(57)【要約】  本発明は、癌の治療に有用でありうる、3,6,9アクリジン化合物および場合によっては置換されたその誘導体に関する。本発明は、前記化合物を含む組成物およびその使用も提供する。
2008532987.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iの化合物および薬学的に許容されるその誘導体：
【化１】
2008532987.tif 000031
[前記式中、R1、R2、R3、R4およびR5のそれぞれは、フッ素であるか、または存在しない(即ち水素原子を表す)かのいずれかであり、
nは、1または2であり、
前記化合物は、ハロ、ヒドロキシ、エーテル、イミノ、オキソ、ホルミル、アシル、アシルハライド、カルボキシ、エステル、アシルオキシ、アミド、アシルアミド、チオアミド、テトラゾリル、アミノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、イソシアノ、シアナト、イソシアナト、チオシアノ、イソチオシアノ、スルフィドリル、チオエーテル、スルホン酸、スルホネート、スルホン、スルホニルオキシ、スルフィニルオキシ、スルファミノ、スルホンアミノ、スルフィンアミノ、スルファミル、スルホンアミド、C1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリル、およびC5〜20アリールから独立に選択される置換基によって、1つまたは複数の位置において任意選択で置換されていてもよい]。
【請求項２】
次の構造を有する、請求項１に記載の化合物および薬学的に許容されるその誘導体。
【化２】
2008532987.tif 000032
【請求項３】
次の構造を有する、請求項２に記載の化合物および薬学的に許容されるその誘導体。
【化３】
2008532987.tif 000033
【請求項４】
前記化合物が、プロドラッグの形態である、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
薬剤としての使用のための、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその誘導体。
【請求項６】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体とを含む組成物。
【請求項７】
テロメラーゼの阻害における、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および/または請求項６に記載の組成物の使用。
【請求項８】
細胞増殖の調節における、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および/または請求項６に記載の組成物の使用。
【請求項９】
薬剤としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および/または請求項６に記載の組成物の使用。
【請求項１０】
前記薬剤が、増加した細胞増殖を特徴とする疾患の治療および/または予防および/または診断に使用される、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
増加した細胞増殖を特徴とする疾患の治療および/または予防および/または診断のための薬剤の製造における、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および/または請求項６に記載の組成物の使用。
【請求項１２】
前記増加した細胞増殖を特徴とする疾患が、良性の、前癌状態の、または悪性の細胞増殖である、請求項１０または１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記疾患が、新生物および腫瘍、癌、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖障害、ならびにアテローム性動脈硬化の群から選択される、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
増加した細胞増殖を特徴とする前記疾患が癌である、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記腫瘍が、組織球腫、神経膠腫、星状細胞腫および骨腫からなる群から選択され、前記癌が、卵巣癌、乳癌、腸癌、結腸癌、腎癌、肺癌、小細胞肺癌、精巣癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、メラノーマ、白血病、膵臓癌および皮膚癌からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
前記化合物の作用が、細胞増殖の調節、血管形成(新しい血管の形成)の阻害、転移(腫瘍のその出発点からの拡散)の阻害、浸潤(腫瘍細胞の隣接した正常な構造への拡散)の阻害、またはアポトーシス(プログラム細胞死)の促進の群から選択される、少なくとも1つの機構を通して生じる、請求項９から１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
前記薬剤が、前記化合物および/または組成物の、治療的にもしくは予防的に有効な用量または複数の用量を含む、請求項９から１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
理想的に有効な用量が、患者において1〜500mg/m2である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
テロメラーゼおよび/または細胞増殖を阻害する化合物の同定のためのインビトロアッセイにおける比較標準としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および/または請求項６に記載の組成物の使用。
【請求項２０】
後の治療のための、適切な候補患者の同定のためのインビトロアッセイにおける、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および/または請求項６に記載の組成物の使用。
【請求項２１】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の有効量および/または請求項６に記載の組成物の有効量を細胞に接触させる段階を含む、テロメラーゼを阻害する方法。
【請求項２２】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物の有効量および/または請求項６に記載の組成物の有効量を細胞に接触させる段階を含む、細胞増殖を調節する方法。
【請求項２３】
化合物または組成物の前記有効量が、0.1から10マイクロモルである、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
式IIの化合物
【化４】
2008532987.tif 000034
(前記式中、L1は、適切な脱離基を表し、nは、請求項１に記載の通りである)と、式IIIの化合物
【化５】
2008532987.tif 000035
(前記式中、R1からR5は、請求項１に記載の通りである)との反応を含む、請求項１から4のいずれか一項に記載の化合物を合成する方法。
【請求項２５】
図1に示された段階を含む、請求項１から４のいずれかに記載の化合物を合成する方法。
【請求項２６】
(a)請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物および/または請求項６に記載の組成物と、
(b)使用説明書と
を含むパーツのキット。
【請求項２７】
前記化合物および/または組成物が、適切な容器に入れて、かつ/または適切な包装で提供される、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
前記説明書が、前記活性化合物の投与方法についての説明書である、請求項２６または２７に記載のキット。
【請求項２９】
前記使用説明書が、前記活性成分が、それに対して適切な処置である指示の一覧も含む、請求項２６から２８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３０】
前記化合物および/または組成物を投与する手段も含む、請求項２６から２９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３１】
(A)請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物または下記に定義された式Iaの化合物、または薬学的に許容されるその誘導体、および
(B)プラチン、または薬学的に許容されるその誘導体
を含む組み合わせ製品であって、
ここで、成分(A)および(B)のそれぞれが、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して製剤化され、
式Iaの化合物が、以下の構造（および薬学的に許容されるその誘導体）を有する、組み合わせ製品。
【化６】
2008532987.tif 000036
[前記式中、
(a)Kは、=Oであり、Lは-Hであり、αは単結合であり、βは二重結合であり、γは単結合であるか、または
(b)Kは9-置換基であり、Lは存在せず、αは二重結合であり、βは単結合であり、γは二重結合であるか
のいずれかであり、かつ
J1およびJ2は、独立して-N(H)-C(O)-(CH2)2-NR1aR2aを表し、
nは、1から5の整数を表し、
Kは、-N(RN)Qを表し、
R1a、R2aおよびRNは、独立して、H、C1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリルまたはC5〜20アリールを独立に表し、ここで、後の3種の基は、非置換のC1〜7アルキル、非置換のC3〜20ヘテロシクリル、非置換のC5〜20アリール、および式Iの化合物について先に定義された任意の置換基の一覧から選択される1個または複数の置換基によって任意選択により置換されていてもよく、かつ
Qは、C1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリル、またはC5〜20アリールを表し、これらのすべては、上に定義されたように任意選択により置換されていてもよい]。
【請求項３２】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物または請求項３１に記載の式Iaの化合物、または薬学的に許容されるその誘導体と、プラチン、または薬学的に許容されるその誘導体と、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、または担体とを含む製剤を含む、請求項３１に記載の組合せ製品。
【請求項３３】
以下の成分：
(a)請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物または請求項３１に記載の式Iaの化合物、または薬学的に許容されるその誘導体を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して含む製剤、および
(b)プラチン、または薬学的に許容されるその誘導体を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して含む製剤
を含むパーツのキットを含み、
ここで、成分(a)および(b)が、他方との併用投与に適した形態でそれぞれ提供される、請求項３１に記載の組合せ製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テロメラーゼ阻害薬および抗増殖剤の分野に、より詳細には、テロメラーゼを阻害し、かつ/または細胞増殖を調節する、特定のアクリドンおよびアクリジン化合物に関する。本発明は、また、このような化合物を含む医薬組成物、ならびにインビトロおよびインビボの両方で、テロメラーゼを阻害し、かつ/または細胞増殖を調節するための、このような化合物および組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳動物の細胞は、器官の構造および機能を維持するために複製を調節する厳格な管理に一般的に従っている。しかしながら、制御されていない細胞増殖を特徴とする、癌を含めた多くの疾患がある。細胞周期の調節に関与する任意のステップを傷つけることは、細胞の調節機構からの離脱に関わり、したがって新生組織形成をもたらしうる。しかしながら、細胞が、増殖の抑制を免れる場合、安全機構が細胞周期に停止を引き起こす前に細胞が進行しうる複製サイクルの数には制限があり、この制限は、生物老化の過程の要素であると考えられる。老化は、複雑な過程であるが、細胞増殖の制限のための分子シグナルの有力候補は、テロメアの短縮化の分子シグナルである。
【０００３】
テロメアは、100未満から数1000個の塩基にわたる、不規則に繰り返された単位に配置された、DNA配列からなる直鎖状染色体の端における核タンパク構造である。不規則な切断によって生成された染色体末端と対照的に、テロメアは、分解または他の染色体末端と融合する傾向がない、安定した構造であり、通常のDNA修復機構に従わない。
【０００４】
細胞複製の各回の間、二本鎖DNAの両方の鎖が、分離し、娘鎖が、リーディング鎖およびラギング鎖上に、わずかに異なる方法で合成される。リーディング鎖は、通常のDNAポリメラーゼを用いて連続的に複製するが、ラギング鎖は、岡崎フラグメントを用いて不連続的に複製する。個々の岡崎フラグメントの間のギャップは、通常のDNAポリメラーゼによって充填される。しかしながら、これは、潜在的な「末端複製問題」の発端となる。これは、岡崎フラグメントプライミングは、DNAの厳密な端から必ずしも開始しないために、また、RNAプライマーは、除去されると複製しない3'-DNA(修復されない3'-オーバーハング)の部分をもたらすために生じる。これは、「死滅段階1(mortality stage 1)」(M1)と呼ばれる増殖抑制機構の活性化と一致する長さまでのテロメアの最終的な短縮化を伴う、体細胞分裂の毎回の50〜200個の塩基対の損失をもたらすことがあり、この段階で、体細胞における老化が生じる。したがって、テロメア短縮は、「細胞分裂時計」として機能し、体細胞における分裂を約50〜70回に制限し、それにより細胞老化の一因となる。
【０００５】
ある細胞においては、種々の機構のために、M1期は、回避され、細胞は、テロメアが、危機的に短縮(「死滅段階2(mortality stage 2)」または「M2」)されるまで分裂しうる。M2期の間、「テロメラーゼ」と呼ばれる特異性DNAポリメラーゼが、多くの不死細胞において見出される。テロメラーゼは、その内部にあるRNA鋳型を利用し、テロメア配列を合成し、不完全な複製によるテロメアDNAの損失を補う。これは、テロメアのさらなる短縮を防ぎ、得られるその長さの安定化は不死化の一因となる。
【０００６】
テロメラーゼは、健康な哺乳動物の体細胞中に通常は発現されず、存在する場合でも、その活性は抑制されている。テロメラーゼは、しかしながら、雄の生殖細胞系を含む特定の再生細胞系、およびいくらかの上皮幹細胞(例えば、腸陰窩、表皮基底層、およびヒトの毛嚢における)で発現される。
【０００７】
活性なテロメラーゼ分子、および短縮されたが安定化されたテロメアは、検査された腫瘍の大多数において(および検査されたすべてのヒトの癌の90%超において)検出され、したがって、テロメアおよびテロメラーゼは、腫瘍(例えば、癌)に対する化学療法の一般に認識された標的である。
【０００８】
ほとんどの正常細胞におけるテロメラーゼの不存在は、その抑制は全体として患者に最小の損傷しか恐らく引き起こさないであろうことを考慮すると、この酵素を特に魅力的な標的にする。腫瘍細胞は、正常の複製細胞集団に比べて、より短いテロメアおよびより高い増殖速度を有するという事実は、治療用テロメラーゼ阻害剤は、再生組織への損傷が発生するよりかなり前に、腫瘍細胞死の一因となり、それにより、望ましくない副作用を最小化しうることを示唆している。
【０００９】
テロメラーゼは、また、癌細胞中のテロメアの末端の保護(「キャップ形成」)に関与する。この機能の崩壊は、老化の急激な発生、次いでのこれらの細胞のアポトーシスという結果を伴う、腫瘍細胞中のテロメア維持の不安定化をもたらしうる。三置換体アクリジン化合物であるBR-ACO-19が、腫瘍細胞系からの染色体における末端間融合(end-to-end fusion)(Incles et al.、2004)を引き起こす能力によって示されるように、G-四座配位子は、腫瘍細胞中のテロメアを選択的に脱キャップ化することができること(Leonetti et al.、2004)が示唆されている。今までの証拠は、腫瘍細胞中のテロメアを標的とすること、および結果として生じるテロメア維持の崩壊は、G-四座配位子の特異的な性質であり、これらの化合物が、インビトロおよびインビボでの抗腫瘍活性を有するために、テロメラーゼ阻害自体に比べてより重要であることを示唆している。
【００１０】
テロメアおよびテロメラーゼのより詳細な議論、ならびに抗増殖標的(anti-proliferative target)としてのその役割については、例えば、Sharma et al., 1997; Urquidi et al., 1998; Perry et al., 1998c; Autexier, 1999; Neidle et al., 1999; Neidle and Parkinson, 2002; Shay and Wright, 2002; Mergny et at., 2002およびそれらの中の参考文献を参照されたい。
【００１１】
多環式アクリジン、アントラキノン、およびフルオレノンを含めたいくつかの多環式化合物は、テロメラーゼを阻害し、かつ/またはインビトロでの抗腫瘍効果を有することが示されている。例えば、Bostock-Smith et al., 1999; Gimenez-Arnau et al., 1998; Gimenez-Arnau et al., 1998; Hagan et al., 1997; Hagan et al., 1998; Harrison et al., 1999; Julino et al., 1998; Perry et al., 1998a, 1998b, 1999a, 1999b; Sun et al., 1997を参照されたい。
【００１２】
Harrison et al., 1999は、テロメラーゼを阻害し、かつ特定の卵巣癌細胞系における細胞増殖を阻害することが示された特定の3,6-二置換アクリジンを記載している。
【００１３】
Read et al., April 2001; Harrison et al., 2003、およびSchultes et al., 2004は、ヒトのテロメラーゼに対する強力なインビトロ阻害活性を有することが示された、BR-ACO-19(BSG01)、およびBR-ACO-20を含めた特定の3,6,9-三置換アクリジン(その中の図1の化合物3および4を参照されたい)を記載している。Burger et al.、2005は、ヒトの腫瘍異種移植片モデルにおけるBR-ACO-19(BSG01)のインビボ活性を記載している。
【００１４】
いくつかのテロメラーゼ阻害剤が知られているが、有効なテロメラーゼ阻害剤および抗腫瘍剤、とりわけさらなる薬理学的利点を提供するテロメラーゼ阻害剤の必要性が残っている。
【００１５】
例えば、とりわけ好ましいテロメラーゼ阻害剤は、次の性質の1つまたは複数を特徴とするものである。
(a)インビトロでのテロメラーゼ阻害(nM)に対するTaqポリメラーゼ(>10マイクロモル)の阻害の大きな差異(特異性をもたらし、広域スペクトルのポリメラーゼ阻害剤を排除するため)、好ましくは、<5μMにおいてTaqポリメラーゼの阻害が皆無。
(b)無細胞テロメラーゼ阻害(nM)に対する急性細胞毒性(マイクロモル)の大きな差異(>10倍);好ましくは、<0.5μMにおける無細胞テロメラーゼ阻害。
(c)急性細胞毒性の濃度に比べて少なくとも5倍少ない濃度での、腫瘍細胞におけるテロメア長の短縮化。
(d)急性細胞毒性の濃度に比べて5から10倍少ない濃度での、ヒトの腫瘍細胞における老化またはアポトーシスの誘導。
(e)許容可能なインビボ血漿内半減期(>2時間が望ましい)
(f)静脈経路による2〜3の独立した腫瘍モデルにおける毒性のない用量で、マウスにおけるインビボ抗腫瘍活性。
(g)許容される「薬学的」性質(生体適合性の理想的に水性の溶媒における溶解度>1mg/ml、安定性>6時間)、スケールアップに適した合成法。
(h)ヒトの腫瘍異種移植片におけるテロメア短縮化。
(i)潜在的な経口バイオアベイラビリティ。
(j)急性細胞毒性の濃度に比べて有意に少ない濃度での、腫瘍細胞の増殖を阻害する能力。
(k)融点の増加が>10℃であるほどの高い親和力で、ヒトの四重DNA(quadruplex DNA)に結合する能力。
(l)細胞取り込みを助けることができる親油性の構造的特徴をもつこと。
【特許文献１】WO02/08193
【非特許文献１】Berge et al.、1977、"Pharmaceutically Acceptable Salts"、J.Pharm.Sci.、Vol.66、pp.1-19
【非特許文献２】Protective Groups in Organic Synthesis(T Green and P Wuts、Wiley、1991)
【非特許文献３】"Comprehensive Organic Synthesis" by B.M.Trost and I.Fleming、Pergamon Press、1991
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、したがって、本明細書で「アクリジン」と呼ばれるクラスの化合物の、特定のメンバーおよび任意に置換されたその誘導体に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明の第1の態様においては、式Iの3,6,9アクリジン化合物および薬学的に許容されるその誘導体が提供される。
【００１８】
【化１】
2008532987.tif 000003
【００１９】
[上記式中、R1、R2、R3、R4およびR5のそれぞれは、フッ素であるか、または存在しない(即ち水素原子を表す)かのいずれかであり、nは、本明細書で使用されるたび毎に、1または2であり、
前記化合物は、
ハロ、ヒドロキシ、エーテル(例えば、C1〜7アルコキシ)、イミノ、オキソ、ホルミル、アシル(例えば、C1〜7アルキルアシル、C5〜20アリールアシル)、アシルハライド、カルボキシ、エステル、アシルオキシ、アミド、アシルアミド、チオアミド、テトラゾリル、アミノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、イソシアノ、シアナト、イソシアナト、チオシアノ、イソチオシアノ、スルフィドリル、チオエーテル(例えば、C1〜7アルキルチオ)、スルホン酸、スルホネート、スルホン、スルホニルオキシ、スルフィニルオキシ、スルファミノ、スルホンアミノ、スルフィンアミノ、スルファミル、スルホンアミド、C1〜7アルキル(例えば、C1〜7ハロアルキル、C1〜7ヒドロキシアルキル、C1〜7カルボキシルアルキル、C1〜7アミノアルキル、C5〜20アリール-C1〜7アルキルを含めた)、C3〜20ヘテロシクリル、およびC5〜20アリール(例えば、C5〜20カルボアリール、C5〜20ヘテロアリール、C1〜7アルキル-C5〜20アリールおよびC5〜20ハロアリールを含めた)から独立に選択される置換基によって、1つまたは複数の位置において任意選択で置換されていてもよい]、
前記化合物を、以下「本発明の化合物」とよぶ。
【００２０】
「薬学的に許容される誘導体」によって、我々は、薬学的に許容される、塩、エステル、アミド、溶媒和物、水和物、およびそれらの保護された形態を含む。
【００２１】
本発明の化合物は、それだけには限らないが、シスおよびトランス型；EおよびZ型；c、t、およびr型；エンドおよびエキソ型；R、S、およびメソ型；DおよびL型；dおよびl型；(+)および(-)型；ケト、エノール、およびエノラート型；シンおよびアンチ型；シンクリナルおよびアンチクリナル型；αおよびβ型；アキシアルおよびエクアトリアル型；舟、いす、ねじれ、封筒、および半いす型；ならびにそれらの組合せ、を含めた、1つまたは複数の特定の幾何異性体、光学異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、エピマー、立体異性体、互変異性体、配座異性体、またはアノマーとして存在することができ、以下、「異性体」(または「異性体形態(isomeric form)」)とまとめてよぶ。
【００２２】
互変異性体についての下記の記述を除いて、本明細書で用いられる「異性体」という用語から特異的に排除されるのは、構造異性体(即ち、単に空間における原子の位置によってではなく原子間の結合において異なる異性体)である。例えば、メトキシ基、-OCH3への言及は、その構造異性体である、ヒドロキシメチル基、-CH2OHへの言及と解釈されるべきではない。同様に、オルト-クロロフェニルへの言及は、その構造異性体である、メタ-クロロフェニルへの言及と解釈されるべきではない。
【００２３】
しかしながら、構造のクラスへの言及は、そのクラス(例えば、C1〜7アルキルは、n-プロピルおよびイソプロピルを含み、ブチルは、n-、iso-、sec-およびtert-ブチルを含み、メトキシフェニルは、オルト-、メタ-、およびパラ-メトキシフェニルを含む)の範囲に入る構造異性体を十分に含むことができる。
【００２４】
上記の除外は、例えば、次の互変異性のペア、即ち、ケト/エノール、イミン/エナミン、アミド/イミノアルコール、アミジン/アミジン、ニトロソ/オキシム、チオケトン/エンチオール、N-ニトロソ/ヒドロキシアゾ、およびニトロ/アシニトロにおけるように、互変異性体、例えば、ケト-、エノール-、およびエノラート型には当てはまらない。
【００２５】
1個または複数の同位体置換を有する化合物は、特に、「異性体」という用語に含まれる。例えば、Hは、1H、2H(D)、および3H(T)を含めた、任意の同位体形態であってよく、炭素は、12C、13C、および14Cを含めた、任意の同位体形態であってよく、酸素は、16Oおよび18Oを含めた、任意の同位体形態であってよい。
【００２６】
特別の定めのない限り、本発明の化合物への言及は、そのラセミおよび他の混合物を含めた(全体的にまたは部分的に)すべてのこのような異性体を含む。このような異性体の調製(例えば、不斉合成)および分離(例えば、分別結晶およびクロマトグラフ手段)の方法は、当技術分野で公知であり、かつ/または本明細書の実施例において教示される方法を含む。
【００２７】
本発明の化合物は、いくつかの異なる共鳴構造で存在することができ、そのうちの1つだけが上に示されている。一共鳴構造への言及は、すべての可能な対応する共鳴構造への言及である。
【００２８】
上記活性化合物の対応する塩、例えば、薬学的に許容される塩を調製し、精製し、かつ/または取り扱うことは、好都合であり、または望ましいことがある。
【００２９】
薬学的に許容される塩の例は、Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts"、J. Pharm. Sci., Vol.66, pp.1-19に議論されている。
【００３０】
例えば、化合物が、陰イオン性であるか、または陰イオン性になりうる官能基(例えば、-COOHは-COO-になりうる)を有する場合、適切な陽イオンと共に塩が形成されうる。適切な無機陽イオンの例には、以下には限らないが、Na+およびK+などのアルカリ金属イオン、Ca2+およびMg2+などのアルカリ土類陽イオン、ならびにAl3+などの他の陽イオンが含まれる。適切な有機陽イオンの例には、それだけには限らないが、アンモニウムイオン(例えば、NH+)および置換されたアンモニウムイオン(例えば、NH3R+、NH2R2+、NHR3+、NR4+)が含まれる。
【００３１】
いくつかの適切な置換されたアンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミン、ならびにリシンおよびアルギニンなどのアミノ酸から誘導されるものである。一般的な第四級アンモニウムイオンの例は、N(CH3)4+である。
【００３２】
化合物が陽イオン性であるか、または陽イオンになりうる官能基(例えば、-NH2は、-NH3+になりうる)を有する場合、適切な陰イオンと共に塩が形成されうる。適切な無機陰イオンの例には、以下には限らないが、次の無機酸、即ち、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、および亜リン酸、から誘導されるものが含まれる。
【００３３】
適切な有機陰イオンの例には、以下には限らないが、次の有機酸、即ち、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、パルミチン酸、乳酸、リンゴ酸、パモン酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、安息香酸、桂皮酸、ピルビン酸、サリチル酸、スルファニル酸、2-アセチルオキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、および吉草酸から誘導されるものが含まれる。
【００３４】
適切なポリマー陰イオンの例には、以下には限らないが、次のポリマー酸、即ち、タンニン酸、カルボキシメチルセルロースから誘導されるものが含まれる。
【００３５】
上記活性化合物の対応する溶媒和物を調製し、精製し、かつ/または取り扱うことは、好都合であり、または望ましいことがある。「溶媒和物」という用語は、本明細書で、溶質(例えば、活性化合物、活性化合物の塩)および溶媒の錯体を意味する通常の意味で使用される。溶媒が水である場合、溶媒和物は、水和物、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などと、好都合に呼ぶことができる。
【００３６】
化学的に保護された形態で活性化合物を調製し、精製し、かつ/または取り扱うことは、好都合であり、または望ましいことがある。反応性官能基を保護することによって、他の保護されていない反応性官能基を関与させる反応を、保護された基に影響を与えずに実施することができ、保護基を、分子の残りの部分に実質的に影響を与えずに、通常は後のステップにおいて除去することができる。例えば、Protective Groups in Organic Synthesis(T Green and P Wuts, Wiley, 1991)を参照されたい。
【００３７】
例えば、ヒドロキシ基を、エーテル(-OR)またはエステル(-OC(=O)R)として、例えば、t-ブチルエーテル、ベンジル、ベンズヒドリル(ジフェニルメチル)、またはトリチル(トリフェニルメチル)エーテル、トリメチルシリルまたはt-ブチルジメチルシリルエーテル、またはアセチルエステル(-OC(=O)CH3、-OAc)として保護することができる。
【００３８】
例えば、アルデヒドまたはケトン基を、それぞれアセタールまたはケタールとして保護することができ、ここで、カルボニル基(>C=O)が、例えば、第一級アルコールとの反応によって、ジエーテル(>C(OR)2)に変換される。アルデヒドまたはケトン基は、酸の存在下で大過剰の水を用いる加水分解によって容易に再生される。
【００３９】
例えば、アミン基を、例えば、アミドまたはウレタンとして、例えば、メチルアミド(-NHCO-CH3)、ベンジルオキシアミド(-NHCO-OCH2C6H5、-NH-Cbz)として、t-ブトキシアミド(-NHCO-OC(CH3)3、-NH-Boc)、2-ビフェニル-2-プロポキシアミド(-NHCO-OC(CH3)2C6H4C6H5、-NH-Bpoc)として、9-フルオレニルメトキシアミド(-NH-Fmoc)として、6-ニトロベラトリルオキシアミド(-NH-Nvoc)として、2-トリメチルシリルエチルオキシアミド(-NH-Teoc)として、2,2,2-トリクロロエチルオキシアミド(-NH-Troc)として、アリルオキシアミド(-NH-Alloc)として、2(-フェニルスルホニル)エチルオキシアミド(-NH-Psec)として、または、適切な場合には、N-オキシド(>NO)として保護することができる。
【００４０】
例えば、カルボン酸基を、エステルとして、例えば、C1〜7アルキルエステル(例えば、メチルエステル、t-ブチルエステル)、C1〜7ハロアルキルエステル(例えば、C1〜7トリハロアルキルエステル)、トリC1〜7アルキルシリル-C1〜7アルキルエステル、またはC5〜20アリール-C1〜7アルキルエステル(例えば、ベンジルエステル、ニトロベンジルエステル)として、またはアミド、例えば、メチルアミドとして保護することができる。
【００４１】
例えば、チオール基を、チオエーテル(-SR)として、例えば、ベンジルチオエーテル、アセトアミドメチルエーテル(-S-CH2NHC(=O)CH3)として保護することができる。
【００４２】
誤解を避けるために、本発明の化合物中の2個以上の置換基の素性が同一でありうる場合、それぞれの置換基の実際の素性は、まったく相互依存していない。例えば、任意の置換基が、両方ともアルキル基である状況において、これらのアルキル基は、同じであるか、または異なっていてよい。
【００４３】
挙げることができる本発明の化合物には、
両方のnの数値が、同じであり、nが、1であり、かつ/または
任意の置換基が、ハロ、ヒドロキシ、エーテル(例えば、C1〜7アルコキシ)、ホルミル、アシル(例えば、C1〜7アルキルアシル、C5〜20アリールアシル)、アシルハライド、カルボキシ、エステル、アシルオキシ、アミド、アシルアミド、チオアミド、テトラゾリル、アミノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、イソシアノ、シアナト、イソシアナト、チオシアノ、イソチオシアノ、スルフィドリル、チオエーテル(例えば、C1〜7アルキルチオ)、スルホン酸、スルホネート、スルホン、スルホニルオキシ、スルフィニルオキシ、スルファミノ、スルホンアミノ、スルフィンアミノ、スルファミル、スルホンアミド、C1〜7アルキル(例えば、C1〜7ハロアルキル、C1〜7ヒドロキシアルキル、C1〜7カルボキシアルキル、C1〜7アミノアルキル、C5〜20アリール-C1〜7アルキルを含めた)、C3〜20ヘテロシクリル、およびC5〜20アリール(例えば、C5〜20カルボアリール、C5〜20ヘテロアリール、C1〜7アルキル-C5〜20アリールおよびC5〜20ハロアリールを含めた)から独立に選択される化合物が含まれる。
【００４４】
式Iの化合物が、任意の置換基(即ち、R1からR5以外の置換基)によって置換されている場合、挙げることができる本発明の実施形態は、次の通りである。
【００４５】
第1の実施形態においては、任意の置換基は、それが存在する場合は、式Iの化合物中の任意の可能な位置に結合している。即ち、置換基は、
(1)アクリジンの3-および9-置換基の終端における窒素複素環(即ち、本発明の化合物のピロリジンまたはピペリジン複素環)、
(2)上記(1)で述べた窒素複素環と、アクリジンの3-および9-位との間の連結基（リンカー基） (即ち、N(H)-C(O)-(CH2)2-リンカー基)、
(3)アクリジン環系(即ち、アクリジンの2-、4-、5-、7-、8-または10-位)、
(4)アクリジン環の6-位におけるベンジル基の-CH2-基、および/または
(5)フッ素基が存在しない、式Iの化合物のフェニル環の位置(即ち、R1、R2、R3、R4およびR5のいずれか1つまたは複数が、フッ素以外を表す場合)
に結合していてよい。
【００４６】
第2の実施形態においては、任意の置換基は、それが存在する場合は、上記の(1)から(4)に詳述された位置(即ち、R1からR5基が結合しているC原子以外の、式Iの化合物上の任意の位置)に結合している。
【００４７】
任意の置換基が、それが存在する場合は、 (1)、(3)および、本発明の第1の実施形態の化合物の場合に(5)、において、上で記載した位置において結合していることが好ましい。
【００４８】
本発明の代わりの(かつ、とりわけ好ましい)実施形態においては、任意の置換基が、存在しない(したがってR1からR5だけが、式Iの化合物の置換基である)。
【００４９】
種々の親の基中への、任意の置換基の形成および導入のための方法も、よく知られている。
【００５０】
次に、上記に挙げられた任意の置換基のそれぞれを、より詳細に記載する。
［C1〜7アルキル］
本明細書で用いられる「C1〜7アルキル」という用語は、脂肪族または脂環式であり、またはそれらの組合せであってよく、飽和、部分的に不飽和、または完全に不飽和(ただし芳香族ではない)であってよい、1から7個の炭素原子を有する、C1〜7炭化水素化合物から水素原子を除去することによって得られる一価残基を意味する。
【００５１】
(置換されていない)飽和直鎖C1〜7アルキル基の例には、以下には限らないが、メチル、エチル、n-プロピル、n-ブチル、およびn-ペンチル(アミル)が含まれる。
【００５２】
(置換されていない)飽和分枝C1〜7アルキル基の例には、以下には限らないが、イソ-プロピル、イソ-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、およびneo-ペンチルが含まれる。
【００５３】
飽和脂環式(炭素環式)C1〜7アルキル基(「C3〜7シクロアルキル」基とも呼ばれる)の例には、以下には限らないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルなどの置換されていない基、ならびにアルキル基、例えば、メチルシクロプロピル、ジメチルシクロプロピル、メチルシクロブチル、ジメチルシクロブチル、メチルシクロペンチル、ジメチルシクロペンチル、メチルシクロヘキシル、ジメチルシクロヘキシル、シクロプロピルメチルおよびシクロヘキシルメチルによって置換された部分環式基または環式基などの置換された基(例えば、このような基を含む基)が含まれる。
【００５４】
1個または複数の炭素-炭素二重結合を有する(置換されていない)不飽和C1〜7アルキル基(「C2〜7アルケニル」基とも呼ばれる)の例には、以下には限らないが、エテニル(ビニル、-CH=CH2)、2-プロペニル(アリル、-CH-CH=CH2)、イソプロペニル(-C(CH3)=CH2)、ブテニル、ペンテニル、およびヘキセニルが含まれる。
【００５５】
1個または複数の炭素-炭素三重結合を有する(置換されていない)不飽和C1〜7アルキル基(「C1〜7アルキニル」基とも呼ばれる)の例には、それだけには限らないが、エチニル(エチニル)および2-プロピニル(プロパルギル)が含まれる。
【００５６】
1個または複数の炭素-炭素二重結合を有する不飽和脂環式(炭素環式)C1〜7アルキル基(「C3〜7シクロアルケニル」基とも呼ばれる)の例には、それだけには限らないが、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルなどの置換されていない基、ならびにシクロプロペニルメチルおよびシクロヘキセニルメチルなどの置換された基(例えば、このような基を含む基)が含まれる。
【００５７】
［C3〜20ヘテロシクリル］
本明細書で用いられる「C3〜20ヘテロシクリル」という用語は、C3〜20複素環化合物の環原子から水素原子を除去することによって得られる一価残基を意味し、前記化合物は、単環、または2個以上の環(例えば、スピロ、縮合、架橋)を有し、3から20個の環原子を有し、これらの環原子の1から10個は、環ヘテロ原子であり、ここで、前記環の少なくとも1個は、複素環である。好ましくは、それぞれの環は、3から7個の環原子を有し、これらの環原子の1から4個は、環ヘテロ原子である。「C3〜20」は、炭素原子またはヘテロ原子にかかわらず環原子を意味する。
【００５８】
(非芳香族の)単環式ヘテロシクリル基の例には、以下には限らないが、
N1:アジリジン(C3)、アゼチジン(C4)、ピロリジン(テトラヒドロピロール)(C5)、ピロリン(例えば、3-ピロリン、2,5-ジヒドロピロール)(C5)、2H-ピロールまたは3H-ピロール(イソピロール、イソアゾール)(C5)、ピペリジン(C6)、ジヒドロピリジン(C6)、テトラヒドロピリジン(C6)、アゼピン(C7)；
O1:オキシラン(C3)、オキセタン(C4)、オキソラン(テトラヒドロフラン)(C5)、オキソール(ジヒドロフラン)(C5)、オキサン(テトラヒドロピラン)(C6)、ジヒドロピラン(C6)、ピラン(C6)、オキセピン(C7)；
S1:チイラン(C3)、チエタン(C4)、チオラン(テトラヒドロチオフェン)(C5)、チアン(テトラヒドロチオピラン)(C6)、チエパン(C7)；
O2:ジオキソラン(C5)、ジオキサン(C6)、およびジオキセパン(C7)；
O3:トリオキサン(C6)；
N2:イミダゾリジン(C5)、ピラゾリジン(ジアゾリジン)(C5)、イミダゾリン(C5)、ピラゾリン(ジヒドロピラゾール)(C5)、ピペラジン(C6)；
N1O1:テトラヒドロオキサゾール(C5)、ジヒドロオキサゾール(C5)、テトラヒドロイソオキサゾール(C5)、ジヒドロイソオキサゾール(C5)、モルホリン(C6)、テトラヒドロオキサジン(C6)、ジヒドロオキサジン(C6)、オキサジン(C6)；
N1S1:チアゾリン(C5)、チアゾリジン(C5)、チオモルホリン(C6)；
N2O1:オキサジアジン(C6)；
O1S1:オキサチオール(C5)およびオキサチアン(チオキサン)(C6)；ならびに
N1O1S1:オキサチアジン(C6)
から誘導されるものが含まれる。
【００５９】
置換された(非芳香族の)単環ヘテロシクリル基の例には、環式形態の糖類、例えば、アラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノースおよびキシロフラノースなどのフラノース(C5)、ならびにアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、グロピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース、およびタロピラノースなどのピラノース(C6)が含まれる。
【００６０】
ヘテロアリール基でもあるヘテロシクリル基の例は、アリール基と共に下記に記載されている。
【００６１】
［C5〜20アリール］
本明細書で用いられる「C5〜20アリール」という用語は、C5〜20芳香族化合物の芳香族環原子から水素原子を除去することによって得られる一価残基に相当し、前記化合物は、単環、または2個以上の環(例えば、縮合)を有し、5から20個の環原子を有し、ここで、前記環の少なくとも1個は、芳香族環である。好ましくは、それぞれの環は、5から7個(例えば、5または6)の環原子を有する。
【００６２】
これに関連して、接頭辞(例えば、C3〜20、C5〜7、C5〜6など)は、炭素原子またはヘテロ原子にかかわらず、環原子の数、または環原子の数の範囲を意味する。例えば、本明細書で用いられる「C5〜6アリール」という用語は、5または6個の環原子を有するアリール基を意味する。アリール基のグループの例には、C3〜20アリール、C5〜7アリール、およびC5〜6アリールが含まれる。
【００６３】
環原子は、「カルボアリール基」(例えば、C5〜20カルボアリール)におけるように、すべて炭素原子であってよい。
【００６４】
カルボアリール基の例には、以下には限らないが、ベンゼン(即ち、フェニル)(C6)、ナフタレン(C10)、アズレン(C10)、アントラセン(C14)、フェナントレン(C14)、ナフタセン(C18)、およびピレン(C16)から誘導されるものが含まれる。このような基には、すべての環が芳香族である縮合環が含まれる。
【００６５】
縮合環を含み、その縮合環の少なくとも1つが芳香族環であるアリール基の例には、それだけには限らないが、インデン(C9)、イソインデン(C9)、およびフルオレン(C13)から誘導される基が含まれる。
【００６６】
別法として、環原子は、「ヘテロアリール基」におけるように、以下には限らないが、酸素、窒素、およびイオウを含めた、1個または複数のヘテロ原子を含むことができる。この場合には、この基を、「C5〜20ヘテロアリール」基と好都合に呼ぶことができ、ここで、「C5〜20」は、炭素原子またはヘテロ原子にかかわらず、環原子を意味する。好ましくは、それぞれの環は、5から7個の環原子を有し、これらの環原子のうち、0から4個が、環ヘテロ原子である。
【００６７】
単環式ヘテロアリール基の例には、以下には限らないが；
O1:フラン(オキソール)(C5)；
S1:チオフェン(チオール)(C5)；
N1O1:オキサゾール(C5)、イソオキサゾール(C5)、オキサジン(C6)；
N2O1:オキサジアゾール(フラザン)(C5)；
N3O1:オキサトリアゾール(C5)；
N3S1:チアゾール(C5)、イソチアゾール(C5)；
N2:イミダゾール(1,3-ジアゾール)(C5)、ピラゾール(1,2-ジアゾール)(C5)、ピリダジン(1,2-ジアジン)(C6)、ピリミジン(1,3-ジアジン)(C6)(例えば、シトシン、チミン、ウラシル)、ピラジン(1,4-ジアジン)(C6)；
N3:トリアゾール(C5)、トリアジン(C6)；および
N4:テトラゾール(C5)
から誘導されるものが含まれる。
【００６８】
縮合環を含む複素環基(この複素環基のいくつかは、ヘテロアリール基でもある)の例には、以下には限らないが、
ベンゾフラン(O1)、イソベンゾフラン(O1)、インドール(N1)、イソインドール(N1)、プリン(N4)(例えば、アデニン、グアニン)、ベンズイミダゾール(N2)、ベンゾオキサゾール(N1O1)、ベンズイソオキサゾール(N1O1)、ベンゾジオキソール(O2)、ベンゾフラザン(N2O1)、ベンゾトリアゾール(N3)、ベンゾチオフラン(S1)、ベンゾチアゾール(N1S1)、ベンゾチアジアゾール(N2S)から誘導されるC9複素環基(2個の縮合環を有する)；
ベンゾジオキサン(O2)、キノリン(N1)、イソキノリン(N1)、ベンゾオキサジン(N1O1)、ベンゾジアジン(N2)、ピリドピリジン(N2)、キノキサリン(N2)、キナゾリン(N2)から誘導されるC10複素環基(2個の縮合環を有する)；
カルバゾール(N1)、ジベンゾフラン(O1)、ジベンゾチオフェン(S1)から誘導されるC13複素環基(3個の縮合環を有する)；ならびに
アクリジン(N1)、キサンテン(O1)、フェノキサチイン(O1S1)、フェナジン(N2)、フェノキサジン(N1O1)、フェノチアジン(N1S1)、チアントレン(S2)、フェナントリジン(N1)、フェナントロリン(N2)、フェナジン(N2)から誘導されるC14複素環基(3個の縮合環を有する)が含まれる。
【００６９】
-NH-基の形態で窒素環原子を有する複素環基(ヘテロアリール基を含めた)は、N-置換、即ち、-NRa-のように置換されうる。例えば、ピロールは、N-メチル置換されて、N-メチルピロールを生じうる。このようなN-置換基(即ち、Raの値)の例には、以下には限らないが、C1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリル、C5〜20アリール、およびアシル基が含まれる。
【００７０】
-N-の形態で窒素環原子を有する複素環基(ヘテロアリール基を含めた)は、N-オキシドの形態に、即ち、-N(=O)-(-N(->O)-とも示される)のように置換することができる。例えば、キノリンは、置換して、キノリンN-オキシドを得ることができ、ピリジンは、置換して、ピリジンN-オキシドを得ることができ、ベンゾフラザンは、置換して、ベンゾフラザンN-オキシド(ベンゾフロキサンとしても知られている)を得ることができる。
【００７１】
環式基は、環炭素原子上に1個または複数のオキソ(=O)基をさらに有することができる。このような基の単環式の例には、以下には限らないが、
C5:シクロペンタノン、シクロペンテノン、シクロペンタジエノン；
C6:シクロヘキサノン、シクロヘキセノン、シクロヘキサジエノン；
O1:フラノン(C5)、ピロン(C6)；
N1:ピロリドン(ピロリジノン)(C5)、ピペリジノン(ピペリドン)(C6)、ピペリジンジオン(C6)；
N2:イミダゾリドン(イミダゾリジノン)(C5)、ピラゾロン(ピラゾリノン)(C5)、ピペラジノン(O6)、ピペラジンジオン(C6)、ピリダジノン(C6)、ピリミジノン(C6)(例えば、シトシン)、ピリミジンジオン(C6)(例えば、チミン、ウラシル)、バルビツール酸(C6)； 
N2S1:チアゾロン(C5)、イソチアゾロン(C5)；
N1O1:オキサゾリノン(C5)
から誘導されるものが含まれる。
【００７２】
このような基の多環式の例には、以下には限らないが、
C9:インデンジオン；
N1:オキシインドール(C9)；
O1:ベンゾピロン(例えば、クマリン、イソクマリン、クロモン)(C10)；
NO1O1:ベンゾオキサゾリノン(C9)、ベンゾオキサゾリノン(C10)；
N2:キナゾリンジオン(C10)；
N4:プリノン(C9)(例えば、グアニン)
から誘導されるものが含まれる。
【００７３】
環炭素原子上に1個または複数のオキソ(=O)基を有する環式基のさらなる例には、
以下には限らないが、
無水マレイン酸(C5)、無水コハク酸(C5)、および無水グルタル酸(C6)を含めた環状無水物(環中の-C(=O)-O-C(=O)-)；
エチレンカーボネート(C5)および1,2-プロピレンカーボネート(C5)などの環状カーボネート(環中の-O-C(=O)-O-)；
以下には限らないが、スクシンイミド(C5)、マレイミド(C5)、フタルイミド、およびグルタルイミド(C6)を含めたイミド(環中の-C(=O)-NR-C(=O)-)；
以下には限らないが、β-プロピオラクトン、γ-ブチロラクトン、δ-バレロラクトン(2-ピペリドン)、およびε-カプロラクトンを含めたラクトン(環状エステル、環中の-O-C(=O)-)；
以下には限らないが、β-プロピオラクタム(C4)、γ-ブチロラクタム(2-ピロリドン)(C5)、δ-バレロラクタム(C6)、およびε-カプロラクタム(C7)を含めたラクタム(環状アミド、環中の-NRb-C(=O)-)；
2-オキサゾリドン(C5)などの環状カルバメート(環中の-O-C(=O)-NRc-)；
2-イミダゾリドン(C5)およびピリミジン-2,4-ジオン(例えば、チミン、ウラシル)(C6)などの環状尿素(環中の-NRd-C(=O)-NRe-)
から誘導されるものが、これらだけには限らないが含まれ、
ここで、N-置換基(即ち、Rb、Rc、RdおよびRe)は、好ましく、かつ独立に、C1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリル、C5〜20アリール基およびアシル基を表す。
【００７４】
上記のC1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリル、C5〜20アリール基は、単独または別の置換基の一部にかかわらず、それ自体および下記に挙げられる追加の置換基から選択される1個または複数の基で、それ自体、場合によっては置換されうる。
【００７５】
［水素:-H］
特定の位置における置換基が水素である場合、この化合物をその位置において「置換されていない」と言及することが好都合でありうることを留意されたい。
【００７６】
［ハロ］
-F、-Cl、-Br、および-I
【００７７】
［ヒドロキシ］
-OH
【００７８】
［エーテル］
エーテル置換基は、酸素原子が2個の炭素原子の間にある置換基である。したがって、それは、-Rf-O-Rg基、または、より好ましくは、-ORh基であってよく、ここで、Rf、RgおよびRhは、独立に、エーテル置換基、例えば、C1〜7アルキル基(下記に議論されるC1〜7アルコキシ基とも呼ばれる)、C3〜20ヘテロシクリル基(C3〜20ヘテロシクリルオキシ基とも呼ばれる)、またはC5〜20アリール基(C5〜20アリールオキシ基とも呼ばれる)を、好ましくはC1〜7アルキル基を表す。
【００７９】
［C1〜7アルコキシ］
-ORi、ここで、RiはC1〜7アルキル基である。C1〜7アルコキシ基の例には、以下には限らないが、-OCH3(メトキシ)、-OCH2CH3(エトキシ)および-OC(CH3)3(tert-ブトキシ)が含まれる。
【００８０】
［オキソ(ケト、-オン):-O］
置換基として、オキソ基(=O)を有する環式化合物および/または環式基の例には、以下のものには限らないが、シクロペンタノンおよびシクロヘキサノンなどの炭素環；ピロン、ピロリドン、ピラゾロン、ピラゾリノン、ピペリドン、ピペリジンジオン、ピペラジンジオン、およびイミダゾリドンなどの複素環；以下には限らないが、無水マレイン酸および無水コハク酸を含めた環状無水物；プロピレンカルボネートなどの環状カーボネート；以下には限らないが、スクシンイミドおよびマレイミドを含めたイミド；以下には限らないが、β-プロピオラクトン、γ-ブチロラクトン、δ-バレロラクトン、およびε-カプロラクトンを含めたラクトン(環状エステル、環中の-O-C(=O)-)；および、以下には限らないが、β-プロピオラクタム、γ-ブチロラクタム、δ-バレロラクタム、およびε-カプロラクタムを含めたラクタム(環状アミド、環中の-NH-C(=O)-)、が含まれる。
【００８１】
［イミノ(イミン)］
=NRj、ここで、Rjは、イミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基、好ましくは水素またはC1〜7アルキル基である。イミノ基の例には、以下には限らないが、=NH、=NMe、=NEt、およびNPhが含まれる。
【００８２】
［ホルミル(カルバルデヒド、カルボキサルデヒド)］
-C(=O)H
【００８３】
［アシル(ケト)］
-C(=O)Rk、ここで、Rkは、アシル置換基、例えば、C1〜7アルキル基(C1〜7アルキルアシルまたはC1〜7アルカノイルとも呼ばれる)、C3〜20ヘテロシクリル基(C3〜20ヘテロシクリルアシルとも呼ばれる)、またはC5〜20アリール基(C5〜20アリールアシルとも呼ばれる)、好ましくはC1〜7アルキル基である。アシル基の例には、以下には限らないが、-C(=O)CH3(アセチル)、-C(=O)CH2CH3(プロピオニル)、-C(=O)C(CH3)3(ピバロイル)、および-C(=O)Ph(ベンゾイル、フェノン)が含まれる。
【００８４】
［アシルハライド(ハロホルミル、ハロカルボニル)］
-C(=O)X、ここで、Xは、-F、-Cl、-Br、または-Iであり、好ましくは-Cl、-Br、または-Iである。
【００８５】
［カルボキシ(カルボン酸)］
-COOH
【００８６】
［エステル(カルボキシレート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル)］
-C(=O)ORm、ここで、Rmは、エステル置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基、好ましくはC1〜7アルキル基である。エステル基の例には、以下のものには限らないが、-C(=O)OCH3、-C(=O)OCH2CH3、-C(=O)OC(CH3)3、および-C(=O)OPhが含まれる。
【００８７】
［アシルオキシ(逆エステル)］
-OC(=O)Rn、ここで、Rnは、アシルオキシ置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基、好ましくはC1〜7アルキル基である。アシルオキシ基の例には、以下のものには限らないが、-OC(=O)CH3(アセトキシ)、-OC(=O)CH2CH3、-OC(=O)C(CH3)3、-OC(=O)Phおよび-OC(=O)CH2Phが含まれる。
【００８８】
［アミド(カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド)］
-C(=O)NRpRq、ここで、RpおよびRqは、独立に、アミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくは、HまたはC1〜7アルキル基であり、あるいは、RpおよびRqは一緒に結合して「環状」アミノ基を形成することができ、即ち、RpおよびRqは、それらが結合している窒素原子と一緒に、3個から(例えば4個)8個まで(例えば6個)の環原子(4個から8個の環原子などの)を有する複素環を形成し、ここで、複素環は、例えば、さらなる(RpおよびRqが必ず結合している必須の窒素原子に加えて)1個または2個(例えば1個)のヘテロ原子(例えば窒素、酸素もしくはイオウ)を任意で含んでもよい。アミド基の例には、以下のものには限らないが、-C(=O)NH2、-C(=O)NHCH3、-C(=O)NH(CH3)2、-C(=O)NHCH2CH3、および-C(=O)N(CH2CH3)2、ならびにRpおよびRqが、それらが結合している窒素原子と一緒になって複素環構造、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル、およびピペラジノカルボニルを形成するアミド基が含まれる。
【００８９】
［アシルアミド(アシルアミノ)］
-NRrC(=O)Rs、ここで、Rrは、アミド置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基であり、Rsは、アシル置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基である。アシルアミド基の例には、以下のものには限らないが、-NHC(=O)CH3、-NHC(=O)CH2CH3、および-NHC(=O)Phが含まれる。RrおよびRsは、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、およびフタルイミジルにおけるように、一緒になって環状構造を形成することができる。
【００９０】
［チオアミド(チオカルバミル)］
-C(=S)NRtRu、ここで、RtおよびRuは、独立に、アミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくは、HまたはC1〜7アルキル基であり、あるいは、RtおよびRuは、一緒に結合して、「環状」アミノ基を形成することができ、即ち、RtおよびRuは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、3個(例えば4個)から8個(例えば6個)の環原子(4個から8個の環原子などの)を有する複素環を形成し、ここで、複素環は、例えば、さらなる(RtおよびRuが、必ず結合している必須の窒素原子に加えて)1個または2個(例えば1個)のヘテロ原子(例えば、窒素、酸素もしくはイオウ)を任意選択で含んでもよい。アミド基の例には、以下のものには限らないが、-C(=S)NH2、-C(=S)NHCH3、-C(=S)NH(CH3)2、および-C(=S)NHCH2CH3が含まれる。
【００９１】
［テトラゾリル］
4個の窒素原子および1個の炭素原子を有する5員芳香族環。
【００９２】
［アミノ］
-NRvRw、ここで、RvおよびRwは、独立に、アミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基(C1〜7アルキルアミノもしくはジC1〜7アルキルアミノとも呼ばれる)、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくは、HまたはC1〜7アルキル基であり、あるいは、RvおよびRwは、一緒に結合して、「環状」アミノ基を形成することができ、即ち、RvおよびRwは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、3個(例えば4個)から8個(例えば6個)の環原子(4個から8個の環原子などの)を有する複素環を形成し、ここで、複素環は、例えば、さらなる(RpおよびRqが、必ず結合している必須の窒素原子に加えて)1個または2個(例えば1個)のヘテロ原子(例えば、窒素、酸素もしくはイオウ)を任意で含んでもよい。アミノ基の例には、以下のものには限らないが、-NH2、-NHCH3、-NHCH(CH3)2、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、および-NHPhが含まれる。環状アミノ基の例には、以下のものには限らないが、アジリジノ、アゼチジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、およびチオモルホリノが含まれる。
【００９３】
［ニトロ］
-NO2
【００９４】
［ニトロソ］
-NO
【００９５】
［アジド］
-N3
【００９６】
［シアノ(ニトリル、カルボニトリル)］
-CN
【００９７】
［イソシアノ］
-NC
【００９８】
［シアナト］
-OCN
【００９９】
［イソシアナト］
-NCO
【０１００】
［チオシアン(チオシアナト)］
-SCN
【０１０１】
［イソチオシアノ(イソチオシアナト)］
-NCS
【０１０２】
［スルフィドリル(チオール、メルカプト)］
-SH
【０１０３】
［チオエーテル(スルフィド)］
チオエーテル置換基は、イオウ原子が、2個の炭素原子の間にある置換基である。したがって、それは、-Rx-S-Ry基、または、より好ましくは、-SRz基であってよく、ここで、Rx、RyおよびRzは、独立に、チオエーテル置換基、例えば、C1〜7アルキル基(C1〜7アルキルチオ基とも呼ばれる)、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基を、好ましくは、C1〜7アルキル基を表す。C1〜7アルキルチオ基の例には、以下のものには限らないが、-SCH3および-SCH2CH3が含まれる。
【０１０４】
［スルホン酸(スルホ)］
-S(=O)2OH
【０１０５】
［スルホネート(スルホン酸エステル)］
-S(=O)2ORaa、ここで、Raaは、スルホネート置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基である。スルホネート基の例には、以下のものには限らないが、-S(=O)2OCH3および-S(=O)2OCH2CH3が含まれる。
【０１０６】
［スルホン(スルホニル)］
-S(=O)2Rab、ここで、Rabは、スルホン置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基である。スルホン基の例には、以下のものには限らないが、-S(=O)2CH3(メタンスルホニル、メシル)、-S(=O)2CF3、-S(=O)2CH2CH3、および4-メチルフェニルスルホニル(トシル)が含まれる。
【０１０７】
［スルホニルオキシ］
-OS(=O)2Rac、ここで、Racは、スルホニルオキシ置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基である。スルホニルオキシ基の例には、以下のものには限らないが、-OS(=O)2CH3および-OS(=O)2CH2CH3が含まれる。
【０１０８】
［スルフィニルオキシ］
-OS(=O)Rad、ここで、Radは、スルフィニルオキシ置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基である。スルフィニルオキシ基の例には、以下のものには限らないが、-OS(=O)CH3および-OS(=O)CH2CH3が含まれる。
【０１０９】
［スルファミノ］
-NRaeS(=O)2OH、ここで、Raeは、アミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはHまたはC1〜7アルキル基である。スルファミノ基の例には、以下のものには限らないが、-NHS(=O)2OHおよび-N(CH3)S(=O)2OHが含まれる。
【０１１０】
［スルホンアミノ］
-NRafS(=O)2Rag、ここで、Rafは、アミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはHまたはC1〜7アルキル基であり、Ragは、スルホンアミノ置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基である。スルホンアミノ基の例には、以下のものには限らないが、-NHS(=O)2CH3および-N(CH3)S(=O)2C6H5が含まれる。
【０１１１】
［スルフィンアミノ］
-NRahS(=O)Rai、ここで、Rahは、アミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはHまたはC1〜7アルキル基であり、Raiは、スルフィンアミノ置換基、例えば、C1〜7アルキル基、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基であり、好ましくはC1〜7アルキル基である。スルフィンアミノ基の例には、以下のものには限らないが、-NHS(=O)CH3および-N(CH3)S(=O)C6H5が含まれる。
【０１１２】
［スルファミル］
-S(=O)NRajRak、ここで、RajおよびRakは、独立に、アミノ置換基、例えば、水素、C1〜7アルキル基(C1〜7アルキルアミノまたはジC1〜7アルキルアミノとも呼ばれる)、C3〜20ヘテロシクリル基、またはC5〜20アリール基、好ましくは、HまたはC1〜7アルキル基であり、あるいは、RajおよびRakは、一緒になって「環状」アミノ基を形成することができ、即ち、RajおよびRakは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、3個(例えば4個)から8個(例えば6個)の環原子(4個から8個の環原子などの)を有する複素環を形成し、ここで、複素環は、例えば、さらなる(RajおよびRakが必ず結合している必須の窒素原子に加えて)1個または2個(例えば1個)のヘテロ原子(例えば、窒素、酸素もしくはイオウ)を任意で含んでもよい。スルファミル基の例には、以下のものには限らないが、-S(=O)NH2、-S(=O)NH(CH3)、-S(=O)N(CH3)2、-S(=O)NH(CH2CH3)、-S(=O)N(CH2CH3)2、および-S(=O)NHPhが含まれる。
【０１１３】
［スルホンアミド］
-S(=O)2NRamRan、ここで、RamおよびRanは、独立に、アミノ基について定義された通りのアミノ置換基である。スルホンアミド基の例には、以下のものには限らないが、-S(=O)2NH2、-S(=O)2NH(CH3)、-S(=O)2N(CH3)2、-S(=O)2NH(CH2CH3)、-S(=O)2N(CH2CH3)2、および-S(=O)2NHPhが含まれる。
【０１１４】
［さらなる置換］
上記の通り、C1〜7アルキル基は、例えば、ヒドロキシ(C1〜7ヒドロキシアルキル基とも呼ばれる)、C1〜7アルコキシ(C1〜7アルコキシアルキル基とも呼ばれる)、アミノ(C1〜7アミノアルキル基とも呼ばれる)、ハロ(C1〜7ハロアルキル基とも呼ばれる)、カルボキシ(C1〜7カルボキシアルキル基とも呼ばれる)、およびC5〜20アリール(C5〜20アリール-C1〜7アルキル基とも呼ばれる)で置換することができる。
【０１１５】
同様に、C5〜20アリール基は、例えば、ヒドロキシ(C5〜20ヒドロキシアリール基とも呼ばれる)、ハロ(C5〜20ハロアリール基とも呼ばれる)、アミノ(例えば、アニリンにおけるように、C5〜20アミノアリール基とも呼ばれる)、C1〜7アルキル(例えば、トルエンにおけるように、C1〜7アルキル-C5〜20アリール基とも呼ばれる)、およびC1〜7アルコキシ(例えば、アニソールにおけるように、C1〜7アルコキシ-C5〜20アリール基とも呼ばれる)で置換することができる。
【０１１６】
このような置換基のこれらおよび他の具体例も下記に議論される。
【０１１７】
［C1〜7ハロアルキル基］
本明細書で用いられる「C1〜7ハロアルキル基」という用語は、少なくとも1個の水素原子(例えば、1個、2個、3個)が、ハロゲン原子(例えば、F、Cl、Br、I)で置換されているC1〜7アルキル基を意味する。1個以上の水素原子が、ハロゲン原子で置換されている場合、そのハロゲン原子は、独立に、同じであるか、または異なっていてよい。すべての水素原子を、ハロゲン原子で置換することができ、その場合には、その基は、C1〜7パーハロアルキル基と好都合に呼ぶことができる。
【０１１８】
C1〜7ハロアルキル基の例には、以下のものには限らないが、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CCl3、-CBr3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、および-CH2CF3が含まれる。
【０１１９】
［C1〜7ヒドロキシアルキル］
本明細書で用いられる「C1〜7ヒドロキシアルキル基」という用語は、少なくとも1個の水素原子が、ヒドロキシ基で置換されているC1〜7アルキル基を意味する。
【０１２０】
C1〜7ヒドロキシアルキル基の例には、以下のものには限らないが、-CH2OH、-CH2CH2OH、および-CH(OH)CH2OHが含まれる。
【０１２１】
［C1〜7カルボキシアルキル］
本明細書で用いられる「C1〜7カルボキシアルキル基」という用語は、少なくとも1個の水素原子がカルボキシ基で置換されているC1〜7アルキル基を意味する。C1〜7カルボキシアルキル基の例には、以下のものには限らないが、-CH2COOHおよび-CH2CH2COOHが含まれる。
【０１２２】
［C1〜7アミノアルキル］
本明細書で用いられる「C1〜7アミノアルキル基」という用語は、少なくとも1個の水素原子が、アミノ基で置換されているC1〜7アルキル基を意味する。C1〜7アミノアルキル基の例には、以下のものには限らないが、-CH2NH2、-CH2CH2NH2、および-CH2CH2N(CH3)2が含まれる。
【０１２３】
［C1〜7アルキル-C5〜20アリール］
本明細書で用いられる「C1〜7アルキル-C5〜20アリール」という用語は、C1〜7アルキル基で置換されている特定のC5〜20アリール基を表す。このような基の例には、以下のものには限らないが、トリル(トルエンにおけるように)、キシリル(キシレンにおけるように)、メシチル(メシチレンにおけるように)、スチリル(スチレンにおけるように)、およびクメニル(クメンにおけるように)が含まれる。
【０１２４】
［C5〜20アリール-C1〜7アルキル］
本明細書で用いられる「C5〜20アリール-C1〜7アルキル」という用語は、C5〜20アリール基で置換されている特定のC1〜7アルキル基を表す。このような基の例には、以下のものには限らないが、ベンジル(フェニルメチル)、トリルメチル、フェニルエチル、およびトリフェニルメチル(トリチル)が含まれる。
【０１２５】
［C5〜20ハロアリール］
本明細書で用いられる「C5〜20ハロアリール」という用語は、1個または複数のハロ基で置換されている特定のC5〜20アリール基を表す。このような基の例には、以下のものには限らないが、ハロフェニル(例えば、オルト-、メタ-、またはパラ-置換されているにかかわらず、フルオロフェニル、クロロフェニル、ブロモフェニル、またはヨードフェニル)、ジハロフェニル、トリハロフェニル、テトラハロフェニル、およびペンタハロフェニルが含まれる。
【０１２６】
挙げることができる本発明の実施形態には、任意の置換基が存在してもよい、式Iの化合物の実施形態が含まれる。
(A)Ra、Rb、Rc、RdおよびReは、C5〜6ヘテロシクリル、C5〜6アリール(例えばフェニル)または-C(O)-C1〜3アルキルまたは、より好ましくは、C1〜6(例えばC1〜4)アルキル(エチルまたは、特にメチルなどの)を独立に表し；
Rf、Rg、Rh、Ri、Rk、Rm、Rr、Rs、Rx、Ry、Rz、Raa、Rab、Rac、Rad、RagおよびRaiのいずれか1つが、C1〜7アルキルを表す場合、そのアルキル基は、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、または、特に、C5〜6アリール(例えばフェニル)またはハロで置換されていてよく、あるいは、より好ましくは、置換されておらず；
Rf、Rg、Rh、Ri、Rk、Rm、Rr、Rs、Rx、Ry、Rz、Raa、Rab、Rac、Rad、RagおよびRaiは、C5〜8(例えばC5もしくはC6)ヘテロシクリル基、C5〜8(例えばC5もしくはC6)アリール基または、好ましくは、C1〜6アルキル基を独立に表し；
Rp、Rq、Rt、Ru、Rv、Rw、Rae、Raf、Rah、Raj、Rak、Ram、Ranは、C5〜8(例えばC5もしくはC6)ヘテロシクリル基、C5〜8(例えばC5もしくはC6)アリール基または、好ましくは、C1〜6(例えばC1〜3)アルキル基を独立に表し、または、適切なペア(即ち、RpおよびRq、RtおよびRu、RvおよびRw、RajおよびRak、ならびにRamおよびRan)は、本明細書で定義されるように結合し；
(B)Rhは、C1〜4アルキル(例えば、メチル、エチルまたはtert-ブチル)を表し、この基は、1個または2個(例えば1個)のC5〜6アリール基(例えばフェニル)またはハロ(例えばフッ素、塩素もしくは臭素)で任意で置換されていてもよく；
Rjは、水素、C1〜3アルキル(例えばメチルもしくはエチル)またはC5〜6アリール(例えばフェニル)を表し；
RkおよびRmは、C1〜4アルキル(例えばメチル、エチルもしくはtert-ブチル)またはC5〜6アリール(例えばフェニル)を独立に表し；
Rnは、C1〜4アルキル(例えばメチル、エチルもしくはtert-ブチル)を表し、この基は、1個もしくは2個(例えば1個)のC5〜6アリール基(例えばフェニル)で任意に置換されていてもよく、またはC5〜6アリール(例えばフェニル)を表してもよく；
RpおよびRqは、水素、C1〜3アルキル(例えばメチルもしくはエチル)を独立に表し、または、本明細書で上記に定義されたように一緒に結合し；
Rrは、水素を表し；
Rsは、C1〜3アルキル(例えばメチルもしくはエチル)またはC5〜6アリール(例えばフェニル)を表し、あるいは、RrおよびRsは、本明細書で上記に定義されたように結合し；
RvおよびRwは、水素、C1〜4アルキル(例えばメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルもしくはt-ブチル)またはC5〜6アリール(例えばフェニル)を独立に表し、あるいは、本明細書で上記に定義されたように一緒に結合し；
上記任意の置換基が、置換されていないアルキル基である場合、その基は、C1〜4アルキル(例えばメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルもしくはt-ブチル)を表し；
上記任意の置換基が、置換されたアルキル基である場合、それらのさらなる置換基は、ハロ(例えばフッ素、塩素もしくは臭素)、ヒドロキシ、およびアミノ(例えば-NH2もしくは-NH(CH3))から選択され；
上記任意の置換基が、C1〜7ハロアルキル基である場合、その基は、1個、2個または3個の塩素、フッ素または臭素原子で置換されたC1〜2アルキルを表し；
上記任意の置換基が、C1〜7ヒドロキシアルキル基である場合、その基は、1個または2個のヒドロキシ基で置換されたC1〜2アルキルを表し；
上記任意の置換基が、C1〜7アミノアルキル基である場合、その基は、本明細書で上記に定義された、1個または2個(例えば1個)のアミノ基で置換されたC1〜2アルキルを表し；
上記任意の置換基が、C5〜20アリール基である場合、その基は、フェニルを表し；かつ、
(C)上記任意の置換基が、ハロ、-OH、-ORh、-SH、-SRz、-C(O)H、-C(O)Rk、-C(O)ORm、-C(O)NRpRq、NRrC(O)Rs、-NRvRw、-CN、-NO2、本明細書で定義されるハロ、ヒドロキシおよびアミノから選択される1個または複数の置換基で任意に置換されていてもよいC1〜6アルキル、およびC5〜6アリールから独立に選択される。
【０１２７】
本発明の特定の一実施形態においては、上記任意の置換基は、
-F、-Cl、-Br、および-I;
-OH;
-OMe、-OEt、-O(tBu)、および-OCH2Ph;
-SH;
-SMe、-SEt、-S(tBu)、および-SCH2Ph;
-C(=O)H;
-C(=O)Me、-C(=O)Et、-C(=O)(tBu)、および-C(=O)Ph;
-C(=O)OH;
-C(=O)OMe、-C(=O)OEt、および-C(O)O(tBu);
-C(O)NH2、-C(=O)NHMe、-C(=O)NMe2、および-C(=O)NHEt;
-NHC(=O)Me、-NHC(=O)Et、-NHC(=O)Ph、スクシンイミジル、およびマレイミジル;
-NH2、-NHMe、-NHEt、-NH(iPr)、-NH(nPr)、-NMe2、-NEt2、-N(iPr)2、
-N(nPr)2、-N(nBu)2、および-N(tBu)2;
-CN;
-NO2;
-Me、-Et、-nPr、-iPr、-nBu、-tBu;
-CF3、-CHF2、-CH2F、-CC13、-CBr3、-CH2CH2F、-CH2CHF2、および-CH2CF3;
-OCF3、-OCHF2、-OCH2F、-OCC13、-OCBr3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、および-OCH2CF3;.
-CH2OH、-CH2CH2OH、および-CH(OH)CH2OH;
-CH2NH2、-CH2CH2NH2、および-CH2CH2NMe2;および、
任意選択で置換されていてもよいフェニル、
を含む群から独立に選択されるいずれかの置換基であってよい。
【０１２８】
本発明の特定の一実施形態においては、挙げることができる式Iの化合物には、
任意の置換基が、ハロ、-ORh、1個または複数のフッ素原子で任意で置換されていてもよいC1〜2アルキル(例えばメチル)(こうした例として、トリフルオロメチル基)および-NRvRwから選択され；
任意の置換基が、窒素複素環(上記のポイント(1)で示された)上にあるか、本発明の第1の実施形態の場合においては、ベンジル基(上記のポイント(5)で示された)のフェニル環上にある化合物、が含まれる。
【０１２９】
本発明の特定の一実施形態においては、挙げることができる式Iの化合物には、任意の置換基が、-F、-OMe、-CF3、-NH2および-N(Me)2から独立に選択されるいずれかの置換基である化合物が含まれる。
【０１３０】
本発明の好ましい化合物には、
nが、2(それにより、メチルで4位を任意に置換されていてもよいピペリジン基が形成される)または、特に、1を表し；
アクリジン三環が、任意の置換基を有さず；
-N(H)-(CH2)2リンカー基が、任意の置換基を有さず；
-CH2-リンカー基が、任意の置換基を有さず；
R1からR5(例えばR3、好ましくはR3およびR5または、より好ましくは、R3およびR4)の少なくとも1個(例えば1個から3個および、好ましくは、2個)が、Fを表し、他が水素を表す化合物が含まれる。
【０１３１】
最も好ましくは、式Iの化合物は、次の構造を有する。
【０１３２】
【化２】
2008532987.tif 000004
【０１３３】
即ち、[N-(9-(3,4-ジフルオロ-ベンジルアミノ)-6-(3-ピロリジン-1-イル-プロピオンアミド)-アクリジン-3-イル)-3-ピロリジン-1-イル-プロピオンアミド]、代わりにBSG17と呼ばれる。
【０１３４】
挙げることができる本発明の他の特定の実施形態には以下のものが含まれる。
(I)任意の置換基が存在しない図20の化合物(即ち、BSG-43、BSG-46およびBSG-22)、これらの化合物は、次の構造を有する。
【０１３５】
【化３】
2008532987.tif 000005
【０１３６】
(II)任意の置換基が存在する図20の化合物(即ち、BSG-18、BSG-19、BSG-44、BSG-45、-BSG-47、BSG-48、BSG-20、BSG-21およびBSG-24)、これらの化合物は、次の構造を有する。
【０１３７】
【化４】
2008532987.tif 000006
【０１３８】
［他の化合物形態］
上記に含まれるのは、これらの置換基の周知のイオン、塩、溶媒和物、および保護形態である。例えば、カルボン酸(-COOH)への言及には、また、その陰イオン(カルボキシレート)形態(-COO-)、塩、または溶媒和物、ならびに通常の保護形態が含まれる。
【０１３９】
同様に、アミノ基への言及には、そのアミノ基のプロトン化形態(-N+HRR)、塩、または溶媒和物、例えば、塩酸塩、ならびにアミノ基の通常の保護形態が含まれる。
【０１４０】
同様に、ヒドロキシ基への言及は、また、その陰イオン形態(-O-)、塩または溶媒和物、ならびにヒドロキシ基の通常の保護形態が含まれる。
【０１４１】
プロドラッグの形態の活性化合物を調製し、精製し、かつ/または取り扱うことが、好都合または望ましい場合がある。一般的に、プロドラッグは、不活性であるか、または活性化合物に比べてより活性が低いが、有利な取扱い、投与、または代謝特性を提供することができる。
【０１４２】
例えば、あるプロドラッグは、活性化合物のエステル(例えば、生理学的に許容される代謝を受けやすいエステル)である。代謝時に、エステル基(-C(=O)ORm)は、開裂されて活性な薬物を生じる。このようなエステルは、適切な場合、親化合物中の任意の他の反応基の前保護、必要な場合は、それに続いての脱保護を伴っての、例えば、親化合物中のカルボン酸基(-C(=O)OH)のいずれかのエステル化によって形成することができる。このような代謝を受けやすいエステルの例には、Rmが、C1〜7アルキル(例えば、-Me、-Et)、C1〜7アミノアルキル(例えば、アミノエチル、2-(N,N-ジエチルアミノ)エチル、2-(4-モルホリノ)エチル)、およびアシルオキシ-C1〜7アルキル(例えば、アシルオキシメチル、アシルオキシエチル、例えば、ピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、1-アセトキシエチル、1-(1-メトキシ-1-メチル)エチル-カルボキシルオキシエチル、1-(ベンゾイルオキシ)-エチル、イソプロポキシ-カルボニルオキシメチル、1-イソプロポキシ-カルボニルオキシエチル、シクロヘキシル-カルボニルオキシメチル、1-シクロヘキシル-カルボニルオキシエチル、シクロヘキシル-カルボニルオキシメチル、1-シクロヘキシルオキシ-カルボニルオキシエチル、シクロヘキシルオキシカルボニルオキシメチル、1-シクロヘキシルオキシカルボニルオキシエチル、(4-テトラヒドロピラニルオキシ)カルボニルオキシメチル、1-(4-テトラヒドロピラニルオキシ)カルボニルオキシエチル、(4-テトラヒドロピラニル)カルボニルオキシメチル、および1-(4-テトラヒドロピラニル)カルボニルオキシエチル)であるものが含まれる。
【０１４３】
したがって、本発明の化合物は、プロドラッグの形態で好都合に提供することができる。
【０１４４】
同様に、あるプロドラッグは、酵素的に活性化されて、活性化合物、またはさらなる化学反応によって、活性化合物を生じる化合物を生じる。例えば、プロドラッグは、糖誘導体または他のグリコシド結合体であってよく、またはアミノ酸エステル誘導体であってよい。
【０１４５】
本発明の第2の態様においては、本発明の第1の態様によって記載された化合物と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体とを含む組成物が提供される。
【０１４６】
本発明の第3の態様においては、第1の態様の化合物または第2の態様の組成物の使用が提供される。
【０１４７】
好都合に、上記化合物および/または組成物は、テロメラーゼの阻害に使用することができる。活性化合物は、例えば、細胞増殖を調節するために、テロメラーゼを阻害するための細胞培養添加剤として使用することができる。
【０１４８】
したがって、上記化合物および/または組成物は、細胞増殖の調節にも使用することができる。
【０１４９】
好ましくは、上記化合物および/または組成物は、薬剤として使用することができる。有利に、上記薬剤は、増加した細胞増殖を特徴とする疾患の治療および/または予防および/または診断に使用することができる。
【０１５０】
当分野の技術者は、候補の化合物が、テロメラーゼ活性を阻害し、細胞増殖を調節し、または任意の特定の細胞系に関して抗増殖特性を示すか否かを容易に決定できる。例えば、特定の化合物により示される活性を評価するのに好都合に使用することができるアッセイは、実施例に記載されている。
【０１５１】
例えば、細胞のサンプル(例えば、腫瘍からの)を、インビトロで増殖し、活性化合物を前記細胞に接触させ、それらの細胞への化合物の効果を観察することができる。「効果」の例としては、細胞の形態的状態を決定することができ、または、細胞周期の調節に関係する遺伝子の発現量を測定することができる。活性化合物が、細胞への影響を与えることが見出される場合、これを、同じ細胞型の細胞を有する患者の治療の方法における、化合物の効能の予後または診断的マーカーとして使用することができる。
【０１５２】
増殖状態の例には、以下のものには限らないが、新生物および腫瘍(例えば、組織球腫、神経膠腫、星状細胞腫、骨腫)、癌(例えば、卵巣癌、乳癌、腸癌、結腸癌、腎癌、肺癌、小細胞肺癌、精巣癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、メラノーマ、)、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖障害(fibroproliferative disorder)(例えば、結合組織の)、およびアテローム性動脈硬化を含めた、以下のものには限らないが、良性、前癌状態、および悪性細胞増殖が含まれる。以下のものには限らないが、結腸、腎臓、胸部(乳房)、肺、卵巣、肝臓、膵臓、皮膚、および脳を含めた任意のタイプの細胞を、治療することができる。
【０１５３】
増加した細胞増殖を特徴とする疾患は、癌でありうる。
【０１５４】
好ましくは、癌は、組織球腫、神経膠腫、星状細胞腫、骨腫、卵巣癌、乳癌、腸癌、結腸癌、腎癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌治療、精巣癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、メラノーマ、白血病、リンパ腫、膵臓癌、皮膚癌、子宮頚癌および食道癌である。
【０１５５】
本発明の化合物の抗癌効果は、以下のものには限らないが、細胞増殖の調節、血管形成(新しい血管の形成)の阻害、転移(腫瘍のその発生点からの拡散)の阻害、浸潤(腫瘍細胞の隣接した正常な構造への拡散)の阻害、またはアポトーシス(プログラム細胞死)の促進を含めた1つまたは複数の機構で生じうる。
【０１５６】
本発明は、ヒトまたは動物の身体の治療の方法、例えば、増殖状態、例えば癌、の治療における使用のための活性化合物をさらに提供する。このような方法は、このような対象に、好ましくは、医薬組成物の形態の治療有効量の活性化合物を投与するステップを含むことができる。
【０１５７】
治療および療法の例には、以下のものには限らないが、化学療法(例えば、薬物、抗体(例えば、免疫療法におけるような)、プロドラッグ(例えば、光線力学療法、GDEPT、ADEPTなどにおけるような)を含めた活性な薬剤の投与)、手術、放射線治療、および遺伝子治療が含まれる。
【０１５８】
好ましくは、上記薬剤は、上記化合物および/または組成物の治療的もしくは予防的有効な量または複数の用量を含む。
【０１５９】
好都合には、理想的に有効な用量は、患者において1から500mg/m2である。別法として、理想的に有効な用量は、約0.008から約4mg/kg/日として表すことができる。
【０１６０】
本発明の第4の態様においては、増加した細胞増殖を特徴とする疾患の治療および/または予防および/または診断のための薬剤の製造における、第1の態様の化合物または第2の態様の組成物の使用を提供する。
【０１６１】
本発明の第5の態様においては、インビトロアッセイにおける第1の態様の化合物または第2の態様の組成物の使用を提供する。
【０１６２】
活性化合物は、例えば、候補の宿主が、問題の化合物での治療から利益を得られそうかを決定するためのインビトロアッセイの一部としても使用することができる。
【０１６３】
活性化合物は、例えば、他の活性化合物、他のテロメラーゼ阻害薬、他の抗増殖剤、などを同定するためのアッセイにおける標準としても使用することができる。
【０１６４】
好都合には、上記化合物および/または組成物は、テロメラーゼを阻害し、かつ/または細胞増殖を調節する化合物の同定における比較標準としてインビトロアッセイに使用することができる。
【０１６５】
別法として、上記化合物および/または組成物は、後の療法に適切な候補患者を同定するためのインビトロアッセイにおいて使用することができる。
【０１６６】
本発明の第6の態様においては、細胞を、第1の態様の化合物または第2の態様の組成物の有効量に接触させるステップを含む、テロメラーゼを阻害し、かつ/または細胞増殖を調節する方法を提供する。
【０１６７】
好ましくは、上記有効量は、0.1から10ミクロモル(例えば、式Iの化合物の0.1から10μM溶液)である。
【０１６８】
本発明の第7の態様においては、本発明の第1の態様による化合物の合成方法を提供する。
【０１６９】
好ましくは、上記方法は、図1に示されたステップを含む。
【０１７０】
例えば、式Iの化合物は、式IIの化合物：
【０１７１】
【化５】
2008532987.tif 000007
【０１７２】
[上記式中、L1は、ハロゲン(例えば塩素)などの適切な脱離基を表し、nは、本明細書で上に定義した通りである]と、式IIIの化合物：
【０１７３】
【化６】
2008532987.tif 000008
【０１７４】
{上記式中、R1からR5は、適切な塩基(例えばジイソプロピルエチルアミンなどのアミン塩基)および適切な溶媒[例えば(エタノールなどの)アルコール溶媒}の存在下で、本明細書で上に定義した通りである]との反応によって合成することができる。
【０１７５】
式IIおよびIIIの化合物は、いずれも市販されており、文献で公知であり、あるいは、本明細書に記載した方法(例えば図1に従って)と類似方法によってか、適した試薬および反応条件を用いた、入手可能な出発原料からの、標準の技術に従っての通常の合成手順によってかのいずれかで得ることができる。この点に関して、技術者は、とりわけ、"Comprehensive Organic Synthesis" by B.M.Trost and I.Fleming, Pergamon Press, 1991を参照することができる。
【０１７６】
本発明の第8の態様においては、
(a)第1の態様の化合物または第2の態様の組成物と、
(b)使用説明書と
を含むキットが提供される。
【０１７７】
好ましくは、上記化合物および/または組成物は、適切な容器で、かつ/または適切な包装で提供され、上記説明書は、活性化合物の投与方法に関する説明書である。
【０１７８】
上記説明書は、それにより活性成分が適切な治療である指示の一覧も含むことができる。
【０１７９】
好ましくは、上記キットは、上記化合物および/または組成物の投与の手段も含む。好都合には、このような投与の手段は、注射器または点滴である。
【０１８０】
上記の通り、本発明の化合物は、単独で、または、より好ましくは、本明細書に記載されたものなどの周知の医薬製剤によって投与することができる。それ自体、本発明の化合物は、単一治療薬として投与することができる。
【０１８１】
しかしながら、本発明の第9の態様によれば、式Iの化合物は、テロメラーゼ活性の阻害または細胞増殖(例えば増殖状態)の調節が、望ましく、かつ/または必要である疾患の治療に有用な他の治療薬と組み合わせることもできる。同じことが、同じ作用機構を有する関連した化合物(例えばWO02/08193に開示されている化合物)にも当てはまり、この化合物は、下記式Iaの化合物および薬学的に許容されるその誘導体として表すことができる。
【０１８２】
【化７】
2008532987.tif 000009
【０１８３】
[上記式中、
(a)Kは、=Oであり、Lは、-Hであり、αは、単結合であり、βは、二重結合であり、γは、単結合であるか(即ち、「アクリドン」)、または
(b)Kは、9-置換基であり、Lは、存在せず、αは、二重結合であり、βは、単結合であり、γは、二重結合であるか(即ち、「アクリジン」)のいずれかであり、かつ
J1およびJ2は、独立して、-N(H)-C(O)-(CH2)2-NR1aR2aを表し、
nは、1から5の整数を表し、
Kは、-N(RN)Qを表し、
R1a、R2aおよびRNは、独立して、H、C1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリルまたはC5〜20アリールを表し、ここで、後の3基は、置換されていないC1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリル、C5〜20アリールおよび式Iの化合物について本明細書で上記に定義された任意の置換基のリストから選択される1個または複数の置換基によって任意選択で置換されていてもよく、かつ
Qは、C1〜7アルキル、C3〜20ヘテロシクリルまたはC5〜20アリールを表し、これらのすべては、上記に定義されたように任意で置換されていてもよい]
【０１８４】
式Iaの好ましい化合物には、
J1が、2-または3-置換基であり、
J2が、6-または7-置換基であり、
nが、1から4(例えば1から3(1もしくは2などの))を表し、
R1aおよびR2aが、独立して、H、C1〜4アルキルを表し、または一緒に結合してC5〜8ヘテロシクリル基(即ち5から8員環式窒素複素環)を形成し、
RNが、HまたはC1〜7(例えばC1〜3)アルキルである化合物が含まれる。
【０１８５】
挙げることができる式Iaの特定の化合物には、BSG-01(BRACO-19とも呼ばれる)が含まれ、これは、次の構造を有する。
【０１８６】
【化８】
2008532987.tif 000010
【０１８７】
したがって、
(A)本明細書で上記に定義された式IもしくはIaの化合物、または薬学的に許容されるその誘導体、および
(B)プラチン、または薬学的に許容されるその誘導体
を含む組合せ製品がさらに提供され、ここで、成分(A)および(B)のそれぞれは、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して処方される。
【０１８８】
本明細書で用いられる「プラチン」という用語には、カルボプラチンまたは、好ましくは、シスプラチンへの言及が含まれる。誤解を避けるために、シスプラチンは、シス-ジアミンジクロロ白金(II)(下記にも示されている)であり、カルボプラチンは、シスプラチンの類似体であり、下記に示されている。
【０１８９】
【化９】
2008532987.tif 000011
【０１９０】
このような組合せ製品は、プラチンと併せた式IまたはIaの化合物の投与を提供し、したがって、別々の製剤として提示することができ、ここで、それらの製剤の少なくとも1つは、式IまたはIaの化合物を含み、少なくとも1つは、プラチンを含み、あるいは、組み合わせた製剤(即ち、式IまたはIaの化合物およびプラチンを含む単一の製剤として提示される)として提示(即ち製剤化)することができる。
【０１９１】
したがって、
(1)本明細書で上記に定義された式IまたはIaの化合物、プラチン、および薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を含む製剤、ならびに
(2)(a)薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して、本明細書で上記に定義された式IまたはIaの化合物を含む製剤、および
(b)薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して、プラチンを含む製剤
の成分を含むパーツのキット
がさらに提供され、ここで、成分(a)および(b)は、もう一方と併せての投与に適切である形態でそれぞれ提供される。
【０１９２】
本発明の第9の態様の特定の実施形態においては、組合せ製品は、
(A)本明細書で上記に定義された式IもしくはIaの化合物、または薬学的に許容されるその誘導体の第1の量、および
(B)プラチン、または薬学的に許容されるその誘導体の第2の量
を含み、
ここで、成分(A)および(B)のそれぞれは、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合して製剤化され、ここで、
(i)上記第1および第2の量は、両方とも(別々に)治療有効量であり、または
(ii)上記第1および第2の量は一緒になって治療有効量を含み、または
(iii)上記第1および第2の量は一緒になって相乗的に有効な量を共に含む。
【０１９３】
「相乗的に有効な量」という用語は、本明細書で用いられる場合、別々に投与された場合の、成分(A)および(B)の同量の治療効果に基づいて予想することができない(即ち、単なる相加作用を超える)治療効果を生じる組合せ製品の成分(A)および(B)の組み合わせた量への言及を含む。この点において、治療効果は、テロメラーゼ活性の阻害、細胞増殖の調節または抗増殖特性の発揮によって治療されうる疾患(例えば、癌などの増加した細胞増殖を特徴とする疾患)に関してでありうる。
【０１９４】
上記の通り、本発明の化合物のいくつかの利点がありうる。さらに、BSG17は、周知のテロメラーゼ阻害薬、例えばBR-ACO-19(BSG01)に比べて、有利な性質を有することが示された。驚くべきことに、コンピュータによるモデル化は、9位のリンカー基に余計に炭素原子を有する化合物(即ちベンジル置換基を作る)は、BR ACO-19によって代表される化合物に比べて、ヒトのG-四重分子構造に、より有効に結合する(Parkinson et al.、2002)ことを示唆している。リンカー基へのこの修飾は、芳香族環がグアニン塩基と重複し、予想される結合親和力を増すのを可能にする。BSG17化合物は、ベンジル環の9位に結合した2個のフッ素原子と一緒に、上記の望ましい特徴と一致した性質を与える特徴を有する。
【０１９５】
本発明の化合物は、それらは、上で示した使用あるいはそれ以外の使用のためであるかにかかわらず、先行技術で公知の化合物に比べて、より有効であり、より毒性が少なく、より長く作用し、より強力であり、より少ない副作用しか生じさせず、より容易に吸収され、かつ/またはより良い薬物動態プロファイル(例えばより高い経口バイオアベイラビリティおよび/またはより低いクリアランス)を有し、かつ/または他の有用な、薬理学的、物理的、もしくは化学的性質を有するという利点も有することができる。
【０１９６】
[定義]
本明細書で用いられる、「カルボ」、「カルビル」、「炭化水素」および「ヒドロカルビル」という用語は、炭素および水素原子のみを有する化合物および/または基を意味する。
【０１９７】
本明細書で用いられる「ヘテロ」という用語は、少なくとも1個のヘテロ原子、例えば、ホウ素、ケイ素、窒素、リン、酸素およびイオウなどの多価ヘテロ原子(環ヘテロ原子としても適切である)、ならびにフッ素、塩素、臭素、およびヨウ素などの一価ヘテロ原子を有する化合物および/または基を意味する。
【０１９８】
本明細書で用いられる「飽和」という用語は、いかなる炭素-炭素二重結合または炭素-炭素三重結合を有さない化合物および/または基を意味する。
【０１９９】
本明細書で用いられる「不飽和」という用語は、少なくとも1個の炭素-炭素二重結合または炭素-炭素三重結合を有する化合物および/または基を意味する。
【０２００】
本明細書で用いられる「脂肪族の」という用語は、直鎖または分枝であるが、環状ではない(「非環式の」または「開鎖の」基としても知られる)化合物および/または基を意味する。
【０２０１】
本明細書で用いられる「環状」という用語は、単環、または2以上の環(例えば、スピロ、縮合、架橋)を有する化合物および/または基を意味する。
【０２０２】
本明細書で用いられる「環」という用語は、3個から10個の共有結合している原子、より好ましくは3個から8個の共有結合している原子の閉鎖環を意味する。
【０２０３】
本明細書で用いられる「芳香族環」という用語は、3個から10個の共有結合している原子、より好ましくは5個から8個の共有結合している原子の閉鎖環であって、その環が、芳香族である閉鎖環を意味する。
【０２０４】
本明細書で用いられる「複素環」という用語は、3個からの共有結合している原子、より好ましくは3個から8個の共有結合している原子の閉鎖環であって、少なくとも1個の環原子は、多価の環ヘテロ原子、例えば、窒素、リン、ケイ素、酸素、およびイオウであるが、より一般的には窒素、酸素、およびイオウである閉鎖環を意味する。
【０２０５】
本明細書で用いられる「脂環式」という用語は、単環、または2個以上の環(例えば、スピロ、縮合、架橋)を有する化合物および/または基であって、前記環が、芳香族ではない化合物および/または基を意味する。
【０２０６】
本明細書で用いられる「芳香族」という用語は、単環、または2個以上の環(例えば、縮合)を有する化合物および/または基であって、前記環が、芳香性である化合物および/または基を意味する。
【０２０７】
本明細書で用いられる「複素環」という用語は、1個の複素環、または2個以上の複素環(例えば、スピロ、縮合、架橋)を有する環式化合物および/または基であって、前記環が、脂環式または芳香族でありうる環式化合物および/または基、を意味する。
【０２０８】
本明細書で用いられる「芳香族複素環」という用語は、1個の複素環または2個以上の複素環(例えば、縮合)を有する環式化合物および/または基であって、前記環が芳香族である環式化合物および/または基を意味する。
【０２０９】
便宜上、特定の化学基は、本明細書では、以下のものには限らないが、メチル(Me)、エチル(Et)、n-プロピル(nPr)、イソプロピル(iPr)、n-ブチル(nBu)、tert-ブチル(tBu)、n-ヘキシル(nHex)、シクロヘキシル(cHex)、フェニル(Ph)、ビフェニル(biPh)、ベンジル(Bn)、ナフチル(naph)、メトキシ(MeO)、エトキシ(EtO)、ベンゾイル(Bz)、およびアセチル(Ac)を含めた周知の省略形を用いて表される。
【０２１０】
便宜上、特定の化合物は、本明細書では、以下のものには限らないが、メタノール(MeOH)、エタノール(EtOH)、イソ-プロパノール(iPrOH)、メチルエチルケトン(MEK)、エーテルまたはジエチルエーテル(Et2O)、酢酸(AcOH)、ジクロロメタン(塩化メチレン、DCM)、トリフルオロ酢酸(TFA)、ジメチルホルムアミド(DMF)、4-(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP)、テトラヒドロフラン(THF)、およびジメチルスルホキシド(DMSO)を含めた周知の省略形を用いて表される。
【０２１１】
本明細書で用いられる「任意に（任意選択で）置換された（されていてもよい）」という句は、置換されていないか、または置換されている親基を意味する。
【０２１２】
特別の定めのない限り、本明細書で使用される「置換された」という用語は、1個または複数の置換基を有する親基を意味する。「置換された」という用語は、本明細書では、通常の意味で使用され、親基に、共有結合している、付加している、または適切な場合、縮合している化学基を意味する。
【０２１３】
本明細書で使用される「化学的に保護された形態」という用語は、1個または複数の反応性官能基が、望ましくない化学反応から保護されている、即ち、保護された基または保護基(マスクされた基もしくはマスク基、またはブロックされた基もしくはブロック基としても知られる)の形態である化合物を意味する。
【０２１４】
本明細書で使用される「プロドラッグ」という用語は、代謝された(例えば、インビボで)場合に、所望の活性化合物を生じる化合物を意味する。
【０２１５】
本明細書で使用される「活性な」という用語は、テロメラーゼを阻害し、かつ/または細胞増殖を調節することができる化合物を意味する。
【０２１６】
「細胞増殖」、「増殖状態」、「増殖障害」、および「増殖疾患」という用語は、本明細書では、同義的に使用され、インビトロまたはインビボにかかわらず、腫瘍性または肥厚成長などの、望まれていない過剰なまたは異常な細胞の、望まれていないまたは制御されていない細胞増殖を意味する。
【０２１７】
状態の治療との関連で、本明細書で用いられる「治療」という用語は、何らかの望ましい治療効果、例えば、状態の進行の阻害が達成される、ヒト、または動物(例えば、家畜用途における)にかかわらず、治療および療法を一般的に意味し、進行速度の低下、進行速度の停止、状態の改善、および状態の治癒を含む。予防対策(即ち、予防)としての治療も含まれる。「治療」という用語には、2つ以上の治療または療法が、例えば、順次的にまたは同時に組み合わされる、併用治療および療法も含まれる。
【０２１８】
本明細書で用いられる「治療有効量」という用語は、いくらかの所望の治療効果を生じるのに有効である、妥当な利益/リスク割合と釣り合った、活性化合物、または活性化合物を含む材料、組成物もしくは剤形の量を意味する。治療効果は、客観的(即ち、何らかの試験または指標で測定可能な)であるか、または主観的(即ち、対象が、効果の兆候を示すか、または効果を感じる)であってよい。
【０２１９】
本明細書で用いられる「抗増殖薬」という用語は、増殖状態を治療する化合物(即ち、増殖状態の治療に有用である化合物)を意味する。
【０２２０】
本明細書で用いられる「抗癌剤」という用語は、癌を治療する化合物(即ち、癌の治療に有用である化合物)を意味する。
【０２２１】
本発明の特定の好ましい態様を具体化している実施例を、添付した図を参照して説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０２２２】
BSG-17(本明細書でAS1410とも呼ばれる)をBSG-01(BRACO19とも呼ばれる)と比較する種々の比較試験を実施した。誤解を避けるために、これらの化合物は、次の構造を有する。
【０２２３】
【化１０】
2008532987.tif 000012
【０２２４】
(実施例)
(実施例1)
［化合物合成］
本発明のアクリドンおよびアクリジン化合物を、例えば、図1に示された方法、またはMatsumura, 1929 および Korolev et al., 1977(およびその中で引用された参考文献)などの他の公知の方法によって、あるいは技術者の知識内のやり方の方法のいずれかの適応によって調製することができる。
【０２２５】
(実施例2)
［生物学データ］
〔Taqポリメラーゼアッセイ〕
すべての化合物を、広域スペクトラムポリメラーゼ阻害薬を除外し、TRAPアッセイにおいて発生していたかもしれない全ての偽陽性を除去するために、Taqアッセイを用いて試験した。したがって、好ましい化合物は、「Taq-ネガティブ」である。化合物を、当技術分野(例えば、Perry et al.、1998aを参照されたい)で記載されたように、10ng pCl-neo mammalian expression vector (Promega、Southampton、UK)、およびフォワード(GGAGTTCCGCGTTACATAAC)、およびリバース(GTCTGCTCGAAGCATTAACC)プライマー(200nmol)を含むPCR 50μLマスターミックス中の様々な最終濃度(0.1、0.5、1、5、10、20および50μM)において、その酸付加塩として試験した。約1kbの生成物を、増幅(94℃1分間、55℃1分間および72℃2.5分間の30サイクル)に続いて2% w/w アガロースゲル上で可視化した。Taqアッセイを、Taqポリメラーゼ阻害が観察されなくなるまで実施した。すべての化合物は、Taqネガティブであることが見出された。
【０２２６】
改変テロメア反復増幅プロトコール(TRAP)アッセイ
無細胞アッセイにおいてテロメラーゼを阻害する化合物の能力を、指数関数的に成長しているA2780ヒト卵巣癌細胞からの抽出物を用いる改変TRAPアッセイで評価した。このTRAPアッセイを、以下の2ステップで実施した。
(a)TRAP緩衝液(20mM Tris-HC1(pH8.3)、68mM KC1、1.5mM MgCl2、1mM EGTA、0.05% v/v Tween 20)、0.05μgウシ血清アルブミン、50μMのそれぞれのデオキシヌクレオチドトリフォスフェート、0.1μg TSプライマー、および3μCiの[α-P]dCTP(Amersham plc、UK)タンパク質(40 ngもしくは20ng)を含む40μL 反応混合物中に含まれたフォワードプライマー(TS:5'-AATCCGTCGAGCAGAGTT、Oswel Ltd.、Southampton、UK.)のテロメラーゼ媒介伸長、次いで、25℃で、20分間、50 μMまでの最終濃度で反応混合物および薬剤(酸付加および第四級ジメチオジド塩)と共にインキュベートした。溶解（リーシス）緩衝液(無タンパク質)対照、加熱不活性化したタンパク質対照、および50%タンパク質(20ngもしくは10ng)対照を、それぞれのアッセイに含めた。
(b)テロメラーゼ活性を不活性化するために、サーマルサイクラー(Hybaid、UK)のPCR ブロック中で80℃で、5分間加熱しながら、0.1μgのリバースCXプライマー(3'-AATCCCATTCCCATTCCCATTCCC-5')および2ユニットのTaq DNAポリメラーゼ("red hot"、Advanced Biotechnologies)を添加した。3ステップPCR、即ち94℃30秒間、50℃30秒間、および72℃1分間の31サイクルを、次いで、実施した。化合物の存在下または不存在下のテロメラーゼ伸長PCR生成物を、次いで、8%w/wアクリルアミド変性ゲルを用いる電気泳動分離およびホスホイメージングもしくはオートラジオグラフィーによる分析によって、またはWhatmanフィルター(25mmガラス超極細繊維)上の回収および液体シンチレーション計数による分析によって、のいずれかで測定した。
【０２２７】
［FRET DNAメルティングアッセイ］
化合物のG-四重DNAを安定化する能力を、96-ウェルフォーマット中のハイスループットスクリーンとして使用されるよう改変された蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)分析を用いて調べた。FRETプローブとして使用された標識オリゴヌクレオチドF21T(5'-FAM-dGGG(TTAGGG)3-TAMRA-3')を、原液（ストック）から、50mMカコジル酸カリウム緩衝液(pH.7.4)中で正確な濃度(400nM)に希釈し、次いで、85℃に10分間加熱することによってアニールし、続いて加熱ブロック中で、室温に冷却した。
【０２２８】
化合物は、DMSO中の10mM原液として貯蔵しており、最終溶液(2×濃度での)を、最初の1:10希釈に水または1M HC1を用いて調製し、その後、50mMカコジル酸カリウム緩衝液(pH7.4)を、すべてのその後のステップにおいて使用した。アニールしたDNAの50μ1を、次いで化合物溶液の50μ1を各ウェルに分注することによって、96ウェルプレート(MJ Research、Waltham、MA)を調製した。450〜495nmでの励起および515〜545nmでの検出を備えたDNA Engine Opticon(MJ Research)で測定を行った。蛍光の読み取りを、安定した数値を確保するために各読み取りの前30秒間一定温度を維持して、0.5℃の間隔で、30〜100℃の範囲で行った。データの最終的な分析を、プログラムのOrigin 7.0(OriginLab Corp.、Northampton、MA)に記載されたスクリプトを用いて実施した。Origin7.0の先進的カーブフィティング関数も、Guyen et al.、2004に記載されたように、[conc]ΔTm=20数値の計算のために関係した曲線を得るのに使用した。
【０２２９】
［増殖阻害アッセイ］
増殖阻害を、3種のヒト卵巣癌細胞系(A2780、CH1、およびSKOV-3)および1種のヒト頚癌細胞系(A431)においてスルホローダミンB(SRB)アッセイを用いて測定した。手短にいえば、3000個から6000個の細胞を、96ウェルマイクロタイタープレートのウェルに蒔き、終夜付着させた。化合物(酸付加および第四級ジメチオジド塩)を、水中に500μMで溶解し、4通りに、0.05、0.25、1、5および25 μMの最終濃度で即座にウェルに添加した。96時間のインキュベーション期間に続いて、残った細胞を、氷冷した10% w/vトリクロロ酢酸(30分)で固定し、1% v/v酢酸中の0.4% SRBで染色(15分)した。各薬物濃度の540nmでの平均吸光度を、対照の処置されていないウェルの吸光度の百分率として表し、IC50値(細胞増殖を50%阻害するのに要する濃度)を、それぞれについて決定した。
【０２３０】
［結果］
【表１】
2008532987.tif 000013
【０２３１】
(実施例4)
［薬物動態評価］
〔試験化合物〕
試験物質を、BSG17と識別し、BSG01(BRACO-19)と比較して調べた。バルク試験物質を入れたバイアルを、室温(15〜30℃)で貯蔵した。
【０２３２】
〔試験製剤の調製〕
試験化合物を、必要な最終濃度に、0.9%生理食塩水B.P.中に再構成した。試験製剤の安定性を確実にするために、調製した製剤を、調製の2時間以内で投与した。
【０２３３】
〔試験化合物の投与〕
処置されたマウスは、10mL/g体重の投与量で、単一ボーラス静脈注射または試験製剤の経口胃管補給を受けた。対照マウスは、処置しなかった。
【０２３４】
投与の静脈および経口経路は、それらが、潜在的なヒトの治療経路であるので選択した。
【０２３５】
〔マウスの割り付け〕
マウスは、それが、げっ歯類であり、薬物動態研究の規制当局に許容されるために選択した。1mg/kg(静脈)および20mg/kg(経口)の用量レベルを本研究用に選択した。
【０２３６】
26〜30gの体重範囲のメスMF1マウス(6から8週齢)を、BRF Facility、SGHMS/Harlan UK、Bicesterから入手し、長持ちする尾標(無毒のマーカーペンを用いて)を用いて個別に識別した。試験室への順応の7日の期間の後に、試験物質を36匹のマウスに投与した。
【０２３７】
〔動物保護〕
本実験におけるすべての手順は、動物(科学的処置)法1986および動物保護に関係する適切な法律および指導の要件に従った。
【０２３８】
動物を、科学的手順に使用される動物の収容および介護のための実施基準の要件を満たす底板付きのかご中に収容した。市販のげっ歯類飼料および滅菌水が、試験を通して自由に提供された。木材の切りくずまたは削りくずが、底板付きのかご用の寝具として提供された。
【０２３９】
［サンプリングおよび分析手順］
〔血液サンプリング〕
血液サンプルを、下記に指定した時点において、時点毎に3匹のマウスから採取した。
【０２４０】
【表２】
2008532987.tif 000014
【０２４１】
血液サンプルを、マウスを深いハロセン麻酔にかけて心臓穿刺によって採取した。サンプリング後、マウスを、頚椎脱臼によって安楽死させた。
【０２４２】
サンプルを、事前ヘパリン化注射器中に集め、このサンプルを1mlエッペンドルフチューブに移した。血漿を、遠心分離によって作製し、無菌の、ラベルを貼ったエッペンドルフチューブに移し、分析までは約-20℃で凍結した。
【０２４３】
サンプルを、HPLCまたはGC-MS/MS法を用いて分析した。
【０２４４】
〔採尿〕
安楽死の時点において、尿サンプルを、可能であれば、手を使った膀胱の触診によって採取した。サンプルを、ラベルを貼ったエッペンドルフチューブ中に集め、分析までは約-20℃で凍結した。
【０２４５】
サンプルを、BRACO-19(親)用のGC-MS/MS法および代謝産物の定性的同定を用いて分析した。分析の前に、投与のそれぞれの群/経路のサンプルを次の通りためた。
Pool 1-投与後1時間までに回収した尿
Pool 2-投与後2から4時間に回収した尿
Pool 3-投与後8から24時間に回収した尿
【０２４６】
［結果］
複合の血漿濃度時間曲線を、ボーラス静脈内または経口投与が投与された後6〜8時間の期間にわたって作成した。結果は、図2および3に示されている。
【０２４７】
BSG01およびBSG17の薬物動態パラメーターは次の通りである。
【０２４８】
【表３】
2008532987.tif 000015
【０２４９】
(実施例5)
［有効性研究］
本試験の目的は、試験化合物の抗増殖効果を測定するために、無胸腺マウスに移植されたヒト腫瘍異種移植片の、試験化合物に対する応答を測定することである。
【０２５０】
〔投与の経路〕
投与の静脈経路が、可能性のある、ヒトの治療経路であるので選択した。
【０２５１】
〔種、株および異種移植片モデル〕
マウスを、それがげっ歯類であり、ヒトの異種移植片試験用に一般に好まれる種として国際的に受け入れられるので選択した。nu/nu MF1染色を選択した。
【０２５２】
DU145転移性前立腺モデルを、この用量範囲調査研究用に選択した。なぜなら、置換されたアクリジン類似体が、長期のインビトロ細胞毒性アッセイの間、この細胞系に対して有意な細胞増殖抑制作用を有することが示されたからである。
【０２５３】
10日間、毎日1度投与する1mg/kgの高い用量レベルを、本研究に選択した。0.3から0.6mg/kg/日の低用量および中間用量レベルも、用量-応答プロファイルの特性決定の助けとして選択した。
【０２５４】
上記試験は、医薬品安全性試験実施基準の精神に従って実施され、通常の実験室手法に従って実施され、SOPsに従った。
【０２５５】
〔試験化合物〕
試験化合物は、BSG17であり、BSG01(BR-ACO-19)と比較して試験した。それらの生物学的および物理化学的性質は、次の通り要約される。
【０２５６】
【表４】
2008532987.tif 000016
【０２５７】
試験化合物を、the School of Pharmacy、University of London、UKにおいて合成し精製した。バルク試験物質を収容しているバイアルを、室温(15〜30℃)において貯蔵した。
【０２５８】
BSG17も、化合物BSG-18からBSG-22、BSG24およびBSG-43からBSG-49と比較して試験した。それらの生物学的および物理化学的性質は、図20に要約されている。
【０２５９】
〔試験製剤〕
試験物質を、所要の最終濃度に、0.9%生理食塩水B.P.中に再構成し、必要ならば、有機溶媒(例えばDMSOまたはエタノール)を、いくつかの物質の可溶化を助けるために使用した。
【０２６０】
調製した製剤は、調製の2時間以内に投与した。
【０２６１】
〔試験化合物の投与〕
処置されたマウスは、2週間(平日のみ)、毎日1度、試験製剤のボーラス静脈注射を受けた。5ml/g体重の投薬量を用いた。対照マウスは、処置しなかった。
【０２６２】
〔動物〕
合計175匹のメスMF1マウスを、the Biological Research Facility、SGHMS、Londonから入手した。動物は、26〜30gの体重範囲(6から8週齢)であった。マウスを、皮下移植したマイクロチップを用いて個別に識別した。
【０２６３】
到着後、動物を、第1の試験手順の実施前に、少なくとも7日間、試験室に順応させた。
【０２６４】
動物を、科学的手順に使用される動物の収容および介護のための実施基準の要件を満たす底板付きのかご中に収容した。市販のげっ歯類飼料および滅菌水を、試験を通して自由に提供した。木材の切りくずまたは削りくずを、底板付きのかご用の寝具として提供した。
【０２６５】
本実験におけるすべての手順は、動物(科学的処置)法1986および動物保護に関係する適切な法律および指導の要件に従った。
【０２６６】
マウスは、次の通りにグループに割り当てた。
【０２６７】
【表５】
2008532987.tif 000017
【０２６８】
〔異種移植片の確立〕
異種移植片は、DU145細胞系(ATCC HTB-81)から調製した。細胞を、この細胞系用の確立された方法に従って増殖して、マウス1匹当たり5×106個の細胞が得られた。
【０２６９】
異種移植片を、各マウスの右脇腹への皮下注射によって、MF1マウスに確立した(100mlリン酸緩衝生理食塩水中の5×106個の細胞)。
【０２７０】
動物を、目に見える腫瘍が現れるまで、定期的に調べた。次いで、腫瘍を、関連したSOPに従って毎週3回測定し、次式を用いて腫瘍の体積を計算した。
体積=(π÷6000)×(L×W×H)
【０２７１】
測定は、異種移植片が約0.05cm3の体積(例えば、約5×5×4mmの寸法)に到達したとき、処置の日(第0日)の約1週間前に開始した。
【０２７２】
腫瘍が確立され次第、マウスを階層化した異種移植片体積に基づいたランダム化法を用いて5匹のマウスのグループに割り当てた。異種移植片が「根付かなかった」、または腫瘍体積が指定した範囲(0.05〜0.25cm3)外のマウスは、いずれも排除した。
【０２７３】
測定結果は、Quantum systemを用いて電子的に記録し、データはAccess databaseに転送した。これは、データを分析し一連の4つの試験報告書を作成するのに使用した。
【０２７４】
第0日は、平均腫瘍体積が0.12から0.16cm3である日と定義される。第0日の相対的腫瘍体積は1と定義される。
【０２７５】
各マウスを観察し、異種移植片が処置の日(V0)の体積に比べて体積が3倍になる(3V0)まで、腫瘍を測定した。経過期間は、体積3倍化時間(VTT)であった。
【０２７６】
3倍化を確認次第、マウスを、承認された人道的方法を用いて殺した。
【０２７７】
〔実験的観察〕
用量投与手順の間またはその後に見られた全ての兆候を記録し続けた。個別の体重を、腫瘍測定を実施するのと同時に同じ頻度で記録した。
【０２７８】
〔結果〕
DU145細胞系の結果が図4から9に示され、A549の結果が図10および11に示されている。BSG17は、すべての3つの用量レベル(0.3、0.6および1.0mg/kg/日)において明確な投与応答および効果を示し、BSG01に比べて増加した効果をより長期間示す。
【０２７９】
0.3、0.6、または1mg/kg/日における7、11.6、または11日のT-C値。
【０２８０】
(実施例6)
［組合せ研究-インビトロ］
(1)図21から23は、インビトロでのMCF7細胞の増殖に対する、AS1410(単独)、シスプラチン(単独)およびそれらの組合せの効果を示している。
(2)図24から27は、インビトロでのA549細胞の増殖に対する、AS1410(単独)、シスプラチン(単独)およびそれらの組合せの効果を示している。
A549細胞系については、投与されたAS1410の濃度は、その目的が、組合せにおいて最大の細胞殺滅を生じさせるのに必要な最低のAS1410濃度を確立することであったため、IC50値に比べて格段に低かった。
(3)図28から30は、インビトロでのA431細胞の増殖へのBRACO19(即ちBSG-01)(単独)、シスプラチン(単独)およびそれらの組合せの効果を示している。
【０２８１】
この組合せ試験においては、次の方法を使用した。
〔細胞系〕
ヒト乳癌細胞系(MCF7)、および肺癌細胞系(A549)(ATCCから購入)を、75cm2フラスコ中でDulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)(Invitrogen Corporation)と共に普通どおり維持した。培地に、L-グルタミン2mM、非必須アミノ酸、ウシ胎仔血清およびヒドロコルチゾンを補充した。細胞を、37℃、5% CO2でインキュベートした。
【０２８２】
［薬物の調製］
〔AS1410〕
10mM原液を、滅菌蒸留水中でAS1410コハク酸塩(MW 896)から調製し4℃に保った。滅菌水中でさらなる希釈を行って1mM溶液を得て、適切な体積を、長期試験において細胞培養物に添加した。
【０２８３】
〔シスプラチン〕
1mMシスプラチン原液を、結晶質のシスジアミンジクロロ白金(2)粉末(Sigma)を0.1%食塩水10ml中に溶解することによって調製した。光に対するその感受性のためにこの原液をホイルで包んだ。この薬物は、溶液中でのその不安定性のために、使用する当日に新しく作り、細胞培養物に添加する前にろ過滅菌した。
【０２８４】
〔長期の組合せ実験〕
長期の組合せ試験を、単独の薬剤および組合せの薬剤を用いて各細胞系について設定した。
【０２８５】
この長期の試験は、実験の期間(4週間)、毎週繰り返されたスケジュールに従う。細胞系のそれぞれのスケジュールは、次の通りである。
1.  第1日に、1×105個の細胞を、75cm2フラスコ中で1mM薬物原液の適切な体積を含む10ml DMEM中に蒔き、上記に記載された通りインキュベートした。
2.  第3または4日に、細胞を、適切な濃度の薬物を含む新しい培地で再処理し、もとの通りインキュベートし続けた。
3.  第7日に細胞を数え、1×105個の細胞を前の通り再度プレーティングし、実験を4週間継続した。
【０２８６】
薬物の濃度はIC50値によった。
【０２８７】
(実施例7)
［組合せ研究;異種移植片データ］
〔製剤〕
AS1410を、0.9%食塩水B.P.中に、所要の最終濃度(0.331および0.0993mg/mlの静脈内投与用AS1410コハク酸塩)に再構成した。
【０２８８】
［実験方法］
〔細胞培養〕
異種移植片を、肺癌A549(ATCC番号CCL-185)から調製した。細胞を標準の操作手順および本細胞系用の確立された方法に従って増殖して、マウス1匹当たり5×106個の細胞を得た。
【０２８９】
〔異種移植片の確立および測定〕
A549由来の異種移植片は、各マウスの右脇腹への皮下注射によって、50匹のメスnu/nu MF1マウスにそれぞれ確立された(100μlリン酸緩衝生理食塩水中5×106個の細胞)。
【０２９０】
動物を、目に見える腫瘍が現れるまで定期的に確認した。腫瘍を、次いで、関連したSOPに従って定期的に測定し、腫瘍の体積を次式を用いて計算した。
体積=(π÷6000)×(L×W×H)
【０２９１】
腫瘍が確立され次第、マウスを、階層化した異種移植片体積に基づいたランダム化手順を用いて、9匹のマウスのグループに割り当てた。異種移植片が「根付かなかった」または腫瘍体積が指定した範囲(0.04〜0.1cm3)外のマウスは全て排除した。
【０２９２】
測定は、データ入力用に電子キャリパーおよびQuantumシステムを用いて電子的に記録された。
【０２９３】
第0日は、平均腫瘍体積が0.04から0.1cm3である日と定義される。第0日の相対的腫瘍体積は1と定義される。
【０２９４】
各マウスを観察し、異種移植片が、処置の日(V0)の体積に比べて体積が3倍になる(3V0)まで腫瘍を測定した。経過期間は、体積3倍化時間(VTT)である。
【０２９５】
〔試験物質の投与〕
AS1410がゆっくりとしたボーラス静脈注射で与えられた。AS1410について、投与量5μl/g体重が用いられた。対照マウスは処置しなかった。シスプラチンを、AS1410の直前に投与した。
【０２９６】
〔研究計画〕
マウスを、次の通りにグループに割り当てた。
【０２９７】
【表６】
2008532987.tif 000018
【０２９８】
〔臨床的徴候〕
すべての動物を、不健康または明らかな毒性の兆候に関して毎日観察した。各動物の臨床状態の記録を続けた。
【０２９９】
異種移植片を、外観、質感および状態に関する変化について監視した。
【０３００】
〔病的状態および死亡〕
すべての動物を、動物が健康であることを確かめるために毎日2度調べた。
【０３０１】
〔体重〕
個別の体重を、投与の日および次いでその後毎週記録した。
【０３０２】
［結果］
図31から32は、A549細胞系に由来する異種移植片における腫瘍増殖曲線および生存曲線の結果をそれぞれ示している。比較を、処置されていない対照、AS1410(単独)、シスプラチン(単独)およびAS1410およびシスプラチンの2種の組合せ(ここで、用量は、AS1410の0.3mg/kgおよび1mg/kgであった)の間で行った。
【０３０３】
図31は、相対的腫瘍体積は、処置されていない対照については約43日後に約6であったことを示している。AS1410(単独)、シスプラチン(単独)およびAS1410(0.3mg/kg)およびシスプラチンの組合せの結果は、すべて、約60日後に約5の相対的腫瘍体積を示した。
【０３０４】
しかしながら、AS1410(1mg/kg)およびシスプラチンの組合せは、約60日後にわずか2の相対的腫瘍体積を示した。これは、上記に比べて、著しい、予想外の利点を示している。
【０３０５】
図32は、処置されていない対照においては約52日後に0%の生存であったことを示している。これは、AS1410(単独)、シスプラチン(単独)およびAS1410(0.3mg/kg)およびシスプラチンの組合せの同じ時間後の約40から60%の生存率と比較される。
【０３０６】
しかしながら、AS1410(1mg/kg)およびシスプラチンの組合せは、60日後でさえ100%の生存を示した。やはり、これは、他の処置計画に比べ、著しい、予想外の利点を示している。
【０３０７】
(実施例8)
［物理化学的評価法］
［方法］
〔溶解性〕
熱力学的溶解度値を、0.1M HCl、脱イオン水、pH6.8リン酸緩衝液、0.9%食塩水、および5%ブドウ糖のそれぞれにおいて測定した。
【０３０８】
1.25〜1.5mgのサンプルを、計量して1ml HPLCチューブに入れ、これに0.25mlの溶解媒体を添加して5mg/mlまでの溶解度の測定を可能にした。次いで、pHの測定、ろ過(ガラス繊維フィルター膜を有する96ウェルプレートを通して)、希釈、ならびに一般的な5分HPLC法での異なる注入体積でのそのままの溶液および希釈溶液の分析の前に、この懸濁液を24時間振とうした。
【０３０９】
試験溶解度の比較および計算のために、DMSO中で基準液を調製した。完全な溶解が達成されなかった実験からの残余固形物のXRPDパターンを測定した。
【０３１０】
HPLCクロマトグラムにおいて示された大きな追加のピークは、親化合物の回転異性体によると考えられる。これは、したがって、全体のピーク面積評価に含まれるべきである。したがって、基準溶液において示された最大のピークおよび2番目に大きいピークは、試験サンプル注入において同一のピーク(即ち、同じ保持時間)であったかのように一緒に加えられる。
【０３１１】
〔X線粉末回折(XRPD) 〕
X線粉末回折を、XYZステージおよび自動サンプルポジショニング用レーザービデオ顕微鏡、および120秒の一般的収集時間のHiStar area Detectorを備えたBruker C2回折計で行った。密封銅管(Cu Kα放射;1.5407Å)電圧および電流は、40kVおよび40mAに設定した。C2上のX線光学機器は、0.3mmのピンホールコリメータと組み合わされた単一Gobel鏡からなる。ビーム広がり、即ち、X線スポットの有効サイズは、約4mmの値を示す。シータ-シータ連続走査を、3.2〜29.8°の有効2シータレンジを与える20cmのサンプル-検知器距離と共に用いた。コランダム(α-AL2O3)標準(NIST 1976平板)を、計器較正を確認するために毎週実行した。試料調製は、平面を得るためにスライドガラスに軽く押し付けた数mgのサンプルからなった。
【０３１２】
〔PKa/LogP/D〕
PKa測定を、D-PAS(ディッププローブ吸収分光)アタッチメントを備えたSirius GlpKa 装置で行った。測定は、25℃でMeOH:H2O混合物中の電位差滴定およびUV滴定によって行った。滴定溶媒は、0.15M KClでイオン強度調節した。MeOH:H2O混合物中で見られた数値は、Yasuda-Shedlovsky外挿法によって0%共溶媒に外挿した。pKa値の予想は、ACD v8.07ソフトウェアを用いて行った。
【０３１３】
LogP値は、Sirius GlpKa装置で、オクタノール/ISA(イオン強度調節された)水の混合物中の化合物の溶液の滴定によって測定した。水に対するオクタノールの異なる比における滴定は、LogPion値の計算を可能にし、したがってLogDプロファイルの計算を可能にした。LogP値の予想は、ACD v8.07およびSyracuse KNOWWIN v1.67ソフトウェアを用いて行った。
【０３１４】
pKa滴定の2つ(BSG01およびBSG17)から沈殿した物質を、XRPDおよびHPLC分析の前に、ろ過して水で洗浄した。
【０３１５】
〔純度分析〕
純度分析を、Agilent HP 1100 systemで行い、Chemstation V9.0を用いて、データを収集し処理した。
全方法期間: 12.5分
カラム: LUNA C18(2)150×4.6mm i.d. 5μm粒子サイズ(Phenomenex)
カラム温度: 40℃
注入体積: 5μl
流速ml/分: 0.6ml/分
検出: 210〜310nmからのダイオードアレイ
フェーズA: メタノール(Analar、HPLCグレード) + 0.1%ギ酸(HPLCグレード)
フェーズB: 水(HPLCグレード) + 1%ギ酸(HPLCグレード)
グラジエントタイムテーブル: 表６
【０３１６】
【表７】
2008532987.tif 000019
【０３１７】
〔安定性〕
0.9% NaClおよび5%ブドウ糖中のこれらの化合物の一般的に低い溶解性のため、これらの試験中に化合物の完全な溶解を維持するために、これらの媒体を50%イソプロパノール(IPA)と混合することとした。25℃でのIPA中の安定性の並列試験も、この溶媒が、安定性に重要な影響を持たないことを確かめるために実施した。
【０３１８】
pKa測定からの残余のDMSO原液5mg/mlを、安定性試験に使用した。この溶液は、これらの安定性試験の前に数日間、冷蔵庫に貯蔵されていた。0.1mg/mlの濃度の溶液を、各実験(DMSO原液の50倍希釈)用に調製した。安定性試験を、4℃(冷蔵庫)および25℃(25℃における振とう機の上で)かつ0、1および7日の時点で実施した。100% IPAの場合においては、データを、25℃で貯蔵後0、1および14日に収集した。下記の4.5節で議論されるHPLC純度法を、純度分析に使用した。最大および2番目に大きいピークを、上記で議論した回転異性体の分離により、一緒に加えた。
【０３１９】
［物理化学的試験の結果］
〔溶解性〕
【表８】
2008532987.tif 000020
【０３２０】
〔PKaおよびLogP/D〕
【０３２１】
【表９】
2008532987.tif 000021
【０３２２】
【表１０】
2008532987.tif 000022
【０３２３】
【表１１】
2008532987.tif 000023
【０３２４】
〔表10についての注釈〕
BSG01 - 4.14は、水性UV測定からである(不完全な曲線が収集されたが、電位差測定法は4.15を示した)。他の数値は、水/MeOH混合物中の電位差測定法に続いての0% MeOHへのYasuda-Shedlovsky外挿による。すべてのpKasは、基本的に外挿の傾きからである。
【０３２５】
BSG17 - 数値は、水/MeOH混合物中の電位差滴定に続いての0% MeOHへのYasuda-Shedlovsky外挿による。すべてのpKasは、基本的に外挿の傾きからである。30% MeOH中の滴定についてのpKas2および3は、沈殿のためにYS外挿から排除した。
【０３２６】
【表１２】
2008532987.tif 000024
【０３２７】
〔純度分析〕
【表１３】
2008532987.tif 000025
【０３２８】
〔安定性〕
【表１４】
2008532987.tif 000026
【０３２９】
【表１５】
2008532987.tif 000027
【０３３０】
［考察］
0.1M HCl中の溶解度測定(表7を参照されたい)は、塩基性官能基のプロトン化によって、両方の化合物について5mg/mlより大きい値を示した。水への溶解度は、変わりやすく、BSG01は、<0.001mg/mlを示し、BSG17は、0.02mg/mlを示した。両方の化合物について、5%ブドウ糖は、0.9% NaClに比べてより良い溶解度を示したことも注目された。これらの測定における誤差は、HPLC分析で言及し、上記で論じた回転異性体の影響により、通常よりも大きい。
【０３３１】
そのまま(即ち、可溶化および/または他の試験の前)のすべてのサンプルのXRPD分析(図12および13)は、それらがすべて本質的に非結晶質であることを示した。
【０３３２】
溶解度分析で溶解されていない物質を、XRPD分析(図14から17)用のろ板（フィルタープレート）から抽出した。BSG01およびBSG17の両方について、分析を可能にするのに十分な抽出可能な物質があった。水性溶媒中での24時間を超える平衡は、非結晶質形態を結晶質状態に変換することは明らかであった。
【０３３３】
BSG01およびBSG17の結晶質形態は、約pH11.2における、メタノール/水/0.15M KCl中の電位差pKa滴定の終わりにおいても形成された。これらの物質(図16および17)のXRPD分析は、高度の結晶化度を示した。これらの結晶性物質の続いてのHPLC分析(表12)は、純度分析で言及した回転異性体により追加のピークを示した。
【０３３４】
pKaおよびLogP/Dの予想値と測定値は、表8および9に示されている。測定されたpKaおよびLogP/Dは、表10および11に示されており、測定値に関する注釈は、表に直ぐ続いて提供されている。生成されたデータの質が良いので、pKaおよびLogPの測定に回転異性体が影響を及ぼしているようには見えなかった。
【０３３５】
図18は、これらの物質の純度分析からのクロマトグラムを示している(表12中の純度データ)。最終的な純度数値は、回転異性体によると考えられる2つの最大ピークの総和である。
【０３３６】
表13および14ならびに図19は、50:50のIPA:5%ブドウ糖、50:50のIPA:0.9% NaClおよび100% IPAにおける安定性データおよびプロットを示している。これらの実験は、物質の完全な溶解を確実にするために50:50のIPA/試験媒体混合物中で行った。したがって、100% IPA中の安定性データも、IPAが試験媒体に比べて大きな影響を持たないことを確かめる比較のためにとった。25℃における14日間のIPA中の安定性試験は、すべてのサンプルについて極めて少しの変化しか示さなかった。温度は安定性に有意な影響を有さず、5%ブドウ糖および0.9% NaClは極めて類似した結果を示した。すべてのサンプルは、4℃および25℃において7日後に著しく分解した。
【０３３７】
(実施例9)
［製剤および投与］
本発明の化合物は、本発明の第1の態様による化合物を、薬学的にまたは獣医学的に許容される、アジュバント、希釈剤または担体と混合して含む製剤に製剤化することができる。
【０３３８】
上記製剤は、活性成分の、毎日の用量または単位、毎日の副用量(sub-dose)または適切なその一部分を含む単位用量である。
【０３３９】
本発明の化合物は、通常、薬学的に許容される剤形中に、活性成分を、場合によっては無毒の有機の、または無機の、酸性、または塩基性の、付加塩の形態で含む製剤の形態で、経口または任意の非経口経路で投与される。治療すべき障害および患者、ならびに投与の経路に応じて、本組成物は、様々な用量で投与することができる。
【０３４０】
ヒトの治療においては、本発明の化合物は単独で投与することができるが、一般的には、所望の投与の経路および標準的な製薬技法に関して選択される適切な製薬上の賦形剤、アジュバント、希釈剤または担体と混合して投与する。
【０３４１】
例えば、本発明の化合物は、即効、遅延または制御放出用途のための、着香料または着色剤を含むことができる、錠剤、カプセル、腔坐剤、エリキシル剤、溶液または懸濁液の形態で、経口で、頬側にまたは舌下で投与することができる。本発明の化合物は、陰茎海綿体注射(intracavernosal injection)でも投与することができる。
【０３４２】
このような錠剤は、微結晶性セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウムおよびグリシンなどの賦形剤、デンプン(好ましくは、トウモロコシ、ジャガイモもしくはタピオカデンプン)、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウムおよび特定のケイ酸錯体などの崩壊剤、およびポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)、ヒドロキシ-プロピルセルロース(HPC)、蔗糖、ゼラチンおよびアカシアなどの造粒結合剤を含むことができる。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリン、およびタルクなどの平滑剤を含むことができる。
【０３４３】
ゼラチンカプセル中の充てん剤として、同様のタイプの固体組成物も使用することができる。この点で好ましい賦形剤には、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖または高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。水性懸濁液および/またはエリキシル剤については、本発明の化合物は、様々な甘味剤または着香料、着色材料または染料と、乳化剤および/または懸濁化剤と、および水、エタノール、プロピレングリコールおよびグリセリンなどの希釈剤、ならびにそれらの組合せと組み合わせることができる。
【０３４４】
本発明の化合物は、非経口で、例えば、静脈内に、動脈内に、腹腔内に、髄腔内に、脳室内に、胸骨内に、頭蓋内に、筋肉内に、または皮下に投与することもでき、あるいは、それらは、輸注技術によって投与することができる。それらは、他の物質、例えば、溶液を血液と等浸透圧にするのに十分な塩またはブドウ糖を含むことができる無菌の水性溶液の形態で最もよく使用される。この水性溶液は、必要ならば、適切に緩衝化すべきである(好ましくは、3から9のpHに)。無菌条件下での適切な非経口製剤の調製は、当分野の技術者に周知の標準製薬技術によって容易に達成される。
【０３４５】
非経口投与に適切な製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬および製剤を所定の受容者の血液と等浸透圧にする溶質を含むことができる水性および非水性無菌注射液、ならびに懸濁化剤および増粘剤を含むことができる水性および非水性無菌懸濁液が含まれる。製剤は、単位用量または複数用量容器、例えば、密閉アンプルおよびバイアルに入れて提供することができ、凍結乾燥された状態で貯蔵することができ、無菌の液体担体、例えば注射用の水を添加するだけで直ぐに使用できる。即時注射液および懸濁液を、上記に記載された種類の、無菌の粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【０３４６】
ヒトの患者への経口および非経口投与については、本発明の化合物の毎日の用量レベルは、通常、1mg/kgから30mg/kgである。したがって、例えば、本発明の化合物の錠剤またはカプセルは、必要に応じて、1回のまたは同時に2回以上の投与のための活性化合物の用量を含むことができる。医師は、いずれにしても、任意の個々の患者に最も適した実際の投薬量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重および反応で変わる。上記の投薬量は、平均の場合の例である。より高いまたはより低い用量範囲が当然である個別の事例は言うまでもなくありうるが、それは本発明の範囲内である。
【０３４７】
本発明の化合物は、鼻腔内にまたは吸入によっても投与することもでき、加圧容器、ポンプ、適切な噴霧剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロ-エタン、1,1,1,2-テトラフルオロエタン(HFA 134A、もしくは1,1,1,2,3,3,3-ヘプタフルオロプロパン(HFA227EA))などのヒドロフルオロアルカン、二酸化炭素、または他の適切なガスを使用するスプレーまたは噴霧器からの乾燥粉末吸入器またはエアゾール噴霧の形態で好都合に送達される。加圧されたエアゾールの場合には、投薬量単位は、定量を送達するためのバルブを提供することによって決定することができる。加圧容器、ポンプ、スプレー、または噴霧器は、例えば、エタノールおよび噴霧剤の混合物を溶媒として用いる、活性化合物の溶液または懸濁液を含むことができ、この溶液または懸濁液は、さらに、潤滑剤、例えばトリオレイン酸ソルビタンを含むことができる。吸入器または注入器での使用のためのカプセルおよびカートリッジ(例えば、ゼラチンから作られた)は、本発明の化合物の混合粉体およびラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末ベースを含むよう製剤化することができる。
【０３４８】
エアゾールまたは乾燥粉末製剤は、好ましくは、それぞれの定量した用量または「ひと吹き」が、本発明の化合物の適切な用量を患者に送達するように用意される。エアゾールを用いた全体の毎日の用量は、患者毎に変わり、単一用量で、または、より一般的には、1日を通して分割した用量で投与することができることを理解されたい。
【０３４９】
別法として、本発明の化合物は、坐薬またはペッサリーの形態で投与することができ、あるいは、それらは、ローション、溶液、クリーム、軟膏または散布剤の形態で局所に適用ることができる。本発明の化合物は、経皮的に、例えば、皮膚用パッチ剤の使用によっても投与することができる。それらは、また、眼経路(ocular route)によって、特に眼の疾患の治療のために投与することもできる。
【０３５０】
眼への使用については、本発明の化合物は、等浸透圧の、pH調節した、無菌食塩水中の微粉状懸濁液として、または、好ましくは、等浸透圧の、pH調節した、無菌食塩水中の、任意選択で塩化ベンザルコニウムなどの保存料と組み合わせての溶液として製剤化することができる。別法として、それらは、ワセリンなどの軟膏中に製剤化することができる。
【０３５１】
皮膚への局所適用については、本発明の化合物は、例えば、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ろうおよび水の1種または複数との混合物中に、懸濁された、または溶解された活性成分を含む適切な軟膏として製剤化することができる。別法として、それらは、例えば、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート60、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、2-オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水の1種または複数の混合物中に懸濁された、または溶解された適切なローションまたはクリームとして製剤化することができる。
【０３５２】
口中の局所投与に適した製剤には、味付けされたベース、通常、蔗糖およびアカシアまたトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチンおよびグリセリン、または蔗糖およびアカシア、などの不活性ベース中に活性成分を含むトローチ；および適切な液体担体中に活性成分を含む洗口剤が含まれる。
【０３５３】
一般的に、ヒトにおいては、本発明の化合物の経口または局所投与は、好ましい経路であり、最も好都合である。受容者が、経口投与後の嚥下障害または薬物吸収の機能障害に悩まされている状況においては、上記薬物は、非経口で、例えば舌下または頬側に投与することができる。
【０３５４】
家畜への使用については、本発明の化合物は、標準の獣医技法に従った適切に許容される製剤として投与され、獣医が、特定の動物に最も適切となる投薬計画および投与の経路を決定する。
【０３５５】
(参考文献)
【表１６】
2008532987.tif 000028
【表１７】
2008532987.tif 000029
【表１８】
2008532987.tif 000030
【図面の簡単な説明】
【０３５６】
【図１】BSG17への合成経路、およびBSG17の構造を示す図である。
【図２】BSG01の血漿中動態を示す図である。T1/2(時間=1.1;Cmax(μM)=1.9およびAUC(0-t)=0.96
【図３】BSG17の血漿中動態を示す図である。T1/2(時間=2.1;Cmax(μM)=1.7およびAUC(0-t)=1.23
【図４】0.3mg/kg・日、0.6mg/kg・日および1.0mg/kg・日の量で、静脈経路でBSG-01を毎日処置(5日実施、2日休みの2サイクル)した異種移植株DU145の相対的な腫瘍体積を示す図である。
【図５】0.3mg/kg・日、0.6mg/kg・日および1.0mg/kg・日の量で、静脈内経路でBSG01を処置(5日実施、2日休みの2サイクル)した、確立されたDU145異種移植片(静脈内経路)の%マウス<3Vを示す図である。
【図６】0.3mg/kg・日、0.6mg/kg・日および1.0mg/kg・日の量で、静脈内経路でBSG-17を毎日処置(5日実施、2日休みの2サイクル)した異種移植株DU145の相対的な腫瘍体積を示す図である。
【図７】0.3mg/kg・日、0.6mg/kg・日、および1.0mg/kg・日の量で、静脈内経路でBSG17を処置(5日実施、2日休み、5日実施)した、確立されたDU145異種移植片(静脈内経路)の%マウス<3Vを示す図である。
【図８】BSG01およびBSG17の両方を毎日、腹腔内処置したDU145異種移植片の腫瘍体積%を示す図である。
【図９】BSG01およびBSG17の両方を毎日、腹腔内処置したDU145異種移植片の%マウス<3Vを示す図である。
【図１０】A549異種移植片モデルでのBSG01およびBSG17と対照(5日実施、2日休み、5日実施)の比較の腫瘍体積%を示す図である。
【図１１】A549異種移植片モデルでのBSG17と対照(5日実施、2日休み、5日実施)の比較の%マウス<3Vを示す図である。
【図１２】可溶化前の物質のBSG01のXRPDパターンを示す図である。
【図１３】可溶化前の物質のBSG17のXRPDパターンを示す図である。
【図１４】水、0.9% NaClおよび5%ブドウ糖中の溶解度アッセイから回収された固体のBSG01のXRPDパターンを示す図である。
【図１５】水、0.9% NaClおよび5%ブドウ糖中の溶解度アッセイから回収された固体のBSG17のXRPDパターンを示す図である。
【図１６】MEOH/水/0.15M KCl中の、約pH11.2での電位差滴定から回収された固体のBSG01のXRPDパターンを示す図である。
【図１７】MEOH/水/0.15M KCl中の、約pH11.2での電位差滴定から回収された固体のBSG17のXRPDパターンを示す図である。
【図１８Ａ】BSG01およびBSG17の純度分析のためのクロマトグラムを示す図である。
【図１８Ｂ】BSG01およびBSG17の純度分析のためのクロマトグラムを示す図である。
【図１９Ａ】BSG01およびBSG17の、両方とも5%ブドウ糖および0.9% NaCl中の純度劣化を示す図である。
【図１９Ｂ】BSG01およびBSG17の、両方とも5%ブドウ糖および0.9% NaCl中の純度劣化を示す図である。
【図２０Ａ】BSG-17、BSG-18〜22、BSG-24およびBSG-43からBSG-49を示す図である。
【図２０Ｂ】BSG-17、BSG-18〜22、BSG-24およびBSG-43からBSG-49を示す図である。
【図２０Ｃ】BSG-17、BSG-18〜22、BSG-24およびBSG-43からBSG-49を示す図である。
【図２１】MCF7細胞のインビトロでの増殖に対するAS1410(単独)の効果を示す図である。
【図２２】MCF7細胞のインビトロでの増殖に対するシスプラチン(単独)の効果を示す図である。
【図２３】MCF7細胞のインビトロでの増殖に対するAS1410およびシスプラチンの組合せの効果を示す図である。
【図２４】A549細胞のインビトロでの増殖に対するAS1410(単独)の効果を示す図である。
【図２５】A549細胞のインビトロでの増殖に対するシスプラチン(単独)の効果を示す図である。
【図２６】A549細胞のインビトロでの増殖に対するAS1410およびシスプラチンの組合せの効果を示す図である。
【図２７】A549細胞のインビトロでの増殖に対するAS1410およびシスプラチンの組合せの効果を示す図である。
【図２８】A431細胞のインビトロでの増殖に対するBRACO19(即ちBSG-01)(単独)の効果を示す図である。
【図２９】A431細胞のインビトロでの増殖に対するシスプラチン(単独)の効果を示す図である。
【図３０】A431細胞のインビトロでの増殖に対するBRACO19(即ちBSG-01)およびシスプラチンの組合せの効果を示す図である。
【図３１】A549異種移植片モデルでのAS1410(単独)、シスプラチン(単独)および組合せの腫瘍増殖曲線の比較を示す図である。
【図３２】A549異種移植片モデルでのAS1410(単独)、シスプラチン(単独)および組合せの生存曲線の比較を示す図である。
【図１】
2008532987.tif 000037
【図２】
2008532987.tif 000038
【図３】
2008532987.tif 000039
【図４】
2008532987.tif 000040
【図５】
2008532987.tif 000041
【図６】
2008532987.tif 000042
【図７】
2008532987.tif 000043
【図８】
2008532987.tif 000044
【図９】
2008532987.tif 000045
【図１０】
2008532987.tif 000046
【図１１】
2008532987.tif 000047
【図１２】
2008532987.tif 000048
【図１３】
2008532987.tif 000049
【図１４】
2008532987.tif 000050
【図１５】
2008532987.tif 000051
【図１６】
2008532987.tif 000052
【図１７】
2008532987.tif 000053
【図１８Ａ】
2008532987.tif 000054
【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
2008532987.tif 000058
【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１】
2008532987.tif 000061
【図２２】
2008532987.tif 000062
【図２３】
2008532987.tif 000063
【図２４】
2008532987.tif 000064
【図２５】
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【図２６】
2008532987.tif 000066
【図２７】
2008532987.tif 000067
【図２８】
2008532987.tif 000068
【図２９】
2008532987.tif 000069
【図３０】
2008532987.tif 000070
【図３１】
2008532987.tif 000071
【図３２】
2008532987.tif 000072
【国際調査報告】
2008532987.tif 000073
2008532987.tif 000074