(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−１７Ｆ媒介性の気道の炎症が、ヒト呼吸器上皮細胞の側底面上でＩＬ−１７Ｒを通してのシグナル伝達によって媒介される可能性があるという所見に関連している。そこで、本発明は、単離されて精製されたＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリヌクレオチドおよびポリペプチドを提供する。本発明は、ＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害する、すなわち減少させる、制限する、遮断する、さもなければ低下させることのできる試験化合物をスクリーニングするための新規な方法、およびＩＬ−１７Ｆ生物活性に関連する障害、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症にＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合が及ぼす作用に関連する障害を診断する、予後診断する、および進行を監視するための方法にさらに向けられる。本発明は、ＩＬ−１７Ｆ生物活性に関連する前記障害を介入（治療）および予防するための新規な治療薬および治療標的ならびに方法にさらに向けられる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者におけるＩＬ−１７Ｆに関連する障害を診断する方法であって、
前記被験者からのサンプル中でＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の試験量を検出する工程と、
前記試験量をコントロールサンプル中のＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の正常量と比較する工程とを含み、
これにより、前記正常量を有意に超える試験量がＩＬ−１７Ｆに関連する障害の診断において陽性の指標を提供する、方法。
【請求項２】
ＩＬ−１７Ｆに関連する障害は気道炎症である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験者は、嚢胞性線維症であると診断された患者である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
被験者は、肺症状が悪化している、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
肺症状の悪化は感染因子に起因する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物はＩＬ−１７Ｆタンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質は、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を用いて検出される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を阻害できる化合物についてスクリーニングする方法であって：
ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルを化合物と接触させる工程と、
前記試験化合物と接触させたサンプル中でのＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合が前記化合物と接触していないサンプル中でのＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合に比較して減少しているかどうかを決定する工程とを含み、
これにより前記化合物と接触させたサンプル中でのＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合における減少が前記化合物をＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を阻害する化合物であると同定する、方法。
【請求項９】
ＩＬ−１７Ｆに関連する障害の危険性がある、またはＩＬ−１７Ｆに関連する障害を有すると診断された被験者を治療する方法であって、前記被験者に治療有効量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを投与する工程を含む、方法。
【請求項１０】
ＩＬ−１７Ｆに関連する障害は気道炎症である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
被験者は、嚢胞性線維症であると診断された患者である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
被験者は、肺症状が悪化している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
肺症状の悪化は感染因子に起因する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、可溶性ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７Ｒを含有する融合タンパク質、ＩＬ−１７ＲのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含有する融合タンパク質、拮抗性低分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｆ核酸分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｒ核酸分子、ｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｆ核酸分子、およびｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｒ核酸分子からなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
被験者に治療有効量の少なくとも１つの追加の治療薬を投与する工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つの追加の治療薬は、サイトカイン阻害剤、成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞毒性剤、および細胞分裂阻害剤からなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの追加の治療薬は、ＴＮＦアンタゴニスト、抗ＴＮＦ因子、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、Ｔ細胞枯渇因子、Ｂ細胞枯渇因子、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、ＣＣＩ−７７９、エタネルセプト、インフリキシマブ、リツキシマブ、アダリムマブ、プレドニゾロン、アザチオプリン、金、スルファサラジン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ミノサイクリン、アナキンラ、アバタセプト、メトトレキセート、レフルノミド、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、ｐ３８阻害剤、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳおよび／またはＣＤ２８のアンタゴニスト、ならびにＣＴＬＡ４のアゴニストからなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１９】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、可溶性ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７Ｒを含有する融合タンパク質、ＩＬ−１７ＲのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含有する融合タンパク質、拮抗性低分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｆ核酸分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｒ核酸分子、ｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｆ核酸分子、およびｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｒ核酸分子からなる群より選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストおよび細菌性抗原を含むワクチンアジュバント。
【請求項２１】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、可溶性ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７Ｒを含有する融合タンパク質、ＩＬ−１７ＲのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含有する融合タンパク質、拮抗性低分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｆ核酸分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｒ核酸分子、ｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｆ核酸分子、およびｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｒ核酸分子からなる群より選択される、請求項２０に記載のワクチンアジュバント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、これにより参照して本明細書に全体として組み込まれる２００５年２月１４日に提出された米国仮特許出願第６０／６５３，１８６号に対する優先権を主張する。
【０００２】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、ＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合の作用についての特性解析に関する；詳細には、本発明は、ＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合が、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症に及ぼす作用に関する。
【０００３】
（関連背景技術）
ＩＬ−１７Ａは、顆粒球形成および炎症部位内への好中球の動員の両方を調節する前炎症性サイトカインである(Yao et al. (1995) J. Immunol. 155:5483-86; Ye et al. (2001) J. Exp. Med. 194:519-28;Kolls et al. (2003) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 28:9-11;Laan et al. (1999) J. Immunol. 162:2347-52; Linden et al. (2000) Eur. Respir. J. 15:973-77)。これは、一部には、ＣＸＣケモカインの遊離を誘導する、および重要な顆粒球形成成長因子であるＧ−ＣＳＦの発現を調節するＩＬ−１７Ａの両方の能力に起因する(Laan, supra; Moseley et al. (2003) Cytokine Growth Factor Rev. 14:155-74; Jones and Chan (2002) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 26:748-53; Ye et al. (2001) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25:335-40; Ye et al. (2001) J. Exp. Med. 194:519-28)。ＩＬ−１７Ａに対する受容体、すなわちＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）のホモ接合性欠失を有するマウスは、実験的グラム陰性肺炎に比較して増大した致死性、欠陥のある好中球動員、および減少した顆粒球形成を有する(Ye et al. (2001) J. Exp. Med. 194:519-28)。しかし、それらはリステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）もしくは結核菌（Mycobacteria tuberculosis）によって誘発される細胞内感染に対する増加した感受性を有していない(未公表の観察所見)。宿主防衛におけるこの欠陥はおそらく、一部には、コントロールマウスに比較して、ＩＬ−１７Ｒ欠損性マウスにおけるグラム陰性細菌の惹起投与に応答したＧ−ＣＳＦにおける９０％を超える減少、ならびに感染に対する有意に弱力化した応答に起因するようである(Ye et al. (2001) J. Exp. Med. 194:519-28)。
【０００４】
近年、ＩＬ−１７Ａに加えて、５種の他のタンパク質がＩＬ−１７タンパク質ファミリーのメンバーであると同定されている；ＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７Ａに対する緊密な配列相同性（タンパク質レベルで５８％）、ならびにＣＸＣケモカインの類似の誘導および類似の好中球動員プロファイルを有している(Moseley et al., supra; Li et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:773-78; Starnes et al. (2001) J. Immunol. 167:4137-40; Starnes et al. (2002) J. Immunol. 169:642-46; Hurst et al. (2002) J. Immunol. 169:443-53; Aggarwal and Gurney (2002) J. Leukoc. Biol. 71:1-8; Hymowitz et al. (2001) EMBO J. 20:5332-41)。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、マウス第１染色体およびヒト第６染色体上で相互に直接隣接して存在しており、どちらのサイトカインもＩＬ−２３に応答してＴ細胞によって産生される(Chmiel et al. (2002) Clin. Rev. Allergy Immunol. 23:5-27; Aggarwal et al. (2003) J. Biol. Chem. 278(3):1910-14; Happel et al. (2003) J. Immunol. 170:4432-36; Kolls et al. (2004) Immunity 21 :467-76)。さらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、実験的グラム陰性細菌性肺炎において肺内で類似の時間経過をたどって誘導される（未公表の観察所見）。ＩＬ−１７Ｆは、ＩＬ−１７Ｒに対してＩＬ−１７Ａに比較して１桁低い親和性を有するが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方がＩＬ−１７Ｒを介してシグナル伝達するのではないかという一部の推測があり、これはこれら２種のタンパク質が類似の生物活性を有するためである(Hymowitz et al., supra)。
【０００５】
現在までに、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの間の相互作用は特性解析されていない。結果として、ＩＬ−１７Ｆ媒介性シグナル伝達および気道炎症の直接的相関関係は、確定的には証明されていない。本発明は、この相関関係を提供する。詳細には、本発明によって提供される相関関係は、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症の、ＩＬ−１７Ｆを検出する方法による診断、予後診断、監視および／または治療を可能にする。
【０００６】
（発明の概要）
気道内のＩＬ−１７Ｆ媒介性炎症を阻害する、例えば、減少する、制限する、遮断する、またはさもなければ低下させることのできる試験化合物をスクリーニングする方法が開示される。さらに、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を診断する、予後診断する、監視する、および／または治療する方法であって、ＩＬ−１７Ｆを検出する工程を含む方法が開示される。
【０００７】
本発明者らは、ヒト肺において、ＩＬ−１７Ｒが呼吸器上皮細胞内で発現し、頂端面に比較して側底面上でより大きな発現を示すことを証明している。さらに、呼吸器上皮細胞の側底面上でのＩＬ−１７Ｒの増加した発現は、頂端に供給されたＩＬ−１７Ｆに比較して側底に供給されたＩＬ−１７Ｆによる成長因子（例えば、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＴＮＦ−α、ＧＲＯ−αなど）のより強力な誘導と相関付けられている。これらの誘導された成長因子の中でも、ＧＲＯ−α、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−６、およびＩＬ−８は、試験した全ドナーからのＨＢＥ細胞内での発現の最大誘導を証明した（ｎ＞７）。さらに、本発明者らは、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｒ抗体がサイトカイン／ケモカイン産生のＩＬ−１７Ｆ媒介性誘導を弱めることを証明したが、これはさらにＩＬ−１７ＦがＩＬ−１７Ｒへの結合によってＨＢＥ細胞内でのサイトカイン／ケモカイン産生を誘導する証拠をさらに提供する。本発明者らは、ＩＬ−１７Ｆが、肺症状の悪化にも苦しんでいた嚢胞性線維症を有する患者から入院初日に採取した全試験サンプル中で検出可能であることもまた証明した。さらに、本発明者らは、これらの患者から採取したサンプル中のＩＬ−１７Ｆレベルにおける有意な低下が肺症状の悪化の治療と相関していることも証明した。
【０００８】
したがって、１つの態様では、本発明は、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの間の相互作用を阻害する、例えば、減少させる、限定する、遮断する、またはさもなければ低下させることのできる試験化合物をスクリーニングする方法を提供する。本明細書に開示した方法は、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルを前記化合物と接触させる工程と、およびサンプル内でのＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの間の相互作用が前記化合物と接触させられていないサンプル中でのＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの間の相互作用に比較して減少しているかどうかを決定する工程とを含み、これにより前記化合物と接触させたサンプル内でのＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの間の相互作用における減少が前記化合物をＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの間の相互作用を阻害する化合物であることを同定する。本発明の１つの実施形態では、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの間の相互作用における減少は、サイトカイン発現、ケモカイン発現、および／または成長因子発現のＩＬ−１７Ｆ媒介性誘導における減少として検出される。
【０００９】
また別の態様では、本発明は、被験者においてＩＬ−１７Ｆに関連する障害を診断する、予後診断する、および／または監視する方法であって、前記被験者からのサンプル中のＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の試験量を検出する工程と、前記試験量をコントロールサンプルにおけるＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の正常量と比較する工程とを含み、これにより正常量を有意に超える試験量はＩＬ−１７Ｆに関連する障害の診断において陽性の指標を提供する方法をさらに特徴とする。本発明の１つの実施形態では、本方法は、気道炎症、例えば肺症状の悪化を生じさせる気道炎症、感染因子によって惹起される気道炎症、嚢胞性線維症などを有する患者における気道炎症などを診断する、予後診断する、および／または監視する工程に向けられる。他の実施形態では、本発明の方法は、例えば抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を用いて、ＩＬ−１７Ｆタンパク質を検出する工程を含む。
【００１０】
また別の態様では、本発明は、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症の危険性がある、または気道炎症と診断された被験者を治療する方法を提供する。本明細書に開示した治療する方法は、前記被験者に治療有効量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを投与する工程を含む。
【００１１】
１つの実施形態では、本発明は、被験者におけるＩＬ−１７Ｆに関連する障害を診断する方法であって、前記被験者からのサンプル中でＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の試験量を検出する工程と、前記試験量をコントロールサンプル中のＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の正常量と比較する工程とを含み、これにより、前記正常量を有意に超える試験量がＩＬ−１７Ｆに関連する障害の診断において陽性の指標を提供する方法を提供する。また別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害は気道炎症である。また別の実施形態では、前記被験者は、嚢胞性線維症であると診断された患者である。また別の実施形態では、前記被験者は肺症状が悪化している。さらに別の実施形態では、肺症状の悪化は感染因子に起因する。また別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物はＩＬ−１７Ｆタンパク質である。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆタンパク質は抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を用いて検出される。
【００１２】
また別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を阻害できる化合物についてスクリーニングする方法であって、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルを１つの化合物と接触させる工程と、前記試験化合物と接触させたサンプル中でのＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合が前記化合物と接触していないサンプル中でのＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合に比較して減少しているかどうかを決定する工程とを含み、これにより前記化合物と接触させたサンプル中でのＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合における減少が前記化合物をＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を阻害する化合物であると同定する方法を提供する。
【００１３】
また別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害の危険性がある、またはＩＬ−１７Ｆに関連する障害を有すると診断された被験者を治療する方法であって、前記被験者に治療有効量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを投与する工程を含む方法を提供する。また別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害は気道炎症である。また別の実施形態では、前記被験者は、嚢胞性線維症であると診断された患者である。また別の実施形態では、前記被験者は肺症状が悪化している。さらに別の実施形態では、肺症状の悪化は感染因子に起因する。また別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、可溶性ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７Ｒを含有する融合タンパク質、ＩＬ−１７ＲのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含有する融合タンパク質、拮抗性低分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｆ核酸分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｒ核酸分子、ｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｆ核酸分子、およびｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｒ核酸分子からなる群より選択される。また別の実施形態では、本発明は、前記被験者に治療有効量の少なくとも１つの追加の治療薬を投与する工程をさらに含む。さらに別の実施形態では、前記少なくとも１つの追加の治療薬は、サイトカイン阻害剤、成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞毒性剤、および細胞分裂阻害剤からなる群より選択される。さらにまた別の実施形態では、前記少なくとも１つの追加の治療薬は、ＴＮＦアンタゴニスト、抗ＴＮＦ因子、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、Ｔ細胞枯渇因子、Ｂ細胞枯渇因子、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、ＣＣＩ−７７９、エタネルセプト、インフリキシマブ、リツキシマブ、アダリムマブ、プレドニゾロン、アザチオプリン、金、スルファサラジン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ミノサイクリン、アナキンラ、アバタセプト、メトトレキセート、レフルノミド、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、ｐ３８阻害剤、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳおよび／またはＣＤ２８のアンタゴニスト、ならびにＣＴＬＡ４のアゴニストからなる群より選択される。
【００１４】
また別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。また別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、可溶性ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７Ｒを含有する融合タンパク質、ＩＬ−１７ＲのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含有する融合タンパク質、拮抗性低分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｆ核酸分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｒ核酸分子、ｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｆ核酸分子、およびｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｒ核酸分子からなる群より選択される。
【００１５】
また別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストおよび細菌抗原を含むワクチンアジュバントを提供する。また別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性のＩＬ−１７Ｒ抗体、可溶性ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７Ｒを含有する融合タンパク質、ＩＬ−１７ＲのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含有する融合タンパク質、拮抗性低分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｆ核酸分子、アンチセンスＩＬ−１７Ｒ核酸分子、ｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｆ核酸分子、およびｓｉＲＮＡ ＩＬ−１７Ｒ核酸分子からなる群より選択される。
【００１６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、一部には、以下の所見に基づいている：１）ＩＬ−１７Ｒは、呼吸器上皮細胞の側底面上において最大レベルで発現する、２）ＩＬ−１７Ｆは、呼吸器上皮細胞の側底側に供給された場合は、頂端側に供給された場合に比較して炎症性サイトカイン、ケモカイン、および／または成長因子の発現を刺激することにより強力である、３）サイトカイン、ケモカイン、および／または成長因子のＩＬ−１７Ｆ媒介性誘導は、阻害性の抗ＩＬ−１７Ｒ抗体によって有意に減衰させられる、および４）ＩＬ−１７Ｆ発現レベルは、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症の進行に相関している。これらの所見は、呼吸器系の炎症性障害における、ＩＬ−１７Ｆが果たす役割、およびＩＬ−１７Ｒを通してのその後のシグナル伝達を強力に支持している。
【００１７】
そこで、本発明は、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｒポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにそれらの使用に関する。そのような使用には、その後にＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を阻害する、すなわち減少させる、限定する、遮断する、さもなければ低下させることのできる試験化合物をスクリーニングする方法において使用できる特異的抗体の生成、サンプルもしくは被験者中で発現レベルを監視する方法（例えば、診断する、予後診断する、および／または監視するために）、および例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を治療する方法が含まれるが、それらに限定されない。
【００１８】
ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｒのポリヌクレオチドおよびポリペプチド
ＩＬ−１７Ｆのヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、当分野において公知であり、提供されている。ヒトＩＬ−１７Ｆのヌクレオチド配列は、配列番号１として規定されている。上記のヌクレオチド配列に対応する全長ＩＬ−１７Ｆタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２として規定されている。成熟ＩＬ−１７Ｆのアミノ酸配列は、配列番号２のほぼアミノ酸３１で始まるタンパク質に対応する（例えば、参照して本明細書に全体として組み込まれる米国特許出願第１０／１０２０８０号を参照されたい）。
【００１９】
ＩＬ−１７Ｒのヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、当分野において公知であり、提供されている。ヒトＩＬ−１７Ｒのヌクレオチド配列は、ポリ（Ａ）尾部を含む配列番号３として規定されている。上記のヌクレオチド配列に対応する全長ＩＬ−１７Ｒタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号４として規定されている。
【００２０】
本発明に関連する核酸はＤＮＡもしくはＲＮＡを含んでいてよく、全部もしくは部分的に合成であってよい。本明細書に規定したヌクレオチド配列の言及は、特定された配列を伴うＤＮＡ分子を含んでおり、そしてその状況が他のことを必要としない限り、ＵがＴと置換されている特定された配列を伴うＲＮＡ分子を含む。
【００２１】
本発明に関連する単離されたポリヌクレオチドは、本明細書に開示したポリヌクレオチドをコードする配列と同一もしくは類似の配列を有する核酸を同定して単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用できる。核酸を同定して単離するためのハイブリダイゼーション方法には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、サザンハイブリダイゼーション、インサイチューハイブリダイゼーションおよびノーザンハイブリダイゼーションが含まれ、当業者には周知である。
【００２２】
ハイブリダイゼーション反応は、様々なストリンジェンシーの条件下で実施できる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーには、任意の２つの核酸分子が相互にハイブリダイズするときに伴う困難が含まれる。好ましくは、各ハイブリダイジングするポリヌクレオチドは、減少したストリンジェンシー条件下、より好ましくはストリンジェントな条件下、および最も好ましくは高度にストリンジェントな条件下でその対応するポリヌクレオチドへハイブリダイズする。ストリンジェンシー条件の例は、以下の表１に示されている：高度にストリンジェントな条件は、例えば、条件Ａ〜Ｆと少なくとも同様にストリンジェントである；ストリンジェントな条件は、例えば条件Ｇ〜Ｌと少なくとも同様にストリンジェントである；および減少したストリンジェンシー条件は、例えば、条件Ｍ〜Ｒと少なくとも同様にストリンジェントである。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
本発明に関連する単離されたポリヌクレオチドは、本明細書に開示したポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体をコードする配列を有するＤＮＡを同定して単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用できる。対立遺伝子変異体は、本明細書に開示したポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと同一である、または有意な類似性を有するポリペプチドをコードする本明細書に開示したポリヌクレオチドの天然型代替形である。好ましくは、対立遺伝子変異体は、本明細書に開示したポリヌクレオチドと少なくとも９０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも９５％同一性；最も好ましくは、少なくとも９９％同一性）を有する。または、有意な類似性は、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で本明細書に開示したポリヌクレオチドへハイブリダイズする場合に存在する。
【００２５】
本発明に関連する単離されたポリヌクレオチドは、本明細書に開示したポリヌクレオチドと同種であるポリペプチドをコードする配列を有するＤＮＡを同定して単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとしても使用できる。これらのホモログは、本明細書に開示したポリペプチドおよびポリヌクレオチドの種とは相違する種から単離した、または同一種内に含まれるが、本明細書に開示したポリヌクレオチドおよびポリペプチドとの有意な配列類似性を伴うポリヌクレオチドおよびポリペプチドである。好ましくは、ポリヌクレオチドホモログは、本明細書に開示したポリヌクレオチドと少なくとも５０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも７５％の同一性；最も好ましくは、少なくとも９０％の同一性）を有するが、他方ポリペプチドホモログは、本明細書に開示したポリペプチドと少なくとも３０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも４５％の同一性；最も好ましくは、少なくとも６０％の同一性）を有する。好ましくは、本明細書に開示したポリヌクレオチドおよびポリペプチドのホモログは、哺乳動物種から単離されたホモログである。
【００２６】
２つの配列間の「相同性」もしくは「配列同一性」（これらの用語は、本明細書では互換的に使用される）の計算は、以下の通りに実施される。配列は、最適比較のために整列させられる（例えば、最適アライメントのために第１および第２アミノ酸もしくは核酸配列の一方もしくは両方にギャップを導入することができ、非相同配列は比較目的のためには無視することができる）。好ましい実施形態では、比較のために整列させた参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、いっそうより好ましくは少なくとも６０％、およびさらにいっそうより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に対応するアミノ酸位置もしくはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基もしくはヌクレオチドが比較される。第１配列内の位置が第２配列内の対応する位置と同一アミノ酸残基もしくはヌクレオチドによって占められる場合は、それらの分子はその位置で同一である（本明細書で使用するアミノ酸もしくは核酸「同一性」は、アミノ酸もしくは核酸「相同性」と同等である）。２つの配列間の同一性率（％）は、２つの配列の最適アライメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一位置の数の関数である。
【００２７】
配列の比較および２つの配列間の配列同一性率（％）の決定は、数学的アルゴリズムを用いて遂行できる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性率（％）は、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックスもしくはＰＡＭ２５０マトリックスのどちらか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、もしくは４のギャップ重量および１、２、３、４、５、もしくは６の長さ重量を用いてＧＣＧソフトウエアパッケージ（www.gcg.comから入手できる）のＧＡＰプログラム内に組み込まれている、Needleman and Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48:444-53)アルゴリズムを用いて決定される。さらにまた別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の配列同一性（％）は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスならびに４０、５０、６０、７０、もしくは８０のギャップ重量および１、２、３、４、５、もしくは６の長さ重量を用いて、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手できる）内のＧＡＰプログラムを用いて決定される。特に好ましいパラメータセット（および分子が本発明の配列同一性もしくは相同性限界内にあるかどうかを決定するためにどのパラメータを適用すべきかについて熟練者が不確かである場合に使用すべきパラメータセット）は、１２のギャップペナルティ、４のギャップ伸長ペナルティ、および５のフレームシフトギャップペナルティを備えるＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスである。２つのアミノ酸もしくはヌクレオチド配列間の配列同一性（％）は、さらにまたＰＡＭ１２０重量残基表（weight residue table）、１２のギャップ長ペナルティおよび４のギャップペナルティを用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）内に組み込まれているMeyers and Miller ((1989) CABIOS 4:11-17)のアルゴリズムを用いて決定することができる。
【００２８】
本発明に関連する単離されたポリヌクレオチドは、本発明に関連するポリペプチドを発現する細胞および組織ならびにその下でそれらが発現する条件を同定するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用することもできる。
【００２９】
さらに、細胞もしくは生物内で本発明に関連するポリヌクレオチドに対応する遺伝子の発現を変化させる（すなわち、強化する、減少させる、もしくは修飾する）ための本発明に関連するポリペプチドの機能は、そのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを使用することによって直接的に試験できる。これらの「対応する遺伝子」は、本発明に関連するポリヌクレオチドがそれに由来するｍＲＮＡを生成するために転写される、本発明に関連するゲノムＤＮＡ配列である。
【００３０】
本発明に関連する遺伝子の変化した発現は、細胞もしくは生物内において、様々な阻害性ポリヌクレオチド、例えば本発明に関連する遺伝子から転写されたｍＲＮＡに結合する、および／または開裂させるアンチセンスポリヌクレオチドおよびリボザイムの使用によって達成できる(例えば、Galderisi et al. (1999) J. Cell Physiol. 181:251-57; Sioud (2001) Curr. Mol. Med. 1:575-88を参照されたい)。例えばＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒに対する阻害性ポリヌクレオチドは、例えばＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を阻害するためのアンタゴニストとして使用できる。結果として、そのような阻害性ポリヌクレオチドは、ＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合に関連する障害、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、例えば嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を予防もしくは治療する際に有用な可能性がある。
【００３１】
本発明に関連するアンチセンスポリヌクレオチドもしくはリボザイムは、本発明に関連する遺伝子の全コード鎖に、またはその一部分にのみ相補的である可能性がある。または、アンチセンスポリヌクレオチドもしくはリボザイムは、本発明に関連する遺伝子のコード鎖の非コーディング領域に相補的であってよい。アンチセンスポリヌクレオチドもしくはリボザイムは、当分野において周知の方法を用いて化学合成および酵素的ライゲーション反応を用いて構築することができる。化学合成されたポリヌクレオチドのヌクレオシド連鎖は、ヌクレアーゼ媒介性分解に抵抗する能力を強化するため、ならびにそれらの配列特異性を増加させるために修飾することができる。そのような連鎖の修飾には、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホロアミデート、ボラノホスフェート、モルホリノ、およびペプチド核酸（ＰＮＡ）連鎖が含まれるが、それらに限定されない(Galderisi et al., supra; Heasman (2002) Dev. Biol. 243:209-14; Micklefield (2001) Curr. Med. Chem. 8:1157-79)。または、これらの分子は、その中に本発明に関連するポリヌクレオチドがアンチセンス（すなわち、逆）方向でサブクローニングされている発現ベクターを用いて生物学的に生成することもできる。
【００３２】
本発明の阻害性ポリヌクレオチドには、高度の特異性および親和性で二重鎖ＤＮＡの主要溝（groove）内で結合する三重鎖形成能オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）もまた含まれる(Knauert and Glazer (2001) Hum. Mol. Genet. 10:2243-51)。本発明に関連する遺伝子の発現は、遺伝子の転写を防止する三重ラセン構造を形成するために遺伝子の調節領域（すなわち、プロモータおよび／またはエンハンサ配列）に相補的なＴＦＯをターゲティングすることによって阻害することができる。
【００３３】
本発明の１つの実施形態では、本発明の阻害性ポリヌクレオチドは短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子である。これらのｓｉＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡの配列特異的分解を引き起こす短い（好ましくは１９〜２５ヌクレオチド；最も好ましくは１９もしくは２１ヌクレオチド）、二本鎖ＲＮＡ分子である。この分解は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として公知である(例えば、Bass (2001) Nature 411 :428-29を参照されたい)。最初は下等生物において同定されたが、ＲＮＡｉは、哺乳動物細胞へ効果的に適用されており、近年はＦａｓ ｍＲＮＡを標的としたｓｉＲＮＡ分子を用いて処置されたマウスにおける劇症肝炎を防止することが証明されている(Song et al. (2003) Nature Med. 9:347-51)。さらに、クモ膜下に送達されたｓｉＲＮＡは近年、ラットにおける２種のモデル（アゴニスト誘導性疼痛モデルおよび神経障害性疼痛モデル）での疼痛反応を遮断することが報告されている(Dorn et al. (2004) Nucleic Acids Res. 32(5):e49)。
【００３４】
本発明のｓｉＲＮＡ分子は、２つの相補的な一本鎖ＲＮＡ分子（それらの一方は標的ｍＲＮＡの一部分にマッチする）を一緒にアニーリングすることによって(Fire et al.、米国特許第６，５０６，５５９)、または不可欠な二本鎖部分を生成するためにそれ自体の上で折り畳む一本鎖ヘアピンＲＮＡ分子の使用を通して生成することができる(Yu et al. (2002) Proc. Nail. Acad. Sci. USA 99:6047-52)。ｓｉＲＮＡ分子は、化学合成できる(Elbashir et al. (2001) Nature 411 :494-98)、または一本鎖ＤＮＡテンプレートを用いるインビトロ転写によって生成できる(Yu et al., supra)。または、ｓｉＲＮＡ分子は、一過性(Yu et al., supra; Sui et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:5515-20)または安定性(Paddison et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:1443-48)のいずれかで、センスおよびアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含有する発現ベクターを用いて生物学的に生成することができる。近年、一次ヒト細胞中での、効果的かつ配列特異的方法での標的ｍＲＮＡのレベルの減少が、さらにその後にｓｉＲＮＡ中に処理されるヘアピンＲＮＡを発現するアデノウイルスベクターを用いて証明された(Arts et al. (2003) Genome Res. 13:2325-32)。
【００３５】
本発明に関連するポリヌクレオチドを標的とするｓｉＲＮＡ分子は、当分野において周知の基準に基づいて設計できる(例えば、Elbashir et al. (2001) EMBO J. 20:6877-88)。例えば、標的ｍＲＮＡの標的セグメントは、好ましくはＡＡ（最も好ましい）、ＴＡ、ＧＡ、もしくはＣＡで始まるべきである；ｓｉＲＮＡ分子のＧＣ比は、好ましくは４５〜５５％であるべきである；ｓｉＲＮＡ分子は、好ましくは列内に３つの同一ヌクレオチドを含有していてはならない；ｓｉＲＮＡ分子は、好ましくは列内に７つの混合したＧ／Ｃを含有していてはならない；および標的セグメントは、好ましくは標的ｍＲＮＡのＯＲＦ領域内にあってよく、好ましくは、開始ＡＴＧの少なくとも７５ｂｐ後および終止コドンの少なくとも７５ｂｐ前に存在すべきである。これらの基準、または他の公知の基準(例えば、Reynolds et al. (2004) Nature Biotechnol. 22:326-30)に基づくと、本発明に関連するｍＲＮＡポリヌクレオチドを標的とする本発明に関連するｓｉＲＮＡ分子は、当業者であれば設計することができる。
【００３６】
生物内での本発明に関連する遺伝子の変化した発現は、本発明に関連するポリヌクレオチドがそのゲノム内に導入されている非ヒトトランスジェニック動物の作製を通して達成することもできる。そのようなトランスジェニック動物には、本発明の遺伝子（すなわち、導入遺伝子）の複数コピーを有する動物が含まれる。組織特異的調節配列は、本発明に関連するポリペプチドの発現を特定細胞もしくは特定発達段階へ指示するために導入遺伝子へ機能的に連結させることができる。胚操作およびマイクロインジェクションによるトランスジェニック動物、特別には例えばマウスなどの動物を作製する方法は、慣習的になっており、当分野において周知である(例えば、Bockamp et al., Physiol. Genomics, 11:115-32 (2002))。
【００３７】
生物内での本発明に関連する遺伝子の変化した発現は、本発明に関連するポリヌクレオチドに対応するその内因性遺伝子が外来ポリヌクレオチド配列の挿入を通して破断されている動物（すなわち、ノックアウト動物）の作製を通して達成することもできる。内因性遺伝子のコーディング領域は、破断させることができ、それにより非機能的タンパク質が生成される。または、内因性遺伝子の上流調節領域は、相違する調節エレメントを用いて破断もしくは置換することができ、その結果として依然として機能的であるタンパク質の変化した発現が生じる。ノックアウト動物を作製する方法には、同種組換えが含まれ、当分野において周知である(例えば、Wolfer et al., Trends Neurosci., 25:336-40 (2002))。
【００３８】
本発明の単離されたポリヌクレオチドは、本発明に関連するポリヌクレオチド（その活性フラグメントおよび／または融合ポリペプチドを含む）の組換え生成のために、発現制御配列へ機能的に連結させる、および／または発現ベクター内にライゲートさせることもできる。組換えタンパク質を発現させる一般的方法は、当分野において周知である。
【００３９】
本明細書で使用する発現ベクターは、それに連結しているまた別の核酸を輸送できる核酸分子を意味することが意図されている。１つのタイプのベクターは、追加のＤＮＡセグメントをその中にライゲートできる環状二本鎖ＤＮＡループを意味するプラスミドである。また別のタイプのベクターはウイルスベクターであるが、このとき追加のＤＮＡセグメントはウイルスゲノム内にライゲートさせることができる。特定のベクターは、それらがその中に導入される宿主細胞内で自律複製することができる（例えば、細菌性複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。その他のベクター（例、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内へ導入されると宿主細胞のゲノム内に統合することができ、それらによって宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、特定のベクターは、それらがそれに機能的に連結させられる遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では組換え発現ベクター（または単純に、発現ベクター）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用である発現ベクターは、しばしばプラスミドの形状にある。本明細書では、プラスミドおよびベクターは、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形状であるために互換的に使用できる。しかし、本発明は、発現ベクターの他の形状、例えば同等の機能を果たすウイルスベクター（例、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）を含むことが意図されている。
【００４０】
１つの実施形態では、本発明に関連するポリヌクレオチドは、組換えＩＬ−１７Ｆアゴニスト、例えば少なくとも１つの「ＩＬ−１７Ｆ受容体結合モチーフ」の存在に基づいて同定できるアゴニストを作製するために使用される。本明細書で使用する用語「ＩＬ−１７Ｆ受容体結合モチーフ」には、ＩＬ−１７Ｆをその必要な受容体へ結合させるために重要であるアミノ酸配列もしくは残基が含まれる。ＩＬ−１７Ｆアゴニストの例には、組換えＩＬ−１７Ｆ、および／またはそのフラグメント、例えばそのＩＬ−１７Ｒ結合フラグメントが含まれる。また別の実施形態では、本発明に関連するポリヌクレオチドは、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメント（例、ＩＬ−１７Ｆ結合フラグメント）および／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）を作製するために使用される。
【００４１】
融合ポリペプチド、すなわち第２ポリペプチド部分と連結した第１ポリペプチド部分を作製する方法は、当分野において周知である。例えば、ＩＬ−１７ＦポリペプチドもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチドは、そのフラグメントを含めて、第２ポリペプチド部分、例えば免疫グロブリンもしくはそのフラグメント（例、そのＦｃ結合フラグメント）へ融合させることができる。一部の実施形態では、第１ポリペプチド部分は、例えば、全長ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチドを含む。または、第１ポリペプチドは、全長未満のＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチドを含んでいてよい。さらに、例えばＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒの可溶形は、「リンカー」配列を通して免疫グロブリンのＦｃ部分へ融合させることができる。その他の融合タンパク質、例えばグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、Ｌｅｘ−Ａ、チオレドキシン（ＴＲＸ）もしくはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）もまた使用できる。
【００４２】
第２ポリペプチド部分は、好ましくは可溶性である。一部の実施形態では、第２ポリペプチド部分は、連結したポリペプチドの半減期（例、血清中半減期）を増強する。一部の実施形態では、第２ポリペプチド部分は、融合ポリペプチドと第２ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチドとの結合を促進する配列を含んでいる。好ましい実施形態では、第２ポリペプチドは、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも１つの領域を含む。免疫グロブリン融合ポリペプチドは当分野において公知であり、これによりそれらは全体が参照して本明細書に組み込まれる米国特許第５，５１６，９６４号；第５，２２５，５３８号；第５，４２８，１３０号；第５，５１４，５８２号；第５，７１４，１４７号；および第５，４５５，１６５号に記載されている。融合タンパク質は、追加して、第１ポリペプチド部分、例えば、ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒをそのフラグメントを含めて第２部分に結合させるリンカー配列を含む。そのようなリンカー配列の使用は、当分野において周知である。例えば、融合タンパク質は、ペプチドリンカー、例えば、アミノ酸長で約２〜２０、より好ましくは１０未満のペプチドリンカーを含むことができる。１つの実施形態では、ペプチドリンカーは長さが２アミノ酸であってよい。
【００４３】
また別の実施形態では、組換えタンパク質は、そのＮ末端で異種シグナル配列（すなわち、ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒ核酸によってコードされるポリペプチド内に存在しないポリペプチド配列）を含む。例えば、また別のタンパク質からのシグナル配列はＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチドと、そのフラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含めて融合させることができる。所定の宿主細胞（例、哺乳動物宿主細胞）内では、組換えタンパク質の発現および／または分泌は異種シグナル配列の使用によって増加させることができる。融合タンパク質内に含めることのできるシグナルペプチドは、メリチンシグナルペプチドＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡ（配列番号５）である。
【００４４】
本発明の融合タンパク質は、標準組換えＤＮＡ技術によって生成できる。例えば、相違するポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントは、従来型技術によって、例えばライゲーションのための平滑末端もしくは付着末端(stagger-ended termini)、適切な末端を提供するための制限酵素消化、適切に付着端の充填、望ましくない結合を回避するためのアルカリホスファターゼ処置、および酵素的ライゲーションを使用することによってフレーム内に一緒にライゲートされる。また別の実施形態では、融合遺伝子は自動ＤＮＡ合成装置を含む従来型技術によって合成できる。または、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、２つの連続遺伝子フラグメント間で相補的突出部を生じさせるアンカープライマーを用いて実施することができ、引き続いてキメラ遺伝子配列を生成するためにアニーリングして再増幅させることができる(例えば、Ausubel et al. (Eds.) CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, 1992を参照)。さらに、融合部分（例、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする多数の発現ベクターを市販で入手できる。ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒをコードする核酸は、その融合部分が免疫グロブリンタンパク質へフレーム内で連結されるようにそのような発現ベクター内にクローニングすることができる。一部の実施形態では、ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒ融合ポリペプチドは、オリゴマー、例えば二量体もしくは三量体として存在する。
【００４５】
本発明の組換え発現ベクターは、追加の配列、例えば宿主細胞内でベクターの複製を調節する配列（例、複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子を運ぶことができる。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターがその中に導入されている宿主細胞の選択を促進する。例えば、典型的には、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターがその中に導入されている宿主細胞上で、薬物、例えばＧ４１８、ヒグロマイシンもしくはメトトレキセートに対する耐性を与える。好ましい選択可能なマーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅を用いてｄｈｆｒ−宿主細胞中で使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。
【００４６】
適切な調節配列、例えばプロモータ配列、ターミネータ配列、ポリアデニル化配列、エンハンサ配列、マーカー遺伝子、ならびにその他の配列、例えば適切に宿主細胞中でベクターの複製を調節する配列（例、複製起点）を含有する適切なベクターを選択または構築することができる。ベクターは、プラスミドもしくはウイルス性、例えば、適切にファージもしくはファージミドであってよい。さらなる詳細については、例えば、Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 2nd ed., Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989を参照されたい。例えば、核酸構築物の調製、突然変異生成、シーケンシング、細胞内へのＤＮＡの導入および遺伝子発現、ならびにタンパク質の分析における核酸を操作するための多数の公知の技術およびプロトコールは、Current Protocols in Molecular Biology, 2nd ed., Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons, 1992の中に詳細に記載されている。
【００４７】
そこで、本発明のまた別の態様は、本明細書に開示した核酸を含む宿主細胞を提供する。さらにまた別の態様は、そのような核酸を宿主細胞中に導入する工程を含む方法を提供する。導入は、任意の利用可能な技術を使用できる。真核細胞については、適切な技術は、カルシウムホスフェート形質移入、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介性形質移入、およびレトロウイルスもしくはその他のウイルス、例えばワクシニアウイルス、もしくは昆虫細胞についてはバキュロウイルスを用いる形質導入を含むことができる。細菌細胞については、適切な技術は、カルシウムクロライド形質転換、エレクトロポレーションおよびバクテリオファージを用いる形質移入を含むことができる。導入の後には、核酸からの発現を引き起こす、もしくは可能にする工程、例えばその遺伝子を発現させるための条件下で宿主細胞を培養する工程を行なうことができる。
【００４８】
多数の細胞系は、本発明に関連するポリペプチドの組換え発現のための適切な宿主細胞として機能することができる。哺乳動物宿主細胞系には、例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、Ａ４３１細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｌ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｕ９３７細胞、ＨａＫ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、ならびに一次組織および一次外植片のインビトロ培養に由来する細胞株が含まれる。
【００４９】
または、下等真核生物、例えば酵母内、または原核生物内で本発明に関連するポリペプチドを組換え生成することも可能なはずである。潜在的に適合する酵母株には、サッカロミセス・セレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、クリュベロミセス（Kluyveromyces）株、およびカンジダ（Candida）株が含まれる。潜在的に適合する細菌株には、大腸菌（Escherichia coli）、枯草菌（Bacillus subtilis）、およびサルモネラ・ティフィリウム（Salmonella typhimurium）が含まれる。本発明に関連するポリペプチドが酵母もしくは細菌内で作製される場合は、機能性を得るために、例えば、適切な部位のリン酸化またはグリコシル化によってそれらを修飾することが必要な場合がある。そのような共有結合は、周知の化学的もしくは酵素的方法を用いて遂行できる。
【００５０】
細菌内での発現は、組換えタンパク質を組み込んでいる封入体の形成を生じさせることがある。そこで、活性もしくはより活性な物質を生成するために、組換えタンパク質のリフォールディングが必要になることがある。細菌性封入体から正確に折り畳まれた異種タンパク質を入手するための数種の方法は、当分野において公知である。これらの方法は、一般に、それらの封入体からタンパク質を可溶化させる工程と、次にカオトロピック剤を用いてそのタンパク質を完全に変性させる工程とを含む。タンパク質の一次アミノ酸配列内にシステイン残基が存在する場合は、ジスルフィド結合（レドックス系）の正確な形成を可能にする環境においてリフォールディングを遂行することがしばしば必要になる。リフォールディングの一般的方法は、Kohno (1990) Meth. Enzymol. 185:187-95に開示されている。欧州特許第０４３３２２５号、および米国特許第５，３９９，６７７号は、他の適切な方法を記載している。
【００５１】
本発明に関連するポリペプチドは、１つまたは複数の昆虫発現ベクター、例えばバキュロウイルス内で本発明の単離されたポリヌクレオチドを適切なコントロール配列へ機能的に連結させる工程、および昆虫細胞発現系を使用する工程によって組換え生成することもできる。バキュロウイルス／Ｓｆ９発現系のための材料および方法は、市販のキット形（例、ＭａｘＢａｃ（登録商標）キット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カリフォルニア州カールスバッド）で入手できる。
【００５２】
適切な宿主細胞中での組換え発現に続いて、本発明の組換えポリペプチドは、公知の精製プロセス、例えばゲル濾過およびイオン交換クロマトグラフィを用いて培養培地もしくは細胞抽出物から精製することができる。例えば、ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒタンパク質（そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む）は、馴化培地から精製できる。例えば、ＩＬ−１７Ｒの膜結合形は、発現細胞から全膜分画を調製する工程と、非イオン性洗剤、例えばＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を用いて膜を抽出する工程とによって精製できる。本発明に関連するポリペプチドは、市販で入手できるタンパク質濃縮フィルタ、例えばＡｍｉｃｏｎもしくはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置を用いて濃縮できる。濃縮工程後、濃縮物を精製マトリックス、例えばゲル濾過媒体へ適用できる。または、アニオン交換樹脂、例えばペンダント基であるジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）もしくはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックスもしくは基質を使用できる。これらのマトリックスは、タンパク質精製において一般に使用されるアクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロースもしくは他のタイプであってよい。または、カチオン交換工程を使用できる。適切なカチオン交換体には、スルホプロピルもしくはカルボキシメチル基を含む様々な不溶性マトリックスが含まれる。スルホプロピル基が好ましい（例、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）。培養上清からの組換えタンパク質の精製は、さらにまたコンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）（Ｔｏｙｏ Ｓｏｄａ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ社、日本国)もしくはＣｉｂａｃｒｏｍ ｂｌｕｅ ３ＧＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）などの親和性樹脂への１つまたは複数のカラム工程；または樹脂、例えばフェニルエーテル、ブチルエーテル、もしくはプロピルエーテルを用いる疎水性相互作用クロマトグラフィによる工程；またはイムノアフィニティクロマトグラフィによる工程を含むことができる。最後に、疎水性逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）媒体、例えばペンダントメチルもしくは他の脂肪族基を有するシリカゲルを用いる１つまたは複数のＲＰ−ＨＰＬＣ工程を使用すると、組換えタンパク質をさらに精製することができる。組換えタンパク質に対する抗体（例えば、本明細書に記載した方法を用いて記載された抗体）を含むアフィニティカラムもまた、公知の方法によって精製する際に使用できる。上記の精製工程の一部もしくは全部は、様々な組み合わせで、または他の公知の方法とともに、実質的に精製されて単離された組換えタンパク質を提供するために使用することもできる。好ましくは、単離された組換えタンパク質は、それが実質的に他の哺乳動物タンパク質を含んでいないように精製される。さらに、これらの精製プロセスは、本発明のポリペプチドを、天然起源を含む他の起源から精製するためにも使用できる。例えば、本発明に関連するポリペプチド、例えばＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチド（そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む）は、トランスジェニック動物の生成物として、例えばトランスジェニッ���ウシ、ヤギ、ブタ、もしくはヒツジの乳汁の構成成分として発現させられ、上述したように精製することができる。
【００５３】
または、これらのポリペプチドは、精製を促進する形状で組換え発現させることもできる。例えば、本ポリペプチドは、タンパク質、例えばマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、もしくはチオレドキシン（ＴＲＸ）との融合体として発現させることができる。そのような融合タンパク質を発現および精製するためのキットは、各々Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ社（マサチューセッツ州ベバリー）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社（ニュージャージー州ピスカタウェイ）、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から市販で入手できる。組換えタンパク質は、小エピトープを用いてタグ付けし、引き続いてそのエピトープに対する特異的抗体を用いて同定もしくは精製することもできる。好ましいエピトープは、ＦＬＡＧエピトープであり、Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ社（コネチカット州ニューヘブン）から市販で入手できる。
【００５４】
本発明に関連するポリペプチドは、公知の従来型化学合成によって生成することもできる。そのようなポリペプチドを化学的に合成するための方法は、当業者には周知である。そのような化学合成ポリペプチドは、天然の精製されたポリペプチドと共通する生物学的特性を有することができ、したがって天然ポリペプチドに対する生物活性もしくは免疫学的置換体として使用できる。
【００５５】
本発明に関連するポリペプチドは、本明細書に開示したポリペプチドとは構造的に相違する（例えば、わずかに変化した配列を有する）が、本明細書に開示したポリペプチドと実質的に同一の生化学的特性を有する（例えば、機能的に非必須アミノ酸残基においてのみ荷電している）分子も含むことができる。そのような分子には、変化、置換、交換、挿入、もしくは欠失を含有する天然型対立遺伝子変異体および故意に人工的に作り出された変異体が含まれる。そのような変化、置換、交換、挿入、もしくは欠失のための技術は、当業者には周知である。一部の実施形態では、ポリペプチド成分は、タンパク質分解に対して（非突然変異配列に比較して）より耐性である配列を生じさせる天然型配列（野生型）における突然変異を有する変異体ポリペプチドとして提供される。
【００５６】
ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチド、およびそのフラグメントおよび／または融合ポリペプチドは、ＩＬ−１７Ｆに結合できる、および／またはＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害できる物質、すなわち拮抗物質をスクリーニングするために使用できる。そのようなアンタゴニスト、例えば阻害性ポリヌクレオチド、ポリペプチド（そのフラグメントおよび融合タンパク質を含む）、抗体、小化合物などは、例えばＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を阻害することによってＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害できる。固定化された、もしくは固定化されていない所望の結合タンパク質を利用する結合アッセイは当分野において周知であり、この目的にＩＬ−１７Ｒを含む本発明に関連するポリペプチドと一緒に使用できる。精製された細胞をベースにする、またはタンパク質をベースにする（細胞無含有）スクリーニングアッセイは、そのような物質を同定するために使用できる。例えば、ＩＬ−１７Ｆタンパク質は、精製された形状で担体上に固定化することができ、潜在的リガンドの精製されたＩＬ−１７Ｆへの結合を測定できる。
【００５７】
抗体
本発明者らは、肺症状の悪化にも苦しんでいた嚢胞性線維症を有する患者から採取した喀痰サンプル中でＩＬ−１７Ｆを検出するために、ＩＬ−１７Ｆへ特異的に結合する抗ＩＬ−１７Ｆ抗体（すなわち、完全抗体およびその抗原結合フラグメント）を使用した。さらに、本発明者らは、炎症性サイトカイン（例、ＧＲＯ−αおよびＧ−ＣＳＦ）のＩＬ−１７Ｆ媒介性産生に拮抗するためにＩＬ−１７Ｒに対して特異的なモノクローナル抗体を使用した。そこで、本発明の１つの実施形態では、拮抗性抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体は、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、例えば嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を診断する、予後診断する、監視する、および／または治療する際に有用な可能性がある。これらの抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ、またはインビトロ生成抗体であってよい。
【００５８】
当業者は、本明細書で使用する用語「抗体」は、少なくとも１つ、および好ましくは２つの、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略する）、および少なくとも１つおよび好ましくは２つの軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略する）を含むタンパク質を意味する。ＶＨおよびＶＬ領域は、さらに、より保存された用語「フレームワーク領域」（ＦＲ）である領域が組み入れられている「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と称する超可変領域に分割することができる。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は、正確に規定されている(Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; and Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-17、これにより参照して組み込まれる)。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成されており、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へ配列されている：ＦＲｌ、ＣＤＲｌ、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００５９】
本抗体は、それにより重鎖および軽鎖免疫グロブリン各々を形成するために重鎖および軽鎖定常領域をさらに含んでいてよい。１つの実施形態では、本抗体は、２本の重鎖免疫グロブリンおよび２本の軽鎖免疫グロブリンの四量体であるが、このとき重鎖および軽鎖免疫グロブリンは、例えばジスルフィド結合によって相互結合されている。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有している。これらの抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の様々な細胞（例、エフェクタ細胞）および古典的補体系の第１構成成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織もしくは因子への抗体の結合を媒介する。
【００６０】
免疫グロブリンは、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる１つまたは複数のポリペプチドからなるタンパク質を意味する。認識されたヒト免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、εおよびμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄ、もしくは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端では可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）およびＣＯＯＨ末端ではκもしくはλ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄ、もしくは４４６アミノ酸）は、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および他の上記の定常領域の１つ、例えばγ（約３３０アミノ酸をコードする）によって同様にコードされる。免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子は、抗体クラス、すなわちアイソタイプ（例、ＩｇＭもしくはＩｇＧ１）をコードする。本明細書で使用する抗体の抗原結合フラグメント（または単純に「抗体部分」、もしくは「フラグメント」）は、抗原（例、ＣＤ３）へ特異的に結合する能力を維持している全長抗体の１つまたは複数のフラグメントを意味する。抗体の用語「抗原結合フラグメント」に含まれる結合フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の１本のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント(Ward et al. (1989) Nature 341:544-46)；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは個別遺伝子によってコードされるが、それらは組み換え方法を用いて、その中でＶＬおよびＶＨ領域対が一価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えばBird et al. (1988) Science 242:423-26; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-83を参照）を形成する単一タンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって結合できる。そのような一本鎖抗体も、抗体の用語「抗原結合フラグメント」の中に含まれることが意図されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来型技術を用いて入手され、これらのフラグメントは完全抗体と同一方法で有用性についてスクリーニングされる。
【００６１】
本発明のポリペプチドに対する抗体分子、例えばＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒに対する抗体は、当業者には周知の方法によって生成できる。例えば、モノクローナル抗体は、公知の方法によるハイブリドーマの生成によって生成できる。この方法で生成されたハイブリドーマは、次に標準方法、例えば酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、本発明のポリペプチドと特異的に結合する抗体を生成する１つまたは複数のハイブリドーマを同定するためにスクリーニングされる。例えば、本発明のＩＬ−１７Ｆタンパク質は、ＩＬ−１７Ｆタンパク質と反応するポリクローナルおよびモノクローナル抗体を入手するために動物を免疫するために使用できる。同様に、ＩＬ−１７Ｒタンパク質は、ＩＬ−１７Ｒと特異的に反応するポリクローナルおよびモノクローナル抗体を入手するために使用できる。ペプチド免疫原は、追加してカルボキシル末端でシステイン残基を含有していてよく、そしてハプテン、例えばスカシガイヘモシアニン（ＫＬＨ）へコンジュゲートすることができる。追加のペプチド免疫原は、チロシン残基を硫酸化チロシン残基と交換することによって生成できる。そのようなペプチドを合成するための方法は、当分野において、例えばMerrifield (1963) J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54; Krstenansky et al. (1987) FEBS Lett. 211:10におけるように周知である。本発明の全長ポリペプチドは、免疫原として使用できる、またはポリペプチドの抗原性ペプチドフラグメントを使用できる。本発明のポリペプチドの抗原性ペプチドは、少なくとも７つの連続アミノ酸残基を含んでおり、ペプチドに対して立てられた抗体がそのポリペプチドとの特異的免疫複合体を形成するようにエピトープを含む。好ましくは、抗原性ペプチドは、少なくとも１０アミノ酸残基、より好ましくは少なくとも１５アミノ酸残基、いっそうより好ましくは少なくとも２０アミノ酸残基、および最も好ましくは少なくとも３０アミノ酸残基を含む。
【００６２】
モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡテクノロジーの当業者に公知の他の方法によって生成できる。モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを調製する代替法として、本発明のポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、それによって本発明に関連するポリペプチドに結合する免疫グロブリンライブラリメンバーを単離するために、本発明に関連するポリペプチド（例、ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒ）を用いて組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリ（例、抗体ファージ提示ライブラリ）をスクリーニングすることによって同定して単離することができる。ファージ提示ライブラリを生成してスクリーニングするための技術および市販で入手できるキットは、当業者には周知である。さらに、抗体提示ライブラリを生成およびスクリーニングする際に使用するために特に適する方法および試薬の例は、文献の中に見いだすことができる。例えば、「コンビナトリアル抗体提示」法は周知であり、特定の抗原特異性を有する抗体フラグメントを同定して単離するために開発され、そしてモノクローナル抗体を生成するために利用できる(コンビナトリアル抗体提示の説明については、例えば、Sastry et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5728; Huse et al. (1989) Science 246:1275; Orlandi et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:3833を参照されたい)。上述したような免疫原を用いて動物を免疫した後、結果として生じたＢ細胞プールの抗体レパートリーはクローニングされる。オリゴマープライマーの混合物およびＰＣＲを用いて免疫グロブリン分子の様々な集団の可変領域のＤＮＡ配列を入手するための方法は、一般に公知である。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合したオリゴヌクレオチドプライマー、ならびに保存された３’定常領域に対するプライマーは、多数のマウス抗体からの重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅のために使用できる(Larrick et al. (1991) Biotechniques 11:152-56)。類似の戦略は、ヒト抗体からヒト重鎖および軽鎖可変領域を増幅させるためにも使用できる(Larrick et al. (1991) Methods: Companion to Methods in Enzymology 2:106-10)。
【００６３】
ポリクローナル血清および抗体は、本発明のポリペプチドを用いて適切な被験者を免疫することによって生成できる。免疫された被験者における抗体力価は、標準技術によって、例えば固定化タンパク質を用いるＥＬＩＳＡを使用して経時的に監視できる。所望であれば、本発明のポリペプチドに対して向けられた抗体分子は、その被験者もしくは培養培地から単離することができ、さらに周知の技術、例えばタンパク質ＡクロマトグラフィによってＩｇＧ分画を入手するためにさらに精製できる。
【００６４】
本発明のポリペプチドに対する抗体のフラグメントは、当分野において周知の方法による抗体の開裂によって生成できる。例えば、免疫学的に活性なＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体を酵素、例えばペプシンで処置することによって生成できる。
【００６５】
ヒト抗体は、追加して、抗原負荷に応答して動物の内因性抗体よりむしろ完全ヒト抗体を生成できるように修飾されているトランスジェニック非ヒト動物を用いて生成することができる（例えば、ＰＣＴ国際特許公開ＷＯ９４／０２６０２を参照されたい）。非ヒト宿主内での重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードする内因性遺伝子は無能力化されており、そしてヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードする活性遺伝子座は宿主のゲノム内に挿入されている。ヒト遺伝子は、例えば必要なヒトＤＮＡセグメントを含有する酵母人工染色体を用いて組み込まれる。すべての所望の修飾を提供する動物は、次に修飾の全部より少ない補体を含有する中間トランスジェニック動物を異種交配させることによって子孫として入手される。そのような非ヒト動物の好ましい実施形態はマウスであり、ＰＣＴ国際特許公開ＷＯ９６／３３７３５およびＷＯ９６／３４０９６に開示されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）と称されている。この動物は、完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を生成する。これらの抗体は、当該の免疫原を用いた免疫後に、例えばポリクローナル抗体の配合物として動物から直接的に、もしくは動物に由来する不死化Ｂ細胞、例えばモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマから入手できる。さらに、ヒト可変領域を備える免疫グロブリンをコードする遺伝子は抗体を直接的に入手するために回収して発現させることができる、または抗体のアナログ、例えば一本鎖Ｆｖ分子を入手するためにさらに修飾することができる。
【００６６】
さらに、本発明のポリペプチドに対するキメラ、ヒト化、および一本鎖抗体は、ヒトおよび非ヒト部分を含んでおり、標準組換えＤＮＡ技術および／または組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリを用いて生成できる。ヒト化抗体は、内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することはできないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することはできるトランスジェニックマウスを用いて生成することもできる。例えば、ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、例えばＩＬ−１７Ｆに対して立てられたｍＡｂは、マウス免疫グロブリン遺伝子ではなくむしろヒト免疫グロブリン遺伝子を有しているトランスジェニックマウスを用いて生成することができる。当該の抗原を用いて免役したこれらのトランスジェニックマウスからの脾細胞は次に、ヒトタンパク質由来のエピトープに対して特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを生成するために使用できる(例えば、Wood et al., 国際出願公開ＷＯ９１／００９０６; Kucherlapati et al., ＷＯ９１／１０７４１; Lonberg et al., ＷＯ９２／０３９１８; Kay et al., ＷＯ９２／０３９１７; Lonberg et al. (1994) Nature 368:856-59; Green et al. (1994) Nat. Genet. 7:13-21; Morrison et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-55; Bruggeman (1993) Year Immunol 7:33-40; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-24; Bruggeman et al. (1991) Eur. J. Immunol. 21:1323-26を参照されたい)。
【００６７】
キメラ免疫グロブリン鎖を含むキメラ抗体は、当分野において公知の組換えＤＮＡ技術によって生成できる。例えば、マウス（または他の種）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子は、マウスＦｃをコードする領域を除去するために制限酵素を用いて消化され、そしてヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の同等部分は置換される(例えば、Robinson et al., 国際出願公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９; Akira et al., 欧州特許出願第１８４，１８７号; Taniguchi, 欧州特許出願第１７１，４９６号; Morrison et al., 欧州特許出願第１７３，４９４号; Neuberger et al., 国際出願公開ＷＯ８６／０１５３３; Cabilly et al., 米国特許第４，８１６，５６７号; Cabilly et al., 欧州特許出願第１２５，０２３号; Better et al. (1988) Science 240:1041-43; Liu et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-43; Liu et al. (1987) J. Immunol. 139:3521-26; Sun et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-18; Nishimura et al. (1987) Cancer Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-49; and Shaw et al. (1988) J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-59を参照されたい)。
【００６８】
抗体もしくは免疫グロブリン鎖は、当分野において公知の方法によってヒト化できる。ヒト化免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体は、抗原結合に直接的には関係していないＦｖ可変領域の配列をヒトＦｖ可変領域由来の同等配列と置換することによって生成できる。ヒト化抗体を生成するための一般的方法は、それらの全体がこれにより参照して組み込まれるMorrison (1985) Science 229:1202-07; Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214; Queen et al.、米国特許第５，５８５，０８９号；５，６９３，７６１号；５，６９３，７６２号によって提供される。それらの方法には、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つ由来の免疫グロブリンＦｖ可変領域の全部もしくは一部をコードする核酸配列を単離する、操作する、および発現する工程が含まれる。そのような核酸配列の起源は当業者には周知であり、例えば、所定標的に対する抗体を生成するハイブリドーマから入手できる。ヒト化抗体、もしくはそのフラグメントをコードする組換えＤＮＡは、次に適切な発現ベクター内にクローニングすることができる。
【００６９】
ヒト化もしくはＣＤＲグラフト化抗体分子または免疫グロブリンは、ＣＤＲグラフト化もしくはＣＤＲ置換によって生成できるが、このとき免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、もしくは全ＣＤＲを交換することができる。例えば、これによりそれらの全体の内容が参照して組み込まれる米国特許第５，２２５，５３９号；Jones et al. (1986) Nature 321:552-25; Verhoeyan et al. (1988) Science 239:1534; Beidler et al. (1988) J. Immunol. 141:4053-60; Winter, 米国特許第５，２２５，５３９号を参照されたい。Winterは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用できるＣＤＲグラフト化法について記載しており(英国特許出願ＧＢ２，１８８，６３８Ａ； Winter, 米国特許第５，２２５，５３９号)、それらの内容はこれにより参照して組み込まれる。特定のヒト抗体のＣＤＲは全部が、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部分と交換することができる、またはＣＤＲの一部だけを非ヒトＣＤＲと交換することができる。ヒト化抗体を所定抗原に結合させるために必要とされるＣＤＲの数を交換することだけが必要である。
【００７０】
例えば、抗体の他の部分、例えば定常領域を欠失させる、付加する、もしくは置換することによって修飾されているモノクローナル、キメラおよびヒト化抗体もまた本発明の範囲内に含まれる。非限定的例として、抗体は、定常領域を欠失させることによって、定常領域をまた別の定常領域、例えば抗体の半減期、安定性、もしくは親和性を増加させることが意図される定常領域、もしくは他の種もしくは抗体クラス由来の定常領域と交換することによって、または例えば、グリコシル化部位の数、エフェクタ細胞機能、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、補体固定化などを変化させるために定常領域内の１つまたは複数のアミノ酸を修飾することによって修飾することができる。抗体定常領域を変化させる方法は、当分野において公知である。変化した機能、例えばエフェクタリガンド、例えば細胞上のＦｃＲ、もしくは補体のＣ１構成成分に対する変化した親和性を備える抗体は、抗体の定常部分内の少なくとも１つのアミノ酸残基を相違する残基と交換することによって生成できる(例えば、それらの全体の内容がこれにより参照して組み込まれるＥＰ３８８，１５１Ａ１，米国特許第５，６２４，８２１号および５，６４８，２６０号を参照されたい)。マウス（もしくは他の種の）免疫グロブリンに対する類似タイプの変化は、これらの機能を減少もしくは排除するために適用できる。そのような変化は当分野において公知である。例えば、ＦｃＲ（例、ＦｃγＲ１）、もしくはＣ１ｑ結合に対する抗体（例、ＩｇＧ、例えばヒトＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性は、特定された残基をその側鎖上で適切な官能基を有する残基と交換することによって、または荷電官能基、例えばグルタミン酸塩もしくはアスパラギン酸塩、または芳香族非極性残基、例えばフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンもしくはアラニンを導入することによって変化させることが可能である(例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照されたい)。本発明の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体は、上清、細胞溶解物、または細胞表面上でＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチドを各々、単離する、精製する、および／または検出するために有用なことがある。さらに、当業者は、ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒに対する抗体をそれによって以下に記載するスクリーニング方法において使用する方法を認識するであろう。本明細書に開示した抗体は、臨床検査方法の一部として、例えばＩＬ−１７Ｆタンパク質レベルを監視するために診断的に、または抗体の抗原を含む細胞もしくは組織へ治療用モジュレータをターゲティングするために臨床的にさらに使用できる。例えば、低分子などの治療薬、または本発明の他の治療薬は、ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒを各々発現する細胞もしくは組織へ治療薬をターゲティングするために、抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体へ連結させることができる。または、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒに対する抗体は、阻害性抗体として、すなわちＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒへの結合を減少させる、限定する、遮断する、さもなければ低下させるためのアンタゴニストとして使用できる。
【００７１】
本発明において使用するための抗体に加えて、他の分子もまた、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａホモ二量体の活性を変調させるために使用できる。そのような分子には、低分子免疫薬学的（ＳＭＩＰ（商標））薬物（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社、ワシントン州シアトル）が含まれる。ＳＭＩＰは、抗原、対受容体などの同族構造に対する結合ドメイン、１つのシステイン残基を有する、もしくは有さないヒンジ領域ポリペプチド、ならびに免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインから構成される一本鎖ポリペプチドである（さらに、ｗｗｗ．ｔｒｕｂｉｏｎ．ｃｏｍも参照されたい）。ＳＭＩＰならびにそれらの使用および用途は、例えば米国特許出願第２００３／０１１８５９２号、第２００３／０１３３９３９号、第２００４／００５８４４５号、第２００５／０１３６０４９号、第２００５／０１７５６１４号、第２００５／０１８０９７０号、第２００５／０１８６２１６号、第２００５／０２０２０１２号、第２００５／０２０２０２３号、第２００５／０２０２，０２８号、第２００５／０２０２５３４号、および第２００５／０２３８６４６号、ならびにそれらの関連特許ファミリーメンバーに開示されており、それらは全体が参照して本明細書に全体として組み込まれる。
【００７２】
スクリーニングアッセイ
本発明の関連するポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、それらに対する抗体も含めて、細胞もしくは生物中でＩＬ−１７Ａの活性を変調させることができ、それによって炎症反応の潜在的調節剤である、抗体を含む、薬理学的物質もしくは物質に対する主要化合物を同定するためのスクリーニングアッセイにおいて使用できる。例えば、ＩＬ−１７Ｆ（天然型もしくは組換えのいずれか）を含有するサンプルは複数の試験化合物の１つ（生物剤もしくは小有機分子のいずれか）と接触させ、そして処置されたサンプル各々の中のＩＬ−１７Ｆの生物活性を未処置サンプルもしくは様々な試験化合物と接触させたサンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性と比較できる。そのような比較は、試験化合物のいずれかが、１）それによりＩＬ−１７Ｆのアンタゴニストであることを指示する、ＩＬ−１７Ｆの発現もしくは生物活性の実質的に減少したレベル、２）それによりＩＬ−１７Ｆのアゴニストであることを指示する、ＩＬ−１７Ｆの発現もしくは生物活性の実質的に増加したレベルを生じさせるかどうかを決定するであろう。１つの実施形態では、ＩＬ−１７Ｆ活性を変調させることのできる試験化合物の同定は、高スループットスクリーニングアッセイ、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ社、スウェーデン国ウプサラ）、ＢＲＥＴ（生物発光共鳴エネルギー転移）、およびＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー転移）アッセイ、ならびにＥＬＩＳＡおよびセルベースアッセイを用いて実施される。
【００７３】
低分子
ＩＬ−１７Ｆに関連する障害、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、例えば嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症に罹患した（もしくは危険性がある）生物（もしくは被験者）、またはそのような障害に関係するそのような生物（もしくは被験者）由来の細胞における減少したＩＬ−１７Ｆ活性は、ＩＬ−１７Ｆに拮抗する、すなわちその活性を阻害する低分子（通常は有機低分子）の使用によって達成することもできる。新規の拮抗性低分子は、上述したスクリーニング方法によって同定することができ、以下に記載する本発明の治療方法において使用できる。
【００７４】
用語「低分子」は、高分子ではない化合物を意味する(例えば、Karp (2000) Bioinformatics Ontology 16:269-85; Verkman (2004) AJP-CeIl Physiol. 286:465-74を参照されたい)。そこで、低分子はしばしば、例えば１，０００ダルトン未満の化合物であると見なされている(例えば、Voet and Voet, Biochemistry, 2nded., ed. N. Rose, Wiley and Sons, New York, 14 (1995)を参照されたい)。例えば、Davis et al. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:5981-86は、フォレート、メトトレキセート、および神経ペプチドを指示するために低分子という語句を使用しているが、他方Halpin and Harbury (2004) PLos Biology 2:1022-30は、低分子遺伝子産物、例えばＤＮＡ、ＲＮＡおよびペプチドを指示するためにこの語句を使用している。天然低分子の例には、コレステロール、神経トランスミッタ、アプタマ、およびｓｉＲＮＡが含まれるがそれらに限定されない；合成低分子の例には、多数の市販で入手できる低分子データベース、例えばＦＣＤ（Fine Chemicals Database）、ＳＭＩＤ（Small Molecule Interaction Database）、ＣｈＥＢＩ（Chemical Entities of Biological Interest）、およびＣＳＤ（Cambridge Structural Database）の中に列挙された様々な化学物質が含まれるがそれらに限定されない(例えば、Alfarano et al. (2005) Nuc. Acids Res. Database Issue 33:D416-24を参照されたい)。
【００７５】
ＩＬ−１７Ｆに関連する障害を診断する、予後診断する、および進行を監視するための方法
本発明は、被験者におけるＩＬ−１７Ｆに関連する障害（例えば、ＩＬ−１７Ｆの生物活性における増加に直接的もしくは間接的に関係する障害）を診断する、予後診断する、および進行を監視するための方法であって、ＩＬ−１７Ｆ活性のアップレギュレーションを検出する工程による、例えば、ヒト被験者におけるそのような方法の使用を含むがそれらに限定されない、ＩＬ−１７Ｆのアップレギュレーションを検出する工程による方法を提供する。これらの方法は、例えばＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリヌクレオチド（もしくはそのフラグメント）；ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチド（もしくはそのフラグメントおよび／または融合タンパク質）；ＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリペプチドに対する抗体（もしくはその誘導体）；または例えば臨床状況において便宜的に使用できる、本明細書に記載したＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドのモジュレータを含む群のうちの少なくとも１つを含む事前に包装された診断キットを利用する工程によって実施できる。さらに、当業者は、例えば、ＩＬ−１７Ｆのアップレギュレーションは、間接的方法、例えば免疫細胞、例えば好中球の数を計数する工程によっても検出できることを認識するであろう。
【００７６】
「診断」もしくは「診断する工程」は、病的状態の存在もしくは不在を同定する工程を意味する。診断方法には、被験者（ヒトもしくは非ヒト動物）由来の生物学的サンプル中のＩＬ−１７Ｆの遺伝子産物（例えば、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくはポリペプチド、それらのフラグメントを含む）の試験量を決定する工程によって、およびその試験量を正常量もしくは範囲（すなわち、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害に罹患していないことが公知の個体からの量もしくは範囲）と比較する工程とによってＩＬ−１７Ｆ生物活性のアップレギュレーションを検出する工程が含まれる。特定診断方法はＩＬ−１７Ｆに関連する障害の確定診断を提供しない場合があるが、その方法が診断に役立つ陽性の指標を提供するかどうかには十分である。
【００７７】
本発明は、例えば、ＩＬ−１７Ｆ活性のアップレギュレーションを検出する工程によって、例えばＩＬ−１７Ｆのアップレギュレーションを検出する工程によって、そのような障害を予後診断するための方法をさらに提供する。「予後診断」もしくは「予後診断する工程」は、病的状態の予想される発生および／または重症度を予測する工程を意味する。予後診断方法は、被験者由来の生物学的サンプル中のＩＬ−１７Ｆの遺伝子産物の試験量を決定する工程と、そして前記試験量をＩＬ−１７Ｆの遺伝子産物に対する予後診断量もしくは範囲（すなわち、様々な重症度の、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害を有する個体からの量もしくは範囲）と比較する工程と、を含む。試験サンプル中の様々な量のＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物は、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害についての特定の予後と一致している。特定予後レベルでのある量のＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の検出は、その被験者にとっての予後診断を提供する。
【００７８】
本発明は、例えば、ＩＬ−１７Ｆ活性のアップレギュレーションを検出する工程によって、例えばＩＬ−１７Ｆのアップレギュレーションを検出する工程によって、ＩＬ−１７Ｆに関連するそのような障害の進行もしくは経過を監視するための方法をさらに提供する。監視する工程は、第１および第２の時点に被験者から採取された生物学的サンプル中のＩＬ−１７Ｆの遺伝子産物の試験量を決定する工程と、そしてそれらの量を比較する工程とを含む。第１および第２の時点間でのＩＬ−１７Ｆの遺伝子産物の量における変化は、ＩＬ−１７Ｆ関連性障害の経過における変化を指示しており、量における減少はそのような障害の寛解を指示し、そして量における増加はそのような障害の進行を指示する。そのような監視アッセイは、自己免疫障害に対して治療されている患者における特定治療的介入の有効性を評価するためにもまた有用である。
【００７９】
上記に記載した方法における増加したＩＬ−１７Ｆは、生体液（例、全血、血漿、および尿）、細胞（例、全細胞、細胞分画、および細胞抽出物）、ならびにその他の組織を含む様々な生物学的サンプル中で検出できる。生物学的サンプルは、組織の切片、例えば組織学検査のために採取された生検標本および冷凍切片をさらに含む。好ましい生物学的サンプルには、血液、血漿、リンパ液、組織生検標本、尿、ＣＳＦ（脳脊髄液）、滑液、およびＢＡＬ（気管支肺胞洗浄液）が含まれる。生物学的サンプルの分析は、必ずしも被験者からの細胞もしくは組織の除去を必要としないことは理解されるであろう。例えば、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物（例、抗体、核酸）へ結合する適切に標識された物質は、被験者に投与して、標準イメージング技術（例、ＣＡＴ、ＮＭＲ（ＭＲＩ）、およびＰＥＴ）を用いて（標的に結合した場合は）視認することができる。
【００８０】
本発明の診断および予後診断アッセイでは、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物が検出され、試験量を生成するために定量される。試験量は、次に正常量もしくは範囲と比較される。正常量もしくは範囲を有意に超える試験量は、ＩＬ−１７Ｆに関連する障害の診断における陽性の指標である。以下ではＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物を検出および定量する特定方法を記載する。
【００８１】
ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の正常量もしくはベースラインレベルは、任意の特定サンプルタイプおよび集団について決定できる。一般に、ＩＬ−１７Ｆタンパク質もしくはｍＲＮＡのベースライン（正常）レベルは、正常（すなわち、健常）被験者由来の生物学的サンプルタイプ中でのＩＬ−１７Ｆタンパク質もしくはｍＲＮＡの各々の量を測定する工程によって決定される。または、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の正常値は、疾患（もしくは疾患の可能性がある）試験細胞もしくは組織が由来した同一被験者から採取された健常細胞もしくは組織中での量を測定することによって決定できる。ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の量（正常量もしくは試験量のいずれか）は、１つの細胞、全タンパク質、もしくは容積ベースで決定もしくは表示することができる。サンプルの細胞量を決定するためには、構成的に発現した遺伝子産物または生物学的サンプルが由来したタイプの細胞中で公知のレベルで発現した他の遺伝子産物のレベルを測定できる。
【００８２】
本発明のアッセイ方法は、必ずしもＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の絶対値の測定を必要としないことは理解されるであろうが、これはこれらの方法の多数の用途には相対値で十分なためである。ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物の量もしくは存在度に加えて、変異体もしくは異常なＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物もしくはそれらの発現パターン（例、突然変異転写体、短縮ポリペプチド）は、正常な遺伝子産物および発現パターンとの比較によって同定できる。
【００８３】
２つのサンプル中での特定遺伝子もしくはタンパク質の発現が有意に類似する、または有意に相違する、例えば所与のレベルより有意に高い、もしくは有意に低いかどうかは、遺伝子自体に、そして特に相違する個体間もしくは相違するサンプル間での発現の変動性に左右される。発現レベルが有意に類似であるか相違しているかを決定することは、当分野における技術の範囲内にある。例えばＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒ発現レベルにおける個体、種、器官、組織、または細胞間の遺伝的変異などの要素は、例えば２つのサンプル間のＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒの発現レベルが有意に類似するか、もしくは有意に相違するか、例えば有意に所与レベルを超えているかを決定するために（必要な場合に、必要に応じて）考慮に入れることができる。個体、種、器官、組織、もしくは細胞間の遺伝子発現における自然な異質性の結果として、「有意に類似する」もしくは「有意に超える」などの語句は、正確なパーセンテージもしくは数値として規定できないが、むしろ本発明を実施する当業者によって確定されることは可能である。
【００８４】
本発明の診断、予後診断、および監視アッセイは、生物学的サンプル中でＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物を検出して定量する工程を含む。ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物にはｍＲＮＡおよびポリペプチドが含まれ、どちらも当業者には周知の方法を用いて測定できる。
【００８５】
例えば、ｍＲＮＡは、ハイブリダイゼーションをベースとするアッセイ、例えばノーザンハイブリダイゼーション、インサイチューハイブリダイゼーション、ドットおよびスロットブロット、ならびにオリゴヌクレオチドアレイを用いて直接的に検出および定量することができる。ハイブリダイゼーションをベースとするアッセイは、プローブ核酸が標的核酸にハイブリダイズさせるアッセイを意味する。一部のフォーマットでは、標的、プローブ、または両方が固定化される。固定化された核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または他のオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドであってよく、そして天然型もしくは非天然型ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、または主鎖を含んでいてよい。本発明において使用するための核酸プローブ配列を（ＩＬ−１７Ｆの核酸配列に基づいて）選択する方法は、当分野において周知である。
【００８６】
または、ｍＲＮＡは検出および定量の前に増幅させることができる。そのような増幅をベースとするアッセイは当分野において周知であり、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＰＣＲ酵素結合免疫吸着検定法（ＰＣＲ−ＥＬＩＳＡ）、およびリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）が含まれる。増幅させたＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物（例、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ）を生成および検出するためのプライマーおよびプローブは、ＩＬ−１７Ｆの核酸配列に基づいて当業者によって無用な実験を行なわずに容易に設計および生成することができる。増幅させたＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物は、例えば、ゲル電気泳動法；プローブ核酸へのハイブリダイゼーション；シーケンシング；蛍光、燐光、もしくは放射性シグナルの検出；または様々な周知の方法のいずれかによって直接的に分析できる。さらに、標的核酸配列の増幅によって生成したシグナルを増大させるための方法は、当業者には公知である。当業者は、いずれの増幅方法が使用されても、当分野において公知の様々な定量方法（例、定量的ＰＣＲ）を遺伝子産物の定量が所望の場合には使用できることを認識するであろう。
【００８７】
ＩＬ−１７Ｆポリペプチド（もしくはそのフラグメント）は、上述したように生成できる各抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を使用して様々な周知の免疫学的アッセイを用いて検出できる。免疫学的アッセイは、例えばＩＬ−１７Ｆポリペプチド（もしくはそのフラグメント）へ特異的に結合する抗体（例えば、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化、ｓｃＦｖ、および／またはそのフラグメント）を利用するアッセイを意味する。本発明の実践のために適合するそのような周知の免疫学的アッセイには、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降法、免疫蛍光、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、およびウェスタンブロッティングが含まれる。当業者はさらに、ＩＬ−１７Ｆポリペプチドは標識したＩＬ−１７Ｒポリペプチドを用いて検出できることもまた認識するであろう。
【００８８】
当業者は、上述した方法が、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を含むがそれには限定されないＩＬ−１７Ｆに関連する障害に適用できることを理解するであろう。
【００８９】
療法におけるＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの使用
本発明者らは、本発明者らが最初に、ＩＬ−１７ＦによるＩＬ−１７Ｒの結合は、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症と相関していることを認識したと考えている。そこで、本発明は、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を治療するためのＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを使用する方法を開示する。
【００９０】
上述した方法を用いて同定されたＩＬ−１７ＦもしくはＩＬ−１７Ｒポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド活性のモジュレータを含む本明細書に開示したＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、インビトロ、エックスビボで使用できる、または医薬組成物中に組み込んで、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を治療するために、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）の投与によって、個体へインビボで投与することができる。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを投与すべきかどうかを決定する際に考慮すべき数種の薬理ゲノミクスアプローチは当業者には周知であり、ゲノムワイド（ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ）関連、候補遺伝子アプローチ、および遺伝子発現プロファイリングが含まれる。本発明の医薬組成物は、その企図された投与経路（例えば、経口組成物は、一般に不活性希釈剤もしくは食用担体を含む）と適合するように調製される。その他の投与経路の非限定的例には、非経口（例、静脈内）、皮内、皮下、経口（例、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与が含まれる。各企図された経路と適合する医薬組成物は、当分野において周知である。
【００９１】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、医薬上許容される担体と結合した場合に医薬組成物として使用できる。そのような組成物は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストおよび担体に加えて、様々な希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、および当分野において周知のその他の物質を含有することができる。用語「医薬上許容される」は、有効成分の生物活性の有効性を妨害しない物質の非毒性量を意味する。担体の特性は、投与経路に依存するであろう。
【００９２】
本発明の医薬組成物は、さらにまたサイトカイン、リンホカイン、もしくは他の造血因子、例えばＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−Ｉ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、Ｇ−ＣＳＦ、幹細胞因子およびエリスロポエチンを含有していてよい。本医薬組成物は、さらにまた以下でより詳細に記載する抗サイトカイン抗体を含んでいてよい。本医薬組成物は、血栓溶解性もしくは抗血栓性因子、例えばプラスミノーゲンアクチベータおよび第ＶＩＩＩ因子を含有していてよい。本医薬組成物は、さらに以下でより詳細に記載する他の抗炎症剤を含んでいてよい。そのような追加の因子および／または物質は、本医薬組成物中に、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストとの相乗作用を生成するため、またはＩＬ−１７Ｆアンタゴニストによって誘発される副作用を最小限に抑えるために含むことができる。これとは逆に、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解性もしくは抗血栓性因子、または抗炎症剤の配合物中に、そのサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解性もしくは抗血栓性因子、または抗炎症剤の副作用を最小限に抑えるために含められてもよい。
【００９３】
本発明の医薬組成物は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストが、他の医薬上許容される担体に加えて、両親媒性物質、例えばミセル、不溶性単層、液晶、または水溶液中の薄層として凝集形で存在する脂質と結合されているリポソームの形状であってよい。リポソーム配合物のために適合する脂質には、制限なく、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などが含まれる。そのようなリポソーム配合物の調製は、例えば、それらの全体が参照して本明細書に組み込まれる米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号に開示されているように、当業者のレベルの範囲内に含まれる。
【００９４】
本明細書で使用する用語「治療有効量」は、有意な患者の有益性、例えばそのような状態の症状の改善、治癒、もしくは治癒速度の増加を示すために十分である医薬組成物もしくは方法の各活性成分の総量を意味する。単独で投与された個々の有効成分に適用される場合は、この用語はその成分単独に関する。組み合わせに適用される場合は、この用語は、組み合わせて、連続で、もしくは同時のいずれで投与されても、治療作用を生じさせる有効成分の結合量を意味する。本発明の治療方法もしくは使用を実施する際には、治療有効量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストが被験者、例えば哺乳動物（好ましくはヒト）へ投与される。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、本発明の方法によって、単独で、または他の療法、例えばサイトカイン、リンホカインもしくは他の造血因子、または抗炎症剤と組み合わせて投与することができる。１つまたは複数の物質と共投与される場合は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、第２物質と同時に、または連続して投与することができる。連続的に投与される場合は、担当医師は、例えばＩＬ−１７Ｒポリペプチド（もしくはその融合タンパク質）および／または阻害性抗体の、他の物質と組み合わせた適切な投与順序を決定するであろう。
【００９５】
治療有効量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストが経口投与される場合は、結合剤は、錠剤、カプセル剤、散剤、液剤もしくはエリキシル剤の形状にあるであろう。錠剤形で投与される場合は、本発明の医薬組成物は、追加して固体担体、例えばゼラチンもしくはアジュバントを含有する場合がある。錠剤、カプセル剤、および散剤は、約５〜９５％の結合剤、および好ましくは約２５〜９０％の結合剤を含有している。液剤形で投与される場合は、液状担体、例えば水、石油、動物もしくは植物起源の油、例えば落花生油（集団内での落花生アレルギーの頻度を念頭に置いた上ではあるが）、鉱油、大豆油、もしくはゴマ油、または合成油を加えることができる。本医薬組成物の液剤形は、さらに生理的食塩液、デキストロースもしくは他の糖溶液、またはグリコール類、例えばエチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコールを含有していてよい。液剤形で投与される場合は、本医薬組成物は、重量で約０．５〜９０％の結合剤、および好ましくは重量で約１〜５０％の結合剤を含有している。
【００９６】
治療有効量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストが静脈内、皮内、もしくは皮下注射によって投与される場合は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、発熱物質を含有していない、非経口的に許容される水溶液の形状であろう。そのような非経口的に許容されるタンパク質溶液の、ｐＨ、等張性、安定性などを十分に顧慮した調製は、当業者の技術の範囲内である。静脈内、皮内、もしくは皮下注射のために好ましい医薬組成物は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストに加えて、等張性ビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンガー注射液、または当分野において公知の他のビヒクルを含んでいなければならない。本発明の医薬組成物は、さらに安定剤、保存剤、緩衝剤、酸化防止剤、または当業者に公知の他の添加物を含有していてよい。
【００９７】
本発明の医薬組成物中のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの量は、治療される状態の性質および重症度、ならびにその患者が受けていた先行治療の性質に依存するであろう。最終的には、担当医師が、それを用いて各個別患者を治療するＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの量を決定するであろう。最初に、担当医師は低用量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを投与し、患者の応答を観察するであろう。より高用量のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、その患者にとって最適の治療作用が入手されるまで投与することができ、その時点で用量は一般にはそれ以上増量されない。本発明の方法を実践するために使用された様々な医薬組成物は、体重１ｋｇにつき、約０．１μｇ〜約１００ｍｇのＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト、例えば組換えＩＬ−１７Ｒ（その融合タンパク質を含む）を含有しているべきであると企図されている。
【００９８】
本発明の医薬組成物を用いる静脈内（ｉ．ｖ．）療法の期間は、治療される疾患の重症度、ならびに各個別患者の状態および潜在的な固有の応答に依存して変動するであろう。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの各投与期間は１２〜２４時間の持続ｉ．ｖ．投与の範囲内にあってよいことが企図されている。さらに、本発明の医薬組成物を用いる皮下（ｓ．ｃ．）療法も企図されている。これらの療法は、１日１回、週１回、またはより好ましくは１週おきに、もしくは月１回投与することができる。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストが低分子（例えば、経口送達のため）である場合は、これらの療法は、１日１回、１日２回、１日３回などで投与できることもまた企図されている。最終的には、担当医師が、ｉ．ｖ．もしくはｓ．ｃ療法、もしくは低分子を用いた療法の適切な期間、および本発明の医薬組成物を用いる療法の投与時期を決定するであろう。
【００９９】
本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質は、以下に規定した使用もしくは生物活性（本明細書で言及したアッセイと結び付いている生物活性を含む）の１つまたは複数を示すことが予想されている。本発明のタンパク質について記載された使用もしくは活性は、そのようなタンパク質の投与もしくは使用によって、またはそのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与もしくは使用（例えば、ＤＮＡの導入に適合する遺伝子療法もしくはベクターなど）によって提供できる。
【０１００】
気道炎症を減少させるためのＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの使用
１つの態様では、本発明は、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を減少させる方法を特徴とする。本方法は、細胞もしくは集団のＩＬ−１７Ｆ活性を阻害するために十分な量で、細胞集団をＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）と接触させる工程を含んでいてよい。
【０１０１】
これらの方法は、少なくとも一部には、ＩＬ−１７ＦがＩＬ−１７Ｒに結合する（実施例４）、そして嚢胞性線維症を有する患者の喀痰中のＩＬ−１７Ｆ濃度が肺症状の悪化の程度と直接的に相関している（実施例７）という所見に基づいている。したがって、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト、すなわちＩＬ−１７Ｆ活性を阻害する分子（例、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体）は、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症を減少させるために使用できる。
【０１０２】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを使用する方法は、さらにまたＩＬ−１７Ｆ炎症活性を阻害するために使用でき、このため、様々な免疫障害を治療もしくは予防するために使用できる。治療もしくは予防できる障害の非限定的例には、移植片拒絶反応、自己免疫疾患（例えば、糖尿病、関節炎（関節リウマチ、若年性慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む）、多発性硬化症、脳脊髄炎、筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎）、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、内因性喘息、アレルギー性喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ハンセン病反転反応、ハンセン性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、真正赤血球性貧血、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ヴェグナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、バセドー病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症）、移植片対宿主疾患、およびアレルギー、例えばアトピー性アレルギーが含まれるがそれらに限定されない。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト、例えば阻害性のＩＬ−１７Ｆ抗体の投与を含む方法を用いて治療できる好ましい障害には、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、例えば嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む気道炎症が含まれる。
【０１０３】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）を使用すると、免疫応答を様々な方法で調節することが可能である。ダウンレギュレーションは、既に進行中の炎症性応答を阻害もしくは遮断する工程の形状であってよい、または炎症性応答の誘導を防止する工程を含んでいてよい。
【０１０４】
１つの実施形態では、その医薬組成物を含むＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、併用療法で投与される、すなわち他の物質、例えば病的状態もしくは障害、例えば免疫障害および炎症性疾患（気道炎症を含む）を治療するために有用な治療薬と併用される。この状況における用語「併用して」は、物質が同時もしくは連続的のいずれかの実質的に同時性で投与されることを意味する。連続的に与えられる場合は、第２化合物の投与開始時には、２種の化合物の第１は、好ましくは治療部位で依然として有効濃度で検出可能である。
【０１０５】
例えば、併用療法は、以下でより詳細に記載するように、１つまたは複数の追加の治療薬、例えば１つまたは複数のサイトカインおよび成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞毒性もしくは細胞分裂阻害剤と共調製された、および／または共投与された、１つまたは複数のＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／もしくはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）を含むことができる。さらに、本明細書に記載した１以上のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、本明細書に記載した２つまたは複数の治療薬と組み合わせて使用できる。そのような併用療法は、有益にも、投与される治療薬の低用量を利用するので、様々な単剤療法に結び付いた可能性のある毒性もしくは合併症が回避される。さらに、本明細書に開示した治療薬は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路とは相違する経路に作用するので、したがってＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの作用を増強する、および／または相乗作用を与えると予想される。
【０１０６】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用される好ましい治療薬は、炎症性応答（気道炎症を含む）における様々な段階で妨害する物質である。１つの実施形態では、本明細書に記載した１つまたは複数のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、１つまたは複数の追加の物質、例えば他のサイトカインもしくは成長因子アンタゴニスト（例、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、低分子、リガンド融合体）；または他の標的に結合する抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメント（例えば、他のサイトカインもしくは成長因子、それらの受容体、または他の細胞表面分子に結合する抗体）；ならびに抗炎症性サイトカインもしくはそれらのアゴニストと共調製する、およびまたは共投与することができる。そのため、本明細書に記載した１つまたは複数のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、１つまたは複数のサイトカイン阻害剤、成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞毒性剤、および細胞分裂阻害剤と組み合わせて使用できる。本明細書に記載したＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用できる物質の非限定的例には、１つまたは複数のインターロイキン（ＩＬ）もしくはそれらの受容体のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２のアンタゴニスト；サイトカインもしくは成長因子もしくはそれらの受容体、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦのアンタゴニストが含まれるがそれらに限定されない。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、例えば細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０（例えば、ＣＤ２０阻害剤であるリツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、またはＣＤ１５４（ｇｐ３９もしくはＣＤ４０Ｌ）、もしくはＬＦＡ−ｌ／ＩＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１を含むそれらのリガンドに対する抗体の阻害剤と組み合わせて使用できる(Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med. Res. Rev. 22:146-67)。本明細書に記載したＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用できる好ましいアンタゴニストには、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２のアンタゴニストが含まれる。
【０１０７】
それらの物質の例には、ＩＬ−１２アンタゴニスト、例えばＩＬ−１２（好ましくはヒトＩＬ−１２）に結合するキメラ、ヒト化、ヒトもしくはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えば、ＷＯ００／５６７７２に開示された抗体：ＩＬ−１２受容体阻害剤、例えばヒトＩＬ−１２受容体に対する抗体；およびＩＬ−１２受容体、例えばヒトＩＬ−１２受容体の可溶性フラグメントが含まれる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例には、ＩＬ−１５もしくはその受容体に対する抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えば、ヒトＩＬ−１５もしくはその受容体に対するキメラ、ヒト化、ヒトもしくはインビトロ生成抗体、ＩＬ−１５受容体の可溶性フラグメント、およびＩＬ−１５結合タンパク質が含まれる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例には、例えば、ヒトＩＬ−１８に対するキメラ、ヒト化、ヒトもしくはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、ＩＬ−１８受容体の可溶性フラグメント、およびＩＬ−１８結合タンパク質が含まれる(IL-18BP, Mallat et al. (2001) Circ. Res. 89:e41-45)。ＩＬ−１アンタゴニストの例には、インターロイキン１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、例えばＶｘ７４０、ＩＬ−１アンタゴニスト、例えばＩＬ−１ＲＡ（アナキンラ−ＫＩＮＥＲＥＴ（商標）、Ａｍｇｅｎ社）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ社）、および抗ＩＬ−１受容体抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）が含まれる。
【０１０８】
ＴＮＦアンタゴニストの例には、ＴＮＦ（例、ヒトＴＮＦα）に対するキメラ、ヒト化、ヒトもしくはインビトロ生成抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）、例えばＨＵＭＩＲＡ（商標）（Ｄ２Ｅ７、ヒトＴＮＦα抗体、米国特許第６，２５８，５６２号）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）；抗ＴＮＦ抗体フラグメント（例、ＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５もしくはｐ７５ ヒトＴＮＦ受容体もしくはその誘導体、例えば、７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標）；Ｉｍｍｕｎｅｘ社）、ｐ５５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（登録商標））；酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤（例えば、α−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＷＯ０１／５５，１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ ３３３３、−００５、もしくは−０２２）；およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質）が含まれる。好ましいＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦ受容体、例えばｐ５５もしくはｐ７５ ヒトＴＮＦ受容体もしくはその誘導体の可溶性フラグメント、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ、およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤である。
【０１０９】
他の実施形態では、本明細書に記載したＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、次のうちの１つまたは複数と組み合わせて投与することができる：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）および／またはＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２アンタゴニスト、例えばＤＡＢ ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質）、および／またはＩＬ−２Ｒに対する抗体、例えば抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社）。さらにまた別の組み合わせには、非枯渇性抗ＣＤ−４阻害剤（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ ２１０３９６；非枯渇性霊長類化抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社）と組み合わせた、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）が含まれる。さらに他の好ましい組み合わせには、抗体、可溶性受容体もしくは拮抗性リガンド；ならびにｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、抗炎症性サイトカイン、例えば、ＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ ５２０００；組換えＩＬ−１０ ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）；ＩＬ−１３およびＴＧＦ−β、ならびにそれらのアゴニスト（例、アゴニスト抗体）を含む共刺激性経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）もしくはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが含まれる。
【０１１０】
他の実施形態では、１つまたは複数のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、１つまたは複数の抗炎症薬、免疫抑制剤、または代謝もしくは酵素阻害剤と共調製、および／または共投与することができる。本明細書に記載したＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用できる薬物もしくは阻害剤の非限定的例には、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、イブプロフェン、テニダプ、ナプロキセン、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク、およびインドメタシン；スルファサラジン；コルチコステロイド剤、例えばプレドニゾロン；サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成の阻害剤、例えば、プリン生合成の阻害剤、葉酸塩アンタゴニスト（例、メトトレキセート（Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）；およびピリミジン生合成の阻害剤、例えばジヒドロオロト酸脱水素酵素（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例、レフルノミド）のうちの１つまたは複数が含まれるが、それらに限定されない。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用するために好ましい治療薬には、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例、レフルノミド）、および葉酸塩アンタゴニスト（例、メトトレキセート）が含まれる。
【０１１１】
追加の阻害剤の例には、コルチコステロイド剤（経口、吸入および局所注射）；免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害剤、例えば、シロリムス（ラパマイシン−ＲＡＰＡＭＵＮＥ（商標）もしくはラパマイシン誘導体、例えば、可溶性ラパマイシン誘導体（例、エステルラパマイシン誘導体、例えば、ＣＣＩ−７７９(Elit (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3(8):1249-53; Huang et al. (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3(2):295-304)；ＴＮＦαもしくはＩＬ−１（例、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８もしくはＭＡＰキナーゼ阻害剤）などの前炎症性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する物質；Ｃｏｘ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、およびそれらの変異体；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、Ｒ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害剤）、ホスホリパーゼ阻害剤、例えば、細胞質ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）（例、トリフルオロメチルケトンアナログ(米国特許第６，３５０，８９２号)）；血管内皮細胞成長因子もしくは成長因子受容体の阻害剤、例えばＶＥＧＦ阻害剤および／またはＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤；および血管形成の阻害剤のうちの１つまたは複数が含まれる。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用するために好ましい治療薬は、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６)；ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、シロリムス（ラパマイシン）もしくはラパマイシン誘導体、例えば、可溶性ラパマイシン誘導体（例、エステルラパマイシン誘導体、例えば、ＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ２阻害剤、例えば、セレコキシブおよびその変異体；ならびにホスホリパーゼ阻害剤、例えば、細胞質ホスホリパーゼ２の阻害剤（ｃＰＬＡ２）、例えば、トリフルオロメチルケトンアナログである。
【０１１２】
ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用できる治療薬の追加の例には、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）；アザチオプリン；スルファサラジン；メサラジン；オルサラジン；クロロキニン／ヒドロキシクロロキン（ＰＬＡＱＵＥＮＩＬ（登録商標））；ペンシラミン；アウロチオマレート（aurothiornalate）（筋肉内および経口）；アザチオプリン；コルヒチン；β−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール）；キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリケート；ネドクロミル；ケトチフェン；イプラトロピウムおよびオキシトロピウム；ミコフェノレートモフェチル；アデノシンアゴニスト；抗血栓薬；補体阻害剤；およびアドレナリン作用薬のうちの１つまたは複数が含まれる。
【０１１３】
以下ではＩＬ−１７Ｆに関連する特異的障害を治療もしくは予防するために他の治療薬と組み合わせた本明細書に開示したＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの使用についてより詳細に考察する。
【０１１４】
関節障害（例えば、慢性関節リウマチ、炎症性関節炎、慢性関節リウマチ、若年性慢性関節リウマチ、変形性関節症および乾癬性関節炎）を治療もしくは予防するための、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストをそれと組み合わせることのできる物質の非限定的例には、本明細書に記載したＩＬ−１２アンタゴニスト；ＮＳＡＩＤ；ＣＳＡＩＤ；ＴＮＦ、例えばＴＮＦα、本明細書に記載したアンタゴニスト；本明細書に記載した非枯渇性抗ＣＤ４抗体；本明細書に記載したＩＬ−２アンタゴニスト；抗炎症性サイトカイン、例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦ−α、もしくはそれらのアゴニスト；本明細書に記載したＩＬ−１もしくはＩＬ−１受容体アンタゴニスト；本明細書に記載したホスホジエステラーゼ阻害剤；本明細書に記載したＣｏｘ−２阻害剤；イロプロスト；メトトレキセート；サリドマイドおよびサリドマイド関連薬（例、Ｃｅｌｇｅｎ）；レフルノミド；プラスミノーゲン活性化の阻害剤、例えば、トラネキサム酸；サイトカイン阻害剤、例えばＴ−６１４；プロスタグランジンＥ１；アザチオプリン；インターロイキン１変換酵素（ＩＣＥ）の阻害剤；ｚａｐ−７０および／または１ｃｋ阻害剤（チロシンキナーゼｚａｐ−７０もしくは１ｃｋの阻害剤）；本明細書に記載した血管内皮細胞成長因子もしくは血管内皮細胞成長因子受容体の阻害剤；本明細書に記載した血管形成の阻害剤；コルチコステロイド系抗炎症薬（例、ＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦコンバターゼ阻害剤；ＩＬ−１１；ＩＬ−１３；ＩＬ−１７阻害剤；金；ペニシラミン；クロロキン；ヒドロキシクロロキン；クロラムブシル；シクロホスファミド；シクロスポリン；全リンパ照射；抗胸腺細胞グロブリン；ＣＤ５−毒素；経口投与されるペプチドおよびコラーゲン；ロベンザリット二ナトリウム；サイトカイン調節剤（ＣＲＡ）ＨＰ２２８およびＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ ２３０２；Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカンポリサルフェート；ミノサイクリン（ＭＩＮＯＣＩＮ（登録商標））；抗ＩＬ−２Ｒ抗体；海洋および植物性脂質（魚および植物種子脂肪酸）；オーラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；静脈内免疫グロブリン；ジロートン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（ｔｈｅｒａｆｅｃｔｉｎ）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；およびアザリビンのうちの１つまたは複数が含まれる。好ましい組み合わせには、メトトレキセートもしくはレフルノミドと、そして中等症もしくは重症の慢性関節リウマチの症例ではシクロスポリンと組み合わせた、１つまたは複数のＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）が含まれる。
【０１１５】
関節炎性障害を治療するためにＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用するための阻害剤の好ましい例には、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦに結合する、キメラ、ヒト化、ヒトもしくはインビトロ生成抗体、もしくはそれらの抗原結合フラグメント；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えばｐ５５もしくはｐ７５ ヒトＴＮＦ受容体もしくはそれらの誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標）、ｐ５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦ−α変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇因子（例、抗ＣＤ４もしくは抗ＣＤ２２抗体）；低分子阻害剤、例えば、メトトレキセートおよびレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン−ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）およびそれらのアナログ、例えば、ＣＣＩ−７７９；ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦκＢ阻害剤；ＲＡＧＥもしくは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンもしくはＰＳＧＬ−１阻害剤（例えば、低分子阻害剤、それに対する抗体、例えばＰ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体β（ＥＲＢ）アゴニストもしくはＥＲＧ−ＮＦκＢアンタゴニストが含まれる。１つまたは複数のＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、１Ｌ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）と共投与および／または共調製できる最も好ましい追加の治療薬には、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５もしくはｐ７５ ヒトＴＮＦ受容体もしくはそれらの誘導体、例えば７５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））；メトトレキセート、レフルノミド、もしくはシロリムス（ラパマイシン）もしくはそのアナログ、例えばＣＣＩ−７７９のうちの１つまたは複数が含まれる。
【０１１６】
多発性硬化症を治療もしくは予防するためにＩＬ−１７Ｆアンタゴニストをそれと組み合わせることのできる物質の非限定的例には、次のインターフェロン、例えばインターフェロンα１ａ（例、ＡＶＯＮＥＸ（商標）、Ｂｉｏｇｅｎ社）およびインターフェロン１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（商標）、Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ社）；コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（商標）、Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラドリビン；本明細書に記載したＴＮＦアンタゴニスト；コルチコステロイド剤；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン：シクロスポリンＡ、メトトレキセート；４−アミノピリジン；およびチザニジンが含まれる。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストと組み合わせて使用できる追加のアンタゴニストには、他のヒトサイトカインもしくは成長因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体もしくはアンタゴニストが含まれる。本明細書に記載したＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０もしくはそれらのリガンドに対する抗体と組み合わせることができる。ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、さらにまた物質、例えば、メトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、コルチコステロイド剤、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、本明細書に記載した前炎症性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する物質、ＩＬ−１ｂ変換酵素阻害剤（例、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えばキナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体および本明細書に記載したそれらの誘導体、ならびに抗炎症性サイトカイン（例、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦ）と組み合わせることもできる。
【０１１７】
多発性硬化症に対してそれとＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを組み合わせることのできる治療薬の好ましい例には、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ；コパクソン、コルチコステロイド剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体、ＩＬ−１２アンタゴニストが含まれる。
【０１１８】
炎症性腸疾患（例、クローン病、潰瘍性大腸炎）を治療もしくは予防するためにＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）をそれと組み合わせることのできる物質の非限定的例には、ブデソニド（budenoside）；上皮成長因子；コルチコステロイド剤；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；酸化防止剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−Ｒモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載したＴＮＦアンタゴニスト；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３および／またはＴＧＦβサイトカインもしくはそれらのアゴニスト（例、アゴニスト抗体）；ＩＬ−１１；プレドニゾロン、デキサメタゾンもしくはブデソニドのグルクロニドもしくはデキストランコンジュゲート化プロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ ２３０２；Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）；徐放性メサラジン；メトトレキセート；血小板活性化因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；およびリグノカインが含まれる。
【０１１９】
１つの実施形態では、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）を、免疫応答、例えば移植片拒絶反応を調節する際に関係する他の標的に向けて立てられた１つまたは複数の抗体と組み合わせて使用できる。免疫応答を治療もしくは予防するための、本発明のＩＬ−１７Ｆアンタゴニストをそれと組み合わせて使用できる物質の非限定的例には、以下の他の細胞表面分子、例えばＣＤ２５（インターロイキン２受容体−ａ）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４（ＣＤ８０（Ｂ７．１）、例えばＣＴＬＡ４ Ｉｇ−アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標））、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳおよび／またはＣＤ８６（Ｂ７．２）に対する抗体が含まれるが、それらに限定されない。さらにまた別の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、１つまたは複数の一般的免疫抑制剤、例えばシクロスポリンＡもしくはＦＫ５０６と組み合わせて使用される。
【０１２０】
他の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、例えば、嚢胞性線維症を有する患者における、例えば嚢胞性線維症における細菌感染に起因する肺症状の悪化を含む炎症性疾患、例えば気道炎症に対するワクチンアジュバントとして使用される。これらのタイプの障害を治療するためのアジュバントの組み合わせは、様々な抗原と組み合わせて使用するために適合する。抗原は、タンパク質に由来するペプチドもしくはポリペプチド、ならびに以下の：糖、タンパク質、ポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチド、自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質、移植抗原、アレルゲン、または他の高分子成分のうちのいずれかのフラグメントを含んでいてよい。一部の例では、１つより多い抗原が抗原性組成物に含まれる。
【０１２１】
例えば、脊椎動物宿主内でのアレルゲンに対する応答を抑えるための、本発明のアジュバントの組み合わせを含有する所望のワクチンは、アレルゲンもしくはそのフラグメントを含有するワクチンを含む。そのようなアレルゲンの例は、これにより参照して本明細書にその全体が組み込まれる米国特許第５，８３０，８７７号および国際特許出願公開ＷＯ９９／５１２５９に記載されており、花粉、昆虫毒液、動物皮膚アカ、真菌胞子および薬物（例えば、ペニシリン）を含む。ワクチンは、アレルギー反応の公知の原因であるＩｇＥ抗体の産生を妨害する。また別の例では、脊椎動物宿主内でのアミロイド沈着を特徴とする疾患を予防もしくは治療するための、本発明のアジュバントの組み合わせを含有する望ましいワクチンは、アミロイドペプチドタンパク質（ＡＰＰ）の部分を含有するワクチンを含む。この疾患は、様々に、アルツハイマー病、アミロイドーシスもしくはアミロイド形成疾患と呼ばれている。そこで、本発明のワクチンには、本発明のアジュバントの組み合わせ＋Ａβペプチド、ならびにＡβペプチドのフラグメントおよびＡβペプチドに対する抗体もしくはそのフラグメントが含まれる。
【０１２２】
１）細胞機能を提示する抗原をダウンレギュレートする；および２）免疫抑制を管理するための併用療法の方法は当分野において周知である(例えば、Xiao et al. (2003) BioDrugs 17:103-11; Kuwana (2002) Hum. Immunol. 63:1156-63; Lu et al. (2002) Transplantation 73:S19-S22; Rifle et al. (2002) Transplantation 73:S1-S2; Mancini et al. (2004) Crit. Care. Nurs. Q. 27:61-64を参照)。
【０１２３】
したがって本発明のまた別の態様は、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒポリペプチド（フラグメントおよび／またはその融合タンパク質を含む）；阻害性の抗ＩＬ−１７Ｆもしくは抗ＩＬ−１７Ｒ抗体；および／または拮抗性低分子など）の投与を実施するためのキットに関する。１つの実施形態では、本キットは、医薬担体中で調製された１つまたは複数の結合剤と、および少なくとも１つの物質、例えば、１つまたは複数の個別医薬製剤中で適切に調製された治療薬と、を含む。
【０１２４】
本特許出願を通して言及した全参考文献、特許、および特許出願公開の全内容は、これにより参照して本明細書に組み込まれる。
(実施例)
以下の実施例は、本発明の例示的実施形態を提供しており、決して本発明を限定するものではない。当業者は、極めて多数の他の実施形態が本発明の範囲内に含まれることを理解するであろう。
【実施例１】
【０１２５】
材料および方法
実施例１．１：ヒト気道組織由来の一次細胞培養
ヒト気管支上皮（ＨＢＥ）細胞は、以前に記載されたように(Devor et al. (2000) Am. J. Physiol. - Cell Physiol. 279:C461-79)、臓器移植レシピエント自身の肺、またはドナー肺の未使用切片から単離した。気道を周囲外膜組織から切除し、ペニシリン、ストレプトマイシン、およびアムホテリシンＢを含有する氷温ＨＥＰＥＳ緩衝最小必須培地中に置いた。低温ハンクス平衡塩液（ＨＢＳＳ）を用いて複数回にわたり洗浄した後、軟骨性気道セグメントを縦方向に切開し、０．１％ プロテアーゼＸＩＶ（Ｓｉｇｍａ社、ミズーリ州セントルイス）中において４℃で一晩インキュベートした。気道上皮細胞は、鉗子の鈍端を用いて上皮を穏やかにこすり取ることによって入手した。回収した細胞は、ＩＶ型ヒト胎盤コラーゲン（Ｓｉｇｍａ社）をコーティングした組織培養プレート上の気管支上皮増殖培地（ＢＥＧＭ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ社、カリフォルニア州サンディエゴ）およびケラチノサイト−血清無含有培地（Ｋ−ＳＦＭ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）の１：１混合液中でプレーティングした。これらの条件下で５〜７日後、細胞をトリプシン処理し、ＨＢＳＳ中で洗浄し、ＢＥＧＭ／Ｋ−ＳＦＭ中で１００％コンフルエンスでＩＶ型ヒト胎盤コラーゲンを被覆したＣｏｒｎｉｎｇ／ＣｏＳｔａｒ  Ｔｒａｎｓｗｅｌｌフィルタ上に播種した。２４時間後、細胞をＴｒａｎｓｗｅｌｌフィルタから頂端培地を除去することによって空気−液体界面に配置し、そして側底培地を、分化を促進するために２％ ＵｌｔｒｏＳｅｒ Ｇ（ＢｉｏＳｅｐｒａ社）を含有するＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）と取り換えた。二相性培養条件下で、繊毛および粘膜分泌顆粒の形成を伴う粘膜繊毛上皮が観察された。これらの培養は、サイトカイン処置を開始する２４時間前の血清に由来した。
【０１２６】
実施例１．２：サイトカインおよび抗体処置
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ミネソタ州ミネアポリス）をＦ１２／ＤＭＥＭ中に溶解させ、最終濃度が０、１、１０もしくは１００ｎｇ／ｍｌとなるように一次ＨＢＥ培養の頂端および／または基底表面の両方へ直接的に加えた。ＴＮＦ−α（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、カリフォルニア州カマリロ）は、１ｎｇ／ｍｌの最終濃度で使用した。抗ヒトＩＬ−１７受容体モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）がＩＬ−１７Ｆ生物活性に及ぼす阻害作用を試験するために、この抗体を、ＥＤ５０の１０倍を超える２μｇ／ｍｌの最終濃度で培養に加え、そしてヒト皮膚線維芽細胞によるサイトカイン、ケモカインおよび／または成長因子分泌を決定した。組換えヒトＩＬ−Ｒ：Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を１μｇ／ｍｌで使用した。ＴＮＦ受容体中和試験では、抗ヒトＴＮＦ−ＲＩ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社）を１０μｇ／ｍｌの濃度で使用した、および／または組換えヒトＴＮＦ−ＲＩＩ：Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を０．５μｇ／ｍｌの濃度で使用した。
【０１２７】
実施例１．３：ＤＥＦＢ４遺伝子発現のＲＮＡ単離／ＲＴ−ＰＣＲ分析 
ＲＮＡは、ＴｒｉＺＯＬ ＬＳ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を製造業者のプロトコールにしたがって使用して２４時間のインキュベーション後に培養から抽出した。Ｔａｑｍａｎ ＰＣＲは、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７７００配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）上での逆転写および増幅後にヒトβディフェンシン−４（ＤＥＦＢ１０４）遺伝子発現を試験するために実施した。ＤＥＦＢ１０４のための遺伝子特異的プライマーは、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社から購入した。ＰＣＲ反応は９６ウエル光学反応プレート内で実施したが、各ウエルは、２５μｌのＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒミックス、０．５μｌの各プライマー（最終濃度:９００ｎＭ）、１９μｌの水および５μｌのｃＤＮＡサンプルとの５０μｌの反応混合液を含有していた。閾値サイクル（Ｃｔ）値は、１回の反応内で発生する蛍光が２標準偏差を超えるサイクル数を反映している。各サンプルの相対ｍＲＮＡ量は、ハウスキーピング遺伝子１８ｓのＣｔと比較して、そのＣｔに基づいて計算した。結果は、比較発現レベル（２−ΔΔＣＴ）として表示されている。リアルタイムＰＣＲは、各サンプルについて３回ずつ実施し、平均値を計算した。この方法を少なくとも３回の独立実験において実施した。
【０１２８】
実施例１．４：Ｂｉｏ−ＰｌｅｘおよびＥＬＩＳＡの測定 
頂端および側底培地中のＩＬ−ｌβ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、およびＴＮＦ−αを同時に定量するためのＢｉｏ−Ｐｌｅｘヒトサイトカインアッセイ（ＢＩＯ−ＲＡＤ社）を推奨方法にしたがって実施した。Ｇ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−αは、別個のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を製造業者の取扱説明書にしたがって用いて測定した。ヒトＩＬ−１７Ｆは、Ｗｙｅｔｈ社（マサチューセッツ州ケンブリッジ）によって提供された抗体を用いて測定した。
【０１２９】
実施例１．５：免疫組織化学検査
抗ヒトＩＬ−１７Ｒ抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、カリフォルニア州サンタクルーズ）を使用してヒト肺組織切片由来の呼吸器上皮細胞上でのＩＬ−１７Ｆ受容体の発現を特性解析した。染色は、二次抗体としてのＣｙ−３コンジュゲート化ウサギ抗ヤギ抗体（Ｓｉｇｍａ社）および封入剤としてのｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ Ｇを用いて実施した。前染色を遮断するためにはウサギ血清を使用した。染色画像は、Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｐｒｏｖｉｓ蛍光顕微鏡に取り付けられたカメラを用いて記録し、画像はさらにＯｌｙｍｐｕｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｏｌｙｍｐｕｓ社、ニューヨーク州メルビル）を用いて分析した。
【０１３０】
気液界面上で増殖させた分極ＨＢＥ細胞上でのＴＮＦ受容体Ｉ（ＴＮＦ−ＲＩ）およびＩＩ（ＴＮＦ−ＲＩＩ）の発現を特性解析するために、マウス抗ヒトＴＮＦ−ＲＩおよびＴＮＦ−ＲＩＩモノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を一次抗体として使用し、Ａｌｅｘａ ４８８ヤギ抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社、オレゴン州ユージーン）を二次抗体として使用した。ＤＡＰＩを含むＰｒｏｌｏｎｇ Ｇｏｌｄ ａｎｔｉｆａｄｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社）を封入剤として使用した。画像はＡｘｉｏｐｌａｎ ２汎用イメージング顕微鏡に取り付けられたカメラによって記録し、さらにＳｌｉｄｅｂｏｏｋ ４．０ソフトウエア（どちらもＩｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ社、コロラド州デンバー）およびＭｅｔａｍｏｒｐｈソフトウエア（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ社、ペンシルベニア州ダウニングタウン）を用いて分析した。
【０１３１】
実施例１．６：ヒト被験者
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）がコロニー形成している嚢胞性線維症を有しており、入院を必要とするほど肺症状が悪化している成人患者（平均年齢２２歳）を本試験に登録し、入院第１日、ならびに抗生物質および強化呼吸療法の開始１０および２０日後に、喀痰中の炎症のバイオマーカーを測定した。喀痰サンプルは、Ｓｐｕｔｏｌｙｓｉｎ（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ニュージャージー州サマービル）を用いて処理した。手短には、喀痰１ｍｇに付き１ｍｌの１０％ Ｓｐｕｔｏｌｙｓｉｎを加え、サンプルを強力に攪拌しながら３７℃で５分間インキュベートし、注入ピペットを用いて強力に混合した。次にサンプルを４℃で５分間にわたり２，０００ｒｐｍで遠心分離し、上清をＢｉｏ−ＰｌｅｘおよびＥＬＩＳＡによってアッセイした。
【０１３２】
実施例１．７：ウェスタンブロット分析
処理した喀痰由来のウェスタンブロットサンプルは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離した（１レーンに付き１２．４μｇのタンパク質）。ゲル上で分離したタンパク質は、１４０ｍＡで１時間かけてＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、マサチューセッツ州ベッドフォード）へ移した。この膜は、５％ ＢＳＡを含有するＰＢＳを用いて４℃で一晩ブロッキングした。ブロットはウサギ抗ヒトｐ１９抗体を用いて室温で１時間かけて染色し、二次アルカリホスファターゼコンジュゲート化ヤギ抗ウサギＩｇＧ（ＢＩＯ−ＲＡＤ社）およびＢＣＥＰ／ＮＢＴ試薬（ＢＩＯ−ＲＡＤ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、カリフォルニア州ハーキュリーズ）を用いたインキュベーションによって発現させた。
【０１３３】
実施例１．８：統計的分析
データは、ＳｔａｔＶｉｅｗ統計的ソフトウエア（Ｂｒａｉｎｐｏｗｅｒ社、カリフォルニア州カラバサス）を用いて分析した。データが正規分布している群間の比較はスチューデントのｔ検定を用いて実施し、複数の群間もしくはノンパラメトリックデータ間の比較は分散分析を用いて実施した。シェフェの検定を事後検定として使用した。順序比較を行なうためには、マン・ホイットニー検定もしくはウィルコクソンの対応のあるサンプル検定を使用した。有意性はｐ値＜０．０５で容認された。
【実施例２】
【０１３４】
ＩＬ−１７Ｆはヒト気管支上皮細胞によるＧ−ＣＳＦ、ＧＲＯ−αおよびＭＣＰ−１発現をアップレギュレートする
実施例１．１に記載したＢｉｏ−ＰｌｅｘおよびＥＬＩＳＡアッセイを用いて、頂端および側底培地の両方に対して、気液界面で増殖させたヒト一次気管支上皮細胞中で（実施例１参照）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆによって調節される可能性があるサイトカイン、ケモカインおよび／または成長因子についてスクリーニングした。ＩＬ−１７Ａによって誘導されると既に報告された（データは示していない）２つの因子であるＩＬ−８およびＩＬ−６に加えて、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＲＯ−αおよびＭＣＰ−１分泌における有意な誘導は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆで処置された一次ＨＢＥ細胞中において２４時間後に検出された（表２）。これらのデータは、相違する気道ドナーから分離された成長因子の絶対量における変動性のために、誘導倍率としてグラフ化されている。これらの作用は、用量依存性であり（図１Ａ；表２）、最高作用は１００ｎｇ／ｍｌの濃度で観察された。ＩＬ−１７Ａは、２４時間後にＧ−ＣＳＦ、ＧＲＯ−αおよびＭＣＰ−１を誘導することに関して重量／重量ベースでＩＬ−１７Ｆより強力であった。１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを用いて実施した時間経過は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦがＧ−ＣＳＦ、ＧＲＯ−αおよびＭＣＰ−１に及ぼす作用が時間依存性であり（図１Ｂ）、最高作用は２４時間後に観察されることを示した。これらの動的試験に基づいて、以下の実験の大多数は、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆおよび２４時間のインキュベーション時間を用いて実施された。
【０１３５】
【表２】
2008532493.tif 000004
【実施例３】
【０１３６】
ＩＬ−１７ＦはＧ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−α分泌を誘導するためにＴＮＦ−αと相乗作用性である
ＩＬ−１７ＡとＴＮＦ−αとの相乗作用は報告されているので、ＩＬ−１７Ｆ（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍｌ）の併用が一次ＨＢＥ細胞によるＧ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−α分泌をアップレギュレートする作用を決定した。サイトカインの最適濃度は、以前の実験で決定されていた（データは示していない）。ＨＢＥ細胞は、ＩＬ−１７ＦをＴＮＦ−αと２４時間にわたり結合させた場合に、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−α分泌における相乗作用を示した（図２Ａおよび２Ｂ）。この相乗作用は、刺激性サイトカイン混合物を抗ＩＬ−１７Ｒ ｍＡｂとプレインキュベートすることによって阻害されたが、可溶性ＩＬ−１７Ｒ：Ｆｃキメラタンパク質もしくはアイソタイプがマッチしたコントロールＡｂを用いた場合は阻害されなかった（アイソタイプのデータは示していない）。しかし、抗ＩＬ−１７Ｒ ｍＡｂおよび可溶性ＩＬ−１７Ｒ：Ｆｃタンパク質はどちらも、Ｇ−ＣＳＦにおけるＩＬ−１７Ａ誘導性増加を阻害することに有効であった（図２Ｃ）。これらのデータは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ誘導性Ｇ−ＣＳＦ応答のどちらにとってもＩＬ−１７Ｒが極めて重要であることを示唆している。
【実施例４】
【０１３７】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆによって誘導されたＧＲＯ−αおよびＧ−ＣＳＦ分泌は抗ＩＬ−１７受容体Ａｂによって減少する
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに応答したＧＲＯ−αおよびＧ−ＣＳＦ分泌の分極化を決定するために、一次ＨＢＥ細胞をＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆで２４時間刺激し、そしてＧＲＯ−αおよびＧ−ＣＳＦを頂端もしくは側底液中でアッセイした。ＧＲＯ−αおよびＧ−ＣＳＦはどちらも頂端側および側底側の両方で分泌され、ＧＲＯ−αはＧ−ＣＳＦに比較して側底側分泌においてより大きな誘導を示した（図３）。抗ＩＬ−１７Ｒ Ａｂとのプレインキュベーションは、頂端および側底培地においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方によって媒介されるＧＲＯ−αおよびＧ−ＣＳＦ分泌の誘導を有意に阻止した（図３）。これらの結果は、ＨＢＥ細胞上でＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆ活性のどちらかがＧ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−α産生を誘導するためにはＩＬ−１７Ｒが必要とされるという意見を支持している。
【実施例５】
【０１３８】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦはＤＥＦＢ１０４の発現をアップレギュレートする
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ（どちらも１０ｎｇ／ｍｌ）をＨＢＥ培養に加え、２４時間後にＲＮＡを抽出し、ヒトβディフェンシン−４ｍＲＮＡ発現（ＤＥＦＢ１０４遺伝子）をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって分析し、１８ｓのリボソームＲＮＡへ標準化した。ＤＥＦＢ１０４は用量依存方法でＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方によってアップレギュレートされたが（図４Ａ）、ＩＬ−１７Ａは２４時間にわたる１０ｎｇ／ｍｌでＩＬ−１７Ｆより高い誘導倍率を有した（ΔΔＣＴ：各々、−３．３４±０．４４ＳＥＭ対−２．２３±０．３１ＳＥＭ）。２μｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１７Ｒ抗体とのプレインキュベーションは１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａおよび１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ｆの作用を部分的に、各々、６２．５％および７７．６％を阻害したが、これはＩＬ−１７受容体シグナル伝達が両方のサイトカインによるＤＥＦＢ１０４のアップレギュレーションのためにも必要とされることを指示している（図４Ｂ）。最後に、ＤＥＦＢ１０４誘導に対するＩＬ−１７Ａ（１ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ−１７Ｆ（１０ｎｇ／ｍｌ）とＴＮＦ−α（１ｍｇ／ｍｌ）との組み合わせの作用を評価した。ＩＬ−１７ＡおよびＴＮＦ−α、またはＩＬ−１７ＦおよびＴＮＦ−αのいずれかの組み合わせを用いると付加的作用が見いだされた（図４Ｃ）。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の組み合わせもまたＤＥＦＢ１０４誘導に付加的作用を生成した（図４Ｃ）。
【実施例６】
【０１３９】
ＩＬ−１７受容体は、呼吸器上皮細胞の側底面上で機能的に発現する
ＩＬ−１７受容体のための免疫組織化学的染色をヒト肺標本の冷凍切片について実施した。非特異的染色を示さなかったコントロール切片とは対照的に、ＩＬ−１７Ｒは呼吸器上皮細胞中ならびに肺実質細胞中で発現して、主として呼吸器上皮細胞の側底面に局在することが見いだされた（データは示していない）。この免疫組織化学的所見を確証するために、ＨＢＥ細胞を側底培地もしくは頂端培地中でＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆと一緒に２４時間インキュベートする実験を設計した。Ｇ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−αのための馴化側底培地をアッセイし、どちらの成長因子もＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを側底培地に適用した場合にアップレギュレートされることが見いだされた。しかし、ＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆを頂端へ適用した場合にはＧＲＯ−αもしくはＧ−ＣＳＦの誘導は観察されなかった（図５）。これらをまとめると、これらのデータは、ＩＬ−１７Ｆ生物活性がＨＢＥ細胞の側底側でＩＬ−１７Ｒを通してのシグナル伝達によって発生することを示唆している。
【実施例７】
【０１４０】
ＴＮＦ受容体ＩおよびＩＩは呼吸器上皮細胞の側底面上で構造的および機能的に発現する
ＴＮＦ受容体Ｉ（ＴＮＦ−ＲＩ）およびＩＩ（ＴＮＦ−ＲＩＩ）は、抗ヒトＴＮＦ−ＲＩおよび抗ヒトＴＮＦ−ＲＩＩモノクローナル抗体を用いてＴｒａｎｓｗｅｌｌ膜上で増殖させた分極一次ＨＢＥ細胞上で染色した。両方の受容体がＨＢＥ細胞中で発現することが見いだされた（データは示していない）。陰性コントロールとして、二次抗体だけを用いてフィルタを染色すると、非特異的染色を示さなかった（データは示していない）。さらにその上、ＺＸ軸の再構築は、ＴＮＦ−ＲＩおよびＴＮＦ−ＲＩＩがＨＢＥ細胞の外側膜の、密着帯の下方に局在することを証明した（データは示していない）。
【０１４１】
この免疫組織化学的所見を確証するために、ＨＢＥ細胞を側底培地もしくは頂端培地中でＩＬ−１７Ｆおよび／またはＴＮＦ−αと一緒に２４時間インキュベートする実験を設計した。側底馴化培地をアッセイした。Ｇ−ＣＳＦは、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＴＮＦ−αを側底培地に適用した場合にアップレギュレートされたが、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＴＮＦ−αを頂端に適用してもＧ−ＣＳＦの誘導は観察されなかった（図６Ａ）。これらをまとめると、これらのデータは、ＩＬ−１７ＦおよびＴＮＦ−αの間の相乗作用を導くシグナル伝達がＨＢＥ細胞中において側底で発生することを示唆している。
【０１４２】
ＩＬ−１７ＦおよびＴＮＦ−αの間の相乗作用のために必要とされるシグナル伝達にとってのＴＮＦ受容体ＩおよびＩＩの重要性を解明するために、ＨＢＥ細胞を抗ヒトＴＮＦ−ＲＩおよび組換えヒトＴＮＦ−ＲＩＩ：Ｆｃキメラの一方もしくは両方と一緒にプレインキュベートした。ＩＬ−１７ＦおよびＴＮＦ−αを結合した後にＧ−ＣＳＦ分泌へ及ぼす相乗作用は、抗ヒトＴＮＦ−ＲＩおよび組換えＴＮＦ−ＲＩＩ：Ｆｃキメラによって遮断された（図６Ｂ）。予想外にも、抗ヒトＴＮＦ−ＲＩもしくはＴＮＦ−ＲＩＩ：Ｆｃキメラのどちらかの存在下でのＩＬ−１７ＦおよびＴＮＦ−αの併用に応答してＨＢＥ細胞によって分泌されるＧ−ＣＳＦのレベルは、ＩＬ−１７Ｆ刺激に応答してＨＢＥ細胞によって分泌されるＧ−ＣＳＦのレベルより低かったが（図６Ｂ）、これはＩＬ−１７ＦがＨＢＥ培養へ単独で適用された場合でさえ、それがこれらの細胞によって持続性で分泌されるＴＮＦ−αと相互作用することによって相乗作用を有することを示唆している。ＴＮＦ ＲＩＩ：Ｆｃキメラとのインキュベーションだけが、ＨＢＥ細胞によるＧ−ＣＳＦ分泌をＩＬ−１７Ａ刺激に応答してＨＢＥ細胞によって分泌されるＧ−ＣＳＦのレベルにほぼ同等のレベルまで減少させた（図６Ｃ）。
【実施例８】
【０１４３】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆレベルは肺症状が悪化している嚢胞性線維症患者において増加する
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、持続性気管支内感染および好中球性肺炎症(Karp et al. (2004) Nat. Immunol. 5:388-92)ならびに高喀痰中ＣＸＣＬ８レベル(Smountas et al. (2004) Clin. Biochem 37:1031-36; Sagel et al. (2001), Am. J. Respir. Crit. Care Med. 164:1425-31)を特徴とする肺疾患である。Ye and colleagues ((2001) J. Exp. Med. 194:519-527) は以前に、ＩＬ−１７Ｒシグナル伝達がグラム陰性菌性感染に応答したマウス肺中でのＣＸＣＬ２発現のために極めて重要であることを証明しており、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは肺症状が悪化しているＣＦ患者の喀痰中でアップレギュレートされるであろうと仮説が立てられた。これを支持して、予備試験は、喘息もしくは胃食道逆流疾患に起因する慢性の咳を伴うコントロールに比較して、進行中の肺症状の悪化のための気管支鏡検査を受けているＣＦ患者における高いＩＬ−１７Ａレベルを証明した（データは示していない）。これらのサンプルは、臨床的に気管支鏡検査を実施する決定のために選択の偏りを受ける可能性があるので、肺症状が悪化している（入院および静脈内抗生物質投与を必要とする）８例の成人ＣＦ患者（平均年齢：２２歳）由来の喀痰サンプル中のＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆおよび近位メディエータＩＬ−２３（ｐ１９）を調査対象に選択した。入院第１日に、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの増加したレベルは、ＣＦではないと診断された４例の被験者から採取された喀痰サンプルと比較した場合に容易に検出できた（ＩＬ−１７Ａについては５９．５８ｐｇ／ｍｌ±５．２２（Ｓ.Ｅ.Ｍ）対４．１７±２．１３；およびＩＬ−１７Ｆについては８４．６７±１０．８７対２０．１±３．２５）。喀痰は、抗生物質治療中に連続的に採取して分析した。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ濃度は第２０日までに劇的に減少し（図７Ａ）、ＣＦではないと診断された被験者に類似するレベルに到達した。これらの患者の喀痰中で１パネルの他の１８種のサイトカインはＬｕｍｉｎｅｘサイトカインビーズを用いて測定したところ、ＩＬ−８、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＲＯ−α、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１βもまた入院第１日に増加していたが、第２０日までに印象的に減少して（例えば、図７Ｂ）、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆについて所見されるパターンに類似する総合パターンを示すことが見いだされた。類似の発現パターンは、サイトカイン／ケモカイン濃度が全タンパク質含量について補正されてもされなくても所見された。最後に、大部分がマクロファージおよび樹状細胞の生成物であるＩＬ−２３はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの近位レギュレータであるので、ＩＬ−２３ ｐ１９タンパク質の存在を検出するために、喀痰サンプル［抗生物質処置の直前（入院第1日）および構成物質処置の２０日後に肺症状悪化に苦しむ３例の嚢胞性線維症患者から入手した］のウェスタンブロット分析を実施した。ＩＬ−２３は肺症状が悪化しているＣＦ患者全例において検出された；患者３例中２例では、ＩＬ−２３のレベルは入院第１日の方が高く、第２０日までに減少した（データは示していない）。
【実施例９】
【０１４４】
考察
ＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆは、感染性(Ye et al. (2001) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25:335-40）および抗原性刺激（Hellings et al. (2003) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 28:42-50）の両方に応答して活性化されたＴ細胞の生成物(Moseley (2003) Cytokine Growth Factor Rev. 14:155-74)である。グラム陰性細菌のリポポリサッカリドは、ＴＬＲ４依存性およびＩＬ−２３依存性経路を通してＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを誘導すると思われる(Happel et al. (2003) J. Immunol.170:4432-36; Aggarwal et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:1910-14; Linden and Adachi (2002) Allergy 57:769-75)。肺におけるＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆの過剰発現は、ＣＸＣケモカインおよび好中球動員の誘導を生じさせる(Ye et al. (2001) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25:335-40; Hurst et al. (2002) J. Immunol. 169:443-53)。遺伝子ターゲティングを通してのＩＬ−１７Ｒシグナル伝達の欠損症は、顆粒球生成および肺好中球動員の両方における欠損を伴うグラム陰性細菌性肺感染に対する増加した感受性を生じさせる(Ye et al. (2001) J. Exp. Med. 194:519-28)。ＩＬ−１７Ａの阻害は、リポポリサッカリド誘導性肺好中球動員を減少させることもまた報告されている(Laan et al. (1999) J. Immunol. 162:2347-52; Ferretti et al. (2003) J. Immunol. 170:2106-12.)。ＩＬ−１７Ｒノックアウトマウスにおける顆粒球生成の欠損には、Ｇ−ＣＳＦ遊離における９０％を超える減少が結び付いている(Ye et al. (2001) J. Exp. Med. 194:519-28)。さらに、ＩＬ−１７Ａの全身性過剰発現は、一部にはＧ−ＣＳＦに依存する顆粒球生成における顕著な誘導を生じさせる(Schwarzenberger et al. (1998) J. Immunol. 161:6383-89; Schwarzenberger et al. (2000) J. Immunol. 164:4783-89)。
【０１４５】
肺内でのＧ−ＣＳＦおよびＣＸＣケモカインＧＲＯ−αを調節する際のＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆの役割をより明確に規定するために、肺組織中でのＩＬ−１７受容体発現を試験したところ、基底呼吸器上皮細胞中でＩＬ−１７Ｒの有意な発現が見いだされた。分極ＨＢＥ細胞とＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方とのインキュベーションは、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−αに加えてＩＬ−８およびＩＬ−６の誘導（データは示していない）を含む、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘによって測定したサイトカイン応答と類似のプロファイルを生じさせた。ＩＬ−１７ＦはＴＮＦ−αと相乗作用してヒト肺から単離された気管支上皮細胞によるＧ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−αの産生をさらに誘導することもまた証明された。これらの所見とは対照的に、Numasaki and coworkers ((2004) Immunol. Lett. 95:97-104)は、ＩＬ−１７ＦがＧ−ＣＳＦのＴＮＦ−α誘導性分泌に対する阻害作用を有することを報告した。しかし、Numasakiの研究は、この応答が相違する可能性がある肺微小血管内皮細胞中で実施された。
【０１４６】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦはどちらもＧＲＯ−αおよびＧ−ＣＳＦ分泌を調節する際にＩＬ−１７受容体を含むと思われるが、これはＩＬ−１７Ｒに対して特異的なモノクローナル抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに応答したこれらのサイトカインの遊離を有意に弱めるからである。しかし、この受容体を用いた場合の低いリガンド効率のために(Hymowitz et al. (2001) EMBO J. 20:5332-41)、ＩＬ−１７Ｆに関係する共受容体の可能性を排除することはできない(Kolls and Linden (2004) Immunity 21 :467-76)。ＩＬ−１７Ｆは最近、インビトロでＩＬ−１７ＲＣへ結合することが証明されている(Kuestner et al. (2005) Keystone Symposia: Cytokines, Disease, and Therapeutic Intervention, 49(Abstract))。これらのデータを支持して、可溶性ＩＬ−１７ＲはＨＢＥ細胞中のＩＬ−１７Ａ生物活性を阻害することに有効であったが、ＩＬ−１７Ｆには有効ではなかった。これらのデータは、ＩＬ−１７Ｆの結合が細胞膜受容体については相違すること、またはＩＬ−１７Ｆ応答のためにはＩＬ−１７Ｒを含む共受容体複合体が必要とされることを示唆している。また別の可能性は、ｍＡｂのＩＬ−１７ＲＣに対する交差反応性である；しかしこれは、ＩＬ−１７ＲＣのＩＬ−１７Ｒへの相同性が１５％に過ぎないのでありそうもない(Kolls (2004) Immunity 21 :467-76)）。さらに、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、およびＴＮＦ−αの生物活性は、リガンドが側底へ適用された場合に最大であったが、これはＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、およびＴＮＦ−αシグナル伝達がおそらく気道上皮細胞の側底面を通して発生することを示唆している。この受容体局在は目的論的意味をなすが、それはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの顕著な潜在的起源は、粘膜下間隙内に存在できる活性化Ｔ細胞であるためである(Kolls and Linden (2004) Immunity 21 :467-76)。実際に、Langrish and colleaguesは最近、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦならびにＴＮＦ−αを共発現するＴｈＩＬ−１７細胞の集団を規定した（Langrish et al. (2005) J. Exp. Med. 201(2):233-40）。そこで、ＴｈＩＬ−１７細胞は、炎症応答を媒介するヒト気管支上皮細胞と相互作用する極めて重要な細胞集団を表す可能性がある。可溶性ＴＮＦ−αを用いて、ＴＮＦ−ＲＩがＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆとの相乗作用のために極めて重要であることが証明された。しかし、ＨＢＥ細胞はＴＮＦ−ＲＩＩも発現するので、これらの細胞は、優先的に結合してＴＮＦ−ＲＩＩを通してシグナル伝達するＴｈＩＬ−１７上で発現した細胞表面ＴＮＦに応答することができる(Grell et al. (1995) Cell 83:793-802)。注目すべきであるのは、ＨＢＥ細胞中でのＧ−ＣＳＦおよびＧＲＯ−α応答（図７を参照）を引き出すために使用された濃度は、喀痰中で検出された濃度より約１０〜１００倍高いという事実である。これはおそらく、肺中の局所組織濃度が喀痰（プロテアーゼが富裕である）中より高い可能性があるという事実、またはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦはＴＮＦ−αなどの相乗作用性サイトカインがｐｇ／ｍｌ濃度でシグナル伝達することを必要とする可能性があるという事実(Kolls (2004) Immunity 21 :467-76)を反映している。ＴＮＦ−αとＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆとの相乗作用の機序は完全には解明されていないが、１つの機序は、その後の遺伝子転写を駆動する(Shen et al. (2005) J. Leukoc. Biol. 77:388-99)、転写因子、例えばＣ／ＥＢＰδの相乗作用性誘導を含む可能性がある。
【０１４７】
ＩＬ−１７Ａは、関節リウマチ(Lubberts (2003) Curr. Opin. Investig. Drugs 4:572-77)、多発性硬化症(Lock et al. Nat. Med. 8:500-08)、および炎症性腸疾患(Fujino et al. (2003) Gut 52:65-70)を含む多数の炎症性自己免疫疾患においてアップレギュレートされると報告されている。最近、Ｔ細胞由来ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、マクロファージおよび樹状細胞上のＴＬＲ４ならびにその後のこれらの細胞によるＩＬ−２３産生によって調節されることが証明されている。さらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは類似の染色体位置を有しており、おそらく遺伝子重複事象から発生した。これらのデータ、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆが肺好中球増加症を媒介する能力(Laan et al. (1999) J. Immunol. 162:2347-52)、およびＣＦにおける慢性炎症が主として好中球性であるという事実に基づくと、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、慢性グラム陰性細菌感染、例えば気管支拡張症もしくは嚢胞性線維症（ＣＦ）などの状況における気道炎症において何らかの役割を果たす可能性が高い。
【０１４８】
このような目的で、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆはどちらも肺症状が悪化している成人ＣＦ患者の喀痰中で増加することが見いだされた。さらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆレベルの上昇には以前に同定された炎症メディエータ、例えばＩＬ−８(Sagel et al. (2001) Am. J. Respir. Crit. Care Med. 164:1425-31)およびＧ−ＣＳＦ(Schuster et al. (1995) Eur. Arch. Otorhinolaryngol. 252(suppl. 1):S59-S60)が結び付いており、これはこれらのＩＬ−１７ファミリーメンバーがこれらの患者の気道内への進行中の好中球動員において何らかの役割を果たす可能性があることを示唆している。さらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、ＣＦを有する患者におけるＣＸＣケモカインおよびＧ−ＣＳＦ遊離を調節できると仮定されている。さらに、ＩＬ−２３ｐ１９は濃縮喀痰中において１００ｎｇ／ｍｌに近いレベルで検出されたが、そのレベルはＩＬ−１７のヒトＴ細胞産生を生じさせる範囲内に明確に含まれている(Eijnden et al. (2005) Eur. J. Immunol. 35:469-75)。
【０１４９】
これらのデータは、臨床サンプル中のＩＬ−１７Ｆを測定した最初のデータであると考えられる。慢性炎症は嚢胞性線維症の状況における肺機能低下にとって極めて重要であると考えられるので、本明細書に含めたデータは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆが、好中球媒介性炎症を拮抗するための極めて優れた治療薬を表す２つのＩＬ−１７ファミリーメンバーであることを示唆している。さらに、ＩＬ−１７Ｒシグナル伝達に拮抗する戦略は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの作用をどちらも遮断する可能性が高い。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
【図１】（左のパネル）１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、もしくは１００ｎｇ／ｍｌ（ｘ軸）のＩＬ−１７Ａ（■）またはＩＬ−１７Ｆ（□）いずれかを用いて、２４時間にわたり処置された一次ヒト気管支上皮（ＨＢＥ）細胞から採取した側底培地中のＧＲＯ−α、Ｇ−ＣＳＦおよびＭＣＰ−１タンパク質レベルの濃度（コントロール培地と比較した倍率変化；ｙ軸）を図１に示した。（右のパネル）４、８、１６もしくは２４時間にわたり（ｘ軸）、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａ（■）またはＩＬ−１７Ｆ（□）を用いて刺激されたＨＢＥ細胞から採取された側底培地中のＧＲＯ−α、Ｇ−ＣＳＦ、およびＭＣＰ−１の濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を図１に示した。結果は、代表的な１回の実験からの３例のサンプルの平均値±ＳＥＭとして表示した。
【図２】Ａ）以下の４つの条件（ｘ軸）：ＩＬ−１７Ｆ（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１７Ｆ（１０ｎｇ／ｍｌ）＋ＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍｌ）、もしくは抗ＩＬ−１７Ｒ ｍＡｂとともにプレインキュベートしたＩＬ−１７Ｆ＋ＴＮＦ−αのうちの１つを用いて処置した一次ＨＢＥ細胞から採取した側底培地中のＧＲＯ−α、Ｂ）以下の４つの条件（ｘ軸）：ＩＬ−１７Ｆ（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１７Ｆ（１０ｎｇ／ｍｌ）＋ＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１７Ｒ−Ｆｃ（１μｇ／ｍｌ）とともにプレインキュベートしたＩＬ−１７Ｆ＋ＴＮＦ−α、もしくは抗ＩＬ−１７Ｒ ｍＡｂとともにプレインキュベートしたＩＬ−１７Ｆ＋ＴＮＦ−αのうちの１つを用いて処置した一次ＨＢＥ細胞から採取した側底培地中のＧ−ＣＳＦ、またはＣ）以下の４つの条件（ｘ軸）：ＩＬ−１７Ａ（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１７Ａ（１０ｎｇ／ｍｌ）＋ＴＮＦ−α（１ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１７Ｒ−Ｆｃ（１μｇ／ｍｌ）とともにプレインキュベートしたＩＬ−１７Ａ＋ＴＮＦ−α、もしくは抗ＩＬ−１７Ｒ ｍＡｂとともにプレインキュベートしたＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ−１７Ｆ＋ＴＮＦ−αのうちの１つを用いて処置した一次ＨＢＥ細胞から採取した側底培地中のＧ−ＣＳＦ、の濃度（コントロール培地と比較した倍率変化；ｙ軸）を図２に示した。結果は、３回の個別実験からの平均値±ＳＥＭとして表示した（*はＡＮＯＶＡによるｐ＜０．０５を意味する）。
【図３】１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆのいずれかを用いて２４時間のインキュベーション前の３０分間にわたり２μｇ／ｍｌのＩＬ−１７受容体抗体（抗ＩＬ−１７Ｒ）を用いて前処置した（各グラフの第２および第４の棒）、もしくは未処置（第１および第３の棒）のいずれかであった一次ＨＢＥ細胞から採取した頂端もしくは側底培地中のＡ）ＧＲＯ−αおよびＢ）Ｇ−ＣＳＦの濃度（コントロール培地と比較した倍率変化；ｙ軸）を図３に示した。結果は、３回の個別実験からの平均値±ＳＥＭとして表示した（*はＡＮＯＶＡによるｐ＜０．０５を意味する）。
【図４】リアルタイムＰＣＲによって分析した、１８ｓの発現レベルに相対的に定量して、コントロールを用いて標準化した、そしてＡ）２４時間にわたり１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、もしくは１００ｎｇ／ｍｌ（ｘ軸）のＩＬ−１７Ａ（■）もしくはＩＬ−１７Ｆ（□）を用いて刺激した、Ｂ）培地へＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆを添加する前に抗ＩＬ−１７Ｒ抗体を用いてプレインキュベートした、またはＣ）ＩＬ−１７Ａ単独、ＩＬ−１７Ｆ単独、ＴＮＦ−α単独、もしくはＴＮＦ−α＋ＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆのいずれかを用いてインキュベートした一次ＨＢＥ細胞中におけるＤＥＦＢ１０４の比較発現レベル（ｙ軸）を図４に示した。結果は、３回の個別実験からの平均値±ＳＥＭとして表示した（*はＡＮＯＶＡによるｐ＜０．０５を意味する）。
【図５】側底面もしくは頂端面に１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆのいずれかを添加した後の一次ＨＢＥ細胞によるＧ−ＣＳＦ（■）およびＧＲＯ−α（□）濃度（コントロールと比較した倍率変化；ｙ軸）を図５に示した。結果は、代表的な１回の実験からの３例のサンプルの平均値±ＳＥＭとして表示した（*は、ＡＮＯＶＡによるｐ＜０．０５を意味する）。
【図６】Ａ）２４時間にわたり１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ｆおよび／または１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−α（ｘ軸）を用いて処置した一次ＨＢＥ細胞から採取した頂端もしくは側底培地中、Ｂ）１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ｆおよび／または１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αのいずれかとともに２４時間にわたりインキュベーションする２時間前に坑ヒトＴＮＦ−ＲＩおよび／またはＴＮＦ−ＲＩＩ：Ｆｃキメラ（０．５μｇ／ｍｌ）を用いて前処置した一次ＨＢＥ細胞から採取した側底培地中、またはＣ）１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａおよび／または１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αのいずれかを用いた２４時間のインキュベーションの２時間前に抗ヒト ＴＮＦ−ＲＩおよび／またはＴＮＦ−ＲＩＩ：Ｆｃキメラ（０．５μｇ／ｍｌ）を用いて前処置した一次ＨＢＥ細胞から採取した側底培地中におけるＧ−ＣＳＦの濃度（コントロール培地と比較した倍率変化；ｙ軸）を図６に示す。結果は、３回の個別実験からの平均値±ＳＥＭとして表示した（*はＡＮＯＶＡによるｐ＜０．０５を意味する）。
【図７】処置前（ＰＲＥ−処置）、抗生物質処置（ＡＴＢ）１０日後、またはＡＴＢ２０日後に、肺症状の悪化に苦しんでいる、嚢胞性線維症を有する患者から入手した喀痰サンプル中におけるＡ）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ、ならびにＢ）（上方パネル）ＩＬ−８、および（下方パネル）ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−１β、およびＴＮＦ−αの濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を図７に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
2008532493000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成20年1月18日(2008.1.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
2008532493.tif 000022
2008532493.tif 000023
2008532493.tif 000024
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