(57)【要約】  本発明は、ウイルス、細菌、原生動物または真菌感染等の、感染、特に細胞内病原体感染の治療、管理、および/または改善のために設計された方法および組成物を提供する。特に、本発明は、感染細胞(例えば感染上皮細胞)においてEphA2の発現がアップレギュレートされている場合の感染を治療、管理、予防および/または改善するための方法であって、有効量の1種以上のEphA2/EphrinA1モジュレーターを対象に投与することを含む方法を提供する。本発明では、前記方法はEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1種以上の治療(物質)の実施(投与)を含んでもよい。また本発明は、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1種以上の予防または治療物質を含む医薬組成物、および感染の治療、管理、予防および/または改善におけるそのような組成物の使用を提供する。さらに本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター、および、場合により、他の予防または治療物質(例えば免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗真菌剤、等)を含む製品およびキットを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
感染またはその症状の治療方法であって、それを必要とする対象に治療有効量のEphA2/EphrinA1モジュレーターを投与することを含む方法。
【請求項２】
感染が対象の細胞におけるEphA2発現の増加と関連している、請求項１の方法。
【請求項３】
感染が細菌感染、真菌感染または原虫感染である、請求項１または２の方法。
【請求項４】
感染がウイルス感染である、請求項１または２の方法。
【請求項５】
ウイルス感染がRSV感染である、請求項４の方法。
【請求項６】
EphA2/EphrinA1モジュレーターが、EphA2に免疫特異的に結合する抗体である、請求項１または２の方法。
【請求項７】
抗体がEphrinA1に対するEphA2の結合を妨げる、請求項６の方法。
【請求項８】
抗体がEphA2のシグナル伝達を誘発する、請求項６の方法。
【請求項９】
抗体がEphA2の分解を誘発する、請求項６の方法。
【請求項１０】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項６の方法。
【請求項１１】
抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項６の方法。
【請求項１２】
抗体がEA2またはEA5である、請求項６の方法。
【請求項１３】
EA2またはEA5抗体がヒト化またはキメラ抗体である、請求項１２の方法。
【請求項１４】
EphA2/EphrinA1モジュレーターが可溶性EphrinA1である、請求項１または２の方法。
【請求項１５】
可溶性EphrinA1が、IgG分子のFc部分に融合されたEphrinA1である、請求項１４の方法。
【請求項１６】
EphA2/EphrinA1モジュレーターがEphA2アンチセンス分子である、請求項１または２の方法。
【請求項１７】
EphA2/EphrinA1モジュレーターがEphA2ワクチンである、請求項１または２の方法。
【請求項１８】
EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の有効量の治療物質を投与することをさらに含む、請求項１または２の方法。
【請求項１９】
治療物質が抗炎症剤、免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗菌剤または抗真菌剤である、請求項１８の方法。
【請求項２０】
対象がヒト対象である、請求項１または２の方法。
【請求項２１】
EphA2/EphrinA1モジュレーターが、EphA2に免疫特異的に結合する抗体である、請求項４の方法。
【請求項２２】
抗体がEphrinA1に対するEphA2の結合を妨げる、請求項２１の方法。
【請求項２３】
抗体がEphA2のシグナル伝達を誘発する、請求項２１の方法。
【請求項２４】
抗体がEphA2の分解を誘発する、請求項２１の方法。
【請求項２５】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項２１の方法。
【請求項２６】
抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項２１の方法。
【請求項２７】
抗体がEA2またはEA5である、請求項２１の方法。
【請求項２８】
EA2またはEA5抗体がヒト化またはキメラ抗体である、請求項２７の方法。
【請求項２９】
EphA2/EphrinA1モジュレーターが可溶性EphrinA1である、請求項４の方法。
【請求項３０】
可溶性EphrinA1が、IgG分子のFc部分に融合されたEphrinA1である、請求項２９の方法。
【請求項３１】
EphA2/EphrinA1モジュレーターがEphA2アンチセンス分子である、請求項４の方法。
【請求項３２】
EphA2/EphrinA1モジュレーターがEphA2ワクチンである、請求項４の方法。
【請求項３３】
EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の有効量の治療物質を投与することをさらに含む、請求項４の方法。
【請求項３４】
治療物質が抗炎症剤、免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗菌剤または抗真菌剤である、請求項３３の方法。
【請求項３５】
対象がヒト対象である、請求項４の方法。
【請求項３６】
EphA2/EphrinA1モジュレーターが、EphA2に免疫特異的に結合する抗体である、請求項５の方法。
【請求項３７】
抗体がEphrinA1に対するEphA2の結合を妨げる、請求項３６の方法。
【請求項３８】
抗体がEphA2のシグナル伝達を誘発する、請求項３６の方法。
【請求項３９】
抗体がEphA2の分解を誘発する、請求項３６の方法。
【請求項４０】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項３６の方法。
【請求項４１】
抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項３６の方法。
【請求項４２】
抗体がEA2またはEA5である、請求項３６の方法。
【請求項４３】
EA2またはEA5抗体がヒト化またはキメラ抗体である、請求項４２の方法。
【請求項４４】
EphA2/EphrinA1モジュレーターが可溶性EphrinA1である、請求項５の方法。
【請求項４５】
可溶性EphrinA1が、IgG分子のFc部分に融合されたEphrinA1である、請求項４４の方法。
【請求項４６】
EphA2/EphrinA1モジュレーターがEphA2アンチセンス分子である、請求項５の方法。
【請求項４７】
EphA2/EphrinA1モジュレーターがEphA2ワクチンである、請求項５の方法。
【請求項４８】
EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の有効量の治療物質を投与することをさらに含む、請求項５の方法。
【請求項４９】
治療物質が抗炎症剤、免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗菌剤または抗真菌剤である、請求項４８の方法。
【請求項５０】
対象がヒト対象である、請求項５の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、2004年10月27日提出の米国仮出願第60/622,489号、および2005年8月3日提出の米国仮出願第60/705,705号の優先権を主張する。上記各文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。
【０００２】
1.  発明の属する分野
本発明は、ウイルス、細菌、原生動物または真菌感染等の病原体感染の治療、管理(management)、および/または改善のために設計された方法および組成物を提供する。特に、本発明は、感染細胞(例えば感染上皮細胞)においてEphA2の発現がアップレギュレートされている場合の感染を治療、管理、予防および/または改善するための方法であって、EphA2および/またはその内因性リガンドであるEphrinA1の発現および/または活性をモジュレートする、有効量の1種以上のEphA2/EphrinA1モジュレーターを対象に投与することを含む方法を提供する。本発明では、前記方法はEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1種以上の治療物質(therapies)の投与を含んでもよい。また本発明は、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1種以上の予防または治療物質を含む医薬組成物、および感染の治療、管理、予防および/または改善におけるそのような組成物の使用を提供する。また本発明は、病原体感染を検出、診断および/または予見し、ならびに/あるいは病原体感染の治療、予防、管理または改善において治療の効力をモニターする方法を提供する。さらに本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター、および、場合により、他の予防または治療物質(例えば免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗真菌剤、等)を含む製品およびキットを提供する。
【背景技術】
【０００３】
2.  発明の背景
2.1  EPHA2
EphA2(上皮細胞キナーゼ)は受容体チロシンキナーゼのEphファミリーの130 kDaのメンバーである(Zantek et al, 1999, Cell Growth Differ. 10:629-38; Lindberg et al., 1990, Mol. Cell. Biol. 10:6316-24)。EphA2の機能は未知であるが、結腸上皮の増殖、分化、および障壁機能(Rosenberg et al., 1997, Am. J. Physiol. 273:G824-32)、血管網の組立て、内皮の遊走、毛細血管の形態形成、および血管形成(Stein et al., 1998, Genes Dev. 12:667-78)、神経系の分節化(segmentation)および軸索の開通(axon pathfinding)(Bovenkamp and Greer, 2001, DNA Cell Biol. 20:203-13)、腫瘍血管新生(Ogawa K. et al., 2000, Oncogene 19:6043-52)、および癌転移(国際特許公開第WO 01/941 1020号, 第WO 96/36713号, 第WO 01/12840号, 第WO 01/12172号)を調節することが示唆されている。
【０００４】
EphA2の天然リガンドはEphrinA1である(Eph Nomenclature Committee, 1997, Cell 90(3):403-404; Gale, et al., 1997, Cell Tissue Res. 290(2): 227-41)。EphA2とEphrinA1の相互作用は、器官表面のアンカー細胞を支援するとともに、EphA2の自己リン酸化を介してEphA2発現を低下させることによって上皮および/または内皮細胞増殖をダウンレギュレートすると考えられる(Lindberg et al., 1990, Mol. Cell. Biol. 10:6316-24)。天然条件下では、該相互作用は、器官を保護する上皮細胞障壁の維持を支援し、上皮細胞の過剰増殖および成長の調節を支援する。しかし、上皮細胞の保護障壁形成を阻害し、あるいは上皮および/または内皮細胞の破壊および/または分断を引き起こし、かくして適正に治癒しない病状となる。
【０００５】
2.2  感染
感染を治療するための抗菌薬の開発は過去数年間に急速に進歩しているが、そのような物質は特定群の微生物に対してしか作用しえないものであり、また、耐性の割合の増加と関連している(Rachakonda and Sartee, 2004, Curr. Med. Chem.11(6):775-93)。ゆえに、感染の治療は依然として重要な臨床上の関心の中心であり、難題である。現行の感染治療には、それぞれウイルス、細菌、および真菌感染を治療、予防、または改善するための抗ウイルス剤、抗菌剤、および抗真菌剤の投与が含まれる。残念ながら、特定の感染に関しては、利用可能な治療が存在しないか、感染が治療に不応性であることが判明しているか、あるいは対象に対する治療の実施の利益より副作用の発生の方が重大である。例えば、抗真菌剤の投与は腎不全または骨髄機能障害を生じさせることがあり、免疫系が抑制されている患者では、真菌感染に対して有効でないかもしれない。さらに、感染の原因である微生物(例えばウイルス、細菌、または真菌)は、投与される治療物質または治療の併用に対して耐性であるか、あるいは耐性を達成するかもしれない。実際、実施された治療に対して耐性を達成する微生物は、多面的薬物耐性または多剤耐性、すなわち、実施された治療の機構とは異なる機構によって作用する治療に対する耐性を達成することが多い。ゆえに、薬物耐性の結果として、多数の感染が多様な標準的治療プロトコルに不応性であることが判明している。したがって、感染およびその症状を治療、予防、および改善するための、独特の作用機構を有する新規治療が必要である。
【０００６】
2.2.1  ウイルス感染
すべてのウイルスは本来寄生性であり、生存および複製するために宿主の生存を必要とする。ウイルスはそのゲノムに応じてRNAおよびDNAウイルスに細区分することができる。RNAウイルスは一本鎖または二本鎖でありうる。DNAウイルスもまた一本鎖または二本鎖でありうる。RNAウイルスは分節および非分節ウイルスにさらに分類することができ、RNAおよびDNAウイルスの両者はエンベロープを有するウイルスとエンベロープを有さないウイルスに識別される。ウイルスの分類法には、目、科(ファミリー)および亜科(サブファミリー)、および属および種が含まれる。ヒトにおいて病原性である重要なウイルスおよびそれらが引き起こす疾患の非限定的な例には、以下のものが含まれる: A型肝炎ウイルス(急性肝炎); HIV (AIDS); 重症急性呼吸器症候群ウイルス(呼吸器感染); 灰白髄炎ウイルス(軽い発熱症状、無菌性髄膜炎、麻痺); 風疹ウイルス(発疹、微熱、関節痛、聴力損失、先天性心疾患); ウエストナイル熱ウイルス(頭痛、発熱、高齢患者の脳炎); 狂犬病ウイルス(脳炎、麻痺、昏睡); ザイールエボラウイルス(発熱、出血性ショック); ムンプスウイルス(耳下腺炎、髄膜脳炎、睾丸炎); はしかウイルス(Measles virus)(発熱、発疹、間質性肺炎、リンパ球減少); ハンタウイルス(発熱、毛細血管漏出、肺水腫); ラッサ熱ウイルス(発熱、咽頭炎、毛細血管漏出); ロタウイルス(下痢); サイトメガロウイルス(単核球症; 乳児では、小頭症、聴力損失、視神経萎縮); B型肝炎ウイルス(肝炎；急性および慢性肝細胞癌); パラインフルエンザウイルス(「PIV」)(乳児では、気道疾患); 呼吸器合胞体ウイルス(「RSV」)(乳児では、下気道疾患; 成体では、上気道疾患); およびトリおよびヒトメタニューモウイルス(上気道疾患、重度の細気管支炎、肺炎)。例えば、Ertl, H.C., Viral Immunology, in: Fundamental Immunology, 5th ed. (Paul, ed.) Lippincott Williams & Wilkins (Philadelphia, 2003)を参照のこと。
【０００７】
ほとんどのウイルスは、気道、結膜(conjunctivae)、消化管、または尿生殖路の粘膜面を通ってその宿主に感染する。他のウイルスは、皮膚を通って、あるいは組織内への直接接種によって侵入する。活発なウイルス感染では、ウイルスは、宿主細胞または組織に侵入すると、その遺伝物質およびウイルスタンパク質の複製を開始する。
【０００８】
ウイルス感染の結果生じる損傷の多くは、ウイルス複製中の宿主細胞の死滅に起因する。宿主はウイルス感染に対する多数の早期の免疫防御機構を有する。例えば、ナチュラルキラー(NK)細胞は、正常細胞上では抑制性受容体に結合するMHCクラスI分子の不存在下で活性化される。活性化後、NK細胞はサイトカイン、例えばインターフェロン(IFN)-γまたはパーフォリンを分泌する。辺縁帯B細胞およびB1細胞は、活性化されると、一連の病原体に対して低親和性の免疫グロブリンM (IgM)抗体を分泌する。該抗体は、感染の初期に循環ウイルスに結合し、それを中和することができる。早期の免疫応答後、宿主免疫系は、抗原特異的(適応的)免疫応答の誘発を開始し、それにはCD4+およびCD8+ T細胞およびB細胞が関与し、感染後少なくとも4〜5日を要する。適応的免疫応答には、免疫系に対するプロセシング済みウイルス抗原の提示ならびにB細胞の活性化が含まれ、特定のウイルス抗原を認識する抗原特異的抗体が産生される。
【０００９】
いくつかの感染例では、いくつかのウイルスがウイルスタンパク質の合成を停止し、潜伏状態に入ることによって宿主免疫系から逃避することがある(潜伏感染)。そのような状態では、宿主免疫系は、ウイルス抗原を発現しない潜伏感染細胞に気付かないままである。これにより、急性免疫応答の最中にウイルスが完全な破壊を逃れることが許容される。免疫系がより緩やかな記憶段階になると、ウイルスは、T細胞が記憶細胞から変化して、エフェクター細胞に戻るまでの数日間、妨害されずに再活性化および複製することができる。これらのウイルス複製の短期間の群発は、他の生物へのその伝播を許容するために十二分な量のウイルスを生産するのに十分であろう。
【００１０】
そのワクチンおよび薬物を用いる現代医学はヒトの健康に対するウイルス感染の影響を劇的に低減しているが、新規ウイルスが絶えず出現し、世界旅行の増加によってウイルスの伝播が増加している。ゆえに、ウイルス感染の発病機構を利用する新規治療が必要である。
【００１１】
2.2.1.1  パラインフルエンザウイルス感染
パラインフルエンザウイルス(「PIV」)感染は、乳児および小児において深刻な気道疾患を生じさせる。(Tao et al., 1999, Vaccine 17: 1100-08)。感染性パラインフルエンザウイルスの感染は、世界中で気道感染を患っている小児科患者の全入院例の約20%を占める。同文献。
【００１２】
PIVはパラミクソウイルス科のパラミクソウイルス属のメンバーである。PIVは以下の2種の構造モジュールで構成されている: (1)ウイルスゲノムを含有する、内側のリボ核タンパク質コアまたはヌクレオカプシド、および(2)外側の、概して球状のリポタンパク質エンベロープ。そのゲノムは一本鎖のマイナス鎖RNAであり、その長さは約15,456ヌクレオチドであり、少なくとも8ポリペプチドをコードする。これらのタンパク質には、限定するものではないが、ヌクレオカプシド構造タンパク質(属に応じてNP、NC、またはN)、リンタンパク質(P)、マトリックスタンパク質(M)、融合糖タンパク質(F)、赤血球凝集素-ノイラミニダーゼ糖タンパク質(HN)、大型ポリメラーゼタンパク質(L)、ならびに未知の機能のCおよびDタンパク質が含まれる。同文献。
【００１３】
パラインフルエンザヌクレオカプシドタンパク質(NP、NC、またはN)は各タンパク質単位内の2種のドメインからなり、分子の約3分の2を含み、RNAと直接相互作用するアミノ末端ドメイン、および、組立てられたヌクレオカプシドの表面に位置するカルボキシル末端ドメインが含まれる。これらの2種のドメインの連結部にはヒンジが存在し、それによってこのタンパク質にいくらかの可動性が付与されると考えられる(Fields et al. (ed.), 1991, Fundamental Virology, 2nd ed., Raven Press, New York (参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。マトリックスタンパク質(M)はウイルスの組立てに明らかに関与し、ウイルス膜ならびにヌクレオカプシドタンパク質の両者と相互作用する。リンタンパク質(P)は、リン酸化の対象であり、転写における調節的役割を果たすと考えられ、メチル化、リン酸化およびポリアデニル化にも関与するかもしれない。融合糖タンパク質(F)はウイルス膜と相互作用し、最初は不活性な前駆体として生産され、次いで翻訳後に切断されて、2種のジスルフィド連結型ポリペプチドが生じる。活性なFタンパク質はまた、ウイルスエンベロープと宿主細胞の原形質膜の融合を促進することによってパラインフルエンザウイルス粒子の宿主細胞内への浸透に関与する。同文献。糖タンパク質、赤血球凝集素-ノイラミニダーゼ(HN)はエンベロープから突き出し、ウイルスが赤血球凝集素およびノイラミニダーゼ活性の両者を含有することを許容する。HNはそのアミノ末端が強い疎水性であり、それはHNタンパク質を脂質二重層内へアンカーするために機能する。同文献。最後に、大型ポリメラーゼタンパク質(L)は転写および複製の両者において重要な役割を果たす。同文献。
【００１４】
現在、PIVに関する治療は特定症状の治療を含む。ほとんどの場合、残屑(rest)、液体、および快適な環境がPIV感染に関する十分な治療である。熱が高い場合、特に小児においては、インフルエンザを伴うライ症候群のリスクを回避するためにアスピリンよりアセトアミノフェンが推奨される。PIV感染と関連するクループでは、上気道膨潤を減少させるために、治療、例えば加湿空気、酸素、エアロゾル化ラセミ体エピネフリン、および経口デキサメタゾン(ステロイド)が推奨され、脱水に関しては静脈内輸液が投与される。PIV感染と関連する細気管支炎の治療には、支持療法(例えば、分泌物、残屑、および透明液を除去するための酸素、加湿空気、胸部軽打(chest clapping)、および体位ドレナージ)およびアルブテロールまたはステロイドの投与が含まれる。二次的な呼吸器感染を予防するために抗生物質、抗ウイルス剤、および/または抗真菌剤を投与してよい。Merck Manual of Diagnosis and Therapy (17th ed., 1999)を参照のこと。
【００１５】
2.2.1.2  呼吸器合胞体ウイルス感染
呼吸器合胞体ウイルス(「RSV」)は乳児および小児における深刻な下気道疾患の主原因である(Feigen et al., eds., 1987, Textbook of Pediatric Infections, WB Saunders, Philadelphia at pages 1653-1675; New Vaccine Development, Establishing Priorities, Vol. 1, 1985, National Academy Press, Washington DC at pages 397-409; およびRuuskanen et al., 1993, Curr. Probl. Pediatr. 23:50-79)。RSV感染が年に一度流行する性質は世界中で明らかになっているが、ある季節におけるRSV疾患の発生率および重症度は地域によって変動する(Hall, C.B., 1993, Contemp. Pediatr. 10:92-110)。北半球の温帯地域では、通常、それは晩秋に始まり、晩春に終わる。一次RSV感染は、ほとんどの場合、6週〜2歳の年齢の小児において生じ、まれに院内流行中には生まれてから最初の4週間において生じる(Hall et al., 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396)。RSV感染由来のリスクが高い小児には、限定するものではないが、早産児(Hall et al., 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396)ならびに気管支肺異形成(Groothuis et al., 1988, Pediatrics 82:199-203)、先天性心疾患(MacDonald et al., New Engl. J. Med. 307:397-400)、先天性または後天性免疫不全(Ogra et al., 1988, Pediatr. Infect. Dis. J. 7:246-249; およびPohl et al., 1992, J. Infect. Dis. 165:166-169)、および嚢胞性線維症(Abman et al., 1988, J. Pediatr. 113:826-830)を伴う小児が含まれる。RSV感染で入院している心疾患または肺疾患を有する乳児の致死率は3%〜4%である(Navas et al., 1992, J. Pediatr. 121:348-354)。
【００１６】
RSVは成人ならびに乳児および小児に感染する。健康な成人では、RSVは主に上気道疾患を引き起こす。最近明らかになっていることは、いくつかの成人、特に高齢者が、以前に報告されているよりも頻繁に症候性RSV感染を有することである(Evans, A.S., eds., 1989, Viral Infections of Humans Epidemiology and Control, 3rd ed., Plenum Medical Book, New York at pages 525-544)。養護ホーム患者および施設に入っている若い成人の間で数回の流行例がさらに報告されている(Falsey, A.R., 1991, Infect. Control Hosp. Epidemiol. 12:602-608; およびGarvie et al., 1980, Br. Med. J. 281:1253-1254)。最後に、RSVは免疫抑制者、特に骨髄移植患者において深刻な疾患を引き起こすかもしれない(Hertz et al., 1989, Medicine 68:269-281)。
【００１７】
確立したRSV疾患を治療するために利用可能な治療は限られている。下気道の重篤なRSV疾患は、加湿酸素の投与および呼吸支援等のかなりの支持療法を必要とすることが多い(Fields et al., eds, 1990, Fields Virology, 2nd ed., Vol. 1, Raven Press, New York at pages 1045-1072)。
【００１８】
ワクチンはRSV感染を予防するかもしれないが、この徴候に関して認可されているワクチンはまだない。ワクチン開発にとって大きな障害は安全性である。免疫原性ではあるがホルマリンで不活化されたワクチンは、免疫化された乳児において、RSVに起因して、同様に調製された3価パラインフルエンザワクチンで免疫化された乳児においてより高くて、より重篤な下気道疾患の発生率を予想外に生じさせた(Kim et al., 1969, Am. J. Epidemiol. 89:422-434; およびKapikian et al., 1969, Am. J. Epidemiol. 89:405-421)。いくつかのRSVワクチンの候補は断念され、他のワクチンは開発中である(Murphy et al., 1994, Virus Res. 32:13-36)が、安全性の問題が解決された場合でさえ、さらにワクチンの効力を改善する必要がある。多数の問題が今後の課題として残っている。免疫化は即時の新生児期に必要とされるであろう。その理由は、下気道疾患の発生のピークが2〜5月齢で生じるからである。新生児の免疫応答の未熟さが、母系的に獲得された高い力価のRSV抗体と一緒になって、新生児期におけるワクチンの免疫原性を低減することが予測されるであろう(Murphy et al., 1988, J. Virol. 62:3907-3910; およびMurphy et al., 1991, Vaccine 9:185-189)。最後に、一次RSV感染および疾患は以後のRSV疾患をあまり防御しない(Henderson et al., 1979, New Engl. J. Med. 300:530-534)。
【００１９】
現在、RSV疾患を予防するための唯一認可されているアプローチは受動免疫である。IgGに関する保護的役割を示唆する最初の証拠は、ケナガイタチ(Prince, G.A., Ph.D. diss., University of California, Los Angeles, 1975)およびヒト(Lambrecht et al., 1976, J. Infect. Dis. 134:211-217; およびGlezen et al., 1981, J. Pediatr. 98:708-715)における母系抗体に関する観察から得られた。Hemmingら(Morell et al., eds., 1986, Clinical Use of Intravenous Immunoglobulins, Academic Press, London at pages 285-294)は、新生児敗血症を有すると疑われる新生児の静脈内免疫グロブリン(IVIG)の薬物動態に関する研究中にRSV感染の治療または予防に関するRSV抗体の潜在的有用性を認識した。彼らは、呼吸器分泌物からRSVが得られた1乳児がIVIG注入後に急速に回復したことに気付いた。IVIGロットの以後の分析では、RSV中和抗体の力価が異常に高いことが示された。この同グループの研究者は、次いで、RSV中和抗体に関して濃縮された超免疫血清または免疫グロブリンが、コットンラットおよび霊長類をRSV感染に対して保護する能力を検査した(Prince et al., 1985, Virus Res. 3:193-206; Prince et al., 1990, J. Virol. 64:3091-3092; Hemming et al., 1985, J. Infect. Dis. 152:1083-1087; Prince et al., 1983, Infect. Immun. 42:81-87; およびPrince et al., 1985, J. Virol. 55:517-520)。これらの研究の結果は、予防的に投与されたRSV中和抗体がコットンラットにおけるRSVの気道での複製を阻害することを示唆した。治療的に投与された場合、RSV抗体はコットンラットおよび非ヒト霊長類の両モデルにおいて肺でのウイルス複製を低減した。さらにまた、免疫血清または免疫グロブリンの受動注入は、後にRSVをチャレンジされたコットンラットにおいて肺の病状の増進を生じなかった。
【００２０】
最近の臨床研究では、受動的に投与されたこのRSV超免疫グロブリン(RSV IVIG)が、リスクにさらされている小児をRSVによる重篤な下部呼吸器感染から保護する能力が実証されている(Groothius et al., 1993, New Engl. J. Med. 329:1524-1530; およびThe PREVENT Study Group, 1997, Pediatrics 99:93-99)。これはRSV感染の予防に関する大きな進歩であるが、この治療はその広範な使用に関して一定の制限をもたらす。第一に、RSV IVIGを数時間にわたって静脈内注入して、有効量を達成しなければならない。第二に、超免疫グロブリン中の有効物質の濃度は、リスクにさらされている成人または易感染性の（comprised）心肺機能を有するほとんどの小児を治療するためには不十分である。第三に、静脈内注入はRSVのシーズン中に毎月の病院訪問を必要とする。最後に、この製品の要求を満たすRSVに関する超免疫グロブリンを生産するために十分なドナーを選択することが困難であると判明することがある。現在、超免疫グロブリンの生産に適格であるほど十分に高いRSV中和抗体力価を有するのは、約8%の正常なドナーでしかない。
【００２１】
免疫グロブリンの比活性を改善する一方法は、1種以上の非常に強力なRSV中和モノクローナル抗体(MAb)を開発することであろう。そのようなMAbは、好都合な薬物動態を保持するため、およびヒト抗マウス抗体応答の発生を回避するためにヒトまたはヒト化抗体であるべきであろう。その理由は、RSVのシーズンの初めから終わりまで繰り返し投薬することが必要とされるからである。RSVの表面の2種の糖タンパク質、FおよびGは中和抗体の標的であることが示されている(Fields et al., 1990, 上記; およびMurphy et al., 1994 , 上記)。またこれらの2種のタンパク質は、ウイルスによる標的細胞の認識およびその細胞内への侵入に主に関与し; Gタンパク質は特定の細胞受容体に結合し、Fタンパク質はウイルスと細胞の融合を促進する。またFタンパク質は、感染細胞の表面で発現され、その後の他の細胞との融合に関与し、合胞体形成を導く。ゆえに、Fタンパク質に対する抗体は、ウイルスを直接中和するか、あるいは細胞内へのウイルスの侵入をブロックするか、あるいは合胞体形成を妨げてよい。GおよびFタンパク質の両者に関してAおよびBサブタイプ間の抗原性および構造上の差異が報告されているが、より重大な抗原性の差異はG糖タンパク質にあり、そのアミノ酸配列は53%相同でしかなく、抗原関連性は5%である(Walsh et al., 1987, J. Infect. Dis. 155:1198-1204; およびJohnson et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5625-5629)。逆に、Fタンパク質に対して産生される抗体は、サブタイプAおよびBウイルス間で高度な交差反応性を示す。RSV Fタンパク質を標的とする18種の異なるマウスMAbについての生物学的および生化学的特性の比較では、A、B、およびCとして指定される3種の異なる抗原部位が特定された。(Beeler and Coelingh, 1989, J. Virol. 7:2941-2950)。1956年〜1985年に単離されたRSV系統のパネルに対して中和実験が実施され、抗原部位AおよびC内のエピトープは高度に保存されているが、抗原部位Bのエピトープはさまざまであることが実証された。
【００２２】
RSVのFタンパク質のA抗原部位中のエピトープを標的とするヒト化抗体、パリビズマブ(palivizumab)(SYNAGIS(登録商標))は、RSVによって引き起こされる深刻な下気道疾患を予防するために小児科患者に筋肉内投与することが認可されている。その投与は、推奨される毎月の15 mg/体重kgの用量でRSVのシーズンの初めから終わりまで施される(北半球では11月〜4月)。パリビズマブ(SYNAGIS(登録商標))はヒト(95%)およびマウス(5%)抗体配列の複合物である。Johnson et al., 1997, J. Infect. Diseases 176:1215-1224および米国特許第5,824,307号(参照によりその内容全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと。ヒト重鎖配列はヒトIgG1 (IgGi)の定常ドメインおよびCor (Press et al., 1970, Biochem. J. 117:641-660)およびCess (Takashi et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:194-198)のVH遺伝子の可変フレームワーク領域から生成された。ヒト軽鎖配列はCκ(CK)の定常ドメインおよびJκ-4を伴うVL遺伝子K104の可変フレームワーク領域から生成された(Bentley et al., 1980, Nature 288:5194-5198)。マウス配列は、マウスモノクローナル抗体Mab 1129 (Beeler et al., 1989, J. Virology 63:2941-2950)から、マウス相補性決定領域をヒト抗体フレームワーク中に移植することを含むプロセスにおいて生成された。
【００２３】
2.2.1.3  トリおよびヒトメタニューモウイルス
最近、ヒト呼吸器合胞体ウイルス(「hRSV」)感染によって生じる症状を思い起こさせる、軽度の上気道疾患から重篤な細気管支炎および肺炎までにわたる臨床症状を有する28人の小児からパラミクソウイルス科の新規メンバーが単離された(Van Den Hoogen et al., 2001, Nature Medicine 7:719-724)。新規ウイルスは配列ホモロジーおよび遺伝子配置に基づいてヒトメタニューモウイルス(hMPV)と命名された。前記研究では、さらに、5歳までに、実質的にすべてのオランダの小児がhMPVにさらされていること、および該ウイルスが少なくとも半世紀にわたってヒトで循環していることが示された。
【００２４】
ヒトメタニューモウイルスのゲノム構成はvan den Hoogen et al., 2002, Virology 295:119-132に記載されている。ヒトメタニューモウイルスは、最近、北米の患者から単離された(Peret et al., 2002, J. Infect. Diseases 185:1660-1663)。
【００２５】
ヒトメタニューモウイルスはトリメタニューモウイルスと関連している。例えば、hMPVのFタンパク質はトリニューモウイルス(pneumonovirus)(「APV」)のFタンパク質と高度に相同である。ヒトメタニューモウイルスFタンパク質とマガモ(Mallard Duck)から単離されたトリニューモウイルスのFタンパク質のアライメントでは、外部ドメインで85.6%の同一性が示される。ヒトメタニューモウイルスFタンパク質と七面鳥(サブグループB)から単離されたトリニューモウイルスのFタンパク質のアライメントでは、外部ドメインで75%の同一性が示される。例えば、2002年2月21日提出の、Haller and Tangの、共同所有で同時係属中の仮出願第60/358,934号、表題「Recombinant Parainfluenza Virus Expression Systems and Vaccines Comprising Heterologous Antigens Derived from Metapneumovirus」(参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと。
【００２６】
APVによって引き起こされる呼吸器疾患は1970年代後半に南アフリカで初めて報告された(Buys et al., 1980, Turkey 28:36-46)。それは七面鳥産業に壊滅的な影響をもたらした。七面鳥の該疾患は副鼻腔炎および鼻炎を特徴とし、七面鳥鼻気管炎(TRT)と称された。APVのヨーロッパ単離体はまた、ニワトリの頭部膨脹症候群(SHS)の要因であると強く指摘された(O'Brien, 1985, Vet. Rec. 117:619-620)。元々、該疾患はニューカッスル病ウイルス(NDV)に感染したブロイラー群で出現し、ニューカッスル病(ND)と関連している二次的な問題であると考えられた。ヨーロッパAPVに対する抗体は、SHSの発症後に罹患ニワトリで検出され(Cook et al., 1988, Avian Pathol. 17:403-410)、ゆえにAPVが原因であるとされた。
【００２７】
トリニューモウイルスは一本鎖の非分節RNAウイルスであり、パラミクソウイルス科のニューモウイルス亜科、メタニューモウイルス属に属する(Cavanagh and Barrett, 1988, Virus Res. 11:241-256; Ling et al., 1992, J. Gen. Virol. 73:1709-1715; Yu et al., 1992, J. Gen. Virol. 73:1355-1363)。パラミクソウイルス科は2つの亜科: パラミクソウイルス亜科およびニューモウイルス亜科に分けられる。パラミクソウイルス亜科には、限定するものではないが、パラミクソウイルス属、ルブラウイルス属、およびモルビリウイルス属が含まれる。最近、ニューモウイルス亜科は遺伝子の順序に基づいて2つの属、すなわちニューモウイルス属およびメタニューモウイルス属に分けられた(Naylor et al., 1998, J. Gen. Virol., 79:1393-1398; Pringle, 1998, Arch. Virol. 143:1449-1159)。ニューモウイルス属には、限定するものではないが、ヒト呼吸器合胞体ウイルス(hRSV)、ウシ呼吸器合胞体ウイルス(bRSV)、ヒツジ呼吸器合胞体ウイルス、およびマウスニューモウイルスが含まれる。メタニューモウイルス属には、限定するものではないが、ヨーロッパトリニューモウイルス(亜群AおよびB)が含まれ、それはニューモウイルス属の基準種であるhRSVと区別される(Naylor et al., 1998, J. Gen. Virol., 79:1393-1398; Pringle, 1998, Arch. Virol. 143:1449-1159)。APVの米国単離体はメタニューモウイルス属内の第三の亜群(亜群C)であり、その理由は、ヨーロッパ単離体と抗原的および遺伝的に異なることが見出されているからである(Seal, 1998, Virus Res. 58:45-52; Senne et al., 1998, In: Proc. 47th WPDC, California, pp. 67-68)。
【００２８】
ネガティブ染色APVの電子顕微鏡検査では、長さが1000〜2000 nmの範囲の長いフィラメントを有する、直径が80〜200 nmの範囲の多形性の、時には球状の、ビリオンが示される(Collins and Gough, 1988, J. Gen. Virol. 69:909-916)。エンベロープは長さ13〜15 nmのスパイクが点在する膜で構成される。ヌクレオカプシドはらせん状であり、直径14 nmであり、7 nmの間隔(pitch)を有する。ヌクレオカプシドの直径はパラミクソウイルス属およびモルビリウイルス属の直径より小さく、それらは、通常、約18 nmの直径を有する。
【００２９】
トリニューモウイルスの感染は、世界の他の場所では多年にわたり家禽において存在しているにもかかわらず、米国では新興感染症である。1996年5月には、高度に伝染性の七面鳥の呼吸器疾患がコロラドで出現し、その後、アイオワ、エームズのNational Veterinary Services Laboratory (NVSL)でAPVが単離された(Senne et al., 1997, Proc. 134th Ann. Mtg., AVMA, pp. 190)。この時までは、米国およびカナダにはトリニューモウイルスが存在しないと考えられていた(Pearson et al., 1993, In:  Newly Emerging and Re-emerging Avian Diseases:  Applied Research and Practical Applications for Diagnosis and Control, pp. 78-83; Hecker and Myers, 1993, Vet. Rec. 132:172)。1997年の初期に、ミネソタの七面鳥でAPVの存在が血清学的に検出された。最初の確定診断が下された時までに、APV感染は多数の農場にすでに伝播していた。該疾患は、上気道における臨床徴候: 泡沫状眼、鼻汁および副鼻腔(sinuses)の膨潤と関連している。それは二次感染によって悪化する。感染鳥類の罹患率は100%ほどに高くなりうる。死亡率は1〜90%の範囲でありうる。それは6〜12週齡のひなで最も高い。
【００３０】
トリニューモウイルスは接触によって伝染する。鼻汁、罹患鳥類の移動、汚染水、汚染設備; 汚染飼料トラックおよび積み出し活動はウイルスの伝染に寄与しうる。回収された七面鳥はキャリアーであると考えられる。該ウイルスは産卵七面鳥の卵管の上皮に感染することが示されているため、およびAPVが若いひなで検出されているため、卵伝染が起こりうると考えられる。
【００３１】
hMPVを用いた最近の成果に基づいて、hMPVがヒトの、特に、若年性呼吸器疾患に関する重要な要因であることが同様に考えられる。
【００３２】
ゆえに、これらの3種のウイルス、RSV、hMPV、およびPIVは、ヒト呼吸器疾患のかなりの部分の原因である。したがって、これらのウイルスによって引き起こされるウイルス性呼吸器疾患の発生率を低減するための広域性治療が必要である。
【００３３】
2.2.1.4  重症急性呼吸器症候群ウイルス
重症急性呼吸器症候群(SARS)の患者において新規コロナウイルスが発見され、SARSの推定される原因として特定された(SARS; Drosten et al., 2003, N Engl J Med 348:1967-76)。SARSは密接な接触物に対して伝染する可能性が高い感染物である。SARSの症状には、発熱(> 38℃)、乾性咳、息切れまたは呼吸困難、および、肺炎を示す胸部X線の変化が含まれる。他の症状には、頭痛、筋肉の凝り、食欲不振、倦怠感、錯乱、発疹および下痢が含まれる。現在、SARS関連コロナウイルス感染の予防または治療に利用可能な特異療法は存在しない。SARS関連コロナウイルスの伝播の可能性およびSARSの死亡率を考慮に入れると、SARS関連コロナウイルス感染を予防、治療および／または改善するための予防的および治療的な療法が必要である。
【００３４】
2.2.1.5  B型肝炎ウイルス
B型肝炎ウイルス(「HPV」)は血液および精液等の体液中に存在し、皮膚または粘膜を通してこれらの液体を接種することによって伝染することができる。最高濃度のHBVは血液および漿液中に見出せる。
【００３５】
肝臓に到達するために、HBVは皮膚または粘膜を通って血液循環に到達する必要がある。高度に感染性のウイルスであることに加えて、HBVは環境表面で7日間まで安定であり、その結果、無生物から間接的に接種されることがある。以下の4種の主な伝染様式が認識される: 出生時(垂直的)、非経口的/経皮的、性的、および水平的(物理的接触)。
【００３６】
感染が非常に流行している地域では2種の異なる伝染パターンが観察される。アジアでは、出生時感染が成人集団における慢性HBV感染の少なくとも25パーセントを占める。これらの地域では、妊娠中の女性の5〜12パーセントがHBsAg陽性であり、これらの女性の半数までがウイルス性(viraemic)である。母系血清HBVのDNAは乳児における感染転帰の最も重要な決定要因である。出生時伝染率は90パーセントほどに高くなりうる。HBVが子宮内でまたは出生時に母から子へ垂直的に伝染するかどうかは不明である。アフリカおよび中東では、出生時伝染があまり頻繁ではないが、家族内または家族以外の供給源からの水平的伝染がより重大である。すべての幼児は生まれてから最初の5年間に慢性感染を獲得するリスクが高い。水平的伝染の正確な経路は不確定である。
【００３７】
中間の有病率を有する地域では、新生児から成人までのすべての年齢群で伝染が生じる。早期の小児期感染はほとんどの慢性感染に関与するであろうが、さらに高い割合の急性感染が年長児、青年および若年成人間で生じると考えられる。そのような感染は慢性になる可能性は低い。HBVは、性的に、あるいは刺鍼術または皮膚が傷つけられる儀式上の実施を介して伝染することがある。
【００３８】
HBV感染の有病率が低い国では、伝染は主に、ライフスタイルよって感染のリスクにさらされている規定のリスクグループの成人間で生じる。最高のリスクを有する2種の群は、針を共有する静脈内薬物濫用者、および複数のパートナーとの異性愛者または同性愛者である。発生率はまた、流行地からの移民間で上昇する。米国では、少なくとも30パーセントのB型肝炎の症例が、感染源が特定可能でない人々の間で生じる。
【００３９】
他の疫学的研究では、HBV感染のリスクが以下の群で高いことが示されている: 複数の性的パートナーおよび性的に伝染する他の疾患の病歴を有する個体; B型肝炎を有する個体の家族接触; 血液および体液にさらされるか、あるいは針刺し傷を有する可能性がある医療従事者; 刑務所および精神病院のスタッフおよびレジデント; 汚染血液の輸血または血液製剤のレシピエント; 非経口薬物濫用者は、急性および慢性B型肝炎の両者の重症度を増加させるデルタ肝炎(HDV)感染というさらなる脅威にさらされている。米国の非経口薬物濫用者間で急激な発生が生じている。HBVと同様に、原因物質であるHDVは血液を介して伝染する。さらにHCVおよびHIVの同時感染が針の共有によって獲得される可能性がある。
【００４０】
2.2.1.6  ヒト免疫不全ウイルス
HIV感染は、ヒト免疫不全症候群ウイルス(「HIV」)によって引き起こされるウイルス感染であり、それは免疫系をしだいに破壊し、身体が闘うことができない感染を生じさせる。急性HIV感染は、曝露の2〜4週間以内の単核球症またはかぜに類似の症状と関連しているであろう。HIV血清反応反転(HIV陰性からHIV陽性への転換)は、通常、ウイルスに対する曝露の3か月以内に生じる。HIVに感染したヒトは10年までの間は症状を有さないかもしれないが、依然としてその感染を他人に伝染させることができる。一方で、彼らの免疫系はしだいに弱くなり、ついには後天性免疫不全症候群(「AIDS」)と診断される。HIVに感染したほとんどの個体は治療されなければAIDSを発症する。Centers for Disease and Controlは、HIV感染者が200未満のCD4 T細胞数を有し始める時点としてAIDSを定義した。それは、HIV感染の存在下で生じる多数の日和見感染および癌によっても定義される。
【００４１】
HIVの流行は、集団へのウイルス導入のタイミングおよび問題の集団の人口統計に応じて、複数回の波で発生している。世界の特定地域では、感染の発生率が最近頭打ちになっているが、他の地域では、発生率が上がり続けている。アフリカの16の国では、15〜49歳の成人間のHIV感染の有病率が10%を超え; その流行が加速しているアジアの地域では、近い将来、同様の割合が認められるであろう。米国では、男性間の性的接触は依然として流行の全経過にわたるHIV伝染の最も一般的な機構であり; しかし、異性愛者間の伝染および注射薬物使用は過去数年にわたってHIVの症例の増加する割合を占める。AIDSを引き起こすHIVの伝染は、性的接触(例えば口、膣および肛門による接触)を介して、血液(例えば輸血または針の共有)を通して、ならびに母から子へ生じる。他の伝染方法はまれであり、それには、偶発的な針による傷害、提供精子を用いる人工授精、および提供器官を介する伝染が含まれる。
【００４２】
AIDSの多数の症状と闘う多数の有効な医薬が開発されるが、現在AIDSの治療法は存在しない。ゆえに、この死に至る疾患を治療するための新規治療を開発する必要がある。
【００４３】
2.2.2  細菌感染
細菌感染は、宿主組織に損傷を与える微生物の存在および成長によって引き起こされる。感染の程度は、どれだけ多数の生物が存在するか、およびそれらが放出する毒素によって一般に決定される。世界的に、細菌感染は、任意の他の原因より多数の死に関与している。症状は、炎症および膨潤、痛み、熱、潮紅、および機能喪失を含みうる。最も重要なリスク要因は、やけど、重篤な外傷、少ない白血球数、免疫療法治療中の患者、および栄養不良またはビタミン欠乏を有する任意の人である。
【００４４】
細菌は、一般に、感染済みの人から新たな感染者に伝播する。最も一般的な侵入経路は、空気伝染細菌の吸入、不潔な手または用具から胃への摂取、または汚染食物または水を介して、別の人の身体の感染領域との直接接触、汚染血液、あるいは昆虫刺傷による経路である。
【００４５】
ヒト疾患を引き起こす病原性細菌は多様である。感染の病理発生およびその結果の免疫応答に基づいて、これらの細菌を2種の一般的なタイプ: 細胞内感染を引き起こす細菌および細胞外感染を引き起こす細菌に分類することができる。細胞内感染を引き起こすほとんどの細菌は、食胞-リソソーム融合を妨害するか、あるいは食胞から逃避して細胞質内へ入ることによって、食作用による死滅を回避する。細胞性免疫は細胞内細菌に対して重要である。細胞内細菌に対する免疫応答のレビューに関しては、例えばKaufmann, Immunity to Intracellular Bacteria, in: Fundamental Immunology, 5th ed., Paul (ed.) Philadelphia, pp. 1229-1283, 2003を参照のこと。
【００４６】
細胞内細菌は多数の病原体を含む。ヒトに関して最も重要なものは、Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium leprae、Salmonella enterica 血清型Typhi、およびChlamydia trachomatisであり、それらは、それぞれ、結核、ライ病、腸チフス、およびトラコーマの病因物質であり、ともに、6億を越える人々に罹患している。Chlamydia peneumoniaeと循環器病の関連が主張されている。いくつかの日和見病原体、例えばMycobacterium avium/Mycobacterium intracellulareは、AIDS患者等の免疫不全患者の数の増加を伴って、ますます増加する重要性を達成しつつある。
【００４７】
細胞内細菌はその寿命のほとんどを宿主細胞の内部で生存しうる。細胞内細菌およびヒトにおいてそれらが引き起こす感染の非限定的な例には、以下のものが含まれる: Mycobacterium tuberculosis (結核)、Mycobacterium leprae (ライ病)、Salmonella enterica 血清型Typhi (チフス熱)、Brucella sp (ブルセラ症)、Legionella sp (レジオネラ症)、Listeria monocytogenes (リステリア症)、Francisella tularensis (野兎病)、Rickettsia rickettsii (ロッキー山紅斑熱); Rickettsia prowazekii (発疹熱); Rickettsia typhi (チフス); Rickettsia tsutsugamushi (草原熱); Chlamydia trachomatis (泌尿生殖器感染、結膜炎、トラコーマ、性病性リンパ肉芽腫症(異なる血清型)); Chlamydia psittaci (オウム病); およびChlamydia pneumoniae (肺炎、冠動脈心疾患)。
【００４８】
身体の3種の主な防御網には、第一に、天然に存在する化学物質、例えば涙中に認められるリゾチーム、胃の胃酸、腸の膵臓酵素、および皮膚における脂肪酸が含まれる。身体の免疫応答は、感染生物がまんまと身体に侵入した場合にのみ、一翼を担う。非特異的免疫応答--身体の第二の防御網--は主に炎症からなり、一方、特異的免疫応答--第三の防御網--はリンパ球の活性化に依存し、関与する特定タイプの生物を認識しようと試みるためにTおよびB細胞を送る。T細胞は細胞障害性細胞を導き、それは生物を破壊するために送られ、B細胞は、特定タイプの細菌を破壊できる抗体--免疫グロブリン--を産生する。
【００４９】
急性細菌感染は即時の慣用医療を必要とする。FDA認可の抗生物質が効かなければ、米国の抗生物質より数年進歩している欧州の抗生物質が有効であるかもしれない。
【００５０】
1940年代に抗生物質が発見された当時、多数の細菌感染の治療においてそれらは非常に有効であった。やがて、多数の抗生物質は特定タイプの細菌に対するその有効性を失った。その理由は、多くは耐性遺伝子の発現を介して、耐性株が生じたからである。
【００５１】
細菌が抗生物質療法に耐性になるいくつかの経路が存在する。1経路は、すでに「流出」ポンプを発達させている細菌がいることである。該細菌が抗生物質の侵入を認識すると、その流出ポンプが抗生物質を単純にポンプして、その細胞の外へ出す。しかし、耐性遺伝子がコードするのはポンプだけにとどまらない。いくつかの遺伝子は、抗生物質を分解するか、あるいは化学的に変化させ(、したがって不活化す)る酵素の製造を導く。これらの耐性遺伝子はどこからもたらされるのか。通常、細菌はそれらを他の細菌から獲得する。ある場合には、それらは「ドナー」細胞由来のプラスミドを含有する遺伝子を拾い上げる。また、ウイルスがある細菌から耐性遺伝子を抽出し、それを別の細菌に注入することが示されている。さらにまた、ある細菌は、その周りの死細胞からDNAを「除去し」、時折、除去された遺伝子は安定な様式でレシピエント細胞の染色体またはプラスミドに組み込まれ、該レシピエント細菌の部分になる。少数の耐性遺伝子は、細菌DNAのランダムな変異によって生じる。
【００５２】
ゆえに、細菌感染、特に細胞内細菌感染を治療するための新規治療を開発する必要があり、その必要性はますます増加している。
【００５３】
2.2.2.1  Mycobacterium Tuberculosis
Mycobacterium tuberculosisは19億人に感染し、活発な疾患である結核(「TB」)は世界中で毎年190万人の死を招く。(Dye et al., 1999, JAMA 282:677-686)。今世紀の、米国におけるTB症例の割合の着実な減退後、1980年代後半に、M. tuberculosisの多剤耐性株の出現、HIVの流行、および移民の流入の結果、その減少傾向は逆転した。(Navin et al., 2002, Emerg. Infect. Dis. 8:11)。
【００５４】
M. tuberculosisは偏性好気性菌であり、非運動性の桿菌である。結核の古典的症例では、M. tuberculosis複合体は十分に通気される肺の上葉中に存在する。M. tuberculosisは、特定の色素および染色による細胞壁の不透過性に起因して抗酸菌として分類される。ペプチドグリカンおよび複合脂質から構成されるM. tuberculosisの細胞壁は、多数の抗生物質、酸性およびアルカリ性化合物、浸透圧溶解、および致死的酸化に対する細菌の耐性、およびマクロファージ内部での生存に関与する。
【００５５】
TBは5段階で進行する。第1段階では、対象は、3細菌(bacilli)未満を含有する飛沫核を吸入する。肺胞のマクロファージがM. tuberculosisを取り込むが、マクロファージは活性化されず、該細菌を破壊しない。最初の感染の7〜21日後、M. tuberculosisはマクロファージ内で複製し、ついにはマクロファージを破裂させ、それにより追加のマクロファージが感染部位に引きつけられ、それらはM. tuberculosisを食菌するが、活性化されず、ゆえにM. tuberculosisを破壊しない。第3段階では、リンパ球、特にT細胞が活性化され、M. tuberculosisを破壊可能なマクロファージを活性化するサイトカイン、例えばIFNが生産される。この段階で、患者はツベルクリン陽性であり、溶解酵素を放出する活性型マクロファージおよびサイトカインを分泌するT細胞を含む細胞性免疫応答が開始される。いくつかのマクロファージはM. tuberculosisに対して活性化されるが、該細菌は不活性型マクロファージ内で複製し続け、半固形中心を特徴とする結節を成長させ始める。第4段階では、結節は、気管支、肺の他の部分、および血液供給ラインに侵入する可能性があり、患者は、泌尿生殖器系、骨、関節、リンパ節、および腹膜を含む身体の他の部分において二次病変を示すかもしれない。最終段階では、結節は溶解し、M. tuberculosisの成長増加を誘発する。大規模な細菌負荷は気管支付近の壁を破裂させ、肺の他の部分に急速に伝播する感染を可能にする腔を形成させる。
【００５６】
TBに関して利用可能な現行の治療は、複数の抗生物質、例えばリファンピシン(rifampcin)、イソニアジド、ピランジンアミド(pyranzinamide)、エタンブトール、またはストレプトマイシンの初期2か月療法を含む。次の4か月は、リファンピシンおよびイソニアジドのみを投与して、残存するM. tuberculosisを破壊する。適正な処方および患者のコンプライアンスによってほとんどの場合治癒に至るが、現行の抗生物質療法に耐性の新規M. tuberculosis株が出現した結果、TBによる死亡数は上昇中である。(Rattan et al., 1998, Emerging Infections, 4(2):195-206)。さらに、リファンピシンおよびピランジンアミドでの潜在性TBの治療には致死的および重篤な肝臓傷害が関連している。(CDC Morbidity and Mortality Weekly Report, 51(44):998-999)。
【００５７】
2.2.3  真菌感染
全身性の侵襲性真菌感染の数は過去10年間急激に上昇した。それは、器官(臓器)移植、腫瘍学研究、ヒト免疫不全ウイルス、血管カテーテルの使用、および広域性抗生物質の誤用の結果として、リスクにさらされている患者集団が増加したことに起因する。Dodds et al., 2000 Pharmacotherapy 20(11): 1335-1355。70パーセントの真菌関連の死は、Candida種、Aspergillus種、およびCryptococcus neoformansに起因する。Yasuda, California Journal of Health-System Pharmacy, May/June 2001, pp. 4-11。感染を引き起こす真菌の非限定的な例には、Absidia種(例えばAbsidia corymbiferaおよびAbsidia ramosa)、Aspergillus種、(例えばAspergillus flavus、Aspergillus fumigatus、Aspergillus nidulans、Aspergillus niger、およびAspergillus terreus)、Basidiobolus ranarum、Blastomyces dermatitidis、Candida種(例えばCandida albicans、Candida glabrata、Candida kerr、Candida krusei、Candida parapsilosis、Candida pseudotropicalis、Candida quillermondii、Candida rugosa、Candida stellatoidea、およびCandida tropicalis)、Coccidioides immitis、Conidiobolus種、Cryptococcus neoforms、Cunninghamella種、皮膚糸状菌、Histoplasma capsulatum、Microsporum gypseum、Mucor pusillus、Paracoccidioides brasiliensis、Pseudallescheria boydii、Rhinosporidium seeberi、Pneumocystis carinii、Rhizopus種(例えばRhizopus arrhizus、Rhizopus oryzae、およびRhizopus microsporus)、Saccharomyces種、Sporothrix schenckii、接合菌綱、および、Zygomycetes (接合菌綱)、Ascomycetes (子嚢菌)、Basidiomycetes (担子菌綱)、Deuteromycetes (不完全菌)、およびOomycetes (卵菌)等の綱が含まれる。
【００５８】
2.2.3.1  全身性カンジダ症
すべての主要な全身性真菌感染の80%はCandida種に起因する。The Merk Manual of Diagnosis and Therapy, 17th ed., 1999。侵襲性カンジダ症は、免疫抑制患者において、Candida albicans、Candida troicalis、およびCandida glabrataに起因することが最も多い。同文献。カンジダ症は限定的なAIDSの日和見感染であり、食道、気管、気管支、および肺に感染する。同文献。HIV感染患者では、カンジダ症は、通常、粘膜皮膚性であり、中咽頭、食道、および膣に感染する。Ampel, April-June 1996, Emerg. Infect. Dis. 2(2): 109-116。
【００５９】
Candida種は、正常な消化管および皮膚にコロニー形成する(片利)共生生物(commensals)である。The Merk Manual of Diagnosis and Therapy, Berkow et al. (eds.), 17th ed., 1999。ゆえに、痰、口、尿、便、膣、または皮膚由来のCandidiaの培養は侵襲性で進行性の感染を必ずしも示さない。同文献。ほとんどの場合、カンジダ症の診断には、特徴的臨床病変の提示、組織侵襲の組織病理学的証拠についての文書調査、または他の原因の排除が必要である。同文献。気道の全身性カンジダ症感染の症状は典型的に非特異的であり、嚥下障害、咳、および発熱が含まれる。同文献。
【００６０】
すべての形式のカンジダ症は、深刻で、進行性で、および潜在的に致死的であるとみなされる。同文献。カンジダ症の治療のための治療には、典型的に、抗真菌剤であるアンホテリシンBおよびフルシトシンの併用投与が含まれる。同文献。残念ながら、アンホテリシンB療法には急性腎不全が関連している。Dodds, 上記。フルコナゾールは特定種のCandidaの治療においてアンホテリシンBほど有効ではないが、種の特定が未定である間の高い経口用量または静脈内用量での初期治療としては有用である。The Merk Manual of Diagnosis and Therapy, 17th ed., 1999。しかし、フルコナゾールは治療の失敗の増加および抗真菌剤耐性を招いている。Ampel, 上記。ゆえに、全身性カンジダ症を治療するための新規治療が必要である。
【００６１】
2.2.3.2  アスペルギルス症
Aspergillusには、132種および18変種が含まれ、とりわけ、Aspergillus fumigatusはAspergillus関連疾患の80%に関与する。Kurp et al., 1999, Medscape General Medicine 1(3)。Aspergillus fumigatusは侵襲性の肺アスペルギルス症の最も一般的な原因であり、侵襲性の肺アスペルギルス症は急速に広がって、進行性で、最終的に致死の呼吸不全を引き起こす。The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 17th ed., 1999。長期の高用量コルチコステロイド療法を受けている患者、器官移植患者、好中球機能の遺伝性障害を有する患者、およびAIDSの感染患者は、アスペルギルス症のリスクにさらされている。
【００６２】
Aspergillusによる侵襲性の肺感染の臨床症状には、発熱、咳、および胸痛が含まれる。Aspergillusは、既存の肺の損傷腔にアスペルギルス腫(真菌球)の形式でコロニー形成し、それはもつれている多量の菌糸、フィブリン浸出物、および線維組織でカプセル化された炎症細胞から構成される。同文献。通常、アスペルギルス腫は、気管支拡張症、新生物、TB、および他の慢性肺感染に元々起因する肺腔で生成し、拡大する。同文献。ほとんどのアスペルギルス腫は全身性抗真菌治療に応答しないか、あるいはそれを必要としない。同文献。しかし、侵襲性感染は急速に進行することがよくあり、致死であり、ゆえにIVアンホテリシンBまたは経口イトラコナゾールを含む攻撃的な治療が必要とされる。同文献。残念ながら、高用量アンホテリシンBは腎不全を引き起こすことがあり、イトラコナゾールは中程度に重篤な症例でしか有効でない。同文献。したがって、アスペルギルス症を治療するための新規治療が必要である。
【００６３】
2.2.3.3  クリプトコッカス症
HIVの流行前はクリプトコッカス症の症例はまれであった。Ampel, 上記。AIDS患者、ホジキンまたは他のリンパ腫またはサルコイドーシスの患者、および長期コルチコステロイド療法を受けている患者はクリプトコッカス症の高いリスクにさらされている。The Merk Manual of Diagnosis and Therapy, 17th ed., 1999。ほとんどの場合、クリプトコッカス感染は自己制限性(self-limited)であるが、AIDS関連のクリプトコッカス感染は、急性呼吸困難および肺の一次病巣を有する、重篤で進行性の肺炎の形式であることがある。同文献。免疫無防備状態でない患者に罹患している進行性で播種性のクリプトコッカス症の症例では、慢性髄膜炎が最も一般的であり、臨床的に明らかな肺の病変はない。同文献。
【００６４】
免疫能が正常な患者は、限局性肺クリプトコッカス症を治療するための治療の実施を常に必要とするわけではない。しかし、そのような患者に限局性肺クリプトコッカス症を治療するための治療を実施する場合、典型的にその治療は、フルシトシンを伴うか、あるいは伴わずにアンホテリシンBを投与することからなる。同文献。AIDS患者は、概して、アンホテリシンBおよびフルシトシンからなる初期治療を施され、その後、クリプトコッカス症を治療するために経口フルコナゾールを投与される。同文献。フルシトシンを用いるか、用いずにアンホテリシンBを服用しているすべての患者の腎臓および血液学的機能は、治療前および治療中に評価される必要がある。その理由は、フルシトシン血中濃度をモニターして毒性を制限する必要があり、フルシトシンの投与は既存の腎不全または骨髄機能障害を有する患者に関して安全でないことがあるからである。同文献。ゆえに、クリプトコッカス症を治療するための新規治療が必要である。
【００６５】
2.2.4  原虫感染
原生動物は世界中のほとんどの環境で見られる単細胞動物である。ほとんどの種は自由生活性であるが、すべての高等動物は1種以上の原生動物に感染する。寄生虫の種および系統ならびに宿主の耐性に依存して、感染は無症候性から生命を脅かす感染にまでおよぶ。原生動物は微視的な単細胞の真核生物であり、比較的複雑な内部構造を有し、複雑な代謝活性を実行する。いくつかの原生動物は推進または他のタイプの運動のための構造を有する。分類の観点では、ほとんどの原生動物は光学顕微鏡および電子顕微鏡による形態学に基づいて分類される。現在、原生動物は6つの門に分類され、SacromastigophoraおよびApicomplexa門のメンバーはヒト疾患の原因である。
【００６６】
実質的にすべてのヒトは、いつかの時点で、身体中または身体表面で生存する原生動物を有し、多数のヒトはその寿命の間じゅう1種以上の原生動物に感染している。いくつかの種は共生生物であるとみなされ、すなわち通常は無害であり、一方、他のものは病原体であり、通常、疾患を生じさせる。原虫疾患は非常に軽度の疾患から生命を脅かす疾患にまでおよぶ。寄生虫感染を抑制できるが、排除できない防御を有する個体はキャリアーになり、他者に関する大規模感染源を構成する。
【００６７】
正常な個体で不顕性または軽度である多数の原虫感染は、免疫抑制患者、特に後天性免疫不全症候群(「AIDS」)の患者では生命を脅かしうる。多数の健康なヒトがその肺に少数のPneumocystis cariniiを有することを示唆する証拠がある。しかし、この寄生虫はAIDS (ADDS)の患者等の免疫抑制患者において致死的肺炎を頻繁に引き起こす。非常に一般的な寄生原生動物であるToxoplasma gondiiは、通常、やや軽度の初期疾病を引き起こし、その後、持続性の潜伏感染を引き起こす。しかし、AIDS患者は致死のトキソプラズマ脳炎を発症しうる。Cryptosporidiumは19世紀に報告されたが、広範なヒト感染は最近認識されたばかりである。Cryptosporidiumは別の原虫であり、AIDS患者において深刻な合併症を生じさせうる。ヒトの微胞子虫症はAIDSの出現前にはほんの数例しか報告されなかった。今やそれは、AIDS患者において、より一般的な感染になっている。さらに徹底的なAIDS患者の研究が行われるにつれて、他のまれな原虫感染または異常な原虫感染が診断されそうである。
【００６８】
寄生原生動物の属およびその関連疾患の非限定的な例には、以下のものが含まれる: Leishmania (内臓、皮膚および粘膜皮膚の感染); Trypanosoma (睡眠病、シャーガス病); Giardia (下痢); Trichomonas (膣炎); Entamoeba (赤痢、肝膿瘍); Dientamoeba (大腸炎); NaegleriaおよびAcanthamoeba (中枢神経系および角膜潰瘍); Babesia (バベシア症); Plasmodium (マラリア); Isospora (下痢); Sarcocystis (下痢); Toxoplasma (トキソプラズマ症); Enterocytozoon (下痢); Balantidium (赤痢); およびPneumocystis (肺炎)。原虫感染のレビューに関しては、例えばEnglund and Sher (eds): The Biology of Parasitism. A Molecular and Immunological Approach. Alan R. Liss, New York, 1988; Goldsmith and Heyneman (eds): Tropical Medicine and Parasitology. Appleton and Lange, East Norwalk, CT, 1989; Lee et al. (eds): An Illustrated Guide to the Protozoa. Society of Protozoologists, Lawrence, KS, 1985; Kotlar and Orenstein, 1994, J. Gastroenterol. 89:1998; およびNeva and Brown, Basic Clinical Parasitology, 6th ed., Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994を参照のこと。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００６９】
2.3  EPHA2および感染
細菌を含む多数の臨床的に重要な病原体は、上皮細胞層に侵入することによって疾患を開始させる。上皮内への微生物の侵入は活動的なプロセスであり、種々のタイプの病原体に関して、関与する具体的なシグナル伝達経路は異なるが、侵入病原体から宿主細胞へのシグナル伝達を必要とする(Finlay and Cossart, 1997, Science 276:718-725)。侵入プロセスを促進することに加えて、侵入病原体と宿主細胞間の相互作用によって上皮性遺伝子発現のプログラムが活性化される。このプログラムは炎症反応および膜結合タンパク質に関与する遺伝子を包含する。cDNAアレイ発現解析を使用する最近の研究では、感染に応答して、特定遺伝子の宿主がアップレギュレートまたはダウンレギュレートされることが示されている。
【００７０】
EphA2 (上皮細胞キナーゼ)は受容体チロシンキナーゼのEphファミリーの130 kDaのメンバーである(Zantek N. et al, 1999, Cell Growth Differ. 10:629-38; Lindberg R. et al., 1990, Mol. Cell. Biol. 10:6316-24)。EphA2の機能は未知であるが、結腸上皮の増殖、分化、および障壁機能(Rosenberg et al., 1997, Am. J. Physiol. 273:G824-32)、血管網の組立て、内皮の遊走、毛細血管の形態形成、および血管形成(Stein et al., 1998, Genes Dev. 12:667-78)、神経系の分節化および軸索の開通(Bovenkamp D. and Greer P., 2001, DNA Cell Biol. 20:203-13)、腫瘍血管新生(Ogawa K. et al., 2000, Oncogene 19:6043-52)、および癌転移(国際特許公開第WO 01/9411020号, 第WO 96/36713号, 第WO 01/12840号, 第WO 01/12172号)を調節することが示唆されている。
【００７１】
EphA2の天然リガンドはEphrinA1である(Eph Nomenclature Committee, 1997, Cell 90(3):403-4; Gale, et al., 1997, Cell Tissue Res. 290(2): 227-41)。EphA2とEphrinA1の相互作用は、器官表面のアンカー細胞を支援するとともに、EphA2の自己リン酸化を介してEphA2発現を低下させることによって上皮および/または内皮細胞増殖をダウンレギュレートすると考えられる(Lindberg et al., 1990, 上記)。天然条件下では、該相互作用は、器官を保護する上皮細胞障壁の維持を支援し、上皮細胞の過剰増殖および成長の調節を支援する。しかし、上皮細胞の保護性障壁形成を阻害するか、あるいは上皮および/または内皮細胞の破壊および/または分断を引き起こし、かくして適正に治癒しない病状となる。
【課題を解決するための手段】
【００７２】
3.  発明の要旨
本発明は、RSVに感染した上皮細胞中でEphA2がアップレギュレートされるという発明者らの発見に部分的に基づくものである。特定の理論または機構に拘束されないが、病原体感染細胞におけるEphA2発現のアップレギュレートは望ましくない細胞生存を促進するかもしれない。ゆえに本発明は、病原体感染を治療、管理、予防および/または改善するために設計された方法および組成物を提供する。該病原体感染には、限定するものではないが、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染および原虫感染が含まれる。特に、本発明は、感染細胞(例えば、感染EphA2発現細胞)においてEphA2の発現がアップレギュレートされている場合の感染を治療、管理、予防、および/または改善するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の1種以上のEphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の有効量の治療物質を投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、本発明の方法にしたがって治療、予防、管理および/または改善される対象の病原体感染は細胞内病原体感染である。
【００７３】
好ましい実施形態では、本発明の方法にしたがって治療、管理、予防および/または改善される対象の細菌感染は細胞内細菌感染である。ヒトにおける感染を引き起こし、ならびに/あるいはそれと関連している細胞内細菌の非限定的な例には、Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium leprae、Salmonella enterica 血清型Typhi、Brucella sp、Legionella sp、Listeria monocytogenes、Francisella tularensis、Rickettsia rickettsii; Rickettsia prowazekii; Rickettsia typhi; Rickettsia tsutsugamushi; Chlamydia trachomatis; Chlamydia psittaci; およびChlamydia pneumoniaeが含まれる。特定の実施形態では、本発明は、細胞内細菌感染を予防、治療、管理および/または改善する方法であって、それを必要とする対象に、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療物質を投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、予防、治療、管理および/または改善対象の細胞内細菌感染は、感染細胞(例えば感染上皮細胞)におけるEphA2発現の増加を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連しているものである。特定の実施形態では、細胞内細菌に感染した細胞は、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えばRT-PCR、ノーザンブロット、FACS解析、またはELISA等の免疫アッセイ)によって評価された場合に、対象(例えば同一対象)または対象集団由来の非感染細胞より、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも98%、または少なくとも1倍、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5倍、少なくとも5倍、少なくとも7倍、または少なくとも10倍高いEphA2の発現レベルを有する。別の特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の細胞内細菌感染は活動性(active)である。別の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の細胞内細菌感染は潜伏性である。
【００７４】
特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の細胞内細菌感染は、Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium leprae、Salmonella enterica 血清型Typhi、Brucella sp、Legionella sp、Listeria monocytogenes、Francisella tularensis、Rickettsia rickettsii; Rickettsia prowazekii; Rickettsia typhi; Rickettsia tsutsugamushi; Chlamydia trachomatis; Chlamydia psittaci; およびChlamydia pneumoniaeに起因する感染である。特定の他の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の細胞内細菌感染は、以下の1種以上の細胞内細菌に起因する感染ではない: Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium leprae、Salmonella enterica 血清型Typhi、Brucella sp、Legionella sp、Listeria monocytogenes、Francisella tularensis、Rickettsia rickettsii; Rickettsia prowazekii; Rickettsia typhi; Rickettsia tsutsugamushi; Chlamydia trachomatis; Chlamydia psittaci; およびChlamydia pneumoniae。
【００７５】
ヒトにおける感染を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連しているウイルスの非限定的な例には、A型肝炎ウイルス; B型肝炎ウイルス; HIV; 重症急性呼吸器症候群ウイルス; 灰白髄炎ウイルス; 風疹ウイルス; ウエストナイル熱ウイルス; 狂犬病ウイルス; ザイールエボラウイルス; ムンプスウイルス; はしかウイルス; ハンタウイルス; ラッサ熱ウイルス; ロタウイルス; サイトメガロウイルス; パラインフルエンザウイルス; 呼吸器合胞体ウイルス(「RSV」); およびトリおよびヒトメタニューモウイルスが含まれる。特定の実施形態では、本発明は、ウイルス感染を予防、治療、管理、および/または改善する方法であって、それを必要とする対象に、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療物質を投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、予防、治療、管理および/または改善対象のウイルス感染は、感染細胞(例えば感染上皮細胞)におけるEphA2発現の増加を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連しているものである。特定の実施形態では、ウイルスに感染した細胞は、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えばRT-PCR、ノーザンブロット、FACS解析、またはELISA等の免疫アッセイ)によって評価された場合に、対象(例えば同一対象)または対象集団由来の非感染細胞より、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも98%、または少なくとも1倍、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5倍、少なくとも5倍、少なくとも7倍、または少なくとも10倍高いEphA2の発現レベルを有する。別の特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象のウイルス感染は活動性である。別の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象のウイルス感染は潜伏性である。
【００７６】
特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象のウイルス感染は、ヒトパピローマウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、単純ヘルペスウイルス-2、ハンタウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルスA、BおよびC、フニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、はしかウイルス(Rubeola virus)、エプスタイン・バーウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトコロナウイルス、痘瘡ウイルス、黄熱ウイルス、ウエストナイルウイルス、西部EEウイルス、アデノウイルス、ロタウイルス、セムリキ森林ウイルス、ワクシニアウイルス、ベネズエラEEウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、グアナリトウイルス、リフトバレー熱ウイルス、マールブルグウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、サビアウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、またはトリおよびヒトメタニューモウイルスに起因する感染である。特定の他の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象のウイルス感染は、以下の1種以上のウイルスに起因する感染ではない: ヒトパピローマウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、単純ヘルペスウイルス-2、ハンタウイルス、A型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルスA、BおよびC、フニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、はしかウイルス、エプスタイン・バーウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトコロナウイルス、痘瘡ウイルス、黄熱ウイルス、ウエストナイルウイルス、西部EEウイルス、アデノウイルス、ロタウイルス、セムリキ森林ウイルス、ワクシニアウイルス、ベネズエラEEウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、グアナリトウイルス、リフトバレー熱ウイルス、マールブルグウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、サビアウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、またはトリおよびヒトメタニューモウイルス。特定の実施形態では、本発明の方法および組成物によって予防、治療、管理および/または改善される対象のウイルス感染は呼吸器ウイルス感染ではない。特定の実施形態では、本発明の方法および組成物によって予防、治療、管理および/または改善される対象のウイルス感染はRSV感染ではない。
【００７７】
ヒトにおける感染を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連している原生動物の非限定的な例には、Leishmania;(Leishmanial) Trypanosoma; Giardia; Trichomonas; Entamoeba; Dientamoeba; NaegleriaおよびAcanthamoeba; Babesia; Plasmodium; Isospora; Sarcocystis; Toxoplasma; Enterocytozoon; Balantidium; およびPneumocystisが含まれる。特定の実施形態では、本発明は、細胞内原虫感染を予防、治療、管理および/または改善する方法であって、それを必要とする対象に、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療物質を投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、予防、治療、管理および/または改善対象の原虫感染は、感染細胞(例えば感染上皮細胞)におけるEphA2発現の増加を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連しているものである。特定の実施形態では、原生動物に感染した細胞は、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えばRT-PCR、ノーザンブロット、FACS解析、またはELISA等の免疫アッセイ)によって評価された場合に、対象(例えば同一対象)または対象集団由来の非感染細胞より、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも98%、または少なくとも1倍、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5倍、少なくとも5倍、少なくとも7倍、または少なくとも10倍高いEphA2の発現レベルを有する。別の特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の原虫感染は活動性である。別の実施形
態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の原虫感染は潜伏性である。
【００７８】
特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の原虫感染は、Leishmania; Trypanosoma; Giardia; Trichomonas; Entamoeba; Dientamoeba; NaegleriaおよびAcanthamoeba; Babesia; Plasmodium; Isospora; Sarcocystis; Toxoplasma; Enterocytozoon; Balantidium; およびPneumocystisに起因する感染である。特定の他の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の原虫感染は、以下の1種以上の細胞内原生動物に起因する感染ではない: Leishmania; Trypanosoma; Giardia; Trichomonas; Entamoeba; Dientamoeba; NaegleriaおよびAcanthamoeba; Babesia; Plasmodium; Isospora; Sarcocystis; Toxoplasma; Enterocytozoon; Balantidium; およびPneumocystis。
【００７９】
ヒトにおける感染を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連している真菌の非限定的な例には、Absidia種(例えばAbsidia corymbiferaおよびAbsidia ramosa)、Aspergillus種、(例えばAspergillus flavus (βavus)、Aspergillus fumigatus、Aspergillus nidulans、Aspergillus niger、およびAspergillus terreus)、Basidiobolus ranarum、Blastomyces dermatitidis、Candida種(例えばCandida albicans、Candida glabrata、Candida kerr、Candida krusei、Candida parapsilosis、Candida pseudotropicalis、Candida quillermondii、Candida rugosa、Candida stellatoidea、およびCandida tropicalis)、Coccidioides immitis、Conidiobolus種、Cryptococcus neoforms、Cunninghamella種、皮膚糸状菌、Histoplasma capsulatum、Microsporum gypseum、Mucor pusillus、Paracoccidioides brasiliensis、Pseudallescheria boydii、Rhinosporidium seeberi、Pneumocystis carinii、Rhizopus種(例えばRhizopus arrhizus、Rhizopus oryzae、およびRhizopus microsporus)、Saccharomyces種、Sporothrix schenckii、接合菌綱、および、Zygomycetes、Ascomycetes、Basidiomycetes、Deuteromycetes、およびOomycetes等の綱が含まれる。特定の実施形態では、本発明は、真菌感染を予防、治療、管理および/または改善する方法であって、それを必要とする対象に、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療物質を投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、予防、治療、管理および/または改善対象の真菌感染は、感染細胞(例えば感染上皮細胞)におけるEphA2発現の増加を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連しているものである。特定の実施形態では、真菌に感染した細胞は、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えばRT-PCR、ノーザンブロット、FACS解析、またはELISA等の免疫アッセイ)によって評価された場合に、対象(例えば同一対象)または対象集団由来の非感染細胞より、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも98%、または少なくとも1倍、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5倍、少なくとも5倍、少なくとも7倍、または少なくとも10倍高いEphA2の発現レベルを有する。別の特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の真菌感染は活動性である。別の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の真菌感染は潜伏性である。
【００８０】
特定の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の真菌感染は、Candida種、Aspergillus種、およびCryptococcus neoformansに起因する感染である。特定の他の実施形態では、本発明の方法にしたがって予防、治療、管理、および/または改善される対象の真菌感染は、以下の1種以上の真菌種に起因する感染ではない: Absidia種(例えばAbsidia corymbiferaおよびAbsidia ramosa)、Aspergillus種、(例えばAspergillus flavus、Aspergillus fumigatus、Aspergillus nidulans、Aspergillus niger、およびAspergillus terreus)、Basidiobolus ranarum、Blastomyces dermatitidis、Candida種(例えばCandida albicans、Candida glabrata、Candida kerr、Candida krusei、Candida parapsilosis、Candida pseudotropicalis、Candida quillermondii、Candida rugosa、Candida stellatoidea、およびCandida tropicalis)、Coccidioides immitis、Conidiobolus種、Cryptococcus neoforms、Cunninghamella種、皮膚糸状菌、Histoplasma capsulatum、Microsporum gypseum、Mucor pusillus、Paracoccidioides brasiliensis、Pseudallescheria boydii、Rhinosporidium seeberi、Pneumocystis carinii、Rhizopus種(例えばRhizopus arrhizus、Rhizopus oryzae、およびRhizopus microsporus)、Saccharomyces種、Sporothrix schenckii、接合菌綱、および、Zygomycetes、Ascomycetes、Basidiomycetes、Deuteromycetes、およびOomycetes等の綱。
【００８１】
EphA2/EphrinA1モジュレーターは以下のことを(直接または間接的に)モジュレートすることによって生物学的効果をもたらす物質である: (i) 例えば転写レベル、転写後レベル、翻訳レベルまたは翻訳後レベルでの、EphA2および/またはEphA2の内因性リガンド(群)(好ましくはEphrinA1)の発現; および/または(ii) EphA2および/またはEphrinA1の活性(群)。EphA2/EphrinA1モジュレーターの例には、限定するものではないが、EphA2とEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減する物質(以下、「EphA2/EphrinA1相互作用インヒビター」)が含まれる。EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターの非限定的な例には、以下の物質が含まれる: (i) EphA2に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphrinA1 (例えば単量体または多量体型のEphrinA1-Fc)および、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達およびリン酸化を誘発する抗体(すなわちEphA2作用性抗体)); (ii) EphA2に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルのEphA2のシグナル伝達しか誘発しない物質(例えばEphA2拮抗性抗体およびドミナントネガティブフォームのEphrinA1); (iii) EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphA2 (例えばEphA2-Fc)および、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する抗体); および(iv) EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルのEphrinA1のシグナル伝達しか誘発しない物質(例えばドミナントネガティブフォームのEphA2および抗EphrinA1抗体)。
【００８２】
EphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2の発現をモジュレートする物質がさらに含まれる。そのような物質は、EphA2発現を低下させ/ダウンレギュレートすることができ(例えばEphA2アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)、あるいはEphA2発現を増加させ/アップレギュレートして、細胞表面のEphA2の量が、結合に利用可能な内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の量を超え、ゆえに未結合EphA2の量を増加させるようにすることができる(例えばEphA2をコードする核酸))。
【００８３】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphrinA1の発現をモジュレートする物質である。そのような物質は、EphrinA1発現を低下させ/ダウンレギュレートすることができ(例えばEphrinA1アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)、あるいはEphrin発現を増加させ/アップレギュレートすることができる(例えばEphrinA1をコードする核酸))。
【００８４】
さらに他の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2またはEphrinA1のタンパク質の安定性またはタンパク質の蓄積をモジュレートする物質が含まれる。
【００８５】
別の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはキナーゼ活性(例えば、EphA2、EphrinA1のキナーゼ活性、または細胞膜でEphA2またはEphrinA1と関連していることが知られる異種タンパク質のキナーゼ活性)を促進する物質である。
【００８６】
さらに別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達を防止または低減するが、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphA2イントラボディー); および、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を防止または低減するが、EphrinA1とEphA2の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphrinA1抗体)が含まれる。
【００８７】
本発明の特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは1種以上の以下のことを実行する: (i) EphA2発現および/または活性を低下させる; (ii) 病原体に感染したEphA2発現細胞のアポトーシスおよび/または壊死を生じさせる; および(iii) EphA2リガンド誘発型リン酸化(例えば自己リン酸化)および分解を生じさせる。他の特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは以下の物質のうちの1つである: (i) 可溶性EphrinA1分子(例えばEphrinA1-Fc); (ii) EphA2アンチセンス核酸分子; (iii) EphA2のリン酸化および分解を誘発するEphA2作用性抗体; (iv) EphA2ワクチン; (v)細胞障害性物質にコンジュゲートされた抗EphrinA1または抗EphA2抗体; (vi)例えばEphA2および病原体抗原または細胞マーカーを標的にする多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体(例えばBiTE分子)。
【００８８】
EphA2/EphrinA1モジュレーターは抗体、好ましくはモノクローナル抗体であってよく、それは低いKoff率(例えば3x10-3s-1未満のKoff)を有するであろう。一実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。より好ましい実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、ヒト、ヒト化またはキメラのEph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5ではない。
【００８９】
特定の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターは米国特許公開第US 2004/0180823A1号または国際公開第WO 2004/028551 A1号に開示される物質または化合物ではない。
【００９０】
本発明は、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療物質または予防物質(例えば免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗真菌剤、等)を含む医薬組成物を提供する。本発明は、感染、特に細胞内病原体感染を検出、診断および/または予見する方法、および/または、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターを使用して感染を予防、治療、管理および/または改善するための治療の効力をモニターする方法をさらに提供する。そのような方法は、感染を検出、診断、モニターまたは予見するための他の方法と併用してよい。好ましい実施形態では、感染はEphA2の過剰発現を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連しているものである。特定の実施形態では、本発明は、潜伏感染を検出、診断、モニターまたは予見するための方法を提供する。
【００９１】
さらに本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1種以上の治療物質または予防物質(例えば免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗真菌剤、等）を含む製品およびキットを提供する。特定の実施形態では、製品およびキットは、EphA2/EphrinA1モジュレーターおよびオプションの他の治療物質の用量および投与に関する指示書を含む。
【００９２】
3.1  定義
本明細書中で使用される用語「物質(剤)(agent)」とは、所望の生物学的効果を有する分子を表す。物質には、限定するものではないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、翻訳後修飾タンパク質、抗体等を含むがそれらに限定されないタンパク質性分子; ワクチン(例えばListeriaベースのワクチン) 小分子(1000ダルトン未満)、無機または有機化合物; および、二本鎖もしくは一本鎖DNA、または二本鎖もしくは一本鎖RNA(例えばアンチセンス、RNAi、等)、アプタマー、ならびに三重らせん核酸分子を含むがそれらに限定されない核酸分子が含まれる。物質は、任意の公知の生物(例えば、限定するものではないが、動物(例えば哺乳類(ヒトおよび非ヒト哺乳類))、植物、細菌、真菌、および原生生物、またはウイルス)に由来するか、あるいはそれから取得されるか、あるいは合成分子のライブラリーに由来するか、あるいはそれから取得されるものであってよい。EphA2/EphrinA1モジュレーターである物質は以下のことを(直接または間接的に)モジュレートする: (i) 例えば転写レベル、転写後レベル、翻訳レベルまたは翻訳後レベルでのEphA2および/またはEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の発現; および/または(ii) EphA2および/またはEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の活性(群)。
【００９３】
本明細書中で使用される用語「アナログ」とは、タンパク質性物質(例えばペプチド、ポリペプチド、タンパク質または抗体)の関連では、第二のタンパク質性物質(例えばEphA2ポリペプチドまたはEphrinA1ポリペプチド)と類似または同一の機能を有するが、第二のタンパク質性物質のアミノ酸配列または構造と類似または同一のアミノ酸配列または構造を必ずしも含まないタンパク質性物質を表す。類似のアミノ酸配列を有するタンパク質性物質とは、少なくとも1つの以下の条件を満たすタンパク質性物質を表す: (a)第二のタンパク質性物質のアミノ酸配列に対して、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%同一のアミノ酸配列を有するタンパク質性物質; (b)少なくとも20アミノ酸残基、少なくとも30アミノ酸残基、少なくとも40アミノ酸残基、少なくとも50アミノ酸残基、少なくとも60アミノ残基、少なくとも70アミノ酸残基、少なくとも80アミノ酸残基、少なくとも90アミノ酸残基、少なくとも100アミノ酸残基、少なくとも125アミノ酸残基、または少なくとも150アミノ酸残基の第二のタンパク質性物質をコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質性物質; および(c)第二のタンパク質性物質をコードするヌクレオチド配列に対して、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%同一のヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質性物質。第二のタンパク質性物質と類似の構造を有するタンパク質性物質とは、第二のタンパク質性物質と類似の二次、三次または四次構造を有するタンパク質性物質を表す。タンパク質性物質の構造は当業者に公知の方法によって決定することができ、それには、限定するものではないが、X線結晶構造解析、核磁気共鳴、および結晶学的電子顕微鏡観察が含まれる。好ましくは、タンパク質性物質はEphA2またはEphrinA1活性を有する。
【００９４】
2種のアミノ酸配列または2種の核酸配列の同一性パーセントを決定するために、最適な比較目的で配列をアライメントする(例えば、第二のアミノ酸または核酸配列との最適なアライメントのために第一のアミノ酸または核酸配列の配列中にギャップを導入できる)。そして、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第一の配列中の位置が第二の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、分子はその位置で同一である。2配列間の同一性パーセントは、該配列によって共有される同一位置の数と相関する(すなわち、%同一性 = 同一の重複位置の数/位置の総数 x 100%)。一実施形態では、2配列は同一の長さである。
【００９５】
2配列間の同一性パーセントの決定は数学的アルゴリズムを使用して達成することもできる。2配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87: 2264-2268のアルゴリズムであり、それはKarlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 5873-5877において見られるように改変される。そのようなアルゴリズムはAltschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215: 403のNBLASTおよびXBLASTプログラムに組み込まれている。NBLASTヌクレオチドプログラムパラメータセット、例えばスコア=100、ワードレングス=12を用いてBLASTヌクレオチドサーチを実施して、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を取得することができる。XBLASTプログラムパラメータセット、例えばスコア-50、ワードレングス=3を用いてBLASTタンパク質サーチを実施して、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を取得することができる。比較目的でギャップ導入アライメントを達成するために、Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402に記載のようにGapped BLASTを利用することができる。あるいは、PSI-BLASTを使用して、分子間の遠い関連性を検出するための反復サーチ(iterated search)を実施することができる(同文献)。BLAST、Gapped BLAST、およびPSI-Blastプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム(例えばXBLASTおよびNBLAST)のデフォルトパラメータを使用することができる(例えばNCBIウェブサイトを参照のこと)。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Myers and Miller, 1988, CABIOS 4: 11-17のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムはALIGNプログラム(バージョン2.0)に組み込まれている。ALIGNプログラムはGCG配列アライメントソフトウェアパッケージの部分である。アミノ酸配列の比較にALIGNプログラムを利用する場合、PAM120重み残基表、ギャップレングスペナルティー12、およびギャップペナルティー4を使用することができる。
【００９６】
2配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容してもしなくても、上記技術と同様の技術を使用して決定することができる。同一性パーセントの計算では、典型的に厳密なマッチしかカウントしない。
【００９７】
本明細書中で使用される用語「アナログ」とは、非タンパク質性アナログの関連では、第一の有機分子または無機分子と類似または同一の機能を有し、かつ、第一の有機分子または無機分子と構造が類似している第二の有機分子または無機分子を表す。
【００９８】
本明細書中で使用される用語「EphA2に免疫特異的に結合する抗体」および類似の用語は、EphA2ポリペプチドまたはEphA2ポリペプチドの断片に特異的に結合し、かつ、非EphA2ポリペプチドには特異的に結合しない抗体を表す。好ましくは、EphA2ポリペプチドまたはその断片に免疫特異的に結合する抗体は他の非関連抗原に交差反応しない。特定の実施形態では、EphA2に免疫特異的に結合する抗体または断片は、関連抗原(例えばEph受容体のAまたはBファミリー由来の他のタイプのEph受容体)と交差反応性であってよい。EphA2ポリペプチドまたはその断片に免疫特異的に結合する抗体は、例えば免疫アッセイまたは当業者に公知の他の技術によって特定することができる。好ましくは、EphA2ポリペプチドまたはその断片に免疫特異的に結合する抗体は、EphA2活性(群)をモジュレートするだけであり、他の活性に重大に影響することはない。EphA2ポリペプチドまたはその断片に免疫特異的に結合する抗体は好ましくはモノクローナル抗体であり、それは低いKoff率(例えばK<,ff less than 3x10-V)を有するであろう。一実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。より好ましい実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、ヒトまたはヒト化のEph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5ではない。
【００９９】
本明細書中で使用される用語「EphrinA1に免疫特異的に結合する抗体」および類似の用語は、EphrinA1ポリペプチドまたはEphrinA1ポリペプチドの断片に特異的に結合し、かつ、非EphrinA1ポリペプチドには特異的に結合しない抗体を表す。好ましくは、EphrinA1ポリペプチドまたはその断片に免疫特異的に結合する抗体は他の非関連抗原に交差反応しない。特定の実施形態では、EphrinA1に免疫特異的に結合する抗体または断片は、関連抗原(例えばEphrinリガンドのAまたはBファミリー由来の他のタイプのEphrin)と交差反応性であってよい。EphrinA1ポリペプチドまたはその断片に免疫特異的に結合する抗体は、例えば免疫アッセイまたは当業者に公知の他の技術によって特定することができる。好ましくは、EphrinA1ポリペプチドまたはその断片に免疫特異的に結合する抗体は、EphrinA1活性(群)をモジュレートするだけであり、他の活性に重大に影響することはない。
【０１００】
本発明の抗体には、限定するものではないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え生産された抗体、多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体)、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、イントラボディー、単鎖Fv (scFv)(例えば単一特異性および二重特異性、等)、Fab断片、F(ab')断片、ジスルフィド結合型Fv (sdFv)、抗イディオタイプ(anti-Id)抗体、および上記抗体のいずれかのエピトープ結合性断片が含まれる。特に、本発明の抗体には、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、EphA2抗原またはEphrinA1抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子(例えば抗EphA2抗体または抗EphrinA1抗体の1種以上の相補性決定領域(CDR))が含まれる。本発明の抗体は、任意のタイプ(例えばIgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY)、クラス(例えばIgG1 (IgGi)、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 (IgAi)およびIgA2)またはサブクラスの免疫グロブリン分子であってよい。
【０１０１】
本明細書中で使用される用語「誘導体」とは、タンパク質性物質(例えばタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、および抗体)の関連では、アミノ酸残基の置換、欠失、および/または付加を導入することによって改変されているアミノ酸配列を含むタンパク質性物質を表す。さらに本明細書中で使用される用語「誘導体」とは、修飾型のタンパク質性物質、すなわち、あるタイプの分子を該タンパク質性物質に共有結合によって取り付けることによって修飾されているタンパク質性物質を表す。例えば、限定目的ではないが、タンパク質性物質の誘導体は、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護/遮断基による誘導体化(derealization)、タンパク質分解による切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質への連結、等によって生産してよい。タンパク質性物質の誘導体は、当業者に公知の技術を使用する化学修飾によって生産してもよい。それには、限定するものではないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、等が含まれる。さらに、タンパク質性物質の誘導体は1種以上の非従来型のアミノ酸を含有してよい。タンパク質性物質の誘導体は、その派生元のタンパク質性物質と同一の機能(群)を有する。特定の実施形態では、タンパク質性物質の誘導体は、EphA2ポリペプチド、EphrinA1ポリペプチド、EphA2ポリペプチドもしくはEphrinA1ポリペプチドの断片、EphA2ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体、またはEphrinA1ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体の誘導体である。一実施形態では、EphA2ポリペプチド、EphrinA1ポリペプチド、EphA2ポリペプチドもしくはEphrinA1ポリペプチドの断片、EphA2ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体、またはEphrinA1ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体の誘導体は、EphA2ポリペプチド、EphrinA1ポリペプチド、EphA2ポリペプチドもしくはEphrinA1ポリペプチドの断片、EphA2ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体、またはEphrinA1ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体と類似または同一の機能を有する。別の実施形態では、EphA2ポリペプチド、EphrinA1ポリペプチド、EphA2ポリペプチドもしくはEphrinA1ポリペプチドの断片、EphA2ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体、またはEphrinA1ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体の誘導体は、未改変ポリペプチドと比較して改変された活性を有する。例えば、誘導体の抗体またはその断片は、よりタイトにそのエピトープに結合するか、あるいはタンパク質分解に、より耐性でありうる。
【０１０２】
本明細書中で使用される用語「誘導体」とは、非タンパク質性誘導体の関連では、第一の有機分子または無機分子の構造に基づいて形成される第二の有機分子または無機分子を表す。有機分子の誘導体には、限定するものではないが、例えばヒドロキシル、メチル、エチル、カルボキシル、ニトリル、またはアミン基の付加または欠失によって修飾された分子が含まれる。有機分子は、例えば、エステル化、アルキル化および/またはリン酸化されてもよい。
【０１０３】
本明細書中で使用される用語「有効量」とは、感染、またはその症状の重症度および/または持続時間を低減および/または改善し、該感染の進行を予防し、該感染を退行させ、該感染と関連している1種以上の症状の再発、発生、または開始を予防し、あるいは別の治療(例えば予防物質または治療物質)の予防効果または治療効果(群)を増強または改善するのに十分な治療(例えば予防物質または治療物質)の量を表す。EphA2/EphrinA1モジュレーターの有効量についての非限定的な例は以下のセクション5.4に挙げる。
【０１０４】
本明細書中で使用される用語「内因性リガンド」または「天然リガンド」とは、in vivoで特定の受容体に通常結合する分子を表す。例えば、EphrinA1はEphA2の内因性リガンドである。
【０１０５】
本明細書中で使用される用語「EphA2/EphrinA1モジュレーター」とは、以下のことを(直接または間接的に)モジュレートすることによって生物学的効果をもたらす物質(群)を表す: (i) 例えば転写レベル、転写後レベル、翻訳レベルまたは翻訳後レベルでのEphA2および/またはEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の発現; および/または(ii) EphA2および/またはEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の活性(群)。
【０１０６】
EphA2/EphrinA1モジュレーターの例には、限定するものではないが、EphA2とEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減する物質(以下、「EphA2/EphrinA1相互作用インヒビター」)が含まれる。EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターの非限定的な例には、以下の物質が含まれる: (i) EphA2に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphrinA1 (例えば単量体または多量体型のEphrinA1-Fc)および、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達およびリン酸化を誘発する抗体(すなわちEphA2作用性抗体)); (ii) EphA2に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルのEphA2のシグナル伝達しか誘発しない物質(例えばEphA2拮抗性抗体およびドミナントネガティブフォームのEphrinA1); (iii) EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphA2 (例えばEphA2-Fc)および、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する抗体); および(iv) EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルのEphrinA1のシグナル伝達しか誘発しない物質(例えばドミナントネガティブフォームのEphA2および抗EphrinA1抗体)。
【０１０７】
別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2の発現をモジュレートする物質が含まれる。そのような物質は、EphA2発現を低下させ/ダウンレギュレートすることができ(例えばEphA2アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)、あるいはEphA2発現を増加させ/アップレギュレートして、細胞表面のEphA2の量が、結合に利用可能な内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の量を超え、ゆえに未結合EphA2の量を増加させるようにすることができる(例えばEphA2をコードする核酸))。
【０１０８】
他の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphrinA1の発現をモジュレートする物質である。そのような物質は、EphrinA1発現を低下させ/ダウンレギュレートすることができ(例えばEphrinA1アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)、あるいはEphrin発現を増加させ/アップレギュレートすることができる(例えばEphrinA1をコードする核酸))。
【０１０９】
さらに他の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2またはEphrinA1のタンパク質の安定性またはタンパク質の蓄積をモジュレートする物質が含まれる。
【０１１０】
別の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはキナーゼ活性(例えば、EphA2、EphrinA1のキナーゼ活性、または細胞膜でEphA2またはEphrinA1と関連していることが知られる異種タンパク質のキナーゼ活性)を促進する物質である。
【０１１１】
さらに別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達を防止または低減するが、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphA2イントラボディー); および、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を防止または低減するが、EphrinA1とEphA2の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphrinA1抗体)が含まれる。
【０１１２】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは以下の細胞性効果のうちの1つ、2つまたはすべてを有する: (i) EphA2の細胞質尾部のリン酸化の増加; (ii) EphA2自己リン酸化の増加; および(iii) EphA2分解の増加。
【０１１３】
本明細書中で使用される用語「EphA2ポリペプチド」とは、EphA2、そのアナログ、誘導体もしくは断片、またはEphA2、そのアナログ、誘導体もしくは断片を含む融合タンパク質を表す。EphA2ポリペプチドは任意の種由来であってよい。特定の実施形態では、用語「EphA2ポリペプチド」とは、成熟している、プロセシングされたフォームのEphA2を表す。他の実施形態では、用語「EphA2ポリペプチド」とは、未成熟のフォームのEphA2を表す。本実施形態にしたがって、本発明の抗体は、成熟している、プロセシングされたフォームのEphA2と一致する未成熟のフォームのEphA2の部分に免疫特異的に結合する。
【０１１４】
EphA2ポリペプチドのヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列は文献または公共データベースにおいて見出すことができ、あるいは該ヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列は、当業者に公知のクローニングおよびシークエンシング技術を使用して決定することができる。例えば、ヒトEphA2のヌクレオチド配列はGenBankデータベースにおいて見出すことができる(例えばAccession Nos. BC037166、M59371およびM36395を参照のこと)。ヒトEphA2のアミノ酸配列はGenBankデータベースにおいて見出すことができる(例えばAccession Nos. AAH37166およびAAA53375を参照のこと)。EphA2のアミノ酸配列についての追加の非限定的な例を以下の表1に列挙する。
【表１】
2008518021.tif 000002
【０１１５】
特定の実施形態では、EphA2ポリペプチドは任意の種由来のEphA2である。好ましい実施形態では、EphA2ポリペプチドはヒトEphA2である。
【０１１６】
本明細書中で使用される用語「EphrinA1ポリペプチド」とは、EphrinA1、そのアナログ、誘導体もしくは断片、またはEphrinA1、そのアナログ、誘導体もしくは断片を含む融合タンパク質を表す。EphrinA1ポリペプチドは任意の種由来であってよい。特定の実施形態では、用語「EphrinA1ポリペプチド」とは、成熟している、プロセシングされたフォームのEphrinA1を表す。他の実施形態では、用語「EphrinA1ポリペプチド」とは、未成熟のフォームのEphrinA1を表す。本実施形態にしたがって、本発明の抗体は、成熟している、プロセシングされたフォームのEphrinA1と一致する未成熟のフォームのEphrinA1の部分に免疫特異的に結合する。
【０１１７】
EphrinA1ポリペプチドのヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列は文献または公共データベースにおいて見出すことができ、あるいは該ヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列は、当業者に公知のクローニングおよびシークエンシング技術を使用して決定することができる。例えば、ヒトEphrinA1のヌクレオチド配列はGenBankデータベースにおいて見出すことができる(例えばAccession No. BC032698を参照のこと)。ヒトEphrinA1のアミノ酸配列はGenBankデータベースにおいて見出すことができる(例えばAccession No. AAH32698を参照のこと)。EphrinA1のアミノ酸配列についての追加の非限定的な例を以下の表2に列挙する。
【表２】
2008518021.tif 000003
【０１１８】
特定の実施形態では、EphrinA1ポリペプチドは任意の種由来のEphrinA1である。好ましい実施形態では、EphrinA1ポリペプチドはヒトEphrinA1である。
【０１１９】
本明細書中で使用される用語「エピトープ」とは、動物、好ましくは哺乳類、および最も好ましくはヒトにおいて抗原性または免疫原性の活性を有する、ポリペプチドまたはタンパク質の部位または断片を表す。特定の実施形態では、用語「エピトープ」とは、動物、好ましくは哺乳類、および最も好ましくはヒトにおいて抗原性または免疫原性の活性を有する、EphA2ポリペプチドまたはEphrinA1ポリペプチドの部分を表す。免疫原性の活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を誘発する、ポリペプチドまたはタンパク質の部位または断片である。特定の実施形態では、免疫原性の活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を誘発する、EphA2ポリペプチドまたはEphrinA1ポリペプチドの部分である。抗原性の活性を有するエピトープは、当業者に周知の任意の方法、例えば免疫アッセイによって決定された場合に、抗体が免疫特異的に結合する対象の、ポリペプチドまたはタンパク質の部位または断片である。特定の実施形態では、抗原性の活性を有するエピトープは、当技術分野において周知の任意の方法、例えば免疫アッセイによって決定された場合に、抗体が免疫特異的に結合する対象の、EphA2ポリペプチドまたはEphrinA1ポリペプチドの部分である。抗原性エピトープは必ずしも免疫原性である必要はない。
【０１２０】
本明細書中で使用される用語「断片」とは、タンパク質性物質の関連では、別のポリペプチドまたはタンパク質の少なくとも5個の連続のアミノ酸残基、少なくとも10個の連続のアミノ酸残基、少なくとも15個の連続のアミノ酸残基、少なくとも20個の連続のアミノ酸残基、少なくとも30個の連続のアミノ酸残基、少なくとも40個の連続のアミノ酸残基、少なくとも50個の連続のアミノ酸残基、少なくとも60個の連続のアミノ残基、少なくとも70個の連続のアミノ酸残基、少なくとも80個の連続のアミノ酸残基、少なくとも90個の連続のアミノ酸残基、少なくとも100個の連続のアミノ酸残基、少なくとも125個の連続のアミノ酸残基、少なくとも150個の連続のアミノ酸残基、少なくとも175個の連続のアミノ酸残基、少なくとも200個の連続のアミノ酸残基、または少なくとも250個の連続のアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを表す。特定の実施形態では、断片は、EphA2もしくはEphrinA1ポリペプチド、またはEphA2もしくはEphrinA1ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体の断片である。ある実施形態では、タンパク質またはポリペプチドの断片は、該タンパク質またはポリペプチドの少なくとも1種の機能を保持する。別の実施形態では、ポリペプチドまたはタンパク質の断片は、該ポリペプチドまたはタンパク質の少なくとも2種、3種、4種、または5種の機能を保持する。好ましくは、EphA2ポリペプチドもしくはその断片、またはEphrinA1ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する抗体の断片は、それぞれEphA2ポリペプチドもしくはその断片、またはEphrinA1ポリペプチドもしくはその断片に免疫特異的に結合する能力を保持する。好ましくは、抗体断片はエピトープ結合性断片である。
【０１２１】
本明細書中で使用される用語「融合タンパク質」とは、第一のポリペプチドもしくはタンパク質またはその断片、アナログもしくは誘導体のアミノ酸配列、および異種ポリペプチドまたはタンパク質(すなわち、第一のポリペプチドもしくはタンパク質またはその断片、アナログもしくは誘導体と異なる第二のポリペプチドもしくはタンパク質またはその断片、アナログもしくは誘導体、または第一のポリペプチドもしくはタンパク質またはその断片、アナログもしくは誘導体の通常ではない部分)のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはタンパク質を表す。一実施形態では、融合タンパク質は、異種タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに融合された予防物質または治療物質を含む。本実施形態にしたがって、異種タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドは、異なるタイプの予防物質または治療物質であっても、そうでなくてもよい。例えば、免疫調節活性を有する2種の異なるタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドをともに融合して、融合タンパク質を形成させてよい。好ましい実施形態では、融合タンパク質は、異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドに融合される前の元のポリペプチドまたはタンパク質の活性を保持するか、あるいはそれと比較して改善された活性を有する。
【０１２２】
本明細書中で使用される用語「ヒト化抗体」とは、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列しか含有しない非ヒト(例えばマウス)抗体、好ましくはキメラ抗体のフォームを表す。概して、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域または相補性決定(CDR)残基が非ヒト種、例えばマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類由来の、所望の特異性、親和性、および能力を有する抗体(ドナー抗体)由来の超可変領域残基またはCDR残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの1種以上のフレームワーク領域(FR)残基が、例えばヒト化抗体の親和性を改善するために、対応する非ヒト残基または構造モデリングに基づく他の残基に置き換えられている。さらにまた、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含んでよい。これらの修飾を施して、抗体の性能をさらに改良する。一般に、ヒト化抗体は、実質的にすべての、少なくとも1種、および典型的に2種の、可変ドメインを含み、その場合、すべてまたは実質的にすべての超可変領域は非ヒト免疫グロブリンの超可変領域に相当し、かつ、すべてまたは実質的にすべてのFRはヒト免疫グロブリン配列のFRである。場合により、ヒト化抗体は免疫グロブリン定常領域(Fc)、典型的にヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも部分をさらに含む。さらなる詳細に関しては、Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Reichmann et al., 1988, Nature 332:323-329; Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596; およびQueen et al., 米国特許第5,585,089号を参照のこと。
【０１２３】
本明細書中で使用される用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」とは、少なくとも30% (好ましくは、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%または98%)互いに同一のヌクレオチド配列が典型的に互いにハイブリダイズしたままである、ハイブリダイゼーションおよび洗浄に関する条件を説明する。そのようなストリンジェントな条件は当業者に公知であり、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6に見出すことができる。
【０１２４】
一般に、ストリンジェントな条件は、規定のイオン強度pHでの特定配列に関する熱融点(Tm)より約5〜10℃低いように選択される。Tmは、(規定のイオン強度、pH、および核酸濃度条件下で)平衡状態で標的に相補的なプローブの50%が標的配列にハイブリダイズする温度である(標的配列が過剰に存在する場合、Tmでは、平衡状態で50%のプローブが占有される)。ストリンジェントな条件は、pH 7.0〜8.3で、塩濃度が約1.0 M未満のナトリウムイオン、典型的に約0.01〜1.0 Mナトリウムイオン濃度(または他の塩)であり、温度が短いプローブ(例えば10〜50ヌクレオチド)に関しては少なくとも約30℃であり、長いプローブ(例えば50ヌクレオチドより長いもの)に関しては少なくとも約60℃である条件である。ストリンジェントな条件は、不安定化物質、例えばホルムアミドを加えることによって達成してもよい。選択的または特異的ハイブリダイゼーションでは、ポジティブシグナルは少なくともバックグラウンドの2倍、好ましくはバックグラウンドハイブリダイゼーションの10倍である。
【０１２５】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の非限定的な一例は、約45℃で6X 塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム(SSC)濃度でハイブリダイゼーションを行い、次いで約68℃で0.1X SSC、0.2% SDS中で1回以上の洗浄を行うことである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい非限定的な例は、約45℃で6X SSC中でハイブリダイゼーションを行い、次いで50〜65℃で0.2X SSC、0.1% SDS中で1回以上の洗浄(すなわち50℃、55℃、60℃または65℃で1回以上の洗浄)を行うことである。本発明の核酸には、ただ単にこれらの条件下であるだけで、AまたはTヌクレオチドのみからなるヌクレオチド配列にハイブリダイズする核酸分子が含まれないことが理解される。
【０１２６】
本明細書中で使用される用語「超可変領域」とは、抗原結合を担う、抗体のアミノ酸残基を表す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「CDR」由来のアミノ酸残基(すなわち軽鎖可変ドメインの残基24〜34 (L1)、50〜56 (L2)および89〜97 (L3)および重鎖可変ドメインの31〜35 (H1)、50〜65 (H2)および95〜102 (H3); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))および/または「超可変ループ」由来の残基(すなわち軽鎖可変ドメインの残基26〜32 (L1)、50〜52 (L2)および91〜96 (L3)および重鎖可変ドメインの26〜32 (H1)、53〜55 (H2)および96〜101 (H3); Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917)を含む。「フレームワーク領域」または「FR」残基は、本明細書中で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１２７】
本明細書中で使用される用語「免疫調節剤」とは、対象の免疫系を調節(モジュレート)する物質を表す。特に、免疫調節剤は、1種以上の外来抗原に応答する対象の免疫系の能力を変化させる物質である。特定の実施形態では、免疫調節剤は対象の免疫応答の一態様をシフトさせる物質である。本発明の好ましい実施形態では、免疫調節剤は対象の免疫応答を阻害または低減する物質(すなわち免疫抑制剤)である。好ましくは、対象の免疫応答を阻害または低減する免疫調節剤は、対象の免疫系が1種以上の外来抗原に応答する能力を阻害または低減する。特定の実施形態では、IL-9に免疫特異的に結合する抗体は免疫調節剤である。
【０１２８】
本明細書中で使用される用語「EphA2に免疫特異的に結合する」および類似の用語は、EphA2受容体または1種以上のその断片に特異的に結合し、かつ、他の受容体またはその断片に特異的に結合しないペプチド、ポリペプチド、タンパク質、融合タンパク質、および抗体またはその断片を表す。用語「EphrinA1に免疫特異的に結合する」および類似の用語は、EphrinA1または1種以上のその断片に特異的に結合し、かつ、他のリガンドまたはその断片に特異的に結合しないペプチド、ポリペプチド、タンパク質、融合タンパク質、および抗体またはその断片を表す。EphA2またはEphrinA1に免疫特異的に結合するペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または抗体、またはその断片は、他のペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に結合してよく、その場合、例えば免疫アッセイまたは結合親和性を検出するための当技術分野において公知の他のアッセイによって決定された場合に、より低い親和性を有する。EphA2またはEphrinA1に免疫特異的に結合する抗体または断片は関連抗原と交差反応性であってよい。好ましくは、EphA2またはEphrinA1に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、例えば免疫アッセイまたは当業者に公知の他の技術によって特定することができる。抗体またはその断片は、実験技術、例えばラジオイムノアッセイ(RIA)および酵素結合免疫吸着検定(ELISA)を使用して決定された場合に、任意の交差反応性抗原に対する親和性より高い親和性でEphA2またはEphrinA1に結合する場合に、EphA2またはEphrinA1に特異的に結合する。抗体の特異性に関する考察に関しては、例えばPaul, ed., 1989, Fundamental Immunology, 2nd ed., Raven Press, New York at pages 332-336を参照のこと。好ましい実施形態では、EphA2またはEphrinA1に免疫特異的に結合する抗体は他の抗原に結合または交差反応しない。別の実施形態では、融合タンパク質であるEphA2またはEphrinA1に結合する抗体は、EphA2またはEphrinA1である、該融合タンパク質の部分に特異的に結合する。
【０１２９】
本明細書中で使用される用語「併用して（in combination)」とは、1種より多数の治療の使用を表す。用語「併用して」の使用は、感染を有する対象に対して治療が実施される順序を制限しない。第一の治療は、感染を有したか、有するか、あるいは感染に対して感受性である対象に対して第二の治療を実施する前(例えば、1分、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週、または12週前)、それと同時に、またはその後(例えば、1分、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週、または12週後)に実施することができる。任意の追加の治療を他の追加の治療と任意の順序で実施することができる。特定の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターは1種以上の治療(例えば、感染を治療、予防、管理および/または改善するために現在投与されている非EphA2/EphrinA1モジュレーター、鎮痛剤、麻酔剤、抗生物質、または免疫調節剤)と併用して投与することができる。
【０１３０】
本明細書中で使用される用語「感染」とは、宿主における病原体の生活環の全段階(限定するものではないが、細胞または体組織における病原体による侵襲および病原体の複製が含まれる)、および病原体による侵襲および病原体の複製の結果生じる病理学的状態を表す。ウイルスによる侵襲およびウイルスの増殖には、限定するものではないが、以下が含まれる: ウイルス粒子が細胞にドッキングする、ウイルスの遺伝情報を細胞に導入される、ウイルスのタンパク質が発現される、新規ウイルス粒子が生産されるおよび細胞からウイルス粒子が放出される。特定の実施形態では、感染は細胞内病原体(例えばウイルス、細菌、原虫、または真菌)に起因する。好ましい実施形態では、細胞内病原体による感染は感染細胞内への病原体の侵襲を必要とする。好ましい実施形態では、病原体に起因する感染は、感染細胞におけるEphA2発現の増加を引き起こすか、ならびに/あるいはそれと関連している。特定の実施形態では、病原体に感染した対象の細胞(例えば上皮細胞)におけるEphA2発現のレベルは、該対象の非感染細胞、正常な健常対象の細胞および/または正常な健常細胞集団におけるEphA2発現のレベルと比較して、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍増加する。
【０１３１】
本明細書中で使用される、EphA2発現に関する用語「増加した(increased)」とは、病原体、例えば細菌、ウイルス、真菌または原虫に感染した対象の細胞(例えば上皮細胞)におけるEphA2の発現が、該対象の非感染細胞、正常な健常対象の細胞および/または正常な健常細胞集団におけるEphA2発現のレベルと比較して増加することを表す。特定の実施形態では、病原体に感染した対象の細胞(例えば上皮細胞)におけるEphA2発現のレベルは、該対象の非感染細胞、正常な健常対象の細胞および/または正常な健常細胞集団におけるEphA2発現のレベルと比較して、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも99%または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍増加する。
【０１３２】
本明細書中で使用される用語「単離された(isolated)」とは、タンパク質性物質または核酸以外の有機分子または無機分子(小分子であろうと、大分子であろうと)の関連では、異なる有機分子または無機分子を実質的に含まない有機分子または無機分子を表す。好ましくは、有機分子または無機分子は、第二の異なる有機分子または無機分子が60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、または99%排除されている。好ましい実施形態では、有機分子および/または無機分子は単離されている。
【０１３３】
本明細書中で使用される用語「単離された」とは、タンパク質性物質(例えばペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質、または抗体)の関連では、その由来元の細胞または組織供給源由来の細胞材料または混入タンパク質を実質的に含まないか、あるいは化学合成された場合は化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まないタンパク質性物質を表す。言語「細胞材料を実質的に含まない」には、タンパク質性物質がその単離または組換え生産元の細胞の細胞成分から分離されている、タンパク質性物質の調製物が含まれる。ゆえに、細胞材料を実質的に含まないタンパク質性物質には、(乾燥重量単位で)約30%、20%、10%、または5%未満の異種タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、または抗体(「混入タンパク質」とも称される)しか有さないタンパク質性物質の調製物が含まれる。また、タンパク質性物質が組換え生産される場合、好ましくは、それは培養培地を実質的に含まず、すなわち培養培地はタンパク質性物質の調製物の容量の約20%、10%、または5%未満しか占めない。タンパク質性物質が化学合成によって生産される場合、好ましくは、それは化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわちそれは、該タンパク質性物質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離されている。したがって、そのようなタンパク質性物質の調製物は、(乾燥重量単位で)約30%、20%、10%、5%未満の、目的のタンパク質性物質以外の化学前駆体または化合物しか有さない。特定の実施形態では、本明細書中で開示されるタンパク質性物質は単離されている。好ましい実施形態では、本発明の抗体は単離されている。
【０１３４】
本明細書中で使用される用語「単離された」とは、核酸分子の関連では、核酸分子であって、該核酸分子の天然の供給源中に存在する他の核酸分子から分離されている核酸分子を表す。さらに、「単離された」核酸分子、例えばcDNA分子は、好ましくは、他の細胞材料、または組換え技術によって生産された場合には培養培地を実質的に含まないか、あるいは化学合成された場合には化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。特定の実施形態では、核酸分子は単離されている。好ましい実施形態では、本発明の抗体をコードする核酸分子は単離されている。
【０１３５】
本明細書中で使用される用語「低い寛容」とは、患者が治療から副作用を被り、その有害な効果のために該患者が治療から利益を受けないか、ならびに/あるいは治療を継続しないか、ならびに/あるいは副作用の危害が治療の利益にまさるようになる状態を表す。
【０１３６】
本明細書中で使用される用語「管理する(manage, managing)」および「管理(management)」とは、対象が治療から得る有益な効果であって、感染の治癒に帰着しない効果を表す。特定の実施形態では、対象は、障害の進行または悪化を防止する(すなわち疾患の進行をとどめる)ように感染を「管理する」ための1種以上の治療を施される。
【０１３７】
本明細書中で使用される用語「病態に起因する細胞表現型(pathology-causing cell phenotype)」とは、感染細胞が発揮する機能であって、感染の病理学的状態を引き起こすか、あるいはそれに寄与する機能を表す。病態に起因する細胞表現型には、限定するものではないが、EphA2発現の増加、細胞/細胞内反応(cell intraction)の減少、細胞外基質沈着の増加、遊走の増加、細胞生存の増加および/または感染性病原体/物質(例えば細菌、ウイルス、真菌または原虫)が感染した細胞(例えば上皮細胞)の増殖が含まれる。1種以上のこれらの病態に起因する細胞表現型は、感染を患う患者の症状を引き起こすか、あるいはそれに寄与する。
【０１３８】
本明細書中で使用されるフレーズ「製薬上許容しうる」とは、連邦または州政府の規制当局によって認可されているか、あるいはU.S. Pharmacopeia、European Pharmacopeia、または動物、より具体的にはヒトにおける使用に関して一般に認められている他の薬局方に列挙されていることを意味する。
【０１３９】
本明細書中で使用される用語「増強する」とは、通常の、または認可されている用量での治療の効力の改善を表す。
【０１４０】
本明細書中で使用される用語「予防する(prevent, preventing)」および「予防(prevention)」とは、治療の実施(例えば予防物質または治療物質の投与)、または併用療法の実施(例えば予防物質または治療物質の併用投与)の結果得られる、対象における感染の発生または開始の阻害を表す。
【０１４１】
本明細書中で使用される用語「予防物質」とは、感染、またはその症状の再発、伝播または発症を予防できる任意の物質を表す。特定の実施形態では、用語「予防物質」とは、EphA2/EphrinA1モジュレーターを表す。特定の他の実施形態では、用語「予防物質」とは、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の物質を表す。好ましくは、予防物質は、感染または1種以上のその症状の開始、発生、進行および/または重症度を予防または妨害するために有用であることが知られているか、あるいはそれを予防または妨害してきたか、あるいはそれを予防または妨害するために現在使用されている物質である。
【０１４２】
本明細書中で使用される「予防有効量」とは、感染またはその症状の再発、伝播または発症の予防をもたらすために十分な治療(例えば予防物質)の量を表す。予防有効量とは、例えば、以前に該感染を患っていた対象、または免疫無防備状態または免疫抑制性であるか、あるいは遺伝的に該感染にかかりやすい対象に関して、感染の発生、伝播または再発を予防するために十分な治療(例えば予防物質)の量を表してよい。予防有効量とは、感染の予防において予防的な利益を提供する治療(例えば予防物質)の量を表してもよい。さらに、治療(例えば本発明の予防物質)に関する予防有効量とは、単独の、または1種以上の他の治療(例えば、感染を予防するために現在投与されている非EphA2/EphrinA1モジュレーター、鎮痛剤、麻酔剤、抗生物質、または免疫調節剤)と併用した治療(例えば予防物質)の量であって、感染の予防において予防的な利益を提供する量を意味する。本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの量に関連して使用された場合、該用語は、全体的な予防を改善するか、あるいは別の治療(例えば予防物質)の予防効力またはそれとの相乗作用を増強する量を包含しうる。
【０１４３】
本明細書中で使用される「プロトコル」には、投薬スケジュールおよび投薬計画が含まれる。
【０１４４】
本明細書中で使用される用語「不応性」とは、1種以上の治療(例えば現在利用可能な治療)に対して応答性でない感染を表す。特定の実施形態では、感染が治療に対して不応性であるとは、該感染と関連している症状の少なくとも何らかのかなりの部分が該治療によって排除または緩和されないことを意味する。感染が不応性であるかどうかの判定は、感染に関する治療の有効性をアッセイするための当技術分野において公知の任意の方法によってin vivoまたはin vitroで行うことができる。
【０１４５】
本明細書中で使用されるフレーズ「副作用」は、治療(例えば予防物質または治療物質)についての望ましくない影響および有害な影響を包含する。有害な影響は常に望ましくないが、望ましくない影響は必ずしも有害ではない。治療(例えば予防物質または治療物質)に起因する有害な影響は有害または不快または危険であるかもしれない。副作用の例には、限定するものではないが、吐き気、嘔吐、摂食障害、腹部痙攣、発熱、痛み、体重損失、脱水、脱毛、呼吸困難、不眠、眩暈、粘膜炎、神経および筋肉作用(nerve and muscle effects)、疲労、口内乾燥、および食欲不振、投与部位での発疹または膨潤、インフルエンザ様(flu-like)症状、例えば発熱、悪寒および疲労、消化管障害およびアレルギー反応が含まれる。患者が経験する追加の望ましくない影響は非常に多数であり、当技術分野において公知である。多数の影響はPhysicians' Desk Reference (59th ed., 2005)に記載されている。
【０１４６】
本明細書中で使用される用語「単鎖Fv」または「scFv」とは、抗体のVHおよびVLドメインを含む抗体断片であって、これらのドメインが単一ポリペプチド鎖中に存在する断片を表す。一般に、FvポリペプチドはVHとVLドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、そのリンカーはscFvが抗原結合に所望の構造を形成することを可能にする。scFvのレビューに関しては、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照のこと。
【０１４７】
本明細書中で使用される用語「対象」および「患者」は交換可能に使用される。本明細書中で使用されるように、対象は、好ましくは哺乳類、例えば非霊長類(例えば雌ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット等)および霊長類(例えばサルおよびヒト)、最も好ましくはヒトである。一実施形態では、対象は、感染を有する哺乳類、好ましくはヒトである。別の実施形態では、対象は、感染を有する家畜(例えばウマ、ブタ、または雌ウシ)、ペット(例えばモルモット、イヌまたはネコ)、または実験動物(例えば動物モデル)である。別の実施形態では、対象は、細胞内病原体感染を発生するリスクにさらされている哺乳類、好ましくはヒト(例えば免疫無防備状態または免疫抑制性哺乳類、または遺伝的に感染しやすい哺乳類)である。別の実施形態では、対象は、免疫無防備状態または免疫抑制性哺乳類、好ましくはヒトではない。別の実施形態では、対象は、約500細胞/mm3 (mm^)未満ではないリンパ球数を有する哺乳類、好ましくはヒトである。
【０１４８】
本明細書中で使用される用語「相乗作用」とは、任意の2種以上の単一治療(例えば1種以上の予防物質または治療物質)の相加作用より有効な治療(例えば予防物質または治療物質)の併用を表す。併用療法(例えば予防物質または治療物質の併用)の相乗作用によって、低用量の1種以上の治療(例えば1種以上の予防物質または治療物質)の使用および/または感染を有する対象に対する該治療の少ない頻度の実施が許容される。低用量の治療(例えば予防物質または治療物質)を利用する能力および/または少ない頻度で該治療を実施する能力によって、感染の予防または治療における該治療の効力が低減されることなく、対象に対する該治療の実施と関連している毒性が低減される。さらに、相乗作用は、感染の予防または治療における治療(例えば予防物質または治療物質)についての改善された効力をもたらしうる。最後に、併用療法(例えば予防物質または治療物質)の相乗作用は、任意の単一治療の使用と関連している有害な、または望ましくない副作用を回避または低減するであろう。
【０１４９】
本明細書中で使用される用語「治療物質」とは、感染の治療、管理、予防、または症状の低減において使用できる任意の物質を表す。特定の実施形態では、用語「治療物質」とは、EphA2/EphrinA1モジュレーターを表す。特定の他の実施形態では、用語「治療物質」とは、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の物質を表す。好ましくは、治療物質は、細胞内病原体感染または1種以上のその症状を予防、治療、管理、または改善するために有用であることが知られているか、あるいはそれを予防、治療、管理、または改善してきたか、あるいはそのために現在使用されている物質である。
【０１５０】
本明細書中で使用される「治療有効量」とは、感染の重症度を低減し、感染の持続時間を低減し、感染の1種以上の症状を改善し、感染の進行を予防し、感染を退行させるか、あるいは別の治療物質の治療効果(群)を増強または改善するために十分な治療(例えば治療物質)の量を表す。感染の治療に関して、治療有効量とは、病原体の複製を低減または阻害し、細胞の病原体感染を阻害または低減し、病原体タンパク質の生産を阻害または低減し、病原体の放出を阻害または低減し、他の組織または対象への病原体の伝播を阻害または低減するか、あるいは感染と関連している1種以上の症状を改善するために十分な治療物質の量を表す。好ましくは、治療有効量の治療物質は、当技術分野において公知のアッセイまたは本明細書中に記載のアッセイにおいてコントロール(例えばネガティブコントロール、例えばリン酸緩衝食塩水)と比較して、病原体の複製または伝播を少なくとも5%、好ましくは少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも100%低減する。
【０１５１】
本明細書中で使用される用語「治療」とは、感染の予防、治療または管理において使用できる任意のプロトコル、方法および/または物質を表す。特定の実施形態では、用語「治療群」および「治療」とは、生物学的治療、支持療法、および/または、当業者、例えば医療関係者に公知の、感染または1種以上のその症状の治療、管理、予防、または改善において有用な他の治療を表す。
【０１５２】
本明細書中で使用される用語「治療する(treat, treating)」および「治療(treatment)」とは、1種以上の治療の実施(限定するものではないが、1種以上の予防物質または治療物質の投与が含まれる)の結果得られる、感染の進行、重症度、および/または持続時間の低減または改善または1種以上のその症状の改善を表す。特定の実施形態では、該用語は、病原体の複製の低減または阻害、他の組織または対象への病原体の伝播の阻害または低減、細胞の病原体感染の阻害または低減、または感染と関連している1種以上の症状の改善を表す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１５３】
5.  発明の詳細な説明
本発明は、RSVに感染した上皮細胞中でEphA2がアップレギュレートされるという発明者らの発見に部分的に基づくものである。特定の理論または機構に拘束されないが、病原体感染細胞におけるEphA2発現のアップレギュレートは望ましくない細胞生存を促進するかもしれない。ゆえに本発明は、病原体感染を治療、管理、予防および/または改善するために設計された方法および組成物を提供する。その病原体感染には、限定するものではないが、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染および原虫感染が含まれる。特に、本発明は、感染細胞(例えば感染EphA2発現細胞)においてEphA2の発現がアップレギュレートされている場合の感染を治療、管理、予防および/または改善するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の1種以上のEphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の有効量の治療(物質)を実施(投与)することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、本発明の方法にしたがって治療、管理、予防および/または改善される対象のウイルス、細菌、真菌および原虫感染は細胞内感染である。
【０１５４】
本発明は、EphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療物質または予防物質(例えば免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗真菌剤、等)を含む医薬組成物を提供する。本発明は、感染を検出、診断および/または予見する方法および/または感染の予防、治療、管理および/または改善に関する治療の効力をモニターするための方法をさらに提供する。そのような方法は、感染を検出、診断、モニターまたは予見するための他の方法と併用してよい。特定の実施形態では、本発明は、潜伏感染を検出、診断、モニターまたは予見するための方法を提供する。
【０１５５】
さらに本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター、および場合により、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1種以上の治療物質または予防物質(例えば免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗真菌剤、等）を含む製品およびキットを提供する。特定の実施形態では、製品およびキットは、EphA2/EphrinA1モジュレーターおよびオプションのEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療(物質)の用量および実施(投与)に関する指示書を含む。
【０１５６】
5.1  EPHA2/EPHRINA1モジュレーター
本発明はEphA2および/またはEphrin A1のモジュレーター(「EphA2/EphrinA1モジュレーター」)を提供する。EphA2/EphrinA1モジュレーターは以下のことを(直接または間接的に)調節することによって生物学的効果をもたらす治療物質である: (i) 例えば転写レベル、転写後レベル、翻訳レベルまたは翻訳後レベルでの、EphA2および/またはEphA2の内因性リガンド(群)(好ましくはEphrinA1)の発現; および/または(ii) EphA2および/またはEphrinA1の活性(群)。
【０１５７】
EphA2/EphrinA1モジュレーターの例には、限定するものではないが、EphA2とEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減する物質(以下、「EphA2/EphrinA1相互作用インヒビター」)が含まれる。EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターの非限定的な例には、以下の物質が含まれる: (i) EphA2に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphrinA1 (例えば単量体または多量体型のEphrinA1-Fc)および、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達およびリン酸化を誘発する抗体(すなわちEphA2作用性抗体)); (ii) EphA2に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルのEphA2のシグナル伝達しか誘発しない物質(例えばEphA2拮抗性抗体およびドミナントネガティブフォームのEphrinA1); (iii) EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphA2 (例えばEphA2-Fc)および、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する抗体); および(iv) EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルのEphrinA1のシグナル伝達しか誘発しない物質(例えばドミナントネガティブフォームのEphA2および抗EphrinA1抗体)。
【０１５８】
別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2の発現をモジュレートする物質が含まれる。そのような物質は、EphA2発現を低下させ/ダウンレギュレートすることができ(例えばEphA2アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)、あるいはEphA2発現を増加させ/アップレギュレートして、細胞表面のEphA2の量が、結合に利用可能な内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の量を超え、ゆえに未結合EphA2の量を増加させるようにすることができる(例えばEphA2をコードする核酸))。
【０１５９】
他の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphrinA1の発現をモジュレートする物質である。そのような物質は、EphrinA1発現を低下させ/ダウンレギュレートすることができ(例えばEphrinA1アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)、あるいはEphrin発現を増加させ/アップレギュレートすることができる(例えばEphrinA1をコードする核酸))。
【０１６０】
さらに他の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2またはEphrinA1のタンパク質の安定性またはタンパク質の蓄積をモジュレートする物質が含まれる。
【０１６１】
別の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはキナーゼ活性(例えば、EphA2、EphrinA1のキナーゼ活性、または細胞膜でEphA2またはEphrinA1と関連していることが知られる異種タンパク質のキナーゼ活性)を促進する物質である。
【０１６２】
さらに別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達を防止または低減するが、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphA2イントラボディー); および、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を防止または低減するが、EphrinA1とEphA2の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphrinA1抗体)が含まれる。
【０１６３】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2と内因性リガンド、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減する物質ではない。別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphA2作用性抗体ではない。別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEph受容体アンチセンス分子またはEphrinA1アンチセンス分子ではない。さらに別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは可溶型のEph受容体(例えばEph-Fc)ではないか、あるいは可溶型のEphrinA1(例えばEphrin-Fc)ではない。
【０１６４】
本発明の特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは1種以上の以下のことを実行する: (i) EphA2発現および/または活性を低下させる; (ii) 病原体に感染したEphA2発現細胞のアポトーシスおよび/または壊死を生じさせる; および(iii) EphA2リガンド誘発型リン酸化(例えば自己リン酸化)および分解を生じさせる。他の特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは以下の物質のうちの1つである: (i) 可溶性EphrinA1分子(例えばEphrinA1-Fc); (ii) EphA2アンチセンス核酸分子; (iii) EphA2のリン酸化および分解を誘発するEphA2作用性抗体; (iv) EphA2ワクチン; (v)細胞障害性物質にコンジュゲートされた抗EphrinA1または抗EphA2抗体; (vi)例えばEphA2および病原体抗原または細胞マーカーを標的にする多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体(例えばBiTE分子)。
【０１６５】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2発現を低下させるか、あるいはダウンレギュレートする物質である(例えばEphA2アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えばRT-PCR、ノーザンブロットまたは免疫アッセイ、例えばELISA)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水)と比較して、EphA2発現を少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低下させるか、あるいはダウンレギュレートする。
【０１６６】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えば免疫アッセイ)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphA2のタンパク質の安定性および/またはタンパク質の蓄積を、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低減する物質である。
【０１６７】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphrinA1の発現を阻害するか、あるいは低下させる物質である(例えばEphrinA1アンチセンス分子、RNAiおよびリボザイム)。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えばRT-PCR、ノーザンブロットまたは免疫アッセイ、例えばELISA)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphrinA1の発現を少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低下させる。
【０１６８】
別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達を防止または低減するが、EphA2とEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphA2イントラボディー)である。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えば免疫アッセイ)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphA2のシグナル伝達を少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低減する。本実施形態にしたがって、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水)と比較して、EphA2とEphA2の内因性リガンド(群)(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を低減しないか、あるいは40%以下、35%以下、30%以下、25%以下、20%以下、15%以下、10%以下、または5%以下しか低減しない。
【０１６９】
別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を防止または低減するが、EphrinA1とEphA2の間の相互作用を阻害または低減しない物質(例えばEphrinA1抗体)である。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えば免疫アッセイ)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphrinA1のシグナル伝達を少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低減する。本実施形態にしたがって、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphA2とEphA2の内因性リガンド(群)(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を低減しないか、あるいは40%以下、35%以下、30%以下、25%以下、20%以下、15%以下、10%以下、または5%以下またはそれ未満、または2倍以下、1.5倍以下または1倍以下しか低減しない。
【０１７０】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphA2/EphrinA1相互作用インヒビターである。一実施形態では、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、EphA2に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphrinA1 (EphrinA1-Fc)および、EphA2に結合し、EphA2のシグナル伝達およびリン酸化を誘発する抗体(すなわち作用性抗体))である。特定の実施形態では、そのようなEphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphA2とEphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低減する。本実施形態にしたがって、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えば免疫アッセイ)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphA2のシグナル伝達を少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少
なくとも7倍または少なくとも10倍誘発する。
【０１７１】
別の実施形態では、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、EphA2に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルにしか誘発しない物質(例えば抗体)である。特定の実施形態では、そのようなEphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphA2とEphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低減する。本実施形態にしたがって、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えば免疫アッセイ)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水)と比較して、5%以下、10%以下、15%以下、20%以下、25%以下、30%以下、35%以下、40%以下、または2倍以下、1.5倍以下または1倍以下しかEphA2のシグナル伝達を誘発しない。
【０１７２】
別の実施形態では、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する物質(例えば可溶型のEphA2、ドミナントネガティブフォームのEphA2、および、EphrinA1に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する抗体)である。特定の実施形態では、そのようなEphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水またはコントロールIgG)と比較して、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低減する。本実施形態にしたがって、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えば免疫アッセイ)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水 コントロールIgG)と比較して、EphrinA1のシグナル伝達を少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍誘発する。
【０１７３】
別の実施形態では、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、EphrinA1に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルにしか誘発しない物質(例えば抗体)である。特定の実施形態では、そのようなEphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水 コントロールIgG)と比較して、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%または少なくとも95%、または少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも2.5倍、少なくとも3倍、少なくとも3.5倍、少なくとも4倍、少なくとも4.5、少なくとも5倍、少なくとも7倍または少なくとも10倍低減する。本実施形態にしたがって、EphA2/EphrinA1相互作用インヒビターは、本明細書中に記載のアッセイまたは当技術分野において公知のアッセイ(例えば免疫アッセイ)において、コントロール(例えばリン酸緩衝食塩水)と比較して、5%以下、10%以下、15%以下、20%以下、25%以下、30%以下、35%以下、40%以下、または2倍以下、1.5倍以下または1倍以下しかEphrinA1のシグナル伝達を誘発しない。
【０１７４】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは以下の細胞性効果のうちの1つ、2つまたはすべてを有する: (i) EphA2の細胞質尾部のリン酸化の増加; (ii) EphA2自己リン酸化の増加; および(iii) EphA2分解の増加。
【０１７５】
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターには、限定するものではないが、タンパク質性分子(限定するものではないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、翻訳後修飾タンパク質、抗体、EphA2ワクチン、等が含まれる)、小分子(1000ダルトン未満)、無機または有機化合物、核酸分子(限定するものではないが、二本鎖、一本鎖DNA、二本鎖または一本鎖RNA(例えばアンチセンス、仲介RNAi (mediates RNAi)、等)、および三重らせん核酸分子が含まれる)、アプタマー、および上記物質のいずれかの誘導体が含まれる。
【０１７６】
5.1.1  EphA2/EphrinA1モジュレーターとしてのポリペプチド
本発明の方法は、ポリペプチドであるEphA2/EphrinA1モジュレーターを包含する。特定の実施形態では、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターは、細胞内病原体感染の進行を防止または低減するか、あるいはそれを遅くする。好ましい実施形態では、細胞内病原体に感染した細胞は、増加したEphA2発現を有する。
【０１７７】
一実施形態では、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターは抗体、好ましくはモノクローナル抗体である。別の実施形態では、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターは可溶型のEphA2 (例えばEphA2-Fc)である。別の実施形態では、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターはドミナントネガティブフォームのEphA2である。
【０１７８】
一実施形態では、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターはEphA2/EphrinA1相互作用インヒビターである。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2に免疫特異的に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達(限定するものではないが、EphA2の自己リン酸化が含まれる)を誘発するEphA2抗体である。別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2に免疫特異的に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達(限定するものではないが、EphA2の自己リン酸化が含まれる)を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルにしか誘発しないEphA2抗体である。特定の実施形態では、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2に免疫特異的に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達を誘発するEphA2抗体ではない。
【０１７９】
特定の実施形態では、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphrinA1に免疫特異的に結合し、EphA1とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発するEphrinA1抗体である。別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphrinA1に免疫特異的に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルにしか誘発しないEphrinA1抗体である。
【０１８０】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2に結合する可溶型のEphrinA1またはEphrinA1の断片(例えばEphrinA1-Fc)であり、それはEphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達(限定するものではないが、自己リン酸化が含まれる)を誘発する。別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2に結合し、EphA2とEphrinA1の間の相互作用を防止または低減し、EphA2のシグナル伝達(限定するものではないが、EphA2の自己リン酸化が含まれる)を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルにしか誘発しない可溶型のEphrinA1またはEphrinA1の断片である。
【０１８１】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発する可溶型のEphA2またはEphA2の断片である。別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルにしか誘発しない可溶型のEphA2またはEphA2の断片である。
【０１８２】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発するドミナントネガティブフォームのEphA2である。別の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)に結合し、EphA2とEphA2の内因性リガンド(好ましくはEphrinA1)の間の相互作用を防止または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を防止するか、あるいは非常に低いレベル〜無視できるレベルにしか誘発しないドミナントネガティブフォームのEphA2である。
【０１８３】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、異種タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに融合またはコンジュゲートされたEphA2またはその断片(例えばEphA2の細胞外ドメイン)を含む融合タンパク質である。好ましい実施形態では、該融合タンパク質は、抗体のFc部分(例えばIgG抗体のFc部分)に融合またはコンジュゲートされたEphA2またはその断片を含む。本発明にしたがって、EphA2またはその断片は、以下のセクション5.1.1.3に記載の物質にコンジュゲートまたは融合することができる。セクション5.1.1.3で考察される物質および技術を使用して、EphA2またはその断片を含む融合タンパク質を生産することができる。
【０１８４】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、異種タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに融合またはコンジュゲートされたEphrinA1またはその断片(例えばEphrinA1の細胞外ドメイン)を含む融合タンパク質である。好ましい実施形態では、該融合タンパク質は、抗体のFc部分(例えばIgG抗体のFc部分)に融合またはコンジュゲートされたEphrinA1またはその断片を含む。本発明にしたがって、EphrinA1またはその断片は、以下のセクション5.1.1.3に記載の物質にコンジュゲートまたは融合することができる。セクション5.1.1.3で考察される物質および技術を使用して、EphrinA1またはその断片を含む融合タンパク質を生産することができる。
【０１８５】
5.1.1.1  EphA2/EphrinA1モジュレーターとしての抗体
一実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは抗体、好ましくはモノクローナル抗体である。より好ましくは、抗体はヒト化抗体である。本発明の抗体EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2またはEphrinA1に免疫特異的に結合し、EphA2および/またはEphrinA1の活性および/または発現をモジュレートする。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーター抗体は低いKoff率(例えば3x10-3s-1未満のKoff)を有するであろう。一実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。より好ましい実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、ヒトまたはヒト化のEph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5ではない。好ましい実施形態では、抗体は感染の進行を防止または低減するか、あるいはそれを遅くする。
【０１８６】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、EphA2の細胞外ドメインに(例えばEphA2のリガンド結合部位内またはその外側のエピトープで)免疫特異的に結合し、EphA2の分解を生じさせることなくEphA2の細胞質尾部のリン酸化を低下させる。別の特定の実施形態では、抗体はEphA2の細胞外ドメインに(例えばEphA2のリガンド結合部位内またはその外側のエピトープで)結合し、EphA2-リガンド相互作用の程度を阻害または低減する。別の特定の実施形態では、本発明の抗体は、EphA2の細胞外ドメインに(例えばEphA2のリガンド結合部位内またはその外側のエピトープで)免疫特異的に結合し、EphA2のシグナル伝達(限定するものではないが、EphA2の自己リン酸化が含まれる)を低下させる。さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、EphA2の細胞外ドメインに(例えばEphA2のリガンド結合部位内またはその外側のエピトープで)免疫特異的に結合し、EphA2のシグナル伝達(限定するものではないが、EphA2の自己リン酸化が含まれる)を低下させ、EphA2-リガンド相互作用の程度を阻害または低減する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、GenBankデータベースに開示されているヒトEphA2 (GenBank accession no. NP_004422.2)のリガンド結合ドメインに(例えばアミノ酸残基28〜201で)免疫特異的に結合する。
【０１８７】
一実施形態では、本発明の抗体は、EphrinA1に(例えばEphA2結合部位内またはその外側のエピトープで)免疫特異的に結合し、EphA2との結合を防止または低減する。別の実施形態では、本発明のEphrinA1抗体は、EphrinA1に(例えばEphA2結合部位内またはその外側のエピトープで)免疫特異的に結合し、EphrinA1発現細胞におけるEphrinA1のシグナル伝達をモジュレート(誘発または阻害)する。別の特定の実施形態では、本発明の抗体は、EphrinA1に(例えばEphA2結合部位内またはその外側のエピトープで)免疫特異的に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を低下させ、EphA2-EphrinA1相互作用の程度を阻害または低減する。別の特定の実施形態では、本発明の抗体は、EphrinA1に(例えばEphA2結合部位内またはその外側のエピトープで)免疫特異的に結合し、EphrinA1のシグナル伝達を誘発し、EphA2-EphrinA1相互作用の程度を阻害または低減する。別の実施形態では、本発明の抗体は、EphrinA1に(例えばEphrinA1のクラスター形成に関与するエピトープで)免疫特異的に結合し、EphrinA1と他の分子、例えばSrcファミリーキナーゼ(例えばFyn)の相互作用を阻害または低減し、EphrinA1のシグナル伝達を阻害または低減する。
【０１８８】
本発明の抗体には、限定するものではないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え生産された抗体、多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体)、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、イントラボディー、単鎖Fv (scFv)(例えば単一特異性および二重特異性、等)、Fab断片、F(ab')断片、ジスルフィド結合型Fv (sdFv)、抗イディオタイプ(anti-Id)抗体、および上記抗体のいずれかのエピトープ結合性断片が含まれる。特に、本発明の抗体には、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、EphA2抗原またはEphrinA1抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子(例えば抗EphA2抗体または抗EphrinA1抗体の1種以上の相補性決定領域(CDR))が含まれる。本発明の抗体は、任意のタイプ(例えばIgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY)、クラス(例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2)またはサブクラスの免疫グロブリン分子であってよい。
【０１８９】
本発明は、EphA2に免疫特異的に結合し、EphA2をアゴナイズ(agonize)、すなわちEphA2のシグナル伝達を誘発し、EphA2の発現を低下させる作用性抗体を包含する。作用性EphA2抗体は、EphA2の自己リン酸化を誘発し、それによってその後のEphA2の分解を引き起こして、EphA2の発現をダウンレギュレートし、EphA2とその内因性リガンド(例えばEphrinA1)の相互作用を阻害する可能性がある。そのような抗体は米国特許公開第US 2004/0091486 A1号(May 13, 2004)、および第US 2004/0028685 A1号(Feb. 12, 2004)に開示されている。該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーター抗体は低いKoff率(例えば3x10-3s-1 (~V)未満のKoff)を有するであろう。別の実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。より好ましい実施形態では、本発明の方法において使用される抗体は、ヒトまたはヒト化のEph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5ではない。
【０１９０】
本発明は単一ドメイン抗体をさらに包含し、それにはラクダ化(camelized)単一ドメイン抗体が含まれる(例えばMuyldermans et al., 2001, Trends Biochem. Sci. 26:230; Nuttall et al., 2000, Cur. Pharm. Biotech. 1:253; Reichmann and Muyldermans, 1999, J. Immunol. Meth. 231:25; 国際特許公開第WO 94/04678号および第WO 94/25591号; 米国特許第6,005,079号を参照のこと; 該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)。一実施形態では、本発明は、単一ドメイン抗体が形成されるように修飾を施された任意のEphA2またはEphrinA1抗体(群)のVHドメイン(群)のアミノ酸配列を有する2つのVHドメインを含む単一ドメイン抗体を提供する。別の実施形態では、本発明は、任意のEphA2またはEphrinA1抗体(群)の1種以上のVH CDRを含む2つのVHドメインを含む単一ドメイン抗体をさらに提供する。
【０１９１】
本発明の抗体には、EphA2またはEphrinA1イントラボディーが含まれる(以下のセクション5.1.1.1.2を参照のこと)。本発明の抗体EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2またはEphrinA1に免疫特異的に結合し、EphA2またはEphrinA1の発現および/または活性をモジュレートする(増加または低下させる)イントラボディーである。特定の実施形態では、本発明のイントラボディーは、EphA2の細胞内ドメインに免疫特異的に結合し、EphA2の分解を生じさせることなくEphA2の細胞質尾部のリン酸化を低下させる。別の実施形態では、本発明のイントラボディーは、EphA2に免疫特異的に結合し、EphA2のシグナル伝達(限定するものではないが、EphA2の自己リン酸化が含まれる)を防止または低減するが、EphA2とEphA2の内因性リガンド(群)、好ましくはEphrinA1の間の相互作用を阻害または低減しない。
【０１９２】
本発明の方法で使用される抗体は任意の動物起源由来であってよく、該動物には、鳥類および哺乳類(例えばヒト、マウス、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリ)が含まれる。最も好ましい実施形態では、抗体はヒト抗体であるか、あるいはヒト化されている。本明細書中で使用される「ヒト」抗体には、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が含まれ、また、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体またはヒト遺伝子由来の抗体を発現するマウスから単離された抗体が含まれる。
【０１９３】
本発明の方法で使用される抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性またはそれ以上の多重特異性の抗体であってよい。多重特異性抗体は、EphA2ポリペプチドまたはEphrinA1ポリペプチドの種々のエピトープに免疫特異的に結合するかもしれないし、あるいはEphA2ポリペプチドまたはEphrinA1ポリペプチドならびに異種エピトープ、例えば異種ポリペプチドまたは固形支持体材料の両者に免疫特異的に結合するかもしれない。例えば国際特許公開第WO 93/17715号, 第WO 92/08802号, 第WO 91/00360号, および第WO 92/05793号; Tutt, et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; 米国特許第4,474,893号, 第4,714,681号, 第4,925,648号, 第5,573,920号, および第5,601,819号; およびKostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547-1553を参照のこと。
【０１９４】
5.1.1.1.1  BiTE分子
特定の実施形態では、本発明の方法で使用するための抗体は二重特異性T細胞エンゲージャー(bispecific T cell engagers)(BiTE)である。二重特異性T細胞エンゲージャー(BiTE)は、標的の抗原特異的除去のためにT細胞をリダイレクトする(redirect)ことができる二重特異性抗体である。BiTE分子は、T細胞抗原(例えばCD3)に結合する抗原結合ドメインを分子の一端において有し、かつ、標的細胞上の抗原に結合する抗原結合ドメインを有する。BiTE分子は国際公開第WO 99/54440号で報告された。該文献は参照により本明細書中に組み入れられる。この公開では、CD19およびCD3抗原(CD19xCD3)に関する結合部位を含む新規の単一鎖多機能性ポリペプチドが記載されている。この分子は、B細胞上のCD19に結合する抗体およびT細胞上のCD3に結合する抗体の2種の抗体から派生されたものである。これらの異なる抗体の可変領域がポリペプチド配列によって連結されて、単一分子が創出される。重鎖(VH)および軽鎖(VL)可変ドメインをフレキシブルリンカーで連結して、単一鎖の二重特異性抗体を創出することがさらに記載されている。
【０１９５】
本発明のある実施形態では、目的のポリペプチド(例えばEphA2および/またはEphrinA1)に免疫特異的に結合する抗体またはリガンドはBiTE分子の部分を構成する。例えば、目的のポリペプチド(例えばEph受容体および/またはEphrin)に結合する抗体のVHおよび/またはVL (好ましくはscFV)を、上記分子の部分のような抗CD3結合部分に融合して、目的のポリペプチド(例えばEphA2および/またはEphrinA1)を標的にするBiTE分子を創出することができる。目的のポリペプチド(例えばEphA2および/またはEphrinA1)に対する抗体の重鎖および/または軽鎖可変ドメインに加えて、目的のポリペプチド(例えばEphA2および/またはEphrinA1)に結合する他の分子をBiTE分子に含ませることができる。例えば受容体(例えばEphA2および/またはEphrinA1)である。別の実施形態では、BiTE分子は、他の(CD3以外の)T細胞抗原に結合する分子を含むことができる。例えば、CD2、CD4、CD8、CD11a (CD1 Ia)、TCR、およびCD28等のT細胞抗原に免疫特異的に結合するリガンドおよび/または抗体は、本発明の部分であることが意図される。このリストは網羅的であることを意味せず、T細胞抗原に免疫特異的に結合できる他の分子をBiTE分子の部分として使用できることを示すためだけのものである。これらの分子には、抗体のVHおよび/またはVL部分または天然リガンド(例えばLFA3であり、その天然リガンドはCD3である)が含まれうる。
【０１９６】
5.1.1.1.2  イントラボディー
特定の実施形態では、本発明とともに使用される対象の抗体は細胞内エピトープに結合し、すなわちそれはイントラボディーである。特定の実施形態では、本発明のイントラボディーはEphA2の細胞質ドメインに結合し、EphA2のシグナル伝達(例えば自己リン酸化)を防止する。イントラボディーは、抗原に免疫特異的に結合可能であり、好ましくは、その分泌用のコード配列を含有しない、抗体の少なくとも部分を含む。そのような抗体は細胞内で抗原に結合する。一実施形態では、イントラボディーは単鎖Fv (「scFv」)を含む。scFvは、抗体のVHおよびVLドメインを含む抗体断片であり、その場合、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖中に存在する。一般に、scFvポリペプチドはVHとVLドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、そのリンカーはscFvが抗原結合に所望の構造を形成することを可能にする。scFvのレビューに関しては、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照のこと。別の実施形態では、イントラボディーは、好ましくは、作動可能な分泌配列をコードせず、ゆえに細胞内にとどまる(一般には、Marasco, WA, 1998, "Intrabodies: Basic Research and Clinical Gene Therapy Applications" Springer:New Yorkを参照のこと)。
【０１９７】
イントラボディーの作成は当業者に周知であり、例えば、米国特許第6,004,940号; 第6,072,036号; 第5,965,371号に記載されている。該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。さらに、イントラボディーの構築は、Ohage and Steipe, 1999, J. Mol. Biol. 291:1119-1128; Ohage et al., 1999, J. Mol. Biol. 291:1129-1134; およびWirtz and Steipe, 1999, Protein Science 8:2245-2250で考察されている。該参考文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。組換え分子生物学的技術、例えば抗体の組換え生産に関して報告されている技術をイントラボディーの作成に使用してもよい。
【０１９８】
一実施形態では、本発明のイントラボディーは抗原に対して完全抗体(すなわち定常ドメイン全体ならびに可変領域を有する)の結合効率の少なくとも約75%を保持する。より好ましくは、イントラボディーは完全抗体の結合効率の少なくとも85%を保持する。さらにより好ましくは、イントラボディーは完全抗体の結合効率の少なくとも90%を保持する。さらにより好ましくは、イントラボディーは完全抗体の結合効率の少なくとも95%を保持する。
【０１９９】
イントラボディーの生産では、目的のVHおよびVL鎖の両者に関する可変領域をコードするポリヌクレオチドを、例えば該ドメインのPCR増幅用の鋳型としてハイブリドーマmRNAまたは脾臓mRNAを使用してクローニングすることができる(Huse et al., 1989, Science 246:1276)。好ましい一実施形態では、リンカーをコードするポリヌクレオチド配列によって、VHおよびVLドメインをコードするポリヌクレオチドを結合させて、単鎖抗体(scFv)を作成する。このscFvは、典型的に、配列VH-リンカー-VLまたはVL-リンカー-VH (Vn)を有する単一ペプチドを含む。リンカーは、重鎖および軽鎖がその適正なコンフォメーション上の配向において互いに結合することを可能にするように選択される(例えばHuston et al., 1991, Methods in Enzym. 203:46-121 (参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。別の実施形態では、リンカーは、各可変ドメインに対するその融合点の間の距離(例えば3.5 nm)にわたり、ネイティブのFvコンフォメーションの歪みを最小化することができる。そのような実施形態では、リンカーは少なくとも5アミノ酸残基、少なくとも10アミノ酸残基、少なくとも15アミノ酸残基、またはそれ以上のポリペプチドである。別の実施形態では、リンカーは結合部位のVHおよびVLドメインを立体的に妨害しないべきであろう。そのような実施形態では、リンカーは35アミノ酸またはそれ未満、30アミノ酸またはそれ未満、または25アミノ酸またはそれ未満である。ゆえに、最も好ましい実施形態では、リンカーは15-25アミノ酸残基長の範囲である。別の実施形態では、リンカーは親水性であり、VHおよびVLドメインが抗原の検出に必要なコンフォメーションをとりうるように十分に可動性である。イントラボディーは、同一のVHおよびVLドメイン間に種々のリンカー配列を挿入して作成することができる。特定ペアのVHおよびVLドメインに関して適切な特性を有するリンカーは、各々の抗原結合の程度を評価することによって経験的に決定することができる。リンカーの例には、限定するものではないが、以下の表3に開示される配列が含まれる。
【表３】
2008518021.tif 000004
【０２００】
一実施形態では、イントラボディーは細胞質で発現される。他の実施形態では、イントラボディーは種々の細胞内部位に局在化される。そのような実施形態では、特定の局在化配列をイントラボディーポリペプチドに取り付けて、該イントラボディーを特定の部位に向けることができる。イントラボディーは、例えば以下の細胞内部位に局在化させることができる: 小胞体(Munro et al., 1987, Cell 48:899-907; Hangejorden et al., 1991, J. Biol. Chem. 266:6015); 核(Lanford et al., 1986, Cell 46:575; Stanton et al.,1986, PNAS 83:1772; Harlow et al., 1985, Mol. Cell Biol. 5:1605; Pap et al., 2002, Exp. Cell Res. 265:288-93); 核小体領域(Seomi et al., 1990, J. Virology 64:1803; Kubota et al., 1989, Biochem. Biophys. Res. Comm. 162:963; Siomi et al., 1998, Cell 55:197); エンドソーム区画(Bakke et al., 1990, Cell 63:707-716); ミトコンドリア基質(Pugsley, A. P., 1989, "Protein Targeting", Academic Press, Inc.); ゴルジ装置(Tang et al., 1992, J. Bio. Chem. 267:10122-6); リポソーム(Letourneur et al., 1992, Cell 69:1183); ペルオキシソーム(Pap et al., 2002, Exp. Cell Res. 265:288-93); トランスゴルジ網(Pap et al., 2002, Exp. Cell Res. 265:288-93); および原形質膜(Marchildon et al., 1984, PNAS 81:7679-82; Henderson et al., 1987, PNAS 89:339-43; Rhee et al., 1987, J. Virol. 61:1045-53; Schultz et al., 1984, J. Virol. 133:431-7; Ootsuyama et al., 1985, Jpn. J. Can. Res. 76:1132-5; Ratner et al., 1985, Nature 313:277-84)。局在化シグナルの例には、限定するものではないが、以下の表4に開示される配列が含まれる。
【表４】
2008518021.tif 000005
【０２０１】
VHおよびVLドメインは、保存されている構造上のジスルフィド結合を一般に有する免疫グロブリンドメインからなる。イントラボディーが還元環境(例えば細胞質)で発現される実施形態では、該構造上の特徴は存在しえない。イントラボディーポリペプチド配列に変異を施して、ジスルフィド結合の形成が生じないことに起因する免疫グロブリン構造の安定性の低下を補うことができる。一実施形態では、イントラボディーのVHおよび/またはVLドメインは、還元環境におけるその発現が安定化されるように1種以上のポイントミューテーションを含有する(Steipe et al., 1994, J. Mol. Biol. 240:188-92; Wirtz and Steipe, 1999, Protein Science 8:2245-50; Ohage and Steipe, 1999, J. Mol. Biol. 291:1119-28; Ohage et al., 1999, J. Mol Biol. 291:1129-34を参照のこと)。
【０２０２】
治療物質としてのイントラボディータンパク質
一実施形態では、組換え発現されたイントラボディータンパク質を患者に投与する。そのようなイントラボディーポリペプチドは、予防効果または治療効果を媒介するために細胞内に存在する必要がある。本発明の本実施形態では、イントラボディーポリペプチドは「膜透過性配列」を伴う。膜透過性配列は、細胞の外側から細胞の内側へ細胞膜を通り抜けて透過可能なポリペプチドである。膜透過性配列は、別のポリペプチドに連結されると、細胞膜を横切る該ポリペプチドの転位を同様に導くことができる。
【０２０３】
一実施形態では、膜透過性配列はシグナルペプチドの疎水性領域である(例えばHawiger, 1999, Curr. Opin. Chem. Biol. 3:89-94; Hawiger, 1997, Curr. Opin. Immunol. 9:189-94; 米国特許第5,807,746号および第6,043,339号(参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。膜透過性配列の配列は任意のシグナルペプチドの疎水性領域に基づくものであってよい。シグナルペプチドは、例えばSIGPEPデータベースから選択することができる(例えばvon Heijne, 1987, Prot. Seq. Data Anal. 1:41-2; von Heijne and Abrahmsen, 1989, FEBS Lett. 224:439-46を参照のこと)。特定の細胞タイプがイントラボディーポリペプチドの挿入に関する標的とされる場合、膜透過性配列は、好ましくは、該細胞タイプに内因性のシグナルペプチドに基づくものである。別の実施形態では、膜透過性配列はウイルスタンパク質(例えばヘルペスウイルスタンパク質VP22)またはその断片である(例えばPhelan et al., 1998, Nat. Biotechnol. 16:440-3を参照のこと)。特定のイントラボディーおよび/または特定の標的細胞タイプに適切な特性を有する膜透過性配列は、細胞膜を横切るイントラボディーの転位を導く各膜透過性配列の能力を評価することによって経験的に決定することができる。膜透過性配列の例には、限定するものではないが、以下の表5に開示される配列が含まれる。
【表５】
2008518021.tif 000006
【０２０４】
別の実施形態では、膜透過性配列は誘導体であってよい。本実施形態では、膜透過性配列のアミノ酸配列は、アミノ酸残基の置換、欠失、付加、および/または修飾を導入することによって改変されている。例えば、限定目的ではないが、ポリペプチドは、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護/遮断基による誘導体化、タンパク質分解による切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質への連結、等によって修飾してよい。膜透過性配列ポリペプチドの誘導体は、当業者に公知の技術を使用する化学修飾によって修飾してよい。それには、限定するものではないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、等が含まれる。さらに、膜透過性配列ポリペプチドの誘導体は1種以上の非従来型のアミノ酸を含有してよい。一実施形態では、ポリペプチド誘導体は未改変ポリペプチドと類似または同一の機能を有する。別の実施形態では、膜透過性配列ポリペプチドの誘導体は、未改変ポリペプチドと比較して改変された活性を有する。例えば、誘導体膜透過性配列ポリペプチドは、より効率的に細胞膜を通り抜けて転位することができ、あるいはタンパク質分解に対して、より耐性でありうる。
【０２０５】
膜透過性配列はいくつかの方法でイントラボディーに取り付けることができる。一実施形態では、膜透過性配列およびイントラボディーを融合タンパク質として発現させる。本実施形態では、標準的な組換えDNA技術を使用して、膜透過性配列をコードする核酸をイントラボディーをコードする核酸に取り付ける(例えばRojas et al., 1998, Nat. Biotechnol. 16:370-5を参照のこと)。別の実施形態では、膜透過性配列およびイントラボディーをコードする核酸の間にスペーサーペプチドをコードする核酸配列を配置する。別の実施形態では、各々を別々に組換え発現させた後に、膜透過性配列ポリペプチドをイントラボディーポリペプチドに取り付ける(例えばZhang et al., 1998, PNAS 95:9184-9を参照のこと)。本実施形態では、当技術分野において標準的な方法に基づき、ペプチド結合または非ペプチド結合によって(例えば架橋試薬、例えばグルタルアルデヒドまたはチアゾリジノ連結を用いて(例えばHawiger, 1999, Curr. Opin. Chem. Biol. 3:89-94を参照のこと))ポリペプチドを連結することができる。
【０２０６】
膜透過性配列-イントラボディーポリペプチドの投与は、非経口投与、例えば静脈内注射、例えば標的細胞(群)を有する組織(群)または器官(群)に血管を通して供給される局所潅流によって、またはエアロゾルの吸入、皮下または筋肉内注射、皮膚創傷および損傷に対する投与等の局所投与、例えば移植用に調製された骨髄細胞内へのダイレクトトランスフェクションおよび後の対象内への移植、および後に対象内へ移植される器官内へのダイレクトトランスフェクション(direcUransfection)によって行うことができる。別の投与方法には、特に複合体がカプセル化されている場合には経口投与が含まれ、あるいは特に複合体が坐剤形である場合には経直腸投与が含まれる。製薬上許容しうる担体には、生物学的に、またはその他の点で望ましくないことがない任意の材料が含まれ、すなわち、該材料は、選択された複合体とともに個体に投与してよく、望ましくない生物学的影響を全く生じさせず、あるいはそれが含有される医薬組成物の他のいずれの成分とも有害な様式で相互作用しない。
【０２０７】
膜透過性配列-イントラボディーポリペプチドの投与に関する条件は、当技術分野における手引きを考慮に入れて容易に決定することができる(例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., E. W. Martin (ed.), Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1990)を参照のこと)。特定のin vivoの細胞タイプが例えば器官または腫瘍の局所潅流によって標的にされる場合、標的組織由来の細胞を生体組織検査に付することができ、該組織内への複合体の移入に最適な用量をin vitroで決定し、濃度および時間の長さを含めてin vivo用量を最適化することができる。あるいは、同一細胞タイプの培養細胞を使用して、in vivoの標的細胞に関する用量を最適化することもできる。
【０２０８】
治療法としてのイントラボディー遺伝子治療
別の実施形態では、イントラボディーをコードするポリヌクレオチドを患者に投与する(例えば遺伝子治療の場合のように行う)。本実施形態では、以下のセクション5.3.1に記載の方法を使用して、本発明のポリヌクレオチドを投与することができる。
【０２０９】
5.1.1.1.3  抗体の生産方法
抗原に免疫特異的に結合する抗体は、抗体の合成に関する、当技術分野において公知の任意の方法、特に化学合成または好ましくは組換え発現技術によって生産することができる。
【０２１０】
抗原に関して免疫特異的なポリクローナル抗体は、当技術分野において周知の種々の手順によって生産することができる。例えば、限定するものではないが、ウサギ、マウス、ラット、等を含む種々の宿主動物にヒト抗原を投与して、該ヒト抗原に特異的なポリクローナル抗体を含有する血清の生産を誘発することができる。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを使用して免疫学的応答を増大させてよい。該アジュバントには、限定するものではないが、フロイント(完全および不完全)、ミネラルゲル、例えば水酸化アルミニウム、表面活性物質、例えばリゾレシチン、プルロニック(pluronic)ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油性乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、および潜在的に有用なヒトアジュバント、例えばBCG (カルメット・ゲラン菌(bacille Calmette-Guerin))およびコリネバクテリウム・パルヴム(corynebacterium parvum)が含まれる。また、そのようなアジュバントは当技術分野において周知である。
【０２１１】
モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。該技術には、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術の使用、またはその組み合わせが含まれる。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の技術および、例えばHarlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)(該参考文献は参照によりその全体が組み入れられる)で教授される技術を含むハイブリドーマ技術を使用して生産することができる。本明細書中で使用される用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって生産される抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核クローン、原核クローン、またはファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体を表し、その生産方法を表すものではない。
【０２１２】
ハイブリドーマ技術を使用して特異的抗体を生産およびスクリーニングするための方法は、当技術分野において慣例的かつ周知である。簡潔に言えば、マウスを非マウス抗原で免疫化することができ、免疫応答が検出されたら、例えばマウス血清中で該抗原に特異的な抗体が検出されたら、マウスの脾臓を回収し、脾細胞を単離する。次いで、周知の技術によって、該脾細胞を任意の好適な骨髄腫細胞、例えばATCCから入手可能な細胞株SP20由来の細胞に融合する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈(limited dilution)によってクローニングする。次いで当技術分野において公知の方法によって、本発明のポリペプチドに結合可能な抗体を分泌する細胞に関してハイブリドーマクローンをアッセイする。ポジティブハイブリドーマクローンでマウスを免疫化することによって、概して高レベルの抗体を含有する腹水を作成することができる。
【０２１３】
本発明は、モノクローナル抗体を作成する方法であって、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含み、その場合、好ましくは、非マウス抗原で免疫化されたマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合し、次いで融合の結果得られたハイブリドーマを、該抗原に結合できる抗体を分泌するハイブリドーマクローンに関してスクリーニングすることによって該ハイブリドーマが作成される方法、ならびに本方法によって生産される抗体を提供する。
【０２１４】
当業者に公知の任意の技術によって、特異的な特定のエピトープを認識する抗体断片を作成しうる。例えば、本発明のFabおよびF(ab')2断片は、酵素、例えばパパイン(Fab断片が生産される)またはペプシン(F(ab')2断片が生産される)を使用するタンパク質分解による免疫グロブリン分子の切断によって生産しうる。F(ab')2断片は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のCH1ドメインを含有する。さらに、本発明の抗体は、当技術分野において公知の種々のファージディスプレイ法を使用して作成することもできる。
【０２１５】
ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインを、それをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面に表示させる。特に、動物cDNAライブラリー(例えばヒトまたはマウスの患部組織のcDNAライブラリー)から、VHおよびVLドメインをコードするDNA配列を増幅する。該VHおよびVLドメインをコードするDNAをscFvリンカーとともにPCRによって組換えて、ファージミドベクター中にクローニングする。該ベクターをE. coli (大腸菌)内にエレクトロポレーションし、該E. coliにヘルパーファージを感染させる。これらの方法で使用されるファージは、典型的に、繊維状ファージであり、それにはfdおよびM13が含まれ、VHおよびVLドメインは、通常、ファージ遺伝子IIIまたは遺伝子VIIIに組換え的に融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージを、抗原を用いて選択または特定することができる。その場合、例えば、標識抗原または、固形表面もしくはビーズに結合もしくは捕獲された抗原を使用する。本発明の抗体の作成に使用できるファージディスプレイ法の例には、以下の文献で開示される方法が含まれる: Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic et al., 1997, Gene 187:9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; 国際出願第PCT/GB91/O1 134号; 国際公開第WO 90/02809号, 第WO 91/10737号, 第WO 92/01047号, 第WO 92/18619号, 第WO 93/11236号, 第WO 95/15982号, 第WO 95/20401号, および第WO97/13844号; および米国特許第5,698,426号, 第5,223,409号, 第5,403,484号, 第5,580,717号, 第5,427,908号, 第5,750,753号, 第5,821,047号, 第5,571,698号, 第5,427,908号, 第5,516,637号, 第5,780,225号, 第5,658,727号, 第5,733,743号および第5,969,108号; 各文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。
【０２１６】
上記参考文献に記載のように、ファージ選択後、該ファージ由来の抗体コード領域を単離し、それを使用して抗体全体、例えばヒト抗体、または任意の他の所望の抗原結合断片を作成し、任意の所望の宿主、例えば哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌で、例えば下記のように、発現させることができる。Fab、Fab'およびF(ab')2断片を組換え生産する技術を使用することもできる。その場合、当技術分野において公知の方法、例えばPCT公開第WO 92/22324号; Mullinax et al., 1992, BioTechniques 12(6):864-869; Sawai et al., 1995, AJRI 34:26-34; およびBetter et al., 1988, Science 240:1041-1043 (該参考文献は参照によりその全体が組み入れられる)に開示されている方法を使用する。
【０２１７】
抗体全体を作成するために、VHまたはVLヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するためのフランキング配列を含むPCRプライマーを使用して、scFvクローン中のVHまたはVL配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して、VH定常領域、例えばヒトガンマ4定常領域を発現するベクター内にPCR増幅されたVHドメインをクローニングすることができ、VL定常領域、例えばヒトカッパまたはラムダ(lamba)定常領域を発現するベクター内にPCR増幅されたVLドメインをクローニングすることができる。好ましくは、VHまたはVLドメインを発現するためのベクターは、EF-1αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメイン用のクローニング部位、定常ドメイン、および選択マーカー、例えばネオマイシンを含む。必要な定常領域を発現する1ベクター内にVHおよびVLドメインをクローニングしてもよい。次いで重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを細胞株内に同時トランスフェクトし、当業者に公知の技術を使用して、完全長抗体、例えばIgGを発現する安定細胞株または一過性細胞株を作成する。
【０２１８】
ヒトにおける抗体のin vivo使用およびin vitro検出アッセイを含むいくつかの用途では、ヒト化抗体またはキメラ抗体を使用することが好ましいであろう。完全なヒト抗体およびヒト化抗体は、ヒト対象の治療治療に関して特に望ましい。ヒト抗体は、当技術分野において公知の種々の方法によって作成することができ、その方法には、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを使用する上記ファージディスプレイ法が含まれる。また、米国特許第4,444,887号および第4,716,111号; および国際公開第WO 98/46645号, 第WO 98/50433号, 第WO 98/24893号, 第WO98/16654号, 第WO 96/34096号, 第WO 96/33735号, および第WO 91/10741号を参照のこと; 各文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。
【０２１９】
ヒト抗体は、トランスジェニックマウスを使用して生産することもできる。そのトランスジェニックマウスは機能的な内因性免疫グロブリンを発現する能力がないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体をランダムにまたは相同組換えによってマウス胚幹細胞内に導入してよい。あるいは、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域をマウス胚幹細胞内に導入してよい。ヒト免疫グロブリン遺伝子座を相同組換えによって導入して、別々にまたは同時に、マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子を非機能的にしてよい。特に、JH領域のホモ接合体欠失は内因性抗体生産を妨げる。改変された胚幹細胞を増殖させ、胚盤胞内にマイクロインジェクションしてキメラマウスを生産する。次いで該キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性の子孫を生産する。該トランスジェニックマウスを、選択抗原、例えば本発明のポリペプチドの全体または部分で通常の様式で免疫化する。慣用のハイブリドーマ技術を使用して、該免疫化トランスジェニックマウスから該抗原を標的にするモノクローナル抗体を取得することができる。該トランスジェニックマウスが宿しているヒト免疫グロブリン導入遺伝子はB細胞分化中に再編成され、その後、クラススイッチおよび体細胞突然変異を受ける。ゆえに、前記技術を使用して、治療上有用なIgG、IgA、IgMおよびIgE抗体を生産することが可能である。ヒト抗体を生産するための本技術の概要に関しては、Lonberg and Huszar, 1995, Int. Rev. Immunol. 13:65 93を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を生産するための本技術の詳細な考察およびそのような抗体を生産するためのプロトコルに関しては、例えば国際公開第WO 98/24893号, 第WO 96/34096号, および第WO 96/33735号; および米国特許第5,413,923号, 第5,625,126号, 第5,633,425号, 第5,569,825号, 第5,661,016号, 第5,545,806号, 第5,814,318号, および第5,939,598号を参照のこと。該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。さらに、企業、例えばAbgenix, Inc. (Fremont, CA) およびGenpharm (San Jose, CA)は、上記と同様の技術を使用して、選択抗原を標的にするヒト抗体の提供に従事することができる。
【０２２０】
キメラ抗体は、抗体の種々の部分が種々の免疫グロブリン分子に由来する分子である。キメラ抗体を生産するための方法は当技術分野において公知である。例えばMorrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202; および米国特許第5,807,715号, 第4,816,567号, 第4,816,397号, および第6,311,415号を参照のこと。該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる。
【０２２１】
フレームワーク領域中のフレームワーク残基をCDRドナー抗体由来の対応する残基で置き換えて、抗原結合性を改変し、好ましくは改善することがよくある。これらのフレームワーク置換は、当技術分野において周知の方法、例えば抗原結合に関して重要なフレームワーク残基を特定するためのCDRとフレームワーク残基の相互作用についてのモデリングおよび特定の位置での異常なフレームワーク残基を特定するための配列比較によって特定される(例えば米国特許第5,585,089号; およびRiechmann et al., 1988, Nature 332:323 (該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。
【０２２２】
ヒト化抗体は、実質的にヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するフレームワーク領域および実質的に非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するCDRを含む、あらかじめ決められた抗原に結合可能な抗体またはその変異体またはその断片である。ヒト化抗体は、実質的にすべての、少なくとも1種、および典型的に2種の、可変ドメイン(Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc、Fv)を含み、その場合、すべてまたは実質的にすべてのCDR領域は非ヒト免疫グロブリン(すなわちドナー抗体)のCDR領域に一致し、すべてまたは実質的にすべてのフレームワーク領域はヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。好ましくは、ヒト化抗体は免疫グロブリン定常領域(Fc)、典型的にヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも部分をさらに含む。通常、該抗体は軽鎖ならびに少なくとも重鎖の可変ドメインをともに含有する。該抗体は重鎖のCH1、ヒンジ、CH2、CH3、およびCH4領域を含んでもよい。該ヒト化抗体は、任意のクラスの免疫グロブリン、例えばIgM、IgG、IgD、IgAおよびIgE、ならびに任意のアイソタイプ、例えばIgG1、IgG2、IgG3およびlgG4から選択することができる。通常、定常ドメインは補体結合性定常ドメインであり、それは該ヒト化抗体が細胞障害活性を示すことが望ましい場合であり、そのクラスは典型的にIgG1である。そのような細胞障害活性が望ましくない場合、該定常ドメインはIgG2クラスの定常ドメインであってよい。該ヒト化抗体は、2種以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでよく、所望のエフェクター機能を最適化するための特定の定常ドメインの選択は当技術分野の通常の技量の範囲内である。ヒト化抗体のフレームワークおよびCDR領域は親配列に正確に一致する必要はなく、例えばドナーCDRまたはコンセンサスフレームワークを少なくとも1残基の置換、挿入または欠失によって変異誘発して、該部位のCDRまたはフレームワーク残基が該コンセンサスまたは移入抗体に一致しないようにしてよい。しかし、そのような変異は大規模なものではない。通常、少なくとも75%のヒト化抗体残基は親フレームワークおよびCDR配列の残基と一致し、より通常には90%であり、最も好ましくは95%を超える。ヒト化抗体は当技術分野において公知の多様な技術を使用して生産することができ、その技術には、限定するものではないが、以下の技術が含まれる: CDR移植(例えば欧州特許第EP 239,400号; 国際公開第WO 91/09967号; および米国特許第5,225,539号, 第5,530,101号, および第5,585,089号(各文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)、化粧張り(veneering)または表面置換(resurfacing)(例えば欧州特許第EP 592,106号および第EP 519,596号; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814; およびRoguska et al., 1994, PNAS 91:969-973 (各文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)、連鎖シャッフル(chain shuffling)(例えば米国特許第5,565,332号(該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)、および例えば米国特許第6,407,213号, 米国特許第5,766,886号, 国際公開第WO 9317105号, Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353 60 (2000), Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678 84 (1997), Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996), Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717 22 (1995), Sandhu JS, Gene 150(2):409 10 (1994), およびPedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959 73 (1994)(各文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)に開示されている技術。フレームワーク領域中のフレームワーク残基をCDRドナー抗体由来の対応する残基で置き換えて、抗原結合性を改変し、好ましくは改善することがよくある。これらのフレームワーク置換は、当技術分野において周知の方法、例えば抗原結合に関して重要なフレームワーク残基を特定するためのCDRとフレームワーク残基の相互作用についてのモデリングおよび特定の位置での異常なフレームワーク残基を特定するための配列比較によって特定される。(例えばQueen et al., 米国特許第5,585,089号; およびRiechmann et al., 1988, Nature 332:323 (該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。
【０２２３】
さらに、EphA2もしくはEphrinA1またはその断片に免疫特異的に結合する抗体を、次いで、当業者に周知の技術を使用して、抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を作成するために利用することができる。(例えばGreenspan & Bona, 1989, FASEB J. 7(5):437-444; およびNissinoff, 1991, J. Immunol. 147(8):2429-2438を参照のこと)。
【０２２４】
5.1.1.2  EphA2/EphrinA1モジュレーターとしてのEphA2断片およびEphrinA1断片
一実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはEphA2ポリペプチドである。特定の実施形態では、EphA2/EphrinモジュレーターはEphA2の断片(「EphA2断片」)である。本実施形態にしたがって、EphA2断片は、好ましくは、EphrinA1に結合する能力を保持する。好ましい実施形態では、EphA2断片はEphrinA1に結合する能力を保持し、内因性EphA2とEphA2の内因性リガンド、好ましくはEphrinA1の結合を阻害または低減する。特定の実施形態では、EphA2/Ephrinモジュレーターは、EphrinA1またはその断片に特異的に結合し、他のEphrin分子またはその断片には結合しないEphA2断片である。
【０２２５】
EphA2断片の非限定的な例には、限定するものではないが、ヒトEphA2のリガンド結合ドメイン(アミノ酸残基28〜201)および任意の以下の1種以上のドメインを含むEphA2断片が含まれる: 第一のフィブロネクチンIII型ドメイン(アミノ酸残基332〜424); 第二のフィブロネクチンIII型ドメイン(アミノ酸残基439〜519); チロシンキナーゼ触媒ドメイン(アミノ酸残基607〜874); および/または無益なアルファモチーフ「SAM」ドメイン(アミノ酸残基902〜968)。該ドメインの配列はGenBankデータベースで見出されるものであってよい(例えばヒトEphA2に関してはGenBank Accession No. NP_004422.2)。特定の実施形態では、EphA2断片は可溶性である(すなわち膜結合型でない)。別の特定の実施形態では、本発明のEphA2断片はEphA2の膜貫通ドメイン(例えばアミノ酸残基520〜606)を欠き、膜結合型でない。特定の実施形態では、本発明のEphA2断片はEphA2の細胞外ドメインまたはその断片を含む。他の実施形態では、本発明のEphA2断片は細胞外ドメインまたはその断片を含み、該EphA2が膜結合型でないように膜貫通ドメインまたはその部分を欠く。他の実施形態では、本発明のEphA2断片はEphA2の細胞質ドメインまたはその断片を含む。別の実施形態では、本発明のEphA2断片はEphA2の細胞質ドメインまたはその細胞質ドメインの断片を含み、該EphA2が膜結合型でないように膜貫通ドメインまたはその断片を欠く。さらに別の実施形態では、本発明のEphA2断片はEphA2の細胞外ドメインまたはその断片および細胞質ドメインまたはその断片を含む。そのようなEphA2断片は、好ましくは、膜貫通ドメインを欠く。
【０２２６】
特定の実施形態では、EphA2断片はEphA2の細胞外ドメインしか含まない。別の特定の実施形態では、EphA2断片はリガンド結合ドメイン(例えばGenBank Accession No. NP_004422.2に開示されるヒトEphA2のアミノ酸残基28〜201)しか含まない。特定の実施形態では、本発明のEphA2断片はヒトEphA2の細胞外ドメインの特定断片(例えばアミノ酸残基1〜25、1〜50、1〜75、1〜100、1〜125、1〜150、1〜175、1〜200、1〜225、1〜250、1〜275、1〜300、1〜325、1〜350、1〜375、1〜400、1〜425、1〜450、1〜475、1〜500、または1〜525)を含む。別の特定の実施形態では、本発明のEphA2断片は膜貫通ドメインまたは膜貫通ドメインの断片を含む。本実施形態にしたがって、EphA2断片はEphA2の細胞外ドメインまたはその断片および/またはEphA2の細胞質ドメインまたはその断片をさらに含んでよい。
【０２２７】
該EphA2断片は、内因性EphA2配列に対して100%、98%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%同一のポリペプチドを含む。2アミノ酸配列の同一性パーセントの決定は、当業者に公知の任意の方法、例えばBLASTタンパク質サーチによって決定することができる。特定の実施形態では、本発明のEphA2断片はEphA2のアナログまたは誘導体であってよい。例えば、本発明のEphA2断片には、修飾型の、すなわち該ポリペプチドに任意のタイプの分子が共有結合されることによって修飾されている誘導体が含まれる。例えば、限定目的ではないが、ポリペプチド誘導体(例えばEphA2ポリペプチド誘導体)には、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護/遮断基による誘導体化、タンパク質分解による切断、細胞リガンドへの連結、等によって修飾されているポリペプチドが含まれる。多数の化学修飾のいずれかを公知の技術によって実行してよく、該技術には、限定するものではないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、等が含まれる。さらに、該誘導体は1種以上の非従来型のアミノ酸を含有してよい。
【０２２８】
特定の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはドミナントネガティブフォームのEphA2であり、それはシグナル伝達に必要とされる細胞質ドメインまたはその断片を欠く。本実施形態にしたがって、該ドミナントネガティブフォームのEphA2はEphA2の膜貫通ドメインまたはその断片を含み、膜結合型である。特定の実施形態では、該ドミナントネガティブフォームのEphA2はEphrinA1に結合する能力を保持するが、シグナルを伝達する能力がなく、低〜無視できるシグナル伝達しか誘発しないか、あるいはリガンド-受容体相互作用に応じて活性化されるすべてのシグナル伝達経路を誘発しない。特定の実施形態では、EphA2の関連での低〜無視できるシグナル伝達とは、本明細書中に記載されるか、あるいは当業者に周知のin vivoおよび/またはin vitroアッセイにおいて、コントロールと比較して、リガンド結合に応じたEphA2のシグナル伝達の任意の態様が少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも98%低下することを表す。本発明の特定の態様では、EphA2のシグナル伝達は、EphA2がその内因性リガンド(例えばEphrinA1)に結合すると活性化される任意の1種以上のシグナル伝達経路を包含する。そのようなシグナル伝達経路の非限定的な例には、限定するものではないが、分裂促進因子活性化型プロテインキナーゼ(MAPK)/ERK経路、Ras経路、およびSrcファミリーのキナーゼが関与する経路が含まれる(他のEph受容体経路に関しては、Cheng et al., 2002, Cytokine & Growth Factor Rev. 13:75-85; Kullander and Klein, 2002, Nature Rev. 3:475-486; Holder and Klein, 1999, Development 126:2033-2044; Zhou, 1998, Pharmacol. Ther. 77:151-181; およびNakamoto and Bergemann, 2002, Microscopy Res. & Technique 59:58-67 (該すべての文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。
【０２２９】
当業者に公知の種々のアッセイを実施してEphA2のシグナル伝達を測定してよい。例えば、EphA2のリン酸化を測定し、リガンド結合に応じてEphA2のシグナル伝達が活性化されるかどうかを決定してよい。その決定は、EphrinA1で処理されていないコントロール細胞と比較してEphrinA1処理細胞中に存在するリン酸化EphA2の量を測定することによって行う。当業者に公知の任意のタンパク質免疫沈降法および本発明のEphA2抗体を使用してEphA2を単離してよい。次いで、当業者に公知の任意の標準的免疫ブロット法を使用し、抗ホスホチロシン抗体(Upstate Tiotechnology, Inc., Lake Placid, New York)を使用してリン酸化EphA2を測定してよい。例えばCheng et al., 2002, Cytokine & Growth Factor Rev. 13:75-85を参照のこと。別の実施形態では、MAPKリン酸化を測定して、リガンド結合に応じてEphA2のシグナル伝達が活性化されるかどうかを決定してよい。その決定は、当業者に公知の標準的な免疫沈降および免疫ブロットアッセイを使用して、EphrinA1で処理されていないコントロール細胞と比較して、EphrinA1処理細胞中に存在するリン酸化MAPKの量を測定することによって行う(例えばMiao et al., 2003, J. Cell Biol. 7:1281-1292 (該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。
【０２３０】
一実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphrinA1ポリペプチドである。特定の実施形態では、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはEphrinA1の断片(「EphrinA1断片」)である。本実施形態にしたがって、EphrinA1断片は、好ましくは、EphA2に結合する能力を保持する。好ましい実施形態では、EphrinA1断片はEphA2に結合する能力を保持し、内因性EphrinA1と内因性EphA2の結合を阻害または低減する。
【０２３１】
EphrinA1断片の非限定的な例には、限定するものではないが、GenBankデータベースに開示されているヒトEphrinA1の任意の断片(例えばGenBank Accession Nos. NP_004419 (変異体1)およびNP_872626 (変異体2))が含まれる。特定の実施形態では、EphrinA1断片は可溶性である(すなわち膜結合型でない)。特定の実施形態では、本発明のEphrinA1断片はヒトEphrinA1の細胞外ドメインまたはその部分を含む。別の実施形態では、本発明のEphrinA1断片はヒトEphrinA1の細胞外ドメインまたはその断片を含み、膜結合型でない。特定の実施形態では、本発明のEphrinA1断片はヒトEphrinA1変異体1の細胞外ドメインまたはその断片の特定断片を含み、膜結合型でない。他の特定の実施形態では、本発明のEphrinA1断片はヒトEphrinA1変異体2の細胞外ドメインまたはその断片の特定断片を含み、膜結合型でない。
【０２３２】
該EphrinA1断片は、内因性EphrinA1配列に対して100%、98%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%同一のポリペプチドを含む。2アミノ酸配列の同一性パーセントの決定は、当業者に公知の任意の方法、例えばBLASTタンパク質サーチによって決定することができる。特定の実施形態では、本発明のEphrinA1断片はEphrinA1のアナログまたは誘導体であってよい。例えば、本発明のEphrinA1断片には、修飾型の、すなわち該ポリペプチドに任意のタイプの分子が共有結合されることによって修飾されている誘導体が含まれる。例えば、限定目的ではないが、ポリペプチド誘導体(例えばEphrinA1ポリペプチド誘導体)には、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護/遮断基による誘導体化、タンパク質分解による切断、細胞リガンドへの連結、等によって修飾されているポリペプチドが含まれる。多数の化学修飾のいずれかを公知の技術によって実行してよく、該技術には、限定するものではないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、等が含まれる。さらに、該誘導体は1種以上の非従来型のアミノ酸を含有してよい。
【０２３３】
特定の実施形態では、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphA2またはEphrinA1融合タンパク質である。融合タンパク質であるEphA2/EphrinA1モジュレーターは、例えば以下のセクション5.1.1.3でさらに詳細に考察される。好ましい実施形態では、EphA2またはEphrinA1融合タンパク質は可溶性である。EphA2融合タンパク質の非限定的な例には、可溶型のEphA2、例えばEphA2-Fcが含まれる(例えばCheng et al., 2002, Mol. Cancer Res. 1:2-11 (該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。特定の実施形態では、EphA2融合タンパク質はヒト免疫グロブリンIgG1のFc部分に融合されたEphA2を含む。別の実施形態では、EphA2融合タンパク質は、ヒト免疫グロブリンIgG1のFc部分に融合された、EphrinA1に結合する能力を保持するEphA2断片(例えばEphA2の細胞外ドメイン)を含む(例えばCarles-Kinch et al., 2002, Cancer Res. 62:2840-2847; およびCheng et al., 2002, Mol. Cancer Res. 1:2-11 (該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。さらに別の実施形態では、EphA2融合タンパク質は異種タンパク質(例えばヒト血清アルブミン)に融合された、EphrinA1に結合する能力を保持するEphA2断片を含む。
【０２３４】
EphrinA1融合タンパク質の非限定的な例には、可溶型のEphrinA1、例えばEphrinA1-Fcが含まれる(例えばDuxbury et al., 2004, Biochem. & Biophys. Res. Comm. 320:1096-1102 (該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。特定の実施形態では、EphrinA1融合タンパク質はヒト免疫グロブリンIgGのFcドメインに融合されたEphrinA1を含む。別の実施形態では、EphrinA1融合タンパク質は、ヒト免疫グロブリンIgGのFcドメインに融合された、EphA2に結合する能力を保持するEphrinA1断片を含む。さらに別の実施形態では、EphrinA1融合タンパク質は異種タンパク質(例えばヒト血清アルブミン)に融合された、EphA2に結合する能力を保持するEphrinA1断片を含む。
【０２３５】
EphA2またはEphrinA1の断片を作成し、本明細書中に記載されるタンパク質-タンパク質相互作用の研究に関する生化学的、生物物理学的、遺伝学的、および/または計算(コンピュータ)技術を使用するか、あるいは当技術分野において公知の任意の方法によって、それぞれEphrinA1またはEphA2に結合する能力に関してアッセイすることができる。in vitroまたはin vivoで定性的または定量的にタンパク質結合を検出するための(例えばEphrinA1に対するEphA2の結合を検出するための)方法の非限定的な例には、GST親和性結合アッセイ、ファーウエスタンブロット解析、表面プラズモン共鳴(SRP)、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)、蛍光偏光(FP)、等温滴定熱量測定(ITC)、円偏光二色性(CD)、タンパク質断片相互作用アッセイ(protein fragment complementation assays)(PCA)、種々の二重ハイブリッド系、およびプロテオミクスおよびバイオインフォマティクスに基づくアプローチ、例えばコンピュータ解析用のScansiteプログラムが含まれる(例えばFu, H., 2004, Protein-Protein Interactions: Methods and Applications (Humana Press, Totowa, NJ); およびProtein-Protein Interactions: A Molecular Cloning Manual, 2002, Golemis, ed. (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York)(該文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。
【０２３６】
5.1.1.3  コンジュゲート／融合タンパク質
本発明は、異種タンパク質またはポリペプチド（またはその断片、好ましくは、少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90または少なくとも100アミノ酸のポリペプチド）に組換え的に融合された又は化学的に結合（共有結合および非共有結合の両方を含む）したEphA2/EphrinA1モジュレーター（例えば、EphA2および／またはEphrinA1抗体、あるいはEphA2および／またはEphrinA1に免疫特異的に結合するその断片）の、融合タンパク質を作製するための使用を含む。例えば、該抗体を、特定の細胞表面受容体に特異的な抗体に融合または結合させることにより、in vitroまたはin vivoで、異種ポリペプチドを特定の細胞型へ標的化するために、抗体を融合させることが可能である。異種ポリペプチドに融合または結合した抗体は、当技術分野で公知の方法を用いるin vitroイムノアッセイおよび精製方法においても使用されうる。例えば、国際公開WO 93/21232; EP 439,095; Naramuraら, 1994, Immunol. Lett. 39:91-99; 米国特許第5,474,981号; Gilliesら, 1992, PNAS 89:1428-1432; およびFellら, 1991, J. Immunol. 146:2446-2452（それらの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。
【０２３７】
本発明はさらに、抗体断片に融合または結合した異種ポリペプチドを含む組成物を含む。例えば、該異種ポリペプチドは、Fab断片、Fd断片、Fv断片、F(ab)2断片またはそれらの一部分に融合または結合させることが可能である。タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドを抗体または抗体断片に融合または結合させるための方法は当技術分野で公知である。例えば、米国特許第5,336,603号, 第5,622,929号, 第5,359,046号, 第5,349,053号, 第5,447,851号および第5,112,946号; 欧州特許番号EP 307,434およびEP 367,166; 国際公開番号WO 96/04388およびWO 91/06570; Ashkenaziら, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539; Zhengら, 1995, J. Immunol. 154:5590-5600; ならびにVilら, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-11341（該参考文献の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。
【０２３８】
他の融合タンパク質、例えば、本発明のEphA2またはEphrinA1モジュレーターの任意の融合タンパク質は、遺伝子シャフリング（gene-shuffling）、モチーフシャフリング、エキソンシャフリングおよび／またはコドンシャフリング（「DNAシャフリング」と総称される）の技術により作製されうる。DNAシャフリングは、本発明の抗体またはその断片の活性を改変するために（例えば、より高い親和性およびより低い解離速度を有する抗体またはその断片）用いられうる。全般的には、米国特許第号5,605,793号、第5,811,238号、第5,830,721号、第5,834,252号および第5,837,458号、ならびにPattenら, 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16:76; Hanssonら, 1999, J. Mol Biol. 287:2659、ならびにLorenzoおよびBlasco, 1998, BioTechniques 24:308（これらの特許および刊行物のそれぞれの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。組換え前に変異導入型PCRによるランダム突然変異誘発、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法に付すことにより、抗体もしくはその断片またはコード化抗体もしくはその断片を改変することが可能である。EphA2またはEphrinA1に免疫特異的に結合する抗体または抗体断片をコードするポリヌクレオチドの部分の1以上を、1以上の異種分子の成分、モチーフ、切片、部分、ドメイン、断片などの1以上と組換えることが可能である。
【０２３９】
さらに、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、マーカー配列、例えば精製を促進するペプチドに融合されうる。好ましい実施形態においては、該マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、pQEベクター（QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, CA, 91311）において提供されるタグのようなヘキサ-ヒスチジンペプチド（それらの多くは商業的に入手可能である）である。例えばGentzら, 1989, PNAS 86:821に記載されているとおり、ヘキサ-ヒスチジンは融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグには、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに相当する赤血球凝集素（HA）タグ（Wilsonら, 1984, Cell, 37:767）、および「flag」タグが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２４０】
他の実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターを診断用または検出可能な物質に結合させる。そのようなモジュレーターは、臨床試験法の一部として感染の発生または進行をモニターまたは予知する（例えば、特定の療法の有効性を決定する）のに有用でありうる。また、そのようなモジュレーターは、感染の発生または進行をモニターまたは予知するのに有用でありうる。
【０２４１】
そのような診断および検出は、検出可能な物質に該抗体を結合させることにより達成されうる。検出可能な物質には、限定的なものではないが例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ-カラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼのような種々の酵素；限定的なものではないが例えばストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンのような補欠分子族；限定的なものではないが例えばウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンのような蛍光物質；限定的なものではないが例えばルミノールのような発光物質；限定的なものではないが例えばルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンのような生物発光物質；限定的なものではないが例えばビスマス（213Bi）、炭素（14C）、クロム（57Cr）、、コバルト（57Co）、フッ素（18F）、ガドリニウム（153Gd、159Gd）、ガリウム（68Ga、67Ga）、ゲルマニウム（68Ge）、ホルミウム（166Ho）、インジウム（115In、113In、111In、111In）、ヨウ素（131I、125I、123I、121I）、ランタニウム（140La）、ルテニウム（177Lu）、マンガン（54Mn）、モリブデン（99Mo）、パラジウム（103Pd）、リン（32P）、プラセオジム（142Pr）、プロメチウム（149Pm）、レニウム（186Re、188Re、）、ロジウム（105Rh）、ルテニウム（97Ru）、サマリウム（153Sm）、スカンジウム（47Sc）、セレニウム（75Se）、ストロンチウム（85Sr）、硫黄（35S）、テクネチウム（99Tc）、タリウム（201Ti）、スズ（113Sn、117Sn）、トリチウム（3H）、キセノン（133Xe）、イッテルビウム（169Yb、175Yb）、イットリウム（90Y）、亜鉛（65Zn）のような放射性物質；種々の陽電子放射断層撮影法を使用する陽電子放出性金属、ならびに非放射性常磁性金属イオンが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２４２】
本発明はさらに、予防または治療物質に結合したEphA2/EphrinA1モジュレーターの使用を含む。EphA2/EphrinA1モジュレーターは、治療部分、例えば細胞毒、例えば静細胞または殺細胞物質、治療物質または放射性金属イオン、例えばアルファ-放射体に結合させることが可能である。細胞毒または細胞毒性物質には、細胞に有害な任意の物質が含まれる。治療部分には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：代謝拮抗剤（例えば、メトトレキセート、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、シタラビン、5-フルオロウラシルデカルバジン）; アルキル化剤（例えば、メクロルエタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（BCNU）およびロムスチン（CCNU）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンC、およびシスジクロロジアミン白金（II）（DDP）、およびシスプラチン）; アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧称ダウノマイシン）およびドキソルビシン）; 抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧称アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（AMC））; アウリスタチン（Auristatin）分子（例えば、アウリスタチンPHE、ブリオスタチン（bryostatin）1およびソラスタチン（solastatin）10; Woykeら, Antimicrob. Agents Chemother. 46:3802-8 (2002), Woykeら, Antimicrob. Agents Chemother. 45:3580-4 (2001), Mohammadら, Anticancer Drugs 12:735-40 (2001), Wallら, Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:76-80 (1999), Mohammadら, Int. J. Oncol. 15:367-72 (1999)（それらのすべてを参照により本明細書に組み入れることとする））; ホルモン（例えば、グルココルチコイド、プロゲスチン、アンドロゲンおよびエストロゲン）、DNA修復酵素インヒビター（例えば、エトポシドまたはトポテカン（topotecan））、キナーゼインヒビター（例えば、化合物ST1571、イマチニブ（imatinib）メシラート (Kantarjianら, Clin Cancer Res. 8(7):2167-76 (2002)）; 細胞毒性物質（例えば、パクリタキセル、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトザントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1-デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログが、ならびに、米国特許第6,245,759号、第6,399,633号、第6,383,790号、第6,335,156号、第6,271,242号、第6,242,196号、第6,218,410号、第6,218,372号、第6,057,300号、第6,034,053号、第5,985,877号、第5,958,769号、第5,925,376号、第5,922,844号、第5,911,995号、第5,872,223号、第5,863,904号、第5,840,745号、第5,728,868号、第5,648,239号、第5,587,459号に開示されている化合物）; ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター（例えば、R115777、BMS-214662、ならびに例えば米国特許第6,458,935号、第6,451,812号、第6,440,974号、第6,436,960号、第6,432,959号、第6,420,387号、第6,414,145号、第6,410,541号、第6,410,539号、第6,403,581号、第6,399,615号、第6,387,905号、第6,372,747号、第6,369,034号、第6,362,188号、第6,342,765号、第6,342,487号、第6,300,501号、第6,268,363号、第6,265,422号、第6,248,756号、第6,239,140号、第6,232,338号、第6,228,865号、第6,228,856号、第6,225,322号、第6,218,406号、第6,211,193号、第6,187,786号、第6,169,096号、第6,159,984号、第6,143,766号、第6,133,303号、第6,127,366号、第6,124,465号、第6,124,295号、第6,103,723号、第6,093,737号、第6,090,948号、第6,080,870号、第6,077,853号、第6,071,935号、第6,066,738号、第6,063,930号、第6,054,466号、第6,051,582号、第6,051,574号および第6,040,305号）; トポイソメラーゼインヒビター（例えば、カンプトテシン、イリノテカン、SN-38、トポテカン、9-アミノカンプトテシン、GG-211 (GI 14721 1)、DX-8951f、IST-622、ルビテカン、ピラゾロアクリジン、XR-5000、セイントピン（saintopin）、UCE6、UCE1022、TAN-1518A、TAN-1518B、KT6006、KT6528、ED-110、NB-506、ED-110、NB-506およびレベッカマイシン（rebeccamycin））; ブルカレイン（bulgarein）; DNA小溝結合体、例えばHoescht色素33342およびHoechst色素33258; ニチジン（nitidine）; ファガロニン（fagaronine）; エピベルベリン（epiberberine）; コラリン（coralyne）; ベータ-ラパコン（lapachon）; BC-4-1; ビスホスホナート（例えば、アレンドロナート（alendronate）、シマドロナート（cimadronte）、クロドロナート（clodronate）、チルドロナート（tiludronate）、エチドロナート（etidronate）、イバンドロナート（ibandronate）、ネリドロナート（neridronate）、オルパンドロナート（olpandronate）、リセドロナート（risedronate）、ピリドロナート（piridronate）、パミドロナート（pamidronate）、ゾレンドロナート（zolendronate））HMG-CoAレダクターゼインヒビター（例えば、ロバスタチン（lovastatin）、シンバスタチン（simvastatin）、アトルバスタチン（atorvastatin）、プラバスタチン（pravastatin）、フルバスタチン（fluvastatin）、スタチン（statin）、セリバスタチン（cerivastatin）、レスコール（lescol）、ルピトール（lupitor）、ロスバスタチン（rosuvastatin）およびアトルバスタチン（atorvastatin））; アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、米国特許第6,277,832号、第5,998,596号、第5,885,834号、第5,734,033号および第5,618,709号に開示されているもの）; アデノシンデアミナーゼインヒビター（例えば、フルダラビン（Fludarabine）ホスファートおよび2-クロロデオキシアデノシン）; イビリツモマブ・チウキセタン（ibritumomab tiuxetan）（Zevalin（登録商標））; トシツモマブ（tositumomab）（Bexxar（登録商標））ならびにそれらの製薬上許容しうる塩、溶媒和物、包接化合物およびプロドラッグ。
【０２４３】
さらに、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、放射性物質、または放射性金属イオン（例えば、前記の放射性物質を参照されたい）を結合させるのに有用な大環状キレーターのような治療部分に結合させることが可能である。ある実施形態においては、大環状キレーターは、リンカー分子を介して抗体に結合されうる1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-N,N',N'',N''-四酢酸（DOTA）である。そのようなリンカー分子は当技術分野において一般に公知であり、Denardoら, 1998, Clin. Cancer Res. 4:2483-90; Petersonら, 1999, Bioconjug. Chem. 10:553; およびZimmermanら, 1999, Nucl. Med. Biol. 26:943-50（それらの各々の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
【０２４４】
さらに、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、与えられた生物学的応答を修飾する予防／治療部分または薬物部分に結合させることができる。治療部分または薬物部分は古典的な化学療法剤に限定されると解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を有するタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドでありうる。そのようなタンパク質には、例えば、アブリン、リシンA、シュードモナス外毒素、コレラ毒素またはジフテリア毒素のような毒素；腫瘍壊死因子、αインターフェロン、βインターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター、アポトーシス剤、例えばTNF-α、TNF-β、AIM I（国際公開番号WO 97/33899を参照されたい）、AIM II（国際公開番号WO 97/34911を参照されたい）、Fasリガンド（Takahashiら, 1994, J. Iminunol., 6: 1567-1574）およびVEGI（国際公開番号WO 99/23105を参照されたい）のようなタンパク質；あるいは生物応答修飾物質、例えばリンホカイン｛例えば、インターフェロンガンマ（「IFN-γ」）、インターロイキン1（「IL-1」）、インターロイキン2（「IL-2」）、インターロイキン4（「IL-4」）、インターロイキン5（「IL-5」）、インターロイキン6（「IL-6」）、インターロイキン7（「IL-7」）、インターロイキン10（「IL-10」）、インターロイキン12（「IL-12」）、インターロイキン15（「IL-15」）、インターロイキン23（「IL-23」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「GM-CSF」）および顆粒球コロニー刺激因子（「G-CSF」））または増殖因子｛例えば、成長ホルモン（「GH」））または凝固因子｛例えば、カルシウム、鐚員K、組織因子、例えば限定的なものではないがハーゲマン因子（因子XII）、高分子量キニノーゲン（FIMWK）、プレカリクレイン（PK）、凝固タンパク質因子II（プロトロンビン）、因子V、XIIa、VIII、XIIIa、XI、XIa、IX、IXa、X、リン脂質フィブリノペプチドAおよびB（フィブリノーゲンのαおよびβ鎖由来のもの）、フィブリン単量体）が含まれる。
【０２４５】
さらに、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、放射性金属イオン、例えばアルファ放射体、例えば213Bi、または限定的なものではないが131In、131L、131Y、131Ho、131Smを含む放射性金属イオンをポリペプチドまたは前記の任意のものに結合させるのに有用な大環状キレーターのような予防または治療部分に結合させることが可能である。ある実施形態においては、大環状キレーターは、リンカー分子を介して抗体に結合されうる1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-N,N',N'',N'''-四酢酸（DOTA）である。そのようなリンカー分子は当技術分野において一般に公知であり、Denardoら, 1998, Clin. Cancer Res. 4(10):2483-90; Petersonら, 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7; およびZimmermanら, 1999, Nucl. Med. Biol. 26(8):943-50（それらの各々の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
【０２４６】
もう1つの実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターを、予防または治療物質を封入するために使用するリポソームに融合または結合させることが可能である（例えば、Parkら, 1997, Can. Lett. 118:153-160; Lopes de Menezesら, 1998, Can. Res. 58:3320-30; Tsengら, 1999, Int. J. Can. 80:723-30; Crosassoら, 1997, J. Pharm. Sci. 86:832-9を参照されたい）。好ましい実施形態においては、PEGの脂質誘導体をリポソーム製剤内に含有させることによりリポソームの薬物動態およびクリアランスっを改善する（例えば、Allenら, 1991, Biochem Biophys Acta 1068:133-41; Huwylerら, 1997, J. Pharmacol. Exp. Ther. 282:1541-6を参照されたい）。
【０２４７】
予防または治療部分をタンパク質に結合させるための技術はよく知られている。そのような部分は、限定的なものではないがアルデヒド／シッフ連結、スルフヒドリル連結、酸不安定性連結、cis-アコニチル連結、ヒドラゾン連結、酵素分解性連結を含む当技術分野で公知の任意の方法によりタンパク質に結合させることが可能である（全般的には、Garnett, 2002, Adv. Drug Deliv. Rev. 53:171-216を参照されたい）。予防または治療部分を抗体に結合させるための技術はよく知られている。例えば、Arnonら, “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeldら(編), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstromら,“Antibodies For Drug Delivery”, in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinsonら(編), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pincheraら(編), pp. 475-506 (1985);“Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwinら(編), pp. 303-16 (Academic Press 1985); およびThorpeら, 1982, Immunol. Rev. 62:119-58を参照されたい。抗体をポリペプチド部分に融合または結合させるための方法は当技術分野で公知である。例えば、米国特許第5,336,603号、第5,622,929号、第5,359,046号、第5,349,053号、第5,447,851号および第5,112,946号; EP 307,434、EP 367,166; 国際公開番号WO 96/04388およびWO 91/06570; Ashkenaziら, 1991, PNAS 88:10535-10539; Zhengら, 1995, J. Immunol. 154:5590-5600; およびVilら, 1992, PNAS 89:11337-11341を参照されたい。そのような部分への抗体の融合は必ずしも直接的である必要はなく、リンカー配列を介して生じうる。そのようなリンカー分子は当技術分野で一般に公知であり、Denardoら, 1998, Clin Cancer Res. 4:2483-90; Petersonら, 1999, Bioconjug. Chem. 10:553; Zimmermanら, 1999, Nucl. Med. Biol. 26:943-50; Garnett, 2002, Adv. Drug Deliv. Rev. 53:171-216（それらの各々の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
【０２４８】
あるいは、Segal, 米国特許第4,676,980号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているとおりに、抗体ヘテロコンジュゲートを形成させるために、抗体を第2の抗体に結合させることが可能である。
【０２４９】
遊離物質と比較した場合のコンジュゲート物質の相対的効力は多数の要因に左右されうる。例えば、（例えば、エンドサイトーシスによる）細胞内への抗体-物質の取り込みの速度、該抗体からの該物質の遊離の速度／効率、細胞からの該物質の輸出の速度などすべてが、該物質の作用に影響を及ぼしうる。物質の標的化運搬に使用する抗体は、関連細胞型（すなわち、治療すべき障害に関連している細胞型）によりエンドサイトーシスされる能力に関して、当技術分野で公知の任意の方法によりアッセイすることが可能である。また、物質を抗体に結合させるために用いる連結のタイプは、標的細胞内での該物質の作用が妨げられないよう、当技術分野で公知の任意の方法によりアッセイすべきである。
【０２５０】
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター（例えば、それぞれEphA2またはEphrinA1ポリペプチドに免疫特異的に結合するEphA2またはEphrinA1抗体あるいはその断片）に結合させる予防もしくは治療部分または薬物は、感染の治療、管理または予防のための所望の予防または治療効果を達成するよう選択すべきである。臨床医または他の医療従事者は、どのような治療部分または薬物をEphA2/EphrinA1に結合させるかを決定する際には、以下の点を考慮すべきである：疾患の性質、疾患の重症度、および対象の状態。
【０２５１】
また、抗体は、イムノアッセイまたは標的抗原の精製に特に有用な固体支持体に結合させることが可能である。そのような固体支持体には、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミドゲル、ナイロン、ポリスチレン、ポリビニルクロリドまたはポリプロピレンが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２５２】
5.1.1.4  ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするポリヌクレオチド
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターは、前記第5.1.1節に開示されているポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドから産生されるポリペプチドを含む。1つの実施形態においては、本発明の抗体は、当技術分野でよく知られている又は本明細書に記載のアッセイの1以上においてEphA2および／またはEphrinA1の発現および／または活性をモジュレートするモノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドから産生されるEphA2またはEphrinA1モノクローナル抗体を含む。もう1つの実施形態においては、本発明の方法において使用するEphA2断片またはEphrinA1断片は、EphA2またはEphrinA1の断片をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドから産生されるポリペプチドを含む。ハイブリダイゼーションのための条件には、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件、例えば、6×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（SSC）中、約45℃でのフィルター結合DNAへのハイブリダイゼーション、およびそれに続く、0.2×SSC/0.1％ SDS中、約50〜65℃での1回以上の洗浄、高いストリンジェンシーの条件、例えば、6×SSC中、約45℃でのフィルター結合DNAへのハイブリダイゼーション、およびそれに続く、0.1×SSC/0.2％ SDS中、約60℃での1回以上の洗浄、または当業者に公知の他の任意のストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件（例えば、Ausubel, F. M.ら編, 1989 Current Protocols in Molecular Biology, vol. 1, Green Publishing Associates, Inc.ならびにJohn Wiley and Sons, Inc., NY, p. 6.3.1-6.3.6および2.10.3を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２５３】
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターには、本明細書に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。本明細書に記載のポリペプチド（例えば、本発明の抗体またはEphA2断片およびEphrinA1断片）をコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の任意の方法により入手し配列決定することが可能である。例えば、本発明の方法において使用するポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするポリヌクレオチドは、（例えば、Kutmeierら, 1994, BioTechniques 17:242に記載されているとおりに）化学合成オリゴヌクレオチドから合体されうる。簡潔に説明すると、その方法は、該ポリペプチドをコードする該配列の部分を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結、ならびにそれに続く、PCRによる連結オリゴヌクレオチドの増幅を含む。
【０２５４】
あるいは、本発明の方法において使用するポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするポリヌクレオチドは、適当な起源からの核酸から製造することが可能である。特定のポリペプチドをコードする核酸を含有するクローンが入手できないが該ポリペプチドの配列が公知である場合には、該ポリペプチドをコードする核酸を化学合成し、または適当な起源（例えば、抗体cDNAライブラリー、または所望のポリペプチドを発現する任意の組織もしくは細胞、例えば、本発明の抗体を発現するよう選択されたハイブリドーマ細胞、またはEphA2またはEphrinA1を発現する上皮および／もしくは内皮細胞から作製されたcDNAライブラリー、またはそのような組織もしくは細胞から単離された核酸、好ましくは、ポリA + RNA）から得ることが可能であり、これは、該配列の3'および5'末端にハイブリダイズしうる合成プライマーを使用するPCR増幅により、または個々の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングにより行うことが可能であり、それにより、例えば、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするcDNAライブラリーからのcDNAクローンを特定することが可能である。ついで、PCRにより得られた増幅された核酸を、当技術分野でよく知られた任意の方法を用いて、複製可能なクローニングベクター内にクローニングすることが可能である。
【０２５５】
本発明の方法において使用するポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターのヌクレオチド配列を決定したら、ヌクレオチド配列の操作のための当技術分野でよく知られた方法、例えば組換えDNA技術、部位特異的突然変異誘発、PCRなどを用いて（例えば、Sambrookら, 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NYおよびAusubelら編, 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY（それらの両方の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている技術を参照されたい）、該ヌクレオチド配列を操作して、異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得、例えばアミノ酸の置換、欠失および／または挿入を行うことが可能である。
【０２５６】
ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするヌクレオチド配列内に突然変異を導入するためには、アミノ酸置換をもたらす当業者に公知の標準的な技術、例えば部位特異的突然変異誘発およびPCR媒介突然変異誘発を用いることが可能である。好ましくは、該誘導体は、元のEphA2/EphrinA1モジュレーターと比較して15個未満のアミノ酸置換、10個未満のアミノ酸置換、5個未満のアミノ酸置換、4個未満のアミノ酸置換、3個未満のアミノ酸置換、または2個未満のアミノ酸置換を含む。好ましい実施形態においては、該誘導体は、1以上の推定非必須アミノ酸残基において行われた保存的アミノ酸置換を有する。
【０２５７】
本発明はまた、フレームワークまたは可変領域内に突然変異（例えば、1以上のアミノ酸置換）を有する任意のEphA2またはEphrinA1抗体のアミノ酸配列を含む抗体または抗体断片の使用を含む。好ましくは、これらの抗体内の突然変異は、それらが免疫特異的に結合する特定の抗原に対する該抗体のアビディティおよび／または親和性を維持または増強する。ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターとその結合相手との間の結合の度合をアッセイするためには、当業者に公知の標準的な技術（例えば、イムノアッセイまたはELISAアッセイ）を用いることが可能である。特定の実施形態においては、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターが抗体、EphA2抗原、EphrinA1抗原、EphA2融合タンパク質、EphrinA1融合タンパク質またはEphA2のドミナントネガティブフォームである場合には、適宜、EphA2またはEphrinA1への結合を評価することが可能である。
【０２５８】
5.1.2  ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターの組換え製造
ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーター（その誘導体、類似体または断片を含むが、これらに限定されるものではない）の組換え発現は、該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を必要とする。ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするポリヌクレオチドを得たら、当技術分野で良く知られた技術を用いる組換えDNA技術により、該ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターの製造のためのベクターを製造することができる。ポリペプチドコード配列と適当な転写および翻訳制御シグナルとを含有する発現ベクターを構築するためには、当業者に良く知られた方法を用いることができる。したがって、ポリヌクレオチドを発現させることによりタンパク質を製造するための方法が本明細書に記載されている。これらの方法には、例えば、in vitro組換えDNA技術、合成技術、およびin vivo遺伝的組換えが含まれる。したがって、本発明は、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。
【０２５９】
該発現ベクターを通常の技術により宿主細胞内に導入し、ついでトランスフェクトされた細胞を通常の技術により培養して、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターを得る。したがって、本発明は、機能しうる形で異種プロモーターに連結された、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含む。
【０２６０】
ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターを発現させるためには、種々の宿主-発現ベクター系を使用することが可能である（例えば、米国特許第5,807,715号を参照されたい）。そのような宿主-発現系は、関心のあるコード配列が産生され次いで精製されうるビヒクルを代表するものであるが、適当なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に本発明のポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをin situで発現しうる細胞をも代表する。これらには、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNAまたはコスミドDNA発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、E. coliおよびB. subtilis）、抗体コード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Saccharomyces Pichia）のような微生物、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードする配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、抗体コード配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Tiプラスミド）で形質転換された又は組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス, CaMV; タバコモザイクウイルス, TMV）に感染した植物細胞系、あるいは哺乳類細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス7.5Kプロモーター）を含有する組換え発現構築物を保持する哺乳類細胞系（例えば、COS、CHO、BHK、293、NS0および3T3細胞）が含まれるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、大腸菌（Escherichia coli）のような細菌細胞、およびより好ましくは、特に全組換えポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターの発現には真核細胞を、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターの発現に使用する。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間（major intermediate）初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組合されたチャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）のような哺乳類細胞は、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーター、特に抗体ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターのための有効な発現系である（Foeckingら, 1986, Gene, 45:101およびCockettら, 1990, Bio/Technology, 8: 2）。特定の実施形態においては、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーターまたは組織特異的プロモーターにより調節される。
【０２６１】
細菌系においては、発現されるポリペプチドに意図される用途に応じて多数の発現ベクターが有利に選択されうる。例えば、医薬組成物の製造のために大量のそのようなタンパク質を製造したい場合には、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を導くベクターが望ましいかもしれない。そのようなベクターには、大腸菌（E. coli）発現ベクターpUR278（Rutherら, 1983, EMBO, 12:1791）（この場合、融合タンパク質が産生されるよう、該抗体コード配列は個々に、lacZコード領域とインフレームで該ベクター内に連結されうる）、pINベクター（Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res., 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem., 24:5503-5509）などが含まれるが、これらに限定されるものではない。グルタチオン5-トランスフェラーゼ（GST）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させるためには、pGEXベクターを使用することも可能である。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、吸着、およびマトリックスグルタチオン-アガロースビーズへの結合、およびそれに続く、遊離グルタチオンの存在下での溶出により、細胞溶解細胞から容易に精製されうる。クローン化標的遺伝子産物がGST部分から遊離されうるよう、pGEXベクターは、トロンビンまたはXa因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計する。
【０２６２】
昆虫細胞系においては、外来遺伝子を発現させるためのベクターとして、Autographa californica核多角体病ウイルス（AcNPV）を使用する。該ウイルスはSpodoptera frugiperda細胞内で増殖する。該抗体コード配列を該ウイルスの非必須領域（例えば、多角体遺伝子）内に個々にクローニングし、AcNPVプロモーター（例えば、多角体プロモーター）の制御下に配置することができる。
【０２６３】
哺乳類宿主細胞においては、ウイルスに基づく多数の発現系を使用することが可能である。発現ベクターとしてアデノウイルスを使用する場合には、関心のあるポリペプチドコード配列をアデノウイルス転写／翻訳制御複合体（例えば、後期プロモーターおよび三成分リーダー配列）に連結することが可能である。ついでこのキメラ遺伝子をin vitroまたはin vivo組換えによりアデノウイルスゲノム内に挿入することが可能である。該ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域E1またはE3）内へ挿入は、感染宿主内で該ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターを発現しうる生存可能な組換えウイルスを与える（例えば、Logan & Shenk, 1984, PNAS, 81:3655-3659を参照されたい）。挿入されたポリペプチドコード配列の効率的な翻訳のためには、特異的開始シグナルも要求されうる。これらのシグナルはATG開始コドンおよび隣接配列を含む。さらに、全インサートの翻訳が保証されるためには、開始コドンは所望のコード配列のリーディングフレームと同調していなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然物および合成物の両方を含む種々のものに由来しうる。発現の効率は、適当な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含有させることにより向上させることが可能である（例えば、Bitterら, 1987, Methods in Enzymol., 153:516-544を参照されたい）。
【０２６４】
また、挿入配列の発現をモジュレートし又は所望の特定の様態で遺伝子産物を修飾しプロセシングする宿主細胞株を選択することが可能である。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は該タンパク質の機能に重要でありうる。種々の宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後プロセシングおよび修飾のための特徴的かつ特異的なメカニズムを有する。発現された外来タンパク質の適切な修飾およびプロセシングが保証されるよう、適当な細胞系または宿主系を選択することができる。この目的には、一次転写産物の適切なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化およびリン酸化のための細胞装置を有する真核宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳類宿主細胞には、CHO、VERY、BHK、HeLa、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20およびT47D、NSO（いずれの免疫グロブリン鎖をも内因的には産生しないマウス骨髄腫細胞系）、CRL7030およびHsS78Bst細胞が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２６５】
組換えタンパク質の長期的な高収率の産生のためには、安定な発現が好ましい。例えば、抗体分子を安定に発現する細胞系を操作することができる。ウイルス複製起点を含有する発現ベクターを使用する代わりに、適当な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）により制御されるDNAおよび選択マーカーで宿主細胞を形質転換することができる。該外来DNAの導入の後、操作された細胞を富化培地内で1〜2日間増殖させ、ついで選択培地と交換することができる。組換えプラスミド内の選択マーカーは該選択に対する耐性を付与し、細胞がその染色体内に該プラスミドを安定に組込んでフォーカスを形成するよう増殖するのを可能にし、そしてそれをクローニングし、細胞系にまで増殖させることが可能である。この方法は、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターを発現する細胞系を操作するために有利に用いられうる。そのような操作された細胞系は、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターと直接的または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価において特に有用かもしれない。
【０２６６】
限定的なものではないが単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wiglerら, 1977, Cell, 11:223）、グルタミンシンテターゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48:202）およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Lowyら, 1980, Cell, 22:8-17）遺伝子を含む多数の選択系をそれぞれtk-、gs-、hgprt-またはaprt-細胞において使用することが可能である。また、以下の遺伝子に関する選択の基礎として、代謝拮抗物質耐性を用いることが可能である：dhfr, これはメトトレキセートに対する耐性を付与する（Wiglerら, 1980, PNAS 77:357およびO'Hareら, 1981, PNAS 78:1527）；gpt, これはミコフェノール酸に対する耐性を付与する（Mulligan & Berg, 1981, PNAS 78:2072）；neo, これはアミノグリコシドG-418に対する耐性を付与する（WuおよびWu, 1981, Biotherapy, 3:87; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 32:573; Mulligan, 1993, Science, 260:926; ならびにMorganおよびAnderson, 1993, Ann. Rev. Biochem., 62:191; May, 1993, TIB TECH 11:155-）、およびhygro, これはハイグロマイシンに対する耐性を付与する（Santerreら, 1984, Gene, 30:147）。所望の組換えクローンを選択するためには、組換えDNA技術の当技術分野で一般に公知の方法を常套的に適用することが可能であり、そのような方法は、例えば、Ausubelら(編), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); ならびにChapters 12および13, Dracopoliら(編), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapinら, 1981, J. Mol. Biol., 150:1（それらの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。
【０２６７】
ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターの発現レベルはベクターの増幅により増加させることが可能である（総説としては、BebbingtonおよびHentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3. (Academic Press, New York, 1987)を参照されたい）。ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターを発現するベクター系内のマーカーが増幅可能な場合には、宿主細胞の培養内に存在するインヒビターのレベルの増加はマーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅領域はポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーター遺伝子と結合しているため、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターの産生も増加する（Crouseら, 1983, Mol. Cell. Biol., 3:257）。
【０２６８】
本発明の2つの発現ベクター（第1ベクターは重鎖由来ポリペプチドをコードし、第2ベクターは軽鎖由来ポリペプチドをコードする）で宿主細胞をコトランスフェクトすることが可能である。それらの2つのベクターは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同じ選択マーカーを含有しうる。あるいは、重鎖および軽鎖の両方のポリペプチドをコードしておりそれらを発現しうる単一のベクターを使用することが可能である。そのような場合には、過剰な毒性遊離重鎖を避けるために、該軽鎖を該重鎖の前に配置すべきである（Proudfoot, 1986, Nature, 322:52およびKohler, 1980, PNAS 77:2197）。該重鎖および軽鎖のコード配列はcDNAまたはゲノムDNAを含みうる。
【０２６９】
本発明のポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターが組換え発現により産生されたら、ポリペプチドの精製のための当技術分野で公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティーおよびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術により、それを精製することができる。さらに、ポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターを、精製を促進する本明細書に記載の又は当技術分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合させることが可能である。
【０２７０】
抗体である本発明のポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を既に含むベクターを使用して発現させることが可能である（例えば、米国特許第5,919,900号、第5,747,296号、第5,789,178号、第5,591,639号、第5,658,759号、第5,849,522号、第5,122,464号、第5,770,359号、第5,827,739号; 国際特許公開番号WO 89/01036、WO 89/10404; Bebbingtonら, 1992, BioTechnology 10:169を参照されたい）。抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体または重鎖全体と軽鎖全体との両方の発現のためのそのようなベクター内にクローニングすることが可能である。二本鎖抗体の発現のための好ましい実施形態においては、重鎖と軽鎖との両方をコードするベクターを免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞内で共発現させることが可能である。
【０２７１】
特定の実施形態においては、本発明のポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーター（例えば、EphA2またはEphrinA1ペプチド、ポリペプチド、タンパク質または融合タンパク質）の発現を構成的プロモーターにより調節する。もう1つの実施形態においては、本発明のポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーター（例えば、EphA2またはEphrinA1ペプチド、ポリペプチド、タンパク質または融合タンパク質）の発現を誘導プロモーターにより調節する。もう1つの実施形態においては、本発明のポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーター（例えば、EphA2またはEphrinA1ペプチド、ポリペプチド、タンパク質または融合タンパク質）の発現を組織特異的プロモーターにより調節する。例えば、EphA2をHoxa1およびHoxb1 Homeobox（ホメオボックス）転写因子（例えば、Chenら, 1998, J. Biol. Chem. 273:24670-24675（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい）により調節し、EphrinA1をHomeobox（ホメオボックス）転写因子HoxB3（Myersら, 2000, J. Cell Biol. 148:343-351（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい））により調節する。
【０２７２】
1つの実施形態においては、本発明の方法は、EphA2/EphrinA1モジュレーターをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む組成物の投与を含み、該核酸は、EphA2/EphrinA1モジュレーターを発現する発現ベクターの一部分である。
【０２７３】
5.1.3  ポリヌクレオチドEphA2/EphrinA1モジュレーター
本発明のポリペプチドEphA2/EphrinA1モジュレーターに加えて、核酸分子を本発明の方法において使用することが可能である。1つの実施形態においては、核酸分子EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2発現またはリガンド（例えば、EphrinA1）結合に関する利用能を増加させるためにEphA2の全体または断片をコードしうる。もう1つの実施形態においては、核酸分子EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2への結合に利用可能なEphrinA1の量を増加させるためにEphrinA1の全体または断片をコードしうる。核酸分子を使用してEphA2またはEphrinAの発現を増強するためには、当技術分野で公知の任意の方法を用いることが可能である。もう1つの実施形態においては、核酸EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphrinA1へのリガンド結合に利用可能な内因性EphA2の量を減少させる。さらにもう1つの実施形態においては、核酸分子EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2への結合に利用可能なEphrinA1の量を減少させる。EphA2またはEphrinA1の発現を低下させるためには、限定的なものではないがアンチセンスおよびRNA干渉技術を含む当技術分野で公知の任意の方法を本発明において用いることが可能である。したがって、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphrinA1の発現またはEphA2結合に関する利用能を増加または減少させるのに役立つ物質、およびEphA2の発現または内因性EphA2リガンド（好ましくはEphrinA1）への結合に関する利用能を増加または減少させるのに役立つ物質を含む。
【０２７４】
5.1.3.1  アンチセンス
本発明は、EphA2およびEphrinA1アンチセンス核酸分子、すなわち、EphA2またはEphrinA1をコードするセンス核酸の全部または一部に相補的な分子、二本鎖EphA2またはEphrinA1のコード鎖に相補的な分子、EphA2またはEphrinA1 mRNA配列に相補的なcDNA分子を含む。EphA2およびEphrinA1アンチセンス核酸分子は、例えばGenBankデータベースにおいて開示されているヒトEphA2およびEphrinA1 mRNA配列を使用して、当業者に公知の任意の方法により製造することが可能である。
【０２７５】
特定の実施形態においては、EphA2アンチセンス核酸分子は、GenBank Accession No. NM 004431.2において開示されているヒトEphA2 mRNA配列を使用して、ヒトEphA2 mRNA配列を使用して製造することが可能である。EphA2アンチセンス核酸分子の具体例は、Chengら, 2002, Mol. Cancer Res. 1:2-11およびCarles-Kinchら, 2002, Cancer Res. 62:2840-2847（それらの両方の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）にも開示されている。特定の実施形態においては、EphA2アンチセンス核酸分子は、ヒトEphA2のコード鎖またはセンス鎖によりコードされるヒトEphA2の以下の領域（またはその一部分）のいずれかに相補的でありうる：リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、第1フィブロネクチンIII型ドメイン、第2フィブロネクチンIII型ドメイン、チロシンキナーゼドメインまたはSAMドメイン。
【０２７６】
特定の実施形態においては、EphA2アンチセンス核酸分子は5'-CCAGCAGTACCACTTCCTTGCCCTGCGCCG-3'（配列番号40）および／または5'-GCCGCGTCCCGTTCCTTCACCATGACGACC-3'（配列番号41）ではない。もう1つの特定の実施形態においては、EphA2アンチセンス核酸分子は5'-CCAGCAGTACCGCTTCCTTGCCCTGCGGCCG-3'（配列番号42）および／または5'-GCCGCGTCCCGTTCCTTCACCATGACGACC-3'（配列番号43）ではない。ある実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはEphA2アンチセンス核酸分子ではない。
【０２７７】
好ましい実施形態においては、本発明のアンチセンスEphA2/EphrinA1モジュレーターはヒトEphrinA1アンチセンス核酸分子である。特定の実施形態においては、ヒトEphrinA1アンチセンス核酸分子は、GenBank Accession No. BC032698において開示されているヒトEphrinA1 mRNA配列を使用して製造することが可能である。EphrinA1アンチセンス核酸分子の具体例は、例えばPotlaら, 2002, Cancer Lett. 175(2):187-95（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。特定の実施形態においては、本発明のEphrinA1アンチセンス核酸分子は、Potlaら, 2002, Cancer Lett. 175(2):187-95に開示されているEphrinA1アンチセンス核酸分子ではない。ある実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターはEphrinA1アンチセンス核酸分子ではない。
【０２７８】
アンチセンス核酸はセンス核酸に水素結合しうる。アンチセンス核酸はコード鎖全体またはその一部のみ（例えば、タンパク質コード領域（またはオープンリーディングフレーム）の全部または一部）に相補的でありうる。アンチセンス核酸分子は、本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列のコード鎖の非コード領域の全部または一部に対してアンチセンスでありうる。非コード領域（「5'および3'非翻訳領域」）は、コード領域に隣接しアミノ酸には翻訳されない5'および3'配列である。
【０２７９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約5、10、15、20、25、30、35、40、45または50ヌクレオチド長でありうる。本発明のアンチセンス核酸は、当技術分野で公知の方法を用いる化学合成および酵素連結反応により構築することが可能である。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチドを使用して化学合成することが可能であり、あるいは、該分子の生物学的安定性を増強するよう又はアンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成される二本鎖の物理的安定性を増強するよう設計された様々に修飾（例えば、ホスホロチオアート修飾）されたヌクレオチド、例えばホスホロチオアート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用することが可能である。あるいは、該アンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス配向でサブクローニングされている発現ベクターを使用して生物学的に製造することも可能である（すなわち、挿入された核酸から転写されるRNAは、関心のある標的核酸、すなわちEphrinA1に対してアンチセンス配向のものとなる）。
【０２８０】
本発明のアンチセンス核酸分子は、典型的には、対象に投与されるか又はin situで生成し、それにより、それらは、本発明の選択されたポリペプチドをコードする細胞mRNAおよび／またはゲノムDNAにハイブリダイズまたは結合して、例えば転写および／翻訳の抑制により発現を抑制する。ハイブリダイゼーションは、安定な二本鎖形成する通常のヌクレオチド相補性によるもの、あるいは例えば、DNA二本鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二本鎖の主溝における特異的相互作用によるものでありうる。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の一例には、組織部位における直接的な注射が含まれる。あるいは、アンチセンス核酸分子を、選択された細胞を標的化するために修飾し、ついで全身投与することが可能である。例えば、全身投与の場合には、選択された細胞表面上で発現される受容体または抗原にアンチセンス分子が特異的に結合するよう、例えば、細胞表面受容体または抗原に結合するペプチドまたは抗体にアンチセンス核酸分子を連結させることにより、アンチセンス分子を修飾することが可能である。また、アンチセンス核酸分子は、本明細書に記載のベクターを使用して細胞に運搬することが可能である。アンチセンス分子の十分な細胞内濃度を得るためには、強力なpol IIまたはpol IIIプロモーターの制御下にアンチセンス核酸分子が配置されたベクター構築物が好ましい。
【０２８１】
本発明のアンチセンス核酸分子はαアノマー核酸分子である。αアノマー核酸分子は、相補的RNAと特異的二本鎖ハイブリッドを形成し、この場合、通常のβ単位とは異なり、それらの鎖は互いに平行に伸びる（Gaultierら, 1987, Nucleic Acids Res. 15:6625）。アンチセンス核酸分子はまた、2'-o-メチルリボヌクレオチド（Inoueら, 1987, Nucleic Acids Res. 15:6131）またはキメラRNA-DNA類似体（Inoueら, 1987, FEBS Lett. 215:327）を含みうる。
【０２８２】
5.1.3.2  RNA干渉
ある実施形態においては、EphA2発現を低下させるためにRNA干渉（RNAi）分子を使用する。他の実施形態においては、EphrinA1発現を低下させるためにRNAi分子を使用する。RNA干渉（RNAi）は、二本鎖RNA（dsRNA）が、それ自身の配列に対応する遺伝子の発現を抑制しうることと定義される。RNAiは、転写後遺伝子サイレンシングまたはPTGSとも称される。細胞の細胞質内で通常見出される唯一のRNA分子は一本鎖mRNAの分子であるため、細胞は、dsRNAを認識し21〜25塩基対含有断片（二本鎖らせんの約2ターン）に切断する酵素を有する。該断片のアンチセンス鎖はセンス鎖から十分に分離していて、それは内因性細胞mRNA（例えば、Genbank Accession No. BC032698におけるヒトEphrinA1 mRNA配列）の分子上の相補的センス配列にハイブリダイズする。このハイブリダイゼーションは該二本鎖領域内のmRNAの切断を誘発して、それがポリペプチドに翻訳されうることを妨げる。したがって、特定の遺伝子に対応するdsRNAの導入は、特定の組織および／または選択された時点において、細胞自身によるその遺伝子の発現をノックアウトする。
【０２８３】
哺乳類における遺伝子発現を妨げるために、二本鎖（ds）RNAを使用することが可能である（Wianny & Zernicka-Goetz, 2000, Nature Cell Biology 2: 70-75（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする））。dsRNAは、EphrinA1のヌル突然変異体と同じ表現型を得るために、EphrinA1の機能の抑制性RNAまたはRNAiとして使用される（Wianny & Zernicka-Goetz, 2000, Nature Cell Biology 2: 70-75）。ある実施形態においては、細胞内でRNAi媒介性dsDNAを発現させるために、dsDNAをコードするdsRNA（例えば、ヘアピン構造としてのもの）を使用する。
【０２８４】
特定の実施形態においては、GenBankデータベースにおいて開示されているEphA2 mRNA配列（例えば、Genbank Accession No. NM 00443 1.2のヒトEphA2 mRNA配列）を使用して、EphA2 RNAi分子を作製することが可能である。他の実施形態においては、GenBankデータベースにおいて開示されているEphrinA1 mRNA配列（例えば、Genbank Accession No. BC032698のヒトEphrinA1 mRNA配列）を使用して、EphrinA1 RNAi分子を作製することが可能である。
【０２８５】
5.1.3.3  EphA2/EphrinA1モジュレーターとしてのアプタマー
特定の実施形態においては、本発明はEphA2およびEphrinA1のアプタマーを提供する。当技術分野で公知のとおり、アプタマーは、特定の分子標的（例えば、本明細書に記載のEphA2もしくはEphrinA1タンパク質、EphA2もしくはEphrinA1ポリペプチドおよび／またはEphA2もしくはEphrinA1エピトープ）に強固に結合する核酸（例えば、RNA、DNA）から構成される高分子である。個々のアプタマーは直鎖状ヌクレオチド配列により示されることが可能であり、典型的には約15〜60ヌクレオチド長である。アプタマーにおけるヌクレオチドの鎖は、該分子を複雑な三次元形状へと折り畳む分子内相互作用を形成し、この三次元形状は、該アプタマーがその標的分子の表面に強固に結合するのを可能にする。すべての可能なヌクレオチド配列の世界に存在する分子形状の莫大な多様性を考えると、タンパク質および小分子を含む多種多様な分子標的に対するアプタマーが得られうる。アプタマーは、高い特異性に加えて、それらの標的に対する非常に高い親和性（例えば、タンパク質に関してピコモルから低ナノモル範囲の親和性）を有する。アプタマーは化学的に安定であり、活性の喪失を伴うことなく煮沸または凍結されうる。それらは合成分子であるため、それらは種々の修飾に適合し、これは、特定の用途のためのそれらの機能を最適化しうる。in vivo用途の場合、アプタマーは、血中の酵素による分解に対するそれらの感受性を劇的に減少させるために修飾されうる。また、アプタマーの修飾は、それらの生物分布または血漿中滞留時間を改変するためにも用いられうる。
【０２８６】
EphA2もしくはEphrinA1またはそれらの断片に結合しうるアプタマーの選択は、当技術分野で公知の方法により達成されうる。例えば、アプタマーは、SELEX（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment）法（TuerkおよびGold, 1990, Science 249:505-510（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする））を用いて選択されうる。SELEX法においては、核酸分子の大きなライブラリー（例えば、1015個の異なる分子）を作製し、および／または標的分子（例えば、本明細書に記載のEphA2もしくはEphrinA1タンパク質、EphA2もしくはEphrinA1ポリペプチドおよび／またはEphA2もしくはEphrinA1エピトープ）でスクリーニングする。標的分子をヌクレオチド配列のライブラリーと共に或る時間インキュベートする。ついで、該混合物中の未結合分子からアプタマー標的分子を物理的に単離するためには、いくつかの方法が用いられうる。未結合分子は廃棄されうる。ついで、標的分子に対して最高の親和性を有するアプタマーを標的分子から精製し、酵素的に増幅して、標的分子に結合しうるアプタマーに関して実質的に富化された分子の新たなライブラリーを得ることが可能である。ついで該富化ライブラリーを使用して、選択、分配および増幅の新たなサイクルを開始させることが可能である。この選択、分配および増幅プロセスの5〜15サイクルの後、該ライブラリーは、標的分子に強固に結合する少数のアプタマーへと縮小される。ついで該混合物中の個々の分子を単離し、それらのヌクレオチド配列を決定し、結合親和性および特異性に関するそれらの特性を測定し比較する。ついで、標的結合および／またはアプタマー構造に寄与しないヌクレオチドを排除するために、単離されたアプタマーをさらに改良することが可能である（すなわち、それらのコア結合ドメインへとトランケート化されたアプタマー）。アプタマー技術の総説としては、例えば、Jayasena, 1999, Clin. Chem. 45:1628-1650を参照されたい（その全教示を参照により本明細書に組み入れることとする）。
【０２８７】
特定の実施形態においては、本発明のアプタマーは、本発明の抗体に関して本明細書に記載されている結合特異性および／または機能的活性を有する。したがって、例えば、ある実施形態においては、本発明は、本発明の抗体に関して本明細書に記載されているのと同じ又は類似した結合特異性（例えば、本明細書に記載のEphA2もしくはEphrinA1ポリペプチド、脊椎動物EphA2もしくはEphrinA1ポリペプチド、脊椎動物EphA2もしくはEphrinA1ポリペプチドのエピトープ領域（例えば、本発明の抗体が結合するEphA2またはEphrinA1のエピトープ領域）に対する結合特異性）を有するアプタマーに関する。特定の実施形態においては、本発明のアプタマーはEphA2またはEphrinA1ポリペプチドに結合し、EphA2またはEphrinA1ポリペプチドの活性の1以上を抑制しうる。
【０２８８】
5.1.4  EphA2/EphrinA2モジュレーターとしてのワクチン
特定の実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphA2および／またはEphrinA1ワクチンである。本明細書中で用いる「EphA2ワクチン」なる語は、EphA2を過剰発現する細胞に対する免疫応答を惹起または媒介する任意の試薬を意味する。ある実施形態においては、EphA2ワクチンは、本発明のEphA2抗原ペプチド、EphA2抗原ペプチドのための発現ビヒクル（例えば、裸の核酸またはウイルスまたは細菌ベクターまたは細胞）（例えば、EphA2抗原ペプチドを運搬するもの）、または本発明のEphA2抗原ペプチドで感作されたT細胞もしくは抗原提示細胞（例えば、樹状細胞またはマクロファージ）である。本明細書中で用いる「EphA2抗原ペプチド」および「EphA2抗原ポリペプチド」なる語は、EphA2ポリペプチド、またはEphA2のB細胞エピトープもしくはT細胞エピトープの1以上を含むその断片、類似体もしくは誘導体を意味する。EphA2ポリペプチドは任意の種に由来するものでありうる。ある実施形態においては、EphA2ポリペプチドはEphA2のプロセシングされた成熟形態を意味する。他の実施形態においては、EphA2ポリペプチドはEphA2の未熟形態を意味する。EphA2ワクチンの説明としては、例えば、2004年3月26日付け出願の米国仮特許出願第60/556,601号（発明の名称“EphA2 Vaccines”）、2004年8月18日付け出願の米国仮特許出願第60/602,588号（発明の名称“EphA2 Vaccines”）（Attorney Docket No. 10271-136-888）、2004年10月1日付け出願の米国仮特許出願第60/615,548号（発明の名称“EphA2 Vaccines”）（Attorney Docket No. 10271-143-888）、2004年10月7日付け出願の米国仮特許出願第60/617,564号)（発明の名称“EphA2 Vaccines”）（Attorney Docket No. 10271-148-888）および2004年10月15日付け出願の国際出願番号PCT/US04/34693（発明の名称“EphA2 Vaccines”）（Attorney Docket No. 10271-148-228）（それらのそれぞれの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。
【０２８９】
特定の実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターはEphrinA1ワクチンである。本明細書中で用いる「EphrinA1ワクチン」なる語は、EphrinA1発現細胞上のEphrinA1に対する免疫応答を惹起または媒介する任意の試薬を意味する。ある実施形態においては、EphrinA1ワクチンは、本発明のEphrinA1抗原ペプチド、EphrinA1抗原ペプチドのための発現ビヒクル（例えば、裸の核酸またはウイルスまたは細菌ベクターまたは細胞）（例えば、EphrinA1抗原ペプチドを運搬するもの）、または本発明のEphrinA1抗原ペプチドで感作されたT細胞もしくは抗原提示細胞（例えば、樹状細胞またはマクロファージ）である。本明細書中で用いる「EphrinA1抗原ペプチド」および「EphrinA1抗原ポリペプチド」なる語は、EphrinA1ポリペプチド、またはEphrinA1のB細胞エピトープもしくはT細胞エピトープの1以上を含むその断片、類似体もしくは誘導体を意味する。EphrinA1ポリペプチドは任意の種に由来するものでありうる。ある実施形態においては、EphrinA1ポリペプチドはEphrinA1のプロセシングされた成熟形態を意味する。他の実施形態においては、EphrinA1ポリペプチドはEphrinA1の未熟形態を意味する。
【０２９０】
したがって、本発明は、EphA2ワクチンであるEphA2/EphrinA1モジュレーターを提供する。特定の実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、EphA2またはEphrinA1を過剰発現する細胞に対する細胞性免疫応答、体液性応答またはそれらの両方を惹起または媒介しうるEphA2またはEphrinA1抗原ペプチドを発現するEphA2および／またはEphrinA1抗原ペプチド発現ビヒクルである。免疫応答が細胞性免疫応答である場合には、それはTc、Th1またはTh2免疫応答でありうる。好ましい実施形態においては、免疫応答はTh2細胞性免疫応答である。もう1つの好ましい実施形態においては、EphA2/EphrinA1抗原ペプチド発現ビヒクルにより発現されるEphA2またはEphrinA1抗原ペプチドは、感染に関与するEphA2および／またはEphrinA1発現細胞に対する免疫応答を惹起しうるEphA2またはEphrinA1抗原ペプチドである。
【０２９１】
特定の実施形態においては、EphA2および／またはEphrinA1抗原発現ビヒクルは、EphA2および／またはEphrinA1抗原ペプチドを発現する微生物である。もう1つの特定の実施形態においては、EphA2および／またはEphrinA1抗原発現ビヒクルは弱毒化細菌である。発現ビヒクルとして本発明において使用しうる細菌の非限定的な例には、Listeria monocytogenes、限定的なものではないが例えばBorrelia burgdorferi、Brucella melitensis、Escherichia coli、腸管組織侵入性Escherichia coli、Legionella pneumophila、Salmonella typhi、Salmonella typhimurium、Shigella spp.、Streptococcus spp.、Treponema pallidum、Yersinia enterocohtica、Listeria monocytogenes、Mycobacterium avium、Mycobacterium bovis、Mycobacterium tuberculosis、BCG、Mycoplasma hominis、Rickettsiae quintana、Cryptococcus neoformans、Histoplasma capsulatum、Pneumocystis carnii、Eimeria acervulina、Neospora caninum、Plasmodium falciparum、Sarcocystis suihominis、Toxoplasma gondii、Leishmania amazonensis、Leishmania major、Leishmania mexacana、Leptomonas karyophilus、Phytomonas spp.、Trypanasoma cruzi、Encephahtozoon cuniculi、Nosema helminthorum、Unikaryon legeriが含まれる。特定の実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターワクチンは、EphA2および／またはEphrinA1抗原ペプチドを発現する、Listeriaに基づくワクチンである。もう1つの実施形態においては、EphA2および／またはEphrinA1抗原ペプチドを発現する、Listeriaに基づくワクチンは、弱毒化されている。特定の実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターワクチンは、Listeriaに基づくものではなく、あるいはEphA2に基づくものでもない。
【０２９２】
もう1つの実施形態においては、EphA2および／またはEphrinA1抗原ペプチド発現ビヒクルは、EphA2および／またはEphrinA1抗原ペプチドを発現するウイルスである。発現ビヒクルとして本発明において使用しうるウイルスの非限定的な例には、RNAウイルス（例えば、一本鎖RNAウイルスおよび二本鎖RNAウイルス）、DNAウイルス（例えば、二本鎖DNAウイルス）、包膜ウイルスおよび非包膜ウイルスが含まれる。EphA2および／またはEphrinA1抗原ペプチド発現ビヒクルとして有用なウイルスの他の非限定的な例には、レトロウイルス（限定的なものではないがアンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスまたは単純ヘルペスウイルスが含まれる。ヒト対象への投与のための好ましいウイルスは弱毒化ウイルスである。ウイルスは、例えば、該ウイルスを突然変異原、例えば紫外線照射または化学的突然変異原にさらすことにより、複数の継代および／もしくは非許容宿主における継代により、ならびに／または該ウイルスのビルレンスおよび病原性を減弱するために該ウイルスを遺伝的に改変することにより弱毒化されうる。
【０２９３】
微生物は、当技術分野でよく知られた多数の技術により得ることが可能である。例えば、微生物の抗生物質感受性株を選択することが可能であし、微生物を突然変異させることが可能であり、ビルレンス因子を欠く突然変異体を選択することが可能であり、改変された細胞壁リポ多糖を有する微生物の新規株を構築することが可能である。ある実施形態においては、宿主細胞、特にマクロファージおよび好中球における微生物の生存を確保するビルレンス因子をコードするDNA配列を例えば相同組換え技術および化学的またはトランスポゾン突然変異誘発により欠失させ又は破壊することにより、微生物を弱毒化することが可能である。これらの研究されているビルレンス因子のうちの全てというわけではないがそれらの多くがマクロファージにおける生存に関連していて、これらの因子はストレス、例えば酸性化によりマクロファージにおいて特異的に発現され、あるいは特異的宿主細胞応答、例えばマクロ飲作用の誘導に用いられる（Fieldsら, 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:5189-5193）。細菌ビルレンス因子には、例えば、細胞溶解素、デフェンシン耐性遺伝子座、DNA K、線毛、GroEL、inv遺伝子座、リポタンパク質、LPS、リソソーム融合抑制、マクロファージ生存遺伝子座、酸化ストレス応答遺伝子座、pho遺伝子座（例えば、PhoPおよびPhoQ）、pho活性化遺伝子（pag、例えばpagBおよびpagC）、phoPおよびphoQ調節遺伝子（prg）、ポーリン、血清耐性ペプチド、ビルレンスプラスミド（例えば、spvB、traTおよびty2）が含まれる。
【０２９４】
微生物の弱毒化のためのさらにもう1つの方法は、該微生物の毒性をもたらす該微生物の置換基を修飾することである。例えば、リポ多糖（LPS）または内毒素は、主として、細菌敗血症の病的作用を引き起こす。この応答を引き起こすLPSの成分はリピドA（LA）である。LAの毒性作用の排除または軽減は弱毒化細菌を与える。なぜなら、1）患者における敗血症ショックのリスクが減少し、2）より高いレベルの細菌EphA2またはEphrinA1抗原ペプチド発現ビヒクルが許容されうるからである。
【０２９５】
Rhodobacter (Rhodopseudomonas) sphaeroidesおよびRhodobacter capsulatusはそれぞれ、実験動物において敗血症ショック応答を惹起せずさらには内毒素アンタゴニストであるモノホスホリルリピドA（MLA）を有する（Loppnowら, 1990, Infect. Immun. 58:3743-3750; Takaymaら, 1989, Infect. Immun. 57:1336-1338）。Rhodobacter以外のグラム陰性細菌を遺伝的に改変してMLAを得、それによりその敗血症ショック誘導能を低下させることが可能である。
【０２９６】
細菌のLPSを改変するためのさらにもう1つの例はLPS生合成経路内への突然変異の導入を含む。多数の細菌におけるLPS生合成における幾つかの酵素的段階およびそれらを制御する遺伝子座が特定されており、LPS経路における遺伝的および酵素的障害を有する幾つかの突然変異細菌株が単離されている。ある実施形態においては、該LPS経路突然変異体はfirA突然変異体である。firAは、内毒素生合成における第3段階を調節する酵素UDP-3-O(R-30-ヒドロキシミリストイル)-グリコシアミン N-アシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子である（Kelleyら, 1993, J. Biol. Chem. 268:19866-19874）。
【０２９７】
弱毒化表現型を確保し非弱毒化表現型への復帰を回避するための方法として、細菌が2以上の様態で弱毒化されるよう、細菌を操作することが可能である。例えば、リピドA産生経路における突然変異、および1以上の栄養素または代謝産物に関する栄養要求性への1以上の突然変異（例えば、ウラシル生合成、プリン生合成およびアルギニン生合成）を施すことが可能である。
【０２９８】
EphA2またはEphrinA1抗原ペプチドは、好ましくは、異種遺伝子発現カセットを使用して、細菌のような微生物において発現される。異種遺伝子発現カセットは、典型的には、以下の秩序だった要素から構成される：（1）原核生物プロモーター、（2）シャインダルガルノ配列、（3）分泌シグナル（シグナルペプチド）、および（4）異種遺伝子。場合によっては、異種遺伝子発現カセットはまた、細菌染色体内への安定な組込みのための構築物中の転写終結配列を含有しうる。必ずしも必要なわけではないが、異種遺伝子発現カセットにおける最終的な秩序だった要素として転写終結配列を加えることは、読み過し転写により隣接遺伝子の発現の調節に対する極性効果を妨げうる。
【０２９９】
微生物EphA2またはEphrinA1ワクチンへの発現ベクターの導入は、好ましくは、微生物により産生されるEphA2またはEphrinA1ペプチドおよび場合によってはプロドラッグ変換酵素が微生物により分泌されるよう設計される。多数の細菌分泌シグナルが当技術分野でよく知られており、本発明の組成物および方法において使用されうる。本発明の或る実施形態においては、細菌EphA2抗原ペプチド発現ビヒクルは、抗生物質に対して、より感受性となるよう、および／または化合物の投与に際して細胞死を受けるよう、操作される。本発明の他の実施形態においては、細菌EphA2またはEphrinA1抗原ペプチド発現ビヒクルは、標的EphA2またはEphrinA1発現細胞に自殺遺伝子を運搬するよう操作される。これらの自殺遺伝子は、プロドラッグ変換酵素、例えば単純ヘルペスチミジンキナーゼ（TK）および細菌シトシンデアミナーゼ（CD）を含む。TKは無毒性基質アシクロビルおよびガンシクロビルをリン酸化して、ゲノムDNA内へのそれらの取り込みを介してそれらを毒性にする。CDは無毒性5-フルオロシトシン（5-FC）を5-フルオロウラシル（5-FU）に変換し、これはRNA内へのその取り込みを介して毒性となる。本発明に含まれるプロドラッグ変換酵素の追加的な例には、マイトマイシンCおよびポルフィロマイシンに作用するシトクロムp450 NADPHオキシドレダクターゼが含まれる（Murrayら, 1994, J. Pharmacol. Exp. Therapeut. 270:645-649）。使用しうる他の典型的なプロドラッグ変換酵素には、カルボキシペプチダーゼ、ベータ-グルクロニダーゼ、ペニシリン-V-アミダーゼ、ペニシリン-G-アミダーゼ、ベータ-ラクタマーゼ、ベータ-グルコシダーゼ、ニトロレダクターゼおよびカルボキシペプチダーゼAが含まれる。
【０３００】
グラム陽性微生物と共に使用しうる典型的な分泌シグナルには、SecA（Sadaieら, 1991, Gene 98:101-105）、SecY（Suhら, 1990, Mol. Microbiol. 4:305-314）、SecE（Jeongら, 1993, Mol. Microbiol. 10:133-142）、FtsYおよびFfH（PCT/NL 96/00278）ならびにPrsA（国際公開番号WO 94/19471）が含まれる。グラム陰性微生物と共に使用しうる典型的な分泌シグナルには、例えばSecBおよび熱ショックタンパク質のような可溶性細胞質タンパク質のもの、周辺膜結合タンパク質SecAのもの、ならびに内在性膜タンパク質SecY、SecE、SecDおよびSecFのものが含まれる。
【０３０１】
EphA2またはEphrinA1抗原ペプチドおよび場合によってはプロドラッグ変換酵素の発現を駆動するプロモーターは、該ペプチドまたは酵素が連続的に発現されるよう構成的であることが可能あり、あるいは、誘導分子の存在下においてのみ該ペプチドまたは酵素が発現されるよう誘導性であることが可能であり、あるいは、ある細胞型においてのみ該ペプチドまたは酵素が発現されるよう細胞型特異的制御性であることが可能である。例えば、適当な誘導性プロモーターは、細菌「SOS」応答を引き起こすプロモーター（Friedbergら, In: DNA Repair and Mutagenesis, pp. 407-455, Am. Soc. Microbiol. Press, 1995）でありうる。そのようなプロモーターは、化学療法アルキル化剤、例えば、ヒトにおける使用が承認されているマイトマイシン（Odaら, 1985, Mutation Research 147:219-229; Nakamuraら, 1987, Mutation Res. 192:239-246; Shimdaら, 1994, Carcinogenesis 15:2523-2529）を含む多数の物質により誘導可能である。このグループに属するプロモーターエレメントには、umuC、sulAなど（Shinagawaら, 1983, Gene 23:167-174; Schnarrら, 1991, Biochemie  73:423-431）が含まれる。sulAプロモーターは、sulA遺伝子のATGおよびそれに続く27ヌクレオチドおよびATGの上流の70ヌクレオチドを含む（Cole, 1983, Mol. Gen. Genet. 189:400-404）。したがって、それは、外来遺伝子の発現、および開始コドンを欠く配列の場合の遺伝子融合体の作製の両方において有用である。
【０３０２】
ある実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターワクチンは微生物を含まない。
【０３０３】
5.2  予防／治療方法
本発明は、感染（特に細胞内感染）を治療、管理、予防および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、感染（特に細胞内感染）を治療、管理、予防および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を投与し1以上の他の療法（そのような療法の具体例としては後記第5.2.6節を参照されたい）を行なうことを含む方法を提供する。好ましくは、そのような他の療法は、病原体感染の治療、予防、管理および／または改善において有用であり、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターと併用して使用される。病原体の非限定的な例には、ウイルス、細菌、原生動物および真菌が含まれる。好ましい実施形態においては、病原体は細胞内病原体である。好ましい実施形態においては、病原体に感染した細胞は、上昇したEphA2発現を有する。
【０３０４】
本明細書に記載されている投与量および投与頻度は、「有効量」、「治療的有効」および「予防的有効」なる語に包含される。投与量および頻度はさらに、典型的には、投与する具体的な治療または予防物質、感染の重症度およびタイプ、投与経路ならびに患者の年齢、体重、応答性および過去の病歴に応じた各患者に特定の要因によって様々なものとなろう。適当な計画は、そのような要因を考慮することにより、および例えば文献で報告されている及びPhysician's Desk Reference (59th ed., 2005)において推奨されている投与量に従うことにより、当業者により選択されうる。本発明により提供される予防および治療物質の具体的な投与量および投与頻度に関しては、第5.4節を参照されたい。
【０３０５】
5.2.1  患者集団
本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を、単独で又はEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の治療と併用投与することを含む、感染（特に細胞内感染）またはその症状を治療、管理、予防および／または改善するための方法を提供する。対象は、好ましくは哺乳類、例えば非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）および霊長類（例えば、サル、例えばシノモルグス（cynomolgous）サルまたはヒト）である。好ましい実施形態においては、対象はヒトである。
【０３０６】
本発明の方法は、感染に罹患している又は感染に罹患すると予想される患者（例えば、遺伝的素因を有する患者または過去に罹患したことのある患者）に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を投与することを含む。そのような患者は、例えば非EphA2/EphrinA1モジュレーター治療により、感染に対して過去に治療されたことがあってもよく又は現在治療中であってもよい。もう1つの実施形態においては、本発明の方法は、免疫無防備状態の又は免疫抑制された患者に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を投与することを含む。ある実施形態においては、免疫無防備状態の又は免疫抑制された患者には、EphA2/EphrinA1モジュレーターを投与しない。本発明においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、限定的なものではないが一線級、二線級、三線級および四線級の治療を含む任意の線級の治療として使用されうる。さらに、本発明においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、非EphA2/EphrinA1モジュレーター治療の任意の悪影響または不耐性が生じる前に使用されうる。本発明は、感染の発生または再発を予防するために、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を投与するための方法を含む。
【０３０７】
1つの実施形態においては、本発明はまた、現在の治療の代替手段として、感染を治療、管理、予防および／または改善するための方法を提供する。特定の実施形態においては、現在の治療は患者に対して過度の毒性を示す（すなわち、許容し得ない又は耐えられない副作用を引き起こす）ことが判明していても判明していなくてもよい。もう1つの実施形態においては、EphA2/EphrinA1モジュレーターは、現在の治療と比較して副作用を減少させる。もう1つの実施形態においては、患者は現在の治療に対して治療抵抗性であることが判明している。そのような実施形態においては、本発明は、いずれの他の抗感染治療をも伴わない本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の投与を提供する。ある実施形態においては、感染を治療するための別の治療の代わりに、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を、それを必要とする患者に投与することが可能である。1つの実施形態においては、本発明は、活動的な感染の治療、管理、予防および／または改善方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は潜伏感染の治療、管理、予防および／または改善方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は急性感染の再発の予防方法を提供する。さらにもう1つの実施形態においては、本発明は慢性感染の治療、管理、予防および／または改善方法を提供する。
【０３０８】
本発明はまた、非EphA2/EphrinA1モジュレーター治療に治療抵抗性である又は治療抵抗性となったことのある患者における感染症の症状を治療または改善するために本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を投与するための方法を提供する。感染が治療抵抗性であるかどうかの判断は、感染における罹患細胞（特に上皮細胞）に対する治療の有効性を評価するための又は非EphA2/EphrinA1モジュレーター治療に治療抵抗性である若しくは治療抵抗性となったことのある患者における治療の有効性を評価するための当技術分野で公知の任意の方法によりin vivoまたはin vitroでなされうる。
【０３０９】
5.2.2  ウイルス感染
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上および該EphA2/EphrinA1モジュレーターを含む組成物は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に投与されうる。好ましい実施形態においては、本発明の方法により治療、管理、予防および／または改善されるウイルス感染は細胞内ウイルス感染である。本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上および該抗体を含む組成物は、ウイルス感染の予防、治療、管理または改善に有用な、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の他の治療（例えば、1以上の予防または治療物質）と併用して、ウイルス感染を有する又はウイルス感染の素因を有する対象に投与されうる。そのような治療の非限定的な例には、後記第5.2.6節に記載の物質、特に、第5.2.6.1節に記載の免疫調節物質、第5.2.6.2節に記載の抗炎症物質、第5.2.6.3節に記載の抗ウイルス物質、第5.2.6.4節に記載の抗細菌物質、第5.2.6.5節に記載の抗真菌物質、および第5.2.6.6節に記載の抗原生動物物質が含まれる。
【０３１０】
特定の実施形態においては、本発明は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量と、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の他の治療（例えば、1以上の予防または治療物質）の有効量とを投与することを含む方法を提供する。
【０３１１】
ある実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を、ウイルス感染またはその1以上の症状の予防、管理、治療および／または改善において現在使用中の又は使用されている又は有用であることが判明している1以上の治療（例えば、1以上の予防または治療物質）の有効量と併用して、それを必要とする対象に投与する。ウイルス感染に対する治療には、抗ウイルス物質、例えばアシクロビル（acyclovir）、アマンタジン（amantadine）、オセルタミビル（oseltamivir）、リバビラン（ribaviran）、パリビズマブ（palivizumab）およびアナミビル（anamivir）が含まれるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を、それを必要とする対象に、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために1以上の補助手段と併用投与する。補助手段の非限定的な例には、超音波噴霧器による空気の加湿、エアゾール化（aerolized）ラセミ体エピネフリン、経口デキサメタゾン、静脈内流体、挿管、解熱薬（例えば、イブプロフェン、アセトメタフィン）ならびに抗生物質および／または抗真菌治療（すなわち、二次細菌感染を予防または治療するためのもの）が含まれる。
【０３１２】
任意のタイプのウイルス感染またはウイルス感染から生じる又はそれに関連した状態を本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善することが可能であり、該方法は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は別の治療（例えば、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む。ウイルス感染を引き起こすウイルスの具体例には、レトロウイルス（例えば、ヒトT細胞リンパ球親和性ウイルス（HTLV）IおよびII型ならびにヒト免疫不全ウイルス（HIV, 例えばHIV-1およびHIV-2）、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（HSV）IおよびII型、エプスタイン・バーウイルス、HHV-6-HHV-8およびサイトメガロウイルス）、アレナウイルス（例えば、ラッサ熱ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、モルビリウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ムンプス、hMPVおよびニューモウイルス）、アデノウイルス、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、コロナウイルス、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、フラビウイルス（例えば、C型肝炎ウイルス（HCV）、黄熱ウイルスおよび日本脳炎ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、B型肝炎ウイルス（HBV））、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルスA、BおよびCならびにPFV）、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルスおよびA型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、トガウイルス（例えば、風疹ウイルス）およびラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）が含まれるが、これらに限定されるものではない。ウイルス感染に対する生物学的応答には、IgE抗体レベルの上昇、T細胞の増殖および／または浸潤の亢進、B細胞の増殖および／または浸潤の亢進、上皮過形成およびムチン生成が含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態においては、本発明はまた、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は別の治療の有効量と併用投与することを含む、風邪、ウイルス性咽頭炎、ウイルス性喉頭炎、ウイルス性クループ、ウイルス性気管支炎、インフルエンザ、パラインフルエンザウイルス疾患（「PIV」）（例えば、クループ、細気管支炎、気管支炎、肺炎）、呼吸器合胞体ウイルス（「RSV」）疾患、メタニューマウイルス（metapneumavirus）疾患およびアデノウイルス疾患（例えば、熱性呼吸器疾患、クループ、気管支炎、肺炎）に関連した又はそれらを引き起こすウイルス感染を予防、治療、管理および／または改善するための方法を提供する。
【０３１３】
特定の実施形態においては、インフルエンザウイルス感染、PIV感染、hMPV感染、アデノウイルス感染および／またはRSV感染あるいはそれらの1以上の症状を本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善する。特定の実施形態においては、本発明は、RSV感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は1以上の抗ウイルス物質と併用投与することを含む方法を提供する。該抗ウイルス剤としては、限定的なものではないが例えば、アマンタジン（amantadine）、リマンタジン（rimantadine）、オセルタミビル（oseltamivir）、ズナミビル（znamivir）、リバビラン（ribaviran）、RSV-IVIG（すなわち、免疫グロブリン静注剤）（RESPIGAMTM）およびパリビズマブ（palivizumab）、ならびに米国特許出願第09/996,288号および第09/996,265号（共に2001年11月28日付け出願の発明の名称“Methods of Administering/Dosing Anti-RSV Antibodies For Prophylaxis and Treatment”）開示されている抗体が挙げられる。ある実施形態においては、本発明の方法により治療、管理、予防または改善されるウイルス感染はRSV感染ではない。
【０３１４】
特定の実施形態においては、本発明は、PIV感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は1以上の抗ウイルス物質の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。該抗ウイルス物質としては、限定的なものではないが例えば、アマンタジン（amantadine）、リマンタジン（rimantadine）、オセルタミビル（oseltamivir）、ズナミビル（znamivir）、リバビラン（ribaviran）およびパリビズマブ（palivizumab）が挙げられる。もう1つの特定の実施形態においては、本発明は、hMPV感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明の抗体の1以上の有効量を単独で又は1以上の抗ウイルス物質の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。該抗ウイルス物質としては、限定的なものではないが例えば、アマンタジン（amantadine）、リマンタジン（rimantadine）、オセルタミビル（oseltamivir）、ズナミビル（znamivir）、リバビラン（ribaviran）およびパリビズマブ（palivizumab）が挙げられる。もう1つの特定の実施形態においては、本発明は、インフルエンザを予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は抗ウイルス物質の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。該抗ウイルス物質としては、限定的なものではないが例えば、ザナミビル（zanamivir）（RELENZA（登録商標））、オセルタミビル（oseltamivir）（TAMIFLU（登録商標））、リマンタジン（rimantadine）およびアマンタジン（amantadine）（SYMADINE（登録商標）; SYMMETREL（登録商標））が挙げられる。
【０３１５】
本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は別の治療の有効量と併用投与することを含む、ウイルス性呼吸器感染に罹患している又は罹患したことのある対象における喘息の発生を予防するための方法を提供する。特定の実施形態においては、該対象は高齢者（すなわち、65歳以上の者）、未熟児、乳児または小児である。もう1つの特定の実施形態においては、該対象はRSV感染に罹患した又は罹患している。特定の実施形態においては、該感染はウイルス性呼吸器感染ではない。もう1つの実施形態においては、該感染はRSV感染ではない。
【０３１６】
特定の実施形態においては、本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は他の治療（例えば、他の予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む、一次ウイルス感染に対する1以上の二次的応答を予防、治療、管理および／または改善するための方法を提供する。一次ウイルス感染、特に一次ウイルス呼吸器感染に対する二次的応答の例には、粘膜刺激に対する喘息様応答性、全呼吸器抵抗性の上昇、二次ウイルス、細菌、真菌および原生動物感染に対する感受性の上昇、ならびに限定的なものではないが例えば肺炎、クループおよび熱性気管支炎のような状態の発生が含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態においては、本発明は急性ウイルス感染の予防、治療、管理および／または改善方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は潜伏性ウイルス感染の予防、治療、管理および／または改善方法を提供する。さらにもう1つの実施形態においては、本発明はHIV感染またはHBV感染の予防、治療、管理および／または改善方法を提供する。
【０３１７】
特定の実施形態においては、本発明は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をVITAXINTM（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 00/78815、国際公開番号WO 02/070007 A1（2002年9月12日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin AlphaV Beta3 Antagonists”）、国際公開番号WO 03/075957 A1（2003年9月18日付け、発明の名称“The Prevention or Treatment of Cancer Using Integrin AlphaVBeta3 Antagonists in Combination With Other Agents”）、米国特許公開番号US 2002/0168360 A1（2002年11月14日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin αvβ3 Antagonists in Combination With Other Prophylactic or Therapeutic Agents”）および国際公開番号WO 03/075741 A2（2003年9月18日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Disorders by Administering an Integrin αvβ3 Antagonist in Combination With an HMG-CoA Reductase Inhibitor or a Bisphosphonate”）（それらの各々の全体を参照により本明細書に組み入れることとする））の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。もう1つの特定の実施形態においては、本発明は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をシプリズマブ（siplizumab）（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 02/069904（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする））の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を1以上の抗IL-9抗体（例えば、米国特許公開番号20050002934（2005年1月6日）（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されているもの）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。さらにもう1つの実施形態においては、本発明は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をVITAXINTM、抗IL-9抗体および／またはシプリズマブ（siplizumab）のうちの2以上の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３１８】
1つの実施形態においては、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を1以上の抗IgE抗体の有効量と併用投与する。特定の実施形態においては、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に本発明の抗体の1以上の有効量を抗IgE抗体TNX901の有効量と併用投与する。特定の実施形態においては、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に本発明の抗体の1以上の有効量を抗IgE抗体rhuMAb-E25オマリズマブ（omalizumab）の有効量と併用投与する。もう1つの実施形態においては、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を抗IgE抗体HMK-12の有効量と併用投与する。特定の実施形態においては、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を抗IgE抗体6HD5の有効量と併用投与する。もう1つの実施形態においては、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に本発明の抗体の1以上の有効量を抗IgE抗体MAb Hu-901の有効量と併用投与する。
【０３１９】
本発明は、ウイルス感染に罹患することが予想される又はそのような感染のリスクの増大を伴う患者、例えば、抑制された免疫系を有する患者（例えば、臓器移植レシピエント、エイズ患者、化学療法を受けている患者、高齢者、未熟児、乳児、小児、閉塞を伴う食道の癌の患者、気管気管支フィステルを有する患者、神経学的疾患（例えば、卒中、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症およびミオパシーにより引き起こされるもの）を有する患者、およびウイルス感染に既に罹患している患者）におけるウイルス感染の発生の予防方法を含む。該患者はウイルス感染に対して既に治療されていてもされていなくてもよい。
【０３２０】
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター、組成物または本発明の併用療法は、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために、限定的なものではないが一線級、二線級、三線級および四線級の療法を含む任意の線級の療法として使用されうる。本発明はまた、EphA2発現の上昇に関連した他の疾患または障害に対する療法を受けている患者におけるウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法の任意の悪影響または不耐性が生じる前の患者におけるウイルス感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はまた、治療抵抗性患者におけるウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、ウイルス感染を有する患者は、感染が有意には根治していない及び／又は症状が有意には軽減していない場合に、療法に対して治療抵抗性である。患者が治療抵抗性であるかどうかの判断は、そのような状況における「治療抵抗性」の、当技術分野で受け入れられている意味内容に基づき、感染の治療の有効性を評価するための当技術分野で公知の任意の方法によりin vivoまたはin vitroでなされうる。種々の実施形態において、ウイルス感染を有する患者は、ウイルス複製が低下していない又は上昇している場合に治療抵抗性である。本発明はまた、ウイルス感染の発生のリスクを有する患者におけるウイルス感染の発生または再発の予防方法を含む。本発明はまた、通常の療法に対する有害な反応に感受性である患者においてウイルス感染またはその症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はさらに、いずれの抗ウイルス療法も利用可能でないウイルス感染を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。
【０３２１】
本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法に治療抵抗性であることが判明しておりこれらの療法でもはや治療されていない患者におけるウイルス感染またはその症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤または他の生物学的療法／免疫療法で既に治療されている患者である。これらの患者には、治療抵抗性の患者、通常の療法には若すぎる患者、および既存療法での管理または治療にもかかわらず再発性ウイルス感染を有する患者が含まれる。
【０３２２】
本発明は、他の通常の療法の代替手段として、ウイルス感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。特定の実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は他の療法に治療抵抗性であるか、あるいはそのような療法からの有害な反応に感受性である。該患者は、抑制された免疫系を有する者（例えば、術後患者、化学療法中の患者および免疫不全疾患を有する患者）、腎機能または肝機能不全を有する患者、高齢者、小児、乳児、未熟児、神経精神障害を有する者または精神作用薬を服用している者、発作の病歴を有する者、あるいはウイルス感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために使用される通常の物質と負に相互作用する投薬を受けている者でありうる。
【０３２３】
ウイルス感染療法ならびにそれらの投与量、投与経路および推奨用法は当技術分野で公知であり、例えばPhysicians' Desk Reference (59th ed., 2005)のような文献に記載されている。
【０３２４】
5.2.3  細菌感染
本発明は、細菌感染、特に細胞内細胞感染、またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を投与することを含む方法を提供する。好ましくは、細胞内細菌に感染した細胞は、上昇したEphA2発現を有する。もう1つの実施形態においては、本発明は、細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量と本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、1以上の予防または治療物質）の有効量とを投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態においては、本発明の方法により治療、管理、予防および／または改善される細菌感染は細胞内細菌感染である。
【０３２５】
任意のタイプの細胞内細菌感染、または細菌感染（例えば、呼吸器感染）から生じる若しくはそれに関連した状態が、本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善されうる。感染を引き起こす細胞内細菌の具体例には、Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium leprae、Salmonella enterica serovar Typhi、Brucella sp、Legionella sp、Listeria monocytogenes、Francisella tularensis、Rickettsia rickettsii; Rickettsia prowazekii; Rickettsia typhi; Rickettsia tsutsugamushi; Chlamydia trachomatis; Chlamydia psittaci; およびChlamydia pneumoniaeが含まれるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態においては、本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善される細胞内細菌感染は呼吸器細菌感染ではない。他の実施形態においては、本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善される細胞内細菌感染はSalmonella属の種（species）の感染ではない。さらに他の実施形態においては、本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善される細胞内細菌感染はSalmonella dublin感染ではない。
【０３２６】
特定の実施形態においては、本発明は、細胞内細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、細胞内細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量と本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、予防または治療物質）の有効量とを投与することを含む方法を提供する。
【０３２７】
ある実施形態においては、本発明は、細胞内細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を、細菌感染を予防、治療、管理および／または改善するために使用する、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。細菌感染に対する療法には、抗細菌物質（例えば、アミノグリコシド（例えば、ゲンタマイシン（gentamicin）、トブラマイシン（tobramycin）、アミカシン（amikacin）、ネチリマイシン（netilimicin））、アズトレオナム（aztreonam）、セファロスポリン（例えば、セファクロル（cefaclor）、セファドロキシル（cefadroxil）、セファレキシン（cephalexin）、セファゾリン（cephazolin）、クリンダマイシン（clindamycin）、エリスロマイシン（erythromycin）、ペニシリン（例えば、ペニシリンV、結晶性ペニシリンG、ペニシリンGプロカイン）、スペクチノマイシン（spectinomycin）およびテトラサイクリン（例えば、クロルテトラサイクリン（chlortetracycline）、ドキシサイクリン（doxycycline）、オキシテトラサイクリン（oxytetracycine））、ならびに補助療法、例えば補助的および機械的換気が含まれるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を、それを必要とする対象に、細菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために1以上の補助手段と併用投与する。補助手段の非限定的な例には、超音波噴霧器による空気の加湿、エアゾール化（aerolized）ラセミ体エピネフリン、経口デキサメタゾン、静脈内流体、挿管、解熱薬（例えば、イブプロフェン、アセトメタフィン）、およびより好ましくは、抗生物質または抗真菌療法（すなわち、二次感染を予防または治療するためのもの）が含まれる。
【０３２８】
本発明は、細菌感染に対する生物学的応答（例えば限定的なものではないが、IgE抗体レベルの上昇、マスト細胞の増殖、脱顆粒および／または浸潤、B細胞の増殖および／または浸潤の亢進、ならびにT細胞の増殖および／または浸潤の亢進）を予防、管理、治療および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、細菌感染により引き起こされる又はそれに関連した呼吸器状態（例えば、肺炎、再発性吸引性肺炎、レジオネラ症、百日咳、髄膜炎または結核）を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は別の療法の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３２９】
特定の実施形態においては、本発明の方法は、Mycobacteriaにより引き起こされる細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために使用され、該方法は、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の他の療法（例えば、1以上の予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む。
【０３３０】
特定の実施形態においては、本発明は、一次細菌感染（好ましくは一次細菌感染）に対する1以上の二次的状態または応答を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は他の療法（例えば、他の予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。一次細菌感染（特に細菌感染）に対する二次的状態または応答の例には、粘膜刺激に対する喘息様応答性、全抵抗性の上昇、二次的ウイルス、細菌、真菌および原生動物感染に対する感受性の上昇、ならびに限定的なものではないが例えば肺炎、クループおよび熱性気管支炎のような状態の発生が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３３１】
特定の実施形態においては、本発明は、細菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をVITAXINTM（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 00/78815、国際公開番号WO 02/070007 A1（2002年9月12日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin AlphaV Beta3 Antagonists”）、国際公開番号WO 03/075957 A1（2003年9月18日付け、発明の名称“The Prevention or Treatment of Cancer Using Integrin AlphaVBeta3 Antagonists in Combination With Other Agents”）、米国特許公開番号US 2002/0168360 A1（2002年11月14日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin αvβ3 Antagonists in Combination With Other Prophylactic or Therapeutic Agents”）および国際公開番号WO 03/075741 A2（2003年9月18日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Disorders by Administering an Integrin αvβ3 Antagonist in Combination With an HMG-CoA Reductase Inhibitor or a Bisphosphonate”）（それらの各々の全体を参照により本明細書に組み入れることとする））の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３３２】
もう1つの特定の実施形態においては、本発明の方法は、細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために使用され、該方法は、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をシプリズマブ（siplizumab）（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 02/069904（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする））の有効量と併用投与することを含む。もう1つの実施形態においては、本発明の方法は、細菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために使用され、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を1以上の抗IL-9抗体（例えば、米国特許公開番号20050002934（2005年1月6日）（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載の抗IL-9抗体の1つ）の有効量と併用投与することを含む。さらにもう1つの実施形態においては、本発明は、細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をVITAXINTM、シプリズマブ（siplizumab）および／または抗IL-9抗体のうちの2以上の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３３３】
本発明は、細菌感染に罹患することが予想される又はそのような感染のリスクの増大を伴う患者、例えば、抑制された免疫系を有する患者（例えば、臓器移植レシピエント、エイズ患者、化学療法を受けている患者、高齢者、未熟児、乳児、小児、閉塞を伴う食道の癌の患者、気管気管支フィステルを有する患者、神経学的疾患（例えば、卒中、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症およびミオパシーにより引き起こされるもの）を有する患者、および感染に既に罹患している患者）における細菌感染の発生の予防方法を含む。該患者は感染に対して既に治療されていてもされていなくてもよい。
【０３３４】
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターまたは本発明の併用療法は、細菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために、限定的なものではないが一線級、二線級、三線級および四線級の療法を含む任意の線級の療法として使用されうる。本発明はまた、他の疾患または障害に対する療法を受けている患者における細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法の任意の悪影響または不耐性が生じる前の患者における細菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はまた、治療抵抗性患者における細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、細菌感染を有する患者は、感染が有意には根治していない及び／又は症状が有意には軽減していない場合に、療法に対して治療抵抗性である。患者が治療抵抗性であるかどうかの判断は、そのような状況における「治療抵抗性」の、当技術分野で受け入れられている意味内容に基づき、感染の治療の有効性を評価するための当技術分野で公知の任意の方法によりin vivoまたはin vitroでなされうる。種々の実施形態において、細菌感染を有する患者は、細菌増殖が低下していない又は上昇している場合に治療抵抗性である。本発明はまた、細菌感染の発生のリスクを有する患者における細菌感染の発生または再発の予防方法を含む。本発明はまた、通常の療法に対する有害な反応に感受性である患者において細菌感染またはその症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はさらに、いずれの抗ウイルス療法も利用可能でないウイルス感染を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。
【０３３５】
本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法に治療抵抗性であることが判明しておりこれらの療法でもはや治療されていない患者における細菌感染またはその症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は、抗炎症剤、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤または他の生物学的療法／免疫療法で既に治療されている患者である。これらの患者には、治療抵抗性の患者、通常の療法には若すぎる患者、および既存療法での管理または治療にもかかわらず再発性細菌感染を有する患者が含まれる。
【０３３６】
本発明は、他の通常の療法の代替手段として、細菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。特定の実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は他の療法に治療抵抗性であるか、あるいはそのような療法からの有害な反応に感受性である。該患者は、抑制された免疫系を有する者（例えば、術後患者、化学療法中の患者および免疫不全疾患を有する患者）、腎機能または肝機能不全を有する患者、高齢者、小児、乳児、未熟児、神経精神障害を有する者または精神作用薬を服用している者、発作の病歴を有する者、あるいは細菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために使用される通常の物質と負に相互作用する投薬を受けている者でありうる。
【０３３７】
細菌感染療法ならびにそれらの投与量、投与経路および推奨用法は当技術分野で公知であり、例えばPhysicians' Desk Reference (59th ed., 2005)のような文献に記載されている。
【０３３８】
5.2.4  真菌感染
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上は、本発明の方法に従い、真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に投与されうる。好ましい実施形態においては、真菌に感染した細胞は、上昇したEphA2発現を有する。本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上は、真菌感染および／またはその1以上の症状を治療、管理および／または改善するために、真菌感染またはその1以上の症状の予防、治療、管理または改善に有用な、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の他の療法（例えば、1以上の予防または治療物質）と併用して対象に投与されうる。好ましい実施形態においては、本発明の方法により治療、管理、予防および／または改善される真菌感染は細胞内真菌感染である。
【０３３９】
任意のタイプの真菌感染、または真菌感染から生じる若しくはそれに関連した状態が、本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善されうる。真菌感染を引き起こす真菌の具体例には、Absidia属の種（species）（例えば、Absidia corymbiferaおよびAbsidia ramosa）、Aspergillus属の種（例えば、Aspergillus flavus、Aspergillus fumigatus、Aspergillus nidulans、Aspergillus nigerおよびAspergillus terreus）、Basidiobolus ranarum、Blastomyces dermatitidis、Candida属の種（例えば、Candida albicans、Candida glabrata、Candida kerr、Candida krusei、Candida parapsilosis、Candida pseudotropicalis、Candida quillermondii、Candida rugosa、Candida stellatoideaおよびCandida tropicalis）、Coccidioides immitis、Conidiobolus species、Cryptococcus neoforms、Cunninghamella属の種、皮膚糸状菌、Histoplasma capsulatum、Microsporum gypseum、Mucor pusillus、Paracoccidioides brasiliensis、Pseudallescheria boydii、Rhinosporidium seeberi、Pneumocystis carinii、Rhizopus属の種（例えば、Rhizopus arrhizus、Rhizopus oryzaeおよびRhizopus microsporus）、Saccharomyces属の種、Sporothrix schenckii、接合菌綱、ならびにZygomycetes、Ascomycetes、Basidiomycetes、DeuteromycetesおよびOomycetesのような綱が含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態においては、真菌感染は呼吸器真菌感染ではない。
【０３４０】
特定の実施形態においては、本発明は、真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量と本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、予防または治療物質）の有効量とを投与することを含む方法を提供する。
【０３４１】
ある実施形態においては、1以上の抗体の有効量を、真菌感染（好ましくは真菌感染）の予防、管理、治療または改善において現在使用中の又は使用されている又は有用であることが知られている、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、予防または治療物質）の有効量と併用して、それを必要とする対象に投与する。真菌感染に対する療法には、抗真菌物質、例えばアゾール薬、例えばミコナゾール（miconazole）、ケトコナゾール（ketoconazole）（NIZORAL（登録商標））、酢酸カスポフンジン（caspofungin acetate）（CANCIDAS（登録商標））、イミダゾール、トリアゾール（例えば、フルコナゾール（fluconazole）（DIFLUCAN（登録商標））およびイトラコナゾール（itraconazole）（SPORANOX（登録商標））、ポリエン（例えば、ナイスタチン（nystatin）、アンホテリシンBコロイド分散液（amphotericin B colloidal dispersion）（“ABCD”）（AMPHOTEC（登録商標））、リポソーム・アンホテリシンB（liposomal amphotericin B）（AMBISONE（登録商標））、ヨウ化カリウム（KI）、ピリミジン（例えば、フルシトシン（flucytosine）（ANCOBON（登録商標））、およびボリコナゾール（voriconazole）（VFEND（登録商標））が含まれるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を、それを必要とする対象に、真菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために1以上の補助手段と併用投与する。補助手段の非限定的な例には、超音波噴霧器による空気の加湿、エアゾール化（aerolized）ラセミ体エピネフリン、経口デキサメタゾン、静脈内流体、挿管、解熱薬（例えば、イブプロフェン、アセトメタフィン）、および抗ウイルスまたは抗細菌療法（すなわち、二次ウイルスまたは細菌感染を予防または治療するためのもの）が含まれる。
【０３４２】
本発明はまた、EphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は1以上の他の療法と併用投与することを含む、真菌感染に対する生物学的応答（例えば限定的なものではないが、IgE抗体レベルの上昇、神経成長因子（NGF）レベルの上昇、マスト細胞の増殖、脱顆粒および／または浸潤、B細胞の増殖および／または浸潤の亢進、ならびにT細胞の増殖および／または浸潤の亢進）を予防、管理、治療および／または改善するための方法を提供する。
【０３４３】
特定の実施形態においては、本発明は、一次真菌感染（好ましくは一次細菌感染）に対する1以上の二次的状態または応答を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は他の療法（例えば、他の予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。一次真菌感染（特に真菌感染）に対する二次的状態または応答の例には、粘膜刺激に対する喘息様応答性、全抵抗性の上昇、二次的ウイルス、真菌および真菌感染に対する感受性の上昇、ならびに限定的なものではないが例えば肺炎、クループおよび熱性気管支炎のような状態の発生が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３４４】
特定の実施形態においては、本発明は、真菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をVITAXINTM（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 00/78815、国際公開番号WO 02/070007 A1（2002年9月12日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin AlphaV Beta3 Antagonists”）、国際公開番号WO 03/075957 A1（2003年9月18日付け、発明の名称“The Prevention or Treatment of Cancer Using Integrin AlphaVBeta3 Antagonists in Combination With Other Agents”）、米国特許公開番号US 2002/0168360 A1（2002年11月14日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin αvβ3 Antagonists in Combination With Other Prophylactic or Therapeutic Agents”）および国際公開番号WO 03/075741 A2（2003年9月18日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Disorders by Administering an Integrin αvβ3 Antagonist in Combination With an HMG-CoA Reductase Inhibitor or a Bisphosphonate”）（それらの各々の全体を参照により本明細書に組み入れることとする））の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３４５】
もう1つの特定の実施形態においては、本発明は、真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をシプリズマブ（siplizumab）（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 02/069904）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を1以上の抗IL-9抗体（例えば、米国特許公開番号20050002934（2005年1月6日）（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載の抗IL-9抗体の1以上）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をビタキシン（Vitaxin）、シプリズマブ（siplizumab）および／または抗IL-9抗体のうちの2以上の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３４６】
本発明は、真菌感染に罹患することが予想される又はそのような感染のリスクの増大を伴う患者における真菌感染の発生の予防方法を含む。そのような対象（患者）には、抑制された免疫系を有する患者（例えば、臓器移植レシピエント、エイズ患者、化学療法を受けている患者、閉塞を伴う食道の癌の患者、気管気管支フィステルを有する患者、神経学的疾患（例えば、卒中、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症およびミオパシーにより引き起こされるもの）を有する患者、および病態、特に感染に既に罹患している患者）が含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態においては、患者は気管支肺異形成症、先天性心疾患、嚢胞性線維症および／または後天性もしくは先天性免疫不全に罹患している。もう1つの特定の実施形態においては、患者は未熟児、乳児、小児、高齢者またはグループホーム、養護施設もしくは何らかの他のタイプの施設内のヒトである。本発明はまた、いずれの療法も利用可能でない状態に対する通常の抗真菌療法に対する有害な反応に感受性である患者における真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。
【０３４７】
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターまたは本発明の併用療法は、真菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために、限定的なものではないが一線級、二線級、三線級および四線級の療法を含む任意の線級の療法として使用されうる。本発明はまた、他の疾患または障害に対する療法を受けている患者における真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法の任意の悪影響または不耐性が生じる前の患者における真菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はまた、治療抵抗性患者における真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、真菌感染を有する患者は、感染が有意には根治していない及び／又は症状が有意には軽減していない場合に、療法に対して治療抵抗性である。患者が治療抵抗性であるかどうかの判断は、そのような状況における「治療抵抗性」の、当技術分野で受け入れられている意味内容に基づき、感染の治療の有効性を評価するための当技術分野で公知の任意の方法によりin vivoまたはin vitroでなされうる。種々の実施形態において、真菌感染を有する患者は、真菌増殖が低下していない又は上昇している場合に治療抵抗性である。本発明はまた、真菌感染の発生のリスクを有する患者における真菌感染の発生または再発の予防方法を含む。本発明はまた、通常の療法に対する有害な反応に感受性である患者において真菌感染またはその症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はさらに、いずれの抗真菌療法も利用可能でない真菌感染を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。
【０３４８】
本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法に治療抵抗性であることが判明しておりこれらの療法でもはや治療されていない患者における真菌感染またはその症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤または他の生物学的療法／免疫療法で既に治療されている患者である。これらの患者には、治療抵抗性の患者、通常の療法には若すぎる患者、および既存療法での管理または治療にもかかわらず再発性真菌感染を有する患者が含まれる。
【０３４９】
本発明は、他の通常の療法の代替手段として、真菌感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。特定の実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は他の療法に治療抵抗性であるか、あるいはそのような療法からの有害な反応に感受性である。該患者は、抑制された免疫系を有する者（例えば、術後患者、化学療法中の患者および免疫不全疾患を有する患者）、腎機能または肝機能不全を有する患者、高齢者、小児、乳児、未熟児、神経精神障害を有する者または精神作用薬を服用している者、発作の病歴を有する者、あるいは真菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために使用される通常の物質と負に相互作用する投薬を受けている者でありうる。
【０３５０】
真菌感染療法ならびにそれらの投与量、投与経路および推奨用法は当技術分野で公知であり、例えばPhysicians' Desk Reference (59th ed., 2005)のような文献に記載されている。
【０３５１】
5.2.5  原生動物感染
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上は、本発明の方法に従い、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために対象に投与されうる。好ましい実施形態においては、原生動物に感染した細胞は、上昇したEphA2発現を有する。本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上は、原生動物感染および／またはその1以上の症状を治療、管理および／または改善するために、真菌感染またはその1以上の症状の予防、治療、管理または改善に有用な、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の他の療法（例えば、1以上の予防または治療物質）と併用して対象に投与されうる。好ましい実施形態においては、本発明の方法により治療、管理、予防および／または改善される原生動物感染は細胞内原生動物感染である。
【０３５２】
任意のタイプの原生動物感染、または原生動物感染から生じる若しくはそれに関連した状態が、本発明の方法により予防、治療、管理および／または改善されうる。感染を引き起こす原生動物の具体例には、Leishmania; Trypanosoma; Giardia; Trichomonas; Entamoeba; Dientamoeba; NaegleriaおよびAcanthamoeba; Babesia; Plasmodium; Isospora; Sarcocystis; Toxoplasma; Enterocytozoon; Balantidium; ならびにPneumocystisが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３５３】
特定の実施形態においては、本発明は、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量と本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、1以上の予防または治療物質）の有効量とを投与することを含む方法を提供する。
【０３５４】
ある実施形態においては、1以上のEphA2/EphrinA1モジュレーターの有効量を、原生動物感染の予防、管理、治療または改善において現在使用中の又は使用されている又は有用であることが知られている、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、1以上の予防または治療物質）の有効量と併用して、それを必要とする対象に投与する。ある実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を、それを必要とする対象に、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために1以上の補助手段と併用投与する。補助手段の非限定的な例には、超音波噴霧器による空気の加湿、エアゾール化（aerolized）ラセミ体エピネフリン、経口デキサメタゾン、静脈内流体、挿管、解熱薬（例えば、イブプロフェンおよびアセトメタフィン）、および抗ウイルスまたは抗細菌療法（すなわち、二次ウイルスまたは細菌感染を予防または治療するためのもの）が含まれる。
【０３５５】
本発明はまた、EphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は1以上の他の療法と併用投与することを含む、原生動物感染に対する生物学的応答（例えば限定的なものではないが、IgE抗体レベルの上昇、神経成長因子（NGF）レベルの上昇、マスト細胞の増殖、脱顆粒および／または浸潤、B細胞の増殖および／または浸潤の亢進、ならびにT細胞の増殖および／または浸潤の亢進）を予防、管理、治療および／または改善するための方法を提供する。
【０３５６】
特定の実施形態においては、本発明は、一次感染（好ましくは一次原生動物感染）に対する1以上の二次的状態または応答を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を単独で又は本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の他の療法（例えば、他の予防または治療物質）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３５７】
特定の実施形態においては、本発明は、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をVITAXINTM（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 00/78815、国際公開番号WO 02/070007 A1（2002年9月12日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin AlphaV Beta3 Antagonists”）、国際公開番号WO 03/075957 A1（2003年9月18日付け、発明の名称“The Prevention or Treatment of Cancer Using Integrin AlphaVBeta3 Antagonists in Combination With Other Agents”）、米国特許公開番号US 2002/0168360 A1（2002年11月14日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrin αvβ3 Antagonists in Combination With Other Prophylactic or Therapeutic Agents”）および国際公開番号WO 03/075741 A2（2003年9月18日付け、発明の名称“Methods of Preventing or Treating Disorders by Administering an Integrin αvβ3 Antagonist in Combination With an HMG-CoA Reductase Inhibitor or a Bisphosphonate”）（それらの各々の全体を参照により本明細書に組み入れることとする））の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３５８】
もう1つの実施形態においては、本発明は、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をシプリズマブ（siplizumab）（MedImmune, Inc.; 国際公開番号WO 02/069904）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量を1以上の抗IL-9抗体（例えば、米国特許公開番号20050002934（2005年1月6日）（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載の抗IL-9抗体）の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。もう1つの実施形態においては、本発明は、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量をビタキシン（Vitaxin）、シプリズマブ（siplizumab）および／または抗IL-9抗体のうちの2以上の有効量と併用投与することを含む方法を提供する。
【０３５９】
本発明は、原生動物感染に罹患することが予想される又はそのような感染のリスクの増大を伴う患者における原生動物感染の発生の予防方法を含む。そのような対象（患者）には、抑制された免疫系を有する患者（例えば、臓器移植レシピエント、エイズ患者、化学療法を受けている患者、癌患者、気管気管支フィステルを有する患者、神経学的疾患（例えば、卒中、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症およびミオパシーにより引き起こされるもの）を有する患者、および病態、特に感染に既に罹患している患者）が含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態においては、患者は気管支肺異形成症、先天性心疾患、嚢胞性線維症および／または後天性もしくは先天性免疫不全に罹患している。もう1つの特定の実施形態においては、患者は未熟児、乳児、小児、高齢者またはグループホーム、養護施設もしくは何らかの他のタイプの施設内のヒトである。本発明はまた、いずれの療法も利用可能でない状態に対する通常の抗原生動物療法に対する有害な反応に感受性である患者における原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。
【０３６０】
本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターまたは本発明の併用療法は、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために、限定的なものではないが一線級、二線級、三線級および四線級の療法を含む任意の線級の療法として使用されうる。本発明はまた、他の疾患または障害に対する療法を受けている患者における原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法の任意の悪影響または不耐性が生じる前の患者における原生動物感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はまた、治療抵抗性患者における原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、原生動物感染を有する患者は、感染が有意には根治していない及び／又は症状が有意には軽減していない場合に、療法に対して治療抵抗性である。患者が治療抵抗性であるかどうかの判断は、そのような状況における「治療抵抗性」の、当技術分野で受け入れられている意味内容に基づき、感染の治療の有効性を評価するための当技術分野で公知の任意の方法によりin vivoまたはin vitroでなされうる。種々の実施形態において、原生動物感染を有する患者は、原生動物増殖が低下していない又は上昇している場合に治療抵抗性である。本発明はまた、原生動物感染の発生のリスクを有する患者における原生動物感染の発生または再発の予防方法を含む。本発明はまた、通常の療法に対する有害な反応に感受性である患者において原生動物感染またはその症状を予防、管理、治療および／または改善するための方法を含む。本発明はさらに、いずれの抗原生動物療法も利用可能でない原生動物感染を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。
【０３６１】
本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法に治療抵抗性であることが判明しておりこれらの療法でもはや治療されていない患者における原生動物感染またはその症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。ある実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は、抗生物質、抗ウイルス剤、抗原生動物剤または他の生物学的療法／免疫療法で既に治療されている患者である。これらの患者には、治療抵抗性の患者、通常の療法には若すぎる患者、および既存療法での管理または治療にもかかわらず再発性原生動物感染を有する患者が含まれる。
【０３６２】
本発明は、他の通常の療法の代替手段として、原生動物感染またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するための方法を含む。特定の実施形態においては、本発明の方法により管理または治療される患者は他の療法に治療抵抗性であるか、あるいはそのような療法からの有害な反応に感受性である。該患者は、抑制された免疫系を有する者（例えば、術後患者、化学療法中の患者および免疫不全疾患を有する患者）、腎機能または肝機能不全を有する患者、高齢者、小児、乳児、未熟児、神経精神障害を有する者または精神作用薬を服用している者、発作の病歴を有する者、あるいは真菌感染またはその1以上の症状を予防、管理、治療および／または改善するために使用される通常の物質と負に相互作用する投薬を受けている者でありうる。
【０３６３】
原生動物感染療法ならびにそれらの投与量、投与経路および推奨用法は当技術分野で公知であり、例えばPhysicians' Desk Reference (59th ed., 2005)のような文献に記載されている。
【０３６４】
5.2.6  他の療法
本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を1以上の療法と併用投与することにより、感染、特に細胞内病原体感染を治療、管理または予防するための方法を提供する。好ましくは、それらの他の療法は、感染の治療、管理または予防において現在使用中である又は有用である。特定の実施形態においては、本発明は、感染を治療、管理、予防および／または改善するための方法であって、それを必要とする対象に本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量とEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の療法の有効量とを投与することを含む方法を提供する。感染またはその症状の予防、管理、治療または改善において有用であることが知られている又は使用されている又は現在使用中である任意の療法（例えば、予防または治療物質）が、本明細書に記載の本発明に従いEphA2/EphrinA1モジュレーターと併用して使用されうる。感染またはその症状を予防、治療、管理および／または改善するために使用されている又は使用中の療法、特に予防または治療物質に関する情報としては、例えば、Gilmanら, Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, Tenth Ed., McGraw-Hill, New York, 2001; The Physicians' Desk Reference (59th ed., 2005); The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Berkow, M.D.ら (編), 17th Ed., Merck Sharp & Dohme Research Laboratories, Rahway, NJ, 1999; ならびにCecil Textbook of Medicine, 20th Ed., BennettおよびPlum (編), W.B. Saunders, Philadelphia, 1996を参照されたい。治療または予防物質には、小分子、合成薬、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸（例えば、DNAおよびRNAヌクレオチド、例えば限定的なものではないがアンチセンスヌクレオチド配列、三重ヘリックス、RNAi、ならびに生物学的に活性なタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドをコードするヌクレオチド配列）、抗体、合成または天然無機分子、模倣物質、および合成または天然有機分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。予防および治療物質の例には、免疫調節物質、抗炎症物質（例えば、アドレノコルチコイド、コルチコステロイド（例えば、ベクロメタゾン（beclomethasone）、ブデソニド（budesonide）、フルニソリド（flunisolide）、フルチカゾン（fluticasone）、トリアムシノロン（triamcinolone）、メチルプレドニゾロン（methylprednisolone）、プレドニゾロン（prednisolone）、プレドニゾン（prednisone）、ヒドロコルチゾン（hydrocortisone））、グルココルチコイド、ステロイド、および非ステロイド抗炎症薬（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナック（diclofenac）およびCOX-2インヒビター）、抗コリン作用物質（例えば、イプラトロピウムブロミドおよびオキシトロピウムブロミド）、スルファサラジン（sulphasalazine）、ペニシラミン（penicillamine）、ダプソーン（dapsone）、抗ヒスタミン物質、抗マラリア物質（例えば、ヒドロキシクロロキン）、抗ウイルス物質および抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（dactinomycin）（旧称アクチノマイシン）、ブレオマイシン、エリスロマイシン、ペニシリン、ミトラマイシン（mithramycin）およびアンスラマイシン（and anthramycin）（AMC））が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３６５】
他の実施形態においては、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターを、その投与を必要とする対象に、抗炎症物質、抗ウイルス物質、抗生物質、抗真菌物質、抗原生動物物質および／または抗免疫調節物質と併用投与する。
【０３６６】
該療法は、それを必要とする対象に、連続的または同時に投与することが可能である。特に、該療法を完全に同時に又はある時間間隔で順次、対象に投与すべきであり、それにより、該療法が一緒に作用して、それ以外の様態でそれらが投与された場合より大きな利益が得られるようにする。特定の実施形態においては、本発明の併用療法は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量と、本発明の該EphA2/EphrinA1モジュレーターと同じ作用メカニズムを有する少なくとも1つの他の療法の有効量とを含む。特定の実施形態においては、本発明の併用療法は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上の有効量と、本発明の該EphA2/EphrinA1モジュレーターとは異なる作用メカニズムを有する少なくとも1つの他の療法（例えば、予防または治療物質）の有効量とを含む。
【０３６７】
ある実施形態においては、本発明の併用療法は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターと一緒に作用して相加または相乗効果を及ぼすことにより、EphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の他の療法の予防または治療効果を改善する。ある実施形態においては、本発明の併用療法は、該予防または治療物質に関連した副作用を軽減する。種々の実施形態においては、該療法を、1時間未満の間隔、約1時間の間隔、約1時間〜約2時間の間隔、約2時間〜約3時間の間隔、約3時間〜約4時間の間隔、約4時間〜約5時間の間隔、約5時間〜約6時間の間隔、約6時間〜約7時間の間隔、約7時間〜約8時間の間隔、約8時間〜約9時間の間隔、約9時間〜約10時間の間隔、約10時間〜約11時間の間隔、約11時間〜約12時間の間隔、せいぜい24時間の間隔またはせいぜい48時間の間隔で患者に投与する。好ましい実施形態においては、2以上の療法を患者の同一来院時に投与する。
【０３６８】
該併用療法の予防または治療物質は、同一医薬組成物中で、対象、好ましくはヒト対象に投与されうる。あるいは、該併用療法の予防または治療物質は、別々の医薬組成物中で同時に、対象に投与されうる。該予防または治療物質は、同一または異なる投与経路で対象に投与されうる。
【０３６９】
特定の実施形態においては、感染またはその症状を予防、治療、管理および／または改善するために、本明細書に記載の本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上を含む医薬組成物を、対象、好ましくはヒト対象に投与する。本発明においては、本発明の医薬組成物は、感染に関連した1以上の症状の予防、治療または改善において現在使用中の又は使用されている又は有用であることが知られている、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーター以外の1以上の療法（例えば、予防または治療物質）をも含みうる。
【０３７０】
5.2.6.1  免疫調節療法
ある実施形態においては、本発明は、本発明のEphA2/EphrinA1モジュレーターの1以上と1以上の免疫調節物質（すなわち、対象における免疫応答をモジュレートする物質）とを含む組成物、ならびに該組成物の投与を含む、対象における感染またはその症状を治療、管理、予防および／または改善するための方法を提供する。本発明はまた、EphA2/EphrinA1モジュレーターを1以上の免疫調節物質と併用投与することを含む、感染またはその症状を治療、管理、予防および／または改善するための方法を提供する。本発明の特定の実施形態においては、該免疫調節物質はヒト対象における免疫応答を阻害または抑制する。免疫調節物質は当業者によく知られており、本発明の方法および組成物において使用することが可能である。
【０３７１】
本発明の方法および組成物においては、当業者によく知られた任意の免疫調節物質を使用することが可能である。免疫調節物質は対象における免疫応答の1以上又は全ての態様に影響を及ぼしうる。免疫応答の態様には、炎症応答、補体カスケード、白血球およびリンパ球の分化、増殖および／またはエフェクター機能、単球および／または好塩基球の数、ならびに免疫系の細胞間の細胞連絡が含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明の或る実施形態においては、免疫調節物質は免疫応答の態様の1つを調節（モジュレート）する。他の実施形態においては、免疫調節物質は免疫応答の態様の2以上を調節する。本発明の好ましい実施形態においては、対象への免疫調節物質の投与は対象の免疫応答能の態様の1以上を抑制または軽減する。本発明の特定の態様においては、免疫調節物質は対象における免疫応答を阻害または抑制する。本発明においては、免疫調節物質はEphA2/EphrinA1モジュレーターではない。ある実施形態においては、免疫調節物質は抗炎症物質ではない。ある実施形態においては、免疫調節物質は化学療法剤（化学療法物質）である。ある実施形態においては、免疫調節物質は化学療法剤ではない。
【０３７２】
免疫調節物質の具体例には、タンパク質性物質、例えばサイトカイン、ペプチド模擬体および抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、Fv、ScFv、FabもしくはF(ab)2断片またはエピトープ結合性断片）、核酸分子（例えば、アンチセンス核酸分子および三重ヘリックス）、小分子、有機化合物ならびに無機化合物が含まれるが、これらに限定されるものではない。特に、免疫調節物質には、メトトレキセート（methotrexate）、レフルノミド（leflunomide）、シクロホスファミド（cyclophosphamide）、シトキサン（Cytoxan）、イムラン（Immuran）、シクロスポリン（cyclosporine）A、ミノサイクリン（minocycline）、アザチオプリン（azathioprine）、抗生物質（例えば、FK506（タクロリムス（tacrolimus））、メチルプレドニゾロン（methylprednisolone）（MP）、コルチコステロイド、ステロイド、ミコフェノラート モフェチル（mycophenolate mofetil）、ラパマイシン（rapamycin）（シロリムス（sirolimus）、ミゾリビン（mizoribine）、デオキシスペルグアリン（deoxyspergualin）、ブレキナル（brequinar）、マロノニトリロアミデス（malononitriloamindes）（例えば、レフルナミド（leflunamide））、T細胞受容体モジュレーター、サイトカイン受容体モジュレーター、およびマスト細胞モジュレーターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３７３】
特定の実施形態においては、免疫調節物質はT細胞受容体モジュレーターである。本明細書中で用いる「T細胞受容体モジュレーター」なる語は、T細胞受容体のリン酸化、T細胞受容体に関連したシグナル伝達経路の活性化、および／またはT細胞受容体活性に関連した個々のタンパク質（例えば、サイトカイン）の発現をモジュレートする物質を意味する。そのような物質は、T細胞受容体のリン酸化および／またはT細胞受容体活性に関連した個々のタンパク質（例えば、サイトカイン）の発現を直接的または間接的にモジュレートしうる。T細胞受容体モジュレーターの具体例には、抗T細胞受容体抗体（例えば、抗CD4抗体（例えば、cM-T412（Boeringer）、IDEC-CE9.1（登録商標）（IDECおよびSKB）、mAB 4162W94、オルトクローン（Orthoclone）およびOKTcdr4a（Janssen-Cilag））、抗CD3抗体（例えば、ヌビオン（Nuvion）（Product Design Labs）、OKT3（Johnson & Johnson）またはリツキサン（Rituxan）（IDEC））、抗CD5抗体（例えば、抗CD5リシン結合イムノコンジュゲート）、抗CD7抗体（例えば、CHH-380（Novartis））、抗CD8抗体、抗CD40リガンドモノクローナル抗体（例えば、IDEC-131（IDEC））、抗CD52抗体（例えば、CAMPATH 1H（Ilex））、抗CD2抗体（例えば、シプリズマブ（siplizumab）（MedImmune, Inc., 国際公開番号WO 02/098370およびWO 02/069904））、抗CD1 1a抗体（例えば、Xanelim（Genentech））および抗B7抗体（例えば、IDEC-114）（IDEC）））、CTLA4-免疫グロブリンおよびLFA-3TIP（Biogen, 国際公開番号WO 93/08656および米国特許第6,162,432号）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３７４】
特定の実施形態においては、免疫調節物質はサイトカイン受容体モジュレーターである。本明細書中で用いる「サイトカイン受容体モジュレーター」なる語は、サイトカイン受容体のリン酸化、サイトカイン受容体に関連したシグナル伝達経路の活性化および／または個々のタンパク質、例えばサイトカインまたはサイトカイン受容体の発現をモジュレートする物質を意味する。そのような物質はサイトカイン受容体のリン酸化、サイトカイン受容体に関連したシグナル伝達経路の活性化および／または個々のタンパク質、例えばサイトカインの発現を直接的または間接的にモジュレートしうる。サイトカイン受容体モジュレーターの具体例には、可溶性サイトカイン受容体（例えば、TNF-α受容体の細胞外ドメインまたはその断片、IL-Iβの細胞外ドメインまたはその断片、IL-6受容体の細胞外ドメインまたはその断片）、サイトカインまたはその断片（例えば、インターロイキンIL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-23、TNF-α、TNF-β、インターフェロン（IFN）-α、IFN-β、IFN-γおよびGM-CSF）、抗サイトカイン受容体抗体（例えば、抗IFN受容体抗体、抗IL-2受容体抗体（例えば、Zenapax（Protein Design Labs））、抗IL-3受容体抗体、抗IL-4受容体抗体、抗IL-6受容体抗体、抗IL-10受容体抗体、抗IL-12受容体抗体、抗IL-13受容体抗体、抗IL-15受容体抗体および抗IL-23受容体抗体）、抗サイトカイン抗体（例えば、抗IFN抗体、抗TNF-α抗体、抗IL-1 β抗体、抗IL-3抗体、抗IL-6抗体、抗IL-8抗体（例えば、ABX-IL-8（Abgenix））、抗IL-9抗体（例えば、米国特許公開番号20050002934（2006年1月6日）に開示されているもの）、抗IL-9受容体抗体、抗IL-12抗体、抗IL-13抗体、抗IL-15抗体および抗IL-23抗体が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３７５】
特定の実施形態においては、サイトカイン受容体モジュレーターはIL-3、IL-4、IL-10またはその断片である。もう1つの実施形態においては、サイトカイン受容体モジュレーターは抗IL-1 β抗体、抗IL-6抗体、抗IL-12受容体抗体または抗TNF-α抗体である。もう1つの実施形態においては、サイトカイン受容体モジュレーターはTNF-α受容体の細胞外ドメインまたはその断片である。ある実施形態においては、サイトカイン受容体モジュレーターはTNF-αアンタゴニストではない。
【０３７６】
好ましい実施形態においては、免疫調節物質はIL-9の量を減少させる。より好ましい実施形態においては、免疫調節物質は、IL-9に免疫特異的に結合する抗体（好ましくはモノクローナル抗体）またはその断片である（例えば、2004年4月12日付け出願のReed, 米国特許出願第10/823,810号（発明の名称“Methods of Preventing or Treating Respiratory Conditions”（Attorney Docket No. 10271-113-999）、米国特許公開番号20050002934（2005年1月6日）および2004年4月12日付け出願のReed, 米国仮特許出願第60/561,845号（発明の名称“Anti-IL-9 Antibody Formulations and Uses Thereof”）（Attorney Docket No. 10271-126-888）（それらの全ての全内容を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい）。特定の作用メカニズムに束縛されるものではないが、抗IL-9抗体の使用は、生物学的効果を及ぼすIL-9の能力を中和し、それにより炎症細胞リクルートメントを阻止または軽減する。
【０３７７】
1つの実施形態においては、サイトカイン受容体モジュレーターはマスト細胞モジュレーターである。もう1つの実施形態においては、サイトカイン受容体モジュレーターはマスト細胞モジュレーターではない。マスト細胞モジュレーターの具体例には、幹細胞因子（c-kit受容体リガンド）インヒビター（例えば、mAb 7H6、mAb 8H7a、pAb 1337、FK506、CsA、デキサメタゾン（dexamthasone）およびフルコンシノニド（fluconcinonide））、c-kit受容体インヒビター（例えば、STI 571（かつてはCGP 57148Bとして知られていた））、マスト細胞プロテアーゼインヒビター（例えば、GW-45、GW-58、ウォルトマンニン、LY 294002、カルフォスチン（calphostin）C、シトカラシンD、ジェニステイン（genistein）、KT5926、スタウロスポリン（staurosproine）およびラクトフェリン）、レラキシン（「RLX」)、IgEアンタゴニスト（例えば、抗体rhuMAb-E25オマリズマブ（omalizumab）、HMK-12および6HD5、およびmAB Hu-901）、IL-3アンタゴニスト、IL-4アンタゴニスト、IL-10アンタゴニスト、およびTGF-ベータが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３７８】
免疫調節物質は、B細胞に結合し及び／又は標的化するよう選択されうる。例えば、免疫調節物質は、B細胞マーカーに結合する抗体でありうる。
【０３７９】
免疫調節物質は、Tヘルパーサブセット（TH1またはTH2）とB細胞との間の相互作用を妨げて中和抗体生成を抑制するよう選択されうる。TH（Tヘルパー）細胞によるB細胞の活性化に必要な相互作用を妨げ又は遮断して中和抗体の産生を阻止する抗体は、本発明の方法における免疫調節物質として有用である。例えば、T細胞によるB細胞の活性化は、ある相互作用（例えば、B細胞上のCD40抗原へのTヘルパー細胞上のCD40リガンドの結合、ならびにB細胞上のB7抗原へのT細胞上のCD28および／またはCTL4リガンドの結合が生じることを必要とする（Durieら, Immunol. Today, 15(9):406-410 (1994)）。双方の相互作用がなければ、B細胞は、中和抗体の産生を誘導するよう活性化され得ない。
【０３８０】
CD40リガンド（CD40L）-CD40相互作用は、Tヘルパー細胞の活性化および機能の両方におけるその広範な活性ならびにそのシグナリング経路における重複の非存在のため、免疫応答を遮断するための望ましい点である。したがって、本発明の特定の実施形態においては、CD40LとCD40との相互作用を、1以上の免疫調節物質の投与の時点で一時的に遮断する。これは、TH細胞上のCD40リガンドを遮断しB細胞上のCD40抗原へのTヘルパー細胞上のCD40リガンドの正常な結合を妨げる物質での処理により達成されうる。CD40リガンドに対する抗体（抗CD40L）（Bristol-Myers Squibb Coから入手可能; 例えば、1993年8月18日付け公開の欧州特許出願555,880を参照されたい）または可溶性CD40分子が、本発明の方法による免疫調節物質として選択され使用されうる。
【０３８１】
免疫調節物質は、TH1細胞と細胞傷害性Tリンパ球（「CTL」）との間の相互作用を抑制してCTL媒介殺傷の発生を低下させるよう選択されうる。免疫調節物質は、CD4+および／またはCD8+ T細胞の増殖、分化、活性および／または機能を改変（例えば阻害または抑制）するよう選択されうる。例えば、T細胞に特異的な抗体は、CD4+および／またはCD8+ T細胞を枯渇させ或いはCD4+および／またはCD8+ T細胞の増殖、分化、活性および／または機能を改変するための免疫調節物質として使用されうる。
【０３８２】
本発明の1つの実施形態においては、T細胞、好ましくは記憶T細胞を減少または枯渇させる免疫調節物質を、本発明の方法に従い、感染のリスクまたは感染を有する対象に投与する。例えば、米国特許第4,658,019号を参照されたい。本発明のもう1つの実施形態においては、細胞をCD8+ T細胞を不活性化する免疫調節物質を、本発明の方法に従い、細胞内病原体感染のリスクまたは細胞病原体感染を有する対象に投与する。特定の実施形態においては、CD8+ T細胞を減少または枯渇させるために抗CD8抗体を使用する。
【０３８３】
もう1つの実施形態においては、CD4+ Tヘルパー細胞のTH0、TH1および／またはTH2サブセットの生物活性（例えば、分化、増殖および／またはエフェクター機能）の1以上を軽減または抑制する免疫調節物質を、本発明の方法に従い、細胞内病原体感染のリスクまたは細胞病原体感染を有する対象に投与する。そのような免疫調節物質の一例はIL-4である。IL-4は、TH1細胞機能を犠牲にしてTH2細胞の抗原特異的活性を増強する（例えば、Yokotaら, 1986, Proc. Natl. Acad. Sci., USA 83:5894-5898; および米国特許第5,017,691号を参照されたい）。Tヘルパー細胞（特にTH1および／またはTH2細胞）の生物活性（例えば、増殖、分化および／またはエフェクター機能）に影響を及ぼす免疫調節物質の他の具体例には、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-23およびインターフェロン（IFN）-γが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３８４】
もう1つの実施形態においては、本発明の方法に従い細胞内病原体感染のリスクまたは細胞病原体感染を有する対象に投与される免疫調節物質は、抗原提示を妨げるサイトカインである。特定の実施形態においては、本発明の方法において使用される免疫調節物質はIL-10である。IL-10はまた、細菌の排除に関わるマクロファージ作用を軽減または抑制する。
【０３８５】
免疫調節物質は、マスト細胞の活性化、脱顆粒、増殖および／または浸潤を軽減または抑制するよう選択されうる。ある実施形態においては、免疫調節物質は、マスト細胞と、例えば限定的なものではないが幹細胞因子（c-kitリガンド）、IgE、IL-4、環境刺激物質および感染性因子を含むマスト細胞活性化物質との間の相互作用を妨げる。特定の実施形態においては、免疫調節物質は、例えば限定的なものではないが花粉、塵ダニ、煙草煙および／またはペットりんせつのような環境刺激物質に対するマスト細胞の応答を軽減または抑制する。もう1つの実施形態においては、免疫調節物質は、例えばウイルス、細菌、真菌および原生動物のような感染性因子に対するマスト細胞に対する応答を軽減または抑制する。マスト細胞の活性化、脱顆粒、増殖および／または浸潤を軽減または抑制するマスト細胞モジュレーターの具体例には、幹細胞因子（c-kit受容体リガンド）インヒビター（例えば、mAb 7H6、mAb 8H7aおよびpAb 1337（Mendiazら, 1996, Eur J Biochem 293(3):842-849を参照されたい）、FK506およびCsA（Itoら, 1999 Arch Dermatol Res 291(5):275-283）、デキサメタゾン（dexamthasone）およびフルコンシノニド（fluconcinonide）（Finootoら, 1997, J. Clin. Invest. 99(7):1721-1728を参照されたい））、c-kit受容体インヒビター（例えば、STI 571（かつてはCGP 57148Bとして知られていた）（Heinrichら, 2000 Blood 96(3):925-932を参照されたい））、マスト細胞プロテアーゼインヒビター（例えば、GW-45、GW-58（Temkinら, 2002, J Immunol 169(5):2662-2669を参照されたい）、ウォルトマンニン、LY 294002、カルフォスチン（calphostin）CおよびシトカラシンD（Vossellerら, 1997, Mol Biol Cell 1997:909-922を参照されたい）、ジェニステイン（genistein）、KT5926およびスタウロスポリン（staurosproine）（Nagaiら. 1995, Biochem Biophys Res Commun 208(2):576-581を参照されたい）およびラクトフェリン（Heら, 2003 Biochem Pharmacol 65(6):1007-1015を参照されたい））、レラキシン（「RLX」)（Baniら, 2002 Int Immunopharmacol 2(8):1195-1294を参照されたい）、IgEアンタゴニスト（例えば、抗体rhuMAb-E25オマリズマブ（omalizumab）（Finnら, 2003 J Allergy Clin Immuno 111(2):278-284; Correnら, 2003 J Allergy Clin Immuno 111(1):87-90; BusseおよびNeaville, 2001 Curr Opin Allergy Clin Immunol. 1(1):105-108; ならびにTangおよびPowell, 2001, Eur J Pediatr 160(12): 696-704を参照されたい）、HMK-12および6HD5（Miyajimaら, 2202 Int Arch Allergy Immuno 128(1):24-32を参照されたい）、およびmAB Hu-901（van Neervenら, 2001 Int Arch Allergy Immuno 124(1-3):400を参照されたい）、IL-3アンタゴニスト、IL-4アンタゴニスト、IL-10アンタゴニスト、およびTGF-ベータ（Metcalfeら, 1995, Exp Dermatol 4(4 Pt 2):227-230を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３８６】
本発明においては、1以上の免疫調節物質を、EphA2またはEphrinA1ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体の投与の前、後またはそれと同時に、感染のリスクまたは感染を有する対象に投与する。好ましくは、当業者により必要とみなされる免疫応答の態様の1以上の軽減または抑制のために、1以上の免疫調節物質を、EphA2またはEphrinA1ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体と併用して、感染のリスクまたは感染を有する対象に投与する。個々の対象における免疫応答の態様の1以上を測定し、それにより、免疫調節物質を該対象にいつ投与することが必要かを決定するためには、当業者によく知られた任意の技術を用いることが可能である。好ましい実施形態においては、約500細胞/mm3、好ましくは600細胞/mm3、650細胞/mm3、700細胞/mm3、750細胞/mm3、800細胞/mm3、900細胞/mm3、1000細胞/mm3、1100細胞/mm3または1200細胞/mm3の平均絶対リンパ球数を対象において維持する。もう1つの好ましい実施形態においては、感染のリスクまたは感染を有する対象の絶対リンパ球数が500細胞/mm3以下、550細胞/mm3以下、600細胞/mm3以下、650細胞/mm3以下、700細胞/mm3以下、750細胞/mm3以下または800細胞/mm3以下である場合には、該対象には免疫調節物質を投与しない。
【０３８７】
好ましい実施形態においては、免疫応答の態様の1以上を一時的に軽減または抑制するために、1以上の免疫調節物質を、EphA2またはEphrinA1ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体と併用して、感染のリスクまたは感染を有する対象に投与する。免疫系の態様の1以上のそのような一時的な抑制または軽減は数時間、数日間、数週間または数ヶ月継続しうる。好ましくは、免疫応答の態様の1以上の一時的な抑制または軽減は数時間（例えば、2時間、4時間、6時間、8時間、12時間、14時間、16時間、18時間、24時間、36時間または48時間）、数日間（例えば、3日間、4日間、5日間、6日間、7日間または14日間）または数週間（例えば、3週間、4週間、5週間または6週間）継続する。免疫応答の態様の1以上の一時的な軽減または抑制は、EphA2またはEphrinA1ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体の予防および／または治療効果を増強する。
【０３８８】
好ましい実施形態においては、免疫調節物質として使用するタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド（抗体を含む）は、それらのタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに対する免疫応答の可能性を減少させるために、該タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドのレシピエント（被投与体）と同じ種から誘導される。もう1つの実施形態においては、対象がヒトである場合には、免疫調節物質として使用するタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドはヒト由来またはヒト化体である。
【０３８９】
本発明の方法においては、免疫調節活性を有するタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドをコードする核酸分子、または免疫調節活性をタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドを、感染のリスクまたは感染を有する対象に投与することが可能である。さらに、本発明の方法においては、免疫調節活性を有するタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドの誘導体、類似体もしくは断片をコードする核酸、または免疫調節活性を有するタンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドの誘導体、類似体もしくは断片を、感染のリスクまたは感染を有する対象に投与することが可能である。好ましくは、そのような誘導体、類似体および断片は、完全長の野生型タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドの免疫調節活性を保有する。
【０３９０】
免疫調節物質の免疫調節活性は、当業者によく知られた任意の技術により、例えば、CTLアッセイ、増殖アッセイ、イムノアッセイ（例えば、ELISA）（共刺激分子およびサイトカインのような特定のタンパク質の発現に関するもの）およびFACSにより、in vitroおよび／またはin vivoで測定することが可能である。
【０３９１】
5.2.6.2  抗炎症療法
本発明の組成物および方法においては、当業者によく知られた任意の抗炎症物質、例えば、炎症性障害に対する療法において有用な物質を使用することが可能である。抗炎症物質の非限定的な例には、非ステロイド抗炎症薬（NSAID）、ステロイド抗炎症薬、抗コリン作用物質（例えば、硫酸アトロピン（atropine sulfate）、硝酸メチルアトロピン（atropine methylnitrate）および臭化イプラトロピウム（ipratropium bromide）（ATROVENTTM））、ベータ2-アゴニスト（例えば、アブテロール（abuterol）（VENTOLINTMおよびPROVENTILTM）、ビトルテロール（bitolterol）（TORNALATETM）、レバルブテロール（levalbuterol）（XOPONEXTM）、メタプロテレノール（metaproterenol）（ALUPENTTM）、ピルブテロール（pirbuterol）（MAXAIRTM）、テルブトライン（terbutlaine）（BRETHAIRETMおよびBRETHINETM）、アルブテロール（albuterol）（PROVENTILTM、REPETABSTMおよびVOLMAXTM）、フォルモテロール（formoterol）（FORADIL AEROLIZERTM）、およびサルメテロール（salmeterol）（SEREVENTTMおよびSEREVENT DISKUSTM））、およびメチルキサンチン（例えば、テオフィリン（UNIPHYLTM、THEO-DURTM、SLO-BIDTMおよびTEHO-42TM））が含まれる。NSAIDの具体例には、アスピリン、イブプロフェン、セレコキシブ（celecoxib）（CELEBREXTM）、ジクロフェナック（diclofenac）（VOLTARENTM）、エトドラック（etodolac）（LODINETM）、フェノプロフェン（fenoprofen）（NALFONTM）、インドメタシン（indomethacin）（INDOCINTM）、ケトララック（ketoralac）（TORADOLTM）、オキサプロジン（oxaprozin）（DAYPROTM）、ナブメントン（nabumentone）（RELAFENTM）、スリンダック（sulindac）（CLINORILTM）、トルメンチン（tolmentin）（TOLECTINTM）、ロフェコキシブ（rofecoxib）（VIOXXTM）、ナプロキセン（naproxen）（ALEVETM、NAPROSYNTM）、ケトプロフェン（ketoprofen）（ACTRONTM）およびナブメトン（nabumetone）（RELAFENTM）が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのようなNSAIDは、シクロオキシゲナーゼ酵素（例えば、COX-1および／またはCOX-2）を抑制することにより機能する。ステロイド抗炎症薬の例には、グルココルチコイド、デキサメタゾン（dexamethasone）（DECADRONTM）、コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニソロン（methylprednisolone）（MEDROLTM））、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニソン（prednisone）（PREDNISONETMおよびDELTASONETM）、プレドニソロン（prednisolone）（PRELONETMおよびPEDIAPREDTM）、トリアムシノロン（triamcinolone）、アズルフィジン（azulfidine）、およびエイコサノイド（例えば、プロスタグランジン、トロンボキサンおよびロイコトリエン）のインヒビター（例えば、モンテルカスト（montelukast）（SINGULAIRTM）、ザフィルルカスト（zafirlukast）（ACCOLATETM）、プランルカスト（pranlukast）（ONONTM）またはジレウトン（zileuton）（ZYFLOTM）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０３９２】
抗炎症療法およびそれらの投与量、投与経路および推奨用法は当技術分野で公知であり、例えばPhysicians' Desk Reference (59th ed., 2005)のような文献に記載されている。
【０３９３】
5.2.6.3  抗ウイルス療法
当業者に周知のいずれの抗ウイルス剤も、本発明の組成物および方法に使用することができる。抗ウイルス剤の例は、限定されるものではないが、ウイルスのその受容体への結合、ウイルスの細胞中への内部化、ウイルスの複製、またはウイルスの細胞からの遊離を阻害および／または低下する、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質抗体、核酸分子、有機分子、無機分子、および小分子を含む。特に、抗ウイルス剤としては、限定されるものではないが、ヌクレオシド類似体（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガンシクロビル、ビダラビン、イドクスウリジン、トリフルリジン、およびリバビリン）、フォスカーネット、アマンタジン、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、α-インターフェロン類および他のインターフェロン類、ならびにAZTが挙げられる。
【０３９４】
特定の実施形態においては、抗ウイルス剤は、ウイルス抗原に対して免疫特異的である免疫モジュレーターである。本明細書に使用される、用語「ウイルス抗原」は、限定されるものではないが、免疫応答を誘発することができるいずれかのウイルスペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質（例えば、HIV gp120、HIV nef、RSV F糖タンパク質、RSV G糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルス血球凝集素、HTLV tax、単純ヘルペスウイルス糖タンパク質（例えば、gB、gC、gD、およびgE）およびB型肝炎表面抗原）を含む。ウイルス感染の治療に対して本発明に有用な抗体は、限定されるものではないが、病原ウイルスの抗原に対する抗体を含み、例えば、限定されるものではないが、以下の抗体を含む：アデノウイルス科(例えば、マストアデノウイルス属、およびアヴィアデノウイルス属)、ヘルペスウイルス科(例えば、単純ヘルペスウイルス1、単純ヘルペスウイルス2、単純ヘルペスウイルス5、単純ヘルペスウイルス6、)、レヴイウイルス科(例えば、レヴイウイルス属、腸内細菌フェーズMS2、アロレヴイウイルス属)、ポックスウイルス科、(例えば、コードポックスウイルス亜科、パラポックスウイルス属、アヴィポックスウイルス属、カプリポックスウイルス属、レポリポックスウイルス属、スイポックスウイルス属、モラシポックスウイルス属、および昆虫ポックスウイルス亜科)、パポバウイルス科(例えば、ポリオーマウイルス属、パピローマウイルス属、)、パラミクソウイルス科(例えば、パラミクソウイルス属、パラインフルエンザウイルス1、モービリウイルス属(例えば、麻疹ウイルス)、ルブラウイルス属(例えば、流行性耳下腺炎ウイルス)、ニューモウイルス亜科(例えば、ニューモウイルス属、ヒト呼吸器合胞体ウイルス)、およびメタニューモウイルス属(例えば、トリ・ニューモウイルスおよびヒト・メタニューモウイルス))、ピコルナウイルス科(例えば、エンテロウイルス属、ライノウイルス属、ヘパトウイルス属(例えば、ヒトA型肝炎ウイルス)、カーディオウイルス属、およびアフトウイルス属)、レオウイルス科(例えば、オルトレオウイルス属、オービウイルス属、ロタウイルス属、サイポウイルス属、フィジーウイルス属、植物レオウイルス属、およびオリザウイルス属)、レトロウイルス科(例えば、哺乳類B型レトロウイルス、哺乳類C型レトロウイルス、トリC型レトロウイルス、D型レトロウイルスグループ、BLV-HTLVレトロウイルス、レンチウイルス属(例えば、ヒト免疫不全ウイルス1およびヒト免疫不全ウイルス2)、スプマウイルス属)、フラビウイルス科(例えば、C型肝炎ウイルス)、ヘパドナウイルス科(例えば、B型肝炎ウイルス)、トガウイルス科(例えば、アルファウイルス属(例えば、シンドビスウイルス)およびルビウイルス属(例えば、風疹ウイルス))、ラブドウイルス科(例えば、ヴェシキュロウイルス属、リッサウイルス属、エファメロウイルス属、サイトラブドウイルス属、およびネクレオラブドウイルス属)、アレナウイルス科(例えば、アレナウイルス属、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、イッピウイルス、およびラッサウイルス)およびコロナウイルス科(例えば、コロナウイルス属、およびトロウイルス属)。
【０３９５】
ウイルス感染の治療に対して有用であり市販されている抗体の特定の例としては、限定されるものではないが、HIV感染の治療に有用なCD4融合抗体であるPRO542（Progenies）、B型肝炎ウイルスの治療に有用なヒト抗体であるOstavir（Protein Design Labs, Inc., CA）、およびサイトメガロウイルス(CMV)の治療に有用なヒト化IgG1抗体であるProtovir（Protein Design Labs, Inc., CA）、およびRSVの治療に有用なヒト化抗体であるパリビズマブ（SYNAGIS(登録商標)、MedImmune, Inc.、国際公開特許第WO 02/43,660号）を含む。
【０３９６】
特定の実施形態においては、本発明の組成物および方法に使用される抗ウイルス剤は、ウイルス感染を阻害または低下させ、ウイルス感染を引き起こすウイルスの複製を阻害または低下させ、ウイルス感染を引き起こすウイルスの他の細胞または対象への伝播を阻害または低減する。他の好ましい実施形態においては、本発明の組成物および方法に使用される抗ウイルス剤は、RSV、hMPV、またはPIVによる感染を阻害または低下させ、RSV、hMPV、またはPIVの複製を阻害または低下させ、またはRSV、hMPV、またはPIVの他の細胞または対象への伝播を阻害または低減する。RSV、hMPV、および／またはPIV感染を治療するかかる薬剤および方法の例としては、限定されるものではないが、ジドブジン、アシクロビル、ガンシクロビル、ビダラビン、イドクスウリジン、トリフルリジン、およびリバビリンなどのヌクレオシド類縁体、ならびにフォスカーネット、アマンタジン、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、およびα-インターフェロン類が挙げられる。米国仮特許出願第60/398,475号（2002年6月25日出願）、表題「抗RSV、抗HMPV、および抗PIV抗体を用いて、RSV、HMPV、およびPIVを治療かつ予防する方法（Methods of Treating and Preventing RSV, HMPV, and PIV Using Anti-RSV, Anti-HMPV, and Anti-PIV Antibodies）」、および米国特許出願第10/371,122号（2003年2月21日出願）を参照されたい。これらはそれぞれ本明細書に参照によりその全体を組み入れる。
【０３９７】
特定の実施形態においては、ウイルス感染はRSVであり、抗ウイルス抗原は、RSVの抗原に免疫特異的に結合する抗体である。ある実施形態においては、抗RSV抗原抗体は、RSVのグループAのRSV抗原に免疫特異的に結合する。他の実施形態においては、抗RSV抗原抗体は、RSVのグループBのRSV抗原に免疫特異的に結合する。他の実施形態においては、抗体は1つのグループのRSV抗原に結合しかつ他のグループの類似抗原と交差反応する。特定の実施形態においては、抗RSV抗原抗体は、RSV核タンパク質、RSVリンタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水タンパク質、RSV RNA-依存RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、および／またはRSV Gタンパク質に免疫特異的に結合する。さらなる特定の実施形態においては、抗RSV抗原抗体は、RSV核タンパク質、RSVヌクレオカプシドタンパク質、RSVリンタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV結合糖タンパク質、RSV融合糖タンパク質、RSVヌクレオカプシドタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水タンパク質、RSV RNA-依存RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、RSV Lタンパク質、RSV Pタンパク質、および／またはRSV Gタンパク質の対立変異体に結合する。
【０３９８】
RSV抗原に免疫特異的に結合する抗体が当技術分野で知られていることは認識されるに違いない。例えば、パリビズマブ（シナジス(登録商標)）は、小児科患者へのRSV感染を予防するために現在使用されるヒト化モノクローナル抗体である実施形態において、本発明の方法で使用される抗体は、パリビズマブまたはその抗体結合断片（例えば、パリビズマブの1以上の相補性決定領域（CDR）そして好ましくは、可変ドメインを含む断片）である。パリビズマブのアミノ酸配列は、例えばJohnsonら, J.Infection, 176: 1215-1224, 1997年、および、Youngら, 米国特許第5,824,307号および国際公開第WO 02/43660号、表題「抗RSV抗体を予防および治療のために投与／投薬する方法（Methods of Administering/Dosing Anti-RSV Antibodies for Prophylaxis and Treatment）」に開示されており、これらはそれぞれ本明細書に参照によりその全体を組み入れる。
【０３９９】
RSV抗原と免疫特異的に結合しかつパリビズマブのFcドメインより高いFcRn受容体との親和性をもつFcドメインを含有する１以上の抗体またはその抗原結合断片を、本発明に従って使用することもできる。かかる抗体は、米国特許出願第10/020,354号（2001年12月12日出願）に記載されており、これらはそれぞれ本明細書に参照によりその全体を組み入れる。さらに、１以上の抗RSV抗原抗体A4B4；P12f2；P12f4；P1ld4；Ale9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；lX-493Ll；FRH3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4LlFR-S28Rを、本発明に従って使用することができる。これらの抗体は、Youngら、国際公開第02/43,660号、表題「抗RSV抗体を予防および治療のために投与／投薬する方法（Methods of Administering/Dosing Anti-RSV Antibodies for Prophylaxis and Treatment）」、および米国仮特許出願第60/398,475号（2002年7月25日出願）、表題「抗RSV、抗HMPV、および抗PIV抗体を用いて、RSV、HMPV、およびPIVを治療かつ予防する方法（Methods of Treating and Preventing RSV, HMPV, and PIV Using Anti-RSV, Anti-HMPV, and Anti-PIV Antibodies）」に開示されており、これらはそれぞれ本明細書に参照によりその全体を組み入れる。
【０４００】
ある実施形態においては、抗RSV抗原抗体は、Youngら、米国出願番号第09/724,531号（2000年11月28日出願）；第09/996,288号（2001年11月28日出願）、および米国特許第2003/0,091,584 A1号（2003年5月15日発行）（表題は全て「抗RSV抗体を予防および治療のために投与／投薬する方法（Methods of Administering/Dosing Anti-RSV Antibodies for Prophylaxis and Treatment）」である）の抗原抗体であるか、またはこれらの方法により調製され、これらはそれぞれ本明細書に参照によりその全体を組み入れる。本発明の方法に使用することができる安定化抗体製剤の方法および組成物は、米国仮特許出願第60/388,921号（2002年6月14日出願）、および第60/388,920号（2002年6月14日出願）に開示されており、これらはそれぞれ本明細書に参照によりその全体を組み入れる。
【０４０１】
抗ウイルス治療とその用量、投与経路および推奨される用途は、当技術分野で知られており、The Physician's Desk Reference（第59版、2005）などの文献に記載されている。呼吸器ウイルス性感染に関する更なる情報は、Cecil Textbook of Medicine（第18版、1988年）で入手しうる。
【０４０２】
5.2.6.4  抗菌剤
細菌感染を予防、治療、管理、または改善するための当業者に良く知られる抗菌剤および治療を、本発明の組成物および方法に使用することができる。抗菌剤の例は、限定されるものではないが、細菌感染を阻害もしくは低減する、細菌の複製を阻害もしくは低減する、または他の対象への細菌の伝播を阻害もしくは低減する、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体、核酸分子、有機分子、無機分子、および小分子を含む。特に、抗菌剤の例としては、限定されるものではないが、ペニシリン、セファロスポリン、イミペネム、アクストレオナム(axtreonam)、バンコマイシン、シクロセリン、バシトラシン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、トリメトプリム、ノルフロキサシン、リファンピシン、ポリミキシン、アンホテリシンB、ナイスタチン、ケトコナゾール、イソニアジド、メトロニダゾール、およびペンタミジンが挙げられる。
【０４０３】
好ましい実施形態においては、抗菌剤は、細菌感染を阻害もしくは低下させ、感染を引き起こす細菌の複製を阻害もしくは低下させ、または他の対象に感染を引き起こす細菌の伝播を阻害もしくは低減する薬剤である。細菌感染がマイコプラズマ感染(例えば、咽頭炎、気管気管支炎、および肺炎)の場合、抗菌剤は好ましくは、テトラサイクリン、エリスロマイシン、またはスペクチノマイシンである。細菌感染が結核の場合、抗菌剤は好ましくは、リファンピシン、イソニアジド、ピラジナミド、エタンブトール、およびストレプトマイシンである。
【０４０４】
抗菌療法とその用量、投与経路および推奨される用途は、当技術分野で知られており、「The Physician's Desk Reference（第59版、2005）」などの文献に記載されている。呼吸器感染および抗菌療法に関する更なる情報は「Cecil Textbook of Medicine（第18版、1988）」で入手しうる。
【０４０５】
5.2.6.5  抗真菌剤
真菌感染またはその１以上の症状(例えば、真菌呼吸器感染症)を予防、管理、治療、および／または改善するための当業者に良く知られている抗真菌剤および療法を、本発明の組成物および方法に使用できる。抗真菌剤の例は、限定されるものではないが、真菌感染を阻害もしくは低減する、真菌の複製を阻害もしくは低減する、または他の対象への真菌の伝播を阻害もしくは低減する、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体、核酸分子、有機分子、無機分子、および小分子を含む。真菌剤の具体例としては、限定されるものではないが、アゾール薬（例えば、ミコナゾール、ケトコナゾール（NIZORAL(登録商標)）、カスポファンギン酢酸塩（CANCIDAS(登録商標)）、イミダゾール、トリアゾール薬（例えば、フルコナゾール(DIFLUCAN(登録商標)）、およびイトラコナゾール（SPORANOX(登録商標)）、ポリエン（例えば、ナイスタチン、アンホテリシンB（FUNGIZONE(登録商標)）、アンホテリシンB脂質複合物(「ABLC」）（ABELCET(登録商標)）アンホテリシンBコロイド状分散液（「ABCD」）（AMPHOTEC(登録商標)）、リポソームアンホテリシンB（AMBISONE(登録商標)）、ヨウ化カリウム（KI）、ピリミジン（例えば、フルシトシン（ANCOBON(登録商標)）およびボリコナゾール（VFEND(登録商標)）が挙げられる。具体的な抗真菌剤およびその推奨される用量のリストは、例えば、表６を参照されたい。
【表６】
2008518021.tif 000007
【０４０６】
ある実施形態においては、抗真菌剤は、真菌感染を阻害もしくは低下させ、感染を引き起こす真菌の複製を阻害もしくは低下させ、または他の対象への感染を引き起こす真菌の伝播を阻害もしくは低減する薬剤である。真菌感染が（発病性）分芽菌皮膚炎の場合、抗真菌剤は好ましくは、イトラコナゾール、アンホテリシンB、フルコナゾール、またはケトコナゾールである。真菌感染が肺アスペルギルス腫の場合、抗真菌剤は好ましくは、アンホテリシンB、リポソームアンホテリシンB、イトラコナゾール、またはフルコナゾールである。真菌感染がヒストプラスマ症の場合、抗真菌剤は好ましくは、アンホテリシンB、イトラコナゾール、フルコナゾール、またはケトコナゾールである。真菌感染がコクシジウム症の場合、抗真菌剤は好ましくは、フルコナゾールまたはアンホテリシンBである。真菌感染がクリプトコッカス症の場合、抗真菌剤は好ましくは、アンホテリシンB、フルコナゾール、または2つの薬剤の組合せである。感染がクロモミコーシスの場合、抗真菌剤は好ましくは、イトラコナゾール、フルコナゾール、またはフルシトシンである。真菌感染がムコール菌症の場合、抗真菌剤は好ましくは、アンホテリシンBまたはリポソームアンホテリシンBである。肺性もしくは呼吸性真菌感染が偽アレシェリアシス(pseudoallescheriasis)の場合、抗真菌剤は好ましくは、イトラコナゾールまたはミコナゾールである。
【０４０７】
抗真菌療法とその用量、投与経路および推奨される用途は、当技術分野で知られており、Doddsら, 2000 Phamacotherapy, 20(11), 1335-1355；the Physician's Desk Reference（第59版, 2005）；およびthe Merk Manual of Diagnosis and Therapy（第17版, 1999）などの文献に記載されている。
【０４０８】
5.2.6.6  抗原虫剤
原虫感染またはその1以上の症状（例えば、原虫感染に関連する呼吸性感染）を予防、管理、治療、および／または改善するための当業者に良く知られている抗原虫剤および治療法を本発明の組成物および方法に用いることができる。限定されるものでない抗原虫剤の例は、原虫感染を抑制および／または低減する、原虫の複製を阻害および／または低減する、または他の対象への原虫の伝播を抑制および／または低減するタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体、核酸分子、有機分子、無機分子、および小分子を含む。抗原虫剤の具体例としては、限定するものではないが、リン酸クロロキン（Aralen(登録商標)）；硫酸キニン＋次の薬剤の1つ：ドキシサイクリン、テトラサイクリン、またはクリンダマイシン；アトバクオン-プログアニル（Malarone(登録商標)）；メフロキン（Lariam(登録商標)）；メトロニダゾール（Flagyl）；チニダゾール（Tindamax）； 5-ニトロイミダゾール（オルニダゾール）、および米国特許第6,440,936号に記載の薬剤が挙げられる。
【０４０９】
ある実施形態においては、抗原虫剤は、原虫感染を抑制または低減する、を抑制または低減する、または、感染を引き起こす原虫の複製を抑制または低減する、または、他の対象への感染を引き起こす原虫の伝播を抑制または低減する薬剤である。原虫感染がトリオモナス症である場合、抗原虫剤は好ましくは、メトロニダゾール（Flagyl）、チニダゾール（Tindamax）、または5-ニトロイミダゾール（オルニダゾール）である。原虫感染がマラリアである場合、抗原虫剤は、好ましくはリン酸クロロキン（Aralen(登録商標)）；硫酸キニン＋次の薬剤：ドキシサクリン、テトラサイクリン、またはクリンダマイシンの1つ；グルコン酸キニジン＋次の薬剤：ドキシサクリン、テトラサイクリン、またはクリンダマイシンの1つ；Fansidar(登録商標)；Malarone(登録商標)（アトバクオン250mg＋プログアニル100mg）；またはメフロキン（Larium(登録商標)）である。
【０４１０】
抗原虫治療法およびそれらの用量、投与経路、および推奨される利用法は、当技術分野で公知であり、Dodds ら、2000 Pharmacotherapy 20(11） 1335-1355、the Physicians’ Desk Reference（第59版、2005）；the Merk Manual of Diagnosis and Therapy（第17版、1999）；およびthe Centers for Disease Control and Prevention（CDC； http://www.cdc.gov）（Atlanta、GA）が提供する開示物などに記載されている。
【０４１１】
5.3  生物学的アッセイ
5.3.1  抗体の免疫特異性
本発明の抗体もしくはその断片は、当業者に周知の種々の方法によって特徴づけることができる。特に、本発明の抗体もしくはその断片は、EPHA2もしくはEphrinA1に免疫特異的に結合する能力についてアッセイすることができる。このようなアッセイは、溶液中（例えば、Houghten, 1992, Bio/Techniques 13:412-421）、ビーズ上（Lam, 1991, Nature354:82-84）、チップ上（Fodor, 1993, Nature364:555-556）、細菌上（米国特許第5,223,409号）、胞子上（米国特許第5,571,698号；5,403,484号；および5,223,409号）、プラスミド上（Cullら, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1865-1869）またはファージ上（ScottおよびSmith, 1990、Science 249:386-390；Cwirlaら, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6378-6382；およびFelici, 1991, J. Mol. Biol. 222:301-310）で実施することができる（これらの参考文献はそれぞれその全体を参照により本明細書に組み入れる）。EPHA2もしくはEphrinA1に免疫特異的に結合することが同定された抗体もしくはその断片を、次いで、EPHA2もしくはEphrinA1に対するこれらの特異性および親和性についてアッセイすることができる。
【０４１２】
本発明の抗体もしくはその断片を、当技術分野で公知の任意の方法によってEPHA2もしくはEphrinA1に対する免疫特異的結合や他の抗原との交差反応性についてアッセイすることができる。免疫特異的結合や交差反応性を分析するのに用いることができるイムノアッセイには、限定するものではないが、少し名前を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ELISA(酵素結合免疫吸着アッセイ)、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル内沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量測定法、蛍光イムノアッセイ、プロテインAイムノアッセイなどの技法を用いる競合および非競合アッセイ系が含まれる。このようなアッセイは、当該技術で慣用されかつ周知である（例えば、Ausubelら、編、1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol.1, John Wiley&Sons, Inc. New Yorkを参照されたい。これは参照によりその全体を本明細書に組み入れる）。例示のイムノアッセイについて以下に簡単に記載する（しかし、限定を意図するものでない）。
【０４１３】
免疫沈降プロトコルは、一般に、細胞集団をタンパク質ホスファターゼおよび／またはプロテアーゼ阻害剤（例えば、EDTA、PMSF、アプロチニン、バナジン酸ナトリウム）を補充したRJPAバッファー（1％NP-40またはTritonX-100、1％デオキシコール酸ナトリウム、0.1％SDS、0.15M NaCl、pH 7.2での0.01Mリン酸ナトリウム、1％トラジロール）などの溶解バッファーに溶解すること、目的の抗体を細胞溶解液に添加し、40℃である期間（例えば1〜4時間）インキュベートすること、プロテインAおよび／またはプロテインGセファロースビーズを細胞溶解液に添加し、40℃で約1時間以上インキュベートすること、溶解バッファーでビーズを洗浄し、そしてSDS/サンプルバッファーにビーズを再懸濁することを含んでなる。目的の抗体が特定の抗原を免疫沈降させる能力は、例えばウエスタンブロット分析によって評価することができる。抗原に対する抗体の結合を増加しかつバックグラウンドを低減するために改変しうるパラメータについては当業者が精通しているであろう（例えば、細胞溶解液をセファロースビーズによって予め透明化すること）。免疫沈降プロトコルに関するさらなる考察は、例えば、Ausubelら, 編, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol.1, John Wiley & Sons, Inc., New Yorkの10.16.1節を参照されたい。
【０４１４】
ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製すること、ポリアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に依存して8％〜20％SDS-PAGE）におけるタンパク質サンプルを電気泳動すること、タンパク質サンプルをポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、PVDFまたはナイロンなどの膜に転写すること、膜をブロッキング溶液（例えば、3％BSAまたは脱脂乳を含むPBS）中でインキュベートすること、膜を洗浄バッファー（例えば、PBS-Tween20）中で洗浄すること、膜をブロッキングバッファーに希釈した一次抗体（目的の抗体）と共にインキュベートすること、膜を洗浄バッファーで洗浄すること、膜を、ブロッキングバッファーに希釈した、酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）または放射性分子（例えば、32Pまたは125I）とコンジュゲートした二次抗体（一次抗体、例えば抗ヒト抗体を認識する）と共にインキュベートすること、洗浄バッファー中で膜を洗浄すること、ならびに抗原の存在を検出することを含んでなる。シグナル検出を増加しかつバックグラウンドノイズを低減するために変更しうるパラメータについては当業者が精通しているであろう。ウエスタンブロットのプロトコルに関するさらなる考察については、例えばAusubelら, 編, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol.1, John Wiley & Sons, Inc., New Yorkの10.8.1節を参照されたい。
【０４１５】
ELISAは、抗原を調製すること、96ウェルマイクロタイタープレートのウェルを抗原で被覆すること、酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼあるいはアルカリホスファターゼ）などの検出可能な化合物にコンジュゲートした目的の抗体をウェルに添加して、ある期間インキュベートすること、ならびに抗原の存在を検出することを含んでなる。ELISAでは、目的の抗体を検出可能な化合物とコンジュゲートさせる必要がなく、その代わり、検出可能な化合物とコンジュゲートした二次抗体（目的の抗体を認識する）をウェルに添加することができる。さらに、ウェルを抗原で被覆する代わりに、抗体をウェルに被覆することができる。この場合、目的の抗原を上記被覆されたウェルに加えた後に、検出可能な化合物とコンジュゲートした二次抗体を添加することができる。検出されるシグナルを増加するために変更しうるパラメーターならびに当該技術分野で公知のELISAに関するその他の変法については当業者が精通しているであろう。ELISAに関するさらなる考察については、例えばAusubelら, 編, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol.1, John Wiley & Sons, Inc., New York, 11.2.1節を参照されたい。
【０４１６】
抗体の抗原に対する結合親和性および抗体-抗原相互作用のオフ速度（off-rate）は、競合的結合アッセイによって決定し得る。競合的結合アッセイの一例は、標識した抗原(例えば、3Hまたは125I)を目的の抗体と共に、増加量の非標識抗原の存在下でインキュベートすること、および標識した抗原と結合する抗体を検出することを含んでなるラジオイムノアッセイである。本発明の抗体もしくはその断片のEPHA2もしくはEphrinA1に対する親和性および結合オフ速度は、スキャッチャードプロット分析（scathard plot analysis）によるデータから決定できる。二次抗体との競合も、ラジオイムノアッセイを用いて決定できる。この場合、EPHA2もしくはEphrinA1は、増加量の非標識二次抗体の存在下で標識化合物（例えば、3Hまたは125I）にコンジュゲートされた本発明の抗体と共にインキュベートする。
【０４１７】
好ましい実施形態においては、BIAcore動態解析を用いて、本発明の抗体のEPHA2もしくはEphrinA1に対する結合オン（on）およびオフ（off）速度を決定する。BIAcore動態解析は、本発明の固定化抗体を表面に有するチップからのEPHA2もしくはEphrinA1の結合および解離を分析することを含む。典型的なBIAcore動態試験は、上部に抗原が固定化されているセンサチップ表面の上に、0.005％ Tween-20を含有するHBSバッファーに溶かした様々な濃度の抗体試薬（mAb、Fab）250μLを注入することを含む。その流速は、75μL/分に一定に維持する。必要に応じて解離データを15分以上の間収集する。それぞれの注入/解離サイクルに続き、結合したmAbは希酸、通常は10〜100mM HClの短い1分間パルスを用いることにより抗原表面から除去するが、環境が保証すれば他の再生剤を使う。さらに具体的に説明すると、結合速度konおよびオフ速度koffを測定するため、標準のアミンカップリング化学、すなわちEDC／NHS法（EDC＝N-ジエチルアミノプロピル-カルボジイミド）を利用して、抗原をセンサチップ表面上に直接に固定化する。つまり、10mM NaOAc中の5〜100nM抗原溶液、pH4またはpH5を調製し、約30〜50RUの値の抗原が固定化されるまで、EDC/NHSで活性化した表面上を通過させる。この後、未反応の活性化エステルは、1M Et-NH2の注入によって「キャップ」が解かれる。抗原を含まないブランク表面を、同一の固定条件下で対照の目的で調製する。適当な表面が調製されると、それぞれ1つの抗体試薬の適当な連続希釈液をHBS/Tween-20で調製し、直列に接続された抗原および対照細胞の両方の表面上を通過させる。調製する抗体濃度の範囲は、平衡結合定数KDをどのくらいに見積もるかに応じて変化する。上記のように、結合した抗体は、各注入／解離サイクルの後、適当な再生剤を用いて除去する。
【０４１８】
本発明の抗体もしくはその断片を、当業者に公知の技術を用いて、EphA2もしくはEphrinA1のその宿主細胞受容体もしくはリガンドに対する結合を阻害する能力について、アッセイすることができる。例えば、EphrinA1を発現する細胞を、抗体もしくはその断片の存在または不在下でEphA2と接触させ、EphA2の結合を阻害する抗体もしくはその断片の能力を、例えば、フローサイトメトリーまたはシンチレーションアッセイを用いて測定することができる。EphA2または抗体もしくは抗体断片を、放射性標識(例えば、32P、35Sおよび125I)または蛍光標識(例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、o-フタルデハイド（o-phthaldehyde）およびフルオレサミン)などの検出可能な化合物によって標識して、EphA2とその宿主細胞受容体の間の相互作用を検出することが可能である。あるいは、EphA2のその受容体との結合に対する抗体もしくはその断片の阻害能を、無細胞アッセイにおいて決定することができる。例えば、EphA2を、抗体もしくはその断片と接触させ、EphA2のその宿主細胞受容体への結合を阻害する抗体または抗体断片の能力を決定することができる。好ましくは、抗体または抗体断片は固体支持体上に固定化し、EphA2は検出可能な化合物によって標識する。または、EphA2は固体支持体上に固定化し、抗体もしくはその断片は検出可能な化合物によって標識する。EphA2は、部分的にもしくは完全に精製（例えば、部分的もしくは完全に他のポリペプチドから遊離する）してもよいし、または細胞溶解液の一部であってもよい。さらに、EphA2は、EphA2、誘導体、類似体またはその断片とグルタチオニン-S-トランスフェラーゼなどのドメインを含む融合タンパク質であってもよい。あるいは、EphA2を、当該技術で周知の技術(例えば、ビオチン化キット、Pierce Chemicals;Rockford、IL)を用いてビオチン化してもよい。
【０４１９】
5.3.2  In Vitro研究
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、免疫細胞（例えば、T細胞、好中球および肥満細胞）、内皮細胞、および上皮細胞の生物学的活性をモジュレートする能力について、in vitroおよび／またはin vivoで試験することができる。免疫細胞（例えば、T細胞、B細胞、肥満細胞、マクロファージ、好中球および好酸球）、内皮細胞、および上皮細胞の生物学的活性をモジュレートする本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法の能力は、抗原の発現（例えば、EphA2による遺伝子の活性化）およびリンパ球活性化(例えば、Lγ-6A/E）に関与する遺伝子の検出、免疫細胞、内皮細胞および／または上皮細胞の増殖の検出、シグナリング分子の活性化の検出、免疫細胞（例えば、T細胞、B細胞、肥満細胞、マクロファージ、好中球、および好酸球）、内皮細胞および／または上皮細胞のエフェクター機能の検出、または免疫細胞、内皮細胞、および／または上皮細胞の分化の検出によって評価することができる。当業者に公知の技術をこれらの活性の測定に利用することができる。例えば、細胞増殖は、3H-チミジン取り込みアッセイおよびトリパンブルー法による細胞計数によってアッセイ可能である。抗原発現は、非限定的に、例えば、ウエスタンブロット、免疫組織化学ラジオイムノアッセイ、ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル内沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量測定法、蛍光イムノアッセイ、プロテインAイムノアッセイ、ならびにFACS分析などの技術を用いる競合および非競合アッセイ系を含むイムノアッセイによってアッセイ可能である。シグナリング分子の活性化は、例えば、キナーゼアッセイおよび電気泳動シフトアッセイ（EMSA）によってアッセイ可能である。肥満細胞の脱顆粒は、例えば高速液体クロマトグラフィーによってセロトニン（5-HT）放出またはヒスタミン放出を測定することによってアッセイすることができる（例えば、Taylorら、1995, Immunology86(3):427-433およびKurosawaら、1998, Clin Exp Allergy 28(8):1007-1012を参照）。
【０４２０】
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法は、ヒトにおける使用に先立ち、所望の治療的または予防的な活性について好ましくはin vitroで、次いでin vivoで試験される。例えば、特定の医薬品組成物の投与が必要かどうかを決定するために利用しうるアッセイは、患者の組織サンプルを培養において増殖し、医薬品組成物に曝露するかそうでなければ接触させ、そして組織サンプルに対する上記組成物の効果を観察する細胞培養アッセイを含む。組織サンプルは、患者からの生検によって採取できる。この試験により、各患者に最も効果的な治療(例えば予防剤または治療物質)を治療学的に同定することが可能である。種々の特定の実施形態では、感染（例えば、上皮細胞）に関わる細胞型の代表的な細胞を用いてin vitroアッセイを実施することで、本発明の医薬品組成物がそうした細胞型に対して所望の効果を有するかを判定することができる。
【０４２１】
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物または併用療法の末梢血リンパ球数に対する効果を、当業者に公知の標準的技術を用いてモニター／評価することができる。対象における末梢血リンパ球数は、例えば該対象由来の末梢血サンプルを採取し、例えばFicoll-Hypaque（Pharmacia）勾配遠心分離法を用いてリンパ球を血漿などの末梢血の他の成分から分離し、そしてトリパンブルーを用いてリンパ球を計数することによって決定できる。例えば、対象における末梢血T細胞数は、例えばFicoll-Hypaque（Pharmacia）勾配遠心分離法を用いて、リンパ球を血漿などの末梢血の他の成分から分離し、FITCあるいはフィコエリトリンにコンジュゲートしたT細胞抗原へ向かう抗体によってT細胞を標識し、そしてFACSによってT細胞数を測定することによって決定できる。
【０４２２】
ウイルス感染症またはその1以上の症状を治療、管理、予防、および／または改善する本発明の方法を、in vitroアッセイにおいてウイルス複製を阻害しまたはウイルス負荷を低減する能力について試験することができる。例えば、ウイルス複製は、Johnsonら, 1997, Journal of Infectious Diseases 176:1215-1224に記載されるプラークアッセイによってアッセイ可能である。本発明の方法に従って投与されるEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法は、ウイルスポリペプチドの発現を阻害または下方制御するその能力についてアッセイすることができる。ウエスタンブロット分析、ノーザンブロット分析、RT-PCRなどの当業者に公知の技術（限定するものではないが）を用いることで、ウイルスポリペプチドの発現が測定可能である。
【０４２３】
細菌感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理、および／または改善する本発明の方法を、当技術分野で周知のin vitroアッセイにおいて、感染症を引き起こす細菌に対する活性について試験することができる。当技術分野で公知のin vitroアッセイを用いることで、本発明の治療（例えば、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、他の予防剤または治療物質、それらの組合せ、またはそれらの組成物）に対する細菌の耐性の存在または発生を試験することができる。このようなin vitroアッセイは、Galesら, 2002, Diag.Nicrobiol.Infect.Dis.44(3):301-31；Hicksら, 2002, Clin. Microbiol. Infect. 8(11):753-757；およびNicholsonら, 2002, Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 44(1):101-107に記載されている。
【０４２４】
真菌感染症またはその1以上の症状を治療、管理、予防、および／または改善する本発明の治療（例えば、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター単独または本発明の抗体以外の予防剤または治療物質との併用）を、種々の真菌種に対する抗真菌活性について試験することができる。当該技術で周知の標準的抗真菌アッセイのいずれかを用いることで、治療の抗真菌活性を評価することができる。種々の真菌種に対する抗真菌作用を試験することができる。National Committee for Clinical Laboratories（NCCLS）（National Committee for Clinical Laboratories Standards. 1995年、Proposed Standard M27T.Villanova、Pa.を参照、その全てが参照により本明細書にその全体を組み入れる）によって推奨される試験および当業者に公知の他の方法（Pfallerら.、1993、Infectious Dis. Clin. N. Am. 7:435-444）を用いて、治療の抗真菌作用を評価することができる。治療の抗真菌特性はまた、真菌溶解アッセイから、ならびに、特に、成長阻害アッセイ、蛍光に基づく真菌生存度アッセイ、フローサイトメトリー分析、および当業者に公知の他の標準アッセイなどの他の方法により決定することもできる。
【０４２５】
例えば、治療の抗真菌活性は、当業者に周知のプロトコルを使用するマクロ液体希釈法および／またはミクロ液体希釈法を用いて試験することができる（例えば、Clancyら, 1997 Journal of Clinical Microbiology, 35(11):2878-82；Ryderら, 1998, Antimicrobial Agents and Chemotherapy、42(5):1057-61；米国特許第5,521,153号；米国特許第5,883,120号；米国特許第5,521,169号を参照、すべて参照により本明細書にその全体を組み入れる）。つまり、真菌株を、適当な液体培地で、使用する特定の真菌株に応じた適当な温度で、使用する特定の真菌株に応じた所定の期間、培養しかつ増殖する。次いで、接種材料を測光法によって調製し、懸濁液の混濁度を標準、例えばMcFarland標準の混濁度に適合させる。治療が接種材料の混濁度に与える効果は、視覚でまたは分光光度的に決定する。こうして接種材料の可視的増殖を阻止するリード化合物の最低濃度（培地混濁度を定量することにより測定される）として定義される治療の最小阻害濃度（MIC）が決定される。
【０４２６】
また治療における抗真菌活性は、当業者に周知の比色分析に基づくアッセイの利用によって決定できる。治療における抗真菌活性を評価するために利用できる比色分析アッセイの1例は、Pfallerら, 1994, Journal of Clinical Microbiology, 32(8):1993-6（参照によりその全体を本明細書に組み入れる）により記載されており；またTiballiら, 1995, Journal of Clinical Microbiology, 33(4):915-7も参照されたい。このアッセイでは、酸化還元指示薬（Alamar Biosciences, Inc., Sacramento, CA）を用いる比色分析指標を採用している。
【０４２７】
さらに治療における抗真菌活性は、当業者に周知の光度測定アッセイの利用によって決定できる（例えば, Clancyら、1997, Journal of Clinical Microbiology, 35(11):2878-82；Jahnら, 1995年, Journal of Clinical Microbiology, 33(3):661-667を参照、これらはそれぞれ参照により本明細書にその全体を組み入れる）。この光度測定アッセイは、3-(4,5-ジメチル-2-チアゾリル)-2,5-ジフェニル-2H-テトラゾリウムブロミド（MTT）のホルマザンへの還元を介する生真菌によるミトコンドリア呼吸の定量に基づく。このアッセイによって決定されるMICは、光学密度の最初の急激な低下に関連する試験療法の最高濃度として定義される。いくつかの実施形態では、マクロ液体希釈法、ミクロ液体希釈法およびMTTアッセイを並行使用して、治療を抗真菌活性についてアッセイする。
【０４２８】
さらに、当業者に公知の任意のin vitroアッセイを用いて、呼吸器感染症またはその1以上の症状に対する、本明細書で開示される抗体、組成物、併用療法の予防的および／または治療的有用性を評価することができる。
【０４２９】
5.3.3  In Vivoアッセイ
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、ヒトにおける使用に先立ち、適切な動物モデル系において試験することができる。上記動物モデル系としては、限定するものではないが、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ブタ、イヌ、ウサギなどが含まれる。当技術分野で周知の任意の動物系を用いることができる。この手順のいくつかの態様は様々であり；該態様としては、限定するものではないが、治療（例えば予防剤および／または治療物質）の投与の時間的処方体制、つまりかかる治療を別々にまたは混合して施すかどうか、および治療を施す頻度が含まれる。
【０４３０】
ウイルス感染用の動物モデルも、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法の有効性が評価するために利用することができる。EBV関連疾患、γヘルペスウイルス、感染性単核球症、サル免疫不全ウイルス（SIV）、ボルナ病ウイルス感染症、肝炎、水疱瘡ウイルス感染症、ウイルス性肺炎、病原性エプスタインバーウイルス、ネコ免疫不全ウイルス(FIV)、HTLV I型感染症、ヒトロタウイルス、および陰部ヘルペスなどのウイルス感染症用の動物モデルが作製されている（例えば、Hayashiら, 2002, Histol Histopathol 17(4):1293〜310；Aricoら, 2002, J Interferon Cytokine Res 22(11):1081-8；Flanoら, 2002, Immunol Res 25(3):201-17；Sauermann, 2001年, Curr Mol Med 1(4):515-22；Pletnikovら, 2002, Front Biosci 7:d593〜607；Englerら, 2001, Mol Immunol 38(6):457-65；Whiteら, 2001, Brain Pathol 11(4):475-9；DavisおよびMatalon, 2001, News Physiol Sci 16:185-90；Wang, 2001, Curr Top Microbiol Immunol. 258:201-19；Phillipsら, 2000, J Psychopharmacol. 14(3):244-50；Kazanji, 2000, AIDS Res Hum Retroviruses. 16(16):1741-6；Saifら, 1996, Arch Virol Suppl. 12:153-61；およびHsiungら, 1984, Rev Infect Dis. 6(1):33-50を参照）。
【０４３１】
PIV（例えば、Shephardら、2003 Res Vet Sci 74(2):187〜190；Ottoliniら、2002 J Infect Dis 186(12):1713-1717を参照）、RSV（例えば, Culleyら, 2002 J Exp Med 196(10):1381-1386；およびCurtisら、2002 Exp Biol Med 227(9):799-802を参照）など（これらに限定されない）のウイルス性呼吸器感染症に対する動物モデルが開発されている。特定の実施形態では、コットンラットは、本発明の方法に従って、本発明の抗体、組成物、または併用療法が投与し、105pfuのRSVでチャレンジし、4日以上経てからラットを殺し、RSV滴定濃度および抗RSV抗体血清の滴定濃度を測定する。したがって105pfuのRSVでチャレンジしたが製剤が投与されていないコットンラットに対して、105pfuのRSVでチャレンジしたコットンラットにおけるRSV滴定濃度において2 logの低下または99％の低下をもたらす用量が、RSV感染と関連する1以上の症状の治療、予防または改善のためにヒトに投与することができる製剤の用量である。さらに、この実施形態に従って、殺したラット由来の組織(例えば肺組織)を、組織学的変化について試験することができる。
【０４３２】
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、ウイルス感染症の時間経過を低減する能力について試験することができる。本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、ウイルス感染症に罹患するヒトの生存期間を少なくとも25％、好ましくは、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％増加させるその能力について試験することができる。さらに、本発明の抗体、組成物、または併用療法を、ウイルス感染症に罹患しているヒトの入院期間を少なくとも60％、好ましくは少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％低減するその能力について試験することもできる。当業者に公知の技術を用いることで、in vivoで本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法の機能を分析することができる。
【０４３３】
細菌感染症用の動物モデルを用いることで、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法の有効性を評価することができる。ヘリコバクターピロリ感染症、生殖器性マイコプラズマ病、原発性硬化性胆管炎、コレラ、シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）による慢性呼吸器感染症、レジオネラ症、胃十二指腸潰瘍疾患、細菌性髄膜炎、胃ヘリコバクター感染症、肺炎球菌性中耳炎、実験的アレルギー性神経炎、癩性神経障害、マイコバクテリア感染症、心内膜炎、アエロモナス(Aeromonas)関連腸炎、バクテロイディス・フラジリス（Bacteroides fragilis）感染症、梅毒、連鎖球菌性心内膜炎、急性血行性骨髄炎、ヒト草原熱、中毒性ショック症候群、嫌気性感染症、大腸菌感染症、肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma pneumoniae）感染症などの細菌感染症についての動物モデルが作製されている（例えば, Sugiyamaら, 2002, J Gastroenterol.37 Suppl 13:6-9；Brownら, 2001, Am J Reprod Immunol. 46(3):232-41；Vierling, 2001, Best Pract Res Clin Gastroenterol. 15(4):591-610；Klose, 2000, Trends Microbiol. 8(4):189-91；Stotlandら, 2000, Pediatr Pulmonol. 30(5):413-24；Brielandら, 2000, Immunopharmacology 48(3):249-52；Lee, 2000, Baillieres Best Pract Res Clin Gastroenterol. 14(1):75-96；KoedelおよびPfister, 1999, Infect Dis Clin North Am. 13(3):549-77；Nedrud, 1999, FEMS Immunol Med Microbiol. 24(2):243-50；Prellnerら, 1999, Microb Drug Resist. 5(1):73-82；Vriesendorp, 1997, J Infect Dis. 176 Suppl 2:S164-8；ShettyおよびAntia, 1996, Indian J Lepr. 68(1):95-104；Balasubramanianら, 1994, Immunobiology 191(4-5):395-401；Carbonら, 1994, Int J Biomed Comput. 36(1-2):59-67；Haberbergerら, 1991, Experientia. 47(5):426-9；Onderdonkら, 1990, Rev Infect Dis. 12 Suppl 2:S169-77；WicherおよびWicher, 1989, Crit Rev Microbiol. 16(3):181-234；Scheld, 1987, J Antimicrob Chemother. 20 Suppl A:71-85；EmslieおよびNade, 1986, Rev Infect Dis. 8(6):841-9；Ridgwayら, 1986, Lab Anim Sci. 36(5):481-5；QuimbyおよびNguyen, 1985, Crit Rev Microbiol. 12(1):1-44；Onderdonkら, 1979, Rev Infect Dis. 1(2):291-301；Smith, 1976, Ciba Found Symp. (42):45-72, およびTaylor-Robinson, 1976, Infection. 4(1 Suppl):4-8を参照）。
【０４３４】
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法は、細菌感染症、好ましくは細菌性呼吸器感染症の時間経過を少なくとも25％、好ましくは少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％低減するその能力について試験することができる。本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、細菌感染症に罹患するヒトの生存期間を少なくとも25％、好ましくは、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％増加させるその能力について試験することができる。さらに、本発明の方法に従って投与されるEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、細菌感染症に罹患しているヒトの入院期間を少なくとも60％、好ましくは少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％低減するその能力について試験することができる。当業者に公知の技術を用いて、in vivoで本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または本発明の併用療法の機能を分析することができる。
【０４３５】
真菌感染症の予防、管理、治療、または改善における本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法の有効性を、そのような感染症用の動物モデルにおいて評価することができる。カンジダ感染症、接合菌症、カンジダ乳腺炎、潜在性トリコスポロン血症を伴う進行性播種性トリコスポロン症、播種性カンジダ症、肺パラコクシジオイデス症、肺アスペルギルス症、ニューモシスティス・カリニ（Pneumocystis carinii）肺炎、クリプトコッカス（cryptococcal）髄膜炎、コクシジオイデス（coccidioidal）髄膜脳炎および脳脊髄脈管炎、アスペルギルス・ニガー感染症、フサリウム（Fusarium）角膜炎、副鼻腔真菌症、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）心内膜炎、脛骨軟骨発育不全症、カンジタ・グラブラタ（Candida glabrata）膣炎、口腔咽頭内カンジダ症、X連鎖慢性肉芽腫症、足白癬、皮膚カンジダ症、真菌性胎盤炎、播種性トリコスポロン症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、真菌性角膜炎、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）感染症、真菌性腹膜炎、カーブラリア（Curvularia）葉枯病、ブドウ球菌眼内炎、スポロトリクム症、および皮膚糸状菌症などの真菌感染症についての動物モデルが作製されている（例えば、Arendrupら, 2002, Infection30(5):286-91；Kamei, 2001, Mycopathologia 152(1):5-13；Guhadら, 2000, FEMS Microbiol Lett. 192(1):27-31；Yamagataら, 2000, J Clin Microbiol. 38(9):32606；Andrutisら, 2000, J Clin Microbiol. 38(6):2317-23；Cockら, 2000, Rev Inst Med Trop Sao Paulo 42(2):59-66；Shibuyaら, 1999, Microb Pathog. 27(3):123-31；Beersら, 1999, J Lab Clin Med. 133(5):423-33；Najvarら, 1999, Antimicrob Agents Chemother. 43(2):413-4；Williamsら, 1988, J Infect Dis. 178(4):1217-21；Yoshida, 1988, Kansenshogaku Zasshi. 1998Jun；72(6):621-30；Alexandrakisら, 1998, Br J Ophthalmol. 82(3):306-11；Chakrabartiら, 1997, J Med Vet Mycol. 35(4):295-7；Martinら, 1997, Antimicrob Agents Chemother. 41(1):13-6；Chuら, 1996, Avian Dis. 40(3):715-9；Fidelら, 1996, J Infect Dis. 173(2):425-31；Coleら, 1995, FEMS Microbiol Lett. 15；126(2):177-80；Pollockら, 1995, Nat Genet. 9(2):202-9；Uchidaら, 1994, Jpn J Antibiot. 47(10):1407-12；:Maebashiら, 1994, J Med Vet Mycol. 32(5):349-59；JensenおよびSchonheyder, 1993, J Exp Anim Sci. 35(4):155-60；GokaslanおよびAnaissie, 1992, Infect Immun. 60(8):3339-44；Kurupら, 1992, J Immunol. 148(12):3783-8；Singhら, 1990, Mycopathologia. 112(3):127-37；SalkowskiおよびBalish, 1990, Infect Immun. 58(10):3300-6；Ahmadら, 1986, Am J Kidney Dis. 7(2):153-6；Alture-Werber E, Edberg SC, 1985, Mycopathologia. 89(2):69-73；Kaneら, 1981, Antimicrob Agents Chemother. 20(5):595-9；Barbeeら, 1977, Am J Pathol. 86(1):281-4；およびMaestroneら, 1973, Am J Vet Res. 34(6):833-6を参照）。カンジタ・アルビカンス（Candida albicans）、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）、浸潤性肺アスペルギルス症、ニューモシティス・カリニ（Pneumocystis carinii）、肺クリプトコックス症、シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、カンニンガメラ・バーソレティア（Cunninghamella bertholletia）などの真菌性呼吸器感染症についての動物モデル（例えば、Arataniら, 2002 Med Mycol 40(6):557-563；Bozzaら, 2002 Microbes Infect4(13):1281-1290；Kurupら, 2002、Int Arch Allergy Immunol 129(2):129-137；Horiら, 2002 Eur J Immuno 32(5):1282-1291；Riveraら, 2002、J Immuno 168(7):3419-3427；Vassalloら, 2001, Am J Respir Cell Mol Biol 25(2):203-211；Wilderら, 2002 Am J Respir Cell Mol Biol26(3):304-314；Yonezawaら, 2000 J Infect Chemother 6(3):155-161；Cacciapuotiら, 2000 Antimicrob Agents Chemother 44(8):2017-2022；およびHondaら, 1998 Mycopathologia 144(3):141-146を参照）。
【０４３６】
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、真菌性感染症の時間経過を少なくとも25％、好ましくは少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％低減するその能力について試験することができる。本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、真菌性感染症に罹患するヒトの生存期間を少なくとも25％、好ましくは、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％増加させるその能力について試験することができる。さらに、本発明の方法に従って投与されるEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法を、真菌性感染症に罹患するヒトの入院期間を少なくとも60％、好ましくは少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％低減するその能力について試験することができる。当業者に公知の技術を用いることで、in vivoで本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、または併用療法の機能を分析することができる。
【０４３７】
さらに、当業者に公知の任意のアッセイを用いて、感染症またはその1以上の症状の予防、治療、管理、および／または改善するための、本明細書で開示されるEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、併用療法の予防的および／または治療的有用性を評価することができる。
【０４３８】
5.3.4  毒性アッセイ
本発明の予防的および／または治療的プロトコルの毒性および／または有効性を、細胞培養または実験動物における標準的な製薬的手順、例えばLD50（集団の50％が死に至る用量）およびED50（集団の50％に対して治療効果が得られる用量）によって決定することができる。毒性効果と治療効果の用量比は治療指数であり、LD50／ED50比として表現できる。高い治療指数を示す治療が好ましい。毒性の副作用を示す治療を用いることができる一方で、非感染細胞に対する潜在的な損傷を最小限にし、それにより副作用を低減させるために、患部組織部位に上記薬剤を標的にする送達システムを設計するのに注意が払われるべきである。
【０４３９】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトへの使用のための予防物質および／または治療物質の用量範囲を処方するのに使用することができる。該薬剤の用量は、好ましくは毒性がほとんどないか全くない状態のED50を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、使用される剤形や利用される投与経路に依存して同範囲内で変化することができる。本発明の方法を用いたいかなる治療においても、治療的に有効な用量は、最初は細胞培養アッセイから推定できる。用量を動物モデルにおいて調製することで、細胞培養で決定されるように、IC50(すなわち、症状の半阻害を達成する試験化合物の濃度)を含む循環血漿濃度範囲が得ることができる。ヒトにおける有効量をより正確に決めるのに、上記情報は利用できる。血漿濃度は、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定可能である。
【０４４０】
さらに、当業者に公知の任意のアッセイを使用することで、感染症またはその1以上の症状に対する、本明細書で開示されるEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物、併用療法の予防的および／または治療的有用性を評価することができる。
【０４４１】
5.4   EphA2／EphrinA1モジュレーターを投与する組成物および方法
本発明は、感染症またはその1以上の症状の予防、治療、管理および／または改善を提供する。特定の実施形態では、組成物は、1以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターを含む。他の実施形態では、組成物は、1以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター以外の1以上の予防または治療物質とを含む。好ましくは、上記薬剤は感染症を予防、治療、管理および／または改善するために有用であることが公知であるかまたは用いられていたかまたは現在用いられている。
【０４４２】
特定の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと１以上の免疫モジュレーターを含む。他の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと１以上の抗炎症剤を含む。他の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと１以上の抗菌剤を含む。他の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと１以上の抗ウイルス剤を含む。他の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと１以上の抗菌剤を含む。他の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと次の予防または治療物質のそれぞれの1、2、3以上のいずれかの組合せを含む：免疫モジュレーター、抗炎症剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌剤。さらに他の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターと１以上のインテグリンαvβアンタゴニストを含む。他の実施形態においては、組成物は１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターとVITAXIN(登録商標)、シプリズマブ、パリビズマブ、抗IL-9抗体またはそれらの組合せを含む。予防または治療物質に加えて、本発明の組成物は担体も含むことができる。
【０４４３】
本発明の組成物は、医薬組成物（例えば、対象または患者への投与に適した組成物）の製造において有用なバルク製剤組成物を含み、上記組成物はユニット投薬形式の調製に使用することができる。好ましい実施形態では、本発明の組成物は医薬組成物である。そのような組成物は、予防上または治療上有効な量の1以上の予防物質または治療物質（例えば、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターまたは他の予防物質または治療物質）および製薬上許容しうる担体とを含む。好ましくは、医薬組成物は、対象への投与経路に適するように製剤化される。
【０４４４】
特定の実施形態では、「製薬上許容しうる」という用語は、米国の連邦規制当局または州政府によって承認されているか、米国薬局方または動物、特にヒトについて使用が他の一般的に認められた薬局方に列記されていることを意味する。「担体」という用語は、それと共に治療物質が投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント(完全および不完全)）、賦形剤またはビヒクルを指す。そのような製薬上の担体は、水および油などの無菌液とすることができ、落花生油、大豆油、鉱油、胡麻油等の石油、動物、植物または合成起源のものを含む。医薬組成物を静脈内に投与する場合は、水が好ましい担体である。食塩水およびブドウ糖およびグリセリン溶液も特に注射可能な溶液のために液体担体として使用することもできる。適切な製薬上の賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含む。組成物はまた、所望であれば、小量の湿潤剤または乳化剤、pH緩衝剤を含有できる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸薬、カプセル、パウダー、徐放製剤等の形態をとることができる。
【０４４５】
一般に、本発明の組成物の成分はそれぞれ別々に供給されるか、例えば、凍結乾燥粉または水を含まない濃縮液として、活性剤の量を示すアンプルかサシェットなどの密封容器に気密に封止したユニット投薬形式で一緒に混合される。組成物を注入によって投与する場合、組成物を無菌の製薬グレード水または食塩水を含有する注入ボトルとともに支給することができる。組成物を注入によって投与する場合、投与に先立って成分を混合できるように、注入用の無菌水または食塩水のアンプルを備えることができる。
【０４４６】
本発明の組成物は中性または塩の形態で製剤化できる。製薬上許容しうる塩としては、塩酸、燐酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する陰イオンで形成されたもの、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する陽イオンで形成されたものが含まれる。
【０４４７】
様々な送達システムが当技術分野で知られており、予防物質もしくは治療物質または本発明の組成物を投与して、感染症、炎症性疾患、自己免疫障害、増殖性疾患または感染症（好ましくは呼吸器の感染症）またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善することができ、例えば、リポソーム中のカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、抗体または抗体断片を発現できる組み換え細胞、受容体を介したエンドサイトーシス（例えば、WuおよびWu, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432 (1987)参照）、レトロウイルスその他のベクターなどの一部としての核酸の構築が含まれる。本発明の治療（例えば、予防物質または治療物質）を投与する方法としては、限定されるものではないが、非経口的投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）が含まれる。さらに、例えば、吸入器またはネビュライザーを使用したりエアロゾル剤との製剤化によって肺投与も使用できる。例えば、米国特許第6,019,968号、5,985,320号、5,985,309号、5,934,272号、5,874,064号、5,855,913号、5,290,540号および4,880,078号;および国際公開WO 92/19244号、WO 97/32572号、WO 97/44013号、WO 98/31346号およびWO 99/66903号参照（その各々は参照により本明細書にその全体を組み入れる）。一実施形態では、本発明の抗体、併用療法または組成物は、Alkermes AIR(登録商標)肺薬物送達技術（Alkermes社、Cambridge、MA）を使用して投与する。特定の実施形態では、本発明の予防物質または治療物質を、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、肺または皮下に投与する。予防物質または治療物質は、任意の便利な経路、例えば、注入もしくはボーラス注射、または上皮もしくは粘膜皮膚の内層（例えば、口内粘膜、直腸および腸の粘膜など）を介した吸収によって投与してもよいし、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与してもよい。投与は全身的でも局所的でもよい。
【０４４８】
特定の実施形態では、治療を必要とする領域に本発明の予防物質または治療物質を局所的に投与することが望ましい。これには何らの制限もないが、例えば、局所的注入、注射によって、またはインプラントによって行ってもよい。インプラントは、多孔性または非多孔性の材料であり、シリコン膜、ポリマー、繊維状マトリックス（例えば、Tissuel(登録商標)）またはコラーゲンマトリックスなどの膜およびマトリックスが含まれる。一実施形態では、本発明の1以上の抗体の有効量を、感染症のリスクがあるか、これに罹患している対象に対し、病変部分に局所的に投与する。他の実施形態では、本発明の1以上のEphA2／EphrinA1モジュレーターの有効量を、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター以外の1以上の治療（例えば、予防物質または治療物質）の有効量と併用して、感染症のリスクがあるか、またはこれに罹患している対象に対し、病変部分に局所的に投与する。
【０４４９】
さらに他の実施形態では、本発明の治療は、制御放出または徐放性システムで送達することができる。一実施形態では、制御放出または徐放性を実現するためにポンプを使用してもよい（Langer,前掲；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 20；Buchwaldら, 1980, Surgery88 : 507；Saudekら, 1989, N. Engl. J. Med. 321: 574を参照）。他の実施形態では、本発明の治療の制御放出または徐放性システムを実現するために高分子材料を使用することができる（例えば、Medical Applications of Controlled Release, LangerおよびWise（編), CRC Pres. , Boca Raton, Florida (1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (編), Wiley, New York(1984) ；RangerおよびPeppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23: 61；また、Levyら, 1985, Science228 : 190；Duringら, 1989, Ann. Neurol. 25: 351；Howardら, 1989, J. Neurosurg. 7 1: 105参照）；米国特許第5,679,377号；米国特許第5,916,597号；米国特許第5,912,015号；米国特許第5,989,463号；米国特許第5,128,326号；国際公開WO 99/15154号;および国際公開99/20253号参照）。徐放性製剤で使用されるポリマーの例としては、限定するものではないが、ポリ(メタクリル酸2-ヒドロキシエチル）、ポリ(メタクリル酸メチル)、ポリ(アクリル酸)、ポリ(エチレン-コ-酢酸ビニル)、ポリ(メタクリル酸)、ポリグリコリド（PLG）、ポリアンヒドライド、ポリ(N-ビニルピロリドン)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリアクリルアミド、ポリ(エチレングリコール)、ポリラクチド（PLA）、ポリ(ラクチド-コ-グリコリド)（PLGA）およびポリオルトエーテルが含まれる。好ましい実施形態では、徐放性製剤で使用されるポリマーは不活性で、濾過され得る不純物がなく、保存時に安定していて、無菌で、かつ生物分解性である。さらに他の実施形態では、制御放出または徐放性システムを予防または治療部位の近傍に配置することができ、これにより全身服用量の一部だけを必要とすることができる(例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release,前掲, vol. 2, pp. 115-138 (1984) 参照)。
【０４５０】
制御放出システムはLanger（1990, Science 249: 1527-1533）による総説で考察されている。当業者に知られているどのような技術も、本発明の1以上の治療物質を含む徐放性製剤を生産するために使用することができる。例えば、米国特許第4,526,938号、国際公開WO 91/05548号、国際公開WO 96/20698号、Ningら, 1996,「徐放ゲルを用いるヒト大腸癌異種移植片の腫瘍内ラジオイムノアッセイ（Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel）」Radiotherapy & Oncology 39: 179-189；Songら, 1995, 「長期循環エマルジョンの抗体が介在する肺標的化（Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions）」PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50. 372-397, Cleekら, 1997, 「心血管施用のためのbFGFに用いる生分解性ポリマー担体（Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application）」Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24: 853-854,およびLamら, 1997,「局所送達用組換えヒト化モノクローナル抗体のミクロカプセル化（Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery）」Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24: 759-760参照。これらの各々は、参照により本明細書にその全体を組み入れる。
【０４５１】
特定の実施形態では、本発明の組成物が予防物質または治療物質をコードする核酸である場合、核酸が細胞内に入るように適当な核酸発現ベクターの一部として、例えば、レトロウイルスベクターを使用して構築し、それを投与することにより（米国特許第4,980,286号参照）、または直接注射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Biolistic（Dupont））の使用により、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤で被覆することにより、または核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに連結して投与することにより（例えば、Joliotら, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868を参照）、核酸をin vivoで投与してそのコードされた予防物質または治療物質を発現させることができる。あるいは、核酸を細胞内に導入し、相同的組換えによって発現用の宿主細胞DNAに組み込むことができる。
【０４５２】
本発明の医薬組成物はその意図した投与経路と適合するように製剤化される。投与経路の例としては、限定するものではないが、腸管外、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮的（例えば、局所的）、経粘膜および直腸投与が含まれる。特定の実施形態では、医薬組成物を、ヒトの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内、または局所的投与に適合する医薬組成物として、慣用の手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用組成物は無菌の等張緩衝剤水溶液の溶液である。必要に応じて、組成物は、可溶化剤および注射部位での痛みを緩和するようにリグノカインなどの局所麻酔薬を含んでもよい。
【０４５３】
本発明の組成物を局所的に投与する場合は、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアゾール、溶液、乳剤または当業者に良く知られている他の形態で製剤化することができる。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms,第19版., Mack Pub. Co., Easton, PA (1995)を参照。非スプレー式局所投薬形態のために、典型的には、局所的用途と適合する担体もしくは1以上の賦形剤を含み、かつ好ましくは水より大きな動粘性係数をを有する、粘着性から半固体または固体形態が使用される。適当な製剤は、限定されないが、溶液、懸濁液、乳剤、クリーム、軟膏（ointment）、パウダー、塗布剤、軟膏（salva）等を含み、これらは、必要に応じて、殺菌するか、例えば、浸透圧などの様々な特性に影響を及ぼす補助剤（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤または塩）と混合する。他の適当な局所的の投薬形態としては噴霧可能なエアゾール製剤であって、活性成分が（好ましくは、固体または液体の不活性担体と組み合わせた）加圧された揮発物（例えば、フロンなどのガス状噴射剤）との混合物内、またはスクイーズボトル内にパッケージングされる、上記製剤を含む。所望であれば、モイスチャライザーまたは湿潤剤も医薬組成物および投薬形態に加えることができる。そのような追加成分の例は当技術分野において良く知られている。
【０４５４】
本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合には、組成物はエアゾール形態、スプレー、ミストまたは滴下剤の形態で製剤化できる。特に、本発明によって使用するための予防物質または治療物質は、適当な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当なガス）と共に使用して、加圧されたパックまたはネビュライザーからエアゾールスプレーの形で都合よく送達することができる。加圧されたエアゾールの場合には、一定量を送達するための弁を備えることにより投薬ユニットを決定してもよい。吸入器や通気器で使用するためのカプセルおよびカートリッジ（例えば、ゼラチンからなる）を化合物のパウダーミックス、およびラクトースまたはデンプンなどの適当なパウダーベースを含むように製剤化してもよい。
【０４５５】
本発明の方法が経口投与を含む場合、組成物は、錠剤、カプセル、サシェット、ゲルキャップ（gelcaps）、溶液、懸濁液等の形態で経口的に製剤化できる。結着剤（例えば、予めゼラチン化されたコーンスターチ、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースまたはリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはナトリウムスターチグリコレート）または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの製薬上許容しうる賦形剤を用いて従来の手段により錠剤またはカプセルを調製できる。錠剤は、当技術分野で良く知られている方法によって被覆してもよい。経口投与用の液体製剤は、限定されるものではないが、溶液、シロップまたは懸濁液の形態を採ることができ、または乾燥物品として提供して使用前に水または他の適当なビヒクルで形成してもよい。そのような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化合した食用脂肪）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分留によって得られた植物油）、および保存剤（例えば、p-ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピルまたはソルビン酸）などの製薬上許容しうる添加剤を用いて慣用の手段により調製できる。製剤はまた、必要に応じて、緩衝剤用の塩、香料、着色剤、および甘味剤を含んでもよい。経口投与用製剤は、予防物質または治療物質の穏やかな放出、制御放出または徐放性のために適宜製剤化してもよい。
【０４５６】
本発明の方法は、例えば、エアロゾル剤を用いて製剤化した組成物について吸入器またはネビュライザーの使用する肺投与を含んでもよい。例えば、米国特許第6,019,968号、5,985,320号、5,985,309号、5,934,272号、5,874,064号、5,855,913号、5,290,540号および4,880,078号；ならびに国際公開WO 92/19244号、WO 97/32572号、WO 97/44013号、WO 98/31346号およびWO 99/66903号（その各々は参照によってその全体が本願に組み込まれる）を参照されたい。特定の実施形態では、本発明の抗体、併用治療および／または組成物は、Alkermes AIR(登録商標)肺薬物送達技術（Alkermes社、ケンブリッジ、MA）を使用して投与する。
【０４５７】
本発明の方法は、注射（例えば、ボーラス注射か連続的な注入による）によって非経口的投与用に製剤化された組成物の投与を含んでもよい。注射のための製剤化は、ユニット投薬形態（例えば、アンプル中、または多重服用量容器中）に保存剤を添加して提供してもよい。組成物は、油性または水性のビヒクル中で懸濁液、溶液または乳剤などの形態をとることができ、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの製剤剤を含んでもよい。あるいは、活性成分は、使用前に、適当なビヒクル（例えば、無菌の発熱素を含まない水）で形成するためのパウダー形態でもよい。
【０４５８】
本発明の方法は、さらに、デポ製剤として製剤化された組成物の投与を含んでもよい。そのような長期にわたって活性な製剤は、移植（例えば、皮下にまたは筋肉内に）によって、または筋肉注射によって投与してもよい。したがって、例えば、組成物は、適当な重合体または疎水性材料（例えば、許容しうる油中の乳剤として）またはイオン交換樹脂で、あるいは難溶性誘導体（例えば、難溶性塩として）として製剤化してもよい。
【０４５９】
本発明の方法は、中性または塩の形態で製剤化された組成物の投与にも及ぶ。製薬上許容しうる塩としては、塩酸、燐酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する陰イオンで形成されたもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する陽イオンで形成されたものが含まれる。
【０４６０】
一般に、組成物の成分はそれぞれを別々に供給されるか、例えば、凍結乾燥粉または水を含まない濃縮液として、活性剤の量を示すアンプルかサシェットなどの密封容器に気密に封止したユニット投薬形式で混合される。投与形式が注射の場合は、組成物は無菌の製薬等級水または食塩水を含む注入ボトルが不要であり得る。投与形態が注射による場合は、投与に先立って成分を混合できるように、注射用の滅菌水または食塩水のアンプルを備えることができる。
【０４６１】
特に、本発明は、1以上の予防物質もしくは治療物質または本発明の医薬組成物を薬剤の量を示すアンプルやサシェットなどの密封容器に気密に封止してパッケージングされるように提供する。一実施形態では、1以上の予防物質もしくは治療物質または本発明の医薬組成物は、殺菌された凍結乾燥粉または水を含まない濃縮液として気密に封止した容器で供給され、対象への投与のための適当な濃度に（例えば、水または食塩水で）再構成することができる。好ましくは、予防物質もしくは治療物質または本発明の医薬組成物は、少なくとも5mg、より好ましくは少なくとも10mg、少なくとも15mg、少なくとも25mg、少なくとも35mg、少なくとも45mg、少なくとも50mg、少なくとも75mg、または少なくとも100mgのユニット投薬量で、密封容器中の乾燥した無菌の凍結乾燥パウダーとして供給される。1以上の凍結乾燥された予防物質もしくは治療物質または本発明の医薬組成物は、その本来の容器内に2℃と8℃の間で保存すべきであり、予防物質もしくは治療物質または本発明の医薬組成物は、再構成してから1週間以内、好ましくは5日以内、72時間以内、48時間以内、24時間以内、12時間以内、6時間以内、5時間以内、3時間以内または1時間以内に投与するべきである。他の実施形態では、1以上の予防物質もしくは治療物質または本発明の医薬組成物は、薬剤の量および濃度を示す密封容器中、液体形態で供給される。好ましくは、投与される液状の組成物は、密封容器中で少なくとも0.25mg/ml、より好ましくは少なくとも0.5mg/ml、少なくとも1mg/ml、少なくとも2.5mg/ml、少なくとも5mg/ml、少なくとも8mg/ml、少なくとも10mg/ml、少なくとも15mg/kg、少なくとも25mg/ml、少なくとも50mg/ml、少なくとも75mg/mlまたは少なくとも100mg/mlで供給される。液状物は、その本来の容器内に2℃〜8℃で保存すべきである。
【０４６２】
一般に、本発明の組成物の成分は、そのような組成物のレシピエントと同じ種起源または種反応性である対象に由来する。したがって、好ましい実施形態では、ヒト抗体またはヒト化抗体が、治療または予防処置のため、ヒト患者に投与される。
【０４６３】
5.4.1  遺伝子治療
特定の実施形態においては、ヌクレオチドである本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターを投与して遺伝子治療の方法で感染症を治療、管理、または予防する。遺伝子治療は、発現されたまたは発現可能な核酸を対象へ投与することにより実施される治治療を意味する。本発明のこの実施形態においては、アンチセンス核酸が産生され、予防または治療効果に媒介させる。遺伝子治療は、発現されたまたは発現可能な核酸を対象へ投与することにより実施される治療法を意味する。本発明の特定の実施形態においては、アンチセンス核酸が産生され、予防または治療効果に媒介させる。本発明の他の実施形態においては、遺伝子治療はEphA2／EphrinA1モジュレーターワクチンに基づく治療でない（例えば、EphA2またはEphrinA1ワクチンではない）
当技術分野で利用可能ないずれかの遺伝子治療の方法を本発明によって使用することができる。例示の方法を以下に説明する。
【０４６４】
遺伝子治療の方法の一般的な総説については、Goldspielら, 1993, Clinical Pharmacy 12: 488-505; WuおよびWu, 1991, Biotherapy 3: 87-95; Tolstoshev, 1993, Ami. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32: 573; Mulligan, 1993, Science 260: 926-932 ;ならびにMorganおよびAnderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191; May, 1993, TIBTECH 11:155を参照されたい。使用することができる組み換えDNA技術の分野で広く知られている方法は、Ausubelら(編), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993);およびKriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)に記載されている。
【０４６５】
一態様においては、本発明の組成物はEphA2発現を減少させるEphA2核酸を含み、上記核酸は好適な宿主中で核酸を発現する発現ベクターの一部分である。特に、かかる核酸はプロモーター、好ましくは異種プロモーターを有し、上記プロモーターは誘導性または構成的であり、かつ、場合によっては組織特異的である。他の特定の実施形態では、使用する核酸において、EphA2発現を減少させる核酸といずれか他の所望の配列がゲノムの所望の部位で相同的組換えを促進する領域に隣接し、こうしてEphA2発現を減少させる核酸を染色体内に発現させる（KollerおよびSmithies, 1989, PNAS 86:8932; Zijlstraら, 1989, Nature 342:435）。
【０４６６】
他の態様においては、本発明の組成物はEphrinA1発現を減少させるEphrinA1核酸を含み、上記核酸は好適な宿主中で核酸を発現する発現ベクターの一部分である。特に、かかる核酸はプロモーター、好ましくは異種プロモーターを有し、上記プロモーターは誘導性または構成的であり、かつ、場合によっては組織特異的である。他の特定の実施形態においては、使用する核酸において、EphrinA1発現を減少させる核酸といずれか他の所望の配列がゲノムの所望の部位で相同的組換えを促進する領域に隣接し、こうしてEphrinA1発現を減少させる核酸を染色体内に発現させる（KollerおよびSmithies, 1989, PNAS 86:8932; Zijlstraら, 1989, Nature 342:435）。
【０４６７】
対象内への核酸の送達は、直接でもよいし間接でもよく、直接の場合には、対象は、核酸または核酸を保有するベクターに直接曝露され、間接の場合には、細胞を最初、核酸によりin vitroで形質転換して、次に対象に移植される。これらの2つのアプローチは、in vivoまたはex vivo遺伝子治療として、それぞれ知られている。特定の実施形態では、核酸配列は直接in vivoで投与される。これは、当技術分野で知られている多数の方法のうちのいずれかによって遂行することができ、例えば、適当な核酸発現ベクターの一部としてそれらを構築しそれらが細胞内に入るようにそれを投与すること、例えば、不完全なもしくは弱毒されたレトロウイルスまたは他のウイルスベクターを用いた感染（米国特許第4,980,286号参照）、裸のDNAの直接噴射、微粒子衝突（例えば、遺伝子銃; Biolistic、Dupont）の使用、脂質もしくは細胞表面受容体またはトランスフェクト剤による被覆、リポソーム、微粒子またはマククロカプセル中へのカプセル化、核内に入ると知られているペプチドに連結してそれらを投与すること、あるいはそれを受容体媒介エンドシトーシスの対象となるリガンドに連結して投与すること（例えば、WuおよびWu, 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432参照）（これは特異的に受容体を発現する標的細胞タイプに用いることができる）によって実現される。他の実施形態では、リガンドがエンドソームを分裂させる融合性ウイルスペプチドを含み、核酸がリソソーム分解することを回避する、核酸-配位子複合体を形成することができる。さらに他の実施形態では、核酸は、特異的受容体を標的化することにより、細胞特異的な取り込みおよび発現が行われるようにin vivoで標的化することができる（例えば、国際公開WO 92/06180号；WO 92/22635号；W0 92/20316号；W0 93/14188号；およびWO 93/20221号参照）。あるいは、核酸は細胞内に導入され、相同的組み換えにより宿主細胞DNA内に組み込まれて発現される（KollerおよびSmithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932；およびZijlstraら, 1989, Nature 342:435）。
【０４６８】
特定の実施形態では、EphrinA1発現ベクターを減少する核酸配列を含有するウイルスベクターが用いられる。例えば、レトロウイルスベクターが使用できる(Millerら, 1993, Meth. Enzymol. 217: 581-599参照)。これらのレトロウイルスベクターはウイルスのゲノムの正確なパッケージングおよび宿主細胞DNA中への組込みに必要な成分を含む。遺伝子治療に使用される本発明の抗体または他の予防物質もしくは治療物質をコードする核酸配列は、1以上のベクター中にクローニングされ、対象への遺伝子の送達を容易にする。レトロウイルスベクターに関するより詳細は、Boesenら, 1994, Biotherapy 6: 291-302でみることができ、これは幹細胞を化学療法に対してより耐性とするために造血幹細胞にmdr 1遺伝子を送達するレトロウイルスベクターを使用について記載している。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を例証する他の参考文献は以下のとおりである: Clowesら, 1994, J. Clin. Invest. 93:644-651 ; Kleinら, 1994, Blood 83: 1467-1473; SalmonsおよびGunzberg, 1993, Human Gene Therapy 4: 129-141;ならびにGrossmanおよびWilson, 1993, Curr. Opin. in Genetics and Devel. 3: 110-114。
【０４６９】
アデノウイルスは遺伝子治療に使用できる他のウイルスベクターである。アデノウイルスは、呼吸器内皮組織に遺伝子を送達する点で特に魅力的な伝播体である。アデノウイルスは本来、呼吸器内皮組織に感染し、穏やかな疾患を引き起こす。アデノウイルスは、非分裂細胞に感染できるという長所を有する。KozarskyおよびWilson, 1993, Current Opinion in Genetics and Development 3: 499は、アデノウイルスに基づく遺伝子治療の概要を示す。Boutら, 1994, Human Gene Therapy 5: 3-10は、アカゲザルの呼吸基内皮組織に遺伝子を転移するためのアデノウイルスベクターの使用を実証した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の実例はRosenfeldら, 1991, Science 252: 431；Rosenfeldら, 1992, Cell 68: 143;Mastrangeliら, 1993, J. Clin. Invest. 91: 225；国際特許公開 W0 94/12649;およびWangら, 1995, Gene Therapy 2: 775で見ることができる。好ましい実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。
【０４７０】
アデノ随伴ウイルス(AAV)も、遺伝子治療における使用が提案されている(Walshら., 1993, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204: 289-300;および米国特許第5,436,146号)。
【０４７１】
遺伝子治療への他のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションまたはウイルス感染などの方法によって組織培養中の細胞に遺伝子を導入することを含む。通常、導入の方法は、細胞への選択可能なマーカーの導入を含む。次いで、細胞を選択下に置き、導入した遺伝子を取り込み、かつ発現している細胞を分離する。次いで、それらの細胞を対象に送達する。
【０４７２】
この実施形態においては、核酸を細胞に導入した後、得られる組み換え細胞をin vivoで投与する。そのような導入は当技術分野で知られている任意の方法で行うことが可能であり、限定するものではないが、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、核酸配列を含むウイルスまたはバクテリオファージベクターによる感染、細胞融合、染色体を媒介とした遺伝子導入、微小細胞-媒介遺伝子導入、スフェロプラスト融合などが含まれる。細胞内に外来遺伝子を導入するための多くの技術が当技術分野で知られており(例えば、LoefflerおよびBehr, 1993, Meth. Enzymol. 217: 599；Cohenら, 1993, Meth. Enzymol. 217: 618 を参照)、レシピエント細胞の必要な成長や生理作用を害しない限り、本発明に従って使用し得る。この技術は、核酸が細胞によって発現され、好ましくはその細胞子孫によって継承可能かつ発現可能である、核酸の細胞への安定した導入を提供するに違いない。
【０４７３】
得られる組み換え細胞は当技術分野において既知の様々な方法によって対象に送達できる。使用のために考えられる細胞の量は、所望の効果および患者の状態などに依存し、当業者であれば決定することができる。
【０４７４】
5.5  投与の用量と頻度
感染症を予防、治療、管理および／または改善するのに有効であろう予防物質もしくは治療物質または本発明の組成物の量は、標準の臨床的方法により決定できる。頻度と投薬量はまた、各患者に特異的な要因に従い、投与される具体的な治療物質(例えば、具体的な治療物質または予防物質)、障害、疾患または症状の厳しさ、投与経路、ならびに年齢、体重、応答および患者の過去の病歴に応じて変わりうる。感染症の症状を予防、治療、管理および／または改善するのに有効であろう予防物質もしくは治療物質または本発明の組成物の量は、動物モデル（例えば、本明細書に開示するまたは当業者に知られている動物モデル）への組成物の投与により決定できる。さらに、場合によっては最適の投薬範囲の識別を手助けするin vitroアッセイを使用してもよい。好適な処方体制は、当業者であれば、かかる要因を考慮し、例えば、文献に報告され、Physician's Desk Reference（第59版, 2005）に推奨されている投薬量に従って決定できる。
【０４７５】
小分子の典型的な服用量は、対象または試料重量1キログラム当たり小分子ミリグラムまたはマイクログラムの量（例えば、1キログラム当たり約1マイクログラムから1キログラム当たり約500ミリグラム、1キログラム当たり約100マイクログラムから1キログラム当たり約5ミリグラム、または1キログラム当たり約1マイクログラムから1キログラム当たり約50マイクログラム）を含む。
【０４７６】
本発明に包含される抗体、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドおよび融合タンパク質については、患者に投与される投薬量は、典型的に患者の体重当たり0.0001mg/kgから100mg/kgである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患者の体重当たり0.0001mg/kg〜20mg/kg、0.0001mg/kg〜10mg/kg、0.0001mg/kg〜5mg/kg、0.0001〜2mg/kg、0.0001〜1mg/kg、0.0001mg/kg〜0.75mg/kg、0.0001mg/kg〜0.5mg/kg、0.0001mg/kg〜0.25mg/kg、0.0001〜0.15mg/kg、0.0001〜0.10mg/kg、0.001〜0.5mg/kg、0.01〜0.25mg/kgまたは0.01〜0.10mg/kgである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドへの免疫応答に起因する他の種からの抗体より人体内で長い半減期を有する。したがって、ヒト抗体の投薬量および投与頻度は多くの場合より低いものであり得る。さらに、本発明の抗体もしくはその断片の投与量および投与頻度は、例えば脂質化などの修飾によって抗体の取込量および組織浸透を増強することにより低減することができる。
【０４７７】
特定の実施形態では、患者における感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために投与される本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター（例えば、抗体、組成物または併用療法）の投薬量は、患者の体重当たり150μg/kg以下、好ましくは125μg/kg以下、100μg/kg以下、95μg/kg以下、90μg/kg以下、85μg/kg以下、80μg/kg以下、75μg/kg以下、70μg/kg以下、65μg/kg以下、60μg/kg以下、55μg/kg以下、50μg/kg以下、45μg/kg以下、40μg/kg以下、35μg/kg以下、30μg/kg以下、25μg/kg以下、20μg/kg以下、15μg/kg以下、10μg/kg以下、5μg/kg以下、2.5μg/kg以下、2μg/kg以下、1.5μg/kg以下、1μg/kg以下、0.5μg/kg以下、または0.5μg/kg以下である。他の実施形態では、患者における感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために投与される本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターまたは併用療法の投薬量は、0.1mg〜20mg、0.1mg〜15mgまで、0.1mg〜12mg、0.1mg〜10mg、0.1mg〜8mg、0.1mg〜7mg、0.1mg〜5mg、0.1〜2.5mg、0.25mg〜20mg、0.25〜15mg、0.25〜12mg、0.25〜10mg、0.25〜8mg、0.25mg〜7mg、0.25mg〜5mg、0.5mg〜2.5mg、1mg〜20mg、1mg〜15mg、1mg〜12mg、1mg〜10mg、1mg〜8mg、1mg〜7mg、1mg〜5mg、または1mg〜2.5mgの単位用量である。
【０４７８】
他の実施形態では、対象に、1以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターの有効量を1回以上投与し、有効量の服用により、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターの少なくとも0.1μg/ml、少なくとも0.5μg/ml、少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/ml、または少なくとも400μg/mlの血清力価を達成する。さらに他の実施形態では、対象に、1以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターの有効量を1回投与し、抗体の少なくとも0.1μg/ml、少なくとも0.5μg/ml、少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/ml、または少なくとも400μg/mlの血清力価を達成し、そして1以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターの有効量を続いて１回投与し、少なくとも0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/ml、または少なくとも400μg/mlの血清力価を維持する。この実施形態によれば、対象に、引き続き、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12以上の回数で投与する。
【０４７９】
特定の実施形態では、本発明は、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善する方法であって、本発明の1以上のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物または併用療法の少なくとも10μg、好ましくは少なくとも15μg、少なくとも20μg、少なくとも25μg、少なくとも30μg、少なくとも35μg、少なくとも40μg、少なくとも45μg、少なくとも50μg、少なくとも55μg、少なくとも60μg、少なくとも65μg、少なくとも70μg、少なくとも75μg、少なくとも80μg、少なくとも85μg、少なくとも90μg、少なくとも95μg、少なくとも100μg、少なくとも105μg、少なくとも110μg、少なくとも115μg、または少なくとも120μgの用量をそれを必要とする対象に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善する方法であって、本発明の1以上のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物または併用療法の少なくとも10μg、好ましくは少なくとも15μg、少なくとも20μg、少なくとも25μg、少なくとも30μg、少なくとも35μg、少なくとも40μg、少なくとも45μg、少なくとも50μg、少なくとも55μg、少なくとも60μg、少なくとも65μg、少なくとも70μg、少なくとも75μg、少なくとも80μg、少なくとも85μg、少なくとも90μg、少なくとも95μg、少なくとも100μg、少なくとも105μg、少なくとも110μg、少なくとも115μg、または少なくとも120μgの用量を、3日に1回、好ましくは4日に1回、5日に1回、6日に1回、7日に1回、8日に1回、10日に1回、2週間に1回、3週間に1回、または1カ月に1回、投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【０４８０】
本発明は、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善する方法であって、(a)本発明の1以上のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物または併用療法の予防上または治療上の有効量をそれを必要とする対象に1回以上を投与すること、および(b)前記EphA2／EphrinA1モジュレーターをある回数投与した後に、投与した前記EphA2／EphrinA1モジュレーターの前記対象における血漿レベル/濃度をモニターすることを含んでなる上記方法を提供する。さらに、前記投与回数が、本発明の1以上のEphA2／EphrinA1モジュレーター、組成物または併用療法の予防上または治療上の有効量の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12回投与であることが好ましい。
【０４８１】
特定の実施形態では、本発明は、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善する方法であって、(a)本発明の1以上のEphA2／EphrinA1モジュレーターの少なくとも10μg(好ましくは少なくとも15μg、少なくとも20μg、少なくとも25μg、少なくとも30μg、少なくとも35μg、少なくとも40μg、少なくとも45μg、少なくとも50μg、少なくとも55μg、少なくとも60μg、少なくとも65μg、少なくとも70μg、少なくとも75μg、少なくとも80μg、少なくとも85μg、少なくとも90μg、少なくとも95μg、または少なくとも100μg)の用量で投与すること、(b)前記対象に投与したEphA2／EphrinA1モジュレーターの血漿中レベルが0.1μg/ml以下、好ましくは0.25μg/ml以下、0.5μg/ml以下、0.75μg/ml以下、または1μg/ml以下の場合に、前記対象に本発明の抗体を引き続き1回以上投与することを含んでなる上記方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善する方法であって、(a)本発明の1以上の抗体の少なくとも10μg(好ましくは少なくとも15μg、少なくとも20μg、少なくとも25μg、少なくとも30μg、少なくとも35μg、少なくとも40μg、少なくとも45μg、少なくとも50μg、少なくとも55μg、少なくとも60μg、少なくとも65μg、少なくとも70μg、少なくとも75μg、少なくとも80μg、少なくとも85μg、少なくとも90μg、少なくとも95μg、または少なくとも100μg)をそれを必要とする対象に1回以上投与すること、(b)特定回数の投与後に、投与した本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターの前記対象における血漿レベルをモニターすること、および(c)前記対象に投与したEphA2／EphrinA1モジュレーターの血漿レベルが0.1μg/ml以下、好ましくは0.25μg/ml以下、0.5μg/ml以下、0.75μg/ml以下、1μg/ml以下の場合に、前記対象に本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターを引き続き1以上投与することを含む上記方法を提供する。前記投与回数が、本発明の1以上のEphA2／EphrinA
1モジュレーターの有効量の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12回投与であることが好ましい。
【０４８２】
本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター以外であって、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために使われたことがあるか、または現に使われている治療(例えば、予防物質または治療物質)を、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために、本発明に従って、本発明の1以上のEphA2／EphrinA1モジュレーターと併用して投与することができる。本発明の併用療法で使用される予防物質または治療物質の投薬量は、感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために使われたことがあるか、現に使われている投薬量よりも低いことが好ましい。感染症またはその1以上の症状を予防、治療、管理および／または改善するために現に使われている薬剤の推奨される投薬量は、当技術分野における任意の参考文献(これに限定されないがHardmanら,編., 2001, Goodman &Gilman's The Pharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics, 第10版, Mc-Graw-Hill, New York; Physician's Desk Reference (PDR) 第59版 , 2005, Medical Economics Co., Inc., Montvale, NJ(その全体が参照によって本願に組み入れられる)を含む。)から得ることができる。
【０４８３】
様々な実施形態において、治療(予防物質または治療物質)は、5分以下の間隔で、30分以下の間隔で、1時間の間隔で、約1時間の間隔で、約1時間から約2時間の間隔で、約2時間から約3時間の間隔で、約3時間から約4時間の間隔で、約4時間から約5時間の間隔で、約5時間から約6時間の間隔で、約6時間から約7時間の間隔で、約7時間から約8時間の間隔で、約8時間から9時間の間隔で、約9時間から約10時間の間隔で、約10時間から約11時間の間隔で、約11時間から約12時間の間隔で、約12時間から約18時間の間隔で、約18時間から約24時間の間隔で、約24時間から約36時間の間隔で、約36時間から約48時間の間隔で、約48時間から約52時間の間隔で、約52時間から約60時間の間隔で、約60時間から約72時間の間隔で、約72時間から約84時間の間隔で、約84時間から約96時間の間隔で、約96時間から約120時間の間隔で投与する。好ましい実施形態では、2つ以上の治療を同じ患者の訪問時に施す。
【０４８４】
特定の実施形態では、本発明の1以上の抗体および1以上の他の治療(例えば、予防物質または治療物質)を周期的に投与する。周期的治療は、第1の治療(例えば、第1の予防物質または治療物質)をある期間投与すること、続いて、第2の治療(例えば、第2の予防物質または治療物質)をある期間投与すること、場合により、その後、第3の治療(例えば、第3の予防物質または治療物質)をある期間投与すること、以下同様とし、この連続投与を繰り返す(すなわち、治療のうちの1つに対する耐性の発達を低減し、治療の1つの副作用を回避するか縮小し、および／または治療物質の効能を改善するためのサイクル)ことを含む。
【０４８５】
ある実施形態では、本発明の同じEphA2／EphrinA1モジュレーターの投与を繰り返してもよく、また、投与は、少なくとも1日、2日、3日、5日、10日、15日、30日、45日、2カ月、75日、3カ月または少なくとも6カ月間の間隔としてもよい。他の実施形態では、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター以外の同じ治療(例えば、予防物質または治療物質)の投与を繰り返してもよい。また、投与は、少なくとも1日、2日、3日、5日、10日、15日、30日、45日、2カ月、75日、3カ月または少なくとも6カ月の間隔としてもよい。
【０４８６】
ある実施形態では、本発明のEphA2-またはEphrinA1抗原性ペプチドおよび抗イディオタイプ抗原は、1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、および25mg/mlにて静脈注射用に、かつ5mg/ml、10mg/ml、および80mg/mlにて繰返し皮下投与および筋内注射用に製剤される。
【０４８７】
EphA2もしくはEphrinA1ワクチンが細菌ワクチンである場合、上記ワクチンを、ほぼ1x102 CFU/ml〜ほぼ1x1012 CFU/mlの量にて、例えば、1x102CFU/ml、5x102CFU/ml、1x103CFU/ml、5x103CFU/ml、1x104CFU/ml、5x104CFU/ml、1x105CFU/ml、5x105CFU/ml、1x106CFU/ml、5x106CFU/ml、1x107CFU/ml、5x107CFU/ml、1x108CFU/ml、5x108CFU/ml、1x109CFU/ml、5x109CFU/ml、1x1010CFU/ml、5x1010CFU/ml、1x1011CFU/ml、5x1011CFU/ml、または1x1012CFU/mlにて製剤することができる。
【０４８８】
EphA2およびEphrinA1抗原性ペプチドまたは抗イディオタイプ抗原について、患者に投与される用量は典型的には、患者体重の0.1mg/kg〜100mg/kgである。好ましくは、患者に投与される用量は、患者体重の0.1mg/kg〜20mg/kg、より好ましくは患者体重の1mg/kg〜10mg/kgである。
【０４８９】
本発明の細菌性EphA2もしくはEphrinA1ワクチンの投与量については、投与量は、コロニー形成ユニット（c.f.u.）量に基づく。一般に、様々な実施形態において、投与量範囲は、ほぼ1.0c.f.u./kg〜ほぼ1x1010c.f.u./kg；ほぼ1.0c.f.u./kg〜ほぼ1x108c.f.u./kg；ほぼ1x102c.f.u./kg〜ほぼ1x108c.f.u./kg;およびほぼ1x104c.f.u./kg〜ほぼ1x108c.f.u./kgである。有効用量は、動物モデルから誘導した用量-応答曲線から外挿することができる。ある実施形態において、投与量範囲は、マウスLD50の0.001倍〜10,000倍、マウスLD50の0.01倍〜1,000倍、マウスLD50の0.1倍〜500倍、マウスLD50の0.5倍〜250倍、マウスLD50の1倍〜100倍およびマウスLD50の5倍〜50倍である。ある実施形態においては、投与量範囲は、マウスLD50の0.00.1倍、0.01倍、0.1倍、0.5倍、1倍、5倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1,000倍、5,000倍または10,000倍である。
【０４９０】
5.6  EphA2／EphrinA1モジュレーターの診断的使用
特定の実施形態においては、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターを診断の目的に用いて、感染、特に細胞内病原体感染または１以上のその症状を検出し、診断し、予見し、またはモニターすることができる。かかる方法は、感染を検出し、診断し、モニターし、または予見する他の方法と併用することができる。本発明はまた、治治療の効果を予見しかつモニターする方法も提供する。本発明はまた、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターを用いてEphA2を過剰発現する感染した細胞を検出する方法も提供する。特定の実施形態においては、本発明は活動的および／または潜在的感染を検出し、診断し、モニターし、または予見する方法も提供する。本発明はさらに、感染した細胞におけるEphA2発現の増加を検出する方法であって、(a)EphA2ポリペプチドと免疫特異的に結合する１以上の本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーター（例えば、EphA2抗体または可溶性EphrinA1）を用いて個人からの生体サンプル中のEphA2の発現を試験すること；および(b)EphA2のレベルをEphA2の標準レベル（例えば、正常な生体サンプル）と比較し、その場合、EphA2の標準レベルと比較したEphA2の試験レベルの増加は感染またはその１以上の症状を示すとすることを含んでなる上記方法を提供する。
【０４９１】
好ましい実施形態において、EphA2に免疫特異的に結合する本発明の標識化抗体を診断の目的に使用して、ウイルス、細菌、真菌もしくは原虫が原因である感染症、好ましくは、細胞内病原体感染症を検出し、診断し、予見を行い、モニターする。本発明は呼吸器感染症を検出する方法であって、(a)EphA2に免疫特異的に結合する1以上の本発明の抗体を用いて対象の細胞または組織サンプルにおけるEphA2の発現をアッセイすること、および(b)EphA2の発現レベルを対照レベル、例えば感染していない正常な組織サンプルにおけるレベルと比較し、その場合、EphA2の対照レベルと比較したEphA2のアッセイレベルの増加は感染症を示すとすることを含んでなる上記方法を提供する。
【０４９２】
本明細書で記載されるまたは当業者に公知の古典的免疫組織学的方法（例えば、Jalkanenら, 1985, J.Cell.Biol.101:976-985；およびJalkanenら, 1987, J.Cell.Biol. 105:3087-3096を参照）を用いて、EphA2抗体を使用し、生物学的サンプル中のEphA2レベルをアッセイすることができる。本発明の方法に用いるEphA2抗体は低いKoff速度（例えば、3x10-3s-1より低いKoff）を有する。一実施形態において、本発明の方法に用いる抗体はEph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である。より好ましい実施形態において、本発明の方法に用いる抗体はヒトまたはヒト化Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5である実施形態において、用いる抗体はEph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2またはEA5でない。
【０４９３】
タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な他の抗体に基づく方法としては、イムノアッセイ、例えば酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）およびラジオイムノアッセイ（RIA）が挙げられる。当技術分野で公知の好適な抗体アッセイ標識としては、酵素標識、例えば、グルコースオキシダーゼ；放射標識、例えばヨウ素（125I、121I）、炭素（14C）、硫黄（35S）、トリチウム（3H）、インジウム（121In）、およびテクネチウム（99Tc）；発光標識、例えばルミノール；および蛍光標識、例えばフルオレセインおよびローダミン、およびビオチンが挙げられる。
【０４９４】
本発明の1つの態様は、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトにおける感染の検出および診断である。一実施形態において、診断は、a)EphA2と免疫特異的に結合する本発明の標識したEphA2／EphrinA1モジュレーター（抗体断片あるいはその変異体を含有する、または、からなる分子を含む）の有効量を対象に（例えば、非経口、皮下、あるいは腹腔内に）投与すること、b)投与後しばらくの間、EphA2が発現される対象の部位に標識したEphA2／EphrinA1モジュレーターが優先的に集中する（かつ非結合の標識分子をバックグラウンドレベルまで除去する）のを待つこと、c)バックグラウンドレベルを決定すること、ならびにd) バックグラウンドレベルを上回り、かつ無感染の個人において観察されるレベルを上回るかもしくは下回る、標識したEphA2／EphrinA1モジュレーターを検出できるように、対象において標識したEphA2／EphrinA1モジュレーターを検出することを含んでなる。バックグラウンドレベルは、検出される標識した分子の量を特定の系について予め決めた標準値と比較することを含む様々な方法によって決定することができる。EphA2の異常な（すなわち、増加した）発現は、特に上皮細胞型において生じうる。特定の実施形態において、本発明の方法は、潜在的な細胞内病原体感染症の治療にとって特に有用である。
【０４９５】
対象の大きさと使用される画像システムによって診断画像を作製するのに必要な画像部の画質が決まるということは当業者に理解されるであろう。ラジオアイソトープ成分の場合、ヒト対象にとって、注がれる放射能の線量は通常、99Tcの約5から20ミリキュリーの範囲であろう。次いで、標識した抗体は、特異的なタンパク質を含有する細胞の位置で優先的に蓄積しうる。In vivoでの腫瘍画像処理は、S.W.Burchielら, 「放射性標識した抗体とその断片の免疫薬理動態学（Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments）」(第13章） Tumor Imaging : The Radiochemical Detection of Cancer, S.W.BurchielおよびB.A.Rhodes, 編, Masson Publishing Inc.（1982年）に記載されている。使用される標識のタイプや投与形式を含むいくつかの変数に応じて、対象における部位に標識分子を優先的に集中させて非結合標識分子がバックグラウンドレベルまで除去するための投与後の時間間隔は、6〜48時間、6〜24時間、または6〜12時間である。他の実施形態では、投与後の時間間隔は、5〜20日または5〜10日である。
【０４９６】
一実施形態においては、感染のモニタリングは、例えば、初期診断の1カ月後、初期診断の6カ月後、初期診断の1年後に、感染の診断法を繰り返すことによって実施される。
【０４９７】
患者における標識されたEphA2／EphrinA1モジュレーターの存在は、in vivoでのスキャニングのための当技術分野で公知の方法を用いて検出することができる。これらの方法は、使用される標識のタイプに左右される。当業者は、特定の標識を検出するための適切な方法を決定できるであろう。本発明の診断方法において使用される可能性がある方法および装置として、限定するものではないが、コンピュータ断層撮影（CT）、陽電子放射断層法（PET）、磁気共鳴画像法（MRI）、および断層撮影などの全身スキャンが含まれる。
【０４９８】
特定の実施形態では、EphA2／EphrinA1モジュレーターは、ラジオアイソトープで標識され、患者において放射線反応手術器具（Thurstonら、米国特許第5,441,050号）を用いて検出される。他の実施形態では、EphA2／EphrinA1モジュレーターは、蛍光化合物で標識され、患者において蛍光反応走査機器を用いて検出される。他の実施形態では、EphA2／EphrinA1モジュレーターは、陽電子放射金属で標識され、患者において陽電子放射断層法を用いて検出される。さらに、他の実施形態では、EphA2／EphrinA1モジュレーターは、常磁性標識で標識され、患者において磁気共鳴画像法（MRI）を用いて検出される。
【０４９９】
5.7  キット
本発明は、本発明のEphA2／EphrinA1モジュレーターを詰めた１以上の容器を含む医薬品パックまたはキットを提供する。さらに、感染症を治療、管理または予防するために有用な１以上の予防または治療物質、または他の関係薬剤が上記医薬品パックまたはキット中に含まれてもよい。ある実施形態においては、他の予防または治療物質は免疫調製剤（例えば、抗IL-9抗体）である。他の実施形態においては、他の予防または治療物質は抗ウイルス剤である。さらに他の実施形態においては、他の予防または治療物質は抗菌剤である。さらに他の実施形態においては、他の予防または治療物質は抗真菌剤である。他の実施形態においては、他の予防または治療物質は抗炎症剤である。さらに他の実施形態においては、他の予防または治療物質は抗原虫剤である。本発明はまた、本発明の医薬組成物の１以上の成分を詰めた医薬品パックまたはキットも提供する。場合によっては、かかる容器には、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府当局により指示された形式で、ヒトに投与するための製造、使用または販売の当局による認可を示す注意書きが付されていてもよい。
【０５００】
5.8  製造物品
本発明は、完成パッケージおよび標識された医薬製品を包含する。本製造物品は、密封シールされたグラスバイアルあるいは他の容器などの適切な容器中に適切な単位投与形態を含む。本発明は、非経口溶液および凍結乾燥された粉末の両方を包含し、各々は無菌であり、後者は注射前の再構成に適している。または、その単位投与形態は、経口、経皮、鼻腔、あるいは局所送達に適した固体である場合がある。
【０５０１】
好ましい実施形態としては、その単位投与形態は、静脈内、筋肉内、鼻腔内、経口、局所または皮下送達に適している。故に、本発明は、好ましくは無菌で、各送達経路に適した溶液を包含する。
【０５０２】
あらゆる医薬製品と同様に、梱包される物質および容器は、保存および出荷の間における製品の安定性を保護するように設計される。さらに、本発明の製品は、問題になっている疾患または障害の適切な予防や治療の仕方について、医師、技術者あるいは患者に教示する取扱説明書あるいは他の関連情報を含む。言い換えると、製造物品は、限定するものではないが、実用量、モニター方法、総リンパ球数、肥満細胞数、T細胞数、IgE産生、および他のモニター情報などを含む、投与体制を指示または示唆する指示手段を含む。
【０５０３】
特に本発明は、例えばボックス、ボトル、チューブ、バイアル、容器、スプレー、吸入器、静脈（i.v.）バッグ、エンベロープなどの包装材、およびこの包装材の中に含まれる少なくとも1単位投与形態の薬剤を含む製造物品を提供し、ここで上記薬剤はEphA2／EphrinA1モジュレーターを含み、上記包装材は、上記EphA2／EphrinA1モジュレーターを用いて、本明細書に記載した特定の用量を投与しかつ特定の投薬体制を用いることにより、感染症またはその１以上の症状に関連する１以上の症状を予防、管理、治療、および／または改善することができることを示す指示手段を含む。特定の実施形態においては、感染はEphA2発現の増加が原因である、および／またはそれに関連している。
【０５０４】
本発明はまた、例えばボックス、ボトル、チューブ、バイアル、容器、スプレー、吸入器、静脈（i.v.）バッグ、エンベロープなどの包装材、およびこの包装材の中に含まれる少なくとも1単位投与形態の各薬剤を含む製造物品も提供し、上記薬剤の1つはEphA2／EphrinA1モジュレーターを含み、第2の薬剤はEphA2／EphrinA1モジュレーター以外の予防または治療物質を含み、そして上記包装材は、上記薬剤を用いて、本明細書に記載した特定の用量を投与しかつ特定の投薬体制を用いることにより、感染症またはその１以上の症状を治療、予防および／または改善することができることを示す指示手段を含む。
【０５０５】
本発明は、感染症と関連する1以上の症状を予防、治療、および／または改善するのに用いる製造物品に添付された関連情報中に、本発明の方法によって低下し、または回避し得る副作用が示されているものを提供する。本発明の方法によって低下し、または回避し得る副作用として、バイタルサインの異常（発熱、頻脈、徐脈、高血圧、低血圧）、血液の現象（貧血、リンパ球減少症、白血球減少症、血小板減少症）、頭痛、悪寒、目まい、悪心、無気力、背痛、胸痛（胸部圧迫感）、下痢、筋肉痛、疼痛、痒み、乾癬、鼻炎、発汗、注射部位反応、および血管拡張が含まれるがこれらに限定されない。
【０５０６】
さらに、感染症、あるいはその1以上の症状の予防、治療、管理、および／または改善に用いる製造物品に添付される関連情報は、外来タンパク質がアナフィラキシーまたはシトシン分泌症候群を含むアレルギー反応をも引き起こし得る旨を示すことができる。関連情報には、アレルギー反応が軽度の掻痒性発疹の様相のみを呈し得るか、あるいはこれらが紅皮症、スティーブンス-ジョンソン症候群、脈管炎、またはアナフィラキシーなどの重篤であり得るかが示される必要がある。関連情報には、アナフィラキシー反応（アナフィラキシー）は重症であって時には致命的な超過敏反応を呈することも示される必要がある。任意の外来タンパク質が体内に注射される場合には、アナフィラキシーを含むアレルギー反応が起こる可能性がある。アレルギー反応の範囲は、じんましん、発疹などの軽度の症状から致命的な全身性反応まで及ぶかもしれない。アナフィラキシー反応は、曝露後すぐ、通常は10分以内に起こる。患者は、感覚異常、低血圧、喉頭水腫、精神状態の変化、顔面または咽頭における血管浮腫、気道閉塞、気管支けいれん、じんましんと痒み、血清病、関節炎、アレルギー性神経炎、糸球体腎炎、一過性関節炎、または好酸球増多症を経験し得る。
【０５０７】
6.  実施例
6.1  材料
次の材料を用いて下記実施例１〜８に記載の実験を実施した。
【０５０８】
RSV-A2 #10Y、自家ストック（A. Brewah、MedImmune、Inc.）
BEAS-2B、正常ヒト気管支上皮培養細胞株（ATCC、Manassas、VA）
HNBE、一次正常ヒト気管支上皮細胞（Cambrex、East Rutherford、NJ）
Hep-2、上皮癌細胞株（ATCC）
A549、肺上皮癌細胞株（ATCC）
BEGM Bulletキット、無血清増殖培地（Cambrex）
継代培養試薬パック（Cambrex）
Earles 最小必須培地、GlutaMax入り（Invitrogen、Carlsbad、CA）
ウシ胎児血清、認定済（Invitrogen）
ペニシリン／ストレプトマイシン（Invitrogen）
リン酸塩緩衝化生理食塩水（PBS）、pH 7.4（Invitrogen）
トリプシン、0.05％＋EDTA、0.48mM（Invitrogen）
細胞解離バッファー、無酵素（Invitrogen）
ウシ血清アルブミン、画分V（Sigma、St. Louis、MO）
FACSバッファー：in PBS中の1％ BSA、pH 7.4
BCAタンパク質アッセイキット（Pierce Biotechnology、Inc.、Rockford、IL）
Novex Xcell SureLock細胞（SDS-PAGE用）（Invitrogen）
Novex Xcell IIブロットモジュール（Invitrogen）
ウェスタン転写スポンジ（Invitrogen）
4〜12％ NuPage Bis Tris ポリアクリルアミド ゲル（Invitrogen）
NuPage MES-SDS バッファー（Invitrogen）
NuPage LDS サンプルバッファー（Invitrogen）
NuPage 還元剤（Invitrogen）
NuPage 酸化防止剤（Invitrogen）
NuPage ウェスタン転写バッファー（Invitrogen）
メタノール、ACSグレード（VWR、Bridgeport、NJ）
MagicMark XP ウェスタン・タンパク質MW標準（Invitrogen）
0.2μポアサイズのニトロセルロース／フィルターペーパーサンドイッチ（Invitrogen）
抗Eck/EphA2 クローン D7mAb、(Upstate Biotechnology、Waltham、MA）
ヤギ抗マウスIgG、HRPコンジュゲート（Jackson Immuno Research Labs、West Grove、PA）
Super Signal West Pico化学発光基質（Pierce）
Biomax XAR X線フィルム、13x18 cm（Kodak、Rochester、NY）
X線フィルムプロセッサ、Kodak X-OMAT 1000A（Kodak）
CO2インキュベーター（VWR）
細胞培養用の層流フード（VWR）
10X Tris緩衝化生理食塩水（Biosource、Camarillo、CA）
EDTA（Sigma）
アプロチニン（Sigma）
ロイペプチン（Sigma）
バナジン酸ナトリウム（Sigma）
10x Tris緩衝化生理食塩水（Biosource）
Triton X 100（Sigma）
Tween 20（Sigma）
魚ゼラチン、45％（Sigma）
細胞溶解バッファー：50mM Tris、pH 7.5/150mM NaCl/2mM EDTA/1％ TritonX100/0.1％ NaN3/25μg/mlアプロチニン/10μg/mlロイペプチン/1mMバナジン酸Na
ウェスタン・ブロッキングバッファー：Tris緩衝化生理食塩水/1％ BSA/0.5％ 魚ゼラチン/0.1％ Tween20
ウェスタン・洗浄バッファー（TBS-TB）：Tris緩衝化生理食塩水/0.1％ BSA/0.05％ Tween20
抗RSV-Fタンパク質IgG、Synagis、臨床グレード（MedImmune、Inc.、Gaithersburg、MD）
アイソタイプ対照ヒトmAb、ビタキシン、臨床グレード（MedImmune、Inc.）
抗-EphA2 mAb、B233（MedImmune、Inc.）
アイソタイプ対照、マウスIgG（BD Pharmingen、San Diego、CA）
ウサギ抗ヒトIgG、Alexa488 コンジュゲート（Molecular Probes、Inc.、Eugene、OR）
ヤギ抗マウスIgG、APC コンジュゲート（BD Pharmingen）
ABIプリズム7000配列検出システム（Applied Biosystems、ABI、Foster City、CA）
Microsoft Excelファイル qgene96（Patrick Muller）
全RNA単離用ミニキット（Agilent Technologies、Palo Alto、CA）
TaqMan ワンステップRT-PCRマスターミックスキット（ABI）
アッセイ・オン・デマンド、ヒトEphA2用（ABI）
真核生物の18S rRNA内因性対照（ABI）
96-ウエル光学反応プレート（ABI）
接着シールアプリケーター・キット（ABI）
メチルセルロース（Sigma）
クリスタルバイオレット（Sigma）
6.2  実施例１：ウェスタンブロット分析を用いる、BEAS-2b細胞上のEphA2の検出
本実施例は、RSVによる感染後に全EphA2タンパク質が増加することをウェスタンブロット分析を用いて実証する（図１を参照）。
【０５０９】
細胞培養
細胞培養については、5ml BEGM中の106 BEAS-2B細胞を60mmプレートにまいた。細胞がほぼ80％コンフルエントになった時、RSV-A2を感染させた。
【０５１０】
RSV感染
細胞を感染させるために、1.8x108pfu/mlの濃度のRSV-A2ストックを、BEGMに希釈して2.5x107pfu/mlとし、そしてBEAS-2B細胞を1mlの希釈ウイルスを用いて感染させた。プレートを37℃、5％CO2にて2.5時間、30分毎に振動させてインキュベートした。感染後、種菌を取り除いて5mlの新しいBEGMをプレートに加えた。細胞を37℃、5％CO2にて示された時間、インキュベートした。
【０５１１】
細胞ライセートの調製
細胞ライセートを調製するために、プレートを氷上で溶菌操作中冷却した。培地を取り除き、細胞を5ml氷冷PBS、pH 7.4を用いて1回洗浄した。PBSを取り除いて200μl氷冷溶菌バッファーを各プレートに加えた。プレートを振動させて溶菌バッファーを細胞全体に行きわたらせ、次いで5分間インキュベートした。プレートを傾けてライセートを単層の端から採集し、次いで氷上の1.5mlチューブに移した。
【０５１２】
タンパク質定量
タンパク質を定量するため、各サンプル中のタンパク質濃度をBCA方法により定量した。30μgに相当するサンプルの体積を計算した。
【０５１３】
RSV-感染細胞中のEphA2のウェスタンブロット分析
BEAS-2B細胞からの全細胞抽出物を、0、24、または43時間、RSVを用いて、10の感染多重度（MOI）にて感染させた。このMOIで、実質的に全ての細胞がすぐに感染した。各サンプルからの等量のタンパク質をSDS-PAGE上で泳動させた。還元LDSサンプルバッファー中の30μgサンプルおよびウェスタンブロット標準を、SDS-MESバッファー中の4-12％NuPage Bis Trisゲル上を25分間、100Vにて泳動させた。製造業者の取扱説明書に従って、タンパク質をニトロセルロースに、Xcell IIブロットモジュールを用いて1時間、30Vにて移した。ゲル上のタンパク質をニトロセルロース膜に移し、これを次いでウェスタンブロットとして現像した。ブロット上の非特異的タンパク質結合部位は、ブロットを50mlブロッキングバッファー中で、振動させながら、1時間、室温にてインキュベートすることによりブロックした。ブロッキングバッファーは廃棄した。ブロットを、20ml TBS-TB中の一次抗体、抗EphA2 mAb D7（ヒトEphA2と結合する）、0.5μg/mlを用いて振動させながら、1時間、室温にて処理した。無結合の一次抗体は、20〜30ml TBS-TBにより10回、30分間のコースにわたり、振動させながら室温にてブロットから洗い流した。ブロットは、ペルオキシダーゼ（80 ng/ml）とコンジュゲートした二次抗体、ヤギ抗-マウスIgG、20 ml TBS-TB中の1:10,000希釈液を用いて30分間室温にて振動させながら処理した。ブロットを前のように洗浄して無結合の二次抗体を除去した。ブロットを再び2回、簡単に、20ml TBSを用いて洗浄して化学発光発色に備えた。等体積の2つの化学発光試薬を使用直前に組合せ、そして水抜きをしたブロットを2mlの基質に1〜2分間曝した。基質を水抜きしてブロットを吸収紙上に湿るまで（滴るまででない）置いた。次いでブロットをフィルムカセット内の透明プラスチックシートの間に置いた。X線フィルムをカバーしたブロットに、全ての標準とEphA2バンドを示す曝露が得られるまで様々な時間曝した。
【０５１４】
図１に示した通り、全EphA2タンパク質はBEAS-2B 細胞のRSV感染後に著しく増加し、そして感染後1日〜2日間増加し続ける。
【０５１５】
6.3  実施例２：FACS分析を用いる、BEAS-2b細胞上のEphA2の検出
本実施例は、蛍光活性化細胞ソーティング（FACS）（図２および３をそれぞれ参照）により測定すると、RSVに感染させたBEAS-2B細胞の表面上に存在するRSV-Fタンパク質およびEphA2タンパク質の量が増加することを実証する。FACS分析は、細胞表面上の蛍光標識したRSV-Fタンパク質またはEphA2タンパク質を測定し、これをx軸に沿ったヒストグラムとしてプロットする。細胞数をy軸上にプロットする。それぞれのヒストグラムの側の数字は平均蛍光強度（MFI）である。MFIは細胞表面上のRSV-Fタンパク質またはEphA2タンパク質の量に正比例する。従って、RSV-Fタンパク質については、MFIが細胞の感染度の測定値となる。
【０５１６】
細胞の調製
BEAS-2B細胞を、上記実施例１に記載の通りまいてかつ感染させた。
【０５１７】
感染後の示された時間に、細胞をPBSを用いて1回洗浄し、次いで細胞解離バッファーと0.05％トリプシン/0.48mM EDTAの1：1混合物を用いて2〜3分間、37℃にてプレートから剥がした。細胞（5〜7x105）を5ml FACSチューブに移し、そしてチューブを冷FACSバッファーを用いて満たした。細胞を1100rpmにて3分間室温にてペレット化した。上清をデカンとし、細胞を100μl FACSバッファー中に再懸濁化した。
【０５１８】
細胞上の非特異的結合部位を、3μgヤギIgG/チューブを加えかつ10分間室温にてインキュベートすることによりブロックした。RSV-Fタンパク質（Synagis）、またはEphA2（B233）、またはそれらの対応するアイソタイプ対照を認識する一次抗体を1μg/チューブの濃度にて加えた。細胞と抗体を混合し、30分間氷上でインキュベートした。インキュベーション後、チューブをFACS バッファーを用いて満たし、そして上記の通り遠心分離した。
【０５１９】
遠心分離の後、上清をデカントし、そして細胞を100μl FACSバッファー中に再懸濁化した。二次抗体：Synagisおよびそのアイソタイプ対照にはAlexa488コンジュゲートした1μgウサギ抗-ヒトIgGを、B233およびそのアイソタイプ対照にはAPCコンジュゲートした1μgヤギ抗-マウスIgGをそれぞれ加えた。光から保護して、二次抗体を30分間氷上で結合させた。標識した細胞をFACS バッファーを用いて再び前のように洗浄し、500μl FACSバッファー中に再懸濁し、その後、FACS実験室へ送った。
【０５２０】
データ取得と分析
死細胞だけを染色するプロピジウムヨージドを各サンプルに加えて、生細胞だけを分析しうるようにした。
【０５２１】
フローサイトメトリー実験を、アルゴン-イオンレーザーおよび赤色ダイオードレーザーを備えたFACSCaliburフローサイトメトリー計器（BD Biosciences；SanJose、California）を用いて実施した。計器はFACSComp(登録商標)システム（BD Biosciences）を用いて、毎日、品質管理試験を行った。フローサイトメトリー分析は、BD（FACSCalibur(登録商標)、ユーザーのシステム）が提供する取扱説明書に従って実施した。FACS データを、Macintosh Power PCs G3およびG4でBD CellQuest(登録商標)ソフトウエアを用いて記録しかつ分析した。データは毎日サーバーにバックアップをとり、そして毎月CDに記録した。カルシウムおよびマグネシウムを含まないリン酸塩緩衝化生理食塩水（PBS）、pH7.4中の1％（w/v）アルブミンウシ画分Vを、抗体結合、細胞洗浄、および分析前の再懸濁用のバッファーとして用いた。FACSFlow(登録商標)シース液を、製造業者プロトコルに従い、計器操作用に用いた。
【０５２２】
図２は、RSV-Fタンパク質がRSVに感染した呼吸器上皮細胞の表面上に1日後に高度に発現されかつ2日後に増加し続けることを示す。図３はまた、EphA2発現が、高度に感染した呼吸器上皮細胞の表面上に1日後に有意に増加しかつ2日後に若干増加することも示す。
【０５２３】
6.4  実施例３：RSV感染中のBEAS-2B細胞におけるEphA2 mRNA発現の検出
本実施例は、転写レベルにおけるEphA2発現が呼吸器上皮細胞のRSV感染後に、RT-PCRにより分析して増加することを示す。
【０５２４】
細胞の調製
BEAS-2B細胞をまいて、実施例１に記載の通り感染させた。全RNAを全RNA単離キット（Agilent Technologies、Palo Alto、CA）を用い、製造業者の取扱説明書に従って単離した。RNA濃度をA260により定量した。
【０５２５】
RT-PCR
RT-PCRについては、全RNAをBEAS-2B細胞から単離し、1または2日間感染させ、そしてEphA2のmRNAを逆転写しかつリアルタイムPCRによって増幅した。RT-PCRは、テンプレートとして100ngRNAを用い、TaqManワンステップRT-PCRMastermixキットおよびヒトEphA2用ABIアッセイ・オン・デマンドを使い、製造業者の取扱説明書（Applied Biosystems、Foster City、CA）に従って実施した。18S rRNAプライマーを別々の反応において正常化対照として用いた。
【０５２６】
使用した計器はABI Prism 7000配列検出系および製造業者が供給したソフトウエアであった。温度サイクルは次の通りであった：48℃、30分、および95℃、10分をそれぞれ1回、次いで[95℃、15秒；60℃、1分]を40回繰り返した。閾値サイクル（Ct）データをqgene96、Excelファイル（Patrick Muller作製のマクロ付き）に送出し、そして平均規準化発現レベルを計算した。
【０５２７】
図４に記載の通り、呼吸器上皮細胞のRSV感染の後、EphA2の転写は24時間後に4倍増加し、そして48時間存続した。
【０５２８】
6.5  実施例４：ウェスタンブロット分析を用いる、NHBE細胞上のEphA2の検出
全EphA2タンパク質が、RSVに1日間感染させた一次ヒト気管支上皮細胞（NHBE）において増加することを実証する。
【０５２９】
ウェスタンブロット分析
EphA2タンパク質のウェスタンブロット分析を上記実施例１に記載の通り実施した。
【０５３０】
EphA2タンパク質は、図５に示した通り、RSVに24時間感染させた一次ヒト気管支上皮細胞において有意に増加した。対照は無処置物または無感染細胞から作った細胞 ライセートによるモック（模擬）感染物である。
【０５３１】
6.6  実施例５：FACS分析を用いる、NHBE細胞上のEphA2の検出
本実施例は、より低い量のRSV（MOIの1または0.1）による24時間感染後の一次ヒト気管支上皮細胞（NHBE）の表面上のRSV-Fタンパク質およびEphA2のレベルを示す。
【０５３２】
FACS分析を上記実施例２に記載の通り実施した。これらの実験において、細胞数に対する相対的なウイルス粒子数は10の代わりに1または0.1であった。
【０５３３】
図６および７に図示したように、一次ヒト気道上皮は、RSVに対して細胞株BEAS-2Bの応答と類似の応答を有する。その表面上にRSV-Fタンパク質を発現する細胞の数は24時間における感染度（MOI）に正比例する（図６）感染細胞の表面上のEphA2発現もMOIの増加とともに増加する（図７）。
【０５３４】
6.7  実施例６：FACSアッセイ、四分円分析を用いる、NHBEおよびBEAS-2B細胞上のEphA2の検出
本実施例においては、FACSアッセイおよび四分円分析（quadrant analysis）を実施して、細胞のいくつかをRSVに感染させた後にどの細胞（例えば、感染細胞または隣接する無感染細胞がEphA2をアップレギュレーションするかを確認した（図８および９を参照）。
【０５３５】
RSVによる低多重度感染を実施例５に記載の通り実施し、そして24時間後に該細胞をプレートから剥がして抗RSV-F mAbと抗EphA2 mAbの両方を用いて標識し、その後にFACS分析を行った。単一の標識した細胞および アイソタイプ対照が含まれた。
【０５３６】
EphA2の量をRSV-FネガティブとRSV-Fポジティブ 細胞の間で比較できるように、二重標識した細胞からのデータを四分円中に分割して図示した。細胞集団中にRSV-F染色の連続体が存在するので、どの細胞が無感染でありかつどの細胞が感染しているかを正確に決定することは不可能である。しかし、一般に、上側左の四分円はRSV-Fタンパク質に対する染色がなく無感染と規定された一方、上側右の四分円はRSV-F タンパク質に対してポジティブに染色されていて感染集団と規定された。
【０５３７】
図８および９に図示されたデータは、NHBE細胞（図８）とBEAS-2B細胞（図９）の両方の表面上のEphA2の量は無感染細胞中より感染細胞中で高いことを示唆する。しかし、これは1つの推定である。上側左四分円の細胞のいくつかは感染したものの、RSV-Fタンパク質が細胞表面上に現れるために十分な時間が経過していなかったとも考えうる。
【０５３８】
6.8  実施例７：FACSアッセイを用いる、NHBEおよびBEAS-2B細胞中のEphA2アップレギュレーションの機構の確認
本実施例は、EphA2がウイルス粒子の細胞表面と結合することにより、または活性感染過程によりアップレギュレートされたかを確認するために実施した実験を示す（図10〜17を参照）。
【０５３９】
ウイルスストックの調製
RSVをUV照射により処置して、非感染性であるが無傷であるようにした。
【０５４０】
105 Hep-2細胞／ウエル（1ml）を24ウエルプレートにまいて、UV照射前後のウイルス力価を測定した。RSV-A2#10ストックを4mlフリントガラスバイアル中に380μl/バイアルで分割し、そして短波UV光ボックス上で、30〜60分間、室温にて処置した。
【０５４１】
NHBEまたはBEAS-2B細胞の感染
Hep-2細胞の場合、細胞を80〜90％コンフルエントにし（2日間増殖）、ウイルスストックの連続10倍希釈液を（EMEM／10％FBS／PS）で作り、そして200μlの各希釈液を用いてNHBEまたはBEAS-2B細胞を二重に感染させた。感染は、上記の通り、無処置（1.2x108pfu/ml）またはUV-処置（<50pfu/ml）ウイルスストックを用いて実施し、そしてFACS分析は、NHBEまたはBEAS-2B細胞を用いて、1または0.1のMOIにての24時間感染の後に実施した。NHBEまたはBEAS-2B細胞を1時間、37℃にて感染させ、そのプレートを15分毎に手で揺すった。接種時間の終わりに、完全EMEM増殖培地中の0.75％メチルセルロース1mlを各ウエルに加え、そのプレートを37℃にて4日間インキュベートした。増殖培地を取り除いて単層を固定し、0.5ml/ウエルの20％メタノール/0.1％クリスタルバイオレットを加えて染色し、そして30〜60分間、室温にてインキュベートした。プラークが暗紫色の単層中に空孔またはより明るい円として現れた。UV照射の前の力価は1.2x108pfu/mlであった。UV照射後に、プラークは10-1希釈で検出されなかったので、50pfu/ml未満であった。
【０５４２】
FACSサンプルの調製
上記の通り、NHBEまたはBEAS-2B細胞をまき、そして1または0.1のMOIにて感染させた。24時間後に細胞を剥がして、上記の通り、抗-RSV-FmAbまたは抗-EphA2mAbを用いて染色した。上記の通り、FACS分析も実施した。
【０５４３】
結果
図10および11は、NHBE細胞を1日間、RSVを用いて1のMOIで感染させたとき、RSV-Fタンパク質はほとんど全ての細胞に発現されかつEphA2がほぼ2倍増加したことを示す結果を示す。細胞をUVで不活性化したRSVを用いて同じ条件のもとで感染させたとき、RSV-Fタンパク質はほとんどの細胞に発現されずかつEphA2のレベルは増加しなかった。
【０５４４】
図12および13は、0.1のMOIで行った同じ実験の結果を示す。この場合、RSV-Fタンパク質は小画分の細胞で発現され、1日後に感染した細胞がより少ないことを反映する。しかし、EphA2の増加は、MOI=1の実験に対する増加とほとんど同じだけ高かった。ウイルスがUV不活性化されているとき、RSV-Fタンパク質もまたEphA2の増加も細胞に観察されなかった。
【０５４５】
図14および15は、BEAS-2Bを1日間、1のMOIで無処理またはUV不活性化されたRSVを用いて感染させた結果を示す。結果はNHBE細胞を用いたのと同じ結果が観察されたが、UV不活性化されたRSVを用いて感染させたBEAS-2B上のRSV-Fタンパク質の発現がより高かった。細胞をUV不活性化されたRSVを用いて感染させたときに、EphA2の増加は観察されなかった。
【０５４６】
図16および17は、BEAS-2Bを1日間、0.1のMOIで無処理またはUV不活性化されたRSVを用いて感染させた結果を示す。NHBE細胞を用いた結果と同様に、小画分の細胞はRSV-F タンパク質を発現し、かつEphA2の増加は1のMOIのときより僅かに少なかった。EphA2発現の増加は、細胞を無処理のRSVを用いて感染させたときにだけ観察され、そしてUV不活性化ウイルスを用いたときには観察されなかった。
【０５４７】
従って、一次（NHBE細胞）または確立された気管支上皮細胞株（BEAS-2B細胞）のいずれでも、細胞表面EphA2発現の増加は、RSVによる活性化感染の間だけ起こり、そしてウイルス粒子の細胞膜との単なる結合の間には起こらなかった。
【０５４８】
6.9  実施例８：FACSアッセイを用いる、RSVに感染した他の細胞におけるEphA2の検出
NHBEおよびBEAS-2Bでない細胞型において、RSV感染に応答してEphA2アップレギュレーションが起こるかどうかを確認するために、A549またはHep-2細胞をRSVを用いて様々なMOIで48時間、上記の方法を用いて感染させた。次いで細胞を剥がし、抗EphA2 mAbにより標識し、そしてFACSにより表面EphA2を上記の方法を用いて分析した。
【０５４９】
結果
NHBEおよびBEAS-2Bに加えて、A549およびHep-2細胞も、RSVによる感染の後、それらの表面上にEphA2レベルの増加を提示した（図18）。
【０５５０】
6.10  実施例９：マウス肺におけるEphA2の検出
本実施例は、ホルマリン固定しパラフィン包埋した正常、RSV感染、またはブレオマイシン処理したマウス肺組織におけるEphA2の存在を示す（図19〜21を参照）。
【０５５１】
次の材料を用いて下記の免疫組織化学（IHC）実験を実施した。
【０５５２】
蒸留水はRODIシステム（Aztec、NM）から得た。3％H2O2/メタノールペルオキシダーゼブロックは、25mlの30％H2O2にメタノールを加えて250mlにすることにより調製した。5％ウシ血清アルブミン溶液（BSA）は、12.5gのBSA（Sigma 7906-500G バッチ 103K1375）をTBS-tween（TBST）に溶解して作った。TBSTは、第1インキュベーション日に60ml Biofluids 10X TBSに蒸留水＋60μl tweenを加えて600mlにすることにより作り、そして第2インキュベーション日に400ml Biofluids 10X TBSに蒸留水＋400μl tweenを加えて4Lにすることにより作った。1％BSA溶液は6ml 5％BSA溶液からTBSTを加えて30mlとすることにより調製した。EphA2（H-77）ウサギポリクローナルIgGはSanta Cruz Biotechnology（cat. #SC-10746、Lot A311、200μg/ml）から得て；1：100希釈液は、90μlを9ml 1％BSA溶液に加えることにより調製した。精製ウサギIgGは（Control/RN：1673.072、1.18mg/ml）であり、7.63μlを9ml 1％BSAを加えることにより1μg/mlに希釈した。1％BSA溶液を、マイナス一次対照に用いた。連結抗体については、70.7μlを35ml TBSTに加えることにより、ビオチン化ヤギ抗-ウサギIgG（Dako E0432、0.99 mg/ml）を希釈して、2μg/mlとした。90.3 μlに35ml TBSTを加えることにより、ストレプトアビジン HRP（Dako P0397、Lot 00004379、0.62mg/ml）を希釈して1.6μg/mlとした。ジアミノベンジジン基質（DAB）はSigmaから入手し、そして540μl溶液B（D5815 Lot 103K10302）を18ml溶液A（D5940 Lot 103K10301）に加えることにより作った。
【０５５３】
染色方法
RSV感染したマウス肺と正常マウス肺組織とをホルマリンで固定し、次いでパラフィン包埋ブロックから切除し、そして正に帯電したスライド上に載せて室温にて数日貯蔵した。免疫組織化学分析の直前に、スライドをそれぞれ5分間、次の溶液に漬けることにより脱ワックスを行った：キシレン中に4回、次いで100％試薬アルコール中に2回、次いで95％試薬アルコール中に1回、次いで70％アルコール中に1回。次いでスライドを直ちに蒸留水中に漬けた。組織中の内因性ペルオキシダーゼを、スライドを3％H2O2/メタノール溶液に10分間漬けることによりブロックした（使用直前、スライドの脱ワックス後に行った）。次いでスライドを蒸留水中ですすぎ洗う。次いでスライドを30分間、5％BSA溶液に漬けた。スライドは一次抗体とのインキュベーションの度に、すすぎ洗いせずに、各スライドから過剰の液（5％BSA）をふき取ることにより調製し、それをインキュベーター上に平らに置いて、次いで一次抗体（EphA2 H-77ウサギポリクローナルIgG、精製ウサギIgG、またはマイナス一次溶液）1mlを適用した。スライドを湿環境で室温にて19.5時間インキュベートした。
【０５５４】
TBST中ですすぎ洗った後に、スライドをDako Autostainer Plusに送り、ここで次のインキュベーションを行った：TBSTと10分間インキュベート；ヤギ抗-ウサギIgGと30分間インキュベート；TBSTと5分間インキュベート；ストレプトアビジンHRPと30分間インキュベート、TBSTと5分間インキュベート；TBSTと10分間インキュベート；ヤギ抗-ウサギIgGと30分間インキュベート；TBSTと5分間インキュベート；ストレプトアビジンHRPと30分間インキュベート、TBSTと5分間インキュベート；DABと4分間インキュベート、次いで蒸留水を用いてすすぎ洗う。スライドを自動染色機から取り出して蒸留水に漬けた。次いでMayerのヘマトキシリンに2.5分間漬け、次いで蒸留水を用いて数回すすぎ洗った。スライドを30秒間、Scottの代用水道水（Tap Water Substitute）に漬けて「青色化」し、次いで数回蒸留水ですすぎ洗った。スライドを5分間次の溶液中にそれぞれ漬けることにより脱水した：95％試薬アルコール中で1回、100％試薬アルコール中で3回、キシレン中で4回。スライドをキシレンから取り出し、そしてカバースリップをDPXを用いて接着した。
【０５５５】
図19〜21は、正常（図19）、RSV感染（図20）およびブレオマイシン処理（図21）マウス気道組織中のEphA2を染色するIHC実験の結果を示す。
【０５５６】
7.  均等物
当業者は本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を理解するか、または慣用の実験のみを用いることによって確認することができるだろう。そのような均等物は特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【０５５７】
本明細書で記載されたあらゆる開示、特許および特許出願は、あたかも各々の開示、特許および特許出願が、特定的かつ個別に参照により本明細書中に取り込まれているのと同程度に、参照により本明細書に取り込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０５５８】
【図１】図1は、(高感染多重度(MOI)での)感染の24および48時間後のRSV感染BEAS-2B細胞から単離されたトータルEphA2タンパク質のウエスタンブロット解析である。
【図２】図2は、感染の1および2日後のRSVに感染したBEAS-2B細胞上に存在するRSV-Fタンパク質のFACS解析である。
【図３】図3は、感染の1および2日後のRSVに感染したBEAS-2B細胞上に存在するEphA2タンパク質のFACS解析である。
【図４】図4は、RT-PCRによって測定された、RSV感染(1および2日)後のBEAS-2B細胞におけるEphA2発現である。
【図５】図5は、RSV感染NHBE細胞(24時間)から単離されたトータルEphA2タンパク質のウエスタンブロット解析である。
【図６】図6は、FACS解析を使用した、RSV感染および非感染性のNHBE細胞の表面に存在するRSV-Fタンパク質の検出である。
【図７】図7は、FACS解析を使用した、RSV感染および非感染性のNHBE細胞の表面に存在するEphA2タンパク質の検出である。
【図８】図8は、FACS四分円解析(FACS quadrant analysis)を使用した、MOI 0.1でRSVに感染したNHBE細胞上のEphA2の検出である。
【図９】図9は、FACS四分円解析を使用した、MOI 0.1でRSVに感染したBEAS-2B細胞上のEphA2の検出である。
【図１０】図10は、RSV±UV照射(MOI = 1)で感染させたNHBE細胞上で発現されたRSV-Fタンパク質の検出である。
【図１１】図11は、RSV±UV照射(MOI = 1)で感染させたNHBE細胞上で発現されたEphA2タンパク質の検出である。
【図１２】図12は、RSV±UV照射(MOI = 0.1)で感染させたNHBE細胞上で発現されたRSV-Fタンパク質の検出である。
【図１３】図13は、RSV±UV照射(MOI = 0.1)で感染させたNHBE細胞上で発現されたEphA2タンパク質の検出である。
【図１４】図14は、RSV±UV照射(MOI = 1)で感染させたBEAS-2B細胞上で発現されたRSV-Fタンパク質の検出である。
【図１５】図15は、RSV±UV照射(MOI = 1)で感染させたBEAS-2B細胞上で発現されたEphA2タンパク質の検出である。
【図１６】図16は、RSV±UV照射(MOI = 0.1)で感染させたBEAS-2B細胞上で発現されたRSV-Fタンパク質の検出である。
【図１７】図17は、RSV±UV照射(MOI = 0.1)で感染させたBEAS-2B細胞上で発現されたEphA2タンパク質の検出である。
【図１８】図18は、FACS解析によって測定された、A549およびHep2細胞におけるEphA2の検出である。
【図１９】図19は、正常なマウス肺組織におけるEphA2の免疫組織化学である。
【図２０】図20は、RSV感染マウス肺組織におけるEphA2の免疫組織化学染色である。
【図２１】図21は、ブレオマイシン処理マウス肺組織におけるEphA2の免疫組織化学染色である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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