(57)【要約】  次式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和化合物、複合体またはプロドラッグが開示される:2008540393.tif 000037式中、  Ｒ1およびＲ2は、同じかまたは異なり、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基およびアルキルアミノ基からなる群から選択されてよく；  Ｘは、カルボン酸基、カルボキシレート基、またはカルボキサミド基を表わす。但し、式（Ｉ）の化合物は、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、α−メチルＤＨＡ、α−メチルＤＨＡメチルエステル、α−メチルＤＨＡエチルエステル、またはα−ヒドロキシＤＨＡエチルエステルではない。  そのような化合物を含む脂肪酸組成物および医薬組成物もまた開示される。斯かる化合物の、特に２型糖尿病治療のための医薬としての使用も開示される。
2008540393.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和化合物、複合体またはプロドラッグ。
【化１】
2008540393.tif 000036
（式中、
Ｒ1およびＲ2は、同じかまたは異なり、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基およびアルキルアミノ基からなる群から選択されてよく；
Ｘは、カルボン酸基、カルボキシレート基、またはカルボキサミド基を表わす。
但し、
式（Ｉ）の化合物は、（全てＺ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、α−メチルＤＨＡ、α−メチルＤＨＡメチルエステル、α−メチルＤＨＡエチルエステル、またはα−ヒドロキシＤＨＡエチルエステルではない。）
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルキル基が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ヘキシルおよびベンジルからなる群から選択される化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、前記ハロゲン原子が、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素からなる群から選択される化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルコキシ基が、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、ＯＣＨ2ＣＦ3およびＯＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3からなる群から選択される化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルケニル基が、アリル、２−ブテニルおよび３−ヘキセニルからなる群から選択される化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルキニル基が、プロパルギル、２−プチニルおよび３−ヘキシニルからなる群から選択される化合物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物であって、前記アリール基がフェニル基である化合物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルキルチオ基が、メチルチオ、エチルチオ、イソプロピルチオおよびフェニルチオからなる群から選択される化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルコキシカルボニル基が、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニルおよびブトキシカルボニルからなる群から選択される化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルキルスルフィニル基が、メタンスルフィニル、エタンスルフィニルおよびイソプロパンスルフィニルからなる群から選択される化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルキルスルホニル基が、メタンスルホニル、エタンスルホニルおよびイソプロパンスルホニルからなる群から選択される化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物であって、前記アルキルアミノ基が、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノおよびジエチルアミノからなる群から選択される化合物。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物であって、前記カルボキシレート基が、エチルカルボキシレート、メチルカルボキシレート、ｎ−プロピルカルボキシレート、イソプロピルカルボキシレート、ｎ−ブチルカルボキシレート、ｓｅｃ−ブチルカルボキシレートおよびｎ−ヘキシルカルボキシレートからなる群から選択される化合物。
【請求項１４】
請求項１に記載の化合物であって、前記カルボキサミド基が、一級カルボキサミド、Ｎ−メチルカルボキサミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド、Ｎ−エチルカルボキサミドおよびＮ，Ｎ−ジエチルカルボキサミドからなる群から選択される化合物。
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲが、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基およびアルキルアミノ基からなる群から選択される化合物。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2が、水素原子、ヒドロキシ基、Ｃ1−Ｃ7アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基、アミノ基、およびＣ1−Ｃ7アルキルアミノ基からなる群から選択される化合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の化合物であって、
前記Ｃ1−Ｃ7アルキル基は、メチル、エチルあるいはベンジルであり；
前記ハロゲン原子は、フッ素またはヨウ素であり：
前記Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基は、メトキシまたはエトキシであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基は、メチルチオ、エチルチオまたはフェニルチオであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基は、エタンスルフィニルであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基は、エタンスルホニルであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルアミノ基は、エチルアミノまたはジエチルアミノであり；また
Ｘは、エチルカルボキシレートまたはカルボキサミド基を表す化合物。
【請求項１８】
請求項１に記載の化合物であって、
前記Ｒ1およびＲ2は、水素原子、Ｃ2−Ｃ7アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基、アミノ基、およびＣ1−Ｃ7アルキルアミノ基からなる群から選択され；また
Ｘはカルボキシレートを表わす化合物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の化合物であって、
前記Ｃ2−Ｃ7アルキル基は、エチル、またはベンジルであり；
前記ハロゲン原子は、フッ素またはヨウ素であり：
前記Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基は、メトキシまたはエトキシであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基は、メチルチオ、エチルチオまたはフェニルチオであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基は、エタンスルフィニルであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基は、エタンスルホニルであり；
前記Ｃ1−Ｃ7アルキルアミノ基は、エチルアミノまたはジエチルアミノであり；また
Ｘは、エチルカルボキシレートである化合物。
【請求項２０】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2が異なる化合物。
【請求項２１】
ラセミ体である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ型立体異性体である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｓ型立体異性体である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２４】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2の一方はＣ2-7アルキル基を表し、また他方は水素原子を表わす化合物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の化合物であって、前記アルキル基がエチルである化合物。
【請求項２６】
ラセミ体である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ型立体異性体である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｓ型立体異性体である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
請求項２４に記載の化合物であって、前記前記アルキル基がベンジルである化合物。
【請求項３０】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2の一方がアルコキシ基を表わし、他方が水素原子を表わす化合物。
【請求項３１】
請求項３０に記載の化合物であって、前記アルコキシ基が、エトキシまたはメトキシである化合物。
【請求項３２】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2の一方がハロゲン原子を表わし、他方が水素原子を表わす化合物。
【請求項３３】
請求項３２に記載の化合物であって、前記ハロゲン原子が、フッ素またはヨウ素である化合物。
【請求項３４】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2の一方がアルキルチオ基を表わし、他方が水素原子を表わす化合物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の化合物であって、前記アルキルチオ基がエチルチオである化合物。
【請求項３６】
請求項３４に記載の化合物であって、前記アルキルチオ基がメチルチオまたはフェニルチオである化合物。
【請求項３７】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2の一方がアルキルスルホニル基を表わし、他方が水素原子を表わす化合物。
【請求項３８】
請求項３７に記載の化合物であって、前記アルキルスルホニル基がエタンスルホニルである化合物。
【請求項３９】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2の一方がアミノ基を表わし、他方が水素原子を表わす化合物。
【請求項４０】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2の一方がアルキル−アミノ基を表わし、他方が水素原子を表わす化合物。
【請求項４１】
請求項４０に記載の化合物であって、前記アルキル−アミノ基がエチル−アミノまたはジエチル−アミノである化合物。
【請求項４２】
請求項１に記載の化合物であって、前記Ｒ1およびＲ2がＣ1−Ｃ7−アルキル基である化合物。
【請求項４３】
請求項４２に記載の化合物であって、前記アルキル基がメチル基である化合物。
【請求項４４】
請求項４２に記載の化合物であって、前記アルキル基がエチル基である化合物。
【請求項４５】
請求項２０〜４４の何れか１項に記載の化合物であって、Ｘがエチルカルボキシレートである化合物。
【請求項４６】
請求項１〜４５の何れか１項に記載の化合物であって、リン脂質の形態、トリ−、ジ−もしくはモノグリセリドの形態、または遊離酸の形態である化合物。
【請求項４７】
医薬として使用される、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物。
【請求項４８】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物を製造する方法。
【請求項４９】
請求項４８に記載の方法であって、前記化合物が（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）から調製される方法。
【請求項５０】
請求項４９に記載の方法であって、前記ＤＨＡが植物資源、微生物資源および／または、動物資源から調製される方法。
【請求項５１】
請求項５０に記載の方法であって、前記ＤＨＡが海産物油から調製される方法。
【請求項５２】
請求項５１に記載の方法であって、前記海産物油が魚油である方法。
【請求項５３】
有効成分として請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項５４】
請求項５３に記載の医薬組成物であって、更に、薬学的に許容可能なキャリアを含有する医薬組成物。
【請求項５５】
経口投与のために処方された、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
カプセルまたはサシェーの形態である、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
請求項５３〜５６の何れか１項に記載の医薬組成物であって、前記化合物の１０ｍｇ〜１０ｇの１日投与量を与えるために処方された医薬組成物。
【請求項５８】
請求項５７に記載の医薬組成物であって、前記化合物の１００ｍｇ〜１ｇの１日投与量を与えるために処方された医薬組成物。
【請求項５９】
請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物を含む脂肪酸組成物。
【請求項６０】
請求項５９に記載の脂肪酸組成物であって、該脂肪酸組成物の少なくとも６０重量％は前記化合物で構成される脂肪酸組成物。
【請求項６１】
請求項６０に記載の脂肪酸組成物であって、該脂肪酸組成物の少なくとも９０重量％は前記化合物で構成される脂肪酸組成物。
【請求項６２】
請求項５９〜６１の何れか１項に記載の脂肪酸組成物であって、更に、（全Ｚ）−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、（全Ｚ）−６，９，１２，１５，１８−ヘンエイコサペンタエン酸（ＨＰＡ）、および／または（全Ｚ）−７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）から選択される脂肪酸を含有してなる脂肪酸組成物。
【請求項６３】
請求項６２に記載の脂肪酸組成物であって、前記脂肪酸が誘導体の形態で存在する脂肪酸組成物。
【請求項６４】
請求項５９〜６３の何れか１項に記載の脂肪酸組成物であって、更に、薬学的に許容可能な酸化防止剤を含有してなる脂肪酸組成物。
【請求項６５】
請求項６４に記載の脂肪酸組成物であって、前記酸化防止剤がトコフェロールである脂肪酸組成物。
【請求項６６】
医薬として使用するための、請求項５９〜６５の何れか１項に記載の脂肪酸組成物。
【請求項６７】
体重減少の制御および／または体重増加の防止のための医薬を製造するための、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用。
【請求項６８】
肥満症または過体重状態の治療および／または予防のための医薬を製造するための、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用。
【請求項６９】
動物における糖尿病の予防および／または治療のための医薬を製造するための、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用。
【請求項７０】
請求項６９に記載の使用であって、前記糖尿病が２型糖尿病である使用。
【請求項７１】
アミロイド症関連疾患の治療および／または予防のための医薬を製造するための、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用。
【請求項７２】
心臓血管系疾患の多重危険因子の治療または予防、好ましくは血中脂質増大の治療のための医薬を製造するための、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用。
【請求項７３】
幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の発作の予防のための医薬を製造するための、請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物の使用。
【請求項７４】
体重減少を制御および／または体重増加を防止する方法であって、薬学的に有効な量の請求項１〜４６の何れか１項に記載の化合物がヒトまたは動物に投与される方法。
【請求項７５】
肥満症または過体重状態を治療および／または予防する方法であって、薬学的に有効な量の請求項１〜４６の何れか１項に記載の式（Ｉ）の化合物がヒトまたは動物に投与される方法。
【請求項７６】
糖尿病を予防および／または治療する方法であって、薬学的に有効な量の請求項１〜４６の何れか１項に記載の式（Ｉ）の化合物がヒトまたは動物に投与される方法。
【請求項７７】
請求項７６に記載の方法であって、前記糖尿病が２型糖尿病である方法。
【請求項７８】
アミロイド症関連疾患を治療および／または予防する方法であって、薬学的に有効な量の請求項１〜４６の何れか１項に記載の式（Ｉ）の化合物がヒトまたは動物に投与される方法。
【請求項７９】
心臓血管系疾患の多重危険因子を治療または予防する方法であって、薬学的に有効な量の請求項１〜４６の何れか１項に記載の式（Ｉ）の化合物がヒトまたは動物に投与される方法。
【請求項８０】
幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の発作を予防する方法であって、薬学的に有効な量の請求項１〜４７の何れか１項に記載の式（Ｉ）の化合物がヒトまたは動物に投与される方法。
【請求項８１】
請求項７４〜８０の何れか１項に記載の方法であって、式（Ｉ）の化合物が経口的にヒトまたは動物に投与される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、下記一般式（Ｉ）の化合物、特に２型糖尿病およびその前段階の治療用医薬としてのそれらの使用に関する。
【化１】
2008540393.tif 000003
また、本発明は式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成物、並びに式（Ｉ）の化合物を含有する脂肪酸組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
２型糖尿病の発生の世界的増大は、予防的および治療的な戦略を成功裏に実施するための莫大な公衆衛生および医療的問題を提示している。２型糖尿病に密接に関連した過体重および肥満の同時発生は、糖尿病治療を妨害し、高血圧症、異脂肪血症およびアテローム性動脈硬化関連疾患の可能性を増大させる。
２型糖尿病発症の序幕となる病態生理学的状態は、インスリン抵抗性と呼ばれる末梢組織に対するインスリンの影響低下に関連している。これらの組織は主に筋肉、脂肪および肝臓である。筋組織は、２型糖尿病におけるインスリン抵抗性に関係する主な組織である。インスリン抵抗性、高血圧症、異脂肪血症および前身の前炎症性状態によって特徴づけられる症候群は、代謝性症候群と称される。先進国の成人人口中の代謝性症候群の罹患率は、２２〜３９％である（Meighs 2003）。
現在、代謝性症候群を緩和および抑止する最も有望なアプローチは、減量、飽和脂肪消費の減少、適切な薬物療法と組み合わされた身体運動の増大を伴うライフスタイル介入である。過剰エネルギー摂取を回避する健全な食事は、飽和脂肪の代りに、モノ不飽和および多価不飽和脂肪酸で代用することを包含する。魚類脂肪由来の長鎖オメガ−３脂肪酸、すなわちエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）は、特に２型糖尿病の予防に有益であることが見出された。
ＥＰＡおよびＤＨＡは、血漿脂質レベル、心臓血管機能および免疫機能の調節、インスリン作用および神経発達、並びに視覚機能のような、正常な健康状態および慢性疾患に影響を与える種々の生理学的プロセスに対する影響を有している。冠動脈性心疾患、異脂肪血症、２型糖尿病、インスリン抵抗性および高血圧症の予防および管理における、それらの有益な役割ついての確かな証拠が存在する（Soimonopoulos 1999; Geleijnse 2002; Storlien 1998）。
【０００３】
最近の研究は、オメガ３脂肪酸が遺伝子発現の重要なメディエータとして働いており、脂質およびグルコース代謝ならびに脂肪生成（Jump 2002）に関与する遺伝子発現を制御するペルオキシゾーム増殖因子応答性受容体（ＰＰＡＲ）等の核受容体を介して作用することを示唆している。ＰＰＡＲは、高脂血症、インスリン抵抗性および冠動脈性心疾患等の肥満症関連の代謝病に重要な役割を果たすことに関連した核脂肪酸受容体である。
3つのサブタイプ、α、γおよびδは、異なる発現パターンを有しており、異なるリポタンパク質成分を検知して、特定組織の必要性に基づいた脂質ホメオスタシスを調節するように進化したものである。ＰＰＡＲαは、肝臓中の脂肪酸異化を増強するものであり、脂質を低下させるフィブラート（fibrate）の分子標的である。一方、ＰＰＡＲγは脂肪細胞の分化に不可欠であり、まだ完全には理解されないメカニズムを介してインスリン感作性チアゾリジンジオン（グリタゾン）の活性を媒介する（Chih-Hao 2003; Yki-Jarvinen 2004）。
最近、ＰＰＡＲγ受容体への配位子として働く薬剤が、２型糖尿病治療剤として導入された（Yki-Jarvinen 2004）。これらチアゾリジンジオン類またはグリタゾン類と呼ばれる化合物は、代謝性症候群および２型糖尿病の発症の病態生理学的基礎であるインスリン抵抗性を反転させる。これら化合物（そのうちのロシグリタゾンとピオグリタゾンは医薬として開発されている）は、空腹時および食後のグルコース濃度（それらは病理学的グルコース負荷試験として現れる）、血漿インスリン濃度、並びに遊離脂肪酸濃度を低下させる。この点で、グリタゾンはインスリン抵抗性改善薬として働く。
【０００４】
しかしながら、これらの改善には、一般に体重増加および皮下脂肪組織増加が伴う（Adams 1997）。チアゾリジンジオンの使用は、体重増加に関係するだけでなく、患者のサブグループは更に体液鬱滞および血漿量増大を伴い、これは末梢組織の浮腫を導く。体重および浮腫の増加は心不全の発生率の増加に関係しており、これは、食品医薬品局がロシグリタゾン（Avandiaが提供）およびピオグリタゾン（武田が提供）の投薬情報に警告を含めた理由である。これらの副作用は、特に冠動脈心疾患の患者におけるグリタゾンの使用を制限する。明らかに、インスリン抵抗性に対するプラスの効果を有すると共に、体重減少作用を有し、且つ体液鬱滞傾向のない新薬は将来性が存在する。
ＰＰＡＲに対するポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の影響は、単に、脂肪酸構造および受容体に対する親和性の結果だけではない。細胞内非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）の組成レベルに対する寄与要因もまた重要である。このＮＥＦＡプールは、細胞に導入される外因性脂肪酸の濃度および内因性の合成される脂肪酸の量、並びにそれらの脂質中への組込みおよび酸化経路を介しての除去によって影響される（Pawar 2003）。
オメガ−３脂肪酸はＰＰＡＲの弱いアゴニストであるが、チオグリタゾンのような薬理学的アゴニストと比較したときに、これらの脂肪酸は、グルコース摂取およびインスリン感受性における改善を実証した（Storlien 1987）。食事中の飽和脂肪酸に対するポリ不飽和脂肪酸の比率が増加するときには、脂肪細胞はよりインスリン感受性であり、より多くのグルコースを輸送することが報告された（Field 1990）。総合すると、これらのデータは、炭素数が２０および２２の脂肪酸（即ち、ＥＰＡおおびＤＨＡ）が、インスリン抵抗性の発症に予防的役割を果たし得るであろうことを示している。
【０００５】
生体内での限定された安定性およびそれらの生物学的特異性の欠如により、ＰＵＦＡは治療薬として広範な使用を達成していない。ｎ−３多価不飽和脂肪酸の化学的修飾が、それらの代謝効果を変更または増大させるために、幾つかの研究グループによって行なわれた。
例えば、ＥＰＡのα位またはβ位にメチルまたはエチルを導入することによって、ＥＰＡの脂質低下的影響が増強された（Vaagenes 1999）。また、この化合物は血漿遊離脂肪酸をも低下させたのに対して、ＥＰＡ ＥＥは効果がなかった。
L.ラーセンによって公表された最近の論文（Larsen 2005）において、著者は、ＥＰＡおよびＤＨＡのα−メチル誘導体が、核受容体ＰＰＡＲの活性化を増大させ、それにより、ＥＰＡ/ＤＨＡと比較してＬ−ＦＡＢＰの発現を増大させることを示した。α−位にエチル基を備えたＥＰＡは、α−メチルＥＰＡと同じ強さでＰＰＡＲを活性化させた。著者は、これらα−メチルＦＡの異化の遅延が、ペルオキシゾーム酸化を導くミトコンドリアでのβ酸化の低下に起因して、それらの増大した効果に寄与することを示唆した。
α−メチルＥＰＡは、生体外（Larsen 1998）および生体内（Willumsen 1998）の両方において、ＥＰＡよりも強い血小板凝集阻害剤であることが示されている。
日本の公開番号０５−００９７４の特許要約書は、α位がＯＨ基で置換されたＤＨＡを開示しているが、これは中間体としての開示に過ぎず、この化合物の可能な薬学的効果に関する試験は開示されていない。
また、ラクスデール・リミテッド社（La×dale Limited）は、精神障害または中枢神経障害の治療における、ＥＰＡのα−置換誘導体の使用を開示した（米国特許第６，６８９，８１２号）。
【化２】
2008540393.tif 000004
しかしながら、これらの修飾された脂肪酸は、何れも満足な薬学的活性を呈さず、医薬品市場に出されることはなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
（発明の概要）
本発明の目的は、治療的活性を有する新規なＤＨＡ誘導体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明に基づいて、添付の特許請求の範囲には多くの側面が呈示される。これら側面の幾つかは次の通りである：
１．新規化合物、即ち、一定のα−置換された多価不飽和脂肪酸誘導体。
２．医薬として使用するため、および治療において使用するための新規化合物。
３．前記新規化合物を含有する脂肪酸組成物または医薬組成物。
４．医薬として使用するため、および治療において使用するための、前記新規化合物を含有する脂肪酸組成物。
５．ヒトまたは動物において糖尿病を予防および／または治療するための医薬を製造するための、前記新規化合物の使用。
６．肥満症または過体重の症状を治療および／または予防するための医薬を製造するための、前記新規化合物の使用。
７．体重減少を制御するため、および／または体重増加を防止するための医薬を製造するための、前記新規な化合物の使用。
８．アミロイド症関連の疾患を治療および／または予防するための医薬を製造するための、前記新規化合物の使用。
９．多重リスク因子、または心臓血管系疾患の治療または予防のための医薬を製造するための、前記新規化合物の使用。
１０．幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血もしくは一過性虚血の発作を予防するための医薬を製造するための、前記新規化合物の使用。
１１．糖尿病の状態、特に２型糖尿病を特異的に治療するための方法。
１２．体重減少を制御するため、体重増加を防止するため、および／または肥満症もしくは過体重状態を治療および／または予防するための方法。
１３．アミロイド症関連疾患を治療および／または予防するための方法。
１４．心臓血管系疾患の多重リスク因子を治療または予防するための方法
１５．幾つかの動脈の動脈硬化に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の発作を予防するための方法。
１６．本発明による新規な脂肪酸類縁体を調製するための方法。
本発明は、次式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和化合物、複合体またはプロドラッグに関する:
【０００８】
【化３】
2008540393.tif 000005
式中、
Ｒ1およびＲ2は、同じかまたは異なり、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基、アシル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルキルチオ基、アルコキシカルボニル基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基およびアルキルアミノ基からなる群から選択されてよく；
Ｘは、カルボン酸基、カルボキシレート基、またはカルボキサミド基を表わす。
但し、
式（Ｉ）の化合物は、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、α−メチルＤＨＡ、α−メチルＤＨＡメチルエステル、α−メチルＤＨＡエチルエステル、またはα−ヒドロキシＤＨＡエチルエステルではない。
【０００９】
上記の但書きは、下記の場合に対応する：
・Ｒ1が水素原子であれば、Ｒ2は水素原子ではない；
・Ｒ2が水素原子であれば、Ｒ1は水素原子ではない；
・Ｒ1がメチル基であれば、Ｒ2は水素原子ではなく、またＸはカルボン酸基、メチルカルボキシレートあるいはエチルカルボキシレートではない；
・Ｒ2がメチル基であれば、Ｒ1は水素原子ではなく、またＸはカルボン酸基、メチルカルボキシレートあるいはエチルカルボキシレートではない；
・Ｒ1がヒドロキシ基であれば、Ｒ2は水素原子ではなく、またＸはエチルカルボキシレートではない；
・Ｒ2がヒドロキシ基であれば、Ｒ1は水素原子ではなく、またＸはエチルカルボキシレートではない。
【００１０】
本発明による化合物において、前記アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ヘキシル、およびベンジルからなる群から選択されてよく；前記ハロゲン原子は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素からなる群から選択されてよく；前記アルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、ＯＣＨ2ＣＦ3、およびＯＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3からなる群から選択されてよく；前記アシルオキシ基は、アセトキシ、プロピオノキシ（propiono×y）およびブチロキシ（butyro×y）から選択されてよく；前記アルケニル基は、アリル、２−ブテニル、および３−ヘキセニルからなる群から選択されてよく；前記アルキニル基は、プロパルギル、２−ブチニル（butynyl）、およびヘキシニル（he×ynyl）からなる群から選択されてよく；前記アリール基はフェニル基であり；前記アルキルチオ基は、メチルチオ、エチルチオ、イソプロピルチオおよびフェニルチオからなる群から選択されてよく；前記アルコキシカルボニル基は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、およびブトキシカルボニルからなる群から選択されてよく；前記アルキルスルフィニル基は、メタンスルフィニル、エタンスルフィニルおよびイソプロパンスルフィニルからなる群から選択されてよく；前記アルキルスルホニル基は、メタンスルホニル、エタンスルホニルおよびイソプロパンスルホニルからなる群から選択されてよく；前記アルキルアミノ基は、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノおよびジエチルアミノからなる群から選択されてよく；前記カルボキシレート基は、エチルカルボキシレート、メチルカルボキシレート、ｎ−プロピルカルボキシレート、イソプロピルカルボキシレート、ｎ−ブチルカルボキシレート、ｓｅｃ−ブチルカルボキシレートおよびｎ−ヘキシルカルボキシレートからなる群から選択されてよく；前記カルボキサミド基は、一級カルボキサミド、Ｎ−メチルカルボキサミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルカルボキサミド、Ｎ−エチルカルボキサミド、およびＮ，Ｎ−ジエチルカルボキサミドからなる群から選択されてよい。
【００１１】
本発明の一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2は、水素原子、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アミノ基およびアルキルアミノ基からなる群から選択される。
本発明のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2は、水素原子、ヒドロキシ基、Ｃ1−Ｃ7アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基、アミノ基、およびＣ1−Ｃ7アルキルアミノ基からなる群から選択される。そして、前記Ｃ1−Ｃ7アルキル基は、メチル、エチルまたはベンジルであってよく；前記ハロゲン原子は、フッ素またはヨウ素であってよく：前記Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基は、メトキシまたはエトキシであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基は、メチルチオ、エチルチオまたはフェニルチオであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基は、エタンスルフィニルであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基は、エタンスルホニルであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルアミノ基は、エチルアミノまたはジエチルアミノであってよく；また前記Ｘは、エチルカルボキシレートまたはカルボキサミド基を表してよい。
本発明のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2は、水素原子、Ｃ2−Ｃ7アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基、Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基、アミノ基、およびＣ1−Ｃ7アルキルアミノ基からなる群から選択され；また、Ｘはカルボキシレートを表わす。そして、前記Ｃ2−Ｃ7アルキル基はエチル、またはベンジルであってよく；前記ハロゲン原子はフッ素またはヨウ素であってよく：前記Ｃ1−Ｃ7アルコキシ基は、メトキシまたはエトキシであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルチオ基はメチルチオ、エチルチオあるいはフェニルチオであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルフィニル基は、エタンスルフィニルであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルスルホニル基はエタンスルホニルであってよく；前記Ｃ1−Ｃ7アルキルアミノ基は、エチルアミノまたはジエチルアミノであってよく；また、Ｘはエチルカルボキシレートを表す。
【００１２】
本発明の式（Ｉ）による化合物では、Ｒ1およびＲ2は、同じであっても異なってもよい。それらが異なる場合、式（Ｉ）の化合物は立体異性体の形態で存在することができる。本発明が式（Ｉ）の化合物の全ての光学異性体、並びにラセミ体を含むそれらの混合物を包含することが理解されるであろう。
従って、Ｒ1がＲ2とは異なる場合、本発明は、ラセミ体、または（Ｓ）型もしくは（Ｒ）型エナンチオマーとしての鏡像異性的に純粋な式（Ｉ）の化合物を包含する。従って、Ｒ1がＲ2とは異なる場合に、本発明は、ラセミ体、または（Ｓ）型もしくは（Ｒ）型の立体異性体としての鏡像異性的に純粋な式（Ｉ）の化合物を含んでいる。
上記で定義した式（Ｉ）の化合物のエナンチオマーは、本発明の範囲内である。更に、本発明によるＤＨＡ誘導体のエナンチオマーは、カルボン酸、あるいはその薬学的に許容可能な塩、何れかのエステル、酸無水物またはアミド（一級、二級、三級）であってもよいであろう。これらの酸誘導体は、リン脂質あるいはトリ−、ジ−もしくはモノグリセリドの形態であってもよいであろう。
【００１３】
本発明による式（Ｉ）の化合物の一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2の一方はＣ2−Ｃ7アルキル基、例えばエチルまたはベンジルを表わし、他方は水素原子を表わす。好ましくは、当該アルキル基はエチルである。
発明による式（Ｉ）の化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2の一方はアルコキシ基、例えばエトキシまたはメトキシを表わし、他方は水素原子を表わす。
本発明による式（Ｉ）の化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2の一方はハロゲン原子、例えばフッ素またはヨウ素を表わし、他方は水素原子を表わす。
本発明による式（Ｉ）の化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2の一方はアルキルチオ基、例えばエチルチオ、メチルチオまたはフェニルチオを表わし、他方は水素原子を表わす。好ましくは、該アルキルチオ基はエチルチオである。
発明による式（Ｉ）の化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2のうちの一方はアルキルスルホニル基、例えばエチルスルホニルを表し、他方は水素原子を表わす。
本発明による式（Ｉ）の化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2の一方はアミノ基を表わし、他方は水素原子を表わす。
本発明による式（Ｉ）の化合物のもう一つの実施形態において、Ｒ1およびＲ2の一方はアルキル−アミノ基、例えば、エチル−アミノあるいはジエチル−アミノを表わし、他方は水素原子を表わす。
【００１４】
本発明による式（Ｉ）の化合物のさらなる実施形態において、Ｒ1およびＲ2は同一であり、Ｃ1−Ｃ7アルキル基、好ましくはメチル基またはエチル基を表す。
式（Ｉ）の化合物の好ましい実施形態において、Ｘはカルボキシレート、例えば、エチルカルボキシレートである。
本発明による化合物は、リン脂質、トリ−、ジ−もしくはモノグリセリドの形態、または遊離酸の形態で存在してよい。
発明によるα−置換ＤＨＡ誘導体は、薬学的活性に関して、非常に驚くべき優れた結果を示した。本発明による脂肪酸誘導体は、特に、糖尿病およびその前段階の治療および／または予防において使用されるべき大きな可能性を有している。
【００１５】
本発明の別の側面は、医薬として使用するための式（Ｉ）の化合物に関する。
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。例えば、式（Ｉ）の化合物は、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）から調製されてよい。ＤＨＡは、例えば植物資源、微生物資源および／または海産魚油等の動物資源に由来してよい。式（Ｉ）の化合物を用いるもう一つの重要な利点は、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）から脂肪酸類似体を直接調製できることである。
本発明の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の脂肪酸類似体はＤＨＡから調製され、ここでのＤＨＡは植物資源、微生物資源および動物資源の少なくとも一つ、またはそれらの組み合わせから得られる。従って、本発明には、微生物資源のＤＨＡ含有油から調製された誘導体が含まれる。適切には、前記ＤＨＡは魚油等の海産油から製造される。
本発明のもう一つの側面は、有効成分として、式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成物に関する。医薬組成物は、更に薬学的に許容可能なキャリアを含有してよい。適切には、本発明による医薬組成物は経口投与のために、例えばカプセルまたはサシェーの形態で処方される。本発明による式（Ｉ）の化合物の適切な１日投与量は、１０ｍｇ〜１０ｇ、特に１００ｍｇ〜１ｇである。
【００１６】
加えて、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含有する脂肪酸組成物に関する。該脂肪酸組成物の少なくとも６０重量％、または少なくとも９０重量％が前記化合物で構成されてよい。当該脂肪酸組成物は、更に、（全Ｚ）−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、（全Ｚ）−６，９，１２，１５，１８−ヘンエイコサペンタエン酸（ＨＰＡ）、および／または（全Ｚ）−７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を含んでよい。これら脂肪酸は、誘導体の形態で存在してよい。本発明による脂肪酸組成物は、更に、薬学的に許容可能な酸化防止剤（例えばトコフェロール）を含有してよい。医薬として使用するための上記脂肪酸組成物もまた、本発明の範囲内である。
更なる側面において、本発明は、体重減少を制御するためおよび／または体重増加を防止するための医薬を製造するため；肥満症または過体重状態の治療および／または予防のための医薬を製造するため；動物における糖尿病、特に２型糖尿病を予防および／または治療するための医薬を製造するため；アミロイド症関連疾患を治療および／または予防するための医薬を製造するため；心臓血管系疾患の多重リスク因子を治療または予防するため、好ましくは増大した血中脂質を治療するための医薬を製造するため；幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の発作を予防するための医薬を製造するための、式（Ｉ）に従う化合物の使用に関する。
【００１７】
加えて、本発明は、体重減少を制御するため、および／または体重増加を防止するための方法；肥満症または過体重状態を治療および／または予防するための方法；糖尿病、特に２型糖尿病を予防および／または治療するための方法；アミロイド症関連疾患を治療および／または予防するための方法；心臓血管系疾患の多重リスク因子を治療または予防するための方法；幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の発作を予防するための方法に関し、ここでは薬学的に有効な量の式（Ｉ）の化合物は経口的にヒトまたは動物に投与される。好適には、式（Ｉ）の化合物は経口的にヒトまたは動物に投与される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明に導いた研究においては、優れた薬学的活性示す新規なＤＨＡ誘導体が調製された。
脂肪酸は受動的に、または脂肪酸輸送蛋白質のようなＧタンパク質結合輸送体系を介して細胞内に導入される。細胞の内部において、それらは結合蛋白質（脂肪酸結合蛋白質、ＦＡＢＰ）により一時的に結合されるが、該結合タンパク質は、新陳代謝および遺伝子発現のために種々の細胞内区画へと脂肪酸を向ける上で重要な役割を果たす（Pawar & Jump 2003）（図１、肝臓細胞）。
トリグリセリド、極性脂質およびコレステロールエステルへの脂肪酸のエステル化、およびそれらのベータ酸化（ミトコンドリア的、およびペルオキシゾーム的）は、脂肪酸のアシルＣｏＡチオエステルへの変換を必要とする。ミクロソームＮＡＤＰＨ依存性のモノ酸化およびエイコサン類合成のような他の経路は、基質として非エステル化脂肪酸を利用する。これらの反応は、遊離脂肪酸（非エステル化）の細胞レベルに影響を及ぼし、それによって核受容体に対するリガンドとして使用できるであろう脂肪酸の量および種類に影響する可能性がある。ＰＰＡＲは非エステル化脂肪酸に結合することが知られているので、遊離脂肪酸プールの組成物が、ＰＰＡＲ活性の制御において重要な決定因子であると予測することは合理的である。
【００１９】
遊離脂肪酸プールの組成は、細胞に導入される外因性脂肪酸の濃度、および上記で列挙した経路を介してのその除去速度に影響される。短鎖および中鎖脂肪酸が効果的にこれら経路に補充されるので、実際には、長鎖の多価不飽和脂肪酸だけが核受容体にリガンド結合するために利用可能であろう。加えて、脂肪酸構造もまた重要な決定要素である可能性がある。一連のモノ不飽和および多価不飽和脂肪酸がＰＰＡＲα受容体への親和性を示したとしても、ＥＰＡおよびＤＨＡが、ラット肝細胞の実験において最も高い結合能力を実証した（Pawar & Jump 2003）。
ＰＰＡＲ等の核受容体との相互作用によりタンパク質の遺伝子変化に利用可能な脂肪酸候補を探索することによって、それぞれの脂肪酸が、遊離脂肪酸プールの中で濃縮されるであろうことを立証することが重要である。
細胞に導入されるＤＨＡは、迅速に脂肪アシルＣｏＡチオエステルに変換されてリン脂質の中に組込まれ、そのために、細胞内におｋるＤＨＡレベルは比較的低い。これらＤＨＡ−ＣｏＡは、主としてペルオキシゾームにおけるβ酸化の基質であり、該酸化はＤＨＡのＥＰＡへの逆変換を導く（図１参照）。中性脂質への迅速な組込み、および酸化経路のために、ＤＨＡは遊離脂肪酸プールの中に長くは留まらない。これにより、遺伝子発現に対するＤＨＡの影響はおそらく制限される。
【００２０】
本発明はリン脂質への組込みではなく、遊離脂肪酸プールにおける脂肪酸誘導体の蓄積を達成することを目的とする。本願の発明者等は、驚くべきことに、ＤＨＡのα位に少なくとも一つの置換基を導入することによって、中性脂質へのより少ない組み込みに加えて、より遅い酸化速度が導かれることを見出した。これは、遺伝子発現に対する増大した効果を導くであろう。何故なら、ＤＨＡ誘導体は組織内、特に肝臓、筋肉および脂肪細胞内に蓄積して、ＤＨＡよりも大きく、ローカルな核受容体活性をトリガーするからである。
本発明による異なる置換基は、脂肪酸結合性受容体に対する、誘導体の変化する親和性を与えるであろう。更に、脂肪酸結合性蛋白質に対する親和性の変化が、これら式（Ｉ）のα置換ＤＨＡ誘導体の、生物学的活性の変化を導くことも可能である。これらの変化が総合的に、ＤＨＡと比較したときの、本発明によるＤＨＡ誘導体の増加した治療効果を導くものである。
ＥＰＡ、即ち、（全Ｚ）−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸は、以前にはミトコンドリア酸化を阻害するために、α位およびβ位でアルキル化されていた。ＤＨＡは、ミトコンドリアにおいて酸化されず、むしろリン脂質の中に組込まれる。しかし、ペルオキシゾームにおいて、或るＤＨＡはＥＰＡに逆変換される。ＥＰＡおよびＤＨＡのα位における置換基は、これに起因して異なる代謝経路に影響するであろう。α−メチルＥＰＡおよびβ−メチルＥＰＡがリン脂質およびトリグリセリドの中に組込まれるのに対して、α−エチルＥＰＡは組込まれないことが先に示されている（Larsen、1998年）。この研究において、これらの誘導体は、エイコサノイドカスケードに関与する酵素の基質および／または阻害剤として試験された。これら酵素の基質の殆どはリン脂質から放出される脂肪酸なので、当該誘導体はリン脂質に組込まれることが望ましかった。これとは対照的に、先に述べたように、我々は脂質に組込まれずにＮＥＦＡプールの中に蓄積する誘導体を望んでいる。
【００２１】
この説明の全体を通して、「ＰＲＢ−×」の略号（ここでの×は整数である）は、本発明による特定の化合物を記述するときに用いられる。以下に、これら化合物の各々の構造式および慣用名を列挙する。
【化４】
2008540393.tif 000006
【００２２】
【化５】
2008540393.tif 000007
【００２３】
【化６】
2008540393.tif 000008
【００２４】
【化７】
2008540393.tif 000009
【００２５】
【化８】
2008540393.tif 000010
【００２６】
【化９】
2008540393.tif 000011
【００２７】
【化１０】
2008540393.tif 000012
【００２８】
ＰＲＢ−１は、Ｒ1またはＲ2の一方がメチルで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−２は、Ｒ1またはＲ2の一方がエチルで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−３は、Ｒ1またはＲ2の一方がエトキシで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−４は、Ｒ1またはＲ2の一方がフッ素で、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−５は、Ｒ1およびＲ2がメチルで、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−６は、Ｒ1またはＲ2がメチルチオであり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−７は、Ｒ1またはＲ2の一方がエチルチオで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−８は、Ｒ1およびＲ2の一方がエチルで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−９は、Ｒ1またはＲ2の一方がベンジルで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
【００２９】
ＰＲＢ−１０は、Ｒ1またはＲ2の一方がエタンスルフィニルで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−１１は、Ｒ1またはＲ2の一方がフェニルチオで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−１２は、Ｒ1またはＲ2の一方がヒドロキシで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−１３は、Ｒ1またはＲ2の一方がメチルで、他方が水素であり、またＸが一級カルボキサミドである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−１４は、Ｒ1またはＲ2の一方がメトキシで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−１５は、Ｒ1またはＲ2の一方がヨウ素で、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−１７は、Ｒ1またはＲ2の一方がアミノで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−２０は、Ｒ1またはＲ2の一方がエチルで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物の（Ｓ）型立体異性体に対応する。
ＰＲＢ−２３は、Ｒ1またはＲ2の一方がエチルで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物の（Ｒ）型立体異性体に対応する。
ＰＲＢ−２４は、Ｒ1またはＲ2の一方がＮ−フタルイミドで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−２５は、Ｒ1またはＲ2の一方がエチルアミノで、他方が水素であり、またＸが一級カルボキサミドである式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−２６は、Ｒ1またはＲ2の一方がジエチルアミノで、他方が水素であり、またＸがエチルカルボキシレートであるある式（Ｉ）の化合物に対応する。
ＰＲＢ−２は本発明による最も好ましい化合物である。本発明による他の好ましい化合物はＰＲＢ−５、ＰＲＢ−７およびＰＲＢ−８である。
【００３０】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の可能な何れかの薬学的に許容され得る塩、溶媒和化合物、複合体、またはプロドラッグをも包含することが理解されるべきである。
「プロドラッグ」は、それ自身として薬理学的活性を有していてもよく、または有していなくてもよいが、投与（例えば経口的または非経口的に）された後に、身体内で生物学的活性化（例えば、代謝）を受けて、薬理学的に活性な本発明の薬剤を形成するものである。
Ｘがカルボン酸である場合、本発明はまた、当該カルボン酸の塩も含むものである。カルボキシ基の薬学的に許容可能な適切な塩には、金属塩、例えば、アルミニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、リチウム、ナトリウムまたはカリウム）、アルカリ性金属塩（カルシウムまたはマグネシウム）、およびアンモニウム塩若しくは置換アンモニウム塩が含まれる。
「治療的に有効な量」は、その意図した目的を達成するのに有効な治療薬の量を意味する。個々の患者の必要量は変化する可能性があり、各酸化窒素付加物の有効量の最適な範囲の決定は、当業者の技量の範囲内にある。一般に、本発明の化合物および／または組成物を用いて症状を治療するための投薬療法は、患者の種類、年齢、体重、性別、食事および病状を含む種々の要因に従って選択される。
【００３１】
「医薬」とは、医療目的で使用するのに適切した形態、例えば医薬、製剤または製品、食事療法製品、食品または食品サプリメントの形態の、式（Ｉ）の化合物を意味する。
本明細書の内容において、もしそれに反する特定の表示がなければ、「治療」の用語には「予防」も含まれる。「治療的」および「治療的に」の用語は、これに従って解釈されるべきである。
治療には、ヒトまたは非ヒト動物に有益であり得る如何なる治療的適用も含まれる。哺乳類の治療は特に好ましい。ヒトおよび家畜の治療は、両者とも本発明の範囲内である。治療は、現実に存在している状態に関するものであってもよく、または予防的なものであってもよい。それは、成人、青少年、幼児、胎児、またはこれらの何れか一部（例えば器官、組織、細胞または核酸分子）であってよい。「慢性の治療」は、数週間または数年の間継続する治療を意味する。
「治療的または薬学的に有効な量」は、望ましい薬理学的および／または治療的効果を導く量に関連する。本発明による化合物は、例えば、食品、食品サプリメント、栄養学的サプリメント，または食事療法製品の中に含められてよい。
【００３２】
α−置換ＤＨＡ誘導体およびＥＰＡ（またはその代りにＤＨＡ）は、ノボザイム４３５［固相化された形態の、カンジダ・アンタルクチカ（Candida antarctica）由来の商業的に入手可能なリパーゼ］に触媒された該α−誘導体、ＥＰＡおよびグリセロールの混合物間でのエステル化プロセスによって、トリグリセリド形態で一緒に結合し、組み合わせることができる。
式（Ｉ）の化合物は、特に核受容体活性のトリガーとして、薬学的活性を有している。従って、本発明はまた、医薬として使用するための、および／または治療において使用するための式（Ｉ）の化合物、その薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、複合体またはプロドラッグに関する。好ましくは、本発明の新規化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、複合体もしくはプロドラッグは、次の目的のために使用することができる：
・ヒトまたは動物における糖尿病の予防および／または治療のため；
・体重減少を制御するため、および／または体重増加を防止するため；
・ヒトまたは動物における肥満または過体重状態を治療および／または予防するため; 
・アミロイド症関連疾患の治療および／または予防のため;
・心臓血管系疾患の多重危険因子の治療または予防のため;
・幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の発作の予防のため；
・ＴＢＣまたはＨＩＶの治療のため。
【００３３】
糖尿病の二つの主要な形態がある。一つは１型糖尿病であり、これはインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）として知られている。もう一つは２型糖尿病であり、これはインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）としても知られている。２型糖尿病は肥満／過体重および運動不足と関係があり、多くの場合は成人において徐々に発症し、末梢インスリン抵抗性と称される低下したインスリン感受性によって引起される。これは、インスリン産生における補償的増大を導く。完全に誘導された２型糖尿病の発症前のこの段階は、代謝性症候群と称され、高インスリン血症、インスリン抵抗性、肥満症、グルコース不寛容、高血圧症、異常な血液脂質、凝固能亢進症、異脂肪血症および炎症によって特徴付けられ、屡々動脈のアテローム性動脈硬化症を導く。その後インスリン生産が停止すると、２型糖尿病が発症する。
好ましい実施形態において、式（Ｉ）による化合物は、２糖尿病の治療に使用されてよい。式（Ｉ）による化合物はまた、代謝性症候群、膵臓の、膵臓／内分泌腺以外の、もしくは薬剤性の糖尿病のような二次的糖尿病、または脂肪組織萎縮性、筋無緊張性、もしくはインスリン受容体障害性の糖尿病のような、例外的形態の糖尿病からなる群から選択される他の種類の糖尿病の治療に使用されてよい。本発明はまた、２型糖尿病の治療を含むものである。適切には、上記で定義した式（Ｉ）の化合物は、核受容体、好ましくはＰＰＡＲ（ペルオキシゾーム増殖因子に活性化される受容体）αおよび／またはγを活性化してよい。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物はまた、肥満症の治療および／または予防のために使用されてよい。通常、肥満症は増大したインスリン抵抗性にリンクしており、肥満症の人々は、心臓血管系疾患発症の主な危険因子である２型糖尿病になる危険が高い。肥満症は慢性病であり、それは西側社会において益々増加する比率の人々を苦しめ、また社会的不名誉だけでなく、短縮される寿命および多くの問題（例えば糖尿病、インスリン抵抗性、高血圧症）にも関係している。従って、本発明は、好ましくは肥満した人間の全体重または脂肪組織の量を減少させて、理想的な体重へと向わせるための、著しい副作用のない薬剤についての長年に亘る必要性を満たすものである。
式（Ｉ）による化合物はまた、アミロイド症関連疾患の予防および／または治療のために使用されてよい。好ましくはフィブリルまたはプラーク形成の結果としてのアミロイドの堆積に関連したアミロイド症関連の状態または疾患には、アルツハイマー病もしくは痴呆、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化、クロイッツェルフェルト・ヤコブ病、嚢胞性繊維症、一次もしくは二次腎アミロイド症、ＩｇＡ腎症、並びに動脈、心筋および神経組織におけるアミロイド沈着が含まれる。これらの疾患は、散発的もしくは遺伝的であることができ、更にはＴＢＣもしくはＨＩＶのような感染症に関連する可能性もある。また、遺伝的形態は寿命のかなり初期に現れ得るとしても、多くの場合は寿命の後期にのみ現れる。それぞれの疾患は特定のタンパク質に関連しており、或いは、これらタンパク質の凝集は当該疾患に関連した病状の直接的な起源であると考えられている。アミロイド症関連疾患の治療は、急性的または慢性的に行うことができる。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物はまた、アミロイド凝集の低下による治療、所謂フィブリルまたはプラークの形成を導き得るタンパク質の折畳みミスの防止による治療、Ａβ−タンパク質（アミロイドベータタンパク質）のような前駆体タンパク質の産生の減少による治療、並びにタンパク質フィブリル、凝集体またはプラークの形成の阻害または遅延による予防および／または治療のために使用されてよい。また、上記で定義した式（Ｉ）の化合物の投与によるフィブリルの蓄積または形成の防止もここに含められる。一つの実施形態において、上記で定義た新規化合物、その薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、複合体、またはプロドラッグは、ＴＢＣ（結核）またはＨＩＶ（ヒト免疫不全ウィルス）の治療のために使用される。
更に、式（Ｉ）の化合物は、脳に血液を供給する動脈のアテローム性動脈硬化症の症状、例えば脳卒中または一過性虚血発作の患者に対して、更なる可能な致死的発作の危険を低減するために投与されてよい。
式（Ｉ）の化合物はまた、ヒトにおける上昇した血中脂質の治療に使用されてよい。
加えて、上記で定義された式（Ｉ）の化合物は、高血圧症、高トリグリセリド血症および高い凝固因子ＶＩＩリン脂質複合体活性のような、心臓血管系疾患について知られた多重危険因子の治療および予防のために有益である。好ましくは、式（Ｉ）の化合物はヒトにおける高血中脂質の治療に使用される。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物、その薬学的に許容可能な塩の化合物、溶媒和物、プロドラッグまたは複合体は、単独で使用されてもよいが、一般には、式（Ｉ）の化合物（有効成分）を薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤またはキャリアと組み合わせた医薬組成物の形態で投与されるであろう。
従って、本発明はまた、治療的に有効な量の本発明の式（Ｉ）の化合物と、薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（それらの組み合わせを含む）とを含有してなる医薬組成物を提供する。
これは、治療的に有効な量の薬学的活性剤を含有する組成物、または該活性剤からなる組成物である。それは、好ましくは薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（その組み合わせを含む）を含んでいる。治療的使用のための許容可能なキャリアまたは希釈剤は、製薬技術において周知である。薬学的キャリアー、賦形剤または希釈剤の選択は、意図した投与ルートおよび標準の製薬実務に関して選択することができる。医薬組成物は、キャリア、賦形剤または希釈剤として、またはそれに加えて、何れか適切なバインダー、潤滑剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含有してよい。
【００３７】
本発明の範囲内にある医薬組成物は、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、風味剤、香料、塩（本発明の化合物自身が薬学的に許容可能な塩の形態で提供されてよい）、緩衝剤、コーティング剤、酸化防止剤、懸濁化剤、アジュバント、賦形剤、および希釈剤の１以上を含んでよい。
本発明による医薬組成物は、好ましくは、ヒトまたは動物への経口投与のために処方される。該医薬組成物は、有効成分が効率的に吸収および利用され得る他の経路、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、鼻腔内、直腸内、膣内、または局所的経路を通して投与するために処方されてよい。
本発明の特定の実施形態において、医薬組成物はカプセルの形態で成形され、これは粉末またはサシェー剤を生じるマイクロカプセルであってよいであろう。該カプセルは風味付けされてもよい。この実施形態はまた、カプセルおよび該カプセルに封入される脂肪酸組成物の両方が風味付けされたカプセルを含むものである。カプセルに風味付けすることによって、それはユーザにとって更に魅力的になる。上記で述べた治療的使用のための投与量は、勿論、使用される化合物、投与モード、望まれる治療、および適用症に応じて変化するであろう。
【００３８】
当該医薬組成物は、１０ｍｇ〜１０ｇの１日投与量を提供するために処方されてよい。好ましくは、該組成物は、５０ｍｇ〜５ｇの前記組成物の１日投与量を提供するために処方される。最も好ましくは、当該医薬組成物は、１００ｍｇ〜２ｇの前記組成物の１日投与量を与えるように処方される。１日投与量とは、２４時間当りの投与量を意味する。勿論、投与される量は使用される化合物、投与モード、望まれる治療および適応症に応じて変化するであろう。典型的には、臨床医は個々の患者に最も適した実際の投与量を決定するであろう。何れか特定の患者についての特定の投与量レベルおよび頻度は変化してよく、これは使用された特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用時間の長さ、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与のモードおよび時間、排泄速度、併用薬物、特定の症状の重篤度、および個々が受けている治療を含む種々の要因に依存するであろう。本発明の薬剤およびまたは医薬組成物は、１日当たり１〜１０回、例えば１日当たり１回または２回の投与指針に従って投与されてよい。ヒト患者への経口投与および非経口投与について、薬剤の１日投与レベルは１回投与量または分割投与量であってよい。
本発明の更なる側面は、式（Ｉ）の化合物を含む脂肪酸組成物に関する。式（Ｉ）の化合物を含む脂肪酸組成物は、遺伝子発現調節の結果であるＤＨＡの自然な生物学的作用を増加させ、また、本発明による誘導体は遊離脂肪酸プールの中に蓄積するであろう。
【００３９】
当該脂肪酸組成物は、６０〜１００重量％の式（Ｉ）の化合物を含有してよく、ここでの全ての重量パーセンテージは、脂肪酸組成物の全体の重量に基づくものである。本発明の好ましい実施形態では、脂肪酸組成物の少なくとも８０重量％は式（Ｉ）の化合物で構成される。より好ましくは、式（１）の化合物は脂肪酸組成物の少なくとも９０重量％を構成する。最も好ましくは、式（Ｉ）の化合物は脂肪酸組成物の９５重量％以上を構成する。
当該脂肪酸組成物は更に、（全Ｚ）−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、（全Ｚ）−６，９，１２，１５，１８−ヘンエイコサペンタエン酸（ＨＰＡ）、および（全Ｚ）−７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡｎ−３）、（全Ｚ）−８，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸（ＥＴＡｎ−３）の少なくとも一つの脂肪酸、またはそれらの組合せを含んでよい。更に、該脂肪酸組成物は、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡｎ−６）および／または（全Ｚ）−５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸（ＡＲＡ）、またはそれらの誘導体を含有してよい。当該脂肪酸組成物はまた、少なくともこれら脂肪酸またはそれらの組み合わせを、誘導体の形態で含んでよい。該誘導体は、上記で定義した式（Ｉ）のＤＨＡ誘導体と同じ方法で、適切に置換される。
【００４０】
本発明による脂肪酸組成物は、少なくとも１．５重量％の量で、または少なくとも３重量％の量で、ＥＰＡおよびＤＨＡ以外の、２０、２１、または２２の炭素原子を有するオメガ−３脂肪酸またはその誘導体を含んでよい。
発明の特定の実施形態では、脂肪酸組成物は、医薬組成物、栄養剤組成物あるいはダイエット組成物である。該脂肪酸組成物は更に、有効量の薬学的に許容可能な酸化防止剤を含んでよい。好ましくは、酸化防止剤はトコフェロール、またはトコフェロール類の混合物である。好ましい実施形態において、当該脂肪酸組成物は、更に脂肪酸組成物の全重量１ｇ当たり約４ｍｇ以内の量で、トコフェロール、またはトコフェロール類の混合物を含有する。好ましくは、当該脂肪酸組成物は、組成物の全重量に基づいて、０．２〜０．４ｍｇ／ｇのトコフェロールを含有する。
本発明の別の側面は、上記で定義した式（Ｉ）の化合物を含む、医薬として、および／または治療において使用するための脂肪酸組成物、またはその何れかの薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、プロドラッグ、または複合体を提供する。このような脂肪酸組成物は、式（Ｉ）の化合物について上記で概説したのと同じ状態を予防および／または治療するために使用してよい。
脂肪酸組成物が医薬として使用されるとき、それは治療的にまたは薬学的に有効な量で投与されるであろう。
好ましい実施形態において、当該脂肪酸組成物は、ヒトまたは動物に対して経口で投与される。
【００４１】
本発明はまた、上記で定義した式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、プロドラッグ、または複合体の使用であって：体重減少を制御するため、および／または体重増加を防止するための医薬の製造；肥満症または過体重の治療および／または予防のための医薬の製造；ヒトまたは動物における糖尿病の予防および／または治療のための医薬の製造；アミロイド症関連疾患の治療および／または予防のための医薬の製造；高血圧症、高トリグリセリド血症、および高凝固因子ＶＩＩリン脂質複合体活性のような、心臓血管系疾患について知られた多重危険因子の治療および予防のための医薬の製造；ＴＢＣまたはＨＩＶの治療のための医薬の製造；あるいは、幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の予防のための医薬の製造；哺乳動物における血中トリグリセリドを低下させ、および／またはヒト患者の血清中のＨＤＬコレステロールを上昇させるための医薬の製造；または「代謝性症候群」と称される多重代謝性症候群の治療および／または予防のための医薬の製造における使用を提供する。また、これら全ての実施形態は、上記で概説した医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物を含有する上記で定義した脂肪酸組成物の使用をも含む。本発明は更に、上記で概説した医薬を製造するための、α−ヒドロキシ-ＤＨＡの使用に関する。
本発明はまた、体重減少を制御するため、および体重増加を防止するための方法であって、上記で定義された少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物を含む脂肪酸組成物が、ヒトまたは動物に投与される方法に関する。
【００４２】
更に、本発明は、肥満症または過体重状態を治療および／または防止するための方法であって、上記で定義された少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物を含む脂肪酸組成物が、ヒトまたは動物に投与される方法に関する。
本発明の好ましい実施例において、本発明は、糖尿病を予防および／または治療するための方法であって、上記で定義された少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物を含む脂肪酸組成物が、ヒトまたは動物に投与される方法に関する。好ましくは、該糖尿病は２型糖尿病である。
本発明の他の側面は、
・アミロイド症関連疾患を治療および／または予防するための方法；
・心臓血管系疾患の多重危険因子を治療または予防処置するための方法；
・幾つかの動脈のアテローム性動脈硬化症に関連した脳卒中、脳虚血または一過性虚血の発作を防止する方法であって、
上記で定義された少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物を含む脂肪酸組成物が、ヒトまたは動物に投与される方法に関する。
式（Ｉ）の脂肪酸誘導体は、ＤＨＡから最も効率的に調製することができる。出発物質が純粋なＤＨＡでなければ（即ち、１００％ＤＨＡでない）、最終の脂肪酸組成物は、上記で定義したＤＮＡ誘導体と、ＤＨＡ以外のある量の他の脂肪酸との混合物を含んでおり、これら脂肪酸もまた式（Ｉ）の新規な脂肪酸類似体と同じ方法で置換される。このような実施形態もまた本発明含まれるものである。
【００４３】
本発明のもう一つの実施形態において、式（Ｉ）の化合は、（全Ｚ）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）から調製され、ここでののＤＨＡは植物、微生物および／または動物資源、またはそれらの組み合わせから得られるものである。好ましくは、前記ＤＨＡは魚油のような海産油から得られる。
当該組成物中の脂肪酸もまた、植物、微生物および／または動物資源、またはそれらの組み合わせから得られてよい。従って、本発明はまた、微生物油から調製された脂肪酸組成物をも含むものである。
本発明はまた、上記で定義した式（Ｉ）の新規な脂肪酸類似体を調製するための方法を提供する。
ＤＨＡは、海産物脂肪、微生物脂肪あるいは植物性脂肪のような生物学的資源から製造される。全ての可能な原料は、ＤＨＡが脂肪酸の微量画分しか構成しないトリグリセリド形態の脂肪酸混合物である。典型的なＤＨＡ濃度は、海産物脂肪で４０％、微生物脂肪では１０〜２５％である。ＤＨＡ含有植物性脂肪は開発途上にあり、またＤＨＡ濃度の高い脂肪が将来的に期待される。
最初の処理段階は、常に、トリグリセリドの遊離脂肪酸またはモノエステルへの変換になるであろう。好ましいエステルは、メチルエステルまたはエチルエステルであるが、他のエステル類も可能である。この方法では、トリグリセリド上に三つづつ結合された脂肪酸が相互に分離され、それによって分離を可能にする。他の脂肪酸からＤＨＡを分離する幾つかの方法が利用可能であり、最も一般的なものは、揮発性によって脂肪酸を分離する短行程蒸留法、および不飽和度によって脂肪酸を分離する尿素沈殿法である。報告された他の方法は、不飽和度で脂肪酸を更に分離する硝酸銀錯化法、脂肪酸に触媒されたエステル化反応と短行程蒸留との組合せ、超臨界二酸化炭素を用いた向流抽出法である。
【００４４】
純粋なＤＨＡの製造に関連した最も重要な挑戦は、全ての利用可能な資源に存在するＣ２０−２２の高度不飽和脂肪酸からＤＨＡを分離することである。これら脂肪酸はＤＨＡに非常に類似した特性を有しているので、上記の方法は何れも十分な分離度を提供しない。幾つかの微生物性高ＤＨＡ脂肪（非常に低レベルのＣ２０−２２高度不飽和脂肪酸レベルを有する）については、短行程蒸留が、単独でまたは上記で述べた他の方法との組合せにより、９０％以上の純度を提供する可能性がある。
殆どのＤＨＡ含有脂肪は、更に相当な量のＣ２０−２２高度不飽和脂肪酸、例えば、ＥＰＡ（２０：５ｎ−３）、ｎ−３ＤＰＡ（２２：５ｎ−３）、ＨＰＡ（２１：５ｎ−３）等を含んでいる。そのような脂肪酸からＤＨＡを分離する唯一の利用可能な方法は、静止相がシリカゲルまたは硝酸銀含浸シリカゲルであり、移動相が有機溶媒または超臨界二酸化炭素から選択される、調製的高速液体クロマトグラフィーである。この方法では９７％を超える純度のＤＨＡが入手可能である。しかし、濃度に伴って製造コストが著しく増加することに注目しなければならず、その一例として、９７％ＤＨＡの製造コストは９０％ＤＨＡの５倍以上である。
９０％、９５％、９７％の純度を有するＤＨＡは、少量の他の脂肪酸を含んでいる。一例として、９７％の純度を有するＤＨＡは、ｎ−３ＤＰＡ（２２：５ｎ−３）や、他の長鎖脂肪酸、例えばＥＰＡ（２０：５ｎ−３）、ＨＰＡ（２１：５ｎ−３）等をも含んでいる。しかし、他の脂肪酸はＤＨＡに類似した方法で反応して、α−置換誘導体を生じる。
【００４５】
ＤＨＡおよびｎ−６ＤＰＡ（および通常は極く低濃度で存在する２２：５ｎ−６）は、最初の二重結合での環化により、γ・ラクトンを与えることができる唯一の既知脂肪酸なので、有機合成が精製方法を提供する可能性がある。ラクトン形成に続く精製、およびＤＨＡに加水分解する経路は、可能性はあるが、ＨＰＬＣよりも更にコスト高になることが予想される。
一つの実施形態において、Ｒ1（またはＲ2）が水素である式（Ｉ）の化合物は、下記プロセス（スキーム１）を通して調製される。適切に適合されたこれらのプロセスは、Ｒ1およびＲ2の両方が、例えばＣ1−Ｃ7アルキル基、ベンジル、ハロゲン、ベンジル、アルケニルまたはアルキニルである一般式（Ｉ）で表わされる化合物を調製するためにも使用さすることができる。
Ｒ1が水素であり、Ｒ2がＣ1-7アルキル基、ベンジル、ハロゲン、ベンジル、アルケニル、アルキニルを示す一般式（Ｉ）で表わされる化合物は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルのような溶媒中において、ＤＨＡエステルを、−６０℃〜−７８℃の温度で、リチウム・ジイソプロピルアミンまたはカリウム／ナトリウム・ヘキサメチルジシラザンのような強い非求核性塩基と反応させて、エステルエノレートを得ることによって調製される（プロセス１）。
【００４６】
（スキーム１）
【化１１】
2008540393.tif 000013
【００４７】
このエステルエノレートは、ヨウ化エチル、塩化ベンジルで例示されるハロゲン化アルキル、塩化アセチル、臭化ベンゾイルで例示されるハロゲン化アシル、無水酢酸で例示されるカルボン酸無水物のような親電子試薬、またはＮ−フルオロベンゼンスルホンイミド（ＮＦＳＩ）等で例示される親電子ハロゲン化試薬と反応されて、モノ置換誘導体を与える（プロセス２）。該エステルは更に、１５〜４０℃の温度で、水中の水酸化リチウム／ナトリウムのような塩基を添加することにより、エタノールまたはメタノールのような溶媒中においてカルボン酸誘導体に加水分解される。
ＤＨＡ・ＥＥを強塩基で処理する際には、ＤＨＡ・ＥＥのクライゼン縮合が生じる。この縮合生成物は、興味ある生物学的活性を有する可能性がある。従って、本発明の一つの実施形態においては、上記で述べた縮合（中間体）生成物、並びに該生成物の本発明による疾患の治療および／または予防のため使用が開示される。
更なる実施形態では、一般式（Ｉ）によって表わされる化合物が、次の方法（スキーム２）を通して合成される。
【００４８】
（スキーム２）
【化１２】
2008540393.tif 000014
【００４９】
Ｒ1が水素であり、Ｒ2がヒドロキシ、アルコキシ基、アシルオキシを示す一般式（Ｉ）で表わされる化合物は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルのような溶媒中において、ＤＨＡエステルを、−６０℃〜−７８℃の温度で、リチウム・ジイソプロピルアミンまたはカリウム／ナトリウム・ヘキサメチルジシラザンのような強い非求核性塩基と反応させて、エステルエノレートを得ることによって調製される（プロセス４）。このエステルエノレートを、トリメチルホスファイトのような異なる添加剤またはＮｉ（ＩＩ）錯体のような異なる触媒と共に、ジメチルジオキシラン、２−（フェニルスルホニル）−３−フェニルオキサジリジン、分子状酸素のような酸素原と反応させて、α−ヒドロキシＤＨＡエステルを得る（プロセス５）。この二級アルコールを、ＴＨＦまたはＤＭＦのような溶媒中において、水酸化ナトリウムのような塩基と反応させることによってアルコキシドを生じさせ、該アルコキシドを、ヨウ化アルキル（例えばヨウ化メチル、ヨウ化エチル）、臭化ベンジル、またはハロゲン化アシル（例えば塩化アセチル、臭化ベンゾイル）のような異なる親電子試薬と反応させる（プロセス６）。該エステルは、１５〜４０℃の温度で水中の水酸化リチウム／ナトリウム等の塩基を添加することにより、エタノールまたはメタノールのような溶媒中においてカルボン酸誘導体へと加水分解される（プロセス７）。
このヒドロキシ−ＤＨＡエステルは、本発明に従ってα位に他の官能基を導入するため有用な中間体である。水酸基は、アンモニア、アミン、チオール等の異なる求核試薬との反応に先立って、酸ハロゲン化物またはトシレートへの変換によって活性化させることができる。更に、光延反応は、他の官能基への水酸基の変換のために有用である（Mitsunobu, O, Synthesis, 1981, 1）。
【００５０】
上記で定義した一般式（Ｉ）で表わされる化合物は、先に説明した異なるプロセスの組合せによって合成することができる。本発明は、上記で述べたプロセスを含んでいる。
本発明は、更に、本発明の医薬組成物を調製するための方法であって、上記で定義した式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、複合体もしくはプロドラッグを、薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤またはキャリアと混合することを含んでなる方法を提供する。
先に定義した式（Ｉ）のラセミ化合物を分割することによって、鏡像異性体的に純粋な化合物を調製することができる。式（Ｉ）の化合物の分割は、既知の分割法、例えば、式（Ｉ）の化合物を鏡像異性体的に純粋な補助物と反応させて、クロマトグラフィーにより分離できるジアステレオマー混合物を与える方法を使用して実施すればよい。その後、化合物（Ｉ）の二つのエナンチオマーは、加水分解等の慣用手段によって、分離されたジアステレオマーから再生させればよい。
上記で定義したように、置換基の不斉キラル導入を行うために、化学量論的キラル補助物を使用することも可能である。キラルなオキサゾリジン−２−オンの使用は、特に有効な方法論であることが立証されている。キラルＮ−アシルオキサゾリジンから誘導されたエノレートは、種々の親電子剤を用いて、高度に立体規則的な方法でクエンチすることができる（Ager, Prakash, Schaad 1996）。
【実施例】
【００５１】
（実施例）
次に、以下の実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、これは本発明を限定するものと解釈されるべきではない。この実施例において、構造は質量分析（MS）により確認された。低および中程度のＤＨＡ（即ち、約４０〜６０ｗ％ＤＨＡ）を含む出発原料から、脂肪酸誘導体が製造されてよいことが指摘されるべきであろう。
【００５２】
＜合成プロトコル＞
・α−メチルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−１）の調製
ブチルリチウム（２２８ｍＬ、０．３７ｍｏｌ、ヘキサン中の１．６Ｍ）を、０℃でＮ2下に、乾燥ＴＨＦ（８００ｍＬ）中のジイソプロピルアミンの撹拌溶液（５９．５ｍＬ、０．４２ｍｏｌ）に滴下により添加した。得られた溶液を、０℃で３０分間撹拌し、−７８℃に冷却し、更に３０分間撹拌した後、乾燥ＴＨＦ（５００ｍＬ）中のＤＨＡ  ＥＥ（１００ｇ、０．２８ｍｏｌ）を２時間かけて滴下添加した。ＭｅＩ（２８ｍＬ、０．４５ｍｏｌ）を添加する前に、この暗緑色溶液を−７８℃で３０分間撹拌した。この溶液を、１．５時間かけて−２０℃に到達させ、次に水（１．５Ｌ）の中に注ぎ、ヘプタン（２×８００ｍＬ）で抽出した。合体させた有機相を１ＭのＨＣｌ（１Ｌ）で洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。この生成物を、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１）で溶出させるシリカゲル上での乾燥フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、５０ｇの表題化合物（４８％）を僅かに黄色を帯びた油として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １．０２（ｔ，Ｊ７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．２０（ｄ，Ｊ６．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．２９（ｔ，Ｊ７．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．０−２．６（ｍ，５Ｈ）、２．８−３．０（ｍ，１０Ｈ）、４．１７（ｔ，Ｊ７．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．３−５．５（ｍ，１２Ｈ）；
ＭＳ（電子スプレー法）；  ３９３［Ｍ＋Ｎａ］。
【００５３】
・α−エチルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−２）の調製
ブチルリチウム（４４０ｍＬ、０．６７ｍｏｌ、ヘキサン中の１．６Ｍ）を、０℃でＮ2下に、乾燥ＴＨＦ（７５０ｍＬ）中のジイソプロピルアミンの撹拌溶液（１１１ｍＬ、０．７８ｍｏｌ）に滴下により添加した。得られた溶液を、乾燥ＴＨＦ（１．６Ｌ）中のＤＨＡ  ＥＥ（２００ｇ、０．５６ｍｏｌ）を滴下添加する前に、−７８℃で４５分間撹拌した。エステルの添加は４時間で完了した。ＥｔＩ（６５ｍＬ、０．８１ｍｏｌ）を添加する前に、この暗緑色溶液を−７８℃で３０分間撹拌した。この溶液を、追加量のＥｔＩ（５ｍＬ、０．０６ｍｏｌ）を添加する前に−４０℃に到達させ、混合物を水中に注いでヘキサン（２×）で抽出する前に、最終的には−１５℃（−７８℃から３時間で）に到達させた。合体された有機相を１ＭのＨＣｌ（水）で洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。この生成物を、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１、続いて５０：１）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製して、黄色油状物として４２．２ｇの表題化合物（２０％）を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）δ  ０．８−１．０（ｍ，６Ｈ）、１．２−１．４（ｍ，４Ｈ）、１．５−１．７（ｍ，２Ｈ）、２．１２（ｍ，２Ｈ）、２．３−２．５（ｍ，２Ｈ）、２．８−３．０（ｍ，１０Ｈ）、４．１８（ｔ，Ｊ７．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．３−５．６（ｍ，１２Ｈ）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ４０７の［Ｍ＋Ｎａ］。
【００５４】
・α−エトキシ-ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−３）の調製
【化１３】
2008540393.tif 000015
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の６０％ＮａＨ懸濁液（８４．１ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）に、−７８℃でＮ2下に、ＴＨＦ（５  ｍＬ）中のα−ヒドロキシ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１２）（３７２ｍｇ、１．００  ｍｍｏｌ）の溶液を滴下により添加し、得られた混合物を、ヨウ化エチル（０．２４ｍＬ、３．０１ｍｍｏｌ）を滴下添加する前に−７８℃で２０分間撹拌した。この反応混合物を、一晩に亘って徐々に室温にまで加温した。ＮＨ4Ｃｌの飽和水溶液（１５ｍＬ）を添加し、該混合物をジエチルエーテル２５ｍＬ×２で抽出し、有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、減圧下で蒸発させ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９５：５）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、６８ｍｇの生成物（１７％）を黄色液体として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚおよびＣＤＣｌ３）δ  ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．１６−１．２９（ｍ，６Ｈ）、２．０５（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．５０（ｍ，２Ｈ）、２．７６−２．８４（ｍ，１０Ｈ）、３．３３−３．４８（ｍ，１Ｈ）、３．５３−３．７１（ｍ，１Ｈ）、３．８３（ｄｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．１８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．３１−５．４５（ｍ，１２Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．２、１５．１、２０．５、２５．５、２５．６、２５．７、３１．０、６０．８、６６．０、７８．７、１２４．１、１２７．０、１２７．８、１２７．９、１２８．０（２信号）、１２８．２（２信号）、１２８．５、１３０．７、１３２．０、１７２．５（隠れた３信号）
ＭＳ（電子スプレー）；  ４２３の［Ｍ＋Ｎａ］+
【００５５】
・α−フルオロＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−４）の調製
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬＤＡ（２．１ｍＬ、４．２ｍｏｌ、ＴＨＦ／ヘプタン／エチルベンゼン中の２Ｍ）を、−７８℃でＮ2下に、乾燥したＴＨＦ（３０ｍＬ）中のＤＨＡ  ＥＥ（１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）に１５分間かけて滴下添加した。その後、ＮＦＳｉ（１．０６ｇ、３．４ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液をＲＴに到達させ、７０時間撹拌した。その混合物を水の中に注ぎ、ヘキサン（２×）で抽出した。合体させた有機相を、１ＭのＨＣｌ（水）で洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させた；ＭＳ（電子スプレー）；３９７［Ｍ＋Ｎａ］。
【００５６】
・α，α−ジメチルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−５）の調製
ブチルリチウム（１００ｍＬ、０．１７ｍｏｌ、ヘキサン中の１．６Ｍ）を、０℃でＮ2下に、乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（２８ｍＬ、０．２０ｍｏｌ）の撹拌した溶液に滴下により添加した。得られた溶液を、０℃で３０分間撹拌し、−７８℃に冷却し、乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＤＨＡ  ＥＥ（５０ｇ、０．１４ｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた暗緑色溶液を、ＭｅＩ（１７ｍＬ、０．２８ｍｏｌ）を添加する前に、−７８℃で３０分間撹拌した。この溶液を−１０℃に到達させ、次いで水の中に注ぎ、ヘキサン（２×）で抽出した。合体させた有機相を１ＭのＨＣｌで洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。
この手順を繰返したが、ＤＨＡ  ＥＥの代わりに、α−メチルＤＨＡ  ＥＥの粗生成物を使用した。この生成物を、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１、続いて９８：２）で流出させるシリカゲル上での乾燥フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、僅かに黄色の油状物として３１．６ｇの表題化合物（５９％）を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）δ  １．０１（ｔ，Ｊ７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．２１（ｓ，６Ｈ）、１．２８（ｔ，Ｊ７．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．０８（ｍ，２Ｈ）、２．３４（ｄ，Ｊ６．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．８−３．０（ｍ，１０Ｈ）、４．１５（ｑ，Ｊ７．５Ｈｚ，２Ｈ）、５．３−５．６（ｍ，１２Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）δ  １４．７、２１．０、２５．３、２６．０、２６．１、３８．３、４２．８、６０．７、１２５．８、１２７．４、１２８．３、１２８．５、１２８．６、１２８．７、１２９．０、１３０．７、１３２．４、１７７．９；
ＭＳ（電子スプレー）；  ３８５の［Ｍ＋Ｈ］。
【００５７】
・α−チオメチルＤＨＡ（ＰＲＢ−６）の調製
２０ｍＬのＴＨＦに溶解したα−ヨードＤＨＡ  ＥＥ（０．５ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）に、０℃でＮ2の下に、ＭｅＳＮａ（８０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を、ヘプタンで希釈する前に、数分間撹拌させた。有機相を水で洗浄し（２×）、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（３０：１）のフラッシュクロマトグラフィーによって所望の生成物を単離し、淡黄色油状物としてα−チオメチルＤＨＡ  ＥＥを得た。このα−チオメチルＤＨＡ  ＥＥを、１０ｍＬのＥｔＯＨおよび１０ｍＬのＴＨＦの中に溶解させた。該溶液を、５ｍＬの水に溶解したＬｉＯＨ（０．３９ｇ、９．２ｍｍｏｌ）に添加した。該反応混合物を、水およびヘプタンで希釈する前に、室温で１番撹拌した。該有機画分を１ＭのＬｉＯＨ（２×）で抽出し、合体させた水相を５ＭのＨＣｌで酸性化し、ジエチルエーテル（２×）で抽出した。合体させた有機相を塩水、水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、１８３ｍｇの表題化合物（４７％）淡黄色油状物として得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．９８（ｔ，Ｊ６．６Ｈｚ，３Ｈ）、１．９５−２．６５（ｍ，７Ｈ）、２．７２−３．０５（ｍ，１０Ｈ）、３．１２−３．４３（ｍ，１Ｈ）、５．２０−５．７０（ｍ，１２Ｈ）、１０．６５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．７、２１．０、２５．９、２６．０、２６．２、２８．８、１２５．４、１２７．４、１２８．１、１２８．３、１２８．４、１２８．７、１２８．９、１２９．０、１３１．６、１３２．４、１７７．０。
【００５８】
・α−チオエチルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−７）の調製
１００ｍＬのＴＨＦ中に溶解されたα−ヨードＤＨＡ  ＥＥ（１１ｇ、２３ｍｍｏｌ）に、０℃でＮ2の下に、ＥｔＳＮａ（２．１ｇ、２５ｍｍｏｌ）を添加し、該溶液を０℃で１時間撹拌させた。この溶液を１Ｍ  ＨＣｌでクエンチし、ヘプタンで希釈した。有機相を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、水（２×）で洗浄し、減圧下で蒸発させた。ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（３０：１）のフラッシュクロマトグラフィーにより所望の生成物を単離して、７．３ｇの表題化合物（７６％）を淡黄色油状物として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １．１−１．３（ｍ，９Ｈ）、２．０５（ｍ，２Ｈ）、２．３−２．７（ｍ，４Ｈ）、２．７−２．９（ｍ，１０Ｈ）、３．２５（ｍ，１Ｈ），４．１７（ｑ，Ｊ７．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．３−５．５（ｍ，１２Ｈ）；
ＭＳ（電子スプレー）：  ４３９の［Ｍ＋Ｎａ］。
【００５９】
・α，α−ジエチルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−８）の調製：
ブチルリチウム（３８．６ｍＬ、０．６２ｍｏｌ、ヘキサン中の１．６Ｍ）を、０℃でＮ2下に、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（９．１ｍＬ、０．６５ｍｏｌ）の撹拌溶液中に滴下および添加した。得られた溶液を０℃で３０分間撹拌し、−７８℃に冷却し、乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のＤＨＡ  ＥＥの溶液（２０．０ｇ、０．５６ｍｏｌ）を滴下により添加した。得られた暗緑色の溶液を、ＥｔＩ（６．８ｍＬ、０．８４ｍｏｌ）を添加する前に、−７８℃で３０分間撹拌した。その溶液を−１０℃に到達させ、次いで水の中に注ぎ、ヘキサン（２×）で抽出した。合体させた有機相を１ＭのＨＣｌで洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。
この手順を繰返したが、ＤＨＡ  ＥＥの代わりに、α―エチルＤＨＡ  ＥＥの粗生成物を使用した。ＥｔＩ添加後の反応混合物を周囲温度に到達させ、一晩撹拌指せた。生成物を、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１、続いて９８：２）で溶出させるシリカゲル上での乾燥フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１０．０ｇの表題化合物（４３％）を僅かに黄色油状物として得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）δ  ０．８３（ｔ，Ｊ７．４Ｈｚ，６Ｈ）、０．９４（ｔ，Ｊ５．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．２８（ｔ，Ｊ７．１Ｈｚ，３Ｈ）、１．６３（ｑ，Ｊ７．４Ｈｚ，４Ｈ）、２．１０（ｍ，２Ｈ）、２．３４（ｄ，Ｊ６．９Ｈｚ，２Ｈ）、２．８−３．０（ｍ，１０Ｈ）、４．１５（ｑ，Ｊ７．５Ｈｚ，２Ｈ）、５．３−５．６（ｍ，１２Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）δ  ８．９、１４．７、２１．０、２３．１、２５．９、２６．０、２６．２、２７．４、３１．２、５０．１、６０．６、１２５．５、１２７．４、１２８．３、１２８．６、１２８．９、１３０．５、１３２．４、１７７．１；
ＭＳ（電子スプレー）；  ４１３．３［Ｍ＋Ｈ］、４３５．３［Ｍ＋Ｎａ］。
【００６０】
・α−ベンジルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−９）の調製：
乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．９１ｍＬ、６．４６ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、０℃に保持された不活性雰囲気下で、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中の１．６Ｍ、３．８６ｍＬ、６．１８ｍｍｏｌ）を滴下により添加した。その混合物を０℃で３０分間撹拌して−７８℃にし、５分間この温度で撹拌した。乾燥ＴＨＦ（１０  ｍＬ）中のＤＨＡ  ＥＥ（２．０ｇ、５．６２ｍｍｏｌ）を滴下により添加し、次いで臭化ベンジル（０．８０  ｍＬ（６．７４  ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、−７８℃で２０分間撹拌した。この得られた溶液を、３時間かけて０℃に到達させ、水（１００ｍＬ）およびヘプタン（１００  ｍＬ）の間で分配させた。水層をヘプタン（５０  ｍＬ）で抽出し、合体させた有機層を１ＭのＨＣｌで洗浄し、乾燥した（Ｎａ2ＳＯ4）。減圧下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１．０５ｇの表題化合物（４２％）を無色の油状物として得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ０．９９（ｔ，３Ｈ）、１．１８（ｔ，３Ｈ）、２．０８−２．１６（ｍ，２Ｈ）、２．３５−２．４２（ｍ，２Ｈ）、２．７４−２．９８（ｍ，１３Ｈ）、４．０９（ｑ，４Ｈ）、５．３８−５．５０（ｍ，１０Ｈ）、７．１９−７．３６（ｍ，５Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  １４．６１、１４．７１、２０．９９、２５．９８、２６．０７、３０．０７、３８．３２、４８．０２、６０．８８、１２６．７５、１２６．８３、１２７．４６、１２８．３１、１２８．４５、１２８．５３、１２８．５８、１２８．８６、１２８．７７、１２９．０１、１２９．３５、１３０．５５、１３２．４６、１３８．８９、１７５．３９；
ＭＳ（電子スプレー）：  ４４７．３［Ｍ＋Ｈ］、４６９．３［Ｍ＋Ｎａ］。
【００６１】
・α−エタンスルフィニルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−１０）の調製
不活性雰囲気下に−２０℃に維持された、１５ｍＬのＣＨＣｌ3中のα−チオエチルＤＨＡ  ＥＥ（０．５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の溶液に、１０ｍＬのＣＨＣｌ3中のＭＣＰＢＡ（０．２２ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。該反応混合物を、この温度で２時間撹拌し、濾過し、ＮａＨＣＯ3の飽和水溶液で洗浄した。水相をＣＨＣｌ3で２回抽出し、合体させた有機相を水および塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾乾燥し、濾過し、濃縮した。ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（８：２）を使用したフラッシュクロマトグラフィーの後に、生成物を残留物質から分離して、０．３５ｇの表題化合物（７０％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ０．９９、１．２７−１．４５（ｍ，６Ｈ）、２．０９（ｍ，２Ｈ）、２．７９−２．９４（ｍ，１４Ｈ）、３．５５（ｍ，１Ｈ）、４．２５（ｑ，２Ｈ）、５．３７−５．５９（ｍ，１２Ｈ）（ｔ，３Ｈ）；
13Ｃ−ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ７．９７、１４．５８、１４．６８、２０．９５、２３．６８、２５．１７、２５．９３、２６．０４、４４．２０、４５．１５、６２．３０、６４．０８、１２３．９１、１２４．４７、１２７．４１、１２７．８６、１２８．２６、１２８．４０、１２８．４４、１２８．７２、１２８．７２、１２８．９６、１２９．１２、１３２．４２、１３２．４７、１７４．５５；
ＭＳ（電子スプレー）：  ４５５．３［Ｍ＋Ｎａ］。
【００６２】
・α−チオフェニル−ＤＨＡ  エチルエステル（ＰＲＢ−１１）
【化１４】
2008540393.tif 000016
アセトン２０ｍＬ中のα−ヨード−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１５）（３．４０ｇ、７．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、アセトン１１０ｍＬ中のナトリウムフェニルスルフィドの溶液（１．０３９ｇ、７．８６ｍｍｏｌ）を滴下により添加した。得られた混合物を周囲温度で１．５時間撹拌し、減圧下で蒸発させ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（２００：１〜９５：５）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、黄色液体として２．３５ｇの生成物（７２％）を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．９７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．１８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．０９（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．５４−２．６６（ｍ，２Ｈ）、２．８３−２．８６（ｍ，１０Ｈ）、３．６７（ｄｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．２４−５．４９（ｍ，１２Ｈ）、７．２８−７．３３（ｍ，３Ｈ）、７．４６−７．５０（ｍ，２Ｈ）
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．０、１４．２、２０．５、２５．５、２５．６、２５．７、２９．４、５０．６、６１．１、１２５．１、１２７．０、１２７．７、１２７．９、１２８．０、１２８．３、１２８．４２、１２８．４５、１２８．９、１３１．２、１３２．０、１３３．０、１３３．２、１７４．１（隠された５つの信号）
ＭＳ（電子スプレー）；  ４６５［Ｍ＋Ｈ］+、４８７［Ｍ＋Ｎａ］+
Ｃ30Ｈ40Ｏ2Ｓについて計算されたＨＲＭＳ（ＥＩ）：  ４６４．２７４９、
実測値：  ４６４．２７４１
【００６３】
・α−ヒドロキシ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１２）の調製
【化１５】
2008540393.tif 000017
乾燥ＴＨＦ（４０  ｍＬ）中のジイソプロピルアミンの溶液（１９．７６ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃においてＮ2雰囲気下に、ヘキサン中の１．６ＭのＢｕＬｉ（８７．５ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）を滴下により添加した。得られた混合物を、ＴＨＦ（８０ｍＬ）中のＤＨＡエチルエステルの溶液（２４．９９ｇ、７０．１ｍｍｏｌ）を滴下して加える前に−７８℃で１５分間撹拌した。得られた暗緑色の反応混合物を、トリエチルホスファイト（１２．２ｍＬ、７０．１ｍｍｏｌ）を滴下して加える前に−７８℃で１時間撹拌し、次いで、反応混合物を通してＯ2を一晩バブリングさせる一方、反応混合物を−７８℃で５時間維持し、次いで徐々に室温にまで加温した。ＮａＨＣＯ3の飽和水溶液（１００ｍＬ）を添加し、該混合物をジエチルエーテル（２００のｍＬ×２）で抽出した。有機相を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、減圧下で蒸発させた、またヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、４．５２ｇの生成物（１７％）を黄色液体として得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．９２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．２４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．０２（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．４４−２．５４（ｍ，２Ｈ）、２．７４−２．８７（ｍ，１０Ｈ）、４．１３−４．２４（ｍ，３Ｈ）、５．２５−５．９４（ｍ，１２Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．０、１４．１、２０．４、２５．４、２５．５、２５．６、３２．０、６１．５、６９．９、１２３．３、１２６．９、１２７．７、１２７．９、１２８．０８、１２８．１、１２８．２、１２８．４、１３１．３、１３１．８、１７４．４（隠された４つの信号）
ＭＳ（電子スプレー）；  ３９５［Ｍ＋Ｎａ］+
Ｃ24Ｈ36Ｏ3Ｎａについて計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ）：  ３９５．２５５６
実測値：  ３９５．２５４３
【００６４】
・α−メチル−ＤＨＡアミド（ＰＲＢ−１３）の調製
【化１６】
2008540393.tif 000018
トルエン９０ｍＬ中のα−メチル−ＤＨＡ（ＰＲＢ−１  ＦＡ）（３．１３ｇ、９．１  ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（８．０ｍＬ、９４．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ０．１ｍＬを加え、得られた混合物を、Ｎ2雰囲気下に周囲温度で１５．５時間撹拌した。次いで、この混合物を減圧下で蒸発させ、残渣をＨＦ（１００ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却し、ＮＨ3水溶液（２０ｍＬ）を滴下して加えるた。氷浴を取外して該混合物を周囲温度で４時間撹拌し、水（５０ｍＬ）を添加し、水相をジエチルエーテル（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液５０ｍＬで洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させ、ＭｅＯＨ中のＣＨ2Ｃｌ2／２Ｍ・ＮＨ3（９７．５：２．５）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、２．５１ｇの生成物（８０％）を黄色液体として得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ０．９１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．１０（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．９４−２．１１（ｍ，３Ｈ）、２．１９−２．３５（ｍ，２Ｈ）、２．７６−２．７７（ｍ，１０Ｈ）、５．１８−５．４５（ｍ，１２Ｈ）、６．０３（ｓ，１Ｈ）、６．７２（ｓ，１Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．６、１７．６、２０．８、２５．８、２５．９、３２．０、４１．０、１２７．３、１２８．１、１２８．４、１２８．６、１２８．８、１３０．１、１３２．２、１７９．６（隠された８つの信号）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ３４２［Ｍ＋Ｈ］+、３６４［Ｍ＋Ｎａ］+
Ｃ23Ｈ35ＮＯについて計算されたＨＲＭＳ（ＥＩ）：  ３４１．２７１９、
実測値：  ３４１．２７０７
【００６５】
・α−メトキシ−ＤＨＡ  エチルエステル（ＰＲＢ−１４）の調製
【化１７】
2008540393.tif 000019
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の６０％ＮａＨ（６１．１ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、−７８℃でＮ2下に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のα−ヒドロキシ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１２）（３７３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、ヨウ化メチル（０．１３ｍＬ、２．０９ｍｍｏｌ）を滴下して加える前に、得られた混合物を−７８℃で２０分巻撹拌した。この反応混合物を５時間かけて徐々に室温にまで加温した。飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（１５ｍＬ）を添加し、該混合物をジエチルエーテル（２５ｍＬ×２）で抽出し、有機相を塩水２５ｍＬで洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１〜４：１）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、１３６ｍｇの生成物（３５％）を黄色液体として得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ０．９２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．２４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．０３（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．４８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）、２．７３−２．８２（ｍ，１０Ｈ）、３．３４（ｓ，３Ｈ）、３．７４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、５．２４−５．４３（ｍ，１２Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣl3）δ  １４．１、２０．４、２５．４、２５．５、２５．７、３０．６、５７．９、６０．９、８０．８、１２３．７、１２６．９、１２７．７１、１２７．７３、１２７．９２、１２７．９４、１２８．０７、１２８．１、１２８．２、１２８．４、１３０．７、１３１．８、１７１．９（隠された３つの信号）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ４０９［Ｍ＋Ｎａ］+
Ｃ25Ｈ38Ｏ3Ｎａについて計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ）：４０９．２７１３、
実測値：４０９．２７１１。
【００６６】
・α−ヨードＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−１５）の調製
ジイソプロピルアミン（２０ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬのＴＨＦ中に溶解し、−２０℃でＮ2下に、該混合物にｎ−ＢｕＬｉ（８８ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ、１．６Ｍ）を滴下により添加し、その後、該溶液を−７８℃に冷却した。該溶液に２５０ｍＬのＴＨＦ中のＤＨＡ  ＥＥ（５０ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を滴下により加え、この反応混合物をＲＴで３０分間撹拌した。得られた混合物を、−７８℃でＮ2下に、４００ｍＬのＴＨＦ中のＩ2の溶液（４２．８ｇ、１６９ｍｍｏｌ）に滴下して加えた。反応を１Ｍ・ＨＣｌで停止し、ヘプタンで希釈した。有機相を１０％Ｎａ2Ｓ2Ｏ3（２×）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、減圧下で蒸発させた。ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（１００：１）のフラッシュクロマトグラフィーにより所望の生成物を単離し、１１．０ｇの表題化合物（１６％）を淡黄色油状物として得た。
ＭＳ（電子スプレー）：５０５［Ｍ＋Ｎａ］。
【００６７】
・α−ヨード−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１５）の調製
【化１８】
2008540393.tif 000020
乾燥ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のジイソプロピルアミンの溶液（４２ｍＬ、２９８ｍｍｏｌ）に、−７８℃でＮ2の下に、ヘキサン中の１．６Ｍ・ＢｕＬｉ（１５８ｍＬ、２５３ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を−７８℃で３５分間撹拌した後、ＴＨＦ（３００ｍＬ）中のＤＨＡエチルエステル（７５．０５ｇ、２１０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。得られた暗緑色の反応混合物を、−７８℃で３０分間撹拌した後、ＴＨＦ２００ｍＬ中のＩ2の溶液（９１．０６ｇ、３５９ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。該反応混合物を−７８℃で２０分間撹拌した後、水２００ｍＬで反応を停止し、ヘプタン３００ｍＬで抽出した。有機相を１ＭのＨＣｌ（１５０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物を、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（１００：１）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、２６．１４ｇの生成物（２６％）を黄色液体として得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．２４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．０４（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．６９−２．８４（ｍ，１２Ｈ）、４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．２２（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．２４−５．４９（ｍ，１２Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １３．７、１４．２、２５．５、２６．０（２つの信号）、２５．８、３４．０、６１．７、１２６．１、１２７．０、１２７．４、１２７．８、１２７．９、１２８．０、１２８．２、１２８．５、１２８．５、１３１．６、１３１．９、１７０．９（隠された４つの信号）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ５０５［Ｍ＋Ｎａ］+
【００６８】
・α−アミノ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１７）の調製
【化１９】
2008540393.tif 000021
ＥｔＯＨ（５ｍＬ）の中のα−フタルイミド−ＤＨＡエチルエステル（３１３．５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン水和物（４６μＬ、０．９５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物をＮ2下で１５．５時間還流させ、続いて減圧下で蒸発させ、ＣＨ2Ｃｌ2：メタノール中の７Ｍ・ＮＨ3（９９：１〜９５：１）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、黄色液体として１４９ｍｇの生成物を得た（６４％）。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．９１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．２２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）、１．７２（ｂｓ，２Ｈ）、２．０２（ｑｕｉｎｔ．，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．３９−２．４６（ｍ，２Ｈ）、２．７３−２．８２（ｍ，１０Ｈ）、３．４７（ｂｓ，１Ｈ）、４．１３（ｑ，２Ｈ）、５．２３−５．５６（ｍ，１２Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．１、２０．４、２５．４、２５．５、２５．６、５４．１、６０．８、１２４．４、１２６．９、１２７．７（２つの信号）、１２７．９、１２８．２、１２８．３、１２８．４、１３１．４、１３１．９、１８９．３（隠された６つの信号）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ３７２［Ｍ＋Ｈ］+。
【００６９】
・（Ｓ）−（＋）−α−エチルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−２０）の調製：
中間体ＰＲＢ−１８の合成：
【化２０】
2008540393.tif 000022
ＤＨＡ（３．００ｇ，１８．３ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下で０℃に維持された乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１２０ｍＬ）中に溶解し、ＤＭＡＰ（２．４５ｇ、２０．１  ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．９６ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を０℃で２０分間撹拌し、（４Ｒ，５Ｓ）−（＋）−４−メチル−５−フェニル−２−オキサゾリジノン（３．２４ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）を添加し、周囲温度で２０時間撹拌した。濾過およびフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝６：１）による精製によって、３．００ｇの中間体ＰＲＢ−１８（３４％）が無色の油状物として得られた。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ０．９３−１．０５（ｔ＋ｄ，６Ｈ）、２．１１（ｍ，２Ｈ）、２．５１（ｍ，２Ｈ）、２．８０−３．００（ｍ，１０Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、４．７７（ｍ，１Ｈ）、５．３４−５．６８（ｍ，１２Ｈ）、５．７０（ｄ，１Ｈ）、７．２８−７．３２（ｍ，２Ｈ）、７．３７−７．４７（ｍ，３Ｈ）。
【００７０】
中間体ＰＲＢ−１９の合成：
【化２１】
2008540393.tif 000023
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＰＲＢ−１８（１．８０ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下で−７８℃に保持された乾燥ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の１Ｍ、４．００ｍＬ、４、００ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。該混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、ＥｔＩ（０．８９ｍＬ、１１．１ｍｍｏｌ）を加え、１時間かけて徐々に０℃にした。その後、該混合物を０℃で１８時間撹拌し、飽和ＮＨ4Ｃｌ（５０ｍＬ）とジエチルエーテル（５０ｍＬ）の間で分配させた。水層をジエチルエーテル（５０ｍＬ）で抽出し、合体した有機層を０．１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）および塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）およびフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝９５：５）による精製によって、０．５２ｇの中間体ＰＲＢ−１９を無色油状物として得た（２７％）。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ０．８８−１．０１（ｍ，９Ｈ）、１．６４−１．７８（ｍ，２Ｈ）、２．０８（ｍ，２Ｈ）、２．３１（ｍ，１Ｈ）、２．４８（ｍ，１Ｈ）、２．８７（ｍ，１０Ｈ）、３．８７（ｍ，１Ｈ）、４．７５（ｍ，１Ｈ）、５．３２（ｍ，１２Ｈ）、５．６３（ｄ，Ｊ７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｍ，２Ｈ）、７．４２（ｍ，３Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ７．２６、１１．７５、１４．６７、１４．９８、２０．９５、２５．５７、２５．９３、２６．０４、２９．９３、４４．５９、５５．３１、７９．１０、１２５．２１、１２６．０１、１２７．１７、１２７．４２、１２８．２７、１２８．５０、１２８．５５、１２８．６７、１２８．９５、１２９．０９、１３０．３５、１３２．４２、１３３．８０、１５３．１８、１７６．２５；
ＭＳ（電子スプレー）：  ５３８．２［Ｍ＋Ｎａ］
【００７１】
【化２２】
2008540393.tif 000024
ＰＲＢ−１９（０．２５ｇ、０．４８５  ｍｍｏｌ）を、ａｂｓ・ＥｔＯＨ（５  ｍＬ）中に溶解して、不活性雰囲気下で０℃にした。ＮａＯＥｔ（ＥｔＯＨ中の１Ｍ、０．５４ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加し、該混合物を０℃で３０分間撹拌し、水とヘプタンの間で分配させた。水層をヘプタンで抽出し、合体させた有機層を０．１ＭのＨＣｌで洗浄し、乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィーによる精製によて、無色の油として０．０２５ｇの表題化合物ＰＲＢ−２０（１３％）を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．８−１．０（ｍ，６Ｈ）、１．２−１．４（ｍ，４Ｈ）、１．５−１．７（ｍ，２Ｈ）、２．１２（ｍ，２Ｈ）、２．３−２．５（ｍ，２Ｈ）、２．８−３．０（ｍ，１０Ｈ）、４．１８（ｔ，２Ｈ）、５．３−５．６（ｍ，１２Ｈ）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ４０７［Ｍ＋Ｎａ］；
［α］D：＋１．７o（ｃ＝１．５、エタノール）。
【００７２】
・（Ｒ）−（−）−α−エチルＤＨＡ  ＥＥ（ＰＲＢ−２３）の調製：
中間体ＰＲＢ−２１の合成：
【化２３】
2008540393.tif 000025
ＤＨＡ（１．００ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）を、不活発雰囲気下で０℃に維持された乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍＬ）の中に溶解し、ＤＭＡＰ（０．４１ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（０．６６ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を０℃で２０分間撹拌し、（４Ｓ，５Ｒ）−（−）−４−メチル−５−フェニル−２−オキサゾリジノンを添加し、周囲温度で２０時間撹拌した。濾過およびフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝６：１）による精製によって、無色の油として１．０８ｇの中間体ＰＲＢ−２１（７３％）を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ０．９３−１．０５（ｔ＋ｄ，６Ｈ）、２．１１（ｍ，２Ｈ）、２．５１（ｍ，２Ｈ）、２．８０−３．００（ｍ，１０Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、４．７７（ｍ，１Ｈ）、５．３４−５．６８（ｍ，１２Ｈ）、５．７０（ｄ，１Ｈ）、７．２８．７．３２（ｍ，２Ｈ）、７．３７−７．４７（ｍ，３Ｈ）。
【００７３】
中間体ＰＲＢ−２２の合成：
【化２４】
2008540393.tif 000026
乾燥ＴＨＦ（１５  ｍＬ）中のＰＲＢ−２１（３．２５ｇ、６．６７ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下で−７８℃に維持された乾燥ＴＨＦ（３５ｍＬ）中のＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の１Ｍ、７．３４ｍＬ、７．３４ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。この混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、ＥｔＩ（１．６ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ）を添加し、１時間かけて徐々に０℃にした。次いで、その混合物を０℃で１８時間撹拌し、飽和ＮＨ4Ｃｌ（５０ｍＬ）とジエチルエーテル（５０ｍＬ）の間で分配させた。水層をジエチルエーテル（５０ｍＬ）で抽出し、合体させた有機層を０．１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）および塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）およびフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝９５：５）による精製により、無色の油として１．５０ｇの中間体ＰＲＢ−２２（４４％）を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚおよびＣＤＣｌ３）：δ  ０．８８−１．０１（ｍ，９Ｈ）、１．６４−１．７８（ｍ，２Ｈ）、２．０８（ｍ，２Ｈ）、２．３１（ｍ，１Ｈ）、２．４８（ｍ，１Ｈ）、２．８７（ｍ，１０Ｈ）、３．８７（ｍ，１Ｈ）、４．７５（ｍ，１Ｈ）、５．３２（ｍ，１２Ｈ）、５．６３（ｄ，Ｊ７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｍ，２Ｈ）、７．４２（ｍ，３Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ  ７．２６、１１．７５、１４．６７、１４．９８、２０．９５、２５．５７、２５．９３、２６．０４、２９．９３、４４．５９、５５．３１、７９．１０、１２５．２１、１２６．０１、１２７．１７、１２７．４２、１２８．２７、１２８．５０、１２８．５５、１２８．６７、１２８．９５、１２９．０９、１３０．３５、１３２．４２、１３３．８０、１５３．１８、１７６．２５；
ＭＳ（電子スプレー）：  ５３８．２［Ｍ＋Ｎａ］
【００７４】
【化２５】
2008540393.tif 000027
ＰＲＢ−２２（０．２５ｇ、０．４８５  ｍｍｏｌ）をａｂｓ  ＥｔＯＨ（５  ｍＬ）の中に溶解し、不活性雰囲気下で０℃にした。ＮａＯＥｔ（ＥｔＯＨ中の１Ｍ、０．５４ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加し、該混合物を０℃で３０分間撹拌し、水とヘプタンの間で分配させた。水層をヘプタンで抽出し、合体させた有機層を０．１ＭのＨＣｌで洗浄し、乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィーによる精製により、無色の油状物として０．０２５ｇの表題化合物ＰＲＢ−２３（１３％）を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．８−１．０（ｍ，６Ｈ）、１．２−１．４（ｍ，４Ｈ）、１．５−１．７（ｍ，２Ｈ）、２．１２（ｍ，２Ｈ）、２．３−２．５（ｍ，２Ｈ）、２．８−３．０（ｍ，１０Ｈ）、４．１８（ｔ，２Ｈ）、５．３−５．６（ｍ，１２Ｈ）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ４０７［Ｍ＋Ｎａ］；
［α］D−１．３o（ｃ＝１．００、エタノール）。
【００７５】
・α−フタルイミド−ＤＨＡ  エチルエステル（ＰＲＢ−２４）の調製
【化２６】
2008540393.tif 000028
ＴＨＦ（１０  ｍＬ）中のα−ヒドロキシ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１２）（３７３．５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、フタルイミド（１７８ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（３１３．９ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ2下で０℃に冷却した後、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（０．２４ｍＬ、１．２４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。氷浴を除去し、反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、減圧下で蒸発させ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（９９：１−９５：１）で溶出させるシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにかけて、３２３ｍｇの生成物（６４％）を黄色液体として得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ０．９５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．２２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．０５（ｍ，２Ｈ）、２．７２−２．８４（ｍ，１１Ｈ）、３．０２−３．２２（１Ｈ）、４．２０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．８７（ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．１７−５．４０（ｍ，１２Ｈ）、７．６８−７．７５（ｍ，２Ｈ）、７．７９−７．８５（ｍ，２Ｈ）；
13ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．０、１４．１、２０．４、２５．４、２５．４、２５．５、２７．０、５１．８、６１．７、１２３．８、１２４．３、１２６．９、１２７．５、１２７．７、１２７．９、１２７．９、１２８．１、１２８．１、１２８．３、１２８．４、１３１．６、１３１．８、１３１．８、１３４．０、１６７．３、１６８．７（隠された２つの信号）；
ＭＳ（電子スプレー）；  ５０２［Ｍ＋Ｈ］+、５２４［Ｍ＋Ｎａ］+
【００７６】
．α−エチルアミノ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−２５）およびα−ジエチルアミノ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−２６）の調製
【化２７】
2008540393.tif 000029
α−アミノ−ＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−１７）（７４６．５ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ・Ｈ2Ｏ（１７１．６ｍｇ、４．０９ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（４ｍＬ）中の分子篩４Ａ（５９９ｍｇ）の混合物に、臭化エチル（３．０ｍＬ、４０．２  ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を周囲温度で７１時間撹拌した。この混合物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、濾過した。有機相を１ＭのＮａＯＨ（２０ｍＬ）および塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、濾過し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させ、ヘプタン：ＥｔＯＡｃ（９５：５）−ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ中の２Ｍ・ＮＨ3（９９：１）で溶出させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、黄色液体として４５８ｍｇ（５３％）のＰＲＢ−２６、および黄色液体として１５２ｍｇ（１９％）のＰＲＢ−２５を得た。
1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ０．８９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）、１．０３（ｔ，３Ｈ）、１．２４（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、６Ｈ）、２．０５（ｑｕｉｎｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．５２（ｍ，４Ｈ）、２．７６−２．８５（ｍ，１２Ｈ）、３．３５（ｔ，１Ｈ）、４．１３（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．２８−５．４４（ｍ，１２Ｈ）
13ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  １４．１、１４．３、１４．４、２０．５、２２．６、２５．５、２５．６、２５、７、３１．９、４４．４、６０．１、６２、９、１２７．０、１２７．８、１２８．０５、１２８．１３、１２８．１７、１２８．２２、１２８．５、１３２．０、１７３．３（隠された５つの信号）
【００７７】
＜実施例＞
代謝性症候群および２型糖尿病に対する影響を実証するために、本発明において使用されたモデルおよび方法の概観が図２に示されている。実験の５つのブロックが、インスリン抵抗性を低減するため、および／または代謝性症候群を緩和するためのＤＨＡ誘導体の効果を解明するために行なわれた。本発明は、示された実施形態および実施例に制限されるべきではない。
【００７８】
実施例１：肝細胞における細胞内遊離脂肪酸（非エステル化脂肪酸）の分析（図２におけるブロック１）
背景：
最初のブロックの実験（図２１参照）では、ＰＲＢ−１、２、５、７および８を供給された動物の肝臓組織を、非エステル化遊離脂肪酸に関して分析した。この動物は、第５のブロックの実験（代謝性症候群の動物モデルにおけるＤＨＡ誘導体の薬力学的効果）から補充された。動物はＤＨＡ（食事の脂肪含有量の１５％）またはＤＨＡ誘導体（食事中の脂肪含有量の１．５％）を８週間与えられており、細胞内ＤＨＡおよびＤＨＡ誘導体のレベルが安定した定常状態にあると仮定された。代謝速度は肝臓において非常に迅速であるとの事実により、肝臓組織が選択された。
【００７９】
方法：
肝臓試料を冷ＰＢＳ緩衝液中でホモジナイズし、０．２ｍＭブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）を含んたクロロホルム：メタノール（２：１）で直ちに抽出し、内部標準としてｃｉｓ−１０−ヘプタデセン酸を使用した。有機相を窒素下で乾燥し、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ＭＳ／ＭＳでの分析用として、０．１％の酢酸および１０μＭ  ＢＨＴと共にアセトニトリルの中に再溶解させた。蛋白質含有量の合計を、ホモジナイゼーション後にＢｉｏ−ｒａｄ法を使用して測定した。
ＤＨＡおよびそのＰＲＢ誘導体を２２分以内に逆相カラム（Ｓｕｐｅｌｃｏ・Ａｓｃｅｎｔｉｓ・Ｃ18カラム、２５ｃｍ×４．６ｍｍ、ｉ．ｄ．５μｍ）で分離するために、アジレント（Agilent）１１００システムを使用した。流動相は、０．１％の酢酸を含む同一勾配のアセトニトリル−Ｈ2Ｏ（８７＋１３、ｖ／ｖ）であった。カラム・オーブン温度は３５℃に設定した。カラム溶出物は、トリプルタンデム四重極質量／質量（ＡＢＩ  Ｑｔｒａｐ−４０００）による多重反応モニタリングモードを適用して、陰電子スプレーイオン化において同定および定量した。親娘イオン対は、ユニット分解能下において、それぞれ３２７．３／３２７．３（ＤＨＡ）、３４１．３／３４１．３（ＰＲＢ−１）、３５５．３／３５５．３（ＰＲＢ−２およびＰＲＢ−５）、３８７．３／３８７．３（ＰＲＢ−７）および２６７．２／２６７．２（Ｉ．Ｓ．ＦＡ  １７：１）であった。信号収集停止時間は、２００ミリ秒にセットされたＦＡ１７：１を除き、全て１００ミリ秒であった。異性体ＰＲＢ化合物の正確な実証は、保持時間と、特有の質量／電荷比率の組合せによって行った。内部標準検量後の定量化のために、二次回帰標準曲線を使用した。
【００８０】
結果：
異なるＤＨＡ誘導体の濃度およびＤＨＡの濃度は、肝細胞の合計タンパク質１ｇ当たりのμｇで与えられた。図３は、高脂肪食における全脂肪含有量の１．５％濃度でＰＲＢ−１、２、５および７を与えた動物からの、異なるＰＲＢ濃度を描いている。
ＲＢの中で最も高い細胞内濃度が、ＰＲＢ−２について得られた。更に、ＰＲＢ−２と同じ程度ではないが、ＰＲＢ−５は細胞内で濃縮された。この発見は予期しなかったものである。
図４は、異なるＰＲＢを与えた動物からの肝臓組織における、ＤＨＡの細胞内濃度を描いている。他の３つのＤＨＡ誘導体と比較して、ＰＲＢ−７を与えられた動物では、ＤＨＡが顕著に高いレベルに達した。ＰＲＢ−２を与えた動物は、最低のＤＨＡ濃度を有していた。ＰＲＢ−７は、ＤＨＡにある程度変換されるように見える。
ＰＲＢ−２は最も高い細胞内の濃度に達した。これは、ＰＲＢ−２が核受容体に対するリガンドとしてより多く利用可能であることを意味し、そのパターンは、血糖および血液脂質の取り扱いにおいて治療効果に翻訳することができるであろう
【００８１】
実施例２：コンピューターに基づく親和性試験（図２におけるブロック２）
背景：
グルコースおよび脂肪の遺伝子的制御に関与するＰＰＡＲおよび他の適切な受容体について、核受容体は既に配列決定されており、またアミノ酸配列も知られている。ＰＰＡＲ受容体のＸ線結晶学およびＮＭＲ分光学が利用可能であり、また受容体にリガンド結合する脂肪酸のコンピューター化された親和性試験が、結合の動力学を評価するために使用することができる。結合のモードまたは姿勢とも屡々称される結合幾何学は、受容体に対するリガンドの位置、並びにリガンドおよび受容体のコンホメーション状態の両方を含んでいる。従って、効果的な配位子ドッキングを分析することができる。
受容体に対する配位子の親和性は、２つの異なるパラメーターによって定義される：即ち、受容体の結合部位へのリガンド（ＤＨＡ誘導体）のドッキング、および受容体の一定のアミノ酸と脂肪酸頭部のカルボキシル基または側鎖との間の静電気的結合である（Krumrine）。
以前に知られているように、ＰＰＡＲγ受容体と比較してＰＰＡＲα受容体はより乱雑であり、これはＰＰＡＲαが、ＰＰＡＲγと比較して更に多くの脂肪酸を配位子として許容するであろうことを意味している。しかし、代謝性症候群または２型糖尿病の患者は通常肥満または過体重であり、また病的な血液脂質（主に高いトリグリセリドおよび低い高密度コレステロール（ＨＤＬ−ｃｈｏＬ））を有しているので、ＰＰＡＲα受容体の活性化が重要である。代謝性症候群または２型糖尿病の治療のための理想的な薬剤は、これら両方の受容体に対するリガンドとして、好ましくはＰＰＡＲγ受容体に対する最も高い親和性をもったリガンドとして作用すべきである。
【００８２】
方法：
異なるＤＨＡ誘導体のランキングを、それらの結合親和性に従って計算し、最低結合親和性（ＬＢＡ）および平均結合親和性（ＡＢＥ）として与えた。
合計１５のＤＨＡ誘導体（ＰＲＢ−１〜ＰＲＢ−１５）を、コンピューター化されたドッキング法で試験した。ＰＲＢ−１、ＰＲＢ−２、ＰＲＢ−７、ＰＲＢ−９、ＰＲＢ−１０、ＰＲＢ−１１、ＰＲＢ−１２、ＰＲＢ−１３、ＰＲＢ−１４およびＰＲＢ−１５のような誘導体のうちの幾つかは、ｒ型エナンチオマーおよびｓ型エナンチオマーとして提示され、この場合はそれらの両方を試験した。ＰＰＡＲγのリガンドであるロシグリタゾンおよびピオグリタゾンも、比較のために、ｒ型およびｓ型の両方の形態で試験した。これらの化合物は、糖尿病治療用のための登録された公認の医薬である。
【００８３】
結果
結果は表１に示されており、パラメータとして、試験された化合物の単一コンホメーションの最低結合エネルギー（ＬＢＥ）、正しく取られたコンホメーションの平均結合エネルギー（ＡＢＥ）、およびＩＣＭ保存された２０の最低エネルギーコンホメーションのうちで正しく取られたコンホメーションの比率（ｆbound）を提示している。ＲＸＲαに対する親和性を同じ設定で試験した。ＲＸＲα受容体は、ＰＰＡＲ受容体と相互作用して、脂肪酸にリガンド結合することによりヘテロ二量体を形成する。
図５は、血糖の取り扱いに関与するタンパク質の転写に主に関与する、ＰＰＡＲγ受容体についての結合親和性を描いている。明かに、ＰＲＢ−２は、ｒ型およびｓ型立体異性体の両方の形態において、ＰＰＡＲγ受容体に対する良好な親和性を有している。ＰＲＢ−５は多少スコアが悪いのに対して、ＰＲＢ−８は最も高いＡＢＥスコアを有していた。これらの発見は信用が高く、血糖の取り扱いの原因であるそれぞれのＰＰＡＲγに活性化された遺伝子のより有効な転写へと翻訳することができるであろう。
図６は、脂肪、血液脂質、脂肪組織生物学、および体重制御の主な原因である核受容体ＰＰＡＲαに対する結合親和性を描いている。幾つかのＤＨＡ誘導体は高い結合親和力を有していたが、ＰＲＢ−８は最も高いスコアを有していた。これもまた、高度の信頼性を有するものである。
図７は、核受容体ＲＸＲαへの結合親和性を描いている。ＲＸＲα受容体に結合することの生理学的結果は確実には樹立されていない。ＲＸＲがＰＰＡＲ受容体に結合することによってヘテロ二量体を形成し、その後、定義された遺伝子の転写を開始させることが知られている。
【００８４】
【表１】
2008540393.tif 000030
ＮＤ＝記録せず、ｃ＝全シス型の二重結合、ｒ＝Ｒ型エナンチオマー、
ｓ＝Ｓ型エナンチオマー、ＲＯＳＩ＝ロシグリタゾン、
ＰＩＯ＝ピオグリタゾン
【００８５】
幾つかのＰＲＢは、母親化合物であるＤＨＡ、並びにＰＰＡＲγリガンドであるロシグリタゾンおよびピオグリタゾンと比較した場合でも、ｒ型およびｓ型の両方において、ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγ受容体についての高いＬＢＥスコアおよびＡＢＥスコアを有している。これは興味ある所見であり、幾つかのＰＲＢは、確立した高糖尿病薬であるロシグリタゾンおよびピオグリタゾンに対する有望な競合医薬であり得ることを示している。
同じ脂肪酸のα位におけるエチル誘導体は、ｒ型およびｓ型の両者とも親和性を改善しなかった。このことは、特にＰＰＡＲγ受容体について真実であった。先に言及したように、ＰＰＡＲα受容体はより乱雑であり、長い一連の脂肪酸を結合する。
結論として、試験したＤＨＡ誘導体の多くは、ＰＰＡＲα受容体およびＰＰＡＲγ受容体に対して興味深い親和性を示し、ロシグリタゾンおよびピオグリタゾンよりも良好な親和性で結合することが立証された。
【００８６】
実施例３
形質移入された細胞における親和性試験（図２１におけるブロック３）
背景：
ルシフェラーゼの放出が遺伝子の転写に関連づけられる。ＰＰＡＲγのような核受容体へのリガンドの結合は、それぞれの遺伝子の転写を誘導し、それによってルシフェラーゼを放出する。従って、この技術は、原因遺伝子の活性化と同様に、受容体へのリガンド親和性の尺度を提供する。
【００８７】
方法：
Ｇｒａｈａｍおよびｖａｎ・ｄｅｒ・Ｅｂ（Graham）により記載されたようにして、６ウエルのプレート中において、ＣＯＳ−１細胞の一時的なトランスフェクションを行なった。全長ＰＰＡＲのトランスフェクション研究のために、各ウエルには、５μｇリポーター構築物、内部対照としての２．５μｇのｐＳＶ−β−ガラクトシダーゼ、０．４μｇのｐＳＧ５−ＰＰＡＲγ２を収容した。細胞を７２時間後に回収し、プロトコル（Promega）に従ってルシフェラーゼ活性を測定した。このルシフェラーゼ活性は、β−ガラクトシダーゼ活性に対して正規化された。トランスフェクション効率の対照として、１６μＬのリポフェクタミンＰｌｕｓ試薬、４μＬのリポフェクタミン（Life Technologies Inc.）、０．２μｇのｐＳＧ５−ＰＰＡＲγ、および１００ナノグラムのｐＴＫ・Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼを使用して、Ｄ１１の分化において脂肪細胞をトランスフェクトした。トランスフェクション後に３時間、細胞を血清含有培地中で培養し、適切な薬剤を含有する同じ培地中で４８時間インキュベートした。製造業者（２重ルシフェラーゼ分析、Ｐｒｏｍｅｇａ）が推奨するようにしてルシフェラーゼ活性を測定した。全てのトランスフェクションを３回繰り返して行った。
脂肪酸（ＢＲＬまたはＤＨＡ）およびＰＲＢ（保存溶液）を、０．１Ｍの終末濃度でＤＭＳＯ中に溶解させた。次いで、脂肪をＤＭＳＯ中に１０ｍＭに溶解し、アルゴンでフラッシュした１．５ｍＬのチューブ（ホモポリマー、プラスチックチューブ）の中に収容し、−２０℃で保存した。１０μＭのＰＲＢ、または脂肪酸およびＤＭＳＯ（対照）を、トランスフェクションの５ｈ後に培地に添加した。トランスフェクトされた細胞は、リポーター溶解緩衝液による溶解の前に２４間維持された。ＰＰＡＲのＬＢＤに対するＰＲＢまたは脂肪酸の結合は、ＵＡＳに対するＧＡＬ４の結合を活性化し、これがｔｋプロモータを刺激してルシフェラーゼの発現を駆動する。照度計（ＴＤ２０／２０照度計；ターナー・デザインズ、Sunnycvale、ＣＡ）を使用してルシフェラーゼ活性を測定し、これを蛋白質含有量に対して正規化した。
【００８８】
結果：
図８は、異なるＰＲＢで処理されたトランスフェクト細胞からの、ルシフェラーゼの放出を描いている。この結果は、ＰＲＢ−３、５、９、１０、１１、１２および１６と比較して、ＰＲＢ−１、２、６、７および１４が著しく高いルシフェラーゼの放出を有することを示している。
【００８９】
実施例４
代謝性症候群をもつ脂肪を蓄積し易い動物における親和性試験（図２におけるブロック４）
背景：
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ株の脂肪を蓄積し易いマウスを使用した代謝性症候群動物モデルを用い、これら動物から採取した脂肪細胞からのルシフェラーゼの放出を測定することによって、９７％のＤＨＡおよび抗糖尿病用薬化合物のロシグリタゾンと比較したときの、ＰＲＢ−２、５および８のＰＰＡＲγに対する親和性を試験した。動物（各群においてｎ＝８）は、８週間の間、高脂肪食（総エネルギーの６０％を構成する脂肪、ブロック５で使用したのと同じ食餌）を与えられた。その後、それらは、更に２週間の間、食餌の脂肪含量の１．５％に相当する投与量でＰＲＢを与えられた。ロシグリタゾン群は、１００ｍｇ／ＫＧ食餌の量を与えられた。対照群では、高脂肪食または標準固形資料のみを継続した。図８はこの研究設計を示している。
【００９０】
方法：
屠殺した後、脂肪組織（副睾丸および皮下）を他の構造物から取外し、これをミリメートルサイズの小片にカットした。脂肪組織を０．９％のＮａＣｌ中で濯ぎ、震盪する水浴中において３７℃で１．５時間の間、Ｈｅｐｅｓ、脂肪酸を含まないウシ血清アルブミン、２００ｎＭのアデノシン、２ｎＭのグルコース、および２６０Ｕ／ｍＬのコラゲナーゼを含む５ｍＬのクレブス・リンゲル液中で消化させた。コラーゲナーゼ消化の後、濾過によって脂肪細胞を組織破片から分離した。その後、細胞を、Ｈｅｐｅｓ、脂肪酸を含まないウシ血清アルブミン、２００ｎＭのアデノシン、２ｎＭのグルコースを含むクレブスリンゲル液中で洗浄し、電気穿孔まで、３７℃の水浴中において最大３０分間震盪を維持した。
特定のＰＰＡＲγ反応要素（ＰＰＲＥ）の活性を測定するために、分離された一次脂肪細胞を電気穿孔によってトランスフェクトさせた。この場合、我々は、アシルＣｏＡオキシダーゼ遺伝子からのＰＰＲＥの制御下で、ほたるルシフェラーゼｃＤＮＡをコードするプラスミドを組込んだ。この細胞には、構成的に活性なプロモータに制御されるＲｅｎｉｌｌａルシフェラーゼｃＤＮＡを含むプラスミドも同時にトランスフェクトした。ＰＰＲＥで誘導可能なほたるルシフェラーゼの活性を、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼに従って正規化して、トランスフェクトされた細胞量の可能な差異を補正した。ルシフェラーゼ信号を測定するために、我々はデュアル−ルシフェラーゼ（登録商標）レポータアッセイシステム（Promega, USA）を使用した。
プールされた副睾丸脂肪組織は、反復実験を実行するための脂肪細胞を分離するのに十分であった。各群は別々の２日で屠殺され、各食餌群について４つの独立したトランスフェクションを得た。
【００９１】
結果：
ＨＦ食餌（３３．７％ｗ／ｗの脂肪）を給餌した最初の８週の間に、標準食餌（４．５％ｗ／ｗ）を与えた対照マウスに比較して徐々に体重が増加した。実験食を給餌する最後の２週の間に、高脂肪食餌動物、およびロシグリタゾンと組合せて高脂肪食餌を与えた動物は、以前とほぼ同じ割合で体重を増加し続けた。ＰＲＢ−８およびＰＲＢ−５に富むＨＦ食餌の場合には体重増加が縮小された。しかし、ＰＲＢ−２およびＤＨＡ（５％ｗ／ｗ）の場合には、この食餌が完全に体重増加を止めて、更に体重の減少を導いた（図１０）。時々、食物の消費を記録した（４×）。ＨＦ群と介入群との間に差はなかった。
ロシグリタゾンと組み合わせた高脂肪の場合、ＰＰＡＲγの内因性の活性は、他の全ての食餌群よりも２倍高かった（図１１）。更に、これらの脂肪細胞は、ＨＦ食餌自身（１．５階刺激）に比較して、５μＭのロシグリタゾン（５，１２倍刺激）での追加のインビトロ刺激に対して更に感受性になった。このロシグリタゾンの増感効果も、ＰＲＢ−２食餌群およびＰＲＢ−５食餌群において記録された（２，６倍の刺激）。
この研究からのデータは、明かに、核ＰＰＡＲ受容体に対する活性を実証しており、特に体重に対して効果を有しており、これはＰＲＢ−２投与群について最も顕著である。ＰＲＢ−５およびＰＲＢ−８を与えられた動物でさえ、高脂肪食餌群が示したような体重増加を示さなかった。興味深いことに、ロシグリタゾンを与えられた動物は、高脂肪食餌のみを与えられた動物と同程度に体重が増加した。これは、ロシグリタゾンのようなＰＰＡＲγリガンドのみを与えることの負の効果を実証しており、インスリン抵抗性が減少したとしても体重増加のリスクを伴うことが明かである。しかし、この実験でルシフェラーゼ活性として測定されたＰＰＡＲγの活性化については、ロシグリタゾンはＰＲＢの何れと比較しても高いスコアを示している。ＰＲＢ群のうちで、ＰＲＢ−２およびＰＲＢ−５は、ＰＲＢ−８およびＤＨＡとの比較においてのみ、より高いスコアを有していた（図１２）。
【００９２】
実施例５
代謝性症候群動物モデルにおけるＤＨＡ誘導体の薬力学的効果（図２におけるブロック５）
背景：
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ株の脂肪を蓄積し易いマウスを使用した代謝性症候群動物モデルを用いて、代謝性症候群に共通の、典型的な実験室的な病理学的および解剖学的特徴に対する影響を記録した。約６０％の脂肪を含有する高脂肪食を与えられたとき、動物は肥満し、高インスリン血漿レベル、病理学的グルコース寛容性基準、高い血清トリグリセリドおよび非エステル化脂肪酸、脂肪肝を発症している。
【００９３】
実施例５ａ
４か月の食餌療法の際の脂肪を蓄積し易いマウスにおけるＤＨＡ誘導体の効果
方法：
全ての実験は、雄のＣ５７ＢＬ／６マウス、亜株Ｃ５７ＢＬ／Ｎ（供給業者：チャールズリバー社、ドイツ、ｎ＝１６０、実験Ａ−Ｃ、以下参照）、または亜株Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（供給業者：ジャクソン研究所、バーハーバー、ＭＥ、アメリカ、ｎ＝３２、実験Ｄ）に対して行った。使用した動物の総数は選り分けのために多かった（それぞれ、ｎ＝１７０および３６）。後者の場合、動物は生理学研究所で数世代（＜２０）に亘って血統維持させた。治療の開始時に動物は１４週齢であり、それらの体重は２３．６〜２７．１ｇであった。研究開始の１週間前に、動物を体重によって分類し、同様の平均体重の副群（ｎ＝８）に割り当てた。この方法は、最低および最高の体重を示す約５〜１０％の動物の選り分けを可能にした。この段階で研究から排除された動物は、頚部の転位によって屠殺された。マウスの完全な健康チェックは、供給業者であるチャールズリバー社によって行なわれ、研究開始時の血清検査はＡＮＬＡＢ（プラハ（チェコ共和国））によって行なわれた。更に、定期的な健康チェックは、見張りマウスおよび血清学的検査（ＡＮＬＡＢ）を使用して、３月間隔で飼育舎において行なわれた。全ての試験において、動物に特定の病原体は存在しなかった。
【００９４】
食餌：
動物には３種類の実験食餌が給餌された。
（ｉ）タンパク質、脂肪および炭水化物がそれぞれ３３エネルギー％、９エネルギー％および５８エネルギー％を構成する食餌（SSNIFF Spezialdieten Gmbh, Soest, Germanyからのssniff R/M-H；更にhttp://ssniff.de参照）。
（ｉｉ）タンパク質、脂肪および炭水化物がそれぞれ１５エネルギー％、５９エネルギー％、および２６エネルギー％を構成し、また脂肪酸組成が良く特徴付けられた、実験室で調製された高脂肪食餌（殆どの脂質はトウモロコシ油に由来する；Ruzickova 2004参照）。
（ｉｉｉ）脂肪（特にトウモロコシ油要素）の０．１５％、０．５％および１．５％が、種々のＰＲＢ化合物（即ち、ＰＲＢ１、ＰＲＢ２、ＰＲＢ５、ＰＲＢ７、ＰＲＢ８）またはＤＨＡで置換されたｃＨＦ食餌。これらの化合物は全て、Ｐｒｏｎｏｖａ  Ｂｉｏｃａｒｅ  ａ．ｓが提供する計量容器中のエチルエステルの形態であった。ＰＲＢ化合物の化学組成は、実験を行う研究室（チェコ共和国プラハの科学研究院、生理学研究所）には知られていなかった。
到着の後、ＰＲＢ化合物は当初の容器内に入れて冷蔵庫に保存された。この容器は、実験食を調製する直前に開かれた。食餌は、窒素でフラッシュしたプラスチックバッグ内に維持され、動物に１週間給餌するのに十分な小アリコートで、−７０℃において保存された。新鮮な比率は２日間隔あるいは毎日与えられた。
【００９５】
研究の概要：
この研究は４つの個別の実験に基づいていた。各実験では、３つの異なる濃度（脂肪含有量の０．１５％、０．５％および１．５％）においてｃＨＦ食餌に混合された異なるＰＲＢ化合物（またはＤＨＡ）を試験した。各実験において、単純なｃＨＦの食餌を給餌したマウスの副群が含められ、対照として用いられた。動物（ｎ＝８−１３）を無作為に異なる試験食餌に割り当てた時に、マウスは４つの群で檻に入れ、３月齢までは標準食餌を給餌した。この新規の食餌に切換えて２月後（５月齢において）に、動物に一晩および午前中の断食をさせ、腹腔内のグルコース寛容性試験（ＧＴＴ）を行なった。実験食で４か月後に７月齢で動物を屠殺し、終点分析を行った。
【００９６】
研究パラメーター：
研究パラメーターは次の通りであった：体重増加（グラム）、腹腔内のグルコース寛容性試験（ｍＭｏｌ×１８０分）の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）、血漿中インスリン（ナノグラム／ｍＬ）、血清トリグリセリド（ＴＡＧ、ｍｍｏｌ／Ｌ）および非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ、ｍｍｏｌ／Ｌ）。
図１３は、インスリン抵抗性の動物がインスリン抵抗性を低下させる化合物を与えられる前後の、典型的な血中グルコース除去曲線を示している。濃度曲線下の面積の縮小は、低下したインスリン抵抗性のために血糖がより効果的に除去されることを意味する。
【００９７】
結果：
これらの結果は、次の表２、表３および表４に示されている（＊＝ｃＨＦ食餌と比較した有意差（Ｐ＜０．０５））。
表２は、１．５％濃度のＰＲＢ試験化合物を与えた動物における効果を、標準食餌（ＳＴＤ）、高脂肪複合食餌（ｃＨＦ）または９７％ＤＨＡを与えた動物と比較して示している。体重増加は、高脂肪食（ｃＨＦ）を与えた動物と比較して、ＰＲＢ−２を与えた動物において著しく減少した。食物摂取は、この群では多少低かった．グルコース寛容性試験からのＡＵＣの最も顕著な低下は、同じ群およびＰＲＢ−１を与えた動物においても見られた。血漿インスリンは、ＰＲＢ−１およびＰＲＢ−５で治療した動物でもこのパラメータについて幾らかの効果を示したとしても、ｃＨＦ対照と比較してＰＲＢ−２群で顕著に低かった。ＰＲＢ−２群は、トリグリセリド（ＴＡＧ）および非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）の最も大きな低下を示した。
表３は、標準食餌（ＳＴＤ）、高脂肪複合食餌（ｃＨＦ）または９７％のＤＨＡを与えられた動物と比較して、より低い濃度（０．５％）のＰＲＢ試験化合物を与えた動物における効果を示している。体重増加は、ＰＲＢ−２およびＰＲＢ−５を与えた動物群において幾分低かった。しかし、グルコース寛容性試験からのＡＵＣ、並びに血漿インスリンは、ＰＲＢ−２群においてのみ著しく低かった。
表４は、最も低いＰＲＢ濃度（０．１５％）を与えたときの結果を示している。ここでは、差が小さかった。体重増加は、ＰＲＢ−１およびＰＲＢ−２群において幾分低かったのに対して、ＡＵＣは、ＰＲＢ−２群においてのみ著しく低かった。血漿インスリンは、ＰＲＢ−１、２および７において低かった。
【００９８】
【表２】
2008540393.tif 000031
【００９９】
【表３】
2008540393.tif 000032
【０１００】
【表４】
2008540393.tif 000033
【０１０１】
結論として、インスリン抵抗性および代謝性症候群に罹った脂肪の蓄積し易い動物でのＰＢＲ−１、２、５、７の４か月に亘る試験は、試験されたＰＲＢの明瞭で信用できる効果を実証し、特に、ＤＨＡ誘導体ＰＢＲ−２は、体重減少、腹腔内のグルコース寛容性試験におけるＡＵＣ低下、低いインスリン／血漿レベル、並びに低下したトリグリセリドおよび非エステル化遊離脂肪酸のような、インスリン抵抗性および代謝性症候群の徴候に対する効果を実証した。１．５％投与量、並びに０．５％投与量の群において効果が観察された。幾つかの結果は、０．１５％の最低濃度群においてさえも、幾つかの効果が認められた。
ＰＲＢ−８化合物の試験は遅れて開始されたので、３つの投与量群（１．５％、０．５％および０．１５％）のうちで、２か月介入のデータだけが与えられている。１．５％投与群では、体重（ＢＷ）は、対照群の２９．６±０．９に比較して２８．０±０．７グラムであり、ＡＵＣは、１０７４±９１と比較して１０３１±１０４であった。これらの差は僅かであるが、傾向は興味深いものである。０．５％および０．１５％の低用量については、介入群と対照群の間に差はなかった。２か月の薬物治療からのＰＲＢ−８データに関するデータは、体重減少およびＡＵＣへの傾向を示している。
【０１０２】
実施例５ｂ
確立された代謝性症候群およびインスリン抵抗性に対するＤＨＡ誘導体の影響
方法：
もう一つの実験では、ＰＲＢ−２、ＰＲＢ−５およびＰＲＢ−７を、同じ血統の動物において試験した。この実験において、動物は、最初に高脂肪食餌（前の実験５ａと同じもの）を８週間与えられてインスリン抵抗性および代謝性症候群を発症し、次いでＰＲＢを与えられた。開始投与量は、脂肪含有量の１５％をＰＲＢで置換することであったが、動物はこの投与量を許容しなかった。更に２週間の期間の後に、動物は、１．５％のＰＲＢ−２、２．５％および１．５％ＰＲＢ−５、１．５％および０．５％ＰＲＢ−７を与えられた。
【０１０３】
結果：
体重減少は、ＰＲＢ−２を与えた動物において非常に良好であった。ＰＲＢ−５を与えた動物でさえ幾らかの体重減少を示したが、５％より高用量においてである。トリグリセリドは、高脂肪複合食餌を給餌された対照動物と比較して、試験した全ての誘導体で低下した。しかしながら、非エステル化脂肪酸の低下は、ＰＲＢ−２およびＰＲＢ−５で最も顕著であったが、異なる投与量においてであった（図１４参照）。
血液コレステロールは、ＰＲＢ−２およびＰＲＢ−５を与えられた動物において低下した。血中グルコースは、これらの動物が、高いインスリン産生により正常なグルコースをもつ前糖尿病の状態であるという事実に起因して、影響されなかった。しかしながら、より重要なこととして、血漿インスリンは、２番目に良好なＤＨＡ誘導体であるＰＲＢ−５と比較して、多くの遥かに低い濃度においてＰＲＢ−２群で著しく低下した。ＰＲＢ−７でさえも、インスリン濃度に対して幾つかの影響を示した（図１５参照）。
ＰＲＢ−２は、基底ライン値と比較して、曲線の全ての時間点において統計的に有意なＡＵＣ血糖の低下を示した。これは、１．５％のＰＲＢ−２治療後に、血糖がより有効に除去されたことを意味する。ＰＢＲ−５およびＰＢＲ−７は或る効力を示したが、同じ程度ではない（図１６参照）。
これらの結果は高度に信頼性があり、且つ代謝性症候群および２型糖尿病における肯定的な影響にについて非常に関連している。これらの患者は、殆ど専ら過体重また肥満であり、また薬剤の体重減少に対する影響は高度に陽性である。今日の２型糖尿病の治療に最も使用される治療薬は、チアゾリジンジオン（これは有力なＰＰＡＲγリガンドであり、それによってインスリン抵抗性を低下させる）は、屡々体重の増大をもたらし、このことは、この副組の患者にとって極めて否定的なものである（Yki-Jaervinen 2004）。
血清トリグリセリドの減少は、実験の中で実証されたもう一つの非常に重要な効果である。代謝性症候群および２型糖尿病の患者は、通常は上昇したトリグリセリドを有している。トリグリセリドを低下させるＤＨＡ誘導体の影響は積極的な発見であり、ここでもＰＲＢ−２は、与えられた最も低い投与量で最も強力な効果を実証した。血漿インスリン試験およびグルコース寛容性試験に関する非常に積極的な効果は非常に有望であり、且つ信頼性が高い。総合すると、ＤＨＡ誘導体、特にＰＲＢ−２で得られた結果は非常に有望であり、抗糖尿病薬の開発のための良好な基礎を形成するものである。
【０１０４】
実施例５ｃ
肝臓脂肪に対するＤＨＡ誘導体の試験
方法：
ＤＨＡ誘導体での実験中の動物からの組織サンプルを、組織学的に分析した。パラフィン包埋の後、肝臓、脂肪組織、骨格筋、膵臓および腎臓由来の組織サンプルを、エオシン−ヘマトキシリンで染色した。
【０１０５】
結果：
肝臓からの組織を除き、検査した組織に病理所見はなかった。高脂肪食を給餌した対照動物は脂肪肝（脂肪変性）を発症した。肝臓中の脂肪小滴は、容易に正常な肝細胞から識別することができる。ＰＲＢ−１、５および７で治療した動物は、低度の脂肪肝を有していた。しかし、１．５％のＰＲＢ−２で治療した動物は、脂肪変性の痕跡のない完全に正常な肝臓細胞を有していた。
これは非常に重要な発見であり、インスリン抵抗性、肥満症および２型糖尿病の患者の治療と非常に関連している。肝臓の脂肪変性はこれら患者における共通の所見であり、通常は、脂肪酸およびトリグリセリドの過負荷、インスリン抵抗性および代謝性症候群の発症中に存在する生物学のマーカーに関連している。ＤＨＡ誘導体は、肝臓の脂肪変性を低減し、ＰＲＢ−２はこの効果をを示す最も効率的な化合物であった。
【０１０６】
考察および結論：
本願は、核受容体、特にＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαを活性化する新規化合物群を明瞭に同定し、それによって、インスリン抵抗性、代謝性症候群、２型糖尿病、心臓血管系疾患、および他のアテローム性動脈硬化症関連疾患の治療における一連の治療効果を提供する。
この化合物群のメンバーは、当該分子のα位に異なる種類の側鎖を有するＤＨＡ誘導体である。多くのα−置換ＤＨＡ誘導体を試験し、対照並びに純粋なＤＨＡおよびＥＰＡと比較した。試験した化合物の幾つかは、潜在的な抗糖尿病薬に非常に関連した興味深い生物学的効果を実証した。
興味深いことに、且つ予期し得ることなく、α−エチルＤＨＡエチルエステル（ＰＲＢ−２）は、インスリン抵抗性、並びにこの病態生理学的状態によって主に引起される疾患、たとえば代謝性症候群、２型糖尿病、心臓血管系疾患、および他のアテローム性動脈硬化関連疾患に関連した効果を実証するために用いた一連の試験において顕著に有効であった。α−エチルＤＨＡエチルエステルは、試験した異なるＤＨＡ誘導体を与えた動物の肝臓組織内に濃縮され（ブロック１）、この化合物がトリグリセリド、エイコサン類または他の代謝中間体の合成に利用されないことが示された。これは間接的に、α−エチルＤＨＡが、ＰＰＡＲのような核受容体にリガンド結合するために利用可能であろうことを意味するであろう。
コンピューター化されたドッキング技術を使用した、ＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαに対する親和性試験において、多くのＤＨＡ誘導体が両受容体に対して、特に血糖代謝の原因である遺伝子の活性化に関与するおそらく最も重要な核受容体であるＰＰＡＲγに対する親和性を示した。特に、α−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）並びにα−ジエチルＤＨＡ（ＰＢＲ−８）は、これら核受容体に対する優れた親和性を有していた。α−ジエチルＤＨＡに比較して、α−エチルＤＨＡは２つの立体異性体、即ち、ｒ型およびｓ型の形態を有している。ドッキング技術を使用することにより、両方の立体異性体がＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲαに対してほぼ同じ親和性を有しており、これはｒ型またはｓ型の何れもが、ラセミ化合物形態と比較して利点をもたないことを意味していた。実際のところ、ラセミ体の形態が立体異性体の各々に対して利点を有する可能性がある。
【０１０７】
核受容体およびその後のＤＮＡ反応要素を担持したトランスフェクト細胞において親和性を試験したときに、幾つかのＰＲＢは、ルシフェラーゼ放出として測定された良好な親和性を示した。ＰＲＢ−６、７および１４と共に、α−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）は最良の結果を示した。
高脂肪食を与えられたときにインスリン抵抗性および代謝性症候群を発症するＣ５７ＢＬ／６マウス・モデルにおいて、５種類のＤＨＡ誘導体を広範囲に試験した。α−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）は三つ個々の実験で試験されたのに対して、ＰＲＢ−１、５および７は二つの実験で試験され、またα−ジエチルＤＨＡ（ＰＲＢ−８）は一つの実験で試験された。全ての誘導体が著しい生物学的効果を実証した。しかし、α−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）は、体重、腹腔内の耐糖能試験からのＡＵＣ、血漿インスリン、並びに血清トリグリセリドおよび非エステル化脂肪酸の一貫した減少を伴って、最も有望な結果を示した。これらの効果は、１．５％および０．５％の投与量で得られた。試験した最低投与量である０．１５％では説得性のある結果は得られなかった。１．５％の投与量のα−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）はまた、インスリン抵抗性および代謝性症候群の患者および動物における重要な病理所見である脂肪肝の正常化を実証した。
純粋なＤＨＡに比較すると、α−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）は、ＤＨＡより１０倍〜３０倍強力であるように見える。概して、親分子であるＤＨＡと比較したときのこれらの所見および性能は予測可能ではなく、全く予期し得ないものである。
【０１０８】
α−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）は核受容体ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγに同時にリガンド結合することにより作用するように見えるので、該化合物は、特にインスリン抵抗性、代謝性症候群および２型糖尿病の患者において、グルコース代謝および脂質代謝に対する治療的に興味深い効果を有するだけでなく、体重減少作用および一般的な抗炎症作用をも有するであろう。直接あるいは危険因子に対する肯定的な介在を通じて、α−エチルＤＨＡ（ＰＲＢ−２）は、心筋梗塞および脳卒中のような心臓血管系疾患の発症に対する予防効果を有すると共に、心臓血管系の死亡に対する予防効果を有するであろう。
ＰＰＡＲγリガンドとして作用する医薬は既に市場で販売されているが、これら化合物がグルコース代謝に対して積極的な効果を有するとしても、それらはトリグリセリド上昇、体重増加および浮腫のような副作用よって妨げられる。この出願で示されたα−置換ＤＨＡ誘導体は、おそらくインスリン抵抗性、代謝性症候群および２型糖尿病の患者に関連し且つ有利な、組み合わされたＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲα効果を有している。更に、これらの組合わせ作用は、更に、血中脂質、炎症性事象、アテローム性動脈硬化症およびそれによる心臓血管系疾患に対しても重要な効果を有するはずである。
本発明は、提示された実施形態および実施例に制限されるべきものではない。
【０１０９】
（参考文献）
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【０１１０】
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【図面の簡単な説明】
【０１１１】
【図１】図１は、遊離脂肪酸プール理論の模式的概観図である。
【図２】図２は、代謝性症候群および２型糖尿病に対する影響を実証するために、本発明において使用されたモデルおよび方法の概観図を示している。
【図３】図３は、１．５％濃度の合計脂肪含量で本発明の化合物を与えた動物の肝臓組織における、本発明の異なる化合物の遊離脂肪酸濃度を描いている。
【図４】図４は、１．５％の濃度の合計脂肪含量で本発明による化合物を与えた動物の肝臓組織における、ＤＨＡの細胞内の濃度を描いている。
【図５】図５は、本発明による異なる化合物のＰＰＡＲγ受容体に対する結合親和力を描いている。
【図６】図６は、本発明による異なる化合物の核受容体ＰＰＡＲαに対する結合親和力を描いている。
【図７】図７は、本発明による異なる化合物の核受容体ＲＸＲαに対する結合親和力を描いている。
【図８】図８は、本発明による異なる化合物で処理されたた、トランスフェクトされた細胞からのルシフェラーゼの放出を描いている。
【図９】図９は、ブロック４の実験の研究設計を示している。
【図１０】図１０は、８週間のＨＦ食餌の後の２週間の食餌介在療法の際の体重変化を示している。
【図１１】図１１は、ルシフェラーゼ活性（即ち、内因性ＰＰＡＲγ活性）からの結果を示している。
【図１２】図１２は、ＤＨＡと比較して、発明による異なる化合物中における内内因性ルシフェラーゼ活性を示している。
【図１３】図１３は、インスリン抵抗性の動物にインスリン抵抗性を弱める効果をもつ化合物を与える前後における、典型的な血糖除去カーブを示している。
【図１４】図１４は、代謝性症候群およびインスリン抵抗性に対する、本発明によるＤＨＡ誘導体の異なる影響を示している。
【図１５】図１５は、代謝性症候群およびインスリン抵抗性に対する、本発明によるＤＨＡ誘導体の異なる影響を示している。
【図１６】図１６は、代謝性症候群およびインスリン抵抗性に対する、本発明によるＤＨＡ誘導体の異なる影響を示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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