(57)【要約】  本発明は、乳癌の相乗的な治療に使用するための、抗エストロゲン剤およびＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０を含む組み合わせ、癌の相乗的な治療のための、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０を含む組み合わせ、および、乳癌の相乗的な治療のための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩおよびＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０を含む３種の組み合わせに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した組み合わせ。
【請求項２】
製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、請求項１に記載の組み合わせを含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物。
【請求項３】
抗エストロゲン剤、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩、および、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
抗エストロゲン剤と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第一の組成物、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第二の組成物を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
温血動物に投与して乳癌の相乗的な治療を提供するための医薬品の製造における、請求項１に記載の組み合わせの使用。
【請求項６】
温血動物に投与して抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療を提供するための医薬品の製造における、請求項１に記載の組み合わせの使用。
【請求項７】
乳癌の治療が必要な温血動物に、請求項１に記載の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む、乳癌の相乗的な治療方法。
【請求項８】
抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療が必要な温血動物に、請求項１に記載の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む、抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療方法。
【請求項９】
乳癌のホルモンに反応性を有する状態からホルモンに反応性を有さない状態への進行を遅らせることに使用するための、請求項１に記載の抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせ。
【請求項１０】
正常な乳房細胞のＤＣＩＳ状態への形質転換を減少させるのに使用するための、請求項１に記載の抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせ。
【請求項１１】
正常な乳房細胞またはＤＣＩＳ細胞の悪性形質転換を減少させるのに使用するための、請求項１に記載の抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせ。
【請求項１２】
ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む、癌の相乗的な治療に使用するのに適した組み合わせ。
【請求項１３】
製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、請求項１２に記載の組み合わせを含む、癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物。
【請求項１４】
ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩、および、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む、請求項１３に記載の癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物。
【請求項１５】
ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第一の組成物、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第二の組成物を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
温血動物に投与して癌の相乗的な治療を提供するための医薬品の製造における、請求項１２に記載の組み合わせの使用。
【請求項１７】
温血動物に投与してＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌の治療を提供するための医薬品の製造における、請求項１２に記載の組み合わせの使用。
【請求項１８】
癌の治療が必要な温血動物に、有効量の請求項１２に記載の組み合わせの構成成分を投与することを含む、癌の相乗的な治療方法。
【請求項１９】
ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌の治療が必要な温血動物に、有効量の請求項１２に記載の組み合わせの構成成分を投与することを含む、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌の治療方法。
【請求項２０】
抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した３種の組み合わせ。
【請求項２１】
製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、請求項２０に記載の３種類の組み合わせを含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物。
【請求項２２】
製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の請求項２０に記載の組み合わせを含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物。
【請求項２３】
抗エストロゲン剤と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第一の組成物、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第二の組成物、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第三の組成物を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
温血動物に投与して乳癌の相乗的な治療を提供するための医薬品の製造における、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの使用。
【請求項２５】
温血動物に投与して抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療を提供するための医薬品の製造における、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの使用。
【請求項２６】
温血動物に投与してＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性乳癌の治療を提供するための医薬品の製造における、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの使用。
【請求項２７】
温血動物に投与して抗エストロゲン剤治療とＥＧＦＲ  ＴＫＩ治療の両方に耐性な乳癌の治療を提供するための医薬品の製造における、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの使用。
【請求項２８】
乳癌の治療が必要な温血動物に、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む、乳癌の相乗的な治療方法。
【請求項２９】
抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療が必要な温血動物に、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む、抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療方法。
【請求項３０】
ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性乳癌の治療が必要な温血動物に、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性乳癌の治療方法。
【請求項３１】
抗エストロゲン剤治療とＥＧＦＲ  ＴＫＩ治療の両方に耐性な乳癌の治療が必要な温血動物に、請求項２０に記載の３種類の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む、抗エストロゲン剤治療とＥＧＦＲ  ＴＫＩ治療の両方に耐性な乳癌の治療方法。
【請求項３２】
乳癌のホルモンに反応性を有する状態からホルモンに反応性を有さない状態への進行を遅らせることに使用するための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む、請求項２０に記載の３種類の組み合わせ。
【請求項３３】
正常な乳房細胞のＤＣＩＳ状態への形質転換を減少させるのに使用するための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む、請求項２０に記載の３種類の組み合わせ。
【請求項３４】
正常な乳房細胞またはＤＣＩＳ細胞の悪性形質転換を減少させるのに使用するための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む、請求項２０に記載の３種類の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
第一の形態において、本発明は、抗エストロゲン剤、および、非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーの特定の阻害剤を含む組み合わせに関する。本発明の組み合わせは、癌、特に乳癌の治療方法、または、このような癌の進行を遅らせる方法に有用である。本発明はまた、このような組み合わせを含む医薬組成物、および、癌の治療に使用するための医薬品の製造、または、癌の進行を遅らせるのに使用するための医薬品の製造におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
さらなる形態において、本発明は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ（ＴＫ）阻害剤、および、非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーの特定の阻害剤を含む組み合わせに関する。本発明のこの組み合わせは、癌の治療、特に乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌および頭頚部癌の治療方法、または、このような癌の進行を遅らせる方法に有用である。本発明のこの形態はまた、このような組み合わせを含む医薬組成物、および、癌の治療、特に肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌および頭頚部癌の治療に使用するための医薬品の製造、または、このような癌の進行を遅らせるのに使用するための医薬品の製造におけるそれらの使用に関する。
【０００３】
さらなる形態において、本発明は、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫ阻害剤、および、非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーの特定の阻害剤を含む組み合わせに関する。本発明の組み合わせは、癌、特に乳癌の治療方法、または、このような癌の進行を遅らせる方法に有用である。本発明のこの形態はまた、このような組み合わせを含む医薬組成物、および、癌の治療に使用するための医薬品の製造、または、癌の進行を遅らせるのに使用するための医薬品の製造におけるそれらの使用に関する。
【０００４】
癌治療に関する現在の選択肢としては、外科的切除、外的なビーム放射線療法、および／または、全身化学療法が挙げられる。これらは、いくつかの癌の形態では部分的に成功するが、それ以外においてはあまり成功しない。癌を治療するための新しい治療的処置の必要性は明らかである。
【０００５】
現在の癌のような細胞増殖疾患のための治療の多くの治療計画では、ＤＮＡ合成を阻害する化合物が利用されている。通常、このような化合物は細胞毒性であるが、腫瘍細胞のような急速に分裂する細胞に対するそれらの毒作用は有益な可能性がある。ＤＮＡ合成阻害以外のメカニズムによって作用する抗癌剤へのその他のアプローチは、作用の選択性の強化を示す可能性を見出すことである。
【０００６】
近年、細胞のＤＮＡの一部が腫瘍遺伝子（すなわち活性化すると悪性腫瘍細胞を形成する遺伝子）に形質転換することによって、細胞が癌性になる可能性がある、ということが発見されている（Ｂｒａｄｓｈａｗ，Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，１９８６，１，９１）。このような腫瘍遺伝子うちいくつかは、増殖因子の受容体であるペプチドの生産を引き起こす。増殖因子受容体複合体の活性化に続いて、細胞増殖の増加が起こる。例えば、数種の腫瘍遺伝子がチロシンキナーゼ酵素をコードしており、さらに所定の増殖因子受容体は、チロシンキナーゼ酵素でもあることがわかっている（Ｙａｒｄｅｎ等，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８８，５７，４４３；Ｌａｒｓｅｎ等，Ａｎｎ．Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８９，第１３章）。同定しようとするチロシンキナーゼの第一群は、このようなウイルス腫瘍遺伝子、例えばｐｐ６０ｖ−Ｓｒｃチロシンキナーゼ（または、ｖ−Ｓｒｃとして知られている）、および、それに対応する正常な細胞中のチロシンキナーゼ、例えばｐｐ６０ｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼ（または、ｃ−Ｓｒｃとして知られている）から得られたものである。
【０００７】
受容体チロシンキナーゼは、細胞の複製を開始させる生化学的なシグナル伝達において重要である。これらは、細胞膜を貫通する大きな酵素であって、さらに、上皮増殖因子（ＥＧＦ）のような増殖因子のための細胞外結合ドメイン、および、キナーゼとしてタンパク質中のチロシンアミノ酸をリン酸化するように機能する細胞内部分を有し、それによって細胞増殖に影響を与える。様々な受容体チロシンキナーゼに結合する増殖因子のファミリーに基づいて、受容体チロシンキナーゼの様々な種類が既知である（Ｗｉｌｋｓ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９３，６０，４３〜７３）。この分類としては、クラスＩ受容体チロシンキナーゼ（これは、受容体チロシンキナーゼのＥＧＦファミリー、例えばＥＧＦ、ＴＧＦα、ＮｅｕおよびｅｒｂＢ受容体を含む）、クラスＩＩ受容体チロシンキナーゼ（これは、受容体チロシンキナーゼのインスリンファミリー、例えばインスリンを含む）、および、ＩＧＦ１受容体およびインスリン関連受容体（ＩＲＲ）、ならびに、受容体チロシンキナーゼのクラス（これは、受容体チロシンキナーゼの血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）ファミリー、例えばＰＤＧＦα、ＰＤＧＦβ、および、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）受容体を含む）が挙げられる。
【０００８】
また、所定のチロシンキナーゼは、非受容体チロシンキナーゼのクラスに属しており、細胞内に存在しており、生化学的なシグナル（例えば腫瘍細胞の運動性、内転移および侵入、それに続く転移性の腫瘍の増殖に影響を与えるシグナル）の伝達に関与していることもわかっている（Ｕｌｌｒｉｃｈ等，Ｃｅｌｌ．１９９０，６１，２０３〜２１２，Ｂｏｌｅｎ等，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，１９９２，６，３４０３〜３４０９，Ｂｒｉｃｋｅｌｌ等，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９２，３，４０１〜４０６，Ｂｏｈｌｅｎ等，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９３，８，２０２５〜２０３１，Ｃｏｕｒｔｎｅｉｄｇｅ等，Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．，１９９４，５，２３９〜２４６，Ｌａｕｆｆｅｎｂｕｒｇｅｒ等，Ｃｅｌｌ，１９９６，８４，３５９〜３６９，Ｈａｎｋｓ等，ＢｉｏＥｓｓａｙｓ，１９９６，１９，１３７〜１４５，Ｐａｒｓｏｎｓ等，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９７，９，１８７〜１９２，Ｂｒｏｗｎ等，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１９９６，１２８７，１２１〜１４９、および、Ｓｃｈｌａｅｐｆｅｒ等，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，７１，４３５〜４７８）。非受容体チロシンキナーゼの様々なクラスが既知であり、例えば、Ｓｒｃファミリー、例えばＳｒｃ、Ｌｙｎ、ＦｙｎおよびＹｅｓチロシンキナーゼ、Ａｂｌファミリー、例えばＡｂｌおよびＡｒｇ、ならびに、Ｊａｋファミリー、例えばＪａｋ１およびＴｙｋ２が挙げられる。
【０００９】
非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーは、正常な細胞では高度に調節され、細胞外の刺激の非存在下では、不活性なコンフォメーションを維持することがわかっている。しかしながら、いくつかのＳｒｃファミリー、例えばｃ−Ｓｒｃチロシンキナーゼは、一般的なヒトの癌、例えば消化管癌（例えば結腸癌、直腸癌および胃癌）（Ｃａｒｔｗｒｉｇｈｔ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９０，８７，５５８〜５６２、および、Ｍａｏ等，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９７，１５，３０８３〜３０９０）、および、乳癌（Ｍｕｔｈｕｓｗａｍｙ等，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９５，１１，１８０１〜１８１０）において、たびたび有意に活性化される（正常な細胞のレベルと比較した場合）。また、非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーは、その他の一般的なヒトの癌、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、例えば肺腺癌および肺扁平上皮癌（Ｍａｚｕｒｅｎｋｏ等，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９２，２８，３７２〜７）、膀胱癌（Ｆａｎｎｉｎｇ等，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９２，５２，１４５７〜６２）、食道癌（Ｊａｎｋｏｗｓｋｉ等，Ｇｕｔ，１９９２，３３，１０３３〜８）、前立腺癌、卵巣癌（Ｗｉｅｎｅｒ等，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９９，５，２１６４〜７０）、および、膵臓癌（Ｌｕｔｚ等，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９９８，２４３，５０３〜８）にも存在している。非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーに関してさらなるヒト腫瘍組織が試験されており、その罹患の蔓延がいずれ立証されると予想される。
【００１０】
さらに、ｃ−Ｓｒｃ非受容体チロシンキナーゼの優れた役割は、多数の細胞質内タンパク質（例えば、焦点接着キナーゼおよびパキシリンなど）との相互作用によって焦点接着複合体の構築を調節することである、ということがわかっている。加えて、ｃ−Ｓｒｃは、細胞運動性を容易にするアクチン細胞骨格を調節するシグナル伝達経路と共役する。同様に、ｃ−Ｓｒｃ、ｃ−Ｙｅｓおよびｃ−Ｆｙｎ非受容体チロシンキナーゼは、インテグリン介在シグナル伝達、および、カドヘリン依存性の細胞−細胞間結合の崩壊において重要な役割を果たす（Ｏｗｅｎｓ等，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，２０００，１１，５１〜６４、および、Ｋｌｉｎｇｈｏｆｆｅｒ等，ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９９，１８，２４５９〜２４７１）。限局性の腫瘍が、血流への内転移、他の組織への浸潤および転移性腫瘍の増殖の開始の段階を経て進行するためには、必然的に細胞運動性が必要である。例えば、結腸腫瘍において、限局性の結腸腫瘍が播種性、浸潤性の転移性疾患に進行することは、ｃ−Ｓｒｃ非受容体チロシンキナーゼ活性と相関がある（Ｂｒｕｎｔｏｎ等，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９７，１４，２８３〜２９３，Ｆｉｎｃｈａｍ等，ＥＭＢＯ  Ｊ，１９９８，１７，８１〜９２、および、Ｖｅｒｂｅｅｋ等，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９９，２４８，５３１〜５３７）。
【００１１】
従っては、このような非受容体チロシンキナーゼの阻害剤が、転移性腫瘍の増殖を阻害するような、腫瘍細胞の運動性の選択的な阻害剤として、さらに哺乳動物の癌細胞の内転移および侵入の選択的な阻害剤として価値があるという予想が認められている。このような非受容体チロシンキナーゼの特定の阻害剤は、充実性腫瘍疾患の封じ込めおよび／または治療に使用するための抗浸潤剤物質として価値があると予想される。
【００１２】
国際特許出願ＷＯ０１／９４３４１、および、ＷＯ０２／１６３５２では、と述べられているこれらで開示されたＳｒｃキナーゼ阻害剤は、単独治療として投与してもよいし、または、これらの発明のキナゾリン誘導体に加えて、従来の外科手術または放射線治療または化学療法を伴ってもよい。このような化学療法は、以下の抗癌剤の種類の１種またはそれ以上を含むと述べられている：
（ｉ）その他の抗浸潤剤（例えば、マリマスタットのようなメタロプロテイナーゼ阻害剤、および、ウロキナーゼ型プラスミノゲン活性化因子受容体の機能の阻害剤）；
（ｉｉ）内科的腫瘍学で用いられるような抗増殖剤／抗新生物薬およびそれらの組み合わせ、例えばアルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、および、ニトロソウレア類）；代謝拮抗物質（例えば、抗葉酸剤、例えばフルオロピリミジン、例えば５−フルオロウラシルおよびテガフールなど、ラルチトレキセド、メトトレキセート、シトシンアラビノシド、ならびに、ヒドロキシ尿素、または、例えば、欧州特許出願番号５６２７３４で開示された好ましい代謝拮抗物質のいずれか１種、例えば（２Ｓ）−２−｛ｏ−フルオロ−ｐ−［Ｎ−｛２，７−ジメチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−６−イルメチル）−Ｎ−（プロパ−２−イニル）アミノ］ベンズアミド｝−４−（テトラゾール−５−イル）酪酸）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン、例えばアドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン）；細胞分裂抑制薬（例えば、ビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン、ならびに、タキソイド、例えばタキソールおよびタキソテール）；および、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン、例えばエトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカン、ならびに、カンプトテシン）；
（ｉｉｉ）抗エストロゲン剤のような細胞増殖抑制性剤（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン）、抗アンドロゲン剤（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミドおよび酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニスト、または、ＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、ロイプロレリンおよびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール（ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、ボラゾール（ｖｏｒａｚｏｌｅ）およびエキセメスタン）、および、フィナステリドのような５α−レダクターゼ阻害剤；
（ｉｖ）増殖因子の機能の阻害剤、例えば以下に挙げる阻害剤：増殖因子抗体、増殖因子受容体抗体、チロシンキナーゼ阻害剤、および、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、例えば上皮増殖因子ファミリーの阻害剤（例えば、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤のＮ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＰ３５８７７４）、および、６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ１０３３））、例えば血小板由来増殖因子ファミリーの阻害剤、および、例えば肝細胞増殖因子ファミリーの阻害剤；および、
（ｖ）抗血管新生剤、例えば血管内皮増殖因子を阻害するものであり、例えば、国際特許出願ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６、および、ＷＯ９８／１３３５４で開示された化合物、および、その他のメカニズムによって作用する化合物（例えば、リノマイド（ｌｉｎｏｍｉｄｅ）、インテグリンαｖβ３の機能の阻害剤、および、アンギオスタチン）。
【００１３】
抗エストロゲン剤とＳｒｃ阻害剤ＡＺＤ０５３０との組み合わせ
初期および進行中の乳癌は、一般的にホルモン依存性であり、そのため、エストロゲン受容体を介したエストロゲン主導の増殖シグナル伝達の阻害に感受性を有する。エストロゲンの排除は、外科的去勢によって達成することもできる。好ましくは、エストロゲンの作用はまた、例えば非ステロイド系抗エストロゲン剤（例えばタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン）を用いた、具体的にはタモキシフェンを用いた抗エストロゲン剤治療を用いて相殺してもよい。また、エストロゲンの作用は、その他の抗エストロゲン剤治療、例えばフルベストラントのようなステロイド系エストロゲン受容体ダウンレギュレーターを用いた抗エストロゲン剤治療を用いて相殺してもよい。
【００１４】
また、ある種のその他の癌（例えば肺癌）の増殖も、ホルモン依存性であり得ることが認識されている。例えば、肺腫瘍組織でエストロゲン受容体が検出されている。従って、このような癌は、エストロゲン受容体を介したエストロゲン主導の増殖シグナル伝達の阻害に対して感受性を有する可能性がある。
【００１５】
しかしながら、内分泌療法への耐性は、乳癌の治療における大きな妨害を生じる。初期は抗ホルモン治療に反応する腫瘍が後になって耐性を生じ、それにより腫瘍の進行が起こる。近年、乳房および前立腺癌における、内分泌療法に対する耐性の発生と病気の進行の基礎となるメカニズムをより理解するための調査が始まった。インビトロで乳癌における抗ホルモン剤（特にタモキシフェン耐性）に対する耐性の獲得を反映する細胞モデルが開発されている。ＭＣＦ７ヒト乳癌細胞における抗エストロゲン剤のタモキシフェンに対する耐性は、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の構成成分の発現および活性化の上昇によって一部媒介されていることが示されている（Ｋｎｏｗｌｄｅｎ等，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００３，１４４，１０３２〜１０４４）。また、ＥＧＦＲのような増殖因子受容体は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達経路の誘導を含むと考えられているメカニズムによって細胞移動を刺激することも示されている（Ｐｒｉｃｅ等，Ｃｅｌｌ．Ｃｏｍｍｕｎ．Ａｄｈｅｓｉｏｎ，２００２，９，８７〜１０２）。癌患者の死亡に影響する最も重要な因子は、それらの腫瘍において浸潤性の表現型を有する癌細胞が発生することである。このような細胞は、インビボでの病気の進行を反映する細胞運動性および侵入の強化を示す。
【００１６】
国際特許出願ＷＯ０１／９４３４１から、所定の５位で置換されたキナゾリン誘導体はＳｒｃキナーゼ阻害活性を有し、乳癌など様々な癌の治療に有用な抗浸潤剤物質であることがわかっている。この化合物、４−（６−クロロ−２，３−メチレンジオキシアニリノ）−７−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エトキシ］−５−テトラヒドロピラン−４−イルオキシキナゾリンは、そこでは実施例１４中の化合物番号７３として開示されている。この化合物は、有力なＳｒｃキナーゼ阻害剤であり、本明細書では、コード番号ＡＺＤ０５３０と識別される。
【００１７】
本発明において、Ｓｒｃキナーゼ活性が増加すると、抗ホルモン耐性細胞の浸潤性の能力の増加を制御する優勢な経路になることが示された。Ｓｒｃキナーゼを阻害すると細胞浸潤の減少が起こることが示されており、このような耐性細胞におけるＳｒｃキナーゼシグナル伝達の重要な役割ことが示唆される。意外なことに、国際特許出願ＷＯ０１／９４３４１、および、ＷＯ０２／１６３５２で述べられている組み合わせ治療の包括的な開示からの特定の選択が、極めて有効であることが発見された。具体的には、抗エストロゲン剤と、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩とを組み合わせることによって、驚くべきことに有効な結果が得られる。より具体的には、抗エストロゲン剤と、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０とを組み合わせることによって、抗エストロゲン剤またはＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０のいずれか単独を投与することによって達成可能な作用よりも大きい作用が得られる。
【００１８】
国際特許出願ＷＯ０１／９４３４１、および、ＷＯ０２／１６３５２では、それらで開示されたＳｒｃキナーゼ阻害剤は、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン）と組み合わせて用いることができるという開示はあるが、抗エストロゲン剤とＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０とを組み合わせた使用という具体的な開示もないし、これらのあらゆる組み合わせによって、驚くべきことに有効な結果が得られるという具体的な開示もない。
【００１９】
本発明によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせが提供される。
【００２０】
当然ながら、用語「組み合わせ」は、組み合わせの構成成分の同時の、連続的な、または、別々の投与を想定している。本発明の一形態において、「組み合わせ」は、抗エストロゲン剤とＳｒｃ阻害剤との同時投与を想定している。本発明のさらなる形態において、「組み合わせ」は、これら物質の連続投与を想定している。本発明のその他の形態において、「組み合わせ」は、これら物質の別々の投与を想定している。これら物質の投与が連続または別々である場合、第二の構成成分の投与を遅らせても、併用療法の相乗効果の利点を失わせるようなことはないと予想される。従って、誤解を避けるために言えば、本発明は、乳癌の相乗的な治療において同時に、連続的または別々に使用するための、または、乳癌の進行の相乗的な遅延において同時に、連続的または別々に使用するための、抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ５０３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせを提供する。
【００２１】
適切な抗エストロゲン剤は、例えば、非ステロイド系抗エストロゲン剤であり、例えばタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン、具体的にはタモキシフェンであるか、または、ステロイド系エストロゲン受容体のダウンレギュレーターであり、例えばフルベストラントである。好ましい抗エストロゲン剤は、タモキシフェン、または、フルベストラントである。より好ましい抗エストロゲン剤は、タモキシフェンである。抗エストロゲン剤のタモキシフェン（また、アストラゼネカ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）の商標名「ノルバデックス（Ｎｏｌｖａｄｅｘ）」としても知られている）は、１−（ｐ−２−ジメチルアミノエトキシフェニル）−１，２−ジフェニルブタ−１−エンのトランス異性体であり、これは、米国特許第４，５３６，５１６号で開示されている。タモキシフェンのその他の名称は、（Ｚ）−２−［ｐ−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］エチルジメチルアミンである。
【００２２】
ステロイド系抗エストロゲン剤のフルベストラント（また、アストラゼネカの商標名「ファスロデックス（Ｆａｓｌｏｄｅｘ）」としても知られており、コード番号はＩＣＩ１８２，７８０である）は、タモキシフェンのような従来の抗エストロゲン剤に関連する部分アゴニスト、エストロゲン様の活性をまったく含まない、有力で純粋な抗エストロゲン剤の第一の新しいクラスである。この化合物は、エストロゲン受容体のダウンレギュレーターとして作用する。フルベストラントは、タモキシフェン治療後に乳癌が進行した女性における臨床試験での有効性がすでに実証されている。フルベストラントの化学名は、７−α−［９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７β−ジオールであり、この化合物は、欧州特許出願番号０１３８５０４の実施例３５および請求項４に記載されている。
【００２３】
加えて、適切な抗エストロゲン剤としては、例えば、非ステロイド系アロマターゼ阻害剤、例えばアナストロゾール、レトロゾール、ファドロゾール、ボロゾール、および、アミノグルテチミド、または、ステロイド系アロマターゼ阻害剤、例えばエキセメスタン、および、１−メチル−１，４−アンドロスタジエン−３、１７−ジオンが挙げられる。好ましい抗エストロゲン剤であるアロマターゼ阻害剤は、アナストロゾール、レトロゾール、または、エキセメスタンである。より好ましい抗エストロゲン剤であるアロマターゼ阻害剤は、アナストロゾール、または、レトロゾールである。例えば、アナストロゾール（また、商標名「アリミデクス」としても知られている）は、活性成分として、化合物２，２’−［５−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルメチル）−１，３−フェニレン］ジ（２−メチル−プロピオニトリル）を有し、これは、米国再発行特許第３６，６１７号で開示されている。アナストロゾールのその他の名称は、２，２’−ジメチル−２，２’−［５−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルメチル）−１，３−フェニレン］ビス（プロピオノニトリル）である。
【００２４】
ＡＺＤ０５３０の適切な製薬上許容できる塩は、例えば、製薬上許容できる酸付加塩であり、例えば無機または有機酸（例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸またはフマル酸）との酸付加塩であり、例えばフマル酸一または二塩である。
【００２５】
上述したように、エストロゲン受容体は肺腫瘍組織で検出されているため、抗エストロゲン剤とＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０とを含む本発明の組み合わせはまた、肺癌の相乗的な治療においても有用であり得る。
【００２６】
本発明の癌治療は抗腫瘍作用を含み、この作用は、従来の手段、例えば奏効率、無増悪期間および／または生存率で評価される。本発明の抗腫瘍作用としては、これらに限定されないが、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖の遅延、腫瘍の縮小、腫瘍の減少、治療の中断中に腫瘍が再増殖するまでの時間の増加、および、病気の進行の遅延が挙げられる。例えば、充実性腫瘍を含む癌の治療が必要な温血動物（例えばヒト）に本発明の組み合わせが投与される場合、この治療によって、例えば、抗腫瘍作用の程度、奏効率、無増悪期間および生存率のうち１またはそれ以上で測定された有益な作用が生じると予想される。
【００２７】
上記で説明されているように、本発明の組み合わせは、乳癌の相乗的な治療または予防において特に有用である。本発明によれば、本組み合わせ治療は、例えば反応の程度、奏効率、無増悪期間または生存期間によって測定したところ、組み合わせの構成成分の治療のうちどちらか一方をその従来の用量で投与することによって達成可能な作用よりも、作用が治療的に優れている場合、相乗効果を生じると定義される。例えば、組み合わせ治療の作用が、抗エストロゲン剤またはＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０単独で達成可能な作用より治療的に優れている場合、その作用は相乗的である。さらに、抗エストロゲン剤またはＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０単独には反応しない（または、反応が弱い）患者群で有益な作用が得られる場合、本組み合わせ治療の作用は相乗的である。加えて、構成成分の一種をその従来の用量で投与し、その他の構成成分を少ない用量で投与し、例えば反応の程度、奏効率、無増悪期間または生存期間を測定したところ、組み合わせの構成成分の治療のいずれか一方を従来の用量で投与した際に達成可能な治療効果と同等か、または、それより優れている治療効果が得られる場合、本組み合わせ治療の作用は相乗効果を生じると定義される。具体的には、反応の程度、奏効率、無増悪期間および生存データの１つまたはそれ以上に不利益がなく、特に反応の持続時間に不利益がなく、ただし、やっかいな副作用が、各構成成分の従来の用量が用いられる場合に生じる副作用よりも少数である、および／または、程度が低い状態で、抗エストロゲン剤またはＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０の従来の用量を少なくすることができる場合、相乗効果があるとみなされる。
【００２８】
本発明の組み合わせ治療剤は、適切な医薬組成物の形態で投与してもよい。本発明のこの形態によれば、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、上記で定義された組み合わせを含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物が提供される。
【００２９】
本明細書で説明される組成物は、経口投与に適した形態、例えば錠剤またはカプセル、非経口での注入（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、血管内または輸液など）、例えば滅菌溶液、懸濁液または乳濁液として、局所投与に適した形態、例えば軟膏またはクリーム、直腸内投与に適した形態、例えば坐剤が可能であり、または、投与経路は、腫瘍への直接の注入、または、局所的送達もしくは局部的送達によるものでもよい。本発明のその他の実施形態において、本組み合わせ治療のＳｒｃキナーゼ阻害剤は、経皮的、静脈内もしくは皮下で送達されてもよいし、または、内視鏡で、または、気管、病巣、腹膜または腫瘍に送達されてもよい。一般的に、本明細書で説明される組成物は、従来の方式で、当業界周知の従来の賦形剤またはキャリアーを用いて製造することもできる。
【００３０】
錠剤に適した製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとしては、例えば、不活性な賦形剤、例えばラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウム、顆粒剤および崩壊剤、例えばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えばゼラチンまたはスターチ；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク；保存剤、例えばエチル、または、４−ヒドロキシ安息香酸プロピル、および、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸が挙げられる。錠剤は、コーティングされていなくてもよいし、または、それらの崩壊、それに続く消化管内での活性成分の吸収を改変するために、または、それらの安定性および／または外観を改善するためにコーティングされていてもよく、いずれの場合も、従来のコーティング剤と当業界周知の手法を用いて施される。
【００３１】
経口で使用するための組成物は、ハードゼラチンカプセルの形態が可能であり、この場合、活性成分は、不活性な固形の賦形剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されており、または、ソフトゼラチンカプセルでもよく、この場合、活性成分は、水または油、例えば落花生油、流動パラフィンまたはオリーブ油と混合される。
【００３２】
本発明の組成物は、有利には、１回投与量で提供される。
抗エストロゲン剤構成成分は、既知の臨床実践に従って投与してもよい。例えば、進行中の乳癌の治療において、タモキシフェンは、毎日の経口用量０．５〜１００ｍｇで用いてもよく、都合のよい形態としては、１日用量５〜３０ｍｇで用いられる。抗エストロゲン性のアロマターゼ阻害剤構成成分が含まれる場合、それらは、既知の臨床実践に従って投与してもよい。例えば、アナストロゾールは、毎日の経口用量０．００５〜２５ｍｇで用いてもよく、都合のよい形態としては用量０．５〜５ｍｇで用いられる。例えば、エキセメスタンは、毎日の経口用量５〜２００ｍｇで用いてもよく、都合のよい形態としては用量１０〜４０ｍｇで用いられる。
【００３３】
フルベストラントが含まれる場合、フルベストラントは、一般的に、有効な非毒性の用量が与えられるように投与されると予想される。用量の大きさは、当然ながら患者への投与経路に応じて様々であると予想される。一般的に、フルベストラントの従来の用量を用いることができる。より具体的には、１日用量は、例えば約１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは約１０ｍｇ〜１ｇ、より好ましくは約１０ｍｇ〜３００ｍｇ（すなわち、約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．２ｍｇ／ｋｇ〜６ｍｇ／ｋｇ体重）の範囲で化合物が投与され、これは、必要に応じて数回に分けた用量で投与される。都合のよい形態としては、フルベストラントの用量は、患者における病気の反応を達成するのに十分な量で投与され、使用可能なフルベストラントの用量は、速攻型の配合物の場合、１〜１５ｍｇ／日（投与経路に応じて）の化合物を投与することができる量、または、持続型の配合物の場合、一ヶ月で２００〜３００ｍｇに匹敵する化合物を投与することができる量を含む。好ましい投与経路は、筋肉注射である。用量は、フルベストラントの血清レベルが５〜２０ｎｇ／ｍｌになるように投与されると予想される。好ましい配合物は、適切な用量のフルベストラント（例えば２５０ｍｇ）を、１０％ｗ／ｖエタノール、１０％ｗ／ｖベンジルアルコールおよび１５％ｗ／ｖ安息香酸ベンジルを含むヒマシ油のサンプル（５ｍｌ）中に溶解することができる。このような配合物は、筋肉注射されて、治療レベルのフルベストラントを約２８日間供給すると予想される。
【００３４】
Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０は、一般的に、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜７５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の１日用量が与えられるように投与されると予想され、これは、必要に応じて数回に分けた用量で投与される。一般的に、非経口経路が用いられる場合、より少ない用量が投与されると予想される。従って、例えば静脈内投与のためには、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量が一般的に用いられると予想される。同様に、吸入法による投与のためには、例えば０．０５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量が用いられると予想される。しかしながら、経口投与が好ましい（特に錠剤の形態で）。一般的に、経口投与のためには、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量が用いられると予想される。特に、例えば０．２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の経口用量が用いられると予想される；より具体的には、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の経口用量が用いられると予想される。典型的には、１回投与量は、約０．５ｍｇ〜０．５ｇのＳｒｃキナーゼ阻害剤を含むと予想され；より具体的には、１回投与量は、約２５ｍｇ〜２５０ｍｇのＳｒｃキナーゼ阻害剤を含むと予想される。
【００３５】
上記で説明された投与量およびスケジュールは、具体的な病状、および、総合的な患者の状態に応じて様々であってよい。例えば、毒性を減少させるために、本組み合わせ治療の構成成分の上述の用量を減少させることが必要であるか、または、望ましい場合がある。用量のスケジューリングは、特定の患者を治療している医師が専門技術と知見を用いて決定することができる。
【００３６】
当然のことながら、本発明に係る医薬組成物としては、抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０、ならびに製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む組成物が挙げられる。都合のよい形態としては、このような組成物は、乳癌の相乗的な治療において同時投与するための、本発明の組み合わせ治療用製品を提供する。
【００３７】
本発明のこの形態によれば、抗エストロゲン剤、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩、および、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物が提供される。
【００３８】
また、本発明に係る医薬組成物としては、抗エストロゲン剤と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第一の組成物、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第二の組成物を含む別々の組成物も挙げられる。都合のよい形態としては、このような組成物は、乳癌の相乗的な治療における連続的または別々の投与のための、本発明の組み合わせ治療剤を提供するが、別々の組成物も同時に投与してもよい。
【００３９】
都合のよい形態としては、本発明のこのような医薬組成物は、抗エストロゲン剤を含む適切な組成物が入った第一の容器、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０を含む適切な組成物が入った第二の容器を含むキットが挙げられる。本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するためのキットが提供され、本キットは、以下を含む：
ａ）第一の１回投与量の、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを共に含む抗エストロゲン剤（例えば、錠剤またはカプセル）；
ｂ）第二の１回投与量の、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを共に含むＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩；および、
ｃ）前記第一および第二の１回投与量を入れるための容器手段。
【００４０】
本発明のさらなる形態によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するための上記で定義された組み合わせが提供される。
本発明のこの形態によれば、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、上記で定義された組み合わせを含む、乳癌の相乗的な治療に使用するための医薬組成物も提供される。
【００４１】
本発明の具体的な驚くべき利点は、本発明の組み合わせで治療することができる乳癌には、これまで抗エストロゲン剤治療で治療されていない患者における乳癌だけでなく、抗エストロゲン剤治療で治療された乳癌であって、このような治療に反応しないか、または、初期はこのような治療で治療可能だったが、その後に耐性になった乳癌も含まれることである。
【００４２】
本発明のさらなる形態によれば、温血動物に投与して乳癌の相乗的な治療を提供するための医薬品の製造における、上記で定義された組み合わせの使用が提供される。
本発明のさらなる形態によれば、温血動物に投与して抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療を提供するための医薬品の製造における、上記で定義された組み合わせの使用が提供される。
【００４３】
本発明のさらなる形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【００４４】
本発明のさらなる形態によれば、抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【００４５】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の有効量の投与の前に、それと同時に、または、その後に、上記で定義された抗エストロゲン剤の有効量を投与することを含む。
【００４６】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された組み合わせの構成成分の有効量を同時に、連続的に、または、別々に投与することを含む。
【００４７】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された抗エストロゲン剤の有効量を投与すること、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の有効量を同時に、連続的に、または、別々に投与することを含む。
【００４８】
本発明はまた、乳癌のホルモンに反応性を有する状態からホルモンに反応性を有さない状態への進行を遅らせることに使用するための、すなわち、ホルモン依存性の非浸潤性の状態からホルモン非依存性のより浸潤性の状態への乳癌細胞の形質転換を阻害するための、抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせに関する。その結果として、本組み合わせは、無増悪期間および生存率に対する有益な作用を有する。
【００４９】
本発明のこの形態によれば、乳癌のホルモンに反応性を有する状態からホルモンに反応性を有さない状態への進行を遅らせることに使用するための、抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせが提供される。
【００５０】
その他の形態において、本発明は、乳房細胞の癌細胞への形質転換を阻害するための本組み合わせの使用に関し、すなわち化合物の組み合わせは、乳癌の化学予防作用を提供する。
【００５１】
閉経前の女性の正常なヒト乳房上皮において、細胞は、標準サイズの核と標準的なクロマチンレベルを有する。悪性腫瘍が発生すると、正常な乳房上皮の外観に一連の変化が起こることがわかっている。正常な上皮組織において、エストロゲンは、正常な増殖を刺激し、プロゲステロン受容体の発現を誘導し、この受容体により、プロゲステロンが乳房上皮細胞の増殖に介在できるようになる。このような上皮細胞の構成的な増殖は、エストロゲン非依存性の基準の細胞が転換することを含む。閉経前の女性において、まず、乳房上皮組織の病気は、一般的に、核の大きさが大きくなり始めて、クロマチンレベルも増加し始めると明らかになる。これらは前癌性変化であり、この段階で、このような状態は、（逆説的に言えば）非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）として知られている。病気が進行し、ＤＣＩＳ細胞が悪性細胞に形質転換するにつれ、それらの細胞の核または核小体は著しく大きくなり、さらにクロマチンレベルが著しく増加する。
【００５２】
我々は、意外なことに、本発明の組み合わせは、形質転換された乳癌細胞の増殖だけでなく、乳房における正常な細胞および良性の異常細胞の構成的な増殖に対しても作用を有することを発見した。それゆえに、本発明の組み合わせは、乳房細胞の悪性形質転換を減少させる、好ましくは阻害するのに用いることができる。本発明の抗エストロゲン剤とＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０との組み合わせは、正常な乳房細胞のＤＣＩＳ状態への形質転換を阻害することができる。また、前記組み合わせも、ＤＣＩＳ細胞の悪性形質転換を阻害することができる。
【００５３】
さらに、本組み合わせは、遺伝学的に乳癌に罹りやすい女性における乳癌の発病を予防することにおいて有益な作用を有すると予想される。
本発明のこの形態によれば、正常な乳房細胞のＤＣＩＳ状態への形質転換を減少させるのに使用するための、好ましくはそれらを阻害するのに使用するための、抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせが提供される。
【００５４】
本発明のこの形態によれば、正常な乳房細胞またはＤＣＩＳ細胞の悪性形質転換を減少させるのに使用するための、好ましくはそれらを阻害するのに使用するための、抗エストロゲン剤、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせも提供される。
【００５５】
上記で定義されたような本発明の組み合わせ治療は、単独治療として投与してもよいし、または、それに加えて、外科手術もしくは放射線治療、または、化学療法剤の投与を含んでいてもよい。
【００５６】
外科手術は、本発明の本組み合わせ治療の投与の前に、その最中に、または、その後に、部分的または完全に腫瘍を切除する工程を含んでいてもよい。
本発明の本組み合わせ治療と必要に応じて用いられる化学療法剤は、例えば以下の治療剤の種類を含んでいてもよい：
（ｉ）内科的腫瘍学で用いられるような抗増殖性／抗新生物薬、およびそれらの組み合わせ（例えば、カルボプラチンおよびシスプラチン）；
（ｉｉ）細胞増殖抑制性剤、例えば増殖因子機能の阻害剤、例えば増殖因子抗体、増殖因子受容体抗体（例えば、抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ、および、抗ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ）、クラスＩ受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、上皮増殖因子ファミリーの阻害剤）、クラスＩＩ受容体チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、インスリン増殖因子ファミリーの阻害剤、例えばＣｈａｋｒａｖａｒｔｉ等，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００２，６２，２００〜２０７によって説明されているＩＧＦ１受容体阻害剤）、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、および、血小板由来増殖因子阻害剤；
（ｉｉｉ）抗血管新生剤、例えば血管内皮増殖因子の作用を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベバシズマブ、および、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＷＯ０１／３２６５１に記載のＺＤ６４７４；実施例２）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＷＯ００／４７２１２に記載のＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（Ｖａｔａｌａｎｉｂ）（ＰＴＫ７８７；ＷＯ９８／３５９８５）、および、ＳＵ１１２４８（ＷＯ０１／６０８１４））；
（ｉｖ）血管に障害を与える物質、例えば国際特許出願ＷＯ９９／０２１６６、ＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４、および、ＷＯ０２／０８２１３で開示された化合物；
（ｖ）生体応答調整物質（例えば、インターフェロン）；および、
（ｖｉ）ビスフォスフォネート、例えばチルドロン酸、イバンドロン酸、インカドロン酸、リセドロン酸、ゾレドロン酸、クロドロン酸、ネリドロン酸、パミドロン酸、および、アレンドロン酸。
【００５７】
例えば、抗エストロゲン剤、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩、および、電離放射線を組み合わせて投与することによって、放射線を行わなかった場合に達成される作用より大きい抗癌作用（例えば抗腫瘍作用）が生じる可能性がある。
【００５８】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物（例えばヒト）に、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の有効量の前に、それと同時に、または、その後に、さらに、電離放射線の有効量の前に、それと同時に、または、その後に、抗エストロゲン剤の有効量を投与することを含む。
【００５９】
電離放射線は、上記で定義された本発明の組み合わせを投与してから１週間より前に、前記温血動物（例えばヒト）に１週間以内で与えてもよい。
放射線治療は、臨床的な放射線治療において既知の慣例に従って投与してもよい。電離放射線の線量は、臨床的な放射線治療に使用するための既知の線量と予想される。用いられる放射線療法は、例えば、γ線、Ｘ線、および／または、放射性同位体からの放射線の定方向からの放射の使用を含むと予想される。また、その他の形態のＤＮＡ損傷因子も本発明に含まれ、例えばマイクロ波、および、ＵＶ放射線照射である。例えば、Ｘ線は、５〜６週間にわたり、１週間のうち５日間、１．８〜２．０Ｇｙの１日線量で投与されてもよい。通常は、分割線量の合計は、４５〜６０Ｇｙの範囲内と予想される。一連の放射線治療の一環として、１回のより大きい線量（例えば５〜１０Ｇｙ）を投与してもよい。手術中に単回線量を投与してもよい。過分割の放射線治療を用いてもよく、それによって、所定期間にわたり定期的に少ないＸ線線量が投与され、例えば、数日にわたり０．１Ｇｙ／時間で投与される。放射性同位体の線量の範囲は、広範囲で様々であり、同位体の半減期、強度および放出される放射線の種類、ならびに細胞による吸収に依存する。
【００６０】
本発明のさらなる形態によれば、乳癌の相乗的な治療を提供するために、電離放射線で治療する予定の温血動物（例えばヒト）に投与するための医薬品の製造における、上記で定義された組み合わせの使用が提供される。
【００６１】
ＥＧＦＲ  ＴＫＩとＳｒｃ阻害剤ＡＺＤ０５３０との組み合わせ
本発明はまた、上皮増殖因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（以下、「ＥＧＦＲ  ＴＫＩ」とする）、および、非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーの特定の阻害剤を含む組み合わせに関する。本発明のこの組み合わせは、癌の治療方法に有用である。
【００６２】
多数のヒト腫瘍においてＥＧＦＲが高いレベルで発現されており、さらに、発現の増加は、患者の病気の進行および予後不良と互いに関係がある可能性があるという、広範囲にわたる証拠がある（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ等，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，１９９４，２９，１１７〜１２５、および、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，２００１，３７，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ４，Ｓ９〜１５）。例えば、ＭＣＦ７ヒト乳癌細胞における抗エストロゲン剤タモキシフェンへの耐性には、部分的に、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の構成成分の発現の上昇と活性化が介在することが示されている（Ｋｎｏｗｌｄｅｎ等，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００３，１４４，１０３２〜１０４４）。また、そこでは、タモキシフェン耐性ＭＣＦ７乳癌細胞の基礎の増殖とＴＧＦαで刺激された増殖はいずれも、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＺＤ１８３９で阻害される可能性があることも示されている。
【００６３】
本発明のこの形態を組み合わせた治療で処置することができる癌としては、食道癌、骨髄腫、肝細胞癌、膵臓癌および子宮頚癌、ユーイング腫瘍、神経芽細胞腫、カポジ肉腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膀胱癌、黒色腫、肺癌［例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）など］、胃癌、頭頚部癌、脳癌、腎臓癌、リンパ腫、ならびに、白血病が挙げられる。より具体的には、本発明のこの組み合わせは、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、ＮＳＣＬＣおよび頭頚部癌の治療において、または、このような癌の進行を遅らせる方法に有用である。
【００６４】
本発明のこの形態によれば、癌（具体的には、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌および頭頚部癌）の相乗的な治療に使用するのに適した、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む組み合わせが提供される。
【００６５】
当然ながら、用語「組み合わせ」は、上述したように、組み合わせの構成成分の同時の、連続的な、または、別々の投与を想定している。
受容体チロシンキナーゼのＥＧＦファミリーのようなクラスＩキナーゼは、前立腺癌のような一般的なヒト上皮癌に高い頻度で存在することわかっている（Ｖｉｓａｋｏｒｐｉ等，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１９９２，２４，４８１）。従って、受容体チロシンキナーゼの阻害剤は、前立腺癌の増殖の選択的な阻害剤として価値があると予想されることが認識されている。
【００６６】
欧州特許出願番号０５６６２２６、および、国際特許出願ＷＯ９６／３３９８０、および、ＷＯ９７／３００３４から、４位にアニリノ置換基を有する所定のキナゾリン誘導体は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害活性を有し、前立腺癌などの癌組織の増殖の阻害剤であることがわかっている。Ｊ  Ｒ  Ｗｏｏｄｂｕｒｎ等のＰｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，３８，６３３、および、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１９９９，８２，２４１〜２５０では、化合物Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（また、ゲフィチニブとしても知られており、および、アストラゼネカの商標名では「イレッサ（Ｉｒｅｓｓａ）」である）開示されており、この化合物は有力なＥＧＦＲ  ＴＫＩであり、以下、コード番号ＺＤ１８３９で識別される。
【００６７】
さらに、国際特許出願ＷＯ９６／３０３４７から、４位にアニリノ置換基を有する構造的に関連する所定のキナゾリン誘導体もまた、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害活性を有することがわかっている。ＷＯ９９／５５６８３では、化合物Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミンまたはその製薬上許容できる塩（コード番号ＣＰ３５８７７４、および、ＯＳＩ−７７４に関連）は、ＥＧＦＲ  ＴＫＩであることが開示されている。この化合物は現在、エルロチニブとして知られており、以下、コード番号ＯＳＩ−７７４で識別される。
【００６８】
さらに、国際特許出願ＷＯ９７／３８９８３から、４位にアニリノ置換基を有する構造的に関連する所定のその他のキナゾリン誘導体もまた、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害活性を有することがわかっている。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，４２，１８０３〜１８１５、および、ＷＯ００／３１０４８では、化合物６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（コード番号ＰＤ１８３８０５、および、ＣＩ１０３３に関連）は、ＥＧＦＲ  ＴＫＩであることが開示されている。この化合物は、以下、コード番号ＣＩ１０３３で識別される）。
【００６９】
さらに、国際特許出願ＷＯ９７／０２２６６から、所定のその他の構造的に関連する複素環式の誘導体もまた、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害活性を有することがわかっている。例えば、化合物４−［（１Ｒ）−１−フェニルエチルアミノ］−６−（４−ヒドロキシフェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（コード番号ＰＫＩ−１６６、ＣＧＰ７５１６６、および、ＣＧＰ５９３２６に関連）は、ＥＧＦＲ  ＴＫＩである。この化合物は、以下、コード番号ＰＫＩ−１６６で識別される。
【００７０】
さらに、欧州特許出願番号０７８７７２２、ならびに、国際特許出願ＷＯ９８／５００３８、ＷＯ９９／０９０１６、および、ＷＯ９９／２４０３７から、４位にアニリノ置換基を有する構造的に関連する所定のその他のキナゾリン誘導体もまた、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害活性を有することがわかっている。例えば、化合物Ｎ−［４−（３−ブロモアニリノ）キナゾリン−６−イル］ブタ−２−インアミド（コード番号ＣＬ−３８７７８５、および、ＥＫＢ−７８５に関連）は、ＥＧＦＲ  ＴＫＩである。この化合物は、以下、コード番号ＣＬ−３８７７８５で識別される。
【００７１】
さらに、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０００，６，１０２４〜１０２８、および、米国特許第６，００２，００８号から、４位にアニリノ置換基を有する所定のその他の構造的に関連するキノリン誘導体もまた、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害活性を有することがわかっている。例えば、化合物４−（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−３−シアノ−６−（４−ジメチルアミノブタ−２（Ｅ）−エンアミド）−７−エトキシキノリン（以下、コード番号ＥＫＢ−５６９で識別される）は、ＥＧＦＲ  ＴＫＩである。
【００７２】
本発明の適切な組み合わせにおいて、ＥＧＦＲ  ＴＫＩは、例えば、ＺＤ１８３９、ＯＳＩ−７７４、ＣＩ１０３３、ＰＫＩ−１６６、ＣＬ−３８７７８５、および、ＥＫＢ−５６９から選択される。好ましくは、本組み合わせのＥＧＦＲ  ＴＫＩ構成成分は、ＺＤ１８３９、または、ＯＳＩ−７７４である。より好ましくは、本組み合わせのＥＧＦＲ  ＴＫＩ構成成分は、ＺＤ１８３９である。
【００７３】
上述したように、ＡＺＤ０５３０の適切な製薬上許容できる塩は、例えば、製薬上許容できる酸付加塩であり、例えば、無機または有機酸（例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸またはフマル酸）との酸付加塩である。本発明のこの形態のＥＧＦＲ  ＴＫＩ構成成分に類似した製薬上許容できる塩を用いてもよい。
【００７４】
上述したように、本発明のＥＧＦＲ  ＴＫＩ、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０を含む組み合わせは、癌の相乗的な治療に有用である。本発明の癌治療は抗腫瘍作用を含み、この作用は、上述したように従来の手段で評価することができる。
【００７５】
本発明の本組み合わせ治療は、上記で説明した基準と類似した基準を用いて、作用が治療的に優れている場合、相乗効果を生じると定義される。
本発明のこの形態による好ましい組み合わせは、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＺＤ１８３９またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む。
【００７６】
さらなる本発明のこの形態による好ましい組み合わせは、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＯＳＩ−７７４またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む。
【００７７】
本発明のこの形態の組み合わせ治療剤は、適切な医薬組成物の形態で投与してもよい。本発明のこの形態によれば、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の組み合わせを含む、癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物が提供される。
【００７８】
本発明のこの形態で説明した組成物は、上述の形態のようなあらゆる適切な形態が可能である。
癌の相乗的な治療に使用するのに適した好ましい医薬組成物は、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＺＤ１８３９またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の組み合わせを含む。
【００７９】
さらなる癌の相乗的な治療に使用するのに適した好ましい医薬組成物は、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＯＳＩ−７７４またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の組み合わせを含む。
【００８０】
ＥＧＦＲ  ＴＫＩ構成成分にとって、経口投与を目的とする錠剤またはカプセル製剤は、一般的に、例えば約２０ｍｇ〜１ｇの活性成分を含むと予想される。ＥＧＦＲ  ＴＫＩがＺＤ１８３９である場合、経口投与には、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇまたは５００ｍｇの活性成分を含む従来の錠剤配合物を用いてもよい。都合のよい形態としては、ＺＤ１８３９の毎日の経口用量は、４０ｍｇより多く、例えば、５０〜７５０ｍｇの範囲、好ましくは１００〜５００ｍｇの範囲、より好ましくは２００〜５００ｍｇの範囲である。ＥＧＦＲ  ＴＫＩがＯＳＩ−７７４である場合、経口投与には、２５ｍｇ、１００ｍｇ、または、１５０ｍｇの活性成分を含む従来の錠剤配合物を用いてもよい。都合のよい形態としては、ＯＳＩ−７７４の毎日の経口用量は、５０〜３００ｍｇの範囲、好ましくは５０〜２００ｍｇの範囲、より好ましくは１００〜１５０ｍｇの範囲である。
【００８１】
Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０ は、一般的に、上述された量および投与経路と類似した量および投与経路を用いて投与されると予想される。
上述した投与量およびスケジュールは、患者の具体的な病状と総合的な状態に従って様々であってよい。例えば、毒性を減少させるために、本組み合わせ治療の構成成分の上述の用量を減少させることが必要であるか、または、望ましい場合がある。用量のスケジューリングは、特定の患者を治療している医師が専門技術と知見を用いて決定することができる。
【００８２】
当然のことながら、本発明に係る医薬組成物としては、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０、および、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む組成物が挙げられる。都合のよい形態としては、このような組成物は、癌の相乗的な治療において同時投与するための、本発明の組み合わせ治療用製品を提供する。
【００８３】
本発明のこの形態によれば、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩、および、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む、癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物が提供される。
【００８４】
また、本発明に係る医薬組成物としては、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第一の組成物、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第二の組成物を含む別々の組成物も挙げられる。都合のよい形態としては、このような組成物は、癌の相乗的な治療において連続的または別々の投与のための、本発明の組み合わせ治療剤を提供するが、別々の組成物も同時に投与してもよい。
【００８５】
都合のよい形態としては、本発明のこのような医薬組成物としては、ＥＧＦＲ  ＴＫＩを含む適切な組成物が入った第一の容器、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０を含む適切な組成物が入った第二の容器を含むキットが挙げられる。本発明のこの形態によれば、癌の相乗的な治療に使用するためのキットが提供され、本キットは、以下を含む：
ａ）第一の１回投与量の、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを共に含むＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩；
ｂ）第二の１回投与量の、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを共に含むＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩；および、
ｃ）前記第一および第二の１回投与量を入れるための容器手段。
【００８６】
本発明のさらなる形態によれば、癌の相乗的な治療に使用するための上記で定義された組み合わせが提供される。
本発明のこの形態によれば、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、上記で定義された組み合わせを含む、癌の相乗的な治療に使用するための医薬組成物も提供される。
【００８７】
本発明の具体的な驚くべき利点は、本発明の組み合わせで治療することができる癌は、これまで増殖因子阻害剤で治療されていない患者における癌だけでなく、増殖因子阻害剤（例えばＥＧＦＲ  ＴＫＩ）で治療されている癌であって、このような治療に反応しないか、または、初期はこのような治療で治療可能だったが、その後に耐性になった癌であってもよい、ということである。
【００８８】
本発明のさらなる形態によれば、温血動物に投与して癌の相乗的な治療を提供するための医薬品の製造における、上記で定義された組み合わせの使用が提供される。
本発明のさらなる形態によれば、温血動物に投与してＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌の治療を提供するための医薬品の製造における、上記で定義された組み合わせの使用が提供される。
【００８９】
本発明のさらなる形態によれば、癌の相乗的な治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【００９０】
本発明のさらなる形態によれば、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌の治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【００９１】
本発明のこの形態によれば、癌（例えば、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌など）の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の有効量の投与の前に、それと同時に、または、その後に、上記で定義されたようなＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩の有効量を投与することを含む。
【００９２】
本発明のこの形態によれば、癌（例えば、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌など）の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された組み合わせの構成成分の有効量を同時に、連続的に、または、別々に投与することを含む。
【００９３】
本発明のこの形態によれば、癌（例えば、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性癌など）の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義されたようなＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩の有効量を投与すること、さらに、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の有効量を同時に、連続的に、または、別々に投与することを含む。
【００９４】
上記で定義されたような本発明の組み合わせ治療は、単独治療として投与してもよいし、または、それに加えて、外科手術もしくは放射線治療、または、上記で定義されたような化学療法剤の投与を含んでいてもよい。
【００９５】
抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ、および、Ｓｒｃ阻害剤ＡＺＤ０５３０の組み合わせ
本発明はまた、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、および、非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーの特定の阻害剤を含む３種の組み合わせに関する。本発明のこの組み合わせ は、癌、特に乳癌の治療方法に有用である。
【００９６】
上述したように、ＭＣＦ７ヒト乳癌細胞における抗エストロゲン剤のタモキシフェンに対する耐性は、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の構成成分の発現および活性化の上昇によって一部媒介されていることが示されている。また、タモキシフェン耐性ＭＣＦ７乳癌細胞の基礎の増殖とＴＧＦαで刺激された増殖はいずれも、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤ＺＤ１８３９で阻害される可能性があることも述べられている。
【００９７】
本発明のこの形態によれば、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した３種の組み合わせが提供される。
【００９８】
当然ながら、用語「組み合わせ」は、上述したように、組み合わせの構成成分の同時の、連続的な、または、別々の投与を想定している。
適切な抗エストロゲン剤は、上記で定義された意味のいずれかである。
【００９９】
適切なＥＧＦＲ  ＴＫＩは、上記で定義された意味のいずれかである。適切な本発明の３種の組み合わせにおいて、ＥＧＦＲ  ＴＫＩは、例えば、ＺＤ１８３９、ＯＳＩ−７７４、ＣＩ１０３３、ＰＫＩ−１６６、ＣＬ−３８７７８５、および、ＥＫＢ−５６９から選択される。好ましくは、３種の組み合わせのＥＧＦＲ  ＴＫＩ構成成分は、ＺＤ１８３９、または、ＯＳＩ−７７４である。より好ましくは、３種の組み合わせのＥＧＦＲ  ＴＫＩ構成成分はＺＤ１８３９である。
【０１００】
上述したように、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ、または、ＡＺＤ０５３０の適切な製薬上許容できる塩は、例えば、製薬上許容できる酸付加塩であり、例えば、無機または有機酸（例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸またはフマル酸）との酸付加塩である。
【０１０１】
上述したように、本発明の３種の組み合わせは、乳癌の相乗的な治療に有用である。本発明の癌治療は抗腫瘍作用を含み、この作用は、上述したように従来の手段で評価することができる。
【０１０２】
本発明の３種の組み合わせの治療は、上記で説明した基準と類似した基準を用いて、作用が治療的に優れている場合、相乗効果を生じると定義される。
本発明のこの形態による好ましい３種の組み合わせは、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＺＤ１８３９またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む。
【０１０３】
さらなる本発明のこの形態による好ましい３種の組み合わせは、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＯＳＩ−７７４またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む。
【０１０４】
また、エストロゲン受容体は肺腫瘍組織でも検出されているため、本発明の３種の組み合わせは、肺癌の相乗的な治療においても有用な可能性もある。
本発明のこの形態の３種の組み合わせは、適切な医薬組成物の形態で投与してもよい。本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物が提供され、本組成物は、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩のの組み合わせを含む。
【０１０５】
本発明のこの形態で説明した組成物 は、上述の形態のようなあらゆる適切な形態が可能である。
乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した好ましい医薬組成物は、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＺＤ１８３９またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の組み合わせを含む。
【０１０６】
さらなる乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した好ましい医薬組成物は、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＯＳＩ−７７４またはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の組み合わせを含む。
【０１０７】
抗エストロゲン剤構成成分、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ構成成分、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０はそれぞれ、一般的に、上述された量および投与経路と類似した量および投与経路を用いて投与されると予想される。
【０１０８】
上述した投与量およびスケジュールは、患者の具体的な病状と総合的な状態に従って様々であってよい。例えば、毒性を減少させるために、本組み合わせ治療の構成成分の上述の用量を減少させることが必要であるか、または、望ましい場合がある。用量のスケジューリングは、特定の患者を治療している医師が専門技術と知見を用いて決定することができる。
【０１０９】
当然のことながら、本発明に係る医薬組成物としては、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０、および、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む組成物が挙げられる。都合のよい形態としては、このような組成物は、乳癌の相乗的な治療において同時投与するための、本発明の組み合わせ治療用製品を提供する。
【０１１０】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するのに適した医薬組成物が提供され、本組成物は、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩、および、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを含む。
【０１１１】
また、本発明のこの形態による医薬組成物としては、抗エストロゲン剤と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第一の組成物、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第二の組成物、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩と製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーとを含む第三の組成物を含む別々の組成物も挙げられる。都合のよい形態としては、このような組成物は、癌の相乗的な治療において連続的または別々の投与のための、本発明の組み合わせ治療剤を提供するが、別々の組成物も同時に投与してもよい。
【０１１２】
都合のよい形態としては、本発明のこのような医薬組成物としては、抗エストロゲン剤を含む適切な組成物が入った第一の容器、ＥＧＦＲ  ＴＫＩを含む適切な組成物が入った第二の容器、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０を含む適切な組成物が入った第三の容器を含むキットが挙げられる。本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するためのキットが提供され、本キットは、以下を含む：
ａ）第一の１回投与量の、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを共に含む抗エストロゲン剤（例えば、錠剤またはカプセル）；
ｂ）第二の１回投与量の、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを共に含むＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩；
ｃ）第三の１回投与量の、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーを共に含むＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩；および、
ｄ）前記第一、第二および、第三の１回投与量を入れるための容器手段。
【０１１３】
また、当然ながら、便宜上、第一の１回投与量で、３種の組み合わせのうちのいずれかの２種の構成成分を一緒にまとめ、第三の構成成分を第二の１回投与量にしてもよい。
本発明のさらなる形態によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するための、上記で定義されたような３種の組み合わせが提供される。
【０１１４】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療に使用するための、製薬上許容できる賦形剤またはキャリアーと共に、上記で定義されたような３種の組み合わせを含む医薬組成物も提供される。
【０１１５】
上述したように、乳癌の内分泌療法に対する耐性は、大きな妨害を生じる。初期は抗ホルモン治療に反応する腫瘍が後になって耐性を生じ、それにより腫瘍の進行が起こる。同様に、ＥＧＦＲ  ＴＫＩを用いた乳癌の治療に対する耐性が生じることもある。抗ホルモン治療（例えばタモキシフェン耐性）、および、ＥＧＦＲ  ＴＫＩを用いた治療の両方に対する乳癌細胞の耐性の獲得を反映するインビトロの細胞モデルが開発されている。現在、タモキシフェン耐性ＭＣＦ７ヒト乳癌細胞の、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＺＤ１８３９に対する耐性は、浸潤性の表現型を有する癌細胞を発達させるＳｒｃキナーゼのシグナル伝達経路の構成成分の発現および活性化の上昇によって一部媒介されていることが示されている。このような細胞は、インビボでの病気の進行を反映する細胞運動性および侵入の強化を示す。
【０１１６】
本発明のこの形態の具体的な驚くべき利点は、本発明の３種の組み合わせで治療することができる乳癌は、これまで抗エストロゲン剤治療またはＥＧＦＲ  ＴＫＩ治療のいずれでも治療されていない患者における乳癌だけでなく、抗エストロゲン剤治療、および、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ治療のいずれか、または、その両方で治療されている乳癌であって、さらにこのような治療に反応しないか、または、初期はこのような治療で治療可能だったが、その後に耐性になった乳癌であってもよい、ということである。
【０１１７】
本発明のさらなる形態によれば、温血動物に投与して乳癌の相乗的な治療を提供するための医薬品の製造における、上記で定義されたような３種の組み合わせの使用が提供される。
【０１１８】
本発明のさらなる形態によれば、温血動物に投与して抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療を提供するための医薬品の製造における、上記で定義されたような３種の組み合わせの使用が提供される。
【０１１９】
本発明のさらなる形態によれば、温血動物に投与してＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性乳癌の治療を提供するための医薬品の製造における、上記で定義されたような３種の組み合わせの使用が提供される。
【０１２０】
本発明のさらなる形態によれば、抗エストロゲン剤治療とＥＧＦＲ  ＴＫＩ治療の両方に耐性である乳癌の治療を提供するための、温血動物に投与するための医薬品の製造における、上記で定義されたような３種の組み合わせの使用が提供される。
【０１２１】
本発明のさらなる形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義されたような３種の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【０１２２】
本発明のさらなる形態によれば、抗エストロゲン剤耐性乳癌の治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義されたような３種の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【０１２３】
本発明のさらなる形態によれば、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性乳癌の治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義されたような３種の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【０１２４】
本発明のさらなる形態によれば、抗エストロゲン剤治療とＥＧＦＲ  ＴＫＩ治療の両方に耐性な乳癌の治療方法が提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義されたような３種の組み合わせの構成成分の有効量を投与することを含む。
【０１２５】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義されたようなＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩の有効量の投与の前に、それと同時に、または、その後に、さらに、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の有効量の投与の前に、それと同時に、または、その後に、抗エストロゲン剤の有効量を投与することを含む。
【０１２６】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義されたような３種の組み合わせの構成成分の有効量を同時に、連続的に、または、別々に投与することを含む。
【０１２７】
本発明のこの形態によれば、乳癌の相乗的な治療方法も提供され、本方法は、このような治療が必要な温血動物に、上記で定義された抗エストロゲン剤の有効量を投与すること、および、上記で定義されたようなＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩の有効量を同時に、連続的に、または、別々に投与すること、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩の有効量を同時に、連続的に、または、別々に投与すること、を含む。
【０１２８】
本発明はまた、乳癌のホルモンに反応性を有する状態からホルモンに反応性を有さない状態への進行を遅らせることに使用するための、すなわち、ホルモン依存性の非浸潤性の状態からホルモン非依存性のより浸潤性の状態への乳癌細胞の形質転換を阻害するための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む３種の組み合わせに関する。その結果として、上記３種の組み合わせは、無増悪期間および生存率に対する有益な作用を有する。
【０１２９】
本発明のこの形態によれば、乳癌のホルモンに反応性を有する状態からホルモンに反応性を有さない状態への進行を遅らせることに使用するための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む３種の組み合わせが提供される。
【０１３０】
その他の形態において、本発明は、乳房細胞の癌細胞への形質転換を阻害するための、上記３種の組み合わせのの使用に関し、すなわち、上記化合物の組み合わせは、乳癌の化学予防作用を提供する。
【０１３１】
我々は、意外なことに、本発明の３種の組み合わせは、形質転換した乳癌細胞の増殖だけでなく、乳房における正常な細胞および良性の異常細胞の構成的な増殖にも作用することを発見した。従って、本発明の３種の組み合わせは、乳房細胞の悪性形質転換を減少させる、好ましくはそれを阻害するのに用いることができる。本発明の抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩ、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０の３種の組み合わせは、正常な乳房細胞のＤＣＩＳ状態への形質転換を阻害することができる。また、前記３種の組み合わせは、ＤＣＩＳ細胞の悪性形質転換を阻害することもできる。
【０１３２】
さらに、上記３種の組み合わせは、遺伝学的に乳癌に罹りやすい女性における乳癌の発病を予防することにおいて有益な作用を有すると予想される。
本発明のこの形態によれば、正常な乳房細胞のＤＣＩＳ状態への形質転換を減少させるのに使用するための、好ましくはそれらを阻害するのに使用するための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む３種の組み合わせが提供される。
【０１３３】
本発明のこの形態によれば、正常な乳房細胞またはＤＣＩＳ細胞の悪性形質転換を減少させるのに使用するための、好ましくはそれらを阻害するのに使用するための、抗エストロゲン剤、ＥＧＦＲ  ＴＫＩまたはその製薬上許容できる塩、および、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０またはその製薬上許容できる塩を含む３種の組み合わせも提供される。
【０１３４】
上記で定義されたような本発明の３種の組み合わせの治療は、単独治療として投与してもよいし、または、それに加えて、外科手術、または、上記で定義されたような放射線治療もしくは化学療法剤の投与を含んでいてもよい。
【０１３５】
生物学試験の手順
抗エストロゲン剤および／またはＥＧＦＲ  ＴＫＩと組み合わせて用いられる場合のＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０の活性を実証するために、以下の試験方法を用いてもよい。
【０１３６】
（ａ）細胞増殖の研究
様々な試験方法が、Ｋｎｏｗｌｄｅｎ等，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００３，１４４，１０３２〜１０４４で説明されており、この方法は、以下の１またはそれ以上を含む：
（ｉ）タモキシフェン反応性「野生型」ＭＣＦ７ヒト乳癌細胞；
（ｉｉ）このようなＭＣＦ７乳癌細胞の、内分泌に悲感受性の変異体（「Ｔａｍ−Ｒ」（タモキシフェン耐性）と命名）；および、
（ｉｉｉ）このような「ＴＡＭ−Ｒ」細胞の、同様にＥＧＦＲ  ＴＫＩ  ＺＤ１８３９を用いた治療に悲感受性の変異体（「Ｔａｍ／ＴＫＩ−Ｒ」と命名）。
【０１３７】
タモキシフェン反応性「野生型」ＭＣＦ７乳癌細胞を、慣例的手順で、５％ウシ胎仔血清＋ペニシリン（１０ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１０μｇ／ｍｌ）、および、フンギソン（２．５μｇ／ｍｌ）が追加されたフェノールレッド非含有ＲＰＭＩ培地中で培養した。培養液を、５％ＣＯ２を含む加湿した雰囲気中で、３７℃に維持した。以下で説明する分析実験解析で用いる場合、この細胞を、５％活性炭処理したステロイドフリーのウシ胎仔血清、上述したような抗生物質、および、グルタミン（２００ｍＭ）が追加されたフェノールレッド非含有ＲＰＭＩ培地中で維持した。
【０１３８】
「Ｔａｍ−Ｒ」ＭＣＦ７乳癌細胞を、５％活性炭処理したステロイドフリーのウシ胎仔血清、上述したような抗生物質、グルタミン（２００ｍＭ）、および、４−ヒドロキシタモキシフェン（１０−７Ｍ，エタノール中）が追加されたフェノールレッド非含有ＲＰＭＩ培地中で維持した。
【０１３９】
「Ｔａｍ−Ｒ」ＭＣＦ７乳癌細胞をＺＤ１８３９（１０−６Ｍ）に１２ヶ月間連続曝露して、「Ｔａｍ／ＴＫＩ−Ｒ」ＭＣＦ７乳癌細胞を得た。
ヌンク（Ｎｕｎｃ，ロスキレ，デンマーク）の組織培養プラスチック製品を用いた。
【０１４０】
上述の組み合わせの個々の構成成分の濃度を高めながら、または、その組み合わせそのものの存在下で、血清の増殖因子非含有のＤＣＣＭ培地中で細胞単層を７日間増殖させた。細胞群個体群の増殖を、細胞単層におけるトリプシンの分散液によって評価し、さらに、ベックマン・コールターの計数器（ベックマン・コールター社（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，ルートン，英国）より入手可能）を用いて細胞数を測定した。全ての細胞増殖実験を三連で行った。
【０１４１】
（ｂ）細胞運動性の経時的解析
６ウェルの組織培養プレートで細胞を培養し、対数増殖期に到達させた。プレートを倒立顕微鏡の加熱した台に移し、細胞運動性解析中に培地中のｐＨ変化を最小化するために、細胞培養にミネラルオイルを載せた。時間経過のビデオ記録システムに連結したビデオカメラを用いて、６時間にわたり細胞運動性を記録した。細胞運動の量を測るため、ビデオ再生の際に１０分間のインターバルで画像を撮り、オプティマス（Ｏｐｔｉｍａｓ）の画像解析ソフトウェア（メディア・サイバーネティックスＵＫ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ  ＵＫ，フィンチャンプステッド（Ｆｉｎｃｈａｍｐｓｔｅａｄ），バークシャー，英国））を用いて少なくとも１０個の別個の細胞の運動を追跡した。細胞運動を、細胞の位置（ｘ位対ｙ位）、または、時間の関数として移動した総合距離（μｍ）のいずれかでプロットした。方向性のある細胞運動性の持久性を決定するために、細胞の軌道を、全ての軌道が原点からスタートするようにしてプロットした。
【０１４２】
（ｃ）創傷治癒の分析
対数増殖期細胞を回収し、２４ウェルの細胞培養プレートで平板培養した。単層培養を確立した後、ピペットチップを用いて手動で引掻くことによって細胞を傷つけ、リン酸緩衝血清（ＰＢＳ）で洗浄した。適切な増殖因子、阻害化合物（または、阻害化合物の組み合わせ）を含む新しい培地を添加した。３６時間後、細胞を４％ホルムアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレット（０．５％，ＰＢＳ中）で染色し、創傷を倍率２０倍で撮影した。創傷治癒の比率が計算できるように、いくつかのウェルを固定し、傷を付けた後（ｔ＝０時間のタイムポイント）に直接染色した。
【０１４３】
（ｄ）フィブロネクチンによる細胞移動分析
トランスウェル（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ）チャンバー（直径６．５ｍｍ，孔径８．０μｍ，コースター社（Ｃｏｓｔａｒ  Ｉｎｃ．，ケンブリッジ，マサチューセッツ州，米国）製）のポリカーボネート製フィルター膜の膜の裏面を、無血清ＲＰＭＩ中の５０μｇ／ｍｌフィブロネクチンで３７℃で２時間被覆した。このポリカーボネート膜をＰＢＳで１回リンスした。細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩに５×１０５細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。細胞のアリコート（１００μｌ；５×１０４細胞）を、５００μｌの実験用培地が添加された各ウェルにシーディングした。コントロール実験において、細胞を膜の裏面に向かって２０時間移動させた。試験用の実験において、適切な濃度の阻害化合物（または、阻害化合物の組み合わせ）を添加し、細胞を膜の裏面に向かって２０時間移動させた。膜の表側に残った非移動性の細胞を綿棒で除去し、膜の裏面に付着した移動性の細胞を４％ホルムアルデヒド中で固定し、０．５％クリスタルバイオレットで周囲温度で１０分間染色した。
移動した細胞の数を倒立顕微鏡を２０倍で用いて計数した。
【０１４４】
（ｅ）細胞浸潤の分析
乳癌細胞の浸潤性を研究するために、Ｈｉｓｃｏｘ等（Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，２０００，５９，２４５〜２５４）によって以前に説明されている方法の改変法を用いた。
【０１４５】
トランスウェルポリカーボネート製フィルター膜のインサート（直径６．５ｍｍ、孔径８μｍ，コースター社製）を２４ウェルの組織培養プレート中におき、滅菌組織培養フード中で、マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）（０．４μｇ／ｍｌ）で周囲温度で一晩コーティングした。無血清ＲＰＭＩでウェルを３７℃で１時間再水和させた後、適切な濃度の阻害化合物（または、阻害化合物の組み合わせ）と共に、またはそれらを含まないで、細胞を膜インサート上に５×１０４細胞／ウェルでシーディングし、膜インサートが浸るように６００μｌの培地を添加した。このウェルを３７℃で７２時間培養し、その後、綿棒でウェル内部から非浸潤性の細胞とマトリゲルを除去した。膜の裏面に浸潤した細胞を４％ホルムアルデヒドで固定し、多孔質膜を、メスの刃を用いて浸潤したチャンバーから除去し、核染色剤のＤＡＰＩを含むガラス製の顕微鏡スライドにマウントした（モレキュラープローブス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，ユージーン，オレゴン州，米国）製のベクタシールド（Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ）を用いて）。蛍光顕微鏡で、１つの膜あたり５分割した視野を倍率２倍で観察することによって細胞浸潤を定量し、各視野の細胞数を計数した。データを、１つの視野あたり平均細胞数±ＳＥＭ、または、コントロールに対する浸潤の比率のいずれかとしてプロットした。
【０１４６】
（ｆ）細胞の結合の分析
９６ウェルプレートのウェルを、マトリゲル（５０μｇ／ウェル）でコーティングし、滅菌組織培養フード中で一晩風乾させた。対数増殖期細胞を回収し、適切な濃度の阻害化合物（または、阻害化合物の組み合わせ）を含む培地中で２×１０５細胞／ｍｌの濃度に調節した。細胞のアリコート（２×１０４細胞）を、各ウェルにシーディングし、このプレートを３７℃で３０分間インキュベートした。ウェルをＰＢＳで２回洗浄し、未結合の細胞を除去し、その後、各ウェルに１５０μｌのＭＴＴ溶液（０．５ｍｇ／ｍｌ，無血清培地中）を添加した。プレートを３７℃でさらに４時間インキュベートし、細胞内でテトラゾリウム結晶を成長させた。ウェルからＭＴＴ溶液を除去し、色素を１０％ＴＸ−１００溶液を用いて４℃で一晩抽出した。５４０ｎｍフィルターを備えたタイターテック（Ｔｉｔｅｒｔｅｃｋ）のマルチスキャンＥＬ１ＳＡプレートリーダー（フロー・ラボラトリーズ（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ），英国）で吸光度を測定した。処置に反応した細胞の結合を、コントロール（未処理）ウェル中に付着した細胞に対する比率として計算した。
【０１４７】
（ｇ）インビトロでのｃ−ＳｒｃでトランスフェクションされたＮＩＨ３Ｔ３（ｃ−ｓｒｃ３Ｔ３）線維芽細胞増殖の分析
この分析では、ヒトｃ−Ｓｒｃの活性化した突然変異体（Ｙ５３０Ｆ）で安定してトランスフェクションされた、国立保険研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ｈｅａｌｔｈ，ＮＴＨ）のマウス３Ｔ３線維芽細胞の増殖を阻害する、試験化合物（または、試験化合物の組み合わせ）の能力が測定された。
【０１４８】
Ｓｈａｌｌｏｗａｙ等，Ｃｅｌｌ，１９８７，４９，６５〜７３で説明されている手法と類似の手順を用いて、ＮＩＨ３Ｔ３細胞を、ヒトｃ−Ｓｒｃの活性化した突然変異体（Ｙ５３０Ｆ）でトランスフェクションした。それぞれダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；シグマ（Ｓｉｇｍａ））＋０．５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭグルタミン、１００ユニット／ｍｌペニシリン、および、Ｏ．１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（０．９％塩化ナトリウム水溶液中）を含む分析培地を含む９６ウェルの組織培養処理した透明な分析プレート（コースター）に、得られたｃ−Ｓｒｃ３Ｔ３細胞をウェルあたり１．５×１０４細胞で典型的にシーディングした。プレートを、加湿した（７．５％ＣＯ２：９５％空気）インキュベーター中で、３７℃で一晩インキュベートした。
【０１４９】
試験化合物をＤＭＳＯに溶解させて、１０ｍＭストック溶液を形成した。ストック溶液のアリコートを上述のＤＭＥＭ培地で希釈し、適切なウェルに添加した。連続希釈液を作製して、各種の試験濃度を得た。各プレートに試験化合物が添加されていないコントロールウェルを設置した。加湿した（７．５％ＣＯ２：９５％空気）インキュベーター中で、プレートを３７℃で一晩インキュベートした。
【０１５０】
ＢｒｄＵ標識試薬（ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ），カタログ番号６４７２２９）を、０．５％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地で１：１００の比率に希釈し、アリコート（２０μｌ）を、各ウェルに添加して、最終濃度１０μＭを得た。プレートを３７℃で２時間インキュベートした。培地をデカントした。変性溶液（ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液，ベーリンガー・マンハイム，カタログ番号６４７２２９；５０μｌ）を、各ウェルに添加し、プレートをプレート振盪機上に周囲温度で４５分間置いた。上清をデカントし、ウェルをＰＢＳ（２００μｌ／ウェル）で洗浄した。抗ＢｒｄＵ−ペルオキシダーゼ溶液（ベーリンガー・マンハイム，カタログ番号６４７２２９）を、１％ＢＳＡ、および、０．０２５％乾燥スキムミルク（マーベル（Ｍａｒｖｅｌ）（登録商標）、プレミア・ビバレッジズ（Ｐｒｅｍｉｅｒ  Ｂｅｖｅｒａｇｅｓ，スタフォード，英国））を含むＰＢＳで１：１００の比率に希釈し、得られた溶液のアリコート（１００μｌ）を、各ウェルに添加した。プレートをプレート振盪機上に周囲温度で９０分間置いた。ウェルをＰＢＳで洗浄し（×５）、結合していない抗体の結合体を確実に除去した。プレートをブロットして乾燥させ、テトラメチルベンジジン基質溶液（ベーリンガー・マンハイム，カタログ番号６４７２２９；１００μｌ）を各ウェルに添加した。プレートをプレート振盪機上で穏やかに揺らし、その間、１０〜２０分間で発色させた。ウェルの吸光度を６９０ｎｍで測定した。各試験化合物（または、試験化合物の組み合わせ）の各種濃度での細胞増殖の阻害の程度を測定し、抗血管増殖性のＩＣ５０値を得た。
【０１５１】
（ｈ）インビトロでの微小液滴の移動分析
この分析では、試験化合物（または、試験化合物の組み合わせ）の哺乳動物の付着細胞系（例えばヒト腫瘍細胞Ａ５４９系）の移動を阻害する能力を測定した。
【０１５２】
１０％ＦＣＳ、１％Ｌ−グルタミン、および、０．３％アガロース（ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）カタログ番号０１４２−０１）を含むＲＰＭＥ培地（シグマ）を、水浴中で３７℃に温めた。２％ストック寒天水溶液をオートクレーブし、４２℃で保存した。この寒天溶液のアリコート（１．５ｍｌ）を、使用直前にＲＰＭＩ培地（１０ｍｌ）に添加した。この培地に、Ａ５４９細胞（登録番号ＡＴＣＣ  ＣＣＬ１８５）を２×１０７細胞／ｍｌの濃度で懸濁し、３７℃の温度で維持した。
【０１５３】
細胞／アガロース混合物の液滴（２μｌ）を、ピペットで、多数の９６ウェルの平底の組織培養処理されていないマイクロタイタープレート（ビビィ・ステライリン（Ｂｉｂｂｙ  Ｓｔｅｒｉｌｉｎ），カタログ番号６４２０００）の各ウェルの中心に移した。アガロースを含む液滴のゲル化を速めるために、プレートを短時間氷上に置いた。４℃に冷却した培地のアリコート（９０μｌ）を、微小液滴を乱さないよう気をつけながら各ウェルに移した。試験化合物を、上述のように、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストック溶液からＲＰＭＩ培地を用いて希釈した。再度、希釈した試験化合物のアリコート（１０μｌ）を、微小液滴を乱さないよう気をつけながらウェルに移した。プレートを、加湿した（７．５％ＣＯ２：９５％空気）インキュベーター中で３７℃で約４８時間インキュベートした。
【０１５４】
移動を視覚的に評価し、裏から寒天液滴の端への移動距離を測定した。移動阻害ＩＣ５０を、試験化合物濃度に対して平均の移動測定値をプロットすることにより得た。
（ｉ）インビボでの異種移植片の増殖分析
この試験では、本発明の組み合わせ製品の、無胸腺ヌードマウスで腫瘍として増殖させたヒトおよび／またはマウス癌腫の増殖を阻害する能力を測定した。注入に適した癌細胞としては、ヒトＭＣＦ７乳癌細胞（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１ユニバーシティ・ブルバード，マナサス，バージニア州２０１１０−２２０９）より入手可能；カタログ番号ＨＴＢ−２２）、ｃ−Ｓｒｃでトランスフェクションされたマウス３Ｔ３線維芽細胞の癌細胞（Ｓｈａｌｌｏｗａｙ等，Ｃｅｌｌ，１９８７，４９，６５〜７３で説明されている手順と類似の手順で、ヒトｃ−Ｓｒｃの活性化した突然変異体（Ｙ５３０Ｆ）でトランスフェクションした）、ヒトＬｏＶｏ結腸直腸癌細胞（ヨーロピアン・コレクション・オブ・セルカルチャーズ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ，ＥＣＡＣＣ，ＣＡＭＲ，ソールズベリー，ウィルトシャー州，ＳＰ４０ＪＧ，英国）より入手可能；カタログ番号ＣＣＬ２２９）、ヒトＣａＬｕ−６肺癌細胞（ＡＴＣＣカタログ番号ＨＴＢ−５６）、および、ヒトＡ５４９ＮＳＣＬＣ癌細胞（ＡＴＣＣカタログ番号ＣＣＬ１８５）が挙げられる。
【０１５５】
マトリゲル（ベクトン・ディッキンソン（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ），カタログ番号４０２３４）、および、イーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ；ギブコ，カタログ番号２１０９０−０２２）の１：１の混合物０．１ｍｌ中の、総数約１×１０６個のヒト癌細胞を、各試験マウスのわき腹に皮下注射し、得られた腫瘍を約１０日間増殖させた。ほぼ同じ平均腫瘍体積のコントロール群と治療群を提供するために、動物を選択した。各組み合わせ製品を、１％ポリソルベート−８０基材（体重１０ｇあたり０．１ｍｌ，適切な試験用量で）中でボールミル粉砕した懸濁液として製造し、１０日目から開始して約２８日間、１日１回経口投与した。腫瘍の大きさをキャリパーを用いて週２回測定し、理論上の体積を計算した。腫瘍増殖に対する作用を評価した。
【０１５６】
一般的に、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０が単独で用いられる場合に示される活性は、上記試験の１種またはそれ以上で、以下の濃度または用量で実証することができた：
試験（ａ）：例えば０．１〜５μＭの範囲でのＩＣ５０；
試験（ｂ）：例えば０．１〜１μＭの範囲でのＩＣ５０；
試験（ｄ）：約０．１μＭの「Ｔａｍ−Ｒ」細胞に対するＩＣ５０；
試験（ｅ）：約０．１μＭの「Ｔａｍ−Ｒ」細胞に対するＩＣ５０；
試験（ｆ）：例えば０．１〜１μＭの範囲でのＩＣ５０；
試験（ｇ）：例えば０．１〜５μＭの範囲の活性；
試験（ｈ）：例えば０．１〜５μＭの範囲の活性；
試験（ｉ）：例えば１〜２００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の活性。
【０１５７】
一般的に、上記試験の１種またはそれ以上で、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０が、抗エストロゲン剤および／またはＥＧＦＲ  ＴＫＩと組み合わせて用いられる場合、活性の増加は、ＡＺＤ０５３０単独で用いた場合に観察された活性と比較して実証することができる。あるいは、抗エストロゲン剤および／またはＥＧＦＲ  ＴＫＩと組み合わせて用いられる場合にＳｒｃキナーゼ阻害剤ＡＺＤ０５３０が有する活性は、上記試験の１種またはそれ以上で、より低い濃度または用量で実証することができる。
【０１５８】
例えば、ＡＺＤ０５３０（０．１μＭ）と、ＺＤ１８３９（１μＭ）との組み合わせが「Ｔａｍ−Ｒ」細胞に用いられる場合、以下の活性を実証することができた：
試験（ｄ）：およそＩＣ７０の作用；
試験（ｅ）：およそＩＣ７０の作用；および、
ＡＺＤ０５３０（１μＭ）とＺＤ１８３９（１μＭ）との組み合わせが「Ｔａｍ−Ｒ」細胞に用いられる場合、以下の活性を実証することができた：
試験（ｄ）：およそＩＣ８５の作用；
試験（ｅ）：およそＩＣ７５の作用。
【国際調査報告】
2008501006.tif 000002
2008501006.tif 000003
2008501006.tif 000004
2008501006.tif 000005