(57)【要約】脊椎動物の眼における変性疾患を治療するための方法が提供される。脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脊椎動物の眼における変性疾患の治療または予防法であって、医薬的または眼科的に許容できるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド誘導体を該脊椎動物に投与することを含む方法。
【請求項２】
正帯電レチノイド誘導体がレチニルアミン誘導体である請求項１記載の方法。
【請求項３】
正帯電レチノイド誘導体がレチノイドサイクルの異性化工程を阻害する請求項１記載の方法。
【請求項４】
正帯電レチノイド誘導体が式Ｉ：
【化１】
2008531586.tif 000012
［式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ４またはＲ５は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容できる塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項１記載の方法。
【請求項５】
レチノイド誘導体が、全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス異性体である請求項４記載の方法。
【請求項６】
正帯電レチノイド誘導体が１１−シスレチニルアミンである請求項４記載の方法。
【請求項７】
正帯電レチノイド誘導体が、９−シスレチニルアミン、１３−シスレチニルアミン、または全トランス型レチニルアミンである請求項４記載の方法。
【請求項８】
正帯電レチノイド誘導体が、式ＩＩ：
【化２】
2008531586.tif 000013
［式中：
ｎは１、２、３、または４であり；
ｍ１＋ｍ２＝１、２、または３；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項１記載の方法。
【請求項９】
正帯電レチノイド誘導体が、式ＩＩＩ：
【化３】
2008531586.tif 000014
［式中：
ｎは１、２、３、または４であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは、第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項１記載の方法。
【請求項１０】
正帯電レチノイド誘導体が１１−シスにロックされたレチニルアミンである請求項９記載の方法。
【請求項１１】
正帯電レチノイド誘導体が、式ＩＶ：
【化４】
2008531586.tif 000015
［式中：
Ｒ１は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、ＯＲ８、ＳＲ８、またはＮＲ８Ｒ９であり、ここで、Ｒ８およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６またはＲ７の少なくとも１つは、第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５またはＲ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＯＲ１０、ＳＲ１０、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１３であり、ここで、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘは、アニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体、またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項１記載の方法。
【請求項１２】
レチノイド誘導体が全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、および１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス異性体である請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
正帯電レチノイド誘導体が、式Ｖ：
【化５】
2008531586.tif 000016
［式中：
Ｒ１およびＲ２は、独立して、低級アルキル、直鎖アルキル、直鎖、イソ−アルキル、ｓｅｃ−アルキル、ｔｅｒｔ−アルキル、Ｃ１〜Ｃ６分岐鎖アルキル、置換アルキル基、置換分岐鎖アルキル、ヒドロキシル、ヒドロアルキル、アミン、またはアミドであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ８が、第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ６またはＲ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ９  Ｒ１０、およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項１記載の方法。
【請求項１４】
変性疾患が、眼中のリポフスチン色素蓄積の結果である請求項１記載の方法。
【請求項１５】
変性疾患が、眼中のＮ−レチニリデン−Ｎ−レチニルエタノールアミン蓄積の結果である請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
変性疾患が、加齢性黄斑変性症またはシュタルガルト病黄斑変性である請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
レチノイド誘導体が眼に局所投与される請求項１記載の方法。
【請求項１８】
レチノイド誘導体が点眼薬、眼内注射または眼周囲注射により局所投与される請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
レチノイド誘導体が脊椎動物に経口投与される請求項１記載の方法。
【請求項２０】
脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法であって、該脊椎動物に医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド化合物を投与し、眼におけるレチノイドサイクル中の発色団フラックスを遅らせ、眼における光受容体の変性を予防することを含む方法。
【請求項２１】
正帯電レチノイド化合物がレチニルアミン誘導体である請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
正帯電レチノイド化合物がレチノイドサイクルの異性化工程を阻害する請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
正帯電レチノイド化合物が、式Ｉ：
【化６】
2008531586.tif 000017
［式中：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つが第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ４またはＲ５は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
正帯電レチノイド化合物が１１−シスレチニルアミンである請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
正帯電レチノイド化合物が全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス異性体である請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
正帯電レチノイド化合物が、式ＩＩ：
【化７】
2008531586.tif 000018
［式中：
ｎは１、２、３、または４であり；
ｍ１＋ｍ２は１、２、または３であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐鎖アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項２０記載の方法。
【請求項２７】
レチノイド化合物が、式ＩＩＩ：
【化８】
2008531586.tif 000019
［式中：
ｎは１、２、３、または４であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項２０記載の方法。
【請求項２８】
正帯電レチノイド化合物が１１−シスにロックされたレチニルアミンである請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
正帯電レチノイド化合物が、式ＩＶ：
【化９】
2008531586.tif 000020
［式中：
Ｒ１は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、ＯＲ８、ＳＲ８、またはＮＲ８Ｒ９であり、ここで、Ｒ８およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６またはＲ７の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５またはＲ６は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＯＲ１０、ＳＲ１０、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１３であり、ここで、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項２０記載の方法。
【請求項３０】
レチノイド誘導体が全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス異性体である請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
正帯電レチノイド化合物が、式Ｖ：
【化１０】
2008531586.tif 000021
［式中：
Ｒ１およびＲ２は、独立して、低級アルキル、直鎖アルキル、直鎖、イソ−アルキル、ｓｅｃ−アルキル、ｔｅｒｔ−アルキル、Ｃ１〜Ｃ６分岐鎖アルキル、置換アルキル基、置換分岐鎖アルキル、ヒドロキシル、ヒドロアルキル、アミン、またはアミドであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ８の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ６またはＲ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ２〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐鎖アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である］
で示されるレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態である請求項２０記載の方法。
【請求項３２】
眼中のリポフスチン色素の蓄積を減少させることをさらに含む請求項２０記載の方法。
【請求項３３】
リポフスチン色素がＮ−レチニリデン−Ｎ−レチニルエタノールアミンである請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
眼中のリポフスチン色素の蓄積を減少させることが、変性眼疾患、加齢性黄斑変性症、またはシュタルガルト病黄斑変性の治療法である請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
レチノイド化合物が眼に局所投与される請求項２０記載の方法。
【請求項３６】
合成レチノイドが点眼薬、眼内注射または眼周囲注射により局所投与される請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
合成レチノイドが脊椎動物に経口投与される請求項２０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
（本願は、２００５年２月２４日に出願された米国特許出願番号［ＵＷ−０００９］の利益を主張し、２００５年３月１８日に出願された米国特許出願番号［ＵＷ−００１４］の利益を主張する。これらの開示は全体として本発明の一部として参照される。）
【０００２】
（政府援助の表明）
（本発明は、国立眼病研究所により授与された認可番号ＥＹ００８０６１により政府支援によってなされた。政府は本発明に一定の権利がある。）
【０００３】
本発明は、脊椎動物の眼における変性疾患を治療するための方法を提供する。本発明はさらに、脊椎動物の眼において光受容体の変性を予防する方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
脊椎動物光受容体細胞において、光子は１１−シスレチニリデン発色団の異性化を引き起こし、視覚オプシン受容体と結合した全トランス型レチニリデンにする。この光異性化は、オプシンの構造変化を引き起こし、これは次に、光情報伝達と呼ばれる反応の生化学連鎖を開始する（Ｆｉｌｉｐｅｋら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ６５：８５１−７９、２００３）。視覚色素の再生は、包括的にレチノイド(視覚)サイクルと呼ばれるプロセスにおいて発色団が１１−シス構造に戻ることを必要とする。（ＭｃＢｅｅら、Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０：４６９−５２、２００１において論評）。まず、発色団がオプシンから放出され、レチノールデヒドロゲナーゼにより光受容体において還元される。生成物、全トランス型レチノールは、隣接する網膜色素上皮（ＲＰＥ）においてレチノゾームと呼ばれる細胞下構造中不溶性脂肪酸エステルの形態でトラップされる（Ｉｍａｎｉｓｈｉら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １６４：３７３−８、２００４）。重要な異性化プロセスは分子特性化に対してわかりにくいままである。「イソメロヒドロラーゼ」仮説は、吸熱性異性化反応を行うためにレチニルエステル加水分解のエネルギーを利用する酵素の存在を提案する（Ｒａｎｄｏ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：５９５−６０２、１９９０）。このメカニズムは、全トランス型レチニルパルミテートのＣ１１位での求核攻撃と、アルキル開裂によるパルミテートの同時除去を引き起こす（図１Ａ）。複合体は回転してＣ１１−Ｃ１２結合を新しい構造に変え、続いて発色団−複合体の遷移状態を再水和し、これは１１−シスレチノールの生成に至る。このメカニズムについての直接的証拠はなく、その是非について幅広く論議されている（Ｋｕｋｓａら、Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ  ４３：２９５９−８１、２００３）。別のメカニズムが本発明者らの研究室により提案されており、ここで、全トランス型レチニルエステルは未確認の中間体（全トランス型レチノール、活性化エステルの亜集団、または未知のレチノイド中間体）に変換される（Ｓｔｅｃｈｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：８５７７−８５、１９９９）。この中間体を次いでレチニルカルボカチオンに変換し、遷移状態において再水和し、１１−シス−レチノールとして放出させる（ＭｃＢｅｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３９：１１３７０−８０、２０００）（図１Ｂ）。この吸熱反応における顕著な生成物形成は、レチノイド結合タンパク質の存在下でのみ見られ（ＳｔｅｃｈｅｒおよびＰａｌｃｚｅｗｓｋｉ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｌ  ３１６：３３０−４４、２０００）、生成した異性体の比はレチノイド結合タンパク質の特異性に対して感受性であるらしい（Ｓｔｅｃｈｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：８５７７−８５、１９９９；ＭｃＢｅｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３９：１１３７０−８０、２０００）。両メカニズムにおいて、経路は実験で観察されるようにアルキル開裂を経て進行する（要約および考察については、Ｋｕｋｓａら、Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ  ４３：２９５９−８１、２００３を参照）。第二のメカニズムに基づいて、異性化反応を阻害するために有効な遷移状態類似体を設計することが��きる。反応がカルボカチオン中間体により起こるならば、正帯電レチノイドは酵素を阻害するが、イソメロヒドロラーゼメカニズムはそれほど影響を受けない。
【０００５】
露光後のインビボでの異性化の有効な阻害剤の使用も、視覚色素発色団産生の回復を防止するか、または遅らせる。ＡＢＣＲトランスポーターにおける突然変異に関連するシュタルガルト病（Ａｌｌｉｋｍｅｔｓら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １５：２３６−４６、１９９７）において、全トランス型レチナールの蓄積は、網膜細胞に対して毒性であり、網膜変性を引き起こし、最終的に失明を引き起こすリポフスチン色素、Ａ２Ｅの形成に関与することが提唱されている（ＭａｔａおよびＴｒａｖｉｓ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：７１５４−９；Ｗｅｎｇら、Ｃｅｌｌ  ９８：１３−２３、１９９９）。患者のレチノールデヒドロゲナーゼ、１３−シス−ＲＡ（Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）での治療は、Ａ２Ｅの形成を防止または遅らせ、正常視力を維持する保護特性を有し得る（Ｒａｄｕら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００：４７４２−７、２００３）。１３−シス−ＲＡ（イソトレチノイン、またはＡｃｃｕｔａｎｅ（登録商標））は１１−シスＲＤＨ（ＬａｗおよびＲａｎｄｏ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １６１：８２５−９、１９８９）を阻害し、誘発夜盲症に関連し、１１−シス−ＲＤＨの阻害により１１−シス−レチナールの合成を遅らせるために用いられてきた。他の者は、１３−シス−ＲＡが眼中の異性化プロセスに必須のタンパク質であるＲＰＥ６５を結合させることにより発色団再生を防止する働きをすることを提唱している（ＧｏｌｌａｐａｌｌｉおよびＲａｎｄｏ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０１：１００３０−５、２００４；ＷＯ２００５／０７９７７４；ＷＯ２００６／００７３１４）。これらの発明者らは、１３−シス−ＲＡがＡ２Ｅの形成をブロックすることを見出し、この治療法は、リポフスチン蓄積を阻害し、かくして、シュタルガルト病の患者における視力喪失またはリポフスチン蓄積に関連する黄斑変性の開始を遅らせることを示唆している。レチノイドサイクルおよび非リガンド型オプシンの形成のブロックに関連する潜在的な問題を認識しなければならない（Ｖａｎ  Ｈｏｏｓｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：１９１７３−８２、２００２；Ｗｏｏｄｒｕｆｆら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ３５：１５８−１６４、２００３）。このことはさらに重大な結果をもたらし、患者の予後が悪化する。発色団を形成できないことは、進行性網膜変性に至り、極端な場合、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）に類似した表現型を生成させる。この疾患は、非常にまれな小児期症状であって、出生またはその後まもなくからの子ともに影響を及ぼす。さらに、１３−シス−ＲＡでの治療は、誘発夜盲症と関連する。
【特許文献１】ＷＯ２００５／０７９７７４
【特許文献２】ＷＯ２００６／００７３１４
【非特許文献１】Ｆｉｌｉｐｅｋら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ６５：８５１−７９、２００３
【非特許文献２】ＭｃＢｅｅら、Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０：４６９−５２、２００１
【非特許文献３】Ｉｍａｎｉｓｈｉら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １６４：３７３−８、２００４
【非特許文献４】Ｒａｎｄｏ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：５９５−６０２、１９９０
【非特許文献５】Ｋｕｋｓａら、Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ  ４３：２９５９−８１、２００３
【非特許文献６】Ｓｔｅｃｈｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：８５７７−８５、１９９９
【非特許文献７】ＭｃＢｅｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３９：１１３７０−８０、２０００
【非特許文献８】ＳｔｅｃｈｅｒおよびＰａｌｃｚｅｗｓｋｉ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｌ  ３１６：３３０−４４、２０００
【非特許文献９】Ａｌｌｉｋｍｅｔｓら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １５：２３６−４６、１９９７
【非特許文献１０】ＭａｔａおよびＴｒａｖｉｓ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：７１５４−９
【非特許文献１１】Ｗｅｎｇら、Ｃｅｌｌ  ９８：１３−２３、１９９９
【非特許文献１２】Ｒａｄｕら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００：４７４２−７、２００３
【非特許文献１３】ＬａｗおよびＲａｎｄｏ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １６１：８２５−９、１９８９
【非特許文献１４】ＧｏｌｌａｐａｌｌｉおよびＲａｎｄｏ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０１：１００３０−５、２００４
【非特許文献１５】Ｖａｎ  Ｈｏｏｓｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：１９１７３−８２、２００２
【非特許文献１６】Ｗｏｏｄｒｕｆｆら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ３５：１５８−１６４、２００３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
さらなる望ましくない副作用、例えば、進行性網膜変性、ＬＣＡ、または夜盲症を引き起こすことなく、シュタルガルト病および加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を有効に治療する方法が当該分野において必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、脊椎動物の眼における変性疾患の治療法であって、前記脊椎動物に有効量の正帯電レチノイド誘導体、例えば、レチニルアミン誘導体を、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中で投与することを含む方法を提供する。変性疾患は、加齢性黄斑変性症またはシュタルガルト病黄斑変性である。本発明は、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物における光受容体機能を回復する方法であって、前記脊椎動物に有効量の正帯電レチノイド化合物、例えば、レチニルアミンを医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中で投与して、眼におけるレチノイドサイクル中の発色団フラックスを遅らせ、眼における光受容体機能を回復することを含む方法を提供する。
【０００８】
脊椎動物の眼における変性疾患の治療または予防法であって、前記脊椎動物に有効量の正帯電レチノイド誘導体を医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中で投与することを含む方法が提供される。一つの実施態様において、正帯電レチノイド誘導体はレチニルアミン誘導体である。さらなる態様において、正帯電レチノイド誘導体は、レチノイドサイクルの異性化工程を阻害する。
【０００９】
脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体機能を回復する方法であって、前記脊椎動物に、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド化合物を投与し、脊椎動物の眼におけるレチノイドサイクル中の発色団フラックスを遅らせる、脊椎動物の眼における光受容体変性を防止することを含む方法あるいは眼における光受容体機能を回復する方法が提供される。一つの実施態様において、正帯電レチノイド誘導体はレチニルアミン誘導体である。さらなる態様において、正帯電レチノイド誘導体はレチノイドサイクルの異性化工程を阻害する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は、脊椎動物の眼における変性疾患を治療する方法であって、前記脊椎動物に、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド誘導体、例えば、レチニルアミン誘導体を投与することを含む方法を提供する。変性疾患は、加齢性黄斑変性症またはシュタルガルト病黄斑変性である。本発明はさらに、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法、または脊椎動物の眼における光受容体機能を回復する方法であって、前記脊椎動物に，医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド化合物、例えば、レチニルアミン誘導体を投与し、眼におけるレチノイドサイクル中の発色団フラックスを遅らせ、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防することを含む方法、または眼における光受容体機能を回復する方法を提供する。
【００１１】
光の吸収および１１−シス−レチナールの全トランス型レチナールへの光異性化後、視覚発色団の再生は、光受容体のその暗順応状態への再生において重要な工程である。この再生プロセスは、レチノイド（視覚）サイクルと呼ばれ、光受容体外側部および網膜色素上皮（ＲＰＥ）において生じる。本発明の実験は、眼における発色団の再生は、レチニルカルボカチオン中間体によりおこり得ることを示唆している。異性化は正帯電レチノイドにより阻害されることを示唆する証拠が提供されている。正帯電レチノイドは、異性化プロセスの遷移状態類似体として作用することができる。レチニルアミン（Ｒｅｔ−ＮＨ２）およびレチニルアミン誘導体は、インビトロおよびインビボでレチノイドサイクルの異性化工程を強力かつ選択的に阻害することができる。Ｒｅｔ−ＮＨ２はＲＰＥミクロソーム中タンパク質と結合するが、異性化反応に関与するタンパク質であるＲＰＥ６５とは結合しない。この阻害剤、正帯電レチノイド誘導体、例えばレチニルアミンの新規対は、１３−シス−レチノイン酸（１３−シス−ＲＡ）よりも特異的に発色団フラックスを制御することができる。後者は、眼以外の多くの他の組織に影響を及ぼすその可能性にもかかわらず、レチノイドサイクルを遅らせることにより、シュタルガルト病の症状を治療することが提唱されている。重要なことに、自発的に異性化して、全トランス型異性体になり得、次に各受容体ＲＸＲおよびＲＡＲを活性化する１３−シス−ＲＡと対照的に、Ｒｅｔ−ＮＨ２はマイクロモル濃度でＲＸＲおよびＲＡＲと相互作用しない。従って、Ｒｅｔ−ＮＨ２は１３−シス−ＲＡに対するさらに安全な代替物のようである。
【００１２】
１１−シス−レチニルアミンは、１１−シス−レチナールの還元的アミノ化により調製される。アミンはイソメラーゼ、または視覚サイクルに関与するタンパク質であるイソメロヒドロラーゼの強力な阻害剤である。光漂白後のイソメラーゼのインビボ阻害は、視覚色素発色団の回復に至らず、従って、レチナールの形成の予防およびレチニルエステルの増量に至らない。レチナールは、毒性リポフスチン色素Ａ２Ｅの蓄積に関与し、網膜細胞に対して高い毒性を有し、網膜変性を引き起こす。これは次に、多くの網膜変性疾患、例えば、シュタルガルト病および加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）に至り、これは患者の視力の喪失につながる。患者を１１−シス−レチニルアミンで治療することで、Ａ２Ｅの形成を予防するか、または遅らせることができ、網膜の保護特性を有し得る。
【００１３】
本発明は、脊椎動物の眼における変性疾患を治療する方法であって、前記脊椎動物に、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量のレチニルアミン誘導体を投与することを含む方法を提供する。異性化反応は、インビトロアッセイおよびマウスにおいて正帯電レチニルアミンにより有効かつ可逆的に阻害される証拠が提供されている。これらの研究は、カルボカチオンメカニズムが異性化プロセスに関与することの裏付け証拠を提供する。これらの知見に基づいて、レチニルアミン類似体は１３−シス−ＲＡと比較して、インビボでレチノイドサイクルの阻害に関して優れているようである。脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体の機能を回復する方法であって、前記脊椎動物に、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド化合物、例えば、レチニルアミン誘導体を投与し、眼におけるレチノイドサイクル中の発色団フラックスを遅らせ、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防することを含む方法または眼における光受容体の機能を回復する方法が提供される。脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体の機能を回復する方法であって、前記脊椎動物に、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量のレチニルアミン誘導体を投与し、眼におけるレチノイドサイクル中の発色団フラックスを遅らせ、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法、または眼における光受容体の機能を回復する方法が提供される。
【００１４】
「レチノイド」は、頭−尾で結合した４つのイソプレノイド単位からなる化合物の種類をさす。ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名法に関する合同委員会（Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）参照。すべてのレチノイドは、５つの炭素−炭素二重結合およびアクリル部分の末端で官能基を含有する単環式親化合物から形式上誘導される。基本的なレチノイド構造は、一般に、３つの部分、すなわち、極性末端（例えば、末端アミン、アルコール、アルデヒドまたは酸）、共役側鎖、およびシクロヘキセニル環または非極性アルキル側鎖に細分される。最も一般的な天然のレチノイドの基本的構造は、レチノール、レチンアルデヒド、およびレチノイン酸と呼ばれる。
【００１５】
「正帯電レチノイド誘導体」とは、正帯電置換基、例えば、第一、第二、第三、または第四アミンを有するレチノイドクラスの化合物をさす。さらなる正帯電置換基としては、これに限定されないが、アミン、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、またはスルホニウム（例えば、ＳＭｅ３＋Ｉ−）が挙げられる。
【００１６】
本発明の合成レチノイドは、例えば、１１−シス−レチニルアミン、１３−シス−レチニルアミンまたは９−シス−レチニルアミン、または１１−シス−レチニルアミン、１３−シス−レチニルアミン、９−シス−レチニルアミンである。ある実施態様において、「合成レチノイド」とは、「合成シス−レチノイド」である。
【００１７】
合成レチノイドは、１１−シス−レチニルアミン誘導体、１３−シス−レチニルアミン誘導体、または９−シス−レチニルアミン誘導体、例えば、次のもの：非環式レチニルアミン；ポリエン鎖長が変更されたレチニルアミン、例えば、トリエン酸またはテトラエン酸レチニルアミン；置換ポリエン鎖、例えば、アルキル、ハロゲンまたはヘテロ原子置換ポリエン鎖を有するレチニルアミン；トランスまたはシス−ロックされたポリエン鎖などの変更されたポリエン鎖を有するレチニルアミン、または例えば、アレンまたはアルキン修飾を有するレチニルアミン；および環修飾、例えば、複素環、複素芳香族または置換シクロアルカンまたはシクロアルケン環を有するレチニルアミンを包含する。
【００１８】
脊椎動物の眼における変性疾患の治療または予防法であって、前記脊椎動物に、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド誘導体を投与することを含む方法が提供される。一つの実施態様において、正帯電レチノイド誘導体はレチニルアミン誘導体である。さらなる態様において、正帯電レチノイド誘導体はレチノイドサイクルの異性化工程を阻害する。
【００１９】
一つの実施態様において、脊椎動物の眼における変性疾患の治療または予防法は、正帯電レチノイド誘導体が式Ｉ： 
【化１】
2008531586.tif 000002
(式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは、第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ４またはＲ５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘは、アニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００２０】
一つの態様において、正帯電レチノイド誘導体は全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス異性体である。
【００２１】
さらなる態様において、正帯電レチノイド誘導体は１１−シス−レチニルアミンである。さらなる態様において、正帯電レチノイド誘導体は９−シス−レチニルアミン、１３−シス−レチニルアミン、または全トランス型レチニルアミンである。
【００２２】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における変性疾患を治療または予防する方法は、正帯電レチノイド誘導体が式ＩＩ：
【化２】
2008531586.tif 000003
（式中、
ｎは１、２、３、または４であり；
ｍ１＋ｍ２＝１、２、または３；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グア二ジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００２３】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における変性疾患の治療または予防法は、正帯電レチノイド誘導体が式ＩＩＩ：
【化３】
2008531586.tif 000004
（式中、
ｎは１、２、３、または４であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００２４】
一つの態様において、正帯電レチノイド誘導体は１１−シス−ロックされたレチニルアミンである。
【００２５】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における変性疾患の治療または予防法は、正帯電レチノイド誘導体が式ＩＶ：
【化４】
2008531586.tif 000005
（式中、
Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、ＯＲ８、ＳＲ８、またはＮＲ８Ｒ９であり、ここで、Ｒ８およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６またはＲ７の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５またはＲ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ７は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＯＲ１０、ＳＲ１０、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１３であり、ここで、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００２６】
一つの態様において、正帯電レチノイド誘導体は全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、および１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス異性体である。
【００２７】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における変性疾患の治療または予防法は、正帯電レチノイド誘導体が式Ｖ：
【化５】
2008531586.tif 000006
（式中、
Ｒ１およびＲ２は独立して、低級アルキル、直鎖アルキル、直鎖、ｉｓｏ−アルキル、ｓｅｃ−アルキル、ｔｅｒｔ−アルキル、Ｃ１〜Ｃ６分岐鎖アルキル、置換アルキル基、置換分岐鎖アルキル、ヒドロキシル、ヒドロアルキル、アミン、またはアミドであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ８の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ６またはＲ７は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ８は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ９  Ｒ１０、およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００２８】
一つの態様において、変性疾患は眼におけるリポフスチン色素蓄積の結果である。さらなる態様において、変性疾患は眼におけるＮ−レチニリデン−Ｎ−レチニルエタノールアミン蓄積の結果である。詳細な態様において、変性疾患は加齢性黄斑変性症またはシュタルガルト病黄斑変性である。
【００２９】
さらなる態様において、レチノイド誘導体は眼に局所投与され、さらにレチノイド誘導体は点眼薬、眼内注射または眼周囲注射により局所投与される。レチノイド誘導体は脊椎動物に経口投与することもできる。
【００３０】
脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体機能を回復するための方法であって、医薬的または眼科的に許容されるビヒクル中、有効量の正帯電レチノイド化合物を投与し、眼におけるレチノイドサイクル中の発色団フラックスを遅らせ、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防することを含む方法、または眼における光受容体機能を回復する方法が提供される。一つの実施態様において、正帯電レチノイド誘導体はレチニルアミン誘導体である。さらなる態様において、正帯電レチノイド誘導体はレチノイドサイクルの異性化工程を阻害する。
【００３１】
一つの実施態様において、方法は、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体機能を回復する方法は、正帯電レチノイド化合物が式Ｉ：
【化６】
2008531586.tif 000007
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ４またはＲ５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００３２】
一つの態様において、正帯電レチノイド化合物は１１−シス−レチニルアミンである。さらなる態様において、正帯電レチノイド化合物は全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス」異性体である。
【００３３】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法はまたは脊椎動物の眼における光受容体機能を回復する方法は、正帯電レチノイド化合物が式ＩＩ：
【化７】
2008531586.tif 000008
（式中、ｎは１、２、３、または４であり；
ｍ１＋ｍ２＝１、２、または３；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここでＲ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００３４】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体機能を回復する方法は、正帯電レチノイド化合物が式ＩＩＩ：
【化８】
2008531586.tif 000009
（式中、ｎは１、２、３、または４であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ７Ｒ８＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、またはＮＲ７Ｒ８Ｒ９＋Ｘ−であり；
Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１０であり、ここで、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００３５】
さらなる態様において、正帯電レチノイド化合物は１１−シス−ロックされたレチニルアミンである。
【００３６】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体機能を回復する方法は、正帯電レチノイド化合物が式ＩＶ：
【化９】
2008531586.tif 000010
（式中、Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、ＯＲ８、ＳＲ８、またはＮＲ８Ｒ９であり、ここで、Ｒ８およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６またはＲ７の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ５またはＲ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ７は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ１０Ｒ１１＋Ｘ−、ＯＲ１０、ＳＲ１０、ＣＨ２−ＮＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＮＲ１０Ｒ１１Ｒ１２＋Ｘ−であり；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１３であり、ここで、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態であるとする。
【００３７】
さらなる実施態様において、レチノイド誘導体は全トランス型異性体、９−シス異性体、１１−シス異性体、１３−シス異性体、９，１１−ジ−シス異性体、９，１３−ジ−シス異性体、１１，１３−ジ−シス異性体、または９，１１，１３−トリ−シス異性体である。
【００３８】
さらなる実施態様において、脊椎動物の眼における光受容体の変性を予防する方法または脊椎動物の眼における光受容体機能を回復する方法は、正帯電レチノイド化合物が式Ｖ：
【化１０】
2008531586.tif 000011
（式中、Ｒ１およびＲ２は独立して、低級アルキル、直鎖アルキル、直鎖、ｉｓｏ−アルキル、ｓｅｃ−アルキル、ｔｅｒｔ−アルキル、Ｃ１〜Ｃ６分岐鎖アルキル、置換アルキル基、置換分岐鎖アルキル、ヒドロキシル、ヒドロアルキル、アミン、またはアミドであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ８の少なくとも１つは第一、第二、第三または第四アミンであり；
Ｒ６またはＲ７は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ８は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１４アルキル、Ｃ１〜Ｃ１４アルケニル、Ｃ１〜Ｃ１４アルキリル、Ｃ３〜Ｃ１４分岐アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、ハロゲン、複素環、二置換イミダゾリウム、三置換イミダゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウム、グアニジニウム、イソウロニウム、ヨードニウム、スルホニウム、ＣＨ２−ＳＲ９Ｒ１０＋Ｘ−、ＯＲ７、ＳＲ７、ＣＨ２−ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、またはＮＲ９Ｒ１０Ｒ１１＋Ｘ−であり；
Ｒ９  Ｒ１０、およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＣ３〜Ｃ４シクロアルキル、ＯＨ、またはＯＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；Ｘはアニオン、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ３Ｈ、またはＰ（Ｏ）２（ＯＨ）２である）
のレチノイド誘導体またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶形態を含むものとする。
【００３９】
一つの態様において、変性疾患は、眼におけるリポフスチン色素蓄積の結果である。さらなる実施態様において、変性疾患は、眼におけるＮ−レチニリデン−Ｎ−レチニルエタノールアミン蓄積の結果である。詳細な態様において、変性疾患は加齢性黄斑変性症またはシュタルガルト病黄斑変性である。
【００４０】
さらなる態様において、レチノイド誘導体は眼に局所投与され、さらに、この場合、レチノイド誘導体は点眼薬、眼内注射または眼周囲注射により局所投与される。レチノイド誘導体は脊椎動物に経口投与することもできる。
【００４１】
特定の実施態様において、合成レチノイドは１０−エチル−３，７−ジメチル−ドデカ−２，４，６，８−テトラエニルアミンである。
【００４２】
合成レチノイド化合物およびその誘導体を製造する方法は、例えば、次の文献において開示されている：Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２７２：２３２−４２、１９９９；Ａｎｇｅｗ、Ｃｈｅｍ．３６：２０８９−９３、１９９７；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １４：３９３３−４１、１９７５；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１：３８４−９３、１９８２；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８：２７３２−３９、１９８９；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３：４０８−１６、１９９４；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５：６２５７−６２，１９９６；Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７：３７２−８２、１９９９；Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｃｈｅｍ．  ５６：３１−３９、１９９５；Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｊ．  ５６：１２５９−６５、１９８９；Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｊ．  ８３：３４６０−６、２００２；Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７：４１９８−２０４、２００１；Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （Ｅｕｒｏｐｅ）  ５：１１７２−７５、１９９９；ＦＥＢＳ  １５８：１、１９８３；Ｊ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １０４：３２１４−１６、１９８２；Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １０８：６０７７−７８、１９８６；Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １０９：６１６３、１９８７；Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１２：７７７９−８２、１９９０；Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１９：５７５８−５９、１９９７；Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １２１：５８０３−０４、１９９９；Ｊ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １２３：１００２４−２９、２００１；Ｊ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １２４：７２９４−３０２、２００２；Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：２６１４８−５３、２００１；Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７：４２３１５−２４、２００４；Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  −  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔ．  １：１７７３−７７，１９９７；Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  −  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔ．  １：２４３０−３９、２００１；Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ４９：６４９−５２、１９８４；Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ５８：３５３３−３７、１９９３；Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂ  １０２：２７８７−８０６、１９９８；Ｌｉｐｉｄｓ  ８：５５８−６５；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  １３：２５９−８３、１９８６；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  ４４：８０３−０７、１９８６；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  ５４：９６９−７６、１９９１；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  ６０：６４−６８  （１９９４）；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  ６５：１０４７−５５、１９９１；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  ７０：１１１−１５、２００２；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．  ７６：６０６−６１５、２００２；Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８：９４１２−１６、１９９１；Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：４０７２−７６、１９９３；Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９４：１３４４２−４７、１９９７；ａｎｄ  Ｐｒｏｃ．  ���．  Ｓｏｃ．  Ｌｏｎｄ．  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｂ、Ｂｉｏｌ．  Ｓｃｉ．  ２３３（１２７０）：５５−７６、１９８８（その開示は本明細書の一部として参照される）。
【００４３】
レチニルエステルは、当該分野において公知の方法、例えば、レチノールのカルボン酸での酸触媒エスエル化、カップリング試薬、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの存在下でのレチナールのカルボン酸との反応、またはトリフェニルホスフィンおよびジエチル（イソプロピル）アゾジカルボキシレートの存在下でのレチノールとカルボン酸の間のミツノブ反応、酸ハライドのレチノールとの反応、酸無水物のレチノールとの塩基触媒反応、レチニルエステルのカルボン酸でのエステル交換反応、第一ハライドのレチノイン酸のカルボン酸塩との反応などにより形成することができる。実施態様例において、レチニルエステルは、レチノールのカルボン酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ラウリン酸、オレイン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸、リノール酸、コハク酸、フマル酸などでの酸触媒エステル化により形成することができる。もう一つ別の実施態様例において、レチニルエステルはアシルハライドのレチノールとの反応により形成することができる（例えば、Ｖａｎ  Ｈｏｏｓｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９７：８６２３−２８、２０００参照）。好適なアシルハライドとしては、例えば、アセチルクロリド、パルミトイルクロリドなどが挙げられる。
【００４４】
レチニルエーテルは、当該分野において公知の方法、たとえば、レチノールの第一アルキルハライドとの反応により形成することができる。
【００４５】
ある実施態様において、ＵＶ光に露光することにより、トランスレチノイドを異性化して、シス−レチノイドにすることができる。例えば、全トランス型レチナール、全トランス型レチノール、全トランス型レチニルエステルまたは全トランス型レチノイン酸を異性化して、それぞれ、９−シス−レチナール、９−シス−レチノール、９−シス−レチニルエステルまたは９−シス−レチノイン酸にすることができる。本明細書においてさらに記載するように、約３６５ｎｍの波長を有し、シス−レチノイドの分解の原因となる短波長が実質的にないＵＶ光に露光することにより、トランスレチノイド異性化して、９−シス−レチノイドにすることができる。
【００４６】
レチニルアセタールおよびヘミアセタールは、例えば、酸触媒の存在下で９−シスおよび１１−シス−レチノールをアルコールで処理することにより調製できる。反応の間に形成される水は、例えば、モレキュラシーブのＡｌ２Ｏ３により除去される。
【００４７】
レチニルオキシムは、例えば、レチナールのヒドロキシルアミン、Ｏ−メチル−またはＯ−エチルヒドロキシルアミンなどとの反応により調製できる。
【００４８】
過剰のレチノイド（例えば、過剰の１１−シス−レチノールまたは１１−シス−レチナール）、過剰のレチノイド廃棄物または全トランス型レチナールのリサイクルにおける中間体などを有する合成レチニルアミン誘導体を脊椎動物の眼に投与できる。脊椎動物の眼は典型的には野生型オプシンタンパク質を含む。脊椎動物の眼における内因性レチノイドレベル、およびかかるレチノイドの過剰または不足を測定する方法は、例えば、米国仮特許出願６０／５３８，０５１（２００４年２月１２日出願）（その開示は本発明の一部として参照される）に開示されている。脊椎動物の眼における内因性レチノイドレベル、および過剰のかかるレチノイドを測定する他の方法は、例えば、対象からのサンプルにおけるレチノイドの高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による分析を包含する。例えば、レチノイドレベルまたはこのようなレベルにおける過剰は、対象からの血液サンプルから決定できる。
【００４９】
具体例において、血液サンプルを対象から得ることができ、サンプル中のレチノイドのタイプおよびレベルを順相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（例えば、ＨＰ１１００  ＨＰＬＣおよびＢｅｃｋｍａｎ、Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ−Ｓｉ、４．６  ｍｍ  ｘ  ２５０  ｍｍカラム、１０％酢酸エチル／９０％ヘキサンを１．４ｍｌ／分の流速で使用）により分離し、分析することができる。レチノイドを、例えば３２５ｎｍでダイオード−アレー検出器およびＨＰ  Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ  Ａ．０３．０３ソフトウェアを用いて検出できる。レチノイドにおける過剰は、例えば、サンプル中のレチノイドの特性を正常な対象からのサンプルと比較することにより決定できる。
【００５０】
本明細書において用いられる場合、内因性レチノイド、例えば、１１−シス−レチノールまたは１１−シス−レチナールの増加または過剰レベルは、同じ種の脊椎動物の健康な眼において見られるものよりも低い内因性レチノイドのレベルを意味する。合成レチニルアミン誘導体は内因性レチノイドについて要件を容認できる。
【００５１】
本明細書において用いられる場合、「予防」および「予防的に」とは、合成レチニルアミン誘導体を受容しない比較脊椎動物視覚系と比較して、脊椎動物の視覚系の変性またはさらなる変性あるいは悪化またはさらなる悪化を予防するための合成レチニルアミン誘導体の投与を意味する。「回復」なる用語は、合成レチニルアミン誘導体を受容しない比較脊椎動物視覚系と比較して、脊椎動物視覚系における光受容体機能の長期（例えば、数週間または数ヶ月で測定）改善を意味する。「安定化する」なる用語は、合成レチニルアミン誘導体を受容しない比較脊椎動物視覚系と比較して、脊椎動物視覚系におけるさらなる変性またはさらなる悪化の最小化を意味する。
【００５２】
一つの態様において、脊椎動物の眼は、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）を有するとして特徴づけられる。この疾患は、出生後またはその後まもなくの小児に影響を及ぼす非常にまれな幼少期症状である。これは眼における桿体および錐体の両方に影響を及ぼす。例えば、ＲＰ６５およびＬＲＡＴタンパク質をコード化する遺伝子におけるある突然変異はＬＣＡ中に含まれる。両遺伝子における突然変異の結果、個体が１１−シス−レチナールを適量で生成できなくなる。従って、１１−シス−レチナールは、存在しないか、または減少した量で存在する。ＲＰ６５が欠損した個体において、レチニルエステルがＲＰＥ中に蓄積する。ＬＲＡＴが欠損した個人はエステルを形成することができず、その後、過剰のレチノイドを分泌する。ＬＣＡに関して、合成レチナール誘導体を用いて、存在しないか、または枯渇した１１−シス−レチナールを置換することができる。
【００５３】
もう一つ別の態様において、脊椎動物の眼はシュタルガルト病またはシュタルガルト病黄斑変性を有すると特徴づけられる。ＡＢＣＲトランスポーターにおける突然変異を伴うシュタルガルト病において、全トランス型レチナールの蓄積は、網膜細胞に対して毒性であり、網膜変性を引き起こし、最終的には失明の原因となるリポフスチン色素Ａ２Ｅの形成の原因であると提唱されている。
【００５４】
さらに別の態様において、脊椎動物の眼は加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を有すると特徴づけられる。様々な実施態様において、ＡＭＤは湿潤または乾燥形態であり得る。ＡＭＤにおいて、疾患の後期の合併症が、新規血管の網膜下での成長、または網膜萎縮のいずれかの原因である場合に失明が起こる。特定の理論により拘束されることを意図しないが、全トランス型レチナールの蓄積は、網膜細胞に対して毒性であり、網膜変性そして最終的に失明の原因であるリポフスチン色素、Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニルエタノールアミン（Ａ２Ｅ）の形成の原因であることが提唱されている。
【００５５】
脊椎動物の眼、例えば哺乳動物の眼において、Ａ２Ｅの形成は、光依存性プロセスであり、その蓄積は眼における多くのマイナスの効果につながる。これらには、網膜色素上皮（ＲＰＥ）膜の不安定化、細胞の青色光損傷に対する感作、およびリン脂質の変性障害が含まれる。分子酸素によるＡ２Ｅ酸化の生成物（オキシラン）は培養されたＲＰＥ細胞におけるＤＮＡ損傷を誘発することがさらに示された。すべてのこれらの因子は、視覚の鋭敏さを徐々に減少させ、最終的には失明につながる。視覚プロセスの間にレチナールの形成を減少させることが可能であるならば、眼におけるＡ２Ｅの量の減少につながる。これはＲＰＥおよび網膜の老化を遅らせ、失明を遅らせるかまたは予防する。患者をｌｌ−シス−レチニルアミンで治療することは、Ａ２Ｅの形成を予防するか、または遅らせることができ、網膜に対して保護特性を有し得る。
【００５６】
「治療する」または「治療」とは、症状の軽減；緩和；縮小または損傷、病変、または病気を患者に対してより許容性にすること；変性または減退の速度の遅延；変性の最終点の衰弱度を減少させる；または患者の身体的または精神的健康状態を改善することなどの客観的または主観的パラメータを包含する損傷、病変または病気の治療または改善における成功の兆候を意味する。症状の治療または改善は、健康診断の結果をはじめとする客観的または主観的パラメータに基づく。従って、「治療する」なる用語は、疼痛、痛覚過敏症、異痛症、または侵害受容事象を治療するための本発明の化合物または薬剤の投与を包含する。従って、「治療する」なる用語は、疼痛、痛覚過敏症、異痛症、侵害受容事象、または他の障害に関連する症状または状態の進展を予防または遅延、軽減、阻止または抑制するための、本発明の化合物または薬剤の投与を包含する。「治療的効果」なる用語は、対象における疾患、疾患の症状、または疾患の副作用の減少、排除、または予防を意味する。
【００５７】
「脊椎動物」、「対象」または「患者」または「哺乳動物」とは、本発明の組成物を投与できる任意の脊椎動物または哺乳動物患者または対象を意味する。「脊椎動物」または「哺乳動物」とは、ヒト患者およびヒト以外の霊長類、ならびに実験動物、例えば、ウサギ、ラット、およびマウス、ならびに他の動物を意味する。本発明の具体例において、本発明の方法に準拠した治療のための対象患者を特定するために、標的とされる、または疑わしい疾患または状態を確認するために、あるいは対象においてすでに存在する疾患または状態、例えば、シュタルガルト病の黄斑変性または加齢性黄斑変性症の現状を確認するために、一般に認められたスクリーニング法が用いられる。これらのスクリーニング法としては、例えば、標的とされるかまたは疑わしい疾患または状態に関連する危険因子を確認するための通常の精密検査が挙げられる。これらおよび他の慣例法により、医師が本発明の方法および処方を用いた治療を必要とする患者を選択することが可能になる。
【００５８】
本発明の方法において用いられる化合物は、プロドラッグの形態において存在し得る。「プロドラッグ」は、任意の共有結合した担体であって、活性親薬剤、例えば、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶ、または他の式、あるいはかかるプロドラッグが哺乳動物対象に投与された場合にインビボで本発明の方法において用いられる化合物を放出するものを包含することを意図される。プロドラッグは医薬の多くの望ましい性質（例えば、溶解度、バイオアベイラビリティー、製造など）を向上させることが知られているので、本発明において用いられる化合物は、所望により、プロドラッグ形態において送達することができる。したがって、本発明は、プロドラッグを送達する方法も想定する。本発明において用いられる化合物のプロドラッグ、例えば、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶは、化合物中に存在する官能基を、通常の操作またはインビボのいずれかで、修飾物が開裂して、親化合物になるように修飾することにより調製できる。
【００５９】
従って、プロドラッグは、例えば、本明細書において記載される化合物であって、ヒドロキシ、アミノ、またはカルボキシ基が、プロドラッグが哺乳動物対象に投与された場合に開裂して、それぞれ、遊離ヒドロキシル、遊離アミノ、またはカルボン酸を形成する任意の基と結合している化合物を包含する。例としては、これに限定されないが、アルコールおよびアミン官能基の酢酸塩、ギ酸塩および安息香酸塩誘導体；およびアルキル、炭素環、アリール、およびアルキルアリールエステル、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、フェニル、ベンジル、またはフェネチルエステルを包含する。
【００６０】
レチニルアミンのプロドラッグの例は、さらに、これに限定されないが、レチニルアミンのアミド誘導体、チオアミド誘導体、カーバメート誘導体、チオカーバメート誘導体、イミド誘導体、スルホンアミド誘導体、イミン誘導体、プロトン化  イミン誘導体、イソシアネート誘導体、またはイソチオシアネート誘導体を包含する。例えば、図１１参照。プロドラッグは、例えば、レチニルアミド、レチニルチオアミド、レチニルカーバメート、またはレチニルチオカーバメートである。
【００６１】
化合物は好ましくは、選択された投与経路および、例えば、レミントンの製薬化学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９８０）（全体として本発明の一部として参照される）に記載されているような標準的製薬実施例に基づいて選択される医薬担体と組み合わせられる。
【００６２】
本発明の化合物は、純粋な化学物質として投与できるが、活性成分を医薬組成物として提供するのが好ましい。本発明は、従って、本発明の１以上のレチニルアミン化合物、またはその立体異性体、プロドラッグ、医薬的または眼科的に許容される塩、水和物、溶媒和物、酸塩水和物、Ｎ−オキシドまたは同型結晶性形態を１以上の医薬的に許容される担体および、任意に他の治療および／または予防成分とともに含む医薬組成物を提供する。担体は、組成物の他の成分と適合性であり、その受容者に対して有害でないという意味で許容されなければならない。
【００６３】
シュタルガルト病の黄斑変性、劣性遺伝病は、小児の失明に至る遺伝病である。シュタルガルト病における一次病的欠陥も、毒性リポフスチン色素、例えば、Ａ２Ｅの網膜色素上皮（ＲＰＥ）の細胞における蓄積である。この蓄積は、シュタルガルト病患者において見られる光受容体の死および重度の視力喪失に関与するようである。レチニルアミンは、視覚サイクルにおいてイソメラーゼを阻害することにより、ｌｌ−シス−レチンアルデヒド（１１ｃＲＡＬ）の合成および−５−ロドプシンの再生を遅らせることができる。ロドプシンの光活性化の結果、全トランス型レチナールが放出され、これは、Ａ２Ｅ生合成における第一の反応物質を構成する。
【００６４】
レチニルアミン誘導体は、野生型マウスにおけるリポフスチンの年齢依存性蓄積をブロックすることもできる。さらに、レチニルアミンでの治療は、リポフスチン蓄積を阻害し、かくして、シュタルガルト病およびＡＭＤ患者における視力喪失の開始を遅らせることができる。レチニルアミン誘導体は、低毒性を有すると予想される。最後に、レチニルアミンは、リポフスチン蓄積に関連する網膜または黄斑変性の他の形態の有効な治療法であり得る。
【００６５】
ＲＰＥにおけるＡ２Ｅ蓄積の予防に関して研究が行われてきた。これは、１３−シス−レチノイン酸（Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）またはイソトレチノイン）、挫創の治療に通常用いられる薬剤および１１−シス−レチノールデヒドロゲナーゼの阻害剤での治療を包含する。この提案された治療法の主な欠点は、１３−シス−レチノイン酸が容易に異性化して、全トランス型レチノイン酸になることである。全トランス型レチノイン酸は非常に強力な催奇性化合物であって、細胞増殖および発達に悪影響を及ぼす。レチノイン酸は肝臓においても蓄積し、肝疾患における重要な要因である。
【００６６】
合成レチニルアミン誘導体の脊椎動物の眼への投与はリポフスチン色素（ＡＥ２）（網膜細胞に対して毒性であり、網膜変性の原因である）の形成を予防することができる。ある実施態様においては、合成レチニルアミン誘導体の投与は、不要物、例えば、リポフスチン色素（Ａ２Ｅ）の生成を減少させ、失明（例えば、脈絡膜血管新生および／または網脈絡膜萎縮）を軽減または遅らせることができる。
【００６７】
さらに別の態様において、合成レチニルアミン誘導体を対象、例えば、眼においてＡＢＣＲトランスポーター中に突然変異を有するヒトに投与する。合成レチニルアミン誘導体を、ヒトなどの高齢対象に投与することもできる。本明細書において用いられる場合、高齢のヒト対象は典型的には少なくとも４５才、または少なくとも５０才、または少なくとも６０才、または少なくとも６５才である。ＡＢＣＲトランスポーターにおける突然変異を伴うシュタルガルト病において、全トランス型レチナールの蓄積は、網膜細胞に対して毒性であり、網膜変性、そして最終的には失明を引き起こすリポフスチン色素、Ａ２Ｅの形成の原因であることが提唱されている。理論により拘束されることを望まないが、レチニルアミン誘導体は、視覚サイクルに含まれるイソメロヒドロラーゼタンパク質の強力な阻害剤であり得る。患者のレチニルアミン誘導体、例えば、１１−シス−レチニルアミンでの治療は、Ａ２Ｅの形成を予防または遅延させることができ、正常視力に対する保護特性を有し得る。
【００６８】
合成レチニルアミン誘導体をヒトまたはヒト以外の脊椎動物に投与することができる。ある実施態様において、合成レチニルアミン誘導体は、約５％未満、または約１％未満、または約０．１％未満の他のレチノイドを含有する点で実質的に純粋である。他の実施態様において、合成レチニルアミン誘導体の組み合わせを投与することができる。
【００６９】
合成レチニルアミン誘導体を任意の好適な手段、例えば、経口または局所投与により眼に送達することができる。投与様式は、例えば、点眼薬、眼内注射または眼周囲注射を含み得る。眼周囲注射は、典型的には合成レチニルアミン誘導体を結膜中またはテノン（眼を覆う繊維状組織）に注射することを含む。眼内注射は典型的には、合成レチニルアミン誘導体を硝子体中に注射することを含む。ある実施態様において、投与は非観血的、例えば、点眼薬または経口投与形態である。
【００７０】
医薬的に許容されるビヒクルならびに当該分野において慣例的に用いられる技術を用いて、合成レチニルアミン誘導体を処方することができる。ビヒクルは、合成レチニルアミン誘導体の溶解度に従って選択される。好適な眼科組成物は、点眼薬、注射などにより、眼に局所投与可能なものを包含する。点眼薬の場合、処方はさらに、任意に、例えば、眼科的に適合性の薬剤、例えば、等張化剤、例えば、塩化ナトリウム、濃グリセリンなど；緩衝剤、例えば、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど；界面活性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０とも呼ばれる）、ポリオキシルステアレート４０、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油など；安定剤、例えば、クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウムなど；保存料、例えば、ベンザルコニウムクロリド、および他の成分を包含する。保存料は、例えば、約０．００１〜約１．０％重量／体積の量で用いることができる。処方のｐＨは通常、眼科処方に対して許容できる範囲内、例えば、約ｐＨ４〜８の範囲内である。
【００７１】
注射に関して、合成レチニルアミン誘導体は注射グレードの塩溶液、注射可能なリポソーム溶液などにおいて提供することができる。眼内および眼周囲注射は当業者には公知であり、多くの刊行物、例えば、Ｓｐａｅｔｈ編、Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、  Ｗ．  Ｂ．  Ｓａｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．、８５−８７、１９９０において記載されている。
【００７２】
好適な経口投与形態は、例えば、錠剤、丸薬、サシェ、あるいはハードまたはソフトゼラチン、メチルセルロースまたは消化管中で容易に溶解する別の好適な物質のカプセルを包含する。例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、シュークロース、炭酸マグネシウムなどを包含する、好適な非毒性固体担体を使用できる。（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｅｄ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  “Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”、第１７版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９８５参照）。
【００７３】
合成レチニルアミン誘導体の用量は、対象の臨床状態、症状、および年齢、投与形態などに応じて好適に選択できる。点眼薬の場合、合成レチニルアミン誘導体を、例えば、単回投与あたり約０．０１  ｍｇ、約０．１  ｍｇ、または約１  ｍｇから約２５  ｍｇ、約５０  ｍｇ、約９０  ｍｇまでで投与できる。点眼薬を１日あたり１回以上投与できる。注射の場合、好適な用量は、例えば、約０．０００１  ｍｇ、約０．００１  ｍｇ、約０．０１  ｍｇ、または約０．１  ｍｇ〜約１０  ｍｇから約２５  ｍｇ、約５０  ｍｇ、または約９０  ｍｇまでの合成レチニルアミン誘導体を、１週あたり１〜４回投与できる。別の実施態様において、約１．０〜約３０  ｍｇの合成レチニルアミン誘導体を１週あたり１〜３回投与できる。
【００７４】
経口用量は、典型的には、約１．０〜約１０００  ｍｇの範囲であり、１日あたり１〜４回、またはそれ以上である。用量例は、経口投与については、約１０〜約２５０  ｍｇ、１日あたり１〜３回である。
【００７５】
他の実施態様および用途は本開示の観点から当業者には明らかであろう。以下の実施例は、単に本発明の様々な態様の例示のためのものであって、本発明をなんら限定するものではない。
（実施例）
【実施例１】
【００７６】
レチニルアミンは異性化反応の有効かつ特異的阻害剤である。
１１−シス−レチニルアミン（１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２）が異性化およびエスエル化に影響を及ぼすかどうかを調べるために、インビトロアッセイを用いた。このアッセイにおいて、ＬＲＡＴにより触媒された反応において形成される全トランス型レチニルエステルおよびイソメラーゼによる１１−シス−レチノール生成を測定した（６）。精製されたＲＰＥミクロソームは酵素の供給源であり、全トランス型レチノールは基質であった。１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２は１１−シス−レチノール産生をＩＣ５０  ＝  ７０  ｎＭで強く阻害し（図２Ａ）、一方、エステルの形成は影響を受けなかった（図２Ａ）。Ｒｅｔ−ＮＨ２による異性化の阻害は、ＣＲＡＬＢＰの結合またはＣＲＡＬＢＰに対する結合についての１１−シス−レチノールとの競合のためではない。このことは、ＣＲＡＬＢＰ濃度が６から３０μＭに増大することは、１１−シス−レチノールの産生に影響を及ぼさないという事実により証明される。反応阻害剤の存在下で混合物から単離されるＣＲＡＬＢＰと結合するレチノイドの分析は、有意な量の１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２を示さなかった。全トランス型レチノールの増大した濃度は、図２Ｂにおいて示されるように、阻害のレベルを低下させた。このことは、Ｒｅｔ−ＮＨ２およびレチノールが同じ結合部位について競合することを示唆する。標準的アッセイ条件におけるＤｉｘｏｎ’ｓおよびＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロットは、全トランス型レチノール（ＫＭ  ＝  ０．３  μＭ）が基質であると見なされる場合に、Ｒｅｔ−ＮＨ２についてＫｉ  ＝  ０．１μＭを示した。ＨＰＬＣ分析は、アッセイの開始時および最終時でのＲｅｔ−ＮＨ２の量は変わらず（５％以内）、非阻害Ｎ−パルミトイルレチンアミド以外の中間体はインビトロ実験の過程で形成されなかったことを示す。この推定値は、１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２による阻害の非常に有効な性質を反映する。
【００７７】
阻害の特異性を試験するために、Ｒｅｔ−ＮＨ２の異なる異性体および誘導体を合成し、試験した。１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２（図２ＣおよびＤ、化合物Ｉ）は最も有効な阻害剤であり、９−シス、１３−シス、および全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２は低い有効性レベルを有し、それぞれＩＣ５０＝６４０、７３０、および５００  ｎＭであった（図２Ｃ、Ｄ、化合物ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶ）。Ｒｅｔ−ＮＨ２の非環式類似体は低いが、１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２に匹敵する有効性を有し、１０μＭ濃度でイソメラーゼを７５％阻害した（図２Ｄ、化合物Ｖ）。Ｎ−ヒドロキシレチニルアミン（還元オキシム、図２Ｄ、化合物ＶＩ）はさらに高いＩＣ５０を有していた。興味深いことに、Ｃ１３−１４二重結合の飽和は、効力を１１−シスおよび全トランス型異性体について約１０倍低下させ、このことは、プロトン化アミンのベータ位での二重結合の存在は阻害に重要であることを示唆する（図２Ｄ、化合物  ＶＩＩおよびＶＩＩＩ）。Ｒｅｔ−ＮＨ２のＮ−アルキル化誘導体は異性化を有効に阻害せず、このことは、これらの類似体がイソメラーゼの結合ポケットに最適に適合しないことを示唆する（図２Ｄ、化合物ＩＸ、Ｘ、およびＸＩ）。Ｒｅｔ−ＮＨ２およびその誘導体はイソメラーゼの基質でない。全トランス型チオレチノールも全トランス型１３，１４−ジヒドロレチノールも異性化に影響を及ぼさないので、阻害はアミノ誘導体に対して特異的であった。
【００７８】
図２Ａは、Ｒｅｔ−ＮＨ２およびその誘導体による１１−シス−レチノールイソメラーゼ活性の阻害を示す。Ａ．１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２は、ＬＲＡＴ活性に影響を及ぼすことなくインビトロで低μＭにおいてイソメラーゼ活性を阻害する。灰色の棒グラフおよび白色の棒グラフは、１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２の増大する濃度の関数としての、それぞれ１１−シス−レチノールおよび全トランス型レチニルエステルの相対量に相当する。Ｂ．初期反応速度（ｖ）および全トランス型レチノールおよび１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２の異なる濃度間の関係。プロットされたグラフは、Ｒｅｔ−ＮＨ２によるイソメラーゼの阻害が可逆性であり、全トランス型レチノールにより匹敵することを示す。Ｃ．異なるＲｅｔ−ＮＨ２異性体によるイソメラーゼ阻害の効力。Ｄ．Ｒｅｔ−ＮＨ２類似体によるイソメラーゼアッセイにおける１１−シス−レチノール産生の阻害。
【００７９】
Ｒｅｔ−ＮＨ２の特異性を、生化学アッセイによりさらに試験した。実験は、阻害剤がＲＰＥタンパク質と結合し、ＲＰＥ、ＲＰＥ６５の最も豊富なタンパク質と結合しないことを示した。ＲＰＥミクロソームをＤＨＰＣで可溶化させた場合、イソメラーゼ活性は少しだけ減少した。次に、［３Ｈ］−Ｒｅｔ−ＮＨ２をＲＰＥ抽出物に添加し、ゲル濾過カラム上にかけた。タンパク質を分別し、フラクション１８から６０の間で溶出し（図３Ａ）、その間、放射能がフラクション３６〜３８において溶出した。ＲＰＥ６５をフラクション２３〜３４における免疫ブロット法により同定した（図３Ｂ）。このフラクションにおける最も豊富なタンパク質が質量分析により同定され、グルコースホスフェートイソメラーゼ、Ｄ−グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ホスホグリセレートムターゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、エノラーゼ、アネキシンＶ、カルビンジン２、およびＬＲＡＴを包含する。それほど豊富でないタンパク質の同定は進行中である。この放射性溶出特性は、形成された［３Ｈ］−Ｒｅｔ−ＮＨ２はＲＰＥ６５と異なるタンパク質と複合体を形成したことを示唆する。ＬＲＡＴはクロマトグラムのほとんどのフラクションにおいて溶出され、このことは、複数のオリゴマータンパク質−界面活性剤複合体が抽出物中に存在することを示唆する（図３Ｂ）。対照実験において、異性化反応を弱く阻害するレチノイド、例えば、レチノイン酸、全トランス型レチノール、およびＲｅｔ−ＮＨ２アセチルアミド（ＸＩＩＩ）は、空隙容量中または低分子量化合物とともに溶出した。しかしながら、強力な阻害剤、Ｒｅｔ−ＮＨ２の非環式類似体（Ｖ）は、Ｒｅｔ−ＮＨ２と同様に、フラクション３６〜３８中に溶出した。熱変性タンパク質を用いた対照実験において、［３Ｈ］−Ｒｅｔ−ＮＨ２はフラクション４８〜６０中に溶出し、このことは、特異的結合が非変性タンパク質を必要とすることを示唆する。直接分析において、Ｒｅｔ−ＮＨ２はＲＰＥ中に存在するレチノールデヒドロゲナーゼまたはレチニルアセテートヒドロラーゼ（Ｋｕｋｓａら、Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ  ４３：２９５９−８１、２００３）を阻害しなかった。
【００８０】
図３は、ＲＰＥタンパク質のゲル濾過クロマトグラフィーを示す。ＲＰＥミクロソームを１０  ｍＭ  ＤＨＰＣで可溶化し、１１，１２−ジ［３Ｈ］−全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２  （１μＭ）とともにインキュベートし、４ｍＭ  ＤＨＰＣを含有するＴｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）で平衡化した。タンパク質を一定流速０．４  ｍｌ／分で溶出させた。０．４ｍｌフラクションのタンパク質および放射性レベルをＳＤＳ−ＰＡＧＥ、シンチレーションカウンティング（Ａ）、ならびに抗ＲＰＥ６５および抗ＬＲＡＴ抗体での免疫ブロット（Ｂ）により検査した。星印は、最大放射性に関連するフラクションを示す。
【実施例２】
【００８１】
レチニルアミンは、治療されたマウスにおける発色団および視覚機能の回復に影響を及ぼす。
【００８２】
レチニルアミン（Ｒｅｔ−ＮＨ２）は、強い照明に露光された後、マウスにおいて11−シス−レチナールの再生を特異的に阻害する。この実験において、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２は、１１−シス異性体よりも安定で、利用可能であるので、阻害剤として選択された。マウスに全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２を強制摂取させ、２０分間強い光に露光し、次いで暗所で５時間回復させた。すべての実験における異なる形態のレチノイドの合計量は変化しなかった。治療されたマウスにおいて、残留量の１１−シス−レチナールのみが存在し（ピーク２および２’、図４Ａ、真ん中のパネル）、一方、未処置のマウス１１−シス−レチナールは完全に回復した（ピーク２および２’、図４Ａ、一番上のパネル）。全トランス型レチニルエステルのレベルは、対照と比較して、処置動物において上昇し（図４Ａ、ピーク１、真ん中のパネル）、このことは、ＬＲＡＴ活性が、インビボで本発明者らのインビトロ結果にしたがって影響を受けないことを示す。全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２での処置は、処置された動物における９−シス−レチノールの取り込み、輸送または酸化に影響しなかった（図４Ａ、３番目のパネル）。この実験に関して、マウスを９−シス−レチノールおよび全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２の両方で処置し、２４時間後に漂白し、５時間暗所で回復させた。９−シス−レチナールの存在が処置動物において確認された（図４Ａにおけるピーク４および４’、一番下のパネル、それぞれ、ｓｙｎ−およびａｎｔｉ−９−シス−レチナールオキシムに対応する）。１１−シス−レチナールは、Ｒｅｔ−ＮＨ２での処置後に還元および／またはエステル化されなかった。  このことは、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２が、予想されるように、ロドプシンの結合ポケット、ＲＰＥ、または光受容体デヒドロゲナーゼによる酸化／還元、あるいはＲＰＥから、またＲＰＥへの輸送に対して、発色団と競合しなかったことを示唆する。このことは、Ｒｅｔ−ＮＨ２が異性化反応の特異的阻害剤であるという考えを裏付ける。
【００８３】
Ｒｅｔ−ＮＨ２処置および２０分高強度露光後の発色団回復の５および２４時間用量依存性を図４Ｂに示す。Ｒｅｔ−ＮＨ２−処置された動物は、未処置動物よりもかなりゆっくりと発色団を回復した（５時間回復についてＩＣ５０＝２  ｍｇ／ｋｇ、図４Ｂ、黒丸）。Ｒｅｔ−ＮＨ２の発色団回復に対する影響は可逆的で、これは、マウスを暗所中２４時間保持した後に発色団のレベルが５時間と比較して増大したという事実により証明される（２４時間回復についてＩＣ５０  ＝  ２４  ｍｇ／ｋｇ、図４Ｂ  白丸）。全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２（５０  ｍｇ／ｋｇ）で処置され、露光されていないマウスは、３０時間後に眼中で正常なレチノイドレベルを有していた。１３−シス−ＲＡはインビトロ、ならびに処置された動物においてレチノイドサイクルを阻害することが証明された。Ｒａｄｕら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １００、４７４２−７、２００３；Ｓｉｅｖｉｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９８、１８３５−４０、２００１。Ｒｅｔ−ＮＨ２の効力を１３−シス−ＲＡと平行して試験した。本発明者らのアッセイの条件において、１３−シス−ＲＡ（５０  ｍｇ／ｋｇ）は無効であった（図４Ｂ、赤い三角）。Ｒｅｔ−ＮＨ２は、長期の光処理により光受容体１１−シス−レチナールのすべてが光異性化して、全トランス型になった後に、発色団の回復を完全にブロックする（図７）。かくして、Ｒｅｔ−ＮＨ２は１３−シス−ＲＡと比較して、異性化反応のより特異的かつ非常に有効な阻害剤である。
【００８４】
図４は、レチニルアミンがインビボでの視覚発色団の再生を阻害することを示す。Ａ．ＷＴマウス眼からの非極性レチノイドのクロマトグラフィー分離。Ｇａｎｚｆｅｌｄチャンバー中で１５０  ｃｄ・ｍ−２  Ｗで２０分間漂白する２４時間前にマウスに全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２を強制摂取させた。１１−シス−レチナールの再生を暗所中２４時間許容し、レチノイドを眼から抽出し、物質および方法に記載されるように、順相ＨＰＬＣにより分離した。溶出時間および次のレチノイド：１、全トランス型レチニルエステル；２，２’、ｓｙｎ−およびａｎｔｉ−１１−シス−レチナールオキシム；３、ｓｙｎ−全トランス型レチナールオキシム；４，４’、ｓｙｎ−およびａｎｔｉ−９−シス−レチナールオキシム；５、全トランス型レチノールに対応する吸収スペクトルに基づいてピークを同定した。Ｂ．５時間または２４時間の暗順応の間の全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２の増大する用量での１１−シス−レチナールオキシムレベルの変化。四角は、漂白直後にレチノイドを含まない植物油を強制摂取させたマウス中に存在する１１−シス−レチナールオキシムのレベルを示し、矢印は、５時間の暗順応の間の視覚発色団の増加を示す。三角は、５０  ｍｇ／ｋｇの１３−シス−ＲＡを強制摂取させたマウスにおいて見られる１１−シス−レチナールのレベルに相当する。ＣおよびＤ．全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２処置されたマウスおよび対照マウスについて増加する強度の１回フラッシュＥＲＧ応答。増加するフラッシュ刺激に対して一連の反応が、選択された強度（Ｃ）について全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２処置されたマウスおよび対照マウスについて得られ、漂白前ならびに漂白後５時間および２４時間で暗順応条件下（Ｄ）での様々な光強度に対するａ波およびｂ波の関数としてプロットした。暗順応したマウスを強い一定の照明（１５０  ｃｄ・ｍ−２）で２０分間漂白した。全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２処置されたマウスからの応答は、１回量（５０ｍｇ／ｋｇ）の投与により対照マウスと比較して有意に弱められた（Ｐ＜０．０００１、ワンウェイＡＮＯＶＡ）。ＳＥバーが示される。
【００８５】
図７は、明順応条件において、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２処置されたマウスおよび対照マウスについて増大する強度の１回フラッシュＥＲＧ応答を示す。増大するフラッシュ刺激に対する一連の反応が、選択された強度について全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２処置されたマウスおよび対照マウスについて得られ（Ａ）、強い一定の照明（１５０  ｃｄ・ｍ−２）で２０分間漂白する前ならびに漂白後５時間および２４時間での明順応条件下での光強度に対するａ波およびｂ波（Ｂ）の関数としてプロットした。全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２処置されたマウスからの応答は、対照マウスと比較して、１回量の投与（５０  ｍｇ／ｋｇ）により若干弱められた（ｐ＞０．１、ワンウェイＡＮＯＶＡ）。ＳＥバーが示される。
【００８６】
Ｒｅｔ−ＮＨ２−処置されたマウスのレチノイドの分析から誘導された結論は、視覚機能のＥＲＧ分析により裏付けられた。ＥＲＧ応答は、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２投与での１１−シス−レチナール再生における減少により有意に影響を受けた。全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２の増加する濃度の１回量（０．５〜１００  ｍｇ／ｋｇ）を経口強制摂取によりマウスに送達した。処置されたマウスは全身毒性の症状、例えば、減量または胃腸管傷害を示さなかった。次に、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２投与の、野生型マウスの視覚生理に対する影響を、インビボでＥＲＧを用いて評価した。暗順応ＥＲＧを全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２強制摂取（５０  ｍｇ／ｋｇ）後２４時間ならびに強力漂白後５および２４時間後に連続して行った。処置されたマウスは漂白に得られる記録について正常な波形および応答を示した。しかしながら、２０分の一定照明および５時間の暗順応後、処置されたマウスからのａ波およびｂ波振幅は有意に弱められ、２４時間後でもそのままであった（Ｐ＜０．０００１、ワンウェイＡＮＯＶＡ）。対照的に、対照マウスの暗順応状態は漂白の５時間後に完全に回復した（図４ＣおよびＤ）。明所ＥＲＧ状態を使用して錐体機能を試験した。錐体機能の回復は、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２により桿体機能と同程度に影響を受けなかった。これは、錐体が桿体よりも速く発色団を回復させることができ、強力な漂白後でさえも飽和せず、低レベルの再生錐体色素でこれらを作動させるという事実の結果である（図６）。
【００８７】
図６は、レチニルアミンが強力な漂白後にインビボで視覚発色団の再生を阻害することを示す。非極性レチノイドのＷＴマウスの眼からのクロマトグラフィー分離。マウスに１００  ｍｇ／ｋｇの全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２を漂白の２４時間前に強制摂取させた。マウスを次に５００  ｃｄ  ・ｍ−２に４８時間露光させ、Ｇａｎｚｆｅｌｄチャンバー中で漂白した。１１−シス−レチナールの再生を暗所で２４時間行い、レチノイドを眼から抽出し、物質および方法において記載されているように順相ＨＰＬＣにより分離した。溶出時間および吸収スペクトルに基づいて特定されたピークは、次のレチノイドに相当する：１、全トランス型レチニルエステル；２，２’、ｓｙｎ−およびａｎｔｉ−１１−シス−レチナールオキシム；３，３’ｓｙｎ−およびａｎｔｉ−全トランス型レチナールオキシム；４、全トランス型レチノール。
【００８８】
１３−シス−ＲＡは異性化して、全トランス型ＲＡになり、次いで９−シス−ＲＡになることができ、これらはどちらも、ＲＡレセプター（ＲＡＲ）の有効なリガンドである。９−シス−ＲＡもレチノイドＸレセプター（ＲＸＲ）と結合し、活性化する。これは、ＲＡＲおよびＲＸＲリガンドの毒性の一因となる。前述のようなレセプター細胞を用いて、Ｒｅｔ−ＮＨ２がこれらの核レセプターを活性化できるかどうかを調査した（２０）。β−ガラクトシダーゼ活性アッセイを用いて、全トランス型ＲＡ、９−シス−ＲＡ、およびＲｅｔ−ＮＨ２がこれらの核レセプターの作用物質であるかどうかを調べた。全トランス型ＲＡおよび９−シス−ＲＡと対照的に、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２はＲＡＲまたはＲＸＲのいずれかによりマイクロモル濃度でタンパク質転写を活性化しない（図８および９）。
【００８９】
図８は、Ｆ９−ＲＡＲＥ−ｌａｃＺレポーター細胞系のレチニルアミンに対する応答を示す。Ｆ９−ＲＡＲＥ−ｌａｃＺ細胞は、内因性ＲＡＲおよびＲＸＲを発現し、ｌａｃＺの構造と最小プロモーターの制御下で、ＤＲ５エレメントの上流にトランスフェクトされた（１）。Ｆ９−ＲＡＲＥ−ｌａｃＺ細胞を異なる用量の全トランス型ＲＡまたはＲｅｔ−ＮＨ２で２４時間処理し、その後、細胞を収穫し、可溶性基質ｏ−ニトロフェニルβ−Ｄ−ガラクトピラノシドを用いてβ−ガラクトシダーゼ活性を測定した。無色基質をβ−ガラクトシダーゼにより開裂させて、黄色ｏ−ニトロフェノールを得、分光光度計を用いて、その吸光度を４２０  ｎｍで測定した。実験を２回繰り返して、同様の結果を得た。ＲＡＲＥレポーター細胞系Ｆ９−ＲＡＲＥ−ｌａｃＺ（ＳＩＬ１５−ＲＡ）はＭｉｃｈａｅｌ  Ｗａｇｎｅｒ博士（ＳＵＮＹ  Ｄｏｗｎｓｔａｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ）およびＰｅｔｅｒ  ＭｃＣａｆｆｅｒｙ博士（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ）からの贈り物であった。ＲＡ−反応性Ｆ９細胞系を、イー・コリ（Ｅ．  ｃｏｌｉ）ｌａｃＺ遺伝子の上流に配置されたヒトＲＡレポーター−β遺伝子（ＲＡＲβ）由来のＲＡＲＥエレメントのレポーター構造でトランスフェクトした。（１）細胞を、Ｎ３補足物および抗生物質を含有するＬ１５−ＣＯ２培地中で成長させた。細胞を２４時間暗所中、３７℃、１００％湿度で、ＥｔＯＨ中に表示された濃度で溶解させたＲＡまたはＲｅｔ−ＮＨ２で刺激し、溶解させ、β−ガラクトシダーゼ酵素分析システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）を用いてβ−ガラクトシダーゼの発現について分析した。Ｗａｇｎｅｒ、Ｍ．、Ｈａｎ、Ｂ．  ＆  Ｊｅｓｓｅｌｌ、Ｔ．  Ｍ．（１９９２）  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １１６、５５−６６（本発明の一部として参照される）。
【００９０】
図９は、レチニルアミンによるＤＲ１−エレメントの活性化を示す。ＨＥＫ−２９３細胞をｌａｃＺの構造で、最小プロモーターおよび５つの連続した上流ＤＲ１エレメントの制御下でトランスフェクトした。（上）ＨＥＫ−２９３細胞をＤＲ１−レポーター構造およびマウスＲＸＲαの両方で、ＣＭＶプロモーターの制御下で同時トランスフェクトした。細胞を次いで、表示されたレベルの全トランス型ＲＡ、９−シス−ＲＡ、またはＲｅｔ−ＮＨ２で４８時間処理した。細胞を収穫し、β−ガラクトシダーゼ活性を物質および方法において記載されたようにして分析した。（下）ＤＲ１−レポーターでトランスフェクトされた細胞を異なる用量の全トランス型ＲＡ、９−シス−ＲＡ、またはＲｅｔ−ＮＨ２で、ＲＸＲの不在下で４８時間処理した。細胞を収穫し、β−ガラクトシダーゼ活性を物質および方法において記載されたようにして分析した。逆転写されたマウス肝臓ｃＤＮＡからのプライマー３’−ＧＧＧＣＡＴＧＡＧＴＴＡＧＴＣＧＣＡＧＡ−５’および３’−ＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡ−５’を用いてマウスＲＸＲ−αをクローンした。ＲＸＲ−αＯＲＦを次いでｐｃＤＮＡ３．１単一方向ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）中に、プライマー３’−ＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＡＣＣＡＡＡＣＡＴＴＴＣＣＴ−５’および３’−ＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡ−５’を用いてサブクローンした。ベクターＲＸＲからのＲＸＲＥエレメント（２）半透明レポーターベクター（Ｐａｎｏｍｉｃｓ、Ｒｅｄｗｏｏｄ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を、プライマー３’−ＣＴＣＡＡＣＣＣＴＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＴＣＴ−５’および３’−ＡＴＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＴＴＡＴＡＴＡＣＣＣＡ−５’を用いて増幅させ、最小プロモーターおよびｐＢＬＵＥ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のβ−ガラクトシダーゼの上流にクローンした。これはβ−ガラクトシダーゼの上流に５つの連続したＤＲ１エレメントを配置し、その発現は、ＲＸＲの活性化およびＲＸＲホモダイマーの形成に依存する。突然変異が存在しないこと確実にするために、全構造の両鎖を並べた。リポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、製造業者のプロトコルに従ってＨＥＫ−２９３細胞を一時的にトランスフェクトし、次いで２４時間後、２４穴プレートに分割して、等しい数のトランスフェクトされた細胞が各アッセイウェル中に確実にあるようにした。細胞を適当な濃度のＲＡ、９−シス−ＲＡ、またはＲｅｔ−ＮＨ２で刺激した。β−ガラクトシダーゼの発現を前記のようにして４８時間後に分析した。
【００９１】
次に、ＲＡ酸化経路を調べた。ＣＹＰ２６Ａ１でトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞を用いて、ｃＤＮＡ  ＲＡは容易に酸化して、４−オキソ−、４−ヒドロキシ−、および１８−ヒドロキシ−代謝体になることが判明し、一方、ヒドロキシ−またはオキソ−Ｒｅｔ−ＮＨ２が存在することの証拠はない。この観察は、Ｒｅｔ−ＮＨ２がチトクロームＰ４５０  ＣＹＰ２６酵素の経路により直接代謝されないことを示す。分泌に加えて、Ｒｅｔ−ＮＨ２はまず脱アミノ化により分解して全トランス型レチノール／レチナールになり、これは、Ｒｅｔ−ＮＨ２処理された細胞において増大することが観察された。分泌に加えて、Ｒｅｔ−ＮＨ２をアミド化して、処置されたマウスの肝臓サンプルおよび標準の化学合成のＨＰＬＣおよび質量分析により確認されるように、Ｎ−レチニルパルミトアミドにした。Ｎ−レチニルパルミトアミド（ＸＩＩ）は異性化を阻害しないが、このアミドおよびＮ−レチニルアセトアミド（ＸＩ）もマウスにおける再生の有効な阻害剤であった。これらの観察は、アミドが貯蔵され、加水分解されて、遊離アミンに戻る際、ＲｅｔＮＨ２の長時間持続する効果を説明する。
【００９２】
図１０は、レチニルアミドが、レチニルアミドでの処理後のマウスにおける視覚発色団の再生を阻害することを示し、レチニルアミドの強制摂取によりマウスを処理することは、遊離レチニルアミンの場合に遊離レチナールの量を減少させることにより影響を及ぼすことを示す。図１０は、阻害剤での処理および光漂白後のマウスの眼における１１−シス−レチナールの相対量を示す。マウスに植物油中阻害剤の溶液（対照、非処置、ＲＰＮ−レチニルパルミトアミド、ＲＡＮ−レチニルアセトアミド、Ｒｅｔ−ＮＨ２−全トランス型レチニルアミン）を強制摂取させ、暗所で１６時間保持し、次いで光刺激し、暗所でさらに５時間保持した後、その眼を分析した。アミドの効果は遊離レチニルアミンと同じであった。
【実施例３】
【００９３】
全トランス型レチノール異性化のメカニズムおよび網膜疾患の病因を研究するための新規手段
【００９４】
異性化メカニズムを研究する過程で、レチノイドサイクルの鍵酵素の特異的かつ有効な阻害剤が見出された（ＭｃＢｅｅら、Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０：４６９−５５２、２００１）。異性化反応を行う酵素は知られていないが、異性化のメカニズムに関して、２、３の異なる理論が出てきている。一つのメカニズムにおいて、全トランス型レチニルエステルは、エステル加水分解のエネルギーをＣ１１−１２二重結合の吸熱性異性化と結びつける仮想酵素であるイソメロヒドロラーゼの直接的基質である（Ｒａｎｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：５９５−６０２、１９９０）（図１Ａ）。異性化反応に関する多くの観察がイソメロヒドロラーゼ仮説に疑問を投げかけている（Ｋｕｋｓａら、Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ  ４３：２９５９−８１、２００３）。これらの矛盾を調整するために、第二のメカニズムが提案され、これは異なる答えならびに異性化工程に関する疑問を提示している。提案されたメカニズム（図１Ｂ）において、まだ同定されていない中間体が酸素原子でプロトン化を受け、これは最終的にカルボン酸の除去につながり、全トランス型レチノールがレチニルカルボカチオンとして残る。正電荷は共役二重結合全体にわたって非局在化している（図１Ｂ）。結果は、Ｒｅｔ−ＮＨ３＋がカルボカチオンメカニズムにおいて遷移状態類似体を模倣することを示唆している。１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２は全トランス型よりも有効な阻害剤であるので、レチニルカルボカチオン様構造は１１−シス−レチナール構造と類似している可能性がある。
【００９５】
本発明者らのインビトロおよびインビボ実験からの観察は、Ｒｅｔ−ＮＨ２が異性化プロセスの特異的阻害剤であることを示す。インビトロアッセイは、この化合物がＬＲＡＴ、レチノールデヒドロゲナーゼ、またはレチニルエステルヒドロラーゼを阻害しないことを証明する。さらに、Ｒｅｔ−ＮＨ２はＣＲＡＬＢＰまたはＲＰＥ６５と結合しない。最も有効な阻害剤は１１−シス−Ｒｅｔ−ＮＨ２であり、アミノ基（Ｎ−レチニルヒドロキシルアミンを除く）の修飾は、有効性を低下させ、このことは、化合物が活性部位にぴったりと適合していることを示唆する。Ｎ−レチニルヒドロキシルアミンの場合、−ＮＨＯＨ基が−ＮＨ３＋基と置換されているために水素結合網目構造があり、この化合物は酵素の結合部位においてプロトン化され得る。試験されたレチノイドのほとんどは、中性ｐＨでプロトン化され、この特性は、プロトン化阻害の必須条件であるらしい。嵩高いＲｅｔ−ＮＨ２誘導体、例えばＮ−アルキル−Ｒｅｔ−ＮＨ２は良好な阻害剤でなく、たぶんイソメラーゼの結合ポケット中にうまく適合しない。この観察に基づいて、実際の基質は嵩高い疎水性レチニルエステルではなく、おそらくはより極性が高く、置換されにくい成分、例えば、レチノールまたは低分子量レチニルエステルであるという仮説が立てられる。インビトロ結果は、レチノイドサイクルにおける他の工程も、異性化反応を除いてはＲｅｔ−ＮＨ２により影響を受けないという考えを裏付ける。
【００９６】
レチノイドサイクルおよびシュタルガルト病の阻害
ＡＢＣＲ遺伝子における突然変異は、劣性シュタルガルト病黄斑変性と関連づけられた（Ａｌｌｉｋｍｅｔｓら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １５：２３６−４６、１９９７）。Ｍａｔａおよび共同研究者らは、リポフスチンの主なフルオロフォアであるＡ２Ｅが、８月齢のＡｂｃｒ＋／−マウスにおいて、野生型マウスにおいてよりも〜４倍多いことを見出した（Ｍａｔａら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ４２：１６８５−９０、２００１）。この蓄積は露光に強く依存した。この蓄積は、シュタルガルト病患者における光レセプターの死および重度の視力喪失に関与すると推測される。（Ｗｅｎｇら、Ｃｅｌｌ  ９８：１３−２３、１９９９）。これらの知見に基づいて、シュタルガルト病のマウスモデルにおいてリポフスチン蓄積を阻害する（かくして、レチノイドサイクルを遅らせる）ための新しい治療法が提案された。この目的に関して、１３−シス−ＲＡ（イソトレチノイン、またはＡｃｃｕｔａｎｅ（登録商標））（１１−シス−ＲＤＨ（Ｒａｄｕら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００：４７４２−７、２００３）を阻害し、誘発夜盲症と関連づけられる）が、１１−シス−ＲＤＨの阻害により１１−シス−レチナールの合成を遅らせるために用いられてきた。他の者は、１３−シス−ＲＡが、眼における異性化プロセスに必須のタンパク質であるＲＰＥ６５を結合することにより、発色団再生を予防する働きをすることを提唱している（ＬａｗおよびＲａｎｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １６１：８２５−９、１９８９）。１３−シス−ＲＡの作用はそれでも、先に提案された役割と異なることに注目すべきである。それでも、これらの研究者らは、１３−シス−ＲＡがＡ２Ｅの形成をブロックすることを見出し、この治療法がリポフスチン蓄積を阻害し、かくして、シュタルガルト病患者における視覚喪失の開始またはリポフスチン蓄積に関連する黄斑変性のいずれかを遅らせることを示唆した。提案された治療法は興味深いが、レチノイドサイクルのブロックおよびリガンド結合していないオプシンの形成を伴う潜在的な問題を認識しなければならない（Ｖａｎ  Ｈｏｏｓｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：１９１７３−８２、２００２；Ｗｏｏｄｒｕｆｆら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ３５：１５８−１６４、２００３）。この結果、より深刻な結果がもたらされ、患者の予後が悪くなる。発色団を形成できないことは、進行性網膜変性に至り、極端な場合、ＬＣＡと類似した表現型を生成するであろう。
【００９７】
Ｒｅｔ−ＮＨ２と１３−シス−ＲＡの比較
阻害剤１３−シス−ＲＡおよびＲｅｔ−ＮＨ２の化学および生物学的活性は、互いに明確に対照的である。１３−シス−ＲＡの場合、その２つの可能な代謝運命は、全トランス型異性体への異性化または酸化、グルクロン酸化、および分泌である（Ｌｉら、Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｐｐｌ  ６８３：１５５−６２、１９９６）。１３−シス−ＲＡは全トランス型ＲＡとの平衡において生じ、これはＲＡ−依存性転写経路を活性化できる。ＲＡは、核ＲＡレセプター（ＲＡＲ）およびレチノイドＸレセプター（ＲＸＲ）と結合することにより標的遺伝子の転写を活性化することが示された（Ｃｈａｍｂｏ、Ｆａｓｅｂ  Ｊ  １０：９４０−５４、１９９６）。特に、１３−シス−ＲＡは妊娠中毒性が高い（ＭｉｔｃｈｅｌｌおよびＶａｎ  Ｂｅｎｎｅｋｏｍ、Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ４９：１２０１−２、２００３）。異なる遺伝子によりコードされるＲＡＲの３つの異なるイソタイプ（α、βおよびγ）がある。３つのＲＡＲのリガンド結合ドメインは高度に保存され、９−シス−ＲＡおよび全トランス型ＲＡの両方と結合する。ＲＸＲの３つのイソタイプ（α、βおよびγ）のリガンド結合ドメインも保存され、９−シス−ＲＡのみと結合する。ＲＡＲは、ＲＡＲ／ＲＸＲヘテロダイマーを形成することにより、シス作用応答エレメント（ＲＡＲＥ）を含有する遺伝子の活性化を媒介する。ＲＡＲＥエレメントは、１−５塩基により隔てられたヘキサマーモチーフＰｕＧ（Ｇ／Ｔ）ＴＣＡの直接繰り返しからなり、ＲＡＲβ遺伝子をはじめとする多くの遺伝子のプロモーター領域において見られる（Ｓｕｃｏｖら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：５３９２、１９９０）。ＲＸＲホモダイマーは、９−シス−ＲＡ（Ｈｅｙｍａｎら、Ｃｅｌｌ  ６８、３９７−４０６、１９９２）および他の疎水性基質により活性化できる。ＲＸＲホモダイマーは、ＣＲＢＰ  ＩＩプロモーターにおいて見られるように、１つの塩基対により隔てられたヘキサマーモチーフのＤＲ１エレメントについて特異性である（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら、Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ４２０、１８５−９３、２００３）。ＲＡＲまたはＲＸＲにより媒介される遺伝子の活性化は、最小プロモーターおよびすぐ上流に位置する適当なＤＲエレメントの制御下で、ｌａｃＺを含有するレポーター遺伝子を用いて研究できる。本発明者らの分析において、予想されるように、９−シスおよび全トランス型ＲＡはＤＲ１またはＤＲ５  ＲＡＲＥエレメントの転写を活性化し、一方、Ｒｅｔ−ＮＨ２は活性化しなかった。このことは、Ｒｅｔ−ＮＨ２が、その毒性が多くの患者においてこれらを不適当にするＲＡおよびＲＡ系薬理阻害剤、例えば、１３−シス−ＲＡに対するより安全な代替物であることを示唆する。
【００９８】
インビボでのＲｅｔ−ＮＨ２の薬物動態についてはあまり知られていない。Ｒｅｔ−ＮＨ２はエステル形態において貯蔵できない。これらがアミド化または脱アミノ化を受けるかどうかは未解決の問題であり、さらなる調査を必要とする。本明細書において記載されるように、Ｒｅｔ−ＮＨ２は、Ｃｙｐ２６により触媒される酸化ヒドロキシル化により容易に代謝されない（Ａｂｕ−Ａｂｅｄら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  １５：２２６−４０、２００１）。加えて、Ｒｅｔ−ＮＨ２はアミドの形態で貯蔵でき、Ｃｙｐ２６による酸化ヒドロキシル化を受けない。アミド貯蔵形態は、遊離アミンに関して可逆性であり、このことはマウスにおけるＲｅｔ−ＮＨ２により異性化の長期間持続する阻害を明らかにする。さらに重要なことには、Ｒｅｔ−ＮＨ２はＲＡＲおよびＲＸＲ核レセプターを活性化しない。したがって、用量あたりの高い効力、低い毒性、および錐体の保存のためにＲｅｔ−ＮＨ２が１３−シス−ＲＡの高度に改善された代替物になることを推測することは妥当である。
【００９９】
レチノイドサイクルを理解するための異性化の特異的阻害剤の値
このような有効な阻害剤群の同定は、インビボおよびインビトロのレチノイドサイクルの研究を拡大する。眼におけるその代謝を追跡するために、標識１１−シスレチナールを調製することは、比較的直接的な方法であるらしい。これらの種類の方法は、二光子顕微鏡検査法（Ｉｍａｎｉｓｈｉら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １６４：３７３−８、２００４）と併せて、野生型および遺伝子操作されたマウスにおける視覚サイクルを通してレチノイドの磁束動力学の研究が可能にする。これらの阻害剤も、異性化複合体を単離する試みの間のアフィニティークロマトグラフィーの有用なリガンドであるようである。
【実施例４】
【０１００】
実験手順
【０１０１】
動物
すべての動物実験は、ワシントン大学動物ケア委員会（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ）により承認され、安楽死に関する米国獣医師会委員会の推薦ならびに眼科および視覚に関する研究会議の推薦に準拠した手順を使用した。典型的には、６−８週齢のマウスをすべての実験において用いた。
【０１０２】
物質
新鮮なウシの眼を地方の食肉処理場（Ｓｃｈｅｎｋ  Ｐａｃｋｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｉｎｃ．、Ｓｔａｎｗｏｏｄ、ＷＡ）から入手した。ウシＲＰＥミクロソームの調製は、すでに記載されている方法に従って行われた（Ｓｔｅｃｈｅｒら、Ｊ  Ｂｉｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：８５７７−８５、１９９９）。すべての化学物質は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。１１−シス−レチナールは、Ｒｏｓａｌｉｅ  Ｃｒｏｕｃｈ博士（Ｃｈａｒｌｅｓｔｏｎ、Ｓｏｕｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）から入手した、
【０１０３】
レチノイド調製物
全トランス型レチノールは、全トランス型レチナールをＥｔＯＨ中、０℃で過剰のＮａＢＨ４で還元し、順相ＨＰＬＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ  Ｓｉ  ５μ  ４．５×２５０  ｍｍ、１０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；３２５  ｎｍで検出）により精製することにより入手した。精製された全トランス型レチノールをアルゴン流下で乾燥し、ＤＭＦ中で最終濃度３  ｍＭになるように溶解させ、−８０℃で貯蔵した。ＥｔＯＨ中レチノイド濃度を分光光度測定により測定した。Ｒｅｔ−ＮＨ２の吸収係数はレチノール異性体と等しいと推定された。Ｈｕｂｂａｒｄら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８：  ６１５−６５３、１９７１；  Ｒｏｂｅｓｏｎら、Ｊ．  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  ７７：  ４１１１−４１１９。
【０１０４】
化学合成
Ｒｅｔ−ＮＨ２は、すでに記載された方法に幾つかの変更を加えて入手した。Ｙａｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９４：１３５５９−６４、１９９７。従って、レチナールの対応する異性体をＥｔＯＨ中に溶解させ、ＭｅＯＨ中、５倍過剰の７  Ｎ  ＮＨ３と１時間室温で反応させて、レチニルイミンを形成した。次に、レチニルイミンを５倍過剰のＮａＢＨ４で還元してＲｅｔ−ＮＨ２にした。反応の進行は、分光光度分析により追跡した。０℃で１時間後、水を添加し、Ｒｅｔ−ＮＨ２を２回ヘキサンで抽出した。合わせたヘキサン抽出物を水および食塩水で洗浄し、層を分離し、有機相をシリカゲル上にかけた。カラムをヘキサン、次いで１：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄した。１０％  ７  Ｎ  ＮＨ３／ＭｅＯＨを追加したＥｔＯＡｃでＲｅｔ−ＮＨ２を溶出した。典型的な収率は、３０％の純粋なＲｅｔ−ＮＨ２  であった（図５）。インビトロ実験前に、ＭｅＯＨ中ＥｔＯＡｃ／７  Ｎ  ＮＨ３（９９：０．５）で溶出することにより、順相カラムを用いて、Ｒｅｔ−ＮＨ２をさらに精製した。
【０１０５】
図１は、１１−シス−レチノール形成の２つの提案されたメカニズムを示す。Ａ．第一のメカニズムは、水性イソメロヒドロラーゼにより触媒される反応において、全トランス型異性体のその熱力学的に安定性が低い１１−シス異性体にする望ましくない異性化を推進するために、エステル加水分解のエネルギーを用いる（Ｒａｎｄｏ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：５９５−６０２、１９９０）。Ｂ．第二のメカニズムは、カルボカチオン中間体による１−シス−レチノールの形成を提案し、ここで、全トランス型レチノール、全トランス型レチニルエステル、または別の全トランス型レチノイド誘導体はプロトン化され、続いて脱離反応により、レチニルカルボカチオンが得られる。カルボカチオンの水素化は、１１−シス−レチノールの形成に至る。反応は、未知のイソメラーゼにより触媒され、結合タンパク質の質量作用によりエネルギー的に推進される（Ｋｕｋｓａら、Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ  ４３：２９５９−８１、２００３）。
【０１０６】
図５は、レチニルアミン異性体の合成およびＨＰＬＣ分離を示す。（Ａ）レチノールをＭｎＯ２で酸化してレチナールにすることにより、Ｒｅｔ−ＮＨ２を合成した（Ａλｍａｘが３２５から３８３ｎｍへシフト）。Ｒｅｔ−ＮＨ２を生成させるために、酸化生成物をさらにＮＨ３と反応させた（反応の進行は、吸収最大値のブルーシフトならびに酸化に際しての著しいレッドシフトと同時に起こった）。レチニルイミンをＮＡＢＨ４により還元して、Ｒｅｔ−ＮＨ２にした（Ａλｍａｘ  ＝  ３２５  ｎｍ）。パネルＢは、異性体の分離のＨＰＬＣクロマトグラムを表す（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ中０．５  ％  ＮＨ２）。ピークはその吸収最大値およびスペクトルの形状により次のように特定された：１，１１−シス；２，１３−シス；９−シス；全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２。パネルＣは、全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２のＭＳ分画パターンを示し、親イオンは１８５  ｍ／ｚ、特徴的レチノイドピークは２６８および２５５  ｍ／ｚであった。
【０１０７】
ＮＨ３、過剰の対応するアルキルアミンを全トランス型レチナールのＥｔＯＨ中溶液に添加する以外は、Ｎ−置換全トランス型Ｒｅｔ−ＮＨ２を前述のようにして調製した。Ｎ−アルキル−Ｒｅｔ−ＮＨ２をＨＰＬＣカラム上で、前述のような条件を用いて精製した。
【０１０８】
レチナールの対応するヒドロキシルアミンとのＥｔｏＨ中での反応により、ヒドロキシルアミン誘導体を調製した。全トランス型レチナールオキシムをヘキサン抽出し、乾燥し、酢酸（１０％ｖ／ｖ）を追加したＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ（１：１）中に再溶解させ、ＮａＢＨ３ＣＮで還元した。Ｋｒａｔｏｓ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ＨＶ−３直接プローブ質量分析器を用いて、合成されたレチノイドのＭＳ分析を行った。
【０１０９】
全トランス型レチニルアミンと過剰の無水酢酸または塩化パルミトイルのいずれかの無水ジクロロメタン中、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンの存在下、０℃で３０分間の反応により、レチニルアミドを調製した。反応が完了した後、水を添加し、生成物をヘキサンで抽出した。ヘキサン層を水で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させた。Ｋｒａｔｏｓ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ＨＶ−３直接プローブ質量分析器を用いて、合成されたレチノイドの質量分析を行った。
【０１１０】
イソメラーゼおよびＬＲＡＴ反応の反応条件
イソメラーゼ反応を本質的にすでに記載されているようにして行った（Ｓｔｅｃｈｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：８５７７−８５、１９９９）。反応を１０  ｍＭ  ＢＴＰ緩衝液（ｐＨ７．５）、１  ｍＭ  ＡＴＰおよび６μＭ  ａｐｏ−ＣＲＡＬＢＰを含有する１％  ＢＳＡ中で行った。Ｒｅｔ−ＮＨ２およびその誘導体の阻害特性を調べるために、ＲＰＥミクロソームを５分間、３７℃で、１０ｍＭ  ＢＴＰ緩衝液（ｐＨ７．５）、１％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＡＴＰ中表示された化合物とともにプレインキュベートした後、ａｐｏ−ＣＲＡＬＢＰおよび全トランス型レチノールを添加した。Ｒｅｔ−ＮＨ２およびその誘導体を反応混合物に、１μｌのＤＭＦ中反応混合物に送達し、同じ体積のＤＭＦを対照反応に添加した。各実験は３回重複して行った。平均値を用い、標準偏差を計算した。
【０１１１】
マウスレチノイド抽出および分析
すでに記載されているようにして、レチノイド分析を弱い赤色光下で行った（Ｍａｅｄａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ８５：９４４−９５６、２００３；Ｖａｎ  Ｈｏｏｓｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：１９１７３−８２、２００２）。すでに記載されているようにして、マウスにレチノイドを強制摂取させた（Ｖａｎ  Ｈｏｏｓｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：１９１７３−８２、２００２）。
【０１１２】
網膜電図（ＥＲＧ）
すでに記載されているようにして、マウスを準備し、ＥＲＧ記録を行った（Ｈａｎｓｅｌｅｅｒら、Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ７：１０７９−８７、２００４）。１回のフラッシュ刺激はある範囲の強度を有していた（−３．７〜２．８  ｌｏｇ  ｃｄ・ｓ・ｍ−２）。典型的には、すべての条件における各点の記録のために３〜４匹の動物を使用した。ワンウェイＡＮＯＶＡ試験を用いて、統計分析を行った。
【０１１３】
Ｄｅｉｇｎｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：９６８−９７１、１９８９；Ｇｏｌｌａｐａｌｌｉら、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．  １６５１：  ９３−１０１、２００３；Ｐａｒｉｓｈら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１４６０９−１４６１３、１９９８；Ｒａｄｕら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１０１：  ５９２８−５９３３、２００４
【０１１４】
本明細書において、分子量などの物理的特性、または化学処方などの化学的特性に関して範囲が用いられる場合、範囲のすべての組み合わせおよびサブコンビネーションおよび特定の具体例が含まれることが意図される。
【０１１５】
本明細書において言及または記載された各特許、特許出願および刊行物の開示は全体として本発明の一部として参照される。
【０１１６】
当業者らは、本発明の具体例に対して多くの変更および修正を加えることができ、このような変更および修正は本発明の精神から逸脱することなく行うことができる。したがって、添付の請求の範囲は本発明の精神および範囲内に含まれるこのような等価な変化を網羅することが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、１１−シス−レチノール形成の２つの提案されたメカニズムを示す。
【０１１８】
【図２】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄは、レチニルアミンおよびその誘導体による１１−シス−レチノールイソメラーゼ活性の阻害を示す。
【０１１９】
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、ＲＰＥタンパク質のゲル濾過クロマトグラフィーを示す。
【０１２０】
【図４】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、および４Ｄは、レチニルアミンがインビボでの視覚発色団の再生を阻害することを示す。
【０１２１】
【図５】図５Ａ、５Ｂ、および５Ｃは、レチニルアミン異性体の合成およびＨＰＬＣ分離を示す。
【０１２２】
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、レチニルアミンが、激しい漂白後のインビボでの視覚発色団の再生を阻害することを示す。
【０１２３】
【図７】図７Ａおよび７Ｂは、明順応条件における全トランス型レチニルアミン処理マウスおよび対照マウスの強度を増加させる一回のフラッシュＥＲＧ反応を示す。
【０１２４】
【図８】Ｆ９−ＲＡＲＥ−ｌａｃＺレポーター細胞系のレチニルアミンに対する反応を示す。
【０１２５】
【図９】レチニルアミンによるＤＲ１−エレメントの活性化を示す。ＨＥＫ−２９３細胞を最小プロモーターおよび５つの連続した上流ＤＲ１エレメントの制御下、ｌａｃＺの構造でトランスフェクトした。
【０１２６】
【図１０】レチニルアミドは、レチニルアミドでの処理後のマウスにおける視覚発色団の再生を阻害することを示す。
【０１２７】
【図１１】レチニルアミンの可能なプロドラッグの構造を示す。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５Ａ】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
2008531586.tif 000039