(57)【要約】  本発明は、第VIIa因子、第IXa因子、第Xa因子、第XIa因子、特に第VIIa因子の新規阻害剤、これらの阻害剤を含む医薬組成物、及び血栓塞栓性障害、癌または関節リューマチ炎を治療または予防するためのこれらの阻害剤の使用方法に関する。これらの阻害剤の製造方法も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化合物（ａ）〜（ｋ）：
【化１】
2008501702.tif 000024
【化２】
2008501702.tif 000025
から成る群より選ばれる化合物または医薬として許容可能なその塩。
【請求項２】
医薬として許容可能な担体、及び治療的有効量の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）、或いは医薬として許容可能なその塩を含む、医薬組成物。
【請求項３】
第VIIa因子、第IXa因子、第Xa因子及び／又は第XIa因子によって仲介される動物における病気を治療する方法であって、該動物に治療的有効量の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）、或いは医薬として許容可能なその塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項４】
上記病気が、第VIIa因子によって仲介される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
動物における血栓塞栓性障害の治療方法であって、該動物に治療的有効量の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）或いは医薬として許容可能なその塩を、トロンビン阻害剤、第IXa因子阻害剤、第Xa因子阻害剤、アスピリン（Aspirin）（登録商標）、及びプラビックス（Plavix）（登録商標）から成る群から独立して選ばれる他の抗凝固剤とともに投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な第VIIa因子阻害剤、これらの阻害剤を含む医薬組成物、及び血栓塞栓性障害を治療又は予防するためのこれらの阻害剤の使用方法に関する。これらの阻害剤の製造方法も開示される。
【背景技術】
【０００２】
技術水準
血栓症は、凝固カスケードとして知られる生化学的事象の複雑な連続から生じる。凝固において引き金となる事象は、循環中で見出されるセリンプロテアーゼ第VIIa因子（FVIIa）の組織因子（TF）、損傷又は炎症後に血管表面上に見出される受容体、への結合である。一旦TFに結合すると、第VIIa因子は、セリンプロテアーゼ第Xa因子の生成を触媒し、これは続いてカスケード中の最後のプロテアーゼ、トロンビンを生成する。
【０００３】
血栓症の臨床所見は、心臓の主要な血管（冠血管）において発生する急性の心筋梗塞（AMIまたは心臓発作）及び不安定狭心症（UA）から下部末端における血栓形成であってしばしば臀部及びひざの整形外科手術並びに一般的な腹部の手術及び麻痺の後に起こる深部静脈血栓症（DVT）にまでわたる。DVTの形成は、下部末端で形成した血栓の一部分が切断されて肺に移動し、そこで血流を遮断する、肺塞栓症（PE）の発生のリスクファクターである。予測不可能なPEの発生は、しばしば致死的な結果に導く。血栓症は、微小血栓の形成が血管系全体に発生して全身性化することもできる。播種性血管内凝固症候群（DIC）として知られるこの状態は、エボラなどの一定のウイルス性疾患、一定の癌、敗血症、及びリューマチ関節炎の結果となりうる。重篤なDICは、多臓器不全、出血及び死に至るかもしれない血栓形成反応の過剰な活性化による凝固因子の劇的な減少に導きうる。
【０００４】
脳の血管における血栓の形成又は塞栓形成は、虚血性脳卒中を引き起こす主要な事象である。脳卒中に導くトリガー因子は、心臓から脳へ向かう主要動脈（頚動脈）中の血栓形成がその後におこる、心房の細動又は異常なリズム及びアテローム性動脈硬化である。毎年、６００，０００人超が米国において脳卒中にかかる。これらの脳卒中の犠牲者の３分の２が何らかの身体障害を有し、そして３分の１は永久的な重篤の身体障害を有する。したがって、様々な血栓症状態の治療のための抗血栓剤が必要とされている。本発明は、このそして関連する必要性を満たすものである。
【発明の開示】
【０００５】
発明の要約
１つの側面において、本発明は以下の化合物（ａ）〜（ｋ）：
【化１】
2008501702.tif 000002
【化２】
2008501702.tif 000003
から成る群から選ばれる化合物、または医薬として許容可能なその塩を対象とする。
【０００６】
第二の側面においては、本発明は、医薬として許容可能な担体及び治療的有効量の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）の化合物或いは医薬として許容可能なその塩を含む、医薬組成物を対象とする。
【０００７】
第三の側面においては、本発明は、第VIIa因子、第IXa因子、第Xa因子及び／又は第XIa因子、好ましくは第VIIa因子によって仲介される動物における病気の治療方法であって、前記動物に治療的有効量の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）或いは医薬として許容可能なその塩を投与することを含む方法を対象とする。好ましくは、該障害は、血栓塞栓性障害又は癌又はリューマチ関節炎、より好ましくは血栓塞栓性障害であり、さらにより好ましくは該障害は深部静脈血栓症である。好ましくは、本発明の化合物は、予防的に投与される。
【０００８】
第四の側面においては、本発明は、動物における血栓塞栓性障害の治療方法であって、該動物に治療的有効量の化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）或いは医薬として許容可能なその塩を、トロンビン阻害剤、第IXa因子阻害剤、第Xa因子阻害剤、アスピリン（Aspirin）（登録商標）、及びプラビックス（Plavix）（登録商標）から成る群から独立して選ばれる他の抗凝固剤とともに投与することを含む方法を対象とする。
【０００９】
第五の側面においては、本発明は、（保存された血液製剤及びサンプルなどの）生物学的サンプルの凝固を阻害する方法であって、化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）或いは医薬として許容可能なその塩を投与することを含む方法を対象とする。
【００１０】
第六の側面においては、本発明は、動物における血栓塞栓性障害または癌またはリューマチ関節炎の治療のための医薬の製造における、化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）又は（ｋ）或いは医薬として許容可能なその塩の使用を対象とする。好ましくは、該障害は、深部静脈血栓症などの血栓塞栓性障害である。
【００１１】
発明の詳細な説明
定義
本明細書及び請求項において使用される以下の用語は、特記されない限り、以下に定義される意味を有することを意図される。
【００１２】
本発明は、本発明の化合物のプロドラッグも含む。プロドラッグという用語は、プロドラッグが哺乳動物対象に投与された場合、本発明の活性化合物を放出することのできる、共有結合で結合された担体を表すことを意図される。活性成分の放出はインビボで起こる。プロドラッグは、当業者に知られた技術によって製造可能である。これらの技術は、一般に、所与の化合物中の適切な官能基を修飾する。しかしながら、これらの修飾された官能基は、日常的な操作又はインビボで元の官能基に再生する。本発明の化合物のプロドラッグは、ヒドロキシ、カルバミミドイル、アミノ、カルボキシル、又は類似の基が修飾されている化合物を含む。プロドラッグの例は、これらに限定されないが、本発明の化合物中のヒドロキシ官能基の（アセテート、ホルメート、及びベンゾエート誘導体などの）エステル、（N,N-ジメチルアミノカルボニルなどの）カーバメートなどを含む。本発明の化合物のプロドラッグも、本発明の範囲内にある。
【００１３】
本発明は、本発明の化合物の誘導体及び保護された誘導体も含む。例えば、本発明の化合物が酸化可能な窒素原子を含む場合、該窒素原子は本分野で周知の方法によってＮ−オキシドに転換可能である。
【００１４】
本発明の化合物がヒドロキシ、カルボキシ、カルボニル、チオール又は窒素原子を含む任意の基を含む場合にも、これらの基は好適な保護基で保護されることができる。好適な保護基の包括的なリストは、その開示が参考文献として本明細書中に全体として援用されている、T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc. 1999中に見出されることができる。本発明の化合物の保護された誘導体は、本分野において周知の方法によって製造可能である。
【００１５】
化合物の「医薬として許容可能な塩」は、医薬として許容可能であり、そして親化合物の所望の薬理活性を有する塩を意味する。かかる塩は、以下の：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；または酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）−安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス−（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトン酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸により生成される酸付加塩；或いは
親化合物中に存在する酸性のプロトンが、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアルミニウムイオンなどの金属イオンで置換されているか、或いはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基と配位するいずれかの場合に生成される塩を含む。医薬として許容可能な塩が無毒性であることは理解される。好適な医薬として許容可能な塩に関するさらなる情報は、参考文献として本明細書中に援用されている、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985中に見出されることができる。
【００１６】
本発明の化合物は、不斉中心を有することができる。非対称的に置換された原子を含む本発明の化合物は、光学活性体又はラセミ体として単離されることができる。物質の分割などによって光学活性体を調製する方法は本分野で周知である。本発明の化合物のすべてのキラル体、エナンチオマー、ジアステレオマー、及びラセミ体は、本発明の範囲内にある。
【００１７】
本発明の化合物は、互変異性体平衡で存在する。すべての可能な互変異性体は、かかる名前、図解及び記述によって包含されることを意図され、本発明の範囲内にある。例えば、−C(=NR13)NH2基は、C(=NH)NHR13基に互変異性化することができる。
【００１８】
「医薬として許容可能な担体又は賦形剤」は、一般的に安全、無毒性、かつ、生物学的にもまたその他でも望ましくないものでなく、かつ、獣医学的並びにヒトの医薬としての使用が許容可能な医薬組成物の調製に有用な担体又は賦形剤を含む。本明細書及び請求項において使用される「医薬として許容可能な担体／賦形剤」は、かかる賦形剤を1つ及び２つ以上含む両方の場合がある。
【００１９】
病気の「治療すること」又は「治療」は、以下の：
（１）病気を予防すること、すなわち、病気に対して曝露されるか又は病気に罹らせられるかもしれないが、まだその病気の症状を経験していないか又は表していない哺乳動物において、病気の臨床症状が発生しないようにすること；
（２）病気を抑制すること、すなわち、病気又はその臨床症状の発生を停止させるかまたは低下させること；或いは
（３）病気を軽減すること、すなわち、病気又はその臨床症状を後退させること；
を含む。
【００２０】
「治療的有効量」は、病気の治療のために哺乳動物に投与された場合、病気のかかる治療を行うのに十分な本発明の化合物の量を意味する。「治療的有効量」は、化合物、病気及びその重篤度並びに治療される哺乳動物の年齢、体重等によって変化するであろう。
【００２１】
一般的合成スキーム
本発明の化合物は、以下に示す反応スキームに示される方法によって作られることができる。
【００２２】
これらの化合物の調製において使用される出発物質及び試薬は、Aldrich Chemical Co., (Milwaukee, Wis.)、Bachem（Torrance, Calif.）、又はSigma（St. Louis, Mo.）などの商業的供給者から入手可能であるか、或いはFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-17(John Wiley and Sons, 1991)；Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5 and Supplemental(Elsevier Science Publishers, 1989)；Organic Reactions, Volumes 1-40(John Wiley and Sons, 1991)、March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 4th Edition)及びLarock's Comprehesive Organic Transformations(VCH Publishers Inc., 1989)などの参考文献中に記載された手順にしたがって、当業者に知られた方法により調製される。これらのスキームは、単に本発明の化合物が合成可能ないくつかの方法を例示するものであり、これらのスキームに対する様々な改変が可能であり、そしてこの開示を参照した当業者に示唆されるであろう。
【００２３】
反応の出発物質及び中間体は、所望により、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどを含むがこれらに限られない、慣用の技術を用いて単離されそして精製されることができる。かかる物質は、物理定数表及びスペクトルデータを含む慣用の手段を用いて特徴づけされることができる。
【００２４】
反対の意味に特定されない限り、本明細書に記載の反応は、大気圧で約−７８℃〜約１５０℃の温度範囲、より好ましくは約０℃〜約１２５℃、そして最も好ましくはおよそ室温（又は周囲温度）、例えば約２０℃、で起こる。
【００２５】
本発明の化合物は、以下のスキームIに記載のとおりに調製可能である。
【化３】
2008501702.tif 000004
【００２６】
式I（式中、Rは水素又はヒドロキシ保護基、好ましくはヒドロキシであり、R'はアルキルである。）のフェノール誘導体のホルミル化は式２の化合物を提供する。ホルミル化反応は、塩化マグネシウム及びトリエチルアミンなどの有機塩基の存在下、及びアセトニトリルなどの好適な有機溶媒中で実施される。ジメチルホルムアミドなどの好適な有機溶媒中でのN-ブロモサクシニミド、N-ヨードサクシニミドなどの好適なハロゲン化剤による２のハロゲン化は、Xがハロである、式３の化合物を提供する。
【００２７】
式Iの化合物は本分野で周知の方法によって調製可能である。
式３（式中、Rは水素である）中のヒドロキシ基の、アルキル、メトキシエトキシメチル、ベンジルなどの好適なヒドロキシ保護基による保護は、式４の化合物を提供する。他の好適なヒドロキシ保護基の包括的なリストは、その開示が全体として、本明細書中に参考文献として援用されている、T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc. 1999中に見出されることができる。好ましいヒドロキシ保護基は、２−メトキシエトキシメチル及びベンジルである。反応は典型的には、ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在下、かつジクロロメタン、四塩化炭素、クロロホルムなどのハロゲン化有機溶媒中で実施される。
【００２８】
式５（Rzが−SO2NHPG又はシアノである）のボロン酸化合物による処理５は、式６のビフェニル化合物を提供する。反応はテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどのパラジウム触媒の存在下、かつトルエン又はジメトキシエタンなどの好適な有機溶媒及び水性炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどの塩基中で実施される。或いは、反応はテトラヒドロフランなどの好適な有機溶媒中、ジイソプロピルアミンの存在下でPdCl2(dppf).CH2Cl2錯体存在下で実施可能である。式５の化合物は、本分野で周知の方法によって調製可能である。
【００２９】
ベンゾキノン、空気酸化又はFeCl3及びO2などの好適な酸化剤の存在下かつメタノール、エタノールなどの好適な有機溶媒中での、式７の１，２−ジアミノ化合物による６の縮合は、式８の化合物を提供する。或いは、反応は、イソプロパノールなどのアルコール溶媒中のメタ亜硫酸ナトリウム水溶液を使用し、かつ酸素の存在下で実施される。
【００３０】
そして、化合物８は本発明の化合物に転換される。この転換に利用される手順は、本発明の化合物中のビフェニル−３−イル環上に存在する置換基の性質に依存する。例えば、ビフェニル−３−イル上の置換基が−SO2NH2である場合、化合物８、式中、Rzは−SO2NHPGであり、PGは好適なアミノ保護基である、が利用される。アミノ保護基の除去、その後のエステル基の加水分解は、式１０の化合物を提供する。そして、化合物１０は式NHRaRb、式中、Raは水素であり、そして、Rbは（R）又は（S）−CH(CONH2)CONH2であるか、或いはRaはメチルであり、そしてRbは、R，S，S、S，−N(CH3)CH2CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH2OHである、のアミンとカップリングして化合物（ｈ）、（ｉ）又は（ｊ）をそれぞれ提供する。ビフェニル−３−イル環上の置換基がアミノメチル基で置換される場合、化合物８は先ず、エステル基の加水分解によって式１０の化合物に転換され、その後、アンモニアと反応して化合物１１を提供する。アミノ化反応は、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（PyBOP（登録商標））、O-ベンゾトリアゾール−１−イル−N，N，N'，N'−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（HBTU）、O−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（HATU）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド（EDC）、又は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）、などの好適なカップリング剤の存在下、場合により１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBT）、及びN，N-ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、N-メチルモルホリンなどの塩基の存在下で実施される。反応は、典型的には、２０〜３０℃、好ましくは約２５℃で実施され、そして完結するのに２〜２４時間必要である。好適な反応溶媒は、N，N-ジメチルホルムアミドなどの不活性有機溶媒である。
【００３１】
そして、シアノ基は水素化反応条件下でアミノエチル基に転換され、好適な酸との反応後に化合物（ａ）〜（ｇ）及び（ｋ）を提供する。上記の手順を利用する本発明の化合物の合成の詳細は、以下の実施例において提供される。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物の他の調製方法は、その開示が全体として、本明細書中に参考文献として援用されている、２００３年６月１９日に出願公開第２００３０１１４４５７A1号として公開された、Hu, Huiyongらの米国特許出願に開示されている。
【００３３】
用途
本発明の化合物は、第VIIa、第IXa、第Xa、及び第XIa因子、特に、第VIIa因子を阻害し、そしてしたがって、哺乳動物における血栓塞栓性障害の治療又は予防のための抗凝固剤として有用である。
【００３４】
言及される特別な病気は、（DVTなどの）静脈血栓症及び肺塞栓症、（心筋梗塞、不安定狭心症、血栓に基づく脳卒中及び末梢動脈血栓症などの）動脈血栓症、及び通常心房細動の間の心房に由来するか又は貫壁性心筋梗塞症後の左心室に由来するか或いはうっ血性心不全により引き起こされる、全身性の塞栓症の治療的及び／又は予防的処置；血栓溶解、経皮経管的血管形成術（PTA）及び心臓バイパス手術後の再狭窄（すなわち、血栓症）の予防；一般的に顕微手術及び血管手術後の再血栓形成の予防を含む。
【００３５】
さらなる適応症は、細菌、多発外傷、中毒症、または他の任意のメカニズムによって引き起こされる播種性血管内凝固の治療的及び／または予防的処置；血管移植片、血管ステント、血管カテーテル、機械的及び生物学的な人口弁または任意の他の医療装置などの体内の異物表面と血液が接触した場合の抗凝固処置；並び心肺装置を用いる冠血管手術または血液透析の間などに体外の医療装置と血液が接触する場合の抗凝固処置；特発性及び成人呼吸窮迫症候群、放射線照射または化学療法後の肺線維症、敗血症ショック、敗血症、浮腫、冠動脈疾患及び動脈硬化巣の形成などの急性または慢性の動脈硬化症を含むがこれらに限られない炎症反応、大脳動脈疾患、脳梗塞、脳血栓症、脳塞栓症、末梢動脈疾患、虚血、（不安定狭心症を含む）狭心症、再灌流傷害、経皮経管的血管形成術（PTA）及び冠動脈バイパス手術後の再狭窄の治療的及び／又は予防的処置を含む。
【００３６】
本発明の化合物は、癌またはリューマチ関節炎の治療にも使用可能である。
【００３７】
試験
本発明の化合物が第VIIa因子及び第Xa因子を阻害する能力は、以下の生物学的アッセイの実験例１および２に記載のインビトロ及びインビボのアッセイにおいて試験されることができる。
【００３８】
医薬組成物の投与
一般に、本発明の化合物は、類似の用途に役立つ作用物質の任意の許容された投与様式によって治療的有効量で投与されるであろう。本発明の化合物すなわち、活性成分、の実際の量は、治療される病気の重篤度、対象の年齢及び相対的健康状態、使用される化合物の力価、投与経路及び形態、並びに他の因子などの多数の因子に依存する。
【００３９】
本発明の化合物の治療的有効量は、受容者の体重１キログラム、1日当たり、およそ０．０１〜５０mg；好ましくは、約０．１〜２０mg/kg/日；より好ましくは、約０．２５mg/kg/日〜１０mg/kg/日である。したがって、７０kgの人への投与には、用量は、最も好ましくは一日あたり約７mg〜１．４gである。
【００４０】
一般に、本発明の化合物は、以下の投与経路：経口、全身性（例えば、経皮的、鼻腔内、又は坐剤による）、或いは腸管外（例えば、筋肉内、静脈内または皮下）の任意のものによって、医薬組成物として投与される。好ましい投与方法は、苦痛の程度によって調節可能な便利な毎日投与計画を用いる経口または腸管外投与である。経口組成物は、錠剤、ピル、カプセル、半固体、散剤、徐放性製剤、溶液、懸濁液、エリキシル、エアロゾル、または任意の他の適切な組成物の形態をとることができる。
【００４１】
製剤の選択は、（例えば、経口投与のためには、錠剤、ピルまたはカプセルの形態の製剤が好ましい）薬物投与様式及び薬物物質のバイオアベイラビリティーなどの様々な因子に依存する。最近、表面積を増加させること、すなわち粒子サイズを小さくすること、によってバイオアベイラビリティーが増加可能であるという原理に基づいて、特に、低いバイオアベイラビリティーを示す薬物のための医薬製剤が開発された。例えば、米国特許第４，１０７，２８８号は、活性物質がマクロ分子の架橋マトリックス上に支持されている、１０〜１０００nmのサイズ範囲の粒子を含む医薬製剤を記載する。米国特許第５，１４５，６８４号は、薬物物質が表面改質剤の存在下でナノ粒子（平均粒子サイズ４００nm）に微粉砕され、そして液体媒体中に分散されて、著しく高いバイオアベイラビリティーを示す医薬製剤を生じる、医薬製剤の製造方法を記載する。
【００４２】
一般に、組成物は、少なくとも１つの医薬として許容可能な賦形剤とともに本発明の化合物を含む。許容可能な賦形剤は、無毒性であり、投与を助け、そして本発明の化合物の治療的利益に悪影響を及ぼさない。かかる賦形剤は、任意の固体、液体、半固体またはエアロゾル組成物の場合には、当業者が一般的に利用可能なガス状賦形剤であることができる。
【００４３】
固体医薬賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、シュークロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどを含む。液体及び半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール及び石油、ピーナツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの動物、植物または合成由来の多様なオイルから選ばれることができる。特に注射用溶液のために好ましい液体担体は、水、食塩水、水性デキストロース及びグリコールなどを含む。
【００４４】
圧縮ガスは、本発明の化合物をエアロゾル形態に分散させるのに使用されることができる。この目的のために好適な不活性ガスは、窒素、二酸化炭素などである。
【００４５】
他の好適な医薬賦形剤及びそれらの製剤は、E.W. Martin編のRemington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 18th ed. 1990)に記載されている。
【００４６】
製剤中の化合物の量は、当業者によって採用される全範囲内で変動可能である。典型的には、製剤は、重量パーセント（wt％）に基づいて全製剤中の約０．０１〜９９．９９重量パーセントの本発明の化合物を残りの1つ以上の好適な医薬賦形剤とのバランスで含む。好ましくは、化合物は、約１〜８０重量％のレベルで存在する。本発明の化合物を含む代表的な医薬製剤を以下に記載する。
【００４７】
本発明の化合物は、単独で、又は本発明の他の化合物とともに、又は1つ以上の他の活性成分とともに投与されることができる。例えば、本発明の化合物は、トロンビン阻害剤、第IXa因子及び第Xa因子阻害剤から成る群から独立して選ばれる他の抗凝固剤とともに投与されることができる。好ましくは、トロンビン阻害剤は、イノガトラン（Inogatran（登録商標））、メラガトラン（Melagatran（登録商標））又はそれらのプロドラッグであって、これらは、その開示が全体として本明細書中に参考文献として援用されているPCT国際特許出願公開第WO94/29336号及び同第WO97/23499号中に開示されている。本発明の併用製品中で使用されることのできる第Xa因子阻害剤は、Current Opinion in Therapeutic Patents, 1993, 1173-1179、並びに
【化４】
2008501702.tif 000005
【化５】
2008501702.tif 000006
中に記載されたものを含み、これらのすべての文献の特別なそして一般的な開示は、参考文献として本明細書中に援用されている。
【００４８】
第Xa因子阻害剤は、そのすべての文献の特別なそして一般的な開示が参考文献として本明細書中に援用されている、国際特許出願第WO96/10022号、同第WO97/28129号、同第WO97/29104号、同第WO98/21188号、同第99/06371号、同第WO99/57099号、同第WO99/57112号、同第WO00/47573号、同第WO00/78749号、同第99/09027号及び同第WO99/57113号中に開示されたもの、ならびに４−｛４−［４−（５−クロロインドール−２−イルスルホニル）ピペラジン−１−カルボニル］フェニル｝−ピリジン−１−オキシド及び医薬として許容可能なその塩も含む。好ましい第Xa因子阻害剤は、アンチスタチン、マダニ抗凝固タンパク質、並びにSQ-311及びSQ-315として知られるもの（国際特許出願第WO98/57951号を参照のこと）；SN-292（国際特許出願第WO98/28282号を参照のこと）；SN-429及びSN-116（国際特許出願第WO98/28269号を参照のこと）；RPR-208707（国際特許出願第WO98/25611号の実施例４８を参照のこと）；XU-817（国際特許出願第WO98/01428号を参照のこと）；SF-324及びSF-303（国際特許出願第WO97/23212号を参照のこと）；YM60828（国際特許出願第WO96/16940号の実施例７５を参照のこと）；FACTOREX（米国特許第5,783,421号を参照のこと）；SF-324（ヨーロッパ特許出願第EP874629号を参照のこと）；DX9065A（ヨーロッパ特許出願第EP540051号の実施例３９を参照のこと）；１−（４−カルバミミドイルベンジル）−４−（６−クロロナフタレン−２−イルスルホニル）−ピペラジン−２−オン（日本国特許第JP12204081号の実施例２を参照のこと）；M55555（国際特許出願第WO99/33805号の実施例３９を参照のこと）；DPC423（１−（３−カルバミミドイルフェニル）−２−（２’−アミノスルホニル［１，１’−ビフェニル］−４−イルアミノカルボニル）−４−ブロモピロール、国際特許出願第WO98/28269号を参照のこと）；３−（３，５−ジフルオロ−６−［３−（４，５−ジヒドロ−１−メチル−イミダゾール−２−イル）−フェノキシ］−４−［２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ］−ピリジン−２−イルオキシ）−４−ヒドロキシ−ベンズアミジン（国際特許出願第WO00/31068号を参照のこと）；ZK-807834（国際特許出願第WO7/29067号を参照のこと）；１，４−ジアザ−４−（６−クロロナフタレン−２−イルスルホニル）−６−（メトキシメチル）−７−オキサ−１’−（ピリジン−４−イル）−スピロ［ビシクロ−［４−３．０］−ノナン−８，４’−ピペリジン］−２−オン（国際特許出願第WO01/02397号を参照のこと）；（S）−１−（４−アミノキナゾリン−７−イルメチル）−４−［２−（５−クロロチエン−２−イルオキシ）−アセチル］−３−メトキシ−メチルピペラジン−２−オン（国際特許出願第WO00/32590号を参照のこと）；３−（２−［４−（２−アミノスルホニル−フェニル）ベンゾイルフェノキシ）−ベンズアミジン（国際特許出願第WO01/19788号を参照のこと）；及び４−（２−［４−（５−クロロインドール−２−イル−スルホニル）−２−（ピロリジン−１−イル−カルボニルメチル）−ピペラジン−１−イル−カルボニル］−チアゾール−５−イル）ピリジンNオキシド（日本国特許出願第JP12143623号を参照のこと）；そして、国際特許出願第WO98/21188号の実施例７、同第WO99/57113号の実施例３及び６、同第WO00/78747号の実施例６、米国特許第6,080,767号の実施例１８８、２１１及び１６７；国際特許出願第WO99/33805号の実施例４０、５４及び５５；同第WO01/05784号の実施例５、６、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６及び１７；同第WO01/12600号の実施例６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、２２、２３、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３８、３９、４０、４１、４２及び４３並びに同第WO00/35886号の実施例８０２及び８７７の化合物を含む。併用療法において使用可能な他の抗凝固剤は、全体として本明細書中に参考文献として援用されている、以下の：
【化６】
2008501702.tif 000007
中に開示されたものである。
【００４９】
メラガトラン及び（プロドラッグを含む）その誘導体を投与するのに使用するための好適な製剤は、例えば、なかでも、その開示が参考文献として本明細書中に援用されている、国際特許出願第WO94/29336号、同第WO96/14084号、同第WO96/16671号、同第WO97/23499号、同第WO97/39770号、同第WO97/45138号、同第WO98/16252号、同第WO99/27912号、同第WO99/27913号、同第WO00/12043号及び同第WO00/13671号に記載されたものである。
【００５０】
同様に、第Xa因子阻害剤及び（プロドラッグを含む）その誘導体の投与において使用される好適な製剤は、例えば、その開示が参考文献として本明細書中に援用されている、本明細書中で先に示した第Xa因子阻害剤に関する従来技術の文献中に記載されたように、文献中に記載されている。その他、好適な製剤、そして特にメラガトラン／誘導体及び第Xa因子阻害剤／誘導体の両方を含む併用製剤の調製は、日常的な技術を用いて当業者によって非発明的に達成されることができる。各製剤中のメラガトラン、第Xa因子阻害剤、又はどちらかの誘導体の量は、状態の重篤度及び治療される患者、並びに使用される化合物に依存するが、当業者によって非発明的に決定されることができる。
【００５１】
哺乳動物、特にヒト、の患者の治療的及び／又は予防的処置におけるメラガトラン、第Xa因子阻害剤及びどちらかの誘導体の好適な用量は、医療従事者又は他の当業者によって日常的に決定されることができ、その中の開示が参考文献として本明細書中に援用されている、本明細書中で先に示した、メラガトラン（又はプロドラッグを含むその誘導体）及び第Xa因子阻害剤に関する従来技術の文献中で検討されている各用量を含む。
【実施例】
【００５２】
すべての溶媒及び試薬はAldrichから購入し、そして注記した箇所を除き受領したままで使用した。すべての反応及び生成物は、ダイオードアレイ検出器及びPhenomenex Prodigy 5μODS-3 100Aカラム、１５０mm×３．０mmID（Phenomenex カタログ番号00D４０９６-Y0）を取付けたAgilent HP1100システムを使用するHPLCを用いて分析した。クロマトグラフィーは、４０℃のカラム温度で行い、そして化合物の検出は、２１４及び２５４nmの両方で実施した。酸性緩衝液としてのTFAとアセトニトリル−水の移動相系を用い、典型的には、５〜１０分の勾配を使用する、勾配溶離を採用した。
【００５３】
参考例A
３，４−ジアミノゼンズアミジンモノハイドロクロライドの合成
【化７】
2008501702.tif 000008
ステップ１
1,4−ジオキサン（６００mL）中の４−アミノ−３−ニトロベンゾニトリル（６３．３ｇ、３８８ミリモル）及び無水エタノール（６００mL）の混合物を氷水浴中で０〜５℃まで冷却し、そしてガス状HClで１．５時間処理した。反応混合物をきつく密封し、そして１８時間攪拌しながら室温まで温めた。そして、フラスコを注意深く開封し、そして濁った溶液が得られるまで、反応混合物を無水ジエチルエーテル（約２．４L）で希釈した。そして、清澄な溶液を生じるのに必要な最少量の無水エタノールを加え、得られた溶液を、４−アミノ−３−ニトロ−ベンズイミド酸エチルエステルの結晶が観察されるまで攪拌した。そして、エーテルを注意深く添加して結晶化過程を完了させ、懸濁液を約３０分間静置した。結晶を濾過し、そして無水ジエチルエーテルで洗浄し、アスピレーター真空下で乾燥させた。結晶を真空乾燥して、４−アミノ−３−ニトロ−ベンズイミド酸エチルエステルハイドロクロライド（８４．６ｇ）をオフホワイトの結晶として得た。
【００５４】
ステップ２
４−アミノ−３−ニトロ−ベンズイミド酸エチルエステルハイドロクロライド（８４．５g、３４４ミリモル）を無水エタノール（７５０mL）中に懸濁し、そして０℃に冷却した。そして、その溶液にアンモニアを２時間通した。フラスコをきつく密封し、そして１８時間にわたって攪拌しながら、室温まで温めた。上記のステップ３の記載に類似の方法を使用して、生成物をジエチルエーテルで結晶化し、得られた固体を濾過し、洗浄し、乾燥させて、４−アミノ−３−ニトロベンズアミジンモノハイドロクロライド（７０．７ｇ）をオフホワイトの粉末として得た。
【００５５】
ステップ３
メタノール（２００mL）中の４−アミノ−３−ニトロベンズアミジンモノハイドロクロライド（１５ｇ、６９ミリモル）及びパールマン触媒（Pd(OH)2、１．０ｇ、７．１２ミリモル）を５０psiの水素雰囲気下で１．５時間振とうした。懸濁液をセライトを通して濾過し、そしてろ液を無水ジエチルエーテル（４００mL）に滴下して加え、褐色の固体として３，４−ジアミノベンズアミジンモノハイドロクロライドを沈殿させた。
【００５６】
参考例B  
N-tert−ブチル４−メトキシ−５−（ベンゼンスルホンアミド）−３−ボロン酸の合成
【化８】
2008501702.tif 000009
ステップ１
ジクロロメタン（２．３L）中の２−ヨードアニソール（２２１．２ｇ、９６６ミリモル）溶液を０℃に冷却し、そして１５分間攪拌しながらクロロスルホン酸（６４．５mL、１１２．６ｇ、９６６ミリモル）を滴下して加えた。反応混合物を３時間にわたって放置して１０℃まであたためた。溶液に窒素ガスをとおし、出口で水酸化ナトリウム水溶液を通してあわ立て、反応中に生成したガス状塩化水素を洗い落とした。反応物のアリコートをHPLCで分析し、これは、２−ヨードアニソールが消費されたことを示した。反応混合物を５塩化リン（２１７．８ｇ、１．０４５モル）で処理し、そして室温で２時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、ほとんどの揮発性成分を除去し、そして１００℃の浴温度で濃縮して、反応中に生成したPOCl3を除去した。得られた油状残渣をCH2Cl2（２．８L）に溶解し、そして、pHを７付近に維持するために固体炭酸水素ナトリウムを加えながら、この溶液を水（３L）とともに攪拌した。層分離し、有機層を０℃に冷却し、そして内部温度を１０℃以下に維持するような速度で、tert-ブチルアミン（２３０mL、１６０ｇ）を加えた。反応混合物を一夜放置して、周囲温度まであたため、そして５％水酸化ナトリウムで洗浄した。有機層を真空中で濃縮し、N-tert-ブチル−３−ヨード−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（３４０ｇ）をオフホワイトの固体として得た。
【００５７】
ステップ２
N-tert-ブチル３−ヨード−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（３３５ｇ、９０７ミリモル）をジクロロメタン（３L）に溶解し、そして得られた溶液を内部温度−２０℃まで冷却した。溶液を、ジエチルエーテル（３０８mL、９２５ミリモル）中、３．０Mメチルマグネシウムブロミド溶液を０．５時間にわたって滴下して処理し、フラスコの内部温度を−２０±５℃に維持した。反応混合物を、２．５時間、−２０±５℃で攪拌し、そして、ジエチルエーテル（５１１mＬ、１．０９モル）中のイソプロピルマブネシウムブロミドの２．１３M溶液を約−３５℃で加えた。得られた溶液を−３５±５℃で１．５時間攪拌した。反応混合物を０℃まで温め、追加のジエチルエーテル中イソプロピルマグネシウムブロミド（８６．０ｍL、１８３ミリモル）を加えた。反応混合物を０℃で２時間攪拌し、そしてさらなるアリコートのジエチルエーテル中イソプロピルマグネシウムブロミド（２５．０mL；５３．３ミリモル）を加えた。反応混合物をTHF（１７５mL）中、ホウ酸トリメチル（３２０mL、２．９０モル）で一度に処理した結果、温度が２７℃に上がった。反応混合物をこの温度で４時間攪拌し、水（１．３L）中に注ぎ、そして溶液がpH２になるまで８５％リン酸を加えた。層分離し、有機相を１．５N NaOH水溶液（２L）、続いて１％NaOH水溶液（２L）で洗浄した。併合した水相をリン酸でpH２に酸性化し、そして得られた酸性溶液を９：１のジクロロメタン／THF溶液（２L、続いて１L）で抽出した。有機相を乾燥させ（Na2SO4）、濾過し、真空中で濃縮して約２５０ｇの白色固体を得て、これをエタノール（１L）に溶解した。溶液を水で希釈して全体積４Lとし、得られた溶液を室温で一夜攪拌した。得られた結晶固体を濾過し、そして高度の真空下で一夜乾燥させて、N-tert-ブチル４−メトキシ−５−（ベンゼン−スルホンアミド）−３−ボロン酸（２２１ｇ）を白色固体として得て、これは（およそ）二水和物であった。ろ液を９：１のジクロロメタン／THF溶液で抽出し、抽出物を蒸発させた。粗固体（２３ｇ）を水／エタノールの３：１溶液（５００mL）から再結晶化して、さらなる生成物１９ｇを白色固体として得た。
【００５８】
参考例C
４−ベンジルオキシ−N-tert−ブチル−３−ボロン酸−ベンゼンスルホンアミドの合成
【化９】
2008501702.tif 000010
ステップ１
１Lの丸底フラスコに、２−ヨードフェノール（５０ｇ）及びニトロメタン（２５０mL）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。発煙硫酸（４２mL、３０％SO3）を滴下して加え、反応混合物を放置して室温まで温めた。２時間後、反応が終了し、水中（４００mL）に注ぎ、そして酢酸エチル（２００mL）で洗浄した。有機物を水（３００mL）で逆抽出し、オイルとなるまで濃縮し、もとの水層と併合した。水層を５M 水酸化ナトリウム水溶液（３００mL）で中和し、そして２Lの丸底フラスコに移した。そして、水酸化ナトリウムペレット（１１ｇ）、エタノール（１５０mL）、及びベンジルブロミド（５０mL）を添加し、そして反応混合物を油浴温度８２℃に加熱し、そして１６時間攪拌した。反応完了後、エタノールを減圧蒸留によって除去し、これにより溶液から生成物を沈殿させた。そして、生成物を濾過し、高度の真空下で乾燥させて、４−ベンジルオキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホン酸（６１ｇ、収率７０％）を得た。
【００５９】
ステップ２
２Lの丸底フラスコに、４−ベンジルオキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホン酸（４９．８７ｇ）及びジクロロメタン（１０００mL）を加えた。懸濁液を攪拌し、５塩化リン（５３ｇ）を加えて反応物を溶液とした。反応混合物を４０℃で１時間加熱後、水酸化ナトリウム水溶液（２０％を４００mL）をゆっくりと加え、そして水層がpH７となるまで攪拌を続けた。有機層を分離し、そして５０％飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１２５mL）とともに３０分間攪拌した（pH１０）。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、２Lの丸底フラスコにデカントし、tert-ブチルアミン（３４mL）を加えた。１６時間後、反応混合物を、５％水酸化ナトリウム水溶液でpH１３〜１４に塩基性化した。有機層を分離し、そして固体となるまで濃縮し、これを次に５０℃で酢酸イソプロピル中にスラリー化し、冷却し、そして濾過して、４−ベンジルオキシ−N−tert−ブチル−３−ヨード−ベンゼンスルホンアミド（４６ｇ、収率８０％）を２回で得た。
【００６０】
ステップ３
１Lの丸底フラスコに、４−ベンジルオキシ−N−tert−ブチル−３−ヨード−ベンゼンスルホンアミド（３２ｇ）及びジクロロメタン（３２０mL）を加え、反応混合物を攪拌し、−２０〜−２５℃に冷却した。メチルマグネシウムブロミド（２４．４mL、エーテル中３M）を滴下して加えた。反応混合物を２時間攪拌し、そして−３５〜−４０℃に冷却した。イロプロピルマグネシウムブロミド（５４mL、エーテル中２．１３M）を滴下して加えた。そして、テトラヒドロフラン（１７mL）及びホウ酸トリメチル（６mL）を加えて、白色固体を沈殿させ、そして、反応混合物の内部温度を０℃に上げた。反応混合物を放置して室温まで温め、１２時間後にリン酸（５００mＬの水中の１Mを２５０mL）を加えた。有機層を分離し、そして２．５％の水酸化ナトリウム水溶液（５００mL）で塩基性化して、生成物のいくらかを沈殿させた。いくらかの沈殿固体と水層を濃縮リン酸でpH２まで酸性化し、そしてジクロロメタン中１０％のテトラヒドロフランで抽出した。固体は有機層にともなっており、これを濃縮して白色固体とし、次に１Lの水中に３０分間スラリー化した。固体を濾過し、高度の真空下で乾燥させて、４−ベンジルオキシ−N−tert−ブチル−３−ボロン酸−ベンゼンスルホンアミド（２３ｇ、収率８８％）を得た。
【００６１】
標題化合物の他の合成方法
ステップ１
３つ首の３L丸底フラスコにオーバーヘッドスターラー、温度計、N2ライン、２５０ｍLの等圧滴下漏斗、および（水酸化ナトリウム溶液への）気体出口処理装置（gas-exit scrubber））を取り付けた。フラスコにN2を流し、そして商業的に入手可能な２−ヨードフェノール（Alfa Aesar; 201.95、０．９１８モル）および無水ジクロロメタン（９２０mL）を入れた。穏やかなN2流を反応上部空間中に確立し、反応容器を塩水−氷浴に浸して−５℃に冷却した。滴下漏斗に無水ジクロロメタン（１７５mL）、そしてクロロスルホン酸（Aldrich; １０６．９６ｇ、０．９１８モル、１．００当量）をいれ、そして得られた混合物をテフロン（登録商標）ロッドで攪拌した。クロロスルホン酸の希釈溶液をおよそ９０分間にわたって反応混合物に滴下して加えた。添加中に濃いピンクのスラリーが形成した。添加完了の３０分後、氷浴を除去し、そして反応混合物を周囲温度で攪拌しておいた。２時間後、反応容器を冷水浴に浸し、そして数分間にわたって水（５００mL）を反応混合物に加えた。得られた混合物を、落ちついた後に二相性／均一となるまで激しく攪拌した。水とともに混合物を分離漏斗に移し、そしてジクロロメタンで抽出した。４−ヒドロキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホン酸を含む水層を次のステップのためにもとの容器に戻した。
【００６２】
ステップ２
４−ヒドロキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホン酸の水溶液を激しく攪拌しながら、ここへ水酸化ナトリウム（ペレット、１１０ｇ、２．７５モル、３．００当量）を分けて加えた。添加完了の１０〜１５分後、得られた白色の懸濁液にイソプロピルアルコール（１５０mL）を加えた。滴下漏斗にベンジルブロミド（Aldrich;１６４．９ｇ、０．９６４モル、１．０５当量）を入れ、そして約５分間にわたって反応混合物に加え、そして反応混合物を８０℃≦Tint≦８４℃となるまで温めた。約２５分後、さらに反応が進行しないことを判定し、そしてしたがって追加の水酸化ナトリウム（３．６７ｇ、９１．８ミリモル、０．１当量）そしてベンジルブロミド（１５．７ｇ、９１．８ミリモル、０．１当量）を反応混合物に加えて、均一な溶液を得た。最初のベンジルブロミドの添加の７０分後、加熱を停止し、油浴中で攪拌しながらゆっくりと反応物を冷却した。７．５時間で、反応混合物は、茶色の液体中に細かい反射する沈殿のある懸濁液となった。反応混合物を３：１の水−硫酸（約７０mLが必要であった）を用いてpH１３からpH７．５と８の間まで酸性化した。反応混合物を約５℃までゆっくりと冷却し、そしてその温度で約１時間攪拌した。ろ過によってワックス状の白色のプラークを集め、ジクロロメタンで洗浄し、そして高度の真空下（凍結乾燥機、１００〜２００mTorr）で約２４時間乾燥させて、４−ベンジルオキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホン酸ナトリウムを明るい白色の結晶性固体として得た（２６７．７ｇ、７１％）。
【００６３】
ステップ３
３つ首の３L丸底フラスコにオーバーヘッドスターラー、還流冷却器（水酸化ナトリウム処理溶液へのガス出口つき）、およびN2ラインをつけた等圧滴下漏斗を取り付けた。フラスコにN2を流し、そして４−ベンジルオキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホン酸ナトリウム（２３４g、０．５６８モル）、ジクロロメタン（１．１５L）、および触媒量のジメチルホルムアミド（９１０mg、１１．７モル、２．１モル％）を入れた。穏やかな窒素流下で白色の懸濁液を攪拌し、そして４０〜４５℃に設定した油浴中で加熱した。そして、３〜５分間にわたって塩化オキサリル（９０．１g、０．７１０モル、１．２５当量）を加えた。２．５時間後、冷水浴中で２５℃まで反応物を冷却し、そして約５分間にわたって水（６０mL）を滴下して加えて反応停止した。さらなる水（４５０mL）を一度に加え、そして反応混合物を５〜１０分間、激しく攪拌した。有機層を分離し、そして水のpHがpH４〜５になるまで水で洗浄した。得られた、４−ベンジルオキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホニル塩化物のジクロロメタン溶液を次のステップで使用した。
【００６４】
ステップ４
３つ首の３L丸底フラスコにオーバーヘッドスターラー、温度計、および等圧滴下漏斗を取り付け、４−ベンジルオキシ−３−ヨード−ベンゼンスルホニル塩化物の溶液を入れた。冷水浴（Tint＝２２℃）にフラスコを浸し、そしてtert-ブチルアミン（９０．１ｇ、０．７１０モル、２．１当量）を滴下して加えた（Tintは変化せず）。得られた反応混合物を周囲温度の水浴中で一夜攪拌した。１７時間後、反応混合物が完成し、そして有機層を分離し、そしてそのもとの体積の約１／３（約５００mL）に濃縮し、このとき生成物は沈殿を始めた。固体が再溶解するまで、反応混合物を３５〜４０℃に大気圧で温めた。そして、穏やかに攪拌しながら溶液を室温まで冷却させた。２日以内に白色沈殿が形成した。ヘキサン（１．５L）をゆっくりと加えながら、懸濁液を激しく攪拌し、そして、一夜攪拌し、そして氷浴中で１〜２時間冷却した。沈殿をろ過によって集め、そしてヘキサンで洗浄し、乾燥して、最初は吸引して、４−ベンジルオキシ−N-tert−ブチル−３−ヨード−ベンゼンスルホンアミド（２３８、９４％）を得た。
【００６５】
ステップ５
３つ首の２L丸底フラスコにオーバーヘッドスターラー、温度計、等圧滴下漏斗及びN2ラインを取り付けた。フラスコにN2を流し、そして４−ベンジルオキシ−N-tert−ブチル−３−ヨード−ベンゼンスルホンアミド（１９８．６ｇ、０．４４６モル）およびジクロロメタン（６００mL）を入れた。白色懸濁液を穏やかなN2流下で攪拌し、そして氷−水浴（０℃≦Tint≦５℃）中で冷却した。滴下漏斗にメチルマグネシウムブロミド（Aldrich；無水ジエチルエーテル中３．０M、１６７ｇ、約１７１mL、０．５１３モル、１．１５当量）をいれ、これを、Tintを５℃未満に維持するような速度で懸濁液に滴下して加え（冷却用の浴への塩の添加が必要）、約１／３加える以内で無色の均一な混合物を得た。添加が完了後、滴下漏斗にイソプロピルマグネシウムブロミド（Boulder Scientific；ジエチルエーテル中２．１３M；２５０mL、０．５３３モル、１．２当量）を加え、これは、Tintが５℃未満となるような速度で反応混合物に滴下して加えた。添加が完了後、反応混合物を１５〜２０分間攪拌した。滴下漏斗を除去し、そしてセプタムおよびカニューレに取り替え、反応混合物を２時間にわたって、ホウ酸トリメチル（１０６．６ｇ、１．０３モル、２．３０当量）溶液およびテトラヒドロフラン（６００mL）を入れた３つ首の３L丸底フラスコに移し、そして氷−水浴をもちいて（Tintが５℃未満で）窒素雰囲気下に維持した。添加が完了後、溶液を５℃未満で３０分間攪拌しておき、そして分離漏斗に移して等体積の２：１の水：燐酸溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液に酢酸エチルを加え、併合した有機層を濃縮して、４−ベンジルオキシ−N−tert−ブチル−３−ボロン酸−ベンゼンスルホンアミド（１２９ｇ、８０％）を得た。
【００６６】
参考例D
２−（３―ブロモ−５−ホルミル−４−ヒドロキシフェニル）−２−メチルプロパノエートの合成
【化１０】
2008501702.tif 000011
【００６７】
ステップ１
３Lの３つ首丸底フラスコにオーバーヘッドスターラー、温度計および等圧滴下漏斗を取り付けた。フラスコにTHF中１．０Mのtert-BuOK溶液（Aldrich；１８２２ｇ、２．０２０L、２．０２０モル）をいれ、そして窒素パージした。溶液を攪拌し、冷水道水（内部温度１８℃)の冷却浴中に浸した。４−メトキシフェニルアセトニトリル（１４８．７ｇ、１．０１０モル）をそのままで、添加用の漏斗を介して約３０分間にわたって加えた。添加用の漏斗をTHFで洗浄し、そして洗液を加えた。反応物を２０分間攪拌し、更なる漏斗にヨードメタン（２８６．７ｇ、２．０２０モル）をいれ、これを５５分間にわたって滴下して加え、ミルク状のサーモン色の懸濁液を得た。添加速度は、内部温度を２１〜２７℃に維持するように調節し、そしてこの温度範囲を維持することを助けるために冷却浴に氷を加えた。添加が完了後、反応混合物をさらに６０分間攪拌し、これを、飽和塩化ナトリウム水溶液および水（２：１；１．５L）の混合物中に注ぎ、そして反応容器を飽和塩化ナトリウム水溶液（２５０mL）およびTHF（１００mL）ですすいだ。併合した液体を振とうし、そして得られた層を分離し、そして有機相を真空中で濃縮した。得られた残渣を高度の真空下で一夜乾燥させて、少量の白色沈殿を含む、オレンジ−茶色のオイルとして２−（４−メトキシフェニル）−２−メチルプロピオニトリルを得た。この物質を更なる処理をせずに次のステップで直接使用した。
【００６８】
ステップ２
２−（４−メトキシフェニル）−２−メチルプロピオニトリル（３５８g、２．０４モル）、KOH（２８４．８ｇ、５．０８モル）、エチレングリコール（７５０mL）、および水（１００mL）の混合物を、沸騰フラスコおよび発酵栓を取り付けた１Lの丸底フラスコ中で７時間、１５０〜１６０℃で加熱し、そして一夜静置して冷却させた。さらなる転換が見られずに、さらに７時間加熱を続けた。反応物を放置して冷却させ、そして水（２L）中に注ぎ、そして攪拌しながら濃塩酸（約２５０mL）を加えることによってpH１０〜１１に酸性化した。得られた溶液を酢酸イロプロピル（１×１L、続いて２×５００mL）で抽出し、そしてろ過して少量の白色沈殿を除去した。反応混合物を激しく攪拌し、約pH＝２となるまで濃塩酸（約２５０mL）となるまでさらにゆっくりと酸性化した。生成物はpH６〜７で沈殿をはじめた。懸濁液を周囲温度で３０分間攪拌し、冷蔵庫中で一夜保存した。混合物をろ過し、沈殿を冷たい１M HCl（５００mL）、続いて冷水（２×１５０mL）で洗浄した。固体を吸引し、続いて一夜高度の真空下で乾燥させ（凍結乾燥）、約２％のモノ−メチル不純物を含む、２−（４−メトキシフェニル）−２−メチルプロパン酸（３１４ｇ、８０％）を薄い黄色−オレンジの結晶として得た。
【００６９】
ステップ３
２−（４−メトキシフェニル）−２−メチルプロパン酸（４５．３ｇ；２３３ミリモル）および塩酸ピリジン（１５０ｇ、１．３０モル）の混合物を窒素下、油浴温度１８０〜１９０℃で５時間加熱した。反応混合物を放置して９０℃まで冷却し、水（４００mL）および濃塩酸（３０mL）で希釈した。得られた溶液を酢酸エチル（５５mL）で抽出し、有機層を水（５×５００mL）で洗浄した。併合した水性抽出物を酢酸エチル（４００mL）で洗浄し、そして併合した有機相を乾燥（MgSO4）させ、真空中で濃縮した。固体残渣（４０．９ｇ）を、あらかじめ還流温度まで温めた酢酸エチル（60mL）およびベンゼン（２００mL）の混合物に溶解した。ヘキサン（１００mL）を還流混合物に加え、得られたスラリーを一夜室温まで冷却させた。固体をろ過し、ヘキサン−ベンゼン（１：１）で洗浄し、真空下で乾燥させて、約２．３％のモノ−メチル不純物を含むα，α―ジメチル４−メトキシフェニル酢酸（３５．７０ｇ；８５％）を白色固体として得た。
【００７０】
ステップ４
α，α―ジメチル４−メトキシフェニル酢酸（１０８ｇ；０．５５６モル）をピリジン・HCl（３２４ｇ；２．８０モル）とともに１８０℃まで５時間加熱した。反応混合物を放置して約９０℃まで冷却し、そして等体積の１０％水酸化ナトリウム水溶液及び氷の破片に加えて塩基性溶液とした。水溶液をジエチルエーテルで洗浄し、次に８５％H3PO4でpH＝３に酸性化した。水相を酢酸エチルで抽出し、そして併合した有機抽出物を真空下で濃縮して固体とし、これを水から再結晶化してα，α−ジメチル４−ヒドロキシフェニル酢酸を得た。
【００７１】
他の方法
α，α−ジメチル４−メトキシフェニル酢酸（１００ｇ；０．５１５モル）およびピリジン・HCl（２９７ｇ；２．５７モル）を攪拌しながら、５時間、１８０℃に加熱した。反応混合物を放置して室温まで冷却し、そして一夜静置した。１８時間後、サンプリングの目的のために均一となるように、反応物を再加熱し、そして約１００℃に冷却して１Lの氷の破片と１０％のNaOH水溶液（１．５L）の混合物上に注いだ。水層をジエチルエーテルで抽出し、そして８５％のH3PO4水溶液（約１３０mL）でpH＝３となるまで酸性化し、そして酢酸エチル（５００mL、続いて２５０mL）で抽出した。併合した有機抽出物を真空中で濃縮して固体を得て、これを熱水から結晶化した。結晶が顕著に確立したら、沈殿全体の動きを維持するような速度で攪拌を開始し、一夜継続した。混合物を冷蔵庫（fridge）中で２時間冷却後、結晶をろ過によって集めた。結晶を最小量の冷水（約１００mL）で洗浄し、そして乾燥し、最初は吸引して、そして高度の真空下で乾燥させて（凍結乾燥機）、α，α−ジメチル４−ヒドロキシフェニル酢酸（７６．３ｇ、８２％）を褐色の結晶固体として得た。
【００７２】
ステップ５
α，α−ジメチル４−ヒドロキシフェニル酢酸（90.0g；499ミリモル）およびメタノール（１L）の混合物を氷水浴中で0℃に冷却した。この溶液を攪拌しながら塩化チオニル（７２．９mL；１１９ｇ）を滴下して加えた。得られた溶液を、２時間還流しながら加熱した。溶液を室温に冷却し、そして真空下で濃縮して固体を得て、これをトルエン（９００mL)から結晶化して、メチル２−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチルプロパノエート（９２ｇ、９５％）を得た。
【００７３】
他の方法
塩化チオニル（９２．４ｇ；７７７ミリモル；２００モル％）を２０分間にわたってメタノール（３９０mL）中のα，α−ジメチル４−ヒドロキシフェニル酢酸（７０．０g；３８８ミリモル）の攪拌溶液に加えた。得られた溶液を４０分間、周囲温度で攪拌し、高度の真空下でさらに乾燥させて、メチル２−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチルプロパノエート（７５．３ｇ、１００％）を、明るい茶色の半結晶固体として得た。
【００７４】
ステップ６
オーバーヘッドスターラー、冷却器、熱電対及び加熱用マントルを取付けた５Lの丸底フラスコに、メチル２−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチルプロパノエート（９０．０ｇ、０．４６３モル）、続いてアセトニトリル（２２５０mL）を加えた。その後、トリエチルアミン（２６０mL；１８９ｇ）を加え、続いて無水塩化マグネシウム（８８．０ｇ；９２４ミリモル）を加えた。反応混合物を３０〜４５分間攪拌し、プリル（prill）形態のパラホルムアルデヒド（９９．０ｇ；３．３０モル）を加え、反応物を還流温度まで温めた。HPLCによる反応混合物の分析は、約２時間後に反応が完了したことを示した。その後、反応物を冷却し、そしてジエチルエーテル（３L）及び１N HCl水溶液（３L）で希釈した。層分離し、そして有機相を1N HCl（３×３L）及び飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、そして乾燥した（Na2SO4）。溶液を濃縮すると、オイルを得て、これをドライアイス浴中でヘキサンとともに攪拌することによって結晶化して、メチル（４−ヒドロキシ−３−ホルミルフェニル）−２−メチルプロパノエート（９４．７ｇ、９２％）を白色固体として得た。
【００７５】
他の方法
オーバーヘッドスターラー、冷却器、及び温度計を取付けた、３L、3つ首丸底フラスコにメチル２−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチルプロパノエート（７５．３ｇ；３８８ミリモル）及びアセトニトリル（４００mL）を入れた。攪拌しながら、トリエチルアミン（４７．１ｇ；０．４６６モル；１２０モル％）を一度に加え、そして無水塩化マグネシウム（４０．６ｇ；４２７ミリモル；１１０モル％）を３〜５分間にわたって分けて加えた。反応混合物を８０〜８２℃で３０分間攪拌し、そしてパラホルムアルデヒド（２３．３ｇ、７７６ミリモル；２００モル％）を５分間にわたって分けて加えた。数分以内に、反応物が明るい茶色の懸濁液から均一な黄色の溶液に変わり始めた。反応物を８０〜８２℃で攪拌し、そして出発物質の転換をHPLCでモニターした。反応混合物を放置して約６０℃に冷却し、1M H3PO4水溶液（約１００mL）を加え、そして得られた黄色の高密度の懸濁液を真空中で濃縮してペースト状の固体とした。ジクロロメタン（１L）及び水（１L）を加え、混合物をオーバーヘッドスターラーで激しく攪拌して、固体が溶解し、pH＝３となるまで、８５％H3PO4水溶液（約７０mL）を加えた。層分離し、そして有機層を1M H3PO4（２００mL）、塩水（２００mL）で洗浄し、そして濃縮して、いくらかの未反応の出発物質を含むメチル（４−ヒドロキシ−３−ホルミルフェニル）−２−メチルプロパノエート（８４．５ｇ、質量収率９８％）のオレンジ−茶色のオイルを得た。
【００７６】
ステップ７
オーバーヘッドスターラー及び熱電対を取付けた５Lの丸底フラスコに、メチル（４−ヒドロキシ−３−ホルミルフェニル）−２−メチルプロパノエート（１２１ｇ、５４７ミリモル）、続いてN，N−ジメチルホルムアミド（DMF；１６００mL）を加えた。その後、溶液を５℃に冷却し、そして、DMF（７００mL）中、N-ブロモサクシニミド（１１７ｇ、６５７ミリモル）の溶液を、内部温度を１０℃未満に維持するような速度で滴下して加えた。添加完了後、反応混合物を放置して室温まで温め、そして反応は３時間以内に完了した。反応混合物をジエチルエーテル（３L）で希釈し、そして得られた溶液を水で洗浄した（４×１L）。最初の水の洗液をジエチルエーテル（１L）で逆抽出し、そして残りの洗液と併せた。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１L）で洗浄し、乾燥させ（Na2SO4）、そして濃縮して、赤みがかったオレンジ色の固体を得た。固体を熱イソプロパノール（１２０mL）に溶解し、そして攪拌しながら放冷した。結晶性の生成物を濾過し、そして等量の冷（−２０℃；１２０mL）IPAで洗浄して、メチル（５−ブロモ−４−ヒドロキシ−３−ホルミルフェニル）−２−メチルプロパノエート（１３２ｇ、８０．１％）をオフホワイトの固体として得た。
【００７７】
実施例１
N−［３’−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−（１−カルバモイル−１−メチル−エチル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イルメチル］−（２S）−２，３−ジヒドロキシプロピオンアミドジヒドロクロライドの合成
【化１１】
2008501702.tif 000012
【００７８】
ステップ１
マグネティックスターラーバーを入れた３Lの丸底フラスコに、メチル２−（３−ブロモ−５−ホルミル−４−ヒドロキシフェニル）−２−メチルプロパノエート（１３２ｇ、４３８ミリモル）、炭酸カリウム（６６．７ｇ、４８３ミリモル）及びDMF（１L）を加えた。溶液を室温で０．５時間攪拌した。激しく攪拌しながら、ヨウ化メチル（３１．５mL、５０６ミリモル）を滴下して加えた。反応は３時間後に完了した。この溶液に、メチルtert-ブチルエーテル（MTBE）（３L）を加え、そして溶液を濾過して無機塩を除去した。溶液を水で洗浄し、続いて冷０．５％NaOH水溶液（１L）そして塩水で洗浄した。水層をMTBE（１L）で逆抽出した。併合した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮した。最終産物は、ほとんど完全にMTBEを除去し、続いて冷ヘキサンを加えて生成物を溶液から沈殿させることによって得ることができた。固体を低温濾過してメチル２−（３−ブロモ−５−ホルミル−４−メトキシフェニル）−２−メチルプロパノエート（１３０ｇ、９４％）をオフホワイトの固体として得た。
【００７９】
ステップ２
添加漏斗及び機械的スターラーを取付けた５Lの3つ首フラスコに、３−ブロモ−４−メトキシベンゾニトリル（Lancaster；１５９．０ｇ；７５０ミリモル）、無水THF（３．０L）及びホウ酸トリイソプロピル（３４５mL；２８２ｇ；１．５０モル）を加えた。ドライアイス／アセトン浴中で溶液を−７８℃まで冷却し、そしてヘキサン中、２．４４Mのn-ブチルリチウム溶液（４６１mL；１．１２モル）を２０分間にわたって加えた。添加完了後、反応混合物を−７８℃で１時間攪拌した。反応混合物を、７％リン酸水溶液（２L）で反応停止し、そして反応混合物を放置して室温まで温めた。攪拌を停止し、そして反応混合物を一夜静置した。層分離し、水相を捨て、そして有機相をジクロロメタン（２L）で希釈し、有機相を５％水酸化ナトリウム水溶液（２×１．７L）で抽出した。水相をMTBE（１．５L）で洗浄し、そして、８５％リン酸水溶液でpH＝２．５に酸性化し、白色沈殿を得た。沈殿を濾過し、そして水で洗浄して、２−メトキシ−５−シアノフェニルボロン酸（１０４ｇ、７８％）を白色固体として得た。
【００８０】
ステップ３
スターラーバー、加熱用マントル、還流冷却器、及び温度計を取付けた５Lの丸底フラスコに、メチル２−（３−ブロモ−５−ホルミル−４−メトキシフェニル）−２−メチル−プロパノエート（１１４．５ｇ、３６３ミリモル）、２−メトキシ−５−シアノフェニルボロン酸（７７．５ｇ、４３８ミリモル）、THF（２．３L）、及びN，N−ジイソプロピルアミン（１６９mL；１．２１モル）を加えた。この溶液を室温で脱気し、そしてPdCl2(dppf)・ジクロロメタン錯体（３．４ｇ；４．１ミリモル）を室温で加えた。反応混合物の温度を７０℃まで高め、そしてその温度で一夜攪拌しておいた。次の日、HPLC分析によって完了し、そして溶液を室温まで放冷した。溶媒を真空中で除去した。この溶液に、酢酸エチル（２L）を加え、そして該溶液を５％の炭酸カリウム水溶液（１．５L）で抽出し、そしてさらに塩水（２．０L）で洗浄した。有機層をDARCO-60チャコール（５．７ｇ）で処理し、そしてこの溶液を室温で４時間攪拌しておいた。該溶液を次に硫酸ナトリウム（２００ｇ）で乾燥させた。そして、有機層を、セライト（３００ｇ）、シリカゲル（３００ｇ）及びセライト（３００ｇ）で覆った焼結フィルターを通して濾過した。固体を、９５：５のジクロロメタン：メタノール溶液（１L）で洗浄した。得られた溶液を濃縮して、メチル２−（５’−シアノ−５−ホルミル−６，２’−ジメトキシビフェニル−３−イル）−２−メチルプロパノエート（１３３ｇ）をオイルとして得て、これをさらに精製せずに次のステップに供した。
【００８１】
ステップ４
マグネティックスターラーバーをいれた３Lの丸底フラスコに、粗メチル２−（５’−シアノ−５−ホルミル−６，２’−ジメトキシビフェニル−３−イル）−２−メチルプロパノエート（１３３ｇ）及びイソプロパノール（１．６５L）を加えた。溶液を７０℃に熱し、そして、水（６５０mL）中、メタ亜硫酸水素ナトリウム（６９．０ｇ、３６３ミリモル）溶液を一度に加えた。溶液を７０℃で１．５時間攪拌し、そして３，４−ジアミノベンズアミジンモノハイドロクロライド（８１．０ｇ、４３４ミリモル）を加えた。溶液を、空気に開放しながら、７５〜８０℃で一夜攪拌した。反応混合物を高温で濃縮して、存在するイソプロパノールの約７５％を除去し、そして水（２．０L）を溶液に加えた。溶液を０℃まで冷却し、そして濾過した。沈殿を冷水（３００mL）で洗浄し、そして乾燥して、２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−シアノ−６，２’−ジメトキシビフェニル−３−イル］−２−メチルプロパノエート（１５５ｇ）を得た。
【００８２】
ステップ５
機械的スターラー、Dean-Stark冷却器、加熱用マントル、及び窒素の入り口を取付けた１２Lの３つ首丸底フラスコに、塩酸ピリジン（２．０ｋｇ、１７．３１モル）及びトルエン（１L）を入れた。溶液を還流温度まで一夜加熱して４０mLの過剰の水を除去した。翌日、メチル２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−シアノ−６，２’−ジメトキシビフェニル−３−イル］−２−メチルプロパノエート（１５５ｇ、２９０ミリモル）をトルエン（５００mL）とともに加えた。フラスコの内部温度を１７５℃まで高め、そこから、加熱用マントルへの温度制御装置をオフにして、１９０℃まで１５分にわたって温度を上げた。１９０℃において０．５時間後に反応が終了した。攪拌ブレードを溶液から取り除き、そして融解物を室温まで放冷すると、固体化した。この溶液に水（８L）を加え、溶液を室温で一夜攪拌した。翌朝、沈殿した固体を濾過によって溶液から除去し、そして水（１００mL）で洗浄して２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−シアノ−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イル］−２−メチルプロパン酸（１３５ｇ、９５％）を得て、これは、HPLC分析によれば９８％超の純度であった。
【００８３】
ステップ６
２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−シアノ−６，２’−ジヒドロキシ−ビフェニル−３−イル］−２−メチルプロパン酸（０．７６２ｇ；１．５５２ミリモル）及びHATU（０．７６８ｇ；２．０２ミリモル）を１０mLの無水N，N−ジメチルアセトアミドに溶解した。ピリジン（２．０mL；２４．７ミリモル）を加え、混合物を１時間攪拌し、そして０℃に冷却した。ガス状アンモニアを反応混合物に４５分間通した。反応容器に蓋をし、そして混合物を室温で１日攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をアセトニトリル（４０mL）に懸濁し、そして２０分間ソニケーションした。固体を濾過し、アセトニトリル（２０mL）で洗浄し、そして真空中で乾燥させて、２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−シアノビフェニル−３−イル］イソブチルアミドハイドロクロライドをオフホワイトの粉末として得た。
【００８４】
ステップ７
トリフルオロ酢酸（５０mL）中のカーボンに担持させた水酸化パラジウム（パールマン触媒；５０％湿度；６．０ｇ）を５０psiで１０分間水素化した。粗２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−シアノビフェニル−３−イル］イソブチルアミドハイドロクロライドを還元された触媒懸濁液に添加し、続いて、追加量のTFA（１００mL）を加えた。反応混合物を、HPLC-UV分析で反応完了が判定されるまで、５０psiで水素化した。５時間の全反応時間が必要であった。反応混合物をセライトを通して濾過し、そしてろ液を真空中で濃縮した。残渣を、アセトニトリルと水の勾配溶離を用いる調製用逆相HPLCによって精製して、２−［５’−アミノメチル−５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イル］イソブチルアミドジヒドロクロライド（４５７mg、５５％）を薄い黄色の粉末として得た。
【００８５】
ステップ８
メチル（S）−（−）−２，２−ジメチル１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレート（５．３３ｇ、３３．２８ミリモル；Aldrichカタログ番号２５，４６０−６）を等モル量のLiOH一水和物（１．４０ｇ；３３．２８ミリモル）を含むTHF／水（１：１；２２０mL）に溶解し、そして室温で９０分間攪拌した。溶液を真空中で濃縮し、そして乾燥させて、（S）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸リチウム塩（５．００ｇ、９９％）を白色固体として得た。（S）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸リチウム塩の一部（１０５mg、０．６５ミリモル）及びDMA（１０mL）中HATU（０．２４３ｇ；０．６４ミリモル）を混合し、そして溶解が達成されるまで１５分間ソニケーションした。
【００８６】
別のフラスコ中で、２−［５’−アミノメチル−５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イル］イソブチルアミド（０．３１ｇ；０．５８ミリモル）、N，N−ジイソプロピル−エチルアミン（０．１１３mL；０．６５ミリモル）、ピリジン（３．４mL）、及びN，N−ジメチルアセトアミド（１５mL）を、透明な溶液となるまで２０分間攪拌した。両方の溶液を併合し、そして反応の進行をモニターするためのHPLC-UVを用いながら、３〜４時間攪拌した。反応が完了したと判断した後、水酸化アンモニウム水溶液（２mL）を加え、そして混合物を４時間攪拌した。反応混合物を高度の真空下で濃縮し、そして残渣をアセトニトリル（３０mL）に懸濁し、そして３０分間ソニケーションした。沈殿を濾過し、アセトニトリルで洗浄し、そして乾燥させて、HPLC-UV分析（AUC）によって９５％純度と決定したN−［３’−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−（１−カルバモイル−１−メチル−エチル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イルメチル］−（S）−２，３−ジヒドロキシプロピオンアミド（４４０mg）を得た。この物質を次のステップに直接使用した。
【００８７】
ステップ９
N-［３’−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−（１−カルバモイル−１−メチルエチル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イルメチル］−（S）−２，３−ジヒドロキシプロピオンアミド（０．４１ｇ、０．６６ミリモル）を１NのHCl水溶液（５〜６mL）に溶解し、そして室温で２時間攪拌した。溶液を冷蔵庫に１時間おき、そして得られた結晶生成物を濾過によって単離し、そして冷1N HClで２回洗浄し、そして水（１２mL）に再溶解し、凍結乾燥して、HPLC-UV及びプロトンNMR分析によって純度９７％と決定した標題化合物（２９０mg、７１％）を薄い黄色の固体として得た。実測値（LCMS）５４７．３（M＋１）+、５４５．４（M−１）-。C28H30N6O6についての計算値５４６．２２。
【００８８】
実施例２
N−［３’−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−（１−カルバモイル−１−メチル−エチル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イルメチル］−（２S，３R）−２，３−ジヒドロキシブチルアミドの合成
【化１２】
2008501702.tif 000013
【００８９】
ステップ１
メチル（２S，３R）−２，３−O−イソプロピリデン−２，３−ジヒドロキシブチレート（５．２７ｇ、３０．２５ミリモル；Flukaカタログ番号５９４３７）を、等モル量（１．２７ｇ；３０．２５ミリモル）の水酸化リチウム一水和物を含むTHF／水（１：１；２２０mL）に溶解し、９０分間攪拌した。溶液を真空中で濃縮して、（２S，３R）−２，３−O−イソプロピリデン−２，３−ジヒドロキシブチル酸リチウム塩（４．９０ｇ、９８％）を白色固体として得た。（２S，３R）−２，３−O−イソプロピリデン−２，３−ジヒドロキシブチル酸リチウム塩の一部及びDMA（１０mL）中のHATU（０．２４３ｇ；０．６４ミリモル）を混合し、そして溶解するまで１５分間ソニケーションした。
【００９０】
別のフラスコ中で、２−［５’−アミノメチル−５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イル］イソブチルアミドハイドロクロライド（３１０mg；０．５８ミリモル）、N，N−ジイソプロピルアミン（０．１１３mL；０．６５ミリモル）、DMA（１５mL）中、ピリジン（３．４mL）の混合物を、溶解が完了するまで２０分間攪拌した。両方の溶液を併合し、そして得られた反応混合物を３〜４時間攪拌した。反応の進行をモニターするためにHPLC-UV分析を採用した。反応が完了したとみなされたら（4時間）、水酸化アンモニウム水溶液（２．０mL）を加え、そして反応混合物を４時間攪拌した。反応混合物を高度の真空下で濃縮し、そして残渣をアセトニトリル（３０mL）に懸濁してソニケーションした。得られた沈殿を濾過し、アセトニトリルで洗浄し、そして乾燥して、（４S，５R）−２，２，５−トリメチル−［１，３］ジオキオソラン−４−カルボン酸［３’−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−（１−カルバモイル−１−メチルエチル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イルメチル］アミドハイドロクロライド（３９０mg）を得て、これは、HPLC-UV分析によって９３％純度と決定した。
【００９１】
ステップ２
粗（４S，５R）−２，２，５−トリメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボン酸［３’−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−５’−（１−カルバモイル−１−メチルエチル）−６，２’−ジヒドロキシビフェニル−３−イルメチル］アミド（４４０mg；０．６９１ミリモル）を、1N HCl（５〜６mL）に溶解し、そして室温で２時間攪拌した。反応混合物を冷蔵庫におき、そして３時間静置した。得られた沈殿を濾過によって集め、冷1N HCl水溶液で洗浄し、高度の真空中で一夜乾燥させて、HPLC-UV及びプロトンNMR分析によって純度９７％と決定された標題化合物（２５０mg、５７％）を得た。実測値（LCMS）５６１．３（M＋１）+、５５９．４（M−１）-。C29H32N6O6についての計算値５６０．２４。
【００９２】
実施例３
２S−｛２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−スルファモイルビフェニル−３−イル］−２−メチルプロピオニルアミノ｝サクシミニドの合成
【化１３】
2008501702.tif 000014
【００９３】
ステップ１
メタノール（３６mL）に溶解した２−メトキシ−５−tert−ブチルスルファモイルフェニルボロン酸（４．０８ｇ、１４．２８ミリモル）の溶液に、２−（３−ブロモ−５−ホルミル−４−メトキシフェニル）−２−メチルプロピオネート（３．０ｇ、９．５０ミリモル）及びトルエン（９０mL）を加えた。炭酸カリウム溶液（７．１４mL、２M、１４．２８ミリモル）を加え、反応混合物に窒素を流した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．１０ｇ、０．９５ミリモル）を加え、反応混合物を３時間還流した。冷却後、反応混合物を５％クエン酸溶液で分配し、有機相を乾燥させ、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（４０％酢酸エチル／ヘキサン）による精製により、メチル２−（５’−tert−ブチルスルファモイル−５−ホルミル−６，２’−ジメトキシビフェニル−３−イル）−２−メチル−プロピオネート（３．７９ｇ、８４％）を得た。
【００９４】
ステップ２
メチル２−（５’−tert−ブチルスルファモイル−５−ホルミル−６，２’−ジメトキシビフェニル−３−イル）−２−メチル−プロピオネート（３．７９g、７．９４ミリモル）をメタノール（１５０mL）に溶解し、３，４−ジアミノベンズアミジンHCl（１．３５ｇ、７．２５ミリモル）及びｐ−ベンゾキノン（０．７８ｇ）を添加し、そして反応混合物を一夜還流した。反応混合物を冷却し、そして乾燥するまで蒸発させて、メチル２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−tert−ブチルスルファモイルビフェニル−３−イル］−２−メチルプロピオネートを得て、これをトリフルオロ酢酸（２５mL）に溶解し、そして１時間攪拌した。揮発性物質を蒸発させて、粗メチル２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−スルファモイルビフェニル−３−イル］−２−メチルプロピオネートを得た。粗メチル２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−スルファモイルビフェニル−３−イル］−２−メチルプロピオネートに、ピリジン−HCl（２０ｇ）を加え、混合物を１８０℃で３時間加熱した。冷却後、固体を５％MeCN／水に溶解し、そして調製用HPLCによって精製し、生成物を含む溶出液を凍結乾燥して、２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−スルファモイルビフェニル−３−イル］−２−メチルプロピオン酸（３．５７ｇ、８２％）を得た。
【００９５】
ステップ３
２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−スルファモイル−ビフェニル−３−イル］−２−メチルプロピオン酸（２５０mg、０．４５８ミリモル）を、DMA（１００mL）に溶解し、該溶液にHATU（１９２mg、０．５０４ミリモル）及びコリジン（２４３μL、１．８３ミリモル）をいれ、２時間攪拌した。TEA（１３９μL）とともにアスパラギンアミド−HCl（０．１５４ｇ、０．９１６ミリモル）を加えた。反応混合物を一夜攪拌し、pHを約３に調節し、そして溶媒を蒸発させた。この粗生成物を調製用HPLCによって精製し、そして生成物を含む分画を凍結乾燥して、標題化合物（２２８mg、６６％）を得た。
【化１４】
2008501702.tif 000015
【００９６】
アスパラギンアミド−HClをN−メチル−D−グルカミンに交換する以外は上記の通りに進行して、２−［５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５−スルファモイルバイ−フェニル−３−イル］−N−メチル−N−（２R，３S，４S，５S，６−ペンタヒドロキシヘキシル）−イソブチルアミドを得た。
【化１５】
2008501702.tif 000016
【００９７】
実施例４
２−｛５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−５’−［（２S−ヒドロキシプロピオニルアミノ）メチル］ビフェニル−３−イル｝イソブチルアミドジヒドロクロライドの合成
【化１６】
2008501702.tif 000017
【００９８】
ステップ１
ジイソプロピルエチルアミン（３．５mL、２０ミリモル）を、ジクロロメタン（６０mL）中、４−ニトロフェノール（２．７８ｇ、２０ミリモル）の懸濁液に加えた。溶液を−２０℃まで冷却し、そして（S）−２−アセトキシプロピオニルクロライド（３．０１ｇ、２０ミリモル）のジクロロメタン（１２mL）溶液を１５分間にわたって滴下して加えた。反応混合物をこの温度で３時間攪拌し、そして０．５N HCl水溶液（３００mL）に注いだ。有機層をジクロロメタン（１００mL）で希釈し、水、塩水で洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒の蒸発後、（S）−２−アセトキシプロピオン酸４−ニトロ−フェニルエステル（５．０８ｇ、００％）を得た。
【００９９】
ステップ２
ジメチルアセトアミド（１mL）中、（S）ー２−アセトキシプロピオン酸４−ニトロフェニルエステル（０．０４６ｇ、０．１８ミリモル）の溶液を、ジメチルアセトアミド（３mL）中、２−［５’−アミノメチル−５−（５−カルバミミドイル−１H−ベンゾイミダゾール−２−イル）−６，２’−ジヒドロキシ−ビフェニル−３−イル］−イソブチルアミドジヒドロクロライド（０．０９０５ｇ、０．１７ミリモル）及びトリエチルアミン（０．０５mL、０．３５７ミリモル）の混合物に加えた。反応混合物を３時間攪拌し、３mLの濃アンモニア水溶液を滴下して加えて反応停止させ、そして１４時間放置した。溶媒を高度の真空下でロータリーエバポレーションし、残渣を水に再溶解した。RP−HPLC（アセトニトリル勾配）による精製で、標題化合物を、凍結乾燥後に薄い黄色のアモルファス固体として得た（０．０８ｇ、７８％）。
実測値（LCMS）５３１．３（M+1）+、５２９．４（M−１）-。C28H30N6O5についての計算値５３０．２３。
【０１００】
実験例１
インビトロの第VIIa因子阻害剤アッセイ
（NaCl、１５０mM（pH７．４）；CaCl2、５mM；Tween-20、０．０５％；Dade Innovin tissue factor［Dade Behring, Newark, DE, USA］；EDTA， １．５mM；及びジメチルスルホキシド、１０％を含む）アッセイ媒体中のヒト第VIIa因子（典型的には７nMで供給される）及び被験化合物（可変の濃度で存在する）の混合物を室温で３０分間インキュベーションした。次に、基質［５００μMの（Centerchem, Norwalk, CT, USAからの）CH3SO2-D-Cha-But-Arg-pNA］を添加して反応を開始した。色素生産性基質の加水分解は、５分間、４０５nmにおいて分光測定で追跡した。速度論的分析プログラム（Batch Ki; Bio Kin, Ltd., Pullman, WA）によって反応曲線から計算した初速度の測定値をみかけの阻害定数（みかけのKi値）を決定するために使用した。
【０１０１】
上記のアッセイによって試験した本発明の化合物は、第VIIa因子の阻害を示した。
【０１０２】
実験例２
インビトロの第Xa因子阻害剤アッセイ
（トリス、５０mM（pH７．４）；NaCl、１５０mM；CaCl2、５mM；Tween-20、０．０５％；EDTA、１mM；及びジメチルスルホキシド、１０％を含む）アッセイ媒体中の（Haematologic Technologies, Essex Junction, VT, USAからの）ヒト第Xa因子（典型的には３nMで供給される）及び（可変濃度の）被験化合物の混合物を、室温で３０分間インキュベートした。次に、基質［（Centerchem, Norwalk, CT, USAからの）５００μMのCH3CO2-D-Cha-Gly-Arg-pNA］を加えて反応を開始した。色素生産性基質の加水分解は、５分間、４０５nmにおいて分光測定で追跡した。標準的な数学的モデルを用いて酵素反応曲線からみかけの阻害定数（みかけのKi値）を計算した。
【０１０３】
上記のアッセイによって試験した本発明の化合物は、第Xa因子の阻害を示した。
【０１０４】
実験例３
薬物動態アッセイ
出荷前にヘパリン／食塩水／PVP栓を満たした静脈カテーテルを予め埋め込んだラットをCharles Riverから購入した。３匹のラットを各試験のために選択し、体重測定し、そして尾静脈注射によって被験化合物を注射した。残りの被験化合物を後の分析のためにとっておき、−７０℃で保存した。
【０１０５】
血液サンプル（各０．２５mＬ）を１２０時間にわたって特定の回数、留置カテーテルから集めた。各採取の直後に生理食塩水をカテーテルに流し、そして８、２４及び４８時間の採取のあとにはヘパリン添加生理食塩水で満たした。カテーテルが失敗したときには、適切な時にイソフルラン麻酔下で後方の眼窩洞を介して血液サンプルを集めた。
【０１０６】
血液サンプルを０．５mLのMicrotainer（登録商標）チューブ（リチウムヘパリン）にいれ、穏やかに振って氷上に保存した。サンプルを冷却遠心分離機中、２４００rpmで１０分間遠心分離した。各チューブからの血漿サンプル（０．１mL）を０．５mLのUnisonポリプロピレンバイアル（Sun-５００２１０）に移し、LC/MS-MSによる後の分析のために−７０℃未満で保存した。
【０１０７】
実験例４
インビトロの血液凝固アッセイ…aPTT及びPT
血液凝固アッセイである、活性化部分トロンボプラスチン時間（aPPT）及びプロトロンビン時間（PT）をHougie, C. Hematology (Williams, W.J., Beutler, B., Erslev, A. J., and Lichtman, M.A., Eds.）、pp.1766-1770(1990), McGraw-Hill, New Yorkに記載の手順に基づいて実施した。
【０１０８】
すなわち、正常なヒトクエン酸添加血漿を用いてアッセイを行い、製造者の指示（Medical Laboratory Automation-Pleasantville, New York）にしたがって血液凝固測定器（Electra 800）において３７℃で実施した。阻害剤を含むサンプルについての血液凝固時間を収集する直前に、血漿で機器をキャリブレーションした。aPTT及びPTを二倍にする濃度を、改変されたHillの方程式に阻害剤濃度応答曲線を当てはめることによって計算した。
【０１０９】
医薬組成物の実施例
以下は、本発明の化合物を含む、代表的な医薬製剤である。
【０１１０】
【表１】
2008501702.tif 000018
【０１１１】
【表２】
2008501702.tif 000019
【０１１２】
【表３】
2008501702.tif 000020
【０１１３】
【表４】
2008501702.tif 000021
水を除く上記の成分はすべて、併合し、そして攪拌しながら６０〜７０℃に加熱した。十分量の６０℃の水を激しく攪拌しながら加えて、成分を乳化し、そして水を加えて１００ｇとした。
【０１１４】
【表５】
2008501702.tif 000022
【０１１５】
【表６】
2008501702.tif 000023
【０１１６】
上記の発明は、明確性及び理解のために、例解及び例示のためにいくらか詳細に記載された。当業者には、添付の請求項の範囲内で変更及び改変が行われ得ることが明らかであろう。したがって、以上の記載が例示を意図するものであり、制限的でないことは理解されるべきである。したがって、本発明の範囲は、以上の記載を参照せずに決定されてはならず、以下の添付の請求項とともにかかる請求項が権利付与された等価な範囲全体とともに参照されて決定されなければならない。
【国際調査報告】
2008501702.tif 000026
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