(57)【要約】【化１】2008531675.tif 000022  サイトカイン調節不全のための治療を必要とする患者を治療する、治療的に有効な量の一般式（Ｉ）の化合物をその患者に投与することを含んでなる方法であって、ここにおいて、Ｒ1及びＲ2は、一緒に、−（ＣＨ2）n−ＣＲ4Ｒ5−（ＣＨ2）m−基を形成し、ここにおいて、ｎ及びｍは、独立に選択された整数０、１又は２であり、そしてＲ4及びＲ5は、Ｈ、Ｃ1-18アルキル、Ｃ1-18アルコキシ、Ｃ1-18ヒドロキシアルキル、Ｃ2-18アルケニル及びＣ6-18アリール又はアラルキルから独立に選択され、そしてＲ3は、必須多価不飽和脂肪酸の脂肪族アシル基である。
2008531675.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイトカインの調節を必要とする患者を治療する、治療的に有効な投与量のグリセリド又は以下の一般式Ｉ：
【化１】
2008531675.tif 000020
［式中、Ｒ1及びＲ2は、一緒に、
−（ＣＨ2）n−ＣＲ4Ｒ5−（ＣＨ2）m−
基を形成し、
ここにおいて、ｎ及びｍは、整数０、１又は２から独立に選択され、
そしてＲ4及びＲ5は、Ｈ、Ｃ1-18アルキル、Ｃ1-18アルコキシ、Ｃ1-18ヒドロキシアルキル、Ｃ2-18アルケニル及びＣ6-18アリール又はアラルキルから独立に選択され、
そしてＲ3は、必須多価不飽和脂肪酸の脂肪族アシル基である］
の化合物を、その患者に投与することを含んでなる方法。
【請求項２】
多価不飽和脂肪族アシル基が、ｎ−３、ｎ−６及びｎ−９脂肪酸、更に好ましくはｎ−３及びｎ−６脂肪酸のそれから選択され、なお更に好ましくはγ−リノレノイル、γ−ジホモリノレノイル及びアラキドノイルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ1及びＲ2が、−ＣＲ4Ｒ5基を形成し、ここにおいて、Ｒ4及びＲ5が、Ｈ及びＣ1-6アルキルから独立に選択される、請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ1及びＲ2が、−ＣＨ2−又は−ＣＨ2ＣＨ2−基を形成する、請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
式の化合物が、５−必須脂肪族アシルオキシ−１，３−ジオキサンである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物が、ｎ３−脂肪族アシルオキシ−１，３−ジオキサン又はｎ−６脂肪族アシルオキシ−１，３−ジオキサンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
式Ｉの化合物が、５−γ−リノレノイルオキシ−１，３−ジオキサン、５−ジホモ−γ−リノレノイルオキシ−１，３−ジオキサン及び５−アラキドノイル−１，３−ジオキサンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
患者が、サイトカインの調節不全のための治療を必要とする、先の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
患者が、神経変性疾患における脱髄を予防するための治療を必要とする、請求項１ないし８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
調節されたサイトカインが、ＴＧＦ−β１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１３、及びγ−ＩＦＮのうちの一つ又はそれより多く、である、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
治療が、免疫系の異常に対するものである、先の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
治療が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、アレルギー、喘息、クローン病及びリュウマチ様関節炎、多発性硬化症、神経変性疾患  脳卒中の後遺症、頭部外傷、出血並びにアルツハイマー及びパーキンソン病の慢性異常、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、早産児の異常及び敗血症、からなる群から選択される症状に対するものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
以下の式Ｉ：
【化２】
2008531675.tif 000021
［式中、Ｒ1及びＲ2は、一緒に、
−（ＣＨ2）n−ＣＲ4Ｒ5−（ＣＨ2）m−
基を形成し、
ここにおいて、ｎ及びｍは、整数０、１又は２から独立に選択され、
そしてＲ4及びＲ5は、Ｈ、Ｃ1-18アルキル、Ｃ1-18アルコキシ、Ｃ1-18ヒドロキシアルキル、Ｃ2-18アルケニル及びＣ6-18アラルキルから独立に選択され、
そしてＲ3は、必須多価不飽和脂肪酸の脂肪族アシル基である］
の化合物。
【請求項１４】
Ｒ3が、ｎ−３、ｎ−６及びｎ−９脂肪酸、更に好ましくはｎ−３及びｎ−６脂肪酸の多価不飽和脂肪族アシル基であり、なお更に好ましくはγ−リノレノイル、γ−ジホモリノレノイル及びアラキドノイルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ1及びＲ2が、−ＣＲ4Ｒ5基を形成し、ここにおいて、Ｒ4及びＲ5が、Ｈ及びＣ1-6アルキルから独立に選択される、請求項１３又は１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ1及びＲ2が、−ＣＨ2−又は−ＣＨ2ＣＨ2−基を形成する、請求項１３、１４又は１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
５−アシルオキシ−１，３−ジオキサンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１８】
ｎ−３−脂肪族アシル又はｎ−６脂肪族アシルオキシ−１，３−ジオキサンである、請求項１３ないし１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
５−γ−リノレニルオキシ−１，３−ジオキサン、５−ジホモ−γ−リノレニルオキシ−１，３−ジオキサン又は５−アラキドニル−１，３−ジオキサンである、請求項１３ないし１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
治療において使用するための、請求項１３ないし１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
５−ヒドロキシ−１，３−ジオキサンを、必須脂肪酸又は必須脂肪酸ハロゲン化物と反応させることを含んでなる、一般式Ｉの化合物の合成のための方法。
【請求項２２】
式Ｉの化合物を、医薬的に又は栄養補助食品的に受容可能な担体、被覆、カプセル、希釈剤及び／又は保存剤と一緒に含んでなる、本発明の方法において使用するための組成物。
【請求項２３】
抗酸化剤又はエステル転移反応の阻害剤である保存剤を含んでなる、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
０．０５ｍｇ／ｇ又はそれより少ないビタミンＥを含んでなる、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１ないし２４のいずれか１項に記載の一般式Ｉの化合物を含んでなる、免疫系を制御するための医薬組成物。
【請求項２６】
サイトカインの調節不全の治療又はサイトカイン疾患の調節のための医薬の製造のための、請求項１ないし２５のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２７】
使用が、神経変性疾患を治療するための医薬の製造のためである、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
医薬が、全ての種類の、然し特に、再発寛解型、一次性進行性及び慢性進行性多発性硬化症における神経変性の抑止及び逆転、並びに例えばＭＲＩ又はＣＡＴスキャンによって、或いはＥＤＳＳ採点法によって測定されるような、神経細胞の統合的機能の部分的或いは完全な回復のためである、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
神経変性疾患が、脱髄を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
治療が、根底にある神経変性を特異的に抑止し、そして神経の機能を回復する、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
γ−リノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸及びアラキドン酸の脂質含有率に対して神経膜成分を基準化する、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
末梢血単核球の放出からの自然の放出から測定される、健康なＴＧＦ−β１／ＴＮＦα比を回復する、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
疾病が、再発寛解型多発性硬化症、一次性進行性多発性硬化症又は慢性進行性多発性硬化症である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
治療が、脳卒中後の脳機能障害、頭部外傷及び頭蓋内出血、脱髄又は神経損傷が存在するアルツハイマー病或いはパーキンソン病である、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
脂質が、患者のＴＧＦ−β１レベルを治療的レベルに維持するか又はそれまで増加するために十分な期間及び投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
脂質が、１８ヶ月の毎日投与後、０．４ないし３．０、少なくとも０．５、更に好ましくは少なくとも０．７５、そして最も好ましくは少なくとも１の、患者の血液から単離された末梢血単核細胞から自然に放出されるＴＧＦ−β１／ＴＮＦ−α比に、患者のＴＧＦ−β１レベルを維持するか又はそこまで増加するために十分な期間及び投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
投与量が、１８ヶ月の毎日投与後、少なくとも、少なくとも０．７５の、患者の血液から単離されたＰＢＭＣ中のＴＧＦ−β１／ＩＬ−１β比を産生するようなものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
投与される化合物の量が、一日当り０．５ないし３０グラム、典型的には３ないし５グラム間である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
Ｒ3が、γ−リノレニル又はジホモ−γ−リノレニルであり、そして投与量が、１ないし１０グラム／日間である、請求項１ないし３８のいずれか１項に記載の方法、使用又は組成物。
【請求項４０】
投与量が、２ないし１０グラム／日間である、請求項３９に記載の方法、使用又は組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サイトカインが不均衡な状態にある、又はさもなければ治療的利益を与えるための調節が可能な疾病及び疾患を治療するための方法に関する。特に本発明は、サイトカインＴＧＦ−β１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１３、及びγ−ＩＦＮが調節不全であるか、又はさもなければ治療的利益を与えるための調節が可能な疾患に対する治療を必要とする患者の治療の方法を提供する。
【０００２】
本発明の方法によって治療可能な特別な疾病は、免疫系の異常、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、アレルギー、喘息、クローン病及びリュウマチ様関節炎、然し特に多発性硬化症、そして更に脳卒中の後遺症、頭部外傷、出血並びにアルツハイマー及びパーキンソン病の慢性異常のような神経変性疾患のような疾患である。予防的及び治療的の両方で前処置することができる更なる疾患は、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）早産児の異常及び敗血症である。
【０００３】
本明細書中に参考文献として援用される、本発明人等の同時系属中の特許出願ＷＯ２００４／１００９４３及びＷＯ２００５／０１８６３２は、合成、植物性及び真菌性油の、神経変性疾患、特に多発性硬化症、脳卒中、頭部外傷、アルツハイマー及びパーキンソン病の治療のための使用に関する。ＷＯ２００４／１００９４３は、その脂質のｓｎ−２位に高いパーセントの必須脂肪酸γ−リノレン酸（ＧＬＡ）を有することによって特徴づけられる、典型的には全油中の４０％を超えるｓｎ−２脂肪酸である油に関する。ＷＯ２００５／０１８６３２は、γ−リノレン酸（ＧＬＡ）、ジホモ−γ−リノレン酸（ＤＨＧＬＡ）及びアラキドン酸（ＡＡ）から選択されるｓｎ−２脂肪酸残基を有する構築された脂質に関する。
【０００４】
ｎ−３及びｎ−６不飽和様式の必須脂肪酸（ＥＦＡ）が、自己免疫性疾病を含む広い範囲のヒトの生理学的疾患において利益のある効果を有することは文献中（ＷＯ０２／０２１０５）で十分に報告されている。Ｈａｒｂｉｇｅ（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ｓｏｃ．５７，５５５−５６２は、自己免疫性疾病状態におけるｎ−３及びｎ−６酸による食事の補充を概説し、そして特にγ−リノレン酸（ＧＬＡ）及び／又はリノール酸（ＬＡ）富化油の利益の証拠を記述している。
【０００５】
サイトカインは、ＭＳの発病に関係し、多くの研究は、疾病の再発期と一致するミエリン毒性炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＦＮ−γ）の増加を示している。反対に、抗炎症性及び免疫抑制性サイトカイントランスフォーミング増殖因子−ベータ１（ＴＧＦ−β１）は、再発の期間中に減少し、そして患者が寛解に入ると増加するように見受けられる。従って生物学的に活性なＴＧＦ−β１並びに炎症誘発性ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＮＦ−γ間の均衡は、ＭＳの再発−寛解中に調節不全になるように見受けられる。
【０００６】
ＥＡＥからの自然の回復期中に、ＴＧＦ−β１を分泌するＴ細胞は、ＥＡＥエフェクター細胞を阻害し、ＴＧＦ−β１は、ＣＮＳ中に発現し、そしてＥＡＥの経口寛容誘導の保護において、ＴＧＦ−β及びＰＧＥ2は、脳において発現する（Ｋａｒｐｕｓ  ＆  Ｓｗａｎｂｏｒｇ（１９９１）；Ｋｈｏｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ（１９９２））。Ｈａｒｂｉｂｅ（（１９９８）は、ＥＡＥに対する食事性のγ−リノレン酸効果がＴＧＦ−β１に関係するＴｈ3様機構及び恐らくはスーパーオキシドジスムターゼの抗酸化活性により仲介されていると結論している。
【０００７】
ルリジサ油（典型的には１００％の脂肪酸当り、２０％ないし２３％のγ−リノレン酸及び３４ないし４０％のリノール酸含有率）及びＭｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ真菌油（図１参照）は、ＭＳ候補者を同定するために使用されるＥＡＥ動物モデルにおいて有効であることが示されているが、一方ヒトの疾病において有意に有効であることは一度も示されていない。低いレベルのγ−リノレン酸を含有する高いレベルのリノール酸に富んだ油（ＥＰＯ：７：１のリノール酸：γ−リノレン酸）は、ラットにおけるＥＡＥの発生率及び重度を部分的に抑制し（Ｍｅｒｔｉｎ  ＆  Ｓｔａｃｋｐｏｏｌｅ，１９７８）、一方上記を参照したＢａｔｅｓ’Ｎａｕｄｉｃｅｌｌｅの研究は、患者の悪化に導いた。過去約３０年を超える多発性硬化症罹病者による、ルリジサ油（Ｂｏｒａｇｅ  ｏｉｌ）、及び月見草油のような他のＧＬＡ／ＬＡを含有する油の使用にも関わらず、患者の多くは疾病からの回復に失敗し、有意な改良を示さず、根底にある疾病は死ぬまで進行し続ける。
【０００８】
多発性硬化症における免疫抑制を与えるための手段として、特にγ−リノレン酸及びリノール酸に富んだルリジサ油を使用することが示唆されている（米国特許第４，０５８，９５４号）。批判的には、示唆されている投与量は、一日当り２．４グラムの油であり、そして効力の実際の証拠は、与えられていない。これは、ＷＯ２００４／１００９４３の研究におけるヒトのｉｎ  ｖｉｖｏで無効であることが見出されている低い５ｇ／日の投与量よりはるかに低い。
【０００９】
シクロホスファミドのようなＴ細胞枯渇物質及び調節物質を含む他の更に劇的な免疫抑制治療は、更にＥＡＥモデルにおいて有効であることが示されているが、これらがヒトの多発性硬化症疾病の兆候の改良に使用された場合、しかし根底にある疾病は進行し続ける。Ｔ細胞は、ＴＧＦ−β１のような利益のあるサイトカイン、並びにヒトに有害なものを産生する。Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＵＫのＤａｖｉｄ  Ｂａｋｅｒは、ＥＡＥ及びＭＳにおける有効性間の不同性を、ＵＫのＭＳ  Ｓｏｃｉｅｔｙの１０th  Ｍａｙ  ２００４のＵＫ  ＭＳ  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  Ｍｅｅｔｉｎｇにおける‘Ｅｖｅｒｙｔｈｉｎｇ  ｓｔｏｐｓ  ＥＡＥ，ｎｏｔｈｉｎｇ  ｓｔｏｐｓ  ＭＳ’と題する論文中で要約している。
【００１０】
ＷＯ２００４／１００９４３の研究において、本発明人Ｈａｒｂｉｇｅ及びＬｅａｃｈは、共同発明人Ｓｈａｒｉｅｆと共に、適した付随する脂肪酸含有率を伴う高いレベルのｓｎ−２リノレン酸を含有するトリグリセリド油（ｓｎ−２における＞４０％の残基がγ−リノレン酸である）による‘高投与量’治療に応じて、ＭＳの殆んど全ての徴候の、現時点の高価な標準的治療によって与えられるものを凌駕する顕著なレベルの改良を達成することができることを、驚くべきことに特定した。このような成功は、Ｎａｕｄｉｃｅｌｌｅの研究のような、他のγ−リノレン酸を含有する製剤の、成功を伴わない従来の使用に照らして、特に驚くべきことである。
【００１１】
ＷＯ２００４／１００９４３の研究は、１８ヶ月の期間にわたって、高い投与量（１５ｇ／日）の選択された高ｓｎ−２γ−リノレン酸のルリジサ油を摂取した患者が、ＥＤＳＳ採点法の有意な（ｐ＜０．００１）、そして顕著な改良、再発の減少した比率、筋肉痙縮及び有痛性感覚症候の症候的寛解、並びに認知機能の改良された客観的基準を示したことを示す。このルリジサ油の５ｇ／日の低い投与量は、効果がなかった。
【００１２】
最高の投与量のこのルリジサ油を摂取した患者は、試行期間中、ＴＧＦ−β１の末梢血単核球産生（ＰＢＭＣ）のそのレベルを維持し、その炎症誘発性サイトカインＴＮＦ−α及びＩＬ−１βは、有意に、そして顕著に（＜７０％）減少し、そして彼等は、試行の過程にわたってこれらの脂肪酸の損失を証明したプラセボを摂取した患者とは対照的に、ＰＢＭＣ膜長鎖オメガ−６脂肪酸ジホモ−γ−リノレン酸（ＤＨＬＡ）及びアラキドン酸（ＡＡ）を維持するか又は増加するかのいずれかであった。
【００１３】
従って、免疫抑制が、活性な病変及び神経変性の増加を減少することが予期されるものであるが、高いｓｎ−２ＧＬＡ油の治療は、さもなければ現在の治療により有効に治療されない代謝性欠陥の修正と一致するＭＳにおいて特異的に喪失する、重要な膜脂質成分の維持及び／又は増加を見かけ上標的とする。低い投与量（５グラム／日）がこれに効果を有しないという事実が、この決定を支持する。
【００１４】
本発明人等は、高いｓｎ−２−γ−リノレイン酸のルリジサ油により得られた結果の観点から、これが実際に、サイトカインの調節不全を治療することにおいてその効力を与えるモノグリセリド、特にｓｎ−２モノグリセリド、又はその代謝性前駆体中のｓｎ−２−γ−リノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸又はアラキドン酸の残基の存在であることを証明するためにここに記述する。トリグリセリドそれ自体は、モノグリセリドの対応物の殆んど３倍の重量、そして従って投与量であることに注意して、これらは、ｓｎ−２モノグリセリドの代謝性前駆体又は類似体としての、ｎ−３、ｎ−６及びｎ−９型、特にｎ−６型、の必須脂肪酸を投与することが可能であり、そしてなお利益のあるサイトカインの変化が得られることを特定した。特に、これらの化合物は、同等に大きくないモノグリセリドより更に安定であると信じられる。
【００１５】
２−アラキドニルグリセロールが、ＴＮＦ−α及び反応性酸素種誘導疾病を減少する活性を有することが報告されている（ＷＯ０１／９７７９３参照）が、然しながら、対応するγ−リノレノイル及びパルミトイル化合物は不活性であると記述されている。ｓｎ−２−アラキドニルで構築された脂質は、軽度の認知障害のような‘脳機能低下症’において活性であると更に報告されている（ＥＰ１４１９７６８参照）。
【００１６】
トリグリセリドに対するモノグリセリドの使用の投与量の利益は、ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００３５２４中に例示されているｓｎ−１、ｓｎ−３飽和アシル基ｓｎ−２ＥＦＡトリグリセリドと比較した場合、ある種の形態の増加した不安定性の可能性によって部分的に相殺されることができる。このような不安定性は、例えばエステル転移反応及び酸化のためであることができる。この問題は、モノグリセリドを、更に安定な形態、例えば液体の油ではなく固体又は半固体で製造することに向けられる。
【００１７】
本発明人等は、代謝されて、ｉｎ  ｖｉｖｏでその形態を与えるか、又は直接的に活性であるが、然し保存中のエステル転移反応及び他の分解に抵抗性であるかのいずれかである、特許請求されているようなモノグリセリドの代謝性前駆体であることができる、既知の及び新規な化合物を、ここに更に提供する。
【００１８】
本発明人等による予備研究は、本発明の使用のために選択される化合物が、少なくともいくつかの哺乳動物のリパーゼによる分解の対して、従来使用されたトリグリセリドに基づくルリジサ、月見草及び構築された脂質より抵抗性であり、そして再構成に対してモノグリセリドよりも抵抗性であることを示している。
【００１９】
これらの化合物は、特に、必須脂肪酸、特にｎ−３、ｎ−６及びｎ−９、しかし特にｎ−６脂肪酸を、グリセロールのｓｎ−２位と同等な位置に保有する環式グリセロールである。本発明人等は、これらの化合物が、ルリジサ油及び構築された脂質のｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏの作業によるその従来の臨床的研究に基づいて、患者の健康に好ましい様式でサイトカインを制御することが可能であることを特定している。
【００２０】
環式グリセロールは、一つの群として既知であり、例えばＣｈｅｍ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ｎｏ  ６５：８７４７ｂを参照、そしてモノアシルグリセリドの合成における中間体として使用されている、例えばＣｈｅｍｉｃａｌ  ＆  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ（２０００），４８（７）９０３−９０７を参照。最近のＵＳ２００５／００２０６７９は、多価不飽和脂肪族アシル基、特にアラキドニル基を保有するこの群の全員が、疼痛、末梢部疼痛、緑内障、癲癇、悪心、ＡＩＤＳ消耗、癌、神経変性、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病及びアルツハイマー病、食欲の亢進、受胎能の減少、トゥレット及び他の運動機能障害、神経保護のため、末梢血管拡張並びに抑制記憶の治療における薬理学的使用を有するアナンダミド運搬阻害剤としての用途を有するとして提案していることを提案している。
【００２１】
この文書及びその先行物ＷＯ９９／６４３８９（鎮痛に関する）は、本発明の特別な化合物の教示を提供せず、そして環式グリセロールの治療的に有効な量が１０ｍｇ／日ないし１０００ｍｇ／日であることを有意に教示している。本発明人等の動物及び細胞における相対的効果の研究は、このような投与量が、ここに開示されたサイトカインを制御する指示において無効であるものであることを特定するようにこれらを導く。ヒトにおける有効な投与量は、１０００ｍｇ／日より多い、特に一日当り１ｇないし１０ｇであることが予想される。更に好ましくは２ないし６ｇ／日、なお更に好ましくは２ないし４ｇ／日である。
【００２２】
サイトカインの調節なしでは、このような投与量が、脱髄性疾病  多発性硬化症及びアルツハイマー、パーキンソン、ハンチントン舞踏病及び外傷並びに脳卒中のような疾病の治療を、継続する免疫細胞の抑制及び組織のサイトカインの破壊を達成することはできないという観点で提供する。再取込みを遮断することによる天然のアナンダミドレベルの単なる亢進は、天然のアナンダミドが有効な量で存在しない場合、例えばＴ細胞中又はＣＮＳ病変の周囲では、寛解を提供することはできない。
【００２３】
第１の側面において、本発明は、サイトカイン、特にＴＧＦ−β１、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１３及び／又はγ−ＩＦＮの調節を必要とする患者を治療する、治療的に有効な量の以下の一般式Ｉ：
【００２４】
【化１】
2008531675.tif 000003
【００２５】
［式中、Ｒ1及びＲ2は、一緒に、
−（ＣＨ2）n−ＣＲ4Ｒ5−（ＣＨ2）m−
基を形成し、
ここにおいて、ｎ及びｍは、整数０、１又は２から独立に選択され、
そしてＲ4及びＲ5は、Ｈ、Ｃ1-18アルキル、Ｃ1-18アルコキシ、Ｃ1-18ヒドロキシアルキル、Ｃ2-18アルケニル及びＣ6-18アリール又はアラルキルから独立に選択され、
そしてＲ3は、必須多価不飽和脂肪酸の脂肪族アシル基である］
の化合物を、その患者に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２６】
好ましい多価不飽和脂肪族アシル基は、ｎ−３、ｎ−６及びｎ−９脂肪酸、更に好ましくはｎ−３及びｎ−６脂肪酸のものであり、なお更に好ましくはγ−リノレノイル、γ−ジホモリノレノイル及びアラキドノイルである。
【００２７】
好ましくはＲ1及びＲ2は、Ｈ又は−ＣＲ4Ｒ5基から選択され、ここで、Ｒ4及びＲ5は、Ｈ及びＣ1-6アルキルから独立に選択される。最も好都合には、Ｒ1及びＲ2は、−ＣＨ2−又は−ＣＨ2ＣＨ2−基を形成する。
【００２８】
特に好ましいものは、５−必須脂肪族アシルオキシ−１，３−ジオキサン、更に好ましくは、ｎ−３−脂肪族アシルオキシ又はｎ−６脂肪族アシルオキシ−１，３−ジオキサン、最も好ましくは、５−γ−リノレノイルオキシ、５−ジホモ−γ−リノレノイルオキシ及び５−アラキドノイルオキシ−１，３−ジオキサンである化合物である。最も好ましいものは、非炎症性の５−γ−リノレノイルオキシ及び５−ジホモ−γ−リノレノイルオキシ−１，３−ジオキサンである。
【００２９】
特に治療されるものは、免疫系の調節不全のサイトカイン異常、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、アレルギー、喘息、クローン病及びリュウマチ様関節炎、然し特に多発性硬化症、そして更に脳卒中の後遺症、頭部外傷、出血のような神経変性疾患、並びにアルツハイマー及びパーキンソン病の慢性の異常のような疾病である。予防的及び治療的の両方で前処置することができる更なる疾患は、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）早産児の異常、及び敗血症である。
【００３０】
特に好都合に治療される神経変性疾患は、脱髄を含むものである。本発明の方法は、特異的に根底にある神経変性を抑止し、そして神経の機能を回復することに取組む。特に、この方法は、好ましくは神経膜の組成を正常化し、そして健康なＰＢＭＣ刺激性又は自然に放出されるＴＧＦ−β１／ＴＮＦαの比及びＴＧＦ−β１と他のＰＢＭＣを放出するサイトカインの比を回復する。最も好都合には、この方法は、全ての種類の多発性硬化症、しかし特に再発寛解型、一次性進行性及び慢性進行性ＭＳにおける神経変性を抑制し、並びに例えばＭＲＩ又はＣＡＴスキャンによって、或いはＥＤＳＳ採点法によって測定されるような、神経機能の部分的又は完全な回復をもたらす。このような方法は、更に脱髄又は神経性障害が存在する、脳卒中後の脳機能障害、頭部外傷及び頭蓋内出血の治療において使用することができる。更なる適用は、アルツハイマー病或いはパーキンソン病のような他の慢性の脱髄の治療において提供される。
【００３１】
好ましくは、本発明の化合物は、患者のＴＧＦ−β１レベルを治療的レベルに維持するか又はそれまで増加するために十分な期間及び投与量で投与される。治療的レベルによって、健康な対象と一致するレベルを意味する。好ましくは投与量は、１８ヶ月の毎日投与後、０．４ないし３．０、少なくとも０．５、更に好ましくは少なくとも０．７５、そして最も好ましくは１の、患者の血液から単離された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から自然に放出されたＴＧＦ−β１／ＴＮＦ−αの比を産生するようなものである。好ましくは、投与量は、１８ヶ月の毎日投与後、少なくとも０．５、更に好ましくは０．７５、そして最も好ましくは少なくとも１の、患者の血液中のＴＧＦ−β１／ＩＬ−１β比を産生するようなものである。好ましくは前記レベルは、１２ヶ月後、そして更に好ましくは６ヵ月後に産生される。
【００３２】
本発明は、脱髄性疾病における再ミエリン化を必要とする患者を治療する、治療的に有効な量の、Ｒ3がγ−リノレノイル、γ−ジホモリノレノイル及びアラキドノイル；最も好ましくはγ−リノレノイル及びγ−ジホモリノレノイルから選択される式Ｉの化合物をその患者に投与することを含んでなる方法を更に提供する。
【００３３】
本発明の全ての方法のために、毎日投与される化合物の量は、経口的に投与される、０．５ないし３０グラム間、なお更に好ましくは０．７５ないし２０グラム間、そして最も好ましくは１ないし１８グラム間、典型的には２ないし５グラムであるものである。この投与量は、一回の単一投与として、或いは一日当りの一緒にした合計のこの量を二回又はそれより多い投与で与えることができる。
【００３４】
ｓｎ−２部分がγ−リノレン酸残基のそれである場合、投与量は、これらの範囲の高い端に近いものであることができるが、しかし好ましくは１ないし１０グラム／日、更に好ましくは２ないし６グラム／日である。ｓｎ−２部分がジホモ−γ−リノレン酸残基のそれである場合、投与量はより少ないことができ、一方ｓｎ−２部分がアラキドン酸残基のそれである場合、効力はより高く、しかし高いレベルでの所望しない副作用及びこのＰＵＦＡの炎症誘導性の特性の可能性のために、投与は更に注意深くなければならない。
【００３５】
本発明の第２の側面は、以下の式Ｉ：
【００３６】
【化２】
2008531675.tif 000004
【００３７】
［式中、Ｒ1及びＲ2は、一緒に
−（ＣＨ2）n−ＣＲ4Ｒ5−（ＣＨ2）m−
基を形成し、
ここにおいて、ｎ及びｍは、整数０、１又は２から独立に選択され、
そしてＲ4及びＲ5は、Ｈ、Ｃ1-18アルキル、Ｃ1-18アルコキシ、Ｃ1-18ヒドロキシアルキル、Ｃ2-18アルケニル及びＣ6-18アラルキルから独立に選択され、
そしてＲ3は、必須多価不飽和脂肪酸の脂肪族アシル基である］
の新規な化合物を提供する。
【００３８】
好ましい多価不飽和脂肪族アシル基は、ｎ−３、ｎ−６及びｎ−９脂肪酸、更に好ましくはｎ−３及びｎ−６脂肪酸のものであり、なお更に好ましくはγ−リノレノイル、γ−ジホモリノレノイル及びアラキドノイルである。
【００３９】
好ましくはＲ1及びＲ2は、−ＣＲ4Ｒ5基を形成し、ここで、Ｒ4及びＲ5は、Ｈ及びＣ1-6アルキルから独立に選択される。最も好都合には、Ｒ1及びＲ2は、−ＣＨ2−又は−ＣＨ2ＣＨ2−基を形成する。
【００４０】
従って以下の式ＩＩａ：
【００４１】
【化３】
2008531675.tif 000005
【００４２】
［式中、Ｒ1及びＲ2は、水素及びＣ1-6アルキルから独立に選択される］
の化合物が好ましい。
特に好ましいものは、５−アシルオキシ−１，３−ジオキサン、更に特にｎ−３−脂肪族アシル又はｎ−６脂肪族アシルオキシ−１，３−ジオキサン、最も好ましくは５−γ−リノレノイルオキシ、５−ジホモ−γ−リノレノイルオキシ及び５−アラキドニルオキシ−１，３−ジオキサンである化合物である。
【００４３】
本発明の第３の側面は、５−ヒドロキシ−１，３−ジオキサンと、必須脂肪酸又は必須脂肪酸ハロゲン化物との反応を含んでなる、一般式ＩＩの化合物の合成のための方法を提供する。
【００４４】
本発明の第４の側面は、式Ｉの化合物を、医薬的に又は栄養補助食品的に受容可能な担体、被覆、カプセル、希釈剤及び／又は保存剤と一緒に含んでなる、本発明の方法において使用するための組成物を提供する。本発明において使用するための化合物は、薬学において既知の慣用的なベヒクルのいずれかによって投与することができる。最も都合よくは、これらは、未希釈の油、又は食品との混合物として、このような油を含有するカプセルの形態で、或いは腸溶的に被覆された形態で投与される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １９th  Ｅｄｉｔｉｏｎ以外の他の形態も当業者にとって想起されるものである。
【００４５】
保存剤によって、抗酸化剤又はエステル転移反応の阻害剤を意味する。組成物が、ビタミンＥを含まない、或いは０．０５ｍｇ／ｇ又はそれより少ない、例えば０．００５ないし０．０５ｍｇ／ｇであるレベルのビタミンＥのみを含むことが特に好ましい。
【００４６】
本発明の第５の側面は、免疫系の制御のための、特にサイトカインＴＧＦ−β１、ＴＮＦ−α、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１３、及び／又はγ−ＩＦＮを調節することによる、本発明の治療の方法のために定義したとおりの一般式Ｉの化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４７】
本発明の第６の側面は、本発明の方法のために記載したとおりのサイトカインの調節不全及び神経変性疾患の治療のための医薬の製造のために、先に記載したとおりの式Ｉ、式ＩＩ及び式ＩＩａの化合物の使用を提供する。特に好ましい医薬は、全ての種類の多発性硬化症、しかし特に再発寛解型、一次性進行性及び慢性進行性ＭＳにおける神経変性の抑止又は逆転、並びに例えばＭＲＩ又はＣＡＴスキャンによって、或いはＥＤＳＳ採点法によって測定されるような、神経機能の部分的又は完全な回復のためのものである。他のＴＧＦ−β１に反応性の疾病は、先に記載したように治療することができる。特に治療されるものは、脱髄である。
【００４８】
他の利益のある薬剤を、本発明における使用のための化合物と組合せるか、又はさもなければ治療管理の一部を形成することができることは当業者によって認識されるものである。これらは、イオンチャネル遮断剤、例えばナトリウムチャネル遮断剤、インターフェロン（α、β、又はγ）、Ｔ細胞枯渇物質、ステロイド又は他の対症薬剤であることができる。免疫性及び炎症性反応が調節される場合、このような組合せは、これらの系の複雑な特質を考慮して、注意深く行う必要があることは更に認識されるものである。然しながら、本発明の化合物に対する遅延した反応に対する潜在性を考慮して、短く作用する薬剤は、サイトカインのレベルが正常化される前の最初の月の治療において、更なる治療がこの正常化過程を妨害しない限り、利益があることができる。
【００４９】
本発明において使用するための化合物及び組成物の合成が、比較実施例の合成と一緒に以下に記載される。実施例は、Ｒ3がγ−リノレノイルである化合物を例示しているが、ジホモ−γ−リノレノイル及びアラキドノイル並びにこれらのｎ−３及びｎ−９類似体は、類似の出発物質により容易に合成される。
【００５０】
本発明は、ここに以下の非制約的表、実施例及び図を参照することのみによって、実施例によって記載されるものである。本発明の範囲内に入る更なる態様は、これらに照らして当業者にとって想起されるものである。
【００５１】
表
実施例
背景
高ｓｎ−２ルリジサ油（ＷＯ２００４／１００９４３）試行
ＰＢＭＣの単離及び培養
ヘパリン処置した全血を、等体積のハンクス平衡塩類溶液（Ｓｉｇｍａ，ＵＫ）で希釈し、そして得られた希釈された血液を、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｎｙｃｏｍｅｄ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）上に層状に入れた。８００ｇで３０分間の密度勾配遠心後、ＰＢＭＣを界面から除去し、そしてハンクス溶液中で希釈した。次いで細胞を２５０ｇで１０分間の遠心によって２回洗浄した。次いで得られた最終的なペレットを、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕのペニシリン及び１００μｇのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ，ＵＫ）並びに１０％の自家血漿で補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｓｉｇｍａ，ＵＫ）からなる培養培地中に再懸濁した。トリパンブルー排除法により判定されたように＞９５％生存率のｍｌ当り２×１０6個のＰＢＭＣを、組織培養試験管（Ｂｉｂｂｙ  Ｓｔｅｒｉｌｉｎ  Ｌｔｄ，Ｓｔｏｎｅ，ＵＫ）に入れ、そして２４時間３７℃で、５％ＣＯ2でインキュベートした。抗原の濃度、細胞密度及び培養時間は、最大のサイトカイン産生を決定するために、全て事前の動態実験において決定されていた（データは示されていない）。日常的なサイトスピン標品も、その後の差の計数のために調製した。インキュベーション後、細胞を培養物から２５０ｇで１０分間の遠心によって除去し、次いで得られた上清を除去し、アリコートにし、そして−７０℃で保存した。
【００５２】
血漿試料の調製
１０ｍｌのヘパリン処置した血液を、２５０ｇで１０分間遠心した。次いで得られた血漿層を取出し、アリコートにし、そして−７０℃で保存した。
【００５３】
炎症誘発性サイトカインの検出
細胞培養物の上清及び血漿中のＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＦＮ−γを、ＥＬＩＳＡ方式（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌｔｄ，Ａｂｉｎｇｄｏｎ，ＵＫ）におけるサイトカインの検出を可能にする、商業的に入手可能な対の抗体を使用して検出した。ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γのＥＬＩＳＡの感度は、１５．６−１０００ｐｇ／ｍｌであり、そしてＩＬ−１βに対しては３．９−２５０ｐｇ／ｍｌであった。
【００５４】
生物学的に活性なＴＧＦ−β１の検出
細胞培養物の上清及び血漿中の生物学的に活性なＴＧＦ−β１を、１５．６−１０００ｐｇ／ｍｌの感度を持つ商業的に入手可能なＥmaxＥＬＩＳＡ装置（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ，ＵＫ）を使用して検出した。
【００５５】
統計分析
サイトカイン産生の差を、スチューデントｔ−検定及びマン−ホイットニーＵ−検定を使用して比較し、そしてｐ値が０．０５より小さい場合、有意であると考えた。
【００５６】
結果
図１を参照されたい。
実験方法
抑制されたＮＯＥによるプロトン脱結合13Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、１２５．７２８ＭＨｚで操作されるＪｏｅｌの５００ＭＨｚ分光器の５ｍｍの広帯域プローブで２１℃で収集した。Ｗａｌｚ脱結合が、選択された脱結合モードであり、そして１４．８９秒の取得時にのみゲート処理した。緩和遅延は３０秒に設定し、そしてパルス角度は９０°であった。使用したスペクトルウィンドーは、１７０ｐｐｍのオフセットで、約３５ｐｐｍ（１７３．５から１７２．６ｐｐｍ）であった。スペクトルは、内部的に７７．０ｐｐｍのＣＤＣｌ3に参照された。典型的には、十分なシグナル対ノイズに対して収集されたスキャンの概略の数は、試料の濃度及び純度にもよるが、３００ないし１２００スキャンの範囲であった。実験のための全取得時間は、２−８時間、例えば１２７２スキャン；６５，５３６のデータ点であった。可能な場合、取得時間を減少するために、２０重量／容量％までの濃縮された溶液が使用された。引用された化学シフトは、溶液の濃度によって変化する。
【００５７】
本発明において使用するための化合物の合成
実施例１．
１ａ）  ２−オクタ−６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ−トリエン酸１，３−Ｏ−ベンジリデングリコールの調製
（Ｒ4がＨであり、そしてＲ5がベンジルである本発明において使用するための中間体及び既知の化合物）
塩化オキサリル（ｏｘａｌｏｙｌ）（７．８ｍｌ、１１．３ｇ、０．０８９ｍｏｌ、０．９５当量）を、γ−リノレン酸（ＧＬＡ９５、１６．７ｇ、０．０６０ｍｏｌ、０．６４当量−Ｓｃｏｔｉａ）のジクロロメタン（１００ｍｌ）中のＮ2下の撹拌された溶液に２−３分かけて加えた。混合物を一晩室温で撹拌し、そして次いで真空中で濃縮して、黄褐色の油状物を得た。この粗製塩化γ−リノレノイルを、１，３−Ｏ−ベンジリデングリセロール（１３．０ｇ、０．０９４ｍｏｌ、１当量）、乾燥ピリジン（３０ｍｌ、２９．３ｇ、０．３７ｍｏｌ、４当量）及びジクロロメタン（ＤＣＭ、１２０ｍｌ）の５℃の撹拌された溶液に約１０分かけて加え、そして次いで混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、そして次いで濾液をＤＣＭで洗浄した。次いで混合した濾液及び洗液を水（２×２０ｍｌ）で洗浄し、そしてＤＣＭ抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、そして真空中で濃縮して、粗製生成物を黄褐色の油状物（ＨＰＬＣによる純度＞９０％）を得た。この油状物をシリカゲル（３００ｇ）のカラムクロマトグラフィーによって精製した。ＤＣＭによる溶出により、生成物を、黄色の油状物（１９．２ｇ（７３％）、ＨＰＬＣによる純度９６．３％）を得た。
【００５８】
実施例２
２−ＧＬＡグリセロールホルマール（別名：５−γ−リノレノイルオキシ）−１，３−ジオキサン及び５−（１，３−ジオキサニル）メチル−γ−リノレナート）
この例示の目的のために、このエステルの合成を、商業的に入手可能なグリセロールホルマール混合物のアシル化によって、塩化γ−リノレノイルを使用して行った。この方法によって、二つの生成物の混合物が形成され、そしてこれらは、カラムクロマトグラフィーによって分離可能である。所望しない副産物を最初にカラムから溶出して除去し；更なる溶出により、所望するアセタール−エステルを得る。これは、室温で黄色の油状物であり、そしてＧＬＡと同様な安定特性を有しているように見受けられ、室温の空気中で短時間（数日）安定であるが、しかし長期には窒素下の冷所で最良に保存される。
【００５９】
実験
塩化オキサリル（２．６ｍｌ、３．７８ｇ、３０ｍｍｏｌ、１．５当量）を、γ−リノレン酸（ＧＬＡ、５．５６ｇ、２０ｍｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（ＤＣＭ、４０ｍｌ）中の溶液に加えた。得られた溶液をＮ2下の室温で一晩撹拌し、そして次いで真空中で濃縮した。残留した油状の塩化γ−リノレノイルを、グリセロールホルマール（２．５０ｇ、２４ｍｍｏｌ、１．２当量）の、ピリジン（１０ｍｌ、９．７８ｇ、０．１２ｍｏｌ、６当量）を含有するＤＣＭ（４０ｍｌ）中の５℃の撹拌された溶液に１０分かけて滴下により加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、沈澱したピリジン塩酸塩を濾過して除去し、そして濾液を水（２×）で洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥した後、溶媒を真空中で除去して、明るい黄褐色の油状物（６．５ｇ）を得た。この物質をシリカ（６０ｇ）のクロマトグラフィーにかけた。ヘキサン−エーテル（９４：６）による溶出により、二つの成分（ＴＣＬ、ＨＰＬＣ）からなる５．２ｇの油状物を得た。これらを、第２のシリカカラム（６０ｇ）で分離した。ヘキサン−エーテル（９８：２次いで９５：５）による溶出により、４−（γ−リノレノイルオキシメチル）−１，３−ジオキソランを、黄色い油状物（１．２ｇ、ＨＰＬＣにより９８％）を得た。
【００６０】
【化４】
2008531675.tif 000006
【００６１】
更なる溶出により、５−（γ−リノレノイルオキシ）−１．３−ジオキサンを、黄色の油状物（１．６ｇ、ＨＰＬＣにより９７．８％））として得た。
【００６２】
【化５】
2008531675.tif 000007
【００６３】
両方の化合物を含有するいくつかの画分がクロマトグラフィー中に得られ、そしてこれらは、必要な場合再循環して、更なる物質を得ることができる。
この合成のための反応スキームは、以下の図面中に示されている。
【００６４】
実施例３
合成ＣＧＣで構築された脂質からのモノグリセリド富化組成物の製造。本発明の化合物の代謝産物のためのモデル化合物。
【００６５】
１．  ＣＧＣ（グリセロール１，３−ジデカノアート−２−γ−リノレノアート）からの２−ＧＬＡ  ＭＧ（γ−リノレン酸モノグリセリド）
Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａからのリパーゼアクリル樹脂（Ｓｉｇｍａ，Ｎｏｖｏｚｙｍｅ、０．１ｇ）を、ＣＧＣ（０．２５ｇ）のエタノール（０．７５ｍｌ）中の溶液に加えた。混合物を３５−４０℃で撹拌し、そしてＨＰＬＣによりモニターした。３時間後、樹脂を濾過によって除去し、そしてエタノールで洗浄した。濾液及び洗液を真空中で濃縮した。残留した油状物のＨＰＬＣによる分析は、二つの主要な生成物の形成を示した。これらを、シリカ−ホウ酸のクロマトグラフィーによって分離した。ジクロロメタン（ＤＣＭ）による溶出により、油状物（画分Ａ、１６０ｍｇ）を得た。ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（９：１）による更なる溶出により油状物（画分Ｂ、８０ｍｇ）を得た。標準物質によるＨＰＬＣの比較は、Ｂが要求される物質、即ち２−ＧＬＡ  ＭＧであることを示した（８％の転位された１−異性体も更に存在）。画分Ａの主要（＞９０％）成分は、ドデカン酸エチルであることが見出された（ＨＰＬＣ比較及びＮＭＲによる）。少量の成分は、γ−リノレン酸エチルであることが見出された（ＨＰＬＣ比較及びＮＭＲによる）。これらのエステルは、この反応条件下で、対応する酸（Ｃ及びＧＬＡ）及びエタノールから形成されることが予想される。
【００６６】
生物学的研究
実施例４
Ｓｎ−２モノグリセリドの可溶化を、エチルアルコール又はＤＭＳＯを使用して、ヒト末梢血球（ＰＢＭＣ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏの作業のために行った。酸性のｐＨにおいて沈澱する傾向は、いくつかの動物の胃管栄養法後の固体物質の逆流の原因であることができ、腸溶的に被覆された製剤が好ましいものであることを示唆する。ＳＪＬマウスに実施例１のｓｎ−２ＧＬＡを３種類の投与量（５０、１２５及び２５０μｌ）で、７日間胃管栄養法によって給餌した。より高い投与量を受けたマウスは、逆流の傾向があった。７日後、動物を殺し、そして脳、肝臓及び脾臓を取出し−肝臓及び脳を−７０℃に冷凍し、そして単核細胞を、篩い分け及びＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ）による密度勾配遠心によって脾臓から単離し、そして３７℃で５％ＣＯ２中で、５ｍｌの培養試験管中で１×１０6細胞／ｍｌの細胞密度で、５％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）中のＲＰＭＩ  １６４０中で培養した。細胞を１μｇ／ｍｌ又は２５μｇ／ｍｌのコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ  Ａ）を伴い及び伴わず、概略２０時間培養し、そして上清を除去し、そして必要となるまで−７０℃で保存した。マウスのＴＧＦ−β１を、上清中で商業的に入手可能なＥＬＩＳＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して測定した。
表１
実施例３のｓｎ−２−γ−リノレノイル−グリセロールモノグリセリドの給餌に反応した脾臓ＰＢＭＣからの、刺激された（Ｃｏｎ  Ａ）及び刺激されないＴＧＦ−β１産生ｐｇ／ｍｌ
【００６７】
【表１】
2008531675.tif 000008
【００６８】
これは、実施例２の式のγ−リノレノイル化合物の代謝産物が、サイトカインＴＧＦ−β１を、試行のルリジサ油と同様な様式における産生において活性であることを示す。これは、これに関して調節されたことを先に示した全てのサイトカインの調節と一致する。
【００６９】
実施例５
モノグリセリドホルマール（実施例２の化合物）のｉｎ  ｖｉｖｏの活性。
Ｃ５７／ＢＬマウスに、２ＧＬＡ  ＭＧホルマールを、５０及び１５０ｕｌの２種類の投与量で８日間経口的に投与した。化合物は、投与に先立って４℃で保存され、しかし使用前に２５℃に温められる８本の別個の試験管で供給された。８日後、動物を殺し、そして脳、肝臓及び脾臓を取出した。肝臓及び脳を−７０℃に冷凍し、そして単核細胞を、篩い分け及びＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ）による密度勾配遠心によって脾臓から単離し、そして３７℃で５％ＣＯ2中で、５ｍｌの培養試験管中で２×１０6細胞／ｍｌの細胞密度で、５％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）中のＲＰＭＩ  １６４０中で培養した。細胞を１μｇ／ｍｌ又は２５μｇ／ｍｌのコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ  Ａ）を伴い及び伴わず、概略２０時間培養し、そして上清を除去し、そして必要となるまで−７０℃で保存した。マウスのＴＧＦ−β１を、上清中で商業的に入手可能なＥＬＩＳＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して測定した。
【００７０】
結果
コンカナバリンＡは、この研究においてＴＧＦ−β１産生を有意に刺激しなかった。従ってデータを、統計分析のために組合わせた（ｎ＝９／グループ）。データは、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｉｎｓｔａｔを使用して分析した。
表２
脾臓の単核細胞ＴＧＦβ産生（ｐｇ／ｍｌ）
【００７１】
【表２】
2008531675.tif 000009
【００７２】
［データは、独立ｔ−検定を使用して分析した；データは、平均±ＳＥＭである］
【００７３】
【表３Ａ】
2008531675.tif 000010
【００７４】
【表３Ｂ】
2008531675.tif 000011
【００７５】
【表３Ｃ】
2008531675.tif 000012
【００７６】
【表３Ｄ】
2008531675.tif 000013
【００７７】
【表３Ｅ】
2008531675.tif 000014
【００７８】
【表３Ｆ】
2008531675.tif 000015
【００７９】
【表３Ｇ】
2008531675.tif 000016
【００８０】
【表３Ｈ】
2008531675.tif 000017
【００８１】
【表３Ｉ】
2008531675.tif 000018
【００８２】
【表３Ｊ】
2008531675.tif 000019
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】図１は、プラセボ及び高ｓｎ−２γ−リノレン酸、ＷＯ２００４／１００９４３の試行油で治療されたヒトのＭＳの患者における、１８ヶ月目の、自然の末梢血単核球サイトカインの産生を示す。それぞれの事例の左手のカラムはプラセボであり：右は治療後である。
【図２】図２は、ｘ軸の治療月による柱状図として示した、プラセボ及び低投与量（５ｇ／日）の高ｓｎ−２ＧＬＡルリジサ油の効果を、高投与量（１５ｇ／日）と比較してヒトＳＭ患者のＥＤＳＳ採点で示す。
【図３】図３は、プラセボ、低投与量及び高投与量のｓｎ−２ＧＬＡのルリジサ油の、ヒトＭＳ患者の平均再発率（％）に対する効果を、ｘ軸の月による柱状図として示す。
【図４】図４は、２−ＧＬＡグリセロールホルマール（別名：５−γ−リノレノイルオキシ）−１，３−ジオキサン及び５−（１，３−ジオキサニル）メチル−γ−リノレナート）の合成を示す。
【図１】
2008531675.tif 000023
【図２】
2008531675.tif 000024
【図３】
2008531675.tif 000025
【図４】
2008531675.tif 000026
【国際調査報告】
2008531675.tif 000027
2008531675.tif 000028
2008531675.tif 000029
2008531675.tif 000030