(57)【要約】  式（ＩＡ）：［式中、Ｒ１は２−インダニルであり、Ｒ２は１−メチルプロピルであり、Ｒ３は１−メチル−インダゾール−５−イルであり、Ｒ４はメチルを表し、Ｒ５は水素またはメチルを意味する］で示される化合物およびその医薬上許容される誘導体、その製法、該化合物を含有する医薬組成物および医療における使用、特にオキシトシンアンタゴニストとしての使用が記載されている。2008503535.tif 000026
2008503535.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＡ）：
【化１】
2008503535.tif 000021
［式中、Ｒ１は２−インダニルであり、Ｒ２は１−メチルプロピルであり、Ｒ３は１−メチル−インダゾール−５−イルであり、Ｒ４はメチルを表し、Ｒ５は水素またはメチルを表す］
で示される化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される、少なくとも１つの化学物質。
【請求項２】
式（ＩＡ）：
【化２】
2008503535.tif 000022
［式中、Ｒ１は２−インダニルであり、Ｒ２は１−メチルプロピルであり、Ｒ３は１−メチル−インダゾール−５−イルであり、Ｒ４はメチルを表し、Ｒ５は水素またはメチルを表す］
で示される化合物の塩および溶媒和物より選択される、少なくとも１つの化学物質。
【請求項３】
式（Ｉ）：
【化３】
2008503535.tif 000023
［式中、Ｒ１は２−インダニルであり、Ｒ２は１−メチルプロピルであり、Ｒ３は１−メチル−インダゾール−５−イルであり、Ｒ４はメチルを表し、Ｒ５は水素を表す］
で示される化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される、少なくとも１つの化学物質。
【請求項４】
Ｒ２が（１Ｓ）−１−メチルプロピルである、請求項１または請求項３記載の少なくとも１つの化学物質。
【請求項５】
（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド、またはその医薬上許容される誘導体より選択される、請求項１、３または４のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化学物質。
【請求項６】
（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド、および
（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ,Ｎ−ジメチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド、ならびにその医薬上許容される誘導体より選択される、請求項１または請求項４記載の少なくとも１つの化学物質。
【請求項７】
請求項１または３ないし６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化学物質と、１個または複数の医薬上許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項８】
療法にて用いるための請求項１または請求項３ないし６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化学物質。
【請求項９】
オキシトシンのオキシトシン受容体に対する効果に拮抗作用を及ぼすための医薬の製造における請求項１または請求項３ないし６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化学物質の使用。
【請求項１０】
早期陣痛、月経困難症、子宮内膜症および良性前立腺過形成より選択される１種または複数の疾患または症状を治療するための医薬の製造における請求項１および請求項３ないし６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化学物質の使用。
【請求項１１】
オキシトシンの作用を媒介する疾患または症状を治療あるいは予防する方法であって、それを必要とする哺乳動物に有効量の請求項１および請求項３ないし６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化学物質を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
疾患または症状が早期陣痛、月経困難症、子宮内膜症または良性前立腺過形成より選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１または請求項３の各々に記載の式（Ｉ）または式（ＩＡ）の化合物の調製方法であって、
（ａ）式（ＩＩ）：
【化４】
2008503535.tif 000024
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は請求項１または請求項３の記載と同意義であり、Ｒ３のキラリティーはＲまたはＳあるいはその混合のいずれかである］
で示される化合物またはその活性化誘導体を、アミン：ＨＮＲ４Ｒ５（Ｒ４およびＲ５は請求項１または請求項３の記載と同意義である）と、カルボン酸またはその活性化誘導体とアミンとからアミドを調製するための標準的な条件下で反応させるか、または
（ｂ）式（ＩＩＩ）：
【化５】
2008503535.tif 000025
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は請求項１または請求項３の記載と同意義であり、Ｒ６は２−ヒドロキシフェニルを意味する］
で示される化合物を、１,１'−カルボニルジイミダゾールまたは１,１'−チオカルボニルジイミダゾールと、適当な溶媒中で反応させ、その後、こうして形成された生成物をアミン：ＨＮＲ４Ｒ５（Ｒ４およびＲ５は請求項１または請求項３の記載と同意義である）と反応させることを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オキシトシン受容体にて強力かつ選択的なアンタゴニスト作用を有する新規なジケトピペラジン誘導体に、その製法に、該化合物を含有する医薬組成物に、およびその医学における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
オキシトシンホルモンは子宮の強力な収縮剤であり、陣痛の誘発または増幅に使用される。また、子宮オキシトシン受容体の密度は妊娠の間に１００倍より大きく有意に増加し、陣痛（早期および満期）にてピークに達する。
早産／早期陣痛（２４週と３７週の間）は約６０％の乳児の死亡／死亡率を生じさせる。かくしてオキシトシンの子宮作用を阻害する化合物、例えばオキシトシンアンタゴニストは、早期陣痛の防止または制御に有用であるはずである。
【０００３】
国際特許出願ＷＯ９９／４７５４９は、フルクトース１,６−ビスホスフェート（ＦＢＰａｓｅ）の阻害剤としての３−ベンジル−２,５−ジケトピペラジン誘導体を含むジケトピペラジン誘導体を記載する。
【０００４】
国際特許出願ＷＯ０３／０５３４４３は、オキシトシン受容体にて選択的なアンタゴニストとして特に有用なレベルの活性を示す一連のジケトピペラジン誘導体を記載する。そこに記載の一連の好ましい化合物は、式（Ａ）：
【化１】
2008503535.tif 000003
で示される。
かかる化合物は、とりわけ、Ｒ１が２−インダニルであり、Ｒ２がＣ３−４アルキルであり、Ｒ３が所望により置換されていてもよい６,５−縮合二環式環、例えば、環中の炭素原子を介して分子の残基に結合した１Ｈ−インダゾール−５−イルであり、Ｒ４がＮＲ５Ｒ６基（Ｒ５およびＲ６は、各々、アルキル、例えばメチルであるか、またはＲ５およびＲ６はその結合する窒素原子と一緒になって３−ないし７−員の飽和複素環式環を形成し、その複素環は酸素より選択される付加的なヘテロ原子を含有してもよい）を表すところの、化合物を包含する。
【０００５】
国際特許出願ＷＯ２００５／０００８４０は、式（Ｂ）：
【化２】
2008503535.tif 000004
［式中、Ｒ１は２−インダニルであり、Ｒ２は１−メチルプロピルであり、Ｒ３は２−メチル−１,３−オキサゾール−４−イルであり、Ｒ４およびＲ５はその結合する窒素原子と一緒になってモルホリノを表す］
で示されるジケトピペラジン誘導体を記載する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
この度、本発明者らは、特に有利な薬物動態プロファイルを示す、一群の新規な選択的オキシトシン受容体アンタゴニストを見出した。
本発明は、かくして、式（Ｉ）：
【化３】
2008503535.tif 000005
［式中、Ｒ１は２−インダニルであり、Ｒ２は１−メチルプロピルであり、Ｒ３は１−メチル−インダゾール−５−イルであり、Ｒ４はメチルを表し、Ｒ５は水素を意味する］
で示される化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される少なくとも１つの化学物質を提供する。
【０００７】
あるいはまた、本発明は、式（ＩＡ）：
【化４】
2008503535.tif 000006
［式中、Ｒ１は２−インダニルであり、Ｒ２は１−メチルプロピルであり、Ｒ３は１−メチル−インダゾール−５−イルであり、Ｒ４はメチルを表し、Ｒ５は水素またはメチルを意味する］
で示される化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される少なくとも１個の化学物質を提供する。
【０００８】
式（Ｉ）の化合物および式（ＩＡ）の化合物は、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３基を有する不斉炭素原子が、すなわち、これらの位置での空間的配置が常に（Ｒ）であるように示される、絶対立体化学を有することが分かるであろう。それでも、かかる化合物は実質的にはＲ１、Ｒ２およびＲ３の各々で（Ｓ）−エピマーを含まないが、各エピマーは少量にて存在しうること、例えば、１％以下の（Ｓ）−エピマーが存在してもよいことも認識すべきである。
【０００９】
Ｒ２基が不斉炭素原子を含有し、本発明がその（Ｒ）−および（Ｓ）−エピマーの両方を含むことも理解されよう。
本発明の一の実施形態においては、Ｒ２は（１Ｓ）−１−メチルプロピルである。本発明のもう一つ別の実施形態においては、Ｒ２は（１Ｒ）−１−メチルプロピルである。
本発明の一の実施形態においては、Ｒ５は水素を表す。本発明のもう一つ別の実施形態においては、Ｒ５はメチルを表す。
本発明の一の実施形態は、実施例１に具体的に記載される化合物を調製することにある。本発明のもう一つ別の実施形態は、実施例１および２に具体的に記載される化合物を調製することにある。
【００１０】
一の態様において、本発明にて有用な化学物質は：
（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド、および
（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ,Ｎ−ジメチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド,
ならびにその医薬上許容される誘導体
より選択される少なくとも１つの化学物質であってもよい。
【００１１】
本明細書にて用いる場合、「医薬上許容される」なる語は、医薬用途に適する化合物を意味する。医薬用途に適する本発明の化合物の塩および溶媒和物は、そのカウンターイオンまたは結合溶媒が医薬上許容されるものである。しかし、医薬上許容されないカウンターイオンまたは結合溶媒を有する塩および溶媒和物も、例えば、本発明の他の化合物ならびにその医薬上許容される塩および溶媒和物の調製における中間体として用いるため、本発明の範囲内にある。
【００１２】
本明細書にて用いる場合、「医薬上許容される誘導体」なる語は、被験者に投与されると、本発明の化合物あるいはその活性代謝物または残基の提供能を（直接的または間接的に）有する、本発明の化合物の医薬上許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグ、例えばエステルのいずれをも意味する。かかる誘導体は、当業者であれば過度の実験を行うことなく理解しうる。とは言っても、Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 5 th Edition, Vol 1： Principles and Practiceの教示に言及するものであり、かかる誘導体に対する教示を出典を明示することでその内容を本明細書の一部とする。一の態様において、医薬上許容される誘導体は、塩、溶媒和物、エステル、カルバメートおよびホスフェートエステルである。もう一つ別の態様において、医薬上許容される誘導体は塩、溶媒和物およびエステルである。一の態様において、医薬上許容される誘導体は生理学的に許容される塩である。さらなる態様において、医薬上許容される誘導体は溶媒和物およびエステルである。もう一つ別の態様において、医薬上許容される誘導体は溶媒和物である。
【００１３】
本発明の化合物の適当な生理学的に許容される塩として、生理学的に許容される無機酸または有機酸とで形成される酸付加塩が挙げられる。かかる酸の例として、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、硫酸、スルホン酸、例えばメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、コハク酸、フマル酸およびマレイン酸が挙げられる。
本発明はまた、式（Ｉ）または式（ＩＡ）の化合物の溶媒和物、例えば、水和物、または、限定されるものではないが、アルコール、例えばエタノール、イソプロパノール、アセトン、エーテル、エステル、例えば酢酸エチルを含む、医薬上許容される溶媒との溶媒和物に関する。
【００１４】
本発明の化合物はまた、他の治療薬と組み合わせて用いてもよい。かくして、本発明は、さらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される誘導体をさらなる治療薬と一緒に含む組み合わせを提供する。
【００１５】
本発明の化合物またはその医薬上許容される誘導体を、同じ病態に対して活性である第二治療薬と組み合わせて用いる場合、各化合物の用量は、その化合物を単独で用いる用量とは異なるかもしれない。当業者であれば、適量を容易に認識するであろう。治療に用いるのに必要な本発明の化合物の量は、治療される状態の性質、患者の年齢および状態で変化するであろうし、最終的には顧問医または獣医の判断であろう。本発明の化合物は子宮収縮阻害薬または予防薬と組み合わせて用いてもよい。これらは、限定されるものではないが、テルブタリンまたはリトドリンなどのベータ−アゴニスト、カルシウムチャネル遮断薬、例えばニフェデピン、非ステロイド系抗炎症薬、例えばインドメタシン、マグネシウムの塩、例えば硫酸マグネシウム、他のオキシトシンアンタゴニスト、例えばアトシバン、およびプロゲステロンアゴニストおよび処方を包含する。加えて、本発明の化合物はベータメタゾンおよびデキサメタゾンを含む出生前ステロイド、妊婦用ビタミン、特に葉酸補充剤、抗生物質、限定されるものではないが、アンピシリン、アモキシリン／クラブラン酸塩、メトロニダゾール、クリンダマイシンおよび不安解消薬と組み合わせて用いられてもよい。
【００１６】
一の態様において、上記の組み合わせは医薬処方の形態における使用のために供されてもよく、上記した組み合わせと医薬上許容される担体または賦形剤とを含む医薬処方は本発明のさらなる態様を形成する。かかる組み合わせの個々の成分は、都合のよい経路により、連続的に、あるいは同時に、別々のまたは組み合わせた医薬処方のいずれで投与されてもよい。
連続的に投与する場合、本発明の化合物または第二治療薬のいずれが最初であってもよい。同時に投与する場合、その組み合わせは同じまたは異なる医薬組成物のいずれで投与されてもよい。
【００１７】
同じ処方中に組み合わせる場合、２種の化合物は安定しており、相互におよび処方の他の成分と混和性でなければならない。別々に処方される場合、それらは都合よくは当該分野にてかかる化合物に対して公知の方法にて、いずれか都合のよい処方にて提供されてもよい。
【００１８】
式（Ｉ）および式（ＩＡ）の化合物はラットおよびヒトの子宮上のオキシトシン受容体に対して強いアフィニティを有しており、このことは一般的手段を用いて測定され得る。例えば、ラットの子宮上のオキシトシン受容体に対するアフィニティは、Pettiboneら、Drug Development Research 30. 129-142（1993）の操作により測定され得る。本発明の化合物はまた、ＣＨＯ細胞のヒト組換えオキシトシン受容体で高いアフィニティを示し、このことは、都合よくは、Wyattら、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters、2001（11）1301-1305頁に記載の操作を用いて測定され得る。
【００１９】
本発明の化合物は、良好な生体利用能および固有の低クリアランスを含め、有利な薬物動態プロファイルを示す。一の態様にて、本発明の化合物は良好な効能および固有の低クリアランスを示す。もう一つ別の態様において、本発明の化合物は固有の低クリアランスを示す。
本発明の化合物は、したがって、オキシトシンの作用を介して媒介される疾患および／または症状の治療または予防にて有用である。かかる疾患および／または症状の例として、早期陣痛、月経困難症、子宮内膜症および良性前立腺過形成が挙げられる。
【００２０】
該化合物はまた、選択しうる帝王切開または患者を三次医療センターに移す前に、性的機能不全（男性および女性）、特に早漏、肥満、食事障害、鬱血性心不全、動脈性高血圧、肝硬変、腎臓性高血圧または高眼圧症、強迫障害および神経精神障害の治療の前に、陣痛を遅らせるのに有用でもある。本発明の化合物はまた、動物、例えば家畜の出産率を改良するのにも有用である。
したがって、本発明は、治療にて用いるための、特にヒトまたは家畜の治療にて用いるための、とりわけオキシトシンのオキシトシン受容体に対する作用を拮抗するための医薬として用いるための、式（Ｉ）または式（ＩＡ）の化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される少なくとも１種の化学物質を提供する。
【００２１】
本発明はまた、オキシトシンのオキシトシン受容体に対する作用を拮抗するための医薬の製造における、式（Ｉ）または式（ＩＡ）の化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される少なくとも１種の化学物質の使用を提供する。
【００２２】
さらなる態様によれば、本発明はまた、オキシトシンのオキシトシン受容体に対する作用を拮抗する方法であって、その必要とする患者に、拮抗量の少なくとも一つの式（Ｉ）および式（ＩＡ）の化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される化学物質を投与することを含む、方法を提供する。
本明細書の治療に対する言及は予防ならびに確立された疾患または徴候の治療にまで及ぶことは当業者に明らかであろう。
【００２３】
さらには、治療にて用いるのに必要とされる本発明の化合物の量は、治療される症状の特性、投与形路および患者の年齢および状態で変化し、最終的には顧問医の判断であろう。一般に、成人の治療に利用される用量は、典型的には、投与形路に応じて、２ないし１０００ｍｇ／日の範囲にあるであろう。
かくして、非経口投与の場合、一日の用量は、典型的には、２ないし５０ｍｇ、一の態様にて５ないし２５ｍｇ／日の範囲にあるであろう。経口投与の場合、一日の用量は、典型的には、１０ないし１０００ｍｇ、例えば５０ないし５００ｍｇ／日の範囲内にあるであろう。
【００２４】
望ましい用量は、単回用量にて、あるいは適当な間隔で投与される分割された用量として、例えば一日に付き２回、３回、４回またはそれ以上の細分用量として提供されてもよい。
治療にて用いる場合、本発明の化合物は原料として投与されることも可能であるが、医薬処方の活性成分として投与されることが好ましい。
【００２５】
かくして、本発明は、さらには、式（Ｉ）または式（ＩＡ）の化合物およびその医薬上許容される誘導体より選択される少なくとも１個の化学物質と、１個または複数の医薬上許容される担体と、所望により他の治療および／または予防成分とを一緒に含む医薬処方を提供する。担体は、処方の他の成分と適合しうるという意味で「許容される」ものでなければならず、その受容者に有害であってはならない。
本発明の組成物は、経口、バッカル、非経口、吸入または注入、インプラント、膣または直腸投与用に特に処方された形態のものを包含する。
【００２６】
経口投与用の錠剤およびカプセルは、結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、澱粉粘液またはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、ショ糖、微結晶セルロース、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウムまたはソルビトール；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えばイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム、またはラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤等の慣用的な賦形剤を含有してもよい。錠剤は当該分野にて周知の方法によりコーティングされていてもよい。経口用液体製剤は、例えば水性または油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、あるいは使用前に水または他の適当なビヒクルで復元される乾燥生成物として与えられてもよい。かかる液体製剤は、懸濁化剤、例えばソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／ショ糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは硬化食用脂；乳化剤、例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含んでいてよい）、例えばアーモンド油、分別ココヤシ油、油性エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；界面活性剤、例えばポリソルベートまたはシクロデキストリンなどの可溶化剤；および保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルあるいはアスコルビン酸などの慣用的な添加剤を含有してもよい。該組成物はまた、例えばカカオ脂または他のグリセリドなどの慣用的な坐剤用基剤を含有する坐剤として処方されてもよい。
【００２７】
バッカル投与の場合、該組成物は慣用的操作にて処方された錠剤またはロゼンジの形態を取ることができる。
本発明の組成物は注射または点滴による非経口投与用に処方されてもよい。注射用の処方は、単回投与のアンプルの形態にて、あるいは保存剤を加えた複数回投与用の容器にて与えられてもよい。該組成物は、かかる形態を油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンとして取ってもよく、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの処方剤を含有してもよい。また、活性成分は、使用前に適当なビヒクル、例えば滅菌した発熱物質不含水で復元する粉末形態であってもよい。
【００２８】
本発明の組成物は、０．１−９９％の活性成分、都合よくは錠剤およびカプセルの場合に１−５０％の活性成分、液体製剤の場合に３−５０％の活性成分を含有してもよい。
本発明の化合物の有利な薬物動態プロファイルは、生物学的に活性な化合物の薬物動態特性を測定する通常の操作を用いて容易に測定される。
本発明の化合物およびその医薬上許容される誘導体は、本発明のさらなる態様を構成する、以下に記載の操作により調製される。以下の記載において、基は、特記しない限り、本発明の化合物について上記したとおりである。
【００２９】
かくして、式（Ｉ）および式（ＩＡ）の化合物は、カルボン酸（ＩＩ）：
【化５】
2008503535.tif 000007
（ここで、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ３のキラリティは（Ｒ）または（Ｓ）あるいはその混合物である）またはその活性化誘導体を、アミン  ＨＮＲ４Ｒ５（ここで、Ｒ４およびＲ５は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義である）と、カルボン酸またはその活性化誘導体とアミンとからアミドを調製する標準条件下で、反応させて調製することができる。
【００３０】
上記の反応より得られる式（Ｉ）および式（ＩＡ）の化合物のジアステレオマーの混合物は、当該分野にて周知の標準的分割技法、例えばカラムクロマトグラフィーを用いて分離することができる。
かくして、式（Ｉ）または式（ＩＡ）のアミドは、式（ＩＩ）のカルボン酸を、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘテロフルオロリン酸塩）、ＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロホウ酸塩）、ＢＯＰ−Ｃｌ（ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド）、塩化オキサリルまたは１，１’−カルボニルジイミダゾールなどの活性化剤と、トリエチルアミンなどの非プロトン性溶媒中、所望によりトリエチルアミンなどの第三アミンの存在下で処理し、その後、こうして形成された生成物、すなわち式（ＩＩ）の化合物の活性化誘導体を、アミン  ＨＮＲ４Ｒ５と反応させることで調製され得る。
【００３１】
別法として、式（Ｉ）または式（ＩＡ）のアミドは、カルボン酸（ＩＩ）から誘導される混合無水物をアミン  ＨＮＲ４Ｒ５とテトラヒドロフランなどの非プロトン性溶媒中で反応させることで調製することができる。都合よくは、該反応は低温、例えば２５℃ないし−９０℃、より都合よくは約−７８℃で実施される。
混合無水物は、都合よくは、カルボン酸（ＩＩ）を、適当な酸塩化物、例えば塩化ピバロリルと、トリアルキルアミン、例えばトリエチルアミンなどの第三有機塩基の存在下、低温、例えば２５℃ないし−９０℃、都合よくは約−７８℃で、酢酸エチルなどの非プロトン性溶媒中で反応させることで調製される。
【００３２】
式（Ｉ）または式（ＩＡ）の化合物はまた、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2008503535.tif 000008
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ６は２−ヒドロキシフェニルを意味する］
で示される化合物を、１,１'−カルボニルジイミダゾールまたは１,１'−チオカルボニルジイミダゾールと、ジクロロメタンなどの適当な溶媒中で反応させ、その後、このように形成された生成物をアミン  ＨＮＲ４Ｒ５と反応させることで調製され得る。
【００３３】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｒ６は２−ヒドロキシフェニルである）を、１,１'−カルボニルジイミダゾールまたは１,１−チオカルボニルジイミダゾールと、ジクロロメタンなどの適当な溶媒中で反応させ、その後、こうして形成された生成物を水性アセトンと反応させることで調製され得る。
式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｒ６は２−ヒドロキシフェニルである）は、対応する式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｒ６は２−ベンジルオキシフェニル基である）を水素およびパラジウム触媒を用いて水素添加分解することで調製され得る。
【００３４】
式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｒ６は２−ベンジルオキシフェニル基である）は、式（ＩＶ）：
【化７】
2008503535.tif 000009
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ６は２−ベンジルオキシフェニルであり、Ｒ７はｔ−ブチルオキシカルボニルであり、Ｒ８はＣ１−６アルキルを意味する］
で示される化合物を、ジオキサンなどの溶媒中、塩化水素と反応させ、つづいてメタノール中、トリエチルアミンなどの塩基で処理することにより調製され得る。
【００３５】
式（ＩＶ）の化合物は、アミノエステル塩酸塩（Ｖ）：
【化８】
2008503535.tif 000010
［ここで、Ｒ２は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ８はＣ１−６アルキルである］
を、アルデヒド：Ｒ３ＣＨＯ（ＶＩ）［ここで、Ｒ３は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義である］と、トリエチルアミンの存在下、トリフルオロエタノールなどの溶媒中で反応させ、ついで得られた生成物を、化合物（ＶＩＩ）：
【化９】
2008503535.tif 000011
［ここで、Ｒ１は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ７はｔ−ブチルオキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニル基である］
およびイソシアニド：ＣＮＲ６（ＶＩＩＩ）［ここで、Ｒ６は２−ベンジルオキシフェニル基である］と、トリフルオロエタノールなどの溶媒中で反応させることにより調製され得る。
【００３６】
式（ＩＩＩ）の化合物［式中、Ｒ６は２−ベンジルオキシフェニル基である］は、式（ＩＶ）の化合物［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ６は２−ベンジルオキシフェニルであり、Ｒ７はｔ−ブチルオキシカルボニルである］を、塩化水素と、ジオキサン中で反応させ、つづいてトリエチルアミンとジクロロメタンなどの溶媒中で反応させることにより調製され得る。
式（ＩＶ）の化合物［式中、Ｒ７はｔ−ブチルオキシカルボニルである］は、式（ＶＩＩ）の化合物［式中、Ｒ７はｔ−ブチルオキシカルボニルである］を用い、上記した反応経路により調製され得る。
【００３７】
Ｒ２置換基は１−メチルプロピル基であり、式（Ｉ）および式（ＩＡ）の化合物［式中、Ｒ２は（Ｓ）または（Ｒ）配置の１−メチルプロピル基である］は、アミノエステル塩酸塩（Ｖ）［ここで、Ｒ２基は必要とされる（Ｓ）または（Ｒ）配置である］を用いて開始することで調製され得る。
アミノエステル塩酸塩（Ｖ）［ここで、Ｒ１は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ８はＣ１−６アルキルである］は、Schmidt, U；Kroner, M；Griesser, H.  Synthesis（1989）、（11）、832-5の方法により、その対応する市販のアミノ酸、Ｄ−アロイソロイシンまたはＤ−イソロイシンより調製され得る。
【００３８】
アルデヒド：Ｒ３ＣＨＯ（ＶＩ）［ここで、Ｒ３は式（Ｉ）または式（ＩＡ）の記載と同意義である］は、市販のブロモ化合物  Ｒ３Ｂｒ［ここで、Ｒ３は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義である］より、V. Auwers；Lange；Chem. Ber.；55；1922；1141, 1157の方法に従って調製され得る。別法として、アルデヒド：Ｒ３ＣＨＯ（ＶＩ）は市販のニトリル化合物  Ｒ３ＣＮ［ここで、Ｒ３は式（Ｉ）または式（ＩＡ）の記載と同意義である］より、Halley, Frank；Sava, Xavier  Synthesis of 5-cyanoindazole and 1-methyl and 1-aryl-5-cyanoindazoles. Synthetic Communications（1997）、27（7）、1199-1207の方法に従って調製され得る。
【００３９】
アミノ酸誘導体（ＶＩＩ）［ここで、Ｒ１は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ７はｔ−ブチルオキシカルボニルである］は商業的に入手可能であり；アミノ酸誘導体（ＶＩＩ）［ここで、Ｒ１は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義であり、Ｒ７はベンジルオキシカルボニルである］は、対応する市販のアミノ酸：（Ｒ）−Ｒ１ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ（ＩＸ）［ここで、Ｒ１は式（Ｉ）および式（ＩＡ）の記載と同意義である］をＮ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミドおよびトリエチルアミンと水中ジオキサンなどの溶媒中で処理することで調製され得る。
【００４０】
イソシアニドＣＮＲ６（ＶＩＩＩ）は文献記載の方法に従って調製することができる（Obrecht, Roland；Herrmann, Rudolf；Ugi, Ivar、Synthesis、1985、4、400-402）。
式（Ｉ）および式（ＩＡ）の化合物の酸付加塩は、慣用的手段、例えば、該化合物のジクロロメタンまたはアセトンなどの適当な溶媒中溶液を、適当な無機または有機酸の適当な溶液で処理することにより調製することができる。
以下の実施例は例示であり、本発明の実施形態を限定するものではない。
【００４１】
実験
略語
ＤＩＢＡＬ：塩化ジイソブチルアルミニウム
命名法
中間体および実施例のすべては、イジスドロー（ISISDraw）のＡＣＤ  Ｎａｍｅ  Ｐｒｏ６．０２を用いて命名した。
【００４２】
一般的精製および分析方法
分析用ＨＰＬＣは、Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ  ＬＣＡＢＺ＋ＰＬＵＳカラム（３.３ｃｍｘ４.６ｍｍＩＤ）上で、水中０.１％ＨＣＯ２Ｈおよび０.０１Ｍ酢酸アンモニウム（溶媒Ａ）、およびアセトニトリル中０.０５％ＨＣＯ２Ｈおよび５％水（溶媒Ｂ）で、溶出勾配１：０−０.７分の０％Ｂ、０.７−４.２分の０％−１００％Ｂ、４.２−５.３分の１００％Ｂ、５.３−５.５分の０％Ｂあるいは溶出勾配２：０−０.７分の０％Ｂ、０.７−４.２分の０％−１００％Ｂ、４.２−４.６分の１００％Ｂ、４.６−４.８分の０％Ｂを３ｍｌ／分の流速を用いて溶出して行われた。保持時間（Ｒｔ）は分で示される。マススペクトル（ＭＳ）は、エレクトロスプレーポジティブ［ＭＨ＋およびＭ（ＮＨ４）＋分子イオンを得るのにＥＳ＋ｖｅ］モードまたはエレクトロスプレーネガティブ［（Ｍ−Ｈ）−分子イオンを得るのにＥＳ−ｖｅ］モードを用いてＷａｔｅｒｓ  ＺＱ  ２０００マススペクトロメーターに記録された。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、外部標体としてテトラメチルシランを用い、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ４００ＭＨｚを利用して記録された。
【００４３】
シリカカートリッジを用いる精製は、Presearchより供給されるＲｅｄｉｓｅｐ（登録商標）カートリッジでのＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）ＣｏｍｐａｎｉｏｎＴＭを用いて行われるクロマトグラフィーをいう。疎水性フリットはWhatmanより販売されている濾過チューブをいう。ＳＰＥ（固相抽出法）はInternational Sorbent Technology Ltdより販売されているカートリッジの使用をいう。ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）はシリカゲル６０Ｆ２５４でコーティングされたMerckより販売されているＴＬＣプレートの使用をいう。
【００４４】
中間体１（方法Ａ）
１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド
塩化ｎ−ブチルマグネシウムのテトラヒドロフラン（３.０５ｍｌ）中２.０Ｍ溶液を窒素下でトルエン（２０ｍｌ）に加え、−１０℃に冷却した。これに、ｎ−ブチルリチウムのヘキサン（７.６３ｍｌ）中１.６Ｍ溶液を添加し、１時間後に該反応混合物を−３０℃に冷却した。これに、５−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−インダゾール１（２.３５ｇ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中溶液を添加し、その反応混合物を−１０℃に加温した。１時間後、ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）を添加し、該反応混合物を−１０℃で１時間攪拌した。該反応物を２Ｎ塩酸（２０ｍｌ）を用いてクエンチし、該反応物を室温にまで加温させた。３０分後、該反応混合物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で塩基性にし、ついで酢酸エチル（２ｘ８０ｍｌ）を用いて抽出した。有機相を炭酸水素ナトリウム溶液（２ｘ１００ｍｌ）で、ついで水中１０％塩化リチウム（２ｘ１００ｍｌ）で、つづいてブラインで洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。残渣をシリカRedisep（登録商標）カートリッジ（１２０ｇ）に充填し、シクロヘキサン中１０−３０％酢酸エチルで溶出した。必要とされるフラクションを合し、真空下で蒸発させ、１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（１.４３ｇ、８０％）を白色固体として得た。
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２.２分（勾配１）；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６１（勾配１）
【００４５】
中間体１（方法Ｂ）
１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド
【化１０】
2008503535.tif 000012
【００４６】
１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニトリル２（７ｇ）の無水トルエン（３００ｍｌ）中溶液に、窒素下、−７０℃にて、ＤＩＢＡＬのトルエン（５９.４ｍｌ）中１.５Ｍ溶液を約２０分間にわたって滴下した。該反応混合物を−６０℃に加温し、その温度で４時間攪拌し、冷却浴を取り外し、ついで酢酸（３０ｍｌ）を滴下することでクエンチさせた（気体発生に注意）。水（２４０ｍｌ）を添加し、該混合物を３０分間激しく攪拌し、ついで酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出した。有機相を水（１００ｍｌ）で、ついでブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（６.８ｇ、９５％）を淡黄色固体として得た。それは上記で得られた５−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−インダゾールの特性とあらゆる点で一致するものであった。
【００４７】
中間体２
【化１１】
2008503535.tif 000013
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−Ｎ−｛２−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝アセトアミド
【００４８】
１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（中間体１）（１.６６ｇ）およびＤ−アロイソロイシン酸メチル塩酸塩（１.８８ｇ）を２,２,２−トリフルオロエタノール（３０ｍｌ）およびメタノール（３０ｍｌ）に溶かした。これに、トリエチルアミン（１.４４ｍｌ）を加え、該反応混合物をＮ２下、室温で３.５時間攪拌した。（２Ｒ）−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル（｛［（１,１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝アミノ）エタン酸（３.０１ｇ）および２−［（フェニルメチル）オキシ］フェニルイソシアニド（２.１６ｇ）を該反応混合物に添加し、該溶液を室温で３日間放置した。溶媒を真空下で除去した。残渣をジクロロメタンに溶かし、真空下で蒸発させた。残渣をジオキサン中４Ｎ塩化水素（２０ｍｌ）に溶かし、該反応混合物を１時間攪拌した。溶媒を真空下で除去し、メタノールと一緒に蒸発させた（ｘ３）。残渣をメタノール（７０ｍｌ）に溶かした。フラスコをドライアイス上に置いたまま、この溶液に、トリエチルアミン（６ｍｌ）を添加した。反応混合物を室温で２０時間放置した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をメタノール（ｘ１）およびジクロロメタン（ｘ１）から濃縮した。残渣を酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム水溶液の間に分離させた。有機相を炭酸水素ナトリウム水溶液、水、ブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去し、残渣をシリカカートリッジ（１２０ｇ）に充填した。これをシクロヘキサン中３０−７０％酢酸エチルで溶出した。必要とされるフラクションを合し、真空下で蒸発させ、２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−Ｎ−｛２−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝アセトアミド（４.１５ｇ、６２％）を黄色固体として得た。
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝３.６２、３.６６分（勾配１）；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５６。
【００４９】
中間体３（方法Ａ）
【化１２】
2008503535.tif 000014
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１− ピペラジニル｝−Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）アセトアミド
【００５０】
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１− ピペラジニル｝−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−Ｎ−｛２−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝アセトアミド（中間体２）（０.２０ｇ）をエタノール（２０ｍｌ）に溶かし、パラジウム／チャコール（１０重量％Ｐｄ、５０ｍｇ）上で２０時間水素添加した。濾過で触媒を除去し、エタノール／ジクロロメタン（１：１  ｖ／ｖ）で洗浄した。合した洗浄液および濾液を真空下で蒸発させて２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）アセトアミド（０.１９ｇ、１００％）を白色固体として得た。
【００５１】
中間体３（方法Ａ）
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１− ピペラジニル｝−Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）アセトアミド
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−Ｎ−｛２−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝アセトアミド（３.５ｇ）をエタノール（２００ｍｌ）に溶かし、パラジウム／チャコール（１０重量％Ｐｄ、３５０ｍｇ）上で５時間水素添加した。濾過で触媒を除去して洗浄し、その濾液を真空下で濃縮した。この残渣をRedisep（登録商標）シリカカラム（１２０ｇ）上でシクロヘキサン中５０−９０％酢酸エチルで溶出して精製し、２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）アセトアミド（１.５４ｇ）を白色固体として得た。
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝３.３分（勾配１）；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５６６。
【００５２】
中間体３（方法Ｂ）
【化１３】
2008503535.tif 000015
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１− ピペラジニル｝−Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）アセトアミド
【００５３】
Ｎ−［（２Ｒ）−２−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−２−（｛［（フェニルメチル）オキシ］−カルボニル｝アミノ）アセチル］−Ｎ−［１−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−オキソ−２−（｛２−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝アミノ）エチル］−Ｄ−アロイソロイシン酸メチル（中間体４）（２２.６ｇ、２７.５ミリモル）をエタノール（７５０ｍＬ）および酢酸（７０ｍＬ）に溶かし、該混合物を室温で１気圧のＨ２下、炭素上１０％パラジウム（デグサ型）（水と１：１（ｗ：ｗ）で湿った状態の７.７５ｇ）上で３.５時間水素添加した。該反応混合物を濾過し、ついで減圧下で蒸発させ、残渣をジクロロメタン（４００ｍｌ）の間に分配させ、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（４００ｍｌ、ＣＯ２に注意すること）で処理した。有機相を疎水性フリットで分離し、減圧下で蒸発させて標記化合物を一対のジアステレオマー（１５ｇ）として得た。
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝３.２７分（勾配２）；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５６６
【００５４】
中間体４
【化１４】
2008503535.tif 000016
Ｎ−［（２Ｒ）−２−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−２−（｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝アミノ）アセチル］−Ｎ−［１−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−２−オキソ−２−（｛２−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝アミノ）エチル］−Ｄ−アロイソロイシン酸メチル
【００５５】
１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボアルデヒド（５.７８ｇ、３４ミリモル））および（Ｄ）−アロイソロイシンメチルエステル塩酸塩（６.１７ｇ、３４ミリモル）の２,２,２−トリフルオロエタノール（１００ｍＬ）中混合物をトリエチルアミン（４.７４ｍＬ、３４ミリモル）で処理し、該混合物を窒素下、室温で１８時間放置した。（２Ｒ）−［（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）エタン酸（１１.０５ｇ、３４ミリモル）および２−ベンジルオキシフェニルイソニトリル（７.５２ｇ、３６ミリモル）を添加し、該混合物を窒素下、室温で３日間攪拌した。混合物を減圧下で濃縮し、ついで酢酸エチル（７５０ｍＬ）と水（５００ｍＬ）の間に分配した。水相を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で逆抽出し、合した有機抽出液を飽和塩化ナトリウム（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて粗生成物（２９.６ｇ）を得た。これをRedisep（登録商標）シリカカラム（３３０ｇ）上でシクロヘキサン中１０−５０％酢酸エチルで溶出して精製し、２２.６ｇの標記化合物を一対のジアステレオマーとして得た。
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝４.１３分（勾配２）；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８２２.６
【００５６】
実施例１
【化１５】
2008503535.tif 000017
（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド
【００５７】
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）アセトアミド（中間体３）（０.５ｇ）および１,１'−カルボニルジイミダゾール（０.２３ｇ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶かし、Ｎ２下、室温で３時間放置した。メチルアミンのテトラヒドロフラン（２.２ｍｌ）中２.０Ｍ溶液を添加し、該反応混合物を３時間放置した。該反応混合物を真空下で蒸発させた。残渣をシリカカートリッジ（３５ｇ）に充填し、酢酸エチルから酢酸エチル中１０％メタノールまでの勾配の溶出液で溶出した。必要とされるフラクションを真空下で蒸発させ、その残渣をさらにSCX SPEカートリッジ（５ｇ）を用いて精製し、メタノールで洗浄し、そのメタノール液を濃縮して（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミドを白色固体として得た。
【００５８】
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２.９分（勾配１）；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８８。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７.９９（ｓ，１Ｈ）、７.７９（ｓ，１Ｈ）、７.４７（ｄｄ，１Ｈ）、７.４２（ｄ，１Ｈ）、７.２５−７.１２（ｍ，４Ｈ）、６.５５（ｄ，１Ｈ）、６.１２（ｑ，１Ｈ）、５.０４（ｓ，１Ｈ）、４.１０（ｓ，３Ｈ）、４.０６（ｄｄ，１Ｈ）、３.９６（ｄ，１Ｈ）、３.２２−３.０５（ｍ，３Ｈ）、２.９７（ｍ，１Ｈ）、２.８５（ｄ，３Ｈ）、２.７６（ｄｄ，１Ｈ）、１.９９（ｍ，１Ｈ）、１.７９（ｍ，１Ｈ）、１.１５（ｍ，１Ｈ）、１.０８（ｄ，３Ｈ）、０.９３（ｔ，３Ｈ）。
【００５９】
実施例１
２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１− ピペラジニル｝−Ｎ−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド
２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）アセトアミド（１５ｇ）および１,１'−カルボニルジイミダゾール（６.８８ｇ）を窒素下で乾燥ジクロロメタン（３００ｍＬ）に溶かし、室温で４時間攪拌した。メチルアミンのテトラヒドロフラン（６６.３ｍＬ）中２.０Ｍ溶液を１０分間にわたって加え、ついで該反応混合物を３０分間攪拌し、該反応混合物を１８時間放置した。その反応混合物をジクロロメタン（２００ｍＬ）で希釈し、０.１Ｍ  ＨＣｌ（４００ｍＬ）で洗浄した。有機抽出液を疎水性フリットで分離し、水性抽出液をさらにジクロロメタン（２００ｍｌ）で洗浄した。合した有機抽出液を真空下で濃縮し、残渣をredisep（登録商標）シリカカートリッジ（３３９ｇ）に充填し、酢酸エチルから酢酸エチル１０％メタノールまでの勾配の溶出液で溶出した。必要とされるフラクションを真空下で蒸発させ、残渣をさらに、カートリッジをメタノールでコンディショニングし、ついで負荷を行い、化合物をメタノールで溶出する、SCX-2 SPEカートリッジ（５０ｇ）を用いて精製した。関連するフラクションを濃縮して、これにより（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド（４.１ｇ、３２％）を白色固体として得た。
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝２.９分（勾配１）；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８８。
【００６０】
実施例２
【化１６】
2008503535.tif 000018
（２Ｒ）−２−｛（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５−ジオキソ−１−ピペラジニル｝−Ｎ,Ｎ−ジメチル−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）エタンアミド
【００６１】
標記化合物を中間体３３およびジメチルアミンより同様にして調製した。
ＨＰＬＣ  Ｒｔ＝３.０分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５０２
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８.０２（ｓ，１Ｈ）、７.８２（ｓ，１Ｈ）、７.５３−７.４４（ｍ，２Ｈ）、７.３０−７.１５（ｍ，４Ｈ）、６.４５（ｓ，１Ｈ）、６.２０（ｄ，１Ｈ）、４.１６−４.１０（ｍ，５Ｈ）、３.１９−３.１１（ｍ，３Ｈ）、２.９９−２.８５（ｍ，１Ｈ）、２.９６（ｓ，３Ｈ）、２.８７（ｓ，３Ｈ）、２.７５（ｄｄ，１Ｈ）、１.５０（ｍ，１Ｈ）、１.０５（ｍ，１Ｈ）、０.７８（ｍ，１Ｈ）、０.６０（ｔ，３Ｈ）、０.３９（ｄ，３Ｈ）。
【００６２】
参考文献：
１：V. Auwers；Lange；Chem.Ber.；55；1922；1141、1157
２：Halley, Frank；Sava, Xavier.  Synthesis of 5-cyanoindazole and 1-aryl-5-cyanoindazoles. Synthetic Communications （1997）、27（7）、1199-1207.
【００６３】
生物学的活性
本発明の実施例１および２を以下に記載のあらゆるアッセイにて試験した。各化合物の結果を以下の表１に示す。該表はまた比較のための２種の化合物ＸおよびＹを包含する。
【００６４】
アッセイ１
ＦＬＩＰＲを用いるヒトオキシトシン−１受容体でのアンタゴニストアフィニティの測定
細胞培養
組換えヒトオキシトシン１（ｈＯＴ）受容体を安定して発現する接着チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（Gibco／Invitrogen、カタログ番号０１０００−１４７）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Gibco／Invitrogen、カタログ番号２５０３０−０２４）および０．２ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８（Gibco／Invitrogen、カタログ番号１０１３１−０２７）を補足したＤＭＥＭ：Ｆ１２培地（Sigma、カタログ番号Ｄ６４２１）の培養液に維持した。細胞を、９５％：５％の空気：ＣＯ２の下、３７℃で単層として増殖させ、TrypLE（登録商標）Express（Gibco／Invitrogen、カタログ番号１２６０４−０１３）を用いて３−４日毎に継代させた。
【００６５】
ＦＬＩＰＲＴＭを用いる［Ｃａ２＋］ｉの測定
ＣＨＯ−ｈＯＴ細胞を、ウェル当たり１００００細胞の密度で上記した培地中のブラックウォールクレアベースの３８４−ウェルのプレート（Ｎｕｎｃ）に播種し、（９５％：５％の空気：ＣＯ２、３７℃）を一夜維持した。培地を除去した後、細胞を３７℃で１時間、プロベネシド（０．７ｍｇ／ｍｌ）、細胞質カルシウム指示薬であるＦｌｕｏ−４（４μＭ；Teflabs、USA）および消光剤であるブリリアントブラック（Brilliant Black）（２５０μＭ；Molecular Devices、UK）含有のTyroad培地（NaCl、145mM；KCl、2.5mM；HEPES、10mM；Glucose、10mM；MgCl2、1.2mM；CaCl2、1.5mM）にてインキュベートした。ついで、細胞を３７℃でさらに３０分間、バッファーだけか、ＯＴアンタゴニスト含有のバッファーと一緒にインキュベートし、ＦＬＩＰＲＴＭ（Molecular Devices、UK）に置き、最大下濃度のオキシトシン（ＥＣ８０）を添加する前後での細胞蛍光（λｅｘ＝４８８ｎｍ、λＥＭ＝５４０ｎｍ）をモニター観察した。
【００６６】
データ解析
ＦＬＩＰＲを用いる機能応答をActivity Base Version5.0.10を用いて解析した。
【００６７】
アッセイ２
オキシトシン結合アッセイ
調製
ヒト組換えオキシトシン受容体を発現するＣＨＯ細胞より膜を調製した。該膜調製物を使用まで−７０℃でアリコートにて凍結させた。
膜調製物は使用されるまで−７０℃でアリコートにて凍結された。
【００６８】
結合アッセイプロトコル
１μＭの標識されていないオキシトシンの存在しない（全結合）または存在する（非特異結合）状態にて約２．４ｎＭの［３Ｈ］−オキシトシンと、増加する濃度の実施例１および２の化合物あるいは比較化合物とを含有する２００μｌのアッセイバッファー（５０ｍＭ  トリス、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および０.１％のウシ血清アルブミン、ｐＨ７.５）中で膜（約５０μｇ）をインキュベートした。インキュベーションを室温で６０分間行った。反応を３ｍｌの氷冷バッファーで停止させ、０．３％ポリエチレンイミンに予浸させた、Whatman GF／Cフィルターペーパーを介して濾過した。該フィルターをBrandel細胞ハーベスターを用いて３ｍｌのバッファーで４回洗浄した。フィルターを３ｍｌのReady Safeシンチレーション流体（Beckman）中で計数した。
特異結合は全結合の約９０％を示した。
【００６９】
データ解析
非線形回帰分析（GraphPad）を用いて競合結合実験よりＩＣ５０値を測定し、ChengおよびPrusoff、１９７４の方法を用いてＫｉに変換した。データは平均値で報告されている。
【００７０】
アッセイ３
ミクロソームにおけるインビトロ固有クリアランスの測定
インキュベーションに用いるためのＮＡＤＰ再生バッファーをアッセイの日に新たに調製した。それは、２％炭酸水素ナトリウム１ｍＬに付き、７．８ｍｇのグルコース−６−ホスフェート（一ナトリウム塩）、１．７ｍｇのＮＡＤＰおよび６ユニットのグルコース−６−ホスフェート・デヒドロゲナーゼを含有した。ミクロソーム（ヒト、女性；カニクイザル、雌；イヌ、雌；ラット、雌）をｐＨ７．４のリン酸バッファー中にて調製し、それは１ｍＬ当たり０.６２５ｍｇの蛋白を含有した。特記しない限り、その後のすべての工程はTecan Genesis 150/8 RSPで行われた。１.２５ｍＭの該化合物のストック溶液をアセトニトリル／水（１：１）中に調製した。２５μｌの１.２５ｍＭのストック溶液を６００μｌのアセトニトリル／水（１：１）に加え、５０μＭの溶液を得た。その５０μＭの溶液（１０μＬ）をマイクロプレート（Porvair、９６個の深底ウェル、四角型）にある各種のミクロソーム（７９０μＬ）に添加した。
【００７１】
該化合物を含有する４００μＬのミクロソーム溶液をマイクロプレート（Porvair、９６個の深底ウェル、丸型）に移し、インキュベーションを開始する前に３７℃で５分間予め加温した。インキュベーションはすべて１００μＬのＮＡＤＰ再生システムを予め加温したミクロソームに添加することで開始された。Techne加熱ブロックにて該混合物を３７℃でインキュベートした。インキュベーションを０、３、６、１２および３０分行った後、２０μＬのアリコートを取り、内部標体含有の１００μＬのアセトニトリルに添加した。
【００７２】
代謝率を測定するために、インキュベーションを０．５μＭの化合物の濃度および０．５ｍｇ／ｍＬの蛋白の濃度で行った。該インキュベーションにおける溶媒の濃度は０．５％であった。
試験化合物の濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳで測定した；結果は分析物：内部標体のピーク面積割合として報告された。
喪失速度は指数関数的減衰（single exponential decay）をエクセルを用いて濃度−時間曲線に適合させることで算定され、固有クリアランスは以下の式を用いて算定された：
【数１】
2008503535.tif 000019
【００７３】
結果
本発明の実施例１および２およびまた２種の比較化合物［比較化合物Ｘ＝（２Ｒ）−２−［（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−イソブチル−２,５−ジオキソピペラジン−１−イル］−２−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルエタンアミド（ＷＯ  ０３／０５３４４３の実施例１７２）および比較化合物Ｙ＝（２Ｒ）−２−（２,４−ジフルオロフェニル）−２−［（３Ｒ,６Ｒ）−３−（２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル）−６−イソブチル−２,５−ジオキソピペラジン−１−イル］−Ｎ,Ｎ−ジメチルエタンアミド（ＷＯ  ０３/０５３４４３の実施例８）］を上記アッセイにて試験した。ただし、比較化合物Ｘはアッセイ１および２にて試験しなかった。
【００７４】
しかし、比較化合物Ｙはアッセイ１および２にて試験され、本発明の化合物１および２が示す効能と同様の効能を示した。実際、これらの化合物は、各々、８．５と８．７の間のｆｐＫｉ（アッセイ１）および９．９と１０．４の間のｐＫｉ（アッセイ２）を示した。
しかし、本発明の化合物は、比較化合物ＸおよびＹの両方と比較した場合、ミクロソームにおけるインビトロ固有クリアランス（アッセイ３）にて意外な改善を示した。
【００７５】
【表１】
2008503535.tif 000020
【００７６】
表１の符号
＋  １−８ｍｌ／分／ｍｇに相当する
＋＋  ９−１５ｍｌ／分／ｍｇに相当する
＋＋＋  １６−２０ｍｌ／分／ｍｇに相当する
＋＋＋＋  ２１−３０ｍｌ／分／ｍｇに相当する
＋＋＋＋＋  ＞３１ｍｌ／分／ｍｇに相当する
【国際調査報告】
2008503535.tif 000027
2008503535.tif 000028
2008503535.tif 000029