(57)【要約】本明細書で開示するものは、化合物、組成物、ならびにそのような化合物と組成物を、前癌症状および癌症状を含む過剰増殖性症状の処置に用いる方法である。或る実施形態では、この化合物は、免疫機能を監視または促進するために免疫系と相互作用できるカップリング剤として、この方法で利用可能な共鳴修飾化合物を含む。そのような共鳴修飾剤は、共鳴修飾薬が適用された標的部位に、免疫細胞を引き付けるような固有の電磁的性質を持つ。標的部位の電磁的性質（電圧振幅など）は、共鳴修飾剤の存在によって変化し、また免疫機能の指標となる。外部刺激（印加電磁場など）を加えることによっても、共鳴修飾剤の免疫刺激および誘因特性を増進することができる。共鳴修飾剤の特定の実施例を開示し、これらの物質は一般に、生物環境と静電相互作用が可能な、共鳴分子内双極子モーメントを有する。或る実施例では、化合物は治療部位で凝集し、治療活性を増進させる。他の実施例では、化合物は血小板産生を促進する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式のA-007以外の化合物であり、
【化１】
2008540428.tif 000034
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0もしくは1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化２】
2008540428.tif 000035
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、かつ
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成する、
ことを特徴とする化合物。
【請求項２】
XがNHで且つYがNのとき、nが1、R1がR5であるかもしくはその両方で、
R5がHまたは低級アルキル基であることを特徴とする、請求項１の化合物。
【請求項３】
請求項１の化合物であり、ここでArが一つ以上のハロゲン、ハロアルキル基、アシル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、カルボアルコキシ基、スルホン酸、シアノ基またはニトロ基で置換されたアリール基であることを特徴とする、請求項１の化合物。
【請求項４】
Arが二つ以上の電子求引基を含むことを特徴とする、請求項１の化合物。
【請求項５】
Arがジニトロフェニル基であることを特徴とする、請求項４の化合物。
【請求項６】
R1は、-OR5、-SR5、-SO2N(R5)2、-SO2CN、-SO2R5、-SO2N3、N3、-CN、-N(R5)C(O)R6、-R6、またはそれらの組み合わせから選択された一つ以上の基で置換されたフェニル基で、
各R5は独立にH、低級アルキル基、糖、脂肪酸、アミノ酸、ペプチド、ヌクレオシド、または核酸であり、ならびに、
R6は低級アルキル基またはC-グリコシドである、
ことを特徴とする、請求項１の化合物。
【請求項７】
R2がR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成する、請求項１の化合物
【請求項８】
請求項１の化合物であり、ここで式中のR3が、-OR5、-SR5、-SO2N(R5)2、-SO2CN、-SO2R5、-SO2N3、N3、-CN、-N(R5)C(O)R6、-R6、またはそれらの組み合わせから選択された一つ以上の基で置換されたフェニル基であることを特徴とする、請求項１の化合物。
【請求項９】
nが0であることを特徴とする請求項１の化合物。
【請求項１０】
mが1、2、または3であることを特徴とする請求項１の化合物。
【請求項１１】
mが0または1であることを特徴とする請求項１の化合物。
【請求項１２】
nとmの両方が1であることを特徴とする請求項１の化合物。
【請求項１３】
nが1でmが0であることを特徴とする請求項１の化合物。
【請求項１４】
以下の構造式の化合物であり、
【化３】
2008540428.tif 000036
ここで式中のR5とR6は、独立に、-OR7、-SR7、-SO2N(R7)2、-SO2CN、-SO2R8、-SO2N3、N3、-CN、-N(R7)C(O)R8、-R7であり、
R7はHまたは低級アルキル基で、かつ、
R8は低級アルキル基である、
ことを特徴とする、請求項１３の化合物。
【請求項１５】
以下の構造を持つ請求項１４の化合物。
【化４】
2008540428.tif 000037
【請求項１６】
XがCH2、O、SO2、B、
nが0、
R1が随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化５】
2008540428.tif 000038
式中のR4は随意に置換されたフェニル基で、
R2は随意に置換された低級アルキル基であるか、もしくはZと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR4と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、かつ、
R3は随意に置換されたフェニル基である、
ことを特徴とする、請求項１の化合物。
【請求項１７】
R1が、-OR5、-SR5、-SO2NH2、-SO2CN、-SO2R5、-SO2N3、N3、-CN、-N(R5)C(O)R6、-R6、またはそれらの組み合わせから選択された一つ以上の基で置換されたフェニル基であることを特徴とする、請求項１６の化合物。
【請求項１８】
R2とR3がフェニル基を形成する、請求項１６の化合物。
【請求項１９】
以下の構造を有し、
【化６】
2008540428.tif 000039
ここで式中のR7とR8は、独立に、-OR5、-SR5、-SO2N(R5)2、-SO2CN、-SO2R6、-SO2N3、N3、-CN、-N(R5)C(O)R6、-R6であり、
各R5は独立にHまたは低級アルキル基で、かつ、
R6は低級アルキル基である、
ことを特徴とする、請求項１８の化合物。
【請求項２０】
以下の構造を持つ請求項１９の化合物。
【化７】
2008540428.tif 000040
【請求項２１】
R5とR6が-OHである請求項２０の化合物。
【請求項２２】
XがCH2で且つYがNまたはCHである請求項２１の化合物。
【請求項２３】
以下の構造を持つ請求項２２の化合物であり、
【化８】
2008540428.tif 000041
ここで式中のR5はH、-OR6、-SR6、-SO2N(R6)2、-SO2CN、-SO2R7、-SO2N3、N3、-CN、-N(R6)C(O)R7、または-R7であり、
R1とR6は独立にHまたは低級アルキル基で、かつ、
R2とR7は独立に低級アルキル基である、
ことを特徴とする、請求項２２の化合物。
【請求項２４】
Arがニトロフェニル基を含むことを特徴とする請求項２３の化合物。
【請求項２５】
Arがジニトロフェニル基を含むことを特徴とする請求項２４の化合物。
【請求項２６】
以下の構造を持つ請求項２５の化合物。
【化９】
2008540428.tif 000042
【請求項２７】
R1がHであることを特徴とする請求項２６の化合物。
【請求項２８】
R2がメチル基またはエチル基である請求項２７の化合物。
【請求項２９】
R5が-OR6をあらわす請求項２８の化合物。
【請求項３０】
以下の構造を持つ請求項２９の化合物。
【化１０】
2008540428.tif 000043
【請求項３１】
請求項１の化合物および薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする薬学的組成物。
【請求項３２】
前記化合物が以下の構造を持つ、請求項３１の組成物。
【化１１】
2008540428.tif 000044
【請求項３３】
前記組成物が局所ゲルまたは溶液を含む、請求項３１の組成物。
【請求項３４】
前記局所ゲルまたは溶液が、約0.25%以上の前記化合物を含む、請求項３３の組成物。
【請求項３５】
前記組成物が持続放出剤形を含む請求項３１の組成物。
【請求項３６】
前記持続放出剤形が錠剤または結晶を含む、請求項３５の組成物。
【請求項３７】
前記組成物が吸入を介した輸送に適している、請求項３１の組成物。
【請求項３８】
前記組成物がエアロゾルを含む請求項３７の組成物。
【請求項３９】
請求項６の化合物および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項４０】
請求項１６の化合物および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項４１】
免疫刺激を必要とする被験者の免疫反応を刺激する方法であり、
免疫刺激を必要とする被験者の選択と、
免疫刺激を必要とする前記被験者に、以下の構造を持つA-007以外の共鳴修飾化合物を治療有効量投与することを含み、
【化１２】
2008540428.tif 000045
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0からまたは1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造で、
【化１３】
2008540428.tif 000046
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、かつ、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR3と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成する、
ことを含む方法。
【請求項４２】
免疫刺激を必要とする前記被験者の選択が、免疫不全の臨床検査値を持つ被験者の選択を含む、請求項４１の方法。
【請求項４３】
前記被験者の選択が、感染性病原体に感染した被験者の選択を含む、請求項４１の方法。
【請求項４４】
前記感染性病原体がウィルスである請求項４３の方法。
【請求項４５】
前記病原体がヒトパピローマウィルスである請求項４４の方法。
【請求項４６】
前記被験者の選択が、肛門または子宮頸部の異形成を患う被験者の選択を含む、請求項４１の方法。
【請求項４７】
前記被験者が、パピローマウィルスの感染によって引き起こされた異形成を患う被験者である、請求項４６の方法。
【請求項４８】
前記化合物の投与が、前記共鳴修飾化合物を前記被験者に経膣内または経肛門内に投与することを含む、請求項４１の方法。
【請求項４９】
前記化合物の投与が、持続放出剤形を経膣内または経肛門内に導入することを含む、請求項４８の方法。
【請求項５０】
前記持続放出剤形が錠剤または結晶を含む請求項４９の方法。
【請求項５１】
前記化合物の投与が、前記化合物を皮膚病変以外の部位に局所投与することを含む、請求項４１の方法。
【請求項５２】
前記化合物の投与が、前記化合物を皮膚表面部位に局所投与することを含み、ここで前記皮膚表面は実質的に前記化合物に対して非透過性で、さらに前記免疫反応が前記皮膚表面部位から離れて刺激されることを特徴とする、請求項４１の方法。
【請求項５３】
前記化合物の投与が、前記化合物の吸入投与を含む請求項５１の方法。
【請求項５４】
前記化合物が、気道上皮感染症または腫瘍を患う被験者に吸入で投与される、請求項５３の方法。
【請求項５５】
前記免疫反応がリンパ管網において刺激される請求項４１の方法。
【請求項５６】
前記化合物が過剰増殖性体表面病変に適用される請求項４１の方法。
【請求項５７】
前記過剰増殖性体表面病変が、肛門、子宮頸部、口腔、陰茎、膣または外陰部の病変である、請求項５６の方法。
【請求項５８】
前記過剰増殖性体表面病変が前癌病変である請求項５６の方法。
【請求項５９】
前記前癌病変が、光線角化症、ボーエン様光線角化症、ヒ素角化症、ボーエン病、ウィルス性角化症、白板症、ケイラー紅板症、母斑または疣を含む、請求項５８の方法。
【請求項６０】
前記病変が、肛門癌、子宮頸癌、基底細胞癌もしくは扁平上皮細胞癌、黒色腫、陰茎癌、外陰部癌、膣癌、または口腔粘膜癌から選択された原発性腫瘍性病変である、請求項５６の方法。
【請求項６１】
前記体表面病変が乾癬病変である請求項５６の方法。
【請求項６２】
Arが一つ以上のハロゲン、ハロアルキル基、アシル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、カルボアルコキシ基、スルホン酸、シアノ基またはニトロ基で置換されたアリール基である、請求項４１の方法。
【請求項６３】
前記共鳴修飾化合物がニトロフェニルヒドラゾンである請求項６２の方法。
【請求項６４】
前記共鳴修飾化合物がジニトロフェニルヒドラゾンである請求項６２の方法。
【請求項６５】
前記共鳴修飾化合物が2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンである請求項６４の方法。
【請求項６６】
Arが多環基を含むことを特徴とする請求項４１の方法。
【請求項６７】
Arが置換フェニル基を含むことを特徴とする請求項４１の方法。
【請求項６８】
Arが二つ以上の電子求引置換基を含むことを特徴とする請求項４１の方法。
【請求項６９】
Arがジニトロフェニル基であることを特徴とする請求項６８の方法。
【請求項７０】
nが0である請求項４１の方法。
【請求項７１】
mが1、2、または3である請求項４１の方法。
【請求項７２】
mが0または1である請求項４１の方法。
【請求項７３】
nとmの両方が1である請求項４１の方法。
【請求項７４】
nが1でmが0である請求項４１の方法。
【請求項７５】
請求項４１の方法であり、前記共鳴修飾化合物が以下の構造を持ち、
【化１４】
2008540428.tif 000047
ここで式中のR5とR6は、独立に、-OR7、-SR7、-SO2N(R7)2、-SO2CN、-SO2R8、-SO2N3、N3、-CN、-N(R7)C(O)R8、-R7であり、
R7はHまたは低級アルキル基で、かつ、
R8は低級アルキル基である、
ことを特徴とする、請求項４１の方法。
【請求項７６】
前記共鳴修飾化合物が以下の構造を持つ請求項４１の方法。
【化１５】
2008540428.tif 000048
【請求項７７】
前記共鳴修飾化合物が以下の構造を含み、
【化１６】
2008540428.tif 000049
ここで式中のXはジニトロフェニル基で、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化１７】
2008540428.tif 000050
ここで式中のR2は低級アルキル基または随意に置換されたフェニル基で、
R3は随意に置換された低級アルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR4と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R4はR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基である、
ことを特徴とする、請求項４１の方法。
【請求項７８】
R１がHである請求項７７に準ずる方法。
【請求項７９】
前記共鳴修飾化合物が以下の構造を持ち、
【化１８】
2008540428.tif 000051
ここで式中のR2は低級アルキル基で、
R5はH、OH、-OR6、-SO2NH2、N3、-CN、-SO2CN、-SO2N3または低級アルキル基で、かつ、
R6は低級アルキル基である、
ことを特徴とする、請求項７８に準ずる方法。
【請求項８０】
前記化合物の投与が、前記化合物を前記被験者の上皮表面に適用することを含む、請求項４１の方法。
【請求項８１】
前記被験者の前記上皮表面への前記化合物の適用が、皮膚の表面への前記化合物の塗布を含む、請求項８０の方法。
【請求項８２】
前記被験者の上皮表面への前記化合物の適用が、前記皮膚への前記化合物の導入を含む、請求項８０の方法。
【請求項８３】
免疫反応を刺激する前記方法が、前記被験者の前記免疫反応を刺激することで腫瘍を処置する方法を含む、請求項４１の方法。
【請求項８４】
前記被験者の前記皮膚への前記化合物の塗布が、前記被験者の前記免疫反応を刺激するために、前記化合物を腫瘍の上部または付近の皮膚部分に塗布することを含む、請求項８１の方法。
【請求項８５】
前記腫瘍が悪性腫瘍である請求項８４の方法。
【請求項８６】
前記腫瘍が転移癌である請求項８５の方法。
【請求項８７】
前記化合物を、前記化合物の共鳴修飾の増加を誘導するような電磁場に晒すことで、免疫刺激を増進させることを更に含む、請求項４１の方法。
【請求項８８】
前記電磁場が磁気プローブによって作られる請求項４１の方法。
【請求項８９】
前記電磁場が二電極間を流れる電流によって作られる請求項８８の方法。
【請求項９０】
前記化合物に対する前記被験者の免疫系の反応を決定するために、前記化合物の共鳴修飾によって作られた波形の振幅を監視することを更に含む、請求項４１の方法。
【請求項９１】
前記振幅が治療的に好ましい振幅を下回る場合、前記化合物の共鳴修飾の増加を誘導するために、前記化合物を電磁場に晒すことを更に含む、請求項９０の方法。
【請求項９２】
免疫反応を刺激する前記方法が、細胞外膜結合型タンパク質チロシンホスファターゼを発現する細胞によって、または、細胞外膜結合型タンパク質チロシンホスファターゼを発現する細胞に対して、免疫反応を刺激する方法を含む、請求項４１の方法。
【請求項９３】
前記細胞がTリンパ球で、かつ、前記免疫反応を刺激する前記方法が、前記Tリンパ球による抗原に対する前記免疫反応を刺激することを含む、請求項９２の方法。
【請求項９４】
前記細胞がCD45+ウィルスに感染した細胞で、かつ、前記免疫反応を刺激する前記方法が、前記ウィルスに感染した前記細胞に対する前記免疫反応を刺激することを含む、請求項９３の方法。
【請求項９５】
前記ウィルスがパピローマウィルスまたはレトロウィルスである請求項９４の方法。
【請求項９６】
前記ウィルスがパピローマウィルスである請求項９５の方法。
【請求項９７】
前記ウィルスがヒトパピローマウィルスである請求項９６の方法。
【請求項９８】
前記ウィルスがレトロウィルスである請求項９４の方法。
【請求項９９】
前記ウィルスがヒト免疫不全ウィルスである請求項９８の方法。
【請求項１００】
前記細胞は、活性細胞外膜結合型タンパク質チロシンホスファターゼを含むウィルスに感染した細胞であり、かつ、前記免疫反応を刺激する前記方法が、前記ウィルスに感染した前記細胞に対する前記免疫反応を刺激することを含むことを特徴とする、請求項９２の方法。
【請求項１０１】
被験者の免疫反応を監視する方法であり、
共鳴修飾化合物を前記被験者に接触させて配置し、以下の構造を持つA-007以外の前記共鳴修飾化合物に特有の、固有電磁波形を発生させることを含む方法であり、
【化１９】
2008540428.tif 000052
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0または1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化２０】
2008540428.tif 000053
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成し、XがNHで且つYがNのとき、nが1、R1がR5であるかもしくはその両方であり、かつ、
R5がHまたは低級アルキル基で、ここで前記電磁波形は前記被験者の免疫状態をあらわし、かつ、
前記化合物によって作られた波形を、変化した免疫機能に関連する波形のために監視すること
を含む方法。
【請求項１０２】
前記波形の監視が、外部電流または電位差を導入することなく、前記化合物にわたる経時的な電圧変化を検出することを含む、請求項１０１の方法。
【請求項１０３】
変化した免疫機能に関連する前記波形の監視が、減少した振幅を持つ波形の検出を含む、請求項１０１の方法。
【請求項１０４】
癌病変または前癌病変を処置する方法であり、前記病変に、以下の構造を持つA-007以外の化合物を含む化合物を有効量適用することを含む方法であり、
【化２１】
2008540428.tif 000054
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0または1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化２２】
2008540428.tif 000055
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成し、XがNHで且つYがNのとき、nが1、R1がR5であるかもしくはその両方であり、かつ、
R5がHまたは低級アルキル基である、
ことを含む方法。
【請求項１０５】
前記病変が過剰増殖性体表面病変である請求項１０４の方法。
【請求項１０６】
前記過剰増殖性体表面病変が前癌病変である請求項１０４の方法。
【請求項１０７】
前記病変が肛門、子宮頸部、口腔、陰茎、膣または外陰部の病変である請求項１０５の方法。
【請求項１０８】
前記前癌病変が、光線角化症、ボーエン様光線角化症、ヒ素角化症、ボーエン病、ウィルス性角化症、白板症、ケイラー紅板症、母斑または疣を含む、請求項１０６の方法。
【請求項１０９】
前記前癌病変がパピローマウィルス関連病変である請求項１０６の方法。
【請求項１１０】
前記病変が原発性腫瘍性病変である請求項１０４の方法。
【請求項１１１】
前記腫瘍性病変が肛門癌、子宮頸癌、基底細胞癌または扁平上皮細胞癌、黒色腫、陰茎癌、外陰部癌、膣癌または口腔粘膜癌である、請求項１１０の方法。
【請求項１１２】
前記原発性腫瘍性病変が転移腫瘍性病変を含む請求項１１０の方法。
【請求項１１３】
前記病変が陰茎病変である請求項１１０の方法。
【請求項１１４】
前記病変が外陰部または膣の病変である請求項１１０の方法。
【請求項１１５】
前記過剰増殖性体表面病変が体内表面病変である請求項１０５の方法。
【請求項１１６】
生物組織からリンパ球を集める方法であり、前記生物組織を、以下の構造を持つA-007以外の化合物の有効量に晒すことを含み、
【化２３】
2008540428.tif 000056
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0または1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化２４】
2008540428.tif 000057
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成し、XがNHで且つYがNのとき、nが1、R1がR5であるかもしくはその両方であり、かつ、
R5がHまたは低級アルキル基であること、
を含む方法。
【請求項１１７】
生体を前記化合物の前記有効量へ晒すことが、前記生体の皮膚に前記化合物を適用することを含む、請求項１１６の方法。
【請求項１１８】
前記化合物の前記皮膚への適用が、前記皮膚の前記表面に前記化合物の局所用製剤を適用することを含む、請求項１１７の方法。
【請求項１１９】
被験者の感染を処置する方法であり、前記被験者に、以下の構造を持つA-007以外の化合物であり、細胞のPTP細胞外受容体と相互作用して前記受容体を活性化させる化合物の治療有効量を投与することを含み、
【化２５】
2008540428.tif 000058
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0または1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化２６】
2008540428.tif 000059
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成し、XがNHで且つYがNのとき、nが1、R1がR5であるかもしくはその両方であり、かつ、
R5がHまたは低級アルキル基である、
ことを含む方法。
【請求項１２０】
外部電磁場を前記化合物に印加することで前記化合物の共鳴修飾を増加させ、それによって前記感染を処置するために前記化合物の免疫刺激効果を増加させることを更に含む、請求項１１９の方法。
【請求項１２１】
前記感染がウィルス感染である請求項１１９の方法。
【請求項１２２】
前記ウィルスがパピローマウィルスまたはレトロウィルスである請求項１２１の方法。
【請求項１２３】
前記ウィルスがパピローマウィルスである請求項１２２の方法。
【請求項１２４】
前記ウィルスがヒトパピローマウィルスである請求項１２３の方法。
【請求項１２５】
前記ウィルスがレトロウィルスである請求項１２２の方法。
【請求項１２６】
前記ウィルスがヒト免疫不全ウィルスである請求項１２５の方法。
【請求項１２７】
前記感染が細菌感染である請求項１１９の方法。
【請求項１２８】
前記細胞がT-リンパ球である請求項１１９の方法。
【請求項１２９】
前記細胞がCD45+リンパ球である請求項１２８の方法。
【請求項１３０】
前記細胞がCD45+病原体である請求項１２９の方法。
【請求項１３１】
前記病原体がヒトパピローマウィルスである請求項１３０の方法。
【請求項１３２】
前記化合物と細胞を紫外線に晒すことで、前記化合物と前記受容体間の相互作用を増進させることを更に含む、請求項１１９の方法。
【請求項１３３】
前記被験者への前記化合物の投与が、前記化合物を異形成上皮または化生上皮に適用することを含む、請求項１１９の方法。
【請求項１３４】
前記上皮が泌尿生殖器上皮である請求項１３３の方法。
【請求項１３５】
前記泌尿生殖器上皮が、膣、子宮頸部、または肛門の上皮である請求項１３４の方法。
【請求項１３６】
前記化合物の前記被験者への投与が、前記化合物の扁平上皮細胞癌への適用を含む、請求項１３３の方法。
【請求項１３７】
前記腫瘍が肛門扁平上皮細胞癌である請求項１３６の方法。
【請求項１３８】
投与が局所ゲルの適用を含む請求項１１９の方法。
【請求項１３９】
前記局所ゲルが約0.25%の前記化合物を含む請求項１３８の方法。
【請求項１４０】
前記化合物の前記被験者への適用が、前記化合物を、少なくとも毎日、治療効果を生じるのに十分な期間適用することを含む、請求項１３８の方法。
【請求項１４１】
前記化合物の投与が、前記化合物を少なくとも毎日、5日間以上投与することを含む、請求項１４１の方法。
【請求項１４２】
前記化合物の前記治療有効量が、一日あたり局所ゲル2グラム以上であり、前記ゲルが約0.25%以上の前記化合物を含むことを特徴とする、請求項１１９の方法。
【請求項１４３】
細胞膜に存在する細胞タンパク質チロシンホスファターゼを活性化する方法であり、前記細胞を、以下の構造を持つA-007以外の化合物で、前記タンパク質チロシンホスファターゼを活性化するのに十分な量の共鳴修飾化合物に晒すことを含み、
【化２７】
2008540428.tif 000060
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0または1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造であり、
【化２８】
2008540428.tif 000061
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成する、
ことを含む方法。
【請求項１４４】
前記細胞を前記量の前記共鳴修飾剤に晒すことが、前記細胞に局所的に、または前記細胞の付近に、前記共鳴修飾剤を適用することを含む、請求項１４３の方法。
【請求項１４５】
免疫刺激を必要とする被験者の免疫反応を刺激する方法であり、
免疫刺激を必要とする被験者の選択と、
前記被験者に、以下の構造のA-007以外の化合物を治療有効量投与することを含み、
【化２９】
2008540428.tif 000062
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0からまたは1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造で、
【化３０】
2008540428.tif 000063
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、かつ、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成する、
ことを含む方法。
【請求項１４６】
過剰増殖性疾患を患う被験者を処置するための方法であり、
免疫刺激を必要とする被験者の選択と、
前記被験者に、以下の構造の細胞毒性化合物を治療有効量投与することを含み、
【化３１】
2008540428.tif 000064
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0からまたは1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造で、
【化３２】
2008540428.tif 000065
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、かつ、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成する、
ことを含む方法。
【請求項１４７】
血小板減少症を処置するための方法であり、
血小板減少症を患う被験者の選択と、
前記被験者に、以下の構造を持つA-007以外の細胞毒性化合物を治療有効量投与することを含み、
【化３３】
2008540428.tif 000066
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0からまたは1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造で、
【化３４】
2008540428.tif 000067
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、かつ、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成する、
ことを含む方法。
【請求項１４８】
前記化合物が以下の構造の化合物である請求項１４７の方法。
【化３５】
2008540428.tif 000068
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［政府支援の説明］
米国政府は本発明の一部の権利を保有する。本発明の開発に関するいくつかの研究は、国立癌研究所認可番号R43 CA89772-01のもとに実施された。
［関連出願への相互参照］
本出願は、2005年5月4日出願の米国仮出願No. 60/678,089の優先権を主張し、同出願の全体を参照として本明細書に引用する。
［技術分野］
本発明は、例えば感染性疾患と腫瘍性疾患の診断および／または処置において、免疫機能を監視し修正する方法に関する。本発明はさらに、感染性病原体および／または炎症に付随する過剰増殖性病変などの病変の処置方法も開示する。
【背景技術】
【０００２】
免疫療法は、生来の健康保持能力を改善するために、被験者の免疫反応を調節することを含む。電磁場と、免疫などの生物機能との間には関係があることが認められてきた。例えば、米国特許No. 4,670,386によれば、強力な抗原性の腫瘍特異性抗原の発現は、腫瘍細胞が高周波電磁放射線に晒されることで誘導され、この高周波電磁放射線は、癌細胞の双極性分子成分における極性の、周期性の急激な交互変化を生み出す。しかし、非常に高周波の放射線の難点の一つは、損害を与える可能性のある、生物組織の不要な加熱を引き起こすことである。
【０００３】
電磁放射線と免疫との関係は、米国特許No. 6,038,478にも示されており、所望の位置に電極を適用し、リンパ球を引きつけるのに十分な電流で組織を刺激することによって、体内の所望の位置にリンパ球を引きつけることができることが開示されている。米国特許公報2002/0072646では、免疫反応を誘導するために低エネルギー交流磁場が用いられた。同様に、WO 02/062418によれば、被験者を磁場、あるいは角度調節された非常に高周波の電磁場に晒すことで、免疫機能が増進されることが開示されている。
【０００４】
The Biomedical Engineering Handbook (CRC Press 1995)のchapter 50にある通り、生体系はしばしば電気的活動を伴う。この活動は、一定のDC電場や、電荷を帯びた粒子または電流の一定の流れである可能性か、あるいは、いくつかの時間依存的または生化学的な現象に付随する、時変電場または時変電流である可能性がある。生体電気現象は、生物学的構造中のイオンまたは荷電分子の分布、ならびに、特定の処理によって生じるこの分布の変化に関連している。
【０００５】
電磁気生体インピーダンス測定は、診断目的のために用いられてきた。例えば、WO 01/076475によれば、交流磁場を用いて、生物組織において電界渦電流が誘導された。標的組織に隣接したコイルに電流を作り出すために、発振回路が用いられた。合成電圧の振幅は組織の伝導性に比例するため、生体インピーダンスの変化は、腫瘍（前立腺腫瘍など）に付随する組織の変化を発見するのに用いられる。組織型を識別するための、別の組織インピーダンス測定装置はWO 01/67098に開示されている。これら両PCT公開特許（WO 01/076475およびWO 01/67098）の開示は、参照として本明細書に引用される。
【０００６】
生物有機体と、その細胞成分に対する電磁場の影響は、以前から評価されてきた。しかしながら、この相互関係を利用することは困難であり、免疫系をより効果的に外部の調節電磁放射線源と共役させる必要がある。
【０００７】
タンパク質ホスファターゼは、少なくとも二つの分離した独立ファミリー（タンパク質セリン／スレオニンホスファターゼ、およびタンパク質チロシンホスファターゼ（PTPs））から成る。ヒトのタンパク質チロシンホスファターゼ（ヒトPTPs）は、全ての真核生物に存在する、巨大な種々のタンパク質ファミリーである。各PTPは、触媒作用に必須であると知られる、システインとアルギニン残基を含む11残基の配列モチーフを特徴とする、少なくとも一つの保存ドメインから成る。PTPの配列は、セリンまたはスレオニン、酸またはアルカリホスファターゼとの類似性を持たない。PTPファミリーにおける構造の多様性は、触媒ドメインのNH2-またはCOOH-末端に結合した非触媒配列の種類に主として起因する。多くのPTPsが細胞内リン代謝およびドメインに関連している。細胞外領域の多様性は、おそらく、PTPsが晒されてリン酸塩転移を触媒するリガンドの種類を反映している。
【０００８】
PTPsは通常二つのサブグループに分類される。第一サブグループは、ただ一つのホスファターゼ触媒保存ドメインを持つ、低分子量の細胞内酵素から構成される。既知の全ての細胞内型PTPsは、ただ一つのホスファターゼ触媒保存ドメインを持つ。PTPsの第一グループの例は、胎盤PTP 1B、T細胞PTP、ラット脳PTP、ニューロンホスファターゼ（STEP）、ならびに、細胞骨格タンパク質との相同領域を有する細胞質ホスファターゼを含む。
【０００９】
PTPsの第二サブグループは、R-PTPsと呼ばれる、高分子量の受容体連結型PTPsから構成される。R-PTPsは通常、細胞内触媒領域、ただ一つの膜貫通領域、および推定上のリガンド結合細胞外ドメインを含む。R-PTPsの細胞内触媒領域が高い相同性を持つのとは対照的に、R-PTPsの推定上のリガンド結合細胞外“受容体”ドメインの構造と大きさは、非常に様々である。全てのR-PTPsは二つの縦列重複したホスファターゼ触媒相同ドメインを持つが、例外として有名なHPTPβと呼ばれるR-PTPは、一つしかホスファターゼ触媒ドメインを持たない（Tsai et al., J. Biol. Chem. 266(16):10534-10543(1991)）。
【００１０】
R-PTPsの一例は、白血球共通抗原（LCA）である（Ralph, S. J., EMBO J. 6:1251-1257(1987)）。LCAは、全ての白血球およびその造血系幹細胞の表面に発現する、高分子量の糖タンパク質ファミリーである。様々な種に由来するLCAの配列において、非常に高い類似性が発見されている（Charbonneau et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:7182-7186(1988)）。LCAは文献中で、T200、B細胞型用B220、マウスアロタイプマーカーLy-5、およびより近年ではCD45（Cobbold et al., Leucocyte Typing III, ed. A. J. McMichael et al., pp. 788-803 (1987)）を含む異なる名前で呼ばれている。CD45はT細胞の活性化において重要な役割を担うと考えられている。これらの研究は、Weiss A., Ann. Rev. Genet. 25:487-510(1991)で述べられている。
【００１１】
R-PTPsのもう一つの例は、白血球共通抗原関連分子（LAR）である（Streuli et al., J. Exp. Med. 168:1523-1530 (1988)）。加えて、公開出願WO 92/01050ではヒトR-PTP-α、R-PTP-β、R-PTP-γ、が開示され、これら三つのR-PTP、およびこのタンパク質ファミリーの他のメンバーの保存ドメイン間で見られる、構造的相同性の性質について報告されている。
【００１２】
細胞外PTPsは、白血球細胞表面認識の表面認識分子および接着分子に関連する。PTPsはヒトの細胞のみに関連するのではなく、原核生物およびウィルス、ならびに細菌にも存在する。病原菌Yersiniaにおいては、腺ペストの病原因子であるYop2bチロシン特異性PTPは、必須の毒性決定因子である。
【００１３】
多くの研究が、生理的過程におけるPTPsの重要性を示してきた。表現型の異常、およびTリンパ球とBリンパ球、顆粒球とマクロファージの過剰増殖性反応は、癌と自己免疫疾患の進行における重要な問題と考えられる。
【発明の開示】
【００１４】
本明細書で開示するものは、化合物、組成物、ならびに、そのような化合物と組成物を、免疫反応の調節、特に促進のために用いる方法であり、これは例えば、癌の処置において役立つ。或る実施形態では、化合物は以下の構造を持ち、
【化３６】
2008540428.tif 000002
ここで、式中でArは、一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0または1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造で、
【化３７】
2008540428.tif 000003
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR4と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成する。
【００１５】
或る実施形態では、化合物は生体分子（糖、アミノ酸、ペプチド、脂肪酸、ヌクレオシド、または核酸など）と共に誘導体化される。或る態様では、そのような誘導体化は、化合物の溶解度を増加させるため、および／または化合物を特定の組織、細胞、または受容体に向かわせるために用いられる。或る実施形態では、上記の一般的な構造式について列挙した、随意に置換されたフェニル基は、そのような生体分子を含む。
【００１６】
或る実施形態では、開示する化合物は、治療反応を促進するのに効果的な共鳴修飾剤である。従って、本明細書で開示するものは、治療（免疫刺激など）の必要のある被験者に対して、治療有効量の共鳴修飾化合物を投与することによって、治療反応（免疫反応など）を促進する方法であり、この共鳴修飾化合物は、共鳴する分子内双極子モーメント（または電子密度）を持ち、生物環境と相互作用することができる。化合物の投与は多くの形式を取ることができ、標的部位への局所使用、皮膚へのペレット挿入、罹病器官への挿入、および吸入を含むが、これらに限定はされない。共鳴修飾化合物は、共鳴修飾化合物周辺の標的部位への、免疫細胞（リンパ球など）の浸潤を一部特徴とする免疫反応を促進する能力を有する。免疫細胞が標的部位に入ると、標的部位の電磁的性質も変化し、これらの電磁的変化は、被験者の免疫反応の適性を測定するために検出することができる（例えば、共鳴修飾剤がもたらす電磁信号によって）。このようにして、例えば、予期される免疫細胞の凝集が見られないことにより、免疫反応の欠陥が素早く発見され、適切な治療行為または予防行為が取られるのである。このような診療行為の一つは、共鳴修飾化合物を、免疫反応を標的部位において局所的にも、また体の至る所で遠隔的にも促進する外部電磁刺激に晒すことである。そのような電磁刺激の例としては、化合物中の電位を越えて流れる電流や、誘導磁場、もしくは化合物に加えられる放射エネルギー（レーザーエネルギーなど）がある。
【００１７】
共鳴修飾化合物の特定の例は、アリール化合物、特に電子求引基で置換されたアリール基を持つアリール化合物を含む。或る実施形態では、共鳴修飾化合物は、上記の一般的な構造を持つ。
【００１８】
或る実施形態では、開示する化合物は、例えば以下に示す化合物などの、上記の構造式（式中のnが0である）の化合物を含み、
【化３８】
2008540428.tif 000004
式中のR7とR8は、独立に、-OR5、-SR5、-SO2N(R5)2、-SO2CN、-SO2R6、-SO2N3、N3、-CN、-N(R5)C(O)R6、-R6であり、
各R5は独立にH、低級アルキル基、糖、脂肪酸、アミノ酸、ペプチド、ヌクレオシド、または核酸であり、R6は低級アルキル基またはC-グリコシドで、Ar、X、およびYは上記の通りである。
【００１９】
別の実施形態では、Xは化学結合をあらわす。Xが化学結合をあらわす構造の例は、以下に示す構造を含む。
【化３９】
2008540428.tif 000005
【００２０】
このような化合物の実施形態の例は、n=0のとき、以下の構造式であらわされ、
【化４０】
2008540428.tif 000006
式中のAr、Y、R7およびR8は上記の通りである。
【００２１】
或る実施形態では、化合物は以下の構造を持ち、
【化４１】
2008540428.tif 000007
式中のGは-CH2-、-C(O)-、-N-、―、-O-、または-S-をあらわし、nは0または1であり、Y'、Q、Y、X、Ar、R7およびR8は上記の通りである。
【００２２】
本明細書で開示する他の化合物は、以下の構造を持つものを含み、
【化４２】
2008540428.tif 000008
式中のR5はH、-OR6、-SR6、-SO2N(R6)2、-SO2CN、-SO2R7、-SO2N3、N3、-CN、-N(R6)C(O)R7、または-R7であり、
R1とR6は独立にHまたは低級アルキル基で、
R2とR7は独立に低級アルキル基で、Arは上記の通りアリール基である。
【００２３】
本明細書で開示する化合物の特定の実施形態は、アリールヒドラゾンを含む。他の例は、ポリアリールモノニトロ‐またはジニトロフェニルヒドラゾンといった、フェニルヒドラゾンなどのアリールニトロヒドラゾンを含み、例えば以下のような構造である。
【化４３】
2008540428.tif 000009
または
【化４４】
2008540428.tif 000010
または
【化４５】
2008540428.tif 000011
ここで、式中のR1は水素、ヒドロキシル基、ヒドロキシフェニル基（2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基など）、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩であり、
R2は非置換の(C6H5)か、または置換されたフェニル基（C6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clなど）であり、
ArはC6H3-2,4(NO2)2、C6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2などのニトロフェニル基であり、
R3は-O-、-S-、-CH2-、-N-、―、-CHA-、および-CHOA-であり、ここでAはアリール基、エステル、アミド基、脂質、糖、またはペプチドであり、
YはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、コハク酸塩、またはアミド基であり、
ZはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、コハク酸塩、またはアミド基である。
【００２４】
特定の実施形態では、これらの化合物は共鳴分子内双極子運動を持ち、生物環境と静電相互作用が可能であると考えられ、また特定の実施例では、R-PTPの細胞外触媒受容体（R-PTP CD45+ PTPサブタイプ上に見られるものなど）と相互作用し、あるいは一般にリンパ球と相互作用する。この相互作用は、リンパ球（Tリンパ球など）を、化合物が適用された標的部位に引きつける。共鳴修飾化合物は、非共有結合に加わることができるが、通常は十分な化学反応性を持たず、局所的な化学反応を起こすことはない。それにもかかわらず化合物は、例えば、リンパ球（例えば、CD45RO+またはCD45RA+リンパ球などの、CD45+ Tリンパ球といったTリンパ球など）をリンパ管網から動員することによって、免疫機能を活性化すると思われる。また、化合物に晒された体の標的部位において、免疫活性を集結させる。共鳴修飾化合物は、標的部位から離れた部位の免疫系も促進させることができる（例えば脾臓において、リンパ管系で見られるような免疫細胞の分散ネットワークとの相互作用によって、免疫系が促進される）。この免疫反応の動員は、感染症または腫瘍の処置に利用できる。
【００２５】
開示する化合物は、体への化合物の使用部位から離れた免疫系活性を活性化することができるため、標的細胞自身において細胞毒性または他の薬理作用（エストロゲンまたは抗エストロゲン活性など）が実質的に欠如している場合、化合物は免疫促進剤として作用することができる。
化合物は標的細胞に作用する免疫反応を活性化しているので、所望の治療効果を間接的に得るために、体の自然防御能が引き出される。従って、薬物は体の表面上（たとえば皮膚上）にとどまることができ、標的細胞（異型細胞、新生細胞、またはウィルス感染細胞など）と接触するために、皮膚を浸透することなく遠隔免疫作用を有することができる。薬物は、錠剤または結晶などの新しい剤形で調剤することもでき、これによって、必ずしも薬物を治療行為の標的である細胞と接触させることなく、免疫的刺激が必要とされる環境と長時間接触することができる。このような他の剤形は、容器（密閉包帯または不浸透性袋（impermeable pouches）など）を含み、これらは皮膚に貼付されて、被験者の体に直接接触することなく、あるいは、皮膚の中にまたは皮膚を通して浸透することなく、遠隔免疫活性特性を発揮する。もしくは、固体（結晶を含む）の形状で、効果を発揮する部位となる皮膚に剤形を導入することによって、遠隔免疫活性特性を発揮する。剤形は錠剤または坐薬も含むことが可能で、これらは血管以外の体腔（膣、肛門または腹膜など）に導入され、病変組織（膣頸部、肛門上皮、または腹膜転移など）と接触する体液に溶解する。
【００２６】
開示する化合物の或る実施形態は細胞傷害性である。典型的な細胞毒性化合物は、特定の組織、細胞または受容体（例えば標的細胞）において、核となるか、あるいは自己集合する。或る態様では、そのような化合物は特定の細胞型に対して選択的に細胞毒性を持つ。或る実施例では、腫瘍細胞で標的とされた自己凝集は、薬物活性の局所的な増加を引き起こすことができる。
【００２７】
特定の実施形態では、化合物は被験者の皮膚に塗布（applying）することによって投与される（例えばゲルで皮膚表面に局所的に塗付するか、あるいはそうでなければ、例えば化合物の結晶またはペレットの皮内留置によって、皮膚に導入すること）。しかし、化合物は体（例えば、罹病器官あるいは、悪性腫瘍または転移病巣などの腫瘍）への導入によっても投与することができ、こうして局所的な免疫反応を促進し、リンパ管系からリンパ球を動員し、標的器官または腫瘍に免疫反応を誘導する。化合物は、気管気管支投与または口腔咽頭投与のために、エアロゾル製剤で投与することもできる。或る実施例では、化合物は転移病巣または上皮性病変（胸壁乳癌病巣または子宮頸部上皮癌など）に局所的に塗付されるか、あるいはその近くに塗付される。化合物は、被験者の上皮または表皮の表面に対して、標的部位で免疫反応を促進するために、病巣に治療的に十分近い部位に塗付される。表層病巣（乳癌の胸壁再発や、子宮頸部上皮または肛門上皮の癌など）の例では、化合物は病巣に直接塗付される。
【００２８】
他の実施形態では、化合物は皮膚病変（原発腫瘍または皮膚転移など）には塗布されず、代わりに、化合物が接触しない、下にある体内の腫瘍の上となる体表面に留置される。それによって、腫瘍と化合物は、化合物が浸透できない外皮構造によって隔てられる。従って化合物は、体内のより深部の新生細胞（リンパ管系内の転移細胞、もしくは、子宮、胸部、肛門、または前立腺などの器官や構造内の腫瘍など）に抗腫瘍作用を及ぼすために、被験者の皮膚に接して（on）または皮膚を覆って（over）適用することができる。
【００２９】
開示する化合物は、体の内部表面または外部表面の病変の処置に利用できる。そのような病変は、生殖器または肛門病変などの肛門性器病変、例えば疣や悪性腫瘍（原発性悪性腫瘍など）を含み得る。特定の開示する実施例では、病変は、女性生殖器官の生殖器疣（子宮頸部疣など）といった、内部損傷である。或る実施形態では、病変は前癌病変である。実際にいくつかの実施例では、病変はHPV-誘導病変などの、パピローマウィルス関連病変である。さらに他の実施例では、病変は足底疣、糸状疣、扁平疣または脂漏性疣などの、非性病性疣である。或る実施形態では、開示する化合物は、前癌病変の処置、ならびに組織の新生組織形成の予防または遅延などによって、予防効果を発揮するために利用できる。化合物は、膣癌と外生殖器癌（原発性の陰茎癌または外陰癌など）を含む、種々の病変に起因する生殖器病変の処置に、特に適している。
【００３０】
特定の実施例では、化合物は体の表面病変に局所的に塗付されるか、あるいは皮膚内に導入される（例えば病変へのペレットの注射または留置によって）。あるいは、薬剤はパッドに入れて病変に適用され、そのパッドは病変上に長時間（一日以上または一週間以上）留置される。
【００３１】
他の実施例では、病変は、感染または炎症に起因する皮膚病変である。病変は、例えばパピローマウィルス誘導疣などの疣といった、ウィルス誘導病変であることもある。あるいは、処置される病変は、細菌（例えばブドウ球菌）またはウィルス（例えばヘルペスウィルス）の皮膚感染、あるいは皮膚新生物（例えば、扁平上皮細胞または基底細胞の上皮性悪性腫瘍、もしくは原発性黒色腫などの、皮膚癌）である。
【００３２】
化合物の免疫促進活性、またはPTP活性化能、または免疫修飾活性は、化合物を電磁場（時変電場、時変磁場、および／または放射電磁場など）、例えば化合物の共鳴修飾の増加を引き起こすような場に晒すことで増進させることができる。例えば、そのような場は、被験者に投与された化合物の付近に磁気プローブを置くことによって、あるいは、二つの電極間で化合物を通って流れる電流を与えることによって、あるいは、化合物にレーザーエネルギーを照射するレーザーによって、誘導することができる。特定の実施形態では、便利なパッチまたはペレットを用いて化合物を皮膚の標的部位に塗布することによって、また、化合物の共鳴修飾を増加させるようなやり方で電磁場を誘導することによって、免疫系の活性が好都合に上方制御される。このようにして、皮膚表面において共鳴修飾剤は、外部印加電磁場と免疫系の間の便利な連結器としてはたらき、これにより、共鳴修飾剤の部位で特に局所的に免疫機能を増加させることができる。しかし、共鳴修飾化合物から離れて全身的に免疫機能を増進させることもできると考えられる。
【００３３】
PTPs（免疫系の構成要素など）と相互作用が可能なことで、化合物は免疫機能の監視にも用いることができる。化合物を標的部位に適用することで（例えばパッチに入れて皮膚に適用する）、免疫系の細胞成分などのPTP発現細胞が動員されることが観察されている。免疫細胞の誘引は、おそらく、樹状細胞および他の初期リンパ球様細胞との静電的相互作用、ならびにそれらの細胞の誘引によって引き起こされる。これらの細胞は共鳴修飾剤の付近で凝集し、凝集する標的部位の電磁特性（生体インピーダンスなど）を変化させる。変化した電磁特性は、例えば、標的部位にわたって検出可能な電位差の振幅の変化として、電極間印加電位差が無い場合でも、検出することができる。特定の実施形態では、電極は化合物と接するように配置され、化合物の共鳴修飾によって固有変動電圧が経時的に作られる。これらの変動電位差の振幅は、免疫機能の監視に利用される。例えば、電極間の電圧振幅が正常対照と比較して減少していれば、免疫機能が低下していることを意味する。
【００３４】
波形振幅（または他の電磁特性）は、化合物に対する被験者の免疫系の反応を決定するために監視されることがある。電圧の振幅の経時的な増加は、免疫反応が起こっていること（ならびに、リンパ球などの免疫効果細胞が標的部位に移動したこと）を意味する。もし振幅の増加が所定閾値（少なくとも10%、25%、または50%の増加見込みなど）を下回る場合は、低下した免疫の原因を判断するか、あるいは修正するために、更なる診断行為または治療行為が行われる。例えば、低下した免疫反応における、感染性、毒性または腫瘍性の原因には、厳しい調査が行われる。あるいは、共鳴修飾化合物を、化合物の共鳴修飾の増加を引き起こすような電磁場に晒すことで、免疫反応を上方制御することができる。他のやり方も、適切な抗感染性または抗腫瘍性の化学療法薬剤を用いて、被験者の処置を開始するものと考えられる。
【００３５】
開示する薬剤は、被験者に薬剤を投与することによって、腫瘍の処置に特に効果的である（例えば、皮膚転移の上または付近の標的部位への局所的な適用による）。その後、外部電磁場が任意に薬剤に印加され、共鳴修飾を増進し、それによって免疫刺激効果が増進される。例えば、外部電磁場は、局所磁場を誘導する磁気プローブ、電極間に印加された誘導外部電流、または共鳴修飾化合物の共鳴修飾を促進するレーザーによって作られる。結果として、抗原提示細胞（樹状細胞など）と免疫効果細胞（T細胞など）の標的部位への動員は増加し、これにより、腫瘍標的への直接的な免疫監視および免疫効果活性が助けられる。薬剤は、例えば子宮頸部、肛門、または膣の上皮性悪性腫瘍（HPVが細胞の悪性形質転換を誘導する、HPV感染に関する上皮性悪性腫瘍など）の処置のために利用できる。
【００３６】
特定の実施形態では、開示する薬剤は、RPTP発現細胞（CD45+Tリンパ球、またはRPTP、またはCD45+発現感染細胞といった、CD45+細胞など）を通して、あるいはRPTP発現細胞に対して、免疫反応を促進させることができる。そのような細胞の例は、ウィルス感染細胞（例えばヒトパピローマウィルス（HPV）などのパピローマウィルス、または免疫不全ウィルス（HIVなど）に感染した細胞など）に反応して作られるリンパ球である。
【００３７】
免疫反応を監視する特定の方法では、化合物は被験者に接触して配置される（例えば被験者の皮膚の上または内部）。方法の或る態様では、化合物は共鳴修飾剤であり、化合物の固有共鳴修飾が、化合物の特有波形をもたらすようになっている。化合物から検出される波形（電位差の交番または他の電磁波など）は、変化した免疫機能に関連する、化合物から生じた波形を検出するために監視される。特定の実施形態では、波形は、化合物中の経時的な電圧変化を検出することで監視される（例えば、経時的に見られる増加見込みよりも、振幅が減少した波形を検出すること）。方法のいくつかの実施形態では、変化した免疫機能に関連する波形が検出されると、波形の検出に応じて診断行為または治療行為が行われる。
【００３８】
例えば、診療行為は、変化した免疫の特有の特徴（減少した数、または機能、またはTリンパ球などの免疫反応に関連する特定の細胞など）、あるいは変化した免疫の原因（免疫機能を変化させる、免疫不全ウィルスの感染、または、腫瘍など新生物の病気の存在など）を検出することを目的とした診断行為である。あるいは、変化した免疫の検出の結果、抗腫瘍治療または抗感染治療（抗生物質または抗ウィルス薬剤など）の投与、および／または、免疫機能の増進のために化合物の共鳴を修飾することといった、治療行為がもたらされる。化合物の共鳴を修飾することは、誘導電磁場を化合物に印加して化合物の共鳴修飾を増進させることを含み、それにより免疫機能が改善される。特定の実施形態では、改善された免疫機能は、Tリンパ球（CD45+Tリンパ球など）の共鳴修飾化合物の適用部位への動員を改善する。
【００３９】
開示する方法は、治療有効量の共鳴修飾化合物に腫瘍を晒し、外部電磁場を化合物に印加することで化合物の共鳴修飾を増加し、その結果、腫瘍を処置するために化合物の抗腫瘍効果を増加させることによって、腫瘍を処置する方法もさらに含む。あるいは、方法は、治療有効量の化合物を投与することで、感染症（ペスト菌感染のような細菌感染、あるいはHPVやHIV感染などのウィルス感染、あるいはPTPが病原体によって発現されるような他の感染症など）の処置にも利用できる。特定の実施例では、治療量は、細胞のPTP細胞外受容体と相互作用して受容体を活性化するのに十分である。どちらの処置の特定の実施例においても、化合物は被験者の皮膚か、もしくは感染または新生組織形成の部位に適用される。化合物は、例えばパピローマウィルス（HPVなど）に感染している、被験者の皮膚、あるいは、泌尿生殖器上皮または肛門性器上皮（肛門上皮、膣上皮、もしくは子宮頸部上皮など）に、局所ゲルとして塗布されることもある。いくつかの実施例では、上皮は異形成上皮または化生上皮である（子宮頸部上皮内新生物、または高悪性度新生物、または扁平上皮内新生物（CIN/HSIL）、肛門上皮内新生物（AIN/HSIL）、あるいは扁平上皮癌）。特定の実施例では、化合物は、治療効果を維持するのに十分な期間（五日以上など）、被験者に局所的に塗布される0.25%ゲルとして適用される。特定の処置方法では、ゲルは毎日塗布され、および／または、有効量は、化合物を0.25%以上含む局所ゲル2グラム以上である。
【００４０】
開示する化合物の非凡な特性により、化合物は、樹状細胞および／またはリンパ球を濃縮する方法においても、in vitroでもin vivoでも利用できる。例えば、リンパ球などのRPTP+細胞（例えばTリンパ球などのCD45+細胞）は、生物組織（または細胞）を有効量の薬剤に晒すことで、生物組織から（または培養下で）濃縮することができる。或る実施例では、その薬剤は被験者の皮膚に適用され、RPTP+細胞（リンパ球など）を薬剤の適用部位およびその周辺に濃縮させる。しかし、RPTP+細胞（リンパ球および／または樹状細胞など）は、薬剤が導入された体の任意の標的部位（胸部、結腸、または前立腺の腫瘍など）に引きつけられる。あるいは、薬剤はRPTP+細胞（リンパ球および／または樹状細胞など）を含む組織培養に導入され、これらの細胞を薬剤に誘引する。このようにして細胞亜種の選択的濃縮が行われる。薬剤はさらに、例えばこれらの細胞表面マーカーの発現を誘導することによって、CD45RO+細胞とCD45RB+細胞の濃縮を増加させるために利用できる。特定の実施形態では、CD45RO+の選択的発現が起こり、これは細胞毒性に関係している。
【００４１】
本明細書でさらに開示するものは、例えば血小板減少症の処置において、例えば血小板産生の促進によって、血小板濃度を促進するための方法である。この方法の或る実施形態は、本明細書で開示する化合物を用いて、血小板数の低下した被験者を処置することを含む。或る実施例では、血小板減少症の被験者は、腫瘍性疾患、自己免疫疾患、または感染性疾患の結果として、血小板濃度が低下している。特定の実施例では、被験者は自己免疫性血小板減少症、または毒性血小板減少症（例えば細胞毒性抗癌薬によって引き起こされた）を患う。
【００４２】
開示する化合物、組成物、およびそれらの使用方法にかかる、前述および他の物質、特徴、ならびに利点は、いくつかの実施形態にかかる次の詳細な記述からより明らかになると思われ、付随する図を参照して進められる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４３】
〔１〕略語
A-007：4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン
AMTR：A-007磁気トランジスタ共振器
An：抗原
APC：抗原提示細胞
BDP-DNP：2,6-ジベンジリデンシクロヘキサノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン
DC：樹状細胞
DNP：ジニトロフェニルヒドラゾン
PTP：タンパク質チロシンホスファターゼ
〔２〕用語
【００４４】
別途記載の無い限り、専門用語は慣例的用法に従って用いられる。分子生物学の共通用語の定義は、Oxford University Press発行のBenjamin Lewin, Genes V, 1994 (ISBN 0-19-854287-9)、Blackwell Science Ltd.発行のKendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, 1994 (ISBN 0-632-02182-9)、VCH Publishers, Inc.発行のRobert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)に記載されている。本開示中で用いられる変数は、特に異なる記述のない限り、既定の変数と同じものとする。
【００４５】
もしこれらの用語のいずれかが、参照によって引用された文書と矛盾する場合は、本書記載の用語の意味として解釈することとする。
【００４６】
本開示の種々の実施形態の概説を容易にするため、次の特定用語の説明を示す。
アルキル基：アルキル基は、分岐または非分岐の、炭素数１から２４の飽和炭化水素基であり、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、t-ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、へプチル基、オクチル基、デシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、エイコシル基、テトラコシル基などである。“低級アルキル基”は、分岐または非分岐の、炭素数１から１０の飽和炭化水素である。
アリール基：アリール基は、任意の炭素基芳香族基をあらわし、フェニル基、ナプチル基、フルオレニル基などを含むが、これに限定されない。“芳香族”という用語は、“ヘテロアリール基”も含む。ヘテロアリール基という用語は、芳香族基の環内に組み込まれたヘテロ原子を一つ以上持つ芳香族基をあらわす。ヘテロ原子の例は、窒素、酸素、硫黄、およびリンを含むが、これに限定はされない。アリール基は、アルキル基、アルキニル基、アルケニル基、アリール基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、エステル基、ケトン基、アルデヒド基、ヒドロキシル基、カルボン酸、またはアルコキシ基を含むがこれらに限定はされない一つ以上の基で置換することができ、あるいは、アリール基は置換されない可能性もある。
【００４７】
同様に、“アラルキル基”という用語は、上記のようにアリール基に結合したアルキル基を持つアリール基をあらわす。アラルキル基の例はベンジル基である。
動物：生体多細胞脊椎動物生物、例えば哺乳類と鳥類を含む類である。哺乳類という用語は、ヒトおよびヒト以外の哺乳類両方を含む。同様に、“被験者”という用語は、ヒトおよび動物の被験者両方を含む。
抗原：動物中の抗体産生あるいはT細胞反応を促進することができる化合物、組成物、または物質であり、動物に注入もしくは吸収される組成物を含む。抗原は、異種免疫原に誘導されるものを含む、特定の液性免疫または細胞性免疫の産物と反応する。“抗原”という用語は、全ての関連抗原エピトープを含む。
癌性：悪性腫瘍または悪性病変をあらわす。例は、陰茎、外陰部、膣、子宮頸部、または外皮の原発性癌を含む。陰茎癌の例は、侵襲性の扁平上皮細胞癌である。膣癌の一例は、扁平上皮細胞癌である。これらの腫瘍のいずれも、本明細書記載の方法で処置できる。
CDマーカー：リンパ球の異なる種類の細胞表面マーカーとしてはたらく、分化集団（CD）マーカー。体系的な命名法が開発されており、CDは、特定のヒト白血球抗原（HLA）への、特定のモノクローナル抗体の結合によって定められる。例えばRoitt et al., Immunology (6th Edition), 2001において、CDマーカーについての更なる情報が開示されている。或るCDマーカーのサブセットは、白血球共通抗原（LCA）であるCD45マーカーである。CD45RA、CD45RBおよびCD45ROは、CD45+細胞のサブセットである限定的なLCAsであり、Roitt, et al., Appendix 2に更に記載されている。
これらのLCAsの或る特徴を次の表に示す。
【表１】
2008540428.tif 000012
走化性：化合物に反応して起こる、生物または単細胞（白血球など）の運動。本明細書で用いるように、走化性は、静電的性質を含む、化合物の任意の物理的性質に反応して起こり得る。
化学療法；化学療法剤：本明細書で用いるように、例えば異常細胞増殖（新生物など）を特徴とする疾病など、疾病の処置に治療有効性を持つ任意の化学薬品。或る実施形態では、化学療法剤は固形腫瘍などの新生物の処置に利用される薬剤である。当業者は、有効な化学療法剤を容易に特定できるだろう（例えば以下を参照。Slapak and Kufe, Principles of Cancer Therapy, Chapter 86 in Harrison's Principles of Internal Medicine, 14th edition、Perry et al., Chemotherapy, Ch. 17 in Abeloff, Clinical Oncology 2nd ed., （コピーライト）2000 Churchill Livingstone, Inc.、Baltzer L, Berkery R (eds): Oncology Pocket Guide to Chemotherapy, 2nd ed. St. Louis, Mosby-Year Book, 1995、Fischer DS, Knobf MF, Durivage HJ (eds): The Cancer Chemotherapy Handbook, 4th ed. St. Louis, Mosby-Year Book, 1993）。
誘導体：誘導体は、元の化合物から誘導された、あるいは理論的に誘導可能な、化合物または化合物の一部をあらわすために用いられる。
樹状細胞（DC）：樹状細胞は、一次免疫応答に関する主要抗原提示細胞（APCs）である。樹状細胞は、形質細胞様樹状細胞と骨髄樹状細胞を含む。その主な機能は、組織において抗原を特定および処理し、リンパ器官へ移動し、T細胞カスケードを活性化するために抗原情報を提示することである。未熟樹状細胞は骨髄に由来し、未熟細胞として周囲に存在する。
DCsは、未熟な抗原捕獲細胞から、成熟した抗原提示T細胞プライミング細胞へと進化することができ、抗原を免疫原に転換し、免疫反応を開始するために、サイトカイン、ケモカイン、副刺激分子、およびプロテアーゼなどの分子を発現することができる。
ヒドラゾン：構造R2C=NNR2を持つ化合物であり、二重結合酸素を=NNR2で置換している点で、ケトンやアルデヒドとは異なる。ヒドラゾンは、一般にヒドラジンをカルボニル基で縮合することで作られる。アリールヒドラゾンは、一つ以上のR基がアリール基（例えばフェニルヒドラゾンならフェニル基）であるヒドラゾンである。ニトロフェニルヒドラゾンは、一つ以上のNO2置換基をフェニル環上に持つフェニルヒドラゾンである。
免疫反応：異質（非自己）の物質に対する生物反応。刺激に対する免疫反応は、Bリンパ球またはTリンパ球などの免疫系の細胞によって行われる。或る実施形態では、反応は特定抗原に特異的である（“抗原特異反応”）。
感染物質：対象を感染させ得る物質であり、ウィルス、細菌、および菌類を含むが、これに限定されない。
固有電磁波形：化合物の特性として作られる波形であり、活発誘導された電磁現象（電流、電位、または磁場の意図的な印加など）とは独立している。波形の例は、経時的な交流電圧によって作られる波形、例えば正電位と負電位の間で交流する波形であり、大抵予測可能な形である（例えば正弦波で定められる）。波形は種々の電磁監視装置（化合物と接する二電極間の電位を測定する電圧計など）によって監視できる。
診療行為：診療行為とは、被験者の生理学的状態または医学的状態を発見するか、あるいはその状態に作用するためにとられる行動のことである。診断行為は、例えば臨床試験（血液検査、バイオプシー、画像検査、または身体検査など）によって被験者の状態を検出する。治療行為は、例えば外科手術、薬剤の投与または他の処置、あるいは他の治療手段の実施によって、被験者の状態に影響を及ぼす。
単離した：“単離した”生物学的要素（樹状細胞やリンパ球、またはそれらの細胞の集団など）は、その要素が自然発生する生物の細胞内において、実質的に他の生物学的要素から分離された、あるいは精製されたものである。
免疫不全の臨床検査値：低下した免疫の証拠として、一般に医学的に認められる客観的な検査値であり、特定の研究室の承認基準を下回る白血球数、低下したリンパ球（Tリンパ球など）濃度、または免疫系の任意の細胞の全身活性障害の証拠などである。特定の実施例では、検査値は細胞性免疫または液性免疫の不全、あるいはその両方を示す。
化学反応性欠如：或る共鳴修飾化合物は静電的に活性化しているが、その共鳴安定化のために、生理条件下（体内）においては実質的に非反応性である。そのような化学反応性の欠如の結果、化合物は全身投与（口腔投与または静脈内投与など）の後、実質的に全く変化していない状態で分泌される。この反応性の欠如の例は、例えば体内でA-007のN-メチル化が見られないことによって確かめられる。
白血球：感染性微生物と外来物質に対する体の防御に関連する、“white cells”とも呼ばれる血液中の細胞。白血球は骨髄で作られる。白血球には五つの主要型があり、二つの主要グループに更に細かく分けられる（多形核白血球（好中球、好酸球、好塩基球）および単核白血球（単球およびリンパ球））。感染が見られると、白血球の産生は増加する。
新生物：良性および悪性腫瘍、さらに他の増殖異常を含む、異常細胞増殖。
任意の、または任意に：これらの用語は、後述の事象または状況が起こり得るが、起こらなくてもよいことを意味し、また、前述の事象または状況が起こる場合と、起こらない場合とが含まれた記述であることを意味する。
パピローマウィルス：パピローマウィルスは、正２０面体対称のカプソメアと、約8,000 bpの二本鎖環状DNAゲノムを持つ、小さな非エンベロープウィルスである。全パピローマウィルスは、類似した遺伝子構成を有する。ウィルスゲノムは、ウィルスDNAの複製と細胞形質転換に必要な遺伝子をコードする初期領域と、カプシドタンパク質をコードする後期領域、ならびに、複製開始起点と、多くの転写調節因子と複製調節因子を含む調節領域とに分けられる。
パピローマウィルスは高い種特異性を持つ。ヒトパピローマウィルス（HPV）が、他の種へ自然伝播する例は知られていない。パピローマウィルスは著しい向細胞性も示し、皮膚または粘膜の表面扁平上皮のみに感染し、大部分は良性上皮腫瘍を形成する。特定のウィルス型は、皮膚型または粘膜型のどちらにも嗜好性を有すると思われる。例えば、HPV-11は他の身体部位から皮膚上皮には容易に感染しないが、生殖管または気道のいずれの粘膜上皮も感染させることができる。しかし、パピローマウィルスは浸潤癌の進行につながり得る、細胞増殖と形質転換を誘導する。HPV感染は子宮頸癌と肛門癌の進行に関連している。
生殖器疣は通常HPVに由来する。パピローマウィルスは皮膚と粘膜上に小さな腫瘍（疣）を形成する。生殖器と肛門部位のHPV感染は、陰茎、外陰部、尿道、膣、子宮頸部、および肛門周辺（肛門周囲）上に疣（肛門性器の湿疣）を形成する。50以上の異なるHPVの型が分類されている。6および11を含むいくつかの型は、隆起して面の粗い、容易に見える生殖器疣（特に女性の）に関連している。他の型は、扁平疣に関連する。より重要なことは、いくつかの型は、子宮頸部の前癌変化と悪性変化（異常子宮癌検査）に関連するということである。これらは型16、18、31、39、45、51および52を含む。研究によれば、HPVとヘルペスウィルス両方の存在は、子宮頸癌の進行の良い予測判断材料となることも示されている。
外生殖器上の病変は容易に確認される。陰茎上では、女性生殖器上や両性の肛門周辺に比べ、生殖器疣はより乾燥しやすく貧弱になりやすい。生殖器疣は湿った生殖器部で最も成長し、隆起して面の粗い、肌色の“いぼ状”に見える腫瘍となり、一つずつ、または塊となって形成される。処置されないままでいると、肛門と外陰部周辺の疣は急速に肥大化し、カリフラワー状の外見をとる。女性では、HPVは膣と子宮頸部に侵入する。これらの疣は扁平で、特別な手段なしには容易に見ることができない。HPVは子宮頸部の前癌変化（子宮頸部異形成）を引き起こし得るため、この症状を診断し処置することが重要である。定期子宮癌検査はHPVの発見に重要である。
パピローマウィルス関連部位：病変に関連したHPVの同定など、パピローマウィルス感染の証拠が見られる部位。
薬剤物質または薬剤：被験者に適切に投与されたときに、所望の治療効果または予防効果を引き起こすことができる化合物もしくは組成物。薬剤物質は、化学療法薬剤と抗感染薬剤を含むが、これに限定されない。
薬学的に許容される担体：本発明で有用な薬学的に許容される担体は従来のものである。Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th Edition (1995)に、本明細書で開示する化合物の薬学的な配送に適した配合と処方設計が述べられている。
一般に、担体の性質は用いられる特定の投与様式に依存する。例えば、非経口製剤は通常、薬学的且つ生理学的に許容される流体（水、生理食塩水、平衡塩類溶液、含水デキストロース、グリセロールなどを賦形剤とする）を含む、注射可能な流体から成る。固体組成（例えば粉末、ピル、錠剤、またはカプセル）として、従来の非毒性固形担体は、例えば医薬品等級のマンニトール、ラクトース、でんぷん、またはステアリン酸マグネシウムを含む可能性がある。生物学的に中性の担体に加えて、投与される薬学的組成物は、湿潤剤または乳化剤、保存料、およびpH緩衝剤などの、少量の非毒性補助剤（例えば酢酸ナトリウムやソルビタンモノラウレート）を含む可能性がある。
精製された：“精製された”という用語は、完全な純度を必要とするわけではなく、むしろ相対語として意図されたものである。従って、例えばリンパ球の精製品とは、その中でリンパ球が体内の自然環境よりも高い濃度で存在するもののことである。
共鳴修飾剤：共鳴分子内双極子運動（もしくは電荷密度）を有し、それによって生物環境と静電的に相互作用が可能な化合物。共鳴修飾剤は、化合物の分子内共鳴によって作られた、発振周波数波の放出によっても特徴づけられる。この共鳴は、免疫の上方制御および／または促進のために、免疫系の細胞（樹状細胞など）との相互作用のための電気的性質を伝えると考えられる。共鳴修飾剤は、免疫細胞を引きつけ、共鳴修飾剤付近の末梢免疫系の標的部位に凝集させることができる。また、いくつかの事例では、循環する免疫細胞（リンパ節または脾臓といった、末梢血およびリンパ系組織の免疫細胞など）に遠隔作用を及ぼす。多くの共鳴修飾剤は結晶構造を持つ。共鳴修飾剤候補の選択のためのアッセイの例は、実施例１４に開示する。
シグマ波：結晶および組織培養から記録されたシグマ波は、心臓および他の体内生物リズムから作られる電気エネルギーの基線以上の波である。従ってシグマ波は、A-007への暴露後、経時的な電圧変化と振幅増加を測定する。
免疫刺激が必要とされる被験者：免疫系の、全般的な刺激または特定の刺激によって利益を得るような症状を持つ被験者。例には、免疫不全の被験者（HIV感染者、あるいは、最近化学療法薬または他の免疫抑制薬を受けた者）、ならびに、免疫反応の促進によって改善され得る症状を持つ者（リンパ腫など、免疫機能を変える病原体または腫瘍に感染した被験者など）が含まれる。或る実施例では、被験者は、例えば感染症または免疫不全のためなど、腫瘍以外の症状のために免疫刺激を必要とする（例えば感染性の、あるいは薬剤由来の免疫不全）。他の実施例では、免疫刺激を必要とする被験者は、低下した免疫機能の臨床検査値を持つ被験者である。
治療有効量：疾病の進行の抑制もしくは予防、または疾病の退行をもたらすのに十分な投与量、あるいは、痛みや腫れなどの、疾病由来の症状を軽減することができる投与量。
血小板減少症：減少した血小板（thrombocyte）数を表す用語。正常血小板値は当業者に知られており、その値は自動化手段で容易に決定できる。正常値は、使用した検出手段次第で実験室によって異なる。しかし、血小板減少症は、血液凝固の低下と病的出血（例えば歯茎、鼻、または内臓からの出血）につながる。
修正された免疫機能に関連する波形：増進した、または低下した免疫機能を持つ被験者に存在するとみとめられる波形。例えば、共鳴修飾化合物を被験者に適用後、経時的に増加する電位差振幅波形など。振幅の増加は、正常な免疫機能の結果であり、免疫細胞（リンパ球など）の動員と、化合物の適用部位への移行を示すものである。しかし、振幅の増加が、健康なときに実施された基線測定において同一被験者で見られるものを下回る場合、あるいは、被験者集団における統計的正常範囲を下回る場合は、修正された（低下した）免疫機能に関連するものとみなすことができる。反対に、正常（特定個人または集団毎に定められる）を超える振幅の増加は、正常以上の免疫機能を示す。
他に記載の無い限り、本明細書で用いる全ての技術用語と科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。単数形の語“a”、“an”、および“the”は、文脈に明確な他の表示が無い限り、複数形の言及も含む。同様に、文脈に明確な他の表示が無い限り、語“or”（もしくは、または、など）は“and”（および、ならびに、など）を含むものとする。語“含む（comprises）”は、“包含する（includes）”を意味する。加えて、材料、方法、および実施例は、単に実例のためのものであり、限定的なものではない。
【００４８】
〔３〕いくつかの実施形態の解説
本明細書で開示する特定の方法は、感染性の、新生物および／または炎症の病気を処置するための、ヒドラゾン化合物の使用に関する。例示的な方法は、感染性の、新生物または炎症病変（例えば疣）などの、体表面病変に便利で効果的な処置を含む。
【００４９】
理論に拘束されること無く、或る化合物は共鳴修飾剤としてはたらき、またPTPs活性剤としてはたらく。或る実施例では、化合物は、免疫賦活剤としてはたらくか、および／または、免疫系と、外部監視装置または変調器との間のカップリング剤としてはたらく。化合物はPTPsと相互作用すると考えられ、例えば、免疫細胞の成熟促進のために、免疫系の細胞成分（CD45+受容体リンパ球または樹状細胞など）と相互作用することや、免疫の他の細胞成分を免疫反応に動員することなどが考えられる。化合物は免疫細胞を変調器の付近に引き付けることができるため、局所症状の処置のために免疫反応が必要とされる体内の標的部位（腫瘍など）に、免疫反応を方向付けることができる。しかし、或る実施形態では、化合物は遠隔部位（遠隔リンパ組織または転移病巣など）でも免疫反応を引き出すことができる。従って化合物は免疫系との新たな接点を提供し、免疫状態についての情報を集め、診療行為（免疫機能の操作を含む）を行うことができる。
【００５０】
共鳴構造は化合物の合成電子構造をあらわし、そこで電子密度が非局在化されている。複数の代替的な公式構造は、共鳴構造と呼ばれ、分子はこれらの構造の共鳴混成として記述され得る。本明細書で開示する共役芳香族化合物は、一般に、非局在化した電子密度を持つ複数の代替的な公式構造を含む。
【００５１】
本明細書で開示する共鳴修飾剤の特定例は、2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007と呼ばれる）で、ここで化合物は
【化４６】
2008540428.tif 000013
であり、式中のR1はOHで、R2はC6H4OHで、XはC6H3-2,4(NO2)2である。共鳴修飾化合物の多くの他の例も本明細書で開示し、その中のいくつかは添付の図１２、１６、および１７に示した。これらは、ホルミルおよびアセチルバルビツル酸フェニルヒドラゾンの類似体を含む。他の例は、2,6-ジベンジリデンシクロヘキサノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンで、
【化４７】
2008540428.tif 000014
式中のXはニトロフェニル（C6H3-2,4(NO2)2）で、R1はHで、R2は非置換のフェニル基で、R3はCH2である。
【００５２】
本明細書で開示する共鳴修飾化合物は、4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007）を含み、これらは一般に細胞膜受容体に親和性を持つため、検出剤および免疫調節剤としてはたらくのに特に適している。RPTP+細胞膜受容体に対するこの親和性の一例は、A-007とCD45+ Tリンパ球表面受容体との間の相互作用であり、図１に示してある。これらの相互作用は、相互作用する細胞の成熟を誘導し、免疫反応を促進すると考えられる。
【実施例】
【００５３】
［実施例１］フェニルヒドラゾンとの共鳴修飾
この実施例では、修飾特性と検出特性両方を持つ、特に適した共役芳香族化合物を開示する。そのような或る化合物は、ポリアリールモノニトロ‐またはジニトロフェニルヒドラゾンを含み、例えば
【化４８】
2008540428.tif 000015
などであり、式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチル硫酸塩、リン酸塩、ニトロソ基、琥珀酸塩、もしくは、水素結合が可能な他の水溶性求電子基であり、R2はC6H5、C6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、ArはC6H3-2,4(NO2)2、C6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2である。
【００５４】
図３に示したとおり、これらの化学構造は、共役電子の多い／少ない場所における複数の双極子構造間で共鳴することができ、それによって分子間水素結合の移動が可能になるだけでなく、ある瞬間において化合物が存在できるように、相補的部位との求核／求電子的な誘引が可能になる。図１に示したように、これらの共鳴小型双極子は、例えばアミノ酸（システイン、スレオニン、アルギニンなど）、糖（ムコ多糖）、および糖タンパク質などに存在する-SH、-COOH、-NH2-CH-NH3+を引き付けることができ、これらの全ては免疫系の細胞調節因子の必須成分である。例えば、リンパ球上のCD45+RA受容体表面における3または4アミノ酸との単純相互作用は、修正された表面タンパク質（RO、RB）の発現を誘導すると考えられ、このタンパク質は、組織、器官および循環へのCD4+/CD8+の流入と共にT細胞カスケードを開始することができる。水素結合と誘引が電気刺激を介して調節される間の“ある瞬間（moment in time）”においては、これらの構造と本来共に存在する一時的な静電相互作用は増加し、NMR分光法で定量化することができる。
【００５５】
複数の共鳴構造が可能な複数の負電荷部分の存在は、共役結合およびアリール結合を介して置かれ、発振周波数波を作り出す。本明細書記載の或る共鳴修飾剤（A-007など）は十分な“電子計数”を持ち、静電相互作用に過度の電子を有する。その余剰によって、タンパク質および他の生体分子に存在する求電子／求核中心の誘引が可能になり、これらは構造安定化のために（電子の移動および共有結合形成を介して）反応する必要が無い。その代わり、環境との単純な“戯れ（flirtations）”は、共鳴修飾剤の構造を変えることなく、他の多分子構造（CD45+受容体など）における変化を誘導すると考えられる。
【００５６】
上記の構造を持つ共鳴修飾剤の開示された特定の実施形態では、式中のR1はOHで、R2はC6H4OHで、XはC6H3-2,4(NO2)2である（A-007）。この化合物は強い負の電荷を有する。さらに、図３に示した通り、本明細書で開示する追加の化合物のように、A-007はいくつかの共鳴構造であらわすことができる。ヒドラゾンによって作られた典型的な発振周波数波は、樹状細胞および他の初期リンパ球様細胞成分と静電相互作用し、免疫を促進する。この相互作用は、選択される可能性のある、診断に用いるリンパ球成分の流入に付随する、皮膚内の量子分子変化を定式化するために、一つ以上のディラック方程式に組み込むことができる。
【００５７】
開示する化合物の或る共鳴構造の安定化は、結合の際に起こると考えられ、その結果、共鳴修飾剤がリンパ球と相互作用した試験部位からの、周波数と電気的発散の変化が起こる。この相互作用は、一般的には静電相互作用などの非共有結合性の相互作用である。共鳴周期はこの相互作用によって阻害され、そしてそのような干渉は監視されており（例えば経時的な電圧の波形変化の検出によって）、活性の指標として用いられる。波形パターンの種類は、発達する細胞免疫反応（樹状細胞とリンパ球の浸潤など）の存在を示す。期待される波形の欠如、または他の検出された干渉パターンは、更なる調査および／または処置を必要とする異常免疫反応の発見にも役立つ。従って、共鳴修飾剤は免疫活性と外部監視装置の間のカップリング剤としてはたらく。
【００５８】
共鳴修飾剤は、細胞免疫活性を検出できるだけでなく、この活性を変化させるのに利用可能な外部の物理的変調器にも免疫系を結合させる。例えば、磁気共振器プローブが皮膚表面に磁場を印加するために用いられ、例えばプローブを皮膚表面または皮膚表面付近に適用することによって用いられる。磁気プローブは共鳴修飾剤を活性化し、共鳴エネルギーの流出を刺激し、組織T細胞接触を促進する。従って、もし或る個人が、刺激されていないT細胞‐共鳴修飾剤相互作用を介して免疫調節を誘導できない場合は、外部のプログラム化した磁場によって提供される更なる極性形成が、免疫反応に追加刺激を提供することができる。このような外部磁場を共鳴修飾剤であるA-007と共に用いることは、AMTR（A-007磁気トランジスタ共振器）と呼ばれる。
【００５９】
従って開示する方法のいくつかは、免疫形状の量子化学修飾剤／検出剤／伝達剤として機能することができる、ヒドラゾン類などの種々の共鳴修飾剤の使用に関する。従ってこれらの薬剤は、生体ネットワークを介してリンパ管回路と結合した上皮表面（皮膚など）における変化を、記録ならびに処置するのに役立つ。皮膚でのリンパ球および前駆細胞の末梢調節は、全身性のリンパ球の初期警告ネットワークであり、ならびに、生物系が外来変化と外来異物（ウィルス、細菌、化学物質、癌細胞など）を発見する自然機構である。癌および外来の化学／生物学的物質による進入は、健康を守るために監視／変更を必要とするような、電気的且つ突発的な行動変化を引き起こす可能性がある。従ってこの末梢調節の状態を監視する能力は、重要な新しい医学的診断手段と治療手段をもたらす。
【００６０】
［実施例２］4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007）の抗腫瘍性特性と免疫調節特性
この実施例は、4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンを含む開示する化合物が、抗癌試験（IND 47,470）において顕著な抗癌活性を持つことを示す。特に、局所A-007（0.25%ゲルとして）で処置された53人において、10の完全寛解と共に37%の客観的寛解が観察された。
【表２】
2008540428.tif 000016
【００６１】
開示される或る化合物は、細胞毒性機構を介して作用することはない。このことは、例えばA-007由来の局所または全身毒性が実質的に見られないことから証明される。A-007で局所処置されたヒトの皮膚バイオプシーからの組織化学的分析により、種々のT-リンパ球（CD4+、CD3+、CD8+およびCD45+）の浸潤物が処置の間に増加することが確かめられた。CD11c+樹状細胞の皮膚浸潤物の増加も、処置部位で観察された。これまで免疫組織化学的（IHC）研究により、A-007への暴露を受けて、免疫調節がin vitroおよびin vivoで起こることがわかっている。従って、本明細書で開示する化合物は、しばしば付随的な臨床害の原因となる広範性細胞毒性を伴わずに、治療効果を有することができる。
【００６２】
X線結晶学の資料によれば、A-007（単斜晶）は本来二つの固有分子として存在し、これらはビス‐ジフェニルメタン基内の配向性のみが異なることが明らかにされている。ここで環は、付属の図に示すように、大体お互いに垂直である（さらに、各回転異性体において環の幾何学的配置からおおよそ90°回転している）。両回転異性体は、-HN-N=C-部分の-NHとo-ニトロ基の酸素間で強い分子内水素結合を示す。従ってA-007には、その総体的な生物活性に寄与すると思われる、少なくとも三つの固有部分、ジヒドロキシ‐ジフェニルメタン、ヒドラゾン、およびジニトロフェニル部分が存在する。しかし、A-007は高い求電子性を有するにもかかわらず、ヒトの体内の生理学的条件下では、実質的に化学反応性に欠ける。例えば、ヒドラゾン基のNHは、通常in vivoでメチル化またはアシル化されると予想される。しかし、A-007がヒトの被験者に適用された際には、そのような変化は実質的に見られない。実際には、薬剤は実質的に変化せずに排出される。さらに、A-007は体液に非常に非常に溶けにくく、広く血液中に吸収されない。局所A-007で処置された被験者のいずれからも、血液中のA-007は検出されなかった。A-007の血漿分析が、その安定性を立証している。
【化４９】
2008540428.tif 000017
【００６３】
［実施例３］免疫系への効果
リンパ管系は、網状結合組織の分化した形でリンパ組織を含む、他の構造と器官と通じているリンパ管を含む。リンパ管は毛細リンパ管を含み、これはより大きなリンパ管（lymphatics）に結合している。このリンパ管は、静脈に構造が似ているが、より薄い壁とより多くの弁を持つ。リンパ節は体中に分布し、顔と頸部、液窩部、胸腔、腸、鼠径部、肘と膝において最も濃度が高い。皮膚の浅いリンパ管は一般に静脈に続き、一方、より深いリンパ管は一般に動脈に続いている。これらのリンパ管は、体中のリンパ液をネットワーク化するはたらきをするが、これらは免疫系の重要な分散型の側面でもあり、微生物や癌細胞などの外来細胞に対する監視と防御の機能を持つ。
【００６４】
リンパ管系は数多くのリンパ球型を含む。これらのリンパ球のいくつかは、細胞毒性物質を放出することで直接または間接的に外来細胞を破壊する、T-細胞である。他のリンパ球はB-細胞であり、これは抗原を除去するのを助けるために、抗原に対する抗体を分泌する形質細胞に分化する。リンパ節はリンパ液によって運ばれた外来物質をろ過し、分離された外来物質が、その後食作用によって破壊されるようになっている。脾臓、胸腺および扁桃腺は他のリンパ器官であり、B-細胞、T-細胞、ならびに他のリンパ球を作る。
【００６５】
腫瘍細胞が真皮と表皮に存在するとき、リンパ系からの樹状細胞が腫瘍細胞と相互作用し、さらにリンパ管から他の免疫効果細胞（T-リンパ球など）を動員する。
【００６６】
CD45+表面受容体はリンパ内皮細胞に存在し、特に樹状細胞に存在する。樹状細胞（DC）は、免疫反応の開始にかかわる抗原提示細胞（APCs）である。免疫系の前哨としてはたらくDCsは、抗原（An）の捕捉と、その後のT-リンパ球豊富部位への輸送に関与している。DCsは、リンパ器官だけでなく、末梢皮膚組織などのリンパ組織にも存在する。未熟DCsが抗原と相互作用して活性化されると、成熟APCsは特定の免疫反応が可能になる。皮膚などの二次リンパ器官は、未感作T-リンパ球とAn-活性化DCs（APC）の両方を、T-細胞の豊富なリンパ域／ネットワーク（節など）に動員する。これらの初期免疫反応の共局在化は、認知的T-細胞活性化を構成するものである。
【００６７】
癌および適用化学物質の両方は、リンパ球集団の集合的な分散情報と共に、健康な皮膚において突発的な反応を生み出し得る。効果的な認識応答は、DC（APCs）とリンパ球サイトカインエフェクターの両方を必要とする。化学物質と腫瘍細胞は、しばしば微小組織化学的（MHC）抗原の発現が制限され、共促進分子を持たないため、APCsの効果的な調節因子とはならない。癌および同類の疾病の進行と発達の一つの機構は、MHC抗原特性の欠如であり、そうでなければリンパ管網において突発的な反応が生み出される。同様に、生命を脅かすような化学物質および／または生物接触も、突発的なリンパの反応形式を誘導し得る。本明細書で開示する薬剤は、A-007を含み、ハプテン／Anとしてはたらくために、および／または、新生リンパ球ネットワークの調整または上方制御のために電磁場効果（EFE）を通して、十分に電荷を負った有機分子である。開示する化合物は、本明細書で共鳴修飾剤と称する、新しい種類の再生分子を含む。CD45+受容体の上方制御は、癌患者において観察されるA-007誘導免疫調節のための、一つの開始部位であると考えられる。
【００６８】
CD45+は、樹状細胞、リンパ球、単球、および白血球、さらにいくつかの新生細胞上に、タンパク質チロシンホスファターゼ（PTP）として発現し、PTPsの他のメンバーと共に、チロシン残基のリン酸化に関与する。抗CD45抗体とのCD45+受容体部位の封鎖は、T-細胞活性化を抑制し、未感作T-細胞の分裂促進因子（レクチン）活性化を妨げる。CD45+受容体表面は、天然リガンドに結合し、および／またはAPCsの表面に天然リガンドを運ぶことができ、さらにチロシルホスファターゼを加水分解することもできる、アルギニン、セリン／スレオニン、およびシステイン部位を含む。例えばA-007を含む、開示する化合物のいくつかは、CD45+を抑制または阻害しないが、CD45+リンパ球と樹状細胞（APCsに対して）を、Arg、Cys、Ser／Threoなどとの静電気結合／非共有結合を介して上方制御する（図１に示すとおり）。A-007の別の共鳴状態は、別の免疫細胞と相互作用が可能である。
【００６９】
A-007活性化DCsは、未感作ヒト血中末梢単核球（PBMC）と共に分裂イベントを開始し、ヒト末梢樹状細胞内のCD45+受容体およびCD11c+受容体の両方を上方制御することができる。癌組織の樹状細胞は、皮膚病変の局所処置の間、局所A-007への暴露に引き続き、CD45RA+からCD45RO+／CD45RB+に上方制御される。従って、A-007はCD45+の抑制因子ではなく、分子部位の上方制御因子または修飾因子である。これらの特性によって、A-007の結晶または埋め込み皮膚ペレットが、局所、ならびにより遠隔の免疫細胞集団（脾臓樹状細胞集団など）の両方を増加させ、さらにCD8+細胞毒性リンパ球（CTL）などの免疫効果細胞の濃度を増加させることができる。官能基の置換が、A-007の分子内／分子間水素結合と静電相互作用に与え得る影響について、下記に示す。
【００７０】
この証拠は、A-007が皮膚と他の上皮表面において、樹状細胞と末梢に相互作用することで、抗原提示細胞（APC）の成熟を誘導することができることを示す。加えて、一つ以上の細胞表面受容体（CD45+）がA-007によって上方制御されると思われる。この初期相互作用は、抗原提示細胞などの、樹状前駆体および他のリンパ球前駆体を介すると考えられる。この化学相互作用を通して、APCsと他の初期認識細胞を、リンパ球認識カスケード（CD4+、CD8+など）、および関連サイトカインの成熟と共に、感知し修飾することができる。
【００７１】
免疫修飾剤として適する所以である、A-007の特殊な性質のいくつかは、電流が導入された二つの電線間でスライドガラス上に蒸着された際に、その結晶が特殊なパターンで整列することができることによって示される。この結晶配置は、空気中でA-007のアルコール（5%）溶液を、9ボルトバッテリーのプラスとマイナスのリード線にそれぞれ接続した二つの線の間で、スライドガラス上に蒸着させることによって得られた。A-007は、場全体に拡散した“点”としてではなく、陽極で円周形に凝結する。アルコール溶液の蒸着が磁場で起こる際は、堅く凝集した結晶の単線がスライドの中央にできる。従って、A-007は誘導電磁場と相互作用する電磁特性を有する。この特徴は、他の共鳴修飾剤のふるい分け試験としても利用できる。
【００７２】
A-007のこれらの特殊な電磁特性は、この化合物の伝導性によってさらに説明される。これは、解剖顕微鏡の倍率を用いて二つの微小電極を取り付けたA-007結晶から測定した。電極は結晶表面上で約1.5-2 mm離され、接点からエネルギーを測定した。生じた周波数（Hz）を記録するのにFluke ScopeMeterを用いた。外部印加電流は伴わなかった。従って、測定された周波数は、結晶の天然の物理的特性をあらわす。基準周波数からのこれらの偏位は、環境から蓄積し、断続的に放出されたエネルギーの並進運動型であると考えられる。基準周波数は、環境電磁放射線に由来すると思われる。30-40 Hz以上の基準周波数からの偏位は、約60 Hzの基準周波数からの断続的偏位（周波数の頂点で示される）による、結晶の共鳴によって作られる。エネルギーの固有周波数（例えば基準から20 Hz以上の周波数において、例えば30-40Hzの間まで）、および／または、五分毎に一回以上の周波数（例えば三分毎に一回以上）を発振するこの能力は、共鳴修飾剤の特徴の別の例であり、これにより、共鳴修飾剤が更なる試験のために選別され、選択される可能性ができる。
【００７３】
化学物質の結晶または加圧ペレットが、未感作ヒトリンパ球（末梢血から得られた）と共に組織培養溶媒に浸されると、リンパ球と樹状細胞は、結晶またはペレットの周りに凝集する。A-007の結晶（0.5 mg）は、5%ウシ血清アルブミン、抗生物質保存料ペニシリン／ストレプトマイシン、ならびに健康なヒトの血液の軟膜から得られた未感作リンパ球を含むRPMI溶媒内に置かれた。A-007の結晶と接触後、凝集および増加した有糸分裂活性が見られただけでなく、A-007共鳴修飾物質の部位への、活性化した樹状細胞の定着も見られた。
【００７４】
培養中の未感作リンパ球を、試験薬剤周辺へ凝集させることができるという薬剤の能力は、薬剤が、本明細書で開示する方法における使用に適した共鳴修飾剤であるかどうかを決定する上で、考慮されるべきもう一つの要素である。一時間以内に凝集を誘導する能力は、化合物が更なる研究に適していることを特に強く示唆する。“凝集”は、顕微鏡によって見ることのできる増加など、リンパ球の数の実質的な増加をあらわす。
【００７５】
共鳴修飾剤の他の特殊な電磁特性は、電磁波（電流など）の振幅の増加が、成熟した、結晶の周囲で凝集したリンパ球として測定できるということである。
【００７６】
これらの波形を得るために、図４に示すように、A-007を無菌ガラス顕微鏡スライド上に凝結した。乾燥したスライドを、RPMI（5%ウシアルブミン）を含むペトリ皿に浸し、一対の無菌微小電極を溶媒内に挿入し（約5 cm離して）、さらにA-007の線の反対の端につないで配置し、電圧を記録した。A-007は溶媒には溶けず、継続してスライド上に残る。誘導電流は存在しないため、測定された電流が共鳴修飾化合物の固有特性となった。
【００７７】
A-007への暴露の一時間後、リンパ球がA-007結晶に移動し付着したため、測定電圧の振幅に経時的な増加が見られた。結晶は溶けないので、継続的な相互作用のために利用し続けることができる。In vitroでは、細胞永久化に必要なサイトカインの欠如のために、リンパ球は最終的には約24時間後に死滅する。
【００７８】
従って、共鳴修飾剤の選択に利用可能な他の特徴は、化合物が未感作リンパ球を含む培養に置かれたときに、共鳴修飾剤によって作られる、固有電流における交流電圧の振幅を増加させる能力である。
【００７９】
［実施例４］免疫機能の監視
その並外れた特性の結果として、本明細書記載の化合物（共鳴修飾剤を含む）は、免疫系に関連する電気的活動を監視するのにも利用できる。例示的な化合物は、免疫特性を測定し制御する分析装置として利用でき、その特性はT-リンパ球と周波数応答との間に直線関係を持つ。50 HzのA-007結晶の質量感度がおおよそ0.057 Hzcm2ng-1であり、これは0.1 μgの感度をもつ電子微粒子天秤の感度より約50倍高いという事実のために、微量天秤が存在する。結晶は細胞成分の電磁特性を測定するために利用できる。特定の実施形態では、少なくとも約0.01、0.03、または0.05 Hzcm2ng-1の質量感度を持つ結晶が選ばれる。結晶は石英微結晶と組み合わされ、電気的相互作用（圧電共振子効果）を増幅し、伝送を改善することができる。特定の実施例では、石英微結晶は組成物の総重量の10-50%の量で用意される。
【００８０】
従って結晶は、RPTP+細胞（リンパ球など）の集団と、皮膚組織の対応する電気回路との間の相互作用を容易に変換することができ、これによって、ヒドラゾンおよび他の共鳴修飾剤の存在下における振幅の完全な描写が可能になる。基本的に、共鳴修飾剤は、双極子運動、ならびに細胞成分（組織および末梢免疫系の細胞など）との静電相互作用の共振子としてはたらく。共鳴修飾剤はこれらの相互作用を診断目的のために監視し、治療行為のために修正することができる。
【００８１】
共鳴修飾化合物を免疫機能の監視のために利用できるということは、毒物や外来抗原などの生物損傷を認知する、被験者の修正された能力の早期診断を可能にする。例えば、外来化学物質または生物因子に晒された被験者が、暴露を認知せず、その結果適切に反応しない可能性がある。しかし、もし共鳴修飾剤が免疫系の機能の変化を発見すれば、この修正された免疫状態は、被験者に危険性のある未知の毒物暴露を警告するような前哨事象としてはたらく。同様に、環境ストレス（ウィルス／細菌、および外傷性の事象など）に晒された被験者が、外来ウィルス、化学物質、または癌を認識しない樹状細胞を持つ可能性がある。樹状細胞の機能不全は、突発的な行動機構を介して、免疫防御への重大な侵入と、生命の危険を引き起こす可能性がある。
【００８２】
共鳴修飾剤は、正常な体の免疫と天然の監視活動に関連する、皮膚の細胞の外形における変化を検出し、定量する方法で利用されることもある。動物実験と人体実験によれば、A-007などの共鳴修飾剤は皮膚から吸収されないが、異物汚染または炎症に対する天然調節に必要な、樹状細胞、CD8+細胞毒性リンパ球の集団、および他の細胞集団を引き付け、末梢に活性化するであろうことが示されている。体が、提示された検出剤／刺激の存在に対して反応しない場合は、その後積極的な健康管理と治療が続行される。
【００８３】
監視装置は、被験者の皮膚に接触して共鳴修飾剤を保持するようなパッチの形状を取ることができる。パッチは周期的に電圧計に接続することができ、例えば、オシロスコープから得られた型の追跡波形の形で出力するような電圧計に接続できる。その後、経時的な電圧変化の振幅が評価され、健康な被験者で観察される変化と比較して、振幅がどのように変化したかを決定する。或る実施例では、電圧波形の振幅は、共鳴修飾剤の存在下で所定値（例えば少なくとも10%または25%）だけ増加すると予想される。所定値以下の振幅の変化は、毒物または病原体への暴露など、病的損傷の指標とみなされる。この結果は、環境毒物または病原体の発見、あるいは腫瘍や腫瘍の進行を発見する画像検査など、より特殊な試験の必要性を示唆する。あるいは、異常試験は、化学療法薬剤の投与など、治療（またはより積極的な治療）の開始を促すことができる。
【００８４】
観察される固有振幅および振幅変化は、各共鳴修飾化合物によって異なると思われる。従って、特定の振幅変化を全ての共鳴修飾化合物においてあらわすことはできない。それでもなお、共鳴修飾剤のこの特性と、免疫機能の接点としてはたらく能力の認識は、開示する方法の基礎となるものである。この特性が確認されたからには、特定の疾病状態または全身免疫不全において見られる、各化合物によって作られた特定固有振幅、および振幅変化を決定することが可能である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、振動子効果を通して最大A-007伝送を提供するために、圧電性結晶が共鳴修飾化合物に導入されることもある。
【００８６】
［実施例５］化合物の更なる例
免疫調節および／または抗腫瘍性の活性を持つ種々の化合物を本明細書において開示したが、これらの化合物の多くは、共鳴修飾特性も有する。これらの化合物は、肛門性器、生殖器、生殖器官、または皮膚の癌といった、疣および癌などの体表面病変を処置できる。或る実施形態では、化合物は以下の一般的構造を持ち、
【化５０】
2008540428.tif 000018
式中のArは、一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはBで、
Qは-(CH=CH)m-CH-で、
YおよびY'は独立にN、CH、およびBから選択され、
nは0または1で、
mは0から6で、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基、または
【化５１】
2008540428.tif 000019
であり、式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R２は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成し、あるいはR4と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、あるいは随意に置換されたフェニル基であり、
ZはH、低級アルキル基、置換アルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、あるいはR2と共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成する。
【００８７】
或る実施形態は上記の構造式の化合物を含み、ここでnは1以上である。或る実施形態では、そのような化合物は以下の構造式によってあらわされ、
【化５２】
2008540428.tif 000020
式中のR５およびR６は独立に、-OR7、-SR7、-SO2N(R7)2、-SO2CN、-SO2R8、-SO2N3、N3、-CN、-N(R7)C(O)R8、-R7であり、
R7はH、低級アルキル基、糖、脂肪酸、アミノ酸、ペプチド、ヌクレオシド、または核酸であり、
R8は低級アルキル基またはC-グリコシドである。
【００８８】
他の実施形態では、化合物は以下の構造を持つ。
【化５３】
2008540428.tif 000021
【００８９】
或る実施形態では、上述の一般的構造を持つ化合物は0に等しいnを持つ。そのような化合物の或る実施例は、以下の構造を持ち、
【化５４】
2008540428.tif 000022
式中のR７およびR８は独立に-OR5、-SR5、-SO2N(R5)2、-SO2CN、-SO2R6、-SO2N3、N3、-CN、-N(R5)C(O)R6、-R6であり、
各R5は独立にHまたは低級アルキル基で、R6は低級アルキル基で、かつ、Ar、X、およびYは上記の通りである。
【００９０】
本明細書で開示する他の化合物は、以下の構造を持つものを含み、
【化５５】
2008540428.tif 000023
式中のR5はH、-OR6、-SR6、-SO2N(R6)2、-SO2CN、-SO2R7、-SO2N3、N3、-CN、-N(R6)C(O)R7、または-R7であり、
R1およびR6は独立にHまたは低級アルキル基で、
R2およびR7は独立に低級アルキル基で、かつArは上述のアリール基である。
【００９１】
或る特定の実施例では、化合物は、以下のような、モノもしくはポリアリールモノニトロ‐またはジニトロフェニルヒドラゾンであり、
【化５６】
2008540428.tif 000024
式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、ニトロソ基、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、リン酸塩、琥珀酸塩、または他の水素結合が可能な水溶性求電子基であり、R2はC6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、かつArは一つ以上のニトロ部分で置換されたアリール基をあらわす。或る実施形態では、ArはC6H3-2,4(NO2)2、C6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2を含む。或る特定の実施例では、R1はOHで、R2はC6H4OH、かつXはC6H3-2,4(NO2)2である。
【００９２】
或る実施形態では、有用な化合物は以下の構造によってあらわされ、
【化５７】
2008540428.tif 000025
式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、リン酸塩、琥珀酸塩、または他の水素結合可能な水溶性求電子基であり、R2はC6H5、C6H4OH、C6H5、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、XはC6H3-2,4(NO2)2、C6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2であり、かつYは-O-、-S-、-CH2-、-N-、―、-CHA-、または-CHOA-で、ここでAはアリール基、エステル基、アミド基、脂質、糖、またはペプチド残基である。特定の実施例では、R1はOH、R2はC6H4OH、かつArはC6H3-2,4(NO2)2である。
【００９３】
他の実施形態では、化合物は以下の構造を持ち、
【化５８】
2008540428.tif 000026
式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、リン酸塩、琥珀酸塩、または他の水素結合可能な水溶性求電子基であり、R2はC6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、CH3、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、XはC6H3-2,4(NO2)2、C6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2であり、YはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、琥珀酸塩、またはアミド基であり、かつZはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、琥珀酸塩、またはアミド基である。特定の実施例では、R1はHまたはOH、R2はC6H4OHまたはC6H5、かつArはC6H3-2,4(NO2)2である。
【００９４】
更なる有用な化合物はWO 94/05276（'276公報）に開示されており、参照として本明細書に引用する。'276公報に開示された化合物は、免疫調節および／または共鳴修飾活性を有することが現在わかっている。そのような化合物の実施形態は以下の構造を持ち、
【化５９】
2008540428.tif 000027
式中のGは-CH2-、-C(O)-、-N-、―、-O-、または-S-をあらわし、nは0または1で、R7およびR8は独立に、-OR5、-SR5、-SO2N(R5)2、-SO2CN、-SO2R6、-SO2N3、N3、-CN、-N(R5)C(O)R6、-R6であり、Arは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、SO2、またはBで、
Qは-(CH=CH)m-CH-で、
YおよびY'は独立にN、CH、およびBから選択され、
各R5は独立にHまたは低級アルキル基で、かつR6は低級アルキル基である。
【００９５】
本明細書で開示する化合物の或る実施形態は、次の構造式によってあらわされ、
【化６０】
2008540428.tif 000028
式中のR2はH、低級アルキル基、もしくは随意に置換されたフェニル基であり、R3はHであるか、またはR2と共に、随意にアリール基と縮合する、随意に置換された複素環または炭素環を形成し、R4、R5およびR6は独立にH、-OH、および-OR7から選択される。
【００９６】
記述した化合物の多くの構造および合成方法は、米国特許No. 4,732,904で既に述べられており、参照として本明細書に引用する。その特許において述べられていないいくつかの化合物は、10-[(2,4-ジニトロフェニル)ヒドラゾノ]-1,2-ジヒドロキシ-10H-アントラセン-9-オン（DNPA）を含む。この化合物の合成は、0.1モルの1,2-ジヒドロキシ-9,10-アントラキノンを、50 mlのエタノールと5 mlの硫酸に溶かすことによって行われる。穏やかに溶液を攪拌しながら60℃まで加熱し、0.1モルの2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンを含む50 mlエタノールを、攪拌を続けながらゆっくりと加えた。溶液を2時間加熱し、それから冷蔵庫で冷却した。DNPAの深紅の結晶があらわれ、融点は240-242℃、収率は92%である。生成物をC20H12N4O7として分析すると、Cが63.98、Hが3.46、Nが11.13で、NMRスペクトルおよび質量スペクトルが一致した。本開示の組成物と方法における使用に適した更なる化合物は、2004年9月16日発行のWO 2004/078174に開示されている。この公報に開示された化合物は、参照により本明細書に引用される。
【００９７】
共鳴修飾剤の更なる例は、実施例１３にて提供する。
【００９８】
［実施例６］被験者への投与のための製剤
薬剤は、結晶、ペレット、またはゲル／クリームなど、多くの形状で提供される。薬剤は例えば皮下に移植することができ、あるいは、免疫系が低下したと思われる患者、もしくは免疫系の下方制御が可能な致死物質または毒性物質と接触したと思われる患者の、上皮表面に適用することができる。薬剤は、標的部位と電磁的に接触させるような任意の形（パッチ、または二次元もしくは三次元の基盤など）に組み込むことができる。“電磁的接触”とは、本明細書で述べたような免疫調節効果を発揮するのに十分な接近を意味する。いくつかの実施例では、薬剤は処置される病変（腫瘍または異形成上皮など）に適用されるか、または病変を覆って適用される。所望ならば、薬剤は例えばポリマーを形成するために、化学的に修正されることも可能である。薬剤は、免疫系の自動調節の欠損が見られる場合のような、癌に関連する免疫機能の変化を発見するのにも有用である。
【００９９】
或る実施例では、A-007のペレットは、純粋な化合物50 mgを圧縮し、16ゲージのサイズにすることによって用意された。バルクA-007は、添加剤を加えずにGLP/GMP手順を用いて用意された。100% A-007ペレットの溶解特性によって、添加剤（ステアリン酸、ポビドンなど）もしくは他の薬学的に許容される担体が添加されることもある。ペレットは例えば25 mg、50 mg、および75 mgの用量で製造され得る。ペレット濃度の調節は、観察される物理的性質（溶解特性など）と動物毒性に応じてなされ得る。治療有効量は既知の手段によって決定することができ、投薬量は処置される症状もしくは疾病の重篤度によって異なってもよい。
【０１００】
薬剤は、免疫反応を集中させることが望まれる標的部位（体の部分など）への適用のために、プロピレン グリコール／メチル セルロースの調合液など、ゲルの形で提供することもできる。ゲルは、ゲル内に懸濁された50 mgの活性薬剤など、チューブに入れて提供され得る。これらのゲルは、皮膚または他の上皮表面（例えば胸壁の皮膚、背部、足の皮膚、顔、もしくは肛門性器部、もしくは子宮頸管粘膜）への塗付に特に便利である。いくつかの実施形態では、ゲルは
長い塗布チューブ（直腸または膣内塗布器など）から投薬され、例えば直腸内または経膣内に塗布される。
【０１０１】
あるいは、ペレットは胸壁などの標的部位に挿入されることもできる。他の実施例では、薬剤はテトラヒドロフラン（THF）または他の非毒性エアロゾルに懸濁され、口腔もしくは上気道の癌を処置するために、気管気管支または口腔咽頭部位に導入される。
【０１０２】
ぺレットは尿酸結晶の沈着を促進することがわかっており、これは有痛性の小結節を引き起こす可能性がある。従って皮膚表面への塗布の方が、皮膚内への挿入よりもより好ましいが、どちらのやり方も本明細書で述べた免疫調節を引き起こす。
【０１０３】
［実施例７］免疫活性の外部監視装置
前述の通り、記述した薬剤は、病態に関連する突発的な行動修正の存在下で、免疫特性の監視および／または上方制御の両方を行うことができる。
【０１０４】
最も単純な形では、監視装置は薬剤の電磁特性の変化を検出する装置であり、生物系と相互作用する共鳴修飾剤などである。相互作用はin vitroまたはin vivoのどちらでも観察できる。従って監視装置は、被験者、もしくは被験者から取られた生物試料（組織培養など）に、更なる分析のために適用することができる。
【０１０５】
共鳴修飾物質（A-007）は、0.25%プロピレン グリコール／メチル セルロース ゲル（0.5 g）としてリンパ腫の患者の皮膚上に存在する。ゲルとして示したものの、これは、上皮表面または皮膚（または他の表面）上に塗布するか、あるいは16ゲージの套管針でその中に挿入できるような、クリームまたは単結晶（50 mg）またはペレット（50-100 mg）としても適用することができる。或る実施形態では、薬剤はオレンジのゲルとして皮膚に塗布され、さらに、心電図リード線として用いられる型の電極タブ二つを、相隔てて皮膚表面に接着させながら、2x3 Tegaderm（登録商標）パッチで覆われている。電極は、ゲル間の電位差を測定できるような配置で、ゲルの両側に設置される。それから電圧計の二つのプローブが接続され、一つのプローブが各電極タブに接続される。検出電圧の振幅を経時的に見ることができるように、電圧計は、経時的に電圧変化を測定するオシロスコープに結合していることが好ましい。特定の実施形態では、電圧計はFluke（登録商標） Scopemeter 192/196/199であり、これは、背景電圧を除くために電圧波形をフィルターにかけることができ、さらにコンピューター上での観察、記録、測定および分析が可能なソフトウェアを持つ。こうして、電圧振幅の経時的な変化が、共鳴修飾剤に対する免疫反応を監視するために観察される。
【０１０６】
共鳴修飾剤が皮膚に塗布された時点の基準振幅および／または周波数の設定後、試験部位からの送電の振幅と周波数を監視するために、電極は続いてオシロスコープに接続される。A-007などの共鳴修飾剤のために、経時的な電圧変化の振幅は増加する。
【０１０７】
正常な被験者に7日間パッチを配置した後、電圧計プローブの先端を再び電極リード線に接続し、経時的な電圧変化を記録した。活性化した樹状細胞がパッチの標的部位へ移動することによって起こった、凝集および増加した有糸分裂活性に関連する電気的活動を測定した。波形の振幅（ゼロから測定した）は、3ボルトから4ボルトまで、約25%増加した。
【０１０８】
この実施例は電圧計を用いた電気的活動変化の測定を示したが、電極は、局所の化学物質‐細胞間相互作用の変化を検出するような外部レーザービーム検出器でも探知することができる。化学物質は共鳴を介して電気エネルギーを伝導することができるため、化学物質は細胞間相互作用の局面の信号を提供する。例えば、レーザーなどの分子スキャナーを、化学物質の活性化に用いることや、その吸収波長における分析（A-007なら404 nm）に用いることもできる。そのような分子スキャナーの一つは、Edmund Industrial Optics固体波長可変レーザー（波長425 nm）であり、A-007の共鳴と細胞間相互作用に関連した固有励起を、記録または作成するようにプログラムされている。これらの高性能レーザーは、バーコードスキャナーに酷似して、ナノスケールでのA-007スペクトル特性を認識するようにプログラムされていることもある。
【０１０９】
［実施例８］免疫機能調節の増進
開示する化合物は、例えば免疫不全に苦しむ被験者において、免疫機能を増進する比較的単純な方法も提供する。そのような被験者は、例えば、免疫不全症（HIV/AIDSなど）、または毒素誘発免疫欠如（抗腫瘍化学療法薬または環境毒素によって誘発された白血球減少症など）を患っていることがある。他の被験者は、悪性腫瘍の患者にしばしば見られる種類の免疫不全を抱えている。あるいは、免疫不全の第一原因がわかっているかどうかにかかわらず、被験者は免疫不全の客観的な臨床検査値を持つ可能性がある。化合物は、免疫系とのカップリング剤または接点としてはたらくことができ、免疫系を監視するだけでなく、治療的に制御することもできる。
【０１１０】
既に示したように、薬剤を標的部位の中または付近に導入することにより、標的免疫反応を標的部位（腫瘍の付近など）に方向付けることが可能である。共鳴修飾剤を、薬剤の電磁特性を刺激するような電磁場に晒すことで、共鳴修飾剤が刺激される。例えば、薬剤は外部磁場または電場に晒すことができる。そのような電磁場の一例は、細胞受容体表面との最大接点を提供するために、共鳴修飾剤の共鳴形（図３に示したA-007の形の一つなど）の最高濃度を提供するような周波数の信号を送る、あるいはその周波数に調節するものである。この実施例では、A-007によって示された波長と同じ波長（400-450）を有するレーザーエネルギーの形で電磁場を印加するようにレーザーが選択される。A-007はレーザー発振特性を持たないが、プログラム化されたレーザーはA-007のスペクトル特性を認識することができる。2 AAまたは3 Vバッテリーによって作られた単純磁場は、A-007の表面ゲルを非特異的に活性化し、あるいは9 Vの場合は皮下のペレットを活性化できる。より特殊な波長可変レーザーは領域を走査することができ、印加する最適電磁場についてより特異的である。好ましい周波数を選択することで、共鳴修飾剤で見られる経時的な電圧変化の振幅は増加し、順に免疫反応が増進または活性化される。
【０１１１】
真皮と表皮両方に存在する腫瘍を処置するために、共役芳香族化合物が、腫瘍を含む標的部位の上部の皮膚表面に適用される。化合物は、樹状細胞とリンパ球を標的部位に引き付けるが、腫瘍はしばしば正常な免疫監視を回避することができ、共鳴修飾剤の高い活性化によって免疫反応を更に刺激するのに有用である。化合物を皮膚に適用した部位の上に配置した磁気プローブにより、そのような高い活性化がもたらされる。磁気プローブは、発振回路、周波数カウンタ、電圧源、およびオシロスコープを含む装置に接続される。装置は、化合物に磁気パルスを印加してその共鳴修飾特性を増進するために活性化される。
【０１１２】
適切な磁気パルス発生器の例はThe Magnetic Pulserで、これはHealth Canadaから入手可能なHigh Intensity Momentary Time-Variant Pulsed DC Magnetic Field Therapy Generator MODEL #: MPG5である。The Magnetic Pulser（MPG5）は、強く（〜43,133ガウス）、瞬間的な（〜2.5mS）、パルス状のDC磁場を発生するように設計され、共鳴修飾化合物を刺激するのに利用できる。磁気パルスは、化合物の活性を増進するのに十分な持続時間にわたって印加することができる。例えば、パルス状のDC磁場は5-60分以上にわたって印加できる。
【０１１３】
2 AAまたは3 Vバッテリーによって作られた単純磁場は、A-007の表面ゲルを活性化し、あるいは9 Vバッテリーは皮下のペレットを活性化する。より特殊な波長可変レーザーは、領域（化合物が局所適用された領域など）を走査することができ、印加される電磁場のより特異的な指示を示すことができる。場を印加する好ましい周波数を選択することで、共鳴修飾剤によって作られるエネルギーの振幅が最大化される。電磁場が印加される持続時間は被験者の免疫状態に依存し、より免疫状態が悪い被験者にはより長い刺激期間が有用である。一般的な磁場が用いられるが、広範囲の処置のために好ましいやり方は、波長またはエネルギー特異的な波長可変送信機を用いることである。処置の効果は、末梢T-細胞フローサイトメトリー分析などの、容易に利用できる手法で免疫状態を監視することによって評価される。これらの容易に利用可能で簡便な試験は、特定の共鳴修飾剤のために印加電磁場の特性を選択する上で、更なる指針となる。
【０１１４】
或る実施例では、印加電磁刺激は、参照として引用する米国特許No. 6,190,893で利用された形式の電場である。電気刺激のための装置は、標的部位の一端に沿って伸びる金線陰極と、標的部位の反対の端に沿って配置された銀線陽極を含む。EG&G Princeton Applied Research Potentiostat/Galvostat Model 263A （Oakridge, TN）を、定電位源として用いる。電気刺激は、100 mVの定常電位で一時間以上の期間、適用することができる。
【０１１５】
ヒトの体または組織培養において、共鳴修飾剤に電磁場を印加するために、多くの他の装置が利用できる。例えば、参照として本明細書に引用するPCT公報WO 02/102457は、変換器と、変換器にAC信号を印加する発生器を含むような装置で、電磁場が0.1 Hzと4000 Hzの間の基本周波数で作られるような装置を開示している。同様の装置は、参照として引用する米国特許No. 5,968,527にも示されている。
【０１１６】
いくつかの状況では、共鳴修飾剤への刺激の提供と、共鳴修飾剤が適用された標的部位の電気的性質の監視の両方を行うのに、生体インピーダンス装置を用いることが好ましい。直接生体インピーダンス測定システムは、組織伝導性の測定を目的として、定電流源を用いて、持続的な、一定振幅および一定周波数の電流を、ヒトまたは動物の身体セグメントを通して発生させる。30 KHz-30 MHzの範囲の周波数が通常用いられる。身体セグメントにおける持続的な電流フローに対するインピーダンスは、身体セグメントにわたる電位差を作り出し、生体インピーダンスメーターは身体セグメント中のインピーダンスを測定する。生体インピーダンス装置の例はWO 01/76475、米国特許No. 4,805,621、および米国特許No. 5,529,072に示されている。生体インピーダンスプローブは、共鳴修飾剤が適用された標的部位の上に配置され、電位差が標的部位にわたって導入される。生体インピーダンスの変化は、被験者の免疫系の状態の監視にも利用される。増加した生体インピーダンスは、免疫状態の改善とみなされると考えられる。
【０１１７】
［実施例９］リンパ腫の処置における開示する化合物の利用
実施例７で述べたように、A-007 0.25%ゲル（0.5 g）を42歳のリンパ腫患者の皮膚に塗布したところ、患者の末梢リンパ球形状の改善（総リンパ球数によって測定した）、さらにシグマ波の振幅の増加が見られ、これはA-007に関連して皮膚の活性が増加したことを示唆する。検出は、Fluke（登録商標）ScopeMeterオシロスコープと、記録可能で且つ環境の背景ノイズを除去できるPCプログラム（192/196/199）を用いて行った。この特定の実施例において、電圧振幅の25%の増加は免疫の肯定的な修飾とみなされ、リンパ球形状の改善と一致した。
【０１１８】
［実施例１０］子宮頸癌の処置における化合物の利用
初期子宮頸部上皮内癌を患った23歳の女性に、A-007 0.25%ゲル（2 g）を５日間毎日塗布したところ、一年以上続く劇的な治癒が見られた。表皮の癌細胞は消失し、CD45+ T-リンパ球の流入と共に、正常な外見の上皮組織が得られた。反応は、T-リンパ球型の組織の増加と、癌細胞の消失に関連する。
【０１１９】
［実施例１１］タンパク質チロシンホスファターゼ
ヒトタンパク質チロシンホスファターゼ（PTPs）は、全ての真核生物に存在する大きな種々のタンパク質ファミリーである。各PTPは、システインおよびアルギニン残基を含む11残基配列モチーフを特徴とする、一つ以上の保存ドメインから成り、後者は触媒活性に必須であると知られている。PTPの配列は、セリンまたはスレオニン、酸またはアルカリホスファターゼとの類似点を共有していない。PTPファミリーにおける構造の多様性は、触媒ドメインのNH2-またはCOOH-末端に結合した非触媒配列の種類に主に由来する。細胞内リン代謝およびドメインにかかわるPTPsは数多く存在する。細胞外領域の多様性は、おそらくPTPsが晒されてリン酸塩転移を触媒するリガンドの種類を反映している。
【０１２０】
細胞外PTPsは、白血球細胞表面認識の表面認識および接着分子に関する、PTP受容体の一つの種類である。PTPsはヒト細胞に関連するだけでなく、原核生物とウィルス、および細菌にも存在する。病原菌エルシニアにおいては、腸ペストの病原因子、Yop2bチロシン特異性PTPが、必須の毒性決定因子である。
【０１２１】
数多くの研究が、生理学的過程におけるPTPsの重要性を示してきた。T-リンパ球およびB-リンパ球、顆粒球およびマクロファージの、表現型の異常ならびに異常増殖行動は、癌と自己免疫疾患の進行において重要な問題とみなされる。
【０１２２】
PTPsの触媒ドメインは結晶学的研究において述べられており、Z. Jia, et al., Structural Basis for Phosphotyrosine Peptide Recognition by Protein Tyrosine Phosphatase 1B, Science 268: 1754-1758, 1995に概説されている。この参照およびZ. Xu et al., Negative regulation of CD45 by differential homodimerization of the alternatively splied isoforms, Nature Immunology 3:764-771, 2002では、PTPsを発現する様々な種類の細胞、細菌およびウィルスを開示している。本実施例は、PTP修飾剤としてのアリールヒドラゾンの相互作用と効果について概説する。
【０１２３】
4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007）の概説およびその構造物性関係（図１と３）は、これがリピンスキーの“ルールオブファイブ”を満たさないことを示している。“ルールオブファイブ”は、吸収または浸透のために、薬物は５以下の水素結合供与体、１０以下の水素結合受容体、５００以下の分子量を持ち、および／または計算されたlog Pが５以下になる（CAChe Group, Fujitsu, Beaverton, OR）傾向が強いことを予測している。明らかに、結晶学によってわかる通り、A-007と他のヒドラゾンは５以上の水素結合供与体を持つ（Klein, C.L., Gray. D., and Stevens, E.D., Crystal and molecular structures of benzophenone phenylhydrazone derivatives with anticancer activity, Structural Chemistry 4: 377-383, 1993）。従って、薬物が、実質的には、塗布される皮膚を通って吸収されないので、この特許で述べられているリンパ球と癌細胞への外部結合は、A-007型アリールヒドラゾンの構造‐行動観察と一致する。従って、電磁効果から予想されるように、その効果は遠方で得られる。
【０１２４】
図１にあらわされるように、A-007はCD45+ PTPサブタイプの細胞外触媒受容体にうまく適合する。さらに、以下の構造を含む本明細書で開示する他の化合物も、これらの受容体にうまく適合する。
【化６１】
2008540428.tif 000029
【０１２５】
子宮頸癌（HPV-誘発突然変異を介して変形した）は、A-007の結晶の存在下で細胞死する。これは、共鳴を通して、受容体と細胞死を高めるシステイン残基のHS-SH二量化を触媒するA-007の能力を裏付ける。これは子宮頸癌の患者によって異なっていた（Table 2）。0.25% A-007局所ゲルを、膣内に毎日２グラムの用量で５日間適用した。A-007誘導細胞死は、HPVを含まない、あるいはHPVによって変形されていない良性線維芽細胞または正常上皮細胞では観察されなかった。A-007などの共鳴修飾剤を含む化合物を、HPV感染患者の子宮頸部／膣上皮膜に局所適用することで、癌細胞が除去され、さらにウィルス粒子の除去、およびCD45RO+CD4+とCD8+ T-リンパ球の上方制御が見られた。A-007の局所適用による最大の治療効果は、HIV感染細胞における細胞死の誘導である（Table 2および図１０と１３）。Table 2で示されるように、A-007はT-リンパ球の存在を増加させ、特にCD45+、CD123+、CD4+およびCD8+細胞を増加させる。特定の実施例では、CD45+、CD4+、およびCD8+細胞の増加が特に注目された。特に、CD45RO+、CD45RA+およびCD45RB+の増加が注目された。
【表３】
2008540428.tif 000030
【０１２６】
この実施例ではゲルとして示したが、開示する化合物は、短期間処置のために、上皮表面または皮膚（または他の表面）の上に塗布するか、あるいは16ゲージの套管針を用いてその中に挿入することのできる、クリームや単結晶（50 mg）やペレット（50-100 mg）としても適用することができる。
【０１２７】
HeLa癌細胞（HPV+）は、A-007の結晶と24時間培養すると、類壊死と細胞死に至る。透明な正常癌細胞は結晶へ移動する。その後、細胞膜化学界面を通り、細胞がPTP受容体の調節を下方制御し、DNA凝集に関連する濃縮変化と共に暗くなり、死に至る（下方集合濃染細胞）。結晶が細胞に対して持つ誘引力は、分子内共鳴とそれに関連する磁気形式に関連している。
【０１２８】
未感作T-リンパ球も、活性化したリンパ球+の凝集と共にA-007の存在下で活性化される。
【０１２９】
従って、記述したヒドラゾンなど、A-007および他の開示する化合物は、HPV陽性上皮細胞を、活性化T-細胞による攻撃に対して敏感にする際に独自の役割を果たすことができるだけでなく（Table 2）、HPV陽性細胞とA-007に直接影響し、細胞およびウィルスの死をもたらす（Table 2）。後者の表では、患者は処置後にもはやウィルスに感染しておらず、これは薬剤が抗ウィルス特性も持つことをあらわしている。従って、A-007はT-リンパ球のCD45+活性の上方制御だけでなく、細胞外膜脱制御とHIV感染細胞の除去両方ともを行う。
【０１３０】
これらの発見は、HPV感染子宮頸部上皮細胞とT-リンパ球の両方が、A-007を含む開示する薬剤が相互作用することのできる、細胞外膜結合PTPsを含むことを示す。HPVウィルスは活性細胞外PTP受容体を含み、これは、本明細書で開示する化合物に晒されたとき、脱制御と細胞死する可能性がある。実際の機構にかかわらず、開示する化合物はHPVに対して効果的な抗ウィルス活性を持つことがわかっている。さらに、T-リンパ球はA-007などの共鳴修飾剤によって活性化され、表面膜CD45+RO PTPsの存在を促進すると考えられており、これは触媒受容体部位内のHS-SH形成を通して起こると考えられる。CD45+RA T-リンパ球は、外来細胞を攻撃できない静止細胞または未感作細胞をあらわし、従ってCD45+ROマーカーへの転換は、細胞免疫系の細胞毒性アーム（cytotoxic arm）の活性化をあらわす。Table 2で示したように、共鳴修飾剤は実質的に抗ウィルス（抗-HPV）活性および抗腫瘍性活性を有する。CD45+RO細胞の割合は、薬剤処置の後、実質的に増加する。
【０１３１】
ペスト菌病原菌など、PTPsを発現する細胞、または病原菌に感染したPTP+細胞（HPV感染上皮細胞など）も、A-007と共に凝集することができる。この凝集は、システインの酸化とジスルフィド結合形成によって起こると考えられる。この結合形成は細胞統合性と細胞死‐ウィルスの解放を妨げる。A-007の存在下では、ウィルス性PTP細胞膜自己酸化が、ウィルス不活性化と共に起こる。Table 1の患者のほとんどは、A-007治療で消失するHPV誘導核内変化（CIN）を含むHPV+増殖性子宮頸部細胞も有する。このことは、A-007などの共鳴修飾剤を含む開示する化合物が、悪性細胞だけでなく、HPVに感染した良性細胞と増性細胞を破壊する能力を持つことをさらに強調する。
【０１３２】
2,6-ジベンジリデンシクロヘキサノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンなどの、ヒドラゾン類似体における抗癌および抗ウィルス活性は、PTP CD45受容体の結合親和性と上方制御を改善したが、紫外線への暴露を通しても促進される。紫外線は、A-007とアルギニンのジイミン部位間におけるディールス・アルダー反応、ならびにシステインのHS-部位との付加体形成を誘導し、CD45受容体の上方制御を引き起こす（図１）。従って、そのような共鳴修飾剤の、免疫修飾活性、抗ウィルス活性、および抗腫瘍活性は、化合物を紫外線に晒すことによって増進させることができる。
【０１３３】
［実施例１２］4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007）の抗腫瘍性および免疫修飾特性
4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007、図１２の化合物１）は、肛門扁平上皮細胞癌患者において顕著な抗癌活性を生じた（Table 3）。0.25%のA-007を含む局所ゲル（１日当たり２グラムのゲル）を、５日間毎日肛門内に適用した。観察された結果をTable 3に示す。
【表４】
2008540428.tif 000031
【０１３４】
［実施例１３］開示する化合物の更なる例
2,6-ジベンジリデンシクロヘキサノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（BDP-DNP）は、培養下（処方前後（pre- post Rx））で増殖する悪性扁平上皮細胞癌（SCCA-HM）の細胞増殖に対するBDP-DNPの影響から示されるように、A-007と比較して100倍大きい免疫修飾抗癌活性を持つ。組織培養溶媒（L. R. Morgan,米国特許5,270,172）内にBDP-DNP（0.4 mcg/mL）を加えて２４時間培養した後、リンパ球は目覚しい刺激を受け（活性化T-リンパ球の大きな白い集団）、さらに癌細胞の破壊が起こった。癌細胞は全く発見されなかった。
【０１３５】
［実施例１４］いくつかの活性化合物の特徴
前実施例で開示したように、本明細書で開示する化合物は、免疫系との診断的接点と治療的接点の両方を提供し、さらに、個別に抗腫瘍活性と抗ウィルス活性（特に、HPV感染に関連する膣癌および子宮頸部癌などの、HPVならびにHPV感染細胞に対する）を持つ。
【０１３６】
化合物は、以下の特徴を一つ以上持つことが開示されており、例えば以下の特徴の少なくとも三つ、または五つ、または全てを持つ。
【０１３７】
培養下または生体の表面（皮膚など）に適用した際のいずれかにおける、CD45+リンパ球（例えばCD45RO+およびCD45RA+リンパ球）の、共鳴修飾化合物への特異的誘引。
【０１３８】
例えば被験者の上皮に適用された際の、CD45RA+のCD45RO+リンパ球への上方制御。
【０１３９】
固有電磁特性の所有、例えば、結晶が蒸着された際に正荷電点と負荷電点の間に凝集した結晶の単線を形成する能力、あるいは電磁エネルギーの放出。
【０１４０】
リンパ球の移動に作用する特性の所有、例えば、培養下の未感作リンパ球の凝集の誘導。
【０１４１】
化合物の或る実施例は、個人の皮膚に適用された後に化合物から測定される交流電圧波の振幅を増加させる能力によっても特徴付けられる。或る実施例では、増加した振幅は、リンパ球機能不全など、免疫不全の被験者では減少する。
【０１４２】
或る実施形態では、化合物が皮膚に塗布された際に、実質的に皮膚吸収が観察されない。或る実施形態では、そのような化合物はリピンスキーの“ルールオブファイブ”を満たさない。そのような化合物は、皮膚に塗布された際、経皮的な流動無しに実質的に皮膚表面に完全に残る。
【０１４３】
可能性のある共鳴修飾剤は、共鳴修飾を提示する化学構造、すなわち本明細書の前半で述べた構造特性に基づいて選択することもできる。例えば、Casodex（登録商標）、Naprelan（登録商標）、Eulexin（登録商標）、およびBextra（登録商標）など、電気陰性度を持つポリアリール化合物が選択できる。
【０１４４】
可能性のある共鳴修飾剤として候補が選ばれると、それらがリンパ球幼若化現象を誘導し、リンパ球を活性化するかどうかを定めるために、それらは容易に分析することができる。そのような分析は、参照により引用するMorgan et al., Anticancer Research 13:1763-1768 (1993)に見られる。また、Janossy et al., Clin. Exp. Immunol. 14:581-596 (1973)も参照のこと。簡潔に言えば、培養下のリンパ球に[3H]チミジンの取り込みが測定された。リンパ球は、10%ウシ胎仔血清（FBS）を補ったRPMI-1640組織培養溶媒で培養した。共鳴修飾剤の刺激に引き続き、トリチウム化チミジン（2-20 μCi/ml、比活性度2 Ci/mmol）を細胞に加え、共に培養した。[3H]チミジンの取り込みは、選択した時間後に冷たい10%トリクロロ酢酸を加えることで停止させ、標本の放射能をシンチレーションカウンターで測定した。%リンパ芽球を、高出力場（high powered field：hpf）あたりの芽球の数を計測することで決定し、一方%活性化はトリチウム化チミジンの取り込みによって決定した。電圧増加は実施例７のようにオシロスコープで測定した。
【表５】
2008540428.tif 000032
【０１４５】
この手順は、電圧信号の振幅の増加と、リンパ球の活性化の促進との相関関係をあらわす。特に、より大きな振幅増加は、リンパ球活性化のより活発な増進と共に観察された。この分析は、免疫活性化作用のための共鳴修飾物質の候補を素早く選別するために利用できる。例えば、この分析を用いて、20%以上の電圧振幅の増加（例えば50%以上の振幅増加）は、免疫系における共鳴修飾活性の基準として利用できる。そのような基準（例えば20%以上の振幅増加）を満たす共鳴修飾候補は、その後更なる利用と研究のために選択される。
【０１４６】
［実施例１５］局所用製剤
本明細書で開示する化合物は、免疫賦活剤、抗ウィルス剤、または抗腫瘍製剤として皮膚に適用するために、局所用製剤として調合することができる。
【０１４７】
ある実施例では、化合物は2,6-ジベンジリデンシクロヘキサノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（BDP-DNP）を含む。これは、例えば肛門、膣、または子宮頸部の新生物（子宮頸部CINなど）といった、泌尿生殖器腫瘍などの悪性上皮に適用することによる、上皮表面への適用のために局所用製剤の中に入れられる。
【０１４８】
化合物は、腫瘍細胞の退行または除去を誘導するために、治療有効量の薬剤を罹患患者に投与することにより、腫瘍（新生物）を処置する方法において利用できる。特定の実施例では、BDP-DNPの投与は、経口、吸入、注入、または皮下投与などの他の投与形態も含むことができるが、BDP-DNPの腫瘍への局所投与を含む。
【０１４９】
［実施例１６］吸入用製剤
5%溶液のテトラヒドロフラン（THF）中の化合物（本実施例ではA-007）を、15 psiの圧力下で30秒間、エアロゾルをマウスのいる密室内に放出することで、マウスの呼吸系内に噴霧した。処置の結果、処置されたマウスは一匹も死亡しなかった。５日後、マウスを犠牲にして、気管と肺を一括（en block）切除することにより、肺系統を検査した。標本の組織学的検査により、気管支上皮のリンパ球の浸潤（CD8+とCD4+）が増加したことが明らかとなった。T-細胞修飾の同一パターンは、頸部と皮膚への局所適用でも見られた。対照群はTHFのみの処置で、リンパ球の浸潤の増加は観察されなかった。
【０１５０】
［実施例１７］活性薬剤‐受容体相互作用
この実施例は、本明細書で開示する化合物の、CD45などの受容体との結合を評価するために用いられるモデル化試験について述べる。これらの試験はSybyl 6.9.2 (Tripos Inc, St Louis, MO)を用いて行った。化合物のモデルはSybyl断片から作られ、その後MMFF94力場（MMFF94電荷と共に）を用いて最適化された。これらのモデルは、その後FlexX 1.13とDrug Score採点機能を用いて1BZC結晶構造活性部位にドッキングさせた。FlexXは、断片をベースにした付加的なドッキング（incremental fragment based docking）を行い、そこではリガンドの種々の基本断片（base fragments）がドッキングされ、さらにその後リガンドの残りがこの基本断片配置から組み立てられる。従って、可能性のある全てのリガンドの配向性と立体配座の見本ができる。
【０１５１】
図１９は、以下の化合物のCD45とのドッキングをこの方法に従ってあらわしている。
【化６２】
2008540428.tif 000033
これらの試験において、示された化合物はA-007よりも良い結合スコアを持ち、この主な理由は、上記の化合物のジヒドロキシビフェニル部分と密接に接触するポケットへの入り口でARG47によってより強く保持されるためである。
【０１５２】
図示された化合物も、CD45と結合するところで凝集し、直接的な細胞毒性活性を発揮することがわかっている。
【０１５３】
［実施例１８］ヒドラゾンの調製のための一般的手順
方法１：置換フェニルヒドラジン（0.148モル）をMeOH（300 mL）に50℃で懸濁し、濃硫酸（20 mL）を攪拌しながら50℃で加えた。ヒドラジンが溶けた後、置換ベンゾフェノンまたはアリールケトン（0.1モル）を含むMeOH（300 mL）を、50℃で10分以上攪拌しながら加え、その後さらに30分攪拌した。溶媒を蒸発させ（75%）、水（500 mL）を加え、沈殿物を3%含水NaHCO3で洗浄した。再結晶は、EtOH、MeOH、または酢酸で行った。完全な元素分析とスペクトル分析を全物質において行った。
【０１５４】
方法２：第二の一般的な方法は以下のように行う。置換アリールヒドラジン（2.7 mmol）を15 mLのMeOHに溶かし、2.1 mmolのケトンを攪拌しながら加えた。Dowex 50W-50X2-100陽イオン交換樹脂（0.5g）［Dow Corp., Baton Rouge, LA］を加えた。懸濁液を水浴上で1時間、75℃で還流させた。混合物を高温水中真空圧（hot under water vacuum pressure）にろ過し、樹脂を0.5 mLのMeOHで3回洗浄した。回収フラスコの中身を室温まで冷却し、20 mLの蒸留水を加えた。着色した沈殿物をろ過し、乾燥させ、EtOHまたはMeOHから再結晶化した。典型的な収率は80%の範囲内であった。
【０１５５】
N-ベンズヒドリリデン-N'-(2,4-ジニトロフェニル)ヒドラジンは、方法１を用いて調製され、EtOHまたはMeOHから82%の回収率で黄色結晶を産出した。mpは232-234℃、IRは3295(N-H)、2928(Ar-H)、1612(C=N)、1590、1504、1416、1334、1127、および1091、834、777、698、および608 cm-1、1H-NMR(DMSO, 400 MHz)はδ11.25(1H, s, N-H)、9.07(1H, s)、8.37(1H, d, J = 8 Hz)、8.22(1H, d, J = 8 Hz)、7.67(4H, m, J = 8 Hz)、7.41(6H, m, J = 8 Hz)、C19H14N4O4の元素分析の計算値はC、62.98、H、3.86、N、15.46、実測値はC、63.17、H、4.06、N、15.49であった。
【０１５６】
4-ヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンは方法２を用いて調製され、EtOHから収率80%で再結晶される赤色針状結晶として得られた。mpは224-225℃、IRは3541(N-H)、3271(N-H)、3098(O-H)、2905(Ar-H)、1621(C=N)、1591、1511、1418、1329、1276、1130、1083、829および698 cm-1、1H-NMR(DMSO, 400 MHz)はδ11.23(1/2H, s, N-H)、10.99(1/2H, s, N-H)、10.1(1H, s, "broad"OH)、8.8(1H, s)、8.41(1H, d, J = 8 Hz)、8.19(1H, d, J = 8 Hz)、7.67(2H, m, J = 8 Hz)、7.48(3H, m, J = 8 Hz)、7.28(1H, dd, J = 8 Hz)、7.04(1H, dd, J = 8 Hz)、6.84(1H, dd, J = 8 Hz)、C19H14N4O5の元素分析の計算値は、C、59.07、H、3.62、実測値はC、59.71、H、3.84であった。
【０１５７】
2,2',4,4'-テトラヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンは、収率75%でEtOHから再結晶される深紅結晶として合成された。mpは290-291℃で、IRは3631(N-H)、3491(N-H)、3272(O-H)、2905(Ar-H)、1614(C=N)、1518、1415、1322、1206、1143、1107、974、864および827 cm-1、1H-NMR(DMSO, 400 MHz)はδ11.59(1H, s, O-H)、11.15(1H, s, N-H)、10.12(2H, s, O-H)、9.91(1H, s, O-H)、8.85(1H, s)、8.48(1H, d, J = 8 Hz)、8.19(1H, d, J = 8 Hz)、7.61(1H, d, J = 8 Hz)、6.95(1H, dd, J = 8 Hz)、6.8(1H, dd, J = 8 Hz)、6.57(1H, s)、6.46(1H, dd, J = 8 Hz)、6.38(1H, s)、6.31(1H, dd, J = 8 Hz)、C19H14N4O8の元素分析の計算値は、C、53.52、H、3.28、N、13.14、実測値はC、51.79、H、3.19、N、13.36であった。
【０１５８】
1,2-ジヒドロキシ-10-アントラキノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンは、一般的方法１を用いてベースとなるキノン（base quinone）と2,4-DNPから合成された。収率は92%であった。反応混合物は48時間還流させた。化合物は反応物を冷却すると沈殿し、ジオキサン／ヘキサンから赤色微結晶として再結晶された。mpは240-242℃、IRは3502(N-H)、3287(N-H)、3113(O-H)、2925(Ar-H)、2559(Ar-H)、1618(C=N)、1595、1501、1441、1335、1298、1135、1091および781 cm-1、1H-NMR(DMSO, 300 MHz)はδ11.97(1H, s, N-H)、8.86(1H, s)、8.47(1H, d, J = 6)、8.38(1H, s)、8.24(1H, d, J = 12 Hz)、8.17(2H, m)、8.12(2H, m)、7.89(4H, m)、7.75(3H, m)であった。
【０１５９】
［実施例１９］血小板値の刺激
例えばA-007といった共鳴修飾剤などの、開示する化合物の他の予想外の特性は、薬物を投与された被験者において血小板産生を増加させる能力である。例えば、A-007を受けている被験者においては、脾臓の肥大化と血小板産生の増加が見られることがわかっている。この血小板産生の増加は、例えば、免疫病または腫瘍性疾患、またはそのような疾病の処置に用いられる細胞毒性薬物に由来する血小板減少症に苦しむ被験者にとって、特に有利である。例えばA-007、または共鳴修飾剤、または本明細書で開示する、血小板産生を促進できるような他の化合物は、そのような刺激を必要とする被験者に投与される。薬物は本明細書で開示する任意のやり方で投与される。
【０１６０】
開示する方法に従ってA-007を受けたマウスは、肥大化した脾臓（脾腫）および上昇した血小板産生を示すことがわかっている。従って本明細書で開示する化合物は、髄外に巨核球と血小板の産生（骨髄の外）をもたらすことができる。
【０１６１】
［実施例２０］体表面病変の処置
本明細書で開示する薬剤は、疣、HSV疱疹、乾癬、および皮膚癌などの、幅広い種類の体表面病変の処置に利用できる。これらの病変は、病変の消失または退行を誘導するのに十分な期間、薬剤を病変に局所適用することで処置される。例えば、薬剤は0.25%ゲルで、１日あたり2 gの用量で3-10日間病変表面に塗布される。必要に応じて、処置は病変の解消が達成されるまで継続することができる。
【０１６２】
他の処置計画も利用できる。例えば、より高投与量または低投与量の有効成分を臨床的に適切に利用できる。薬物の治療有効量は、臨床状態に応じて臨床医によって決定される。例えば、1-10 g、2-5 g、または2-3 gの総量が、処置計画の間に局所投与される。用法・用量は一日一回（例えば毎晩）、一日二回、またはより頻繁であることが可能である。処置の総継続期間は臨床状態によって異なり（例えば3-10日間毎日、例えば5日間毎日）、処置計画は必要に応じて間隔を置いて繰り返すことができる。例えば、処置を5日間毎日行い、その後25日間処置を行わず、続いて別の一連の毎日の処置を5日間行うことができる。
【０１６３】
発明の本質をいくつかの実施例で図示し記述してきたが、当業者に明らかなように、発明はその本質から逸脱することなく詳細において変更され得る。次の請求項の趣旨と範囲内に入る全修正形態を請求する。
【図面の簡単な説明】
【０１６４】
【図１】図１は、共役アリールヒドラゾンとCD45+ Tリンパ球表面受容体との間の相互作用の概略図である。
【図２】図２は、A-007の構造式を示す。
【図３】図３は、共役アリールヒドラゾンの共鳴構造の概略図である。
【図１】
2008540428.tif 000069
【図２】
2008540428.tif 000070
【図３】
2008540428.tif 000071
【手続補正書】
【提出日】平成19年12月26日(2007.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本明細書で開示する化合物の特定の実施形態は、アリールヒドラゾンを含む。他の例は、ポリアリールモノニトロ‐またはジニトロフェニルヒドラゾンといった、フェニルヒドラゾンなどのアリールニトロヒドラゾンを含み、例えば以下のような構造である。
【化４３】
2008540428.tif 000072
または
【化４４】
2008540428.tif 000073
または
【化４５】
2008540428.tif 000074
ここで、式中のR1は水素、ヒドロキシル基、ヒドロキシフェニル基（2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基など）、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、コハク酸塩であり、
R2は非置換の(C6H5)か、または置換されたフェニル基（C6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clなど）であり、
ArはC6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2などのニトロフェニル基であり、
R3は-O-、-S-、-CH2-、-N-、―、-CHA-、および-CHOA-であり、ここでAはアリール基、エステル、アミド基、脂質、糖、またはペプチドであり、
YはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、コハク酸塩、またはアミド基であり、
ZはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、コハク酸塩、またはアミド基である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
本明細書で開示する共鳴修飾剤の特定例は、2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007と呼ばれる）で、ここで化合物は
【化４６】
2008540428.tif 000075
であり、式中のR1はOHで、R2はC6H4OHで、XはC6H3-2,4(NO2)2である。共鳴修飾化合物の多くの他の例も本明細書で開示した。これらは、ホルミルフェニルヒドラゾンおよびアセチルバルビツル酸フェニルヒドラゾンの類似体、ホルミルバルビツル酸シッフ塩基の類似体を含む。他の例は、2,6-ジベンジリデンシクロヘキサノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾンで、
【化４７】
2008540428.tif 000076
式中のXはニトロフェニル（C6H3-2,4(NO2)2）で、R1はHで、R2は非置換のフェニル基で、R3はCH2である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
【実施例】
［実施例１］フェニルヒドラゾンとの共鳴修飾
この実施例では、修飾特性と検出特性両方を持つ、特に適した共役芳香族化合物を開示する。そのような或る化合物は、ポリアリールモノニトロ‐またはジニトロフェニルヒドラゾンを含み、例えば
【化４８】
2008540428.tif 000077
などであり、式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチル硫酸塩、ニトロソ基、琥珀酸塩、もしくは、水素結合が可能な他の水溶性求電子基であり、R2はC6H5、C6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、ArはC6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
これらの波形を得るために、A-007を無菌ガラス顕微鏡スライド上に凝結した。乾燥したスライドを、RPMI（5%ウシアルブミン）を含むペトリ皿に浸し、一対の無菌微小電極を溶媒内に挿入し（約5 cm離して）、さらにA-007の線の反対の端につないで配置し、電圧を記録した。A-007は溶媒には溶けず、継続してスライド上に残る。誘導電流は存在しないため、測定された電流が共鳴修飾化合物の固有特性となった。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
或る特定の実施例では、化合物は、以下のような、モノもしくはポリアリールモノニトロ‐またはジニトロフェニルヒドラゾンであり、
【化５６】
2008540428.tif 000078
式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、ニトロソ基、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、琥珀酸塩、または他の水素結合が可能な水溶性求電子基であり、R2はC6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、かつArは一つ以上のニトロ部分で置換されたアリール基をあらわす。或る実施形態では、ArはC6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2を含む。或る特定の実施例では、R1はOHで、R2はC6H4OH、かつXはC6H3-2,4(NO2)2である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
或る実施形態では、有用な化合物は以下の構造によってあらわされ、
【化５７】
2008540428.tif 000079
式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、琥珀酸塩、または他の水素結合可能な水溶性求電子基であり、R2はC6H5、C6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、XはC6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2であり、かつYは-O-、-S-、-CH2-、-N-、―、-CHA-、または-CHOA-で、ここでAはアリール基、エステル基、アミド基、脂質、糖、またはペプチド残基である。特定の実施例では、R1はOH、R2はC6H4OH、かつArはC6H3-2,4(NO2)2である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
他の実施形態では、化合物は以下の構造を持ち、
【化５８】
2008540428.tif 000080
式中のR1は水素、ヒドロキシル基、2-ヒドロキシフェニル基もしくは4-ヒドロキシフェニル基、酢酸塩、リン酸塩、アジド基、二トリル基、アミノ基、ジメチルアミノ基、硫酸塩、メチルスルホン酸塩、琥珀酸塩、または他の水素結合可能な水溶性求電子基であり、R2はC6H4OH、C6H4N3、C6H4CN、CH3、4-HO-C6H4-C6H4、C6H4OPO2OH、C6H4OSO2H、C6H4NH2、C6H4NHMe2、C6H4OSO2Me、C6H4OCO(CH2)xCO2H、またはC6H5Clであり、XはC6H4-4(NO2)、C6H4-3(NO2)、またはC6H3-2,4(NO2)2であり、YはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、琥珀酸塩、またはアミド基であり、かつZはH、(CH)xCH3（x = 0-12）、-S-CH3、二トリル基、アミノ基、ニトロ基、アジド基、琥珀酸塩、またはアミド基である。特定の実施例では、R1はHまたはOH、R2はC6H4OHまたはC6H5、かつArはC6H3-2,4(NO2)2である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２５】
子宮頸癌（HPV-誘発突然変異を介して変形した）は、A-007の結晶の存在下で細胞死する。これは、共鳴を通して、受容体と細胞死を高めるシステイン残基のHS-SH二量化を触媒するA-007の能力を裏付ける。これは子宮頸癌の患者によって異なっていた（Table 2）。0.25% A-007局所ゲルを、膣内に毎日２グラムの用量で５日間適用した。A-007誘導細胞死は、HPVを含まない、あるいはHPVによって変形されていない良性線維芽細胞または正常上皮細胞では観察されなかった。A-007などの共鳴修飾剤を含む化合物を、HPV感染患者の子宮頸部／膣上皮膜に局所適用することで、癌細胞が除去され、さらにウィルス粒子の除去、およびCD45RO+CD4+とCD8+ T-リンパ球の上方制御が見られた。A-007の局所適用による最大の治療効果は、HIV感染細胞における細胞死の誘導である（下記のTable 2）。Table 2で示されるように、A-007はT-リンパ球の存在を増加させ、特にCD45+、CD123+、CD4+およびCD8+細胞を増加させる。特定の実施例では、CD45+、CD4+、およびCD8+細胞の増加が特に注目された。特に、CD45RO+、CD45RA+およびCD45RB+の増加が注目された。
【表３】
2008540428.tif 000081
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３３】
［実施例１２］4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007）の抗腫瘍性および免疫修飾特性
4,4'-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン（A-007）は、肛門扁平上皮細胞癌患者において顕著な抗癌活性を生じた（Table 3）。0.25%のA-007を含む局所ゲル（１日当たり２グラムのゲル）を、５日間毎日肛門内に適用した。観察された結果をTable 3に示す。
【表４】
2008540428.tif 000082
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５１】
以下の化合物のCD45とのドッキングをこの方法に従ってあらわす。
【化６２】
2008540428.tif 000083
これらの試験において、示された化合物はA-007よりも良い結合スコアを持ち、この主な理由は、上記の化合物のジヒドロキシビフェニル部分と密接に接触するポケットへの入り口でARG47によってより強く保持されるためである。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４１】
免疫刺激を必要とする被験者の免疫反応を刺激する方法であり、
免疫刺激を必要とする被験者の選択と、
免疫刺激を必要とする前記被験者に、以下の構造を持つA-007以外の共鳴修飾化合物を治療有効量投与することを含み、
【化１２】
2008540428.tif 000084
ここで式中のArは一つ以上の電子求引基で置換されたアリール基を含み、
XはNH、CH2、O、―、SO2、またはB、
Qは-(CH=CH)m-CH-、
YとY'は独立にN、CHおよびBから選択され、
nは0または1、
mは0から6、
R1はH、低級アルキル基、随意に置換されたフェニル基または以下の構造で、
【化１３】
2008540428.tif 000085
ここで式中のR4は随意に置換されたフェニル基であり、
R2は随意に置換された低級アルキル基、アラルキル基、チオアルキル基、アミドアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、ニトロ基、アジド基であり、Zと共に随意に置換された4-7員環の炭素環または複素環を形成するか、あるいはR3と共に随意に置換されたフェニル基を形成し、
R3はR2と共に随意に置換されたフェニル基を形成するか、または随意に置換されたフェニル基であり、かつ、
ZはH、低級アルキル基、置換されたアルキル基、チオアルキル基、二トリル基、アミノ基であるか、またはR3と共に随意に置換された4-7員環の炭素環もしくは複素環を形成する、
ことを含む方法。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項８２】
前記被験者の前記上皮表面への前記化合物の適用が、前記皮膚への前記化合物の導入を含む、請求項８０の方法。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１１７】
前記生物組織を前記化合物の前記有効量へ晒すことが、生体の皮膚に前記化合物を適用することを含む、請求項１１６の方法。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１４１】
前記化合物の投与が、前記化合物を少なくとも毎日、5日間以上投与することを含む、請求項１３８の方法。
【国際調査報告】
2008540428.tif 000086
2008540428.tif 000087
2008540428.tif 000088
2008540428.tif 000089
2008540428.tif 000090
2008540428.tif 000091