(57)【要約】  本発明は、Cdk1を阻害し且つCdk2及びCdk4に対して選択的である、次式（Ｉ）2008534646.tif 000066の新規置換１，５−ナフチリジンアゾリノンを提供する。それらの化合物および医薬上許容されるその塩は抗増殖活性を有し、抗癌剤として有用である。【選択図】なし
2008534646.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式：
【化１】
2008534646.tif 000059
〔ここで、
Ｘは−Ｓ−又は−ＮＨ−であり；
Ｒ1は
a)水素、
b)下記基により置換されることがある低級アルキル、
(1)低級アルキル、ＯＨ、低級アルコキシ、ハロゲン又はペルフルオロ−低級アルキルにより置換されることがあるアリール、
(2)低級アルキル、＝Ｏ及び−ＮＨにより置換されることがある芳香族複素環、又は
(3)ヘテロシクロ−低級アルキル、
c)アリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキル、
d)低級アルコキシ−低級アルキル、
e)−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4、及び
f)−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ〔ＣＨ2ＣＨ2Ｏ〕p−Ｒ5
から成る群より選択され；
Ｒ2は
a)シアノ、
b)水素、
c)ＣＯＮＲ6Ｒ7、
d)ＣＯ2Ｒ8、及び
e)下記により置換されることがある低級アルキル
(1)ＯＲ9、
(2)シアノ、又は
(3)ＮＲ6Ｒ7
から成る群より選択され；
Ｒ3は下記
a)Ｏ−低級アルキル、
b)Ｓ−低級アルキル、
c)水素、
d)低級アルキル、
e)シクロ低級アルキル、
f)アルケン、
g)アルキレン、
h)ＮＲ6Ｒ7
i)ＣＯＯＲ8及び
j)ＣＯＮＲ6Ｒ7
から成る群より選択され、ここで各場合において、前記低級アルキル、シクロ低級アルキル、低級アルケン及び低級アルキレンは
(1)ＯＲ9、
(2)シアノ、及び
(3)ＮＲ6Ｒ7
により置換されることがあり；
Ｒ4は
a)水素、
b)低級アルキル、
c)Ｏ−低級アルキル、
d)３〜６個の炭素原子を含むシクロ低級アルキル、及び
e)
【化２】
2008534646.tif 000060
から成る群より選択され、ここで
【化３】
2008534646.tif 000061
は(1)アリール環、(2)ヘテロシクロ−低級アルキル環及び(3)芳香族複素環から成る群より選択され；
Ｒ5は水素及び低級アルキルから成る群より選択され；
Ｒ6とＲ7は各々独立に、
a)水素、
b)下記により置換されることがある低級アルキル
(1)ＯＲ9、
(2)ハロゲン、
(3)シアノ、又は
(4)ＮＲ12ＮＲ13、及び
c)シクロ低級アルキル
から成る群より選択され；
Ｒ8はＯＲ9、シアノ又はＮＲ6Ｒ7により置換されることがある低級アルキルであり；
Ｒ9は
a)水素、及び
b)下記により置換されることがある低級アルキル
(1)ＯＲ12、
(2)シアノ、又は
(3)ＮＲ6Ｒ7
から成る群より選択され；
Ｒ10とＲ11は各々独立に、
a)ヒドロキシ、
b)ヒドロキシ−低級アルキル、
c)水素、
d)低級アルキル、
e)ハロゲン、
f)ペルフルオロ低級アルキル、及び
g)低級アルコキシ
から成る群より選択され；
Ｒ12とＲ13は各々独立に
a)水素、
b)低級アルキル、及び
c)シクロ低級アルキル
から成る群より選択され；そして
ｐは０〜６の整数である〕
により示される化合物、又は医薬上許容されるその塩。
【請求項２】
ＸがＳである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1がＨである、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が下記の基：
(1)低級アルキルにより、ＯＨにより、低級アルコキシにより、ハロゲンにより又はペルフルオロ低級アルキルにより置換されることがあるアリール、
(2)低級アルキルにより、＝Ｏにより又は−ＮＨにより置換されることがある複素環式芳香族、又は
(3)ヘテロシクロ−低級アルキル
により置換されることがある低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1がアリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1が低級アルコキシ−低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ1が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4である、請求項２記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1が低級アルキルである、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ1が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ〔ＣＨ2ＣＨ2Ｏ〕p−Ｒ5である、請求項２記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ5が水素でありそしてｐが１〜２である、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ2がシアノである、請求項２記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ2が水素である、請求項２記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ2がＣＯＮＲ6Ｒ7である、請求項２記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ6とＲ7が各々独立にＨ、低級アルキル、又はＯＲ9により置換された低級アルキルである、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ9が水素である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ2がＣＯ2Ｒ8である、請求項２記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ8がＯＲ9により置換されることがある低級アルキルである、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ9が水素又は低級アルキルである、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ2がＯＲ9により、シアノによりもしくはＮＲ6Ｒ7により置換されることがある低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ6が水素又は低級アルキルであり、Ｒ7が水素又は低級アルキルであり、そしてＲ9が水素又は低級アルキルである、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ3がＯ−低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＯＲ9により置換されることがあり、Ｒ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ3がＳ−低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＯＲ9により置換されることがあり、Ｒ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ3が水素である、請求項２記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ3が低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＯＲ9により置換されることがあり、Ｒ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ3がシクロ低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＯＲ9により置換されることがある、請求項２記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ3が低級アルケンであり、ここで前記低級アルケンはＯＲ9により置換されることがあり、Ｒ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ3が低級アルキレンであり、ここで前記低級アルキレンはＯＲ9により置換されることがあり、Ｒ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ3がＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は各々独立に水素であるか、又はＯＲ9により、ハロゲンによりもしくはシアノにより置換されることがある低級アルキルであり、そしてＲ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ3がＣＯＯＲ8であり、ここでＲ8はＯＲ9により置換されている低級アルキルであり、そしてＲ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ3がＣＯＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は各々独立に水素であるか又はＯＲ9により、ハロゲンによりもしくはシアノにより置換されることがある低級アルキルであり、そしてＲ9はＨ又は低級アルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ1がハロゲンにより及び／又は低級アルキルにより置換されているアリールにより置換された低級アルキルである、請求項４記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ1がヘテロシクロ−低級アルキルにより置換された低級アルキルである、請求項４記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ1がアリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキルである、請求項４記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ3がＯ−イソプロピルである、請求項２１記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ1が水素；−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ（ＣＨ3）3；又はシクロプロピル及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、ここで前記シクロプロピル及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル基は各々独立に下記のものから選択された置換基により置換されており：
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
下記のものから各々独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル：
ハロゲン、
−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル；及び
トリフルオロメチル；
Ｒ2が水素又はシアノであり；
Ｒ3が水素又は−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；そして
Ｘが−Ｓ−又は−ＮＨ−である
請求項１記載の化合物；又は医薬上許容されるその塩。
【請求項３６】
Ｒ1がシクロプロピル又は（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであって、これら２つの基は
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
ハロゲン及び−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル
から独立に選択された置換基により置換されており；
Ｒ2がシアノであり；
Ｒ3が−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そして
Ｘが−Ｓ−である
請求項３５記載の化合物；又は医薬上許容されるその塩。
【請求項３７】
Ｒ1がシクロプロピル又は（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであって、これら２つの基は
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
ハロゲン及び−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル
から独立に選択された置換基により置換されており；
Ｒ2がシアノであり；
Ｒ3が水素であり；そして
Ｘが−Ｓ−である
請求項３５記載の化合物；又は医薬上許容されるその塩。
【請求項３８】
Ｒ1が−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ（ＣＨ3）3であるか；あるいは
シクロプロピル又は（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであって、これら２つの基は
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
ハロゲン及び−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル
から独立に選択された置換基により置換されており；
Ｒ2が水素であり；
Ｒ3が−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そして
Ｘが−Ｓ−である
請求項３５記載の化合物；又は医薬上許容されるその塩。
【請求項３９】
下記化合物：
６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
４−イソプロポキシ−６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
４−イソプロポキシ−６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
４−イソプロポキシ−６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；及び
６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
から成る群より選択される、請求項２記載の化合物。
【請求項４０】
下記化合物：
６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；
６−〔２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル；及び
５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）チアゾール−４−オン
から成る群より選択される、請求項２記載の化合物。
【請求項４１】
下記化合物：
２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン；
５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン；
２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン；
２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン；
２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン；
〔５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−４−オキソ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル〕カルバミン酸tert−ブチルエステル；及び
２−アミノ−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕−ナフチリジン−２−イルメチレン〕チアゾール−４−オン
から成る群より選択される、請求項２記載の化合物。
【請求項４２】
Ｘが−ＮＨ−である、請求項１記載の化合物。
【請求項４３】
６−〔２−（２，４−ビス−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル、及び
４−イソプロポキシ−６−〔５−オキソ−２−（２−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
から選択される、請求項４２記載の化合物。
【請求項４４】
請求項１記載の化合物又は医薬上許容されるその塩と、医薬上許容される担体又は賦形剤とを含んで成る医薬組成物。
【請求項４５】
癌を治療又は抑制する方法であって、請求項１記載の化合物の治療的有効量を患者に投与することを含んで成る方法。
【請求項４６】
前記癌が乳癌、肺癌、結腸癌又は前立腺癌から選択される、請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
薬剤として、特に抗癌剤として、更に特には乳癌、肺癌、結腸癌又は前立腺癌に対する薬剤として使用される、請求項１記載の化合物。
【請求項４８】
癌、特に乳癌、肺癌、結腸癌又は前立腺癌の治療薬の製造における、請求項１記載の化合物の使用。
【請求項４９】
Ｘが−Ｓ−である請求項１記載の化合物の製造方法であって、
a)下式の化合物：
【化４】
2008534646.tif 000062
（ここでＲ2及びＲ3は請求項１に与えられた意味を有する）を、下式の化合物：
【化５】
2008534646.tif 000063
（ここでＲ1は請求項１に与えられた意味を有する）と反応させて、請求項１記載の各化合物を提供し；そして
b)前記化合物を反応混合物から分離し、そして所望であれば医薬上許容される塩に変換する
ことを含んで成る方法。
【請求項５０】
Ｘが−ＮＨ−である請求項１記載の化合物の製造方法であって、
a)下式の化合物：
【化６】
2008534646.tif 000064
（ここでＲ2及びＲ3は請求項１に与えられた意味を有する）を、下式の化合物：
【化７】
2008534646.tif 000065
（ここでＲ1は請求項１に与えられた意味を有する）と反応させ、そして
b)前記化合物を反応混合物から分離し、そして所望であれば医薬上許容される塩に変換する
ことを含んで成る方法。
【請求項５１】
本明細書中に実質的に記載されている新規化合物、方法、手順、組成物及び使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野は、サイクリン依存性キナーゼ、最も特定的にはサイクリン依存性キナーゼ１（Cdk1）の活性を阻害することができる置換１，５−ナフチリジンアゾリノンに関する。最も好ましくは、本発明の化合物はCdk1を阻害し、そしてCdk2及びCdk4に対して選択的である。それらの化合物及び医薬上許容されるその塩は、抗増殖活性を有し、従って特に癌、特に固形腫瘍の治療又は抑制において有用である。本発明はまた、そのような化合物を含有する医薬組成物、及び癌腫、最も詳しくは乳癌、肺癌、結腸癌及び前立腺癌の治療又は抑制方法にも関する。
【０００２】
サイクリン依存性キナーゼ（Cdks）は、細胞周期の様々な時期の間の移行、例えばＧ1の静止期（有糸分裂と新たな細胞分裂周期のためのＤＮＡ複製開始との間の間隙期）からＳ期（活発なＤＮＡ合成の時期）への進行、又はＧ2期からＭ期（活発な有糸分裂と細胞分裂が起こる時期）への進行、を調節することに際して重要な役割を果たすセリン−スレオニンプロテインキナーゼである。〔例えば、Science, 274:1643-1677 (1996)；及びAnn. Rev. Cell Dev. Biol., 13:261-291 (1997)の中に編さんされた文献を参照のこと〕。ＣＤＫ複合体は調節サイクリンサブユニット（例えばサイクリンＡ，Ｂ１，Ｂ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３及びＥ）と触媒キナーゼサブユニット（例えばCDK1, CDK2, CDK4, CDK5及びCDK6）の会合を通して形成される。その名が示す通り、ＣＤＫは、それらの標的基質をリン酸化するためにサイクリンサブユニットに対して絶対依存性を示し、そして種々のキナーゼ／サイクリンペアが細胞周期の特定の時期からの進行を調節する機能を有する。
【０００３】
上述したように、それらのプロテインキナーゼは、多様な細胞機能を調節するタンパク質（酵素）の一群である。これは、基質タンパク質の構造（コンホメーション）変化を引き起こすタンパク質基質上の特定アミノ酸のリン酸化により達成される。この構造変化は、基質の活性を変調するか又は別の結合相手と相互作用する能力を調節する。プロテインキナーゼの酵素活性とは、該キナーゼが基質にリン酸基を付加する速度のことを言う。それは、例えば、時間の関数として生成物に変換される基質の量を求めることにより測定することができる。基質のリン酸化は、プロテインキナーゼの活性部位のところで起こる。
【０００４】
CDK、例えばCDK1は細胞分裂の一般的活性剤であるため、CDK1の阻害剤は抗増殖剤として利用することができる。それらの阻害剤は、無秩序な細胞周期進行を抑制することにおける治療的介入を開発するために用いることができる。
【０００５】
別のCdksに対して選択的であるCdk1の小分子阻害剤を提供することが望ましい。即ち、小分子はCdk2及び／又はCdk4活性よりもCdk1活性をより有意に多く阻害する。好ましくは、本発明の化合物は、Cdk2活性よりもCdk1活性を少なくとも２倍、最も好ましくは10倍多く阻害し、Cdk4活性よりもCdk1活性を少なくとも500倍、好ましくは1000倍多く阻害する。潜在的な付随毒性と、複数の標的を阻害することから付随し得る別の望ましくない複雑な問題のために、選択性は望ましいパラメーターであると思われる。かくして、本発明の目的上、Cdk1の阻害の選択性を決定するためにCdk2とCdk4の阻害がモニタリングされる。Cdk2とCdk4に対する選択性を示す化合物は、Cdk1、Cdk2及びCdk4間に選択的でない化合物よりも、より優れた安全性プロフィールを有すると期待される。
【０００６】
本発明の一観点は、下式：
【化１】
2008534646.tif 000003
【０００７】
〔ここで、
Ｘは−Ｓ−又は−ＮＨ−であり；
Ｒ1は
a)水素、
b)下記基により置換されることがある低級アルキル
(1)低級アルキル、ＯＨ、低級アルコキシ、ハロゲン又はペルフルオロ−低級アルキルにより置換されることがあるアリール、
(2)低級アルキル、＝Ｏ及び−ＮＨにより置換されることがある芳香族複素環、又は
(3)ヘテロシクロ−低級アルキル、
c)アリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキル、
d)低級アルコキシ−低級アルキル、
e)−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4、及び
f)−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ〔ＣＨ2ＣＨ2Ｏ〕p−Ｒ5
から成る群より選択され；
【０００８】
Ｒ2は
a)シアノ、
b)水素、
c)ＣＯＮＲ6Ｒ7、
d)ＣＯ2Ｒ8、及び
e)下記により置換されることがある低級アルキル
(1)ＯＲ9、
(2)シアノ、又は
(3)ＮＲ6Ｒ7
から成る群より選択され；
【０００９】
Ｒ3は下記
a)Ｏ−低級アルキル、
b)Ｓ−低級アルキル、
c)水素、
d)低級アルキル、
e)シクロ低級アルキル、
f)低級アルケン、
g)低級アルキレン、
h)ＮＲ6Ｒ7
i)ＣＯＯＲ8及び
j)ＣＯＮＲ6Ｒ7
から成る群より選択され、ここで各場合において、前記低級アルキル、シクロ低級アルキル、低級アルケン及び低級アルキレンは
(1)ＯＲ9、
(2)シアノ、及び
(3)ＮＲ6Ｒ7
により置換されることがあり；
【００１０】
Ｒ4は
a)水素、
b)低級アルキル、
c)Ｏ−低級アルキル、
d)３〜６個の炭素原子を含むシクロ低級アルキル、及び
e)
【化２】
2008534646.tif 000004
から成る群より選択され、ここで
【００１１】
【化３】
2008534646.tif 000005
は(1)アリール環、(2)ヘテロシクロ−低級アルキル環及び(3)芳香族複素環から成る群より選択され；
【００１２】
Ｒ5は水素及び低級アルキルから成る群より選択され；
Ｒ6とＲ7は各々独立に、
a)水素、
b)下記により置換されることがある低級アルキル
(1)ＯＲ9、
(2)ハロゲン、
(3)シアノ、又は
(4)ＮＲ12ＮＲ13、及び
c)シクロ低級アルキル
から成る群より選択され；
【００１３】
Ｒ8はＯＲ9、シアノ又はＮＲ6Ｒ7により置換されることがある低級アルキルであり；
Ｒ9は
a)水素、及び
b)下記により置換されることがある低級アルキル
(1)ＯＲ12、
(2)シアノ、又は
(3)ＮＲ6Ｒ7
から成る群より選択され；
【００１４】
Ｒ10とＲ11は各々独立に
a)ヒドロキシ、
b)ヒドロキシ−低級アルキル、
c)水素、
d)低級アルキル、
e)ハロゲン、
f)ペルフルオロ低級アルキル、及び
g)低級アルコキシ
から成る群より選択され；
【００１５】
Ｒ12とＲ13は各々独立に
a)水素、
b)低級アルキル、及び
c)シクロ低級アルキル
から成る群より選択され；そして
ｐは０〜６の整数である〕
により示される化合物、又は医薬上許容されるその塩である。
【００１６】
本発明の化合物は、Cdk、特にCdk1の活性を阻害する。最も好ましくは、本発明の化合物はCdk1を阻害し、且つCdk2及びCdk4に対して選択的である。
【００１７】
本発明はまた、式Ｉの化合物又は医薬上許容されるその塩を含有する医薬組成物、無秩序のもしくは望ましくない細胞増殖に関連する様々な疾病及び／又は障害、例えば癌、自己免疫疾患、ウイルス性疾患、真菌病、神経変性病及び心臓血管疾患の処置における本発明の化合物又は本発明の医薬組成物の使用にも向けられる。特に、本発明の化合物及びそのような化合物を含有する医薬組成物は、固形腫瘍、最も特定的には乳癌、結腸癌、肺癌及び前立腺癌の治療において有用である。
【００１８】
本明細書中で用いる時、次の用語は下記の定義を有する：
“アリール”とは、単環式又は二環式の非置換芳香族炭化水素環、例えばフェニル又はナフチルを意味し、フェニルが好ましい。
“シアノ”は一価の基−ＣＮを意味する。
【００１９】
“シクロ低級アルキル”とは、３〜８個の炭素原子、好ましくは４〜６個の炭素原子を含む、非芳香族の、部分的もしくは完全に飽和された一価の環式脂肪族炭化水素基を意味する。シクロ低級アルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシル等が挙げられ、シクロプロピルが特に好ましい。
【００２０】
“シクロ低級アルキレン“とは、二価の非置換の３〜６員の飽和炭素環式炭化水素環であるシクロ低級アルケニル置換基を意味する。中でも好ましいシクロ低級アルキレン置換基は、シクロプロペニル及びシクロブテニルである。
【００２１】
“有効量”又は“治療的有効量”は英文明細書第２９頁（段落番号０１１１〜０１１２）に定義される通りである。
【００２２】
“ハロゲン”とは、塩素、フッ素、臭素及びヨウ素、好ましくは塩素及び臭素を意味する。
“ヘテロ原子”とは、Ｎ、Ｏ及びＳから選択された原子を意味する。
“芳香族複素環”とは、４〜５個の炭素原子と、酸素、窒素又は硫黄から成る群より選ばれた１〜２個のヘテロ原子とを含有する、４〜６員の単環式芳香族複素環を意味する。中でも好ましい芳香族複素環基は、チオフェニル、チアゾール、ピリジニル、フラニル等である。
【００２３】
“ヘテロシクロ−低級アルキル”とは、３〜５個の炭素原子と、酸素、窒素又は硫黄から成る群より選ばれた１個又は２個のヘテロ原子とを含有する、４〜６員の単環式飽和環を意味する。中でも好ましいヘテロシクロアルキル基はモルホリニル、チオピラニル又はテトラヒドロピラニルである。
【００２４】
“ヒドロキシ又はヒドロキシル”は−ＯＨを意味する。
“ヒドロキシ−低級アルキル”は、ヒドロキシ基により置換された、好ましくは単置換された、上記に定義したような低級アルキル基を意味する。
【００２５】
“Ｋｉ”（阻害定数）とは、標的タンパク質へのリガンド／阻害剤（すなわち、本発明の化合物）の熱力学的結合の尺度を意味する。Ｋｉは、特に実施例２８（後述）に記載のようにして測定することができる。
【００２６】
“低級アルケン”とは、二重結合を含み且つ１〜６個の炭素原子を有する不飽和炭化水素を意味する。
【００２７】
“低級アルコキシ”は、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキルから形成される、直鎖又は分枝鎖状のアルコキシ基、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロピキシ、ｎ−ブトキシ、tert−ブトキシ等を意味する。
【００２８】
“低級アルコキシ−低級アルキル”は、低級アルコキシ基により置換された、好ましくは単置換された、上記で定義したような低級アルキル置換基を意味し、ここで低級アルコキシは前に定義した通りである。
【００２９】
“低級アルコキシ−低級アルキレン”は、低級アルコキシ基により置換された、好ましくは単置換された、上記で定義したような低級アルキレン置換基を意味し、ここで低級アルコキシは前に定義した通りである。
【００３０】
“低級アルキレン”は、１〜６個の炭素原子を含む、二価の飽和直鎖状又は分枝鎖状炭化水素置換基、例えばエチレン、プロピレンを意味する。
単独での又は複合語での“低級アルキル”は、１〜６個の炭素原子を含有する、一価の直鎖状又は分枝鎖状飽和炭化水素アルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル等を意味する。
【００３１】
“ペルフルオロ−低級アルキル”とは、低級アルキル基の全ての水素原子がフッ素により置換されている、任意の低級アルキル基を意味する。中でも好ましいペルフルオロ−低級アルキル基はトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピルであり、トリフルオロメチルが特に好ましい。
【００３２】
“医薬上許容される塩”とは、式Ｉの化合物の生物学的有効性と性質を保持しており且つ安定な非毒性有機もしくは無機酸から又は有機もしくは無機塩基から形成される、従来の酸付加塩又は塩基付加塩のことを言う。酸付加塩の例としては、無機酸、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸及び硝酸から誘導されるもの、及び有機酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸等から誘導されるものが挙げられる。塩基付加塩の例としては、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、及び第四級アンモニウム水酸化物、例えば水酸化テトラメチルアンモニウムから誘導されるものが挙げられる。塩への医薬化合物（即ち薬剤）の化学修飾は、化合物の改善された物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性及び溶解性を得るために薬剤師に周知の技術である。例えばH. Ansel他、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems（第６版、1995 ）の196頁と1456−1457頁を参照のこと。
【００３３】
“医薬上許容される”、例えば、医薬上許容される担体、賦形剤等とは、特定の化合物が投与される被検者に対して薬理学的に許容され且つ実質的に非毒性であることを意味する。
【００３４】
置換アルキルにおけるような“置換”とは、異なって定義されない限り、１又は複数の位置で置換が起こり、且つ各置換部位の置換基が独立に指定の選択肢より選択されることを意味する。
【００３５】
本明細書中に指摘するように、式Ｉの化合物は有効な抗増殖剤であり、且つＣＤＫ、特にＣＤＫ１の活性を媒介及び／又は阻害するのに有用であり、従って無秩序の又は異常な細胞増殖に関連した癌又は他の疾患の治療のための抗腫瘍剤を提供する。
【００３６】
一態様では、本発明は式Ｉの化合物
【化４】
2008534646.tif 000006
（上式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3及びＸは前に定義した通りである）；
又は医薬上許容されるその塩に向けられる。
【００３７】
好ましい態様では、本発明は、式Ｉ−Ａの化合物
【化５】
2008534646.tif 000007
（上式中、Ｒ1，Ｒ2及びＲ3は前に定義した通りである）
又は医薬上許容されるその塩に向けられる。
【００３８】
式Ｉ−Ａの一態様では、Ｒ1がＨである。
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ1が場合により下記の基により置換されることがある低級アルキルである：
(1)低級アルキルにより、ＯＨにより、低級アルコキシにより、ハロゲンによりもしくはペルフルオロ−低級アルキルにより置換されることがあるアリール、
(2)低級アルキルにより、＝Ｏによりもしくは−ＮＨにより置換されることがある複素環式芳香族、又は
(3)ヘテロシクロ−低級アルキル。
【００３９】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ1がアリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキルである。
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ1が低級アルコキシ−低級アルキルである。
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ1が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4であり、Ｒ4が前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ4が低級アルキルである。
【００４０】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ1が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ〔ＣＨ2ＣＨ2Ｏ〕p−Ｒ5であり、ここでＲ5とｐは前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ5が水素でありそしてｐが１〜２である。
【００４１】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ2がシアノである。
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ2が水素である。
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ2がＣＯＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は前に定義した通りである。好ましくは、Ｒ6とＲ7は各々独立にＨ、低級アルキル、又はＯＲ9により置換された低級アルキルである。最も好ましくは、Ｒ9が水素である。
【００４２】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ2がＣＯ2Ｒ8であり、ここでＲ8は前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ8が場合によりＯＲ9により置換されることがある低級アルキルである。最も好ましくは、Ｒ9は水素又は低級アルキルである。
【００４３】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ2が場合によりＯＲ9により、シアノによりもしくはＮＲ6Ｒ7により置換されることがある低級アルキルであり、ここでＲ6，Ｒ7及びＲ9は前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ6が水素又は低級アルキルであり、Ｒ7が水素又は低級アルキルであり、そしてＲ9が水素又は低級アルキルである。
【００４４】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3がＯ−低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００４５】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3がＳ−低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００４６】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3が水素である。
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3が低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００４７】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3がシクロ低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００４８】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3が低級アルケンであり、ここで前記低級アルケンはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルケンがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００４９】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3が低級アルキレンであり、ここで前記低級アルキレンはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキレンがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００５０】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3がＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は前に定義した通りであり、最も好ましくはＲ6とＲ7は各々独立に水素であるか、又はＯＲ9により、ハロゲンによりもしくはシアノにより置換されることがある低級アルキルであり、そしてＲ9は前に定義した通りである。
【００５１】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3がＣＯＯＲ8であり、ここでＲ8は前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ8がＯＲ9により置換されている低級アルキルであり、そしてＲ9が前に定義した通りである。
【００５２】
式Ｉ−Ａの別の態様では、Ｒ3がＣＯＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は前に定義した通りであり、最も好ましくはＲ6とＲ7は各々独立に水素であるか、又は所望によりＯＲ9により、ハロゲンによりもしくはシアノにより置換されることがある低級アルキルであり、そしてＲ9は前に定義した通りである。
【００５３】
式Ｉ−Ａの好ましい態様では、Ｒ1がハロゲンにより及び／又は低級アルキルにより置換されているアリールにより置換された低級アルキルである。
式Ｉ−Ａの別の好ましい態様では、Ｒ1がヘテロシクロ−低級アルキルにより置換された低級アルキルである。
式Ｉ−Ａの別の好ましい態様では、Ｒ1が場合によりアリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキルである。
【００５４】
式Ｉ−Ａの別の好ましい態様では、Ｒ2がシアノである。
式Ｉ−Ａの別の好ましい態様では、Ｒ2が水素である。
【００５５】
式Ｉ−Ａの別の好ましい態様では、Ｒ3がＯ−低級アルキルであり、好ましくはＯ−イソプロピルである。
式Ｉ−Ａの別の好ましい態様では、Ｒ3が水素である。
【００５６】
式Ｉ−Ａの化合物の例としては、下記のものが挙げられる：
６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−４−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例１）；
６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例２）；
【００５７】
４−イソプロポキシ−６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例３）；
４−イソプロポキシ−６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例４）；
【００５８】
４−イソプロポキシ−６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例５）；
６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例６）；
【００５９】
６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例７）；
６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例８）；
【００６０】
６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例11）；
６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例12）；
【００６１】
６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例13）；
６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例14）；
６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例15）；
【００６２】
６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例16）；
６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例17）；
【００６３】
６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例18）；
６−〔２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（実施例19）；
【００６４】
５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）チアゾール−４−オン（実施例20）；
２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン（実施例21）；
【００６５】
５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン（実施例22）；
２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン（実施例23）；
【００６６】
２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン（実施例24）；
２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン（実施例25）；
【００６７】
〔５−（８−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−４−オキソ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル〕カルバミン酸tert−ブチルエステル（実施例26）；及び
２−アミノ−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕−ナフチリジン−２−イルメチレン〕チアゾール−４−オン（実施例27）。
【００６８】
別の態様では、本発明は式Ｉ−Ｂの化合物
【化６】
2008534646.tif 000008
（上式中、Ｒ1，Ｒ2及びＲ3は前に定義した通りである）；
又は医薬上許容されるその塩に向けられる。
【００６９】
式Ｉ−Ｂの一態様では、Ｒ1が場合により下記の基により置換されることがある低級アルキルである：
(4)低級アルキルにより、ＯＨにより、低級アルコキシにより、ハロゲンによりもしくはペルフルオロ−低級アルキルにより置換されることがあるアリール、
(5)低級アルキルにより、＝Ｏによりもしくは−ＮＨにより置換されることがある複素環式芳香族、又は
(6)ヘテロシクロ−低級アルキル。
【００７０】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ1が場合によりアリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキルである。
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ1が低級アルコキシ−低級アルキルである。
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ1が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4であり、Ｒ4が前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ4が低級アルキルである。
【００７１】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ1が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ〔ＣＨ2ＣＨ2Ｏ〕p−Ｒ5であり、ここでＲ5とｐは前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ5が水素でありそしてｐが１〜２である。
【００７２】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ2がシアノである。
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ2が水素である。
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ2がＣＯＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は前に定義した通りである。好ましくは、Ｒ6とＲ7は各々独立にＨ、低級アルキル、又はＯＲ9により置換された低級アルキルである。最も好ましくは、Ｒ9が水素である。
【００７３】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ2がＣＯ2Ｒ8であり、ここでＲ8は前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ8が場合によりＯＲ9により置換されることがある低級アルキルである。最も好ましくは、Ｒ9が水素又は低級アルキルである。
【００７４】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ2が場合によりＯＲ9により、シアノによりもしくはＮＲ6Ｒ7により置換されることがある低級アルキルであり、ここでＲ6、Ｒ7及びＲ9は前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ6が水素又は低級アルキルであり、Ｒ7が水素又は低級アルキルであり、そしてＲ9が水素又は低級アルキルである。
【００７５】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3がＯ−低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００７６】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3がＳ−低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００７７】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3が水素である。
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3が低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００７８】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3がシクロ低級アルキルであり、ここで前記低級アルキルはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキルがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００７９】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3が低級アルケンであり、ここで前記低級アルケンはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルケンがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００８０】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3が低級アルキレンであり、ここで前記低級アルキレンはＲ3の定義のところで前に定義した通りに置換されることがあり、最も好ましくは前記低級アルキレンがＯＲ9により置換されており、Ｒ9は前に定義した通りである。
【００８１】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3がＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は前に定義した通りであり、最も好ましくはＲ6とＲ7は各々独立に水素であるか、又はＯＲ9により、ハロゲンによりもしくはシアノにより置換されることがある低級アルキルであり、そしてＲ9は前に定義した通りである。
【００８２】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3がＣＯＯＲ8であり、ここでＲ8は前に定義した通りである。最も好ましくは、Ｒ8がＯＲ9により置換された低級アルキルであり、そしてＲ9が前に定義した通りである。
【００８３】
式Ｉ−Ｂの別の態様では、Ｒ3がＣＯＮＲ6Ｒ7であり、ここでＲ6とＲ7は前に定義した通りであり、最も好ましくはＲ6とＲ7は各々独立に水素であるか、又はＯＲ9により、ハロゲンによりもしくはシアノにより置換されることがある低級アルキルであり、そしてＲ9は前に定義した通りである。
【００８４】
式Ｉ−Ｂの好ましい態様では、Ｒ1がハロゲンにより及び／又は低級アルキルにより置換されているアリールにより置換された低級アルキルである。
式Ｉ−Ｂの別の好ましい態様では、Ｒ1がヘテロシクロ−低級アルキルにより置換された低級アルキルである。
式Ｉ−Ａの別の好ましい態様では、Ｒ1が場合によりアリールにより置換されることがあるシクロ低級アルキルである。
【００８５】
式Ｉ−Ｂの別の好ましい態様では、Ｒ2がシアノである。
式Ｉ−Ｂの別の好ましい態様では、Ｒ2が水素である。
【００８６】
式Ｉ−Ｂの別の好ましい態様では、Ｒ3がＯ−低級アルキルであり、好ましくはＯ−イソプロピルである。
式Ｉ−Ｂの別の好ましい態様では、Ｒ3が水素である。
【００８７】
式Ｉ−Ｂの化合物の例としては、下記のものが挙げられる：
６−〔２−（２，４−ビス−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−５−オキソ−３．５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル、及び
４−イソプロポキシ−６−〔５−オキソ−２−（２−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル。
【００８８】
本発明の特に好ましい態様では、式Ｉの化合物であって、
Ｒ1が水素；−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ（ＣＨ3）3；又はシクロプロピル及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから選択され、ここで前記シクロプロピル及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル基は各々独立に下記のものから選択された置換基により置換されており：
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
下記のものから独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル：
ハロゲン、
−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル；及び
トリフルオロメチル；
Ｒ2が水素又はシアノであり；
Ｒ3が水素又は−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであり；そして
Ｘが−Ｓ−又は−ＮＨ−である
式（Ｉ）の化合物；又は医薬上許容されるその塩が提供される。
【００８９】
本発明の別の特に好ましい態様では、
Ｒ1がシクロプロピル又は（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであって、これら２つの基は
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
ハロゲン及び−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル
から独立に選択された置換基により置換されており；
Ｒ2がシアノであり；
Ｒ3が−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そして
Ｘが−Ｓ−である
式（Ｉ）の化合物；又は医薬上許容されるその塩が提供される。
【００９０】
本発明の更に別の特に好ましい態様では、
Ｒ1がシクロプロピル又は（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであって、これら２つの基は
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
ハロゲン及び−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル
から独立に選択された置換基により置換されており；
Ｒ2がシアノであり；
Ｒ3が水素であり；そして
Ｘが−Ｓ−である
式（Ｉ）の化合物；又は医薬上許容されるその塩が提供される。
【００９１】
本発明の更に別の特に好ましい態様では、
Ｒ1が−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ（ＣＨ3）3；及び
シクロプロピル又は（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルであって、これら２つの基は
非置換のフェニルもしくはチオフェニル、又は
ハロゲン及び−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから独立に選択された１個もしくは２個の置換基により更に置換されている、フェニルもしくはチオフェニル
から独立に選択された置換基により置換されており；
Ｒ2が水素であり；
Ｒ3が−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そして
Ｘが−Ｓ−である
式（Ｉ）の化合物；又は医薬上許容されるその塩が提供される。
【００９２】
本明細書中に開示され且つ上記式Ｉにより包含される化合物は、互換異性又は構造異性を示すことがある。本発明はそれらの化合物のいずれの互換異性もしくは構造異性形、又はそのような形態の混合物を包含し、上記式により表わされるいずれか１つの互換異性形又は構造異性形に限定されるわけではない。
【００９３】
本発明の化合物は任意の常法により調製することができる。それらの化合物の適当な合成方法は実施例に与えられる。一般に、式Ｉの化合物は下記の合成経路の１つに従って調製することができる。
【００９４】
スキーム１
【化７】
2008534646.tif 000009
【００９５】
スキーム２
【化８】
2008534646.tif 000010
【００９６】
スキーム３
【化９】
2008534646.tif 000011
【００９７】
スキーム４
【化１０】
2008534646.tif 000012
【００９８】
スキーム５
【化１１】
2008534646.tif 000013
【００９９】
スキーム６
【化１２】
2008534646.tif 000014
【０１００】
化合物１はChemPacificから市販されている。
化合物２はAldrichから市販されている。
化合物８は例えばスキーム１に記載された手順により調製することができる。
化合物９は実施例５に記載された通りに得ることができる。
化合物１０は例えば、Kuon他、J. Med. Chem., 1991, 34, 1845-1849に記載の手順により調製することができる。
【０１０１】
化合物１３は例えばスキーム２及び３に記載の手順により調製することができる。
化合物１５はFlukaから市販されている。
化合物２３は例えばスキーム５に記載の手順により調製することができる。
一般に、本発明化合物は上記に記載した合成スキームに従って調製することができる。それに加えて、本発明化合物の適当な調製方法は実施例に与えられる。
【０１０２】
立体異性体混合物から光学的に純粋な立体異性体への分離（式Ｉの化合物が不斉である場合）
式Ｉの異性体構造物の光学分割は、既知方法、例えば分解能又は不斉高圧液体クロマトグラフィー（不斉ＨＰＬＣとしても知られている）に従って行われ得る。分割方法は良く知られており、“Enantiomers, Racemates, and Resolutions” (Jacques, J.他, John Wiley and Sons, NY, 1981) に要約されている。不斉ＨＰＬＣのための方法も周知であり、“Separation of Enantiomers by Liquid Chromatographic Methods” (Pirkle, W.H. & Finn, J. “Asymmetric Synthesis”, Vol.1, Morrison, J.D.編, Academic Press, Inc., NY 1983, pp. 87-124) に要約されている。
【０１０３】
塩基性窒素を有する式Ｉの化合物から医薬上許容される酸付加塩への変換
塩基性窒素を担持する式Ｉの化合物から医薬上許容される酸付加塩への任意の変換は、常法により達成することができる。例えば該化合物を、無機酸、例えば塩酸、臭酸、硫酸、硝酸、リン酸で、又は適切な有機酸、例えば酢酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等で処理することができる。
【０１０４】
カルボン酸基を有する式Ｉの化合物から医薬上許容されるアルカリ金属塩への変換
カルボン酸基を有する式Ｉの化合物から医薬上許容されるアルカリ金属塩への任意の変換は、常法により達成することができる。例えば、該化合物を、無機塩基、例えば水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等で処理することができる。
【０１０５】
結晶形
本発明の化合物が固体である場合、当業者はそれらの化合物及びそれらの塩が異なる結晶形又は多形体として存在しうることを理解するであろうし、そのすべてが本発明の範囲内及び特定の式の範囲内に入るものである。
【０１０６】
組成物／製剤
別の態様では、本発明は、少なくとも１つの式Ｉの化合物、又は医薬上許容されるその塩、並びに医薬上許容される賦形剤及び／又は担体を含んで成る医薬組成物に関する。
【０１０７】
それらの医薬組成物は、例えば錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬質もしくは軟質ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤（エマルション）又は懸濁液剤の形で経口投与され得る。それらはまた、例えば坐剤の形で直腸的に、又は例えば注射用液剤の形で非経口的に投与することもできる。式Ｉの化合物及び／又はその塩を含んで成る本発明の医薬組成物は、当業界で既知である方法で、例えば従来の混合、カプセル化、溶解、造粒、乳化、封入、糖衣錠製造、又は凍結乾燥法を用いて製造できる。それらの医薬製剤は、治療上不活性の無機又は有機担体と共に配合され得る。ラクトース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩を、錠剤、コーティング錠、糖衣錠及び硬質ゼラチン剤カプセル剤用の担体として用いることができる。軟質ゼラチンカプセル剤用の適切な担体としては、植物油、ワックス及び油脂が挙げられる。活性物質の性質に依存して、一般的に、軟質ゼラチンカプセル剤の場合には、担体は不要である。液剤及びシロップ剤の製造に適切な担体は、水、ポリオール、サッカロース、転化糖及びブドウ糖である。注射用の適切な担体は、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油、リン脂質及び界面活性剤である。坐剤に適した担体は、天然油又は硬化油、ワックス、油脂及び半液体ポリオールである。
【０１０８】
医薬製剤は、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、矯味矯臭剤、浸透圧を変動する塩類、緩衝剤、被覆剤又は酸化防止剤を含有することもできる。それらはまた、別の治療上有効な物質、例えば式Ｉの化合物以外の追加の活性成分を含有することができる。
【０１０９】
本発明の組成物は、医薬組成物を調製するために一般に知られているやり方で、例えば従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、微粉砕（levigating）、乳化、カプセル化、封入又は凍結乾燥といった技術を用いて製造できる。それらの医薬製剤は、１又は複数の生理学的に許容できる担体を使って、従来の方法で製剤化することができ、そのような担体は、医薬として使用できる製剤への活性化合物の加工を促進する賦形剤及び補助剤から選択可能である。
【０１１０】
用量
上述したように、式Ｉの化合物を包含する本発明の化合物は、細胞増殖性疾患の治療又は抑制、例えば癌の化学的予防において有用である。化学的予防とは、最初の突然変異誘発現象を阻止することによるか、又は抑制腫瘍の再発の傷害を既に受けている前癌状態の細胞の進行を阻止することにより、侵略性癌の進行を阻害することとして定義される。それらの化合物及び前記化合物を含む製剤は、固形腫瘍、例えば乳癌、結腸癌、肺癌及び前立腺癌腫の治療又は抑制において特に有用である。
【０１１１】
本発明に係る化合物の治療的有効量は、疾病の症状を予防、軽減もしくは改善するのに有効であるか、又は処置される被験者の生存を延長するのに有効である化合物の量を意味する。治療的有効量の決定は当業者の技術の範囲内である。
【０１１２】
本発明の化合物の治療的有効量又は用量は、広域限界内で異なることができ、且つ当業界で周知の方法で決定することができる。そのような用量は、各々の特定の場合における個々の必要条件、例えば投与される特定化合物、投与経路、処置される条件、及び処置される患者に従って調整されるであろう。一般的に、約70kgの体重の成人への経口又は非経口投与の場合、約10 mg〜約10,000 mg、好ましくは約200 mg〜約1,000 mgの一日量が適切であるが、その上限は、指示された場合には限度を超えることができる。一日量は、１回量として又は分割量で投与され、あるいは非経口投与の場合には、それは連続輸液として投与されてもよい。
【０１１３】
本発明は更に、例えば哺乳類組織において、本発明の化合物を接触させることにより、プロテインキナーゼＣＤＫ１活性を活性調節又は阻害する方法に向けられる。抗増殖剤としての本発明の化合物の活性は、既知方法により、例えばＭＴＴアッセイにおいて全細胞培養物を用いることにより、容易に測定される。ＣＤＫ１プロテインキナーゼ活性の調節剤としての本発明の剤の活性は、生体内（in vivo）及び／又は試験管内（in vitro）アッセイをはじめとする当業者に利用可能な方法のいずれかにより測定することができる。適当な活性測定のためのアッセイ方法の例としては、国際出願第WO 99/21845号公報；Parast他、Biochemistry 37, 16788-16801 (1998) ；Connell-Crowley & Harpes, Cell Cycle: Materials and Methods (Michele Pagano編、Springer, Berlin, Germany)(1995)；国際出願第WO 97/34876号公報；及び国際出願第WO 96/14843号公報に記載されたものが挙げられる。それらの性質は、例えば、下記の実施例に記載される生物学的試験法の１つ又は複数を用いることにより、評価することができる。
【実施例】
【０１１４】
実施例１
６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化１３】
2008534646.tif 000015
【０１１５】
封管に入れたプソイドチオヒダントイン（Aldrich, 97％，23.2 mg, 0.20ミリモル）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、分子篩及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（53.1 mg, 0.22ミリモル）（後述の通り調製）の混合物に、ＡｃＯＨ（0.3 mL）を添加した。反応混合物を85〜95℃に1.5時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体を熱ＤＭＦ（20 mL）中に懸濁し、再び濾過した。濾液を濃縮して褐色固体：55.8 mgを得た。次いでその固体をBiotageフラッシュカラム（１％〜６％MeOH/CH2Cl2）により精製すると、帯黄色固体として６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（15.5 mg, 22.8％）。HR-MS-EI(+) m/e：C16H13N5O2S (M+H)+についての計算値340.0863、実測値340.0863。
【０１１６】
Ａ．６−ホルミル−４−イソプロポキシル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
この化合物は上記スキーム１の手順を使って次の通り調製した。
【０１１７】
６−ホルミル−４−イソプロポキシル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化１４】
2008534646.tif 000016
【０１１８】
２−シアノ−３−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）アクリル酸エチルエステル(3)：トルエン（400 mL）中の３−アミノ−６−ピコリン（ChemPacific, 15.00 g, 138.70ミリモル）の溶液に、エチル（エトキシメチレン）シアノ酢酸エステル（Aldrich, 98％, 35.88 g, 208.00モル）を添加し、反応混合物を４時間還流させた。反応混合物を濃縮し、固体を濾過により収集して２−シアノ−３−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）アクリル酸エチルエステル（21.0ｇ）を得た。濾液を濃縮し、次いで残渣をBiotageカラム上で30〜75％AcOEt／nHexの勾配を用いて溶出せしめることにより精製して、２−シアノ−３−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）アクリル酸エチルエステル（7.6 g,全収率：28.6ｇ、89.0％）を与え、それを更に精製せずに次の段階に使用した。
【０１１９】
６−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル(4)：ジフェニルエーテル（190 mL）中の２−シアノ−３−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）アクリル酸エチルエステル（8.8 g, 38.05ミリモル）の懸濁液を還流させながら５時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物をｎヘキサン（800 mL）中に注ぎ入れ、固体を濾過により収集し、冷ＴＨＦで洗浄して、６−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（3.86ｇ、54.8％）を得た。HR-MS-EI(+) m/e：C10H7N3O(M+)についての計算値185.0589、実測値185.0591。
【０１２０】
４−クロロ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル(5)：POCl3（25mL）中の６−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（1.47 g, 7.93ミリモル）の懸濁液を還流させながら２時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物を氷水で急冷し、NH4OHで塩基性にした後、AcOEtで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、NaSO4上で乾燥し、濃縮して、褐色固体として４−クロロ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルを得た（0.92ｇ、57.1％）。HR-MS-EI(+) m/e：C10H6ClN3(M+)についての計算値203.0250、実測値203.0252。
【０１２１】
４−イソプロポキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル(6)：ＫＨ（30％、685 mg、6.0ミリモル、ｎHexで予備洗浄したもの）を入れた50 mLフラスコに、無水ＴＨＦ（5 mL）中の無水イソプロパノール（0.76 mL, 10.0ミリモル）の溶液をアルゴン下で室温にて添加した。反応混合物を−20℃に冷却した。ＴＨＦ（8 mL）中の４−クロロ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（407.0mg、2.0ミリモル）を滴下添加し、反応混合物を−20℃からr.t.へ30分間攪拌した。次いで反応混合物を飽和NH4Clでクエンチングし、AcOEt（100 mL×３）で抽出した。合わせた有機相をNa2SO4上で乾燥し、濃縮して粗生成物を与え、それをフラッシュカラム（AcOEt／Hex＝1/3〜3/2）により精製すると、白色固体として４−イソプロポキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（240.0 mg、52.8％）が得られ、それを更に精製せずに次の段階に使用した。
【０１２２】
６−ホルミル−４−イソプロポキシル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル(7)：１，４−ジオキサン中の４−イソプロポキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（260.0 mg, 1.14ミリモル）の溶液に、SeO2（165.0 mg, 1.48ミリモル）を添加し、反応混合物を3.5時間還流させ、ＴＬＣが出発物質の残存を示さなくなったら、次いでそれを室温に冷却し、セライトを通して濾過した。固体を熱AcOEtで洗浄し、次いで濾液を濃縮すると、薄黄色固体として６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（270.3 mg, 98.3％）が得られた。HR-MS-EI(+) m/e：C13H11N3O2(M+)についての計算値241.0851、実測値240.0854。
【０１２３】
実施例２
６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化１５】
2008534646.tif 000017
【０１２４】
封管に入れた２−（２−クロロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（48.1 mg, 0.20ミリモル）（後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、分子篩及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（53.1 mg, 0.22ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を85〜95℃（油浴）に1.5時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体を熱MeOH（50 mL）中に懸濁し、再び濾過した。濾液を濃縮して褐色固体：120.3 mgを得た。次いでその固体をBiotageフラッシュカラム（１％〜６％MeOH／CH2Cl2）により精製すると、帯黄色固体として６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（32.8 mg, 35.3％）。HR-MS  (+) m/e：C23H18ClN5O2S(M+H)+についての計算値464.0943、実測値464.0943。
【０１２５】
２−（２−クロロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン
【化１６】
2008534646.tif 000018
【０１２６】
実施例５に記載のものと同様な手順を使って、２−クロロベンジルアミン（Aldrich）、ローダニン、塩化第二水銀及びDIEAから２−（２−クロロベンジルアミノ）チアゾール−４−オンを得た。LC-MS m/e 241 (MH+)。
【０１２７】
実施例３
４−イソプロポキシ−６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化１７】
2008534646.tif 000019
【０１２８】
封管に入れた２−（trans）−フェニルシクロプロピルアミノチアゾール−４−オン（38.0 mg, 0.16ミリモル）（後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（68.2 mg, 0.28ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を80℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体をAcOEt（20 mL）中に懸濁し、ガラス濾過した。固体をAcOEtで洗浄し、乾燥すると、帯黄色固体として４−イソプロポキシ−６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（34.8 mg, 46.7%）。HR-MS (+) m/e：C25H21N5O2S(M+H)+についての計算値456.1489、実測値456.1488。
【０１２９】
２−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）チアゾール−４−オン
【化１８】
2008534646.tif 000020
【０１３０】
実施例５に記載のものと同様な手順を使って、（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミン塩酸塩（Aldrich）、ローダ二ン、塩化第二水銀及びDIEAから２−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）チアゾール−４−オンを得た。LC-MS m/e 232 (MH+)。
【０１３１】
実施例４
４−イソプロポキシ−６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化１９】
2008534646.tif 000021
【０１３２】
封管に入れた２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン（34.0 mg, 0.16ミリモル）(後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（57.9 mg, 0.24ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を80℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体をAcOEt（20 mL）中に懸濁し、濾過した。固体をAcOEtで洗浄し、乾燥すると、淡褐色固体として４−イソプロポキシ−６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（35.4 mg, 50.8％）。HR-ES (+) m/e：C21H17N5O2S2(M+H)+についての計算値436.0897、実測値436.0895。
【０１３３】
２−（チオフェン−２−イルメチルアミノ）チアゾール−４−オン
【化２０】
2008534646.tif 000022
【０１３４】
実施例５に記載のものと同様な手順を使って、チオフェン−２−イルメチルアミン（Aldrich）、ローダニン、塩化第二水銀及びDIEAから２−（チオフェン−２−イルメチルアミノ）チアゾール−４−オンを得た。LC-MS m/e 259 (MH+)。
【０１３５】
実施例５
４−イソプロポキシ−６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化２１】
2008534646.tif 000023
【０１３６】
封管に入れた２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン（36.2 mg, 0.16ミリモル）(後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（50.2 mg, 0.21ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を80℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体をAcOEt（20 mL）中に懸濁し、ガラス濾過した。固体をAcOEtで洗浄し、乾燥すると、淡褐色固体として４−イソプロポキシ−６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（22.6 mg, 32.4％）。HR-ES (+) m/e：C22H19N5O2S2(M+H)+についての計算値450.1053、実測値450.1051。
【０１３７】
２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン
【化２２】
2008534646.tif 000024
【０１３８】
アセトニトリル（30 mL）中の３−メチルチオフェン−２−イルメチルアミン（700 mg, 5.5ミリモル）(Maybridge）及びローダニン（732 mg, 5.5ミリモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（DIEA）（1.91 mL, 11ミリモル）を室温で添加した。次いでこの溶液を０℃に冷却し、塩化第二水銀（1.52 g, 5.6ミリモル）を一度に添加した。添加後、懸濁液を室温に温め、３日間攪拌した。生じた黒色固体をセライトのプラグを通して濾過し、アセトニトリル（200 mL）と酢酸エチル（250 mL）で洗浄した。濾液を減圧留去し、粗製残渣をジクロロメタン（150 mL）中に溶かし、水とブライン溶液で洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥した後、濾液を減圧留去し、残渣をジクロロメタン（10 mL）中に溶解し、ヘキサン（10 mL）で希釈した。冷蔵庫の中で一晩貯蔵した後、生じた固体を濾過により収集し、ジクロロメタンで洗浄した。風乾後、薄黄色の非晶質固体として390 mg（収率31.5％）の２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オンが単離された。EI-HRMS m/e：C9H10N2OS2(M+)についての計算値226.0235、実測値226.0232。
【０１３９】
実施例６
６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化２３】
2008534646.tif 000025
【０１４０】
封管に入れた２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（40.81 mg, 0.16ミリモル）(後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（50.2 mg, 0.21ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を80℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体をAcOEt（20 mL）中に懸濁し、濾過した。濾液を濃縮して褐色固体（45.7 mg）を与え、それをAcOEt−MeOHから再結晶すると、淡褐色固体として６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（12.8 mg, 16.7％）。HR-ES (+) m/e：C24H20ClN5O2S(M+H)+についての計算値478.1099、実測値478.1097。
【０１４１】
２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）チアゾール−４−オン
【化２４】
2008534646.tif 000026
【０１４２】
実施例５に記載のものと同様な手順を使って、２−クロロ−６−メチルベンジルアミン（Lancaster），ローダニン、塩化第二水銀及びDIEAから２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）チアゾール−４−オンを調製した。LC-MS m/e 259 (MH+)。
【０１４３】
実施例７
６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化２５】
2008534646.tif 000027
【０１４４】
封管に入れた２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕チアゾール−４−オン（38.1 mg, 0.16ミリモル）(後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（50.2 mg, 0.21ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を80℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体をAcOEt（20 mL）中に懸濁し、ガラスフィルターを通して濾過した。固体をAcOEtで洗浄し、乾燥すると、淡緑色固体として６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（30.7 mg, 41.6％）。HR-ES (+) m/e：C24H20AFN5O2S (M+H)+についての計算値462.1395、実測値462.1395。
【０１４５】
２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕チアゾール−４−オン
【化２６】
2008534646.tif 000028
【０１４６】
実施例５に記載のものと同様な手順を使って、（３−フルオロフェニル）エチルアミン（Aldrich），ローダニン、塩化第二水銀及びDIEAから２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕チアゾール−４−オンを得た。HR-ES (+) m/e：C11H11FN2OS (M+H)+についての計算値239.0649、実測値239.0647。
【０１４７】
実施例８
６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化２７】
2008534646.tif 000029
【０１４８】
封管に入れた２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（41.4 mg, 0.16ミリモル）(後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（50.2 mg, 0.21ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を80℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体をAcOEt中に懸濁し、濾紙を通して再濾過すると、淡褐色固体として６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（19.2 mg, 24.9％）。HR-ES (+) m/e：C23H17FClN5O2S (M+H)+についての計算値482.0849、実測値482.0848。
【０１４９】
２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン
【化２８】
2008534646.tif 000030
【０１５０】
実施例５に記載のものと同様な手順を使って、２−クロロ−４−フルオロベンジルアミン（Lancaster）、ローダニン、塩化第二水銀及びDIEAから２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オンを得た。LC-MS m/e 259 (MH+)。
【０１５１】
実施例９
６−〔２−（２，４−ビストリフルオロメチルベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化２９】
2008534646.tif 000031
【０１５２】
25 mLの丸底フラスコに入れた２−（２，４−ビス−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４，５−ジヒドロイミダゾール−１−カルボン酸ベンジルエステル（82.7 mg，0.18ミリモル）（C-H. Kwon他、J. Med. Chem. 1991, 34, 1845-1849に記載の通り調製）、６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（45.6 mg, 0.19ミリモル）（実施例１参照）及びi-PrOH（5 mL）の混合物に、ピペリジン（0.05 mL）を添加し、次いで生じた懸濁液を還流させながら５時間加熱して褐色溶液を与えた。反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、濃縮して淡黄色固体（66.3 mg）を得、それをフラッシュカラム精製により精製すると、淡黄色固体として６−〔２−（２，４−ビス−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（20.6 mg, 20.9％）。HR-ES (+) m/e：C25H18F6N6O2 (M+H)+についての計算値549.1468、実測値549.1472。
【０１５３】
実施例10
４−イソプロポキシ−６−〔５−オキソ−２−（２−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３０】
2008534646.tif 000032
【０１５４】
25 mLの丸底フラスコに入れた４−オキソ−２−（２−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−４，５−ジヒドロイミダゾール−１−カルボン酸ベンジルエステル（70.4 mg，0.18ミリモル）（C-H. Kwon他、J. Med. Chem. 1991, 34, 1845-1849に記載の通り調製）、６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（56.5 mg, 0.23ミリモル）（実施例１参照）及びi-PrOH（5 mL）の混合物に、ピペリジン（0.05 mL）を添加し、次いで生じた懸濁液を還流させながら５時間加熱して褐色溶液を与えた。反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、濃縮して淡黄色固体（66.3 mg）を得、それをフラッシュカラム精製により精製すると、淡黄色固体として４−イソプロポキシ−６−〔５−オキソ−２−（２−トリフルオロメチルベンジルアミノ）−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（18.6 mg, 21.5％）。HR-ES (+) m/e：C24H19F3N6O2 (M+H)+についての計算値481.1595、実測値481.1595。
【０１５５】
実施例11
６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３１】
2008534646.tif 000033
【０１５６】
封管に入れた２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン（34.0 mg, 0.16ミリモル）（実施例４参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（38.5 mg, 0.21ミリモル）（後述の通り調製）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に4.5時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水洗した。次いでその固体を加熱しながらＤＭＦ（1 mL）中に溶解し、次いで氷水の中に注ぎ、濾過した。固体をAcOEtで洗浄し、乾燥すると、黒褐色固体として６−｛４−オキソ−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（12.8 mg, 21.2％）。HR-ES (+) m/e：C18H11N5OS2(M+H)+についての計算値400.0297、実測値400.0298。
【０１５７】
６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（14）
【化３２】
2008534646.tif 000034
【０１５８】
６−メチル−〔１,５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（13）：AcOH（20 mL）中の４−クロロ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（200.0 mg, 0.98ミリモル）（化合物５、実施例１参照）の溶液に、亜鉛粉末（156.1 mg, 2.40ミリモル）を添加し、反応混合物をr.t.で２時間攪拌した。反応混合物をセライトを通して濾過し、次いで濾液を濃縮した。残渣をAcOEt中に溶かし、水、飽和Na2CO3、ブラインで洗浄し、そして乾燥すると、淡褐色固体として６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（120.0 mg, 71.3％）が得られた。HR-MS-EI (+) m/e：C10H7N3(M+)についての計算値169.0640、実測値169.0639。
【０１５９】
６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（14）：１，４−ジオキサン中の６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（220.0 mg, 1.30ミリモル）の溶液にSeO2（187.6 mg, 1.70ミリモル）を添加し、反応混合物を２時間還流させ、そしてＴＬＣが出発物質の残留を示さなくなった時、室温に冷却し、セライトを通して濾過した。固体を熱AcOEtで洗浄し、次いで濾液を濃縮し、淡黄色固体として６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（238.1 mg, 100.0％）を得た。HR-MS-EI (+) m/e：C10H5N3O(M+)についての計算値183.0433、実測値183.0433。
【０１６０】
実施例12
６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３３】
2008534646.tif 000035
【０１６１】
封管に入れた２−（trans）−フェニルシクロプロピルアミノチアゾール−４−オン（38.0 mg, 0.16ミリモル）（実施例３参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（38.5 mg, 0.21ミリモル）（実施例11参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、帯黄色固体として６−〔４−オキソ−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（13.7 mg, 18.3％）。HR-ES (+) m/e：C22H15N5OS  (M+H)+についての計算値398.1070、実測値398.1071。
【０１６２】
実施例13
６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３４】
2008534646.tif 000036
【０１６３】
封管に入れた２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン（21.7 mg, 0.10ミリモル）（実施例５参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（22.0mg, 0.12ミリモル）（実施例11参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に1.5時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、AcOEt及びエーテルで洗浄し、淡褐色固体として６−｛２−〔（３−メチルチオフェン−２−イルメチル）アミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（14.0 mg, 35.8 ％）。HR-ES (+) m/e：C19H13N5OS2  (M+H)+についての計算値414.0454、実測値414.0452。
【０１６４】
実施例14
６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−〔１，５〕ナフチリジンン−３−カルボニトリル
【化３５】
2008534646.tif 000037
【０１６５】
封管に入れたプソイドチオヒダントイン（Aldrich, 97％，23.2 mg, 0.20ミリモル）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、分子篩及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（38.5 mg, 0.21ミリモル）（実施例１参照）の混合物に、ＡｃＯＨ（0.3 mL）を添加した。反応混合物を120℃に3.5時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、AcOEt及びエーテルで洗浄すると、帯黄色固体として６−（２−アミノ−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル）−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（30.3 mg, 44.6％）。LR-ES (+) m/e 282 (M+H)。
【０１６６】
実施例15
６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３６】
2008534646.tif 000038
【０１６７】
封管に入れた２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕チアゾール−４−オン（40.9 mg, 0.17ミリモル）（実施例７参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（33.6 mg, 0.18ミリモル）（実施例11参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を120℃（油浴）に２時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、AcOEt及びエーテルで洗浄すると、黒褐色固体として６−｛２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（20.8 mg, 30.1 ％）。HR-ES (+) m/e：C21H14FN5OS  (M+H)+についての計算値404.0976、実測値404.0977。
【０１６８】
実施例16
６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−オキソ−３，５−ジヒドロイミダゾール−４−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３７】
2008534646.tif 000039
【０１６９】
封管に入れた２−（２−クロロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（40.9 mg, 0.17ミリモル）（実施例２参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−４−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（53.1 mg, 0.22ミリモル）（実施例11参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を120℃（油浴）に２時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、黒褐色固体として６−〔２−（２−クロロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（20.8 mg, 30.1 ％）。HR-ES (+) m/e：C20H12ClN5OS  (M+H)+についての計算値406.0524、実測値406.0525。
【０１７０】
実施例17
６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル｝−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３８】
2008534646.tif 000040
【０１７１】
封管に入れた２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（40.81 mg, 0.16ミリモル）（実施例６参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（33.6 mg, 0.18ミリモル）（実施例11参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を110℃（油浴）に１時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、AcOEt及びエーテルで洗浄し、褐色固体（45.7mg）を得、それをAcOEt−MeOHから再結晶すると、褐色固体として６−〔２−（２−クロロ−６−メチルベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（39.5 mg, 51.6％）。HR-ES (+) m/e：C21H14ClN5OS  (M+H)+についての計算値420.0681、実測値420.0680。
【０１７２】
実施例18
６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化３９】
2008534646.tif 000041
【０１７３】
封管に入れた２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（41.4 mg, 0.16ミリモル）（実施例８参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（33.6 mg, 0.18ミリモル）（実施例11参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を120℃（油浴）に２時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、AcOEt及びエーテルで洗浄し、淡褐色固体として６−〔２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルを得た（22.6 mg, 33.3％）。HR-ES (+) m/e：C20H11FClN5OS (M+Na)+についての計算値446.0249、実測値446.0251。
【０１７４】
実施例19
６−〔２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル
【化４０】
2008534646.tif 000042
【０１７５】
封管に入れた２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（41.4 mg, 0.16ミリモル）（後述の通り調製）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び６−ホルミル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリル（33.6 mg, 0.18ミリモル）（実施例11参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を120℃（油浴）に３時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、AcOEt及びエーテルで洗浄し、淡褐色固体として６−〔２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−チアゾール−５−イリデンメチル〕−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボニトリルが得られた（30.6 mg, 45.1 ％）。HR-ES (+) m/e：C20H11FClN5OS  (M+H)+についての計算値424.0430、実測値424.0431。
【０１７６】
２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン
【化４１】
2008534646.tif 000043
【０１７７】
実施例５に記載のものと同様な手順を使って、３−クロロ−４−フルオロベンジルアミン（Lancaster）、塩化第二水銀及びDIEAから２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オンを調製した。LC-MS m/e 259 (MH+)。
【０１７８】
実施例20
５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）チアゾール−４−オン
【化４２】
2008534646.tif 000044
【０１７９】
封管に入れた２−（trans）−フェニルシクロプロピルアミノチアゾール−４−オン（76.0 mg, 0.32ミリモル）（実施例３参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（77.8 mg, 0.36ミリモル）（後述の通り調製）の混合物に、AcOH（0.4 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に1.5時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、淡褐色固体として５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−（２−フェニルシクロプロピルアミノ）チアゾール−４−オンが得られた（101.5 mg, 73.7％）。HR-ES (+) m/e：C24H22N4O2S(M+H)+についての計算値431.1536、実測値431.1537。
【０１８０】
８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（スキーム５）
【化４３】
2008534646.tif 000045
【０１８１】
２−〔（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）メチレン〕マロン酸ジエチルエステル：トルエン（125 mL）中の５−アミノ−２−ピコリン（ChemPacific, 10.80 g, 99.87ミリモル）の溶液に、マロン酸ジエトキシメチレン（Fluka, 26.69 g, 119.80モル）を添加し、反応混合物を５時間還流させた。反応混合物を濃縮し、固体を濾過により収集し、２−〔（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）メチレン〕マロン酸ジエチルエステル（24.0 g）を与えた。濾液を濃縮し、次いで残渣をBiotageカラムにより、30〜75％AcOH／nHexの勾配を用いて溶出させることにより精製し、２−〔（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）メチレン〕マロン酸ジメチルエステル（2.9 g）を得た。全収率：26.9ｇ、97％。HR-ES (+) m/e：C14H18N2O4  (M+H)+についての計算値279.1340、実測値279.1339。
【０１８２】
４−ヒドロキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボン酸ジエチルエステル：ジフェニルエーテル（300 mL）中の２−〔（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）メチレン〕マロン酸ジエチルエステル（24.0 g, 86.23ミリモル）の懸濁液を還流させながら３時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物をｎヘキサン（1000 mL）中に注ぎ入れ、生じた固体を濾過により収集して４−ヒドロキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（8.3 g, 42％）を得た。HR-MS-EI (+) m/e：C12H12N2O3 (M+)についての計算値232.0848、実測値232.0846。
【０１８３】
４−ヒドロキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボン酸：10％ＫＯＨ（40 mL）中の４−ヒドロキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（4.15ｇ、17.87ミリモル）の懸濁液を室温で3.5時間攪拌した。3N HClを添加してpHを７に調整した。固体を濾過により収集し、４−ヒドロキシ−６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボン酸（2.58 g, 72％）を得た。HR-ES (+) m/e：C10H8N2O3 (M+H)についての計算値205.0608、実測値205.0608。
【０１８４】
６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−４−オール：ジフェニルエーテル（100 mL）中の４−ヒドロキシ−６−メチル〔１，５〕ナフチリジン−３−カルボン酸（2.58 g, 12.64ミリモル）の懸濁液を還流させながら４時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物をｎヘキサン（400 mL）と石油エーテル（200 mL）の混合物中に注ぎ入れた。生じた褐色固体を濾過により収集して６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−４−オール（1.71 g, 86％）を得た。HR-MS-EI (+) m/e：C9H8N2O (M+)についての計算値160.0637、実測値160.0638。
【０１８５】
８−クロロ−２−メチル−〔１，５〕ナフチリジン：POCl（25 mL）中の６−メチル−〔１，５〕ナフチリジン−４−オール（1.60ｇ、9.99ミリモル）の懸濁液を還流させながら２時間攪拌した。室温に冷却した後、反応混合物を氷水で急冷し、NH4Clで塩基性にした後、AcOEtで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、濃縮して、褐色固体として８−クロロ−２−メチル−〔１，５〕ナフチリジン（1.2 g, 67％）を得た。HR-MS-EI (+) m/e：C9H7N2Cl (M+)についての計算値178.0298、実測値178.0297。
【０１８６】
８−イソプロポキシ−２−メチル−〔１，５〕ナフチリジン：ＫＨ（30％, 2.7 g, 20.15ミリモル、ｎHexで予備洗浄したもの）を入れた100 mLのフラスコに、無水ＴＨＦ（15 mL）中の無水イソプロパノール（2.04ｇ、33.59ミリモル）の溶液をアルゴン下で室温にて添加した。反応混合物を−20℃に冷却した。ＴＨＦ（20 mL）中の８−クロロ−２−メチル−〔１，５〕ナフチリジン（1.20 g, 6.72ミリモル）を滴下添加し、反応混合物を−20℃から室温に２時間攪拌した。反応混合物を20 mLの氷水中に注ぎ入れ、AcOEt（100  mL×３）で抽出した。合わせた有機層をNa2SO4上で乾燥し、濃縮して、粗生成物を与え、それをフラッシュカラム（AcOEt／Hex＝1/3〜3/2）により精製して、白色固体として８−イソプロポキシ−２−メチル−〔１，５〕ナフチリジン（0.34 g, 25％）を得た。HR-MS-EI (+) m/e：C12H14N2O (M+)についての計算値202.1106、実測値202.1107。
【０１８７】
８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチジリン−２−カルバルデヒド：１，４−ジオキサン（40 mL）中の８−イソプロポキシ−２−メチル−〔１，５〕ナフチリジン（1.13ｇ, 5.60ミリモル）の溶液に、SeO2（0.80ｇ, 7.20ミリモル）を添加し、反応混合物を２時間還流させ、ＴＬＣが出発材料の残存を全く示さなくなった時、室温に冷却し、セライトを通して濾過した。固体を熱AcOEtで洗浄し、次いで濾液を濃縮して、淡黄色固体として８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（1.20 g, 100％）を得た。HR-MS-EI (+) m/e：C12H12N2O2 (M+)についての計算値216.0899、実測値216.0900。
【０１８８】
実施例21
２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン
【化４４】
2008534646.tif 000046
【０１８９】
封管に入れた２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕チアゾール−４−オン（38.1 mg, 0.16ミリモル）（実施例７参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（38.9 mg, 0.18ミリモル）（実施例20参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に４時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、薄緑色固体として２−〔２−（３−フルオロフェニル）エチルアミノ〕−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オンが得られた（45.9 mg, 65.8％）。HR-ES (+) m/e：C23H21FN4O2S(M+H)+についての計算値437.1442、実測値437.1443。
【０１９０】
実施例22
５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン
【化４５】
2008534646.tif 000047
【０１９１】
封管に入れた２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オン（34.0 mg, 0.16ミリモル）（実施例４参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（38.9 mg, 0.18ミリモル）（実施例20参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に4.5時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、淡褐色固体として５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−２−〔（チオフェン−２−イルメチル）アミノ〕チアゾール−４−オンが得られた（29.8 mg, 45.4％）。HR-ES (+) m/e：C20H18N4O2S2(M+H)+についての計算値411.0944、実測値411.0945。
【０１９２】
実施例23
２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン
【化４６】
2008534646.tif 000048
【０１９３】
封管に入れた２−（２−クロロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（38.5 mg, 0.16ミリモル）（実施例２参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、分子篩、及び８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（38.9 mg, 0.18ミリモル）（実施例20参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に５時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水で洗浄した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、褐色固体として２−（２−クロロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オンが得られた（31.4 mg, 44.7％）。HR-ES (+) m/e：C22H19ClN4O2S (M+H)+についての計算値439.0990、実測値439.0987。
【０１９４】
実施例24
２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン
【化４７】
2008534646.tif 000049
【０１９５】
封管に入れた２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（41.4 mg, 0.16ミリモル）（実施例19参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（38.9 mg, 0.18ミリモル）（実施例20参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に２時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、淡褐色固体として２−（３−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オンが得られた（63.5 mg, 86.9％）。HR-ES (+) m/e：C22H18FClN4O2S (M+H)+についての計算値457.0896、実測値457.0897。
【０１９６】
実施例25
２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン
【化４８】
2008534646.tif 000050
【０１９７】
封管に入れた２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）チアゾール−４−オン（41.4 mg, 0.16ミリモル）（実施例18参照）、AcONa（160 mg, 1.95ミリモル）、及び８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（38.9 mg, 0.18ミリモル）（実施例20参照）の混合物に、AcOH（0.3 mL）を添加した。反応混合物を100℃（油浴）に３時間加熱した。次いで反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水、アセトン及びエーテルで洗浄し、薄褐色固体として２−（２−クロロ−４−フルオロベンジルアミノ）−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オンが得られた（43.5 mg, 59.5％）。HR-ES (+) m/e：C22H18FClN4O2S (M+H)+についての計算値457.0896、実測値457.0897。
【０１９８】
実施例26
〔５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−４−オキソ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル〕カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化４９】
2008534646.tif 000051
【０１９９】
マイクロウエーブ管に入れたトルエン中のＮ−Boc−プソイドチオヒダントイン（138.4mg, 0.64ミリモル）（後述の通り調製）及び８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−カルバルデヒド（155.6 mg, 0.72ミリモル）（実施例20参照）の懸濁液に、安息香酸とピペリジンを添加した。反応混合物を加熱して薄黄色溶液を与え、次いでマイクイロウエーブを使って140℃に15分間加熱した。反応混合物を室温（r.t.）に冷却し、トルエンで希釈した。固体を濾過により収集し、トルエン、アセトン及びエーテルで洗浄し、淡褐色固体として〔５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−４−オキソ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル〕カルバミン酸tert−ブチルエステルが得られた（125.3 mg, 47.2％）。HR-ES (+) m/e：C20H22N4O4S (M+H)+についての計算値415.1435、実測値415.1436。
【０２００】
（４−オキソ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル）カルバミン酸tert−ブチルエステル
【化５０】
2008534646.tif 000052
【０２０１】
アセトニトリル（159 mL）中のプソイドチオヒダントイン（Aldrich, 97％，10.13g，84.61ミリモル）の懸濁液に、ジ−tert−ブチルジカーボネート（20.32 g, 93.07ミリモル）とＤＭＡＰ（11.37ｇ，93.07ミリモル）を室温で添加した。生じた混合物を室温で15時間攪拌した。沈澱した固体を濾過により収集し、CH2Cl2で洗浄した。濾液を濃縮し、次いで残渣をBiotageシリカゲルカラムにより精製すると、白色固体として（４−オキソ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル）カルバミン酸tert−ブチルエステルが得られた（（2.75ｇ、15.0％）。EI-LRMS m/e：C8H12N2O3S (M+)についての計算値215.1、実測値215.1。
【０２０２】
実施例27
２−アミノ−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オン
【化５１】
2008534646.tif 000053
【０２０３】
キシレン（2.0mL）中の〔５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）−４−オキソ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル〕カルバミン酸tert−ブチルエステル（50.0 mg, 0.12ミリモル）（実施例26参照）の混合物をＣＥＭマイクロウエーブシンセサイザーを用いて150℃に１時間加熱し、次いで室温に冷却し、キシレンで希釈した。固体を濾過により収集し、アセトンとエーテルで洗浄すると、淡褐色固体として２−アミノ−５−（８−イソプロポキシ−〔１，５〕ナフチリジン−２−イルメチレン）チアゾール−４−オンが得られた（27.3 mg, 72.0％）。HR-ES (+) m/e：C15H14N4O2S (M+H)+についての計算値315.0910、実測値315.0911。
【０２０４】
実施例28
本発明の化合物の薬理学的性質は、多数の薬理学的アッセイを使って確かめることができる。後述の例示的薬理学的アッセイは、本発明に係る化合物及びそれらの塩を使って実施した。本発明の化合物は、5.0μＭ未満のＫi値でＣＤＫ１／サイクリンＢ活性を示した。このことは、それらの化合物がＣＤＫ１／サイクリンＢを阻害する活性を有することを示す。
【０２０５】
キナーゼアッセイ
ＣＤＫ１活性の阻害を測定するために、FlashPlateTM（NENTM−Life Science Products）アッセイ又はＨＴＲＦアッセイのいずれかを用いて行った。どちらの型のキナーゼアッセイも、組換えヒトＣＤＫ１／サイクリンＢ複合体を使って実施した。ＧＳＴ−サイクリンＢ（ＧＳＴ−ｃｙｃＢ）及びバキュロウイルスベクター中のＣＤＫ１ cDNAクローンは、テキサス州ヒューストンのthe Baylor College of MedicineのW. Harper博士により提供された。タンパク質をHigh FiveTM昆虫細胞中で同時発現せしめ、そして以前に記載されたようにして（Harper, J. W.他, Call 1993, 75, 805-816）、グルタチオン−セファロース樹脂（Pharmacia, Piscataway, NJ）上で該複合体を精製した。網膜芽腫（Ｒｂ）タンパク質の6x−ヒスチジン標識せん断形（アミノ酸386−928）を、ＣＤＫ１／シクリンＢアッセイの基質として使用した（発現プラスミドは、英国Welwyn Garden CityにあるRoche Research Centre, Department of Molecular VirologyのVeronica Sullivan博士により提供された）。Ｒｂタンパク質は、ＣＤＫ１によるリン酸化のための天然基質である（Herwig & Strauss, Eur. J. Biochem. Vol. 246 (1997) pp. 581-601及びその中に引用された文献を参照のこと）。62キロダルトン（Kd）のタンパク質の発現は、Ｍ15 大腸菌株におけるIPTG誘導性プロモーターの調節下であった。音波処理により細胞を溶解し、そして１mMイミダゾールで前処理したNiキレート化アガロースカラムにpH 8.0で溶解物を結合せしめることによって精製を行った。次に、pH 6.0まで徐々に低下するｐＨ緩衝剤を使って数回樹脂を洗浄し、そして500 mMイミダゾールを用いて溶出させた。溶出されたタンパク質を、20mM HEPES, pH 7.5, 30％グリセロール、200mM NaCl及び1mM DTTに対して透析した。精製されたＲｂ融合タンパク質原液をタンパク質濃度について定量し、アリコートに分け、そして−70℃で貯蔵した。
【０２０６】
上記FlashPlateキナーゼアッセイに関しては、96ウェルのFlashPlatesを、ウェル当たり100μlを用いて、10μg/mlのＲｂタンパク質により被覆した。プレートを４℃で一晩又は室温で３時間、振とう器上でインキュベートした。非特異的リン酸化を制御するために、ウェルの１列を100μl／ウェルの被覆緩衝液（20mM HEPES, 0.2M NaCl）により被覆した。次に、洗浄緩衝液（リン酸塩緩衝食塩水中、0.01％Tween 20）により２回プレートを洗浄した。試験すべき化合物（“試験化合物”）を、５倍最終濃度でウェルに添加した。40μlの反応混合物（25mM HEPES, 20mM MgCl2, 0.002％Tween 20, 2mM DTT, 1μM ATP, 3.3 nM33Ｐ−ATP）及びバックグラウンドの少なくとも10倍高い計数を与えるのに十分な量の酵素を即座に添加することにより反応を開始せしめた。振とう器上で室温にて30分間プレートをインキュベートした。洗浄緩衝液で４回プレートを洗浄し、密封し、そしてTopCountシンチレーションカウンター（Packard Instrument Co., Downers Grove, IL）上で計数した。ＣＤＫ１活性の阻害の尺度であるＲｂリン酸化の阻害率（％）は、次の式に従って決定した：
【０２０７】
100×〔１−（試験化合物−非特異的）／（合計−非特異的）〕
【０２０８】
ここで“試験化合物”とは、二重反復試験化合物の１分当たりの平均計数を言い、“非特的”とは、ＣＤＫ１／サイクリンＢ等を全く添加しなかった時の１分当たりの平均計数を言い、そして“合計”とは、化合物を全く添加しなかった時の１分当たりの平均計数のことを言う。ＩＣ50値は、記載の試験条件下でプロテインキナーゼにより誘発された放射能の取込みを50％減少させる試験化合物の濃度である。阻害定数Ｋｉの値は次の式により算出される：Ｋｉ＝ＩＣ50／（１＋〔Ｓ〕／Ｋｍ）、ここで〔Ｓ〕はＡＴＰ濃度であり、Ｋｍはミカエリス定数である。
【０２０９】
均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）キナーゼアッセイは、96ウェルのポリプロピレン製プレート（BD Bioscience, Bedford, MA）中で実施した。試験化合物をまずＤＭＳＯ中に溶解し、次いでキナーゼアッセイ緩衝液１（25mM HEPES, pH7.0, 8 mM MgCl2, 1.5mM ＤＴＴ及び162μMのＡＴＰ）中に15％のＤＭＳＯ濃度になるように希釈した。ＣＤＫ１／サイクリンＢ酵素をキナーゼ緩衝液２（25mM HEPES, pH 7.0, 8mM MgCl2, 0.003％Tween 20, 0.045％ＢＳＡ, 1.5mM ＤＴＴ及び0.675μMのＲｂタンパク質）中に希釈した。キナーゼ反応を開始させるために、20μL の化合物溶液をアッセイプレート中の40μLのＣＤＫ１／サイクリンＢ溶液と混合して、それぞれ0.1μg/mL及び0.225μMのＣＤＫ１／サイクリンＢ及びＲｂの最終濃度を与え、そして37℃で30分間インキュベートした。15μLの抗ホスホＲｂ（Ser 780）抗体（Cell Signaling Technology, Beverly, MA）を該抗体の１：7692希釈度で添加した。37℃で25分間インキュベーションを続けた後、LANCE Eu−W1024標識抗ウサギIgＧ（1 nM, PerkinElmer, Wellesley, MA）及びアロフィコシアニン接合−抗His抗体（20 nM, PerkinElmer, Wellesley, MA）を該ウェルに添加した。37℃で更に40分間インキュベーションを続けた。インキュベーションの完了時に、35μLの反応混合物を新しい384ウェルの黒色ポリスチレン製プレート（Corning Incorporated, Corning, NY）に移し、蛍光プレートリーダー上で340 nmの励起波長及び665/615 nmの発光波長を用いて読み取った。
【０２１０】
本発明の主題の化合物に適用したＣＤＫ１／サイクリンＢ活性を示すＫｉ値は、約0.001μＭ〜約5.000μＭの範囲であり、好ましくは約0.01μＭ〜約0.8μＭの範囲であった。幾つかの例についての特定データは次の通りである：
【０２１１】
【表１】
2008534646.tif 000054
【０２１２】
実施例29
錠剤の製剤
【０２１３】
【表２】
2008534646.tif 000055
【０２１４】
製剤手順：
１．品目１，２及び３を適切なミキサー中で15分間混合する。
２．段階１からの粉末混合物を20％ポビドンK30溶液（品目４）と共に造粒する。
３．段階２からの粒状物を50℃で乾燥する。
４．段階３からの粒状物を適切な微粉砕装置に通す。
５．段階４の微粉砕された粒状物に品目５を添加し、そして３分間混合する。
６．段階５からの粒状物を適切なプレス上で圧縮する。
【０２１５】
実施例30
カプセル製剤
【０２１６】
【表３】
2008534646.tif 000056
【０２１７】
製造手順:
１．   品目１，２及び３を適切なミキサー中で15分間混合する。
２．品目４＆５を添加し、そして３分間混合する。
３．適当なカプセル中に充填する。
【０２１８】
実施例31
注射用液剤／乳剤の調製
【０２１９】
【表４】
2008534646.tif 000057
【０２２０】
製造手順
１．品目１を品目２に溶解する。
２．品目３，４及び５を品目６に添加し、分散されるまで混合し、次いで均質化する。
３．段階１からの溶液を段階２からの混合物に添加し、そして分散液が半透明になるまで均質化する。
４．0.2μmのフィルターを通して滅菌濾過し、バイアル中に充填する。
【０２２１】
実施例32
注射用液剤／乳剤の調製：
【０２２２】
【表５】
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【０２２３】
製造方法：
１．品目１を品目２に溶解する。
２．品目３，４及び５を品目６に添加し、分散されるまで混合し、次いで均質化する。
３．段階１からの溶液を段階２からの混合物に添加し、そして分散液が半透明になるまで均質化する。
４．0.2μmのフィルターを通して滅菌濾過し、バイアル中に充填する。
【０２２４】
本発明を特定の及び好ましい態様により例示してきたが、当業者は、日常的な実験及び本発明の実施を通して変更や改良が行われ得ることを理解するであろう。従って、本発明は前述の記載によって制限されるものではなく、添付の請求の範囲及びそれらの等価物により明らかにされるものである。
【国際調査報告】
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