(57)【要約】【課題】１種以上の胆汁酸と、水可溶性澱粉転化物または非澱粉多糖類からなる透明な水溶液を提供する。【解決手段】当該水溶液は、神経退行疾患及び／または運動ニューロン疾患を持つ対象において治療的効果を持つ薬剤学的化合物と共に対象に投与されることができる。一部の実施形態において、前記疾患は、筋萎縮性側索硬化症である。【選択図】図１Ａ
2008518935.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において神経退行疾患の少なくとも一つの症状を改善または治療する方法であって、
（ａ）胆汁酸、胆汁酸の水可溶性誘導体、胆汁酸塩、及びアミンとアミド結合によりコンジュゲートされた胆汁酸からなる群より選ばれた第１の物質と、
（ｂ）水可溶性澱粉転化物または水可溶性非澱粉多糖類からなる群より選ばれた炭水化物と、
（ｃ）水と、を含み、
前記第１の物質と前記炭水化物は両方とも選択されたｐＨ値範囲内の溶液の全てのｐＨ値に対して溶液状態である、透明な水溶液を対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記神経退行疾患は、パーキンソン病、ハンティングトン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、脳卒中及び脊髄損傷からなる群より選ばれるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記神経退行疾患は、筋萎縮性側索硬化症である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記筋萎縮性側索硬化症は、進行性の筋萎縮性側索硬化症である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記症状は、寿命短縮及び痲痺からなる群より選ばれたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記対象は、ほ乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記対象は、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記第１の物質は、治療的活性量で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記第１の物質は、ケノデオキシコール酸、コール酸、ヒオデオキシコール酸、デオキシコール酸、７−オキソリトコール酸、リトコール酸、ヨードデオキシコール酸、ヨーコール酸、タウロウルソデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、グリコウルソデオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、ステロイド核にあるヒドロキシ基またはカルボキシル酸基でのそれらの誘導体、それらの塩、またはこれらのアミンとのコンジュゲート類からなる群より選ばれるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリン、デキストリン、液体ぶどう糖、コーンシロップ固形物及び可溶性澱粉からなる群より選ばれるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記選択されたｐＨ範囲は、約ｐＨ１〜１０である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の物質は、ウルソデオキシコール酸またはウルソデオキシコール酸のナトリウム塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記水可溶性澱粉転化物が、マルトデキストリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記水可溶性非澱粉多糖類は、デキストラン、グァーガム、ペクチン及び難消化性の可溶性繊維からなる群より選ばれるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
対象において運動ニューロン（ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ）疾患の少なくとも一つの症状を改善したり治療する方法であって、
（ａ）胆汁酸、胆汁酸の水可溶性誘導体、胆汁酸塩、及びアミンとアミド結合によりコンジュゲートされた胆汁酸からなる群より選ばれた第１の物質と、
（ｂ）水可溶性澱粉転化物または水可溶性非澱粉多糖類からなる群より選ばれた炭水化物と、
（ｃ）水と、を含み、
前記第１の物質と炭水化物は両方とも、選択されたｐＨ値範囲内の溶液の全てのｐＨ値に対して溶液状態である、透明な水溶液を対象に投与することを含む方法。
【請求項１６】
前記運動ニューロン疾患は、筋萎縮性側索硬化症、進行性延髄痲痺（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｂｕｌｂａｒ  ｐａｌｓｙ）、仮性延髄痲痺（ｐｓｅｕｄｏｂｕｌｂａｒ  ｐａｌｓｙ）、原発性側索硬化症、進行性筋肉萎縮及び小児痲痺症候群からなる群より選ばれるものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記運動ニューロン疾患は、筋萎縮性側索硬化症である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記筋萎縮性側索硬化症は、進行性の筋萎縮性側索硬化症である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記症状は、寿命短縮及び痲痺からなる群より選ばれるものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象は、ほ乳動物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象は、ヒトである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１の物質は、治療的活性量で存在する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の物質は、ケノデオキシコール酸、コール酸、ヒオデオキシコール酸、デオキシコール酸、７−オキソリトコール酸、リトコール酸、ヨードデオキシコール酸、ヨーコール酸、タウロウルソデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、グリコウルソデオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、ステロイド核にあるヒドロキシ基またはカルボキシル酸基におけるそれらの誘導体、それらの塩、またはこれらのアミンとのコンジュゲートからなる群より選ばれるものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリン、デキストリン、液体ぶどう糖、コーンシロップ固形物及び可溶性澱粉からなる群より選ばれるものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記選択されたｐＨ範囲は、約ｐＨ１〜１０である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１の物質は、ウルソデオキシコール酸またはウルソデオキシコール酸のナトリウム塩である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２７】
前記水可溶性澱粉転化物が、マルトデキストリンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
前記水可溶性非澱粉多糖類は、デキストラン、グァーガム、ペクチン及び難消化性の可溶性繊維からなる群より選ばれるものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２９】
対象において神経退行疾患の少なくとも一つの症状または運動ニューロン疾患の少なくとも一つの症状を改善または治療する方法であって、
対象に薬剤学的化合物を投与することと、
（ａ）胆汁酸、胆汁酸の水可溶性誘導体、胆汁酸塩、及びアミンとアミド結合によりコンジュゲートされた胆汁酸からなる群より選ばれた第１の物質と、
（ｂ）水可溶性澱粉転化物または水可溶性非澱粉多糖類からなる群より選ばれた炭水化物と、
（ｃ）水と、を含み、
前記第１の物質と炭水化物は両方とも選択されたｐＨ値範囲内の溶液の全てのｐＨ値に対して溶液状態である透明な水溶液を対象に投与することと、
を含む方法。
【請求項３０】
前記対象は、ほ乳動物である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象は、ヒトである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記薬剤学的化合物の投与と前記透明な水溶液の投与が同時に行われる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記薬剤学的化合物の投与と前記透明な水溶液の投与は、規定された期間内で別々に行われる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記薬剤学的化合物の投与は、前記透明な水溶液の投与前に行われる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記薬剤学的化合物の投与は、前記透明な水溶液の投与後に行われる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記薬剤学的化合物の投与は、薬剤学的化合物を複数回投与することをさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３７】
前記透明な水溶液の投与は、透明な水溶液を複数回投与することをさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３８】
前記薬剤学的化合物の投与は、薬剤学的化合物を複数回投与することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記薬剤学的化合物の投与は、前記透明な水溶液の投与後に少なくとも一回薬剤学的化合物を投与することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記薬剤学的化合物の投与は、前記透明な水溶液の投与前に少なくとも一回薬剤学的化合物を投与することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記透明な水溶液の投与は、前記薬剤学的化合物の投与後に少なくとも一回透明な水溶液を投与することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記透明な水溶液の投与は、前記薬剤学的化合物の投与前に少なくとも一回透明な水溶液を投与することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記透明な水溶液の投与と前記薬剤学的化合物の投与は、各投与ごとに同時に行われる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記透明な水溶液は、前記薬剤学的化合物をさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記第１の物質は、治療的活性量で存在する、請求項２９に記載の方法。
【請求項４６】
前記第１の物質は、ケノデオキシコール酸、コール酸、ヒオデオキシコール酸、デオキシコール酸、７−オキソリトコール酸、リトコール酸、ヨードデオキシコール酸、ヨーコール酸、タウロウルソデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、グリコウルソデオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、ステロイド核にあるヒドロキシ基またはカルボキシル酸基におけるそれらの誘導体、それらの塩、またはこれらのアミンとのコンジュゲートからなる群より選ばれるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項４７】
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリン、デキストリン、液体ぶどう糖、コーンシロップ固形物及び可溶性澱粉からなる群より選ばれるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項４８】
前記選択されたｐＨ範囲は、約ｐＨ１〜１０である、請求項２９に記載の方法。
【請求項４９】
前記第１の物質は、ウルソデオキシコール酸またはウルソデオキシコール酸のナトリウム塩である、請求項２９に記載の方法。
【請求項５０】
前記水可溶性澱粉転化物がマルトデキストリンである、請求項２９に記載の方法。
【請求項５１】
前記水可溶性非澱粉多糖類は、デキストラン、グァーガム、ペクチン及び難消化性の可溶性繊維からなる群より選ばれるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項５２】
前記神経退行疾患または運動ニューロン疾患は、パーキンソン病、ハンティングトン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、脳卒中、脊髄損傷、進行性延髄痲痺、仮性延髄痲痺、原発性側索硬化症、進行性筋肉萎縮及び小児痲痺症候群からなる群より選ばれるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項５３】
前記神経退行疾患または運動ニューロン疾患は、筋萎縮性側索硬化症である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記薬剤学的化合物は、運動ニューロン死滅を減少させる、請求項２９に記載の方法。
【請求項５５】
運動ニューロン死滅を減少させる前記薬剤学的化合物は、
パシニアジド、ベンズチアジド、プレドニソロン、メントール、メブヒドロリンナフタレンスルホネート、トリクロロメチアジド、オキシテトラサイクリン、アルカインサルフェート、エリスロマイシン、グルタチオン、トリオキサレン、ニリドリンＨＣＬ、デスメチルジアゼパム、トンジルアミンＨＣＬ、バルプロエイトＮａ、アミノフェナゾン、スルファメチゾール、ドロペリドール、２−チオウラシル、キヌレン酸、フシジン酸、ロイコボリンＣａ、硫酸スパルテイン、アミグダリン、プラモキシンＨＣＬ、フロセミド、ジニトルミド、ブデソニド、フロプロピオン、フルオロメトロン（抗炎症剤）、Ｎ−ホルミルメチオニルフェニルアラニン、チオペンタルＮａ、ランソプラゾール、トシル酸ブレチリウム、セファマンドルＮａ、オキシベンダゾール、サイクロロイシルグリシン、ダントロレンＮａ、テトロキノン、ピペラジン、エスクリン、エチステロン、ジメタジオン、グリセオフルビン、アセタミノザロール、イソグバシンＨＣＬ、プトレシンＤＩＨＣＬ、エメチンＨＣＬ、スルファニルアミド、ミモシン、アセチルコリン、プラリドキシムメシレート、リシルトリプトファニル−リシン、ヘコゲニン、プレドニソロンアセテート、アルベンダゾール、ヒドロクロロチアジド、デメクロサイクリンＨＣＬ、ニトロフラゾン、ジクロキサシリンＮａ、アルファ−トコフェロール、テトラサイクリンＨＣＬ、フェノフィブレート、プロベネシド、トレチノイン、アセタミノフェン、ヒドラスチニンＨＣＬ、ｄ［−Ａｒｇ−２］キョートルフィンアセテート、ＮＭＤＡ、セフメタゾールＮａ、リバビリン、Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン、ピクロトキシン、オキセタジン、スルファチアゾール、トリクロロメチン、ナブメトン、クロラムフェニコール、リルゾール、人参及びその抽出物、グリシリジン及びグリシリジン酸、カルボキノンの誘導体、コエンザイムＱ１０、クレアチン、インシュリン形態成長因子−１、ミノサイクリン、メカムセリン、キサリプロデン（ｘａｌｉｐｒｏｄｅｎ）、ガバペンチン、デキストロメトルファン、タラムパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、ＩＬ−Ｉ、ＴＲ−５００、プロシステイン、脳誘導神経栄養性因子、バクロフェン、チザニジン、ベンゾジアゼピン類、グリコピロレート、アトロピン、キニン、フェニトイン及びモルフィンからなる群より選ばれるものである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記薬剤学的化合物は、ホルモン、ホルモン拮抗剤、鎮痛剤、解熱剤、抗炎症薬物、免疫活性薬物、抗新生物性薬物、抗生物質、抗炎症剤、交感神経興奮剤、抗感染薬、抗腫瘍剤及び痲酔剤からなる群より選ばれるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項５７】
前記薬剤学的化合物は、
インシュリン、ヘパリン、カルシトニン、アンピシリン、オクトレオチド、シルデナフィルクエン酸塩、カルシトリオール、ジヒドロタキステロール、アムポモルフィン、ヨヒンビン、トラゾドン、アシクロビル、アマンタジン・ＨＣｌ、リマンタジン・ＨＣｌ、シドフォビル、デラビルジン・メシレート、ジタノシン、ファンシクロビル、フォスカルネットナトリウム、フルオロウラシル、ガンシクロビルナトリウム、イドクスウリジン、インターフェロン−α、ラミブジン、ネビラピン、ペンシクロビル、リバビリン、スタブジン、トリフルリジン、バラサイクロビル・ＨＣｌ、ザルシタビン、ジドブジン、インジナビル・Ｈ２ＳＯ４、リトナビル、ネルフィビル・ＣＨ３ＳＯ３Ｈ、サキナビル・ＣＨ３ＳＯ３Ｈ、ｄ−ペニシラミン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、アウロチオグルコース、金ナトリウムチオマレート、アウラノフィンレバミソール、ＤＴＣ、イソプリノシン、メチルイノシンモノポスフェート、ムラミルジペプチド、ジアゾキシド、ヒドララジン・ＨＣｌ、ミノキシジル、ジピリダモル、イソクスプリン（ｉｓｏｘｓｕｐｒｉｎｅ）・ＨＣｌ、ニアシン、ニリドリン・ＨＣｌ、フェントラミン、ドキサゾシン・ＣＨ３ＳＯ３Ｈ、プラゾシン・ＨＣｌ、テラゾシン・ＨＣｌ、クロニジン・ＨＣｌ、ニフェジピン、モルシドミン、アミオダロン、アセチルサリチル酸、ペラパミル、ジルチアゼム、ニソルジピン、イスラジピン、ベプリジル、イソソルビド・二硝酸塩、ペンタエリスリトール・四硝酸塩、ニトログリセリン、シメチジン、ファモチジン、ニザチジン、ラニチジン、ランソプラゾール、オメプラゾール、ミソプロストール、スクラルフェート、メトクロプラミド・ＨＣｌ、エリスロマイシン、ビスムス化合物、アルプロスタジル、アルブテロール、ピルブテロール、テルブタリン・Ｈ２ＳＯ４、サルメトロール、アミノフィリン、ジフィリン、エフェドリン、エチルノレピネフリン、イソエタリン、イソプレテレノール、メタプロテレノール、ｎ−ドクロミル、オキシトリフィリン、テオフィリン、ビトルテロール、フェノテロール、ブデソニド、フルニソリド、べクロメタソン・ジプロピオン酸塩、フルチカソン・プロピオン酸塩、コデイン、硫酸コデイン、燐酸コデイン、デキストロメトルファン・ＨＢｒ、トリアムシノロン・アセトニド、モンテルカストナトリウム、ザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ）、ジレウトン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）、クロモリンナトリウム、臭化イプラトロピウム、ネドクロミルナトリウムベンゾエート、ジフェンヒドラミン・ＨＣｌ、ヒドロコドン・二スズ酸塩、メタドン・ＨＣｌ、硫酸モルフィン、アセチルシステイン、グアイフェネシン、炭酸アンモニウム、塩化アンモニウム、スズ酸カリウムアンチモン、グリセリン、テメピン・水和物、パルミチン酸コルホスセリル、アトルバスタチン・カルシウム、セルバスタチン・ナトリウム、フルバスタチン・ナトリウム、ロバスタチン、プラバスタチン・ナトリウム、シムバスタチン、ピクロラジアクルバ（ｐｉｃｒｏｒｒｈａｚｉａ  ｋｕｒｒｖａ）、アンドログラフィスパニキュラータ、モリンガオレイフェラ、アルビチアレベック、アドハタバシカ、ウコン（ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）、ギムネマシルベスタ（ｇｙｍｎｅｍａ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ）、タミナリアアルジュナ（ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ  ａｒｊｕｎａ）、アザジラクタインジカ、チノスポリアコージフォリア、メトロニダゾール、アンポテリシンＢ、クロトリマゾール、フルコナゾール、ハロプロギン、ケトコナゾール、グリセオフルビン、イトラコナゾール、テルビナフィン・ＨＣｌ、エコナゾール・ＨＮＯ３、ミコナゾール、ニスタチン、オキシコナゾール・ＨＮＯ３、スルコナゾール・ＨＮＯ３、セチリジン・２ＨＣｌ、デキサメタソン、ヒドロコルチソン、プレドニソロン、コルチソン、カテチン及びその誘導体、グリシリジン、グリシリジン酸、ベタメタソン、ルドロコルチソン・アセト酸塩、フルニソリド、フルチカソン・プロピオン酸塩、メチルプレドニソロン、ソマトスタチン、リスプロ、グルカゴン、プロインシュリン、不溶性インシュリン、アクラボス、クロルプロパミド、グリピジド、グリブリド、メトフォルミン・ＨＣｌ、レパグリニド、トルブタミド、アミノ酸、コルヒチン、スルフィンピラゾン、アロプリノール、ピロキシカム、トルメチンナトリウム、インドメタシン、イブプロフェン、ジフルニサル、メフェナミン酸、ナプロキセン及びトリエンチンからなる群より選ばれるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項５８】
透明な水溶液であって、
（ａ）胆汁酸、胆汁酸の水可溶性誘導体、胆汁酸塩、及びアミンとアミド結合によりコンジュゲートされた胆汁酸からなる群より選ばれた第１の物質と、
（ｂ）水可溶性澱粉転化物または水可溶性非澱粉多糖類からなる群より選ばれた炭水化物と、
（ｃ）運動ニューロン死滅を減少させる薬剤学的に有効な量の薬剤学的化合物と、
（ｄ）水と、を含み、
前記第１の物質、炭水化物及びリルゾールはいずれも、選択されたｐＨ値範囲内の溶液の全てのｐＨ値に対して溶液状態である、透明な水溶液。
【請求項５９】
前記第１の物質は、神経保護を呈する量（ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）で存在する、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６０】
前記薬剤学的化合物は、選択された範囲内の全てのｐＨ値に対して溶液状態である、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６１】
前記第１の物質は、ウルソデオキシコール酸である、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６２】
前記第１の物質は、ウルソデオキシコール酸のナトリウム塩である、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６３】
前記第１の物質は、ケノデオキシコール酸、コール酸、ヒオデオキシコール酸、デオキシコール酸、７−オキソリトコール酸、リトコール酸、ヨードデオキシコール酸、ヨーコール酸、タウロウルソデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、グリコウルソデオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、ステロイド核にあるヒドロキシ基またはカルボキシル酸基におけるそれらの誘導体、それらの塩、またはこれらのアミンとのコンジュゲートからなる群より選ばれるものである、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６４】
前記選択されたｐＨ範囲は、約ｐＨ１〜１０である、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６５】
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリン、デキストリン、液体ぶどう糖、コーンシロップ固形物及び可溶性澱粉からなる群より選ばれる、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６６】
前記水可溶性澱粉転化物が、マルトデキストリンである、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６７】
前記水可溶性非澱粉多糖類は、デキストラン、グァーガム、ペクチン及び難消化性の可溶性繊維からなる群より選ばれる、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【請求項６８】
前記薬剤学的化合物は、
パシニアジド、ベンズチアジド、プレドニソロン、メントール、メブヒドロリンナフタレンスルホネート、トリクロロメチアジド、オキシテトラサイクリン、アルカインサルフェート、エリスロマイシン、グルタチオン、トリオキサレン、ニリドリンＨＣＬ、デスメチルジアゼパム、トンジルアミンＨＣＬ、バルプロエイトＮａ、アミノフェナゾン、スルファメチゾール、ドロペリドール、２−チオウラシル、キヌレン酸、フシジン酸、ロイコボリンＣａ、硫酸スパルテイン、アミグダリン、プラモキシンＨＣＬ、フロセミド、ジニトルミド、ブデソニド、フロプロピオン、フルオロメトロン（抗炎症剤）、Ｎ−ホルミルメチオニルフェニルアラニン、チオペンタルＮａ、ランソプラゾール、トシル酸ブレチリウム、セファマンドルＮａ、オキシベンダゾール、サイクロロイシルグリシン、ダントロレンＮａ、テトロキノン、ピペラジン、エスクリン、エチステロン、ジメタジオン、グリセオフルビン、アセタミノザロール、イソグバシンＨＣＬ、プトレシンＤＩＨＣＬ、エメチンＨＣＬ、スルファニルアミド、ミモシン、アセチルコリン、プラリドキシムメシレート、リシルトリプトファニル−リシン、ヘコゲニン、プレドニソロンアセテート、アルベンダゾール、ヒドロクロロチアジド、デメクロサイクリンＨＣＬ、ニトロフラゾン、ジクロキサシリンＮａ、アルファ−トコフェロール、テトラサイクリンＨＣＬ、フェノフィブレート、プロベネシド、トレチノイン、アセタミノフェン、ヒドラスチニンＨＣＬ、ｄ［−Ａｒｇ−２］キョートルフィンアセテート、ＮＭＤＡ、セフメタゾールＮａ、リバビリン、Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン、ピクロトキシン、オキセタジン、スルファチアゾール、トリクロロメチン、ナブメトン、クロラムフェニコール、リルゾール、人参及びその抽出物、グリシリジン及びグリシリジン酸、カルボキノンの誘導体、コエンザイムＱ１０、クレアチン、インシュリン形態成長因子−１、ミノサイクリン、メカムセリン、キサリプロデン、ガバペンチン、デキストロメトルファン、タラムパネル、ＩＬ−Ｉ、ＴＲ−５００、プロシステイン、脳誘導神経栄養性因子、バクロフェン、チザニジン、ベンゾジアゼピン類、グリコピロレート、アトロピン、キニン、フェニトイン及びモルフィンからなる群より選ばれるものである、請求項５８に記載の透明な水溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経退行過程または疾患の少なくとも一つの症状を改善または治療するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
いつにおいても、３０，０００名もの多くのアメリカ人がほとんど常に致命的な筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ:Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）に病んでいる。ルーゲーリッグ病としても知られているＡＬＳは、脳及び脊髄における運動ニューロン（ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ）を攻撃して筋力低下及び萎縮症を招く進行性神経退行疾患である。初期の症状は、機敏性の喪失及び歩行困難を含む。この疾患が進行するにつれて、患者は麻痺し、呼吸サポートを必要とする。ＡＬＳ患者の期待寿命は、診断後、死亡の原因である呼吸機能の喪失を招くまでの通常３乃至５年である。
【０００３】
ＡＬＳ病因は部分的にしか解明されない。家族性（遺伝的）の場合は、全体ＡＬＳ患者の約５乃至１０％にすぎない。この様な一部のＡＬＳ患者のうち、５人当たり一人は、今まで確認された唯一の遺伝的欠陥であるＳＯＤ１遺伝子の突然変異を持っている。この突然変異対立形質は、運動ニューロンに対して毒性とされる蛋白質の生産を招く。大部分の場合、すなわち、残る９０乃至９５％は確認可能なパターン無しに自然発症しているように思われる。したがって、ＡＬＳはいつでも誰にでも発病可能性があると見られる。にもかかわらず、効果的な治療は不十分であるか存在していない。
【発明の開示】
【０００４】
そこで、限定されるものではないが、ＡＬＳを含む神経退行過程または疾患の進行を改善または除去するのに有用な方法及び組成物が要求されている。
本発明は、神経退行過程または疾患の少なくとも一症状を改善または治療する組成物及び方法に関する。例えば、一部の実施形態において、本発明は、神経退行過程または疾患の進行を改善または除去するための組成物及び方法を提供する。本発明の一部の実施形態において、胆汁酸の透明で安定した溶液は、進行性神経退行障害を持つ対象に投与される。一部の実施形態によれば、胆汁酸溶液は他の薬剤（例えば、リルゾール（ｒｉｌｕｚｏｌｅ））をさらに含むことができる。一部の実施形態において、本発明の胆汁酸溶液は、筋萎縮性側索硬化症を持つ対象に投与されることができる。一部の実施形態によれば、リルゾールと胆汁酸の併用投与は、いずれかの薬剤のみを単独で投与することに比べると格段な改善結果をもたらすことができる。一部の実施形態において、本発明の胆汁組成物とリルゾールの共同投与は、一部の実施形態においてリルゾール毒性や副作用を軽減させることができる。
【０００５】
本発明の組成物は（１）胆汁酸、胆汁酸誘導体、胆汁酸塩、または胆汁酸とアミンのコンジュゲート、（２）水、及び（３）胆汁酸と澱粉転化物が、選択されたｐＨ範囲内のいずれのｐＨでも溶液状態になるために充分な量の水可溶性澱粉転化物を含むことができる。
【０００６】
また、本発明は、（１）胆汁酸、胆汁酸誘導体、胆汁酸塩、または胆汁酸とアミンのコンジュゲート、（２）水、及び（３）胆汁酸と多糖類が、選択されたｐＨ範囲内のいずれのｐＨでも溶液状態になるために充分な量の水可溶性非澱粉多糖類を含む組成物に関する。
【０００７】
本発明はまた（１）胆汁酸、胆汁酸誘導体、胆汁酸塩、または胆汁酸とアミンのコンジュゲート、（２）水、（３）薬剤学的適正量の薬剤学的化合物、及び（４）胆汁酸、薬剤学的化合物及び炭水化物が、選択されたｐＨ範囲内のいずれのｐＨレベルでも溶液状態になるために充分な量の水可溶性澱粉転化物または水可溶性非澱粉多糖類を含む薬剤学的組成物に関する。一部の非制限的な実施形態によれば、前記薬剤学的化合物は、神経退行疾患を持つ対象に投与した場合に、有益な効果を持つ薬物である。本発明の一つの非制限的な実施形態によれば、前記薬剤学的化合物は、リルゾール、またはリルゾールの薬剤学的に活性な、あるいは活性となりうる代謝産物、プロドラッグ（ｐｒｏ−ｄｒｕｇ）誘導体または類似物でありうる。
【０００８】
本発明はまた、胆汁酸組成物の溶液投薬形態（ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ）に関する。これらの溶液投薬形態の利点には、胆汁酸の向上した生体利用率及び吸水性がある。溶液投薬形態の付加的な利点には、薬剤学的化合物の向上した生体利用率及び吸収性がある。
【０００９】
本発明の一部の実施形態において、（１）胆汁酸、胆汁酸誘導体、胆汁酸塩、または胆汁酸とアミンのコンジュゲート、（２）水、及び（３）胆汁酸成分と炭水化物が、選択されたｐＨ範囲内のいずれのｐＨでも溶液状態になるために充分な量の炭水化物を含み、この炭水化物は、水可溶性澱粉転化物と水可溶性非澱粉多糖類の配合物である組成物を提供する。組成物が可溶性非澱粉多糖類と高分子量澱粉転化物の両方を含有する実施形態において、それぞれの量は、前記組成物に共に配合される場合、前記胆汁酸成分、高分子量澱粉転化物、可溶性非澱粉多糖類及び薬剤学的化合物がもしあれば、選択されたｐＨ範囲内のいずれのｐＨでも溶液状態になるように十分な量であれば良い。
【００１０】
本発明の一部の実施形態において、薬剤に対する反応度または効能を増大させることができる医療組成物の配合物が提供される。より具体的には、神経退行障害に病んでいる対象に、胆汁酸及びリルゾールを含む本発明の組成物を投与することは、これらの化合物のいずれかを単独投与すること以上の付加的な効果が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
成人ＡＬＳ患者中の約８５％乃至９０％は、当該疾患の家族歴（ｆａｍｉｌｙ  ｈｉｓｔｏｒｙ）を持たない。このように一見ランダムに発症しているため、一部の実務家がこれらの事例を散発性ＡＬＳ（ＳＡＬＳ）として取り扱うようになった。これに対し、ＡＬＳは、患者の約１０％乃至１５％程度が常染色体優性疾患状態のように遺伝的でありうる。これらの事例は、家族性ＡＬＳ（ＦＡＬＳ）として確認された。ＦＡＬＳ事例の約１／５において、突然変異遺伝子は、細胞質酵素であるＣｕ／Ｚｎ過酸化物ディスムターゼ−１（ＳＯＤ）である。Ｃｕ／Ｚｎ  ＳＯＤには、９０個以上の突然変異が確認されており、これは３０部位にわたっている。これらの突然変異は、遺伝子産物の正常機能を単に害するＦＡＬＳに対し、新しい逆機能を起こすであろう。例えば、突然変異ヒトＣｕ／Ｚｎ  ＳＯＤ（Ａ４Ｖ、Ｇ９３Ａ、Ｇ８５Ｒ、Ｇ３７Ｒ）を過発現するトランスジェニック（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）マウスによる実験において、ＳＯＤ１活性の喪失と疾患の発病あるいは重症度間には相関性がなかった。
【００１２】
ＳＯＤ１突然変異を持つＦＡＬＳ患者の症状と病状は、ＳＡＬＳを持つ患者のそれと酷似している。突然変異ＳＯＤ１を発現するマウスからの運動ニューロンにおける臨床的進行及び病理学的変形も、ＳＡＬＳ患者から発見されるものと顕著に類似しており、これは、ＳＡＬＳ及びＦＡＬＳの神経退行の機序が共通の成分を共有していることを示唆する。ミトコンドリアは、細胞の寿命と死亡を調節する多くの代謝及びアポトーシス経路において中枢的な役割を果たす。ミトコンドリアはまた、内因性アポトーシスカスケードの開始部位であり、カスパーゼ依存あるいはカスパーゼ独立方式の両方において作用するプロアポトーシス因子（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）の放出により活性化されることができる。ミトコンドリア機能障害はＡＬＳの発病機序に直接関与することがある。ミトコンドリア機能障害は、カルシウム−媒介興奮毒性の素因となり、反応性酸素種の発生を増大させおよび／または、内在的アポトーシス経路の開始によって運動ニューロン死滅を招く。
【００１３】
ミトコンドリア機能障害は、個別のミトコンドリアから、例えば興奮性シナプス下に恐らく局所的なカルシウム媒介毒性に反応してプロアポトーシス因子、例えばサイトクロムｃ、アポトーシス誘導因子（ＡＩＦ:ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）及びｅｎｄｏＧの非連続的な放出をもたらすことがある。この局所的な毒性は、例えば、樹状突起分枝あるいは軸状分枝などのサブ細胞区画部（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）等の死滅を誘発することもある。この種のサブ細胞区画変性は、細胞の即死を誘発するのに不充分であるかもしれないが、長期間にわたって細胞体に広まることがある。このシナリオによって、ＡＬＳでは、軸索は遠位方向から近位方向に変成され（逆行死亡性：ｄｙｉｎｇ  ｂａｃｋ）、樹状突起は最終運動ニューロン死滅前に萎縮されるようになる。この細胞死滅機序は、ニューロン変性に対して特異である。これはニューロンが複雑なサブ細胞分枝を持ったためであり、他の細胞形態における典型的な細胞死滅機序に比べて比較的遅く進行するためである。その結果、疾患の過程においてどの段階でもわずかな細胞のみが実際にアポトーシスで死亡している。
【００１４】
ＳＯＤ１突然変異による運動ニューロン変性は、細胞培養及びトランスジェニックマウスモデルで研究することができる。試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）分析において、広がり進行した運動ニューロン死滅は、ｈＳＯＤ１（ｈｕｍａｎ  Ｃｕ／Ｚｎ−ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｄｉｓｍｕｔａｓｅ  ｇｅｎｅ）においてＧ９３Ａ（９３番位置でのグリシンからアラニンへの変異）及びＡ４Ｖ（４番位置でのアラニンからバリンへの変異）などのミスセンス突然変異で観察されることができる。例えば、ニューロン分化後２４時間後に野生型、Ｇ９３Ａ及びＡ４Ｖ  ｈＳＯＤ１の細胞生存率は、ＭＴＴアッセイ及びトリパンブルー染色を用いて評価された。生存率は、経時的にかなり減少した。野生型細胞において、生存率はニューロン分化後４８時間後にだいぶ減少し（８５．９１±９．０８％）（Ｐ＜０．０５）、７２時間後には５９．４１±１３．５４％であった（Ｐ＜０．０１）。ニューロン分化後２４時間後に生存率は、野生型細胞（１００＋６．９７％）に比べてＧ９３Ａ（６３．７１±６．２５％）及びＡ４Ｖ細胞（５８．８５±７．８３％）においてはるかに減少した。また、４８時間後に、生存率はＧ９３Ａ細胞で２３．１２±８．９６％と、Ａ４Ｖ細胞で２０．７９±８．０７％とより減少した（Ｐ＜０．０１）。７２時間後には、これらの突然変異細胞は生存率約０％とほとんど死滅した。これらの結果は、ｈＳＯＤ１においてＧ９３ＡまたはＡ４Ｖ突然変異が運動ニューロンをより脆弱にすることを示唆する。これらの結果に照らし、本発明によって行われた分析は、以後の時点で起きうる実質的な生存率低下を避けるためにいくつかの実施形態において約２４時間後に行なった。
【００１５】
Ｇ９３ＡまたはＡ４Ｖを発現するトランスジェニックマウスは、正常または正常以上のＳＯＤ活性にもかかわらず激しい運動ニューロン変性症候群を発展させる。これに対して、これらの症状は、Ｃｕ／Ｚｎ  ＳＯＤがノックアウト（ｋｎｏｃｋｅｄ  ｏｕｔ）されたり、過発現されるマウスでは起こらない。
【００１６】
酸化窒素（ＮＯ）は、中枢神経系での生理的及び病理的過程な役割を果たし、ミトコンドリアは脳でのＮＯ毒性の主な標的になりうる。ＮＯは、超過酸化物陰イオンと相互作用して反応性過酸化亜窒酸塩を形成し、これは酸化的損傷、エネルギー代謝の破壊、カルシウム恒常性及びミトコンドリア作用によって細胞死滅を招く。この毒性は、ＮＯＳ抑制剤及び酸化窒素スカベンジャー（ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）、すなわち、過酸化亜窒酸塩及びヒドロキシルラジカルスカベンジャーによって防止できる。
【００１７】
Ｓ−ニトロソグルタチオン（ＧＳＮＯ）は生理的条件下で徐々に自発的にＮＯを放出できる有用なＮＯドナーであろう。ＧＳＮＯは体内でＮＯ用の保存及び／または輸送ベヒクル（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｖｅｈｉｃｌｅ）でありうる。ＧＳＮＯの代謝酵素は、細菌からヒトまで保存されることができる。酸化的ストレス下で、内皮細胞及び星状膠細胞（ａｓｔｒｏｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ）から発生しうる内因性ＧＳＮＯは、ラット（ｒａｔ）の小脳に位置されうる。したがって、ＧＳＮＯは、内因性ＮＯ保存所であり得、脳で一つ以上の役割を果たすことができる。興味深いことに、細胞をＧＳＮＯで処理すると、顕著なアポトーシスが観察されうる。
【００１８】
ＦＡＬＳ変異（ｍｕｔａｎｔ）ＣｕＺｎＳＯＤ酵素の一部は、試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）野生型蛋白質に比べて大幅に増加した過酸化活性を誘発することがある。過酸化物（Ｏ２）と酸化窒素（ＮＯ）の産物である過酸化亜窒酸塩は、ニトロニウムイオンを生成する変異ＳＯＤのＣｕ２＋と反応して蛋白質のニトロ化に続いて神経毒性を招き；ＡＬＳ患者の運動ニューロンはニトロチロシンに対する増加した免疫反応力を発揮する。増強された過酸化酵素活性は、ヒドロキシルラジカルの生産を増大させ、これはニューロンを損傷させる。
【００１９】
一部の実施形態において、本発明の胆汁酸組成物は、ＵＤＣＡの既存の市販の投薬形態における一つ以上の短所を解消できる。加えて、本発明の胆汁酸組成物は、一部の実施形態においてＡＬＳ及び／または進行性ＡＬＳの少なくとも一つの症状を改善及び／または治療することができる。本発明の一部の実施形態によれば、胆汁酸投薬形態は経口及び非経口投与に適合または容易に適応されることができる。一部の実施形態において、本発明の胆汁酸組成物は、水可溶性澱粉転化物（例えば、澱粉の加水分解に起因する産物）及びＵＤＣＡの純粋分子（ｉｎｔａｃｔ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）を含むことができる。本発明の一部の実施形態による胆汁酸組成物は、水中に可溶化でき、任意のｐＨで沈殿することなく水溶液状態に維持可能である。
【００２０】
一部の実施形態において、本発明の溶液中のＵＤＣＡの溶解度は、市販のＵＤＣＡの概略３０００倍以上であり得（０．１５ｍｏｌ対０．０５ｍｍｏｌ）、ＴＵＤＣＡの３００倍以上でありうる。本発明の溶液は、一部の実施形態において可溶化されたＵＤＣＡを血液、脳、胃、十二指腸、空腸、回腸及び／または結腸に伝達することができる。一部の実施形態において、経口及び非経口投薬形態は、例えば、ＵＤＣＡを５００ｍｇ含有でき、既存の商用化ＵＤＣＡ形態よりも少なくとも８倍以上高いＣｍａｘと、既存の市販ＵＤＣＡ形態よりも約４乃至６倍短いＴｍａｘを持つ。
【００２１】
また、一部の実施形態によれば、本発明の胆汁組成物は、任意のｐＨでいかなる沈殿物も含有せず、全身薬物として作用可能である。一部の実施形態によれば、溶液は１種以上の薬剤学的化合物（例えば、ＡＬＳに対して治療的活性である薬剤学的化合物）と同時に投与されることができる。本発明の胆汁組成物と他の薬剤学的化合物の投与は、一部の実施形態において、（ａ）薬剤学的化合物に対する反応強度の増加、（ｂ）薬剤学的化合物の効能増加、（ｃ）薬剤学的化合物の必要投与量の低下及び／または（ｄ）薬剤学的化合物の毒性減少をもたらすことができる。また、本発明の溶液は、投与経路及び時間の両観点から個別的に投与されても良い。
【００２２】
本発明の溶液は、一部の実施形態においてＡＬＳ疾患及び／または進行性ＡＬＳ疾患を治療したり改善するのに利用されることができる。例えば、本発明の溶液は、パシニアジド（Ｐａｓｉｎｉａｚｉｄｅ）（抗結核剤）、ベンズチアジド（Ｂｅｎｚｔｈｉａｚｉｄｅ）（利尿剤、抗高血圧剤）、プレドニゾロン（グルココルチコイド）、メントール局所鎮痛剤、（抗痒み剤）、メブヒドロリンナフタレンスルホネート（Ｍｅｂｈｙｄｒｏｌｉｎ  Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（Ｈ１、抗ヒスタミン剤）、トリクロロメチアジド（Ｔｒｉｃｈｌｏｒｍｅｔｈｉａｚｉｄｅ）（利尿剤、抗高血圧剤）、オキシテトラサイクリン（抗菌剤）、アルカインサルフェート（Ａｒｃａｉｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔｅ）（ＮＯＳ抑制剤、ＮＭＤＡ抑制剤、抗原虫剤（ａｎｔｉ−ｐｒｏｔｏｚｏａｌ））、エリスロマイシン（抗菌剤）、グルタチオン（重金属中毒、抗酸化剤）、トリオキサレン（Ｔｒｉｏｘｓａｌｅｎ）（メラニン化剤、乾癬治療剤）、ニリドリンＨＣＬ（Ｎｙｌｉｄｒｉｎ  ＨＣＬ）（末梢血管拡張剤）、デスメチルジアゼパム（Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｉａｚｅｐａｍ）（鎮静剤、小神経安定剤）、トンジルアミンＨＣＬ（Ｔｈｏｎｚｙｌａｍｉｎｅ  ＨＣＬ）（抗ヒスタミン剤）、バルプロエイトＮａ（Ｖａｌｐｒｏａｔｅ  Ｎａ）（抗けいれん剤）、アミノフェナゾン（解熱鎮痛剤、鎮痛剤）、スルファメチゾール（抗菌剤）、ドロペリドール（Ｄｒｏｐｅｒｉｄｏｌ）（神経弛緩剤）、２−チオウラシルチロイド（抑制剤）、キヌレン酸（ビタミンＢ欠乏症における営養素）、フシジン酸（Ｆｕｓｉｄｉｃ  ａｃｉｄ）（抗菌剤）、ロイコボリンＣａ（Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  Ｃａ）（抗貧血剤、葉酸拮抗剤に対する解毒剤）、硫酸スパルテイン（Ｓｐａｒｔｅｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）（分娩促進剤）、アミグダリン（Ａｍｙｇｄａｌｉｎ）（抗炎症剤、実験的抗新生物剤）、プラモキシンＨＣＬ（Ｐｒａｍｏｘｉｎｅ  ＨＣＬ）（麻酔剤；局所）、フロセミド（Ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）（利尿剤、抗高血圧剤）、ジニトルミド（Ｄｉｎｉｔｏｌｍｉｄｅ）（抗原虫剤）、ブデソニド（Ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）（抗炎症剤）、フロプロピオン（Ｆｌｏｐｒｏｐｉｏｎｅ）（鎮痙剤）、フルオロメトロン（Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｏｌｏｎｅ）（グルココルチコイド、抗炎症剤）、Ｎ−ホルミルメチオニルフェニルアラニン（Ｎ−Ｆｏｒｍｙｌｍｅｔｈｉｏｎｙｌｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）（化学走性ペプチド）、チオペンタルＮａ（Ｔｈｉｏｐｅｎｔａｌ  Ｎａ）（麻酔剤）、ランソプラゾール（Ｌａｎｓｏｐｒａｚｏｌｅ）（抗潰瘍作用剤）、トシル酸ブレチリウム（Ｂｒｅｔｙｌｉｕｍ  Ｔｏｓｙｌａｔｅ）（ノルエピネフリン放出抑制剤）、セファマンドルＮａ（Ｃｅｆａｍａｎｄｏｌｅ  Ｎａ）（抗菌剤）、オキシベンダゾール（抗寄生虫薬）、サイクロロイシルグリシン（Ｃｙｃｌｏｌｅｕｃｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）（麻薬誘発ドパミンＲ感度抑制剤）、ダントロレンＮａ（Ｄａｎｔｒｏｌｅｎｅ  Ｎａ）（骨格筋肉弛緩剤）、テトロキノン（角質溶解剤）、ピペラジン（抗寄生虫剤）、エスクリン（Ａｅｓｃｕｌｉｎ）（抗炎症剤）、エチステロン（Ｅｔｈｉｓｔｅｒｏｎｅ）（プロゲスチン）、ジメタ���オン（抗けいれん剤）、グリセオフルビン（抗真菌剤、中期有糸分裂抑制、重合微細管及び関連蛋白質との相互作用）、アセタミノザロール（Ａｃｅｔａｍｉｎｏｓａｌｏｌ）（鎮痛剤、解熱鎮痛剤）、イソグバシンＨＣＬ（Ｉｓｏｇｕｖａｃｉｎｅ  ＨＣＬ）（ＧＡＢＡ作用剤）、プトレシンＤＩＨＣＬ（Ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ  ＤＩＨＣＬ）（オルニチンジカルボキシラーゼ抑制剤、細胞成長因子）、エメチンＨＣＬ（Ｅｍｅｔｉｎｅ  ＨＣＬ）（抗アメーバ剤、ＲＮＡ、ＤＮＡ及び蛋白質合成抑制）、スルファニルアミド（抗菌剤）、ミモシン（Ｍｉｍｏｓｉｎｅ）（脱毛剤）、アセチルコリン（心臓抑制剤、縮瞳剤、末梢血管拡張剤）、プラリドキシムメシレート（Ｐｒａｌｉｄｏｘｉｍｅ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）（コリンエステラーゼ再活性剤）、リシルトリプトファニル−リシン（ＤＮＡに対するアセテート結合）、ヘコゲニン（Ｈｅｃｏｇｅｎｉｎ）（ステロイド前駆体）、プレドニソロンアセテート（グルココルチコイド）、アルベンダゾール（抗寄生虫薬）、ヒドロクロロチアジド（利尿剤）、デメクロサイクリンＨＣＬ（抗菌剤）、ニトロフラゾン（Ｎｉｔｒｏｆｕｒａｚｏｎｅ）（局所抗感染剤）、ジクロキサシリンＮａ（Ｄｉｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｎ  Ｎａ）（抗菌剤）、アルファ−トコフェロール（ビタミンＥ欠乏）、テトラサイクリンＨＣＬ（抗アメーバ剤、抗菌剤、抗リケッチア剤）、フェノフィブレート（Ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）（抗高脂血剤）、プロベネシド（Ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ）（尿酸排せつ促進剤）、トレチノイン（Ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）（角質溶解剤）、アセタミノフェン（Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）（鎮痛剤、解熱鎮痛剤）、ヒドラスチニンＨＣＬ（Ｈｙｄｒａｓｔｉｎｉｎｅ  ＨＣＬ）（強心剤、子宮恒常剤（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ））、ｄ［−Ａｒｇ−２］キョートルフィンアセテート（Ｋｙｏｔｏｒｐｈｉｎ  ａｃｅｔａｔｅ）（鎮痛剤）、ＮＭＤＡ（ＮＭＤＡ作用剤）、セフメタゾールＮａ（Ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ  Ｎａ）（抗菌剤）、リバビリン（抗ウイルス剤）、０−ベンジル−Ｌ−セリン（アミノ酸誘導体）、ピクロトキシン（刺激剤、けいれん剤、ＧＡＢＡ  Ｒ拮抗剤、魚毒（ｉｃｈｔｈｙｏｔｏｘｉｎ））、オキセタジン（Ｏｘｅｔｈａｚｉｎｅ）（局所麻酔剤）、スルファチアゾール（抗菌剤）、トリクロロメチン（抗新生物剤、細胞毒性）、ナブメトン（抗炎症剤）、クロラムフェニコール（抗菌剤、抗リケチア剤、蛋白質合成抑制）、リルゾール、人参及びその抽出物、グリシリジン及びグリシリジン酸、カルボキノンの誘導体、コエンザイムＱ１０、クレアチン、インシュリン形態成長因子−１、ミノサイクリン、メカムセリン、キサリプロデン（ｘａｌｉｐｒｏｄｅｎ）、ガバペンチン、デキストロメトルファン、タラムパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、ＩＬ−Ｉ、ＴＲ−５００、プロシステイン、脳誘導神経栄養性因子、バクロフェン、チザニジン、ベンゾジアゼピン類、グリコピロレート、アトロピン、キニン、フェニトイン及びモルフィンなどの運動ニューロン死滅を減少させる薬剤学的化合物を含むことができる。
【００２３】
ラットに供給された疎水性胆汁塩は、肝でアポトーシスを誘発させるであろう。加えて、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）の併用投与は、生体内肝細胞アポトーシスを抑制できる。肝細胞及び肝外細胞の両方において、アポトーシスは疎水性酸類、エタノール、トランスフォームした成長因子−α、作用性Ｆａｓ抗体またはオカダ酸（ｏｋａｄａｉｃ  ａｃｉｄ）などの多様な因子によって誘発される。驚くべきことに、ＵＤＣＡは、ミトコンドリア膜の撹乱や、バックス転位（Ｂａｘ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）及び／またはサイトクロムｃ放出を緩和することによって、アポトーシスを減衰させ、細胞保護を発現できる。
【００２４】
ウルソデオキシコール酸（３α−７β−ジヒドロキシ-５β−コラン酸；ＵＤＣＡ）は、非毒性親水性胆汁酸であり、総胆汁酸の単に約３％程度の低い濃度であるが、通常、ヒトの胆汁に存在する。ＵＤＣＡは、多様な胆汁うっ滞性障害の治療に利用され、これは米国ＦＤＡ（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）で承認された唯一の薬物である。
【００２５】
熊胆の主成分であるＵＤＣＡは、様々な種類の肝疾患に対する治療及び保護用の薬剤学製剤として有用なものである。現在、その医薬的用途は、放射線透過−胆石の溶解や、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、妊娠性肝内うっ滞、嚢胞性線維症に関連した肝疾患、多数の小児肝障害及び肝の慢性移植片−対−宿主病（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）を含む様々な胆汁うっ滞性障害を含む。
【００２６】
ＵＤＣＡの薬理作用は、容量依存方式での毒性胆汁酸のＵＤＣＡへの交換及び／または置換、容量依存方式での細胞保護作用、容量依存方式での細胞膜の安定化／保護、容量依存方式での抗アポトーシス効果、容量依存方式での細胞内グルココルチコイド受容体の活性化による免疫調節効果、ＮＦ−ｋＢの抑制及び酸化窒素合成酵素の誘導阻害による抗炎症効果、容量依存方式での胆汁分泌の刺激、容量依存方式での細胞外流出の刺激及び細管膜伝達体の挿入を含むことができる。
【００２７】
ＵＤＣＡは実際的にｐＨ１乃至８で不溶性である。そのプロトン化形態の溶解度は、約０．０５ｍＭである。そのタウリンコンジュゲート化代謝産物（ＴＵＤＣＡ；０．４５ｍＭ）の溶解度は、ＵＤＣＡ溶解度よりも約１０倍高い。さらに、ＴＵＤＣＡはプロトン化した場合、比較的低い溶解度を持つ唯一の胆汁酸（ＢＡ）である。経口投与後、ＵＤＣＡの略３０乃至６０％は、非イオン受動拡散（Ｎｏｎｉｏｎｉｃ  ｐａｓｓｉｖｅ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）により空腸及び回腸の長さに沿って吸収され、非イオン的能動輸送機序により回腸に吸収され、結晶ＵＤＣＡの不溶性により結腸で少量（摂取容量の２０％）吸収される。これは、その非イオン化した分子の水溶解度とイオン化した胆汁塩種よりも大きい親脂性により非常に遅くて不完全な溶解を招き、したがって、生物学的メンブレイン中に分配されることが可能になる。
【００２８】
ＵＤＣＡはいったん肝細胞により吸収されると、ＴＵＤＣＡ及びＧＵＤＣＡとコンジュゲートされる。これらＴＵＤＣＡ及びＧＵＤＣＡは、ヒトで分泌された胆汁酸として肝の一次通過クリアランス（ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｒｓｔ−ｐａｓｓ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）により胆汁で排せつされるものである。したがって、その血液中レベルは体循環において非常に低い。胆汁酸は広範囲な肝の再循環を受けたり、または、遊離ＵＤＣＡも肝細胞により胆汁中に分泌され、これは胆管細胞により活性的かつ有効に再吸収されることができる。ＵＤＣＡ及びＧＵＤＣＡは能動及び受動輸送機序の両方により吸収される一方、タウロ−コンジュゲートされたＵＤＣＡ（ＴＵＤＣＡ）は末端の回腸で活性的に輸送されることができる。
【００２９】
一部の実施形態において、１０±１２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上のＵＤＣＡ容量は、大量のＵＤＣＡが腸内細菌により７ーケト−リトコール酸を通じてＣＤＣＡに生体内変換されることができるので、胆汁内でその比率の増加を抑制できる。あるいは、ＵＤＣＡは７β-ヒドロキシ基のエピマー化によりＣＤＣＡに、さらにはリトコール酸（ＬＣＡ）に変換されることができる。したがって、ＵＤＣＡの容量増加につれて、ＵＤＣＡの吸収は減少する。
【００３０】
一部の実施形態において、本発明の組成物の投与は、肝、体循環及び／または脳で適切な量のＵＤＣＡに治療効果を付与する。本発明の溶液は、一部の実施形態において有意にＵＤＣＡの水溶解性の増加、膜透過性の増加及びＵＤＣＡのＣＤＣＡへのエピマー化の防止効果を発揮できる。
【００３１】
ＡＬＳ患者に対する生存時間及び寿命は、疾病の初期段階においては睡眠中に付与される呼吸療法、疾患が進行してより飲み込み難くなった段階においては、その代替として良好な栄養を維持する摂食法を用いることにより向上する。現在、ＡＬＳの治療に対して米国食品医薬品局で承認された唯一の薬物は、リルゾールである。しかし、リルゾール供給を受けた患者の寿命は、僅か数カ月しか延びない。幹細胞及び遺伝子療法と関連した研究は未開拓分野として有望であるが、治療する医者に利用可能な選択肢はまだ広がっていない。
【００３２】
任意の特定作用機序に限定されるものではないが、本発明は、神経退行過程を改善できる可溶性胆汁酸の透明で安定した溶液を提供する。本発明の一部の実施形態において、前記組成物は、リルゾールを含む。まだＦＤＡ承認を受けていないが、ＡＬＳ治療用の唯一の薬物であるリルゾールは、信号伝達中に放出されたグルタメートの量を減少させることによって作用する。リルゾールの効能は主に２回の管理された臨床試験から立証されていた。この薬物の副作用の中でもっとも頻度の高いものは、吐き気、嘔吐、食欲不振、下痢、無力症、嗜眠症、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、口腔周囲感覚異常、腹痛及びめまいがあった。なかでも、めまい（ｖｅｒｔｉｇｏ）、下痢、吐き気、口腔周囲感覚異常及び食欲不振は、高容量が投与された患者においてより頻繁に現れる。一般に、リルゾール治療を開始して３ケ月内に血清アミノ転移酵素レベルの増加が見られる。しかし、これらのレベルは、２乃至６ケ月の治療後に下がる。血清アミノ転移酵素レベルのモニタリングは、リルゾール治療してから１年間は推奨される。
【００３３】
胆汁酸は細胞内シグナリング剤（ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）として役割を果たすもので、細胞輸送を調節して細胞内Ｃａ２＋レベルを変化させ、細胞表面受容体を活性化させる。ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）は肝胆汁性障害の治療において立証された臨床効能をもつ親水性胆汁酸である。ＵＤＣＡは、生体内グリシンまたはタウリンと速かにコンジュゲートしてグリコウルソデオキシコール酸及びタウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）をそれぞれ生産する。ＵＤＣＡとその誘導体及びコンジュゲートは、アポトーシスを抑制することによって細胞保護剤として作用する。
【００３４】
グルタメート神経毒性は、アポトーシスを通じて細胞死滅を招くので、アポトーシスを遮断することは急性及び慢性神経退行過程を遅らせることができる。本発明の一部の実施形態において、胆汁組成物はｐ５３により媒介された毒性効果を遮断する。本発明の一部の実施形態において、胆汁組成物は、酸化過程により媒介された毒性効果を遮断する。
【００３５】
本発明は（ｉ）１種以上の可溶性胆汁酸、水可溶性胆汁酸誘導体、胆汁酸塩、及びアミンとコンジュゲートされた胆汁酸（まとめて“胆汁酸”と呼ぶ。）、（ii）水、及び（iii）希望のｐＨ範囲内の任意のｐＨで析出物を形成しない溶液を生成するのに十分な量の１種以上の水可溶性澱粉転化物または水可溶性非澱粉多糖類を含む水性溶液に関するものである。前記組成物は、それ自体が薬剤学的効果を持つ胆汁酸または胆汁酸塩を含有する。本発明の剤形は、希望のｐＨ範囲にわたって本発明の組成物に溶解状態にある薬剤学的材料の伝達のための担体、アジュバントあるいは増強剤（ｅｎｈａｎｃｅｒ）として作用する。または、本発明の一部の実施形態によれば、前記組成物は可溶性が不十分である非−胆汁酸薬剤を含むことができる。
【００３６】
一部の実施形態において、前記胆汁酸と前記炭水化物は、酸性からアルカリ性までの任意のｐＨで沈殿されることなく溶液状態であることが利点でありうる。胆汁酸のこれらの水溶液系は、析出物あるいは粒子を実質的に含有しない。本発明の追加の利点は、水溶液系が５０℃保存の促進条件下で数カ月観察後にも強酸あるいはアルカリ性の追加後に透明度、色相あるいは臭いの変化のような物理的外観の変化が無いことである。
【００３７】
本発明の一部の実施形態において、胆汁酸の水溶液系は経口投与され、したがって、消化管内酸性胃液及びアルカリ性腸液に曝されても、胆汁酸の析出なしに消化管を通って腸内に到達する。これらの溶解された胆汁酸剤形は、腸内固有の溶液系の效果的且つ完全な吸収を可能とし、したがって、腸間循環されることができる。本発明の実施形態によれば、胆汁酸溶解性（例えば、物理的外観の変化及び析出）は、任意の胆汁酸のカルボキシル酸側鎖がプロトン化（非イオン化）できるか、イオン化されているか、あるいは単純なカルボキシル酸であるかによって影響される。
【００３８】
胆汁酸カルボキシル酸側鎖のイオン化状態は、一部の水溶液系において胆汁酸の疎水性及び親水性に大きく影響を与える。本発明の一部の実施形態において、そのイオン化状態は、ｐＨを調整して胆汁酸の毒性、吸水性及び両親媒性を制御することによって調節される。１種以上の胆汁酸は、治療的活性剤で、薬物のアジュバントとして、薬物の担体として、あるいは薬物溶解度の増強剤としてこれらの水溶液系に溶解されることができる。これらの水溶液系は、口腔消費用、浣腸剤、口腔洗浄剤、うがい剤（ｇａｒｇｌｅ）、鼻腔製剤、耳製剤、注射剤、洗浄剤（ｄｏｕｃｈｅ）、局所皮膚製剤、その他局所製剤及び化粧製剤用に製造でき、これらの製剤は、長時間経過後の物理的外観の劣化や析出が生じるといった短所がなく、所望のｐＨをもつ。
【００３９】
可溶性胆汁酸は、水可溶性胆汁酸の任意の類型である。胆汁酸塩は、胆汁酸の全ての任意の水可溶性塩である。胆汁塩は、燐脂質及びコレステロールに対する大きな可溶化能力を発揮し、したがって、良好な洗浄剤である。より疎水性の高い胆汁塩は、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）及び試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）のいずれにおいても多様な隔膜に対してより有害でありうる。胆汁酸の水性溶解塩は、前記説明された胆汁酸とアミンとの反応により形成されることができ、この時のアミンとしては、限定されるものではないが、トリエンチン、ジエチレントリアミン、テトラエチレンペンタミンなどの脂肪族遊離アミン類；アルギニン、リシン、オルニチンなどの塩基性アミノ酸；アンモニア；Ｄ−グルカミン、Ｎ−アルキルグルカミンなどのアミノシュガー類；コリンなどの４級アンモニウム誘導体；ピペラジン、Ｎ−アルキルピペラジン、ピペリジン、Ｎ−アルキルピペリジン、モルフォリン、Ｎ−アルキルモルフォリン、ピロリジンなどの複素環式アミン；トリエタノールアミン及びトリメタノールアミンなどが挙げられる。本発明によれば、胆汁酸とサイクロデキストリン及びその誘導体間の包接化合物、及び水可溶性Ｏ−スルホン化胆汁酸を含む胆汁酸の水可溶性金属塩も可溶性胆汁酸塩として含まれる。
【００４０】
本発明の一部の実施形態による可溶性胆汁酸誘導体は、対応する非誘導体化胆汁酸に比べて水溶液中可溶性が同一であるか、それより大きい誘導体でありうる。胆汁酸誘導体は、これらに限定されるものではないが、胆汁酸のヒドロキシ基及びカルボキシル酸基が、これらに限定されないがハロゲン及びアミノ基等の他の作用基とした誘導体を含む。可溶性胆汁酸は、ＨＣｌ、燐酸、クエン酸、アセト酸、アンモニアまたはアルギニンのうちの一つと配合される胆汁酸の遊離酸形態の水性製剤を含むことができる。
【００４１】
本発明の教示によって使用可能な胆汁酸としては、限定されるものではないが、ウルソデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、コール酸、ヒオデオキシコール酸、デオキシコール酸、７−オキソリトコール酸、リトコール酸、ヨードデオキシコール酸、ヨーコール酸、タウロウルソデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、タウロリトコール酸、グリコウルソデオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、及びステロイド核にあるヒドロキシ基あるいはカルボキシル酸基でのそれらの誘導体が挙げられる。
【００４２】
本発明の一部の実施形態において、一つの利点は、溶液中に胆汁酸を搬送することにより、既存の市販製剤よりも一層高い生体内胆汁酸レベルを達成できるということである。したがって、胆汁酸の治療上の可能性は、既存の剤形よりもはるかに十分に高いものである。胆汁が不完全に可溶化される既存剤形により達成できる胆汁酸の生体内レベルは低く、多量の胆汁酸の投与を必要とする。本発明の剤形においては胆汁酸が完全に溶解されるので、より低い容量で投与された場合にも胆汁酸のより高い生体内レベルを達成することができる。
【００４３】
本発明の一部の実施形態において、複数の胆汁酸は単一剤形で使用される。疎水性活性が異なる２種以上の胆汁塩の混合物は、中間の疎水性活性の単一胆汁塩として作用する。その結果、疎水性活性が相異なる２種以上の胆汁酸の混合物の洗浄性及び毒性は、個別成分に対するものの中間である場合もある。
【００４４】
疎水性活性の相異なる２種以上の胆汁酸の混合物は、中間の疎水性活性の単一胆汁塩として作用できる。その結果、疎水性活性の相異なる２種以上の胆汁酸の混合物の洗浄性及び毒性は、個別成分に対するものの中間である場合もある。
【００４５】
本発明で使用するのに適合する炭水化物には、水可溶性澱粉転化物及び水可溶性非澱粉多糖類が含まれる。本発明の一部の実施形態によれば、水可溶性澱粉転化物は、各種ｐＨ条件下で澱粉の部分あるいは不完全加水分解から直接得られた炭水化物を含む。非剤限的な例には、マルトデキストリン、デキストリン、液体ぶどう糖、とうもろこしシロップ固形物（液体ぶどう糖の乾燥粉末）及び可溶性澱粉（例えば、マルトデキストリンまたはとうもろこしシロップ固形物）が挙げられる。一部の実施形態において、とうもろこしシロップ固形物であるＭＡＬＴＲＩＮ（登録商標）Ｍ２００及びマルトデキストリンであるＭＡＬＴＲＩＮ（登録商標）Ｍ７００を使用することができ、これらはいずれも米国アイオワ州のマスカチンに本拠を置くＧｒａｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社の商品名ＧＰＣ(登録)商標で製造されたものを使用することができる。本実施形態の目的のために、用語“とうもろこしシロップ”は、とうもろこしシロップと液体ぶどう糖を全て含むことができる。澱粉転化物が重合体からなる場合、この重合体は少なくとも一つの還元端部と少なくとも一つの非還元端部をもつことができ、直鎖あるいは分岐鎖でありうる。また、分子量は、約１００質量単位乃至１０６質量単位以上でありうる。高分子量の水可溶性澱粉転化物は分子量１０５以上を持つものである。
【００４６】
本発明の一部の実施形態によれば、水可溶性非澱粉多糖類は、各種加水分解あるいは合成機序により各種ｐＨ条件下で得られることができる。非剤限的な例には、デキストラン、グァーガム、ペクチン、難消化性の可溶性繊維が挙げられる。重合体からなる場合、該当重合体は少なくとも一つの還元端部と少なくとも一つの非還元端部をもつ。前記重合体は直鎖あるいは分岐鎖でありうる。分子量は、約１００質量単位乃至１０６質量単位以上でありうる。好ましくは、分子量は１０５質量単位以上をもつ。
【００４７】
本発明の実施形態で使用される高分子量の水可溶性澱粉転化物及び／または可溶性非澱粉多糖類の量は、少なくとも製剤において選択された（複数の）胆汁酸に希望の濃度及び希望のｐＨ範囲で可溶性を付与するのに必要な量である。本発明の一部の実施形態において、ＵＤＣＡ析出を防止するのに必要なＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの概略最小重量比は、６：１（すなわち、水１００ｍＬ中、ＵＤＣＡ０．２ｇごとに１．２ｇ、ＵＤＣＡ１ｇごとに６ｇ及びＵＤＣＡ２ｇごとに１２ｇ）でありうる。本発明の一部の実施形態において、マルトデキストリンの概略最小量は、ケノデオキシコール酸２００ｍｇごとに３０ｇ、７ーケトリトコール酸２００ｍｇごとに１２ｇ、コール酸２００ｍｇごとに１０ｇ及びデオキシコール酸２００ｍｇごとに５０ｇでありうる。本発明の一部の実施形態において、本発明の水溶液投薬形態から胆汁酸の析出を防止するのに必要なＵＤＣＡに対する液体ぶどう糖（市販の低廉なとうもろこしシロップ）の概略最小重量比は約２５：１（すなわち、水１００ｍＬ中ＵＤＣＡ５００ｍｇごとに１２．５ｇ及び水２００ｍＬ中ウルソデオキシコール酸１ｇごとに２５ｇ）でありうる。本発明の一部の実施形態において、本発明の水溶液投薬形態から胆汁酸の析出を防止するのに必要な液体ぶどう糖（とうもろこしシロップ固形物、例えば、ＭＡＬＴＲＩＮ(登録商標)Ｍ２００）の乾燥粉末の概略最小量は、水１００ｍＬ中ウルソデオキシコール酸１ｇごとに３０ｇ、水２００ｍＬ中ウルソデオキシコール酸２ｇごとに概略６０ｇである。本発明の一部の実施形態において、本発明の水溶液投薬形態から胆汁酸の析出を防止するのに必要な可溶性非澱粉多糖類の概略最小量は、水１００ｍＬ中ウルソデオキシコール酸５００ｍｇごとにグァーガム５０ｇ、水１００ｍＬ中ウルソデオキシコール酸５００ｍｇごとにペクチン８０ｇである。高分子量水可溶性澱粉転化物または可溶性非澱粉多糖類の最小必要量は主として、濃度よりむしろ溶液製剤における胆汁酸の絶対量によって決定されることができる。
【００４８】
本発明の一部の実施形態において、剤形は、澱粉転化物及び／または非澱粉多糖類の他にも、サイクロデキストリンを含むことができる。代案的には、一部の実施形態において、本発明の組成物はサイクロデキストリンがなくても良い。
【００４９】
本発明の一部の実施形態において、前記剤形は、食物繊維をさらに含む。食物繊維の非剤限的例には、グァーガム、ペクチン、オオバコ（ｐｓｙｌｌｉｕｍ）、オーツ麦ガム、豆繊維、オーツ麦のふすま、とうもろこしのふすま、セルロース及び小麦のふすまが挙げられる。
【００５０】
本発明の一部の実施形態において、前記剤形は、乳化剤をさらに含む。本発明の目的のために、用語“乳化剤”は、乳化剤及び懸濁剤を含む。乳化剤の非剤限的な例には、グァーガム、ペクチン、アカシア、カラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポビドン、トラガカンスガム、キサンタンガム及びソルビタンエステルが挙げられる。
【００５１】
剤形がその胆汁酸、澱粉転化物、可溶性非澱粉多糖類及び／またはその薬剤学的化合物を析出させないとして選択されたｐＨ範囲は、水系で得られる任意の範囲のｐＨレベルでありうる。好ましくは、この範囲は、約ｐＨ１乃至約ｐＨ１４、より好ましくは約ｐＨ１乃至約ｐＨ１０の範囲になりうる。より好ましくは、この範囲は、投与方法によって薬剤学的剤形が製剤から溶液状態に維持され、体内に投与され吸収されるのに充分な水系で得られることができる任意の下位セット（ｓｕｂｓｅｔ）のｐＨレベルである。したがって、前記組成物は、薬剤学的化合物が口腔、胃及び腸内で優勢なｐＨレベルで析出されることなく溶液状態にある薬剤学的剤形として使用されることができる。本発明の一部の実施形態において、胆汁酸は、酸性条件下で胆汁酸の一般的な不溶性にもかかわらず遊離胆汁酸として酸性条件の下に溶解されたまま存在するようになる。
【００５２】
本発明の一部の実施形態において、薬剤は、リルゾールである。その他薬剤学的化合物の非剤限的な例には、ホルモン、ホルモン拮抗剤、鎮痛剤、解熱剤、抗炎症薬物、免疫活性薬物、抗新生物性薬物、抗生物質、抗炎症剤、交感神経興奮剤、抗感染薬、抗腫瘍剤及び痲酔剤を含む。追加の非剤限的な例としては、胃腸管、肝、心血管系及び呼吸系統を標的にしたり影響を及ぼす薬物を含む。薬剤学的化合物の追加の非剤限的な例には、インシュリン、ヘパリン、カルシトニン、アンピシリン、オクトレオチド、シルデナフィルクエン酸塩、カルシトリオール、ジヒドロタキステロール、アムポモルフィン、ヨヒンビン、トラゾドン、アシクロビル、アマンタジン・ＨＣｌ、リマンタジン・ＨＣｌ、シドフォビル、デラビルジン・メシレート、ジタノシン、ファンシクロビル、フォスカルネットナトリウム（ｆｏｓｃａｒｎｅｔ  ｓｏｄｉｕｍ）、フルオロウラシル、ガンシクロビルナトリウム、イドクスウリジン、インターフェロン−α、ラミブジン、ネビラピン、ペンシクロビル、リバビリン、スタブジン、トリフルリジン、バラサイクロビル・ＨＣｌ、ザルシタビン、ジドブジン、インジナビル・Ｈ２ＳＯ４、リトナビル、ネルフィビル・ＣＨ３ＳＯ３Ｈ、サキナビル・ＣＨ３ＳＯ３Ｈ、ｄ−ペニシラミン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、アウロチオグルコース、金ナトリウムチオマレート、アウラノフィンレバミソール、ＤＴＣ、イソプリノシン、メチルイノシンモノポスフェート、ムラミルジペプチド、ジアゾキシド、ヒドララジン・ＨＣｌ、ミノキシジル、ジピリダモル、イソクスプリン（ｉｓｏｘｓｕｐｒｉｎｅ）・ＨＣｌ、ニアシン、ニリドリン・ＨＣｌ、フェントラミン、ドキサゾシン・ＣＨ３ＳＯ３Ｈ、プラゾシン・ＨＣｌ、テラゾシン・ＨＣｌ、クロニジン・ＨＣｌ、ニフェジピン、モルシドミン、アミオダロン、アセチルサリチル酸、ペラパミル、ジルチアゼム、ニソルジピン、イスラジピン、ベプリジル、イソソルビド・二硝酸塩、ペンタエリスリトール・四硝酸塩、ニトログリセリン、シメチジン、ファモチジン、ニザチジン、ラニチジン、ランソプラゾール、オメプラゾール、ミソプロストール、スクラルフェート、メトクロプラミド・ＨＣｌ、エリスロマイシン、ビスムス化合物、アルプロスタジル、アルブテロール、ピルブテロール、テルブタリン・Ｈ２ＳＯ４、サルメトロール、アミノフィリン、ジフィリン、エフェドリン、エチルノレピネフリン、イソエタリン、イソプレテレノール、メタプロテレノール、ｎ−ドクロミル、オキシトリフィリン、テオフィリン、ビトルテロール、フェノテロール、ブデソニド、フルニソリド、べクロメタソン・ジプロピオン酸塩、フルチカソン・プロピオン酸塩、コデイン、硫酸コデイン、燐酸コデイン、デキストロメトルファン・ＨＢｒ、トリアムシノロン・アセトニド、モンテルカストナトリウム、ザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ）、ジレウトン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）、クロモリンナトリウム、臭化イプラトロピウム、ネドクロミルナトリウムベンゾエート、ジフェンヒドラミン・ＨＣｌ、ヒドロコドン・二スズ酸塩、メタドン・ＨＣｌ、硫酸モルフィン、アセチルシステイン、グアイフェネシン、炭酸アンモニウム、塩化アンモニ��ム、スズ酸カリウムアンチモン、グリセリン、テメピン・水和物、パルミチン酸コルホスセリル、アトルバスタチン・カルシウム、セルバスタチン・ナトリウム、フルバスタチン・ナトリウム、ロバスタチン、プラバスタチン・ナトリウム、シムバスタチン、ピクロラジアクルバ（ｐｉｃｒｏｒｒｈａｚｉａ  ｋｕｒｒｖａ）、アンドログラフィスパニキュラータ、モリンガオレイフェラ、アルビチアレベック、アドハタバシカ、ウコン（ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）、ギムネマシルベスタ （ｇｙｍｎｅｍａ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ）、タミナリアアルジュナ（ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ  ａｒｊｕｎａ）、アザジラクタインジカ、チノスポリアコージフォリア、メトロニダゾール、アンポテリシン  Ｂ、クロトリマゾール、フルコナゾール、ハロプロギン、ケトコナゾール、グリセオフルビン、イトラコナゾール、テルビナフィン・ＨＣｌ、エコナゾール・ＨＮＯ３、ミコナゾール、ニスタチン、オキシコナゾール・ＨＮＯ３、スルコナゾール・ＨＮＯ３、セチリジン・２ＨＣｌ、デキサメタソン、ヒドロコルチソン、プレドニソロン、コルチソン、カテチン及びその誘導体、グリシリジン、グリシリジン酸、ベタメタソン、ルドロコルチソン・アセト酸塩、フルニソリド、フルチカソン・プロピオン酸塩、メチルプレドニソロン、ソマトスタチン、リスプロ、グルカゴン、プロインシュリン、不溶性インシュリン、アクラボス、クロルプロパミド、グリピジド、グリブリド、メトフォルミン・ＨＣｌ、レパグリニド、トルブタミド、アミノ酸、コルヒチン、スルフィンピラゾン、アロプリノール、ピロキシカム、トルメチンナトリウム、インドメタシン、イブプロフェン、ジフルニサル、メフェナミン酸、ナプロキセン及びトリエンチンが挙げられる。
【００５３】
前記剤形に含まれることができる薬剤学的化合物の追加例には、剤形に添加される場合に可溶性が維持される化合物であればいずれも含まれる。剤形における追加の薬剤学的化合物によれば、溶液中の胆汁酸は可溶性であり、酸及び／またはアルカリで安定的であり、必要な場合、本発明における胆汁酸の所定濃度のこれらの水溶液投薬形態内に添加できるアジュバント、担体、または任意の治療的活性剤の溶解度用の増強制として作用でき、これらの例としては、これに限定される者ではないが、インシュリン（ｐＨ７．４〜７．８）、ヘパリン（ｐＨ５〜７．５）、カルシトニン、アンピシリン、アマンタジン、リマンタジン、シルデナフィル、ネオマイシン硫酸塩（ｐＨ５〜７．５）、アホモルフィン、ヨヒンビン、トラゾドン、リバビリン、パクリタキセル及びその誘導体、レチノール及びトレチノインなどが挙げられる。また、これに限定されるものではないが、メトフォルミンＨＣｌ（ｐＨ５〜７）、ラニチジンＨＣｌ、シメチジン、ラミブジン、セトリジン２ＨＣｌ（ｐＨ４〜５）、アマンタジン、リマンタジン、シルデナフィル、アポモルフィン、ヨヒンビン、トラゾドン、リバビリン及びデキサメタソン、ヒドロコルチソン、プレドニソロン、トリアムシノロン、コルチソン、ニアシン、タウリン、ビタミン、自然産アミノ酸、カテチン及びその誘導体、グリシリザル抽出物（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｌ  ｅｘｔｒａｃｔ）、及びグリシリジン及びグリシリジン酸などのその主成分、そして、水可溶性ビスムス化合物（例えば、ビスムスナトリウムスズ酸塩（ｂｉｓｍｕｔｈ  ｓｏｄｉｕｍ  ｔａｒｔｒａｔｅ））などを含むある種の治療活性化合物は可溶性であり、酸及び／またはアルカリに安定で、必要によって本発明のウルソデオキシコール酸を含有するこれらの水溶液投薬剤形に添加されることができる。
【００５４】
本発明の一部の実施形態は、ｐＨ調節剤により実施することができる。非制限的な例には、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、Ｈ２ＳＯ４、ＨＮＯ３、ＣＨ３ＣＯＯＨ、クエン酸、リンゴ酸、スズ酸、乳酸、燐酸塩、エデト酸（ｅｉｄｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）及びアルカリ類を含む。
【００５５】
本発明の一部の実施形態において、剤形は、ヒト及びほ乳動物疾患を治療するのに利用されることができる。本発明は、ＡＬＳ、ＡＬＳ関連障害及びその他神経退行障害の治療を想定できる。また、本発明は胃腸障害、肝臓疾患、胆石及び高脂血症を治療するのに利用されることができる。肝臓疾患の非制限的な例としてアルコール−誘発肝疾患および非アルコール−誘発肝疾患が挙げられる。胃腸障害の非制限的な例には、慢性胃塩、逆流胃塩及び消化潰瘍疾患が挙げられる。非アルコール−誘発肝疾患の非制限的な例には、原発性胆汁性肝硬変、急性及び慢性肝炎、原発性硬化性胆管炎、慢性活動肝炎及び肝における脂肪過剰蓄積が挙げられる。本発明はまた、ウイルス疾患、細菌性疾患及び真菌疾患の治療を想定できる。本発明の一部の実施形態において、剤形は、ヘリコバクターピロリ感染を治療及び／または撲滅するために投与される。本発明の一部の実施形態において、剤形は、Ｃ型肝炎ウイルス感染、Ａ型インフルエンザ、Ｃ型インフルエンザ、第１型パラインフルエンザ、センダイ（ｓｅｎｄａｉ）、風疹及びシュードラビエス（ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）ウイルスを治療及び／または撲滅するために投与される。本発明の一部の実施形態において、剤形は、急性あるいは慢性炎症性疾患を治療するために投与される。炎症性疾患の非制限的な例には、気管支炎、慢性咽頭炎及び慢性へんとう炎を含む。本発明の一部の実施形態において、剤形は高コレステロール血症を治療するために投与される。
【００５６】
本発明の一部の実施形態において、剤形は、液体、固体、粉末あるいは錠剤として投与されうるように変形される。本発明の一部の実施形態において、剤形は、非経口溶液（例えば、注射用溶液、溶液、シロップ、濃厚シロップあるいはペースト）からなる。溶液の非制限的な例は、マルトデキストリンの濃度が５００ｇ／Ｌ未満であるマルトデキストリン溶液である。シロップの非制限的な例は、マルトデキストリンの濃度が５００ｇ／Ｌ以上１．０ｋｇ／Ｌ以下であるマルトデキストリン溶液である。濃厚シロップの非制限的な例は、マルトデキストリンの濃度が１．０ｋｇ／Ｌ以上１．２ｋｇ／Ｌ以下であるマルトデキストリン溶液である。ペーストの非制限的な例は、マルトデキストリンの濃度が１．２ｋｇ／Ｌより高いマルトデキストリン溶液である。
【００５７】
本発明の投薬剤形の安定性は、多様なｐＨ及び温度レベルで可溶性胆汁酸、高分子量水可溶性澱粉転化物及び水を含む製剤において、時間経過による関連胆汁酸の濃度を測定することによって評価されることができる。各胆汁酸の滞留時間（高性能液体クロマトグラフィー）は必要によって複合サンプル、すなわち、複数の胆汁酸を持つサンプルに存在する各胆汁酸の個別的な分析を許容するように調整することができる。安定性試験も、試験溶液の光散乱特性を評価することによって行われても良い。加えて、確立された促進試験条件を利用しても良い。
【００５８】
本発明の溶液に対して行われた全ての安定性試験は、ＨＰＬＣにより測定された胆汁酸の濃度が多様なｐＨレベルで時間経過によって変化ない点で満足であった。特に、試験された全ての胆汁酸溶液剤形は、試験期間中に析出や物理的外観変化が無い点で安定性試験において優れた結果を見せた。一部の剤形は、２年わたって安定的に維持される。試験された本発明による水溶液投薬形態は、塩化水素酸溶液中で安定的であり、可溶性である治療的活性剤及び化学的活性剤の添加にもかかわらず、前記促進条件下で多様なｐＨ条件で物理的にあるいは化学的に変化されなかった。したがって、これらの水溶液系は酸性条件での析出をはじめ、安定性の問題無しで多様なｐＨ条件でミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）形成によって胆汁酸が薬物のアジュバント、薬物の担体または薬物の溶解度増強制として役割をする治療的に活性である胆汁酸製剤及び／または薬物（薬剤学的化合物）伝達製剤のための非常に価値ある薬剤学的剤形でありうる。
【００５９】
ヒトのニューロン細胞は、本発明の溶液及び５０μＭの過酸化水素及び／またはシスプラチンにより処理した。過酸化水素は強力な酸化剤である。シスプラチンは反応性酸素種（ＲＯＳ：ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）の生産を促進し、抗酸化防御系を妨害する。次に、細胞生存率、細胞増殖及びアポトーシスはＭＴＴ還元の測定により分析した。特に、外因性ＲＯＳ及びＨ２Ｏ２を利用したいくつかの研究は、ヒト及びラットの末梢脈管性平滑筋細胞（ＶＳＭＣ：ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ）を比較的低いレベルの酸化剤ストレスに短時間曝することは細胞成長を促進させる一方で、高濃度で長時間曝されることはアポトーシスまたはネクロシスにより細胞死滅につながるようにすることを立証している。
【００６０】
本発明の溶液の存在下、あるいは本発明の溶液の不存在下での過酸化水素に対する細胞生存率を、ＭＴＴアッセイを用いて評価した。本発明の溶液（０．２ｍｇ／ｍＬ可溶化ＵＤＣＡ）及び過酸化水素（５０μＭ）により処理された細胞は、最も高い細胞生存率（対照群１００％と比較して７５％）を示した。最も低い細胞生存率（対照群１００％と比較して２６％）は、過酸化水素（５０μＭ）単独で処理された細胞で観察された。これらの効果は、容量依存で観察された。
【００６１】
シスプラチンの存在中の細胞生存率は同じ方法で評価された。最も高い細胞生存率（対照群１００％と比較して８７％）は、シスプラチン（２０μＭ）と本発明の溶液（可溶性ＵＤＣＡ１ｍｇ／ｍＬ）の両方により処理された細胞で観察される一方で、最も低い細胞生存率（対照群１００％と比較して３５％）は、シスプラチン（２０μＭ）単独で処理された細胞で観察された。これらの効果も、容量依存で観察された。ＭＴＴアッセイによれば、本発明の溶液はほぼ完全に過酸化水素−誘発酸化細胞毒性を遮断でき、シスプラチン−誘発酸化細胞毒性を完全に遮断できる。結論的に、本発明の溶液は、強力な酸化防止性と非細胞毒性をもつ。
【実施例】
【００６２】
本発明の一部の実施形態は、以下の実施例と関連して理解されるであろう。しかし、当業者にとっては、本発明に開示された具体的な材料、組成物及び結果は、単に説明のために例示されたもので、本発明の範囲及びその各種の実施形態を制限するために意図されたものではないことはもちろん、このように解釈されてもいけないということを容易に認めることができるであろう。
【００６３】
実施例１：胆汁酸溶液の製造
胆汁酸の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、まずＵＤＣＡ（６０ｇ）を５００ｍＬのＮａＯＨ（６．７ｇ）溶液中に溶解させることによって用意した。次に、得られた透明な溶液に、激しく撹拌しながらマルトデキストリン３７５ｇを少しずつ添加した。続いて、高出力の超音波処理（７５０Ｗ、２０ｋＨｚ）を実施しながら、ＨＣｌの滴加によりｐＨを７．０乃至７．２に調整した。次に、注射用蒸溜水により体積を１．０Ｌまで調整した。最後に、得られた透明な溶液を無菌条件下、０．２２μ  ＧＰエクスプレス・プラス・メンブレイン（ｅｘｐｒｅｓｓ  ｐｌｕｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）を用いてろ過滅菌処理した。（このろ過は、滅菌のために重要であり、溶液が既に透明であるから、粒状物を除去するためのものではない。）標準的な薬学的方法により、この溶液を希望のＵＤＣＡ濃度へ希釈した。
【００６４】
実施例２：胆汁酸溶液の製造
胆汁酸の原液は、まず、ＵＤＣＡ（２５ｇ）を４００ｍＬ  ＮａＯＨ（２．７ｇ）溶液中に溶解させることによって用意した。次に、得られた透明な溶液に、激しく撹拌しながらマルトデキストリン７４５ｇを少しずつ添加した。この得られた溶液に、メチルｐ−ヒドロキシベンゾエート０．９５ｇ及び亜硫酸水素ナトリウム０．３ｇを含有する保存液１００ｍＬを添加してから撹はんした。次に、医薬用水（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｇｒａｄｅ  ｗａｔｅｒ）で体積を１．０Ｌまで調整した。最後に、得られた透明な溶液を適切なろ過装置によってろ過した。（このろ過は、溶液が既に透明であるから、粒状物を除去するためのものではない。）標準的な薬学的方法によって、この溶液を希望のＵＤＣＡ濃度へ希釈した。
【００６５】
実施例３：動物試験
トランスジェニックラット；本実施例で利用されたトランスジェニック動物は、グリシン９３−アラニン変異体（Ｇ９３Ａ）を持つ異型接合性ｈＳＯＤ１キャリア（ｃａｒｒｉｅｒ）であった。この系統（ｓｔｒａｉｎ）は、複製数減少したｈＳＯＤ１を含有するＢ６ＳＪＬ−ＴｇＮ（ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒ（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ．，米国メイン州のバーハーバー市所在）として登録されているものであり、ジャクソンラボラトリー社（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から購入した。ＡＬＳ患者において確認された変異を持つヒトＳＯＤ１遺伝子を過発現するトランスジェニックマウスは、成人で発病する進行性運動退行を発症した。これらのトランスジェニックマウスは、前記疾患に対するモデルとされ、疾患の進行及び死亡を遅延させるための多数の方法を試験するのに利用されている。
ＡＬＳにおける本発明の可能性を評価するために、本発明の溶液中の溶解性ＵＤＣＡ  ２４０ｍｇ／ｋｇを、Ｇ９３Ａトランスジェニックマウスが生まれて７０日目から死亡するまで毎週２回経口投与した。
寿命及びその結果；対照群マウス（ｎ＝８）及び処理されたマウス（ｎ＝８）の平均寿命は、図１に示されている。透明な溶液（２５ｍｇ／ｋｇ）は、平均生存時間を対照群マウス（ｎ＝８）の１３４．８日から、処理されたマウス（ｎ＝８）の１４６．６日に増加させ、死亡の遅延は１３日となった。これは、Ｇ９３Ａマウスの寿命が８．８１％に増加したことに相当する。
ロータロッド検査及びその結果；運動遂行能を評価するためにロータロッドを用いた。マウスをロッドの回転逆方向で当該ロッド上に乗せ、当該ロッドから後方に滑るのを避けるよう、これらが動き続けるよう強制した。数日間の学習期間後、マウスは１５ｒ．ｐ．ｍ．で回転するロータロッド上に留まることができた。これらのマウスは、１週に一度ずつ試験した。各マウスは、各ロータロッド検査に対して３回試験を受け、滑り落ちる前まで前記ロッド上に残っていた時間を記録した（レイテンシー）。３回の試験結果の中からロータロッド上に最も長く留まった時間を運動遂行能の尺度として選択した。
処理されたマウスの運動遂行能は、疾患が進行するにつれて大きく向上したが、未処理マウスの運動遂行能は、疾患が進行するにつれてより急速に落ちた。未処理マウスと処理されたマウスとの運動遂行能の差は、１１２日目（ｐ＝０．０１）、１１９日目（０．００１）、１２６日目（ｐ＝０．０１）、１３３日目（ｐ＝０．００１）及び１４０日目（ｐ＝０．０４３）に最も顕著だった。
結論；ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａラットで進行性細胞骨格変質が広範囲に認められ始めた生後７０日の時期は、ＡＬＳの臨床的初期と知られている。これらのデータは、溶解性ＵＤＣＡ溶液が寿命を有意に延長し、痲痺の発病を遅延させ、ＡＬＳ−マウスモデルで筋肉強度と関連した機能性パラメータの発現を遅らせることを立証した。更に、溶解性ＵＤＣＡを投与された生後７０日よりも年齢が高いモデルは、運動遂行能が改善されたことは、本発明の溶液が運動遂行能を回復させながら進行性ＡＬＳ疾患を治療できることを証明した。
【００６６】
実施例４：細胞生存実験
野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞に対する溶解性ＵＤＣＡ溶液の保護効果（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ）を評価するために、これらの細胞をニューロン分化後２００ｎＭまたは２０μＭの溶解性ＵＤＣＡを含有する溶液で処理してから２４時間培養した。野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞に対する溶解性ＵＤＣＡ溶液の保護効果は、ＭＴＴアッセイ及びトリパンブルー染色の両方を用いて決定した。細胞生存率は、図２に示すように、細胞生存％として表現されることができる。
ＧＳＮＯはアポトーシスと関連することが知られている。ｈＳＯＤ１においてＧ９３Ａ変異体及びＡ４Ｖ変異体を含有する細胞及び野生型細胞に対してＧＳＮＯに対する溶解性ＵＤＣＡの抗アポトーシスの効果を評価するために、野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞を５００μＭ  ＧＳＮＯで２４時間培養してアポトーシスを誘発させてから、その細胞生存率を求めた。次に、これらのアポトーシス−誘発野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞を２０μＭ溶解性ＵＤＣＡで２４時間培養し、ＭＴＴアッセイ及びトリパンブルー染色の両方を用いて再度細胞生存率を求めた。細胞生存率は、図３に示すように、細胞生存％として表現されることができる。
【００６７】
細胞培養：ＶＳＣ４．１．（ｖｅｎｔｒａｌ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ４．１；運動神経細胞−神経母細胞種ハイブリッド細胞）をサトの成分（Ｓａｔｏ’ｓ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）（シグマ、米国ミズーリ州のセントルイス市に所在）及び２％の熱不活性新生仔牛血清（ＨｙＣｌｏｎｅ、米国ユタ州のローガン市に所在）を含むダルベッコの変性イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅｓ’  ｍｅｄｉｕｍ）／Ｆ−１２成長培地（Ｇｉｂｃｏ、ニューヨーク州のグランドアイルランド）で維持した。これらをその対数増殖期において、ポリ−（Ｌ−オルニチン）−プリコーティングされた培養皿（Ｆａｌｃｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  ｌａｋｅｓ、ＮＪ）上で生育させた。コンフルーエントに達した（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）後、細胞を１×１０ｎ（ｎ＝４）細胞／ウェルの密度で、９６−ウェルプレート（ＮＵＮＣ、デンマーク）で平板培養した。免疫ブロット法（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔ）のために、１×１０ｎ（ｎ＝５）細胞を１００ｍｍ皿（Ｆａｌｃｏｎ、米国ニュージャジー州のフランクリンレイク市に所在）に接種した。
【００６８】
安定した細胞株の構築及び樹立：野生型（対照群）または変異型（Ｇ９３Ａ、Ａ４Ｖ）ヒトＣｕ／Ｚｎ  ＳＯＤ−１  ｃＤＮＡを、ｐｃＤＮＡ３．０のＢａｍＨＩ部位及びＥｃｏＲＩＩ部位にクローニングした。この挿入物を含有しない空のベクター（ｅｍｐｔｙ  ｖｅｃｔｏｒ）を対照群として使用した。細胞をトランスフェクトさせ（Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ、Ｑｉａｇｅｎ、米国カリフォルニア州のバレンシア市に所在）、Ｇ４１８を４００ｍｇ／ｍＬの濃度で含有した培地（Ｇｉｂｃｏ、ニューヨーク州のグランドアイルランド）に維持した。単一コロニーまたはプールしたコロニーは、非ヒトＳＯＤ１多クローン性抗体（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、米国カリフォルニア州のラホヤ市に所在）を用いてウェスタンブロット分析によってヒトＳＯＤ１（ＷＴ、変異体）の発現を明確にした後、実験のために用いた。これらの細胞株は、ＶＳＣ４．１細胞と同条件下で生育させた。
【００６９】
保護効果を評価するためのＭＴＴアッセイ及びトリパンブルー染色及びその結果；３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を細胞に吸収させ、ミトコンドリアコハク酸脱水素酵素の作用によりホルマザン転換させた。したがって、ホルマザンの蓄積は、ミトコンドリアの活性を直接反映し、細胞生存率を間接的に反映する。このようにして、ニューロン分化した細胞（野生型細胞（対照群）、Ｇ９３Ａ細胞、Ａ４Ｖ細胞）を９６ウェルプレート中１×１０ｎ（ｎ＝４）細胞／ウェル密度で平板培養した。生存率に対するＧ９３Ａ変異体またはＡ４Ｖ変異体の効果を評価するために、平板培養された細胞を１ｍＭジブチリルｃＡＭＰ及び０．０２５ｕｇ／ｍＬアフィディコリンを含有する培地で培養し、野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞の生存率を濃度の関数として評価した。生存率に対する溶解性ＵＤＣＡの保護効果を評価するために、２００ｎＭ及び２０μＭの溶解性ＵＤＣＡを前記培地に添加した。２４時間の培養後、各ウェルに培地（２００μｌ）を添加してから２ｍｇ／ｍＬ  ＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ、米国ミズーリ州のセントルイス市に所在）５０μｌを添加した。続いて、前記溶液２２０μｌを各ウェルから除去したのち、各ウェルにジメチルスルホキシド１５０μｌを再び添加した。最後に、マイクロプレートミキサーにより各ウェル中の粒子を１０分間溶解させてからＥＬＩＳＡプレートリーダー上で５４０ｎｍでＯＤ（ｏｐｔｉｃａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）を判読した。その結果を細胞培養せずに測定したＯＤを用いて較正した。トリパンブルー染色のために、各プレートから回収した細胞１０μｌにトリパンブルー溶液１０μｌを添加し、細胞を２分間培養した。染色されない生きている細胞をヘモサイトメーター（ｈｅａｍｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を用いて計数した。細胞生存率は細胞生存％として表現された。
野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞の生存率は、未処理野生型細胞（対照群；１００％）に比べてそれぞれ、２００ｎＭの溶解性ＵＤＣＡにより処理された場合１００％、１３０％及び１１５％であった。２００ｎＭより１００倍高い濃度の溶解性ＵＤＣＡ（２０μＭ）で、野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞の生存率は、未処理野生型細胞（対照群；１００％）に比べてそれぞれ８９％、１３３％及び１０１％であった。この実験データは、溶解性ＵＤＣＡがＧ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞に対する保護効果を有し、また、野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞に対して非毒性であることを示した。
【００７０】
ＧＳＮＯによるアポトーシスを評価するためのＤＡＰＩ染色及びその結果；４'，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール二塩酸塩（ＤＡＰＩ）染色を次のように行い、アポトーシスを評価した。分化後、野生型細胞（対照群）、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞を５００μＭ  ＧＳＮＯの添加または５００μＭ  ＧＳＮＯ無添加で２４時間培養し、続いて、これらの細胞を２６５ｇで２分間遠心分離し、この細胞ペレット（ｃｅｌｌ  ｐｅｌｌｅｔ）に４％中性緩衝ホルマリン（１００μｌ）を添加した。前記細胞懸濁液のうち５０μｌをガラススライドに塗布し、室温で乾燥させた。固定された細胞をＰＢＳで洗浄し、空気乾燥後に、ＤＮＡ−特異的フルオロクロムであるＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ、米国ミズーリ州のセントルイス市に所在）により２０分間染色した。付着した細胞をＰＢＳで洗浄し、空気乾燥後に、９０％グリセロールで固定した。前記スライドをオリンパス蛍光顕微鏡（写真）の下に観察した。細胞生存率は、細胞生存％として表現された。
ＤＡＰＩ染色は、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞（各１９％、２５％）間のアポトーシス細胞百分率が野生型細胞（８％）に比べて有意に増加することを示した。Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞におけるアポトーシスを経た細胞の増加した百分率は、ＧＳＮＯのアポトーシス効果が野生型細胞に比べ、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞上でより有意であることを立証した。
【００７１】
溶解性ＵＤＣＡの抗アポトーシス効果を評価するためのＭＴＴアッセイ及びトリパンブルー染色及びその結果；３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を細胞に吸収させ、ミトコンドリア−コハク酸脱水素酵素の作用によりホルマザンに転換させた。したがって、ホルマザンの蓄積は、ミトコンドリアの活性を直接反映し、細胞生存率を間接的に反映する。このようにして、ニューロン分化した細胞（野生型細胞（対照群）、Ｇ９３Ａ細胞、Ａ４Ｖ細胞）を９６ウェルプレート中１×１０ｎ（ｎ＝４）細胞／ウェル密度で平板培養した。平板培養された細胞を１ｍＭジブチリルｃＡＭＰ及び０．０２５ｕｇ／ｍＬアフィディコリンを含有する培地で培養し、その後、５００μＭのＧＳＮＯの添加／または無添加で２４時間さらに培養した。細胞に対する溶解性ＵＤＣＡの抗アポトーシス効果を評価するために、２００ｎＭ及び２０μＭの溶解性ＵＤＣＡを前記培地に添加した。２４時間の培養後、各ウェルに培地（２００μｌ）を添加してから２ｍｇ／ｍＬ  ＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ、米国ミズーリ州のセントルイス市に所在）５０μｌを添加した。続いて、前記溶液２２０μｌを各ウェルから除去したのち、各ウェルにジメチルスルホキシド１５０μｌを再び添加した。最後に、マイクロプレートミキサーにより各ウェル中の粒子を１０分間溶解させてからＥＬＩＳＡプレートリーダー上で５４０ｎｍでＯＤを判読した。その結果を細胞培養せずに測定したＯＤを用いて較正した。トリパンブルー染色のために、各プレートから回収した細胞１０μｌにトリパンブルー溶液１０μｌを添加し、細胞を２分間培養した。染色されない生きている細胞をヘモサイトメーターを用いて計数した。細胞生存率は、細胞生存％として表現された。
Ｓ−ニトロソグルタチオン−誘発アポトーシスによる生存率の減少は、野生型細胞に比べてＧ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞でより顕著だった。ＧＳＮＯ処理された（アポトーシス）細胞中の溶解性ＵＤＣＡによる生存率の増加は、野生型細胞に比べてＧ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞で有意だった。より具体的には、野生型細胞（９２％）に比べて、Ｇ９３Ａ変異体及びＡ４Ｖ変異体の生存率は５００μＭ  ＧＳＮＯによる培養後２４時間目にそれぞれ８１％及び７５％であった。溶解性ＵＤＣＡを添加してさらに培養した後、野生型細胞、Ｇ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞の生存率は、野生型細胞では９２％から９８％まで、Ｇ９３Ａ細胞では８１％から１００％まで、そしてＡ４Ｖ細胞では７５％から１１５％まで増加した。
この実験は、可溶性ＵＤＣＡ溶液がＧ９３Ａ細胞及びＡ４Ｖ細胞をＮＯ−媒介アポトーシスから保護することができ、かつ、ＡＬＳのアポトーシス−媒介損傷細胞を回復させることができることを証明している。
当業者にとっては、神経退行疾患及び／または運動ニューロン疾患の症状を改善及び／または治療するためのその他の均等なまたは代替の方法があることが理解できるであろう。例えば、方法及び投薬容量は、症状や、年齢の異なる対象（例えば、子供、成人等）、追加的なアレルギーまたは疾病状態を持つ対象及び／またはアレルギー及び／または症状の重症度が多様な対象を診断及び／または治療するような尺度とすることができる。加えて、方法及び投薬容量は、時間（例えば、月別あるいは季節別）による変動に適合するようにすることができる。自明な変化及び変更によるこれらの均等及び代替は本発明の範囲内に含まれるように意図されている。例えば、提供された数値及び／または範囲の終末点は全ての実施形態に対して厳格な限界とされるように意図されていない。更に、当業者にとっては、単一の実施形態、用途及び／または利点が他の実施形態、用途及び／または利点を例外なく制御したり排除するように意図されたものではないことが理解できるであろう。例えば、医療関係者は、他に対してよりも優れた作用を与えることを保証する環境を想定できるであろう。本発明の開示は、ＡＬＳ及び胆汁酸代謝の遺伝学、生化学及び細胞生物学の現行の認識に対する広範囲な情報を含むが、今後の研究はこれらの認識の側面が不正確または不完全であると明かされる場合もありうる。したがって、当業者なら、本発明が一部または全部が取られようとも、特定モデルや作用機序に制限されないことを理解することができるであろう。加えて、当業者は、その他均等のまたは代替の組成物及び方法が利用されることができることを認識するはずである。例えば、多数の化合物が胆汁酸と共に投与できると説明したが、その他の化合物も含まれることができることはもちろんである。また、薬剤の投与は、胆汁酸組成物の投与と同一時刻に行われたり、または、これらの２つは同一なあるいは重複する時期（例えば、同一時間、同一日時または同一週）の間に単に投与されることができる。したがって、前述した本発明は、添付の特許請求の範囲に記載された本発明の範ちゅうを例示するためのもので、本発明を制限するためのものではない。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１Ａ】寿命及びその結果を、動物が死亡した時、時間に対する生存百分率として表示した図である。
【図１Ｂ】ロータロッド検査（Ｒｏｔａｒｏｄ  ｔｅｓｔ）及びその結果を、動物が死亡するまで毎週、滑り落ちる前にロッド上に残っていた時間で表示した図である。
【図２】野生型細胞、Ａ４Ｖ細胞及びＧ９３Ａ細胞による細胞生存率アッセイの結果を表示した棒グラフで、細胞が未処理の場合（図中左側）、本発明の２００ｎＭ溶解性ＵＤＣＡ溶液中で培養した場合（図中中央）、本発明の２０μＭ溶解性ＵＤＣＡ溶液中で培養した場合（図中右側）をそれぞれ示している。
【図３】野生型細胞、Ａ４Ｖ細胞及びＧ９３Ａ細胞による細胞生存率アッセイの結果を表示した棒グラフで、細胞が未処理の場合（図中左側）、５００μＭ  Ｓ−ニトロソグルタチオン（ＧＳＮＯ）で培養した場合（図中中央）、５００μＭ  ＧＳＮＯに続いて本発明の２０μＭ  ＵＤＣＡ溶液で培養した場合（図中右側）をそれぞれ示している。
【図４】図中Ａは、未処理Ａ４Ｖ細胞（対照群細胞）を示す顕微鏡写真である。  図中Ｂは、５００μＭ  Ｓ−ニトロソグルタチオン（ＧＳＮＯ）で培養したＡ４Ｖ細胞を示す顕微鏡写真である。  図中Ｃは、５００μＭ  ＧＳＮＯで培養したのち、続いて本発明の２０μＭ溶解性ＵＤＣＡ溶液で培養したＡ４Ｖ細胞を示す顕微鏡写真である。  図中Ｄは、未処理Ｇ９３Ａ細胞を示す顕微鏡写真である。  図中Ｅは、５００μＭ  ＧＳＮＯで培養したＧ９３Ａ細胞を示す顕微鏡写真である。  図中Ｆは、５００μＭ  ＧＳＮＯで培養した後、続いて本発明の２０μＭ溶解性ＵＤＣＡ溶液で培養したＧ９３Ａ細胞を示す顕微鏡写真である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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