(57)【要約】  本発明は癌治療の分野に関する。より具体的には、本発明は、癌の治療のための一定のヌクレオチド配列の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞中の配列番号１７によりコードされるタンパク質又はそのアイソフォーム、及び配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を阻害するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であって、ここで該ｓｉＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２つの配列を含んで成り、そしてここでセンス鎖が第一配列を含んで成り、そしてアンチセンス鎖が配列番号１７由来のヌクレオチド配列をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的な相補性領域を含んで成る第二配列を含んで成り、ここで該ｓｉＲＮＡは、細胞内で配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドを発現する細胞と接触する、低分子干渉リボ核酸。
【請求項２】
請求項１に記載のｓｉＲＮＡを含んで成る細胞。
【請求項３】
請求項１に記載のｓｉＲＮＡを含んで成るベクター。
【請求項４】
配列番号１７によりコードされるタンパク質又はそのアイソフォームの発現を阻害する医薬組成物であって、細胞取り込み増強ペプチド断片又は薬剤と一緒に、請求項１に記載のｓｉＲＮＡを含んで成る医薬組成物。
【請求項５】
細胞に対して請求項４に記載の組成物を送達する工程を含んで成る、細胞成長／増殖を阻害するための方法。
【請求項６】
細胞取り込み増強ペプチド断片又は薬剤と一緒に、細胞中の配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォームの発現、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を阻害するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を含んで成る組成物を細胞に送達する工程を含んで成る細胞死を引き起こす方法であって、ここで該ｓｉＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２つの配列を含んで成り、そしてここでセンス鎖が第一配列を含んで成り、そしてアンチセンス鎖が配列番号１７由来のヌクレオチド配列をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的な相補性領域を含んで成る第二配列を含んで成る、方法。
【請求項７】
癌組織の細胞成長／増殖の阻害に有用な医薬の調製のための、請求項１に記載のｓｉＲＮＡの使用。
【請求項８】
前記癌組織が、精巣、腎臓、子宮、神経組織、眼、下垂体、結腸、皮膚、肺、胎盤、胃、膀胱、白血球、乳房、外陰部、咽頭、胎盤、骨、前立腺及び肝臓から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
付随する実施例及び図面に関して実質的に明細書中に記載される、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、細胞、ベクター、医薬組成物、方法及び使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は癌治療の分野に関する。より具体的には、本発明は癌の治療のための一定のヌクレオチド配列の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、現在、標的ＲＮＡの分解又は翻訳停止のいずれかにより媒介される転写後遺伝子サイレンシングを意味する包括的用語である。この過程は、特異性を担う配列相同性を伴う二本鎖ＲＮＡにより開始される。
【０００３】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）により媒介される、進化的に保存された転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）メカニズムである。該ｄｓＲＮＡは、ダイサーと称されるＲＮａｓｅＩＩＩ酵素により、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれる約２１〜２２のヌクレオチド（ｎｔｓ）の小さな二本鎖ＲＮＡ分子に処理される。ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と称されるｓｉＲＮＡと多タンパク質複合体の相互作用は、活性化ＲＩＳＣ複合体と同族ＲＮＡ転写の配列特異的な関係をもたらす。この相互作用は標的転写の配列特異的な切断に導く。
【０００４】
エレガンス線虫（Caenorhabditis elegans）において最初に発見されたように、哺乳類細胞中のＲＮＡｉの研究は、ｓｉＲＮＡ分子の哺乳類体細胞への直接的な導入が、より大きなｄｓＲＮＡ分子を有する脊椎動物細胞の非特異的応答を回避することの発見により、ここ数年で開花した。逆遺伝子解析のための強力なツールとして、ＲＮＡｉは、ヒト疾患に関係する多くの遺伝子、特に発癌及び感染疾患に関係する遺伝子の機能を研究するために急速に適用されてきた。ツールとしてのｓｉＲＮＡの使用は、生物医学研究のほとんど全ての分野において進歩しているが、いくつかの最も活動的かつ刺激的なｓｉＲＮＡの適用は、癌研究におけるものである。
【０００５】
ほとんど全てのヒト癌は、発癌を含む複数の遺伝子病変を蓄積している。癌遺伝子が形成腫瘍に継続的に必要とされるか否かについては、解らないことがしばしばある。更に、非変異型癌原遺伝子又は関連因子に影響しない薬物により本質的な癌遺伝子を標的とすることは極めて困難である。哺乳類細胞培養液中のＲＮＡ干渉及び小分子干渉ＲＮＡの適用は、腫瘍発症における癌遺伝子の役割を調査するための新規なツールを供する。
【０００６】
出願人は、最近、ヒト染色体１７上に位置する精巣特異遺伝子ＳＰＡＧ９をクローン化した。これはコイルドコイル領域及び７６６個のアミノ酸から成るタンパク質をコードするロイシンジッパーモチーフを含み；そしてＵｎｉＧｅｎｅクラスターＨｓと命名した。ＳＰＡＧ９の機能的分析は、ＳＰＡＧ９が受精に導く１又は複数の事象において役割を果たしうることを明らかにした。サザンハイブリダイゼーション実験は、ヒトゲノムが１９のエクソンを有するＳＰＡＧ９遺伝子の１つのコピーを含有することを示唆した。ＳＰＡＧ９のエクソン配列長は３９〜３３３で変動する。出願人は、ＳＰＡＧ９（ＣＡＡ６２９８７）遺伝子を配列決定し、これはポリペプチド（７６６ａａ）をコードする配列番号１７を有し、そしてこれは配列番号１８を有する。
【０００７】
さらに、上記及び更なる実験に基づき、ＳＰＡＧ９がほとんどの腫瘍（癌）及び形質転換細胞株、特に：卵巣、腎臓、子宮、神経組織、眼、下垂体、結腸、皮膚、肺、胎盤、胃、膀胱、白血球、乳房、外陰部、咽頭、胎盤、骨、前立腺及び肝臓で発現する一方、ＳＰＡＧ９ｍＲＮＡはもっぱら精巣組織中で発現されることが発見された。
【０００８】
異なる癌タイプを伴う患者由来の血清中の検出可能ないくつかの細胞内及び表面抗原に対する自己抗体の同定によって部分的に実証されるように、ヒトにおける免疫応答についての証拠が増加している。卵巣以外の組織中のＳＰＡＧ９に対する抗体が産生され、出願人はこの観点を更に調査し、そしてこのたび出願人は癌組織中のＳＰＡＧ９を標的できる新規な配列を開発した。
【発明の開示】
【０００９】
発明の説明
従って、ある観点において、本発明は、正常な精巣組織中でもっぱら発現することが発見されたＳＰＡＧ９ｍＲＮＡを下方制御又は阻害することが可能な新規なヌクレオチド配列を供するが、ＳＰＡＧ９は大抵の腫瘍（癌）及び形質転換細胞株：特に：卵巣、腎臓、子宮、神経組織、眼、下垂体、結腸、皮膚、肺、胎盤、胃、膀胱、白血球、乳房、外陰部、咽頭、胎盤、骨、前立腺及び肝臓で発現する。
【００１０】
従って、本発明は、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は細胞中に配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を阻害するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であって、ここで該ｓｉＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２つの配列を含んで成り、そしてここでセンス鎖が第一配列を含んで成り、そしてアンチセンス鎖が配列番号１７から選択されたポリヌクレオチド配列をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性領域を含んで成る第二配列を含んで成る、低分子干渉リボ核酸を供する。
【００１１】
いくつかの上記新規なヌクレオチド配列を以下の表１中に示す。
【００１２】
【表１】
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【００１３】
他の観点において、本発明はまた、癌細胞増殖を阻害するために有用な組成物を供する。このような組成物は、好ましくは、適当な細胞取り込み増強ペプチド断片又は薬剤と一緒に、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は細胞中の配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を干渉するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であって、ここで該ｓｉＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２つの配列を含んで成り、そしてここでセンス鎖が第一配列を含んで成り、そしてアンチセンス鎖が配列番号１７から選択されたポリヌクレオチド配列をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補性である相補性領域を含んで成る第二配列を含んで成る、低分子干渉リボ核酸を含んでよい。また、本発明は、コード配列番号１〜１６を含む、上記ヌクレオチドを含有する発現ベクターを含んで成る組成物を含む。
【００１４】
ある観点において、本発明は、癌細胞の細胞増殖を阻害するための新規な方法であって、配列番号１〜１６から選択されるヌクレオチドを含んで成る組成物を該細胞に送達する工程を含んで成る方法を供する。上記ヌクレオチド配列は、好ましくは細胞取り込み増強剤と複合体を形成してもよく、そして該細胞中に進入するために十分な量及び条件において送達され、これにより癌細胞成長／増殖を阻害することができる。
【００１５】
さらに他の観点において、本発明は、アポトーシスを促進するための新規な方法であって、該方法が、適当な細胞取り込み増強ペプチド断片又は薬剤と一緒に、細胞中の配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を干渉するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であって、ここで該ｓｉＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２つの配列を含んで成り、そしてここでセンス鎖が第一配列を含んで成り、そしてアンチセンス鎖が配列番号１７から選択されたポリヌクレオチド配列をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補性である相補性領域を含んで成る第二配列を含んで成る、低分子干渉リボ核酸を含んで成る組成物を送達する工程を含んで成る方法を供する。上記ヌクレオチド配列は、好ましくは細胞取り込み増強剤と複合体を形成してもよく、そして該細胞中に進入するために十分な量及び条件において送達され、これによりアポトーシスを引き起こすことができる。
【００１６】
知られているとおり、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）による遺伝子サイレンシングは、精巧な配列特異性での破壊のために標的とされるｍＲＮＡのレベルにおいて作動する。該スキームを図１Ａに示す。原則として、いずれかの疾患関連ｍＲＮＡ配列は、ＲＮＡｉに基づく治療のための推定標的である。該治療的可能性を発展させるために、臨床的に許容される送達手順によりＲＮＡｉを誘発する方法を開発する必要がある。
【００１７】
配列番号１８によりコードされるタンパク質の少なくとも一部若しくはそのアイソフォームの翻訳発現、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を阻害することにより、該配列は、本発明の方法に従い、ＳＰＡＧ９タンパク質又は配列番号１７を含んで成るポリヌクレオチド配列により産生されるタンパク質の発現を阻害し、そして癌細胞成長／増殖を阻害するために有用である。
【００１８】
従って、本発明の新規な配列は、哺乳類細胞に送達され、そして配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を結果的に下方制御又は遮断することができる。
【００１９】
従って、他の観点において、本発明は、治療的有効量の上記ｓｉＲＮＡを、これを必要とする対象に対して送達することにより癌組織の増殖の細胞成長を阻害するための、配列番号１〜１６のいずれかを認識することが可能なｓｉＲＮＡを使用する方法を供する。
【００２０】
本発明は、単に例示的なだけであり、そしていかなる手段における本発明の範囲を制限することを意味しない以下の実施例及び図により例証される。以下の付図の図を付け加える。
【実施例】
【００２１】
実施例１：癌細胞株における、配列番号１７若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの内因性発現
Ａ−５４９（ヒト肺癌細胞）を、１０％ウシ胎仔血清（Gibco BRL)、５０ユニット／ｍｌのペニシリン及び５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンで補ったＲＰＭＩ培地（Invitrogen)中で培養した。該細胞を、５％ＣＯ2を伴う加湿した３７℃インキュベーター中で維持した。癌細胞を、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現について調査した。
【００２２】
癌細胞中に存在する、配列番号１７により発現されるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドを、間接免疫蛍光、ゲル電気泳動及びウェスタンブロッティングにより評価した。
【００２３】
実施例２：間接免疫蛍光アッセイ
癌細胞中の配列番号１７を含んで成るタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの存在を測定するために、間接免疫蛍光アッセイを行った。細胞を、配列番号１７若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドに対して産生した抗体でプローブし、その後二次標識抗体（蛍光結合抗体）でプローブした。蛍光の存在は、癌細胞株における、配列番号１７を含んで成るタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの内因性発現を示した。
【００２４】
実施例３：ゲル電気泳動及びウェスタンブロッティング
配列番号１７を含んで成るタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８タンパク質を含んで成るポリペプチドの存在は、癌細胞可溶化液をＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で実行し、そしてニトロセルロースマトリックス上に移す、ウェスタンブロッティング手順により検出することができる。
【００２５】
端的には、該タンパク質溶液を試料緩衝液で希釈した。該試料をその後、ポリアクリルアミドゲルに充填した。電気液動後、タンパク質をニトロセルロース膜に移した。遮断した膜を、配列番号１７若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドに対して産生した抗体でプローブし、そして続いて二次標識抗体（酵素結合抗体）でプローブした。最後に、膜を０．０５％ＤＡＢで処理した。
【００２６】
多様な癌細胞由来の細胞可溶化液のウェスタンブロット分析は、配列番号１７若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの強力な発現を示した。図２は、ヒト肺癌（Ａ５４９）細胞可溶化液の代表的な写真を示す。
【００２７】
実施例４：配列番号１７若しくはそのアイソフォームのタンパク質発現、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの阻害
ＲＮＡｉプラスミドの調製
ＲＮＡｉプラスミドを構築するための一般的な戦略は、Ｕ６プロモーターを含有する慣習的な発現ベクター中のＳＰＡＧ９の配列番号１〜１６由来のヌクレオチド配列の逆方向反復を含んだ。６３８配列番号１のためのｓｉＳＰＡＧ９は以下のとおり設計した：
【化１】
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５’におけるＡｐａＩ部位及び３’末端におけるＥｃｏＲＩを伴うｓｉＲＮＡ６３８完成構築物
【化２】
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【００２８】
従って、以下のプライマーを設計した：
【化３】
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【００２９】
１工程ＰＣＲを行い、そして挿入断片をＵ６プロモーターを含有する慣習的な発現ベクター中にサブクローニングした。
【００３０】
実施例５：ｓｉＲＮＡトランスフェクション
ｓｉＲＮＡを多様な癌細胞株に送達し、そして有効性を試験した。該アッセイは、異なる起源、すなわち、卵巣、乳房、肺、頚部、大腸、肝臓、前立腺、皮膚、子宮、腎臓、膀胱、子宮内膜、骨、膵臓、直腸、咽頭、外陰部、胎盤、脳、精巣、眼、胃等の多様な癌細胞株で行った。全てのアッセイにおいて、ｓｉＲＮＡは、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を成功的に阻害した。用いたｓｉＲＮＡは、表１から選択した。行ったアッセイの典型例を以下に記載する：
【００３１】
癌細胞を、加熱インキュベートした１０％のウシ胎仔血清で補充したＲＰＭＩ（Invitrogen)中で培養し、そして３５ｍｍプレート中で成長させた。水性培地中のｓｉＲＮＡトランスフェクションのために、細胞取り込み増強ペプチド断片又は薬剤を使用して、ｓｉＲＮＡプラスミドを送達させた。配列番号１７若しくはそのアイソフォーム又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を阻害するために１〜１２μｇの範囲のプラスミドＤＮＡの濃度が評価され、そして用量依存的に有効であることが発見された。
【００３２】
ｓｉＳＰＡＧ９を使用する、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現における低下は、実施例２及び３に記載されるとおり、間接的免疫蛍光アッセイ、ゲル電気泳動及びウェスタンブロッティングにより評価した。また、細胞生存率及びアポトーシスにおける更なる効果をｓｉＳＰＡＧ９の存在下又は不存在下において測定した。
【００３３】
癌細胞の間接免疫蛍光分析は、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現において、図３Ｂに示されるとおり、ｓｉＳＰＡＧ９の存在下においてバックグランドレベル付近まで劇的な低下を示したが、一方未処理癌細胞においては、配列番号１７若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの強い蛍光が観察された（図３Ａ）。
【００３４】
ウェスタンブロット分析において、ｓｉＳＰＡＧ９処理細胞中で、配列番号１７若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現の劇的なノックダウンが観察されたが、未処理細胞では、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現において阻害は何ら示されなかった。図４に示されるとおり、レーン１は未処理細胞株を表し、そしてレーン２はｓｉＳＰＡＧ９処理癌細胞である。レーン１において、該細胞は、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を示したが、一方レーン２においては、配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現は示さなかった。
【００３５】
細胞生存率は、生体染色色素フルオレセイン・ジアセテート（ＦＤＡ）を使用して測定した。フルオレセイン・ジアセテート（ＦＤＡ）及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を細胞試料中に添加し、これを、蛍光フィルターを介して観察される血球計数器に置いた。明るい緑色（ＦＤＡ）が見られる細胞を計数し、そして生存細胞として記録した（図５）。その後該細胞は、ローダミンフィルターを介して観察され、そして明るい赤色（ＰＩ）として見られる細胞を計測し、そして死亡細胞の数として示した。全細胞数を測定するために、細胞は標準光下で観察した。生存細胞のパーセンテージは、図５の棒グラフに示される。未処理細胞は生存したが、ｓｉＳＰＡＧ９処理細胞の生存率は、約５％に低下した。
【００３６】
アポトーシス指示アッセイは、細胞死の偶発的形態ではなく、アポトーシスの結果としての細胞死を認識するために使用することができる。ｓｉＳＰＡＧ９処理細胞及び未処理癌細胞を、２種の蛍光染色に暴露した：フルオレセイン・ジアセテート（ＦＤＡ）、これは無傷膜を伴う細胞を染色し、そしてヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、これは傷ついた膜を特徴付ける。
【００３７】
アポトーシス細胞の存在は、ヨウ化プロピジウムで染色することにより確認した。アポトーシスの誘発は、ｓｉＳＰＡＧ９製剤に対する固有のいずれかの毒性効果に影響することはなかった。これは、培養液中のアポトーシス細胞の不存在による証拠であり、ここでｓｉＳＰＡＧ９は導入されなかった。図６Ａは、ＦＤＡで染色された生存細胞を表し、そして図６Ｂは、ｓｉＳＰＡＧ９製剤処理後の死亡細胞を表す。
【００３８】
実施例６：アガロースオーバーレイ及び製剤：
ｓｉＲＮＡは、ゲル型製剤により送達することができる。腫瘍起源の細胞の確立された培養液は、細胞生存率又は増殖における有害効果を伴うことなく、アガロース／リポソーム／ｓｉＲＮＡゲル製剤で覆うことができる。
【００３９】
端的には、細胞へのｓｉＲＮＡ送達のアガロースオーバーレイ法のために、低融点アガロースを使用した。アガロースオーバーレイのための細胞を調製するために、９６ウェル又は２４ウェルプレート中でこれらを継代培養し、そして２４時間培養液中で正常に確立させた。その後該培地を除去し、そして細胞を至適培地で１回洗浄しそして溶融アガロースで覆った。該アガロースを、３７℃におけるインキュベーション前に、周囲温度でセットさせた。最後に、通常の無抗菌細胞培養培地を各ウェルに添加し、そして該細胞を最大７２時間培養した。アガロース／リポソーム／ｓｉＲＮＡ製剤を調製するために、アガロースを、慣習的なトランスフェクションのために調製した前調製ｓｉＲＮＡ−リポソームで希釈した。注意深く撹拌後、アガロース単独について、該製剤を細胞に適用した。アガロース／リポソーム（ｓｉＲＮＡなし）の製剤もまた試験し、そして、細胞成長及び生存率における効果の欠如に関して、アガロースゲル単独と同等であることが発見された。
【００４０】
従って、出願人は、成功的な局所用のゲル型の、ヒト上皮癌細胞に対するＲＮＡｉの誘発因子の送達を実証した。ＲＮＡｉの局所誘発は、ヒト疾患、例えば、子宮頸癌及び他の利用可能な障害の処置のための重要で新規な治療アプローチを開く。
【００４１】
【表２】
2008531037.tif 000006
【表３】
2008531037.tif 000007
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１Ａ】ｓｉＲＮＡ媒介遺伝子サイレンシングの模式的な表示である。
【図１Ｂ】ヒト肺癌（Ａ５４９）細胞株における、配列番号１７を含んで成るタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を表す。
【図２】ヒト肺癌（Ａ５４９）細胞可溶化液中のタンパク質発現のウェスタンブロット分析である。
【図３】ｓｉＳＰＡＧ９−処理癌細胞と未処理癌細胞との比較におけるヒト肺癌（Ａ５４９）細胞株の間接的免疫蛍光分析である。
【図４】ｓｉＳＰＡＧ９の存在下又は不存在下におけるヒト肺癌（Ａ５４９）細胞株のウェスタンブロット分析を表す。
【図５】ｓｉＳＰＡＧ９処理及び未処理細胞中の生存又は生存可能な細胞のパーセンテージを比較する棒グラフである。
【図６】ｓｉＳＰＡＧ９製剤の存在下又は不存在下におけるヒト肺癌（Ａ５４９）細胞の間接的免疫蛍光分析を表す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
2008531037000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成19年2月23日(2007.2.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞中の配列番号１７によりコードされるタンパク質又はそのアイソフォーム、及び配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を阻害するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であって、ここで該ｓｉＲＮＡが、互いに相補的であって配列番号１〜配列番号１６から選択される少なくとも２つの配列を含んで成り、そしてここでセンス鎖が第一配列を含んで成り、そしてアンチセンス鎖が配列番号１７由来のヌクレオチド配列をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的な相補性領域を含んで成る第二配列を含んで成り、ここで該ｓｉＲＮＡは、細胞内で配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォーム、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドを発現する細胞と接触する、低分子干渉リボ核酸。
【請求項２】
請求項１に記載のｓｉＲＮＡを含んで成る細胞。
【請求項３】
請求項１に記載のｓｉＲＮＡを含んで成るベクター。
【請求項４】
配列番号１７によりコードされるタンパク質又はそのアイソフォームの発現を阻害する医薬組成物であって、細胞取り込み増強ペプチド断片又は薬剤と一緒に、請求項１に記載のｓｉＲＮＡを含んで成る医薬組成物。
【請求項５】
細胞に対して請求項４に記載の組成物を送達する工程を含んで成る、細胞成長／増殖を阻害するための方法。
【請求項６】
細胞取り込み増強ペプチド断片又は薬剤と一緒に、細胞中の配列番号１７によりコードされるタンパク質若しくはそのアイソフォームの発現、又は配列番号１８を含んで成るポリペプチドの発現を阻害するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を含んで成る組成物を細胞に送達する工程を含んで成る、細胞死を引き起こす方法であって、ここで該ｓｉＲＮＡが、互いに相補的であって配列番号１〜配列番号１６から選択される少なくとも２つの配列を含んで成り、そしてここでセンス鎖が第一配列を含んで成り、そしてアンチセンス鎖が配列番号１７由来のヌクレオチド配列をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的な相補性領域を含んで成る第二配列を含んで成る、方法。
【請求項７】
癌組織の細胞成長／増殖の阻害に有用な医薬の調製のための、請求項１に記載のｓｉＲＮＡの使用。
【請求項８】
前記癌組織が、精巣、腎臓、子宮、神経組織、眼、下垂体、結腸、皮膚、肺、胎盤、胃、膀胱、白血球、乳房、外陰部、咽頭、胎盤、骨、前立腺及び肝臓から選択される、請求項７に記載の使用。
【国際調査報告】
2008531037.tif 000017
2008531037.tif 000018
2008531037.tif 000019
2008531037.tif 000020