(57)【要約】  本発明は、標的化部分に結合された免疫応答修飾因子部位を含む免疫調節組成物を提供する。他の態様においては、本発明は、ＩＲＭの標的化送達をもたらし、局所免疫応答を発生し、および被検者における状態を処置する方法を提供する。一般に、方法は、被検者への、送達標的を認識する標的化部分に結合された免疫応答修飾因子部位を含む免疫調節組成物の投与を含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的化部分に結合されたＩＲＭ部分を含む免疫調節組成物。
【請求項２】
前記ＩＲＭ部分が、少なくとも１つのＴＬＲのアゴニストである、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項３】
前記ＩＲＭ部分および標的化部分が接続されたスペーサアームまたは固形支持体をさらに含む、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項４】
前記スペーサアームの長さが約２０Å〜約１００Åである、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項５】
前記固形支持体が、１ｎｍ〜約２００ｎｍの直径を有する粒子を含む、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項６】
ＩＲＭ部分および前記標的化部分が、親和結合されている、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項７】
ＩＲＭ部分および前記標的化部分が、共有結合されている、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項８】
前記標的化部分が、腫瘍特異的抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項９】
前記標的化部分が、乳癌、大腸癌、膵癌、前立腺癌、肺癌、前立腺癌、肝癌、またはメラノーマに対して特異的である少なくとも１つの抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識する、請求項８に記載の免疫調節組成物。
【請求項１０】
前記標的化部分が、腫瘍特異的マーカーのリガンドを含む、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項１１】
前記標的化部分が、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）受容体リガンドを含む、請求項１０に記載の免疫調節組成物。
【請求項１２】
前記標的化部分が、葉酸受容体リガンドを含む、請求項１０に記載の免疫調節組成物。
【請求項１３】
前記標的化部分が、ビスホスホネートを含む、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項１４】
前記標的化部分が、少なくとも１つの内皮抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項１５】
前記標的化部分が、樹状細胞表面抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項１６】
前記標的化部分が、活性化されたときに、腫瘍細胞を死滅させることが可能である細胞の表面抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識する、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項１７】
前記標的化部分が、細胞障害性Ｔリンパ球、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞の表面抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識する、請求項１６に記載の免疫調節組成物。
【請求項１８】
第２の標的化部分をさらに含む、請求項１に記載の免疫調節組成物。
【請求項１９】
１つの標的特異的部分が免疫細胞に特異的な抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識し、および前記第２の標的化部分が腫瘍細胞に特異的な抗原またはマーカーを認識する、請求項１８に記載の免疫調節組成物。
【請求項２０】
１つの標的特異的部分が免疫細胞に特異的な抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識し、および前記第２の標的化部分が内皮抗原またはマーカーの少なくとも一部分を認識する、請求項１８に記載の免疫調節組成物。
【請求項２１】
被検者に、送達標的を認識する標的化部分に結合されたＩＲＭ部分を含む免疫調節組成物を投与することを含む、ＩＲＭ化合物の標的化送達方法。
【請求項２２】
前記送達標的が腫瘍細胞を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記送達標的が免疫細胞を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
被検者に、送達標的を認識する標的化部分に結合されたＩＲＭ部分を含む免疫調節組成物を、免疫応答を誘導するための有効量で投与することを含む、局所免疫応答の誘導方法。
【請求項２５】
前記送達標的が腫瘍細胞を含み、および前記免疫応答が前記送達標的に対して指向される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記送達標的が免疫細胞であり、および前記免疫応答が少なくとも部分的に前記送達標的によって生起される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
免疫応答を誘導することによって処置可能である被検者における状態の処置方法であって、
前記被検者に、送達標的を認識する標的化部分に結合されたＩＲＭ部分を含む免疫調節組成物を有効量で投与して、前記状態の少なくとも１つの症状または徴候を処置することを含む方法。
【請求項２８】
前記状態の少なくとも１つの症状または徴候を処置するための前記有効量は、前記状態の少なくとも１つの症状または徴候を改善するために有効な量である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記状態の少なくとも１つの症状または徴候を処置するための前記有効量は、前記状態の少なくとも１つの症状または徴候の増進を軽減するために有効な量である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
標的化部分に結合されたＩＲＭ部分を含み、前記ＩＲＭ部位が以下の式：
【化１】
2008531580.tif 000019
（式中、
Ｒ1はリンカー基であり；
Ｒ2は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−置換アリール；
−ヘテロアリール；
−置換ヘテロアリール；
−アルキル−Ｏ−アルキル；
−アルキル−Ｓ−アルキル；
−アルキル−Ｏ−アリール；
−アルキル−Ｓ−アリール；
−アルキル−Ｏ−アルケニル；
−アルキル−Ｓ−アルケニル、ならびに
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ5）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ5）2；
−ＣＳ−Ｎ（Ｒ5）2；
−ＳＯ2−Ｎ（Ｒ5）2；
−ＮＲ5−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＮＲ5−ＣＳ−Ｃ1-10アルキル；
−ＮＲ5−ＳＯ2−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−置換アリール；
−ヘテロアリール；
−置換ヘテロアリール；
−ヘテロシクリル；
−置換ヘテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；
−ＣＯ−（置換アリール）；
−ＣＯ−ヘテロアリール、および
−ＣＯ−（置換ヘテロアリール）
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換される−アルキルまたはアルケニル
からなる群から選択され；
Ｒ3およびＲ4は各独立に、
−水素；
−ハロゲン；
−アルキル；
−アルケニル；
−Ｏ−アルキル；
−Ｓ−アルキル、および
−Ｎ（Ｒ5）2
であるか、
または、Ｒ3およびＲ4は、一緒になって、任意により、
−ハロゲン；
−アルキル；
−アルケニル；
−Ｏ−アルキル；
−Ｓ−アルキル、および
−Ｎ（Ｒ5）2
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換される縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成するか、
または、Ｒ3およびＲ4は、一緒になって、任意により１つ以上のヘテロ原子を含有しおよび、任意により、
−ハロゲン；
−アルキル；
−アルケニル；
−Ｏ−アルキル；
−Ｓ−アルキル、および
−Ｎ（Ｒ5）2
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換される縮合５〜７員飽和環を形成し、および
各Ｒ5は、独立に水素またはＣ1-10アルキルである）
で表わされる化合物である免疫調節組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０００年１２月２８日出願の米国仮特許出願第６０／２５４，２２９号に基づく優先権を主張する、２００１年１２月６日出願の米国特許出願シリアル第１０／０１３，１９３号（現在は放棄されている）の継続出願である２００５年８月６日出願の米国特許出願第１１／２２０，２３５号の、一部継続出願である。さらに、本出願は、２００５年２月２３日出願の米国仮特許出願第６０／６５５，７１３号および２００６年２月２２日出願の「免疫応答修飾因子複合体（Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）」と題された米国仮特許出願に基づく優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
背景
近年において、免疫系の一定の重要な点を刺激することにより、ならびに一定の他の点を抑制することにより作用する新しい薬剤化合物の発見に対する注力がなされてきており、顕著な成功がおさめられている（例えば、米国特許第６，０３９，９６９号および同第６，２００，５９２号を参照のこと）。本明細書において免疫応答修飾因子（ＩＲＭ）として称されるこれらの化合物は、トール様受容体（ＴＬＲ）として知られる基本的な免疫系メカニズムを介して作用して、選択されたサイトカイン生合成を誘導すると考えられている。これらは、広く多様な疾病および状態を処置するために有用であり得る。例えば、一定のＩＲＭは、ウイルス性疾患（例えば、ヒトパピローマウイルス、肝炎、ヘルペス）、腫瘍症（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌、日光角化症、メラノーマ）、およびＴH２−媒介性疾病（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎）を処置するために有用であり得、およびワクチンアジュバントとしても有用である。
【０００３】
免疫応答修飾因子は、特に限定されないが抗ウイルス性および抗腫瘍活性を含む、有効な免疫調節活性を有する化合物を含む。一定のＩＲＭは、サイトカインの産生および分泌を調節する。例えば、一定のＩＲＭ化合物は、例えば、タイプＩインターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１などのサイトカインの産生および分泌を誘導する。他の例として、一定のＩＲＭ化合物は、ＩＬ−４およびＩＬ−５などの一定のＴH２サイトカインの産生および分泌を阻害することができる。さらに、いくつかのＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑制すると言われている（米国特許第６，５１８，２６５号）。
【０００４】
一定のＩＲＭは、例えば、米国特許第４，６８９，３３８号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，２６８，３７６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，３８９，６４０号；同第５，４４６，１５３号；同第５，４８２，９３６号；同第５，７５６，７４７号；同第６，１１０，９２９号；同第６，１９４，４２５号；同第６，３３１，５３９号；同第６，３７６，６６９号；同第６，４５１，８１０号；同第６，５２５，０６４号；同第６，５４１，４８５号；同第６，５４５，０１６号；同第６，５４５，０１７号；同第６，５７３，２７３号；同第６，６５６，９３８号；同第６，６６０，７３５号；同第６，６６０，７４７号；同第６，６６４，２６０号；同第６，６６４，２６４号；同第６，６６４，２６５号；同第６，６６７，３１２号；同第６，６７０，３７２号；同第６，６７７，３４７号；同第６，６７７，３４８号；同第６，６７７，３４９号；同第６，６８３，０８８号；同第６，７５６，３８２号；同第６，７９７，７１８号；および同第６，８１８，６５０号；米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号；同第２００４／０１４７５４３号；および同第２００４／０１７６３６７号；および国際公開第ＷＯ２００５／１８５５１号、同第ＷＯ２００５／１８５５６号、同第ＷＯ２００５／２０９９９号、同第ＷＯ２００５／０３２４８４号、同第ＷＯ２００５／０４８９３３号、同第ＷＯ２００５／０４８９４５号、同第ＷＯ２００５／０５１３１７号、同第ＷＯ２００５／０５１３２４号、同第ＷＯ２００５／０６６１６９号、同第ＷＯ２００５／０６６１７０号、同第ＷＯ２００５／０６６１７２号、同第ＷＯ２００５／０７６７８３号、および同第ＷＯ２００５／０７９１９５号に開示のものなどの小有機分子（タンパク質、ペプチド、核酸等などの大きな生物学的分子とは対照的に、例えば、約１０００ダルトン未満の、好ましくは約５００ダルトン未満の分子量）である。
【０００５】
小分子ＩＲＭの追加の例としては、一定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号、および同第６，０２８，０７６号に記載のものなど）、一定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号に記載のものなど）、一定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号に記載のものなど）、一定のベンズイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号に記載のものなど）、５員窒素含有複素環式環に縮合された、４−アミノピリミジンの一定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号；同第６，０２８，０７６号および同第６，３２９，３８１号；およびＷＯ０２／０８９０５に記載のアデニン誘導体など）、一定の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン誘導体（米国特許出願公開第２００３／０１９９４６１号に記載のものなど）、および例えば、米国特許出願公開第２００５／０１３６０６５号に記載のものなどの一定の小分子免疫賦活薬化合物が挙げられる。
【０００６】
他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの大きな生物学的分子が挙げられる。いくつかのＩＲＭオリゴヌクレオチド配列は、シトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、および例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；同第６，３３９，０６８号；および同第６，４０６，７０５号に記載されている。いくつかのＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドとしては、例えば、米国特許第６，４２６，３３４号および同第６，４７６，０００号に記載のものなどの合成免疫調節性構造モチーフを挙げることができる。他のＩＲＭヌクレオチド配列はＣｐＧ配列に欠け、および、例えば、国際公開第ＷＯ００／７５３０４号に記載されている。
【０００７】
他のＩＲＭとしては、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩（ＡＧＰ）などの生物学的分子が挙げられ、および例えば、米国特許第６，１１３，９１８号；同第６，３０３，３４７号；同第６，５２５，０２８号；および同第６，６４９，１７２号に記載されている。
【０００８】
ＩＲＭの免疫賦活効果は、ＩＲＭ化合物および抗原の免疫系の細胞への同時送達によって高め得る。同時送達は、例えば、ＩＲＭおよび抗原の共有または非共有化学結合、またはＩＲＭおよび抗原の定義された空間への物理的拘束によって達成され得る。ＩＲＭおよび抗原の同時送達のための方法が、例えば、米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号に記載されている。
【０００９】
ＩＲＭに対する大きな治療的可能性の観点においては、すでになされた重要な研究にもかかわらず、これらの使用および治療的有益性を発展させるために、継続的な要求が相当にある。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
概要
免疫応答修飾因子材料が標的特異的な材料に結合されることができ、および各部分はそのそれぞれの機能を維持することができることが見出された。被検者に投与されたとき、得られる免疫調節組成物の標的化部分は、免疫応答修飾因子部位の標的化送達をもたらすことができる。
【００１１】
従って、一側面においては、本発明は、標的化部分に結合された免疫応答修飾因子部分を含む免疫調節組成物を提供する。
【００１２】
別の側面においては、本発明はまた、免疫応答修飾因子化合物の標的化送達方法を提供する。一般に、方法は、被検者に、送達標的を認識する標的化部分に結合された免疫応答修飾因子部分を含む免疫調節組成物を投与するステップを含む。
【００１３】
別の側面においては、本発明はまた、局所免疫応答の誘導方法を提供する。一般に、方法は、被検者に、送達標的を認識する標的化部分に結合された免疫応答修飾因子部分を含む免疫調節組成物を、免疫応答を誘導するための有効量で投与するステップを含む。
【００１４】
さらに別の側面において、本発明は、免疫応答を誘導することによって処置可能である被検者における状態の処置方法を提供する。一般に、方法は、被検者に、送達標的を認識する標的化部分に結合された免疫応答修飾因子部分を含む免疫調節組成物を有効量で投与して、状態の少なくとも１つの症状または徴候を処置するステップを含む。
【００１５】
本発明の種々の他の特色および利点は、以下の詳細な説明、実施例、特許請求の範囲および添付の図面を参照することにより容易に明らかとなるはずである。明細書の全体における数々の箇所において、例のリストを通して指針が提供されている。各場合において、引用したリストは代表的な群としてのみ役立ち、および限定的なリストとして解釈されるべきではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
発明の実施態様の詳細な説明
本発明は、免疫応答修飾因子（ＩＲＭ）部分の標的化送達のために、ＩＲＭ部分が標的化部分に結合された、免疫調節組成物を提供する。従って、組成物が全身的に投与され得る場合においても、標的化部分が、指向し、隔離し、維持することができ、またはそうでなければＩＲＭ部位の送達を能動的に標的化することができ、これによりＩＲＭ部位を標的部位に集中させることができる。ＩＲＭ部分を標的部位に集中させることで、例えば、全身的に利用可能なＩＲＭ部分の量を低減させて、ＩＲＭ部分の投与に関連する全身性副作用を軽減（おそらくさらには排除）させることなどの種々の有益性をもたらし得る。また、ＩＲＭ部分が標的部位に集中させられるため、ＩＲＭ部分のより少ない投与量（少なくともＩＲＭ部分の非結合形態（すなわち、非結合ＩＲＭ化合物）と比較して）が効果的な処置を提供するために必要とされ得、これは、経済的および資源的有益性を提供し得、ならびにさらに望ましくない副作用の程度、重症度、および／または期間を限定する。
【００１７】
本発明の目的について、以下の用語は表記の意味を有することとする。
「アゴニスト」は、受容体（例えば、ＴＬＲ）と組み合わさって、細胞活動を誘導することができる化合物を指す。アゴニストは、直接的に受容体に結合するリガンドであり得る。あるいは、アゴニストは、例えば、（ａ）直接的に受容体に結合する他の分子と複合体を形成する、または（ｂ）そうでなければ、他の化合物が直接的に受容体に結合するよう他の化合物の変性をもたらすことによって、受容体と間接的に組み合わされ得る。アゴニストは、特定のＴＬＲのアゴニスト（例えば、ＴＬＲ６アゴニスト）、またはＴＬＲの特定の組み合わせのアゴニスト（例えば、ＴＬＲ７／８アゴニスト−ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方のアゴニスト）として称され得る。
【００１８】
「改善させる」は、特定の状態の症状または臨床的な徴候特徴の程度、重症度、頻度、および／または見込みにおけるどのようにかの軽減を指す。
【００１９】
「抗原」は、ある程度免疫特異的である方策で、抗体によって結合され得るいずれかの物質を指す。
【００２０】
「免疫細胞」は、免疫系の細胞を指し、すなわち、免疫応答が自然、後天性、体液性、または細胞性であろうと、免疫応答の発生または維持管理に直接的にまたは間接的に関わる細胞を指す。
【００２１】
「免疫調節性」およびその変形は、免疫活性のいずれかの増加または軽減（すなわち、誘導または阻害）を指す。
【００２２】
「誘導」およびその変形は、細胞活動におけるいずれかの計測可能な増加を指す。例えば、免疫応答の誘導は、例えば、サイトカインの産生の増加、免疫細胞集団の活性化、増殖、または成熟、および／または向上した免疫機能の他の指標を含み得る。
【００２３】
「阻害」およびその変形は、細胞活動におけるいずれかの計測可能な低減を指す。例えば、特定のサイトカインの阻害は、サイトカインの産生の低下を指す。阻害の程度は、活性の通常レベルの割合として特徴付け得る。
【００２４】
「ＩＲＭ化合物」は、一般に、ＩＲＭ−応答性細胞に投与されたときに、１つ以上の免疫調節性分子、例えば、サイトカインまたは共刺激性マーカーのレベルを変化させる免疫応答修飾因子化合物を指す。代表的なＩＲＭ化合物としては、例えば、小有機分子、プリン誘導体、小複素環式化合物、アミド誘導体、および上述のオリゴヌクレオチド配列が挙げられる。
【００２５】
「ＩＲＭ部分」は、免疫調節組成物の免疫調節性活性を有する部分を指す。ＩＲＭ部分は、ＩＲＭ化合物であり得るか、またはから誘導されが、あるいは、いくつかの他の免疫調節性材料であり得るか、またはから誘導され得る。いくつかの場合において、用語「ＩＲＭ部分」は、標的化部分と結合前の、またはから分離後の非結合化合物を指し得る。
【００２６】
「マーカー」およびその変形は、ある程度特異的である方策で、リガンドによって結合され得る細胞表面上のいずれかの物質を指す。本明細書において用いられるところ、マーカー−リガンド相互作用は、明示的に、免疫学的親和性（すなわち、抗体−抗原親和性）結合を排除する。従って、細胞表面上のいくつかの物質は、あるコンテクストにおいてはマーカーとみなされ得（すなわち、非免疫学的受容体−リガンドバインドが可能であり得る）および他のコンテクストにおいては抗原と見なされ得る（すなわち、抗体の標的であり得る）。
【００２７】
「予防的」およびその変形は、状態の症状または臨床的徴候の発達および／または出現をいずれかの程度に制限する処置を指す。
【００２８】
「選択的」およびその変形は、生物活性に差次的なまたは一般的ではない影響を有することを指す。選択的に生物活性を特定のＴＬＲを介して調節するアゴニストは、ＴＬＲ−選択的アゴニストであり得る。ＴＬＲ−選択性は、特定のＴＬＲに関して説明され得（例えば、ＴＬＲ８−選択的またはＴＬＲ７−選択的）、またはＴＬＲの特定の組み合わせに関して説明され得る（例えば、ＴＬＲ７／９−選択的）。
【００２９】
「徴候」または「臨床的徴候」は、患者以外の者によって見出されることが可能である、特定の状態に関する客観的な物理的知見を指す。
【００３０】
「特異的」およびその変形は、特定の標的に対する差次的なまたは一般的ではない親和性を、ある程度で有することを指す。
【００３１】
「症状」は、いずれかの疾病または患者の状態の主観的なエビデンスを指す。
【００３２】
「標的化部分」は、標的特異的親和性を有する免疫調節組成物の部分を指す。標的化部分は、抗体であり得るか、または由来し得るが、あるいは、例えば、小分子および／またはナノ粒子を含む、非抗体タンパク質またはペプチド、または非タンパク質材料であり得るか、または由来し得る。いくつかの場合において、用語「標的化部分」は、ＩＲＭ部分との結合前の、またはから分離後の非結合化合物を指し得る。
【００３３】
「治療的」およびその変形は、状態に関連する１つ以上の既存の症状または臨床的徴候を改善させる処置を指す。
【００３４】
「処置する」またはその変形は、状態に関連する症状または徴候を、いずれかの程度で、軽減し、進行を制限し、改善させ、予防し、または解決することを指す。
【００３５】
本明細書において用いられるところ、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つ」および「１つ以上」は、同義的に用いられている。従って、例えば、「ａｎ」ＩＲＭ化合物を含む免疫調節組成物は、少なくとも１つのＩＲＭ化合物を含む組成物を意味するとして解釈することができる。
【００３６】
また、本明細書において、終点での数値範囲の列挙は、その範囲内に包摂されるすべての数を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５等を含む）。
【００３７】
多数のＩＲＭ化合物が、免疫系の一定の局面を刺激することが知られている。度々、これは、強力な抗原提示細胞である樹状細胞（ＤＣ）の活性化を介して生じ得る。一定のＩＲＭ化合物の局所的な適用が、数々の動物疾病モデルおよびヒト臨床的治験（例えば、性器疣贅、日光角化症、表在型基底細胞癌等）において効果的であることが知られている。しかしながら、いくつかのＩＲＭ化合物はまた、全身的に投与された場合に、望ましくない副作用を、ある患者において誘導する可能性がある。これは、一つには、全身的に投与されたＩＲＭ化合物が特定の状態の改善に関連のない免疫細胞を活性化し得ることを理由とし得る。例えば、Ｂ細胞の活性化は、癌の一定の形態の処置には関連がない場合がある。全身的に投与されるＩＲＭでのこのような癌の処置は、Ｂ細胞の活性化を生じさせ得、これは、例えば、非特異的免疫グロブリン産生、一定の慢性的状態（例えば自己免疫など）、および／またはＢ細胞の枯渇（その後の病原体に対する曝露での、より大きな疾病の感受性をもたらす可能性がある）などの副作用をもたらす可能性がある。
【００３８】
従って、一側面においては、本発明は、標的化部分に結合されたＩＲＭ部分を含む免疫調節組成物を提供する。いくつかの場合において、ＩＲＭ部分は、ＩＲＭ化合物であり得るか、または由来し得る。いくつかの場合において、標的化部分は、抗体であり得るか、または抗体に由来し得る（すなわち、ある程度の免疫特異性を提供するために、少なくとも抗体の免疫特異的部分に十分である（例えば、Ｌ鎖に十分である））。しかしながら、他の場合においては、標的化部分は、例えば、ある程度、標的細胞集団によって特異的に表される受容体に結合するリガンドなどの腫瘍特異的マーカーの少なくとも一部分を認識する剤であり得るか、または由来し得る。この例において、受容体は、腫瘍特異的マーカーとして見なされ得る。
【００３９】
ＩＲＭ部分および標的化部分は、直接的にまたは間接的に結合され得る。例えば、ＩＲＭ部分および標的化部分の直接的な結合は、ＩＲＭ部位および標的化部分間の共有結合を介して達成され得る。直接的な結合はまた、例えば、アビジン−ビオチン親和性によって非共有的に達成されることができる。一つの部分がビオチン化され得ると共に、他の部分が、公知の方法を用いて、アビジン部分を含有するよう変性され得る。このように変性された部分は、アビジン−ビオチン親和性を活用することにより、直接的に結合され得る。
【００４０】
代わりに、ＩＲＭ部分および標的化部分は、各部分を、例えば、固形支持体またはスペーサアームなどの介在成分に結合することによって間接的に結合され得る。ＩＲＭ化合物を好適な固形支持体に接続するため例および方法が、例えば、米国特許出願公開第２００４／０２５８６９８号に記載されている。
【００４１】
介在成分（例えば、固形支持体）は、複数の官能基を含み得、これにより、複数のＩＲＭ部分および／または複数の標的化部分の間接的な結合を許容する。複数のＩＲＭ部分が介在成分に接続される場合、ＩＲＭ部分は、同一のＩＲＭ化合物または異なるＩＲＭ化合物に由来し得る。同様に、複数の標的化部分が介在成分に接続される場合、標的化部分は同一または異なり得、これは、（例えば、標的を見つける可能性を高めるために）より数多くの特定の標的化部分を有する組成物を設計する機会を提供し、および／または（例えば、多数の異なる標的化部分を有することにより）多数の標的に結合する能力を提供する。
【００４２】
いくつかの実施態様において、ＩＲＭ部分は、例えば、腫瘍特異的マーカーまたは抗腫瘍抗体のリガンドなどの、抗腫瘍標的化部分に結合され得る。本願明細書において用いられるところ、抗腫瘍抗体は、腫瘍の細胞を、ある程度の特異性をもって、正常な組織細胞から認識する抗体（Ａｂ）を指す。結合ＩＲＭ−Ａｂ組成物は、抗体によってもたらされた腫瘍特異性を活用して、結合ＩＲＭ部分の腫瘍抗原の近傍への送達を標的化する。従って、腫瘍の近傍にある樹状細胞（患者全体の樹状細胞とは対照的に）が優先的に活性化され、これにより、局在的な腫瘍特異的な、ＤＣ媒介性免疫応答を発生させ、その一方で、一般的なＤＣ媒介性副作用を誘導する可能性がある樹状細胞の全身的な活性化を制限する。結合ＩＲＭ／腫瘍特異的組成物を利用する治療法は、例えば、手術、放射線療法等などの他の治療法による処置が困難である、または不可能な癌（例えば、転移性癌）の処置に対して、特に望ましい場合がある。
【００４３】
腫瘍特異的標的化部分の他の例としては、例えば、ナノ粒子および一定の小分子などの一定の非タンパク質材料が挙げられる。
【００４４】
直径が約１ｎｍ〜２００ｎｍであるナノ粒子が、ＩＲＭ部分の腫瘍への腫瘍特異的送達を提供するために用いられ得る。上述したとおり、ＩＲＭ化合物は、例えば、共有および非共有化学相互作用などのいずれかの好適な手段によってナノ粒子に結合されていてもよい。非共有化学相互作用としては、親和性（例えば、アビジン／ビオチン、抗原／抗体、受容体／リガンド）、イオン性相互作用、および／または疎水性相互作用を挙げることができる。ＩＲＭ化合物を、ナノ粒子などの固形支持体に接続するための方法が、例えば米国特許出願公開第２００４／０２５８６９８号に記載されている。
【００４５】
ナノ粒子は、腫瘍特異的標的化活性を、少なくとも２つの方法で有していることができる。第１に、上記の、ナノ粒子は、ナノ粒子を腫瘍に指向させる標的化部分で被覆され得る。標的化部分（例えば、抗体、受容体リガンド等）を接続させるための方法は周知である。第２に、ナノ粒子は、１つ以上の接続された標的化部分を有していなくても、ＩＲＭ部分の腫瘍特異的標的化を提供し得る。約５０ｎｍ〜約２００ｎｍの直径を有するナノ粒子は全身的に送達されると共に、腫瘍脈管構造に到達するまで血流中に存在し得る。循環系の間隙率または透過率の局在的な変化が、ナノ粒子が血流から脱して、循環系から離れ、および腫瘍の近傍に蓄積されることを許容する。
【００４６】
ＩＲＭ部分の腫瘍特異的標的化送達を提供することができる小分子部位の一例はビスホスホネートである。ビスホスホネート官能基は、骨組織のヒドロキシアパタイト成分に対する高い親和性、長期の関連性を付与する。ビスホスホネートは、骨組織中の診断および／または治療薬の標的化送達および隔離に対して有用であることが知られている。例えば、ビスホスホネート薬は、骨組織造影剤の送達のために診断的に、および骨粗鬆症、腫瘍骨溶解、および骨転移において治療的に用いられる。ＩＲＭ／ビスホスホネート免疫調節組成物は、通常の転移サイト内にＩＲＭの蓄積をもたらすことが可能である。
【００４７】
黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）受容体は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、卵巣癌、およびメラノーマ細胞では著しく上昇している。従って、ＬＨＲＨ受容体のリガンドは、免疫調節組成物における標的化部分として用いられて、ＩＲＭ部分の腫瘍サイトへの腫瘍特異的標的化送達を提供し得る。上述のヒト癌に対する動物モデルにおいては、ＬＨＲＨ特異的治療学は、選択的に患部組織に回帰する。ＩＲＭの、ＬＨＲＨ受容体のリガンド（例えば、ＬＨＲＨまたは合成類似体）に対する結合は、これらの癌の腫瘍細胞へのＩＲＭの標的化送達をもたらすことができ、これにより、ＩＲＭを腫瘍サイトに集中させると共に、治療指数を、ＩＲＭ化合物単独で観察されたものを超えて高めることができる。フリーのＤｏｘとＬＨＲＨ−結合Ｄｏｘとを比較する研究においては、ＬＨＲＨ複合体と同等の抗腫瘍活性を示すためには、およそ２００倍多くのフリーのＤｏｘが必要であった。好適なＬＨＲＨ受容体リガンドとしては、ＬＨＲＨデカペプチド、アゴニストまたはアンタゴニスト活性を有する類似体、または小分子受容体リガンドを挙げることができる。
【００４８】
ＬＨＲＨ受容体は、正常な器官組織と比して、多くの腫瘍細胞（例えば、乳房、前立腺、メラノーマ）で過剰発現性であることが知られている。従って、単一のＩＲＭ−ＬＨＲＨ受容体リガンド結合組成物が、２つ以上の癌を処置するために用いられる可能性がある。
【００４９】
ＬＨＲＨ受容体リガンドは、直接的にＩＲＭ部位に結合され得、または１つ以上のＩＲＭ部分がまた接続しているナノ粒子に接続され得る。ＬＨＲＨ受容体リガンドを有するナノ粒子は、乳房中または肺転移中のいずれにおいても、乳癌細胞を標的とすることが知られている。比較すると、ＬＨＲＨを有するナノ粒子は、優先的に正常な動物の肝臓に向けられる。
【００５０】
葉酸受容体リガンドはまた、ＩＲＭ部分に結合され得る標的化部分として有用であり得、およびＩＲＭの腫瘍特異的標的化送達をもたらす。葉酸受容体の発現は、多くの腫瘍細胞の表面上で増加される。再度、葉酸受容体リガンドのＩＲＭ部分に対する結合は、腫瘍サイトでのＩＲＭの選択的な蓄積をもたらすことができ、ＩＲＭ部分の全身的な利用可能性を低減し、およびＩＲＭ部分の治療指数を高める。好適な葉酸受容体リガンドとしては、葉酸、アゴニストまたはアンタゴニスト活性を有する類似体、または小分子受容体リガンドが挙げられる。
【００５１】
いくつかの代替的な実施形態において、ＩＲＭ部位は、樹状細胞標的化部分に結合され得る。標的化部分は、抗体（例えば、抗ＤＣ抗体）または、ＤＣ特異的マーカーを認識する非抗体リガンドであり得る。
【００５２】
好適なＤＣ特異的マーカーとしては、例えば、ＴＮＦＲスーパーファミリー（例えば、ＣＤ４０）、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−ＣＤ、Ｂ７．１、Ｂ７．２等のいずれかの構成要素などの例えば、共刺激性マーカーが挙げられ得る。共刺激性マーカーを認識する標的化部分を含む免疫調節組成物が、単一の化学物質において２つのＤＣ活性化刺激（すなわち、ＩＲＭ部分および同時刺激）を送達するために用いられ得る。
【００５３】
本明細書において用いられるところ、抗ＤＣ抗体は、樹状細胞抗原を認識する抗体を指す。好適な樹状細胞標的化部分は、樹状細胞によって、定性的にまたは定量的に差次的に発現するいずれかの抗原に結合し得る。好適な樹状細胞標的化部分は、例えば、ＤＥＣ２０５、ＢＤＣＡ−１、ＢＤＣＡ−２、ＢＤＣＡ−３、ＢＤＣＡ−４、ＤＣ−ＳＩＧＮ、Ｌ−ＳＩＧＮ、ＨＬＲ−ＤＲ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ２１、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ１２３、Ｃ−タイプレクチン、インテグリン（例えば、α４、α６、α１β１）、および／またはいずれか１つのトール様受容体（ＴＬＲ）等などの抗原に結合し得る。
【００５４】
標的化部分がＤＣ特異的マーカーを認識したかまたは抗原を認識したかに関わらず、ＩＲＭ部分の標的化部分への結合は、全身的な送達経路で投与された場合においても、ＩＲＭ部分の全身的な利用可能性を制限することができる。しかも、ＩＲＭ部分は、樹状細胞の近傍に集中され得、これにより、樹状細胞がより効果的に成熟させ、および活性化される。腫瘍サイト（または腫瘍塊の内部においても）で活性化された樹状細胞は、腫瘍細胞の表面上に存在する腫瘍抗原を利用して、腫瘍に対する免疫応答を惹起することが可能であり得る。この方法は、腫瘍特異的抗体を必要とすることなく、全般的な抗腫瘍治療を提供することが可能である。
【００５５】
他の代替的な実施態様において、ＩＲＭ部分は、抗マクロファージ標的化部分に結合され得る。マクロファージは、多くの場合、腫瘍細胞の近傍に局在化されている。従って、再度、ＩＲＭ部分の全身的な利用可能性を制限することができ、およびＩＲＭ部分は、標的細胞（すなわち、マクロファージ）の近傍に集中され得、これにより、マクロファージはより効率的に活性化される。活性化されたマクロファージは、抗腫瘍活性を示すことが知られている。従って、この方法は、腫瘍特異的抗体を必要とすることなく、全般的な腫瘍治療を提供することが可能である。
【００５６】
他の代替的な実施態様において、ＩＲＭ部分は、例えば、ＣＤ８+細胞障害性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞などの、直接的に腫瘍細胞を死滅させる細胞タイプ上の表面抗原を認識する標的特異的部位に結合され得る。再度、免疫調節組成物が全身的に投与された場合においても、ＩＲＭ部分は、腫瘍キラー細胞の近傍に集中され得、これにより、（ａ）腫瘍キラー細胞がより効果的に活性化され、および／または（ｂ）ＩＲＭ部分の全身的な利用可能性が制限される。腫瘍サイト（または腫瘍塊の内部であっても）で活性化された腫瘍キラー細胞は、腫瘍細胞の表面上に存在する腫瘍抗原を利用して、腫瘍に対する免疫応答を惹起させることが可能であり得る。この方法は、腫瘍特異的抗体を必要とすることなく、全般的な腫瘍治療を提供することが可能である。
【００５７】
他の代替的な実施態様において、ＩＲＭ部分は、例えば、内皮標的を認識する標的化部分に結合され得る。腫瘍塊の内皮環境には、正常な毛細血管床と比して顕著な差異が存在する。差異は、例えば、同一性、および一定の内皮表面タンパク質、接着分子（例えば、インテグリン）、細胞外マトリックスタンパク質、増殖因子受容体等が発現する程度において存在する。これらの差異を活用して、ＩＲＭ部分の腫瘍関連内皮への標的送達をすることができる。このような差異を特異的に標的とするいくつかの試薬が、抗血管新生療法として有用であることが示された。標的化部分としてのこのような剤のＩＲＭ部分への結合は、２つの効果的な抗腫瘍療法（免疫療法および抗血管形成療法）を組み合わせることができる。
【００５８】
好適な抗血管形成試薬としては、例えば、抗ＣＤ１０５抗体（ＣＤ１０５は腫瘍内皮において過剰発現される）、抗ＥＤ−Ｂ抗体（ＥＤ−Ｂは、腫瘍塊に見出されるフィブロネクチンアイソフォームである）、腫瘍に関連する内皮インテグリンに認識されるペプチド、およびその受容体が腫瘍内皮（例えば、血管性内皮増殖因子）上で上方制御される増殖因子が挙げられる。
【００５９】
このような抗血管新生試薬の使用は、組み合わせた抗血管形成および免疫療法の見込みをもたらし得る。さらに、ＩＲＭの腫瘍内皮への標的化送達は、一般に、内皮は、腫瘍塊より変異原性に劣る組織であるため、腫瘍自体とは対照的に、より効果的な長期処置を提供し得る。従って、内皮に向けられた治療が薬剤耐性を生じる可能性はきわめてまれであり得る。また、内皮に向けられた治療は、腫瘍特異的試薬を必要とすることはなく、事実上いずれの血管新生化腫瘍（例えば、乳癌、前立腺癌、肺癌）に対しても効果的であり得る。
【００６０】
さらに他の代替的な実施態様において、標的指向化部位は２つ以上の標的化部分を含み得、その各々が異なる標的に結合することが可能である。従って、例えば、標的化部分は、例えば免疫細胞抗原または共刺激性マーカー（例えば、樹状細胞標的）を認識する一つの標的化部分と、例えば標的腫瘍細胞を認識する第２の標的化部分（例えば、抗腫瘍抗原）とを含み得る。このような組成物は、ＩＲＭ部位の標的細胞集団のいずれかまたは両方への送達を標的化し得るだけではなく、また、標的免疫細胞（例えば、樹状細胞または腫瘍キラー細胞）およびＩＲＭ部位の、標的腫瘍細胞（例えば、腫瘍）の近傍への標的化送達をも提供し得る。
【００６１】
組成物の標的化部分は、組成物の標的化送達を提供することができるいずれの材料であってもよい。多数の実施形態において、標的化部分は免疫特異的標的化を提供し得、すなわち、組成物の標的抗原に対する免疫特異的結合を促進するために十分な免疫グロブリン（すなわち抗体）の部分であり得る。しかしながら、本発明は、例えば、ホルモン（自然または合成）、脂質等などの例えば受容体リガンドなどの非免疫グロブリン標的化材料を用いても実施され得る。
【００６２】
免疫グロブリンはタンパク質であるため、標的化部分として用いるには適当ではない変性免疫グロブリンを与えることなく、特定の免疫グロブリンに修飾を成すことができることが理解される。例えば、免疫グロブリンアミノ酸配列の１つ以上の部分が削除または置換され得、または追加のアミノ酸が免疫グロブリンに付加され得、および免疫グロブリンは、なお、本発明の実施に好適とされる十分な免疫特異的特徴を維持することができる。従って、以下の記載においては、特定の抗体に対する言及は、十分な量の免疫特異的特徴を維持しながら可能であるため、このような修飾（例えば、アミノ酸付加、削除、および／または置換）を有する変性免疫グロブリンを含む。
【００６３】
好適な抗体は、微生物抗原（例えば、細菌性、ウイルス性、寄生性または真菌性抗原）、癌または腫瘍関連抗原、および／または自己抗原について特異的であり得る。多数の実施形態において、好適な抗体は、細胞上または中に存在する抗原を認識する、および結合するものである。特定の材料（すなわち、抗原）に結合する抗体は、同義的に、「抗抗原」または「抗原抗体」として称され得る。いくつかの事例においては、抗体は、一般名称または商業的商標によって称され得る。
【００６４】
好適な抗体の例としては、限定されないが、リツキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ）（リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体）、ヘルセプチン（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）（トラツズマブ）、クアドラメット（ＱＵＡＤＲＡＭＥＴ）、パノレックス（ＰＡＮＯＲＥＸ）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム（ＯＮＣＯＬＹＭ）、スマート（ＳＭＡＲＴ）Ｍ１９５、アトラゲン（ＡＴＲＡＧＥＮ）、オバレックス（ＯＶＡＲＥＸ）、ベクサール（ＢＥＸＸＡＲ）、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス（ＺＥＮＡＰＡＸ）、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、メリムネ（ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ）−２、メリムネ（ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ）−１、シアシド（ＣＥＡＣＩＤＥ）［ｇｏｏｇｌｅ］、プレターゲット（ＰＲＥＴＡＲＧＥＴ）、ノボマブ（ＮｏｖｏＭＡｂ）−Ｇ２、ＴＮＴ、グリオマブ（Ｇｌｉｏｍａｂ）−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンフォサイド（ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ）、ＣＭＡ６７６、モノファーム（Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ）−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡＡｂ、スマート（ＳＭＡＲＴ）ＩＤ１０Ａｂ、スマート（ＳＭＡＲＴ）ＡＢＬ３６４Ａｂ、ＣＣ４９（ｍＡｂ  Ｂ７２．３）、ＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡ、抗ＩＬ−４抗体、抗ＩＬ−５抗体、抗ＩＬ−９抗体、抗Ｉｇ抗体、抗ＩｇＥ抗体、血清由来Ｂ型肝炎抗体、組換えＢ型肝炎抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗サイトカイン受容体抗体等が挙げられる。
【００６５】
本発明について同様に有用である他の抗体としては、アレムツズマブ（Ｂ細胞慢性リンパ性白血病）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、ｈＰ６７．６（ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、インフリキシマブ（炎症性腸疾患および関節リウマチ）、エタネルセプト（ＥＴＡＮＥＲＣＥＰＴ）（関節リウマチ）、トシツモマブ、ＭＤＸ−２１０、オレゴボマブ、抗ＥＧＦ受容体ｍＡｂ、ＭＤＸ−４４７、抗組織因子タンパク質（ＴＦ）、（スノール（Ｓｕｎｏｌ））；ｉｏｒ−ｃ５、ｃ５、エドレコロマブ、イブリツモマブチウキセタン、ガングリオシドＧＤ３エピトープの抗イディオタイプｍＡｂ擬態、抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０  ｍＡｂ、抗ＣＤ３３ヒト化ｍＡｂ、抗ＣＤ５２ｈｕｍＡｂ、抗ＣＤ１ｍＡｂ（ｉｏｒ  ｔ６）、ＭＤＸ−２２、セロゴバブ（ｃｅｌｏｇｏｖａｂ）、抗１７−１Ａ  ｍＡｂ、ベバシズマブ、ダクリズマブ、抗ＴＡＧ−７２（ＭＤＸ−２２０）、高分子量プロテオグリカン（Ｉ−Ｍｅｌ−１）の抗イディオタイプｍＡｂ擬態、高分子量プロテオグリカン（Ｉ−Ｍｅｌ−２）の抗イディオタイプｍＡｂ擬態、抗ＣＥＡ  Ａｂ、ｈｍＡｂＨ１１、抗ＤＮＡまたはＤＮＡ−関連タンパク質（ヒストン）ｍＡｂ、グリオマブ（Ｇｌｉｏｍａｂ）−Ｈ  ｍＡｂ、ＧＮＩ−２５０ｍＡｂ、抗ＣＤ２２、ＣＭＡ６７６）、ＧＤ２ガングリオシドに対する抗イディオタイプヒトｍＡｂ、ｉｏｒ  ｅｇｆ／ｒ３、抗ｉｏｒ  ｃ２糖タンパク質ｍＡｂ、ｉｏｒ  ｃ５、抗ＦＬＫ−２／ＦＬＴ−３ｍＡｂ、抗ＧＤ−２二重特異的ｍＡｂ、抗核自己抗体、抗ＨＬＡ−ＤＲ  Ａｂ、抗ＣＥＡ  ｍＡｂ、パリビズマブ、ベバシズマブ、アレムツズマブ、ＢＬｙＳ−ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ２、抗Ｔｒａｉｌ受容体；Ｂ３ｍＡｂ、ｍＡｂ  ＢＲ９６、乳癌；およびＡｂｘ−Ｃｂ１ｍＡｂが挙げられる。
【００６６】
好適な抗体としてはまた、以下の
例えば、特に限定されないが、抗ヒトＦａｓ／Ｆａｓリガンド抗体、抗マウスＦａｓ／Ｆａｓリガンド抗体、グランザイム抗体、グランザイムＢ抗体を含むＦａｓ／Ｆａｓリガンド抗体；特に限定されないが、抗チトクロムＣ抗体、抗ヒトＢｃｌ抗体（モノクローナル）、抗ヒトＢｃｌ抗体（ポリクローナル）、抗マウスＢｃｌ抗体（モノクローナル）、および抗マウスＢｃｌ抗体（ポリクローナル）を含むＢｃｌ抗体などのアポプトーシス抗体；
例えば、抗ＴＲＡＤＤ、抗ＴＲＡＩＬ、および抗ＤＲ３抗体などのその他のアポプトーシス抗体；
例えば、特に限定されないが、抗ヒト、マウスｂｉｍ抗体（ポリクローナル）、抗ヒト、マウスｂｉｍ抗体（モノクローナル）を含むＢｉｍ抗体などのその他のアポプトーシス関連抗体；
例えば、抗ヒトカスパーゼ抗体（モノクローナル）、および抗マウスカスパーゼ抗体などのカスパーゼ抗体；
例えば、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ２９、抗ＣＤ２９、抗ＣＤ４１ａ、抗ＣＤ４２ｂ、抗ＣＤ４２ｂ、抗ＣＤ４２ｂ、抗ＣＤ４３、抗ＣＤ４６、抗ＣＤ６１、抗ＣＤ６１、抗ＣＤ６２／Ｐ−ｓｌｃｔｎ、抗ＣＤ６２／Ｐ−ｓｌｃｔｎ、および抗ＣＤ１５４などの抗ＣＤ抗体；
例えば、ヒトＣＮＴＦ抗体、ヒトエオタキシン抗体、ヒト上皮性好中球活性化ペプチド−７８（ＥＮＡ−７８）抗体、ヒトエクソダス抗体、ヒトＧＲＯ抗体、ヒトＨＣＣ−１抗体、ヒトＩ−３０９抗体、ヒトＩＰ−１０抗体、ヒトＩ−ＴＡＣ抗体、ヒトＬＩＦ抗体、ヒト肝臓−発現ケモカイン（ＬＥＣ）抗体、ヒトリンフォタキシン抗体、ヒトＭＣＰ抗体、ヒトＭＩＰ抗体、ＩＦＮ−γ（ＭＩＧ／ＣＸＣＬ９）抗体によって誘導されたヒトモノカイン、ヒトＮＡＰ−２抗体、ヒトＮＰ−１抗体、ヒト血小板因子−４抗体、ヒトランテス抗体、ヒトＳＤＦ抗体、およびヒトＴＥＣＫ抗体などのヒトケモカイン抗体；
例えば、ヒトＢ−細胞攻撃マウスケモカイン抗体、ケモカイン−１抗体、マウスエオタキシン抗体、マウスエクソダス抗体、マウスＧＣＰ−２抗体、マウスＫＣ抗体、マウスＭＣＰ抗体、マウスＭＩＰ抗体、およびマウスランテス抗体などのマウスケモカイン抗体；
例えば、ラットＣＮＴＦ抗体、ラットＧＲＯ抗体、ラットＭＣＰ抗体、ラットＭＩＰ抗体、およびラットランテス抗体などのラットケモカイン抗体；
例えば、ヒトビオチン化サイトカイン／サイトカイン受容体抗体、ヒトインターフェロン（ＩＦＮ）抗体、ヒトインターロイキン（ＩＬ）抗体、ヒトレプチン抗体、ヒトオンコスタチン抗体、ヒト腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）抗体、ヒトＴＮＦ受容体ファミリー抗体、マウスビオチン化サイトカイン／サイトカイン受容体抗体、マウスＩＦＮ抗体、マウスＩＬ抗体、マウスＴＮＦ抗体、マウスＴＮＦ受容体抗体、ラットビオチン化サイトカイン／サイトカイン受容体抗体、ラットＩＦＮ抗体、ラットＩＬ抗体、およびラットＴＮＦ抗体などのサイトカイン／サイトカイン受容体抗体；
例えば、コラーゲン／プロコラーゲン抗体、ラミニン抗体、ヒトコラーゲン抗体、ヒトラミニン抗体、ヒトプロコラーゲン抗体、ビトロネクチン／ビトロネクチン受容体抗体、ヒトビトロネクチン抗体、ヒトビトロネクチン受容体抗体、フィブロネクチン／フィブロネクチン受容体抗体、ヒトフィブロネクチン抗体、およびヒトフィブロネクチン受容体抗体などの細胞外マトリックス抗体；
例えば、ヒト増殖因子抗体、マウス増殖因子抗体、およびブタ増殖因子抗体などの増殖因子抗体；
例えば、バキュロウイルス抗体、カドヘリン抗体、補体抗体、Ｃ１ｑ抗体、フォンウィルブランド因子抗体、Ｃｒｅ抗体、ＨＩＶ抗体、インフルエンザ抗体、ヒトレプチン抗体、マウスレプチン抗体、マウスＣＴＬＡ−４抗体、Ｐ４５０抗体、およびＲＮＡポリメラーゼ抗体などのその他の抗体；
例えば、アミロイド抗体、ＧＦＡＰ抗体、ヒトＮＧＦ抗体、ヒトＮＴ−３抗体、およびヒトＮＴ−４抗体などの神経生物学的抗体
が挙げられる。
【００６７】
本発明における使用に好適な追加の抗体としては、例えば、１次抗体のＭＳＲＳカタログおよびリンズコッツ（Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ）ダイレクトリーなどの文献にリストされている抗体が挙げられる。
【００６８】
組成物の免疫応答修飾因子部位はいずれかの好適なＩＲＭ化合物であり得るか、またはＩＲＭ化合物に由来し得る。他に示されていない限りにおいて、化合物への言及は、いずれかの異性体（例えば、ジアステレオマーまたはエナンチオマー）、塩、溶媒和物、異形体等を含むいずれかの薬剤的に許容可能な形態での化合物を含むことができる。特に、化合物が光学的に活性である場合には、化合物への言及は、化合物のエナンチオマーの各々、ならびにエナンチオマーのラセミ混合物を含むことができる。
【００６９】
いくつかの実施態様において、ＩＲＭ化合物は小分子免疫応答修飾因子（例えば、約１０００ダルトン未満の分子量）であり得る。いくつかの実施形態において、ＩＲＭ化合物は、５員窒素含有複素環式環に縮合した２−アミノピリジン、または５員窒素含有複素環式環に縮合した４−アミノピリミジンを含み得る。
【００７０】
本発明における使用について好適なＩＲＭ化合物としては、５員窒素含有複素環式環に縮合された２−アミノピリジンを有する化合物が挙げられる。このような化合物としては、例えば、特に限定されないが、例えば、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリーロキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、およびイミダゾキノリンジアミンなどの置換イミダゾキノリンアミンを含むイミダゾキノリンアミン；特に限定されないが、アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、およびテトラヒドロイミダゾキノリンジアミンを含むテトラヒドロイミダゾキノリンアミン；特に限定されないが、アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンを含むイミダゾピリジンアミン；１，２−架橋イミダゾキノリンアミン；６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン；イミダゾナフチリジンアミン；テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン；オキサゾロキノリンアミン；チアゾロキノリンアミン；オキサゾロピリジンアミン；チアゾロピリジンアミン；オキサゾロナフチリジンアミン；チアゾロナフチリジンアミン；およびピリジンアミンに縮合された１Ｈ−イミダゾダイマー、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミン、またはテトラヒドロナフチリジンアミンが挙げられる。
【００７１】
一定の実施態様において、ＩＲＭ化合物は、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンであり得る。
【００７２】
一定の実施態様において、ＩＲＭ化合物は、置換イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンであり得る。
【００７３】
本明細書において用いられるところ、置換イミダゾキノリンアミンは、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリーロキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、またはイミダゾキノリンジアミンを指す。本明細書において用いられるところ、置換イミダゾキノリンアミンは、特定的に、かつ、明示的に１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンおよび４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールを除外する。
【００７４】
好適なＩＲＭ化合物としてはまた、プリン誘導体、イミダゾキノリンアミド誘導体、ベンズイミダゾール誘導体、アデニン誘導体、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩、および上述のオリゴヌクレオチド配列が挙げられ得る。
【００７５】
特定の一実施態様において、化合物の免疫応答修飾因子部位は、Ｎ−［６−（｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−６−オキソへキシル］−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミドに由来する。
【００７６】
本発明のいくつかの実施態様において、ＩＲＭ化合物は、例えば、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、またはＴＬＲ８のアゴニストなどの、少なくとも１つのＴＬＲのアゴニストであり得る。ＩＲＭは、いくつかの場合において、ＴＬＲ９のアゴニストであり得る。
【００７７】
特定の化合物についてのＴＬＲアゴニズムは、いずれかの好適な方策で査定し得る。例えば、テスト化合物のＴＬＲアゴニズムを検出するために好適なアッセイおよび組換え株細胞が、例えば、米国特許出願公開第２００４／００１４７７９号、同第２００４／０１３２０７９号、同第２００４／０１６２３０９号、同第２００４／０１７１０８６号、同第２００４／０１９１８３３号、および同第２００４／０１９７８６５号に記載されている。
【００７８】
利用された特定のアッセイに関わらず、化合物は、化合物でのアッセイを実施して、特定のＴＬＲによって媒介されたいくつかの生物活性の閾増加量が少なくとももたらされる場合、特定のＴＬＲアゴニストとして同定されることができる。逆に、化合物は、指定のＴＬＲにより媒介された生物活性を検出するよう設計されたアッセイの実施に用いられたときに、化合物が生物活性における閾増加量の誘発に失敗する場合には、指定のＴＬＲのアゴニストとして作用しないとして同定され得る。他に示されていない限りにおいて、生物活性の増加は、同一の生物活性における、適切な対照において観察された生物活性を超える増加を指す。アッセイは、適切な対照と併せて実施されても、されなくてもよい。経験により、当業者は、特定のアッセイについて十分に熟知度を深め得（例えば、適切な対照において、特定のアッセイ条件下で観察された値の範囲）、対照の実施は、特定のアッセイにおける化合物のＴＬＲアゴニズムを測定するためには常に必要ではない場合がある。
【００７９】
特定の化合物が所与のアッセイにおいて特定のＴＬＲのアゴニストであるかまたはでないかを判定するための、ＴＬＲ−媒介生物活性の精確な閾増加量は、特に限定されないが、アッセイのエンドポイントとして観察される生物活性、アッセイのエンドポイントを計測または検出するために用いられる方法、アッセイのＳＮ比、アッセイの精度、および両方のＴＬＲについての化合物のアゴニズムの測定に同一のアッセイが用いられたかどうかを含む、技術分野において公知である要素に応じて変化し得る。従って、すべての可能なアッセイについて、一般に化合物を特定のＴＬＲのアゴニストまたは非アゴニストとして同定するために必要とされるＴＬＲ−媒介生物活性の閾増加量を規定することは一般に実際的ではない。当業者は、しかしながら、このような要素を十分に考慮して、適切な閾値を容易に判定することができる。
【００８０】
発現可能なＴＬＲ構造遺伝子で形質移入されたＨＥＫ２９３細胞を利用するアッセイは、化合物を細胞に形質移入されたＴＬＲのアゴニストとして同定するために、化合物が例えば約１μＭ〜約１０μＭの濃度で提供されたとき、例えば、ＴＬＲ−媒介生物活性（例えば、ＮＦκＢ活性化）における少なくとも３倍の増加の閾値を用い得る。しかしながら、異なる閾値および／または異なる濃度範囲が、一定の状況においては好適であり得る。また、異なる閾値が、異なるアッセイについては適切であり得る。
【００８１】
免疫調節組成物は、被検者への投与に好適ないずれかの方策で処方され得る。処方の好適なタイプが、例えば、米国特許第５，７３６，５５３号；同第５，２３８，９４４号；同第５，９３９，０９０号；同第６，３６５，１６６号；同第６，２４５，７７６号；および６，４８６，１８６号；欧州特許第０３９４０２６号；および米国特許出願公開第２００３／０１９９５３８号に記載されている。化合物は、特に限定されないが、溶液、懸濁液、エマルジョンを含むいずれかの好適な形態、またはいずれかの形態の混合物で提供され得る。化合物は、いずれかの薬剤的に許容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクルとの配合物で供給され得る。例えば、配合物は、例えば、クリーム、軟膏剤、エアロゾル配合物、非エアロゾルスプレー、ゲル、ローション等などの従来の局所的剤形で供給され得る。配合物は、特に限定されないが、補助剤、皮膚浸透促進剤、着色剤、芳香剤、香味剤、湿潤剤、増粘剤等を含む１つ以上の添加剤をさらに含み得る。
【００８２】
免疫調節組成物を含有する配合物は、例えば、経口または非経口などのいずれかの好適な方策で投与され得る。本明細書において用いられるところ、経口的とは、経口摂取によることを含む消化管を介した投与を指す。非経口的とは、例えば、静脈内、筋肉内、経皮的、皮下、経粘膜的（例えば、吸入により）、または局所的などの消化管を介する以外の投与を指す。
【００８３】
本発明の実施に好適な配合物の組成物は、特に限定されないが、免疫調節組成物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図される投与計画、被検者の免疫系の状態（例えば、抑制されている、易感染性である、刺激されている）、免疫調節組成物の投与方法、および配合物が投与される種を含む技術分野において公知である要素に応じて異なることとなる。従って、すべての可能な適用について効果的な配合物の組成を、一般に規定することは実際的ではない。当業者は、しかしながら、このような要素を十分に考慮して、適切な配合物を容易に判定することができる。
【００８４】
別の側面において、本発明は、免疫応答修飾因子の標的化送達方法を含む。一般に、方法は、被検者への、送達標的を認識する標的化部分に結合された免疫応答修飾因子を含む免疫調節組成物の投与を含む。
【００８５】
別の側面において、本発明は、局所免疫応答を誘導する方法を提供する。一般に、方法は、被検者への、送達標的を認識する標的化部分に結合された免疫応答修飾因子を含む免疫調節組成物の、免疫応答を誘導するための有効量での投与を含む。
【００８６】
さらに別の側面において、本発明は、免疫応答を誘導することにより処置可能な、被検者における状態を処置する方法を提供する。一般に、方法は、被検者への、送達標的を認識する標的化部分に結合された免疫応答修飾因子を含む免疫調節組成物の、状態の少なくとも１つの症状または徴候を処置するための有効量での投与を含む。
【００８７】
方法の各々について、好適な免疫調節組成物は、上述の免疫調節組成物を含む。いくつかの実施形態において、送達標的は腫瘍細胞を含む。他の実施形態において、送達標的は免疫細胞を含む。一定の実施態様において、標的指向化部位は、２つ以上の送達標的を認識し得る。このような一つの場合において、１つの送達標的は腫瘍細胞を含むことができると共に、２つ目の送達標的は免疫細胞を含むことができる。
【００８８】
いくつかの実施態様において、本発明の方法は、例えば、約０．００１％〜約１０％（他に示されていない限りにおいて、本明細書に記載のすべてのパーセントは、重量／総配合物に関する重量である）の配合物での、免疫調節組成物の被検者への投与を含むが、いくつかの実施形態においては、免疫調節組成物は、この範囲外の濃度で免疫調節組成物を提供する配合を用いて投与され得る。一定の実施態様において、方法は、被検者への、約０．０１％〜約１％の免疫調節組成物を含む配合物、例えば、約０．１％〜約０．５％の免疫調節組成物を含む配合物の投与を含む。
【００８９】
本発明の実施に効果的である免疫調節組成物の量は、標的特異的な免疫応答を発生させるのに十分な量である。本発明の実施に必要とされる免疫調節組成物の精確な量は、特に限定されないが、免疫調節組成物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図された投与計画、被検者の免疫系の状態（例えば、抑制されている、易感染性である、刺激されている）、免疫調節組成物の投与方法、および免疫調節組成物が投与される種を含む技術分野において公知である要素に応じて異なることとなる。従って、すべての可能な適用について効果的な免疫調節組成物の量を構成する量を規定することは一般に実際的ではない。当業者は、しかしながら、このような要素を十分に考慮して、適切な量を容易に判定することができる。
【００９０】
いくつかの実施態様において、本発明の方法は、十分な免疫調節組成物を投与して、例えば、被検者へ約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇのＩＲＭ部位の投与量を提供することを含むが、いくつかの実施態様においては、方法は、免疫調節組成物を投与して、この範囲外のＩＲＭ部位の投与量を提供することにより実施されてもよい。これらの実施態様のいくつかにおいて、方法は、十分な免疫調節組成物を投与して、被検者への約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇのＩＲＭ部位の投与量、例えば、約１００μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの投与量を提供することを含む。
【００９１】
あるいは、投与量は、処置過程の開始直前に得られる実際の体重を用いて算出され得る。このように算出される投与量のために、体表面積（ｍ2）が、デュポワ法：ｍ2＝（体重ｋｇ0.425×身長ｃｍ0.725）×０．００７１８４を用いて、処置過程の開始前に算出される。
【００９２】
いくつかの実施態様において、本発明の方法は、十分なＩＲＭ複合体を投与して、例えば、約０．０１ｍｇ／ｍ2〜約１０ｍｇ／ｍ2の投与量を提供することを含み得る。
【００９３】
いくつかの実施態様において、本発明の方法は、十分な免疫調節組成物を投与して、例えば、被検者への約５０ｎｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの標的化部分の投与量を提供することを含むが、いくつかの実施態様において、方法は、免疫調節組成物を投与して、この範囲外の標的化部分の投与量を提供することによって実施され得る。これらの実施態様のいくつかにおいて、方法は、十分な免疫調節組成物を提供して、被検者への約１０μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ標的化部分の投与量、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投与量を提供することを含む。
【００９４】
投与計画は、特に限定されないが、免疫調節組成物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、免疫調節組成物が投与される量、被検者の免疫系の状態（例えば、抑制されている、易感染性である、刺激されている）、免疫調節組成物の投与方法、および免疫調節組成物が投与される種を含む技術分野において公知である多数の要素に、少なくとも部分的に応じ得る。従って、すべての可能な適用について効果的な投与計画を規定することは一般に実際的ではない。当業者は、しかしながら、このような要素を十分に考慮して、適切な投与計画を容易に判定することができる。
【００９５】
本発明のいくつかの実施態様において、免疫調節組成物は、例えば、単一的な投与量から複数の投与量で投与され得る。一定の実施態様において、免疫調節組成物は、約１日１回から約３ヶ月に１回で投与され得るが、いくつかの実施態様において、本発明の方法は、この範囲外の頻度で免疫調節組成物を投与することによって実施され得る。特定の一実施態様において、免疫調節組成物は、約週１回から約月１回で投与される。他の実施態様において、免疫調節組成物は、１週間に２日で１日１回投与される。さらに他の実施態様において、免疫調節組成物は、１週間に３回で１日１回で投与される。
【００９６】
免疫調節組成物を投与することにより処置され得る状態としては、限定されないが：
（ａ）例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、またはＶＺＶ）、ポックスウイルス（例えば、痘瘡またはワクシニアなどのオルソポックスウイルス、または伝染性軟属腫）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルスまたはエンテロウイルス）、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、および呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ）、パポーウイルス（例えば、性器疣贅、尋常性疣贅、または足底疣贅を発症させるものなどのパピロマーウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルスまたはデングウイルス）、またはレトロウイルス（例えば、ＨＩＶなどのレンチウイルス）による感染から生じる疾病などのウイルス性疾患；
（ｂ）例えば、大腸菌類、エンテロバクター、サルモネラ菌、ブドウ球菌、赤痢菌、リステリア、好気菌、ヘリコバクター、クレブシエラ、プロテウス、シュードモナス、レンサ球菌、クラミジア、マイコプラズマ、肺炎レンサ球菌、ナイセリア、クロストリジウム、バチルス、コリネバクテリウム、マイコバクテリウム、カンピロバクター、ビブリオ、セラチア、プロビデンシア、クロモバクテリウム、ブルセラ、エルシニア、ヘモフィルス、またはボルデテラの細菌による感染から生じる疾病などの、例えば細菌性疾患；
（ｃ）クラミジア、特に限定されないが、カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコッカス髄膜炎を含む真菌性疾病、または特に限定されないが、マラリア、ニューモシスティスカリニ肺炎、リーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、およびトリパノソーマ感染を含む寄生虫症などの他の感染性疾病；
（ｄ）固体腫瘍癌（特に限定されないが、乳癌、大腸癌、膵癌、前立腺癌、肺癌、前立腺癌、肝癌等を含む）、上皮内腫瘍、子宮頚部異形成、日光角化症、基底細胞癌、扁平上皮癌、腎細胞癌、カポジ肉腫、メラノーマ、白血病（特に限定されないが、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫、Ｂ−細胞リンパ腫、および有毛細胞白血病を含む）、および他の癌などの腫瘍性疾患；
（ｅ）アトピー性皮膚炎または湿疹、好酸球増加症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、およびオーメン症候群などのＴH２−媒介アトピー性疾病；
（ｆ）全身性エリテマトーデス、本態性血小板血症、多発性硬化症、円板状エリテマトーデス、円形脱毛症などの一定の自己免疫疾患；および
（ｇ）例えば、ケロイド形成のおよび他のタイプの瘢痕（例えば、慢性的創傷を含む創傷治癒の増強）の阻害などの創傷修復に関連する疾病
が挙げられる。
【００９７】
一定の免疫調節組成物は、易感染性免疫機能を有する固体に特に役立ち得る。例えば、一定の免疫調節組成物は、例えば、移植患者、癌患者およびＨＩＶ患者において、細胞性免疫の抑制後に生じる日和見感染および腫瘍を処置するために用いられ得る。
【００９８】
ＩＲＭ部分および標的化部分は、例えば、共有、および一定のタイプの非共有結合を含む、いずれかの好適な手段によっても結合され得る。共有的および非共有的にＩＲＭ化合物および抗原を結合する方法が、例えば、米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号に記載されている。このような方法は、驚くべきことに、得られる組成物の各部位がその機能的特長を維持するよう、共有的または非共有的にＩＲＭ部分および標的化部分を結合するためにも用いられ得る。ＩＲＭおよび抗原が結合される可能性がある状態のいくつか（例えば、９．０を超えるｐＨおよびＵＶ照射）は、一定の標的化部分の標的特異的特長を破壊する可能性があると考えられていた（例えば、抗体Ｌ鎖の抗原認識サイトの破壊）。しかも、空間的な考慮および１つ以上のＩＲＭ部位がバインドし、従って、標的化部分の標的−結合部分をブロックすることができる可能性は、ＩＲＭおよび標的化部分を結合するためのＩＲＭおよび抗原を結合する方法の使用を妨げるであろう障害であると見なされていた。
【００９９】
あるいは、標的指向化部位は、ＩＲＭ部分および標的化部分を結合するためにＵＶ照射に依存しない化学作用を用いてＩＲＭ部分に結合され得る。このような方法は、共役反応の制御、ＩＲＭ部分対標的化部分の比の制御、最終組成物の特徴づけ、およびより均質な生成物を得ることを容易とし得る化学作用を用いる。ＩＲＭ部分および標的化部分を結合するための追加の方法が、例えば、２００６年２月２２日出願の「免疫応答修飾因子複合体（Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）」と題された米国仮特許出願に記載されている。
【０１００】
上記したとおり、ＩＲＭ部分は、共有結合ではなく、親和性相互作用を用いて標的化部分に結合され得る。上記の一例は、アビジンおよびビオチンの間の親和性を活用する。ＩＲＭ部分および標的化部分を結合するために有用であり得る代替的な親和性相互作用としては、例えば、糖タンパク質／レクチン相互作用が挙げられる。
【０１０１】
あるいは、免疫調節組成物は、ＩＲＭ部分および標的化部分を共有的に結合することにより調製され得る。免疫調節組成物は、一般に、免疫応答修飾因子を、架橋剤と反応させ、および次いで得られた中間体を、例えば、所望の量の標的特異的な送達機能を提供するに十分な分量の抗体などの標的指向化部位と反応させることにより調製され得る。生物複合体の調製に好適な多くの架橋剤が公知であり、および多数が市販されている。例えば、ヘルマンソン（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ），Ｇ．（１９９６年）「生物複合体技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）を参照のこと。
【０１０２】
あるいは、免疫調節組成物は、例えば、標的化部分が、ＩＲＭ部分のＲ1を介してＩＲＭ部位と連結される反応スキームＩに示される方法により、調製され得る。反応スキームＩのステップ（１）においては、式ＩＩＩのＩＲＭ化合物が式ＩＶのヘテロ二官能性架橋剤と反応されて、式ＩＩの化合物が提供される。ＲAおよびＲBの各々は、他方と反応するよう選択される官能基を含有する。例えば、ＲAが第１級アミンを含有する場合には、ＲBがＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミジルエステルなどのアミン−反応性官能基を含有するヘテロ二官能性架橋剤が選択され得る。ＲAおよびＲBは、両者が反応して、所望のリンカー基を複合体中に提供するよう選択され得る。
【０１０３】
ＲAが官能基を含有する式ＩＩＩの化合物の調製方法は公知である。例えば、米国特許第４，６８９，３３８号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６８，３７６号；同第５，３８９，６４０号；同第５，３５２，７８４号；同第５，４９４，９１６号；同第４，９８８，８１５号；同第５，３６７，０７６号；同第５，１７５，２９６号；同第５，３９５，９３７号；同第５，７４１，９０８号；同第５，６９３，８１１号；同第６，０６９，１４９号；同第６，１９４，４２５号；同第６，３３１，５３９号；同第６，４５１，８１０号；同第６，５２５，０６４号；６，５４１，４８５号；同第６，５４５，０１６号；同第６，５４５，０１７号；同第６，６５６，９３８号；同第６，６６０，７４７号；同第６，６６４，２６０号；同第６，６６４，２６４号；同第６，６７０，３７２号；同第６，６７７，３４９号；同第６，６８３、０８８号；および同第６，７９７，７１８号；および米国特許出願公開第２００４／０１４７５４３号および同第２００４／０１７６３６７号を参照のこと。
【０１０４】
多くのヘテロ二官能性架橋剤が公知であり、および多数が市販されている。例えば、ヘルマンソン（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ），Ｇ．（１９９６年）「生物複合体技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、第５章「ヘテロ二官能性架橋剤（Ｈｅｔｅｒｏｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｅｒｓ）」、２２９〜２８５ページを参照のこと。反応は、一般に、式ＩＩＩの化合物のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの好適な溶剤中の溶液と、式ＩＶのヘテロ二官能性架橋剤のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの好適な溶剤中の溶液とを組み合わせることによって行われることができる。反応は、周囲温度で行われ得る。式ＩＩの生成物は、次いで、従来の技術を用いて単離され得る。
【０１０５】
反応スキームＩのステップ（２）において、反応性基ＺAを含有する式ＩＩの化合物が標的化部分と反応されて、式Ｉの免疫調節性複合体が提供される。反応は、一般に、式ＩＩの化合物のジメチルスルホキシドなどの好適な溶剤中の溶液と、標的化部分のＰＢＳなどの好適な緩衝剤中の溶液とを組み合わせることによって行われることができる。反応は、周囲温度でまたは低温（約４℃）で行われ得る。ＺAが、フェニルアジドなどの光反応性基である場合、反応混合物は、長波長ＵＶ光に適切な長さの時間露光されて、架橋が行われることとなる（例えば、１０〜２０分間）。標的化部分当たりのＩＲＭ部分の平均数は、反応において用いられる式ＩＩの化合物の量を調整することにより制御され得る。式Ｉの免疫調節性複合体は、従来の技術を用いて単離および精製され得る。
【０１０６】
反応スキームＩ
【化１】
2008531580.tif 000003
【０１０７】
あるいは、式ＩＩの化合物は、ヘテロ二官能性架橋剤を用いることなく合成され得る。式ＩＩの化合物は、反応性基ＺAを含有している限り、上記のステップ（２）の方法を用いて標的化部分と反応されて、免疫調節性複合体を提供し得る。
【０１０８】
本明細書において用いられるところ、用語「アルキル」、「アルケニル」および接頭語「ａｌｋ−」は直鎖、分岐鎖、および環式基を含み、すなわちシクロアルキルおよびシクロアルケニルを含む。他に規定されていない限りにおいて、これらの基は、１〜２０個の炭素原子を含み、アルケニル基は２〜２０個の炭素原子を含む。好ましい基は、合計で１０個以下の炭素原子を有する。環式基は単環式または多環式であることができ、および好ましくは、３〜１０個の環炭素原子を有する。例証的な環式基としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロピルメチル、およびアダマンチルが挙げられる。
【０１０９】
用語「ハロアルキル」は、１つ以上のハロゲン原子によって置換されている基を包括し、過フッ素化基を含む。これはまた、接頭語「ｈａｌｏ−」を含む基にも当てはまる。好適なｈａｌｏアルキル基の例は、クロロメチル、トリフルオロメチル等である。
【０１１０】
本明細書中で使用するとき、用語「アリール」は、炭素環式芳香族環または環系を含む。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フルオレニルおよびインデニルが挙げられる。用語「ヘテロアリール」としては、少なくとも１つの環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含む芳香族環または環系が挙げられる。好適なヘテロアリール基としては、フリル、チエニル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、イソインドリル、トリアゾリル、ピローリル、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、カルバゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピリミジニル、ベンズイミダゾリル、キノキサリニル、ベンゾチアゾリル、ナフチリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、プリニル、キナゾリニル等が挙げられる。
【０１１１】
「ヘテロシクリル」としては、少なくとも１つの環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含有すると共に、上述のヘテロアリール基の完全に飽和のおよび部分的に不飽和の誘導体のすべてを含む非芳香族環または環系が挙げられる。例証的な複素環基としては、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、およびイミダゾリジニルが挙げられる。
【０１１２】
アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリル基は、未置換であることができ、あるいは、アルキル、アルコキシ、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、アルキルチオ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロアルキルチオ、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、カルボキシ、ホルミル、アリール、アリーロキシ、アリールチオ、アリールアルコキシ、アリールアルキルチオ、ヘテロアリール、ヘテロアリーロキシ、ヘテロアリールチオ、ヘテロアリールアルコキシ、ヘテロアリールアルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアルキル、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルコキシカルボニル、ハロアルキルカルボニル、ハロアルコキシカルボニル、アルキルチオカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アリールチオカルボニル、ヘテロアリールチオカルボニル、アルカノイルオキシ、アルカノイルチオ、アルカノイルアミノ、アリールカルボニルオキシ、アリールカルボニルチオ、アルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アリールジアジニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アリールアルキルスルホニルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールアルキルカルボニルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、アルケニルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アリールアルキルスルホニルアミノ、ヘテロアリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアルキルスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アルケニルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールアミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノカルボニルアミノおよび、ヘテロシクリルの場合には、オキソからなる群から独立に選択される置換基の１つ以上によって置換されていることができる。他の基が「置換されている」または「任意により置換されている」として記載されている場合、それらの基はまた、上に列挙した置換基の１つ以上によって置換されていることもできる。
【０１１３】
一定の置換基が一般に好ましい。例えば、好ましいＲ2基としては、水素、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、Ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、およびシクロプロピルメチル）、およびアルコキシアルキル基（例えば、メトキシエチルおよびエトキシメチル）が挙げられる。好ましくは、Ｒ3およびＲ4は、独立に水素またはメチルであり、またはＲ3およびＲ4は共に結合してベンゼン環、ピリジン環、６員飽和環または窒素原子を含有する６員飽和環を形成する。これらの好ましい置換基の１つ以上は、存在する場合、いずれの組み合わせでも存在することができる。
【０１１４】
ＩＲＭ部分および標的化部分が、共有的に結合されているか、非共有的に結合されているかに関わらず、免疫調節組成物は、例えば、スペーサアームまたは固形支持体などの介在成分を含み得る。例えば約２０Å〜約１００Åの長さを有するものなどの一定のスペーサアームは組成物の溶解度を向上し得、これにより、組成物を用いて得ることができるＩＲＭ活性レベルが高められ得る。好適なスペーサが市販されている。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、免疫調節組成物は、標的化部分およびＩＲＭ部分の両方が接続する巨大分子支持体を含み得る。一定の実施態様において、巨大分子支持体は固形支持体であり得る。ＩＲＭ部位、標的化部分、または両方は、上述のものなどの架橋基を用いて、共有的に巨大分子支持体に接続され得る。巨大分子支持体は、例えばアガロースビーズ、金粒子等などの米国特許出願公開第２００４／０２０２７２０号および同第２００４／０２５８６９８号に記載のものなどの支持体を、例えば含み得る。
【０１１６】
本発明の方法は、いずれかの好適な被検者に実施され得る。好適な被検者としては、限定されず、特に限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシなどの動物が挙げられる。
【実施例】
【０１１７】
実施例
機構、利点、および他の本発明の詳細を単にさらに例示するために以下の実施例が選択された。しかしながら、実施例がこの目的のために役立つ一方で、用いられた特定の材料および量、ならびに他の状態および詳細は、本発明の範囲を不当に制限する可能性のある事項においては解釈されるべきではないことが明白に理解されるべきである。
【０１１８】
以下の実施例において、通常の高性能フラッシュクロマトグラフィ（ＨＰＦＣ）を、ホライゾン（ＨＯＲＩＺＯＮ）ＨＰＦＣシステム（米国バージニア州シャーロッツビルのバイオテージ（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｉｎｃ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）から入手可能な自動化高性能フラッシュ精製製品）またはインテリフラッシュ（ＩＮＴＥＬＬＩＦＬＡＳＨ）フラッシュクロマトグラフィシステム（米国ウィスコンシン州バーリントンのアナロジックス（ＡｎａＬｏｇｉｘ，Ｉｎｃ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）から入手可能な自動化フラッシュ精製システム）を用いて行った。各精製について用いた溶出液が実施例に与えられている。いくつかのクロマトグラフィ分離においては、溶媒混合物８０／１８／２ｖ／ｖ／ｖクロロホルム／メタノール／濃水酸化アンモニウム（ＣＭＡ）を、溶出液の極性成分として用いた。これらの分離において、ＣＭＡをクロロホルムと示した比で混合した。
【０１１９】
ＩＲＭ化合物の調製
ＩＲＭ化合物１（ＩＲＭ１）：Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミド
【化２】
2008531580.tif 000004
【０１２０】
パートＡ
６−（カルボベンジルオキシアミノ）カプロン酸（８．４９グラム（ｇ）、３２．０ミリモル（ｍｍｏｌ））のＤＭＦ（５０ｍＬ）中の溶液に、０℃でＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）を添加した。短時間の後、溶液を、１−（２−アミノ−２−メチルプロピル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号に記載のとおり調製した、１０ｇ、３２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中の０℃溶液に添加した。混合物を室温に温めさせおよび３日間攪拌した。溶液を、水（４００ｍＬ）で希釈すると共に、酢酸エチル（３×）で抽出した。有機層を組み合わせ、および水（２×）および塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、および濃縮した。粗生成物をシリカゲルでのＨＰＦＣにより３回精製して（クロロホルム中のＣＭＡでの勾配溶離）、４．９０ｇのベンジル６−（｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−６−オキソヘキシルカルバメートを白色のフォームとして得た。
【０１２１】
パートＢ
ベンジル６−（｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−６−オキソヘキシルカルバメート（４．９０ｇ、８．７５ｍｍｏｌ）およびエタノール（１００ｍＬ）中の１０％の炭素に担持されたパラジウム（０．５ｇ）の混合物を、パール（Ｐａｒｒ）装置で、２０〜４０ｐｓｉ（１．４×１０5−２．８×１０5Ｐａ）で１日水素化し、その間、新たな水素を数回導入した。混合物を、ＣＥＬＩＴＥフィルタ剤を通してろ過した。濾液を減圧下に濃縮して、白色のフォームを得、これを直接的に次のステップにおいて用いた。
【０１２２】
パートＣ
３，３’−ジチオジプロピオン酸（９２０ｍｇ、４．３８ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）（１．４２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５０ｍＬ）中の混合物に、０℃で塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（１．８５ｇ、９．６３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、０℃で４時間攪拌した。パートＢからの材料（８．７５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却し、および活性化二酸の冷えた溶液を一度に添加し、２回ＤＭＦですすいだ（各１０ｍＬ）。反応を一晩かけて徐々に室温に温めさせた。さらなる数々の分量のＥＤＣを、０℃で次の２日間にわたって反応に添加した。反応を室温でさらに数日間攪拌させ、次いで、水および飽和水性重炭酸ナトリウムで希釈し、および酢酸エチルで数回抽出した。組み合わせた有機抽出物を水および塩水で洗浄し、および減圧下に濃縮した。粗生成物をＨＰＦＣで精製して、Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミドのジスルフィドダイマー３．８ｇを得た。
【０１２３】
パートＤ
パートＣからの材料（３．８ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を、メタノール（３０ｍＬ）中に室温で溶解した。塩酸トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（１．３８ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、水（３ｍＬ）、および１２．５Ｍ水性水酸化ナトリウム（１．１２ｍＬ、１４．１ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を、室温で２時間攪拌し、次いで０℃に冷却した。溶液を、１Ｍ塩酸水溶液（およそ１４ｍＬ）でｐＨ６に調整した。メタノールを減圧下で除去し、および重炭酸ナトリウム水溶液を添加した。混合物をジクロロメタン（３×）で抽出した。有機抽出物を組み合わせ、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。粗生成物を、シリカゲルでのＨＰＦＣにより精製した（クロロホルム中の０〜５０％ＣＭＡでの勾配溶離）。適切な画分を濃縮して、２．３６ｇのＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミドを得た。
【０１２４】
白色のフォーム，ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１５（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ８．２２（ｄｄ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，１Ｈ），７．５１（ｄｄｄ，１Ｈ），７．３２（ｄｄｄ，１Ｈ），５．９６（ｍ，１Ｈ），５．５９（ｓ，１Ｈ），５．５１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），５．０６（ｓ，２Ｈ），４．８４（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．６２（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．８１（ｍ，２Ｈ），２．５０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．９８（ｍ，２Ｈ），１．６１−１．１８（ｍ，１３Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ26Ｈ38Ｎ6Ｏ3Ｓ・０．５Ｈ2Ｏについての解析的計算値：Ｃ，５９．６３；Ｈ，７．５１；Ｎ，１６．０５；Ｓ，６．１２。実際値：Ｃ，５９．８９；Ｈ，７．６６；Ｎ，１６．２２；Ｓ，６．２５。
【０１２５】
ＩＲＭ化合物２（ＩＲＭ２）：Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミド
【化３】
2008531580.tif 000005
【０１２６】
Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミド（１．３３ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１６ｍＬ）中の溶液を、１．５時間にわたって、２，２’−ジピリジルジスルフィド（２．２７ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中の溶液に滴下した。溶液を室温で１８時間攪拌し、次いで減圧下に濃縮した。残渣をシリカゲルでのＨＰＦＣにより２回精製して（ジクロロメタン中の１〜１０％メタノールでの勾配溶離）、８００ｍｇのＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミドを、白色のフォームとして得た。
【０１２７】
代わりに、Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミドを、塩酸６−アミノ−Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝ヘキサンアミドから１ステップで合成した。塩酸６−アミノ−Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝ヘキサンアミド（６８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０４６ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）、およびＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネートのテトラヒドロフラン（１．６ｍＬ）およびＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の混合物を、室温で５時間攪拌した。反応混合物を、水および酢酸エチルの間に分割した。水性相を酢酸エチルで抽出した。有機層を組み合わせ、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。粗生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィによって精製して、３６ｍｇのＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミドを、無色の油として得た。
【０１２８】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６２４（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ８．４３（ｍ，１Ｈ），８．２３（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｍ，１Ｈ），７．６３（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），７．１１六重項，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｍ，１Ｈ），５．５５（ｓ，１Ｈ），５．４７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），４．８３（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．６２（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｑ，２Ｈ），３．０８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．６１（ｔ，２Ｈ），２．０４−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．２２（ｍ，１２Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ31Ｈ41Ｎ7Ｏ3Ｓ2・１．０Ｈ2Ｏについての解析的計算値：Ｃ，５８．０１；Ｈ，６．７５；Ｎ，１５．２８；Ｓ，９．９９。実際値：Ｃ，５８．３７；Ｈ，６．６９；Ｎ，１５．２４；Ｓ，９．９９。
【０１２９】
ＩＲＭ化合物３（ＩＲＭ３）：Ｎ−［４−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］−３−メルカプトプロパンアミド
【化４】
2008531580.tif 000006
【０１３０】
パートＡ
ＩＲＭ化合物１のパートＣにおいて上述したものと同様の手順に従って、１−（４−アミノブチル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（米国特許第６，４５１，８１０号およびその中に引用されている文献、１．００ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［４−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］−３−メルカプトプロパンアミドのジスルフィドダイマー１．０５ｇに転換した。
【０１３１】
パートＢ
ＩＲＭ化合物１のパートＤにおいて上述したものと同様の手順に従って、Ｎ−［４−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］−３−メルカプトプロパンアミドのジスルフィドダイマー（０．７８ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を、シリカゲルでのＨＰＦＣ（クロロホルム中の２〜３０％ＣＭＡでの勾配溶離）による精製後、６００ｍｇのＮ−［４−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］−３−メルカプトプロパンアミドに転換した。
【０１３２】
白色の固体，ｍｐ１３３．０−１３５．０℃。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４００（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ７．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），５．５０（ｍ，１Ｈ），５．３４（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．９０（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．０３−１．８２（ｍ，４Ｈ），１．７３−１．４５（ｍ，５Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ21Ｈ29Ｎ5ＯＳについての解析的計算値：Ｃ，６３．１３；Ｈ，７．３２；Ｎ，１７．５３。実際値：Ｃ，６３．１４；Ｈ，７．３６；Ｎ，１７．８４。
【０１３３】
ＩＲＭ化合物４（ＩＲＭ４）：Ｎ−［４−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］−３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパンアミド
【化５】
2008531580.tif 000007
【０１３４】
パートＡ
ＩＲＭ化合物２のパートＡにおいて上述したものと同様の手順に従って、Ｎ−［４−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］−３−メルカプトプロパンアミド（０．２０ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を、４７ｍｇのＮ−［４−（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル］−３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパンアミドに転換した。
【０１３５】
黄色のガラス状の固体，ｍｐ６３．０−７３．０℃。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５０９（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ８．３３（ｍ，１Ｈ），７．８９（ｍ，１Ｈ），７．８１（ｍ，１Ｈ），７．６１−７．４６（ｍ，３Ｈ），７．３０（ｍ，１Ｈ），７．０５（ｍ，１Ｈ），６．７７（ｍ，１Ｈ），５．４９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３７（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｍ，２Ｈ），２．８８（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．０５−１．６６（ｍ，６Ｈ），１．４９（六重項，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ26Ｈ32Ｎ6ＯＳ2・０．６Ｈ2Ｏについての解析的計算値：Ｃ，６０．１１；Ｈ，６．４４；Ｎ，１６．１８。実際値：Ｃ，５９．８０；Ｈ，６．２３；Ｎ，１６．２５。
【０１３６】
ＩＲＭ化合物５（ＩＲＭ５）：Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−４−ヒドラジノ−４−オキソブタンアミド
【化６】
2008531580.tif 000008
【０１３７】
パートＡ
コハク酸無水物（３．２０ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）を、１−（２−アミノ−２−メチルプロピル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号に記載のとおり調製した、２．００ｇ、６．３９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中の１００℃溶液に添加した。２日後、反応混合物を減圧下に濃縮して、オフホワイトの固体を得た。固体を１００ｍＬのジクロロメタンと共に攪拌し、およびろ過により単離した。濾液を濃縮し、ジクロロメタン（２５ｍＬ）と攪拌し、およびろ過して、追加の固体を得た。組み合わせた固形分を真空下で乾燥させて、３．１６ｇの４−（｛２−［４−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−４−オキソブタン酸を、白色の固体として得、これをさらなる精製なしで用いた。
【０１３８】
パートＢ
４−（｛２−［４−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−４−オキソブタン酸（３．１６ｇ、６．３９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中の溶液を、トリエチルアミン（２．６７ｍＬ、１９．２ｍｍｏｌ）、塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（３．６７ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチルカルバゼート（２．４６ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（７８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を４日間攪拌すると共に、次いで１００ｍＬの水で処理した。層を分離しおよび水性部分をクロロホルム（５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、水（５０ｍＬ）および塩水（５０ｍＬ）で順次に洗浄した。有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮して、白色のフォームを得た。白色のフォームを、ジクロロメタン（５０ｍＬ）中に溶解し、およびエチレンジアミン（１ｍＬ）で処理した。４時間攪拌した後、反応混合物を水（５０ｍＬ）およびクロロホルム（５０ｍＬ）で処理し、および層を分離した。水性部分をクロロホルム（２×２５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を水（５０ｍＬ）および塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、およびシリカゲルでのクロマトグラフィ（勾配溶離、クロロホルム中の２５％〜１００％ＣＭＡ）による粗生成物の精製、続いてジクロロメタンからの結晶化により、１．６７ｇのｔ−ブチル２−［４−（｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−４−オキソブタノイル］ヒドラジンカルボキシレートを、白色の粉末として得た。
【０１３９】
パートＣ
ｔ−ブチル２−［４−（｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−４−オキソブタノイル］ヒドラジンカルボキシレート（７９２ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）中の溶液を、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で処理した。２時間攪拌した後、追加のトリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を反応混合物に添加し、および攪拌を１時間継続した。反応混合物を減圧下に濃縮し、および得られたシロップ剤を水中に溶解した。溶液を、濃縮水酸化アンモニウムの添加により塩基性にし、および次いで１０％メタノール／クロロホルムで反復的に抽出した。組み合わせた有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。粗白色の固体を、シリカゲルでのクロマトグラフィによって精製して（勾配溶離、クロロホルム中の２５％〜７５％ＣＭＡ）、３４０ｍｇのＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−４−ヒドラジノ−４−オキソブタンアミドを得た。
【０１４０】
白色の固体，ｍｐ２０３．０−２０４．６℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．９８（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．２，Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，７．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．５９（ｓ，２Ｈ），４．９９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．７２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．１６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．５１（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．３４−２．２４（ｍ，４Ｈ），１．２０（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１７２．３，１７１．２，１５２．４，１５０．７，１４５．８，１３４．５，１２７．０，１２６．８，１２６．７，１２１．５，１２１．０，１１５．６，６５．８，６４．６，５５．１，５１．４，３１．８，２９．１，２５．９，１５．３；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４２８（Ｍ＋Ｈ）+；Ｃ21Ｈ29Ｎ7Ｏ3・０．５Ｈ2Ｏについての解析的計算値：Ｃ，５７．７８；Ｈ，６．９３；Ｎ，２２．４６。実際値：Ｃ，５８．００；Ｈ，６．６９；Ｎ，２２．３６。
【０１４１】
ＩＲＭ化合物６（ＩＲＭ６）：Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミド
【化７】
2008531580.tif 000009
【０１４２】
パートＡ
６−アミノ−Ｎ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝ヘキサンアミド（２８ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、ＩＲＭ化合物１のパートＡ〜Ｂに全体が記載のとおり調製した）のジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の溶液に、室温で、Ｎ−スクシンイミジル−３−マレイミドプロピオネート（１８ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を試薬が溶解するまで振盪し、３０分間静置させ、次いで減圧下に濃縮した。フォームを、０．０５％ギ酸／水中の０．０５％ギ酸／アセトニトリルを溶出液として用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、１１ｍｇのＮ−｛２−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミドをモノギ酸塩として得た。
【０１４３】
オフホワイトのガラス状の固体，ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５７８（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．３４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｓ，２Ｈ），７．９０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｍ，１Ｈ），７．００（ｓ，２Ｈ），６．６７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），５．００（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．７４（ｂｒ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｍ，２Ｈ），１．３６（ｍ，２Ｈ），１．２０（ｍ，８Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１４４】
ＩＲＭ化合物７（ＩＲＭ７）：Ｎ−｛６−［（４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１−｛２−メチル−２−［（メチルスルホニル）アミノ］プロピル｝−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）オキシ］ヘキシル｝−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミド
【化８】
2008531580.tif 000010
【０１４５】
Ｎ−｛２−［４−アミノ−７−［（６−アミノヘキシル）オキシ］−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝メタンスルホンアミド（国際公開第２００５／０３２４８４号の実施例４５のパートＡ〜Ｊに記載のとおり調製した、４５７ｍｇ、０．９０３ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（９ｍＬ）中に溶解し、およびＮ−ヒドロキシスクシンアミジル−４−アジドサリチル酸（２４８ｍｇ、０．９０３ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を、窒素雰囲気下で一晩攪拌した。反応混合物を、次いで減圧下に濃縮した。得られたシロップ剤を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中に溶解し、および次いで水（４×２５ｍＬ）および塩水で洗浄した。有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（５％メタノール／クロロホルム）で、粘着性の、白色の固体を得、これを、ジクロロメタンおよびヘキサンの混合物から濃縮して、白色の固体を得た。材料を、５０℃で数日間真空下で乾燥させて、３８０ｍｇのＮ−｛６−［（４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１−｛２−メチル−２−［（メチルスルホニル）アミノ］プロピル｝−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）オキシ］ヘキシル｝−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミドを白色の粉末として得た。
【０１４６】
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．５４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｓ，２Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５７（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．９６（ｓ，３Ｈ），１．７８（ｍ，２Ｈ），１．６０（ｍ，２Ｈ），１．５２−１．３９（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｓ，６Ｈ），１．１５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１６８．８，１６２．１，１５７．９，１５２．５，１５０．１，１４７．３，１４４．７，１３５．０，１２９．７，１２５．３，１２２．７，１１２．６，１１１．５，１１０．０，１０９．５，１０８．２，１０７．５，６７．６，６５．７，６５．１，５７．７，５４．６，４４．７，３９．３，２９．１，２９．０，２６．６，２５．８，２５．７，１５．３；ＭＳ  ｍ／ｚ６６８（Ｍ＋Ｈ）+；Ｃ31Ｈ41Ｎ9Ｏ6Ｓについての解析的計算値：Ｃ，５５．７６；Ｈ，６．１９；Ｎ，１８．８８；Ｓ，４．８０。実際値：Ｃ，５５．８７；Ｈ，６．２８；Ｎ，１８．１８；Ｓ，４．６６。
【０１４７】
ＩＲＭ化合物８（ＩＲＭ８）：Ｎ−｛６−［（４−アミノ−１−｛４−［（メチルスルホニル）アミノ］ブチル｝−２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）オキシ］ヘキシル｝−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミド
【化９】
2008531580.tif 000011
【０１４８】
Ｎ−（４−｛４−アミノ−７−［（６−アミノヘキシル）オキシ］−２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル｝ブチル）メタンスルホンアミド（国際公開第２００５／０３２４８４号の実施例４７のパートＡ〜Ｊに記載のとおり調製した、４９０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、およびＮ−ヒドロキシスクシンアミジル−４−アジドサリチル酸（２７４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）で処理し、および混合物を、窒素下で一晩攪拌した。反応混合物を次いで減圧下に濃縮した。得られたシロップ剤を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中に溶解し、および次いで水（３×２５ｍＬ）および塩水で洗浄した。有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（５％メタノール／クロロホルム）で、粘着性の、白色の固体を得た。材料を、５０℃で数日間真空下で乾燥させて、４００ｍｇのＮ−｛６−［（４−アミノ−１−｛４−［（メチルスルホニル）アミノ］ブチル｝−２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）オキシ］ヘキシル｝−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミドを得た。
【０１４９】
白色の粉末。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．８３（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．３８（ｓ，２Ｈ），４．４６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．８６（ｓ，３Ｈ），１．９１−１．７５（ｍ，６Ｈ），１．６６−１．５４（ｍ，４Ｈ），１．５３−１．３９（ｍ，４Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１６８．７，１６２．１，１５７．７，１５２．５，１５２．２，１４６．７，１４４．７，１３３．１，１２９．８，１２５．３，１２１．４，１１２．７，１１２．２，１０９．９，１０９．２，１０８．３，１０７．５，４４．７，４４．２，３９．５，３９．３，２９．１，２９．０，２８．７，２７．４，２６．７，２６．６，２５．７，２１．３，１４．２；ＭＳ  ｍ／ｚ６５２（Ｍ＋Ｈ）+；Ｃ31Ｈ41Ｎ9Ｏ5Ｓについての解析的計算値：Ｃ，５７．１３；Ｈ，６．３４；Ｎ，１９．３４；Ｓ，４．９２。実際値：Ｃ，５６．７９；Ｈ，６．０５；Ｎ，１９．０９；Ｓ，４．７９。
【０１５０】
ＩＲＭ化合物９（ＩＲＭ９）：Ｎ−｛６−［（４−アミノ−２−プロピル［１，３］チアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）オキシ］ヘキシル｝−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミド
【化１０】
2008531580.tif 000012
【０１５１】
７−［（６−アミノヘキシル）オキシ］−２−プロピル［１，３］チアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（米国仮特許出願第６０／７３３０３６号の実施例９のパートＡに記載のとおり調製した、３５０ｍｇ、０．９７８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、およびＮ−ヒドロキシスクシンアミジル−４−アジドサリチル酸（２６８ｍｇ、０．９７８ｍｍｏｌ）で処理し、および混合物を、窒素雰囲気下で３時間攪拌した。反応混合物を、次いで減圧下に濃縮した。得られたシロップ剤を、ジクロロメタン（５０ｍＬ）中に溶解し、および次いで水（４×２５ｍＬ）および塩水で洗浄した。有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。シリカゲルでのクロマトグラフィ（水酸化アンモニウムで飽和された３％メタノール／クロロホルム）で、微量のＤＭＦをまだ含有する、粘着性の、明るい−黄色の固体を得た。材料を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中に溶解し、および次いで水（３×２５ｍＬ）で洗浄した。有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮して、３３０ｍｇのＮ−｛６−［（４−アミノ−２−プロピル［１，３］チアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）オキシ］ヘキシル｝−４−アジド−２−ヒドロキシベンズアミドを得た。
【０１５２】
明るい黄色のフォーム，ｍｐ１２７−１２８℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．１２（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｓ，２Ｈ），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．１１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）１．８６（ｍ，２Ｈ），１．７７（ｍ，２Ｈ），１．５８（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．３５（ｍ，４Ｈ），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１６９．４，１６８．８，１６２．０，１５９．８，１５２．７，１４６．９，１４４．７，１３９．８，１３６．６，１２９．８，１２５．９，１１３．８，１１３．７，１１３．１，１０９．９，１０８．４，１０７．５，６８．２，３９．４，３５．６，２９．１，２９．０，２６．６，２５．６，２２．８，１３．６；ＭＳ  ｍ／ｚ５２０（Ｍ＋Ｈ）+；Ｃ26Ｈ29Ｎ7Ｏ3Ｓについての解析的計算値：Ｃ，６０．１０；Ｈ，５．６３；Ｎ，１８．８７；Ｓ，６．１７。実際値：Ｃ，５９．９７；Ｈ，５．３４；Ｎ，１８．６３；Ｓ，６．２１。
【０１５３】
対照化合物１（ＣＣ１）：Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミド
【化１１】
2008531580.tif 000013
【０１５４】
パートＡ
６−［（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサン酸（６．８１ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．９８ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）、および塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（５．６６ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）を、２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチルアミン（これは、ｔ−ブチル２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチルカルバメートの酸−媒介脱保護によって調製し、これは、米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号に記載されている、８．００ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８０ｍＬ）中の０℃溶液に添加した。溶液を、室温で一晩攪拌した。より多くの６−［（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサン酸およびＥＤＣを添加すると共に、溶液を追加の時間攪拌した。溶液を、水性重炭酸ナトリウムおよび酢酸エチルの間に分割した。水性層を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機層を組み合わせ、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。粗生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィによって精製して、３．９９ｇのｔ−ブチル６−（｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−６−オキソヘキシルカルバメートをフォームとして得た。
【０１５５】
パートＢ
トリフルオロ酢酸（３０ｍＬ）を徐々に、ｔ−ブチル６−（｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−６−オキソヘキシルカルバメート（３．９９ｇ、７．８２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）中の溶液に室温で添加した。１．５時間後、溶液を、圧力下で濃縮して油を得た。油を、少量の水および濃縮水酸化アンモニウム中に溶解した。得られた塩基性混合物を、ジクロロメタンで複数回抽出した。組み合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮して、３．４ｇの６−アミノ−Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝ヘキサンアミドを得、これをさらなる精製なしで次のステップにおいて用いた。
【０１５６】
パートＣ
６−アミノ−Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝ヘキサンアミド（１．３５ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）、３，３’−ジチオジプロピオン酸（０．３４５ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４４３ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）、および塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（０．６９２、３．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中の溶液を、室温で一晩攪拌した。溶液を減圧下に濃縮し、および飽和水性重炭酸ナトリウムおよび酢酸エチル／メタノールの間に分割した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮した。粗生成物をシリカゲルでのＨＰＦＣにより精製して（ＣＭＡ／クロロホルムでの勾配溶離）、Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミドのジスルフィドダイマーを得た。
【０１５７】
パートＤ
Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミド（２．１４ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を、メタノール（２０ｍＬ）中に溶解した。トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（０．８００ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）、水（２ｍＬ）、および１２．５ＭＮａＯＨ（０．６５ｍＬ、８．１７ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を１．５時間室温で攪拌させ、次いで氷浴中に冷却した。溶液を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ６に調整し、および得られた混合物を減圧下に濃縮してメタノールを除去した。混合物を飽和水性重炭酸ナトリウムおよびジクロロメタンの間に分割した。水性層をジクロロメタンで複数回抽出した。有機相を組み合わせ、水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、および減圧下に濃縮して、１．６９ｇのＮ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミドを白色のフォームとして得、これを、真空下で加熱してガラス状の固体を得た。
【０１５８】
無色のガラス状の固体。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５００（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ９．３０（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｍ，１Ｈ），８．２６（ｍ，１Ｈ），７．７２−７．６２（ｍ，２Ｈ），５．８４（ｍ，１Ｈ），５．５９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．１８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．９１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）３．６３（ｍ，２Ｈ），３．２７（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｍ，２Ｈ），２．４９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．０５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６３−１．２２（ｍ，１６Ｈ）。Ｃ26Ｈ37Ｎ5Ｏ3Ｓについての解析的計算値：Ｃ，６２．５０；Ｈ，７．４６；Ｎ，１４．０２；Ｓ，６．４２。実際値：Ｃ，６２．２３；Ｈ，７．５４；Ｎ，１３．９０；Ｓ，６．６５。
【０１５９】
対照化合物２（ＣＣ２）：Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミド
【化１２】
2008531580.tif 000014
【０１６０】
ＩＲＭ化合物２の調製について記載した手順を用いて、Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（ピリジン−２−イルジチオ）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミド（０．５５ｇ）を、Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−［（３−メルカプトプロパノイル）アミノ］ヘキサンアミド（０．８３ｇ）から調製した。最終生成物をシリカゲルでのＨＰＦＣにより精製し（ジクロロメタン中の１〜１０％メタノールでの勾配溶離）、および真空下で加熱した後に、無色のガラス状の固体として単離した。
【０１６１】
無色のガラス状の固体。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６０９（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ９．３０（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｍ，１Ｈ），８．４３（ｍ，１Ｈ），８．２６（ｍ，１Ｈ），７．７１−７．６０（ｍ，４Ｈ），７．１１（ｍ，１Ｈ），６．５０（ｍ，１Ｈ），５．５８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．１９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．９０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）３．６３（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｍ，２Ｈ），３．０７（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６５−１．２２（ｍ，１２Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ31Ｈ40Ｎ6Ｏ3Ｓ3・０．１５ＣＨ3ＯＨについての解析的計算値：Ｃ，６０．９７；Ｈ，６．６７；Ｎ，１３．７０；Ｓ，１０．４３。実際値：Ｃ，６０．５７；Ｈ，６．７５；Ｎ，１３．６１；Ｓ，１０．６２。
【０１６２】
対照化合物３（ＣＣ３）：Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−４−ヒドラジノ−４−オキソブタンアミド
【化１３】
2008531580.tif 000015
【０１６３】
パートＡ
ＤＭＦ（１０ｍＬ）を、２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチルアミン（これは、ｔ−ブチル２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチルカルバメートの酸−媒介脱保護によって調製し、これは、米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号に記載されている、１．００ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）およびコハク酸無水物（０．３３６ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）混合物に室温で添加した。混合物を、溶液が形成されるまで短時間超音波処理した。溶液を、室温で３日間静置させ、および次いで次のステップで用いた。
【０１６４】
パートＢ
パートＡからの溶液を０℃に冷却し、およびｔ−カルバジン酸ブチル（０．４８９ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）および塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（０．７０９ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温に温めさせおよび一晩攪拌した。より多量のｔ−カルバジン酸ブチルおよび塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドを添加した。１時間後、溶液を、水（６０ｍＬ）で希釈すると共に、酢酸エチルで抽出した（３×７５ｍＬ）。組み合わせた有機層を水、飽和水性重炭酸ナトリウム、および塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、および減圧下に濃縮して、黄色のフォームを得た。クロロホルムをフォームに添加して、微細な白色の固体を形成させた。固体をろ過により単離して、０．７５８ｇのｔ−ブチル２−［４−（｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−４−オキソブタノイル］ヒドラジンカルボキシレートを得た。
【０１６５】
パートＣ
トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を、ｔ−ブチル２−［４−（｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝アミノ）−４−オキソブタノイル］ヒドラジンカルボキシレート（０．６８８ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（７ｍＬ）中の溶液に徐々に添加した。溶液を２．５時間攪拌し、次いで減圧下に濃縮した。Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−４−ヒドラジノ−４−オキソブタンアミドのトリフルオロ酢酸塩をアニオン交換樹脂に適用し、これをメタノール中のピリジンで溶離して、Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−４−ヒドラジノ−４−オキソブタンアミドを、遊離塩基として得、これをシリカゲルでのＨＰＦＣにより精製した（勾配溶離、クロロホルム中の２〜５０％ＣＭＡ）。適切な画分を減圧下に濃縮して、フォームを得、これを真空下で加熱して０．３１ｇのＮ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−４−ヒドラジノ−４−オキソブタンアミドをガラス状の固体として得た。
【０１６６】
ガラス状の固体。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４１３（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ９．３０（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｍ，１Ｈ），８．２６（ｍ，１Ｈ），７．７１−７．６１（ｍ，２Ｈ），７．１４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．１６（ｂｒｓ，２Ｈ），４．９０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．８８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．６３（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｓ，４Ｈ），１．３７（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。Ｃ21Ｈ28Ｎ6Ｏ3・０．４Ｈ2Ｏについての解析的計算値：Ｃ，６０．１０；Ｈ，６．９２；Ｎ，２０．０２。実際値：Ｃ，６０．３７；Ｈ，７．０１；Ｎ，２０．０１。
【０１６７】
対照化合物４（ＣＣ４）：Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミド
【化１４】
2008531580.tif 000016
【０１６８】
６−アミノ−Ｎ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝ヘキサンアミド（これは、上記の対照化合物１のパートＡおよびＢにおいて調製した、１６３ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の溶液に、Ｎ−スクシンイミジル−３−マレイミドプロピオネート（１１１ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を、試薬が溶解するまで振盪し、および一晩静置させた。混合物を、ジクロロメタン（２５ｍＬ）で希釈し、２Ｍ水性アンモニア（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、および減圧下に濃縮して１５８ｍｇのＮ−｛２−［２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−１，１−ジメチルエチル｝−６−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝ヘキサンアミドを得た。
【０１６９】
明るい黄色のフォーム、ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５６３（Ｍ＋Ｈ）+。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ９．３０（ｓ，１Ｈ）、８．５５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．３１（ｍ，１Ｈ）、７．６９（ｍ，２Ｈ）、６．６８（ｓ，２Ｈ）、５．７９（ｍ，１Ｈ）、５．５７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．２０（ｍ，２Ｈ）、４．９２（ｍ，２Ｈ）、３．８３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．６３（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、３．２２（ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）、２．５２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．０５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）、１．５５（ｍ，１２Ｈ）、１．２５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１７０】
実施例において追加的に用いたＩＲＭ化合物が表１に示されている。
【０１７１】
【表１】
2008531580.tif 000017
【０１７２】
変性抗体の調製
抗体−ＩＲＭ複合体の調製に用いた材料は、以下の表２に見出すことができる。
【０１７３】
【表２】
2008531580.tif 000018
【０１７４】
抗体のチオレーション：
抗体はｐＨ７．４、５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中に５〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度に調整される。２−ＩＴの５ｍｇ／ｍＬ溶液が、これを、ＰＨ７．４、５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中に溶解することにより調製される。２−ＩＴ溶液は、混合されながら所望のモル過剰量で抗体溶液に徐々に添加され、および１時間室温でインキュベートされる。チオレート化抗体は、混合物を、ＰＨ７．２、５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳで平衡化された脱塩カラムに適用されることにより精製される。１ｍＬ画分を回収し、および波長２８０ｎｍでの吸光度を計測することにより測定されるチオレート化抗体を含有する画分が共にプールされる。任意により、活性化抗体のレベルが、チオール検出試薬（例えばエルマンズ試薬）を用いることにより測定される。
【０１７５】
ヘテロ二官能性架橋剤を用いる抗体の変性：
抗体は、ｐＨ７．４のＰＢＳ中に５〜１０ｍｇ／ｍＬに濃度に調整される。架橋剤（例えば、ｓＳＭＣＣ、ＳＭＰＴ、またはＮＨＳ−ＰＥＯ8−マレイミド）がＤＭＳＯ中に５ｍｇ／ｍＬの濃度に溶解される。架橋剤溶液が、混合されながら、抗体溶液に、所望のモル過剰量で徐々に添加され、および１時間室温でインキュベートされる。変性抗体は、混合物をＰＨ７．２、５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳで平衡化された脱塩カラムに適用されることにより精製される。１ミリリットル画分が回収され、および波長２８０ｎｍでの吸光度を計測することにより測定される変性ＩｇＧを含有する画分が、共にプールされる。任意により、活性化抗体のレベルが、架橋剤について適切な分析方法を用いて測定される。
【０１７６】
光反応性ＩＲＭ（ｐＩＲＭ）への抗体の複合化
抗体を、ｐＨ７．４のＰＢＳ中に５〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。いくつかの事例においては、抗体溶液を１Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ１０に調整した。ｐＩＲＭ（例えば、ＩＲＭ１０）を、ＤＭＳＯ中に溶解した。ｐＩＲＭ溶液を徐々に、所望のモル過剰量で混合しながら抗体溶液に添加した。混合物は、１２−ウェルプレート（５００ｍＬ／ウェル）に添加され、および長波長ＵＶ光（３６６ｎｍ）が、氷上のプレート上に直接的に１５分間置かれる。反応を、ｐＨ８．０の１Ｍトリスを、反応体積１／２０（ｖ／ｖ）で添加することにより急冷した。ＩＲＭ−抗体複合体を、緩衝剤を１ｍＬ／ｍｉｎの流量でカラムを流下させながら、ｐＨ７．４のＰＢＳを用いてサイズ排除クロマトグラフィによって精製した。１ミリリットル画分を回収し、および各画分の吸光度を２８０ｎｍで計測した。ＩＲＭ−抗体複合体を含有する画分をプールし、および無菌条件下で、０．２ミクロンフィルタをとおしてろ過した。ＩＲＭ−抗体複合体の濃度を、ウシガンマグロブリンを標準として用いてＢＣＡアッセイにより測定した。ろ過された複合体を、生物学的アッセイにおける将来的なテストのために４℃で保管した。
【０１７７】
染料標識化抗体
抗体は、ＰＨ７．４のＰＢＳ中に３〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度に調整される。アミン反応性染料（例えば、アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８）が、５ｍｇ／ｍＬの濃度にＤＭＳＯ中に溶解される。アミン反応性染料溶液が、混合されながら、抗体溶液に所望のモル過剰量（例えば、染料対抗体の８倍モル過剰量）で徐々に添加され、および１時間室温でインキュベートされる。標識化抗体は、混合物をＰＨ７．４のＰＢＳで平行化された脱塩カラムに適用されることにより精製される。１ｍＬ画分が回収され、および標識化抗体がプールされる。抗体−染料複合体の吸光度が２８０ｎｍで計測され、および染料（Ａmax）についての最大吸光度が計測されて、染料：抗体比が測定される。あるいは、サイズ排除クロマトグラフィが、抗体−染料複合体を精製するために実施され得る。染料標識化抗体を含有する画分が共にプールされる。
【０１７８】
ＩＲＭ−抗体複合体の調製
ピリジルジスルフィド変性ＩＲＭ（ｐｄＩＲＭ）へのチオレート化抗体の複合化
ｐｄＩＲＭ（例えば、ＩＲＭ２）が、１０ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＭＳＯ中に溶解される。ｐｄＩＲＭは、上記で調製されたチオレート化抗体に、抗体をチオレート化するために用いた２−ＩＴのモル過剰量の半分で添加される。混合物は一晩室温でインキュベートされる。反応を急冷するために、５００ｍＭＬ−システイン溶液（ｐＨ８．０の１Ｍトリス中に溶解した）が、反応混合物の０．０１倍（ｖ／ｖ）で添加される。１ｍＬ画分が回収され、および２８０ｎｍでの吸光度を計測される。ＩＲＭ−抗体複合体は、１ｍＬ／ｍｉｎの流量でカラムを流下される緩衝剤としてｐＨ７．４のＰＢＳを用いるサイズ排除クロマトグラフィで計測される。ＩＲＭ−抗体複合体を含有する画分がプールされ、および無菌条件下で、０．２−ミクロンフィルタを通してろ過される。ＩＲＭ−抗体複合体の濃度が、ウシガンマグロブリンが標準として用いられるＢＣＡアッセイにより測定される。ろ過された複合体が、生物学的アッセイにおける将来的なテストのために４℃で保管される。
【０１７９】
ヘテロ二官能性架橋剤で変性された抗体のスルフヒドリル変性ＩＲＭ（ｓＩＲＭ）への複合化
ｓＩＲＭ（例えば、ＩＲＭ１）が、１０ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＭＳＯ中に溶解される。ｓＩＲＭは、上記で調製された変性抗体に、抗体の変性に用いられた架橋剤の量に対してｓＩＲＭの４倍モル過剰量で添加される。混合物は一晩室温でインキュベートされる。反応を急冷するために、５００ｍＭＬ−システイン溶液（ｐＨ８．０の１Ｍトリス中に溶解した）が、反応混合物の０．０１倍（ｖ／ｖ）で添加される。ＩＲＭ−抗体複合体は、１ｍＬ／ｍｉｎの流量でカラムを流下する緩衝剤としてＰＨ７．４のＰＢＳを用いるサイズ排除クロマトグラフィによって精製される。混合物の１ｍＬ画分が回収され、および２８０ｎｍで計測される。ＩＲＭ−抗体複合体を含有する画分がプールされ、および無菌条件下で、０．２−ミクロンフィルタをとおしてろ過される。ＩＲＭ−抗体複合体の濃度が、ウシガンマグロブリンが標準として用いられるＢＣＡアッセイによって測定される。ろ過された複合体が、生物学的アッセイにおける将来的なテストのために４℃で保管される。
【０１８０】
実施例１
ＩＲＭ１、ＩＲＭ２、ＩＲＭ１０、ＣＣ１およびＣＣ２をヒト抗ＣＤ２０抗体（リツキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ）、カルフォルニア州サンフランシスコのジェネンテック（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ））に複合化した。ＩＲＭ１およびＣＣ１で調製された複合体は、ヘテロ二官能性架橋剤で変性された抗体のスルフヒドリル変性ＩＲＭｓ（ｓＩＲＭ）への複合化について上述された一般的な方法を用いた。具体的には、ＳＭＰＴ架橋剤と抗体とを、ＳＭＰＴを抗体に対して１２倍モル過剰量で混合した。ＩＲＭ２およびＣＣ２で調製された複合体は、チオレート化抗体のピリジルジスルフィド変性ＩＲＭ（ｐｄＩＲＭ）への複合化について上述された一般的な方法を用いた。具体的には、２−ＩＴと抗体とを、２−ＩＴを抗体に対して６０倍モル過剰量で混合した。ＩＲＭ１０で調製された抗体複合体は、上記の一般的な方法において記載された光反応性方法を用いた。具体的には、ＩＲＭ１０と抗体とを、ＩＲＭ１０を抗体に対して２０倍（２０×）および４０倍（４０×）モル過剰量で混合した。
【０１８１】
健常なヒトドナーからの全血が、静脈穿刺によりＥＤＴＡを含有するチューブへ採取される。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）が、ヒストパク（ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ）−１０７７またはフィコール−パックプラス（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ）を用いる密度勾配遠心法により全血から分離される。ＰＢＭＣ層が回収され、およびＤＰＢＳで２回洗浄し、およびフローサイトメトリ染色緩衝剤（ＦＡＣＳ緩衝剤、バイオソース（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ））中に再懸濁させた。ＰＢＭＣを、９６ウェル平底無菌組織培養プレート（マサチューセッツ州ケンブリッジのコースター（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）またはニュージャージー州リンカーンパークのベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，Ｌｉｎｃｏｌｎ  Ｐａｒｋ，ＮＪ））に、１×１０6細胞／ウェルの最終ＰＢＭＣ濃度となるよう添加した。抗ＣＤ２０または上で調製したＩＲＭ／抗ＣＤ２０抗体複合体を、ＦｃＲ遮断薬（カルフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））との組み合わせにおける最終濃度９μｇ／ｍＬ〜０．００４μｇ／ｍＬの３倍希釈液で各ウェルに添加した。プレートを、１５分間氷上にインキュベートし、および次いでウェル当たり０．３−μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２０−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８で処理した。アイソタイプ（ＩｇＧ１）ネガティブコントロール（１５μｇ／ｍＬ、コントロール、ＢＤファーミゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ））および０．３μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２０−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８を、個別のウェルに置いた。プレートを、３０分間、氷上で暗中にインキュベートした。プレートを１３５０ｒｐｍで１０分間遠心分離し、および細胞を再懸濁させ、およびＦＡＣＳ緩衝剤で２回で洗浄し、２００μＬＦＡＣＳ緩衝剤中に再懸濁させ、およびマルチ−ウェルフィルタプレート（ポールコーポレーション（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））をとおしてろ過した。細胞を１００μＬサイトフィックス（ＣＹＴＯＦＩＸ）緩衝剤（ＢＤファーミンゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））中に１５分間、室温で、暗中に再懸濁させた。サンプルを、４℃で一晩保管し、およびＦＡＣＳカリバー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）（ベクトンディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ））で次の日処理した。複合体の抗体活性が、図１から６に示されている。抗ＣＤ２０−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８の細胞への複合体の阻害能によって活性度を計測した。
【０１８２】
実施例２
健常なヒトドナーからの全血が、静脈穿刺によりＥＤＴＡを含有するチューブへ採取される。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）が、ヒストパク（ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ）−１０７７またはフィコール−パックプラス（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ）を用いる密度勾配遠心法により全血から分離される。ＰＢＭＣ層が回収され、およびＤＰＢＳまたはＨＢＳＳで２回洗浄し、および４×１０6細胞／ｍＬでＲＰＭＩ完全媒体中に再懸濁させた。ＰＢＭＣを、９６ウェル平底無菌組織培養プレート（マサチューセッツ州ケンブリッジのコースター（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）またはニュージャージー州リンカーンパークのベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，Ｌｉｎｃｏｌｎ  Ｐａｒｋ，ＮＪ）に、２×１０6細胞／ｍＬの最終ＰＢＭＣ濃度となるよう添加した。ＰＢＭＣを、一晩３７℃で、５％二酸化炭素雰囲気中に、最終抗体濃度に基づく、０．３３μＭ、０．４２０μＭ、０．８３０μＭ、または１．６７μＭ抗ＣＤ２０または実施例１において調製した抗ＣＤ２０複合体で刺激した。培養上澄みを、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ産生について、ヒトＩＦＮ−αエリーザ（ＥＬＩＳＡ）（ＰＢＬバイオメディカルラボラトリーズ（ＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））およびヒト−特定のＴＮＦ  ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（ミッドランド州ゲイザースバーグのバイオベリス社（ＢｉｏＶｅｒｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））をそれぞれ用いて分析し、結果を、ｐｇ／ｍＬで表記した。複合体によるサイトカイン誘導が、図７に示されている。
【０１８３】
実施例３
ＩＲＭ２およびＩＲＭ１０をマウス抗ＣＤ４０抗体（ＦＧＫ４．５）に複合化した。抗ＣＤ４０をＩＲＭ２に複合化するために用いた方法は、実施例１に記載のものと同一であったが、しかしながら、２−ＩＴを抗ＣＤ４０対して７０倍モル過剰量で抗体複合体の調製において用いた。抗ＣＤ４０をＩＲＭ１０に複合するために用いた方法は、実施例１に記載のものと同一であったが、しかしながら、ＩＲＭ１０を抗ＣＤ４０に対して８倍（８×）または２５倍（２５×）モル過剰量で、これらの抗体複合体の調製において用いた。
【０１８４】
マウス脾臓を屠殺されたＣ５７ＢＬ６マウスから取り出し、および脾細胞を、脾臓を均質化することによりマウスから単離した。脾細胞を、１％ＦＣＳを含有するハンクス平衡塩類液媒体（カルフォルニア州カマリロのバイオソースインターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ））中に均質化し、洗浄しおよびＦＡＣＳ緩衝剤（バイオソースインターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ））中に再懸濁させた。脾細胞を、２×１０6細胞／ウェルの最終細胞濃度となるよう、９６−ウェル丸底無菌組織培養プレート（マサチューセッツ州ケンブリッジのコースター（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）またはニュージャージー州リンカーンパークのベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，Ｌｉｎｃｏｌｎ  Ｐａｒｋ，ＮＪ））に置いた。抗ＣＤ４０または上で調製した複合体を、マウスＦｃＲ遮断薬（２．４Ｇ２）との組み合わせにおける最終濃度３００μｇ／ｍＬ〜０．１４μｇ／ｍＬの３倍希釈液で各ウェルに添加した。プレートを氷上に１５分間インキュベートし、および次いでウェル当たり２５−μｇ／ｍＬ抗ＣＤ４０−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８で処理した。アイソタイプ（ＩｇＧ２ａ）ネガティブコントロール（１５μｇ／ｍＬ、コントロール、ＢＤファーミゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ））および２５μｇ／ｍＬ抗ＣＤ４０−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８を個別のウェルに置いた。プレートを、３０分間、氷上で暗中にインキュベートした。プレートを１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、および細胞を再懸濁させ、およびＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、１００μＬサイトフィックス（ＣＹＴＯＦＩＸ）緩衝剤（ＢＤファーミガン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ））中に１５分間、室温で、暗中に再懸濁させた。細胞を洗浄し、および２００μＬＦＡＣＳ緩衝剤中に再懸濁させ、およびマルチ−ウェルフィルタプレートをとおしてろ過した。サンプルを４℃で一晩保管し、およびＦＡＣＳカリバー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）（ベクトンディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ））で、次の日処理した。複合体の抗体活性が図８から１０に示されている。抗ＣＤ４０−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８の細胞へのバインドの、複合体の阻害能によって活性度を計測した。
【０１８５】
実施例４
実施例３において調製した抗ＣＤ４０抗体および複合体を、実施例２に記載のとおりサイトカイン誘導についてテストした。複合体によるサイトカイン誘導が図１１に示されている。
【０１８６】
実施例５
ＩＲＭ２およびＩＲＭ１０をマウス抗ＣＤ８抗体（５３．６．７２；バージニア州マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）のＡＴＣＣ）に複合化した。抗ＣＤ８のＩＲＭ２またはＩＲＭ１０への複合化に用いた方法は、実施例３に記載のものと同一であった。複合体を抗体活性度について、１２μｇ／ｍＬ〜０．００６μｇ／ｍＬの複合体の３倍希釈液および抗ＣＤ８−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８については０．４０μｇ／ｍＬを用いて、実施例３に記載のとおりテストした。抗ＣＤ８抗体および複合体もまた、サイトカイン誘導について実施例２に記載のとおりテストした。複合体の抗体活性が、図１２から１４に示されている。抗ＣＤ８−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８の細胞へのバインドの、複合体の阻害能によって活性度を計測した。複合体によるサイトカイン誘導が、図１５に示されている。
【０１８７】
実施例６
抗体複合体の調製において、２８．４倍（ｐＨ７．４）、２８．４倍（ｐＨ１０）、または４２．６倍（ｐＨ１０）モル過剰量のＩＲＭ１０をＨＥＲ２に対して用いたこと以外は、実施例１に記載したものと同一の方法を用いて、ＩＲＭ１０をヘルセプチン（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）抗体（ＨＥＲ２；ジェネンテック（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））に複合化した。
【０１８８】
ＨＥＲ２抗体および複合体を、抗体活性度について、実施例２に記載のとおりテストしたが、しかしながら、ＨＥＲ２陽性ヒト乳癌細胞（ＨＣＣ２２１８；バージニア州マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）のＡＴＣＣ）を、アッセイ（２．５×１０5細胞／ウェル）においてヒトＰＢＭＣの代わりに用いた。複合体を抗体活性度について、４５μｇ／ｍＬ〜０．００７μｇ／ｍＬの複合体およびＨＥＲ２−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８については０．３０μｇ／ｍＬの３倍希釈液を用いてテストした。複合体の抗体活性が、図１６および１７に示されている。ＨＥＲ２抗体および複合体を、サイトカイン誘導について、実施例２に記載のとおりテストした。複合体によるサイトカイン誘導が、図１８に示されている。
【０１８９】
実施例７
ＩＲＭ１をＨＥＲ２に、実施例１に記載のとおり複合化したが、しかしながら、ＮＨＳ−ＰＥＯ8−マレイミド架橋剤を、抗体と、ＮＨＳ−ＰＥＯ8−マレイミドを抗体に対して１５倍モル過剰量で混合した。
【０１９０】
ＨＥＲ２抗体および複合体を、実施例６に記載のとおり抗体活性度についてテストした。ＨＥＲ２−アレクサ（Ａｌｅｘａ）４８８の細胞へのバインドの、複合体の阻害能によって活性度を計測した。複合体の抗体活性が、図１９に示されている。ＨＥＲ２抗体および複合体を、サイトカイン誘導について、実施例２に記載のとおりテストした。複合体によるサイトカイン誘導が、図２０および２１に示されている。
【０１９１】
実施例８
ＩＲＭ１を抗ＣＤ８抗体に、実施例１に記載のとおり複合化したが、しかしながら、ＮＨＳ−ＰＥＯ8−マレイミド架橋剤を抗体に、ＮＨＳ−ＰＥＯ8−マレイミドを抗体に対して１５倍モル過剰量で混合した。
【０１９２】
抗ＣＤ８抗体および複合体を、サイトカイン誘導について、実施例２に記載のとおりテストした。複合体によるサイトカイン誘導が、図２２および２３に示されている。
【０１９３】
実施例９
ＩＲＭ１０を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に１０ｍｇ／ｍＬとなるよう懸濁させた。ラット抗マウスＣＤ８抗体（５３．６．７２、ニューハンプシャー州ウエストレバノンのバイオエクスプレス（ＢｉｏＥｘｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ））を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に７．８ｍｇ／ｍＬとなるよう懸濁させ、およびｐＨを、ＮａＯＨの添加により＞９．０に調整した。１：１０比のＩＲＭ：抗体（体積：体積）を、６０μＬのＩＲＭ１０溶液（０．６ｍｇＩＲＭ１ＩＲＭ１０）を５４０μＬの抗ＣＤ８抗体溶液（４．２１ｍｇ抗ＣＤ８）と共に添加することにより一緒に混合した。抗体対照は、５４０μＬの抗ＣＤ８抗体溶液と混合された６０μＬのＰＢＳであった。１：１０ＩＲＭ：抗体、１：１００ＩＲＭ：抗体、および抗体対照を、それぞれ２４−ウェル組織培養プレートの単一ウェルに置いた。プレートを氷上に置き、および長波長ＵＶ光源をプレート上に直接的に、ＩＲＭ１０／抗体混合物を含有しているウェルに対してできるだけ接近させて置いた。混合物を、１５分間照射した。得られた複合体および抗体対照を、ウェルから除去し、およびＰＢＳ中に、１：１０、１：１００、および抗体対照について、それぞれ、０．５ｍｇ／ｍＬＩＲＭ１０、３．５１ｍｇ／ｍＬ抗ＣＤ８；０．０５ｍｇ／ｍＬＩＲＭ１０、３．８６ｍｇ／ｍＬ抗ＣＤ８；および３．５１ｍｇ／ｍＬ抗ＣＤ８の最終濃度となるよう再懸濁させ、およびＰＢＳに対して、１０，０００分子量カットオフスライド−ａ−レイザー（Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ）（イリノイ州ロックフォードのピアス（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ））を用いて透析して、非複合化ＩＲＭのすべてを除去した。
【０１９４】
実施例１０
マウス脾臓を屠殺されたＣ５７ＢＬ６マウスから取り出し、および脾細胞を、脾臓を均質化することによりマウスから単離した。脾細胞を、１％ＦＣＳを含有するＥＨＡＡ媒体（カルフォルニア州カマリロのバイオソースインターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ））において均質化し、洗浄し、およびＦＡＣＳ緩衝剤（バイオソースインターナショナル（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ））中に再懸濁させた。脾細胞を、９６ウェル丸底無菌組織培養プレート（マサチューセッツ州ケンブリッジのコースター（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）またはニュージャージー州リンカーンパークのベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，Ｌｉｎｃｏｌｎ  Ｐａｒｋ，ＮＪ））に、１×１０6細胞／ウェルの最終細胞濃度となるよう蒔いた。
【０１９５】
脾細胞を、３０分間、４℃で、ＩＲＭ：共に実施例９で調製した抗体（１：１０）、抗体対照、または７６６μｇ／ｍＬ〜０．００２μｇ／ｍＬの範囲の５倍希釈濃度でのＵＶ未処理抗体で処理した。３０分の処置時間後、ＦＩＴＣ−標識化マウス抗ＣＤ８（５３．６．７、カルフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））およびＰＥ−標識化マウス抗ＣＤ３（ＢＤファーミンゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））を、すべてのウェルに添加し、および３０分間、４℃でインキュベートした。細胞を、次いで２回ＦＡＣＳ緩衝剤で洗浄し、およびサイトフィックス（ＣＹＴＯＦＩＸ）緩衝剤（カルフォルニア州サンディエゴのＢＤファーミンゲン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））で固定した。フローサイトメトリ分析を、ＣＤ３＋リンパ球上にゲーティングしおよびＦＩＴＣ−標識化抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計測することにより実施した。結果が図２４に示されている。
【０１９６】
実施例１１
健常なヒトドナーから全血を、静脈穿刺によりＥＤＴＡ採血管へ採取した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、ヒストパク（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ）（登録商標）−１０７７を用いて密度勾配遠心法により全血から分離した。血液をダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）またはハンクス平衡塩液（ＨＢＳＳ）で１：１に希釈した。ＰＢＭＣ層を回収し、およびＤＰＢＳで２回洗浄し、またはＨＢＳＳおよび４×１０6細胞／ｍＬで、ＲＰＭＩ完全媒体中に再懸濁させた。ＰＢＭＣを、９６ウェル平底無菌組織培養プレート（マサチューセッツ州ケンブリッジのコースター（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）またはニュージャージー州リンカーンパークのベクトンディキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，Ｌｉｎｃｏｌｎ  Ｐａｒｋ，ＮＪ））に、２×１０6細胞／ｍＬの最終ＰＢＭＣ濃度となるよう添加した。ＰＢＭＣを一晩３７℃で、５％二酸化炭素雰囲気中に、ラット抗マウスＣＤ８抗体単独で、または実施例９に記載のとおり１：１０ＩＲＭ／抗体複合体で、３倍希釈物（２９２〜０．１３μｇ／ｍＬ）中に刺激した。培養上澄みを、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ産生について、それぞれ、ヒトＩＦＮ−αエリーザ（ＥＬＩＳＡ）（ニュージャージー州ピスカタウェイのＰＢＬバイオメディカルラボラトリーズ（ＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））、およびヒト−特異的ＴＮＦ  ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（ミッドランド州ゲイザースバーグのバイオベリス社（ＢｉｏＶｅｒｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を用いて分析し、結果を、ｐｇ／ｍＬで表記した。結果が図２５および図２６に示されている。
【０１９７】
特許、特許文書、および本明細書において引用された文献の完全な開示は、その各々が個別に組み込まれたかのように、参照により、それらの全体が援用される。抵触する場合には、定義を含む本明細書が他を規制するであろう。
【０１９８】
本発明に対する種々の修飾および改変は、本発明の範囲および思想から逸脱せずに、当業者に明白となるであろう。図示の実施形態および実施例は、例示のみのために提供されていると共に、本発明の範囲を制限することを意図していない。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ制限される。
【図面の簡単な説明】
【０１９９】
【図１】ＩＲＭ／抗ＣＤ２０抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ２０活性を示す線グラフである。
【図２】対照化合物／抗ＣＤ２０抗体組成物の抗ＣＤ２０活性を示す線グラフである。
【図３】対照化合物／抗ＣＤ２０抗体組成物の抗ＣＤ２０活性を示す線グラフである。
【図４】ＩＲＭ／抗ＣＤ２０抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ２０活性を示す線グラフである。
【図５】ＩＲＭ／抗ＣＤ２０抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ２０活性を示す線グラフである。
【図６】ＩＲＭ／抗ＣＤ２０抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ２０活性を示す線グラフである。
【図７】ＩＲＭ／抗ＣＤ２０抗体免疫調節組成物によるサイトカイン誘導を表す棒グラフである。
【図８】ＩＲＭ／抗ＣＤ４０抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ４０活性を示す線グラフである。
【図９】ＩＲＭ／抗ＣＤ４０抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ４０活性を示す線グラフである。
【図１０】ＩＲＭ／抗ＣＤ４０抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ４０活性を示す線グラフである。
【図１１】ＩＲＭ／抗ＣＤ４０抗体免疫調節組成物によるサイトカイン誘導を示す棒グラフである。
【図１２】ＩＲＭ／抗ＣＤ８抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ８活性を示す線グラフである。
【図１３】ＩＲＭ／抗ＣＤ８抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ８活性を示す線グラフである。
【図１４】ＩＲＭ／抗ＣＤ８抗体免疫調節組成物の抗ＣＤ８活性を示す線グラフである。
【図１５】ＩＲＭ／抗ＣＤ８抗体免疫調節組成物によるサイトカイン誘導を示す棒グラフである。
【図１６】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物の抗ＨＥＲ２活性を示す線グラフである。
【図１７】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物の抗ＨＥＲ２活性を示す線グラフである。
【図１８】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物によるサイトカイン誘導を示す棒グラフである。
【図１９】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物の抗ＨＥＲ２活性を示す線グラフである。
【図２０】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物によるＩＦＮ−α誘導を表す線グラフである。
【図２１】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物によるＴＮＦ−α誘導を表す線グラフである。
【図２２】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物によるＩＦＮ−α誘導を表す線グラフである。
【図２３】ＩＲＭ／抗ＨＥＲ２抗体免疫調節組成物によるＴＮＦ−α誘導を表す線グラフである。
【図２４】ＩＲＭ／抗ＣＤ８抗体免疫調節組成物の免疫特異的を示す線グラフである。
【図２５】ＩＲＭ／抗ＣＤ８抗体免疫調節組成物による末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるＩＦＮ−αの誘導を表す線グラフである。
【図２６】ＩＲＭ／抗ＣＤ８抗体免疫調節組成物によるＰＢＭＣにおけるＴＮＦ−αの誘導を表す線グラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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