(57)【要約】  本発明は、不水溶性または疎水性の有効主成分を含むリポソーム製剤の製造プロセスを提供する。本発明方法の１態様では、少なくとも１種の有効主成分および脂質画分が、有機溶媒中に溶解される。次いで、この溶液は、有機溶媒を除去するために、不活性包装されたまたはされない容器中で減圧（真空）に供され、結果、有効主成分および脂質画分を含むパフケーキが形成される。次いで、このパフケーキは、バルクリポソーム製剤を形成するのに適した制御された条件下で、水溶液と混合される。有効主成分は脂質二重層中に収められているため、水溶液の除去は任意である。【選択図】図１
2008518925.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソーム製剤の製造方法であって、前記方法は：
a.有機溶媒に脂質画分および少なくとも１種の有効主成分を溶解すること；
b.有機溶媒を除去して、パフケーキを形成すること；及び
c.前記パフケーキと水溶液とを接触させて、バルクリポソーム製剤を形成すること
を含む。
【請求項２】
脂質画分が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、ステロール、ステロール誘導体、トコフェロール、トコフェロール誘導体、PEG-コレステロール、脂肪酸、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、カルジオリピン、カチオン性カルジオリピンおよびそれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１種の親油性薬剤を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
脂質画分が、DOPC、コレステロール、テトラミリストイルカルジオリピンおよびトコフェリル酸スクシネートからなる、請求項１記載の方法。
【請求項４】
有機溶媒がエタノールである、請求項１から３のいずれか記載の方法。
【請求項５】
有効主成分が、抗悪性腫瘍薬および抗真菌薬からなる群より選択される、請求項１から４のいずれか記載の方法。
【請求項６】
有効主成分が不水溶性である、請求項５記載の方法。
【請求項７】
有効主成分が疎水性である、請求項５記載の方法。
【請求項８】
抗悪性腫瘍薬が、タキサン、ミトキサントロン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、タモキシエン、トレミフェン、シスプラチン、エピルビシン、塩酸ゲムシタビン、ゲムシタビン複合物、生物活性脂質およびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項５記載の方法。
【請求項９】
タキサンがパクリタキセルである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
有効主成分が、脂質画分の添加前に有機溶媒に溶解される、請求項１から９のいずれか記載の方法。
【請求項１１】
有機溶媒の除去が、有機溶媒を蒸発させるに充分な制御された温度下での減圧を含む、請求項１から１０のいずれか記載の方法。
【請求項１２】
有機溶媒の除去が不活性な支持された構造体上である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
水溶液が、少なくとも１種の保護糖を含む、請求項１から１２のいずれか記載の方法。
【請求項１４】
保護糖が、トレハロース、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、デキストラン、マンニトール、ソルビトールおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
水溶液が、少なくとも１種の張性調整剤を含む、請求項１から１４のいずれか記載の方法。
【請求項１６】
水溶液が、少なくとも１種の有効主成分を含む、請求項１から１５のいずれか記載の方法。
【請求項１７】
有効主成分が、抗悪性腫瘍薬および抗真菌薬からなる群より選択される、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
接触が、前記パフケーキと前記水溶液とを混合することを含む、請求項１から１７記載の方法。
【請求項１９】
サイズ縮小されたリポソーム製剤を得るために、バルクリポソーム製剤をサイズ縮小することをさらに含む、請求項１から１８のいずれか記載の方法。
【請求項２０】
サイズ縮小が、ポリカーボネートフィルターを通してバルクリポソーム製剤を押し出すことによって成される、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
ポリカーボネートフィルターが、約０．２μmと０．１μmとの間である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
サイズ縮小が、約８００psiまでの圧力で、バルクリポソーム製剤を押し出すことによって成される、請求項１９から２１のいずれか記載の方法。
【請求項２３】
リポソーム製剤の濾過滅菌をさらに含む、請求項１から２２のいずれか記載の方法。
【請求項２４】
リポソーム製剤の凍結乾燥をさらに含む、請求項１から２３のいずれか記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本特許出願は、２００４年１０月２９日に出願された、米国仮特許出願番号６０／６２３,４５１（その開示は本明細書に組み込まれるものとする）の利益を主張する。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は、不水溶性の有効主成分を有するリポソーム製剤の商業的量を製造する方法に関する。より詳しくは、本方法は：(1)１種以上の膜形成脂質を、少なくとも１種の有効主成分と共に、有機溶媒に溶解すること、(2) 有機溶媒を蒸発させて、該脂質を沈着させること、および(3)該脂質沈着物と水性溶媒とを接触させることを含む。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
エタノール希釈、薄膜水和および逆相蒸発は、リポソーム製剤を製造するために広く用いられている従来方法の一部を代表している。これらの方法は、小規模基盤においては有効であるが、高い取り込み効率でリポソーム製剤の商業的量を製造する能力を欠いている。例えば、フラスコ表面積の限界を考えれば、薄膜水和は、５０リットルを超えるバッチのリポソームパクリタキセルを製造する能力を欠いている。
【０００４】
これらの限界を解決しようとして、米国特許番号５，７０２，７２２は、リポソーム水溶性薬剤の商業製造のためのプロセスを提案している。大規模製造は上手くいったが、米国特許番号５，７０２，７２２は、不水溶性または疎水性の薬剤のためのそのような商業的プロセスについては述べていない。このように、不水溶性または疎水性の主成分を有するリポソーム製剤の商業的量を製造でき、かつ高い取り込み効率を示すことができる方法に対するニーズが存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、不水溶性または疎水性の有効主成分を含むリポソーム製剤の製造プロセスを提供する。本発明方法の１態様によれば、少なくとも１種の有効主成分および脂質画分が、有機溶媒中に溶解される。この溶液は次いで、有機溶媒を除去するために、不活性包装されたまたはされない容器中で減圧（真空）に供され、結果、有効主成分および脂質画分を含むパフケーキ（puffy cake）が形成される。このパフケーキは次いで、バルクリポソーム製剤を形成するのに適した制御された条件下で、水溶液と混合される。有効主成分は脂質二重層中に収められているため、水溶液の除去は任意である。バルクリポソーム製剤はさらに、サイズ分画もしくはサイズ縮小、膜ろ過による滅菌、凍結乾燥または他の処理によって加工されうる。サイズ縮小は、よりよい体内動態を促進し、０．２２ミクロンのフィルターを通したろ過滅菌も可能にする。加えて、最終製品の凍結乾燥は、リポソーム製剤の保存寿命を延ばす。
【０００６】
本発明方法のこれらの、及び他の利点、並びに更なる本発明の特徴は、本明細書に記載の発明の説明から明白となろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、約８０％から約１００％の取り込み効率で、１種以上の取り込まれた不水溶性の有効主成分を有するリポソーム製剤の製造方法を提供する。
【０００８】
本発明方法に従い、有機溶媒が、脂質画分および１種以上の有効主成分を溶解するために用いられる。好ましくは、有機溶媒としてエタノールが用いられる。脂質画分は、リポソームを形成し得る任意の適当な脂質を含みうる。適当な脂質には、親水性領域および疎水性領域を有する、医薬的に許容される合成、半合成（改質天然）または天然の化合物が含まれる。そのような化合物は、正味の正、負もしくは中性の電荷を持つ両親媒性分子を含むか、またはいかなる電荷も持たない。適当な脂質には、脂肪酸およびリン脂質のような化合物が含まれ、合成性または卵もしくは大豆のような天然源由来でありうる。適当なリン脂質には、ホスファチジルコリン(PC)、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、ホスファチジルセリン(PS)、ホスファチジルグリセロール(PG)、ホスファチジン酸(PA)、ホスファチジルイノシトール(PI)、スフィンゴミエリン(SPM)などの化合物の、単独または組み合わせが含まれる。他の適当なリン脂質には、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、ジミリストイルホスファチジルグリセロール(DMPG)、ジオレオイルホスファチジルグリセロール(DOPG)、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)、ジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジアラキドノイルホスファチジルコリン(DAPC)、または水素添加大豆ホスファチジルコリン(HSPC)が含まれる。
【０００９】
脂質画分はまた、ステロールおよびコレステロールヘミスクシネート(CHS)、コレステロールサルフェイトなどのようなステロール誘導体を含みうる。さらに、トコフェロールおよびα-トコフェロールヘミスクシネートのようなトコフェロールの有機酸誘導体もまた用いられうる。さらに、脂質画分はまた、コレステロールのポリエチレングリコール誘導体（PEG-コレステロール）、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタンまたはα-トコフェロールを含みうる。脂質画分中の好ましい脂質には、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)、テトラミリストイルカルジオリピン、およびトコフェリル酸スクシネートのうちの１種以上が含まれる。ある実施形態では、テトラミリストイルカルジオリピンは、１，３-ビス-（１，２，- ビステトラデシルオキシ−プロピル-３-ジメチルエトキシアンモニウムブロミド）−プロパン-２-オール ［（R) - PCL-２］などのような、正電荷を持つカチオン性カルジオリピンで置換されうる。好ましくは、脂質画分は、これらの化合物のうち少なくとも２種を含み、より好ましくは、脂質画分は、これらの化合物の全てを含む。
【００１０】
ある実施形態では、有効な製剤は、有機溶媒中に脂質画分を形成する脂質を逐次添加することによって製造されうる。より好ましくは、該方法は、有機溶媒中にそれぞれを溶解するための、DOPC、コレステロール、テトラミリストイルカルジオリピンおよびトコフェリル酸スクシネートの逐次添加を伴う。
【００１１】
有効主成分には、１種以上の疎水性または不水溶性の薬剤が含まれる。不水溶性または疎水性の薬剤には、少なくとも１種の抗悪性腫瘍薬または抗真菌薬が含まれる。好ましい有効主成分は、パクリタキセル、ドセタキセルおよび関連化合物（例えば、エポシロンＡおよびＢ、エポシロン誘導体など）のようなタキサンまたはその誘導体、ならびにミトキサントロン、カンプトテシンおよび関連分子（例えば、７-エチル-１０-ヒドロキシカンプトテシン（すなわち、SN-38）、イリノテカンなど）ならびにそれらの誘導体、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、タモキシエン(tamoxien)、トレミフェン、シスプラチン、エピルビシン、塩酸ゲムシタビン、ゲムシタビン複合物、生物活性脂質、並びに癌治療に有用な他の疎水性若しくは不水溶性の化学療法薬のような抗癌剤である。好ましくは、有効主成分は、タキサン又は誘導体からなる群より選択される、少なくとも１種の有効主成分を含む。最も好ましい有効主成分は、パクリタキセルである。
【００１２】
任意量の有効主成分が使用され得る。例えば、パクリタキセルが約２mg/ml使用される場合、パクリタキセルは、バッチサイズ（全リポソーム製剤容量）に対して少なくとも約１．５から約２０％の有機溶媒に溶解される。好適な実施形態では、パクリタキセルは、バッチサイズに対して約５％の有機溶媒に溶解される。ある実施形態では、パクリタキセルの量は、バッチサイズに対して、容量で約２容量％を超えうる。
【００１３】
少なくとも１種以上の不水溶性または疎水性の有効主成分が、有機溶媒に溶解される。該有効主成分は、好ましくは、約４０℃より高い温度又は約４０℃と約６５℃との間の温度で有機溶媒に溶解される。更に、好適な方法では、有効主成分は、脂質の添加前に有機溶媒に加えられる。他の有効主成分が有機溶媒に溶解されうる温度は、個々の有効主成分の特性に依存して変わってもよい。溶解のための適切な温度を選択することは、当業者の範囲内である。
【００１４】
有機溶媒中に溶解された有効主成分及び脂質画分を含む溶液は、該溶媒を蒸発させるために、制御された温度の下、減圧に供される。これは、支持された構造体または支持されていない構造体上で行いうる。支持された構造体は、反応容器中の不活性多孔質材料を含む。この不活性材料には、体積に対して大きな表面積率を持つ任意の材料が含まれる。温度及び圧力条件は、有機溶媒の特性に依存して変化してもよい。溶媒蒸発のための適切な温度及び圧力を選択することは、当業者の範囲内である。溶媒蒸発後に得られる構造は、三次元「パフケーキ」である。
【００１５】
バルクリポソーム製剤を作るために、約１００rpmから約３５０rpmの間で（例えば、Labmaster製ミキサーのような、従来のミキサーを用いて）混合しながら水溶液を「パフケーキ」に加え、その間、約３５℃と約４５℃との間のように、約３５℃より高い温度を維持する。水溶液の量は変化しうるが、通常、バッチサイズに対する容量の最大の割合を占める。好ましくは、水溶液の量は、バッチサイズの少なくとも９０％であり、より好ましくは、水溶液の量は、バッチサイズの少なくとも約９３％から約９４％である。
【００１６】
水溶液はまた、糖、張性調整剤などのような１種以上のさらなる成分を含みうる。適切な張性調整剤には、塩、好ましくは塩化ナトリウム、及び当業者に公知である他の薬剤が含まれる。張性調整剤は、任意の適切な量で存在しうる。しかし、存在する場合は、張性調整剤は、典型的には、水溶液の約２％未満であり、より典型的には、水溶液の約１％未満である。好ましくは、水溶液は、保護糖（例えば、トレハロース、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、デキストラン、マンニトールおよびソルビトール、ならびにそれらの組み合わせ）を含む。１種以上の保護糖は、任意の適切な量で存在し得る。しかし、存在する場合は、保護糖調整剤は、典型的には、溶液の少なくとも約５％であり、通常は、水溶液の約２０％未満（より典型的には、水溶液の約１５％未満）である。最も好ましい水溶液は、２０％スクロース溶液である。
【００１７】
水溶液はまた、１種以上の有効主成分を含みうる。そのような有効主成分は、水溶性であり、抗悪性腫瘍薬または抗真菌薬を含む。バルクリポソーム製剤は、リポソームをより均一性にするために、サイズ縮小されたりまたは押し出されたりされるのが好ましい。押し出しサイクルは、適切なサイズの押し出し機を用いて、適切なサイズのポリカーボネート膜フィルターを通すことによる。好ましくは、リポソームは、典型的には、約８００psiまでの圧力で、０．２μm及び０．１μmのポリカーボネートフィルターを通して押し出すことによりサイズ縮小される。リポソーム製剤の平均サイズは、動的光散乱技術による計測で、例えば、約１２０nmから約１８０nmであり、好ましくは、約１２０nmから約１５０nmであり、より好ましくは、約１２０nmから約１３０nmでありうる。
【００１８】
押し出されたリポソームは、濾過滅菌されることが好ましい。好ましくは、リポソームは、リポソーム製品から全ての生存微生物を除去するために無菌の０．２２μmフィルターを通される。濾過滅菌は、無菌条件下で滅菌された容器中に製品を満たす前に、成される。
【００１９】
更に、好ましい方法に従って、押し出されたリポソームは、制御された条件下で、適切な凍結乾燥機を用いることにより、凍結乾燥される。好ましくは、凍結乾燥は、少なくとも２回の乾燥サイクルがある一連の熱処理を含む。より好ましくは、押し出されたリポソームは、周囲温度に置かれ、該温度は、押し出されたリポソームから非結合水を除くために充分な温度および時間にわたって維持される第一の熱処理および押し出されたリポソームから結合水を除くために充分な温度および時間にわたって維持される第二の熱処理の少なくとも二段階で傾斜をつけられる。該温度および段階持続時間を最適化することは、当業者の範囲内である。
【実施例】
【００２０】
本実施例は、本発明のリポソーム製剤のための製造プロセスを例示している。この実施例は当業者にとってさらなる手引として提供され、いかなる形においても本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００２１】
（脂質および薬剤のパフケーキの製造）
パクリタキセルおよびα-トコフェリル酸スクシネート(TAS)と共に１，２ジオレオイル-sn-グリセロ-３-ホスファチジルコリン(DOPC)、コレステロール、および１，１’，２，２’テトラミリストイルカルジオリピン(カルジオリピン)を、内容物を攪拌しながら４５℃で加熱することにより、エタノール中に溶解した。次いで、得られた、脂質と薬剤との無色で粘り気のあるシロップを凍結乾燥機または真空槽のいずれかに移した。溶媒を制御された温度および適切な圧力条件下で蒸発させた。最初に、内容物の緩やかな沸騰が観察された後、減圧するにつれて、内容物が発泡した。溶媒蒸発の最後で、脂質および薬剤の白色のパフケーキが形成された(LEP-ETU)。
【００２２】
（パフケーキの水和およびバルクリポソームの押し出し）
脂質および薬剤のパフケーキを、一定の攪拌下、等張性のための塩化ナトリウムを含む適切な糖溶液で、室温で、水和させた。次いで、所要圧力下で、得られたリポソーム製剤を、所望のポアサイズのポリカーボネート膜フィルター(Whatman, Clifton, NJ)及び適切なサイズの押し出し機(Lipex Biomembranes, Canada)を用いて、様々なサイクルの押し出しに供した。押し出されたリポソーム製剤を濾過滅菌し、バイアルに注入した。
【００２３】
（ろ過処理されたリポソームの凍結乾燥）
押し出されたリポソーム製剤を、以下の制御された条件の下、適切な凍結乾燥機を用いて凍結乾燥した。
【００２４】
６時間の過程に亘って、熱処理を行った。最初に、押し出されたリポソーム製剤を含むバイアルを、周囲温度に置いた。次に、棚温度を６０分間かけて、−５℃まで傾斜させた。（０．５°/分、３０°/時間）。それから、棚温度を２４０分間かけて、−４５℃まで傾斜させた。（０．１７°/分、１０°/時間）。それから、棚温度を、６０分間、-４５℃に維持した。
【００２５】
次いで、リポソーム製剤を、１１２時間（６７２０分）の過程に亘って、１回の乾燥に供した。最初に、棚温度を、１００ミクロンで減圧しながら、６０分間かけて、−４５から−２５℃まで傾斜させた（０．３３℃/分、２０°/時間）。それから棚温度を、１００ミクロンで減圧しながら、２８８０分間、−２５℃に維持した。次に、棚温度を、１００ミクロンで減圧しながら、６０分間かけて−２２℃まで傾斜させた（０．１℃/分、６°/時間）。それから棚温度を、１００ミクロンで減圧しながら、３７２０分間、−２２℃に維持した。
【００２６】
初回の乾燥後、リポソーム製剤を１８時間（１０８０分）の過程に亘って、二回目の乾燥に供した。最初に、棚温度を、１００ミクロンで減圧しながら、３６０分間かけて、２５℃まで傾斜させた（０．１３℃/分、８°/時間）。それから棚温度を、１００ミクロンで減圧しながら、７２０分間、２５℃に維持した。次に、棚温度を、５００ミクロンで減圧しながら、４０分間かけて５℃まで傾斜させた（０．５℃/分、３０°/時間）。それから棚温度を、栓をするまで５００ミクロンで減圧しながら、５℃に維持した。総サイクル時間は１３５時間（５日間と１６時間）だった。
【００２７】
図２及び３は、凍結乾燥前および凍結乾燥後のリポソーム試料の粒子サイズを例示している。図２に示されるように、押し出し後の凍結乾燥前の懸濁液は、カイ二乗値が１．２６で、１２０nmのサイズ(D-99 219nm)を示した。図３に示されているように、必要量のMiIIiQ水で再構成した凍結乾燥後のケーキは、カイ二乗値が１．０７で、平均直径１１５nm(D-99 230nm)を示した。
【００２８】
（リポソームの特徴付け）
押し出された凍結乾燥後のリポソーム製剤を、他のパラメータの中から、ベシクルサイズ、含水率、脂質および薬剤含有率、取り込み効率、pHのようなパラメータについて特徴づけした。
【００２９】
平均ベシクル直径をNicompModel 380 Sub-micron Particle Sizer (Particle Sizing Systems, Santa Barbara, CA)を用いて、動的光散乱により計測した。標準サイズのポリスチレンビーズを機器キャリブレーションおよび実行のために用いた。データを測定し、ベシクルの体積加重分布で報告した。
【００３０】
LEP-ETUの凍結乾燥後ケーキの含水率をKarl Fischer滴定装置(MettlerToledo, Columbus, Ohio)を用いて測定した。
【００３１】
LEP-ETUのパクリタキセルおよび脂質含有率の分析のために、HPLC法を用いた。流速１ mL/分、予混されたアセトニトリルおよび水(55/45、v/v)の混合物の移動相、２５℃で、 Waters μBondapak C18、39 × 300 mm、10μm HPLCカラムを用いて薬剤含有率分析を行った。試料の注入容量は、２０μLであり、パクリタキセル検知を波長２３０nmで紫外線検出器を用いて行った。流速１ mL/分、クロロホルム：メタノール：酢酸アンモニウム緩衝液移動相、４０℃で、ASTEC DIOL HPLCカラム(Astec Inc., Whippany, NJ)およびELSD検出器(Polymer Laboratories, Amherst, MA)を用いて、DOPCおよびコレステロールを分析した。試料の注入容量は、５０μLであり、蒸発温度および噴霧温度はそれぞれ１１０℃および８０℃であった。流速１．５mL/分、カラム温度４０℃、アセトニトリル：イソプロパノール(75:25、v/v)の移動相で、Hypersil BDS C18 (250 mm × 4.6 mm, 5μm) HPLC カラムを用いて、コレステロールを分析した。紫外線検出器を用いて、２０５nmでコレステロール検知を行った。
【００３２】
市販のSephadex G-25カラム(Macrospin Column, Harvard Biosciences, Holliston, MA, USA)を用いて、ミニカラム遠心法により、リポソーム中のパクリタキセルの取り込み効率を測定した。簡潔に述べると、Sephadex G-25ゲルを１５分間、約５００μLのMiIIiQ水中で膨潤させた。該カラムを、卓上微量遠心機(Sorvall Biofuge fresco)を用いて、３５０ × gで、４分間遠心した。乾燥カラムにLEP-ETUのための偽薬リポソーム１００μLを流しこみ、該リポソームを排出するために１５２０ × gで、１５分間遠心した。次に、LEP-ETU試料を該カラムに導入し、１５２０ × gで、１５分間遠心した。取り込み効率を判定するため、カラムクロマトグラフィー前のLEP-ETU中のパクリタキセル濃度と比較して、溶出した試料を、取り込まれたパクリタキセル濃度について、HPLCを用いて、解析した。
【００３３】
次いで、これらの結果を、薄膜水和および別のパフケーキ法によって調製したLEP-ETUの結果と比較した。表１は、パフケーキ法を用いて調製したLEP-ETUの２つのバッチと共に、LEP-ETU（薄膜水和により調製）のcGMP試料の比較プロファイルを示す。パフケーキから製造した２つのバッチは、溶媒を蒸発させた方法が異なっている。バッチ# LEP-04-001では、溶媒を蒸発させるために凍結乾燥機を用い、一方、# LEP-04-004では、溶媒を除くために真空槽を用いた。
【００３４】
【表１】
2008518925.tif 000003
【００３５】
上記表１に図示されているように、本発明に従うパフケーキ法を用いて調製されたLEP-ETUの含水率、pH、取り込み効率、脂質および薬剤含有率のようなパラメータは、薄膜水和を用いて調製されたLEP-ETUのcGMP試料にひけをとらなかった。
【００３６】
個々の参考文献が参照することによって含まれると個別かつ具体的に示され、かつその全てが本明細書に示されている場合と同程度まで、出版物、特許出願、および特許を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は参照することによって本明細書に含まれる。
【００３７】
本発明を記載する文脈中において（特に添付の特許請求の範囲の文脈中において）用語「a」および 「an」および「the」および同様の指示対象の使用は、本明細書中にその他の意味であると示されているかまたは明らかに文脈によって矛盾するものでなければ、単数形および複数形の両方を含むと解釈されるべきである。本明細書中に値の範囲を列挙することは、本明細書中にそれ以外であると示されていなければ、その範囲内にある各個別の値にそれぞれ言及する速記法としての役目を果たす意図にすぎず、各個別の値はそれぞれが本明細書中に引用されたかのように本明細書中に含まれる。本明細書中に記載されている全ての方法は、本明細書中にその他であると示唆されているまたは明らかに文脈によって矛盾するのでなければ、任意の適切な順番で成されうる。本明細書中に提供されるいかなるおよび全ての例、または例となる言葉（例えば、「など」）の使用は、本発明をより明らかにする意図にすぎず、その他であると主張されているのでなければ、本発明の範囲の限定を提示するものではない。本明細書中の言葉は、特許請求されていない任意の要素が本発明の実施に必要不可欠であることを示すと解釈されるべきではない。
【００３８】
本発明の好適な実施形態は本明細書中に記載され、本発明を実施するために、本発明者らにとって既知の最良の形態を含む。もちろん、それら好適な実施形態のバリエーションは、上述の記載を読めば当業者にとって明らかとなろう。本発明者らは、当業者がそのようなバリエーションを必要に応じて用いることを予期しており、本発明者らは、本発明が本明細書中に具体的に記載されている以外の他の方法で実施されることを意図している。従って、本発明は、適用法によって認められるとおり、本明細書に添付される特許請求の範囲中に列挙されている対象の全ての改変物および均等物を含む。さらに、可能な全てのそのバリエーション中の上記対象要素のいかなる組み合わせも、本明細書中にそれ以外のものであるとして示され又は文脈によって明らかに矛盾するものでなければ、本発明によって包含される。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、本発明の製造プロセスを表した工程流れ図である。
【図２】図２は、本発明の、押出しによるサイズ縮小後であって、かつ凍結乾燥前のパクリタキセル含有リポソームのサイズ分布を表したヒストグラムである。
【図３】図３は、本発明の、サイズ縮小後であり、かつ凍結乾燥後のパクリタキセル含有リポソームのサイズ分布を表したヒストグラムであり、サイズ計測前に凍結乾燥ケーキを必要量のMiIIiQ水で再構成し、サイズを計測した。
【図１】
2008518925.tif 000004
【図２】
2008518925.tif 000005
【図３】
2008518925.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成18年6月27日(2006.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソーム製剤の製造方法であって、前記方法は：
a.有機溶媒に脂質画分および少なくとも１種の有効主成分を溶解すること；
b.有機溶媒を除去して、パフケーキを形成すること；及び
c.前記パフケーキと水溶液とを接触させて、バルクリポソーム製剤を形成すること
を含む。
【請求項２】
脂質画分が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、ステロール、ステロール誘導体、トコフェロール、トコフェロール誘導体、PEG-コレステロール、脂肪酸、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、水素添加大豆ホスファチジルコリン、カルジオリピン、カチオン性カルジオリピンおよびそれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１種の親油性薬剤を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
脂質画分が、DOPC、コレステロール、テトラミリストイルカルジオリピンおよびトコフェリル酸スクシネートからなる、請求項１記載の方法。
【請求項４】
有機溶媒がエタノールである、請求項１記載の方法。
【請求項５】
有効主成分が、抗悪性腫瘍薬および抗真菌薬からなる群より選択される、請求項１から４記載の方法。
【請求項６】
有効主成分が不水溶性である、請求項５記載の方法。
【請求項７】
有効主成分が疎水性である、請求項５記載の方法。
【請求項８】
抗悪性腫瘍薬が、タキサン、ミトキサントロン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、タモキシエン、トレミフェン、シスプラチン、エピルビシン、塩酸ゲムシタビン、ゲムシタビン複合物、生物活性脂質およびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項５記載の方法。
【請求項９】
タキサンがパクリタキセルである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
有効主成分が、脂質画分の添加前に有機溶媒に溶解される、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
有機溶媒の除去が、有機溶媒を蒸発させるに充分な制御された温度下での減圧を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
有機溶媒の除去が不活性な支持された構造体上である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
水溶液が、少なくとも１種の保護糖を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
保護糖が、トレハロース、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、デキストラン、マンニトール、ソルビトールおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
水溶液が、少なくとも１種の張性調整剤を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
水溶液が、少なくとも１種の有効主成分を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
有効主成分が、抗悪性腫瘍薬および抗真菌薬からなる群より選択される、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
接触が、前記パフケーキと前記水溶液とを混合することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
サイズ縮小されたリポソーム製剤を得るために、バルクリポソーム製剤をサイズ縮小することをさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
サイズ縮小が、ポリカーボネートフィルターを通してバルクリポソーム製剤を押し出すことによって成される、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
ポリカーボネートフィルターが、約０．２μmと０．１μmとの間である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
サイズ縮小が、約８００psiまでの圧力で、バルクリポソーム製剤を押し出すことによって成される、請求項１９記載の方法。
【請求項２３】
リポソーム製剤の濾過滅菌をさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
リポソーム製剤の凍結乾燥をさらに含む、請求項１記載の方法。
【国際調査報告】
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