(57)【要約】アルキニルピロロ[2,3-d]ピリミジンおよび関連類似体が、種々のHSP90介在疾患の治療および予防に使用する熱ショックタンパク質90(HSP90)阻害剤としての有用性があることを説明し、証明する。そのような化合物の合成方法および使用も説明し、クレームする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iで示される化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ:
2008534609.tif 000119
I
［式中、
R0は、水素、ハロゲン、低級アルキル、-CN、-SR8、-OR8、および-NHR8からなる群から選ばれる；
R1は、ハロゲン、-OR11、-SR11、および低級アルキルからなる群から選ばれる；
R2は、-NHR8である；
R3は、水素、-CN、-C(O)OH、-OR11、-SR11、-C(O)R9、-NR8R10、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、低級アルキルシリル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれる；
ここで、該アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル基は、モノ−、ビ−、またはトリ−サイクリックである；
R8およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R3上の所望による置換基は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、-CN、-C(O)OH、-NO2,-SR8、-OR8、-C(O)R9、-NR8R8、低級アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、低級ヘテロサイクリル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、アリールヘテロアリールアミノ、オキソ、パーハロアルキル、パーハロアルコキシ、パーハロアシル、グアニジニル、ピリジニル、チオフェニル、フラニル、インドリル、インダゾリル、ホスホニル、ホスファチジル、ホスホルアミジル、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミジル、カルバミル、ウリル、チオウリル、およびチオアミジルからなる群から選ばれる；
ここで、R8およびR8は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R4は、所望により置換された低級アルキレン、-C(R12)2-、-C(O)-、-C(S)-、-S(O)-、および-SO2-からなる群から選ばれる；
R5は、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリルからなる群から選ばれる；
ここで、該アリール基は、2〜5個の置換基で置換されている；
該ヘテロアリール基は、2〜5個の置換基で置換されている；
該アリサイクリル基は、3〜5個の置換基で置換されている；
該ヘテロサイクリル基は、3〜5個の置換基で置換されている；
R5上の置換基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、-CN、-C(O)OH、-NO2、-SR8、-OR8、-C(O)R9、-NR8R10、低級アリール、低級ヘテロアリール、低級アリサイクリル、低級ヘテロサイクリル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、オキソ、パーハロアルキル、パーハロアルコキシ、パーハロアシル、グアニジニル、ピリジニル、チオフェニル、フラニル、インドリル、インダゾリル、ホスホニル、ホスファチジル、ホスホルアミジル、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミジル、カルバミル、ウリル、チオウリル、およびチオアミジルからなる群から選ばれる；
ここで、R8およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R8は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロアルケニル、低級ヘテロアルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、および-C(O)R9からなる群から選ばれる；
R9は、H、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、-NR10R10、および-OR11からなる群から選ばれる；
ここで、R10およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；
ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R10は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロアルケニル、低級ヘテロアルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、および-C(O)R11からなる群から選ばれる；
R11は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、および低級ヘテロアリールからなる群から選ばれる；
R12は、水素、および低級アルキルからなる群から選ばれる。］。
【請求項２】
R0が水素、ハロゲン、または-CNである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、エステル、互変異性体、鏡像異性体、その医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項３】
R1がハロゲンである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項４】
R2が-NH2または-NH-C(O)R9である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項５】
R3が、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、ヘテロサイクリル、-CN、および-C(O)R9(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項６】
R3が、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、-CN、および-C(O)R9(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項７】
R3が水素である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項８】
R3が所望により置換されたフェニルまたはピリジニルである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項９】
R3が-(CH2)nOH(ここで、n=1〜3である)である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１０】
R3が-(CH2)mC(R12)2(CH2)nOH(ここで、m=0〜2であり、n=1〜2である)であり；
各R12が、独立して水素または低級アルキルである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１１】
R3が-(CH2)nNR8R8(ここで、n=1〜3である)であり；
各R8が独立して水素または低級アルキルであるか、または
NR8R8が所望により置換された
【化１】
2008534609.tif 000120
である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１２】
R3が-(CH2)nC(O)NR10R10(ここで、n=1〜3である)であり；
各R10が、独立して水素または-C(O)R11であるか、または
NR10R10が所望により置換された
2008534609.tif 000121
である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１３】
R3が、-(CH2)nC(O)NR10R10(ここで、n=1〜3である)であり；
各R10が、独立して水素または-C(O)R11である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１４】
R3が-(CH2)nC(O)R9(ここで、n=1〜3である)である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１５】
R3が所望により置換された低級アルキルであり、該低級アルキル上の置換基は、-SR8、-OR8、-C(O)R9、および-NR8R10からなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１６】
R3が置換低級アルキルである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１７】
R3が置換低級アルキルであり、該低級アルキル上の置換基がホスホニルまたはホスファチジルである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１８】
R4が-CH2-である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１９】
R5の各該アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、またはヘテロサイクリル基がモノサイクリックまたはビサイクリックである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２０】
R5が置換アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリール上の置換基がハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、チオアルキル、アミノ、およびジアルキルアミノからなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２１】
R5が置換アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリール上の置換基がハロゲン、低級アルキル、または低級アルコキシからなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２２】
R0が水素、ハロゲン、-SH、-OH、または-CNであり；
R1がハロゲンであり；
R2が-NH2または-NH-C(O)R9である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２３】
R1がクロロまたはブロモであり；
R2が-NH2または-NH-C(O)R9であり；
R3が低級アルキル、低級アルケニル、または低級アルキニル、低級パーハロアルキル、低級アリール、または低級ヘテロアリール(すべて所望により置換されている)であり、ここで、R3上の所望による置換基は、水素、-OR8、-NR8R8、および-C(O)R9からなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体 医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２４】
R0が、水素、ハロゲン、または-CNであり、
R2が、-NH2、または-NH-C(O)R9であり、
R4が-CH2-である、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２５】
R0が、水素、ハロゲン、-SH、-OH、または-CNであり；
R1がハロゲンであり；
R3が、水素、-OR11、-SR11、-NR8R10、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、低級アリール、または低級ヘテロアリールであり；
R4が-CH2-であり；
R5が、所望により置換されたアリール、またはヘテロアリールであり、ここで、各該アリール、およびヘテロアリールはモノサイクリックまたはビサイクリックである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２６】
R0が、水素、ハロゲン、または-CNであり；
R1がハロゲンであり；
R3が、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれ；
R4が-CHR12-であり；
R5が、所望により置換されたアリール、またはヘテロアリールである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２７】
R0が水素であり；
R1がハロゲンであり；
R2が-NH2であり；
R3は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれ；
R4が-CH2-であり；
R5が、所望により置換されたアリール、またはヘテロアリールである、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２８】
R1が、クロロ、またはブロモであり；
R2が、-NH2であり；
R5が少なくとも3個の置換基を有するフェニルである、請求項25記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２９】
R1が、クロロ、またはブロモであり；
R2が-NH2であり；
R5が、少なくとも2個の置換基を有するピリジルである、請求項25記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項３０】
R1が、クロロ、またはブロモであり；
R2が-NH2であり；
R5が、少なくとも2個の置換基を有する1-オキシ-ピリジル(N-オキシ-ピリジル)である、請求項25記載の化合物またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項３１】
【化２】
2008534609.tif 000122
【化３】
2008534609.tif 000123
【化４】
2008534609.tif 000124
【化５】
2008534609.tif 000125
【化６】
2008534609.tif 000126
【化７】
2008534609.tif 000127
【化８】
2008534609.tif 000128
からなる群から選ばれる、化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項３２】
請求項1記載の化合物、多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ、および1またはそれ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３３】
HSP90介在疾患を有する個体の治療方法であって、医薬的有効量の請求項1記載の化合物、多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグを含む医薬組成物を該個体に投与することを含む方法。
【請求項３４】
HSP90介在疾患が、炎症性疾患、感染症、自己免疫疾患、卒中、虚血、心臓疾患、神経疾患、繊維形成疾患、増殖性疾患、腫瘍、白血病、新生物、癌、カルチノーマ、代謝疾患、および悪性疾患からなる群から選ばれる、請求項33記載の方法。
【請求項３５】
繊維形成疾患が、さらに強皮症、多発筋炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、および肺線維症からなる群から選ばれる請求項34記載の方法。
【請求項３６】
さらに、細胞毒性剤、抗血管新生剤、および抗新生物剤からなる群から選ばれる、少なくとも1の治療剤を投与することを含む請求項32記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも1の抗新生物剤が、アルキル化剤、抗代謝薬、エピドフィロトキシン、抗血管新生酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、プロカルバジン、ミトキサントロン、白金配位錯体、生物反応修飾物質、および成長阻害剤、ホルモン/非ホルモン療法剤、および造血成長因子からなる群から選ばれる、請求項36記載の方法。
【請求項３８】
医薬の製造における、請求項1記載の化合物、多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグの使用。
【請求項３９】
HSP90依存性疾患および病状の治療的および予防的処置のための医薬の製造における請求項1記載の化合物、多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ使用。
【請求項４０】
【化９】
2008534609.tif 000129
からなる群から選ばれる化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項４１】
2008534609.tif 000130
2008534609.tif 000131
からなる群から選ばれる、請求項1記載の化合物、またはその多形体、溶媒和物、互変異性体、鏡像異性体、医薬的に許容される塩またはプロドラッグ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(相互参照)
本出願は、米国仮出願No. 60/666,899(2005年3月30日出願)の利益を主張する(この内容は本明細書の一部を構成する)。
【０００２】
本発明は、一般的には、アルキニルピロロピリミジン、ならびにその広範な有用性(例えば熱ショックタンパク質90(HSP90)を阻害し、HSP90介在疾患を治療または予防すること)に関する。
【背景技術】
【０００３】
HSP90は、情報伝達、細胞周期調節、および転写制御に関与する重要なタンパク質を含む広範なタンパク質のホールディング、活性化、および組み立てに関与する遍在性シャペロンタンパク質である。研究者らは、HSP90シャペロンタンパク質が、重要な情報伝達タンパク質、例えばステロイドホルモンレセプターおよびプロテインキナーゼ(例えば、Raf-1、EGFR、v-Srcファミリーキナーゼ、Cdk4、およびErbB-2を含む)と結合することを報告した(Buchner J. TIBS 1999、24、136-141； Stepanova、L. et al. Genes Dev. 1996、10、1491-502； Dai、K. et al. J. Biol. Chem. 1996、271、22030-4)。研究は、さらに、ある種のコシャペロン(co-chaperone)、例えば、HSP70、p60/Hop/Sti1、Hip、Bag1、HSP40/Hdj2/Hsj1、イムノフィリン、p23、およびp50がその機能においてHSP90を助けるかもしれないことを示唆する(例えば、Caplan、A. Trends in Cell Biol. 1999、9、262-68参照)。
【０００４】
HSP90はそのN末端に結合ポケットを有する。このポケットは、高度に保存され、DNAギナーゼのATP-結合部位と低い相同性を有する(Stebbins、C. et al.、上記； Grenert、J.P. et al. J. Biol. Chem. 1997、272、23843-50)。さらに、ATPおよびADPは、ともにこのポケットと低親和性に結合し、弱いATPアーゼ活性を有することを示した(Proromou、C. et al. Cell 1997、90、65-75； Panaretou、B. et al. EMBO J. 1998、17、4829-36)。In vitroおよびin vivo試験において、このN末端ポケットのアンサマイシンおよび他のHSP90阻害剤による占有はHSP90機能を変化させ、タンパク質ホールディングを阻害することが示された。アンサマイシンおよび他のHSP90阻害剤は高濃度でタンパク質基質のHSP90に対する結合を妨げることが示された(Scheibel、T.H. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999、96、1297-302； Schulte、T. W. et al. J. Biol. Chem. 1995、270、24585-8； Whitesell、L.、et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994、91、8324-8328)。HSP90阻害剤、例えばアンサマイシンは、シャペロン関連タンパク質基質のATP依存性放出を阻害することも示された(Schneider、C.L. et al. Proc. Natl. Acad. Sci.,USA 1996、93、14536-41； Sepp-Lorenzino et al. J. Biol. Chem. 1995、270、16580-16587)。いずれの場合でも、該基質はプロテアソーム中のユビキチン依存性プロセスにより分解する(Schneider、C. L.、上記； Sepp-Lorenzino、L.、et al. J. Biol. Chem. 1995、270、16580-16587； Whitesell、L. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994、91、8324-8328)。
【０００５】
HSP90基質の不安定化は、腫瘍および非形質転換細胞にも生じ、情報伝達調節因子のサブセット、例えば、Raf(Schulte、T. W. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997、239、655-9； Schulte、T. W.、et al. J. Biol. Chem. 1995、270、24585-8)、核ステロイドレセプター(Segnitz、B.； U. Gehring J. Biol. Chem. 1997、272、18694-18701； Smith、D. F. et al. Mol. Cell. Biol. 1995、15、6804-12)、v-Src(Whitesell、L.、et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994、91、8324-8328)、およびある種の貫膜チロシンキナーゼ(Sepp-Lorenzino、L. et al. J. Biol.Chem. 1995、270、16580-16587)、例えばEGFレセプター(EGFR)、およびHer2/Neu(Hartmann、F.、et al. Int. J. Cancer 1997、70、221-9； Miller、P. et al. Cancer Res. 1994、54、2724-2730； Mimnaugh、E. G.、et al. J. Biol. Chem. 1996、271、22796-801； Schnur、R. et al. J. Med. Chem. 1995、38、3806-3812)、CDK4、および突然変異体p53に特に有効であることが示された。Erlichman et al. Proc. AACR 2001、42、abstract 4474。このタンパク質のHSP90 阻害剤誘導損失は、ある種の制御経路の選択的破壊をもたらし、細胞周期の特定の期における成長停止(Muise-Heimericks、R. C. et al. J. Biol. Chem. 1998、273、29864-72)、およびそのように処置した細胞のアポトーシスおよび/または細胞分化をもたらす(Vasilevskaya、A. et al. Cancer Res.、1999、59、3935-40)。すなわち、HSP90阻害剤は、多くのタイプの癌および増殖性疾患の治療および/または予防に大いに有望であり、伝統的抗生物質としても有望である。
【０００６】
抗癌および抗腫瘍活性に加え、HSP90阻害剤は、抗炎症剤、抗感染症薬、自己免疫治療剤；卒中、虚血、多発性硬化症、心臓疾患、中枢神経系関連疾患の治療剤、神経再生の促進に有用な薬としての使用を含む、種々の他の使用も関与していた(例えば、Rosen et al. WO 02/09696(PCT/US01/23640)； Degranco et al. WO 99/51223(PCT/US99/07242)； Gold、米国特許6,210,974 B1； DeFranco et al.、米国特許6,174,875参照)。上記と幾分重複するが、限定されるものではないが、強皮症、多発筋炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、および肺線維症を含む繊維形成疾患もHSP90阻害剤で治療可能でありうることが文献に報告されている。Strehlow、WO 02/02123(PCT/US01/20578)。さらにHSP90調節、モジュレーター(調節物質)、その使用が出願No. PCT/US03/04283、PCT/US02/35938、PCT/US02/16287、PCT/US02/06518、PCT/US98/09805、PCT/US00/09512、PCT/US01/09512、PCT/US01/23640、PCT/US01/46303、PCT/US01/46304、PCT/US02/06518、PCT/US02/29715、PCT/US02/35069、PCT/US02/35938、PCT/US02/39993、60/293,246、60/371,668、60/335,391、60/128,593、60/337,919、60/340,762、60/359,484、および60/331,893に報告されている。
【０００７】
最近、HSP90阻害作用を示すピロロピリミジンを含むプリン誘導体が報告されている(例えば、PCT/US02/35069；PCT/US02/36075、米国特許出願No.10/945,851およびPCT/US04/31248)。しかしながら、ヒトの臨床試験を進めるのに必要な厳しい生物学的および医薬的基準を満たすさらなる新規の強力なピロロピリミジンHSP90阻害剤が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
(発明の要約)
本発明は、アルキニルピロロ[2,3-d]ピリミジン、および、例えば、HSP90を阻害し、HSP90依存性疾患を治療することにより広い有用性を示す関連化合物を指向する。これら化合物は、以前の特許出願に開示の親ピロロピリミジンとは異なり、環炭素の第5位(C-5位)がアルキン、例えばアセチレンで置換されており、親化合物より改善されたHSP90阻害活性を有する。
【０００９】
ある局面において、本発明は、下記式Iで示されるアルキニルピロロ[2,3-d]ピリミジン化合物を含む：
2008534609.tif 000002
(I)
［式中、
R0は、水素、ハロゲン、低級アルキル、-CN、-SR8、-OR8、および-NHR8からなる群から選ばれる；
R1は、ハロゲン、-OR11、-SR11、および低級アルキルからなる群から選ばれる；
R2は、-NHR8である；
R3は、水素、-CN、-C(O)OH、-OR11、-SR11、-C(O)R9、-NR8R10、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、低級アルキルシリル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれる；
ここで、該アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル基は、モノ−、ビ−、またはトリ−サイクリックである；
R8およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R3上の所望による置換基は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、-CN、-C(O)OH、-NO2,-SR8、-OR8、-C(O)R9、-NR8R8、低級アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、低級ヘテロサイクリル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、アリールヘテロアリールアミノ、オキソ、パーハロアルキル、パーハロアルコキシ、パーハロアシル、グアニジニル、ピリジニル、チオフェニル、フラニル、インドリル、インダゾリル、ホスホニル、ホスファチジル、ホスホルアミジル、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミジル、カルバミル、ウリル、チオウリル、およびチオアミジルからなる群から選ばれる；
ここで、R8およびR8は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R4は、所望により置換された低級アルキレン、-C(R12)2-、-C(O)-、-C(S)-、-S(O)-、および-SO2-からなる群から選ばれる；
R5は、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリルからなる群から選ばれる；
ここで、該アリール基は、2〜5個の置換基で置換されている；
該ヘテロアリール基は、2〜5個の置換基で置換されている；
該アリサイクリル基は、3〜5個の置換基で置換されている；
該ヘテロサイクリル基は、3〜5個の置換基で置換されている；
R5上の置換基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、-CN、-C(O)OH、-NO2、-SR8、-OR8、-C(O)R9、-NR8R10、低級アリール、低級ヘテロアリール、低級アリサイクリル、低級ヘテロサイクリル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、オキソ、パーハロアルキル、パーハロアルコキシ、パーハロアシル、グアニジニル、ピリジニル、チオフェニル、フラニル、インドリル、インダゾリル、ホスホニル、ホスファチジル、ホスホルアミジル、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミジル、カルバミル、ウリル、チオウリル、およびチオアミジルからなる群から選ばれる；
ここで、R8およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R8は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロアルケニル、低級ヘテロアルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、および-C(O)R9からなる群から選ばれる；
R9は、H、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、-NR10R10、および-OR11からなる群から選ばれる；
ここで、R10およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；
ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R10は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロアルケニル、低級ヘテロアルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、および-C(O)R11からなる群から選ばれる；
R11は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、および低級ヘテロアリールからなる群から選ばれる；
R12は、水素、および低級アルキルからなる群から選ばれる。］。
【００１０】
本発明の範囲には、必要に応じて、個々の鏡像異性体、およびジアステレオマー、ラセミ混合物、およびジアステレオマー混合物、およびその組み合わせを含む立体異性体形、ならびにこれら化合物の多形体、特定のラセメート、および立体異性体、溶媒和物、エステル、互変異性体、医薬的に許容される塩、およびプロドラッグが含まれる。
【００１１】
別の局面において、本発明は、HSP90依存性疾患および病状を治療または予防するための、本発明化合物、特に式Iの化合物、またはその多形体、溶媒和物、エステル、互変異性体、ジアステレオ異性体、鏡像異性体、その医薬的に許容される塩またはプロドラッグ、および1またはそれ以上の医薬的賦形剤を含む医薬組成物を特徴とする。
【００１２】
さらなる別の局面において、本発明は、医薬的有効量の式Iの化合物、またはその多形体、溶媒和物、エステル、互変異性体、ジアステレオマー、鏡像異性体、医薬的に許容される塩、またはプロドラッグを含む医薬組成物を投与することによりHSP90介在疾患または病状を予防または治療する方法に関する。
【００１３】
ある態様において、本発明は、炎症性疾患、感染症、自己免疫疾患、卒中、虚血、心臓疾患、神経疾患、繊維形成疾患、増殖性疾患、腫瘍、白血病、慢性リンパ性白血病、後天性免疫不全症候群、新生物、癌、カルチノーマ、代謝疾患、および悪性疾患からなる群から選ばれる疾患を有する個体の治療方法を提供する。
【００１４】
別の態様において、本発明は、繊維形成疾患、例えば、強皮症、多発筋炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、または肺線維症を有する個体の治療方法を提供する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、前記のあらゆる局面または態様に従って医薬的有効量の式Iの化合物、またはその溶媒和物、互変異性体、ジアステレオマー、鏡像異性体、医薬的に許容される塩、多形体、またはプロドラッグ、および細胞毒性剤、抗血管新生剤、および抗新生物剤の群から選ばれる少なくとも1の治療剤を投与することを含む組み合わせ療法を提供する。該抗新生物剤は、アルキル化剤、抗代謝薬、エピドフィロトキシン、抗血管新生酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、プロカルバジン、ミトキサントロン、白金配位錯体、生物反応修飾物質、および成長阻害剤、ホルモン/非ホルモン療法剤、および造血成長因子の群から選ぶことができる。
【００１６】
さらなる局面において、本発明は医薬の製造における式Iの化合物の使用に関する。
【００１７】
さらなる局面において、本発明は、HSP90依存性疾患および病状の治療的および/または予防的処置のための医薬の製造における式Iの化合物の使用に関する。
(参照による取り込み)
【００１８】
本明細書に記載のすべての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願が具体的および個々に本明細書の一部を構成することを示すのと同程度に本明細書の一部を構成する。
(図面の簡単な説明)
【００１９】
本発明の新しい特徴は添付の請求の範囲に詳細に記載する。本発明の特徴および利点のよりよい理解は、本発明の原理を利用する典型的態様を記載する以下の詳細な説明、および以下の添付の図面を参照することにより得られるであろう。
【００２０】
図1は、実施例70に記載のマウスN87胃癌異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【００２１】
図2は、実施例71に記載のマウスNCI295副腎皮質癌異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【００２２】
図3は、実施例72に記載のマウスSK-MEL-28メラノーマ異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【００２３】
図4は、実施例73に記載のマウスHT29結腸癌異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【００２４】
図5は、実施例74に記載の種々の濃度および時点における化合物2および23による治療後のN87胃癌細胞のWesternブロットタンパク質分析を表す。
(発明の詳細な説明)
【００２５】
本発明の好ましい態様を本明細書に示し記載するが、そのような態様が例示のためのみに提供されることは当業者に明らかであろう。当業者は、本発明から離れることなく多くの変動、変化、および置換をすぐに思いつくであろう。本明細書に記載の本発明の態様に対する種々の別法を本発明を実施するのに用いることができると理解すべきである。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義し、これら特許請求の範囲内の方法および構造、およびその等価物の範囲に及ぶことを意図する。
(定  義)
【００２６】
「医薬的に許容される誘導体またはプロドラッグ」は、レシピエントに投与すると本発明化合物またはその医薬的に許容される代謝物または残基を直接または間接的に提供することができる、本発明化合物のあらゆる医薬的に許容される塩、エステル、エステルの塩、または他の誘導体を意味する。特に好ましい誘導体またはプロドラッグは、そのような化合物を患者に投与したときに(例えば、経口投与した化合物が血液中により急速に吸収されるようにすることにより)本発明化合物のバイオアベイラビリティを増大させるか、または親化合物の生物学的コンパートメント(例えば脳またはリンパ系)への送達を増強するものである。
【００２７】
「医薬的に許容される塩」は、塩を形成することができる官能性、例えば、酸または塩基官能性を有するあらゆる本発明化合物について製造してよい。医薬的に許容される塩は、有機または無機の酸および塩基から誘導することができる。1またはそれ以上の塩基性官能基(例えば、アミノ、アルキルアミノ)を含む本発明化合物は、医薬的に許容される有機酸および無機酸と医薬的に許容される塩を形成することができる。これら塩は、本発明化合物の最終単離および精製中にin situで、または遊離塩基形の、精製した本発明化合物を適切な有機酸または無機酸と別個に反応させ、形成された塩を単離することにより製造することができる。適切な酸塩の例には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、ビサルフェート、ブチレート、クエン酸塩、カンホレート、カンファースルホネート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルサルフェート、エタンスルホネート、ホルメート、フマレート、グルコヘプタノエート、グリセロホスフェート、グリコレート、ヘミサルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、塩酸塩、ヒドロブロミド、ヒドロアイオダイド、2-ヒドロキシエタンスルホネート、ラクテート、マレエート、マロネート、メタンスルホネート、2-ナフタレンスルホネート、ニコチネート、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモエート、ペクチネート、パーサルフェート、3-フェニルプロピオネート、ホスフェート、ピクリン酸塩、ピバレート、プロピオネート、サリチル酸塩、スクシネート、サルフェート、酒石酸塩、チオシアネート、トシレート、およびウンデカノエートが含まれる。シュウ酸のような他の酸も、それ自身医薬的に許容されるものはないが、本発明化合物およびその医薬的に許容される酸付加塩を得るための中間体として有用な塩の製造に用いることができる。例えば、Berge et al. 「Pharmaceutical Salts」、J. Pharm. Sci. 1977、66:1-19参照。
1またはそれ以上の酸性官能基を含む本発明化合物は、医薬的に許容される塩基を用いて医薬的に許容される塩を形成することができる。
【００２８】
用語「医薬的に許容される塩」は、本発明化合物の比較的無毒性の無機および有機塩基付加塩を表す。同様に、これら塩は、該化合物の最終単離および精製中にin situで、または遊離酸形の該精製化合物を、適切な塩基、例えば、医薬的に許容される金属カチオンのヒドロオキシド、カーボネート、またはビカーボネート、アンモニア、または医薬的に許容される有機第1、第2、または第3アミンと別個に反応させることにより製造することができる。
【００２９】
典型的医薬的に許容されるカチオンには、アルカリまたはアルカリ土類塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム塩などが含まれる。用いることができる塩基の典型的例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化コリン、炭酸ナトリウム、N+(C1-4アルキル)4などが含まれる。塩基付加塩を形成するのに有用な典型的有機アミンには、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが含まれる。本発明は、本明細書に記載の化合物のあらゆる塩基性窒素含有基の4級化も想定する。水または油に可溶性または分散可能な生成物はそのような4級化により得ることができよう。例えば、Berge et al.(上記)参照。
【００３０】
塩に対する言及には、溶媒付加形、またはその結晶形、特に溶媒和物、または多形体を含むと理解すべきである。溶媒和物は、化学量論的または非化学量論的量の溶媒を含み、医薬的に許容される溶媒、例えば、水、エタノールなどとの結晶の過程で形成されることが多い。水和物は、溶媒が水であるときに形成され、またアルコレートは溶媒がアルコールの時に形成される。多形体には、同じ元素組成の化合物の異なる結晶パッキング配置が含まれる。多形体は、通常、異なるX線回折パターン、赤外スペクトル、融点、密度、高度、結晶形、光学的および電気的特性、安定性、および溶解性を有する。種々の因子、例えば再結晶化溶媒、結晶速度、および保存温度は単結晶形を決定づけるかもしれない。
【００３１】
本発明の医薬的に許容されるプロドラッグには、限定されるものではないが、エステル、カーボネート、チオカーボネート、N-アシル誘導体、N-アシルオキシアルキル誘導体、第3アミンの第4誘導体、N-マンニッヒ塩基、シッフ塩基、アミノ酸コンジュゲート、ホスフェートエステル、金属塩、およびスルホネートエステルが含まれる。
【００３２】
「プロドラッグ」を作製するための本発明化合物の誘導体化に適した位置には、限定されるものではないが2-アミノ置換が含まれる。当業者は、過度な実験を行うことなくこれを達成する知識と手段を有する。種々の形のプロドラッグが当該分野でよく知られている。例えば、Design of Prodrugs、Bundgaard、A. Ed.、Elseview、1985およびMethod in Enzymology、Widder、K. et al.、Ed.； Academic、1985、vol. 42、p. 309-396； Bundgaard、H. 「Design、およびApplication of Prodrugs」、A Textbook of Drug Design、およびDevelopment、Krosgaard-Larsen、およびH. Bundgaard、Ed.、1991、第5章、p. 113-191中； およびBundgaard、H.、Advanced Drug Delivery Review、1992、8、1-38参照(それぞれ、本明細書の一部を構成する)。
【００３３】
本明細書で用いている用語「プロドラッグ」には、限定されるものではないが、以下の基およびこれらの基の組み合わせが含まれる：例えば、ビスカーボメート、またはカーボメート(carbomate)、およびアシルオキシアルキルエステルまたはカボメート(cabomate)、およびアミドなど。
【００３４】
アミンプロドラッグ:
2008534609.tif 000003
【００３５】
ヒドロキシプロドラッグには、限定されるものではないが、アシルオキシアルキルエステル、アルコキシカルボニルオキシアルキルエステル、アルキルエステル、アリールエステル、およびジスルフィド含有エステルが含まれる。
【００３６】
用語「アルキル」は、単独または組み合わせて1〜約30個の炭素、より好ましくは1〜12個の炭素を有する所望により置換された直鎖または所望により置換された分岐鎖飽和炭化水素モノラジカルを表す。アルキルラジカルの例には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、tert-アミル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどが含まれる。
【００３７】
本明細書で用いている用語「シクロアルキル」は、単独または組み合わせて、モノサイクリック、ビサイクリック、トリサイクリック、およびより多サイクリックアルキルラジカルを含む、サイクリックアルキルモノラジカルを表す(ここで、各サイクリック部分は3〜約8個の炭素原子を有する)。シクロアルキルラジカルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが含まれる。
【００３８】
本明細書で用いている用語「低級アルキル」は、単独または組み合わせて、少数の炭素原子を含むアルキル、例えば、1〜約6個の炭素原子を含むものを表す。
【００３９】
本明細書で用いている用語「アルケニル」は、単独または組み合わせて1またはそれ以上の炭素-炭素二重結合を有し、2〜約30個の炭素原子、より好ましくは2〜約18個の炭素を有する所望により置換された直鎖または所望により置換された分岐鎖炭化水素ラジカルを表す。アルケニルラジカルの例には、エテニル、プロペニル、ブテニル、1,3-ブタジエニルなどが含まれる。
【００４０】
本明細書で用いている用語「シクロアルケニル」は、単独または組み合わせて、モノサイクリック、ビサイクリック、トリサイクリック、および高級多サイクリックアルケニルラジカル(ここで、各サイクリック部分は、3〜約8個の炭素原子を有する)を含むサイクリック アルケニルラジカルを表す。
【００４１】
本明細書で用いている用語「低級アルケニル」は、単独または組み合わせて2〜約6個の炭素を有するアルケニルを表す。
【００４２】
本明細書で用いている用語「アルキニル」は、単独または組み合わせて、1またはそれ以上の炭素-炭素三重結合および2〜約30個の炭素原子、より好ましくは2〜約12個の炭素原子、または2〜約6個の炭素原子を有する所望により置換された直鎖または所望により置換された分岐鎖炭化水素ラジカル、および2〜約4個の炭素原子を有するものを表す。アルキニルラジカルの例には、エチニル、2-プロピニル、2-ブチニル、1,3-ブタジニルなどが含まれる。
【００４３】
本明細書で用いている用語「シクロアルキニル」は、単独または組み合わせて、モノサイクリック、ビサイクリック、トリサイクリック、および高級多サイクリックアルキニルラジカル(ここで、各サイクリック部分は3〜約8個の炭素原子を有する)を含むサイクリック アルキニルラジカルを表す。
本明細書で用いている用語「低級アルキニル」は、単独または組み合わせて2〜約6個の炭素を有するアルキニルを表す。
【００４４】
本明細書で用いている用語「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」および「ヘテロアルキニル」は、単独または組み合わせて、上記の、および炭素以外の原子、例えば、酸素、窒素、硫黄、リン、またはその組み合わせから選ばれる1またはそれ以上の骨格鎖原子を有する、所望により置換されたアルキル、アルケニル、およびアルキニル構造を表す。
【００４５】
本明細書で用いている用語「低級ヘテロアルキル」、「低級ヘテロアルケニル」および「低級ヘテロアルキニル」は、単独または組み合わせて、それぞれ2〜約6個の炭素を有するヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、およびヘテロアルキニルを表す。
【００４６】
本明細書で用いている用語「アルキレン」は、単独または組み合わせて二価のヒドロカルビル基を表す。それは二価であるため；2つの多の基と互いに結合することができる。典型的には、それは、-(CH2)n-(ここで、nは1-8であり、好ましくはnは1〜4である)を表し、指定した場合はアルキレンは他の基により置換され、他の長さであり得るが、開放結合価は鎖の反対の末端である必要はない。すなわち、-CH(Me)-および-C(Me)2-も、サイクリック基、例えばシクロプロパン-1,1-ジイルでありうるのでアルキレンと呼んでよい。アルキレン基が置換されている場合は、置換基には、典型的には本明細書に記載のアルキル基上に存在するものが含まれる。
【００４７】
本明細書で用いている用語「低級アルキレン」は、単独または組み合わせて小数の炭素原子、例えば、1〜約6個の炭素原子を含むアルキレン基を表す。
【００４８】
本明細書で用いている用語「炭素鎖」は、単独または組み合わせて、直鎖、サイクリック、またはそのあらゆる組み合わせである、あらゆるアルキル、アルケニル、アルキニル、またはヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、またはヘテロアルキニル基を表す。該鎖がリンカーの部分であり、該リンカーがコアバックボーンの部分として1またはそれ以上の環を含む場合は、鎖長を計算するために、「鎖」は、該環の底部または上端(両方ではない)を構成するそれら炭素原子のみを含み、環の上端および底部の長さが等しくない場合は、より短い距離を鎖長の決定に用いる。鎖が該バックボーンの部分としてヘテロ原子を含む場合は、該原子は炭素鎖長の部分として計算しない。
【００４９】
本明細書で用いている用語「員環」は、単独または組み合わせて、芳香族、ヘテロ芳香族、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、モノサイクリック、ポリサイクリック、および融合環を含むあらゆるサイクリック構造を表す。用語「員」は、環系を構成する骨格(すなわち環)原子の数を表すことを意図する。すなわち、例えば、ピロール、ピロリジン、スクシンイミド、マレイミド、テトラヒドロフラン、およびチオフェンは5員環であり、ピリジン、ピラン、モルフィン、ピペラジン、ピペリジン、およびピリミジンは6員環であり、フタリミド、インドール、およびインダンは9員融合環である。
【００５０】
本明細書で用いている用語「アリール」は、単独または組み合わせて6〜約20個の環原子の所望により置換された芳香族炭化水素モノラジカルを表し、モノ-芳香族環および融合芳香族環を含む。融合芳香族環ラジカルは、連結環が芳香族環、および他の個々の環であり、融合環が、芳香族、ヘテロ芳香族、アリサイクリック、またはヘテロサイクリックであってよい、2〜4個の融合環を含む。さらに、用語アリールは、6〜約12個の炭素原子を含むモノ芳香族環および融合芳香族環、および6〜約10個の炭素原子を含むものを含む。アリール基の例には、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル、アントリル、クリセニル、およびベンゾピレニル環系が含まれる。
【００５１】
本明細書で用いている用語「低級アリール」は、単独または組み合わせて6〜約10個の骨格環炭素、例えば、フェニルおよびナフチル環系を有するアリールを表す。
【００５２】
本明細書で用いている用語「ヘテロアリール」は、単独または組み合わせて、1またはそれ以上の環原子がヘテロ原子、例えば、酸素、窒素、硫黄、セレニウム、またはリンである、約5〜約20個の骨格環原子を含む所望により置換された芳香族ラジカルを表す。用語ヘテロアリールは、少なくとも1のヘテロ原子を有する、所望により置換されたモノ-ヘテロアリールラジカルおよび融合ヘテロアリールラジカル(例えば、キノリン、ベンゾチアゾール)を含む。融合ヘテロアリールラジカルは、連結環がヘテロ芳香族環である場合は2〜4個の融合環を含んでよく、融合環系内の他の個々の環は、芳香族、ヘテロ芳香族、アリサイクリック、またはヘテロサイクリックであってよい。用語ヘテロアリールは、5〜約12個の骨格環原子を有するモノ-ヘテロアリールまたは融合ヘテロアリール、および5〜約10個の骨格環原子を有するものも含む。ヘテロアリールの例には、限定されるものではないが、フラニル、ベンゾフラニル、クロメニル、ピリジル、ピロリル、インドリル、キノリニル、ピリジル-N-オキシド、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ベンゾチオゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾキサジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、プリニル、インドリジニル、チエニルなど、およびそのオキシドが含まれる。
【００５３】
本明細書で用いている用語「低級ヘテロアリール」は、単独または組み合わせて、5〜約10個の骨格環原子、例えば、ピリジル、チエニル、ピリミジル、ピラジニル、ピロリル、またはフラニルを有するヘテロアリールを表す。
【００５４】
本明細書で用いている用語「アリサイクリック」および「アリサイクリル」は、単独または組み合わせて、3〜約20個の環原子を含む、所望により置換された飽和または不飽和の非芳香族炭化水素環系を表す。用語アリサイクリックは、モノ-アリサイクリック、および融合アリサイクリックラジカルを含む。融合アリサイクリックは、連結環がアリサイクリック環である場合は2〜4個の融合環を含んでよく、融合アリサイクリックラジカル内の他の個々の環は、芳香族、ヘテロ芳香族、アリサイクリック、およびヘテロサイクリックであってよい。用語アリサイクリックは、3〜約12個の炭素原子を含むモノアリサイクリックおよび融合アリサイクリックラジカル、および3〜約10個の炭素原子を含むものも含む。アリサイクリックの例には、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロプロペニル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロデシル、シクロドデシル、シクロペンタジエニル、インダニル、およびシクロオクタテトレアエニル環系が含まれる。
【００５５】
本明細書で用いている用語「低級アリサイクリック」および「低級アリサイクリル」は、単独または組み合わせて、3〜約10個の骨格環炭素を有するアリサイクリック、例えば、シクロプロピル、シクロプロペニル、シクロブチル、シクロペンチル、デカリニル、およびシクロヘキシルを表す。
【００５６】
本明細書で用いている用語「ヘテロサイクリック」および「ヘテロサイクリル」は、単独または組み合わせて、1またはそれ以上の環原子がヘテロ原子、例えば、酸素、窒素、硫黄、およびリンである、5〜約20個の環原子を含む、所望により置換された飽和または不飽和の非芳香族環ラジカル。用語ヘテロサイクリックは、モノヘテロサイクリックおよび融合ヘテロサイクリック環ラジカルである。融合ヘテロサイクリックラジカルは、連結環がヘテロサイクリックである2〜4個の融合環を含み、融合ヘテロサイクリックラジカル内の他の個々の環は、芳香族、ヘテロ芳香族、アリサイクリック、またはヘテロサイクリックであってよい。用語ヘテロサイクリックは、5〜約12個の骨格環原子を有するモノヘテロサイクリックおよび融合アリサイクリックラジカル、5〜約10個の骨格環原子を有するものも含む。ヘテロサイクリックの例には、限定されるものではないが、テトラヒドロフラニル、ベンゾジアゼピニル、テトラヒドロインダゾリル、ジヒドロキノリニルなどが含まれる。
【００５７】
本明細書で用いている用語「低級ヘテロサイクリック」および「低級ヘテロサイクリル」は、単独または組み合わせて、5〜約10個の骨格環原子を有するヘテロサイクリック環系、例えば、ジヒドロピラニル、ピロリジニル、ジオキソラニル、ピペリジニル、ピペラジニルなどを表す。
【００５８】
本明細書で用いている用語「アルキルアリール」は、単独または組み合わせて、少なくとも1のH原子が上記アルキルラジカル、例えば、トリル、キシリルなどで置換されている上記アリールラジカルを表す。
【００５９】
本明細書で用いている用語「アリールアルキル」および「アラルキル」は、単独または組み合わせて、少なくとも1のH原子が上記アリールラジカル、例えば、ベンジル、2-フェニルエチルなどで置換されている上記アルキルラジカルを表す。
【００６０】
本明細書で用いている用語「ヘテロアリールアルキル」は、単独または組み合わせて少なくとも1のH原子が上記のヘテロアリールラジカルで置換されている(そのそれぞれは所望により置換されていてよい)上記アルキルラジカルを表す。
【００６１】
本明細書で用いている用語「アルコキシ」は、単独または組み合わせてアルキルエーテルラジカル、アルキル-O-を表す(ここで、用語アルキルは前記と同意義である)。アルコキシラジカルの例には、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、イソ-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシなどが含まれる。
【００６２】
本明細書で用いている用語「低級アルコキシ」は、単独または組み合わせて1〜約6個の炭素原子を有するアルコキシ基を表す。
【００６３】
本明細書で用いている用語「アリールオキシ」は、単独または組み合わせて、アリールエーテルラジカル(ここで、用語アリールは前記と同意義である)を表す。アリールオキシラジカルの例には、フェノキシ、チエニルオキシなどが含まれる。
【００６４】
本明細書で用いている用語「アルキルチオ」および「チオアルキル」は、単独または組み合わせてアルキルチオラジカル、アルキル-S-を表す(ここで、用語アルキルは前記と同意義である)。
【００６５】
本明細書で用いている用語「アリールチオ」は、単独または組み合わせてアリールチオラジカル、アリール-S-を表す(ここで、用語アリールは前記と同意義である)。
【００６６】
本明細書で用いている用語「ヘテロアリールチオ」は、単独または組み合わせて基ヘテロアリール-S-を表す(ここで、用語ヘテロアリールは前記と同意義である)。
【００６７】
本明細書で用いている用語「アシル」は、単独または組み合わせて、ラジカル-C(O)Rを表す(式中、Rは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキル(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリールアルキル、またはヘテロアリール アルキル基は所望により置換されていてよい)を含む)。
【００６８】
本明細書で用いている用語「アシルオキシ」は、単独または組み合わせて、エステル基-OC(O)Rを表す(式中、Rは、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキル(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキルは所望により置換されていてよい)である)。
【００６９】
本明細書で用いている用語「カルボキシエステル」は、単独または組み合わせて、-C(O)ORを表す(式中、Rは、アルキル、アリール、またはアリールアルキル(ここで、該アルキル、アリール、およびアリールアルキル基は所望により置換されていてよい)である)。
【００７０】
本明細書で用いている用語「BOC」は、単独または組み合わせて、C(O)Otブチルを表す。
【００７１】
本明細書で用いている用語「カルボキシアミド」は、単独または組み合わせて、
2008534609.tif 000004
を表す
［式中、RおよびR'は、それぞれ独立してH、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル(ここで、該アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、またはアリールアルキル基は所望により置換されていてよい)からなる群から選ばれる]。
【００７２】
本明細書で用いている用語「チオアミド」および「チオアミジル」は、単独または組み合わせて、
2008534609.tif 000005
を表す
［式中、RおよびR'は、それぞれ独立してH、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル(ここで、該アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、またはアリールアルキル基は所望により置換されていてよい)からなる群から選ばれる]。
本明細書で用いている用語「オキソ」は、単独または組み合わせて=Oを表す。
本明細書で用いている用語「ハロゲン」は、単独または組み合わせてF、Cl、Br、およびIを表す。
【００７３】
本明細書で用いている用語「ハロアルキル」、「ハロアルケニル」、「ハロアルキニル」および「ハロアルコキシ」は、単独または組み合わせて、1またはそれ以上のフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、またはその組み合わせで置換されている、上記アルキル、アルケニル、アルキニル、およびアルコキシ構造を表す。
【００７４】
本明細書で用いている用語「パーハロアルキル」、「パーハロアルキルオキシ」および「パーハロアシル」は、単独または組み合わせて、すべてのH原子がフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、またはその組み合わせで置換されている、上記アルキル、アルキルオキシ、およびアシルラジカルを表す。
【００７５】
本明細書で用いている用語「低級パーハロアルキル」、「低級パーハロアルキルオキシ」および「低級パーハロアシル」は、単独または組み合わせて、2〜約6個の炭素を有する、上記パーハロアルキル、パーハロアルキルオキシ、およびパーハロアシルラジカルを表す。
【００７６】
用語シクロアルキル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アルキル、アルキニル、アルケニル、ハロアルキル、およびヘテロアルキルは、所望により置換されたシクロアルキル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アルキル、アルキニル、アルケニル、ハロアルキル、およびヘテロアルキル基を含む。
【００７７】
本明細書で用いている用語「アルキルシリル」は、単独または組み合わせて-NRR'R”(ここで、R、R'、およびR”はアルキルである)を表す。
【００７８】
本明細書で用いている用語「低級アルキルシリル」は、単独または組み合わせて-NRR'R”(ここで、R、R'、およびR”は低級アルキルである)を表す。
【００７９】
本明細書で用いている用語「アミノ」は、単独または組み合わせて-NH2を表す。
【００８０】
本明細書で用いている用語「アルキルアミノ」は、単独または組み合わせて基-NHR(ここで、Rはアルキルである)を表す。
【００８１】
本明細書で用いている用語「アミノアルキル」は、単独または組み合わせて、基-アルキレン-NH2(ここで、アルキレンは本明細書に定義した通りである)を表す。
【００８２】
本明細書で用いている用語「ジアルキルアミノ」は、単独または組み合わせて、基-NRR'(ここで、RおよびR'はアルキルである)を表す。
【００８３】
本明細書で用いている用語「アリールアルキルアミノ」は、単独または組み合わせて、基-NRR'(ここで、Rはアルキルであり、R'はアリールである)を表す。
【００８４】
本明細書で用いている用語「ジアリールアミノ」は、単独または組み合わせて、基-NRR'(ここで、RおよびR'はアリールである)を表す。
【００８５】
本明細書で用いている用語「ヘテロアリールアミノ」は、単独または組み合わせて、-NHR(ここで、Rはヘテロアリールである)を表す。
【００８６】
本明細書で用いている用語「ジヘテロアリールアミノ」は、単独または組み合わせて、基-NRR'(ここで、RおよびR'はヘテロアリールである)を表す。
【００８７】
本明細書で用いている用語「アリールヘテロアリールアミノ」は、単独または組み合わせて、基-NRR'(ここで、Rはアリールであり、R'はヘテロアリールである)を表す。
【００８８】
本明細書で用いている用語「カルバミル」は、単独または組み合わせて、-NHC(O)ORおよび-OC(O)NHR基(ここで、Rは、限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルであってよい(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基は所望により置換されていてよい))を表す。スルファニル基の非限定的例には、メチルスルファニル(-SCH3)、およびイソ-プロピルスルファニル(-SCH(CH3)2)などが含まれる。
【００８９】
本明細書で用いている用語「ウリル」は、単独または組み合わせて、-NHC(O)NHR基を表す(ここで、Rは、限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルであってよい(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基は所望により置換されていてよい))。スルファニル基の非限定的例には、メチルスルファニル(-SCH3)、およびイソ-プロピルスルファニル(-SCH(CH3)2)などが含まれる。
【００９０】
本明細書で用いている用語「チオウリル」は、単独または組み合わせて、-NHC(S)NHR基を表す(ここで、Rは、限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルであってよい(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基は所望により置換されていてよい))。スルファニル基の非限定的例には、メチルスルファニル(-SCH3)、およびイソ-プロピルスルファニル(-SCH(CH3)2)などが含まれる。
【００９１】
本明細書で用いている用語「グアニジニル」は、単独または組み合わせて、-NHC(NH)NHR基を表す(ここで、Rは、限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルであってよい(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基は所望により置換されていてよい))。スルファニル基の非限定的例には、メチルスルファニル(-SCH3)、およびイソ-プロピルスルファニル(-SCH(CH3)2)などが含まれる。
【００９２】
本明細書で用いている用語「スルフィド」および「チオエーテル」は、単独または組み合わせて、2個の原子と共有結合した硫黄原子を表し、該硫黄の正式な酸化状態は(II)である。これら用語は互換性に用いてよい。
【００９３】
本明細書で用いている用語「スルファニル」は、単独または組み合わせて、-S-R基を表す(ここで、Rは、限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルであってよい(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基は所望により置換されていてよい))。スルファニル基の非限定的例には、メチルスルファニル(-SCH3)、およびイソ-プロピルスルファニル(-SCH(CH3)2)などが含まれる。
【００９４】
本明細書で用いている用語「スルホキシド」は、単独または組み合わせて、3個の原子(その少なくとも1個は酸素原子である)と共有結合した硫黄原子を表し、ここで、該硫黄原子の正式な酸化状態は(IV)である。
【００９５】
本明細書で用いている用語「スルフィニル」は、単独または組み合わせて、基-S(O)-Rを表す(ここで、Rは、限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルであってよい(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基は所望により置換されていてよい))。スルフィニル基の非限定的例には、メチルスルフィニル(-S(O)CH3)などが含まれる。
【００９６】
本明細書で用いている用語「スルホン」は、単独または組み合わせて、4個の原子(その少なくとも2個が酸素原子である)と共有結合した硫黄原子を表し、ここで、該硫黄原子の正式な酸化状態は(VI)である。
【００９７】
本明細書で用いている用語「スルホニル」は、単独または組み合わせて、基-S(O2)-Rを表す(ここで、Rは、限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール 、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルであってよい(ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキル基は所望により置換されていてよい))。スルホニル基の非限定的例には、メチルスルホニル(-S(O2)CH3)などが含まれる。
【００９８】
本明細書で用いている用語「ホスファイト」は、単独または組み合わせて3個の炭素原子と共有結合したリン原子を表し、ここで、該リンの正式な酸化状態は(III)である。
【００９９】
本明細書で用いている用語「ホスフィニル」は、単独または組み合わせて上記のホスファイト基から誘導されたモノラジカルを表す。
【０１００】
本明細書で用いている用語「ホスホネート」は、単独または組み合わせて4個の原子(その3個は酸素であり、その1個は炭素である)と共有結合したリン原子を表し、ここで、該リンの正式な酸化状態は(V)である。
【０１０１】
本明細書で用いている用語「ホスホニル」は、単独または組み合わせて上記のホスホネート基から誘導されたモノラジカルを表す。
【０１０２】
本明細書で用いている用語「ホスフェート」は、単独または組み合わせて4個の酸素原子が共有結合したリン原子を表し、ここで、該リンの正式な酸化状態は(V)である。
【０１０３】
本明細書で用いている用語「ホスファチジル」は、単独または組み合わせて上記のホスフェート基から誘導されたモノラジカルを表す。
【０１０４】
本明細書で用いている用語「ホスホルアミド」は、単独または組み合わせて4個の原子が共有結合したリン原子を表し、該リンの正式な酸化状態は(V)である。
【０１０５】
本明細書で用いている用語「ホスホルアミジル」は、単独または組み合わせて、上記のホスホルアミド基から誘導されたモノラジカルを表す。
【０１０６】
用語「所望の」または「所望により」は、その後に記載する事象または状況が起きても起きなくてもよく、また該説明が該事象または状況が起きる場合とそれが起きない場合を含むことを意味する。例えば、「所望によりアルキルでモノ-またはジ-置換されたアリール」は、アルキルが存在しても存在しなくてもよいか、または1または2個のアルキルが存在してよく、該説明がアリールが1または2個のアルキルで置換されている状況、および該アリールがアルキルで置換されていない状況を含むことを意味する。
【０１０７】
「所望により置換された」基は置換されていても置換されていなくてもよい。「所望により置換された」基の置換基には、限定されるものではないが、以下の基から独立して選ばれる1またはそれ以上の置換基、またはその指定したサブセットを含んでよい：低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、ヘテロアリール、アリサイクリック、ヘテロサイクリック、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、低級アルコキシ、低級アリールオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアリールアルキルアミノ、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、オキソ、オキサ、アシル(-C(O)R)、(-C(O))、カルボキシエステル(-C(O)OR)、カルボキシアミド(-C(O)NH2)、カルボキシ、アシルオキシ、-H、ハロ、-CN、-NO2、-N3、-SH、-OH、-(O)CH3、パーハロアルキル、パーハロアルコキシ、パーハロアシル、グアニジン、ピリジニル、チオフェン、フラニル、インドール、インダゾール、エステル、アミド、ホスホネート、リン酸、ホスフェート、ホスホルアミド、スルホネート、スルホン、サルフェート、スルホンアミド、カルバメート、ウレア、チオウレア、チオアミド、およびチオアルキル。所望により置換された基は、置換されていなくても(例えば、-CH2CH3)、完全に置換されていても(例えば、-CF2CF3)、モノ置換でも(例えば、-CH2CH2F)、または完全置換からモノ置換の間のどのレベルで置換されていてもよい(例えば、-CH2CF3)。
【０１０８】
用語「ピリジン-1-オキシ」は、「ピリジン-N-オキシ」も意味する。
【０１０９】
用語「ヘテロアリール基は、2〜5個の置換基で置換されている」は、1〜4個の置換基を有する1-オキシ-ピリジル、またはN-オキシ-ピリジルを含む。すなわち、ピリジン-N-オキシドの酸素原子は置換基として数えるべきである。
【０１１０】
本発明化合物のあるものは、1またはそれ以上のキラル中心を含んでいてよく、したがって、鏡像異性体形およびジアステレオマー形で存在してよい。本発明の範囲は、すべての異性体自体、およびシスおよびトランス異性体の混合物、ジアステレオマーの混合物、および鏡像異性体(光学異性体)のラセミ混合物に及ぶことを意図する。さらに、よく知られた技術を用いて種々の形を分離することができ、本発明のある態様は、特定の鏡像異性体またはジアステレオマーの精製または豊富化された種を特徴とすることがある。
【０１１１】
本発明化合物のあるものは、互変異性体形で存在しうる。本発明の範囲は、すべての互変異性体に及ぶことを意図する。非限定的例として、R0が-SR8または-OR8であり、R8が水素である式(I)の化合物は、下記互変異性体のいずれかとして存在しうる。
【０１１２】
2008534609.tif 000006
【０１１３】
「薬理学的組成物」は、1またはそれ以上の本明細書に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩と、他の化学成分、例えば医薬的に許容される担体および/または賦形剤との混合物を表す。薬理学的組成物の目的は、化合物の生物への投与を促進することである。
【０１１４】
本明細書で用いている用語「医薬的に許容される担体」は、ある器官、または身体の部分から別の器官または身体の部分に対象物質を運ぶかまたは輸送するのに関与する、医薬的に許容される物質、組成物、またはビークル、例えば液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、または封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者に有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。医薬的に許容される担体の役割を果たすことができる物質の例には、(1) 糖、例えばラクトース、グルコース、およびショ糖；(2) デンプン、例えばコーンスターチ、およびジャガイモデンプン；(3) セルロースおよびその誘導体、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよびセルロースアセテート；(4) トラガカント粉末；(5) 麦芽；(6) ゼラチン；(7) タルク；(8) 賦形剤、例えばココアバターおよび坐剤用ワックス；(9) 油、例えばピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油；(10) グリコール、例えばプロピレングリコール；(11) ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール；(12)エステル、例えばエチルオレエートおよびエチルラウレート；(13) 寒天；(14) 緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム、および水酸化アルミニウム；(15) アルギン酸；(16) 発熱物質不含水；(17) 等張生理食塩水；(18) リンゲル溶液；(19) エチルアルコール；(20) ホスフェート緩衝溶液；および(21) 医薬製剤に用いる他の無毒性適合性物質が含まれる。生理学的に許容される担体は、生物に顕著な刺激を生じてはならず、投与した化合物の生物活性および特性を無効にしない。
【０１１５】
「賦形剤」は、化合物の投与をさらに促進する薬理学的組成物に加える不活性物質を表す。賦形剤の例には、限定されるものではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖およびデンプン種、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１１６】
「医薬的有効量」は、治療および/または予防効果をもたらすことができる量を意味する。治療および/または予防効果を得るために本発明に従って投与する化合物の特定用量は、もちろん、例えば、投与する特定化合物、投与経路、治療する病状、および治療する個体を含む症例の特定の周囲状況により決定されよう。典型的1日用量(単用量または分割用量で投与される)は、本発明化合物の約0.01mg/kg〜約50-100mg/kg体重の用量レベルを含むであろう。一般に好ましい1日用量は、約0.05mg/kg〜約20mg/kg、理想的には約0.1mg/kg〜約10mg/kgであろう。クリアランス速度、半減期、および最大耐量(MTD)のような因子をさらに決定しなければならないが、当業者は標準的手順を用いてこれらを決定することができる。
【０１１７】
ある方法の態様において、好ましい治療効果は、増殖性疾患、例えば、乳癌に特徴的な細胞増殖のある程度の阻害である。治療的有効量は、通常、細胞増殖または細胞塊のサイズ以外の1またはそれ以上の症状をある程度緩和するがしなくてもよい。治療効果には、1) 細胞数の減少； 2)細胞サイズの減少； 3) 例えば、癌転移の場合の末梢器官への細胞浸潤の阻害(すなわち、ある程度遅くする、好ましくは止める)； 3) 腫瘍転移の阻害(すなわち、ある程度遅くする、好ましくは止める)； 4) 細胞増殖のある程度の阻害；および/または5) 1またはそれ以上の該疾患関連症状のある程度の緩和、の1またはそれ以上が含まれてよい。本明細書で用いている用語IC50は、反応を測定するアッセイにおいて最大反応の50%阻害を達成する特定被検化合物の量、濃度、または用量を表す。本発明のいくつかの方法の態様において、本発明化合物の「IC50」値は、増殖性疾患を有する細胞、例えば乳癌細胞より正常細胞でより大きくなりうる。該値は、用いるアッセイに左右される。
【０１１８】
「標準」は、陽性または陰性コントロールを意味する。Her2発現レベルとの関連で陰性コントロールは、例えば、正常細胞に対応するHer2タンパク質の量を有する試料である。陰性コントロールはHer2タンパク質を含まない試料も含み得る。反対に、陽性コントロールは、好ましくは増殖性疾患、例えば乳癌にみられる過剰発現に対応する量のHer2タンパク質を含む。該コントロールは、細胞または組織試料由来であるか、または精製リガンドを含む(またはリガンドを欠く)か、固定化されるか、またはその反対であってよい。ある態様において、1またはそれ以上のコントロールは診断的「ディップスティック」の形であってよい。
【０１１９】
「選択的標的化」は、ある種の細胞(例えば、比較的低または正常Her2レベルと対照的に高い細胞の場合において)に対して別のものよりより大きな影響があることを意味する。
本発明の化合物
【０１２０】
本発明化合物は、HSP90を阻害し、HSP90依存性疾患を治療および予防する有用性を示す、式I：
2008534609.tif 000007
(I)
で示されるアルキニルピロロ[2,3-d]ピリミジン、およびその多形体、溶媒和物、エステル、互変異性体、ジアステレオマー、鏡像異性体、医薬的に許容される塩、またはプロドラッグに関する
［式中、
R0は、水素、ハロゲン、低級アルキル、-CN、-SR8、-OR8、および-NHR8からなる群から選ばれる；
R1は、ハロゲン、-OR11、-SR11、および低級アルキルからなる群から選ばれる；
R2は、-NHR8である；
R3は、水素、-CN、-C(O)OH、-OR11、-SR11、-C(O)R9、-NR8R10、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、低級アルキルシリル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれる；
ここで、該アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル基は、モノ−、ビ−、またはトリ−サイクリックである；
R8およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R3上の所望による置換基は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、-CN、-C(O)OH、-NO2,-SR8、-OR8、-C(O)R9、-NR8R8、低級アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、低級ヘテロサイクリル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、アリールヘテロアリールアミノ、オキソ、パーハロアルキル、パーハロアルコキシ、パーハロアシル、グアニジニル、ピリジニル、チオフェニル、フラニル、インドリル、インダゾリル、ホスホニル、ホスファチジル、ホスホルアミジル、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミジル、カルバミル、ウリル、チオウリル、およびチオアミジルからなる群から選ばれる；
ここで、R8およびR8は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R4は、所望により置換された低級アルキレン、-C(R12)2-、-C(O)-、-C(S)-、-S(O)-、および-SO2-からなる群から選ばれる；
R5は、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリルからなる群から選ばれる；
ここで、該アリール基は、2〜5個の置換基で置換されている；
該ヘテロアリール基は、2〜5個の置換基で置換されている；
該アリサイクリル基は、3〜5個の置換基で置換されている；
該ヘテロサイクリル基は、3〜5個の置換基で置換されている；
R5上の置換基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、-CN、-C(O)OH、-NO2、-SR8、-OR8、-C(O)R9、-NR8R10、低級アリール、低級ヘテロアリール、低級アリサイクリル、低級ヘテロサイクリル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアルキルアミノ、オキソ、パーハロアルキル、パーハロアルコキシ、パーハロアシル、グアニジニル、ピリジニル、チオフェニル、フラニル、インドリル、インダゾリル、ホスホニル、ホスファチジル、ホスホルアミジル、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミジル、カルバミル、ウリル、チオウリル、およびチオアミジルからなる群から選ばれる；
ここで、R8およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R8は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロアルケニル、低級ヘテロアルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、および-C(O)R9からなる群から選ばれる；
R9は、H、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、-NR10R10、および-OR11からなる群から選ばれる；
ここで、R10およびR10は、それらが結合しているN原子と一緒になって3〜7環原子を含む所望により置換された環を形成することがある；
ここで、該N原子に加え、0〜3個の環原子は、O、S、およびNからなる群から選ばれるヘテロ原子である；
R10は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロアルケニル、低級ヘテロアルキニル、低級アリール、低級ヘテロアリール、および-C(O)R11からなる群から選ばれる；
R11は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、および低級ヘテロアリールからなる群から選ばれる；
R12は、水素、および低級アルキルからなる群から選ばれる。］。
【０１２１】
いくつかの態様において、R0は、水素、ハロゲン、または-CNである。他の態様において、R0は、水素、低級アルキル、-SR8、または-OR8である。他の態様において、R0は、水素、-SR8、-OR8、または-NHR8である。他の態様において、R0は、-SR8、または-OR8である。他の態様において、R0は水素である。
【０１２２】
いくつかの態様において、R1はハロゲン、または低級アルキルである。他の態様において、R1は、-OR11または-SR11である。いくつかの態様において、R1はハロゲンである。いくつかの態様において、R1はクロロ、またはブロモである。いくつかの態様において、R1はクロロである。いくつかの態様において、R1はブロモである。
【０１２３】
いくつかの態様において、R2は、-NH2、または-NHC(O)R9である。他の態様において、R2は、-NH-低級アルキル、-NH-低級アルケニル、-NH-低級アルキニル、-NH-低級アリール、または-NH-低級ヘテロアリールである。他の態様において、R2は-NHC(O)R9である(ここで、R9は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アリール、または低級ヘテロアリールである)。他の態様において、R2は-NH2である。他の態様において、R2は-NH(O)tBuである。
【０１２４】
いくつかの態様において、R3は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、ヘテロサイクリル、-CN、または-C(O)R9(すべて所望により置換されている)である。他の態様において、R3は、水素、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、ヘテロサイクリル、または-C(O)R9(すべて所望により置換されている)である。他の態様において、R3は、水素、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、または-C(O)R9(すべて所望により置換されている)である。他の態様において、R3は、置換低級アルキルである(ここで、低級アルキル上の置換基は、低級アルキル、-OR8、-C(O)R9、および-NR8R8からなる群から選ばれる)。他の態様において、R3は、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、-CN、または-C(O)R9(すべて所望により置換されている)である。他の態様において、R3は、水素である。他の態様において、R3は、所望により置換された低級アルキルである。他の態様において、R3は、所望により置換されたフェニル、またはピリジニルである。他の態様において、R3は、-(CH2)nOHである(ここで、n=1-3である)。他の態様において、R3は、-(CH2)mC(R12)2(CH2)nOHである(ここで、m=0-2であり、n=1-2である)。他の態様において、R3は、-(CH2)nNR8R8である(ここで、n=1-3であり、各R8は、独立して水素、または低級アルキルであるか、または-NR8R8は一緒になって所望により置換されたフタリミド、またはモルフィンを形成する)。他の態様において、R3は、-(CH2)nC(O)NR10R10である(ここで、n=1-3であり、各R10は、独立して水素または-C(O)R11であるか、または-NR10R10は一緒になって所望により置換されたピペラジンを形成する)。他の態様において、R3は、所望により置換された低級アルキルシリルである。他の態様において、R3は-CO2Etである。他の態様において、R3は、-(CH2)nC(O)NR10R10である(ここで、n=1-3であり、各R10は独立して水素、または-C(O)R11である)。他の態様において、R3は、-(CH2)nC(O)NHC(O)OtBuである。
【０１２５】
いくつかの態様において、R4は、所望により置換された低級アルキレン、-C(O)-、-S(O)-、または-SO2-である。他の態様において、R4は、-CH2-、-S(O)-、または-SO2である。他の態様において、R4は、-CHR12-である。他の態様において、R4は-CH2-である。
【０１２６】
いくつかの態様において、R5の該アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、またはヘテロサイクリル基は、モノサイクリックまたはビサイクリックである。他の態様において、R5は置換アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリール上の置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノからなる群から選ばれる。他の態様において、R5は、置換アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリール上の置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、および低級アルキルからなる群から選ばれる。
【０１２７】
いくつかの態様において、R0は、水素、ハロゲン、-SH、-OH、または-CNであり、R1はハロゲンであり、R2は、-NH2または-NH-C(O)R9である。
【０１２８】
いくつかの態様において、R1は、クロロまたはブロモであり、R2は-NH2または-NH-C(O)R9であり、R3は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、低級アリール、または低級ヘテロアリール(すべて所望により-OR8、-NR8R8、または-C(O)R9で置換されている)である。
【０１２９】
いくつかの態様において、R0は、水素、ハロゲン、または-CNであり、R2は-NH2、または-NH-C(O)R9であり、R4は-CH2-である。
【０１３０】
他の態様において、R0は、水素、ハロゲン、-SH、-OH、または-CNであり、R1はハロゲンであり、R2は-NH2であり、R3は、水素、-OR11、-SR11、-NR8R8、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、低級アリール、または低級ヘテロアリールであり(ここで、R3中のR8は、水素、低級アルキル、低級ヘテロアルキル、低級アリール、または-C(O)R9である)、R4は-CH2-であり、R5は、アリールまたはヘテロアリール(2〜5個の置換で置換されている)である。
【０１３１】
いくつかの態様において、R0は、水素、ハロゲン、および-CNから選ばれ、R1はハロゲンであり、R2は-NHR8であり、R3は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級パーハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリサイクリル、およびヘテロサイクリル(すべて所望により置換されている)からなる群から選ばれ、R4は、-CHR12-であり、所望により置換されたR5は、アリールまたはヘテロアリールである。
【０１３２】
他の態様において、R0は、水素、ハロゲン、および-CNから選ばれ、R1はハロゲンであり、R2は-NH2であり、R3は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル(すべて所望により-OR8、-NR8R8、または-C(O)R9で置換されている)からなる群から選ばれ、R4は-CH2であり、R5は、アリールまたはヘテロアリールである。
【０１３３】
他の態様において、R1は、クロロまたはブロモであり、R2は-NH2であり、R5は少なくとも3個の置換基を有するフェニルである。
【０１３４】
他の態様において、R1はクロロまたはブロモであり、R2は-NH2であり、R5は少なくとも2個の置換基を有するピリジルである。
【０１３５】
他の態様において、R1は、クロロまたはブロモであり、R2は-NH2であり、R5は少なくとも2個の置換基を有する1-オキシ-ピリジル(N-オキシ-ピリジル)である。
【０１３６】
他の選択した態様において、R0は水素であり、R1はクロロまたはブロモであり、R2は、-NH2または-NHC(O)tBuであり、R3は、水素、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、-CN、所望により置換された低級アルキルシリル、-CO2Et、-(CH2)mC(CH3)nOH(ここで、m=0-2であり、n=1-2である)、-(CH2)nOH(ここで、n=1-3である)、および-(CH2)nNR8R10(ここで、n=1-3であり、R8およびR10は、独立して水素、低級アルキルであるか、または一緒になってピペラジン、フタリミド、またはモルフィンを形成する)からなる群から選ばれ、R4は-CH2-であり、R5は、置換アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリール上の置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノからなる群から選ばれる。
【０１３７】
いくつかの選択した態様において、R0は水素であり、R1はクロロまたはブロモであり、R2は-NH2であり、R3は、水素、低級アルキル、-(CH2)nOH(ここで、n=1-3である)、-(CH2)mC(CH3)nOH(ここで、m=0-2であり、n=1-2である)、-(CH2)2C(O)NH2、-(CH2)OC(O)CH2N(CH3)2、-(CH2)nNHC(O)OtBu、および-(CH2)nNR8R8(ここで、n=1-3であり、R8およびR8は、独立して水素、低級アルキルであるか、または一緒になって所望により置換されたフタリミド、またはモルフィンを形成する)からなる群から選ばれ、R4は、-CH2-であり、R5は、置換ヘテロアリールである(ここで、該ヘテロアリール上の置換基は、独立して低級アルコキシ、および低級アルキルからなる群から選ばれる)。
【０１３８】
いくつかの選択した態様において、R0は水素であり、R1はクロロまたはブロモであり、R2は-NH2であり、R3は、水素、低級アルキル、-(CH2)nOH(ここで、n=1-3である)、-(CH2)mC(CH3)nOH(ここで、m=0-2であり、n=1-2である)、-(CH2)nC(O)NR10R10(ここで、n=1-3であり、R10およびR10は、独立して水素、または-C(O)R11であるか、または一緒になって所望により置換されたピペラジンを形成する)からなる群から選ばれ、R4は-CH2-であり、R5は、置換ヘテロアリールであり、該ヘテロアリール上の置換基は、独立して低級アルコキシ、および低級アルキルからなる群から選ばれる。
【０１３９】
いくつかの選択した態様において、R3は、置換低級アルキルであり、あるさらなる選択した態様において、R3は、置換低級アルキルであり、該低級アルキル上の置換基は、ホスホニルまたはホスファチジルである。
【０１４０】
他の好ましい態様において、以下の化合物がある。
【０１４１】
【化１】
2008534609.tif 000008
【０１４２】
【化２】
2008534609.tif 000009
【０１４３】
【化３】
2008534609.tif 000010
【０１４４】
【化４】
2008534609.tif 000011
【０１４５】
【化５】
2008534609.tif 000012
【０１４６】
【化６】
2008534609.tif 000013
【０１４７】
【化７】
2008534609.tif 000014
【０１４８】
【化８】
2008534609.tif 000015
【０１４９】
本発明のあらゆる上記態様は、実用的なあらゆる組み合わせがありうる。当業者は、種々の態様を本発明の精神内で有効に組み合わせる方法を認識するであろう。本発明の式Iに基づく化合物の非限定的リストを表1に例示する。
表1：式I：
【０１５０】
2008534609.tif 000016
(I)
［式中、R0はHであり、R4は-CH2-である。］に基づく典型的化合物。
【０１５１】
【表１】
2008534609.tif 000017
【０１５２】
【表２】
2008534609.tif 000018
【０１５３】
【表３】
2008534609.tif 000019
【０１５４】
【表４】
2008534609.tif 000020
【０１５５】
【表５】
2008534609.tif 000021
【０１５６】
【表６】
2008534609.tif 000022
【０１５７】
【表７】
2008534609.tif 000023
【０１５８】
【表８】
2008534609.tif 000024
【０１５９】
【表９】
2008534609.tif 000025
【０１６０】
【表１０】
2008534609.tif 000026
【０１６１】
【表１１】
2008534609.tif 000027
【０１６２】
【表１２】
2008534609.tif 000028
【０１６３】
【表１３】
2008534609.tif 000029
【０１６４】
【表１４】
2008534609.tif 000030
【０１６５】
【表１５】
2008534609.tif 000031
【０１６６】
【表１６】
2008534609.tif 000032
【０１６７】
【表１７】
2008534609.tif 000033
【０１６８】
【表１８】
2008534609.tif 000034
【０１６９】
【表１９】
2008534609.tif 000035
【０１７０】
【表２０】
2008534609.tif 000036
【０１７１】
【表２１】
2008534609.tif 000037
【０１７２】
【表２２】
2008534609.tif 000038
【０１７３】
【表２３】
2008534609.tif 000039
【０１７４】
【表２４】
2008534609.tif 000040
【０１７５】
【表２５】
2008534609.tif 000041
【０１７６】
【表２６】
2008534609.tif 000042
【０１７７】
【表２７】
2008534609.tif 000043
【０１７８】
【表２８】
2008534609.tif 000044
【０１７９】
【表２９】
2008534609.tif 000045
【０１８０】
【表３０】
2008534609.tif 000046
【０１８１】
式中、各略号は化学の分野の当業者に知られた通常の意味を有し、すなわち、Me = メチル； Et = エチル； Pr = プロピル； i-Pr = イソ-プロピル； Bu = ブチル； i-Bu = イソ-ブチル； tBu = tert-ブチル； Ph = フェニル； BOC = tert-ブトキシカルボニル； 2-Py = 2-ピリジル； 3-Py = 3-ピリジル； 4-Py = 4-ピリジルである。
【０１８２】
表1中の選択した化合物は、化合物2、3、4、7、8、12、13、17、18、22、23、27、28、32、33、38、42、43、47、48、52、53、57、58、62、63、67、68、72、73、77、78、82、83、87、88、92、93、102、103、107、108、112、113、117、118、122、123、127、128、132、133、137、138、147、148、152、153、157、158、161、162、166、167、171、172、176、177、181、182、186、187、191、192、196、197、 201、202、206、207、211、212、216、217、221、222、226、227、231、232、236、237、240、241、244、246、248、265、266、285、289、291、293、310、311、330、331、332、334、349、350、363、364、365、367、369、382、383、396、397、398、400、402、415、416、429、430、431、433、435、448、449、462、463、464、466、468、481、482、495、496、497、499、501、514、515、528、529、530、532、534、547、548、560、561、652、566、587、588、590、591、592、594、596、602、603、620、621、622、624、626、632、633、635、636、637、639、641、661、662、663、664、665、667、669、675、676、678、679、680、682、684、690、691、692、693、694、696、698、704、705、707、708、710、711、713、714、716、717、718、719、720、722、730、731、732、733、734、736、738、744、745、746、747、748、750、752、753、754、757、759、761、778、779、782、783、784、798、799、802、804、806、823、824、843、844、847、849、851、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、875、894、895、896、899、900、901、903、905、907、920、921、934、935、936、937、938、939、940、および941である。さらに選択した化合物は、77、78、82、83、87、88、92、93、240、241、248、265、285、293、310、330、349、382、396、415、429、448、 462、481、495、514、528、560、587、602、620、632、635、661、663、675、678、690、692、704、718、730、732、744、746、753、778、798、823、863、864、865、866、867、868、869、875、894、895、896、899、900、901、903、905、920、934、935、936、940、および941である。
本発明化合物は、式II:
【０１８３】
2008534609.tif 000047
(II)
で示されるいくつかのピロロ[2,3-d]ピリミジン化合物以上の改良されたHSP90阻害活性を有する
[ここで、R3'は、米国特許出願No. 10/945,851およびPCT出願US04/31248に記載のアルキニルではない。］。上記特許出願の実施例の項に記載のピロロピリミジン化合物は、置換基を持たないかまたは置換アルキル基を有する。式IIの化合物のある態様である化合物0は、C-5位に置換基を持たず(すなわち、R3' = H)、Her-2分解アッセイ(下記実施例の項に記載)で測定するとIC50 = 98nMである。C-5の単にアルキルまたは置換アルキル(すなわち、R3' = アルキルまたは置換アルキル)は、さらに2倍の活性をもたらすことができるのみである。反対に、C-5がアルキン置換である場合は、効力は約10〜20倍増加する(下記シリーズA：化合物A、B、C、およびD参照)。
【０１８４】
2008534609.tif 000048
【０１８５】
例えば、C-5位のアルキニル置換基(シリーズB：化合物E、F、G、およびH参照)は、親化合物0より少なくとも10倍改善し、効力範囲6〜17nMを示した。さらに、2つの化合物が三重結合対単結合の存在を除き全く同じ構造を有するとき(例えば化合物Dを化合物Eと比較)、C-5に置換されたプロパギルアルコールを有する化合物EはIC50 = 17nMであるが、C-5にプロパノール置換基を有する化合物Dは、IC50 = 38nM(2倍の改善)を示す。二次アッセイで測定したアルキンと非アルキンの効力指数の差も顕著である。二次アッセイは腫瘍細胞の殺滅効果を測定する。特定化合物の効力指数を以下のごとく定義する：
指数 = EC50(化合物)/EC50(コントロール)
(ここで、コントロールは17-AAG(17-アリル-17-デスメトキシ-ゲルダナマイシン)である。EC50は、生細胞数の50%減少をもたらすために加えた化合物の量で定義する。選択した化合物を、MCF7およびBT474乳癌細胞系の細胞で試験した。アッセイは、化合物0が17-AAGより10倍以上活性が弱いことを示す。最良の非アルキン置換類似体は、17-AAGより6〜>50倍効力が低い。反対に、アルキン置換類似体は、17-AAGより強力でありうる(Cpd. H参照)(HSP90阻害剤の分野の記録、または指数0.7〜6でほぼ活性)。表2にアッセイの結果を要約した。
表2：MCF7およびBT474細胞系からの腫瘍細胞に対する効力指数
【０１８６】
2008534609.tif 000049
本発明化合物の合成
【０１８７】
本発明の化合物は、下記スキームAに従って5-ハロ-ピロロ[2,3-d]ピリミジンから製造することができる。出発物質、N-(4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)ピバルアミド(ここで、PGはピバロイル保護基であり、X = Iである)の製造は、Seela、F. Synthesis 2004、8、1203、およびその中の参考文献に記載されている。
【０１８８】
スキームA
【化９】
2008534609.tif 000050
【０１８９】
N-(4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)ピバルアミドを、塩基(例えば、K2CO3、C2CO3、NaH、NaOH、t-BuOH)存在下、極性溶媒(例えば、DMF、DMSO、NMP)中の適切なアルキル化剤で処理し、N(7)-アルキル化付加化合物を得る。アルキル化は、典型的には20〜60℃で0.5〜24h(時間)行う。
【０１９０】
NH2保護基を開裂し、2-アミノ誘導体を得る。該保護基がピバロイル基である場合はZnCl2で開裂することができる。脱ピバロイル化は、典型的には1〜10vol%水含有EtOH中、50〜85℃で2〜24h行う。塩化亜鉛は、他のルイス酸、例えばZnI2またはCuClで置換することができるが、同様の収率はもたらさないかもしれない。
【０１９１】
4-クロロ-7-アルキル-5-ハロ-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンを式 HC≡C-R1のアルキンとSonogasiraカップリングし、目的とするアルキンを得る。典型的反応条件では、Pd(PPh3)4/CuIを触媒系として、Et3Nを塩基として、およびDCMまたはDMFを溶媒として必要とする。該反応は典型的には20〜50℃で0.5〜24h操作する。しかしながら、種々の別の触媒系/塩基/条件を用いることができる(Liang、B. et. al.、J. Org. Chem. 2005、70、391とその中の参考文献参照)。
【０１９２】
必要に応じて、R基をさらに以下のごとく操作することができる：
2008534609.tif 000051
例示のために、プロパギルアルコールを、当該分野でよく知られた方法を用いてメシレートまたはブロミドに変換することができる。次に、メシルまたはブロミド基をアミンのような求核試薬で置換することができる。4-Cl原子の望まない求核置換を避けるよう注意しなければならない。
【０１９３】
一連のこれら工程は、例えば、(i) アルキル化、(ii) Sonogashiraカップリング、および(iii) 脱保護として、該スキームに示すものと異なる順番で行うことができる。
医薬組成物、医薬、用量、および投与方法
【０１９４】
本発明は、式Iのアルキニルピロロ[2,3-d]ピリミジン化合物およびその関連類似体、およびその多形体、溶媒和物、エステル、互変異性体、ジアステレオマー、鏡像異性体、その医薬的に許容される塩、およびプロドラッグの使用も指向する。いくつかの態様において、該化合物はHSP90依存性の疾患の治療または予防に有用である。いくつかの態様において、該化合物は医薬の製造に用いられる。他の態様において、該化合物は、HSP90依存性の疾患および病状の治療的および/または予防的処置のための医薬の製造に用いられる。そのような疾患および病状の例には、炎症性疾患、感染症、自己免疫疾患、卒中、虚血、心臓疾患、神経疾患、繊維形成疾患、増殖性疾患、腫瘍、白血病、慢性リンパ性白血病、後天性免疫不全症候群、新生物、癌、カルチノーマ、代謝疾患、および悪性疾患のような疾患が含まれる。繊維形成疾患には、限定されるものではないが、強皮症、多発筋炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、および肺線維症が含まれる。
【０１９５】
本発明は、先のあらゆる局面および態様の、式Iの化合物、またはその多形体、溶媒和物、エステル、互変異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、医薬的に許容される塩、またはそのプロドラッグ、および1またはそれ以上の医薬的賦形剤を含む医薬組成物および医薬を特徴とする。当業者は、例えば、Goodman and Gilman、The Pharmacological Basis of Therapeutics(10版)；Pergamon；およびRemington's、Pharmaceutical Sciences(20版)、Mack Publishing Co.、Easton、Pa.に記載の、本発明の化合物および方法を用いることができる製剤化および投与方法に精通している。
【０１９６】
本発明の方法に用いる化合物は、標準的薬務にしたがって医薬組成物で単独、または医薬的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて投与してよい。該化合物は、経口的または非経口的(静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸、および局所投与経路を含む)に投与することができる。例えば、本発明の治療的または医薬的組成物は、治療を要する領域に局所的に投与することができる。これは、限定されるものではないが、例えば、外科手術中の局所注入、局所適用、例えば、クリーム、軟膏、注射、カテーテル、またはインプラントにより達成することができ、該インプラントは、例えば、シラスティック(sialastic)膜のような膜または繊維を含む多孔、非多孔、またはゲル上物質から製造される。投与は、腫瘍または新生物もしくは非新生物組織の部位(または前の部位)への直接注射もありうる。さらに本発明の化合物または組成物は、小胞、例えば、リポソームで送達することができる(例えば、Langer、Science 1990、249,1527-1533； Treat et al.、Liposomes in the Therapy of Infectious Disease、およびCancer、Lopez-Bernstein、およびFidler、Ed.、Liss、N.Y.、pp. 353-365、1989参照)。
【０１９７】
本発明の方法に用いる化合物および医薬組成物は、制御放出系で送達することもできる。ある態様において、ポンプを用いてよい(Sefton、1987、CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201； Buchwald et al. Surgery、1980 88、507； Saudek et al. N. Engl. J. Med. 1989、321、(574)参照)。さらに、制御放出系は治療標的の近傍に置くことができる。(Goodson、Medical Application of Controlled Release、1984、Vol. 2、pp. 115-138参照)。
【０１９８】
本発明の方法に用いる医薬組成物は、活性成分を、経口使用に適した形で、例えば、錠剤、トローチ、ローゼンジー剤、水性または油性サスペンジョン剤、分散性粉末剤または顆粒剤、エマルジョン剤、硬または軟カプセル剤、またはシロップ剤、またはエリキシル剤として含むこともできる。経口使用のための組成物は、医薬組成物を製造するための当該分野で知られたあらゆる方法に従って製造することができ、そのような組成物は、医薬的に洗練された味のよい製剤を提供するために、甘味料、香味料、着色料、および保存料からなる群から選ばれる1またはそれ以上の物質を含んでよい。錠剤は、活性成分を錠剤の製造に適した無毒性の医薬的に許容される賦形剤と共に含む。これら賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム；造粒剤および崩壊剤、例えば微晶質セルロース、ナトリウムクロスカルメロース、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、またはアカシア、および潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクであってよい。錠剤は、コートされていなくても、薬剤の味を隠すかまたは消化管内での崩壊および吸収を遅らせて長期にわたる持続作用をもたらすための知られた技術によりコートされていてもよい。例えば、水溶性の味を覆う物質、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはヒドロキシプロピルセルロース、または時間を遅らす物質、例えばエチルセルロースまたはセルロースアセテートブチレートを適切に用いてよい。
【０１９９】
経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合している硬ゼラチンカプセル、または活性成分が水溶性担体、例えばポリエチレングリコール、または油状媒質、例えば、ピーナッツ油、液体パラフィン、またはオリーブ油と混合している軟ゼラチンカプセルとして存在してもよい。
【０２００】
水性サスペンジョン(剤)は、活性物質を水性サスペンジョンを製造するのに適した賦形剤とともに含む。そのような賦形剤には懸濁化剤、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ガムトラガカント、およびガムアカシアがあり、分散または湿潤剤は、天然のホスファチド(例えばレシチン)、またはアルキレンオキシドと脂肪酸の縮合産物(例えばポリオキシエチレンステアレート)、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合産物(例えばヘプタデカエチレン-オキシセタノール)、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール由来の部分エステルとの縮合産物(例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート)、または脂肪酸およびヘキシトール無水物由来の部分エステルとの縮合産物(例えばポリエチレンソルビタンモノオレエート)であってよい。水性サスペンジョン剤は、1またはそれ以上の保存料、例えば、エチルまたはn-プロピルp-ヒドロキシベンゾエート、1またはそれ以上の着色剤、1またはそれ以上の香味料、および1またはそれ以上の甘味料、例えばショ糖、サッカリン、またはアスパルテームを含んでもよい。
【０２０１】
油状サスペンジョン(剤)は、活性成分を、植物油、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油、またはココナッツ油、または鉱油、例えば液体パラフィンに懸濁することにより製剤化することができる。油状サスペンジョンは、増粘剤、例えば、蜜ロウ、硬パラフィン、またはセチルアルコールを含んでよい。上記の様な甘味料および香味料を加えて味のよい経口用製剤を提供することができる。これら組成物は、抗酸化剤、例えばブチル化ヒドロキシアニソール、またはアルファトコフェロールを加えて防腐することができる。
【０２０２】
水を加えて水性サスペンジョンを製造するのに適した分散可能な粉末および顆粒は、活性成分を、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤、および1またはそれ以上の保存料と混合して提供される。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤はすでに上記に例示している。さらなる賦形剤、例えば甘味料、香味料、および着色料が存在してもよい。これら組成物は抗酸化剤、例えばアスコルビン酸を加えて防腐してよい。
【０２０３】
本発明の方法に用いる化合物および医薬組成物は、油中水エマルジョンの形であってよい。油相は、植物油、例えば、オリーブ油またはラッカセイ油、または鉱油、例えば液体パラフィン、またはこれらの混合物であってよい。適切な乳化剤は、天然のホスファチド、例えば、ダイズレシチン、および脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導したエステルまたは部分エステル(例えば、ソルビタンモノオレエート)、および該部分エステルとエチレンオキシドの縮合産物(例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート)であってよい。エマルジョンは、甘味料、香味料、保存料、および抗酸化剤を含んでいてもよい。
【０２０４】
シロップおよびエリキシル剤は、甘味料、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、またはショ糖を用いて製剤化してよい。そのような製剤は、鎮痛薬、保存料、香味料、および着色料、および抗酸化剤も含んでよい。
【０２０５】
医薬組成物は、無菌注射可能水性溶液の形であってよい。使用できる許容されるビークルおよび溶媒には水、リンゲル溶液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。
【０２０６】
無菌注射可能製剤は、活性成分が油相に溶解している、無菌注射可能油中水ミクロエマルジョンであってもよい。例えば、活性成分は、最初にダイズ油およびレシチンの混合物に溶解することができる。次に、油溶液を水およびグリセロール混合物に導入し、加工してミクロエマルジョンを形成することができる。
【０２０７】
注射可能溶液またはミクロエマルジョンは、局所ボーラス注射により患者の血流に導入することができる。あるいはまた、本発明化合物の循環濃度を一定に保つような方法で該溶液またはミクロエマルジョンを投与するのが好都合かもしれない。そのような一定濃度を維持するために、連続静脈内送達装置を利用することができる。そのような装置の例には、Deltec CADD-PLUS(登録商標)モデル5400静脈内ポンプがある。
【０２０８】
該医薬組成物は、筋肉内および皮下投与用の無菌注射可能水性または油性サスペンジョンの形であってよい。このサスペンジョンは、それら適切な分散剤または湿潤剤、および上記懸濁化剤を用い、既知の技術に従って製剤化してよい。無菌注射可能製剤は、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射可能溶液またはサスペンジョン、例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液であってもよい。さらに、無菌の不揮発性油を溶媒または懸濁化媒質として常套的に用いる。このために、合成モノ-またはジグリセリドを含むあらゆる無刺激性の不揮発性油を用いることができる。さらに、オレイン酸のような脂肪酸を注射可能物の製造に用いられる。
【０２０９】
本発明の方法に用いる化合物は、薬剤の直腸投与のための坐剤の形で投与することもできる。これら組成物は、該阻害剤を、通常温度で固体であるが直腸温度で液体である適切な無刺激性賦形剤と混合することにより製造することができ、直腸内で溶解し薬剤を放出するであろう。そのような物質には、ココアバター、グリセリン化ゼラチン、水素添加植物油、種々の分子量のポリエチレングリコール混合物、およびポリエチレングリコールの脂肪酸エステルが含まれる。局所使用には、本発明の化合物または組成物を含有するクリーム、軟膏、ゼリー、溶液、またはサスペンジョンなどを用いることができる。本明細書で用いている局所適用には、洗口液およびうがい剤を含みうる。
【０２１０】
本発明の方法に用いる化合物は、適切な鼻内ビークルおよび送達装置の局所使用を介して鼻内形で、または当業者によく知られた経皮パッチの形を用いて経皮経路を介して投与することができる。経皮送達系の形で投与するには、投与方法(用法・用量)は、投与方法を通じて間欠的より連続的であろう。
【０２１１】
本発明の方法、化合物、および組成物は、治療する病状に対するその特定の有用性で選ばれる他のよく知られた治療剤と組み合わせて用いることもできる。例えば、本化合物は、既知の抗癌剤および細胞毒性剤と組み合わせて有用なことがある。さらに、本発明の方法および化合物は、細胞表面成長因子レセプターを細胞増殖を開始する核シグナルと結びつける情報伝達経路の部分の他の阻害剤と組み合わせて有用なこともある。
【０２１２】
本発明の方法は、限定されるものではないが、VEGFレセプターに標的化したアンチセンスおよびリボザイムを含むVEGFレセプター阻害剤、アンギオスタチン、およびエンドスタチンを含む、血管新生を阻害することにより、腫瘍細胞の増殖および侵襲性を阻害する他の薬剤と用いると有用なこともある。本発明の化合物および方法を組み合わせて用いることができる抗新生物薬の例には、一般的には、適切なアルキル化剤、抗代謝薬、エピドフィロトキシン、抗新生物酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、プロカルバジン、ミトキサントロン、白金配位錯体、生物反応修飾物質、および成長阻害剤、ホルモン/非ホルモン療法剤、および造血成長因子が含まれる。抗新生物薬の典型的クラスには、アントラサイクリン、ビンカ薬、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオシド、エポチロン、ジスコデルモリド、プテリジン、ジイネン(diynenes)、およびポドフィロトキシンが含まれる。そのクラスの特定の有用なメンバーには、例えば、カルミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、エトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、マイトマイシンC、ポルフィロマイシン、5-フルオロウラシル、6-メルカプトプリン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシン、またはポドフィロトキシン誘導体、エトポシド、リン酸エトポシド、またはテニポシド、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ラウロシジン、ビンデシン、ラウロシン、パクリタキセルなどが含まれる。他の有用な抗新生物薬には、エストラムスチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ブレオマイシン、ゲムシチビン、イホサミド、メルファラン、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、シタラビン、イダトレキセート、トリメトレキセート、ダカルバジン、L-アスパラギネース、カンプトテシン、CPT-11、トポテカン、アラ-C、ビカルタミド、フルタミド、ロイプロリド、ピリドベンゾインドール誘導体、インターフェロン、およびインターロイキンが含まれる。
【０２１３】
本発明の化合物または組成物をヒト対象に投与するときは、1日用量は通常、個々の患者の年齢、体重、および反応、および患者の症状の重症度に応じて一般的に変化する用量で担当医師が決定するであろう。ある典型的適用において、適切な量の化合物が、癌、例えば乳癌の治療を受けている哺乳動物に投与される。投与は、典型的には、約0.01mg/kg体重〜100mg/kg体重/日(単用量または分割用量で投与)、より好ましくは少なくとも約0.1mg/kg体重/日の量で行われる。特定の治療用量は、例えば約0.01mg〜約1000mg、好ましくは例えば約1mg〜約1000mgの化合物を含み得る。製剤の単位用量中の活性化合物の量は、特定の適用に応じて約0.1mg〜1000mg、好ましくは約1mg〜300mg、より好ましくは10mg〜200mgで変化または調節することができる。投与量は、用いる化合物の特定のIC50値、および健康、体重、および年齢のような因子を考慮した担当医師の判断に応じて変化するであろう。該化合物が唯一の活性成分ではない組み合わせ適用において、より少量の化合物を投与し、まだ治療または予防効果がある可能性がありうる。
【０２１４】
好ましくは、該医薬製剤は単位剤形である。そのような形において、該製剤は、活性成分の適切な量、例えば、意図する目的を達成する有効量を含む単位用量にさらに分割される。用いる実際の用量は、患者の要求および治療する病状の重症度に応じて変化することがある。特定の状況のための適切な用量の決定は当該分野の技術内である。一般的には、治療は、該化合物の最適用量以下であるより低用量で開始される。その後、該状況下で最適効果に達するまで用量を少量ずつ増加させる。便宜上、必要に応じて全1日用量を分割し、その日の間に部分に分けて投与してよい。本発明の方法に用いる本発明の化合物および組成物、および適用可能であれば他の化学療法剤および/または放射線療法の投与量および頻度は、患者の年齢、病状、およびサイズ、および治療する疾患の重症度のような因子を考慮して担当臨床医(医師)の判断に従って調節されるであろう。
【０２１５】
化学療法剤および/または放射線療法は当該分野でよく知られた治療プロトコールに従って投与することができる。化学療法剤および/または放射線療法の投与は、治療する疾患、および該化学療法剤および/または放射線療法のその疾患に対する知られた効果に応じて変化しうることを当業者は認識するであろう。
【０２１６】
また、当業者の知識にしたがって、治療プロトコール(例えば、投与量および投与回数)は、患者に対する投与した治療剤(すなわち、抗新生物薬または放射線)の観察された効果を考慮し、投与した治療剤に対する該疾患の観察された反応を考慮して変化させることができる。
【０２１７】
また、一般的には、本発明化合物は化学療法剤と同じ医薬組成物で投与する必要はなく、異なる物理化学的特性のため、異なる経路で投与してよい。例えば、該化合物/組成物をその良好な血中レベルを生じ、維持するために経口投与してよく、一方、化学療法剤を静脈内投与してよい。可能であれば同じ医薬組成物による投与方法および投与の推奨の決定は、十分当業者の知識内である。初期投与は、当該分野で知られた確立されたプロトコールに従って行うことができ、次いで観察された効果に基づいて、用量、投与方法、および投与回数を熟練医師が変更することができる。
【０２１８】
化合物(および適切であれば化学療法剤および/または放射線療法)の具体的選択は、担当医師の診断、および患者の病状の判定、および適切な治療プロトコールに依存するであろう。
【０２１９】
本発明の化合物/組成物(および適切であれば化学療法剤および/または放射線療法)は、増殖性疾患の性質、患者の病状、および該化合物/組成物と組み合わせて(すなわち、単一治療プロトコール内で)投与するための化学療法剤および/または放射線療法の実際の選択に応じて、同時に(例えば、同時に、本質的に同時に、または同じ治療プロトコール内で)、または連続的に投与してよい。組み合わせ適用および使用において、該化合物/組成物および化学療法剤および/または放射線療法は、同時にまたは本質的に同時に投与する必要はなく、該化合物/組成物および化学療法剤および/または放射線療法の最初の投与順序は重要ではないかもしれない。すなわち、本発明の化合物/組成物を最初に投与し、次いで化学療法剤および/または放射線療法を投与するか、または化学療法剤および/または放射線療法を最初に投与し、次いで本発明の化合物/組成物を投与してよい。この交互投与を単一治療プロトコール中に反復することができる。治療プロトコール中の核治療剤の投与の順序、および投与の反復回数の決定は、治療する疾患および患者の病状の評価後の熟練医師の十分知識内である。例えば、化学療法剤および/または放射線療法は、特に毒性剤である場合は最初に投与し、次いで本発明の化合物/組成物の投与の継続治療を投与し、次いで好都合であると確定すれば、該治療プロトコールが完結するまで化学療法剤および/または放射線療法を投与することができる。
【０２２０】
すなわち、経験と知識に応じて、担当医師は、治療の進行につれて個々の患者の要求に従って治療するための化合物/組成物の各投与プロトコールを変更することができる。投与した用量で治療が有効か否かを判定する担当医は、患者の一般健康問題、およびより明確な徴候、例えば疾患関連症状の緩和、腫瘍増殖の阻害、腫瘍の実際の退縮、または転移の阻害を考慮するであろう。腫瘍のサイズは標準的方法、例えば放射線学的試験、例えば、CATまたはMRIスキャンにより測定することができ、継続的測定を用いて腫瘍の増殖が抑制または逆転したか否か判定することができる。痛みのような疾患関連症状の緩和、および病状全体の改善を用いて治療効果の判定を助けることもできる。
HSP90結合および下流効果を測定するためのアッセイ
【０２２１】
種々のin vitroおよびin vivoアッセイは、本発明のアルキニルピロロ[2,3-d]ピリミジン化合物のHSP90に対する効果を試験するのに利用することができる。HSP90競合結合アッセイおよび機能アッセイは、本発明化合物に置き換えることにより当該分野で知られているように行うことができる。Chiosis et al. Chemistry & Biology 2001、8、289-299は、これを行うことができる知られた方法をいくつか記載している。例えば、ゲルダナマイシンまたは17-AAGをHSP90の競合結合阻害剤として用いる競合結合アッセイを用いて、ゲルまたは固体マトリックス上に興味のある化合物または他の競合阻害剤を固定し、HSP90を他の阻害剤とプレインキュベーションし、該ゲルまたはマトリックス上にプレインキュベーションした混合物を通し、次いで該ゲルまたはマトリックス上に保持されているかまたは保持されていないHSP90の量を測定することにより本発明化合物の相対HSP90親和性を測定することができる。
【０２２２】
下流効果は、例えば、Raf1およびHer2を含む種々のステロイドレセプターおよび情報伝達タンパク質の機能および安定性に対するHSP90阻害の知られた効果に基づいて評価することもできる。本発明化合物は、標準的技術を用いて測定することができるこれら分子の用量依存性分解を誘導する。HSP90の阻害は、HSP90および同時に測定することができる関連シャペロンタンパク質の上方調節ももたらす。種々の癌細胞系に対する抗増殖作用も、HSP90阻害に関連する形態学的および機能的分化同様、測定することができる。
【０２２３】
タンパク質濃度を測定し、細胞内および液試料中のタンパク質レベルを測定または予測するための多くの異なるタイプの方法が当該分野で知られている。間接技術には、核酸ハイブリダイゼーション、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を用いる増幅が含まれる。これら技術は当業者に知られており、例えば、Sambrook、Fritsch & Maniatis Molecular Cloning：A Laboratory Manual、2版、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、N.Y.、1989； Ausubel、et al. Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons、NY、1994、および患者試料中のHER2/Neuの定量、検出、および相対活性に具体的に適用されるものとして、例えば、米国特許4,699,877、4,918,162、4,968,603、および5,846,749に記載されている。使用できる2つの一般技術の簡単な説明を以下に示す。
【０２２４】
細胞がHer2を過剰発現するか、またはHer2の上昇したレベルを含むか否かの測定は、よく知られた抗体技術、例えばイムノブロッティング、ラジオイムノアッセイ、Westernブロッティング、免疫沈降法、酵素免疫測定法(ELISA)、およびHer2に対する抗体を用いる派生技術を用いて測定することができる。例として、乳癌細胞中のHer2の発現は、免疫組織化学アッセイ、例えばDako Hercep(登録商標)試験(Dako Corp.、Carpinteria、CA)を用いて測定することができる。Hercep(登録商標)試験は、腫瘍組織試料中のHer2の過剰発現を検出するために設計した抗体染色アッセイである。この特定のアッセイは、Her2発現を4つのレベル：0、1、2、および3に等級付けし、レベル3がHer2発現の最高レベルを示す。正確な定量は、例えば、Press、M. et al. Modern Pathology 2000、13、225Aに記載のAutomated Cellular Imaging System(ACIS)を用いることにより高めることができる。
【０２２５】
ポリクローナルまたはモノクローナル抗体は、種々の市販業者から購入することができるか、または例えば、Harlow et al. Antibodies：A Laboratory Manual、2版； Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、N.Y.、1988に記載のよく知られた方法を用いて製造してよい。
【０２２６】
Her2過剰発現は、Her2タンパク質の過剰発現とそれをコードする遺伝子の増幅の高い関連が報告されているので核酸レベルで測定することもできる。これを試験する1つの方法はRT-PCRを用いることによる。Her2のゲノムおよびcDNA配列が知られている。特異的DNAプライマーを、よく知られた標準的技術を用いて作製し、次いでこれを用いて細胞にすでに存在する鋳型を増幅することができる。この例は、Kurokawa、H. et al. Cancer Res. 2000、60、5887-5894に記載されている。PCRは、定量的な差が、正常細胞と異常細胞、例えば癌細胞および非癌細胞として観察されるように標準化することができる。例えば濃度測定を用いるよく知られた方法を用いてPCRを用いて増幅した核酸レベルを定量および/または比較することができる。
【０２２７】
同様に、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)アッセイおよび他のアッセイを用いることができる(例えば、Northernおよび/またはSouthernブロッティング)。これらは、Her2遺伝子またはmRNAと、上記PCRプライマーと同じまたは同様の方法で設計することができる対応する核酸プローブ、との核酸ハイブリダイゼーションに依存する。例えば、Mitchell MS、およびPress M.F. Oncol.、Suppl. 1999、12、108-116参照。FISHでは、この核酸プローブを好ましくはハイブリダイゼーションと干渉しない、蛍光分子、例えばフルオレセインおよび/またはローダミンと結合させることができ、次いで該蛍光をハイブリダイゼーション後に測定することができる。例えば、Kurokawa、H et al、Cancer Res. 2000、60、5887-5894(配列5'-FAM-核酸-TAMRA-p-3'配列を有する特異的核酸プローブを記載)参照。上記ACISに基づくアプローチを用いてより定量的なアッセイを行うことができる(de la Torre-Bueno、J.、et al. Modern Pathology 2000、13、221A)。
【０２２８】
免疫および核酸検出法を、HSP90およびHER2以外のタンパク質(それにもかかわらず、該タンパク質はHSP90阻害に応じて影響を受ける)に対して導くこともできる。以下の実施例は単に例示のために提供するものであり、本発明の全範囲および精神を限定することを意図しない。
【実施例】
【０２２９】
材料と方法
下記本発明の新規生成物を製造するのに用いる化学試薬は、例えばAldrich Chemical Co.、Milwaukee、WI、USAからすべて市販されている。あるいはまた、それらの製造は当業者に知られており容易であるか、または本明細書に記載または参照している。
【０２３０】
最終化合物は、通常、溶離剤にEtOAc/ヘキサンまたはMeOH/CH2Cl2を用いプレパラティブTLC(シリカゲル60Å、Whatman Partisil PK6F)、またはフラッシュクロマトグラフィ(シリカゲル60Å、EMD Chemicals)により精製された。Rf'sは、シリカゲルTLCプレート(シリカゲル60Å、EMD Chemicals)を用いて測定した。分析的HPLCクロマトグラムは、C18カラム(Agilent Zorbax 300SB-C18； 5ミクロン； 4.6 mm x 150 mm)を用いて得た。勾配を、溶媒A(0.1% TFA、H2O中)と溶媒B(0.5% TFA、CH3CN中)の間に適用した(Aの部分を5%(t=0)から100%(t=7.00 min)まで直線的に増加し、流速は一定で1mL/minであった)。試料は、典型的にはMeOHまたはCH3CNで0.1〜1mg/mLに希釈し、注射容量は、典型的には10μLであった。カラムは加熱せず、UV検出は254nmで行った。1H-NMRスペクトルをBruker Avance 400 MHz分光光度計で記録した。化学名はBeilstein Autonom 2.1ソフトウエアを用いて作製した。
【０２３１】
一般的手順
一般的手順A：Sonogashiraカップリング
【化１０】
2008534609.tif 000052
【０２３２】
DCM(5mL/mmol出発ヨウ化物)中の、適切な5-ヨード-ピロロ[2,3-d]ピリミジン、アルキン(2〜5当量)、Et3N(2〜5当量)、Pd(PPh3)4(0.01〜0.05当量)、およびCuI(0.05〜0.30当量)の混合物を0.5〜3h加熱還流した。反応混合物を飽和水性NaHCO3およびブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、次いで濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/DCM/Et3N 15:74:1、MeOH(0〜7vol%)を徐々に加える)により目的とする5-アルキニル-ピロロ[2,3-d]ピリミジンを得た(典型的には20〜70%の収率)。
【０２３３】
一般的手順B：ZnCl2介在脱保護
2008534609.tif 000053
【０２３４】
湿EtOH(5vol%水)中の、2-(ピバロイルアミノ)-ピロロ[2,3-d]ピリミジン、およびZnCl2(3〜20当量)の懸濁液を80℃に加熱し、HPLCでモニターした。反応が完結したらDCMを加え、有機層を飽和水性NaHCO3およびブラインで洗浄した。乾燥し(Na2SO4)、濃縮して目的とする2-アミノ-ピロロ[2,3-d]ピリミジンを得た。
【０２３５】
実施例1
3-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-プロパ-2-イン-1-オール
【化１１】
2008534609.tif 000054
(Shih、C. et al. Heterocycles、1993、35、825、および米国特許5,196,424参照。)
【０２３６】
工程1. 2-アミノ-3,7-ジヒドロ-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-オン
2,4-ジアミノ-6-ヒドロキシピリミジン(300 g、2.37 mol)、クロロアセトアルデヒド(50%水性溶液、382 g、2.43 mol、303mL、1.02 eq.)、酢酸ナトリウム(195 g、2.37 mol)、DMF(2.5 L)、および水(360mL)の混合物を室温で2日間機械的に撹拌した。得られた固体をろ過して回収し、水(50mL×3)で洗浄した。母液を濃縮してさらなる物質を得、これを水(50mL×3)で洗浄した。混合固体物質をMeOHから再結晶して標記化合物を白色粉末として得た(186g、52%の収率、HPLC純度：100%)。tR：2.21 min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 11.00(br. s、1H)、10.33(br. s、1H)、6.63(q、1H)、6.21(q、1H)、6.12(br. s、2H)。
【０２３７】
工程2. 2,2-ジメチル-N-(4-オキソ-4,7-ジヒドロ-3H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)-プロピオンアミド
ピリジン(2 L)中の2-アミノ-3,7-ジヒドロ-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-オン(186 g、1.23 mol)の溶液をトリメチルアセチルクロリド(475 g、3.94 mol、485mL、3.2 eq)で90℃、2h処理してN(2)-モノアシル化およびN(2),N(7)-ビスアシル化物質の混合物を得た。該溶媒を蒸発させ、残渣を水性アンモニア(37% NH3、310mL)およびMeOH(2L)にとり、室温で30分間撹拌してN(7)-ピバロイル基を選択的に開裂した。該固体をろ過して回収し、水(500mL×5)で洗浄し、次いで高真空で乾燥して標記化合物を固体として得た(193 g)。母液を濃縮してさらなる固体物質を得、これを回収し、水(50mL×5)で洗浄し、次いで乾燥した(77 g)。合計収率は93%(HPLC純度 98.6% )であった。tR：4.57 min. 1H-NMR(DMSO-d6) δ 12.00、(br. s、1H)、7.40(br. s、1H)、6.96(q、1H)、6.40(q、1H)、1.24(s、9H)。
【０２３８】
工程3. N-(4-クロロ-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)-2,2-ジメチル-プロピオンアミド
2,2-ジメチル-N-(4-オキソ-4,7-ジヒドロ-3H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)-プロピオンアミド(210 g、0.90 mol)、POCl3(828 g、5.40 mol、503mL、6.0 eq)、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド(411 g、1.80 mol)、N,N-ジメチルアニリン(220 g、231mL、1.80 mol)、およびアセトニトリル(2.0 L)の混合物を40〜60分間加熱還流し、HPLCでモニターした。溶媒ロータリーエバポレーターで蒸発させ、残渣を注意深く(注意：発熱および腐食)、徐々に氷水(16 L)に加えた。pHを固体NaOHで7に調節し、得られた沈殿物をろ過して回収した。乾燥して標記化合物(159 g、70%の収率 70%、HPLC純度 100%)を得た。tR：5.37 min. 1H-NMR(DMSO-d6) δ 12.35(br. s、1H)、10.06(br. s、1H)、7.54(q、1H)、6.52(q、1H)、1.25(s、9H)。
【０２３９】
工程4. N-(4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)-2,2-ジメチル-プロピオンアミド
無水THF(2 L)中のN-(4-クロロ-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)-2,2-ジメチル-プロピオンアミド(101 g、0.40 mol)の溶液を、N2雰囲気下、N-ヨードスクシンイミド(98.9g、0.44mol、1.1 eq.)で室温で40分間処理した。溶媒を蒸発させ、残渣をCH2Cl2(1.5 L)にとり、次いでNa2SO3(500mL×3)およびブライン(300mL×3)で洗浄した。蒸発させ、MeOHから再結晶して標記生成物を白色粉末として得た(122 g、81%の収率、HPLC純度：98.2%)。tR：6.19 min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 12.65(br.s、1H)、10.11(br. s、1H)、7.76(d、1H)、1.24(s、9H)。
【０２４０】
工程5. N-[4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド
N-(4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)-2,2-ジメチル-プロピオンアミド(37.8 g、0.1 mol)、2-クロロメチル-4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン・塩酸(23.1 g、0.104 mol)、微粉末K2CO3、(41.5 g、0.3 mol、3.0 eq.)、および無水DMF(200mL)の混合物を室温で一夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をCH2Cl2(500mL)にとり、ブラインで洗浄し(200mL×3)、蒸発させ、次いでMeOHから再結晶して標記生成物を白色粉末として得た(42.0g、80%の収率； HPLC純度 98%)。tR：6.49 min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 10.16(br. s、1H)、8.04(s、1H)、7.72(s、1H)、5.46(s、2H)、3.73(s、3H)、2.33(s、3H)、2.15(s、3H)、1.21(s、9H)。
【０２４１】
工程6. 4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
N-[4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド(1.0g、1.89mmol)、ZnCl2(1.29 g、9.47 mol、5.0 eq.)、およびEtOH/H2O溶液(25mL、体積比100:5)の混合物を80℃で一夜撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、固体をろ過して回収し、水(10mL×3)で洗浄し、次いでMeOHから再結晶して標記生成物を得た(0.67 g、85%の収率； HPLC純度 98%)。tR：5.39 min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 8.07(s、1H)、7.28(s、1H)、6.75(br. s、2H)、5.29(s、2H)、3.73(s、3H)、2.26(s、3H)、2.17(s、3H)。
【０２４２】
工程7. 3-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-プロパ-2-イン-1-オール 
標記化合物を、一般的手順Aに従って、4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)とプロパギルアルコールとのSonogashiraカップリングにより製造した。tR：4.42min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 8.04(s、1H)、7.32(s、1H)、6.71(br. s、2H)、5.27(s、2H)、5.22(t,1H)、4.26(d、1H)、3.71(s、3H)、2.24(s、3H)、2.14(s、3H)。
【０２４３】
実施例2
4-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ブタ-3-イン-1-オール
2008534609.tif 000055
【０２４４】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と3-ブチン-1-オールとのSonogashiraカップリングにより製造した。tR：4.54min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 8.04(s、1H)、7.22(s、1H)、6.69(br.s.、2H)、5.25(s、2H)、4.82(d、1H)、3.70(s、3H)、3.55(q、2H)、2.49(t、2H)、2.23(s、3H)、2.14(s、3H)。
【０２４５】
実施例3
5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イン-1-オール
2008534609.tif 000056
【０２４６】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と4-ペンチン-1-オールとのSonogashiraカップリングにより製造した。tR：4.71min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 8.04(s、1H)、7.22(s、1H)、6.69(br. s、2H)、5.25(s、2H)、4.48(d、1H)、3.71(s、3H)、3.50(q、2H)、2.42(t、2H)、2.23(s、3H)、2.14(s、3H)、1.65(5、2H)。
【０２４７】
実施例4
4-クロロ-5-(3-ジイソブチルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
【化１２】
2008534609.tif 000057
【０２４８】
工程1. N-[4-クロロ-5-(3-ヒドロキシ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド
標記化合物を、一般的手順Aに従ってN-[4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド(実施例1参照)とプロパギルアルコールとのSonogashiraカップリングにより製造した。tR：5.58 min.
1H-NMR(DMSO-d6)：δ 10.15(br. s、1H)、8.04(s、1H)、7.80(s、1H)、5.48(s、2H)、5.31(t、1H)、4.33(d、2H)、3.74(s、3H)、2.33(s、3H)、2.15(s、3H)、1.21(s、9H)。
【０２４９】
工程2. N-[4-クロロ-5-(3-ジイソブチルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド
DCM(50mL)中の、N-[4-クロロ-5-(3-ヒドロキシ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド(9.0g、19.7 mmol)、およびEt3N(2mL)の溶液をMsCl(15.3mL、19.7 mmol)で0℃で20分間処理し、次いで蒸発させてほぼ目的とするメシレート(10.7 g)を含む黄色の固体を得た。この固体の部分標本(106.8mg、0.2 mmol)をDCM(2mL)中のジイソブチルアミン(25.9mg、24.8μL)で0℃で10時間、次いで25℃で3日間処理した。蒸発およびプレパラティブプレートクロマトグラフィにより標記化合物を得た。
【０２５０】
工程3. 4-クロロ-5-(3-ジイソブチルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
標記化合物を、一般的手順Bに従ってN-[4-クロロ-5-(3-ジイソブチルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミドのピバロイル保護基をZnCl2で開裂させて製造した。tR：5.23 min.  1H-NMR(CDCl3) δ 8.23(s、1H)、7.08(s、1H)、5.31(s、2H)、4.99(s、1H)、3.76(s、3H)、3.56(s、2H)、2.29(s、3H)、2.27(d、4H)、2.21(s、3H)、1.74(m、2H)、0.90(d、12H)。
【０２５１】
実施例5
4-クロロ-5-(3-ジイソプロピルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
【化１３】
2008534609.tif 000058
【０２５２】
工程1. N-[4-クロロ-5-(3-ジイソプロピルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド
DCM(50mL)中の、N-[4-クロロ-5-(3-ヒドロキシ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド(9.0 g、19.7 mmol)およびEt3N(2mL)の溶液をMsCl(15.3mL、19.7 mmol)で0℃で20分間処理し、次いで蒸発させてほぼ目的とするメシレート(10.7 g)を含む黄色固体を得た。この固体の部分標本(106.8mg、0.2 mmol)をDCM(2mL)中のジイソプロピルアミン(20.3mg、28.1μL)で0℃で10時間、次いで25℃で3日間処理した。蒸発およびプレパラティブプレートクロマトグラフィにより標記化合物を得た。
【０２５３】
工程2. 4-クロロ-5-(3-ジイソプロピルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
標記化合物を、一般的手順Bに従ってN-[4-クロロ-5-(3-ジイソプロピルアミノ-プロパ-1-イニル)-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミドのピバロイル保護基をZnCl2で開裂させて製造した。tR：4.71min.  1H-NMR(CDCl3) δ 8.24(s、1H)、7.05(s、1H)、5.30(s、2H)、4.96(s、1H)、3.76(s、3H)、3.68(s、2H)、3.27(7、2H)、2.27(s、2H)、2.20(s、2H)、1.15(d、12H)。
【０２５４】
実施例6
4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-ピリジン-2-イルエチニル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000059
【０２５５】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と2-エチニルピリジンとのSonogashiraカップリングにより製造した。tR：4.65 min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 8.59(s、1H)、8.07(s、1H)、7.82(td、1H)、7.62(s、1H)、7.56(d、1H)、7.36(td、1H)、6.84(br. s、2H)、5.36(s、2H)、3.74(s、3H)、2.28(s、3H)、2.17(s、3H)。
【０２５６】
実施例7
6-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ヘキサ-5-イン-1-オール
2008534609.tif 000060
【０２５７】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と5-ヘキシン-1-オールとのSonogashiraカップリングにより製造した。tR：4.92 min.  1H-NMR(DMSO-d6) δ 8.04(s、1H)、7.22(s、1H)、6.69(br. s、2H)、5.25(s、2H)、4.39(t、1H)、3.70(s、3H)、3.40(q、2H)、2.39(t、2H)、2.23(s、3H)、2.14(s、3H)、1.55(m、4H)。
【０２５８】
実施例8
4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-トリメチルシラニルエチニル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000061
【０２５９】
工程1：N-[4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-トリメチルシラニルエチニル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド
標記化合物を、一般的手順Aに従ってN-[4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミド(実施例1参照)とエチニル-トリメチルシランとのSonogashiraカップリングにより製造した。tR = 7.48 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.18(s、2H)、7.38(s、1H)、5.49(s、2H)、3.74(s、3H)、2.24(s、6H)、1.35(s、9H)、0.24(s、9H)。
【０２６０】
工程2：4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-トリメチルシラニルエチニル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
標記化合物を、一般的手順Bに従ってN-[4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-トリメチルシラニルエチニル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル]-2,2-ジメチル-プロピオンアミドのピバロイル保護基をZnCl2で開裂させて製造した。tR = 6.56 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.22(s、1H)、7.11(s、1H)、5.30(s、2H)、5.09(s、2H)、3.75(s、3H)、2.26(s、3H)、2.18(s、3H)、0.24(s、9H)。
【０２６１】
実施例9
5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イン酸
2008534609.tif 000062
【０２６２】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と4-ペンチン酸とのSonogashiraカップリングにより製造した。tR = 4.73 min.  1H NMR(DMSO-d6) δ 12.2(s、1H)、8.15(s、1H)、7.28(s、1H)、6.80(s、2H)、5.33(s、2H)、3.73(s、3H)、3.31(br. s、2H)、2362(br. t、2H)、2.27(s、3H)、2.17(s、3H)。
【０２６３】
実施例10
5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イン酸 ジエチルアミド
2008534609.tif 000063
【０２６４】
5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イン酸(前記実施例参照、25mg)、Et2NH(100μL)、EDCI(87mg)、HOBt(50mg)、およびDMF(1mL)の混合物を室温で16時間撹拌した。プレパラティブプレートクロマトグラフィ(EtOAc/ヘキサン 2:1)により標記化合物を得た。tR = 5.33 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.23(s、1H)、7.01(s、1H)、5.32(s、2H)、4.98(s、2H)、3.76(s、3H)、3.42(q、2H)、3.33(q、2H)、2.78(dd、2H)、2.64(dd、2H)、2.27(s、3H)、2.18(s、3H)、1.20(t、3H)、1.13(t、3H)。
【０２６５】
実施例11
5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-1-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-ペンタ-4-イン-1-オン
2008534609.tif 000064
工程1：1-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-ペンタ-4-イン-1-オン
【０２６６】
DCM(10mL)中の、4-ペンチン酸(519mg、5.29 mmol)、およびEt3N(737μL、5.29 mmol)の溶液をエチルクロロホルメート(504μL、5.29 mmol)で室温で15分間処理した。次に、N-メチル-ピペラジン(588μL、5.29 mmol)を加え、撹拌を45分間持続した。後処理(work-up)(飽和水性NaHCO3)および濃縮して標記化合物を無色油状物として得た。1H NMR(CDCl3) δ 3.63(t、2H)、3.48(t、2H)、2.55(m、4H)、2.38(quint.、4H)、2.30(s、3H)。
工程2：5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-1-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-ペンタ-4-イン-1-オン
【０２６７】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と1-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-ペンタ-4-イン-1-オンとのSonogashiraカップリングにより得た。tR = 4.16 min.
1H NMR(CDCl3) δ 8.22(s、1H)、7.00(s、1H)、5.30(s、2H)、5.14(s、2H)、3.74(s、3H)、3.64(t、2H)、3.50(t、2H)、2.76(dd、2H)、2.64(dd、2H)、2.29(s、3H)、2.24(s、3H)、2.18(s、3H)。
【０２６８】
実施例12
5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イン酸 アミド
2008534609.tif 000065
工程1：ペンタ-4-イン酸アミド
【０２６９】
DCM(10mL)中の4-ペンチン酸(517mg、5.29 mmol)、およびEt3N(737μL、5.29 mmol)の溶液をエチルクロロホルメート(504μL、5.29 mmol)で室温で15分間処理した。次に、NH3(MeOH中7M、1mL、7mmol)を加え、撹拌を5分間持続した。後処理(飽和水性NaHCO3)および濃縮して標記化合物を無色固体として得た。1H NMR(CDCl3) δ 6.03(s、1H)、5.86(s、1H)、2.55(m、2H)、2.46(m、2H)、2.02(t、1H)。
工程2：5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イン酸 アミド
【０２７０】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)とペンタ-4-イン酸アミドとのSonogashiraカップリングにより得た。tR = 4.35 min.  1H NMR(DMSO-d6) δ 8.07(s、1H)、7.36(s、1H)、7.23(s、1H)、6.87(s、1H)、6.71(s、2H)、5.28(s、2H)、3.72(s、3H)、2.59(t、2H)、2.34(t、2H)、2.25(s、3H)、2.16(s、3H)。
【０２７１】
実施例13
{3-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-プロパ-2-イニル}-カルバミン酸 tert-ブチル エステル
2008534609.tif 000066
工程1：プロパ-2-イニル-カルバミン酸 tert-ブチル エステル
【０２７２】
DCM(10mL)中のプロパギルアミン(1g、18 mmol)の溶液を(BOC)2O(4.0 g、18 mmol)で室温で3時間処理した。蒸発させて標記化合物を油状物として得た。1H NMR(CDCl3) δ 4.80(s、1H)、3.93(s、2H)、2.23(t、1H)、1.47(s、9H)。
工程2：{3-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-プロパ-2-イニル}-カルバミン酸 tert-ブチル エステル
【０２７３】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)とプロパ-2-イニル-カルバミン酸 tert-ブチルエステルとのSonogashiraカップリングにより得た。tR = 5.91 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.20(s、1H)、7.05(s、1H)、5.36(s、2H)、5.31(s、2H)、4.82(s、1H)、4.16(s、2H)、3.76(s、3H)、2.26(s、3H)、2.24(s、3H)、1.47(s、9H)。
【０２７４】
実施例14
5-(3-アミノ-プロパ-1-イニル)-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000067
【０２７５】
DCM(3mL)中の{3-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-プロパ-2-イニル}-カルバミン酸 tert-ブチル エステル(先の実施例参照、22mg)の溶液をTFA(0.6mL)で室温で15分間処理した。蒸発、後処理(DCM/飽和水性NaHCO3)、乾燥(Na2SO4)、次いで蒸発により標記化合物を油状物として得た。
tR = 3.85 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.24(s、1H)、7.06(s、1H)、5.32(s、2H)、5.02(s、2H)、3.75(s、3H)、2.27(s、3H)、2.20(s、3H)。
【０２７６】
実施例15
{5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イニル}-カルバミン酸 tert-ブチル エステル
2008534609.tif 000068
工程1：ペンタ-4-イニル-カルバミン酸 tert-ブチル エステル
【０２７７】
DCM(5mL)中のペンタ-4-イニルアミン(480mg； Li、Y. et al. J. Am. Chem. Soc. 1996、118、9295)の溶液を(BOC)2Oで室温で15分間処理した。蒸発させて標記化合物を無色油状物として得た。  1H NMR(CDCl3) δ 4.68(s、1H)、3.24(q、2H)、2.25(td、2H)、1.97(t、1H)、1.70(quint.、2H)、1.45(s、9H)。
工程2：{5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イニル}-カルバミン酸 tert-ブチル エステル
【０２７８】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)とペンタ-4-イニル-カルバミン酸 tert-ブチル エステルとのSonogashiraカップリングにより得た。 tR = 5.96 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.23(s、1H)、7.02(s、1H)、5.30(s、2H)、5.07(s、2H)、 4.80(br. t、1H)、3.75(s、3H)、3.30(q、2H)、2.48(t、2H)、2.26(s、3H)、2.19(s、3H)、1.80(quint.、2H)、1.43(s、9H)。
【０２７９】
実施例16
5-(5-アミノ-ペンタ-1-イニル)-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000069
【０２８０】
DCM(1.0mL)中の{5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イニル}-カルバミン酸 tert-ブチル エステル(先の実施例参照、33mg)の溶液を、TFA(0.2mL)で室温で10分間処理した。反応混合物を濃縮し、水(1.5mL)にとり、EtOAc(1.5mL)で洗浄し、飽和水性NH4OH(0.5mL)でアルカリ性とし、次いでEtOAc(25mL)に逆抽出したした。洗浄(NH4OH 1M)、乾燥(Na2SO4)、次いで濃縮して標記化合物を得た。tR = 4.37 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.15(s、1H)、6.97(s、1H)、5.25(s、2H)、3.72(s、3H)、2.94(m、2H)、2.48(t、2H)、2.23(s、3H)、2.16(s、3H)、1.80(quint.、2H)。
【０２８１】
実施例17
2-{5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イニル}-イソインドール-1,3-ジオン
2008534609.tif 000070
【０２８２】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と2-ペンタ-4-イニル-イソインドール-1,3-ジオンとのSonogashiraカップリングにより得た(Li、Y. et al. J. Am. Chem. Soc. 1996、118、9295)。  tR = 6.08 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.17(s、1H)、7.75(dd、2H)、7.58(dd、2H)、6.85(s、1H)、5.22(s、2H)、3.81(t、2H)、3.72(s、3H)、2.46(t、2H)、2.23(s、3H)、2.14(s、3H)、1.95(quint.、2H)。
【０２８３】
実施例18
4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-(4-モルフィン-4-イル-ブタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000071
工程1：メタンスルホン酸 ブタ-3-イニル エステル
【０２８４】
DCM(40mL)中の、3-ブタ-1-インオン(5.62 g、80.2 mmoL)、およびEt3N(14.5mL、104 mmol)の溶液をMsCl(7.48mL、96.2 mmol)で0℃で10分間処理した。後処理(水；飽和水性NaHCO3)、乾燥(Na2SO4)、次いで濃縮して標記化合物を淡橙色油状物として得た。
1H NMR(CDCl3) δ 4.32(t、2H)、3.07(s、3H)、2.67(td、2H)、2.09(t、2H)。
工程2：4-ブタ-3-イニル-モルフィン
【０２８５】
メタンスルホン酸 ブタ-3-イニルエステル(10.1 g、68 mmol)、およびモルフィン(12.5mL、143 mmol)の混合物を100℃で1時間加熱した。混合物をEt2O(50mL)で希釈し、次いでろ過した。固体残渣を捨て、母液を3N HClで抽出した。水性層を、NaOHで塩基性化し、EtOAcに逆抽出した。乾燥(Na2SO4)、濃縮、次いで蒸留(短経路、b.p.= 130℃、〜5mmHg)して標記化合物を無色油状物として得た。1H NMR(CDCl3) δ 3.72(t、4H)、2.60(t、2H)、2.48(t、4H)、2.39(td、2H)、2.00(t、1H)。
工程3：4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-(4-モルフィン-4-イル-ブタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
【０２８６】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と4-ブタ-3-イニル-モルフィンとのSonogashiraカップリングにより得た。tR = 4.12 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.33(s、1H)、6.96(s、1H)、5.26(s、2H)、5.12(s、2H)、3.76(s、3H)、3.72(t、4H)、2.67(m、2H)、2.60(m、2H)、2.52(t、4H)、2.25(s、3H)、2.20(s、3H)。
【０２８７】
実施例19
4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-(5-モルフィン-4-イル-ペンタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000072
工程1：5-ヨード-ペンタ-1-イン
【０２８８】
5-クロロ-ペンタ-1-イン(5.0mL、47 mmol)、NaI(9.7 g、65 mmol)、およびアセトン(20mL)の混合物を15時間加熱還流した。さらにNaI(9.7 g、65 mmol)を加え、還流を24時間持続した。ろ過および濃縮後、残渣をヘキサンに溶解し、次いで水および水性Na2S2O3で洗浄した。乾燥(Na2SO4)および濃縮して標記化合物を得た。1H NMR(CDCl3) δ 3.33(t、2H)、2.36(td、2H)、2.03(quint.、2H)、2.01(t、1H)。
工程2：4-ペンタ-4-イニル-モルフィン
【０２８９】
5-ヨード-ペンタ-1-イン(2.40 g、12.3 mmol)、およびモルフィン(2.70 g、30.9 mmol)の混合物を80℃で15分間撹拌した。混合物をEt2Oで希釈し、次いでろ過した。固体残渣を捨て、母液を3N HClで抽出した。水性層を、NaOHで塩基性とし、次いでEtOAcに逆抽出した。乾燥(Na2SO4)および濃縮して標記化合物を淡橙色油状物として得た。1H NMR(CDCl3) δ 3.67(t、4H)、2.39(m、6H)、2.21(td、2H)、1.93(t、1H)、1.67(quint.、2H)。
工程3：4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-5-(5-モルフィン-4-イル-ペンタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
【０２９０】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)と4-ペンタ-4-イニル-モルフィンとのSonogashiraカップリングにより得た。tR = 4.26 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.21(s、1H)、7.00(s、1H)、5.29(s、2H)、5.13(s、2H)、3.74(s、3H)、3.71(t、4H)、2.51-2.45(m、8H)、2.25(s、3H)、2.18(s、3H)、1.78(quint.、2H)。
【０２９１】
実施例20
5-(4-tert-ブチルアミノ-ブタ-1-イニル)-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000073
工程1：tert-ブチル-ブタ-3-イニル-アミン
【０２９２】
tert-BuNH2(3.54 g. 48 mmol)中のトルエン-4-スルホン酸 ブタ-3-イニル エステル(1.57 g、7.1 mmol)の溶液を18時間加熱還流した。反応混合物をEt2O(20mL)で希釈し、ろ過し、次いで濃縮して標記生成物を得た。1H NMR(CDCl3) δ 2.74(t、2H)、2.38(td、2H)、2.00(t、1H)、1.12(s、9H)。
工程2：5-(4-tert-ブチルアミノ-ブタ-1-イニル)-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
【０２９３】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)とtert-ブチル-ブタ-3-イニル-アミンとのSonogashiraカップリングにより得た。tR = 4.38 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.21(s、1H)、7.03(s、1H)、5.29(s、2H)、5.10(s、2H)、3.74(s、3H)、2.81(t、2H)、2.62(t、2H)、2.25(s、3H)、2.18(s、3H)、1.13(s、9H)。
【０２９４】
実施例21
5-(5-tert-ブチルアミノ-ペンタ-1-イニル)-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
2008534609.tif 000074
工程1：tert-ブチル-ペンタ-4-イニル-アミン
【０２９５】
tert-BuNH2(2.0 g. 27 mmol)中の5-ヨード-ペンタ-1-イン(1.0 g、5.2 mmol)の溶液を、4時間加熱還流し、蒸発させ、Et2Oで希釈し、ろ過し、次いで濃縮して標記化合物を得た。1H NMR(CDCl3) δ 2.67(t、2H)、2.27(td、2H)、1.96(t、1H)、1.70(quint.、2H)、1.11(s、9H)。
工程2：5-(5-tert-ブチルアミノ-ペンタ-1-イニル)-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン
【０２９６】
標記化合物を、一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルアミン(実施例1参照)とtert-ブチル-ペンタ-4-イニル-アミンとのSonogashiraカップリングにより得た。tR = 4.51 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.23(s、1H)、7.02(s、1H)、5.30(s、2H)、5.00(s、2H)、3.75(s、3H)、2.74(t、2H)、2.50(t、2H)、2.27(s、3H)、2.19(s、3H)、1.76(quint.、2H)、1.12(s、9H)。
【０２９７】
実施例22
ジメチルアミノ-酢酸 3-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-プロパ-2-イニル エステル
2008534609.tif 000075
【０２９８】
無水ピリジン(3mL)中の3-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-プロパ-2-イン-1-オール(実施例1参照、177mg、0.48 mmol)の溶液を、N,N-ジメチルアミノ-アセチルクロリド・塩酸(113mg、0.72 mmol)で室温で30分間処理した。トルエン(10mL)を加えると粘着性のペレットが形成された。トルエン溶液を捨て、該ペレットを水とDCMの間に分配した。DCM層を濃縮し、次いでフラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/DCM/Et3N 33:66:1、MeOH(0〜2%)を徐々に添加)で精製して標記化合物を得た。tR = 4.51 min.  1H NMR(CDCl3) δ 8.23(s、1H)、7.14(s、1H)、5.31(s、2H)、5.00(s、2H)、4.98(s、2H)、3.76(s、3H)、3.25(s、2H)、2.38(s、6H)、2.28(s、3H)、2.20(s、3H)。
【０２９９】
実施例23
5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルペンタ-4-イン-2-オール
2008534609.tif 000076
【０３００】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと2-メチルペンタ-4-イン-2-オールとのSonogashiraカップリングにより(H. Zhang et al.、Tetrahedron Lett. 1999、40、7851)、標記化合物を固体として得た。Mp = 163-165 ℃. HPLC Rt = 4.98 min。
【０３０１】
実施例24
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(5-(4-メチルピペラジン-1-イル)ペンタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000077
工程1：1-メチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン
【０３０２】
ペンタ-4-イニル メタンスルホネート(887mg)、およびN-メチルピペラジン(607μL)の混合物を80℃で4.5時間処理し、1,2-ジクロロエタン(5mL)で希釈し、次いで70℃で18時間加熱した。飽和水性NaHCO3を加え(10mL)、混合物をDCM(3 x 40mL)で抽出し、Na2SO4で乾燥し、次いで濃縮して1-メチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン(0.23 g)を得た。
工程2
【０３０３】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-メチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。Mp = 160.1-162.3 ℃. HPLC Rt = 4.08 min。
【０３０４】
実施例25
4-クロロ-5-(5-(4-エチルピペラジン-1-イル)ペンタ-1-イニル)-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000078
工程1：1-エチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン
【０３０５】
ペンタ-4-イニル メタンスルホネート(849mg)、およびN-メチル ピペラジン(665μL)の混合物を80℃で3時間加熱し、1,2-ジクロロエタン(5mL)で希釈し、次いで70℃で18時間加熱した。飽和水性NaHCO3を加え(10mL)、混合物をDCM(1 x 40mL)で抽出し、Na2SO4で乾燥し、次いで濃縮して0.56gの1-エチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジンを得た。
工程2 
【０３０６】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-エチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。Mp = 142.3-144.1℃. HPLC Rt = 4.11 min。
【０３０７】
実施例26
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ブタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000079
工程1：1-(ブタ-3-イニル)-4-メチルピペラジン
【０３０８】
ブタ-3-イニル 4-メチルベンゼンスルホネート(972mg)、およびN-メチル ピペラジン(482μL)の混合物を80℃で4.5時間加熱し、1,2-ジクロロエタン(5mL)で希釈し、次いで70℃で18時間加熱した。飽和水性NaHCO3を加え(10mL)、および混合物をDCM(3 x 40mL)で抽出し、次いで濃縮して0.70 gの1-(ブタ-3-イニル)-4-メチルピペラジンをトシレート塩および遊離塩基の3:2混合物として得た。
工程2
【０３０９】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-(ブタ-3-イニル)-4-メチルピペラジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を油状物として得た。HPLC Rt = 4.05 min。
【０３１０】
実施例27
4-(5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ペンタ-4-イニル)-N-メチルピペラジン-1-カルボキシアミド
2008534609.tif 000080
工程1：1-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン
【０３１１】
EtOH(80mL)中の、ペンタ-4-イニル メタンスルホネート(19.55 g)、およびピペラジン(41.5 g)の溶液を1時間加熱還流し、次いで蒸発させた。残渣をNaOH 2M(70mL)にとり、次いでEt2O(70mL)で抽出した。蒸発させ1-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン(4.4 g)を得た。
工程2：4-ニトロフェニル 4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシlate
【０３１２】
1,2-ジクロロエタン(22mL)中の、1-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン(2.2 g)、およびEt3N(22mL)の溶液をp-ニトロフェニルクロロホルメート(2.9 g)で室温で10分間処理した。後処理およびシリカゲルクロマトグラフィ(DCM:EtOAc 1:3→0:3)により4-ニトロフェニル 4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシレートを黄色油状物として得た(2.96 g)。
工程3：N-メチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシアミド
【０３１３】
THF(10mL)中の、4-ニトロフェニル 4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシレート(1.37 g)の溶液を40%水性MeNH2(10mL)で70℃で2時間処理した。混合物を濃縮し、濃NH4OH(5mL)および水(15mL)で希釈した。抽出(DCM、80mL)および濃縮してN-メチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシアミド(0.659 g)を得た。
工程4
【０３１４】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンとN-メチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシアミドとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。Mp = 191.2-193.2 ℃. HPLC Rt = 4.24 min。
【０３１５】
実施例28
4-(5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ペンタ-4-イニル)-N-エチルピペラジン-1-カルボキシアミド
2008534609.tif 000081
工程1：N-エチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシアミド
【０３１６】
DCM(5mL)中の1-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン(1.08)の溶液をエチルイソシアネート(0.56mL)で室温で2時間処理し、次いで蒸発させてN-エチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシアミドを得た。
工程2
【０３１７】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンとN-エチル-4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-カルボキシアミドとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。Mp = 200.5-203.3℃. HPLC Rt = 4.35 min。
【０３１８】
実施例29
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(4-(4-フェニルピペラジン-1-イル)ブタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000082
工程1：1-(ブタ-3-イニル)-4-フェニルピペラジン
【０３１９】
1,2-ジクロロエタン(5mL)中の、ブタ-3-イニル 4-メチルベンゼンスルホネート(1.72 g)、N-フェニル ピペラジン(1.17mL)、およびジイソプロイルエチルアミン(1.45mL)の溶液を、一夜加熱還流した。混合物を濃縮し、飽和水性NaHCO3(5mL)で希釈し、次いでDCM(2 x 50mL)で抽出した。乾燥(Na2SO4)およびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ(3% Et3N in EtOAc)により1-(ブタ-3-イニル)-4-フェニルピペラジン(0.76 g)を得た。
工程2
【０３２０】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-(ブタ-3-イニル)-4-フェニルピペラジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.97 min。
【０３２１】
実施例30
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(4-(4-(ピリジン-2-イル)ピペラジン-1-イル)ブタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000083
工程1：1-(ブタ-3-イニル)-4-(ピリジン-2-イル)ピペラジン
【０３２２】
1,2-ジクロロエタン(7mL)中の、ブタ-3-イニル 4-メチルベンゼンスルホネート(1.27 g)、1-(ピリジン-2-イル)ピペラジン(1.17 g)、およびジイソプロイルエチルアミン(1.37mL)の溶液を一夜加熱還流した。混合物を濃縮し、飽和水性NaHCO3(5mL)で希釈し、次いでDCM(2 x 50mL)で抽出した。乾燥(Na2SO4)およびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/ヘキサン 1:1→1:0)により1-(ブタ-3-イニル)-4-(ピリジン-2-イル)ピペラジン(0.59 g)を得た。
工程2
【０３２３】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-(ブタ-3-イニル)-4-(ピリジン-2-イル)ピペラジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.09 min。
【０３２４】
実施例31
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(4-(4-(ピリミジン-2-イル)ピペラジン-1-イル)ブタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000084
工程1：2-(4-(ブタ-3-イニル)ピペラジン-1-イル)ピリミジン
【０３２５】
1,2-ジクロロエタン(6mL)中の、ブタ-3-イニル 4-メチルベンゼンスルホネート(1.14 g)、2-(ピペラジン-1-イル)ピリミジン(1.06 g)、およびジイソプロイルエチルアミン(1.24mL)の溶液を一夜加熱還流した。混合物を濃縮し、飽和水性NaHCO3(5mL)で希釈し、次いでDCM(2 x 50mL)で抽出した。乾燥(Na2SO4)およびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/ヘキサン 1:1→1:0)により2-(4-(ブタ-3-イニル)ピペラジン-1-イル)ピリミジン(0.60 g)を得た。
工程2
【０３２６】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと2-(4-(ブタ-3-イニル)ピペラジン-1-イル)ピリミジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.50 min。
【０３２７】
実施例32
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(5-(4-フェニルピペラジン-1-イル)ペンタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000085
工程1：1-(ペンタ-4-イニル)-4-フェニルピペラジン
【０３２８】
THF(5mL)中の、ペンタ-4-イニル メタンスルホネート(1.05 g)、N-フェニル ピペラジン(1.02 g)、およびジイソプロイルエチルアミン(1.2mL)の溶液を一夜加熱還流した。混合物を濃縮し、水性NaOH 2M(10mL)で希釈し、次いでDCM(2 x 50mL)で抽出した。乾燥(Na2SO4)およびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/ヘキサン 2:1→2:0)により1-(ペンタ-4-イニル)-4-フェニルピペラジン(1.03 g)を得た。
工程2
【０３２９】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-(ペンタ-4-イニル)-4-フェニルピペラジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 5.08 min。
【０３３０】
実施例33
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(5-(4-(ピリジン-2-イル)ピペラジン-1-イル)ペンタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000086
工程1：1-(ペンタ-4-イニル)-4-(ピリジン-2-イル)ピペラジン
【０３３１】
THF(5mL)中の、ペンタ-4-イニル メタンスルホネート(1.05 g)、1-(ピリジン-2-イル)ピペラジン(1.02 g)、およびジイソプロイルエチルアミン(1.2mL)の溶液を一夜加熱還流した。混合物を濃縮し、水性NaOH 2M(10mL)で希釈し、次いでDCM(2 x 50mL)で抽出した。乾燥(Na2SO4)およびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/ヘキサン 2:1→2:0)により1-(ペンタ-4-イニル)-4-(ピリジン-2-イル)ピペラジン(1.02 g)を得た。
工程2
【０３３２】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-(ペンタ-4-イニル)-4-(ピリジン-2-イル)ピペラジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.23 min。
【０３３３】
実施例34
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(5-(4-(ピリミジン-2-イル)ピペラジン-1-イル)ペンタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000087
工程1：2-(4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-イル)ピリミジン
【０３３４】
THF(5mL)中のペンタ-4-イニル メタンスルホネート(1.05 g)、2-(ピペラジン-1-イル)ピリミジン(1.02 g)、およびジイソプロイルエチルアミン(1.2mL)の溶液を一夜加熱還流した。混合物を濃縮し、水性NaOH 2M(10mL)で希釈し、次いでDCM(2 x 50mL)で抽出した。乾燥(Na2SO4)およびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ(EtOAc/ヘキサン 2:1→2:0)により2-(4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-イル)ピリミジン(0.95 g)を得た。
工程2
【０３３５】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと2-(4-(ペンタ-4-イニル)ピペラジン-1-イル)ピリミジンとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.61 min。
【０３３６】
実施例35
5-(5-(1H-イミダゾール-1-イル)ペンタ-1-イニル)-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000088
工程1：1-(ペンタ-4-イニル)-1H-イミダゾール
【０３３７】
2-ブタノン(11mL)中の、ペンタ-4-イニル メタンスルホネート(1.06 g)、イミダゾール(534mg)、およびK2CO3(3.66 g)の混合物を一夜加熱還流した。後処理(DCM、H2O)、乾燥(Na2SO4)、次いで濃縮して1-(ペンタ-4-イニル)-1H-イミダゾール(472mg)を得た。
工程2
【０３３８】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-(ペンタ-4-イニル)-1H-イミダゾールとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.40 min。
【０３３９】
実施例36
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル エチルカーボネート
2008534609.tif 000089
【０３４０】
無水DMA(25mL)中の、4-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ブタ-3-イン-1-オール(実施例2参照)(1.53 g)、およびNaH(95%、0.38 g)の溶液を、エチルクロロホルメート(1.5mL)で0〜23℃で0.5時間処理した。後処理およびプレパラティブHPLCにより標記化合物を得た。HPLC Rt = 5.65 min。
【０３４１】
実施例37
エチル-4-クロロ-5-(4-(エトキシカルボニルオキシ)ブタ-1-イニル)-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イルカルバメート
2008534609.tif 000090
【０３４２】
無水ピリジン(5mL)およびDCM(25mL)中の、4-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ブタ-3-イン-1-オール(実施例2参照)(0.73 g)の懸濁液を、エチルクロロホルメート(1mL)で室温で30分間処理した。混合物を0℃に冷却し、さらにEtOCOCl(1mL)で処理し、次いで温度を徐々に一晩で室温とした。反応混合物をDCM(30mL)で希釈し、順次H2O、NH4OH 1M、およびブラインで洗浄した。DCMを蒸発させ(残存ピリジンは蒸発しない)、次いでMeOH(20mL)を加えて生成物を白色針状物として結晶させる。HPLC Rt = 6.28 min。
【０３４３】
実施例38
4-(4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル)-N-メチルピペラジン-1-カルボキシアミド
2008534609.tif 000091
工程1：1-(ブタ-3-イニル)ピペラジン
【０３４４】
EtOH(6mL)中の、ブタ-3-イニル 4-メチルベンゼンスルホネート(2.0mL)、およびピペラジン(2.0 g)の溶液を30分間加熱還流した。混合物を濃縮し、NaOH 2M(8mL)で希釈し、次いでEt2O(50mL)で抽出した。有機層を蒸発させてモノおよびビス-アルキル化ピペラジンの2：1混合物(450mg)を得た(これは捨てた)。水性層をさらにDCM(100mL)で抽出して1-(ブタ-3-イニル)ピペラジン(640mg)を得た。
工程2：4-(ブタ-3-イニル)-N-メチルピペラジン-1-カルボキシアミド
【０３４５】
THF(4mL)中の1-(ブタ-3-イニル)ピペラジン(445mg)の溶液を4-ニトロフェニル カルボノクロリデート(649mg)で室温で5分間処理した。沈殿物が速やかに形成され、次いで反応を確実に完結させるため懸濁液をEt3N(0.45mL)で処理した。懸濁液を、H2O(2mL)、MeOH(2mL)、および40% aq. MeNH2(4.0mL)で希釈し、次いで室温で3日間撹拌した。DCM(50mL)で抽出し、次いで洗浄(NaOH 2M)、乾燥(Na2SO4)、濃縮して4-(ブタ-3-イニル)-N-メチルピペラジン-1-カルボキシアミド(370mg)を得た。
工程3
【０３４６】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと4-(ブタ-3-イニル)-N-メチルピペラジン-1-カルボキシアミドとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.10 min。
【０３４７】
実施例39
5-(4-(1H-イミダゾール-1-イル)ブタ-1-イニル)-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000092
工程1：1-(ブタ-3-イニル)-1H-イミダゾール 
【０３４８】
2-ブタノン(10mL)中の、ブタ-3-イニル 4-メチルベンゼンスルホネート(1.04 g)、イミダゾール(573mg)、およびK2CO3(3.88 g)の混合物を一夜加熱還流した。後処理(DCM、H2O)、乾燥(Na2SO4)、次いで濃縮して1-(ブタ-3-イニル)-1H-イミダゾール(501mg)を得た。
工程2
【０３４９】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと1-(ブタ-3-イニル)-1H-イミダゾールとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.21 min。
【０３５０】
実施例40
(S)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル 2-アミノプロパノエート
2008534609.tif 000093
【０３５１】
無水DMA(4mL)中の、4-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ブタ-3-イン-1-オール(実施例2参照)(51.7mg)、N-Bocアラニン(53.3mg)、DMAP(33.7mg)、およびEDCI(54.9mg)の溶液を室温で一夜撹拌した。後処理(EtOAc；H2O)して粗Boc保護中間体を得た。DCM(1.0mL)中のこの中間体(40mg)の溶液をTFA(0.2mL)で室温で5分間処理し、次いで蒸発させた。該物質をMeOH(1ml)および水(10mL)に溶解し、次いでEt2O(10mL)で洗浄した。有機層を捨てた。水性層を、飽和水性NaHCO3でpH>7とし、次いでDCMで逆抽出した。標記化合物を固体として単離した。HPLC Rt = 4.37 min。
【０３５２】
実施例41
(R)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル 2-アミノ-3-メチルブタノエート
2008534609.tif 000094
【０３５３】
この化合物は、N-BocバリンをN-Bocアラニンのかわりに用い、実施例40で用いたのと同じ方法により得、標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.58 min。
【０３５４】
実施例42
(R)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル 2-アミノ-4-メチルペンタノエート
2008534609.tif 000095
【０３５５】
この化合物は、N-BocイソロイシンをN-Bocバリンのかわりに用い、実施例40で用いたのと同じ方法により得、標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.76 min。
【０３５６】
実施例43
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル ジ-tert-ブチル ホスフェート
2008534609.tif 000096
【０３５７】
THF(160mL)中の、4-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ブタ-3-イン-1-オール(実施例2参照)(4.0 g)、および1-H-テトラゾール(0.45M、アセトニトリル中、70mL)の溶液をジ-tert-ブチル ジイソプロピルホスホアミダイト(16.4mL)で室温で2時間処理した。該溶液を0℃に冷却し、次いで30%水性H2O2(11mL)で30分間処理した。後処理(EtOAc、aq. NaHCO3)、および逆相プレパラティブHPLCにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 6.13 min。
【０３５８】
実施例44
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル・リン酸二水素塩(ジハイドロゲンホスフェート)
2008534609.tif 000097
【０３５９】
DCM()中の4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル ジ-tert-ブチル ホスフェート(実施例43参照)の溶液をTFA()で室温で()時間処理した。蒸発させて標記化合物をTFA塩(5 g)として処理した。粗物質をEt3N(0.7mL)およびMeOH(60mL)の混合物に溶解し、Dowex 50Wx2-400(20 g、MeOHで予備洗浄)にロードし、次いで樹脂をMeOH(200mL)で洗浄して過剰のTFAを除去した。目的とするホスフェートをEt3N:MeOH 1:10(200mL)を用いて樹脂から放出させた。溶液を濃縮し、該ホスフェートを油状のトリエチルアミン塩(2.75 g)として得た。結晶化をEtOH(60mL)で誘導した。混合物を室温で1.5時間、次いで-20℃で一夜放置し、結晶の最初の収穫を得た(0.64 g)。混合物を濃縮し、結晶化手順を反復し、第2の収穫を得た(0.74 g)。混合トリエチルアミン塩(1274mg)をMeOH(50mL)に溶解し(Et3N(326μL)で促進させた)、MeOH(4.68mL)中のNaOHの1.0 M溶液で処理した。蒸発させ、高真空下で一夜乾燥して標記化合物を固体ナトリウム塩として得た。HPLC Rt = 4.21 min。
【０３６０】
実施例45
2-((2-アミノ-4-クロロ-5-(4-ヒドロキシブタ-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)メチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド
2008534609.tif 000098
工程1：2-((4-クロロ-5-ヨード-2-ピバルアミド-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)メチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド 
【０３６１】
DMF(6.0mL)中の、N-(4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-イル)ピバルアミド(235mg)、2-(クロロメチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド(129mg)、およびK2CO3(413mg)の混合物を室温で3日間撹拌し、次いで水で希釈した。沈殿物をろ過して回収し、IPAで洗浄して2-((4-クロロ-5-ヨード-2-ピバルアミド-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)メチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド(124mg)を得た。
固体。HPLC Rt = 6.73 min。
工程2：2-((4-クロロ-5-(4-ヒドロキシブタ-1-イニル)-2-ピバルアミド-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)メチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド
【０３６２】
一般的手順Aに従って2-((4-クロロ-5-ヨード-2-ピバルアミド-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)メチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド(335mg)とブタ-3-イン-1-オール(200μL)とのSonogashiraカップリングにより粗2-((4-クロロ-5-(4-ヒドロキシブタ-1-イニル)-2-ピバルアミド-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)メチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド(291mg)を得た。
固体。HPLC Rt = 5.82 min、
工程3
【０３６３】
粗2-((4-クロロ-5-(4-ヒドロキシブタ-1-イニル)-2-ピバルアミド-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)メチル)-4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン 1-オキシド(291mg)を10mL EtOHに溶解した。この溶液の部分標本(2mL)をさらにEtOH(5mL)で希釈し、次いで ZnCl2(103mg)で電子レンジ中、120℃で20分間処理した。逆相プレパラティブHPLCにより標記化合物(2.2mg)を固体として得た。HPLC Rt = 4.88 min。
【０３６４】
実施例46
5-(ブタ-3-エン-1-イニル)-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000099
【０３６５】
DMF(7.0mL)中の、4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル 4-メチルベンゼンスルホネート(516mg)、およびCsF(2.0 g)の混合物を70℃で1時間加熱した。後処理およびフラッシュクロマトグラフィ(1→3% MeOH、DCM中)により標記化合物(280mg)を淡黄色油状物として得た。HPLC Rt = 5.90 min。
【０３６６】
実施例47
5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ペンタ-4-イニル メタンスルホネート
2008534609.tif 000100
【０３６７】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンとペンタ-4-イニル メタンスルホネートとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 5.31 min。
【０３６８】
実施例48
4-クロロ-5-(5-フルオロペンタ-1-イニル)-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000101
【０３６９】
KF(77.8mg)、Kryptofix 222(Aldrich、839mg)、および水(10mL)の溶液を蒸発させて乾燥し、無水CH3CN(3 x 20mL)で最初に共沸させて乾燥し、次いで高真空下、50℃で一夜乾燥させた。該固体を無水アセトニトリル(13mL)に再溶解して0.1M フロリド溶液を得た。5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ペンタ-4-イニル メタンスルホネート(実施例47参照)(42mg)をこの溶液(3mL)で60〜70℃で2時間処理し、次いで後処理および逆相プレパラティブHPLCにより標記化合物を油状物として得た。HPLC Rt = 5.88 min。
【０３７０】
実施例49
(S)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イン-1,2-ジオール
2008534609.tif 000102
【０３７１】
5-(ブタ-3-エン-1-イニル)-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン(実施例46参照)(35mg)をt-BuOH:THF:水1:1:1(6mL)中AD-mix-α(Aldrich、540mg)で室温で一夜処理し、次いで後処理および逆相プレパラティブHPLCにより標記化合物(10mg)を固体として得た。HPLC Rt = 4.13 min。
【０３７２】
実施例50
(R)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イン-1,2-ジオール
2008534609.tif 000103
【０３７３】
5-(ブタ-3-エン-1-イニル)-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン(実施例46参照)(35mg)をt-BuOH:THF:水1:1:1(6mL)中AD-mix-β(Aldrich、540mg)で室温で一夜処理し、次いで後処理および逆相プレパラティブHPLCにより標記化合物(10mg)を固体として得た。HPLC Rt = 4.13 min。
【０３７４】
実施例51
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(3-メチルブタ-3-エン-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン
2008534609.tif 000104
【０３７５】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと2-メチルブタ-1-エン-3-インとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 6.00 min。
【０３７６】
実施例52
(S)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルブタ-3-イン-1,2-ジオール
2008534609.tif 000105
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(3-メチルブタ-3-エン-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン(実施例51参照)(263mg)をt-BuOH:水1:1：(7mL)中AD-mix-α(Aldrich、1.41 g)で室温で3日間処理し、次いで減衰(NaHSO3、1.6 g)、後処理、およびプレパラティブHPLCにより標記化合物(69mg)を固体として得た。HPLC Rt = 4.36 min。
【０３７７】
実施例53
(R)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルブタ-3-イン-1,2-ジオール
2008534609.tif 000106
【０３７８】
4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-5-(3-メチルブタ-3-エン-1-イニル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミン(実施例51参照)(357mg)をt-BuOH:水1:1：(10mL)中AD-mix-β(Aldrich、1.57 g)で室温で18時間処理し、ついで減衰(NaHSO3、1.2 g)、後処理、およびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ(1→10% MeOH、DCM中)により標記化合物(61mg)を得、出発物質を回収した(263mg)。
固体。HPLC Rt = 4.36 min。
【０３７９】
実施例54
(R)-((S)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-ヒドロキシ-2-メチルブタ-3-イニル) 3,3,3-triフルオロ-2-メトキシ-2-フェニルプロパノエート
2008534609.tif 000107
【０３８０】
THF(3.0mL)中の、(S)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルブタ-3-イン-1,2-ジオール(実施例52参照)(18mg)、(S)-(+)-α-メトキシ-アルファ-(トリフルオロメチル)フェニルアセチルクロリド(45μL)、およびEt3N(50μL)の混合物を70℃で2時間、次いで40℃で一夜加熱した。プレパラティブTLC(EtOAc/DCM 25:65)を標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 6.45 min。
【０３８１】
実施例55
(R)-((R)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-ヒドロキシ-2-メチルブタ-3-イニル) 3,3,3-トリフルオロ-2-メトキシ-2-フェニルプロパノエート
2008534609.tif 000108
【０３８２】
THF(3.0mL)中の、(R)-4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルブタ-3-イン-1,2-ジオール(実施例53参照)(22mg)、(S)-(+)-アルファ-メトキシ-アルファ-(トリフルオロメチル)フェニルアセチルクロリド(45μL)、およびEt3N(50μL)の混合物を40℃で一夜加熱した。プレパラティブTLC(EtOAc/DCM 25:65)標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 6.44 min。
【０３８３】
実施例56
2-((2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)エチニル)-2-ヒドロキシプロパン-1,3-ジイル ジアセテート
2008534609.tif 000109
工程1：2-エチニル-2-ヒドロキシプロパン-1,3-ジイル ジアセテート
【０３８４】
エチニルマグネシウム ブロミド溶液(0.5 M、THF中)を窒素下-78℃に冷却した。THF(3.0mL)中の1,3-ジアセトキシアセトン(0.5 g)の溶液を加え、得られた混合物を-78℃で30分間、次いで0℃で5分間撹拌し、1.0N水性HCl(3mL)で減衰させ、次いでEtOAcで抽出した。蒸発させて粗2-エチニル-2-ヒドロキシプロパン-1,3-ジイル ジアセテート(約50 mol%の1,3-ジアセトキシアセトンが夾雑)を得た。粗物質をさらに精製することなく用いた。
工程2
【０３８５】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと粗2-エチニル-2-ヒドロキシプロパン-1,3-ジイル ジアセテートとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を油状物として得た。HPLC Rt = 4.89 min。
【０３８６】
実施例57
2-((2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)エチニル)プロパン-1,2,3-トリオール
2008534609.tif 000110
【０３８７】
THF(1mL)およびMeOH(6mL)中の、2-((2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)エチニル)-2-ヒドロキシプロパン-1,3-ジイル ジアセテート(実施例56参照)(60mg)、およびEt3N(1mL)の溶液を電子レンジ中、150℃で20分間加熱した。濃縮およびプレパラティブHPLCにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 3.90 min。
【０３８８】
実施例58
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルブタ-3-イン-2-オール
2008534609.tif 000111
【０３８９】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンと2-メチルブタ-3-イン-2-オールとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.81 min。
【０３９０】
実施例59
5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ペンタ-4-イン-2-オール
2008534609.tif 000112
【０３９１】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンとペンタ-4-イン-2-オールとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.29 min。
【０３９２】
実施例60
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル アセテート
2008534609.tif 000113
工程1：ブタ-3-イニル アセテート
【０３９３】
1,2-ジクロロエタン(10mL)中の、ブタ-3-イン-1-オール(3.0mL)、およびEt3N(6.6mL)の溶液を注意しながら(非常に発熱性)AcCl(3.1mL)で処理した。後処理してブタ-3-イニル アセテートを得た。
工程2
【０３９４】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンとブタ-3-イニル アセテートとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 5.31 min。
【０３９５】
実施例61
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル スルファメート
2008534609.tif 000114
【０３９６】
ギ酸(0.463 g)およびN,N-ジメチルアセトアミド(1滴)の混合物をDCM(9mL)中のクロロスルホニル イソシアネート(1.31 g)の溶液に加え、3時間加熱還流した。得られた溶液をDMA(10mL)中の4-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ブタ-3-イン-1-オール(実施例2参照)(200mg)の溶液に加え、室温で30分間撹拌した。後処理および逆相プレパラティブHPLCにより標記化合物を固体として得た。HPLC Rt = 4.96 min。
【０３９７】
実施例62
5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ペンタ-4-イニル スルファメート
2008534609.tif 000115
【０３９８】
実施例61と同じ手順により5-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ペンタ-4-イン-1-オール(実施例2参照)を用いて反応を行い、標記化合物を得た。固体。HPLC Rt = 4.77 min。
【０３９９】
実施例63
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル 硫酸水素塩
2008534609.tif 000116
工程1：ブタ-3-イニル硫酸水素ピリジン塩
【０４００】
DCM(20mL)中のブタ-3-イン-1-オール(2.1 g)を硫黄 トリオキシド-ピリジン複合体(4.77 g)で一夜処理した。固体をろ過して除去し、反応混合物を濃縮し、さらに精製することなく用いた。
工程2
【０４０１】
一般的手順Aに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンとブタ-3-イニル硫酸水素ピリジン塩とのSonogashiraカップリングにより標記化合物を得た。
固体。HPLC Rt = 4.24 min。
【０４０２】
実施例64
4-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)ブタ-3-イニル ビス(2,2,2-トリクロロエチル) ホスフェート
2008534609.tif 000117
工程1：ブタ-3-イニル ビス(2,2,2-トリクロロエチル) ホスフェート
【０４０３】
DCE(20mL)中のブタ-3-イン-1-オール(0.413 g)の溶液を、Et3N(2mL)およびビス(2,2,2-トリクロロエチル)ホスホロクロリド(2.27 g)で50℃で一夜処理した。後処理して粗ブタ-3-イニル ビス(2,2,2-トリクロロエチル) ホスフェートを油状物として得、さらに精製することなく用いた。
工程2
【０４０４】
一般的手順Iに従って4-クロロ-5-ヨード-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-アミンとブタ-3-イニル ビス(2,2,2-トリクロロエチル) ホスフェートとのSonogashiraカップリングにより標記化合物を得た。
固体。HPLC Rt = 6.69 min。
実施例65
rHSP90競合結合アッセイ
【０４０５】
リン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の5μgの精製rHSP90タンパク質(Stressgen、BC、Canada、#SPP-770)を96ウェルプレート上に4℃で一夜コートした。非結合タンパク質を除去し、コートしたウェルを200μLのPBSで2回洗浄した。次いで、DMSOコントロール(無処理試料とみなす)または被検化合物を100-30-10-3-1-0.3μM希釈(PBS中)で加え、プレートをプレートシェーカーで30秒間混合し、次いで37℃で60分間インキュベーションした。ウェルを200μL PBSで2回洗浄し、10μM ビオチン化ゲルダナマイシン(ビオチン-GM)を加え、37℃で60分間インキュベーションした。ウェルを200μL PBSで再度2回洗浄し、次いで20μg/mL ストレプトアビジン-フィコエリスリン(ストレプトアビジン-PE)(Molecular Probes、Eugene、OR)を加え、37℃で60分間インキュベーションした。ウェルを200μL PBSで再度2回洗浄した。相対蛍光単位(RFU)をSpectraMax Gemini XS蛍光分光計(Molecular Devices、Sunnyvale、CA)(485 nmで励起、580 nmで放射)を用いて測定し、SOFTmax(登録商標)PROソフトウエア(Molecular Devices Corporation、Sunnyvale、CA)を用いてデータを得た。バックグラウンドをHSP90でコートしていないがビオチン-GMおよびストレプトアビジン-PEで処理したウェルから生じたRFUとして定義した。バックグラウンドの測定値を他のコンピュータ処理前に、ビオチン-GMおよびストレプトアビジン-PE処理した各試料の測定値から引いた。各試料の結合阻害パーセントを以下のごとくバックグラウンドを引いた値から計算した：
%結合阻害 = [(RFU無処理  RFU処理)/RFU 無処理] x 100。
実施例66
細胞溶解物結合アッセイ
【０４０６】
MCF7乳癌細胞溶解物を、溶解用緩衝液(20mM HEPES、pH 7.3、1mM EDTA、5mM MgCl2、100mM KCl)中で小刻みに動かして調製し、次いで被検化合物を加えるか加えずに4℃で30分間インキュベーションし、次いでBioMag(登録商標)ストレプトアビジン磁性ビーズ(Qiagen)と結合したビオチン-GMで4℃、1時間インキュベーションした。チューブを磁性ラック上に置き、非結合上清を除去した。磁性ビーズを溶解用緩衝液で3回洗浄し、SDS-PAGE試料緩衝液中で95℃で5分間ボイルした。試料をSDSタンパク質ゲルで分析し、WesternブロットをrHSP90について行った。Westernブロット中のバンドをBio-rad Fluor-S MultiImagerを用いて定量し、rHSP90のビオチン-GMに対する結合阻害%を計算した。上記アッセイに基づく選択した本発明化合物の溶解物結合能を表3に要約する。報告したIC50は、MCF7細胞溶解物中のrHSP90に対するビオチン-GM結合の50%阻害を達成するのに必要な被検化合物の濃度である。
実施例67
Her2分解活性
【０４０７】
多くの癌は過剰発現Her2タンパク質と関連する。Her2レベルを減少させることができる化合物は抗癌剤として有望であることが示されている。すなわち、抗癌作用を示すと思われる本発明化合物を同定するためのよいin vitroアッセイは下記のHer2分解アッセイである。
【０４０８】
MCF7乳癌細胞(ATCC)を10%ウシ胎児血清(FBS)および10mM HEPESを含むダルベッコ変法イーーグル培地(DMEM)中で増殖させ、24ウェルプレートに接種した(50%コンフルエント)。24時間後(細胞は65〜70%コンフルエントである)、被検化合物を加え、一夜16時間インキュベーションした。作用の弱い化合物の添加量は100μM、30μM、10μM、および1μMであり、作用のより強い化合物の添加量は、1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM、および0.003μMであった。ウェルを1mL ホスフェート緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄し、200μLトリプシンを各ウェルに加えた。トリプシン処理が完結した後、50μLのFBSを各ウェルに加えた。次に、200μL細胞は、96ウェルプレートに移した。細胞をピペッティングし、単細胞浮遊液を得た。プレートをSorvall Legend RT(登録商標)卓上遠心器(Kendro Laboratory Products、Asheville、NC)を用い、2,500 rpmで1分間遠心した。次に、細胞を0.2% BSAおよび0.2% アジ化ナトリウム(BA緩衝液)を含むPBSで1回洗浄した。フィコエリスリン(PE)結合抗HER2/Neu抗体(Becton Dickinson、#340552)、またはPE結合抗キーホールリンペットヘモシアニン[KLH](Becton Dickinson、#340761)コントロール抗体を、各1:20および1:40の希釈で加え(最終濃縮は1μg/mL)、細胞をピペッティングして単細胞浮遊液を形成し、15分間インキュベーションした。細胞を200μL BA緩衝液で2回洗浄し、200μL BA緩衝液に再浮遊させ、さらに250μL BA緩衝液を入れたFACSCANチューブに移した。試料をPE フルオロクロームを励起するために488nm光の15mWを放射するアルゴンイオンレーザーを装着したFACSCalibur(登録商標)フローサイトメーター(Becton Dickinson、San Jose、CA)を用いて分析した。試料ごとに10,000事象を収集した。蛍光ヒストグラムを得、各試料の平均蛍光強度(MFI)をCellquestソフトウエアを用いて測定した。バックグラウンドをコントロールIgG-PEでインキュベーションした細胞から生じたMFIとして定義し、これをHER2/Neu抗体で染色した各試料から引いた。該化合物をDMSOに再懸濁したので、DMSOとインキュベーションした細胞を無処置コントロールとして用いた。Her2の分解パーセントを以下のごとく計算した。
% Her2分解 = [(MFl無処理細胞 - MFl処理細胞)/MFl無処理細胞] x 100
【０４０９】
このアッセイに基づく選択した本発明化合物のHer2分解能を表3に要約する。IC50は、HER2/Neuタンパク質の50%分解がある濃度で定義する。
実施例68
MTSアッセイ
【０４１０】
3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5-(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2H-テトラゾリウムアッセイは、ゲルダナマイシン誘導体の細胞毒性を測定する。MTS(3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5-(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2H-テトラゾリウム)は、代謝的に活性な細胞のデヒドロゲナーゼ酵素によりホルマザン生成物に変換されるテトラゾリウム色素である(Corey、A. et al. 「Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture」、Cancer Commun. 1991、3、207-212)。細胞を96ウェルプレートに2000細胞/ウェルで播き、10%ウシ胎児血清添加ダルベッコ変法イーグル培地中で一夜付着させた。最終培養容量は100μLであった。生細胞数を、Celltiter 96 AQueous Non-radioactive Cell Proliferation Assay(Promega、Madison WI)を用いることにより決定した。MTS/PMS(フェナジンメトサルフェート)溶液を20:1の比で混合し、20μL/ウェルを100μLの培養液に加えた。2〜4時間後、ホルマザン生成物の形成をマルチウェルプレート分光光度計を用いて490nm吸光度として測定した。バックグラウンドを細胞培養液および細胞非存在下のMTS-PMSのABs 490nmを測定することにより測定し、これをすべての値から引いた。
【０４１１】
%生細胞は以下のごとく計算した。
%生細胞 =(処理細胞の490nmの吸光度/非処理細胞の490nmの吸光度) x 100
【０４１２】
MTSアッセイに従ったMCF7乳癌細胞に対する選択した本発明化合物の効果を表3に要約する。IC50は、生細胞数の50%減少をもたらす化合物の濃度で定義した。
表3. 選択した本発明化合物の生物活性
【０４１３】
【化１４】
2008534609.tif 000118
実施例69
In Vivoマウス腫瘍試験
【０４１４】
6〜8週齢のBalb/Cおよびnu/nu無胸腺雌マウスは、Harlan Sprague Dawley、(Indianapolis、IN)から得た。マウスを、12時間明/暗周期の部屋中で無菌フィルターをかぶせたケージで維持するか、無菌フィルター換気ケージに入れた。放射線処理ペレット飼料(Harlan Teklad #7912)およびオートクレーブ処理脱イオン水を自由に与えた。動物を個々に番号付けした耳タグを用いて識別した。実験は、Institute for Laboratory Animal Research(ILAR)により確立された研究におけるヒトの正しい動物使用のための制度的ガイドラインに従って行った。腫瘍フラグメント(約2mm3)、または5 x 106個の腫瘍細胞を動物の右または左脇腹に皮下接種した。定着した腫瘍(50-200mm3)を有するマウスを試験のために選択した(n=7〜10/処置群)。腫瘍の寸法をキャリパーを用いて測定し、腫瘍の体積は楕円球のための式を用いて計算した：(l x w2)/2 = mm3(ここで、lおよびwは各測定で収集した大きいほうの寸法および小さい方の寸法を表す)。コントロール群の腫瘍体積が約1000mm3に達するまでマウスを追跡し、CO2安楽死により屠殺した。各群の平均腫瘍体積を計算した。平均処置腫瘍体積の変化を平均腫瘍体積の変化で割り、100を掛け、100%から引いて、各群の腫瘍増殖阻害を得た。統計分析は、標準T検定およびGraphPad Prism(登録商標)ソフトウエアを用いて行った。
実施例70
N87胃癌異種移植
【０４１５】
実施例69に従ってヒトN87胃癌細胞の接種によりマウスに腫瘍を定着させた。4処置群(n=7〜10/処置群)を試験用に設けた。
【０４１６】
I. 4-[2-アミノ-4-クロロ-7-(4-メトキシ-3,5-ジメチル-ピリジン-2-イルメチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル]-ブタ-3-イン-1-オール(上記実施例2に記載のごとく製造した)を8mg/kg po投与した。
【０４１７】
II. 5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルペンタ-4-イン-2-オール(上記実施例23に記載のごとく製造した)を8mg/kg po投与した。
【０４１８】
III. 5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルペンタ-4-イン-2-オール(上記実施例23に記載のごとく製造した)を16mg/kg po投与した。
【０４１９】
IV. ビークル単独をコントロール群に投与した。
【０４２０】
結果を図1に示す(時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロット)。
実施例71
NCI295副腎皮質癌異種移植
【０４２１】
実施例69に従ってNCI295副腎皮質癌細胞の接種によりマウスに腫瘍を定着させた。2処置群(n=7〜10/処置群)を試験用に設けた。
【０４２２】
I. 5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルペンタ-4-イン-2-オール(上記実施例23に記載のごとく製造した)を8mg/kg po投与した。
【０４２３】
II. ビークル単独をコントロール群に投与した。
【０４２４】
結果を図2に示す(時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロット)。
実施例72
SK-MEL-28メラノーマ異種移植
【０４２５】
実施例69に従ってSK-MEL-28メラノーマ細胞の接種によりマウスに腫瘍を定着させた。2処置群(n=7〜10/処置群)を試験用に設けた。
【０４２６】
I. 5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルペンタ-4-イン-2-オール(上記実施例23に記載のごとく製造した)を8mg/kg po投与した。
【０４２７】
II. ビークル単独をコントロール群に投与した。
【０４２８】
結果を図3に示す(時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロット)。
実施例73
HT29結腸癌異種移植
【０４２９】
実施例69に従ってHT29結腸癌細胞の接種によりマウスに腫瘍を定着させた。3処置群(n=7〜10/処置群)を試験用に設けた。
【０４３０】
I. 5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルペンタ-4-イン-2-オール(上記実施例23に記載のごとく製造した)を4mg/kg po投与した。
【０４３１】
II. 5-(2-アミノ-4-クロロ-7-((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イル)-2-メチルペンタ-4-イン-2-オール(上記実施例23に記載のごとく製造した)を8mg/kg po投与した。
【０４３２】
III. ビークル単独をコントロール群に投与した。
【０４３３】
結果を図4に示す(時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロット)。
実施例74
薬力学的効果
緩衝液および試薬の調製
【０４３４】
下記試薬および緩衝液を実験に先立って調製する。Western溶解用緩衝液(WLS)は、10mM HEPES、42mM KCl、5mM MgCl2、0.1mM EDTA、0.1mM EGTA、1mM DTT、1mM PMSF、1ug/ml ペプスタチンA、1ug/ml ロイペプチン、5ug/ml アプロチニン、および1% Triton X-100を含む。部分標本とし、-20℃で保存する。5X Western試料緩衝液(5X WSB)は、20ml グリセロール、4ml β-メルカプトエタノール、5g SDS、12.5ml 1M Tris pH 6.8、および50mgブロモフェノールブルーを含む。水を最終容量50mlで加える。部分標本とし、-20℃で保存する。Westernトランスファー緩衝液は、23.3g Tris塩基、116gグリシン、および1.6L メタノールを含む。水を最終容量8Lまで加え、4℃で保存する。TBST(1X)は、10mM Tris pH8.0、150mM NaCl、および0.1% Tween 20を含む。
ブロッキング溶液は1X TBST中5%無脂肪乾燥乳を含む。4℃で保存する。
腫瘍試料の処理
【０４３５】
即時凍結N87胃癌腫瘍を液体窒素から-80℃冷凍庫に移す。WLBに氷上プロテアーゼ阻害剤カクテル(100Xでストック)を添加する。各腫瘍を氷上で解凍し、ペトリ皿の蓋に移した。それを50ulのWLBで覆い、ディスポーザブル外科用メスで細切してより小片とする。腫瘍に付着したあらゆる残存皮膚を除去する。次に、腫瘍片をさらに細切し、300〜500ulの氷冷WLBに移した。細切試料を固体片がこれ以上小さくできない状態までFisher Scientific's Sonic Dismembrator 550(3に設定)でソニケーションする。次に、サスペンジョンを15,000gで4℃で5分間遠心する。上清を溶解物として氷上の清浄Eppendorfチューブに回収する。2ulの溶解物を用い、BCAタンパク質アッセイキットの指示書に従って総タンパク質の定量を行う。残った溶解物をBCAアッセイが進行中の間、液体窒素中に即時冷凍する。各溶解物の総タンパク質濃度をBCAアッセイが完結したら計算する。溶解物を水浴で解凍し、その総タンパク質濃度を、5X WSB(総容量の最終20%に)およびWLB(必要に応じ)で4〜10mg/mlに調整した。調整溶解物を95℃で5分間ボイルし、室温に冷却する。この段階で、それらをさらにWesternブロッティング分析用に-20℃で凍結する。
Westernブロッティング分析
【０４３６】
腫瘍または脾臓試料由来の定量および調整した溶解物を水浴で解凍し、同じ総タンパク質量でビオチン化タンパク質マーカーとともに4〜12% Tris-グリシンプレキャストゲルにロードする。電気泳動を140Vで1.5時間行う。ゲル中の分離したタンパク質をWesternトランスファー用緩衝液中で100Vで約1時間PVDF膜に移す。ブロットを、ブロッキング緩衝液中でゆっくり揺らしながら室温で1時間または4℃で一夜インキュベーションする。興味のある種々のHSP90クライアントタンパク質に対する一次抗体をゆっくり揺らしながら室温で1時間適用する。過剰の抗体をTBSTで5分間6回洗浄して洗い流す。次に、ブロットをHRP結合二次抗体およびストレプトアビジン-HRPコンジュゲートと室温で1時間ゆっくり揺らしながらインキュベーションする。過剰の二次抗体およびコンジュゲートをTBSTで5分間6回洗浄して洗い流す。次に、ブロットを、Pierce's SuperSignal West Femto化学ルミネッセンス基質を用い、新たに調製した等量のルミナルエンハンサーおよびパーオキシド緩衝液を混合し、該混合物を1つずつブロット上に加えることにより発現させる。タンパク質バンドを、Bio-Rad's Quantity Oneソフトウエアを用い、Bio-Rad's fluor-S Max2 MultiImagerで可視化することができる。Westernブロット分析の結果を図5に示す。
【０４３７】
前記実施例は、本発明の種々の局面および態様の単に例示であって、本発明を限定するものではない。本明細書に記載のすべての文献は、本発明が関与する分野の技術水準を示し、本明細書の一部を構成する。しかしながら、これらはいずれも先行技術であると認めない。当業者は、本発明を、目的を実施し、本明細書に記載のならびに固有の目的および利点を得るよう十分適応させることを容易に認識するであろう。好ましい態様を例示する記載した方法および組成物は、例示であって、本発明の範囲を限定するものではない。ある種の修飾および他の使用は、当業者が思いつくであろうし、請求の範囲に定義したように本発明の精神内に含まれる。
【０４３８】
本明細書に適切に例示的に記載した本発明は、本明細書に具体的に開示していないあらゆる要素(または複数の要素)または限定(または複数の限定)なしに実施することができる。用いた用語および表現は限定ではなく説明の用語として用い、示し、説明した特徴またはその部分のあらゆる等価物を除くそのような用語および表現の使用を意図しない。クレームした本発明の範囲内で種々の修飾が可能であると認識される。すなわち、本発明を好ましい態様により具体的に開示したが、本明細書に開示した概念の所望の特徴、修飾、および変更は当業者により再区分されてよく、そのような修飾および変更は、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載の本発明の範囲内であると考えられると理解すべきである。
【０４３９】
さらに、本発明の特徴または局面が、マーカッシュグループまたは代替物(例えば属)の他のグループ分けについて説明される場合は、当業者は、本発明は、マーカッシュグループまたは亜属のあらゆる個々のメンバーまたはメンバーのサブグループ、ならびに例えば但し書きにより適切な個々のメンバーの排除についても説明されると認識するであろう。
他の態様は下記特許請求の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０４４０】
【図１】実施例70に記載のマウスN87胃癌異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【図２】実施例71に記載のマウスNCI295副腎皮質癌異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【図３】実施例72に記載のマウスSK-MEL-28メラノーマ異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【図４】実施例73に記載のマウスHT29結腸癌異種移植モデルにおける本発明化合物(およびコントロール)を投与した動物における時間(日)に対する腫瘍体積(mm3)のプロットを表す。
【図５】実施例74に記載の種々の濃度および時点における化合物2および23による治療後のN87胃癌細胞のWesternブロットタンパク質分析を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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