(57)【要約】本発明は、腫瘍を検出するための方法を提供する。本発明は、腫瘍を診断するための方法を提供する。本発明は、腫瘍を位置決定するための方法を提供する。本発明は、腫瘍を画像化するための方法を提供する。本発明はまた、癌を検出するための方法に関する。本発明は、癌を診断するための方法に関する。本発明は、癌を位置決定するための方法に関する。本発明は、癌を画像化するための方法に関する。本発明は、癌を処置するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を診断するためまたは腫瘍を検出するための方法であって、
（ａ）細胞または組織における骨髄性ＤＡＰ１２結合レクチン−１（ＭＤＬ−１）発現のレベルを測定する工程；および
（ｂ）測定されたＭＤＬ−１のレベルと、コントロール由来の細胞もしくは組織におけるＭＤＬ−１の発現レベルとを比較する工程であって、該コントロールと比較した測定されたＭＤＬ−１発現のレベルの上昇は、癌、または腫瘍の存在に関連する、工程；
を包含する、方法。
【請求項２】
前記ＭＤＬ−１は、ポリペプチドまたは核酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
患者において腫瘍を診断または検出するための方法であって、
（ａ）ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを該患者に投与する工程；
（ｂ）該患者の細胞もしくは組織における該抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルを測定する工程；および
（ｃ）該測定された結合のレベルと、コントロールの細胞もしくは組織におけるＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルとを比較する工程であって、該コントロールと比較した該患者において測定された結合のレベルの上昇は、該腫瘍の存在に関連する、工程；
を包含する、方法。
【請求項９】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、活性化抗体、抑制性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体および融合タンパク質からなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメントおよびＦｖフラグメントからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、標識に結合される、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記標識は、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
癌を処置するための方法であって、該方法は、
ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を患者に投与する工程；
を包含し、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞傷害性因子に結合される、
方法。
【請求項１８】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、活性化抗体、抑制性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体および融合タンパク質からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメントおよびＦｖフラグメントからなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞傷害性因子は、薬物、毒素、放射線を放射する化合物、植物起源の分子、真菌起源の分子、細菌起源の分子、生物学的タンパク質、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記放射線を放射する化合物は、α線放射物質、β線放射物質またはγ線放射物質である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物は、腫瘍細胞を消散させるか、腫瘍細胞を殺すか、または腫瘍の大きさを減少させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
患者において腫瘍の存在を診断または検出するための方法であって、
（ａ）可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントを患者に投与する工程；
（ｂ）該患者の細胞もしくは組織におけるリガンドに対する該ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルを測定する工程；および
（ｃ）該測定された結合のレベルと、コントロールの細胞もしくは組織におけるリガンドに対する可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルとを比較する工程であって、該コントロールと比較した該患者において測定された結合のレベルの上昇は、腫瘍の存在と関連する、工程；
を包含する、方法。
【請求項２８】
前記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８を含むアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントは、標識に結合される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記標識は、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
癌を処置するための方法であって、該方法は、
リガンドに結合する可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントを含む組成物を患者に投与する工程；
を包含し、該ポリペプチドまたはそのフラグメントは、細胞傷害性因子に結合される、
方法。
【請求項３３】
前記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８を含むアミノ酸配列を有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞傷害性因子は、薬物、毒素、放射線を放射する化合物、植物起源の分子、真菌起源の分子、細菌起源の分子、生物学的タンパク質、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記放射線を放射する化合物は、α線放射物質、β線放射物質またはγ線放射物質である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記組成物は、腫瘍細胞を消散させるか、腫瘍細胞を殺すか、または腫瘍の大きさを減少させる、請求項３２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本願は、２００４年１１月８日出願の米国仮特許出願第６０／６２５，８２９号（その開示は、その全体が本明細書によって参考として援用される）に基づく優先権の利益を、米国特許法第１１９条（ｅ）項の下で主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、腫瘍（特に、固形腫瘍、皮膚の腫瘍（例えば、黒色腫）、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍）を検出するための新規方法、腫瘍を診断するための新規方法、腫瘍を位置決定するための新規方法、および腫瘍を画像化するための新規方法に関する。本発明はまた、癌（特に、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌）を検出するための新規方法、癌を診断するための新規方法、癌を画像化するための新規方法、および癌を処置するための新規方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
単球の活性化および炎症反応において役割を果たす数種のレセプター複合体（非特許文献１）は、膜貫通アダプター糖タンパク質ＤＡＰ１２と、Ｉｇスーパーファミリーのレセプター（非特許文献２；非特許文献３）またはＣ型レクチンスーパーファミリーのレセプター（非特許文献４）との非共有結合によって形成される。これらの結合は、ＤＡＰ１２の膜貫通ドメインに位置する負に荷電したアミノ酸残基（アスパラギン酸）と、これらのレセプターの膜貫通ドメインに位置する正に荷電したアミノ酸残基（リジン）との相互作用によって形成される（非特許文献５）。
【０００４】
ＤＡＰ１２は、ジスルフィド結合した、ホモダイマーのＩ型膜貫通糖タンパク質であり、ＤＡＰ１２は、その細胞内ドメインに位置する免疫レセプターベースチロシン活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ）（ＩＴＡＭ）を含む（非特許文献６；特許文献１；非特許文献７；非特許文献８）。ＤＡＰ１２の重要性は、ＩＴＡＭドメインによるものである（非特許文献１）。ＤＡＰ１２と非共有結合する、上記Ｉｇスーパーファミリー（非特許文献２；非特許文献３）および上記Ｃ型レクチンスーパーファミリー（非特許文献４）のレセプターの細胞内ドメインは、他の分子との相互作用を可能にするには短すぎるので、そのＤＡＰ１２の細胞質ドメインは、これらのレセプター複合体のシグナル伝達サブユニットを構成する。上記レセプターのリガンド結合サブユニットが係合すると、ＤＡＰ１２の細胞質ＩＴＡＭは、Ｓｒｃキナーゼによってリン酸化される。次いでＤＡＰ１２のＩＴＡＭは、Ｓｙｋ細胞質チロシンキナーゼと相互作用し、この相互作用は、活性化をもたらす事象のカスケードを開始する（非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８）。
【０００５】
ＤＡＰ１２は、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、顆粒球、樹状細胞および肥満細胞において発現され、これらは、少なくとも８種の異なるレセプターにシグナル伝達機能を提供する（非特許文献１；非特許文献８）。ＤＡＰ１２に結合するＣ型レクチンスーパーファミリーの単球性レセプターは、骨髄性ＤＡＰ１２結合レクチン−１（ＭＤＬ−１）（ＩＩ型膜貫通タンパク質）である。ＭＤＬ−１は、同定されかつクローニングされた最初のＤＡＰ１２結合分子であった（非特許文献４）。ＭＤＬ−１は、単球およびマクロファージにおいて独占的に発現される（非特許文献４）。ＤＡＰ１２の膜貫通ドメイン中の負に荷電した残基の存在は、ＭＤＬ−１のようなパートナーのレセプター（これは、その膜貫通ドメイン中に正に荷電した残基を有する）の非存在下において、ＤＡＰ１２の細胞表面における発現を妨げる。しかし、ＤＡＰ１２は、単独では細胞表面におけるその発現および機能に関して十分ではない。したがって、ＤＡＰ１２結合分子（例えば、ＭＤＬ−１）とＤＡＰ１２との組み合わせは、ＤＡＰ１２を介する特定の生理学的シグナルの伝達に寄与し得る（非特許文献９）。
【０００６】
腫瘍浸潤性白血球（例えば、骨髄系列の細胞またはマクロファージ）は、血流を離れて腫瘍の中に移動した白血球細胞である。マクロファージは、腫瘍の白血球浸潤の主要な成分である。腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、それらと腫瘍性細胞との相互作用において、複雑な二重の機能を有し、そして証拠は、それらが腫瘍の進行を促進する炎症回路の一部であることを示唆する（非特許文献１０；非特許文献１１）。ＴＡＭは、分極したＭ２マクロファージ集団であると報告されている。分極したＭ２細胞の性質を発現することによって、ＴＡＭは、腫瘍の増殖および進行、適応免疫、支質形成ならびに新脈管形成を調節する回路に関与する。特に、ＴＡＭＳは、腫瘍の進行および転移を促進する炎症の回路の構成成分である（Ｍａｎｔｏｖａｎｉら、前出）。
【０００７】
癌は、米国における２番目の死亡原因である（非特許文献１２）。現在、米国における死亡の４分の１は、癌に起因する（非特許文献１３）。癌は、それが局所期（ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｓｔａｇｅ）または遠隔期（ｄｉｓｔａｎｔ  ｓｔａｇｅ）においてよりもむしろ限局期（ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｓｔａｇｅ）にて早期に診断される場合、より容易かつ上首尾に処置される（非特許文献１３）。処置の選択肢としては、外科手術、化学療法、放射線治療および免疫療法が挙げられる。治療の主要な様式は、局所の癌および限局−局所（ｌｏｃａｌ−ｒｅｇｉｏｎａｌ）の癌の両方に対しては外科手術または放射線治療のいずれかであるが、化学療法は、全身の部位に対して最適である。臨床上診断された多くの固形腫瘍において、外科手術よる除去は、主要な治療手段と見なされる。
【０００８】
現在利用可能な癌治療のための方法は、再発の予防において限定的な成功を納めているか、またはこれらの方法は、深刻でありかつ望ましくない副作用を生じているかのいずれかである。さらに、癌の迅速かつ正確な検出を可能にする方法の開発は、医学界（ｍｅｄｉｃａｌ  ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ）の課題であり続ける。多数の癌に関連した死亡、ならびに現在利用可能な検出方法および処置方法の不適切性に鑑みて、癌を検出および処置するためのさらに有効な化合物に対する必要性が、存在する。したがって、腫瘍を検出する方法に対する必要性、および癌を処置する必要性が、存在する。
【特許文献１】国際公開第９９／０６５５７号パンフレット
【非特許文献１】Ｇｉｎｇｒａｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．、２００１年、第３８巻、ｐ．８１７−８２４
【非特許文献２】Ｂｏｕｃｈｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、第１６４巻、ｐ．４９９１−４９９５
【非特許文献３】Ｄｉｅｔｒｉｃｈら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、第１６４巻、ｐ．９−１２
【非特許文献４】Ｂａｋｋｅｒら、ＰＮＡＳ  Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９９９年、第９６巻、ｐ．９７９２−９７９６
【非特許文献５】Ｇｉｎｇｒａｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．、２００１年、第３８巻、ｐ．８１７−８２４
【非特許文献６】Ｌａｎｉｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９８年、第３９１巻、ｐ．７０３−７０７
【非特許文献７】ＣａｍｐｂｅｌｌおよびＣｏｌｏｎｎａ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１９９９年、第３１巻、ｐ．６３１−６３６
【非特許文献８】ＬａｎｉｅｒおよびＢａｋｋｅｒ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、２０００年、第２１巻、ｐ．６１１−６１４
【非特許文献９】Ｎｏｃｈｉら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２００３年、第１６２巻、ｐ．１１９１−１２０１
【非特許文献１０】Ｍａｎｔｏｖａｎｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１９９２年、第１３巻、ｐ．２６５−２７０
【非特許文献１１】Ｍａｎｔｏｖａｎｉら、ＴＲＥＮＤＳ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００２年、第２３巻、ｐ．５４９−５５５
【非特許文献１２】Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ、２００４年
【非特許文献１３】Ｊｅｍａｌら、ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｃｌｉｎ、２００４年、第５４巻、ｐ．８−２９
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌を有する患者由来の腫瘍（特に、固形腫瘍）に関連するＭＤＬ−１発現の上昇したレベルを検出することにより、癌を検出するための方法、癌を診断するための方法、癌を位置決めするための方法、および癌を画像化するための方法を提供することによって、前述の必要性に取り組む。本発明はまた、腫瘍（特に、固形腫瘍、皮膚の腫瘍（例えば、黒色腫）、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍）を検出するための方法、腫瘍を診断するための方法、腫瘍を位置決定するための方法、および腫瘍を画像化するための方法を提供することによって、これらの必要性に取り組む。さらに、本発明は、ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、癌を診断するための方法、癌を位置決定するための方法、癌を画像化するための方法、および癌を処置するための方法を提供することによって、これらの必要性に取り組む。さらに、本発明は、可溶性ＭＤＬ−１タンパク質またはそのフラグメントを使用して、癌（例えば、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌）を診断するための方法、癌を位置決定するための方法、癌を画像化するための方法、および癌を処置するための方法を提供することによって、これらの必要性に取り組む。
【００１０】
本発明は、癌を診断するための方法であって、（ａ）細胞または組織における骨髄性ＤＡＰ１２結合レクチン−１（ＭＤＬ−１）発現のレベルを測定する工程；および（ｂ）測定されたＭＤＬ−１のレベルと、コントロール由来の細胞もしくは組織におけるＭＤＬ−１の発現レベルとを比較する工程であって、上記コントロールと比較した測定されたＭＤＬ−１発現のレベルの上昇は、癌に関連する、工程；を包含する方法を提供する。上記ＭＤＬ−１が、ポリペプチドまたは核酸である上記方法もまた、提供される。上記ＭＤＬ−１が、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するか、または上記ＭＤＬ−１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む上記方法；および上記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する上記方法もまた、提供される。上記癌が、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される上記方法もまた、提供される。
【００１１】
本発明のなお別の実施形態は、腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）細胞または組織におけるＭＤＬ−１発現のレベルを測定する工程；および（ｂ）測定されたＭＤＬ−１のレベルと、コントロール由来の細胞もしくは組織におけるＭＤＬ−１の発現レベルとを比較する工程であって、上記コントロールと比較した測定されたＭＤＬ−１発現のレベルの上昇は、腫瘍の存在に関連する、工程；を包含する方法を提供する。上記ＭＤＬ−１が、ポリペプチドまたは核酸である上記方法もまた、提供される。上記ＭＤＬ−１が、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するか、または上記ＭＤＬ−１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む上記方法；および上記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する上記方法もまた、提供される。上記腫瘍が、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される上記方法もまた、提供される。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、患者において腫瘍を診断するための方法であって、（ａ）ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを上記患者に投与する工程；（ｂ）上記患者の細胞もしくは組織における上記抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルを測定する工程；および（ｃ）上記測定された結合のレベルと、コントロールの細胞もしくは組織においてＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルとを比較する工程であって、上記コントロールと比較した上記患者において測定された結合のレベルの上昇は、上記腫瘍の存在に関連する、工程；を包含する方法を提供する。上記ＭＤＬ−１が、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するか、または上記ＭＤＬ−１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む上記方法；および上記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する上記方法もまた、提供される。上記腫瘍が、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される上記方法；ならびに上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、活性化抗体、抑制性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、単鎖抗体および融合タンパク質からなる群より選択される上記方法；または上記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、およびＦｖフラグメントからなる群より選択される上記方法；または上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、標識に結合される上記方法；または上記標識が、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される上記方法もまた、提供される。
【００１３】
別の実施形態において、本発明は、腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを患者に投与する工程；（ｂ）上記患者の細胞もしくは組織における上記抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルを測定する工程；および（ｃ）上記測定された結合のレベルと、コントロールの細胞もしくは組織におけるＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルとを比較する工程であって、上記コントロールと比較した上記患者において測定された結合のレベルの上昇は、上記腫瘍の存在に関連する、工程；を包含する方法を提供する。上記ＭＤＬ−１が、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するか、または上記ＭＤＬ−１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む上記方法；および上記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する上記方法もまた、提供される。上記腫瘍が、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される上記方法；または上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、活性化抗体、抑制性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体および融合タンパク質からなる群より選択される上記方法；または上記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、およびＦｖフラグメントからなる群より選択される上記方法；または上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、標識に結合される上記方法；または上記標識が、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される上記方法もまた、提供される。
【００１４】
別の実施形態において、本発明は、ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を患者に投与する工程を包含する、癌を処置するための方法であって、上記抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞傷害性因子に結合される、方法を提供する。上記ＭＤＬ−１が、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するか、または上記ＭＤＬ−１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む上記方法；および上記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する上記方法もまた、提供される。上記癌が、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される上記方法；または上記抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、活性化抗体、抑制性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体および融合タンパク質からなる群より選択される上記方法；または上記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、およびＦｖフラグメントからなる群より選択される上記方法もまた、提供される。上記細胞傷害性因子が、薬物、毒素、放射線を放射する化合物、植物起源の分子、真菌起源の分子、細菌起源の分子、生物学的タンパク質、およびそれらの混合物からなる群より選択される上記方法；または上記放射線を放射する化合物が、α線放射物質、β線放射物質またはγ線放射物質である上記方法；または上記組成物が、腫瘍細胞を消散させるか、腫瘍細胞を殺すか、または腫瘍の大きさを減少させる上記方法もまた、提供される。
【００１５】
別の実施形態において、本発明は、リガンドに結合する可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントを含む組成物を患者に投与する工程を包含する、癌を処置するための方法であって、上記ポリペプチドまたはそのフラグメントは、細胞傷害性因子に結合される、方法を提供する。上記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８を含むアミノ酸配列を有する上記方法もまた、提供される。上記癌が、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される方法もまた、提供される。上記細胞傷害性因子が、薬物、毒素、放射線を放射する化合物、植物起源の分子、真菌起源の分子、細菌起源の分子、生物学的タンパク質、およびそれらの混合物からなる群より選択される上記方法；または上記放射線を放射する化合物が、α線放射物質、β線放射物質またはγ線放射物質である上記方法；または上記組成物が、腫瘍細胞を消散させるか、腫瘍細胞を殺すか、または腫瘍の大きさを減少させる上記方法もまた、提供される。
【００１６】
別の実施形態において、本発明は、腫瘍の存在を診断するための方法であって、（ａ）可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントを患者に投与する工程；（ｂ）上記患者の細胞もしくは組織におけるリガンドに対する上記ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルを測定する工程；および（ｃ）上記測定された結合のレベルと、コントロールの細胞もしくは組織におけるリガンドに対する可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルとを比較する工程であって、上記コントロールと比較した上記患者において測定された結合のレベルの上昇は、腫瘍の存在と関連する、工程；を包含する方法を提供する。上記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８を含むアミノ酸配列を有する上記方法もまた、提供される。上記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される上記方法；または上記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドもしくはそのフラグメントが、標識に結合される上記方法；または上記標識が、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される上記方法もまた、提供される。
【００１７】
別の実施形態において、本発明は、患者において腫瘍の存在を検出するための方法であって、（ａ）可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントを患者に投与する工程；（ｂ）上記患者の細胞もしくは組織におけるリガンドに対する上記ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルを測定する工程；および（ｃ）上記測定された結合のレベルと、コントロールの細胞もしくは組織におけるリガンドに対する可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルとを比較する工程であって、上記コントロールと比較した上記患者において測定された結合のレベルの上昇は、腫瘍の存在と関連する、工程；を包含する方法を提供する。上記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８を含むアミノ酸配列を有する上記方法もまた、提供される。上記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される上記方法；または上記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドもしくはそのフラグメントが、標識に結合される上記方法；または上記標識が、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される上記方法もまた、提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（定義）
本明細書中で使用される場合、用語「癌」とは、細胞の正常な制御機構が失われ、したがって増殖を調節していない細胞の群（通常は、単一の細胞に由来する）をいう。癌性組織または悪性疾患としては、しばしば癌と称される、血液および血液を形成する組織の癌性組織または悪性疾患（例えば、白血病およびリンパ腫）ならびに固形腫瘍が挙げられる。このような癌は、癌腫または肉腫であり得る。
【００１９】
本明細書中で使用される場合、用語「腫瘍」とは、異常な増殖または異常な塊をいう。腫瘍は、良性または癌性（悪性）であり得る。良性腫瘍は、癌ではない。良性腫瘍は、身体から取り除かれ得、その後ほぼ繰り返して増殖することはない。良性腫瘍由来の細胞は、周囲の組織または身体の他の部分に拡散しない。
【００２０】
癌性細胞が、成長し、そして増殖する場合、その癌性細胞は、腫瘍である癌性組織の塊を形成し、癌性組織は、隣接正常組織を侵し、そして破壊する。悪性腫瘍は、癌である。悪性腫瘍は、通常、取り除かれ得るが、悪性腫瘍は、繰り返して増殖し得る。悪性腫瘍由来の細胞は、近傍の組織および近傍の器官を侵し、そしてそれらに損傷を与え得る。また、癌細胞は、悪性腫瘍から離れて、血流またはリンパ系に進入し得、このことは、癌細胞が原発性腫瘍（すなわち、最初の癌）から拡散して、他の器官において新しい腫瘍を形成する手段である。身体における癌の拡散は、転移と称される（Ｗｈａｔ  Ｙｏｕ  Ｎｅｅｄ  ｔｏ  Ｋｎｏｗ  Ａｂｏｕｔ  Ｃａｎｃｅｒ−ａｎ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．００−１５６６；２０００年９月２６日掲載、２００２年９月１６日更新（２００２））。
【００２１】
本明細書中で使用される場合、用語「固形腫瘍」とは、組織の異常な増殖または塊をいい、それは、通常、嚢胞領域も液体領域も含まない。固形腫瘍は、良性（癌性ではない）または悪性（癌性）であり得る。種々の型の固形腫瘍が、それらを形成する細胞の型にちなんで称される。固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫、およびリンパ腫である。白血病（血液の癌）は、一般的に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｅｒｍｓ）。
【００２２】
本明細書中で使用される場合、用語「原発性癌」とは、最初の腫瘍または第１の腫瘍をいう。癌は、身体のあらゆる器官または組織において起こり得る。癌は、通常、それが発生する身体の部分または細胞の型にちなんで称される（Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ：Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｓｗｅｒｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｆａｃｔｓ  ６．２０，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（２００４年９月１日に再考された）（２００４））。
【００２３】
本明細書中で使用される場合、用語「インサイチュの癌種」とは、癌性細胞が増殖し始めた組織内になおも含まれ、未だ身体の他の部分に侵入も拡散もしていない癌性細胞をいう。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、用語「癌腫」とは、身体の表面を覆い、ホルモンを産生し、そして腺を構成する細胞である上皮細胞の癌をいう。癌腫の例は、皮膚の癌、肺の癌、結腸の癌、胃の癌、乳房の癌、前立腺の癌および甲状腺の癌である。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、用語「白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）」とは、ヘモグロビンを含まない血球をいう。白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）はまた、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）と称される。白血球としては、リンパ球、好中球、好酸球、マクロファージおよび肥満細胞が挙げられる。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、用語「腫瘍浸潤性白血球」（例えば、骨髄系列の細胞またはマクロファージ）とは、血流から離れ、そして腫瘍に移動した白血球をいう。したがって、腫瘍浸潤性白血球は、腫瘍特異性を有し得る。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、用語「発現状態」は、遺伝子およびその産物（例えば、ｍＲＮＡ発現のレベル）の発現、機能および調節、発現した遺伝子産物（例えば、核酸配列およびアミノ酸配列）の完全性、ならびにこれらの分子に対する転写改変および翻訳改変に関与する、種々の因子を広くいうために使用される。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体分子」とは、抗体全体（例えば、ＩｇＧ（好ましくは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）およびそのフラグメント（好ましくは、抗原結合フラグメント）をいう。抗体フラグメントとしては、Ｆａｂ抗体フラグメント、Ｆ（ａｂ）２抗体フラグメント、Ｆｖ抗体フラグメント、単鎖Ｆｖ抗体フラグメントおよびｄｓＦｖ抗体フラグメントが挙げられる。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、用語「被験体」もしくは「患者」または「宿主」とは、あらゆる生物体（好ましくは、動物、より好ましくは、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ウシ、イヌ、ネコ、ウシ、チンパンジー、ゴリラ）、そして最も好ましくは、ヒト）をいう。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、用語「コントロール」は、癌を有さない患者、腫瘍を有さない患者、癌を有さない患者由来のサンプル、腫瘍を有さない患者由来のサンプル、癌を有する患者由来の非癌性サンプル、腫瘍を有する患者由来の非腫瘍サンプルを含む。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、用語「投与」および「処置」とは、それが動物、ヒト、実験の被験体、細胞、組織、器官、または生物学的流体に適用される場合、外因性の薬学的因子、治療因子、診断因子、化合物、もしくは組成物の、動物、ヒト、被験体、細胞、組織、器官、または生物学的流体への接触をいう。「投与」および「処置」はまた、インビトロの処置、インビボの処置およびエキソビボの処置を意味する。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、治療因子の用語「治療有効量」は、意味深い患者の利益を示す（すなわち、処置される状態の症状の減少、予防、または改善を生じる）のに十分である、薬学的処方物の各活性成分の量として定義される。薬学的処方物が、診断因子を含む場合、「治療有効量」は、シグナル、画像、または他の診断パラメータをもたらすのに十分である量として定義される。薬学的処方物の有効量は、個体の感受性の程度、個体の年齢、性別、および体重、ならびに個体の特異体質性の反応などの因子によって変動する。例えば、米国特許第５，８８８，５３０号を参照のこと。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、用語「外因性の」とは、文脈に依存して、生物体外、細胞外、またはヒトの身体外で生成される物質をいう。本明細書中で使用される場合、用語「内因性の」とは、文脈に依存して、細胞内、生物体内、またはヒトの身体内で生成される物質をいう。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、用語「組換え」とは、天然で隣接せず、互いに融合されている、２以上の核酸または２以上のタンパク質をいう。この用語はまた、ヒトの介入によって変更された（例えば、翻訳後に修飾されたか、または翻訳後に変異させられた）、核酸またはタンパク質を指す。例えば、野生型コドンは、同時に核酸配列認識部位を導入または除去しながら、同じアミノ酸残基をコードする縮重（ｒｅｄｕｎｄａｎｔ）コドンによって置換され得るか、または同時に核酸配列認識部位を導入または除去しながらの保存的置換であり得る。同様に、所望の機能をコードする核酸セグメントは、天然において一緒に見出されない機能の所望される組み合わせをコードする単一の遺伝的実体を産生するために融合され得る。制限酵素認識部位は、しばしば、このような人工的な操作の標的であるが、他の部位特異的な標的（例えば、プロモーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、コントロール配列、または他の有用な特徴）が、設計によって組み込まれ得る。以下に記載されるような、検出または精製のためのエピトープタグをコードする配列もまた、組み込まれ得る。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」または「核酸分子」とは、一本鎖形態、二本鎖形態もしくはその他の、リボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジンまたはシチジン）のリン酸エステルポリマー形態（「ＲＮＡ分子」）のリン酸エステルポリマー形態もしくはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、またはデオキシシチジンのリン酸エステルポリマー形態（「ＤＮＡ分子」）、またはその任意のホスホエステルアナログ（例えば、ホスホロチオエートおよびチオエステル）のリン酸エステルポリマー形態をいう。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド配列」、「核酸配列」または「ヌクレオチド配列」とは、核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）における一連のヌクレオチド塩基（「ヌクレオチド」ともいわれる）をいい、そしてこれらの用語は、２以上のヌクレオチドのあらゆる鎖を意味する。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、用語「コード配列」または発現産物（例えば、ＲＮＡ、ポリペプチド、タンパク質、または酵素）を「コードする」配列は、発現された場合にその産物の生成をもたらすヌクレオチド配列である。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子」とは、リボヌクレオチドもしくはアミノ酸の特定の配列（これは、ＲＮＡ分子、タンパク質または酵素の全てまたは１つ以上の部分を含む）をコードするか、またはこれらの配列に対応し、かつ調節ＤＮＡ配列（プロモーター配列）を含んでも、含まなくてもよいＤＮＡ配列を意味し、その調節ＤＮＡ配列は、例えば、遺伝子が発現される条件を決定する。遺伝子は、ＤＮＡから、アミノ酸配列に翻訳され得るＲＮＡ、またはアミノ酸配列に翻訳されない可能性があるＲＮＡへと転写され得る。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、ＤＮＡの用語「増幅」とは、ＤＮＡ配列の混合物内の特定のＤＮＡ配列の濃度を増加させるためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の使用をいう。ＰＣＲの記載については、Ｓａｉｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、（１９８８）、２３９：４８７を参照のこと。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド」とは、目的とするゲノムＤＮＡ分子、ｃＤＮＡ分子、または遺伝子をコードするｍＲＮＡ分子、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくは他の核酸にハイブリダイズし得る、一般的には少なくとも１０ヌクレオチド（例えば、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチドまたは１４ヌクレオチド）、好ましくは少なくとも１５ヌクレオチド（例えば、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチドまたは１９ヌクレオチド）、そしてより好ましくは少なくとも２０ヌクレオチド（例えば、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチドまたは３０ヌクレオチド）、好ましくは１００ヌクレオチド以下（例えば、４０ヌクレオチド、５０ヌクレオチド、６０ヌクレオチド、７０ヌクレオチド、８０ヌクレオチドまたは９０ヌクレオチド））からなる、核酸をいう。オリゴヌクレオチドは、例えば、３２Ｐ−ヌクレオチド、３Ｈ−ヌクレオチド、１４Ｃ−ヌクレオチド、３５Ｓ−ヌクレオチド、または標識（例えば、ビオチン）が共有結合されているヌクレオチドを組み込むことによって、標識され得る。１つの実施形態において、標識オリゴヌクレオチドは、核酸の存在を検出するためのプローブとして使用され得る。別の実施形態において、オリゴヌクレオチド（その一方または両方が標識され得る）は、遺伝子の全長または遺伝子のフラグメントをクローニングすること、または核酸の存在を検出することのいずれかのために、ＰＣＲプライマーとして使用され得る。一般に、オリゴヌクレオチドは、合成によって、好ましくは核酸合成機にて、調製される。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「プロモーター」または「プロモーター配列」とは、細胞中でＲＮＡポリメラーゼに（例えば、直接にか、または他のプロモーター結合タンパク質もしくはプロモーター結合物質を介して）結合可能であり、かつコード配列の転写を開始する、ＤＮＡ調節領域を指す。プロモーター配列は、一般に、転写開始部位によってその３’末端で境界を接し、そして上流（５’方向）に延びて、任意のレベルで転写を開始するために必要な最小限の数の塩基またはエレメントを含む。このプロモーター配列内には、転写開始部位（簡便には、例えば、ヌクレアーゼＳ１を用いるマッピングによって規定される）、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合を担うタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が、見出され得る。このプロモーターは、他の発現制御配列（エンハンサー配列およびリプレッサー配列を含む）、または本発明の核酸と、作動可能に結合され得る。
【００４２】
本明細書中で使用される場合、用語「発現する」および「発現」は、遺伝子、ＲＮＡ配列もしくはＤＮＡ配列中の情報が明らかになるのを可能にすることまたはそれを引き起こすこと（例えば、対応する遺伝子の転写および翻訳に関与する細胞機能を活性化することによって、タンパク質を生成すること）を意味する。ＤＮＡ配列は、細胞中でかまたは細胞によって、「発現産物」（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）またはタンパク質（例えば、抗体またはそのフラグメント））を形成するように発現される。その発現産物自体はまた、その細胞によって「発現される」といわれ得る。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、用語「ベクター」、「クローニングベクター」および「発現ベクター」は、宿主を形質転換し、そして必要に応じて、導入された配列の、発現および／または複製を促進するように、ＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列が宿主細胞中に導入され得るビヒクル（例えば、プラスミド）を意味する。
【００４４】
本明細書中で使用される場合、用語「トランスフェクション」または「形質転換」とは、核酸を細胞中に導入することを意味する。導入される遺伝子または配列は、「クローン」と称され得る。その導入されるＤＮＡまたはＲＮＡを受容する宿主細胞は、「形質転換」されており、これは、「形質転換体」または「クローン」である。宿主細胞に導入されるＤＮＡまたはＲＮＡは、任意の供給源由来であり得、これらの供給源は、宿主細胞と同じ属もしくは種の細胞、または異なる属もしくは種の細胞を含む。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、用語「宿主細胞」は、細胞による物質の生産（例えば、細胞による遺伝子、ＤＮＡ配列もしくはＲＮＡ配列、タンパク質または酵素の、発現または複製）のために、選択されるか、改変されるか、トランスフェクトされるか、形質転換されるか、増殖させられるか、または任意の方法で使用されるか、もしくは操作される、任意の生物体の任意の細胞を意味する。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、用語「発現系」は、ベクターによって運ばれそして宿主細胞に導入されるタンパク質または核酸を、適切な条件下で発現し得る、宿主細胞および適合性ベクターを意味する。一般的な発現系としては、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主細胞およびプラスミドベクター、昆虫宿主細胞およびバキュロウイルスベクター、ならびに哺乳動物宿主細胞およびベクターが挙げられる。適切な細胞としては、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞、ＨｅＬａ細胞ならびにＮＩＨ  ３Ｔ３細胞およびＮＳＯ細胞（Ｉｇ非生産性のマウス骨髄腫細胞株）が挙げられる。本発明の抗体または抗原結合フラグメントをコードする核酸は、米国特許第４，９５２，４９６号；同第５，６９３，４８９号および同第５，８６９，３２０号ならびにＤａｖａｎｌｏｏら、（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１、２０３５−２０３９；Ｓｔｕｄｉｅｒら、（１９８６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８９：１１３−１３０；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、（１９８７）Ｇｅｎｅ  ５６：１２５−１３５；およびＤｕｎｎら、（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６８：２５９（これらは、本明細書中に参考として援用される）に開示されるようなＥ．ｃｏｌｉ／Ｔ７発現系において、高レベルで発現され得る。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、用語  ポリヌクレオチド配列の「配列保存的改変体」とは、所定のコドンの１つ以上のヌクレオチドの変化が、その位置においてコードされるアミノ酸の変化をもたらさない、改変体をいう。本発明の抗体の機能保存的改変体もまた、本発明によって企図される。本明細書中で使用される場合、用語「機能保存的改変体」とは、タンパク質または酵素中の１つ以上のアミノ酸残基が、そのポリペプチドの全体的な立体配座および機能を変えることなく変化された、改変体をいい、アミノ酸を同様の特性を有するアミノ酸で置換することを包含するが、これには、決して限定されない。同様の特性を有するアミノ酸は、当該分野で周知である。例えば、交換可能であり得る極性／親水性アミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、スレオニン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸が挙げられる；交換可能であり得る非極性／疎水性アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、およびメチオニンが挙げられる；交換可能であり得る酸性アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられ、交換可能であり得る塩基性アミノ酸としては、ヒスチジン、リジンおよびアルギニンが挙げられる。
【００４８】
本明細書中で使用される場合、用語「単離された核酸」または「単離されたポリペプチド」とは、細胞中において通常は見出される他の成分から部分的にかまたは完全に分離されているか、または組換えＤＮＡ発現系中にある、それぞれ、核酸（例えば、ＲＮＡ分子もしくはＤＮＡ分子、または混合ポリマー）またはポリペプチドをいい得る。これらの成分としては、細胞膜、細胞壁、リボソーム、ポリメラーゼ、血清成分、および隣接ゲノム配列が挙げられるが、これらに限定されない。したがって、この用語は、その天然に存在する環境から分離されている核酸を含み、そして組換えＤＮＡ単離物またはクローニングされたＤＮＡ単離物、および化学的に合成されたアナログまたは異種の系によって生物学的に合成されたアナログを含み得る。単離された核酸または単離されたポリペプチドは、好ましくは、本質的に均質な分子組成であるが、いくらかの不均質性を含み得る。
【００４９】
本明細書中で使用される場合、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、全てのこのような改変（特に、宿主細胞中でポリヌクレオチドを発現することによって合成されるポリペプチドに存在するもの）を包含する。
【００５０】
本明細書中で使用される場合、用語「アンチセンス」とは、特定のＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチド配列を有する任意の組成物をいう。用語「アンチセンス鎖」は、「センス」鎖と相補的である核酸鎖についての言及に使用される。アンチセンス分子は、ペプチド核酸を含み、そしてそのアンチセンス分子は、合成または転写を含む任意の方法によって産生され得る。一旦細胞に導入されると、相補ヌクレオチドは、その細胞によって産生される天然の配列と組み合わさって二重鎖を形成し、そして転写または翻訳のいずれかをブロックする。呼称「ネガティブ」は、ときに、アンチセンス鎖についての言及に使用され、そして「ポジティブ」は、ときに、センス鎖についての言及に使用される。
【００５１】
本明細書中で使用される場合、用語「抗原決定基」とは、特定の抗体との接触を行なう分子のフラグメント（すなわち、エピトープ）をいう。タンパク質またはタンパク質のフラグメントは、宿主動物を免疫化するために使用され、そのタンパク質の多くの領域は、そのタンパク質の所定の領域または三次元構造に対して特異的に結合する抗体の産生を誘導し得る；これらの領域または構造は、抗原決定基と称される。抗原決定基は、抗体に対する結合に関して、インタクトな抗原（すなわち、免疫応答を誘発するために使用される免疫原）と競合し得る。
【００５２】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体分子」は、抗体およびそのフラグメント（好ましくは、抗原結合フラグメント）を包含するが、これらに限定されない。この用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異性抗体、Ｆａｂ抗体フラグメント、Ｆ（ａｂ）２抗体フラグメント、Ｆｖ抗体フラグメント（例えば、ＶＨまたはＶＬ）、単鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）フラグメント、およびｄｓＦｖ抗体フラグメントを包含する。さらに、本発明の抗体分子は、完全ヒト抗体、またはキメラ抗体であり得る。
【００５３】
本明細書中で使用される場合、用語「Ｋｏｆｆ」とは、抗体／抗原複合体からのその抗体の解離についての解離速度定数（ｏｆｆ−ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）をいう。
【００５４】
本明細書中で使用される場合、用語「Ｋｏｎ」とは、抗体が抗体と結合する速度をいう。
【００５５】
本明細書中で使用される場合、用語「Ｋｄ」とは、特定の抗体／抗原相互作用の解離定数をいう。Ｋｄ＝Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎ。
【００５６】
本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体（すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、天然に存在する可能性がる変異を除いて同一である）をいう。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対する。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養物（本質的に、他の免疫グロブリンによって汚染されていない）によって合成され得るという点で、有利である。修飾語「モノクローナル」とは、実質的に均質な抗体の集団から得られたものとしてのその抗体の特徴を示し、そしてその修飾語は、任意の特定の方法によるその抗体の産生を必要とするものとしては、解釈されるべきではない。上述されるように、本発明に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって生成され得る。
【００５７】
本明細書中で使用される場合、用語「ポリクローナル抗体」とは、他の１つ以上の同一でない抗体とともに産生されたか、またはそのような抗体の存在下で産生された抗体をいう。一般に、ポリクローナル抗体は、Ｂリンパ球から、同一でない抗体を産生した他の数種のＢリンパ球の存在下で産生される。通常、ポリクローナル抗体は、免疫化された動物から直接得られる。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、用語「二重特異的抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）または二機能性抗体」とは、２つの異なる重鎖／軽鎖の対および２つの異なる結合部位を有する、人工的なハイブリッド抗体をいう。二重特異的抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む、種々の方法によって産生され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉら、（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、（１９９２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照のこと。さらに、二重特異的抗体は、「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、（１９９３）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８）、または「Ｊａｎｕｓｉｎｓ」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、（１９９１）ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  第７補遺：５１−５２）として形成され得る。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、用語「抗イディオタイプ抗体」または「抗イディオタイプ」とは、別の抗体分子の抗原結合領域または可変領域（イディオタイプと称される）に対する抗体をいう。Ｊｅｒｎｅら（Ｊｅｒｎｅ，Ｎ．Ｋ．，（１９７４）Ａｎｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ｐａｒｉｓ）１２５ｃ：３７３およびＪｅｒｎｅ，Ｎ．Ｋ．ら、（１９８２）ＥＭＢＯ  １：２３４）により開示されるように、所定の抗原（例えば、ＭＤＬ−１ペプチド）に対するパラト−プ（抗原結合部位）を発現する抗体分子による免疫化は、一群の抗抗体を生成し、その抗抗体のいくつかは、その抗原と、そのパラト−プに対する相補的構造を共有する。その抗イディオタイプ抗体の部分集団による免疫化は、その後、最初の抗原に対して反応性である、抗体の部分集団または免疫細胞部分集団を産生する。
【００６０】
本明細書中で使用される場合、用語「完全ヒト抗体」とは、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体をいう。完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生される場合、マウス糖質鎖を含み得る。同様に、「マウス抗体」とは、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体をいう。
【００６１】
「ヒト化」抗ＭＤＬ−１ペプチド抗体もまた、本発明の範囲内にある。本明細書中で使用される場合、用語「ヒト化」または「完全ヒト化」とは、ヒト抗体フレームワークに移植された、親抗体（例えば、マウス抗体）の６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸配列を含む抗体をいう。非ヒト（例えば、マウスまたはニワトリ）抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリンであり、これは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む。大部分に関して、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、マウス、ニワトリ、ラット、またはウサギ）の相補性決定領域由来の残基で置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、そのヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基もまた、対応する非ヒト残基によって置換される。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、用語「部分的ヒト化」抗体または「キメラ」抗体は、ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域に連結される、例えば、マウス起源の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体を意味する。
【００６３】
ヒト化の代わりとなるものは、ファージ上に提示されるヒト抗体ライブラリーまたはトランスジェニックマウスに含まれるヒト抗体ライブラリーを使用することである。例えば、Ｖａｕｇｈａｎら、（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ、（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１：８３７−８３９；ｄｅ  Ｈａａｒｄら、（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：１８２１８−１８２３０；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら、（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７；Ｍｅｎｄｅｚら、（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６−１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ、（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓら、（２００１）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら、（１９９６）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ  Ｂｒｕｉｎら、（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９を参照のこと。
【００６４】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト」とは、１００％ヒト起源であるアミノ酸配列を含む抗体をいい、その抗体は、例えば、ヒト宿主、動物宿主、昆虫宿主、真菌宿主、植物宿主、細菌宿主、またはウイルス宿主において発現され得る（Ｂａｃａら、（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｌａｒｋ、（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３９７−４０２）。
【００６５】
本発明は、別の、非ヒト種（例えば、マウス、ウマ、ウサギ、イヌ、ウシ、ニワトリ）由来の抗体領域（例えば、定常領域）と融合またはそれらとキメラ化される本発明の可変領域を含む抗体を意味する「キメラ抗体」を包含する。これらの抗体は、上記非ヒト種においてＭＤＬ−１の発現または活性を調節するために使用され得る。
【００６６】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト／マウスキメラ抗体」とは、ヒト定常領域に融合されたマウス可変領域（ＶＨおよおびＶＬ）を含む抗体をいう。
【００６７】
本明細書中で使用される場合、用語「単鎖Ｆｖ」抗体フラグメントまたは「ｓＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを有する抗体フラグメントを意味し、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖中に存在する。一般に、上記ｓＦｖポリペプチドは、このＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、そのｓＦｖが抗原結合のために望ましい構造を形成できるようにするポリペプチドリンカーを、さらに含む。単鎖抗体の産生について記載された技術（米国特許第５，４７６，７８６号；同第５，１３２，４０５号および同第４，９４６，７７８号）は、抗ＭＤＬ−１特異的単鎖抗体を産生するために適合され得る。ｓＦｖの概説について、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。
【００６８】
単鎖抗体、単一ドメイン抗体、および二重特異的抗体は、記載される（例えば、Ｍａｌｅｃｋｉら、（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：２１３−２１８；Ｃｏｎｒａｔｈら、（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３４６−７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら、（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０、Ｋｏｓｔｅｌｎｅｙら、（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３；米国特許第５，９３２，４４８号；同第５，５３２，２１０号；同第６，１２９，９１４号；同第６，１３３，４２６号；同第４，９４６，７７８号を参照のこと）。
【００６９】
本明細書中で使用される場合、用語「ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント」および「ｄｓＦｖ」とは、ジスルフィド架橋によって連結された可変重鎖（ＶＨ）および／または可変軽鎖（ＶＬ）を有する抗体分子をいう。
【００７０】
本発明の組成物の「有効量」は、ＭＤＬ−１レセプターもしくはその機能的フラグメントによって引き起こされるかまたは媒介される医学的状態を特徴付ける周知のパラメータのうちの、１つ以上を改善する量であり得る。「有効量」によって、外科的除去のための腫瘍縮小または腫瘍の消失をもたらすために、腫瘍の浸潤性白血球上に発現される標的抗原（例えば、ＭＤＬ−１）に結合するのに必要とされる抗体の量または濃度もまた、意味される。
【００７１】
（発明の詳細な説明）
本発明は、細胞または組織におけるＭＤＬ−１発現のレベルと、コントロールにおけるＭＤＬ−１発現レベルとを比較することによって、腫瘍（特に、固形腫瘍、皮膚の腫瘍（例えば、黒色腫）、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍）を検出するための方法、腫瘍を診断するための方法、腫瘍を位置決定するための方法、および腫瘍を画像化するための方法に関し、これらの方法は、定量的および定性的の両方である。
【００７２】
本発明はまた、細胞または組織におけるＭＤＬ−１発現のレベルと、コントロールにおけるＭＤＬ−１発現のレベルとを比較することによって、癌を検出するための診断アッセイおよび診断方法、癌を診断するための診断アッセイおよび診断方法、癌を位置決定するための診断アッセイおよび診断方法、ならびに癌を画像化するための診断アッセイおよび診断方法に関し、これらの診断アッセイおよび診断方法は、定量的および定性的の両方である。
【００７３】
本発明は、腫瘍（特に、固形腫瘍（例えば、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍））に関連するＭＤＬ−１発現の上昇したレベルを検出することによって、癌を検出するための診断アッセイおよび診断方法、癌を診断するための診断アッセイおよび診断方法、癌を位置決定するための診断アッセイおよび診断方法、ならびに癌を画像化するための診断アッセイおよび診断方法に関し、これらの診断アッセイおよび診断方法は、定量的および定性的の両方である。
【００７４】
本発明は、正常なコントロールに対する、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌におけるＭＤＬ−１の高い発現の検出に関する。ＭＤＬ−１の発現は、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍に由来する腫瘍組織において、著しく増大または上昇する。
【００７５】
第Ｉ期、第ＩＩ期、または第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の黒色腫を有する患者；第Ｉ期、第ＩＩ期、または第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の卵巣癌を有する患者；第Ｉ期、第ＩＩ期、または第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の乳癌を有する患者；第Ｉ期、第ＩＩ期、または第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の結腸直腸の癌を有する患者；第Ｉ期／第ＩＩ期および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の腎臓癌を有する患者；ならびに第Ｉ期、第ＩＩ期、第ＩＩＩ期または第ＩＶ期の胃癌を有する患者に由来する、対応した正常／腫瘍サンプルにおけるＭＤＬ−１の発現は、腫瘍組織における高レベルのＲＮＡ発現を示し、このことは、ＭＤＬ−１が、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓癌（例えば、腎臓の癌）および胃癌の検出のための有用なマーカーであることを示唆する。
【００７６】
腫瘍または腫瘍組織において同定されたＭＤＬ−１発現の上昇したレベルは、その腫瘍内部に存在する腫瘍浸潤性白血球（例えば、それらは、骨髄系列の細胞またはマクロファージである）上のＭＤＬ−１の発現に起因すると考えられる。ＭＤＬ−１ポジティブな白血球の大多数はまた、マクロファージ／単球マーカーのＣＤ６８、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ２０６を発現し得る。
【００７７】
用語「ＭＤＬ−１」、「骨髄性ＤＡＰ１２結合レクチン−１」、「骨髄性ＤＡＰ１２結合型レクチン−１（Ｍｙｅｌｏｉｄ  ＤＡＰ１２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  レクチン−１）」、「ＤＡＰ−１２」、「ＤＡＰ１２」、「ＤＮＡＸ活性化タンパク質，１２ｋＤ」は、当該分野において周知である。上記ヒトおよびマウスのＤＡＰ１２ならびにＭＤＬ−１のヌクレオチド配列およびポリペプチド配列は、ＷＯ  ９９／０６５５７に開示される。上記ヒトＭＤＬ−１ヌクレオチド配列および上記ヒトＭＤＬ−１アミノ酸配列は、それぞれ、ＷＯ  ９９／０６５５７の配列番号１１および配列番号１２によって規定される。ヒトＭＤＬ−１核酸配列（ＡＲ２１７５４８）ならびにマウスＭＤＬ−１核酸配列およびマウスＭＤＬ−１アミノ酸配列（それぞれ、ＡＲ２１７５４９およびＡＡＮ２１５９３）のＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）寄託物もまた、利用可能である。下の表１は、適切な配列識別子を提供する。
【００７８】
ＭＤＬ−１の可溶性形態もまた、本発明の範囲内である。ＭＤＬ−１タンパク質の構造的特徴は、その細胞外ドメインであり、その細胞外ドメインは、配列番号２のヒトＭＤＬ−１タンパク質のアミノ酸残基２６〜１８８、および配列番号４のマウスＭＤＬ−１タンパク質のアミノ酸残基２６〜１９０によって規定される。ＭＤＬ−１の可溶性形態（すなわち、可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたは可溶性ＭＤＬ−１タンパク質）は、上記細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む。可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドは、ＭＤＬ−１抗体の使用もしくはその抗原結合フラグメントの使用に類似する治療剤または診断剤として使用され得る。
【００７９】
【表１】
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ＭＤＬ−１を発現する癌（特に、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌）の処置に対する多くのアプローチが、本明細書中に記載される。これらの治療アプローチは、抗ＭＤＬ−１抗体による抗体治療、および可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドによる治療を含む。さらに、癌におけるＭＤＬ−１の増加した発現を考慮すると、ＭＤＬ−１または可溶性形態のＭＤＬ−１ポリペプチドは、癌（特に、皮膚癌（例えば、黒色腫）、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌）に対する診断剤として有用であり、そしてそれらは、同様に、このレセプターを発現する他の癌についてのマーカーであり得る。
【００８０】
癌についてのスクリーニング、腫瘍または癌の検出、および癌の診断は、スクリーニング、試験および身体検査を包含し得る。癌の診断および腫瘍の検出は、臨床手順および外科的手順の両方を含み得る。癌についてのスクリーニング、腫瘍の検出および癌の診断は、スキャン（例えば、骨スキャン）、またはその癌またはその腫瘍を検出する他の画像試験（例えば、コンピュータ連動断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ））を使用し得る。超音波スキャニング法は、内部器官の構造を示す音波を使用し、そしてその超音波スキャニング法は、特に、腎臓、肝臓、骨盤、および前立腺の特定の癌または腫瘍を同定してそのの大きさを決定するために有用である。ＣＴスキャニング法は、身体の多くの部分において癌または腫瘍を検出するために使用され得る。このような検出は、癌を診断および病期分類するのに有用である。ＭＲＩは、ＣＴに代わるものである。この手順に関して、非常に強力な磁場が、鮮明で詳細な解剖学的画像をもたらす。陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）もまた、癌の診断を補助するためか、または腫瘍を検出するために使用され得る。ＰＥＴスキャンは、癌内部の生化学的プロセスを測定することによって癌を画像化する。生検がまた、画像試験において発見された異常が癌または腫瘍であることを確認するために行われ得る。
【００８１】
患者において症状が存在する前の癌についてのスクリーニングは、重要であり得る。なぜならそのスクリーニングは、医師が、癌を早期に見出してそれを処置するのを補助し得るからである。初期の癌は、通常、患者に疼痛をもたらさない。癌の処置は、癌が早期（すなわち、初期；局在期）に検出される場合、より有効であるようである。
【００８２】
病期分類は、最初の腫瘍（原発性腫瘍）の広がりおよび身体における拡散の程度に基づく、個体の癌の広がりまたは重症度を記載する。病期分類は、癌が発症する様式の知識に基づく。癌細胞は制御も命令もなく分裂および成長して、増殖（ｇｒｏｗｔｈ）または腫瘍と称される組織の塊を形成する。腫瘍が増殖する場合、その腫瘍は、近傍の器官および近傍の組織を侵し得る。癌細胞はまた、腫瘍から離れて、血流およびリンパ系に進入し得、このことは、癌細胞が原発部位から拡散して、他の器官において新しい腫瘍を形成することを可能にする。上記癌の拡散は、転移と称される（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｓｔａｇｉｎｇ：Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｓｗｅｒｓ，Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔ  ５．３２（２００４年１月６日に再考された）（２００４））。
【００８３】
ほとんどの病期において考慮される共通の要素は、原発性腫瘍の位置、腫瘍の大きさおよび腫瘍の数、リンパ節浸潤、細胞型および腫瘍のグレード、ならびに転移の有無である。ＴＮＭシステム（最も一般的に使用される病期分類システムの１つ）は、腫瘍の広がり（Ｔ）、リンパ節への拡散の程度（Ｎ）、および転移の存在（Ｍ）に基づく。数が、腫瘍の大きさまたは広がり、および拡散の程度を示すために加えられる（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｓｔａｇｉｎｇ：Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｓｗｅｒｓ、Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔ  ５．３２（２００４年１月６日に再考された）（２００４））。
【００８４】
多くの癌登録機関（例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ，Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｅｎｄ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｐｒｏｇｒａｍ（ＳＥＥＲ））は、要約分類（ｓｕｍｍａｒｙ  ｓｔａｇｉｎｇ）を使用する。このシステムは、全ての型の癌について使用され、そしてそのシステムは、癌症例を５つの主要なカテゴリーに分類し、それらのカテゴリーは、以下である：（ａ）上皮内（ｉｎ  ｓｉｔｕ）（これは、癌が起こった細胞の層にのみ存在する早期の癌である）、（ｂ）限局（ｌｏｃａｌｉｚｅｄ）（これは、癌が起こった器官に限定され、拡散の形跡を伴わない癌である）、（ｃ）局所（ｒｅｇｉｏｎａｌ）（これは、最初の部位（原発部位）を越えて近傍の節または器官および組織に拡散した癌である）（ｄ）遠隔（ｄｉｓｔａｎｔ）（これは、原発部位から遠隔器官または遠隔リンパ節に拡散した癌である）、および（ｅ）不明（これは、病期を割り当てるための十分な情報が存在しない癌を記載するために使用される）（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｔａｇｉｎｇ：Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｓｗｅｒｓ、Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔ  ５．３２（２００４年１月６日に再考された）（２００４））。
【００８５】
病期分類のための試験の型は、癌の型に依存する。スクリーニング試験および検出試験は、以下を含み得る：（ａ）身体検査（これは、癌についての情報を収集するために使用される）、（ｂ）画像研究（これは、身体の内側の領域の画像をもたらすために使用され、そしてＸ線、コンピュータ連動断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴（ＭＲＩ）スキャン、および陽電子断層撮影（ＰＥＴ）スキャンなどの手順を含み、それらの手順は、癌の位置、腫瘍の大きさ、および癌が拡散しているか否かを示し得る）、（ｃ）身体から取得した血液、尿、他の流体および組織の検査室検査、（ｄ）病理報告（これは、腫瘍の大きさ、腫瘍の増殖、癌細胞の型、および腫瘍のグレード（その癌細胞が正常組織にどの程度近く似ているのか）についての情報を含み得、生検（顕微鏡下における検査のための細胞または組織の除去）は、病理報告に情報を提供するために行われ得る）、および（ｅ）腫瘍の大きさおよび外観の説明のような外科手術の間に見出されるものを記載する外科的報告（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｓｔａｇｉｎｇ：Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｓｗｅｒｓ，Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔ  ５．３２（２００４年１月６日に再考された）（２００４））。
【００８６】
癌組織は、当該分野で周知の方法を使用して、診断されそして病期分類され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎｅら（編）、（２００２）ＡＪＣＣ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｇｉｎｇ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと。
【００８７】
癌の処置または治療に対する固形腫瘍の応答は、Ｔｈｅｒａｓｅｅら（Ｔｈｅｒａｓｓｅら、（２０００）Ｊ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ９２：２０５−２１６）によって記載された指針に従い、当業者によって評価され得る。
【００８８】
個体におけるＭＤＬ−１遺伝子の発現レベルまたはＭＤＬ−１遺伝子産物の発現レベルを評価するアッセイは、患者由来の生物学的サンプルの増殖または腫瘍形成能に関する情報を提供する。例えば、ＭＤＬ−１  ｍＲＮＡは、黒色腫、乳癌、卵巣癌、結腸直腸の癌、腎臓癌および胃癌において高度に発現され、かつ対応した正常組織においては高度に発現されないので、生物学的サンプル中のＭＤＬ−１  ｍＲＮＡ転写物の相対レベルまたはＭＤＬ−１タンパク質の相対レベルを評価するアッセイが、ＭＤＬ−１の増加した発現に関連する疾患（例えば、癌）を診断するために使用され得、そしてそのアッセイは、適切な治療選択肢を定義するのに有用な予後判定情報を提供し得る。
【００８９】
ＭＤＬ−１  ｍＲＮＡが、癌において高度に発現され、かつ対応した正常組織においては高度に発現されないという知見は、この遺伝子が、腫瘍または癌性細胞の増殖に関連するという証拠を提供し、したがってその知見は、この遺伝子およびその産物を、当業者が、ＭＤＬ−１の増加した発現に関連した疾患を有すると疑われる個体由来の生物学的サンプルを評価するために使用し得る、標的として同定する。
【００９０】
ＭＤＬ−１の発現レベルは、特定の疾患状態（例えば、進行および／または腫瘍の攻撃性）に対する感受性を予測するために有用な情報を提供し得る。本発明は、ＭＤＬ−１発現レベルを決定するため、およびＭＤＬ−１を発現する癌（例えば、皮膚癌、乳癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、腎臓癌、胃癌）を診断するための、方法ならびにアッセイを提供する。患者サンプルにおけるＭＤＬ−１発現レベルは、当該分野において周知である多くの手段によって分析され得、その手段としては、免疫組織化学的分析、インサイチュハイブリダイゼーション、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションしたサンプルに対するＲＴ−ＰＣＲ分析、臨床サンプルおよび細胞株のウェスタンブロット分析、ならびに組織アレイ分析が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
別の実施形態において、本発明は、個体において癌の存在を決定するのに有用なアッセイを提供し、そのアッセイは、試験細胞サンプルもしくは試験組織サンプルにおけるＭＤＬ−１  ｍＲＮＡ発現またはＭＤＬ−１タンパク質発現の、対応するコントロール細胞またはコントロール組織における発現レベルに対する増加を検出することを包含する。ＭＤＬ−１  ｍＲＮＡの存在は、例えば、組織サンプルにおいて評価され得、その組織サンプルとしては、皮膚、乳房、結腸、直腸、卵巣、腎臓および胃が挙げられるが、これらに限定されない。これらの組織のうちのいずれかにおける高いＭＤＬ−１発現の存在は、これらの癌の出現、存在および局在を示すのに有用である。なぜなら、対応する正常組織は、より低いレベルにてＭＤＬ−１  ｍＲＮＡを発現するからである。
【００９２】
別の実施形態において、ＭＤＬ−１発現レベルは、核酸レベルにおいてよりもむしろ、タンパク質レベルにおいて決定され得る。例えば、このような方法またはアッセイは、試験組織サンプル中の細胞によって発現されたＭＤＬ−１タンパク質のレベルを決定すること、およびそうして決定されたレベルを、対応するコントロールサンプルにおいて発現されたＭＤＬ−１のレベルと比較することを包含する。１つの実施形態において、ＭＤＬ−１タンパク質の存在は、例えば、免疫組織化学的方法を使用して評価される。ＭＤＬ−１抗体、またはＭＤＬ−１タンパク質発現を検出し得る結合パートナーが、この目的のために、当該分野において周知である種々のアッセイ形式で使用され得る。
【００９３】
本明細書中で使用される場合、用語「ＭＤＬ−１発現のレベル」、「測定されたＭＤＬ−１発現のレベル」、「ＭＤＬ−１発現のレベルの測定」は、細胞もしくは組織において発現されるＭＤＬ−１核酸のレベルまたはＭＤＬ−１ポリペプチドのレベルを意味する。例えば、配列番号１および配列番号３の任意のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子によって発現されるポリペプチド。あるいは、この用語は、例えば、配列番号１および配列番号３のうちのいずれかのポリヌクレオチド配列を含む遺伝子のうちのいずれかによってコードされるネイティブｍＲＮＡのレベル、または例えば、配列番号１および配列番号３のポリヌクレオチド配列のうちのいずれかを含む遺伝子のレベルを意味し得る。このようなレベルは、好ましくは、患者に由来する以下のうちの少なくとも１つにおける正常レベルおよび異常レベルの決定を含んで測定される：細胞、組織、および／または体液。したがって、例えば、コントロールの正常体液サンプル、コントロールの正常細胞サンプル、もしくはコントロールの正常組織サンプルと比較してＭＤＬ−１発現のレベルまたはＭＤＬ−１タンパク質のレベルの変化を測定するための、本発明に従う診断アッセイは、癌の存在を診断するために使用され得、その癌としては、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌、胃癌および悪性黒色腫が挙げられる。さらに、コントロールの正常体液サンプル、コントロールの正常細胞サンプル、もしくはコントロールの正常組織サンプルと比較してＭＤＬ−１発現のレベルまたはＭＤＬ−１タンパク質のレベルの変化を測定するための、本発明に従う診断アッセイは、腫瘍の存在を診断するために使用され得、その腫瘍としては、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍、および胃の腫瘍が挙げられる。本発明の好ましい実施形態において、上記腫瘍は、固形腫瘍である。
【００９４】
「変化」によって、ＭＤＬ−１発現のレベルの上昇が意味される。例えば、コントロールと比較した場合のレベルの上昇は、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌、胃癌および黒色腫に関連する。例えば、コントロールと比較した場合のレベルの上昇は、腫瘍の存在、腫瘍の増殖に関連し、その腫瘍としては、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍、胃の腫瘍が挙げられる。好ましい実施形態において、上記腫瘍は、固形腫瘍である。
【００９５】
「〜倍の増加（増加倍数）（ｆｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ）」によって、一般的に、メジアンの発現値が、コントロールより２倍以上（３倍、または４倍を含む）高いか、コントロールの値より５倍以上（６倍、７倍、８倍、または９倍を含む）高いか、より好ましくはコントロールより１０倍以上（１１倍、１２倍、１３倍、または１４倍を含む）高いか、コントロールより１５倍以上（１６倍、１７倍、１８倍、または１９倍を含む）高いか、コントロールより２０倍以上（２１倍、２２倍、２３倍、または２４倍を含む）高いか；またはコントロールより２５倍以上高いことが意味される。
【００９６】
ＭＤＬ−１発現のレベルの上昇は、一般的に、コントロールの２倍〜５倍以上の範囲にあるか；コントロールの５倍〜１０倍以上の範囲にあるか；コントロールの１５倍〜２０倍以上の範囲にあるか；またはコントロールの２０倍〜２５倍以上の範囲にある。
【００９７】
ＭＤＬ−１  ｍＲＮＡまたはＭＤＬ−１タンパク質の発現を検出するための方法およびＭＤＬ−１  ｍＲＮＡまたはＭＤＬ−１タンパク質の発現を定量化するための方法は、本明細書中に記載され、そしてそれらの方法は、当該分野において周知である、標準的な核酸検出技術およびタンパク質検出技術ならびに定量化技術を使用する。ＭＤＬ−１  ｍＲＮＡの検出および定量化のための標準的な方法としては、標識されたＭＤＬ−１リボプローブを使用するインサイチュハイブリダイゼーション、ＭＤＬ−１ポリヌクレオチドプローブを使用するノーザンブロットおよび関連技術、ＭＤＬ−１に特異的なプライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲ分析、および例えば、分岐ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡなどのような他の増幅型検出方法が挙げられる。特定の実施形態において、半定量的ＲＴ−ＰＣＲが、以下の実施例において記載されるように、ＭＤＬ−１  ｍＲＮＡ発現を、検出および定量化するために使用され得る。ＭＤｌ−１を増幅し得る任意の数のプライマーが、この目的のために使用され得、そのプライマーとしては、本明細書中に具体的に記載される種々のプライマーセットが挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質の検出および定量化のための標準的な方法が、この目的のために使用され得る。特定の実施形態において、野生型ＭＤＬ−１タンパク質と特異的に反応性であるポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が、生検組織の免疫組織化学的アッセイにおいて使用され得る。
【００９８】
細胞表面におけるＭＤＬ−１の発現は、この分子が、抗体ベースの治療ストラテジーのための魅力的な標的であることを示す。ＭＤＬ−１の細胞外ドメインと特異的に反応性である抗体は、毒素もしくは治療因子との結合体、または細胞の増殖もしくは機能を阻害し得るそのまま（ｎａｋｅｄ）の抗体のいずれかとして、腫瘍に存在するＭＤＬ−１ポジティブな細胞を処置するために有用であり得る。上記細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含むレセプターの可溶性形態は、毒素もしくは治療因子との結合体、または上記リガンドの結合に関して競合するかもしくは上記ＭＤＬ−１／ＤＡＰ１２レセプター複合体の形成と競合することによって細胞間のシグナル伝達を阻害し得るそのまま（ｎａｋｅｄ）の可溶性タンパク質のいずれかとして、腫瘍に存在するＭＤＬ−１ポジティブな細胞を処置するために有用であり得る。
【００９９】
ＭＤＬ−１抗体は、患者に対して導入され得、その結果、上記抗体は、上記腫瘍に存在する上記癌細胞浸潤性白血球上のＭＤＬ−１もしくは上記腫瘍浸潤性白血球上のＭＤＬ−１に結合して、その細胞およびその腫瘍の破壊を媒介し、そして／またはその細胞もしくはその腫瘍の増殖を阻害する。このような抗体が治療効果を発揮する機構は、補体媒介性の細胞溶解、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、ＭＤＬ−１の生理学的機能の調節、リガンド結合の阻害もしくはシグナル伝達経路の阻害、腫瘍細胞の分化の調節、腫瘍新脈管形成因子のプロフィールの変化を含み得、そして／またはその機構は、アポトーシスの誘導により得る。ＭＤＬ−１抗体は、毒性因子または治療因子と結合体化され得、そしてその抗体は、上記腫瘍に関連するＭＤＬ−１を有する腫瘍細胞もしくはＭＤＬ−１を有する細胞に対して、その毒性因子または治療因子を直接送達するために使用され得る。毒性因子の例としては、カルケミシン（ｃａｌｃｈｅｍｉｃｉｎ）、マイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、および放射性同位体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
抗ＭＤＬ−１抗体を使用する癌免疫療法は、他の型の癌の処置に首尾よく利用されている種々のアプローチからもたらされる教示に従い得、他の型の癌としては、結腸癌（Ａｒｌｅｎら、１９９８、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：１３３−１３８）、多発性骨髄腫（Ｏｚａｋｉら、１９９７、Ｂｌｏｏｄ  ９０：３１７９−３１８６；Ｔｓｕｎｅｎａｒｉら、１９９７、Ｂｌｏｏｄ  ９０：２４３７−２４４４）、胃の癌（Ｋａｓｐｒｚｙｋら、１９９２、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：２７７１−２７７６）、結腸直腸の癌（Ｍｏｕｎら、１９９４、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：６１６０−６１６６；Ｖｅｌｄｅｒｓら、１９９５、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：４３９８−４４０３）、および乳癌（Ｓｈｅｐａｒｄら、１９９１、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１１７−１２７）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０１】
好ましくは腫瘍組織の免疫組織化学的評価、定量的なＭＤＬ−１の画像化、またはＭＤＬ−１発現の存在および程度を容易に示し得る他の技術を使用して、ＭＤＬ−１発現の存在およびレベルについて評価されることが、ある癌患者に対しては望まれ得る。腫瘍生検または外科的検体の免疫組織化学的分析が、この目的に関して好まれ得る。腫瘍組織の免疫組織化学的分析のための方法は、当該分野において周知である。
【０１０２】
本発明はまた、ＭＤＬ−１を認識する抗体またはその抗原結合フラグメントの使用、および特定の癌性の固形腫瘍（例えば、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍）に関連するＭＤＬ−１タンパク質の可溶性形態または可溶性ＭＤＬ−１タンパク質の使用に関する。これらの抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは可溶性ＭＤＬ−１タンパク質は、標識され得、そして癌性組織（特に、固形腫瘍に由来する癌性組織または浸潤性白血球を含む癌性組織（これらは、ＭＤＬ−１を発現する））の検出に使用され得る。上記標識された抗体、または標識された可溶性ＭＤＬ−１タンパク質は、腫瘍（特に、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍、または浸潤性白血球を含む腫瘍（これらは、ＭＤＬ−１を発現する））を、検出し、診断し、位置決めし、そして画像化するために使用され得る。
【０１０３】
上記標識された抗体、または標識された可溶性ＭＤＬ−１タンパク質は、癌性の固形腫瘍の存在を検出するために使用され得る。それらはまた、癌に対する治療としてインビトロおよびインビボの両方で、細胞の増殖を阻害するか、または細胞（好ましくは、腫瘍に関連する細胞）を消散させるかもしくは殺すのに有効な物質に結合されて、使用され得る。本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、腫瘍に存在する腫瘍浸潤性白血球上のＭＤＬ−１を標的すると考えられる。本発明の可溶性ＭＤＬ−１タンパク質はまた、腫瘍に存在する腫瘍浸潤性白血球中のＭＤＬ−１リガンドを標的すると考えられる。
【０１０４】
（診断アッセイ）
本発明は、好ましくはコントロール由来の同じ型の細胞、組織または体液におけるＭＤＬ−１レベルと比較して、試験細胞、試験組織または試験体液におけるＭＤＬ−１の発現レベルを分析することによって癌の存在を診断するための方法を、提供する。本明細書中に示されるように、コントロールに対する患者におけるＭＤＬ−１（例えば、配列番号２）発現のレベルの上昇は、癌の存在に関連する。好ましい実施形態において、上記癌は、（上記腫瘍が局在して増殖する）固形腫瘍（例えば、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍）に関連する。
【０１０５】
代表的に、定量的診断アッセイに関して、癌を有する試験された患者を示すポジティブな結果は、その細胞、組織、または体液が、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍高いＭＤＬ−１発現レベルを有する患者であることである。
【０１０６】
宿主に由来するサンプル中において本発明のＭＤＬ−１のような遺伝子の発現のレベルを決定するために使用され得るアッセイ技術は、当業者にとって周知である。このようなアッセイ方法としては、放射免疫アッセイ、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ、定量的リアルタイムＰＣＲアッセイ、免疫組織化学アッセイ、インサイチュハイブリダイゼーションアッセイ、競合結合アッセイ、ウェスタンブロットアッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイ、フローサイトメトリーアッセイ（例えば、腫瘍関連マクロファージのＭｌ表現型分析（ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）に対するＭ２表現型分析についての二色ＦＡＣＳ分析（Ｍａｎｔｏｖａｎｉら、（２００２）ＴＲＥＮＤＳ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２３：５４９−５５５））が挙げられる。
【０１０７】
ＥＬＩＳＡアッセイは、最初に、ＭＤＬ−１に特異的な抗体（好ましくは、モノクローナル抗体）を調製することを包含する。さらに、ＭＤＬ−１と特異的に結合するレポーター抗体が、一般的には調製される。上記レポーター抗体は、放射性試薬、蛍光試薬または酵素試薬（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素またはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な試薬に結合される。
【０１０８】
上記ＥＬＩＳＡを実施するために、ＭＤＬ−１に特異的な抗体が、その抗体を結合する固体支持体（例えば、ポリスチレンディッシュ）上でインキュベートされる。次いでディッシュ上のあらゆる空いている（ｆｒｅｅ）タンパク質結合部位は、非特異的タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）と一緒にインキュベートすることによって覆われる。次に、分析されるべきサンプルが、上記ディッシュにおいてインキュベートされる。その間に、ポリスチレンディッシュに結合された特異的抗体にＭＤＬ−１が結合する。結合されていないサンプルは、緩衝液によって洗い落とされる。ＭＤＬ−１を特異的に指向しかつ西洋ワサビペルオキシダーゼに連結されたレポーター抗体が、上記ディッシュに配置され、ＭＤＬ−１に結合されたあらゆるモノクローナル抗体に対するレポーター抗体の結合を生じる。次いで結合されていない抗体は、洗い落とされる。次いで、発色基質（ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を含むペルオキシダーゼ活性に対する試薬が、上記ディッシュに添加される。ＭＤＬ−１抗体に連結され固定化されたペルオキシダーゼは、有色の反応生成物を生成する。所定の時間内に発生した色の量は、サンプルに存在するＭＤＬ−１タンパク質の量と比例する。定量的な結果は、代表的に、標準曲線を参照することによって得られる。
【０１０９】
競合アッセイが、利用され得、そのアッセイにおいて、ＭＤＬ−１に特異的な抗体が、固体支持体に結合され、標識されたＭＤＬ−１、および宿主に由来するサンプルが、その固体支持体上を通され、そしてその固体支持体に結合された検出された標識の量は、そのサンプル中のＭＤＬ−１の量に相関し得る。
【０１１０】
ハイブリダイゼーションプローブとして本発明のＭＤＬ−１の核酸配列の全てまたは一部を使用して、核酸の方法もまた、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍、および胃の腫瘍を含む腫瘍のマーカーとして、ＭＤＬ−１  ｍＲＮＡのレベルを検出するために使用され得る。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および他の核酸の方法（例えば、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）および核酸配列ベースの増幅（ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｂａｓｅｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＮＡＳＢＡ））が、種々の悪性疾患の診断およびモニタリングのために細胞を検出するために使用され得る。例えば、特定のｍＲＮＡ集団の存在を多くの他のｍＲＮＡ種の複雑な混合物において検出するために使用され得る逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）は、強力な技術である。ＲＴ−ＰＣＲにおいて、ｍＲＮＡ種は、最初に、酵素である逆転写酵素の使用によって相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写される；次いでそのｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ反応においてのように増幅される。したがって、ＲＴ−ＰＣＲは、増幅によって、単一のｍＲＮＡ種の存在を示す。したがって、上記ｍＲＮＡがそれを産生する細胞について高度に特異的である場合、ＲＴ−ＰＣＲは、特定の型の細胞の存在および／または非存在を同定するために使用され得る。
【０１１１】
固体支持体上に配列（すなわち、グリッディング（ｇｒｉｄｄｉｎｇ））されたクローンまたはオリゴヌクレオチドへのハイブリダイゼーションは、その発現の検出、およびその遺伝子の発現レベルの定量化の両方のために使用され得る。このアプローチにおいて、ＭＤＬ−１をコードするｃＤＮＡの全部または一部が、基材に固定される。上記基材は、任意の適切な型であり得、その型としては、ガラス、ニトロセルロース、ナイロンまたはプラスチックが挙げられるが、これらに限定されない。ＭＤＬ−１をコードするＤＮＡの少なくとも一部は、上記基材に結合され、次いで目的の組織から単離されたＲＮＡのＲＮＡコピーまたは相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）コピーであり得る分析物と一緒にインキュベートされる。基材に結合されたＤＮＡと上記分析物との間のハイブリダイゼーションは、数種の手段によって検出および定量化され得、その手段としては、その分析物の放射標識化もしくは蛍光標識化、または上記ハイブリッドを検出するように設計された二次的分子が挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子発現のレベルの定量化は、比較される分析物からのシグナル強度と、既知の標準物から決定されるシグナル強度との比較によって行われ得る。上記標準物は、標的遺伝子のインビトロ転写を行い、その収量を定量化し、次いで標準曲線を作成するためにその材料を使用することによって、得られ得る。
【０１１２】
上記試験は、種々の細胞、体液および／または組織抽出物（例えば、患者から得られたホモジネートまたは可溶化した組織）に由来するサンプルに対して実施され得る。組織抽出物は、組織生検および剖検材料から慣習的に得られる。本発明において有用な体液としては、血液、尿、唾液もしくは任意の他の身体の分泌物またはそれらの誘導体が挙げられる。用語「血液」は、全血、血漿、血清または血液の任意の誘導体を含むことを意味する。
【０１１３】
（ＭＤＬ−１のインビボにおける標的化／癌治療）
ＭＤＬ−１の固形腫瘍との関係の同定もまた、癌、および特に、固形腫瘍に関連する癌（例えば、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌、胃癌および皮膚癌（例えば、黒色腫））を画像化する新規治療、およびその癌を処置する新規治療の合理的な設計に有用である。
【０１１４】
本発明はまた、ヒトＭＤＬ−１（例えば、配列番号２）のようなＭＤＬ−１を認識する抗体またはその抗原結合フラグメントの使用に関し、そのＭＤＬ−１は、特定の固形腫瘍（例えば、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍）に関連する。これらの抗体またはその抗原結合フラグメントは、標識され得、そして癌性組織（特に、固形腫瘍に由来する癌性組織または浸潤性白血球を含む癌性組織（これらは、ＭＤＬ−１を発現する））の検出のために使用され得る。上記標識された抗体は、固形腫瘍の存在を検出するために使用され得る。それらはまた、癌に対する治療として、このような細胞を消散させるかまたは殺すのに有効な物質に結合されて、使用され得る。
【０１１５】
例えば、１つの実施形態において、ＭＤＬ−１に結合する抗体が、惹起され得、そしてその抗体は、癌を罹患すると疑われる患者において、インビボで使用され得る。ＭＤＬ−１を結合する抗体は、診断目的および／または治療目的のために、癌を有すると疑われる患者に対して注射され得る。したがって、本発明の別の局面は、癌の処置を必要とするヒト患者において、その患者に抗体の有効量を投与することによって癌を処置するための方法を提供する。
【０１１６】
インビボでの診断および処置のための抗体の調製ならびに使用は、当該分野において周知である。例えば、インジウム−１１１によって標識された抗体−キレート剤が、腫瘍を表す癌胎児抗原の放射免疫シントグラフィーによる画像化における使用について記載されている（Ｓｕｍｅｒｄｏｎら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．１９９０  １７：２４７−２５４）。特に、これらの抗体−キレート剤は、再発性の結腸直腸の癌を有すると疑われる患者において腫瘍を検出するのに使用されている（Ｇｒｉｆｆｉｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｅ．１９９１  ９：６３１−６４０）。磁気共鳴画像法において使用するための標識として常磁性イオンを有する抗体がまた、記載されている（Ｌａｕｆｆｅｒ、Ｒ．Ｂ．Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９９１  ２２：３３９−３４２）。ＭＤＬ−１に対する抗体は、類似の様式で使用され得る。ＭＤＬ−１を結合する標識された抗体は、癌を有すると疑われる患者に対して、患者の疾患状態を診断する目的のために注射され得る。使用される標識は、使用されるべき画像化様式によって選択される。例えば、放射標識（例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍまたはヨウ素−１３１）は、平面スキャン（ｐｌａｎａｒ  ｓｃａｎ）またはシングルフォトンエミッションコンピュータ連動断層撮影（ＳＰＥＣＴ）のために使用され得る。陽電子放出性の標識（例えば、フッ素−１９）は、陽電子断層撮影法において使用され得る。常磁性イオン（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ）またはマンガン（ＩＩ））は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において使用され得る。上記標識の存在は、正常組織の画像化と比較した場合、癌の拡散の決定を許容する。器官内または組織内の標識の量はまた、その器官もしくは組織における癌の有無の決定を可能にする。
【０１１７】
（遺伝子治療）
本発明は、遺伝子治療の公知の技術を使用してＭＤＬ−１ポリペプチドの可溶性形態またはそのフラグメントを産生する、手段を提供する。可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドは、ＭＤＬ−１ポリペプチドの細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む。方法は、ＭＤＬ−１の可溶性ポリペプチドもしくはＭＤＬ−１の可溶性タンパク質フラグメント、または可溶性ＭＤＬ−１をコードする核酸分子、および可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドを発現して適切に提供することが可能な組換えベクターを利用することによって、容易に実施され得る。
【０１１８】
（キット）
上に記載される診断適用および治療適用において使用するために、キットもまた、本発明によって提供される。このようなキットは、緊密に（ｃｌｏｓｅ  ｃｏｎｆｉｎｅｍｅｎｔ）１以上の容器手段（例えば、バイアル、チューブなど）を受容する仕切られたキャリア手段を備え得、その容器手段の各々は、上記方法において使用されるべき別個のエレメントのうちの１つを備える。例えば、上記容器手段のうちの１つは、検出可能に標識されたプローブを備えても、検出可能に標識され得るプローブを備えてもよい。このようなプローブは、抗体またはポリヌクレオチドであり得、それらは、それぞれ、ＭＤＬ−１タンパク質またはＭＤＬ−１遺伝子もしくはＭＤＬ−１メッセージに特異的であり得る。上記キットが、標的核酸を検出するために核酸ハイブリダイゼーションを利用する場合、そのキットはまた、標的核酸配列の増幅のためのヌクレオチドを備える容器、および／またはレポーター分子（例えば、酵素標識、蛍光標識、または放射性同位体標識）に結合されたレポーター手段（例えば、アビジンまたはストレプトアビジンのようなビオチン結合タンパク質）を備える、容器を有し得る。
【０１１９】
本発明のキットは、代表的に、上に記載される容器、ならびに商業的見地および使用者の見地から所望される材料（緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用のための指示書を備えるパッケージ挿入物が挙げられる）を備える１以上の他の容器を備える。ラベルは、上記組成物が特定の治療または非治療用途に使用されることを示すために、容器上に存在し得、そしてそのラベルはまた、上に記載されるようなインビボまたはインビトロのいずれかでの使用法を示し得る。
【０１２０】
（分子生物学）
本発明に従って、当業者の範囲内にある従来の分子生物学、微生物学、および組換えＤＮＡ技術が使用され得る。そのような技術は、文献中に完全に説明される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ＆  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（本明細書中では「Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９」）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，第Ｉ巻および第ＩＩ巻（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編、１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４．；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８６））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６））；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照のこと。
【０１２１】
本発明は、本発明のＭＤＬ−１抗体の組換えバージョンまたは本発明の抗原結合フラグメントの組換えバージョンを包含する。
【０１２２】
特定の実施形態において、本発明は、ＭＤＬ−１をコードする核酸、可溶性ＭＤＬ−１をコードする核酸、抗ＭＤＬ−１抗体をコードする核酸、抗ＭＤＬ−１抗体重鎖もしくは抗ＭＤＬ−１抗体軽鎖をコードする核酸、抗ＭＤＬ−１抗体重鎖可変領域もしくは抗ＭＤＬ−１軽鎖可変領域をコードする核酸、抗ＭＤＬ−１抗体重鎖定常領域もしくは抗ＭＤＬ−１抗体軽鎖定常領域をコードする核酸、または抗ＭＤＬ−１抗体ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２またはＣＤＲ−Ｈ３）をコードする核酸を包含し、その核酸は、ＰＣＲによって増幅され得る。
【０１２３】
任意の核酸（例えば、ＭＤＬ−１遺伝子をコードする核酸、あるいは抗ＭＤＬ−１抗体またはそのフラグメントもしくは部分をコードする核酸）の配列は、当該分野で公知の任意の方法（例えば、化学的配列決定または酵素的配列決定）によって、配列決定され得る。ＤＮＡの「化学的配列決定」は、ＭａｘａｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ、（１９７７）（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５６０）の方法などを意味し得、この方法では、ＤＮＡは、個々の塩基特異的な反応を使用してランダムに切断される。ＤＮＡの「酵素的配列決定」は、Ｓａｎｇｅｒ（Ｓａｎｇｅｒら、（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５４６３）の方法など意味し得る。
【０１２４】
本明細書中の核酸は、天然の調節（発現制御）配列により隣接され得るか、または異種配列（プロモーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、および他のリボソーム結合部位配列、エンハンサー、応答エレメント、サプレッサー、シグナル配列、ポリアデニル化配列、イントロン、５’非コード領域および３’非コード領域などを含む）に結合され得る。
【０１２５】
遺伝子発現を制御するために使用され得るプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（米国特許第５，３８５，８３９号および同第５，１６８，０６２号）、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔら、（１９８１）Ｎａｔｕｒｅ  ２９０：３０４−３１０）、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、（１９８０）Ｃｅｌｌ  ２２：７８７−７９７）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：１４４１−１４４５）、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、（１９８２）Ｎａｔｕｒｅ  ２９６：３９−４２）；原核生物発現ベクター（例えば、β−ラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋｏｍａｒｏｆｆら、（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７５：３７２７−３７３１）またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２１−２５））（「Ｕｓｅｆｕｌ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｂａｃｔｅｒｉａ」、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ（１９８０）２４２：７４−９４もまた参照のこと）；ならびに酵母もしくは他の真菌由来のプロモーターエレメント（例えば、Ｇａｌ４プロモーター、ＡＤＣ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーターまたはアルカリホスファターゼプロモーター）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
コード配列は、細胞中の転写制御配列および翻訳制御配列がそのコード配列からＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）へのＲＮＡポリメラーゼ媒介性転写を指向し、そのＲＮＡが、その後、（イントロンを含む場合には）トランス−ＲＮＡスプライシングされ得、必要に応じて、そのコード配列によりコードされるタンパク質へと翻訳され得る場合に、それらの転写制御配列および翻訳制御配列「の制御下にある」か、それら「と機能的に結合している」か、またはそれら「と作動可能に結合している」。
【０１２７】
本発明は、タンパク質（例えば、本発明のＭＤＬ−１）に対応するアミノ酸配列もしくはヌクレオチド配列に対する改変（特に、影響が少ない任意の改変または些細な任意の改変）を企図する。具体的には、本発明は、本発明のヒトＭＤＬ−１をコードする核酸の配列保存的改変体、および本発明のマウスＭＤＬ−１をコードする核酸の配列保存的改変体を、企図する。
【０１２８】
本発明は、表１に記載されるような核酸およびその核酸にハイブリダイズする核酸によってコードされる、ＭＤＬ−１を包含する。好ましくは、上記核酸は、低ストリンジェンシー条件下で、より好ましくは中ストリンジェシー条件下で、最も好ましくは高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズし、そしてその核酸は、好ましくは、ＭＤＬ−１活性を示す。
【０１２９】
核酸分子は、その核酸分子の一本鎖形態が、適切な温度条件および溶液イオン強度条件（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）を参照のこと）下で別の核酸分子にアニールし得る場合に、その別の核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはＲＮＡ）に対して「ハイブリダイズ可能である」。上記温度条件およびイオン強度条件が、そのハイブリダイゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。代表的な低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、５５℃、５×ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ、０．２５％ミルク、ホルムアミドなし；または３０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、０．５％  ＳＤＳである。代表的な中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、そのハイブリダイゼーションが４０％ホルムアミド中で５×ＳＳＣもしくは６×ＳＳＣを用いて実施されることを除いて、低ストリンジェンシー条件と同様である。高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、そのハイブリダイゼーション条件が５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣもしくは６×ＳＳＣ中で（必要に応じて、より高温（例えば、５７℃，５９℃、６０℃、６２℃、６３℃、６５℃、または６８℃）で）実施されることを除いて、低ストリンジェンシー条件と同様である。一般に、ＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣ１および０．０１５Ｍクエン酸Ｎａである。ハイブリダイゼーションには、その２つの核酸が、相補配列を含むことが必要とされるが、そのハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに依存して、塩基間のミスマッチが可能である。核酸をハイブリダイズするための適切なストリンジェンシーは、当該分野で周知の変数である、核酸の長さおよび相補性の程度に依存する。２つのヌクレオチド配列間の類似性または相同性の程度が大きい程、それらの核酸がハイブリダイズし得るストリンジェンシーが高くなる。１００ヌクレオチド長より長いハイブリッドについて、その融解温度を計算するための式が、誘導されている（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）９．５０〜９．５１を参照のこと）。より短い核酸（すなわち、オリゴヌクレオチド）とのハイブリダイゼーションについて、ミスマッチの位置が、より重要になり、そのオリゴヌクレオチドの長さは、その特異性を決定する（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）１１．７−１１．８を参照のこと）。
【０１３０】
本発明にまた含まれるのは、ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって比較を行なった場合に、表１の参照ヌクレオチド配列および参照アミノ酸配列に対して、少なくとも７０％同一であり、少なくとも８０％同一であり、少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％）同一であり、そして少なくとも９５％（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％）同一である、ヌクレオチド配列を含む核酸、ならびにそのようなアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、そのアルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の長さ全体にわたってそれぞれの配列間で最大の一致を与えるように選択される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって比較が行なわれる場合に、表１の参照アミノ酸配列（例えば、配列番号２および配列番号４）に対して、少なくとも７０％類似し、少なくとも８０％類似し、少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％）類似し、そして少なくとも９５％（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％）類似する、アミノ酸配列を含むポリペプチドもまた、本発明に包含され、そのアルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の長さ全体にわたってそれぞれの配列間で最大の一致を与えるように選択される。
【０１３１】
配列同一性とは、比較されている２つの配列のヌクレオチドの間またはアミノ酸の間における正確な一致をいう。配列類似性とは、比較されている２つのポリペプチドのアミノ酸の間における正確な一致、および同一でない生化学的に関連するアミノ酸の間における一致の両方をいう。類似する特性を共有し、かつ交換可能であり得る生化学的に関連するアミノ酸は、上で考察されている。
【０１３２】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムに関する以下の参考文献は、本明細書中で参考として援用される：ＢＬＡＳＴアルゴリズム：Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０；Ｇｉｓｈら、（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．３：２６６−２７２；Ｍａｄｄｅｎら、（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１−１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；Ｚｈａｎｇら、（１９９７）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．７：６４９−６５６；Ｗｏｏｔｔｏｎら、（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９−１６３；Ｈａｎｃｏｃｋら、（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：６７−７０；アライメントスコアリングシステム：Ｄａｙｈｏｆｆら、「Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．」、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（１９７８）、第５巻、補遺３、Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編）、ｐｐ．３４５〜３５２，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ｓｃｈｗａｒｔｚら、「Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．」、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８）第５巻，補遺３．、Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３５３−３５８，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ、（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５−５６５；Ｓｔａｔｅｓら、（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３：６６−７０；Ｈｅｎｉｋｏｆｆら、（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５−１０９１９；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２９０−３００；アライメント統計学：Ｋａｒｌｉｎら、（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−２２６８；Ｋａｒｌｉｎら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７；Ｄｅｍｂｏら、（１９９４）Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２．２０２２−２０３９；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．「Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ．」、Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ編），（１９９７）ｐｐ．１−１４，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ。
【０１３３】
本発明はまた、ＭＤＬ−１の可溶性形態の組換えバージョンまたはそのフラグメントの組換えバージョンを包含する。可溶性ＭＤＬ−１タンパク質は、ＭＤＬ−１の細胞外ドメインを含む。さらに、細胞外ドメインのフラグメントはまた、ＭＤＬ−１タンパク質の可溶性形態を提供する。フラグメントは、細胞外領域の所望の部分を単離する公知の技術を使用して調製され得る。
【０１３４】
本発明はまた、本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドと、「タグ」と呼ばれ得る第２のポリペプチド部分もしくは第２のポリヌクレオチド部分とを含む、融合物を包含する。本発明の融合物は、表１に示されるポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのいずれか、またはそれらの任意の部分配列もしくはフラグメント（上記に考察される）を含み得る。本発明の融合ポリペプチドは、例えば、本発明のポリヌクレオチドまたはそのフラグメントを、上に記載されるような発現ベクター中に挿入することによって、簡便に構築され得る。本発明の融合物は、精製または検出を容易するタグを含み得る。このようなタグとしては、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ヘキサヒスチジン（Ｈｉｓ６）タグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ、赤血球凝集素（ＨＡ）タグ、セルロース結合タンパク質（ＣＢＰ）タグ、およびｍｙｃタグが挙げられる。検出可能な標識またはタグ（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６８Ｇａ、１８Ｆ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１３ｍＩｎ、７６Ｂｒ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１２３Ｉ、１１１Ｉｎおよび６８Ｇａ）もまた、本発明のポリペプチドを標識するために使用され得る。このような融合物を構築および使用するための方法は、非常に従来的であり、当該分野で周知である。
【０１３５】
ポリペプチドにおいて生じる改変（例えば、翻訳後修飾）は、しばしば、それがなされる方法の関数である。例えば、宿主においてクローニングした遺伝子を発現することによって作製されるポリペプチドについて、その改変の性質および程度は、大部分は、宿主細胞の翻訳後修飾能力、およびそのポリペプチドのアミノ酸配列中に存在する修飾シグナルによって、決定される。例えば、周知であるように、グリコシル化は、しばしば、細菌宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）において生じない。従って、グリコシル化が望ましい場合、ポリペプチドは、グリコシル化する宿主（一般的には、真核生物細胞）において発現され得る。昆虫細胞は、しばしば、哺乳動物細胞と同様に翻訳後グリコシル化を行う。この理由のために、昆虫細胞発現系は、グリコシル化のネイティブパターンを有する哺乳動物タンパク質を効率的に発現するために開発されている。あるいは、脱グリコシル化酵素が、真核生物発現系における生成の間に結合した糖質を除去するために、使用され得る。
【０１３６】
本発明のＭＤＬ−１ペプチドのアナログは、化学合成によってか、または部位特異的変異誘発（Ｇｉｌｌｍａｎら、（１９７９）Ｇｅｎｅ  ８：８１；Ｒｏｂｅｒｔｓら、（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ、３２８：７３１またはＩｎｎｉｓ（編）、１９９０、ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ）を使用することによって、もしくはＤａｕｇｈｅｒｔｙら、（１９９１）（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２４７１）によって例示されるようなポリメラーゼ連鎖反応法である、そのペプチドをコードする核酸を改変するＰＣＲ（Ｓａｉｋｉら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：４８７）を使用することによって、調製され得る。組換え産物の精製または検出のためにエピトープタグを付加することが、想定される。
【０１３７】
さらに他のアナログは、反応性側鎖を介したタンパク質の架橋形成における有用性について当該分野で公知である、薬剤の使用によって調製される。架橋剤による好ましい誘導体化の部位は、遊離アミノ基または遊離カルボキシ基、遊離糖質部分および遊離システイン残基である。
【０１３８】
（タンパク質精製）
代表的に、本発明のペプチドは、培養（例えば、Ｌｕｒｉａブロスのなどの液体培養）において増殖される宿主細胞中で、上記ポリペプチドをコードする核酸を発現することによって産生され得る。例えば、上記核酸は、上記宿主細胞に存在するベクター（例えば、プラスミド）の一部であり得る。発現後、本発明のペプチドは、培養された細胞から単離され得る。本発明のペプチドは、標準的な方法（塩沈もしくはアルコール沈殿、アフィニティクロマトグラフィ（例えば、上で考察されるようなタグ化ペプチドの精製と組み合わせて使用される）、調製用ディスクゲル電気泳動、等電集束法、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、逆相ＨＰＬＣ、ゲル濾過、カチオン交換クロマトグラフィーおよびアニオン交換クロマトグラフィー、および分配クロマトグラフィー、および向流分配が挙げられるが、これらに限定されない）によって、精製され得る。このような精製方法は、当該分野で周知であり、例えば、「Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１８２巻，Ｍ．Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ編、１９９０、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹに開示される。
【０１３９】
（抗体構造）
一般に、基本的な抗体構造の単位は、四量体を構成することが公知である。各四量体は、同一のポリペプチド鎖対を２つ含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０アミノ酸以上の可変領域を含み得る。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定し得る。代表的に、ヒト軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。さらに、ヒト重鎖は、代表的に、μ、δ、γ、α、またはυとして分類され、そしてそれらは、それぞれ、抗体のアイソタイプを、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして規定する。軽鎖内および重鎖内で、可変領域および定常領域は、約１２アミノ酸以上の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖はまた、約１０アミノ酸以上の「Ｄ」領域を含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））（全ての目的のためにその全体が参考として援用される）を参照のこと。
【０１４０】
軽鎖／重鎖対の各々の可変領域は、抗体結合部位を形成し得る。したがって、一般に、インタクトなＩｇＧ抗体は、２つの結合部位を有する。二機能性抗体または二重特異的抗体を除いて、上記２つの結合部位は、一般に、同じである。
【０１４１】
通常、上記鎖の全ては、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示し、そのフレームワーク領域は、３個の超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとも称される）によって結合される。各対の２つの鎖由来のＣＤＲは、通常、上記フレームワーク領域によって整列されて、特異的なエピトープに対する結合を可能にする。一般に、Ｎ末端からＣ末端までに、軽鎖および重鎖の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインに対するアミノ酸の割り当ては、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．；第５版；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ、（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら、（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら、（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３に従う。
【０１４２】
（抗体分子）
本発明の抗ＭＤＬ−１抗体分子は、好ましくは、ヒトＭＤＬ−１を認識する。例えば、配列番号１のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子によって発現されるポリペプチド。例えば、配列番号２のヒトＭＤＬ−１タンパク質のアミノ酸残基２６〜１８８によって規定される可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチド。しかし、本発明は、マウスＭＤＬ−１、および他の種（好ましくは、哺乳動物（例えば、ラット、ウサギ、ヒツジまたはイヌ））由来のＭＤＬ−１を認識する、抗体分子を包含する。例えば、配列番号３のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子によって発現されるポリペプチド。例えば、配列番号４のマウスＭＤＬ−１タンパク質のアミノ酸残基２６〜１９０によって規定される可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチド。本発明はまた、ＭＤＬ−１もしくはその任意のフラグメントと複合体形成された、抗ＭＤＬ−１抗体またはそのフラグメント；あるいは細胞表面上にＭＤＬ−１またはその任意の部分もしくはフラグメントを発現している任意の細胞と複合体形成された、抗ＭＤＬ−１抗体またはそのフラグメントを含む。このような複合体は、上記抗体または抗体フラグメントと、ＭＤＬ−１または上記ＭＤＬ−１フラグメントとを接触させることによって作製され得る。
【０１４３】
１つの実施形態において、ＭＤＬ−１に対する完全ヒトモノクローナル抗体が、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を保有するトランスジェニックマウスを使用して、産生される。本明細書中で「ＨｕＭＡｂ」マウスと称され得るこれらのトランスジェニックマウスは、再配列されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖の免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子の小型遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｉ）を、内因性のμ鎖およびκ鎖の遺伝子座を不活化する標的化変異と一緒に含む（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９）。したがって、そのマウスは、マウスＩｇＭまたはマウスＩｇκの減少した発現を示し、そして免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖トランスジーンおよびヒト軽鎖トランスジーンは、高親和性のヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を産生するクラススイッチおよび体細胞変異を起こす（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら、（１９９４）、前出；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．、（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１において概説される；Ｌｏｎｂｅｒｇら、（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３、およびＨａｒｄｉｎｇら、（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ７６４：５３６−５４６）。ＨｕＭａｂマウスの作製は、当該分野において一般的に公知であり、そしてそれは、例えば、Ｔａｙｌｏｒら、（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−６２９５；Ｃｈｅｎら、（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：６４７−６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：３７２０−３７２４；Ｃｈｏｉら、（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−１２３；Ｃｈｅｎら、（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎら、（１９９４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０；Ｌｏｎｂｅｒｇら、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．、（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１；Ｔａｙｌｏｒら、（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：５７９−５９１；Ｌｏｎｂｅｒｇら、（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３：６５−９３；Ｈａｒｄｉｎｇら、（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ７６４：５３６−５４６；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１およびＨａｒｄｉｎｇら、（１９９５）Ａｎｎａｌｓ  ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６（これらの全ての内容は、その全体が本明細書により参考として援用される）に記載される。さらに、米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８７７，３９７号；同第５，６６１，０１６号；同第５，８１４，３��８号；同第５，８７４，２９９号；同第５，７７０，４２９号および同第５，５４５，８０７号；ならびに国際特許出願公開第ＷＯ  ９８／２４８８４号；同第ＷＯ  ９４／２５５８５号；同第ＷＯ  ９３／１２２２７号；同第ＷＯ  ９２／２２６４５号および同第ＷＯ  ９２／０３９１８号（これらの全ての開示は、その全体が本明細書により参考として援用される）を参照のこと。
【０１４４】
ＭＤＬ−１に対するヒトの完全なモノクローナル抗体を産生するために、ＨｕＭａｂマウスが、Ｌｏｎｂｅｒｇら、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１およびＷＯ  ９８／２４８８４によって記載されるような、抗原性ＭＤＬ−１ポリペプチドによって免疫化され得る。好ましくは、そのマウスは、最初の免疫化の際に、６〜１６週齢である。例えば、ＭＤＬ−１の精製された調製物が、上記ＨｕＭａｂマウスを免疫化するために、腹腔内に使用され得る。上記マウスはまた、ＭＤＬ−１遺伝子によって安定に形質転換またはトランスフェクトされた細胞全体を用いて、免疫化され得る。
【０１４５】
一般に、ＨｕＭＡｂトランスジェニックマウスは、まず、完全フロイントアジュバント中の抗原によって腹腔内（ＩＰ）で免疫化され、次いで不完全フロイントアジュバント中の抗原によって１週間おきにＩＰ免疫化（通常は、合計で６回まで）が行われる場合に、良好に応答する。マウスは、最初に、ＭＤＬ−１を発現する細胞によって免疫化され得、次いでＭＤＬ−１の可溶性フラグメントによって免疫化され得、そしてそれら２つの抗原による交互の免疫化を継続的に受け得る。上記免疫応答は、免疫化プロトコルプロセスの間中、眼窩後方からの採血（ｒｅｔｒｏｏｒｂｉｔａｌ  ｂｌｅｅｄ）によって得られる血漿サンプルを用いてモニタリングされ得る。その血漿は、例えば、ＥＬＩＳＡによって抗ＭＤＬ−１抗体の存在についてスクリーニングされ得る。そして十分な力価の免疫グロブリンを有するマウスは、融合のために使用され得る。マウスは、屠殺してその脾臓を取り出す３日前に、抗原によって静脈内でブーストされ得る。各抗原について２〜３回の融合が行われる必要があり得ることが、予期される。数匹のマウスが、各抗原について免疫化され得る。例えば、合計で１２匹のＨＣ０７系統およびＨＣ０１２系統のＨｕＭＡｂマウスが、免疫化され得る。
【０１４６】
上記モノクローナル抗ＭＤＬ−１抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、当該分野において一般的に公知である方法によって産生され得る。これらの方法としては、最初にＫｏｈｌｅｒら、（１９７５）（Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）によって開発されたハイブリドーマ技術、ならびにトリオーマ技術（Ｈｅｒｉｎｇら、（１９８８）Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．４７：２１１−２１６およびＨａｇｉｗａｒａら、（１９９３）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ４：１５）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２およびＣｏｔｅら、（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  ８０：２０２６−２０３０）、およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、ｐｐ．７７−９６、１９８５）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、マウス脾細胞が単離され、そしてそのマウス脾細胞は、標準的なプロトコルに基づき、ＰＥＧを用いてマウス骨髄腫細胞株に融合される。次いで得られたハイブリドーマは、抗原特異的抗体の産生のためにスクリーニングされ得る。例えば、免疫化されたマウス由来の脾リンパ球の単一細胞懸濁物は、５０％  ＰＥＧを用いて、６分の１の数のＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌性マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ  １５８０）に融合され得る。細胞は、１ｍＬあたり約２×１０５個の細胞で平底マイクロタイタープレートにプレートされ得、次いで２０％胎仔クローン血清、１８％「６５３」順化培地（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  ｍｅｄｉａ）、５％  ｏｒｉｇｅｎ（ＩＧＥＮ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、５０単位／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシンおよび１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴは、融合の２４時間後に添加される）を含む選択培地において２週間インキュベートされ得る。２週間後、細胞は、上記ＨＡＴがＨＴで置換される培地中で培養され得る。次いで個々のウェルは、ＥＬＩＳＡによって、ヒト抗ＭＤＬ−１モノクローナルＩｇＧ抗体についてスクリーニングされ得る。一旦大規模なハイブリドーマの増殖が起きると、培地は、通常、１０〜１４日後に観察され得る。抗体分泌性ハイブリドーマは、再度プレートされ、再びスクリーニングされ得、そしてヒトＩｇＧ（抗ＭＤＬ−１モノクローナル抗体）についてなおもポジティブな場合、そのハイブリドーマは、限界希釈によって少なくとも２回サブクローニングされ得る。次いで安定なサブクローンは、特徴付けのための組織培養培地中で、少量の抗体をもたらすためにインビトロで培養され得る。
【０１４７】
本発明の抗ＭＤＬ−１抗体分子はまた、（例えば、上で考察されるようなＥ．ｃｏｌｉ／Ｔ７発現系において）組換えで産生され得る。この実施形態において、本発明の抗体分子（例えば、ＶＨまたはＶＬ）をコードする核酸は、ｐＥＴベースのプラスミドに挿入され得、そしてその核酸は、Ｅ．ｃｏｌｉ／Ｔ７系において発現され得る。組換え抗体を産生するための数種の方法が存在し、それらの方法は、当該分野において公知である。抗体の組換え産生のための方法の１つの例は、米国特許第４，８１６，５６７号（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示される。形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための任意の公知の方法により得る。異種のポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入するための方法は、当該分野において周知であり、そしてそれらの方法としては、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム中へのポリヌクレオチドのカプセル化、核内へのＤＮＡのバイオリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）インジェクションおよび直接マイクロインジェクションが挙げられる。さらに、核酸分子は、ウイルスベクターによって哺乳動物細胞に導入され得る。細胞を形質転換する方法は、当該分野において周知である。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，９１２，０４０号；同第４，７４０，４６１号および同第４，９５９，４５５号を参照のこと。
【０１４８】
発現用の宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該分野において周知であり、そしてその細胞株としては、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が挙げられる。これらとしては、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ラット乳児腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、および多くの他の細胞株が挙げられる。哺乳動物宿主細胞としては、ヒトの細胞、マウスの細胞、ラットの細胞、イヌの細胞、サルの細胞、ブタの細胞、ヤギの細胞、ウシの細胞、ウマの細胞およびハムスターの細胞が挙げられる。特に好ましい細胞株は、細胞株が高い発現レベルを有することの決定によって選択される。使用され得る他の細胞は、昆虫細胞株（例えば、Ｓｆ９細胞）、両生生物細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞である。重鎖またはその抗原結合フラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合フラグメントをコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞に導入される場合、上記抗体は、宿主細胞におけるその抗体の発現を可能にするのに十分な時間、その宿主細胞を培養することによってか、またはより好ましくは宿主細胞が増殖する培養培地中にその抗体を５回の分泌することによって、産生される。
【０１４９】
抗体は、標準的なタンパク質精製法を使用して培養培地から回収され得る。さらに、産生細胞株由来の本発明の抗体（またはそれに由来する他の部分）の発現は、多くの公知の技術を使用して増強され得る。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、特定の条件下において発現を増強するための一般的なアプローチである。ＧＳ系は、全体的または部分的に、欧州特許第０  ２１６  ８４６号、同第０  ２５６  ０５５号、および同第０  ３２３  ９９７号ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号に関連して考察される。
【０１５０】
異なる細胞株によって発現されるかまたは異なるトランスジェニック動物において発現される抗体は、互いに異なるグリコシル化を有する可能性がある。しかし、本明細書中に提供される核酸分子によってコードされる全ての抗体、または本明細書中に提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体は、それらの抗体のグリコシル化にかかわらず、本発明の一部である。
【０１５１】
本発明の範囲内に含まれる抗体フラグメント（好ましくは、抗原結合性抗体フラグメント）はまた、例えば、ペプシンによるＩｇＧの酵素的切断によって産生され得るＦ（ａｂ）２フラグメントを含む。Ｆａｂフラグメントは、例えば、ジチオスレイトールまたはメルカプトエチルアミンを用いたＦ（ａｂ）２の還元によって産生され得る。Ｆａｂフラグメントは、ジスルフィド架橋によってＶＨ−ＣＨ１鎖に付加されたＶＬ−ＣＬ鎖である。Ｆ（ａｂ）２フラグメントは、２つのＦａｂフラグメントであり、次に、それらのＦａｂフラグメントは、２つのジスルフィド架橋によって付加される。Ｆ（ａｂ）２分子のＦａｂ部分は、ジスルフィド架橋が配置されるＦｃ領域の部分を含む。
【０１５２】
周知である通り、Ｆｖ（完全な抗原認識部位および完全な抗原結合部位を含む、最小の抗体フラグメント）は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの非共有結合による二量体（ＶＨ−ＶＬ）からなる。ネイティブな抗体において見出される配置に対応するこの配置において、各可変ドメインの３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、上記ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を規定するように相互作用する。まとめると、６個のＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を付与する。上記ＣＤＲに隣接するフレームワーク（ＦＲ）は、本質的に、異なる種のネイティブな免疫グロブリンにおいて保存される三次構造を有し、この三次構造の違いは、ヒトとマウスとにおける違いと同程度である。これらのＦＲは、ＣＤＲをその適切な方向で保持するように機能する。定常ドメインは、結合機能に必要とされないが、ＶＨ−ＶＬ相互作用の安定化を補助し得る。単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３個のＣＤＲのみを含むＦｖの半分）が、抗原を認識し、そして抗原に結合する能力を有するとしても、それは、通常、完全な結合部位よりも低い親和性である（Ｐａｉｎｔｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１（１９７２）、１３２７−１３３７）。したがって、本発明において定義されそして記載されるような抗体構築物の結合部位のこのドメインは、異なる免疫グロブリンのＶＨ−ＶＬドメイン、ＶＨ−ＶＨドメインまたはＶＬ−ＶＬドメインからなる対であり得る。ポリペプチド鎖内のＶＨドメインとＶＬドメインとの順序は、本発明に関して決定的ではなく、上記で与えられるドメインの順序は、通常、あらゆる機能の損失を伴わずに反転され得る。しかし、上記ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、抗原結合部位が適切に折り畳まれ得るように配置されることが、重要である。ＦＶフラグメントは、ＶＬ領域またはＶＨ領域である。
【０１５３】
その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、種々のクラスへと割当てられ得る。免疫グロブリンについて、少なくとも５つの主要なクラスが存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ。これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、およびＩｇＧ−４；ＩｇＡ−１およびＩｇＡ−２）へとさらに分割され得る。
【０１５４】
本発明の抗ＭＤＬ−１抗体分子またはＭＤＬ−１の可溶性タンパク質はまた、化学物質部分に結合体化され得る。この化学物質部分は、とりわけ、ポリマー、放射性核種または細胞傷害性因子であり得る。好ましくは、その化学物質部分は、被験体の身体におけるその抗体分子の半減期を増加するポリマーである。適切なポリマーとしては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、分子量２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、または４０ｋＤａを有するＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｌｅｅら、（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３−９８１）は、ＰＥＧ結合体化単鎖抗体を開示する。Ｗｅｎら、（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５−５５３）は、放射性金属キレート剤（ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ））に結合されたＰＥＧと抗体とを結合体化することを開示する。
【０１５５】
本発明の抗体および抗体フラグメント、またはＭＤＬ−１の可溶性タンパク質もしくはそのフラグメントはまた、標識（例えば、９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７Ｃｕ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈ、４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、５２Ｔｒおよび５６Ｆｅ）と結合体化され得る。
【０１５６】
本発明の抗体および抗体フラグメント、またはＭＤＬ−１の可溶性タンパク質もしくはそのフラグメントはまた、蛍光標識または化学発光標識（発蛍光団（例えば、希土類キレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、イソチオシアネート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレスカミン（ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロン（ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ）、ルシフェリン、ルミナール標識、イソルミナール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、シュウ酸エステル標識、エクオリン（ａｅｑｕｏｒｉｎ）標識、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン（ｓｐｉｎ）標識、および安定なフリーラジカルを包含する）と結合体化され得る。
【０１５７】
上記抗体分子または可溶性ＭＤＬ−１タンパク質はまた、細胞傷害性因子（例えば、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ内毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉのタンパク質および化合物（例えば、脂肪酸）、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｉａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシンおよびエノマイシン）に結合体化され得る。
【０１５８】
本発明の抗体分子またはタンパク質分子を種々の部分に結合体化するために、当該分野において公知である任意の方法が、使用され得、その方法としては、Ｈｕｎｔｅｒら、（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ  １４４：９４５；Ｄａｖｉｄら、（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４；Ｐａｉｎら、（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９；およびＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．，（１９８２）Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７によって記載される方法が挙げられる。抗体およびタンパク質を結合体化するための方法は、慣習的であり、当該分野において非常に周知である。
【０１５９】
本発明のＭＤＬ−１ペプチドの抗原性（すなわち、免疫原性）フラグメントは、本発明の範囲内である。抗原性フラグメントは、免疫原として使用されるように、他の物質（例えば、融合したポリペプチドまたは共有結合したポリペプチド）に結合され得る。上記抗原性ペプチドは、ＭＤＬ−１またはその任意のフラグメントを認識する抗体分子を調製するために有用であり得る。抗原およびそのフラグメントは、種々の免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミンまたはオボアルブミン）に融合されても、共有結合されてもよい（Ｃｏｌｉｇａｎら、（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第２巻、９．３−９．４、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ）。適切な抗原性のペプチドは、アルゴリズムを使用してポリペプチド標的から選択され得る（例えば、Ｐａｒｋｅｒら、（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２５：５４２５−５４３２；ＪａｍｅｓｏｎおよびＷｏｌｆ、（１９８８）Ｃａｂｉｏｓ  ４：１８１−１８６；ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ（１９８３）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４８３−４８９を参照のこと）。
【０１６０】
常に必要であるわけではないが、ＭＤＬ−１ペプチドが、免疫学的に適格な宿主において抗体産生を誘発するための抗原として使用される場合、より小さい抗原性フラグメントが、好ましくは、最初に、架橋形成もしくはコンカテマー形成によってか、または免疫原性キャリア分子（すなわち、宿主動物において免疫学的応答を独立して誘発する特性を有する高分子（例えば、ジフテリア毒素または破傷風毒素））にカップリングすることによって、より免疫原性にされる。架橋形成またはキャリア分子への結合体化が、必要とされ得る。なぜなら、小さいポリペプチドフラグメントは、ときとして、ハプテン（抗体に特異的に結合し得るが抗体産生を誘発する能力はない分子（すなわち、それらの分子は、免疫原性ではない））として作用するからである。免疫原性キャリア分子へのこのようなフラグメントの結合体化は、そのようなフラグメントを、「キャリア効果」として一般的に公知であるものを介して、より免疫原性にする。
【０１６１】
キャリア分子としては、例えば、タンパク質、および天然ポリマー化合物または合成ポリマー化合物（例えば、ポリペプチド、多糖、リポ多糖など）が挙げられる。タンパク質キャリア分子が、特に好ましく、それとしては、キーホールリンペットヘモシアニンおよび哺乳動物血清タンパク質（例えば、ヒトγグロブリンもしくはウシγグロブリン、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、もしくはウサギ血清アルブミン、またはこのようなタンパク質のメチル化誘導体もしくは他の誘導体）が挙げられるが、これらに限定されない。他のタンパク質キャリアは、当業者にとって明らかである。好ましくは、このタンパク質キャリアは、そのフラグメントに対する抗体が誘発される宿主動物に対して、外来である。
【０１６２】
このキャリア分子に対する共有結合は、当該分野において周知である方法を使用して達成され得；その正確な選択は、使用されるキャリア分子の性質によって示される。その免疫原性キャリア分子がタンパク質である場合、本発明のフラグメントは、例えば、水溶性カルボジイミド（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはグルタルアルデヒド）を使用して、結合され得る。
【０１６３】
これらのようなカップリング剤はまた、別のキャリア分子を使用することなく、そのフラグメントをそのカップリング剤自体に架橋するために使用され得る。凝集物へのそのような架橋形成はまた、免疫原性を増加し得る。免疫原性はまた、公知のアジュバントを単独でかまたはカップリングもしくは凝集と組み合わせて使用することによって、増加され得る。
【０１６４】
動物のワクチン接種のためのアジュバントとしては、アジュバント６５（落花生油、モノオレイン酸マンノイド（ｍａｎｎｉｄｅ）、モノステアリン酸アルミニウムを含む）；フロイント完全アジュバントもしくはフロイント不完全アジュバント；ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、およびミョウバン）；界面活性剤（例えば、ヘキサデシルアミン、オクタデシルアミン、リソレシチン、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシメチル）プロパンジアミン、メトキシヘキサデシルグリセロール、およびプルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール；ポリアニオン（例えば、ピラン、硫酸デキストラン、ポリＩＣ、ポリアクリル酸、およびカルボポール）；ペプチド（例えば、ムラミルジペプチド、ジメチルグリシンおよびタフトシン（ｔｕｆｔｓｉｎ）；ならびに油乳剤が挙げられるが、これらに限定されない。このポリペプチドはまた、リポソームまたは他のマイクロキャリア中に組み込まれた後に、投与され得る。
【０１６５】
アジュバントおよび種々の局面の免疫アッセイに関する情報は、例えば、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｌｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，第３版，１９８７，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋによるシリーズ中に開示される。ポリクローナル抗血清を調製するための方法を網羅する他の有用な参考文献としては、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９６９，Ｈｏｅｂｅｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，ＨａｒｐｅｒおよびＲｏｗ；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ，Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，１９６２，Ｄｏｖｅｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ならびにＷｉｌｌｉａｍｓら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｌｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ，第１巻，１９６７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋが挙げられる。
【０１６６】
本発明の抗ＭＤＬ−１「抗体分子」としては、抗ＭＤＬ−１抗体（例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異的抗体および抗イディオタイプ抗体）およびフラグメント（好ましくは、その抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ抗体フラグメント、Ｆ（ａｂ）２抗体フラグメント、Ｆｖ抗体フラグメント（例えば、ＶＨまたはＶＬ）、単鎖Ｆｖ抗体フラグメントおよびｄｓＦｖ抗体フラグメント））が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、本発明の抗体分子は、完全ヒト抗体、マウス抗体、ウサギ抗体、ニワトリ抗体、ヒト／マウスキメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。
【０１６７】
本発明の抗ＭＤＬ−１抗体分子は、好ましくは、本発明のヒトＭＤＬ−１ペプチドまたは本発明のマウスＭＤＬ−１ペプチドを認識する；しかし、本発明は、異なる種（好ましくは、哺乳動物（例えば、ブタ、ラット、ウサギ、ヒツジまたはイヌ））に由来するＭＤＬ−１ペプチドを認識する抗体分子を包含する。
【０１６８】
本発明はまた、本発明のＭＤＬ−１ペプチドと１つ以上の抗体分子とを含む複合体を包含する。このような複合体は、上記抗体分子とその同種（ｃｏｇｎａｔｅ）のペプチドとを単純に接触させることによって作製され得る。
【０１６９】
種々の方法が、本発明の抗体分子を作製するために使用され得る。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、米国特許第５，６２５，１２６号；同第５，８７７，３９７号；同第６，２５５，４５８号；同第６，０２３，０１０号および同第５，８７４，２９９号と同様の方法によって産生される。次いでモノクローナルの完全ヒト抗ＭＤＬ−１ペプチド抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、当該分野において一般的に公知である方法によって産生され得る。これらの方法としては、Ｋｏｈｌｅｒら、（１９７５）（Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）によって最初に開発されたハイブリドーマ技術、ならびにトリオーマ技術（Ｈｅｒｉｎｇら、（１９８８）Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．４７：２１１−２１６およびＨａｇｉｗａｒａら、（１９９３）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ４：１５）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２およびＣｏｔｅら、（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  ８０：２０２６−２０３０）、およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｑｐ  ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６，１９８５）が挙げられるが、これらに限定されない。再び、ＥＬＩＳＡは、ハイブリドーマ細胞が抗ＭＤＬ−１ペプチド抗体を発現しているか否かを決定するために使用され得る。
【０１７０】
抗原の精製は、抗体の産生に必要ではない。免疫化は、ＤＮＡベクターによる免疫化によって行われ得る（例えば、Ｗａｎｇら、（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２２８：２７８−２８４を参照のこと）。あるいは、動物は、目的の抗原を有する細胞を用いて免疫化され得る。次いで脾細胞が、免疫化された動物から単離され得、そしてその脾細胞は、ハイブリドーマを産生するために骨髄腫細胞株に融合され得る（Ｍｅｙａａｒｄら、（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら、（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら、（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：１９１１−１９１８）。得られたハイブリドーマは、機能的アッセイまたは生物学的アッセイ（すなわち、精製された抗原の所有に依存しないアッセイ）によって所望の抗体の産生についてスクリーニングされ得る。細胞を用いた免疫化は、精製された抗原を用いた免疫化より抗体産生に優れていることを証明し得る（Ｋａｉｔｈａｍａｎａら、（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４）。
【０１７１】
抗原に対する抗体の結合特性およびレセプターに対するリガンドの結合特性は、例えば、表面プラスモン共鳴（Ｋａｒｌｓｓｏｎら、（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４５：２２９−２４０；Ｎｅｒｉら、（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：１２７１−１２７５；Ｊｏｎｓｓｏｎら、（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７）、または競合ＥＬＩＳＡ（Ｆｒｉｇｕｅｔら、（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７７：３０５−３１９；Ｈｕｂｂｌｅ、（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：３０５−３０６）によって測定され得る。抗体は、その抗体の標的抗原および関連する結合型タンパク質を単離するアフィニティー精製のために使用され得る（例えば、Ｗｉｌｃｈｅｋら、（１９８４）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０４：３−５５を参照のこと）。
【０１７２】
ＭＤＬ−１の改変体に特異的に結合する抗体は、その改変体が、本明細書中に列挙されるものと実質的に同じ核酸およびアミノ酸配列を有するがその核酸またはアミノ酸配列の機能的側面には実質的に影響しない置換を保有する場合、企図された方法の定義の範囲内である。これらの核酸およびポリペプチドの生物学的機能を実質的に変えない領域の切断、欠失、付加、および置換を有する改変体は、企図された方法の定義の範囲内である。
【０１７３】
（抗体結合アッセイ）
本発明の抗体は、当該分野において公知である任意の方法によって、免疫特異的結合（ｉｍｍｕｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ）についてアッセイされ得る。使用され得るイムノアッセイとしては、いくつか挙げるならばウェスタンブロット、放射免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイなどの技術を使用する、競合的アッセイ系および非競合的アッセイ系が挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは、慣習的であり、当該分野において周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。例示的なイムノアッセイは、下で簡単に記載される（しかし、それは、限定として意図されない）。
【０１７４】
免疫沈降プロトコルは、一般に、溶解緩衝液（例えば、プロテインホスファターゼおよび／またはプロテアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチニン、バナジン酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％  ＮＰ−４０またはＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１％デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）、１％  Ｔｒａｓｙｌｏｌ））において細胞の集団を溶解すること、その細胞溶解物に目的の抗体を添加すること、４℃にてしばらくの間（例えば、１〜４時間）インキュベートすること、その細胞溶解物にプロテインＡセファロースビーズおよび／またはプロテインＧセファロースビーズを添加すること、４℃にて約１時間以上インキュベートすること、溶解緩衝液中でそのビーズを洗浄すること、ならびにＳＤＳ／サンプル緩衝液中にそのビーズを再懸濁することを包含する。目的の抗体が特定の抗原を免疫沈降させる能力は、例えば、ウェスタンブロット分析によって評価され得る。当業者は、抗原に対する抗体の結合を増大させバックグラウンドを減少させるために改変され得る、パラメータ（例えば、セファロースビーズによって上記細胞溶解物を前洗浄すること）に精通している。免疫沈降プロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１０．１６．１を参照のこと。
【０１７５】
ウェスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製すること、ポリアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に依存する８％〜２０％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）におけるタンパク質サンプルの電気泳動、そのタンパク質サンプルをそのポリアクリルアミドゲルから、ニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロンなどのメンブレンに転写すること、ブロッキング溶液（例えば、３％  ＢＳＡまたは無脂肪乳を含むＰＢＳ）中でそのメンブレンをブロッキングすること、洗浄緩衝液（例えば、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０）中でそのメンブレンを洗浄すること、ブロッキング緩衝液中に希釈された一次抗体（目的の抗体）を用いてそのメンブレンをブロッキングすること、洗浄緩衝液中でそのメンブレンを洗浄すること、酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）または放射性分子（例えば、３２Ｐまたは１２５Ｉ）と結合体化されブロッキング緩衝液中に希釈された二次抗体（これは、一次抗体を認識する（例えば、抗ヒト抗体））を用いてそのメンブレンをブロッキングすること、洗浄緩衝液中でそのメンブレンを洗浄すること、およびその抗原の存在を検出することを包含する。当業者は、検出されるシグナルを増強するため、およびバックグラウンドノイズを低下させるために改変され得るパラメータに精通している。ウェスタンブロットプロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１０．８．１を参照のこと。
【０１７６】
ＥＬＩＳＡは、抗原を調製すること、９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルをその抗原によってコーティングすること、酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）などの検出可能な化合物と結合体化された目的の抗体をそのウェルに添加してしばらくの間インキュベートすること、およびその抗原の存在を検出することを包含する。ＥＬＩＳＡにおいて、目的の抗体は、検出可能な化合物と結合体化される必要はない；代わりに、検出可能な化合物と結合体化された第２の抗体（これは、目的の抗体を認識する）が、上記ウェルに添加され得る。さらに、上記抗原によって上記ウェルをコーティングすることの代わりに、上記抗体を、そのウェルにコーティングし得る。この場合において、そのコーティングされたウェルに対する目的の抗原の添加後に、検出可能な化合物と結合体化された第２の抗体が、添加され得る。当業者は、検出されるシグナルを増強するために改変され得るパラメータおよび当該分野において公知であるＥＬＩＳＡの他のバリエーションに精通している。ＥＬＩＳＡに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１１．２．１を参照のこと。
【０１７７】
抗原に対する抗体の結合親和性および抗体−抗原相互作用の解離速度は、競合結合アッセイによって決定され得る。競合結合アッセイの１つの例は、放射免疫アッセイであり、それは、漸増量の標識されていない抗原の存在下における標識された抗原（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）と目的の抗体とのインキュベーション、およびその標識された抗原に結合されたその抗体の検出を包含する。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性およびその結合の解離速度は、そのデータからスキャッチャードプロット分析によって決定され得る。第２の抗体との競合もまた、放射免疫アッセイを使用して決定され得る。この場合において、上記抗原は、漸増量の標識されていない第２の抗体の存在下で、標識化合物（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）に結合体化された目的の抗体と一緒にインキュベートされる。
【０１７８】
抗体が、ある抗原を、別の抗原と比較して優先的かつ特異的に結合する能力は、当該分野において公知である任意の方法を使用して決定され得る。非限定的な例として、抗体は、その抗体が、第１の抗原を第２の抗原に対するその抗体の解離定数（ＫＤ）より低いＫＤで結合する場合、優先的にその第１の抗原を結合すると見なされ得る。別の非限定的な実施形態において、抗体は、その抗体が、第１の抗原を第２の抗原に対するその抗体の解離定数（ＫＤ）より少なくとも１桁低い親和性（すなわち、ＫＤ）で結合する場合、優先的にその第１の抗原を結合すると見なされ得る。別の非限定的な実施形態において、抗体は、その抗体が、第１の抗原を第２の抗原に対するその抗体の解離定数（ＫＤ）より少なくとも２桁低い親和性（すなわち、ＫＤ）で結合する場合、優先的にその第１の抗原を結合すると見なされ得る。
【０１７９】
別の非限定的な実施形態において、抗体は、その抗体が、第１の抗原を第２の抗原に対するその抗体の解離速度（Ｋｏｆｆ）より低いＫｏｆｆで結合する場合、優先的にその第１の抗原を結合すると見なされ得る。別の非限定的な実施形態において、抗体は、その抗体が、第１の抗原を第２の抗原に対するその抗体のＫｏｆｆより少なくとも１桁低いＫｏｆｆで結合する場合、優先的にその第１の抗原を結合すると見なされ得る。別の非限定的な実施形態において、抗体は、その抗体が、第１の抗原を第２の抗原に対するその抗体のＫｏｆｆより少なくとも２桁低いＫｏｆｆで結合する場合、優先的にその第１の抗原を結合すると見なされ得る。
【０１８０】
本発明の抗体はまた、その抗体の交差反応性（ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）に関して記載され得るか、または特定され得る。本発明のポリペプチドのいかなる他のアナログも、オルソログもホモログも結合しない抗体が、含まれる。本発明のポリペプチドに対して少なくとも１００％、少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９７％、少なくとも９６％、少なくとも９５％、少なくとも９４％、少なくとも９３％、少なくとも９２％、少なくとも９１％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、および少なくとも５０％の（当該分野において公知である方法および本明細書中に記載される方法を使用して算出されるような）同一性を有するポリペプチドを結合する抗体もまた、本発明に包含される。
【０１８１】
本発明のポリペプチドに対して１００％未満、９９％未満、９８％未満、９７％未満、９６％未満、９５％未満、９４％未満、９３％未満、９２％未満、９１％未満、９０％未満、８０％未満、７０％未満、６０％未満、および５０％未満の（当該分野において公知である方法および本明細書中に記載される方法を使用して算出されるような）同一性を有するポリペプチドを結合しない抗体もまた、本発明に包含される。本発明は、（本明細書中に記載されるような）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下において本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを結合する抗体を、さらに包含する。本発明の抗体はまた、本発明のポリペプチドに対するその抗体の結合親和性に関して記載され得るか、または特定され得る。
【０１８２】
（治療的使用および診断的使用）
本発明は、増殖性障害（例えば、癌）の診断のための方法、および増殖性障害（例えば、癌）の処置のための方法を提供する。本発明は、増殖性障害（癌（例えば、腫瘍））の診断のための方法、および増殖性障害（癌（例えば、腫瘍））の処置のための方法を提供する。本発明はまた、固形腫瘍の診断のための方法および固形腫瘍の処置のための方法を提供する。上記方法は、ＭＤＬ−１のポリペプチドまたは核酸に対して特異的な結合組成物（例えば、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または可溶性ＭＤＬ−１タンパク質または核酸プローブまたはプライマー）の使用を包含し得る。コントロール結合組成物（例えば、コントロール抗体（例えば、Ｌａｃｅｙら、（２００３）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４８：１０３−１０９；ＣｈｏｙおよびＰａｎａｙｉ、（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：９０７−９１６；ＧｒｅａｖｅｓおよびＷｅｉｎｓｔｅｉｎ、（１９９５）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３２：５８１−５８８；ＲｏｂｅｒｔおよびＫｕｐｐｅｒ、（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１８１７−１８２８；Ｌｅｂｗｏｈｌ、（２００３）Ｌａｎｃｅｔ  ３６１：１１９７−１２０４を参照のこと））もまた、提供される。
【０１８３】
第２の治療因子（例えば、サイトカイン、化学療法剤、抗生物質、または放射線）を用いた、同時投与または処置のための方法は、当該分野において周知である（Ｈａｒｄｍａｎら（編）、（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第１０版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；ＰｏｏｌｅおよびＰｅｔｅｒｓｏｎ（編）、（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａ．、ＰＡ；ＣｈａｂｎｅｒおよびＬｏｎｇｏ（編）、（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａ．、ＰＡ）。治療上の有効量は、症状を、代表的には少なくとも１０％減少させ、通常は少なくとも２０％減少させ、好ましくは少なくとも３０％減少させ、より好ましくは少なくとも４０％減少させ、そして最も好ましくは少なくとも５０％減少させる。
【０１８４】
治療因子の処方物および診断因子の処方物は、保存のために、生理学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤と混合することによって、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁物の形態で調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら、（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ、（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、およびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）、（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）、（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）、（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ、（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと）。
【０１８５】
適切な用量の決定は、例えば、処置に影響することが当該分野において公知であるか、もしくはそれが疑われるか、または処置に影響すると予想される、パラメータあるいは因子を使用して、臨床家によって行われる。一般に、上記用量は、適量よりやや低い量で始まり、その後、その用量は、あらゆるネガティブな副作用と比較して、所望の効果または最適な効果が達成されるまで、少量の増分で増加される。重要な診断基準としては、例えば、炎症の症状の診断基準、または産生される炎症性サイトカインのレベルの診断基準が挙げられる。好ましくは、使用される生物学的製剤は、処置のための標的とされる動物と同じ種に由来し、それによってその試薬に対する体液性の応答を最小化する。
【０１８６】
特定の患者に対する有効量は、処置される状態、その患者の全身の健康、投与の方法、経路および用量、ならびに副作用の重症度などの要因に依存して、変動し得る。組み合わせの場合、有効量は、成分の組み合わせに対する比であり、そしてその効果は、個々の成分単独に限られない。処置方法および診断方法についての手引きは、利用可能である（Ｍａｙｎａｒｄら、（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、ＦＬ；Ｄｅｎｔ、（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．、Ｌｏｎｄｏｎ、ＵＫ）。
【０１８７】
本発明はまた、細胞および区画を備えるキット、細胞および試薬を備えるキット、細胞および使用ついての指示書または廃棄についての指示書を備えるキット、ならびに細胞、区画、および試薬を備えるキットを提供する。
【０１８８】
（薬学的組成物）
本発明の抗体分子または可溶性ＭＤＬ−１タンパク質は、好ましくは治療目的のために、好ましくは薬学的組成物中にて被験体に投与され得る。好ましくは、薬学的組成物は、薬学的に受容可能なキャリアを含む。上記抗体分子は、ＭＤＬ−１レセプターを標的とするため、そしてそれによってそのレセプターによって引き起こされるかまたは媒介される任意の医学的状態を処置するために、（例えば、薬学的組成物中にて）治療的に使用され得る。上記可溶性ＭＤＬ−１タンパク質は、ＭＤＬ−１レセプターリガンドを標的とし、それによってそのレセプターによって引き起こされるか、または媒介される任意の医学的状態を処置するために、（例えば、薬学的組成物中にて）治療的に使用され得る。
【０１８９】
薬学的に受容可能なキャリアは、慣習的であり、当該分野において非常に周知である。例としては、水性キャリアおよび非水性キャリア、安定剤、抗酸化剤、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤、緩衝剤、血清タンパク質、等張化剤および吸収遅延剤（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｄｅｌａｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）など（これらは、生理学的に適合性である）が挙げられる。好ましくは、上記キャリアは、被験体の身体への注射に適する。一般に、このような薬物の非経口投与に有用である組成物は、周知である；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１７版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０）。
【０１９０】
本発明の薬学的組成物に利用され得る適切な水性キャリアおよび非水性キャリアの例としては、水、エタノール、ポリオール類（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、植物油（例えば、オリーブ油）、ならびに注射可能な有機エステル類（例えば、オレイン酸エチル）が挙げられる。適切な流動性が、例えば、コーティング材料（例えば、レシチン）の使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
【０１９１】
本発明の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物または第２の薬学的物質と組み合わせて投与され得る。併用療法が使用される場合、両方の組成物は、同時送達のために単一の組成物へと処方されても、２以上の組成物へと別々に処方されてもよい（例えば、キット）。
【０１９２】
鎮痛薬としては、アスピリン、アセトアミノフェン（ａｃｅｔｏｍｉｎｏｐｈｅｎ）、コデイン、モルヒネ、アポモルヒネ（ａｐｏｎｏｒｐｈｉｎｅ）、ノルモルヒネ、エトルフィン、ブプレノルフィン、ヒドロコドン、ラセモルファン、レボファノール、ブトルファンド（ｂｕｔｏｒｐｈａｎｄ）、メタドン、デメロール（ｄｅｍｅｒｏｌ）、イブプロフェンまたはオキシコドンが挙げられ得る。
【０１９３】
本発明の薬学的組成物はまた、他の型の物質を含み得、その物質としては、本明細書中に記載されるアッセイを使用して同定され得る有機低分子および抑制性リガンドアナログが挙げられる。
【０１９４】
上記処方物は、単位投薬形態にて簡便に与えられ得、そして薬学の分野において周知である任意の方法によって調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編）、（１９９０），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（前出），Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．；Ａｖｉｓら（編）、（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（編）、（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ならびにＬｉｅｂｅｒｍａｎら（編）、（１９９０），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。
【０１９５】
治療適用に関与する投薬レジメンは、治療物質の作用を改変し得る種々の要因（例えば、患者の状態、体重、性別および食事、なんらかの感染の重症度、投与回数、および他の臨床因子）を考慮して、医師によって決定され得る。
【０１９６】
しばしば、処置投薬量は、低レベルから上向きに用量決定されて、安全性および効力が最適にされる。投薬量は、より小さい分子サイズおよびおそらく減少する投与後の半減期（クリアランス時間）を計上するように調整され得る。
【０１９７】
このような物質の治療的投与のための代表的なプロトコルは、当該分野において周知である。本発明の薬学的組成物は、例えば、腸管外経路（例えば、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、腫瘍内注射または注入）または非腸管外経路（例えば、経口投与、肺投与または局所投与）によって、投与され得る。
【０１９８】
組成物が、当該分野において公知である医療デバイスを用いて、投与され得る。例えば、好ましい実施形態において、本発明の薬学的組成物は、皮下針を用いる注射によって、投与され得る。
【０１９９】
本発明の薬学的組成物はまた、針なし皮下注射デバイス（例えば、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；または同第４，５９６，５５６号に開示されるデバイス）を用いて、投与され得る。
【０２００】
本発明において有用である周知のインプラントおよびモジュールの例としては、以下が挙げられる：制御された速度で薬剤を分配するための移植可能な微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；継続的な薬物送達のための移植可能な可変流量の注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；複数チャンバーの区画を有する浸透圧性薬物送達システムを開示する米国特許第４，４３９，１９６号。
【０２０１】
（アンチセンス分子）
本発明はまた、本発明のＭＤＬ−１ペプチドをコードする核酸（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズし得るアンチセンスオリゴヌクレオチドを包含し、好ましくは、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、その核酸の発現を妨げるために配列番号２もしくは配列番号４またはその配列のいずれかによって規定されるアミノ酸配列を有する。
【０２０２】
本発明はさらに、（ａ）細胞膜を通過し、そしてその細胞中で本発明のＭＤＬ−１ペプチドをコードするｍＲＮＡと特異的に結合してその翻訳を妨げることによって、ＭＤＬ−１レセプターの活性を調節するのに有効な量のオリゴヌクレオチドと、（ｂ）細胞膜を通過し得る薬学的受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物を提供する。１つの実施形態において、そのオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡを不活化する物質（例えば、リボザイム）に結合されている。
【実施例】
【０２０３】
以下の実施例は、本発明を例示する。この実施例は、本発明の幅広い範囲を限定するとは解釈されるべきではない。
【０２０４】
（Ｉ．ＭＤＬ−１のｍＲＮＡ発現）
種々のヒト腫瘍サンプルにおけるＭＤＬ−１（ａ．ｋ．ａ．ＣＬＥＣＳＦ５、Ｃ型レクチンスーパーファミリー５；例えば、Ｅｂｎｅｒら、（２００３）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ５３：４４−５５；およびＤｒｉｃｋａｍｅｒ、（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９：５８５−５９０を参照のこと）の発現レベルを、決定した。腫瘍組織を、それぞれの場合について収集し、そして可能な場合、対応する隣接正常組織もまた、収集した。すべての組織を病理学者によって自前でスクリーニングして、病期分類の診断を確認した。全ＲＮＡを、標準的な方法論によって組織から調製し、そしてその全ＲＮＡを逆転写した。リアルタイムの定量的ＰＣＲを、標準的な方法論によって行なった。ゲノムＤＮＡの混入がないことを、ＣＤ４プロモーターのゲノム領域を認識するプライマーを使用して確認した。ユビキチンのレベルを、別個の反応において測定し、そしてΔ−Δ  Ｃｔ法によってそのデータを正規化するために使用した。例えば、Ｕｓｅｒ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＃２、（１９９７）Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡを参照のこと（ユビキチンおよび各サンプルのＭＤＬ−１についての平均サイクの閾値を使用して、式１．８ｅ（Ｃｔユビキチン−Ｃｔ  ＭＤＬ−１）×１０４を使用して、正規化した値を得た）。Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓノンパラメトリック統計分析を、対数に変換したデータに対して行なった（メジアン法）。例えば、ＨｏｌｌａｎｄｅｒおよびＷｏｌｆｅ、（１９７３）Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、ｐｐ．１１５−１２０を参照のこと。これらの方法を、下の癌パネルにおいて使用した。
【０２０５】
（ＩＡ．ヒトにおける黒色腫のパネル）
黒色腫のパネルは、１５のコントロール正常皮膚サンプル；腫瘍の症例と対応した８６の隣接正常組織；およびパネル上の病期によって定められる８７の黒色腫の症例を含んだ。全ＲＮＡを、標準的な方法論によって組織から調製し、そしてその全ＲＮＡを逆転写した。リアルタイムの定量的ＰＣＲを、標準的な方法論によって行なった。
【０２０６】
上記コントロール組織（ｎ＝１５）は、メジアンＭＤＬ−１発現値３．６６を有し、一方で、第Ｉ期の黒色腫サンプル、第ＩＩ期ＳＳの黒色腫サンプル、第ＩＩ期ＮＭの黒色腫サンプル、第ＩＩ期黒色腫（全身）の黒色腫サンプルおよび第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の黒色腫サンプルは、それぞれ、１８．８３（５．１倍）、８．７９（２．４倍）、９．７５（２．６倍）、１０．８１（２．９倍）、および１１．６６（３．１倍）のメジアンＭＤＬ−１発現値を有した（表２）。対数に変換したデータに対するＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓメジアン分析は、正常サンプルと比較して、第Ｉ期の黒色腫サンプル（Ｐ＜０．００１）、第ＩＩ期の結節の黒色腫サンプル（Ｐ＜０．０１）および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の黒色腫サンプル（Ｐ＜０．０１）において、統計学的に有意な評価を示した。
【０２０７】
（表２．ヒトにおける黒色腫のパネル：ユビキチンと比較し、そして対数に変換した、定量的リアルタイムＰＣＲ分析によるＭＤＬ−１の発現）
【０２０８】
【表２】
2008518629.tif 000003
（ＩＢ．ヒトにおける卵巣の腫瘍のパネル）
卵巣のパネルは、２０のコントロール卵巣組織；腫瘍の症例と対応した３５の隣接正常組織；およびパネル上の病期／分化によって定められる３６の乳頭状漿液性嚢胞腺癌組織を含んだ。全ＲＮＡを、標準的な方法論によって組織から調製し、そしてその全ＲＮＡを逆転写した。リアルタイムの定量的ＰＣＲを、標準的な方法論によって行なった。
【０２０９】
上記コントロール組織（ｎ＝２０）は、メジアンＭＤＬ−１発現値２．９５を有し、一方で、第Ｉ期の卵巣腫瘍サンプル、第ＩＩ期の卵巣腫瘍サンプル、および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の卵巣腫瘍サンプルは、それぞれ、４６．３７（１５．７倍）、４０．５５（１３．７倍）、および１３．３５（４．５倍）のメジアンＭＤＬ−１発現値を有した（表３）。対数に変換したデータに対するＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓメジアン分析は、正常コントロール組織と比較して、３つ全ての病期群において、統計学的に有意な評価を示した（全てについて０．００１未満のＰ値を有する）。
【０２１０】
（表３．ヒトにおける卵巣癌のパネル：ユビキチンと比較し、そして対数に変換した、定量的リアルタイムＰＣＲ分析によるＭＤＬ−１の発現）
【０２１１】
【表３】
2008518629.tif 000004
（ＩＣ．ヒトにおける乳房の腫瘍のパネル）
乳房の腫瘍のパネルは、１８のコントロール乳房組織；腫瘍の症例と対応した７９の隣接正常組織（入手可能な場合）；およびパネル上の病期／分化によって定められる９１の乳房の腫瘍の症例（６の上皮内腺管癌組織、６４の浸潤性腺管癌（ＩＤＣ）組織、４の粘液性ＩＤＣ組織、２の混合型ＩＤＣ組織、１３の浸潤性小葉癌組織および２の髄様癌組織）を含んだ。全ＲＮＡを、標準的な方法論によって組織から調製し、そしてその全ＲＮＡを逆転写した。リアルタイムの定量的ＰＣＲを、標準的な方法論によって行なった。
【０２１２】
上記コントロール組織（ｎ＝１８）は、メジアンＭＤＬ−１発現値１．０３を有し、一方で、第Ｉ期の乳房のＩＤＣ腫瘍サンプル、第ＩＩ期の乳房のＩＤＣ腫瘍サンプル、および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の乳房のＩＤＣ腫瘍サンプルならびに小葉癌（全ての病期）は、それぞれ、７．３７（７．１倍）、７．１２（６．９倍）、１０．３９（１０倍）、および３．７１（３．６倍）のメジアンＭＤＬ−１発現値を有した（表４）。小さい「ｎ」を有する群（粘液性ＩＤＣ、混合型ＩＤＣおよび髄様癌）からのデータを、統計分析から除外した。対数に変換したデータに対するＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓメジアン分析は、隣接正常組織を加えた正常コントロール組織（ｎ＝９７）と比較して、ＩＤＣの３つ全ての病期群において、統計学的に有意な評価を示し（全てについて０．００１未満のＰ値を有する）、そして小葉癌における有意性（Ｐ＜０．０１）を示した。
【０２１３】
（表４．ヒトにおける乳癌のパネル：ユビキチンと比較し、そして対数に変換した、定量的リアルタイムＰＣＲ分析によるＭＤＬ−１の発現）
【０２１４】
【表４】
2008518629.tif 000005
（ＩＤ．ヒトにおける結腸直腸の腫瘍のパネル）
結腸直腸の腫瘍のパネルは、１１のコントロール結腸組織；腫瘍の症例と対応した４０の隣接正常組織；およびパネル上の病期／分化によって定められる４０の結腸直腸腺腫（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）組織を含んだ。全ＲＮＡを、標準的な方法論によって組織から調製し、そしてその全ＲＮＡを逆転写した。リアルタイムの定量的ＰＣＲを、標準的な方法論によって行なった。
【０２１５】
上記コントロール組織（ｎ＝１１）は、メジアンＭＤＬ−１発現値１．７５を有し、一方で、第Ｉ期の結腸直腸の腫瘍サンプル、第ＩＩ期の結腸直腸の腫瘍サンプル、および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の結腸直腸の腫瘍サンプルは、それぞれ、８．０５（４．６倍）、３６．５９（２０．９倍）、および１４．１６（８倍）のメジアンＭＤＬ−１発現値を有した（表５）。対数に変換したデータに対するＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓメジアン分析は、隣接正常組織を加えた正常コントロール組織（ｎ＝５１）と比較して、第ＩＩ期の群および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の群において、統計学的に有意な評価を示した（両方について０．００１未満のＰ値を有する）。
【０２１６】
（表５．ヒトにおける結腸直腸の癌のパネル：ユビキチンと比較し、そして対数に変換した、定量的リアルタイムＰＣＲ分析によるＭＤＬ−１の発現）
【０２１７】
【表５】
2008518629.tif 000006
（ＩＥ．ヒトにおける腎臓の腫瘍のパネル）
腎臓の腫瘍のパネルは、１２のコントロール腎臓組織；腫瘍の症例と対応した３０の隣接正常組織；およびパネル上の病期／分化によって定められる３１の腎淡明細胞癌組織を含んだ。全ＲＮＡを、標準的な方法論によって組織から調製し、そしてその全ＲＮＡを逆転写した。リアルタイムの定量的ＰＣＲを、標準的な方法論によって行なった。
【０２１８】
上記コントロール組織（ｎ＝１２）は、メジアンＭＤＬ−１発現値１．７３を有し、一方で、第Ｉ期／第ＩＩ期の腎臓の腫瘍および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の腎臓の腫瘍は、それぞれ、５．０９（２．９倍）および９．３５（５．４倍）のメジアンのＭＤＬ−１発現値を有した（表６）。サンプルの低い「ｎ」が原因で、第Ｉ期由来のサンプルおよび第ＩＩ期由来のサンプルを１つの群にまとめ、そして第ＩＩＩ期および第ＩＶ期からのサンプルを１つの群にまとめた。対数に変換したデータに対するＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓメジアン分析は、隣接正常組織を加えた正常コントロール組織（ｎ＝４２）と比較して、第Ｉ期／第ＩＩ期の群（Ｐ＜０．０１）および第ＩＩＩ期／第ＩＶ期の群（Ｐ＜０．００１）の両方において統計学的に有意な評価を示した。
【０２１９】
（表６．ヒトにおける腎臓の癌のパネル：ユビキチンと比較し、そして対数に変換した、定量的リアルタイムＰＣＲ分析によるＭＤＬ−１の発現）
【０２２０】
【表６】
2008518629.tif 000007
（ＩＦ．ヒトにおける胃の腫瘍のパネル）
胃の腫瘍のパネルは、１２のコントロール胃組織；腫瘍の症例と対応した６４の隣接正常組織（入手可能な場合）；およびパネル上の病期／分化によって定められる７５の胃の腺癌組織を含んだ。全ＲＮＡを、標準的な方法論によって組織から調製し、そしてその全ＲＮＡを逆転写した。リアルタイムの定量的ＰＣＲを、標準的な方法論によって行なった。
【０２２１】
上記コントロール組織（ｎ＝１２）は、メジアンＭＤＬ−１発現値０．３９を有し、一方で、第Ｉ期の胃の腫瘍サンプル、第ＩＩ期の胃の腫瘍サンプル、第ＩＩＩＡ期の胃の腫瘍サンプル、第ＩＩＩＢ期の胃の腫瘍サンプルおよび第ＩＶ期の胃の腫瘍サンプルは、それぞれ、４．４２（１１．３倍）、４．１４（１０．６倍）、９．７７（２５倍）、８．９８（２３倍）および７．０３（１８倍）のメジアンＭＤＬ−１発現値を有した（表７）。対数に変換したデータに対するＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓメジアン分析は、隣接正常組織を加えた正常コントロール組織（ｎ＝７６）と比較して、第ＩＩ期の群（Ｐ＜０．０５）、第ＩＩＩＡ期の群および第ＩＩＩＢ期の群（両方ともＰ＜０．００１）ならびに第ＩＶ期の群（Ｐ＜０．０１）において統計学的に有意な評価を示した（添付の図表を参照のこと）。
【０２２２】
（表７．ヒトにおける胃癌のパネル：ユビキチンと比較し、そして対数に変換した、定量的リアルタイムＰＣＲ分析によるＭＤＬ−１の発現）
【０２２３】
【表７】
2008518629.tif 000008
（結論）
上記発現レベル（ユビキチンに対して正規化し、そして対数に変換した値）は、上記組織サンプルにおいて発現されるＭＤＬ−１の量に対応し、その結果、その発現レベルが高くなるほど、その組織サンプルにおいて発現されたＭＤＬ−１の量が大きかった。上記の実験結果は、ＭＤＬ−１発現が、コントロールと比較して黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌において有意に上昇したことを示す。
【０２２４】
（ＩＩ．抗体産生）
（ヒトＭＤＬ−１およびマウスＭＤＬ−１を特異的に結合する抗体の産生）
ヒトＭＤＬ−１（ｈｕＭＤＬ−１）またはマウスＭＤＬ−１（ｍｕＭＤＬ−１）を特異的に結合する抗体を、ヒト免疫グロブリンのＦｃドメインに融合したマウスＭＤＬ−１の細胞外ドメイン（配列番号４のアミノ酸残基２６〜１９０）（ＭｕＭＤＬ−１−ｈｕＩｇ）を含む免疫原性融合タンパク質を用いてラットを免疫化することによって産生した。免疫化を数ヶ月間継続し、その時点で、その動物を屠殺し、そしてその脾臓細胞を、標準的なハイブリドーマプロトコルによって、マウス骨髄腫細胞に融合させた。抗ヒトＭＤＬ−１モノクローナル抗体を、ヒト免疫グロブリンのＦｃドメインに融合したｈｕＭＤＬ−１の細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８）（ｈｕＭＤＬ−１−ｈｕＩｇ）を含む免疫原性融合タンパク質を用いてＢａｌｂ／Ｃマウスを免疫化することによって、産生した。ハイブリドーマの産生のために、上に記載した手順と同様の手順を、使用した。
【０２２５】
（ＩＩＢ．ＭＤＬ−１に特異的に結合する抗体についてのスクリーニング）
ｍｕＭＤＬ−１を特異的に結合する抗体を、融合したハイブリドーマ由来の上清を使用し、かつその上清を示差的ＥＬＩＳＡ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ＥＬＩＳＡ）技術に供して、スクリーニングした。抗ｍｕＭＤＬ−１モノクローナル抗体を、ｍｕＭＤＬ−１細胞株のＦＡＣＳ分析、およびｍｕＭＤＬ−１を発現する細胞に由来するＭＤＬ−１／ＤＡＰ１２複合体の免疫沈降によって、特異性についてさらに試験した。ヒトＭＤＬ−１に特異的なモノクローナル抗体を、免疫化した脾臓／骨髄腫融合ハイブリッドから産生し、そして細胞株によって発現されるＭＤＬ−１のＦＡＣＳおよび免疫沈降によって、特異性について確かめた。
【０２２６】
（ＩＩＩ．免疫組織化学（ＩＨＣ））
ヒト腫瘍生検および隣接正常組織を、腫瘍切除手術を受ける患者から得て、それらを直ちに、液体窒素中で急速冷凍した。冷凍した組織断片（１〜３ｍｍ）を、ＯＣＴ中に包埋し、そしてさらに液体窒素によるフローテーション（ｌｉｑｕｉｄ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｆｌｏｔａｔｉｏｎ）によって冷凍した。次いで全ての冷凍した組織を、−８０℃に保存した。クライオスタット切片（５〜８ｕｍ）を、冷たい８０％アセトンおよび２０％メタノール中に固定し、風乾し、次いで１５％正常ヤギ血清によって室温で３０分間ブロックした。次いで切片を、一次抗体（３μｇ／ｍｌ）において室温にて２時間インキュベートし、ＰＢＳ中で大範囲に洗浄し、そしてさらに、ビオチンに結合体化したヤギ抗ラットＩｇＧまたはビオチンに結合体化したヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）において１時間インキュベートした。次いで切片を、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ試薬（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）中で３０分間インキュベートし、ＰＢＳ中で３回洗浄し、次いでペルオキシダーゼ基質において５〜１０分間インキュベートした。切片を、ヘマトキシリンによって対比染色し、退色しないように顕微鏡標本を作製し、そしてＮｉｋｏｎ  Ｅ８００顕微鏡下で検査した。免疫染色はまた、パラフィン包埋した組織に対して行われ得る。
【０２２７】
上記ｍＲＮＡ発現分析と一致して、ＭＤＬ−１は、黒色腫、卵巣の腺癌、乳房の浸潤性腺管癌、結腸直腸腺腫、胃の腺癌および腎淡明細胞癌における多数の浸潤性白血球上に、強力に発現された。ＭＤＬ−１は、これらの癌腫における腫瘍細胞によっては発現されなかったが、多数の腫瘍浸潤性白血球（主に骨髄系／マクロファージ系統である）によって、広く発現された。
【０２２８】
（ＩＶ．浸潤性のＭＤＬ−１ポジティブな白血球の表現型分析）
ＭＤＬ−１ポジティブな白血球は、ヒト腫瘍生検から得られ得る。その白血球の表現型分析を、Ｍａｎｔｏｖａｎｉら（（２００２）ＴＲＥＮＤＳ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５４９−５５５）によって記載されるように行い得る。分極したＭ１マクロファージおよび分極したＭ２マクロファージに対するマーカーを使用する二色ＦＡＣＳ分析は、ＭＤＬ−１ポジティブな白血球がＭ２表現型の白血球であることを示し得る。多数のＭＤＬ−１ポジティブな白血球は、マクロファージ／単球のマーカー（ＣＤ６８、ＣＤ１１ｂ、およびＣＤ２０６）を同時に発現し得る。
【０２２９】
本発明は、本明細書中に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際に、本明細書中に記載されるものに加えて、本発明の種々の改変は、上述の記載から当業者にとって明らかとなる。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
【０２３０】
特許、特許出願、刊行物、製品説明およびプロトコルが、本願全体を通して記載され、それらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【配列表】
2008518629000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成19年7月9日(2007.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を診断することまたは腫瘍を検出することを補助するためのインビトロでの方法であって、
（ａ）細胞または組織における骨髄性ＤＡＰ１２結合レクチン−１（ＭＤＬ−１）発現のレベルを測定する工程；および
（ｂ）測定されたＭＤＬ−１のレベルと、コントロール由来の細胞もしくは組織におけるＭＤＬ−１の発現レベルとを比較する工程であって、該コントロールと比較した測定されたＭＤＬ−１発現のレベルの上昇は、癌、または腫瘍の存在に関連する、工程；
を包含する、方法。
【請求項２】
前記ＭＤＬ−１は、ポリペプチドまたは核酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
患者において腫瘍を診断または検出するための組成物であって、該組成物は、
ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメント
を含み、
該患者の細胞もしくは組織における該抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルが、測定され、そしてコントロールの細胞もしくは組織におけるＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの結合のレベルと比較されることが、意図され、該コントロールと比較した該患者において測定された結合のレベルの上昇は、該腫瘍の存在に関連する、組成物。
【請求項９】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、活性化抗体、抑制性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体および融合タンパク質からなる群より選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメントおよびＦｖフラグメントからなる群より選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、標識に結合される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１６】
前記標識は、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
癌を処置するための組成物であって、該組成物は、
ＭＤＬ−１を結合する抗体またはその抗原結合フラグメント
を含み、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞傷害性因子に結合されている、
組成物。
【請求項１８】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＭＤＬ−１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＭＤＬ−１は、腫瘍内部の腫瘍浸潤性白血球に存在する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、活性化抗体、抑制性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体および融合タンパク質からなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２３】
前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメントおよびＦｖフラグメントからなる群より選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記細胞傷害性因子は、薬物、毒素、放射線を放射する化合物、植物起源の分子、真菌起源の分子、細菌起源の分子、生物学的タンパク質、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２５】
前記放射線を放射する化合物は、α線放射物質、β線放射物質またはγ線放射物質である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物は、腫瘍細胞を消散させるか、腫瘍細胞を殺すか、または腫瘍の大きさを減少させる、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２７】
患者において腫瘍の存在を診断または検出するための組成物であって、該組成物は、
可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメント
を含み、該患者の細胞もしくは組織におけるリガンドに対する該ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルが、測定され、そしてコントロールの細胞もしくは組織におけるリガンドに対する可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントの結合のレベルとを比較されることが、意図され、該コントロールと比較した該患者において測定された結合のレベルの上昇は、腫瘍の存在と関連する、
組成物。
【請求項２８】
前記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８を含むアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記腫瘍は、固形腫瘍、黒色腫、卵巣の腫瘍、乳房の腫瘍、結腸直腸の腫瘍、腎臓の腫瘍および胃の腫瘍からなる群より選択される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメントは、標識に結合される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
前記標識は、放射標識、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識および酵素標識からなる群より選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
癌を処置するための組成物であって、該組成物は、
リガンドに結合する可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドまたはそのフラグメント
を含み、該ポリペプチドまたはそのフラグメントは、細胞傷害性因子に結合されている、
組成物。
【請求項３３】
前記可溶性ＭＤＬ−１ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸残基２６〜１８８を含むアミノ酸配列を有する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記癌は、黒色腫、卵巣癌、乳癌、結腸直腸の癌、腎臓の癌および胃癌からなる群より選択される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
前記細胞傷害性因子は、薬物、毒素、放射線を放射する化合物、植物起源の分子、真菌起源の分子、細菌起源の分子、生物学的タンパク質、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
前記放射線を放射する化合物は、α線放射物質、β線放射物質またはγ線放射物質である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記組成物は、腫瘍細胞を消散させるか、腫瘍細胞を殺すか、または腫瘍の大きさを減少させる、請求項３２に記載の組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成19年11月8日(2007.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008518629000001.app
【国際調査報告】
2008518629.tif 000013
2008518629.tif 000014
2008518629.tif 000015
2008518629.tif 000016
2008518629.tif 000017