(57)【要約】  望ましくない免疫応答を治療または予防するための方法であって、シクロスポリン等の免疫抑制薬と、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾン等のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとを同時に投与する工程を含む方法。望ましくない免疫応答として、例えば、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデスまたは移植拒絶反応があげられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
望ましくない免疫応答を治療または予防するための方法であって、免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの同時投与を含む、方法。
【請求項２】
（ａ）免疫抑制薬とＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとの同時投与を含む、最初の治療期と；
（ｂ）（ａ）期の免疫抑制薬なしで、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの投与を含む、その後の治療期と
を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
（ａ）免疫抑制薬とＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとの同時投与を含む、最初の治療期と；
（ｂ）免疫抑制薬なしで、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの投与を含む、その後の治療期と
を含む、請求項１または請求項２記載の方法。
【請求項４】
免疫抑制薬がＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの不存在下にて治療量以下であるレベルにて利用されることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがファルグリタザルであることを特徴とする、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがチアゾリジンジオンであることを特徴とする、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
チアゾリジンジオンがピオグリタゾンまたはロシグリタゾンであることを特徴とする、請求項６記載の方法。
【請求項８】
チアゾリジンジオンがロシグリタゾンであることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項９】
免疫抑制薬がシクロスポリンでないことを特徴とする、請求項１ないし８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
免疫抑制薬がシクロスポリンＡでないことを特徴とする、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
免疫抑制薬がマクロライドであることを特徴とする、請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
免疫抑制薬がピメクロリムス、タクロリムスまたはシロリムスから選択されることを特徴とする、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
免疫抑制薬がタクロリムスであることを特徴とする、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
免疫抑制薬がシクロスポリンＡであることを特徴とする、請求項１ないし８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
免疫抑制薬が生物学的免疫抑制薬であることを特徴とする、請求項１ないし８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
免疫応答が慢性炎症を含むことを特徴とする、請求項１ないし１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
免疫応答が組織修復を含むことを特徴とする、請求項１ないし１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
免疫応答が細胞浸潤を含むことを特徴とする、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
免疫応答が血管閉塞を含むことを特徴とする、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
免疫応答が線維症を含むことを特徴とする、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
望ましくない免疫応答が移植片拒絶反応であることを特徴とする、請求項１ないし２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
移植が固形臓器移植であることを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
固形臓器移植が腎臓、肝臓、心臓、肺、小腸および肢の移植からなる群より選択されることを特徴とする、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
移植が骨髄移植であることを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
移植後に最初の治療期（ａ）を開始することを特徴とする、請求項２１ないし２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
最初の治療期（ａ）に先立ち、免疫抑制薬なしでＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを投与することを含む前治療期を行うことを特徴とする、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
望ましくない免疫応答が自己免疫障害であることを特徴とする、請求項１ないし２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
自己免疫障害が、関節リウマチ、乾癬および全身性エリテマトーデスからなる群より選択されることを特徴とする、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
自己免疫障害が乾癬であることを特徴とする、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
自己免疫障害が関節リウマチであることを特徴とする、請求項２８記載の方法。
【請求項３１】
自己免疫障害が全身性エリテマトーデスであることを特徴とする、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
望ましくない免疫応答が自己免疫性の要素を有する障害であることを特徴とする、請求項２７記載の方法。
【請求項３３】
自己免疫性の要素を有する障害が、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、橋本甲状腺炎、悪性貧血、アジソン病、Ｉ型糖尿病、全身性皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群およびグレーブス病からなる群より選択されることを特徴とする、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
自己免疫性の要素を有する障害が炎症性腸疾患であることを特徴とする、請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
自己免疫性の要素を有する障害が多発性硬化症であることを特徴とする、請求項３２記載の方法。
【請求項３６】
望ましくない免疫応答が炎症性の要素を有する障害であり、自己免疫関連性であってもなくてもよいことを特徴とする、請求項２７記載の方法。
【請求項３７】
炎症性の要素を有し、自己免疫関連性であってもなくてもよい障害がアテローム性動脈硬化症であることを特徴とする、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを含む、医薬組成物。
【請求項３９】
付加的に、医薬上許容される希釈剤または担体を含む、請求項３８記載の医薬組成物。
【請求項４０】
（ａ）免疫抑制薬を含む医薬組成物と、
（ｂ）ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを含む医薬組成物とを、
望ましくない免疫応答の治療または予防に使用するための説明書と共に含む部材のキット。
【請求項４１】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの、免疫抑制薬との併用において望ましくない免疫応答の治療または予防のための医薬の製造における使用。
【請求項４２】
免疫抑制薬の、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとの併用において望ましくない免疫応答の治療または予防のための医薬の製造における使用。
【請求項４３】
免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの、望ましくない免疫応答の治療または予防のための医薬の製造における使用。
【請求項４４】
免疫抑制薬との併用において望ましくない免疫応答を治療または予防するのに用いるためのＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト。
【請求項４５】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとの併用において望ましくない免疫応答を治療または予防するのに用いるための免疫抑制薬。
【請求項４６】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがファルグリタザルであることを特徴とする、請求項３８ないし４５のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項４７】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがチアゾリジンジオンであることを特徴とする、請求項３８ないし４５のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項４８】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがピオグリタゾンまたはロシグリタゾンであることを特徴とする、請求項４７記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項４９】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがロシグリタゾンであることを特徴とする、請求項４８記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５０】
免疫抑制薬がシクロスポリンでないことを特徴とする、請求項３８ないし４９のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５１】
免疫抑制薬がシクロスポリンＡでないことを特徴とする、請求項５０記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５２】
免疫抑制薬がマクロライドであることを特徴とする、請求項３８ないし４９のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５３】
免疫抑制薬がピメクロリムス、タクロリムスまたはシロリムスから選択されることを特徴とする、請求項５２記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５４】
免疫抑制薬がタクロリムスであることを特徴とする、請求項５３記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５５】
免疫抑制薬がシクロスポリンＡであることを特徴とする、請求項３８ないし４９のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５６】
免疫抑制薬が生物学的免疫抑制薬であることを特徴とする、請求項３８ないし４９のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５７】
望ましくない免疫応答が移植片拒絶反応であることを特徴とする、請求項３８ないし５６のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５８】
望ましくない免疫応答が自己免疫障害であることを特徴とする、請求項３８ないし５６のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項５９】
望ましくない免疫応答が自己免疫性の要素を有する障害であることを特徴とする、請求項３８ないし５６のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【請求項６０】
望ましくない免疫応答が炎症性の要素を有する障害であって、自己免疫と関連していてもいなくてもよいことを特徴とする、請求項３８ないし５６のいずれか一項に記載の組成物、キット、使用、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストまたは免疫抑制薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自己免疫障害または移植拒絶反応等、望ましくない免疫応答を治療するための併用療法、および望ましくない免疫応答の治療に使用するための組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫障害は、正常な体組織に対して免疫系が有害な応答を示す場合に発生する。自己免疫障害は、体組織の損傷、異常な臓器の増殖および／または臓器の機能の変化に至る場合がある。本障害は、臓器または組織型の１種のみを冒すこともあれば、複数の臓器または組織を冒すこともある。自己免疫障害によって通常冒される臓器および組織として、赤血球等の血液構成成分、血管、結合組織、甲状腺または膵臓等の内分泌腺、筋肉、関節および皮膚があげられる。
【０００３】
自己免疫障害の例として、関節リウマチ、乾癬およびエリテマトーデスが挙げられる。自己免疫性の要素を有するとみなされる障害の例として、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病）、橋本甲状腺炎、悪性貧血、アジソン病、Ｉ型糖尿病、全身性皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群およびグレーブス病が挙げられる。また、潜在的な機構がまだ確認されていない障害も存在するが、これには炎症性の要素が関係し、この障害は自己免疫性であることもあれば、そうではないこともある。そのような自己免疫性の可能性がある障害の例として、アテローム性動脈硬化症があげられる。
【０００４】
関節リウマチ（ＲＡ）は、慢性疾患であり、主な特徴は、関節の内層の炎症である。これは、長期に及ぶ関節の損傷を起こし、その結果、慢性の疼痛、機能の喪失および身体障害に至る恐れがある。本疾患は、３つの明確な相を経て進行する。第１段階では、滑膜内層の腫脹により、関節の周囲に疼痛、硬直、発赤および腫脹が生じる。次いで、第２段階では、急速な細胞の分裂および増殖によって、滑膜が肥厚する。次いで、第３段階では、細胞の炎症から、骨および軟骨に分解が起こり、さらに、関節が形およびアライメントを失いはじめる。過剰量の炎症誘発性のサイトカイン、例えば、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ６およびＩＬ１−ベータが、ＲＡの病理学的な特徴の多くを仲介する。疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）および非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が、ＲＡ患者の治療の頼みの綱となっている。現在、関節リウマチの治療は、ＤＭＡＲＤのより早期の投与に向けて展開している。というのは、関節の破壊が非常に早期の過程ではじまるので、疾患が発症してすぐに治療を開始すると、ＤＭＡＲＤは、最も効果的であることができるからである。最近の推定が示すところによれば、ＲＡの治療を受けている患者の５０〜７０％が、治療のどこかの段階でＤＭＡＲＤを投与されており、低用量のメトトレキサートが、その有利な利点／危険プロフィールから最も広範に使用されているＤＭＡＲＤである。その他のＤＭＡＲＤとして、ヒドロキシクロロキン、クロロキン、金（例えば、金チオリンゴ酸ナトリウムとして）、スルファサラジン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ブロモクリプチン、テトラサイクリン（および関連化合物）、シクロホスファミド、Ｄ−ペニシラミン、ブシラミン、レフノミドおよび副腎皮質ステロイドがあげられる。しかし、ＤＭＡＲＤでは、未治療の患者と比較して、侵食の進行は遅くなっているものの、進行は止まらない。ＴＮＦ−アルファに対して作られた抗体（例えば、インフリキシマブ、エタネルセプトおよびアダリムマブ）およびＩＬ６に対して作られた抗体等、より最近の治療法は、顕著な抗炎症効果および高い率の患者の応答に至っている。シクロスポリンＡ等の強力な免疫抑制薬は、顕著な有害作用のため、ＲＡの治療には滅多に使用されないが、そのような薬物は、より極端な症例には適用する場合がある。ＲＡの治療法のさらなる情報は、例えば、Ｅ．Ｍｅｉｅｒら、Ｅｌｉａ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２００４）２：７−９を参照されたい。
【０００５】
乾癬は、衰弱性の自己免疫皮膚疾患であり、これは、世界の全人口の約１〜３％および米国の人口の２．６％を冒す（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，２００２）。プラーク乾癬は、本疾患の最も多い形態であり、銀白の鱗屑が覆う赤色の皮膚によって特徴付けられる。組織学的には、炎症性細胞の浸潤を伴う乾癬プラーク内にケラチノサイトの無秩序の分化および過剰増殖を認める像の１つである（Ｊ．Ｐ．Ｏｒｔｏｎｎｅ，Ｂｒｉｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（１９９９）１４０（ｓｕｐｐｌ  ５４）１−７）。乾癬の皮膚病変は、様々な形の炎症性で赤色の明確に境界を示すプラークであり、特徴的な光沢のある銀白の鱗屑を有する。紅斑、皮膚の肥厚化および鱗屑が、体表面の５０％に及ぶ領域を覆う場合もあれば、時にはそれ以上の領域を覆う場合もある。これは、不快であり、容貌を損ない、現在入手可能な薬物では満足には治療されない。
【０００６】
乾癬の局所治療法（クリームおよび軟膏の処方）として、ビタミンＤ３類似体（例えば、カルシポトリオールおよびマキサカルシトール）、ステロイド（例えば、プロピオン酸フルチカゾン、吉草酸ベタメタゾンおよびプロピオン酸クロベタゾール）、レチノイド（例えば、タザロテン）、コールタールおよびジトラノールがあげられる。局所薬物はしばしば、相互に併用したり（例えば、ビタミンＤ３とステロイド）、サリチル酸等の別の薬剤と共に使用されたりする。
【０００７】
乾癬の経口治療法として、免疫抑制治療法（メトトレキサート、ミコフェノール酸およびシクロスポリンＡ等）またはレチノイド（アシトレチンおよびタザロテン等）があげられる。ピメクロリムスの経口での使用は、現在調査中である。
【０００８】
乾癬の治療における有用な生物学的薬剤として、抗ＴＮＦ療法（例として、ＴＮＦに対するモノクローナル抗体、例えば、アダリムマブおよびインフリキシマブ、またはエタネルセプト等のＴＮＦ受容体融合タンパク質）、ＣＤ１１ａに対するヒト化抗体（エファリズマブ）、またはアレファセプト等のＣＤ２に結合する（それによって、ＣＤ２  ＬＦＡ３相互作用を遮断する）薬剤があげられる。ここに列挙した生物学的薬剤の全てが、乾癬の治療における使用に承認されているわけではないことに留意されたい。
【０００９】
乾癬患者の別の治療法は、光線療法が関係し、これは、単にＵＶＡ／ＵＶＢ光が関係するもの、またはソラレン療法と併用するＵＶ光のいずれかである。
【００１０】
本明細書で使用する「乾癬」という用語には、乾癬ならびに紅斑、皮膚の肥厚化／隆起および鱗屑をはじめとする乾癬の症状が含まれる。
【００１１】
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性疾患である。これは、若年成人を冒す最も多い神経学的障害のうちの１つである。特定の原因は、まだ確認されていない。白灰質の局所的な炎症が、ミエリンの喪失につながり、神経細胞および軸索の損傷にも破壊にもつながる。炎症性の因子および脱髄が、軸索の伝導を遮断または制限する。神経細胞および軸索の喪失が、身体障害の不化逆的な進行に直接伴う。再発寛解型、一次性進行型、二次性進行型および進行再発型の、本疾患がたどる４つの主たる臨床的な過程があり、そのそれぞれは、異なる治療応答および短期の予後を有する（Ｆ．Ｄ．Ｌｕｂｌｉｎら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（１９９６）４６（４）：９０７−９１１）。しかし、非常に著しいのは、臨床的な過程および症状の重症度が、遺伝的な要因および環境暴露要因の可能性が最も高い要因によって、患者間で非常に大きく変動することである。一般に、ＭＳ患者は、感覚および運動の機能の、はじめは可逆性であり、後に進行性で不可逆性となる障害を経験する。特異的な症状として、しびれ、痙攣性の筋肉の脱力、疼痛、視覚上の問題、失調症、性的機能の喪失、発声および嚥下の困難、ならびに平衡の喪失をあげることができる。中枢性の疲労、注意および記憶の障害ならびに高度な機能障害等の認知障害が、中心的な症状として、増加して認められる。通常、対症療法（例えば、痙攣の制御、排尿頻度の制限、疼痛の制御）が使用されるが、せいぜい中等度の効果しか得られない。本疾患の過程を修飾する現在承認されている治療法は、免疫抑制に基づく治療法に限られている。メチルプレドニゾロンおよび関連のステロイドは、再発の期間を短縮する場合がある。インターフェロン−ベータ製剤または（特許権によって保護されている）免疫調節性のペプチドミックス（Ｃｏｐ−１）は、再発の頻度を低下させ、本疾患の早期では、進行速度に小さな効果を示す場合がある。ミトキサントロン、キャンパス−１Ｈ等の薬剤、または骨髄移植を用いた実質的な免疫抑制が、一部の患者においては、新たな炎症性の活性に実質的な影響を及ぼして、多分進行速度を遅らせることができるであろうが、毒性およびそれに伴う病的状態のために広範に使用されることはないであろう。十分に許容される、より選択性の高い免疫抑制薬および炎症に連結する神経変性を遮断する薬剤を開発する差し迫った必要性がある。ＭＳのさらなる情報は、例えば、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ−Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｄ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｃａｒｅ，Ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２００４（ＩＳＢＮ  １  ８６０１６  １８２  ０）を参照されたい。
【００１２】
慢性炎症性腸疾患であるクローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、小児および成人の両方を冒す（Ｂ．Ａ．Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２００２）１５（１）：７９−９４）。ＩＢＤは、全世界で発生するが、米国、連合王国および北欧でより多い（Ｂ．Ａ．Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２００２）１５（１）：７９−９４）。発生率の範囲は、年間１００，０００人あたり４〜１０人であり、有病率は、１００，０００人あたり４０〜１００人である（Ｊ．Ｂ．Ｋｉｒｓｎｅｒら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９８２）３０５：８３７−８４８）。
【００１３】
ＵＣは、炎症性の応答および形態学的な変化が結腸に限定されている状態と定義されている。９５％の患者で、直腸が関係している。炎症は、大部分が粘膜に限定されており、結腸全体に及び、種々の重症度の潰瘍化、浮腫および出血が連続的に関係してなっている（Ｂ．Ａ．Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２００２）１５（１）：７９−９４）。通常、ＵＣは、便に混在する血液および粘液の存在によって顕在化し、これには便通の通過時に最も激しくなる下腹部の腹痛が伴う。臨床的には、血液および粘液の伴う下痢の存在によって、ＵＣは、血液が存在しない過敏性腸症候群とは区別される。また、便中の血液の存在に気付いた人物が医師の診断を仰ぐことから、典型的には、ＵＣは、ＣＤよりも早期に診断される。腹痛の場所は、結腸の関係の程度によって変動する。
【００１４】
ＣＤは、中咽頭から肛門周辺領域に至る胃腸管のいかなる部分にも関係することができる。患部と患部とは、介在する正常な腸（「スキップ領域」）によって分離される場合が多く、炎症は、経壁性である場合があり、しばしば漿膜を越えて広がり、洞管または瘻孔の形成に至ることがある（Ｂ．Ａ．Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２００２）１５（１）：７９−９４）。
【００１５】
ＵＣとは異なり、ＣＤの症状は通常微妙であり、そのため診断の遅れにつながる。併発の場所、程度および重症度等の要因によって、胃腸症状の程度が決まる。回腸結腸に併発を有する患者は、通常、食後に腹痛を訴え、右下の四分円の圧痛および時には炎症性の腫瘤を伴う。胃十二指腸ＣＤに伴う症状として、早期の満腹、悪心、嘔吐、心窩部痛または嚥下障害があげられる。結腸ＣＤの症状は、ＵＣに類似することがある。決定的に、肛門周辺の疾患が多く、これには肛門垂、深い肛門裂傷および瘻孔が伴う（Ｂ．Ａ．Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２００２）１５（１）：７９−９４）。
【００１６】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の腸外の特徴として、発熱、体重減少、成長不全、関節痛、関節炎、口腔内アフタ様潰瘍等の粘膜皮膚の病変、結節性紅斑および壊疽性膿皮症（まれ、＜１％）等の皮膚の徴候、眼科的合併症、肝胆道疾患、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、腎臓疾患、骨の異常があげられる。
【００１７】
いくつかのクラスの治療薬が、ＣＤおよびＵＣの両方の治療に有用性を示している。スルファサラジンおよびアミノサリチル酸（例えば、メサラジン）は、軽度〜中等度に活動性のＵＣにおける寛解の誘導および寛解の維持をねらう治療の頼みの綱となっている。これらの薬剤は、ＣＤへの適用には承認されていないものの、軽度〜中等度に活動性の疾患の治療にも使用されているが、有用性は限定されている。これらの薬剤に伴う有害作用として、悪心／嘔吐および頭痛、さらには、スルファサラジンのスルファ部分に伴う過敏症反応があげられる。
【００１８】
プレドニゾンおよび同等の用量の他の従来のステロイド（例えば、ブデソニド）の両方をはじめとする副腎皮質ステロイドは、活動性のＣＤおよびＵＣにおける寛解の誘導に効果的である。しかし、患者が顕著な有害作用を経験する（すなわち、ステロイド不耐性である）場合、疾患の活動にほとんど、または全く改善をもたらさない（すなわち、ステロイド抵抗性である）場合、あるいは用量の減少またはステロイドの休薬の際に急に悪化する（すなわち、ステロイド依存性である）場合がある。また、いずれの疾患においても、従来のステロイドは、長期の使用に伴う有害作用を避けるのに十分低い用量では、寛解の維持にも効果がない。副腎皮質ステロイドの短期使用の有害作用のプロフィールには、筋障害、精神障害、緑内障、高血圧症、体液貯留、高血糖症および高脂血症が含まれる。長期の使用には、骨粗鬆症、ＨＰＡ系の抑制、白内障、創傷治癒不良およびクッシング様の外見が伴う。ＣＤ患者を回腸放出性のブデソニドで治療すれば、全身的なステロイド暴露が低下し、したがって、これらの副作用が発生する可能性は下がるが、このように改善された安全プロフィールには、効力の低下が伴う。
【００１９】
メトロニダゾールは、軽度から中等度の疾患を有する患者の肛門周辺のＣＤの治療に有用であり、しばしば回腸切除後の患者の術後に使用される。メトロニダゾールの長期使用は、末梢神経障害の危険によって制限される。
【００２０】
チオプリンであるアザチオプリンおよび６−メルカプトプリンは、ＣＤおよびＵＣの両方における寛解の維持に使用されるが、効力の発揮までに長時間を要するので、寛解の誘導にはほとんど有用性を示さない。これらの薬剤の使用に伴う毒性として、好中球減少症および血小板減少症、肝毒性、発疹、日和見感染症ならびにリンパ腫があげられる。総合すると、これらの薬剤は、普遍的に有効性を示すわけではなく、定期的に毒性をモニターする必要があり、顕著な有害作用のプロフィールを有する。また、メトトレキサートを、ＣＤ患者において維持療法として使用することもできるが、これの使用には、肝毒性および日和見感染症が伴う。また、重症の難治性疾患を有するＣＤおよびＵＣの患者をシクロスポリンＡで治療することも可能であるが、これは腎毒性および日和見感染症の高まった危険が伴う治療法である。
【００２１】
従来の治療法に応答しないＣＤ患者を、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−アルファに対して作られたモノクローナル抗体（例えば、インフリキシマブ）で治療し、寛解の誘導および維持の両方をねらうことができる。本薬剤は、静脈内にデリバリーされる生物学的薬剤であることから、副作用として、注入反応、アナフィラキシー様応答および免疫原性があげられる。本薬剤の使用に伴って、日和見感染症の危険が高まる恐れがある。
【００２２】
アテローム性動脈硬化症は、脂肪性物質、コレステロール、体細胞老廃物、カルシウムおよびフィブリン（血液中の凝固物質）が、動脈の内層に沈着することと関係がある。沈着したプラークは、動脈を通る血流を部分的または全体的に遮断することができる。さらに、プラークの区域で凝血塊が形成される場合があり、これも血流を止めることができる。プラーク自体または凝血塊によって遮断が起きると、心臓発作または脳卒中に至る場合がある。
【００２３】
アテローム性動脈硬化症は、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、心筋梗塞（ＭＩ）、狭心症、脳血管疾患（ＣＶＤ）、脳血栓症、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、下肢および足への不十分な血液供給（跛行）、臓器の損傷ならびに糖尿病の血管系合併症をはじめとするいくつかの状態の要因である。
【００２４】
アテローム性動脈硬化症の治療法には、主として、ＨＭＧＣｏＡ（３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ）還元酵素阻害薬、例えば、スタチン（例として、アトルバスタチン、シンバスタチンおよびロスバスタチン、これらはそれぞれ、Ｌｉｐｉｔｏｒ、ＺｏｃｏｒおよびＣｒｅｓｔｏｒの商標名で知られる）が含まれ、また、カルシウムアンタゴニスト、ベータ遮断薬、ＡＣＥ阻害薬およびアンジオテンシンＩＩアンタゴニスト等の降圧薬も含まれる。ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがアテローム性動脈硬化症を緩和することができるという動物モデルからのいくつかの証拠がある（Ｃ．Ｄｕｖａｌら、ＴＲＥＮＤＳ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００２）８（９）：４２２−４３０）。
【００２５】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、結合組織の自己免疫疾患であり、複数の系（皮膚、関節、腎臓、神経系、肺、心臓、血液）が関係する。本疾患は、女性１０００人あたり約１人を冒し、発症のピークは２０〜４０歳であり、アフリカ系アメリカ人の黒人女性に特に多い（２５０人に１人の有病率）。臨床的には、本疾患は、軽度（皮膚発疹／光線過敏および関節痛のみ）、中等度（肺および心臓の内層の炎症を追加の特徴とする）、および重度（１５〜２０％の患者にみられ、腎臓等の主要臓器が関係し、腎不全および神経系の問題に至る）である。これらの疾患の状況は、必ずしも進行性であるとは限らない。疲労が、全タイプの狼瘡の非常に顕著な特徴であり、軽度の疾患であっても、病的状態および労働不可能な状態をもたらし、このこと（および治療法の選択肢が限られていること）から、軽度の疾患についても、より重度の形態についても、新しい治療法が強く望まれている。本疾患の特徴は、急な悪化と寛解であり、このことは、寛解を誘導するために間欠的に使用できる治療法、およびその後に寛解を維持するためのその他の治療法またはより低い用量にも関心があることを意味する。
【００２６】
薬物誘発性ＳＬＥ（例えば、イソニアジドを原因とする）以外は、原因は不明である。病因は、主要臓器を冒す、免疫複合体が仲介する血管炎であり、免疫複合体および補体の血管への沈着ならびに好中球の蓄積が伴う。多数の自己抗体、特に、抗核抗体および抗二本鎖ＤＮＡ抗体が、本疾患に伴う。抗ＤＮＡ抗体のレベルは、疾患の活動と相関性がある。
【００２７】
ＳＬＥの管理は、疾患のタイプによって決まる。しかし、ＳＬＥに特定された適用の薬剤は１つもない。皮膚疾患は、抗マラリア薬（クロロキンまたはヒドロキシクロロキン）で治療し、関節疾患は、非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン）で治療する。中等度の疾患は、全身性ステロイド（例えば、プレドニゾロン）で治療するが、副作用および治療が長期にわたる性質のものであることから、これらは、控えめに使用される。また、ミコフェノール酸（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ）も、この群で使用される。高用量の経口ステロイドおよび細胞障害性薬剤、主としてシクロホスファミドを、場合によりアザチオプリンおよび／またはミコフェノール酸と併用して、重度の疾患が治療される。最も重度の疾患では、ステロイドおよびシクロホスファミドを、パルス静脈療法として投与する。シクロホスファミドには、不妊症の顕著な副作用があり、これは、本疾患が出産可能な年齢の女性に発生することから重要である。免疫抑制薬によって、医原性の免疫不全症ならびに重度の生命を危うくする日和見感染症および腫瘍を生じる。生物学的薬剤は、ＳＬＥの治療においては、あまり使用されていない。抗ＴＮＦ薬剤は、狼瘡様症候群を起こしたことから、その他の患者群で不安を招いている。抗Ｂ細胞抗体（抗ＣＤ２０、リツキシマブ）は、本疾患の重症例に有効であるようである。その他の治療法として、シクロスポリンＡ、タクロリムスおよびサリドマイドの使用があげられる。
【００２８】
臓器移植は、末期の臓器不全の治療の究極的な選択肢である。腎臓、肝臓、心臓、肺、小腸および肢の移植をはじめとする血管新生化臓器移植は、現存する状態を良好に緩和することができ、初年度の移植片生着は９０％を超える。しかし、臨床的移植は、生涯疾患の恒久的な治療法としての可能性を完全には満たしておらず、移植後の移植片機能損失は、年５％で一定している。
【００２９】
移植組織の拒絶反応が、移植処置の最終的な成功の主たる関門となっている。移植拒絶反応は、レシピエントのドナー組織に対する同種免疫応答の結果である。一般に、拒絶反応の機構は、超急性拒絶反応、急性拒絶反応および慢性拒絶反応の３つの群に特徴付けられる。
【００３０】
超急性拒絶反応は、移植手術後の初期に起こり、移植片上でのレシピエントにすでに存在している抗体とドナーの抗原との相互作用の結果である。移植後数分または数時間以内に発生し、血栓性の閉塞および出血を特徴とする。典型的には、移植片は、不可逆性の損傷をこうむるであろう。超急性拒絶反応は、例えば、妊娠、輸血または以前の移植手術を通して、過去に非自己の抗原に暴露したことがある個人でより起こりやすい。レシピエントとなるであろう患者の抗移植片抗体の存在を同定するスクリーニング技法を使用することによって、超急性拒絶反応の危険を最小限に留めることができる。
【００３１】
急性拒絶反応は、移植後数日から数週間以内に起こり、これは、Ｔ細胞による移植片抗原の認識が原因である。その結果、サイトカインの放出が生じ、炎症、組織の歪み、血行不全および細胞破壊に至る。急性拒絶反応の危険は、移植後の最初の数ヶ月が最も高く、免疫抑制薬の使用によって低めることができる。
【００３２】
慢性拒絶反応は、移植レシピエントに対する長期の危険であり、病理的な組織の修復が関係する。サイトカインおよび組織増殖因子が、平滑筋細胞の増殖、移動および新しい基質物質の産生を誘導する。また、間質内の線維芽細胞のコラーゲンの産生も誘導する。組織学的には、進行性の新生内膜形成が、動脈内で起こり、ある程度までは移植片の静脈内でも起こる。その結果起こる血流の喪失は、虚血、線維症および壊死を招く。慢性拒絶反応は、副腎皮質ステロイド（例えば、デキサメタゾン、プレドニゾロンおよびプレドニゾン）、免疫抑制薬（具体的には、シロリムス、タクロリムス、シクロスポリンＡ）および抗増殖薬（例えば、メトトレキサート、シクロホスファミドおよびアザチオプリン）を長期にわたり併用することによって対処する。慢性移植片拒絶反応は、ほとんどの後期移植片機能損失の原因である（Ｐ．ＬｉｂｂｙおよびＪ．Ｐｏｂｅｒ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００１）１４（４）：３８７−３９７）。
【００３３】
一般に、移植レシピエントの長期の治療に現在利用されている免疫抑制薬の有効性は、その免疫抑制の直接的な結果（具体的には、日和見感染症および特定の悪性腫瘍）として、および特定の薬物に関連する副作用（シクロスポリンＡは、例えば、肝毒性、腎毒性があり、ＩＩ型糖尿病の発生に至る場合がある）の両方の多大な副作用のために、見劣りがする。
【００３４】
移植レシピエントは、はじめに、薬物を併用して、典型的には少なくとも１種の副腎皮質ステロイド（これは、Ｔ細胞の活性化を抑制する）および免疫抑制薬（例えば、タクロリムスまたはシクロスポリンＡ）を投与されるであろう。一般に、ステロイドによる治療は、できるだけ早急に止められる。
【００３５】
通常、継続した免疫抑制薬による治療が、慢性拒絶反応を避けるためにレシピエントの生涯にわたって必要であるが、免疫抑制治療の結果として、顕著な副作用が見られる場合には、第一選択薬を、第二選択薬（例えば、メトトレキサート）に代えることができる。しばしば、移植拒絶反応が起きないことを保証しながら、維持療法の間に移植レシピエントに投与する免疫抑制薬の量を最小限にすることが可能であるが、これには、拒絶反応が起きないことを保証するためにレシピエントを注意深くモニターする必要がある。
【００３６】
ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲ−ガンマ）は、リガンド活性化転写因子のステロイド／甲状腺剤／レチノイド受容体スーパーファミリーのオーファンメンバーである。ＰＰＡＲ−ガンマは、独立した遺伝子によってコードされる密接に関連するＰＰＡＲからなるサブファミリーのうちの１つである（Ｃ．Ｄｒｅｙｅｒら、Ｃｅｌｌ（１９９２）６８：８７９−８８７；Ａ．Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（１９９２）６：１６３４−１６４１；Ｙ．Ｚｈｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９３）２６８：２６８１７−２６８２０；Ｓ．Ａ．Ｋｌｉｅｗｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９４）９１：７３５５−７３５９）。３種の哺乳類ＰＰＡＲが単離されており、ＰＰＡＲ−アルファ、ＰＰＡＲ−ガンマおよびＮＵＣ−１（ＰＰＡＲ−デルタとしても知られる）と名付けられている。これらのＰＰＡＲは、ＰＰＡＲ応答エレメント（ＰＰＲＥ）と名付けられているＤＮＡ配列エレメントに結合することによって、標的遺伝子の発現を調節する。今日までに、ＰＰＲＥは、脂質代謝を調節するタンパク質をコードする多数の遺伝子のエンハンサーとして同定されており、これは、ＰＰＡＲが脂肪生成のシグナル伝達カスケードおよび脂質のホメオスタシスにおいて中心的な役割を果たしていることを示唆している（Ｈ．ＫｅｌｌｅｒおよびＷ．Ｗａｈｌｉ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｍｅｔ．（１９９３）４：２９１−２９６）。
【００３７】
欧州特許第３０６２２８号は、ＩＩ型糖尿病の治療におけるインスリン増感剤として使用するためのチアゾリジンジオン誘導体であるＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの１つのクラスを記載している。これらの化合物は、抗高血糖活性を有する。当該の明細書に記載されている好ましい化合物は、５−［４−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ピリジル）アミノ）エトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオンの化学名で知られており、ロシグリタゾンの一般名が与えられている。マレイン酸塩をはじめとする本化合物の塩が、ＷＯ第９４／０５６５９号に記載されている。欧州特許出願公開第０００８２０３号、第０１３９４２１号、第００３２１２８号、第０４２８３１２号、第０４８９６６３号、第０１５５８４５号、第０２５７７８１号、第０２０８４２０号、第０１７７３５３号、第０３１９１８９号、第０３３２３３１号、第０３３２３３２号、第０５２８７３４号、第０５０８７４０号；国際特許出願公開第９２／１８５０１号、第９３／０２０７９号、第９３／２２４４５号；ならびに米国特許第５１０４８８８号および第５４７８８５２号も、特定のチアゾリジンジオンＰＰＡＲガンマアゴニストを開示している。言及することができる特異的な化合物として、５−［４−［２−（５−エチル−２−ピリジル）エトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（ピオグリタゾンとしても知られる）、５−［４−［（１−メチルシクロヘキシル）メトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（シグリタゾンとしても知られる）、５−［［４−［（３，４−ジヒドロ−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（トログリタゾンとしても知られる）、および５−［（２−ベンジル−２，３−ジヒドロベンゾピラン）−５−イルメチル）チアゾリジン−２，４−ジオン（エングリタゾンとしても知られる）があげられる。
【００３８】
米国特許第６２９４５８０号（この開示は、参照によって本明細書に組み込まれている）は、チアゾリジンジオンのクラスには属さないが、その代わり、チロシンのＯ−およびＮ−置換誘導体であり、それにもかかわらずＩＩ型糖尿病の治療におけるインスリン増感剤として有効である一連のＰＰＡＲガンマアゴニスト化合物を記載している。そのような化合物の１つが、Ｎ−（２−ベンゾイルフェニル）−Ｏ−［２−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）エチル］−Ｌ−チロシンの化学名を有する（２（Ｓ）−（２−ベンゾイル−フェニルアミノ）−３−｛４−［２−５−メチル−２−フェニル−オキサゾール−４−イル）−エトキシ］−フェニル｝−プロピオン酸の化学名としても知られ、ファルグリタザルの一般名によっても知られる）。
【００３９】
米国特許第５９２５６５７号は、ロシグリタゾン等のチアゾリジンジオンＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの投与によって炎症応答に伴うサイトカインの産生を治療または予防するための方法を開示している。
【００４０】
米国特許第６１５９３７１号は、ロシグリタゾン等のインスリン抵抗性改善物質を投与することによって自己免疫疾患を治療または予防する方法を開示している。
【００４１】
Ｄ．ＢａｌｄｗｉｎおよびＫ．Ｄｕｆｆｉｎ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００４）７７：１００９−１０１４は、糖尿病を、ロシグリタゾンの使用によって、固形臓器移植後に、安全でかつ効果的に治療できることを実証している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４２】
本発明の第１の目的は、望ましくない免疫応答のレベルを、従来の治療法と比べ、より大きな程度で下げることである。本発明の第２の目的は、強力な免疫抑制薬を、所与のレベルの免疫抑制を維持しながら、従来の治療法と比べ、より低い用量で使用できるようにすることであり、それによって患者が経験する副作用を減らすことができる。本発明の第３の目的は、従来の治療法に伴う、強力な免疫抑制薬を用いた長期にわたる治療の必要性を取り除くことである。
【課題を解決するための手段】
【００４３】
本発明によれば、望ましくない免疫応答を治療または予防するための方法が提供され、この方法は、免疫抑制薬とＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとを同時に投与する工程を含む。
【００４４】
本発明を以下の図面を用いて説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４５】
望ましくない免疫応答は、自己免疫障害、自己免疫性の要素を有する障害、炎症性の要素を有する障害であって、自己免疫性である、またはそうではない場合、あるいは移植手術から生じることがある。本発明の一実施形態では、望ましくない免疫応答が、自己免疫障害（例えば、関節リウマチ、乾癬および全身性エリテマトーデス）である。本発明の第２の実施形態では、望ましくない免疫応答が、自己免疫性の要素を有する障害（例えば、（潰瘍性大腸炎およびクローン病をはじめとする）炎症性腸疾患、橋本甲状腺炎、悪性貧血、アジソン病、Ｉ型糖尿病、全身性皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群およびグレーブス病）である。本発明の第３の実施形態では、望ましくない免疫応答が、炎症性の要素を有する障害であって、自己免疫性である、またはそうではない場合（例えば、アテローム性動脈硬化症）である。本発明の別の実施形態では、望ましくない免疫応答が、移植拒絶反応、特に、固形臓器移植（例えば、腎臓、肝臓、心臓、肺、小腸および肢）、またはそうでなければ骨髄移植のいずれかである。望ましくない免疫応答は、特に、慢性の炎症が関係するもの、とりわけ、組織修復が関係するものであり、例えば、以下の過程のうちの１種あるいは２種または３種の組合せが関係するものである：細胞の浸潤、血管の閉塞および線維症。
【００４６】
慢性の同種移植片拒絶反応は、腎移植片に最も多くみられ、血管の閉塞および移植片の実質の線維症が認められる。本発明のある実施形態では、望ましくない免疫応答が、慢性の腎臓の同種移植片拒絶反応である。本発明の別の実施形態では、望ましくない免疫応答が、慢性の心臓の同種移植片拒絶反応である。
【００４７】
本明細書で使用する免疫抑制薬という用語は、免疫応答を抑制する化合物または組成物を含むことを意味する。例示的な免疫抑制薬として、アザチオプリン、マクロライドおよびシクロスポリン、特に、マクロライド（具体的には、ピメクロリムス、タクロリムスおよびシロリムス）およびシクロスポリン（具体的には、シクロスポリンＡ）があげられる。別の免疫抑制薬として、ムロモナブＣＤ３、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アレムツズマブおよびその他の生物学的免疫抑制薬（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４またはＣＤ８を標的とするもの）があげられる。本発明の一実施形態では、免疫抑制薬が、マクロライド、特に、タクロリムスまたはシロリムス、とりわけ、タクロリムスである。本発明の別の実施形態では、免疫抑制薬が、シクロスポリンＡである。本発明のさらなる実施形態では、免疫抑制薬が、生物学的免疫抑制薬である。
【００４８】
前出のパラグラフで記載したもの等、広域型の免疫抑制薬によって、免疫系の全般的な抑制が得られる。本発明の一実施形態では、免疫抑制薬が、広域型の薬剤である。しかし、免疫応答の一部のみを抑制する薬剤もまた、本発明の範囲内に属するものとみなされる。本発明の第２の実施形態では、免疫抑制薬が、免疫応答の一部のみを抑制するものである。
【００４９】
ＴＮＦ−アルファ抗体は、炎症経路に対して作用し、そのようなものは、免疫応答の症状を緩和することができる。本発明の一実施形態では、免疫抑制薬が、ＴＮＦ−アルファ抗体である。
【００５０】
所望により、本発明では、複数の免疫抑制薬を利用することができる（例えば、２種の免疫抑制薬の併用）。本発明の一実施形態では、単一の免疫抑制薬を利用する。しかし、望ましくない免疫応答が、複数の機構および多くの細胞型に関係する場合があり、そのような場合は、最適な応答を得るために免疫抑制薬を併用する治療が必要となる症例であり得ることが多い。
【００５１】
本明細書で使用するＰＰＡＲ−ガンマアゴニストという用語は、ＰＰＡＲ−ガンマ受容体のアゴニストまたは部分アゴニストとして挙動する化合物または組成物を含むことを意味する。本発明の使用に適したＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとして、ドコサヘキサエン酸、プロスタグランジンＪ２、プロスタグランジンＪ２類似体（例えば、Δ１２−プロスタグランジンＪ２および１５−デオキシ−Δ１２，１４−プロスタグランジンＪ２）、ファルグリタザル（ＧＩ  ２６２５７０）、オキサゾリジンジオンおよびチアゾリジンジオンがあげられる。例示的なチアゾリジンジオンとして、トログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン（ＢＲＬ  ４９６５３）、ダルグリタゾンおよびエングリタゾンがあげられる。
【００５２】
適切には、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストは、チアゾリジンジオンである。チアゾリジンジオンは、特に、ロシグリタゾンまたはピオグリタゾン、とりわけ、ロシグリタゾンである。また、ファルグリタザルも、特に関心がある。
【００５３】
所望により、本発明では、複数のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを利用することができる（例えば、２種のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの併用）。適切には、単独のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを利用する。
【００５４】
望ましくない免疫応答が、自己免疫疾患である乾癬によるものであり、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストが、ロシグリタゾンである場合には、適切には、免疫抑制薬はシクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ）ではない。
【００５５】
薬物の投与に関連して本明細書で使用する、同時投与という用語は、個々の薬物が、対象内に時を同じくして存在するような薬物の投与を指す。時を同じくして（同一または別の経路から）薬物を投与することに加え、同時投与は、時を違えて（同一または別の経路から）薬物を投与することも含むことができる。
【００５６】
免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの同時投与は、治療または予防の期間を通して維持してもよいが、驚くことに、本発明の方法によって誘導した免疫抑制は、大部分、その後にＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを単独で（例えば、初期に免疫抑制薬なしで、または別法として、いずれの免疫抑制薬もなしで）投与することによって維持することができることが見出された。さらにより驚くことに、本発明の方法によって誘導した免疫抑制は、免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストのいずれをも投与せずに、継続させることができることが見出された。
【００５７】
適切には、本発明による望ましくない免疫応答の治療を受ける対象は、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの投与によって通常治療する糖尿病障害（例えば、ＩＩ型糖尿病または移植後の糖尿病）を患う者ではない。
【００５８】
本発明の第２の態様として、ここに、望ましくない免疫応答を治療または予防するための方法であって、
（ａ）免疫抑制薬とＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとの同時投与を含む、最初の治療期と；
（ｂ）（ａ）期の免疫抑制薬なしで、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの投与を含む、その後の治療期と
を含む方法を提供する。
【００５９】
さらに、ここに、望ましくない免疫応答を治療または予防するための方法であって、
（ａ）免疫抑制薬とＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとの同時投与を含む、最初の治療期と；
（ｂ）免疫抑制薬なしで、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの投与を含む、その後の治療期と
を含む方法を提供する。
【００６０】
本発明による方法は、免疫抑制薬単独の従来の治療法と比較して、改善されたレベルの免疫抑制を提供することができる。したがって、より少ない副作用で、同一または適切なレベルの免疫抑制を維持しながら、免疫抑制薬を、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがない場合には不十分（すなわち、治療量以下）であろう用量で利用することができるであろう。
【００６１】
望ましくない免疫応答が、移植拒絶反応である場合には、典型的には、免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを併用する治療は、移植の直後に開始するものとする。また、本発明による治療は、移植一定期間後に開始しても有益であり得ることを期待することができる。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態では、１種のみの薬物（例えば、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト）を使用する治療期の後に、免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを併用して治療するのが望ましい場合がある。例えば、１種の薬物のレベルが体内で安定化するまでに一定期間を要する場合には、そのような前治療期が必要であろう。
【００６３】
本発明に免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを使用するためには、通常、標準的な製薬慣行に従って、それらを医薬組成物に製剤化することになる。利用する個々の薬物によって異なるが、それらを組み合わせて製剤化してもよいし（安定な処方が調製できる場合および所望の投与計画が適合する場合）、薬物を別々に製剤化してもよい（同一または別の経路から、時を同じくしてまたは別々に投与する場合）。
【００６４】
本発明により、ここに、免疫抑制薬とＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとを、所望により、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む医薬組成物を提供する。
【００６５】
また、
（ａ）免疫抑制薬を含む医薬組成物と；
（ｂ）ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを含む医薬組成物と
を、望ましくない免疫応答の治療または予防に使用するための説明書と共に含む部材のキットも提供する。
【００６６】
本発明のさらなる態様では、ここに、望ましくない免疫応答の治療または予防のための薬物の製造における、免疫抑制薬と組み合わせたＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの使用を提供する。
【００６７】
本発明の別の態様では、ここに、望ましくない免疫応答の治療または予防のための薬物の製造における、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストと組み合わせた免疫抑制薬の使用を提供する。
【００６８】
また、望ましくない免疫応答の治療または予防のための薬物の製造における、免疫抑制薬とＰＰＡＲ−ガンマアゴニストとの使用も提供する。
【００６９】
ここに、望ましくない免疫応答の治療または予防において使用するための、免疫抑制薬と組み合わせたＰＰＡＲ−ガンマアゴニストもさらに提供する。
【００７０】
また、ここに、望ましくない免疫応答の治療または予防において使用するための、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストと組み合わせた免疫抑制薬も提供する。
【００７１】
当業者であれば、本薬物は、薬学的に許容される塩または溶媒和化合物の形態で提示できることが明らかであろう。
【００７２】
適切な溶媒和化合物は、水和物である。
【００７３】
適切な塩として、有機および無機の両方の酸または塩基を用いて形成されるものがあげられる。薬学的に許容される酸付加塩として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリフェニル酢酸、スルファミン酸、スルファニル酸、コハク酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、オキザロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アリールスルホン酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸またはナフタレンジスルホン酸）、サリチル酸、グルタル酸、グルコン酸、トリカルバリル酸、桂皮酸、置換桂皮酸（例えば、４−メチルおよび４−メトキシ桂皮酸をはじめとするフェニル、メチル、メトキシまたはハロ置換桂皮酸）、アスコルビン酸、オレイン酸、ナフトエ酸、ヒドロキシナフトエ酸（例えば、１−または３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸）、ナフタレンアクリル酸（例えば、ナフタレン−２−アクリル酸）、安息香酸、４−メトキシ安息香酸、２−または４−ヒドロキシ安息香酸、４−クロロ安息香酸、４−フェニル安息香酸、ベンゼンアクリル酸（例えば、１，４−ベンゼンアクリル酸）およびイセチオン酸から形成されるものがあげられる。薬学的に許容される塩基の塩として、アンモニウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、ならびにジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミン等の有機塩基の塩があげられる。
【００７４】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがロシグリタゾンである場合、適切には、本ロシグリタゾンはマレイン酸ロシグリタゾンの形態である。ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがピオグリタゾンである場合、適切には、本ピオグリタゾンは塩酸ピオグリタゾンの形態である。ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがファルグリタザルである場合、例示的な塩の形態はナトリウム塩である。
【００７５】
適切な処方として、経口投与、（皮下、皮内、筋肉内、静脈内および関節内をはじめとする）非経口投与、（様々なタイプの、計量された用量の加圧された噴霧器、ネブライザーまたは散布器の手段によって発生させる微粒子粉末または霧をはじめとする）吸入投与、直腸および（経皮、頬側、舌下および眼内をはじめとする）局所投与のための処方があげられるが、最も適切な経路は、例えば、被投与者の状態および当該の薬物によって異なることができる。処方は、好都合に、単位用量形態で提示してもよいし、調剤術において周知の方法のいずれかによって調製してもよい。全ての方法が、活性成分を、１種または複数の付属の成分を構成する担体と結合させる工程を含む。一般に、処方は、活性成分を液体の担体または細かく粉砕した個体の担体またはそれらの両方と均一にかつ密に結合させ、必要であれば、製品を所望の処方に形作ることによって調製される。
【００７６】
経口投与に適した本発明の処方を、それぞれがあらかじめ定められた量の活性成分を含有する、カプセル剤、カシェーまたは錠剤等の分離性の単位として；散剤または顆粒剤として；水性の液体または非水性の液体中の液剤または懸濁剤として；あるいは水中油型乳剤または油中水型乳剤として提示することができる。また、活性成分を、ボーラス、練薬またはペースト剤として提示することもできる。
【００７７】
錠剤は、所望により、１種または複数の付属の成分を加え、圧縮または成形によって作ることができる。圧縮錠剤は、粉末または顆粒等の自由に流動する形態の活性成分を、所望により、結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、界面活性剤または分散剤と混合し、適切な機械中で圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、不活性な液体の希釈剤で湿らせた粉末の化合物の混合物を適切な機械中で成形することによって作ることができる。所望により、錠剤は、コートしてもよいし、刻み目を付けてもよく、その中の活性成分が緩慢にまたは制御されて放出されるように処方してもよい。
【００７８】
非経口投与のための処方として、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、および意図される被投与者の血液と当該処方を等張にする溶質を含有することができる、水性または非水性の無菌の注射用液剤；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含有することができる、水性または非水性の無菌の懸濁剤があげられる。処方は、単位用量または多用量の容器、例えば、密封されたアンプルおよびバイアル内に提示することができ、使用の直前に無菌の液体の担体、例えば、食塩水または注射用水の添加のみを要する、凍結後に乾燥させた（凍結乾燥）状態で保管することができる。用時溶解型の注射用の液剤および懸濁剤を、これまでに記載した種類の無菌の粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【００７９】
吸入による肺への局所デリバリーのための乾燥粉末組成物は、例えば、吸入器または散布器に使用するために、ゼラチン等からなるカプセルおよびカートリッジ、またはラミネートされたアルミ箔等からなるブリスター中に提示することができる。一般に、粉末混合物の処方は、本発明の化合物、および単糖類、二糖類または多糖類（例えば、ラクトースまたはデンプン）等の適切な粉末の基剤（担体／希釈剤／賦形剤物質）からなる吸入のための粉末混合物を含有する。適切には、ラクトースを使用する。
【００８０】
吸入による肺への局所デリバリーのためのスプレー組成物は、例えば、水性の液剤または懸濁剤として、あるいは適切な液化した噴霧剤を用いて、計量された用量の吸入器等の加圧された容器からデリバリーされるエアロゾルとして製剤化される。吸入に適したエアロゾル組成物は、懸濁剤または液剤のいずれであってもよく、一般に、式（Ｉ）の化合物を含有し、所望により、別の治療的に活性な成分およびフルオロカーボンまたは水素を含有するクロロフルオロカーボンまたはそれらの混合物、特に、ヒドロフルオロアルカン、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラ−フルオロエタン、とりわけ、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン、またはそれらの混合物等の適切な噴霧剤と組み合わせることができる。また、二酸化炭素またはその他の適切な気体も、噴霧剤として使用することができる。エアロゾル組成物は、賦形剤なしでもよいし、所望により、界面活性物質、例えば、オレイン酸またはレシチン、および共溶媒、例えば、エタノール等の当技術分野で周知の追加の処方賦形剤を含有してもよい。一般に、加圧処方は、バルブ（例えば、計量バルブ）で閉じ、マウスピースが提供されているアクチュエーターにはまる缶内（例えば、アルミニウム製の缶）に保持するものとする。
【００８１】
望ましくは、吸入によって投与するための薬物は、粒子の大きさが制御されている。気管支系内への吸入に最適な粒子の大きさは、通常、１〜１０μｍ、特に、２〜５μｍである。２０μｍ超の大きさの粒子は、通常、吸入して細い気道に達するには大きすぎる。これらの粒子の大きさを達成するために、製造された活性成分の粒子の大きさを、従来の手段によって、例えば、微粒子化によって減少させることができる。所望の画分を、風力分級またはふるいによって選り分けることができる。適切には、粒子は、結晶性であろう。一般に、ラクトース等の賦形剤を利用する場合、賦形剤の粒子の大きさは、本発明内の吸入される薬物よりもはるかに大きいであろう。賦形剤がラクトースである場合、典型的には、これは、製粉したラクトースとして存在させ、その場合、ラクトース粒子の８５％以下が６０〜９０μｍのＭＭＤを有し、１５％以上が１５μｍ未満のＭＭＤを有するものとする。
【００８２】
鼻腔内スプレー剤を、水性または非水性のビヒクルを用いて、増粘剤、ｐＨを調節するための緩衝塩または酸またはアルカリ、等張化剤、あるいは抗酸化剤等の薬剤を加えて製剤化することができる。
【００８３】
ネブライザーを用いて吸入するための液剤を、水性のビヒクルを用いて、酸またはアルカリ、緩衝塩、等張化剤、あるいは抗菌剤等の薬剤を加えて製剤化することができる。これらの液剤を、ろ過またはオートクレーブ内での加熱によって滅菌してもよいし、無菌ではない製品として提示してもよい。
【００８４】
直腸投与のための処方を、カカオ脂またはポリエチレングリコール等の通常の担体を用いた坐剤として提示することができる。
【００８５】
口内、例えば、頬側または舌下への局所投与のための処方として、スクロースおよびアカシアゴムまたはトラガントゴム等の香味を付けた基剤中に活性成分を含むドロップ剤、ならびにゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアゴム等の基剤中に活性成分を含むトローチ剤があげられる。
【００８６】
特に上記で言及した成分に加え、本発明の処方は、当該の処方のタイプを考慮して、当技術分野で従来からあるその他の薬剤を含むことができ、例えば、経口投与に適するものには、香味料を含むことができることを理解されたい。
【００８７】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストがロシグリタゾンまたはピオグリタゾンである場合、これらの化合物は、経口投与用に、特に、錠剤として適切に製剤化される。免疫抑制薬が、タクロリムスである場合、この化合物は、好ましくは、非経口投与用または経口投与用、とりわけ、経口投与用に製剤化される。免疫抑制薬が、シロリムスである場合、この化合物は、好ましくは、経口投与用に製剤化される。免疫抑制薬が、シクロスポリンＡである場合、この化合物は、適切には、非経口投与用または経口投与用、とりわけ、経口投与用に製剤化される。
【００８８】
ロシグリタゾンは、マレイン酸ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）の形態で、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能であり、２、４または８ｍｇの経口錠剤として製剤化されている。
【００８９】
ピオグリタゾンは、塩酸ピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ）の形態で、Ｔａｋｅｄａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能であり、１５、３０または４５ｍｇの経口錠剤として製剤化されている。
【００９０】
シロリムス（Ｒａｐａｍｙｃｉｎ、Ｒａｐａｍｕｎｅ）は、Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能であり、経口投与用に１、２または５ｍｇの錠剤あるいは１ｍｇ／ｍｌの液剤として製剤化されている。
【００９１】
タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ）は、Ｆｕｊｉｓａｗａ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから入手可能であり、経口投与用に０．５、１または５ｍｇのカプセル剤として、あるいは注射用に５ｍｇ／ｍｌの液剤として製剤化されている。
【００９２】
シクロスポリンＡは、多数のメーカー、例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能であり（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ、Ｎｅｏｒａｌ）、経口投与用（２５、５０および１００ｍｇのカプセル剤、または１００ｍｇ／ｍｌの液剤）、または注射用（５０ｍｇ／ｍｌの液剤）に製剤化されている。
【００９３】
本発明による方法および医薬処方は、特異的な望ましくない免疫応答に関連する、１種または複数のその他の治療薬と併用してもよいし、または特異的な望ましくない免疫応答に関連する、１種または複数のその他の治療薬を含んでもよい。例えば、（ナプロキセン、イブプロフェン、ジクロフェナク、インドメタシン、ナブメトン、ピロキシカムおよびアスピリン等のＮＳＡＩＤをはじめとする）抗炎症薬、副腎皮質ステロイド、抗増殖薬および抗生物質である。特異的な望ましくない免疫応答の治療または予防のために、本発明品と併用する適切な追加の薬剤には、例示的な望ましくない免疫応答の記載および現在利用されている治療法の議論においてこれまでに列挙したものが含まれる。
【００９４】
本発明に利用する免疫抑制薬が、経口投与されるシクロスポリンＡである場合、典型的な用量は、約４〜５ｍｇ／ｋｇ、１日２回とする。本発明に利用する免疫抑制薬が、経口投与されるタクロリムスである場合、典型的な用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日からはじめるものとする。本発明に利用する免疫抑制薬が、経口投与されるシロリムスである場合、典型的な用量は、約２〜５ｍｇ／日からはじめるものとする。本発明に利用するＰＰＡＲ−ガンマアゴニストが、経口投与されるロシグリタゾンである場合、典型的な用量は、約２〜８ｍｇ／日とする。本発明に利用するＰＰＡＲ−ガンマアゴニストが、経口投与されるファルグリタザルである場合、典型的な用量は、約２〜１０ｍｇ／日とする。
【００９５】
当業者であれば、実際の用量のレベルは、個々の必要性によって決まるものであり、上記に記載したものとは異なる場合があることが理解されよう。
【００９６】
以下の非限定的な実施例によって、本発明を説明する。
【実施例】
【００９７】
[実施例１]
【００９８】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト処方
ロシグリタゾン顆粒濃縮物の調製
表１に、錠剤処方に利用した顆粒濃縮物の組成を示す。濃縮物は、ラクトース一水和物の約３分の２を、適切なふるいを通過させ、マレイン酸ロシグリタゾンと混合することによって調製した。デンプングリコール酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロースおよび残りのラクトースを、適切なふるいを通過させ、混合物に添加する。次いで、混合を続ける。次いで、得られた混合物、純水を用いて、湿式顆造粒する。次いで、湿潤顆粒をふるいにかけ、流動床乾燥機上で乾燥させ、乾燥顆粒を、別のふるいを通過させ、最後的に均質となす。
【００９９】
【表１】
2008531669.tif 000002
【０１００】
濃縮物から錠剤への製剤化
以下に示す表２は、（ロシグリタゾンに基づく重量に関して）１、２、４または８ｍｇのロシグリタゾンを含有する錠剤の最終組成を示す。最初に回転式ブレンダーに顆粒濃縮物を入れることによって、錠剤を調製する。約３分の２のラクトースをふるいにかけ、ブレンダーに添加する。微結晶セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよび残りのラクトースをふるいにかけ、ブレンダーに添加し、混合物を混ぜ合わせる。次いで、得られた混合物を、１、２および４ｍｇ錠剤の目標重量を１５０ｍｇ、ならびに８ｍｇ錠剤の目標重量を３００ｍｇとして、回転打錠プレス上で圧縮する。
【０１０１】
次いで、暖かい空気（約６５℃）であらかじめ加温した錠剤コーティング装置に、錠剤の芯を移し、ここで、錠剤の芯に、錠剤の重量が２．０％から３．５％増加するまで、被膜をコートする。
【０１０２】
【表２】
2008531669.tif 000003
[実施例２]
【０１０３】
ラットにおける心臓の同種移植片拒絶反応（生物学的マーカーの解析）
一般
移植レシピエントは、健常なラット、Ｌｅｗｉｓ系、雄、８〜１０週齢であった。健常なラット、Ｆ３４４系またはＬｅｗｉｓ系、雄、８〜１０週齢から、ドナーの臓器を収集した。
【０１０４】
ラットは、オーストラリアのＡｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｒｅから入手した。１２時間明／１２時間暗のサイクルの部屋で、ラットに食餌および水を自由に摂取させた。実験プロトコールは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｎｇ  ＫｏｎｇのＣｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌｉｖｅ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｔｅａｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈによって認められた。
【０１０５】
ラットを、適用する移植方法および投与薬物に従って、６種の実験プロトコールのうちの１種に供した。
【０１０６】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストであるロシグリタゾンは、マレイン酸ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）として利用した。
【０１０７】
移植
（ｉ）治療群１（ＴＧ１）−免疫抑制薬のみ
ＴＧ１のレシピエントのラットは、ドナーのＦ３３４系のラットから収集した心臓を受け取った。移植片の収集および移植の標準的な方法を使用した（Ｍ．Ｅ．Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９３）９０：６０８６−６０９０）。
【０１０８】
（ｉｉ）治療群２（ＴＧ２）−中用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストのみ
ＴＧ１で記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧ２のラットは、移植片を受け取った。
【０１０９】
（ｉｉｉ）治療群３（ＴＧ３）−免疫抑制薬および低用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト
ＴＧ１で記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧ３のラットは、移植片を受け取った。
【０１１０】
（ｉｖ）治療群４（ＴＧ４）−免疫抑制薬および中用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト
ＴＧ１で記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧ４のラットは、移植片を受け取った。
【０１１１】
（ｖ）治療群５（ＴＧ５）−同系移植
ＴＧ５のレシピエントのラットは、ドナーのＬｅｗｉｓ系のラットから収集した心臓を受け取った。ドナーのラットの系統を除いては、移植方法は、ＴＧ１で記載した手順と同一の手順に従った。
【０１１２】
（ｖｉ）治療群６（ＴＧ６）−偽移植
ＴＧ６のラットを、偽移植に供し、この場合、ラットの腹部を開いた後、閉じた。
【０１１３】
治療計画
（ｉ）治療群１−免疫抑制薬のみ
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０１１４】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０１１５】
（ｉｉ）治療群２−中用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストのみ
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始した。
【０１１６】
（ｉｉｉ）治療群３−免疫抑制薬および低用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０１１７】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０１１８】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、０．５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始した。
【０１１９】
（ｉｖ）治療群４−免疫抑制薬および中用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０１２０】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０１２１】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始した。
【０１２２】
（ｖ）治療群５−同系移植
ＴＧ５のラットには、免疫抑制薬もＰＰＡＲ−ガンマアゴニストも投与しなかった。
【０１２３】
（ｖｉ）治療群６−偽移植
ＴＧ６のラットには、免疫抑制薬もＰＰＡＲ−ガンマアゴニストも投与しなかった。
【０１２４】
結果
（ｉ）病理
図１は、移植した心臓の選択した切片を示し、これらは、拒絶反応の病理を代表するものである。図１ａは、ＴＧ５（対照の同系移植）のマウスからの切片である。
【０１２５】
図１ｂは、ＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）のマウスから採った移植した心臓からの切片である。図１ｂは、限られた細胞の浸潤、内膜の狭小化および線維症を示している。
【０１２６】
図１ｃは、治療群１（シクロスポリンＡのみ）のマウスから採った拒絶された移植片からの切片である。顕著なレベルの細胞の浸潤および内膜の狭小化から、図中の血管は閉塞しつつある。
【０１２７】
（ｉｉ）内膜の狭小化
ＴＧ５（同系移植）の内膜の厚さを、ＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）およびＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）の内膜の厚さと比較した。
【０１２８】
管腔の距離（Ｌ）、ならびに内膜と管腔との距離（Ｉ＋Ｌ）を測定した。距離は、ソフトウエア（Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ）を用いて測定した。内膜の狭小化（狭窄％）を、式：内膜の厚さ＝Ｉ／Ｉ＋Ｌに従って計算し、ＴＧ５（同系移植）に対する増加の百分率として表した。データを、以下の表３に示す。
【０１２９】
【表３】
2008531669.tif 000004
【０１３０】
ｎは、計算した血管の全数を示し、これは、試料のスライド中に見える血管の数によって異なる。試料は、３匹の異なる動物から得、１匹から１枚のスライドを得た。
【０１３１】
図２は、データをグラフにしたものである。
【０１３２】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔソフトウエア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、米国から入手可能）を使用してデータを解析し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較検定を使用して確率の値を計算した。
【０１３３】
ＴＧ４のラット（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）は、シクロスポリンＡを単独で用いる従来の治療を受けたＴＧ１のラットと比較して、移植後６０日（ｐ＝０．００１）および１２０日（ｐ＝０．００１）において、有意に少ない内膜の狭小化を示している。
【０１３４】
（ｉｉｉ）線維症
ＴＧ５（同系移植）について、コラーゲンの沈着を求め、ＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）およびＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）のコラーゲンの沈着と比較した。特異的に染色した切片（Ｖｅｒｈｏｅｆｆ’ｓ  Ｅｌａｓｔｉｎ）上のコラーゲンが沈着した面積を、ＭｅｔａＭｏｒｐｈソフトウエア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｄｏｗｎｉｎｇｔｏｗｎ、米国から入手可能）によって測定する。全面積に対するコラーゲン陽性面積の百分率を計算した。
【０１３５】
【表４】
2008531669.tif 000005
【０１３６】
試料は、３匹の動物から、各時点で得た（対象１匹から１枚のスライド、各スライドから１０視野を解析した）。
【０１３７】
図３は、データをグラフにしたものである。
【０１３８】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔソフトウエアを使用してデータを解析し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較検定を使用して確率の値を計算した。
【０１３９】
ＴＧ４のラット（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）は、シクロスポリンＡを単独で用いる従来の治療を受けたＴＧ１のラットと比較して、移植後６０日（ｐ＝０．００９）および１２０日（ｐ＝０．００１）において、有意に少ないコラーゲンの面積を示している。
【０１４０】
（ｉｖ）組織の壊死
ＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）、ＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）およびＴＧ５（同系移植）で観察される平滑筋細胞の数を、正常な心臓の組織（正常とは、Ｌｅｗｉｓ系のラットと年齢が一致する健常な雄から得た組織と定義される）と比較した。
【０１４１】
特異的に染色した切片（Ｖｅｒｈｏｅｆｆ’ｓ  Ｅｌａｓｔｉｎ）上の筋肉線維の面積を、ＭｅｔａＭｏｒｐｈソフトウエアによって測定した。全面積に対する筋肉の面積の百分率を計算した。筋肉の面積が大きいほど、組織の壊死が少ないことを示すとみなす。
【０１４２】
【表５】
2008531669.tif 000006
【０１４３】
試料は、３匹の動物から、各時点で得た（対象１匹から１枚のスライド、各スライドから１０視野）。
【０１４４】
図４は、データをグラフにしたものである。
【０１４５】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔソフトウエアを使用してデータを解析し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較検定を使用して確率の値を計算した。
【０１４６】
ＴＧ４のラット（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）は、シクロスポリンＡを単独で用いる従来の治療を受けたＴＧ１のラットと比較して、移植後６０日（ｐ＝０．００６）および１２０日（ｐ＝０．０１３）において、有意に大きい筋肉の面積（すなわち、低いレベルの筋肉の壊死）を示している（ｐ＜０．００１）。
【０１４７】
（ｖ）炎症性細胞の浸潤
ＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）、ＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）およびＴＧ５（同系移植）で観察される炎症性細胞の浸潤のレベルを、正常な心臓の組織（正常とは、Ｌｅｗｉｓ系のラットと年齢が一致する健常な雄から得た組織と定義される）と比較した。炎症性細胞の浸潤を、核の面積を測定することによって（全面積に対する百分率として）求めた。
【０１４８】
【表６】
2008531669.tif 000007
【０１４９】
試料は、３匹の動物から、各時点で得た（対象１匹から１枚のスライド、各スライドから１０視野）。
【０１５０】
図５は、データをグラフにしたものである。
【０１５１】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔソフトウエアを使用してデータを解析し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較検定を使用して確率の値を計算した。
【０１５２】
ＴＧ４のラット（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）は、シクロスポリンＡを単独で用いる従来の治療を受けたＴＧ１のラットと比較して、移植後６０日（ｐ＞０．００１）および１２０日（ｐ＞０．００１）において、有意に小さい核の面積を示している。
【０１５３】
（ｖｉ）マクロファージの数
ＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）、ＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）およびＴＧ５（同系移植）のラットの炎症性細胞の浸潤中のマクロファージの数を、免疫組織化学的に染色した切片中のＥＤ−１陽性の細胞を数えることによって求めた。データは、各４００倍視野の陽性の細胞の数を示す。各スライドから５視野を解析し、スライドは各群の３匹の動物から得た。
【０１５４】
【表７】
2008531669.tif 000008
【０１５５】
図６は、データをグラフにしたものである。
【０１５６】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔソフトウエアを使用してデータを解析し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較検定を使用して確率の値を計算した。
【０１５７】
ＴＧ４のラット（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）は、シクロスポリンＡを単独で用いる従来の治療を受けたＴＧ１のラットと比較して、移植後３０日（ｐ＝０．００５）、６０日（ｐ＝０．００５）および１２０日（ｐ＝０．００５）において、有意に低いマクロファージの数を示している。
【０１５８】
（ｖｉｉ）ＴＮＡ−アルファの産生
ＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）、ＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）およびＴＧ５（同系移植）のラットについて、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）の血清レベルを測定した。ＴＮＦ−アルファの血清レベルは、ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅから供給されたＥＬＩＳＡキットを使用して求め、ｐｇ／ｍｌとして提示した。
【０１５９】
【表８】
2008531669.tif 000009
【０１６０】
図７は、データをグラフにしたものである。
【０１６１】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔソフトウエアを使用してデータを解析し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較検定を使用して確率の値を計算した。
【０１６２】
ＴＧ４のラット（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）は、シクロスポリンＡを単独で用いる従来の治療を受けたＴＧ１のラットと比較して、移植後６０日（ｐ＝０．００５）において、有意に低いＴＮＦ−アルファの血清レベルを示している。移植後１２０日においては、顕著な差は認められないが、これは、生存動物数が減ったこの遅い時点のデータセットの減少によると思われる。
【０１６３】
（ｖｉｉｉ）同種抗体
堵殺時に、移植された動物から血清試料を採取し、Ｆ３４４系のラットから単離した胸腺細胞を標識するための第１抗体として使用した。血清を段階希釈した（１：３、１：１０、１：３０および１：１００）。１：３の希釈で、陽性細胞の百分率は飽和しておらず、したがって、１：３の希釈で、これ以降のデータを得、解析した。ＦＩＴＣ結合抗ラットアイソタイプ特異的抗体ＩｇＭを、第２抗体として使用した（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、カリフォルニア州、米国）。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｅｒ、カリフォルニア州、米国）によって、試料を解析した。前方散乱対側方散乱が、リンパ細胞集団のゲーティングを定義し、得られた結果を、ＣＥＬＬＱｕｅｓｔソフトウエアを使用して解析した。
【０１６４】
陽性細胞の百分率を、相対的な抗体のレベルの指標として使用した。各実験群で、３匹の移植された動物からの血清試料を解析した。
【０１６５】
ＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）、ＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）およびＴＧ５（同系移植）のラットを、負の対照としての同系移植からの血清試料に対して測定した。さらに、試料を、ＴＧ１およびＴＧ２に属していたが、移植片を拒絶した動物から得た。堵殺時に（または、適宜、拒絶反応時に）血清を採取し、冷凍した。
【０１６６】
【表９】
2008531669.tif 000010
【０１６７】
図８は、データをグラフにしたものである。
【０１６８】
６０日後または９０日後のＴＧ１に関するデータは、入手できていない。
【０１６９】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔソフトウエアを使用してデータを解析し、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較検定を使用して確率の値を計算した。
【０１７０】
同種移植片を拒絶したＴＧ４（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）またはＴＧ１（シクロスポリンＡのみ）のいずれかのラットは、ＴＧ５（同系移植）のラットと比較して、抗体のレベルが有意に高いことを実証している。
【０１７１】
さらに、移植後１２０日まで生存するＴＧ１のラットは、ＴＧ５（同系移植）のラットと比較して、有意に高い抗体のレベルを示している（ｐ＝０．０１９）点に留意されたい。この知見から、移植拒絶反応は起きていないものの、レシピエントは、引き続き移植片に対する免疫応答下にあり、依然として拒絶反応の危険があることが示唆される。
【０１７２】
結論
本発明の方法により免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを併用した治療によって、炎症性の組織修復（すなわち、細胞の浸潤、血管の閉塞および線維症）に寄与する重要な要素がそれぞれ減弱した。これは、全般的な、かつ特に、慢性的な炎症が主たる症状である望ましくない免疫応答への本方法の適用の根拠を提供する。
【０１７３】
免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを併用した最初の治療期に続く、ロシグリタゾンの単独投与は、免疫抑制を維持し、移植された臓器を拒絶反応から保護するのに十分であることが明らかである。
[実施例３]
【０１７４】
ラットにおける心臓の同種移植片拒絶反応−長期生着
一般
移植レシピエントは、健常なラット、Ｌｅｗｉｓ系、雄、８〜１０週齢であった。健常なラット、Ｆ３４４系またはＬｅｗｉｓ系、雄、８〜１０週齢から、ドナーの臓器を収集した。
【０１７５】
ラットは、オーストラリアのＡｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｒｅから入手した。１２時間明／１２時間暗のサイクルの部屋で、ラットに食餌および水を自由に摂取させた。実験プロトコールは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｎｇ  ＫｏｎｇのＣｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌｉｖｅ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｔｅａｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈによって認められた。
【０１７６】
ラットを、適用する移植方法および投与薬物に従って、３種の実験プロトコールのうちの１種に供した。各治療群で、６匹のラットを使用した。
【０１７７】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストであるロシグリタゾンは、マレイン酸ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）として利用した。
【０１７８】
移植
（ｉ）治療群Ａ（ＴＧＡ）−免疫抑制薬のみ
ＴＧＡのレシピエントのラットは、ドナーのＦ３３４系のラットから収集した心臓を受け取った。移植片の収集および移植の標準的な方法を使用した（Ｍ．Ｅ．Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９３）９０：６０８６−６０９０）。
【０１７９】
（ｉｉ）治療群Ｂ（ＴＧＢ）−ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストのみ
ＴＧＡで記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧＢのラットは、移植片を受け取った。
【０１８０】
（ｉｉｉ）治療群Ｃ（ＴＧＣ）−免疫抑制薬および中用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト
ＴＧＡで記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧＣのラットは、移植片を受け取った。
【０１８１】
治療計画
（ｉ）治療群Ａ−免疫抑制薬のみ
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０１８２】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０１８３】
（ｉｉ）治療群Ｂ−中用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストのみ
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始し、移植後１２０日まで続けた。
【０１８４】
（ｉｉｉ）治療群Ｃ−免疫抑制薬および中用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０１８５】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０１８６】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始し、移植後１２０日まで続けた。
【０１８７】
結果
以下の表１０に、移植片生着率を示す。移植片生着は、明白な心拍の存在と定義される。
【０１８８】
【表１０】
2008531669.tif 000011
【０１８９】
図９は、データを、時間に対して移植片生着をプロットしたものである。
【０１９０】
移植片生着を、カイ２乗検定を使用して解析した。
【０１９１】
本発明の組合せを使用した治療法であるＴＧＣは、ＴＧＡの従来の方法による治療法と比較して有意に良好な生着率を示した。
【０１９２】
結論
実施例３の移植片生着の結果は、本発明の方法に、移植患者における長期の移植片生着率を高めることを期待できることを示す。ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを単独で用いた第２の治療期は、１２０日後に停止したが、薬物が存在しないにもかかわらず、ラットはこの時点以降も生存する。
[実施例３（追加）]
【０１９３】
ラットにおける心臓の同種移植片拒絶反応−長期生着
一般
実施例３を拡張して、いくつかの別の治療群を含め、かつすでに調査した治療群のうちの特定の群においては動物数を追加した。
【０１９４】
一般的な手順は、上記に記載した。
【０１９５】
移植
（ｉ）治療群Ｄ（ＴＧＤ）−同系移植
ＴＧＤのレシピエントのラットは、ドナーのＬｅｗｉｓ系のラットから収集した心臓を受け取った。ドナーのラットの系統を除いては、移植方法は、ＴＧＡで記載した手順と同一の手順に従った。
【０１９６】
（ｉｉ）治療群Ｅ（ＴＧＥ）−同種移植のみ
ＴＧＡで記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧＥのラットは、移植片を受け取った。
【０１９７】
（ｉｉｉ）治療群Ｆ（ＴＧＦ）−高用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストのみ
ＴＧＡで記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧＦのラットは、移植片を受け取った。
【０１９８】
治療計画
（ｉ）治療群Ｄ（ＴＧＤ）−同系移植
ＴＧＤのラットには、免疫抑制薬もＰＰＡＲ−ガンマアゴニストも投与しなかった。
【０１９９】
（ｉｉ）治療群Ｅ（ＴＧＥ）−同種移植のみ
ＴＧＥのラットには、免疫抑制薬もＰＰＡＲ−ガンマアゴニストも投与しなかった。
【０２００】
（ｉｉｉ）治療群Ｆ（ＴＧＦ）−高用量のＰＰＡＲ−ガンマアゴニストのみ
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始し、移植後１２０日まで続けた。
【０２０１】
結果
以下の表１０ｂに、元々のデータおよび追加のデータの両方を含む移植片生着率の概要を示す。移植片生着は、明白な心拍の存在と定義される。
【０２０２】
【表１１】
2008531669.tif 000012
【０２０３】
本発明の組合せを使用した治療法であるＴＧＣは、ＴＧＡの従来の方法による治療法と比較して有意に良好な生着率を示している（ｐ＜０．０１）。
【０２０４】
さらに、中用量（ＴＧＢ）または高用量（ＴＧＦ）で、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを単独で使用した治療法は、未処置の対象（ＴＧＥ）と比較して、いかなる顕著な差も示してない。したがって、本発明の組合せの相乗的な効果は、特に驚くに値する。
[実施例４]
【０２０５】
別の投与計画
一般
免疫抑制薬および／またはＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの別の用量レベルの効果を調査するために、実施例４の実験を行った。
【０２０６】
移植レシピエントは、健常なラット、Ｌｅｗｉｓ系、雄、８〜１０週齢であった。健常なラット、Ｆ３４４系またはＬｅｗｉｓ系、雄、８〜１０週齢から、ドナーの臓器を収集した。
【０２０７】
ラットは、オーストラリアのＡｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｒｅから入手した。１２時間明／１２時間暗のサイクルの部屋で、ラットに食餌および水を自由に摂取させた。実験プロトコールは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｎｇ  ＫｏｎｇのＣｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌｉｖｅ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｔｅａｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈによって認められた。
【０２０８】
ラットを、適用する移植方法および投与薬物に従って、３種の実験プロトコールのうちの１種に供した。各治療群で、６または７匹のラットを使用した。
【０２０９】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストであるロシグリタゾンは、マレイン酸ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）として利用した。
【０２１０】
移植
（ｉ）治療群Ｉ（ＴＧＩ）−シクロスポリンＡ、２０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、２０ｍｇ／ｋｇ／日
ＴＧＩのレシピエントのラットは、ドナーのＦ３３４系のラットから収集した心臓を受け取った。移植片の収集および移植の標準的な方法を使用した（Ｍ．Ｅ．Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９３）９０：６０８６−６０９０）。
【０２１１】
（ｉｉ）治療群ＩＩ（ＴＧＩＩ）−シクロスポリンＡ、１０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日
ＴＧＩで記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧＩＩのラットは、移植片を受け取った。
【０２１２】
（ｉｉｉ）治療群ＩＩＩ（ＴＧＩＩＩ）−シクロスポリンＡ、１０ｍｇ／ｋｇ／日
ＴＧＩで記載した手順と同一の手順に従い、ＴＧＩＩＩのラットは、移植片を受け取った。
【０２１３】
治療計画
（ｉ）治療群Ｉ（ＴＧＩ）−シクロスポリンＡ、２０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、２０ｍｇ／ｋｇ／日
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０２１４】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０２１５】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始し、移植後１２０日まで続けた。
【０２１６】
（ｉｉ）治療群ＩＩ（ＴＧＩＩ）−シクロスポリンＡ、１０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、移植の３日前に開始し、移植後１２０日まで続けた。
【０２１７】
（ｉｉｉ）治療群ＩＩＩ（ＴＧＩＩＩ）−シクロスポリンＡ、１０ｍｇ／ｋｇ／日
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、１０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０２１８】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０２１９】
以下の表１１に、移植片生着率を示す。移植片生着は、明白な心拍の存在と定義される。
【０２２０】
【表１２】
2008531669.tif 000013
【０２２１】
データを、図１０に示す。
【０２２２】
シクロスポリンＡ、１０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日を併用した治療法（ＴＧＩＩ）は、最も高い生着率を示し、これは、シクロスポリンＡ、１０ｍｇ／ｋｇ／日単独を用いた治療法と比較して、有意に改善されている（ｐ＜０．０５）。
[実施例５]
【０２２３】
免疫抑制の持続：第２の心臓同種移植の拒絶反応
一般
移植レシピエントは、実施例３の治療群Ｃ（シクロスポリンＡおよび中用量のロシグリタゾン）について記載した治療法による治療後１２０日間生存したＬｅｗｉｓ系のラットであった。健常なラット、Ｆ３４４系またはＤＡ系、雄、８〜１０週齢から、第２の移植のドナーの臓器を収集した。
【０２２４】
ラットは、オーストラリアのＡｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｒｅから入手した。１２時間明／１２時間暗のサイクルの部屋で、ラットに食餌および水を自由に摂取させた。実験プロトコールは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｎｇ  ＫｏｎｇのＣｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌｉｖｅ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｔｅａｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈによって認められた。
【０２２５】
ラットを、第２の移植に利用するドナーの臓器の源に従って、２種の実験プロトコールのうちの１種に供した。
【０２２６】
移植
第２の移植を、第１の移植と同一の方法を使用して行い（Ｍ．Ｅ．Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９３）９０：６０８６−６０９０）、第１の移植片の下に、血管新生化した第２の移植片を付着させた。第２の移植は、第１の移植後１２０日で完了した。
【０２２７】
治療計画
実施例５のラットは、実験の経過中、免疫抑制薬もＰＰＡＲ−ガンマアゴニストも投与されなかった。
【０２２８】
結果
（実施例３に記載する方法によって定義される）移植片生着を、第１および第２の移植片について測定した。４匹のラットが、Ｆ３４４のドナーから第２の移植片を受け取り、４匹のラットが、ＤＡのドナーから第２の移植片を受け取った。生着期間を、以下の表１２に示す。
【０２２９】
【表１３】
2008531669.tif 000014
【０２３０】
結論
第２の移植時には、免疫抑制薬もＰＰＡＲ−ガンマアゴニストも存在しなかったにもかかわらず、第１に移植された臓器は生存し続け、同一の系統から第２に移植された臓器（第２のＦ３４４移植片）は、実験の経過中拒絶されていない。この知見は、数日以内に第２の移植片が拒絶された、異なる系統から第２の移植片（第２のＤＡ移植片）を受け取った動物とは対照をなす。
【０２３１】
これらのデータは、本発明の方法は、その他の同種抗原に対する免疫応答は抑制しないが、ドナー特異的寛容の確立に至ることを示す。
【０２３２】
免疫抑制薬を使用する（または本発明による免疫抑制薬およびＰＰＡＲ−ガンマアゴニストを併用する）長期にわたる治療は必要でない。本知見は、従来の方法を使用する長期の治療に伴うコストの低減、および従来の長期にわたる治療を必要とする移植レシピエントがこうむる副作用の軽減の両方の点で、臓器および組織の移植の分野に対して重要な意味を有する。
【０２３３】
別の意味は、犠牲的組織移植片を使用して、ドナー特異的寛容を誘導する可能性があることである。これは、大部分のドナーの臓器源の性質上、通常は適用できないが、（家族等の）既知の臓器のドナーを有するレシピエントとなるであろう患者は利益を有するであろう。
【０２３４】
ドナー特異的寛容の誘導には、自己免疫障害の治療において非常に価値があると期待することができる。患者が本障害の原因である自己抗原に対する寛容を回復する可能性がある。
[実施例５（追加）]
【０２３５】
免疫抑制の持続：第２の心臓同種移植の拒絶反応
一般
実施例５を拡張して、いくつかの別の治療群を含めた。
【０２３６】
一般的な手順は、上記に記載した、すなわち、異なる治療計画を受けるラットに、Ｆ３４４系の動物からの第１の移植片を与え、次いで、１２０日後に生存した動物に、Ｆ３４４系またはＤＡ系の動物のいずれかからの第２の移植片を与えた。
【０２３７】
治療計画
（ｉ）治療群Ｗ−シクロスポリンＡ，１０ｍｇ／ｋｇ／日
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、１０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０２３８】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０２３９】
（ｉｉ）治療群Ｘ−シクロスポリンＡ，２０ｍｇ／ｋｇ／日
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、１０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０２４０】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０２４１】
（ｉｉｉ）治療群Ｙ−シクロスポリンＡ，１０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、１０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０２４２】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０２４３】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、第１の移植の３日前に開始し、第１の移植後１２０日まで続けた。
【０２４４】
（ｉｖ）治療群Ｚ−シクロスポリンＡ，２０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日
免疫抑制薬（シクロスポリンＡ）を、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、腹腔内注射によって投与した。投与は、外科手技の完了に続いて、第１の移植の日から開始し、全部で１４日間続けた。
【０２４５】
濃縮されたシクロスポリンＡ（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、５０ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で希釈することによって、投与に用いるシクロスポリンＡの１６．６ｍｇ／ｍｌ溶液を毎日調製した。毎朝、シクロスポリンＡを１回注射した。
【０２４６】
ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト（ロシグリタゾン）を、５ｍｇ／ｋｇ／日で、経口投与した。４ｍｇロシグリタゾン錠剤を、蒸留水に溶解させ、ロシグリタゾン溶液を、毎日朝１回、経管栄養によって、ラットに与えた。投与は、第１の移植の３日前に開始し、第１の移植後１２０日まで続けた。
【０２４７】
結果
移植片生着（すなわち、明白な心拍の存在）を、第１および第２の移植片について測定した。第２の移植片生着期間を、以下の表１２ｂに示す。
【０２４８】
【表１４】
2008531669.tif 000015
【０２４９】
全ての第１の移植片は、実験終了まで（すなわち、全部で１８０日）生着した。
【０２５０】
実験終了時の組織学のデータを、図１１に示す。切片ＡからＣは、治療群ＴＧＸ（すなわち、シクロスポリンＡ、２０ｍｇ／ｋｇ／日、移植後６０日）からの第２の移植片であり、切片ＤからＦは、治療群ＴＧＺ（すなわち、シクロスポリンＡ、２０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日、移植後６０日）からの第２の移植片であり、切片ＧからＩは、治療群ＴＧＸ（すなわち、シクロスポリンＡ、２０ｍｇ／ｋｇ／日、移植後１８０日）からの第１の移植片であり、切片ＪからＬは、治療群ＴＧＺ（すなわち、シクロスポリンＡ、２０ｍｇ／ｋｇ／日およびロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日、移植後１８０日）からの第１の移植片である。スライドに認められるように、全ての組織試料は、同等のレベルの組織修復を示している。
【０２５１】
結論
第２の移植時には、免疫抑制薬もＰＰＡＲ−ガンマアゴニストも存在しなかったにもかかわらず、同一の系統から第２に移植された臓器は、実験の経過中拒絶されていない（全ての４種の実験群について、第２のＦ３４４移植片）。この知見は、数日以内に第２の移植片が拒絶された、異なる系統から第２の移植片を受け取った動物とは対照をなす（対象を有する全ての４種の実験群について、第２のＤＡ移植片）。
【０２５２】
これらのデータは、本発明の方法は、その他の同種抗原に対する免疫応答は抑制しないが、ドナー特異的寛容の確立に至ることを示す。
【０２５３】
表１２ｂのデータを検討する際、ある程度の注意が必要である。データが、治療群間で同等ではあるが、はじめの移植後１２０日まで生存した動物のみが、第２段階に移行したことを忘れてはならない。したがって、データは、従来の治療法よりも、本発明による治療法を使用した単回の移植片生着の方が良好であることを示している以前の知見と両立しないわけでなない。むしろ、本追加実験のデータは、治療計画に関係なく移植片生着における重要な要因はドナー特異的寛容の誘発であり、異なる治療計画の下で類似する寛容を誘発することができるが、それを本発明が促進することを示唆する。
【０２５４】
実施例２において、１２０日の時点（本実施例の治療を終了した時点）で、本発明により治療した動物と従来の治療法を受けた動物との間で組織修復の程度に明確な差が以前に見出された。本実験の終了時の第１の移植片における組織修復の程度に顕著な差が認められなかったことは、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニストの継続した投与が望ましいであろうことを間接的に示唆する。
【０２５５】
本出願で参照した、特許および特許出願を含む全ての参照文献は、可能な限りその全体が参照によって本明細書に組み込まれている。
【０２５６】
明細書およびそれに続く特許請求の範囲を通して、文脈上そうではない必要がない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変形は、述べられている整数または工程あるいは整数の群を包含するが、いずれかのその他の整数または工程あるいは整数または工程の群を除外するわけではないことを意味すると理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【０２５７】
【図１】拒絶反応の病理を代表する、移植した心臓の選択した切片を示す図である。
【図２】一連の治療計画を受けた移植レシピエントの内膜の狭小化を比較したグラフである。
【図３】一連の治療計画を受けた移植レシピエントのコラーゲンの沈着を比較したグラフである。
【図４】一連の治療計画を受けた移植レシピエントの平滑筋の面積を比較したグラフである。
【図５】一連の治療計画を受けた移植レシピエントの核の面積を比較したグラフである。
【図６】一連の治療計画を受けた移植レシピエントのマクロファージの数を比較したグラフである。
【図７】一連の治療計画を受けた移植レシピエントのＴＮＦ−アルファのレベルを比較したグラフである。
【図８】一連の治療計画を受けた移植レシピエントの血清ＩｇＭのレベルを比較したグラフである。
【図９】一連の治療計画を受けた移植レシピエントの移植片生着期間を比較したグラフである。
【図１０】一連の治療計画を受けた移植レシピエントの移植片生着期間を比較したグラフである。
【図１１】第１および第２の移植片を与えられた移植レシピエントからの切片を比較した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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