(57)【要約】  本発明は、請求項１に記載の、Ｒ１〜Ｒ４、Ｘ、Ｙ及びｎの定義を有する式Ｉの新規なカリウムチャンネル調節剤、並びに医薬組成物の調製におけるその使用に関する。本発明はさらに、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害、特に呼吸器系疾患、てんかん、けいれん、血管けいれん、冠動脈攣縮、腎機能異常、多発性嚢胞腎、膀胱けいれん、尿失禁、膀胱流出障害、過敏性腸症候群、胃腸障害、分泌性下痢、虚血、脳虚血、虚血性心疾患、狭心症、冠状動脈性心臓病、外傷性脳損傷、精神病、統合失調症、不安神経症、うつ病、認知症、記憶障害及び注意欠陥、アルツハイマー病、月経困難症、ナルコレプシー、レイノー病、間欠性跛行、シェーグレン症候群、片頭痛、不整脈、高血圧症、欠神発作、筋硬直性筋肉異栄養、口腔乾燥症、ＩＩ型糖尿病、高インスリン血症、早期分娩、禿頭症、がん、免疫抑制又は疼痛を治療又は緩和するのに有用な医薬組成物を目的とする。
2008534472.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉのピラゾリル−ピリミジン誘導体、
【化１】
2008534472.tif 000005
異性体若しくはその異性体の混合物、そのＮ−オキシド、そのプロドラッグ又は薬剤として許容されるその塩
（式中、
ｎは０、１、２又は３であり、
ＸはＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、
Ｒ’は水素、アルキル、特にメチル又はエチル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表すか、
又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、前記複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されており、
Ｙはアルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、アルケニル、フェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、テトラヒドロ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル又はキノリニルを表し、前記フェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル及びキノリニル基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、メチレンジオキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、フェニル及びモルホリニルからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよいか、
又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｙは、Ｒ’及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、前記複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されており、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は互いに独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシ−カルボニル、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及び／又はアミノを表す）。
【請求項２】
ｎが０、１、２又は３である、請求項１に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項３】
ＸがＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、
Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表すか、又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、前記複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されている、請求項１又は２に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項４】
ＸがＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、
Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表す、請求項１又は２に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項５】
ｎが０であり、
ＸがＮＲ’であり、但し、
Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、前記複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されている、請求項１又は２に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項６】
Ｙがアルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、アルケニル、フェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、テトラヒドロピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル又はキノリニルを表し、前記フェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル及びキノリニル基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、メチレンジオキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、フェニル及びモルホリニルからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよい、請求項１から５までのいずれか一項に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項７】
Ｙがアルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルケニル、フェニル、ベンジル又はナフチルを表し、前記フェニル、ベンジル及びナフチル基は、アルキル、ハロ、ハロアルキル及びアルコキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよい、請求項６に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項８】
Ｙがフェニル、ベンジル又はナフチルを表し、前記フェニル、ベンジル及びナフチル基は、メチル、フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル及びメトキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよい、請求項６に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項９】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が互いに独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシ−カルボニル、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及び／又はアミノを表す、請求項１から８までのいずれか一項に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項１０】
ｎが０であり、
ＸがＮＨであり、
Ｙがアルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、ヒドロキシ−アルキル、フェニル、ベンジル又はナフチルを表し、
Ｒ１及びＲ２がメチルを表し、
Ｒ３が水素、メチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ４が水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、エトキシカルボニル及び／又はシアノを表す
請求項１に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項１１】
ｎが０であり、
ＸがＮＨであり、
Ｙがフェニル又はベンジルを表し、前記フェニル及びベンジル基はアルキル、ハロ、ハロアルキル及びアルコキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよく、
Ｒ１及びＲ２がメチルを表し、
Ｒ３が水素、メチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ４が水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、エトキシカルボニル又はシアノを表す、請求項１に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項１２】
ベンジル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
シクロペンチル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ジエチル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−フェニル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン；
（３，４−ジクロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ナフタレン−２−イル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
シクロヘキシル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン；
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−ブロモ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン；
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−５−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−ブロモ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン；又は
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
又は薬剤として許容されるその塩である、請求項１に記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体。
【請求項１３】
少なくとも１種の薬剤として許容される担体又は希釈剤と一緒に、請求項１から１２までのいずれかに記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体若しくは薬剤として許容されるその付加塩、又はそのプロドラッグを治療有効量で含む医薬組成物。
【請求項１４】
ヒトを含む哺乳動物の疾患、障害又は状態を、治療、予防又は緩和する医薬品を製造するための請求項１から１２までのいずれかに記載の化合物の使用であって、前記疾患、障害又は状態がカリウムチャンネルの活性に付随する使用。
【請求項１５】
カリウムチャンネルの活性に付随する前記疾患又は障害が、呼吸器系疾患、てんかん、発作、欠神発作、けいれん、血管けいれん、冠動脈攣縮、腎機能異常、多発性嚢胞腎、膀胱けいれん、尿失禁、膀胱流出障害、過敏性腸症候群、胃腸障害、分泌性下痢、虚血、脳虚血、虚血性心疾患、狭心症、冠状動脈性心臓病、外傷性脳損傷、精神病、統合失調症、不安神経症、うつ病、認知症、記憶障害及び注意欠陥、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、月経困難症、ナルコレプシー、レイノー病、間欠性跛行、シェーグレン症候群、片頭痛、不整脈、高血圧症、欠神発作、筋硬直性筋肉異栄養、口腔乾燥症、ＩＩ型糖尿病、高インスリン血症、早期分娩、禿頭症、がん、免疫抑制又は疼痛である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
カリウムチャンネルの活性に付随する前記疾患又は障害が、呼吸器系疾患、尿失禁、不安神経症、てんかん、精神病、統合失調症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又は疼痛である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
前記カリウムチャンネルの活性が呼吸器系疾患、特にぜんそく、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）又は鼻漏である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１８】
ヒトを含む動物生体の疾患、障害又は状態を治療、予防又は緩和する方法であって、前記疾患、障害又は状態がカリウムチャンネルの調節に応答し、前記方法がそれを必要とするヒトを含む動物生体に、請求項１から１２までのいずれかに記載のピラゾリル−ピリミジン誘導体を治療有効量で投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なカリウムチャンネル調節剤、及び医薬組成物の調製におけるその使用に関する。
【０００２】
本発明はさらに、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害、特に呼吸器系疾患、てんかん、けいれん、発作、欠神発作、血管けいれん、冠動脈攣縮、腎機能異常、多発性嚢胞腎、膀胱けいれん、尿失禁、膀胱流出障害、勃起障害、胃腸障害、分泌性下痢、虚血、脳虚血、虚血性心疾患、狭心症、冠状動脈性心臓病、運動失調、外傷性脳損傷、パーキンソン病、双極性障害、精神病、統合失調症、不安神経症、うつ病、気分障害、認知症、記憶障害及び注意欠陥、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、月経困難症、ナルコレプシー、レイノー病、間欠性跛行、シェーグレン症候群、不整脈、高血圧症、筋硬直性筋肉異栄養、痙縮、口腔乾燥症、ＩＩ型糖尿病、高インスリン血症、早期分娩、禿頭症、がん、過敏性腸症候群、免疫抑制、片頭痛又は疼痛の治療又は緩和に有用な医薬組成物を目的とする。
【背景技術】
【０００３】
イオンチャンネルは、細胞膜を通過する無機イオンの輸送の触媒作用をする膜貫通タンパクである。イオンチャンネルは、活動電位の生成及びタイミング、シナプス伝達、ホルモンの分泌、筋肉の収縮等の様々なプロセスにおいて関与している。
【０００４】
すべての哺乳類の細胞は、その細胞膜でカリウム（Ｋ＋）チャンネルを発現し、そのチャンネルは膜電位の調節において主要な役割を果たす。これらは、神経細胞及び筋肉細胞において活動電位の周波数及び形態、神経伝達物質の放出、並びに気管支及び血管の拡張の度合いを調節する。
【０００５】
分子の観点から、Ｋ＋チャンネルは、最も大きく且つ最も多様なイオンチャンネルのグループを代表する。総括的には、これらは５つの大きなサブファミリーに区分することができる。すなわち、電圧活性化Ｋ＋チャンネル（Ｋｖ）、長いＱＴに関連したＫ＋チャンネル（ＫｖＬＱＴ）、内向き整流（ＫＩＲ）、２ポア（ｔｗｏ−ｐｏｒｅ）Ｋ＋チャンネル（ＫＴＰ）及びカルシウム活性化Ｋ＋チャンネル（Ｋｃａ）である。
【０００６】
後者のグループ、Ｃａ２＋活性化Ｋ＋チャンネルは、３つの明確なサブタイプ：ＳＫチャンネル、ＩＫチャンネル及びＢＫチャンネルからなる。ＳＫ、ＩＫ及びＢＫは単一チャンネルコンダクタンス（小、中位及び大コンダクタンスＫチャンネル）を指す。ＳＫ、ＩＫ及びＢＫチャンネルは、例えば、電圧及びカルシウム感受性、薬理、分布及び機能に違いを示す。
【０００７】
ＳＫチャンネルは多くの中枢ニューロンや神経節中に存在し、そこでの主要な機能は、てんかん誘発活性が長く続いて起こるのを阻止するために、１つ又は複数の活動電位に続いて、神経細胞を過分極化することである。ＳＫチャンネルは、骨格筋、腺細胞、肝細胞及びＴ−リンパ球を含むいくつかの末梢細胞中にも存在する。正常な骨格筋におけるＳＫチャンネルの重要性ははっきりしていないが、麻痺した筋肉中でその数は著しく増大し、筋硬直性筋肉異栄養を有する患者の筋肉中のＳＫチャンネルの数が多いことは、疾患の発症における役割を示唆している。
【０００８】
研究によれば、Ｋ＋チャンネルは、ぜんそく、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患及び鼻漏、けいれん、血管けいれん、冠動脈攣縮、腎機能異常、多発性嚢胞腎、膀胱けいれん、尿失禁、膀胱流出障害、過敏性腸症候群、胃腸障害、分泌性下痢、虚血、脳虚血、虚血性心疾患、狭心症、冠状動脈性心臓病、外傷性脳損傷、精神病、不安神経症、うつ病、認知症、記憶障害及び注意欠陥、アルツハイマー病、月経困難症、ナルコレプシー、レイノー病、間欠性跛行、シェーグレン症候群、片頭痛、不整脈、高血圧症、欠神発作、筋硬直性筋肉異栄養、口腔乾燥症、ＩＩ型糖尿病、高インスリン血症、早期分娩、禿頭症、がん及び免疫抑制を含む多くの疾患の治療における治療標的であることが示されている。
【０００９】
米国特許第６５５９３０７号は、置換されたピリミジンを調製するための改善された方法を記載している。しかし、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は開示されておらず、カリウムチャンネル調節因子としてのその活性は全く提案されていない。
【００１０】
ＷＯ９７／１９０６５は、プロテインキナーゼ阻害剤として有用な置換された２−アニリノピリミジンを記載している。しかし、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は開示されておらず、カリウムチャンネル調節因子としてのその活性は全く提案されていない。
【００１１】
ＷＯ２００１／２９００９は、プロテインキナーゼ阻害剤として有用な４，５−置換アニリノピリミジンを記載している。しかし、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は開示されておらず、カリウムチャンネル調節因子としてのその活性は全く提案されていない。
【００１２】
ＷＯ２００３／０７５８２８は、式ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩの化合物を含む、がんの治療に有用な種々の化合物を記載している。しかし、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は開示されておらず、カリウムチャンネル調節因子としてのその活性は全く提案されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、ＳＫチャンネル又はＳＫチャンネルのサブタイプを選択的に調節することができる新規な化合物を提供することである。
【００１４】
さらに本発明は、呼吸器系疾患、てんかん、けいれん、発作、欠神発作、血管けいれん、冠動脈攣縮、腎機能異常、多発性嚢胞腎、膀胱けいれん、尿失禁、膀胱流出障害、勃起障害、胃腸障害、分泌性下痢、虚血、脳虚血、虚血性心疾患、狭心症、冠状動脈性心臓病、運動失調、外傷性脳損傷、パーキンソン病、双極性障害、精神病、統合失調症、不安神経症、うつ病、気分障害、認知症、記憶障害及び注意欠陥、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、月経困難症、ナルコレプシー、レイノー病、間欠性跛行、シェーグレン症候群、不整脈、高血圧症、筋硬直性筋肉異栄養、痙縮、口腔乾燥症、ＩＩ型糖尿病、高インスリン血症、早期分娩、禿頭症、がん、過敏性腸症候群、免疫抑制、片頭痛又は疼痛のような疾患又は状態を含む、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害の治療又は緩和のために有用な医薬組成物を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
したがってその第１の態様では、本発明は、式Ｉの新規なピラゾリル−ピリミジン誘導体、異性体若しくはその異性体の混合物、そのＮ−オキシド、そのプロドラッグ又は薬剤として許容されるその塩を提供する。
【化１】
2008534472.tif 000003
（式中、
ｎは０、１、２又は３であり、
ＸはＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表すか、又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、その複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されており、
Ｙはアルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、アルケニル、フェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、テトラヒドロ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル又はキノリニルを表し、そのフェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル及びキノリニル基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、メチレンジオキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、フェニル及びモルホリニルからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよいか、又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｙは、Ｒ’及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、その複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されており、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は互いに独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシ−カルボニル、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及び／又はアミノを表す）
【００１６】
他の態様では、本発明は有効量の本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
他の態様では、本発明は、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害の治療又は緩和のための医薬品の製造のための本発明の化合物の使用に関し、且つ、カリウムチャンネルの調節に応答する障害又は状態の治療又は緩和の方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
カリウムチャンネル調節剤
その第１の態様では、本発明は、式Ｉの新規なピラゾリル−ピリミジン誘導体、異性体若しくはその異性体の混合物、そのＮ−オキシド、そのプロドラッグ又は薬剤として許容されるその塩を提供する。
【化２】
2008534472.tif 000004
（式中、
ｎは０、１、２又は３であり、
ＸはＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表すか、又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、その複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されており、
Ｙはアルキル、シクロアルキル、アルキル−シクロアルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、アルケニル、フェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、テトラヒドロピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル又はキノリニルを表し、そのフェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロ−インデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル及びキノリニル基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、メチレンジオキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、フェニル及びモルホリニルからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよいか、又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｙは、Ｒ’及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、その複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されており、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は互いに独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシ−カルボニル、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及び／又はアミノを表し、
但し、ピラゾリル−ピリミジン誘導体は
メチル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
シクロヘキシル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
フェニル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−メチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−ｎ−ブチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−５−エチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−ｎ−ブチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−メトキシ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−エトキシ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（２−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−エトキシ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
フェニル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−５−エチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
２−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル−アミノ］−エタノール；
４−シクロヘキシルアミノ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル；
２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−４−メチル−６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ピリミジン；
２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−４−メチル−６−（４−フェニル−ピペラジン−１−イル）−ピリミジン；
４−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−モルホリン；又は
２，４−ビス−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン
ではない。
【００１９】
好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ｎが０、１、２又は３であり、
ＸがＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表すか、又は、ｎが０である場合、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、
Ｙがアルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、アルケニル又は単環若しくは多環の、炭素環若しくは複素環基を表し、その炭素環若しくは複素環基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及びアミノからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよいか、又は、ｎが０である場合、Ｙは、Ｒ’及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が互いに独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及びアミノを表し、Ｒ４が水素を表す
式Ｉの化合物である。
【００２０】
他の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、ｎが０、１、２又は３である式Ｉの化合物である。
【００２１】
より好ましい実施形態では、ｎは０又は１である。
【００２２】
さらに好ましい実施形態では、ｎは０である。
【００２３】
第３の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、ＸがＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表すか、又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成しており、その複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されている式Ｉの化合物である。
【００２４】
より好ましい実施形態では、ＸはＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表すか、又は、ｎが０でありＸがＮＲ’である場合、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している。
【００２５】
第４の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ＸがＯ、Ｓ又はＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表す式Ｉの化合物である。
【００２６】
より好ましい実施形態では、ＸはＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表す。
【００２７】
さらに好ましい実施形態では、ＸはＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素又はアルキル、特にメチル又はエチルを表す。
【００２８】
さらに好ましい実施形態では、ＸはＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、メチル又はエチルを表す。
【００２９】
さらに好ましい実施形態では、ＸはＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素を表す。
【００３０】
さらに好ましい実施形態では、ＸはＮＲ’を表し、但し、Ｒ’はメチル又はエチルを表す。
【００３１】
第５の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ｎが０であり、
ＸがＮＲ’であり、但し、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環、特にピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル又はピラゾリルを形成しており、その複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよい式Ｉの化合物である。
【００３２】
より好ましい実施形態では、
ｎは０であり、
ＸはＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になってピロリジニル又はピペリジニル環を形成している。
【００３３】
さらに好ましい実施形態では、
ｎは０であり、
ＸはＮＲ’であり、但し、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になってピペリジニル、ピペラジニル又はピラゾリル環を形成しており、その複素環は、アルキル及びフェニルからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されている。
【００３４】
さらに好ましい実施形態では、
ｎは０であり、
ＸはＮＲ’であり、但し、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になってピペリジニル、４−メチル−ピペリジニル、ピペラジニル、４−フェニルピペラジニル、ピラゾリル又は３，５−ジメチル−ピラゾリル環を形成している。
【００３５】
さらに好ましい実施形態では、
ｎは０であり、
ＸはＮＲ’であり、但し、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になって４−メチル−ピペリジニル、４−フェニル−ピペラジニル又は３，５−ジメチルピラゾリル環を形成している。
【００３６】
第６の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
Ｙがアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、アルケニル、フェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロインデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、テトラヒドロ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル又はキノリニルを表し、そのフェニル、ベンジル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフチル、インデニル、１，２−ジヒドロインデニル、フラニル、チエニル、ピラニル、２，３，５，６テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イル、ピリジニル、インドリニル及びキノリニル基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキルアミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、メチレンジオキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、フェニル及びモルホリニルからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよい式Ｉの化合物である。
【００３７】
第７の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
Ｙがアルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、アルケニル、又は単環若しくは多環の炭素環若しくは複素環基を表し、その炭素環若しくは複素環基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及びアミノからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよいか、又は、ｎが０であり、ＸがＮＲ’である場合、Ｙは、Ｒ’及びそれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している式Ｉの化合物である。
【００３８】
より好ましい実施形態では、Ｙはアルキル、特にメチル、エチル、プロピル、ブチル又はペンチル；シクロアルキル、特にシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチル；アルキル−シクロアルキル、特にメチル−シクロヘキシル又はｔ−ブチル−シクロヘキシル；ヒドロキシ−アルキル、特にヒドロキシル−メチル、２−ヒドロキシ−エチル又は３−ヒドロキシ−プロピル；アルケニル、特にプロペニル；フェニル、ベンジル、又はナフチルを表し、そのフェニル、ベンジル及びナフチル基は、アルキル、特にメチル；ハロ、特にフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード；ハロアルキル、特にトリフルオロメチル；及びアルコキシ、特にメトキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよい。
【００３９】
さらに好ましい実施形態では、Ｙはメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、メチルシクロヘキシル、ｔ−ブチル−シクロヘキシル、ヒドロキシル−メチル、２−ヒドロキシ−エチル、３−ヒドロキシ−プロピル、フェニル、ベンジル又はナフチルを表し、そのフェニル、ベンジル及びナフチル基は、メチル、フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル及びメトキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよい。
【００４０】
さらに好ましい実施形態では、Ｙはアルキル、アルケニル又はシクロアルキルを表す。
【００４１】
さらに好ましい実施形態では、Ｙはフェニル、ベンジル、又はナフチルを表し、そのフェニル、ベンジル及びナフチル基は、メチル、フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル及びメトキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよい。
【００４２】
さらに好ましい実施形態では、Ｙはフェニル又はベンジルを表し、そのフェニル及びベンジル基は、メチル、フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル及びメトキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよい。
【００４３】
さらに好ましい実施形態では、Ｙはナフチルを表す。
【００４４】
さらに好ましい実施形態では、Ｙはフェニル、ナフチル又は１，２，３，４−テトラヒドロナフチルから選択される単環若しくは多環の炭素環基；ピロリジニル、ピペリジニル、フラニル、チエニル及びピロリルから選択される単環若しくは多環の複素環基を表し、そのフェニル、ナフチル、１，２，３，４テトラヒドロナフチル、ピロリジニル、ピペリジニル、フラニル、チエニル及びピロリル基は、アルキル、アミノ−アルキル、アルキル−アミノ、アルキル−アミノ−アルキル、ヒドロキシ−アルキル、アルコキシ−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及びアミノからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されていてよい。
【００４５】
第８の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が互いに独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシ−カルボニル、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及び／又はアミノを表す式Ｉの化合物である。
【００４６】
より好ましい実施形態では、
Ｒ１及びＲ２は互いに独立に、水素又はアルキル、特にメチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ３及びＲ４は互いに独立に、水素；アルキル、特にメチル、エチル又はプロピル；ハロ、特にフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード；ハロアルキル、特にトリフルオロメチル；アルコキシ−カルボニル、特にメトキシ−カルボニル又はエトキシ−カルボニル；及び／又はシアノを表す。
【００４７】
さらに好ましい実施形態では、
Ｒ１及びＲ２は互いに独立に、アルキル、特にメチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ３及びＲ４は互いに独立に、水素；アルキル、特にメチル、エチル又はプロピル；ハロ、特にフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード；ハロアルキル、特にトリフルオロメチル；アルコキシ−カルボニル、特にメトキシ−カルボニル又はエトキシ−カルボニル及び／又はシアノを表す。
【００４８】
さらに好ましい実施形態では、
Ｒ１及びＲ２は互いに独立に、メチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ３及びＲ４は互いに独立に、水素；アルキル、特にメチル、エチル又はプロピル；ハロ、特にフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード；ハロアルキル、特にトリフルオロメチル；アルコキシ−カルボニル、特にメトキシ−カルボニル又はエトキシ−カルボニル及び／又はシアノを表す。
【００４９】
さらに好ましい実施形態では、
Ｒ１及びＲ２はメチルを表し、
Ｒ３及びＲ４は互いに独立に、水素；アルキル、特にメチル、エチル又はプロピル；ハロ、特にフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード；ハロアルキル、特にトリフルオロメチル；アルコキシ−カルボニル、特にメトキシ−カルボニル又はエトキシ−カルボニル；及び／又はシアノを表す。
【００５０】
さらに好ましい実施形態では、
Ｒ１及びＲ２はメチルを表し、
Ｒ３は水素又はアルキル、特にメチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ４は水素；アルキル、特にメチル、エチル又はプロピル；ハロ、特にフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード；アルコキシ−カルボニル、特にメトキシ−カルボニル又はエトキシ−カルボニル；及び／又はシアノを表す。
【００５１】
さらに好ましい実施形態では、
Ｒ１及びＲ２はメチルを表し、
Ｒ３は水素、メチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ４は水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、エトキシカルボニル及び／又はシアノを表す。
【００５２】
第９の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が互いに独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ及びアミノを表し、Ｒ４が水素を表す式Ｉの化合物である。
【００５３】
より好ましい実施形態では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は互いに独立に、アルキル、シクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルを表し、Ｒ４は水素を表す。
【００５４】
第１０の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ｎが０であり、
ＸがＮＨであり、
Ｙがアルキル、特にメチル、エチル、プロピル、ブチル又はペンチル；シクロアルキル、特にシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチル；アルキル−シクロアルキル、特にメチル−シクロヘキシル又はｔ−ブチル−シクロヘキシル；ヒドロキシ−アルキル、特にヒドロキシル−メチル、２−ヒドロキシ−エチル又は３−ヒドロキシ−プロピル；フェニル、ベンジル又はナフチルを表し、
Ｒ１及びＲ２がメチルを表し、
Ｒ３が水素、メチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ４が水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、エトキシカルボニル及び／又はシアノを表す式Ｉの化合物である。
【００５５】
第１１の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ｎが０であり、
ＸがＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、メチル、エチル又はプロピルであり、
Ｙがアルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、又はアルケニル、ピペリジニル又はフェニルを表し、そのフェニルはハロ又はトリフルオロメチルの１つ若しくは２つで任意選択で置換されていてよく、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が互いに独立に、メチル、エチル又はプロピルを表し、Ｒ４が水素を表す式Ｉの化合物である。
【００５６】
第１２の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ｎが０であり、
ＸがＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は、Ｙ及びそれらが結合している窒素と一緒になってピロリジニル又はピペリジニル環を形成しており、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が互いに独立に、メチル、エチル又はプロピルを表し、Ｒ４が水素を表す式Ｉの化合物である。
【００５７】
第１３の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ｎが１であり、
ＸがＮＲ’を表し、但し、Ｒ’は水素、メチル、エチル又はプロピルであり、
Ｙがフラニル、チエニル又はフェニルを表し、そのフェニルはハロ又はトリフルオロメチルの１つ若しくは２つで任意選択で置換されており、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が互いに独立に、メチル、エチル又はプロピルを表し、Ｒ４が水素を表す式Ｉの化合物である。
【００５８】
第１４の好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ｎが０であり、
ＸがＮＨであり、
Ｙがフェニル又はベンジルを表し、そのフェニル及びベンジル基は、アルキル、特にメチル；ハロ、特にフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード；ハロアルキル、特にトリフルオロメチル並びにアルコキシ、特にメトキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよく、
Ｒ１及びＲ２がメチルを表し、
Ｒ３が水素、メチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ４が水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、エトキシカルボニル又はシアノを表す式Ｉの化合物である。
【００５９】
より好ましい実施形態では、
ｎは０であり、
ＸはＮＨであり、
Ｙはフェニル又はベンジルを表し、そのフェニル及びベンジル基は、メチル、クロロ、トリフルオロメチル及びメトキシからなる群から選択される１つ若しくは２つの置換基で任意選択で置換されていてよく、
Ｒ１及びＲ２はメチルを表し、Ｒ３は水素、メチル、エチル又はプロピルを表し、
Ｒ４は水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、エトキシカルボニル又はシアノを表す。
【００６０】
最も好ましい実施形態では、本発明のピラゾリル−ピリミジン誘導体は、
ベンジル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
シクロペンチル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ジエチル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−フェニル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン；
（３，４−ジクロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ナフタレン−２−イル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
シクロヘキシル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン；
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−ブロモ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン；
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−５−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−ブロモ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン；又は
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
又は薬剤として許容されるその塩である。
【００６１】
本明細書で述べる実施形態の２つ以上のどの組合せも本発明の範囲にあるものとする。
【００６２】
置換基の定義
本発明の関連では、ハロはフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを表す。したがって、トリハロメチル基は、例えば、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、及び同様のトリハロ置換メチル基を表す。
【００６３】
本発明の関連では、ハロアルキル基は本明細書で定義のアルキル基を表し、そのアルキル基は１つ又は複数のハロで置換されている。本発明の好ましいハロアルキル基には、トリハロメチル、好ましくはトリフルオロメチルが含まれる。
【００６４】
本発明の関連では、アルキル基は一価の飽和直鎖又は分岐の一価炭化水素鎖を表す。炭化水素鎖は、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、第三ペンチル、ヘキシル及びイソヘキシルを含む、好ましくは１〜１８個の炭素原子（Ｃ１〜１８−アルキル）、より好ましくは５〜６個の炭素原子（Ｃ１〜６−アルキル；低級アルキル）を含む。好ましい実施形態では、アルキルは、ブチル、イソブチル、第二ブチル及び第三ブチルを含むＣ１〜４−アルキル基を表す。本発明の好ましい実施形態では、アルキルはＣ１〜３−アルキル基を表し、具体的には、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであってよい。
【００６５】
本発明の関連では、ヒドロキシ−アルキル基は上記に定義のアルキル基を表し、そのヒドロキシ−アルキル基は１個又は複数のヒドロキシ基で置換されている。本発明の好ましいヒドロキシ−アルキル基の例には、２−ヒドロキシ−エチル、３−ヒドロキシ−プロピル、４−ヒドロキシ−ブチル、５−ヒドロキシ−ペンチル及び６−ヒドロキシヘキシルが含まれる。
【００６６】
本発明の関連では、アルケニル基が、ジ−エン、トリ−エン及びポリ−エンを含む１つ又は複数の二重結合を含む炭素鎖を表す。好ましい実施形態では、本発明のアルケニル基は、少なくとも１つの二重結合を含む２〜８個の炭素原子（Ｃ２〜８−アルケニル）、より好ましくは２〜６個の炭素原子（Ｃ２〜６−アルケニル）を含む。最も好ましい実施形態では、本発明のアルケニル基は、エテニル；１−若しくは２−プロペニル；１−、２−若しくは３−ブテニル、若しくは１，３−ブテニル；１−、２−、３−、４−若しくは５−ヘキセニル、又は１，３−ヘキセニル、又は１，３，５−ヘキセニル；１−、２−、３−、４−、５−、６−若しくは７−オクテニル、又は１，３−オクテニル、又は１，３，５−オクテニル、又は１，３，５，７−オクテニルである。
【００６７】
本発明の関連では、シクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを含む、３〜１０個の炭素原子（Ｃ３〜１０−シクロアルキル）、好ましくは３〜８個の炭素原子（Ｃ３〜８−シクロアルキル）を好ましくは含む環状アルキル基を表す。
【００６８】
本発明の関連では、シクロアルキル−アルキル基が上記定義のシクロアルキル基を表し、そのシクロアルキル基は、やはり上記で定義したようにしてアルキル基上で置換されている。本発明の好ましいシクロアルキル−アルキル基の例には、シクロプロピルメチル及びシクロプロピルエチルが含まれる。
【００６９】
本発明の関連では、アルコキシ基は、アルキルが上記の定義通りである「アルキル−Ｏ−」基を表す。
【００７０】
本発明の関連では、ハロアルコキシ基は本明細書で定義のアルコキシ基を表し、そのアルコキシ基は１つ又は複数のハロで置換されている。本発明の好ましいハロアルコキシ基には、トリハロメトキシ、好ましくはトリフルオロメトキシが含まれる。
【００７１】
本発明の関連では、アミノ基は、第一（−ＮＨ２）、第二（−ＮＨ−アルキル）、又は第三（−Ｎ（アルキル）２）アミノ基であってよい、すなわち、１つ又は２つの上記定義のアルキル基で置換されていてよい。
【００７２】
本発明の関連では、単環若しくは多環の炭素環基は、単環若しくは多環の炭化水素基を表し、その基は具体的には、芳香族炭化水素基、すなわち単環若しくは多環のアリール基、或いは飽和炭化水素基又は部分的に飽和した炭化水素基であってよい。好ましいポリ炭素環基は二環式炭素環基である。
【００７３】
本発明の関連では、単環又は多環の炭素環基は、単環又は多環の炭化水素基を表す。本発明の好ましい炭素環基の例には、シクロアルキル、フェニル、ナフチル、インデニル、アズレニル、アントラセニル及びフルオレニルが含まれる。本発明の最も好ましい炭素環基には、フェニル、ナフチル及び１，２，３，４テトラヒドロ−ナフチルが含まれる。
【００７４】
本発明の関連では、単環又は多環の複素環基は、その環構造の中にその基が１個又は複数のヘテロ原子を保持する単環又は多環基を表す。好ましいヘテロ原子には窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）及びイオウ（Ｓ）が含まれる。環構造の１つ又は複数は、特に芳香族（すなわちヘテロアリール）であって、飽和しているか又は部分的に飽和していてよい。本発明の好ましい複素単環基は５員及び６員の複素単環の基を含む。本発明の好ましいポリ複素環基は二環式複素環基である。
【００７５】
本発明の好ましい複素単環の基の例には、ピロリジニル、特にピロリジン−１−イル、ピロリジン−２−イル及びピロリジン−３−イル；ピペリジニル、特にピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−３−イル及びピペリジン−４−イル；フラニル、特にフラン−２−イル及びフラン−３−イル；チエニル、特にチエン−２−イル及びチエン−３−イル並びにピロリル、特にピロール−１−イル、ピロール−２−イル及びピロール−３−イルが含まれる。
【００７６】
異性体
当業者は、本発明の化合物が、鏡像異性体、ジアステレオマー、並びに幾何異性体（シス−トタンス異性体）を含む様々な立体異性体で存在できることを理解されよう。本発明は、そうしたすべての異性体及びラセミ混合物を含むその任意の混合物を含む。
【００７７】
ラセミ体は、既知の方法又は技術で光学対掌体へ分割することができる。鏡像異性化合物（鏡像異性中間体を含む）を分離する１つの方法は、光学的に活性なアミンを用い、酸で処理して、ジアステレオマーの分割された塩を生成させるものである。ラセミ化合物を光学対掌体へ分割する他の方法は、光学活性マトリックスでのクロマトグラフィーによるものである。したがって、本発明のラセミ化合物は、例えばＤ−又はＬ−（酒石酸塩、マンデル酸塩又はカンファースルホン酸塩）塩の例えば分別晶出によって、その光学対掌体へ分割することができる。
【００７８】
本発明の化合物は、本発明の化合物と（＋）又は（−）フェニルアラニン、（＋）又は（−）フェニルグリシン、（＋）又は（−）カンファン酸から誘導されるものなどの光学的に活性な活性化カルボン酸の反応によるジアステレオマーアミドの生成によっても、或いは、本発明の化合物と光学的に活性なクロロホーメート若しくは類似体の反応によるジアステレオマーアミドの生成によっても分割することができる。
【００７９】
光学異性体を分割するための他の方法は当業界で周知である。そうした方法には、Ｊａｑｕｅｓ  Ｊ，Ｃｏｌｌｅｔ  Ａ，＆  Ｗｉｌｅｎ  Ｓ  の「鏡像異性体、ラセミ化合物及び分割（Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１）に記載されているものなどが含まれる。
【００８０】
光学活性化合物は光学活性の出発物質又は中間体から調製することもできる。
【００８１】
薬剤として許容される塩
本発明の化合物は所望の投与に適した任意の形態で提供することができる。適切な形態には、本発明の化合物の薬剤として（すなわち生理学的に）許容されるプレドラッグ又はプロドラッグが含まれる。
【００８２】
薬剤として許容される付加塩の例には、これらに限定されないが、塩酸から誘導される塩酸塩、臭化水素から誘導される臭化水素塩、硝酸から誘導される硝酸塩、過塩素酸から誘導される過塩素酸塩、リン酸から誘導されるリン酸塩、硫酸から誘導される硫酸塩、ギ酸から誘導されるギ酸塩、酢酸から誘導される酢酸塩、アコニチン酸から誘導されるアコニチン酸塩、アスコルビン酸から誘導されるアスコルビン酸塩、ベンゼンスルホン酸から誘導されるベンゼンスルホン酸塩、安息香酸から誘導される安息香酸塩、桂皮酸から誘導される桂皮酸塩、クエン酸から誘導されるクエン酸塩、エンボン酸から誘導されるエンボン酸塩、エナント酸から誘導されるエナント酸塩、フマル酸から誘導されるフマル酸塩、グルタミン酸から誘導されるグルタミン酸塩、グリコール酸から誘導されるグリコール酸塩、乳酸から誘導される乳酸塩、マレイン酸から誘導されるマレイン酸塩、マロン酸から誘導されるマロン酸塩、マンデル酸から誘導されるマンデル酸塩、メタンスルホン酸から誘導されるメタンスルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸から誘導されるナフタレン−２−スルホン酸塩、フタル酸から誘導されるフタル酸塩、サリチル酸から誘導されるサリチル酸塩、ソルビン酸から誘導されるソルビン酸塩、ステアリン酸から誘導されるステアリン酸塩、コハク酸から誘導されるコハク酸塩、酒石酸から誘導される酒石酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸から誘導される塩などの非毒性の無機及び有機の酸付加塩が含まれる。そうした塩は当業界で周知の記述されている手順によって生成させることができる。
【００８３】
薬剤として許容されるものと考えられるシュウ酸などの他の酸は、本発明の化合物及び薬剤として許容されるその酸付加塩を得る中間体として有用な塩の調製において有用である。
【００８４】
本発明の化合物の金属塩には、カルボキシ基を含む本発明の化合物のナトリウム塩などのアルカリ金属塩が含まれる。
【００８５】
本発明の関連では、Ｎ−含有化合物の「オニウム塩」も薬剤として許容される塩として考えられる。好ましい「オニウム塩」には、アルキル−オニウム塩、シクロアルキル−オニウム塩及びシクロアルキルアルキル−オニウム塩が含まれる。
【００８６】
本発明の化合物は、水、エタノール等の薬剤として許容される溶媒と一緒に、溶解した形態又は溶解していない形態で提供することができる。溶解した形態には、一水和物、二水和物、半水和物、三水和物、四水和物等の水和物の形態も含まれる。一般に、本発明のためには、溶解した形態は溶解していない形態と同等であると考えられる。
【００８７】
調製方法
本発明の化合物は、化学合成の通常の方法、例えば実施例に記載されているものなどによって調製することができる。本出願で記述する方法のための出発物質は、既知のものであるか、又は市販の化学薬品通常の方法で容易に調製できるものである。
【００８８】
本明細書で記述する反応の最終生成物は、通常の技術、例えば、抽出、結晶化、蒸留、クロマトグラフィー等で単離することができる。
【００８９】
生物活性
本発明の化合物をインビトロでの実験にかけ、それがカリウムチャンネル調節剤として具体的に有用であることが見出された。より具体的には、本発明の化合物は、ＳＫ１、ＳＫ２及び／又はＳＫ３チャンネルを選択的に調節することができる。
【００９０】
したがって、他の態様では、本発明は、医薬品製造のための本発明の化合物の使用に関し、その医薬品は、カリウムチャンネルなどの活性、具体的にはＳＫチャンネル、より具体的にはＳＫ１、ＳＫ２及び／又はＳＫ３チャンネルの活性に付随する疾患又は障害の治療又は緩和に有用である。
【００９１】
好ましい実施形態では、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害は、呼吸器系疾患、てんかん、けいれん、発作、欠神発作、血管けいれん、冠動脈攣縮、腎機能異常、多発性嚢胞腎、膀胱けいれん、尿失禁、膀胱流出障害、勃起障害、胃腸障害、分泌性下痢、虚血、脳虚血、虚血性心疾患、狭心症、冠状動脈性心臓病、運動失調、外傷性脳損傷、パーキンソン病、双極性障害、精神病、統合失調症、不安神経症、うつ病、気分障害、認知症、記憶障害及び注意欠陥、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、月経困難症、ナルコレプシー、レイノー病、間欠性跛行、シェーグレン症候群、不整脈、高血圧症、筋硬直性筋肉異栄養、痙縮、口腔乾燥症、ＩＩ型糖尿病、高インスリン血症、早期分娩、禿頭症、がん、過敏性腸症候群、免疫抑制、片頭痛又は疼痛である。
【００９２】
より好ましい実施形態では、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害は、呼吸器系疾患、尿失禁、勃起障害、不安神経症、てんかん、精神病、統合失調症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又は疼痛である。
【００９３】
他の好ましい実施形態では、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害は、呼吸器系疾患、特にぜんそく、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの鼻漏である。
【００９４】
第３の好ましい実施形態では、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害は尿失禁である。
【００９５】
第４の好ましい実施形態では、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害は、てんかん、発作、欠神発作又はけいれんである。
【００９６】
第５の好ましい実施形態では、カリウムチャンネルの活性に付随する疾患又は障害は、呼吸器系疾患、特にぜんそく、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）又は鼻漏である。
【００９７】
試験した化合物はすべて、マイクロモル及びサブマイクロモル、すなわち１未満〜約１００μＭの範囲で生物活性を示した。本発明の好ましい化合物は、本明細書で記述したようにして測定して、マイクロモル及びサブマイクロモル、すなわち１未満〜約１０μＭの範囲で生物活性を示す。
【００９８】
医薬組成物
さらに他の態様では、本発明は、以下の化合物を含む本発明の化合物を治療有効量で含む新規な医薬組成物を提供する。
ベンジル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
シクロペンチル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ジエチル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−フェニル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン；
（３，４−ジクロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ナフタレン−２−イル−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
シクロヘキシル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン；
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−ブロモ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン；
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−５−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［５−ブロモ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン；
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
メチル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
シクロヘキシル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
フェニル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−メチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−ｎ−ブチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−５−エチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−ｎ−ブチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−メトキシ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−エトキシ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（２−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−エトキシ−フェニル）−アミン；
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン；
フェニル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−５−エチル−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン；
２−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル−アミノ］−エタノール；
４−シクロヘキシルアミノ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル；
２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−４メチル−６−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）−ピリミジン；
２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−４−メチル−６−（４−フェニル−ピペラジン−１−イル）−ピリミジン；
４−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−モルホリン；及び
２，４−ビス−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン。
【００９９】
好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、少なくとも１種の薬剤として許容される担体又は希釈剤と一緒に、治療有効量の上記ピラゾリル−ピリミジン誘導体又は薬剤として許容されるその付加塩を含む。
【０１００】
治療に用いるための本発明の化合物は、そのままの化合物形態で投与してよいが、医薬組成物中に、１種又は複数のアジュバント、賦形剤、担体及び／又は希釈剤と一緒に、任意選択で生理学的に許容される塩の形態か又はプロドラッグの形態で、その活性成分を導入することが好ましい。
【０１０１】
したがって、好ましい実施形態では、本発明は、１種又は複数の薬剤として許容される担体、及び任意選択で他の治療成分及び／又は予防成分と併用して、本発明の化合物若しくは薬剤として許容される塩又はその誘導体を含む医薬組成物を提供する。担体は、製剤の他の成分と適合し、且つそのレシピエントに対して有害でないという意味で「許容され」なければならない。
【０１０２】
本発明の医薬組成物は、経口、経直腸、経気管支、経鼻、局所（頬側及び舌下を含む）、経皮、経膣又は非経口（皮膚、皮下、筋肉内、腹膜内、静脈内、動脈内、脳内、眼内注射又は注入を含む）投与に適したものか、又は粉末及び液体エアロゾル投与を含む、吸入又はガス注入による投与に適した形態のものか、或いは持続放出系であってよい。持続放出系の適切な例には、本発明の化合物を含む固体の疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれる。そのマトリックスは造形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態であってよい。
【０１０３】
したがって、本発明の化合物は、従来のアジュバント、担体又は希釈剤と一緒に、医薬組成物及びその単位ドーセッジ中に配置されてよい。そうした形態には、これらはすべて経口使用のためであるが、固体、特に錠剤、充填カプセル、粉末やペレットの形態、並びに液体、特に水溶液又は非水性溶液、懸濁液、乳液、エリキシル剤及びそれを充填したカプセルが含まれ、経直腸投与のためには坐薬、腸管外使用のためには無菌性の注入可能な溶液が含まれる。そうした医薬組成物及びその単位剤形は、追加の活性化合物若しくは成分（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）を含むか又は含まないで通常の成分を通常の割合で含むことができ、そうした単位剤形は、用いられる所定の１日投与量範囲に相応する任意の適切な活性成分を有効量で含むことができる。
【０１０４】
本発明の化合物は広い範囲の経口及び非経口剤形で投与することができる。以下の剤形が、本発明の化合物か又は本発明の化合物の薬剤として許容される塩を活性成分として含むことができることは当業者には明らかであろう。
【０１０５】
本発明の化合物から医薬組成物を調製するためには、薬剤として許容される担体は固体であっても液体であってもよい。固体状の調剤には、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル、カシェ、坐薬、分散性顆粒が含まれる。固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤、崩壊剤又はカプセル化の材料として働くこともできる１種又は複数の物質であってよい。
【０１０６】
粉剤では、担体は微細化された固体であり、これは微細化された活性成分との混合物である。
【０１０７】
錠剤では、活性成分は、必要な結合能力を有する担体と適切な割合で混合され、所望の形状と大きさに圧縮される。
【０１０８】
粉剤及び錠剤は５又は１０％から７０％の活性化合物を含むことが好ましい。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、でんぷん、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシチルセルロース、低融点ワックス、ココアバター等である。「調剤」という用語は、カプセルを提供する担体としてのカプセル化材料を用いた活性化合物の製剤を含むものとする。そのカプセル内では、活性成分は、担体を用いるか又は用いないで、担体によって囲繞されており、したがってその担体は活性成分と併用されることになる。同様に、カシェ及びトローチ剤が含まれる。錠剤、粉剤、カプセル、丸剤、カシェ及びトローチ剤は経口投与に適した固体の形態として用いることができる。
【０１０９】
坐薬の調剤のためには、脂肪酸グリセリド又はココアバターの混合物などの低融点ワックスをまず溶融させ、攪拌しながらその中に活性成分を均一に分散させる。次いで、溶融した均一混合物を好都合な大きさの鋳型に注加し、冷却して固化させる。
【０１１０】
経膣投与に適した組成物は、活性成分に加えて、当業界で妥当とされる担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡状物又はスプレー剤として提供することができる。
【０１１１】
液体調剤には、液剤、懸濁剤及び乳剤、例えば水又は水−プロピレングリコール溶液が含まれる。例えば、非経口注射用液体調剤は、ポリエチレングリコール水溶液中の液剤として製剤することができる。
【０１１２】
したがって、本発明による化合物は非経口投与（例えば、注射、例えばボーラス注射又は連続注入）のために製剤することができ、アンプル、事前充填シリンジ、小容積輸液か、又は保存剤を加えた複数用量容器中の単位用量形態で提供することができる。組成物は、油性又は水性の媒体中の懸濁剤、液剤又は乳剤などの形態をとることができ、懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散化剤などの製剤を含むことができる。或いは、活性成分は、無菌固体の無菌単離によるか、又は溶液からの凍結乾燥によって得られる、使用する前に適切な媒体、例えば無菌の発熱物質を含まない水で再構成するための粉体であってよい。
【０１１３】
経口での使用に適した水溶液は、活性成分を水に溶解し、所望の適切な着色剤、香味剤、安定化剤及び増粘剤を加えて調製することができる。
【０１１４】
経口での使用に適した水性懸濁剤は、天然若しくは合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシチルセルロース、又はよく知られている他の懸濁化剤などの粘性材料を用いて、微細化した活性成分を水の中に分散させて作製することができる。
【０１１５】
使用の直前に経口投与用の液状調剤に転換させるための固体状調剤も含められる。液状形態には、液剤、懸濁剤及び乳剤が含まれる。これらの調剤は、活性成分に加えて、着色剤、香味剤、安定化剤、緩衝剤、人工甘味剤及び天然甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含むことができる。
【０１１６】
表皮への局所投与のために、本発明による化合物は、軟膏、クリーム又はローションとして、或いは皮膚用パッチとして製剤することができる。軟膏及びクリームは、例えば、水性又は油性のベースを用いて、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を加えて製剤することができる。ローションは、水性又は油性のベースを用いて製剤することができ、また一般に１種又は複数の乳化剤、安定化剤、分散化剤、懸濁化剤、増粘剤又は着色剤も含むことになる。
【０１１７】
口腔での局所投与に適した組成物には、香味付けしたベース、一般にスクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含むトローチ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの不活性なベース中に活性成分を含むトローチ並びに適切な液体担体中に活性剤を含むうがい薬が含まれる。
【０１１８】
液剤又は懸濁剤は、例えば、点滴器、ピペット又はスプレーを用いた通常の手段で鼻腔に直接施用される。組成物は単一用量又は複数用量又はで提供することができる。
【０１１９】
気道への投与は、活性成分が、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、若しくはジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガスなどの適切な噴射剤を用いた加圧パックで提供される、エアロゾル製剤の手段によって実施することもできる。エアロゾルはレシチンなどの界面活性剤を好都合に含むこともできる。薬物の用量は計量弁を設けることによって制御することができる。
【０１２０】
或いは、活性成分は、乾燥粉末、例えば乳糖、でんぷん、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのでんぷん誘導体及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの適切な粉末ベース中の化合物の粉末ミックスの形態で提供することができる。粉末担体は鼻腔中でゲルを形成することが好都合である。粉末組成物は、例えばゼラチンからなる例えばカプセル若しくはカートリッジ、又は、吸入器でそこから粉末を投与できるブリスターパックの単位用量形態で提供することができる。
【０１２１】
経鼻組成物を含む、気道に投与するための組成物では、化合物は通常、例えば５ミクロン以下のオーダーの小さい粒子径を有する。そうした粒子径は、当業界で周知の手段、例えば微粉化によって得ることができる。
【０１２２】
望むなら、活性成分を持続放出するようになされた組成物を用いることができる。
【０１２３】
医薬調剤は単位剤形であることが好ましい。そうした形態では、調剤は、適切な量の活性成分を含む単位用量に細分化される。単位剤形は、そのパッケージが、パッケージ化した錠剤、カプセル及びバイアル又はアンプル中の粉末などの別々の量の調合物を含むパッケージ化した調剤であってよい。単位剤形はカプセル、錠剤、カシェ又はトローチ剤自体であってよく、また、これらのいずれか適切な数がパッケージされた形態であってよい。
【０１２４】
経口投与のためには錠剤又はカプセルが、静脈内投与及び連続注入のためには液体が好ましい組成物である。
【０１２５】
製剤及び投与のための技術のさらなる詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版に見ることができる。
【０１２６】
治療に有効な用量は、症状又は状態を改善する活性成分のその量を指す。治療効能及び毒性、例えばＥＤ５０及びＬＤ５０は、細胞培養又は実験動物で、標準の薬理学的手順で測定することができる。治療効果と毒性効果の用量比が治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。高い治療指数を示す医薬組成物が好ましい。
【０１２７】
投与される用量は、もちろん、治療を受ける個体の年齢、体重及び状態、並びに投与経路、剤形及びレジメン、並びに所望の結果に合わせて調節しなければならない。正確なドーセッジはもちろん、医師によって決定されるべきである。
【０１２８】
実際のドーセッジは、処理を受ける疾患の性質や重篤度及び投与経路に依存し、それは医師の裁量の範囲内であり、所望の治療効果をもたらすために、本発明の特定の環境に合わせて用量を漸増させてそれを変えることができる。しかし、治療処置のためには、本発明では、個別用量当り約０．１〜約５００ｍｇ、好ましくは約１〜約１００ｍｇ、最も好ましくは約１〜約１０ｍｇの活性成分を含む医薬組成物が適切であると考えられる。
【０１２９】
活性成分は１日当り１つ又は複数の用量で投与ことができる。満足すべき結果は、場合によっては、０．１μｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．及び１μｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．しかないドーセッジでも得ることができる。ドーセッジ範囲の上限は、本発明では約１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．及び１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．と考えられる。好ましい範囲は、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日  ｉ．ｖ．及び約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日  ｐ．ｏ．である。
【０１３０】
治療方法
他の態様では、本発明は、その疾患、障害又は状態がカリウムチャンネル、特にＳＫチャンネルの調節に応答する、ヒトを含む動物生体の疾患、障害又は状態の予防、治療又は緩和のための方法を提供する。その方法は、それを必要とするヒトを含むそうした動物生体に、治療有効量の本発明の化合物を投与することを含む。
【０１３１】
本発明により考えられる好ましい指標（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）は上記の通りである。
【０１３２】
適切なドーセッジ範囲は本発明では、通常通り投与の正確な様式、投与される形態、投与の対象となる徴候、関係する対象、及び関係する対象の体重、さらに、担当の医師又は獣医の選択及び経験に応じて、１日当り０．１〜１０００ｍｇ、１日当り１０〜５００ｍｇ、特に１日当り３０〜１００ｍｇであると考えられる。
【０１３３】
場合によっては、０．００５ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．及び０．０１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．しかないドーセッジでも満足すべき結果を得ることができる。ドーセッジ範囲の上限は、約１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．及び１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．である。好ましい範囲は、約０．００１〜約１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．及び約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．である。
【実施例】
【０１３４】
以下の実施例を参照して、本発明をさらに説明する。これらは特許請求する本発明の範囲を限定するものではない。
【０１３５】
（実施例１）
予備実施例
方法Ａ
ベンジル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン（化合物Ａ１）
２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン（５２８ｍｇ；３．２４ミリモル）をアセトニトリル（１０ｍＬ）中に溶解した。ベンジルアミン（３８２ｍｇ；３．５６ミリモル）及びトリエチルアミン（２．２６ｍＬ；１６．２ミリモル）を加えた。混合物を室温で終夜攪拌した。これをろ過し、蒸発させて黄色油状物を得た。これをジクロロメタン中に溶解し、水で３回洗浄した。脱水（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、蒸発させ、続いてヘプタン／酢酸エチルを用いてカラムクロマトグラフィーにかけて４７０ｍｇ（６１％）のベンジル−（２−クロロ−６−メチル−ピリミジン−４−イル）−アミンを得た。
【０１３６】
ベンジル−（２−クロロ−６−メチル−ピリミジン−４−イル）−アミン（４６０ｍｇ；２．０１ミリモル）をアセトニトリル（５ｍＬ）中に溶解し、３，５−ジメチルピラゾール（２９０ｍｇ；３．０２ミリモル）を加えた。混合物を電子レンジの中で、１７０℃で２０分間加熱した。蒸発させ、続いてジクロロメタンと水酸化ナトリウム１Ｍで抽出し、脱水（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、蒸発させて黄色結晶性化合物を得た。ヘプタン／酢酸エチル中で再結晶化させてベンジル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン（１８０ｍｇ；３１％）を結晶性化合物として得た。Ｍｐ．１３５．９〜１３７．３℃。
【０１３７】
シクロヘキシル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン（化合物Ａ２）
を方法Ａにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、シクロヘキシルアミン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．１４５．０〜１４６．７℃。
【０１３８】
シクロペンチル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン、塩酸塩（化合物Ａ３）
を方法Ａにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、シクロペンチルアミン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。但し、抽出の代わりに、生成物を沈殿させ塩酸塩としてろ過した。Ｍｐ．１１１．９〜１２７．７℃。
【０１３９】
［２−（３，５−ジメチルピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ジエチルアミン、フマル酸塩（化合物Ａ４）
を方法Ａにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、ジエチルアミン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。但し、再結晶化の代わりに、フマル酸（エーテル／メタノール９：１中に０．０７７５Ｍ）を加え、化合物をフマル酸塩として単離した。Ｍｐ．１２０．５℃。
【０１４０】
シクロヘキシル−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン（化合物Ａ５）
を方法Ａにしたがって、２，４−ジクロロピリミジン、シクロヘキシルアミン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ１４４．５−１４６．７℃；
【０１４１】
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン（化合物Ａ６）
を方法Ａにしたがって、２，４，５−トリクロロピリミジン、シクロヘキシルアミン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ９０．０−９９．０℃；
【０１４２】
［５−ブロモ−２−（３．５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−シクロヘキシル−アミン（化合物Ａ７）
を方法Ａにしたがって、５−ブロモ２，４−ジクロロピリミジン、シクロヘキシルアミン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＣ−ＥＳＩ−ＨＲＭＳは３５０．０９７２  Ｄａ．Ｃａｌｃ．３５０．０９８０３３  Ｄａ．ｄｅｖ．−２．４ｐｐｍを示す。
【０１４３】
方法Ｂ
［２−（３，５−ジメチルピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン（化合物Ｂ１）
２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン（６００ｍｇ、２．７ミリモル）をアセトニトリル（４ｍＬ）中に溶解した。ｐ−トルイジン（４７０ｍｇ、４．４２ミリモル）とトリエチルアミン（０．６５ｍＬ、５．５２ミリモル）を加えた。混合物を、砂浴上の密封バイアル中で、６０℃で１２時間振とうさせた。蒸発に続いてカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン）にかけて、（２−クロロ−６−メチル−ピリミジン−４−イル）−ｐ−トリル−アミン（４００ｍｇ、６３％）を得た。
【０１４４】
（２−クロロ−６−メチル−ピリミジン−４−イル）ｐ−トリル−アミン（４００ｍｇ、１．７ミリモル）をアセトニトリル（４ｍＬ）中に溶解し、３，５−ジメチルピラゾール（１８１ｍｇ、１．８８ミリモル）を加えた。混合物を電子レンジの中で、１３０℃で３０分間加熱した。混合物を濃縮し、残留物を炭酸水素ナトリウムで塩基性化し、クロロホルムで抽出し、無水硫酸ナトリウムで脱水して、ろ過し蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製して［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン（２００ｍｇ、４０％）Ｍｐ．１３５．１〜１３７．５℃を得た。
【０１４５】
以下の化合物を同様にして調製する。
［２−（３．５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−フェニル−アミン（化合物Ｂ２）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、アニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．１３４．５〜１３８．８℃。
【０１４６】
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチルピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン（化合物Ｂ３）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、４−クロロアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．１８１〜１８３．２℃。
【０１４７】
（３．４−ジクロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチルピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン（化合物Ｂ４）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、３，４−ジクロロアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．１３５．３〜１３７．８℃。
【０１４８】
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−メトキシ−フェニル）−アミン（化合物Ｂ５）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、ｐ−アニシジン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。
【０１４９】
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン（化合物Ｂ６）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、３−トリフルオロメチルアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．１３０．５〜１３３．６℃。
【０１５０】
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−６−メチル−ピリミジン−４−イル］−ナフタレン−２−イル−アミン（化合物Ｂ７）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロ−６−メチルピリミジン、２−ナフチルアミン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＣ−ＥＳＩ−ＨＲＭＳは３３０．１７２９  Ｄａ．Ｃａｌｃ．３３０．１７１８７  Ｄａ，ｄｅｖ．３．１ｐｐｍを示す。
【０１５１】
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミン（化合物Ｂ８）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロピリミジン、３−トリフルオロメチルアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．９８．５〜９９．６℃。
【０１５２】
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−アミン（化合物Ｂ９）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロピリミジン、４−クロロアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ１３５．５〜１４０．０℃。
【０１５３】
［５−ブロモ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン（化合物Ｂ１０）
を方法Ｂにしたがって、５−ブロモ２，４−ジクロロピリミジン、４−クロロアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．１４４．５〜１５４．０℃。
【０１５４】
［２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−ｐ−トリル−アミン（化合物Ｂ１１）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロピリミジン、ｐ−トルイジン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．５２〜５５．６℃。
【０１５５】
（４−クロロ−フェニル）−［２−（３，５−ジメチルピラゾール−１−イル）−５−メチル−ピリミジン−４−イル］−アミン（化合物Ｂ１２）
を方法Ｂにしたがって、２，４−ジクロロ−５−メチルピリミジン、４−クロロアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。Ｍｐ．１７９．２〜１８２．３℃。
【０１５６】
［５−クロロ−２−（３，５−ジメチル−ピラゾール−１−イル）−ピリミジン−４−イル］−（４−クロロ−フェニル）−アミン（化合物Ｂ１３）
を方法Ｂにしたがって、２，４，５−トリクロロピリミジン、４−クロロアニリン及び３，５−ジメチルピラゾールから調製した。［Ｍ＋Ｈ］＋のＬＣ−ＥＳＩ−ＨＲＭＳは３３４．０６４  Ｄａ．Ｃａｌｃ．３３４．０６２６２６  Ｄａ，ｄｅｖ．４．１ｐｐｍを示す。
【０１５７】
（実施例２）
生物活性
この実施例は本発明の代表的化合物（化合物Ａ２）の生物活性を実証する。小コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャンネル（ＳＫチャンネル、サブタイプ３）を通して流れるイオン電流を、パッチクランプ技術によるホールセル構造を用いて記録した。
【０１５８】
小コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャンネル、サブタイプ３（ＳＫ３）をクローン化し、ＨＥＫ２９３細胞中で安定的に発現させた。
【０１５９】
ＨＥＫ２９３細胞中でのＳＫ３の安定的発現
ヒトＳＫ３（ｈＳＫ３）をｐｃＤＮＡ３（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）から誘導されたカスタマイズ化ベクターである発現ベクターｐＮＳ３ｎ中にサブクローン化して、プラスミドコンストラクトｐＮＳ３＿ｈＳＫ３を得た。ＨＥＫ２９３組織培養細胞を、５％ＣＯ２中、３７℃で、１０％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）で補充したＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ））中で増殖させた。Ｔ２５細胞培養フラスコ中で５０％の培養密度まで培養した細胞を、リポフェクタミン（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて２．５μｇのｐＮＳ３＿ｈＳＫ３で形質移入した。形質移入した細胞を０．２５ｍｇ／ｍｌ  Ｚｅｏｃｉｎで補充した培地中で選択した。単一のクローンを採取し、凍結するのに十分な細胞が得られるまで選択培地中で増殖させた。以後、細胞を、選択剤なしの通常の培地中で培養した。機能性ｈＳＫ３チャンネルの発現をパッチクランプによって検証した。
【０１６０】
ホールセル読み取り
実験は複数のパッチクランプ装置の１つで実施した。カバースリップ上に蒔いた細胞を、ＩＭＴ−２顕微鏡に搭載した１５μｌのかん流チャンバー（流速約１ｍｌ／分）中に置いた。顕微鏡をアースしたファラデー箱中の除振テーブル上に置いた。すべての実験は室温（２０〜２２℃）で実施する。ＥＰＣ−９パッチクランプ増幅器（ＨＥＫＡ−ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｌａｍｂｒｅｃｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を、ＩＴＣ１６インターフェイスを介してＭａｃｉｎｔｏｓｈコンピュータに接続する。データは直接ハードディスクに貯蔵し、ＩＧＯＲソフトウェア（Ｗａｖｅｍｅｔｒｉｃｓ，Ｌａｋｅ  Ｏｓｗｅｇａ，ＯＲ，ＵＳＡ）で解析する。
【０１６１】
パッチクランプ技術のホールセル構造を適用する。概略的には、遠隔制御装置を用いて、ホウケイ酸塩でできたピペット（抵抗２〜４ＭΩ）のチップを細胞膜上に静かに置く。軽く吸引すると、ギガシール（ピペット抵抗は１ＧΩ超へ増大）が形成され、次いで、より強く吸引してピペットの下の細胞膜を破裂させる。細胞電気容量を電気的に補償し、ピペットと細胞内部（直列抵抗、Ｒｓ）との間の抵抗を測定し補償する。通常、細胞電気容量は５〜２０ｐＦ（細胞サイズに応じて）の範囲であり、直列抵抗は３〜６ＭΩの範囲である。実験の間にＲｓ並びに電気容量補償を更新する（各刺激の前に）。ドリフトするＲｓ値を有する実験はすべて除く。リークサブトラクション（Ｌｅａｋ−ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ）は実施しない。
【０１６２】
溶液
細胞外（バス）溶液は（ｍＭで）：１４０ＮａＣｌ、４ＫＣｌ、０．１ＣａＣｌ２、３ＭｇＣｌ２、１０ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌでｐＨ＝７．４に）を含む。試験化合物を、濃厚ストック溶液からＤＭＳＯ中に溶解して１０００倍にし、次いで細胞外溶液中に希釈する。
【０１６３】
細胞内（ピペット）溶液は以下の組成（ｍＭで）、すなわち、１０５ＫＣｌ、４５ＫＯＨ、１０ＥＧＴＡ、１．２１ＭｇＣｌ２、７．６３ＣａＣｌ２及び１０ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌでｐＨ＝７．２に）有する。この溶液中の計算されたＣａ２＋の遊離濃度は３００ｎＭであり、そのＭｇ２＋は１ｍＭである。
【０１６４】
定量化
ホールセル構造を構築した後、電圧勾配（通常−１２０〜＋３０ｍＶ）を、−８０ｍＶの保持電位から、５秒毎に細胞に印加する。１００〜５００秒以内に安定した基礎電流が得られ、次いで、試験化合物を含む細胞外溶液に変えることによって化合物を加える。未変性ＨＥＫ２９３細胞中でのこれらの環境下では、内因性電流（２〜１０ｎＡ  ＳＫ３電流に対して３０ｍＶで＜２００ｐＡ）はほとんど活性化されない。
【０１６５】
−２０ｍＶでの基礎電流の変化を計算して活性化合物を定量化する。化合物不在下での電流を１００％に設定する。活性化因子（Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）は１００を超える値を有し、２００％の値は倍の電流を示す。他方、５０％の値は化合物が基礎電流をその値の半分に低下させたことを示す。
【０１６６】
活性化因子についてはＳＣ１００の値が推定される。ＳＣ１００の値は、基礎電流を１００％増大させるのに要する刺激濃度と定義される。本発明の化合物Ａ２について測定されたＳＣ１００の値は０．１μＭであった。これは、その強力なＳＫ３活性化特性を示している。
【国際調査報告】
2008534472.tif 000006
2008534472.tif 000007
2008534472.tif 000008
2008534472.tif 000009
2008534472.tif 000010