(57)【要約】有効量のＢ細胞表面マーカー（ＣＤ２０抗体など）に結合するアンタゴニストを、任意選択的に、有効量のこのような障害を治療する薬剤などの別の薬物と共に投与する、哺乳動物における種々の骨の適応症（骨粗鬆症など）の治療方法を提供する。製品も提供する。さらに、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体をコードする核酸を含む単離された歯骨前駆細胞（ｏｄｏｎｔｏｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）または前骨芽細胞を哺乳動物に導入する工程を含む、哺乳動物の骨溶解を阻害する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において骨障害を治療する方法であって、有効量のＣＤ２０抗体を該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記抗体が、キメラ抗体、ヒト抗体、またはヒト化抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体がリツキシマブを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体が、配列番号２および８中の可変ドメイン配列を含むヒト化２Ｈ７である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体が、配列番号８のＮ１００ＡまたはＤ５６Ａ、Ｎ１００Ａの変化を有する重鎖可変ドメイン、および配列番号２のＭ３２Ｌ、Ｓ９２Ａ、またはＭ３２Ｌ、Ｓ９２Ａの変化を有する軽鎖可変ドメインを含むヒト化２Ｈ７である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が、配列番号３０の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列、および配列番号８の重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含むヒト化２Ｈ７であり、前記抗体が、ＶＨ−ＣＤＲ２中のＤ５６Ａのアミノ酸置換をさらに含み、ＶＨ−ＣＤＲ３中のＮ１００がＹまたはＷに置換されている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、配列番号３１のｖ５１１軽鎖配列、および配列番号３２のｖ５１１重鎖配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が、裸の抗体である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体が別の分子と結合体化している、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、骨ターゲティング薬に共有結合している、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が、前記哺乳動物への投与の際に主な臨床応答を誘導する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体が、約１ヶ月の期間内に約１〜４回の頻度にて約４００ｍｇ〜１．３ｇの用量で投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
各用量が約５００ｍｇ〜１．２ｇである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
各用量が約７５０ｍｇ〜１．１ｇである、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体が、２〜４回投与される、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体が、２〜３回投与される、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が、約２〜３週間の期間内に投与される、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記期間が約２週間である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が、関節に局所投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体が、骨欠損部位に局所投与される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記骨欠損が、骨折、骨移植片部位、インプラント部位、または歯周ポケットである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体が全身投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体が静脈内投与される、請求項１〜１９または２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体が皮下投与される、請求項１〜１９または２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
第２薬物が有効量で投与され、前記ＣＤ２０抗体が第１薬物である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第２薬物が１種以上の薬物である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記第２薬物が、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、細胞傷害薬、インテグリンアンタゴニスト、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ホルモン、またはその組み合わせを治療する薬剤である、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２薬物が、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、またはその両方である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記第２薬物が免疫抑制薬である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記免疫抑制薬が、シクロホスファミド、クロラムブシル、レフルノミド、アザチオプリン、またはメトトレキサートである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記免疫抑制薬が、シクロホスファミドまたはメトトレキサートである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２薬物が、破骨細胞関連障害の治療薬である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記薬剤が、オステオプロテジェリン、インターロイキン、ＭＭＰインヒビター、βグルカン、インテグリンアンタゴニスト、カルシトニン、プロトンポンプインヒビター、プロテアーゼインヒビター、ビスホスホネート、インスリン様増殖因子−１、血小板由来増殖因子、上皮増殖因子、トランスフォーミング増殖因子αのインヒビター、トランスフォーミング増殖因子β、骨形成タンパク質、副甲状腺ホルモン、線維芽細胞増殖因子、ビタミンＤ、カルシウム、フッ化物、マグネシウム、ホウ素、ビトロネクチン、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター、またはプロテアーゼインヒビターである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記薬剤がサイトカインまたはビスホスホネートである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記薬剤が、該薬剤で処置された哺乳動物にＣＤ２０抗体を投与しない場合に使用される量よりも少ない量で投与される、請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記哺乳動物は、以前にＣＤ２０抗体で処置されたことがない、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記骨障害が、骨粗鬆症、骨粗鬆症性骨折、限局的骨量減少、骨欠損、幼児期特発性骨量減少、歯槽骨量減少、下顎骨量減少、歯槽骨量減少、歯周炎に関連する骨量減少、多発性骨髄腫における骨疾患、マクログロブリン血症、または単クローン性γグロブリン血症である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記骨障害が、限局的骨量減少、多発性骨髄腫における骨疾患、マクログロブリン血症、単クローン性γグロブリン血症、または骨粗鬆症である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記骨障害が、続発性骨粗鬆症に関連する骨量減少である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記骨障害が、限局的骨量減少である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＣＤ２０抗体の量が、炎症性関節炎におけるびらん性骨疾患の予防に有効である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記炎症性関節炎が関節リウマチである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記骨障害が、関節リウマチにも関節リウマチの発症リスクにも関連しない、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗体が、送達ビヒクルで投与される、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記送達ビヒクルが、骨粉、リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト、ポリメタクリレート、生分解性ポリエステル、水性重合ゲル、またはフィブリンシーラントである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
哺乳動物の骨障害を治療する方法であって、Ｂ細胞表面マーカーに結合する有効量の抗体を該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
【請求項４８】
哺乳動物の骨障害を治療する方法であって、Ｂ細胞表面マーカーに結合する有効量のアンタゴニストを該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
【請求項４９】
製品であって、
ｉ．ＣＤ２０抗体を含む容器と、
ｉｉ．哺乳動物における骨障害の治療のための説明書を含む添付文書と
を含み、該説明書が有効量のＣＤ２０抗体が該哺乳動物に投与されることを示す、製品。
【請求項５０】
第２薬物を含む容器をさらに含み、前記ＣＤ２０が第１薬剤であり、該第２薬剤を使用する哺乳動物の治療についての添付文書に関する説明書をさらに含む、請求項４９に記載の製品。
【請求項５１】
前記第２薬物が、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、細胞傷害薬、細胞傷害薬、インテグリンアンタゴニスト、またはホルモンである、請求項５０に記載の製品。
【請求項５２】
前記第２薬物が、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、またはその両方である、請求項５０または請求項５１に記載の製品。
【請求項５３】
哺乳動物において骨溶解を阻害する方法であって、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体をコードする核酸を含む単離した歯骨前駆細胞または前骨芽細胞を該哺乳動物に導入する工程を含む、方法。
【請求項５４】
前記細胞が歯骨前駆細胞である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記哺乳動物が、歯周炎を罹患しているかまたは歯周炎の発症リスクがある、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記哺乳動物が、歯周疾患に起因する歯槽骨量減少を罹患しているかまたは歯周疾患に起因する歯槽骨量減少の発症リスクがある、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記細胞が、下顎部分の歯周靭帯に投与される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記細胞が前骨芽細胞である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５９】
前記細胞が、前記哺乳動物の結合関節に移植される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記細胞が脛骨内投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記細胞が大腿骨内投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗体の発現が、抗生物質の化合物によって調節される、請求項５３〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗生物質の化合物が、テトラサイクリンまたはテトラサイクリンアナログである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記哺乳動物にミノサイクリンを投与する工程をさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗生物質の化合物が全身投与される、請求項６２〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
破骨細胞関連障害の治療薬を投与する工程をさらに含む、請求項５３〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記薬剤が、インターロイキン−４または腫瘍壊死因子−αのインヒビターである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記哺乳動物が、関節リウマチを罹患しているかまたは関節リウマチの発症リスクがある、請求項５３〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記哺乳動物が、関節リウマチを罹患しておらず、関節リウマチの発症リスクもない、請求項５３〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
前記哺乳動物が、根尖周囲または軟骨内の骨量減少、人工関節粒子誘導性骨溶解、または骨溶解性骨転移を罹患しているか、あるいは根尖周囲または軟骨内の骨量減少、人工関節粒子誘導性骨溶解、または骨溶解性骨転移の発症リスクがある、請求項５３または請求項５８〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体がＣＤ２０抗体である、請求項５３〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）のもとに米国仮特許出願第６０／６５６，９４３号（２００５年２月２８日出願）からの優先権を主張する。この仮特許出願の全内容は参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、Ｂ細胞表面マーカー（ＣＤ２０またはＣＤ２２など）に結合するアンタゴニスト（例えば、ＣＤ２０に結合する抗体）を使用した骨障害の治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
骨障害
骨再造形は、組織量および骨構造が維持される動的過程である。この過程は、骨吸収と骨形成との間の平衡であり、２つの細胞型（破骨細胞および骨芽細胞）が主に作用すると考えられている。骨芽細胞は、新規の骨を合成し、破骨細胞によって掘削された空洞にこの骨を沈着させる。骨芽細胞および破骨細胞の活動は、全身および局所的な多くの因子（増殖因子が含まれる）によって調節される。
【０００４】
骨は、以下の機能を果たす分化した動的結合組織である（ａ）機械的機能（移動運動のための筋肉付着のための支持体および部位）、（ｂ）重要臓器および骨髄の防御機能、（ｃ）生命に不可欠な血清ホメオスタシスの維持のためのイオン（詳細には、カルシウムイオンおよびリン酸イオン）の貯蔵所としての代謝的機能。骨は連続的な吸収および更新を受け、この過程は、集合的に再造形として公知である。したがって、骨の機械的および生物学的完全性は、何百万もの微視的部位でのその連続的な破壊（吸収）および連続的再構築（形成）に依存する。成人期において、骨の再造形は構造的に破壊した骨または老化した骨を排除して、構造的に新規の健康な骨に置換するのに極めて重要である。適切な骨量を維持するために、吸収および形成が完全な均衡で維持される。加齢と共に、吸収と形成との間の均衡が変化し、しばしば吸収が優先され、その結果、骨量が減少し、骨構造が劣化し、ストレス耐性が減少し、骨が脆弱になり、骨折しやすくなる。これらの症状をまとめて骨粗鬆症という。
【０００５】
破骨細胞は、骨基質を侵食するように機能する巨大な多核細胞である。これらは、単球から発生するマクロファージおよび他の細胞に関連する。マクロファージのように、破骨細胞は、造血前駆細胞に由来する。破骨細胞は、全身および局所的骨量減少の両方を媒介する。
【０００６】
骨基質の侵食は、骨基質形成（骨芽細胞が関連する過程）と調和して起こる正常な過程である。本質的に、骨芽細胞は、骨基質を侵食して骨に穴をあけ、骨芽細胞があとに続いてトンネル壁を裏打ちし、新規の骨基質を形成する。典型的には、正常な成人では、年間約５〜１０％の骨がこれらの過程によって置換される。
【０００７】
西洋社会における主な健康上の問題である骨粗鬆症は、最も一般的な疾患であり、最も医療費がかかる。骨粗鬆症のリスクは、４５歳を超える女性の８５％、男性の１５％と推定されている。米国では、１７００万人の閉経後の女性がピーク骨量の１０％を喪失し、９４０万人が２５％を喪失し、５００万人が骨粗鬆症の結果として骨折していると推定されている。合衆国での脊椎骨折および股関節部骨折に由来する骨粗鬆症にかかる医療費は年間１４０億ドルを超え、しばしば、これらの骨折は診断されないままである場合の疾患の最初の徴候である。
【０００８】
骨粗鬆症は、典型的には、骨吸収が骨形成を超える骨の代謝回転の不均衡を反映する。骨吸収は破骨細胞の特定の機能であり、破骨細胞は、造血区画、より正確には、顆粒球−マクロファージコロニー形成単位（ＧＭ−ＣＦＵ）由来の単核前駆体の融合によって形成された多核化された特定の骨細胞である。破骨細胞は、骨吸収するための主な細胞型であり、骨形成細胞（骨芽細胞）と共に、骨量、骨の形状、および骨構造が決定される。骨形成骨芽細胞の活性または数に対する破骨細胞の活性および／または数の増加により、骨粗鬆症および他の骨量減少疾患の発症が決定される。
【０００９】
パジェット病は４０歳を超える集団の３％、８０歳を超える集団の１０％が罹患し、骨粗鬆症ほど一般的でも費用もかからないにもかかわらず、骨折の原因であることに加えて、重症変形性関節症および重症神経障害を引き起こし得るので、重要な疾患である。パジェット病は、急速な骨代謝回転、それによる線維性骨（最初に胚および成長中に形成され、成体骨格で実質的に存在しない組織型）の形成によって特徴づけられる。線維性骨は、脆弱性を特徴とし、したがって、骨折および湾曲する傾向がある。骨は、拡大するようになり、しばしば、血流を妨害して神経を収縮させ、それにより、パジェット病に関連する神経症状が多数起こる。
【００１０】
推定上異常に高レベルで破骨細胞が骨を吸収し、且つ骨芽細胞が正常レベルで骨を形成する疾患（骨粗鬆症）について、合理的な治療標的は破骨細胞であろう。破骨細胞の数および／または機能の減少により、骨の吸収と形成との間の均衡が修復され得る。実際、現在利用可能な骨粗鬆症の治療は、骨吸収の抑制を意図する。
【００１１】
破骨細胞は、単球−マクロファージファミリーに由来する。マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）でのＣＦＵ−ＧＭの刺激の際、単核食細胞および破骨細胞の非接着性前駆体である前単球を形成する。前単球は、マクロファージ経路に沿って増殖および分化することができ、最終的に組織マクロファージを形成するか、破骨細胞経路によって分化することができ、これは、曝されることになるサイトカインに依存する。例えば、受容体アクチベーターＮＦ−κＢリガンド（ＲＡＮＫＬ）（Ｓｉｍｏｎｅｔら、Ｃｅｌｌ  ８９：３０９−３１９（１９９７））（骨芽細胞膜表面上に発現されるサイトカイン）は、マクロファージよりもむしろ破骨細胞に分化するように前単球に影響を与える一方で、Ｍ−ＣＳＦでの処置は、前単球をマクロファージに発達させるように駆動する。ＲＡＮＫＬの発現を支持するＭ−ＣＳＦおよび他のサイトカイン（例えば、インターロイキン−１またはＴＮＦ−α）はマクロファージの生成物であり、これらのサイトカインおよび増殖因子の発現を変化させる免疫調整物質はマクロファージだけでなく破骨細胞にも影響を与え得ると推測し得る。
【００１２】
多数の骨粗鬆症の治療方法が存在し、ビスホスホネート（Ｆｌｅｉｓｃｈ  Ｈ，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ，”Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４：３０−３４（２００２）、Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｃ  Ｐ，Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ．Ｊ  Ｃ“Ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ．”Ｉｎ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｍｕｎｉｚ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９８，ｐｐ  １１１−１２３）、または“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ”（ＳＥＲＭＳ）が含まれる。
【００１３】
骨芽細胞、破骨細胞、およびその前駆体の増殖、分化、および活性に影響を与えるタンパク質の多くが、軟骨細胞（軟骨の形成（軟骨）を担う細胞）におけるこれらの過程にも影響を与える。これらのタンパク質には、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、および軟骨由来増殖因子（ＣＤＧＦ）が含まれる。
【００１４】
「ｚｖｅｇｆ３」として公知のＰＤＧＦホモログが最近同定され、「ＶＥＧＦ−Ｒ」とも命名された（ＷＩＰＯ公開ＷＯ９９／３７６７１号）。Ｚｖｅｇｆ３／ＶＥＧＦ−Ｒは、増殖因子のＰＤＧＦ／ＶＥＧＦファミリーと有意に相同なマルチドメインタンパク質である。Ｚｖｅｇｆ３は、骨粗鬆症などの一定の骨障害の治療で有用であることが見出された（ＵＳ２００４／００４３０３１号および米国特許第６，６６３，８７０号を参照のこと）。
【００１５】
生きている前骨芽細胞または歯骨前駆細胞（ｏｄｏｎｔｏｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）から産生された組成物は、骨組織を構築または再構築するために抗炎症性ポリペプチド（例えば、ヒトインターロイキン−４）を送達させることが開示されている（ＵＳ２００４／０１２６３６４号を参照のこと）。
【００１６】
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーの受容体およびリガンドは、破骨細胞の分化および活性において不可欠な役割を果たし、したがって、骨吸収で役割を果たすことが最近示されている。ＴＮＦ−αは、破骨細胞形成（破骨細胞の生成）を促進することが公知である。破骨細胞および間質細胞上に存在し、そして／またはこれらによって分泌されるＴＮＦ様分子は、本分野および本明細書中で、交換可能に、「ＮＦ−κＢリガンドの受容体アクチベーター」（ＲＡＮＫＬ）、「破骨細胞分化因子」（ＯＤＦ）、「オステオプロテゲリンリガンド」（ＯＰＧＬ）、および「ＴＮＦ関連活性化誘導サイトカイン」（ＴＲＡＮＣＥ）と呼ばれ、破骨細胞形成および成熟破骨細胞の吸収活性と無関係に、破骨細胞前駆体および成熟破骨細胞の膜中に存在する本分野および本明細書中で「ＮＦ−κＢリガンドの受容体アクチベーター」（ＲＡＮＫ）と呼ばれるＴＮ受容体様分子と相互作用する。抗体などのＴＮＦインヒビターを使用して、関節リウマチを使用する。Ｓｕｄａら（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０（３）：３４５−３５７（１９９９））は、破骨細胞の分化および機能を記載している。Ｆｉｌｖａｒｏｆｆ  ａｎｄ  Ｄｅｒｙｎｃｋ（Ｃｕｒｔ：Ｂｉｏｌ．８：Ｒ６７９−Ｒ６８２（１９９８））は、骨再造形および破骨細胞調節のためのシグナル伝達系について言及している。Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌら  ＆  Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，３（４）：２８７−２８９（２００３）；Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４２  Ｓｕｐｐｌ  ２，ｐｉｉｌ  １−６（Ｍａｙ  ２００３）；Ｇｏｌｄｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，１３（５）：３５１−３６２（２００２）；およびＧｏｌｄｒｉｎｇ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  １４（４）４０６−１０（２００２）も参照のこと。さらに、マウスが発症し得る関節炎は炎症性が高いが、ＲＡＮＫＬ／ＯＤＦノックアウトマウスは、骨侵食を起こさない（Ｇｒａｖａｌｌｅｓｅ，“Ｂｏｎｅ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ”Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６１（ｓｕｐｐｌ  ＩＩ）：ｉｉ８４−６（２００２）に概説）。
【００１７】
ＵＳ２００４／００５８８８９号は、骨量減少または低骨密度に関連する容態を治療するためのβ−グルカンの使用方法および骨成長の増強が望ましい状況での骨成長の促進方法を開示している。
【００１８】
ＣＤ２０抗体およびこれを用いた治療法
リンパ球は、造血過程中に骨髄で産生される多くの白血球型の１つである。２つの主な白血球集団（Ｂリンパ球（Ｂ細胞）およびＴリンパ球（Ｔ細胞））が存在する。本明細書中ではＢ細胞が特に重要である。
【００１９】
Ｂ細胞は骨髄内で成熟し、骨髄から遊離して、その細胞表面上に抗原結合抗体を発現する。ナイーブＢ細胞が最初にその膜結合抗体が特異的である抗原と遭遇した場合、細胞は急速に分裂し始め、その子孫が記憶Ｂ細胞および「形質細胞」と呼ばれるエフェクター細胞に分化する。記憶Ｂ細胞は、より寿命が長く、元の親細胞と同一の特異性を有する膜結合抗体を発現し続ける。形質細胞は膜結合抗体を産生しないが、その代わりに、分泌することができる形態の抗体を産生する。分泌抗体は、体液性免疫の主なエフェクター分子である。
【００２０】
ＣＤ２０抗原（ヒトＢリンパ球制限分化抗原（Ｂｐ３５）とも呼ばれる）は、分子量が約３５ｋＤのプレＢリンパ球および成熟Ｂリンパ球上に存在する疎水性膜貫通タンパク質である。Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（１９）：１１２８２−１１２８７（１９８９）およびＥｉｎｆｅｌｄら、ＥＭＢＯ  Ｊ．７（３）：７１１−７１７（１９８８）。抗原は、９０％を超えるＢ細胞ホジキンリンパ種（ＮＨＬ）でも発現されるが（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ  ６３（６）：１４２４−１４３３（１９８４））、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞、または他の正常組織では見出されない（Ｔｅｄｄｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５（２）：９７３−９７９（１９８５））。ＣＤ２０は、細胞周期の開始および分化のための活性化過程の初期段階を調節し（Ｔｅｄｄｅｒら、上記）、これはおそらくカルシウムイオンチャネルとして機能する。Ｔｅｄｄｅｒら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４Ｄ：１９５（１９９０）。
【００２１】
Ｂ細胞リンパ腫でＣＤ２０が発現と仮定すると、この抗原は、このようなリンパ球の「ターゲティング」の候補としての役割を果たすことができる。本質的に、このようなターゲティングを、以下のように一般化することができる：Ｂ細胞のＣＤ２０表面抗原に特異的な抗体を患者に投与する。これらの抗ＣＤ２０抗体は、正常および悪性のＢ細胞の両方のＣＤ２０抗原に（表向きは）特異的に結合し、ＣＤ２０表面抗原に結合した抗体により、新生物性Ｂ細胞の破壊および枯渇をもたらす。さらに、腫瘍を破壊する能力を有する化学薬品または放射性標識を、この薬剤が新生物性Ｂ細胞に特異的に「送達される」ように、抗ＣＤ２０抗体に結合体化することができる。アプローチにかかわりなく、主な目的は、腫瘍を破壊することであり、特定のアプローチを、使用される特定のＣＤ２０抗体によって決定することができ、したがって、利用可能なＣＤ２０抗原のターゲティングアプローチを大幅に変更することができる。
【００２２】
リツキシマブ抗体（米国でＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、他でＭＡＢＲＡ（登録商標）として販売されている製品中の活性成分（ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ））は、ＣＤ２０抗原に指向する遺伝子操作されたキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体である。リツキシマブは、１９９８年４月７日発行の米国特許第５，７３６，１３７号（Ａｎｄｅｒｓｏｎら）で「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれる抗体である。リツキシマブは、再発性または無反応性の低悪性度または濾胞性リンパ腫、ＣＤ２０陽性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫患者の治療が示されている。インビトロでの作用機構研究により、リツキシマブがヒト補体に結合し、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によってリンパ様Ｂ細胞株を溶解することが証明されている。Ｒｅｆｆら、Ｂｌｏｏｄ  ８３（２）：４３５−４４５（１９９４）。さらに、リツキシマブは、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイで有意な活性を有する。より最近では、リツキシマブは、トリチウム化チミジン組み込みアッセイで抗増殖効果を有し、且つアポトーシスを直接誘導する一方で、他の抗ＣＤ１９および抗ＣＤ２０抗体はそうではないことが示されている。Ｍａｌｏｎｅｙ  ら  Ｂｌｏｏｄ  ８８（１０）：６３７ａ（１９９６）。リツキシマブと化学療法薬との間の相乗効果も実験的に認められている。特に、リツキシマブは、薬物耐性ヒトＢ細胞リンパ腫細胞株を、ドキソルビシン、ＣＤＤＰ、ＶＰ−１６、ジフテリア毒素、およびリシンの細胞傷害効果に対して感受性にする。（Ｄｅｍｉｄｅｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  １２（３）：１７７−１８６（１９９７））。インビボでの前臨床研究では、リツキシマブは、おらく補体および細胞媒介過程によってカニクイザルの末梢血、リンパ節、および骨髄からＢ細胞を枯渇させることが示されている。Ｒｅｆｆら、Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５（１９９４）。
【００２３】
リツキシマブは、再発性または無反応性の低悪性度または濾胞性ＣＤ２０＋Ｂ細胞ＮＨＬ患者の治療において１９９７年１１月に米国で承認され、毎週３７５ｍｇ／ｍ２の用量で４回投与される。２００１年には、食品医薬品局（ＦＤＡ）は、低悪性度ＮＨＬの治療、再治療（１週間毎に計４回）、およびさらなる投与レジメン（１週間毎に計８回）のさらなる適用を承認した。３００，０００人を超える患者が、単剤療法または免疫抑制薬もしくは化学療法薬と組み合わせてリツキシマブに曝露されている。患者はまた、２年までの維持療法としてリツキシマブで治療されている。Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１：１７４６−１７５１（２００３）；Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：４２６１−４２６７（２００２）；Ｅｄｗａｒｄｓら“Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ”Ｎ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５０：２５７２−８２（２００４）。
【００２４】
リツキシマブは、種々の非悪性自己免疫障害でも研究されており、Ｂ細胞および自己抗体が疾患の病態生理学で役割を果たすようである。Ｅｄｗａｒｄｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：８２４−８２８（２００２）。リツキシマブは、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）（Ｌｅａｎｄｒｏら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６１：８８３−８８８（２００２）；Ｅｄｗａｒｄｓら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，４６（Ｓｕｐｐｌ．９）：Ｓ４６（２００２）；Ｓｔａｈｌら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，６２（Ｓｕｐｐｌ．１）：ＯＰ００４（２００３）；Ｅｍｅｒｙら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４８（９）：Ｓ４３９（２００３））、狼瘡（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．５：１５７−１５９（２００３）；Ｌｅａｎｄｒｏら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４６：２６７３−２６７７（２００２）；Ｇｏｒｍａｎら、Ｌｕｐｕｓ，１３：３１２−３１６（２００４））、免疫性血小板減少性紫斑（Ｄ’Ａｒｅｎａら、Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ４４：５６１−５６２（２００３）；Ｓｔａｓｉら、Ｂｌｏｏｄ，９８：９５２−９５７（２００１）；Ｓａｌｅｈら、Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，２７（Ｓｕｐｐ  １２）：９９−１０３（２０００）；Ｚａｉａら、Ｈａｅｍａｔｏｌｇｉｃａ，８７：１８９−１９５（２００２）；Ｒａｔａｎａｔｈａｒａｔｈｏｒｎら、Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．，１３３：２７５−２７９（２０００））、新生赤血球性無形成症（Ａｕｎｅｒら、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，１１６：７２５−７２８（２００２））、自己免疫性貧血症（Ｚａｊａら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ８７：１８９−１９５（２００２）（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ８７：３３６（２００２）の記載は誤植のようである）、寒冷凝集素病（Ｌａｙｉｏｓら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１５：１８７−８（２００１）；Ｂｅｒｅｎｔｓｅｎら、Ｂｌｏｏｄ，１０３：２９２５−２９２８（２００４）；Ｂｅｒｅｎｔｓｅｎら、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，１１５：７９−８３（２００１）；Ｂａｕｄｕｅｒ，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，１１２：１０８３−１０９０（２００１）；Ｄａｍｉａｎｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，１１４：２２９−２３４（２００１））、重症インスリン抵抗性のＢ型症候群（Ｃｏｌｌら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３５０：３１０−３１１（２００４）、混合性クリオグロブリン血症（ＤｅＶｉｔａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４６  Ｓｕｐｐｌ．９：Ｓ２０６／Ｓ４６９（２００２））、重症筋無力症（Ｚａｊａら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，５５：１０６２−６３（２０００）；Ｗｙｌａｍら、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．，１４３：６７４−６７７（２００３））、ウェゲナー肉芽腫症（Ｓｐｅｃｋｓら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４４：２８３６−２８４０（２００１））、無反応性尋常性天疱瘡（Ｄｕｐｕｙら、Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１４０：９１−９６（２００４））、皮膚筋炎（Ｌｅｖｉｎｅ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，４６（Ｓｕｐｐｌ．９）：Ｓ１２９９（２００２））、シェーグレン症候群（Ｓｏｍｅｒら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４９：３９４−３９８（２００３））、活性ＩＩ型混合性クリオグロブリン血症（Ｚａｊａら、Ｂｌｏｏｄ，１０１：３８２７−３８３４（２００３））、尋常性天疱瘡（Ｄｕｐａｙら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１４０：９１−９５（２００４））、自己免疫性神経障害（Ｐｅｓｔｒｏｎｋら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ）７４：４８５−４８９（２００３））、腫瘍随伴性眼球クローヌス−ミオクローヌス症候群（Ｐｒａｎｚａｔｅｌｌｉら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６０（Ｓｕｐｐｌ．１）ＰＯ５．１２８：Ａ３９５（２００３））、再発−寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）（Ｃｒｏｓｓら（ａｂｓｔｒａｃｔ）“Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  ＭＳ”Ｅｉｇｈｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０−２１（２００３）の徴候および症状を潜在的に緩和することが報告されている。
【００２５】
関節リウマチ（ＲＡ）患者で第２相試験（ＷＡ１６２９１）を行い、リツキシマブの安全性および有効性に関する４８週間の追跡データが得られている。Ｅｍｅｒｙら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ４８（９）：Ｓ４３９（２００３）；Ｓｚｃｚｅｐａｎｓｋｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ４８（９）：Ｓ１２１（２００３）。全部で１６１人の患者を、無作為に以下の４つの治療群に均等に分けた：メトトレキサートのみ、リツキシマブのみ、リツキシマブ＋メトトレキサート、リツキシマブ＋シクロホスファミド（ＣＴＸ）。リツキシマブの処置レジメンは、１日目および１５日目に１ｇを静脈投与するものであった。ほとんどのＲＡ患者におけるリツキシマブの注入は、ほとんどの患者で十分に許容され、３６％の患者がその最初の注入時に少なくとも１つの副作用を経験した（偽薬を投与した患者の３０％と比較した場合）。概して、有害事象の大部分は、軽度から中等度の重症度であると見なされ、全治療群を通して十分にバランスがとれていた。４群で４８時間にわたって全部で１９人の重篤な有害事象が認められ、これは、リツキシマブ／ＣＴＸ群よりもわずかに頻繁であった。感染症の発生率は、全群を通して十分にバランスがとれていた。このＲＡ患者集団における重篤な感染症の平均比率は、年間で１００人の患者あたり４．６６人であり、これは、地域ベースの疫学的研究で報告されたＲＡ患者における入院が必要な感染症の比率よりも低い（年間で１００人の患者あたり９．５７人）。Ｄｏｒａｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４６：２２８７−２２９３（２００２）。
【００２６】
少数の神経障害患者（自己免疫性神経障害（Ｐｅｓｔｒｏｎｋら、上記）、眼球クローヌス−ミオクローヌス症候群（Ｐｒａｎｚａｔｅｌｌｉら、上記）、およびＲＲＭＳ（Ｃｒｏｓｓら、上記）が含まれる））における報告されたリツキシマブの安全性プロフィールは、癌またはＲＡで報告されたものと類似していた。ＲＲＭＳ患者（Ｃｒｏｓｓら、上記）におけるインターフェロン−β（ＩＲＮ−β）または酢酸ガラティラメルと組み合わせたリツキシマブについての進行中の研究者委託型試験（ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ−ｓｐｏｎｓｏｒｅｄ  ｔｒｉａｌ）では、１０人の処置患者のうちの１人がリツキシマブの最初の注入後の中等度の発熱および硬直後に一晩観察するために入院し、他の９人の患者はいかなる報告される有害事象をも引き起こすことなく４回の注入レジメンを完了した。
【００２７】
ＣＤ２０抗体およびＣＤ２０結合分子に関する特許および特許公報には、以下が含まれる：米国特許第５，７７６，４５６号、同第５，７３６，１３７号、同第５，８４３，４３９号、同第６，３９９，０６１号、および同第６，６８２，７３４号ならびにＵＳ２００２／０１９７２５５号、ＵＳ２００３／００２１７８１号、ＵＳ２００３／００８２１７２号、ＵＳ２００３／００９５９６３号、ＵＳ２００３／０１４７８８５号（Ａｎｄｅｒｓｏｎら）；米国特許第６，４５５，０４３号およびＷＯ２０００／０９１６０号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ａ．）；ＷＯ２０００／２７４２８号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ）；ＷＯ２０００／２７４３３号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ  ａｎｄ  Ｌｅｏｎａｒｄ）；ＷＯ２０００／４４７８８号（Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙら）；ＷＯ２００１／１０４６２号（Ｒａｓｔｅｔｔｅｒ，Ｗ．）；ＷＯ０１／１０４６１号（Ｒａｓｔｅｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ）；ＷＯ２００１／１０４６０号（Ｗｈｉｔｅ  ａｎｄ  Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ）；ＵＳ２００１／００１８０４１号、ＵＳ２００３／０１８０２９２号、ＷＯ２００１／３４１９４号（Ｈａｎｎａ  ａｎｄ  Ｈａｒｉｈａｒａｎ）；ＵＳ２００２／０００６４０４号およびＷＯ２００２／０４０２１号（Ｈａｎｎａ  ａｎｄ  Ｈａｒｉｈａｒａｎ）；ＵＳ２００２／００１２６６５号およびＷＯ２００１／７４３８８号（Ｈａｎｎａ，Ｎ．）；ＵＳ２００２／００５８０２９号（Ｈａｎｎａ，Ｎ．）；ＵＳ２００３／０１０３９７１号（Ｈａｒｉｈａｒａｎ  ａｎｄ  Ｈａｎｎａ）；ＵＳ２００２／０００９４４４号およびＷＯ２００１／８０８８４号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ａ．）；ＷＯ２００１／９７８５８号（Ｗｈｉｔｅ，Ｃ）；ＵＳ２００２／０１２８４８８号およびＷＯ２００２／３４７９０号（Ｒｅｆｆ，Ｍ．）；ＷＯ２００２／０６０９５５号（Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙら）；ＷＯ２００２／０９６９４８号（Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙら）；ＷＯ２００２／０７９２５５号（Ｒｅｆｆ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｅｓ）；米国特許第６，１７１，５８６号およびＷＯ１９９８／５６４１８号（Ｌａｍら）；ＷＯ１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；ＷＯ１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；ＷＯ１９９９／５１６４２，米国特許第６，１９４，５５１号、米国特許第６，２４２，１９５号、米国特許第６，５２８，６２４号、および米国特許第６，５３８，１２４号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）；ＷＯ２０００／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＷＯ２０００／６７７９６号（Ｃｕｒｄら）；ＷＯ２００１／０３７３４号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚら）；ＵＳ２００２／０００４５８７号およびＷＯ２００１／７７３４２号（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａ）；ＵＳ２００２／０１９７２５６号（Ｇｒｅｗａｌ，Ｌ）；ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許第６，５６５，８２７号、同第６，０９０，３６５号、同第６，２８７，５３７号、同第６，０１５，５４２号、同第５，８４３，３９８号、および同第５，５９５，７２１号（Ｋａｍｉｎｓｋｉら）；米国特許第５，５００，３６２号、同第５，６７７，１８０号、同第５，７２１，１０８号、同第６，１２０，７６７号、および同第６，６５２，８５２号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら）；米国特許第６，４１０，３９１号（Ｒａｕｂｉｔｓｃｈｅｋら）；米国特許第６，２２４，８６６号およびＷＯ００／２０８６４号（Ｂａｒｂｅｒａ−Ｇｕｉｌｌｅｍ，Ｅ．）；ＷＯ２００１／１３９４５号（Ｂａｒｂｅｒａ−Ｇｕｉｌｌｅｍ，Ｅ．）；ＷＯ２０００／６７７９５号（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ）；ＵＳ２００３／０１３３９３０号およびＷＯ２０００／７４７１８号（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｓｅｎ）；ＵＳ２００３／０２１９４３３号およびＷＯ２００３／６８８２１号（Ｈａｎｓｅｎら）；ＷＯ２００４／０５８２９８号（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｓｅｎ）；ＷＯ２０００／７６５４２号（Ｇｏｌａｙら）；ＷＯ２００１／７２３３３号（Ｗｏｌｉｎ  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ）；米国特許第６，３６８，５９６号（Ｇｈｅｔｉｅら）；米国特許第６，３０６，３９３号およびＵＳ２００２／００４１８４７号（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，Ｄ．）；ＵＳ２００３／００２６８０１号（Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｔｍａｎｎ）；ＷＯ２００２／１０２３１２号（Ｅｎｇｌｅｍａｎ，Ｅ．）；ＵＳ２００３／００６８６６４号（Ａｌｂｉｔａｒら）；ＷＯ２００３／００２６０７号（Ｌｅｕｎｇ，Ｓ．）；ＷＯ２００３／０４９６９４号、ＵＳ２００２／０００９４２７号、およびＵＳ２００３／０１８５７９６号（Ｗｏｌｉｎら）；ＷＯ２００３／０６１６９４号（Ｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｉｅｇａｌｌ）；ＵＳ２００３／０２１９８１８号（Ｂｏｈｅｎら）；ＵＳ２００３／０２１９４３３号およびＷＯ２００３／０６８８２１号（Ｈａｎｓｅｎら）；ＵＳ２００３／０２１９８１８号（Ｂｏｈｅｎら）；ＵＳ２００２／０１３６７１９号（Ｓｈｅｎｏｙら）；ＷＯ２００４／０３２８２８号（Ｗａｈｌら）；ならびにＷＯ２００２／５６９１０号（Ｈａｙｄｅｎ−Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ）。米国特許第５，８４９，８９８号および欧州特許第３３０，１９１号（Ｓｅｅｄら）；欧州特許第３３２，８６５Ａ２号（Ｍｅｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓ）；米国特許第４，８６１，５７９号（Ｍｅｙｅｒら）；ＵＳ２００１／００５６０６６号（Ｂｕｇｅｌｓｋｉら）；ＷＯ１９９５／０３７７０号（Ｂｈａｔら）；ＵＳ２００３／０２１９４３３Ａ１号（Ｈａｎｓｅｎら）；ＷＯ２００４／０３５６０７号（Ｔｅｅｌｉｎｇら）；ＷＯ２００４／０５６３１２号（Ｌｏｗｍａｎら）；ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｓｈｉｔａｒａら）；ＷＯ２００４／１０３４０４号（Ｗａｔｋｉｎｓら）；ＷＯ２００５／０００９０１号（Ｔｅｄｄｅｒら）；およびＵＳ２００５／００２５７６４号（Ｗａｔｋｉｎｓら）も参照のこと。
【００２８】
リツキシマブを使用した治療に関する刊行物には、以下が含まれる：Ｐｅｒｏｔｔａ  ａｎｄ  Ａｂｕｅｌ，“Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｅｌａｐｓｉｎｇ  ＩＴＰ  ｏｆ  １０  ｙｅａｒｓ  ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ”Ａｂｓｔｒａｃｔ＃３３６０Ｂｌｏｏｄ１０（１）（ｐａｒｔ１−２）：ｐ．８８Ｂ（１９９８）；Ｐｅｒｏｔｔａら“Ｒｉｔｕｘａｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐａｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ（ＩＴＰ）”，Ｂｌｏｏｄ，９４：４９（ａｂｓｔｒａｃｔ）（１９９９）；Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｒ．，“Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｅｒｅｔｉｃｓ”Ｎｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ（２００１年４月７日）；Ｌｅａｎｄｒｏら“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ２２ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ”Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ，ｓｕｐｒａ；Ｌｅａｎｄｒｏら“Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：  ｅａｒｌｙ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｓａｆｅｔｙ，ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｄｏｓｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ”Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４４（９）：Ｓ３７０（２００１）；Ｌｅａｎｄｒｏら“Ａｎ  ｏｐｅｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ”，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４６：２６７３−２６７７（２００２）（２週間の間に、各患者に５００ｍｇのリツキシマブを２回注入し、７５０ｍｇのシクロホスファミドを２回注入し、高用量の経口コルチコステロイドを注入し、２人の患者が７ヶ月後および８ヶ月後にそれぞれ再発し、再処置するが異なるプロトコールである）；“Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｔｈｅｒａｐｙ”Ｗｅｉｄｅら、Ｌｕｐｕｓ，１２：７７９−７８２（２００３）（患者をリツキシマブ（３７５ｍｇ／ｍ２×４、１週間間隔で繰り返す）で処置し、５〜６ヶ月毎にリツキシマブをさらに適用し、次いで、３ヶ月毎に３７５ｍｇ／ｍ２のリツキシマブを使用して維持治療を行い、第２の無反応性ＳＬＥ患者をリツキシマブで首尾よく処置し、３ヶ月毎に維持療法を行い、両患者はリツキシマブ両方に対して十分に応答した）；Ｅｄｗａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｔｏ  ｄｅｐｌｅｔｅ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ”Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ４０：２０５−２１１（２００１）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅら“Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｓｅｒｉａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ”Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，４６（Ｓｕｐｐｌ．９）：Ｓ１３５０（２００２）；Ｅｄｗａｒｄｓら“Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ”Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，上記；Ｅｄｗａｒｄｓら“Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ，ａ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４６（９）：Ｓ１９７（２００２）；Ｅｄｗａｒｄｓら“Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｂ−ｃｅｌｌ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，”Ｎ．Ｅｎｇｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．３５０：２５７２−８２（２００４）；Ｐａｖｅｌｋａら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６３：（Ｓ１）：２８９−９０（２００４）；Ｅｍｅｒｙら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５０（Ｓ９）：Ｓ６５９（２００４）；Ｌｅｖｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｓｔｒｏｎｋ，“ＩｇＭ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ：Ｂ−ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ”Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５２：１７０１−１７０４（１９９９）；ＤｅＶｉｔａら“Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ”Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍ  ４６：２０２９−２０３３（２００２）；Ｈｉｄａｓｈｉｄａら“Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＤＭＡＲＤ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ．”Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ；Ｏｃｔ  ２４−２９；Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ  ２００２；Ｔｕｓｃａｎｏ，Ｊ．“Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ”Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ；Ｏｃｔ  ２４−２９；Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ  ２００２；“Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ；ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ”Ｍａｒｔｉｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ２０：５１７−５２７（２００４）；Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｍａｎ，“Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ａ��ｄ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉ−Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４８：１４８４−１４９２（２００３）；Ｋａｚｋａｚ  ａｎｄ  Ｉｓｅｎｂｅｒｇ，“Ａｎｔｉ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４：３９８−４０２（２００４）；Ｖｉｒｇｏｌｉｎｉ  ａｎｄ  Ｖａｎｄａ，“Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，５８：２９９−３０９（２００４）；Ｋｌｅｍｍｅｒら“Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ＡｎｔｉＣＤ２０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ”，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４８：（９）９，Ｓ（ＳＥＰ），ｐａｇｅ：Ｓ６２４−Ｓ６２４（２００３）；Ｋｎｅｉｔｚら“Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０６：５１９−５２７（２００２）；Ａｒｚｏｏら“Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）”Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，６１（１０），ｐ９２２−４（２００２）Ｃｏｍｍｅｎｔ  ｉｎ  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．６１：８６３−８６６（２００２）；“Ｆｕｔｕｒｅ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ”ｂｙ  Ｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｄｉｏｎｎｅ，ｉｎ  Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２００３  ｂｙ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）Ａｒｔｉｃｌｅ  Ｏｎｌｉｎｅ  Ｐｏｓｔｉｎｇ  Ｄａｔｅ：  Ｊａｎｕａｒｙ  １５，２００３（Ｃｈａｐｔｅｒ２“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ”）；Ｌｉａｎｇ  ａｎｄ  Ｔｅｄｄｅｒ，Ｗｉｌｅｙ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｅｃｔｉｏｎ：ＣＤ２０  ａｓ  ａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｔａｒｇｅｔ，ａｒｔｉｃｌｅ  ｏｎｌｉｎｅ  ｐｏｓｔｉｎｇ  ｄａｔｅ：２００２年１月１５日、タイトル「ＣＤ２０」；Ａｐｐｅｎｄｉｘ  ４Ａ、タイトル“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ”ｂｙ  Ｓｔｏｃｋｉｎｇｅｒら、ｅｄｓ：Ｃｏｌｉｇａｎら、ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００３  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ）Ｏｎｌｉｎｅ  Ｐｏｓｔｉｎｇ  Ｄａｔｅ：Ｍａｙ，���００３；Ｐｒｉｎｔ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｄａｔｅ：２００３年２月；Ｐｅｎｉｃｈｅｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，“ＣＤ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ／ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ；Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”ｉｎ  Ｗｉｌｅｙ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｓｅｃｔｉｏｎ：Ｃｈｉｍｅｒｉｃ，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；２００２年１月１５日、オンライン投稿；Ｓｐｅｃｋｓら“Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  Ｗｅｇｅｎｅｒ’ｓ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ  ｔｏ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ”Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４４：２８３６−２８４０（２００１）；ｏｎｌｉｎｅ  ａｂｓｔｒａｃｔ  ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｖｉｔａｔｉｏｎ  Ｋｏｅｇｈら“Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｆｏｒ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｅｖｅｒｅ  ＡＮＣＡ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ：Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｐｅｎ−Ｌａｂｅｌ  Ｐｉｌｏｔ  Ｔｒｉａｌ  ｉｎ  １０Ｐａｔｉｅｎｔｓ”，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｓｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ：２８−１００，Ｓｅｓｓｉｏｎ  Ｔｉｔｌｅ：Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ，Ｓｅｓｓｉｏｎ  Ｔｙｐｅ：ＡＣＲ  Ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｅｓｓｉｏｎ，Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃａｔｅｇｏｒｙ：２８  Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ，Ｓｅｓｓｉｏｎ１０／１８／２００４（＜ｗｗｗ．ａｂｓｔｒａｃｔｓｏｎｌｉｎｅ．ｃｏｍ／ｖｉｅｗｅｒ／ＳｅａｒｃｈＲｅｓｕｌｔｓ．ａｓｐ＞）；Ｅｒｉｋｓｓｏｎ，“Ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｉｎ  ５ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＡＮＣＡ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ”，Ｋｉｄｎｅｙ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ，２６：２９４（２００３）；Ｊａｙｎｅら“Ｂ−ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｆｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ”Ｋｉｄｎｅｙ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２６：２９４（２００３）；Ｊａｙｎｅ，ｐｏｓｔｅｒ８８（１１ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ  ａｎｄ  ＡＮＣＡ  ｗｏｒｋｓｈｏｐ），２００３  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ；Ｓｔｏｎｅ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｋｓ，“Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ＡＮＣＡ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ”，ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ２００２−２００３  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ，＜ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ．ｏｒｇ／ｒｅｓｅａｒｃｈ／ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ／ｔｒｉａｌｓ／ｓｔｏｎｅ．ｈｔｍｌ＞。Ｌｅａｎｄｒｏら“Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｃｃｕｒｓ  ｍａｉｎｌｙ  ｆｒｏｍ  ｎａｉｖｅ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ”Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，４８（Ｓｕｐｐｌ  ９）：Ｓ１１６０（２００３）も参照のこと。
【００２９】
破骨細胞形成におけるＢリンパ球の役割は、破骨細胞形成および寿命に対するＢ系統細胞の刺激効果および阻害効果の両方が報告されているので、議論の余地がある。Ｂリンパ系細胞は、２つの方法（破骨細胞分化を支持し、破骨細胞前駆体としての機能を果たすためのＯＤＦ／ＲＡＮＫＬの発現）で破骨細胞形成に関与し得る（Ｍａｎａｂｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６７（５）：２６２５−２６３１（２００１））。オステオプロテゲリンは、Ｂ細胞成熟および骨代謝を調節する（Ｙｕｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６６（３）：１４８２−１４９１（２００１））。Ｂ細胞は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）（これらの細胞中でアポトーシスを誘導する因子）の分泌によって破骨細胞の形成を阻害し、成熟破骨細胞形成の寿命を短くすることが示されている（Ｗｅｉｔｚｍａｎｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，７８：（２）：３１８−３２４（２０００））。Ｂリンパ球前駆体は、機能的破骨細胞を生成し得る（Ｇｒｃｅｖｉｃら、Ｃｒｏａｔｉａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，４２（４）：３８４−３９２（２００１））。
【００３０】
ラットアジュバント関節炎研究におけるビスホスホネートには、エトリドロネート（ｅｔｒｉｄｒｏｎａｔｅ）およびクロドロネートが体重減少、足の炎症、および骨吸収を減少させることが含まれる（非特許文献１）。ＮＥ５８０９５は、骨侵食を予防し、実験関節炎における関節構造を保存するジホスフェートである（非特許文献２）。ゾレドロネートは、実験炎症性関節炎における骨幹端皮質内欠損から防御する（非特許文献３）。クロドロネートの２０ｍｇ／ｋｇ／日のｉｖ注入により、足の炎症および骨吸収が減少するが、骨形成も阻害される。非特許文献４。
【００３１】
全ての承認されているビスホスホネート（プアミドロネート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）、アレンドロネート、リセドロネート、ゾレドロネート）が、骨吸収の生化学的測定量を改善し（全身骨量減少を減少させ）、限局性骨侵食の進行を阻害する。Ｇｒａｖａｌｌｅｓｅ，上記。ビスホスホネートが関節リウマチの構造変化を遅延させる潜在的療法として見なされ得るにもかかわらず、有効性、長期許容性、および毒性は知られておらず、さらなる試験が必要である。
【００３２】
組織の成長および修復における増殖因子の役割についての知識は増加しているにもかかわらず、骨、靭帯、および軟骨の成長促進のための材料および方法が当該分野で依然として必要である。破骨細胞形成を調節し、成熟破骨細胞の活性を吸収する方法も必要である。骨量減少を防止し、骨疾患を治療する方法も必要である。
【非特許文献１】Ｆｌｏｒａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，２２：３４０−３４６（１９７８）
【非特許文献２】Ｆｒａｎｃｉｓら、Ｉｎｔ  Ｊ．Ｔｉｓ．Ｒｅｓ．，１１：２３９−２５２（１９８９）
【非特許文献３】Ｐｙｓｋｌｗｅｃら、Ｊ．Ｏｒｔｈｏｐ．Ｒｅｓ．，１５：８５８−８６１（１９９７）
【非特許文献４】Ｏｅｌｚｎｅｒら、Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，４９：４２４−４３３（２０００）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００３３】
発明の要旨
したがって、本発明は、特許請求の範囲に記載の通りである。本発明は、骨障害を有する被験体に安全且つ有効な治療レジメンを提供するＢ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニストの投与を含む。
【００３４】
第１態様では、本発明は、有効量のＣＤ２０抗体を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の骨障害の治療方法に関する。
【００３５】
別の態様では、本発明は、Ｂ細胞表面マーカーに結合する有効量の抗体を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の骨障害の治療方法に関する。
【００３６】
さらに別の態様では、本発明は、Ｂ細胞表面マーカーに結合する有効量のアンタゴニストを哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の骨障害の治療方法に関する。
【００３７】
さらなる態様では、本発明は、ＣＤ２０抗体またはＢ細胞表面マーカーに結合する抗体もしくはアンタゴニストを含む容器および哺乳動物の骨障害の治療のための説明書を含む添付文書を含み、説明書がＣＤ２０抗体またはＢ細胞表面マーカーに結合する抗体もしくはアンタゴニストを有効量で哺乳動物に投与することを示す製品を提供する。好ましい実施形態では、製品は、治療のための抗体以外の薬剤を含む容器をさらに含み、このような薬剤での哺乳動物の治療についての指示をさらに含む。
【００３８】
上記発明の好ましい実施形態では、骨障害は、骨粗鬆症または限局性骨侵食（辺縁関節侵食および軟骨下骨侵食（骨髄）が含まれる）、骨欠損、小児期特発性骨量減少、歯槽骨量減少、骨折、もしくは関節近接骨減少症などの骨減少症であるか、または関節リウマチなどの自己免疫疾患に関連する骨量減少である。なおさらなる実施形態では、本発明は、関節リウマチなどの炎症性関節炎におけるびらん性骨障害を予防する方法であって、有効量のＣＤ２０抗体をこのような障害を罹患した哺乳動物に投与する工程を含む方法を提供する。自己免疫疾患（特に、関節リウマチ）または自己免疫疾患の発症リスクに関連しない骨障害の治療方法も本発明の範囲内である。
【００３９】
別の好ましい態様では、第２薬物を有効量で哺乳動物に投与し、ＣＤ２０抗体またはＢ細胞表面マーカーに結合する抗体もしくはアンタゴニストは第１薬物である。このような薬物は、１つまたは複数の薬物であり得る。より好ましくは、このような第２薬物は、破骨細胞関連障害の治療薬（オステオプロテゲリン、ＭＭＰインヒビター、ＩＬ−４などのサイトカイン、βグルカン、インテグリンアンタゴニスト、カルシトニン、プロトンポンプインヒビター、プロテアーゼインヒビター、またはビスホスホネート（リセドロネート、エチドロネート、クロドロネート、ＮＥ−５８０９５、ゾレンドロネート、パミドロネート、またはアレンドロネートなど）、免疫抑制薬、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、細胞傷害薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ホルモン、またはその組み合わせなど）である。さらに別の好ましい実施形態では、哺乳動物はヒトである。抗体を、静脈内または皮下に投与することが好ましい。
【００４０】
これらの最後の態様のさらに別の好ましい実施形態では、哺乳動物は、ＣＤ２０抗体などのＢ細胞表面マーカーに結合する抗体で以前に処置されたことがなく、そして／またはＢ細胞表面マーカーに結合する抗体（ＣＤ２０抗体が含まれる）以外の骨障害を治療するための薬物を哺乳動物に投与しない。
【００４１】
さらなる態様では、本発明は、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体（好ましくは、ＣＤ２０抗体）をコードする核酸を含む単離した歯骨前駆細胞または前骨芽細胞を前記哺乳動物に導入する工程を含む、哺乳動物の骨溶解を阻害する方法を提供する。細胞が歯骨前駆細胞である場合、哺乳動物は、歯周炎を罹患しているか発症リスクがあり得るか、歯周疾患に起因する歯槽骨量減少を罹患しているか発症リスクがあり得る。別の実施形態では、歯骨前駆細胞を、下顎部分の歯周靭帯に投与することができる。
【００４２】
別の実施形態では、細胞が前骨芽細胞である場合、これを哺乳動物の結合関節に移植することができるか、脛骨内または大腿骨内に投与することができる。さらに、抗体の発現を、抗生物質（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）（テトラサイクリンまたはテトラサイクリンアナログなど）によって調節することができ、さらに、ミノサイクリンを哺乳動物に投与することができる。このような抗生物質を、好ましくは、全身投与する。
【００４３】
インターロイキン−４または腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）のインヒビターを、このような状況で哺乳動物にさらに投与することができる。さらに、このような哺乳動物は、関節リウマチ、根尖周囲または軟骨内の骨量減少、人工関節粒子誘導性骨溶解、または骨溶解性骨転移を罹患しているか、発症リスクがあり得る。
【００４４】
骨成長の促進が有利である条件には、例えば、骨移植片の強化（脊椎骨癒合症が含まれる）、長骨伸長の強化、脊椎動物（例えば、哺乳動物（ヒトが含まれる））の顔面再建術、上顎骨再建術、および／または下顎骨再建術後の骨治癒の強化などが含まれる。
【００４５】
本発明の方法（いずれかの理論に制限されない）によって達成される破骨細胞活性の阻害は、破骨細胞の吸収機構の阻害活性の結果であり得るか、前駆細胞から採用された破骨細胞数の阻害の結果であり得るか、両方の組み合わせであり得る。ほとんどの高齢の個体、特に閉経後の女性が罹患する骨粗鬆症では、骨芽細胞による骨形成が遅延し、且つ骨吸収が増加する（通常は加齢過程によって起こる現象）。本明細書中に記載の方法は、特に、骨芽細胞形成を増強し、従って、骨形成も増加させることを意図する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
好ましい実施形態の詳細な説明
Ｉ．定義
「Ｂ細胞」は、骨髄内で成熟するリンパ球であり、ナイーブＢ細胞、記憶Ｂ細胞、またはエフェクターＢ細胞（形質細胞）が含まれる。本明細書中に記載のＢ細胞は、正常または非悪性Ｂ細胞であり得る。
【００４７】
本明細書中の「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞表面抗原」は、Ｂ細胞に結合するアンタゴニストを使用してターゲティングすることができるＢ細胞の表面上で発現する抗原である。例示的Ｂ細胞表面マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５、およびＣＤ８６白血球表面マーカーが含まれる（説明については、Ｔｈｅ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．１９９７，ｅｄ．Ｂａｒｃｌａｙら、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｈａｒｃｏｕｒｔ  Ｂｒａｃｅ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。他のＢ細胞表面マーカーには、ＲＰ１０５、ＦｃＲＨ２、Ｂ細胞ＣＲ２、ＣＣＲ６、Ｐ２Ｘ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＣＸＣＲ５、ＦＣＥＲ２、ＢＲ３、Ｂｔｉｇ、ＮＡＧ１４、ＳＬＧＣ１６２７０、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＡＴＷＤ５７８、ＦｃＲＨ３、ＩＲＴＡ１、ＦｃＲＨ６、ＢＣＭＡ、および２３９２８７が含まれる。特に重要なＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞上に優先して発現し、前駆Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の両方に発現することができる。本明細書中の好ましいＢ細胞表面マーカーは、ＣＤ２０およびＣＤ２２である。
【００４８】
「ＣＤ２０」抗原または「ＣＤ２０」は、末梢血またはリンパ器官由来の９０％を超えるＢ細胞表面上で見出される約３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は、正常なＢ細胞および悪性Ｂ細胞の両方に存在するが、幹細胞上で発現しない。文献中でのＣＤ２０の別名には、「Ｂリンパ球制限抗原」および「Ｂｐ３５」が含まれる。ＣＤ２０抗原は、例えば、Ｃｌａｒｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８２：１７６６（１９８５）に記載されている。
【００４９】
ＢＬ−ＣＡＭまたはＬｙｂ８としても公知の「ＣＤ２２」抗原または「ＣＤ２２」は、分子量が約１３０（還元型）〜１４０ｋＤ（非還元型）の１型内在性膜糖タンパク質である。これは、Ｂリンパ球の細胞質および細胞膜の両方で発現する。ＣＤ２２抗原は、ＣＤ１９抗原とほぼ同一の段階でＢ細胞リンパ球分化の初期に出現する。他のＢ細胞マーカーと異なり、ＣＤ２２膜発現は、成熟Ｂ細胞（ＣＤ２２＋）と形質細胞（ＣＤ２２−）との間に含まれる後期分化段階に制限される。ＣＤ２２抗原は、例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７（１９９１）およびＷｉｌｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５０１３（１９９３）に記載されている。
【００５０】
「アンタゴニスト」は、Ｂ細胞上のＣＤ２０への結合の際に、例えば、Ｂ細胞によって誘発される液性応答の減少または防止によって哺乳動物中のＢ細胞を破壊または枯渇し、そして／または１つもしくは複数のＢ細胞機能を妨害する分子である。アンタゴニストは、好ましくは、アンタゴニストで処置された哺乳動物中のＢ細胞を枯渇させる（すなわち、循環Ｂ細胞レベルを減少させる）ことができる。このような枯渇を、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞死の誘導（例えば、アポトーシスによる）等の種々の機構を介して行うことができる。本発明の範囲内に含まれるアンタゴニストには、ＣＤ２０に結合し、任意選択的に細胞傷害薬と結合体化するか融合した抗体、合成配列または天然配列のペプチド、イムノアドヘシン、および小分子アンタゴニストが含まれる。好ましいアンタゴニストは、抗体を含む。
【００５１】
本明細書中の「抗体アンタゴニスト」は、Ｂ細胞表面マーカーへの結合の際に、例えば、Ｂ細胞によって誘発される液性応答の減少または防止によって哺乳動物中のＢ細胞を破壊または枯渇し、そして／または１つもしくは複数のＢ細胞機能を妨害する分子である。抗体アンタゴニストは、好ましくは、抗体アンタゴニストで処置された哺乳動物中のＢ細胞を枯渇させる（すなわち、循環Ｂ細胞レベルを減少させる）ことができる。このような枯渇を、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞死の誘導（例えば、アポトーシスによる）等の種々の機構を介して行うことができる。
【００５２】
本明細書中の用語「抗体」を、最も広い意味で使用し、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメント（これらが所望の生物活性を示す場合に限る）を対象とする。半減期が増加し、胎児への母性ＩｇＧの移入を担う新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）ａｎｄ  Ｋｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は本定義に含まれ、ＷＯ００／４２０７２号およびＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１号に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合が改善される１つまたは複数の置換を含むＦｃ領域を含む。ＦｃＲｎ結合が改善された好ましいＦｃ領域含有抗体変異型（ｖａｒｉａｎｔ）は、そのＦｃ領域の１つ、２つ、または３つの位置においてアミノ酸置換を含む。
【００５３】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、好ましくは、その抗原結合領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、線状抗体、単鎖抗体分子、および抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が含まれる。
【００５４】
本明細書中の目的のために、「インタクトな抗体」は、重鎖および軽鎖の可変ドメインならびにＦｃ領域を含むものである。
【００５５】
「Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体」は、Ｂ細胞表面マーカーへの結合の際に、例えば、Ｂ細胞によって誘発される液性応答の減少または防止によって哺乳動物中のＢ細胞を破壊または枯渇し、そして／または１つもしくは複数のＢ細胞機能を妨害する分子である。抗体は、好ましくは、抗体で処置された哺乳動物中のＢ細胞を枯渇させる（すなわち、循環Ｂ細胞レベルを減少させる）ことができる。このような枯渇を、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞死の誘導（例えば、アポトーシスによる）等の種々の機構を介して行うことができる。１つの好ましい実施形態では、抗体は、主な臨床応答を誘導する。別の好ましい実施形態では、Ｂ細胞表面マーカーは、ＣＤ２０またはＣＤ２２であり、その結果、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体は、ＣＤ２０またはＣＤ２２にそれぞれ結合する抗体、すなわち、それぞれ「ＣＤ２０抗体」または「ＣＤ２２抗体」である。ＣＤ２２抗体の例には、欧州特許第１，４７６，１２０号（Ｔｅｄｄｅｒ  ａｎｄ  Ｔｕｓｃａｎｏ）、欧州特許第１，４８５，１３０号（Ｔｅｄｄｅｒ）、および欧州特許第１，５０４，０３５号（Ｐｏｐｐｌｅｗｅｌｌら）に記載のもの、ならびにＵＳ２００４／０２５８６８２号（Ｌｅｕｎｇら）に記載のものが含まれる。なおさらに好ましい実施形態では、抗体はＣＤ２０抗体である。特に好ましい実施形態は、主な臨床応答を誘導するＣＤ２０抗体またはＣＤ２２抗体、好ましくは、ＣＤ２０抗体である。本明細書中の目的のために、「主な臨床応答」は、米国リウマチ学会の７０％改善（ＡＣＲ７０）の６ヶ月間にわたる達成と定義する。ＡＣＲ応答スコアを、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、およびＡＣＲ７０と分類し、ＡＣＲ７０はこの評価システムで最も高い徴候および症状の制御レベルである。ＡＣＲ応答スコアは、関節リウマチ疾患の活性（関節の腫脹および圧痛、痛み、障害レベル、ならびに全体的な患者の評価および医師の評価）の改善を測定する。ＦＤＡによって認識されており、本明細書中で定義される主な臨床応答を誘導する異なる抗体型の例は、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））である。
【００５６】
ＣＤ２０抗体の例には、以下が含まれる：現在、「リツキシマブ」（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）／ＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標））（米国特許第５，７３６，１３７号）と呼ばれている「Ｃ２Ｂ８」；「Ｙ２Ｂ８」と呼ばれるイットリウム９０標識２Ｂ８マウス抗体またはＢｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｅ  Ｉｎｃ．から市販されている「Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  Ｔｉｕｘｅｔａｎ」（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））（米国特許第５，７３６，１３７号）；２Ｂ８（１９９３年６月２２日にＡＴＣＣアクセッション番号ＨＢ１１３８８で寄託された）；任意選択的に、１３１Ｉで標識して「１３１Ｉ−Ｂ１」または「ヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ」抗体（Ｃｏｒｉｘａから市販されているＢＥＸＸＡＲ（商標））が生成されるマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」（「トシツモマブ」とも呼ばれる）（米国特許第５，５９５，７２１号も参照のこと）；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Ｐｒｅｓｓら、Ｂｌｏｏｄ  ６９（２）：５８４−５９１（１９８７））およびその変異型（「フレームワークパッチ（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｐａｔｃｈｅｄ）」またはヒト化１Ｆ５（ＷＯ２００３／００２６０７号、Ｌｅｕｎｇ，Ｓ．；ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ−９６４５０）が含まれる）；マウス２Ｈ７抗体およびキメラ２Ｈ７抗体（米国特許第５，６７７，１８０号）；ヒト化２Ｈ７（ＷＯ２００４／０５６３１２号（Ｌｏｗｍａｎら）および下記）；Ｂ細胞の細胞膜中のＣＤ２０分子をターゲティングするＨＵＭＡＸ−ＣＤ２０（商標）全ヒト高親和性抗体（Ｇｅｎｍａｂ，Ｄｅｎｍａｒｋ；例えば、Ｇｌｅｎｎｉｅ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ８：５０３−５１０（２００３）およびＣｒａｇｇら、Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）を参照のこと）；ＷＯ２００４／０３５６０７号（Ｔｅｅｌｉｎｇら）に記載のヒトモノクローナル抗体；ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｓｈｉｔａｒａら）に記載のＦｃ領域に結合した複雑なＮ−グリコシド結合糖鎖を有する抗体；ＣＤ２０に結合するモノクローナル抗体および抗原結合フラグメント（ＷＯ２００５／０００９０１，Ｔｅｄｄｅｒら）（ＨＢ２０−３、ＨＢ２０−４、ＨＢ２０−２５、およびＭＢ２０−１１など）；ＣＤ２０結合抗体（ＡＭＥ抗体シリーズ（例えば、ＷＯ２００４／１０３４０４号（Ｗａｔｋｉｎｓら、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）に記載のＡＭＥ−３３（商標）抗体）など）；ＣＤ２０結合分子（ＵＳ２００５／００２５７６４号（Ｗａｔｋｉｎｓら）に記載のものなど）；Ａ２０抗体またはその変異型（キメラまたはヒト化Ａ２０抗体（それぞれ、ｃＡ２０、ｈＡ２０））（ＵＳ２００３／０２１９４３３，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ならびにＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、Ｉｎ：Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，Ｅｄ．，ｐ．４４０，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７））から市販されているモノクローナル抗体Ｌ２７、Ｇ２８−２、９３−１Ｂ３、Ｂ−Ｃｌ、またはＮＵ−Ｂ２。本明細書中の好ましいＣＤ２０抗体は���キメラ、ヒト化、またはヒトＣＤ２０抗体、より好ましくは、リツキシマブ、ヒト化２Ｈ７、キメラまたはヒト化Ａ２０抗体（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、およびＨＵＭＡＸ−ＣＤ２０（商標）ヒトＣＤ２０抗体（Ｇｅｎｍａｂ）である。
【００５７】
本明細書中の用語「リツキシマブ」または「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」は、ＣＤ２０抗原に指向する遺伝子操作されたキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体をいい、米国特許第５，７３６，１３７号で「Ｃ２Ｂ８」と命名され、ＣＤ２０に結合する能力を保持するそのフラグメントが含まれる。
【００５８】
単に本明細書の目的のためであり、且つ他で示さない限り、「ヒト化２Ｈ７」は、ヒト化ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントをいい、この抗体は、インビボで霊長類Ｂ細胞を枯渇させるのに有効であり、そのＨ鎖可変領域（ＶＨ）中に抗ヒトＣＤ２０抗体由来の配列番号１２（図１Ｂ）の少なくとも１つのＣＤＲＨ３配列および実質的にヒト重鎖サブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のヒトコンセンサスフレームワーク（ＦＲ）残基を含む。好ましい実施形態では、この抗体は、配列番号１０のＨ鎖ＣＤＲＨ１配列をさらに含み、より好ましくは、配列番号４のＬ鎖ＣＤＲＬ１配列、配列番号５のＣＤＲＬ２配列、配列番号６のＣＤＲＬ１３配列、および実質的にヒト軽鎖サブグループＩ（ＶＩ）のヒトコンセンサスフレームワーク（ＦＲ）をさらに含み、ＶＨ領域をヒトＩｇＧ鎖定常領域に連結することができ、この領域は、ＩｇＧまたはＩｇＧ３で有り得る。ＷＯ２００４／０５６３１２号（Ｌｏｗｍａｎら）も参照のこと。
【００５９】
好ましい実施形態では、このような抗体は、配列番号８のＶＨ配列（図１Ｂに示すｖ１６）、任意選択的に、配列番号２のＶＬ配列（図１Ａに示すｖ１６）も含み、Ｈ鎖中にＤ５６ＡおよびＮ１００Ａのアミノ酸置換ならびにＬ鎖中にＳ９２Ａの置換を有し得る（ｖ９６）。好ましくは、抗体は、配列番号１３および１４の軽鎖および重鎖のアミノ酸をそれぞれ含むインタクトな抗体２Ｈ７．ｖ１６である。別の好ましい実施形態は、抗体が配列番号１３および１５の軽鎖および重鎖のアミノ酸をそれぞれ含む抗体２Ｈ７．ｖ３１である場合である。本明細書中の抗体は、Ｆｃ領域中にＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を改善する少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含み得る（アミノ酸置換がＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａである抗体、より好ましくは、配列番号１５の重鎖アミノ酸配列を有する２Ｈ７．ｖ３１など）。別の好ましい実施形態は、図２および３にそれぞれ示すように、抗体が、配列番号２８および２９の軽鎖および重鎖アミノ酸配列を含む２Ｈ７．ｖ１３８であり、これらの配列と２Ｈ７．ｖ１６の対応する軽鎖および重鎖アミノ酸配列とのアラインメントである場合である。あるいは、このような好ましいインタクトなヒト化２Ｈ７抗体は、Ｎ４３４Ｗのアミノ酸置換以外は２Ｈ７．ｖ１３８の軽鎖配列および重鎖配列を有する２Ｈ７．ｖ４７７である。これらの抗体のいずれかは、Ｆｃ領域中にＣＤＣ活性を減少させる少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、少なくとも置換Ｋ３２２Ａを含む）をさらに含み得る。米国特許第６，５２８，６２４Ｂ１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）を参照のこと。
【００６０】
いくつかの好ましいヒト化２Ｈ７変異型は、配列番号２の軽鎖可変ドメインおよび配列番号８の重鎖可変ドメインを有するもの（すなわち、Ｆｃ領域が置換されているか置換されていないもの）および配列番号８中にＮ１００ＡまたはＤ５６ＡおよびＮ１００Ａの変化を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号２中にＭ３２Ｌ、Ｓ９２Ａ、またはＭ３２ＬおよびＳ９２Ａの変化を有する軽鎖可変ドメインを有するもの（すなわち、Ｆｃ領域が置換されているか置換されていないもの）である。Ｆｃ領域が置換されている場合、これらは、好ましくは、以下の表に記載の置換の１つである。
【００６１】
本発明のいくつかの種々の好ましい実施形態のまとめでは、２Ｈ７バージョン１６に基づいた変異型のＶ領域は、以下の表中に示すアミノ酸置換の位置を除いて、ｖ１６のアミノ酸配列を有する。他で示さない限り、２Ｈ７変異型は、ｖ１６と同一のＬ鎖を有する。
【００６２】
【化１】
2008531699.tif 000002
特に好ましいヒト化２Ｈ７は、軽鎖可変配列：
【００６３】
【化２】
2008531699.tif 000003
および重鎖可変配列
【００６４】
【化３】
2008531699.tif 000004
を含むインタクトな抗体または抗体フラグメントである。
【００６５】
ヒト化２Ｈ７抗体がインタクトな抗体である場合、好ましくは、軽鎖アミノ酸配列：
【００６６】
【化４】
2008531699.tif 000005
および重鎖アミノ酸配列：
【００６７】
【化５】
2008531699.tif 000006
または重鎖アミノ酸配列
【００６８】
【化６】
2008531699.tif 000007
を含む。
【００６９】
別の好ましい実施形態では、インタクトなヒト化２Ｈ７抗体は、軽鎖アミノ酸配列：
【００７０】
【化７】
2008531699.tif 000008
および重鎖アミノ酸配列：
【００７１】
【化８】
2008531699.tif 000009
を含む。
【００７２】
別の好ましい実施形態では、ヒト化２Ｈ７抗体は、配列番号３０の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列および配列番号８の重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含み、この抗体は、ＶＨ−ＣＤＲ２中にＤ５６Ａのアミノ酸置換をさらに含み、ＶＨ−ＣＤＲ３中のＮ１００がＹまたはＷで置換され、配列番号３０が配列：
【００７３】
【化９】
2008531699.tif 000010
を有する。
【００７４】
この最後のヒト化２Ｈ７抗体の１つの実施形態では、Ｎ１００は、Ｙで置換されている。別の実施形態では、Ｎ１００は、Ｗで置換されている。さらに、さらなる実施形態では、抗体は、ＶＨ−ＣＤＲ３中に置換Ｓ１００ａＲを含み、好ましくは、Ｆｃ領域中にＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を改善する少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む（アミノ酸置換Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｋ３２６Ａを含むＩｇＧ１  Ｆｃを含むものなど）。あるいは、抗体は、ＶＨ−ＣＤＲ３中に置換Ｓ１００ａＲを含み、好ましくは、Ｆｃ領域中に、ＡＤＣＣ活性を改善するがＣＤＣ活性を減少させる少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む（少なくともアミノ酸置換Ｋ３２２Ａを含むものおよびアミノ酸置換Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａをさらに含むものなど）。
【００７５】
１つの特に好ましい実施形態では、抗体は、２Ｈ７．ｖ５１１軽鎖：
【００７６】
【化１０】
2008531699.tif 000011
および２Ｈ７．ｖ５１１重鎖：
【００７７】
【化１１】
2008531699.tif 000012
を含む。
【００７８】
「抗体依存性細胞傷害性」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後に標的細胞を溶解させる細胞媒介反応をいう。ＡＤＣＣ媒介のための初代細胞（ＮＫ細胞）はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対して、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。まとめた造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３である。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号などに記載のインビトロＡＤＣＣアッセイを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいはまたはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性を、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）などに開示の動物モデルで評価することができる。
【００７９】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つまたは複数のＦｃＲを発現する白血球であり、エフェクター機能を果たす。好ましくは、細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、および好中球が含まれ、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。
【００８０】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」を、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明するために使用する。好ましいＦｃＲは、未変性配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体（対立遺伝子変異型、あるいはこれらの受容体のスプライシング形態が含まれる）を誘導するＦｃＲである。ＦｃγＲＩＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは、類似のアミノ酸配列を有するが、主にその細胞質ドメインが異なる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−４９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；およびｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−３４１（１９９５）に概説されている。他のＦｃＲ（今後同定されるものが含まれる）は、本明細書中の用語「ＦｃＲ」に含まれる。この用語には、成熟ＩｇＧの胎児への移動を担う新生児受容体（ＦｃＲ）も含まれる（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。
【００８１】
「補体依存生細胞傷害性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力をいう。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の、同族抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）への結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）に記載のＣＤＣアッセイを行うことができる。
【００８２】
「成長阻害性」抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を防止または減少させる抗体である。例えば、この抗体は、インビトロおよび／またはインビボでＢ細胞増殖を防止または減少させることができる。
【００８３】
「アポトーシスを誘導する」抗体は、標準的なアポトーシスアッセイ（アネキシンＶ、ＤＮＡの断片化、細胞の収縮、小胞体の希釈、細胞の断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成など）によって決定される、例えば、Ｂ細胞のプログラム細胞死抗体である。
【００８４】
「未変性抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によって重鎖に連結され、ジスルフィド結合数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖および軽鎖はまた、均一に間隔をあけた鎖内ジスルフィド結合を有する。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に多数の定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）および他の末端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインが重鎖の第１定常ドメインと並列し、軽鎖可変ドメインが重鎖の可変ドメインと並んでいる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面（ｉｎｔｅｒｆａｃｅ）を形成すると考えられている。
【００８５】
用語「可変」は、抗体の間で可変ドメインの一定の部分の配列がかなり異なるという事実をいい、各抗体のその特定の抗原への結合および特異性において使用される。しかし、可変性は、抗体の可変ドメインに均一に分布していない。可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメイン中に超可変領域と呼ばれる３つのセグメント中に集中している。より高度に保存された可変ドメイン部分を、フレームワーク領域（ＦＲ）という。未変性の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、４つのＦＲを含み、このＦＲの大部分はβシート立体配置を採用し、３つの超可変領域によって連結され、ループ連結部を形成し、いくつかの場合、βシート構造の一部を形成する。各鎖中の超可変領域は、ＦＲによって他の鎖由来の超可変領域と極めて接近してまとまり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能（抗体の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への関与など）を示す。
【００８６】
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」フラグメントとよばれる２つの同一の抗原結合フラグメント（それぞれ１つの抗原結合部位を有する）および残存する「Ｆｃ」フラグメント（その名称が容易に結晶化する能力を反映する）が産生される。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、且つ依然として抗原に架橋することができるＦ（ａｂ’）２フラグメントが得られる。
【００８７】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、強固に非共有結合した１つの重鎖および１つの軽鎖の可変ドメインの二量体からなる。この立体配置では、各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体表面上の抗原結合部位が明らかになる。集合的に、６つの超可変領域は、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、１つの可変ドメイン（または抗原に特異的なたった３つの超可変領しか含まないＦｖの半分）は、全結合部位よりも親和性が低いにもかかわらず、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００８８】
Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’フラグメントは、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端にいくつかの残基が付加されている点で（抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインが含まれる）Ｆａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書中で、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１つの遊離チオール基を保有するＦａｂ’を意味する。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、最初に、その間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメント対として産生される。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも公知である。
【００８９】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」を、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明らかに異なる型のうちの１つに割り当てることができる。
【００９０】
その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、抗体を、異なるクラスに割り当てることができる。インタクトな抗体には以下の５つの主なクラスが存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ。これらのうちのいくつかを、サブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２）にさらに分類することができる。異なる抗体クラスに対応する重鎖定常ドメインを、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ぶ。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。
【００９１】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインが１つのポリペプチド鎖中に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することができる。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。
【００９２】
用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小抗体フラグメントをいい、このフラグメントは、同一のポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。短すぎて同一鎖上の２つのドメインの間を対合することができないリンカーの使用によって、ドメインの別の鎖の相補ドメインとの対合を強いて２つの抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号；ＷＯ９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ  ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）により完全に記載されている。
【００９３】
本明細書中で使用される、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体集団由来の抗体をいう。すなわち、モノクローナル抗体の産生中に惹起し得る可能性のある変異型（一般にこのような変異型が少量存在する）を除き、集団を含む各抗体が同一であり、そして／または同一のエピトープに結合する。このようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、この標的結合ポリペプチド配列を、複数のポリペプチド配列からの１つの標的結合ポリペプチドの選択を含む過程によって得た。例えば、選択過程は、複数のクローン（ハイブリドーマクローンのプール、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンなど）からの固有のクローンの選択であり得る。例えば、標的に対する親和性を改善するため、標的結合配列をヒト化するため、細胞培養物中でのその産生を改善するため、インビボでのその免疫原性を減少させるため、多重特異性抗体を産生するために、選択された標的結合配列をさらに変化させることができ、変化した標的結合配列を含む抗体も本発明のモノクローナル抗体であると理解すべきである。異なる決定基（エピトープ）に指向する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の１つの決定基に指向した。その特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、これらが典型的には他の免疫グロブリンによって汚染されていないという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られた抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生が必要であると解釈されない。例えば、本発明で使用すべきモノクローナル抗体を、種々の技術（例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ら，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−ＣｅＩｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７を参照のこと）、ファージディスプレイテクノロジー（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１−５９７（１９９１）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  ３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；およびＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）を参照のこと））およびヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全部を有するヒトまたはヒト様抗体を動物中に産生するためのテクノロジー（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３号；ＷＯ１９９６／３４０９６号；ＷＯ１９９６／３３７３５号；ＷＯ１９９１／１０７４１号；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，５９１，６６９号（全てＧｅｎＰｈａｒｍ）；同第５，５４５，８０７号；ＷＯ１９９７／１７８５２；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；および同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８２６（１９９６）；およびＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ，Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１３：６５−９３（１９９５）を参照のこと）によって作製することができる。
【００９４】
本明細書中のモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来するか特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか相補的である一方で、残りの鎖が別の種に由来するか別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか相補的である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）ならびに、所望の生物活性を示す限り、このような抗体のフラグメントが含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書中の目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（オナガザル、例えば、ヒヒ、アカゲザル、またはカニクイザル）およびヒトの定常領域配列由来の可変ドメイン抗原結合配列を含む「霊長類化」抗体が含まれる（米国特許第５，６９３，７８０号）。
【００９５】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（マウス、ラット、または非ヒト霊長類など）の超可変領域由来の残基によって置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体やドナー抗体で見出されない残基を含み得る。抗体の能力をさらに洗練させるためにこれらの修飾を行う。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含み、全てまたは実質的に全ての超可変ループは非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲは、上記のＦＲ置換を除き、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体はまた、任意選択的に、免疫グロブリン、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ，Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。
【００９６】
用語「超可変領域」は、本明細書中で使用する場合、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、および８９〜９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、および９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））および／または「超可変ループ」由来の残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、および９１〜９６（Ｌ３）および重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で定義の超可変領域の残基以外の可変ドメイン残基である。
【００９７】
「裸の抗体」は、細胞傷害性部分または放射性標識などの異種分子に結合体化していない（本明細書中で定義の）抗体である。
【００９８】
「単離」抗体は、その自然環境の成分から同定され、分離され、そして／または回収された抗体である。その自然環境の汚染成分は、抗体の診断または治療上の使用を妨げると考えられる物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。好ましい実施形態では、抗体を、（１）ローリー法で決定した場合、抗体の９５重量％超、最も好ましくは、９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーターの使用によってＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー染色または好ましくは銀染色を使用した還元または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで精製する。抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないので、単離抗体には、組換え細胞内でインサイチュの抗体が含まれる。しかし、通常、単離抗体を、少なくとも１つの精製工程によって調整する。
【００９９】
治療のための「哺乳動物」は、哺乳動物として分類される任意の動物（ヒト、家畜、およびイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどが含まれる）をいう。好ましくは、哺乳動物はヒトである。このような哺乳動物は、１つまたは複数の徴候、症状、または骨障害の他の指標を経験しているか既に経験し、骨障害と診断されたか（例えば、新規に診断されたか以前に診断され、新規に回帰または再発を経験する）、骨障害の発症リスクがある骨障害の治療にふさわしい被験体（患者が含まれる）である。哺乳動物は、以前にＣＤ２０抗体で治療されていても治療されていなくても良い。骨障害治療にふさわしい哺乳動物を、血液などのＣＤ２０細胞の浸潤レベルの増加についてスクリーニングした哺乳動物として最適に同定することができる。
【０１００】
本明細書中の哺乳動物の「治療」は、治療上の処置および予防手段または防止手段をいう。治療が必要な者には、既に骨障害を罹患している者および食障害を防止すべき者が含まれる。したがって、哺乳動物を、骨障害を有すると診断されたか、骨障害に罹りやすいか感受性を示し得る。本明細書中で使用される、用語「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔ）」、または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」には、防止的（例えば、予防的）、姑息的、および治癒的治療が含まれる。本発明の方法によって骨が形成され、それにより、骨折率が減少する。本発明は、骨形成を増加させ、それにより、骨粗鬆症および関連骨障害が防止、遅延、および／または抑制される方法を提供することによって当該分野に有意に寄与する。
【０１０１】
骨障害の「症状」は、哺乳動物が経験し、疾患を示す任意の病的徴候または正常な構造、機能、もしくは感覚からの逸脱（上記など）である。
【０１０２】
句「破骨細胞関連障害の治療薬」は、本明細書中に定義の骨障害の症状を阻害、防止、治療、または低減するために使用することができる任意の分子をいう。例には、骨および結合組織の成長に好ましい効果を示す増殖因子および他の治療薬（増殖因子（インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、ＰＤＧＦ、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）のインヒビター、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、上皮増殖因子（ＲＧＦ）、骨形成タンパク質、白血病阻害因子、線維芽細胞増殖因子、サイトカイン（インターロイキン−４（ＩＬ−４）、およびＩＬ−４の変異体（ＵＳ２００４／０１２６３６４号に記載）、ｚｖｅｇｆ３タンパク質（ＵＳ２００４／００４３０３１号および米国特許第６，６６３，８７０号に記載）、およびｚｖｅｇｆ４タンパク質）が含まれる）など）および他の治療薬（ビタミンＤ、ビスホスホネート、カルシトニン、エストロゲン、副甲状腺ホルモン、オステオゲニン、ＮａＦ、オステオプロテゲリン、スタチン、米国特許第６，６８２，７３９Ｂ１号および同第６，６７３，７７１Ｂ１号に記載の破骨細胞骨侵食活性を阻害するのに効果的なＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫインヒビター、ＵＳ２００４００５８８８９号に記載の骨粗鬆症および他の骨吸収疾患の治療のためのβグルカン、骨形成に有益であることが当該分野で公知の１つまたは複数の化合物（カルシウム、フッ化物、マグネシウム、ホウ素、またはその組み合わせなど）、骨吸収のインヒビターとしてのチエニル置換アシルグアニジン、および米国特許第６，６６０，７２８号に記載のビオネクチン受容体アンタゴニスト、米国特許第６，６０２，８７８号に記載のアシルクアニジン誘導体、グリコール酸、乳酸、コラーゲン、脱灰骨、またはその組み合わせからなる群から選択されるマトリックスが含まれる）が含まれる。フィブロネクチンを含む第１生物活性分子をマトリックスに結合させて、骨芽細胞活性を促進し、骨形成の増加を促進する。ＵＳ２００３／０２１９４２９号に記載のように、破骨細胞を引き付けて破骨細胞活性に対する阻害効果を得、それにより、骨吸収を減少させる能力について選択されたビトロネクチンを含む第２生物活性分子を、マトリックスの一部に付着させる（プラスミノゲンアクチベーターインヒビター（２つのクラスが存在する））。これら２つのクラスは、ＳＥＲＰＩＮ（セリンプロテアーゼインヒビター）およびネキシンＩである。ＳＥＲＰＩＮクラス内に２つのインヒビター型（すなわち、ＰＡＩ−１およびＰＡＩ−２）が存在する。ＰＡＩ−１は、潜在形態および活性形態の両方で存在する（プロテオグリカン；フィブロネクチンおよびフィブロネクチンフラグメント；ビトロネクチンおよびビトロネクチンフラグメント；コラーゲンおよびコラーゲンフラグメント；ヘパリンおよびヘパリンフラグメント；フォンウィルブランド因子；骨シアロタンパク質；オステオポンチン；オステオネクチン；オステオカルシン；セレクチンおよびセレクチンフラグメント；細胞接着を容易にするタンパク質およびペプチド（環状バージョンが含まれる）；ＲＧＤ型（（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）およびＧＰＲ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ）など）；ＧＨＫ型（（Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌ��ｓ）など）；ラミニンまたはラミニンフラグメントなど；ＥＩＬ型（（Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ）など）；ＬＤＶ型（Ｌｅｕ−Ａｓｐ）、ＬＤＶ−ＮＨ２（Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−ＮＨ２）など）；アミノ酸のＲＧＤまたはＧＨＫ配列を含む合成ペプチド；オステオネクチンおよびＳＰＡＲＣ（システインに富む酸性分泌タンパク質）；オステオポンチン；コラーゲン（Ｉ型およびＩＩ型）；フォンウィルブランド因子（構造への細胞の接着を容易にする糖タンパク質。これは、細胞に結合する能力を有し、したがって、骨芽細胞の細胞表面受容体のリガンドである可能性がある）；骨シアロタンパク質；トロンボスポンジン；オステオカルシン；サイトモジュリン（ｃｙｔｏｍｏｄｕｌｉｎ）；骨形成タンパク（ＢＭＰ）；テネイシン；線維素溶解阻害因子；増殖因子（例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）など）；細胞表面成分（例えば、β−１）に対する抗体；インテグリン抗体；プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ）；プロテアーゼインヒビター；およびメタロプロテアーゼインヒビター）（上記説明では、以下の従来の表記法に従う：Ｒ＝Ａｒｇ、Ｇ＝Ｇｌｙ、Ｄ＝Ａｓｐ、Ｓ＝Ｓｅｒ、Ｃ＝Ｃｙｓ、Ｖ＝Ｖａｌ、Ｅ＝Ｇｌｕ、Ａ＝Ａｌａ、Ｐ＝Ｐｒｏ、Ｋ＝Ｌｙｓ、Ｔ＝Ｔｈｒ，Ｙ＝Ｔｙｒ、Ｑ＝Ｇｌｎ、Ｈ＝Ｈｉｓ、Ｌ＝Ｌｅｕ、Ｉ＝Ｉｌｅ、およびＦ＝Ｐｈｅ）。オステオプロテジェリン、インターロイキン、ＭＭＰインヒビター、βグルカン、インテグリンアンタゴニスト、カルシトニン、プロトンポンプインヒビター、プロテアーゼインヒビター、ビスホスホネート、インスリン様増殖因子−１、血小板由来増殖因子、上皮増殖因子、トランスフォーミング増殖因子αのインヒビター、トランスフォーミング増殖因子β、骨形成タンパク質、副甲状腺ホルモン、オステオプロテジェリン、線維芽細胞増殖因子、ビタミンＤ、カルシウム、フッ化物、マグネシウム、またはホウ素、ビトロネクチン、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター、またはプロテアーゼ阻害薬（メタロプロテアーゼ阻害剤など）が好ましい。薬剤がサイトカインまたはビスホスホネートであることがより好ましい。
【０１０３】
本明細書中で補助療法について使用される、用語「免疫抑制薬」は、本明細書中の治療をうける哺乳動物の免疫系を抑制またはマスキングするように作用する物質をいう。これには、サイトカイン産生を抑制し、自己抗原発現を下方制御するか抑制し、ＭＨＣ抗原をマスキングする物質が含まれるであろう。このような薬剤の例には、２−アミノ−６−アリール−５置換ピリジン（米国特許第４，６６５，０７７を参照のこと）；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビル、タクロリムス、糖質コルチコイド（コルチゾールまたはアルドステロンなど）、抗炎症薬（シクロオキシゲナーゼインヒビター、５−リポキシゲナーゼインヒビター、またはロイコトリエン受容体アンタゴニスト；プリンアンタゴニスト（アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）など）；アルキル化薬（シクロホスファミドなど）；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載のようにＭＨＣ抗原をマスキングする）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣフラグメントの抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；ステロイド（副腎皮質ステロイド、糖質コルチコイド、または糖質コルチコイドアナログ（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムが含まれる）、およびデキサメサゾンなど）；ジヒドロ葉酸還元酵素インヒビター（メトトレキサート（経口または皮下）など）；抗マラリア薬（クロロキンおよびヒドロキシクロロキンなど）；スルファサラジン；レフルノミド；サイトカインまたはサイトカイン受容体抗体（抗インターフェロンα、β、またはγ抗体が含まれる）、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗−ＴＮＦαイムノアドヘシン（エタネルセプト）、抗ＴＮＦ−β抗体、抗インターロイキン２（ＩＬ−２）抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体、ならびに抗−インターロイキン６（ＩＬ−６）受容体抗体およびアンタゴニスト；抗ＬＦＡ−１抗体（抗−ＣＤ１１ａおよび抗−ＣＤ１８抗体が含まれる）；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体（好ましくは、抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体）；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（７／２６／９０に公開のＷＯ９０／０８１８７号）；ストレプトキナーゼ；トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；クロラムブシル；デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎら、米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体フラグメント（Ｏｆｆｎｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ９０／１１２９４号；Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）；およびＷＯ９１／０１１３３号）；ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＡＦＦ抗体、ＢＲ３抗体、およびｚＴＮＦ４アンタゴニスト（概説については、Ｍａｃｋａｙ  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：１１３−５（２��０２）を参照のこと、以下の定義も参照のこと）；Ｔ細胞ヘルパーシグナルを妨害する生物学的作用物質（抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）（ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対する遮断抗体が含まれる）など）（例えば、Ｄｕｒｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３２８−３０（１９９３）；Ｍｏｈａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５４：１４７０−８０（１９９５））、およびＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：１２２５−７（１９９４））；ならびにＴ細胞受容体抗体（欧州特許第３４０，１０９号）（Ｔ１０Ｂ９など）が含まれる。本明細書中のいくつかの好ましい免疫抑制薬には、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ミコフェノール酸モフェチル、またはメトトレキサートが含まれる。
【０１０４】
本明細書中で使用される、用語「細胞傷害薬」は、細胞の機能を阻害または防止し、そして／または細胞の破壊を生じさせる物質をいう。この用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法薬、および毒素（細菌、真菌、植物もしくは動物起源、またはそのフラグメントの小分子毒素または酵素活性毒素など）が含まれることが意図される。
【０１０５】
「化学療法薬」は、癌治療で有用な化合物である。化学療法薬の例には、アルキル化薬（チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））；スルホン酸アルキル（ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；アジリジン（ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、およびトリメチロールオメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）が含まれる）；アセトゲニン（特に、ブラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）およびブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；β−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログであるトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）が含まれる）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン（ａｃｅｔｙｌｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９−アミノカンプトテシンが含まれる）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）、およびビセレシン合成アナログが含まれる）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１が含まれる）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード（クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド，、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど）；ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）（カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）など）；抗生物質（エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特に、カリチアマイシンγＩＩおよびカリチアマイシンωＩ１（例えば、Ａｎｇｅｗ，Ｃｈｅｍ  ｌｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照のこと）；ジネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）（ジネマイシンＡが含まれる）；エスペラミシン；およびネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射液（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、およびデオキシドキソルビシンが含まれる）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（マイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなど）；代謝拮抗薬（メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポシロン、および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）；葉酸アナログ（デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセートなど）；プリンアナログ（フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニンなど）；ピリミジンアナログ（アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど）；抗副腎薬（アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど）；葉酸補給薬（ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）（フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；エニルラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクォン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルホルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（��ｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）ポリサッカリド複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ、およびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子処方物（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロラムブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ（シスプラチンおよびカルボプラチンなど）；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（レチノイン酸など）；上記のいずれかの薬剤的に容認可能な塩、酸、または誘導体、ならびに２つまたはそれを超える上記の組み合わせ（ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語）およびＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵおよびロイコボビンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を使用した治療レジメンの略語）など）が含まれる。
【０１０６】
癌の成長を促進することができるホルモンの影響を調節、減少、遮断、または阻害するように作用する抗ホルモン薬も本定義に含まれ、これは、しばしば全身（すなわち、身体全体の）治療形態である。これらは、ホルモン自体であり得る。例には、抗エストロゲン薬および選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンが含まれる）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、およびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）が含まれる）；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方制御因子（ＥＲＤ）；エストロゲン受容体アンタゴニスト（フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）など）；卵巣を抑制するか遮断するように機能する薬剤（例えば、黄体形成（ｌｅｕｔｉｎｉｚｉｎｇ）ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト（酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）およびＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン、およびトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ））；抗アンドロゲン（フルタミド、ニルタミド、およびビカルタミドなど）；ならびに酵素アロマターゼを阻害し、副腎におけるエストロゲン産生を調節するアロマターゼインヒビター（例えば、４（５）イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））、ホルメスタニイ（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、およびアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）など）が含まれる。さらに、化学療法薬のこのような定義には、ビスホスホネート（クロドロン酸（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パルミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））など）；ならびにトロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（特に異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路中の細胞発現を阻害するもの（例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、および上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）など）；ワクチン（ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンおよび遺伝子治療ワクチン（例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンなど）；トポイソメラーゼ１インヒビター（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ジトシル酸ラパチニブ（ＥｒｂＢ−２およびＧＷ５７２０１６と���ても公知のＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子インヒビター）；上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導体が含まれる。
【０１０７】
用語「サイトカイン」は、ある細胞集団によって放出される細胞間メディエーターとして別の細胞に作用するタンパク質の一般名である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、インターロイキン（ＩＬ）（ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２、ヒトＩＬ−４、ヒトＩＬ−４の変異体（例えば、ＩＬ−２Ｒγへの結合に関与するＩＬ−４領域が変異した（例えば、Ａｒｇ２１がＧｌｕ残基に変化する）変異体など）が含まれる）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βなど）、ならびに他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）が含まれる）である。本明細書中で使用される、用語「サイトカイン」には、天然供給源または組換え細胞培養物由来のタンパク質および未変性配列サイトカインの生物学的に活性な等価物（合成によって産生された小分子構成要素（ｅｎｔｉｔｙ）およびその薬学的に許容可能な誘導体および塩が含まれる）が含まれる。
【０１０８】
用語「ホルモン」は、一般に、管を有する腺器官によって分泌されるポリペプチドホルモンをいう。そのうち、例えば、ホルモン（成長ホルモン（ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなど）；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインシュリン；リラキシン；エストラジオール；ホルモン補充療法薬；アンドロゲン（カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、またはテストラクトンなど）；プロレラキシン（ｐｒｏｒｅｌａｘｉｎ）；糖タンパク質ホルモン（卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）など）；プロラクチン、胎盤ラクトゲン、マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド、性腺刺激ホルモン放出ホルモン；インヒビン；アクチビン；ミューラー管阻害物質；およびトロンボポエチン）が含まれる。本明細書中で使用される、用語「ホルモン」には、天然供給源または組換え細胞培養物由来のタンパク質および未変性配列サイトカインの生物学的に活性な等価物（合成によって産生された小分子構成要素およびその薬学的に許容可能な誘導体および塩が含まれる）が含まれる。
【０１０９】
用語「増殖因子」は、成長を促進するタンパク質をいい、例えば、肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；血管内皮増殖因子；神経増殖因子（ＮＧＦ−βなど）；血小板由来増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βなど）；インスリン様増殖因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン（インターフェロンα、β、およびγなど）；およびコロニー刺激因子（ＣＳＦ）（マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）など）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）が含まれる。本明細書中で使用される、用語「増殖因子」には、天然供給源または組換え細胞培養物由来のタンパク質および未変性配列サイトカインの生物学的に活性な等価物（合成によって産生された小分子構成要素およびその薬学的に許容可能な誘導体および塩が含まれる）が含まれる。
【０１１０】
用語「インテグリン」は、細胞を細胞外基質に結合して応答させる受容体タンパク質をいい、種々の細胞機能（創傷治癒、細胞の分化、腫瘍細胞の帰巣（ｈｏｍｉｎｇ）、およびアポトーシスなど）に関与する。これらは、細胞−細胞内基質相互作用および細胞−細胞相互作用に関与する巨大な細胞接着受容体ファミリーの一部である。機能的インテグリンは、αおよびβと呼ばれる非共有結合した２つの膜貫通糖タンパク質サブユニットからなる。αサブユニットは、全て、互いにいくらかの相同性を共有し、βサブユニットも同様である。受容体は、常に、１つのα鎖および１つのβ鎖を含む。例には、α６β１、α３β１、α７β１、ＬＦＡ−１などが含まれる。本明細書中で使用される、用語「インテグリン」には、天然供給源または組換え細胞培養物由来のタンパク質および未変性配列サイトカインの生物学的に活性な等価物（合成によって産生された小分子構成要素およびその薬学的に許容可能な誘導体および塩が含まれる）が含まれる。
【０１１１】
本明細書中の目的のために、「腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）」は、Ｐｅｎｎｉｃａら、Ｎａｔｕｒｅ，３１２：７２１（１９８４）またはＡｇｇａｒｗａｌら、ＪＢＣ，２６０：２３４５（１９８５）に記載のアミノ酸配列を含むヒトＴＮＦ−αをいう。本明細書中の「ＴＮＦ−αインヒビター」は、一般に、ＴＮＦ−αへの結合およびその活性の中和によってＴＮＦ−αの生物学的機能をいくらかの範囲で阻害する薬剤である。本明細書中で特に意図されるＴＮＦインヒビターの例には、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、およびアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））が含まれる。
【０１１２】
「疾患修飾性抗リウマチ薬」または「ＤＭＡＲＤ」の例には、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、スルファサラジン、メトトレキサート、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ（＋経口および皮下メトトレキサート）、アザチオプリン、Ｄ−ペニシラミン、金塩（経口）、金塩（筋肉内）、ミノサイクリン、シクロスポリ（シクロスポリンＡおよび局所シクロスポリンが含まれる）、ブドウ球菌タンパク質Ａ（Ｇｏｏｄｙｅａｒ  ａｎｄ  Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９７，（９），ｐ１１２５−３９（２００３））（その塩および誘導体が含まれる）が含まれる。
【０１１３】
「非ステロイド性抗炎症薬」または「ＮＳＡＩＤ」の例には、アスピリン、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、ＣＯＸ−２インヒビター（セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）；４−（５−（４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ベンゼンスルホンアミドおよびバルデコキシブ（ＢＥＸＴＲＡ（登録商標）など）、およびメロキシカム（ＭＯＢＩＣ（登録商標））（その塩および誘導体など）が含まれる。好ましくは、これらは、アスピリン、ナプロキセン、イブプロフェン、インドメタシン、またはトルメチンである。
【０１１４】
本明細書中の「インテグリンアンタゴニストまたは抗体」の例には、ＬＦＡ−Ｉ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈから市販されているエファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）など）、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｅから市販されているα４インテグリン抗体（ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）など）、またはジアザ環状フェニルアラニン誘導体（ＷＯ２００３／８９４１０号）、フェニルアラニン誘導体（ＷＯ２００３／７０７０９号、ＷＯ２００２／２８８３０、ＷＯ２００２／１６３２９号、およびＷＯ２００３／５３９２６）、フェニルプロピオン酸誘導体（ＷＯ２００３／１０１３５号）、エナミン誘導体（ＷＯ２００１／７９１７３号）、プロパン酸誘導体（ＷＯ２０００／３７４４４号、アルカン酸誘導体（ＷＯ２０００／３２５７５号）、置換フェニル誘導体（米国特許第６，６７７，３３９号および同第６，３４８，４６３号）、芳香族アミン誘導体（米国特許第６，３６９，２２９号）、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド（ＵＳ２００２／００４２３６８号）、αβ３インテグリンに対する抗体（欧州特許第６３３９４５号）、アザ架橋二環式アミノ酸誘導体（ＷＯ２００２／０２５５６号）などが含まれる。
【０１１５】
「コルチコステロイド」は、ステロイドの一般的な化学構造を有し、天然に存在するコルチコステロイドの効果を模倣するか増大させるいくつかの合成または天然に存在する物質のいずれか１つをいう。合成コルチコステロイドの例には、プレドニゾン、プレドニゾロン（メチルプレドニゾロン（ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）コハク酸ナトリウムメチルプレドニゾロンなどが含まれる）、デキサメサゾンまたはデキサメサゾントリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、およびベタメタゾンが含まれる。本明細書中の好ましいコルチコステロイドは、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、またはデキサメサゾンである。
【０１１６】
用語「ＢＡＦＦ」、「ＢＡＦＦポリペプチド」、「ＴＡＬＬ−１」、または「ＴＡＬＬ−１ポリペプチド」、および「ＢＬｙＳ」は、本明細書中で使用する場合、「未変性配列ＢＡＦＦポリペプチド」および「ＢＡＦＦ変異型」を含む。「ＢＡＦＦ」は、以下に示すアミノ酸配列のいずれか１つを有するポリペプチドに与えられた名称である。
【０１１７】
【化１２】
2008531699.tif 000013
および未変性のＢＡＦＦの生物活性を有するそのホモログ、フラグメント、および変異型。ＢＡＦＦの生物活性を、Ｂ細胞生存の促進、Ｂ細胞変異の促進、およびＢＲ３への結合からなる群から選択することができる。ＢＡＦＦの変異型は、好ましくは、ＢＡＦＦポリペプチドの未変性配列と少なくとも８０％または１００％まで（１００％を含む）の任意の連続する整数、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％のアミノ酸配列が同一である。
【０１１８】
「未変性配列」ＢＡＦＦポリペプチドは、天然由来の対応するＢＡＦＦポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。例えば、ＢＡＦＦは、フリン型プロテアーゼによる細胞表面からの切断後の可溶性形態で存在する。このような未変性配列ＢＡＦＦポリペプチドを、自然界から単離するか、組換え手段および／または合成手段によって産生することができる。
【０１１９】
用語「未変性配列ＢＡＦＦポリペプチド」または「未変性ＢＡＦＦ」は、特に、天然に存在する短縮形態または分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に存在する変異形態（例えば、選択的スプライシング形態）、およびポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子変異型を含む。用語「ＢＡＦＦ」には、Ｓｈｕら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．，６５：６８０（１９９９）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ１３６２９３；１９９８年３月７日公開のＷＯ１９９８／１８９２１号；１９９８年１０月７日公開の欧州特許第８６９，１８０号；１９９８年６月２５日公開のＷＯ１９９８／２７１１４号；１９９９年３月１８日公開のＷＯ１９９９／１２９６４号；１９９９年７月８日公開のＷＯ１９９９／３３９８０号；Ｍｏｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８５：２６０−２６３（１９９９）；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８９：１７４７−１７５６（１９９９）、およびＭｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４：１５９７８−１５９８１（１９９９）に記載のポリペプチドが含まれる。
【０１２０】
本明細書中で使用される、用語「ＢＡＦＦアンタゴニスト」を最も広い意味で使用し、（１）未変性配列ＢＡＦＦポリペプチドに結合するかＢＲ３の未変性配列に結合してＢＡＦＦポリペプチドとのＢＲ３の相互作用を部分的または完全に遮断し、（２）未変性配列ＢＡＦＦ活性を部分的または完全に遮断、阻害、または中和する任意の分子が含まれる。１つの好ましい実施形態では、遮断すべきＢＡＦＦ受容体は、ＢＲ３受容体である。未変性のＢＡＦＦ活性は、特に、Ｂ細胞の生存および／またはＢ細胞の成熟を促進する。１つの実施形態では、ＢＡＦＦの阻害、遮断、または中和により、Ｂ細胞数が減少する。本発明のＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＡＦＦポリペプチドの１つまたは複数の生物活性を、インビトロおよび／またはインビボで部分的または完全に遮断、阻害、または中和する。１つの実施形態では、生物活性ＢＡＦＦは、以下の事象のいずれか１つまたは組み合わせをインビトロおよび／またはインビボで強化する：Ｂ細胞生存の増加、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭレベルの増加、形質細胞数の増加、および脾臓Ｂ細胞中でのＮＦ−κｂ２／１００のｐ５２  ＮＦ−κｂへのプロセシング（例えば、Ｂａｔｔｅｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１４５３−１４６５（２０００）；Ｍｏｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：２６０−２６３（１９９９）；Ｋａｙａｇａｋｉら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １７：５１５−５２４（２００２））。
【０１２１】
上記のように、ＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＡＦＦシグナル伝達をインビトロまたはインビボで部分的または完全に遮断、阻害、または中和するための直接的または間接的様式で機能することができる。例えば、ＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＡＦＦに直接結合することができる。例えば、抗体がＢＲ３へのＢＡＦＦ結合を立体障害するような残基１６２〜２７５および／またはヒトＢＡＦＦの１６２、１６３、２０６、２１１、２３１、２３３、２６４、および２６５からなる群から選択される残基の隣接残基を含むヒトＢＡＦＦ領域内で結合するＢＡＦＦ抗体が意図され、このような残基番号を配列番号１６という。別の例では、直接的な結合剤（ｂｉｎｄｅｒ）は、未変性のＢＡＦＦに結合するＢＡＦＦ受容体の細胞外ドメインまたはそのフラグメントおよび変異型などのＢＡＦＦに結合するＢＡＦＦ受容体の任意の部分を含むポリペプチドである。別の例では、ＢＡＦＦアンタゴニストには、式Ｉ：
【０１２２】
【化１３】
2008531699.tif 000014
（式中、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１４、Ｘ１５、およびＸ１７は、システイン以外の任意のアミノ酸であり、
Ｘ１６は、Ｌ、Ｆ、Ｉ、およびＶからなる群から選択されるアミノ酸であり、ポリペプチドは、式Ｉの最もＮ末端側のシステインＣに対してＮ末端側および最もＣ末端側のシステインＣに対してＣ末端側の７つのアミノ酸残基内にシステインを含まない）の配列を含むポリペプチド配列を有するポリペプチドが含まれる。
【０１２３】
１つの実施形態では、式Ｉの配列を含むポリペプチドは、ジスルフィド結合によって連結した２つのＣを有し、Ｘ５ＬＸ７Ｘ８は、ＬとＸ７との間にターンの中心を有するＩ型βターン構造の高次構造を形成し、Ｘ８の二面角φが正の数を有する。１つの実施形態では、Ｘ１０は、Ｗ、Ｆ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｙ、Ｍ、および非極性アミノ酸からなる群から選択される。別の実施形態では、Ｘ１０は、Ｗである。別の実施形態では、Ｘ３は、Ｍ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、および非極性アミノ酸からなる群から選択される。別の実施形態では、Ｘ５は、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｓ、Ｉ、Ａ、およびＲからなる群から選択される。別の実施形態では、Ｘ７は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、およびＬからなる群から選択される。別の実施形態では、Ｘ８は、Ｒ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｈ、およびＤ型アミノ酸からなる群から選択される。別の実施形態では、Ｘ９は、Ｈ、Ｋ、Ａ、Ｒ、およびＱからなる群から選択される。別の実施形態では、Ｘ１１は、ＩまたはＶである。別の実施形態では、Ｘ１２は、Ｐ、Ａ、Ｄ、Ｅ、およびＳからなる群から選択される。別の実施形態では、Ｘ１６は、Ｌである。１つの特定の実施形態では、式Ｉの配列は、ＥＣＦＤＬＬＶＲＡＷＶＰＣＳＶＬＫ（配列番号１９）、ＥＣＦＤＬＬＶＲＨＷＶＰＣＧＬＬＲ（配列番号２０）、ＥＣＦＤＬＬＶＲＲＷＶＰＣＥＭＬＧ（配列番号２１）、ＥＣＦＤＬＬＶＲＳＷＶＰＣＨＭＬＲ（配列番号２２）、ＥＣＦＤＬＬＶＲＨＷＶＡＣＧＬＬＲ（配列番号２３）、およびＱＣＦＤＲＬＮＡＷＶＰＣＳＶＬＫ（配列番号２４）からなる群から選択される。好ましい実施形態では、ＢＡＦＦアンタゴニストは、配列番号１９、２０、２１、２２、および２３からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む。
【０１２４】
さらに別の実施形態では、ＢＡＦＦアンタゴニストには、以下の式ＩＩ：
【０１２５】
【化１４】
2008531699.tif 000015
（式中、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１４、Ｘ１５、およびＸ１７は、システイン以外の任意のアミノ酸であり、ポリペプチドは、式ＩＩの最もＮ末端側のシステインＣに対してＮ末端側および最もＣ末端側のシステインＣに対してＣ末端側の７つのアミノ酸残基内にシステインを含まない）の配列を含むポリペプチドの配列を有するポリペプチドが含まれる。
【０１２６】
１つの実施形態では、式ＩＩの配列を含むポリペプチドは、２つのＣの間にジスルフィド結合を有し、Ｘ５ＬＸ７Ｘ８は、ＬとＸ７との間にターンの中心を有するＩ型βターン構造の高次構造を形成し、Ｘ８の二面角φが正の数を有する。式ＩＩの別の実施形態では、Ｘ３は、Ｍ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、および非極性アミノ酸からなる群から選択される。式ＩＩの別の実施形態では、Ｘ５は、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｓ、Ｉ、Ａ、およびＲからなる群から選択される。式ＩＩの別の実施形態では、Ｘ８は、Ｒ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｈ、およびＤ型アミノ酸からなる群から選択される。式ＩＩの別の実施形態では、Ｘ９は、Ｈ、Ｋ、Ａ、Ｒ、およびＱからなる群から選択される。
【０１２７】
さらなる実施形態では、細胞外ドメインまたはそのＢＡＦＦ結合フラグメントもしくはＢＡＦＦ結合変異型が由来するＢＡＦＦ受容体は、ＴＡＣＩ、ＢＲ３、またはＢＣＭＡである。あるいは、ＢＡＦＦアンタゴニストは、そのＢＡＦＦ結合領域で未変性配列ＢＲ３の細胞外ドメインに結合して、インビトロ、インサイチュ、またはインビボでＢＲ３を部分的または完全に遮断、阻害、または中和することができる。例えば、このような間接的アンタゴニストは、ヒトＢＲ３のＢＡＦＦへの結合が立体障害されるように、下記に定義のヒトＢＲ３（配列番号２６）の残基２３〜３８を含むＢＲ３領域またはこれらの残基の隣接領域中に結合する抗ＢＲ３抗体である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本発明のＢＡＦＦアンタゴニストには、ＢＡＦＦ受容体の細胞外ドメインを含むＢＡＦＦタンパク質およびイムノアドヘシンまたは未変性のＢＡＦＦに結合するそのフラグメントおよび変異型が含まれる。さらなる実施形態では、細胞外ドメインまたはそのＢＡＦＦ結合フラグメントもしくはＢＡＦＦ結合変異型が由来するＢＡＦＦ受容体は、ＴＡＣＩ、ＢＲ３、またはＢＣＭＡである。さらに別の実施形態では、イムノアドヘシンは、上記の式Ｉまたは式ＩＩのアミノ酸配列を含む（配列番号１９、２０、２１、２２、２３、および２４からなる群のいずれか１つから選択されるアミノ酸配が含まれる）。
【０１２９】
１つの実施形態によれば、ＢＡＦＦアンタゴニストは、１００ｎＭまたはそれ未満の結合親和性でＢＡＦＦポリペプチドまたはＢＲ３ポリペプチドに結合する。別の実施形態によれば、ＢＡＦＦアンタゴニストは、１０ｎＭまたはそれ未満の結合親和性でＢＡＦＦポリペプチドまたはＢＲ３ポリペプチドに結合する。さらに別の実施形態によれば、ＢＡＦＦアンタゴニストは、１ｎＭまたはそれ未満の結合親和性でＢＡＦＦポリペプチドまたはＢＲ３ポリペプチドに結合する。
【０１３０】
用語「ＢＲ３」、「ＢＲ３ポリペプチド」、または「ＢＲ３受容体」は、本明細書中で使用する場合、「未変性配列ＢＲ３ポリペプチド」および「ＢＲ３変異型」を含む（本明細書中でさらに定義する）。「ＢＲ３」は、以下のアミノ酸配列およびそのホモログを含むポリペプチドおよび未変性ＢＡＦＦに結合するその変異型またはフラグメントに与えられた名称である。
【０１３１】
【化１５】
2008531699.tif 000016
本発明のＢＲ３ポリペプチドを、種々の供給源（ヒト組織型など）または別の供給源から単離するか、組換え法および／または合成法によって調製することができる。用語ＢＲ３には、ＷＯ２００２／２４９０９号およびＷＯ２００３／１４２９４号に記載のＢＲ３ポリペプチドが含まれる。
【０１３２】
「未変性配列」ＢＲ３ポリペプチドまたは「未変性ＢＲ３」は、天然由来の対応するＢＲ３ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような未変性配列ＢＲ３ポリペプチドを、自然界から単離するか、組換え手段および／または合成手段によって産生することができる。用語「未変性配列ＢＲ３ポリペプチド」は、特に、天然に存在する短縮形態または分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に存在する変異形態（例えば、選択的スプライシング形態）、およびポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子変異型を含む。本発明のＢＲ３ポリペプチドには、ヒトＢＲ３（配列番号２６）のアミノ酸残基１〜１８４の連続配列を含むか、これらからなるＢＲ３ポリペプチドが含まれる。
【０１３３】
ＢＲ３「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、本質的に膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含まないＢＲ３ポリペプチド形態をいう。ＢＲ３のＥＣＤ形態には、ヒトＢＲ３のアミノ酸１〜７７、２〜６２、２〜７１、１〜６１、７〜７１、２３〜３８、および２〜６３からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを含むポリペプチドが含まれる。本発明は、未変性ＢＡＦＦに結合するヒトＢＲ３の上記のＥＣＤ形態ならびにその変異形およびフラグメントのいずれか１つを含むポリペプチドであるＢＡＦＦアンタゴニストを意図する。
【０１３４】
ミニＢＲ３は、ＢＲ３のＢＡＦＦ結合ドメインの２６残基コア領域である（すなわち、アミノ酸配列：ＴＰＣＶＰＡＥＣＦＤ  ＬＬＶＲＨＣＶＡＣＧ  ＬＬＲＴＰＲ（配列番号２７）。
【０１３５】
「ＢＲ３変異型」は、未変性配列、全長ＢＲ３、またはＢＲ３ＥＣＤのアミノ酸配列と少なくとも８０％のアミノ酸が同一であるＢＲ３ポリペプチドを意味する。任意選択的に、ＢＲ３変異型は、１つのシステインリッチドメインを含む。このようなＢＲ３変異型ポリペプチドには、例えば、全長アミノ酸配列のＮ末端および／またはＣ末端ならびに１つまたは複数の内部ドメイン内で１つまたは複数のアミノ酸残基が付加または欠失されたＢＲ３ポリペプチドが含まれる。未変性配列ＢＡＦＦポリペプチドに結合するＢＲ３  ＥＣＤのフラグメントも意図される。１つの実施形態によれば、ＢＲ３変異ポリペプチドは、ヒトＢＲ３ポリペプチドまたはその特定のフラグメント（例えば、ＥＣＤ）と少なくとも約８０％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８１％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８２％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８３％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８４％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８５％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８６％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８７％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８８％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約８９％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９０％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９１％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９２％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９３％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９４％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９５％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９６％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９７％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９８％のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約９９％のアミノ酸配列が同一である。ＢＲ３変異ポリペプチドは、未変性ＢＲ３ポリペプチド配列を含まない。別の実施形態によれば、ＢＲ３変異ポリペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長、少なくとも約２０アミノ酸長、少なくとも約３０アミノ酸長、少なくとも約４０アミノ酸長、少なくとも約５０アミノ酸長、少なくとも約６０アミノ酸長、または少なくとも約７０アミノ酸長である。
【０１３６】
１つの好ましい実施形態では、本明細書中のＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＡＦＦに結合するＢＲ３、ＴＡＣＩ、またはＢＣＭＡの一部またはＢＡＦＦに結合するその変異型を含むイムノアドヘシンである。他の実施形態では、ＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＡＦＦ抗体である。「ＢＡＦＦ抗体」は、ＢＡＦＦに結合し、好ましくは、本明細書中の「ＢＡＦＦ」の定義で開示のヒトＢＡＦＦ配列（配列番号１６）の残基１６２〜２７５を含むヒトＢＡＦＦ領域内のＢＡＦＦに結合する抗体である。別の実施形態では、ＢＡＦＦアンタゴニストは、ＢＲ３抗体である。「ＢＲ３抗体」は、ＢＲ３に結合し、好ましくは、本明細書中の「ＢＡＦＦ」の定義で開示のヒトＢＲ３配列（配列番号２６）の残基２３〜３８を含むヒトＢＲ３領域内のＢＲ３に結合する抗体である。一般に、本明細書中で言及したヒトＢＡＦＦおよびヒトＢＲ３のアミノ酸の位置は、本明細書中の「ＢＡＦＦ」および「ＢＲ３」の定義に開示のヒトＢＡＦＦおよびヒトＢＲ３の配列番号付け（それぞれ、配列番号１６および２６）に従う。
【０１３７】
ＢＡＦＦ結合ポリペプチドまたはＢＡＦＦ抗体の他の例を、例えば、ＷＯ２００２／０９２６２０号、ＷＯ２００３／０１４２９４号、Ｇｏｒｄｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２（２０）：５９７７−５９８３（２００３），Ｋｅｌｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（１６）：１６７２７−１６７３５（２００４）、ＷＯ１９９８／１８９２１号、ＷＯ２００１／１２８１２号、ＷＯ２０００／６８３７８号、およびＷＯ２０００／４０７１６号に見出すことができる。
【０１３８】
「リポソーム」は、哺乳動物への薬物（本明細書中に開示のアンタゴニストなど）の送達に有用な種々の脂質型、リン脂質型、および／または界面活性剤型から構成される小胞である。リポソーム成分は、一般に、生体膜の脂質配置に類似の二重層形態で配置されている。
【０１３９】
本明細書中で使用される、用語「骨障害」は、骨量減少によって特徴づけられる疾患（すなわち、症状または病状として骨量または骨密度が減少する疾患、容態、障害、または症状）をいう。骨量減少によって特徴づけられる疾患の例には、骨溶解（骨の転移、非感染性の人工関節のゆるみ（ａｓｅｐｔｉｃ  ｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ  ｌｏｏｓｅｎｉｎｇ）、歯周炎、骨粗鬆症、パジェット病、転移性骨疾患、および関節リウマチが含まれるが、これらに限定されない。このような骨障害には、狼瘡および関節リウマチなどの自己免疫疾患に関連する骨障害が含まれる。ＳＬＥは、従来のコルチコステロイド使用状態と無関係に、ＳＬＥ疾患の損傷が増加していない女性よりも骨ミネラル濃度Ｔスコアが有意に低いことが見出されている。このような骨障害には、低骨量に関連する容態（骨量レベルが、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ“Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｆｒａｃｔｕｒｅ  Ｒｉｓｋ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｆｏｒ  Ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ（１９９４）．Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ  ８４３”によって標準と定義された年齢別正常値未満である容態が含まれる）も含まれる。原発性および続発性骨粗鬆症が低骨量に関連する容態に含まれる。歯周病、歯槽骨喪失、骨切り術後および幼児期特発性骨量減少、ならびに骨粗鬆症の長期合併症（脊椎の湾曲、身長損失、および補綴手術も含まれる。このような骨障害は、上記などの疾患（骨粗鬆症が含まれる）の平均的発症率を有意に高いことが公知の低骨量の者（脊椎動物（例えば、哺乳動物）など）（例えば、閉経後の女性、５０歳を超える男性）に影響を与え得る。この障害を、骨量増加法または骨量増強法（骨吸収、骨折治癒速度の増加、完全な置換骨移植片手術、首尾に良い骨移植率の増加、顔面再建術、上顎骨再建術、下顎骨再建術、補綴内方成長（ｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ  ｉｎｇｒｏｗｔｈ）、椎骨融合症、または長骨伸長後の骨治癒が含まれる）を使用して治療することができる。当業者は、用語骨量が実際に単位面積あたりの骨量をいい、時折（厳密には正確ではないが）、骨ミネラル濃度をいうと認識している。
【０１４０】
本明細書中に開示の骨障害の例には、骨粗鬆症（原発性および続発性骨粗鬆症など、糖質コルチコイド誘導性骨粗鬆症が含まれる）、限局性骨侵食または骨疾患（関節リウマチ由来のものなど、辺縁性継手びらんおよび肋軟骨下骨侵食（骨髄）が含まれる）、パジェット病、骨欠損、骨代謝回転の異常な増加、歯周病、歯牙欠損、人工挿入物周囲骨溶解、骨形成不全症、転移性骨疾患、悪性高カルシウム血症、幼児期特発性骨量減少、歯槽骨喪失、骨折、骨減少症（関節近接骨減少症など）、多発性骨髄腫における骨疾患および関連容態（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症および／または単クローン性γグロブリン血症など）が含まれる。本明細書中の好ましい骨障害は、多発性骨髄腫における骨疾患、マクログロブリン血症（ｍａｃｒｏｇｌｕｌｉｎｅｍｉａ）、単クローン性γグロブリン血症、および骨粗鬆症、より好ましくは、続発性骨粗鬆症、さらにより好ましくは、炎症時の骨量減少である。悪性疾患に関連しない骨障害も本発明の範囲内に含まれる。
【０１４１】
「続発性骨粗鬆症」には、脊椎動物（例えば、哺乳動物（ヒトが含まれる））における炎症時の骨量減少炎症、糖質コルチコイド誘導性骨粗鬆症、甲状腺機能亢進症誘導性骨粗鬆症、不動誘導性骨粗鬆症、ヘパリン誘導性骨粗鬆症、および免疫抑制性誘導性骨粗鬆症が含まれる。本明細書中で使用される、用語「骨吸収」は、少なくとも一部が破骨細胞活性によって生じる望ましくない骨量減少をいう。
【０１４２】
「骨溶解」は、破滅的骨量減少（すなわち、一定範囲の病状（関節リウマチ、骨の転移、非感染性の人工関節のゆるみ、および歯周炎が含まれる）の消耗性の病的結果）をいう。関節リウマチ（ＲＡ）は、慢性炎症性疾患であり、しばしば、長期能力障害および死亡率上昇がおこる。
【０１４３】
「前骨芽細胞」は、骨間質細胞由来の分化した骨前駆細胞をいう。
【０１４４】
「歯骨前駆細胞」は、歯周靭帯由来の分化した骨前駆細胞をいう。
【０１４５】
本明細書中で使用される、用語「阻害する」は、特定の活性の量、質、または効果を減少させることを意味し、用語「減少させる」、「最小にする」、および「低下させる」と交換可能に使用され、例えば、治療有効量の本発明の化合物の哺乳動物への投与によって生じる破骨細胞の骨侵食活性の減少をいう。本明細書中に定義の骨障害の治療には、骨吸収、破骨細胞形成、または破骨細胞機能の阻害、および骨量減少によって特徴づけられる疾患の治療が含まれる。
【０１４６】
本明細書中で使用される、用語「有効量」は、骨障害の治療に有効な抗体またはアンタゴニストの量をいうことを意味する。したがって、１つの態様では、骨障害に関連する容態または骨成長の促進が有利な容態の治療で使用される組成物の「有効量」は、骨量減少の阻害および／または骨形成の増加または破骨細胞活性の阻害に有効な量である。より詳細な態様または別の態様では、有効量の化合物により、治療有効量の化合物を骨量減少によって特徴づけられる疾患に感受性を示すか罹患している個体に投与した場合に個体の骨量減少速度の減少として認められる医学的効果が得られる。有効量を、典型的には、有効成分を含まない組成物（すなわち、コントロール）を類似の状況の個体に投与した場合に認められた効果との比較によって決定する。さらに、組成物の「有効量」は、統計的に有意な効果（骨折修復速度の統計的に有意な増加、骨粗鬆症における骨量減少の逆転、関節損傷治癒速度の増加、軟骨欠損の逆転の増加、人工器官への骨成長の増加または加速、歯欠損修復の改善など）が得られる量である。
【０１４７】
「添付文書」を、通例、治療薬の商業包装（ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  ｐａｃｋａｇｅ）中に含まれ、適応症、使用法、投薬量、投与、矛盾（ｃｏｎｔｒａｄｉｃｔｉｏｎ）、包装製品と組み合わせるべき他の治療薬、および／またはこのような治療薬の使用に関する警告についての情報を含む説明書をいうために使用する。
【０１４８】
「薬物」は、骨障害またはその症状もしくは副作用を治療するのに有効な薬物である。
【０１４９】
ＩＩ．治療法
１つの態様では、本発明は、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニスト（好ましくは、抗体）（より好ましくは、ＣＤ２０抗体）を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の骨障害を治療する方法を提供する。
【０１５０】
正確な用量を、治療すべき容態の性質および重症度、アンタゴニストの型、哺乳動物／患者の特徴などを考慮して、許容されている標準にしたがって臨床医によって決定する。用量の決定は、当業者のレベルの範囲内である。投与の経路および方法に応じて、タンパク質を、長期注入によって単回用量で投与するか、長期にわたって間欠的に投与することができる。典型的な１〜数時間にわたるボーラス注射または注入によって静脈内投与する。徐放性処方物を使用することができる。一般に、治療有効量のＣＤ２０アンタゴニストは、処置した容態の臨床的に有意な変化（骨折修復に必要な時間の臨床的に有意な減少、空洞または他の欠損の体積の有意な減少、骨密度の有意な増加、罹患率の有意な減少、または組織学的スコアの有意な増加など）を得るのに十分な量である。
【０１５１】
好ましい実施形態では、用量は、約１ヶ月以内に約１〜４回の投与頻度で、約４００ｍｇ〜１．３ｇ、より好ましくは、約５００ｍｇ〜１．２ｇ、さらにより好ましくは、約７５０ｍｇ〜１．１ｇである。別の好ましい実施形態では、抗体を、約２〜４回、より好ましくは、約２〜３回、最も好ましくは、約２回投与する。さらに好ましい実施形態では、抗体を、約２〜３週間以内、より好ましくは、約２週間以内に投与する。
【０１５２】
使用する特定の用量数（１回、２回、３回、またはそれを超える）は、例えば、処置する骨障害の型、使用される抗体の型、どのような型、どれぐらいの量および数の第２薬物を下記のように使用するのか、ならびに投与の方法および頻度に依存する。１回を超えて投与する場合、より後の投与（例えば、第２または第３投与）を、好ましくは、前の投与から約１〜２０日目、より好ましくは、約６〜１６日目、最も好ましくは、約１４〜１６日目に投与する。個別の投与を、好ましくは、約１日と４週間との間、より好ましくは、約１日と２０日との間の総期間以内に（例えば、６〜１８日以内）投与する。１つのこのような態様では、個別の投与を、ほぼ毎週投与し、第２投与を、第１投与から約１週間後に投与し、任意の第３またはその後の投与を、第２投与から約１週間後に投与する。抗体のそれぞれのこのような個別の投与は、好ましくは、約０．５〜１．５ｇ、より好ましくは、約０．７５〜１．３ｇである。
【０１５３】
骨折または他の骨欠損における骨再生などの局所適用のために、タンパク質を、約０．１〜１００μｇ／ｃｍ２の創傷面積の範囲で適用することができる。
【０１５４】
しかし、上記のように、これらの提案したアンタゴニスト量は、非常に多くの治療上の判断に制約される。適切な用量および計画の選択における重要な要因は、上記のように、得られる結果である。例えば、比較的高い用量は、進行性および急性の疾患の治療に最初に必要であり得る。その後の用量は、より早い用量よりも高くてよい。最も有用な結果を得るために、疾患または障害に応じて、アンタゴニストを、疾患または障害の最初の徴候、診断、外観、または発症にできるだけ近づけて投与するか、疾患または障害の寛解中に投与する。
【０１５５】
アンタゴニストを、任意の適切な手段（非経口、皮下、腹腔内、吸入、鞘内、関節内、鼻腔内、および病変内投与（局所免疫抑制薬治療が望ましい場合）が含まれる）によって投与する。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。さらに、アンタゴニストを、パルス注入（例えば、低アンタゴニスト用量で）によって適切に投与することができる。好ましくは、注射、最も好ましくは、静脈内または皮下注射によって投与し、これは、投与が短期間または慢性であるかどうかに一部依存する。
【０１５６】
当業者は、有効量の決定において、哺乳動物の年齢、活性レベル、ホルモンバランス、全体的な健康状態などの要因を考慮し、例えば、低投薬量での開始および有効量を決定するための投薬量の滴定によって哺乳動物毎に調整する。本明細書中に記載の研究により、βグルカン濃度の増加は破骨細胞活性の阻害を必ずしも増加させず、実際は破骨細胞活性の阻害を減少させ得ることが発見された。１００ｐｇでの効果は、骨粗鬆症の制御薬として使用されている種々の形態のビスホスホネートを使用して得た効果と類似する。
【０１５７】
アンタゴニスト／抗体の少なくとも約２回の曝露（例えば、約２〜６０回の曝露、より具体的には、約２〜４０回の曝露、最も具体的には、約２〜２０回の曝露）などの１回を超える曝露または一連の用量を投与することにより、哺乳動物をアンタゴニスト／抗体で再治療することができる。このような曝露を、種々の間隔（例えば、約２４〜２８週間、４８〜５６週間、またはそれを超える間隔など）で投与することができる。好ましくは、このような曝露を、それぞれ２４〜２６週間、約３８〜４２週間、または約５０〜５４週間の間隔で投与する。１つの実施形態では、各アンタゴニスト／抗体曝露を、単回用量のアンタゴニスト／抗体として行う。別の実施形態では、各アンタゴニスト／抗体曝露を、個別の抗体用量として行う。しかし、全てのアンタゴニスト／抗体曝露を、単回用量または個別の用量として行う必要はない。
【０１５８】
好ましいアンタゴニストは、細胞傷害薬に結合体化していない抗体（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）などの抗体）である。本明細書中に記載の方法では、Ｂ細胞表面マーカーまたはＣＤ２０抗体は、裸の抗体（ｎａｋｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）であり得るか、別の分子と結合体化することができる（骨ターゲティング薬（ｂｏｎｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）への共有結合など）。本明細書中の好ましいＣＤ２０抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒトＣＤ２０抗体、より好ましくは、リツキシマブ、ヒト化２Ｈ７（例えば、配列番号２および８中の可変ドメイン配列を含むか、配列番号８中にＮ１００ＡまたはＤ５６ＡおよびＮ１００Ａの変化を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号２中にＭ３２Ｌ、Ｓ９２Ａ、またはＭ３２ＬおよびＳ９２Ａの変化を有する軽鎖可変ドメインを含むか、配列番号３０の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列および配列番号８の重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含み、ここで、抗体は、ＶＨ−ＣＤＲ２中にＤ５６Ａのアミノ酸置換をさらに含み、ＶＨ−ＣＤＲ３中のＮ１００がＹまたはＷに置換され、特に、配列番号３１のｖ５１１軽鎖配列および配列番号３２のｖ５１１重鎖配列を含む）、キメラ抗体、またはヒト化Ａ２０抗体（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、またはＨＵＭＡＸ−ＣＤ２０（商標）ヒトＣＤ２０抗体（Ｇｅｎｍａｂ）である。リツキシマブまたはヒト化２Ｈ７がさらにより好ましい。別の態様では、好ましい抗体は、上記定義の主な臨床応答を誘導する。
【０１５９】
本明細書中の全ての方法のさらなる実施形態では、哺乳動物は、骨障害を治療するため、薬物（破骨細胞関連障害の治療薬または免疫抑制薬など）で以前に処置されたことがなく、そして／またはＢ細胞表面マーカーに対するアンタゴニストまたは抗体で以前に治療されたことがない（例えば、ＣＤ２０抗体で以前に治療されたことがない）。なおさらなる態様では、哺乳動物は、上記の任意の方法で治療される前に（最初またはその後の一連の用量の抗体後が含まれる）骨障害が再発しているか、他の組織損傷（腎臓損傷など）を罹患していてもよい。しかし、好ましくは、哺乳動物は、少なくとも最初の治療前にこのような再発をしていない。
【０１６０】
ヒトおよび非ヒト動物の両方における産生を刺激することを望むいずれの場所にもＢ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニストを使用することができる。動物への使用には、家畜（家畜類およびコンパニオンアニマル）への使用が含まれる。特定の適用には、骨折（癒着不能骨折および治癒に欠陥のある患者（糖尿病、アルコール中毒者、および高齢者など）の骨折が含まれる）、骨移植片、照射誘導性骨壊死後の治癒骨、インプラント（関節置換および歯科インプラントが含まれる）、手術から生じた骨欠損の修復（腫瘍除去後の頭蓋または上顎表面修復、外傷後の外科的再建術、遺伝的または他の身体的異常の修復、および形成術における骨治癒の促進など）、歯周病の治療および他の歯科欠損の修復、骨の癌の治療上の処置後の骨欠損の治療、仮骨延長術中の骨形成の増加、関節損傷の治療（軟骨および靭帯の修復が含まれる）、骨関節症を罹患している関節の修復、腱の修復および再接合、骨粗鬆症（加齢性骨粗鬆症、閉経後骨粗鬆症、糖質コルチコイド誘導性骨粗鬆症、および廃用性骨粗鬆症が含まれる）および骨量減少または骨形成の減少によって特徴づけられる他の容態の治療、月経前の女性のピーク骨量の上昇、および硬膜に関連する結合組織の治癒における使用が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６１】
本明細書中の任意の方法では、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニストまたは抗体と共に第２薬物（Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニストまたは抗体（例えば、ＣＤ２０抗体）が第１薬剤である場合）を投与することができる。本発明の方法を、矯正装置（脊椎固定ケージ、脊椎固定ハードウェア、内部および外部骨固定デバイス、螺子、ならびにピンなど）と組み合わせて使用することもできる。第２薬物は、１つまたは複数の薬物であり得、例えば、破骨細胞関連障害の治療薬、細胞傷害薬、免疫抑制薬、疼痛薬、またはその任意の組み合わせが含まれる。当業者に公知の他の種々の治療薬を適用することもできる。このような第２薬物型は、種々の要因（骨障害の型、骨障害の重症度、哺乳動物の状態および年齢、使用した第１薬剤型および用量などが含まれる）に依存する。
【０１６２】
このようなさらなる薬物の例には、破骨細胞関連障害の治療薬、化学療法薬、インターフェロンクラスの薬物（インターフェロンα（例えば、Ａｍａｒｉｌｌｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）、ＩＦＮ−β−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標）およびＡＶＯＮＥＸ（登録商標））またはＩＦＮ−β−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標））など）、オリゴペプチド（酢酸グラチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）など）、ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンド遮断薬、細胞傷害薬または免疫抑制薬（ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、メトトレキサート、シクロホスファミド、クロラムブシル、レフルノミド、およびアザチオプリンなど）、免疫グロブリン静注（γグロブリン）、リンパ球枯渇療法（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ）（例えば、ミトキサントロン、シクロホスファミド、ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）抗体、抗−ＣＤ４、クラドリビン、自己反応性Ｂ細胞のＩｇ受容体によって特異的に認識される脱免疫化自己反応性抗原またはそのフラグメントを含む少なくとも２つのドメインを有するポリペプチド構築物（ＷＯ２００３／６８８２２号）、全身照射法、骨髄移植、インテグリンアンタゴニストまたは抗体（例えば、ＬＦＡ−１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈから市販されているエファリズマブ／ＲＡＰＴｌＶＡ（登録商標）など）、α４インテグリン抗体（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｅから市販されているナタリズマブ／ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）など）、または上記の他のもの）、ステロイド（コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン（注射用のＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（商標）メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムなど）、プレドニゾン（低用量プレドニゾンなど）、デキサメサゾン、または糖質コルチコイド（例えば、関節内注入（全身性副腎皮質ステロイド療法が含まれる）による）など）、非リンパ球枯渇免疫抑制療法（例えば、ＭＭＦまたはシクロスポリン）、「スタチン」クラスのコレステロール低下薬（セリバスタチン（ＢＡＹＣＯＬ（商標））、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（商標））、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（商標））、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（商標））、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（商標））、およびシンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（商標））が含まれる）、エストラジオール、テストステロン（任意選択的に、高投薬量で使用；Ｓｔｕｖｅら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ８：２９０−３０１（２００２））、アンドロゲン、ホルモン補充療法、ＴＮＦインヒビター（ＴＮＦ−αに対する抗体など）、ＤＭＡＲＤ、ＮＳＡＩＤ、プラスマフェレーシス、または血漿交換、トリメトプリムスルファメトキサゾール（ＢＡＣＴＲＩＭ（商標）、ＳＥＰＴＲＡ（商標））、ミコフェノール酸モフェチル、Ｈ２遮断薬、またはプロトンポンプインヒビター（潜在的な潰瘍誘発性免疫抑制療法）、レボチロキシン、シクロスポリンＡ（例えば、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（登録商標））、ソマトスタチンアナログ、サイトカイン、代謝拮抗薬、免疫抑制薬、再建手術（ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｖｅ  ｓｕｒｇｅｒｙ）、放射性ヨウ素、甲状腺摘除、ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＡＦＦもしくはＢＲ３抗体またはイムノ��ドヘシンなど）、抗−ＣＤ４０受容体または抗−ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）、抗−ＩＬ−６受容体アンタゴニスト／抗体、別のＢ細胞表面アンタゴニストまたは抗体（リツキシマブを含むヒト化２Ｈ７抗体、他のヒト化抗体、またはＣＤ２０抗体）などが含まれる。
【０１６３】
好ましいこのような薬物は、破骨細胞関連障害の治療薬、化学療法薬、細胞傷害薬、抗インテグリン、γグロブリン、抗ＣＤ４、クラドリビン、トリメトプリムスルファメトキサゾール、Ｈ２遮断薬、プロトンポンプインヒビター、副腎皮質ステロイド、シクロスポリン、スタチンクラスのコレステロール低下薬、エストラジオール、テストステロン、アンドロゲン、ホルモン補充療法薬、ＴＮＦインヒビター、ＤＭＡＲＤ、ＮＳＡＩＤ（例えば、筋骨格の症状を治療するため）、レボチロキシン、シクロスポリンＡ、ソマトスタチンアナログ、ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＡＦＦ抗体またはＢＲ３抗体、特に、ＢＡＦＦ抗体など）、免疫抑制薬、および別のＢ細胞表面マーカー抗体（リツキシマブとヒト化２Ｈ７抗体または他のヒト化ＣＤ２０抗体との組み合わせなど）である。
【０１６４】
より好ましいこのような薬物は、破骨細胞関連障害の治療薬（サイトカインなど）、免疫抑制薬（ＴＮＦ−αに対する抗体、ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対する抗体、およびＢＡＦＦ抗体またはＢＲ３抗体などのＢＡＦＦアンタゴニストが含まれる）、ＤＭＡＲＤ、細胞傷害薬、インテグリンアンタゴニスト、ＮＳＡＩＤ、ホルモン、またはその組み合わせである。免疫抑制薬は、例えば、主要器官が関与する非常に活動的な疾患に必要であり得、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、クロラムブシル、レフルノミド、ＭＭＦ、アザチオプリン（ＩＭＵＲＡＮ（登録商標））、およびメトトレキサートなどの薬剤が含まれる。有効性を高めるための第１薬物と組み合わせたＢＡＦＦアンタゴニストが有用であり得る。
【０１６５】
破骨細胞関連障害の治療薬（ＩＬ−４などのサイトカイン）、免疫抑制薬、またはその組み合わせがさらにより好ましく、破骨細胞関連障害の治療薬および／または免疫抑制薬が最も好ましくは、ビスホスホネートおよび／またはメトトレキサートとさらに最も好ましい。
【０１６６】
１つの特に好ましい実施形態では、第２薬物は、１つまたは複数の破骨細胞関連障害の治療薬であるか、これを含む。
【０１６７】
なおさらに特に好ましい態様では、第２薬物は、免疫抑制薬、より好ましくは、シクロホスファミド、ＭＭＦ、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、またはメトトレキサートであり、好ましくは、少なくとも最初の抗体用量で投与する。１つの実施形態では、アザチオプリン、メトトレキサート、またはＭＭＦを、好ましくは、寛解の維持のためにシクロホスファミドの代わりに使用する。
【０１６８】
なおさらに好ましい実施形態では、第２薬物は、１つまたは複数の破骨細胞関連障害の治療薬および免疫抑制薬の組み合わせである。
【０１６９】
全てのこれらの薬物を、互いに組み合わせて使用するか、これらのみを第１薬物と共に使用することができ、その結果、本明細書中で使用される表現「第２薬物」は、第１薬物以外の唯一の薬物であることを意味しない。したがって、第２薬物は、１つの薬物である必要はないが、１つを超えるこのような薬物を構成するか含み得る。
【０１７０】
前述のこれらの第２薬物を、一般に、上文と同一の投薬量および投薬経路またはこれまで使用された投薬量の１〜９９％で使用する。このような第２薬物を全て使用する場合、好ましくは、これらを、特に、これらによって引き起こされる副作用を排除または減少させるために、第１薬物を使用した最初の投与を超えるその後の投与で、第１薬物が存在しない場合よりも少ない量で使用する。組み合わせ投与には、個別の処方物または１つの薬学的処方物を使用した同時投与およびいずれかの順序での連続投与が含まれ、両方（または全て）の活性成分がその生物活性を同時に発揮する時間が存在することが好ましい。
【０１７１】
本明細書中の再治療法のために、第２薬物を有効量の一連の用量で抗体と共に投与する場合、第２薬物を、任意の一連の用量（例えば、１つの一連の用量または１つを超える一連の用量）で投与することができる。１つの実施形態では、第２薬物を、最初の一連の用量を使用して投与する。別の実施形態では、第２薬物を、最初および第２の一連の用量を使用して投与する。なおさらなる実施形態では、第２薬物を、全ての一連の用量を使用して投与する。
【０１７２】
第２薬物の組み合わせ投与には、個別の処方物または１つの薬学的処方物を使用した同時投与（並行（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）投与）およびいずれかの順序での連続投与が含まれ、両方（または全て）の活性成分（薬物）がその生物活性を同時に発揮する時間が存在することが好ましい。
【０１７３】
本明細書中の抗体またはアンタゴニストを、任意の適切な手段（非経口、局所、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、および／または病変内投与が含まれる）によって投与する。非経口注入には、筋肉内、静脈内（ｉ．ｖ．）、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。鞘内投与も意図される（ＣＤ２０抗体の鞘内送達に関するＧｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ａ．のＵＳ２００２／０００９４４４号を参照のこと）。さらに、抗体またはアンタゴニストを、例えば、漸減用量の抗体またはアンタゴニストを使用したパルス注入によって適切に投与することができる。好ましくは、静脈内または皮下、より好ましくは、静脈内注入によって投与する。
【０１７４】
複数の一連の用量の抗体を投与する場合、各一連の用量を、同一または異なる投与手段を使用して投与する。１つの実施形態では、各一連の用量を、静脈内投与によって投与する。別の実施形態では、各一連の用量を、皮下投与によって投与する。さらに別の実施形態では、複数の一連の用量を、静脈内投与および皮下投与の両方によって投与し、抗体は、同一でも異なっていてもよい。
【０１７５】
このようなアンタゴニストおよび抗体の産生、修飾、および処方の考察を以下に示す。
【０１７６】
ＩＩＩ．アンタゴニストおよび抗体の産生
本発明の方法および製品は、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニストを使用するか組み込む。したがって、このようなアンタゴニストの生成方法を本明細書中に記載する。
【０１７７】
アンタゴニストの産生またはスクリーニングのために使用すべきＢ細胞表面マーカーは、例えば、所望のエピトープを含む抗原またはその一部の可溶性形態であり得る。あるいはまたはさらに、その細胞表面にＢ細胞表面マーカーを発現する細胞を使用して、アンタゴニストを生成するかスクリーニングすることができる。アンタゴニストの生成に有用なＢ細胞表面マーカーの他の形態は、当業者に明らかである。好ましくは、Ｂ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９またはＣＤ２０抗原である。
【０１７８】
好ましいアンタゴニストが抗体である一方で、抗体以外のアンタゴニストが本明細書中で意図される。例えば、アンタゴニストは、任意選択的に、細胞傷害薬（本明細書中に記載のものなど）と融合しているか結合体化している小分子アンタゴニストを含み得る。小分子のライブラリーを、本明細書中の目的のＢ細胞表面マーカーに対してスクリーニングして、この抗原に結合する小分子を同定することができる。小分子を、さらに、その拮抗特性についてスクリーニングし、そして／または細胞傷害薬と結合体化することができる。
【０１７９】
アンタゴニストはまた、合理的デザインまたはファージディスプレイによって生成されたペプチドであり得る（例えば、１９９８年８月１３日公開のＷＯ９８／３５０３６号を参照のこと）。１つの実施形態では、選択の分子は、抗体のＣＤＲに基づいてデザインされた「ＣＤＲ模倣物」または抗体アナログであり得る。このようなペプチド自体が拮抗性を示す一方で、任意選択的にペプチドを細胞傷害薬と融合して、ペプチドの拮抗特性を付加するか増強することができる。
【０１８０】
本発明で使用した抗体アンタゴニストの産生のための例示的技術に関する説明を以下に示す。
【０１８１】
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体を、好ましくは、関連抗原およびアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物中で惹起する。これは、二官能性薬または誘導体化薬（例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基による結合体化）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基による）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１は、異なるアルキル基である））を使用した免疫化すべき種において免疫原性を示すタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビター）への関連抗原の結合体化に有用であり得る。
【０１８２】
動物を、例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質または結合体化体（それぞれ、ウサギまたはマウス）と３倍体積のフロイント完全アジュバントとの組み合わせおよび溶液の複数の部位への皮内注射によって、抗原、免疫原性結合体化体、または誘導体に対して免疫化する。１ヶ月後、動物を、複数の部位への皮下注射によって、元の量の１／５〜１／１０のペプチドまたは結合体化体を含むフロイント完全アジュバントで追加免疫する。７〜１４日後、動物から採血し、抗体力価について血清をアッセイする。動物を、力価がプラトーになるまで追加免疫する。好ましくは、動物を、同一の抗原であるが異なるタンパク質に結合体化した結合体化体および／または異なる架橋剤によって追加免疫する。結合体化体を、タンパク質融合物として組換え細胞培養物中で作製することもできる。また、ミョウバンなどの凝集剤を適切に使用して、免疫応答を増強する。
【０１８３】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体を、実質的に均一な抗体集団（すなわち、集団を含む各抗体は、少量で存在し得る天然に存在する変異体を除いて同一である）から得る。したがって、修飾語「モノクローナル」は、個別の抗体の混合物ではない抗体の特徴を示す。
【０１８４】
例えば、モノクローナル抗体を、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製することができるか、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製することができる。
【０１８５】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物（ハムスターなど）を、上記のように免疫化してリンパ球を誘発し、免疫化のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか産生することができる。あるいは、リンパ球を、インビトロで免疫化することができる。次いで、リンパ球を、適切な融合剤（ポリエチレングリコールなど）を使用して骨髄腫細胞に融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０１８６】
したがって、ハイブリドーマ細胞を播種し、適切な培養培地中で成長させる。この培地は、非融合親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含むことが好ましい。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒドロキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的には、ヒドロキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質がＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する。
【０１８７】
好ましい骨髄腫細胞は、効率よく融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性を示すものである。これらのうち、好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡから利用可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のものならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ＵＳＡから利用可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロミエローマ（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０１８８】
ハイブリドーマ細胞が成長する培養培地を、抗原に指向するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ（放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）など）によって決定する。
【０１８９】
モノクローナル抗体の結合親和性を、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード分析によって決定することができる。
【０１９０】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを、限界希釈手順によってサブクローン化し、標準的な方法によって成長させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的に適切な培養培地には、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞を、動物の腹水腫瘍としてインビボで成長させることができる。
【０１９１】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体を、従来の免疫グロブリン精製手順（例えば、タンパク質Ａ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィなど）によって、培養培地、腹水、または血清から適切に分離する。
【０１９２】
モノクローナル抗体を、組換えによって産生することもできる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡを容易に単離し、従来の手順（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用による）を使用して配列決定する。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源としての機能を果たす。一旦単離されると、ＤＮＡを発現ベクターに配置し、次いで、宿主細胞（他で免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞など）にトランスフェクトして、組換え宿主細胞中にモノクローナル抗体を合成することができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総論には、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，５：２５６−２６２（１９９３）およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．，１３０：１５１−１８８（１９９２）が含まれる。
【０１９３】
さらなる実施形態では、抗体または抗体フラグメントを、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技術を使用して生成した抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、ファージライブラリーを使用したマウス抗体およびヒト抗体の単離を記載している。その後の刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））ならびに非常に巨大なファージライブラリーの構築ストラテジーとしての組み合わせ感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））を記載している。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替法である。
【０１９４】
ＤＮＡを、例えば、ヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインのコード配列を相同なマウス配列の代わりにコード配列に置換すること（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部または一部の免疫グロブリンコード配列への共有結合によって修飾することができる。
【０１９５】
典型的には、このような非免疫グロブリンポリペプチドに、抗体の定常領域を置換するか、これらに抗体の１つの抗原組み合わせ部位の可変ドメインを置換して、抗原に特異性を有する１つの抗原組み合わせ部位および異なる抗原に特異性を有する別の抗原組み合わせ部位を含む二価のキメラ抗体を作製する。
【０１９６】
（ｉｉｉ）ヒト化抗体
非ヒト抗体のヒト化方法は、当該分野で説明されている。好ましくは、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源由来のアミノ酸残基に導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基を、しばしば「移入」残基と呼ばれ、典型的には、「移入」可変ドメインから選択する。ヒト化を、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法にしたがって、超可変領域配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによって行うことができる。したがって、このような「ヒト化」抗体は、実質的にインタクト未満のヒト可変ドメインが非ヒト種由来の対応する配列によって置換されているキメラ抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域の残基および可能ないくつかのＦＲ残基がげっ歯類黄体中の相同部位由来の残基によって置換されているヒト抗体である。
【０１９７】
ヒト化抗体の作製で使用すべきヒト可変ドメイン（軽鎖および重鎖の両方）の選択は、抗原性を減少させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法によれば、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列を、公知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングする。次いで、げっ歯類配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として許容されている（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の全ヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワーク領域を使用する。同一のフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５１：２６２３（１９９３））。
【０１９８】
抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持した抗体をヒト化することがさらに重要である。この目的を達成するために、好ましい方法によれば、ヒト化抗体を、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用した親配列および種々の概念ヒト化産物の分析過程によって調製する。三次元免疫グロブリンモデルは市販されており、当業者に良く知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元高次構造を図解および表示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらの表示の検討により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の起こり得る役割を分析する（すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原に結合する能力に影響を与える残基を分析する）。この方法では、ＦＲ残基を選択し、レシピエント配列および移入配列と組み合わせ、それにより、所望の抗体の特徴（標的抗原に対する親和性の増加など）を得る。一般に、超可変領域の残基は、抗原結合への影響に直接且つ最も実質的に関与する。
【０１９９】
（ｉｖ）ヒト抗体
ヒト化の代替法として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、現在、免疫化の際に内因性免疫グロブリンを産生することなくヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失によって内因性抗体産生が完全に阻害されることが記載されている。このような生殖系列変異マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入により、抗原の攻撃誘発の際にヒト抗体が産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号、および同第５，５４５，８０７号を参照のこと。
【０２００】
あるいは、ファージディスプレイテクノロジー（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０））を使用して、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからインビトロでヒト抗体および抗体フラグメントを産生することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、インフレームで糸状バクテリオファージ（Ｍ１３またはｆｄなど）の主なまたは少数のコートタンパク質遺伝子のいずれかにクローン化し、ファージ粒子の表面に機能的抗体フラグメントをディスプレイする。糸状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的性質に基づいた選択により、これらの性質を示す抗体をコードする遺伝子も選択される。したがって、ファージは、Ｂ細胞のいくつかの性質を模倣する。ファージディスプレイを、種々の形式で行うことができる。その概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１（１９９３）を参照のこと。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源を、ファージディスプレイのために使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２／６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓由来のＶ遺伝子の小さなランダム組み合わせライブラリーから多様な多数の抗オキサゾロン抗体を単離した。非免疫化ヒトドナー由来のＶ遺伝子レパートリーを構築し、多様な多数の抗原（自己抗原が含まれる）に対する抗体を、本質的に、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載された技術にしたがって単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号も参照のこと。
【０２０１】
インビトロでの活性化Ｂ細胞によってヒト抗体を生成することもできる（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照のこと）。
【０２０２】
（ｖ）抗体フラグメント
抗体フラグメント産生のための種々の技術が開発されている。伝統的には、これらのフラグメントを、インタクトな抗体のタンパク質消化を介して誘導した（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。しかし、現在、これらのフラグメントを、組み合わせ宿主細胞によって直接産生することができる。例えば、抗体フラグメントを、上記で考察した抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを、大腸菌から直接回収し、化学結合させて、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体フラグメントの他の産生技術は、当業者に明らかである。他の実施形態では、目的の抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５号；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。抗体フラグメントはまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載のように、「線状抗体」であり得る。このような線状フラグメントは、単一特異性または二重特異性であり得る。
【０２０３】
（ｖｉ）二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに結合糖異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２つの異なるエピトープに結合することができる。他のこのような抗体は、第１Ｂ細胞マーカーに結合し、第２Ｂ細胞表面マーカーにさらに結合することができる。あるいは、抗Ｂ細胞マーカー結合アームを、白血球上の誘発分子（Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）など）またはＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）など））に結合するアームと組み合わせて、細胞防御機構をＢ細胞に集中することができる。二重特異性抗体を使用して、細胞傷害薬をＢ細胞に局在化させることもできる。これらの抗体は、Ｂ細胞マーカー結合アームおよび細胞傷害薬（例えば、サポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート、または放射性同位体ハプテン）に結合するアームを保有する。二重特異性抗体を、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
【０２０４】
二重特異性抗体の作製方法は、当該分野で公知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの鎖が異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づく（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。ランダムな種々の免疫グロブリン重鎖および軽鎖により、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を産生し、これらのうちの１種のみが正確な二重特異性構造を有する。通常、親和性クロマトグラフィ工程によって行われる正確な分子の精製は、むしろ煩雑であり、生成物の収率は低い。類似の手順は、ＷＯ９３／０８８２９号およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０２０５】
異なるアプローチによれば、所望の結合親和性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原組み合わせ部位）を、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合する。ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合が好ましい。少なくとも１つの融合物中に存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第１重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物および（必要に応じて）免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを、個別の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物に同時トランスフェクトする。これにより、構築で使用される同等でない比率の３つのポリペプチド鎖によって最適な収率が得られる実施形態で、３つのポリペプチドフラグメントの相互比率が非常に柔軟に調整される。しかし、等しい比率の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現によって収率が高い場合または比率が特に有意でない場合に、１つの発現ベクター中で２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を挿入することが可能である。
【０２０６】
このアプローチの好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアーム中の第１結合親和性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖および他方のアーム中のハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２結合特異性が得られる）から構成される。二重特異性分子の片方のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在によって手軽な分離方法が得られるので、この非対称構造によって望ましくない免疫グロブリン鎖組み合わせからの所望の二重特異性化合物の分離が容易になることが見出された。このアプローチは、ＷＯ９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０２０７】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別のアプローチによれば、抗体分子対の間の界面を操作して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の比率を最大にすることができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の界面由来の１つまたは複数の小アミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）と置換する。巨大な鎖と同一または類似のサイズの補償的「空洞」を、巨大なアミノ酸側鎖のより小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはチロシン）への置換によって第２抗体分子の界面に作製する。これにより、ホモ二量体などの他の望ましくない末端産物を超えるヘテロ二量体の収率を増加させるための機構が得られる。
【０２０８】
二重特異性抗体には、架橋または「ヘテロ結合体化体」抗体が含まれる。例えば、ヘテロ結合体化体中の抗体の一方をアビジンとカップリングし、他方をビオチンとカップリングすることができる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞の望ましくない細胞へのターゲティング（米国特許第４，６７６，９８０号）およびＨＩＶ感染の治療（ＷＯ９１／００３６号、ＷＯ９２／２００３７３号、および欧州特許第０３０８９号）が提案されている。ヘテロ結合体化体抗体を、任意の都合の良い架橋法を使用して作製することができる。適切な架橋剤は、当該分野で周知であり、多数の架橋技術と共に、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０２０９】
抗体フラグメントからの二重特異性抗体の生成技術は、文献にも記載されている。例えば、二重特異性抗体を、化学結合を使用して調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体をタンパク質分解してＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成する手順を記載している。これらのフラグメントを、ジチオール錯化剤である亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近傍ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を防止する。次いで、生成されたＦａｂ’フラグメントを、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つを、メルカプトエチルアミンでの還元によってＦａｂ’−チオールに再変換し、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合して二重特異性抗体を形成する。産生された二重特異性抗体を、酵素の選択的固定剤として使用することができる。
【０２１０】
大腸菌からのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接回収が最近進められている。このフラグメントを化学的カップリングして二重特異性抗体を形成することができる。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全にヒト化した二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各Ｆａｂ’フラグメントを大腸菌から個別に分泌させ、インビトロで有向（ｄｉｒｅｃｔｅｄ）化学的カップリングに供して二重特異性抗体を形成させる。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞および正常なヒトＴ細胞に結合し、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。
【０２１１】
組換え細胞培養物に直接由来する二重特異性抗体フラグメントを作製および単離するための種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体を、ロイシンジッパーを使用して産生している。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結した。抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元して単量体を形成させ、次いで、再酸化して抗体ヘテロ二量体を形成させる。この方法を、抗体ホモ二量体の産生に使用することもできる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ  ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ダイアボディ」テクノロジーは、二重特異性抗体フラグメントを作製するための別の機構を提供している。フラグメントは、短すぎて同一鎖上の２つのドメインの間を対合することができないリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインに別のフラグメントの相補的ＶＬおよびＶＨドメインとの対合を強いて２つの抗原結合部位を形成させる。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用による二重特異性抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーも報告する。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０２１２】
２価を超える抗体が意図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０２１３】
ＩＶ．アンタゴニストの結合体化体および他の修飾物
本明細書中の方法で使用されるか製品中に含まれるアンタゴニストを、任意選択的に、別の薬剤（骨ターゲティング薬など）と結合体化し、それにより、例えば、本発明の全身投与された組成物の送達を、ターゲティング分子へのＣＤ２０アンタゴニストの結合体化によって増強することができる。「ターゲティング分子」は、目的の組織に結合する分子である。例えば、骨ターゲティング分子には、テトラサイクリン、カルセイン、ビスホスホネート、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、アミノホスホ糖（ａｍｉｎｏｐｈｏｓｐｈｏｓｕｇａｒｓ）、骨のミネラル相（ｍｉｎｅｒａｌ  ｐｈａｓｅ）に関連することが公知のペプチド（例えば、オステオネクチン、骨シアロタンパク質、およびオステオポンチン）、骨特異的抗体、骨無機質を有するタンパク質、または骨細胞結合ドメイン（例えば、カルシトニン）などが含まれる。例えば、欧州特許第５１２，８４４号；欧州特許第３４１，９６１号；およびＢｒｉｎｋｌｅｙ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：２−１３（１９９２）を参照のこと。
【０２１４】
通常、共有結合によって結合体化し、その正確な性質を、ターゲティング分子およびＣＤ２０アンタゴニストポリペプチド上の結合部位によって決定する。典型的には、非ペプチド薬を、化学修飾によってＣＤ２０アンタゴニスト上に導入されたそのアミノ酸側鎖、炭水化物鎖、または反応基を介してＣＤ２０アンタゴニストを結合体化するリンカーの付加によって修飾する。例えば、薬物を、リジン残基のε−アミノ基を介するか、遊離α−アミノ基を介するか、システイン残基へのジスルフィド交換によって、または過ヨウ素酸での炭水化物鎖中の１，２−ジオールの酸化によって結合させて、シッフ塩基結合を介した種々の求核試薬を含む薬物を結合することができる。例えば、米国特許第４，２５６，８３３号を参照のこと。
【０２１５】
タンパク質修飾薬には、アミン反応試薬（例えば、反応性エステル、イソチオシアネート、アルデヒド、およびスルホニルハライド）、チオール反応試薬（例えば、ハロアセチル誘導体およびマレイミド）、ならびにカルボン酸およびアルデヒド反応試薬が含まれる。二官能性架橋試薬の使用によって、ＣＤ２０アンタゴニストポリペプチドをペプチド薬に共有結合することができる。ヘテロ二官能性試薬が最も一般的に使用されており、これは、２つの異なる反応部分（例えば、アミン反応部分およびチオール、ヨードアセトアミド、またはマレイミド）の使用によって２つの異なるタンパク質のカップリングを調節する。このような連結剤の使用は、当該分野で周知である。例えば、Ｂｒｉｎｋｌｅｙ（上記）および米国特許第４，６７１，９５８号を参照のこと。ペプチドリンカーを使用することもできる。代替法では、ＣＤ２０アンタゴニストポリペプチドを、融合ポリペプチドの調製によってペプチド部分に連結することができる。
【０２１６】
さらなる二官能性タンパク質カップリング剤の例には、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジプイミダート塩酸塩（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ  ＨＣＬ））、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタレルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソチオシアネート（トリエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）が含まれる。
【０２１７】
あるいは、アンタゴニストおよび薬剤を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製することができる。
【０２１８】
アンタゴニストの他の修飾が本明細書中で意図される。例えば、アンタゴニストを、種々の非タンパク質ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマー）のうちの１つに連結することができる。
【０２１９】
本明細書中に開示のアンタゴニストを、リポソームとして処方することもできる。アンタゴニストを含むリポソームを、当該分野で公知の方法（Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号；ならびに１９９７年１０月２３日公開のＷＯ９７／３８７３１号に記載の方法など）によって調製する。循環時間が増加したリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０２２０】
特に有用なリポソームを、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を使用した逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームを、定義された孔サイズのフィルターから押し出して、所望の直径のリポソームを得る。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントを、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載のようにジスルフィド交換反応によってリポソームに結合体化することができる。化学療法薬は、任意選択的に、リポソーム内に含まれる。Ｇａｂｉｚｏｎら、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８１（１９）：１４８４（１９８９）を参照のこと。
【０２２１】
本明細書中に記載のタンパク質またはペプチドアンタゴニストのアミノ酸配列の修飾が意図される。例えば、アンタゴニストの結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。アンタゴニストのアミノ酸配列変異型を、アンタゴニスト核酸への適切なヌクレオチド変化の導入またはペプチド合成によって調製する。このような修飾には、例えば、アンタゴニストのアミノ酸配列の欠失および／または挿入および／または置換が含まれる。最終構築物が所望の特徴を有するという条件で、最終構築物に到達するように欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせを行う。アミノ酸の変化により、アンタゴニストの翻訳後プロセシングを変化させることもできる（グリコシル化部位の数または位置の変化など）。
【０２２２】
変異誘発に好ましい位置に存在するアンタゴニストの一定の残基または領域の有用な同定方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）に記載のいわゆる「アラニンスキャニング変異誘発」である。ここに、標的残基の残基または基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕなどの荷電残基）を同定し、中性または負電荷のアミノ酸（最も好ましくは、アラニンまたはポリアラニン）と置換して、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を与える。次いで、置換基に対する機能的感受性が証明されたアミノ酸の位置を、置換部位での、または置換部位へのさらなる変異型または他の変異型の導入によって改良する。したがって、アミノ酸配列変異を導入するための部位を決定する一方で、変異自体の性質を予め決定する必要はない。例えば、所与の部位での変異能力を分析するために、標的コドンまたは標的領域でａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発を行い、発現したアンタゴニスト変異型を所望の活性についてスクリーニングする。
【０２２３】
アミノ酸配列の挿入物には、１残基から１００個またはそれを超える残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノおよび／またはカルボキシル末端融合物ならびに１つまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入物が含まれる。末端挿入物の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有するアンタゴニストまたは細胞傷害性ポリペプチドに融合したアンタゴニストが含まれる。アンタゴニスト分子の他の挿入変異型には、酵素のアンタゴニストのＮＢまたはＣ末端への融合物またはアンタゴニストの血清半減期が増加したポリペプチドが含まれる。
【０２２４】
変異型の別の型は、アミノ酸置換変異型である。これらの変異型は、アンタゴニスト分子中に異なる残基に置換された少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。抗体アンタゴニストの置換変異誘発に非常に重要な部位には、超可変領域が含まれるが、ＦＲの変化も意図される。保存的置換を、「好ましい置換」の見出しで表１に示す。このような置換によって生物活性が変化する場合、表１中の「例示的置換」に示すか、アミノ酸クラスに関して以下にさらに記載のより実質的な変化を導入し、産物をスクリーニングすることができる。
【０２２５】
【表１−１】
2008531699.tif 000017
【０２２６】
【表１−２】
2008531699.tif 000018
アンタゴニストの生物学的特性の実質的修飾を、（ａ）例えば、シートまたはヘリックス高次構造としての置換領域中のポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩の維持に対するその影響が有意に異なる置換基の選択によって行う。天然に存在する残基は、共通の側鎖の性質に基づいて以下の群に分類される。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性で親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスの１つの別のクラスへのメンバーの効果を伴う。
【０２２７】
アンタゴニストの適切な高次構造の維持に関与しない任意のシステイン残基を、一般に、セリンと置換して、分子の酸化安定性を改善し、異所性架橋を防止することができる。逆に、システイン結合をアンタゴニストに付加して、その安定性を改善することができる（特に、アンタゴニストがＦｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合）。
【０２２８】
置換変異型の特に好ましい型は、親抗体の１つまたは複数の超可変領域の残基の置換を含む。一般に、さらに進歩させるために選択された得られた変異型は、変異型が生成された親抗体と比較して改善された生物学的特性を有する。このような置換変異型の都合の良い生成方法は、ファージディスプレイを使用したアフィニティ変異である。簡潔に述べれば、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異させて、各部位に可能な全てのアミノ酸置換を生成する。このようにして生成された抗体変異型を、１価の様式で、融合物としての糸状ファージ粒子から各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物までディスプレイする。次いで、ファージディスプレイされた変異型を、本明細書中に開示のその生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。修飾のための候補超可変領域部位を同定するために、アラニンスキャニング変異誘発を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域の残基を同定することができる。あるいはまたはさらに、抗体と抗原との間の接触点を同定するために、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析することが有利であり得る。このような接触残基および隣接残基は、本明細書中に詳述する技術による置換の候補である。一旦このような変異型が生成されると、変異型パネルを、本明細書中に記載のスクリーニングに供し、１つまたは複数の関連アッセイで優れた性質を有する抗体を、さらなる開発のために選択することができる。
【０２２９】
アンタゴニストのアミノ酸変異型の別の型は、アンタゴニストの元のグリコシル化パターンが変化している。変化は、アンタゴニスト中で見出される１つまたは複数の炭水化物部分の欠失および／またはアンタゴニスト中に存在しない１つまたは複数のグリコシル化部位の付加を意味する。
【０２３０】
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ結合は、アスパラギン残基側鎖への炭水化物部分の結合をいう。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸（最も一般的にはセリンまたはトレオニンであるが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンを使用することもできる）への糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースの１つの結合をいう。
【０２３１】
アンタゴニストへのグリコシル化部位の付加を、１つまたは複数の上記のトリペプチド配列（Ｎ結合グリコシル化部位のため）を含むようなアミノ酸配列の変化によって都合良く行う。元のアンタゴニスト配列への１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加または置換（Ｏ結合グリコシル化部位のため）によって変化させることもできる。
【０２３２】
アンタゴニストのアミノ酸配列変異型をコードする核酸分子を、当該分野で公知の種々の方法によって調製する。これらの方法には、天然供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異型の場合）またはオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異誘発による調製、ＰＣＲ変異誘発、およびアンタゴニストのより早く調製された変異型または非変異型バージョンのカセット変異誘発が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３３】
例えば、アンタゴニストの抗原依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を増強するために、エフェクター機能に関して本発明のアンタゴニストを修飾することが望ましい場合がある。抗体アンタゴニストのＦｃ領域中の１つまたは複数のアミノ酸置換の導入によってこれを行うことができる。あるいはまたはさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それにより、この領域中に鎖間ジスルフィド結合を形成することができる。このようにして生成されたホモ二量体抗体は、改善された内在化能力および／または増加した補体媒介性細胞死および抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有し得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。抗腫瘍活性が増強したホモ二量体抗体を、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載のヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製することもできる。あるいは、二重Ｆｃ領域を有し、それにより、補体溶解およびＡＤＣＣ能力が増強された抗体を操作することができる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。
【０２３４】
例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載のように、アンタゴニストの血清半減期を増加させるために、アンタゴニスト（具体的には、抗体フラグメント）にサルベージ受容体結合エピトープを組み込むことができる。本明細書中で使用される、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増加を担うＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープをいう。
【０２３５】
Ｖ．薬学的処方物
本発明で使用されるアンタゴニストの治療処方物を、所望の純度のアンタゴニストと任意選択的に薬学的に許容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））との混合によって、保存のために凍結乾燥処方物または水溶液の形態で調製する。許容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤は、使用した投薬量および濃度でレシピエントに無害であり、緩衝液（リン酸、クエン酸、および他の有機酸の緩衝液など）、抗酸化剤（アスコルビン酸およびメチオニンが含まれる）、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルアルコール、またはベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチルパラベンまたはプロピルパラベンなど）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなど）、モノサッカリド、ジサッカリド、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンが含まれる）、キレート剤（ＥＤＴＡなど）、糖（スクロース、マンノース、トレハロース、またはソルビトールなど）、塩形成対イオン（ナトリウムなど）、錯塩（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、および／または非イオン性界面活性剤（ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）が含まれる。
【０２３６】
例示的抗ＣＤ２０抗体処方物は、ＷＯ１９９８／５６４１８号に記載されている。この公報は、４０ｍｇ／ｍＬリツキシマブ、２５ｍＭ酢酸塩、１５０ｍＭトレハロース、０．９％ベンジルアルコール、０．０２％ポリソルベート２０を含み、２〜８℃での最短の有効期限が２年間であるｐＨ５．０の液体複数回投与（ｍｕｌｔｉｄｏｓｅ）処方物を記載している。対象の別の抗ＣＤ２０処方物は、１０ｍｇ／ｍＬリツキシマブを含む９．０ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬクエン酸ナトリウム二水和物、０．７７ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０、および注射用滅菌水（ｐＨ６．５）を含む。
【０２３７】
皮下投与に適合した凍結乾燥処方物は、米国特許第６，２６７，９５８号（Ａｎｄｙａら）に記載されている。このような凍結乾燥処方物を、適切な希釈剤で抗タンパク質濃度に再構成し、再構成された処方物を、本明細書中で治療すべき哺乳動物に皮下投与することができる。
【０２３８】
本明細書中の処方物はまた、必要に応じて、１つを超える活性化合物（上記の第２薬物）、好ましくは、互いに悪影響を与えない補助的活性を有する薬物を含み得る。このような薬物の型および有効量は、例えば、処方物中に存在するアンタゴニストの量および治療される哺乳動物の臨床パラメーターに依存する。好ましいこのような薬物を、上に記載する。
【０２３９】
有効成分を、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製したマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）を含むコロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンに捕捉することもできる。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０２４０】
徐放性処方物を調製することができる。徐放性調製物の適切な例には、アンタゴニストを含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、マトリックスは、成型物（例えば、フィルム）またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ  Ｊ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸など）が含まれる。
【０２４１】
本明細書中のさらなる薬学的に許容可能な送達ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）には、生体適合性の固体または半固体マトリックス（骨粉、セラミックス、生分解性および非生分解性合成ポリマー、および天然高分子が含まれる）、組織接着剤（例えば、フィブリンベース）、水性高分子ゲル、水溶液、およびリポソームなどが含まれる。例示的処方物および送達ビヒクルを以下に開示する。この開示は例示であり、当業者は、適切な代替物（具体的に命名された材料の誘導体および材料の組み合わせが含まれる）を容易に認識する。処方物には、１つまたは複数のさらなる成長因子、賦形剤、防腐剤、可溶化剤、緩衝剤、バイアル表面上のタンパク質の喪失を防止するアルブミンなどがさらに含まれ得る。処方は当該分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９ｔｈ  ｅｄ．，１９９５に開示されている。
【０２４２】
ＣＤ２０アンタゴニストを、組織接着剤成分として送達させることができる。フィブリンベースの組織接着剤は当該分野で公知であり、血漿または組換え供給源から調製することができる。組織接着剤は、フィブリノゲンおよび第ＸＩＩＩ因子を含み、これに架橋を活性化するために使用直前にトロンビンを添加する。例えば、米国特許第４，４１４，９７６号；同第４，４２７，６５０号；および同第４，９２８，６０３号を参照のこと。組織接着剤の使用は、結合組織（靭帯または腱の裂傷など）を修復しなければならない容態の治療で特に有利であり得る。ＣＤ２０アンタゴニストを、コラーゲンベースの接着剤と組み合わせることもできる。コラーゲンを、天然および合成の供給源から単離することができる。
【０２４３】
固体および半固体マトリックスは、癒着不能骨折、空洞、および他の骨欠損の充填のための好ましい送達ビヒクルである。これらのマトリックスは、天然の骨の空間充填代替物を提供し、骨置換薬（ｂｏｎｅ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト、リン酸三カルシウムとヒドロキシアパタイトとの組み合わせ、ポリメチルメタクリレート、アルミン酸塩および他のセラミックス、ならびに脱塩凍結乾燥皮膚骨など）が含まれる。固体および半固体のマトリックスを、種々の高分子材料から調製することもできる。半固体マトリックスは、骨欠損に正確に充填されるように成形することができるような展性（ｍａｌｅａｂｉｌｉｔｙ）を示す利点がある。マトリックスには、他の活性または不活性成分が含まれ得る。組織の成長または浸潤を促進する薬剤が特に重要である。骨成長を促進する薬剤には、形態形成タンパク質（米国特許第４，７６１，４７１号およびＷＯ９０／１１３６６号）、オステオゲニン（Ｓａｍｐａｔｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：７１０９−７１１３（１９８７）およびＮａＦ（Ｔｅｎｃｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔ．Ｒｅｓ．２３：５７１−５８９（１９８９））が含まれる。
【０２４４】
生分解性合成ポリマーには、ポリエステル、ポリオルトエステル、ポリアンヒドリド、ポリカーボネート、ポリフマレート、ポリヒドロキシブチレート、およびビニルポリマーなどが含まれる。特定の例には、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリラクチド／ポリグリコリドコポリマー、ポリジオキサノン、ポリグリコリド／トリメチレンカーボネートコポリマー、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、およびポリビニルアルコールが含まれるが、これらに限定されない。このような材料を、骨への付着または挿入のための種々の形状（フィルム、プレート、ピン、ロッド、ネジ、ブロック、および格子などが含まれる）で調製することができる。例えば、米国特許第５，８６３，２９７号およびＷＯ９３／２０８５９号を参照のこと。これらの材料には、アルブミン、ポリオキシエチレンソルビタン界面活性剤またはグルタミン酸などのキャリアがさらに含まれ得る。原理上、ポリマー分解を増強するか、マトリックス中に孔を作製するか、マトリックスへの成長因子の吸着を減少させる任意の物質をキャリアとして使用することができる。キャリアとして有用なポリオキシエチレンソルビタン界面活性剤には、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、およびポリオキシエチレンソルビタントリオレエートが含まれる。可塑剤を含むこともできる。
【０２４５】
一般に、本明細書中に記載のフィルムまたはデバイスを、骨の損傷部位に適用する。一般に、標準的な外科的手順を使用して、骨への移植または表面への付着によって適用する。
【０２４６】
生分解性ポリマーフィルムは、人工器官および外科的インプラントのコーティングとして特に有用である。このようなフィルムで、例えば、手術用のネジ、ロッド、ピン、およびプレートなどの外面を被覆するか、これ自体を巻くか種々の形状に形成することができる。この型の移植可能なデバイスは、整形外科で日常的に使用されている。フィルムを使用して、骨充填材料（ヒドロキシアパタイトブロック、脱灰骨基質栓（ｐｌｕｇ）、およびコラーゲンマトリックスなど）をコーティングすることもできる。本明細書中で使用される、用語「コポリマー」には、２つまたはそれを超える単量体単位型を含む任意のポリマーが含まれる。
【０２４７】
マトリックスの分解および結果として起こるマトリックスからの増殖因子の放出を、分子量、コポリマーの構造、ポリマーの比率、マトリックスの厚さ、および空隙率などのパラメーターの調整ならびに上記開示のキャリアを含めることによって調整することができる。例えば、ＰＬＡ／ＰＧＡフィルムを一般的に配合して、７５：２５と２５：７５との間、より一般的には、６５：３５と３５：６５との間のＰＬＡ：ＰＧＡ比を得る。一般に、分子量が１０，０００ダルトンと２００，０００ダルトンとの間のコポリマーを使用して、インプラントを調製する。一般に、より低い分子量のコポリマーは、より高い分子量の処方物よりも迅速に分解する。ランダムコポリマーは結晶性が低く、したがって、他のコポリマー型よりも早く分解する。鏡像異性体ラクチドのポリマーは結晶であり、したがって、そのラセミ対応物よりも分解耐性が高い。
【０２４８】
ポリマーマトリックスを、当該分野で公知の手順を使用して調製する。例えば、米国特許第４，９０２，５１５号；Ｇｉｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｅｄ，Ｐｏｌｙｍｅｒ  ２０：１４５９−１４６４（１９７９）；および米国特許第３，７７３，９１９号を参照のこと。例えば、ＰＬＡ／ＰＧＡコポリマーインプラントを、適切な溶媒（例えば、クロロホルムまたは塩化メチレン）中での所望の量のＰＬＡ／ＰＧＡコポリマー粒子の組み合わせ、得られた溶液を鋳型に注ぐこと、および溶媒の完全な蒸発によって生成する。代替法では、ＰＬＡ／ＰＧＡインプラントを、圧縮成形、押し出し成形、または他の公知の方法によって生成することができる。マトリックスに充填するために、ＣＤ２０アンタゴニストおよびキャリアを、粉末または液体として適用する。例えば、凍結乾燥ＣＤ２０アンタゴニストおよびアルブミンを、ポリマーフィルムのある表面上に均一に分散させ、フィルムを折り重ねることができる。この過程の繰り返しにより、ポリマーおよびＣＤ２０アンタゴニストの重層化された「サンドイッチ」を構築することができる。代替法では、タンパク質を水溶液（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水または０．１Ｍ酢酸）として適用し、乾燥させる。多孔質インプラントを、ＣＤ２０アンタゴニスト溶液（任意選択的に、他の成分を含む）に浸漬し、液体を蒸発させる。ＣＤ２０アンタゴニストを、展性ポリマーマトリックスに組み込み、その後、マトリックスを所望の形状に形成し、高温（例えば、６０〜６５℃）で硬化させる。多孔質インプラントを、真空下でのマトリックスの硬化によって調製することができる。
【０２４９】
ＣＤ２０アンタゴニストを、生分解性スポンジ（例えば、ゼラチン、コラーゲン、セルロース、またはキチンのスポンジ）と組み合わせて送達させることができる。このようなスポンジは、当該分野で公知である。例えば、米国特許第２，４６５，３５７号；米国特許第４，２７１，０７０号；およびＷＯ９０／１３３２０号を参照のこと。ＣＤ２０アンタゴニストおよび任意選択的に１つまたは複数のさらなる治療薬の溶液をスポンジに注射し、スポンジを３０〜１００℃で含水量が５０％未満、好ましくは１０％未満まで減少するのに十分な期間風乾させる。
【０２５０】
送達ビヒクルとしてゲルを使用することもできる。増殖因子の送達のための水性高分子ゲルは、例えば、米国特許第５，４２７，７７８号；同第５，７７０，２２８号；同第４，７１７，７１７号；および同第５，４５７，０９３号に開示されている。ゲルは、水中で粘性溶液を形成する生体適合性の水溶性または水膨潤性ポリマーを含む。このようなポリマーには、ポリサッカリド（メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、デキストラン、デンプン、キトサン、およびアルギン酸が含まれる）、グリコサミノグリカン（ヒアルロン酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、およびヘパラン硫酸が含まれる）、タンパク質（コラーゲン、ゼラチン、およびフィブロネクチンが含まれる）、およびアクリルアミド（ポリアクリルアミドおよびポリメタクリルアミドが含まれる）が含まれるが、これらに限定されない。一般に、室温で２００ｃｐｓ〜１００，０００ｃｐｓ、より一般的には、約１０００ｃｐｓ〜３０，０００ｃｐｓの粘度のゲルを調製し、後者の範囲は、水中で約０．２５〜１０％のヒドロキシエチルセルロースに対応する。より高い粘度のゲルが当該分野で公知である（例えば、米国特許第５，４２７，７７８号）。粘度を、成分ポリマーの種々の濃度および／または長さの変化によって調整することができる。ゲルを、ポリマーを適切な緩衝液（中性またはわずかに酸性ｐＨの低イオン強度のクエン酸、リン酸、または酢酸の緩衝液など）と組み合わせることによって調製する。一般に、防腐剤（抗菌薬）（メチルパラベン、プロピルパラベン、またはベンジルアルコールなど）を含める。完全な混合後、溶液を、適切な手段（例えば、加圧滅菌）によって滅菌する。混合物を冷却し、濾過滅菌したＣＤ２０アンタゴニストを添加する。
【０２５１】
ＣＤ２０アンタゴニストの別の局所送達手段には、浸透圧ミニポンプ（例えば、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ミニポンプ；Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，Ｃａｌｉｆ．）、ＷＯ９２／０３１２５号に開示の帯電デキストランビーズ、コラーゲンベースの送達系（Ｋｓａｎｄｅｒら（Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．２１１：２８８−２９４，１９９０）に開示のものなど）、Ｅｄｅｌｍａｎら（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，１２：６１９−６２６，１９９１）に開示のアルギン酸塩ベースの系が含まれる。骨への徐放局所送達のための当該分野で公知の他の方法には、治療薬と共に充填することができる多孔質コーティング金属人工挿入物および治療組成物を組み込んだ固体プラスチックロッドが含まれる。
【０２５２】
ＣＤ２０アンタゴニストをさらに使用して、個体への治療有効量のＣＤ２０アンタゴニストの投与によって骨粗鬆症を治療することができる。インビボ投与アッセイを使用して、ＣＤ２０アンタゴニストタンパク質をインタクトな動物で試験することができる。原型的投与を、皮下投与、腹腔内投与、または経口投与によって行うことができ、注射、徐放、または他の送達技術によって行うことができる。ＣＤ２０アンタゴニストの投与期間は、変化して良い（例えば、２８日および３５日が適切であり得る）。
【０２５３】
ＣＤ２０アンタゴニストが骨芽細胞と接触するようにＣＤ２０アンタゴニストを哺乳動物の体内に移植することができ、それにより、骨芽細胞が増殖して骨成長が刺激される。例えば、ＣＤ２０アンタゴニストを、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）と組み合わせてマトリックスに配置することができる。ＢＭＰは、間葉骨芽細胞前駆体を部位への移動を誘導し、さらに、間葉細胞の骨芽細胞への分化を誘導する。次いで、ＣＤ２０アンタゴニストは、さらに、骨芽細胞の増殖を刺激する。適切なマトリックスは、多孔質材料の粒子で構成されている。孔は、前駆細胞の移動およびその後の分化および増殖が可能な寸法でなければならず、一般に、７０〜８５０μｍ、一般に、１５０μｍ〜４２０μｍである。ＣＤ２０アンタゴニストを含むマトリックスを、骨欠損を包み込む形状に成形することができる。マトリックス材料の例は、粒子状の、脱灰されグアニジン抽出された種特異的骨である。他の潜在的に有用なマトリックス材料には、コラーゲン、グリコール酸と乳酸とのホモポリマーおよびコポリマー、ヒドロキシアパタイト、リン酸三カルシウム、および他のリン酸カルシウムが含まれる。ＣＤ２０アンタゴニストを、骨芽細胞の増殖の促進に十分な濃度、好ましくは、少なくとも１μｇ／ｍｌのマトリックスの濃度でマトリックスに適用することができる。ＣＤ２０アンタゴニスト溶液を、骨折部位に直接注射して、骨折の治癒を促進することができる。ＢＭＰおよびその生成のためのマトリックスの使用の例は、ＷＯ９２／０７０７３号、ＷＯ９１／０５８０２号、米国特許第５，６４５，５９１、および米国特許第５，１０８，７５３号に開示されている。
【０２５４】
インビボ投与のために使用すべき処方物は無菌でなければならない。滅菌濾過膜による濾過によってこれを容易に行う。
【０２５５】
別の実施形態において、本発明は、インビボで骨形成細胞またはその前駆体の成長および／または分化を刺激する方法を提供する。一般に上記に開示のように、これらの方法を使用して、細胞を患者から採取し、エキソビボで拡大し、患者に戻すことができる。骨髄細胞の成長および／または分化が特に重要であり、骨髄細胞は、分化刺激薬の存在下で培養して、特に、骨芽細胞、破骨細胞、および軟骨細胞に進化することができる。初代培養物内の分化された細胞の同定は、主に表現型による。例えば、骨髄細胞の表現型マーカーには、アルカリホスファターゼの発現（Ｍａｎｄｕｃａら、Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．８：２８１（１９９３））、１型コラーゲン合成（Ｋｕｒｉｈａｒａら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１１８（３）：９４０−９４７（１９８６））、オステオカルシンの産生（Ｙｏｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７：８５２１−８５２６（１９８８））、および副甲状腺ホルモンに対する反応性（Ａｕｂｉｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，９２：４５２−４６１（１９８２））が含まれる。骨芽細胞を、典型的には、炭素源、窒素源、必須アミノ酸、ビタミン、ミネラル、および一般にウシ胎仔血清によって供給される増殖因子を含む成長培地中にて３７℃、５％ＣＯ２で培養する。種々の適切な培地が当該分野で公知である。ＣＤ２０アンタゴニストペプチドを、これらの細胞型のための組織培養培地に、約１０μｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で添加する。当業者は、ＣＤ２０アンタゴニストタンパク質を培養培地中で他の増殖因子と都合良く組み合わせることができると認識する。
【０２５６】
Ｂ細胞表面マーカーの抗体をコードするポリヌクレオチドを患者に投与する遺伝子治療アプローチを使用して、骨欠損を修復することもできる。これに関して有用な遺伝子送達系には、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、および裸のＤＮＡベクターが含まれる。例えば、米国特許第５，３９９，３４６号；Ｍａｎｎら、Ｃｅｌｌ  ３３：１５３（１９８３）；米国特許第４，６５０，７６４号；米国特許第４，９８０，２８９号；Ｍａｒｋｏｗｉｔｚら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１１２０（１９８８）；米国特許第５，１２４，２６３号；ＷＯ９５／０７３５８号；およびＫｕｏら、Ｂｌｏｏｄ  ８２：８４５（１９９３）を参照のこと。罹患組織の局所感染（歯周ポケット、骨折、関節、インプラント部位、または人工器官付着部位へのベクターの局所適用など）が特に重要である。
【０２５７】
別の遺伝子治療アプローチでは、ＵＳ２００４／０１２６３６４号は、生きた前骨前駆細胞または前骨芽細胞（ＯＰＣ）を使用して骨組織成長を促進するための哺乳動物へのポリペプチドの送達（本明細書中で適用可能な方法）を開示している。細胞を、細胞ベースのプラットフォームとしての機能を果たすために自己細胞移植または同種細胞移植のための細胞を使用して、部位特異的な調節された様式で本明細書中の抗体を送達させることができる。合成細胞ベースの送達が意図され、骨溶解性病変部位でＣＤ２０抗体などのＢ細胞表面マーカーに結合する細胞ベースの送達も意図される。後者は、炎症エフェクター細胞（例えば、マクロファージ）および骨溶解エフェクター細胞（例えば、破骨細胞前駆細胞）が存在する抗体を炎症部位に濃縮することが可能である。細胞は、一般に、骨溶解を阻害するために骨中の特定の移植部位での抗体の発現を指示するための調節可能な誘導性骨芽細胞特異的プロモーターを含む遺伝子操作されたウイルスまたは非ウイルスプラスミドベクターを含む。
【０２５８】
これらの方法の目的のための細胞は、典型的には、骨芽細胞系譜に委ねられる。例えば、骨間質細胞を、自己または同種歯周靭帯から単離し、レシピエント患者への移植前にエキソビボで操作する。分化状態の骨髄間質細胞または靭帯由来細胞を、細胞外基質（ＥＣＭ）成分（ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）または他の市販のマトリックス調製物など）の存在下、好ましくは、１つまたは複数の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）（ＢＭＰ−２、−４、または−６など）の存在下での培養によって誘導する。前駆細胞への分化の誘導を、細胞の遺伝子操作の前後で行う。しかし、この工程を、好ましくは、分化細胞を１つまたは複数の治療抗体をコードする遺伝子を含むレトロウイルス発現ベクターを使用して形質導入する。
【０２５９】
分化した前駆細胞の骨組織を構築する能力を、未分化間質細胞と比較して増強した。ＯＰＣまたは歯骨前駆細胞を、アルカリホスファターゼの産生、オステオカルシンの発現、および骨シアロタンパク質の発現（歯骨前駆細胞の場合、象牙質シアロタンパク質発現に加えて）によって骨間質細胞（および脂肪、筋、または軟骨の細胞または組織）と区別する。
【０２６０】
骨髄吸引物由来の間質細胞からＯＰＣを単離および拡大し、ＥＣＭの存在下、エキソビボで分化した。自己骨髄間質細胞を拡大する。細胞を、任意選択的に、凍結し、液体窒素中で長期間保存後、分化および形質導入した。関節リウマチは長年存続し得るので、これらの「保存」自己細胞は、長期間にわたって複数回摂取可能であることは有利である。
【０２６１】
臨床上の利点がこのような細胞の使用によって付与されると予想されるので、さらなる態様では、本発明は、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体（好ましくは、ＣＤ２０抗体）をコードする核酸を含む単離した歯骨前駆細胞または前骨芽細胞を哺乳動物に導入する工程を含む、哺乳動物の骨溶解を阻害する方法を意図する。哺乳動物は、例えば、歯周炎または骨量減少（歯槽骨量減少）を引き起こし得る他の骨障害を罹患しているか発症リスクがあるヒト患者である。本明細書中に記載の方法はまた、獣医学的使用（例えば、イヌ、ネコ、ウマの治療）にも適用可能である。
【０２６２】
ＯＰＣを、骨芽細胞に分化した細胞中に優先的に連結する核酸の転写を指示するプロモーターに作動可能に連結された本明細書中の抗体をコードする核酸を含むように遺伝子改変する。典型的には、レトロウイルス発現ベクターを構築する。このような構築物中の好ましいプロモーターは、骨芽細胞特異的プロモーター（上記で特定した米国特許出願に記載のオステオカルシン、骨シアロタンパク質、または象牙質シアロタンパク質を有するプロモーター配列など）ならびに／または逆トランスアクチベーターであるテトラサイクリンアクチベーター（ｒｔＴＡ）遺伝子（治療抗体の産生も調節する）の転写を開始するためのプロモーターである。さらに、（他の細胞型と比較して）歯骨前駆細胞またはＯＰＣ中での転写を優先的に指示するように機能するこのようなプロモーターの短縮フラグメントを使用することができる。好ましくは、ＯＰＣを、α−５インテグリン受容体の発現が増加するように修飾することができる。この修飾により、細胞をインビボで移植した場合に細胞が骨基質タンパク質に接着することが可能となり、例えば、多孔質リン酸カルシウムセラミックキューブまたは他のカプセル化デバイス型への事前のカプセル化を行わずにＯＰＣを骨溶解部位に直接挿入することができるというさらなる利点が付与される。抗体をコードする核酸の発現は、好ましくは、誘導性である。骨芽細胞または歯骨前駆細胞転写調節ＤＮＡを使用して、転写単位中での抗体発現を調節することができる。調節配列（例えば、シス活性細胞特異的転写調節エレメント）を、転写単位中の抗体コード核酸配列の５’側に配置することができる。
【０２６３】
抗体コード配列の発現を、細胞の抗生物質（例えば、テトラサイクリンまたはテトラサイクリンアナログ（例えば、ミノサイクリンまたはドキシサイクリン）など）への接触によって調節することができ、１つの特定の実施形態では、テトラサイクリンを、ミノサイクリンと共に、同時または個別に哺乳動物に投与する。このような抗生物質を、好ましくは、全身投与する。
【０２６４】
例えば、テトラサイクリンを、歯根膜手術の少なくとも２日前（例えば、本発明の細胞を移植する時）ならびに／または手術および／もしくは移植の少なくとも２日後に全身投与する。細胞によって抗体が発現される一方で抗生物質が組織内に存在する（すなわち、一方で抗生物質が細胞移植レシピエントに投与される）。抗体の発現は、抗生物質投与の停止後に減少し、終了する。典型的には、抗生物質を、手術の８〜１２日前および手術の８〜１２日後に投与した。同様に、抗生物質を、形成手術（例えば、結合関節（ａｒｔｉｃｕｌａｔｉｎｇ  ｊｏｉｎｔ）からの軟骨の除去手術または転移性骨腫瘍の除去手術（その時に、罹患組織またはその近傍に細胞を移植する））の前後に投与する。
【０２６５】
細胞が歯骨前駆細胞である場合、哺乳動物は、歯周病または歯周疾患に起因する歯槽骨量減少を罹患しているか発症リスクがあり得る。細胞を、歯科形成手術用人工器官の移植前、移植中、または移植後に移植することができる。進行性歯周病治療のために、細胞を、下顎部分の歯周靭帯に局所投与することができる。
【０２６６】
骨障害の治療のために、歯骨前駆細胞を、レシピエント哺乳動物の骨髄または哺乳動物の結合関節に移植することができる。例えば、細胞を、脛骨内または大腿骨内に投与する。細胞を、例えば、骨量減少部位または部位（例えば、骨髄など）の近傍に局所投与する。
【０２６７】
哺乳動物の骨髄への細胞の移植方法は、当該分野で周知である（例えば、米国特許第４，１８８，４８６号）。投与すべき細胞の用量は、移植部位に適切な体積で１×１０細胞〜１×１０１０細胞の範囲である（大腿骨の骨髄への移植と比較して、下顎組織または歯周靭帯への移植にはより小さな体積を使用する）。このような移植手順の臨床プロトコールは、当該分野で公知である。例えば、１×１０８細胞／ｋｇ体重の用量を、大腿骨の骨髄に投与することができる。関節リウマチなどの長期疾患には、反復移植が必要であり得る。
【０２６８】
破骨細胞関連障害の治療薬（例えば、ＩＬ−４、特に、組換えヒトＩＬ−４またはＴＮＦ−αのインヒビターなど）を、任意選択的に、抗体と共に投与する。さらに、任意選択的に、他の第２薬物（ＮＳＡＩＤまたは抗疼痛薬（アスピリン、イブプロフェン、およびインドメタシンが含まれる）ならびにビスアリールＣＯＸ−２阻害化合物（例えば、米国特許第５，９９４，３７９号）および（メチルスルホニル）−フェニル−２−（５Ｈ）−フラノン（例えば、米国特許第６，０２０，３４３号）など）を投与することができる。より好ましくは、ＩＬ−４またはＴＮＦ−αのインヒビターをさらに投与する。
【０２６９】
単離された遺伝子修飾ＯＰＣを使用して、骨量減少障害（関節リウマチ、骨粗鬆症、根尖周囲または軟骨内の骨量減少、人工関節粒子誘導性骨溶解、骨折または骨欠損、原発性または続発性副甲状腺機能亢進症、転移性骨疾患、骨溶解性骨疾患、形成手術後、人工関節手術後など）を罹患しているか発症リスクがある個体を治療する。より好ましくは、このような哺乳動物は、関節リウマチ、根尖周囲または軟骨内の骨量減少、人工関節小片（ｐａｒｔｉｃｌｅ）誘導性骨溶解、または骨溶解性骨転移を罹患しているか発症リスクがあり得る。したがって、例えば、本明細書中の抗体を分泌するように操作されたＯＰＣを、インプラント誘導性骨溶解の発症に起因する人工関節置換の修正を受けた患者ならびに関節リウマチに起因する骨量減少を罹患した患者および重症歯周病に起因する口腔に移植することができる。
【０２７０】
ＶＩ．製品
本発明の別の実施形態では、上記の骨障害の治療に有用な材料を含む製品を提供する。１つの態様では、製品は、（ａ）Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニスト（これに結合する抗体（ＣＤ２０抗体が含まれる））を含む容器（好ましくは、容器は、容器内にアンタゴニストまたは抗体および薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤を含む）、および（ｂ）哺乳動物（患者など）の骨障害の治療についての説明書（説明書は、アンタゴニストまたは抗体を、有効量（例えば、約４００ｍｇ〜１．３ｇの用量で１〜４回の投与頻度などのアンタゴニストまたは抗体など）で約１ヶ月以内に患者に投与することを示す）を含む添付文書を含む。
【０２７１】
好ましい実施形態では、本明細書中の製品は、第２薬物を含む容器をさらに含み、アンタゴニストまたは抗体は第１薬物である。この製品は、添付文書に有効量の第２薬物での患者の治療についての説明をさらに含む。第２薬物は、上記の任意の薬物であり得、例示的な第２薬物は、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、細胞傷害薬、インテグリンアンタゴニスト、またはホルモンである。好ましい第２薬物は、上記の薬物であり、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、またはその両方が最も好ましい。
【０２７２】
別の態様では、本発明は、（ａ）Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体（例えば、ＣＤ２０抗体）を含む容器（好ましくは、容器は、容器内に抗体および薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤を含む）、および（ｂ）哺乳動物の骨障害の治療についての説明書（説明書は、最初の一連の用量の抗体、その後に第２の一連の用量の抗体を得るのに有効な抗体の量を哺乳動物に投与し、最初の一連の用量から約１６〜５４週間まで第２曝露を行わないことを示す）を含む添付文書を含む製品を提供する。
【０２７３】
好ましくは、このような添付文書を、哺乳動物の骨障害の治療についての説明書（説明書は、約０．５ｇ〜４ｇの最初の抗体を曝露し、その後に０．５〜４ｇの第２抗体を曝露するのに有効な抗体の量を哺乳動物に投与し、最初の曝露から約１６〜５４週間まで第２曝露を行わず、各抗体曝露を、抗体の約１〜４つの用量、好ましくは、単回用量または２〜４つの個別の用量として哺乳動物に行うことを示す）と共に提供する。
【０２７４】
本発明の態様の好ましい実施形態では、本明細書中の製品は、さらに、第２薬物を含む容器を含み、抗体は第１薬物であり、製品は、さらに、添付文書に有効量の第２薬物での哺乳動物の治療についての説明書を含む。第２薬物は、上記の任意の薬物であり得、例示的な第２薬物は、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、細胞傷害薬、インテグリンアンタゴニスト、またはホルモンであり、破骨細胞関連障害の治療薬、免疫抑制薬、またはその両方が最も好ましい。
【０２７５】
これら全ての態様では、添付文書は、容器上または容器に付随している。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが含まれる。容器を、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成することができる。容器は、骨障害の治療に有効な組成物を保持するか含み、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグ、または皮下注射針によって突き刺すことができるストッパーを有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性成分は、アンタゴニストまたは抗体である。ラベルまたは添付文書は、哺乳動物（治療を行うのにふさわしい患者（例えば、本明細書中に列挙した骨疾患などの骨疾患を罹患しているか罹患しやすい患者）など）の治療のために組成物を使用することを示し、アンタゴニストまたは抗体および任意の他の薬物の投与量および投与間隔に関する特定のガイダンスを提供する。製品は、さらに、薬学的許容可能な希釈用緩衝液（注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液、および／またはデキストロース溶液など）を含むさらなる容器を含み得る。製品は、さらに、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料（他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジが含まれる）を含み得る。
【０２７６】
本発明のさらなる詳細を、以下の非限定的な実施例によって例証する。明細書中の全ての引例の開示は、明確に本明細書中で参考として援用される。
【実施例】
【０２７７】
実施例１
血清生化学マーカーは、リツキシマブでの関節リウマチ治療に対する応答と相関する
背景：
リツキシマブ（ＲＴＸ；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）／ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標））を有するターゲティングＢ細胞は、関節リウマチ（ＲＡ）の新規の治療アプローチを提供することが見出されている。メトトレキサートが無効な活動性関節リウマチ患者におけるランダムな対照臨床試験は、単独使用またはシクロホスファミドもしくは継続的メトトレキサートと組み合わせたリツキシマブを２回注入する１つの治療単位によって２４週間（Ｅｄｗａｒｄｓら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２００４）上記；Ｐａｖｅｌｋａら（上記））および４８週間（Ｅｄｗａｒｄｓら、Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２００４）上記）で疾患活動性が有意に改善され、一部の患者では、２年間持続する（Ｅｍｅｒｙら（２００４）上記）ことを示した。しかし、ＲＡを治療するその作用機構またはＲＡ患者における種々の生物マーカーに対する効果についてはほとんど知られていない。特に、リツキシマブなどのＢ細胞枯渇療法が破骨細胞の活性に効果があるかどうかは知られていない。
【０２７８】
目的：
血清生物マーカーに対するリツキシマブの効果、そしてこのような効果が臨床所見と一致するのかどうかをさらに理解するために、炎症および骨代謝回転の多数の血清学的マーカーを調査した。
【０２７９】
方法：
メトトレキサート（ＭＴＸ）のみまたはＲＡにおけるリツキシマブの第ＩＩａ相研究の一部としてリツキシマブの１回の治療単位と組み合わせたＭＴＸのいずれかを投与されたＲＡ＋患者由来の血清サンプルを分析した。以下のマーカーを、ベースラインおよび２４週目に測定した：抗ＣＣＰ、ＣＲＰ、Ｓ１００、ＳＡＡ、Ｐ１ＮＰ、およびオステオカルシン（ＯＣ）。
【０２８０】
結果：
２４週目のＡＣＲ５０応答の主要エンドポイントは、ＭＴＸ投与を継続した２週間間隔のリツキシマブの２回の注入を受けた患者がＭＴＸのみを投与された患者よりも臨床応答が有意に高いことを証明した。生物マーカーデータを、ＭＴＸ群におけるベースラインからの２４週間後の変化率とＲＴＸ＋ＭＴＸ群との比較による非パラメーターアプローチを使用して分析した。ベースラインからの変化率の中央値を、以下の式を使用してプロットした。
Ｐｃｆｂ１（マーカー）＝（（勾配＿ｌｒ＊最後の訪問での研究期間）／切片＿ｌｒ）＊１００
（式中、勾配＿ｌｒ＝各患者についての線形回帰の勾配
切片＿ｌｒ＝各患者についての線形回帰の切片）
２４週目のＲＴＸ＋ＭＴＸ群で認められた臨床応答は、分析したマーカーの血清レベルの有意な変化にも付随している。結果を、表２に示す。
【０２８１】
【表２】
2008531699.tif 000019
＊両側ウィルコクスン順位和検定によるＰ値
１抗ＣＣＰは抗シトルリン化（ａｎｔｉ−ｃｉｔｒｕｌｉｎａｔｅｄ）ペプチド抗体である
２ＣＲＰはＣ反応性タンパク質である
３Ｓ１００は食細胞中のＣａ＋＋結合カルグラニュリンタンパク質であるＳ１００  Ａ８／９である
４ＳＡＡは血清アミロイドＡである
５Ｐ−１ＮＰはプロコラーゲン１型Ｎ末端プロペプチドである、６ＯＣはオステオカルシンである。
【０２８２】
結論：
分析した全てのマーカーは、ＭＴＸのみと比較して、ＲＴＸ＋ＭＴＸ群で２４週目に有意な変化を示した。特に、抗ＣＣＰ、ＣＲＰ、Ｓ１００、およびＳＡＡの血清レベルの変化により、リツキシマブの１回の短期間の治療単位によって炎症および自己抗体に著しい効果があることが示唆され、これは、認められた徴候および症状の実質的改善と一致する。総免疫グロブリンレベルは、リツキシマブでの治療によって有意な影響を受けなかった。さらに、ＯＣおよびＰ１ＮＰ血清レベルは、ＭＴＸ群と比較してＲＴＸ＋ＭＴＸ群で有意に増加し、ＲＡの徴候および症状に対するリツキシマブの効果が骨代謝回転の生物マーカーに対する好ましい効果によって補足されることが示唆され、骨密度および／または構造の損傷に対するリツキシマブの効果を示す。
【０２８３】
実施例２
動物の骨再造形
リツキシマブの活性を、骨再造形の動物モデルで証明することができる。したがって、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの体重を合わせ、各群につき１０匹ずつ７つの群に分けた。研究開始時に屠殺するラットのコントロール群、ビヒクルのみを投与するコントロール群、ＰＢＳ処置コントロール群、および骨成長を促進することが公知の化合物を投与したポジティブコントロール群を含む。３つの投薬量レベルのリツキシマブを、残りの３群に投与する。
【０２８４】
リツキシマブ、ポジティブコントロール化合物、ＰＢＳ、またはビヒクルのみを、１日に１回を３５日間皮下投与する。全動物に、屠殺の９日前および２日前にカルセインを注射する（各指定日にカルセインを２回注射した）。毎週体重を測定した。３５日サイクルの最終日に、動物を秤量し、眼窩または心臓穿刺によって採血する。血清カルシウム、リン酸塩、オステオカルシン、およびＣＢＣを決定する。評価のために両脚の骨（大腿骨および脛骨）および腰椎を取り出し、接着した軟組織を除去し、７０％エタノール中に保存する。骨再造形に対するリツキシマブの効果を、末梢定量的コンピュータ断層撮影法（ｐＱＣＴ；Ｆｅｒｒｅｔｔｉ，Ｂｏｎｅ  １７：３５３Ｓ−３６４Ｓ（１９９５）），二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ；Ｌａｖａｌ−Ｊｅａｎｔｅｔら、Ｃａｌｃｉｆ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｉｎｔｌ．５６：１４−１８（１９９５）；Ｃａｓｅｚら、Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｉｎｅｒａｌ  ２６：６１−６８（１９９４）、および／または組織形態測定によって評価する。
【０２８５】
リツキシマブのインビボでの投与により、破骨細胞形成および関連する骨吸収を阻害し、ヒトにおける骨減少障害を模倣する動物モデルで認められる破骨細胞数および活性の病理学的増加を遮断すると予想される。したがって、リツキシマブ（すなわち、ヒト化２Ｈ７）がこの動物モデルにおけるコントロールよりも骨再造形の増強に有効であると予想される。
【０２８６】
実施例３
骨粗鬆症におけるリツキシマブの臨床研究
骨粗鬆症と診断された患者を、リツキシマブで処置することができる。処置された患者を、Ｂ細胞悪性疾患を罹患させるために選択する。
【０２８７】
以下の投与計画にしたがって、リツキシマブを患者に静脈内（ＩＶ）投与する。
（Ａ）５０ｍｇ／ｍ２  ＩＶ（１日目）
１５０ｍｇ／ｍ２  ＩＶ（８、１５、および２２日目）
（Ｂ）１５０ｍｇ／ｍ２  ＩＶ（１日目）
３７５ｍｇ／ｍ２  ＩＶ（８、１５、および２２日目）
（Ｃ）３７５ｍｇ／ｍ２  ＩＶ（１、８、１５、および２２日目）
（Ｄ）１ｇ  ＩＶ（１および１５日目）
さらなる補助療法（上記の破骨細胞関連障害の治療薬など）を、リツキシマブ療法と組み合わせることができるが、好ましくは、患者を、治療単位を通して単剤としてリツキシマブで処置する。プラセボ（リツキシマブを含まないリツキシマブ処方物溶液）を使用して、個別の患者群にコントロールを投与する。
【０２８８】
標準的な化学パラメーターによって決定される骨の骨芽細胞の改善に基づいて、全応答率を決定する。さらに、骨密度計測および骨折率の評価を、生物マーカー（実施例１に記載のものなど）に加えたエンドポイントとして使用する。リツキシマブ（すなわち、ヒト化２Ｈ７）の投与により、プラセボコントロールと比較して、上記のように処置した患者において、生物マーカーによって決定した骨の骨芽細胞が改善され、骨密度が改善し、骨折率が減少すると予想される。
【０２８９】
実施例４
インビトロで形成された破骨細胞の同定
ＴＲＡＰは、破骨細胞様細胞を同定する酒石酸耐性酸ホスファターゼをいう。リツキシマブを、ＴＲＡＰアッセイのポジティブコントロールとして使用することができる。
【０２９０】
ＴＲＡＰでの細胞化学的染色は、インビボおよびインビトロでの破骨細胞の同定に広く使用されている。この試験では、ナフトールＡＳ−ＭＸホスフェート５ｍｇ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、０．５ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｗａｋｏ）に溶解する。３０ｍｇのファーストレッドバイオレットＬＢ塩（Ｓｉｇｍａ）および５０ｍＭ酒石酸ナトリウムを含む５０ｍｌの０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）を、混合物（ＴＲＡＰ染色液）に添加する。細胞を、３．７％（ｖ／ｖ）ホルムアルデヒドを含むＣａ２＋およびＭｇ２＋を含まないリン酸緩衝化生理食塩水で１０分間固定し、エタノール−アセトン（５０：５０、ｖ：ｖ）で再度１分間固定し、ＴＲＡＰ染色液と１０分間インキュベートする。ＴＲＡＰ陽性破骨細胞は、赤色細胞として認められる。経時的に破骨細胞以外の細胞がわずかに陽性になるので、インキュベーション期間は１０分間を超えるべきではない。染色後、細胞を、蒸留水で洗浄し、３つまたはそれを超える核を有するＴＲＡＰ陽性多核化細胞を、顕微鏡下で破骨細胞として計数する（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７８：３５５（１９８６））。リツキシマブまたはヒト化２Ｈ７がこのＴＲＡＰアッセイにおけるポジティブコントロールとして有効であると予想される。
【０２９１】
実施例５
歯周病のためのＣＤ２０抗体
リツキシマブを使用して、歯周病で喪失した骨または靭帯を再生することができる。このモデルでは、周囲の顎骨が２０％〜８０％減少した歯を剥がし、次いで、切開によって顎骨および歯根を露呈することによって全層歯肉弁を作製する。歯根を削って歯垢および歯石を除去する。リツキシマブを、２．５％ＨＰＭＣゲル中にて歯あたり１００ｇの用量で歯周ポケットに適用するか、リツキシマブを含む１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）を骨粉に添加して、歯あたり１００ｇのリツキシマブの投薬量を得る。材料を完全に混合し、露呈した歯周ポケットに適用する。両方の場合、歯肉弁を閉じ、縫合によって適所に保持する。リツキシマブをよりもむしろプラセボを使用したコントロールと比較して、リツキシマブ（すなわち、ヒト化２Ｈ７）を使用したこの歯周炎モデルにおいて周囲の顎骨が少なくとも部分的に再生されると予想される。
【０２９２】
実施例６
歯のインプラント
リツキシマブ活性を、歯インプラントモデルで証明することができる。ポリ乳酸−ポリグリコール酸フィルム（５０：５０）は、約３４０ｍｇのポリマー粒子（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ）を室温で１０ｍｌクロロホルムに溶解し、室温でスローエアフローフード（ｓｌｏｗ  ａｉｒ  ｆｌｏｗ  ｈｏｏｄ）にて溶媒を完全に蒸発させることによる溶媒鋳造物（ｓｏｌｖｅｎｔ  ｃａｓｔ）である。フィルムは、１０μｍの厚さである。それぞれ８０ｍｍ×４０ｍｍのシートに切断し、それにより、約２７０〜２９０ｍｇのポリマーが残存する。リツキシマブまたはヒト化２Ｈ７およびウサギ血清アルブミンの溶液をフィルム上に広げ、液体を蒸発させる。次いで、フィルムを直径０．９ｍｍのＫｉｒｓｃｈｎｅｒワイヤの周囲に巻き付けて直径１．５〜３．０ｍｍにし、冷エチレンオキシドガスを使用して滅菌する。これらのインプラントを、ＣＤ２０抗体よりもむしろプラセボを有するインプラントと共にラットに配置する。コントロールインプラントと比較して、リツキシマブまたはヒト化２Ｈ７を使用したこのインプラントモデルで骨量減少が予防されると予想される。
【０２９３】
実施例７
ＯＶＸ動物における骨量減少の予防
コントロールとしてエストロゲン処置群を使用したインビボでの投与アッセイを使用して、リツキシマブ活性を急性卵巣切除動物において証明することができる。この予防モデルでは、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの体重を合わせ、８つの群に分ける。これらの群は、研究開始時に屠殺するラットのコントロール群、３つのコントロール群（偽卵巣切除（偽ＯＶＸ）＋ビヒクルのみ、卵巣切除（ＯＶＸ）＋ビヒクルのみ、ＰＢＳ処置ＯＶＸ）、およびエストロゲンを投与したコントロールＯＶＸ群を含む。３つの投薬量レベルのリツキシマブを、ＯＶＸ動物の残りの３群に投与する。卵巣切除術（ＯＶＸ）が過食症を誘導するので、３５日間の研究にわたり、全ＯＶＸ動物について、摂餌量を偽ＯＶＸ動物と揃えた（ｐａｉｒ−ｆｅｄ）。
【０２９４】
リツキシマブ、ポジティブコントロール化合物、ＰＢＳ、またはビヒクルのみを、１日に１回、３５日間皮下投与する。あるいは、リツキシマブを、移植可能なペレット中に配合し、３５日間移植する。屠殺の９日前および２日前に、全動物（偽ＯＶＸ／ビヒクルおよびＯＶＸ／ビヒクル群が含まれる）にカルセインを腹腔内注射する（新規に形成された骨の適切な標識を確認するために、各指定日にカルセインを２回注射する）。毎週体重を測定した。３５日サイクルの最終日に、上記のように動物の血液および組織を処理する。リツキシマブ（すなわち、ヒト化２Ｈ７）は、このモデルの骨量減少の予防においてコントロール群よりも有効であると予想される。
【０２９５】
実施例８
慢性ＯＶＸ動物における骨への影響
リツキシマブ活性を、慢性ＯＶＸ動物において証明することができる。このモデルでは、いくつかのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、時間０に偽手術（偽ＯＶＸ）または卵巣切除術（ＯＶＸ）に供し、ベースラインコントロールとするために１０匹のラットを屠殺する。体重を毎週記録する。骨枯渇から６週間後、１０匹の偽ＯＶＸラットおよび１０匹のＯＶＸラットを、枯渇期間コントロールとして屠殺するために無作為に選択する。残りの動物のうち、１０匹の偽ＯＶＸラットおよび１０匹のＯＶＸラットを、プラセボ処置コントロールとして使用する。残りのＯＶＸ動物を、３〜５回のリツキシマブで５週間処置する。ポジティブコントロールとして、ＯＶＸ群のラットを、ＰＴＨ（このモデルで公知の同化剤）などの薬剤で処置する（Ｋｉｍｍｅｌら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３２：１５７７−１５８４（１９９３））。大腿骨、脛骨、および第１〜第４腰椎を切り出して回収し、骨形成に対する効果を決定する。左および右脛骨近位をｐＱＣＴ測定、海綿骨ミネラル濃度（ＢＭＤ）（重量測定）、および組織学のために使用する一方で、各脛骨の中軸（ｍｉｄｓｈａｆ）を皮質ＢＭＤまたは組織学に供する。生体力学試験前に中軸のｐＱＣＴスキャニングのための大腿骨を調製する。腰椎（ＬＶ）に関して、ＢＭＤのためにＬＶ２を処理し、非脱灰骨の組織学のためにＬＶ３を調製し、機械的試験のためにＬＶ４を処理する。リツキシマブまたはヒト化２Ｈ７で処置したＯＶＸ動物が、骨形成の増強において、１つまたは複数のこれらの試験でプラセボ処置コントロールよりも大腿骨、脛骨、および第１〜第４腰椎が改善すると予想される。
【０２９６】
実施例９
細胞送達ＣＤ２０抗体による歯槽骨量減少の阻害
破骨細胞は、進行性歯周炎時の過剰な骨吸収の媒介を担う。リツキシマブは、破骨細胞の分化および機能を阻害すると予想される。この動物モデルでは、自己細胞を、リツキシマブを発現するように操作し、当該分野で公知の方法を使用して、炎症部位（下顎、罹患歯に隣接する軟組織、または歯周靭帯）に恒久的に移植する。
【０２９７】
歯周病は、臨床的に関連する微生物であるポルフィロモナス・ジンジバリス由来のＬＰＳの反復注射（当該分野で認識されている歯周病モデル）によってＣ３Ｈマウス中に誘導する。調節可能な様式でリツキシマブを産生するように遺伝子操作されたＣ３Ｈ１０Ｔ１／２マウス線維芽細胞株を使用して、歯周病マウスを試験する。リツキシマブの産生を、例えば、飲料水での抗生物質の経口投与によって調節する。細胞を骨吸収部位に局所的に移植し、それにより、生体活性分子の全身投与または反復局所注射のいずれの必要性も回避される。任意選択的に、抗生物質を、歯周病のための細胞移植後に歯周ポケットに配置する。リツキシマブの局所送達のためのこの細胞ベースのアプローチは、歯槽骨吸収を阻害するように操作した組織を使用する。
【０２９８】
本明細書中で使用されるモロニーマウスレトロウイルスベクターは十分に特性決定されており、ヒトまたはマウスにおいて非免疫原性を示す。
【０２９９】
標準的なインサイチュハイブリッド形成（ＩＳＨ）を使用して、リツキシマブ産生を検出し、細胞インプラントレシピエントの集合した（ｐｏｐｕｌａｔｅｄ）下顎骨または他の骨組織を有する細胞中の破骨細胞表現型を特性決定する。
【０３００】
上記から、本発明の特定の実施形態を例示の目的のために本明細書中に記載しているが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく種々の修正形態を得ることができると認識される。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲以外で制限されない。
【図面の簡単な説明】
【０３０１】
【図１Ａ】図１Ａは、マウス２Ｈ７（配列番号１）、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異型（ｖａｒｉａｎｔ）（配列番号２）、およびヒトκ軽鎖サブグループＩ（配列番号３）の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のアミノ酸配列をそれぞれ比較した配列アラインメントである。２Ｈ７およびｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶＬのＣＤＲは以下である：ＣＤＲ１（配列番号４）、ＣＤＲ２（配列番号５）、およびＣＤＲ３（配列番号６）。
【図１Ｂ】図１Ｂは、マウス２Ｈ７（配列番号７）、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異型（配列番号８）、および重鎖サブグループＩＩＩのヒトコンセンサス配列（配列番号９）の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列をそれぞれ比較した配列アラインメントである。２Ｈ７およびｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶＨのＣＤＲは以下である：ＣＤＲ１（配列番号１０）、ＣＤＲ２（配列番号１１）、およびＣＤＲ３（配列番号１２）。
【０３０２】
図１Ａおよび図１Ｂでは、示すように、各鎖中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３をボックスで囲み、フレームワーク領域（ＦＲ１〜ＦＲ４）に隣接している。２Ｈ７は、マウス２Ｈ７抗体をいう。配列の２つの矢印の間のアスタリスクは、２つの配列の間で異なる位置を示す。残りの番号は、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅとして示した挿入図を含むＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に従う。
【図２】図２は、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異型（配列番号２）およびヒト化２Ｈ７．ｖ１３８変異型（配列番号２８）の軽鎖アミノ酸配列を比較した配列アラインメントである。
【図３】図３は、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異型（配列番号８）およびヒト化２Ｈ７．ｖ１３８変異型（配列番号２９）の重鎖アミノ酸配列を比較した配列アラインメントである。
【図１Ａ】
2008531699.tif 000020
【図１Ｂ】
2008531699.tif 000021
【図２】
2008531699.tif 000022
【図３】
2008531699.tif 000023
【配列表】
2008531699000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成20年2月15日(2008.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008531699000001.app
【国際調査報告】
2008531699.tif 000049
2008531699.tif 000050
2008531699.tif 000051
2008531699.tif 000052
2008531699.tif 000053
2008531699.tif 000054
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