(57)【要約】  本明細書は、クロストリジウム毒素の酵素ドメイン、クロストリジウム毒素の転座ドメイン及び増大したクロストリジウム毒素の結合ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素；その修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子；及びその修飾クロストリジウム毒素の製造方法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメイン；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメイン；
ｃ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができる修飾クロストリジウム結合ドメインを含む増大した標的ドメイン；及び、
ｄ）プロテアーゼ切断部位
を含む修飾クロストリジウム毒素であって、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させ；及び、
修飾クロストリジウム結合ドメインが、修飾クロストリジウム結合ドメインが由来する天然由来のクロストリジウム結合ドメインの結合活性に比べ、内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対して増大した結合活性を示す、修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転座ドメイン、及び増大した標的ドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増大した標的ドメイン、及びクロストリジウム毒素転座ドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、増大した標的ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、増大した標的ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素転座ドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項６】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、及び増大した標的ドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項７】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増大した標的ドメイン、及びクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項８】
クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、及びＴｅＮＴ酵素ドメインからなる群より選択される、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項９】
クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／Ａ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転座ドメイン、及びＴｅＮＴ転座ドメインからなる群より選択される、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１０】
修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインが、修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメイン、及び修飾ＴｅＮＴ結合ドメインからなる群より選択される、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１１】
修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインが、配列番号１のＴｒｐ１１０１番、Ｇｌｙ１１０２番、Ｌｅｕ１１０５番、Ｔｙｒ１１１１番、Ｔｙｒ１１１２番、Ｇｌｙ１１５８番、Ｉｌｅ１１６３番、Ａｓｐ１１７９番、Ｇｌｕ１２０３番、Ｐｈｅ１２５２番、Ｓｅｒ１２６４番、Ｔｒｐ１２６６番、Ｔｙｒ１２６７番、Ｇｌｎ１２７０番、Ｇｌｙ１２７９番、及びＴｒｐ１２８２番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＢｏＮＴ／Ａ受容体系に対する修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１２】
修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインが、配列番号２のＴｒｐ１０８８番、Ｇｌｙ１０８９番、Ｌｅｕ１０９２番、Ｔｙｒ１０９８番、Ｔｙｒ１０９９番、Ｇｌｙ１１４２番、Ｉｌｅ１１４７番、Ａｓｐ１１６５番、Ｇｌｕ１１９１番、Ｉｌｅ１２４０番、Ｓｅｒ１２６０番、Ｔｒｐ１２６２番、Ｔｙｒ１２６３番、Ｇｌｕ１２６６番、Ｇｌｙ１２７７番、及びＴｒｐ１２８０番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＢｏＮＴ／Ｂ受容体系に対する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１３】
修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインが、配列番号３のＴｒｐ１１０２番、Ｇｌｙ１１０３番、Ｌｅｕ１１０６番、Ｔｙｒ１１１２番、Ｔｙｒ１１１３番、Ｇｌｙ１１４５番、Ｉｌｅ１１５０番、Ａｓｐ１１６６番、Ｇｌｕ１１９６番、Ｉｌｅ１２４７番、Ｇｌｙ１２５６番、Ｔｒｐ１２５８番、Ｔｙｒ１２５９番、Ｈｉｓ１２６１番、Ｇｌｙ１２８１番、及びＴｒｐ１２８４番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＢｏＮＴ／Ｃ１受容体系に対する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１４】
修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインが、配列番号４のＴｒｐ１０８９番、Ｇｌｙ１０９０番、Ｌｅｕ１０９３番、Ｔｙｒ１０９９番、Ｔｙｒ１１００番、Ｇｌｙ１１３２番、Ｉｌｅ１１３７番、Ａｓｐ１１５３番、Ａｓｎ１１８６番、Ｌｙｓ１２３６番、Ｔｒｐ１２３８番、Ａｒｇ１２３９番、Ｐｈｅ１２４２番、Ｓｅｒ１２６２番、及びＴｒｐ１２６５番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＢｏＮＴ／Ｄ受容体系に対する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１５】
修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインが、配列番号５のＴｒｐ１０７６番、Ｇｌｙ１０７７番、Ｌｅｕ１０８０番、Ｔｙｒ１０８６番、Ｔｙｒ１０８７番、Ｇｌｙ１１２４番、Ｉｌｅ１１２９番、Ａｓｐ１１４６番、Ｇｌｕ１１７２番、Ｐｈｅ１２１３番、Ｓｅｒ１２２１番、Ｔｒｐ１２２３番、Ｔｙｒ１２２４番、Ｈｉｓ１２２７番、Ｇｌｙ１２３６番、及びＴｒｐ１２３９番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＢｏＮＴ／Ｅ受容体系に対する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１６】
修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインが、配列番号６のＴｒｐ１０９６番、Ｇｌｙ１０９７番、Ｌｅｕ１１００番、Ｔｙｒ１１０６番、Ｔｙｒ１１０７番、Ｇｌｙ１１４７番、Ｉｌｅ１１５２番、Ａｓｐ１１７１番、Ｇｌｕ１１９５番、Ｐｈｅ１２３７番、Ｓｅｒ１２４５番、Ｔｒｐ１２４７番、Ｔｙｒ１２４８番、Ａｓｎ１２５１番、Ｇｌｙ１２６０番、及びＴｒｐ１２６３番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＢｏＮＴ／Ｆ受容体系に対する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１７】
修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインが、配列番号７のＴｒｐ１０９６番、Ｇｌｙ１０９７番、Ｌｅｕ１１００番、Ｔｙｒ１１０６番、Ｔｙｒ１１０７番、Ｇｌｙ１１４８番、Ｉｌｅ１１５３番、Ａｓｐ１１７２番、Ｇｌｎ１１９８番、Ｉｌｅ１２４５番、Ｓｅｒ１２６６番、Ｔｒｐ１２６８番、Ｔｙｒ１２６９番、Ａｒｇ１２７２番、Ｇｌｙ１２８３番、及びＴｒｐ１２８５番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＢｏＮＴ／Ｇ受容体系に対する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１８】
修飾ＴｅＮＴ結合ドメインが、配列番号８のＴｒｐ１１１８番、Ｇｌｙ１１１９番、Ｌｅｕ１１２２番、Ｔｙｒ１１２８番、Ｔｙｒ１１２９番、Ｇｌｙ１１７２番、Ｉｌｅ１１７７番、Ａｓｐ１１９４番、Ａｓｐ１２２２番、Ｔｈｒ１２７０番、Ｓｅｒ１２８７番、Ｔｒｐ１２８９番、Ｔｙｒ１２９０番、Ｈｉｓ１２９３番、Ｇｌｙ１３００番、及びＴｒｐ１３０３番、並びにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される位置でのアミノ酸の置換を含み；
アミノ酸の置換が、ＴｅＮＴ受容体系に対する修飾ＴｅＮＴ結合ドメインの結合活性を増大させる、請求項１０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１９】
修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインが、β−三葉形ドメインに少なくとも１個のアミノ酸の置換を含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２０】
アミノ酸の置換が、β−三葉形ドメインのα−折り畳み、β−折り畳みまたはγ−折り畳み内に位置する、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２１】
アミノ酸の置換が、β−三葉形ドメインのβ４／β５  β−ヘアピンカーブまたはβ８／β９  β−ヘアピンカーブ内に位置する、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２２】
アミノ酸の置換が、グリシンまたはフェニルアラニンである、請求項２１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２３】
修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、ＦＧＦ−１  α−折り畳み、ＦＧＦ−２  α−折り畳み、ＦＧＦ−４  α−折り畳み、ＦＧＦ−８  α−折り畳み、ＦＧＦ−９  α−折り畳み、ＦＧＦ−１７  α−折り畳み、及びＦＧＦ−１８  α−折り畳みからなる群より選択されるα−折り畳みに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのα−折り畳みの置換を含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２４】
修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、ＦＧＦ−１  β−折り畳み、ＦＧＦ−２  β−折り畳み、ＦＧＦ−４  β−折り畳み、ＦＧＦ−８  β−折り畳み、ＦＧＦ−９  β−折り畳み、ＦＧＦ−１７  β−折り畳み、及びＦＧＦ−１８  β−折り畳みからなる群より選択されるβ−折り畳みに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのβ−折り畳みの置換を含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２５】
修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、ＦＧＦ−１  γ−折り畳み、ＦＧＦ−２  γ−折り畳み、ＦＧＦ−４  γ−折り畳み、ＦＧＦ−８  γ−折り畳み、ＦＧＦ−９  γ−折り畳み、ＦＧＦ−１７  γ−折り畳み、及びＦＧＦ−１８  γ−折り畳みからなる群より選択されるγ−折り畳みに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのγ−折り畳みの置換を含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２６】
修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−２  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−４  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−８  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−９  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、及びＦＧＦ−１８  β４／β５  β−ヘアピンカーブからなる群より選択されるβ４／β５  β−ヘアピンカーブに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのβ４／β５  β−ヘアピンカーブの置換を含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２７】
修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−２  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−４  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−８  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−９  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、及びＦＧＦ−１８  β８／β９  β−ヘアピンカーブからなる群より選択されるβ８／β９  β−ヘアピンカーブに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのβ８／β９  β−ヘアピンカーブの置換を含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２８】
プロテアーゼ切断部位が、内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位または外因性切断部位である、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２９】
内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位が、ＢｏＮＴ／Ａ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｂ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｃ１二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｄ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｅ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｆ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｇ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、及びＴｅＮＴ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位からなる群より選択される、請求項２８に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３０】
外因性プロテアーゼ切断部位が、エンテロキナーゼ切断部位、トロンビン切断部位、Ｘａ因子切断部位、ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルスプロテアーゼ切断部位、ジペプチジルアミノペプチダーゼ切断部位、低分子量のユビキチン類似因子（ＳＵＭＯ）／ユビキチン様タンパク質−１（ＵＬＰ−１）プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素基質切断部位からなる群より選択される、請求項２８に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３１】
クロストリジウム毒素基質切断部位が、ＢｏＮＴ／Ａ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｂ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｃ１基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｄ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｅ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｆ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｇ基質切断部位、及びＴｅＮＴ基質切断部位からなる群より選択される、請求項３０に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３２】
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメイン；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメイン；
ｃ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができるクロストリジウム非毒素関連タンパク質のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメイン；及び、
ｄ）プロテアーゼ切断部位
を含む修飾クロストリジウム毒素であって、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる、修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３３】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転座ドメイン、及び増大した標的ドメインを含む、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３４】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増大した標的ドメイン、及びクロストリジウム毒素転座ドメインを含む、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３５】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、増大した標的ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３６】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、増大した標的ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素転座ドメインを含む、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３７】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、及び増大した標的ドメインを含む、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３８】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増大した標的ドメイン、及びクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３９】
クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、及びＴｅＮＴ酵素ドメインからなる群より選択される、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４０】
クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／Ａ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転座ドメイン、及びＴｅＮＴ転座ドメインからなる群より選択される、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４１】
クロストリジウム非毒素関連タンパク質のβ−三葉形ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、及びクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメインからなる群より選択される、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４２】
プロテアーゼ切断部位が、内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位または外因性切断部位である、請求項３２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４３】
内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位が、ＢｏＮＴ／Ａ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｂ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｃ１二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｄ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｅ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｆ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｇ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、及びＴｅＮＴ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位からなる群より選択される、請求項４２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４４】
外因性プロテアーゼ切断部位が、エンテロキナーゼ切断部位、トロンビン切断部位、Ｘａ因子切断部位、ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルスプロテアーゼ切断部位、ジペプチジルアミノペプチダーゼ切断部位、低分子量のユビキチン類似因子（ＳＵＭＯ）／ユビキチン様タンパク質−１（ＵＬＰ−１）プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素基質切断部位からなる群より選択される、請求項４２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４５】
クロストリジウム毒素基質切断部位が、ＢｏＮＴ／Ａ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｂ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｃ１基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｄ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｅ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｆ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｇ基質切断部位、及びＴｅＮＴ基質切断部位からなる群より選択される、請求項４４に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４６】
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメイン；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメイン；
ｃ）ＦＧＦＲ３に選択的に結合することができるＦＧＦ  β−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメイン；及び
ｄ）プロテアーゼ切断部位
を含む修飾クロストリジウム毒素であって、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる、修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４７】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転座ドメイン、及び増大した標的ドメインを含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４８】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増大した標的ドメイン、及びクロストリジウム毒素転座ドメインを含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４９】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、増大した標的ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５０】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、増大した標的ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素転座ドメインを含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５１】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、及び増大した標的ドメインを含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５２】
修飾クロストリジウム毒素が、アミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチドの線形順序で、クロストリジウム毒素転座ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増大した標的ドメイン、及びクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５３】
クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、及びＴｅＮＴ酵素ドメインからなる群より選択される、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５４】
クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／Ａ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転座ドメイン、及びＴｅＮＴ転座ドメインからなる群より選択される、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５５】
ＦＧＦ  β−三葉形ドメインが、ＦＧＦ−１  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−２  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−４  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−８  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−９  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−１７  β−三葉形ドメイン、及びＦＧＦ−１８  β−三葉形ドメインからなる群より選択される、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５６】
プロテアーゼ切断部位が、内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位または外因性切断部位である、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５７】
内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位が、ＢｏＮＴ／Ａ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｂ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｃ１二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｄ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｅ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｆ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、ＢｏＮＴ／Ｇ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位、及びＴｅＮＴ二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位からなる群より選択される、請求項５６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５８】
外因性プロテアーゼ切断部位が、エンテロキナーゼ切断部位、トロンビン切断部位、Ｘａ因子切断部位、ヒトライノウイルス３Ｃプロテアーゼ切断部位、タバコエッチウイルスプロテアーゼ切断部位、ジペプチジルアミノペプチダーゼ切断部位、低分子量のユビキチン類似因子（ＳＵＭＯ）／ユビキチン様タンパク質−１（ＵＬＰ−１）プロテアーゼ切断部位、及びクロストリジウム毒素基質切断部位からなる群より選択される、請求項５６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５９】
クロストリジウム毒素基質切断部位が、ＢｏＮＴ／Ａ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｂ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｃ１基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｄ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｅ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｆ基質切断部位、ＢｏＮＴ／Ｇ基質切断部位、及びＴｅＮＴ基質切断部位からなる群より選択される、請求項５８に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項６０】
修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子であって、ポリヌクレオチド分子は、
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｃ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができる修飾クロストリジウム結合ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｄ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させ、及び
修飾クロストリジウム結合ドメインが、修飾クロストリジウム結合ドメインが由来する天然由来のクロストリジウム結合ドメインの結合活性に比べ、内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対して増大した結合活性を示す、ポリヌクレオチド分子。
【請求項６１】
ポリヌクレオチド分子が、請求項２〜７のいずれか一項に記載の修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６２】
ポリヌクレオチド分子が、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、及びＴｅＮＴ酵素ドメインからなる群より選択されるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６３】
ポリヌクレオチド分子が、ＢｏＮＴ／Ａ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転座ドメイン、及びＴｅＮＴ転座ドメインからなる群より選択されるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６４】
ポリヌクレオチド分子が、修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメイン、修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメイン、及び修飾ＴｅＮＴ結合ドメインからなる群より選択される修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６５】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  α−折り畳み、ＦＧＦ−１  α−折り畳み、ＦＧＦ−２  α−折り畳み、ＦＧＦ−４  α−折り畳み、ＦＧＦ−８  α−折り畳み、ＦＧＦ−９  α−折り畳み、ＦＧＦ−１７  α−折り畳み、及びＦＧＦ−１８  α−折り畳みからなる群より選択されるα−折り畳みに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのα−折り畳みの置換を含む修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６６】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β−折り畳み、ＦＧＦ−１  β−折り畳み、ＦＧＦ−２  β−折り畳み、ＦＧＦ−４  β−折り畳み、ＦＧＦ−８  β−折り畳み、ＦＧＦ−９  β−折り畳み、ＦＧＦ−１７  β−折り畳み、及びＦＧＦ−１８  β−折り畳みからなる群より選択されるβ−折り畳みに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのβ−折り畳みの置換を含む修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６７】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  γ−折り畳み、ＦＧＦ−１  γ−折り畳み、ＦＧＦ−２  γ−折り畳み、ＦＧＦ−４  γ−折り畳み、ＦＧＦ−８  γ−折り畳み、ＦＧＦ−９  γ−折り畳み、ＦＧＦ−１７  γ−折り畳み、及びＦＧＦ−１８  γ−折り畳みからなる群より選択されるγ−折り畳みに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのγ−折り畳みの置換を含む修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６８】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−２  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−４  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−８  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−９  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１７  β４／β５  β−ヘアピンカーブ、及びＦＧＦ−１８  β４／β５  β−ヘアピンカーブからなる群より選択されるβ４／β５  β−ヘアピンカーブに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのβ４／β５  β−ヘアピンカーブの置換を含む修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項６９】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  １β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  １β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  １β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  ２β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−２  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−４  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−８  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−９  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、ＦＧＦ−１７  β８／β９  β−ヘアピンカーブ、及びＦＧＦ−１８  β８／β９  β−ヘアピンカーブからなる群より選択されるβ８／β９  β−ヘアピンカーブに対するクロストリジウム毒素結合ドメインのβ８／β９  β−ヘアピンカーブの置換を含む修飾クロストリジウム毒素の結合ドメインをコードする、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７０】
プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子が、内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位または外因性切断部位である、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７１】
ポリヌクレオチド分子が、発現ベクターを含む、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７２】
修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子であって、ポリヌクレオチド分子が、
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｃ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができるクロストリジウム非毒素関連タンパク質のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｄ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる、ポリヌクレオチド分子。
【請求項７３】
ポリヌクレオチド分子が、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載の修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項７２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７４】
ポリヌクレオチド分子が、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、及びＴｅＮＴ酵素ドメインからなる群より選択されるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードする、請求項７２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７５】
ポリヌクレオチド分子が、ＢｏＮＴ／Ａ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転座ドメイン、及びＴｅＮＴ転座ドメインからなる群より選択されるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードする、請求項７２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７６】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメイン、及びクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ  β−三葉形ドメインからなる群より選択されるクロストリジウム非毒素関連タンパク質のβ−三葉形ドメインをコードする、請求項７２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７７】
プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子が、内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位または外因性切断部位である、請求項７２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７８】
ポリヌクレオチド分子が、発現ベクターを含む、請求項６０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項７９】
修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子であって、ポリヌクレオチド分子が、
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｃ）ＦＧＦＲ３に選択的に結合することができるＦＧＦ  β−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｄ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる、ポリヌクレオチド分子。
【請求項８０】
ポリヌクレオチド分子が、請求項４７〜５２のいずれか一項に記載の修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項７９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項８１】
ポリヌクレオチド分子が、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、及びＴｅＮＴ酵素ドメインからなる群より選択されるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードする、請求項７９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項８２】
ポリヌクレオチド分子が、ＢｏＮＴ／Ａ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転座ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転座ドメイン、及びＴｅＮＴ転座ドメインからなる群より選択されるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードする、請求項７９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項８３】
ポリヌクレオチド分子が、ＦＧＦ−１  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−２  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−４  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−８  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−９  β−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−１７  β−三葉形ドメイン、及びＦＧＦ−１８  β−三葉形ドメインからなる群より選択されるＦＧＦ  β−三葉形ドメインをコードする、請求項７９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項８４】
プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子が、内因性クロストリジウム毒素の二重鎖ループのプロテアーゼ切断部位または外因性切断部位である、請求項７９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項８５】
ポリヌクレオチド分子が、発現ベクターを含む、請求項７９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項８６】
細胞内で修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を発現させる段階を含む、修飾クロストリジウム毒素の製造方法であって、ポリヌクレオチド分子が、
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｃ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができる修飾クロストリジウム結合ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｄ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させ；及び
修飾クロストリジウム結合ドメインが、修飾クロストリジウム結合ドメインが由来する天然由来のクロストリジウム結合ドメインの結合活性に比べ、内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対する増大した結合活性を示す、方法。
【請求項８７】
細胞内で修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を発現させる段階を含む、修飾クロストリジウム毒素の製造方法であって、ポリヌクレオチド分子が、
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｃ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができるクロストリジウム非毒素関連タンパク質のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｄ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる、方法。
【請求項８８】
細胞内で修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を発現させる段階を含む、修飾クロストリジウム毒素の製造方法であって、ポリヌクレオチド分子が、
ａ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｂ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｃ）ＦＧＦＲ３に選択的に結合することができるＦＧＦ  β−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｄ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる、方法。
【請求項８９】
ａ）修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を細胞内に取り込む段階において、ポリヌクレオチド分子が、
ｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｉｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｉｉｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができる修飾クロストリジウム結合ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｉｖ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変化させ；及び
修飾クロストリジウム結合ドメインが、修飾クロストリジウム結合ドメインが由来する天然由来のクロストリジウム結合ドメインの結合活性に比べ、内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対して増大した結合活性を示す段階；及び、
ｂ）ポリヌクレオチド分子によってコードされる修飾クロストリジウム毒素を発現させる段階
を含む、修飾クロストリジウム毒素の製造方法。
【請求項９０】
ａ）修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を細胞内に取り込む段階であって、ポリヌクレオチド分子が、
ｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｉｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｉｉｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の細胞結合段階を行うことができるクロストリジウム非毒素関連タンパク質のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｉｖ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる段階；
ｂ）ポリヌクレオチド分子によってコードされた修飾クロストリジウム毒素を発現させる段階
を含む、修飾クロストリジウム毒素の製造方法。
【請求項９１】
ａ）修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を細胞内に取り込む段階であって、ポリヌクレオチド分子が、
ｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができるクロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｉｉ）クロストリジウム毒素の中毒過程の転座段階を行うことができるクロストリジウム毒素転座ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｉｉｉ）ＦＧＦＲ３に選択的に結合することができるＦＧＦ  β−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；及び
ｉｖ）プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチド分子
を含み、
プロテアーゼ切断部位の切断が、修飾クロストリジウム毒素の単鎖形態を二重鎖形態に変換させる段階；
ｂ）ポリヌクレオチド分子によってコードされた修飾クロストリジウム毒素を発現させる段階
を含む、修飾クロストリジウム毒素の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本特許出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項に基づき、その内容全体が全て参照として本明細書に組み込まれる、２００５年３月１５日に出願された米国仮出願第６０／６６２，１５１号及び２００５年３月１５日に出願された米国仮出願第６０／６６１，９５３号に対して優先権を主張する。
【０００２】
本出願に言及された全ての特許及び刊行物は、その内容全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
例えば、ボツリヌス神経毒素（ＢｏＮＴ）、ＢｏＮＴ／Ａ、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ１、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／Ｆ及びＢｏＮＴ／Ｇ、及び破傷風神経毒素（ＴｅＮＴ）のようなクロストリジウム毒素（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  ｔｏｘｉｎ）の神経シグナル伝達を阻害する能力が、広範囲な治療的及び美容的応用において開発されている。例えば、非特許文献１を参照する。一例として、ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、現在１つ以上の国家で下記の適用について承認されている；弛緩不能症、成人での痙直、裂肛、腰痛、眼瞼けいれん、歯ぎしり、頸部ジストニア、本態性振戦、眉間のしわ、または運動過多性顔のしわ、頭痛、片側顔面けいれん、膀胱の活動亢進、多汗症、小児脳性麻痺、多発性硬化症、ミオクローヌス障害、鼻と唇のしわ、けいれん性発声障害、斜視及びＶＩＩ神経障害。また、クロストリジウム毒素療法が下記の治療のために提案されているが、神経筋障害については、例えば、ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｔｙｐｅｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ」、特許文献１（２００５年３月２９日）；レット  Ｍ．シフマン（Ｒｈｅｔｔ  Ｍ．Ｓｃｈｉｆｆｍａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｕｔｅｒｉｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献２（２００４年９月９日）；リチャード  Ｌ．バロン（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｌ．Ｂａｒｒｏｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｕｌｃｅｒｓ  ａｎｄ  Ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｒｅｆｌｕｘ  Ｄｉｓｅａｓｅ」、特許文献３（２００４年５月７日）；及びケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら  、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｄｙｓｔｏｎｉａ  ｗｉｔｈ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｃ  ｔｏ  Ｇ」、特許文献４（２００１年１１月２０日）を参照し、目の疾患については、例えば、エリク  Ｒ．ファースト（Ｅｒｉｃ  Ｒ．Ｆｉｒｓｔ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｅｙｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献５（２００４年１１月２５日）；ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｂｌｅｐｈａｒｏｓｐａｓｍ」、特許文献６（２００４年８月５日）；及びケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｓｔｒａｂｉｓｍｕｓ」、特許文献７（２００４年７月１日）を参照し、痛みについては、例えば、ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｐａｉｎ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｂｙ  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ」、特許文献８（２００５年３月２２日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｔｏｘｉｎ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ  Ｐａｉｎ」、特許文献９（２００３年１１月４���）；ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｐａｉｎ  ｂｙ  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ」、特許文献１０（２００２年１０月１５日）；ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）及びミングレイ  チュー（Ｍｉｎｇｌｅｉ  Ｃｕｉ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｐａｉｎ」、特許文献１１（２０００年９月５日）；マーティン  Ａ．ボエット（Ｍａｒｔｉｎ  Ａ．Ｖｏｅｔ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ」、特許文献１２（２００３年９月２３日）；マーティン  Ａ．ボエット（Ｍａｒｔｉｎ  Ａ．Ｖｏｅｔ）、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ」、特許文献１３（２００４年４月１日）；及びケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｗｅｒ  Ｂａｃｋ  Ｐａｉｎ」、特許文献１４（２００４年２月２６日）を参照し、筋肉損傷については、例えば、グレゴリ  Ｆ．ブルクス（Ｇｒｅｇｏｒｙ  Ｆ．Ｂｒｏｏｋｓ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｉｎｊｕｒｉｅｓ」、特許文献１５（２００２年７月２３日）を参照し、頭痛については、例えば、マーティン  ボエット（Ｍａｒｔｉｎ  Ｖｏｅｔ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｓｉｎｕｓ  Ｈｅａｄａｃｈｅ」、特許文献１６（２００５年１月４日）；ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｔｅｎｓｉｏｎ  Ｈｅａｄａｃｈｅ」、特許文献１７（２００４年８月１７日）；ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｈｅａｄａｃｈｅ」、特許文献１８（２００２年１０月１日）；及びウィリアム  Ｊ．ビンダー（Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｊ．Ｂｉｎｄｅｒ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｇｒａｉｎｅ  Ｈｅａｄａｃｈｅ  Ｐａｉｎ」、特許文献１９（１９９８年２月３日）を参照し、心臓血管疾患については、例えば、グレゴリ  Ｆ．ブルクス（Ｇｒｅｇｏｒｙ  Ｆ．Ｂｒｏｏｋｓ）及びステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ」、特許文献２０（２００４年７月２７日）を参照し、神経障害については、例えば、ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」、特許文献２１（２００３年９月１６日）；及びステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ」、特許文献２２（２００１年１０月２３日）を参照し、精神神経疾患については、例えば、ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉ��  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献２３（２００４年９月１６日）；及びスティーヴン  ドノバン（Ｓｔｅｖｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献２４（２００３年１１月１３日）を参照し、内分泌障害については、例えば、ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献２５（２００４年１２月７日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｔｈｙｒｏｉｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ」、特許文献２６（２００４年５月２５日）；ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  ａ  Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ  Ｓｗｅａｔ  Ｇｌａｎｄ」、特許文献２７（２００４年１月２７日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ」、特許文献２８（２００２年７月９日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ」、特許文献２９（２００２年１月８日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  ａ  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ」、特許文献３０（２００１年７月１７日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、  特許文献３１（２０００年１１月７日）を参照し、癌については、例えば、ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｂｏｎｅ  Ｔｕｍｏｒｓ」、特許文献３２（２００３年５月２０日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  ｔｏ  Ｉｍｐｒｏｖｅ  Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ」、特許文献３３（２００２年４月９日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ」、特許文献３４（２０００年１０月３１日）；及びミッチェル  Ｆ．ブリン（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｆ．Ｂｒｉｎ）及びステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｃａｎｃｅｒｓ」、特許文献３５（２００５年２月１０日）を参照し、耳の疾患については、例えば、ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｎｅｒ  Ｅａｒ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献３６（２００２年３月１９日）；及びステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｏｔｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献３７（２００１年７月２４日）を参照し、自律神経障害については、例えば、パンカイ  Ｊ．パスリチャ（Ｐａｎｋａｉ  Ｊ．Ｐａｓｒｉｃｈａ）及びアンソニー  Ｎ．ケル（Ａｎｔｈｏｎｙ  Ｎ．Ｋａｌｌｏｏ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｓｍｏｏｔｈ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ」、特許文献３８（１９９５年８月１日）を参照し、また、その他の障害については、例えば、ウィリアム  Ｊ．ビンダー（Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｊ．Ｂｉｎｄｅｒ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｋｉｎ  Ｌｅｓｉｏｎｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｃｅｌｌ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献３９（１９９７年９月２３日）；エリク  Ｒ．ファースト（Ｅｒｉｃ  Ｒ．Ｆｉｒｓｔ）、「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、特許文献４０（２０００年５月１６日）；マービン  シュワルツ（Ｍａｒｖｉｎ  Ｓｃｈｗａｒｔｚ）及びブライアン  Ｊ．フロイント（Ｂｒｉａｎ  Ｊ．Ｆｒｅｕｎｄ）、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｔｏ  Ｒｅｄｕｃｅ  Ｈａｉｒ  Ｌｏｓｓ  ａｎｄ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｅ  Ｈａｉｒ  Ｇｒｏｗｔｈ」、特許文献４１（２００１年１０月９日）；ジーン  Ｄ．Ａ．カラザーズ(Ｊｅａｎ  Ｄ．Ａ．Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ)及びアラステア  カラザーズ（Ａｌａｓｔａｉｒ  Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ）、「Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｏｗｎｔｕｒｎｅｄ  Ｍｏｕｔｈ」、特許文献４２（２００２年３月１９日）；ステファン  ドノバン（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｄｏｎｏｖａｎ）、「Ｕｓｅ  ｏｆ  ａ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｔｏｘｉｎ  ｔｏ  Ｒｅｄｕｃｅ  Ａｐ
ｐｅｔｉｔｅ」、特許文献４３（２００４年１２月１６日）；及びハワード  Ｉ．カッツ（Ｈｏｗａｒｄ  Ｉ．Ｋａｔｚ）及びアンドリュー  Ｍ．ブルーメンフェルド（Ａｎｄｒｅｗ  Ｍ．Ｂｌｕｍｅｎｆｅｌｄ）、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｄｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」、特許文献４４（２００４年６月１７日）；ケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ」、特許文献４５（２００２年１月２４日）；及びケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）ら、「Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｖａｒｉｏｕｓ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐａｉｎ」、特許文献４６（２００４年１月２２日）を参照する。また、ヒト及びその他の哺乳動物の治療的及び美容的処理における、例えば、ＢｏＮＴ及びＴｅＮＴのようなクロストリジウム毒素の予測される用途は、これらの毒素の特性から利益が得られる、さらに増加している範囲の疾患及び病症に拡大されるものと予想される。
【発明の開示】
【０００４】
クロストリジウム毒素療法は、多数の適用において、成功的に用いられている。一般に、クロストリジウム毒素治療剤の投与は、耐薬性が良好である。しかしながら、一部の応用分野では、毒素投与が問題を引き起こすことがあるが、これは、有益な効果を得るためにより多くの投与量が必要だからである。投与量が多くなると、前記毒素が、体内の間質液、及び例えば、心臓血管系及びリンパ系のような循環系を移動し、毒素が、毒素治療の標的ではない区域に望ましくない分散を引き起こす可能性が高くなり得る。このような分散は、例えば、治療の標的ではない神経細胞での神経伝達物質の放出の阻害、または、治療の目的ではない筋肉の麻痺のような望ましくない副作用を引き起こすこともある。例えば、斜頸について、首の筋肉に治療的に有効量のＢｏＮＴ／Ａ治療剤が投与された患者は、毒素が中咽頭に分散され、嚥下困難を引き起こすこともあり得る。したがって、治療部位では効果的であるが、毒素治療の標的ではない区域では殆ど影響を及ぼさない、改善されたクロストリジウム毒素が依然として望まれている。
【０００５】
大きな投与量を必要とする療法でのクロストリジウム毒素の臨床的、治療的及び美容的用途の増加は、製薬産業において、適用標的部位では効果的であるが、所望でない位置または位置等への毒素の分散に関連した望ましくない副作用は減少させまたは防止する修飾クロストリジウム毒素の開発を必要とする。本発明は、非標的化区域への毒素の分散に関連した所望でない副作用を減少させまたは防止する新規なクロストリジウム毒素を提供する。これらの長所及び関連した長所は、例えば、神経筋障害、神経病症障害、目の疾患、痛み、筋肉損傷、頭痛、心臓血管疾患、精神神経疾患、内分泌障害、癌、耳の障害、及び運動過多性顔のしわなど、哺乳動物に対するクロストリジウム毒素の投与が有益な効果を生じ得るその他の障害の治療のような多様な臨床的、治療的及び美容的応用分野に有用である。
【０００６】
図面の簡単な説明
図１は、中枢及び末梢神経細胞での神経伝達物質放出及びクロストリジウム毒素中毒の現在パラダイムの概略図を示す。図１Ａは、中枢及び末梢神経細胞での神経伝達物質放出メカニズムに対する概略図を示す。放出過程は、１）小胞体ドッキング段階であり、神経伝達物質分子を含有する小胞体の小胞体結合ＳＮＡＲＥタンパク質が、原形質膜に位置した膜結合ＳＮＡＲＥタンパク質と結合する段階、及び２）神経伝達物質放出段階であり、前記小胞体が原形質膜と融合し、神経伝達物質分子が細胞外流出される段階の、２段階を含むものと説明され得る。図１Ｂは、中枢及び末梢神経細胞での破傷風及びボツリヌス毒素活性に対する中毒メカニズムの概略図を示す。この中毒過程は、１）受容体結合段階であり、クロストリジウム毒素がクロストリジウム受容体系と結合し、中毒過程を開始する段階、２）複合体内在化段階であり、毒素結合後、毒素／受容体系複合体を含有する小胞体が細胞内に細胞内移入される段階、３）軽鎖転座段階であり、例えば、小胞の内部ｐＨの変化、クロストリジウム毒素重鎖のＨＮドメインを含むチャンネル細孔の形成、前記重鎖からクロストリジウム毒素軽鎖の分離、及び活性軽鎖の放出を含む多様なイベントが起こると推定される段階、及び４）酵素標的修飾段階であり、クロストリジウム毒素タンパク質の活性軽鎖が、例えば、ＳＮＡＰ−２５、ＶＡＭＰまたはシンタキシンのようなその標的ＳＮＡＲＥ基質を、タンパク質分解的に切断することにより、小胞体ドッキング及び神経伝達物質放出を防止する段階の、４段階を含むものと説明され得る。
【０００７】
図２は、天然由来のクロストリジウム毒素のドメイン編成を示す。単一鎖型は、酵素ドメイン、転座ドメイン、結合ドメインを含む、アミノからカルボキシルまでの線形編成を示す。転座ドメインと酵素ドメインとの間に位置した二重鎖ループ領域は、二重ＳＳ括弧で示される。この領域は、例えば、内因性クロストリジウム毒性プロテアーゼまたは環境で生成した天然由来のプロテアーゼのような天然由来のプロテアーゼを用いたタンパク質分解的切断の際に、毒素の単一鎖型を二重鎖型に変換させる内因性二重鎖ループプロテアーゼ切断部位を含む。前記単一鎖型上には、クロストリジウム毒素結合ドメインのＨＣＣ領域が示されている。この領域は、アミノからカルボキシルまでの線形編成のうち、α−折り畳み、β４／β５ヘアピンカーブ、β−折り畳み、β８／β９ヘアピンカーブ、及びγ−折り畳みを含むβ−三葉形ドメインを含む。
【０００８】
図３は、修飾毒素のアミノ末端に位置した増大された標的ドメインを有する修飾クロストリジウム毒素を示す。図３Ａは、増大された標的ドメイン、酵素ドメイン及び転座ドメインを含む、アミノからカルボキシルまでの線形編成を有する修飾クロストリジウム毒素の単一ポリペプチド形態を示し、二重鎖ループ領域は、二重ＳＳ括弧で示されている。二重鎖ループ領域内のタンパク質分解的切断部位Ｐは、転座ドメインと酵素ドメインとの間に位置している。Ｐプロテアーゼを用いたタンパク質分解的切断の際に、前記毒素の単一鎖型が二重鎖型に変換する。Ｐプロテアーゼ部位は、クロストリジウム毒素内因性プロテアーゼ切断部位または非クロストリジウム毒素外因性プロテアーゼ切断部位であってもよい。スペーサは、標的ドメインと転座ドメイン、転座ドメインと酵素ドメイン、またはこれらの任意の組合せ間に配置されてもよい。図３Ｂは、増大された標的ドメイン、酵素ドメイン及び転座ドメインを含む、アミノからカルボキシルまでの線形編成を有する修飾クロストリジウム毒素の単一ポリペプチド形態を示し、二重鎖ループ領域は、二重ＳＳ括弧で示されている。二重鎖ループ領域内のタンパク質分解的切断部位Ｐは、酵素ドメインと転座ドメインとの間に位置している。Ｐプロテアーゼを用いたタンパク質分解的切断の際に、前記毒素の単一鎖型が二重鎖型に変換する。Ｐプロテアーゼ部位は、クロストリジウム毒素内因性プロテアーゼ切断部位または非クロストリジウム毒素外因性プロテアーゼ切断部位であってもよい。スペーサは、標的ドメインと酵素ドメイン、酵素ドメインと転座ドメイン、またはこれらの任意の組合せ間に配置されてもよい。
【０００９】
図４は、他の２つのドメイン間に位置した増大された標的ドメインを有する修飾クロストリジウム毒素を示す。図４Ａは、酵素ドメイン、増大された標的ドメイン及び転座ドメインを含む、アミノからカルボキシルまでの線形編成を有する修飾クロストリジウム毒素の単一ポリペプチド形態を示し、二重鎖ループ領域は、二重ＳＳ括弧で示されている。二重鎖ループ領域内のタンパク質分解的切断部位Ｐは、酵素ドメインと標的ドメインとの間に位置している。Ｐプロテアーゼを用いたタンパク質分解的切断の際に、前記毒素の単一鎖型が二重鎖型に変換する。Ｐプロテアーゼ部位は、クロストリジウム毒素内因性プロテアーゼ切断部位または非クロストリジウム毒素外因性プロテアーゼ切断部位であってもよい。スペーサは、酵素ドメインと標的ドメイン、標的ドメインと転座ドメイン、またはこれらの任意の組合せ間に配置されてもよい。図４Ｂは、転座ドメイン、増大された標的ドメイン、及び酵素ドメインを含む、アミノからカルボキシルまでの線形編成を有する修飾クロストリジウム毒素の単一ポリペプチド形態を示し、二重鎖ループ領域は、二重ＳＳ括弧で示されている。二重鎖ループ領域内のタンパク質分解的切断部位Ｐは、転座ドメインと標的ドメインとの間に位置している。Ｐプロテアーゼを用いたタンパク質分解的切断の際に、前記毒素の単一鎖型が二重鎖型に変換する。Ｐプロテアーゼ部位は、クロストリジウム毒素内因性プロテアーゼ切断部位または非クロストリジウム毒素外因性プロテアーゼ切断部位であってもよい。スペーサは、転座ドメインと標的ドメイン、標的ドメインと酵素ドメイン、またはこれらの任意の組合せ間に配置されてもよい。
【００１０】
図５は、修飾毒素のカルボキシル末端に位置した増大された標的ドメインを有する修飾クロストリジウム毒素を示す。図５Ａは、酵素ドメイン、転座ドメイン及び増大された標的ドメインを含む、アミノからカルボキシルまでの線形編成を有する修飾クロストリジウム毒素の単一ポリペプチド形態を示し、二重鎖ループ領域は、二重ＳＳ括弧で示されている。二重鎖ループ領域内のタンパク質分解的切断部位Ｐは、酵素ドメインと転座ドメインとの間に位置している。Ｐプロテアーゼを用いたタンパク質分解的切断の際に、前記毒素の単一鎖型が二重鎖型に変換する。Ｐプロテアーゼ部位は、クロストリジウム毒素内因性プロテアーゼ切断部位または非クロストリジウム毒素外因性プロテアーゼ切断部位であってもよい。スペーサは、酵素ドメインと転座ドメイン、転座ドメインと標的ドメイン、またはこれらの任意の組合せ間に配置されてもよい。図５Ｂは、転座ドメイン、酵素ドメイン及び増大された標的ドメインを含む、アミノからカルボキシルまでの線形編成を有する修飾クロストリジウム毒素の単一ポリペプチド形態を示し、二重鎖ループ領域は、二重ＳＳ括弧で示されている。二重鎖ループ領域内のタンパク質分解的切断部位Ｐは、転座ドメインと酵素ドメインとの間に位置している。Ｐプロテアーゼを用いたタンパク質分解的切断の際に、前記毒素の単一鎖型が二重鎖型に変換する。Ｐプロテアーゼ部位は、クロストリジウム毒素内因性プロテアーゼ切断部位または非クロストリジウム毒素外因性プロテアーゼ切断部位であってもよい。スペーサは、転座ドメインと酵素ドメイン、酵素ドメインと標的ドメイン、またはこれらの任意の組合せ間に配置されてもよい。
【００１１】
詳細な説明
本発明は、天然由来のクロストリジウム毒素により標的とされた細胞に対する増大した結合活性を示す修飾クロストリジウム毒素を開示する。増大された結合活性は、クロストリジウム毒素の天然由来の結合ドメインを、クロストリジウム毒素標的細胞に対する増大した結合活性を示す結合ドメインと置換することにより得られる。この標的細胞に対する増大された結合活性は、より低い有効投与量の修飾クロストリジウム毒素を個人に投与可能にしなければならないが、これは、より多くの毒素が標的細胞に伝達されるからである。増大した結合活性を有する、そのように修飾されたクロストリジウム毒素は、毒素の、治療に対する標的ではない区域への望ましくない分散を減少させ、クロストリジウム毒素の望まない位置への拡散と関連する望ましくない副作用を減少させまたは防止することができる。
【００１２】
本発明の態様は、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン、及び増大された標的ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素であって、天然由来のクロストリジウム毒素と比べて、クロストリジウム毒素標的細胞に対して増大された標的化活性を示す修飾クロストリジウム毒素を提供する。本明細書の修飾クロストリジウム毒素内の増大された標的ドメインの位置は、毒素のアミノ末端、酵素ドメインと転座ドメインとの間、または、毒素のカルボキシル末端から見出されるものと想定される。したがって、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素は、例えば、増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素転座ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメイン；増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメインと、クロストリジウム毒素転座ドメイン；クロストリジウム毒素酵素ドメインと、増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素転座ドメイン；クロストリジウム毒素転座ドメインと、増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメイン；クロストリジウム毒素酵素ドメインと、クロストリジウム毒素転座ドメインと、増大された標的ドメイン；及びクロストリジウム毒素転座ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメインと、増大された標的ドメインの、アミノからカルボキシルまでのドメイン配列を含んでもよい。
【００１３】
本発明の他の態様は、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン、及び増大された標的ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子であって、前記修飾クロストリジウム毒素が天然由来のクロストリジウム毒素と比べて、クロストリジウム毒素標的細胞に対して増大された標的化活性を示すものであるポリヌクレオチド分子を提供する。本明細書のポリヌクレオチド分子によりコードされる修飾クロストリジウム毒素の増大された標的ドメインの位置は、毒素のアミノ末端、酵素ドメインと転座ドメインとの間、または、毒素のカルボキシル末端から見出されるものと予想される。したがって、本明細書に開示されたポリヌクレオチド分子は、例えば、増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素転座ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメイン；増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン；クロストリジウム毒素酵素ドメインと、増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素転座ドメイン；クロストリジウム毒素転座ドメインと、増大された標的ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメイン；クロストリジウム毒素酵素ドメインと、クロストリジウム毒素転座ドメインと、増大された標的ドメイン；及びクロストリジウム毒素転座ドメインと、クロストリジウム毒素酵素ドメインと、増大された標的ドメインの、アミノからカルボキシルまでのドメイン配列を含む修飾クロストリジウム毒素をコードしてもよい。
【００１４】
本発明の他の態様は、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素を製造する方法であって、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン、及び増大された標的ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を細胞内で発現させるが、前記修飾クロストリジウム毒素が天然由来のクロストリジウム毒素と比べて、クロストリジウム毒素標的細胞に対して増大された標的化活性を示すものである段階を含む方法を提供する。本発明の他の態様は、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素を製造する方法であって、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転座ドメイン、及び増大された標的ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を含む発現構造体を細胞内に導入する段階を含み、前記修飾クロストリジウム毒素が天然由来のクロストリジウム毒素と比べて、クロストリジウム毒素標的細胞に対して増大された標的化活性を示すものである段階、及び細胞内で前記発現構造体を発現する段階を含む方法を提供する。
【００１５】
クロストリジウム・ボツリヌス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、クロストリジウム・バラティ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂａｒａｔｉｉ）、及びクロストリジウム・ブチリカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）により産生されるクロストリジウム毒素が、ヒト及び他の哺乳動物の治療的及び美容的処理に最も幅広く使用される。Ｃ．ボツリヌス（Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）菌株は、７つの抗原的に異なる類型のボツリヌス毒素（ＢｏＮＴ）を産生するが、この毒素は、ヒト（ＢｏＮＴ／Ａ、／Ｂ、／Ｅ及び／Ｆ）、動物（ＢｏＮＴ／Ｃ１及び／Ｄ）、または土壌から分離されたもの（ＢｏＮＴ／Ｇ）におけるボツリヌス中毒症発生を調査することにより識別された。７つのボツリヌス毒素（ＢｏＮＴ）血清型の全てが類似した構造及び薬理学的特性を有するのに対して、それぞれはまた、異種の細菌学的特徴を示す。その一方、破傷風毒素（ＴｅＮＴ）は、Ｃ．テタニ（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）の均一菌により産生される。クロストリジウムの他の２つの種であるＣ．バラティ（Ｃ．ｂａｒａｔｉｉ）及びＣ．ブチリカム（Ｃ．ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）もまた、それぞれＢｏＮＴ／Ｆ及びＢｏＮＴ／Ｅと類似した毒素を産生する。
【００１６】
クロストリジウム毒素は、互いに約３５％のアミノ酸同一性を保有し、同一の機能的ドメイン組織及び全体の構造的構成を共有する。クロストリジウム毒素は、それぞれ約１５０ｋＤａの単一鎖ポリペプチドと翻訳され、続いて、例えば、内因性クロストリジウム毒素プロテアーゼまたは環境で産生された天然由来のプロテアーゼのような天然由来のプロテアーゼにより、二硫化物ループ内でタンパク質分解的分裂により切断される（図２）。この翻訳後加工は、約５０ｋＤａの軽鎖（ＬＣ）及び約１００ｋＤａの重鎖（ＨＣ）が、単一二硫化物結合及び非共有相互作用により一緒に維持される二重鎖分子を産生する。それぞれの熟成した二重鎖分子は、１）神経伝達物質放出装置の核心成分を特異的に標的化した亜鉛依存性のエンドペプチダーゼ活性を含有するメタロプロテアーゼ領域を含むＬＣに位置した酵素ドメイン（表１）、２）細胞内小胞体から標的細胞の細胞質内へのＬＣの放出を容易にするＨＣのアミノ末端側半分（ＨＮ）内に含有された転座ドメイン（表１）、３）標的細胞の表面に位置した受容体複合体に対する毒素の結合活性及び結合特異性を決定するＨＣのカルボキシル末端側半分（ＨＣ）の中で見出される結合ドメイン（表１）の、３つの機能的に異なったドメインを含む。
【００１７】
【表１】
2008532549.tif 000002
【００１８】
これらの３つの機能的ドメインの結合、転座及び酵素活性は、全て毒性のために必要である。この過程の全ての細部事項が未だ明らかに知られていないが、クロストリジウム毒素が神経細胞に入り、神経伝達物質放出を阻害する全体的な細胞中毒メカニズムは、血清型はたは亜型にかかわらず類似している。本出願人は、下記記載により限定する意図は全くないが、前記中毒メカニズムは、１）受容体結合、２）複合体の内在化、３）軽鎖転座、及び４）酵素標的修飾の少なくとも４つの段階を含むものと説明され得る（図１参照）。前記過程は、クロストリジウム毒素のＨＣドメインが標的細胞の原形質膜の表面上に位置した毒素特異的受容体系に結合する際に開始される。受容体複合体の結合特異性は、部分的には、それぞれのクロストリジウム毒素受容体複合体を区別して含むものと見えるガングリオシドとタンパク質受容体の特異的組合せにより得られるものと推定される。一旦結合されると、毒素／受容体複合体は、エンドサイトーシスにより内在化し、内在化した小胞体は、特定の細胞内経路に分類される。転座段階は、小胞体区画の酸性化により始まるようである。この過程は、疎水性を増加させ、毒素の二重鎖型の形成を促進する２つの重要なｐＨ依存性の構造再配列を開始するようである。一旦活性化すると、毒素の軽鎖エンドペプチダーゼが細胞内小胞体からサイトゾル内に放出され、そこでは、神経伝達物質放出装置の３つの公知された核心成分の１つを特異的に標的とするようである。これらのコアタンパク質である小胞体−関連膜タンパク質（ＶＡＭＰ）／シナプトブレビン、２５ｋＤａのシナプトソーム関連のタンパク質（ＳＮＡＰ−２５）及びシンタキシンは、神経末端でのシナプス小胞体ドッキング及び融合に必要であり、可溶性Ｎ−エチルマレイミド感受性因子接合タンパク質受容体（ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｎ−ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｆａｃｔｏｒ−ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＳＮＡＲＥ））族の構成員を構成する。ＢｏＮＴ／Ａ及びＢｏＮＴ／Ｅは、ＳＮＡＰ−２５をカルボキシル末端領域で切断し、それぞれ９個または２６個のアミノ酸断片を放出し、ＢｏＮＴ／Ｃ１もまた、ＳＮＡＰ−２５をカルボキシル末端の近くで切断する。ボツリヌス血清型であるＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｆ及びＢｏＮＴ／Ｇ、及び破傷風毒素は、ＶＡＭＰの保存した中央部分上に作用し、ＶＡＭＰのアミノ末端部分をサイトゾル内に放出する。ＢｏＮＴ／Ｃ１は、シンタキシンをサイトゾル膜表面の近くで単一部位で切断する。シナプスＳＮＡＲＥの選択的なタンパク質分解は、インビボクロストリジウム毒素により引き起こされる神経伝達物質放出の遮断の原因となる。クロストリジウム毒素のＳＮＡＲＥタンパク質標的は、様々な非神経細胞類型でのエキソサイトーシスに対して普遍的である。これらの細胞では、神経細胞と同様に、軽鎖ペプチダーゼ活性が細胞外流出を阻害する。例えば、ヤン  フメーウ（Ｙａｎｎ  Ｈｕｍｅａｕ）ら「Ｈｏｗ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ａｎｄ  Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ  Ｂｌｏｃｋ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  Ｒｅｌｅａｓｅ」、第８２巻、第５号、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ．４２７−４４６頁（２０００年）；キャスリン  タートン（Ｋａｔｈｒｙｎ  Ｔｕｒｔｏｎ）ら、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ａｎｄ  Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｔｉｌｉｔｙ」、第２７巻、第１１号、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．５５２−５５８頁（２００２年）；ジョバンナ  ラリ（Ｇｉｏｖａｎｎａ  Ｌａｌｌｉ）ら、「Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎｅｙ  ｏｆ  Ｔｅｔａｎｕｓ  ａｎｄ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｎｓ」、第１１巻、第９号、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４３１−４３７頁、（２００３年）を参照する。
【００１９】
本発明の態様は、部分的には、修飾クロストリジウム毒素を提供する。本明細書で用いられる用語の「修飾クロストリジウム毒素」は、クロストリジウム毒素が神経細胞に入り、神経伝達物質放出を阻害する全体的な細胞メカニズムを行うことができる任意のポリペプチドを意味し、クロストリジウム毒素の低親和性または高親和性受容体複合体への結合、毒素の内在化、クロストリジウム毒素軽鎖の細胞質内への転座、及びクロストリジウム毒素基質の酵素的修飾を含む。本明細書で開示された前記修飾クロストリジウム毒素が、クロストリジウム毒素で見出される天然由来の結合ドメインの細胞結合活性が欠けているということにより、天然由来のクロストリジウム毒素と区別される。その代わりに、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素は、標的細胞の表面に位置した内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する修飾クロストリジウム毒素の結合活性を決定する増大された標的ドメインを含む。定義によれば、天然由来のクロストリジウム毒素は、増大された標的ドメインが欠けている。
【００２０】
本発明の態様は、部分的には、クロストリジウム毒素酵素ドメインを提供する。本明細書で用いられる用語の「クロストリジウム毒素酵素ドメイン」は、中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができる任意のクロストリジウム毒素ポリペプチドを意味する。したがって、クロストリジウム毒素酵素ドメインは、クロストリジウム毒素基質を特異的に標的とし、例えば、ＳＮＡＰ−２５基質、ＶＡＭＰ基質、及びシンタキシン基質等のＳＮＡＲＥタンパク質のようなクロストリジウム毒素基質のタンパク質分解的切断を含む。クロストリジウム毒素酵素ドメインの非限定的な例には、例えば、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖領域、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖領域、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖領域、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖領域、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖領域、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖領域、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖領域、及びＴｅＮＴ軽鎖領域のようなクロストリジウム毒素軽鎖領域が含まれる。
【００２１】
クロストリジウム毒素酵素ドメインは制限なく、例えば、クロストリジウム毒素軽鎖イソ型及びクロストリジウム毒素軽鎖亜型のような天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体；例えば、保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体、非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体、クロストリジウム毒素軽鎖キメラ、これらの活性クロストリジウム毒素軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体を含む。
【００２２】
本明細書で用いられる用語の「クロストリジウム毒素軽鎖変異体」は、天然由来であれ非天然由来であれ、開示された標準配列（表１参照）の相応する領域から少なくとも１つのアミノ酸変化を有するクロストリジウム毒素軽鎖を意味し、前記標準配列の相応する領域に対してパーセント同一性と記載されてもよい。特に表示されない限り、本明細書に開示された全てのクロストリジウム毒素軽鎖変異体は、中毒過程の酵素標的修飾段階を行うことができる。制限されない例として、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番を含むＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体は、配列番号１のアミノ酸領域１番〜４４８番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番を含むＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体は、配列番号２のアミノ酸領域１番〜４４１番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番を含むＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体は、配列番号３のアミノ酸領域１番〜４４９番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番を含むＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体は、配列番号４のアミノ酸領域１番〜４４５番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番を含むＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体は、配列番号５のアミノ酸領域１番〜４２２番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番を含むＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体は、配列番号６のアミノ酸領域１番〜４３９番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番を含むＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体は、配列番号７のアミノ酸領域１番〜４４６番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；また配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番を含むＴｅＮＴ軽鎖変異体は、配列番号８のアミノ酸領域１番〜４５７番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有する。
【００２３】
当業者であれば、クロストリジウム毒素のそれぞれの血清型中に、アミノ酸配列が少し異なり、かつ、これらのタンパク質をコードする核酸が異なる天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体があり得ることが認知可能である。例えば、現在、４個のＢｏＮＴ／Ａ亜型であるＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３及びＢｏＮＴ／Ａ４があり、特定の軽鎖亜型は、他のＢｏＮＴ／Ａ軽鎖亜型と比べて、約９５％のアミノ酸同一性を示す。本明細書で用いられる用語の「天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体」は、制限なく、選択的スプライスによる転写物から生成したクロストリジウム毒素軽鎖イソ型、偶発突然変異により生成したクロストリジウム毒素軽鎖イソ型、及びクロストリジウム毒素軽鎖亜型を含む、天然由来の過程により生成した任意のクロストリジウム毒素軽鎖を意味する。天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素軽鎖を置換することができる。天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸、または１００個以上のアミノ酸を置換してもよい。天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体はまた、その天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から、少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、前記天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖に対して、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有する。
【００２４】
天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体の制限されない例は、例えば、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖イソ型、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖イソ型、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖イソ型、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖イソ型、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖イソ型、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖イソ型、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖イソ型、及びＴｅＮＴ軽鎖イソ型のようなクロストリジウム毒素軽鎖イソ型である。クロストリジウム毒素軽鎖イソ型は、そのクロストリジウム毒素軽鎖イソ型が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素軽鎖を置換することができる。
【００２５】
天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体のまた他の制限されない例は、例えば、亜型ＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３及びＢｏＮＴ／Ａ４由来の軽鎖；亜型ＢｏＮＴ／Ｂ１、ＢｏＮＴ／Ｂ２、ＢｏＮＴ／Ｂ二価型及びＢｏＮＴ／Ｂタンパク非分解性由来の軽鎖；亜型ＢｏＮＴ／Ｃ１−１及びＢｏＮＴ／Ｃ１−２由来の軽鎖；亜型ＢｏＮＴ／Ｅ１、ＢｏＮＴ／Ｅ２及びＢｏＮＴ／Ｅ３由来の軽鎖；及びＢｏＮＴ／Ｆ１、ＢｏＮＴ／Ｆ２、ＢｏＮＴ／Ｆ３及びＢｏＮＴ／Ｆ４由来の軽鎖のようなクロストリジウム毒素軽鎖亜型である。クロストリジウム毒素軽鎖亜型は、そのクロストリジウム毒素軽鎖亜型が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素軽鎖を置換することができる。
【００２６】
本明細書で用いられる用語の「非天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体」は、制限なく、ランダム変異誘発または合理的設計を用いて、遺伝工学により生成したクロストリジウム毒素軽鎖、及び化学合成により生成したクロストリジウム毒素軽鎖を含む、ヒトの操作補助の下で生成した任意のクロストリジウム毒素軽鎖を意味する。非天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体の制限されない例には、例えば、保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体、非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体、クロストリジウム毒素軽鎖キメラ変異体、及び活性クロストリジウム毒素軽鎖断片が含まれる。
【００２７】
本明細書で用いられる用語の「保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体」は、標準クロストリジウム毒素軽鎖配列（表１）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した特性を少なくとも１つ有する他のアミノ酸またはアミノ酸類似体で置換されているクロストリジウム毒素軽鎖を意味する。特性の例には、制限なく、類似したサイズ、トポグラフィー、電荷、疎水性、親水性、親油性、共有結合能、水素結合能、物理化学的性質等、またはこれらの任意の組合せが含まれる。保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素軽鎖を置換することができる。保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸、１００個以上のアミノ酸、２００個以上のアミノ酸、３００個以上のアミノ酸、４００個以上のアミノ酸、または５００個以上のアミノ酸を置換してもよい。保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体はまた、その保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から、少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖に対して、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有する。保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体の制限されない例には、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体、保存的ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体、保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体、保存的ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体、保存的ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体、保存的ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体、保存的ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体、及び保存的ＴｅＮＴ軽鎖変異体が含まれる。
【００２８】
本明細書で用いられる用語の「非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体」は、１）その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から少なくとも１つのアミノ酸が欠失される；２）その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖に少なくとも１つのアミノ酸が添加される；または３）標準クロストリジウム毒素軽鎖配列（表１）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した任意の特性を共有しない他のアミノ酸またはアミノ酸類似体で置換されるクロストリジウム毒素軽鎖を意味する。非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素軽鎖を置換することができる。非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸が欠失されてもよい。非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖に、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸を添加してもよい。非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸、１００個以上のアミノ酸、２００個以上のアミノ酸、３００個以上のアミノ酸、４００個以上のアミノ酸、または５００個以上のアミノ酸を置換してもよい。非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体はまた、その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖から、少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、その非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素軽鎖に対して、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有する。非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体の制限されない例には、例えば、非保存的ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体、及び非保存的ＴｅＮＴ軽鎖変異体が含まれる。
【００２９】
本明細書で用いられる用語の「クロストリジウム毒素軽鎖キメラ」は、クロストリジウム毒素軽鎖の少なくとも一部及び少なくとも１つの他のポリペプチドの少なくとも一部を含み、表１の標準クロストリジウム毒素軽鎖から少なくとも１つの特性が異なった毒素軽鎖を形成するポリペプチドを意味するが、但し、このクロストリジウム毒素軽鎖キメラは、依然として神経伝達物質放出装置の核心成分を特異的に標的化し、したがって、クロストリジウム毒素が基質をタンパク質分解的に切断する全体的な細胞メカニズムを行うことができなければならない。このようなクロストリジウム毒素軽鎖キメラは、例えば、ランス  Ｅ．スチュアード（Ｌａｎｃｅ  Ｅ．Ｓｔｅｗａｒｄ）ら、「Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  Ｍｏｔｉｆ  ａｎｄ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｔｏｘｉｎｓ」、米国特許出願公開第２００３／００２７７５２号（２００３年２月６日）；ランス  Ｅ．スチュアード（Ｌａｎｃｅ  Ｅ．Ｓｔｅｗａｒｄ）ら、「Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ」、米国特許出願公開第２００３／０２１９４６２号（２００３年１１月２７日）；及びランス  Ｅ．スチュアード（Ｌａｎｃｅ  Ｅ．Ｓｔｅｗａｒｄ）ら、「Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ」、米国特許出願公開第２００４／０２２０３８６号（２００４年１１月４日）に記述されている。
【００３０】
本明細書で用いられる用語の「活性クロストリジウム毒素軽鎖断片」は、本発明の態様において有用可能な軽鎖を含む様々なクロストリジウム毒素断片の任意であるが、但し、これらの軽鎖断片は、神経伝達物質放出装置の核心成分を特異的に標的化し、したがって、クロストリジウム毒素が基質をタンパク質分解的に切断する全体的な細胞メカニズムを行うことができなければならない。クロストリジウム毒素の軽鎖は、長さがアミノ酸約４２０〜４６０個であり、酵素ドメインを含む（表１）。研究結果によれば、クロストリジウム毒素軽鎖の全長が、前記酵素ドメインの酵素活性に必ずしも必要ではない。制限されない一例としては、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖の最初の８個のアミノ酸（配列番号１の残基１番〜８番）は、酵素活性に必要ではない。他の制限されない例として、ＴｅＮＴ軽鎖の最初の８個のアミノ酸（配列番号８の残基１番〜８番）は、酵素活性に必要ではない。同様に、軽鎖のカルボキシル末端は、活性に必須ではない。制限されない例として、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖の最後の３２個のアミノ酸（配列番号１の残基４１７番〜４４８番）は、酵素活性に必要ではない。他の制限されない例として、ＴｅＮＴ軽鎖の最後の３１個のアミノ酸（配列番号８の残基４２７番〜４５７番）は、酵素活性に必要ではない。したがって、本実施形態の態様は、例えば、少なくとも３５０個のアミノ酸、少なくとも３７５個のアミノ酸、少なくとも４００個のアミノ酸、少なくとも４２５個のアミノ酸、及び少なくとも４５０個のアミノ酸の長さを有する酵素ドメインを含むクロストリジウム毒素軽鎖を含んでもよい。本実施形態の他の態様は、例えば、多くても３５０個のアミノ酸、多くても３７５個のアミノ酸、多くても４００個のアミノ酸、多くても４２５個のアミノ酸、及び多くても４５０個のアミノ酸の長さを有する酵素ドメインを含むクロストリジウム毒素軽鎖を含んでもよい。
【００３１】
制限なく、包括的方法、局所的方法、及び例えば断片アプローチ法のようなハイブリッド法を含む様々な配列アラインメント法のいずれかを使用して、天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体及び非天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体のパーセント同一性を求めることができる。パーセント同一性を求めるプロトコルは、当業者の範囲内で、また、本明細書の教示から日常的な手続きである。
【００３２】
包括的方法は、配列を分子の最初から最後までアラインメントし、個別の残基対のスコアを合算し、ギャップペナルティーを与えることで最善のアラインメントを決定する。制限されない方法には、例えば、クラスタル・ダブル(ＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗ)法、例えば、ジューリー  Ｄ．トンプスン（Ｊｕｌｉｅ  Ｄ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）ら、「ＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗ：Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ、Ｐｏｓｉｔｉｏｎ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｇａｐ  Ｐｅｎａｌｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｗｅｉｇｈｔ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｃｈｏｉｃｅ」、第２２巻、第２２号、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、４６７３−４６８０頁（１９９４年）参照；及び反復改良法、例えば、オサム  ゴトウ（Ｏｓａｍｕ  Ｇｏｔｏｈ）、「Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ａｃｃｕｒａｃｙ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ  ｂｙ  Ｉｔｅｒａｔｉｖｅ  Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ  ａｓ  Ａｓｓｅｓｓｅｄ  ｂｙ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｏ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ」、第２６４巻、第４号、J．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８２３−８３８頁（１９９６年）参照が含まれる。
【００３３】
局所的方法は、入力配列の全てが共有する１つ以上の保存モチーフを同定することで配列をアラインメントする。制限されない方法例には、例えば、Ｍａｔｃｈ−ｂｏｘ法、例えば、エリック  デピエール（Ｅｒｉｃ  Ｄｅｐｉｅｒｅｕｘ）及びアーネスト  フェイトマンズ（Ｅｒｎｅｓｔ  Ｆｅｙｔｍａｎｓ）、「Ｍａｔｃｈ−Ｂｏｘ：Ａ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｌｙ  Ｎｅｗ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｅｖｅｒａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」、第８巻、第５号、ＣＡＢＩＯＳ、５０１−５０９頁（１９９２年）参照；ギブスサンプリング法、例えば、Ｃ．Ｅ．ローレンス（Ｃ．Ｅ．Ｌａｗｒｅｎｃｅ）ら、「Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  Ｓｕｂｔｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｓｉｇｎａｌｓ：Ａ  Ｇｉｂｂｓ  Ｓａｍｐｌｉｎｇ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ」、第２６２巻、第５１３１号、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０８−２１４頁（１９９３年）参照；アライン−Ｍ法、例えば、イボ  ヴァン  ワル（Ｉｖｏ  Ｖａｎ  Ｗａｌｌｅ）ら、「Ａｌｉｇｎ−Ｍ  Ａ  Ｎｅｗ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｆｏｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」、第２０巻、第９号、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１４２８−１４３５頁（２００４年）参照が含まれる。
【００３４】
ハイブリッド法は、包括的及び局所的アラインメント法の両方の機能的態様を組み合わせる。制限されない方法には、例えば、断片対断片比較法、例えば、ブルクハルド  モーガンスターン（Ｂｕｒｋｈａｒｄ  Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ）ら、「Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ＤＮＡ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｂａｓｅｄ  Ｏｎ  Ｓｅｇｍｅｎｔ−Ｔｏ−Ｓｅｇｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」、第９３巻、第２２号、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１２０９８−１２１０３頁（１９９６年）参照；Ｔ−コーヒー法、例えば、ケドリック・ノートルダム（Ｃｅｄｒｉｃ  Ｎｏｔｒｅｄａｍｅ）ら、「Ｔ−Ｃｏｆｆｅｅ：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｆｏｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ」、第３０２巻、第１号、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０５−２１７頁（２０００年）参照；マッスル法、例えば、ロバート  Ｃ．エドガー（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｃ．Ｅｄｇａｒ）、「ＭＵＳＣＬＥ：Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｗｉｔｈ  Ｈｉｇｈ  Ｓｃｏｒｅ  Ａｃｃｕｒａｃｙ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ」、第３２巻、第５号、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７９２−１７９７頁（２００４）参照；及びＤＩＡＬＩＧＮ−Ｔ法、例えば、アマレンドラン  Ｒ  スブラマニアン（Ａｍａｒｅｎｄｒａｎ  Ｒ  Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ）ら、「ＤＩＡＬＩＧＮ−Ｔ：Ａｎ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｆｏｒ  Ｓｅｇｍｅｎｔ−Ｂａｓｅｄ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ」、第６巻、第１号、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、６６頁（２００５年）参照が含まれる。
【００３５】
したがって、一実施形態では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素がクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む。本実施形態の一態様では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、例えばクロストリジウム毒素軽鎖イソ型またはクロストリジウム毒素軽鎖亜型のような天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体を含む。本実施形態の他の態様では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、例えば、保存的クロストジウム毒素軽鎖変異体、非保存的クロストリジウム毒素軽鎖変異体、クロストリジウム毒素キメラ軽鎖、活性クロストリジウム毒素軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のクロストリジウム毒素軽鎖変異体を含む。
【００３６】
他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、ＢｏＮＴ／Ａイソ型由来の軽鎖またはＢｏＮＴ／Ａ亜型由来の軽鎖のような天然由来のＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、配列番号１のＢｏＮＴ／Ａイソ型のアミノ酸１番〜４４８番または配列番号１のＢｏＮＴ／Ａ亜型のアミノ酸１番〜４４８番のような配列番号１の天然由来のＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４８番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体、ＢｏＮＴ／Ａキメラ軽鎖、活性ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１の保存的ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４８番、配列番号１の非保存的ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４８番、配列番号１の活性ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖断片のアミノ酸１番〜４４８番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号１の非天然由来のＢｏＮＴ／Ａ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４８番を含む。
【００３７】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００３８】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００３９】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ａ軽鎖が、例えば、配列番号１のアミノ酸１番〜４４８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００４０】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｂイソ型由来の軽鎖またはＢｏＮＴ／Ｂ亜型由来の軽鎖のような天然由来のＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のＢｏＮＴ／Ｂイソ型のアミノ酸１番〜４４１番または配列番号２のＢｏＮＴ／Ｂ亜型のアミノ酸１番〜４４１番のような配列番号２の天然由来のＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４１番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体、ＢｏＮＴ／Ｂキメラ軽鎖、活性ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２の保存的ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４１番、配列番号２の非保存的ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４１番、配列番号２の活性ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖断片のアミノ酸１番〜４４１番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号２の非天然由来のＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４１番を含む。
【００４１】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００４２】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００４３】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｂ軽鎖が、例えば、配列番号２のアミノ酸１番〜４４１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００４４】
他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｃ１イソ型由来の軽鎖またはＢｏＮＴ／Ｃ１亜型由来の軽鎖のような天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のＢｏＮＴ／Ｃ１イソ型のアミノ酸１番〜４４９番または配列番号３のＢｏＮＴ／Ｃ１亜型のアミノ酸１番〜４４９番のような配列番号３の天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４９番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体、ＢｏＮＴ／Ｃ１キメラ軽鎖、活性ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３の保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４９番、配列番号３の非保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４９番、配列番号３の活性ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖断片のアミノ酸１番〜４４９番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号３の非天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４９番を含む。
【００４５】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００４６】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００４７】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１軽鎖が、例えば、配列番号３のアミノ酸１番〜４４９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００４８】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｄイソ型由来の軽鎖またはＢｏＮＴ／Ｄ亜型由来の軽鎖のような天然由来のＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のＢｏＮＴ／Ｄイソ型のアミノ酸１番〜４４５番または配列番号４のＢｏＮＴ／Ｄ亜型のアミノ酸１番〜４４５番のような配列番号４の天然由来のＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４５番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体、ＢｏＮＴ／Ｄキメラ軽鎖、活性ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４の保存的ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４５番、配列番号４の非保存的ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４５番、配列番号４の活性ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖断片のアミノ酸１番〜４４５番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号４の非天然由来のＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４５番を含む。
【００４９】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００５０】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００５１】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｄ軽鎖が、例えば、配列番号４のアミノ酸１番〜４４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００５２】
他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｅイソ型由来の軽鎖またはＢｏＮＴ／Ｅ亜型由来の軽鎖のような天然由来のＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のＢｏＮＴ／Ｅイソ型のアミノ酸１番〜４２２番または配列番号５のＢｏＮＴ／Ｅ亜型のアミノ酸１番〜４２２番のような配列番号５の天然由来のＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４２２番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体、ＢｏＮＴ／Ｅキメラ軽鎖、活性ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５の保存的ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４２２番、配列番号５の非保存的ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４２２番、配列番号５の活性ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖断片のアミノ酸１番〜４２２番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号５の非天然由来のＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４２２番を含む。
【００５３】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００５４】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００５５】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｅ軽鎖が、例えば、配列番号５のアミノ酸１番〜４２２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００５６】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｆイソ型由来の軽鎖またはＢｏＮＴ／Ｆ亜型由来の軽鎖のような天然由来のＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のＢｏＮＴ／Ｆイソ型のアミノ酸１番〜４３９番または配列番号６のＢｏＮＴ／Ｆ亜型のアミノ酸１番〜４３９番のような配列番号６の天然由来のＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４３９番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体、ＢｏＮＴ／Ｆキメラ軽鎖、活性ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６の保存的ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４３９番、配列番号６の非保存的ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４３９番、配列番号６の活性ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖断片のアミノ酸１番〜４３９番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号６の非天然由来のＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４３９番を含む。
【００５７】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００５８】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００５９】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｆ軽鎖が、例えば、配列番号６のアミノ酸１番〜４３９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００６０】
他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｇイソ型由来の軽鎖またはＢｏＮＴ／Ｇ亜型由来の軽鎖のような天然由来のＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のＢｏＮＴ／Ｇイソ型のアミノ酸１番〜４４６番または配列番号７のＢｏＮＴ／Ｇ亜型のアミノ酸１番〜４４６番のような配列番号７の天然由来のＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４６番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体、ＢｏＮＴ／Ｇキメラ軽鎖、活性ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７の保存的ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４６番、配列番号７の非保存的ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４６番、配列番号７の活性ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖断片のアミノ酸１番〜４４６番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号７の非天然由来のＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４４６番を含む。
【００６１】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００６２】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００６３】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｇ軽鎖が、例えば、配列番号７のアミノ酸１番〜４４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００６４】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素酵素ドメインが、ＴｅＮＴ軽鎖を含む。本実施形態の一態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、ＴｅＮＴイソ型由来の軽鎖またはＴｅＮＴ亜型由来の軽鎖のような天然由来のＴｅＮＴ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のＴｅＮＴイソ型のアミノ酸１番〜４５７番または配列番号８のＴｅＮＴ亜型のアミノ酸１番〜４５７番のような配列番号８の天然由来のＴｅＮＴ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４５７番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、保存的ＴｅＮＴ軽鎖変異体、非保存的ＴｅＮＴ軽鎖変異体、ＴｅＮＴキメラ軽鎖、活性ＴｅＮＴ軽鎖断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＴｅＮＴ軽鎖変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８の保存的ＴｅＮＴ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４５７番、配列番号８の非保存的ＴｅＮＴ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４５７番、配列番号８の活性ＴｅＮＴ軽鎖断片のアミノ酸１番〜４５７番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号８の非天然由来のＴｅＮＴ軽鎖変異体のアミノ酸１番〜４５７番を含む。
【００６５】
本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００６６】
本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００６７】
本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴ軽鎖が、例えば、配列番号８のアミノ酸１番〜４５７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００６８】
本発明の態様は、部分的には、クロストリジウム毒素転座ドメインを提供する。本明細書で用いられる用語の「クロストリジウム毒素転座ドメイン」は、クロストリジウム毒素軽鎖転座を媒介する中毒過程の転座段階を行うことができる任意のクロストリジウム毒素ポリペプチドを意味する。したがって、クロストリジウム毒素転座ドメインは、膜を横切るクロストリジウム毒素軽鎖の移動を容易にし、細胞内小胞体の膜を通じて細胞の細胞質内へのクロストリジウム毒素軽鎖の移動を含む。クロストリジウム毒素転座ドメインの制限されない例には、例えば、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域、及びＴｅＮＴＨＮ領域のようなクロストリジウム毒素ＨＮ領域が含まれる。
【００６９】
クロストリジウム毒素転座ドメインには、制限なく、例えば、クロストリジウム毒素ＨＮ領域イソ型及びクロストリジウム毒素ＨＮ領域亜型のような天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体；例えば、保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体、非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体、クロストリジウム毒素ＨＮ領域キメラ、これらの活性クロストリジウム毒素ＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が含まれる。
【００７０】
本明細書で用いられる用語の「クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体」は、天然由来であれ非天然由来であれ、開示された標準配列（表１参照）の相応する領域から少なくとも１つのアミノ酸変化を有するクロストリジウム毒素ＨＮ領域を意味し、前記標準配列の相応する領域に対してパーセント同一性と記載されてもよい。特に表示されない限り、本明細書に開示された全てのクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、クロストリジウム毒素軽鎖転座を媒介する中毒過程の転座段階を行うことができる。制限されない例として、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番を含むＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体は、配列番号１のアミノ酸領域４４９番〜８７１番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番を含むＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体は、配列番号２のアミノ酸領域４４２番〜８５８番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番を含むＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体は、配列番号３のアミノ酸領域４５０番〜８６６番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番を含むＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体は、配列番号４のアミノ酸領域４４６番〜８６２番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番を含むＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体は、配列番号５のアミノ酸領域４２３番〜８４５番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番を含むＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体は、配列番号６のアミノ酸領域４４０番〜８６４番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番を含むＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体は、配列番号７のアミノ酸領域４４７番〜８６３番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し；また配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番を含むＴｅＮＴＨＮ領域変異体は、配列番号８のアミノ酸領域４５８番〜８７９番に比べて、例えば、アミノ酸の置換、欠失または添加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有する。
【００７１】
当業者であれば、クロストリジウム毒素のそれぞれの血清型中に、アミノ酸配列が少し異なり、かつ、これらのタンパク質をコードする核酸が異なる天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体があり得ることが認知可能である。例えば、現在、４個のＢｏＮＴ／Ａ亜型であるＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３及びＢｏＮＴ／Ａ４があり、特定のＨＮ領域亜型は、他のＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域亜型と比べて、約８７％のアミノ酸同一性を示す。本明細書で用いられる用語の「天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体」は、制限なく、選択的スプライスによる転写物から生成したクロストリジウム毒素ＨＮ領域イソ型、偶発突然変異により生成したクロストリジウム毒素ＨＮ領域イソ型、及びクロストリジウム毒素ＨＮ領域亜型を含む、天然由来の過程により生成した任意のクロストリジウム毒素ＨＮ領域を意味する。天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域を置換することができる。天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸または１００個以上のアミノ酸を置換してもよい。天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体はまた、その天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、前記天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体に対して、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。
【００７２】
天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体の制限されない例は、例えば、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域イソ型、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域イソ型、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域イソ型、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域イソ型、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域イソ型、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域イソ型、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域イソ型、及びＴｅＮＴＨＮ領域イソ型のようなクロストリジウム毒素ＨＮ領域イソ型である。クロストリジウム毒素ＨＮ領域イソ型は、そのクロストリジウム毒素ＨＮ領域イソ型が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域を置換することができる。
【００７３】
天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体の他の制限されない例は、例えば亜型ＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３及びＢｏＮＴ／Ａ４由来のＨＮ領域；亜型ＢｏＮＴ／Ｂ１、ＢｏＮＴ／Ｂ２、ＢｏＮＴ／Ｂ二価型及びＢｏＮＴ／Ｂタンパク非分解性由来のＨＮ領域；亜型ＢｏＮＴ／Ｃ１−１及びＢｏＮＴ／Ｃ１−２由来のＨＮ領域；亜型ＢｏＮＴ／Ｅ１、ＢｏＮＴ／Ｅ２及びＢｏＮＴ／Ｅ３由来のＨＮ領域；及び亜型ＢｏＮＴ／Ｆ１、ＢｏＮＴ／Ｆ２、ＢｏＮＴ／Ｆ３及びＢｏＮＴ／Ｆ４由来のＨＮ領域のようなクロストリジウム毒素ＨＮ領域亜型である。クロストリジウム毒素ＨＮ領域亜型は、そのクロストリジウム毒素ＨＮ領域亜型が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域を置換することができる。
【００７４】
本明細書で用いられる用語の「非天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体」は、制限なく、ランダム変異誘発または合理的設計を用いて、遺伝工学により生成したクロストリジウム毒素ＨＮ領域、及び化学的合成により生成したクロストリジウム毒素ＨＮ領域を含む、ヒトの操作補助の下で生成した任意のクロストリジウム毒素ＨＮ領域を意味する。非天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体の制限されない例には、例えば、保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体、非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体、クロストリジウム毒素ＨＮ領域キメラ性変異体、及び活性クロストリジウム毒素ＨＮ領域断片が含まれる。
【００７５】
本明細書で用いられる用語の「保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体」は、標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域配列（表１）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した特性を少なくとも１つ有する他のアミノ酸またはアミノ酸類似体で置換されているクロストリジウム毒素ＨＮ領域を意味する。特性の例としては、制限なく、類似したサイズ、トポグラフィー、電荷、疎水性、親水性、親油性、共有結合能、水素結合能、物理化学的性質等、またはこれらの任意の組合せが含まれる。保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域を置換することができる。保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸、１００個以上のアミノ酸、２００個以上のアミノ酸、３００個以上のアミノ酸、４００個以上のアミノ酸、または５００個以上のアミノ酸を置換してもよい。保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体はまた、その保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から、少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体に対して、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体の制限されない例には、例えば、保存的ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体、保存的ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体、保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体、保存的ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体、保存的ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体、保存的ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体、保存的ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体、及び保存的ＴｅＮＴＨＮ領域変異体が含まれる。
【００７６】
本明細書で用いられる用語の「非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体」は、１）その非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から少なくとも１つのアミノ酸が欠失されるか；２）その非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域に少なくとも１つのアミノ酸が添加されるか；または３）標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域配列（表１）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した任意の特性を共有しない他のアミノ酸またはアミノ酸類似体で置換されたクロストリジウム毒素ＨＮ領域を意味する。非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域と実質的に同じ様式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域を置換することができる。非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸が欠失されたものであってもよい。非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域に、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸を添加したものであってもよい。非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体は、その非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸、１００個以上のアミノ酸、２００個以上のアミノ酸、３００個以上のアミノ酸、４００個以上のアミノ酸、または５００個以上のアミノ酸を置換してもよい。非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体はまた、その非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から、少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、前記非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体が基礎とする標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体に対して、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体の制限されない例には、例えば、非保存的ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体、及び非保存的ＴｅＮＴＨＮ領域変異体が含まれる。
【００７７】
本明細書で用いられる用語の「クロストリジウム毒素ＨＮ領域キメラ」は、クロストリジウム毒素ＨＮ領域の少なくとも一部及び少なくとも１つの他のポリペプチドの少なくとも一部を含み、表１の標準クロストリジウム毒素ＨＮ領域から少なくとも１つの特性が異なった毒素ＨＮ領域を形成するポリペプチドを意味するが、但し、このクロストリジウム毒素ＨＮ領域キメラは、依然として神経伝達物質放出装置の核心成分を特異的に標的化し、したがって、クロストリジウム毒素が基質をタンパク質分解的に切断する全体的な細胞メカニズムを行うことができなければならない。
【００７８】
本明細書で用いられる用語の「活性クロストリジウム毒素ＨＮ領域断片」は、本発明の態様で有用可能なＨＮ領域を含む様々なクロストリジウム毒素断片のうち、任意のものを意味するが、但し、このような活性断片は、細胞内小胞体から標的細胞の細胞質へのＬＣの放出を容易にし、したがって、クロストリジウム毒素が基質をタンパク質分解的に切断する全体的な細胞メカニズムを行うことができなければならない。クロストリジウム毒素の重鎖由来のＨＮ領域は、長さがアミノ酸約４１０〜４３０個であり、転座ドメインを含む（表１）。研究結果によれば、クロストリジウム毒素重鎖由来のＨＮ領域の全長が、前記転座ドメインの転座活性に必ずしも必要なものではない。したがって、本実施形態の態様は、例えば、少なくとも３５０個のアミノ酸、少なくとも３７５個のアミノ酸、少なくとも４００個のアミノ酸、及び少なくとも４２５個のアミノ酸の長さを有する転座ドメインを含むクロストリジウム毒素ＨＮ領域を含むことができる。本実施形態の他の態様は、例えば、多くても３５０個のアミノ酸、多くても３７５個のアミノ酸、多くても４００個のアミノ酸、及び多くても４２５個のアミノ酸の長さを有する転座ドメインを含むクロストリジウム毒素ＨＮ領域を含むことができる。
【００７９】
制限なく、包括的方法、局所的方法、及び例えば断片アプローチ法のようなハイブリッド法を含む様々な配列アラインメント法のいずれによっても、天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体及び非天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体のパーセント同一性を求めることができる。パーセント同一性を求めるプロトコルは、当業者の範囲内で、また、本明細書の教示から日常的な手続きである。
【００８０】
したがって、一実施形態では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が、クロストリジウム毒素転座ドメインを含む。本実施形態の一態様では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、例えばクロストリジウム毒素ＨＮ領域イソ型またはクロストリジウム毒素ＨＮ領域亜型のような天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、例えば、保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体、非保存的クロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体、クロストリジウム毒素キメラＨＮ領域、活性クロストリジウム毒素ＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のクロストリジウム毒素ＨＮ領域変異体を含む。
【００８１】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、ＢｏＮＴ／Ａイソ型由来のＨＮ領域またはＢｏＮＴ／Ａ亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のＢｏＮＴ／Ａイソ型のアミノ酸４４９番〜８７１番または配列番号１のＢｏＮＴ／Ａ亜型のアミノ酸４４９番〜８７１番のような配列番号１の天然由来のＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体のアミノ酸４４９番〜８７１番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体、ＢｏＮＴ／ＡキメラＨＮ領域、活性ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１の保存的ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体のアミノ酸４４９番〜８７１番、配列番号１の非保存的ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体のアミノ酸４４９番〜８７１番、配列番号１の活性ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域断片のアミノ酸４４９番〜８７１番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号１の非天然由来のＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域変異体のアミノ酸４４９番〜８７１番を含む。
【００８２】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００８３】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００８４】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＡＨＮ領域が、例えば、配列番号１のアミノ酸４４９番〜８７１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００８５】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｂイソ型由来のＨＮ領域またはＢｏＮＴ／Ｂ亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のＢｏＮＴ／Ｂイソ型のアミノ酸４４２番〜８５８番または配列番号２のＢｏＮＴ／Ｂ亜型のアミノ酸４４２番〜８５８番のような配列番号２の天然由来のＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体のアミノ酸４４２番〜８５８番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体、ＢｏＮＴ／ＢキメラＨＮ領域、活性ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２の保存的ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体のアミノ酸４４２番〜８５８番、配列番号２の非保存的ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体のアミノ酸４４２番〜８５８番、配列番号２の活性ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域断片のアミノ酸４４２番〜８５８番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号２の非天然由来のＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域変異体のアミノ酸４４２番〜８５８番を含む。
【００８６】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００８７】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００８８】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＢＨＮ領域が、例えば、配列番号２のアミノ酸４４２番〜８５８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００８９】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｃ１イソ型由来のＨＮ領域またはＢｏＮＴ／Ｃ１亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のＢｏＮＴ／Ｃ１イソ型のアミノ酸４５０番〜８６６番または配列番号３のＢｏＮＴ／Ｃ１亜型のアミノ酸４５０番〜８６６番のような配列番号３の天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体のアミノ酸４５０番〜８６６番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体、ＢｏＮＴ／Ｃ１キメラＨＮ領域、活性ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３の保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体のアミノ酸４５０番〜８６６番、配列番号３の非保存的ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体のアミノ酸４５０番〜８６６番、配列番号３の活性ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域断片のアミノ酸４５０番〜８６６番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号３の非天然由来のＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域変異体のアミノ酸４５０番〜８６６番を含む。
【００９０】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００９１】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００９２】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／Ｃ１ＨＮ領域が、例えば、配列番号３のアミノ酸４５０番〜８６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００９３】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｄイソ型由来のＨＮ領域またはＢｏＮＴ／Ｄ亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のＢｏＮＴ／Ｄイソ型のアミノ酸４４６番〜８６２番または配列番号４のＢｏＮＴ／Ｄ亜型のアミノ酸４４６番〜８６２番のような配列番号４の天然由来のＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体のアミノ酸４４６番〜８６２番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体、ＢｏＮＴ／ＤキメラＨＮ領域、活性ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４の保存的ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体のアミノ酸４４６番〜８６２番、配列番号４の非保存的ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体のアミノ酸４４６番〜８６２番、配列番号４の活性ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域断片のアミノ酸４４６番〜８６２番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号４の非天然由来のＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域変異体のアミノ酸４４６番〜８６２番を含む。
【００９４】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００９５】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００９６】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＤＨＮ領域が、例えば、配列番号４のアミノ酸４４６番〜８６２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【００９７】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｅイソ型由来のＨＮ領域またはＢｏＮＴ／Ｅ亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のＢｏＮＴ／Ｅイソ型のアミノ酸４２３番〜８４５番または配列番号５のＢｏＮＴ／Ｅ亜型のアミノ酸４２３番〜８４５番のような配列番号５の天然由来のＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体のアミノ酸４２３番〜８４５番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体、ＢｏＮＴ／ＥキメラＨＮ領域、活性ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５の保存的ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体のアミノ酸４２３番〜８４５番、配列番号５の非保存的ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体のアミノ酸４２３番〜８４５番、配列番号５の活性ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域断片のアミノ酸４２３番〜８４５番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号５の非天然由来のＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域変異体のアミノ酸４２３番〜８４５番を含む。
【００９８】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【００９９】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１００】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＥＨＮ領域が、例えば、配列番号５のアミノ酸４２３番〜８４５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１０１】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｆイソ型由来のＨＮ領域またはＢｏＮＴ／Ｆ亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のＢｏＮＴ／Ｆイソ型のアミノ酸４４０番〜８６４番または配列番号６のＢｏＮＴ／Ｆ亜型のアミノ酸４４０番〜８６４番のような配列番号６の天然由来のＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体のアミノ酸４４０番〜８６４番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体、ＢｏＮＴ／ＦキメラＨＮ領域、活性ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６の保存的ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体のアミノ酸４４０番〜８６４番、配列番号６の非保存的ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体のアミノ酸４４０番〜８６４番、配列番号６の活性ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域断片のアミノ酸４４０番〜８６４番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号６の非天然由来のＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域変異体のアミノ酸４４０番〜８６４番を含む。
【０１０２】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１０３】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１０４】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＦＨＮ領域が、例えば、配列番号６のアミノ酸４４０番〜８６４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１０５】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、ＢｏＮＴ／Ｇイソ型由来のＨＮ領域またはＢｏＮＴ／Ｇ亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のＢｏＮＴ／Ｇイソ型のアミノ酸４４７番〜８６３番または配列番号７のＢｏＮＴ／Ｇ亜型のアミノ酸４４７番〜８６３番のような配列番号７の天然由来のＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体のアミノ酸４４７番〜８６３番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、保存的ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体、非保存的ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体、ＢｏＮＴ／ＧキメラＨＮ領域、活性ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体を含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域、例えば、配列番号７の保存的ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体のアミノ酸４４７番〜８６３番、配列番号７の非保存的ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体のアミノ酸４４７番〜８６３番、配列番号７の活性ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域断片のアミノ酸４４７番〜８６３番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号７の非天然由来のＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域変異体のアミノ酸４４７番〜８６３番を含む。
【０１０６】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１０７】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１０８】
本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＢｏＮＴ／ＧＨＮ領域が、例えば、配列番号７のアミノ酸４４７番〜８６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１０９】
また他の実施形態では、クロストリジウム毒素転座ドメインが、ＴｅＮＴＨＮ領域を含む。本実施形態の一態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、ＴｅＮＴイソ型由来のＨＮ領域またはＴｅＮＴ亜型由来のＨＮ領域のような天然由来のＴｅＮＴＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のＴｅＮＴイソ型のアミノ酸４５８番〜８７９番または配列番号８のＴｅＮＴ亜型のアミノ酸４５８番〜８７９番のような配列番号８の天然由来のＴｅＮＴＨＮ領域変異体のアミノ酸４５８番〜８７９番を含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、保存的ＴｅＮＴＨＮ領域変異体、非保存的ＴｅＮＴＨＮ領域変異体、ＴｅＮＴキメラＨＮ領域、活性ＴｅＮＴＨＮ領域断片、またはこれらの任意の組合せのような非天然由来のＴｅＮＴＨＮ領域変異体を含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８の保存的ＴｅＮＴＨＮ領域変異体のアミノ酸４５８番〜８７９番、配列番号８の非保存的ＴｅＮＴＨＮ領域変異体のアミノ酸４５８番〜８７９番、配列番号８の活性ＴｅＮＴＨＮ領域断片のアミノ酸４５８番〜８７９番、またはこれらの任意の組合せのような配列番号８の非天然由来のＴｅＮＴＨＮ領域変異体のアミノ酸４５８番〜８７９番を含む。
【０１１０】
本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１１１】
本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１１２】
本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、ＴｅＮＴＨＮ領域が、例えば、配列番号８のアミノ酸４５８番〜８７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸添加を有するポリペプチドを含む。
【０１１３】
本発明の態様は、部分的には、増大された標的ドメインを提供する。本明細書で用いられる用語の「増大された標的ドメイン」は、クロストリジウム毒素標的細胞上で見出される内因性クロストリジウム毒素受容体系に選択的に結合し、クロストリジウム毒素が標的細胞を中毒させる全体的な内在化メカニズムを開始することができる任意のポリペプチドを意味するが、但し、増大された標的ドメインは、天然由来のクロストリジウム毒素由来の天然由来の結合ドメインではない。本明細書で用いられる用語の「選択的に」は、極めて好ましい活性または效果を有することを意味する。本明細書で用いられる用語の「選択的に結合」は、ある分子が生理学的条件下で、または生理学的条件と実質的に類似したインビトロ条件下で、その標的受容体系に、他の非標的受容体系と比べて統計的に相当程度高く結合することができることを意味する。したがって、本明細書の増大された標的ドメインに対しては、前記増大された標的ドメインの内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する差別的な結合が存在する。
【０１１４】
本明細書に開示された増大された標的ドメインは、クロストリジウム毒素標的細胞の表面に位置した内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素の結合活性を容易にする。本明細書で用いられる用語の「結合活性」は、制限なく、一分子が共有結合、イオン結合、金属結合、水素結合、疎水性相互作用、ファンデルワールス相互作用等、またはこれらの任意の組合せを含む少なくとも１つの分子間または分子内力を通じて他の分子と直接的または間接的に接触することを意味する。「結合される」及び「結合する」は、結合を意味する用語と見なされる。
【０１１５】
本明細書で用いられる用語の「結合親和性」は、特定の受容体系に対するある分子の結合活性がどれくらい強いかを意味する。一般に、高結合親和性は、結合ドメインとその受容体系との間のより大きい分子間力に起因するのに対して、低結合親和性は、リガンドとその受容体との間の分子間力がより少ない。高結合親和性は、結合ドメインのその受容体結合部位での滞留時間が、低結合親和性の場合と比べてより長い。このように、高結合親和性を有する分子は、受容体系の結合部位を最大限占有し、生理学的反応を引き起こすのに前記分子がより低い濃度で必要であることを意味する。反対に、低結合親和性は、受容体系の受容体結合部位が最大限占有され、最大の生理学的反応が得られるためには、比較的高濃度の分子が必要であることを意味する。したがって、高結合親和性により増加された結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素は、減少した投与量の毒素が投与されることにより、毒素の非標的化区域への分散と関連した好ましくない副作用を減少させまたは防止することである。
【０１１６】
本明細書で用いられる用語の「結合特異性」は、ある特定の受容体系においてある分子の結合活性がどれくらい特異的であるかを意味する。一般に、高結合特異性は、ある特定の受容体系または受容体系のサブグループとのより排他的な相互作用をもたらすのに対して、低結合特異性は、より大きい群の受容体系とのより排他的な相互作用をもたらす。このように、高結合特異性を有する分子は、前記分子が１つの特定の受容体系の結合部位を占有し、生理学的反応を引き起こすことを意味する。反対に、低結合特異性は、ある分子が多くの受容体系の結合部位を占有し、複数の生理学的反応を引き起こすことを意味する。したがって、高結合特異性により増加された結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素は、クロストリジウム毒素標的細胞のサブグループのみを標的とし、全てのクロストリジウム毒素標的細胞の標的化と関連した副作用を減少させる。
【０１１７】
天然由来のクロストリジウム毒素標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する結合親和性を増加させる増大された標的ドメイン；及び天然由来のクロストリジウム毒素標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素受容体系のサブグループに対する結合特異性を増加させる増大された標的ドメインを含む増大された標的ドメインは、いずれも、制限なく、本発明の態様を実施するのに用いられ得ることが想定される。本明細書で用いられる用語の「クロストリジウム毒素標的細胞」は、制限なく、運動神経細胞を含めて、天然由来のクロストリジウム毒素に対する天然由来の標的細胞である細胞を意味する。
【０１１８】
天然由来のクロストリジウム毒素標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する結合活性を増加させる増大された標的ドメインの一例には、制限なく、例えば、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメイン、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメイン、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメイン、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメイン、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメイン、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメイン、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメイン及び増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ結合ドメインのような、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが含まれる。結合活性を増加させる修飾クロストリジウム毒素結合ドメインの例には、例えば、天然由来のクロストリジウム毒素標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する結合親和性を増加させる修飾クロストリジウム毒素結合ドメイン、及び天然由来のクロストリジウム毒素標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素受容体系のサブグループに対する結合特異性を増加させる修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが含まれる。
【０１１９】
ＢｏＮＴ／Ａ、ＢｏＮＴ／Ｂ及びＴｅＮＴのＨＣドメインの三次元結晶構造は、クロストリジウム神経毒素の３つの機能性ドメインが、構造的に区別されることを示す。軽鎖のＨＥＸＸＨコンセンサスモチーフは、チャンネルを通じて接近可能な、タンパク質表面上の深い裂け目に位置した触媒部位の４面体的亜鉛結合ポケットを形成する。ＨＮ及びＨＣドメインの構造は、一次的に単一α−螺旋により連結されたβ−シートトポロジーからなる。円筒状のＨＮドメインは、一部のウイルスタンパク質から見出されるコイルドコイルモチーフと類似した２つの長い両親媒性α−螺旋を含む。ＨＮドメインはまた、「転座ベルト」と呼ばれる非組織化された長いループを形成するが、この転座ベルトは、活性部位の触媒結合ポケットに対する亜鉛原子の接近を遮断する、軽鎖の負に帯電した大きな裂け目の周囲を包み込む。前記ＨＣドメインは、機能を示す約等しい大きさの２つの異なった構造的特徴を含む。ＨＣＮサブドメインと命名された第１は、ＨＣドメインのアミノ側半分内に位置する。ＨＣＮサブドメインは、β−バレル、ゼリーロール折り畳みを形成する。ＨＣＣサブドメインは、ＨＣドメインを含む第２のサブドメインである。このカルボキシ末端サブドメインは、血清アミロイドＰ、シアリダーゼ、ｃｒｙｉａ、殺虫性∂−エンドトキシン及びレクチンのような多数の糖結合タンパク質から見出される炭水化物結合部分と類似した３つの異なった炭水化物結合領域を形成する修飾β−三葉形ドメインを含む。生化学研究によれば、ＨＣＣサブドメインのβ−三葉形ドメイン構造は、細胞表面上のクロストリジウム毒素受容体系の特定の炭水化物含有成分への結合を媒介するものと見える。例えば、クシシトフ  ジナルスキ（Ｋｒｚｙｓｚｔｏｆ  Ｇｉｎａｌｓｋｉ）ら「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｅｔａ−Ｔｒｅｆｏｉｌ  Ｓｕｂｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｆａｍｉｌy  Ｐｒｏｖｉｄｅｓ  Ｒｅｓｉｄｕｅ  Ｌｅｖｅｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ａｂｏｕｔ  ｔｈｅ  Ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ」、第４８２巻、第１−２号、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．１１９−１２４頁（２０００年）参照。ＨＣドメインは、ＨＮドメインから遠ざかるように傾き、表面ループを露出させ、これらが結合のために接近可能になるようにする。軽鎖とＨＣドメインとの間には、何らの接触も行われていない。
【０１２０】
構造的β−三葉形ドメインを含むタンパク質は、様々な群のタンパク質を代表する。例えば、Ｃ．Ａ．オレンゴ（Ｃ．Ａ．Ｏｒｅｎｇｏ）ら、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｉｅｓ  ａｎｄ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｓｕｐｅｒｆｏｌｄｓ」、第３７２巻、Ｎａｔｕｒｅ、６３１−６３４頁（１９９４年）参照。前記β−三葉形ドメインは、特徴的疑似−３回転軸対称を示す、３つのβ−ヘアピン構造により一端が閉鎖された６重鎖β−バレルを含む。この３回転軸対称の単量体的構造単位を、一対の逆平行β−シートとして編成された４つのβ−シートを含有するβ−三葉形折り畳みという。これらのβ−三葉形折り畳みをそれぞれに分割したものが、β−ヘアピンカーブである。したがって、線形方式では、β−三葉形ドメインが、第１のβ−三葉形折り畳み（α−折り畳み）の４つのβ−シート、１つのβ−ヘアピンカーブ、第２のβ−三葉形折り畳み（β−折り畳み）の４つのβ−シート、１つの第２のβ−ヘアピンカーブ、第３のβ−三葉形折り畳み（γ−折り畳み）の４つのβ−シート（図２）を含む。前記第１のヘアピンカーブが、β−三葉形ドメインの第４及び第５のβ−シート間に位置するので、β４／β５  β−ヘアピンカーブと命名する。同様に、前記第２のヘアピンカーブが、β−三葉形ドメインの第８及び第９のβ−シート間に位置するので、β８／β９  β−ヘアピンカーブと命名する。
【０１２１】
引き続いた研究によれば、β４／β５及びβ８／β９  β−ヘアピンカーブが、β−三葉形ドメインから観測される適切な疑似−３回転軸対称を付与するのに重要であると明らかになった。さらに、この研究は、これらの２つのβ−ヘアピンカーブでのアミノ酸変化が、β−三葉形ドメインの安全性を増加させることができ、また、増加された結合活性をもたらすことを立証した。例えば、シュテファン  Ｒ．ブリチ（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｒ．Ｂｒｙｃｈ）ら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｔｏ  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｏｒｅ  Ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ａ  β−ｔｒｅｆｏｉｌ」、第１０巻、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２５８７−２５９９頁（２００１年）；ゼウォン  キム（Ｊａｅｗｏｎ  Ｋｉｍ）ら、「Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｔｙｐｅ  Ｉ  ａｎｄ  Ｉ’Ｔｕｒｎ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  β８／β９  β−ｈａｉｒｐｉｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ａｃｉｄｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ」、第１１巻、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．４５９−４６６頁（２００２年）；ゼウォン  キム（Ｊａｅｗｏｎ  Ｋｉｍ）ら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｓｗａｐｐｉｎｇ  Ｄｏｅｓ  Ｎｏｔ  Ｒｅｓｕｌｔ  ｉｎ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｗａｐｐｉｎｇ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  β４／β５  ａｎｄ  β８／β９  β−ｈａｉｒｐｉｎ  Ｔｕｒｎｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ａｃｉｄｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ」、第１４巻、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．３５１−３５９頁（２００５年）参照。制限されない例として、β４／β５ヘアピンカーブまたはβ８／β９  β−ヘアピンカーブを含むアミノ酸を、グリシンに代替すると、β−三葉形ドメインの安定化が増加される。したがって、クロストリジウム毒素の結合ドメインに存在するβ−三葉形ドメインのβ４／β５及びβ８／β９  β−ヘアピンカーブに位置したアミノ酸の代替は、β−三葉形ドメインの構造的安全性を増加させることにより、そのような修飾クロストリジウム毒素の結合活性を増加させる。様々なクロストリジウム毒素から見出されるβ−三葉形ドメインを含むアミノ酸配列を表２に示す。
【０１２２】
【表２】
2008532549.tif 000003
【０１２３】
β−三葉形折り畳みを含有するタンパク質は一般的に、クロストリジウム毒素間のＨＣＣサブドメインの全体的アミノ酸配列同一性は低い。しかし、結合活性に必須的な主要残基が構造分析及び突然変異誘発実験により同定された。例えば、クシシトフ  ジナルスキ（Ｋｒｚｙｓｚｔｏｆ  Ｇｉｎａｌｓｋｉ）ら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｅｔａ−Ｔｒｅｆｏｉｌ  Ｓｕｂｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｒｏｖｉｄｅｓ  Ｒｅｓｉｄｕｅ  Ｌｅｖｅｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ａｂｏｕｔ  ｔｈｅ  Ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ」、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．第４８２巻、第１−２号、１１９−１２４頁（２０００年）参照。例えば、ＨＣＣサブドメイン構造の結晶学的分析により、炭水化物結合部分の浅い表面ポケットを形成するのに重要な５つの極めて良好に保存された残基が同定された。これらの極性残基は、炭水化物環と水素結合を生成する。ＢｏＮＴ／Ａにおいて、これら５つの極性残基は、Ｇｌｕ１２０３番、Ｐｈｅ１２５２番、Ｓｅｒ１２６４番、Ｔｙｒ１２６７番、及びＧｌｙ１２７９番である一方、ＴｅＮＴにおいては、これらの残基がＡｓｐ１２２２番、Ｔｈｒ１２７０番、Ｓｅｒ１２８７番、Ｔｙｒ１２９０番、及びＧｌｙ１３００番である。さらに、このポケットの親水性壁を形成するチロシン残基も重要で（ＢｏＮＴ／ＡのＴｒｐ１２６６番及びＴｅＮＴのＴｒｐ１２８９番）、トリプトファン蛍光消光の実験では、ＢｏＮＴ／ＡのＴｒｐ１２６６番が炭水化物分子と結合することとなった。また他の研究では、光親和性ラベル実験からＢｏＮＴ／ＡのＧｌｎ１２７０番及びＴｅＮＴのＨｉｓ１２９３番が炭水化物分子との結合に関連があることが分かった。機能喪失結合活性突然変異を評価するために考案された突然変異誘発実験では、ＢｏＮＴ／Ａ及びＴｅＮＴの上記した多くの残基の重要性が確認され、この分析をＢｏＮＴ／Ｂに拡大した（Ｇｌｕ１１９０番、Ｈｌｓ１２４１番、Ｔｙｐ１２６２番、Ｔｙｒ１２６３番）。例えば、アンドレアス  ラメル（Ａｎｄｒｅａｓ  Ｒｕｍｍｅｌ）ら、「Ｔｈｅ  ＨＣＣ−Ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ  Ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ａ  Ｓｉｎｇｕｌａｒ  Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ｄｉｓｐｌａｙｉｎｇ  Ｓｅｒｏｔｙｐｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ」、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．第５１巻、第３号、６３１−６４３頁（２００４年）参照。
【０１２４】
本明細書における「クロストリジウム毒素結合ドメイン」は、「クロストリジウム毒素ＨＣ領域」と同意語であり、例えば標的細胞の原形質膜表面上に位置した毒素−特異的受容体系に対するクロストリジウム毒素の結合を含む中毒過程の細胞結合段階を行うことができる天然由来のクロストリジウム毒素ポリペプチドを意味する。本明細書における用語「修飾クロストリジウム毒素結合ドメイン」は、「修飾クロストリジウム毒素ＨＣ領域」と同意語であり、例えば結合親和性、または結合特異性のような、内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する細胞結合活性を、前記修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが由来する非修飾天然由来のクロストリジウム毒素結合ドメインに比べて、統計的に有意義な程度に増大するように修飾された天然由来のクロストリジウム毒素結合ドメインを意味する。定義によれば、修飾クロストリジウム毒素結合ドメインは、開示された標準配列（表１参照）の相応する領域から少なくとも１つのアミノ酸変化を有し、前記標準配列の相応する領域に対するパーセント同一性により記載することができる。非限定的な例として、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域は、配列番号１のアミノ酸領域８７２番〜１２９６番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域は、配列番号２のアミノ酸領域８５９番〜１２９１番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域は、配列番号３のアミノ酸領域８６７番〜１２９１番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域は、配列番号４のアミノ酸領域８６３番〜１２７６番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域は、配列番号５のアミノ酸領域８４６番〜１２５２番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域は、配列番号６のアミノ酸領域８６５番〜１２７４番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域は、配列番号７のアミノ酸領域８６４番〜１２９７番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有する。さらに、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番を含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域は、配列番号８のアミノ酸領域８８０番〜１３１５番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有する。
【０１２５】
また他の非限定的な例として、配列番号１のアミノ酸１０９２番〜１２９６番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域は、配列番号１のアミノ酸領域１０９２番〜１２９６番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号２のアミノ酸１０７９番〜１２９１番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域は、配列番号２のアミノ酸領域１０７９番〜１２９１番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号３のアミノ酸１０９３番〜１２９１番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域は、配列番号３のアミノ酸領域１０９３番〜１２９１番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号４のアミノ酸１０８０番〜１２７６番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域は、配列番号４のアミノ酸領域１０８０番〜１２７６番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号５のアミノ酸１０６７番〜１２５２番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域は、配列番号５のアミノ酸領域１０６７番〜１２５２番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号６のアミノ酸１０８７番〜１２７４番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域は、配列番号６のアミノ酸領域１０８７番〜１２７４番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有し、配列番号７のアミノ酸１０８７番〜１２９７番を含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域は、配列番号７のアミノ酸領域１０８７番〜１２９７番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有する。さらに、配列番号８のアミノ酸１１０９番〜１３１５番を含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域は、配列番号８のアミノ酸領域１１０９番〜１３１５番に比べて、例えばアミノ酸の置換、欠失または付加のような少なくとも１つのアミノ酸相違を有する。
【０１２６】
増大した結合活性を有する結合ドメインを含む各種修飾クロストリジウム毒素ＨＣ領域の断片はどれも本発明の態様において有用であるが、ただし、これらの活性断片は、標的細胞の表面に位置した受容体系に前記毒素の増大した結合活性を提供することができることも予測可能である。クロストリジウム毒素の重鎖由来のＨＣ領域は、長さが約４００〜４４０個のアミノ酸であり、結合ドメインを含む（表１）。研究結果によれば、クロストリジウム毒素重鎖由来のＨＣ領域の全長が前記結合ドメインの結合活性に必要なわけではない。従って、本実施形態の形態は、例えば少なくとも３５０個のアミノ酸、少なくとも３７５個のアミノ酸、少なくとも４００個のアミノ酸、及び少なくとも４２５個のアミノ酸の長さを有する結合ドメインを含むクロストリジウム毒素ＨＣ領域を含むことができる。本実施形態の他の態様は、例えば多くても３５０個のアミノ酸、多くても３７５個のアミノ酸、多くても４００個のアミノ酸、及び多くても４２５個のアミノ酸の長さを有する結合ドメインを含むクロストリジウム毒素ＨＣ領域を含むことができる。
【０１２７】
制限なく、包括的方法、局所的方法、及び、例えば切片接近法のようなハイブリッド方法を含む様々な配列アラインメント方法を用いることにより、天然由来のクロストリジウム毒素ＨＣ領域に対する修飾クロストリジウム毒素ＨＣ領域のパーセント同一性を求めることができる。パーセント同一性を求めるプロトコルは、当業者の技術範囲内、また、本明細書の教示による通常の手続きである。
【０１２８】
天然由来のクロストリジウム毒素標的細胞上に存在する天然由来のクロストリジウム毒素受容体系に対する結合活性を増加させるために、クロストリジウム毒素結合ドメインを修飾させる方法に対する当業者に公知の一般的なアプローチ法は、具体的に同定されたアミノ酸を変えることに関するものである。上述したように、結合活性に必須的なアミノ酸を同定し、どのアミノ酸の置換が結合活性を増大させるかを決めるときに有用な方法は当業者に周知である。例えば、コンピューターを利用したタンパク質デザインアルゴリズムにおける最近の進展は、安定性の増大、基質特異性の変化、結合親和性の改善、及び薬物動態の最適化を含む最適の特性を有する新規タンパク質を生成する能力を大きく改善した。例えば、ターニャ  コルテメ（Ｔａｎｊａ  Ｋｏｒｔｅｍｍｅ）ら、「Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｒｅｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ」、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第１１巻、第４号、３７１−３７９頁（２００４年）；ターニャ  コルテメ（Ｔａｎｊａ  Ｋｏｒｔｅｍｍｅ）及びデイビッド  ベイカー（Ｄａｖｉｄ  Ｂａｋｅｒ）、「Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．第８巻、第１号、９１−９７頁（２００４年）；モトム  シマオカ（Ｍｏｔｏｍｕ  Ｓｈｉｍａｏｋａ）ら、「Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  Ｉ  ｄｏｍａｉｎ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｏｐｅｎ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ」、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．第７巻、第８号、６７４−６７８頁（２０００年）；ロイック  マーチン（Ｌｏic  Ｍａｒｔｉｎ）ら、「Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａ  ＣＤ４  Ｍｉｍｉｃ  ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＨＩＶ−１  Ｅｎｔｒｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｏｓｅｓ  Ｃｒｙｐｔｉｃ  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｅｐｉｔｏｐｅｓ」、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．第２１巻、第１号、７１−７６頁（２００３年）；及びカシム  Ａ．サーカー（Ｃａｓｉｍ  Ａ．Ｓａｒｋａｒ）ら、「Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｌｉｆｅｔｉｍｅ  ａｎｄ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｐｏｔｅｎｃｙ  Ｕｓｉｎｇ  ｐＨ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  「Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  Ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ」」、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．第２０巻、第９号、９０８−９１３頁（２００２年）参照。
【０１２９】
また、クロストリジウム毒素結合ドメインに存在するアミノ酸を変更することができる方法には、制限なく、部位特異的突然変異誘発、オリゴヌクレオチド定方向突然変異誘発、及び部位特異的突然変異誘発が含まれる。クロストリジウム毒素において突然変異を生成するための特異的突然変異誘発プロトコルの非限定的な例は、例えばＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ、１３．１−１３．１０５頁（Ｓａｍｂｒｏｏｋ及びＲｕｓｓｅｌｌ編著、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第３巻、第３版．２００１年）に記載されている。また、商業的販売者から入手可能な、特性化された突然変異誘発プロトコールの非限定的な例には、制限なく、アルタード・サイツＩＩ（Ａｌｔｅｒｅｄ  ＳｉｔｅｓＩＩ）(登録商標)インビトロで突然変異誘発システム（プロメガ社（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）、Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州、米国）；イレース・ア・ベース（Ｅｒａｓｅ−ａ−Ｂａｓｅ）（登録商標）システム（プロメガ社（Ｐｒｏｍｅｇａ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州、米国）；ジンテーラー（Ｇｅｎｅ  Ｔａｉｌｏｒ）（商標）部位特異的突然変異誘発システム（インビトロゲン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｉｎｃ．）、Ｃａｒｌｓｂａｄ、カリフォルニア州、米国）；クイックチェンジＩＩ（ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  ＩＩ）（登録商標）部位特異的突然変異誘発キット（ストラタジン社（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、カリフォルニア州、米国）；及びトランスフォーマ（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ）（商標）部位特異的突然変異誘発キット（ＢＤ−クローンテク社（ＢＤ−Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、カリフォルニア州、米国）が含まれる。
【０１３０】
最後に、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素の結合活性を試験する方法も当業者に周知である。例えば、ルテア  Ａ．Ａ．ｄｅ  ヨン（Ｌｕｔｅａ  Ａ．Ａ．ｄｅ  Ｊｏｎｇ）ら、「Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｓｓａｙｓ：Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  第８２９巻、１−２５頁（２００５年）参照。ヘテロジニアスアッセイ型、ホモジニアスアッセイ型、及び非分離ホモジニアスアッセイ型を使用して、本明細書に開示されている増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素の結合活性を決定できることが予測される。ヘテロジニアスアッセイ法は、結合活性の測定前に遊離リガンドが結合されたリガンドから、例えば濾過、遠心分離または透析により分離される。ホモジニアスアッセイ法は、結合活性の測定前に結合されたリガンドから遊離リガンドの分離が不要である。非分離ホモジニアスアッセイ法は、すべてのホモジニアスアッセイ法の非分離態様の外にも、リガンドや受容体が固体相支持体上に固定化される。ヘテロジニアス、ホモジニアス及び非分離ホモジニアスアッセイ法の非限定的な例には、例えば放射性エネルギ伝達を利用した濾過アッセイ法、放射性エネルギ伝達を利用したＳＰＡ／フラッシュプレートアッセイ法のような放射性ヘテロジニアスアッセイ法；及び、例えば蛍光を利用した濾過アッセイ法、蛍光エネルギ伝達を利用したＦＲＥＴアッセイ法、光偏光を利用したＦＰアッセイ法、単一細胞ＦＭＡＴアッセイ法、及び流動血球計算法（ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）のような非放射性ヘテロジニアスアッセイ法が含まれる。また、商業的販売者から入手可能な、特性化された受容体結合プロトコールの非限定的な例には、制限なく、均一時間分解蛍光に基づいた受容体結合アッセイ法（ＨＴＲＦ（登録商標）；シスビオインターナショナル社（Ｃｉｓｂｉｏ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、Ｂｅｄｆｏｒｄ、マサチューセッツ州、米国）；デルフィア（ＤＥＬＦＩＡ）(登録商標)に基づいた受容体結合アッセイ法（パーキンエルマーライフサイエンス社（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｂｏｓｔｏｎ、マサチューセッツ州、米国）；及びアルファスクリーン（ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ）（商標）に基づいた受容体結合アッセイ法（パーキンエルマー  ライフサイエンス社（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｂｏｓｔｏｎ、マサチューセッツ州、米国）が含まれる。
【０１３１】
また、本明細書に開示されている増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素の結合活性は、例えば全反射蛍光（ｔｏｔａｌ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；ＴＩＲＦ）及び表面プラズモン共鳴（ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｌａｓｍｏｎ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ；ＳＰＲ）のような固定化受容体及び界面光学アッセイ法を利用した親和性クロマトグラフィーにより求められると予測される。これらアッセイ法の非限定的な例には、例えば拡散媒介強度変動を利用したＦＣＳ、質量−依存的屈折率を利用したＳＰＲ、質量−依存的屈折率を利用したＴＩＲＦ、光学的強度変化を利用したマイクロアレイ及び滞留容積を利用したＱＡＣが含まれる。
【０１３２】
天然由来のクロストリジウム毒素標的細胞上に存在する天然由来のクロストリジウム毒素受容体系に対する結合活性を増加させるためのクロストリジウム毒素結合ドメインを修飾させる方法に関する当業者に周知のまた他の一般的なアプローチ法としては、方向的進化法（ｄｉｒｅｃｔｅｄ−ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ）が含まれる。例えば、アンドレ  コルタマン（Ａｎｄｒｅ  Ｋｏｌｔｅｒｍａｎｎ）ら、「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ  ｂｙ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」、米国特許出願公開第２００４／００７２２７６号（２００４年４月１５日）；ランス  Ｅ．スチュアード（Ｌａｎｃｅ  Ｅ．Ｓｔｅｗａｒｄ）及びケイ  ロジャー  アオキ（Ｋｅｉ  Ｒｏｇｅｒ  Ａｏｋｉ）、「Ｅｖｏｌｖｅｄ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｔｏｘｉｎｓ  ｗｉｔｈ  Ａｌｔｅｒｅｄ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」、米国特許出願公開第２００４／０１１５７２７号（２００４年６月１７日）、及びＬ  ユアン（Ｌ  Ｙｕａｎ）ら、「Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ」、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．第６９巻、第３号、３７３−３９２頁（２００５年）参照。
【０１３３】
通常、方向的進化法の第１段階は、関心の対象である遺伝子、または関連遺伝子群が存在する場合には、遺伝子組換えの誤りを犯しやすいＰＣＲ増幅である。この場合、全長クロストリジウム毒素、または、ＨＣ結合ドメイン単独に対応する遺伝子のみが、分子あたり１つ〜３つのアミノ酸の置換を算出する条件下で増幅される。次に、前記タンパク質が発現され、所望の活性（すなわち、受容体結合及び／または増大した活性）に対して選別される。変化の規模に関係なく、形式的にでも受容体結合が改善されたある構造物や進化の付加的巡回に提供されることができる。これにより、無作為突然変異誘発研究の結果として、改善された結合、またはさらには、劇的に減少した結合を示すあるアミノ酸や飽和突然変異誘発に提供されることもできる。これは、関心の対象であるコドンが完全に無作為化され、関心の対象である部位で置換された２０個のアミノ酸それぞれを含む異なる構造物を生成するようにする過程である。
【０１３４】
受容体結合の特徴を改善するために、幾つかの異なる選別アプローチ法を活用することができる。受容体が公知の場合には、前記受容体の可溶性部分がＳＰＲ結合アッセイ法での使用のために組換え的に発現されることができる。例えば、受容体の可溶性部分は、ストレプトアビジン、ポリヒスチジンタグなどとの融合として発現されることができ、これによって前記受容体は、適切なセンサーチップ上に固定化されることができる。ＳＰＲ機器を利用して、受容体結合の結果としての局所的屈折率の変化をＳＰＲ角度の変化として測定する。これにより、ＳＰＲ角度の変化率を分析して会合及び解離相を決め、その結果、平衡定数を決めることができる。このようなパターンのアッセイ法は、全長クロストリジウム毒素またはＨＣドメインのいずれによっても測定することができる。付加的に、「ベート分子（ｂａｉｔ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」として作用する親和性タグされた受容体を利用する親和性プールダウン（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｐｕｌｌ−ｄｏｗｎ）実験に依存する結合パターンアッセイ法を使用可能である。次に、修飾クロストリジウム毒素またはＨＣドメインは、前記ベート分子に関わる標的タンパク質の量を分析するために、放射性同位元素として標識することができる。また他には、放射性標識されたリガンドが標識されないクロストリジウム毒素またはＨＣドメイン変異体と競争することもできる。
【０１３５】
受容体が公知でない場合、全長クロストリジウム毒素の変異体は、天然クロストリジウム毒素を利用した処理に敏感であると知られた細胞を利用して選別することができる。この場合、細胞内クロストリジウム毒素の存在、例えばウエスタンブロットまたは細胞基盤ＦＲＥＴ活性アッセイ法により切断したＳＮＡＲＥタンパク質の測定、または細胞外流出の阻害、例えば神経伝達物質放出アッセイ法を含む、改善された受容体結合のために可能な読み取り方が幾つかある。
【０１３６】
従って、一実施形態では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素ＨＣ領域、または増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素ＨＣ領域断片を含む。本実施形態の他の態様では、修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素ＨＣＣ領域、または増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素ＨＣＣ領域断片を含む。
【０１３７】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０１３８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と少なくとも８０％アミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と多くても８０％アミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１３９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４０】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸８７２番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４１】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１２９６番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に対する修飾を含む。
【０１４２】
実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１４３】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１１１番〜１１６２番、アミノ酸１１７９番〜１２２３番、またはアミノ酸１２３７番〜１２９６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４５】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番の修飾を含む。
【０１４６】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１４７】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番由来の任意のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域が、例えば配列番号１のアミノ酸１１６３番〜１１７８番またはアミノ酸１２２４番〜１２３６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１４９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１１０１番、Ｇｌｙ１１０２番、Ｌｅｕ１１０５番、Ｔｙｒ１１１１番、Ｔｙｒ１１１２番、Ｇｌｙ１１５８番、Ｉｌｅ１１６３番、Ａｓｐ１１７９番、Ｇｌｕ１２０３番、Ｐｈｅ１２５２番、Ｓｅｒ１２６４番、Ｔｒｐ１２６６番、Ｔｙｒ１２６７番、Ｇｌｎ１２７０番、Ｇｌｙ１２７９番またはＴｒｐ１２８２番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１１０１番、Ｇｌｙ１１０２番、Ｌｅｕ１１０５番、Ｔｙｒ１１１１番、Ｔｙｒ１１１２番、Ｇｌｙ１１５８番、Ｉｌｅ１１６３番、Ａｓｐ１１７９番、Ｇｌｕ１２０３番、Ｐｈｅ１２５２番、Ｓｅｒ１２６４番、Ｔｒｐ１２６６番、Ｔｙｒ１２６７番、Ｇｌｎ１２７０番、Ｇｌｙ１２７９番またはＴｒｐ１２８２番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＢｏＮＴ／Ａ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０１５０】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域、または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣＣ領域、または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０１５１】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１５２】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５３】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸８５９番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５４】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１２９１番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に対する修飾を含む。
【０１５５】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１５６】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５７】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１０９８番〜１１４７番、アミノ酸１１６６番〜１２１０番、またはアミノ酸１２２３番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１５８】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番の修飾を含む。
【０１５９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１６０】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１６１】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番由来の任意のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域が、例えば配列番号２のアミノ酸１１４８番〜１１６５番またはアミノ酸１２１１番〜１２２２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１６２】
本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０８８番、Ｇｌｙ１０８９番、Ｌｅｕ１０９２番、Ｔｙｒ１０９８番、Ｔｙｒ１０９９番、Ｇｌｙ１１４２番、Ｉｌｅ１１４７番、Ａｓｐ１１６５番、Ｇｌｕ１１９１番、Ｉｌｅ１２４０番、Ｓｅｒ１２６０番、Ｔｒｐ１２６２番、Ｔｙｒ１２６３番、Ｇｌｕ１２６６番、Ｇｌｙ１２７７番またはＴｒｐ１２８０番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０８８番、Ｇｌｙ１０８９番、Ｌｅｕ１０９２番、Ｔｙｒ１０９８番、Ｔｙｒ１０９９番、Ｇｌｙ１１４２番、Ｉｌｅ１１４７番、Ａｓｐ１１６５番、Ｇｌｕ１１９１番、Ｉｌｅ１２４０番、Ｓｅｒ１２６０番、Ｔｒｐ１２６２番、Ｔｙｒ１２６３番、Ｇｌｕ１２６６番、Ｇｌｙ１２７７番またはＴｒｐ１２８０番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＢｏＮＴ／Ｂ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０１６３】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域、または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣＣ領域、または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０１６４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１６５】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１６６】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸８６７番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１６７】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１２９１番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に対する修飾を含む。
【０１６８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１６９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１７０】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１１２番〜１１５０番、アミノ酸１１６７番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３０番〜１２９１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１７１】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番の修飾を含む。
【０１７２】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１７３】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１７４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番由来のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番由来の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域が、例えば配列番号３のアミノ酸１１５１番〜１１６６番またはアミノ酸１２１９番〜１２２９番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１７５】
本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１１０２番、Ｇｌｙ１１０３番、Ｌｅｕ１１０６番、Ｔｙｒ１１１２番、Ｔｙｒ１１１３番、Ｇｌｙ１１４５番、Ｉｌｅ１１５０番、Ａｓｐ１１６６番、Ｇｌｕ１１９６番、Ｉｌｅ１２４７番、Ｇｌｙ１２５６番、Ｔｒｐ１２５８番、Ｔｙｒ１２５９番、Ｈｉｓ１２６１番、Ｇｌｙ１２８１番またはＴｒｐ１２８４番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域は、アミノ酸Ｔｒｐ１１０２番、Ｇｌｙ１１０３番、Ｌｅｕ１１０６番、Ｔｙｒ１１１２番、Ｔｙｒ１１１３番、Ｇｌｙ１１４５番、Ｉｌｅ１１５０番、Ａｓｐ１１６６番、Ｇｌｕ１１９６番、Ｉｌｅ１２４７番、Ｇｌｙ１２５６番、Ｔｒｐ１２５８番、Ｔｙｒ１２５９番、Ｈｉｓ１２６１番、Ｇｌｙ１２８１番またはＴｒｐ１２８４番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０１７６】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインは、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０１７７】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１７８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１７９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸８６３番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１８０】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１２７６番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に対する修飾を含む。
【０１８１】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１８２】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１８３】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１０９９番〜１１３７番、アミノ酸１１５４番〜１２０７番、またはアミノ酸１２１９番〜１２７６番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１８４】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番の修飾を含む。
【０１８５】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１８６】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１８７】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番由来のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番由来の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域が、例えば配列番号４のアミノ酸１１３８番〜１１５３番またはアミノ酸１２０８番〜１２１８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１８８】
本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０８９番、Ｇｌｙ１０９０番、Ｌｅｕ１０９３番、Ｔｙｒ１０９９番、Ｔｙｒ１１００番、Ｇｌｙ１１３２番、Ｉｌｅ１１３７番、Ａｓｐ１１５３番、Ａｓｎ１１８６番、Ｌｙｓ１２３６番、Ｔｒｐ１２３８番、Ａｒｇ１２３９番、Ｐｈｅ１２４２番、Ｓｅｒ１２６２番またはＴｒｐ１２６５番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０８９番、Ｇｌｙ１０９０番、Ｌｅｕ１０９３番、Ｔｙｒ１０９９番、Ｔｙｒ１１００番、Ｇｌｙ１１３２番、Ｉｌｅ１１３７番、Ａｓｐ１１５３番、Ａｓｎ１１８６番、Ｌｙｓ１２３６番、Ｔｒｐ１２３８番、Ａｒｇ１２３９番、Ｐｈｅ１２４２番、Ｓｅｒ１２６２番またはＴｒｐ１２６５番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＢｏＮＴ／Ｄ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０１８９】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態のまた他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０１９０】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１９１】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１９２】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸８４６番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１９３】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１２５２番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に対する修飾を含む。
【０１９４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１９５】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１９６】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１０８６番〜１１２９番、アミノ酸１１４７番〜１１９０番、またはアミノ酸１１９９番〜１２５２番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０１９７】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番の修飾を含む。
【０１９８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０１９９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２００】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番由来の任意のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域が、例えば配列番号５のアミノ酸１１３０番〜１１４６番またはアミノ酸１１９１番〜１１９８番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２０１】
本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０７６番、Ｇｌｙ１０７７番、Ｌｅｕ１０８０番、Ｔｙｒ１０８６番、Ｔｙｒ１０８７番、Ｇｌｙ１１２４番、Ｉｌｅ１１２９番、Ａｓｐ１１４６番、Ｇｌｕ１１７２番、Ｐｈｅ１２１３番、Ｓｅｒ１２２１番、Ｔｒｐ１２２３番、Ｔｙｒ１２２４番、Ｈｉｓ１２２７番、Ｇｌｙ１２３６番またはＴｒｐ１２３９番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０７６番、Ｇｌｙ１０７７番、Ｌｅｕ１０８０番、Ｔｙｒ１０８６番、Ｔｙｒ１０８７番、Ｇｌｙ１１２４番、Ｉｌｅ１１２９番、Ａｓｐ１１４６番、Ｇｌｕ１１７２番、Ｐｈｅ１２１３番、Ｓｅｒ１２２１番、Ｔｒｐ１２２３番、Ｔｙｒ１２２４番、Ｈｉｓ１２２７番、Ｇｌｙ１２３６番またはＴｒｐ１２３９番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＢｏＮＴ／Ｅ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０２０２】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインは、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０２０３】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２０４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２０５】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸８６５番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２０６】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１２７４番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に対する修飾を含む。
【０２０７】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２０８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２０９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１０６番〜１１５２番、アミノ酸１１７２番〜１２１３番、またはアミノ酸１２２２番〜１２７４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２１０】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域を含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番の修飾を含む。
【０２１１】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２１２】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２１３】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番由来の任意のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番由来の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域が、例えば配列番号６のアミノ酸１１５３番〜１１７１番またはアミノ酸１２１４番〜１２２１番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２１４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０９６番、Ｇｌｙ１０９７番、Ｌｅｕ１１００番、Ｔｙｒ１１０６番、Ｔｙｒ１１０７番、Ｇｌｙ１１４７番、Ｉｌｅ１１５２番、Ａｓｐ１１７１番、Ｇｌｕ１１９５番、Ｐｈｅ１２３７番、Ｓｅｒ１２４５番、Ｔｒｐ１２４７番、Ｔｙｒ１２４８番、Ａｓｎ１２５１番、Ｇｌｙ１２６０番またはＴｒｐ１２６３番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０９６番、Ｇｌｙ１０９７番、Ｌｅｕ１１００番、Ｔｙｒ１１０６番、Ｔｙｒ１１０７番、Ｇｌｙ１１４７番、Ｉｌｅ１１５２番、Ａｓｐ１１７１番、Ｇｌｕ１１９５番、Ｐｈｅ１２３７番、Ｓｅｒ１２４５番、Ｔｒｐ１２４７番、Ｔｙｒ１２４８番、Ａｓｎ１２５１番、Ｇｌｙ１２６０番またはＴｒｐ１２６３番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＢｏＮＴ／Ｆ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０２１５】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態のまた他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０２１６】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２１７】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２１８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸８６４番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２１９】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１２９７番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域を含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に対する修飾を含む。
【０２２０】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２２１】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２２２】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１０６番〜１１５３番、アミノ酸１１７３番〜１２１８番、またはアミノ酸１２３１番〜１２９７番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２２３】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域がＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番の修飾を含む。
【０２２４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２２５】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２２６】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番由来のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番由来の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域が、例えば配列番号７のアミノ酸１１５４番〜１１７２番またはアミノ酸１２１９番〜１２３０番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２２７】
本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０９６番、Ｇｌｙ１０９７番、Ｌｅｕ１１００番、Ｔｙｒ１１０６番、Ｔｙｒ１１０７番、Ｇｌｙ１１４８番、Ｉｌｅ１１５３番、Ａｓｐ１１７２番、Ｇｌｎ１１９８番、Ｉｌｅ１２４５番、Ｓｅｒ１２６６番、Ｔｒｐ１２６８番、Ｔｙｒ１２６９番、Ａｒｇ１２７２番、Ｇｌｙ１２８３番またはＴｒｐ１２８５番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１０９６番、Ｇｌｙ１０９７番、Ｌｅｕ１１００番、Ｔｙｒ１１０６番、Ｔｙｒ１１０７番、Ｇｌｙ１１４８番、Ｉｌｅ１１５３番、Ａｓｐ１１７２番、Ｇｌｎ１１９８番、Ｉｌｅ１２４５番、Ｓｅｒ１２６６番、Ｔｒｐ１２６８番、Ｔｙｒ１２６９番、Ａｒｇ１２７２番、Ｇｌｙ１２８３番またはＴｒｐ１２８５番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＢｏＮＴ／Ｇ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０２２８】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ結合ドメインを含む。本実施形態の一態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域断片を含む。本実施形態のまた他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ結合ドメインが増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣＣ領域または増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣＣ領域断片を含む。
【０２２９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２３０】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２３１】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  Ｈｃ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸８８０番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００または２００個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２３２】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１３１５番の修飾を含む、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域がＴｅＮＴ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＴｅＮＴ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＴｅＮＴ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に対する修飾を含む。
【０２３３】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２３４】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２３５】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１２８番〜１１７７番、アミノ酸１１９５番〜１２４０番、またはアミノ酸１２５５番〜１３１５番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２３６】
また他の実施形態では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域がＴｅＮＴ結合ドメインのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブまたはＴｅＮＴ結合ドメインのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域を含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番の修飾を含む。
【０２３７】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２３８】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番由来の任意のアミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の非隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２３９】
本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番由来のアミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をグリシンで置換されてもよい。本実施形態の他の態様では、配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番由来の疎水性アミノ酸の隣接のアミノ酸の置換をフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施形態のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施形態の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形折り畳みドメインを含む修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域が、例えば配列番号８のアミノ酸１１７８番〜１１９４番またはアミノ酸１２４１番〜１２５４番に比べて少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の隣接のアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２４０】
本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１１１８番、Ｇｌｙ１１１９番、Ｌｅｕ１１２２番、Ｔｙｒ１１２８番、Ｔｙｒ１１２９番、Ｇｌｙ１１７２番、Ｉｌｅ１１７７番、Ａｓｐ１１９４番、Ａｓｐ１２２２番、Ｔｈｒ１２７０番、Ｓｅｒ１２８７番、Ｔｒｐ１２８９番、Ｔｙｒ１２９０番、Ｈｉｓ１２９３番、Ｇｌｙ１３００番またはＴｒｐ１３０３番、またはこれらの任意の組合わせの置換を含むが、前記置換は、修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。本実施形態の他の態様においては、増大した結合活性を有する修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域がアミノ酸Ｔｒｐ１１１８番、Ｇｌｙ１１１９番、Ｌｅｕ１１２２番、Ｔｙｒ１１２８番、Ｔｙｒ１１２９番、Ｇｌｙ１１７２番、Ｉｌｅ１１７７番、Ａｓｐ１１９４番、Ａｓｐ１２２２番、Ｔｈｒ１２７０番、Ｓｅｒ１２８７番、Ｔｒｐ１２８９番、Ｔｙｒ１２９０番、Ｈｉｓ１２９３番、Ｇｌｙ１３００番またはＴｒｐ１３０３番、またはこれらの任意の組合わせの欠失を含むが、前記欠失は、修飾ＴｅＮＴ  ＨＣ領域の結合活性を増大させる。
【０２４１】
天然由来のクロストリジウム毒素の標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素受容体系に対する結合活性を増加させる増大された標的ドメインの他の一例としては、制限なく、例えば非毒性、非赤血球凝集素（ＮＴＮＨ）、赤血球凝集素−１７（ＨＡ−１７）、赤血球凝集素−３３（ＨＡ−３３）及び赤血球凝集素−７０（ＨＡ−７０）のような、クロストリジウム毒素の非毒素関連タンパク質が含まれる。インビボでは、クロストリジウムバクテリアが、ほぼ１５０−ｋＤａクロストリジウム毒素及び包括的に非毒素関連タンパク質（ｎｏｎｔｏｘｉｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ；ＮＡＰ）と呼ばれるその他のタンパク質を含む毒素複合体を生産する。同定されたＮＡＰには、例えばほぼ１７−ｋＤａの赤血球凝集素（ＨＡ−１７）、ほぼ３３−ｋＤａの赤血球凝集素（ＨＡ−３３）及びほぼ７０−ｋＤａの赤血球凝集素（ＨＡ−７０）のような赤血球凝集活性を保有するタンパク質を始めとして、ほぼ１３０−ｋＤａのタンパク質である非毒性−非赤血球凝集素（ＮＴＮＨ）が含まれる。例えば、エリック  Ａ．ジョンソン（Ｅｒｉｃ  Ａ．Ｊｏｈｎｓｏｎ）及びマリテ  ブラッドショー（Ｍａｒｉｔｅ  Ｂｒａｄｓｈａｗ）、（２００１年）「Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ：Ａ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」、Ｔｏｘｉｃｏｎ第３９巻、１７０３−１７２２頁；及びステファニー  ラフェスチン（Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ  Ｒａｆｆｅｓｔｉｎ）ら、（２００４年）「Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｇｅｎｅｓｉｎ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ａｎｄ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ」、Ａｎａｅｒｏｂｅ第１０巻、９３−１００頁参照。前記毒素複合体は、中毒過程において重要である。その理由は、劣悪な環境条件からの保護、プロテアーゼ消化に対する耐性を提供し、前記毒素の内在化及び活性化を促すものと考えられるためである。
【０２４２】
最近の結晶学実験は、各種クロストリジウムバクテリア由来のＨＡ−１７、ＨＡ−３３及びＮＴＮＨがクロストリジウム毒素の結合ドメインに存在する単一β−三葉形ドメインと非常に類似したβ−三葉形ドメインを含む領域を含むことを明らかにした。例えば、カオル  イノウエ（Ｋａｏｒｕ  Ｉｎｏｕｅ）ら、（２００３年）「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｂｙ  Ｘ−Ｒａｙ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ  ｏｆ  ａ  Ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ（ＨＡ１）ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  Ｔｏｘｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ」、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．第１４９巻、３３６１−３３７０頁；及びジョセフ  Ｗ．アーント（Ｊｏｓｅｐｈ  Ｗ．Ａｒｎｄｔ）ら、（２００５年）「Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＨＡ３３／Ａ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ａ  Ｒｅｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  β−ｔｒｅｆｏｉｌ  Ｆｏｌｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第３４６巻、１０８３−１０９３頁参照。例えば、クロストリジウムボツリヌス血清型Ａ由来のＨＡ−３３は、２つのβ−三葉形ドメインを有するが、それぞれは、第１β−三葉形ドメインに対して１α（配列番号９のアミノ酸１０番〜５５番）、１β（配列番号９のアミノ酸５６番〜１０２番）及び１γ（配列番号９のアミノ酸１０３番〜１４４番）、及び第２β−三葉形ドメインに対して２α（配列番号９のアミノ酸１５１番〜１９７番）、２β（配列番号９のアミノ酸１９８番〜２４５番）及び２γ（配列番号９のアミノ酸２４６番〜２９３番）に命名された、３つの潜在的な炭水化物結合部分またはβ−三葉形折り畳みからなる。前記炭水化物結合部分の保存されたアミノ酸での突然変異は、炭水化物結合の喪失をもたらす。例えば、カオル  イノウエ（Ｋａｏｒｕ  Ｉｎｏｕｅ）ら、（２００３年）「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｂｙ  Ｘ−Ｒａｙ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ  ｏｆ  ａ  Ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ（ＨＡ１）ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  Ｔｏｘｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ」、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．第１４９巻、３３６１−３３７０頁参照。
【０２４３】
これらβ−三葉形ドメインはまた、クロストリジウムボツリヌス血清型Ｂ、血清型Ｃ１及び血清型Ｄにより生産されるＨＡ−３３タンパク質でも発見され、配列アライメントから全体的炭水化物結合に必須なアミノ酸は保存されることが明らかになった。炭水化物結合に必須であると予測されるアミノ酸は以下のとおりである。配列番号９のＨＡ−３３／Ａ１、配列番号１０のＨＡ−３３／Ａ２、配列番号１１のＨＡ−３３／Ａ３、配列番号１２のＨＡ−３３／Ａ５及び配列番号１５のＨＡ−３３／Ｂ２のＡｓｐ２６３番、Ｔｙｒ２６５番、Ｇｌｎ２６８番、Ｇｌｎ２７６番、Ｐｈｅ２７８番及びＧｌｎ２８６番；配列番号１２のＨＡ−３３／Ａ４のＡｓｐ２６４番、Ｔｙｒ２６６番、Ｇｌｎ２６９番、Ｇｌｎ２７７番、Ｐｈｅ２７９番及びＧｌｎ２８７番；配列番号１４のＨＡ−３３／Ｂ１のＡｓｐ２６２番、Ｔｙｒ２６４番、Ｇｌｎ２６７番、Ｇｌｎ２７５番、Ｐｈｅ２７７番及びＧｌｎ２８５番；配列番号１６のＨＡ−３３／Ｃ１のＡｓｐ２５５番、Ｖａｌ２５７番、Ｇｌｙ２６０番、Ｇｌｎ２６８番、Ｔｙｐ２７０番及びＧｌｎ２７８番；及び配列番号１７のＨＡ−３３／Ｃ２及び配列番号１８のＨＡ−３３／ＤのＡｓｐ２５６番、Ｔｙｒ２５８番、Ｇｌｎ２６１番、Ｉｓｅ２６９番、Ａｓｐ２７１番及びＧｌｎ２７９番。免疫親和性カラムクロマトグラフィー及びプールダウンアッセイにより、ＨＡ−３３がクロストリジウム毒素受容体と推定されるシナプトタグミンＩＩ（ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ  ＩＩ）と結合できることが分かった。例えば、ユ  チョウ（Ｙｕ  Ｚｈｏｕ）ら、（２００５年）「Ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ−３３  ｏｆ  Ｔｙｐｅ  Ｑ  Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｂｉｎｄｓ  ｗｉｔｈ  Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ  ＩＩ」、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．第２７２巻、２７１７−２７２６頁参照。各種クロストリジウムＨＡ−３３タンパク質から発見されるβ−三葉形ドメインを含むアミノ酸配列を次の表３及び表４に示す。
【０２４４】
【表３】
2008532549.tif 000004
【０２４５】
【表４】
2008532549.tif 000005
【０２４６】
ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメイン配列の追加分析で、ＨＡ−１７及びＮＴＮＨにおけるβ−三葉形ドメインをさらに同定した。例えば、Ｊｏｓｅｐｈ  Ｗ．Ａｒｎｄｔら、（２００５年）、「Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＨＡ３３／Ａ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ａ  Ｒｅｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  β−ｔｒｅｆｏｉｌ  Ｆｏｌｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第３４６巻、１０８３−１０９３頁参照。ＨＡ−１７は、３つの炭水化物結合部分またはβ−三葉形折り畳みを含む単一のβ−三葉形ドメインを含む。ＨＡ−１７の炭水化物結合部分は、ＨＡ−３３の２γ炭水化物結合部分との最大の配列類似性を示す。これらのβ−三葉形ドメインは、さらにクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ、血清型Ｃ１及び血清型Ｄによって生成されるＨＡ−１７タンパク質からも発見され、配列アラインメントから、全体的炭水化物結合に必須アミノ酸は、保存されていることが明らかになった。炭水化物結合に必須なものとして予測されるアミノ酸は、後述のとおりである：配列番号１９のＨＡ−１７／Ａ、配列番号２０のＨＡ−１７／Ｂ、配列番号２１のＨＡ−１７／Ｃ１及び配列番号２２のＨＡ−１７／ＤのＴｙｒ１１０番、Ｔｙｐ１１２番、Ｔｙｒ１１５番、Ｐｒｏ１３０番、Ｐｈｅ１３２番及びＡｓｎ１３８番。各種のクロストリジウムＨＡ−１７タンパク質から発見されるβ−三葉形ドメインを含むアミノ酸配列を表５に示す。
【０２４７】
【表５】
2008532549.tif 000006
【０２４８】
各種のクロストリジウムバクテリア由来のＮＴＮＨは、ＢｏＮＴ／Ａ及びＴｅＮＴの細胞結合ドメインに存在するβ−三葉形ドメインとの相当な配列類似性を示す。前記高度の構造的類似性は、ＮＴＮＨとクロストリジウム毒素との間の低配列類似性の観点で興味深いものである。また、各種の血清型のＮＴＮＨは、クロストリジウム毒素よりも大きい配列類似性を有するため、他のクロストリジウム菌株によって生成されるＮＴＮＨも、クロストリジウム毒素の結合ドメインとの高い構造的類似性を示すβ−三葉形ドメインを有すると思われる。各種のクロストリジウムＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインは、以下のとおりである。配列番号２３のＮＴＮＨ／Ａ１のアミノ酸１０５０番〜１１９３番；配列番号２４のＮＴＮＨ／Ａ２のアミノ酸１０５０番〜１１９８番；配列番号２５のＮＴＮＨ／Ａ３のアミノ酸１０５０番〜１１９３番；配列番号２６のＮＴＮＨ／Ｂのアミノ酸１０４９番〜１１９７番；配列番号２７のＮＴＮＨ／Ｃ１のアミノ酸１０４９番〜１１９６番；配列番号２８のＮＴＮＨ／Ｄのアミノ酸１０４９番〜１１９６番；配列番号２９のＮＴＮＨ／Ｅのアミノ酸１０１４番〜１１６２番；配列番号３０のＮＴＮＨ／Ｆ１のアミノ酸１０１６番〜１１５９番；配列番号３１のＮＴＮＨ／Ｆ２のアミノ酸１０１７番〜１１６５番；及び配列番号３２のＮＴＮＨ／Ｇのアミノ酸１０５０番〜１１９８番。各種のクロストリジウムＮＴＮＨタンパク質から発見されるβ−三葉形ドメインを含むアミノ酸配列を表６に示す。
【０２４９】
クロストリジウム毒素に存在するβ−三葉形ドメインであるＨＡ−３３、ＨＡ−１７及びＮＴＮＨは、共同でクロストリジウム毒素の複合体の質量のほぼ半分を構成し、中毒過程の細胞結合段階において炭水化物結合の明白な重要性の基礎になる。このような観察は、クロストリジウム毒素単独では毒素複合体全体として細胞の中毒にあまり効果的でないという事実によってさらに裏付けられる。このような増大した結合活性に対する１つの可能な説明は、ＨＡ−３３、ＨＡ−１７及びＮＴＮＨに存在するβ−三葉形ドメインの類型的及び量的存在である。したがって、クロストリジウム毒素から発見されるβ−三葉形ドメインに比べてＨＡ−３３、ＨＡ−１７及びＮＴＮＨに存在するβ−三葉形ドメインの構造類似性の高い予測率は、増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素の開発に有用な結合ドメインの潜在的供給源を供給する。非制限の一例として、ＨＡ−３３、ＨＡ−１７またはＮＴＮＨ由来の炭水化物結合部分またはβ−三葉形折り畳みは、クロストリジウム毒素に存在する天然由来炭水化物結合部分に置き換えられる。他の非制限の例として、ＨＡ−３３、ＨＡ−１７またはＮＴＮＨ由来の炭水化物結合部分またはβ−三葉形折り畳みは、クロストリジウム毒素に存在する天然由来炭水化物結合部分にさらに付加されてもよい。またの非制限の例として、複数のＨＡ−３３、ＨＡ−１７またはＮＴＮＨ由来の炭水化物結合部分またはβ−三葉形折り畳みは、クロストリジウム毒素に存在する天然由来炭水化物結合部分に置き換えられる。またの非制限の例として、複数のＨＡ−３３、ＨＡ−１７またはＮＴＮＨ由来の炭水化物結合部分またはβ−三葉形折り畳みは、クロストリジウム毒素に存在する天然由来炭水化物結合部分にさらに付加されてもよい。さらにまたの非制限の例として、複数のクロストリジウム毒素の結合ドメイン由来の炭水化物結合部分またはβ−三葉形折り畳みは、クロストリジウム毒素に存在する天然由来炭水化物結合部分にさらに付加されてもよい。
【０２５０】
【表６】
2008532549.tif 000007
【０２５１】
本明細書で使用される用語「非毒素関連タンパク質」は、「ＮＡＰ」と同義であり、内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対し、例えば結合親和性または結合特異性のような選択的な結合活性を有するクロストリジウムＮＡＰを意味する。天然由来のＮＡＰだけでなく、増大した結合活性を有するＮＡＰも、本発明の態様の実施に使用され得ると予想される。本明細書で使用される用語「増大した結合活性を有するＮＡＰ」は、クロストリジウム毒素由来の修飾されていない天然由来のクロストリジウム結合ドメインに比べて統計的に有意の程度に、内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対し、例えば結合親和性または結合特異性のような増大した結合活性を有するクロストリジウムＮＡＰを意味する。定義によると、増大した結合活性を有するＮＡＰは、開示された標準配列の相応する領域（表３〜６参照）から少なくとも１つのアミノ酸変化を有し、前記標準配列の相応する領域に対するパーセント同一性で記載することができる。
【０２５２】
制限なく、包括的方法、局所的方法、及び例えば切片接近法のようなハイブリッド方法を含む様々な配列アラインメント方法のうちいずれかを使用して、天然由来のクロストリジウムＮＡＰに対する修飾クロストリジウムＮＡＰのパーセント同一性を求めることができる。パーセント同一性を求めるプロトコールは、当業者の範囲内で、また本明細書の教示から日常的な手続きである。
【０２５３】
天然由来のクロストリジウム毒素の標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対する結合活性を増加するためにクロストリジウムＮＡＰを修飾させる方法に対する、当業者に周知の接近法。上述したように、１つの接近法は、コンピューターを利用したタンパク質デザインアルゴリズムを用いてアミノ酸を同定する段階；制限なく、部位特異的突然変異誘発、オリゴヌクレオチド−指向的突然変異誘発及び部位特異的突然変異誘発を利用して特異的に同定されたアミノ酸を変える段階；及び、例えばヘテロジニアスアッセイ、ホモジニアスアッセイ及び非分離ホモジニアスアッセイを用いて増大した結合活性を有する修飾クロストリジウムＮＡＰを含む修飾クロストリジウム毒素の結合活性をテストする段階を含む。また、本明細書に開示された増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素の結合活性は、固定化した受容体及び界面光学アッセイ法を利用して親和性クロマトグラフィーによって求められるとさらに予想される。上述の他の接近法では、天然由来のクロストリジウム毒素の標的細胞上に存在する天然由来のクロストリジウム毒素の受容体系に対する修飾クロストリジウムＮＡＰの結合活性は、指向的進化法を利用して達成される。
【０２５４】
クロストリジウムＮＡＰは、制限なく、例えば、クロストリジウムＮＡＰイソ型及びクロストリジウムＮＡＰ亜型のような天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体；例えば保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体、非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体、クロストリジウムＮＡＰキメラ、これらの活性クロストリジウムＮＡＰ断片、またはこれらの任意の組み合わせのような非天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体を含む。
【０２５５】
本明細書で使用される用語「クロストリジウムＮＡＰ変異体」は、天然由来でも非天然由来でも、開示された標準配列（表３〜６参照）の相応する領域から少なくとも１つのアミノ酸変化を有するクロストリジウムＮＡＰを意味し、前記標準配列の相応する領域に対してパーセント同一性で記載することができる。明確に記載しない限り、本明細書に開示されたすべてのクロストリジウムＮＡＰ変異体は、中毒過程の細胞結合段階を行うことができる。
【０２５６】
当業者であれば、各クロストリジウムバクテリア内でアミノ酸配列が、またこれらのタンパク質をコードする核酸が少しずつ異なる天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体があり得ることを認知する。例えば、現在、５種のクロストリジウムボツリヌス菌血清型ＡＨＡ−３３変異体のＨＡ−３３／Ａ１、ＨＡ−３３／Ａ２、ＨＡ−３３／Ａ３、ＨＡ−３３／Ａ４及びＨＡ−３３／Ａ５（表３及び４）があり、特定のＨＡ−３３変異体は、他のＨＡ−３３変異体に比べて、様々な程度のアミノ酸の差を示す。他の一例として、現在、３種のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ−３３変異体のＮＴＮＨ／Ａ１、ＮＴＮＨ／Ａ２及びＮＴＮＨ／Ａ３（表６）があり、特定のＮＴＮＨ変異体は、別のＮＴＮＨ変異体に比べて、様々な程度のアミノ酸の差を示す。本明細書で使用される用語「天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体」は、制限なく、代案的にスプライスされた転写物から生じたクロストリジウムＮＡＰイソ型、自発の突然変異によって生じたクロストリジウムＮＡＰイソ型、及びクロストリジウムＮＡＰ亜型を含む、天然由来の過程によって生成される任意のクロストリジウムＮＡＰを意味する。天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウムＮＡＰを置換することができる。天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸、または１００個以上のアミノ酸を置換してもよい。天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体は、また、前記天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから、少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、前記天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰに対し少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。
【０２５７】
天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体の非制限の例は、例えばクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７イソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨイソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨイソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨイソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨイソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨイソ型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨイソ型、及びクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨイソ型のようなクロストリジウムＮＡＰイソ型である。クロストリジウムＮＡＰイソ型は、前記クロストリジウムＮＡＰイソ型を基にする標準クロストリジウムＮＡＰと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様おいても標準クロストリジウムＮＡＰを置換することができる。
【０２５８】
天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体の他の非制限の例は、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ亜型、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ亜型、及びクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ亜型のようなクロストリジウムＮＡＰ亜型である。クロストリジウムＮＡＰ亜型は、前記クロストリジウムＮＡＰ亜型を基にする標準クロストリジウムＮＡＰと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様おいても標準クロストリジウムＮＡＰを置換することができる。
【０２５９】
本明細書で使用される用語「非天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体」は、制限なく、ランダムな突然変異誘発または合理的デザインを利用して遺伝工学によって生成されたクロストリジウムＮＡＰ、及び化学的合成によって生成されたクロストリジウムＮＡＰを含む、人間の操作下に生成された任意のクロストリジウムＮＡＰを意味する。非天然由来のクロストリジウムＮＡＰ変異体の非制限の例には、例えば、保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体、非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体、クロストリジウムＮＡＰキメラ性変異体、及び活性クロストリジウムＮＡＰ断片が含まれる。
【０２６０】
本明細書で使用される用語「保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体」は、標準クロストリジウムＮＡＰ配列（表３〜６参照）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した特性を少なくとも１つ有する他のアミノ酸またはアミノ酸類似体で置換されているクロストリジウムＮＡＰを意味する。特性の例には、制限なく、類似した大きさ、局所形態、電荷、疎水性、親水性、親油性、共有結合能力、水素結合能力、物理化学的特性など、またはこれらの任意の組み合わせが含まれる。保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様おいても標準クロストリジウムＮＡＰを置換することができる。保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、または５０個以上のアミノ酸を置換してもよい。保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、さらに、前記保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから、少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置換することができるが、前記隣接アミノ酸は、保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰに対して少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体の非制限の例には、例えば、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ変異体、保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ変異体、及び保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ変異体が含まれる。
【０２６１】
本明細書で使用される用語「非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体」は、１）前記非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから少なくとも１つのアミノ酸が欠失され；２）前記非保存的クロストリジウムＮＡＰが基にする標準クロストリジウムＮＡＰに少なくとも１つのアミノ酸が付加され；または、３）標準クロストリジウムＮＡＰ配列（表３〜６参照）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した任意の特性を共有しない他のアミノ酸またはアミノ酸類似体に置き換えられたクロストリジウムＮＡＰを意味する。非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準クロストリジウムＮＡＰを置換することができる。非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸が欠失されたものであってもよい。非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰに１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸を付加したものであってもよい。非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、前記非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、または５０個以上のアミノ酸を置き換えられたものであってもよい。非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体は、さらに、前記非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰから少なくとも１０個の隣接アミノ酸、少なくとも１５個の隣接アミノ酸、少なくとも２０個の隣接アミノ酸、または少なくとも２５個の隣接アミノ酸を置き換えたものであってもよいが、前記隣接アミノ酸は、前記非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体を基にする標準クロストリジウムＮＡＰに対して少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性または９５％のアミノ酸同一性を有するものである。非保存的クロストリジウムＮＡＰ変異体の非制限の例には、例えば、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−���７変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ変異体、非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ変異体、及び非保存的クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ変異体が含まれる。
【０２６２】
本明細書で使用される用語「クロストリジウムＮＡＰキメラ」は、クロストリジウムＮＡＰの少なくとも一部及び少なくとも１つの他のポリペプチドの少なくとも一部を含み、標準クロストリジウムＮＡＰ（表３〜６参照）から少なくとも１つの特性が異なる増大した標的ドメインを形成するポリペプチドを意味するが、ただし、このクロストリジウムＮＡＰキメラは、クロストリジウム毒素の標的細胞に存在するクロストリジウム毒素の受容体系に特異的に結合することができ、したがってクロストリジウム毒素が基質をタンパク質分解的に切断する全体的細胞メカニズムを行うのに関与する。
【０２６３】
本明細書で使用される用語「活性クロストリジウムＮＡＰ断片」は、本発明の態様で有用な、増大した標的ドメインを含む多様なクロストリジウムＮＡＰ断片のうち任意のものを意味するが、ただし、このようなＮＡＰ断片は、クロストリジウム毒素の標的細胞に存在するクロストリジウム毒素の受容体系に特異的に結合することができ、したがってクロストリジウム毒素が基質をタンパク質分解的に切断する全体的細胞メカニズムを行うのに関与する。
【０２６４】
したがって、一実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が、ＮＡＰ由来のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。他の実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が、ＮＡＰ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。
【０２６５】
さらに他の実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が、クロストリジウムＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、クロストリジウムＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、例えばクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメイン、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。
【０２６６】
他の実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が、クロストリジウムＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、クロストリジウムＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えばクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。
【０２６７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号９のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０２６８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号９のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０２６９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４���、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２７０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２７１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号９のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２７２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０２７３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０２７４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２７５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２７６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号９のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２７７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０２７８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０２７９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、���ミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２８０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２８１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１０のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２８２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０２８３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番の修飾を含む。
【０２８４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２８５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンに置換される。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２８６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のまた他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１０のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２８７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０２８８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０２８９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００���、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２９０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２９１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１１のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２９２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０２９３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０２９４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２９５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のまた他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２９６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のまた他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１１のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０２９７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のアミノ酸１０番〜１４６番またはアミノ酸１５３番〜２９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番を含む。
【０２９８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のアミノ酸１０番〜１４６番またはアミノ酸１５３番〜２９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番を含む。
【０２９９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２���、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３００】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様のまた他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３０１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１２のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２０２番〜２４３番、またはアミノ酸２５０番〜２９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３０２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番を含む。
【０３０３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番の修飾を含む。
【０３０４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３０５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３０６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１２のアミノ酸５７番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４４番〜２４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３０７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０３０８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９３番を含む。
【０３０９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、���ミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３１０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３１１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１３のアミノ酸１０番〜５５番、アミノ酸５６番〜１０２番、アミノ酸１０３番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９７番、アミノ酸１９８番〜２４５番、またはアミノ酸２４６番〜２７９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３１２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０３１３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０３１４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３１５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３１６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１３のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３１７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９２番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番を含む。
【０３１８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のアミノ酸１０番〜１４４番またはアミノ酸１５１番〜２９２番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番を含む。
【０３１９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、���ミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３２０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３２１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１４のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜１００番、アミノ酸１０５番〜１４４番、アミノ酸１５１番〜１９５番、アミノ酸２００番〜２４１番、またはアミノ酸２４８番〜２９２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３２２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番を含む。
【０３２３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番を含む。
【０３２４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３２５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３２６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１４のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸１０１番〜１０４番、アミノ酸１９６番〜１９９番、またはアミノ酸２４２番〜２４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３２７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番を含む。
【０３２８】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、���ミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３２９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３３０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１５のアミノ酸１０番〜５６番、アミノ酸６２番〜１０２番、アミノ酸１０７番〜１４６番、アミノ酸１５３番〜１９７番、アミノ酸２００番〜２４２番、またはアミノ酸２４９番〜２９１番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３３１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０３３２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番を含む。
【０３３３】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３３４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３３５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１５のアミノ酸５６番〜６１番、アミノ酸１０３番〜１０６番、アミノ酸１９８番〜２０１番、またはアミノ酸２４３番〜２４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３３６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のアミノ酸１０番〜１４１番またはアミノ酸１４８番〜２８５番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番を含む。
【０３３７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のアミノ酸１０番〜１４１番またはアミノ酸１４８番〜２８５番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番を含む。
【０３３８】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１���１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３３９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３４０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１６のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３４番、またはアミノ酸２４１番〜２８５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３４１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番を含む。
【０３４２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番を含む。
【０３４３】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３４４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３４５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１６のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３５番〜２４０番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３４６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のアミノ酸１０番〜１４１番またはアミノ酸１４８番〜２８６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番を含む。
【０３４７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のアミノ酸１０番〜１４１番またはアミノ酸１４８番〜２８６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番を含む。
【０３４８】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１���１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３４９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３５０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１７のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３５１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番を含む。
【０３５２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番の修飾を含む。
【０３５３】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３５４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３５５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１７のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３５６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のアミノ酸１０番〜１４１番またはアミノ酸１４８番〜２８６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番を含む。
【０３５７】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のアミノ酸１０番〜１４１番またはアミノ酸１４８番〜２８６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１γ−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番を含む。
【０３５８】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１���、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３５９】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３６０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３が、例えば配列番号１８のアミノ酸１０番〜５４番、アミノ酸６０番〜９８番、アミノ酸１０３番〜１４１番、アミノ酸１４８番〜１９０番、アミノ酸１９５番〜２３５番、またはアミノ酸２４２番〜２８６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３６１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番を含む。
【０３６２】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β４／β５ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾１β８／β９ヘアピンカーブ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３のβ−三葉形ドメインの修飾２β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番を含む。
【０３６３】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３６４】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３６５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−３３由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１８のアミノ酸５５番〜５９番、アミノ酸９９番〜１０２番、アミノ酸１９１番〜１９４番、またはアミノ酸２３６番〜２４１番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３６６】
一実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素がクロストリジウムＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、クロストリジウムＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、例えばクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメイン、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインがクロストリジウムＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。
【０３６７】
一実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素がクロストリジウムＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、クロストリジウムＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えばクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインがクロストリジウムＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。
【０３６８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０３６９】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０３７０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３７１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３７２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号１９のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３７３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番を含む。
【０３７４】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番の修飾を含む。
【０３７５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３７６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３７７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号１９のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３７８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０３７９】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０３８０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３８１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３８２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２０のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３８３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番を含む。
【０３８４】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番を含む。
【０３８５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３８６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３８７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２０のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３８８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０３８９】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０３９０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３９１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３９２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２１のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３９３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番を含む。
【０３９４】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番の修飾を含む。
【０３９５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０３９６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３９７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２１のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０３９８】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０３９９】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のアミノ酸９番〜１４６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番を含む。
【０４００】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４０１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４０２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７が、例えば配列番号２２のアミノ酸９番〜５０番、アミノ酸５５番〜９１番、またはアミノ酸９５番〜１４６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４０３】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番を含む。
【０４０４】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番の修飾を含む。
【０４０５】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４０６】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４０７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＨＡ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２２のアミノ酸５１番〜５４番またはアミノ酸９２番〜９４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４０８】
一実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素がクロストリジウムＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、クロストリジウムＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、例えばクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメイン、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインがクロストリジウムＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。
【０４０９】
一実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素がクロストリジウムＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、クロストリジウムＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えばクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインがクロストリジウムＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。
【０４１０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１１９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番を含む。
【０４１１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１１９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番を含む。
【０４１２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４１３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４１４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４１５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番を含む。
【０４１６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番を含む。
【０４１７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４１８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４１９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２３のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４２０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１１９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番を含む。
【０４２１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１１９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番を含む。
【０４２２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４２３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４２４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４２５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番を含む。
【０４２６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番の修飾を含む。
【０４２７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４２８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４２９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２４のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４３０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１１９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番を含む。
【０４３１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１１９４番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番を含む。
【０４３２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４３３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４３４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４９番〜１１９４番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４３５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番を含む。
【０４３６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番を含む。
【０４３７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４３８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４３９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ａ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２５のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１３９番〜１１４８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４４０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１１９８番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番を含む。
【０４４１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１１９８番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番を含む。
【０４４２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４４３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４４４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９８番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４４５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番を含む。
【０４４６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番を含む。
【０４４７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４４８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４４９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｂ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２６のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４５０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１１９７番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番を含む。
【０４５１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１１９７番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番を含む。
【０４５２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４５３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４５４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４５５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番を含む。
【０４５６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番を含む。
【０４５７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４５８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４５９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｃ１  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２７のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４６０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１１９７番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番を含む。
【０４６１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１１９７番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番を含む。
【０４６２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４６３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４６４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０４９番〜１０９６番、アミノ酸１１１０番〜１１３８番、またはアミノ酸１１４８番〜１１９７番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４６５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番を含む。
【０４６６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番を含む。
【０４６７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４６８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４６９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｄ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２８のアミノ酸１０９７番〜１１０９番またはアミノ酸１１３９番〜１１４７番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４７０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１１６３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番を含む。
【０４７１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１１６３番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番を含む。
【０４７２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４７３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４７４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０１４番〜１０６１番、アミノ酸１０７５番〜１１０３番、またはアミノ酸１１１４番〜１１６３番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４７５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番を含む。
【０４７６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番の修飾を含む。
【０４７７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４７８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４７９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｅ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号２９のアミノ酸１０６２番〜１０７４番またはアミノ酸１１０４番〜１１１３番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４８０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１１６０番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番を含む。
【０４８１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１１６０番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番を含む。
【０４８２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４８３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４８４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０１６番〜１０６３番、アミノ酸１０７７番〜１１０４番、またはアミノ酸１１１５番〜１１６０番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４８５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番を含む。
【０４８６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番を含む。
【０４８７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４８８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４８９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３０のアミノ酸１０６４番〜１０７６番またはアミノ酸１１０５番〜１１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４９０】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１１６６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番を含む。
【０４９１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１１６６番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番を含む。
【０４９２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４９３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４９４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０１７番〜１０６４番、アミノ酸１０７８番〜１１０６番、またはアミノ酸１１１７番〜１１６６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４９５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番を含む。
【０４９６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番を含む。
【０４９７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０４９８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０４９９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番由来の任意のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｆ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３１のアミノ酸１０６５番〜１０７７番またはアミノ酸１１０７番〜１１１６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５００】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１１９９番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番を含む。
【０５０１】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１１９９番を含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番を含む。
【０５０２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５０３】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５０４】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０５０番〜１０９７番、アミノ酸１１１１番〜１１３９番、またはアミノ酸１１５０番〜１１９９番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５０５】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番を含む。
【０５０６】
他の実施態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはクロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨのβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨの増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番を含む。
【０５０７】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５０８】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番由来の任意のアミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番由来の任意の疎水性アミノ酸の非隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の非隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５０９】
本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番由来のアミノ酸の隣接アミノ酸の置換がグリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番由来の疎水性アミノ酸の隣接アミノ酸の置換がフェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、クロストリジウムボツリヌス菌血清型Ｇ  ＮＴＮＨ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば配列番号３２のアミノ酸１０９８番〜１１１０番またはアミノ酸１１４０番〜１１４９番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接アミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５１０】
天然由来のクロストリジウム毒素の標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対する結合活性を増加させる増大した標的ドメインの他の例には、制限なく、天然由来のクロストリジウム毒素と同一の受容体系と結合するリガンドが含まれる。最近の研究から、中毒過程中にクロストリジウム毒素によって使用される内因性受容体系の成分が明らかになった。非制限の一例として、線維芽細胞の成長因子３受容体（ＦＧＦＲ３）が、ＢｏＮＴ／Ａ受容体として作用する。例えば、エスター  フェルナンデス−サラス（Ｅｓｔｅｒ  Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｓａｌａｓ）ら、「Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  Ｔｏｘｉｎ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｓｓａｙｓ」、ＰＣＴ特許出願第２００５／００６４２１号（２００５年９月９日）参照。他の非制限の一例として、シナプトタグミンＩ（ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ  Ｉ）がＢｏＮＴ／Ｂ受容体として、さらに、ＢｏＮＴ／Ｇ受容体として作用する。例えば、Ｍｉｎ  Ｄｏｎｇら、（２００３年）「Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｅｎｔｒｙ  ｏｆ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｂ  ｉｎｔｏ  ｃｅｌｌｓ」、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．第１６２巻、第７号、１２９３−１３０３頁；及びＡｎｄｒｅａｓ  Ｒｕｍｍｅｌら、（２００４年）「Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ  ａｃｔ  ａｓ  ｎｅｒｖｅ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ  Ｇ」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２７９巻、第２９号、３０８６５−３０８７０頁参照。さらに他の非制限の例として、シナプトタグミンＩＩが、ＢｏＮＴ／Ｂ受容体として、またＢｏＮＴ／Ｇ受容体として作用する。例えば、Ｍｉｎ  Ｄｏｎｇら、同上、（２００３年）；及びＡｎｄｒｅａｓ  Ｒｕｍｍｅｌら、同上、（２００４年）参照。増大した結合領域としてのリガンドドメインの選択は、修飾されるクロストリジウム毒素に依存する。非制限の例として、ＦＧＦＲ３に選択的に結合するリガンドは、修飾ＢｏＮＴ／Ａに対する増大した標的ドメインとして使用され得るのに対し、シナプトタグミンＩまたはシナプトタグミンＩＩと選択的に結合するリガンドは、修飾ＢｏＮＴ／Ｂまたは修飾ＢｏＮＴ／Ｇに対する増大した標的ドメインとして使用され得る。
【０５１１】
線維芽細胞の成長因子（ＦＧＦ）は、複雑な組合せのシグナル伝逹経路を通じて細胞の多様な発生、分化及び成長及び修復過程に関与する。現在では、少なくとも２３個のリガンド（ＦＧＦ１〜２３）が５個の膜貫通チロシンキナーゼＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ１〜５）群を介してシグナル伝逹を行うことが知られている。ＦＧＦＲのそれらのリガンドに対する親和性は非常に多様であり、成長因子群の各構成員によって異なる親和性を有する。例えば、Ｃ．Ｊ．Ｐｏｗｅｒｓら、（２０００年）「Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ，ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ．第７巻、第３号、１６５−１９７頁参照。このような多様性は、部分的には区分される受容性イソ型をコードする、代案としてスプライシングされた変異体の生成によって得られる。例えば、Ｂｅｒｎｈａｒｄ  Ｒｅｕｓｓ及びＯｌｉｖｅｒ  ｖｏｎ  Ｂｏｈｌｅｎ  ｕｎｄ  Ｈａｌｂａｃｈ、（２００３年）「Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ」、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ．第３１３巻、第２号、１３９−１５７頁参照。リガンド結合選択性に最大の影響を及ぼすように見えるタンパク質領域は、ＩｇＩＩＩドメインの一部であり、三種の異なるスプライス変異体によってコードされる前記部分のイソ型が同定された。ＩｇＩＩＩａ、ＩｇＩＩＩｂ及びＩｇＩＩＩｃと命名されたこれらの三種のイソ型は、異なるＦＧＦＲ群の構成員に対し相対的な結合親和性を有する。ａ及びｂと命名されたＦＧＦＲリガンド結合ドメインにおける代案のスプライシングは、新規なリガンド親和性を有する付加の受容体イソ型を生成する。ＩｇＩＩＩａ、ＩｇＩＩＩｂ及びＩｇＩＩＩｃのイソ型が、ＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ２の何れに対しても同定された。今まで、ＦＧＦＲ３のＩｇＩＩＩａイソ型及びＦＧＦＲ４及びＦＧＦＲ５のＩｇＩＩＩａ及びＩｇＩＩＩｂイソ型は報告されたことがない。
【０５１２】
現在、例えばＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１７及びＦＧＦ−１８のような何種のＦＧＦがＦＧＦＲ３に選択的に結合することか明らかになった。例えば、Ｈｅｃｈｔら、１９９５年；Ｏｒｎｉｔｚら、１９９６年；及びＸｕら、２０００年参照。付加的研究から、ＦＧＦ−１及びＦＧＦ９は、ＦＧＦＲ３ＩＩＩｂに優先して結合するのに対し、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−８、及びＦＧＦ９は、ＦＧＦＲ３ＩＩＩｃに優先して結合することが明らかになった。研究の結果、これらのリガンドは、それぞれ、各種の脊椎動物種に高度の配列同一性を有して存在することが明らかになったが、このような配列同一性は、機能的対等性または類似性を示唆する。非制限の一例として、ＦＧＦ−８は、魚類、鳥類及び哺乳類で発見され、これらのＦＧＦ−８リガンドは、それぞれ８０％を超えるアミノ酸配列同一性を有する。他の非制限の一例として、ＦＧＦ−１８は、魚類、鳥類及び哺乳類で発見され、これらのＦＧＦ−１８リガンドは、それぞれ７０％を超えるアミノ酸配列同一性を有する。結晶学の研究では、すべてのＦＧＦがβ−三葉形ドメインにより構造的に編成されることが明らかになった。ＦＧＦＲ３に結合する様々なＦＧＦリガンドで発見されるβ−三葉形ドメインを含むアミノ酸配列を、表７に示す。
【０５１３】
【表７】
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【０５１４】
本明細書で使用される用語「線維芽細胞成長因子」は、「ＦＧＦ」と同義であり、例えば、ＦＧＦＲ３を含む受容体系のような内因性クロストリジウム毒素の受容体系を含む受容体系に対し、結合親和性または結合特異性のような選択的な結合活性を有するポリペプチドを意味する。天然由来ＦＧＦ及び増大した結合活性を有するＦＧＦの両方が、本発明の態様の実施に使用され得るものと予想される。本明細書で使用される用語「増大した結合活性を有するＦＧＦ」は、クロストリジウム毒素由来の修飾されていない天然由来のクロストリジウム毒素の結合ドメインに比べて、統計的に有意の程度で、例えば結合親和性または結合特異性のような、内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対して、増大した結合活性を有するＦＧＦを意味する。定義によると、増大した結合活性を有するＦＧＦは、開示された標準配列（表７参照）の相応する領域から少なくとも１つのアミノ酸変化を有し、前記標準配列の相応する領域に対するパーセント同一性で記載することができる。
【０５１５】
制限なく、包括的方法、局所的方法、及び、例えば切片接近法のようなハイブリッド方法を含む様々な配列アラインメント方法のうちいずれかにより、天然由来ＦＧＦに対する修飾ＦＧＦのパーセント同一性を求めることができる。パーセント同一性を求めるプロトコールは、当業者の範囲内で、また本明細書の教示から日常的な手続きである。
【０５１６】
天然由来のクロストリジウム毒素の標的細胞上に存在する内因性クロストリジウム毒素の受容体系に対する結合活性を増加させるためにＦＧＦを修飾する方法に関する、当業者によく知られた接近法。上述したように、１つの接近法は、コンピューターを利用したタンパク質デザインアルゴリズムを用いてアミノ酸を同定する段階；制限なく、部位特異的突然変異の誘発、オリゴヌクレオチド−指向的突然変異の誘発、及び部位特異的突然変異の誘発を利用して特異的に同定されたアミノ酸を変える段階；さらに、例えば、ヘテロジーニアスアッセイ、ホモジーニアスアッセイ、及び非分離ホモジーニアスアッセイを用いて、増大した結合活性を有する修飾ＦＧＦを含む修飾クロストリジウム毒素の結合活性をテストする段階を含む。また、本明細書に開示された増大した結合活性を有する修飾クロストリジウム毒素の結合活性は、固定化された受容体及び界面光学アッセイ法を利用して、親和性クロマトグラフィーにより求められると予想される。上述の他の接近法では、天然由来のクロストリジウム毒素の標的細胞上に存在する天然由来のクロストリジウム毒素の受容体系に対する修飾ＦＧＦの結合活性は、指向的進化法を利用して達成され得る。
【０５１７】
ＦＧＦは、制限なく、例えば、ＦＧＦイソ型及びＦＧＦ亜型のような天然由来のＦＧＦ変異体；例えば、保存的ＦＧＦ変異体、非保存的ＦＧＦ変異体、ＦＧＦキメラ、これらの活性ＦＧＦ断片、または、これらの任意の組み合わせのような非天然由来のＦＧＦ変異体を含む。
【０５１８】
本明細書で使用される用語「ＦＧＦ変異体」は、天然由来であっても非天然由来であっても、開示された標準配列（表７参照）の相応する領域から少なくとも１つのアミノ酸変化を有するＦＧＦを意味し、前記標準配列の相応する領域に対してパーセント同一性で記載することができる。特に表記していない限り、本明細書に開示されたすべてのＦＧＦ変異体は、中毒過程の細胞結合段階を行うことができる。
【０５１９】
当業者であれば、各クロストリジウムバクテリア内で、アミノ酸配列及びまたこれらのタンパク質をコードする核酸が少しずつ異なる天然由来のＦＧＦ変異体があり得ることを認知しているはずである。例えば、現在、少なくとも４種類のＦＧＦ−８変異体である、ＦＧＦ−８Ａ、ＦＧＦ−８Ａ、ＦＧＦ−８Ｂ、ＦＧＦ−８Ｅ及びＦＧＦ−８Ｆがあり、特定のＦＧＦ−８変異体は、他のＦＧＦ−８変異体に比べて、多様な程度のアミノ酸の相違を示す。別の一例として、現在、少なくとも２つのＦＧＦ−２変異体であるＦＧＦ−２−１及びＦＧＦ−２−１があり、ＦＧＦ−２−１変異体は、ＦＧＦ−２−２変異体に比べて、多様な程度のアミノ酸の相違を示す。本明細書で使用される用語「天然由来のＦＧＦ変異体」は、制限なく、代案的にスプライシングされた転写物から得られたＦＧＦイソ型、自発の突然変異によって得られたＦＧＦイソ型、及びＦＧＦ亜型を含む、天然由来過程によって生成される任意のＦＧＦを意味する。天然由来のＦＧＦ変異体は、前記天然由来のＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準ＦＧＦを置換することができる。天然由来のＦＧＦ変異体は、前記天然由来のＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから、１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、５０個以上のアミノ酸、または１００個以上のアミノ酸を置換してもよい。天然由来のＦＧＦ変異体は、また、前記天然由来のＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから、少なくとも１０個の隣接したアミノ酸、少なくとも１５個の隣接したアミノ酸、少なくとも２０個の隣接したアミノ酸、または少なくとも２５個の隣接したアミノ酸を置換することができるが、前記隣接したアミノ酸は、前記天然由来のＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦ変異体に対し、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。
【０５２０】
天然由来のＦＧＦ変異体の非制限の例は、例えば、ＦＧＦ−１イソ型、ＦＧＦ−２イソ型、ＦＧＦ−４イソ型、ＦＧＦ−８イソ型、ＦＧＦ−９イソ型、ＦＧＦ−１７イソ型、及びＦＧＦ−１８イソ型のようなＦＧＦイソ型である。ＦＧＦイソ型は、前記ＦＧＦイソ型が基にする標準ＦＧＦと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準ＦＧＦを置換することができる。
【０５２１】
天然由来のＦＧＦ変異体の他の非制限の例は、例えば、ＦＧＦ−１亜型、ＦＧＦ−２亜型、ＦＧＦ−４亜型、ＦＧＦ−８亜型、ＦＧＦ−９亜型、ＦＧＦ−１７亜型、及びＦＧＦ−１８亜型のようなＦＧＦ亜型である。ＦＧＦ亜型は、前記ＦＧＦ亜型が基にする標準ＦＧＦと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準ＦＧＦを置換することができる。
【０５２２】
本明細書で使用される用語「非天然由来のＦＧＦ変異体」は、制限なく、ランダムな突然変異誘発または合理的なデザインを利用して、遺伝工学によって生成されたＦＧＦ、及び化学的合成によって生成されたＦＧＦを含む、人間の人間の操作下に生成された任意のＦＧＦを意味する。非天然由来のＦＧＦ変異体の非制限の例には、例えば、保存的ＦＧＦ変異体、非保存的ＦＧＦ変異体、ＦＧＦキメラ性変異体、及び活性ＦＧＦ断片が含まれる。
【０５２３】
本明細書で使用される用語「保存的ＦＧＦ変異体」は、参照ＦＧＦ配列（表７参照）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した特性を少なくとも１つ有する他のアミノ酸、またはアミノ酸類似体で置換されているＦＧＦを意味する。特性の例には、制限なく、類似した大きさ、局所形態、電荷、疎水性、親水性、親油性、共有結合能力、水素結合能力、物理化学的特性など、または、これらの任意の組み合わせが含まれる。保存的ＦＧＦ変異体は、前記保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準ＦＧＦを置換することができる。保存的ＦＧＦ変異体は、前記保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから、１つ以上のアミノ酸、２つ以上以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、または５０個以上のアミノ酸を置換してもよい。保存的ＦＧＦ変異体は、さらに、前記保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから、少なくとも１０個の隣接したアミノ酸、少なくとも１５個の隣接したアミノ酸、少なくとも２０個の隣接したアミノ酸、または少なくとも２５個の隣接したアミノ酸を置換することができるが、前記隣接したアミノ酸は、保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦ変異体に対して少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。保存的ＦＧＦ変異体の非制限の例には、例えば、保存的ＦＧＦ−１変異体、保存的ＦＧＦ−２変異体、保存的ＦＧＦ−４変異体、保存的ＦＧＦ−８変異体、保存的ＦＧＦ−９変異体、保存的ＦＧＦ−１７変異体、及び保存的ＦＧＦ−１８変異体が含まれる。
【０５２４】
本明細書で使用される用語「非保存的ＦＧＦ変異体」は、１）前記非保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから少なくとも１つのアミノ酸が欠失され；２）前記非保存的ＦＧＦが基にする標準ＦＧＦに少なくとも１つのアミノ酸が付加され；または、３）参照ＦＧＦ配列（表７参照）から、少なくとも１つのアミノ酸が、本来のアミノ酸のものと類似した任意の特性を共有しない他のアミノ酸またはアミノ酸類似体で置換されたＦＧＦを意味する。非保存的ＦＧＦ変異体は、前記非保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦと実質的に同一の方式で機能することができ、本発明のいずれの態様においても標準ＦＧＦを置換することができる。非保存的ＦＧＦ変異体は、前記非保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから、１つ以上のアミノ酸、２つ以上以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸が欠失されたものであってもよい。非保存的ＦＧＦ変異体は、前記非保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦに、１つ以上のアミノ酸、２つ以上以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、及び１０個以上のアミノ酸を付加したものであってもよい。非保存的ＦＧＦ変異体は、前記非保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから、１つ以上のアミノ酸、２つ以上以上のアミノ酸、３つ以上のアミノ酸、４つ以上のアミノ酸、５つ以上のアミノ酸、１０個以上のアミノ酸、２０個以上のアミノ酸、３０個以上のアミノ酸、４０個以上のアミノ酸、または５０個以上のアミノ酸を置換してもよい。非保存的ＦＧＦ変異体は、さらに、前記非保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦから、少なくとも１０個の隣接したアミノ酸、少なくとも１５個の隣接したアミノ酸、少なくとも２０個の隣接したアミノ酸、または少なくとも２５個の隣接したアミノ酸を置換してもよいが、前記隣接したアミノ酸は、前記非保存的ＦＧＦ変異体を基にする標準ＦＧＦ変異体に対して、少なくとも５０％のアミノ酸同一性、６５％のアミノ酸同一性、７５％のアミノ酸同一性、８５％のアミノ酸同一性、または９５％のアミノ酸同一性を保有するものである。非保存的ＦＧＦ変異体の非制限の例には、例えば、非保存的ＦＧＦ−１変異体、非保存的ＦＧＦ−２変異体、非保存的ＦＧＦ−４変異体、非保存的ＦＧＦ−８変異体、非保存的ＦＧＦ−９変異体、非保存的ＦＧＦ−１７変異体、及び非保存的ＦＧＦ−１８変異体が含まれる。
【０５２５】
本明細書で使用される用語「ＦＧＦキメラ」は、ＦＧＦの少なくとも一部及び少なくとも１つの他のポリペプチドの少なくとも一部を含み、標準ＦＧＦ（表７参照）から、少なくとも１つの特性が異なる増大した標的ドメインを形成するポリペプチドを意味するが、ただし、このＦＧＦキメラは、クロストリジウム毒素の標的細胞に存在する内因性クロストリジウム毒素の受容体系に特異的に結合することができ、したがって、クロストリジウム毒素が基質をタンパク質分解的に切断する全体的細胞メカニズムを行うのに参加しなければならない。
【０５２６】
したがって、一実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が、ＦＧＦ由来のβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、ＦＧＦ由来のβ−三葉形ドメインが、例えば、ＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−１７由来のβ−三葉形ドメイン、またはＦＧＦ−１８由来のβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ由来のβ−三葉形ドメインが、ＦＧＦのβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、ＦＧＦのβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦのβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。
【０５２７】
一実施態様では、本明細書に開示された修飾クロストリジウム毒素が、ＦＧＦ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む増大した標的ドメインを含む。本実施態様の一態様では、ＦＧＦ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、ＦＧＦ−１７由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメイン、またはＦＧＦ−１８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、ＦＧＦのβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＦＧＦのβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦのβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。
【０５２８】
他の実施態様では、ＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のアミノ酸２６番〜１５５番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番を含む。
【０５２９】
他の実施態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のアミノ酸２６番〜１５５番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番を含む。
【０５３０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５３１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５３２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−１が、例えば、配列番号３３のアミノ酸２６番〜６４番、アミノ酸６８番〜１０５番、またはアミノ酸１０９番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５３３】
他の実施態様では、ＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番を含む。
【０５３４】
他の実施態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−１のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番の修飾を含む。
【０５３５】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５３６】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番由来の任意のアミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５３７】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番由来のアミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番由来の疎水性アミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−１由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３３のアミノ酸６５番〜６７番、またはアミノ酸１０６番〜１０８番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５３８】
他の実施態様では、ＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のアミノ酸２９番〜１５５番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番を含む。
【０５３９】
他の実施態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のアミノ酸２９番〜１５５番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番を含む。
【０５４０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５４１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５４２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−２が、例えば、配列番号３４のアミノ酸２９番〜６７番、アミノ酸７１番〜１１１番、またはアミノ酸１１５番〜１５５番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５４３】
他の実施態様では、ＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番を含む。
【０５４４】
他の実施態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−２のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番の修飾を含む。
【０５４５】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５４６】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番由来の任意のアミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５４７】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番由来のアミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番由来の疎水性アミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−２由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３４のアミノ酸６８番〜７０番、またはアミノ酸１１２番〜１１４番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５４８】
他の実施態様では、ＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のアミノ酸８３番〜２０６番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番を含む。
【０５４９】
他の実施態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のアミノ酸８３番〜２０６番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番を含む。
【０５５０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５５１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５５２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−４が、例えば、配列番号３５のアミノ酸８３番〜１２１番、アミノ酸１２５番〜１６２番、またはアミノ酸１６６番〜２０６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５５３】
他の実施態様では、ＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番を含む。
【０５５４】
他の実施態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−４のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番の修飾を含む。
【０５５５】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５５６】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番由来の任意のアミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５５７】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番由来のアミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番由来の疎水性アミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−４由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３５のアミノ酸１２２番〜１２４番、またはアミノ酸１６３番〜１６５番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５５８】
他の実施態様では、ＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のアミノ酸４３番〜１７２番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の態様では、ＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番を含む。
【０５５９】
他の実施態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のアミノ酸４３番〜１７２番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番を含む。
【０５６０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５６１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５６２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−８が、例えば、配列番号３６のアミノ酸４３番〜８０番、アミノ酸８４番〜１２３番、またはアミノ酸１２７番〜１７２番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５６３】
他の実施態様では、ＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番を含む。
【０５６４】
他の実施態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−８のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番の修飾を含む。
【０５６５】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５６６】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番由来の任意のアミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番由来の任意の疎水性アミノ酸の隣接していないアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５６７】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番由来のアミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、グリシンで置換されてもよい。本実施態様の他の態様では、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番由来の疎水性アミノ酸の隣接したアミノ酸の置換が、フェニルアラニンで置換されてもよい。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、多くても１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−８由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３６のアミノ酸８１番〜８３番、またはアミノ酸１２４番〜１２６番に比べて、少なくとも１、２、３または４個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５６８】
他の実施態様では、ＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１９６番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインのα−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインのβ−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインのγ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番を含む。
【０５６９】
他の実施態様では、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含む。さらに他の実施態様では、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１９６番を含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインの修飾α−折り畳みモチーフ、ＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインの修飾β−折り畳みモチーフ、またはＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインの修飾γ−折り畳みモチーフを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番を含む。
【０５７０】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と少なくとも７５％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と少なくとも８０％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と少なくとも８５％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と多くても７０％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と多くても７５％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と多くても８０％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と多くても８５％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と多くても９０％のアミノ酸同一性、または配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番と多くても９５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０５７１】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接していないアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５７２】
本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の置換を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の欠失を有するポリペプチドを含む。本実施態様のさらに他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。本実施態様の他の態様では、増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインを含むＦＧＦ−９が、例えば、配列番号３７のアミノ酸６３番〜１００番、アミノ酸１０４番〜１４４番、またはアミノ酸１４８番〜１９６番に比べて、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または２０個の隣接したアミノ酸の付加を有するポリペプチドを含む。
【０５７３】
他の実施態様では、ＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインのβ４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインのβ８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−９由来のβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のアミノ酸１０１番〜１０３番、またはアミノ酸１４５番〜１４７番を含む。
【０５７４】
他の実施態様では、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインの修飾β４／β５ヘアピンカーブ、またはＦＧＦ−９のβ−三葉形ドメインの修飾β８／β９ヘアピンカーブを含む。本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、配列番号３７のアミノ酸１０１番〜１０３番、またはアミノ酸１４５番〜１４７番の修飾を含む。
【０５７５】
本実施態様の他の態様では、ＦＧＦ−９由来の増大した結合活性を有するβ−三葉形ドメインが、例えば、配列番号３７のアミノ酸１０１番〜１０３番、またはアミノ酸１４５番〜１４７番と少なくとも７０％のアミノ酸同一性、配列番号３７のアミノ酸１０１番〜１０３番、またはアミノ酸１４５番〜１４７番と少なくとも７５％臣ꊂ菣躃藩貐룤Ꞁ胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣醰臣辁臣节볯邼볯꺁苣龃菣뢅郥肸胦膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꢁ냥ꪁ臣ꢁ苣颼볯薼臣ꊂ菣躃藩貐룤Ꞁ胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣醰臣辁臣节볯邼볯꺁苣龃菣뢅郥肸胦膀臣龁臣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣醰臣辁臣节볯閼볯꺁苣龃菣뢅郥肸胦銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣閁苣ꮁ믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢馼铧ꖝ臣鞢ꓥ鞁臣邵郥뮴胦銂鳦馁苣캋銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣设臣낁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣骤臣ꚁ苣鞼볯薼臣ꊂ菣躃藩貐룤Ꞁ胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣骤臣ꚁ苣鞼볯薼臣ꊂ菣躃藩貐룤Ꞁ胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣骤臣ꚁ苣颼볯薼臣ꊂ菣躃藩貐룤Ꞁ胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣骤臣ꚁ苣颼볯薼臣ꊂ菣躃藩貐룤Ꞁ胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣骤臣ꚁ苣馼볯薼臣ꊂ菣躃藩貐룤Ꞁ胣뺁臣꾁藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꢁꓥ辁臣节볯閼볯꺁苣龃菣뢅郥肸胦銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯閼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†鳦龮雦讅꟦꺁믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢馼铧ꖝ臣鞢ꓥ鞁臣邵郥뮴胦銂鳦馁苣캋銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣设臣낁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣钯臣ꚁ胣骤臣ꚁ苣醼胣銼胣鎼臣龁臣钼胥꺁髩ꖎ臣ꚁ臣ꪁ臣ꊂ菣躃藩꺁뷧鮏苣覜臣讂菣ꪃ菣鞃菣覃苣ꮐ苣芀鳦龮雦讅꟦꺁믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢馼铧ꖝ臣鞢ꓥ鞁臣邵郥���胦銂鳦馁苣캋銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣设臣낁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣钯臣ꚁ胣醰臣辁臣节볯膀볯膀볯뺁臣꾁볯讀臣ꎚ軦鞁臣蒁臣蒁苣龃菣뢅臣꺽迦銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧놔鷦꺁믤辄臣ꊂ菣躃藩꺁髩ꖎ臣ꚁ臣ꪁ臣ꊂ菣躃藩꺁뷧鮏臣膀苣ꪃ苣뎃臣꺽迦閁苣ꚁ苣袂臣芀鳦龮雦讅꟦꺁믤꺁藦颧臣꾁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ铧ꖝ臣뮻蓦꺁雧뒰胦ꊂ菣躃藩꺁髩ꖎ臣ꚁ臣ꪁ臣ꊂ菣躃藩꺁뷧鮏臣膀菣Ꞃ菣ꮃ苣ꦃ菣뎃臣꺽迦閁苣ꚁ苣袂臣芀鳦龮雦讅꟦꺁臣覂臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀뻤袁臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꮁ꿦릁臣膀ꓥ辁臣节볯膀볯膀볯뺁臣꾁볯讀臣ꎚ軦鞁臣蒁臣蒁苣龃菣뢅臣ꂬꓥ銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀뻤袁臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꮁ꿦릁臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼胣銼胣鎼臣龁臣钼胥꺁髩ꖎ臣ꚁ臣ꪁ臣ꊂ菣躃藩꺁곦놤苣覜臣讂菣ꪃ菣鞃菣覃苣ꮐ苣芀鳦龮雦讅꟦꺁臣覂臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀뻤袁臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꮁ꿦릁臣膀ꓥ辁臣节볯膀볯膀볯뺁臣꾁볯讀臣ꎚ軦鞁臣蒁臣蒁苣龃菣뢅臣颻諥銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀뻤袁臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꮁ꿦릁臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼胣銼胣鎼臣龁臣钼胥꺁髩ꖎ臣ꚁ臣ꪁ臣ꊂ菣躃藩꺁믤ꂊ苣覜臣讂菣ꪃ菣鞃菣覃苣ꮐ苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯鞼볯醀⼼䥄㹖 겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀뻤袁臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯���闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꮁ꿦릁臣膀ꓥ辁臣节볯膀볯膀볯뺁臣꾁볯讀臣ꎚ軦鞁臣ꊂ菣躃藩꺁뷧鮏苣覜臣讂菣ꪃ菣鞃菣覃苣ꮐ苣芀鳦龮雦讅꟦꺁믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢馼铧ꖝ臣鞢ꓥ鞁臣邵郥뮴胦銂鳦馁苣캋銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣设臣낁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣钯臣ꚁ胣醰臣辁臣节볯膀볯膀볯뺁臣꾁볯讀臣ꎚ軦鞁臣ꊂ菣躃藩꺁뷧鮏苣覜臣讂菣ꪃ菣鞃菣覃苣ꮐ苣芀鳦龮雦讅꟦꺁믤꺁藦颧臣꾁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ铧ꖝ臣ꊂ菣躃藩꺁髩ꖎ臣龁苣龃菣뢅臣꺽迦貁胣낂菣랂菣ꞁ뷧鮏臣貂臣节苣蒁胣겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧놔鷦꺁雧뒰胦ꊂ菣躃藩꺁髩ꖎ臣龁苣龃菣뢅臣꺽迦貁胣閃苣讃菣ꊂ菣讃菣ꞁ뷧鮏臣貂臣节苣蒁胣겜껥붖藦颧臣閁苣ꮁ믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢馼铧ꖝ臣鞢ꓥ鞁臣邵郥뮴胦銂鳦馁苣캋銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣设臣낁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣钯臣ꚁ胣骤臣ꚁ苣醼胣銼胣鎼臣龁臣钼胥꺁髩ꖎ臣龁苣龃菣뢅臣ꂬꓥ銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀뻤袁臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꮁ꿦릁臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼胣銼胣鎼臣龁臣钼胥꺁髩ꖎ臣龁苣龃菣뢅臣ꂬꓥ銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣閁苣ꮁ믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢馼铧ꖝ臣鞢ꓥ鞁臣邵郥뮴胦銂鳦馁苣캋銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣设臣낁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯邼볯ꪕ胣醼볯鎼闧膀臣龁臣ꊂ菣躃藩醼볯閼闧鲀볯钼볯ꪕ臣钯臣ꚁ胣骤臣ꚁ苣醼胣銼胣鎼臣龁臣钼胥꺁髩ꖎ臣龁苣龃菣뢅臣颻諥銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀뻤袁臣膀藩鞈闧랏볯鞼臣ꊂ菣躃藩醼볯醼闧鲀볯邼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯钼볯ꪕ胣醼볯鞼闧ꮁ꿦릁臣膀냥ꪁ臣ꢁ苣醼胣銼胣鎼臣龁臣钼胥꺁髩ꖎ臣龁苣龃菣뢅臣颻諥銂鳦馁苣鶃菣骃菣膃菣銂郥肂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀���閼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†믤꺁껥붖藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢醼볯놔鷦꺁닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀藩鞈闧랏볯颼臣ꚼ볯ꚼ裢醼볯놔鷦꺁닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃苣ꮐ苣芀臣覂臣隻臣龮雦讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯鞼铧ꖝ臣캮銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯閼闧鲀볯颼볯ꪕ苣ꮐ苣芀鳦龮雦讅꟦꺁믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢醼볯놔鷦꺁닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀藩鞈闧랏볯颼臣ꚼ볯ꚼ裢醼볯꺁닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣캮銈諦誂闧뾁菣膃菣閃胣ꚼ볯ꚼ裢醼볯꺁닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣캮銈諦誂闧뾁菣膃菣閃胣뺁臣꾁볯Ꞽ볯銈볯鞼臣캮銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣꺁돎裢颊苣뎕臣ꊃ菣벃菣銂郥肂胣겜껥붖藦颧臣隻臣讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯鞼铧ꖝ臣캮銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯閼闧鲀볯醼闧膀苣龃菣뢅볯閼闧鲀볯鎼볯ꪕ胣뺁臣꾁苣龃菣뢅볯鎼볯ꪕ胣醼볯鎼闧銂郥肂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯閼볯馼胣㲑䐯噉ਾ†믤꺁껥붖藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢醼볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀藩鞈闧랏볯颼臣ꚼ볯ꚼ裢醼볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃苣ꮐ苣芀臣覂臣隻臣龮雦讅꟦ꞁ臣膀볯Ꞽ볯銈볯鞼铧ꖝ臣鞢ꓥ鞁臣邵郥뮴胦銂鳦馁苣캋銈룤覑뷥覃菣ꒂ菣貁胣超裥ꪕ迥鎼볯꺁苣龃菣뢅볯閼闧鲀볯颼볯ꪕ苣ꮐ苣芀鳦龮雦讅꟦꺁믤꺁藦颧臣꾁胣ꚼ볯ꚼ裢醼볯놔鷦꺁ꋥꞤ臣龁뗧袐듦Ꞁ苣覜臣讂닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣膀藩鞈闧랏볯颼臣ꚼ볯ꚼ裢醼볯꺁닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣꺿ꏩ캾銈諦誂闧뾁菣膃菣閃胣ꚼ볯ꚼ裢醼볯꺁닎裢覸釨ꊽ菣ꆃ苣뎃臣꺿ꏩ캾銈諦誂闧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