(57)【要約】  本発明は、式(Ｉ)：【化１】2008524211.tif 000028[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ａ、Ａ１およびＢは、本明細書中で定義した通りである。]の化合物；その製造方法；それらを含む医薬組成物；該医薬組成物の製造方法；および治療におけるその使用を提供する。該化合物は、ＭＭＰ阻害剤として有用である。
2008524211.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)：
【化１】
2008524211.tif 000022
[式中、
Ｒ１は、Ｈ、ハロゲン、ＣＦ３、またはＣＨ２ＣＮを表し；
Ｒ２は、Ｃ１−３アルキルを表し；そして
Ａ、Ａ１およびＢは、それぞれ独立して、ＣＨまたはＮを表す。]
の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１がクロロを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＣＦ３を表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がメチルまたはエチルを表す、請求項１から３の何れか１項に記載の化合物。
【請求項５】
ＡおよびＡ１が、それぞれＮを表す、請求項１から４の何れか１項に記載の化合物。
【請求項６】
(５Ｓ)−５−メチル−５−({[６−[２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル]−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)イミダゾリジン−２,４−ジオン；
(５Ｓ)−５−({[６−(４−クロロフェニル)−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン；
{４−[２−({[(４Ｓ)−４−メチル−２,５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル]メチル}スルホニル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]フェニル}アセトニトリル；
(５Ｓ)−５−メチル−５−{[(６−ピリジン−３−イル−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル)スルホニル]メチル}イミダゾリジン−２,４−ジオン；
(５Ｓ)−５−({[６−(４−クロロフェニル)−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン；
およびその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造方法であって、
ａ) 式(II)：
【化２】
2008524211.tif 000023
[式中、Ｒ２は式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＬ１は脱離基を表す。]の化合物を、式(III)：
【化３】
2008524211.tif 000024
[式中、Ｒ１、Ａ、Ａ１およびＢは、式(Ｉ)で定義した通りである。]の化合物(またはその塩)と反応させること；または
ｂ) 式(Ｖ)：
【化４】
2008524211.tif 000025
[式中、Ｒ２およびＢは式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＬＧは脱離基である。]の化合物を、式(XII)：
【化５】
2008524211.tif 000026
[式中、Ｒ１、ＡおよびＡ１は、式(Ｉ)で定義した通りである。]のボロン酸誘導体と反応させること；または
ｃ) 式(IX)：
【化６】
2008524211.tif 000027
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ａ、Ａ１およびＢは、式(Ｉ)で定義した通りである。]の化合物を、炭酸アンモニウムおよびシアン化カリウムと反応させること；
そして所望によりその後、その薬学的に許容される塩を形成すること；
を含む方法。
【請求項８】
薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と組み合わせた、請求項１から６の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
【請求項９】
請求項１から６の何れか１項で記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と混合することを含む、請求項８に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項１０】
治療に使用するための、請求項１から６の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
閉塞性気道疾患の処置に使用する医薬の製造における、請求項１から６の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１２】
閉塞性気道疾患が喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
リウマチ性関節炎、骨関節炎、アテローム動脈硬化症、癌、または多発性硬化症の処置に使用する医薬の製造における、請求項１から６の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１４】
ＭＭＰ１２および／またはＭＭＰ９が介在する疾患もしくは状態を処置する方法であって、患者に、治療有効量の、請求項１から６の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。
【請求項１５】
閉塞性気道疾患を処置する方法であって、患者に、治療有効量の、請求項１から６の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ヒダントイン誘導体、その製造方法、それらを含む医薬組成物、および治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタロプロテイナーゼは、近年急激にその数が増加しているプロテイナーゼ(酵素)のスーパーファミリーである。構造的および機能的な考察に基づいて、これらの酵素は、N.M. Hooper (1994) FEBS Letters 354:1-6 で記載されたように、ファミリーとサブファミリーに分類される。メタロプロテイナーゼの例は、コラゲナーゼ(ＭＭＰ１、ＭＭＰ８、ＭＭＰ１３)、ゼラチナーゼ(ＭＭＰ２、ＭＭＰ９)、ストロメライシン(ＭＭＰ３、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１)、マトリライシン(ＭＭＰ７)、メタロエラスターゼ(ＭＭＰ１２)、エナメライシン(ＭＭＰ１９)、ＭＴ−ＭＭＰ(ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７)のような、マトリックスメタロプロテイナーゼ(ＭＭＰ)；ＴＮＦ変換酵素(ＡＤＡＭ１０、ＴＡＣＥ)のような、セクレターゼおよびシェダーゼを含むレプロリシン、アダマライシン、またはＭＤＣファミリー；コラーゲン前駆体加工・処理プロテイナーゼ(ＰＣＰ)のような酵素を含むアスタシン・ファミリー；およびアグリカナーゼのような他のメタロプロテイナーゼ、エンドセリン変換酵素ファミリー、およびアンジオテンシン変換酵素ファミリーを含む。
【０００３】
メタロプロテイナーゼは、胎児の発育、骨形成、月経周期間の子宮の再構成のような、組織の再構成を含む、多血性の生理学的疾病過程に重要であると信じられている。これは、メタロプロテイナーゼが、コラーゲン、プロテオグリカン、フィブロネクチンのような広範囲のマトリックス基質の開裂を行い得ることに基づく。メタロプロテイナーゼはまた、腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)のような生物学的に重要な細胞のメディエーターの加工・処理または分泌；および親和性の低いＩｇＥ受容体ＣＤ２３のような、生物学的に重要な膜タンパク質(より完全なリストは N. M. Hooper et al., (1997) Biochem J. 321:265-279 参照のこと)の翻訳後のタンパク質分解過程または切断において、重要であると信じられている。
【０００４】
メタロプロテイナーゼは、多くの疾患もしくは状態と関連している。１もしくはそれ以上のメタロプロテイナーゼの活性の阻害は、これらの疾患もしくは状態、例えば：関節の炎症(特にリウマチ性関節炎、骨関節炎、痛風)、胃腸管の炎症(特に炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、胃炎)、皮膚の炎症(特に乾癬、湿疹、皮膚炎)のような様々な炎症性およびアレルギー性疾患；腫瘍の転移または浸潤；骨関節炎のような細胞外マトリックスの無制御の分解と関連した疾患；骨の再吸収性疾患(例えば骨粗鬆症およびページェット病)；異常血管新生と関連した疾患；糖尿病、歯周病(例えば歯肉炎)と関連した、コラーゲンの再構築の亢進；角膜の潰瘍、皮膚の潰瘍、手術後の状態(例えば結腸の吻合)、皮膚の創傷治癒；中枢および末梢神経系の脱髄性疾患(例えば多発性硬化症)；アルツハイマー病；再狭窄およびアテローム動脈硬化症のような心血管疾患において観察される、細胞外マトリックスの再構成；喘息；鼻炎；および慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)において、十分有益であり得る。
【０００５】
ＭＭＰ１２はまた、マクロファージ・エラスターゼまたはメタロエラスターゼとして知られており、これは初めに、マウスにおいて、Shapiroらによってクローニングされ[1992, Journal of Biological Chemistry 267: 4664]、そしてヒトにおいて、同じグループによって 1995年にクローニングされた。ＭＭＰ−１２は、活性化されたマクロファージにおいて優先的に発現され、喫煙者由来の肺胞マクロファージから [Shapiro et al, 1993, Journal of Biological Chemistry, 268: 23824]、そしてアテローム動脈硬化症の病変部における泡沫細胞中で [Matsumoto et al, 1998, Am J Pathol 153: 109]、分泌されることが示されている。ＣＯＰＤのマウスのモデルは、６月間、１日当たり２本、週６日 タバコの煙で負荷をかけたマウスをベースとしている。野生型のマウスは、該処置の後肺気腫にかかった。ＭＭＰ１２ノックアウトマウスが該モデルで試験した場合、肺気腫にほとんどかからなかった。このことは、ＭＭＰ−１２がＣＯＰＤの病理変化におけるキーエンザイムであることを強く示している。ＣＯＰＤ(肺気腫および気管支炎)におけるＭＭＰ１２のようなＭＭＰの役割は、Anderson and Shinagawa, 1999, Current Opinion in Anti-inflammatory and Immunomodulatory Investigational Drugs 1(1): 29-38 において論じられている。近年では、ヒトの頚動脈プラークにおいて、喫煙がマクロファージの浸潤およびマクロファージに誘導されるＭＭＰ−１２の発現を増大させることが見出されている Kangavari [Matetzky S, Fishbein MC et al., Circulation 102:(18), 36-39 Suppl. S, Oct 31, 2000]。
【０００６】
ＭＭＰ９(ゼラチナーゼ Ｂ；９２ｋＤａ タイプ IV コラゲナーゼ；９２ｋＤａ ゼラチナーゼ)は、１９８９年に初めて精製されクローン化され配列決定された分泌性タンパク質である[S.M. Wilhelm  et al (1989) J. Biol. Chem. 264(29): 17213-17221; published erratum in J. Biol. Chem. (1990) 265(36): 22570]。ＭＭＰ９の近年のレビューは、このプロテアーゼについての詳細な情報と参考文献の優れた情報源である：T.H. Vu & Z. Werb (1998) (Matrix Metalloproteinases, 1998, edited by W.C. Parks & R.P. Mecham, pp.115-148, Academic Press. ISBN 0-12-545090-7)。下記の事項は、T.H. Vu & Z. Werb (1998) によるレビューから引用する。
【０００７】
ＭＭＰ９の発現は、通常、トロホブラスト、破骨細胞、好中球およびマクロファージを含む幾つかの細胞のタイプに制限される。しかし、それらの発現は、同じおよび他の細胞タイプにおいて、成長因子またはサイトカイニンに細胞が曝されることを含めて、幾つかのメディエータによって誘発される。これらは、しばしば炎症応答の発生に関するものと同じメディエータである。他の分泌されたＭＭＰと同様に、ＭＭＰ９は、不活性な酵素前駆体として放出され、続いて切断され、酵素的に活性な酵素を形成する。この in vivo での活性化に要するプロテアーゼは、知られていない。活性なＭＭＰ９と不活性な酵素のバランスは、さらに天然に生じたタンパク質である、ＴＩＭＰ−１(メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤)との相互作用によって調節される。ＴＩＭＰ−１は、ＭＭＰ９のＣ末端領域に結合し、ＭＭＰ９の触媒ドメインの阻害を引き起こす。ＭＭＰ９前駆体の誘発発現のバランス、前駆体の活性なＭＭＰ９への切断、およびＴＩＭＰ−１の存在が組み合わさって、局所に存在する触媒的に活性なＭＭＰ９の量を決定する。タンパク質分解的に活性なＭＭＰ９は、ゼラチン、エラスチン、および野生型のタイプ IV コラーゲンおよびタイプＶコラーゲンを含む基質を攻撃し；野生型のタイプＩコラーゲン、プロテオグリカン、またはラミニンに対して活性を持たない。
【０００８】
様々な生理学的な、および病理学的なプロセスにおいて、ＭＭＰ９の役割に関わるデータは増大している。生理学的な役割は、胚の着床の初期段階における、子宮の上皮を通じての胚のトロホブラストの浸潤；骨の成長と発達における幾つかの役割；および炎症性の細胞の、血管から組織への移動を含む。
【０００９】
ＭＭＰ−９の放出は、酵素免疫アッセイを用いて測定され、別の集団からのものと比べて、処置していない喘息由来の体液およびＡＭ上清において、有意に増加している [Am. J. Resp. Cell & Mol. Biol., (Nov 1997) 17 (5):583-591]。また、増大したＭＭＰ９発現は、特定の別の病状においても観測されている。そのことによって、ＭＭＰ９は、例えば、ＣＯＰＤ、関節炎、腫瘍の転移、アルツハイマー病、多発性硬化症、急性の環状動脈症状(例えば心筋梗塞)を引き起こすアテローム動脈硬化症におけるプラーク破裂といった疾病過程において、ＭＭＰ９が関係している。
【００１０】
幾つかのメタロプロテイナーゼ阻害剤が既知である(例えばＭＭＰ阻害剤のレビュー：Beckett R.P. and Whittaker M., 1998, Exp. Opin. Ther. Patents, 8(3):259-282, および Whittaker M. et al, 1999, Chemical Reviews 99(9):2735-2776 を参照のこと)。
【００１１】
WO 02/074767 は、ＭＭＰ阻害剤として、特に強力なＭＭＰ１２阻害剤として有用な、式：
【化１】
2008524211.tif 000003
のヒダントイン誘導体を開示している。
【００１２】
我々は、ここで、メタロプロテイナーゼ阻害剤であり、かつ特にＭＭＰ、例えばＭＭＰ１２およびＭＭＰ９を阻害する点で興味深い、ヒダントイン誘導体のさらなるグループを開示している。本発明の化合物は、有益な効力、選択性および／または薬物動態学的性質を有する。本発明の化合物は、WO 02/074767 の一般的な範囲内であるが、特にその中で例示されたものではない。
【発明の開示】
【００１３】
本発明によって、式(Ｉ)：
【化２】
2008524211.tif 000004
[式中、
Ｒ１は、Ｈ、ハロゲン、ＣＦ３、またはＣＨ２ＣＮを表し；
Ｒ２は、Ｃ１−３アルキルを表し；そして
Ａ、Ａ１およびＢは、それぞれ独立して、ＣＨまたはＮを表す。]
の化合物、およびその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１４】
式(Ｉ)の化合物は、エナンチオマーの形態で存在してもよい。全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、およびそれらの混合物が本発明の範囲に含まれると理解されるべきである。
【００１５】
式(Ｉ)の化合物はまた、種々の互変異性体の形態で存在してもよい。全ての可能な互変異性体の形態およびその混合物は、本発明の範囲に含まれる。
【００１６】
１つの態様において、Ｒ１はクロロを表す。
１つの態様において、Ｒ１はＣＦ３を表す。
１つの態様において、Ｒ２はメチルまたはエチルを表す。１つの態様において、Ｒ２はメチルを表す。
【００１７】
１つの態様において、ＡおよびＡ１は、それぞれＮを表す。別の態様において、ＡはＮを表し、そしてＡ１はＣＨを表す。別の態様において、ＡおよびＡ１は、それぞれＣＨを表す。
【００１８】
１つの態様において、ＢはＮを表す。別の態様において、ＢはＣＨを表す。
１つの態様において、Ｒ１はＣＦ３を表し；Ｒ２はメチルまたはエチルを表し；ＡおよびＡ１は、それぞれＮを表し；そしてＢはＣＨを表す。
【００１９】
１つの態様において、Ｒ１はＣＦ３を表し；Ｒ２はメチルまたはエチルを表し；ＡおよびＡ１は、それぞれＮを表し；そしてＢはＮを表す。
【００２０】
１つの態様において、Ｒ１はクロロを表し；Ｒ２はメチルまたはエチルを表し；ＡはＮを表し、そしてＡ１はＣＨを表し；そしてＢはＮを表す。
【００２１】
１つの態様において、Ｒ１はクロロを表し；Ｒ２はメチルまたはエチルを表し；そしてＡ、Ａ１およびＢは、それぞれＣＨを表す。
【００２２】
異なる指定をしない限り、本明細書中で記載した“Ｃ１−３アルキル”という用語は、１から３個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルを表す。該基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびｉ−プロピルを含む。
【００２３】
異なる指定をしない限り、本明細書中で記載した“ハロゲン”という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを表す。
【００２４】
本発明の化合物の例は、
(５Ｓ)−５−メチル−５−({[６−[２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル]−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)イミダゾリジン−２,４−ジオン；
(５Ｓ)−５−({[６−(４−クロロフェニル)−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン；
{４−[２−({[(４Ｓ)−４−メチル−２,５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル]メチル}スルホニル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]フェニル}アセトニトリル；
(５Ｓ)−５−メチル−５−{[(６−ピリジン−３−イル−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル)スルホニル]メチル}イミダゾリジン−２,４−ジオン；
(５Ｓ)−５−({[６−(４−クロロフェニル)−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン；
およびその薬学的に許容される塩を含む。
例示した化合物はそれぞれ、本発明の特定の、かつ独立の態様を表す。
【００２５】
式(Ｉ)の化合物はエナンチオマーの形態で存在し得る。従って、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、およびそれらの混合物は、本発明の範囲に含まれる。種々の光学異性体は、慣用の方法(例えば分別結晶もしくはＨＰＬＣ)を用いて、本化合物のラセミ混合物の分割によって単離され得る。あるいは、光学異性体は、不斉合成によって、または光学活性な出発物質から合成することによって得られる。
【００２６】
本発明の化合物において光学異性体が存在する場合、我々は、本発明の個々の特定の態様として、全ての個々の光学活性な形態、およびこれらの組み合わせ、ならびにその対応するラセミ体を開示している。
【００２７】
好ましくは、式(Ｉ)の化合物は、以下に示した(５Ｓ)−立体化学を有する：
【化３】
2008524211.tif 000005
【００２８】
本発明の化合物において互変異性体が存在する場合、我々は、本発明の個々の特定の態様として、全ての個々の互変異性体の形態、およびこれらの組み合わせを開示している。
【００２９】
本発明は、塩の形態で式(Ｉ)の化合物を含む。適当な塩は、有機酸もしくは無機酸、または有機塩基もしくは無機塩基と形成される塩を含む。該塩は、通常、薬学的に許容される塩であるが、薬学的に許容されない塩が、特定の化合物の製造および精製に有用であり得る。該塩は、酸付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、クエン酸塩、トシル酸塩、マレイン酸塩、ならびにリン酸と、また硫酸と形成される塩を含む。別の態様において、適当な塩は、塩基付加塩、例えばアルカリ金属塩(例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩)、アルカリ土類金属塩(例えばカルシウム塩もしくはマグネシウム塩)、または有機アミン塩(例えばトリエチルアミン塩)である。
【００３０】
式(Ｉ)の化合物の塩は、遊離塩基もしくはその別の塩を、１当量以上の適当な酸もしくは塩基と反応させることによって形成され得る。
【００３１】
式(Ｉ)の化合物は、それらが動物において薬理学的活性を有するために有用であり、従って、医薬として有用である可能性がある。特に、本発明の化合物は、メタロプロテイナーゼ阻害剤であり、従って、ＭＭＰ１２および／またはＭＭＰ９が介在する疾患もしくは状態[例えば喘息、鼻炎、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、関節炎(例えばリウマチ性関節炎および骨関節炎)、アテローム動脈硬化症、および再狭窄、癌、浸潤および転移、組織分解に関する疾患、人工股関節の緩み、歯周病、線維性疾患、梗塞、および心臓疾患、肝線維症、腎臓線維症、子宮内膜症、細胞外マトリックスの弱体化に関する疾患、心不全、大動脈瘤、ＣＮＳ関連疾患(例えばアルツハイマー病および多発性硬化症(ＭＳ))、および血液疾患]の処置に用いられ得る。
【００３２】
一般的に、本発明の化合物は、ＭＭＰ９およびＭＭＰ１２の強力な阻害剤である。本発明の化合物はまた、種々の他のＭＭＰ、例えばＭＭＰ１４を比較的阻害しない点で、良好な選択性を示す。
【００３３】
従って、本発明は、治療に使用するための、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
別の態様において、本発明は、治療に使用する医薬の製造における、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３４】
別の態様において、本発明は、ＭＭＰ１２および／またはＭＭＰ９の阻害が有益である疾患もしくは状態の処置に使用する医薬の製造における、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３５】
別の態様において、本発明は、炎症性疾患の処置に使用する医薬の製造における、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、閉塞性気道疾患(例えば喘息もしくはＣＯＰＤ)の処置に使用する医薬の製造における、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３６】
別の態様において、本発明は、リウマチ性関節炎、骨関節炎、アテローム動脈硬化症、癌もしくは多発性硬化症の処置に使用する医薬の製造における、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３７】
本明細書の内容において、“治療”という用語はまた、特定の記載に反しない限り、“予防”を含む。“治療の”および“治療上”という用語も、それに従って解釈されるべきである。
【００３８】
予防は、特に、対象の疾患もしくは状態の病歴があるヒト、またはそれ以外にはそれに罹患するリスクが増大しているヒトに関連すると予測される。特定の疾患もしくは状態に罹患するリスクがあるヒトは、一般的に、該疾患もしくは状態の家族病歴を有するヒト、または遺伝子試験もしくはスクリーニングによって、該疾患もしくは状態に特に罹患しやすいと分かったヒトを含む。
【００３９】
本発明は、さらに、ＭＭＰ１２および／またはＭＭＰ９の阻害が有益である疾患もしくは状態を処置する方法であって、患者に、治療有効量の上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００４０】
本発明はまた、閉塞性気道疾患(例えば喘息もしくはＣＯＰＤ)を処置する方法であって、患者に、治療有効量の上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００４１】
上記の治療的使用のために、投与される投与量は、用いられる化合物、投与方法、望ましい処置、および処置されるべき疾患に伴って、当然に変化する。式(Ｉ)の化合物／塩(活性成分)の１日用量は、０.００１mg/kgから７５mg/kgの範囲、特に０.５mg/kgから３０mg/kgの範囲であってもよい。この１日用量は、必要であれば分割用量で与えられ得る。典型的には、単位用量は、約１mgから５００mgの本発明の化合物を含む。
【００４２】
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、それ自身で用いられ得るが、一般的に、式(Ｉ)の化合物／塩(活性成分)が薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と組み合わされている医薬組成物の形態で投与され得る。投与方法に依存して、医薬組成物は、好ましくは０.０５から９９％ｗ(重量パーセント)の、より好ましくは０.１０から７０％ｗの活性成分、ならびに１から９９.９５％ｗの、より好ましくは３０から９９.９０％ｗの薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体を含む(全ての重量パーセントは、組成物の総量に基づく)。適当な医薬製剤の選択および製造のための慣用の手順は、例えば“Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs”, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988 に記載されている。
【００４３】
従って、本発明はまた、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と組み合わされた、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。
【００４４】
本発明は、さらに、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤もしくは担体と混合することを含む、本発明の医薬組成物の製造方法を提供する。
【００４５】
本発明の医薬組成物は、処置が望ましい疾患もしくは状態に標準的な方法で、例えば経口、局所、非経腸、頬側、鼻腔内、膣内、もしくは直腸投与によって、または吸入によって投与され得る。これらの目的のために、本発明の化合物は、当業者に既知の手段によって、例えば錠剤、カプセル剤、水性もしくは油性溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏、ゲル、鼻腔スプレー、坐剤、吸入用微細化粉末もしくはエアゾール、および非経腸使用(静脈内、筋肉内もしくは点滴を含む)のための滅菌処理された水性もしくは油性溶液もしくは懸濁液、または滅菌処理されたエマルジョンの形態に、製剤化され得る。
【００４６】
本発明の化合物に加えて、本発明の医薬組成物はまた、例えば“Symbicort”(商標)製剤のように、上記の１以上の疾患もしくは状態を処置するのに有益な１個以上の薬理学的薬剤を含んでも、また共に投与(同時にもしくは連続して)してもよい。
【００４７】
本発明は、さらに、上記で定義した式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造方法であって、
ａ) 式(II)：
【化４】
2008524211.tif 000006
[式中、Ｒ２は式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＬ１は脱離基を表す。]の化合物を、式(III)：
【化５】
2008524211.tif 000007
[式中、Ｒ１、Ａ、Ａ１およびＢは、式(Ｉ)で定義した通りである。]の化合物(またはその塩)と反応させること；または
【００４８】
ｂ) 式(Ｖ)：
【化６】
2008524211.tif 000008
[式中、Ｒ２およびＢは式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＬＧは脱離基である。]の化合物を、式(XII)：
【化７】
2008524211.tif 000009
[式中、Ｒ１、ＡおよびＡ１は、式(Ｉ)で定義した通りである。]のボロン酸誘導体と反応させること；または
【００４９】
ｃ) 式(IX)：
【化８】
2008524211.tif 000010
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ａ、Ａ１およびＢは、式(Ｉ)で定義した通りである。]の化合物を、炭酸アンモニウムおよびシアン化カリウムと反応させること；
そして所望によりその後、その薬学的に許容される塩を形成すること；
を含む方法を提供する。
【００５０】
上記の段階(ａ)において、適当な脱離基Ｌ１は、ハロ(特にクロロ)、またはトリフルオロメチルスルホネートを含む。反応は、好ましくは、適当な溶媒中、所望によりさらなる塩基の存在下、適当な時間(典型的には０.５から１６時間)、環境温度から還流温度で行われる。典型的には、溶媒は、例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ピリジン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、Ｎ−メチルピロリジンもしくはジクロロメタンが用いられる。用いられる場合は、さらなる塩基は、有機塩基(例えばトリエチルアミン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、もしくはピリジン)であっても、無機塩基(例えば炭酸アルカリ金属塩)であってもよい。反応は、典型的には、環境温度で、０.５から１６時間、または反応の完了に達するまで(クロマトグラフィーもしくは分光学的方法によって測定される)、行われる。ハロゲン化スルホニルと種々の第１級アミンとの、および第２級アミンとの反応は、文献で周知であり、該条件のバリエーションは、当業者に明らかである。
【００５１】
式(II)の塩化スルホニル[ここで、Ｌ１がクロロを表し、かつＲ２がＭｅを表す]は、WO 02/074767 に開示されており、本明細書中で引用される。Ｒ２がＣ１−３アルキルを表す対応する化合物は、類似の方法を用いて製造され得る。
【００５２】
式(Ｉ)の化合物の適当な製造方法は、スキーム１により、合成経路を遡る方法で記載されている：
【化９】
2008524211.tif 000011
【００５３】
スキーム１において、保護基(ＰＧ)は、カルバメート類(例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルバメート)、アミド類(例えばトリフルオロアセチル)、またはアルキル (例えばｔｅｒｔ−ブチルもしくはベンジル)の何れかであり得る。脱離基(ＬＧ)は、クロライド、ブロミド、アイオダイド、もしくはトリフルオロメチルスルホネートの何れかであり得る。パラジウム触媒 Suzuki カップリングにおいて、ボロン酸類もしくはピナコールボロネート類の何れを用いてもよい。中間体(IVa-c)は、求電子剤(VIIa-c)およびホウ素試薬(XII)との、または逆に求電子剤(XI)およびホウ素試薬(VIIIa-c)との標準的な Suzuki カップリングによって製造され得る(Chem. Rev. 1995, 95, 2457)。後者は、(VIIa-c)から、Miyaura 条件を用いて得られる(J. Org. Chem. 1995, 60, 7508-7510)。メタノール中の塩化水素によって(ＰＧ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)、もしくは還流１−クロロエチル クロロホルメート／還流メタノールによって(ＰＧ＝ｔｅｒｔ−ブチルもしくはベンジル)(Synlett. 1993, 195-196)、(IVa-c)を脱保護し、アミン(IIIa-c)を塩酸塩として得る。遊離塩基は、(IIIa-c)を、塩基で処理し、そして有機溶媒(例えば酢酸エチルもしくはトルエン)で抽出することによって得られる。塩もしくは塩基としての(IIIa-c)を、適当な溶媒中(例えばアセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ−メチルピロリジンもしくはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド)、塩化スルホニル(II)と、第３級アミン(例えばトリエチルアミン、ピリジンもしくはＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン)の存在下、０.５から１６時間反応させ、式(Ｉ)の化合物を得る。
【００５４】
中間体(IIIa-c)から、メタンスルホンアミド(Xa-c)およびケトン(IXa-c)を介して、式(Ｉ)の化合物を製造する別の経路は、以前に記載されている(WO 02/074767)。簡潔に言えば、適当な溶媒(例えばジクロロメタンもしくはテトラヒドロフラン)中で、(IIIa-c)を塩化メタンスルホニルおよび第３級アミン(例えばトリエチルアミン、ピリジンもしくはＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン)で処理し、メタンスルホンアミド(Xa-c)を製造し、次にそれを標準的な手順を用いてケトン(IXa-c)に変換し得る。ケトン(IXa-c)を、５０％水性エタノール中の炭酸アンモニウムおよびシアン化カリウムと共に、密封したバイアル中で、８０〜９０℃で、１から５時間加熱し、ラセミ体のヒダントインを得た。それをキラルクロマトグラフィー(例えばＯＤ−Ｈ, １００％ エタノール)によって分割し得る。
【００５５】
第３の経路において、中間体(VIIa-c)を上記の通りに脱保護し、アミン(VIa-c)を塩酸塩として得た。塩基で処理し、有機溶媒(例えば酢酸エチルもしくはトルエン)で抽出することによって、遊離塩基を単離し得る。適当な溶媒(例えばアセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ−メチルピロリジンもしくはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド)中の、塩もしくは塩基の何れかとしての(VIa-c)を、塩化スルホニル(II)と、第３級アミン(例えばトリエチルアミン、ピリジンもしくはＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン)の存在下、０.５から１６時間反応させ、キラルスルホンアミド(Va-c)を製造する。後者を、ホウ素試薬(XII)と、標準的な Suzuki 条件を用いてカップリングさせ、式(Ｉ)の化合物を得る。
【００５６】
中間体(VIIa-b)を、下記の方法を用いて簡便に製造する。
１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン中間体(VIIa)
１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンの合成方法は、文献で周知である。古典的な経路は、ベンズアルデヒドと、ジアセタール保護アミノアセトアルデヒドとの Pomeranz-Fritz 反応(Org. React. 1951, 6, 191)で、イソキノリン核を形成し、後者を触媒で還元し、１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリンを得る。別の経路は、２−フェニルエタンアミンのカルバメートと、還流トルエンもしくはキシレン中の塩化ホスホリルとの Bischler-Napieralski 反応である(Org. React. 1951, 6, 74)。 得られた環状ベンズアミドを、テトラヒドロフラン中の水素化アルミニウムリチウム(J. Med. Chem. 1987, 30(12), 2208-2216)、またはテトラヒドロフラン中のジボラン(J. Med. Chem. 1980,  23(5), 506-511)で還元し、１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンを得る。Bischler-Napieralski 反応のバリエーションが、Pictet-Spengler 合成である(Org. React. 1951, 6, 151)。この反応において、２−フェニルエタンアミンのアミド、カルバメート、もしくはスルホンアミドを、パラホルムアルデヒドおよび強いプロトン酸(例えばトリフルオロ酢酸、硫酸)もしくはルイス酸と共に、溶媒中(例えばジクロロメタン、トルエン、蟻酸)中で加熱して、１段階で１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンを得る(Tetrahedron 2002, 58(8), 1471-1478)。
【００５７】
スキーム２：
【化１０】
2008524211.tif 000012
試薬：
ａ) (ＣＦ３ＣＯ)２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ；＋４℃.
ｂ) (ＨＣＨＯ)ｎ、Ｈ２ＳＯ４、ＨＯＡｃ；室温.
ｃ) ＮａＢＨ４、ＥｔＯＨ；室温、または、ＮＨ３(濃)、ＥｔＯＨ、加熱.
ｄ) (ｔ−ＢｕＯＣＯ)２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＣＭ、室温.
【００５８】
好ましくは、１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン中間体(VIIa)は、スキーム２に示した経路Ａによって合成される。この経路は、酢酸中のＮ−[２−(３−ブロモフェニル)エチル]−２,２,２−トリフルオロアセトアミドと、ホルムアルデヒドおよび硫酸との Friedel-Craft型反応(Tetrahedron Lett. 1996, 37(31), 5453-5456)であり、３：１の比の６−ブロモ−アイソマーおよび８−ブロモ−アイソマーの混合物を得る。トリフルオロアセトアミド基をＢＯＣ基と置き換え、(VIIa)を得る。位置異性体は、この段階で簡便に分離されない。
【００５９】
１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジン中間体(VIIb)
１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンとは対照的に、文献での、１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジンについての合成方法の例はかなり少ない。１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジンを製造する１つの重要な方法は、２,７−ナフチリジンの位置選択的触媒還元である(Eur. J. Med. Chem. Ther. 1996, 31(11), 875-888)。２,７−ナフチリジンおよびその幾つかの誘導体の合成は、文献に記載されている。１つの古典的な経路は、幾つかの段階を含み、マロノニトリルと、１,３−アセトンジカルボン酸ジエチルとの酸触媒縮合で始める(J. Chem. Soc. 1960, 3513-3515; J. Heterocycl. Chem.  1970, 7, 419-421もまた参照のこと)。２,７−ナフチリジンに至るわずかに異なる経路は、４−ホルミル−２,７−ナフチリジンの酸化を含み、２,７−ナフチリジン−４−カルボン酸を得た後、脱カルボキシル反応を行う(Synthesis 1973, 46-47)。完全に異なる方法は、Ｎ−(エトキシカルボニル)−Ｎ−(ブタ−３−イニル)アミノ−メチルピラジンの分子内 Diels-Alder 反応に基づき、カルバメート基を加水分解した後、１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジンおよび５,６,７,８−テトラヒドロ−１,７−ナフチリジンの混合物を得る(WO 02/064574)。
【００６０】
スキーム３：
【化１１】
2008524211.tif 000013
試薬：
ａ) ＬｉＣＨ３ＮＣＨ２ＣＨ２Ｎ(ＣＨ３)２、ＴＨＦ、−７０℃.
ｂ) ｎ−ＢｕＬｉ、ヘキサン中、−７０℃、次にＩ２.
ｃ) ＴＭＳ−アセチレン、ＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２、ＣｕＩ、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、６０℃.
ｄ) ７Ｍ  ＮＨ３、ＥｔＯＨ、８０℃.
ｅ) Ｈ２、ＰｔＯ２、ＨＯＡｃ.
ｆ) ４８％  ＨＢｒ(ａｑ)、１２０℃.
ｇ) (ＢＯＣ)２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、Ｈ２Ｏ、ＴＨＦ.
ｈ) Ｔｆ２Ｏ、ＰｈＭｅ、３０％  Ｋ３ＰＯ４.
【００６１】
好ましくは、１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジン中間体(VIIb)は、スキーム３および４に示された通りに合成され得る。経路Ｂにおいて、市販の６−メトキシニコチンアルデヒドを、Ｎ,Ｎ,Ｎ'−トリメチルエチレンジアミンのリチウム塩で、次にヘキサン中のｎ−ＢｕＬｉで、最後にヨウ素で連続的に処理し、４−ヨード−６−メトキシニコチンアルデヒドを得る(cf. Tetrahedron Lett. 1993, 34(39), 6173-6176)。ヨード化合物を、通常の Sonagashira-Hagihara 条件下で、トリメチルシリルアセチレンとカップリングさせ(Synthesis 1980, 627-630)、得られた６−メトキシ−４−[(トリメチルシリル)エチニル]ニコチンアルデヒドを、エタノール中の水酸化アンモニウムで縮合し、３−メトキシ−２,７−ナフチリジンを得る(Synthesis 1999, 2, 306-311)。位置選択的触媒還元(cf. Eur. J. Med. Chem. Ther. 1996, 31(11), 875-888)により、６−メトキシ−１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジンを得る。脱メチル反応およびＢＯＣ無水物でのＮ−保護を行い、最後に得られたｔｅｒｔ−ブチル ６−ヒドロキシ−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−カルボキシレートを、２相系中、トリフルオロメタンスルホン酸無水物で処理し、(VIIb)を得る。
【００６２】
スキーム４：
【化１２】
2008524211.tif 000014
試薬：
ａ) ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＨＦ、−７０℃、次にＤＭＦ、−７０℃〜室温.
ｂ) ｔ−ＢｕＮＨ２、ＤＣＭ、３Åモレキュラーシーブ.
ｃ) Ｌｉ−ＴＭＰ、−２０℃、次にＤＭＦ、−２０〜−１０℃.
ｄ) ＮａＢＨ３ＣＮ、ＭｅＯＨ、ＨＯＡｃ；室温.
ｅ) ４８％  ＨＢｒ(ａｑ)、還流；Ｋ２ＣＯ３(ａｑ)で後処理.
ｆ) Ｔｆ２Ｏ、ピリジン、＋４℃.
【００６３】
経路Ｃにおいて、無水テトラヒドロフラン中の市販の５−ブロモ−２−メトキシ−４−メチルピリジンを、ｎ−ＢｕＬｉで金属化し、次にＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドで処理し、６−メトキシ−４−メチルニコチンアルデヒドを得る。これを、ジクロロメタン中のｔｅｒｔ−ブチルアミンでｔｅｒｔ−ブチルイミンに変換する。２,２,６,６−テトラメチルピペリジン リチウム(Ｌｉ−ＴＭＰ)で金属化し(cf. J. Org. Chem. 1993, 58, 2463-2467)、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドを付加し、イミノアセトアルデヒドを得て、それをメタノール中のシアノ水素化ホウ素ナトリウムで還元し、２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メトキシ−１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジンを得る。メチル基を還流４８％ 臭化水素酸で切断し、塩基の存在下でトリフルオロメタンスルホン酸無水物で処理し、ｔｅｒｔ−ブチルアミンとして保護された(VIIb)を得る。
【００６４】
本発明の方法において、出発試薬もしくは中間体化合物中の特定の潜在的に反応性の官能基、例えばヒドロキシル基もしくはアミノ基は、適当な保護基によって保護される必要があり得ることが、当業者によって認識されるであろう。従って、本発明の化合物の製造は、種々の段階で、１個以上の保護基の付加および除去を含んでもよい。
【００６５】
適当な保護基および該基の付加および除去の方法の詳細は、'Protective Groups in Organic Chemistry', edited by J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973) および 'Protective Groups in Organic Synthesis', 3rd edition, T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience (1999)に記載されている。
【００６６】
本発明の化合物およびその中間体は、その反応混合物から単離されてもよく、必要であれば、さらに、標準的な方法を用いることによって精製される。
本発明は、さらに、下記の実施例に記載することによって説明される。
【００６７】
一般的な方法
１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを、Varian Inova 400 MHz もしくは Varian Mercury-VX 300 MHz 装置で記録した。クロロホルム−ｄ(δＨ 7.27 ppm)、ジメチルスルホキシド−ｄ６(δＨ 2.50 ppm)、アセトニトリル−ｄ３(δＨ 1.95 ppm)、もしくはメタノール−ｄ４(δＨ 3.31 ppm)のピークの中心を内部標準として用いた。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル(0.040〜0.063mm, Merck)を用いて、わずかにカラムに過圧(０.２〜０.４bar)をかけて行った。分取ＨＰＬＣについて、Kromasil KR-100-5-C18 カラム(250×20 mm, Akzo Nobel)、および０.１％ ＴＦＡを含むアセトニトリル／水の混合物を、流速１０mL/分で用いた。別記しない限り、出発物質は市販されているものであった。全ての溶媒および市販の試薬は、研究室等級であり、購入品をそのまま用いた。抽出した有機相は、他の方法を記載しなければ、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相もしくは溶液は、ロータリーエバポレーターによって濃縮した。収率は最適化したものではなかった。
【００６８】
下記の方法をＬＣ−ＭＳ分析について用いた：
装置：Agilent 1100；
カラム：Waters Symmetry 2.1×30mm；
マス：APCI；
流速：０.７mL/分；
波長：２５４もしくは２２０nm；
溶媒Ａ＝水＋０.１％ ＴＦＡ；
溶媒Ｂ＝アセトニトリル＋０.１％ ＴＦＡ；
濃度勾配：１５〜９５％／Ｂ  ２.７分, ９５％  Ｂ  ０.３分.
【００６９】
下記の方法をＧＣ−ＭＳ分析について用いた：
装置：Hewlett Packard 5890 Series II；
カラム：Agilent HP-5 (30 m×0.32 mm ID)；
質量選択的検出器：Hewlett Packard 5971 Series；
圧力：５５kPa He；
オーブン・プログラム：１００℃(３分)から３００℃, ２５℃／分.
【００７０】
【表１】
2008524211.tif 000015
【実施例】
【００７１】
実施例１
(５Ｓ)−５−メチル−５−({[６−[２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル]−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)イミダゾリジン−２,４−ジオン
【化１３】
2008524211.tif 000016
乾燥ＴＨＦ(０.６０ml)中の塩化 [(４Ｓ)−４−メチル−２,５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル]メタンスルホニル(０.０２９５ｇ, ０.１３mmol)を、氷浴温度で、６−[２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル]−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン(０.０３９ｇ, ０.１４mmol)、ＤＩＰＥＡ(０.０３４ml, ０.２０mmol)および乾燥ＴＨＦ(０.６０ml)の溶液に、撹拌しながら滴下した。添加完了後、溶液を室温で２時間撹拌し、次に水−塩水に溶かし、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、乾燥し、濾過し、濃縮し、粗生成物を得た。分取ＨＰＬＣによって精製し、０.０５０ｇ(７６％)の表題化合物を、白色の固体として得た。
LC-MS m/z 470 (M+1); 
1H NMR (CD3CN) δ 9.19 (s, 2H), 8.51 (br s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.36 (d, 1H), 6.33 (br s, 1H), 4.51 (s, 2H), 3.57 (t, 2H), 3.52 (d, 1H), 3.42 (d, 1H), 3.04 (t, 2H) and 1.48 (s, 3H) ppm.
【００７２】
出発物質を下記の通りに製造した。
６−[２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル]−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン
ｔｅｒｔ−ブチル ６−[２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル]−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレート(０.０５１ｇ, ０.１３mmol)を、ＴＦＡ(１.０ml)およびＤＣＭ(１.０ml)中、室温で終夜撹拌し、次に２回濃縮し、２回目にトルエン(５ml)を加えて濃縮し、トリフルオロ酢酸塩を得た。
LC-MS m/z 280 (M+1); 
1H NMR (CD3CN) δ 9.25 (s, 2H), 7.73 (m, 2H), 7.44 (d, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.56 (t, 2H) and 3.24 (t, 2H) ppm.
【００７３】
粗生成物を１Ｍ 炭酸ナトリウム溶液(１０ml)に溶かし、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、乾燥し、濾過し、濃縮し、０.０３９ｇ(１００％)の表題生成物を白色の固体として得た。
【００７４】
２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル トリフルオロメタンスルホネート
乾燥ＤＣＭ(７０ml)中の無水トリフルオロメタンスルホン酸(１３.９ｇ, ８５mmol)を、２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−オール(１３.９, ８５mmol)(US 4,558,039)、ＤＩＰＥＡ(１６ml, ９３mmol)、および乾燥ＤＣＭ(２６０ml)の氷冷した溶液に、温度が４℃から６℃の間に保たれる速度で、ゆっくりと加えた。添加完了後、溶液を４℃で２.５時間撹拌し、次に室温まで昇温した。水(５０ml)および１Ｍ リン酸(４.５ml)を加え、相を洗浄し、分離した。有機相を、水で、そして飽和重炭酸ナトリウムで連続して洗浄し、乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレーター(圧力３００〜４００mbar)にかけることによって、注意深く濃縮した。暗赤色の油状物を、ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：８から１：４)を溶出液としてカラムクロマトグラフィーにかけることによって精製し、２２.５ｇ(９０％)の表題生成物を無色の油状物として得た。それを冷却器中で結晶化させた。あるいは、生成物を蒸留(b.p. 75〜77℃/10mbar)によって精製した。
1H NMR (CDCl3) δ 8.90 (s, 2H) ppm.
【００７５】
ｔｅｒｔ−ブチル ６−[２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル]−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル ６−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレートおよびｔｅｒｔ−ブチル ８−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレートの４：１混合物(０.１０ｇ, ０.２８mmol)、２−(トリフルオロメチル)ピリミジン−５−イル トリフルオロメタンスルホネート(０.０８３ｇ, ０.２８mmol)、ＰｄＣｌ２・ｄｐｐｆ(０.００４８ｇ)、２Ｍ 炭酸ナトリウム(１.１ml)、トルエン(４.０ml)、ならびにＥｔＯＨ(１.０ml)を、乾燥アルゴンで１０分間パージし、次に、密封したバイアル中で、８１℃で６時間加熱した。黒色の溶液をガラスウールで濾過し、水−塩水に溶かし、ＥｔＯＡｃで２回洗浄した。合わせた有機相を乾燥し、濾過し、シリカ(５ｇ)で濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：８から１：５)でカラムクロマトグラフィーにかけ、０.０５１ｇ(４８％)の表題生成物を白色の固体として得た。
LC-MS m/z 380 (M+1); 
1H NMR (CDCl3) δ 9.06 (s, 2H), 7.44 (dd, 1H), 7.38 (br s, 1H), 7.30 (d, 1H), 4.66 (s, 2H), 3.71 (t, 2H), 2.95 (t, 2H), and 1.51 (s, 9H) ppm.   
【００７６】
ｔｅｒｔ−ブチル ６−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル ６−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレートおよびｔｅｒｔ−ブチル ８−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレートの３：１混合物(０.４９ｇ, １.６mmol)、ビス(ピナコレート)ジボラン(０.４５ｇ, １.８mmol)、ＰｄＣｌ２・ｄｐｐｆ(０.０３９ｇ, ０.０４８mmol)、酢酸カリウム(０.４８ｇ, ４.８mmol)、ならびにＤＭＦ(８.０ml)を、８１℃で終夜加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣を水−塩水に溶かし、ＥｔＯＡｃで２回洗浄した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：１０から１：４)でカラムクロマトグラフィーにかけ、０.２４ｇの、表題生成物およびｔｅｒｔ−ブチル ８−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレートの４：１混合物を得た。
1H NMR (CDCl3) δ 7.62 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.13 (d, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.64 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 1.50 (s, 9H) and 1.35 (s, 12H) ppm (６−アイソマー).
1H NMR (CDCl3) δ 7.69 (d, 1H), 7.24-7.14 (m, 2H), 4.88 (s, 2H), 3.64 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 1.50 (s, 9H) and 1.35 (s, 12H) ppm (８−アイソマー).
【００７７】
ｔｅｒｔ−ブチル ６−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレート
６−ブロモ−２−(トリフルオロアセチル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンを、[２−(３−ブロモフェニル)エチル]アミン(４.０ｇ, ２０mmol)から、２段階で、Stokkerの手順 (Tetrahedron Lett. 1996, 37(31), 5453-5456)に従って製造した。ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：１０から１：６)でカラムクロマトグラフィーにかけ、２.３ｇ(７.５mmol)の、６−ブロモ−２−(トリフルオロアセチル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンおよび８−ブロモ−２−(トリフルオロ−アセチル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンの３：１混合物を得た。
1H NMR (CDCl3) δ 7.62 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.13 (d, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.64 (t, 2H), 2.85 (t, 2H) and 1.50 (s, 9H) and 1.35 (s, 12H) ppm (６−アイソマー).
1H NMR (CDCl3) δ 7.69 (d, 1H), 7.24-7.14 (m, 2H), 4.88 (s, 2H), 3.64 (t, 2H), 2.85 (t, 2H) and 1.50 (s, 9H) and 1.35 (s, 12H) ppm (８−アイソマー).
【００７８】
上記の物質を、無水ＥｔＯＨ(１００ml)、および２５％水酸化アンモニウム(１０ml)と共に、６０℃で４時間撹拌した。さらに２５％水酸化アンモニウム(１５ml)を加え、室温で終夜撹拌を続けた。揮発成分を蒸発させ、粗製のアミンが白色の固体として残った。
LC-MS m/z 212, 214 (M+1).
【００７９】
乾燥ＴＨＦ(５０ml)およびＤＩＰＥＡ(１.３ml, ７.５mmol)を加え、次にＢＯＣ無水物(１.８ｇ, ８.２mmol)を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。揮発成分を蒸発させ、残渣を水に溶かした。１Ｍ リン酸でｐＨを２に調節し、生成物をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、飽和重炭酸ナトリウムでわずかにアルカリ性にし、乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：５０から１：２０)でカラムクロマトグラフィーにかけることによって精製し、２.２４ｇ(９６％)の、表題生成物およびｔｅｒｔ−ブチル ８−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−カルボキシレートの３：１混合物を得た。
LC-MS m/z 256, 258 (M-56);
1H NMR (CDCl3) δ 7.31 (dd, 1H), 7.30 (br s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.63 (t, 2H), 2.81 (t, 2H) and 1.50 (s, 9H) ppm (６−アイソマー).
1H NMR (CDCl3) δ 7.42 (dd, 1H), 7.12-7.01 (m, 2H), 4.55 (s, 2H), 3.64 (t, 2H), 2.84 (t, 2H) and 1.51 (s, 9H) ppm (８−アイソマー).
【００８０】
実施例２
(５Ｓ)−５−({[６−(４−クロロフェニル)−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン
【化１４】
2008524211.tif 000017
(５Ｓ)−５−{[(６−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル)スルホニル]メチル}−５−メチル−イミダゾリジン−２,４−ジオン(０.０１６ｇ, ０.０４０mmol)、４−クロロフェニルボロン酸(０.００７２ｇ, ０.０４５mmol)、ＰｄＣｌ２・ｄｐｐｆ(０.００３０ｇ)、２Ｍ 炭酸ナトリウム(０.１５ml)、トルエン(０.８０ml)、およびＥｔＯＨ(０.２０ml)を、密封したバイアル中で、９５℃で１７時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水に溶かした。溶液を１０％ ＨＯＡｃでｐＨ ６まで酸性にし、次にＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を塩水−飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、乾燥し、濾過し、濃縮し、粗生成物を得た。
LC-MS m/z 434 (M+1).
【００８１】
分取ＨＰＬＣによって精製し、０.００８０ｇ(４６％)の表題化合物を白色の固体として得た。
1H NMR (CD3CN) δ 8.53 (br s, 1H), 7.62 (m, 2H), 7.46 (m, 4H), 7.23 (d, 1H), 6.34 (br s, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.49 (d, 1H), 3.39 (d, 1H), 2.99 (m, 2H) and 1.46 (s, 3H) ppm.
【００８２】
実施例３および４の化合物を、実施例２の一般的な方法を用いて製造した。
実施例３
{４−[２−({[(４Ｓ)−４−メチル−２,５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル]メチル}スルホニル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]フェニル}アセトニトリル
【化１５】
2008524211.tif 000018
白色の固体。
LC-MS m/z 439 (M+1); 
1H NMR (CD3CN) δ 8.61 (br s, 1H), 7.65 (m, 2H), 7.48 (m, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.23 (d, 1H), 6.38 (br s, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.50 (d, 1H), 3.40 (d, 1H), 3.00 (m, 2H) and 1.46 (s, 3H) ppm.
【００８３】
実施例４
(５Ｓ)−５−メチル−５−{[(６−ピリジン−３−イル−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル)スルホニル]メチル}イミダゾリジン−２,４−ジオン
【化１６】
2008524211.tif 000019
白色の固体。
LC-MS m/z 401 (M+1);
1H NMR (CD3CN) δ 8.98 (br s, 1H), 8.71 (m, 1H), 8.54 (d, 2H), 7.89 (m, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.34 (m, 1H), 6.34 (br s, 1H), 4.49 (s, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.52 (d, 1H), 3.41 (d, 1H), 3.03 (m, 2H) and 1.47 (s, 3H) ppm.
【００８４】
出発物質を下記の通りに製造した。
(５Ｓ)−５−({[６−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン
６−ブロモ−２−(トリフルオロアセチル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンおよび８−ブロモ−２−(トリフルオロアセチル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリンの３：１混合物(０.４４ｇ, １.４mmol)(Tetrahedron Lett. 1996, 37(31), 5453-5456に従って製造)を、数滴の２５％水酸化アンモニウムを含むエタノール(１０ml)中、室温で撹拌した。２.５時間後、溶液を濃縮し、アルゴン下で乾燥ＴＨＦ(１.０ml)に溶解し、氷浴で冷却した。ＤＩＰＥＡ(０.４１ml, ２.４mmol)を加え、次に塩化 [(４Ｓ)−４−メチル−２,５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル]メタンスルホニル(０.２７ｇ, １.２mmol)および乾燥ＴＨＦ(１.０ml)の溶液を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮した。粗生成物を水に溶かし、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、乾燥し、濾過し、濃縮し、０.５５ｇの、(５Ｓ)−５−({[６−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオンおよび(５Ｓ)−５−({[８−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオンの混合物を得た。位置異性体を分取ＨＰＬＣによって分離した。
【００８５】
(５Ｓ)−５−({[８−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン(第１溶出物)
収量：０.１３ｇの白色の固体。
LC-MS m/z 402/404 (M+1), 419/421 (M+18); 
1H NMR (CD3CN) δ 8.48 (br s, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.21 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 6.31 (br s, 1H), 4.36 (s, 2H), 3.48 (m, 4H), 2.95 (m, 2H) and 1.46 (s, 3H) ppm.
【００８６】
(５Ｓ)−５−({[６−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン(第２溶出物)
収量：０.２５ｇの白色の固体。
LC-MS m/z 402/404 (M+1), 419/421 (M+18);
1H NMR (CD3CN) δ 8.47 (br s, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.08 (m, 1H), 6.29 (br s, 1H), 4.36 (s, 2H), 3.48 (m, 2H), 3.47 (d, 1H), 3.37 (d, 1H), 2.92 (m, 2H) and 1.45 (s, 3H) ppm.
【００８７】
実施例５
(５Ｓ)−５−({[６−(４−クロロフェニル)−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−イル]スルホニル}メチル)−５−メチルイミダゾリジン−２,４−ジオン
【化１７】
2008524211.tif 000020
無水ＮＭＰ(０.５０ml)中の、塩化 [(４Ｓ)−４−メチル−２,５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル]メタンスルホニル(０.０８６ｇ, ０.３８mmol)を、６−(４−クロロフェニル)−１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジン(０.０４６ｇ, ０.１９mmol)、ＤＩＰＥＡ(０.０６６ml, ０.３８mmol)および無水ＮＭＰ(１.５ml)の溶液に、撹拌しながら、室温で滴下した。添加完了後、溶液を室温で１.５時間撹拌し、次に水(１ml)で希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製し、０.００７０ｇ(８％)の表題化合物を白色の固体として得た。
LC-MS m/z 435, 436 (M+1);
1H NMR (DMSO-d6) δ 10.8 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.10 (d, 2H), 8.06 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.54 (d, 2H), 4.45 (s, 2H), 3.61 (d, 1H), 3.48 (d, 1H), 3.47 (t, 2H), 2.98 (t, 2H) and 1.34 (s, 3H) ppm.
【００８８】
出発物質を下記の通りに製造した。
６−(４−クロロフェニル)−１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジン
ｔｅｒｔ−ブチル ６−{[(トリフルオロメチル)スルホニル]オキシ}−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−カルボキシレート(０.６９ｇ, １.８mmol)、４−クロロフェニルボロン酸(０.３９ｇ, ２.５mmol)、ＰｄＣｌ２・ｄｐｐｆ(０.０５０ｇ)、飽和炭酸ナトリウム(２ml)、ＥｔＯＨ(４ml)およびトルエン(４ml)を、８０℃で６時間撹拌した。溶液を室温まで冷却し、水(１０ml)に溶かし、ＥｔＯＡｃ(２５ml)で抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、乾燥し、濾過し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：１)を溶出液としてカラムクロマトグラフィーにかけることによって精製し、０.０６５ｇ(１０％)のｔｅｒｔ−ブチル ６−(４−クロロフェニル)−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−カルボキシレートを得た。
LC-MS m/z 345 (M+1).
【００８９】
この物質をＭｅＯＨ(２ml)に溶解し、塩化アセチル(０.２ml)をゆっくりと加えた。４０℃で終夜撹拌した後、溶液を濃縮し、残渣を１Ｍ 水酸化ナトリウム(１０ml)に溶かし、ＥｔＯＡｃ−エーテル(１：１)(４×３０ml)で抽出した。合わせた有機相を乾燥し、濾過し、濃縮し、０.０４６ｇ(１００％)の粗製の表題化合物を得た。
LC-MS m/z 245 (M+1).
【００９０】
ｔｅｒｔ−ブチル ６−{[(トリフルオロメチル)スルホニル]オキシ}−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−カルボキシレート
粗製の３−メトキシ−２,７−ナフチリジン(４.４mmolの６−メトキシ−４−[(トリメチルシリル)エチニル]ニコチンアルデヒドから製造)を、室温で、ＨＯＡｃ(２５ml)中のＰｔＯ２(約０.１ｇ)で、２.５時間水素化(圧力３０psi)した。溶液をセライト・パッドで濾過し、澄明な濾液を凍結乾燥によって濃縮し、粗製の６−メトキシ−１,２,３,４−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジンを酢酸塩として得た。
LC-MS m/z 165 (M+1). 
【００９１】
この物質を、４８％臭化水素酸中で、１０時間還流した。揮発成分を蒸発させ、残渣を、真空下、４５℃で乾燥し、約０.７０ｇの粗製の５,６,７,８−テトラヒドロ−２,７−ナフチリジン−３−オール臭化水素酸塩を得た。
LC-MS m/z 151 (M+1).
【００９２】
この物質(約４.８mmol)を、水(１３ml)に溶解し、ＴＨＦ(３３ml)、Ｅｔ３Ｎ(０.８５ml, ６.０mmol)およびＢＯＣ無水物(１.６ｇ, ７.３mmol)で、室温で処理した。同じ温度で６時間撹拌した後、溶液を元の容積の１／３になるまで濃縮し、残渣を水に溶かし、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機相を乾燥し、濾過し、濃縮し、０.８０ｇ(粗収率 ６７％)のｔｅｒｔ−ブチル ６−ヒドロキシ−３,４−ジヒドロ−２,７−ナフチリジン−２(１Ｈ)−カルボキシレートを白色の固体として得た。
LC-MS m/z 251 (M+1), 195 (M-55).
【００９３】
この物質(約５.４mmol)を、トルエン(２０ml)および３０％水性オルトリン酸三カリウム(２０ml)の２相系に溶解し、トリフルオロメタンスルホン酸無水物(１.６ml, ６.８mmol)で、４℃で処理した[Org. Lett. 2002, 4(26), 4717-4718]。氷浴を除き、室温で２時間撹拌を続け、その後２相を分離した。水相をトルエンで１回洗浄した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(２：１)を溶出液としてカラムクロマトグラフィーにかけることによって精製し、０.４５ｇ(収率１７％)の表題生成物を得た。
LC-MS m/z 383 (M+1), 283 (M-99).
【００９４】
３−メトキシ−２,７−ナフチリジン
無水ＴＨＦ(６５ml)中のＮ,Ｎ,Ｎ'−トリメチルエチレンジアミン(１.９ml, １５mmol)の溶液に、撹拌しながら、アルゴン下、−７０℃で、ヘキサン中１.６Ｍのｎ−ＢｕＬｉ(９.０ml, １４mmol)をゆっくりと加えた。−７０℃で１５分間撹拌後、６−メトキシ−ニコチンアルデヒド(１.３ｇ, ９.８mmol)を滴下した。添加完了後、−７０℃でさらに１５分間撹拌を続けた。次にヘキサン中１.６Ｍのｎ−ＢｕＬｉ(１０ml, １６mmol)を滴下し、−４５℃で４時間撹拌を続けた。溶液を−７０℃に冷却し、次にヨウ素(３.０ｇ, １２mmol)および無水ＴＨＦ(２５ml)の溶液を滴下した。添加完了後、−７０℃で３０分間、次に室温で３時間撹拌を続けた。粗生成物をエーテル(４０ml)に溶かし、飽和塩化アンモニウム(２×４０ml)で、そして５％ チオ硫酸ナトリウム(２×２０ml)で連続して洗浄した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：１)を溶出液としてカラムクロマトグラフィーにかけることによって精製し、０.４１ｇ(収率１５％)の４−ヨード−６−メトキシニコチンアルデヒドを得た。
LC-MS m/z 264 (M+1);
1H NMR (CDCl3) δ 9.95 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.32 (s, 1H) and 3.98 (s, 3H) ppm.
【００９５】
４−ヨード−６−メトキシニコチンアルデヒド(０.４１ｇ, １.６mmol)、トリメチルシリルアセチレン(０.３５ml, ２.８mmol)、ＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２(触媒量)、ＣｕＩ(触媒量)、ＴＥＡ(２ml)およびＴＨＦ(１０ml)を６０℃で２時間撹拌した。揮発成分を蒸発させ、残渣を水に溶かし、エーテルで抽出した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ヘプタン(１：３)を溶出液としてカラムクロマトグラフィーにかけることによって精製し、０.２５ｇ(収率６８％)の６−メトキシ−４−[(トリメチルシリル)エチニル]ニコチンアルデヒドを得た。
LC-MS m/z 234 (M+1); 
1H NMR (CDCl3) δ 10.4 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.03 (s, 3H) and 0.30 (s, 9H) ppm.
【００９６】
６−メトキシ−４−[(トリメチルシリル)エチニル]ニコチンアルデヒド(０.２５ｇ, １.１mmol)およびＭｅＯＨ中７Ｍのアンモニア(５ml)を、密封したバイアル中、８０℃で終夜撹拌した。溶液を濃縮し、飽和炭酸ナトリウムに溶かし、エーテルで抽出した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮し、０.２０ｇの表題生成物を得た。
GC-MS m/z 160 (M); 
1H NMR (CDCl3) δ 9.41 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.03 (s, 1H) and 4.12 (s, 3H) ppm.
【００９７】
薬理学的実施例
精製酵素アッセイ
ＭＭＰ１２
リコンビナントのヒトＭＭＰ１２触媒ドメインは、Parkar A.A. et al, (2000), Protein Expression and Purification, 20, 152 で記載された通りに発現させ、精製され得る。精製された酵素を用いて、活性の阻害剤を以下の通りにモニターし得る：
ＭＭＰ１２(最終濃度５０ng/ml)を、阻害剤の存在下(１０種の濃度)もしくは非存在下、アッセイ緩衝液中(０.１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＣａＣｌ２、０.０２０ｍＭ ＺｎＣｌおよび０.０５％(w/v) “Brij 35”(商標)界面活性剤を含む、０.１Ｍ “Tris-HCl”(商標)緩衝液(pH 7.3))、合成基質：Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2 (１０μＭ)と共に室温で６０分間インキュベーションする。λex＝３２０nmおよびλem＝４０５nmで蛍光を測定することによって、活性を決定する。％阻害を以下の通りに計算する：
％阻害＝[蛍光阻害剤添加−蛍光バックグラウンド]／[蛍光阻害剤非添加−蛍光バックグラウンド]
【００９８】
ＭＭＰ８
精製ｐｒｏ−ＭＭＰ８を Calbiochem から購入する。酵素(１０μｇ/ml)を、３５℃で、１ｍＭのｐ−アミノ−フェニル−水銀(II)酢酸塩(ＡＰＭＡ)によって、２.５時間活性化する。活性化した酵素を用いて、活性の阻害剤を以下の通りにモニターし得る：
ＭＭＰ８(最終濃度２００ng/ml)を、阻害剤の存在下(１０種の濃度)もしくは非存在下、アッセイ緩衝液中(０.１Ｍ ＮａＣｌ、３０ｍＭ ＣａＣｌ２、０.０４０ｍＭ ＺｎＣｌおよび０.０５％(w/v)“Brij 35”(商標)界面活性剤を含む、０.１Ｍ “Tris-HCl”(商標)緩衝液(pH 7.5))、合成基質：Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2 (１２.５μＭ)と共に、３５℃(８０％ Ｈ２Ｏ)で９０分間インキュベートする。λex＝３２０nmおよびλem＝４０５nmで蛍光を測定することによって活性を決定する。％阻害を以下の通りに計算する：
％阻害＝[蛍光阻害剤添加−蛍光バックグラウンド]／[蛍光阻害剤非添加−蛍光バックグラウンド]
【００９９】
ＭＭＰ９
リコンビナントのヒトＭＭＰ９触媒ドメインを発現させ、次にＺｎキレート・カラムクロマトグラフィー、次にヒドロキサメート・アフィニティー・カラムクロマトグラフィーによって精製した。この酵素を用いて活性の阻害剤を以下の通りにモニターし得る：
ＭＭＰ９(最終濃度５ng/ml)を、阻害剤の存在下(１０種の濃度)もしくは非存在下、アッセイ緩衝液中(０.１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＣａＣｌ２、０.０２０ｍＭ ＺｎＣｌ、および０.０５％(w/v)“Brij 35”(商標)界面活性剤を含む、０.１Ｍ “Tris-HCl”(商標)緩衝液(pH 7.3))、合成基質：Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2 (５μＭ)と共に、室温で３０分間インキュベートする。λex＝３２０nmおよびλem＝４０５nmで蛍光を測定することによって活性を決定する。％阻害を以下の通りに計算する：
％阻害＝[蛍光阻害剤添加−蛍光バックグラウンド]／[蛍光阻害剤非添加−蛍光バックグラウンド]
【０１００】
ＭＭＰ１４
リコンビナントのヒトＭＭＰ１４触媒ドメインは、Parkar A.A. et al, (2000), Protein Expression and Purification, 20, 152 に記載された通りに発現させ、精製され得る。精製した酵素を用いて活性の阻害剤を以下の通りにモニターし得る：
ＭＭＰ１４(最終濃度１０ng/ml)を、阻害剤の存在下(５種の濃度)もしくは非存在下、アッセイ緩衝液中(０.１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＣａＣｌ２、０.０２０ｍＭ ＺｎＣｌ、および０.０５％(w/v)“Brij 35”(商標)界面活性剤を含む、０.１Ｍ “Tris-HCl”(商標)緩衝液(pH 7.5))、合成基質：Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(１０μＭ)と共に、室温で６０分間インキュベートする。λex＝３２０nmおよびλem＝４０５nmで蛍光を測定することによって活性を決定する。％阻害を以下の通りに計算する：
％阻害＝[蛍光阻害剤添加−蛍光バックグラウンド]／[蛍光阻害剤非添加−蛍光バックグラウンド]
【０１０１】
発現させ精製されたｐｒｏＭＭＰを用いた、ＭＭＰ９を含む他のマトリックス・メタロプロテイナーゼに対する試験のプロトコルは、例えば C. Graham Knight et al., (1992) FEBS Lett., 296(3), 263-266 に記載されている。
【０１０２】
ＭＭＰ１９
リコンビナントのヒトＭＭＰ１９触媒ドメインは、Parkar A.A. et al, (2000), Protein Expression and Purification, 20:152 に記載された通りに発現させ、精製され得る。精製した酵素を用いて、活性の阻害剤を以下の通りにモニターし得る：
ＭＭＰ１９(最終濃度４０ng/ml)を、阻害剤の存在下(５種の濃度)もしくは非存在下、アッセイ緩衝液中(０.１Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＣａＣｌ２、０.０２０ｍＭ ＺｎＣｌおよび０.０５％(w/v)“Brij 35”(商標)界面活性剤を含む、０.１Ｍ “Tris-HCl”(商標)緩衝液(pH 7.3))、合成基質：Mca-Pro-Leu-Ala-Nva-Dpa-Ala-Arg-NH2 (５μＭ)と共に、３５℃で、１２０分間インキュベートする。λex＝３２０nmおよびλem＝４０５nmで蛍光を測定することによって活性を測定する。％阻害を以下の通りに計算する：
％阻害＝[蛍光阻害剤添加−蛍光バックグラウンド]／[蛍光阻害剤非添加−蛍光バックグラウンド]
【０１０３】
下記の表は、本発明の化合物の代表例についてのデータを示す。
【表２】
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【国際調査報告】
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