, H-C(1'')); 1.43 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.28 (d, J = 6.2, 3 H, CO2CHMe2); 1.26 (d, J = 6.2, 3 H, CO2CHMe2); 1.15 (m,  1 H, Hb-C (2'')); 0.86 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(1'')); 0.78 (t, J = 7.4, 3 H, H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 165.0 (CONH); 164.0 (CO2CHMe2); 149.8 (C(4')); 135.5 (C(4a')); 132.6, 130.4 (C(5') または C(6') または C(7')); 128.4 (C(8a'); 127.9 (C(8')); 123.8 (C(5') または (C(6') または C(7')); 117.5 (C(2)); 67.8 (CO2CHMe2); 55.8 (C(3')); 41.5 (C(1'')); 24.4 (C(2'')); 21.9 (CO2CHMe2); 15.1 (Me-C(1')); 11.0 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 302 ([M + H]+), 324 ([M + Na]+), 603 ([2M + H]+), 625 ([2M + Na]+).
【００５２】
実施例8
1-ブチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジュヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(10)の合成
一般的方法 I に従って、化合物10を白色固体として得た（82mg、収率：69%）。
【化１１】
2008524170.tif 000014
【００５３】
化合物１１の物性値は以下の通りである。
m.p.: 110-112℃
[α]D = -316.6（c = 0.5, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3467, 3311, 2927, 1707, 1667, 1599, 1186, 770 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 8.14 (m, 1 H, H-C (8')); 7.59 (m, 3 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 6.48 (ブロードな s, 1 H, NH); 6.35 (s, 1 H, H-C(2)); 5.46 (dd, J= 6.8, 3.4, 1 H,  H-C (3')); 4.18 (t, J = 6.7, 2 H, CO2CH2CH2CH2CH3); 1.73-1.59 (m, 3 H, H-C(1'') CO2CH2CH2CH2CH3); 1.50-1.42 (m, 3 H, Ha-C (2''), CO2CH2CH2CH2CH3); 1.18 (m, 1 H, Hb-C (2'')); 0.96 (t, J = 7.4, CO2CH2CH2CH2CH3); 0.88 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(1'')); 0.82 (t, J = 7.2, H, H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 165.6 (CONH); 164.7 (CO2CH2CH2CH2CH3); 150.2 (C(4')); 135.5 (C(4a')); 132.8, 130.5 (C(5') または C(6') または C(7')); 128.1 (C(8a'); 126.9 (C(8')); 123.9 (C(5') または (C(6') または C(7')); 117.0 (C(2)); 64.4 (CO2CH2CH2CH2CH3); 55.9 (C(3')); 41.5 (C(1'')); 39.6 (CO2CH2CH2CH2CH3); 24.4 (C(2'')); 19.2 (CO2CH2CH2CH2CH3); 15.1 (Me-C(1')); 13.7 (CO2CH2CH2CH2CH3); 11.0 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 316 ([M + H]+), 338 ([M + Na]+), 631 ([2M + H]+), 653 ([2M + Na]+).
【００５４】
実施例9
ベンジル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(11)の合成
一般的方法 I に従って、化合物11を白色固体として得た（69mg、収率：50%）。
【化１２】
2008524170.tif 000015
【００５５】
化合物１１の物性値は以下の通りである。
m.p.: 53-54℃
[α]D = -178.5（c = 0.005, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3435, 2927, 1710, 1669, 1159, 1028, 767, 695 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 8.14 (m, 1 H, H-C (8')); 7.56 (m, 3 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 7.39 (m, 5 H, CO2CH2Ph); 6.86 (ブロードなd, J = 4.3, 1 H, NH); 6.40 (s, 1 H, H-C(2)); 5.46 (dd, J= 7.1, 4.3, 1 H,  H-C (3')); 5.22 (s, 2 H, CO2CH2Ph); 1.61 (m, 1 H, H-C(1'')); 1.44 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.14 (m, 1 H, Hb-C (2'')); 0.87 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(1'')); 0.81 (t, J = 7.3, 3 H, H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 165.2 (CONH); 163.8 (CO2CHPh); 150.9 (C(4')); 135.6 C(4a')); 135.4 (C(Ph)); 132.7, 130.6 (C(5') または C(6') または C(7')); 128.6, 128.5, 128.4, 128.3, 128.1 (7 C, C(8') C(8a'), (C(Ph))); 123.9 (C(5') または (C(6') または C(7')); 116.5 (C(2)); 66.3 (CO2CHPh); 55.9 (C(3')); 41.5 (C(1'')); 24.4 (C(2'')); 15.1 (Me-C(1')); 11.1 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 350 ([M + H]+), 372 ([M + Na]+), 699 ([2M + H]+), 721 ([2M + Na]+).
【００５６】
実施例10
(S,S,S,S,Z,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-ブタ-2-エニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(12)の合成
一般的方法 I に従って、化合物12を白色固体として得た（35mg、収率：41%）。
【化１３】
2008524170.tif 000016
【００５７】
化合物１２の物性値は以下の通りである。
m.p.: 79-81℃
[α]D = -404.2（c = 0.12, CHCl3）.
IR (KBr) ν: 3429, 2964, 2927, 1714, 1671, 1273, 1157, 773 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 8.14 (m, 2 H, H-C (8')); 7.56 (m, 6 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 6.67 (ブロードなd, J = 4.6, 2 H, NH); 6.34 (s, 2 H, H-C(2)); 5.84 (t, J= 4.1, 2 H, CH=CH);  5.46; (dd, J = 7.1, 4.6, 2 H, C (3')); 4.81 (t, J = 4.1, 4 H, CO2CH2CH=CHCH2CO2); 1.59 (m, 1 H, H-C(1'')); 1.44 (m, 2 H, Ha-C (2'')); 1.16 (m, 2 H, Hb-C (2'')); 0.87 (d, J = 6.8, 6 H, Me-C(1'')); 0.80 (t, J = 7.4, 6 H, H-C3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 165.1 (CONH); 163.8 (CO2CH2CH=CHCH2CO2); 151.2 (C(4')); 135.3 (C(4a')); 132.6, 130.7 (C(5') または C(6') または C(7')); 128.4, 128.2, 128.1 (C(8'), C(8a') C(CH=CH)); 123.8 (C(5') または C(6') または C(7')); 116.2 (C(2)); 59.9 (CO2CH2CH=CHCH2CO2); 55.9 (C(3')); 41.5 (C(1'')); 24.5 (C(2'')); 15.1 (Me-C(1')); 11.0 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 571 ([M + H]+), 593 ([M + Na]+), 1141 ([2M + H]+), 1163 ([2M + Na]+).
【００５８】
実施例11
(S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)- ブタ-2-イニル 4-[2-3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-アセテート(13)の合成
一般的方法Iに従って、化合物13を白色固体として得た（44mg、収率：52%）。
【化１４】
2008524170.tif 000017
【００５９】
化合物１３の物性値は以下の通りである。
m.p.: 85-87℃
[α]D = -447.2（c = 0.14 CHCl3）
IR (KBr) ν: 3434, 2963, 2927, 1718, 1669, 1378, 1273, 1152, 771 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 8.12 (m, 2 H, H-C (8')); 7.55 (m, 6 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 6.67 (ブロードなd, J = 4.5, 2 H, NH); 6.35 (s, 2 H, H-C(2)); 5.41 (dd, J= 7.3, 4.5, 2 H, C (3'));
2008524170.tif 000018
1.59 (m, 2 H, H-C(1'')); 1.42 (m, 2 H, Ha-C (2'')); 1.15 (m, 2 H, Hb-C (2'')); 0.85 (d, J = 6.8, 6 H, Me-C(1'')); 0.77 (t, J = 7.3, 6 H, H-C3'')) ppm.
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ: 164.5 (CONH);
2008524170.tif 000019
152.1 (C(4')); 135.1 (C(4a')); 132.8, 130.9 (C(5') または C(6') または C(7')); 128.4 (C(8a')), 128.1 (C(8')); 123.9 (C(5') または (C(6') または C(7')); 115.6 (C(2));
2008524170.tif 000020
56.1 (C(3'));
2008524170.tif 000021
41.6 (C(1'')); 24.4 (C(2'')); 15.1 (Me-C(1')); 11.1 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 569 ([M + H]+), 591 ([M + Na]+), 1137 ([2M + H]+), 1159 ([2M + Na]+).
【００６０】
実施例12
(S,S,S,S,Z,Z)-4-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトキシル]-ベンジル (3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(14)の合成
一般的方法 I に従って、化合物14を白色固体として得た（25mg、収率：27%）。
【化１５】
2008524170.tif 000022
【００６１】
化合物１４の物性値は以下の通りである。
m.p.: 213-215℃
[α]D = -391.0（c = 0.22, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3422, 2927, 1712, 1671, 1379, 1275, 1158, 775 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 8.14 (m, 2 H, H-C (8')); 7.57 (m, 6 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 7.43 (s,  4 H, CO2CH2PhCH2CO2); 6.40 (s, 2 H, H-C (2)); 6.25 ブロードなd, J = 4.7, 2 H, NH); 5.45 (dd, J= 7.1, 4.7, 2 H, H-C (3')); 5.23 (s,  2 H, CO2CH2PhCH2CO2); 5.22 (s,  2 H, CO2CH2PhCH2CO2); 1.61 (m, 2 H, H-C(1'')); 1.44 (m, 2 H, Ha-C (2'')); 1.17 (m, 2 H, Hb-C (2'')); 0.87 (d, J = 6.8, 6 H, Me-C(1'')); 0.81 (t, J = 7.3, 6 H, H-C3'')) ppm.
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ: 165.1 (CONH); 163.9 (CO2CH2PhCH2CO2); 151.3 (C(4')); 135.9 (C(Ph)); 135.3 (C(4a')); 132.7, 130.6 (C(5') または C(6') または C(7')); 128.5 (6 C, C(8a'), C(Ph)); 128.0 (C(8')); 123.8 (C(5') または C(6') または C(7')); 116.3 (C(2)); 65.8 (CO2CH2PhCH2CO2); 55.9 (C(3')); 41.5 (C(1'')); 24.4 (C(2'')); 15.1 (Me-C(1')); 11.0 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 621 ([M + H]+), 643 ([M + Na]+), 1241 ([2M + H]+), 1264 ([2M + Na]+).
【００６２】
実施例13
酸8とアミン及びジアミンとの反応（一般的方法II）
酸8のアミドの合成
酸8（100mg, 0.38mmol）を無水CH2Cl2（2.5mL）に加えた懸濁液中へ、0℃でSOCl2（0.28mL, 3.8mmol） を滴下した。混合物を、室温になるまで撹拌した後、約１時間にわたって加熱還流させた。減圧下で溶剤を除去することによって得られた暗色油油状物を無水CH2Cl2（2.5mL）に溶解させ、得られた溶液中へ、対応するアミン（0.57mmolのモノアミン又は0.17mmolのジアミン）を無水CH2Cl2（2.5mL）中へ溶解させた溶液を、アルゴン雰囲気下で添加した。次いで、Et3N（0.1mL, 0.76mmol）を添加した後、室温下で撹拌を一夜おこなった。反応混合物を、CH2Cl2（50mL）を用いて希釈した後、5% HCl 水溶液（3×50mL）及びNaHCO3 の飽和水溶液（3×50mL）を用いて順次抽出した。有機相を、ブラインを用いて洗浄した後、MgSO4を用いて乾燥させた。真空下で溶剤を除去して得られた粗生成物を、溶離液としてヘキサン/EtOAc（7:3 〜 1:1）を用いるカラムクロマトグラフィーによる精製処理に付した。
【００６３】
実施例14
(S,S,Z)-N-ベンジル-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(15)の合成
一般的方法IIに従って、化合物15を白色固体として119mg得た（収率：90%）。
【化１６】
2008524170.tif 000023
【００６４】
化合物１５の物性値は以下の通りである。
m.p.: 90-94℃
[α]D = -315.1（c = 0.25, CH3OH）.
IR (KBr) ν: 3435, 2963, 2927, 1651, 1523, 1450 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 8.10 (m, 1 H, H-C (8')); 7.49 (m, 3 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')); 7.32 (s, 5 H, CONHCH2Ph); 6.20 (ブロードなs, J = 4.5, 1 H, NH); 6.17 (s, 1 H,  H-C (2)); 6.02 (m, 1 H, CONHCH2Ph); 5.65 (dd, J = 7.3, 4.5, 2 H, H-C(3')); 4.53 (m, 2 H, CONHCH2Ph); 1.63 (m, 1 H,  H-C (1'')); 1.45 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.19  (m,  1 H, Hb-C (2'')); 0.89 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(1'')); 0.81 (t, J = 7.3, 3 H, H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ: 164.7 (CONHCH2Ph); 163.9 (CONH); 147.1 (C(4a')); 137.9 (C(4')); 135.9 (C(Ph)); 132.7, 129.9 (C(5') または C(6') または C(7')); 128.8, 128.4, 127.9, 127.7 (7 C, C(8'), C(8a'), C(Ph)); 123.5 (C(5') または C(6') または C(7')); 119.2 (C(2)); 55.6 (C(3')); 43.7 (CONHCH2Ph); 41.3 (C(1'')); 24.6 (C(2'')); 15.2 (Me-C(1')); 11.1 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 349 ([M + H]+), 371 ([M + Na]+), 697 ([2M + H]+), 719 ([2M + Na]+).
【００６５】
実施例15
(S,S,Z)-N-(3-アセチル-フェニル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(16)の合成
一般的方法IIに従って、化合物16を白色固体として112mg得た（収率：79%)。
【化１７】
2008524170.tif 000024
【００６６】
化合物１６の物性値は以下の通りである。
m.p.: 147-151℃
[α]D = -333.5（c = 0.26, CH3OH）
IR (KBr) ν: 3413, 3435, 2964, 2927, 1673, 1656, 1549, 1484, 1167, 688 cm-1.
1H-NMR (500 MHz, 50℃, CDCl3) δ: 8.33 (ブロードなs, 1 H, CONHAr); 8.10 (m, 2 H, H-C (8') H-Ar); 7.98 (d, J = 7.3, 1 H, H-Ar); 7.66 (d, J = 7.8, 1 H H-Ar); 7.46 (m, 4 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7'), H-Ar); 6.51 (broad s, 1 H, NH); 6.35 (s, 1 H, H-C(2)); 5.60 (dd, J = 7.3, 4.8, 2 H, H-C(3')); 2.57 (s, 3 H, ArCOCH3); 1.63 (m, 1 H,  H-C (1'')); 1.47 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.15  (m,  1 H, Hb-C (2'')); 0.90 (d, J = 6.8, 3 H, Me-C(1'')); 0.80 (t, J = 7.3, 3 H, H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (75 MHz, CDCl3) δ: 198.3 (ArCOCH3); 164.5, 163.3 (CONH); 148.2 (C(4a')); 138.8 (C(4')); 135.9, 132.8, 130.2, 128.2, 127.8 (C(Ph), C(5') または C(6') または C(7'), C(8')); 129.(3 C(8a')); 124.4, 123.9 (C(2), C(Ph)); 55.6 (C(3')); 41.3 (C(1'')); 29.7 (ArCOCH3); 24.7 (C(2'')); 15.2 (Me-C(1')); 11.2 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 377 ([M + H]+), 399 ([M + Na]+), 753 ([2M + H]+), 775 ([2M + Na]+).
【００６７】
実施例16
(S,S,Z)-N-(2'-アミノ-ビフェニル-2-イル)-2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセトアミド(17)の合成
一般的方法IIに従って、化合物17を白色固体として121mg得た（収率：75%）。
【００６８】
化合物１７の物性値は以下の通りである。
[α]D = -312.6（c = 0.33, CH3OH）
IR (KBr) ν: 3436, 1661, 1515, 1439, 1299, 1161, 749 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, 30℃, CDCl3, 配座異性体Mとmとの 1:1混合物) δ: 8.24 (m, 2 H, H-Ar, M+m); 8.08 (m, 2 H, H-C(8'), M+m); 8.00 (ブロードなs, 1 H, CONHAr, M); 7.95 (ブロードなs, 1 H, CONHAr, m); 7.54-7.39 (m, 8 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7'), H-Ar, M+m); 7.29-7.22 (m, 6 H, H-Ar, M+m); 7.19-7.09 (m, 2 H, H-Ar, M+m); 6.92-6.82 (m, 4 H, H-Ar, M+m); 6.38 (ブロードなs, 1 H, NH, M); 6.38 (m, 1 H, NH, m); 6.10  (s, 1 H, H-C(2), M); 6.06  (s, 1 H, H-C(2), m); 5.59 (m, 1 H, H-C(3'), M); 5.33 (m, 1 H, H-C(3'), m); 3.97 (s, 2 H, ArNH2, M+m); 1.59  (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.41  (m, 1 H, Ha-C (2'') M+m); 1.13  (m,  1 H, Hb-C (2''), M+m); 0.85 (d, J = 4.2, 3 H, Me-C(1''), M); 0.83 (d, J = 4.2, 3 H, Me-C(1''), m); 0.77 (t, J = 7.3, 3 H, H-C(3'')) ppm.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9.32 (ブロードなs, 1 H, CONHAr); 8.48 (ブロードなd, J = 4.6, 1 H, NH); 7.87 (m, 1 H, H-C (8')); 7.70 (d, 1 H, H-C (5')); 7.58 (m, 3 H, H-C (6'), H-C (7'),  H-C (2)); 7.37 (m, 1 H, H-Ar) 7.25 (m, 2 H, H-Ar); 7.06 (m, 1 H, H-Ar); 6.92 (m, 1 H, H-Ar); 6.78 (m, 1 H, H-Ar); 6.64 (m, 1 H, H-Ar); 6.56 (m, 1 H, H-Ar); 5.43 (m, 1 H, H-C(3')); 4.63 (s, 2 H, ArNH2); 1.35 (m, 2 H, Ha-C (2''), H-C(1'')); 1.21 (m,  1 H, Hb-C (2'')); 0.73 (m, 6 H, Me-C(1''), H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (300 MHz, CDCl3, 配座異性体Mとmとの 1:1混合物) δ: 163.9, 163.8, 163.2 (CONH, M+m); 147.5, 147.1, 150.9, 137.8, 135.9, 132.7, 130.0, 128.8, 128.0, 127.9, 127.8 (19 C, C(4), (C(4a'), (C(5'), C(6'), C(7'), C(8'), C(8a'), C(Ph), M+m); 125.2, 125.1 (C(Ar), M+m); 123.8, 123.7 (C(5') または C(6') または C(7'), M+m); 122.5, 122.3 (C(Ar), M+m); 120.3, 120.1, 119.7, 119.4, (C(2), C(Ar), M+m); 115.9 (C(Ar)); 55.9, 55.6 (C(3'), M+m); 41.4 (C(1'')); 24.6 (C(2'')); 15.2 (Me-C(1')); 11.2 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 426 ([M + H]+), 753 ([2M + H]+), 851 ([2M + H]+), 874 ([2M + H + Na]+).
【００６９】
実施例17
(S,S,S,S,Z,Z)-2,2'-ビス-[(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]ビフェニル(18)の合成
一般的方法IIに従って、化合物18を白色固体として154mg得た（収率：61%）。
【００７０】
化合物１８の物性値は以下の通りである。
m.p.: 177-180℃
[α]D = -395.0（c = 0.25, CH3OH）
IR (KBr) ν: 3435, 2963, 1656, 1521, 1302, 1161, 753 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, 配座異性体Mとmとの 1:1混合物) δ: 8.10 (m, 2 H, CONH-Bif, M+m); 8.06 (m, 1 H, H-C(8'), M); 8.01 (m, 1 H, H-C(8'), m); 7.52-7.16 (m, 14 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7'), H-Bif, M+m); 6.61 (ブロードなd, 1 H, NH-L-Biq, M); 6.36 (d, J = 4.4, 1 H, NH-L-Biq, m); 6.07 (s, 1 H, H-C(2), M); 6.02  (s, 1 H, H-C(2), m); 5.55 (m, 1 H, H-C(3'), M); 5.37 (m, 1 H, H-C(3'), m); 1.61-1.52 (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.38  (m, 1 H, Ha-C (2''), M+m); 1.12  (m, 1 H, Hb-C (2''), M+m); 0.86-0.71 (m, 12 H, Me-C(1''), H-C(3''), M+m) ppm. [頭字語「Biq 」はイソキノリンから誘導されるラジカルを示すために使用し、また、頭字語「Bif」はビフェニル誘導体を示すために使用する。].
MS (ES+) m/e: 667 ([M + H]+), 689 ([M + Na]+), 1356 ([2M +  H + Na]+).
【００７１】
実施例18
アミン17とアミノ酸誘導体との反応(一般的方法III)
ペプチド-ヘテロシクロ-ビフェニルハイブリッドの合成
対応するN-Fmoc-アミノ酸（0.31mmol）を無水CH2Cl2（2.0mL）に加えた懸濁液中へ、0℃でSOCl2（0.23mL, 3.1mmol）を滴下した。この混合物を、室温になるまで撹拌した後、約１時間にわたって加熱還流させた。減圧下で溶剤を除去して得られた白色固体を無水CH2Cl2（2.0mL）に溶解させ、この溶液中へ、アミン17（200mg, 0.47mmol）を無水CH2Cl2 （2.0mL）に溶解させた溶液をアルゴン雰囲気下で添加した。次いで、Et3N（80μL, 0.62mmol）を添加した後、室温下での撹拌処理を一夜行った。反応混合物を、CH2Cl2（50mL）で希釈した後、NaHCO3 の飽和水溶液（3×50mL）及び5% HCl水溶液（3×50mL）を用いて順次抽出した。有機相をブラインで洗浄した後、MgSO4を用いて乾燥させた。真空下で溶剤を除去して得られた粗生成物を、溶離液としてヘキサン/EtOAc（3:2 〜 1:1）を用いるカラムクロマトグラフィーによる精製処理に付した。
【００７２】
【化１８】
2008524170.tif 000025
【００７３】
実施例19
(S,S,S,Z)-9H-fフオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-プロピル)-カルバメート(19)の合成
一般的方法IIIに従って、化合物19を白色固体として172mg得た（収率：73%）。
【化１９】
2008524170.tif 000026
【００７４】
化合物１９の物性値は以下の通りである。
m.p.: 133-135℃
[α]D  = -188.0（c = 0.25, CH2Cl2）
IR (KBr) ν: 3408, 2963, 1663, 1519, 1450, 1299, 1232, 758, 739 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, 323 K, CDCl3, 配座異性体Mとmとの 1:1混合物) δ: 8.14-7.93 (m, 2 H, H-Ar, M+m); 7.75-7.70 (m, 1 H, H-Ar, M+m); 7.57-7.12 (m, 19 H, H-Ar, CONH-Bif-CONH, M+m); 6.18 (d, J = 4.4, 0.5 H, NH-L-Biq, M); 6.12 (d, J = 4.4, 0.5 H, NH-L-Biq, m); 6.03 (s, 0.5 H, H-C (2) M); 5.98 (s, 0.5 H, H-C(2), m); 5.45 (m, 0.5 H, H-C (3') M); 5.36 (s, 0.5 H, H-C(3'), m); 5.04 (ブロードなs, 1 H, NH-Fmoc, M+m); 4.42-4.26 (m, 2 H, CH2-Fmoc, M+m), 4.17-4.09 (m, 1 H, CHα-L-Val, M+m), 3.87 (m, 0.5 H, CH-Fmoc, M), 3.81 (m, 0.5 H, CH-Fmoc, m), 1.96 (m, 1 H, CHβ-L-Val, M+m), 1.54 (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.40  (m, 1 H, Ha-C (2''), M+m); 1.10  (m,  1 H, Hb-C (2''), M+m); 0.89-0.73 (m, 12 H, Me-C(1''), H-C(3''), Me2 of L-Val, M+m) ppm.
1H-NMR (300 MHz, 353 K, DMSO-d6) δ: 8.93 (ブロードなs, 1 H, CONHBif); 8.75 ブロードな s, 1 H, CONHBif); 8.14-6.94 (m, 22 H, H-C (5') H-C (6'), H-C (7'),  H-C (8'), H-Ar); 6.43 (s, 1 H, H-C(2)); 5.34 (m, 1 H, H-C(3')); 4.32-4.15 (m, 3 H, CH2-Fmoc, CH-Fmoc); 3.84 (m, 1 H, CHα-L-Val); 1.91 (m, 1 H, CHβ-L-Val); 1.38 (m, 2 H, Ha-C (2''), H-C(1''));1.09 (m, 1 H, Hb-C (2''));  0.86-0.66 (m, 12 H, Me-C(1''), H-C(3''), Me2 of L-Val) ppm.
MS (ES+) m/e: 747 ([M + H]+), 770 ([M + Na]+), 1515 ([2M + H + Na]+).
【００７５】
実施例20
(S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル(1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-フェニル-エチル)-カルバメート(20)の合成
一般的方法IIIに従って、化合物20を白色固体として109mg得た（収率：45%）。
【化２０】
2008524170.tif 000027
【００７６】
化合物２０の物性値は以下の通りである。
m.p.: 108-110℃
[α]D = -181.0（c = 0.23, CH2Cl2）
IR (KBr) ν: 3409, 2956, 1659, 1519, 1450, 1247, 1161, 1046, 758, 739 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, 313 K, CDCl3, 配座異性体Mとmとの 1.5:1混合物) δ: 8.14-7.99 (m, 2 H, H-Ar, M+m); 7.88-7.65 (m, 3 H, H-Ar, M+m); 7.48-7.01 (m, 20 H, H-Ar, M+m); 6.72 (d, J = 4.4, 0.6 H, NH-L-Biq, M); 6.52 (d, J = 4.4, 0.4 H, NH-L-Biq, m); 6.05 (s, 0.6 H, H-C (2), M); 5.98 (s, 0.4 H, H-C(2), m); 5.46 (m, 0.4 H, H-C (3') m); 5.37 (s, 0.4 H, H-C(3'), M); 5.27 (ブロードなs, 0.6 H, NH-Fmoc, M); 5.02 (ブロードなs, 0.4 H, NH-Fmoc, m); 4.38-4.06 (m, 4 H, CH2-Fmoc, CH-Fmoc, CHα-L-Phe, M+m), 3.21 (m, 1 H, CHβ-L-Phe, M), 2.84 (m, 1 H, CHβ-L-Phe, m); 1.61 (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.41  (m, 1 H, Ha-C (2''), M+m); 1.13  (m, 1 H, Hb-C (2''), M+m); 0.80 (d, 2 H, J = 6.8, Me-C(1''), M); 0.80 (d, 0.5 H, J = 6.8, Me-C(1''), m); 0.74 (t, 3 H, J = 7.8, H-C(3''), M+m) ppm.
MS (ES+) m/e: 795 ([M + H]+), 818 ([M + Na]+), 1612 ([2M + H + Na]+).
【００７７】
実施例21
(S,S,S,S,Z)-9H-フオレン-9-イルメチル (1-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イルカルバモイル}-2-メチル-ブチル)-カルバメート(21)の合成
一般的方法IIIに従って、化合物21を白色固体として101mg得た（収率：58%）。
【化２１】
2008524170.tif 000028
【００７８】
化合物２１の物性値は以下の通りである。
m.p.: 116-120℃
[α]D = -155.1（c = 0.12, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3406, 3282, 2963, 2920, 1662, 1516, 1450, 1233, 757, 740 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, 318 K, CDCl3, 配座異性体Mとm,との1:1混合物) δ: 8.12-7.01 (m, 22 H, H-Ar, CONH-Bif-CONH, M+m); 6.33 (ブロードなs, 0.5 H, NH-L-Biq, M); 6.27 (ブロードなs, 0.5 H, NH-L-Biq, m); 6.05 (s, 0.5 H, H-C (2) M); 5.99 (s, 0.5 H, H-C(2), m); 5.47 (m, 0.5 H, H-C (3') M); 5.34 (s, 0.5 H, H-C(3'), m); 5.23 (ブロードなs, 1 H, NH-Fmoc, M+m); 4.44-3.88 (m, 4 H, CH2-Fmoc, CH-Fmoc, CHα-L-Ile, M+m), 1.86 (m, 0.5 H, CHβ-L-Ile, M); 1.72 (m, 0.5 H, CHβ-L-Ile, m),1.54 (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.40  (m, 1 H, Ha-C (2''), M+m); 1.14  (m, 1 H, Hb-C (2''), CHb-L-Ile, M+m); 0.88-0.70 (m, 12 H, Me-C(1''), H-C(3''), [CH-CH3] of L-Ile, [CH2-CH3] of L-Ile, M+m) ppm.
MS (ES+) m/e: 761 ([M + H]+), 783 ([M + Na]+), 1522 ([2M + H]+), 1545 ([2M + Na]+).
【００７９】
実施例22
N-Fmoc 基の脱保護(一般的方法IV)
保護された対応するN-Fmoc 化合物 (0.09 mmol)を 0.3 mL の無水DMFに溶解させた溶液中へ、0℃においてアルゴン雰囲気下でピペリジン(70 μL) を添加した。この混合物を室温になるまで約２時間放置した。溶剤を除去して得られた粗生成物を、溶離液としてヘキサン/EtOAc (1:1 〜 1:9)を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製した。
【００８０】
【化２２】
2008524170.tif 000029
【００８１】
実施例23
(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ブチルアミド22)の合成
一般的方法IVに従って、化合物22を白色固体として12mg得た（収率：24%）。
【化２３】
2008524170.tif 000030
【００８２】
化合物２２の物性値は以下の通りである。
m.p.: 110-113℃
[α]D = -35.9（c = 0.07, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3434, 2956, 1660, 1521, 14369, 1165, 753 cm-1.
1H-NMR (500 MHz, 313 K, CDCl3, 配座異性体Mとmとの1:1混合物) δ: 9.31 (ブロードなs, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, M); 9.28 (ブロードなs, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, m); 8.38 (ブロードなs, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, M); 8.28 (ブロードなs, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, m); 8.09 (m, 1 H, H-C(8'), M); 8.19 (m, 1 H, H-C(8'), m); 7.45 (m, 6 H, H-Ar. H-Bif M+m); 7.23 (m, 5 H, H-Ar. H-Bif M+m); 6.25 (d, J =  4.5, 0.5 H, NH-L-Biq, M); 6.18 (d, J =  4.5, 0.5 H, NH-L-Biq, m); 6.03 (s, 0.5 H, H-C (2) M); 5.99 (s, 0.5 H, H-C(2), m); 5.52 (m, 0.5 H, H-C (3') M+m); 3.47 (m, 1 H, NH2, M); 3.29 (m, 1 H, NH2, m); 3.23 (d, J = 3.4, 0.5 H, CHα-L-Val, M); 3.15 (d, J = 3.4, 0.5 H, CHα-L-Val, m), 2.24 (m, 1 H, CHβ-L-Val, M+m); 1.61 (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.52 (m, 1 H, Ha-C (2''), M+m); 1.18  (m, 1 H, Hb-C (2''), M+m); 0.91-0.63 (m, 12 H, Me-C(1''), H-C(3''), Me2 of L-Val, M+m) ppm.
MS (ES+) m/e: 525 ([M + H]+), 547 ([M + Na]+), 1049 ([2M + H]+), 1072 ([2M + Na]+).
【００８３】
実施例24
(S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-フェニル-プロピオンアミド(23)の合成
一般的方法IVに従って、化合物23を白色固体として32mg得た（収率：61%）。
【化２４】
2008524170.tif 000031
【００８４】
化合物２３の物性値は以下の通りである。
m.p.: 107-110℃
[α]D = -231.0（c = 0.06, CH2Cl2）
IR (KBr) ν: 3435, 1658, 1519, 1436, 1161, 753 cm-1.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3, 配座異性体M とmとの 2.5:1混合物) δ: 9.36 (ブロードなs, 0.7 H, CONH-Bif-CONH, M); 9.32 (ブロードなs, 0.3 H, CONH-Bif-CONH, m); 8.40-8.05 (m, 3 H, H-C(8'), CONH-Bif-CONH, M+m); 7.53-7.44 (m, 6 H, H-Ar, H-Bif, M+m); 7.43-7.13 (m, 5 H, H-Ar, H-Bif, M+m); 6.49 (m, 1 H, NH-L-Biq, M+m); 6.07 (s, 0.7 H, H-C (2) M); 6.06 (s, 0.3 H, H-C(2), m); 5.51 (m, 1 H, H-C (3') M+m); 3.55 (m, 1 H, CHα-L-Phe, M+m); 3.18 (m, 1 H, CHβ-L-Phe, M); 2.49 (m, 1 H, CHβ-L-Phe, m); 1.59 (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.50 (m, 1 H, Ha-C (2''), M+m); 1.16  (m, 1 H, Hb-C (2''), M+m); 0.90-0.70 (m, 6 H, Me-C(1''), H-C(3''),  M+m) ppm.
【００８５】
実施例25
(S,S,S,S,Z)-2-アミノ-N-{2'-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-iイソキノリン-4-イリデン)-aアセチルアミノ]-ビフェニル-2-イル}-3-メチル-ペンタンアミド(24)の合成
一般的方法IVに従って、化合物24を白色固体として34mg得た（収率：71%）。
【化２５】
2008524170.tif 000032
【００８６】
化合物２４の物性値は以下の通りである。
m.p.: 93-96℃
[α]D = -215.6（c = 0.09, MeOH）
IR (KBr) ν: 3413, 2962, 2920, 1666, 1580, 1521, 1436, 1302, 1164, 755 cm-1.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3, 配座異性体Mとmとの 1:1混合物) δ: 9.41 (ブロードなs, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, M); 9.38 (ブロードなs, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, m); 8.32 (ブロードな s, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, M); 8.22 (ブロードなs, 0.5 H, CONH-Bif-CONH, m); 8.13 (m, 0.5 H, H-C(8'), M); 8.03 (m, 0.5 H, H-C(8'), m); 7.46-7.35 (m, 6 H, H-Ar, H-Bif,  M+m); 7.24-7.09 (m, 5 H, H-Ar, H-Bif,  M+m); 6.77 (d, J = 4.4, 0.5 H, NH-L-Biq, M+m); 6.70 (d, J = 4.4, 0.5 H, NH-L-Biq, M+m); 6.04 (s, 0.5 H, H-C (2), M); 6.02 (s, 0.5 H, H-C(2), m); 5.48 (m, 1 H, H-C (3') M+m); 3.26 (m, J = 3.4, 0.5 H, CHα-L-Ile, M); 3.17 (m, J = 3.4, 0.5 H, CHα-L-Ile, m); 1.96 (m, 1 H, CHβ-L-Ile, M); 1.88 (m, 1 H, CHβ-L-Ile, m); 1.58 (m, 1 H, H-C(1''), M+m); 1.52 (m, 1 H, Ha-C (2''), M+m); 1.14 (m, 1 H, Hb-C (2''), M+m); 0.89-0.74 (m, 12 H, Me-C(1''), H-C(3''), [CH-CH3] of L-Ile, [CH2-CH3] of L-Ile, M+m) ppm.
【００８７】
実施例26
ペプチド-イソキノリンハイブリッドの合成（一般的方法V）
酸8（150mg, 0.58mmol）を無水DMFに溶解させた溶液中へ、次の化合物を順次添加した：トリフルオロアセテートとしての対応するペプチド（0.70mmol）、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBT；92mg, 0.70mmol）、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド(EDC；134.4mg, 0.70mmol）及び4-(ジメチルアミノ）ピリジン（DMAP；7mg, 0.058mmol)。室温下において、この混合物の撹拌処理を一夜行った。有機溶剤を真空下で除去して得られた粗生成物を、カラムクロマトグラフィーを用いる精製処理に付すことによって対応するペプチド-イソキノリンハイブリッドを得た。
【００８８】
【化２６】
2008524170.tif 000033
【００８９】
実施例27
メチル(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノエート(25)の合成
一般的方法Vに従い、ペプチドCF3CO2- +H-L-Ile-L-Ile-OCH3を出発原料として使用し、クロマトグラフィー（溶離液：hexane-EtOAc の4:1 〜 3:2混合物)を用いる精製処理を行うことによって、化合物25を白色固体として232mg得た（収率：80%）。
【化２７】
2008524170.tif 000034
【００９０】
化合物２５の物性値は以下の通りである。
IR (KBr) ν: 3436, 2965, 1743, 1652, 1544 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3,) δ: 8.26 (m, J = 5.1, 1 H, NH-L-Iiq); 7.96 (m, 1 H-C(8')); 7.38-7.21 (m, 5 H H-C (5'), H-C (6'), H-C (7'), NH-L-Ile [1], NH-L-Ile [2]); 6.09 (s, 1 H, オレフィン性H); 5.57 (dd, J = 7.2, 5.1, 1 H, H-C(3')); 4.68 (m, 1 H, CHα-L-Ile [2]); 4.43 (dd, J = 7.6, 5.1, 1 H, CHα-L-Ile [1]); 3.72 (s, 3 H, CO2Me); 1.93-1.79 (m, 3 H, [Me-CH-Et] of L-Iiq; CHβ-L-Ile [1], CHβ-L-Ile [2]); 1.66-1.08 (m, 6 H, [Me-CH-CH2CH3] of L-Iiq, [Me-CH-CH2CH3] of L-Iiq, [CH-CH3] of L-Ile [1], [CH-CH3] of L-Ile [2], [CH2CH3] of L-Ile [1], [CH2CH3] of L-Ile [2] ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 172.0, 171.9 (CO2Me, CONH- L-Ile [2]); 164.8, 164.5 (=C-CONH, CONH- L-liq), 147.5 (C(4')), 136.0 (C(4a')), 132.4, 129.5, 123.6 (C(5'), C(6'), C(7'), 128.3 (C(8a')); 127.5 (C(8)); 119.2 (オレフィン性 CH); 57.3 (CHα-L-Ile [2]); 56.9 (CHα-L-Ile [1]); 54.9 (C(3')); 51.9 (CO2Me); 41.3, 38.3, 37.1  ([Me-CH-Et] of L-liq; CHβ-L-Ile [1], CHβ-L-Ile [2]); 25.1, 24.9 (3 C [Me-CH-CH2CH3] of L-Iiq, CH2-L-Ile [1],CH2 of L-Ile [2]); 15.4, 15.3, 15.0, 11.4, 11.2 ( (6 C [Me-CH-CH2CH3] of L-Iiq, [Me-CH-CH2CH3] of L-Iiq, [CH-CH3] of L-Ile [1]), [CH-CH3] of L-Ile [2], CH2-CH3] of L-Ile [1], [CH2-CH3] of L-Ile [2]) ppm.
MS (ES+) m/e: 500 ([M + H]+), 522 ([M + Na]+), 999 ([2M + H]+), 1021 ([2M + Na]+).
【００９１】
実施例28
メチル(S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]- 3-メチル-ペンタノイルアミノ-3-メチル-ペンタノイルアミノ)-3-メチル-ペンタノエート(26)の合成
一般的方法Vに従い、ペプチドCF3CO2- +H-L-Ile-L-Ile-OCH3を出発原料として使用し、また、カラムクロマトグラフィー(溶離液：ヘキサン-EtOAcの 1:4 〜 1:9混合物)を用いる精製処理に付すことによって、化合物26を白色固体として234mg得た（収率：66%）。
【化２８】
2008524170.tif 000035
【００９２】
化合物２６の物性値は以下の通りである。
m.p.: 151-154℃
[α]D = -100.9（c = 0.33, MeOH）
IR (KBr) ν: 3302, 2965, 1739, 1650, 1529, 1207 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, (D6)DMSO) δ: 8.49 (d, J = 4.5, 1 H, NH-L-Biq); 8.25 (d, J = 8.5, 1 H NH-L-Ile [3]); 8.14 (d, J = 7.3, 1 H NH-L-Ile [1]); 7.99 (d, J = 8.7, 1 H NH-L-Ile [2]); 7.88 (dd, J = 7.3, 0.8, 1 H, H-C(8')); 7.66-7.58 (m, 2 H H-C (5'), H-C (6'), H-C (7'); 7.50 (td, J = 7.6, 0.9, 1 H, H-C(7')); 6.70 (s, 1 H, オレフィン性H); 5.47 (dd, J = 7.3, 4.5, 1 H, H-C(3')); 4.35 (t, J = 8.5, 1 H, CHα-L-Ile [3]); 4.24 (t, J = 8.7, 1 H, CHα-L-Ile [2]); 4.17 (t, J = 7.3, 1 H, CHα-L-Ile [1]); 3.58 (s, 3 H, CO2Me); 1.84-1.62 (m, 3 H, CHβ-L-Ile [1], CHβ-L-Ile [2], CHβ-L-Ile [3]); 1.52-0.91 (m, 9 H, [Me-CH-Et] of L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, CH2-L-Ile [1], CH2-L-Ile [2], CH2-L-Ile [3]); 0.90-0.68 (m, 24 H, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, [CH-CH3] of L-Ile [1], [CH-CH3] of L-Ile [2], [CH-CH3] of L-Ile [3], [CH2-CH3] of L-Ile [1], [CH2-CH3] of L-Ile [2] [CH2-CH3] of L-Ile [3]) ppm.
13C-NMR (50 MHz, (D6)DMSO) δ: 171.7, 171.2, 170.7 (CONH-L-Ile [1], CONH-L-Ile [2], =CH-CONH); 164.6, 162.6 (CONH- L-Biq, CO2Me); 144.0 (C(4')), 136.0 (C(4a')), 132.4 (C(5') または C(6'); 129.5 (C(7'), 128.6 (C(8a')); 126.9 (C(8')); 123.7 (C(5') または C(6'); 120.3 (オレフィン性CH); 56.5, 56.4, 56.2 (CHα-L-Ile [1], CHα-L-Ile [2], CHα-L-Ile [3]); 54.6 C(3')); 51.5 (CO2Me); 41.3 [Me-CH-Et] of L-Biq); 36.8, 36.5, 35.9 (CHβ-L-Ile [1], CHβ-L-Ile [2], CHβ-L-Ile [3]); 24.6, 24.2 (4 C [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, CH2-L-Ile [1], CH2-L-Ile [2], CH2-L-Ile [3]); 15.3, 15.2, 15.0, 14.9, 11.0, 10.9, 10.8 (8 C [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, [CH-CH3] of L-Ile [1], [CH-CH3] of L-Ile [2], [CH-CH3] of L-Ile [3], [CH2-CH3] of L-Ile [1], [CH2-CH3] of L-Ile [2] [CH2-CH3] of L-Ile [3]) ppm.
MS (ES+) m/e: 613 ([M + H]+), 635 ([M + Na]+), 1226 ([2M + H]+), 1247 ([2M + Na]+).
【００９３】
実施例29
メチル(S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ブチリルアミノ}-3-フェニル-プロピオネート(27)の合成
一般的方法Vに従い、ペプチドCF3CO2- +H-L-Val-L-Phe-OCH3 を出発原料として使用し、また、カラムクロマトグラフィー(溶離液：ヘキサン-EtOAc の3:2 〜 2:3混合物)を用いる精製処理に付すことによって、化合物27を白色固体として217mg得た（収率：72%）。
【化２９】
2008524170.tif 000036
【００９４】
化合物２７の物性値は以下の通りである。
m.p.: 174-176℃
[α]D = -129.0（c = 0.5 CHCl3）
IR (KBr) ν: 3436, 2964, 1743, 1655, 1538 cm-1.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.24(d, J = 4.6, 1 H, NH-L-Biq); 7.96 (dd, J = 7.6, 1.4, 1 H, H-C(8')); 7.37-7.03 (m, 10 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7'), NH-L-Ile, NH-L-Phe, L-Pheの芳香族性Ｈ); 6.06 (s, 1 H,オレフィン性H); 5.57 (dd, J = 9.1, 4.9, 1 H, H-C(3')); 4.74 (dd, J = 14.0, 6.3, 1 H, CHα-L-Phe); 4.48 (dd, J = 9.1, 6.6, CHα-L-Val); 3.66 (s, 3 H, CO2Me); 2.91 (dd, J = 14.0, 6.3, 2 H, CHβ-L-Phe); 2.11 (m, 1 H, CHβ-L-Val); 1.57-1.48 (m, 2 H, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq,); 1.17-1.09 (m, 1 H, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq); 1.00 (d, J =  6.7, 3 H, Me2 of L-Val); 0.96 (d, J =  6.7, 3 H, Me2 of L-Val); 0.85 (d, J =  6.7, 3 H, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq); 0.80 (t, J =  7.3, 3 H, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 1712.0, 171.5 (CONH-L-Val, CO2Me); 164.9, 164.6 (=CH-CONH, CONH-L-Biq); 147.2 (C(4')), 135.9, 135.7, 132.5, 129.6, 129.2, 128.5, 128.3, 127.4, 127.0, 123.6 (12 C, C(4a'), (C(5'),  C(6'), C(7'), C(8a'), C(8'), L-Pheの芳香族性Ｃ): 119.1 (オレフィン性CH); 58.3 (CHα-L-Phe); 55.0 (C(3')); 53.3 (CHα-L-Val); 52.1 (CO2Me); 41.3 [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq), 37.5 (CHβ-L-Phe); 31.6 (CHβ-L-Val); 24.7 ([Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, 19.2, 18.2 (Me2 of L-Val); 15.1 ([Me-CH-CH2CH3] of L-Biq); 11.3 ([Me-CH-CH2CH3] of L-Biq) ppm.
MS (ES+) m/e: 520 ([M + H]+), 542 ([M + Na]+), 1039 ([2M + H]+), 1061 ([2M + Na]+).
【００９５】
実施例30
メチル(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセテート(28)の合成
【化３０】
2008524170.tif 000037
【００９６】
イソキノリノン7（273mg, 1.0mmol）を無水トルエン（9.0mL）に溶解させた溶液中へラベッソン試薬([2,4-ビス(4-メトキシフェニル)-1,3-ジチア-2,4-ジホスフェタン-2,4-ジスルフィド])（445mg, 1.1mmol）を添加し、この混合物を約１時間にわたって加熱還流させた後、室温になるまで放置し、次いで真空下で溶剤を除去することにより得られた粗生成物を、溶離液としてヘキサン/EtOAc 混合物（19:1 〜 7:3）を用いるカラムクロマトグラフィーによる精製処理に付すことによって、化合物28を黄色固体として263mg得た（収率：91%）。
【００９７】
化合物２８の物性値は以下の通りである。
m.p.: 50-53℃
[α]D = -754.2（c = 0.5, CHCl3）
IR (KBr) ν: 3436, 3432, 3170, 2665, 1713, 1637, 1368, 1215, 1195, 1172, 1013, 772 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, 50℃, CDCl3) δ: 8.58 (ブロードなs, 1 H, NH); 8.58 (dd, J = 7.5, 1.7, 1 H, H-C(8')); 7.55-7.43 (m, 3 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')), 6.31 (s, 1 H, H-C(2)); 5.48 (dd, J = 7.8, 5.1, 1 H, H-C(3')); 3.75 (s, 3 H, CO2Me); 1.66 (m, 1 H,  H-C (1'')); 1.49 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.19  (m,  1 H, Hb-C (2'')); 0.86-0.79 (m, 6 H, Me-C(1''), H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ: 191.4 (CSNH); 165.8 (CO2Me); 149.6 (C(4')); 133.1 (C(4a')); 132.3, 131.0 (C(5') または C(6') または C(7')); 130.8 (C(8a')); 130.5 (C(8')); 123.7 (C(5') または C(6') または C(7'));117.1 C(2)); 57.7 (C(3')); 51.7 (CO2Me); 40.8 (C(1'')); 24.9 (C(2'')); 14.9, 10.9 (Me-C(1')) C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 290 ([M + H]+), 312 ([M + Na]+), 601 ([2M + Na]+).
【００９８】
実施例31
(S,S,Z)-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸(29)の合成
【化３１】
2008524170.tif 000038
【００９９】
チオラクタム２８（231.2mg, 0.8mmol）をTHF-H2O の１：１混合溶剤（8mL）に溶解させた溶液中へ、LiOH（1.6 mmol）をH2O（1.6mL）に溶解させた溶液を室温下で添加した。この混合物を室温下で一夜撹拌した後、5% HCl を用いて酸性化した（pH = 2）。THFを真空下で除去し、水性相をEtOAc（3×50mL）によって抽出した。有機相を、ブラインを用いて洗浄した後、MgSO4を用いて乾燥させた。溶剤を真空下で除去して得られた粗生成物を、EtOAc/ヘキサンを用いる再結晶化処理に付すことによって酸29を黄色固体として211mg得た（収率：96%）。
【０１００】
化合物２９の物性値は以下の通りである。
m.p.: 193-196℃
[α]D = -600.5（c = 0.5, CH3OH）
IR (KBr) ν: 3449, 3210, 2963, 1674, 1281, 1254, 1219, 776 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.77 (ブロードなs, 1 H, CO2H); 11.03 (d, J = 4.9, 1 NH); 8.39 (dd, J = 7.6, 1 H, H-C(8')); 7.72-7.53 (m, 3 H, H-C (5'), H-C (6'), H-C (7')), 6.39 (s, 1 H, H-C(2)); 5.33 (dd, J = 8.2, 4.9, 1 H, H-C(3')); 1.56-1.46 (m, 1 H, Ha-C (2'')); 1.44-1.38 (m, 1 H, H-C(1')); 1.19-1.06 (m, 1 H, Hb-C (2'')); 0.78 (t, J = 7.5, 3 H, Me-C(1'')); 0.81 (d, J = 6.9, 3 H, H-C(3'')) ppm.
13C-NMR (50 MHz, DMSO-d6) δ: 189.3 (CSNH); 166.6 (CO2H); 147.8 (C(4')); 133.1 (C(4a')); 131.1 (2 C, C(5') または C(6') または C(7')); 130.6 (C(8a')); 130.1 (C(8')); 124.4 (C(5') または C(6') または C(7'));118.8 (C(2)); 55.7 (C(3')); 40.9 (C(1'')); 24.8 (C(2'')); 14.9 (Me-C(1')); 10.9 (C(3'')) ppm.
MS (ES+) m/e: 276 ([M + H]+), 298 ([M + Na]+), 573 ([2M + Na]+).
【０１０１】
実施例32
メチル(S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-アセチルアミノ]-3-メチル-ペンタノイルアミノ}-3-メチル-ペンタノエート(30)の合成
一般的方法Vに従い、酸29及びペプチドCF3CO2- +H-L-Ile-L-Ile-OCH3 を出発原料として使用して得られた粗生成物を、溶離液としてヘキサン/EtOAc（4:1 〜 3:2）を用いるクロマトグラフィーによる精製処理に付すことによって、化合物30を油状物として257mg得た（収率：86%）。
【化３２】
2008524170.tif 000039
【０１０２】
化合物３０の物性値は以下の通りである。
m.p.: 178-181℃
[α]D = -366.0（c = 0.25, CHCl3)
IR (KBr) ν: 3435, 2964, 1739, 1631, 1525, 1212 cm-1.
1H-NMR (300 MHz, (D6)DMSO) δ: 10.96 (d, J = 4.9, 1 H, NH-L-Biq); 8.38-8.28 (m, 3 H NH-l-Ile [1]), NH-L-Ile [2], H-C(8')); 7.65-7.48 (m, 3 H H-C (5'), H-C (6'), H-C (7'); 6.72 (s, 1 H, オレフィン性 H); 5.61-5.56 (m, 1 H, H-C(3')); 4.39 (t, J = 8.1, 1 H, CHα-L-Ile [2]); 4.16 (t, J = 7.1, 1 H, CHα-L-Ile [1]); 3.59 (s, 3 H, CO2Me); 1.86-1.68 (m, 2 H, CHβ-L-Ile [1], CHβ-L-Ile [2]); 1.54-0.98 (m, 7 H, [Me-CH-Et] of L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, CH2-L-Ile [1], CH2-L-Ile [2]); 0.86-0.65 (m, 18 H, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] of L -Biq, [CH-CH3] of L-Ile [1], [CH-CH3] of L -Ile [2], [CH2-CH3] of L -Ile [1] [CH2-CH3] of L -Ile [2]).
13C-NMR (50 MHz, (D6)DMSO) δ: 189.2 (CSNH); 171.7, 171.3 (CO2Me, CONH-L-Ile [2]); 164.5 (=C-CONH); 142.9 (C(4')), 132.8, 130.9, 123.8 (C(5'), C(6'), C(7')); 131.4 (C(8')); 130.6 (C(8a')); 129.4 (C(4a')); 121.5 (オレフィン性CH); 56.5 (CHα-L-Ile [2]); 56.1 (CHα-L-Ile [1]); 55.0 (C(3')); 51.5 (CO2Me); 40.3, 36.8, 35.9 [Me-CH-Et] of L-Biq, CHβ-L-Ile [1], CHβ-L-Ile [2]); 24.9, 24.7, 24.2 ([Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, CH2-L-Ile [1], CH2-L-Ile [2]); 15.3, 15.1, 14.7, 11.1, 10.8 (6 C [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] of L-Biq, [CH-CH3] of L-Ile [1], [CH-CH3] of L-Ile [2], [CH2-CH3] of L -Ile [1], [CH2-CH3] of L -Ile [2]).
MS (ES+) m/e: 516 ([M + H]+), 583 ([M + Na]+), 1031 ([2M + H]+), 1053 ([2M + Na]+).
【０１０３】
実施例３３
酵素活性試験：カルパインの抑制
カルパイン抑制能はIC50値を用いて定量的に評価した。この値は、酵素の触媒活性を半減させるインヒビターの濃度によって定義される。IC50値が小さいほど、インヒビターはより強力である。本発明による一部の化合物のカルパインＩ（生理学的な観点からは最も問題となる酵素である）に対する抑制効果を以下の表１及び図１に示す。
【０１０４】
【表２】
2008524170.tif 000040
【０１０５】
実験は、スペクトロフルオル・テカン社製の93382型分光蛍光計を用いておこなった（励起は485nMでおこない、測定は530nMでおこなった）。市販のカゼイン「BODIPY-FL(登録商標)(モレキュラー・プローブズ社製)を基質として使用し、また、ブタの赤血球から得たカルパインＩ(カルバイオケム社；カタログNo 208712）を酵素として使用した。凍結乾燥した基質は、モレキュラー・プローブズ社製のプロテアーゼ・アッセイキット「EnzChek(登録商標) 緑色蛍光」(レファレンス# E-6638)の成分Ａである。「２０Ｘ消化緩衝液」として知られている成分Ｂは、13mLの200mMトリス-HCl（pH 7.8）及び2mMのナトリウムアジドを含有する。使用した市販のカルパインＩの濃度は、1mLの水溶液（即ち、グリセリンを３０％含有し、20mMのイミダゾール-HC（pH 6.8）、1mMのEDTA、1mMのEGTA及び5mMのβ-メルカプトエタノールを含有する水溶液）中に1mg含有する濃度である。
【０１０６】
i）消化緩衝溶液（消化溶液）の調製
2.5mLの20X消化緩衝液（モレキュラー・プローブズ社製のキットの成分Ｂ）を水で希釈することによって、全容量を50mLとした。
ii）基質溶液（カゼイン溶液）の調製
200μgの凍結乾燥した基質（モレキュラー・プローブズ社製のキットの成分Ａ）を200μLのリン酸塩緩衝食塩水に溶解させた。この溶液をメスフラスコ内へ移した後、消化溶液で希釈することによって、全容量を40mLとした。
iii）カルパイン溶液の調製
20μLの市販のカルパイン溶液を消化溶液で希釈することによって、全容量を200μLとした。
iv）インヒビター溶液の調製
インヒビターはDMSOに溶解させた。各々のインヒビターのアッセイは、10nM〜200μMの範囲における７種の異なる濃度についておこなった。
【０１０７】
酵素活性実験
全てのデータは、蛍光の経時的変化を測定することによって得た。マルチセル装置とエッペンドルフ・マルチチャネルピペットを使用することによって、６４個までの実験における蛍光の変化を測定することが可能であった。このため、対照実験及び異なる濃度のインヒビターを用いる実験は、同一の測定セットにおいておこなった。全ての実験は２回おこなった。
【０１０８】
対照実験
対照実験は、180μLのカゼイン溶液と5μLのカルパイン溶液を混合することによっておこなった。反応は、10μLの50μM CaCl2 水溶液を添加することによって開始させ、次いで、Ca2+ の添加時点（時間 = 0）から250〜300 秒間 蛍光を測定した(測定は２０の反応速度サイクル中におこなった）。蛍光の変化（ΔF）は時間(t)に対して表示した。酵素活性に対すDMSOの影響を調べるため、インヒビターを用いる実験で使用した量のDMSOを添加することによって付加的な対照実験をおこなったところ、上記の対照実験の場合と同様の結果が得られた。
【０１０９】
インヒビターの存在下での酵素活性
180μLのカゼイン溶液、5μLのカルパイン溶液及び5μLの種々の濃度のインヒビター溶液を混合した。反応は、10μLの50μM CaCl2 水溶液を添加することによって開始させ、次いで、Ca2+ の添加時点（時間 = 0）から250〜300 秒間蛍光を測定した(測定は２０の反応速度サイクル中におこなった）。各々の実験において、蛍光の変化（ΔF）を時間(t)に対して表示し、ΔF/t の値を得た。
【０１１０】
IC50値の決定
各々のインヒビターに関して、インヒビターの濃度（ｃ）（c = 0 〜 c = 200μM）に対してΔF/t値を表示した。データは直線関係を示したので、一次式からIC50 値（酵素の活性を半減させるインヒビターの濃度）を決定した。
【０１１１】
略語
以上の説明において使用した略語の意味は以下の通りである。
- CANP: カルシウム活性化中性プロテアーゼ
- DMF: N,N-ジメチルホルムアミド
- DMSO: ジメチルスルホキシド
- EA: 元素分析
- EDTA: エチレンジアミン四酢酸
- EGTA: エチレン-ビス-(オキシエチレンニトリル)四酢酸
- EtOAc: エチルアセテート
- ES: エレクトロスプレー（Electro-spray）
- MS: マススペクトル
- IR: 赤外線
- m.p.: 融点
- NMDA: N-メチル-D-アスパルテート
- THF: テトラヒドロフラン
- tlc: 薄層クロマトグラフィー
- Tris: トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン
1H-NMR: プロトン核磁気共鳴
13C-NMR: 炭素-13 核磁気共鳴
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１】図１は、本発明に含まれる（3-sec-ブチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸の誘導体及び（3-sec-ブチル-1-チオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソキノリン-4-イリデン)-酢酸の誘導体及びこれらのカルパイン I のインヒビターとしての生物学的活性に関する試験結果を示す。
【図１】
2008524170.tif 000043
【国際調査報告】
2008524170.tif 000044
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