(57)【要約】  本発明は、側方流動を与えることができる１つまたは複数の担持材を備える装置を提供する。この１つまたは複数の担持材は、標的検体を含む生体試料を受入れるための区域と、標的検体と複合体を形成することができる移動可能に含まれる検出リガンドを有する区域と、予め定められた量の固定捕捉試薬を有する第１の捕捉区域であって、この固定捕捉試薬が複合体に特異的に結合することができる第１の捕捉区域と、固定捕捉試薬を有する第２の捕捉区域と、溶解剤とを含む。典型的には、生体試料を受入れるための区域と、移動可能に含まれる検出リガンドを有する区域と、第１の捕捉区域と、第２の捕捉区域とは１つまたは複数の担持材の中に配置され、試料がこれらの区域を通って連続的に側方流動できるようにしている。
2008537145.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
側方流動を与えることができる１つまたは複数の担持材を備える装置であって、前記１つまたは複数の担持材は、
標的検体を含む生体試料を受入れるための区域と、
移動可能に含まれる検出リガンドを含む区域と、
予め定められた量の固定捕捉試薬を含む第１の捕捉区域と、
前記固定捕捉試薬を含む第２の捕捉区域と、
溶解剤とを備え、
前記検出リガンドは、前記標的検体と複合体を形成することができ、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域および前記生体試料を受入れるための前記区域は、分離区域、同じ区域または部分的に同じ区域とすることができ、
前記固定捕捉試薬が、前記複合体に特異的に結合することができることを特徴とする装置。
【請求項２】
前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とが、前記１つまたは複数の担持材の中に配置され、もって試料が、前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とを通って連続的に側方流動できるようにしたことを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記１つまたは複数の担持材が、セルロースエステル、ＤＥＡＥ、ガラス、ナイロン、微粒子シリカ、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリアミド、ポリアクリルアミド、ポリビニル、ポリプロピレン、セルロースアガロースまたはデキストランを含有することを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項４】
前記１つまたは複数の担持材が、前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域と、前記溶解剤とを備える単一のストリップを備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項５】
前記標的検体は、ＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原であることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項６】
前記固定捕捉試薬は、ＣＤ４リンパ球に存在する前記ＣＤ４抗原に特異的に結合することができる抗体を含むことを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項７】
前記検出リガンドは、抗体に接合される金コロイドを含むことを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項８】
前記第１の捕捉区域の中に存在する前記予め定められた量は、指定されたレベルで前記複合体を結合するのに十分であることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項９】
前記第２の捕捉区域は、第２の指定されたレベルで前記複合体を結合するのに十分な、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含むことを特徴とする請求項８に記載の装置。
【請求項１０】
前記第２の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも、第２の量の前記標的検体の存在を表示することができることを特徴とする請求項９に記載の装置。
【請求項１１】
前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第３の捕捉区域をさらに備えることを特徴とする請求項１０に記載の装置。
【請求項１２】
前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第４の捕捉区域をさらに備えることを特徴とする請求項１１に記載の装置。
【請求項１３】
前記第３の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも、第３の量の標的検体の存在を表示することができ、前記第４の捕捉区域は、前記試料中に存在する、少なくとも第４の量の標的検体の存在を表示することができ、前記第３の量は前記第２の量より大きく、および前記第４の量は前記第３の量より大きいことを特徴とする請求項１２に記載の装置。
【請求項１４】
固定コントロール試薬を含むコントロールラインをさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項１５】
前記標的検体はＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原であり、前記移動可能に含まれる検出リガンドは前記ＣＤ４抗原と前記複合体を形成することができ、前記固定捕捉試薬は前記複合体を特異的に結合し、前記第１の区域は前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約１００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項１３に記載の装置。
【請求項１６】
前記第２の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約２００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項１５に記載の装置。
【請求項１７】
前記第３の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約４００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項１６に記載の装置。
【請求項１８】
前記第４の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約８００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項１７に記載の装置。
【請求項１９】
前記１つまたは複数の担持材を少なくとも部分的に覆うハウジングをさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項２０】
前記溶解剤は、前記試料受入れ区域の中に設置されることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項２１】
前記溶解剤は、前記試料受入れ区域と前記第１の捕捉区域の間で横方向に設置され、もって前記試料が前記第１の捕捉区域に到達する前に、前記試料受入れ区域から横方向に流れる試料が前記溶解剤にさらされることになることを特徴とする請求項１に記載の装置。
【請求項２２】
側方流動を与えることができる１つまたは複数の担持材を備える装置であって、前記１つまたは複数の担持材は、
ＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原を含む生体試料を受入れるための区域と、
移動可能に含まれる検出リガンドを含む区域と、
予め定められた量の固定捕捉試薬を含む第１の捕捉区域と、
前記固定捕捉試薬を含む第２の捕捉区域とを備え、
前記検出リガンドは、前記ＣＤ４抗原と複合体を形成することができ、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域および前記生体試料を受入れるための前記区域は、分離区域、同じ区域または部分的に同じ区域とすることができ、
前記固定捕捉試薬が前記複合体に特異的に結合することができることを特徴とする装置。
【請求項２３】
前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とが、前記１つまたは複数の担持材の中に配置され、もって試料が、前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とを通って連続的に側方流動できるようにしたことを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項２４】
前記１つまたは複数の担持材は、セルロースエステル、ＤＥＡＥ、ガラス、ナイロン、微粒子シリカ、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリアミド、ポリアクリルアミド、ポリビニル、ポリプロピレン、セルロースアガロースまたはデキストランを含有することを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項２５】
前記１つまたは複数の担持材は、前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とを備える単一のストリップを備えることを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項２６】
前記固定捕捉試薬は、ＣＤ４リンパ球に存在する前記ＣＤ４抗原に特異的に結合することができる抗体を含むことを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項２７】
前記検出リガンドは、抗体に結合される金コロイドを含み、前記抗体は、ＣＤ４抗原を認識し、かつ前記固定捕捉試薬および前記ＣＤ４抗原とサンドイッチ複合体を形成することができることを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項２８】
前記第２の捕捉区域は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含み、前記試料中に存在する少なくとも、第２の量のＣＤ４抗原の存在を表示することができることを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項２９】
前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第３の捕捉区域をさらに備えることを特徴とする請求項２８に記載の装置。
【請求項３０】
前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第４の捕捉区域をさらに備えることを特徴とする請求項２９に記載の装置。
【請求項３１】
前記第３の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも第３の量のＣＤ４抗原の存在を表示することができ、前記第４の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも第４の量のＣＤ４抗原の存在を表示することができ、前記第３の量は前記第２の量より大きく、および前記第４の量は前記第３の量より大きいことを特徴とする請求項３０に記載の装置。
【請求項３２】
固定コントロール試薬を含むコントロールラインをさらに備えることを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項３３】
前記第１の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約１００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項３４】
前記第２の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約２００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項２８に記載の装置。
【請求項３５】
前記第３の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約４００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項３１に記載の装置。
【請求項３６】
前記第４の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約８００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項３５に記載の装置。
【請求項３７】
前記１つまたは複数の担持材を少なくとも部分的に覆うハウジングをさらに備えることを特徴とする請求項２２に記載の装置。
【請求項３８】
生体試料中の標的検体の量を測定する方法であって、
側方流動を与えることができる１つまたは複数の担持材を備える装置を設けるステップと、
前記生体試料を受入れるための前記区域上に前記試料を配置するステップと、
前記検出リガンドによって与えられる可視インジケータを使用して、前記試料中の前記標的検体の量に関する情報を測定するステップとを含み、
前記１つまたは複数の担持材は、
生体試料を受入れるための区域と、
移動可能に含まれる検出リガンドを含む区域と
予め定められた量の固定捕捉試薬を含む第１の捕捉区域と、
前記固定捕捉試薬を含む第２の捕捉区域と、
溶解剤とを備え、
前記検出リガンドは、前記標的検体と複合体を形成することができ、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域および前記生体試料を受入れるための前記区域は、分離区域、同じ区域または部分的に同じ区域とすることができ、
前記固定捕捉試薬が前記複合体に特異的に結合することができることを特徴とする方法。
【請求項３９】
前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とが、前記１つまたは複数の担持材の中に配置され、もって前記生体試料が、前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とを通って連続的に横方向に流れるようにしたことを特徴とする請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記標的検体は、ＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原であり、前記捕捉試薬は、ＣＤ４リンパ球に存在する前記ＣＤ４抗原に特異的に結合することができる抗体を含むことを特徴とする請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記第１の捕捉区域の中に存在する前記予め定められた量は、指定されたレベルで前記複合体を結合するのに十分であることを特徴とする請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記第２の捕捉区域は、第２の指定されたレベルで前記複合体を結合するのに十分な予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含み、前記第２の捕捉区域での前記検出リガンドは、前記試料中の少なくとも、第２の量の前記標的検体の存在を表示することを特徴とする請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第３の捕捉区域をさらに備えており、前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第４の捕捉区域をさらに備えており、前記第３の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも第３の量の標的検体の存在を表示することができ、前記第４の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも第４の量の標的検体の存在を表示することができ、前記第３の量は前記第２の量より大きく、および前記第４の量は前記第３の量より大きいことを特徴とする請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記標的検体はＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原であり、前記移動可能に含まれる検出リガンドは前記ＣＤ４抗原と前記複合体を形成することができ、前記固定捕捉試薬は前記複合体を特異的に結合し、前記第１の区域は前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約１００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記第２の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約２００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記第３の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約４００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記第４の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約８００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
生体試料中のＣＤ４リンパ球の量を測定する方法であって、
側方流動を与えることができる１つまたは複数の担持材を備える装置を設けるステップと、
前記生体試料を受入れるための前記区域上に前記試料を配置するステップと、
前記検出リガンドによって与えられる可視インジケータを使用して、前記試料中の前記ＣＤ４リンパ球の量に関する情報を測定するステップとを含み、
前記１つまたは複数の担持材は、
前記生体試料を受入れるための区域と、
移動可能に含まれる検出リガンドを含む区域と、
予め定められた量の固定捕捉試薬を含む第１の捕捉区域と、
前記固定捕捉試薬を含む第２の捕捉区域とを備え、
前記検出リガンドは、前記ＣＤ４リンパ球上のＣＤ４抗原と複合体を形成することができ、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域および前記生体試料を受入れるための前記区域は、分離区域、同じ区域または部分的に同じ区域とすることができ、
前記固定捕捉試薬が、前記複合体に特異的に結合することができることを特徴とする方法。
【請求項４９】
前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とが、前記１つまたは複数の担持材の中に配置され、もって前記生体試料が前記生体試料を受入れるための前記区域と、前記移動可能に含まれる検出リガンドを含む前記区域と、前記第１の捕捉区域と、前記第２の捕捉区域とを通って連続的に横方向に流れるようにしたことを特徴とする請求項３８に記載の方法。
【請求項５０】
前記標的検体は、ＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原であり、前記捕捉試薬は、ＣＤ４リンパ球を示す前記ＣＤ４抗原に特異的に結合することができる抗体を含むことを特徴とする請求項３８に記載の方法。
【請求項５１】
前記第１の捕捉区域の中に存在する前記予め定められた量は、指定されたレベルで前記複合体を結合するのに十分であることを特徴とする請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
前記第２の捕捉区域は、第２の指定されたレベルで前記複合体を結合するのに十分な予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含み、前記第２の捕捉区域の前記検出リガンドは、前記試料中の少なくとも第２の量の前記ＣＤ４リンパ球の存在を表示することを特徴とする請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第３の捕捉区域をさらに備えており、前記１つまたは複数の担持材は、予め定められた量の前記固定捕捉試薬を含む第４の捕捉区域をさらに備えており、前記第３の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも第３の量のＣＤ４リンパ球の存在を表示することができ、前記第４の捕捉区域は、前記試料中に存在する少なくとも第４の量のＣＤ４リンパ球の存在を表示することができ、前記第３の量は前記第２の量より大きく、および前記第４の量は前記第３の量より大きいことを特徴とする請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記第１の区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約１００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項４８に記載の方法。
【請求項５５】
前記第２の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約２００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記第３の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約４００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記第４の捕捉区域は、前記試料中のＣＤ４細胞の少なくとも約８００個／μｌの存在を表示することができることを特徴とする請求項５６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００５年４月２０日に出願した米国特許仮出願第６０／６７３２１８号の優先権を主張するものである。その出願の開示は参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
本発明は、標的検体の試料の半定量分析のための装置および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
以下の議論では、ある物品および方法を、背景説明および導入目的のために説明することにする。本明細書中に含まれるいかなる事項も、従来技術であるとの「自認」として解釈されるべきではない。出願人は、本明細書中で参照される物品および方法は適用可能な法令の規定の下で従来技術を構成しないことを必要に応じて表明する権利を明示的に留保する。
【０００４】
様々な免疫反応は、分析技術として役立つと分かってきた。免疫化学アッセイ（ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｓｓａｙ）は、一般的にいくつかの異なるカテゴリに分類される。最もよく見かけるタイプのうちの２つは、競合的アッセイ（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ａｓｓａｙ）およびサンドイッチアッセイ（ｓａｎｄｗｉｃｈ  ａｓｓａｙ）である。競合的アッセイでは、限られた量の結合材料（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍａｔｅｒｉａｌ）を、検体および既知の濃度の標識検体含む溶液と接触させる。標識検体および非標識検体は、結合材料上の結合部位に対して競合する。結合材料に結合される標識検体の量は、試験溶液中に存在する検体の濃度と相関できる。定量化は、典型的には較正曲線の参照、反応によって引き起こされる色変化の範囲の目視比較、または試験機器を用いた評価によってなされる。
【０００５】
サンドイッチアッセイは、結合材料を、検体を含んでいる溶液と接触させるものであり、それにより検体を結合材料に結合させる。この複合体を、次いで標識結合材料、一般には抗体と接触させ、該抗体は結合した検体と反応する。したがって、結合した標識結合材料の量は、結合した検体の量に正比例する。定量化は、典型的には標準または参照検体を用いた反応によって引き起こされる色変化の比較、較正曲線の参照、または試験器機による検査によって達成される。
【０００６】
【特許文献１】米国特許第４７０３０１７号明細書
【特許文献２】米国特許第４５１７２８８号明細書
【特許文献３】米国特許第４１８６１４６号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、従来の技術およびそうした技術に頼る装置は、様々な欠陥を示してきている。例えば、比較的簡単な試験ストリップ（ｔｅｓｔ  ｓｔｒｉｐ）装置が開発されてきたが、この装置は少なくともアッセイの結果を即時に定量化することの能力を欠くことが多い。この点においては、多くのそうした装置は、選択された閾値よりも多く検体が存在するのか、あるいは選択された閾値よりも少なく存在するのかについて、単に陽性または陰性の結果を示すだけである。その上、典型的にはそうした装置は洗浄ステップを必要とし、またはそうした装置は１種または複数種の試薬および試料を混合することを必要とする。そうした洗浄のステップまたは混合のステップを行うことが必要であることで、アッセイに望ましくない複雑さが加わり、該複雑さにより、素人、あるいは下位レベルの医学的訓練を受けた人による使用にも望ましくないものとしている。
【０００８】
そうした試験の改良およびそうした試験についての新たな応用が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第１の態様によれば、本発明は、側方流動を与えることができる１つまたは複数の担持材を備える装置を提供する。この１つまたは複数の担持材は、標的検体を含む生体試料を受け入れるための区域と、標的検体と複合体を形成することができる移動可能に含まれる検出リガンド（ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄ）を有する区域と、予め定められた量の固定捕捉試薬（ｉｍｍｏｂｉｌｅ  ｃａｐｔｕｒｅ  ｒｅａｇｅｎｔ）を有する第１の捕捉区域（該区域において、この固定捕捉試薬が前記複合体に特異的に結合することができる）と、固定捕捉試薬を有する第２の捕捉区域と、溶解剤（ｌｙｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）とを含む。典型的には、生体試料を受入れるための区域と、移動可能に含まれる検出リガンドを有する区域と、第１の捕捉区域と、第２の捕捉区域とは、試料がこれらの区域を通って連続的に側方流動できるように、１つまたは複数の担持材中に配置されている。
【００１０】
別な態様によれば、標的検体は、ＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原である。したがって、１つまたは複数の材料は、ＣＤ４抗原と複合体を形成することができる移動可能に含まれる検出リガンドを有する区域と、複合体に特異的に結合することができる予め定められた量の固定捕捉試薬を有する第１の捕捉区域と、固定捕捉試薬を含む第２の捕捉区域とを含む。典型的には、生体試料を受入れるための区域と、移動可能に含まれる検出リガンドを有する区域と、第１の捕捉区域と、第２の捕捉区域とは、試料がこれらの区域を通って連続的に側方流動できるように１つまたは複数の担持材中に配置されている。
【００１１】
本発明は、そうした装置を使用する方法をさらに提供する。
【００１２】
前述および他の本発明の特徴、態様および利点は、以下の説明、添付した特許請求の範囲、および図面中に示される例示の実施形態から明らかとなるであろう。図面は、後に簡潔に説明される。同種の要素は、特段の定めがない限り同一の参照番号を有することに留意されたい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
次いで本発明の原理を、本発明のある例示的な実施形態についての以下の議論により、および図面を参照することによりさらに説明することにする。本明細書で別段の指示がない限り、同一の図面の参照番号または参照符号は複数の図面の中で、同一または類似の要素の例示を示すために利用されている。
【００１４】
本明細書で使用される「検体（ａｎａｌｙｔｅ）」なる用語は、試験試料中で検出または計測される化合物または組成物を指す。該検体は、抗体またはその免疫反応断片（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）が認識できる少なくとも１つのエピトープを有することになる。検体は、任意の抗原性物質、ハプテン、抗体およびそれらの組合せを含むことができる。アッセイで対象となる標的検体は、例えばタンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、ホルモン、ステロイド、ビタミン；ポリクローナル抗体および／またはモノクローナル抗体を生産可能にするための病原微生物、天然または合成の化学物質、汚染物質、不法な目的で投与されるのみならず治療目的で投与される薬剤、および任意の上述の物質の代謝物質または任意の上述の物質に対する抗体であることができる。この用語によって含まれる一具体例は、ＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原である。
【００１５】
本明細書で使用される「生体試料（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓａｍｐｌｅ）」なる用語は、検出のための検体を含むことができる任意の試料を指す。好ましくは生体試料は、液状であり、または液状に変化できるものである。生体試料は、全血、尿、唾液、または他の体液および分泌物を包含できる。生体試料なる用語は、生体試料の供給源に関しては特定されない。したがって、試料は、人間または他の哺乳動物など任意の供給源から得ることができる。
【００１６】
本明細書で使用される「試料受入れ区域（ｓａｍｐｌｅ  ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  ａｒｅａ）」なる用語は、生体試料と最初に接触するアッセイ装置の部分を意味しており、すなわちその部分により、問題の検体について試験される試料が受入れられる。
【００１７】
「側方流動（ｌａｔｅｒａｌ  ｆｌｏｗ）」なる用語は、試料の成分が横（ｌａｔｅｒａｌ）方向に材料を通って運搬されている流れを指す。例えば、アッセイ装置がシートの形態またはストリップの形態であるとき、横方向は装置の（１つまたは複数の）主要面によって定められる面と平行である。
【００１８】
本明細書で使用される材料（ｍａｔｅｒｉａｌ）」なる用語は、側方流動を与えることができる任意の物質を指す。これには、セルロースエステル、ニトロセルロース、ポリエステルまたはセルロースとのニトロセルロース混合物、未処理の紙（ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  ｐａｐｅｒ）、多孔性紙、多孔性ポリエチレン、多孔性ポリプロピレン、レーヨン、ガラス繊維、アクリロニトリル共重合体またはナイロンなどの材料が含まれることになる。当業者は、側方流動を可能にする他の多孔性材料に気付くことであろう。
【００１９】
本明細書で称される「移動性（ｍｏｂｉｌｅ）」なる用語は、拡散的または非拡散的に取付けられ、あるいは含浸されているということを意味する。移動性である物質または試薬は、試料とともに分散することおよび側方流動によって運搬されることができる。
【００２０】
本明細書で使用される「固定（ｉｍｍｏｂｉｌｅ）」なる用語は、液体試料の側方流動が、材料中で固定粒子の配置に悪影響を与えないように担持材に取付けられる物質または試薬を指す。そうした取付けは、例えば共有結合性の手段またはイオンによる手段を介してできる。当業者は、様々な物質または試薬を固定化するための取付け手段に気付くことであろう。
【００２１】
本明細書で使用される「検出リガンド（ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄ）」なる用語は、問題の検体を認識し、または問題の検体に結合する任意の粒子、タンパク質または分子であって、検出可能信号を生成できる任意の物質に化学的、共有結合的、非共有結合的、イオン的または非イオン的に取付け、接合または結合されたものを指す。検出可能信号を生成できるそうした物質には、明細書の全内容が参照により本明細書に組み込まれる特許文献１に記載されたタイプの信号生成物質を伴った、色原体、触媒、蛍光化合物、コロイド金属粒子および／またはコロイド非金属粒子、染料粒子、酵素若しくは基質、有機ポリマー、ラテックス粒子、リポソームが含まれることになる。検体を認識する粒子または分子は、天然または非天然とすることができる。例示の実施形態によれば、検出リガンドは、金コロイド粒子に接合されるリガンド、または可視色素を含んでいるリポソームに接合されるリガンドを含む。
【００２２】
本明細書で使用される「検出可能信号（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  ｓｉｇｎａｌ）」なる用語は、肉眼および／または光学的読取り機器を用いて見えるものである任意のインジケータ（ｉｎｄｉｃａｔｏｒ）を指しており、この任意のインジケータは光学的読取り機器でそうした可視インジケータに変換できるものである。「肉眼で見える」は、補正レンズおよび拡大手段を使用することを包含することが意図される。検出可能信号は、即時または連続的に見えるものでよく、または別の試薬との反応に基づいてのみ見えるようになるものでもよい。例えば、典型的には金などのコロイド金属は、即時または連続的に見られる。代替として、信号を生成できる物質は、酵素などの第１の反応物を含むことができ、第２の反応物は分離区域に設けることができ、酵素が該分離区域に移動すると化学反応が発生し、結果は分離区域中の色の変化であるようにできる。
【００２３】
本明細書で使用される「検出リガンド区域（ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄ  ａｒｅａ）」なる用語は、移動性検出リガンドが配設される、装置の区域を指す。
【００２４】
本明細書で使用される「コントロール試薬（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｒｅａｇｅｎｔ）」なる用語は、リガンド検出体を結合できるが、標的検体を認識または結合しない任意の粒子または分子を指す。例えば、検出リガンドは、信号を生成できる物質に接合されるリガンドであることができる。コントロール試薬は、検体がそこに結合されないときに、検出リガンドのリガンド部分を認識または結合する粒子または分子となろう。好ましくは、コントロール試薬は、リガンドを認識するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体となろう。コントロール試薬は固定されている。したがって、コントロール試薬は結合されていない標識試薬を一旦結合すると、それはこの標識試薬を固定化し、標識試薬が側方流動の中で存続することを妨げる。
【００２５】
本明細書で使用される「コントロールライン（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｌｉｎｅ）」なる用語は、コントロール試薬が固定化されている、装置の区域を指す。
【００２６】
本明細書で使用される「捕捉試薬（ｃａｐｔｕｒｅ  ｒｅａｇｅｎｔ）」なる用語は、対象の検体を認識し、または対象の検体に結合する任意の粒子または分子、あるいは検体に結合される検出リガンドを認識しまたは検体に結合される検出リガンドに結合する任意の粒子または分子を指す。捕捉試薬は固定されており、したがって捕捉試薬が検体−検出リガンド複合体を一旦結合すると、捕捉試薬は複合体が側方流動を続けることを妨げる。捕捉試薬は、抗体、Ｆａｂ、ペプチド、アプタマー等などの任意の適当なリガンドを含むことができる。例示的な一実施形態によれば、捕捉試薬は、ＣＤ４リンパ球に存在するＣＤ４抗原に対する抗体を含む。
【００２７】
本明細書で使用される「捕捉区域（ｃａｐｔｕｒｅ  ａｒｅａ）」なる用語は、材料中で捕捉試薬が固定化されている、装置の区域を指す。
【００２８】
本明細書で使用される「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄ）」なる用語は、受容体や捕捉剤などを介して生じると共に、特定の薬剤または特定の物質とのみ選択的に結合する結合機構を指す。
【００２９】
次いで本発明の原理により構成される第１の実施形態を図１および図２を参照することにより説明することにする。装置１０は、一般に担持材１５を備え、この担持材１５は、矢印ＬＦの方向に流れる側方流動を生成することができる。
【００３０】
図１に例示するように、担持材１５は、ストリップの形態で形成でき、以下の説明においてそのようなものとして参照されることになる。代替として、担持材１５は、具体的な形態が本明細書で説明される様々な機能を可能にする限り、幅広い種類の形状または形態で設けることができる。
【００３１】
この担持部１５は、前述の側方流動の機能が可能になる限り、、いくつかの異なる適当な材料でも形成可能である。例えば、この材料は、ガラス繊維、セルロースエステル、ナイロン、架橋デキストラン等を含有できる。一実施形態によれば、この材料は、ニトロセルロースを含有する。以下の例で述べるように、この担持部は、単一のストリップであることに加えて、１つまたは複数の別個の担持材を備えることができる。
【００３２】
例示した装置１０では、生体試料受入れ区域２０は、ストリップ１５上に設けられる。例示した実施形態では、ストリップ１５の一端部で設置される１つの試料受入れ区域２０のみが示されているが、複数の試料受入れ区域を設けることができるということも本発明に含まれることを理解されたい。その上、（１つまたは複数の）試料受入れ区域は、例示した実施形態の位置とは異なる位置を有することができる。装置１０は、検出リガンドを含んでいる区域２５をさらに含む。検出リガンドは、移動性であるような形で区域２５内に含まれる。つまり、検出リガンドは、前述の側方流動によって区域２５から運搬されることができる。例示的な非限定例によれば、区域２５中でｃｍ幅当り検出リガンド３〜７μＬ、好ましくは５μＬが施されており、乾燥されている。検出リガンドは、金コロイド粒子１０〜１００ｎｍ、好ましくは４０ｎｍの懸濁液１ｍＬ当りに接合される抗体１０〜２００μｇ、好ましくは５０μｇを含むことが好ましい。例示した実施形態では、検出リガンドを含んでいる区域２５および生体試料受入れ区域２０は、ストリップ１５上の分離した別個の区域として例示される。しかし、これら２つの区域を組み合わせて、単一の区別できないストリップ１５の区域を画定するようにすることも本発明の範囲内である。
【００３３】
コントロールライン３０を、ストリップ１５上に任意に設けることもできる。コントロールライン３０が存在する場合、該ラインはコントロール試薬を含む区域を画定する。コントロールライン３０内に含まれるコントロール試薬は固定されている。例示的な非限定例によれば、コントロールライン３０中、ｃｍ幅当りコントロール試薬０．１〜１０μｇ、好ましくは１μｇが配設される。
【００３４】
第１の捕捉区域３５は、例示した実施形態の中で設けられ、側方流動の中で前述のストリップ１５の区域と通じている。第１の捕捉区域３５は、そこに捕捉試薬を含んでいる。この捕捉試薬は、第１の捕捉区域３５内で固定して含まれている。ＣＤ４測定用に役立つ一実施形態では、ｃｍ幅当り捕捉剤２ｎｇが第１の捕捉区域３５に配設されている（細胞当り６０，０００個のＣＤ４分子、１００μＬの血液試料、μＬ当り１００個のＣＤ４細胞で飽和された捕捉区域、幅５ｍｍのストリップ、抗体のモル質量１５０，０００ｇ／ｍｏｌと仮定する）。
【００３５】
本発明の別の任意選択的特徴によれば、溶解剤は、様々な位置でストリップ材料１５に加えることができる。例えば溶解剤は、試料受入れ区域２０内、または試料受入れ区域２０と第１の捕捉区域３５の間で設置されるストリップ１５の任意の区域内に含まれてよい。適当な溶解剤には、例えばｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３〜１０および３〜１４、サポニン、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００、Ｔｗｅｅｎ  ２０、ＳＤＳ［ｓｏｄｉｕｍ  ｄｏｄｅｃｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ（ドデシル酢酸ナトリウム）］およびＣＴＡＢが含まれる。
【００３６】
例示した実施形態によれば、第２、第３および第４の捕捉区域４０、４５および５０それぞれは、ストリップ１５上に追加的に設けられる。しかし、ストリップ１５が少なくとも１つの捕捉区域を含むことは、本発明の範囲内であることを理解されたい。他の実施形態によれば、ストリップ１５は、少なくとも２つの捕捉区域を含むことができる。他の実施形態によれば、ストリップ１５は、少なくとも４つの捕捉区域を含むことができる。
【００３７】
例示した実施形態によれば、捕捉区域は、側方流動ＬＦの方向に、お互いに別個に分離している。しかし、１つまたは複数の捕捉区域が組合せ可能なこと、および／またはその他の方法で併合可能なことも本発明に含まれる。追加的には、捕捉区域の位置、形状、大きさおよび構成は、例示した実施形態の捕捉区域の位置、形状、大きさおよび構成から逸脱してもよい。
【００３８】
図２中に示す本実施形態は、本質的に図１の実施形態に対応するが、任意選択的ハウジング５５をさらに備える。ハウジング５５は、任意の適当な材料で形成可能である。例えばこのハウジングは、マイラー（Ｍｙｌａｒ）などのプラスチック材料で形成可能である。ハウジング５５は、少なくとも部分的にストリップ１５を封入するかまたは囲む。図２に例示するように、ハウジングは、試料受入れ区域窓６０と、コントロールライン窓６２と、捕捉区域窓６５とを備えることができる。例示した実施形態によれば、検出リガンドを含んでいる区域は、ハウジング５５により使用者の視界から隠されている。もちろん、検出リガンドを含んでいる区域が、ハウジングを通して使用者に可視的であることも含まれる。その上、ハウジング５５は、透明または半透明のプラスチック材料で形成可能である。
【００３９】
ハウジング５５は、表示７０を任意選択的に備えることができ、この表示７０により装置１０により測定される生体試料中に存在する標的検体の様々な濃度低下（ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）を識別する。図２に例示した表示７０から明らかなように、生体試料中で存在する検体の濃度を具体的な範囲の値の内で確認することができ、それは本明細書でさらに詳細に説明される。
【００４０】
図３Ａ〜図３Ｄ中に例示される実施形態は、図１および図２中に例示される実施形態に関連して説明される多くの特徴を含む。概して言えば、図３中に例示される実施形態は、それぞれのストリップが標的検体の閾値濃度レベルを示すための単一の捕捉区域を含んでいる点で前述の実施形態とは異なる。陽性の表示は、特定の予め定められた検体の濃度が生体試料中に存在するときにのみ捕捉区域で与えられる。
【００４１】
したがって、先の説明および以下の説明は、図３Ａ〜図３Ｄ中に例示したストリップに等しく適用される。
【００４２】
例示した図３Ａの実施形態によれば、装置１００ａは、概してストリップのように形成される担持材１１５ａによって与えられる。ストリップ１１５ａは、試料受入れ区域１２０ａと、検出リガンド１２５ａを含んでいる区域と、任意選択的にコントロールライン１３０ａとを含む。区域１２５ａ中に含まれる検出リガンドは移動性であり、したがって側方流動により区域１２５ａから外へ輸送できる。コントロールライン１３０ａは、少なくとも１つのコントロール試薬を含んでいる区域を画定する。コントロール試薬は、コントロールライン１３０ａ内で固定して含まれている。第１の捕捉区域１３４ａは、前述のストリップ１１５ａの区域から分離しているが、側方流動の中で前述のストリップ１１５ａの区域と通じるように例示されている。もちろん、先の実施形態と関連して説明したように、ストリップ１１５ａの様々な区域の位置番号および配置は、例示した実施形態のそれから変更できる。したがって、図１および図２に関連してなされた先の説明が参考となる。捕捉区域１４０ａは、予め定められた特定の量で設けられる固定捕捉試薬を含む。
【００４３】
図３Ｂ〜図３Ｄ中に例示されるように、ストリップ１１５ｂ〜１１５ｄは、それぞれ第１の捕捉区域１３４ｂ〜１３４ｄと第２の捕捉区域１４０ｂ〜１４０ｄの両方を備えることができる。捕捉区域１３４ｂ〜１３４ｄの中に設けられる所定量の捕捉試薬は、生体試料の中に含まれる予め定められた具体的な量の標的検体を捕捉するために使用される。第１の捕捉区域１３４ｂ〜１３４ｄは、試料に含まれる標的検体の量に関連してそれ自体が何らかの表示を与えるために利用されるわけではない。例示した実施形態によれば、第２の捕捉区域１４０ｂ〜１４０ｄが、この目的のために設けられる。第２の捕捉区域１４０ｂ〜１４０ｄは、そこに具体的な予め定められた量の捕捉試薬も含む。捕捉試薬はまた、第２の捕捉区域１４０ｂ〜１４０ｄ内で固定して含まれる。しかし、捕捉区域の個数、位置および配置が変動可能であることは本発明の範囲内である。
【００４４】
図４は、本発明の追加の実施形態の例示となっており、装置１００は、図３Ａ〜図３Ｄの実施形態に関連して上述したのと同じ特徴を有するが、追加的に任意選択的なハウジング部材１５５を含む。ハウジング１５５は、任意の適当な材料で構成できる。例えば、ハウジング１５５は、マイラーなどのプラスチック材料で構成できる。任意選択的なハウジング１５５は、試料受入れ区域窓１６０と、コントロールライン窓１６２と、捕捉区域窓１６５と、表示１７０とを備えることができる。例示した実施形態によれば、第１の捕捉区域は、ハウジング１５５により視界から隠されている。第１の捕捉区域１３４は生体試料中に含まれる検体の量に関連した有益な表示を何ら与えないところであるため、この区域が使用者にとって見えるものであることは必ずしも必要ではない。しかし、ハウジング１５５は、少なくともこの追加のストリップ１１５の区域が、使用者にとって見えるように製作できるように修正され得ることが含まれる。代替として、ハウジング１５５は、透明または半透明のプラスチック材料で構成できる。
【００４５】
上記の装置は、当業者によく知られている技術を利用することにより構成できる。上記の試薬は、担持材に入れる（ｄｅｐｏｓｉｔ  ｉｎｔｏ）および／または担持材上に置く（ｄｅｐｏｓｉｔ  ｕｐｏｎ）ために任意選択的に液状で調製される。担持材と一旦接触して置かれると、液体試薬は乾燥し、担持材に付着する。従来のフィルタ、結合剤、表面活性剤などが特に必要であれば液体試薬の中に混ぜてもよい。加えて、結合剤の材料を、担持材への付着を容易にするために、液体試薬組成物の中に混ぜてもよい。
【００４６】
任意の特定の区域で担持材の中に導入される試薬の量を精確にコントロールすることが望ましい。したがって、導入される試薬の量をコントロールするためにピペット、ミクロピペットなどを使用することが本発明に含まれる。加えて、具体的な試薬が導入される区域を、分離またはその他の方法で閉じ込めることが望ましいであろう。この区域は、当業者に知られた技術によりコントロールできる。例えば、１つまたは複数の前述の本発明のストリップの区域が、非吸収性および／または疎水性である区域によって分離できることは本発明の範囲内である。この分離は、これらの介在区域内の担持材を処理することによって、または代替としてこれらの望ましい特性を付与する異なる材料のセクション（ｓｅｃｔｉｏｎ）またはセグメント（ｓｅｇｍｅｎｔ）を導入することによって達成できる。
【００４７】
図１〜図４に示した上記の実施形態から明らかなように、ある種の試薬を担持材の中に、試薬を担持材に固定させる形で導入することが望ましい。固定化は、蒸着、吸着、共有結合または免疫固定化（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）などの任意の使い易い技術によって達成できる。そうした技術は、例えば、全内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる特許文献２および３により詳しく記述されている。ある種の試薬を担持材の中に、その試薬が担持材の中で移動性のままであるような形で導入できることも望ましい。そうした適用は、少量の液体試薬溶液を所望の区域に単にピペットで移すことによって達成できる。そうした技術は、当業者によく知られている。
【００４８】
本発明のさらなる態様によれば、標的検体をアッセイする方法または技術が、次いで説明されることになる。説明のために、図１〜図４の例示的な実施形態の参照がなされることになる。しかし、本発明の方法および技術は、図１〜図４中に例示される実施形態の物理的な構成および配置によって必ずしも制限されないことを理解されたい。
【００４９】
本発明の原理により導かれるアッセイの例示的な実施形態は、以下に詳細に説明されることになると共に、サンドイッチタイプのアッセイとして例示する目的で説明されることになる。しかし、本明細書に含まれる教示についての知識を有する当業者が、競合タイプアッセイおよび／または阻害タイプアッセイ（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ−ｔｙｐｅ  ａｓｓａｙ）の実行によって同じ目的を達成できるということも本発明に含まれる。したがって、本発明の方法は、サンドイッチタイプアッセイに限定して解釈されるとは必ずしもされるべきではない。
【００５０】
本発明により行われるアッセイは、適切な生体試料の収集で開始する（単に便宜上、図１および図３Ｂの参照を行う）。適切な試料の量は、幅広く変動し得る。例えば、１〜１００μｌ程度の試料が利用できる。本発明の一実施形態によれば、生体試料は全血を含む。生体試料は、試験ストリップ（１５、１１５ｂ）の試料受入れ区域（２０、１２０ｂ）に加えられる。試験ストリップ材料は、材料内で生体試料の側方流動（ＬＦ）を促進する。生体試料は、検出リガンドを含んでいる区域（２５、１２５ｂ）の中に流れる。この検出リガンドは、検査中の特定の標的検体に特異的に結合するように設計される。したがって、標的検体が側方流動によって検出リガンドを含んでいる区域を通って移動するときに、標的検体は検出リガンドに特異的に結合されることになり、複合体として前述の区域から外へ移動する。
【００５１】
任意選択的に、前述の複合体を含んでいる生体試料は、コントロール試薬を含んでいるコントロールライン区域（ｃｏｎｔｒｏｌ  ｌｉｎｅ  ａｒｅａ）（３０、１３０ｂ）の中に側方流動によって運搬される。この領域で、コントロールライン区域は、内部手続的コントロールとして働き、この区域で信号を検出することは、毛管流動が発生しているということ、および装置の機能的な完全性が維持されたということを実証する。
【００５２】
そこに含まれる生体試料および複合体は、次いで第１の捕捉区域（３５、１３４ｂ）へ横方向に流れる。第１の捕捉区域は、標的検体を含んでいる複合体に特異的に結合するように構成される固定捕捉試薬を含む。したがって、複合体が第１の捕捉区域を通って移動するとき、複合体は捕捉試薬に固定して結合されることになる。生体試料が第１の捕捉区域中に含まれる捕捉試薬の容量を超過するような量の標的検体を含む範囲内では、任意のそうした超過した標的検体およびそれによって形成される複合体は、側方流動の影響の下で移動を続け、それによって１つまたは複数の任意選択的に設けられた追加の捕捉区域に到達する。
【００５３】
上記から明らかなように、第１の捕捉区域中に含まれる捕捉試薬の量をコントロールすることは、生体試料中に含まれるある量またはある濃度の標的検体が越えて通過できないようにする障壁を定めるために利用できる。この最小閾値が超過される範囲内では、超過量の標的検体は、側方流動の下で１つまたは複数の捕捉区域へ自由に移動し、該区域でさらに、分析中の標的検体の最小閾値のレベルの増加を確立する。この点について、捕捉区域それぞれで設けられる捕捉試薬の量は、お互いに同じ量とすることができる。代替として、捕捉区域それぞれの中に含まれる捕捉試薬の量は、次第に増加または減少させることができる。限定するものではない例示的な例によれば、２ｎｇの捕捉試薬を第１の捕捉区域中に設けることができ、２ｎｇの捕捉試薬を第２の捕捉区域中に設けることができ、４ｎｇの捕捉試薬を第３の捕捉区域中に設けることができ、および８ｎｇの捕捉試薬を第４の捕捉区域中に設けることができる。
【００５４】
上記の１つまたは複数の捕捉区域中の、十分な量の標的検体の存在ならびに標的検体および検出リガンドから形成される複合体の存在は、検出可能な信号の生成によって表示される。この検出可能な信号は、当業者によく知られているいくつかの異なる方式で生成できる。一例によれば、検出リガンドは、即時におよび絶えず肉眼で見える物質を含むことができる。したがって、１つまたは複数の捕捉区域上で、標的検体と検出リガンドとの間で形成される複合体が物理的にわずかに存在すれば、所望の検出可能な信号を生成するために十分である。代替として、検出リガンドは、標的検体と形成される複合体に関連するものの、非可視的な第１の反応物を含むことができる。次いで第２の反応物を、１つまたは複数の捕捉区域中で与えることができ、第２の反応物は、第１の反応物との組合せおよび相互作用に基づいて検出可能信号を生成する。検出可能信号は、肉眼で見えるものでもよいし、または分光計、蛍光光度計、顕微鏡等などの別個の装置の助けを借りて読取りまたは分析されるものでもよい。本発明の原理により実行されるさらなるアッセイの任意選択的態様としては、溶解剤がストリップ材料の中に導入されてよく、溶解剤は生体試料と相互作用して、それによって標的検体物質を解放する。直ちに明らかなように、本発明の装置および方法は、いくつかの異なる応用例で役立つものであり、いくつかの異なる目的に役立つものである。概して、本発明の装置および方法は、簡単、精確、迅速なおよび費用効果の高い方式で確認されることが望まれるときに、生体試料中に含まれる標的検体の量の半定量分析に役立つものである。適切な非限定応用例には、血糖モニタリングならびにＨＩＶ／ＡＩＤＳなどのウイルス性疾患の診断および治療を含めることができる。ＣＤ４細胞数の低下はＨＩＶの影響であり、ＣＤ４細胞の減少は免疫欠損を指示するものであることが観測されてきた。この点について、疫病対策センター（ＣＤＣ：Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）は、ＣＤ４細胞数の臨床上の重要性を強調するＨＩＶ感染についての分類体系を考案している。ＣＤＣの分類体系は、命に関わる日和見疾患の進行とＣＤ４細胞数の間に強い関連性を示す研究に基づくものである。この点について、ＣＤ４細胞数が減少すると、日和見疾患の危険度および重症度が増大する。したがって、ＣＤ４細胞数は、ＨＩＶ感染者の臨床管理および治療管理をうまく行うために使用される。ＣＤＣによれば、抗レトロウイルス療法は、細胞５００個／μｌより少ないＣＤ４数を有するすべての人について検討されるべきであるということ、およびニューモシスティスカリニ肺炎（ＰＣＰ：Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  Ｃａｒｒｉｎｉｉ  Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）に対する予防的治療は、細胞２００個／μｌより少ないＣＤ４細胞数を有するすべての患者について推奨されるということを提案している。
【００５５】
ＣＤ４リンパ球細胞数についての３つのＣＤＣのカテゴリは、以下の通りである。
【００５６】
カテゴリ１：細胞５００個／μｌ以上
カテゴリ２：細胞２００〜４９９個／μｌ
カテゴリ３：細胞２００個／μｌ未満
【００５７】
上記から直ちに明らかなように、本発明の装置および技術は、患者のＣＤ４細胞数がどのＣＤＣのカテゴリに分類されるのかを判定するために利用できる。例えば本発明によれば、第１の捕捉区域は、生体試料中に存在するＣＤ４細胞数が細胞約１００個／μｌ以上の場合にのみ、検出可能信号が第１の捕捉区域で生成されるものとするように、具体的な量の捕捉剤を備えることができる。第２の捕捉区域は、細胞約２００個／μｌ以上のＣＤ４細胞濃度が存在することに基づいてのみ、検出可能信号が第２の捕捉区域で生成されることになるように設けられることができる。第３の捕捉区域は、生体試料中のＣＤ４細胞約４００個／μｌが存在することに基づいてのみ、検出可能信号が第３の捕捉区域で生成されることになるように、第３の捕捉区域に含まれる適切な量の捕捉試薬を備えることができる。第４の捕捉区域は、ＣＤ４細胞約８００個／μｌが存在することに基づいてのみ、検出可能信号が生成されることになるように、適切な量の捕捉試薬を備えることができる。設けられる捕捉区域の具体的な濃度および／または個数は、具体的な診断目的を達成するために要望通りに変更できることは本発明の範囲内である。ＣＤ４細胞数は、いつ患者が抗ウイルス療法を開始すべきか判定するための過程において重要な診断ツールとして幅広く認識されており、さらにそうした抗ウイルス療法の有効性および実効性のモニタリングにおいて重要なツールとして幅広く認識されている。したがって、ＣＤ４細胞数の頻繁な測定がなされるべきである。本発明の装置および方法は、半定量方式でＣＤ４細胞数を頻繁に測定する簡単、精確、迅速および費用効果の高い手段を提供する。
【００５８】
ここで、本発明の概念をさらに例示するために、本発明の原理によって含まれる非限定的具体的な例を説明することにする。
【実施例１】
【００５９】
本実施例では、人間の血液は、半定量的な量のＣＤ４リンパ球について試験可能である。被験者からの１滴の血液は、ランセットを用いて指先を刺すことによって得られ、側方流動の装置上の生体試料を受入れるための区域に施される。これに続いて側方流動を促進するために、受入れ区域にリン酸緩衝生理食塩水などの２滴の適切な緩衝剤を加える。この装置は、血液試料を受入れるためのパッド、例えばレーヨンまたはガラス繊維からなる。溶解剤は、血液細胞を溶解するためのパッドの中に含浸させられる。金コロイドに結合される検出抗体（ＣＤ４抗原に特異的なモノクローナル抗体）も同じパッドの中にある。このパッドの下には、典型的には幅５ｍｍ、長さ３０ｍｍのニトロセルロースからなるストリップがある。このパッドは、このストリップの一方の末端に設置される。このストリップの他方の末端では、液体の毛管流動を容易にし、液体の毛管流動を維持するために、吸収性のパッドがストリップに接触している。血液試料中の流体は、毛管作用の結果としてストリップを（「上流へ」）上がって行くことになる。本実施例では、ニトロセルロースのストリップ上に固定して置かれるのが、ＣＤ４検出複合体とサンドイッチ複合体を形成できる捕捉抗体の４つのゾーンである。試料配置区域に最も近い捕捉ゾーンは、試料μＬ当りＣＤ４リンパ球１００個相当量からのＣＤ４抗原で飽和されるに十分な捕捉抗体を含む。同様に、第２、第３および第４の捕捉ゾーンはそれぞれ、試料μＬ当りＣＤ４リンパ球２００個、４００個および８００個相当量で飽和されるように、捕捉抗体を含むことになろう。このストリップを１５分間展開し、ストリップ上の可視バンドの数がカウントされる。試験ストリップの読取り性は、ヘモグロビンにより引き起こされる任意の背景色を一掃するために、血液試料の後に洗浄液を加えることによって強化できる。バンドの数は、血液試料中のＣＤ４細胞の数を示す。第１のバンドだけが観測される場合、ＣＤ４細胞のレベルは、細胞５０〜１００個／μＬである。第１のバンドおよび第２のバンドだけが観測される場合、そのレベルは細胞約２００個／μＬである。最初の３つのバンドが観測される場合、そのレベルは細胞約４００個／μＬであり、４つのバンドすべてが観測される場合、そのレベルは細胞８００個／μＬより大きいものである。
【００６０】
本発明の好ましい実施形態に関連して詳細に説明したように、本発明は多数の様々な形態の実施形態によって満足されるものであるが、本開示は、本発明の原理についての典型例であるとみなされるべきものであり、本明細書中で例示および説明した具体的な実施形態に本発明を限定することが意図されるものではないことが理解されよう。非常に多数の変形例が、本発明の精神から逸脱することなく当業者によってなされることができるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】本発明の原理により構成される装置の斜視図である。
【図２】本発明の別の実施形態により構成される装置の斜視図である。
【図３Ａ】本発明のさらなる実施形態により構成される装置の斜視図である。
【図３Ｂ】本発明のさらなる実施形態により構成される装置の斜視図である。
【図３Ｃ】本発明のさらなる実施形態により構成される装置の斜視図である。
【図３Ｄ】本発明のさらなる実施形態により構成される装置の斜視図である。
【図４】本発明の原理により構成される装置のさらなる別の実施形態の図である。
【図１】
2008537145.tif 000003
【図２】
2008537145.tif 000004
【図３Ａ】
2008537145.tif 000005
【図３Ｂ】
2008537145.tif 000006
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
2008537145.tif 000009
【国際調査報告】
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