(57)【要約】  本発明は、コショウ科(Piperaceae)、特にクベバ(Piper cubeba)から単離された(-)-クベビン(cubebin)、およびミカン科(Rutacea)、特にザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)から単離された(-)-メチルプルビアトリド(methylpluviatolide)に由来するジベンジルブチロラクトンリグナン；それらの合成的および半合成的な誘導体、ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)から単離されるガルグラビン(galgravin)およびベラゲンシン(veragensin)のようなテトラヒドロフランリグナンを得る方法、ならびに前記リグナンの鎮痛性および抗炎症性の活性、および製剤中にリグナンが60〜80％存在する局所性および／または全身性の製剤に関する。本発明は、炎症および／または痛みを治療するための、前記リグナンに基づく局所性および／または全身性の製剤を使用した治療方法にも関する。具体的には、(-)-O-アセチルクベビン; (-)-O-メチルクベビン; (-)-O-(N,N-ジメチルアミノ-エチル)-クベビン; (-)-ヒノキニン; (-)-6,6’-ジニトロイノキニン; (-)-O-ベンジルクベビン; (-)-6,6’-ジアミノヒノキニン、および得られる他の合成的な誘導体のような(-)-クベビンの合成的および半合成的な誘導体、ならびに(-)-6, 6’-ジニトロメチルプルビアトリド(dinitromethylpluviatolide)および(-)-6,6’-ジアミノメチルプルビアトリドのような(-)-メチルプルビアトリドの合成的および半合成的な誘導体を得るための方法であって、鎮痛および抗炎症活性を有する薬剤の製造において使用することができる方法にも関する。本発明は、ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)から単離される物質ガルグラビンおよびベラゲンシン、ならびに得られる芳香環上に置換基を有するそれらの合成的および半合成的な誘導体を得る方法にも関する。【選択図】    図１
2008539173.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
特に、以下の構造式の(-)-クベビン(1)およびメチルプルビアトリド(9)からジベンジルブチロラクトンリグナンを得るための方法であって、原料としてザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)の葉を使用すること、および以下の工程を含んで成ることを特徴とする方法：
【化１】
2008539173.tif 000008
【化２】
2008539173.tif 000009
a) ザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)の葉を採集し、それを40〜60℃の温度のオーブンで乾燥する工程と；
b) ナイフ粉砕機においてザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)の葉を粉砕する工程と；
c) ザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)の葉から得られる粉末を液浸軟化し、25℃で約5日間、ヘキサンを用いて完全抽出する工程と；
d) 液浸軟化した生成物をろ過することにより粗製の抽出物を調製し、減圧下、30℃において、溶媒が完全に除去されるまで濃縮する工程と；
e) シリカゲルを用いたクロマトグラフカラムにおいて、ヘキサン、AcOEt(AcOEt)、およびエタノールにより始め、比率を増大させる溶媒系を用いて、各500mlの210クロマトグラフ部分を供給することにより溶出し、ザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)の葉から得られた粗製の抽出物を繰り返し精製する工程と；
f) 1Hおよび13Cの核磁気共鳴(NMR)、[α]D、質量、IVからのデータの分析により同定する工程。
【請求項２】
特に(-)-クベビン(1)からジベンジルブチロラクトンリグナンを得るための方法であって、原料としてクベバ(Piper cubeba)の種子を使用すること、および以下の工程を含んでなることを特徴とする方法：
a) クベバ(Piper cubeba)の種子を採集し、それを40〜60℃のオーブンで乾燥する工程と；
b) ナイフ粉砕機においてクベバ(Piper cubeba)の種子を粉砕する工程と；
c) クベバ(Piper cubeba)の種子から得られる粉末を液浸軟化し、25℃で約5日間、98％エタノールを用いて完全抽出する工程と；
d) 液浸軟化した生成物をろ過することにより粗製の抽出物を調製し、減圧下、40℃において、溶媒が完全に除去されるまで濃縮する工程と；
e) 前記粗製のエタノール抽出物をメタノールの9：1水性アルコール溶液中に可溶化し、n-ヘキサンを用いて分配することにより、テルペノイド油部分を除去する工程と；
f) 水性アルコール部分を分離し、完全に溶媒が除去されるまで濃縮する工程と；
g) 100％ ヘキサン；50％ ヘキサン:ジクロロメタン; 100％ ジクロロメタン; 50％ ジクロロメタン：酢酸エチル；および100％ 酢酸エチルの溶媒系を用いて、粗製の水性アルコール部分についてシリカゲルを用いた減圧液体クロマトグラフィーを行う工程と；
h) 100％ジクロロメタンにおける部分から溶媒を減圧除去し、(-)-クベビン(1)の精製のために4：1 へキサン：アセトンにおいて連続的に再結晶を行う工程と；
i) 薄層クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーにおいて、結晶化した(-)-クベビン(1)の純度を分析する工程と；
j) 1Hおよび13Cの核磁気共鳴(NMR)、[α]D、質量、IVからのデータの分析により同定する工程。
【請求項３】
特にガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)からテトラヒドロフランリグナンを得るための方法であって、原料としてネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮を使用すること、および以下の工程を含んでなることを特徴とする方法：
a) ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮を採集し、それを40〜60℃のオーブンで乾燥する工程と；
b) ナイフ粉砕機においてネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮を粉砕する工程と；
c) ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮から得られる粉末を液浸軟化し、25℃で約5日間、EtOH：H2O（9：1）を用いて完全抽出する工程と；
d) 液浸軟化した生成物をろ過することにより粗製の抽出物を調製し、減圧下、30℃において、溶媒が完全に除去されるまで濃縮する工程と；
e) MeOH: H2O (7:3)を用いて溶解することにより前記粗製の抽出物を分画し、ヘキサン、クロロホルム、およびブタノールを用いて繰り返し分配し、残っている水の画分を凍結乾燥し、移動相としてヘキサン-EtOAc (9:1)を用い、前記画分に対してシリカによるフラッシュカラムクロマトグラフィーを行い、半分取HPLC（高速液体クロマトグラフィー）(MeOH-H2O 75: 250)を行うことにより、ガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)を得る工程と；
f) 1Hおよび13Cの核磁気共鳴(NMR)、[α]D、質量、IVからのデータの分析により同定する工程。
【請求項４】
ジベンジルブチロラクトンリグナンから合成および半合成の誘導体、特に(-)-クベビン(1)およびメチルプルビアトリド(9)の誘導体を得るための方法、ならびに特にガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)に由来するテトラヒドロフランリグナンを得るための方法であって、ジベンジルブチロラクトンリグナンについては合成および半合成の工程を含んでなり、テトラヒドロフランリグナンについてはネクタンドラ・メガポタミカ(N.megapotamica)の粗製の水性アルコール抽出物から単離する工程を含んでなることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項1、2、および4に記載のジベンジルブチロラクトンリグナンの合成および半合成の誘導体、特に(-)-クベビン(1)の誘導体を得るための方法であって、(-)-O-アセチルクベビン(2)、(-)-O-メチルクベビン(3)、(-)-O-(N, N-ジメチルアミノエチル)-クベビン(4)、(-)-O-ベンジルクベビン(5)、(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6,6’-ジニトロイノキニン(7)、(-)-6,6’-ジアミノヒノキニン(8)を得ることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項1および4に記載の合成および半合成のジベンジルブチロラクトンリグナン誘導体、特にメチルプルビアトリド(9)誘導体を得るための方法であって、6, 6’-ジニトロメチルプルビアトリド(10)および6, 6’-ジアミノメチルプルビアトリド(11)を得ることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法により得られるリグナンに由来する化合物であって、抗炎症剤として作用することを特徴とする化合物。
【請求項８】
請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法により得られるリグナンに由来する化合物であって、鎮痛剤として作用することを特徴とする化合物。
【請求項９】
請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法により得られるリグナンに由来する化合物を活性因子として60〜80％含有することを特徴とする、局所性および／または全身性の製剤。
【請求項１０】
関節リウマチ、腱炎、歯周炎、滑液包炎等の疾患と闘うための薬剤および製剤中における、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法により得られる化合物の使用。
【請求項１１】
非ステロイド性の鎮痛抗炎症剤と同程度に炎症過程を減少させ、痛みを軽減するための製剤および薬剤の活性因子として、請求項7または8に記載の化合物を使用することを特徴とする治療方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の説明】
【０００１】
本発明は、コショウ科(Piperaceae)、特にクベバ(Piper cubeba)から単離された(-)-クベビン(cubebin)、およびミカン科(Rutacea)、特にザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)から単離された(-)-メチルプルビアトリド(methylpluviatolide)に由来するジベンジルブチロラクトンリグナン；それらの合成的および半合成的な誘導体、ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)から単離されるガルグラビン(galgravin)およびベラゲンシン(veragensin)のようなテトラヒドロフランリグナンを得る方法、ならびに前記リグナンの鎮痛性および抗炎症性の活性、および製剤中にリグナンが60〜80％存在する局所性および／または全身性の製剤に関する。本発明は、炎症および／または痛みを治療するための、前記リグナンに基づく局所性および／または全身性の製剤を使用した治療方法にも関する。
【０００２】
具体的には、(-)-O-アセチルクベビン; (-)-O-メチルクベビン; (-)-O-(N,N-ジメチルアミノ-エチル)-クベビン; (-)-ヒノキニン; (-)-6,6’-ジニトロイノキニン; (-)-O-ベンジルクベビン; (-)-6,6’-ジアミノイノキニン、および得られる他の合成的な誘導体のような(-)-クベビンの合成的および半合成的な誘導体、ならびに(-)-6, 6’-ジニトロメチルプルビアトリド(dinitromethylpluviatolide)および(-)-6,6’-ジアミノメチルプルビアトリドのような(-)-メチルプルビアトリドの合成的および半合成的な誘導体を得るための方法であって、鎮痛および抗炎症活性を有する薬剤の製造において使用することができる方法にも関する。本発明は、ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)から単離される物質ガルグラビンおよびベラゲンシン、ならびに得られる芳香環上に置換基を有するそれらの合成的および半合成的な誘導体を得る方法にも関する。
【０００３】
より安全且つより効果的な新規の代替治療に対する研究は、現状を打破するために非常に重要である。ここで述べられるリグニンは、優れた鎮痛-抗炎症活性を示し、使用に対して副作用が実際にほとんどない。
【０００４】
技術の進歩と共に、より深い研究は、原料として天然物を使用して生物活性物質を合成する必要性を研究者および医薬産業に示している。多くの分類の異なる天然物は、重要な抗マラリア活性を有するセスキテルペン誘導体およびアルテミシンの合成のための原料として使用されるテルペン誘導体のように、新規の医薬を合成する。(-)-クベビンが含まれるリグナンの分類は、既に言及した活性以外に抗腫瘍、抗ウイルス、および抗シャガス(Chagas)活性を有するため、特に興味深い。植物の種々の治療的な適用の中で、多くは抗炎症活性および鎮痛活性を示し、大衆薬中に広範に使用される。それ故、前記活性および毒性プロフィールを確認するための生物学的試験における研究および調査が必要である。
【０００５】
炎症過程は、細胞および血漿起源のメディエーターにより開始および伝導され、局所的に作用することにより、前記反応、すなわち、痛み、熱、赤み、および腫瘍の特徴的なシグナルを促進し、続いて、患部の臓器または組織の機能を喪失し得る。臨床的に、前記炎症反応は、常同性の様式で出現し、刺激の性質からは独立している。小さな変形は、患部の組織または臓器および病態学的状態の共存に依存して生じてよい。
【０００６】
アラキドン酸カスケードは、重要な細胞メディエーターの生体内変換の原因である。これらのうち、我々は、種々の生理的な過程において非常に重要であるプロスタグランジン(PG)を見出している。現在、新規の非ステロイド性抗炎症剤(AINS)における研究は、アラキドン酸カスケードの酵素の選択的な阻害についてなされている。最近では、プロスタグランジンエンドペルオキシド合成酵素(PGHS)の第2のアイソフォームであるPGHS-2の発見により、炎症性の疾患の治療は、通常の抗炎症剤により引き起こされる副作用なく作用する新規のクラスのAINS剤を開示する可能性を伴う新規の展望を得た。
【０００７】
研究は、(-)-クベビンならびに合成的および半合性的な誘導体(-)-O-アセチルクベビン；(-)-O-メチルクベビン; (-)-O-(N, N-ジメチルアミノエチル)-クベビン; (-)-O-ベンジルクベビン; (-)-ヒノキニン; (-)-6, 6’-ジニトロイノキニン; (-)-6, 6’-ジアミノヒノキニンのようなジベンジルブチロラクトンのリグナン、ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮から単離されるガルグラビンおよびベラゲンシンのようなテトラヒドロフランリグナンが、有意な鎮痛作用および抗炎症作用を有することを示した。
【０００８】
本発明の目的は、以下の化学構造に示す通り、(-)-O-アセチルクベビン(2)、(-)-O-メチルクベビン(3)、(-)-O-(N,N-ジメチルアミノエチル)-クベビン(4)、(-)-O-ベンジルクベビン(5)、(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6,6’-ジニトロイノキニン(7)、(-)-6, 6’-ジアミノヒノキニン(8)のような、クベバ(Piper cubeba)から単離される(-)-クベビン(1)に由来するジベンジルブチロラクトンリグナン、ならびに(-)-6, 6’-ジニトロメチルプルビアトリド(10)および(-)-6, 6’-ジアミノメチルプルビアトリド(11)のような、ミカン科(Rutacea)から単離されるメチルプルビアトリド(9)に由来する他のジベンジルブチロラクトンリグナン、さらに、ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)から単離されるガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)のようなテトラヒドロフランリグナン、ならびにここで述べるような方法により得られる他のものを得ることであり、ほぼ100％の効力を有する鎮痛-抗炎症剤として作用する薬物の製造において使用されてよい。クベビン(1)およびジベンジルブチロラクトンリグナン誘導体の構造は、以下の通りである。
【化３】
2008539173.tif 000003
【０００９】
(-)-メチルプルビアトリド(9)の誘導体は、ベラトルムアルデヒド(veratraldehyde)およびメチルスクシネートからの全合成により得られ、それらの芳香環の一方にメトキシ基、ならびに-NO2および-NH2置換基を有するため、高い鎮痛-抗炎症ポテンシャルを示す。
【００１０】
メチルプルビアトリド(9)の構造およびそのジベンジルブチロラクトンリグナン誘導体を以下に示す。
【化４】
2008539173.tif 000004
【００１１】
ガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)のようなテトラヒドロフランリグナンは、PAF（血小板凝集因子）に関する受容体において作用する重要なアンタゴニストとして使用される。前記リグナンは、Z. ナランジロ(naranjillo)およびP. クベバ(cubeba)から単離されるジベンジルブチロラクトンリグナンのように、重要な鎮痛および抗炎症活性を示す。
【００１２】
ガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)の構造を以下に示す。
【化５】
2008539173.tif 000005
【００１３】
ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)からテトラヒドロフランリグナンを得る方法、およびクベバ(Piper cubeba)から(-)-クベビン(1)誘導体であるジベンジルブチロラクトンリグナンを得る方法は、以下のステップを有する：
−採集；
−乾燥；
−粉砕；
−液浸軟化；
−抽出物の調製；
−分画およびろ過；
−精製；
−同定。
【００１４】
テトロヒドロフランリグナンのガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)を得る方法は図2に示されており、以下のステップを含んでなる：
a) 採集：ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮；
b) 乾燥：40〜60℃の温度の乾燥器；
c) 粉砕：ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮をナイフ粉砕機中で微粉砕した；
d) 液浸軟化：得られたネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮の粉を25度で5日間、EtOH：H2O (9:1)から完全抽出した；
e) 粗抽出物の精製：液浸軟化からの生成物をろ過し、溶媒が完全に除去されるまで、30℃の温度、減圧下で濃縮した；
f) 抽出物の分画：ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)の皮から得られた粗抽出物をMeOH: H2O (7:3)に溶解し、ヘキサン、クロロホルム、およびブタノールを用いて分配を繰り返した。残った水の画分を凍結乾燥した。分配から得られる画分Iは、比率を増大させるヘキサン-酢酸エチル混合物を用いて、減圧カラムを用いた液体クロマトグラフィーシステムでシリカゲルにおいてクロマトグラフし、結果として4の画分が得られた。結果として、画分I（ヘキサン-EtOAc 9：1）が得られた。分配から得られる画分IIは、比率を増大させるヘキサン-酢酸エチル混合物を用いて、減圧カラムを用いた液体クロマトグラフィーシステムでシリカゲルにおいてクロマトグラフし、結果として6の画分が得られた。結果として画分IIから得られる画分III（ヘキサン-EtOAc 1：1）および画分IV（ヘキサン-EtOAc 4：6）は、移動相としてヘキサン-EtOAc（9：1）を用いて、シリカを通してフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけ、半分取HPLC（高速液体クロマトグラフィー）（MeOH-H2O 75: 250）を行った。この方法により、化合物ガルグラビン(12)およびベラゲンシン(13)が得られる。
【００１５】
g) 同定： 1Hおよび13Cの核磁気共鳴(NMR)、[α]D、質量、IVのデータ分析により行った。
【００１６】
スキーム1において、入手反応は、クベバ(Piper cubeba)の種子から単離される(-)-クベビン(1)の半合成誘導体の対応する構造を用いて図示され、ステージi、ii、iii、iv、v、vi、およびviiからなる。
【００１７】
i) ジベンジルブチロラクトンリグナンである(-)-クベビン(1)は、その生物学的活性を改善することを目的として半合成により構造的に修飾される。(-)-クベビン（200g以上）とP.A.無水酢酸をピリジン中で反応させた。クベビンを無水酢酸に溶解し、反応の全期間（24時間）の間、室温で一定に振とうしながらピリジンを添加した。反応後、薄層クロマトグラフィー分析を行った（シリカゲル60−移動相：ヘキサン／AcOEt 6：4）。
【００１８】
(-)-O-アセチルクベビン(2)の単離は、トルエンの一部の反応媒質への添加およびピリジンを抽出するための減圧下での連続的な蒸発により行われた。この方法の後、ジクロロメタンの一部をトルエンを含有する媒質に添加し、トルエンを除去するために減圧下で連続的に蒸発させた。その後、有機相を収集フラスコに移し、分取円形クロマトグラフィー(preparative circular chromatography:CCP)（クロマトトロン）により精製した。この方法の後、生成物(-)-O-アセチルクベビン(2)を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を用いた純度測定にかけ、純度指数が＞95％であることが分かった。生成物(-)-O-アセチルクベビン(2)について、1Hおよび13CのNMR分析ならびに[α]26Dの分析を行った。
【００１９】
ii) 蒸留し、乾燥したTHF中の(-)-クベビン(1)（200g以上）に、NaHを加え（十分量、パラフィングリースを含まないヘキサンで洗浄）、混合物を室温で1/2時間振とうした。その後、ヨウ化メチルを加え、N2ガス中、一晩振とうしながら反応媒質を放置した。
【００２０】
単離は、水中におけるメタノール（1：1）を添加して過剰量のNaHを分解することにより行った。有機溶媒は、反応媒質から蒸留した。希釈したHClを加え、AcOEtで抽出した。有機相を、5％ NaHCO3 溶液、生理食塩水(10％ NaCl)、再び5％ NaHCO3溶液で中和し、MgSO4を用いて乾燥し、ろ過した。溶媒を回転蒸発させ、茶色の残留物を得た。続いて、生成物に対してシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行った（溶離剤  ヘキサン／AcOEt 4：1）。精製は、円形分取クロマトグラフィー(CPC)(クロマトトロン)により行った。この手順の後、生成物(-)-O-メチルクベビン(3)をHPLCによる純度測定にかけ、98％の純度指数であることが分かった。特徴づけは、1Hおよび13CのNMRならびに[α]26Dの分析により行った。
【００２１】
iii) 5 lのエタノール中における300 g (701.5 mmol)の(-)-クベビン(1)のナトリウムエトキシド溶液(5 lのエタノール, 2 MEq のNa0)を、2時間を超える再流により加えた。続いて、120 g (1020 mmol)のジメチルエチルアミンクロリドを加えた。反応はCCDによりモニターされ、再流はあと4時間延長された。反応の最後に、5 mlの水を加えて相を分離し、酢酸エチル(3×500 ml)を用いて有機相を抽出した。有機相を10％ NaCl水溶液(3×500 ml)で洗浄し、MgSO4を用いて乾燥し、ろ過した。減圧下で溶媒を蒸発させ、溶離液としてジクロロメタンを用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製した。生成物(-)-O-(N, N-ジメチルアミノエチル)-クベビン(4)が濃い黄色の油として得られ、その純度はHPLCにより99％と評価された。
【００２２】
iv) (-)-クベビン(1) (200 g以上)を、乾燥ジクロロメタン中の2モル当量のpcc (ピリジニウムクロロクロメート)と反応させた。3口のバルーンに、pcc (ピリジニウムクロロクロメート)を入れ、その分解を妨げるために乾燥ジクロロメタンをすばやく加えた。一定の振とうおよび不活性ガス(N2)のもとに系を維持した。pcc 1gに対して、1 lのジクロロメタンを使用した。別のバルーンにおいて、(-)-クベビン(1)を乾燥DCMに溶解し、不活性ガスを維持した。テフロン(Teflon：登録商標)皮下注射器および広い口径の針を用いて、溶液(懸濁液)をバルーンから取り出し、振とうおよびN2ガスを24時間維持しながら、pccを含有するバルーンに液滴として加えた。精製の後、1Hおよび13CのNMR分光分析を行った。得られた生成物は濃い黄色の油であり、その純度はHPLCにより99％と評価された。
【００２３】
この後、反応媒質を、一水和物MgSO4を含有する焼結プレートn°2を有するクロマトグラフカラムに注ぎ、減圧ろ過した。その後、焼結プレートn°2、カラムに対するシリカゲル60、および溶媒系（純粋なヘキサン、8:2 ヘキサン/AcOEt、7:3 ヘキサン/AcOEt、6:4 ヘキサン/AcOEt、1:1 ヘキサン/AcOEt、および100％ AcOEt）を有するカラムを用いて、試料をクロマトグラフカラムに適用した。溶出の後、溶媒は回転エバポレーター中で除去され、結果として得られる生成物は回転分取クロマトグラフィーにおいて精製され、結果として(-)-ヒノキニン(6)を得た。精製の後、1Hおよび13CのNMR分光分析ならびに[α]26Dの分析を行った。生成物(-)-ヒノキニン(6)は、濃い黄色の油として得られ、その純度はHPLCにより99％と評価された。
【００２４】
v) (-)-ヒノキニン(6) (200 g以上)をクロロホルムに溶解し、反応媒質を−6℃に維持した。硝酸(6 MEq)を液滴によりゆっくりと加え、2時間反応させた。この時間の後、反応を停止させるためにNa2CO3の飽和溶液を加えた。6,6’-ジニトロイノキニン(7)を、クロロホルムを用いて反応媒質から抽出し、減圧下で蒸発させた。メタノールにおける再結晶の後、黄色い粉末の生成物6,6’-ジニトロイノキニン(7)が得られた。精製の後、1Hおよび13CのNMR分光分析ならびに[α]26Dの分析を行った。生成物6,6’-ジニトロイノキニン(7)は濃い黄色の固体として得られ、その純度は、HPLCおよび他のスペクトルのデータから98％と評価された。
【００２５】
vi) 5 lのTHFにおける(-)-クベビン(1) (300 g, 701.5 mmol)の溶液を、THF (3 l)中のNaH (グリースのないヘキサンで洗浄した十分な量)の懸濁液に加え、混合物を室温で30分間振とうした。その後、ベンジルブロミド(250 ml)を加え、N2ガスの下で一晩、反応媒質を振とうした。水中におけるメタノール(1：1)の添加により、過剰量のNaHを分解した。希釈したHClを加え、酢酸エチル(3×500 ml)を用いて媒質を3回分配した。5％ NaHCO3水溶液(2×500 ml)、10％ NaCl水溶液(3×500 ml)、および5％ NaHCO3水溶液(2×500 ml)を用いて有機相を中和し、MgSO4を用いて乾燥し、ろ過した。減圧下で溶媒を蒸発させ、得られる茶色の残留物は、ヘキサン／酢酸エチル(4：1)を溶離液として使用したシリカゲルカラムにおいて精製され、91.4％の理論収率を有する透明な油を提供した。生成物 (-)-O-ベンジルクベビン(5)は、HPLCおよび他のスペクトルデータにより純度が98％であると評価された。
【００２６】
vii) ステンレスのオートクレーブに、10 lの無水メタノールに溶解した300 g (687.3 mmol)の化合物6,6’-ジニトロイノキニン(7)を振とうしながら加え、その後、無水メタノール(5 l)中の活性炭の上に298.8 gのパラジウム(5％)を加えた。オートクレーブを閉じ、室温で24時間、20atmのH2中に置いた。シリカゲルを通して懸濁液をろ過し、減圧下で溶媒を蒸発させた。生成物(-)-6,6’-ジアミノヒノキニン(8)を、溶離液として1：1の割合のヘキサン-酢酸エチル混合物を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物は、HPLCおよび他のスペクトルデータにより、98％の純度であると評価された。
【００２７】
スキーム1
【化６】
2008539173.tif 000006
【００２８】
スキーム2において、入手反応は、ザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)の葉から単離されたメチルプルビアトリド(9)の半合成誘導体の対応する構造を用いて図示され、ステージviii、ix、xおよびxiからなる。
【００２９】
スキーム2
【化７】
2008539173.tif 000007
【００３０】
誘導体(-)-6, 6’-ジニトロメチルプルビアトリド(10)および(-)-6, 6'-ジアミノメチルプルビアトリド(11)を、それぞれ以下の方法により得た。
【００３１】
viii) 6, 6’-ジニトロイノキニン(7)を得るのと同じ方法であるが、ヒノキニン(6)の代わりにメチルプルビアトリド(9)を使用することにより誘導体6, 6’-ジニトロメチルプルビアトリド(10)が得られる。
【００３２】
ix) (-)-6,6’-ジアミノヒノキニン(8)を得るのと同じ方法であるが、6, 6’-ジニトロメチルプルビアトリド(10)から誘導体6, 6'-ジアミノメチルプルビアトリド(11)が得られる。
【００３３】
既に示した（既に特許出願した）殺トリパノソーマ活性に関する結果に加えて、種々の(-)-クベビン誘導体の鎮痛および抗炎症作用は、(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6, 6’-ジニトロイノキニン(7)、および(-)-6,6’-ジアミノヒノキニン(8)が抗炎症剤としてより高い効果を示し、それぞれ71％、62％、および82％の阻害を示すことが分析された（図3-A、B、C、およびD）。誘導体(-)-O-ベンジルクベビン(5)は、抗炎症剤として有効ではなかった。鎮痛作用について考えると、誘導体(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6, 6’-ジニトロイノキニン(7)、(-)-6,6’-ジアミノヒノキニン(8)、および(-)-O-ベンジルクベビン(5)は鎮痛剤として有効であり、それぞれ95％、75％、92％、および89％の阻害を示した（図4-B、C、D、およびE）。
【００３４】
ここで得られる化合物は、炎症過程を減少させ、痛みを軽減する製剤の活性因子として使用され、非ステロイド性の鎮痛抗炎症作用と同様である。(-)-ヒノキニン(6)および(-)-6,6’-ジアミノヒノキニン(8)のようなそれらのいくつかは、インドメタシンと同様の効力を示すが、インドメタシンにおいて観察されるような胃への影響は両方のプロトタイプで証明されていない。それ故、消化系に対する最も低い副作用であり、予備的な試験において他の生物化学的および血液学的な障害が発生しないことは、使用される参照標準を超えるこれらの活性因子の利点を示す。それ故、前記物質は、関節リウマチ、腱炎、歯周炎、滑液包炎等の疾患に対して使用することができる。
【実施例】
【００３５】
マウスおよびラットを用いた試験を行い、使用した物質が炎症過程および痛みを減少させるのに有効であることが示され、その結果を以下の図に示す。
【００３６】
図3は、カラゲニン（100μg/足）により誘発されたラットの足の浮腫について、10、20、30、および40 mg/kgの用量で、(-)-クベビン(1)、(-)-O-ベンジルクベビン(5)、(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6, 6’-ジニトロイノキニン(7)、および(-)-6, 6’-ジアミノヒノキニン(8)を経口投与した場合の効果を示すグラフである。各棒は、カラゲニンの投与後（3時間）における浮腫容積の増加の平均±SE(n＝6)を表す。データは、一方向性のANOVAおよびダネットの多重比較検定により分析し、p＜0.05 (*) およびp＜0.01 (**)の場合に統計学的に有意であるとした。
【００３７】
図4は、マウスに0.6％ 酢酸溶液を腹腔内投与することにより誘発されるライジング試験において、10、20、30、および40 mg/kgの用量で、(-)-クベビン(1)、(-)-O-ベンジルクベビン(5)、(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6, 6’-ジニトロイノキニン(7)、および(-)-6, 6’-ジアミノヒノキニン(8)を経口投与した場合の効果を示すグラフである。各棒は、異なる用量について、20分後におけるライジングの数の平均±SE(n＝6)を表す。データは、一方向性のANOVAおよびダネットの多重比較検定により分析し、p＜0.05 (*) およびp＜0.01 (**)の場合に統計学的に有意であるとした。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】図1は、クベバ(Piper cubeba)の種子およびザントキシラム・ナランジロ(Zanthoxylum naranjillo)の葉からジベンジルブチロラクトンリグナンを得るための方法のフロー図である。
【図２】図2は、ネクタンドラ・メガポタミカ(Nectandra megapotamica)からテトラヒドロフランリグナンを得るための方法のフロー図である。
【図３】図3は、(-)-クベビン(1)、(-)-O-ベンジルクベビン(5)、(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6, 6’-ジニトロイノキニン(7)、および(-)-6, 6’-ジアミノヒノキニン(8)を経口投与した場合の、ラットの足の浮腫における効果を示すグラフである。
【図４】図4は、マウスを用いたひきつり(contortion)試験において、(-)-クベビン(1)、(-)-O-ベンジルクベビン(5)、(-)-ヒノキニン(6)、(-)-6, 6’-ジニトロイノキニン(7)、および(-)-6, 6’-ジアミノヒノキニン(8)を投与した場合の効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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