(57)【要約】  本発明は下記構造の化合物（ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ6、Ｒ7及びＲ15は上記で定義される）を提供する。本発明の化合物は、脳卒中又は頭部傷害による神経障害又は合併症；良性又は悪性の腫瘍性疾患、ガン腫及び腺ガン；増殖性障害；及び炎症性障害の治療において有用である。従って、本発明の化合物は、神経保護剤及び神経再生剤として、抗増殖剤として、または抗炎症剤として有用である。2008524240.tif 000039
2008524240.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物又はその医薬的に許容され得る塩：
【化１】
2008524240.tif 000028
式中、
Ｒ1及びＲ2は異なり、かつ、独立した基であり、かつ、ＯＲ3及びＮ（Ｒ3'）（Ｒ3"）からなる群より選択される；又は
Ｒ1及びＲ2は異なり、かつ、単結合を介して連結し、かつ、Ｏ及びＮＲ3からなる群より選択される；
Ｒ3、Ｒ3'及びＲ3"は、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6置換アルキル、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、Ｃ3−Ｃ8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール及び置換ヘテロアリールからなる群より選択される；
Ｒ4及びＲ4'は、
（ａ）独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｏ（Ｃ1−Ｃ6置換アルキル）、Ｏ（アシル）、Ｏ（アリール）、Ｏ（置換アリール）及びハロゲンからなる群より選択される；又は
（ｂ）一緒になって、Ｏとの二重結合を形成する；
Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は、独立して、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ3からなる群より選択される；
Ｒ8及びＲ9は、（ｉ）単結合を介して連結し、かつ、ＣＨ2であるか、又は、（ｉｉ）二重結合を介して連結し、かつ、ＣＨである；
Ｒ15は、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＯＨ及びＣＨ2からなる群より選択される；
ｎは１又は２である。
【請求項２】
Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結している、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1がＯＲ3であり、かつ、Ｒ2がＮ（Ｒ3'）（ＮＲ3"）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ3、Ｒ3'及びＲ3"がアリール又は置換アリールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
前記置換アリールが置換ベンゼン環である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記アリール又は置換アリールが、下記の構造：
【化２】
2008524240.tif 000029
（式中、
Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13及びＲ14は、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ハロゲン、アシル、ＯＨ、Ｏ（アルキル）、Ｏ（置換アルキル）、Ｏ（アリール）、Ｏ（置換アリール）、Ｏ（アシル）、ＮＨ2、ＮＨ（アルキル）、ＮＨ（置換アルキル）、ＮＨ（アリール）、ＮＨ（置換アリール）及びＮＨ（アシル）からなる群より選択される）
のものである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ8及びＲ9が単結合を介して結合する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ8及びＲ9が二重結合を介して結合する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ4又はＲ4'がＯＨである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ4又はＲ4'がＯ（アシル）である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記アシルが、
【化３】
2008524240.tif 000030
である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ5、Ｒ6及びＲ7がＯＣＨ3である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
ｎが２である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ15がＣ＝Ｏである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ヘンイコサヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；３７−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；３７−（２，６−ジクロロフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；２，２−ジメチル−３−（ピリジン−２−イル）−プロピオン酸との９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンエステル；及び３７−（２，６−ジクロロフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；又はこれらのそれぞれの医薬的に許容され得る塩からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ3がフェニルであり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、かつ、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ1がＯＲ3であり、Ｒ2がＮ（Ｒ3'）（Ｒ3"）であり、Ｒ3がＨであり、Ｒ3'がＨであり、Ｒ3"がフェニルであり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、かつ、Ｒ8及びＲ9がＨ2Ｃ−ＣＨ2である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ3がフェニルであり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、かつ、Ｒ8及びＲ9がＨ2Ｃ−ＣＨ2である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨであり、かつ、Ｒ3が、
【化４】
2008524240.tif 000031
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨであり、かつ、Ｒ3が、
【化５】
2008524240.tif 000032
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ3がフェニルであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨであり、かつ、Ｒ4が、
【化６】
2008524240.tif 000033
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨ2Ｃ−ＣＨ2であり、かつ、Ｒ3が、
【化７】
2008524240.tif 000034
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
【化８】
2008524240.tif 000035
からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
下記の式Ｉａの化合物又はその医薬的に許容され得る塩：
【化９】
2008524240.tif 000036
式中、
Ｒ1及びＲ2は異なり、かつ、独立した基であり、かつ、ＯＨ及びＮ（Ｒ3'）（Ｒ3"）からなる群より選択される；又は
Ｒ1及びＲ2は異なり、かつ、単結合を介して連結し、かつ、Ｏ及びＮＲ3からなる群より選択される；
Ｒ3'及びＲ3"は、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6置換アルキル、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、Ｃ3−Ｃ8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール及び置換ヘテロアリールからなる群より選択される；
Ｒ8及びＲ9は、（ｉ）単結合を介して連結し、かつ、ＣＨ2であるか、又は、（ｉｉ）二重結合を介して連結し、かつ、ＣＨである。
【請求項２６】
下記の式Ｉｂの化合物：
【化１０】
2008524240.tif 000037
式中、
Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ハロゲン、アシル、ＯＨ、Ｏ（アルキル）、Ｏ（置換アルキル）、Ｏ（アリール）、Ｏ（置換アリール）、Ｏ（アシル）、ＮＨ2、ＮＨ（アルキル）、ＮＨ（置換アルキル）、ＮＨ（アリール）、ＮＨ（置換アリール）及びＮＨ（アシル）からなる群より選択される；かつ
ｍは１〜５である。
【請求項２７】
神経保護剤である、請求項１〜２６のいずれかに記載の化合物。
【請求項２８】
医薬品として使用される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
その必要性のある被験者における神経障害を治療するための医薬品の調製における、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３０】
前記神経障害が、アルツハイマー病、てんかん、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、脳卒中、脊髄傷害、外傷性脳傷害、レヴィー小体認知症、ピック病、ニーマン・ピック病、アミロイド血管症、脳アミロイド血管症、全身性アミロイドーシス、ダッチ型のアミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、封入体筋炎、軽度認識障害、ダウン症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、デュシェンヌ型ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型（ランドジー・デジュリーヌ）筋ジストロフィー及び肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ）からなる群より選択される、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
その必要性のある被験者における脳卒中又は頭蓋骨損傷(head trauma)に起因する合併症を治療するための医薬品、あるいは、その必要性のある被験者における炎症性障害を治療するための医薬品の調製における、請求項１〜２７のいずれか１項に記載される化合物の使用。
【請求項３２】
前記炎症性障害が、狼瘡、リウマチ様関節炎、乾癬性関節炎、変形性関節症、強直性脊椎炎、乾癬、皮膚炎、強皮症、炎症性腸疾患、クローン病及び潰瘍性大腸炎からなる群より選択される、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
悪性高体温、セントラルコア病、カテコールアミン作動性多型心室性頻脈及び２型催不整脈性右室異形成（ＡＲＶＤ−２）からなる群より選択される障害をその必要性のある被験者において治療するための医薬品、又は、うっ血性心不全、発作性頻脈、遅延型後脱分極、心室性頻拍、突発性頻脈、運動誘発性不整脈、ＱＴ延長症候群、二方向性頻脈、動脈の心臓血管血栓塞栓性障害、静脈の心臓血管血栓塞栓性障害、心臓の心房／心室における血栓塞栓性障害、アテローム性動脈硬化、再狭窄、末梢動脈疾患、冠状動脈バイパス移植手術、頸動脈疾患、動脈炎、心筋炎、心臓血管炎症、血管炎症、冠状動脈心疾患（ＣＨＤ）、不安定狭心症（ＵＡ）、不安定不応性狭心症、安定狭心症（ＳＡ）、慢性的安定狭心症、急性冠症候群（ＡＣＳ）、最初又は再発の心筋梗塞、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、心筋梗塞、非Ｑ波心筋梗塞、非ＳＴＥ心筋梗塞、冠動脈疾患、虚血性心疾患、心虚血、虚血、虚血性突然死、一過性虚血発作、脳卒中、末梢閉塞性動脈疾患、静脈血栓症、深部静脈血栓症、血栓性静脈炎、動脈塞栓症、冠動脈血栓症、脳動脈血栓症、脳塞栓症、腎臓塞栓症、肺塞栓症、血栓症、上室性不整脈、心房性不整脈、心房粗動及び心房細動からなる群より選択される心臓血管障害をその必要性のある被験者において治療するための医薬品の調製における、請求項１〜２７のいずれか１項に記載される化合物の使用。
【請求項３４】
（ｉ）ラパマイシン又はそのアナログを場合により置換されたニトロソベンゼンと結合する工程；及び
（ｉｉ）（ｉ）の生成物を単離する工程
を含む、請求項１〜２７のいずれか１項に定義される化合物を調製する方法。
【請求項３５】
前記ラパマイシンアナログが、ノルラパマイシン、デオキソラパマイシン又はデスメチルラパマイシンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
工程（ｉ）が高温において行われる、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項３７】
工程（ｉｉ）が、クロマトグラフィーを使用して行われる、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ヘンイコサヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；３７−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；３７−（２，６−ジクロロフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；２，２−ジメチル−３−（ピリジン−２−イル）プロピオン酸との９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンエステル；及び３７−（２，６−ジクロロフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンからなる群より選択される化合物を調製するための、請求項３４〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記場合により置換されたニトロソベンゼンが、ニトロソベンゼン、２，６−ジクロロニトロソベンゼン及び１−クロロ−２−メチル−４−ニトロソベンゼンからなる群より選択される、請求項３４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
（ｉｉｉ）（ｉｉ）の生成物を水素化剤と組み合わせる工程；及び
（ｉｖ）（ｉｉｉ）の生成物を単離する工程
をさらに含む、請求項３４〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記水素化剤がＰｄ／Ｃ触媒及び水素ガスを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
（ｉｉｉ）の生成物が、
【化１１】
2008524240.tif 000038
又はその医薬的に許容され得る塩である、請求項４０又は４１に記載の方法。
【請求項４３】
その必要性のある被験者における良性又は悪性の腫瘍性疾患を治療するための有用な医薬品の調製における、（ｉ）９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン及び（ｉｉ）３７−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンから選択される化合物の使用。
【請求項４４】
その必要性のある被験者におけるガン腫及び腺ガンを治療するための医薬品の調製における、（ｉ）９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン及び（ｉｉ）３７−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンから選択される化合物の使用。
【請求項４５】
前記ガン腫又は腺ガンが、子宮内膜、卵巣、乳房、結腸、前立腺若しくは下垂体のもの、又は髄膜腫若しくは他のホルモン依存性の腫瘍である、請求項４４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラパマイシンアナログ（類似体）、並びに、神経障害、増殖性障害及び炎症性障害の治療におけるその使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
虚血性脳卒中は全脳卒中事例の８３％を占め（残る１７％は出血性タイプである）、毎年約７００，０００人のアメリカ人において発生しており、これは４５秒毎におよそ１件の脳卒中に等しい。虚血性脳卒中は、脳に血液を供給する血管の内部における閉塞の結果として生じる。このタイプの閉塞についての根本的な状態は、血管壁の内側を覆う脂肪沈着物の発生であり、これはアテローム性動脈硬化と呼ばれる。このような脂肪沈着物は２つのタイプの閉塞を引き起こし得る：１）脳血栓症（これは、血管の詰まった部分で発生する血栓（凝血塊）を示す）及び２）脳塞栓症（これは、循環系における別の場所（通常、心臓、並びに、上部胸部及び頸部の大きな動脈）において形成する凝血塊を一般には示す）。凝血塊の一部分が離れ、血流に入り、そのような一部分を通過させるには小さすぎる血管に、そのような一部分が到達するまで脳の血管の中を移動する。虚血性脳卒中を治すための現在の治療は限られている。今日まで、虚血性脳卒中のための唯一の承認された薬物は遺伝子組換え型組織プラスミノーゲン活性化因子（ｒｔ−ＰＡ）である。ｒｔ−ＰＡは、血栓溶解剤として作用するため、治療可能な好機は限られており（３時間）、従って、全脳卒中患者の１〜２％のみが治療を受けることが可能であるにすぎない。虚血性脳卒中のための神経保護剤は、市販されていない。
【０００３】
パーキンソン病（ＰＤ）は、黒質のドーパミン作動性（ＤＡ作動性）ニューロンの選択的な変性によって神経学的に特徴づけられる神経変性疾患である。ＰＤは、平均発症年齢が５５歳である進行性の疾患であるが、１５％の患者が５０歳までに診断される。１５０万人のアメリカン人がＰＤに罹っていると推定される。ＰＤの古典的な徴候のいくつかが、身体の片側での休止時振戦、全身性の運動緩慢（動作緩慢）、四肢の硬直（強直）、歩行問題又は平衡問題（姿勢異常）である。現在のＰＤの薬物療法では、症状が治療され、これに対して、ＤＡ作動性ニューロンの変性を防止する又は遅らせる薬物は無い。
【０００４】
その臨床的重要性を考えた場合、神経保護活性及び／又は神経再生（neuroregenerative）活性の両方を明瞭に示すプロトタイプ分子が非常に探し求められている。ニューロトロフィンは、神経変性の前臨床モデルにおける驚くべき治療特性を有する一群のタンパク質である。実験的に有望ではあるが、ニューロトロフィンの臨床開発は重大な障害及び後退に遭遇した（例えば、これらの大きなタンパク質をニューロンの標的集団に送達することができないこと、タンパク質の不安定性、及び、非特異的な活性など）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
この分野で求められているものは、神経障害、増殖性障害及び炎症性障害の治療において有用なさらなる化合物である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
１つの態様において、本発明は、神経障害、増殖性障害及び炎症性障害を治療することにおいて、また、神経障害、増殖性障害及び炎症性障害の治療に有用な医薬品の調製において、有用な新規な化合物を提供する。
【０００７】
別の態様において、本発明は、新規な神経保護剤、抗増殖剤及び抗炎症剤を提供する。
【０００８】
さらなる態様において、本発明は、良性又は悪性の腫瘍性疾患、ガン腫及び腺ガンを治療することにおいて、また、良性又は悪性の腫瘍性疾患、ガン腫及び腺ガンの治療に有用な医薬品の調製において、有用な新規な化合物を提供する。
【０００９】
別の態様において、本発明は、自己免疫障害（例えば、狼瘡）、皮膚の炎症性障害、腸の炎症性障害、喘息及びアトピー性障害、並びに、移植組織／移植片拒絶（これらに限定されない）を含む、様々な炎症性障害を治療することにおいて、また、そのような炎症性障害の治療に有用な医薬品の調製において、有用な新規な化合物を提供する。
【００１０】
さらなる態様において、本発明は、ラパマイシンアナログ、並びに、その医薬的に許容され得る塩、プロドラッグ及び代謝産物を提供する。
【００１１】
別の態様において、本発明は、ラパマイシンアナログを調製する方法を提供する。
【００１２】
さらなる態様において、本発明は、神経障害、増殖性障害、心臓血管障害及び炎症性障害を治療する方法を提供する。
【００１３】
さらに別の態様において、本発明は、脳卒中又は頭蓋骨損傷に起因する合併症を治療する方法を提供する。
【００１４】
さらなる態様において、本発明は、良性又は悪性の腫瘍性疾患、ガン腫及び腺ガンを治療する方法を提供する。
【００１５】
さらに別の態様において、本発明は、自己免疫障害（例えば、狼瘡）、皮膚の炎症性障害、腸の炎症性障害、喘息及びアトピー性障害、並びに、移植組織／移植片拒絶（これらに限定されない）を含む、様々な炎症性障害を治療するための方法を提供する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、本発明の化合物が被覆又は含浸されている血管ステント又は血管シャント（vascular shunt）を提供する。
【００１７】
本発明の他の態様及び利点が、その好ましい実施形態についての下記の詳細な説明においてさらに記載される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明は、神経保護剤、抗増殖剤及び／又は抗炎症剤として有用である新規なラパマイシンアナログを提供する。本発明の新規なラパマイシンアナログはヘテロ原子置換基をラパマイシン骨格の１位及び４位に有する。別の実施形態において、本発明は、環状構造をラパマイシン骨格の１位、２位、３位及び／又は４位に有するラパマイシンアナログを提供する。
【００１９】
本発明のこれらの新規な化合物は、様々な神経障害を治療する際に使用される組成物における神経保護剤として有用である。そのような神経障害（これらには、例えば、神経変性状態及び神経筋変性状態が含まれる）は、出生時に存在する遺伝的障害の結果、個体の生涯の期間中に発症した障害（例えば、脳卒中）、及び／又は、身体的外傷（例えば、頭部傷害、脊髄傷害、又は、末梢神経系への傷害）の結果であり得る。
【００２０】
従って、本発明の化合物は、以前から存在する神経障害の症状を緩和すること、さらなる神経変性及び／又は神経筋変性を防止することにおいて有用であり得る。いくつかの実施形態において、本発明の神経保護剤は、神経障害に関連する症状の発症を遅らせるために使用することができる。
【００２１】
本発明の新規な化合物は、抗増殖剤及び抗炎症剤としても有用であり、従って、様々な炎症性障害（これらには、自己免疫障害、関節炎障害、皮膚の炎症性障害、腸の炎症性障害、喘息及びアトピー性障害、並びに、移植組織／移植片拒絶が含まれる）の治療において有用である。
【００２２】
驚くべきことに、本発明の少なくとも２つの化合物、例えば、９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン及び３７−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンが、抗増殖活性及び免疫抑制活性を有することが見出されている。
【００２３】
Ｉ．本発明の化合物
本発明は、下記の式Ｉのラパマイシンアナログ、あるいはその医薬的に許容され得る塩、プロドラッグ又は代謝産物を提供する：
【化１２】
2008524240.tif 000003
【００２４】
上記式におけるＲ1及びＲ2は異なり、独立した基であり、かつ、ＯＲ3及びＮ（Ｒ3'）（Ｒ3"）の中から選択されるか、又は、Ｒ1及びＲ2は異なり、単結合を介して連結し、かつ、Ｏ及びＮＲ3から選択される。Ｒ3、Ｒ3'及びＲ3"は、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6置換アルキル、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、Ｃ3−Ｃ8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール及び置換ヘテロアリールから選択される。Ｒ4及びＲ4'は、（ａ）独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、Ｏ（Ｃ1−Ｃ6置換アルキル）、Ｏ（アシル）、Ｏ（アリール）、Ｏ（置換アリール）及びハロゲンから選択されるか、又は、（ｂ）一緒になって、Ｏとの二重結合を形成する。Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は、独立して、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ3から選択される。Ｒ8及びＲ9は、（ｉ）単結合を介して連結し、かつ、ＣＨ2であるか、又は、（ｉｉ）二重結合を介して連結し、かつ、ＣＨである。Ｒ15は、Ｃ＝Ｏ、ＣＨＯＨ及びＣＨ2から選択され、かつ、ｎは１又は２である。
【００２５】
さらなる実施形態において、Ｒ1及びＲ2は単結合を介して連結し、かつ、Ｏ及びＮＲ3から選択される。なおさらにさらなる実施形態において、Ｒ1はＯであり、Ｒ2はＮＲ3である。
【００２６】
１つの実施形態において、Ｒ3'又はＲ3"はアリール基又は置換アリール基あるいは置換ベンゼン環である。別の実施形態において、Ｒ3'又はＲ3"における置換ベンゼン基には、下記の構造の環が含まれる：
【化１３】
2008524240.tif 000004
Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13及びＲ14は、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ハロゲン、アシル、ＯＨ、Ｏ（アルキル）、Ｏ（置換アルキル）、Ｏ（アリール）、Ｏ（置換アリール）、Ｏ（アシル）、ＮＨ2、ＮＨ（アルキル）、ＮＨ（置換アルキル）、ＮＨ（アリール）、ＮＨ（置換アリール）及びＮＨ（アシル）から選択される。
【００２７】
さらなる実施形態において、Ｒ3、Ｒ3'又はＲ3"は、Ｃ1−Ｃ6アルキル及びハロゲンから選択される１つ又は２つの置換基によって場合により置換されるフェニルである。なおさらにさらなる実施形態において、Ｒ3、Ｒ3'又はＲ3"は、１つ又は２つのメチル置換基又はクロロ置換基で場合により置換されるフェニルであり、例えば、フェニル、並びに、３−メチル、４−クロロフェニルである。
【００２８】
１つの実施形態において、Ｒ4又はＲ4'はＯＨ又はＯ（アシル）であり、例えば、Ｏ（アシル）において、アシルは、−Ｃ（Ｏ）−場合により置換されるアルキルであり、特に、この場合、アルキルは直鎖又は分枝状が可能であり、かつ、例えば、複素環（例えば、芳香族複素環など、例えば、ピリジルなど）によって場合により置換され得る。一例が、
【化１４】
2008524240.tif 000005
である。
【００２９】
他の実施形態において、式Ｉのラパマイシンアナログには、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7がＯＣＨ3であるラパマイシンアナログ、ラパマイシン骨格の１７位〜２２位における窒素含有環がピペリジン環であるラパマイシンアナログ、又は、Ｒ15がカルボニルであるラパマイシンアナログが含まれる。
【００３０】
１つの実施形態において、本発明は下記の式Ｉａの化合物を提供する：
【化１５】
2008524240.tif 000006
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ8及びＲ9は上記のように定義される。
【００３１】
別の実施形態において、本発明は下記の式Ｉｂの化合物を提供する：
【化１６】
2008524240.tif 000007
【００３２】
式Ｉｂにおいて、Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ハロゲン、アシル、ＯＨ、Ｏ（アルキル）、Ｏ（置換アルキル）、Ｏ（アリール）、Ｏ（置換アリール）、Ｏ（アシル）、ＮＨ2、ＮＨ（アルキル）、ＮＨ（置換アルキル）、ＮＨ（アリール）、ＮＨ（置換アリール）及びＮＨ（アシル）から選択され、かつ、ｍは１〜５である。
【００３３】
本発明の具体的な化合物が本明細書中に例示され、それらには、９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ヘンイコサヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；３７−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；３７−（２，６−ジクロロフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；２，２−ジメチル−３−（ピリジン−２−イル）プロピオン酸との９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンエステル；３７−（２，６−ジクロロフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントン；あるいは、その医薬的に許容され得る塩、プロドラッグ又は代謝産物が含まれる。本発明はこれらの例示的な化合物に限定されない。
【００３４】
別の実施形態において、具体的な化合物には、下記のものが含まれる：
【化１７】
2008524240.tif 000008
【００３５】
本発明はまた、Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ3がフェニルであり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、かつ、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨである化合物；Ｒ1がＯＲ3であり、Ｒ2がＮ（Ｒ3'）（Ｒ3"）であり、Ｒ3がＨであり、Ｒ3'がＨであり、Ｒ3"がフェニルであり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、かつ、Ｒ8及びＲ9がＨ2Ｃ−ＣＨ2である化合物；Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ3がフェニルであり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、かつ、Ｒ8及びＲ9がＨ2Ｃ−ＣＨ2である化合物；Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨであり、かつ、Ｒ3が、
【化１８】
2008524240.tif 000009
である化合物；Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨであり、かつ、Ｒ3が、
【化１９】
2008524240.tif 000010
である化合物；Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ3がフェニルであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨＣ＝ＣＨであり、かつ、Ｒ4が、
【化２０】
2008524240.tif 000011
である化合物；及び、Ｒ1及びＲ2が単結合を介して連結し、Ｒ1がＯであり、Ｒ2がＮＲ3であり、Ｒ4がＯＨであり、Ｒ5〜Ｒ7がＯＣＨ3であり、Ｒ8及びＲ9がＨ2Ｃ−ＣＨ2であり、かつ、Ｒ3が、
【化２１】
2008524240.tif 000012
である化合物を提供する。
【００３６】
本発明の化合物は１つ又はそれ以上の不斉炭素原子を含有することができ、また、化合物のいくつかは１つ又はそれ以上の不斉（キラル）中心を含有することができ、従って、光学異性体及びジアステレオマーをもたらし得る。立体化学を考慮することなく示される一方で、化合物が１つ又はそれ以上のキラル中心を含有し得るとき、好ましくは、キラル中心の少なくとも１つはＳ−立体化学である。従って、本発明には、そのような光学異性体及びジアステレオマー、並びに、ラセミ体、及び、分割されたエナンチオマー的に純粋な立体異性体、並びに、Ｒ−立体異性体及びＳ−立体異性体の他の混合物、そして、それらの医薬的に許容され得る塩、水和物、代謝産物及びプロドラッグが含まれる。
【００３７】
用語「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を有し、望ましくは約１〜８個の炭素原子を有する直鎖の飽和脂肪族炭化水素基及び分枝鎖の飽和脂肪族炭化水素基の両方を示すために本明細書中では使用される。用語「アルケニル」は、１つ又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を有し、かつ、約２〜１０個の炭素原子を含有する直鎖アルキル基及び分枝鎖アルキル基の両方を示すために本明細書中では使用される。１つの実施形態において、アルケニルの用語は、１つ又は２つの炭素−炭素二重結合を有し、かつ、２〜約６個の炭素原子を有するアルキル基を示す。用語「アルキニル」基は、１つ又はそれ以上の炭素−炭素三重結合を有し、かつ、２〜８個の炭素原子を有する直鎖アルキル基及び分枝鎖アルキル基の両方を示すために本明細書中では使用される。別の実施形態において、アルキニルの用語は、１つ又は２つの炭素−炭素三重結合を有し、かつ、２〜６個の炭素原子を有するアルキル基を示す。
【００３８】
用語「シクロアルキル」は、環状構造であり、かつ、約４〜１０個の炭素原子又は約５〜８個の炭素原子を有する前述したアルキル基を示すために本明細書中では使用される。
【００３９】
用語「置換アルキル」、用語「置換アルケニル」及び用語「置換アルキニル」は、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＯ2、アミノ、アリール、複素環、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルカルボニル、アルキルカルボキシ及びアリールチオ（これらに限定されない）（そのような基は、例えば、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＯ2、アミノ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルオキシ、アルキルカルボニル、アルキルカルボキシ、アミノアルキル及びアリールチオをはじめとする１〜４個の置換基によって場合により置換され得る）をはじめとする１つ又はそれ以上の置換基を有するアルキル基、アルケニル基及びアルキニル基をそれぞれ示す。これらの置換基は、結合により、安定な化学的部分が構成されるならば、アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基の任意の炭素に結合することができる。
【００４０】
本明細書中で使用される用語「アリール」は、例えば、６〜２０個の炭素原子の芳香族系を示し、この場合、そのような芳香族系は１つだけの環を含むことができ、あるいは、縮合又は連結した環の少なくとも一部分が共役芳香族系を形成する縮合又は連結した多数の芳香族環（例えば、２つ又は３つ）を含むことができる。アリール基には、フェニル、ナフチル、ビフェニル、アントリル、テトラヒドロナフチル、フェナントリル、インデン、ベンゾナフチル、フルオレニル及びカルバゾリルが含まれ得るが、これらに限定されない。
【００４１】
用語「置換アリール」は、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＯ2、アミノ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルオキシ、アルキルカルボニル、アルキルカルボキシ、アミノアルキル及びアリールチオ（そのような基は場合により置換され得る）をはじめとする１つ又はそれ以上の置換基により置換されるアリール基を示す。１つの実施形態において、置換アリール基は、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＯ2、アミノ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルオキシ、アルキルカルボニル、アルキルカルボキシ、アミノアルキル及びアリールチオをはじめとする１〜４個の置換基により置換される。
【００４２】
本明細書中で使用される用語「複素環（式の）」は、飽和、部分的不飽和又は完全不飽和である安定な４〜７員の単環又は多環の複素環式の環を示し、これには、芳香族（例えば、ピリジルなど）が含まれる。複素環式の環は、炭素原子と、窒素原子、酸素原子及びイオウ原子をはじめとする１つ又はそれ以上のヘテロ原子とを有する。１つの実施形態において、複素環式の環は１〜４個のヘテロ原子を環の骨格に有する。複素環式の環が窒素原子又はイオウ原子を環の骨格に含有する場合、その窒素原子又はイオウ原子は酸化され得る。用語「複素環（式の）」はまた、例えば、複素環式の環がアリール環に縮合する、９〜２０個の環構成成分を有する多環状の環を示す。複素環式の環は、得られる複素環式の環構造が化学的に安定であるならば、ヘテロ原子又は炭素原子を介してアリール環に結合することができる。
【００４３】
様々な複素環式の基が当分野では公知であり、そのような複素環式の基には、限定されないが、酸素含有環、窒素含有環、イオウ含有環、混合ヘテロ原子含有環、縮合ヘテロ原子含有環、及び、それらの組合せが含まれる。酸素含有環には、フリル環、テトラヒドロフラニル環、ピラニル環、ピロニル環及びジオキシニル環が含まれるが、これらに限定されない。窒素含有環には、限定されないが、ピロリル環、ピラゾリル環、イミダゾリル環、トリアゾリル環、ピリジル環、ピペリジニル環、２−オキソピペリジニル環、ピリダジニル環、ピリミジニル環、ピラジニル環、ピペラジニル環、アゼピニル環、トリアジニル環、ピロリジニル環及びアゼピニル環が含まれる。イオウ含有環には、限定されないが、チエニル環及びジチオリル環が含まれる。混合ヘテロ原子含有環には、オキサチオリル環、オキサゾリル環、チアゾリル環、オキサジアゾリル環、オキサトリアゾリル環、ジオキサゾリル環、オキサチアゾリル環、オキサチオリル環、オキサジニル環、オキサチアジニル環、モルホリニル環、チアモルホリニル環、チアモルホリニルスルホキシド環、オキセピニル環、チエピニル環及びジアゼピニル環が含まれるが、これらに限定されない。縮合ヘテロ原子含有環には、ベンゾフラニル環、チオナフテン環、インドリル環、ベナザゾリル環、プリンジニル環、ピラノピロリル環、イソインダゾリル環、インドキサジニル環、ベンゾオキサゾリル環、アントラニリル環、ベンゾピラニル環、キノリニル環、イソキノリニル環、ベンゾジアゾニル環、ナフチルリジニル環、ベンゾチエニル環、ピリドピリジニル環、ベンゾオキサジニル環、キサンテニル環、アクリジニル環及びプリニル環が含まれるが、これらに限定されない。
【００４４】
本明細書中で使用される用語「置換された複素環（式の）」は、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＯ2、アミノ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルオキシ、アルキルカルボニル、アルキルカルボキシ、アミノアルキル及びアリールチオ（そのような基は場合により置換され得る）をはじめとする１つ又はそれ以上の置換基を有する複素環式の基を示す。１つの実施形態において、置換された複素環式の基は１〜４個の置換基により置換される。
【００４５】
用語「アシル」は、炭素原子において置換される−Ｃ（Ｏ）−基を示す。アシル基は置換され得るか、又は、末端アシル基（例えば、ＨＣ（Ｏ）−基など）であり得る。置換基には、アルキル基について上記で記された任意の置換基、すなわち、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＮＯ2、アミノ、アリール、複素環、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルカルボニル、アルキルカルボキシ及びアリールチオ（これらに限定されない）（そのような基は場合により置換され得る）をはじめとする１つ又はそれ以上の置換基が含まれ得る。例には、−Ｃ（Ｏ）−アルコキシ（例えば、−ＯＭｅ又は−ＯＥｔ）又は−Ｃ（Ｏ）−アルキル（この場合、アルキルは直鎖又は分枝状が可能であり、かつ、例えば、複素環（例えば、ピリジルなど）によって場合により置換され得る）が含まれる。
【００４６】
本明細書中で使用される用語「アルコキシ」はＯ（アルキル）基を示し、この場合、結合点は酸素原子を介してであり、かつ、アルキル基は場合により置換される。
【００４７】
本明細書中で使用される用語「アリールオキシ」はＯ（アリール）基を示し、この場合、結合点は酸素原子を介してであり、かつ、アリール基は場合により置換される。
【００４８】
本明細書中で使用される用語「アルキルオキシ」はアルキルＯＨ基を示し、この場合、結合点はアルキル基を介してである。
【００４９】
本明細書中で使用される用語「アリールチオ」はＳ（アリール）基を示し、この場合、結合点はイオウ原子を介してであり、かつ、アリール基は場合により置換され得る。
【００５０】
本明細書中で使用される用語「アルキルカルボニル」はＣ（Ｏ）（アルキル）基を示し、この場合、結合点はカルボニル部分の炭素原子を介してであり、かつ、アルキル基は場合により置換される。
【００５１】
本明細書中で使用される用語「アルキルカルボキシ」はＣ（Ｏ）Ｏ（アルキル）基を示し、この場合、結合点はカルボキシ部分の炭素原子を介してであり、かつ、アルキル基は場合により置換される。
【００５２】
本明細書中で使用される用語「アミノアルキル」は第二級アミン及び第三級アミンの両方を示し、この場合、結合点は窒素原子を介してであり、かつ、アルキル基は場合により置換される。アルキル基は、同一又は異なるものであり得る。
【００５３】
本明細書中で使用される用語「ハロゲン」は、Ｃｌ基、Ｂｒ基、Ｆ基又はＩ基を示す。
【００５４】
ＩＩ．本発明の化合物を調製する方法
本発明の式Ｉのラパマイシンアナログはラパマイシン系出発物質から調製される。好ましくは、ラパマイシン系出発物質には、限定されないが、ラパマイシン、ノルラパマイシン、デオキソラパマイシン、デスメチルラパマイシン又はデスメトキシラパマイシン、あるいは、それらの医薬的に許容され得る塩、プロドラッグ又は代謝産物が含まれる。しかしながら、当業者は、本発明の新規なラパマイシンアナログを調製するために利用することができる好適なラパマイシン系出発物質を容易に選択することができる。
【００５５】
用語「デスメチルラパマイシン」は、１つ又はそれ以上のメチル基を有さない一群のラパマイシン化合物を示す。本発明に従って使用することができるデスメチルラパマイシン類の例は、とりわけ、３−デスメチルラパマイシン（米国特許第６，３５８，９６９号）、７−Ｏ−デスメチル−ラパマイシン（米国特許第６，３９９，６２６号）、１７−デスメチルラパマイシン（米国特許第６，６７０，１６８号）及び３２−Ｏ−デスメチルラパマイシンが含まれる。
【００５６】
用語「デスメトキシラパマイシン」は、１つ又はそれ以上のメトキシ基を有さない一群のラパマイシン化合物を示し、これには、限定されないが、３２−デスメトキシラパマイシンが含まれる。
【００５７】
従って、本発明の式Ｉのラパマイシンアナログは、ラパマイシン系出発物質及びジエノフィルを結合することによって調製される。用語「ジエノフィル」は、１，３−ジエンと反応して、［４＋２］付加環化生成物を与える分子を示す。好ましくは、本発明において利用されるジエノフィルは、場合により置換されたニトロソベンゼンである。様々なニトロソベンゼン類を本発明において利用することができ、これらには、とりわけ、ニトロソベンゼン、２，６−ジクロロニトロソベンゼン及び１−クロロ−２−メチル−４−ニトロソベンゼンが含まれる。当業者は、本発明のラパマイシンアナログの調製に効果的なニトロソベンゼンの量を容易に選択することができる。好ましくは、過剰なニトロソベンゼンが利用され、より好ましくは、ニトロソベンゼン対ラパマイシン系出発物質の５：１の比率で利用される。しかしながら、当業者によって明らかにされるように、ニトロソベンゼン対ラパマイシンの１：１、２：１又は３：１の比率でも利用することができる。
【００５８】
ニトロソベンゼン及びラパマイシン系出発物質は溶媒中で結合させられる。溶媒は好ましくは、ニトロソベンゼン及び／又はラパマイシン系出発物質を、接触したときに溶解するか、あるいは、ニトロソベンゼン及びラパマイシン系出発物質を、反応が進行するにつれて溶解する。本発明において利用することができる溶媒には、限定されないが、ジメチルホルムアミド、ジオキサン（例えば、ｐ−ジオキサンなど）、クロロホルム、アルコール（例えば、メタノール及びエタノールなど）、酢酸エチル、水、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン及びトルエン、又は、それらの組合せが含まれる。しかしながら、当業者は、ラパマイシン系出発物質及びニトロソベンゼンの溶解性、並びに、それらとの溶媒の反応性に基づいて、好適な溶媒を容易に選択することができる。利用される溶媒量は、反応の規模、具体的には、反応混合物に存在するラパマイシン系出発物質及びニトロソベンゼンの量に依存する。当業者は、必要な溶媒量を容易に決定することができる。
【００５９】
典型的には、ニトロソベンゼン、ラパマイシン系出発物質及び溶媒を含有する溶液は、高い温度で、好ましくは、ラパマイシン系出発物質及びニトロソベンゼンの分解を促進しない温度で維持される。１つの実施形態において、溶液は約３０℃〜約７０℃の温度で維持され、好ましくは約５０℃の温度で維持される。成分が、ラパマイシンとニトロソベンゼンとの間での反応を可能にするために十分な期間にわたって加熱される。公知の技術を使用して、当業者は加熱期間中の反応の進行を容易に追跡することができ、従って、反応を行うために必要な時間を容易に決定することができる。１つの好ましい実施形態において、ラパマイシン及びニトロソベンゼンはｐ−ジオキサンと一緒にされ、約５０℃の温度で維持される。
【００６０】
ラパマイシンアナログの単離及び精製は十分に当業者の範囲内であり、これには、クロマトグラフィー（これには、限定されないが、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（例えば、逆相ＨＰＬＣ及び順相ＨＰＬＣなど）及びサイズ排除クロマトグラフィーが含まれる）及び再結晶が含まれる。
【００６１】
ラパマイシンアナログが得られると、そのラパマイシンアナログは、より飽和したラパマイシンアナログを形成するために還元することができる。当業者はまた、本発明において使用される好適な還元剤を容易に選択することができる。好ましくは、ラパマイシンアナログの還元は、水素化剤を使用して行うことができる。当業者はまた、本発明において使用される好適な水素化剤を容易に選択することができる。典型的には、水素ガスの存在下での、とりわけ、遷移金属触媒、又は、担体（好ましくは、炭素担体）上の遷移金属が、この還元を行うために利用される。好ましい実施形態において、還元は、パラジウム金属担持炭素を水素ガスの存在下で使用して行われる。
【００６２】
ラパマイシンアナログの還元は、典型的には、溶媒中で行われる。様々な溶媒をこの還元において利用することができ、そのような溶媒には、限定されないが、アルコール（例えば、メタノールなど）が含まれる。しかしながら、当業者は、本発明において使用される好適な溶媒を、水素化触媒及び還元されているラパマイシンアナログに依存して容易に選択することができる。溶媒量は、反応の規模、具体的には、還元されているラパマイシンアナログの量に依存する。
【００６３】
本発明において利用される水素化剤の量は当業者によって容易に決定することができる。しかしながら、当業者はまた、この還元を行うために必要な水素化剤の量、及び、本発明のより飽和したラパマイシンアナログを形成するために必要な水素化剤の量を決定及び調節することができる。さらに、様々な装置を、本発明の水素化を行うために利用することができ、そのような装置には、中でも、Ｐａｒｒ装置が含まれる。水素化のための特定のな装置の選択は十分に当業者の範囲内である。
【００６４】
本発明のラパマイシンアナログを調製する好ましい方法が下記のスキーム１に要約される：
【化２２】
2008524240.tif 000013
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ15及びｎは上記で定義される。
【００６５】
本発明のラパマイシンアナログは、医薬的又は生理学的に許容され得る酸又は塩基に由来するその医薬的に許容され得る塩、プロドラッグ又は代謝産物の形態で利用することができる。これらの塩には、鉱酸又は無機酸（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸など）及び有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、コハク酸及びマレイン酸など）との下記の塩が含まれるが、これらに限定されない。他の塩には、エステル、カルバマート及び他の従来の「プロドラッグ」形態でのアルカリ金属又はアルカリ土類金属（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はマグネシウムなど）との塩が含まれ、これらは、そのような形態で投与されたとき、活性な部分にインビボで変換される。
【００６６】
ＩＩＩ．本発明の化合物を使用する方法
本発明の式Ｉ、式Ｉａ及び式Ｉｂのラパマイシンアナログ（飽和度がより大きいラパマイシンアナログ及び飽和度がより低いラパマイシンアナログを含む）は、とりわけ、神経障害（神経筋障害を含む）及び心臓血管障害に関連する適用において有用である。本発明の式Ｉ、式Ｉａ及び式Ｉｂのラパマイシンアナログ（飽和度がより大きいラパマイシンアナログ及び飽和度がより低いラパマイシンアナログを含む）は、カルシウム（Ｃａ2+）イオンチャネルの機能不全を伴う障害において有用であり、例えば、リアノジン受容体（ＲｙＲ１、ＲｙＲ２及びＲｙＲ３など）チャネル病（chennelopathy）（これには、なかでも、悪性高体温、セントラルコア病、カテコールアミン作動性多型心室性頻脈及び２型催不整脈性右室異形成（ＡＲＶＤ−２）が含まれる）において有用である。本発明の式Ｉ、式Ｉａ及び式Ｉｂのラパマイシンアナログ（飽和度がより大きいラパマイシンアナログ及び飽和度がより低いラパマイシンアナログを含む）はまた、ジヒドロピリジン受容体チャネル病（これには、ジヒドロピリジン感受性カルシウムイオン（Ｃａ2+）チャネルの活性に起因するリアノジン受容体活性から生じるチャネル病が含まれる）において有用である。本明細書中で使用される用語「チャネル病」は、イオンチャネルの機能不全を伴う疾患又は障害を示す。
【００６７】
本明細書中で示される疾患及び障害は本明細書中では従来の表題（例えば、神経障害及び炎症性障害）で分類される。当業者は、本明細書中で示される疾患及び障害が、異なる表題で、又は、多数の表題で適切に分類され得ることを認識する。本明細書中で示される疾患及び／又は障害の分類は本発明の限定ではない。
【００６８】
本発明の化合物は、アルツハイマー病；てんかん；ハンチントン舞踏病；パーキンソン病；脳卒中；脊髄傷害；外傷性脳傷害；レヴィー小体認知症；ピック病；ニーマン・ピック病；アミロイド血管症；脳アミロイド血管症；全身性アミロイドーシス；ダッチ型のアミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血；封入体筋炎；軽度認識障害；ダウン症候群を含む、様々な神経障害；及び、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症及び筋ジストロフィー（デュシェンヌ型ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕筋型（ランドジー・デジュリーヌ）筋ジストロフィー及び肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ）を含む）を含む、様々な神経筋障害の治療において有用であり、また、そのための医薬品の調製において有用である。ラパマイシンアナログはまた、脳卒中、頭蓋骨損傷又は脊髄傷害、あるいは、脳、末梢神経系、中枢神経系又は神経筋系に対する他の傷害に起因する合併症の治療において有用であり、また、そのための医薬品の調製において有用である。
【００６９】
新規なラパマイシンアナログはまた、神経保護剤として有用である。本発明のラパマイシンアナログはまた、神経再生剤として、すなわち、上記状態のいずれか１つの発症、及び／あるいは、傷害、脳卒中又は他の外傷の後で何らかの神経機能及び／又は神経筋機能又は他の機能を回復させる神経再生剤として有用であり得る。
【００７０】
本発明の化合物は、うっ血性心不全；催不整脈性症候群（発作性頻脈、遅延型後脱分極、心室性頻拍、突発性頻脈、運動誘発性不整脈、ＱＴ延長症候群及び二方向性頻脈を含む）；血栓塞栓性障害（動脈の心臓血管血栓塞栓性障害、静脈の心臓血管血栓塞栓性障害、及び、心臓の心房／心室における血栓塞栓性障害を含む）；アテローム性動脈硬化；再狭窄；末梢動脈疾患；冠状動脈バイパス移植手術；頸動脈疾患；動脈炎；心筋炎；心臓血管炎症；血管炎症；冠状動脈心疾患（ＣＨＤ）；不安定狭心症（ＵＡ）；不安定不応性狭心症；安定狭心症（ＳＡ）；慢性的安定狭心症；急性冠症候群（ＡＣＳ）；最初又は再発の心筋梗塞；急性心筋梗塞（ＡＭＩ）；心筋梗塞；非Ｑ波心筋梗塞；非ＳＴＥ心筋梗塞；冠動脈疾患；虚血性心疾患；心虚血；虚血；虚血性突然死；一過性虚血発作；脳卒中；末梢閉塞性動脈疾患；静脈血栓症；深部静脈血栓症；血栓性静脈炎；動脈塞栓症；冠動脈血栓症；脳動脈血栓症；脳塞栓症；腎臓塞栓症；肺塞栓症；（ａ）人工弁又は他のインプラント、（ｂ）留置カテーテル、（ｃ）ステント、（ｄ）心肺バイパス、（ｅ）血液透析、又は、（ｆ）血液が、血栓症を促進させる人工的表面にさらされる他の手法から生じる血栓症；アテローム性動脈硬化、手術又は手術合併症、長期にわたる不動化、動脈細動、先天性血栓形成傾向、ガン、糖尿病、薬物療法又はホルモンの影響、及び、妊娠の合併症から生じる血栓症；心不整脈（上室性不整脈、心房性不整脈、心房粗動、心房細動を含む）；Heart Diseases: A Textbook of Cardiovascular Medicine、2 Volume Set、6th Edition、2001、Eugene Braunwald、Douglas P. Zipes、Peter Libby、Douglas D. Zipesに列挙される他の疾患（これらに限定されない）を含む、様々な心臓血管障害の治療において有用であり、また、そのための医薬品の調製において有用である。
【００７１】
さらなる実施形態において、心臓血管疾患は、アテローム性動脈硬化；冠状動脈心疾患（ＣＨＤ）；再狭窄；末梢動脈疾患；冠状動脈バイパス移植手術；頸動脈疾患；動脈炎；心筋炎；心臓血管炎症；血管炎症；不安定狭心症（ＵＡ）；不安定不応性狭心症；安定狭心症（ＳＡ）；慢性的安定狭心症；急性冠症候群（ＡＣＳ）；心筋梗塞；又は急性心筋梗塞（ＡＭＩ）（最初又は再発の心筋梗塞、非Ｑ波心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇心筋梗塞及びＳＴセグメント上昇心筋梗塞を含む）である。
【００７２】
なおさらにさらなる実施形態において、心臓血管疾患は、アテローム性動脈硬化；冠状動脈心疾患（ＣＨＤ）；不安定狭心症（ＵＡ）；不安定不応性狭心症；安定狭心症（ＳＡ）；慢性的安定狭心症；急性冠症候群（ＡＣＳ）；心筋梗塞；又は急性心筋梗塞（ＡＭＩ）（最初又は再発の心筋梗塞、非Ｑ波心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇心筋梗塞及びＳＴセグメント上昇心筋梗塞を含む）である。
【００７３】
本発明の式Ｉ、式Ｉａ及び式Ｉｂのラパマイシンアナログはまた、免疫抑制活性を有することが示されており、従って、自己免疫障害（例えば、狼瘡）、皮膚の炎症性障害、腸の炎症性障害、喘息及びアトピー性障害、並びに移植組織／移植片拒絶（これらに限定されない）を含む、様々な炎症性障害を治療するための抗炎症剤として有用である。従って、ラパマイシンアナログは、自己免疫障害、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節炎障害（例えば、リウマチ様関節炎、乾癬性関節炎、変形性関節症、強直性脊椎炎）、糖尿病（Ｉ型）、多発性硬化症、重症筋無力症、脈管炎；皮膚の炎症性障害（例えば、乾癬、皮膚炎及び強皮症）；腸の炎症性障害（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病及び潰瘍性大腸炎）；喘息及びアトピー性障害（例えば、アレルギー）；並びに移植組織／移植片拒絶及び移植片対宿主病（これらに限定されない）を含む、様々な炎症性障害の治療において、またそのための医薬品の調製において、有用である。
【００７４】
式Ｉ、式Ｉａ及び式Ｉｂのこれらの化合物はまた、良性又は悪性の腫瘍性疾患又はガン腫及び腺ガンの治療又は防止において、また、そのための医薬品の調製において有用である。１つのそのような化合物が９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−３７−フェニル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンである。別のそのような化合物が３７−（４−クロロ−３−メチルフェニル）−９，２７−ジヒドロキシ−３−｛２−［４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル］−１−メチルエチル｝−１０，２１−ジメトキシ−６，８，１２，１４，２０，２６−ヘキサメチル−４，９，１０，１２，１３，１４，１５，１８，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ−ノナデカヒドロ−３Ｈ−２３，２７−エポキシ−１８，１５−（エポキシイミノ）ピリド［２，１−ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン−１，５，１１，２８，２９（６Ｈ，３１Ｈ）−ペントンである。本発明に従って治療することができるガン腫及び腺ガンには、限定されないが、子宮内膜、卵巣、乳房、結腸、腎臓、前立腺、下垂体のガン腫若しくは腺ガン、又は髄膜腫若しくは他のホルモン依存性の腫瘍が含まれる。
【００７５】
本発明のラパマイシンアナログの投薬必要量は、状態、示された症状の重篤度、及び、治療されている特定の被験者に依存して変化し得る。当業者は、ラパマイシンアナログの必要量を容易に決定することができる。１つの実施形態において、約０．５ｍｇ〜２００ｍｇが投与される。さらなる実施形態においては、約０．５ｍｇ〜１００ｍｇが投与される。別の実施形態においては、約０．５ｍｇ〜約７５ｍｇが投与される。さらにさらなる実施形態においては、約１ｍｇ〜約２５ｍｇが投与される。別の実施形態においては、特に別の薬剤との組合せで使用されるとき、約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇが投与される。さらにさらなる実施形態においては、約２ｍｇ〜約５ｍｇが投与される。さらに別の実施形態においては、約５ｍｇ〜約１５ｍｇが投与される。治療は、所望の効果を生じさせるために必要な投薬量よりも少なく、かつ、一般にはラパマイシンアナログの最適な用量よりも低い投薬量のラパマイシンアナログを用いて開始することができる。その後、投薬量を、その状況下での最適な効果に到達するまで増大させることができる。正確な投薬量は、治療されている個々の被験者に関して経験に基づいて投薬医によって決定される。一般に、本発明の組成物は、最も望ましくは、何らかの危険な副作用又は有害な副作用を引き起こすことなく、効果的な結果をもたらす濃度で投与される。
【００７６】
ＩＶ．ラパマイシンアナログを含有する投与可能な組成物を調製する方法
１つの態様において、本発明は、本発明の１つ又はそれ以上のラパマイシンアナログを含有する医薬組成物を調製する方法を含む。本明細書中で使用される場合、本発明の「ラパマイシンアナログ」を含有する組成物に対する参照は、本発明の１つ又はそれ以上のラパマイシンアナログを含有する組成物を包含することが意図される。組成物はいくつかの異なる経路によって、被験対象の哺乳動物に投与することができ、望ましくは、固体形態又は液体形態で経口投与される。
【００７７】
ラパマイシンアナログを含有する様々な固体剤形（これらには、錠剤、カプセル及びカプレットが含まれる）を、ラパマイシンアナログを上記で記載された成分の１つ又は複数と混合することによって形成することができる。１つの実施形態において、組成物の成分は乾式混合又は湿式混合される。別の実施形態において、成分は乾式造粒される。さらなる実施形態において、成分は液体に懸濁又は溶解され、被験対象の哺乳動物への投与のために好適な剤形に加えられる。
【００７８】
ラパマイシンアナログを含有する様々な液体剤形は、ラパマイシンアナログを、被験対象の哺乳動物への投与のために好適な液体に溶解又は懸濁することによって形成することができる。
【００７９】
本発明のラパマイシンアナログを含有する組成物は、ラパマイシンアナログ及び医薬的に許容され得る担体を組み合わせることによって本発明に従って調製することができる。
【００８０】
ラパマイシンアナログを含有する本明細書中に記載される組成物は、ラパマイシンアナログの医薬的に効果的な量を使用して、所望の送達経路のために好適な任意の形態で配合することができる。例えば、本発明の組成物は、経路（例えば、経口、皮膚、経皮、気管支内、鼻腔内、静脈内、筋肉内、皮下、非経口的、腹腔内、鼻腔内、膣内、直腸、舌下、頭蓋内、硬膜外、気管内の経路など）によって、又は、持続放出によって送達することができる。好ましくは、送達は経口による。
【００８１】
本発明の経口投薬用の錠剤組成物はまた、ラパマイシンアナログの誘導体を含有する経口投薬用の錠剤を調製するために使用することができ、そのような誘導体には、当業者に公知のエステル、カルバマート、スルファート、エーテル、オキシム及びカルボナートなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００８２】
ラパマイシンアナログの医薬的に効果的な量は、具体的な化合物、送達様式、治療されている状態の重篤度、及び、組成物において使用される任意の他の有効成分に依存して変更し得る。服用法はまた、最適な治療効果をもたらすために調節することができる。数個の分割された服用量を毎日送達することができ、例えば、１日に２〜４回の分割された服用量で送達することができ、又は、単回服用量を送達することができる。しかしながら、服用量は、治療状況からの要求に適応するように比例して増減することができる。１つの実施形態において、送達は、毎日、毎週又は毎月である。別の実施形態において、送達は毎日の送達である。しかしながら、１日投薬量は、反復した送達に基づいて増減することができる。
【００８３】
本発明のラパマイシンアナログは、本発明の組成物との適合性を有する固体担体及び液体担体（これらに限定されない）を含む１つ又はそれ以上の医薬的に許容され得る担体又は賦形剤と組み合わせることができる。そのような担体には、とりわけ、アジュバント、シロップ、エリキシル剤、希釈剤、結合剤、滑剤、界面活性剤、造粒剤、崩壊剤、皮膚軟化剤、金属キレーター、ｐＨ調整剤、界面活性剤、増量剤、錠剤分解物質及びそれらの組合せが含まれる。１つの実施形態において、ラパマイシンアナログは、金属キレーター、ｐＨ調整剤、界面活性剤、増量剤、錠剤分解物質、滑剤及び結合剤と組み合わされる。
【００８４】
アジュバントは、限定されないが、矯味矯臭剤、着色剤、保存剤、及び、補助的な酸化防止剤（これには、ビタミンＥ、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）及びブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）が含まれ得る）が含まれ得る。
【００８５】
結合剤は、限定されないが、とりわけ、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、微結晶性セルロース、非結晶性セルロース、ポリプロピルピロリドン、ポリビニルピロリドン（ポビドン、ＰＶＰ）、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、デンプン、糖（例えば、スクロース、カオリン、デキストロース及びラクトースなど）、コレステロール、トラガカント、ステアリン酸、ゼラチン、カゼイン、レシチン（ホスファチド）、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、セチルエステルワックス、デキストラート、デキストリン、グリセリルモノオレアート、グリセリルモノステアラート、グリセリルパルミトステアラート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンひまし油誘導体、ポリオキシエチレンステアラート、ポリビニルアルコール及びゼラチンが含まれ得る。１つの実施形態において、結合剤は、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はゼラチンである。別の実施形態において、結合剤はポビドンである。
【００８６】
滑剤は、とりわけ、ステアリン酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、タルク、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム及びナトリウムステアリルフマラートが含まれ得る。１つの実施形態において、滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はナトリウムステアリルフマラートである。別の実施形態において、滑剤はステアリン酸マグネシウムである。
【００８７】
造粒剤は、限定されないが、とりわけ、二酸化ケイ素、微結晶性セルロース、デンプン、炭酸カルシウム、ペクチン、クロスポビドン（crospovidone）及びポリプラスドン（polyplasdone）が含まれ得る。
【００８８】
崩壊剤又は錠剤分解物質は、とりわけ、クロスカルメロースナトリウム、デンプン、カルボキシメチルセルロース、置換されたヒドロキシプロピルセルロース、重炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム、ナトリウムデンプングリコラート、アルファ化デンプン又はクロスポビドンが含まれ得る。１つの実施形態において、錠剤分解物質はクロスカルメロースナトリウムである。
【００８９】
皮膚軟化剤は、限定されないが、ステアリルアルコール、ミンク油、セチルアルコール、オレイルアルコール、ラウリン酸イソプロピル、ポリエチレングリコール、オリーブ油、ワセリン、パルミチン酸、オレイン酸及びミリスチン酸ミリスチルが含まれ得る。
【００９０】
界面活性剤は、ポリソルバート、ソルビタンエステル、ポロキサマー又はラウリル硫酸ナトリウムが含まれ得る。１つの実施形態において、界面活性剤はラウリル硫酸ナトリウムである。
【００９１】
金属キレーターは、生理学的に許容され得るキレート化剤（これには、エデト酸、リンゴ酸又はフマル酸が含まれる）が含まれ得る。１つの実施形態において、金属キレーターはエデト酸である。
【００９２】
ｐＨ調整剤はまた、ラパマイシンアナログを含有する溶液のｐＨを約４〜約６に調整するために使用することができる。１つの実施形態において、ラパマイシンアナログを含有する溶液のｐＨは約４．６のｐＨに調整される。ｐＨ調整剤には、生理学的に許容され得る薬剤（これには、クエン酸、アスコルビン酸、フマル酸又はリンゴ酸、及び、それらの塩が含まれる）が含まれ得る。１つの実施形態において、ｐＨ調整剤はクエン酸である。
【００９３】
本発明に従って使用することができる増量剤は、無水ラクトース、微結晶性セルロース、マンニトール、リン酸カルシウム、アルファ化デンプン又はスクロースが含まれる。１つの実施形態において、増量剤は無水ラクトースである。別の実施形態において、増量剤は微結晶性セルロースである。
【００９４】
１つの実施形態において、本発明のラパマイシンアナログを含有する組成物は、錠剤、カプレット又はカプセル、マイクロカプセル、分散性粉末、顆粒剤、懸濁物、シロップ、エリキシル剤及びエアロゾルによって経口送達される。望ましくは、ラパマイシンアナログを含有する組成物が経口送達されるとき、送達は錠剤及びハード充填カプセル又は液体充填カプセルによって行われる。
【００９５】
別の実施形態において、ラパマイシンアナログを含有する組成物は、容易なシリンジ能が存在する程度に流動性である無菌の注射可能な溶液、懸濁物、分散物及び粉末の形態で静脈内、筋肉内、皮下、非経口的及び腹腔内に送達することができる。そのような注射可能な組成物は無菌であり、かつ、製造及び貯蔵の条件のもとで安定であり、かつ、微生物（例えば、細菌及び菌類など）の混入作用がない。
【００９６】
さらなる実施形態において、ラパマイシンアナログを含有する組成物は従来の坐薬の形態で直腸に送達することができる。
【００９７】
別の実施形態において、ラパマイシンアナログを含有する組成物は、従来の坐薬、クリーム、ゲル、リング又は被覆子宮内デバイス（ＩＤＵ）の形態で膣に送達することができる。
【００９８】
別の実施形態において、ラパマイシンアナログを含有する組成物は、支持構造体の被覆又は含浸によって、すなわち、本発明の化合物を含有する医薬的に許容され得る担体又は賦形剤を含有又は支持することができる骨格構造体（例えば、脈管構造において使用される血管ステント又は血管シャント、冠状動脈ステント、末梢ステント、カテーテル、動脈静脈グラフト、バイパスグラフト及び薬物送達バルーン）の被覆又は含浸によって送達することができる。１つの実施形態において、使用に好適な被覆には、本発明の化合物が実質的に可溶性である任意のポリマー物質から構成されるポリマー被覆が含まれるが、これに限定されない。様々な支持構造体及び被覆方法又は含浸方法（例えば、米国特許第６，８９０，５４６号に記載される支持構造体及び被覆方法又は含浸方法）が当業者には公知であり、これらは本発明の限定ではない。
【００９９】
さらに別の実施形態において、ラパマイシンアナログを含有する組成物はエアロゾルの形態で鼻腔内又は気管支内に送達することができる。
【０１００】
ラパマイシンアナログは、静脈内経路、筋肉内経路又は皮下経路によるだけでなく、経口投与によって投与される。固体担体には、デンプン、ラクトース、リン酸二カルシウム、微結晶性セルロース、スクロース及びカオリンが含まれ、一方、液体担体には、無菌水、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤及び食用油（例えば、トウモロコシ油、ピーナッツ油及びゴマ油など）が含まれ、これらは有効成分の性質及び所望の具体的な投与形態に対して好適である。医薬組成物の調製において慣例的に用いられるアジュバントが好都合には含まれる（例えば、矯味矯臭剤、着色剤、保存剤及び酸化防止剤（例えば、ビタミンＥ、アスコルビン酸、ＢＨＴ及びＢＨＡ）など）。
【０１０１】
調製及び投与の容易さの観点からの好ましい医薬組成物は固体組成物であり、特に、錠剤及びハード充填カプセル又は液体充填カプセルである。化合物の経口投与が好ましい。
【０１０２】
ラパマイシンアナログはまた、非経口的又は腹腔内に投与される。遊離塩基又は医薬的に許容され得る塩としてのこれらの活性な化合物の溶液又は懸濁物が、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロースなど）と好適に混合された水において調製される。分散物もまた、グリセロール、液状ポリエチレングリコール、及び、オイルにおけるそれらの混合物において調製される。貯蔵及び使用の通常の条件のもとで、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための保存剤を含有する。
【０１０３】
注射剤使用のために好適な医薬品剤形には、無菌の水性の溶液又は分散物、及び、無菌の注射可能な溶液又は分散物を即座に調製するための無菌の粉末が含まれる。すべての場合において、当該剤形は無菌であり、かつ、容易なシリンジ能が存在する程度に流動性である。当該剤形は、製造及び貯蔵の条件のもとで安定であり、かつ、微生物（例えば、細菌及び菌類など）の混入作用から保護される。担体は、例えば、水、エタノール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液状ポリエチレングリコール）、それらの好適な混合物、及び、植物油を含有する溶媒又は分散媒体である。
【０１０４】
Ｖ．本発明のキット
本発明はまた、ラパマイシンアナログを含有するキット又は包装物（package）を提供する。本発明のキットは、本発明のラパマイシンアナログと、上記で議論されたような被験対象の哺乳動物への投与のために好適な担体とを含むことができる。キットはまた、本発明のラパマイシンアナログを調製するために必要とされる試薬を含有することもでき、また、ラパマイシン、場合により置換されたニトロソベンゼン、及び溶媒を含むことができる。
【０１０５】
キットは、他のラパマイシンアナログを形成するための他の試薬を場合により含むことができ、水素化剤を含むことができる。
【０１０６】
キットはさらに、本発明の反応を行うための説明書を含有することができる。キットにはまた、他の好適な化学試薬、使い捨て手袋、汚染除去の説明書、アプリケータースティック又は容器、及び、サンプル調製者用カップが提供され得る。
【０１０７】
下記の実施例は、本発明を例示するために提供され、本発明の範囲を限定しない。当業者は、具体的な試薬及び条件が下記の実施例において概略されるが、本発明の思想及び範囲によって包含されることが意図される様々な改変が行われ得ることを十分に理解する。
【実施例１】
【０１０８】
【化２３】
2008524240.tif 000014
表１は、下記の２つの代替経路によって調製された化合物についての質量スペクトル（ＭＳ）データを提供し、図１はその核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを提供する。
【０１０９】
【表１】
2008524240.tif 000015
【０１１０】
Ａ．経路１
ラパマイシン（２．５ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）を２００ｍＬのｐ−ジオキサンに溶解した。この溶液に、２００ｍＬのｐ−ジオキサンにおけるニトロソベンゼン（１．５０ｇ、５当量）の溶液を滴下して加えた。反応混合物を５０℃で６４時間撹拌し、その後、生成物を逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（カラム：２００×５０ｍｍ ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ、移動相：８０％メタノール：水、１０ｍＬ／分から３５ｍＬ／分への１０分での傾斜流速、その後、３５ｍＬ／分でさらに６５分間保持する）によってクロマトグラフィー処理して、１．２２ｇの生成物を得た（４４％の収率、ｔR＝１２．１分、分析ＨＰＬＣ条件：カラム＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ−３  １２０Å、移動相／グラジエント：６分で９５％水（＋０．０２５％ギ酸）／アセトニトリル（＋０．０２５％ギ酸）から５％水に、５％で９分間保持する、流速＝０．３０ｍＬ／分）。
【０１１１】
Ｂ．経路２−代替経路
ラパマイシン（０．３ｇ、０．３２８ｍｍｏｌ）を穏やかな加熱とともに５ｍＬのトルエンに溶解した。この溶液に、５ｍＬのトルエンにおけるニトロソベンゼン（０．１ｇ、３当量）の溶液を滴下して加えた。反応混合物を７０℃で１６時間撹拌し、その後、生成物を逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（カラム：５０×２０のガードカラムを伴う２５０×２０ｍｍ ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ、移動相：４０分での８０〜８５％メタノール：水、流速＝２０ｍＬ／分）によってクロマトグラフィー処理して、０．１３９ｇの生成物を得た（４２％の収率、ｔR＝１２．１分、分析ＨＰＬＣ条件：カラム＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ−３  １２０Å、移動相／グラジエント：６分で９５％水（＋０．０２５％ギ酸）／アセトニトリル（＋０．０２５％ギ酸）から５％水に、５％で９分間保持する、流速＝０．３０ｍＬ／分）。
【実施例２】
【０１１２】
【化２４】
2008524240.tif 000016
表２は、下記の２つの代替経路によって調製された化合物についての質量スペクトル（ＭＳ）データを提供し、図２はその核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを提供する。
【０１１３】
Ａ．経路１
実施例１に従って調製された化合物（０．２９ｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）を１８ｍｍの試験管において７ｍＬのメタノールに溶解し、スパチュラ先端１杯分のＰｄ／Ｃ触媒（Ａｌｄｒｉｃｈ）を加えた。混合物をＰａｒｒ装置で２．０気圧のＨ2において１５分間水素化した。生成物を逆相ＨＰＬＣ（カラム：５０×２０のガードカラムを伴う２５０×２０ｍｍ ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ、移動相：８０％メタノール：水で１５分間、次いで、５分で８５％に、次いで、８５％で２０分間保持する、流速＝２０ｍＬ／分）によってクロマトグラフィー処理して、０．０８９ｇの生成物を得た（３１％の収率、ｔR＝１２．６分、分析ＨＰＬＣ条件：カラム＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ−３  １２０Å、移動相／グラジエント：６分で９５％水（＋０．０２５％ギ酸）／アセトニトリル（＋０．０２５％ギ酸）から５％水に、５％で９分間保持する、流速＝０．３０ｍＬ／分）。
【０１１４】
Ｂ．経路２−代替経路
実施例１に従って調製された化合物（９．８５ｇ、９．６５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのメタノールに溶解し、スパチュラ先端３杯分のＰｄ／Ｃ触媒（Ａｌｄｒｉｃｈ）を加えた。混合物をＰａｒｒ装置で２．５気圧のＨ2において２．５時間水素化した。生成物を逆相ＨＰＬＣ（カラム：２５０×２０ｍｍ  ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ、移動相：８０％メタノール：水で４０分間、次いで、５分で８５％に、次いで、８５％で３５分間保持する、流速＝３５ｍＬ／分）によってクロマトグラフィー処理して、３．３５ｇの生成物を得た（１５％の収率、ｔR＝１２．２分、分析ＨＰＬＣ条件：カラム＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ−３  １２０Å、移動相／グラジエント：６分で９５％水（＋０．０２５％ギ酸）／アセトニトリル（＋０．０２５％ギ酸）から５％水に、５％で９分間保持する、流速＝０．３０ｍＬ／分）。
【０１１５】
【表２】
2008524240.tif 000017
【実施例３】
【０１１６】
【化２５】
2008524240.tif 000018
ラパマイシン（０．２５ｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）を穏やかな加熱とともに５ｍＬのトルエンに溶解した。この溶液に、７ｍＬのトルエンにおける２，６−ジクロロニトロソベンゼン（０．１４４ｇ、３当量）の溶液を滴下して加えた。反応混合物を８０℃で３６時間撹拌し、その後、生成物を逆相ＨＰＬＣ（カラム：５０×２０のガードカラムを伴う２５０×２０ｍｍ ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ、移動相：４０分での８０〜８５％メタノール：水、流速＝２０ｍＬ／分）によってクロマトグラフィー処理して、０．０４６ｇの生成物を得た（１５％の収率、ｔR＝１３．０分、分析ＨＰＬＣ条件：カラム＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ−３  １２０Å、移動相／グラジエント：６分で９５％水（＋０．０２５％ギ酸）／アセトニトリル（＋０．０２５％ギ酸）から５％水に、５％で９分間保持する、流速＝０．３０ｍＬ／分）。ＭＳデータが表３に提供され、図３にはＮＭＲスペクトルが提供される。
【０１１７】
【表３】
2008524240.tif 000019
【実施例４】
【０１１８】
【化２６】
2008524240.tif 000020
本実施例の合成を、０．０５ｇのラパマイシン及び０．０４２ｇの１−クロロ−２−メチル−４−ニトロソベンゼンを用いて実施例３に記載されるように行って、０．０１２ｇの生成物を得た（２０％の収率、ｔR＝１２．８分）。ＭＳデータが表４に提供され、図４にはＮＭＲスペクトルが提供される。
【０１１９】
【表４】
2008524240.tif 000021
【実施例５】
【０１２０】
【化２７】
2008524240.tif 000022
実施例３からの生成物（０．０４６ｇ、０．０４２２ｍｍｏｌ）を１８ｍｍの試験管において５ｍＬのメタノールに溶解し、スパチュラ先端１杯分のＰｄ／Ｃ触媒（Ａｌｄｒｉｃｈ）を加えた。混合物をＰａｒｒ装置で３気圧のＨ2において６０分間水素化した。生成物を逆相ＨＰＬＣ（カラム：５０×２０のガードカラムを伴う２５０×２０ｍｍ ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ、移動相：１５分で８５％メタノール：水から９０％に、次いで、９０％で２５分間保持する、流速＝２０ｍＬ／分）によってクロマトグラフィー処理して、０．００５ｇの生成物を得た（１１％の収率、ｔR＝１０．０分、分析ＨＰＬＣ条件：カラム＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ−３  １２０Å、移動相／グラジエント：６分で９５％水（＋０．０２５％ギ酸）／アセトニトリル（＋０．０２５％ギ酸）から５％水に、５％で９分間保持する、流速＝０．３０ｍＬ／分）。ＭＳデータが表５に提供され、図５にはＮＭＲスペクトルが提供される。
【０１２１】
【表５】
2008524240.tif 000023
【実施例６】
【０１２２】
【化２８】
2008524240.tif 000024
本実施例の合成を、２，２−ジメチル−３−（ピリジン−２−イル）プロピオン酸とのラパマイシン４２−エステル（これは米国特許第５，３８５，９０８号の方法に従って調製された）の０．１０８ｇ（０．０９９ｍｍｏｌ）及び０．０３２ｇのニトロソベンゼン（０．２９７ｍｍｏｌ、３当量）を使用して実施例３に記載されるように行った。反応液を７０℃で４０時間撹拌し、その後、生成物を逆相ＨＰＬＣ（カラム：５０×２０のガードカラムを伴う２５０×２０ｍｍ ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ、移動相：１５分での８０〜８５％メタノール：水、次いで、１０分で９０％メタノールに、次いで、９０％で１５分間保持する、流速＝２０ｍＬ／分）によってクロマトグラフィー処理して、０．００７ｇの生成物を得た（６％の収率、ｔR＝１３．０分）。ＭＳデータが表６に示され、図６にはＮＭＲスペクトルが提供される。
【０１２３】
【表６】
2008524240.tif 000025
【実施例７】
【０１２４】
【化２９】
2008524240.tif 000026
実施例１に従って調製された化合物（０．０３１ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を１８ｍｍの試験管において５ｍＬのメタノールに溶解し、スパチュラ先端１杯分のＰｄ／Ｃ触媒（Ａｌｄｒｉｃｈ）を加えた。混合物をＰａｒｒ装置で２．０気圧のＨ2において３０分間水素化した。生成物を逆相ＨＰＬＣ（カラム：５０×２０のガードカラムを伴う２５０×２０ｍｍ ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ、移動相：８０％メタノール：水で１５分間、次いで、５分で８５％に、次いで、８５％で２０分間保持する、流速＝２０ｍＬ／分）によってクロマトグラフィー処理して、０．０１６ｇの生成物を得た（５５％の収率、ｔR＝９．９５分、分析ＨＰＬＣ条件：カラム＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ−３  １２０Å、移動相／グラジエント：６分で９５％水（＋０．０２５％ギ酸）／アセトニトリル（＋０．０２５％ギ酸）から５％水に、５％で９分間保持する、流速＝０．３０ｍＬ／分）。ＭＳデータが表７に提供される。
【０１２５】
【表７】
2008524240.tif 000027
【実施例８】
【０１２６】
中脳のドーパミン作動性ニューロンの培養物を、Pongら、J. Neurochem.、69:986-994、1997（これはその全体が参照により本明細書中に組み込まれる）に記載されるように調製した。胚発生１５日目（Ｅ１５）のラット胎児を集め、氷冷したリン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）において解剖した。中脳のドーパミン作動性領域を含む腹側組織片をばらばらにした。ばらばらにした組織片を一緒にまとめ、２０ＩＵ／ｍＬのパパインをアール平衡塩溶液（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、ＮＪ、ＵＳＡ）に含有する酵素的解離媒体に移し、３７℃で６０分間インキュベーションした。酵素的解離の後、パパイン溶液を吸引し、組織を、２，０００ＩＵ／ｍＬのＤＮａｓｅ及び１０ｍｇ／ｍＬのオボムコイドプロテアーゼ阻害剤を含有する完全培地（０．１ｍｇ／ｍＬのアポトランスフェリン及び２．５μｇ／ｍＬのインスリンが補充された等体積の最少必須培地（ＭＥＭ）及びＦ−１２栄養混合物（ＧｉｂｃｏＢＲＬ））において、炎で丸めたガラス製パスツールピペットにより機械的に粉砕した。
【０１２７】
ドーパミン取り込み実験のために、完全培地における単一細胞懸濁物を、ポリ−Ｌ−オルニチン及びラミニンが被覆された２４ウェルプレートに播種した。培養物を実験前の７日間維持した。培養物を様々な濃度の化合物で２４時間にわたって前処理し、その後、１０ｍＭのＭＰＰ＋に１時間さらした。１時間のインキュベーションの後、培地を３回交換し、新鮮な化合物をさらに４８時間にわたって加えた。
【０１２８】
中脳のドーパミン作動性ニューロンの培養物をＭＰＰ＋暴露後４８時間成長させた後、高親和性の３Ｈ−ドーパミン取り込みを、Ｐｒｏｃｈｉａｎｔｚら（Nature、293:570-572、1981；これは参照により本明細書中に組み込まれる）によって記載される改変された方法を使用して行った。培養物を、５．６ｍＭのグルコース及び１ｍＭのアスコルビン酸を含有する予め加温したＰＢＳにより洗浄した。その後、培養物を、５０ｎＭの３Ｈ−ドーパミン（３１Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＤｕＰｏｎｔ−ＮＥＮ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ、ＵＳＡ）と３７℃で１５分間インキュベーションした。培養物を緩衝液で２回洗浄し、０．５ＮのＮａＯＨにより溶解した。溶解物を、Ｕｌｔｉｍａ  Ｇｏｌｄシンチレーションカクテルを含有するシンチレーションバイアルに移し、放射能を液体シンチレーションカウンターにより求めた。あるいは、培養物の溶解物を緩衝液で２回洗浄し、Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘシンチレーションカクテル（Ｗａｌｌａｃ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）と室温で２時間インキュベーションし、放射能を液体シンチレーションカウンターにより測定した。
【０１２９】
ばらばらにした皮質ニューロンの培養物を以前に記載されたように調製した（Pongら、2001）。簡単に記載すると、胚発生１５日目のラット胎児を集め、氷冷ＰＢＳ中で解剖した。ばらばらにした皮質を一緒にまとめ、パパインを含有する酵素的解離培地に移した。３０分後、組織を、炎で丸めたガラス製パスツールピペットにより機械的に粉砕した。完全培地における単一細胞懸濁物を、ポリ−Ｌ−オルニチン及びラミニンが被覆された９６ウェルプレートに播種した。２４時間後、培養物を様々な濃度の化合物により７２時間にわたって処理した。その後、培養物を固定処理し、抗チューブリン一次抗体（ＴＵＪ−１）及び蛍光標識された二次抗体により染色した。神経突起の伸長を、Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｎｅｕｒｉｔｅ  Ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ（ＥＮＯ）アルゴリズムをＣｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＡｒｒａｙＳｃａｎとともに使用することによって求め、細胞あたりの平均神経突起長さ又は総神経突起長さとして表した。
【０１３０】
脊髄ニューロン培養物を胚発生１５日目（Ｅ１５）のラット胚（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から調製した。胚を集め、その脊髄を、Ｃａ2+及びＭｇ2+を含まない氷冷したリン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）において取り出した。ばらばらにした脊髄組織片を一緒にまとめ、２０ＩＵ／ｍＬのパパインをアール平衡塩溶液（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｆｒｅｅｈｏｌｄ、ＮＪ、ＵＳＡ）に含有する酵素的解離培地に移し、３７℃で３０分間インキュベーションした。酵素的解離の後、パパイン溶液を吸引し、組織を、２，０００ＩＵ／ｍＬのＤＮａｓｅ及び１０ｍｇ／ｍＬのオボムコイドプロテアーゼ阻害剤を含有する完全培地［Ｂ−２７補充物（Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、３．３μｇ／ｍＬのアフィディコリン、０．５ｍＭのグルタミン酸塩を伴うＮｅｕｒｏｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ］において、炎で丸めたパスツールピペットにより機械的に粉砕した。完全培地における単一細胞懸濁物を、事前に被覆されたポリ−Ｌ−オルニチン／ラミニン９６ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）に１．０×１０4細胞／ウェルの密度で置床した。脊髄ニューロンを２４時間維持し、その後、ビヒクル又は様々な濃度の化合物に７２時間さらした。
【０１３１】
実施例１〜３の化合物は、すべてが皮質ニューロンアッセイにおいて活性であり、ＥＣ50が１μＭ未満であった。実施例１及び実施例６の化合物は、すべてがドーパミン作動性取り込みアッセイにおいて活性であり、ＥＣ50が１μＭ未満であった。実施例１〜３及び実施例６の化合物は、すべてが脊髄ニューロンアッセイにおいて活性であり、ＥＣ50が１μＭ未満であった。
【０１３２】
比較において、ＣＣＩ−７７９及びラパマイシンは皮質ニューロンアッセイ及びドーパミン作動性取り込みアッセイにおいて不活性であると見なされ、ＥＣ50値が１μＭよりも大きかった。ラパマイシンフェニルトリアゾリンジオンはドーパミン作動性取り込みアッセイにおいて活性であり、ＥＣ50値が１μＭ未満であった。
【実施例９】
【０１３３】
中大脳動脈の永続的閉塞（ｐＭＣＡＯ）
成体オスＷｉｓｔｅｒラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）（２７０〜３００ｇ）を７０％亜酸化窒素及び３０％酸素における３％イソフルランによりノーズコーンによって麻酔した。温度を、加熱ランプを使用して手術期間中を通して３７℃で維持した。ＭＣＡＯの永続的閉塞を、側副循環を中断するための両方の頸動脈の９０分間の結紮とともに（開頭術による）ＭＣＡの遠位部分の電気焼灼によって誘導した（Chen ST、Hsu CY、Hogan EL、Maricq H、Balentine JD (1986) A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction、Stroke、17:738-743）。化合物を、虚血後の１．５時間、５．５時間、２４時間、４８時間及び７２時間で、１０ｍｇ／ｋｇのi.v.で投与した。ラットを長期間の機能回復評価のために２１日間飼育した。３つの行動試験（Bedersonら（Bederson JB、Pitts LH、Tsuji M、Nishimura MC、Davis RL、Bartkowski H (1986)、Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination、Stroke、17(3):472-476）及びDeRyckら（DeRyck M、van Reempts J、Duytschaever H、van Deuren B、Clincke G (1992)、Neocortical localization of tactile/proprioceptive limb placing reactions in the rat、Brain Res、573:44-60）によって報告された、より初期の試験から改変された試験）を使用して、感覚運動機能及び反射機能を評価した。簡単に記載すると、姿勢試験のために、ラットを実験台から約３０ｃｍ上方に尾から吊した。実験台に向かって両方の前肢を伸ばすラットを０としてスコア化し、身体に向かって反対側の肢を曲げる場合、及び／又は、反対側の肩及び肢を内側に回転させる場合には１としてスコア化し、身体を反対側に丸め、尾をつかもうと試みる場合には２としてスコア化した。前肢置き試験は、視覚性置き試験及び触覚性置き試験の２つの部分試験から構成される。視覚性置き試験のために、ラットを、前肢を自由に垂れさせながら保持し、前方又は側面のいずれかから実験台の上面に近づけた。触覚性置き試験のために、ラットを、実験台の上を見ることができないように保持した。前足の背側表面及び側方表面が実験台の上面に軽く触れた。それぞれの試験について、スコア化を行った。置き応答が即時かつ正常であったならば、０である；置きが（２秒を超えて）遅れたか、又は時々であったならば、１である；応答が全くなかったならば、２である。後肢置き試験のために、ラットを実験台の端で保持し、反対側の後肢を引っ張って端から離し、解放した。後肢を実験台に直ちに戻すラットを０としてスコア化し、（２秒を超えて）遅れた場合には１としてスコア化し、後肢を引っ込めることができない場合には２としてスコア化した。総スコアは０〜１２の範囲であった。実施例２で調製された化合物は、ｐＭＣＡＯ後のＩ．Ｖ．投与（１０ｍｇ／ｋｇ）の後でのラットにおける行動欠落スコア化の統計学的に著しい減少を示した。
【実施例１０】
【０１３４】
Ｔ細胞アッセイ
下記のアッセイでは、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐを製造者の説明書（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ）に従って使用して末梢血リンパ球からの負の選択によって精製した。
【０１３５】
Ａ．抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激及びＩＬ−２再刺激アッセイ
トシル活性化磁石マイクロスフェア（Ｄｙｎａｌ、Ｇｒｅａｔ  Ｎｅｃｋ、ＮＹ）を、Blairら、J. Immunol.、160:12、1998に記載されるように、抗ＣＤ３Ａｂ（１μｇ／１０7個マイクロスフェア）及び抗ＣＤ２８Ａｂ（０．５μｇ／１０7個マイクロスフェア）により被覆した。マウスＩｇＧを使用して、マイクロスフェアの結合能を飽和させた（総タンパク質＝５μｇ／１０7個マイクロスフェア）。タンパク質被覆マイクロスフェアを、精製されたＣＤ４＋Ｔ細胞（２×１０6細胞／ｍＬ、比率、１ビーズ：１細胞）に加え、ＲＰＭＩ／１０％ウシ胎児血清／２ｍＭグルタミン培地において７２時間活性化した。細胞を集め、洗浄し、新鮮な培地で一晩培養し、Bennettら、J. Immunol.、170:711、2003に記載されるようにＩＬ−２により再刺激した。簡単に記載すると、一晩の休止細胞を再計数し、平底９６ウェルマイクロタイタープレートに置床し（１０5細胞／ウェル）、増大する濃度の化合物の存在下で１ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）により刺激した。培養物の再刺激後７２時間で、プレートを１μＣｉ／ウェルのトリチウム化チミジンでパルス処理し、６〜１６時間の期間にわたってインキュベーションした。
【０１３６】
実施例１及び実施例３の化合物はＩＬ−２産生を阻害し、ＩＣ50は約１μＭ未満であり、好ましくは約２００ｎＭ未満であった。実施例１及び実施例３の化合物のＩＬ−２産生は、ラパマイシン及びＣＣＩ−７７９のＩＬ−２産生と同等であった。
【０１３７】
Ｂ．ホルボール１２−ミリスタート１３−アセタート（ＰＭＡ）／イオノマイシン活性化アッセイ
化合物の増殖を、このアッセイを使用して求めた。ＣＤ４＋Ｔ細胞（５×１０5細胞／ウェル）をＲＰＭＩ／１０％ウシ胎児血清／２ｍＭグルタミン培地において平底９６ウェルマイクロタイタープレートに置床し、増大する濃度の化合物の存在下でＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍＬ）及びイオノマイシン（２００ｎｇ／ｍＬ）により刺激した。活性化後７２時間で、１００μＬの培養培地をＩＬ−２測定のために集め、さらなる１００μＬの新鮮な培地を各ウェルに加え、培養物をトリチウム化チミジン（１μＣｉ／ウェル）により６時間標識した。培養物を集め、トリチウム化チミジンの取り込み（カウント／分、ＣＰＭ）を、Ｔｒｉｌｕｘ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｓｈｅｌｔｏｎ、ＣＴ）を使用して評価した。ＩＬ−２の産生を、ＥＬＩＳＡを製造者の説明書（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）に従って使用して求めた。
【０１３８】
このアッセイにおいて、実施例１及び実施例３の化合物は増殖を阻害し、ＥＣ50は４．９〜０．２μＭの範囲であった。
【実施例１１】
【０１３９】
ＰＴＥＮ腫瘍サプレッサー遺伝子（第１０染色体で欠失した、ホスファート及びテンシンのホモログ）は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴのシグナル伝達経路の負の調節において非常に重要な役割を果たす脂質ホスファターゼをコードする。ＰＴＥＮ遺伝子の変異又は欠失が、脳、前立腺、子宮内膜、甲状腺、乳房の腫瘍及びリンパ系腫瘍において見出されている。Cantleyら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、96:4240-4245、1999；Aliら、J. Natl. Cancer Inst.、91:1922-32、1999；Scottら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、95:7772-7777、1998；及びNaveら、Biochem. J.、344:427-431、1999を参照のこと。
【０１４０】
このアッセイでは、細胞に基づく増殖アッセイが、乳腫瘍細胞株ＭＤＡ４６８（ＰＴＥＮ変異型）ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＨＴＢ−１３２又は前立腺腫瘍細胞株ＬＮＣａｐ（ＰＴＥＮ変異型）ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１７４０を含む細胞の成長を阻害することにおいて本発明の化合物を評価するために行われた。
（ｉ）１日目、細胞を９６ウェル培養プレートに置床した。
（ｉｉ）２日目、化合物を細胞に所定の濃度で加えた。
（ｉｉｉ）５日目、細胞増殖を、SA O'Tooleら、Cancer Detection and Prevention、27(1)、2003に記載されるような標準的なＭＴＳアッセイプロトコルによって測定した。結果を、９６ウェル形式のプレートリーダーを使用してＡ４９０吸光度によって記録した。
（ｉｖ）その後、化合物処理ウェルからのＭＴＳ結果（Ａ４９０ユニット）を同じ培養プレートにおけるコントロール（非処理）ウェルに対する％コントロール成長として計算した。
【０１４１】
このデータは、実施例１の化合物がＭＤＡ４６８細胞株及びＬＮＣａｐ細胞株の両方について０．０１μＭ未満のＩＣ50値を有したことを例示する。
【実施例１２】
【０１４２】
リアノジン受容体カルシウム流の調節
様々な化合物が、下記のアッセイで試験されたとき、リアノジン受容体に対するＦＫＢＰ１２．６の結合を安定化することによりリアノジン受容体カルシウム流を調節することが予想される。
【０１４３】
Ａ．カルシウム取り込みアッセイ
カルシウム（Ｃａ2+）の取り込みを、(1)T. Yamamotoら、Cardiovascular Research、44:146-155 (1999)、又は、(2)M. Yanoら、Circulation、102:2131-2136 (2000)に記載される手法によって測定する。
【０１４４】
これらのアッセイで使用される筋小胞体（ＳＲ）小胞をKraniasら（Biochem. Biophys. Acta., 709:28-37 (1982)）の方法に従って調製する。心不全が誘発されたイヌから得られた左心室を、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ−マレイン酸、０．３Ｍスクロース、５ｍｇ／Ｌロイペプチン及び０．１ｍＭ ＰＭＳＦをｐＨ７．０で含有する溶液（Solution Ｉ）においてホモジネートする。ホモジネートを５５００ｇで１０分間遠心分離し、得られる上清を４層のチーズクロスでろ過し、その後、１２，０００ｇで２０分間遠心分離する。上清をチーズクロスで再びろ過し、１４３，０００ｇで３０分間遠心分離する。ペレットを、０．６Ｍ ＫＣｌ、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ−マレイン酸、０．３Ｍスクロース、５ｍｇ／Ｌロイペプチン及び０．１ｍＭ ＰＭＳＦをｐＨ７．０で含有する溶液（Solution ＩＩ）に再懸濁する。懸濁物を上記のように１４３，０００ｇで遠心分離する。ペレットをSolution Ｉに懸濁し、１４３，０００ｇで遠心分離する。ＳＲ小胞を含有するペレット化されたミクロソーム画分を、０．１Ｍ ＫＣｌ、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−マレイン酸、０．３Ｍスクロース、５ｍｇ／Ｌロイペプチン、０．１ｍＭ ＰＭＳＦをｐＨ７．０で含有する溶液に懸濁して、１０〜２０ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度にする。
【０１４５】
（１）上記のように調製されたＳＲ小胞（０．２ｍｇ／ｍＬ）を、０．１５Ｍ ＫＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ2、３０μＭ 45ＣａＣｌ2（１ｍＣｉ／ｍＬ）、１０ｍＭ ＮａＮ3及び２０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ７．１、２２℃）を含有する２ｍＬの溶液においてインキュベーションする。Ｃａ2+の取り込みを１ｍＭ ＡＴＰの添加によって開始させ、２ｍＬのアリコートを０．４５μｍのＭｉｌｌｉｐｏｒｅフィルターに置き、フィルターを５ｍＬの洗浄緩衝液（３０ｍＭ ＥＧＴＡ及び０．１５μＭルテニウムレッドを含有する０．１５Ｍ ＫＣｌ、２０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．１（２２℃））によりリンスすることによって様々な時間間隔で測定する。
【０１４６】
フィルターに保持される放射能を、液体シンチレーション計数によって求める。
【０１４７】
（２）上記のように調製されたＳＲ小胞（０．２ｍｇ／ｍＬ）を、０．１５ｍｏｌ／Ｌグルコン酸カリウム、１ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ2、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＧＴＡ−カルシウム緩衝液（遊離［Ｃａ2+］、０．３μＭ）、１０ｍＭ ＮａＮ3及び２０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ６．８）を含有する０．５ｍＬの溶液においてインキュベーションする。Ｃａ2+の取り込みを、０．５ｍＭ ＡＴＰをキュベットに加えることによって開始させる。Ｃａ2+の取り込みを、Ｃａ2+指示薬としてのｆｌｕｏ３（４８０ｎｍでの励起、５３０ｎｍでの発光）を用いて分光光学的に経時的にモニターする。
【０１４８】
Ｂ．カルシウム漏出アッセイ
カルシウム（Ｃａ2+）の取り込みを、M. Yanoら、Circulation、102:2131-2136 (2000)に記載される手法によって測定する。
【０１４９】
上記の「Ａ．カルシウム取り込みアッセイ、（２）」に記載される手法に従ったＳＲ小胞でのＣａ2+取り込みにおけるプラトー状態の後、様々な濃度のＦＫ５０６を、ＳＲのＣａ2+−ＡＴＰ活性を阻害するために１μＭのタプシガルギンの存在下で加え、生じるＣａ2+漏出をモニターする。
【０１５０】
Ｃ．同時局在化アッセイ
ＦＫＢＰ１２（又はＦＫＢＰ１２．６）に対する心臓のリアノジン受容体（ＲｙＲ）の同時局在化を、C. Georgeら、Circulation Research、93:531-540 (2003)に記載される手法によって明らかにする。
【０１５１】
ヒト心臓リアノジン２受容体（ｈＲｙＲ２）を発現するＨＬ−１心筋細胞をゼラチン（０．０２％［ｗｔ／ｖｏｌ］）／フィブロネクチン（１０μｇ．ｍＬ）マトリックスにおいて培養し、ウシ胎児血清（１０％［ｗｔ／ｖｏｌ］）、グルタミン（２ｍＭ）、ノルエピネフリン（０．１ｍＭ）、ペニシリン（１００ｕ／ｍＬ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）が補充されたＣｌａｙｃｏｍｂ培地（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）において維持する。ＦＫＢＰ１２．６：ｈＲｙＲ２の相互作用を、免疫沈殿及び免疫ブロットを行うためにｐＡｂ１２９（抗ＲｙＲ２）及び抗ＦＫＢＰをそれぞれ使用する同時免疫沈殿アッセイを使用して明らかにする。
【０１５２】
ＲｙＲ２を、ｐＡｂ１２９抗体及びＡｌｅｘａ488コンジュゲート化二次抗体を使用して免疫局在化し、ＦＫＢＰを、Ｎ−１９抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及びＡｌｅｘａ546二次抗体を使用して同時染色する。
【０１５３】
Ｄ．ウエスタンブロット
ＦＫＢＰ１２（又はＦＫＢＰ１２．６）に対する心臓リアノジン受容体（ＲｙＲ）の発現及び会合を、C. Georgeら、Circulation Research、93:531-540 (2003)に記載される手法によって明らかにする。
【０１５４】
上記において「Ｃ．同時局在化アッセイ」に記載されるように培養されたＨＬ−１心筋細胞から得られるミクロソーム画分のウエスタンブロットを、従来の技術を使用して行うことができる。ＨＬ−１細胞からのミクロソーム画分（１００μｇ）を、抗ＲｙＲ２（ｐＡｂ１２９）を使用して免疫沈殿し、その後、抗ＦＫＢＰ免疫ブロッティングを行う。
【０１５５】
Ｅ．ＳＲのＣａ2+漏出の電気生理学的測定
筋小胞体（ＳＲ）のＣａ2+漏出を、T. Shannonら、Circ. Res.、93:592-594 (2003)に記載される手法により、明らかにする。
【０１５６】
心室の筋細胞を、心不全が複合型の大動脈弁閉鎖不全症及び狭窄症によって誘導されるＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅウサギ（Ｍｙｒｔｌｅ’ｓ  Ｒａｂｂｉｔｒｙ，Ｉｎｃ．，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｓｔａｔｉｏｎ、Ｔｅｎｎ．，ＵＳＡ）から単離する。拡張期のＳＲのＣａ2+を、負荷を変化させるための様々な頻度での定常状態への細胞刺激の期間中に測定する。拡張期のリアノジン受容体（ＲｙＲ）のＣａ2+漏出のレベルを、テトラカイン（ＲｙＲ遮断剤）を含むときの増大した総筋小胞体Ｃａ2+負荷（［Ｃａ2+］SRT）によって評価することができる。
【実施例１３】
【０１５７】
心臓血管作用
心臓血管疾患又は末梢血管疾患を治療又は阻害する本発明の化合物の能力が、ＡｐｏＥノックアウト（ＥＫＯ）マウス（これは、ヒトのアテローム性動脈硬化の広く受け入れられている動物モデルである）を使用する標準的な薬理学的試験手法で確認される。使用される手順を簡単に下記にまとめる。
【０１５８】
オスのＥＫＯマウス（４〜６週齢）を靴箱ケージに収容し、自由に食物及び水を取らせる。動物を体重によって５つの群（Ｎ＝１２〜１５匹／群）に無作為に分け、Ｐｕｒｉｎａ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｃｈｏｗを研究の最初の１週間与える。また、この期間中、ならびに、研究の残る１２週間の期間中において、動物には、２日毎に、０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ又は８ｍｇ／ｋｇのラパマイシンアナログが、２％のＴｗｅｅｎ−８０、１％のカルボキシメチルセルロースをビヒクル及びコントロールとして使用して皮下（s.c.）により与えられる。動物の餌を、研究の第２週〜第１３週の間、カゼインに基づくＷｅｓｔｅｒｎ  Ｄｉｅｔに切り換える。研究期間が終了したとき、動物を安楽死させ、血漿サンプルを得て、心臓を最初に生理的食塩水により灌流し、次いで１０％ホルマリンにより灌流する。総コレステロール及びトリグリセリドを、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ及びＷａｋｏ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓからそれぞれ得られる市販キット、並びに、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  Ｈｉｔａｃｈｉｉ  ９１１  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）を用いて酵素法を使用して求める。血漿リポタンパク質の分離及び定量化を、ＦＰＬＣサイズ分画化を使用して行う。簡単に記載すると、５０〜１００ｍｌの血清をろ過し、連続して連結した２本のＳｕｐｅｒｏｓｅ  ６カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＵＫ，Ｌｔｄ）に注入し、１ｍＭのナトリウムＥＤＴＡ及び０．１５ＭのＮａＣｌにより一定の流速で溶出する。ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬを表すそれぞれの曲線の面積を、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して積分し、それぞれのリポタンパク質画分を、総コレステロール値にそれぞれの各ピークの相対的面積比を乗ずることによって定量化した。大動脈を慎重に単離し、ホルマリン固定液に４８〜７２時間入れたままにし、その後、処理する。アテローム硬化性病変部が、Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ染色（中性脂質（例えば、コレステロール及びトリグリセリドなど）の蓄積を特定するための広く受け入れられている手法）によって特定される。血管を脱染色し、Ｓｏｎｙ  ３ＣＣＤビデオカメラシステムを備えたＮｉｋｏｎ  ＳＭＵ８００顕微鏡を画像取り込みソフトウエアとしてのＩＭＡＱ  Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  Ｕｔｉｌｉｔｙ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）と協調して使用して画像化する。病変部を、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｃｏｌｌ（Ｃｏｌｅｍａｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって設計された特注の閾値ユーティリティーソフトウエアパッケージを使用して大動脈弓に沿って定量化する。自動化された病変部評価を、プログラムの閾値関数を使用して、血管に対して、具体的には、右総頸動脈の近位端から左鎖骨下動脈の遠位端までの大動脈弓に含有される領域に対して行う。大動脈のアテローム性動脈硬化データを、この定義された内腔領域に厳密に含まれるパーセント病変部（脂質）関与として��す。コントロール群と治療群との間での統計学的有意性を、ダネットの検定を１％の有意性レベル（ｐ＜０．０１）で使用して求める。
【０１５９】
結果は、本発明の化合物による治療が、コントロールのＥＫＯマウスと比較したとき、循環している血漿中のＨＤＬ−コレステロール及びＬＤＬ−コレステロールのレベルを著しく（ｐ＜０．０１）増大させ、その一方で、トリグリセリド、総コレステロール又はＶＬＤＬ−コレステロールのレベルには著しく影響を及ぼさないことを示すことが予想される。結果は、治療したマウスにおいてアテローム性動脈硬化（脂質沈着）のレベルでの顕著かつ劇的な減少を示すこともまた予想される。
【０１６０】
結果はまた、本発明の化合物が、血管壁における脂肪蓄積、及び、古典的に記載されるアテローム硬化性疾患の発症から保護することを示すことが期待される。
【０１６１】
本明細書に列挙されるすべての特許公報、公開公報及び他の刊行物は、参照により本明細書中に組み込まれる。本発明が、特に好ましい実施形態を参照して記載されているが、様々な改変が、本発明の思想から逸脱することなく行われ得ることが理解される。そのような改変は、添付された請求項の範囲に含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１６２】
【図１】実施例１の化合物についての核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを提供する。このＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚの分光計を使用してｄ3−アセトニトリル中で得られた。
【図２】実施例２の化合物についてのＮＭＲスペクトルを提供する。このＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚの分光計を使用してｄ3−アセトニトリル中で得られた。
【図３】実施例３の化合物についてのＮＭＲスペクトルを提供する。このＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚの分光計を使用してｄ3−アセトニトリル中で得られた。
【図４】実施例４の化合物についてのＮＭＲスペクトルを提供する。このＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚの分光計を使用してｄ3−アセトニトリル中で得られた。
【図５】実施例５の化合物についてのＮＭＲスペクトルを提供する。このＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚの分光計を使用してｄ3−アセトニトリル中で得られた。
【図６】実施例６の化合物についてのＮＭＲスペクトルを提供する。このＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚの分光計を使用してｄ3−アセトニトリル中で得られた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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