(57)【要約】  本発明は、新鮮な植物材料、又は乾燥後の水戻し植物材料若しくは植物抽出物を７０〜１１０℃のある温度で１０時間を超えて加熱する、植物からグルコサミンを生成するプロセスであって、グルコサミン前駆体として作用する肥料を、植物の収穫前のその栽培中に添加することを特徴とするプロセスに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
新鮮な植物材料、又は乾燥後の水戻し植物材料若しくは植物抽出物を７０〜１１０℃のある温度で１０時間を超えて加熱する、植物からグルコサミンを生成するプロセスであって、グルコサミン前駆体として作用する肥料を、植物の収穫前のその栽培中に添加することを特徴とするプロセス。
【請求項２】
肥料が、グルコサミンを形成するために必要な糖−窒素化合物の縮合体を形成できる化合物であり、好ましくはアンモニウム塩である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
肥料が、植物の成長用に使用する窒素系肥料である、請求項１又は２に記載のプロセス。
【請求項４】
植物種が、Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ属、Ｄａｕｃｕｓ属、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ属、及び／又はＢｅｔａ属に属する、請求項１〜３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５】
植物が、チコリー（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓ）、ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）、キクイモ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、及び／又はビート（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）である、請求項１〜４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６】
チコリーを水耕条件で作出する、請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
肥料を、エンダイブの作出前又は作出後に、チコリーの根を水耕栽培するための栄養液中に添加する、請求項６に記載のプロセス。
【請求項８】
エンダイブの作出により生じた根をグルコサミン源として使用する、請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
植物材料（乾燥重量）１ｋｇ当たり少なくとも５ｇ、好ましくは少なくとも７．５ｇ／ｋｇ、より好ましくは１０ｇ／ｋｇを超えるグルコサミンを含む植物又は植物抽出物。
【請求項１０】
グルコサミンの少なくとも一部が遊離型であり、好ましくはグルコサミンの少なくとも半分が遊離型である、請求項９に記載の植物又は植物抽出物。
【請求項１１】
植物が、Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ属、Ｄａｕｃｕｓ属、Ｈｅｌｉａｎｔｕｓ属、又はＢｅｔａ属に属する、請求項９又は１０に記載の植物又は植物抽出物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、乾物の０．５％（ｗｔ）以上のグルコサミン量を含有する植物原材料を生成するプロセスに関する。
【０００２】
（発明の背景）
グルコサミンの使用
関節疾患の治療における純グルコサミンの使用は、通常、様々な天然資源からの他の化合物又は抽出物との組合せで、特許並びに科学文献に広く記載されている。純グルコサミンは、グルコサミン塩酸塩又はグルコサミン硫酸塩として添加され、甲殻類の加水分解で得られる。例えば、国際公開第２０００／００７４６９６号パンフレットには、「関節組織の炎症又は変性、例えば関節炎を治療するための、グルコサミンとＴｒｙｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ  ｌｕｃｉｄｕｍ及び／又はＥｒｙｃｉｂｅ  ｓｃｈｍｉｄｔｉｉとを含む薬草組成物」が記述されてあり、この場合、純グルコサミンは、植物調製物と混合される。他の特許は、栄養補助食品としての（ＥＰ１１７２０４１又はＥＰ９２３３８２）植物性炭水化物の組成物に関するが、その中のグルコサミンは、キチン、即ちやはり甲殻類の加水分解に由来する。
【０００３】
抗変形性関節症薬としてのグルコサミンの使用は、この１０年間で集中的に開発されてきた。グルコサミンは、変形性関節症などの関節疾患に関して唯一の活性化合物であると思われている（最近まで、非ステロイド性抗炎症薬などの対症療法のみが効果があるとして追求されてきた）。
【０００４】
グルコサミンは、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１３などのＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）の生成を阻害することにより軟骨退化を予防することも示されている。グルコサミンが、継続的な弾力性の損失及び水分の損失が主な特徴とされている皮膚の老化プロセスにも関連することは興味深い。皮膚の老化は、主要構造の変化及び組成変化によって反映される。最も顕著な老化皮膚は、若い皮膚と比較してコラーゲン及びグリコサミノグリカンが少ない。皮膚により産生されるグリコサミノグリカン分子には、ヒアルロン酸（ポリｄ−グルクロン酸−ｎ−アセチル−ｄ−グルコサミン）、コンドロイチン硫酸、及びデルマタン硫酸が挙げられる。ヒアルロン酸は、剥脱に応じて、皮膚細胞によってより大量に産生される。ヒアルロン酸は、高い水和力を有する。
【０００５】
ＭＭＰ−１の阻害は、ポリグリカン／コラーゲン分解の阻害に関連し、したがって、皮膚老化にも関連する。即ち、ＭＭＰ−１は、ＵＶによって誘発し得るものであり、皮膚老化の指標として認識される。ＵＳ２００２／１１９１０７では、この発明は、ＭＭＰ−１の選択的阻害に基づき、コラーゲンの分解から人間の皮膚を保護するための局所用組成物を請求している。ＵＳ２００４／０３７９０１では、メタロプロテアーゼの発現を阻害するローズマリー植物体からの抽出物を含む、皮膚の老化作用の有害兆候を阻害する投与計画を請求している。
【０００６】
グルコサミンは、皮膚の乾燥及び剥脱を著しく改善することが示されている。グルコサミンは、皮膚の水分量を増加させ、滑らかさを改善する。これらの知見は、皮膚の水分量及び滑らかさを改善する際にグルコサミンを長期で摂取することが効果的であることを示唆する。
【０００７】
グルコサミン含有経口サプリメントにより、このサプリメントを摂取した一群の女性において目立つしわの数が減少し（３４％）、小じわの数も減少する（３４％）ことが示されている。グルコサミン、ミネラル、及び様々な酸化防止化合物を含有する経口サプリメントの使用により、目立つしわ及び小じわの外観を潜在的に改善し得る。
【０００８】
米国特許第６４１３５２５号では、皮膚を実質的に剥脱する方法を記載している。特に、この発明は、アミノ糖をＮ−アセチルグルコサミンの形態で含有し、局所塗布する組成物に関する。即ち、若い皮膚細胞を剥脱後に露出すると、Ｄ−グルクロン酸分子及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン分子を交互に繰り返す連鎖からなるグリコサミノグリカンであるヒアルロン酸の産生量が増加する。Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンは、生細胞によるヒアルロン酸産生の律速因子であることは公知である。グルコサミンの局所塗布は、ヒアルロン酸の継続的産生を促進する。
【０００９】
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンを含有し、局所塗布する他の組成物も、例えば、日本国特許第５９０１３７０８号（皮膚の柔軟化及び保湿化）又は米国特許第５８６６１４２号（皮膚剥脱用組成物）に開示されている。
【００１０】
グルコサミンの由来
グルコサミン、即ち２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコースは、果糖の天然誘導体であり、多くの真核生物のタンパク質の重要な構成物質である糖タンパク質及びプロテオグリカンの必須成分である。これは、ムコ多糖及びキチンの必須成分である。グリコサミノグリカン（ムコ多糖）は、結合組織、皮膚、腱、靭帯及び軟骨中に組み込まれる大きな複合体である。
【００１１】
グルコサミンの工業的供給源
工業製グルコサミンは、甲殻類からのキチンの酸加水分解、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンから誘導される複合糖質から得られる純粋な化合物である。例えば、米国特許第６４８６３０７号では、キチンを酸加水分解するための改良方法、即ち、キチンを微粉サイズにすりつぶし、これを濃塩酸で分解することによりキチンからグルコサミン塩酸塩を作製する方法を記述している。
【００１２】
グルコサミンは、甲殻類の酵素加水分解からも作製できる。例えば、米国特許第５９９８１７３号では、甲殻類の殻のキチンを加水分解する酵素のキチナーゼ類の一群を利用してキチンから直接Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンを作製する新規プロセスを記述している。
【００１３】
培養微生物がグルコサミンを生合成する微生物発酵プロセスを保護する特許も出願されている。例えば、米国特許第６３７２４５７号では、遺伝子組み換え微生物を使用して、発酵によりグルコサミンを作製するための方法及び材料を記載している。
【００１４】
これらのプロセスはすべて、甲殻類の抽出物と競合する、抽出した純粋なグルコサミンの作製に関する。
【００１５】
英国特許第６４９７９１号は、チコリーの乾燥の改良に関する。この特許によるプロセスは、
チコリーの根を切断し、
好気条件下、実質的に７０℃を超えない温度（最良温度５０〜５５℃）で７〜８時間チコリーの根を発酵させ、
チコリーを１５０℃で約３０分間急速乾燥させる
工程を含む。これらの条件では、グルコサミンを生成できない。
【００１６】
「Ｖｅｒｎｏｎｉａ  ｈｅｒｂａｃｅａによる、鉱物肥料及び収穫時間により影響されるイヌリンの作製」（Ｒｅｖｉｓｔａ  ｂｒａｓｉｌｅｉｒａ  ｄｅ  ｂｏｔａｎｉｃａ、１９９８）と題する出版物において、Ｃａｒｖａｌｈｏらは、イヌリン含有植物の栽培中に肥料を添加すると、イヌリン含量が増えないことを示した。
【００１７】
国際公開第２００５／０５３７１０号パンフレットでは、グルコサミンは、数種の植物原材料から、特殊な乾燥プロセスに従うことによって形成され、したがって乾燥重量１ｋｇ当たり１５０〜１０００ｍｇのグルコサミン含量を達成し得ることが見出された。
【００１８】
（発明の概要）
第１の態様において、本発明では、窒素系肥料を使用した後、植物材料を収穫しこれを加熱プロセスに掛けることにより植物からグルコサミンを得る新規プロセスについて記載する。この窒素系肥料は、グルコサミンの前駆体として作用することにより、乾物の０．５％（乾燥重量１ｋｇ当たり５ｇ）を超える量のグルコサミンを含有する植物原材料を得る。したがって、本発明は、従来技術で以前に記載された、例えば、国際公開第２００５／０５３７１０号パンフレットにより示された場合よりずっと多い、植物材料中のグルコサミン含量に達することができる。この結果、この文献に記載のグルコサミンの活性量に達するために必要な植物原材料又は植物の抽出物が減少する。したがって、このプロセスは、工業規模での有用性がより高い。
【００１９】
上述の肥料は、植物材料を収穫する前数時間から数週間の間に、農場又は水耕栽培システムにおいて添加し得る。
【００２０】
（発明の詳細な説明）
本明細書では、「加熱する」（及び派生の「加熱された」）という語は、７０−１１０℃の温度範囲で１０時間を超える、好ましくは一週間未満の加熱プロセスとして理解するものとする。この加熱プロセスは、乾燥プロセスと呼び得る。この加熱プロセスは、液体浸漬にも存在し、乾燥プロセスの代用として、同じ温度及び時間条件で行うことができる。
【００２１】
本明細書では、「遊離グルコサミン」とは、未重合グルコサミンとして理解するものとする。
【００２２】
本明細書では、「多量のグルコサミン」とは、グルコサミンの量が、微量のグルコサミンより多く、相当する新鮮材料（未乾燥の）の量より多く、文献又は特許に掲載のいずれの含量より多いと理解するものとする。原材料の乾物１ｋｇ当たり０．５％を超える量で存在するグルコサミンとして理解するものとする。
【００２３】
本明細書では、「植物」及び「植物材料」は、同義語とみなす。「植物」、「植物材料」又は「植物抽出物」は、本発明の加熱プロセスに従ってグルコサミンを生成できる任意の植物材料、及び本発明の加熱プロセスに従ってグルコサミンを生成できる前記植物材料から、当業者に周知の任意の抽出操作により得られる任意の種類の植物抽出物として理解するものとする。例えば、ある特定量のグルコサミンを含む植物は、本発明のプロセスに掛けた後の乾燥した又は水戻しした植物材料であってもよい。ある特定量のグルコサミンを含む植物抽出物は、本発明のプロセスに掛けた後の前記植物から抽出した水溶液でもよい。
【００２４】
したがって、ある態様において、本発明では、植物からグルコサミンを得る新規プロセスを記載する。
【００２５】
本発明の第１の目的に対し、植物又は植物抽出物は、天然の遊離グルコサミンを多量に含有するために、本発明に従って処理する。
【００２６】
好ましい実施形態では、植物又は植物抽出物は、植物の任意の部分、例えば、葉、塊茎、果実、種子、根、穀粒、又は細胞培養物からのものである。植物原材料の加熱プロセスを制御した後、植物又は植物抽出物は、植物又は新鮮な植物の供給源に応じて、葉、根、及び／又は果実の乾燥、凍結乾燥抽出物、或いはグルコサミン濃縮画分の形態でもよい。
【００２７】
一実施形態では、植物種の栽培を、農場又は水耕栽培システム内で行う。
【００２８】
好ましい実施形態では、植物種の栽培を水耕栽培システム内で行う。
【００２９】
植物又は植物抽出物は、本発明のプロセスを通じて遊離グルコサミンを生成する能力で選択され、特に、Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ、Ｄａｕｃｕｓ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ、Ｂｅｔａなどの、ショ糖、果糖、又はイヌリンを含有する植物種からなる群から選択し得る。
【００３０】
一実施形態では、植物材料又は植物抽出物は、例えば、チコリー（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓ）の根、ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）、キクイモ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）の塊茎、ビート（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）の根からのものでよい。
【００３１】
好ましい実施形態では、植物種は、農場又は水耕栽培システム内でベルギーエンダイブを作出するために使用するＣｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓである。即ち、シコン（ｃｈｉｃｏｎ）、ウィットルーフチコリー、ウィットルーフ、フレンチエンダイブ、ホワイトエンダイブ、ダッチチコリー（Ｄｕｔｃｈ  ｃｈｉｃｏｒｙ）、チコリー（ｓｕｃｃｏｒｙ）、普通のチコリー、又はイタリアンタンポポが、Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓである。ウィットルーフチコリーは、ほとんどの園芸家によって、栽培植物に対して使用される一般名である一方、ベルギーエンダイブは、食料品店で最終的に顧客に販売される製品に対してより多く使用される。エンダイブは、チコリーの根の上端からの芽の二次成長である。一次成長は、種子から成長する植物において農場で行われる。二次成長は、農場外で、通常建物内の暗所で行われる。各根は、シコン（エンダイブ）の成長に至る１つの主芽を有する。
【００３２】
最も好ましい実施形態では、チコリーの栽培は、水耕栽培システム内で行う。チコリーの根は、再循環する水耕溶液中に入れ、更なるグルコサミンの形成に関与する肥料を含む、この栄養液中の栄養分は、チコリーの根の底から発芽する細根の成長を促進する。これらの細根は、チコリーの根の導管系全体においてポンプの機能を果たす。即ち、当業者なら、本実施例において、広範な処理と、多様な適用に対して本発明の化合物の天然量を合理的に調整する混合物とを包含する多くの変更を認識されよう。
【００３３】
一実施形態では、エンダイブの現行の生産システムは、グルコサミンの前駆体として作用する肥料の存在下で使用し、この場合、チコリーの根も、地上部（エンダイブ）と同時に収穫する。
【００３４】
別の実施形態では、エンダイブの現行の商業生産の後、チコリーの根を、グルコサミンの前駆体として作用する肥料の存在下で水耕条件下に再度入れる。
【００３５】
一実施形態では、乾燥してその後水で戻す、本発明に従って処理した新鮮な植物材料又は本発明に従って処理した植物材料は、出発原料として使用し、本発明に従って処理して高いグルコサミン含量を有する植物材料を得ることができる。
【００３６】
好ましい実施形態では、新鮮な植物材料を使用する。
【００３７】
グルコサミンの前駆体として作用する、植物成長用の窒素系肥料を様々な手段と共に使用する本発明によれば、得られたグルコサミンの量は、国際公開第２００５／０５３７１０号パンフレットの場合よりずっと多い（チコリーの根の乾物１ｋｇ当たり５ｇより多い）。
【００３８】
国際公開第２００５／０５３７１０号パンフレットで開示されているように、記載の乾燥プロセスは、植物中に多量のグルコサミンを得る一方法である。チコリーの根の乾物１ｋｇ当たり約５００ｍｇの量、ニンジンの根の乾物１ｋｇ当たり１００ｍｇ、又はキクイモの塊茎若しくはビートの根の乾物１ｋｇ当たり５０ｍｇは、国際公開第２００５／０５３７１０号パンフレットに記載の乾燥プロセスを使用して得ることができる。
【００３９】
その成長中に窒素系肥料と前もって接触させた、新鮮な、乾燥又は水戻しした植物原材料は、植物種及び植物器官に応じて、１１０℃未満の温度で、好ましくは７０〜１１０℃のある温度で、最も好ましくは７０〜９１℃で、１０時間を超える及び好ましくは１週間未満、好ましくは１０〜１２０時間、例えば１２〜５０時間液体浸漬又は乾燥プロセスを使用して加熱する。温度及び／又は加熱時間が、低すぎる及び／又は短すぎる場合、グルコサミンの生成が非効率であるか非常に遅くなることにより、経済的に実行不可能と思われるプロセスとなろう。一方、温度及び／又は加熱時間が、高すぎる及び／又は長すぎる場合、グルコサミンは、生成するがその後徐々に分解するであろう。
【００４０】
したがって、温度及び時間は、加熱プロセスに掛けた相当する植物材料の乾物１ｋｇ当たり少なくとも５ｇのグルコサミンのグルコサミン含量を得るために選択される。
【００４１】
最も好ましい例は、温度８５℃のオーブン中での４８〜７２時間の乾燥を含む。
【００４２】
本発明に従って使用する肥料は、グルコサミンを形成するために必要な糖−窒素化合物の縮合体を形成できる化合物である。これらはアンモニウム塩として存在することが好ましい。このようなアンモニウム塩の例は、とりわけ、硝酸アンモニウム又は硫酸アンモニウムである。好ましいグルコサミンの前駆体は、本発明によるプロセスにおいて意外にも良好な結果を示した硫酸アンモニウムである。
【００４３】
肥料は、植物材料の収穫前数時間から数週間の間に使用する。即ち、当業者なら、本実施例において、多様な適用に対して本発明の化合物の天然量を合理的に調整する肥料の広範な適用を包含する多くの変更を認識するであろう。
【００４４】
グルコサミンの形成に至る最終プロセスについては、植物材料を調製するための適切なプロセスが、国際公開第２００５／０５３７１０号パンフレットに記載されている。植物材料を収穫し、植物種及び植物器官に応じて、切断し、オーブン又は工業用乾燥機中で、１１０℃未満、好ましくは８０〜１０５℃、最も好ましくは９１℃以下の温度で、１０時間を超えて及び好ましくは１週間未満、好ましくは１０〜１２０時間、例えば１２〜５０時間乾燥させる。理論で縛られることを望まないが、植物材料を、例えば薄片又はサイコロに切断し、好ましくは５ｍｍの最大幅を有することが好ましいと考えられる。実際、本発明者らは、そうした操作が、最適化された熱力学的交換に達するために本発明にとって重要であると考えている。
【００４５】
グルコサミンの前駆体として作用する、植物材料の収穫前の肥料の添加により、前駆体がない場合の、乾燥重量１ｋｇ当たり数百ｍｇのグルコサミンから、相当する植物材料の乾物１ｋｇ当たり少なくとも５ｇのグルコサミンへ、上述の反応を著しく高めることができる。
【００４６】
本発明のプロセスは、遊離型のグルコサミンを直接生成する。理論で縛られることを望まないが、前記プロセスにより製造されるグルコサミンの少なくとも半分が遊離型であり、更には、作製されるグルコサミンの殆どすべてが遊離型であると考えられる。実際、グルコサミンの少なくとも５０％、少なくとも７０％、更には少なくとも９０％が、本発明のプロセスに従って、遊離型で作製されると考えられる。このことは、例えばキチン、糖タンパク質、又はプロテオグリカンなどの複合体分子から遊離グルコサミンを放出するために加水分解処理が必須である、グルコサミンを作製するために使用する公知の技術と比較して、本発明の別の利点である。
【００４７】
本発明による植物又は植物抽出物は、食品組成物を調製する際に、更に処理又は抽出することなく使用できる。前記組成物は、栄養バランスのとれた食品若しくはペットフード、栄養補助食品、処方剤又は医薬品組成物の形態となり得る。
【実施例】
【００４８】
以下の実施例は、本発明の範囲内にある幾つかの製品及び製品を作製する方法の例示である。これらは、本発明をまったく限定しないものとみなす。本発明に関し、変更及び修正を行ってもよい。即ち、当業者なら、これらの実施例において、多様な適用に対して本発明の化合物の天然量を合理的に調整するための広範な配合、材料、処理及び混合物を包含する変更を認識するであろう。
【００４９】
実施例１：水耕栽培におけるシコン（エンダイブ）の作出サイクル中に肥料で処理する新鮮なチコリー（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓ）の根
チコリーの根は、２０℃、相対湿度８０％の暗所で２１日間、エンダイブを作出する現行プロセスの間、水耕栽培条件で栽培する。栄養液は、０．１Ｍの硫酸アンモニウムを含有する。２１日後、シコン及び根を収穫する。根をサイコロ（０．５×０．５×０．５ｃｍ）に切断し、次いで温度９１℃のオーブン中で４０時間乾燥させる。
【００５０】
分析：
グルコサミンの抽出：
粉末にして特別に乾燥させたチコリーの根２ｇを、室温で１分間、２０ｍｌの水で抽出する。この溶液をＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ＆  Ｓｃｈｕｌｔｚ（ｎ°５９７）のフィルターで濾過又は遠心分離する。カチオン交換カラム（ＯａｓｉｓカートリッジＷＡＴＥＲＳ、ＭＣＸ型、１８６０００７７６参照）を使用してこの溶液の精製工程を行う。マトリックス上に取り込まれた塩基性化合物は、ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ２％（ｖ／ｖ）で溶出する。濾過後、一定分量を使用してＬＣシステム（ＤＩＯＮＥＸ）に直接注入する。
【００５１】
分離：
ＤＩＯＮＥＸ  ＤＸ  ５００装置で、イオン交換ＰＡ１カラム（４＊２５０ｍｍ）を使用するＨＰＡＥ／ＰＥＤシステムで分析を行う。
【００５２】
【表１】
2008540480.tif 000002
【００５３】
これらの条件では、グルコサミンは、約１１分の保持時間を有し、容易に検出され、適切に処理したチコリー抽出物中の定量化を更に行う。前駆体がない場合の９００ｍｇ／ｋｇ未満及び加熱プロセスがない場合又は市販の乾燥したチコリーの根の１０ｍｇ／ｋｇ未満とは異なり、本実施例では、この方法によって５０００ｍｇ／ｋｇ乾燥重量の濃度を定量化した。
【００５４】
したがって、本発明を、商品価値の維持される副産物としてエンダイブを作出する植物材料に適用することが可能である。
【００５５】
グルコサミンの有無の確認：
ビート植物の抽出物中のグルコサミンの有無の確認するために、異なる３つの定量法で評価した。
【００５６】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
純グルコサミン及び植物抽出物を、酢酸エチル／ＭｅＯＨ／水（５０／５０／１０；Ｖ／Ｖ／Ｖ）を溶離液として使用するＨＰＴＬＣ（高速薄層クロマトグラフィー）シリカゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ、１．０５６４２参照）で分析した。溶出後、このプレートをニンヒドリン１％の酢酸溶液でスプレーし、１２０℃で１０分間加熱する。１つのスポットが、対照及び抽出物に対して同じ速度係数（Ｒｆ）でピンク／青色に現れた。
【００５７】
化学分解
ニンヒドリンの存在下では、酸化的脱アミノ作用がグルコサミンと共に生じ、その結果、糖のＬＣルーチン分析により容易に検出されるアラビノースが放出されることになる。対照及びチコリー抽出物と共にアラビノースの有無を、明確に確認した。
【００５８】
グルコサミンの誘導体化
Ｚｈｏｎｇｍｉｎｇらの「ＵＶ  ＨＰＬＣでのプレカラム誘導を使用する、栄養補助食品、原材料中のグルコサミン塩酸塩、剤形、及び血漿の測定、Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌｙｓｉｓ、１９９９（２０）、８０７−８１４」に記載の、イソチオシアン酸フェニルでのプレカラム誘導体化及びＵＶ検知（λ＝２５４ｎｍ）を使用する逆相クロマトグラフィーは、純粋な化合物及び植物抽出物で使用した。
【００５９】
グルコサミン誘導体の相当するピークを、チコリー抽出物中に、並びに純粋な化合物で検知した。
【００６０】
質量スペクトル分析
植物抽出物は、グルコサミンの有無を確認するために、エレクトロスプレー質量分析法によって正イオン化状態で分析した。質量分析計は、飛行時間型計器（Ｚ−ｓｐｒａｙインターフェースを備えた、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社製ＬＣＴ）であった。標準グルコサミンは、ｍ／ｚ１８０．０８８７のイオンを放出する。このイオンのフラグメントは、分析した植物抽出物中に見られる。
【００６１】
実施例２：水耕栽培でのシコン（エンダイブ）の作出サイクル後に肥料で処理する新鮮なチコリー（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓ）の根
通常の商業生産用の現行条件下で成長したエンダイブを収穫した後、残根を同じ処理に掛ける。根は、１Ｍの硫酸アンモニウムを含有する栄養液を含む第２の栽培サイクルのために、実施例１の場合のように再度水耕栽培条件下に入れる。
【００６２】
根を５日目に収穫し、次いで実施例１に記載のように処理する（切断、乾燥）。その結果、乾燥重量１ｋｇ当たり１０ｇのグルコサミン濃度となる。
【００６３】
この実施例は、商品価値の維持される副生物として、エンダイブを作出する植物材料に、本発明を適用することが可能であるもう１つの実施例である。
【国際調査報告】
2008540480.tif 000003
2008540480.tif 000004
2008540480.tif 000005