(57)【要約】  本発明は、１，２−又は１，３−アミノチオール基を有する又は有するように改変された非保護標的化合物（例えば、ポリペプチド、ペプチド又は有機化合物）と複合化させるための、非常にすぐれた１，２−又は１，３−アミノチオール特異的試薬である新規ビヒクル誘導体を提供する新規化学プロセスに関する。本発明は、さらに、新規水溶性ポリマー誘導体及びその複合物を使用する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造を有する化合物又は薬剤として許容されるその塩若しくは水和物。
【化１】
2008531475.tif 000068
（式中、
Ａは、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される０、１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋であり、
Ｅ１はＮ、Ｏ又はＣであり、
Ｅ２はＮ又はＣであり、
Ｇは、単結合、二重結合、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅであり、
【化２】
2008531475.tif 000069
は各々単結合であり、
【化３】
2008531475.tif 000070
の一方はさらに二重結合とすることができ、ＧがＣ又はＮであるときには
【化４】
2008531475.tif 000071
の一方はさらに二重結合とすることができ、Ｇが単結合又は二重結合であるときには
【化５】
2008531475.tif 000072
は全て存在せず、
Ｌ１は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＮＲａＲａ及びオキソから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換された、二価のＣ１−６アルキル又はＣ１−６ヘテロアルキルであり、
ｍは各々独立に０又は１であり、
ｎは１以上であり、
ｏは０、１、２、３、４又は５であり、
Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はベンジルであり、これらのいずれもハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＣ２−６アルキルＮＲａＲａ、−ＯＣ２−６アルキルＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−ＮＲａＣ２−６アルキルＮＲａＲａ及び−ＮＲａＣ２−６アルキルＯＲａから選択される０、１、２又は３個の基で置換され、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ及びＩから選択される０、１、２、３、４、５又は６個の原子でさらに置換されており、
Ｒ２はビヒクルであり、Ｒ３は生理活性化合物であり、又はＲ３はビヒクルであり、Ｒ２は生理活性化合物であり、
Ｒａは各々独立にＨ又はＲｂであり、
Ｒｂは各々独立にフェニル、ベンジル又はＣ１−６アルキルであり、該フェニル、ベンジル及びＣ１−６アルキルはハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換されており、
Ｒｃは各々独立にハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される。）
【請求項２】
以下の一般構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【化６】
2008531475.tif 000073
【請求項３】
以下の一般構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【化７】
2008531475.tif 000074
2008531475.tif 000075
【請求項４】
Ａが、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ａが、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−炭素原子架橋である、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
Ａが不飽和４−炭素原子架橋であり、
Ｅ２がＣであり、
Ｇが二重結合である、
請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
Ｇが単結合又は二重結合であり、
【化８】
2008531475.tif 000076
が全て存在しない、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ＧがＣ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
【化９】
2008531475.tif 000077
が各々単結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
ＧがＣ又はＮであり、
【化１０】
2008531475.tif 000078
の１個が二重結合である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２がビヒクルであり、Ｒ３が生理活性化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３がビヒクルであり、Ｒ２が生理活性化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３がポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、ポリ（アクリロイルモルホリン−）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、アミノ酸ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、ＰＥＧとアミノ酸のコポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー及びポリエチレングリコール（ｇｌｙｃｏ）／チオリンゴ酸コポリマー又はこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３がＰＥＧである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ２がＢ１ペプチド拮抗物質である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２が、配列番号５−２６及び４２−６２から選択されるペプチドであるＢ１ペプチド拮抗物質であり、前記ペプチドはＮ末端システイン残基を有するように修飾された、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ａ）  Ｒ２−（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨと
【化１１】
2008531475.tif 000079
を反応させる段階、又は
Ｂ）  Ｒ２−［（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨ］ｎと
【化１２】
2008531475.tif 000080
を反応させる段階
を含む、請求項１に記載の化合物を調製する方法。
（式中、Ｊはカルボニル又は保護されたカルボニルである。）
【請求項１８】
Ａ）  Ｒ２−（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨと
【化１３】
2008531475.tif 000081
を反応させる段階、又は
Ｂ）  Ｒ２−［（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨ］ｎと
【化１４】
2008531475.tif 000082
を反応させる段階
を含む、請求項１に記載の化合物を調製する方法。
（式中、Ｊはカルボニル又は保護されたカルボニルである。）
【請求項１９】
ＪがＣ（＝Ｏ）、Ｃ（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒａ））、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ）、Ｃ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒａ））、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｓ）、Ｃ（ＯＲｂ）２、Ｃ（ＳＲｂ）２及びＣ（ＮＲａＲｂ）２から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
反応がｐＨ２から７で実施される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
反応がｐＨ３から５で実施される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
ＪがＣ（＝Ｏ）、Ｃ（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒａ））、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ）、Ｃ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒａ））、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｓ）、Ｃ（ＯＲｂ）２、Ｃ（ＳＲｂ）２及びＣ（ＮＲａＲｂ）２から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
反応がｐＨ２から７で実施される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
反応がｐＨ３から５で実施される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
以下の構造を有する化合物。
【化１５】
2008531475.tif 000083
2008531475.tif 000084
（式中、
Ａは、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される０、１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋であり、
Ｅ１はＮ、Ｏ又はＣであり、
Ｅ２はＮ又はＣであり、
Ｇは、単結合、二重結合、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅであり、
【化１６】
2008531475.tif 000085
は各々単結合であって、
【化１７】
2008531475.tif 000086
の一方はさらに二重結合とすることができ、ＧがＣ又はＮであるときには
【化１８】
2008531475.tif 000087
の一方はさらに二重結合とすることができ、Ｇが単結合又は二重結合であるときには
【化１９】
2008531475.tif 000088
は全て存在せず、
Ｊはカルボニル又は保護されたカルボニルであり、
Ｌ１は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＮＲａＲａ及びオキソから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換された、二価のＣ１−１２アルキル又はＣ１−１２ヘテロアルキルであり、
ｍは各々独立に０又は１であり、
ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であり、
ｏは０、１、２、３、４又は５であり、
Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はベンジルであり、これらのいずれもハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＣ２−６アルキルＮＲａＲａ、−ＯＣ２−６アルキルＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−ＮＲａＣ２−６アルキルＮＲａＲａ及び−ＮＲａＣ２−６アルキルＯＲａから選択される０、１、２又は３個の基で置換され、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ及びＩから選択される０、１、２、３、４、５又は６個の原子でさらに置換されており、
Ｒ３は生理活性化合物又はビヒクルであり、
Ｒａは各々独立にＨ又はＲｂであり、
Ｒｂは各々独立にフェニル、ベンジル又はＣ１−６アルキルであり、該フェニル、ベンジル及びＣ１−６アルキルはハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換されており、
Ｒｃは各々独立にハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択され、
ＸはＣ（＝Ｏ）であり、ＹはＮＨであり、又はＸはＮＨであり、ＹはＣ（＝Ｏ）である。）
【請求項２６】
以下の一般構造を有する、請求項２５に記載の化合物。
【化２０】
2008531475.tif 000089
【請求項２７】
以下の一般構造を有する、請求項２５に記載の化合物。
【化２１】
2008531475.tif 000090
【請求項２８】
Ａが、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋である、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ａが、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−炭素原子架橋である、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３０】
Ａが不飽和４−炭素原子架橋であり、
Ｅ２がＣであり、
Ｇが二重結合である、
請求項２７に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｇが単結合又は二重結合であり、
【化２２】
2008531475.tif 000091
が全て存在しない、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３２】
ＧがＣ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３３】
【化２３】
2008531475.tif 000092
が各々単結合である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３４】
ＧがＣ又はＮであり、
【化２４】
2008531475.tif 000093
の１個が二重結合である、
請求項２５に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ３が生理活性化合物である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ３がビヒクルである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｒ３がポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、ポリ（アクリロイルモルホリン−）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、アミノ酸ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、ＰＥＧとアミノ酸のコポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー及びポリエチレングリコール（ｇｌｙｃｏ）／チオリンゴ酸コポリマー又はこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｒ３がＰＥＧである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３９】
（Ｙ−Ｌ２）ｎ−Ｒ３を
【化２５】
2008531475.tif 000094
（式中、
Ｌ２は各々独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＮＲａＲａ及びオキソから選択される０、１、２、３又は４個の置換基で置換された、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６ヘテロアルキルであり、
Ｘは求核基であり、Ｙは求電子基であり、又はＸは求電子基であり、Ｙは求核基である。）
と反応させる段階を含む、請求項２５に記載の化合物を調製する方法。
【請求項４０】
求核基がＳＨ、ＮＨ２及びＯＨから選択され、
求電子基がＣＨ２ハロゲン、ＣＨ２ＳＯ２ＯＲｂＣ（＝Ｏ）Ｏ（スクシンイミド）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（パーフルオロアルキル）、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２ＣＮ）及びＣ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ６Ｆ５）から選択される、
請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
治療を必要とする患者に請求項１に記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、とう痛及び／又は炎症を治療する方法。
【請求項４２】
請求項１に記載の化合物と薬剤として許容される担体又は希釈剤とを含む薬剤組成物。
【請求項４３】
請求項１に記載の化合物を含む医薬品の製造。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
バイオテクノロジーにおける最近の進歩によって、治療用タンパク質、ペプチド、抗体、抗体断片などの生体分子の大規模製造が可能になり、かかる生体分子がより広範に利用可能になった。残念ながら、生体分子の有用性は、その急速なタンパク質分解、短い循環半減期、低溶解性、製造、保存若しくは投与時の不安定性、又は投与時の免疫原性のために損なわれることが多い。治療及び／又は診断用の生体分子投与における関心が増大したため、これらの欠点を克服する多様な手法が探究されている。
【０００２】
広範に探究されているかかる一手法は、ポリエチレングリコール（以下、「ＰＥＧ」）などのビヒクルの共有結合によるタンパク質及び他の治療薬候補の改変である（例えば、Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５２（１１）：３５７９−３５８６（１９７７）；Ｄａｖｉｓ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ４６：６４９−６５２（１９８１）及び米国特許出願公開第２００４０１３２６６４号参照）。タンパク質又はペプチド薬剤の問題の多くを解決又は改善するための、タンパク質又はペプチドにＰＥＧ基を付加する方法（以下、「ＰＥＧ化」）は、詳細に記録されている（例えば、Ｆｒａｎｃｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，  ６８：１−１８（１９９８）；Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９７７）；  Ｃｈａｐｍａｎ，  Ａ．，  Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．  Ｒｅｖ．  ５４，  ５３１−５４５（２００２））及びＲｏｂｅｒｔｓ，  Ｍ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ５４：４５９−４７６（２００２）参照）。
【０００３】
手短に述べると、ビヒクルと、タンパク質、ペプチド、多糖、ポリヌクレオチド、脂質、有機分子などの活性物質との共有結合（以下、「複合化」）は、典型的には、一方又は両方の末端に反応基を有するビヒクル誘導体を用いて実施することができる。この反応基は、ビヒクルに連結しようとする分子上の利用可能な反応基のタイプに基づいて選択される。例として、ポリマーに官能性を持たせる手段は、国際公開第９６／４１８１３号及びＪ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．  Ｓｃｉ．  ８７，  １４４６−１４４９（１９９８））に記載されている。ビヒクルがＰＥＧであるときには、生体分子の求核性中心（例えば、リジン、システイン及びタンパク質又はペプチドの類似の残基）との反応に適切な活性化ＰＥＧ誘導体としては、ＰＥＧ−アルデヒド、混合無水物、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、カルボニルイミダゾリド（ｃａｒｂｏｎｙｌｉｍａｄａｚｏｌｉｄｅ）、クロロシアヌラートなどが挙げられる。これらの方法の各々は、既知の利点と欠点を有する（Ｈａｒｒｉｓ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｈｅｒａｔｉ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｐｏｌｙｍ  Ｐｒｅｐｒ．（Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ，  Ｄｉｖ．  Ｐｏｌｙｍ．  Ｃｈｅｍ），  ３２（１）：１５４−１５５（１９９１）；Ｈｅｒｍａｎ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ，  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  Ｐｈｙｓ．，  １９５：２０３−２０９（１９９４）及びＲｏｂｅｒｔｓ，  Ｍ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ５４：４５９−４７６（２００２））。公知方法による複合化に付随するより一般的な問題としては、反応性不純物の生成、不安定な結合、副反応、及び／又は置換における選択性の欠如などが挙げられる。また、これらの難点は、所望の生理活性複合物の単離及び精製を複雑にすることによって現れる。異なる量の異性体が生成する場合もある。かかるばらつきによって、ロット間の再現性問題が起こる恐れがあり、なかでも最も問題なことには、生理活性を再現できなくなる恐れがある。
【０００４】
マレイミド、ビニルスルホン、ヨードアセトアミド、チオール、ジスルフィドなどのチオール選択的な官能基を有する活性化ビヒクル誘導体は、タンパク質又はペプチドのシステイン側鎖とのカップリングに特に適している（Ｚａｌｉｐｓｋｙ，  Ｓ．  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  ６，  １５０−１６５（１９９５）；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，  Ｒ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｔｈｅｒ．  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．  １７，  １０１−１６１  （２０００）；２５  Ｈｅｒｍａｎ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  Ｐｈｙｓ．  １９５，  ２０３−２０９（１９９４））。しかし、これらの試薬は、特に治療用ビヒクル複合型生体分子の開発が目的である場合には、欠点がないわけではない。例えば、初期に形成されるＰＥＧマレイミド−チオール複合物は、（Ｒ）−鏡像異性と（Ｓ）−鏡像異性の混合物である。混合物の形成は、ＰＥＧ化生体分子の開発を様々なレベルで複雑にする。例えば、鏡像異性体の一方は、他方と比較して、望ましくない活性を有し、又は厄介な安全性の問題を有し得る。ＰＥＧマレイミド−チオール複合化方法の別の欠点は、初期に形成される付加体が再配列してチオモルホリノンになり易いことである。
【０００５】
２個以上の連結活性物質の複合物を再現性良く生成する必要もある。同じビヒクル分子に結合した１個を超える活性物質を含むこれらの「多量体」複合体の投与は、相加的及び／又は相乗的利点をもたらす場合がある。例えば、２個以上の同一の結合ペプチド又はポリペプチドを含む複合体は、結合相手のリガンド又は活性部位に対する親和性が、単量体ポリペプチドよりも実質的に増大し得る。或いは、（１）体内の特定の部位においてその効果を発揮する生理活性タンパク質と（２）その特異的部位に複合体を誘導することができる分子とを含む複合体は、特に有利になり得る。残念ながら、２個以上の生理活性又は生体機能性分子と複合化されたビヒクルを生成する現在の方法を拡張すると、上記欠点が拡大する。例えば、２個の生理活性分子を単一の二価のＰＥＧ−マレイミドと複合化しようとすると、異なる量の１６個の別々の化合物（ｅｎｔｉｔｉｅｓ）が生成し得る。例えば、四価のＰＥＧ−マレイミドを用いて合計４個の生理活性分子と複合化されたＰＥＧの生成に現行の方法を適用すると、ＰＥＧと生理活性分子の２５６個の別々の結合可能部位が生成し得る。これらの別個の化合物を定量しようとすることは、既存のツールを用いては、一般に困難であり、不可能でさえある技術的難題であり、このタイプの生体分子の開発を著しく妨害し、さらには完全に妨げ得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、活性物質の複合物を高収率及び高純度で調製する新規方法が求められていることは明らかである。かかる複合物は、加水分解に対して安定であり、比較的最少の生成反応しか必要とせず、ビヒクル又はビヒクルセグメントの完全性を維持する（すなわち、穏和な反応条件下で実施される）方法によって容易に精製され、及び／又は望ましい生理活性を保持することが理想的である。本発明は、現況技術に存在する上記問題を解決し、上記問題に関連して多数の利点をもたらす新規の試薬、方法及び複合物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、１，２−又は１，３−アミノチオールに選択的な末端を有する少なくとも１個のビヒクルセグメントを含むビヒクル誘導体に関する。本発明のビヒクル誘導体は、１，２−又は１，３−アミノチオール部分を含む分子とのカップリングに有用である。本発明の一実施形態は、１個以上の活性物質と、ＰＥＧを含めて、但しこれだけに限定されない水溶性ポリマーとの結合に関する。
【０００８】
本発明は、本発明のビヒクル誘導体を製造する方法及びビヒクル誘導体を用いて新規活性物質複合物を製造する方法を提供する。
【０００９】
本発明の一態様は、以下の構造を有する化合物又は薬剤として許容されるその塩若しくは水和物に関する。
【００１０】
【化２６】
2008531475.tif 000002
式中、
Ａは、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される０、１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋であり、
Ｅ１はＮ、Ｏ又はＣであり、
Ｅ２はＮ又はＣであり、
Ｇは、単結合、二重結合、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅであり、
【化２７】
2008531475.tif 000003
は各々単結合であり、
【化２８】
2008531475.tif 000004
の一方はさらに二重結合とすることができ、ＧがＣ又はＮであるときには
【化２９】
2008531475.tif 000005
の一方はさらに二重結合とすることができ、Ｇが単結合又は二重結合であるときには
【化３０】
2008531475.tif 000006
は全て存在せず、
Ｌ１は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＮＲａＲａ及びオキソから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換された、二価のＣ１−６アルキル又はＣ１−６ヘテロアルキルであり、
ｍは各々独立に０又は１であり、
ｏは０、１、２、３、４又は５であり、
Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はベンジルであり、これらのいずれもハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＣ２−６アルキルＮＲａＲａ、−ＯＣ２−６アルキルＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−ＮＲａＣ２−６アルキルＮＲａＲａ及び−ＮＲａＣ２−６アルキルＯＲａから選択される０、１、２又は３個の基で置換され、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ及びＩから選択される０、１、２、３、４、５又は６個の原子でさらに置換されており、
Ｒ２はビヒクルであり、Ｒ３は生理活性化合物であり、又はＲ３はビヒクルであり、Ｒ２は生理活性化合物であり、
Ｒａは各々独立にＨ又はＲｂであり、
Ｒｂは各々独立にフェニル、ベンジル又はＣ１−６アルキルであり、該フェニル、ベンジル及びＣ１−６アルキルはハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換されており、
Ｒｃは各々独立にハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される。
【００１１】
本発明の別の態様は、以下の構造を有する化合物又は薬剤として許容されるその塩若しくは水和物に関する。
【００１２】
【化３１】
2008531475.tif 000007
式中、
Ａは、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される０、１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋であり、
Ｅ１はＮ、Ｏ又はＣであり、
Ｅ２はＮ又はＣであり、
Ｇは、単結合、二重結合、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅであり、
【化３２】
2008531475.tif 000008
は各々単結合であり、
【化３３】
2008531475.tif 000009
の一方はさらに二重結合とすることができ、ＧがＣ又はＮであるときには
【化３４】
2008531475.tif 000010
の一方はさらに二重結合とすることができ、Ｇが単結合又は二重結合であるときには
【化３５】
2008531475.tif 000011
は全て存在せず、
Ｌ１は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＮＲａＲａ及びオキソから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換された、二価のＣ１−６アルキル又はＣ１−６ヘテロアルキルであり、
ｍは各々独立に０又は１であり、
ｎは１以上であり、
ｏは０、１、２、３、４又は５であり、
Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はベンジルであり、これらのいずれもハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＣ２−６アルキルＮＲａＲａ、−ＯＣ２−６アルキルＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−ＮＲａＣ２−６アルキルＮＲａＲａ及び−ＮＲａＣ２−６アルキルＯＲａから選択される０、１、２又は３個の基で置換され、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ及びＩから選択される０、１、２、３、４、５又は６個の原子でさらに置換されており、
Ｒ２はビヒクルであり、Ｒ３は生理活性化合物であり、又はＲ３はビヒクルであり、Ｒ２は生理活性化合物であり、
Ｒａは各々独立にＨ又はＲｂであり、
Ｒｂは各々独立にフェニル、ベンジル又はＣ１−６アルキルであり、該フェニル、ベンジル及びＣ１−６アルキルはハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換されており、
Ｒｃは各々独立にハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される。
【００１３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋である。
【００１４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−炭素原子架橋である。
【００１５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは１である。
【００１６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは２である。
【００１７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは３である。
【００１８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは４である。
【００１９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは５である。
【００２０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは６である。
【００２１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは７である。
【００２２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは８である。
【００２３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは不飽和４−炭素原子架橋であり、Ｅ２はＣであり、Ｇは二重結合である。
【００２４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｇは単結合又は二重結合であり、
【化３６】
2008531475.tif 000012
は全て存在しない。
【００２５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ＧはＣ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅである。
【００２６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、
【化３７】
2008531475.tif 000013
は各々単結合である。
【００２７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ＧはＣ又はＮであり、
【化３８】
2008531475.tif 000014
の１つは二重結合である。
【００２８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２はビヒクルであり、Ｒ３は生理活性化合物である。
【００２９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３はビヒクルであり、Ｒ２は生理活性化合物である。
【００３０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３は、ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、ポリ（アクリロイルモルホリン−）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、アミノ酸ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、ＰＥＧとアミノ酸のコポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー及びポリエチレングリコール／チオリンゴ酸コポリマー又はこれらの任意の組み合わせから選択される。
【００３１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３はＰＥＧである。
【００３２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。
【００３３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３は分枝ＰＥＧであり、ｎは２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。
【００３４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２はＢ１ペプチド拮抗物質である。
【００３５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２は、配列番号５−２６及び４２−６２から選択されるＢ１ペプチド拮抗物質であり、前記ペプチドは、Ｎ末端システイン残基を有するように修飾された。
【００３６】
本発明の別の態様は、
Ａ）  Ｒ２−（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨと
【００３７】
【化３９】
2008531475.tif 000015
を反応させる段階、又は
Ｂ）  Ｒ２−［（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨ］ｎと
【００３８】
【化４０】
2008531475.tif 000016
を反応させる段階を含む、請求項１に記載の化合物を調製する方法に関する。式中、Ｊはカルボニル又は保護されたカルボニルである。
【００３９】
本発明の別の態様は、
Ａ）  Ｒ２−（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨと
【００４０】
【化４１】
2008531475.tif 000017
を反応させる段階、又は
Ｂ）  Ｒ２−［（Ｃ（＝Ｏ））ｍＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（ＣＨ２）ｍＳＨ］ｎと
【００４１】
【化４２】
2008531475.tif 000018
を反応させる段階を含む、請求項１に記載の化合物を調製する方法に関する。式中、Ｊはカルボニル又は保護されたカルボニルである。
【００４２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｊは、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒａ））、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ）、Ｃ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｒａ））、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、Ｃ（Ｎ（Ｒａ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｓ）、Ｃ（ＯＲｂ）２、Ｃ（ＳＲｂ）２及びＣ（ＮＲａＲｂ）２から選択される。
【００４３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、反応はｐＨ２から７で実施される。
【００４４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、反応はｐＨ３から５で実施される。
【００４５】
本発明の別の態様は、以下の構造を有する化合物に関する。
【００４６】
【化４３】
2008531475.tif 000019
式中、
Ａは、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される０、１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋であり、
Ｅ１はＮ、Ｏ又はＣであり、
Ｅ２はＮ又はＣであり、
Ｇは、単結合、二重結合、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅであり、
【化４４】
2008531475.tif 000020
は各々単結合であり、
【化４５】
2008531475.tif 000021
の一方はさらに二重結合とすることができ、ＧがＣ又はＮであるときには
【化４６】
2008531475.tif 000022
の一方はさらに二重結合とすることができ、Ｇが単結合又は二重結合であるときには
【化４７】
2008531475.tif 000023
は全て存在せず、
Ｊはカルボニル又は保護されたカルボニルであり、
Ｌ１は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＮＲａＲａ及びオキソから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換された、二価のＣ１−１２アルキル又はＣ１−１２ヘテロアルキルであり、
ｍは各々独立に０又は１であり、
ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であり、
ｏは０、１、２、３、４又は５であり、
Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はベンジルであり、これらのいずれもハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＣ２−６アルキルＮＲａＲａ、−ＯＣ２−６アルキルＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−ＮＲａＣ２−６アルキルＮＲａＲａ及び−ＮＲａＣ２−６アルキルＯＲａから選択される０、１、２又は３個の基で置換され、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ及びＩから選択される０、１、２、３、４、５又は６個の原子でさらに置換されており、
Ｒ３は生理活性化合物又はビヒクルであり、
Ｒａは各々独立にＨ又はＲｂであり、
Ｒｂは各々独立にフェニル、ベンジル又はＣ１−６アルキルであり、該フェニル、ベンジル及びＣ１−６アルキルはハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択される０、１、２又は３個の置換基で置換されており、
Ｒｃは各々独立にハロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル、−ＯＣ１−４アルキル、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＣ１−４アルキル及び−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）Ｃ１−４アルキルから選択され、
ＸはＣ（＝Ｏ）であり、ＹはＮＨであり、又はＸはＮＨであり、ＹはＣ（＝Ｏ）である。
【００４７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは１である。
【００４８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは２である。
【００４９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは３である。
【００５０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは４である。
【００５１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは５である。
【００５２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは６である。
【００５３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは７である。
【００５４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ｎは８である。
【００５５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１、２又は３個のヘテロ原子を含み、残りの架橋原子が炭素である、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−原子架橋である。
【００５６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは、飽和、部分飽和又は不飽和の２−、３−、４−、５−又は６−炭素原子架橋である。
【００５７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは不飽和４−炭素原子架橋であり、Ｅ２はＣであり、Ｇは二重結合である。
【００５８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｇは単結合又は二重結合であり、
【化４８】
2008531475.tif 000024
は全て存在しない。
【００５９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ＧはＣ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ又はＴｅである。
【００６０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、
【化４９】
2008531475.tif 000025
は各々単結合である。
【００６１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ＧはＣ又はＮであり、
【化４９】
2008531475.tif 000026
の１つは二重結合である。
【００６２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３は生理活性化合物である。
【００６３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３はビヒクルである。
【００６４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３は、ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、ポリ（アクリロイルモルホリン−）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、アミノ酸ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、ＰＥＧとアミノ酸のコポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー及びポリエチレングリコール／チオリンゴ酸コポリマー又はこれらの任意の組み合わせから選択される。
【００６５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ３はＰＥＧである。
【００６６】
本発明の別の態様は、（Ｙ−Ｌ２）ｎＲ３を
【００６７】
【化５０】
2008531475.tif 000027
（式中、
Ｌ２は各々独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＮＲａＲａ及びオキソから選択される０、１、２、３又は４個の置換基で置換された、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６ヘテロアルキルであり、
Ｘは求核基であり、Ｙは求電子基であり、又はＸは求電子基であり、Ｙは求核基である。）
と反応させる段階を含む、上記化合物を調製する方法に関する。
【００６８】
本発明の別の実施形態においては、求核基がＮＨ２及びＯＨから選択され、求電子基がＣＨ２ハロゲン、ＣＨ２ＳＯ２ＯＲｂ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ及びＣ（＝Ｏ）ＯＲｂから選択される。
【００６９】
本発明の別の態様は、治療を必要とする患者に上記化合物の治療有効量を投与することを含む、とう痛及び／又は炎症を治療する方法に関する。
【００７０】
本発明の別の態様は、上記化合物と薬剤として許容される担体又は希釈剤とを含む薬剤組成物に関する。
【００７１】
本発明の別の態様は、上記化合物を含む医薬品の製造に関する。
【００７２】
本発明の別の態様は、上記化合物を含む、とう痛及び／又は炎症の治療用医薬品の製造に関する。
【００７３】
本発明の一態様は、以下の構造を有する化合物又は薬剤として許容されるその任意の塩若しくは水和物に関する。
【００７４】
【化５１】
2008531475.tif 000028
式中、
Ａは、ｉ）（置換又は非置換の）ｓｐ３若しくはｓｐ２混成の２個の炭素（両方の炭素は、求電子基の両方のカルボキシルを連結する、環式又は非環式である。）、又はｉｉ）（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）炭素、（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）窒素若しくは（環式又は非環式の一部の）酸素から選択される３個の原子であり、
Ｂは、ｉ）（置換又は非置換の）ｓｐ３若しくはｓｐ２混成の２個の炭素（両方の炭素は、求電子基の両方のカルボキシルを連結する、環式又は非環式である。）、又はｉｉ）（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）炭素、（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）窒素若しくは（環式又は非環式の一部の）酸素から選択される３個の原子である。
【００７５】
上記及び下記実施形態に関連して、一実施形態においては、Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はベンジルであって、そのいずれもハロ、シアノ、ニトロ、オキソ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−ＯＣ２−６アルキルＮＲａＲａ、−ＯＣ２−６アルキルＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（＝ＮＲａ）ＮＲａＲａ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｂ、−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａＲａ、−ＮＲａＣ２−６アルキルＮＲａＲａ及び−ＮＲａＣ２−６アルキルＯＲａから選択される０、１、２又は３個の基で置換され、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ及びＩから選択される０、１、２、３、４、５又は６個の原子でさらに置換されている。
【００７６】
上記及び下記実施形態に関連して、一実施形態においては、Ｒ３は、ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、ポリ（アクリロイルモルホリン−）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、アミノ酸ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、ＰＥＧとアミノ酸のコポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー及びポリエチレングリコール／チオリンゴ酸コポリマー又はこれらの任意の組み合わせから選択される。
【００７７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルセグメントはポリ（エチレンオキシド）である。
【００７８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルは線状構造である。
【００７９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルはＰＥＧである。
【００８０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記多環式Ｎ，Ｓ−複素環は（９ｂＳ）（９ｂＨ）−２，３−ジヒドロチアゾロ［２，３−ａ］イソインドル−５−オンであり、Ｒ２はタンパク質又はペプチドであり、Ｒ３はＰＥＧである。
【００８１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２はＢ１ペプチド拮抗物質である。
【００８２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｂ１ペプチド拮抗物質は、配列番号５−２６及び４２−６２から選択されるペプチドであり、前記ペプチドは、Ｎ末端システイン残基を有するように修飾された。
【００８３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルは、それぞれ２個以上の水溶性セグメントを有する叉状又は分枝構造である。
【００８４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルは、２個以上のＰＥＧセグメントを有する、分枝ＰＥＧ（ｂＰＥＧ）又は叉状ＰＥＧ（ｆＰＥＧ）である。
【００８５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記多環式Ｎ，Ｓ−複素環は（９ｂＳ）（９ｂＨ）−２，３−ジヒドロチアゾロ［２，３−ａ］イソインドル−５−オンであり、Ｒ２はタンパク質又はペプチドである。
【００８６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ｂＰＥＧは、３から８個のポリマーセグメント−（ｂＰＥＧ）３−８を有する。
【００８７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ｂＰＥＧの前記セグメントの少なくとも１個は、アミンで活性化された末端を有する（Ｃ−［（ｂＰＥＧ）３−８］−（ＮＨ２）１−８）。
【００８８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ｂＰＥＧは、４個のポリマーセグメントを有し（Ｃ−［（ｂＰＥＧ）４］−（ＮＨ２）１−４）、前記セグメントの少なくとも１個は、アミンで活性化された末端を有する。
【００８９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記セグメントの少なくとも５０％は、アミンで活性化された末端を有する。
【００９０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ポリマーセグメントの少なくとも１個はキャップされている。
【００９１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約２００から約１００，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【００９２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約２００から約６０，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【００９３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約１０，０００から約４０，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【００９４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２はあらゆる場合においてＢ１ペプチド拮抗物質である。
【００９５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記Ｂ１ペプチド拮抗物質は配列番号２７−３５及び３８−６２から選択される。
【００９６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２は１つの場合においてＢ１ペプチド拮抗物質である。
【００９７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２は４つの場合のうち２つにおいてＢ１ペプチド拮抗物質である。
【００９８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２は４つの場合のうち３つにおいてＢ１ペプチド拮抗物質である。
【００９９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記各Ｂ１ペプチド拮抗物質は配列番号２７−３４及び３８−６２から独立に選択される。
【０１００】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｒ２は少なくとも１つの場合においてＢ１ペプチド拮抗物質以外の活性物質である。
【０１０１】
本発明の別の態様は、上記化合物のいずれかと医薬品賦形剤を含む薬剤組成物に関する。
【０１０２】
本発明の別の態様は、上記化合物のいずれかと医薬品賦形剤を含む薬剤組成物の送達に関する。前記投与は、非経口、経粘膜又は経皮的である。
【０１０３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記経粘膜は、経口、経鼻、肺、膣又は直腸である。
【０１０４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記非経口は、動脈内、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、眼内、眼か内又は頭蓋内である。
【０１０５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記投与は経口である。
【０１０６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ポリペプチド又はペプチドは、Ｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｘ−（ビオチン）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＴａｔ抑制ポリペプチド、生物学的及び薬剤的に許容されるその塩、異性体が存在する場合には、レトロインバーソ（ｒｅｔｒｏ  ｉｎｖｅｒｓｏ）アナログを含めて、その立体、光学及び幾何異性体、並びに薬剤として許容されるその塩及び溶媒和化合物を含む。ここで、Ｒは、カルボン酸又はアセチル基の残基を含み、ＸはＣｙｓ残基である。
【０１０７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、アミノチオール化合物を含む前記ポリペプチド又はペプチドは、Ｎ−アセチル−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−（ビオチン）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号６４）、Ｎ−アセチル−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−（ビオチン）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号６５）、Ｎ−アセチル−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｃｙｓ−（ビオチン）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号６６）、Ｎ−アセチル−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−（ビオチン）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号６７）、Ｎ−アセチル−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−（ビオチン）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号６８）、Ｎ−アセチル−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−（ビオチン）−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号６９）、Ｎ−アセチル−ＤＣｙｓ−ＤＬｙｓ−（ビオチン）−ＤＡｒｇ−ＤＡｒｇ−ＤＡｒｇ−ＤＧｌｎ−ＤＡｒｇ−ＤＡｒｇ−ＤＬｙｓ−ＤＬｙｓ−ＤＡｒｇ−ＮＨ２から選択されるアミノ酸配列又は生物学的及び薬剤的に許容されるその塩を含む。
【０１０８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルは、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、アミノ酸ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、ＰＥＧとアミノ酸のコポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー及びＰＥＧ／チオリンゴ酸コポリマー又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０１０９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ポリマーは、約１００から約２００，０００ダルトンの分子量を有する。
【０１１０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ポリマーは、約２，０００から約５０，０００ダルトンの分子量を有する。
【０１１１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記間隔は約１００から約１０，０００ダルトンである。
【０１１２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記間隔は約３００から約５，０００ダルトンである。
【０１１３】
本発明の別の態様は、
（ａ）以下の式を有する少なくとも１個のビヒクルセグメントを含むビヒクルを用意する段階と、
Ｙ−Ｒ３
（式中、Ｙは求核基又は求電子基であり、Ｒ３はビヒクルである。）
（ｂ）以下の式を有する、１，２−若しくは１，３−アミノチオールに選択的な部分又はその保護された形態を含む分子と共有結合を形成するために、前記ビヒクル誘導体を反応させる段階と
を含む、１，２−又は１，３−アミノチオールに選択的なビヒクル誘導体を調製する方法に関する。
【０１１４】
【化５２】
2008531475.tif 000029
式中、Ａは、ｉ）（置換又は非置換の）ｓｐ３若しくはｓｐ２混成の２個の炭素（両方の炭素は、求電子基の両方のカルボキシルを連結する、環式又は非環式である。）、又はｉｉ）（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）炭素、（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）窒素若しくは（環式又は非環式の一部の）酸素から選択される３個の原子であり、Ｒ１はＨ及び電子吸引基から選択され、Ｒ２＝アルキルであり、ＸはＹが求核基であるときには求電子基であり、Ｙが求電子基であるときには求核基である。
【０１１５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは以下の式を有する構造である。
【０１１６】
【化５３】
2008531475.tif 000030
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは非環式である。
【０１１７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｆは炭素であり、Ｄはｉ）炭素、ｉｉ）酸素及びｉｉｉ）窒素から選択される。
【０１１８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｄは炭素であり、ＥはＸで置換された炭素、Ｘで置換された窒素、酸素、硫黄、Ｘで置換されたケイ素、Ｘで置換されたホウ素、結合、Ｘで置換された亜リン酸から選択され、又はｉｉ）酸素であり、Ｅは炭素、窒素、ケイ素、ホウ素及び結合から選択され、又はｉｉｉ）窒素であり、Ｅは炭素、窒素、酸素、ケイ素  硫黄、ホウ素及び結合から選択される。
【０１１９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ａは以下の式を有する構造である。
【０１２０】
【化５４】
2008531475.tif 000031
【０１２１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｆは炭素であり、Ｄはｉ）炭素、ｉｉ）酸素及びｉｉｉ）窒素から選択される。
【０１２２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｙは酸である。
【０１２３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｙはアミンである。
【０１２４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｙは第一級アミンである。
【０１２５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、９５％を超えるＹは、１，２−又は１，３−アミノチオールに選択的な部分と共有結合している。
【０１２６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記Ｒ３の少なくとも１個は、Ｈ、アルキル、Ｃ１−Ｃ１０直鎖アルキル、ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、ポリ−（アクリロイルモルホリン−）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）及びポリ（エチレンオキシド）から選択される。
【０１２７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルは、分枝構造、叉状構造、又は複数の腕を有する構造を有する。
【０１２８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、少なくともＲ３はＰＥＧである。
【０１２９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルは、約２００から約１００，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【０１３０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、方法は、前記セグメントの＞９５％が、アミンで活性化された末端を有するように、前記ビヒクルを精製する第１の段階をさらに含む。
【０１３１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記精製段階は、クロマトグラフィー分離又は化学的分離を含む。
【０１３２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記精製段階は、陽イオン交換クロマトグラフィーを含む。
【０１３３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記求核基は、第二級アミン、ヒドロキシ、イミノ又はチオールから選択される。
【０１３４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記求電子基は活性化エステルである。
【０１３５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記活性化エステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、スクシンイミジル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾイル、パーフルオロフェニル、クロロ−、ブロモ−、ヨードアルカンなどのアルキル化部分、メタンスルホニル−、トリフルオロメタンスルホニル−、ｐ−トルエンスルホニル−、トリクロロアセトイミダートなどの活性化アルコール及びトリフェニルホスホニウムエーテルなどのｉｎ  ｓｉｔｕ活性化アルコールから選択される。
【０１３６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、Ｙは、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニルオキシ、置換アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、置換アルキニルオキシ、アリールオキシ及び置換アリールオキシから選択される。
【０１３７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約５，０００から約６０，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【０１３８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約１０，０００から約４０，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【０１３９】
本発明の別の態様は、
（ａ）以下の式を有する少なくとも１個のビヒクルセグメントを含むビヒクルを用意する段階と、
Ｙ−Ｒ３
（式中、Ｙは求核基又は求電子基であり、Ｒ３はビヒクルである。）
（ｂ）以下の式を有する、１，２−若しくは１，３−アミノチオールに選択的な部分又はその保護された形態を含む分子と共有結合を形成するために、前記ビヒクル誘導体を反応させる段階と、
【０１４０】
【化５５】
2008531475.tif 000032
（式中、Ａは、ｉ）（置換又は非置換の）ｓｐ３若しくはｓｐ２混成の２個の炭素（両方の炭素は、求電子基の両方のカルボキシルを連結する、環式又は非環式である。）、又はｉｉ）（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）炭素、（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）窒素若しくは（環式又は非環式の一部の）酸素から選択される３個の原子であり、Ｒ１はＨ及び電子吸引基から選択され、ＸはＹが求核基であるときには求電子基であり、Ｙが求電子基であるときには求核基である。）
（ｃ）段階（ａ）及び（ｂ）から得られた主生成物を１，２−又は１，３−アミノチオールを含む活性物質又は基質と反応させる段階と
を含む、組成物を調製する方法に関する。
【０１４１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記活性物質はポリペプチド又はペプチドである。
【０１４２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、ペプチドはＢ１ペプチド拮抗物質である。
【０１４３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ペプチドは、配列番号２７−３５及び３８−４１から選択されるペプチドである。
【０１４４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ペプチドは、前記ペプチドのＮ末端にシステインをさらに含む配列番号１１−２６及び４３−４６から選択される。
【０１４５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記１，２−又は１，３−アミノチオールに選択的な部分は１，２−又は１，３−ホルミルエステルである。
【０１４６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記求電子基は酸である。
【０１４７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記求核基はアミンである。
【０１４８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記求電子基は第一級アミンである。
【０１４９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルセグメントは、ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、ポリ（アクリロイルモルホリン−）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、アミノ酸ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、ＰＥＧとアミノ酸のコポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー及びポリエチレングリコール／チオリンゴ酸コポリマー又はこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０１５０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、１３Ｃを含む活性化末端の１３Ｃ  ＮＭＲによって、又は１３Ｃを含まない活性化末端に対して現在利用可能な他の方法によって求めて、９５％を超える前記活性化末端は、１，２−又は１，３−アミノチオールに選択的な部分と共有結合していた。
【０１５１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルセグメントはポリ（エチレンオキシド）である。
【０１５２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ビヒクルセグメントはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
【０１５３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、線状構造、分枝構造（ｂＰＥＧ）、叉状構造（ｆＰＥＧ）又は複数の腕を有する構造を有する。
【０１５４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記分枝ＰＥＧは、３から８個のポリマーセグメントを有する（Ｃ−［ｂＰＥＧ３−８］）。
【０１５５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記セグメントの少なくとも１個は、アミンで活性化された末端を有する（Ｃ−［ｂＰＥＧ３−８］−（ＮＨ２）１−８）。
【０１５６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ｂＰＥＧは、４個のポリマーセグメントを有し（Ｃ−［ｂＰＥＧ４］−（ＮＨ２）１−４）、前記セグメントの少なくとも１個は、アミンで活性化された末端を有する。
【０１５７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記セグメントの末端の少なくとも５０％はアミンで活性化されている。
【０１５８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ポリマーセグメントの少なくとも１個はキャップされている。
【０１５９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約２００から約１００，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【０１６０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、方法は、９５％を超える前記セグメントが、アミンで活性化された末端を有するように、アミンで活性化された前記ビヒクルを精製する第１の段階をさらに含む。
【０１６１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記精製段階は、クロマトグラフィー分離又は化学的分離を含む。
【０１６２】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記精製段階は、陽イオン交換クロマトグラフィーを含む。
【０１６３】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記求核基は、第二級アミン、ヒドロキシ、イミノ又はチオールから選択される。
【０１６４】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記求電子基は活性化エステルである。
【０１６５】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記活性化エステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、スクシンイミジル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾイル、パーフルオロフェニル、クロロ−、ブロモ−、ヨードアルカンなどのアルキル化部分、メタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル−、トリクロロアセトイミダートなどの活性化アルコール及びトリフェニルホスホニウムエーテルなどのｉｎ  ｓｉｔｕ活性化アルコールから選択される。
【０１６６】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記キャップは、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニルオキシ、置換アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、置換アルキニルオキシ、アリールオキシ及び置換アリールオキシから選択される化学基を含む。
【０１６７】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記キャップは、放射性基、磁性基、比色定量（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）基又は蛍光性基をさらに含む。
【０１６８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約５，０００から約６０，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【０１６９】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ＰＥＧは、約１０，０００から約４０，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有する。
【０１７０】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記ポリペプチド又はペプチドは、ビタミン（例えば、ビオチン、葉酸、パントテン酸、Ｂ−６、Ｂ−１２）、糖（例えば、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン）、ケモカイン（例えば、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−２、ＯＰＧ）、ペプチド（又は非ペプチド）ベクター（例えば、Ｔａｔ、ｆＭＬＦ、ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ、ＶＥＧＦ、トランスフェリン）、レトロインバーソペプチド（例えば、ＲＩ  ＴＡＴ）、膜融合ペプチド（例えば、ｇｐ４１、ＶＥＧＦ）、脂質（又はリン脂質）（例えば、ミリスチン酸、ステアリン酸）、センス（又はアンチセンス）オリゴヌクレオチド（例えば、５−（１−ペンチル）−２’−デオキシウリジンを含むアプタマー）、酵素（例えば、ノイラミニダーゼ）、毒素、抗体（又は抗体断片）（例えば、ＣＤ４［標的ヘルパーＴ細胞］、ＣＤ４４［標的卵巣癌細胞］）、抗原（又はエピトープ）（例えば、インフルエンザウイルス赤血球凝集素）、ペプチドリガンド、ホルモン（例えば、エストロゲン、プロゲステロン、ＬＨＲＨ、ＡＣＴＨ、成長ホルモン）、接着分子（例えば、レクチン、ＩＣＡＭ）及びこれらのいずれかのアナログを含めて、但しこれらだけに限定されない、生物学的トランスポーター、受容体、細胞表面成分に結合する任意の部分であり得る結合リガンド又はターゲティングリガンドから選択される。
【０１７１】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、前記活性物質は、１，２−若しくは１，３−アミノチオール基を含み、又は誘導体化されて１，２−若しくは１，３−アミノチオール基を含む。
【０１７２】
本発明の別の態様は、化合物のペプチド又はタンパク質成分の生物活性に負の影響を及ぼす成分を含まない、治療又は診断用途に適切な化合物を特定する方法に関する。この方法は、本発明の化合物を調製し、該化合物の治療及び／又は診断上の部分の生物活性によって該化合物をスクリーニングすることを含む。
【０１７３】
本発明の特定の実施形態は、１，２−又は１，３−アミノチオールに選択的なビヒクル誘導体を調製する方法である。前記方法は、
（ａ）求核基又は求電子基で活性化された少なくとも１個の末端を有する少なくとも１個のビヒクルセグメントを含むビヒクルを用意する段階と、
（ｂ）一般式Ｉで定義される、１，２−若しくは１，３−アミノチオールに選択的な部分又はその保護された形態を含む分子と共有結合を形成させて、１，２−若しくは１，３−アミノチオールに選択的な末端又はその保護された形態を含むビヒクル誘導体を形成するために、前記ポリマーを反応させる段階と
を含む。
【０１７４】
【化５６】
2008531475.tif 000033
式中、Ａは、ｉ）（置換又は非置換の）ｓｐ３若しくはｓｐ２混成の２個の炭素（両方の炭素は、求電子基の両方のカルボキシルを連結する、環式又は非環式である。）、又はｉｉ）（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）炭素、（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）窒素若しくは（環式又は非環式の一部の）酸素から選択される３個の原子である。
【０１７５】
本発明の別の実施形態は、
（ａ）求核基又は求電子基で活性化された少なくとも１個のビヒクルセグメントを含むビヒクルを用意する段階と、
（ｂ）一般式Ｉで定義される、１，２−若しくは１，３−アミノチオールに選択的な部分又はその保護された形態を含む物質と共有結合を形成するために、前記ビヒクルを反応させる段階と（式中、Ａは、ｉ）（置換又は非置換の）ｓｐ３若しくはｓｐ２混成の２個の炭素（両方の炭素は、求電子基の両方のカルボキシルを連結する、環式又は非環式である。）、又はｉｉ）（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）炭素、（置換又は非置換の、環式又は非環式の一部の）窒素若しくは（環式又は非環式の一部の）酸素から選択される３個の原子である。）、
（ｃ）段階（ａ）及び（ｂ）の主生成物を１，２−又は１，３−アミノチオールを含む活性物質と反応させる段階と
を含む、組成物を調製する方法である。かかる方法は、一般に、下記反応スキーム１によって示すことができる。
【０１７６】
【化５７】
2008531475.tif 000034
Ｒ１＝Ｈ、アルキル、エチニル；Ｒ２＝アルキル、Ｒ３＝Ｈ、アルキル、ポリマー、生理活性種。
Ａ＝２又は３個の炭素原子；Ｂ＝２又は３個の原子、
Ｘ及びＹは、共有結合を形成することができる２個の基、すなわち、Ｘ＝求電子基及びＹ＝求核基である。
【０１７７】
上（反応スキーム１）で一般に示される反応は、ビヒクルが、多価のビヒクルを構成する複数の活性化ビヒクルセグメントを含む多価のビヒクルであるときに特に有利である。かかる場合においては、本発明の方法は、実際にポリマーの適切に活性化された（本明細書に定義する）各ビヒクルセグメントにおいて官能性を持った比較的純粋な複合物を高収率で効率的に生成する。一実施形態においては、複数の物質を単一の分枝ビヒクルと複合化することができる。非限定的例においては、本発明は、ペプチド拮抗物質と複合化された、複数の枝を有する生体適合性水溶性ポリマーを提供する。
【０１７８】
本発明と矛盾しない特徴及び原理によれば、種々の物質を、該物質の適切な反応基を介して、活性化ビヒクルと効率的に複合化することができる。かかる物質としては、生物活性物質又は診断薬が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１７９】
上記及び下記実施形態に関連して、本発明の別の実施形態においては、物質は、薬理活性を有する小分子化合物であり得る。或いは、物質は、元の型と同じ又は類似の生物活性を有するが、酵素による攻撃又は代謝酵素に対する低感受性などの他の望ましい特性も有する、生物活性ペプチドのレトロインバーソ型又は最適型であり得る。より具体的には、物質としては、抗体又は抗体断片が挙げられるが、これらだけに限定されない。適切な１，２−又は１，３−アミノチオール基を含む物質は、合成によって誘導することができ、又は特定の物質内に天然に存在し得る。したがって、物質は、１，２−若しくは１，３−基を有する物質又は１，２−若しくは１，３−基を有するように改変された物質であり得る。又は、物質は、修飾ペプチド、システイン含有生理活性物質など、１，２−若しくは１，３−アミノチオール基を有する化合物と複合化し得る。
【０１８０】
本発明の例示的一態様としては、２００５年９月２９日に米国特許出願公開第２００５／０２１５４７０号として公開された、２００４年１０月２１日に出願された係属中の米国特許出願第１０／９７２，２３６号に記載のビヒクル複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質（以後、「米国出願’２３６」）を含めて、但しこれだけに限定されない、ビヒクル複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質の製造方法が挙げられる。
【０１８１】
本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１個のビヒクル複合型物質が分散した、賦形担体材料を含む薬剤組成物を提供することである。
【０１８２】
本発明の別の目的は、賦形剤と、少なくとも１種類の本発明のビヒクル複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質、又は本発明の試薬及び方法を用いて製造された１種類のビヒクル複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質とを含む組成物の薬剤的に有効な量の投与を含む、Ｂ１媒介性疾患、症状又は障害を治療する方法を提供することである。
【０１８３】
本発明の新規ビヒクル複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質、並びに本発明の試薬及び方法を用いて製造されたビヒクル複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質は、炎症性及び神経障害性起源の炎症及び慢性痛状態、敗血症ショック、関節炎、骨関節炎、アンギナ、癌、ぜん息、アレルギー性鼻炎及び片頭痛を含めて、但しこれらだけに限定されない、米国出願’２３６に記載の癌及び疾患、症状又は障害を含めて、但しこれらだけに限定されない、多様なＢ１媒介性疾患、症状又は障害の治療又は予防に使用することができる。
【０１８４】
本発明のビヒクル複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質、又は本発明の試薬及び方法を用いて製造されたビヒクル複合型Ｂ１ペプチドは、当分野で公知の適切な薬剤担体材料と一緒に処方し、治療又は予防が必要なヒト（又は他の哺乳動物）などの患者に組成物の有効量を投与することによって、上記又は下記の疾患、症状及び／又は症状の治療又は予防に使用することができる。
【０１８５】
本発明のこれらの態様及び他の態様は、以下の図及び詳細な説明を考慮すれば明らかなはずである。
【０１８６】
本明細書において使用する項目名は、単なる構成上の目的のためにすぎず、記述する主題を限定するものと解釈すべきではない。特許、特許出願、記事、本及び論文を含めて、但しこれらだけに限定されない、本願で引用する全ての文献又は文献の一部を、参照によりその全体を本明細書に援用する。援用した文献の１つ以上が、本願における用語の定義と矛盾する用語を定義している場合には、本願を基準とする。
【０１８７】
定義
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成並びに抗体又は抗体断片の作製及び同定には標準技術を使用することができる。上記技術及び手順は、一般に、当分野で周知の従来法によって実施することができ、また、本明細書を通して引用及び考察する種々の一般的参考文献及びより具体的な参考文献に記載のように実施することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。特に定義しない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、医薬品化学及び製薬化学に関連して利用する命名法、その実験手順及び技術は、当分野で一般に使用される周知のものである。標準技術は、化学合成、ペプチド合成、化学分析、化学的精製、薬剤、処方、送達及び患者の治療に使用することができる。
【０１８８】
本願では、特段の記載がない限り、単数を使用するときには複数も含む。本願では、特段の記載がない限り、「又は」を使用するときには「及び／又は」を意味する。また、「含めて」という用語及び「含む」、「含まれる」などの他の形態の使用は、限定的なものではない。
【０１８９】
天然アミノ酸残基は、３通りの方法、すなわち、アミノ酸の完全な名称、標準の３文字表記、又は以下の表に従った標準の１文字表記で考察する。
【０１９０】
【表１】
2008531475.tif 000035
【０１９１】
ある実施形態においては、１個以上の非通常性（ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ）アミノ酸をポリペプチドに組み込むことができる。「非通常性アミノ酸」という用語は、通常の２０種類のアミノ酸の１種類ではない任意のアミノ酸を指す。「非天然アミノ酸」という用語は、天然には存在しないアミノ酸を指す。非天然アミノ酸は、非通常性アミノ酸の一サブセットである。非通常性アミノ酸としては、通常の２０種類のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−，α−二置換アミノ酸などの異常アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、ホモセリン、ホモシステイン、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン並びに当分野で公知の他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられるが、これらだけに限定されない。本明細書で使用するポリペプチド表記では、標準の用法及び慣行に従って、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシ末端方向である。特に明示しない限り、本明細書の天然又は非天然アミノ酸の名称は、アミノ酸のＤ異性体とＬ異性体の両方を包含するものとする。ある種の異常アミノ酸に対して本明細書で使用する追加の略語は、米国特許第５，８３４，４３１号、国際公開第９８／０７７４６号及びＮｅｕｇｅｂａｕｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．（２００２）に記載のものと同じである。さらに、略語「Ｄａｂ」及び「Ｄ−Ｄａｂ」は、異常アミノ酸Ｄ−２−アミノ酪酸のそれぞれＬ異性体及びＤ異性体を表すものとする。略語「３’−Ｐａｌ」及び「Ｄ−３’−Ｐａｌ」は、異常アミノ酸３’−ピリジルアラニンのそれぞれＬ異性体及びＤ異性体を表すものとする。また、略語「Ｉｇｌ」は、「Ｉｇｌａ」と「Ｉｇｌｂ」（それぞれ、α−（１−インダニル）グリシン及びα−（２−インダニル）グリシン）の両方を含むものとする。同様に，「Ｄ−Ｉｇｌ」は「Ｄ−Ｉｇｌａ」と「Ｄ−Ｉｇｌｂ」（それぞれα−（１−インダニル）グリシン及びα−（２−インダニル）グリシンの各Ｄ異性体）の両方を含むものとする。本明細書で使用するときには、ＩｇｌはＩｇｌｂであり、Ｄ−ＩｇｌはＤ−Ｉｇｌｂであることが好ましい。
【０１９２】
本明細書を通して使用する種々の他の略語のリストを以下に示す。
【０１９３】
【表２】
2008531475.tif 000036
2008531475.tif 000037
2008531475.tif 000038
【０１９４】
本開示に従って使用する以下の用語は、別段の記載がない限り、以下の意味を有すると理解すべきである。
【０１９５】
「活性物質」という用語は、任意の治療薬、生理活性物質及び／又は診断薬をその意味に含む。「Ｂ１」という用語は、ブラジキニンＢ１受容体を意味する（Ｊｕｄｉｔｈ  Ｍ  Ｈａｌｌ，  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ＢＫ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ｐｈａｒｍａｃ．  Ｔｈｅｒ．，  ５６：１３１−１９０（１９９２）参照）。特段の記載がない限り、Ｂ１又はブラジキニンＢ１受容体は、ヒトブラジキニンＢ１受容体（ｈＢ１）を意味するものとする。ｈＢ１は野生型受容体であることが好ましい。より好ましくは、ｈＢ１は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＪ２３８０４４に記載のブラジキニン受容体である。
【０１９６】
本発明の化合物は、一般に幾つかの不斉中心を有し得、典型的にはラセミ混合物の形で示される。本発明は、ラセミ混合物、部分ラセミ混合物、個々の鏡像異性体及びジアステレオマーを包含するものとする。
【０１９７】
別段の記載がない限り、以下の定義を、本明細書及び特許請求の範囲中の用語に適用する。
【０１９８】
「Ｃα−βアルキル」は、分枝、環式若しくは直鎖関係又はこれら３つの任意の組み合わせの、最小値αと最大値βの炭素原子を含むアルキル基を意味する。ここで、α及びβは整数である。このセクションに記載するアルキル基は、１又は２個の二重結合又は三重結合も含み得る。Ｃ１−６アルキルの例としては、以下のものが挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１９９】
【化５８】
2008531475.tif 000039
【０２００】
「Ｃα−βヘテロアルキル」は、アルキルの炭素原子のいずれかがＯ、Ｎ又はＳで置換されたＣα−βアルキルを意味する。Ｃ１−６ヘテロアルキルの例としては、以下のものが挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０２０１】
【化５９】
2008531475.tif 000040
【０２０２】
「脱離基」は、一般に、アミン、チオール、アルコール求核基などの求核基で容易に置換可能な基を指す。かかる脱離基は当分野で周知である。かかる脱離基の例としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ハロゲン化物、トリフラート、トシラートなどが挙げられるが、これらだけに限定されない。好ましい脱離基を必要に応じて本明細書に示す。
【０２０３】
「保護基」は、一般に、カルボキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプトなどの選択した反応基が、求核、求電子、酸化、還元などの望ましくない反応を起こすのを阻止するために使用される、当分野で周知の基を指す。好ましい保護基を必要に応じて本明細書に示す。アミノ保護基の例としては、アラルキル、置換アラルキル、シクロアルケニルアルキル及び置換シクロアルケニルアルキル、アリル、置換アリル、アシル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、シリルなどが挙げられるが、これらだけに限定されない。アラルキルの例としては、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、ニトロ、アシルアミノ、アシルなどで置換されていてもよい、ベンジル、オルト−メチルベンジル、トリチル及びベンズヒドリル並びにホスホニウム、アンモニウム塩などの塩が挙げられるが、これらだけに限定されない。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、インダニル、アントラセニル、９−（９−フェニルフルオレニル）、フェナントレニル、ズレニル（ｄｕｒｅｎｙｌ）などが挙げられる。シクロアルケニルアルキル又は置換シクロアルキレニルアルキル基の例は、好ましくは６−１０炭素原子を有し、シクロヘキセニル  メチルなどが挙げられるが、これらだけに限定されない。適切なアシル、アルコキシカルボニル及びアラルコキシカルボニル基としては、ベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、イソ−ブトキシカルボニル、ベンゾイル、置換ベンゾイル、ブチリル、アセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタロイルなどが挙げられる。保護基の混合物を使用して、同じアミノ基を保護することができる。例えば、第一級アミノ基をアラルキル基とアラルコキシカルボニル基の両方で保護することができる。アミノ保護基は、アミノ保護基が結合している窒素と一緒に複素環、例えば、１，２−ビス（メチレン）ベンゼン、フタルイミジル、スクシンイミジル、マレイミジルなどを形成することもできる。これらの複素環式基は、隣接アリール及びシクロアルキル環をさらに含むことができる。また、複素環式基は、ニトロフタルイミジルなど一、二又は三置換することができる。アミノ基は、塩酸塩、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの付加塩を形成することによって、酸化などの望ましくない反応に対して保護することもできる。アミノ保護基の多くは、カルボキシ、ヒドロキシ及びメルカプト基の保護にも適切である。例えば、アラルキル基。ｔｅｒｔ−ブチルなどのアルキル基も、ヒドロキシ及びメルカプト基を保護するのに適切な基である。
【０２０４】
シリル保護基は、１個以上のアルキル、アリール及びアラルキル基で置換されていてもよいケイ素原子である。適切なシリル保護基としては、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ジメチルフェニルシリル、１，２−ビス（ジメチルシリル）ベンゼン、１，２−ビス（ジメチルシリル）エタン及びジフェニルメチルシリルが挙げられるが、これらだけに限定されない。アミノ基をシリル化すると、モノ又はジシリルアミノ基が得られる。アミノアルコール化合物をシリル化すると、Ｎ，Ｎ，Ｏ−トリシリル誘導体を生成することができる。シリルエーテル官能基からのシリル官能基の除去は、例えば、金属水酸化物又はフッ化アンモニウム試薬を用いて、分離した反応段階として処理することによって、又はアルコール基との反応中にその場で処理することによって、容易に実施される。適切なシリル化剤は、例えば、塩化トリメチルシリル、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、塩化フェニルジメチルシリル、塩化ジフェニルメチルシリル又はこれらとイミダゾール若しくはＤＭＦとの組み合わせ生成物である。アミンのシリル化方法及びシリル保護基の除去方法は、当業者に周知である。これらのアミン誘導体を対応するアミノ酸、アミノ酸アミド又はアミノ酸エステルから調製する方法も、アミノ酸／アミノ酸エステル又はアミノアルコール化学反応を含めて、有機化学の当業者に周知である。
【０２０５】
保護基は、分子の残りの部分に影響を及ぼさない条件下で除去される。これらの方法は、当分野で周知であり、酸加水分解、水素化分解などが挙げられる。好ましい方法は、アルコール、酢酸、これらの混合物など適切な溶媒系中での炭素担持パラジウムを利用した水素化分解によるベンジルオキシカルボニル基の除去などの保護基の除去を含む。ｔ−ブトキシカルボニル保護基は、ジオキサン、塩化メチレンなどの適切な溶媒系中で、ＨＣｌ、トリフルオロ酢酸などの無機酸又は有機酸を利用して除去することができる。生成したアミノ塩を中和して遊離アミンを容易に得ることができる。メチル、エチル、ベンジル、ｔｅｒｔ−ブチル、４−メトキシフェニルメチルなどのカルボキシ保護基は、当業者に周知の加水分解及び水素化分解条件下で除去することができる。
【０２０６】
本発明の化合物は、以下の例で示す、環式及び非環式のアミジン及びグアニジン基、ヘテロ原子置換ヘテロアリール基（Ｙ’＝Ｏ、Ｓ、ＮＲ）などの互変異性型として存在し得る基を含み得ることに留意されたい。
【０２０７】
【化６０】
2008531475.tif 000041
【０２０８】
また、本明細書において１つの型の名称を挙げ、記述し、表示し、及び／又は特許請求の範囲に記載しても、全互変異性型が、かかる名称、記述、表示及び／又は特許請求の範囲に本質的に含まれるものであることに留意されたい。
【０２０９】
本発明の化合物のプロドラッグも本発明によって企図される。プロドラッグは、患者に投与した後に、加水分解、代謝などのインビボでの生理作用によって、本発明の化合物に化学的に改変される、活性化合物又は不活性化合物である。プロドラッグの製造及び使用に必要な適合性及び技術は、当業者に周知である。エステルを含むプロドラッグの考察全般については、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  ａｎｄ  Ｔｕｎｅｋ  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６５（１９８８）及びＢｕｎｄｇａａｒｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）を参照されたい。マスクされたカルボキシラート陰イオンの例としては、アルキル（例えば、メチル、エチル）、シクロアルキル（例えば、シクロヘキシル）、アラルキル（例えば、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル）、アルキルカルボニルオキシアルキル（例えば、ピバロイルオキシメチル）などの種々のエステルが挙げられる。アミンは、アリールカルボニルオキシメチル置換誘導体としてマスクされる。アリールカルボニルオキシメチル置換誘導体は、エステラーゼによってインビボで切断されて、遊離薬物とホルムアルデヒドを放出する（Ｂｕｎｇａａｒｄ  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２５０３（１９８９））。また、イミダゾール、イミド、インドールなどの酸性ＮＨ基を含む薬物は、Ｎ−アシルオキシメチル基でマスクされる（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５））。ヒドロキシ基は、エステル及びエーテルとしてマスクされる。ＥＰ  ０３９，０５１（Ｓｌｏａｎ  ａｎｄ  Ｌｉｔｔｌｅ，  ４／１１／８１）は、マンニッヒ塩基ヒドロキサム酸プロドラッグ、その調製及び使用を開示している。
【０２１０】
明細書及び特許請求の範囲は、「．．．及び．．．から選択される」及び「．．．又は．．．である」という言葉（マーカッシュグループと呼ばれることもある。）を用いる一連の種（ｓｐｅｃｉｅｓ）を含む。この言葉を本願において使用するときには、別段の記載がない限り、グループ全体、その任意の単一の構成要素、又はその任意のサブグループを含むものとする。この言葉の使用は単なる略記目的にすぎず、個々の要素又はサブグループを必要に応じて除外することを制限するものでは決してない。
【０２１１】
「診断薬」という用語は、インビボ又はインビトロで、特定の物質の有無を検出する方法、特定の物質の量を測定する方法及び／又は特定の物質を画像化する方法に関連して使用することができる、任意の化合物、組成物又は粒子をその意味に含む。
【０２１２】
本明細書では「単離ポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム、ｃＤＮＡ、合成由来のポリヌクレオチド又はこれらの組み合わせを意味するものとする。その起源によって、「単離ポリヌクレオチド」は、（１）「単離ポリヌクレオチド」が天然に存在するポリヌクレオチドの全部又は一部を伴わず、（２）自然には連結されないポリヌクレオチドと連結され、又は（３）より大きい配列の一部として天然に存在しない。
【０２１３】
「ポリマー」という用語は、非ペプチド構造単位の繰り返しからなる化学物質を意味する。本発明の一部の実施形態においては、ビヒクルは、ＰＥＧ、メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）などの水溶性ポリマーであり得る。
【０２１４】
「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、区別なく使用され、本明細書では、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドの重合体を意味する。ある実施形態においては、塩基は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、及びヌクレオチドのどちらかのタイプの改変体の少なくとも１個を含み得る。この用語は、一本鎖ＤＮＡ及び二重鎖ＤＮＡを含む。
【０２１５】
「天然ヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを含む。デオキシリボヌクレオチドとしては、アデノシン、グアニン、シトシン及びチミジンが挙げられるが、これらだけに限定されない。リボヌクレオチドとしては、アデノシン、シトシン、チミジン及びウラシルが挙げられるが、これらだけに限定されない。「修飾ヌクレオチド」という用語は、修飾又は置換された糖類を含むヌクレオチドなどを含むが、これらだけに限定されない。「ポリヌクレオチド結合」という用語は、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホルアニラダート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホロアミダート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｍｉｄａｔｅ）などのポリヌクレオチド結合を含むが、これらだけに限定されない。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １０６：６０７７（１９８４）；Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １６：３２０９（１９８８）；Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．  Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，  Ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．  米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）を参照されたい。ある実施形態においては、ポリヌクレオチドは検出用標識を含むことができる。
【０２１６】
ポリペプチド、ペプチド又はタンパク質に対して使用するときの「精製」という用語は、対象分子に天然に付随する細胞成分を本質的に含まない、すなわち、対象分子に天然に付随する細胞成分の約５０％未満、好ましくは約７０％未満、より好ましくは約９０％未満を含む、ポリペプチド、ペプチド及びタンパク質を意味するものとする。ポリペプチド、ペプチド及びタンパク質を精製する方法は当分野で周知である。
【０２１７】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、ペプチド結合又は修飾ペプチド結合によって互いに連結された２個以上のアミノ酸のポリマー、すなわち、ペプチドイソスターを各々指す。この用語は、天然アミノ酸を含むアミノ酸ポリマー、及び１個以上のアミノ酸残基が非天然アミノ酸又は天然アミノ酸の化学類似体であるアミノ酸ポリマーに適用される。ポリペプチド、ペプチド又はタンパク質は、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などの翻訳後プロセシングなど１つ以上の天然のプロセスによって修飾された１個以上のアミノ酸残基、及び／又は当分野で公知の１つ以上の化学修飾技術によって修飾された１個以上のアミノ酸残基を含み得る。
【０２１８】
基準ポリペプチドの「断片」とは、基準ポリペプチドの任意の部分からの連続したアミノ酸配列を指す。断片は、基準ポリペプチドの長さよりも短い任意の長さとすることができる。
【０２１９】
全てのポリペプチド、ペプチド及びタンパク質配列を、一般に容認されている慣習に従って記述する。Ｎ末端アミノ酸残基は左側であり、Ｃ末端は右側である。本明細書では、「Ｎ末端」という用語は、ペプチド中のアミノ酸の遊離アルファ−アミノ基を指し、「Ｃ末端」という用語は、ポリペプチド、ペプチド及びタンパク質中のアミノ酸の遊離アルファ−カルボン酸末端を指す。
【０２２０】
活性物質とビヒクル又は活性化ビヒクルとの化学反応の記述に本明細書で使用する「選択的」という用語は、ｉ）遊離アミン、アミン、グアニジン、ヒドロキシル及びカルボン酸を含めて、但しこれらだけに限定されない他の官能基を保護する必要がないように、また、ｉｉ）所望の複合物が反応生成物の少なくとも５０％を占めるように、規定された公知の様式で進行する化学反応を表す。
【０２２１】
基準ポリペプチドの「変異体」は、基準ポリペプチドに対して１個以上のアミノ酸の置換、欠失又は挿入を含むポリペプチドを指す。ある実施形態においては、基準ポリペプチドの変異体は、変化した翻訳後修飾部位（すなわち、グリコシル化部位）を有する。ある実施形態においては、基準ポリペプチドと基準ポリペプチドの変異体の両方が特異的結合物質である。ある実施形態においては、基準ポリペプチドと基準ポリペプチドの変異体の両方が抗体である。
【０２２２】
基準ポリペプチドの変異体としては、システイン変異体が挙げられるが、これだけに限定されない。ある実施形態においては、システイン変異体としては、基準ポリペプチドの１個以上のシステイン残基が１個以上の非システイン残基で置換された変異体、及び／又は基準ポリペプチドの１個以上の非システイン残基が１個以上のシステイン残基で置換された変異体が挙げられる。ある実施形態においては、システイン変異体は、未変性タンパク質よりも多いシステイン残基を有する。
【０２２３】
基準ポリペプチドの「誘導体」とは、（１）基準ポリペプチドの１個以上のアミノ酸残基の１つ以上の修飾を含むポリペプチド、及び／又は（２）１個以上のペプチジル結合が１個以上の非ペプチジル結合で置換されたポリペプチド、及び／又は（３）Ｎ末端及び／又はＣ末端が修飾されたポリペプチド、及び／又は（４）側鎖基が修飾されたポリペプチドを指す。ある種の例示的な修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、ビオチン化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル、共有結合性架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニン化などのトランスファー−ＲＮＡによって媒介されるタンパク質へのアミノ酸付加、及びユビキチン化が挙げられるが、これらだけに限定されない。ある実施形態においては、基準ポリペプチドと基準ポリペプチド誘導体の両方が特異的結合物質である。ある実施形態においては、基準ポリペプチドと基準ポリペプチド誘導体の両方が抗体である。ポリペプチドとしては、翻訳後プロセシングなどの天然のプロセスによって、又は当分野で周知の化学修飾技術によって、修飾されたアミノ酸配列が挙げられるが、これらだけに限定されない。ある実施形態においては、修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖及びアミノ又はカルボキシ末端を含めて、ポリペプチドのどこででも起こり得る。特定のかかる実施形態においては、修飾は、所与のポリペプチド中の幾つかの部位において同じ程度でも、異なる程度でも存在し得る。ある実施形態においては、所与のポリペプチドは、未変性配列の１個以上のアミノ酸の欠失、付加及び／又は置換などの多数の修飾タイプを含む。ある実施形態においては、ポリペプチドは分枝状及び／又は環状であり得る。環式、分枝及び分枝環式ポリペプチドは、（ユビキチン化を含めて、但しこれだけに限定されない）翻訳後の天然のプロセスから生成し得、又は合成方法によって製造され得る。
【０２２４】
「生物活性」又は「生理活性」という用語は、上記物質が、ポリペプチド、細胞、生物などの生体分子又は生物系との相互作用に対して生物学的効果をインビトロ又はインビボで発揮及び／又は惹起し得ることを意味する。生物活性を実証する方法としては、その多くが当分野で周知であるインビトロでのバイオアッセイなどが挙げられる。生物学的に活性な物質としては、治療薬が挙げられるが、これだけに限定されない。
【０２２５】
「治療薬」という用語は、患者における疾患の治療方法などの任意の治療用途に使用することができる任意の物質、組成物又は粒子をその意味に含む。したがって、治療薬は、患者における（疾病、苦痛、症状、疾患、障害、病変、外傷又は傷害を含めて、但しこれらだけに限定されない）任意の病理学的状態の（予防、軽減、とう痛緩和又は治癒を含めた）治療に使用することができる任意の化合物又は材料を含む。治療薬の非限定的例としては、薬剤、ビオチン、パントテン酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２などのビタミン、栄養素、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子などの核酸、アミノ酸、ポリペプチド、ペプチド、レトロインバーソ（ＲＩ）及びホルミル−メチオニルペプチド、酵素、ホルモン、成長因子、ケモカイン、抗体及びその断片、酵素補因子、ステロイド、炭水化物、脂質、ヘパリンなどの有機種、金属含有物質、受容体作動物質、受容体拮抗物質、結合タンパク質、受容体又は受容体の一部、細胞外基質タンパク質、細胞表面分子、接着分子、抗原、ハプテン、ターゲティング基（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）並びにキレート化剤が挙げられる。受容体という全表記は、２つ以上の形態が存在するときにはいつでも受容体の全ての形態を含む。
【０２２６】
治療薬の追加の非限定的例としては、インスリン、Ｔａｔ阻害剤（下記参照）などの抗ＨＩＶペプチド、成長ホルモン、インターフェロン、免疫グロブリン、副甲状腺ホルモン、カルシトニン、エンケファリン、エンドルフィン、薬物、薬剤、細胞毒性薬、化学療法剤、放射線治療薬、タンパク質、オリゴペプチド及びポリペプチドを含めた天然又は合成ペプチド、ビタミン、ステロイド並びにヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド及びプラスミドを含めた遺伝物質が挙げられる。このうち、薬物又は薬剤が好ましい。薬物又は薬剤の例としては、シメチジン、ファモチジン、ラニチジン、ロキサチジンアセタート、パントプラゾール、オメプラゾール、ランソプラゾール、スクラルファートなどの抗潰よう薬；臭化プロパンテリン、カミロフィン（アカミロフェニン）、ジサイクロミン、ヒヨスチンブチルブロマイド、メベベリン、シサプリド、オキシブチニン、臭化メチルピペンゾラート、ドロタベリン、メトクロプラミド、臭化クリジニウム、イソプロパミド、臭化オキシフェノニウムなどの腸弛緩剤（ｇｕｔ  ｒｅｌａｘａｎｔ）又は運動促進薬；パンクレアチン、パパイン、ペプシン、アミラーゼなどの酵素又は駆風薬；ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、Ｌ−オルニチン、シリマリンなどの肝胆道製剤；クロニジン、メチルドパ  ニトロプルシドナトリウム、テラゾシン、ドキサゾシン、（ＤＩ）ヒドララジン、プラゾシンなどの高血圧治療薬；エスモロール、セリプロロール、アテノロール、ラベタロール（ｌａｂｅｔｏｌｏｌ）、プロプラノロール、メトプロロール、カルベジロール、ソタロール、オクスプレノロール（ｏｘｙｐｒｅｎｏｌｏｌ）、ビソプロロールなどのベータ遮断薬；フェロジピン、ニトレンジピン、ニフェジピン、ベニジピン、ベラパミル、アムロジピン、ラシジピンなどのカルシウムチャネル遮断薬；エナラプリル、リシノプリル、ラミプリル、ペリンドプリル、ベナゼプリル、カプトプリルなどのＡＣＥ阻害薬；ロサルタンカリウムなどのアンジオテンシンＩＩ阻害剤；ニコランジルなどのカリウムチャネル賦活薬；ヒドロクロロチアジド、キシパミド、ブメタニド、アミロライド、スピロノラクトン、インダパミド、トリアムテレン、クロパミド、フロセミド、クロロサリドンなどの利尿薬及び抗利尿薬；二硝酸イソソルビド（ｉｓｏｓｃｏｒｂｉｄｅ）、オキシフェドリン、イソソルビド−５−モノニトラート、ジルチアゼム、四硝酸エリトリチル、トリメタジジン、リドフラジン、四硝酸ペンタエリトリット、三硝酸グリセリン、ジラゼプなどの抗狭心症薬；抱合卵胞ホルモン、ジオスミン、メナフトン、メナジオン、ヘモコアグラーゼ、エタンシラート（シクロナミン）、ルチン−フラボノイド、アドレノクロムモノセミカルバゾンなどの凝固剤；チクロピジン、ワルファリン、ストレプトキナーゼ、フェニンジオン、ｒｔｐａ、ウロキナーゼ、バソプレッシン、ニクマロン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、ムコ多糖体多硫酸エステル、ジピリダモールなどの抗凝固剤  抗血栓薬又は抗血小板薬；キニジン、ジソピラミド、プロカインアミド、リグノカイン（リドカイン）、メキシレチン、アミオダロン（ａｒｎｉｏｄａｒｏｎｅ）、アデノシン  プロパフェノンなどの抗不整脈薬；メフェンテルミン、ジゴキシン  ドーパミン、ドブタミン、ノルアドレナリンなどの心不全及びショックにおける薬物、イソクスプリン、ニコチン酸キサンチノール、塩酸ナイリドリン、ペントキシフィリン（オクスペンチフィリン（ｏｘｐｅｎｔｉｆｙｌｌｉｎｅ））、シクランデレートなどの血管拡張剤；デスラノシド（ｄｅｓｌａｎｅｓｉｄｅ）、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギタリンなどの強心配糖体；ベンジルペニシリン、プロカインペニシリン（Ｇ）、ベンザチンペニシリン（Ｇ）、フェノキシメチルペニシリン、ペニシリンＧ／Ｖ、バカンピシリン、カルベニシリン、ピペラシリン、アンピシリン、クロキサシリン、アモキシシリンなどのペニシリン；ナリジキシン酸、ペフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、ロメフロキサシンなどのキノロン又はフルオロキノロン、セフチゾキシム、セフロキシム、セフィキシム、セフォタキシム、セファクロル、セフトリアキソンナトリウム、セファドロキシル、セファレキシン、セファゾリン、セファロリジン、セフタジジム（ｃｅｆｔａｚｉｄｉｎｅ）、セフォペラゾン（ｃｅｆｏｒｐｅｒａｚｏｎｅ）などのセファロスポリン；スルホンアミド、スルファモキソール、スルファジメトキシン（ｓｕｌｐｈａｄｉｍｅｈｔｏｘｉｎｅ）、コトリファモル（ｃｏｔｒｉｆａｍｏｌｅ）、コトリモキサゾール、トリメトプリムなどのスルホンアミド、ゲンタマイシン、トブラマイシン、ネオマイシン、アミカシン、シソマイシン、カナマイシン、ネチルマイシンなどのアミノ配糖体、ポリミキシン−ｂ、硫酸コリスチンなどのポリミキシン；クロラムフェニコール；テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、デメクロサイクリン、オキシテトラサイクリンなどのテトラサイクリン；エリスロマイシン、クラリスロマイシン、バンコマイシン、リンコマイシン、アジスロマイシン、スピラマイシン、ロキシスロマイシン、クリンダマイシン、セフピロム、テイコプラニン（テイコマイシン（ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｉｎ）ａ２）などのマクロライド、アバカビル、ラミブジン、アシクロビル、アマンタジン、インターフェロン、リバビリン、スタブジン（ｓｔａｖｕｒｄｉｎｅ）、ラミブジン、ジドブジン（ＡＺＴ）などの抗ウイルス薬；キニーネ、プログアニル、クロロキン、プリマキン、アモジアキン（ａｎｏｄｉａｑｕｉｎｅ）、アルテメテル、アーテスネート、メフロキン、ピリメタミン、アルテエーテル、メパクリンなどの抗マラリア薬；サイクロセリン、カプレオマイシン、エチオナミド、プロチオンアミド、リファンピシン、イソニアジド、ピラチナミド、エタンブトールなどの抗結核薬；エタンブトール、ストレプトマイシン、ピラチナミド；ピペラジン、ニクロサミド、パモ酸ピランテル、レバミソール、ジエチルカルバマジン、テトラミソール、アルベンダゾール、プラジクアンテル、グルコン酸アンチモンナトリウム、メベンダゾール（ｍｅｎｂｅｎｄａｚｏｌｅ）などの駆虫薬＆抗感染薬；ダプソン、クロファジミンなどのハンセン病治療薬；チニダゾール、メトロニダゾール、ジロキサニドフロアート、セクニダゾール、ヒドロキシ��ノロン、デヒドロエメチン、オミダゾール（ｏｍｉｄａｚｏｌｅ）、フラゾリドンなどの抗嫌気性菌薬（ａｎｔｉａｎａｅｒｏｂｉｃ）、抗原虫薬又は抗アメーバ薬（ａｎｔｉａｍｏｅｂｉｃ）；フルコナゾール、ケトコナゾール、ハマイシン、テルビナフィン、エコナゾール、アンホテリシン−Ｂ、ニスタチン、クロトリマゾール、グリセオフルビン、ミコナゾール、イトラコナゾールなどの抗真菌薬；ビタミン；塩酸ドキサプラムなどの呼吸刺激薬；イソプレナリン、サルブタモール（アルブテロール）、オルシプレナリン、エフェドリン、硫酸テルブタリン、サルメテロール、アミノフィリン、テオフィリン（ｔｈｅｒｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、プロピオン酸フルチカゾンなどの抗喘息薬；テルフェナジン、アステミゾール、ロラタジン、クレマスチン、マレイン酸ジメチンデン（ｄｉｍｅｔｈｉｎｄｅｎｅ  ｍａｌｅｔａｔｅ）、塩酸フェキソフェナジン、ヒドロキシジン、クロルフェニラミン、マレイン酸アザタジン、メトジラジン、マレイン酸フェニラミン、ジフェンヒドラミン、セチリジン（ｃｅｔｒｉｚｉｎｅ）などの抗アレルギー薬；チザニジン  メトカルバモール、カリソプロドール、バレタメート、バクロフェン、クロルメザノン、クロルゾキサゾンなどの骨格筋弛緩薬；臭化オキシフェノニウム、臭化プロパンテリン、ジシクロミン（ｄｉｃｌｏｍｉｎｅ）、ヒヨスチンブチル（ｂｕｙｔｙｌ）ブロマイド、メベベリン、ドロタベリン、臭化クリジニウム、イソプロパミド、二塩酸カミロフィンなどの平滑筋弛緩薬；ナプロキセン、メフェナム酸、ニメスリド、ジクロフェナク、テノキシカム、イブプロフェン、メロキシカム、アスピリン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、ケトプロラック（ｋｅｔｏｐｒｏｌａｃ）、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、インドメタシン、ピロキシカムなどの非ステロイド性抗炎症薬；ナイトロジェンマスタード化合物（例えば、シクロホスファミド、トロホスファミド、イホスファミド（ｉｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メルファラン又はクロランブシル）、アジリジン（例えば、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ））、Ｎ−ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）誘導体（例えば、カルムスチン、ロムスチン又はニムスチン）、白金化合物（例えば、スピロプラチン、シスプラチン及びカルボプラチン）、プロカルバジン、ダカルバジン  メトトレキセート、アドリアマイシン、マイトマイシン、アンサマイトシン、シトシンアラビノシド、アラビノシルアデニン、メルカプトポリリジン、ビンクリスチン、ブスルファン、クロランブシル、メルファラン（例えば、ＰＡＭ、Ｌ−ＰＡＭ又はフェニルアラニンマスタード）、メルカプトプリン、ミトタン、塩酸プロカルバジン  ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、エピルビシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、ミトキサントロン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、アミノグルテチミド、リン酸エストラムスチンナトリウム、フルタミド、酢酸ロイプロリド、酢酸メゲストロール、クエン酸タモキシフェン、テストラクトン、トリロスタン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アスパラギナーゼ（Ｌ−アスパラギナーゼ）  エ���ウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）由来のアスパラギナーゼ、エトポシド（ＶＰ−１６）、インターフェロンａ−２ａ、インターフェロンａ−２ｂを含めて、但しこれらだけに限定されないインターフェロン、テニポシド（ＶＭ−２６）、硫酸ビンブラスチン（ＶＬＢ）、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、パクリタキセル（タキソール）、メトトレキセート、アドリアマイシン、アラビノシル、ヒドロキシ尿素などの抗腫瘍薬；葉酸拮抗物質（例えば、アミノプテリン、メトトレキセート）、プリン及びピリミジン塩基の拮抗物質（例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、フルオロウラシル又はシタラビン）；アヘン安息香チンキ、コデイン、モルフィン、アヘン、アモバルビタール、アモバルビタールナトリウム、アプロバルビタール、ブトバルビタールナトリウム、抱水クロラール、エトクロルビノール、エチナメート、塩酸フルラゼパム、グルテチミド、塩酸メトトリメプラジン、メチプリロン、塩酸ミダゾラム、パラアルデヒド、ペントバルビタール、セコバルビタールナトリウム、タルブタール、テマゼパム、トリアゾラムなどの麻薬、オピエート又は鎮静薬；ブピバカイン、クロロプロカイン、エチドカイン、リドカイン、メピバカイン、プロカイン又はテトラカイン、ドロペリドール、エトミデート、クエン酸フェンタニルとドロペリドール、塩酸ケタミン、メトヘキシタールナトリウム、チオペンタールなどの局所又は全身麻酔薬；アトラクリウムメシラート、ガラミントリエチオダイド、臭化ヘキサフルオレニウム、ヨウ化メトクリン、臭化パンクロニウム、塩化スクシニルコリン、塩化ツボクラリン、臭化ベクロニウムなどの神経筋遮断薬、又は成長ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、エストラジオール、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、酢酸コルチゾン、デキサメタゾン、フルニソリド、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、酢酸フルドロコルチゾンなどのホルモン系の治療、アデノシンデアミナーゼ、アンプレナビル、アルブミン、ラロニダーゼ、インターフェロンアルファ−Ｎ３、塩酸パロノセトロン、ヒト抗血友病因子、ヒト第ＩＸ凝固因子、アレファセプト、アンホテリシンＢ、テストステロン、ビバリルジン、ダーベポエチンアルファ、タザロテン、ベバシズマブ、硫酸モルヒネ、インターフェロンベータ−ｌａ、第ＩＸ凝固因子、イ
ンターフェロンベータ−１ｂ、トシツモマブ及びＩ−１３１トシツモマブ、抗血友病因子、ソマトロピン（ｓｕｍａｔｒｏｐｉｎ）などのヒト成長ホルモン、Ａ型ボツリヌス毒素、エクセナチド、アレムツズマブ、ヒアルロン酸、アルシツモマブ（ａｃｒｉｔｕｍｏｍａｂ）、アルグルセラーゼ、ベータ−グルコセレブロシダーゼ、イミグルセラーゼ、タダラフィル、クロファラビン、コデインポリスチレクス（ｐｏｌｉｓｔｉｒｅｘ）、クロルフェニラミンポリスチレクス、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）Ｂ結合型［髄膜炎菌結合型］、コラーゲン、ガラガラヘビ多価免疫Ｆａｂ、ダプトマイシン、ヒアルロニダーゼ、ＣＭＶ免疫グロブリンＩＶ、ダウノルビシン、シタラビン、塩酸ドキソルビシン、塩酸エピナスチン、ロイプロリド、ラスブリカーゼ、エムトリシタビン、エタネルセプト、Ｂ型肝炎抗原、エポエチン（ｅｐｏｉｅｔｉｎ）アルファ、セツキシマブ、エストラジオール、クリンダマイシン、メシル酸ゲミフロキサシン、ウロフォリトロピン、インフルエンザウイルス抗原、塩酸デキサメチルフェニデート、ホリトロピンベータ、テリパラタイド、カルシトニン、コハク酸フロバトリプタン、エンフューヴィルタイド、硝酸ガリウム、ヒトソマトロピン、メシル酸イマチニブ、グルカゴン、塩酸メトホルミン、ホリトロピンアルファ、ドキセルカルシフェロール、アデフォビルジピボキシル、トラスツヅマブ、ヘタスターチ、インスリン及びインスリンアナログ、フォンウィルブランド因子、アダリムマブ、パーフレキサン、メカセルミン、インターフェロンアルファコン−１、骨形成タンパク質−２、エプチフィバチド、アルファ−インターフェロン、チモロール、パリフェルミン、アナキンラ、インスリングラルギン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、クラドリビン、ホスアンプレナビルカルシウム、エスゾピクロン、ルトロピンアルファ、ベタメタゾン、ＯｓｐＡリポタンパク質、ペガプタニブ、メチルフェニデート、メチルアミノレブリン酸（ａｍｉｎｏｌｅｙｕｌｉｎａｔｅ）、マイトマイシン、ゲムツズマブオゾガミシン、Ｂ型ボツリヌス毒素、ヒトＢ型肝炎免疫グロブリン、ガルスルファーゼ、塩酸メマンチン、シアノコバラミン、ネシリチド、ペグフィルグラスチム、オプレルベキン、フィルグラスチム、テクネチウム［９９ｍ  Ｔｃ］ファノレソマブ（ｆａｎｏｌｅｓｏｍａｂ）、ミトキサントロン、インスリンアスパルト、第ＶＩＩａ凝固因子、プロピオン酸クロベタゾール（ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）、Ｌ−アスパラギナーゼ、デニロイキンジフチトクス、アンレキサノクス、ニチシノン、ムロモナブ−ＣＤ３、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、バチルス  カルメット  ゲラン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）抗原、アリトレチノイン、ジフテリア、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、ポルフィマーナトリウム、性腺刺激ホルモン放出ホルモン拮抗物質、レパグリニド、肺炎球菌７価結合型、ジコノタイド、塩酸シプロフロキサシン、インジウムＩｎ  １１１カプロマブペンデタイド（ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、ソマトレム、モダフィニル、ドルナーゼアルファ、サマリウムＳＭ−１５３レキシドロナム、オメプラゾール、エファリツマブ、リバビリン及びアルファインターフェロン、レピルジン、ゲルベカプレルミン、インフリキシマブ、トレプロスチニルナトリウム、塩酸セベラマー、アブシキシマブ、レテプラーゼ、Ｒｈ０免疫グロブリン、リツキシマブ、インターフェロンアルファ−２ａ、塩化トロスピウム、塩酸フルオキセチン、合成ブタセクレチン、塩酸シナカルセット、バシリキシマブ、ペグビソマント、酢酸プラムリンチド、パリビズマブ、リン酸オセルタミビル、エルロチニブ（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ベキサロテン、ベキサロテン、抗胸腺細胞グロブリン、甲状腺刺激ホルモンアルファ、チログロブリン（Ｔｇ）、テネクテプラーゼ、インフルエンザ、ジフテリア、破傷風及び無細胞百日咳抗原、ジフテリア、破傷風トキソイド及び無細胞百日咳抗原、三酸化二ひ素、エムトリシタビン、ナタリズマブ、ボルテゾミブ、イロプロスト、アザシチジン、ネルフィナビル、フマル酸テノフォビルジソプロキシル、シドフォビル注射、ベルテポルフィン、ホミビルセン、インターフェロンアルファ−ｎ１、Ｒｈｏ［Ｄ］免疫グロブリン、ブロムフェナクナトリウム、リファキシミン、ドロトレコギンアルファ、オマリズマブ、ナトリウムオキシベート（ｓｏｄｉｕｍ  ｏｘｙｂａｔｅ）、ミグラスタット、オメプラゾール、ダクリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ゾニサミド、エタボン酸ロテプレドノール、トブラマイシン、ブロムヘキシン、カルボシステイン又はクラブラン酸、ドコサノール、パラセタモール、インターフェロンガンマ−１ｂ、アルテプラーゼ並びにテクネチウムＴｃ−９９アプシタイドが挙げられる。
【０２２７】
本発明の複合物中のビヒクルに連結された活性物質は、１，２−若しくは１，３−アミノチオール部分を有し、又は有するように改変され、或いは結合を形成する前に、本明細書に記載のその賞賛の（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）官能基を介してビヒクル誘導体と反応することができる式Ｉの基を有し、又は有するように改変される。反応性１，２−アミノチオールの例はアミノ酸システイン中に存在する。
【０２２８】
多くのタンパク質は、遊離システイン（ジスルフィド結合に関与しないシステイン）も、任意の他の反応性１，２−又は１，３−アミノチオール基も含まない。また、システイン１，２−アミノチオールは、生物活性に必要なので、ポリマーとの結合に適切ではない可能性がある。また、タンパク質は、ある種の活性な高次構造に折り畳む必要がある。活性な高次構造においては、システインの１，２−アミノチオールは、タンパク質内部に埋もれているので、接近することができない。さらに、活性に不要な、接近可能なシステイン１，２−アミノチオールでも、ポリマーとの結合を形成するには不適切な部位であり得る。活性にとって本質的ではないアミノ酸は「非必須」と称される。非必須システインは、活性部位に対するシステインの位置によってはポリペプチドがビヒクルとの複合化後に不活性になるので、不適当な複合化部位となり得る。
【０２２９】
タンパク質同様、多数の他の生物活性分子も、上記理由と同様の理由によって特定のビヒクルとの複合化に適切ではない反応性１，２−若しくは１，３−アミノチオールを有し、又は反応性１，２−若しくは１，３−アミノチオール基を含まないしたがって、本発明は、必要な又は望ましいときには、本発明のビヒクル誘導体と複合化し得る、生物活性物質への反応性１，２−又は１，３−アミノチオール基の導入を企図する。チオアミド部分を含む生物活性物質の例は、米国特許出願第０９／６２１，１０９号に記載されている。かかる化合物としては、ＵＣ７８１、Ｒ８２１５０、ＨＢＹ０９７、トロビリジン（ｔｒｏｖｉｒｉｄｉｎｅ）、Ｓ２７２０、ＵＣ３８及び２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオロ−４−チオチミジンが挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０２３０】
反応性チオール基又はチオアミド基は、当分野で周知の化学手段によって導入することができる。化学修飾は、ポリペプチド又は非ペプチド性分子と一緒に使用することができ、分子へのチオール単体の導入、又はより大きい基、例えばシステイン残基の一部としての導入を含む。システインを例えばＤＴＴで化学的に還元することによって、ポリペプチド中に遊離システインを生成することもできる。
【０２３１】
修飾前には未変性タンパク質中にアミノ酸残基が存在しなかった位置にアミノ酸残基を含むように修飾されたポリペプチドは、「変異タンパク質」と呼ばれる。システイン変異タンパク質を生成させるために、Ｎ末端非必須アミノ酸をシステインで置換することができる。リジン残基は活性な高次構造のタンパク質の表面に存在することが多いので、Ｎ末端リジンのシステインへの変異も適切である。また、当業者は、可能な変異部位を選択する際に、ポリペプチドの結合部位又は活性部位についてのあらゆる情報を利用することができる。当業者は、周知の組換えＤＮＡ技術を用いてシステイン変異タンパク質を生成させることもできる。未変性ポリペプチドをコードする核酸を、標準の部位特異的変異誘発によって、変異タンパク質をコードするように改変することができる。標準の変異誘発技術の例は、Ｋｕｎｋｅｌ，  Ｔ．Ａ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  Ｖｏｌ．  ８２，  ｐｐ．４８８−４９２（１９８５）及びＫｕｎｋｅｌ，  Ｔ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，  Ｖｏｌ．  １５４，  ｐｐ．３６７−３８２（１９８７）に記載されている。
【０２３２】
変性（ｎｏｎ−ｎａｔｉｖｅ）システインの導入部位候補としては、ポリペプチドのグリコシル化部位、Ｎ末端などが挙げられる。これらの例においては、グリコシル供与体は、１，２−又は１，３−アミノチオールを含むことができる。当業者は、活性物質上のセリン又はトレオニンにグリコシル基を付加することができる。
【０２３３】
或いは、変異タンパク質をコードする核酸を当分野で周知の技術によって化学的に合成することができる。ＤＮＡ合成装置を使用することができ、例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）から入手することができる。所望の変異タンパク質をコードする核酸は、動物系、昆虫系及び細菌系を含めて、種々の発現系において発現することができる。所望の変異タンパク質が生成した後、当業者は、変異タンパク質のバイオアッセイを実施し、変異タンパク質の活性を未変性ポリペプチドと比較することができる。変異タンパク質の相対活性が減少する場合でも、変異タンパク質から形成される複合物は特に有用であり得る。例えば、複合物は、生体系において、非複合型分子よりも溶解性が増大し、抗原性若しくは免疫原性が低下し、又はクリアランス時間が短縮され得る。
【０２３４】
「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書において同義で使用され、本質的に実質的にタンパク質である任意の化合物を意味する。しかし、ポリペプチド基は、幾らかの非ペプチド性要素を含み得る。例えば、グリコシル化ポリペプチド又は合成修飾タンパク質も定義に含まれる。
【０２３５】
本明細書では「有効量」及び「治療有効量」という用語は、ペプチド、ビヒクル複合型ペプチド、ＰＥＧ複合型ペプチドなどの生理活性物質に関連して使用するときには、所望の結果を生じるのに十分な量又は投与量を指す。ビヒクル複合型Ｂ１ペプチド及び／又はＰＥＧ複合型ペプチドＢ１拮抗物質においては、所望の結果は、例えば、炎症及び／又はとう痛の所望の減少であり得、又はＢ１の１つ以上の生物活性のレベルの観察可能な減少を維持することであり得る。より具体的には、治療有効量は、生物活性物質によるインビボでの治療を受けた対象において、問題となっている症状、例えば炎症又はとう痛に関連した臨床的に定義された病理過程の１つ以上を、ある時間抑制し、阻害し、又は防止するのに十分な生物活性物質の量である。有効量は、生物学的物質（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔ）に応じて変動し得る。有効量は、治療対象に関係する種々の要因及び状態並びに障害の重症度にも左右される。例えば、生物活性複合物をインビボで投与する場合には、患者の年齢、体重、健康などの要因、前臨床の動物実験（ａｎｉｍａｌ  ｗｏｒｋ）で得られた用量反応曲線及び毒性データなどを考慮する。生物活性複合物を細胞とインビトロで接触させる場合には、摂取量、半減期、用量、毒性などのパラメータを評価する種々のインビトロでの前臨床試験を計画することもある。所与の物質の有効量又は治療有効量は、当業者の能力の範囲内で十分に決定される。
【０２３６】
「薬理活性」という用語は、上記物質が、医学的パラメータ又は病態（例えば、とう痛）に影響を及ぼす活性を有すると判定されることを意味する。本発明のビヒクル複合型Ｂ１ペプチドに関連して、この用語は、Ｂ１によって誘導される、又はＢ１によって媒介される、疾患、障害又は異常な健康状態を典型的に指し、より具体的には炎症又はとう痛の拮抗作用を指す。
【０２３７】
「拮抗物質」、「阻害剤」及び「逆作動物質」という用語は（例えば、Ｒｉａｎｎｅ  Ａ．Ｆ．  ｄｅ  Ｌｉｇｔ，  ｅｔ．  ａｌ，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０００，  １３０，  １３１参照）、対象となる関連タンパク質の生物活性を遮断し、妨害し、抑制し、減少させ、又は何らかの方法で干渉する分子を指す。本発明の好ましい「Ｂ１ペプチド拮抗物質」は、Ｂ１活性のインビトロアッセイにおいて、Ｂ１に結合し、５００ｎＭ以下のＩＣ５０でＢ１を阻害する分子である。本発明のより好ましいＢ１ペプチド拮抗物質は、Ｂ１活性のインビトロアッセイにおいて、１００ｎＭ以下のＫｉで受容体と結合し、カルシウム流入などのＢ１媒介性機能を１００ｎＭ未満のＩＣ５０で阻害する分子である。本発明の最も好ましいＢ１ペプチド拮抗物質は、Ｂ１活性のインビトロアッセイにおいて、１０ｎＭ未満のＫｉと１０ｎＭ以下のＩＣ５０で、Ｂ１に結合し、Ｂ１を阻害する分子である。また、前記分子は、一般に容認されたインビボでの少なくとも１つのとう痛動物モデルで測定して、とう痛又は炎症を防止し、回復させ、若しくは消失させ、及び／又は浮腫、炎症若しくはとう痛のインビボ動物モデルにおいて生化学的攻撃を阻害する。
【０２３８】
さらに、本発明のペプチド又は複合型ペプチドの生理学的に許容される塩も本発明に包含される。本明細書では「生理学的に許容される塩」と「薬理学的に許容される塩」という句は区別なく使用され、薬剤として許容される（すなわち、温血動物の治療において有用である）ことが公知である塩、又は後日発見される塩を含むものとする。具体例は、酢酸塩；塩酸塩、臭化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；硫酸塩；クエン酸塩；酒石酸塩；グリコール酸塩；シュウ酸塩；塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、リンゴ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸などを含めて、但しこれらだけに限定されない無機酸及び有機酸の塩である。本発明の化合物がカルボキシ基などの酸性官能基を含むときには、適切な薬剤として許容される、カルボキシ基の陽イオン対は、当業者に周知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウム、第４級アンモニウム陽イオンなどが挙げられる。「薬理学的に許容される塩」の追加の例については、以下及びＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６：１（１９７７）を参照されたい。
【０２３９】
「保護基」は、一般に、カルボキシ−、アミノ−、ヒドロキシ−、メルカプト−などの選択した反応基が、求核、求電子、酸化、還元などの望ましくない反応を起こすのを阻止するために使用する、当分野で周知の基を指す。好ましい保護基を必要に応じて本明細書に示す。アミノ保護基の例としては、アリールアルキル−、置換アリールアルキル−、シクロアルケニルアルキル−及び置換シクロアルケニル−  アルキル−、アリル−、置換アリル−、アシル−、アルコキシカルボニル−、アリールアルコキシカルボニル−、シリル−などが挙げられるが、これらだけに限定されない。アリールアルキル−の例としては、ハロゲン、アルキル−、アルコキシ−、ヒドロキシル−、ニトロ−、アシルアミノ−、アシル−などで置換されていてもよい、ベンジル−、オルト−メチルベンジル−、トリチル−及びベンズヒドリル−並びにホスホニウム、アンモニウム塩などの塩が挙げられるが、これらだけに限定されない。アリール基の例としては、フェニル−、ナフチル−、インダニル−、アントラセニル−、９−（９−フェニルフルオレニル）−、フェナントレニル−、ズレニル−などが挙げられる。シクロアルケニルアルキル基又は置換シクロアルキレニルアルキル基の例は、好ましくは６−１０炭素原子を有し、シクロヘキセニル−、メチル−などが挙げられるが、これらだけに限定されない。適切なアシル、アルコキシカルボニル及びアラルコキシカルボニル基としては、ベンジルオキシカルボニル−、ｔ−ブトキシカルボニル−、イソ−ブトキシカルボニル−、ベンゾイル−、置換ベンゾイル−、ブチリル−、アセチル−、トリフルオロアセチル−、トリクロロアセチル−、フタロイル−などが挙げられる。保護基の混合物を使用して、同じアミノ基を保護することができる。例えば、第一級アミノ基をアリールアルキル基とアリールアルコキシカルボニル基の両方で保護することができる。アミノ保護基は、これらが結合している窒素と一緒に複素環、例えば、１，２−ビス（メチレン）ベンゼン、フタルイミジル−、スクシンイミジル−、マレイミジル−などを形成することもできる。これらの複素環式基は、隣接アリール及びシクロアルキル環をさらに含むことができる。また、複素環式基は、ニトロフタルイミジル−など一、二又は三置換することができる。アミノ基は、塩酸塩、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの付加塩を形成して、酸化などの望ましくない反応に対して保護することもできる。アミノ保護基の多くは、カルボキシ−、ヒドロキシル−及びメルカプト−基の保護にも適切である。例えば、アリールアルキル−基。ｔｅｒｔ−ブチルなどのアルキル基も、ヒドロキシ−及びメルカプト−基を保護するのに適切な基である。
【０２４０】
シリル保護基は、１個以上のアルキル（ａｌｋｙ−ｌ）、アリール（ａｒｙ−ｌ）及びアリールアルキル基で置換されていてもよいケイ素原子である。適切なシリル保護基としては、トリメチル−シリル、トリエチルシリル、トリ−イソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ジメチルフェニルシリル、１，２−ビス（ジメチルシリル）ベンゼン、１，２−ビス（ジメチルシリル）−エタン及びジフェニルメチルシリルが挙げられるが、これらだけに限定されない。アミノ基をシリル化すると、モノ又はジシリルアミノ基が得られる。アミノアルコール化合物をシリル化すると、Ｎ，Ｎ，Ｏ−トリ−シリル誘導体を得ることができる。シリルエーテル官能基からのシリル官能基の除去は、例えば、金属水酸化物又はフッ化アンモニウム試薬を用いて、分離した反応段階として処理することによって、又はアルコール基との反応中にその場で処理することによって、容易に実施される。適切なシリル化剤は、例えば、塩化トリメチルシリル、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、塩化フェニルジメチルシリル、塩化ジフェニルメチルシリル又はこれらとイミダゾール若しくはＤＭＦとの組み合わせ生成物である。アミンのシリル化方法及びシリル保護基の除去方法は、当業者に周知である。これらのアミン誘導体を対応するアミノ酸、アミノ酸アミド又はアミノ酸エステルから調製する方法も、アミノ酸／アミノ酸エステル又はアミノアルコール化学反応を含めて、有機化学の当業者に周知である。
【０２４１】
保護基は、分子の残りの部分に影響を及ぼさない条件下で除去される。これらの方法は、当分野で周知であり、酸加水分解、水素化分解などが挙げられる。好ましい方法は、アルコール、酢酸、これらの混合物など適切な溶媒系中での炭素担持パラジウムを利用した水素化分解によるベンジルオキシカルボニル基の除去などの保護基の除去を含む。ｔ−ブトキシ−カルボニル保護基は、ジオキサン、塩化メチレンなどの適切な溶媒系中で、ＨＣｌ、トリフルオロ酢酸などの無機酸又は有機酸を利用して除去することができる。生成したアミノ塩を中和して遊離アミンを容易に得ることができる。メチル、エチル、ベンジル、ｔｅｒｔ−ブチル、４−メトキシフェニルメチルなどのカルボキシ保護基は、当業者に周知の加水分解及び水素化分解条件下で除去することができる。保護基のより包括的な使用は、Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ（１９９９），  ”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．に記載されている。
【０２４２】
本発明は、１，２−又は１，３−アミノチオール基を有する、又は有するように改変された非保護標的物質（例えば、ポリペプチド、ペプチド又は有機化合物）と複合化する例外的な１，２−又は１，３−アミノチオール選択的試薬である新規ビヒクル誘導体を生成する新規化学的方法の確認に基づく。非常に特異的な反応によって、ビヒクル誘導体と標的活性物質の１，２−又は１，３−アミノチオール部分との共有結合が位置選択的に形成される。反応は、きわめて穏和な条件下でほぼ完全に終了するまで進行する。
【０２４３】
システイン含有断片とアルデヒド含有断片の化学選択的な反応によるタンパク質の合成は記述されているが（Ｌｉｕ，  Ｃ．−Ｆ．；Ｔａｍ，  Ｊ．Ｐ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １９９４，  １１６，．４１４９．  Ｌｉｕ，  Ｃ．−Ｆ．；Ｒａｏ，  Ｃ．；Ｔａｍ，  Ｊ．Ｐ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １９９６，  １１８，．３０７；Ｔａｍ，  Ｊ．Ｐ．；Ｍｉａｏ，  Ｚ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １９９９，  １２１，．９０１３．  Ｍｅｌｎｙｋ，  Ｏ．；Ｆｒｕｃｈａｒｔ，  Ｊ．−Ｓ．；Ｇｒａｎｄｊｅａｎ，  Ｃ．；Ｇｒａｓ−Ｍａｓｓｅ，  Ｈ．  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２００１，  ６６，  ４１５３）、本明細書に記載の化学的連結手法は、ペプチド、タンパク質又は有機化合物をビヒクルと複合化する方法として適用されていない。
【０２４４】
一実施形態においては、本発明は、１，２−又は１，３−アミノチオールがアルデヒドと化学選択的に反応してチアゾリンを形成する独特な能力に依拠する。チアゾリン窒素は、形成された後、動力学的にアミド結合を形成し易くなる。これは、チアゾリン窒素から除去されるエステルカルボニル５−又は６−原子を配置することによって実施される。また、本発明の新規化学反応は、一般に、単一の主要な種を生成し、所望の複合物の精製、分析及びキャラクタリゼーションが容易である。
【０２４５】
本発明の新規化学試薬及び方法は、複数のペプチドとビヒクルの複合物を生成する戦略に特に有効である。例えば、本発明の試薬及び方法を用いて、４種類のシステイン含有Ｂ１ペプチド拮抗物質を分枝多価ＰＥＧポリマー上に効率的に複合化した。本明細書に記載の試薬及び方法によって、複数のペプチドとＰＥＧの所望の複合物が高収率及び高純度で効率的に生成した。複数のペプチドとＰＥＧの種々の複合物は、活性が増大し（場合によってはｈＢ１  Ｋｉ＝１００ｐｍ）、循環半減期が劇的に延長され、ＰＥＧの量が減少して、ビヒクル１分子当たり単一のペプチドを有するペプチド複合物と比較して、かなり大きな曝露及び長期の効力をインビボで与える、許容される投与計画が可能となった。ビヒクル複合型Ｂ１ペプチドは、公知の非複合型Ｂ１ペプチド拮抗物質を上回るきわめて大きな治療上の利点が得られ、炎症及びとう痛を含めて、但しこれらだけに限定されないＢ１媒介性の疾患、症状又は障害の治療及び／又は予防に有用であり得る。
【０２４６】
本発明の方法において本発明の新規活性化ビヒクル誘導体を使用すると、特に多価ポリマー複合化戦略に関して、既知のポリマー複合化方法（例えば、国際公開第９５／０６０５８号、米国特許出願公開第２００３／００４０１２７号参照）を上回る多数の驚くべき予想外の利点が得られた。
【０２４７】
本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を記述するためのものにすぎず、限定的なものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることを理解されたい。
【０２４８】
本明細書に記載の目的及び方法によってビヒクルとの複合化が企図されるブラジキニンＢ１受容体結合性ペプチドとしては、本明細書に開示する新規Ｂ１結合性ペプチド拮抗物質、及び（その各々を参照によりその全体を援用する）以下の刊行物のいずれか１つに開示された任意のペプチドを含めて、但しこれらだけに限定されない、当分野で公知のＢ１ペプチド拮抗物質が挙げられるが、これらだけに限定されない：Ｒｅｇｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａ．，  ３４８：１−１０（１９９８）；Ｎｅｕｇｅｂａｕｅｒ，  Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｋｉｎｉｎ  Ｂ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｕｌｔｉ−ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．  Ｃａｎ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  ８０：２８７−２９２（２００２）；Ｓｔｅｗａｒｔ，  Ｊ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ，  Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：  ｐｒｅｓｅｎｔ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ４３：１５５−１６１（１９９９）；Ｓｔｅｗａｒｔ，  Ｊ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ３８２：３７−４１（２００１）；国際公開第９８／０７７４６号及び国際公開第２００５０４２０２７号及び米国特許第４，６９３，９９３号、同４，８０１，６１３号、同４，９２３，９６３号、同５，６４８，３３６号、同５，８３４，４３１号、同５，８４９，８６３号、同５，９３５，９３２号、同５，６４８，３３３号、同５，３８５，８８９号、同５，４４４，０４８号及び同５，５４１，２８６号。
【０２４９】
本発明による「官能化試薬」は、本発明に従ってビヒクルに官能性を持たせるようになされた試薬である。
【０２５０】
「官能化反応」は、ビヒクルが本発明に従って官能性を持つ反応である。官能化反応は、１つ以上の段階からなり得る。
【０２５１】
本明細書では「ビヒクル」という用語は、活性物質の分解を遅延させ、半減期を延長し、毒性を低下させ、免疫原性を低下させ、及び／又は生物活性を増大させる分子を指す。本発明に関連して有用であるビヒクルは、当分野で公知であり、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール及びデキストランが挙げられるが、これらだけに限定されない。種々のビヒクルが、例えば、米国特許第６，６６０，８４３号、国際公開第９９／２５０４４号及び国際公開第９８／０７７４６号、Ｌａｎｇｅｒ，  Ｒ．，  ”Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  ３３  ＡＣＣ．  ＣＨＥＭ．  ＲＥＳ．  ９４（２０００）並びにＬａｎｇｅｒ，  Ｒ．，  ”Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，”  １  ＭＯＬ．  ＴＨＥＲ．  １２（２０００），  Ｈａｉｓｃｈ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ  Ｔｉｓｓｕｅ，  ４４  ＨＮＯ  ６２４（１９９６）；Ｅｒｓｈｏｖ，  Ｉ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  Ｘ−Ｒａｙ  Ｃｏｎｔｒａｃｔ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ，  ２  ＭＥＤ．  ＴＥＫＨ．  ３７（１９９４）；Ｐｏｌｏｕｓ，  Ｉ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ａ  Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｆｉｌｍ，  １３４  ＶＥＳＴＮ．  ＫＨＩＲ．  ＩＭ．  ＩＩ  ＧＲＥＫ．  ５５（１９８５）に記載されている。ビヒクルの追加の例としては、ポリアミド−６がおそらく付加したＮ−ビニルピロリドン−メタクリル酸メチルコポリマー（Ｂｕｒｏｎ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｍｐａｔａｂｌｅ  Ｏｓｔｅｏｃｏｎｄｕｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ，  １６  ＣＬＩＮ．  ＭＡＴＥＲ．  ２１７（１９９４））、ポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）（Ｉｓｏｂｅ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｏｎｅ  Ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ，  ３２  Ｊ．  ＢＩＯＭＥＤ．  ＭＡＴＥＲ．  ＲＥＳ．  ４３３（１９９６））、メチルメタクリラート：メタクリル酸２−ヒドロキシエチルの７０：３０混合物（Ｂａｒ，  Ｆ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｃｏｍｐａｔａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｃｏａｔｉｎｇ，  ５２  Ｊ．  ＢＩＯＭＥＤ．  ＭＡＴＥＲ．  ＲＥＳ．  １９３（２０００））、ポリウレタンを含んでいていてもよい２−メタクリロイル−オキシエチルホスホリルコリン（Ｉｗａｓａｋｉ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｍｉ−Ｉｎｔｅｒｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｎｅｔｗｏｒｋｓ  ．．．，  ５２  Ｊ．  ＢＩＯＭＥＤ．  ＭＡＴＥＲ．  ＲＥＳ．  ７０１（２０００））、精製高グルロン酸アルギナート（ｇｕｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｌｇｉｎａｔｅ）などのアルギン酸カルシウム（Ｂｅｃｋｅｒ，  Ｔ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｌｇｉｎａｔｅ  Ｇｅｌ，  ５４  Ｊ．  ＢＩＯＭＥＤ．  ＭＡＴＥＲ．  ＲＥＳ．  ７６（２００１））、タンパク質ポリマー（例えば、Ｂｕｃｈｋｏ，  Ｃ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｒｏｕｓ，  Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｔｈｉｎ  Ｆｉｌｍｓ，  ２２  ＢＩＯＭＡＴＥＲＩＡＬＳ  １２８９（２００１）；ｃｆ．  Ｒａｕｄｉｎｏ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｖｅｓｃｉｃｌｅｓ  ．．．，  ２３１  Ｊ．  ＣＯＬＬＯＩＤ．  ＩＮＴＥＲＦＡＣＥ  ＳＣＩ．  ６６（２０００））、ポリビニルピロリドン、ポリメチルエチレン−グリコール、ポリヒドロキシ−プロピレングリコール、ポリプロピレン−グリコール及びオキシド、ポリメチルプロピレン−グリコール、ポリ−ヒドロキシプロピレンオキシド、直鎖及び分枝鎖ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコール及びモノメチルエーテル、モノセチルエーテル、モノ−ｎ−ブチルエーテル、モノ−ｔｅｒｔ−ブチル−エーテル及びそのモノオレイルエーテル、ポリ−アルキレングリコールとカルボン酸のエステル及びポリアルキレングリコールとアミンの脱水縮合物並びに他のポリアルキレンオキシド及びグリコール、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリビニルアルコール、ポリ（酢酸ビニル）、コポリマーポリ（酢酸ビニル−コ−ビニルアルコール）、ポリビニルオキサゾリドン、ポリ（ビニルメチル−オキサゾリドン）及びポリ（ビニルメチルエーテル）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリヒドロキシエチル−メタクリラート、ポリ（アクリルアミド）及びポリ（メタクリルアミド）、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（Ｎ−アセトアミドアクリル−アミド）及びポリ（Ｎ−アセトアミドメタクリルアミド並びにアミドの他のＮ−置換誘導体が挙げられる。
【０２５２】
ＰＥＧは、水溶性、非免疫原性、生体適合性材料である。ビヒクルとして使用したときに、付加物質に一般に付与されるＰＥＧの有用な諸性質としては、溶解性の改善、血流中の循環寿命の延長、プロテアーゼ及びヌクレアーゼに対する抵抗性、低免疫原性などが挙げられる。ＰＥＧの分子量は大きいので、過剰の非複合型ペプチド及び他の小さな不純物から最終複合物をきわめて容易に分離することができる。したがって、ＰＥＧ複合物は、制御された条件下で保存すると安定であり、診断アッセイに使用するのに好都合である。ＰＥＧのポリエーテル骨格は化学的に比較的不活性であるが、両端の第一級ヒドロキシル基は反応性であり、反応性物質との結合にそのまま利用することができる。これらのヒドロキシル基は、複合化目的で反応性のより高い官能基に常法に従って転換される。
【０２５３】
「活性化ビヒクル誘導体」、「活性化ビヒクル」、「官能性を持たせたビヒクル誘導体」及び「官能性を持たせたビヒクル」は、本明細書では区別なく使用され、少なくとも１個のビヒクルセグメントの末端に反応基を有するビヒクルを意味するものとする。同様に、「活性化ビヒクルセグメント」と「官能性を持たせたビヒクルセグメント」という句は本明細書では区別なく使用され、末端反応基を有するビヒクルセグメントを意味するものとする。
【０２５４】
ＰＥＧは、水溶性、非免疫原性、生体適合性材料である。ビヒクルとして使用したときに、付加物質に一般に付与されるＰＥＧの有用な諸性質としては、溶解性の改善、血流中の循環寿命の延長、プロテアーゼ及びヌクレアーゼに対する抵抗性、低免疫原性などが挙げられる。ＰＥＧの分子量は大きいので、過剰の非複合型ペプチド及び他の小さな不純物から最終複合物をきわめて容易に分離することができる。したがって、ＰＥＧ複合物は、制御された条件下で保存すると安定であり、診断アッセイに使用するのに好都合である。ＰＥＧのポリエーテル骨格は化学的に比較的不活性であるが、両端の第一級ヒドロキシル基は反応性であり、反応性物質との結合にそのまま利用することができる。これらのヒドロキシル基は、複合化目的で反応性のより高い官能基に常法に従って転換される（すなわち、「活性化される。）。
【０２５５】
「ビヒクル複合型活性物質」と「複合型活性物質」という句は本明細書では区別なく使用され、少なくとも１個の活性物質と、活性物質自体に、又は（活性物質に共有結合したペプチジル又は非ペプチジルリンカー（例えば、芳香族リンカー）を含めて、但しこれらだけに限定されないリンカーに共有結合した少なくとも１個のビヒクルセグメントを含むビヒクルとを含む複合物を意味するものとする。
【０２５６】
本発明の一部の実施形態においては、「ビヒクル複合型ペプチド」又は「複合型ペプチド」は、Ｎ末端システインを有する、又は有するように改変されたペプチドと、少なくとも１個のペプチドのＮ末端システイン残基と共有結合したビヒクルセグメントを含むビヒクルとを含む複合物を指す。他の実施形態においては、複合物は、少なくとも１個のペプチドと、ペプチドの残基と共有結合した、芳香族リンカーを含めて、但しこれだけに限定されない非ペプチジルリンカーと共有結合した少なくとも１個のビヒクルセグメントを含むビヒクルとを含む。
【０２５７】
本発明の一部の実施形態においては、「ＰＥＧ複合型ペプチド」は、Ｎ末端システインを有する、又は有するように改変された少なくとも１個のペプチドと、少なくとも１個のペプチドのＮ末端システイン残基と共有結合したＰＥＧセグメントを含むＰＥＧとを含む複合物を指す。他の実施形態においては、複合物は、少なくとも１個のペプチドと、少なくとも１個のペプチドの残基と共有結合した、芳香族リンカーを含めて、但しこれだけに限定されない非ペプチジルリンカーと共有結合した少なくとも１個のＰＥＧセグメントを含むＰＥＧとを含む。
【０２５８】
上記及び下記実施形態に関連して、別の実施形態においては、複合型ペプチドは、Ｎ末端システインを有するようにさらに改変された配列番号１１−２３及び４３−４６から選択されるペプチドのＮ末端システイン残基と共有結合したビヒクルセグメントを含むビヒクルを含む。
【０２５９】
本発明の一部の実施形態においては、ビヒクルは、約１００から約２００，０００ダルトンの見かけ平均分子量、又は約１００から約１００，０００ダルトンの見かけ平均分子量、又は約５，０００から約１００，０００ダルトンの見かけ平均分子量、又は約１０，０００から約６０，０００ダルトンの見かけ平均分子量、又は約１０，０００から約４０，０００ダルトンの見かけ平均分子量、又は約２０，０００から約４０，０００ダルトンの見かけ平均分子量を有し得る。
【０２６０】
活性化ビヒクル上の反応基は、さほど有害な結果をもたらさずに所望の複合物の種々の成分を結合させることができる反応に関与し得る幾つかの部分のいずれかであり得る。非限定的例としては、酸、エステル、チオール、アミン又は第一級アミンが挙げられるが、これらは本発明の単なる説明のためのものに過ぎない。重要なことには、ビヒクル又はビヒクルセグメントと、それと複合化された所定の活性物質のいずれかとの間で形成される共有結合は、比較的安定（ｎｏｎ−ｌａｂｉｌｅ）であるべきである。
【０２６１】
典型的には、活性化ビヒクルは線状であり、したがって最高２個の官能基（すなわち、各末端に１個）の容量しか持たない。これによって、複合化の数がちょうど２に制限されることは明白である。同じビヒクル分子と複数の活性物質が結合するための複数の反応基を有するビヒクルが好ましい状況もある。本発明の方法は、所望の多価ビヒクル上の比較的正確な数の官能基を与える複合化戦略の設計に非常に役立つ。
【０２６２】
本発明の特定の実施形態においては、ビヒクルは、両末端が活性化された線状ビヒクル、１個を超える活性化ビヒクルセグメントを有する叉状ビヒクル、及び１個を超える活性化ビヒクルセグメントを有する分枝ビヒクルを含めて、但しこれらだけに限定されない多価ビヒクル分子であり得る。本発明の一部の実施形態においては、ビヒクルは、両末端が活性化された線状ＰＥＧ、１個を超える活性化ビヒクルセグメントを有する叉状ＰＥＧ（ｆＰＥＧ）、及び１個を超える活性化ビヒクルセグメントを有する分枝ＰＥＧ（ｂＰＥＧ）を含めて、但しこれらだけに限定されない多価ＰＥＧであり得る。
【０２６３】
本発明の特定の実施形態においては、アミンで誘導体化されたビヒクル、又は少なくとも１個がアミンで誘導体化された複数のビヒクルセグメントを含むビヒクルを、１，２−又は１，３−ホルミルエステルと反応させて、本発明のビヒクル複合物を製造する。
【０２６４】
本発明は、本明細書に記載する具体的な実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際、上記説明及び添付の図から、本明細書に記載する形態に加えて本発明の様々な改変形態が当業者には明らかになるはずである。かかる改変形態も、添付した特許請求の範囲内にあるものとする。
実施例
実験全般
ＮＭＲ：ＰＥＧ含有分子のプロトンＮＭＲは、ＰＥＧ一重線（ＤＳＳのＤ２Ｏ溶液に対して３．７ｐｐｍ）を基準にした。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、ＰＥＧ一重線（ＤＳＳのＤ２Ｏ溶液に対して７２．０ｐｐｍ）を基準にした。
【０２６５】
ＦＴＭＳデータは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｑ−ＦＴＭＳを７テスラで操作して取得した。この装置は、ＰＥＧ３００／６００溶液を用いて標準Ｆｒａｎｃｅｌ式によって外部で較正された。各較正物質イオンの計算質量誤差は、測定値から１．０ｐｐｍ未満であった。各スペクトルに対して、検出掃引幅１．２５ＭＨｚ（質量カットオフ８６Ｄａ）で５１２ｋのデータポイントを収集した。時間領域データを、マグニチュードモードフーリエ変換を実行する前には処理しなかった。
【０２６６】
ＧＣ−ＭＳデータをＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  ＧＣ−Ｍｓによって以下のパラメータで記録した。
【０２６７】
カラム：Ｊ及びＷ  ＤＢ−ＸＬＢキャピラリーカラム、３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．５０μＭ、ＰＮ  １２２１２３６。
【０２６８】
方法１：
インジェクターパラメータ：インジェクター温度＝２５０℃；スプリット比５０：１；ヘリウム流量＝１ｍＬ／ｍｉｎ。
【０２６９】
ＧＣパラメータ：初期温度＝８０℃；８０℃で０から２分間保持；２から１４分間で２００℃に昇温；２００℃で５分間保持。０．５分間再平衡。
【０２７０】
質量分析計移送温度（Ｍａｓｓ  ｓｐｅｃ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）＝２８０℃。
【０２７１】
質量スペクトルパラメータ：スキャン５０から５５０ａｍｕ、ＥＩ電圧＝２３７６．５ｍＶ。
【０２７２】
方法２：
インジェクターパラメータ：インジェクター温度＝２５０℃；スプリット比５０：１；ヘリウム流量＝１ｍＬ／ｍｉｎ。
【０２７３】
ＧＣパラメータ：初期温度＝１４０℃；１４０℃で０から２分間保持；２から１１分間で３２０℃に昇温；３２０℃で１分間保持。０．５分間再平衡。
【０２７４】
質量分析計移送温度＝２８０℃。
【０２７５】
質量スペクトルパラメータ：スキャン５０から５５０ａｍｕ、ＥＩ電圧＝２３７６．５ｍＶ
方法３：
インジェクターパラメータ：インジェクター温度＝２５０℃；スプリット比５０：１；ヘリウム流量＝１ｍＬ／ｍｉｎ。
【０２７６】
ＧＣパラメータ：初期温度＝７０℃；０から２分間；１０℃／ｍｉｎで９０℃に昇温；２０℃／ｍｉｎで３２０℃に昇温；３２０℃で４．５分間保持。０．５分間再平衡。
【０２７７】
質量分析計移送温度＝２８０℃。
【０２７８】
質量スペクトルパラメータ：スキャン５０から５５０ａｍｕ、ＥＩ電圧＝２３７６．５ｍＶ
ペプチドをＳｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ  ”Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（１９８４）に記載の標準ＦＭＯＣ法によって合成した。ペプチド合成の当業者は、記述したペプチドを手操作又は自動の固相方法によって合成することができるはずである。
【０２７９】
化学発光検出（ＣＬＮＤ）を用いたＨＰＬＣによるペプチド含有量：
溶媒系：Ａ＝０．０４％ＴＦＡ水溶液、Ｂ＝０．０４％ＴＦＡの９０％メタノール溶液。
【０２８０】
カラム：Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ１８  ３００Å、５０×２．０ｍｍカラム、粒径５μｍ。
【０２８１】
ＣＬＮＤ：Ａｎｔｅｋ  ８０６０、オーブン温度１０４８℃、検出器を高感度及びアテニュエーション１で運転した。
【０２８２】
ＨＰＬＣ：ＨＰ  １１００  ＬＣ、ダイオードアレイ検出器
勾配：１０分間で１０％Ｂから１００％Ｂとし、２分間保持し、４分間再平衡にする。
【０２８３】
流量及びスプリット：全流量は０．３ｍｌ／ｍｉｎであった。これを、ＣＬＮＤと排液の間でＴ字管で約２：１に分割した。
【０２８４】
分取逆相ＨＰＬＣ：
システム：２台のＡｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００分取ポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００分取自動インジェクター、５−２０ｍＬ試料ループを備えたＲｈｅｏｄｙｎｅ手動インジェクター、Ａｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００多波長検出器（２１５及び２５４ｎｍに設定）及びＡｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００自動フラクションコレクター。
【０２８５】
ソフトウエア：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ。
【０２８６】
溶媒系：
１：Ａ＝１０ｍＭギ酸ＮＨ４水溶液（ｐＨ＝３．７５）；Ｂ＝アセトニトリル。
２：Ａ＝０．１％酢酸水溶液  Ｂ＝０．１％酢酸のアセトニトリル溶液。
３：Ａ＝１０ｍＭ炭酸水素ＮＨ４（ｐＨ１０）水溶液；Ｂ＝アセトニトリル。
【０２８７】
カラム：
１：Ｖｙｄａｃ／Ｔｈｅ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｇｒｏｕｐによって充填されたＷａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＭＳ、５０ｍｍ×３００ｍｍ（ＰＮ  ＰＡ００００−０５０７３０）、粒径１０μｍ、球状。
２：３０×１００ｍｍ  Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ、孔径１００Å、粒径５μｍ、球状、ＰＮ  １８６００１９４２。
【０２８８】
勾配表：
【０２８９】
【表３】
2008531475.tif 000042
2008531475.tif 000043
【０２９０】
分取陽イオン交換ＬＣ：
システム及びソフトウエア：分取ＨＰＬＣの場合と同じ。
【０２９１】
溶媒：
１：Ａ＝１０ｍＭホウ酸の５：４０：５５  ＭｅＯＨ−アセトニトリル−水溶液；Ｂ＝Ａ＋０．２Ｍ  ＫＣｌ。
【０２９２】
カラム：
１：Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫ  Ｇｅｌ  ＳＰ−５ＰＷ−ＨＲ、ＰＮ  ４３３８２、５０×２５０ｍｍガラスカラムに充填された２０μｍ粒子（Ｈｏｄｇｅ  Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．  Ｐ／Ｎ＝ＴＡＣ５０／２５０Ｓ２−ＳＲ−１）。層の長さの測定値＝１８０ｍｍ。
２：２１．５×１５０ｍｍ  ＴＳＫ  Ｇｅｌ  ＳＰ−５ＰＷ、ＰＮ  ０７５７５。
【０２９３】
勾配表：
【０２９４】
【表４】
2008531475.tif 000044
【０２９５】
実験の部
【０２９６】
【化６１】
2008531475.tif 000045
【０２９７】
試薬及び条件：ａ）ＢＢｒ３、−７８℃、ＣＨ２Ｃｌ２；ｂ）ＴＢＤＭＳＣｌ、ＤＭＦ、ＤＩＰＥＡ、ｒｔ；ｃ）ＣＨ２Ｃｌ２、カルボニルジイミダゾール、ｒｔ；ｄ）ＣＨ３ＯＨ、ＤＣＥ、ＭＷ、１００℃、２ｍｉｎ．；ｅ）ＮＢＳ、ＡＩＢＮ、ＣＣｌ４、還流；ｆ）ＡｇＮＯ３、Ｈ２Ｏ、ｉ−ＰｒＯＨ、ｒｔ、次いでＴＢＡＦ、ＤＣＭ；ｇ）ベンジル２−ブロモアセタート、Ｋ２ＣＯ３、アセトン、０℃；ｈ）２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン、１，２−ビス（トリメチルシリルオキシ）エタン、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル、２−ピリジルカルビノール、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃；ｉ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＥｔＯＡｃ；ｊ）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ＰＳ−カルボジイミド（Ａｒｇｏｎａｕｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＥｔＯＡｃ。
【０２９８】
４−ヒドロキシ−２−メチル安息香酸（２）。火炎で乾燥させた２５０ｍＬ三口丸底フラスコに４−メトキシ−２−メチル安息香酸（１）（５．０ｇ、３０．０８ｍｍｏｌ）及びＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）を添加した。反応物（ｒｅａｃｔｉｏｎ）を−７８℃に冷却し、添加漏斗から純粋なＢＢｒ３（５．７ｍＬ、６０．１７ｍｍｏｌ）を滴下して処理した。反応物を−７８℃で３０分間撹拌した。溶液温度を−１５℃に上昇させ、４時間撹拌した（−１５から−１０℃）。冷浴を除去した。反応物を室温で２０時間撹拌した。溶液を０℃に冷却し、エーテル（１５ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）でクエンチした（注意：水は激しい反応を起こすので、滴下した。）。二相混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。混合有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ３００ｇ、７０：３０へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．３１）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５１．１２（Ｍ−Ｈ）；Ｃ８Ｈ８Ｏ３の計算値：１５２．１５。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ２．５５（ｓ、３Ｈ）  ６．２９−６．７８（ｍ、２Ｈ）  ７．９０（ｄ、Ｊ＝９．４２Ｈｚ、１Ｈ）。
【０２９９】
４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−メチル安息香酸（３）。４−ヒドロキシ−２−メチル安息香酸（２）（４．２ｇ、２７．６０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）撹拌溶液に、ｔ−ＢＤＭＳＣｌ（１０．２ｇ、６７．６３ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間撹拌した。ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ（１４．０ｍＬ、８０．０５ｍｍｏｌ）を添加漏斗から滴下し、室温で２０時間撹拌した。最終ｐＨが３−４になるまで、反応物を１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４（７ｍＬ）でクエンチした。溶液をへキサン（４×１００ｍＬ）で抽出した。混合有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ３００ｇ、９０：９：１へキサン−アセトン−ＡｃＯＨ、Ｒｆ＝０．２８）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６７．１５（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１４Ｈ２２Ｏ３Ｓｉの計算値：２６６．１３。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．２４（ｓ、６Ｈ）  ０．９９（ｓ、９Ｈ）  ２．６１（ｓ、３Ｈ）  ６．６１−６．７８（ｍ、２Ｈ）  ７．９２−８．０６（ｍ、１Ｈ）。
【０３００】
（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−メチルフェニル）（１Ｈ−イミダゾル−１−イル）メタノン（４）。４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−メチル安息香酸（３）（５．８ｇ、２１．７７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）に溶解させ、１，１’−カルボニルジイミダゾール（４．２ｇ、２６．１２ｍｍｏｌ）をＮ２下室温で２０時間処理した。溶液をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈した。有機層を水（２×５０ｍＬ）、塩水（２×３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４を用いて脱水し、ろ過し、減圧濃縮して、標記化合物（７０：２９：１へキサン−アセトン−ＮＥｔ３、Ｒｆ＝０．１４）を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１７．１５（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１７Ｈ２４Ｎ２Ｏ３Ｓｉの計算値：３１６．４７。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．２５（ｓ、６Ｈ）  １．００（ｓ、９Ｈ）  ２．３９（ｓ、３Ｈ）  ６．７５（ｄｄ、Ｊ＝８．３８、２．１７Ｈｚ、１Ｈ）  ６．８１（ｄ、Ｊ＝１．８８Ｈｚ、１Ｈ）  ７．１３（ｓ、１Ｈ）  ７．３３（ｄ、Ｊ＝８．２９Ｈｚ、１Ｈ）  ７．４７（ｓ、１Ｈ）  ７．９２（ｓ、１Ｈ）。
【０３０１】
１３Ｃ−メチル４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−メチルベンゾアート（５）。オーブンで乾燥した２０ｍＬ  Ｃｏｎｉｃａｌ  Ｓｍｉｔｈ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ管に（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−メチルフェニル）（１Ｈ−イミダゾル−ｌ−イル）メタノン（４）（５．５ｇ、１７．３８ｍｍｏｌ）、ＤＣＥ（１０ｍＬ）、１３ＣＨ３ＯＨ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、２．２ｍＬ、５２．１３ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（０．８ｍＬ、５．２１ｍｍｏｌ）を添加した。管を密封し、Ｓｍｉｔｈ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて１００℃で２分間マイクロ波照射した。反応物を減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ３００ｇ、９５：５へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．６５）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８２．５（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１４１３ＣＨ２４Ｏ３Ｓｉの計算値：２８１．１５。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．２２（ｓ、６Ｈ）  ０．９８（ｓ、９Ｈ）  ２．５６（ｓ、３Ｈ）  ３．８５（ｄ、Ｊ＝１４６．７５Ｈｚ、３Ｈ）  ６．６２−６．７４（ｍ、２Ｈ）  ７．８６（ｄ、Ｊ＝８．８５Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３０２】
１３Ｃ−メチル４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−（ジブロモメチル）ベンゾアート（６）。１３Ｃ−メチル４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−メチルベンゾアート（５）（４．０ｇ、１４．２１ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（５０ｍＬ）撹拌溶液にＮ−ブロモスクシンイミド（７．６ｇ、４２．６４ｍｍｏｌ）及び２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（２．３ｇ、１４．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をＮ２下で１８時間加熱還流した（８３℃）。反応物を室温に冷却し、ろ過した。溶媒をろ液から減圧除去した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ３００ｇ、９０：１０へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．７８）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４０．２（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１４１３ＣＨ２２Ｏ３Ｓｉの計算値：４３９．２２。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．２８（ｓ、６Ｈ）  １．０１（ｓ、９Ｈ）  ３．９０（ｄ、Ｊ＝１４７．３１Ｈｚ、３Ｈ）  ６．８０（ｄｄ、Ｊ＝８．６７、２．４５Ｈｚ、１Ｈ）  ７．５８（ｄ、Ｊ＝２．４５Ｈｚ、１Ｈ）  ７．８３（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）  ８．１０（ｓ、１Ｈ）。
【０３０３】
１３Ｃ−メチル２−ホルミル−４−ヒドロキシベンゾアート（７）。１３Ｃ−メチル４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−（ジブロモメチル）ベンゾアート（６）（５．０ｇ、１１．３８ｍｍｏｌ）のｉ−ＰｒＯＨ（６０ｍＬ）撹拌溶液に硝酸銀（３．８６ｇ、２２．７７ｍｍｏｌ）水溶液（６ｍＬ）を添加した。生成した混合物をＮ２下で２０時間撹拌した。反応物をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、ＭｇＳＯ４を用いて脱水し、ろ過し、１Ｍフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムのＴＨＦ溶液（６．６ｍｌ、２２．７７ｍｍｏｌ）で処理した。Ｎ２下で３時間後、反応物を減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １２０ｇ、８０：２０へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．３３）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８２．２（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ８１３ＣＨ８Ｏ４の計算値：１８１．０５。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．９５（ｄ、Ｊ＝１４７．５０Ｈｚ、３Ｈ）  ７．０９（ｄｄ、Ｊ＝８．５７、２．７３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．４０（ｄ、Ｊ＝２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．９８（ｄ、Ｊ＝８．４８Ｈｚ、１Ｈ）  １０．６９（ｓ、１Ｈ）。
【０３０４】
１３Ｃ−メチル４−（２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−ホルミルベンゾアート（８）。１３Ｃ−メチル２−ホルミル−４−ヒドロキシベンゾアート（７）（１．５５ｇ、８．５６ｍｍｏｌ）をアセトン（２０ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却した。ベンジル２−ブロモアセタート（１．９ｍｌ、１１．９７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．４ｇ、１０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をＮ２下で０℃で１８時間撹拌した。反応物を水（５ｍＬ）でクエンチし、溶媒を減圧除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（４０ｍＬ）に分配した。層を分離させ、有機層を水（２×２０ｍＬ）、塩水（１×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４を用いて脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １２０ｇ、８５：１５へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．３５）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３０．１（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１７１３ＣＨ１６Ｏ６の計算値：３２９．０９。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．９５（ｄ、Ｊ＝１４７．６９Ｈｚ、３Ｈ）  ４．７７（ｓ、２Ｈ）  ５．２５（ｓ、２Ｈ）  ７．１５（ｄｄ、Ｊ＝８．６７、２．６４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３２−７．４３（ｍ、６Ｈ）  ７．９８（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）  １０．６８（ｓ、１Ｈ）。
【０３０５】
１３Ｃ−メチル４−（２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−（１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンゾアート（９）。１３Ｃ−メチル４−（２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−ホルミルベンゾアート（８）（２．１７ｇ、６．６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却した。２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（０．１５０ｍｌ、０．６６ｍｍｏｌ）、１，２−ビス（トリメチルシリルオキシ）エタン（２．４ｍｌ、９．８８ｍｍｏｌ）及びトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．１８０ｍｌ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃でＮ２下で１８時間撹拌した。溶液を２−ピリジルカルビノール（０．１２７ｍｌ、１．３２ｍｍｏｌ）でクエンチした。溶媒を減圧除去した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １２０ｇ、８０：２０へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．２２）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７４．１（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１９１３ＣＨ２０Ｏ７の計算値：３７３．１２。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．８８（ｄ、Ｊ＝１４７．１２Ｈｚ、３Ｈ）  ３．９７−４．０６（ｍ、Ｊ＝２．２６Ｈｚ、４Ｈ）  ４．７３（ｓ、２Ｈ）  ５．２４（ｓ、２Ｈ）  ６．６５（ｓ、１Ｈ）  ６．８８（ｄｄ、Ｊ＝８．６７、２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３０（ｄ、Ｊ＝２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３５（ｓ、５Ｈ）  ７．９１（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３０６】
２−（３−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−４−（１３Ｃ−メトキシカルボニル）フェノキシ）酢酸（１０）。１３Ｃ−メチル４−（２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−（１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンゾアート（９）（１．７２ｇ、４．６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ）撹拌溶液に炭素担持パラジウム１０％（１７０ｍｇ）を添加した。排気／窒素補充を３回繰り返して溶液を脱気した。最後の排気後、風船からのＨ２を使用して、最終排気分を充填（ｂａｃｋｆｉｌｌ）した。反応物をＨ２下室温で３時間撹拌した。溶液をセライトのパッドに通してろ過した。溶媒をろ液から減圧除去して、標記化合物（６０：４０へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．１１）を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）；２８４．３（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１２１３ＣＨ１４Ｏ７の計算値：２８３．０８。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．８９（ｄ、Ｊ＝１４７．１２Ｈｚ、３Ｈ）  ４．０６（ｓ、４Ｈ）  ４．７５（ｓ、２Ｈ）  ６．６５（ｓ、１Ｈ）  ６．９２（ｄｄ、Ｊ＝８．７６、２．７３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３４（ｄ、Ｊ＝２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．９４（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３０７】
１３Ｃ−メチル４−（Ｎ−（スクシンイミドオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−（１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンゾアート（１１）。２−（３−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−４−（１３Ｃ−メトキシカルボニル）フェノキシ）酢酸（１０）（１．２１ｇ、４．２７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）溶液に１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（０．７４ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）及びＰＳ−カルボジイミド（Ａｒｇｏｎｕｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１．２９ｍｍｏｌ／ｇ）（４．６ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を密封し、室温で２０時間撹拌した。中間の多孔度の焼結ガラス漏斗を用いて溶液をろ過した。焼結ガラスを通してＮ２を１０分間バブリングさせることによって、樹脂をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）と一緒に撹拌した。ＥｔＯＡｃ溶液をろ過し、第１のろ液と混合した。樹脂を同じプロトコルによって２回洗浄した。混合ろ液を減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  １２０ｇ、７０：２９：１へキサン−アセトン−ＡｃＯＨ、Ｒｆ＝０．１４）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８１．２（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１６１３ＣＨ１７ＮＯ９の計算値：３８０．０９。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ２．８７（ｓ、４Ｈ）  ３．８９（ｄ、Ｊ＝１４７．１２Ｈｚ、３Ｈ）  ４．０２−４．１０（ｍ、Ｊ＝１．７０Ｈｚ、４Ｈ）  ５．０４（ｓ、２Ｈ）  ６．６７（ｓ、１Ｈ）  ６．９５（ｄｄ、Ｊ＝８．６７、２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３５（ｄ、Ｊ＝２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．９５（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３０８】
【化６２】
2008531475.tif 000046
【０３０９】
試薬及び条件：ａ）ｎ−ＢｕＬｉ、次いでクロロギ酸メチル；ｂ）トルエン、１７０℃；ｃ）ベンジルブロモアセタート、Ｋ２ＣＯ３、アセトン；ｄ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＥｔＯＡｃ。
【０３１０】
メチル４，４−ジエトキシブタ−２−イノアート（１３）。ジエトキシプロピン（Ａｌｄｒｉｃｈ、１０．９３ｇ、８５．３ｍｍｏｌ）のジエチレングリコール−ジメチルエーテル（１００ｍＬ）溶液をＮ２下で−３０℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（８１．０ｍｍｏｌ）を５分間滴下した。反応物を６時間インキュベートした。形成された陰イオンをクロロギ酸メチル（６．５ｍＬ、８４．１ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジエチレングリコール−ジメチルエーテル溶液に頭上で撹拌しながらドライアイス／アセトン浴中でＮ２下、カニューレ処置した。反応物を室温に終夜加温した。固体をアルミナ（エーテル２００ｍＬでリンスした塩基性アルミナ１００ｇ）のパッドによってろ過除去した。溶液をロータリーエバポレーターによって十分濃縮した（浴温＝３５℃）。固体を（エーテル５００ｍＬでリンスした）アルミナ（塩基性アルミナ１００ｇ）のパッドによってろ過除去した。溶液をロータリーエバポレーターによって十分濃縮した（浴温＝３５℃）。生成物を蒸留によって精製して（５７−６０℃で１ｍｍＨｇで沸騰させた画分）、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ：１．２４（ｄ、Ｊ＝１４．３２Ｈｚ、６Ｈ）  ３．５６−３．６８（ｍ、２Ｈ）  ３．６８−３．８３（ｍ、２Ｈ）  ３．７９（ｓ、３Ｈ）  ５．３６（ｓ、６Ｈ）。ＧＣ−ＭＳ：方法１：４．２２分間（ＥＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）＝１４１（Ｍ−ＯＥｔ）；Ｃ７Ｈ９Ｏ３＋の計算値：１４１）。
【０３１１】
メチル２−（ジエトキシメチル）−４−ヒドロキシベンゾアート（１６）。オーブン乾燥した５ｍＬ  Ｃｏｎｉｃａｌ  Ｓｍｉｔｈ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ管にメチル４，４−ジエトキシブタ−２−イノアート（０．２５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）（１３）、（Ｅ）−（４−メトキシブタ−１，３−ジエン−２−イルオキシ）トリメチルシラン（０．５２ｍｌ、２．７ｍｍｏｌ）（１２）、４−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジル）−２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール（０．１１ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及びトルエン（４ｍｌ）を添加した。管を密封し、１７０℃で２０時間加熱した。反応物を室温に冷却し、丸底フラスコに移し、１Ｍフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムのＴＨＦ溶液（０．７８ｍｌ、２．７ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を密封し、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧除去した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ４０ｇ、８０：２０へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．４２）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５５．２（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１３Ｈ１８Ｏ５の計算値：２５４．１２。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２３（ｔ、Ｊ＝７．０６Ｈｚ、６Ｈ）  ３．５３−３．６６（ｍ、２Ｈ）  ３．６６−３．７８（ｍ、２Ｈ）  ３．８７（ｓ、３Ｈ）  ５．５９（ｓ、１Ｈ）  ６．２６（ｓ、１Ｈ）  ６．８０（ｄｄ、Ｊ＝８．５７、２．７３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３０（ｄ、Ｊ＝２．６４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．８２（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３１２】
メチル４−（２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−（ジエトキシメチル）ベンゾアート（１７）。０℃のメチル２−（ジエトキシメチル）−４−ヒドロキシベンゾアート（０．５ｇ、２ｍｍｏｌ）（１６）のアセトン（１５ｍＬ）撹拌溶液にベンジル２−ブロモアセタート（０．４ｍｌ、３ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．３ｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をＮ２下で０℃で２０時間撹拌した。溶液を水（５ｍＬ）でクエンチし、溶媒を減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）と水（３０ｍＬ）に分配した。層を分離させ、有機層を水（２×２０ｍＬ）、塩水（１×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４を用いて脱水し、ろ過し、減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ４０ｇ、８５：１５へキサン−アセトン、Ｒｆ＝０．３５）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５５．２（Ｍ−ＥｔＯＨ）。Ｃ２２Ｈ２６Ｏ７の計算値：４０２．１７。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２１（ｔ、Ｊ＝６．９７Ｈｚ、６Ｈ）  ３．５３−３．６０（ｍ、２Ｈ）  ３．６２−３．７４（ｍ、２Ｈ）  ３．８７（ｓ、３Ｈ）  ４．７３（ｓ、２Ｈ）  ５．２４（ｓ、２Ｈ）  ６．２２（ｓ、１Ｈ）  ６．８６（ｄｄ、Ｊ＝８．６７、２．６４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３５（ｓ、６Ｈ）  ７．８３（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３１３】
２−（３−（ジエトキシメチル）−４−（メトキシカルボニル）フェノキシ）酢酸（１８）。メチル４−（２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−（ジエトキシメチル）−ベンゾアート（０．６５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）（１７）のＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）撹拌溶液にパラジウム（０．０５２ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。排気／窒素補充を３回繰り返して溶液を脱気した。最後の排気後、風船からのＨ２を使用して、最終排気分を充填した。反応物をＨ２下室温で３時間撹拌した。溶液をセライトのパッドに通してろ過した。溶媒を減圧除去して、標記化合物（７０：２９：１へキサン−アセトン−ＡｃＯＨ、Ｒｆ＝０．２１）を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１．１（Ｍ−Ｈ）。Ｃ１５Ｈ１９Ｏ７の計算値：３１１．１。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２２（ｔ、Ｊ＝６．９７Ｈｚ、６Ｈ）  ３．５１−３．６４（ｍ、２Ｈ）  ３．６４−３．７８（ｍ、２Ｈ）  ３．８８（ｓ、３Ｈ）  ４．７４（ｓ、２Ｈ）  ６．２４（ｓ、１Ｈ）  ６．９０（ｄｄ、Ｊ＝８．６７、２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３６（ｄ、Ｊ＝２．６４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．８６（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３１４】
メチル４−（Ｎ−（スクシンイミドオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−（１，３−ジオキソラン−２−イル）ベンゾアート（１９）。２−（３−（ジエトキシメチル）−４−（メトキシカルボニル）フェノキシ）酢酸（４５０ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）（１８）のＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）撹拌溶液にＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２４８ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）及びＰＳ−カルボジイミド（Ａｒｇｏｎａｕｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１．２９ｍｍｏｌ／ｇ）（１．５ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を密封し、室温で２０時間撹拌した。中間の多孔度の焼結ガラス漏斗を用いて溶液をろ過した。焼結ガラスを通してＮ２を１０分間バブリングさせることによって、樹脂をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）と一緒に撹拌した。ＥｔＯＡｃ溶液をろ過し、第１のろ液と混合した。樹脂を同じプロトコルによって２回洗浄した。混合ろ液を減圧濃縮した。粗生成物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＳｉＯ２  ４０ｇ、８０：１９：１へキサン−アセトン−ＡｃＯＨ、Ｒｆ＝０．３８）によって精製して標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６４．２３（Ｍ＋Ｈ−ＯＥｔ）。Ｃ１７Ｈ１８ＮＯ８＋の計算値：３６４．１。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２３（ｔ、Ｊ＝７．１６Ｈｚ、６Ｈ）  ２．８７（ｓ、４Ｈ）  ３．５４−３．７６（ｍ、４Ｈ）  ３．８７（ｓ、３Ｈ）  ５．０３（ｓ、２Ｈ）  ６．２３（ｓ、１Ｈ）  ６．９１（ｄｄ、Ｊ＝８．６７、２．８３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．４０（ｄ、Ｊ＝２．６４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．８６（ｄ、Ｊ＝８．６７Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３１５】
【化６３】
2008531475.tif 000047
試薬及び条件：ａ）アセトニトリル、２５℃；ｂ）ＤＣｌ、Ｄ２Ｏ。
【０３１６】
テトラキス−［ω−（４−アザ−５−オキソ−７−オキサ−７−（（３−（２，４−ジオキサシクロペンチル）−４−（１３Ｃ−メトキシ）カルボニル）ベンゼン）ヘプタン）−２．５ｋＤポリオキシエチレン］メタン２２。ＰＴＥ−１００  ＰＡ（ＮＯＦ  ｃｏｒｐ、５４７ｍｇ、約５２μｍｏｌ）を無水アセトニトリル２．５ｍＬに溶解させ、スクシナート１１（１００ｍｇ、２６０μｍｏｌ、５当量）で処理した。反応物を４０℃に７時間加熱した。反応物を室温に冷却し、１０ｍＭギ酸ＮＨ４（１０ｍＬ）で処理した。溶液をカラム１に詰め、実験全般の分取逆相ＨＰＬＣの項で規定した溶媒系１／勾配表１で溶出させた。２７．４−２８．８分で溶出したバンドを単離し、減圧濃縮してアセトニトリルを除去した。水溶液を０．２２μｍ遠心フィルター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＰＮ  ６６０６４−４６６）によって２５６０ｇでろ過し、ろ液を凍結乾燥させた。固体をＤ２Ｏ  ５ｍＬに溶解させ、凍結乾燥させて、生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  １．７８（ｐ、Ｊ＝６．６５Ｈｚ、２Ｈ）  ３．３５（ｔ、Ｊ＝６．４６Ｈｚ、２Ｈ）  ３．４５（ｔ、Ｊ＝６．２６Ｈｚ、２Ｈ）  ３．４８−３．５２（ｍ、２Ｈ）  ３．７０（ｓ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ）  ３．９０（ｄ、Ｊ＝１４９．０７Ｈｚ、３Ｈ）  ４．０９−４．１６（ｍ、４Ｈ）  ４．７１（ｓ、２Ｈ）  ６．５１（ｓ、１Ｈ）  ７．１２（ｄｄ、Ｊ＝８．６１、２．７４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３１（ｄ、Ｊ＝２．７４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．９７（ｄ、Ｊ＝８．６１Ｈｚ、１Ｈ）  ８．４０（ｓ、１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  ５５．０８（ｓ、４Ｃ）、７２．００（ｓ、５Ｃ）。
【０３１７】
テトラキス−［ω−（４−アザ−５−オキソ−７−オキサ−７−（（３−（２，４−ジオキサシクロペンチル）−４−（１３Ｃ−メトキシ）カルボニル）ベンゼン）ヘプタン）−５．０ｋＤポリオキシエチレン］メタン２３。ＰＴＥ−２００  ＰＡ（ＮＯＦ  ｃｏｒｐ、１．５５ｇ、約６４μｍｏｌ；分析証明書：４官能化（ｔｅｔｒａｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ）８３％）、スクシナート１１（１４７ｍｇ、３８６μｍｏｌ）及びアセトニトリル５ｍＬを４０℃に４時間加熱した。アセトニトリルを除去し、０．１％酢酸５ｍＬを添加した。溶液を３５℃に加熱して、溶解させた。溶液をカラム１（カラム外装及び溶媒を３５℃に加熱した。）に詰め、実験全般の分取逆相ＨＰＬＣの項で規定した溶媒系２／勾配表１で溶出させた。２２．８から２６分で溶出したバンドを減圧濃縮し、３５℃で減圧（１ｍｍＨｇ）乾燥させた。残渣をＤ２Ｏ  １０ｍＬに溶解させ、凍結乾燥させて、生成物を得た。固体は、１Ｈ  ＮＭＲによって２３と２５の６：１混合物であると同定された。２３の１Ｈ  ＮＭＲ。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  １．７８（ｐ、Ｊ＝６．０６Ｈｚ、２Ｈ）  ３．３５（ｔ、Ｊ＝６．６５Ｈｚ、２Ｈ）  ３．４５（ｔ、Ｊ＝６．２６Ｈｚ、２Ｈ）  ３．５０（ｓ、２Ｈ）  ３．７０（ｓ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ）３．９０（ｄ、Ｊ＝１４７．１２Ｈｚ、３Ｈ）  ４．０９−４．１６（ｍ、４Ｈ）  ４．７１（ｓ、２Ｈ）  ６．５１（ｓ、１Ｈ）  ７．１２（ｄｄ、Ｊ＝８．６１、２．７４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３１（ｄ、Ｊ＝２．７４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．９８（ｄ、Ｊ＝９．００Ｈｚ、１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  ５５．０８（ｓ、９．９８Ｃ）  ７２．００（ｓ、２．８４Ｃ）。
【０３１８】
テトラキス−［ω−（４−アザ−５−オキソ−７−オキサ−７−（（３−ホルミル−４−（１３Ｃ−メトキシ）カルボニル）ベンゼン）ヘプタン）−２．５ｋＤポリオキシエチレン］メタン２４。ＰＥＧ試薬２２（４３９ｍｇ、３８．３μｍｏｌ）をＤ２Ｏ  ５ｍＬに溶解させ、０℃に冷却し、排気／窒素補充を４回繰り返して脱気した。８５ｍＭ  ＤＣｌのＤ２Ｏ溶液（３６０μＬ、０．２当量／アセタール）を添加した。冷却浴を除去し、反応物を室温で２４時間撹拌した。２４時間後、追加のＤＣｌを添加した（３６０μＬ）。反応物を６３時間撹拌した。水溶液を凍結乾燥させ、Ｄ２Ｏ  ２ｍＬに溶解させた。溶液を０．１μｍ遠心フィルター（Ｍｉｃｒｏｎ  Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ、ＰＮ  ＵＦＣ４０Ｗ００）に通してろ過し、凍結乾燥させて、生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  １．８０（ｐ、Ｊ＝６．１０Ｈｚ、２Ｈ）  ３．３６（ｔ、Ｊ＝６．４６Ｈｚ、２Ｈ）  ３．４５−３．５４（ｍ、４Ｈ）  ３．７０（ｓ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ）  ３．９６（ｄ、Ｊ＝１４８．６８Ｈｚ、３Ｈ）  ４．７２（ｓ、２Ｈ）  ７．３２（ｄ、Ｊ＝９．００Ｈｚ、１Ｈ）  ７．３８（ｓ、１Ｈ）  ８．０１（ｄ、Ｊ＝８．６１Ｈｚ、１Ｈ）  ８．２６（ｓ、１Ｈ）  １０．４２（ｓ、１Ｈ）。
【０３１９】
テトラキス−［ω−（４−アザ−５−オキソ−７−オキサ−７−（（３−ホルミル−４−（１３Ｃ−メトキシ）カルボニル）ベンゼン）ヘプタン）−５．０ｋＤポリオキシエチレン］メタン２５。ＰＥＧ試薬２３（８４０ｍｇ、３９μｍｏｌ）をＨ２Ｏ  １０ｍＬに溶解させ、０℃に冷却し、８５ｍＭ  ＤＣｌのＤ２Ｏ水溶液（１８３μＬ、１５．６μｍｏｌ、０．１当量／アセタール）で処理した。４．５日後、反応物を凍結乾燥させ、Ｄ２Ｏ  １０ｍＬに溶解させ、８５ｍＭ  ＤＣｌのＤ２Ｏ溶液（１８３μＬ、１５．６μｍｏｌ）で室温で１日間処理した。溶液を凍結乾燥させて、生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  １．７９（ｐ、Ｊ＝６．３１Ｈｚ、２Ｈ）  ３．３６（ｔ、Ｊ＝６．６５Ｈｚ、２Ｈ）  ３．４３−３．５５（ｍ、４Ｈ）  ３．７０（ｓ、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ）  ３．９６（ｄ、Ｊ＝１４８．６８Ｈｚ、３Ｈ）  ４．７４（ｓ、２Ｈ）  ７．３４（ｄｄ、Ｊ＝８．６１、２．７４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．４２（ｄ、Ｊ＝２．７４Ｈｚ、１Ｈ）  ８．０３（ｄ、Ｊ＝８．６１Ｈｚ、１Ｈ）  １０．４４（ｓ、１Ｈ）。
【０３２０】
【化６４】
2008531475.tif 000048
試薬及び条件：６００ｍＭ  ＬｉＣｌ、ｐＨ２．５−６  アスコルビン酸緩衝剤。
【０３２１】
テトラキス−［ω−（４−アザ−５−オキソ−７−オキサ−７−（（（３’Ｒ，９’ｂＳ）−３’−（カルボニル（ＨＮ−ＧＧＧＧＧＫＫＲＰ−（Ｈｙｐ）Ｇ（Ｃｐｇ）Ｓ（Ｄ−Ｔｉｃ）（Ｃｐｇ）−ＯＨ））−２’，３’−ジヒドロチアゾロ［２’，３’−ａ］イソインドル−５’（９’ｂＨ）−オン−８’−イル））ヘプタン）−２．５ｋＤポリオキシエチレン］メタン２７。ペプチド２６（１．１２ｇ、ＰＰＬ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）をＤ２Ｏ  １．８ｍＬに溶解させ、０．５０Ｍアスコルビン酸ナトリウム／４．８Ｍ  ＬｉＣｌのＤ２Ｏ溶液０．２５ｍＬで処理し、０℃に冷却した。排気／窒素補充を３回繰り返して溶液を脱気した。ｐＨを１Ｍ  ＬｉＯＨを用いて窒素下で６．１に調節し、排気／窒素補充を３回繰り返して脱気した。ペプチド濃度は、実験全般の項に記載のようにカフェインで較正した化学発光窒素検出（ＣＬＮＤ）を備えたＨＰＬＣによって、１１４．４ｍＭと求められた。ＰＥＧ試薬２４（４００ｍｇ、３５．４μｍｏｌ）をＤ２Ｏ  ２．５ｍＬに溶解させ、０．５０Ｍアスコルビン酸ナトリウム／４．８Ｍ  ＬｉＣｌのＤ２Ｏ溶液０．２５ｍＬ及び０．５５  アスコルビン酸／４．８６Ｍ  ＬｉＣｌのＤ２Ｏ溶液０．２５ｍＬで連続して処理した。次いで、ペプチド２６（１．４ｍＬ、１５９．４μｍｏｌ）を添加した。溶液のｐＤは５．１と求められた。反応物を室温で窒素下で３日間撹拌した。溶液をカラム１に詰め、実験全般の分取逆相ＨＰＬＣの項で規定した溶媒系２／勾配表１で溶出させた。１２．２−１５．４分で溶出したバンドを減圧濃縮してアセトニトリルを除去し（浴温＝３５℃）、凍結乾燥させた。陽イオン交換カラム１を用い、実験全般の分取イオン交換の項で規定した溶媒系１／勾配表１で溶出させて、残渣をさらに精製した。４１．２から５８．２分で溶出したバンドを、ロータリーエバポレーターによって濃縮乾固した（浴温＝３５℃）。残渣を水１０ｍＬに溶解させ、３５００  ＭＷＣＯ透析膜（Ｐｉｅｒｃｅ、ＰＮ  ６５０３５）に充填し、脱イオン水で透析した（３×５００ｍＬ、各サイクル１−２時間）。透析した溶液を凍結乾燥させて、生成物を得た。ＣＬＮＤ：２９．３％；理論：３６．３％。結合に用いられた化学反応に特徴的な選択されたＮＭＲ共鳴（ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ＮＭＲ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  ４．８５（ｄｄ、Ｊ＝１４．８７Ｈｚ、１Ｈ）  ４．９８（ｔ、Ｊ＝７．０４Ｈｚ、１Ｈ）  ５．０１−５．０７（ｍ、１Ｈ）  ５．１７（ｔ、Ｊ＝５．４８Ｈｚ、１Ｈ）  ５．３０−５．４０（ｍ、１Ｈ）  ６．１９（ｓ、１Ｈ）  ７．１３−７．３６（ｍ、１Ｈ）  ７．８０（ｄ、Ｊ＝８．６１Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３２２】
テトラキス−［ω−（４−アザ−５−オキソ−７−オキサ−７−（（（３’Ｒ，９’ｂＳ）−３’−（カルボニル（ＨＮ−ＧＧＧＧＧＫＫＲＰ−（Ｈｙｐ）Ｇ（Ｃｐｇ）Ｓ（Ｄ−Ｔｉｃ）（Ｃｐｇ）−ＯＨ））−２’，３’−ジヒドロチアゾロ［２’，３’−ａ］イソインドル−５’（９’ｂＨ）−オン−８’−イル））ヘプタン）−５．０ｋＤポリオキシエチレン］メタン２８。ＰＥＧ試薬２８（９９．４ｍｇ、４．６６μｍｏｌ）をＤ２Ｏ  ２ｍＬに溶解させ、０．５０Ｍアスコルビン酸ナトリウム／４．８Ｍ  ＬｉＣｌのＤ２Ｏ溶液０．５ｍＬで処理した。ｐＤは４．３と求められた。この溶液にペプチド２６（ペプチド含有量７２％、４７．４ｍｇ、２１．７μｍｏｌ）を添加した。反応物を窒素雰囲気下で室温で１８時間撹拌し、次いで４５℃に２時間加熱した。溶液をカラム２に詰め、実験全般の分取逆相ＨＰＬＣの項で規定した溶媒系２／勾配表２で溶出させた。１０．５−１２分で溶出したバンドを収集し、２ｍＬに減圧濃縮した（浴温＝３４℃）。溶液を陽イオン交換カラム２に詰め、実験全般の分取陽イオン交換ＬＣの項で規定した溶媒系１／勾配表２で溶出させた。２０−２４分で溶出したバンドを減圧濃縮し（浴温＝３５℃）、１０Ｋ  ＭＷＣＯ  Ｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒ（Ｐｉｅｒｃｅ、ＰＮ＝６６８１０）を用いて脱イオン水５００ｍＬで透析した。水を２、１０及び２時間で新しい水５００ｍＬと交換した。透析した溶液を０．２２μｍ遠心フィルター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＰＮ  ６６０６４−４６６）によって２５６０ｇでろ過し、ろ液を凍結乾燥させて、標記化合物を得た。ＣＬＮＤ：２２．４％  ペプチド含有量；理論：２３．２％。この試料を詳細な構造キャラクタリゼーションに使用した。
【０３２３】
複合物２８の詳細な構造解析：
ＮＭＲ実験。
【０３２４】
ＮＭＲ実験を３ｍｍ管中で５ｍｍ逆検出（ｉｎｖｅｒｓｅ−ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）凍結探針を用いてＢｒｕｋｅｒ  ｄｒｘ−６００分光計によって実施した。
【０３２５】
化学シフトの帰属
２８のプロトン化学シフト（図１）を２Ｄ  ＴＯＣＳＹ（ＤＩＰＳＩ−２混合時間１００ｍｓ）及び２Ｄ  １３Ｃ−１Ｈ  ＨＭＢＣ（ｎＪＣＨの展開６０ｍｓ、ｎ＝１−４）に基づいて帰属した。主要な回転異性体（トランス）の共鳴のみを表２に示す。副次的な回転異性体は、Ｃ末端及びプロリンのアミド結合の束縛回転から生ずる。
【０３２６】
【化６５】
2008531475.tif 000049
【化６６】
2008531475.tif 000050
【０３２７】
【表５】
2008531475.tif 000051
2008531475.tif 000052
2008531475.tif 000053
【０３２８】
ＰＥＧ共鳴とペプチドの相関。
３結合（Ｔｈｒｅｅ  ｂｏｎｄ）１Ｈ−１３Ｃ相関分光法を使用してＰＥＧ化部位を確認した。フェノキシアセトアミドメチレン（ＰＥＧα、図３）を出発点として用いた（４．５８ｐｐｍ、６００ＭＨｚ、表３）。観測された相関経路（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｐａｔｈ）は、ＰＥＧα（４．５９ｐｐｍ）→Ｃ８（１６２．２ｐｐｍ）→Ｈ６（７．６７ｐｐｍ）→Ｃ５（１７３．２ｐｐｍ）→Ｈ３（４．８５ｐｐｍ）→Ｃ３’（１７２．７ｐｐｍ）→Ｇｌｙ５−α（３．８９ｐｐｍ）であった。中央のＢ環の形成は、Ｃ５（１７３．２ｐｐｍ）とＨ９ｂ（６．０６ｐｐｍ）の間で認められた相関によって裏付けられた。同様に、Ａ環の形成は、Ｈ３（４．８５ｐｐｍ）→Ｃ９ｂ（６７．２ｐｐｍ）→Ｈ２Ｒ（３．７３ｐｐｍ）の相関配列（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）によって裏付けられた。Ｈ２ＲシグナルはＣ３’と相関し、Ａ環がペプチドのｇｌｙ５に近接していることを裏付けた。
【０３２９】
【化６７】
2008531475.tif 000054
【０３３０】
Ｈ１の相対立体化学の決定（図３）
１）残基Ｈ１の相対立体化学は、２Ｄ  ＮＯＥＳＹ実験結果（混合時間５００ｍｓ）及び短い（１００ｐｓ）ＭＤ実行結果に基づいて、Ｈ４に対してトランスであることが判明した。シスとトランスの両方のジアステレオマーの計算距離を、２Ｄ  ＮＯＥＳＹに基づく測定距離と一緒に表２に示す。具体的には、トランス配置のＨ１−Ｈ４距離は４．１Åと予測されたが、他方のシス−ジアステレオマーはかなり短かった（３．１Å）。４．４Åの測定距離は、提案されたトランス−ジアステレオマーとよく一致している。
【０３３１】
【表６】
2008531475.tif 000055
【０３３２】
２：シス−及びトランス−ジアステレオマーの原子Ｈ４−Ｃ４−Ｎ−Ｃ１及びＨ１−Ｃ１−Ｎ−Ｃ４によって形成される予測二面角を表３に示す。これらの角度から、３結合の結合定数がＨ３−Ｃ９ｂ及びＨ９ｂ−Ｃ３に対して導出される。Ｈ３−Ｃ９ｂ及びＨ９ｂ−Ｃ３に対して観測されたそれぞれ８及び０Ｈｚのカップリングは、図１に示す提案されたトランス−ジアステレオマーと一致する。さらに、ＨＭＢＣ  ２Ｄ実験において相関が認められた。
【０３３３】
【表７】
2008531475.tif 000056
【０３３４】
３．  分子力学計算によれば、トランス−ジアステレオマーは、シス−ジアステレオ異性体よりも５．５ｋｃａｌ／ｍｏｌ低いエンタルピーを有する（図４）。カルボニル５及びアミドＮＨからのＧｌｙ５の測定距離は２．１Åと求められた。これは、分子内水素結合の存在を裏付ける。
【０３３５】
【化６８】
2008531475.tif 000057
【０３３６】
複合物２８を、７−Ｔ超伝導磁石を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｑ−ＦＴＭＳシステムによって分析した。個々のイオンを前置の四重極によって単離した。イオンを「ガス支援ダイナミックトラップ（ｇａｓ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｄｙｎａｍｉｃ  ｔｒａｐｐｉｎｇ）」を用いたＦＴＭＳセル中で捕捉した。溶液を４：１  ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ溶液から流量０．５ｕＬ／ｍｉｎでエレクトロスプレーした。ＩＲＭＰＤ解離実験の場合、Ｓｙｎｒａｄ  ＣＯ２レーザーをレーザー出力１５％で２００ｍｓ間照射した。イオンをダイレクトモード検出によって取得バンド幅９００ｋＨｚで検出し、５１２Ｋのデータポイントを収集した。時間領域データをアポダイズし、マグニチュードモードフーリエ変換を実行する前に１回ゼロ充填した。装置は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｕｎｉｎｇ  ｍｉｘを用いて外部で較正された。この実験（図５）では、ポリマーの不均一性を示す、完全にデコンボリューションされた（ｆｕｌｌ  ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｅｄ）スペクトルを得た。４２０個の繰り返し−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−単位を含む１種類の分離した異性体がＦＴ−ＭＳセル中で捕捉され、ＩＲレーザーが照射された（図６）。照射によって、イオンは解離して、各々１４７８．６７４２ａｍｕだけ離れた４個の娘断片（ｄａｕｇｈｔｅｒ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）が生成した。これらのデータは、１個のポリマー当たり４個のペプチドが存在することと一致した。解離は、グリシンと新たに形成された三環構造との間で起こった（図７）。
【０３３７】
【化６９】
2008531475.tif 000058
【化７０】
2008531475.tif 000059
【化７１】
2008531475.tif 000060
【０３３８】
【化７２】
2008531475.tif 000061
試薬及び条件：ａ）メタノール−水、１００ｍＭ  Ｌ−アスコルビン酸、２０ｍＭＬ−アスコルビン酸ナトリウム。
【０３３９】
【表８】
2008531475.tif 000062
2008531475.tif 000063
【０３４０】
（３’Ｒ，９’ｂＳ）−３’−（カルボニル（ＨＮ−ＧＧＧＧＧＫＫＲＰ（Ｈｙｐ）Ｇ（Ｃｐｇ）Ｓ（Ｄ−Ｔｉｃ）（Ｃｐｇ）−ＯＨ））−２’，３’−ジヒドロチアゾロ［２’，３’−ａ］イソインドル−５’（９’ｂＨ）−オン３２。ペプチド２６（１１６ｍｇ、ペプチド含有量７２％、５２．８μｍｏｌ）を１００ｍＭ  Ｌ−アスコルビン酸／２０ｍＭ  Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム４．０ｍＬに溶解させた。メチル２−ホルミルベンゾアート（１０．４ｍｇ、６３．３μｍｏｌ）、続いてＭｅＯＨ  ４００μＬを添加した。反応物を５０時間撹拌した。溶液をカラム２に詰め、実験全般の分取逆相ＨＰＬＣの項で規定した溶媒系２／勾配表３で溶出させた。１４−１５分で溶出したバンドを減圧濃縮してアセトニトリルを除去し、凍結乾燥させて、生成物を得た。ＣＬＮＤによるペプチド含有量は５６％であった。図８に示すプロトンに帰属された、２６の選択された１Ｈ  ＮＭＲ共鳴。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、重水）δ  ｐｐｍ  ４．９６（Ｈ３、ｔ、Ｊ＝７．４３Ｈｚ、１Ｈ）  ６．１９（Ｈ９、ｓ、１Ｈ）  ７．１５−７．２８（Ｄ−Ｔｉｃ、ｍ、４Ｈ）  ７．６１（Ｈ６、ｔ、Ｊ＝７．４３Ｈｚ、１Ｈ）  ７．６４（Ｈ８、ｄ、Ｊ＝８．６１Ｈｚ、１Ｈ）  ７．７２（Ｈ７、ｔ、Ｊ＝７．０４Ｈｚ、１Ｈ）  ７．７９（Ｈ５、ｄ、Ｊ＝７．８２Ｈｚ、１Ｈ）。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）  ８４８．８９７１  （Ｍ＋２、ｚ＝２）；Ｃ７８Ｈ１１５Ｎ２１Ｏ２０Ｓ（ｚ＝２）の計算値：８４８．９０９。
【０３４１】
ペプチド３３−３６を、３３に対して記述した手順を用いて合成した。質量スペクトルデータを表７に示す。
【０３４２】
【化７３】
2008531475.tif 000064
【０３４３】
ペプチド３２の詳細な構造解析：
ＮＭＲ実験。
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルの帰属を、２Ｄ  Ｃｏｓｙ４５、２Ｄ  Ｎｏｅｓｙ（位相敏感、２５及び４０℃）、２Ｄ  １Ｈ／１３Ｃ  ＨＳＱＣ、２Ｄ  １Ｈ／１３Ｃ  ＨＭＢＣの組み合わせによって、６００ＭＨｚで５ｍｍ逆広帯域プローブ（ｉｎｖｅｒｓｅ  ｂｒｏａｄｂａｎｄ  ｐｒｏｂｅ）を用いて実施した。Ｈ９の立体化学的帰属を、Ｌ−システインから得られたＨ３を基準として行った。具体的には、Ｈ９とＨ（２Ｓ）の間でｎＯｅ（４０℃）が認められた。ジェミナルプロトンＨ（２Ｒ）の帰属は、２Ｄ  Ｃｏｓｙ４５実験から得られた。この同じ共鳴（Ｈ（２Ｒ））は、４０℃での２Ｄ  ＮＯＥＳＹ実験においてＨ３と相関を示した。まとめると、ＮＭＲ実験結果は、Ｈ９とＨ３がチアゾリン環の面に対してトランスの関係にあることを裏付けている（図８）。
【０３４４】
【化７４】
2008531475.tif 000065
試薬及び条件：ａ）ＣＤＩ、１３Ｃ−ＭｅＯＨ、ＤＢＵ；ｂ）ＮＢＳ、ＡＩＢＮ。
【０３４５】
１３Ｃメチル５−ブロモ−２−メチルベンゾアート（３８）。５−ブロモ−２−メチル安息香酸（３７）（２５ｇ、１１６ｍｍｏｌ）の１００ｍｌ無水ＤＣＭ撹拌溶液に１，１’−カルボニルジイミダゾール（２１ｇ、１２８ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３．５時間撹拌した。溶液を圧力容器に移し、１３ＣＨ３ＯＨ及びＤＢＵで処理した。溶液をＨ２Ｏ（２×２０ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ３（２×２０ｍＬ）で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４を用いて脱水した。溶媒を減圧除去して生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ２．５９（ｓ、３Ｈ）  ３．８９（ｄ、Ｊ＝１４７．１２Ｈｚ、３Ｈ）  ７．３９（ｄｄ、Ｊ＝８．２９、１．５１Ｈｚ、１Ｈ）  ７．４２（ｓ、１Ｈ）  ７．７９（ｄ、Ｊ＝８．２９Ｈｚ、１Ｈ）。
【０３４６】
１３Ｃ−メチル５−ブロモ−２−（ジブロモメチル）ベンゾアート（３９）。３８（５．６ｇ  ２４ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４撹拌溶液にＮ−ブロモスクシンイミド（１３．０ｇ、７３ｍｍｏｌ）及び２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（４．０ｇ、２４ｍｍｏｌ）を添加した。還流させた溶液を、出発材料がＴＬＣで判定して消費されるまで還流させた。混合物を、Ｂｉｏｔａｇｅ  ４０＋を充填したシリカカラムを備えたフラッシュクロマトグラフィーにかけ、０−１０％ＥｔＯＡｃ／へキサン勾配によって精製して（１：９ＥｔＯＡｃ／へキサン中、３９のＲｆ＝０．４）、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ３．９５（ｄ、Ｊ＝１４７．９１Ｈｚ、３Ｈ）  ７．５２（ｄｄ、Ｊ＝８．４８、２．０５Ｈｚ、１Ｈ）  ７．７８（ｄ、Ｊ＝８．４８Ｈｚ、１Ｈ）  ８．００（ｓ、１Ｈ）  ８．３０（ｄ、Ｊ＝１．９０Ｈｚ、１Ｈ）
【０３４７】
【化７５】
2008531475.tif 000066
試薬及び条件：ａ）ＮａＨ、ＰＳ−ＤＩＥＡ；ｂ）メタノール−水、１００ｍＭ  Ｌ−アスコルビン酸、２０ｍＭ  Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム。
【０３４８】
１３Ｃ−メチル５−ブロモ−２−（３−ブチルチアゾリジン−２−イル）ベンゾアート（４１）。２−（ブチルアミノ）エタンチオール（４０）（６２１．５ｍｇ、５ｍｍｏｌ）の２０ｍｌ  ＴＨＦ撹拌溶液にＰＳ−トリフェニルホスフィン（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２．１０３０ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を３０分間撹拌し、中間の多孔度の焼結ガラス漏斗を用いて溶液をろ過した。Ｎ２を焼結ガラスを通して１０分間バブリングさせることによって、樹脂をＴＨＦ（２０ｍＬ）と一緒に撹拌した。ＴＨＦ溶液をろ過し、第１のろ液と混合した。樹脂を同じプロトコルによって２回洗浄した。混合ろ液を０℃に冷却した。水素化ナトリウム（０．０６ｍｌ、３ｍｍｏｌ）、１３Ｃ−メチル５−ブロモ−２−（ジブロモメチル）ベンゾアート（３９）（８９７．０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＰＳ−ＤＩＥＡ（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１．２４２９ｇ、５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２日間撹拌した。反応物を終夜還流させ、室温に冷却し、１０日間撹拌した。溶液をろ過し、減圧濃縮し、逆相クロマトグラフィー（カラム１、溶媒系３、勾配表４）によって精製した。２６から２７分で溶出したバンドを減圧濃縮して、標記化合物を得た。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５９．０（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１４１３ＣＨ２１７９ＢｒＮＯ２Ｓの計算値：３５９．０４。ＡＰＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６１．０（Ｍ＋Ｈ）；Ｃ１４１３ＣＨ２１８１ＢｒＮＯ２Ｓの計算値：３６１．０４。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９１（ｔ、Ｊ＝７．２５Ｈｚ、３Ｈ）  １．３１−１．４３（ｍ、Ｊ＝１１．３０Ｈｚ、２Ｈ）  １．４６−１．５９（ｍ、Ｊ＝７．７２Ｈｚ、２Ｈ）  ２．３８−２．６９（ｍ、Ｊ＝１２．０６Ｈｚ、２Ｈ）  ２．８５−３．０１（ｍ、Ｊ＝６．０３Ｈｚ、２Ｈ）  ３．０７−３．２７（ｍ、Ｊ＝１１．２１、６．１２Ｈｚ、２Ｈ）  ３．９１（ｄ、Ｊ＝１４７．５０Ｈｚ、２Ｈ）  ５．８８（ｓ、１Ｈ）  ７．４１（ｄｄ、Ｊ＝８．２９、１．８８Ｈｚ、１Ｈ）  ７．６８（ｄ、Ｊ＝８．２９Ｈｚ、１Ｈ）  ８．０１（ｓ、１Ｈ）。
【０３４９】
（３’Ｒ，９’ｂＳ）−７’−ブロモ−３’−（カルボニル（ＨＮ−ＧＧＧＧＧＫＫＲＰ（Ｈｙｐ）Ｇ（Ｃｐｇ）Ｓ（Ｄ−Ｔｉｃ）（Ｃｐｇ）−ＯＨ））−２’，３’−ジヒドロチアゾロ［２’，３’−ａ］イソインドル−５’（９’ｂＨ）−オン４２。３２の場合と同じ手順で調製した。ＨＲ  ＦＴＭＳ  （ｍ／ｚ）：８８７．８６１２（Ｍ＋２、ｚ＝２）；Ｃ７８Ｈ１１４７９ＢｒＮ２１Ｏ２０Ｓ（ｚ＝２）の計算値：８８７．８６５０；８８８．８５０９（Ｍ＋２、ｚ＝２）；Ｃ７８Ｈ１１４８１ＢｒＮ２１Ｏ２０Ｓ（ｚ＝２）の計算値：８８８．８６５０。
【０３５０】
【化７６】
2008531475.tif 000067
試薬及び条件：ａ）ＰＳ−カルボジイミド、ペンタフルオロフェノール；ｂ）ＰＥＧ試薬２１、ヒューニッヒ塩基；ｃ）Ｄ２Ｏ、１００ｍＭ  ＬｉＣｌ、１Ｍ  ＮａＯＤのＤ２Ｏ溶液でｐＤ３．７に塩基性化された５０ｍＭ重水素化アスコルビン酸。
【０３５１】
メチル２−（ジエトキシメチル）−４−（２−オキソ−２−ペンタフルオロフェノキシエトキシ）ベンゾアート（４３）。減圧排気し、Ｎ２を充填した５０ｍＬ  ＲＢフラスコに、洗浄／乾燥した炭素担持１０％Ｐｄ  １３２ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ  Ｐｄ）及び無水ＴＨＦ  ４ｍＬを添加した。（突沸を最小限に抑えるように）慎重に排気し、Ｎ２を充填することを３回繰り返して混合物を脱気した。メチル４−（２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ）−２−（ジエトキシメチル）ベンゾアート（０．５００ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）（１７）の無水ＴＨＦ（３ｍＬ）溶液をスラリーに添加し、バイアルを追加のＴＨＦ  １ｍＬで洗浄し、ＲＢフラスコに移し、排気／窒素補充を３回繰り返して脱気した。最後の排気後、減圧排気したＲＢフラスコに風船からＨ２を充填した。反応物を室温でＨ２下４時間撹拌した。この時点で、ＧＣ／ＭＳ（方法３）によれば、反応は完結した（１７、１７．４ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝３５８．１、Ｃ１９１３ＣＨ２１Ｏ６＋の計算値＝３５８．１、Ｍ−ＯＥｔ；１８、１４．２６ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝２６８．１、Ｃ１２１３ＣＨ１５Ｏ６＋の計算値＝２６８．１、Ｍ−ＯＥｔ）。微細なフリットのガラス減圧フィルターを用いたセライトパッドに溶液を通して、無水ＴＨＦ  １５ｍＬに懸濁したＰＳ−カルボジイミド（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ、２．４ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を含む５０ｍＬ  ＲＢフラスコにろ過した。セライトをＴＨＦ（３ｍＬ）で３回洗浄し、ろ液／ＰＳ−カルボジイミドと混合した。不均一混合物をＮ２下で２０分間撹拌し、ペンタフルオロフェノール（４５６ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液で処理した。反応混合物をＮ２下で１６時間撹拌した。この時点で、ＧＣ／ＭＳ（方法３）によれば反応は完結した（１８、１４．２６ｍｉｎ；４３、１５．６ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝４３４．１、Ｃ１８１３ＣＦ５Ｈ１５Ｏ６＋の計算値＝４３４．１、Ｍ−ＯＥｔ）。混合物を中程度のフリットの漏斗を通して、タールで覆われた５０ｍＬ  ＲＢフラスコにろ過した。次いで、ＴＨＦ  １０ｍＬを樹脂に添加し、Ｎ２を用いて軽く撹拌して混合した。ろ液を混合し、溶媒を除去し、生成物を減圧乾燥させて生成物を得た。ＥＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ＝４３４．１、Ｃ１８１３ＣＦ５Ｈ１５Ｏ６＋の計算値＝４３４．１、Ｍ−ＯＥｔ）
【０３５２】
化合物４４。減圧排気し、Ｎ２を充填した５０ｍＬ  ＲＢフラスコに、２０ＫテトラアミノＰＥＧ（２１、４４０ｍｇ、２２μｍｏｌ）及び無水アセトニトリル３ｍＬを添加した。（突沸を最小限に抑えるように）慎重に排気し、Ｎ２を充填することを３回繰り返して混合物を脱気した。溶液にヒューニッヒ塩基（０．１７２ｍｍｏｌ、３０μＬ）、続いてメチル２−（ジエトキシメチル）−４−（２−オキソ−２−ペンタフルオロフェノキシエトキシ）ベンゾアート（４３、０．１２８ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（１ｍＬ＋リンス用１ｍＬ）溶液を添加した。モレキュラーシーブ（粉末、孔径４Å、１００ｍｇ）を混合物に添加した。排気／窒素補充を３回繰り返して溶液を脱気した。反応物をＮ２下４０℃で２４時間撹拌した。混合物を中程度のフリットの漏斗を通して、Ｓｉ結合ピペラジン（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ  Ｉｎｃ．、１７１ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＳｉ結合カルボナート（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ  Ｉｎｃ．、０．３ｍｍｏｌ、４３４ｍｇ）を含む５０ｍＬ  ＲＢフラスコにろ過し、追加のアセトニトリル１０ｍＬで洗浄した。混合ろ液をＮ２下４０℃で１５時間撹拌した。次いで、混合物を中程度のフリットの漏斗を通して、タールで覆われた５０ｍＬ  ＲＢフラスコにろ過し、追加のアセトニトリル１０ｍＬで洗浄した。溶媒を除去し、生成物を減圧乾燥させて、４４を得た。１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ、部分構造）：δ  １７０．１４、７２．００。
【０３５３】
化合物４５を２８の場合と同様に合成した。反応をＤ２Ｏ中でｐＤ３．７で実施した。具体的には、１００ｍＭ  ＬｉＣｌと（Ｄ２Ｏから３サイクルの凍結乾燥によって得た）５０ｍＭ重水素化アスコルビン酸の溶液をＤ２Ｏ中で調製した。ｐＤを１Ｍ  ＮａＯＤで３．７に調節した。この溶液にＰＥＧ試薬４４及びペプチド２６を添加した。反応物を室温で１３時間撹拌し、２８の場合と同様に処理した。ＦＴ−ＭＳＭＳによる構造は２８と類似していたが、１３Ｃのために１ａｍｕ高位にシフトした。
【０３５４】
実施例：ラット及びサルのとう痛モデルにおけるポリマー複合型抗Ｂ１ペプチドのインビボでの抗侵害受容活性
Ａ．  ラット神経因性とう痛モデル。オスのスプレーグドーリーラット（２００ｇ）をイソフルラン吸入麻酔によって麻酔し、Ｋｉｍ及びＣｈｕｎｇ（Ａｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  ｓｐｉｎａｌ  ｎｅｒｖｅ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．  Ｐａｉｎ  ５０：３５５−３６３，（１９９２））によって最初に記載されたように、Ｌ５及びＬ６レベルの左腰部脊髄神経を後根神経節の遠位で坐骨神経に入る前にしっかりと結さつ（４−０絹縫合糸）する。切開部を閉じラットを回復させる。この手順によって、金網観察おりを通して（足せき間の）足底に垂直にかけられる段階的刺激（４．０から１４８．１ｍＮのｖｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメント）から（神経損傷部位と同側の）患部の足を引っ込める圧力を記録することによって評価して、左後足に機械的（触覚）異痛症が生じる。足を引っ込めるしきい値（ＰＷＴ）を、Ｃｈａｐｌａｎ，  Ｓ．Ｒ．等（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔａｃｔｉｌｅ  ａｌｌｏｄｙｎｉａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｐａｗ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  Ｍｅｔｈ．，  ５３：５５−６３（１９９４））によって記述されたように、刺激強度を連続的に増減させ、足を引っ込めるデータをＤｉｘｏｎノンパラメトリック検定を用いて解析することによって求める。
【０３５５】
正常なラット及び（神経を分離したが結さつしていない）偽手術ラットは、少なくとも１４８．１ｍＮ（１５ｇと等価）の圧力に応答なしに耐える。脊髄神経を結さつしたラットは、患部の足に対するわずか４．０ｍＮ（０．４１ｇと等価）の圧力に応答する。ラットは、運動機能障害（例えば、足の引きずり又は落下）を示さなかった場合にのみ試験に含めることができ、そのＰＷＴは３９．２ｍＮ（４．０ｇと等価）未満であった。手術から少なくとも７日後にラットをｓ．ｃ．注射によって試験ペプチド、試験ビヒクル複合型ペプチド（通常、それぞれ約１ｍｇ／ｋｇ及び約６０ｍｇ／ｋｇのスクリーニング用量）又は対照希釈剤（ＰＢＳ）で１回処理し、その後７日間毎日ＰＷＴを測定する。
【０３５６】
Ｂ．  ラットＣＦＡ炎症性とう痛モデル。オスのスプレーグドーリーラット（２００ｇ）にイソフルラン吸入麻酔によって軽く麻酔をかけ、左後足に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）０．１５ｍｌを注射する。この手順によって、金網観察おりを通して（足せき間の）足底に垂直にかけられる段階的刺激（４．０から１４８．１ｍＮのｖｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメント）から患部の足を引っ込める圧力を記録することによって評価して、左後足に機械的（触覚）異痛症が生じる。ＰＷＴは、Ｃｈａｐｌａｎ等（１９９４）によって記述されたように、刺激強度を連続的に増減させ、足を引っ込めるデータをＤｉｘｏｎノンパラメトリック検定を用いて解析することによって求められる。ラットは、運動機能障害（例えば、足の引きずり又は落下）や皮膚の損傷を示さない場合にのみ試験に含めるべきであり、そのＰＷＴは３９．２ｍＮ（４．０ｇと等価）未満である。ＣＦＡ注射から少なくとも７日後にラットをｓ．ｃ．注射によって試験ポリマー複合型ペプチド（通常、約６０ｍｇ／ｋｇのスクリーニング用量）又は対照溶液（ＰＢＳ）で１回処理し、その後７日間毎日ＰＷＴを測定することができる。足を引っ込めるしきい値（ＰＷＴ）の平均を次式によって最大可能効果割合（％ＭＰＥ）に変換することができる：％ＭＰＥ＝１００×（処理ラットのＰＷＴ−対照ラットのＰＷＴ）／（１５−対照ラットのＰＷＴ）。したがって、１５ｇ（１４８．１ｍＮ）のカットオフ値はＭＰＥ１００％に等しく、対照応答はＭＰＥ０％に等しい。
【０３５７】
本発明の好ましいポリマー複合型ペプチドは、それぞれ約１ｍｇ／ｋｇ及び約６０ｍｇ／ｋｇのスクリーニング用量で、ＰＤ関係を有する抗侵害受容効果を生じると予想される。
【０３５８】
Ｂ．  サバンナモンキーＬＰＳ炎症モデル。ｄｅＢｌｏｉｓ及びＨｏｒｌｉｃｋ（参照によりその全体を本明細書に援用するＢｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  １３２：３２７−３３５（２００２））によって基本的に記載されたように、Ｂ１活性阻害剤としてのポリマー複合型ペプチドの有効性を、Ｂ１作動物質を局所投与したオスのサバンナモンキー（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈａｅｃｕｓ  ａｅｔｈｉｏｐｓ  Ｓｔ  Ｋｉｔｔｓ）で評価することができる。
【０３５９】
本発明のＰＥＧ複合型ペプチド拮抗物質が、Ｂ１によって誘発される浮腫を阻害するかどうかを判定するために、下記試験をオスのサバンナモンキー（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈａｅｃｕｓ  ａｅｔｈｉｏｐｓ  Ｓｔ  Ｋｉｔｔｓ；Ｃａｒｉｂｂｅａｎ  Ｐｒｉｍａｔｅｓ  Ｌｔｄ．実験農場（Ｓｔ  Ｋｉｔｔｓ、Ｗｅｓｔ  Ｉｎｄｉｅｓ））に対して実施することができる。体重６．０±０．５ｋｇ（ｎ＝６７）のサバンナモンキーに麻酔をし（５０ｍｇケタミン／ｋｇ）、伏在静脈を介したＬＰＳ（９０μｇ／ｋｇ）又は食塩水（１ｍｌ）の単独静脈内注射によって前処理する。
【０３６０】
１．  炎症試験
キニンによって誘発される浮腫を腹側皮下脂肪アッセイ（Ｓｃｉｂｅｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７）によって評価することができる。手短に述べると、麻酔をしたサルにカプトプリルを注射する（アッセイ３０分前に１ｍｇ／ｋｇ）。ｄＫＤ、ＢＫ又はビヒクル（２ｍＭアマスタチンの１００μｌ乳酸リンゲル溶液）の単独皮下注射を腹側部に施し、較正したノギスを用いて皮下脂肪厚の増加を３０−４５分間モニターする。結果を皮下注射前後の皮下脂肪厚の差として表すことができる。カプトプリル及びアマスタチンを使用して、それぞれカルボキシル末端及びアミノ末端におけるキニンの分解を抑制し得る。
【０３６１】
拮抗物質シルド解析
ｄＫＤ（１−１００ｎｍｏｌ）によって誘発される浮腫の用量−反応関係を種々の濃度のＰＥＧ−ペプチド拮抗物質の非存在下又は存在下でＬＰＳから２４時間後に求めることができる。ＢＫ（３０ｎｍｏｌ）を正の対照として用いることができる。
【０３６２】
拮抗物質の時間的経過
単一ボーラス投与後４、２４、４８、７２及び／又は９６時間における拮抗物質による阻害の時間的経過を求めることができる。ＢＫ（３０ｎｍｏｌ）を正の対照として用いることができる。
【０３６３】
薬物
塩酸ケタミン、ＬＰＳ、アマスタチン及びカプトプリルはＳｉｇｍａ（ＭＯ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）から購入することができる。ペプチドは全てＰｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）から入手することができる。
【０３６４】
統計
値は、平均値±平均標準誤差（ｓ．ｅ．平均）として表すことができる。浮腫試験においては、注射前の皮下脂肪厚を皮下投与後の値から減算する。カーブフィッティング及びＥＣ５０の計算値を、Ａｐｐｌｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ用Ｄｅｌｔａ  Ｇｒａｐｈ  ４．０ソフトウエアを用いて得ることができる。データを二元配置分散分析、続いてボンフェローニ補正付き独立片側スチューデントｔ検定によって比較する。Ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなす。
【０３６５】
サバンナモンキーにＬＰＳを投与すると、浮腫形成アッセイにおけるＢ１受容体作動物質に対する感受性がゼロレベルから増加するはずである。これに対して、Ｂ２受容体作動物質ＢＫに対する応答は影響されないはずである。
【０３６６】
実施例：ラットの薬物動態試験
（水性媒体中の）種々のペプチド又は複合型ペプチドをボーラスとしてオスのスプレーグドーリーラットに静脈内（ｉｖ）又は皮下（ｓｃ）経路で投与する。血液試料を、ヘパリン処置した（ｈｅｐａｒｉｚｅｄ）管に種々の時点（例えば、注射後０、１５、３０分及び／又は１、２、４、６、８、１０、１２、１８、２４、３０、３６、４２、４８、６０、７２、８４、９６、１２０、２４０及び／又は３２０時間）で採取する。血しょうを細胞ペレットから遠心分離によって除去し、凍結し、又は即座に加工する。血しょう中の目的化合物を、分析物に特異的なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ又はＥＬＩＳＡ法によって定量する。クリアランス（ＣＬ）、見掛けクリアランス（ＣＬ／Ｆ）、分布容積（Ｖｓｓ）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、曲線下面積（ＡＵＣ）、消失半減期（ｔ１／２）など種々の標準薬物動態パラメータをノンコンパートメント法によって計算することができる。
【配列表】
2008531475000001.app