(57)【要約】  本発明は、抗菌性環状イミノペプチド誘導体およびそれらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用、特に細菌感染のためのものに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2008534538.tif 000034
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、水素を表すか、
または、
Ｒ１およびＲ２は、メチルを表すか、
または、
Ｒ１はメチルを表し、そして、
Ｒ２は水素を表し、
そして、
Ｒ３およびＲ４は、相互に独立して、Ｃ１−Ｃ４−アルキルを表すか
｛これは、シアノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノカルボニル、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０−アリールおよび５員または６員のヘテロアリールからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよく、Ｃ１−Ｃ４−アルキルがメチルではない場合、代替的にまたは付加的に、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシおよびＣ１−Ｃ６−アルキルアミノからなる群から相互に独立して選択される１個ないし３個の置換基で置換されていてもよい｝
または、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルを表すか
｛それは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、シアノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ６−アルキルアミノカルボニルからなる群から相互に独立して選択される１個ないし３個の置換基で置換されていてもよい｝、
または、
Ｒ３およびＲ４は、一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４を表し、そして、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、５員または６員の環を形成しており、ここで、その環は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、シアノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ６−アルキルアミノカルボニルからなる群から相互に独立して選択される１個ないし２個の置換基で置換されていてもよいか、
または、
Ｒ３およびＲ４は、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、式
【化２】
2008534538.tif 000035
｛ここで、＊は、カルボニル基への結合部位である｝
の基を形成している］
の化合物、またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項２】
式中、
Ｒ１およびＲ２が、水素を表すか、
または、
Ｒ１およびＲ２がメチルを表すか、
または、
Ｒ１がメチルを表し、かつ、
Ｒ２が水素を表し、
そして、
Ｒ３およびＲ４が、相互に独立して、メチルまたはエチルを表すか、
または、
Ｒ３およびＲ４が、一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４を表し、そして、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、５員または６員の環を形成しており、ここで、その環は、ヒドロキシおよびエトキシカルボニルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよいか、
または、
Ｒ３およびＲ４が、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、式
【化３】
2008534538.tif 000036
｛ここで、＊は、カルボニル基への結合部位である｝
の基を形成している、
ことを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項３】
式中、
Ｒ１がメチルを表し、かつ、
Ｒ２が水素を表し、
そして、
Ｒ３およびＲ４が、相互に独立して、メチルまたはエチルを表すか、
または、
Ｒ３およびＲ４が、一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４を表し、そして、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、５員または６員の環を形成しており、ここで、その環は、ヒドロキシおよびエトキシカルボニルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよい、
ことを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の化合物、またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項４】
式
【化４】
2008534538.tif 000037
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項１、請求項２または請求項３に記載の意味を有する）
に相当することを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の化合物、またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項５】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つの製造方法であって、
［Ａ］式
【化５】
2008534538.tif 000038
（式中、Ｒ１およびＲ２は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物を、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下、式
【化６】
2008534538.tif 000039
（式中、Ｒ３およびＲ４は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させる、
または、
［Ｂ］式（ＩＩ）の化合物を、第１段階で、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下、式
【化７】
2008534538.tif 000040
（式中、Ｒ３は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、第２段階で、式
【化８】
2008534538.tif 000041
（式中、Ｒ４は請求項１に記載の意味を有し、Ｘ１は、ハロゲン、好ましくは臭素またはヨウ素を表す）
の化合物と、塩基の存在下で反応させる、
を特徴とする、方法。
【請求項６】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項８】
細菌性疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項９】
少なくとも１種の請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物を、少なくとも１種の不活性、非毒性、医薬的に許容し得る補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１０】
細菌感染の処置および／または予防のための、請求項９に記載の医薬。
【請求項１１】
抗菌的有効量の少なくとも１種の請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物または請求項９もしくは請求項１０に記載の医薬を投与することによる、ヒトおよび動物における細菌感染の制御方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌性環状イミノペプチド誘導体およびそれらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用、特に細菌感染のためのものに関する。
【背景技術】
【０００２】
ボトロマイシン（bottromycin）の発酵は、ＪＰ４３０１０９９８、ＪＰ４７０１００３６、ＵＳ３６５０９０４、ＪＰ４９１１６２９７およびＨＵ５２１６５に記載されている。ＵＳ３３８０８８５は、ボトロマイシンをニワトリおよびシチメンチョウの処置用の抗生物質として、ＪＰ６１１６５３３２は、家畜のマイコプラズマ病およびブタの赤痢の処置用に、記載している。当分野の現状でボトロマイシンについて記載されている構造は、間違った立体化学を示している。
【０００３】
ボトロマイシンのアミドおよびヒドラジン誘導体は、ＪＰ４２００６９０５、ＤＥ１６２００２７、J. Antibiotics 19, 1966, 149, J. Antibiotics 20, 1967, 162 および J. Med. Chem. 11, 1968, 746 において、間違ったボトロマイシンの基本構造を推定して、抗生物質として発表されている。
【０００４】
これらの天然産物は、それらの特性の観点で、抗菌性医薬の要件を満たさない。抗菌活性を有する構造的に異なる物質が市場で入手可能であるが、耐性の発生は常にあることである。従って、良好かつより有効な治療のために、新しい物質が望ましい。
【発明の開示】
【０００５】
従って、本発明の１つの目的は、ヒトおよび動物における細菌性疾患の処置用の、同等または改善された抗菌活性を有する新規かつ代替的な化合物を提供することである。
【０００６】
驚くべきことに、これらの天然産物のエステル基が置換ヒドロキサム酸塩で置き換えられている天然産物のある種の誘導体が、抗菌活性および天然産物と比較して改善された薬物動態学的特性を有することが見出された。
【０００７】
本発明は、式
【化１】
2008534538.tif 000002
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、水素を表すか、
または、
Ｒ１およびＲ２は、メチルを表すか、
または、
Ｒ１はメチルを表し、そして、
Ｒ２は水素を表し、
そして、
【０００８】
Ｒ３およびＲ４は、相互に独立して、Ｃ１−Ｃ４−アルキルを表すか
｛これは、シアノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノカルボニル、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０−アリールおよび５員または６員のヘテロアリールからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよく、Ｃ１−Ｃ４−アルキルがメチルではない場合、代替的にまたは付加的に、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシおよびＣ１−Ｃ６−アルキルアミノからなる群から相互に独立して選択される１個ないし３個の置換基で置換されていてもよい｝
または、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルを表すか
｛それは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、シアノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ６−アルキルアミノカルボニルからなる群から相互に独立して選択される１個ないし３個の置換基で置換されていてもよい｝、
または、
Ｒ３およびＲ４は、一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４を表し、そして、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、５員または６員の環を形成しており、ここで、その環は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、シアノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ６−アルキルアミノカルボニルからなる群から相互に独立して選択される１個ないし２個の置換基で置換されていてもよいか、
または、
Ｒ３およびＲ４は、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、式
【化２】
2008534538.tif 000003
｛ここで、＊は、カルボニル基への結合部位である｝
の基を形成している］
の化合物、並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物に関する。
【０００９】
本発明の化合物は、式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、並びに、式（Ｉ）および（Ｉａ）に包含され、例示的実施態様として後述する化合物並びにそれらの塩、溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である（後述する、式（Ｉ）および（Ｉａ）に包含される化合物が、まだ塩、溶媒和物および塩の溶媒和物ではない場合において）。
【００１０】
本発明の化合物は、それらの構造次第で、立体異性体で存在できる（エナンチオマー、ジアステレオマー）。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマー、およびそれらの各々の混合物に関する。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、キラル相のクロマトグラフィーまたはキラルアミンもしくはキラル酸を用いる結晶化などの既知の方法により、立体異性的に均一な成分を単離できる。
本発明はまた、化合物の構造次第で、化合物の互変異性体にも関する。
【００１１】
本発明の目的上、好ましい塩は、本発明の化合物の生理的に許容し得る塩である。
化合物（Ｉ）の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、トリフルオロ酢酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１２】
化合物（Ｉ）の生理的に許容し得る塩には、通常の塩基の塩、例えば、そして好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは１個ないし１６個の炭素原子を有する有機アミン類（例えば、そして好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジヒドロアビエチルアミン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびメチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩も含まれる。
【００１３】
本発明の目的上、溶媒和物は、溶媒分子との配位により固体または液体状態で錯体を形成している化合物の形態を表す。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。
【００１４】
本発明の目的上、断りのない限り、置換基は以下の意味を有する：
アルキル自体、並びに、アルコキシ、アルキルアミノ、アルコキシカルボニルおよびアルキルアミノカルボニル中の「アルコ（alk）」および「アルキル」は、一般的には１個ないし６個、好ましくは１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカル、例えば、そして好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ.−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルを表す。
【００１５】
アルコキシは、例えば、そして好ましくは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシおよびｔｅｒｔ.−ブトキシを表す。
【００１６】
アルキルアミノは、１個または２個のアルキル置換基（相互に独立して選択される）を有するアルキルアミノラジカル、例えば、そして好ましくは、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔｅｒｔ.−ブチルアミノ、ｎ−ペンチルアミノ、ｎ−ヘキシルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−ｔｅｒｔ.−ブチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−ｎ−ペンチルアミノおよびＮ−ｎ−ヘキシル−Ｎ−メチルアミノを表す。Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノは、例えば、１個ないし３個の炭素原子を有するモノアルキルアミノラジカル、または、アルキル置換基毎に１個ないし３個の炭素原子を有するジアルキルアミノラジカルを表す。
【００１７】
アルコキシカルボニルは、例えば、そして好ましくは、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｔｅｒｔ.−ブトキシカルボニル、ｎ−ペントキシカルボニルおよびｎ−ヘキソキシカルボニルを表す。
【００１８】
アルキルアミノカルボニルは、１個または２個のアルキル置換基（相互に独立して選択される）を有するアルキルアミノカルボニルラジカル（ここで、アルキル置換基は、相互に独立して、一般的には１個ないし６個、好ましくは１個ないし４個、特に好ましくは１個ないし３個の炭素原子を含む）、例えば、そして好ましくは、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ｎ−プロピルアミノカルボニル、イソプロピルアミノカルボニル、ｔｅｒｔ.−ブチルアミノカルボニル、ｎ−ペンチルアミノカルボニル、ｎ−ヘキシルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノカルボニル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノカルボニル、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノカルボニル、Ｎ−ｔｅｒｔ.−ブチル−Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ−エチル−Ｎ−ｎ−ペンチルアミノカルボニルおよびＮ−ｎ−ヘキシル−Ｎ−メチルアミノカルボニルを表す。Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノカルボニルは、例えば、１個ないし３個の炭素原子を有するモノアルキルアミノカルボニルラジカル、または、アルキル置換基毎に１個ないし３個の炭素原子を有するジアルキルアミノカルボニルラジカルを表す。
【００１９】
シクロアルキルは、一般的には３個ないし６個の炭素原子を有するシクロアルキル基を表し、例えば、そして好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルがシクロアルキルとして挙げられる。
【００２０】
アリールは、一般的には６個ないし１０個の炭素原子を有する単環式または二環式の芳香族性ラジカルを表し、例えば、そして好ましくは、フェニルおよびナフチルがアリールとして挙げられる。
【００２１】
ヘテロアリールは、一般的には５個ないし６個の環原子を有し、Ｓ、ＯおよびＮの系列から４個までのヘテロ原子を有する（ここで、窒素原子はＮ−オキシドを形成していてもよい）芳香族性の単環式ラジカル、例えば、そして好ましくは、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニルを表す。
【００２２】
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素、好ましくはフッ素および塩素を表す。
【００２３】
本発明の化合物中のラジカルが置換されているならば、そのラジカルは、断りの無い限り、同一かまたは異なって、１回または数回置換されている。３個までの同一かまたは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換がことさら特に好ましい。
【００２４】
本発明の目的上、好ましい化合物は、式中、
Ｒ１およびＲ２が、水素を表すか、
または、
Ｒ１およびＲ２がメチルを表すか、
または、
Ｒ１がメチルを表し、かつ、
Ｒ２が水素を表し、
そして、
Ｒ３およびＲ４が、相互に独立して、メチルまたはエチルを表すか、
または、
Ｒ３およびＲ４が、一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４を表し、そして、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、５員または６員の環を形成しており、ここで、その環は、ヒドロキシおよびエトキシカルボニルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよいか、
または、
Ｒ３およびＲ４が、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、式
【化３】
2008534538.tif 000004
｛ここで、＊は、カルボニル基への結合部位である｝
の基を形成している、
式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００２５】
本発明の目的上、好ましい化合物は、また、式中、
Ｒ１がメチルを表し、かつ、
Ｒ２が水素を表し、
そして、
Ｒ３およびＲ４が、相互に独立して、メチルまたはエチルを表すか、
または、
Ｒ３およびＲ４が、一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４を表し、そして、それらが各々結合している窒素または酸素原子と一体となって、５員または６員の環を形成しており、ここで、その環は、ヒドロキシおよびエトキシカルボニルからなる群から選択される１個の置換基で置換されていてもよい、
式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００２６】
本発明の目的上、好ましい化合物は、また、式
【化４】
2008534538.tif 000005
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
に相当する式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００２７】
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物またはそれらの塩、それらの溶媒和物もしくはそれらの塩の溶媒和物の製造方法に関し、その方法では、
［Ａ］式
【化５】
2008534538.tif 000006
（式中、Ｒ１およびＲ２は、上記の意味を有する）
の化合物を、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下、式
【化６】
2008534538.tif 000007
（式中、Ｒ３およびＲ４は、上記の意味を有する）
の化合物と反応させる、
または、
【００２８】
［Ｂ］式（ＩＩ）の化合物を、第１段階で、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下で、式
【化７】
2008534538.tif 000008
（式中、Ｒ３は、上記の意味を有する）
の化合物と反応させ、第２段階で、式
【化８】
2008534538.tif 000009
（式中、Ｒ４は上記の意味を有し、Ｘ１は、ハロゲン、好ましくは臭素またはヨウ素を表す）
の化合物と、塩基の存在下で反応させる。
【００２９】
方法［Ａ］による反応および方法［Ｂ］による第一段階は、一般的に、不活性溶媒中、必要に応じて塩基の存在下、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００３０】
ここで適する脱水剤は、例えば、カルボジイミド類、例えば、Ｎ,Ｎ'−ジエチル−、Ｎ,Ｎ'−ジプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ'−プロピルオキシメチルポリスチレン（ＰＳ−カルボジイミド）またはカルボニル化合物、例えばカルボニルジイミダゾール、または、１,２−オキサゾリウム化合物、例えば２−エチル−５−フェニル−１,２−オキサゾリウム−３−サルフェート、または、２−ｔｅｒｔ.−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウムパークロレート、または、アシルアミノ化合物、例えば２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキノリン、または、プロパンホスホン酸無水物、または、イソブチルクロロホルメート、または、ビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロリド、または、ベンゾトリアゾリルオキシトリ（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートまたはＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、または、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、または、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、または、これらの混合物、または、これらと塩基との混合物である。
【００３１】
塩基は、例えば、アルカリ炭酸塩、例えば、炭酸ナトリウムまたはカリウム、または、重炭酸塩、または、有機塩基、例えばトリエチルアミンなどのトリアルキルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンまたはジイソプロピルエチルアミンである。
【００３２】
好ましくは、縮合は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを用いて、塩基、特にジイソプロピルエチルアミンの存在下で実施する。
【００３３】
不活性溶媒は、例えば、ジクロロメタンもしくはトリクロロメタンなどのハロ炭化水素類、ベンゼンなどの炭化水素、または、ニトロメタン、ジオキサン、ジメチルホルムアミドまたはアセトニトリルである。溶媒の混合物を使用することも可能である。ジメチルホルムアミドが特に好ましい。
【００３４】
方法［Ｂ］による第２段階の反応は、一般的に、不活性溶媒中、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００３５】
塩基は、例えば、アルカリ炭酸塩、例えば、炭酸セシウム、ナトリウムもしくはカリウム、または重炭酸塩である；炭酸セシウムが好ましい。
【００３６】
不活性溶媒は、例えば、塩化メチレン、トリクロロメタンもしくは１,２−ジクロロエタンなどのハロ炭化水素類、または、ジオキサン、テトラヒドロフランもしくは１,２−ジメトキシエタンなどのエーテル類、または、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、２−ブタノンもしくはアセトニトリルなどの他の溶媒、または、これらの溶媒の水との混合物である；ジオキサン、ジオキサン／水またはジメチルホルムアミドが好ましい。
【００３７】
式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）および（ＩＩＩｂ）の化合物は、知られているか、または、既知方法と同様に製造できる。
【００３８】
式（ＩＩ）の化合物は、知られているか、または、式
【化９】
2008534538.tif 000010
（式中、Ｒ１およびＲ２は、上記の意味を有する）
の化合物を、塩基と反応させることにより製造できる。
【００３９】
この反応は、一般的に、不活性溶媒中、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００４０】
塩基は、例えば、水酸化ナトリウム、リチウムもしくはカリウムなどのアルカリ水酸化物、または、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ炭酸塩、好ましくは水酸化リチウムである。
【００４１】
不活性溶媒は、例えば、塩化メチレン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、トリクロロエタン、テトラクロロエタン、１,２−ジクロロエタンもしくはトリクロロエチレンなどのハロ炭化水素類、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ.−ブチルエーテル、１,２−ジメトキシエタン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、グリコールジメチルエーテルもしくはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル類、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールもしくはｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコール類、または、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルもしくはピリジンなどの他の溶媒、または、溶媒の混合物であり、好ましい溶媒は、テトラヒドロフランおよび／またはメタノールである。
【００４２】
式（ＩＶ）の化合物は、発酵により製造できる。それらは、例えば、ストレプトマイセス・ボトロペンシス（Streptomyces bottropensis） （ＤＳＭ１６８１４）種、または、ストレプトマイセス属（Streptomyces spec.）（ＤＳＭ１７０２５）種の菌株を、水性培養培地中、好気性条件下で発酵させるときに産生される。典型的には、これらの微生物を、炭素源および場合によりタンパク質性物質を含有する培養培地中で発酵させる。好ましい炭素源は、例えば、グルコース、黒砂糖、スクロース、グリセロール、デンプン、トウモロコシデンプン、ラクトース、デキストリンおよびモラセスである。好ましい窒素源は、例えば、綿実粉、酵母、自己消化パン酵母、乳固形分、大豆粉、トウモロコシ粉、カゼインの膵臓またはパパイン消化分解産物、固体蒸留産物（solid distillation products）、動物ペプトンのブロス、および、肉骨粉である。好ましくは、これらの炭素および窒素源の組合せを使用する。水道水および未精製の成分を培地の成分として使用するならば、例えば亜鉛、マグネシウム、マンガン、コバルトおよび鉄などの微量元素を発酵培地に添加する必要はない。
【００４３】
製造は、微生物の十分な増殖を確実にする任意の温度を含み得る。この温度は、好ましくは２１℃ないし３２℃、特に好ましくは約２８℃である。
【００４４】
最適な製造は、一般的に、４ないし８日の内に、好ましくは約７日で達成される。発酵ブロスは、通常、発酵中にわずかに塩基性（ｐＨ７.２ないしｐＨ８.４）のままである。最終ｐＨは、部分的には任意の使用するバッファーに、そして部分的には培養培地の当初ｐＨに依存する。好ましくは、滅菌前にｐＨを約６.５ないし７.５に、特に好ましくはｐＨ７.２に調節する。
【００４５】
製造は、振盪フラスコ中、および撹拌発酵槽中の両方で実施する。培養を振盪フラスコまたは大型バットおよびタンク中で実施する場合、好ましくは、代謝物の産生における明白な遅滞期を回避し、かくして設備の非効率的な利用を回避するために、微生物の胞子形態ではなく栄養形態を播種に使用する。従って、この培地に土壌培養または斜面培養のアリコートを播種することにより、水性培養培地中の栄養形態の種菌を調製するのが有利である。一度この方法で新鮮な活発な栄養形態の種菌を調製したら、微生物の発酵のためにこれを無菌的に他の振盪フラスコまたは他の適する設備に移す。栄養形態の種菌を産生する培地は、微生物の十分な増殖を確実にするならば、本発明の化合物の製造に使用する培地と同一であっても異なっていてもよい。
【００４６】
一般に、製造は、上述の微生物を使用して、好気条件下で、撹拌発酵槽中で実施する。しかしながら、製造は、使用する発酵槽および出発培養物とは無関係である。これらの前駆物質は、振盪培養を使用して得ることもできる。大容量発酵には、栄養形態の種菌を使用するのが好ましい。栄養状態の種菌は、少量の培養培地に、その微生物の胞子形態、菌糸体断片または凍結乾燥ペレットを播種することにより産生する。次いで、栄養形態の種菌を発酵バットに移す。そこで、適当な培養時間の後、式（ＩＶ）の化合物が最適収率で産生される。通常、好気的液内発酵法では、無菌の空気を培養培地に通す。微生物の効率的な増殖のために、使用する空気の体積は、約０.２５ないし約０.５倍の空気の体積／培養培地の体積／分の範囲にある（ｖｖｍ）。３０ｌのバットにおける最適な割合は約０.３ｖｖｍであり、撹拌を伴い、それは常套のプロペラ回転で約２００−５００回転／分、好ましくは２４０回転／分でもたらされる。泡の形成が問題であるならば、少量、例えば１ｍｌ／ｌのシリコンなどの消泡剤を発酵培地に添加することが必要である。
【００４７】
産生は、一般的には、約９６時間後に始まり、発酵期間中、少なくとも３日間起こる。ピークの産生には、約６ないし７日の発酵時間で到達する。
【００４８】
式（ＩＶ）の化合物は、発酵培地から、通常の方法により単離できる。
式（ＩＶ）の化合物は、発酵した微生物の培養濾液中に主に含有されるが、それらは、微生物の菌糸体中にも少量で存在し得る。簡単な方法で分離器を使用する分離により、培養ブロスを得ることができる。
【００４９】
式（ＩＶ）の化合物を発酵ブロスから分離し、それらを精製するのに、クロマトグラフィー的吸着方法（例えば、カラムクロマトグラフィー、液体−液体分離クロマトグラフィー、ゲル浸透クロマトグラフィーにより）、それに続く適当な溶媒による溶出、溶媒からの結晶化、およびそれらの組合せなどの、様々な方法を使用できる。好ましい精製方法では、式（ＩＶ）の化合物を、菌糸体から、または、上清の抽出物から抽出する。後者は、吸着樹脂、例えば XAD、HP20 または Lewapol を使用して調製できる。最初の精製を実施するのに、カラムクロマトグラフィーの方法、好ましくは Biotage C18 KP を使用する。化合物の最終的精製は、好ましくは、C18 カラム物質を使用する分取用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により実施する。
【００５０】
好ましい発酵条件および培地は、実施例１Ａないし３Ａに記載する。
【００５１】
上述の菌株ストレプトマイセス・ボトロペンシスＤＳＭ１６８１４およびストレプトマイセス属ＤＳＭ１７０２５は、the Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Mascheroder Weg 1b, D-38124 Brunswick, Germany に、ブタペスト条約に従い寄託されている。
【００５２】
本発明の化合物は、予測し得なかった価値ある抗菌的および薬物動態的特性を示す。
従って、それらは、ヒトおよび動物の疾患の処置および／または予防用の医薬としての使用に適する。
【００５３】
本発明の化合物は、それらの薬理特性を理由として、単独で、または他の活性化合物と組み合わせて、感染性疾患、特に細菌感染の処置および／または予防のために使用できる。
【００５４】
例えば、以下の病原体または以下の病原体の混合物に起因する局所および／または全身的疾患を処置および／または予防することが可能である：
グラム陽性球菌、例えばブドウ球菌（黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌）および連鎖球菌（ストレプトコッカス・アガラクチア、フェカリス菌、肺炎連鎖球菌、化膿性連鎖球菌）；グラム陰性球菌（淋菌）並びにグラム陰性桿菌、例えば腸内細菌科、例えば大腸菌、インフルエンザ菌、シトロバクター属（シトロバクター・フロインデイ、シトロバクター・ジベルニス（divernis））、サルモネラ属および赤痢菌属；また、クレブシエラ属（肺炎桿菌、クレブシエラ・オキシトシ（oxytocy））、エンテロバクター属（エンテロバクター・アエロゲネス、エンテロバクター・アグロメランス（agglomerans））、ハフニア属、セラチア属（セラチア・マルセセンス）、プロテウス属（プロテウス・ミラビリス、プロテウス・レッチゲリ（rettgeri）、プロテウス・ブルガリス）、プロビデンシア属、エルシニア属およびアシネトバクター属。さらに、抗菌スペクトルには、シュードモナス属（緑膿菌、シュードモナス・マルトフィリア）、並びに、厳密に嫌気性の細菌、例えば、バクテロイデス・フラジリス、ペプトコッカス属、ペプトストレプトコッカス属およびクロストリジウム属の代表例；さらに、マイコプラズマ属（肺炎マイコプラズマ、マイコプラズマ・ホミニス、マイコプラズマ・ウレアリチカム）、並びに、ミコバクテリア、例えば結核菌が含まれる。
上記の病原体のリストは例示にすぎず、決して限定とみなされるべきではない。
【００５５】
上述の病原体または混合感染に起因し、そして本発明に従い使用できる製剤により予防、改善または治癒できる疾患として言及し得る例は、以下のものである：
ヒトの感染性疾患、例えば、敗血性感染、骨および関節の感染、皮膚感染、術後創感染、膿瘍、蜂窩織炎、創傷感染、感染熱傷、火傷、口腔領域の感染、歯科手術後の感染、敗血症性関節炎、乳腺炎、扁桃炎、性器感染症および眼感染。
【００５６】
ヒトの他に、他の種でも細菌感染を処置できる。言及し得る例には、以下のものがある：
ブタ：大腸菌性下痢症（coli diarrhea）、腸毒血症、敗血症、赤痢、サルモネラ症、子宮炎−乳腺炎−アガラクチア症候群、乳腺炎；
反芻動物（ウシ、ヒツジ、ヤギ）：下痢、敗血症、気管支肺炎、サルモネラ症、パスツレラ症、マイコプラズマ病、性器感染；
ウマ：気管支肺炎、関節の病気、産褥性および産褥後感染、サルモネラ症；
イヌおよびネコ：気管支肺炎、下痢、皮膚炎、耳炎、尿路感染、前立腺炎；
家禽（ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ハト、観賞用鳥類など）：マイコプラズマ病、大腸菌感染、慢性呼吸器疾患、サルモネラ症、パスツレラ症、オウム病。
【００５７】
生産用および観賞用の魚類の飼育および管理における細菌性疾患の処置も同様に可能であり、そこでは抗菌スペクトルは前述した病原体を超えて、例えば、パスツレラ属、ブルセラ属、カンピロバクター属、リステリア属、エリシペロスリス属（Erysipelothris）、コリネバクテリウム属、ボレリア属（Borellia）、トレポネーマ属、ノカルジア属、リケッチア属、エルシニア属などのさらなる病原体に及ぶ。
【００５８】
本発明はさらに、疾患、好ましくは細菌性疾患、特に細菌感染の処置および／または予防のための、本発明の化合物の使用に関する。
本発明はさらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防のための、本発明の化合物の使用に関する。
本発明はさらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明の化合物の使用に関する。
本発明はさらに、本発明の化合物の抗菌的有効量を使用する、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防方法に関する。
【００５９】
本発明の化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。それらは、この目的のために、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜に、もしくは、耳に、または、インプラントもしくはステントとして、適する方法で投与できる。
【００６０】
本発明の化合物をこれらの投与経路に適する投与形で投与できる。
経口投与に適するのは、当分野の現状に準じて機能し、本発明の化合物を、迅速に、かつ／または、修飾された様式で放出し、そして、本発明の化合物を結晶形および／または無定形および／または溶解形で含有する投与形、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、腸溶性被覆、または、遅れて溶解するか、もしくは不溶であり、本発明の化合物の放出を制御する被覆を有する）、口腔中で急速に崩壊する錠剤またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤である。
【００６１】
非経腸投与は、吸収段階を避けて（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内）、または、吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）行うことができる。非経腸投与に適する投与形には、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌散剤の形態の、注射および点滴用製剤が含まれる。
【００６２】
他の投与経路に適するのは、例えば、吸入用医薬形（なかんずく、散剤吸入器、噴霧器）、点鼻薬、液、スプレー；舌に、舌下に、または頬側に投与するための、錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐剤、耳または眼用製剤、膣カプセル剤、水性懸濁剤（ローション剤、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えばパッチなど）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末剤（dusting powder）、インプラントまたはステントである。
【００６３】
本発明の化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に許容し得る補助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助剤には、なかんずく、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えばアスコルビン酸などの抗酸化剤）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および味および／または臭気の隠蔽剤。
【００６４】
本発明はさらに、少なくとも１種の本発明の化合物を、通常１種またはそれ以上の不活性、非毒性、医薬的に許容し得る補助剤と共に含む医薬、および上述の目的のためのそれらの使用に関する。
【００６５】
非経腸投与で２４時間につき約５ないし２５０ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると、一般に明らかになった。経口投与では、量は２４時間につき約５ないし１００ｍｇ／体重ｋｇである。
【００６６】
それにも拘わらず、特に体重、投与経路、活性化合物に対する個体の挙動、製剤のタイプおよび投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり得、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。大量に投与する場合、これらを１日に亘る数個の個別用量に分割するのが望ましいことがある。
【００６７】
断りの無い限り、以下の試験および実施例における百分率のデータは、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度は、各場合で体積を基準とする。
【実施例】
【００６８】
Ａ. 実施例
使用する略号：
【表１】
2008534538.tif 000011
【００６９】
ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法：
方法１（ボトロマイシン誘導体を精製するための分取用ＨＰＬＣの標準的条件）：カラム：VP 250/21Nukleodur 100-5, C18 ec, Macherey&Nagel: 762002；溶離剤Ａ：水中の０.０１％トリフルオロ酢酸、溶離剤Ｂ：アセトニトリル／０.０１％トリフルオロ酢酸；グラジエント：０分０％Ｂ、２０分２０％Ｂ、４０分２０％Ｂ、６０分３０％Ｂ、１００分３０％Ｂ、１１０分１００％Ｂ、１３２分１００％Ｂ；流速：５ｍｌ／分；オーブン：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７０】
方法２（ボトロマイシン誘導体の分析用ＨＰＬＣの標準的条件）：カラム：XTerra 3.9 x 150 WAT 186000478；温度：４０℃；流速：１ｍｌ／分；溶離剤Ａ：水中の０.０１％トリフルオロ酢酸、溶離剤Ｂ：アセトニトリル＋０.０１％トリフルオロ酢酸、グラジエント：０.０分２０％Ｂ→１分２０％Ｂ→４分９０％Ｂ→６分９０％Ｂ→６.２分２０％Ｂ。
【００７１】
方法３（ボトロマイシン誘導体の分析用ＬＣ−ＭＳ測定の標準的条件）：装置：HPLC Agilent Series 1100 を有する Micromass LCT；カラム：Waters Symmetry C18; 3.5 μm; 50 mm x 2.1 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋９８−１００％ギ酸１ｍｌ；溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋９８−１００％ギ酸１ｍｌ；グラジエント：０分１００％Ａ→１分１００％Ａ→６分１０％Ａ→８分０％Ａ→１０分０％Ａ→１０.１分１００％Ａ→１２分１００％Ａ；流速０分から１０分まで０.５ｍｌ／分→１０.１分１ｍｌ／分→１２分０.５ｍｌ／分；オーブン：４０℃；ＵＶ検出ＤＡＤ：２０８−５００ｎｍ。
【００７２】
ＮＭＲ測定：プロトン周波数５００.１３ＭＨｚの Bruker DMX500 で ＮＭＲ測定を実施した。溶媒は、ＤＭＳＯ−ｄ６であり、温度は３０２Ｋであった。較正は、２.５ｐｐｍのＤＭＳＯシグナルに基づいた。
【００７３】
出発化合物
ボトロマイシンＡ２（実施例１Ａ）の構造をＸ線構造解析により確認した。挙げた他のボトロマイシン（実施例２Ａないし５Ａ）は、類似のＮＭＲスペクトルを示すので、同じ立体化学を有すると想定される。従って、これらの構造は、当分野の現状とは異なる立体化学を有する。
【００７４】
発酵中に形成される化合物１Ａないし５Ａを、さらなる反応に使用する（実施例１参照）。もし化合物１Ａないし５Ａの立体化学の属性が実際は異なるならば、二次的産物の立体化学も対応して異なる。
【００７５】
実施例１Ａ
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（ボトロマイシンＡ２）
【化１０】
2008534538.tif 000012
【００７６】
実施例２Ａ
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（ボトロマイシンＢ２）
【化１１】
2008534538.tif 000013
【００７７】
実施例３Ａ
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４,１４−ジメチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−メトキシ−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（ボトロマイシンＣ２）
【化１２】
2008534538.tif 000014
【００７８】
実施例４Ａ
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−２−カルボキシ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）エチル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（酸としてのボトロマイシンＡ２）
【化１３】
2008534538.tif 000015
【００７９】
実施例５Ａ
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４,１４−ジメチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−２−カルボキシ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）エチル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（酸としてのボトロマイシンＣ２）
【化１４】
2008534538.tif 000016
【００８０】
化合物１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａおよび５Ａの合成
使用する株
表１：前駆物質ボトロマイシンＡおよびＢを産生できる菌株：
【表２】
2008534538.tif 000017
ATCC = American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, U.S.A. 
DSM = Deutsche Sammlung fuer Mikroorganismen und Zellkuluren, Brunswick, Germany. 
CBS = Centraalbureau voor Schimmelcultures, Baarn, The Netherlands 
【００８１】
ストレプトマイセス・ボトロペンシスは、Koninklijke Nederlandsche Gisten Spiritusfabriek, N.V. により単離および同定され、菌株寄託番号 CBS 163.64 で CBS, Baarn, The Netherlands (BP 762736, 1954) に寄託された。本特許の確認のために、その菌株は Deutsche Sammlung fuer Mikroorganismen und Zellkuluren, Brunswick, Germany に受託番号 DSM 16814 で再度寄託された。
【００８２】
ストレプトマイセス属 DSM 17025 は、Eifel/ドイツ由来の土壌サンプルから単離され、Bayer Healthcare AG の保存培養物所蔵品に、菌株番号BC16019で含まれた。
【００８３】
実施例１Ａ、２Ａおよび３Ａの製造
Ｓ.ボトロペンシスＤＳＭ１６８１４の予備培養物の調製
予備培養物の調製のために、菌株Ｓ.ボトロペンシスＤＳＭ１６８１４を以下の培地中で培養した：培地１：酵母−麦芽培地：Ｄ−グルコース０.４％、酵母抽出物０.４％、麦芽抽出物１.０％、水道水１ｌまで。水酸化ナトリウム水溶液を使用して培地のｐＨ値を７.２に調節した。各場合で、１２１℃、１.１ｂａｒの過圧下で２０分間培地を滅菌した。
【００８４】
各場合で、５０％グリセロール中の菌糸体懸濁液２ｍｌを、種菌として、１０００ｍｌの三角フラスコ中の１５ｘ１５０ｍｌの培地１用に調製し、９６時間、毎分２４０回転（回転／分）、２８℃で、回転式振盪機上でインキュベートした。これらの培養物を、−２０℃で保存される新しいグリセロール保存サンプルの調製に使用するか、または、それらを製造用培養物の種菌として供した。
【００８５】
Ｓ.ボトロペンシスＤＳＭ１６８１４の製造用培養物（３０ｌの規模）
製造用培養物の調製のために、上記の１５ｘ１５０ｍｌの予備培養物を、２２ｌの以下の培地２：グルコース（１％）、デンプン（１.５％）、酵母抽出物（０.５％）、脱脂大豆粉（１.０％）、塩化ナトリウム（０.５％）、炭酸カルシウム（０.３％）、に種菌として使用した。播種に先立ち、消泡剤 SAG 5693 (Union Carbide, USA) １ｍｌ／ｌを培地に添加し、６０分間、１.１ｂａｒ下で、蒸気で培地を滅菌した。この製造用培養物を、１２０−１６０時間、２８℃、撹拌速度２４０回転／分で、通気速度０.３ｖｖｍで、３０ｌの Bioengineering (Switzerland）の撹拌発酵槽（ブレード式撹拌機）でインキュベートした。無菌条件で得た毎日のサンプル２０ｍｌで、分析用ＨＰＬＣを使用して試験し、製造過程を監視した。これらの条件下で、ボトロマイシンＡ（実施例１Ａ）の収量２０ｍｇ／ｌを得た。
【００８６】
Ｓ.属ＤＳＭ１７０２５の予備培養物の調製
予備培養物の調製のために、菌株Ｓ.属ＤＳＭ１７０２５を、以下の培地中で培養した：培地１：酵母−麦芽培地：Ｄ−グルコース０.４％、酵母抽出物０.４％、麦芽抽出物１.０％、水道水１ｌまで。水酸化ナトリウム水溶液を使用して培地のｐＨ値を７.２に調節した。各場合で、１２１℃、１.１ｂａｒの過圧下で２０分間培地を滅菌した。
【００８７】
各場合で、５０％グリセロール中の菌糸体懸濁液２ｍｌを、種菌として、１０００ｍｌの三角フラスコ中の２ｘ１５０ｍｌの培地１用に調製し、９６時間、毎分２４０回転（回転／分）、２８℃で、回転式振盪機上でインキュベートした。これらの培養物を、−２０℃で保存される新しいグリセロール保存サンプルの調製に使用するか、または、それらを製造用培養物の種菌として供した。
【００８８】
Ｓ.属ＤＳＭ１７０２５の製造用培養物（３０ｌの規模）
製造用培養物の調製のために、上記の２ｘ１５０ｍｌの予備培養物を、３０ｌの以下の培地２：グルコース（１％）、デンプン（１.５％）、酵母抽出物（０.５％）、脱脂大豆粉（１.０％）、塩化ナトリウム（０.５％）、炭酸カルシウム（０.３％）、に種菌として使用した。播種に先立ち、消泡剤 SAG 5693 (Union Carbide, USA) １ｍｌ／ｌを培地に添加し、６０分間、１.１ｂａｒ下で、蒸気で培地を滅菌した。この製造用培養物を、９０−１４０時間、２８℃、撹拌速度２４０回転／分で、通気速度０.３ｖｖｍで、４０ｌの Bioengineering (Switzerland）の撹拌発酵槽（ブレード式撹拌機）でインキュベートした。無菌条件で得た毎日のサンプル２０ｍｌで、分析用ＨＰＬＣを使用して試験し、製造過程を監視した。これらの条件下で、ボトロマイシンＡ（実施例１Ａ）の収量２０ｍｇ／ｌを得た。
【００８９】
分析用ＨＰＬＣ
ＵＶ／可視（ＨＰＬＣ−ＵＶ／Ｖｉｓ）検出および質量分析による検出を用いる分析用ＨＰＬＣ法を、生合成中の検出に使用した。
ＨＰＬＣ分析の前に、水性の発酵サンプルを菌糸体と培養上清とに分け、得られた両方の産物にメタノールを添加した：培養濾液をメタノールで１：４に希釈し、遠心分離した菌糸体を、当初量のメタノールで、超音波槽中で１５分間抽出した。メタノール性のサンプルを、０.４５μｍのフィルターで濾過し、分析用ＨＰＬＣまたはＬＣ−ＭＳに各々注入した。
【００９０】
ＨＰＬＣ−ＭＳによる分析を、Micromass-LCT 質量分析機 (Micromass, Manchester, Great Britain) と組み合わせた HP 1100 HPLC システムで、ＥＳＩ＋およびＥＳＩ−モードで実施した。質量スペクトルをｍ／ｚ＝１００ないし１６５０の範囲で記録した。個々のボトロマイシンは、以下の保持時間を有する：
ボトロマイシンＡ２（実施例１Ａ）：Ｒｔ＝４.５４分
ボトロマイシンＢ２（実施例２Ａ）：Ｒｔ＝４.５１分
ボトロマイシンＣ２（実施例３Ａ）：Ｒｔ＝４.６１分
ボトロマイシンＡ２遊離酸（実施例４Ａ）：Ｒｔ＝４.５１分
ボトロマイシンＣ２遊離酸（実施例５Ａ）：Ｒｔ＝４.４８分
【００９１】
使用したＨＰＬＣ−ＭＳシステムは、以下のパラメーターを用いて操作した：固定相：Waters Symmetry C18, 3.5 μm 2.1 x 50 mm；移動相：グラジエント０.１％ギ酸を含む水（Ａ）および０.１％ギ酸を含むアセトニトリル（Ｂ）：０−１分１００％Ａ；１−６分９０％Ｂまで直線状グラジエント；６−８分９０％Ｂ−１００％Ｂ；８−１０分１００％Ｂ；流速０.５ｍｌ／分；カラムオーブン４０℃、ＵＶ検出：ＤＡＤ２０８−７００ｎｍ。ボトロマイシンの検出は、プロトン化分子イオン（Ｍ＋Ｈ）＋および脱プロトン化分子イオン（Ｍ−Ｈ）−、二重荷電分子（Ｍ＋２Ｈ）＋＋およびギ酸付加物（Ｍ＋ＡＳ）−に基づき行った。
【００９２】
ボトロマイシンＡ２（実施例１Ａ）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝８２３.８；（Ｍ＋２Ｈ）＋＋＝４１２.５；（Ｍ−Ｈ）−＝８２１.６；（Ｍ＋ＡＳ）−＝８６７.７
ボトロマイシンＢ２（実施例２Ａ）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝８０９.８；（Ｍ＋２Ｈ）＋＋＝４０５.５；（Ｍ−Ｈ）−＝８０７.６；（Ｍ＋ＡＳ）−＝８５３.６
ボトロマイシンＣ２（実施例３Ａ）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝８３７.７；（Ｍ＋２Ｈ）＋＋＝４１９.５；（Ｍ−Ｈ）−＝８３５.６；（Ｍ＋ＡＳ）−＝８８１.６
ボトロマイシンＡ２遊離酸（実施例４Ａ）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝８０９.６；（Ｍ＋２Ｈ）＋＋＝４０５.５；（Ｍ−Ｈ）−＝８０７.５
ボトロマイシンＣ２遊離酸（実施例５Ａ）：（Ｍ＋Ｈ）＋＝８２３.７；（Ｍ＋２Ｈ）＋＋＝４１２.５；（Ｍ−Ｈ）−＝８２１.５；（Ｍ＋ＡＳ）−＝８６７.５
【００９３】
G 1312A バイナリポンプシステム、G 1315A ダイオードアレイ検出器、G 1316A カラム 温度制御システム、G 1322A 脱気システムおよび G 1313A 自動注入器からなる Hewlett Packard Series 1100 Analytical HPLC System (HP, Waldbronn, Germany) を使用して、ＨＰＬＣ−ＵＶ／Ｖｉｓ分析を実施した。流速０.４ｍｌ／分の０.０５％トリフルオロ酢酸を含む水（Ａ）および０.０５％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル（Ｂ）を移動相として使用し、１０ｍｍのプレカラムを有する Waters Symmetry C18, 3.5 μm 2.1 x 50 mm カラムを固定相として供した。段階的グラジエント０−１００％Ｂ（０−１−２−３.５−６.７−６.８−７.８−８.４分で２５−２５−４５−４５−６５−１００−２５％Ｂ）でサンプルを分離した。ＨＰＬＣ−ＵＶクロマトグラムを２１０ｎｍ（不純物の検出）、２２５ｎｍおよび２５４ｎｍで記録した。２００−６００ｎｍの範囲のダイオードアレイ検出は、ＨＰＬＣ−ＵＶ／Ｖｉｓスペクトルをもたらした。カラムオーブンは４５℃に設定した。
【００９４】
記載した化合物は、以下のＵＶスペクトルを有する：２０６−２０７ｎｍにＵＶｍａｘ、２３０ｎｍに弱いショルダー、以下の保持時間：
ボトロマイシンＡ２（実施例１Ａ）：Ｒｔ＝４.６８分
ボトロマイシンＢ２（実施例２Ａ）：Ｒｔ＝４.５４分
ボトロマイシンＣ２（実施例３Ａ）：Ｒｔ＝４.８８分
ボトロマイシンＡ２遊離酸（実施例４Ａ）：Ｒｔ＝３.４４分
ボトロマイシンＣ２遊離酸（実施例５Ａ）：Ｒｔ＝４.２２分
【００９５】
撹拌発酵槽培養（３０ｌの規模）からの実施例１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａおよび５Ａの化合物の単離
３０ｌ規模の菌株ストレプトマイセス・ボトロペンシスＤＳＭ１６８１４発酵物からの菌糸体を、上清から遠心分離により分離した（２３００回転／分で１５分間）。
遠心分離後に得られる培養上清を、２５００ｍｌの Lewapol カラム (吸着樹脂、OC 1064, Bayer AG, Leverkusen, Germany）に負荷した。通過物および洗浄水（約３０ｌ）を廃棄した。次いで、後の洗浄を、カラムの６倍の体積の６０％メタノールおよびカラムの３倍の体積の８０％メタノールで実施した。得られる画分を廃棄し、吸着樹脂に結合したボトロマイシンを、少なくともカラム体積の１０倍の１００％メタノールで溶出した。次いで、溶出液を真空で乾燥した。
【００９６】
遠心分離後に得られた菌糸体を、Ultra-Turrax P50 DPX (Janke&Kunkel Labortechnik)中、メタノール各５ｌで２回処置し、次いで分離し、廃棄した。菌糸体の温浸から得たメタノール性抽出物を、ロータリーエバポレーターで濃縮し、水性残渣（約２.６ｌ）を酢酸エチル各２ｌで４回抽出した。酢酸エチル相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で乾燥させた。
【００９７】
菌糸体（約１１ｇ、ボトロマイシンＡ２の含有量→主要な代謝物、約３％）および培養上清（約５ｇ、ボトロマイシンＡ２の含有量約１０％）の後処理の残渣を合わせ、部分的にメタノールに溶解し、Biotage クロマトグラフィーカラム (Flash 75, 75 x 300 mm, Biotage C18 KP-WP, 15-20 μM）でさらに精製した。溶離剤０.０５％トリフルオロ酢酸を含む水（Ａ）および０.０５％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル（Ｂ）を流速８０ｍｌ／分で、１２、１６、２０、２５、２８、３１、３１、３５および５０％Ｂの段階で、段階的グラジエントを使用した。３１％Ｂで溶出されるボトロマイシンを、真空で乾燥するまで濃縮し（残渣約０.９ｇ、収率約６１％のボトロマイシンＡ２）、メタノールに溶解した。全体量を３つの部分に分割し、次いで、分取ＨＰＬＣシステムを使用して、３回の個別の実施で分離した: hardware Gilson Abimed HPLC（ＵＶ検出器２１０ｎｍ、バイナリポンプシステム、フラクションコレクター）；固相：プレカラム Nucleosil C18, 7 μm, 20 x 30 mm を有する Inertsil ODS-3 C18, 5 μm; 30 x 250 mm；流速：４１.２ｍｌ／分；画分サイズ２０.６ｍｌ／０.５分、５０分から開始）；０.０５％トリフルオロ酢酸を含む水（Ａ）から０.０５％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル（Ｂ）への段階的グラジエント：０−１５−７５−１０５−１１５−１２５分で１０−１０−３０−３０−１００−１００％Ｂ。
【００９８】
ボトロマイシンは、グラジエント領域３１−３５％Ｂで溶出した。ＨＰＬＣおよびＨＰＬＣ−ＭＳ分析の後、個々の画分を標的物質に従って合わせ、真空で乾燥させた。
【００９９】
主要な代謝物ボトロマイシンＡ２（実施例１Ａ）について、＞９７％純度の３２０ｍｇの収量が達成された。第２の代謝物ボトロマイシンＢ２（実施例２Ａ）およびボトロマイシンＣ２（実施例３Ａ）について、＞９８％純度の１２ｍｇおよび＞９０％純度の約１５ｍｇが達成された。ボトロマイシンＡ２（実施例４Ａ）およびボトロマイシンＣ２（実施例５Ａ）の遊離酸は、少量の成分として、＜５ｍｇの量で存在する。第２の代謝物（実施例３Ａ）および少量の成分（実施例４Ａ）、（実施例５Ａ）を、同じ分取用ＨＰＬＣ法で、さらなる精製段階で＞９８％純度にさらに精製した。
【０１００】
精製後、ボトロマイシンは、トリフルオロ酢酸の塩として存在し、メシルおよびギ酸塩への塩交換は完全に可能である。
【０１０１】
実施例４Ａ
代替的合成：
ボトロマイシンＡ２ ２６５ｍｇ（３２２μｍｏｌ）を、メタノール１２５ｍｌに溶解し、２Ｍ水酸化リチウム水溶液２.４ｍｌを添加する。溶液を還流下で１時間加熱し、次いで、室温に冷却し、１Ｍ塩酸５.４ｍｌでｐＨ１−２に調節する。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル３００ｍｌと水１００ｍｌとに分配した。水相を分離し、塩化アンモニウムで飽和させ、酢酸エチル１００ｍｌで再度抽出する。合わせた酢酸エチル相を濃縮し、残渣をジクロロメタン／メタノール１：１に取る。ジエチルエーテルおよび石油エーテルの添加により、標的生成物を冷やして沈殿させる。吸引濾過による回収および乾燥の後、酸１９９ｍｇ（理論値の７６％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.３４分；ｍ／ｚ＝８０９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０２】
実施例５Ａ
代替的合成：
実施例４Ａの代替的合成と同様に、表題化合物をボトロマイシンＣ２ ２８ｍｇ（３３.４５μＭ）から製造する。
収量：２０ｍｇ（理論値の７３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.４７分；ｍ／ｚ＝８２１（Ｍ−Ｈ）−
【０１０３】
実施例６Ａ
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザ−シクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−２−カルボキシ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）エチル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化１５】
2008534538.tif 000018
実施例４Ａの代替的合成と同様に、ボトロマイシンＢ２ ２２ｍｇ（２７μＭ）から表題化合物を製造する。
収量：２１ｍｇ（理論値の９７％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.０１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.３４分；ｍ／ｚ＝７９３（Ｍ−Ｈ）−
【０１０４】
例示的実施態様
実施例１
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−［メトキシ（メチル）アミノ］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化１６】
2008534538.tif 000019
【０１０５】
実施例４Ａ由来の化合物７５ｍｇ（９２.７μＭ）を、ＤＭＦ３ｍｌに溶解し、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール１８.８ｍｇ（１３９μｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩２１.３ｍｇ（１１１.２μｍｏｌ）、および、次いで、Ｎ,Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン２８.３ｍｇ（４６３.５μｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で１６時間撹拌する。次いで、混合物を濃縮する。残っている残渣をジクロロメタン３００ｍｌに取り、５％クエン酸５０ｍｌと振盪することにより抽出する。水相を分離し、塩化アンモニウムで飽和させ、ジクロロメタンで再度抽出する。合わせた有機相を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。対応する画分を合わせ、溶媒を蒸発させ、残っている残渣をジオキサン／水１：１から凍結乾燥する。標的化合物５５ｍｇ（理論値の７０％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.５９分；ｍ／ｚ＝８５２（Ｍ＋Ｈ）＋
1H-NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 0.8 および 0.89 (2d, 6H), 0.84 (s, 9H), 0.9 (s, 9H), 0.97 (d, 3H), 1.12 (d, 3H), 1.68 (m, 1H), 1.88 (m, 1H), 2.2 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.9-3.3 (m, 6H), 3.65-3.8 (m, 5H), 3.4 および 3.9 (2m, 2H), 3.95 (d, 1H), 4.12 (d, 1H), 4.2 (dd, 1H), 4.7 (t, 1H), 5.0 (d, 1H), 5.63 (m, 1H), 6.7 (d, 1H), 7.1-7.3 (m, 5H), 7.45 (m, 1H), 7.63 および 7.73 (2d, 2H), 7.8-8.0 (m, 2H), 8.95 (d, 1H), 9.22 (d, 1H). 
【０１０６】
実施例２
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−イソオキサゾリジン−２−イル−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化１７】
2008534538.tif 000020
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物５ｍｇ（６.２μＭ）、イソオキサゾリジン塩酸塩 (Perkin 2, 2000, 1435 or J. Chem. Soc. 1942, 432 と同様に製造）１.３５ｍｇ（１２.４μＭ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール１.２５ｍｇ、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩１.４ｍｇおよびエチル−ジイソプロピルアミン３μｌから、表題化合物を製造する。
収量：２.１ｍｇ（理論値の４０％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.０分；ｍ／ｚ＝８６４（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０７】
実施例３
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−ベータ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ）−３−（１,２−オキサジナン−２−イル）−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化１８】
2008534538.tif 000021
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物１０ｍｇ（１２.４μＭ）、１,２−オキサジナン塩酸塩（Perkin 2, 2000, 1435 または J. Chem. Soc. 1942, 432 と同様に製造）３.１ｍｇ（２４.７μＭ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール２.５ｍｇ、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩２.９ｍｇおよびエチル−ジイソプロピルアミン６.５μｌから、表題化合物を製造する。
収量：３.８ｍｇ（理論値の３５％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.６分；ｍ／ｚ＝８７８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０８】
実施例４
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザ−シクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−ベータ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ）−３−（１,２−オキサジナン−２−イル）−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化１９】
2008534538.tif 000022
実施例１の合成と同様に、実施例６Ａ由来の化合物１１ｍｇ（１３.８５μＭ）、１,２−オキサジナン塩酸塩（Perkin 2, 2000, 1435 または J. Chem. Soc. 1942, 432と同様に製造) ５.１ｍｇ（４１.５μＭ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール２.８ｍｇ、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩３.２ｍｇおよびエチル−ジイソプロピルアミン７μｌから、表題化合物を製造する。
収量：１.７ｍｇ（理論値の１４％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.６０分；ｍ／ｚ＝８６４（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０９】
実施例５
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザ−シクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−［メトキシ（メチル）アミノ］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２０】
2008534538.tif 000023
実施例１の合成と同様に、実施例６Ａ由来の化合物１１ｍｇ（１３.９μＭ）、Ｎ,Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン４.２ｍｇ（６９μＭ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール２.８ｍｇおよびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩３.２ｍｇから、表題化合物を製造する。
収量：８.８ｍｇ（理論値の７６％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.４９分；ｍ／ｚ＝８３８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１０】
実施例６
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４,１４−ジメチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−［メトキシ（メチル）アミノ］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２１】
2008534538.tif 000024
実施例１の合成と同様に、実施例５Ａ由来の化合物１０ｍｇ（１２μＭ）、Ｎ,Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン３.７ｍｇ（６１μＭ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール２.５ｍｇおよびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩２.８ｍｇから表題化合物を製造する。
収量：１.７ｍｇ（理論値の１６％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.５４分；ｍ／ｚ＝８６６（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１１】
実施例７
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−［エトキシ（エチル）アミノ］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２２】
2008534538.tif 000025
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物１０ｍｇ（１２.４μＭ）、Ｎ,Ｏ−ジエチルヒドロキシルアミン（ＤＥ２１１３３５５（１９７１）と同様に製造）５.５ｍｇ（６２μＭ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール３.３ｍｇおよびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩３.６ｍｇから、表題化合物を製造する。
収量：５.４ｍｇ（理論値の５０％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.７８分；ｍ／ｚ＝８８０（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１２】
実施例８
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−［エトキシ（メチル）アミノ］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２３】
2008534538.tif 000026
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物１０ｍｇ（１２.４μＭ）、Ｎ−メチル−Ｏ−エチルヒドロキシルアミン（ＤＥ２１１３３５５（１９７１）と同様に製造）４.６ｍｇ（６２μＭ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール３.３ｍｇおよびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩３.６ｍｇから、表題化合物を製造する。
収量：５ｍｇ（理論値の４７％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.６３分；ｍ／ｚ＝８６６（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１３】
実施例９
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−（４−ヒドロキシイソオキサゾリジン−２−イル）−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２４】
2008534538.tif 000027
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物１０ｍｇ（１２.４μＭ）およびイソオキサゾリジン−４−オール（Synthesis 1982, 5, 426と同様に製造）２.２ｍｇ（２５μＭ）から、表題化合物を製造する。ここで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩／１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの代わりに、［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］（ＨＡＴＵ）７.１ｍｇ（１８.６μＭ）を、エチルジイソプロピルアミン３.２ｍｇの存在下でカップリング剤として使用する。１６時間室温で撹拌した後、混合物を濃縮し、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により残渣を直接精製し、表題化合物を実施例１と同様に単離する。
収量：６.８ｍｇ（理論値の６３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝３.８６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝４.７分；ｍ／ｚ＝８８０（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１４】
実施例１０
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−［５−（エトキシカルボニル）イソオキサゾリジン−２−イル］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２５】
2008534538.tif 000028
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物１０ｍｇ（１２.４μＭ）およびエチルイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1984, 9, 606と同様に製造）３.６ｍｇ（２５μＭ）から、表題化合物を製造する。ここで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩／１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの代わりに、［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］（ＨＡＴＵ）９.４ｍｇ（２４.７μＭ）を、エチルジイソプロピルアミン３.２ｍｇの存在下で、カップリング剤として使用する。室温で１６時間撹拌した後、混合物を濃縮し、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により残渣を直接精製し、実施例１と同様に、表題化合物を単離する。
収量：６ｍｇ（理論値の５２％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝５.１分；ｍ／ｚ＝９３６（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１５】
実施例１１
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−［６−（エトキシカルボニル）−１,２−オキサジナン−２−イル］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２６】
2008534538.tif 000029
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物１７ｍｇ（２１μＭ）およびエチル−１,２−オキサジナン−６−カルボキシレート（J. Org. Chem. 2000, 65, 7667から製造）６.７ｍｇ（４２μＭ）から、表題化合物を製造する。ここで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩／１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの代わりに、［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］（ＨＡＴＵ）１６ｍｇ（４２μＭ）を、エチルジイソプロピルアミン５.４ｍｇの存在下で、カップリング剤として使用する。１６時間室温で撹拌した後、混合物を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により直接精製し、表題化合物を実施例１と同様に単離する。
収量：１６.７ｍｇ（理論値の８４％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝５.３分；ｍ／ｚ＝９４８（Ｍ−Ｈ）−
【０１１６】
実施例１２
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−ベータ−メチル−Ｎ−［（１Ｒ）−３−（２−オキサ−３−アザビシクロ［２.２.２］オクタ−５−エン−３−イル）−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２７】
2008534538.tif 000030
実施例１の合成と同様に、実施例４Ａ由来の化合物５ｍｇ（６.２μＭ）および２−オキサ−３−アザビシクロ［２.２.２］オクタ−５−エントリフルオロアセテート（Organic Letters 2004, 11, 1805 から製造）４.２ｍｇ（１９μＭ）から、表題化合物を製造する。ここで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩／１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの代わりに、［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］（ＨＡＴＵ）３.５ｍｇ（９.５μＭ）を、エチルジイソプロピルアミン１.６ｍｇの存在下で、カップリング剤として使用する。室温で１６時間撹拌した後、混合物を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により直接精製し、表題化合物を実施例１と同様に単離する。
収量：５ｍｇ（理論値の９０％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝５.０および５.１分；ｍ／ｚ＝９０２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１７】
実施例１３
Ｎ−［（３Ｓ,６Ｓ,１４Ｒ,１４ａＳ）−６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−イソプロピル−１４−メチル−１,４,１０−トリオキソドデカヒドロピロロ［１,２−ａ］［１,４,７,１０］テトラアザシクロドデシン−７（８Ｈ）−イリデン］−３−メチル−Ｌ−バリル−（ベータＳ）−Ｎ−［（１Ｒ）−３−ベンジル（メトキシ）アミノ］−３−オキソ−１−（１,３−チアゾール−２−イル）プロピル］−ベータ−メチル−Ｌ−フェニルアラニンアミド
【化２８】
2008534538.tif 000031
実施例４Ａ由来の化合物４０ｍｇ（４９.４μｍｏｌ）を、ＤＭＦ２０ｍｌに溶解し、Ｎ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩１１.８ｍｇ（７４.２μｍｏｌ）、［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］（ＨＡＴＵ）３７.６ｍｇ（９８.８μｍｏｌ）およびエチルジイソプロピルアミン１２.８ｍｇを添加する。１６時間室温で撹拌した後、混合物を濃縮し、残渣をアセトニトリル／水１：２に取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。対応する画分を合わせ、溶媒を蒸発させ、残っている残渣をジオキサンから凍結乾燥する。標的化合物４４.８ｍｇ（理論値の９９％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３８分
【０１１８】
この中間体２５ｍｇ（２７.３μｍｏｌ）を、１０ｍｌのジオキサン／水１：１に溶解し、炭酸セシウム２６.７ｍｇ（８２μｍｏｌ）を添加する。１０分間室温で撹拌した後、混合物を凍結乾燥する。残渣をＤＭＦ１０ｍｌに取り、ヨウ化メチル８５μｌ（１.４ｍｍｏｌ）を室温で添加する。反応は３０分後に完了する。混合物を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。表題化合物８.４ｍｇ（理論値の３３％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝５.６５分；ｍ／ｚ＝９２８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１９】
Ｂ. 生理活性の評価
使用する略号：
【表３】
2008534538.tif 000032
【０１２０】
本発明の化合物のインビトロおよびインビボの活性は、以下のアッセイで立証できる：
最低阻害濃度（ＭＩＣ）の決定
最低阻害濃度（ＭＩＣ）は、試験微生物の増殖が１８−２４時間にわたり阻害される抗生物質の最低濃度である。これらの場合、阻害剤の濃度は、標準的な微生物学的方法により決定できる（例えば、The National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard-fifth edition. NCCLS document M7-A5 [ISBN 1-56238-394-9]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2000 参照）。本発明の化合物のＭＩＣは、９６−ウェルマイクロタイタープレートの規模での液体希釈試験で決定する。５％ヒツジ血液を用いるコロンビア血液寒天プレート（Becton Dickinson）［インフルエンザ菌用のチョコレート−寒天プレート（Becton Dickinson）］上の新鮮な細菌の画線を、生理塩水中でＯＤ５７８０.１に調節する。試験物質をＤＭＳＯ１０ｍＭに溶解し、１：２希釈段階でＤＭＳＯによりさらに希釈する。各場合で、希釈した試験物質１μｌを９６ウェルマイクロタイタープレートに加え、Mueller-Hinton ブロス（インフルエンザ菌用のＨＴＭ）で１：３００に希釈した微生物懸濁液１００μｌを添加する。肺炎球菌および化膿性連鎖球菌には、微生物希釈は、２％溶血ウマ血液を添加した Mueller-Hinton ブロス中で１：１００である。マイクロタイタープレートを、好気的に１８−２４時間３７℃でインキュベートする；連鎖球菌およびインフルエンザ菌を微好気的に５％ＣＯ２の存在下でインキュベートする。
各場合で、目視できる細菌の増殖が起こらなくなる最低物質濃度を、ＭＩＣと定義する。
【０１２１】
表Ａ
【表４】
2008534538.tif 000033
濃度のデータ：μＭ表記のＭＩＣ
【０１２２】
黄色ブドウ球菌１３３による全身感染：
本発明の化合物の細菌感染の処置への適合性は、様々な動物モデルで立証できる。この目的で、一般的に、動物を適当な病原性微生物に感染させ、次いで、特定の治療モデルに適合させた製剤中に存在する試験しようとする化合物で処置する。特に、本発明の化合物の細菌感染の処置への適合性は、黄色ブドウ球菌による感染後のマウス敗血症モデルで立証できる。
【０１２３】
この目的で、黄色ブドウ球菌１３３細胞を、ＢＨブロス（Oxoid, Germany）中で終夜培養する。終夜培養物を新鮮なＢＨブロス中で１：１００に希釈し、３時間増殖させた。対数増殖期にある細菌を遠心分離し、緩衝化生理食塩水で２回洗浄する。次いで、吸光度５０ユニットの塩水中の細胞懸濁物を、光度計（Dr Lange LP 2W）で調節する。希釈段階（１：１５）の後、この懸濁液を１０％ムチン（mucine）懸濁液と１：１で混合する。マウス２０ｇ当たりにこの感染溶液０.２ｍｌをｉ.ｐ.投与する。これは、微生物約１−２ｘ１０６個／マウスの細胞数に相当する。ｉ.ｖ.治療を、感染の３０分後に行う。雌のＣＦＷ１マウスをこの感染実験に使用する。動物の生存率を５日間記録する。動物モデルを、非処置動物が感染後２４時間以内に死亡するように調節する。ＥＤ１００は、全ての動物が観察期間中に感染から生き残る最低用量に相当する。
【０１２４】
肺炎球菌Ｌ３ＴＶによる肺感染
本発明の化合物の細菌感染の処置への適合性を、肺炎球菌による感染後のマウスの肺感染モデルでも立証できる。
この場合、雌のＣＦＷ１マウスを、８ｘ１０５個の微生物肺炎球菌Ｌ３ＴＶで鼻腔内感染させる。凍結保存培養物の希釈により接種菌液を調節する。感染の１日目および２日目に、ｉ.ｖ.治療を各場合で１日２回適用する。感染後３日目に、肺を取り出し、組織をホモジナイズし、微生物の計数を実施する。
【０１２５】
インビボの薬物動態的特性の決定
一般に、化合物の薬物動態的特性（例えば、クリアランス、分布量など）は、特定の種における化合物の血漿濃度の測定により決定する。このために、例えば化合物の静脈投与後に、血液を様々な時間（例えば、２、５、１０、２０、４０分、１、２、４、６、８、２４時間）で採取し、遠心分離する。次いで、ＬＣ／ＭＳＭＳによる適当な分析方法で化合物の血漿濃度を測定する。
【０１２６】
マウスでは、各サンプル採取時間に１匹の動物が必要である。血液は、尾静脈から採取する。ラットでは、カテーテル処置した動物から血液を得る：シリコンカテーテルを、右外頸静脈を介して心臓まで進めるか、または、尾静脈中に置いて確保し、頸筋中に固定し、皮下で背中にもたらし、皮膚を通して導き出し、プラスチックの閉塞物で閉じる。このカテーテルは、１匹の動物における完全な血中動態を得ることを可能にするように、恒常的な静脈への接近をもたらす。
イヌの場合、血液を頸静脈から採取する。再度、１匹の動物における完全な血中動態を得る。
【０１２７】
医薬組成物の例示的実施態様
本発明の化合物は、以下の方法で医薬製剤に変換できる：
静脈内投与できる液剤：
組成：
実施例１の化合物１ｍｇ、ポリエチレングリコール４００ １５ｇおよび注射用水２５０ｇ。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコール４００と共に撹拌しながら水に溶解する。溶液を濾過滅菌し（孔直径０.２２μｍ）、加熱滅菌した点滴瓶に無菌条件下で分注する。後者を点滴用の栓およびクリンプキャップで閉じる。
【国際調査報告】
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