(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）：2008531532.tif 000014で表される化合物とその塩およびその調製方法、それを含む組成物、ならびにアレルギー性鼻炎などの各種障害の治療におけるその使用、に関する。【選択図】  なし
2008531532.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１−｛４−［（１−シクロブチル−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝−４−｛［４−（メチルスルホニル）フェニル］カルボニル｝ピペラジン
【化１】
2008531532.tif 000012
もしくはその塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物もしくはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物もしくはその塩の調製方法であって、式（ＩＩ）
【化２】
2008531532.tif 000013
で表される化合物もしくはその塩と４−（メチルスルホニル）−安息香酸とを反応させることを含む方法。
【請求項４】
治療で用いるための式（Ｉ）の化合物もしくはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
炎症性疾患および／またはアレルギー性疾患の治療で用いるための請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
鼻炎、特にアレルギー性鼻炎の治療で用いるための請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
任意付加的な１種以上の医薬的に許容される担体および／または賦形剤と一緒に式（Ｉ）の化合物もしくはその医薬的に許容される塩を含む組成物。
【請求項８】
さらにＨ１受容体拮抗薬を含む請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物もしくはその医薬的に許容される塩と１種以上の他の治療剤とを含む組み合せ。
【請求項１０】
前記他の治療剤がＨ１受容体拮抗薬である、請求項９に記載の組み合せ。
【請求項１１】
炎症性疾患および／またはアレルギー性疾患の治療または予防のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物もしくはその医薬的に許容される塩の使用。
【請求項１２】
前記疾患がアレルギー性鼻炎である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
治療を必要とする患者に式（Ｉ）の化合物もしくはその医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む炎症性疾患および／またはアレルギー性疾患の治療または予防方法。
【請求項１４】
前記疾患がアレルギー性鼻炎である請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ある化合物、その調製方法、それを含む医薬組成物、および各種障害特に気道の炎症性障害および／またはアレルギー性障害の治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー性鼻炎、肺炎および肺うっ血は、多くの場合、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、季節性アレルギー性鼻炎、通年性アレルギー性鼻炎などの他の病態が関連する病状である。一般に、これらの病状には、各種の細胞、特にマスト細胞からのヒスタミンの放出が関連している炎症が、少なくとも一部介在している。
【０００３】
「花粉症」とも呼ばれるアレルギー性鼻炎は、世界の人口の大部分に影響を及ぼしている。アレルギー性鼻炎には二つのタイプ、季節性と通年性がある。季節性アレルギー性鼻炎の臨床症状としては、典型的には、鼻の痒みと刺激、クシャミ、および水様鼻汁が挙げられ、多くの場合鼻詰まりが伴う。通年性アレルギー性鼻炎の臨床症状は、鼻閉がよりひどい以外は似たようなものである。アレルギー性鼻炎のどちらのタイプも、喉および／または眼の痒み、流涙、眼の周りの浮腫などの他の症状を引き起こすことがある。アレルギー性鼻炎の症状の程度は、不快なレベルから衰弱レベルまで変化し得る。
【０００４】
アレルギー性鼻炎や他のアレルギー性病状には、さまざまな細胞タイプの中でも特にマスト細胞からのヒスタミンの放出が関連する。ヒスタミンの生理活性には、古典的には、Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３と呼ばれる三つの受容体サブタイプが介在している。Ｈ１受容体は中枢神経系と末梢神経系に広く分布しており、覚醒状態および急性炎症に関与する。Ｈ２受容体は、ヒスタミンに応答して胃酸分泌に介在する。Ｈ３受容体は中枢神経系と末梢神経系のいずれの神経終末にも存在しており、神経伝達物質放出の抑制に介在する［非特許文献１］。最近、ヒスタミン受容体ファミリーの四番目のメンバーが明らかにされ、Ｈ４受容体と命名された［非特許文献２］。Ｈ４受容体の分布は免疫系と炎症系の細胞に限られているように見受けられるが、この受容体の生理的な役割はまだ明らかにされていない。
【０００５】
血管や神経終末のＨ１受容体の活性化は、痒み、クシャミ、水様鼻汁産出などのアレルギー性鼻炎症状の多くを引き起こす。抗ヒスタミン化合物すなわち選択的Ｈ１受容体拮抗薬である薬物例えばクロルフェニラミンやセチリジンは、アレルギー性鼻炎に伴う痒み、クシャミ、鼻汁を治療するのに有効であるが、鼻詰まり症状に対しては有効でない［非特許文献３］。
【０００６】
ヒスタミンＨ３受容体は中枢神経系終末と末梢神経終末のいずれにも広く発現しており、神経伝達物質放出の抑制に介在する。分離ヒト伏在静脈の末梢交感神経のインビトロ電気的刺激はノルアドレナリン放出の増大および平滑筋の収縮をもたらし、これはヒスタミンＨ３受容体作動薬によって抑制することができる［非特許文献４及び５］。Ｈ３受容体作動薬はまた、ブタ鼻粘膜の血管緊張に対する交感神経活性化の効果を阻害する［非特許文献６］。インビボでは、Ｈ３受容体作動薬は、交感神経活性化によってもたらされる鼻気道抵抗低下を抑制する［非特許文献７］。ヒト鼻粘膜のヒスタミンＨ３受容体の活性化は、交感神経性血管収縮を抑制する［非特許文献８］。さらに、Ｈ３受容体拮抗薬は、ヒスタミンＨ１受容体拮抗薬との組み合せで、鼻気道抵抗および鼻腔容積（鼻詰まりの一つの指標）に対するマスト細胞活性化の作用を逆転させることがこれまでに示されており［非特許文献９］、また正常ヒト被検体で行われたヒスタミン鼻惹起検査・分析によってヒスタミン誘発鼻閉に対するＨ３受容体の寄与についてのさらなる証拠が提供されている［非特許文献１０］。
【非特許文献１】Hill et al., Pharmacol. Rev., 49: 253-278,(1997)
【非特許文献２】Hough, Mol. Pharmacol., 59: 415-419,(2001)
【非特許文献３】Aaronson, Ann. Allergy, 67: 541-547,(1991)
【非特許文献４】Molderings et al., Naunyn-Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol., 346:46-50,(1992)
【非特許文献５】Valentine et al., Eur. J. Pharmacol., 366: 73-78,(1999)
【非特許文献６】Varty & Hey., Eur. J. Pharmacol., 452: 339-345,(2002)
【非特許文献７】Hey et al., Arzneim-Forsch Drug Res., 48: 881-888,(1998)
【非特許文献８】Varty et al., Eur. J. Pharmacol., 484: 83-89,(2004)
【非特許文献９】Mcleod et al., Am. J. Rhinol., 13: 391-399,(1999)
【非特許文献１０】Taylor-Clark et al., British J. Pharmacol., 1-8,(2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ヒスタミンＨ３受容体拮抗薬および／または逆作動薬である、ある化合物（またはその塩）に関するものである。この化合物は、マスト細胞のような細胞からのヒスタミン放出が関連する気道の炎症性疾患および／またはアレルギー性疾患、例えばアレルギー性鼻炎のようなさまざまな病気、特に炎症性疾患および／またはアレルギー性疾患の治療で有用であると思われる。さらに、本発明の化合物（またはその塩）が以下の特徴：
（ｉ）ｐＫｉが約９．５よりも高い、強力なＨ３拮抗薬／逆作動薬活性；
（ｉｉ）Ｈ１受容体よりもＨ３受容体に対しておよそ１０，０００倍の選択性；
（ｉｉｉ）低ＣＮＳ（中枢神経系）浸透；
（ｉｖ）向上したバイオアベイラビリティ；および
（ｖ）血液中のより低いクリアランスおよび／またはより長い半減期；
の一つ以上をもち得るという点において、本発明の化合物は、公知のＨ３拮抗薬／逆作動薬よりも改善されたプロファイルを示し得る。
【０００８】
そのようなプロファイルを有している化合物は経口が効果的であり、および／または一日当たり一回の投与が可能となり得る。および／またはさらに他の既存治療薬に比較して改善された副作用プロファイルを有し得る。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
つまり本発明は、第一の態様で、化合物１−｛４−［（１−シクロブチル−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝−４−｛［４−（メチルスルホニル）フェニル］カルボニル｝ピペラジン
【化１】
2008531532.tif 000003
【００１０】
または（例えば医薬的に許容される塩などの）その塩を提供する。
【００１１】
本発明が式（Ｉ）の化合物をその遊離の塩基としておよびその塩（例えば医薬的に許容される塩）として保護していることは理解されるべきである。
【００１２】
さらに、以降における本発明の化合物または式（Ｉ）の化合物についての言及は、遊離の塩基としての式（Ｉ）の化合物、または塩としての式（Ｉ）の化合物を意味することは理解されるべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本明細書で使用される用語「医薬的に許容される塩」とは、レシピエントへの投与に際して本発明の化合物またはその活性代謝産物もしくは残基を（直接的にまたは間接的に）供することができる本発明の化合物のあらゆる医薬的に許容される塩または溶媒和物を意味する。
【００１４】
有機化合物の多くは溶媒と複合体を形成することができ、それらが反応すること、または複合体から沈殿または結晶化することは理解されよう。これらの複合体は「溶媒和物」と呼ばれる。例えば、水との複合体は「水和物」と呼ばれる。本発明の化合物の溶媒和物は、本発明の範囲の中に入る。
【００１５】
本発明の化合物は、医薬的に許容される塩の形態にあっても良いし、および／または医薬的に許容される塩として投与しても良い。適切な塩に関する総説については、Berge et al., J. Pharm. Sci., 66: 1-19,(1977)を参照されたい。
【００１６】
典型的には、医薬的に許容される塩は、所望の酸を適宜用いることで容易に調製することができる。塩は、溶液から沈殿させて濾過によって回収することができるし、あるいは溶媒の蒸発によっても回収することができる。
【００１７】
医薬的に許容される酸付加塩は、任意付加的な有機溶媒などの適当な溶媒中で式（Ｉ）の化合物と適切な無機もしくは有機酸（例えば臭化水素酸、塩化水素酸、ギ酸、硫酸、硝酸、リン酸、コハク酸、マレイン酸、酢酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、あるいはナフタレンスルホン酸）を反応させてその塩を生成させることで形成することができ、これは、通常、例えば結晶化や濾過により単離される。つまり、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される酸付加塩は、例えば臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、ギ酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、あるいはナフタレンスルホン酸塩であり得る。
【００１８】
他の医薬的に許容されない塩、例えばシュウ酸塩やトリフルオロ酢酸塩は、例えば本発明の化合物の単離において用いることができ、本発明の範囲の中に含まれる。本発明においては、その範囲の中に、式（Ｉ）の化合物の塩の全ての考えられる化学量論的形態および非化学量論的形態が含まれる。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物は、結晶質形態または非晶質形態にあって良い。さらに、式（Ｉ）の化合物の結晶質形態の一部は多形体として存在することができ、これは本発明の範囲の中に含まれる。式（Ｉ）の化合物の熱力学的に最も安定な多形形態は、特に興味のあるところである。
【００２０】
式（Ｉ）の化合物の多形形態は、例えば、限定するものではないが、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターン、赤外（ＩＲ）スペクトル、ラマンスペクトル、示差走査熱量計（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、固体核磁気共鳴（ＮＭＲ）などの多数ある慣用の分析手法を用いてキャラクタリゼーションおよび識別をすることができる。
【００２１】
上記から、本発明の範囲には、本発明の化合物およびその塩の全ての溶媒和物、水和物、複合体、および多形体が含まれることは理解されよう。
【００２２】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその塩の調製方法を提供する。
【００２３】
つまり式（Ｉ）の化合物は、ジクロロメタンのような適当な溶媒中で、任意付加的な適切な塩基例えばトリエチルアミンおよび適切なカップリング剤例えばＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）の存在下に、式（ＩＩ）
【化２】
2008531532.tif 000004
【００２４】
で表される化合物またはその塩（例えば酸付加塩）と４−（メチルスルホニル）安息香酸とを反応させることによって調製することができる。
【００２５】
別の方法として、ジクロロメタンのような適当な溶媒中で、任意付加的な適切な塩基例えばトリエチルアミンの存在下に、４−（メチルスルホニル）ベンゾイルクロリドを用いてアシル化を行うこともできる。
【００２６】
式（ＩＩ）の化合物は、以下の反応スキーム：
【化３】
2008531532.tif 000005
【００２７】
［ａ）ジ−ｔ−ブチルジカルボネート、ジメチルホルムアミド；ｂ）ジ−ｔ−ブチルアゾジカルボキシレート、トリフェニルホスフィン、ベンジル４−ヒドロキシ−１−ピペリジンカルボキシレート、ジクロロメタン；ｃ）Ｈ２、炭素担持１０％パラジウム、エタノール；ｄ）ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド、シクロブタノン、ジクロロメタン；ｅ）４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン、ジクロロメタン］
に従って調製することができる。
【００２８】
式（ＶＩＩ）の化合物［５６６２１−４８−８］はＡｃｒｏｓ社、Ａｖｏｃａｄｏ社、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ社から入手可能であり、４−（メチルスルホニル）−安息香酸［４０５２−３０−６］はＡｌｄｒｉｃｈ社、Ａｃｒｏｓ社から入手可能である。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物またはその塩は、国際公開第２００４／０３５５５６号パンフレットに記載の方法によっても合成することができる（実施例２９２のステップ４を参照されたい。それが式（ＩＩ）の化合物である）。
【００３０】
記載した合成経路で用いることができる保護基の例、およびその脱離手段は、T. W. Greene’Protective Groups in Organic Synthesis’(3rd edition, J. Wiley and Sons, 1999)に載っている。好適なアミン保護基としては、スルホニル（例えばトシル）、アシル（例えばアセチル、２’，２’，２’−トリクロロエトキシシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、あるいはｔ−ブトキシカルボニル）、およびアリールアルキル（例えばベンジル）が挙げられ、これらは適宜加水分解により（例えばジオキサン中塩化水素やジクロロメタン中トリフルオロ酢酸などの酸を用いて）あるいは還元的に（例えばベンジル基の水素化分解や酢酸中亜鉛を用いた２’，２’，２’−トリクロロエトキシシカルボニル基の還元的脱離）脱離させることができる。他の好適なアミン保護基としてはトリフルオロアセチル（−ＣＯＣＦ３）（これは塩基触媒加水分解により脱離できる）や固体相樹脂結合ベンジル基例えばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂結合２，６−ジメトキシシベンジル基（Ｅｌｌｍａｎリンカー）（これは、例えばトリフルオロ酢酸による酸触媒加水分解により脱離できる）が挙げられる。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩が潜在的に有用な抗炎症性および／または抗アレルギー性作用を有し得る疾病状態の例としては、気管支炎（慢性気管支炎も含む）、喘息（アレルゲン誘発喘息反応も含む）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、副鼻腔炎、アレルギー性鼻炎（季節性および通年性）などの気道の病気が挙げられる。その他の疾病状態としては、炎症性腸疾患（例えばクローン病や潰瘍性大腸炎）や放射線曝露またはアレルゲン曝露腸炎症性二次疾患などの腸炎症性疾患のような胃腸管の病気が挙げられる。
【００３２】
さらに、本発明の化合物は、腎炎、乾癬・湿疹・アレルギー性皮膚炎などの皮膚疾患、および過敏反応症の治療で有用となり得る。
【００３３】
本発明の化合物はまた、鼻ポリープ症、結膜炎、あるいは掻痒症の治療で有用となり得る。
【００３４】
さらなる疾患としては、胃腸管の炎症性疾患（例えば炎症性大腸疾患）が挙げられる。
【００３５】
特に興味のある疾患は、アレルギー性鼻炎である。
【００３６】
Ｈ３受容体の拮抗薬および／または逆作動薬である化合物はまた、Ｈ３の活性化が関係している可能性のある他の疾患で有用となり得る。そのような疾患としては、非アレルギー性鼻炎が挙げられる。
【００３７】
当業者なら、本明細書における治療または療法の言及は、予防ならびに既往症状の治療に及ぶことは理解されよう。
【００３８】
上述したように、式（Ｉ）の化合物は治療薬として有用であり得る。つまり、本発明のさらなる態様として、治療で使用するための式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩が提供される。
【００３９】
本発明のもう一つの態様により、上記病気を治療するための医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用が提供される。
【００４０】
さらなる、または別の態様で、治療を必要とするヒトまたは動物被験体での上記病気の治療方法が提供され、該方法は式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物は、治療で用いられる場合、通常適切な組成で製剤化される。そのような組成物は、標準的な方法により調製することができる。
【００４２】
つまり、本発明はさらに、任意付加的な１種以上の医薬的に許容される担体および／または賦形剤と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組成物を提供する。
【００４３】
好適には大気温度および大気圧での混合により調製することができる本発明の組成物は、通常、経口、非経口、または直腸投与用に適合するが、特に経口投与用に適合し、それゆえ、タブレット剤、カプセル剤、経口液体調製剤、粉剤、顆粒剤、ロゼンジ剤、再構成可能粉剤、注射用または輸液用溶液剤または懸濁液剤、または坐剤の形態にあって良い。
【００４４】
経口投与用のタブレット剤およびカプセル剤は単位投薬形態にあって良く、結合剤、増量剤、タブレット用滑剤、崩壊剤、許容されている湿潤剤などの慣用の賦形剤を含んでいて良い。タブレット剤は、正規の製薬プラクティスにおいて良く知られた方法に従ってコートすることができる。
【００４５】
経口液体調製剤は、例えば、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ、あるいはエリキリルの形態にあって良く、また使用前に水または他の適切なビヒクルで再構成される乾燥製品の形態にあっても良い。そのような液体調製剤は、懸濁化剤、乳化剤、非水性ビヒクル（食用油も含まれ得る）、防腐剤ほか、所望なら慣用の矯味矯臭剤や着色剤を含んでいて良い。
【００４６】
非経口投与用には、本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩、および滅菌ビヒクルを用いて液体単位投薬形態が調製される。用いるビヒクルおよび濃度に応じて、化合物をビヒクル中に懸濁させるかまたは溶解させることができる。溶液剤を調製するには、化合物を注入用に溶解させ、そして濾過滅菌したあと適当なバイアルまたはアンプルに充填・密封することができる。有利には、ビヒクルには局所麻酔剤、防腐剤、緩衝剤などの佐剤が溶解される。安定性を増すために、組成物をバイアルに充填したあと凍結させ、同時にその水を真空下で除去することもできる。非経口の懸濁液剤は、化合物がビヒクルに溶解される代わりに懸濁されること、および滅菌が濾過ではできないこと以外は、実質的に同じ方法で調製される。滅菌ビヒクルに懸濁させる前に、化合物はエチレンオキサイドに曝すことで滅菌することもできる。化合物の均一な分布を促進するために、組成物には界面活性剤や湿潤剤を加えておくこともできる。
【００４７】
本組成物は、投与の方法に応じて、活性材料を約０．１％〜９９重量％、例えば約１０〜６０重量％含んでいて良い。上述した病気の治療で用いられる化合物の用量は、障害の深刻度、病人の体重、その他の類似の要因に伴って、通常の様式で変わるものである。しかしながら、一般的な指針としては、適切な単位用量は約０．０５〜１０００ｍｇ、より適切には約１．０〜２００ｍｇであって良く、そのような単位用量は、一日当たり１回よりも多く、例えば一日当たり２回または３回投与して良い。そのような治療は数週間あるいは数ヶ月に及び得る。一つの実施形態では、本発明の化合物および組成物は経口投与に適しており、および／または一日１回投与が可能である。
【００４８】
本発明による化合物および組成物は、例えば抗炎症薬、抗コリン薬（特にＭ１／Ｍ２／Ｍ３受容体拮抗薬）、β２−アドレナリン受容体作動薬、抗感染薬（例えば抗生物質、抗ウイルス剤）、抗ヒスタミン剤などから選択される１種以上の他の治療薬との組み合せで用いても良いしあるいはそれを含んでいても良い。つまり本発明は、さらなる態様で、例えば抗炎症薬（例えば他のコルチコステロイドやＮＳＡＩＤ）、抗コリン薬、β２−アドレナリン受容体作動薬、抗感染薬（例えば抗生物質や抗ウイルス剤）、または抗ヒスタミン剤から選択される１種以上の他の治療的に活性な薬剤と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せを提供する。β２−アドレナリン受容体作動薬、および／または抗コリン薬、および／またはＰＤＥ−４抑制薬と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せは本発明のなおもう一つの態様を形成する。本発明の組み合せは１種または２種の他の治療薬を含んでいても良く、また任意付加的に１種以上の医薬的に許容される担体および／または賦形剤を所望される通りに含んでいても良い。
【００４９】
適切であれば、上記他の治療成分を、塩（例えばアルカリ金属塩やアミン塩としてあるいは酸付加塩として）、またはプロドラッグ、またはエステル（例えば低級アルキルエステル）、または溶媒和物（例えば水和物）の形態で用いてその治療成分の活性および／または安定性および／または物理特性（例えば溶解度）を至適化できることは当業者には明らかであると思われる。また、適切であれば、上記治療成分は、光学的に純粋な形態で用いても良いことは明らかであると思われる。
【００５０】
β２−アドレナリン受容体作動薬の例としては、サルメテロール（例えばラセミ化合物やＲ−エナンチオマーまたはＳ−エナンチオマーのような単体エナンチオマーとして）、サルブタモール（例えばラセミ化合物やＲ−エナンチオマーのような単体エナンチオマーとして）、ホルモテロール（例えばラセミ化合物やＲ−エナンチオマーのような単体エナンチオマーとして）、サルメファモール、フェノテロール、カルモテロール、エタンテロール、ナミンテロール、クレンブテロール、ピルブテロール、フレルブテロール［flerbuterol］、レプロテロール、バムブテロール、インダカテロール、テルブタリン、ならびにこれらの塩例えばサルメテロールのキシナホ酸（１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボキシレート）塩、サルブタモールの硫酸塩または遊離塩基、あるいはホルモテロールのフマル酸塩が挙げられる。約１２時間以上の有効な気管支拡張を与える長時間作用性β２−アドレナリン受容体作動薬と一緒に本発明の化合物を含む組み合せは、特に興味深いものとなり得る。
【００５１】
その他のβ２−アドレナリン受容体作動薬としては、国際公開第０２／０６６４２２号パンフレット、国際公開第０２／０７０４９０号パンフレット、国際公開第０２／０７６９３３号パンフレット、国際公開第０３／０２４４３９号パンフレット、国際公開第０３／０７２５３９号パンフレット、国際公開第０３／０９１２０４号パンフレット、国際公開第０４／０１６５７８号パンフレット、国際公開第２００４／０２２５４７号パンフレット、国際公開第２００４／０３７８０７号パンフレット、国際公開第２００４／０３７７７３号パンフレット、国際公開第２００４／０３７７６８号パンフレット、国際公開第２００４／０３９７６２号パンフレット、国際公開第２００４／０３９７６６号パンフレット、国際公開第０１／４２１９３号パンフレットおよび国際公開第０３／０４２１６０号パンフレットに記載のものが挙げられる。
【００５２】
例示的なβ２−アドレナリン受容体作動薬としては：
３−（４−｛［６−（｛（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）フェニル］エチル｝アミノ）ヘキシル］オキシ｝ブチル）ベンゼンスルホンアミド；
３−（３−｛［７−（｛（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−［４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル）フェニル］エチル｝−アミノ）ヘプチル］オキシ｝プロピル）ベンゼンスルホンアミド；
４−｛（１Ｒ）−２−［（６−｛２−［（２，６−ジクロロベンジル）オキシ］エトキシシ｝ヘキシル）アミノ］−１−ヒドロキシエチル｝−２−（ヒドロキシメチル）フェノール；
４−｛（１Ｒ）−２−［（６−｛４−［３−（シクロペンチルスルホニル）フェニル］ブトキシ｝ヘキシル）アミノ］−１−ヒドロキシエチル｝−２−（ヒドロキシメチル）フェノール；
Ｎ−［２−ヒドロキシｌ−５−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−［［２−４−［［（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル］アミノ］フェニル］エチル］アミノ］エチル］フェニル］ホルムアミド；
Ｎ−２｛２−［４−（３−フェニル−４−メトキシシフェニル）アミノフェニル］エチル｝−２−ヒドロキシ−２−（８−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−キノリノン−５−イル）エチルアミン；および
５−［（Ｒ）−２−（２−｛４−［４−（２−アミノ−２−メチル−プロポキシ）−フェニルアミノ］−フェニル｝−エチルアミノ）−１−ヒドロキシ−エチル］−８−ヒドロキシ−１Ｈ−キノリン−２−オン；
が挙げられる。
【００５３】
抗炎症薬としてはコルチコステロイドが挙げられる。本発明の化合物との組み合せで用いることができるコルチコステロイドは、抗炎症活性を有している経口用、吸入用のコルチコステロイドおよびそのプロドラッグである。例としては、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、フルチカゾンプロピオネート、６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−１７α−［（４−メチル−１，３−チアゾール−５−カルボニル）オキシ］−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−１７α−プロピオニルオキシ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−（２−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イル）エステル、６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−１７β−（２，２，３，３−テトラメチルシクロプロピルカルボニル）オキシ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−シアノメチルエステル、６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−１７β−（１−メチルシクロプロピルカルボニル）オキシ−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、ベクロメタゾンのエステル（例えばその１７−プロピオン酸エステルまたはその１７，２１−ジプロピオン酸エステル）、ブデゾニド、フルニゾリド、モメタゾンのエステル（例えばそのフロ酸エステル）、トリアムシノロンアセトニド、ロフレポニド、シクレソニド（１６α，１７−［［（Ｒ）−シクロヘキシルメチレン］ビス（オキシ）］−１１β，２１−ジヒドロキシ−プレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオン）、ブチキソコルトプロピオネート、ＲＰＲ−１０６５４１、およびＳＴ−１２６が挙げられる。興味を引くと思われるコルチコステロイドとしては、フルチカゾンプロピオネート、６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−１７α−［（４−メチル−１，３−チアゾール−５−カルボニル）オキシ］−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステルおよび６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−１７β−（２，２，３，３−テトラメチルシクロプロピルカルボニル）オキシ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−シアノメチルエステルおよび６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−１７β−（１−メチルシクロプロピルカルボニル）オキシ−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル、特に６α，９α−ジフルオロ−���７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステルが挙げられる。
【００５４】
転写促進よりも転写抑制に対して選択性を有し得る、また組み合せ治療で有用となり得るグルココルチコイド作動性を有する非ステロイド系化合物としては、次の特許：国際公開第０３／０８２８２７号パンフレット、国際公開第０１／１０１４３号パンフレット、国際公開第９８／５４１５９号パンフレット、国際公開第０４／００５２２９号パンフレット、国際公開第０４／００９０１６号パンフレット、国際公開第０４／００９０１７号パンフレット、国際公開第０４／０１８４２９号パンフレット、国際公開第０３／１０４１９５号パンフレット、国際公開第０３／０８２７８７号パンフレット、国際公開第０３／０８２２８０号パンフレット、国際公開第０３／０５９８９９号パンフレット、国際公開第０３／１０１９３２号パンフレット、国際公開第０２／０２５６５号パンフレット、国際公開第０１／１６１２８号パンフレット、国際公開第００／６６５９０号パンフレット、国際公開第０３／０８６２９４号パンフレット、国際公開第０４／０２６２４８号パンフレット、国際公開第０３／０６１６５１号パンフレット、国際公開第０３／０８２７７号パンフレット、に記載のものが挙げられる。
【００５５】
抗炎症薬としては、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられる。ＮＳＡＩＤとしては、ナトリウムクロモグリケート、ネドクロミルナトリウム、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害薬（例えばテオフィリン、ＰＤＥ４阻害薬、あるいは混合ＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害薬）、ロイコトリエン拮抗薬、ロイコトリエン合成の抑制物質（例えばモンテルカスト）、ｉＮＯＳ阻害薬、トリプターゼおよびエラスターゼ阻害薬、ベータ−２インテグリン拮抗薬およびアデノシン受容体作動薬または拮抗薬（例えばアデノシン２ａ作動薬）、サイトカイン拮抗薬（例えばＣＣＲ３拮抗薬のようなケモカイン拮抗薬）またはサイトカイン合成の抑制物質、あるいは５−リポキシゲナーゼ阻害薬が挙げられる。ｉＮＯＳ阻害薬としては、国際公開第９３／１３０５５号パンフレット、国際公開第９８／３０５３７号パンフレット、国際公開第０２／５００２１号パンフレット、国際公開第９５／３４５３４号パンフレットおよび国際公開第９９／６２８７５号パンフレットに開示されているものが挙げられる。ＣＣＲ３阻害薬としては、国際公開第０２／２６７２２号パンフレットに開示されているものが挙げられる。
【００５６】
本発明の組み合せで有用なＰＤＥ４特異的阻害薬としては、ＰＤＥ４酵素を阻害することが知られている、またはＰＤＥ４阻害薬として作用することが発見された任意の化合物、さらにＰＤＥ４と同時にＰＤＥ３やＰＤＥ５などの他のＰＤＥファミリーメンバーを阻害する化合物ではなく、ＰＤＥ４阻害薬のみである任意の化合物を挙げることができる。
【００５７】
ＰＤＥ４阻害薬としては、シス−４−シアノ−４−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸、２−カルボメトキシシ−４−シアノ−４−（３−シクロプロピルメトキシシ−４−ジフルオロメトキシシフェニル）シクロヘキサン−１−オンおよびシス−［４−シアノ−４−（３−シクロプロピルメトキシシ−４−ジフルオロメトキシシフェニル）シクロヘキサン−１−オール］が挙げられる。また、シス−４−シアノ−４−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシシフェニル］シクロヘキサン−１−カルボン酸（シロミラストとも呼ばれる）ならびにその塩、エステル、プロドラッグもしくは物理的形態が、１９９６年９月３日発行の米国特許第５，５５２，４３８号明細書に記載されている。
【００５８】
その他のＰＤＥ４阻害薬としては、Ｅｌｂｉｏｎ社が提供しているＡＷＤ−１２−２８１（Hofgen, N.et al. 15th EFMC Int Symp Med Chem (Sept 6-10, Edinburgh) 1998, Abst P. 98; CAS reference No. 247584020-9）；９−ベンジルアデニン誘導体指定ＮＣＳ−６１３（ＩＮＳＥＲＭ社）；Ｃｈｉｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ社が提供しているＤ−４４１８；ＣＩ−１０１８（ＰＤ−１６８７８７）と識別されＰｆｉｚｅｒ社製であるベンゾアゼピンＰＤＥ４阻害薬；Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ社が国際公開第９９／１６７６６号パンフレットで開示しているベンゾジオキソール誘導体；Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ社が提供しているＫ−３４；Ｎａｐｐ社が提供しているＶ−１１２９４Ａ（Landells, L. J. et al., Eur. Resp. J. [Ann. Cong. Eur. Resp. Soc. (Sept 19-23,Geneva) 1998] 1998, 12 (Suppl. 28): Abst P2393）；Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ社が提供しているロフルミラスト（ＣＡＳ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｎｏ．１６２４０１−３２−３）およびフタラジノン（国際公開第９９／４７５０５号パンフレット）；Ｂｙｋ−Ｇｕｌｄｅｎ社（現在はＡｌｔａｎａ社）により調製・発表された混成ＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害薬であるプマフェントリン［Ｐｕｍａｆｅｎｔｒｉｎｅ］、（−）−ｐ−［（４ａＲ＊，１０ｂＳ＊）−９−エトキシシ−１，２，３，４，４ａ，１０ｂ−ヘキサヒドロ−８−メトキシシ−２−メチルベンゾ［ｃ］［１，６］ナフチリジン−６−イル］−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルベンザミド；Ａｌｍｉｒａｌｌ−Ｐｒｏｄｅｓｆａｒｍａ社が開発中のアロフィリン；Ｖｅｒｎａｌｉｓ社が提供しているＶＭ５５４／ＵＭ５６５；あるいはＴ−４４０（Tanabe Seiyaku; Fuji, K. et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 284(1): 162, 1998）、およびＴ２５８５；が挙げられる。
【００５９】
興味のあるさらなる化合物が、公開された国際特許出願である国際公開第０４／０２４７２８号パンフレット（Ｇｌａｘｏ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ）、ＰＣＴ／ＥＰ２００３／０１４８６７（Ｇｌａｘｏ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ）およびＰＣＴ／ＥＰ２００４／００５４９４（Ｇｌａｘｏ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ）に開示されている。
【００６０】
抗コリン薬は、ムスカリン性受容体で拮抗薬として作用する化合物、特にＭ１またはＭ３受容体の拮抗薬、Ｍ１／Ｍ３またはＭ２／Ｍ３受容体のデュアル拮抗薬、またはＭ１／Ｍ２／Ｍ３受容体のパン拮抗薬［pan-antagonists］である化合物である。吸入による投与用の例示的な化合物としては、イプラトロピウム（例えばその臭化物として、ＣＡＳ２２２５４−２４−６、商品名「Ａｔｒｏｖｅｎｔ」で販売されている）、オキシトロピウム（例えばその臭化物として、ＣＡＳ３０２８６−７５−０）、およびチオトロピウム（例えばその臭化物として、ＣＡＳ１３６３１０−９３−５、商品名「Ｓｐｉｒｉｖａ」で販売されている）が挙げられる。レバトロペート（例えばその臭化水素酸塩として、ＣＡＳ２６２５８６−７９−８）、および国際公開第０１／０４１１８号パンフレットに開示されているＬＡＳ−３４２７３も興味あるところである。経口投与用の例示的な化合物としては、ピレンゼピン（ＣＡＳ２８７９７−６１−７）、ダリフェナシン（ＣＡＳ１３３０９９−０４−４、または商品名「Ｅｎａｂｌｅｘ」で販売されているその臭化水素酸塩についてはＣＡＳ１３３０９９−０７−７）、オキシブチニン（ＣＡＳ５６３３−２０−５、商品名「Ｄｉｔｒｏｐａｎ」で販売されている）、テロジリン（ＣＡＳ１５７９３−４０−５）、トルテロジン（ＣＡＳ１２４９３７−５１−５、またはその酒石酸塩についてはＣＡＳ１２４９３７−５２−６、商品名「Ｄｅｔｒｏｌ」で販売されている）、オチロニウム（例えばその臭化物として、ＣＡＳ２６０９５−５９−０、商品名「Ｓｐａｓｍｏｍｅｎ」で販売されている）、塩化トロスピウム（ＣＡＳ１０４０５−０２−４）、およびソリフェナシン（ＣＡＳ２４２４７８−３７−１、またはＹＭ−９０５とも呼ばれ且つ商品名「Ｖｅｓｉｃａｒｅ」で販売されているそのコハク酸塩についてはＣＡＳ２４２４７８−３８−２）が挙げられる。
【００６１】
その他の抗コリン薬としては、米国特許出願第６０／４８７９８１号明細書に開示されている式（ＸＸＩ）：
【化４】
2008531532.tif 000006
【００６２】
［式中、
トロパン環に結合しているアルキル鎖の配向は、エンドであって良く；
Ｒ３１およびＲ３２は、独立に、例えば１〜６個の炭素原子を有している直鎖または分枝鎖低級アルキル基、５〜６個の炭素原子を有しているシクロアルキル基、６〜１０個の炭素原子を有しているシクロアルキル−アルキル、２−チエニル、２−ピリジル、フェニル、４個以下の炭素原子を有しているアルキル基で置換されたフェニル、および４個以下の炭素原子を有しているアルコキシ基で置換されたフェニルからなる群から選択され；
Ｘ−は、Ｎ原子の正電荷と会合しているアニオンを表し、Ｘ−は、限定するものではないが、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびトルエンスルホン酸塩で有り得る］
で表される化合物が挙げられ、例えば：
（３−エンド）−３−（２，２−ジ−２−チエニルエテニル）−８，８−ジメチル−８−アゾニアビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジフェニルエテニル）−８，８−ジメチル−８−アゾニアビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；
（３−エンド）−３−（２，２−ジフェニルエテニル）−８，８−ジメチル−８−アゾニアビシクロ［３．２．１］オクタン４−メチルベンゼンスルホネート；
（３−エンド）−８，８−ジメチル−３−［２−フェニル−２−（２−チエニル）エテニル］−８−アゾニアビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；および／または
（３−エンド）−８，８−ジメチル−３−［２−フェニル−２−（２−ピリジニル）エテニル］−８−アゾニアビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；
が挙げられる。
【００６３】
さらなる抗コリン薬としては、米国特許出願第６０／５１１００９号明細書に開示されている式（ＸＸＩＩ）または式（ＸＸＩＩＩ）：
【化５】
2008531532.tif 000007
【００６４】
［式中：
矢印で示したＨ原子はエキソ配置にあり；
Ｒ４１は、Ｎ原子の正電荷と会合しているアニオンを表し、Ｒ４１は、限定するものではないが、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびトルエンスルホン酸塩で有り得；
Ｒ４２およびＲ４３は、独立に、（例えば、１〜６個の炭素原子を有している）直鎖または分枝鎖低級アルキル基、（５〜６個の炭素原子を有している）シクロアルキル基、（６〜１０個の炭素原子を有している）シクロアルキル−アルキル、（５〜６個の炭素原子およびヘテロ原子としてのＮまたはＯを有している）ヘテロシクロアルキル、（６〜１０個の炭素原子およびヘテロ原子としてのＮまたはＯを有している）ヘテロシクロアルキル−アルキル、アリール、置換されていても良いアリール、ヘテロアリール、および置換されていても良いヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ４４は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル，（Ｃ３〜Ｃ１２）シクロアルキル，（Ｃ３〜Ｃ７）ヘテロシクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ１２）シクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ７）ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−アリール，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ヘテロアリール、−ＯＲ４５、−ＣＨ２ＯＲ４５、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｏ（ＣＯ）Ｒ４６、−ＣＯ２Ｒ４７、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ４７）ＳＯ２Ｒ４５、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４７）（Ｒ４８）、−ＣＯＮ（Ｒ４７）（Ｒ４８）、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ４８）ＣＯ（Ｒ４６）、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ４８）ＳＯ２（Ｒ４６）、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ４８）ＣＯ２（Ｒ４５）、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ４８）ＣＯＮＨ（Ｒ４７）からなる群から選択され；
Ｒ４５は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ１２）シクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ７）ヘテロシクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−アリール，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ４６は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル，（Ｃ３〜Ｃ１２）シクロアルキル，（Ｃ３〜Ｃ７）ヘテロシクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ１２）シクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ７）ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−アリール，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ４７およびＲ４８は、独立に、Ｈ，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル，（Ｃ３〜Ｃ１２）シクロアルキル，（Ｃ３〜Ｃ７）ヘテロシクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ１２）シクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ７）ヘテロシクロアルキル，（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−アリール、および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−ヘテロアリールからなる群から選択される］
で表される化合物が挙げられ、例えば：
（エンド）−３−（２−メトキシシ−２，２−ジ−チオフェン−２−イル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；
３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピオニトリル；
（エンド）−８−メチル−３−（２，２，２−トリフェニル−エチル）−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン；
３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピオンアミド；
３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピオン酸；
（エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジフェニル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；
（エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジフェニル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；
３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロパン−１−オール；
Ｎ−ベンジル−３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピオンアミド；
（エンド）−３−（２−カルバモイル−２，２−ジフェニル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；
１−ベンジル−３−［３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピル］−尿素；
１−エチル−３−［３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピル］−尿素；
Ｎ−［３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−［３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピル］−ベンズアミド；
３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジ−チオフェン−２−イル−プロピオニトリル；
（エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジ−チオフェン−２−イル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；
Ｎ−［３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピル］−ベンゼンスルホンアミド；
［３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピル］−尿素；
Ｎ−［３−（（エンド）−８−メチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル）−２，２−ジフェニル−プロピル］−メタンスルホンアミド；および／または
（エンド）−３−｛２，２−ジフェニル−３−［（１−フェニル−メタノイル）−アミノ］−プロピル｝−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；
が挙げられる。
【００６５】
本発明の組み合せで有用となり得る特に興味ある化合物としては：
（エンド）−３−（２−メトキシシ−２，２−ジ−チオフェン−２−イル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；
（エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジフェニル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；
（エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジフェニル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；
（エンド）−３−（２−カルバモイル−２，２−ジフェニル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；
（エンド）−３−（２−シアノ−２，２−ジ−チオフェン−２−イル−エチル）−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンヨージド；および／または
（エンド）−３−｛２，２−ジフェニル−３−［（１−フェニル−メタノイル）−アミノ］−プロピル｝−８，８−ジメチル−８−アゾニア−ビシクロ［３．２．１］オクタンブロミド；
が挙げられる。
【００６６】
特に興味あるのは、Ｈ１拮抗薬と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せである。好適なＨ１拮抗薬としては、限定するものではないが、アステミゾール、アザタジン、アゼラスチン、アクリバスチン、ブロムフェニラミン、セチリジン、レボセチリジン、エフレチリジン、クロルフェニラミン、クレマスチン、シクリジン、カレバスチン、シプロヘプタジン、カルビノキサミン、デカルボエトキシルオラタジン、ドキシラミン、ジメチンデン、エバスチン、エピナスチン、エフレチリジン、フェキソフェナジン、ヒドロキシジン、ケトチフェン、ロラタジン、レボカバスチン、ミゾラスチン、メキタジン、ミアセリン、ノベラスチン、メクリジン、ノラステミゾール、ピクマスト、ピリラミン、プロメタジン、テルフェナジン、トリペレンナミン、テメラスチン、トリメプラジン、およびトリプロリジン、特にセチリジン、レボセチリジン、エフレチリジンおよびフェキソフェナジン、が挙げられる。単独で、またはＨ３受容体拮抗薬との組み合せで用いることができるその他のヒスタミン受容体拮抗薬としては、Ｈ４受容体の拮抗薬（および／または逆作動薬）、例えばJablonowski et al J. Med Chem. 46: 3957-3960(2003)に開示されている化合物が挙げられる。
【００６７】
つまり本発明は、さらなる態様で、ＰＤＥ４阻害薬と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せを提供する。
【００６８】
つまり本発明は、さらなる態様で、β２−アドレナリン受容体作動薬と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せを提供する。
【００６９】
つまり本発明は、さらなる態様で、抗コリン薬と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せを提供する。
【００７０】
つまり本発明は、さらなる態様で、Ｈ１受容体拮抗薬と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せを提供する。
【００７１】
つまり本発明は、さらなる態様で、コルチコステロイドと一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せを提供する。
【００７２】
つまり本発明は、さらなる態様で、Ａ２ａ受容体作動薬と一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む組み合せを提供する。
【００７３】
上記した組み合せは、都合良く、組成物の形態で用いられるために提供されても良く、つまり任意付加的な医薬的に許容される希釈剤または担体と一緒に上記で定義した組み合せを含む組成物は本発明のさらなる態様となる。
【００７４】
そのような組み合せの個々の化合物は、別々の組成物かまたは組み合せの組成物で順次的に投与することができるし、または同時的に投与することもできる。好適には、個々の化合物は、組み合せの組成物で同時に投与されるものである。当業者であれば、公知の治療薬の適切な用量は、容易に理解されよう。
【実施例】
【００７５】
本発明の化合物は、以下に説明する方法によってあるいは同じような方法によって調製することができる。つまり以下の詳細例および実施例は本発明の化合物の調製を説明するものであって、本発明の範囲を限定するものとは決してとるべきでない。
【００７６】
一般的実験事項
実施例をとおして、以下の略記号を用いる：
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー／質量分析；
ＲＴ：保持時間；
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ｍｉｎ：分。
【００７７】
ＳＣＸカートリッジはＩｏｎ  Ｅｘｃｈａｎｇｅ  ＳＰＥカラムであり、ここでは静止相は高分子ベンゼンスルホン酸である。これらは、アミンを単離するのに用いられる。
ＳＣＸ２カートリッジはＩｏｎ  Ｅｘｃｈａｎｇｅ  ＳＰＥカラムであり、ここでは静止相は高分子プロピルスルホン酸である。これらは、アミンを単離するのに用いられる。
有機溶液は、硫酸マグネシウムか硫酸ナトリウムで脱水した。
【００７８】
ＬＣＭＳは、水中０．１％ＨＣＯ２Ｈおよび０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（溶媒Ａ）とアセトニトリル中０．０５％ＨＣＯ２Ｈおよび５％水（溶媒Ｂ）で溶離するＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ  ＬＣＡＢＺ＋ＰＬＵＳカラム（３．３ｃｍ×４．６ｍｍ  ＩＤ）で行い、流速３ｍＬ／ｍｉｎで以下の溶離勾配：０．０〜０．７ｍｉｎ  ０％Ｂ；０．７〜４．２ｍｉｎ  １００％Ｂ；４．２〜５．３ｍｉｎ  ０％Ｂ；５．３〜５．５ｍｉｎ  ０％Ｂ；を用いた。質量スペクトルは、エレクトロスプレーポジティブおよびネガティブモード（ＥＳ＋ｖｅおよびＥＳ−ｖｅ）を用いるＦｉｓｏｎｓ  ＶＧ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ分光計で記録した。
【００７９】
説明例１：１，１−ジメチルエチル４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１）
ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（２５７ｇ、１．１８モル）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４００ｍＬ）溶液を５〜１０℃にあるＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８００ｍＬ）中Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）ピペラジン（２００ｇ、１．１２モル）の撹拌懸濁液に滴下で加えた。この混合物を冷浴中でさらに１時間撹拌し、続いて周囲温度まで昇温させ、その後に２日間撹拌した。この混合物を分液漏斗中でヘキサン（１２００ｍＬ）で洗い、そしてそのＤＭＦ相を分離し、真空中で蒸発させた。この残留物をジエチルエーテルで摩砕し、得られた固形物をジエチルエーテルで洗って標題化合物（３０４ｇ）を得た。ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．７６ｍｉｎ、ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２７９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８０】
説明例２：１，１−ジメチルエチル４−｛４−［（１−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ２）
ジ−ｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（２５ｇ、１０８ミリモル）の脱水ジクロロメタン（１５０ｍＬ）溶液を脱水ジクロロメタン（３００ｍＬ）中１，１−ジメチルエチル４−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１）（２５．１６ｇ、９０．４ミリモル）、ベンジル４−ヒドロキシ−１−ピペリジンカルボキシレート（Ａｌｄｒｉｃｈ社）（２５．５６ｇ、１０９ミリモル）、およびトリフェニルホスフィン（２８．４５ｇ、１０８ミリモル）の撹拌混合物にその反応温度を２５℃より下に保つために必要に応じ冷却しながら滴下で加えた。この混合物を続いて周囲温度で一晩、その後さらに２４時間撹拌した。この溶媒を蒸発させ、得られた残留物を、ジクロロメタン・酢酸エチル（９：１）で溶離するシリカカラムで精製して、標題化合物（１７．９ｇ）を得た。ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．７９ｍｉｎ、ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８１】
説明例３：１，１−ジメチルエチル４−［４−（４−ピペリジニルオキシ）フェニル］−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ３）
【化６】
2008531532.tif 000008
【００８２】
１，１−ジメチルエチル４−｛４−［（１−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ２）（５．１ｇ）をエタノール（５０ｍＬ）中炭素担持１０％パラジウムにより大気圧で１時間かけて水素化した。触媒はＣｅｌｉｔｅカートリッジによる濾過により分離し、エタノールで洗った。合わせた炉液および洗浄液を濃縮して標題化合物（２．０２３ｇ）を得た。ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．３０ｍｉｎ、ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８３】
説明例４：１，１−ジメチルエチル４−｛４−［（１−シクロブチル−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ４）
【化７】
2008531532.tif 000009
【００８４】
１，１−ジメチルエチル４−［４−（４−ピペリジニルオキシ）フェニル］−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ３）（２．０２３ｇ、５．６０ミリモル）のジクロロメタン（３０ｍＬ）溶液に酢酸（０．３２ｍＬ、５．６０ミリモル）およびシクロブタノン（０．８３６ｍＬ、１１．２ミリモル）を加えた。得られた溶液を室温で５分間撹拌した。その後この溶液にトリアセトキシボロ水素化ナトリウム（１．７８ｇ、８．４０ミリモル）を加え、これを室温で一晩撹拌した。この反応混合物をこの後ジクロロメタンと水間に分配させた。この有機層をブラインで洗い、濃縮し、そしてメタノールで溶離するＳＣＸ−２カートリッジ（２０ｇ）その後メタノール中２Ｍアンモニア溶液により精製し、そのアンモニア分画を回収して標題化合物（１．１３６ｇ）を得た。ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．４２ｍｉｎ、ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８５】
説明例５：１−｛４−［（１−シクロブチル−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝ピペラジントリヒドロクロリド（Ｄ５）
【化８】
2008531532.tif 000010
【００８６】
１，１−ジメチルエチル４−｛４−［（１−シクロブチル−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ４）（１．１３６ｇ、２．７４ミリモル）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液にジオキサン（１５ｍＬ）中４Ｍ塩化水素溶液を加え、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。この反応混合物をこの後濃縮して標題化合物（１．１５８ｇ）を得た。ＬＣＭＳ  ＲＴ＝０．２１ｍｉｎおよび０．２８ｍｉｎ、ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８７】
実施例１：１−｛４−［（１−シクロブチル−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝−４−｛［４−（メチルスルホニル）フェニル］カルボニル｝ピペラジン
【化９】
2008531532.tif 000011
【００８８】
４−（メチルスルホニル）安息香酸（７８ｍｇ、０．３９ミリモル）とＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（１２５ｍｇ、０．３９ミリモル）の混合物に１−｛４−［（１−シクロブチル−４−ピペリジニル）オキシ］フェニル｝ピペラジントリヒドロクロリド（Ｄ５）（１２５ｍｇ、０．３ミリモル）のジクロロメタン（４ｍＬ）溶液およびトリエチルアミン（０．５４ｍＬ、３．９０ミリモル）を加えた。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。この反応混合物をこの後ジクロロメタンと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液間に分配させた。この有機層を濃縮し、エタノールで溶離するＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ）その後メタノール中２Ｍアンモニア溶液で精製し、そのアンモニア分画を回収して標題化合物（１１８．７ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．１２ｍｉｎ，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４９８（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤ３ＯＤ；４００ＭＨｚ）８．０６（２Ｈ，ｍ），７．６９（２Ｈ，ｍ），６．９５（２Ｈ，ｍ），６．８７（２Ｈ，ｍ），４．３２（１Ｈ，ｂｒ  ｍ），３．９２（２Ｈ，ｂｒ  ｍ），３．５３（２Ｈ，ｂｒ  ｍ），３．１５（５Ｈ，ｓおよびｂｒ  ｍ），３．０２（２Ｈ，ｂｒ  ｍ），２．９０（１Ｈ，ｂｒ  ｍ），２．７０（２Ｈ，ｂｒ  ｍ），２．３２（２Ｈ，ｂｒ  ｍ），２．１５−１．６８（１０Ｈ，ｍ）。
【００８９】
生物学的データ
以下のアッセイもしくは類似のアッセイにより、本発明の化合物をインビトロ生物学的活性について試験することができる。
【００９０】
Ｈ１受容体細胞系発生およびＦＬＩＰＲアッセイプロトコル
１．ヒスタミンＨ１細胞系の発生
文献［Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994, 201(2), 894］に載っている公知の方法によりヒトＨ１受容体をクローニングした。文献［Br. J. Pharmacol. 1996,  117(6), 1071］に載っている公知の方法によりヒトＨ１受容体を安定に発現しているチャイニーズハムスター卵巣細胞を発生させた。
【００９１】
ヒスタミンＨ１官能拮抗薬アッセイ
このヒスタミンＨ１細胞系を、無コート黒壁透明底３８４ウェル組織培養プレート中の、透析子ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社カタログ番号１２４８０−０２１）１０％およびＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社カタログ番号２５０３０−０２４）２ｍＭが補充されたアルファミニマムエッセンシャルミディアム（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号２２５６１−０２１）に接種し、一晩５％ＣＯ２、３７℃に維持しておいた。
【００９２】
各ウェルから過剰培地を除去して１０μＬを残した。各ウェルにローディングダイ（タイロード緩衝液＋プロベネシド（１４５ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ  Ｄ−グルコース、１．２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．５ｍＭ  ＣａＣｌ２、２．５ｍＭプロベネシド；ＮａＯＨ  １．０ＭでｐＨを７．４０に調整）に希釈された２５０μＭ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌａｃｋ、２μＭ  Ｆｌｕｏ−４）３０μＬを加え、プレートを６０分間５％ＣＯ２、３７℃でインキュベートした。
【００９３】
タイロード緩衝液＋プロベネシドに必要とされる濃度に希釈された試験化合物１０μＬ（またはコントロールとしてのタイロード緩衝液＋プロベネシド１０μＬ）を各ウェルに加え、プレートを３０分間３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。この後、Sullivan et al., (In: Lambert DG (ed.), Calcium Signaling Protocols, New Jersey: Humana Press, 1999, 125-136）に記載されている方法で、ヒスタミンの最終アッセイ濃度がＥＣ８０となるような濃度のヒスタミン１０μＬを加える前および後に、プレートをＦＬＩＰＲ（商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社、英国）に入れて細胞蛍光発光（λｅｘ＝４８８ｎｍ、λＥＭ＝５４０ｎｍ）をモニタリングした。
【００９４】
ＦＬＩＰＲ（商標）システム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）によって測定されるヒスタミン誘発蛍光発光増加抑制により官能拮抗は示される。濃度効果曲線から、官能結合性が、標準的な薬理数学解析により決定される。
【００９５】
２．Ｈ３受容体細胞系発生、膜調製、および官能ＧＴＰγＳアッセイプロトコル
ヒスタミンＨ３細胞系の発生
酵素ＢａｍＨ１およびＮｏｔ−１によるプラスミドＤＮＡの制限消化により、ヒスタミンＨ３  ｃＤＮＡ保有ベクターｐＣＤＮＡ３．１  ＴＯＰＯ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ社）からヒスタミンＨ３  ｃＤＮＡを単離し、同じ酵素で消化された誘導発現ベクターｐＧｅｎｅ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ社）にライゲーションした。ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ（商標）システム（インデューサーの不存在下ではトランスジーン発現のスイッチが切れ、インデューサーの存在下ではスイッチが入るシステム）を、米国特許第５，３６４，７９１号明細書；第５，８７４，５３４号明細書；および第５，９３５，９３４号明細書；に記載されているように執行した。ライゲーションＤＮＡを非感染能力のあるＤＨ５α大腸菌宿主細菌細胞に形質転換し、Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（ｐＧｅｎｅおよびｐＳｗｉｔｃｈ上に存在するｓｈ  ｂｌｅ遺伝子を発現している細胞のセレクションを可能にする抗生物質）を５０μｇ／ｍＬで含有しているＬｕｒｉａ  Ｂｒｏｔｈ（ＬＢ）カンテン上で平板培養した。再ライゲーションプラスミド含有コロニーを制限分析により識別した。このｐＧｅｎｅＨ３プラスミド含有宿主細菌の培養液２５０ｍＬから、ＤＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ  Ｍｉｄｉ−Ｐｒｅｐ社）を製造者のガイドライン（Ｑｉａｇｅｎ社）どおりに用いることで、哺乳動物細胞へのトランスフェクション用ＤＮＡを調製し、単離した。
【００９６】
使用の２４時間前に、前もってｐＳｗｉｔｃｈ調節プラスミドがトランスフェクションされたＣＨＯ  Ｋ１細胞（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ社）を、透析ウシ胎児血清１０体積／体積％、Ｌ−グルタミン、およびハイグロマイシン（１００μｇ／ｍＬ）が補充されたＨａｍｓ  Ｆ１２（ＧＩＢＣＯＢＲＬ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）培地を含んでいるＣｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（完全培地）中のＴ７５フラスコ当たり２ｘ１０ｅ６細胞で接種した。リポフェクタミンプラス（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ｐｌｕｓ）を製造者ガイドライン（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ社）に沿って用いることでこの細胞にプラスミドＤＮＡをトランスフェクションした。トランスフェクションの４８時間後に、Ｚｅｏｃｉｎ（商標）５００μｇ／ｍＬが補充された完全培地に細胞を入れた。
【００９７】
セレクションの１０〜１４日後に、１０ｎＭ  Ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ社）をこの培養培地に加えて受容体発現を誘発した。誘発の１８時間後に、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ；１：５０００；ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてフラスコから細胞を取り離し、その後ｐＨ７．４のリン酸緩衝食塩水で数回洗い、そしてフェノールレッド無しの、Ｅａｒｌｅｓ  ｓａｌｔｓおよびＦｏｅｔａｌ  Ｃｌｏｎｅ  ＩＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）３％が補充されたミニマムエッセンシャルミディアム（ＭＥＭ）含有Ｓｏｒｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍに懸濁させた。ヒスタミンＨ３受容体のＮ末端ドメインに対して作製されたウサギポリクローナル抗体４ａで染色することによっておよそ１ｘ１０ｅ７細胞を受容体発現について検査し、氷上で６０分間インキュベートし、その後に仕分け培地（ｓｏｒｔｉｎｇ  ｍｅｄｉｕｍ）中で２回洗った。細胞を６０分間氷上で、Ａｌｅｘａ  ４８８蛍光発光マーカーが接合されたヤギ抗ウサギ抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社）と共にインキュベートすることで受容体結合抗体を検出した。Ｓｏｒｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍでさらに２回洗った後、細胞を５０μｍ  Ｆｉｌｃｏｎ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で濾過し、その後Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  Ｕｎｉｔ（自動細胞沈積装置）が装着されたＦＡＣＳ  Ｖａｎｔａｇｅ  ＳＥ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで分析した。同じような方法で処理した非誘発細胞をコントロール細胞とした。陽染色細胞を、Ｚｅｏｃｉｎ（商標）５００μｇ／ｍＬ含有Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍが入っている９６ウェルプレートに単一細胞として仕分けし、そして増殖させたあと抗体結合およびリガンド結合の詳細な検査・分析による受容体発現についての再分析を行った。クローン１種（３Ｈ３）を膜調製のために選択した。
【００９８】
培養細胞からの膜調製
プロトコルのステップは全て４℃で且つ予冷試薬で行った。細胞ペレットを１０容量のホモジナイズ用緩衝液（５０ｍＭ  Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１ｍＭエチレンジアミンテトラ−酢酸（ＥＤＴＡ）；ＫＯＨによりｐＨ７．４；１０ｅ−６Ｍロイペプチン（アセチル−ロイシル−ロイシル−アルギナル；Ｓｉｇｍａ社のＬ２８８４）、２５μｇ／ｍＬバシトラシン（Ｓｉｇｍａ社のＢ０１２５）、１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）および２ｘ１０ｅ−６ＭペプスタチンＡ（Ｓｉｇｍａ社）が補充されている）に再懸濁させた。細胞をこの後１リットルガラス製Ｗａｒｉｎｇブレンダー中で２×１５秒バーストだけホモジナイズし、そのあと５００ｇで２０分間遠心分離した。これの上澄み液をこの後４８，０００ｇで３０分間遠心機にかけた。得られたペレットをホモジナイズ用緩衝液（元の細胞ペレット容量の４倍量）に５秒間渦流回転することで再懸濁させ、その後Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザー中でホモジナイズした（１０〜１５ストローク）。この時点で、調製物をポリプロピレン試験管にアリコートし、−８０℃で保管した。
【００９９】
ヒスタミンＨ３官能拮抗薬アッセイ
アッセイが行われる各化合物に対して、白一色の３８４ウェルプレートに：
（ａ）必要とされる濃度までＤＭＳＯに希釈されている試験化合物０．５μＬ（またはコントロールとしてのＤＭＳＯ０．５μＬ）；
（ｂ）Ｗｈｅａｔ  Ｇｅｒｍ  Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ  Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ  ＬｅａｄＳｅｅｋｅｒ（登録商標）（ＷＧＡ  ＰＳ  ＬＳ）シンチレーションプロキシミティアッセイ（ＳＰＡ）ビーズと（上述した方法により調製された）膜とを混合し、アッセイ用緩衝液（２０ｍＭ  Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）＋１００ｍＭ  ＮａＣｌ＋１０ｍＭｍｇＣｌ２、ｐＨ７．４ＮａＯＨ）に希釈して最終容量３０μＬ（これはウェル当たり蛋白５μｇおよびビーズ０．２５ｍｇを含んでいる）を得、室温で６０分間ローラー上でインキュベートし、そしてプレートに加える直前に最終濃度１０μＭのグアノシン５’ジホスフェート（ＧＤＰ）（Ｓｉｇｍａ社；アッセイ用緩衝液に希釈）を加えることで調製されたビーズ／膜／ＧＤＰのミックス３０μＬ；
（ｃ）０．３８ｎＭ［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（Ａｍｅｒｓｈａｍ社；放射能濃度＝３７ＭＢｑ／ｍＬ；比放射能＝１１６０Ｃｉ／ミリモル）１５μＬ、ヒスタミン（ヒスタミンの最終アッセイ濃度がＥＣ８０となるような濃度のもの）；
を加えた。
【０１００】
２〜６時間後、プレートを５分間１５００ｒｐｍで遠心分離し、Ｖｉｅｗｌｕｘカウンターで６１３／５５フィルターを用いて５ｍｉｎ／プレートかけてカウントした。データは、４パラメーター論理式を用いて解析した。基底放射能すなわちヒスタミンがウェルに加えられていないものを最小値として用いた。
【０１０１】
ＣＮＳ浸透
化合物をオスＣＤ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに名目投薬濃度１ｍｇ／ｋｇで静脈内的に投薬した。化合物は、５％ＤＭＳＯ／４５％ＰＥＧ２００／５０％水に調合した。血液サンプルは投薬の５分後におけるイソフルランによる終末麻酔の下に採取し、脳も脳浸透評価のために取り出した。血液サンプルは直接ヘパリン化試験管に採取した。血液サンプルは分析用には蛋白沈殿により下準備し、脳サンプルは、ホモジナイズ化およびその後の蛋白沈殿による脳からの薬物の抽出により下準備した。血液、脳抽出物中の親薬物の濃度は、化合物特異的質量転移を用いる定量ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって決定した。
【０１０２】
ラット薬物動態
化合物をオスＣＤ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに名目投薬濃度１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇでそれぞれ１回の静脈内投与または経口投与により投薬した。化合物は、５％ＤＭＳＯ、４５％ＰＥＧ２００、５０％水に調合した。静脈内プロファイルは、投薬の０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、および７時間後において順次または終末血液サンプルを採取することにより得た。経口プロファイルは、投薬の０．２５、０．５、１、２、４、７および１２時間後において順次または終末血液サンプルを採取することにより得た。血液サンプルは直接ヘパリン化試験管に採取した。血液サンプルは蛋白沈殿により下準備し、化合物特異的質量転移を用いるＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる定量分析を行った。薬物濃度−時間プロファイルを作成し、非コンパートメント（区画）ＰＫ解析により半減期、クリアランス、分布容量、および経口バイオアベイラビリティの推算値を算出した。
【０１０３】
イヌ薬物動態
化合物をオスＢｅａｇｌｅ犬に名目投薬濃度１ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇでそれぞれ１回の静脈内投与または経口投与により投薬した。この検査・分析は、二つの投薬実験のうちのどちらにも同じイヌを用い且つ投薬実験を１週間離して行うように設定された交差方式により行った。化合物は、５％ＤＭＳＯ、４５％Ｐｅｇ２００、５０％水に調合した。静脈内プロファイルは、投薬の０．０８３、０．２５、０．５、０．７５、１、２、４、６および１２時間後において順次血液サンプルを採取することにより得た。経口プロファイルは、投薬の０．２５、０．５、０．７５、１、２、４、６、１２および２４時間後において順次血液サンプルを採取することにより得た。血液サンプルは直接ヘパリン化試験管に採取した。血液サンプルは蛋白沈殿により下準備し、化合物特異的質量転移を用いるＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる定量分析を行った。薬物濃度−時間プロファイルを作成し、非コンパートメント（区画）ＰＫ解析により半減期、クリアランス、分布容量、および経口バイオアベイラビリティの推算値を算出した。
【０１０４】
結果
上記の（または同じような）分析／方法で、式（Ｉ）の化合物は、
（ｉ）およそ９．５のＨ３における平均ｐｋｉ（ｐＫｂ）、
（ｉｉ）およそ５．６のＨ１における平均ｐｋｉ（ｐＫｂ）、
（ｉｉｉ）低ＣＮＳ浸透性（１００ｎｇ化合物未満／ｇ脳組織）、
（ｉｖ）約５０％より高いラットでの経口バイオアベイラビリティ［これはイヌで確認された（９０％より高い経口バイオアベイラビリティ）］、
（ｖ）ラットでおよそ２時間（静脈内経路）、イヌでおよそ５時間（静脈内経路）の半減期、ならびにラットで約２９ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ、イヌでは約１０ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇのクリアランス、
を有していた。
【０１０５】
本明細書で言及された引用文献などの全ての刊行物の内容は、その全部が本明細書に組み込まれることとする。
【国際調査報告】
2008531532.tif 000015
2008531532.tif 000016
2008531532.tif 000017