(57)【要約】  増殖性疾患または持続的血管形成と関連する疾患を有する患者を処置するための組合せ治療を記載する。該患者はカンプトテシン誘導体ならびに微小管活性剤；アルキル化剤；抗腫瘍代謝拮抗物質；プラチン化合物；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ＶＥＧＦ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤；ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤；インシュリン様増殖因子Ｉ阻害剤；Ｒａｆキナーゼ阻害剤；モノクローナル抗体；プロテアソーム阻害剤；ＨＤＡＣ阻害剤；および電離放射線から選択される１種またはそれ以上の化学療法剤で処置される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）微小管活性剤；アルキル化剤；抗腫瘍代謝拮抗物質；プラチン化合物；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ＶＥＧＦ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤；ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤；インシュリン様増殖因子Ｉ阻害剤；Ｒａｆキナーゼ阻害剤；モノクローナル抗体；プロテアソーム阻害剤；ＨＤＡＣ阻害剤；および電離放射線から選択される１種またはそれ以上の化学療法剤
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法。
【請求項２】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）パクリタキセル；ドセタキセル；エポチロンＢ；テモゾロマイド；５−ＦＵ；ゲムシタビン；オキサリプラチン；シスプラスチン；カルボプラチン；ドキソルビシン；｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミン；エバロリムス；イマチニブ；エルロチニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、およびベルケイドから選択される１種またはそれ以上の化学療法剤
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法。
【請求項３】
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）微小管活性剤；アルキル化剤；抗腫瘍代謝拮抗物質；プラチン化合物；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ＶＥＧＦ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤；ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤；インシュリン様増殖因子Ｉ阻害剤；Ｒａｆキナーゼ阻害剤；モノクローナル抗体；プロテアソーム阻害剤；ＨＤＡＣ阻害剤；および電離放射線から選択される１種またはそれ以上の化学療法剤
を含む、医薬組成物。
【請求項４】
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）パクリタキセル；ドセタキセル；エポチロンＢ；テモゾロマイド；５−ＦＵ；ゲムシタビン；オキサリプラチン；シスプラスチン；カルボプラチン；ドキソルビシン；｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミン；エバロリムス；イマチニブ；エルロチニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、およびベルケイドから選択される１種またはそれ以上の化学療法剤
を含む、医薬組成物。
【請求項５】
増殖性疾患が乳癌、肺癌、食道、胃、小腸、大腸、結腸および直腸癌を含む消化器癌、神経膠腫、肉腫、卵巣癌、骨髄腫、子宮頸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、中皮腫、腎臓癌、尿管、膀胱および尿道癌、白血病；前立腺癌、皮膚癌および黒色腫、過増殖性状態、例えば白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
増殖性疾患が結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺癌、白血病、およびグリア芽腫から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
増殖性疾患の処置のため、パクリタキセル；ドセタキセル；エポチロンＢ；テモゾロマイド；５−ＦＵ；ゲムシタビン；オキサリプラチン；シスプラスチン；カルボプラチン；ドキソルビシン；｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミン；エバロリムス；イマチニブ；エルロチニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、およびベルケイドから選択される１種またはそれ以上の化学療法剤と組合せて使用するための、医薬の製造のための７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンの使用。
【請求項８】
増殖性疾患が結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺癌、白血病、およびグリア芽腫から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）オキサリプラチンの薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が卵巣癌である方法。
【請求項１０】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）ドセタキセル
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌および卵巣癌から選択される方法。
【請求項１１】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）パクリタキセル
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が非小細胞肺癌である方法。
【請求項１２】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）カルボプラチン
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が卵巣癌または非小細胞肺癌から選択される方法。
【請求項１３】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）ドキソルビシン
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が乳癌である方法。
【請求項１４】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）シスプラチン
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が肺癌、結腸腺癌、または卵巣癌である方法。
【請求項１５】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）テモゾロマイド
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患がグリア芽腫である方法。
【請求項１６】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）イマチニブ
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が肺癌、黒色腫、腎細胞腺癌、卵巣腺癌、膵臓類上皮癌腫、骨髄腫、結腸直腸腺癌、子宮頸癌腫、グリア芽腫、または膵臓癌腫である方法。
【請求項１７】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）エルロチニブ
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患がグリア芽腫である方法。
【請求項１８】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）ベバシズマブ
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患がグリア芽腫である方法。
【請求項１９】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用する、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）ベルケイドの薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が肺癌、黒色腫、腎細胞腺癌、卵巣腺癌、膵臓類上皮癌腫、骨髄腫、結腸直腸腺癌、子宮頸癌腫、白血病、または膵臓癌腫である方法。
【請求項２０】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）エポチロンＢ
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が肺癌、前立腺癌および卵巣癌から選択される方法。
【請求項２１】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）エバロリムス
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が肺癌、黒色腫、腎細胞腺癌、卵巣腺癌、腎細胞腺癌、膵臓類上皮癌腫、骨髄腫、結腸直腸腺癌、子宮頸癌腫および膵臓癌腫から選択される方法。
【請求項２２】
増殖性疾患を予防または処置するため、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；および
（ｂ）｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミン
の薬学的に有効量の組合せを投与することを含む、増殖性疾患の予防または処置するための方法であって、該増殖性疾患が肺癌、黒色腫、腎細胞腺癌、卵巣腺癌、腎細胞腺癌、膵臓類上皮癌腫、骨髄腫、結腸直腸腺癌、子宮頸癌腫および膵臓癌腫から選択される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は
（ａ）カンプトテシン誘導体；および
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤
を含む薬剤の組合せで、哺乳類、特にヒトにおける増殖性疾患または持続的血管形成と関連するもしくは持続的血管形成により誘発される疾患を予防するまたは処置する方法に関する。
【０００２】
本発明はさらに、
（ａ）カンプトテシン誘導体；
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤；および
（ｃ）薬学的に許容される担体
を含む医薬組成物に関する。
【０００３】
本発明はさらに、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）カンプトテシン誘導体の医薬製剤；および
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤の医薬製剤
を含む市販用パッケージまたは製品に関する。
【０００４】
組合せパートナー（ａ）および（ｂ）を１つに組み合わせた単位用量形または２つの別々の単位用量形で一緒に、順にまたは別々に投与することができる。単位用量形はまた固定した組合せであり得る。
【背景技術】
【０００５】
発明の背景
カンプトテシンおよびその誘導体は主に、悪性細胞において通常過剰発現している臨床的に有効な薬剤標的であるトポイソメラーゼＩを阻害することにより抗腫瘍活性を示す細胞毒性剤である。カンプトテシンおよびその誘導体は、悪性細胞のアポトーシスおよびプログラム死を引き起こす事象の引き金を引く細胞性酵素トポイソメラーゼＩによるスーパーコイルＤＮＡの巻き戻しを妨害することにより機能する。
【発明の開示】
【０００６】
発明の要旨
今回驚くべきことに他の化学療法剤と組合せて使用するとき、カンプトテシン誘導体はよりいっそう効果的であることを見いだした。効力および安全性の両方に対して相乗的および相加的利点の両方がある。カンプトテシン誘導体と化学療法剤の組合せの治療効果は、組合せた各成分の低用量の安全な範囲をもたらすことができる。
【０００７】
本発明は、
（ａ）カンプトテシン誘導体；および
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤を含む薬剤
の組合せで哺乳類、特にヒトにおける増殖性疾患または持続的血管形成と関連するもしくは持続的血管形成により誘発される疾患を予防するまたは処置する方法を提供する。
【０００８】
本発明はさらに、
（ａ）カンプトテシン誘導体；
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤；および
（ｃ）薬学的に許容される担体
を含む医薬組成物に関する。
【０００９】
本発明はさらに、同時に、共に、別々にまたは連続して使用するための、
（ａ）カンプトテシン誘導体の医薬製剤；および
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤の医薬製剤
を含む市販用パッケージまたは製品に関する。
【００１０】
化学療法剤
“化学療法剤”なる用語は異なる作用メカニズムを有する多数の化学療法剤を包含する広範なものである。カンプトテシン誘導体とこれらのいくつかとの組合せは、癌治療における改良をもたらすことができる。一般に、化学療法剤は作用メカニズムにしたがって分類される。多数の有効な薬剤は様々な腫瘍の発達経路の代謝拮抗物質であるか、または腫瘍細胞のＤＮＡと反応する。
【００１１】
“化学療法剤”なる用語は、とりわけトポイソメラーゼＩ阻害剤またはその誘導体以外の全ての化学療法剤を意味する。それは、限定しないが１種またはそれ以上の下記のものを含む：
ｉ．微小管活性剤；
ｉｉ．アルキル化剤；
ｉｉｉ．抗腫瘍代謝拮抗物質；
ｉｖ．プラチン化合物；
ｖ．トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；
ｖｉ．タンパク質もしくは脂質キナーゼ活性またはタンパク質もしくは脂質ホスファターゼ活性を標的とする／減少させる化合物；
ｖｉｉ．モノクローナル抗体；
ｖｉｉｉ．プロテアソーム阻害剤；
ｉｘ．ＨＤＡＣ阻害剤；および
ｘ．腫瘍細胞損傷法、例えば電離放射線。
【００１２】
本明細書で使用される“微小管活性剤”なる用語は、限定しないが、タキサン類、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル；ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、とりわけ硫酸ビンブラスチン；ビンクリスチン、とりわけ硫酸ビンクリスチンおよびビノレルビン；ディスコデルモライド；コルヒチンおよびエポチロンならびにそれらの誘導体、例えば、エポチロンＢまたはその誘導体を含む、微小管安定化剤、微小管不安定化剤および微小管重合阻害剤に関する。パクリタキセルはＴＡＸＯＬとして；ドセタキセルはＴＡＸＯＴＥＲＥとして；硫酸ビンブラスチンはＶＩＮＢＬＡＳＴＩＮ  Ｒ．Ｐとして；および硫酸ビンクリスチンはＦＡＲＭＩＳＴＩＮとして市販されている。また一般の形のパクリタキセル、ならびに様々な投与形のパクリタキセルを含む。一般の形のパクリタキセルは、限定しないが、塩酸ベタキソロールを含む。様々な投与形のパクリタキセルは、限定しないが、ＡＢＲＡＸＡＮＥとして市販されているアルブミンナノ粒子パクリタキセル；ＯＮＸＯＬ、ＣＹＴＯＴＡＸを含む。ディスコデルモライドは、例えば米国特許第５，０１０，０９９号に記載のとおりに得ることができる。また米国特許第６，１９４，１８１号、ＷＯ  ９８／１０１２１、ＷＯ  ９８／２５９２９、ＷＯ  ９８／０８８４９、ＷＯ  ９９／４３６５３、ＷＯ  ９８／２２４６１およびＷＯ  ００／３１２４７に記載のエポソリン（Epotholine）誘導体を含む。とりわけエポソリンＡおよび／またはＢが好ましい。
【００１３】
本明細書で使用される“アルキル化剤”なる用語は、限定しないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランもしくはニトロソウレア（ＢＣＮＵもしくはＧｌｉａｄｅｌ）、またはテモゾロマイド（ＴＥＭＯＤＡＲ）を含む。シクロホスファミドは例えば商標名ＣＹＣＬＯＳＴＩＮおよびイホスファミドは例えば商標名ＨＯＬＯＸＡＮの下に例えば販売されている形で投与することができる。
【００１４】
“抗腫瘍代謝拮抗物質”なる用語は、限定しないが、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）；カペシタビン；ゲムシタビン；ＤＮＡ脱メチル化剤、例えば５−アザシチジンおよびデシタビン；メトトレキサート；エダトレキサート；ならびに限定しないが、ペメトレキセドのような葉酸アンタゴニストを含む。カペシタビンは例えば商標名ＸＥＬＯＤＡおよびゲムシタビンは例えば商標名ＧＥＭＺＡＲの下に例えば販売されている形で投与することができる。
【００１５】
本明細書で使用される“プラチン化合物”なる用語は、限定しないが、カルボプラチン、シスプラチン、シスプラスチン、オキサリプラチン、サトラプラチンおよびプラチン剤、例えばＺＤ０４７３を含む。カルボプラチンは例えば商標名ＣＡＲＢＯＰＬＡＴおよびオキサリプラチンは例えば商標名ＥＬＯＸＡＴＩＮの下に例えば販売されている形で投与することができる。
【００１６】
本明細書で使用される“トポイソメラーゼＩＩ阻害剤”なる用語は、限定しないが、リポソーム製剤、例えばＣＡＥＬＹＸを含むアントラサイクリン、例えばドキソルビシン；リポソーム製剤、例えばＤＡＵＮＯＳＯＭＥを含むダウノルビシン；エピルビシン；イダルビシンおよびネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）；アントラキノンミトキサントロンおよびロソキサントロン；ならびにポドフィロトキシンエトポシドおよびテニポシドを含む。エトポシドはＥＴＯＰＯＰＨＯＳとして；テニポシドはＶＭ  ２６  ＢＲＩＳＴＯＬとして；ドキソルビシンはＡＤＲＩＢＬＡＳＴＩＮまたはＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮとして；エピルビシンはＦＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮとして；イダルビシンはＺＡＶＥＤＯＳとして；およびミトキサントロンはＮＯＶＡＮＴＲＯＮとして市販されている。
【００１７】
本明細書で使用される“タンパク質もしくは脂質キナーゼ活性；またはタンパク質もしくは脂質ホスファターゼ活性を標的とする／減少させる化合物；またはさらなる抗血管形成化合物”なる用語は、限定しないが、タンパク質チロシンキナーゼおよび／またはセリンおよび／またはスレオニンキナーゼ阻害剤もしくは脂質キナーゼ阻害剤、例えば下記を含む：
【００１８】
ｉ．血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えばＶＥＧＦの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、とりわけＶＥＧＦ受容体を阻害する化合物、例えば、限定しないが、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体；ＢＡＹ  ４３−９００６；ＷＯ  ００／０９４９５に記載のイソコリン（ｉｓｏｌｃｈｏｌｉｎｅ）化合物、例えば（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−９４−ピリジン−４−イルメチル−イソキノリン−１−イル）−アミン；
【００１９】
ｉｉ．血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えばＰＤＧＦ受容体の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、とりわけＰＤＧＦ受容体を阻害する化合物、例えば、Ｎ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ、ＳＵ１０１、ＳＵ６６６８およびＧＦＢ−１１１；
【００２０】
ｉｉｉ．繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物；
【００２１】
ｉｖ．インシュリン様増殖因子受容体１（ＩＧＦ−１Ｒ）の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えばＩＧＦ−ＩＲの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、とりわけＩＧＦ−ＩＲ受容体を阻害する化合物。化合物は、限定しないが、ＷＯ  ０２／０９２５９９に記載の化合物および４−アミノ−５−フェニル−７−シクロブチル−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体のその誘導体を含む；
【００２２】
ｖ．Ｔｒｋ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物；
【００２３】
ｖｉ．Ａｘｌ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物；
【００２４】
ｖｉｉ．ｃ−Ｍｅｔ受容体の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物；
【００２５】
ｖｉｉｉ．Ｒｅｔ受容体チロシンキナーゼの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物；
【００２６】
ｉｘ．Ｋｉｔ／ＳＣＦＲ受容体チロシンキナーゼの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物；
【００２７】
ｘ．Ｃ−Ｋｉｔ受容体チロシンキナーゼ（ＰＤＧＦＲファミリーの一部）の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えばｃ−Ｋｉｔ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、とりわけｃ−Ｋｉｔ受容体、例えばイマチニブを阻害する化合物；
【００２８】
ｘｉ．ｃ−Ａｂｌファミリーのメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えばＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼ、例えばｃ−ＡｂＩファミリーメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物の活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばＰａｒｋｅＤａｖｉｓのイマチニブ、ＰＤ１８０９７０、ＡＧ９５７、ＮＳＣ  ６８０４１０もしくはＰＤ１７３９５５；またはＢＭＳ３５４８２５；
【００２９】
ｘｉｉ．タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）のメンバーのおよびセリン／スレオニンキナーゼのＲａｆファミリーメンバーの、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫのメンバーのおよびＲａｓ／ＭＡＰＫファミリーメンバーの、またはＰＩ（３）キナーゼファミリーメンバーの、またはＰＩ（３）−キナーゼ関連キナーゼファミリーメンバーの、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー（ＣＤＫ）のメンバーの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、とりわけ米国特許第５，０９３，３３０号に記載のそれらのスタウロスポリン誘導体、例えばミドスタウリン；さらなる化合物の例として、例えば、ＵＣＮ−０１；サフィンゴール；ＢＡＹ  ４３−９００６；Ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ  １；Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ；Ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ；ＲＯ  ３１８２２０およびＲＯ  ３２０４３２；ＧＯ  ６９７６；Ｉｓｉｓ  ３５２１；ＬＹ３３３５３１／ＬＹ３７９１９６；イソチノリン（ｉｓｏｃｈｉｎｏｌｉｎｅ）化合物、例えばＷＯ  ００／０９４９５に記載のもの；ＦＴＩｓ；ＰＤ１８４３５２またはＱＡＮ６９７、Ｐ１３Ｋ阻害剤を含む；
【００３０】
ｘｉｉｉ．タンパク質チロシンキナーゼの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えばメシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ）；チルホスチンまたはピリミジルアミノベンズアミドおよびそれらの誘導体。チルホスチンは好ましくは低分子量（Ｍｒ＜１５００）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、とりわけベンジリデンマロニトリルクラスまたはＳ−アリールベンゼンマロニトリルまたは二基質キノリンクラスから選択される化合物、さらにとりわけチルホスチンＡ２３／ＲＧ−５０８１０、ＡＧ  ９９、チルホスチンＡＧ  ２１３、チルホスチンＡＧ  １７４８、チルホスチンＡＧ  ４９０、チルホスチンＢ４４、チルホスチンＢ４４（＋）エナンチオマー、チルホスチンＡＧ  ５５５、ＡＧ  ４９４、チルホスチンＡＧ  ５５６；ＡＧ９５７；およびアダホスチン（ａｄａｐｈｏｓｔｉｎ）（４−｛［（２，５−ジヒドロキシフェニル）メチル］アミノ｝−アダマンチル安息香酸エステル；ＮＳＣ  ６８０４１０、アダホスチン）からなる群から選択されるいずれかの化合物である；
【００３１】
ｘｉｖ．受容体チロシンキナーゼ（ホモ−またはヘテロダイマーとしてのＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４）の上皮細胞増殖因子ファミリーの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、例えば上皮細胞増殖因子受容体ファミリーの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物、とりわけＥＧＦ受容体チロシンキナーゼファミリーのメンバー、例えばＥＧＦ受容体、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を阻害するか、またはＥＧＦまたはＥＧＦ関連リガンドに結合する化合物、タンパク質または抗体、そして、特に一般的におよび具体的にＷＯ  ９７／０２２６６に記載の化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体、例えば実施例３９の化合物、またはＥＰ  ０  ５６４  ４０９、ＷＯ  ９９／０３８５４、ＥＰ  ０５２０７２２、ＥＰ  ０  ５６６  ２２６、ＥＰ  ０  ７８７  ７２２、ＥＰ  ０  ８３７  ０６３、米国特許第５，７４７，４９８号、ＷＯ  ９８／１０７６７、ＷＯ  ９７／３００３４、ＷＯ  ９７／４９６８８、ＷＯ  ９７／３８９８３および、とりわけＷＯ  ９６／３０３４７に記載のもの、例えばＣＰ  ３５８７７４、ＷＯ  ９６／３３９８０で既知の化合物、例えば化合物ＺＤ  １８３９；およびＷＯ  ９５／０３２８３、例えば化合物ＺＭ１０５１８０、例えば、トラスツマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、セツキシマブ、イレッサ、ＯＳＩ  ７７４、ＣＩ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３またはＥ７．６．３、および｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミン、エルロチニブおよびゲフィチニブである。ＡＢＸ−ＥＧＦＲを含む上皮細胞増殖因子受容体に対するヒトモノクローナル抗体であるエルロチニブは販売されている形、例えばＴＡＲＣＥＶＡとして、およびゲフィチニブはイレッサとして、投与することができる；ならびに
【００３２】
ｘｖ．セリン／スレオニンｍＴＯＲキナーゼの活性／機能を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物は、とりわけｍＴＯＲキナーゼファミリーメンバーを標的とする／阻害する化合物、タンパク質または抗体、例えば、ＲＡＤ、ＲＡＤ００１、ＣＣＩ−７７９、ＡＢＴ５７８、ＳＡＲ５４３、ラパマイシンおよびそれらの誘導体／類似体、ＡｒｉａｄのＡＰ２３５７３およびＡＰ２３８４１、エバロリムス（ＣＥＲＴＩＣＡＮ）およびシロリムスである。ＣＥＲＴＩＣＡＮ（エバロリムス、ＲＡＤ）は、Ｔ細胞および血管平滑筋細胞の増殖を予防する試験中の新規増殖シグナル阻害剤である。
【００３３】
本明細書で使用される“モノクローナル抗体”なる用語は、限定しないが、ベバシズマブ、セツキシマブ、トラスツマブ、イブリツモマブチウキセタン、ならびにトシツモマブとヨウ素Ｉ  １３１を含む。ベバシズマブは販売されている形、例えば、ＡＶＡＳＴＩＮとして；セツキシマブはＥＲＢＩＴＵＸとして；トラスツマブはＨＥＲＣＥＰＴＩＮとして；リツキシマブはＭＡＢＴＨＥＲＡとして；イブリツモマブチウキセタンはＺＥＶＵＬＩＮとして；ならびにトシツモマブとヨウ素Ｉ  １３１はＢＥＸＸＡＲとして投与することができる。
【００３４】
本明細書で使用される“プロテアソーム阻害剤”なる用語は、プロテオソームの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物を含む。プロテオソームの活性を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物は、限定しないが、ＰＳ−３４１；ＭＬＮ  ３４１、ボルテゾミブまたはベルケイドを含む。
【００３５】
本明細書で使用される“ＨＤＡＣ阻害剤”なる用語は、ヒストンデアセチラーゼを阻害し、かつ抗増殖性活性を所有する化合物に関する。これは、限定しないが、ＷＯ  ０２／２２５７７に記載の化合物、とりわけＮ−ヒドロキシ−３−［４−［［（２−ヒドロキシエチル）［２−（１Ｈ−インドル−３−イル）エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド；およびＮ−ヒドロキシ−３−［４−［［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル）−エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド；ならびにそれらの薬学的に許容される塩を含む。それはさらに、とりわけヒドロキサム酸サベロイルアニリド（ＳＡＨＡ）；［４−（２−アミノ−フェニルカルバモイル）−ベンジル］−カルバミン酸ピリジン−３−イルメチルエステルおよびそれらの誘導体；酪酸、ピロキサミド、トリコスタチンＡ、オキサムフラチン、アピシジン（ａｐｉｃｉｄｉｎ）、デプシペプチド、デプデシン（ｄｅｐｕｄｅｃｉｎ）およびトラポキシン（ｔｒａｐｏｘｉｎ）を含む。
【００３６】
“腫瘍細胞損傷法”は、例えば電離放射線法を示す。上記および下記に示される“電離放射線”なる用語は電磁波、例えばＸ線およびγ線；または粒子、例えばα、βおよびγ粒子のいずれかで生じる電離放射線を意味する。電離放射線は、限定しないが、放射線治療において提供され、当分野で既知である。Hellman, Cancer, 4th Edition, Vol. 1, Devita et al., Eds., pp. 248-275 (1993)参照のこと。
【００３７】
特許出願または科学文献を引用するそれぞれの場合において、特に特許請求の範囲のそれぞれの化合物および本明細書の実施例の最終産物に関しては、最終産物、医薬製剤および特許請求の範囲の対象物質を出典明示により本明細書に包含させる。同様に本明細書に記載の対応する立体異性体、ならびに対応する結晶変態、例えば、溶媒和物および多形を含む。本明細書に記載の組合せ中で活性成分として使用される化合物は各々、引用文献に記載のとおりに製造および投与できる。
【００３８】
コード番号、一般名または商品名により同定される活性剤の構造は、標準概論“The Merck Index”の現版からまたはデータベース、例えばPatents International、例えばIMS World Publicationsまたは上記もしくは下記の刊行物から得ることができる。それらの対応する内容は出典明示により本明細書に包含させる。
【００３９】
成分（ａ）および（ｂ）の言及はまたいずれかの活性物質の薬学的に許容される塩を含むことを意味すると理解される。成分（ａ）および／または（ｂ）を含む活性物質が、例えば少なくとも１個の塩基性中心を有するとき、それらは酸付加塩を形成できる。対応する酸付加塩はまた、望ましいとき、さらに塩基性中心の存在を有して形成できる。酸基、例えばＣＯＯＨを有する活性物質は、塩基と塩を形成できる。成分（ａ）および／もしくは（ｂ）またはそれらの薬学的に許容される塩を含む活性物質はまた、水和物形で使用され得、または結晶化のための他の溶媒を含み得る。７−ｔ−ブトキシイミノメチル−カンプトテシンはもっとも好ましい組合せパートナー（ａ）である。
【００４０】
本発明で使用されるカンプトテシン誘導体は、米国特許第６，２４２，４５７号（出典明示により本明細書に包含させる）に記載のものを含み、そして下記式（Ｉ）：
【化１】
2008524225.tif 000002
［式中、
Ｒ１は−Ｃ（Ｒ５）＝Ｎ−Ｏ（ｎ）Ｒ４基であり、
ここで
Ｒ４は水素またはＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基またはＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルケニル基またはＣ３−Ｃ１０シクロアルキルもしくはＣ３−Ｃ１０シクロアルキルＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基、またはＣ６−Ｃ１４アリールもしくはＣ６−Ｃ１４アリールＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基、またはヘテロ環式もしくはヘテロシクロＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基であり、該ヘテロ環式基は所望によりＣ１−Ｃ８アルキル基で置換されている窒素原子ならびに／または酸素および／もしくは硫黄からなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含み；該アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリール−アルキル、ヘテロ環式またはヘテロシクロアルキル基は、所望により：ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、フェニル、シアノ、ニトロ、−ＮＲ６Ｒ７（ここでＲ６およびＲ７は、同一または異なって、水素、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキルである）；−ＣＯＯＨ基またはその薬学的に許容されるエステル、または−ＣＯＮＲ８Ｒ９基（ここでＲ８およびＲ９は、同一または異なって、水素、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキルまたはフェニルである）からなる群から選択される１またはそれ以上の基で置換されているか、または
Ｒ４はＣ６−Ｃ１０アロイル基またはＣ６−Ｃ１０アリールスルホニル基であり、所望によりハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルコキシ、フェニル、シアノ、ニトロ、−ＮＲ１０Ｒ１１（ここでＲ１０およびＲ１１は、同一または異なって、水素、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキルである）からなる群から選択される１またはそれ以上の基で置換されているか、または
Ｒ４はポリアミノアルキル基であり；
ｎは１であり；
Ｒ５は水素、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルケニル、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、Ｃ６−Ｃ１４アリールＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキルであり；
Ｒ２およびＲ３は、同一または異なって、水素、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルコキシである。］
の化合物およびそれらのＮ１−オキシド、それらの単一異性体、それらの可能なエナンチオマー、ジアステレオマー異性体および関連する混合物、それらの薬学的に許容される塩およびそれらの活性代謝物を含むが；ただしＲ５、Ｒ２およびＲ３が水素のとき、Ｒ４は水素ではない。
【００４１】
本発明の範囲内で、Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルおよびアセチルならびに例えばイソプロピル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルのようなそれらの可能な異性体を意味する。
【００４２】
Ｃ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルケニル基の例はメチレン、エチリデン、ビニル、アリル、プロパリル、ブチレン、ペンチレンであり、ここで、所望により他の炭素−炭素不飽和の存在下でアルキル鎖の異なる可能な位置において炭素−炭素二重結合が位置し得、それはまた許容される異性性で分岐し得る。
【００４３】
Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロオクチル（ｃｙｃｌｏｃｔｙｌ）および例えば、アダマンチルのような多環状基である。
【００４４】
Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基の例は、シクロプロピルメチル、２−シクロプロピルエチル、１−シクロプロピルエチル、３−シクロプロピルプロピル、２−シクロプロピルプロピル、１−シクロプロピルプロピル、シクロブチルメチル、２−シクロブチルエチル、１−シクロブチルエチル、３−シクロブチルプロピル、２−シクロブチルプロピル、１−シクロブチルプロピル、シクロヘキシルメチル、２−シクロヘキシルエチル、１−シクロヘキシルエチル、３−シクロヘキシルプロピル、２−シクロヘキシルプロピル、１−シクロヘキシルプロピル、５−シクロヘキシルペンチル、３−シクロヘキシルペンチル、３−メチル−２−シクロヘキシルブチル、１−アダマンチルエチル、２−アダマンチルエチルおよびアダマンチルメチルである。
【００４５】
Ｃ６−Ｃ１４アリール、またはＣ６−Ｃ１４アリールＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基の例は、フェニル、１−または２−ナフチル、アントリル、ベンジル、２−フェニルエチル、１−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、２−アントリルプロピル、１−アントリルプロピル、ナフチルメチル、２−ナフチルエチル、１−ナフチルエチル、３−ナフチルプロピル、２−ナフチルプロピル、１−ナフチルプロピル、シクロヘキシルメチル、５−フェニルペンチル、３−フェニルペンチルおよび２−フェニル−３−メチルブチルである。
【００４６】
ヘテロ環式−もしくはヘテロシクロＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基の例は、チエニル、キノリル、ピリジル、Ｎ−メチルピペリジニル、５−テトラゾリル、２−（４，５−ジヒドロオキサゾリル）１，２，４−オキサジアゾリジン−３−イル−５−オン、プリン塩基およびピリミジン塩基、例えば、ウラシルであり、所望により上記一般の定義において示したとおりに置換されていてもよい。
【００４７】
Ｃ６−Ｃ１０アロイル基の例はベンゾイルおよびナフトイルである。
【００４８】
Ｃ６−Ｃ１０アリールスルホニル基、所望によりアルキル基で置換されている例は、トシルおよびベンゼンスルホニルである。ハロゲンとは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を意味する。
【００４９】
置換されている基の例は、ペンタフルオロフェニル、４−フェニルベンジル、２，４−ジフルオロベンジル、４−アミノブチル、４−ヒドロキシブチル、ジメチルアミノエチルおよびｐ−ニトロベンゾイル、ｐ−シアノベンゾイルである。
【００５０】
ポリアミノアルキル基の例は、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨ２
〔式中
ｍおよびｐは２−６の整数であり；
ｑは０−６（０および６を含む）であり；そして
Ｒ１２およびＲ１３はＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキル基である。〕
であり、例えば、Ｎ−（４−アミノブチル）２−アミノエチル、Ｎ−（３−アミノプロピル）−４−アミノブチルおよびＮ−［Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−（４−アミノブチル）］−３−アミノプロピルである。
【００５１】
グリコシル基の例は、６−Ｄ−ガラクトシル、６−Ｄ−グルコシル、Ｄ−ガラクトピラノシルであり、該グリコシル基は所望により適当なケタール基、例えばイソプロピリデンで保護されている。
【００５２】
薬学的に許容される塩の例は、塩基特性を有する窒素原子の場合、薬学的に許容される酸、例えば、塩酸、硫酸および酢酸のような無機および有機両方との塩；または酸基、例えばカルボキシルの場合；薬学的に許容される塩基との塩、例えば、アルカリおよびアルカリ土類水酸化物；水酸化アンモニウム；アミン；ならびにまたヘテロ環式塩基のような無機および有機両方との塩である。
【００５３】
Ｒ１は好ましくは−Ｃ（Ｒ５）＝Ｎ−Ｏ（ｎ）Ｒ４であり、式中、Ｒ４は好ましくはＣ１−Ｃ８直鎖もしくは分岐鎖アルキルであり；そして
Ｒ２およびＲ３は好ましくは水素である。
【００５４】
７−メチルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−メトキシイミノメチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン；
７−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−プロポキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−エトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−イソプロポキシイミノメチルカンプトテシン；
７−（２−メチルブトキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−ｔ−ブトキシイミノメチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン；
７−ｔ−ブトキシイミノメチル−１０−メトキシカンプトテシン；
７−（４−ヒドロキシブトキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−トリフェニルメトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−カルボキシメトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−（２−アミノ）エトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−アリルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−シクロヘキシルオキシイミノエチルカンプトテシン；
７−シクロヘキシルメトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−シクロオクチルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−シクロオクチルメトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−ベンジルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−［（１−ベンジルオキシイミノ）−２−フェニルエチル］カンプトテシン；
７−（１−ベンジルオキシイミノ）エチルカンプトテシン；
７−フェノキシイミノメチルカンプトテシン；
７−（１−ｔ−ブトキシイミノ）エチルカンプトテシン；
７−ｐ−ニトロベンジルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−ｐ−メチルベンジルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−ペンタフルオロベンジルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−ｐ−フェニルベンジルオキシイミノメチルカンプトテシン；
７−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エトキシ］イミノメチルカンプトテシン；
７−（４−ｔ−ブチルベンジルオキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−（１−アダマンチルオキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−（１−アダマンチルメトキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−（２−ナフチルオキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−（９−アントリルメトキシ）イミノメチルカンプトテシン；
７−オキシラニルメトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−（６−ウラシル）メトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−［２−（１−ウラシル）エトキシ］イミノメチルカンプトテシン；
７−（４−ピリジル）メトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−（２−チエニル）メトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−［（Ｎ−メチル）−４−ピペリジニル］メトキシイミノメチルカンプトテシン；
７−［２−（４−モルホリニル(morpholininyl)］エトキシ］イミノメチルカンプトテシン；
７−（ベンゾイルオキシイミノメチル）カンプトテシン；
７−［（１−ヒドロキシイミノ）−２−フェニルエチル）カンプトテシン；
７−ｔｅｒｔ−ブチルオキシイミノメチルカンプトテシン−Ｎ−オキシド；および
７−メトキシイミノメチルカンプトテシン−Ｎ−オキシドからなる群から選択される化合物がより好ましい。
【００５５】
本発明のより好ましい態様において、式（Ｉ）のカンプトテシン誘導体は下記の構造を有する。
【化２】
2008524225.tif 000003
【００５６】
式（Ｉ）のカンプトテシン誘導体およびその製造法は、米国特許第６，２４２，４５７号に記載されている（その全体を本明細書に包含させる）。
【００５７】
組合せ
したがって、第１の局面において、本発明は：
（ａ）好ましくは式（Ｉ）のカンプトテシン誘導体；および
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤
の薬学的に有効量の組合せを同時にまたは連続して患者に処置することを含む、哺乳類、好ましくはヒト患者における増殖性疾患または持続的血管形成により誘発される疾患の処置または予防するための方法に関する。
【００５８】
他の局面において、本発明は：
（ａ）好ましくは式（Ｉ）のカンプトテシン誘導体；および
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤
の組合せを含む医薬組成物に関する。
【００５９】
さらなる局面において、本発明は：
（ａ）式（Ｉ）のカンプトテシン誘導体；および
（ｂ）１種またはそれ以上の化学療法剤と
薬学的に許容される担体を一緒に含む医薬製剤を提供する。
【００６０】
好ましい態様において、本発明は：
（ａ）式（Ｉ）のカンプトテシン誘導体；および
（ｂ）微小管活性剤；アルキル化剤；抗腫瘍代謝拮抗物質；プラチン化合物；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ＶＥＧＦ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤；ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤；インシュリン様増殖因子Ｉ阻害剤；Ｒａｆキナーゼ阻害剤；モノクローナル抗体；プロテアソーム阻害剤；ＨＤＡＣ阻害剤；および電離放射線から選択される１種またはそれ以上の化学療法剤
を含む医薬製剤を提供する。
【００６１】
他の好ましい態様において、本発明は：
（ａ）式（Ｉ）のカンプトテシン誘導体；および
（ｂ）パクリタキセル；ドセタキセル；エポチロンＢ；テモゾロマイド；５−ＦＵ；ゲムシタビン；オキサリプラチン；シスプラスチン；カルボプラチン；ドキソルビシン；｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミン；エバロリムス；イマチニブ；エルロチニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、およびベルケイドから選択される１種またはそれ以上の化学療法剤
を含む医薬製剤を提供する。
【００６２】
すべて上記または定義されている、成分（ａ）および（ｂ）の組合せ、これら２種の成分を投与することを含む温血動物を処置する方法、同時に、個別にもしくは連続して使用するこれら２種の成分を含む医薬組成物、増殖性疾患の進行の遅延もしくは処置のための、またはこれらの目的のための医薬製剤の製造のための組合せの使用またはこのような成分（ａ）および（ｂ）の組合せを含む市販品はまた、以下「本発明の組合せ」（したがって、この語は、必要に応じてこの語に置き換えることができるこれらの態様各々を意味する）と言及される。
【００６３】
同時の投与は、例えば２種またはそれ以上の活性成分を有する１つの固定した組合せの形を取るか、または独立して製剤された２種またはそれ以上の活性成分を同時に投与することにより行い得る。連続した使用（投与）は、好ましくは該組合せが独立して投与される単一の化合物よりも有効性を示す（とりわけ相乗効果を示す）ように、好ましくはある時点で組合せの１種（またはそれ以上）の成分を投与し、異なる時点で、すなわち時間的にずれた方法で他の成分を投与することを意味する。別々に使用（投与）は、好ましくは互いに独立した異なる時点での組合せの成分の投与を意味する。
【００６４】
２種またはそれ以上の組合せの連続した、別々のおよび同時の投与はまた、好ましくは組合せ成分薬剤が、組合せ成分薬剤がそれらの治療効果に相互作用がない大きな時間間隔で独立して使用されるときに見られる効果を超える共同の治療効果を示すことが可能であり、相乗効果がとりわけ好ましい。
【００６５】
本明細書で使用される“進行の遅延”なる用語は、処置すべき疾患の最初のまたはその後の徴候の；または再発の前段階または初期にある患者への組合せの投与を意味し、ここで、該患者は、例えば、対応する疾患の前形態であることが診断されているか；または、該患者は、例えば医学的処置または事故に起因する状態にあって対応する疾患を発症しそうな状態にある。
【００６６】
“共同で治療活性”または“共同の治療効果”は、化合物を、好ましくは、処置される温血動物、とりわけヒトにおいて（好ましくは相乗的な）相互作用（共同の治療効果）がまだ示される時間間隔で別々に（時間的にずれた方法で、とりわけ順番特異的方法で）投与し得ることを意味する。
【００６７】
“薬学的に有効”は、好ましくは増殖性疾患の進行に対して、治療的にまたは広い意味においてまた予防的に有効である量に関する。
【００６８】
本明細書で使用される“市販用パッケージ”または“製品”なる用語は、カンプトテシン誘導体である成分（ａ）、および１種またはそれ以上の上記定義の化学療法剤を含む（ｂ）は、独立してまたは区別された量の成分（ａ）および（ｂ）で別々に固定された組合せの使用により、すなわち同時にまたは異なる時点で投与できる点で、とりわけ“複数パーツのキット”と定義する。さらに、これらの用語は、活性成分として成分（ａ）および（ｂ）を、増殖性疾患の進行の遅延または処置における、それらの同時に、連続して（時間的にずれて、優先的には時間特異的順序で）または（好ましくはないが）別々に使用するための指示書と一緒に含む（とりわけ組み合わさっている）市販用パッケージを含む。次いで複数パーツのキットのパーツは、例えば、複数パーツのキットのいずれかのパーツと異なる時点でおよび等しいまたは異なる時間間隔で同時にまたは時間的にずれて投与できる。より好ましくは、標準方法にしたがって決定できるように、時間間隔はパーツの組合せ使用において処置される疾患に対する効果が組合せパートナー（ａ）および（ｂ）のいずれか１種のみの使用により得られる効果よりも大きいように選択される。組合せ製剤で投与すべき組合せパートナー（ａ）の組合せパートナー（ｂ）に対する全量の比は、例えば、処置される患者亜母集団の要求または個々の患者の要求(この異なる要求は患者の特定の疾患、年齢、性別、体重などによる)に対処するため変化し得る。好ましくは、少なくとも１種の有益な効果、例えば、組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の効果の相互の増強、特に相加を超える効果があり（これは、したがって組合せなしで個々の薬剤のみでの処置の場合に許容されるよりも、組合せた薬剤それぞれの低用量を成し遂げられる）、さらなる有利な効果、例えば、より少ない副作用または組合せパートナー（成分）（ａ）および（ｂ）の一方または両方の非有効用量での組合せ治療効果、および非常に好ましくは組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の強力な相乗効果を生じる。
【００６９】
成分（ａ）および（ｂ）の組合せならびに市販用パッケージの使用の両方の場合において、同時の、連続したおよび別々の使用の任意の組合せがまた可能であり、これは、成分（ａ）および（ｂ）をある時点で同時に投与し、続いて後の時点で宿主への毒性が低い一方の成分のみを慢性的に、例えば、毎日投与で３−４週間以上投与し、続いて、さらにその後の時点で他方の成分または両方の成分の組合せのいずれかを投与すること（最適な抗腫瘍効果のための連続的薬剤組合せ処置コース）などを意味する。
【００７０】
「本発明の組合せ」はまた、他の処置、例えば、外科的介入、温熱治療および／または照射治療と組み合わせて適用できる。
【００７１】
本発明の医薬組成物は、慣用の方法により製造でき、治療有効量のカンプトテシン誘導体と少なくとも１種の化学療法剤のみまたは１種またはそれ以上の薬学的に許容される担体、とりわけ経腸投与または非経腸投与に適しているものと組合せて含む、ヒトを含む哺乳類への経腸投与、例えば経口投与または直腸投与、および非経腸投与に適当なものである。
【００７２】
医薬組成物は、約０．００００２％から約１００％、とりわけ例えば、直ぐに使用できる注入希釈物の場合、０．０００１−０．０２％、または、例えば注射または注入濃縮物またはとりわけ非経腸製剤の場合、約０．１％から約９５％、好ましくは約１％から約９０％、より好ましくは約２０％から約６０％の活性成分（それぞれの場合において重量に対する重量）からなる。本発明の医薬組成物は、例えばアンプル剤、バイアル、糖衣錠、錠剤、輸液バッグまたはカプセル形のような、例えば単位用量形であり得る。
【００７３】
本発明の製剤において使用される各組合せパートナーの有効量は、使用される特定の化合物または医薬組成物、投与経路、処置される状態および処置される状態の重症度に依存して変化し得る。通常の医師、臨床医または獣医は容易に状態の進行を予防する、処置するまたは阻害するために必要な各活性成分の有効量を決定できる。
【００７４】
化学療法剤がドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロンおよびそれらの誘導体、テモゾロマイド、５−ＦＵ；ゲムシタビン、オキサリプラチン、カルボプラチン、７Ｈ−ピロール−［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体、イソチノリン化合物、ＲＡＤ００１、ＧＬＥＥＶＥＣ、エルロチニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ベルケイド、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［（２−ヒドロキシ−エチル）［２−（１Ｈ−インドル−３−イル）エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミドおよび４−アミノ−５−フェニル−７−シクロブチル−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、それらの誘導体、薬学的に許容される塩または溶媒和物；ならびにそれらの薬学的に許容されるプロドラッグエステルからなる群から選択され；処置される患者がヒトであるとき、例えば５−ＦＵの適当な用量は１００−１５００ｍｇ／日、例えば２００−１０００ｍｇ／日、例えば２００、４００、５００、６００、８００、９００または１０００ｍｇ／日の範囲の適当な用量で、１日に１回または２回で投与される。５−ＦＵは約５０−１０００ｍｇ／ｍ２／日で変化する投与範囲、例えば５００ｍｇ／ｍ２／日でヒトに投与され得る。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤の中で、ドキソルビシンは約１０−１００ｍｇ／ｍ２／日で変化する投与範囲、例えば２５または７５ｍｇ／ｍ２／日で、例えば単回投与でヒトに投与され得る。パクリタキセルは約５０−３００ｍｇ／ｍ２／日で変化する投与範囲でヒトに投与され得る。ドセタキセルは約２５−１００ｍｇ／ｍ２／日で変化する投与範囲でヒトに投与され得る。カルボプラチンは約４週間ごとに約２００−４００ｍｇ／ｍ２で変化する投与範囲でヒトに投与され得る。オキサリプラチンは２週間ごとに約５０−８５ｍｇ／ｍ２で変化する投与範囲でヒトに投与され得る。
【００７５】
経腸または非経腸投与用の組合せ治療のための医薬製剤は、例えば単位用量形のもの、例えば糖衣錠剤、カプセルまたは坐剤；およびさらにアンプル剤である。他に特に示さない限り、これらの製剤は慣用の方法、例えば慣用の混合、造粒、糖衣、溶解または凍結乾燥の方法により製造される。必要な有効量が複数の投与単位の投与により達することができるため、各投与形の個々の用量を含む組合せパートナーの単位含有量は、有効量をそれ自身で構成する必要はないことは理解されよう。当業者は組合せ成分の適当な薬学的に有効量を測定することができる。
【００７６】
好ましくは、該化合物またはそれらの薬学的に許容される塩は、錠剤、カプセルもしくはシロップ形の経口医薬製剤として；または適当なとき非経腸注射液として投与される。
【００７７】
経口投与用の組成物の製造において、薬学的に許容される媒体は、例えば水、グリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤または着色剤を使用され得る。薬学的に許容される担体は、デンプン、糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤および崩壊剤を含む。
【００７８】
活性成分の溶液、およびまた懸濁液、とりわけ等張水溶液または懸濁液は、活性成分の非経腸投与のために有用であり、例えば、活性成分単独または薬学的に許容される担体、例えばマンニトールを一緒に含む凍結乾燥組成物の場合、このような溶液または懸濁液を使用する前に調製することが可能である。該医薬組成物は滅菌され得、そして／または賦形剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節するための塩および／またはバッファーを含み得、それ自体既知の方法、例えば慣用の溶解法または凍結乾燥法により製造される。溶液または懸濁液は、粘性増加物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンを含み得る。油中の懸濁液は注射目的のため油成分として、慣用の植物油、合成油または半合成油を含む。
【００７９】
等張剤は、当分野で既知のいずれかのもの、例えばマンニトール、デキストロース、グルコースおよび塩化ナトリウムから選択され得る。注入製剤は水性媒体で希釈され得る。希釈剤として使用される水性媒体の量は注入溶液中の活性成分の所望の濃度にしたがって選択される。注入溶液は、静脈内に投与される製剤中に一般に使用される他の賦形剤、例えば抗酸化剤を含み得る。
【００８０】
本発明はさらに、“組合せ製剤”に関し、これは、本明細書で使用されるとき、上記定義のとおりの組合せパートナー（ａ）および（ｂ）が独立して、または、組合せパートナー（ａ）および（ｂ）の区別された量で固定された組合せの使用により、すなわち、同時にまたは異なる時点で別々に投与することができる点で、とりわけ“複数パーツのキット”を定義する。複数パーツのキットのパーツは、例えば、同時にまたは時間的にずれて、すなわち異なる時点でおよび複数パーツのキットのいずれかのパーツから等しいまたは異なる時間間隔で投与することができる。組合せ製剤で投与すべき組合せパートナー（ａ）の全量の組合せパートナー（ｂ）の全量に対する比は、例えば、患者が経験するなんらかの副作用の重症度に基づいて、処置される患者亜母集団の要求または個々の患者の要求に対処するために変化することができる。
【００８１】
本発明は、とりわけ
（ａ）カンプトテシン誘導体の１またはそれ以上の単位用量形；および
（ｂ）化学療法剤の１またはそれ以上の単位用量形
を含む組合せ製剤に関する。
【００８２】
処置される疾患
本発明の組合せは、増殖性疾患または持続的血管形成と関連するもしくは持続的血管形成により誘発される疾患を処置するために有用である。
【００８３】
増殖性疾患は主に腫瘍疾患（または癌）（および／またはなんらかの転移）である。本発明の組成物は、特に乳癌；肺癌、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）；消化器癌、例えば食道、胃、小腸、大腸、直腸および結腸癌；神経膠腫、例えばグリア芽腫；肉腫、例えば骨、軟骨、軟組織、筋肉、血管およびリンパ管関連肉腫；卵巣癌；骨髄腫；子宮頸癌；子宮内膜癌；頭頸部癌；中皮腫；腎臓癌；子宮癌；膀胱癌および尿道癌；白血病；前立腺癌；皮膚癌；ならびに黒色腫である腫瘍を処置するために有用である。特に、本発明の組成物は、特に下記の処置のために有用である：
【００８４】
ｉ．乳房腫瘍；肺腫瘍、例えば非小細胞肺腫瘍、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）；消化器腫瘍、例えば結腸直腸腫瘍；または尿生殖器腫瘍、例えば前立腺腫瘍；卵巣癌；神経膠腫、例えばグリア芽腫；
【００８５】
ｉｉ．他の化学療法剤での処置で難治性ある増殖性疾患；または
【００８６】
ｉｉｉ．多剤耐性のため他の化学療法剤での処置で難治性ある腫瘍。
【００８７】
本発明の広範な意味において、増殖性疾患はさらに過増殖性状態、例えば白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫であり得る。
【００８８】
本発明の組合せはまた、持続的血管形成により誘発される疾患、例えばカポジ肉腫、白血病または関節炎を予防または処置するために使用できる。
【００８９】
腫瘍、腫瘍疾患、癌腫または癌が記載されているとき、腫瘍および／または転移の位置がどこであれ、原発臓器もしくは組織におけるおよび／またはいずれかの他の場所における転移が代替的にまたはそれらに加えて包含される。
【００９０】
該組成物は正常細胞よりも急速に増殖している細胞、特にヒト癌細胞、例えば癌性腫瘍に選択的に毒性であるかまたはより高い毒性であり、該化合物は著しい抗増殖性効果を有し、分化、例えば細胞周期停止およびアポトーシスを促進する。
【００９１】
本発明は、本発明の化合物、組成物および組合せ、ならびにそれらの有用性の詳細な下記実施例を参照してさらに定義される。物質および方法両方の多くの修飾が、本発明の目的および関心から逸脱しないで実施できることは、当業者には明らかである。実施例は上記で定義のまたは特許請求の範囲の本発明の範囲を限定することを意図しない。
【実施例】
【００９２】
実施例１：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとオキサリプラチンの組合せ
インビボにおける実験手順
試験システム：腫瘍モデルのためメスＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスを使用した。
動物の数：１７６匹（各腫瘍モデルについて８８匹）。
Ａ２７８０腫瘍モデル：ヒト卵巣癌腫細胞（２×１０６）をメスマウスの右脇腹にｓ．ｃ．移植し、７−８匹マウス／群を腫瘍注射３日後、下記薬剤で処置する。
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、３−７日目）
３．オキサリプラチンを７ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび４．７ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ４ｄ×２、３日目、７日目）
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋オキサリプラチン：０．２８＋７、０．２８＋４．７、０．１９＋７、０．１９＋４．７
５．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ×２ｗ、３−７日目、１０−１４日目）
６．オキサリプラチンを７ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ７ｄ×２、３日目、１０日目）
７．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋オキサリプラチンを０．１９＋７
該薬剤は７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンの１時間前に投与される。
【００９３】
データ分析
すべての生データは登録番号と組合せた適当な形で記録し、保存し、コンピューターシステムにより処理する。式ＴＶ（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２を使用し、ここで幅および長さはそれぞれ各腫瘍の最も短いおよび最も長い直径である。ＬＣＫ（ｌｏｇ１０細胞死（cell kill））は下記式：（Ｔ−Ｃ）／３．３２×ＤＴを使用して計算し、ここでＴ−Ｃは処置された腫瘍（Ｔ）および対照の腫瘍（Ｃ）各々が同定される体積に到達するまでに必要な平均時間（日）であり、ＤＴは対照腫瘍の倍加時間である。ＣＲは処置終了後少なくとも１０日間続く腫瘍の消失と定義する。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと種々の薬剤の組合せの効果はRomanelli et al. (1998)の方法にしたがって評価される。１（相加的効果）またはそれ以下のＲ指標は相乗効果がないことを示す。相乗効果は１よりも大きいＲの任意の値と定義する。Ｒは期待されるおよび観察されるＴ／Ｃ％値から計算した。
【００９４】
Ａ２７８０卵巣癌腫：０．２８ｍｇ／ｋｇのＭＴＤで７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンは、腫瘍容積阻害（ＴＶＩ＝１００％）、ＣＲ＝８／８およびＬＣＫ＞２の点から強い抗腫瘍活性を示す。同じ腫瘍において７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとオキサリプラチンの組合せは、単一薬剤としての７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンに匹敵する活性を与えるが、６０日目に完全な応答者が幾分存在した。
【００９５】
Ａ２７８０卵巣癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とオキサリプラチン［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表１】
2008524225.tif 000004
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＣＲ＝最後の処置後の完全応答。５ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝２．１日。＋６０日目で、下記マウスは腫瘍病巣がなかった：４．７＋０．１９（１／８）、７＋０．１９（１／８）。
【００９６】
実施例２：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとドセタキセルの組合せ
インビボにおける実験手順
試験システム：腫瘍モデルのためメスＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスを使用する。
動物の数：１７６匹（各腫瘍モデルについて８８匹）。
ＭＣＦ−７ヒト乳房癌腫エストロゲン依存細胞（５×１０６）をあらかじめ１７β−エストラジオールの持続放出ペレット（０．７２ｍｇ／ペレット）を移植したメスマウスの右脇腹に移植する。腫瘍細胞接種１日前にペレットを肩甲中領域に置く。８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後６日間処置する：
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、３−７日目）。
３．ドセタキセルを２０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび１３．３ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ３−４ｄ×２、３日目、７日目）。
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋ドセタキセル：０．２８＋２０、０．２８＋１３．３、０．１９＋２０、０．１９＋１３．３。
【００９７】
Ａ２７８０／ＤＤＰヒトプラチン卵巣癌腫細胞（２×１０６）をメスマウスの右脇腹に移植する。８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後３日間処置する。
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、３−７日目）
３．ドセタキセルを２０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび１３．３ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ４ｄ×２、３日目、７日目）
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋ドセタキセル：０．２８＋２０、０．２８＋１３．３、０．１９＋２０、０．１９＋１３．３。
【００９８】
ＮＣＩ−Ｈ４６０ヒト非小細胞肺癌腫細胞（３×１０６）をメスマウスの右脇腹に移植する。８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後３日間処置する：
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、３−７日目）
３．ドセタキセルを２０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび１３．３ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ４ｄ×２、３日目、７日目）
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋ドセタキセル：０．２８＋２０、０．２８＋１３．３、０．１９＋２０、０．１９＋１３．３。
【００９９】
７匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後３日間処置する：
１．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ×２ｗ、３−７日目、１０−１４日目）
２．ドセタキセルを２０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ７ｄ×２、３日目、１０日目）。
【０１００】
ＤＵ１４５ヒト前立腺癌腫細胞（３×１０６）をオスマウスの右脇腹にｓ．ｃ．移植する。８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後１４日間処置する：
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２５ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、１４−１８日目）
３．ドセタキセルを２０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび１３．３ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ４ｄ×２、１４−１８日目）
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋ドセタキセル：０．１９＋１３．３、０．２５＋１３．３。
【０１０１】
８匹マウス／群をまた下記薬剤で腫瘍注射後１４日間処置する：
１．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．１７ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ×３ｗ、１４−１８日目、２１−２５日目、２８−３２日目）
２．ドセタキセルを２０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ７ｄ×３、１４目、２１目、２８日目）
３．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋ドセタキセル：０．１７＋２０。
【０１０２】
データ分析
すべての生データは登録番号と組合せた適当な形で記録し、保存し、コンピューターシステムにより処理する。式ＴＶ（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２を使用し、ここで幅および長さはそれぞれ各腫瘍の最も短いおよび最も長い直径である。ＬＣＫ（ｌｏｇ１０細胞死）は下記式：（Ｔ−Ｃ）／３．３２×ＤＴを使用して計算され、ここでＴ−Ｃは処置された腫瘍（Ｔ）および対照の腫瘍（Ｃ）各々が同定される体積に到達するまでに必要な平均時間（日）であり、ＤＴは対照腫瘍の倍加時間である。ＣＲは処置終了後少なくとも１０日間続く腫瘍の消失と定義する。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと種々の薬剤の組合せの効果はRomanelli et al. (1998) Cancer Chemother. Pharmacol. 41, 385-390の方法にしたがって評価される。１（相加的効果）またはそれ以下のＲ指標は相乗効果がないことを示す。相乗効果は１よりも大きいいずれかのＲの値と定義する。Ｒは期待されるおよび観察されるＴ／Ｃ％値から計算した。
【０１０３】
ＭＣＦ−７エストロゲン依存乳癌腫：０．２８ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤ）でスケジュールｑｄ×５にしたがってｐ．ｏ．送達される７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンは最後の処置後３２日目、腫瘍病巣なしの１から８匹のマウスで強い抗腫瘍活性（ＴＶＩ＝７０％）を示す。同じ腫瘍モデルにおいて、２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．ｑ４ｄ×２のＭＴＤでドセタキセルは、７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンに匹敵する抗腫瘍活性（ＴＶＩ＝７３％）およびＣＲ＝１／８を示す。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンがドセタキセルと、両方ともそれらのＭＴＤで組合せたとき強い毒性を観察するが（７／８のマウスが死亡）、それらの最適より少ない用量（０．１９＋１３．３ｍｇ／ｋｇ）で、腫瘍容積阻害および完全応答の数の増加の点から相乗的相互作用（Ｒ＝９．５）が見られた。
【０１０４】
ＭＣＦ−７ヒト乳癌に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋６）とドセタキセル［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ３−４ｄ×２、＋６）の組合せの抗腫瘍活性
【表２】
2008524225.tif 000005
腫瘍注射６日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。５ＣＲ＝完全応答。ＤＴ＝１８．９日間。Ｒ＝７．５（０．２８＋１３．３）；Ｒ＝９．５（０．１９＋１３．３）；Ｒ＝１．３（０．１９＋２０）。
【０１０５】
Ａ２７８０／ＤＤＰプラチン耐性卵巣癌腫：ほぼ最大許容用量の０．２８ｍｇ／ｋｇ（ｑｄ×５／ｗ）で７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンはわずかに効果的（ＴＶＩ＝４６％）である。ＭＴＤでドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２）は７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンの効果に匹敵する抗腫瘍効果を示す。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとドセタキセルの組合せ効果はこの腫瘍モデルにおいて相加的である。
【０１０６】
Ａ２７８０／ＤＤＰプラチン耐性卵巣癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とドセタキセル［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表３】
2008524225.tif 000006
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝１．７日間。Ｒ＝１．０６（１３．３＋０．１９）；０．４８（２０＋０．１９）；１．０９（１３．３＋０．２８）；０．８８（２０＋０．２８）。
【０１０７】
ＮＣＩ−Ｈ４６０  ＮＳＣＬＣ：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（０．２８ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑｄ×５）はドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．ｑ４ｄ×２）（ＴＶＩ＝６３％、８匹中１匹のマウスが最後の処置１０日後完全に応答する）と比較して強い抗腫瘍効果（ＴＶＩ＝９４％）を示す。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとドセタキセルの相互作用は投与レジメンに依存して相加的または相乗的である。
【０１０８】
ＮＣＩ−Ｈ４６０非小細胞肺癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とドセタキセル［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表４】
2008524225.tif 000007
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＣＲ＝最後の処置後の完全応答。５ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝２．９日。Ｒ＝１．５（１３．３＋０．１９）；１．３（２０＋０．１９）；１．１５（１３．３＋０．２８）；０．４４（２０＋０．２８）。
【０１０９】
ＤＵ１４５前立腺癌腫：ほぼ最大許容用量の０．２５ｍｇ／ｋｇ（ｑｄ×５／ｗ）で７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンは、２０ｍｇ／ｋｇ、ｑ４ｄ×２でｉ．ｐ．送達したドセタキセルのＭＴＤで見いだされた活性と匹敵する活性を示す（ＴＶＩが５３％であった）。ドセタキセルと７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（１３．３および０．１９ｍｇ／ｋｇ）の最適より少ない用量の組合せは相乗的相互作用を生じる。０．１７ｍｇ／ｋｇの最適より少ない用量で７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを２０ｍｇ／ｋｇでドセタキセルと組合せて３週間、ｉ．ｐ．投与するとき（ｑ７ｄ×３）、それは完全応答（３／８）およびＬＣＫの増加の点から腫瘍増殖における相乗効果を生じる。
【０１１０】
ＤＵ１４５前立腺癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄｘ５／ｗ、＋１４）とドセタキセル［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ４ｄｘ２、＋１４）の組合せの抗腫瘍活性
【表５】
2008524225.tif 000008
腫瘍注射１４日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＣＲ＝最後の処置後の完全応答。５ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝１０．７日間。Ｒ＝１．９２（１３．３＋０．１９）；１．０６（１３．３＋０．２５）。
【０１１１】
実施例３：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとパクリタキセルの組合せ
インビボにおける実験手順
試験システム：腫瘍モデルのためメスＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスを使用した。
動物の数：１７６匹（各腫瘍モデルについて８８匹）。
ＭＣＦ−７ヒト乳房癌腫エストロゲン依存細胞（５×１０６）をあらかじめ１７β−エストラジオールの持続放出ペレット（０．７２ｍｇ／ペレット）を移植したメスマウスの右脇腹に移植する。腫瘍細胞接種１日前にペレットを肩甲中領域に置く。８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後６日間処置する：
インビトロ細胞培養からのＮＣＩ−Ｈ４６０ヒト肺癌腫を３×１０６細胞／１００μｌ／マウスでＣＤ１ヌードマウスの右脇腹にｓ．ｃ．注射する。マウスを腫瘍注射３日、１０日、１７日後、３回パクリタキセルの静脈内投与で処理する。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを腫瘍移植３日後に開始して経口経路で３サイクル（ｑｄ×５／ｗ）投与する。マウスの他の群において、７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを同じスケジュールを使用してパクリタキセルと組み合わせてｐ．ｏ．投与する。ＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍モデルにおける処置を各８匹のマウスの下記群において行う：
１．ビヒクル
２．パクリタキセル（３日目、１０日目、１７日目）を５０ｍｇ／１５ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｖ．
３．パクリタキセル（３日目、１０日目、１７日目）を３３．３ｍｇ／１５ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｖ．
４．パクリタキセル（３日目、１０日目、１７日目）を２５ｍｇ／１５ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｖ．
５．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２５ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（３−７日目）、（１０−１４日目）、（１７−２１日目）
６．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．１２５ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（３−７日目）、（１０−１４日目）、（１７−２１日目）
７．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．０８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（３−７日目）、（１０−１４日目）、（１７−２１日目）
８．パクリタキセル＋７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（３３．３＋０．１２５）
９．パクリタキセル＋７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（３３．３＋０．０８）
１０．パクリタキセル＋７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（２５＋０．１２５）
１１．パクリタキセル＋７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（２５＋０．０８）。
【０１１２】
ヒト異種移植片における薬剤の抗腫瘍活性を評価するため、腫瘍容積をノギスで週二回腫瘍直径を測定することにより評価する。式ＴＶ（ｍｍ３）＝［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２を使用し、ここで幅および長さはそれぞれ各腫瘍の最も短いおよび最も長い直径である。マウスの腫瘍が約２ｇの容積に達したとき、動物を頸椎脱臼により殺す。
【０１１３】
データ分析
すべての生データは登録番号と組合せた適当な形で記録し、保存し、コンピューターシステムにより処理する。式ＴＶ（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２を使用し、ここで幅および長さはそれぞれ各腫瘍の最も短いおよび最も長い直径である。ＬＣＫ（ｌｏｇ１０細胞死）は下記式：（Ｔ−Ｃ）／３．３２×ＤＴを使用して計算し、ここでＴ−Ｃは処置された腫瘍（Ｔ）および対照の腫瘍（Ｃ）各々が同定される体積に到達するまでに必要な平均時間（日）であり、ＤＴは対照腫瘍の倍加時間である。ＣＲは処置終了後少なくとも１０日間続く腫瘍の消失と定義する。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと異なる薬剤の組合せの効果はRomanelli et al. (1998)の方法にしたがって評価される。１（相加的効果）またはそれ以下のＲ指標は相乗効果がないことを示す。相乗効果は１よりも大きいいずれかのＲの値と定義する。Ｒは期待されるおよび観察されるＴ／Ｃ％値から計算した。
【０１１４】
ＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍モデル：許容用量のパクリタキセルの５０ｍｇ／ｋｇで、スケジュールｑ７ｄ×３にしたがってｉ．ｖ．投与し、腫瘍接種３日後に開始し、６％の低い平均体重減少で腫瘍増殖の減少（Ｔ／Ｃ％＝３８．６）を誘導できる。同じスケジュールにしたがってｉ．ｖ．投与される、ＭＴＤの２／３およびＭＴＤの１／２各々である他の２つの低用量３３．３ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇも同様に有効である。評価されたＴ／Ｃ％は３６．８および５５．２、各々である。５日間、３サイクルで投与される０．２５ｍｇ／ｋｇおよび０．１２５ｍｇ／ｋｇの両用量で、約９９％および９０％、各々の腫瘍容積を減少する（Ｔ／Ｃ％は１．５および９．９であった）ため、ＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍は７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン単独で非常に応答性である。これらの用量は毒性に関連する死亡または体重の減少を生じない（８匹中０匹のマウス）。同じスケジュールにしたがって投与される、７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（０．０８ｍｇ／ｋｇ）の低用量は有効である（Ｔ／Ｃ％＝５９．５％）。各薬剤の最適より少ない用量を組合せたとき（７−ｔブトキシイミノメチルカンプトテシンの０．１２５ｍｇ／ｋｇおよびパクリタキセルの３３．３または２５ｍｇ／ｋｇ）、組合せ群は単剤７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン治療（Ｔ／Ｃ％は２．２および２．５％であった）よりも高い腫瘍増殖阻害を達成し、それぞれ１．６および２．２のＲ指標である。これらの処置はマウスにおいて毒性を誘導しない。低用量の７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（０．０８ｍｇ／ｋｇ）と２つの最適より少ない用量のパクリタキセル（３３．３および２５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）の組合せはまた、１．３および２．１のＲ指標を生じる。
【０１１５】
ＮＣＩ−Ｈ４６０  ＮＳＣＬＣに対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とパクリタキセル［Ｂ］（ｉ．ｖ．、ｑ７ｄ×３、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表６】
2008524225.tif 000009
１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３処置されたマウスにおけるＴＷ／対照マウスにおけるＴＷ×１００。
【０１１６】
実施例４：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとカルボプラチンの組合せ
インビボにおける実験手順
試験システム：腫瘍モデルのためメスＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスを使用する。
動物の数：１７６匹（各腫瘍モデルについて８８匹）。
Ａ２７８０／ＤＤＰヒトプラチン卵巣癌腫細胞（２×１０６）をメスマウスの右脇腹に移植する。８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後３日間処置する。
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、３−７日目）
３．カルボプラチンを５０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび３３．３ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ４ｄ×２、３日目、７日目）
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋カルボプラチン：０．２８＋５０、０．２８＋３３．３、０．１９＋５０、０．１９＋３３．３。
【０１１７】
Ａ２７８０卵巣癌腫細胞（２×１０６）をメスマウスの右脇腹にｓ．ｃ．移植する。７−８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後３日間処置する。
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、３−７日目）
３．カルボプラチンを５０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび３３．３ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ４ｄ×２、３日目、７日目）
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋カルボプラチン：０．２８＋５０、０．２８＋３３．３、０．１９＋５０、０．１９＋３３．３
５．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ×２ｗ、３−７日目、１０−１４日目）
６．カルボプラチンを５０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ７ｄ×２、３、１０日目）
７．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋カルボプラチンを０．１９＋５０。
【０１１８】
ＮＣＩ−Ｈ４６０ヒト非小細胞肺癌腫細胞（３×１０６）をメスマウスの右側に移植する。８匹マウス／群を下記薬剤で腫瘍注射後３日間処置する：
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２８ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ、３−７日目）
３．カルボプラチンを５０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび３３．３ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ４ｄ×２、３日目、７日目）
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋カルボプラチン：０．２８＋５０、０．２８＋３３．３、０．１９＋５０、０．１９＋３３．３。
【０１１９】
７匹マウス／群はまた下記薬剤で腫瘍注射後３日間処置される：
１．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．１９ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ×２ｗ、３−７日目、１０−１４日目）
２．カルボプラチンを５０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（ｑ７ｄ×２、３日目、１０日目）。
【０１２０】
組合せ群すべてにおいて、薬剤を７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン１時間前に投与した。
【０１２１】
ヒト異種移植片における薬剤の抗腫瘍活性を評価するため、腫瘍容積をノギスで週二回腫瘍直径を測定することにより評価する。式ＴＶ（ｍｍ３）＝［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２を使用し、ここで幅および長さはそれぞれ各腫瘍の最も短いおよび最も長い直径である。マウスの腫瘍が約２ｇの容積に達したとき、動物を頸椎脱臼により殺す。
【０１２２】
データ分析
すべての生データは登録番号と組合せた適当な形で記録し、保存し、コンピューターシステムにより処理する。式ＴＶ（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２を使用し、ここで幅および長さは各腫瘍、各々の最も短いおよび最も長い直径である。ＬＣＫ（ｌｏｇ１０細胞死）は下記式：（Ｔ−Ｃ）／３．３２×ＤＴを使用して計算し、ここでＴ−Ｃは処置された腫瘍（Ｔ）および対照の腫瘍（Ｃ）各々が同定される体積に到達するまでに必要な平均時間（日）であり、ＤＴは対照腫瘍の倍加時間である。ＣＲは処置終了後少なくとも１０日間続く腫瘍の消失と定義する。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと種々の薬剤の組合せの効果はRomanelli et al. (1998)の方法にしたがって評価される。１（相加的効果）またはそれ以下のＲ指標は相乗効果がないことを示す。相乗効果は１よりも大きいいずれかのＲの値と定義する。Ｒは予測されるおよび観察されるＴ／Ｃ％値から計算した。
【０１２３】
Ａ２７８０／ＤＤＰプラチン耐性卵巣癌腫：ほぼ最大許容用量の０．２８ｍｇ／ｋｇ（ｑｄ×５／ｗ）で７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンはわずかに効果的（ＴＶＩ＝４６％）であり、カルボプラチン（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２）（ＴＶＩ＝３４％）の活性と匹敵する活性を示す。ＭＴＤでドセタキセル（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２）は７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンの効果に匹敵する抗腫瘍効果を示す。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとカルボプラチンの組合せたとき、相加的乃至相乗的相互作用が見られる。
【０１２４】
Ａ２７８０／ＤＤＰプラチン耐性卵巣癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とカルボプラチン［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表７】
2008524225.tif 000010
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝１．７日。Ｒ＝０．９（３３＋０．１９）；０．７１（５０＋０．１９）；１．３５（３３＋０．２８）；０．９４（５０＋０．２８）。
【０１２５】
Ａ２７８０卵巣癌腫腫瘍モデル：０．２８ｍｇ／ｋｇのＭＴＤで７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンは、腫瘍容積阻害（ＴＶＩ＝１００％）、ＣＲ＝８／８およびＬＣＫ＞２の点から強い抗腫瘍活性を示す。それを最適より少ない用量の３３．３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２でカルボプラチンと組合せたとき、ＬＣＫの増加が観察され、処置後の腫瘍増殖の阻害における効果の著しい持続を示唆する。２週間、７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（０．１９ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ×５／ｗ×２ｗ）とカルボプラチン（５０ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄ×２）の組合せを投与するとき、高いＬＣＫに達したため、同じ結果が得られる。
【０１２６】
Ａ２７８０卵巣癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とカルボプラチン［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表８】
2008524225.tif 000011
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＣＲ＝最後の処置後の完全応答。５ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝２．１日。＋６０日目で、下記マウスは腫瘍病巣なしだった：３３．３＋０．１９（１／８）、５０＋０．１９（２／８）、３３．３＋０．２８（５／８）、５０＋０．２８（３／６）。
【０１２７】
Ａ２７８０卵巣癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ×２ｗ、＋３）とカルボプラチン［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ７ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表９】
2008524225.tif 000012
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＣＲ＝最後の処置後の完全応答。５ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝２．１日。＋６０日目で、下記マウスは腫瘍病巣なしだった：０．１９（４／７）、５０（１／７）、５０＋０．１９（７／７）。
【０１２８】
ＮＣＩ−Ｈ４６０  ＮＳＣＬＣ腫瘍モデル、７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（０．２８ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ｑｄ×５）は、中程度の抗腫瘍効果（ＴＶＩ＝５９％）である５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．ｑ４ｄ×２、（ＭＴＤ）でのカルボプラチンに比較して強い抗腫瘍効果（ＴＶＩ＝９４％）を示す。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン（０．２８ｍｇ／ｋｇ）を最適より少ない用量のカルボプラチン（３３．３ｍｇ／ｋｇ）と組合せたとき、ＴＶＩが１００％に達し、８匹中３匹のマウスは腫瘍移植後１０日目に腫瘍病巣がないため、相乗効果（Ｒ＝３）が観察される。２種の薬剤の効果が、２剤を単独で与えたときの効果を超えるため、治療的利点がこのタイプの組合せで見いだされる。相加的効果が他の用量のこの組合せで見いだされる。７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンはまたスケジュールｑｄ×５／ｗ×２ｗ、０．１９ｍｇ／ｋｇにしたがって、５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｑ７ｄ×２でのカルボプラチンと組合せて、さらに相乗効果（Ｒ＝１．９）を生じる。
【０１２９】
ＮＣＩ−Ｈ４６０非小細胞肺癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とカルボプラチン［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ４ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表１０】
2008524225.tif 000013
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＣＲ＝最後の処置後の完全応答。５ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝２．９日。Ｒ＝１．２（３３．３＋０．１９）；１．７（５０＋０．１９）；３（３３．３＋０．２８）；０．８２（５０＋０．２８）。
【０１３０】
ＮＣＩ−Ｈ４６０非小細胞肺癌腫に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ×２ｗ、＋３）とカルボプラチン［Ｂ］（ｉ．ｐ．、ｑ７ｄ×２、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表１１】
2008524225.tif 000014
腫瘍注射３日後、処置を始める。１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。４ＣＲ＝最後の処置後の完全応答。５ＬＣＫ＝ｌｏｇ１０細胞死。ＤＴ＝２．９日。Ｒ＝１．８６（５０＋０．１９）。
【０１３１】
実施例５：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとドキソルビシンの組合せ
インビボにおける実験手順
試験システム：腫瘍モデルのためＢＡＬＢ／ｃｎｕ／ｎｕマウスを使用する。
ＭＤＡ  ＭＢ  ４３５Ｓヒト乳癌細胞（作業用ストックＶＰＳｔｏｃｋ  ０４４から４回継代）をＡＴＣＣ(Rockville, MD, USA)から得、１０％のＦＣＳおよびペニシリンストレプトマイシン（５０ＩＵ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬの最終濃度）を補ったＲＰＭＩ１６４０細胞培養培地で培養する。細胞をトリプシン処理して回収し、２回ＨＢＳＳで洗浄し、生存細胞を区別するためＴｒｙｐａｎ  Ｂｌｕｅを使用してカウントする。細胞を次いでＨＢＳＳ中に懸濁し、１×１０７細胞／ｍＬの最終濃度に調節する。接種のために、注射部をおおまかにアルコールで消毒し、動物の右肩の直下の皮下腔に皮膚を介して針を挿入し、１００μＬの細胞（１×１０６）を抜き取る。許容される腫瘍容積に接種３０日後に達する。
【０１３２】
７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンをそれ自身（すなわち単一治療として）およびドキソルビシンと組合せの両方を１週間に５回経口投与（ｐ．ｏ．）した。ドキソルビシン（それのみまたはＧｉｍａｔｅｃａｎと一緒のいずれか）を１週間に３回尾静脈を介して静脈内投与（ｉ．ｖ．）する。
１．ビヒクル
２．７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンを０．２９ｍｇ／ｋｇ、０．１７ｍｇ／ｋｇおよび０．０９ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．（ｑｄ×５／ｗ）
３．ドキソルビシンを５０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇおよび４．５ｍｇ／ｋｇ、２．９７ｍｇ／ｋｇ、１．４９ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．（（ｑｄ×３／ｗ））
４．組合せ群：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋ドキソルビシン：０．１７＋２．９７、０．１７＋１．４９、０．１７＋０．４５、０．０９＋２．９７、０．０９＋１．４９、０．０９＋２．９７、０．０３＋２．９７、０．０３＋１．４９、０．０３＋０．４５。
【０１３３】
データ分析
対応のあるｔ試験を、１４群および１５群について０日目から１３日目、ならびに他のすべての群について０日から２０日の体重変化の差を測定するために使用する（表４）。すべての計算はＳｉｇｍａＳｔａｔ  ３．０を使用して行う。一元配置ＡＮＯＶＡ法を腫瘍容積の差の統計学的計算のために使用する。
【０１３４】
ＭＤＡ  ＭＢ４３５Ｓヒト乳癌において、ドキソルビシンと組合せた７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンは相加的乃至相乗的抗腫瘍活性を示す。相乗的活性は、４８％のＴ／Ｃの組合せ活性を提供する単一薬剤で非効果的用量のＢ０．２９＋Ａ０．０７群においてもっとも顕著である。
【０１３５】
ＭＤＡ  ＭＢ４３５Ｓヒト乳癌に対する７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン［Ａ］（ｐ．ｏ．、ｑｄ×５／ｗ、＋３）とカルボプラチン［Ｂ］（ｉ．ｖ．、ｑｄ×３／ｗ、＋３）の組合せの抗腫瘍活性
【表１２】
2008524225.tif 000015
１薬剤処置により誘導される体重減少％。２死／処置されたマウス。３対照腫瘍に対する処置された腫瘍の容積阻害％。
【０１３６】
実施例６：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとシスプラチンの組合せ
インビトロ実験手順
細胞培養および細胞毒性アッセイ
ＮＣＩ−Ｈ４６０非小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）はAmerican Type Culture Collection(ATCC)から得、Ａ５４９（ＮＳＣＬＣ）、ＨＴ−２９結腸腺癌、Ａ２７８０およびＡ２７８０／Ｄｘ、Ａ２７８０／ＤＤＰ卵巣癌腫はIstituto Nazionale Tumori、Milan、Italyから得る。細胞は１０％のウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ）および５０μｇ／ｍｌの硫酸ゲンタマイシン（ＳＩＧＭＡ）を含むＲＰＭＩ  １６４０（ＧＩＢＣＯ）中で増殖させる。細胞増殖に対する化学療法剤の効果を試験するために、細胞を約１０％コンフルエンスで９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にまき、付着させ、少なくとも２４時間で回収する。次いで種々の濃度の薬剤を単独でまたは組合せて各ウェルに加える。プレートを２時間インキュベーションし、次いで洗浄し、薬剤無しでさらに７２時間インキュベーションする。他のプレートを薬剤で連続して処理する（薬剤で２時間、次いで他の薬剤で７２時間）。次いで、生存細胞の数をSkehan P et al. (1990)  J. Natl. Cancer Inst. 82, 1107-1112に記載のとおりに、ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ（ＳＲＢ）の染色により測定する。
【０１３７】
データ分析
７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと異なる薬剤の相互作用をDrewinko et al. (1976) Cancer Biochem. Biophys. 1: 187-195の分析を使用することにより測定する。分析は下記のとおりに行う：（ＳＦａｘＳＦｂ／ＳＦａ＋ＳＦｂ）／１００、ここでＳＦａは７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンの生存率であり、ＳＦｂは化学療法剤の生存率である。値は下記の効果を示す：値＞１相乗的、＜１拮抗的、＝１相加的。
【０１３８】
ＮＣＩ−Ｈ４６０非小細胞肺癌腫：細胞が同時にまたは連続して暴露されるとき、組合せは相加的細胞毒性効果（１のＲ指数）を示す。
【０１３９】
Ａ５４９非小細胞肺癌腫：細胞を同時に７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンおよびシスプラチンに、またはシスプラチン、次いで７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンの連続処置に暴露するとき、相加的毒性効果（１のＲ指数）を示す。Ａ５４９細胞を７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン、次いでシスプラチンに連続暴露するとき、相乗的細胞毒性効果（１．２−１．３のＲ値）を観察する。
【０１４０】
Ａ２７８０卵巣癌腫：細胞が同時にまたは連続して暴露されるとき、組合せは相加的細胞毒性効果（１のＲ指数）を示す。
【０１４１】
Ａ２７８０／ＤＤＰ（プラチン耐性）卵巣癌腫：細胞が同時にまたはシスプラチン、次いで７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンに連続して暴露されるとき、組合せは相加的細胞毒性効果（１のＲ指数）を示す。２７８０／ＤＤＰ細胞が連続して７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン、次いでシスプラチンに暴露されるとき、相乗的細胞毒性効果（１．２のＲ値）を観察する。
【０１４２】
スケジュール：（Ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋シスプラチン
（Ｂ）最初に７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン、次いでシスプラチン
（Ｃ）最初にシスプラチン、次いで７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン
【表１３】
2008524225.tif 000016
【０１４３】
実施例７：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとテモゾロマイドの組合せ
【０１４４】
実施例８：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとイマチニブの組合せ
インビトロ実験手順
細胞培養および細胞毒性アッセイ
Ａ５４９非小細胞肺癌腫、Ａ３７５黒色腫、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＳＫＯＶ３卵巣腺癌、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＰＡＮＣ−１膵臓類上皮癌腫、Ｕ２６６Ｂ１骨髄腫、ＳＷ６２０結腸直腸腺癌、ヒーラ子宮頸癌腫およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２膵臓癌腫をAmerican Type Culture Collection(ATCC)から得る。選択された細胞系を付着した細胞系については１，０００−２，０００細胞／ウェルおよび懸濁した細胞系については１０，０００−２０，０００細胞／ウェルの細胞数に基づいて適当な培地中で希釈し、１００μｌの希釈した細胞／ウェルを使用して細胞を９６ウェルプレートにまく。細胞を薬剤処置前に３７℃、５％ＣＯ２および８５％湿度でインキュベーター内で一晩培養する。希釈化合物を各化合物に関してＤＭＳＯ溶液から作る。一般的にこの希釈はＥＣ５０を中心とし、化合物に暴露されたときの細胞の全用量応答を包含する６または９希釈であり得る。２種の化合物の組合せから作られる希釈物は３シリーズであった。このシリーズの希釈点ごとに、各化合物の固定された割合を使用する。細胞を同時に７２時間化合物に暴露し、次いでＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）マイクロプレートリーダーを使用して各ウェルについてＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ蛍光（励起５３５、蛍光５９０）で増殖の量を測定する。
【０１４５】
データ分析
７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと種々の薬剤の相互作用を、各ウェルを対照ウェルで割った結果の比として定義される増殖の阻害％から決定する。次いでChou and Talay(Chou T-C, Talalay, P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drags or enzyme inhibitors.  Adv. Enzyme Regulation 1984;22:27-55)に記載されているとおりに、組合せ指数（ＣＩ）を２５、５０および７５％効果レベルについて決定した。ＣＩ＜１は相乗的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＝１は相加的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＞１は拮抗的細胞毒性効果を示す。
【０１４６】
Ａ５４９非小細胞肺癌腫：イマチニブとの組合せは使用された薬剤の濃度に依存して相乗的活性乃至拮抗活性のスペクトルを示した。
ＳＫＯＶ３卵巣腺癌：イマチニブとの組合せはＣＩ値＜１を示すため相乗的細胞毒性効果を示した。
７８６−Ｏ腎細胞腺癌：イマチニブとの組合せはＣＩ値＜１を示すため相乗的細胞毒性効果を示した。
ＭＩＡ  ＰａＣａ−２膵臓癌腫：イマチニブとの組合せは使用した薬剤の濃度に依存してＣＩ値＜１または＝１を示すため相乗的または相加的細胞毒性効果を示した。
Ａ３７５黒色腫：イマチニブとの組合せは使用した薬剤の濃度に依存してＣＩ値＜１または＝１を示すため相乗的または相加的細胞毒性効果を示した。
ＰＡＮＣ−１膵臓類上皮癌腫：イマチニブとの組合せはＣＩ値＝１を示すため相加的細胞毒性効果を示した。
【０１４７】
【表１４】
2008524225.tif 000017
【０１４８】
実施例９：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとベルケイドの組合せ
インビトロ実験手順
細胞培養および細胞毒性アッセイ
Ａ５４９非小細胞肺癌腫、Ａ３７５黒色腫、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＳＫＯＶ３卵巣腺癌、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＰＡＮＣ−１膵臓類上皮癌腫、Ｕ２６６Ｂ１骨髄腫、ＳＷ６２０結腸直腸腺癌、ヒーラ子宮頸癌腫およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２膵臓癌腫をAmerican Type Culture Collection(ATCC)から得る。選択された細胞系を付着した細胞系については１，０００−２，０００細胞／ウェルおよび懸濁した細胞系については１０，０００−２０，０００細胞／ウェルの細胞数に基づいて適当な培地中で希釈し、１００μｌの希釈した細胞／ウェルを使用して細胞を９６ウェルプレートにまく。細胞を薬剤処置前に３７℃、５％ＣＯ２および８５％湿度でインキュベーター内で一晩培養する。希釈化合物を各化合物に関してＤＭＳＯ溶液から作る。一般的にこの希釈はＥＣ５０を中心とし、化合物に暴露されたときの細胞の全用量応答を包含する６または９希釈であり得る。２種の化合物の組合せから作られる希釈物は３シリーズである。このシリーズの希釈点ごとに、各化合物の固定された割合を使用する。細胞を同時に７２時間化合物に暴露し、次いでＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）マイクロプレートリーダーを使用して各ウェルについてＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ蛍光（励起５３５、蛍光５９０）で増殖の量を測定する。
【０１４９】
データ分析
７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと種々の薬剤の相互作用を、各ウェルを対照ウェルで割った終点の比として定義される増殖の阻害％から決定する。次いでChou and Talay(Chou T-C, Talalay, P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drags or enzyme inhibitors.  Adv. Enzyme Regulation 1984;22:27-55)に記載されているとおりに、組合せ指数（ＣＩ）を２５、５０および７５％効果レベルについて決定した。ＣＩ＜１は相乗的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＝１は相加的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＞１は拮抗的細胞毒性効果を示す。
【０１５０】
Ｕ２６６Ｂ１骨髄腫：ベルケイドとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から拮抗的活性のスペクトルを示す。
ＳＫＯＶ３卵巣腺癌：ベルケイドとの組合せはＣＩ値＜１を示すため相乗的細胞毒性効果を示す。
Ａ３７５黒色腫：ベルケイドとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から拮抗的活性のスペクトルを示す。
ＭＩＡ  ＰａＣａ−２膵臓癌腫：ベルケイドとの組合せはＣＩ値約１を示すため相加的細胞毒性効果を示す。
ＳＷ６２０結腸直腸腺癌：ベルケイドとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から拮抗的活性のスペクトルを示す。
【０１５１】
【表１５】
2008524225.tif 000018
【０１５２】
実施例１０：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとエポチロンＢの組合せ
インビトロ実験手順
細胞培養および細胞毒性アッセイ
ヒト非小細胞肺腺癌Ａ５４９（ＣＣＬ１８５）および卵巣癌腫ＳＫ−ＯＶ−３（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ７７）細胞系をAmerican Type Culture Collection(ATCC, Rockville, MD, USA)から得る。ヒト転移前立腺癌腫ＰＣ  ３ＭをDr. I. J. Fidler (MD Anderson Cancer Center, Houston, TX, USA)から得る。細胞培養培地および補充物をAnimed/Bioconcept(Allschwil, Switzerland)から得る。
【０１５３】
細胞をインキュベーター内で、ＲＰＭＩ−１６４０培地（１０％ＦＣＳ、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）およびＬ−グルタミン（２ｍＭ）を補った）で３７℃、５％ｖ／ｖＣＯ２および８０％の相対湿度雰囲気下で培養する。試験化合物による単層細胞増殖の阻害を固定したメチレンブルー色素により評価する。細胞を０日目に１．５×１０３細胞／ウェルで９６ウェルマイクロタイタープレートにまき、一晩インキュベーションする。エポチロンＢと組合せパートナーの薬剤相互作用を下記の同時にならびに連続して薬剤を添加する条件下で評価する。同時に薬剤添加：エポチロンＢおよび組合せパートナーを同時に１日目に加え、抗増殖性効果を７２時間インキュベーション後、４日目に評価する。連続して薬剤添加、ａ）“エポチロンＢ、次いで組合せパートナー”：エポチロンＢを１日目に加える。２４時間インキュベーション後、薬剤含有培地を２日目にアスピレーションにより除去し、組合せパートナー含有培地と置き換える。４８時間さらにインキュベーション後、抗増殖性効果を４日目に評価する。連続して薬剤添加、ｂ）“エポチロンＢ、次いで組合せパートナー”：組合せパートナーを１日目に加える。２４時間インキュベーション後、薬剤含有培地を２日目にアスピレーションにより除去し、エポチロンＢ含有培地と置き換える。４８時間さらにインキュベーション後、抗増殖性効果を４日目に評価する。パイロット実験において測定するため、エポチロンＢと組合せパートナーを得られるスケジュールにおいてそれらの各単一薬剤ＩＣ５０の固定比率（倍率および割合）で試験する。薬剤を最も高い意図した濃度であらかじめ混合し、次いで深ウェルプレート中で１．５倍連続希釈を９回する。単一薬剤活性を評価するとき、組合せパートナーをそのそれぞれのビヒクルに置き換え、各実験の内部基準のため並行して行う。各条件が２つ存在する。インキュベーション期間の最後に、細胞を３．３％ｖ／ｖグルタルアルデヒドで固定し、水で洗浄し、０．０５％ｗ／ｖメチレンブルーで染色する。洗浄後、色素を３％のＨＣｌで抽出し、最適密度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ３４０分光光度計(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)で６６５ｎｍで測定する。
【０１５４】
薬剤相互作用効果の組合せ指数分析
インビトロにおける細胞増殖阻害に関して薬剤相互作用の性質（相乗的、相加的または拮抗的）を測定するため、中間用量効果理論に基づく組合せ指数方法(Chou TC and Talalay P Advanced Enzyme Regulation 1977;22:27-55)を使用する。この方法は各薬剤単独および各薬剤組合せの有効性、ならびに用量効果曲線の形を考慮する。Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ分析(Chou TC、Motzer RJ、Tong Y and Bosl GJ Journal of the National Cancer Institute 1994; 86:1517-1524.)は、市販のソフトウェア（Ｃａｌｃｕｓｙｎ、Ｂｉｏｓｏｆｔ、ＵＫ）を使用して行う。組合せ指数（ＣＩ）は下記複数の薬剤効果の方程式：ＣＩ＝（Ｄ）１／（Ｄｘ）１＋（Ｄ）２／（Ｄｘ）２］に基づいて計算される。（Ｄ）１および（Ｄ）２はｘ％の細胞増殖阻害を与える薬剤１と薬剤２の組合せの用量である。（Ｄｘ）１および（Ｄｘ）２はｘ％の細胞増殖阻害を与える薬剤１および薬剤２単独、各々の用量である。ＣＩ＜１は相加的効果より大きいことを示し（相乗的；値が小さいほど、強い相乗度）、ＣＩが１と等しいとき相加的を示し、ＣＩ＞１は拮抗的を示す。ＣＩ結果は平均＋／−標準偏差の平均（ｎ＝３の独立した実験）として示す。
【０１５５】
Ａ５４９（ＣＣＬ１８５）、非小細胞肺腺癌ＳＫ−ＯＶ−３卵巣癌腫およびＰＣ−３Ｍ転移前立腺癌腫において、７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとエポチロンＢの組合せは、細胞培養において群依存的効果、細胞毒性効果を示す。同時投与は拮抗的結果であるが、スケジュールは相加的乃至相乗的細胞毒性効果を与える。
【０１５６】
インビトロにおけるＡ５４９（肺）、ＰＣ−３Ｍ（前立腺）およびＳＫ−ＯＶ−３（卵巣）癌腫細胞に同時にまたは連続して投与される７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとエポチロンＢの抗増殖性の組合せ指数。
【０１５７】
スケジュール：（Ａ）７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン＋エポチロンＢ
（Ｂ）最初に７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン次いでエポチロンＢ
（Ｃ）最初にエポチロンＢ次いで７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシン
【表１６】
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細胞死（影響した分画；ＩＣ５０、ＩＣ７５およびＩＣ９０に対応）。計算された組合せ指数（ＣＩ）値を平均±標準偏差の平均（ｎ＝３の独立した実験）として示す。定義にしたがって、ＣＩ＝１は相加的を示す。ＣＩ＜１．０は相乗的を示す（値が小さいほど、強い相乗度）が、ＣＩ＞１．０は拮抗的を示す（値が高いほど、強い拮抗度）。ａ適切でない、すなわち試験された薬剤範囲内において細胞効果の範囲が狭いため（影響した分画が５０％未満）、計算されたＣＩ値が誤って大きい誤差範囲を示し、したがって示していない。
【０１５８】
実施例１１：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンとエバロリムスの組合せ
インビトロ実験手順
細胞培養および細胞毒性アッセイ
Ａ５４９非小細胞肺癌腫、Ａ３７５黒色腫、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＳＫＯＶ３卵巣腺癌、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＰＡＮＣ−１膵臓類上皮癌腫、Ｕ２６６Ｂ１骨髄腫、ＳＷ６２０結腸直腸腺癌、ヒーラ子宮頸癌腫およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２膵臓癌腫をAmerican Type Culture Collection(ATCC)から得る。選択された細胞系を付着した細胞系については１，０００−２，０００細胞／ウェルおよび懸濁した細胞系については１０，０００−２０，０００細胞／ウェルの細胞数に基づいて適当な培地中で希釈し、１００μｌの希釈した細胞／ウェルを使用して細胞を９６ウェルプレートにまく。細胞を薬剤処置前に３７℃、５％ＣＯ２および８５％湿度でインキュベーター内で一晩培養する。希釈化合物を各化合物に関してＤＭＳＯ溶液から作る。一般的にこの希釈はＥＣ５０を中心とし、化合物に暴露されたときの細胞の全用量応答を包含する６または９希釈であり得る。２種の化合物の組合せから作られる希釈物は３シリーズであった。このシリーズの希釈点ごとに、各化合物の固定された割合を使用する。細胞を同時に７２時間化合物に暴露し、次いでＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）マイクロプレートリーダーを使用して各ウェルについてＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ蛍光（励起５３５、蛍光５９０）で増殖の量を測定する。
【０１５９】
データ分析
７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと種々の薬剤の相互作用を、各ウェルを対照ウェルで割った終点の比として定義される増殖の阻害％から決定する。次いでChou and Talay(Chou T-C, Talalay, P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drags or enzyme inhibitors.  Adv. Enzyme Regulation 1984;22:27-55)に記載されているとおりに、組合せ指数（ＣＩ）を２５、５０および７５％効果レベルについて決定した。ＣＩ＜１は相乗的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＝１は相加的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＞１は拮抗的細胞毒性効果を示す。
【０１６０】
Ａ５４９非小細胞肺癌腫：エバロリムスとの組合せはＣＩ値＜１を示すため相乗的細胞毒性効果を示す。
ＳＫＯＶ３卵巣腺癌：エバロリムスとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から相加的活性のスペクトルを示す。
ＰＡＮＣ−１膵臓類上皮癌腫：エバロリムスとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から相加的活性のスペクトルを示す。
ＳＷ６２０結腸直腸腺癌：エバロリムスとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して活性から相加的活性のスペクトルを示す。
【０１６１】
【表１７】
2008524225.tif 000020
【０１６２】
実施例１２：７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンの組合せ
インビトロ実験手順
細胞培養および細胞毒性アッセイ
Ａ５４９非小細胞肺癌腫、Ａ３７５黒色腫、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＳＫＯＶ３卵巣腺癌、７８６−Ｏ腎細胞腺癌、ＰＡＮＣ−１膵臓類上皮癌腫、Ｕ２６６Ｂ１骨髄腫、ＳＷ６２０結腸直腸腺癌、ヒーラ子宮頸癌腫およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２膵臓癌腫をAmerican Type Culture Collection(ATCC)から得る。選択された細胞系を付着した細胞系については１，０００−２，０００細胞／ウェルおよび懸濁した細胞系については１０，０００−２０，０００細胞／ウェルの細胞数に基づいて適当な培地中で希釈し、１００μｌの希釈した細胞／ウェルを使用して細胞を９６ウェルプレートにまく。細胞を薬剤処置前に３７℃、５％ＣＯ２および８５％湿度でインキュベーター内で一晩培養する。希釈化合物を各化合物に関してＤＭＳＯ溶液から作る。一般的にこの希釈はＥＣ５０を中心とし、化合物に暴露されたときの細胞の全用量応答を包含する６または９希釈であり得る。２種の化合物の組合せから作られる希釈物は３シリーズである。このシリーズの希釈点ごとに、各化合物の固定された割合を使用する。細胞を同時に７２時間化合物に暴露し、次いでＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）マイクロプレートリーダーを使用して各ウェルについてＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ蛍光（励起５３５、蛍光５９０）で増殖の量を測定する。
【０１６３】
データ分析
７−ｔ−ブトキシイミノメチルカンプトテシンと種々の薬剤の相互作用を、各ウェルを対照ウェルで割った終点の比として定義される増殖の阻害％から決定する。次いでChou and Talay(Chou T-C, Talalay, P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drags or enzyme inhibitors.  Adv. Enzyme Regulation 1984;22:27-55)に記載されているとおりに、組合せ指数（ＣＩ）を２５、５０および７５％効果レベルについて決定した。ＣＩ＜１は相乗的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＝１は相加的細胞毒性効果を示し、ＣＩ＞１は拮抗的細胞毒性効果を示す。
【０１６４】
Ａ５４９非小細胞肺癌腫：｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンとの組合せはＣＩ値＜１を示すため相乗的細胞毒性効果を示す。
ＳＫＯＶ３卵巣腺癌：｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から拮抗的活性のスペクトルを示す。
ＰＡＮＣ−１膵臓類上皮癌腫：｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から拮抗的活性のスペクトルを示す。
ＳＷ６２０結腸直腸腺癌：｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から拮抗的活性のスペクトルを示す。
ＭＩＡ  ＰａＣａ−２膵臓癌腫：｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンとの組合せはＣＩ値＜１を示すため相乗的細胞毒性効果を示す。
Ａ３７５黒色腫：｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンとの組合せはＣＩ値＜１を示すため相乗的細胞毒性効果を示す。
ヒーラ子宮頸癌腫：｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニル−エチル）−アミンとの組合せは使用する薬剤の濃度に依存して相乗的活性から相加的活性のスペクトルを示す。
【０１６５】
【表１８】
2008524225.tif 000021
【国際調査報告】
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2008524225.tif 000023
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