(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路に関連する単離及び精製されたポリヌクレオチド及びポリペプチドを提供する。本発明はまた、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体に対する抗体、及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含むＩＬ−１７ファミリーの成員を天然ソースから単離し、精製する方法を提供する。本発明はまた、炎症性疾患、例えば自己免疫疾患（例えば関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス及び多発性硬化症）、呼吸器疾患（例えばＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶反応（固形臓器移植拒絶反応を含む）、及び炎症性腸疾患又は障害（ＩＢＤ、例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）を含むが、これらに限定されない、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患、すなわちＩＬ−１７Ｆ関連疾患の進行を診断する、予後判定する、観測する、及び疾患を治療する及び／又は予防するための新規方法を対象とする。本発明はさらに、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患の介入処置（治療）及び予防のための新規治療薬及び治療標的、及び試験化合物をスクリーニングし、評価する方法を対象とする。【選択図】図１
2008532936.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することができる試験化合物をスクリーニングする方法であって、
ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ｒを含む試料を化合物と接触させる工程；及び
試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用が、化合物と接触していない試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用に比べて低下しているかどうかを判定する工程を含み、
化合物と接触させた試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用のそのような低下が、その化合物を、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用を阻害し、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することができるものとして特定する、前記方法。
【請求項２】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することができる試験化合物をスクリーニングする方法であって、
ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７ＲＣを含む試料を化合物と接触させる工程；及び
試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７ＲＣとの相互作用が、化合物と接触していない試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７ＲＣとの相互作用に比べて低下しているかどうかを判定する工程を含み、
化合物と接触させた試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７ＲＣとの相互作用の低下が、その化合物を、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７ＲＣとの相互作用を阻害し、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することができるものとして特定する、前記方法。
【請求項３】
被験者においてＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患を診断する方法であって、
被験者からの試料においてＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物の試験量を検出する工程；及び
前記試験量を、対照試料中の同じＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物の正常量と比較する工程を含み、
正常量を有意に上回る試験量が、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患の診断における陽性指標を提供する、前記方法。
【請求項４】
疾患が、自己免疫疾患、呼吸器疾患及び炎症性腸疾患から成る群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物がＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物がＩＬ−１７Ｒ遺伝子産物である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物がＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の治療有効量を被験者に投与することを含む、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患の危険性がある又は前記疾患と診断された被験者を治療する方法。
【請求項９】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体及び拮抗性低分子から成る群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
阻害性ポリヌクレオチドが、配列番号１７〜２４に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるｓｉＲＮＡである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
阻害性ポリヌクレオチドが、配列番号２５〜３２に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるｓｉＲＮＡである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
可溶性ポリペプチドが、配列番号３４に示すアミノ酸配列を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
可溶性ポリペプチドが、配列番号３５に示すアミノ酸配列を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチドが、配列番号１に示すヌクレオチド配列、又は配列番号１に示すヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、又は配列番号１のフラグメント、又はそれらのＲＮＡ等価物を含み、かつ、細胞における阻害性ポリヌクレオチドの発現がＩＬ−１７Ｆの発現低下を生じさせる、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチドが、配列番号５に示すヌクレオチド配列、又は配列番号５に示すヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、又は配列番号５のフラグメント、又はそれらのＲＮＡ等価物を含み、かつ、細胞における阻害性ポリヌクレオチドの発現がＩＬ−１７Ｒの発現低下を生じさせる、請求項９に記載の方法。
【請求項２０】
ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチドが、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列、又は配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、又は配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列のフラグメント、又はそれらのＲＮＡ等価物を含み、かつ、細胞における阻害性ポリヌクレオチドの発現がＩＬ−１７ＲＣの発現低下を生じさせる、請求項９に記載の方法。
【請求項２１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患が炎症性疾患である、請求項８に記載の方法。
【請求項２２】
炎症性疾患が、自己免疫疾患、呼吸器疾患及び炎症性腸疾患から成る群より選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
炎症性疾患が自己免疫疾患であり、自己免疫疾患が、関節炎、乾癬、全身性エリテマトーデス及び多発性硬化症から成る群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
自己免疫疾患が慢性関節リウマチである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
炎症性疾患が呼吸器疾患であり、呼吸器疾患が嚢胞性線維症である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１つの付加的な治療薬の治療有効量を被験者に投与することをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの付加的な治療薬が、サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝阻害物質、酵素阻害剤、細胞傷害性物質及び細胞増殖抑制物質から成る群より選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの付加的な治療薬が、ＴＮＦ拮抗物質、抗ＴＮＦ薬、ＩＬ−１２拮抗物質、ＩＬ−１５拮抗物質、ＩＬ−１７拮抗物質、ＩＬ−１８拮抗物質、ＩＬ−２２拮抗物質、Ｔ細胞除去剤、Ｂ細胞除去剤、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、ＣＣＩ−７７９、エタネルセプト、インフリキシマブ、リツキシマブ、アダリムマブ、プレドニゾロン、アザチオプリン、金、スルファサラジン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ミノサイクリン、アナキンラ、アバタセプト、メトトレキサート、レフルノミド、ラパマイシン、ラパマイシン類似体、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、ｐ３８阻害剤、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳ及び／又はＣＤ２８の拮抗物質、及びＣＴＬＡ４の作動物質から成る群より選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を細胞集団又は被験者に投与することを含む、細胞集団又は被験者においてＮＦ−κＢ応答性プロモーターを活性化するＮＦ−κＢの能力を阻害する方法。
【請求項３１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体及び拮抗性低分子から成る群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を細胞集団又は被験者に投与することを含む、細胞集団又は被験者においてＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害する方法。
【請求項３３】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体及び拮抗性低分子から成る群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ＩＬ−１７Ｆ生物活性が、好中球分化、好中球動員及びサイトカイン誘導から成る群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質及び製薬上許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項３６】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体及び拮抗性低分子から成る群より選択される、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、及び自己抗原、アレルゲン、同種抗原及びそれらのフラグメントから成る群より選択される抗原を含むワクチンアジュバント。
【請求項３８】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体及び拮抗性低分子から成る群より選択される、請求項３７に記載のワクチンアジュバント。
【請求項３９】
配列番号６に示すアミノ酸配列に特異的に結合することができる単離抗体。
【請求項４０】
配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５に示すアミノ酸配列から成る群より選択されるアミノ酸配列に特異的に結合することができる単離抗体。
【請求項４１】
抗体がＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗する、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４２】
抗体がＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗する、請求項４０に記載の抗体。
【請求項４３】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質に特異的に結合することができる単離抗体。
【請求項４４】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質がヒト又は霊長動物に由来する、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４５】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質が多量体である、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４６】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質がＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ｆへテロ二量体である、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４７】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質がヘテロ二量体であり、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、請求項４６に記載の抗体。
【請求項４８】
抗体がＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害する、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４９】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達が、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方によって媒介される、請求項１〜３及び８のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達が、少なくとも一部には、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体によって媒介され、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ＩＬ−１７Ｆ生物活性が、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方によって媒介される、請求項３２に記載の方法。
【請求項５２】
ＩＬ−１７Ｆ生物活性が、少なくとも一部には、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体によって媒介され、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方に拮抗する、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方に拮抗する、請求項３７に記載のワクチンアジュバント。
【請求項５５】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することを含む、ＩＬ−２１シグナル伝達に関連する少なくとも１つの活性を阻害する方法。
【請求項５６】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することを含む、ＩＬ−２３シグナル伝達に関連する少なくとも１つの活性を阻害する方法。
【請求項５７】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達が、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方によって媒介される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達が、少なくとも一部には、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体によって媒介され、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
ａ）培地中でＴ細胞を活性化すること；及び
ｂ）培地からＩＬ−１７Ａタンパク質を免疫沈降させること
を含む、天然ＩＬ−１７Ａタンパク質を精製する方法。
【請求項６０】
ａ）培地中でＴ細胞を活性化すること；及び
ｂ）培地からＩＬ−１７Ｆタンパク質を免疫沈降させること
を含む、天然ＩＬ−１７Ｆタンパク質を精製する方法。
【請求項６１】
ＩＬ−１７Ａタンパク質が、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ａホモ二量体とＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の両方である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質が、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
ＩＬ−１７Ａタンパク質がヘテロ二量体であり、ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質がヘテロ二量体であり、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
培地がＩＬ−２１を含む、請求項５９又は６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６６】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質がＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体である、単離ＩＬ−１７Ｆタンパク質。
【請求項６７】
ＩＬ−１７Ｆタンパク質が天然ソースから単離される、請求項６６に記載のＩＬ−１７Ｆタンパク質。
【請求項６８】
天然ソースが少なくとも１個のＴ細胞である、請求項６７に記載のＩＬ−１７Ｆタンパク質。
【請求項６９】
ＩＬ−１７Ａタンパク質がＩＬ−１７Ａホモ二量体又はＩＬ−１７Ａヘテロ二量体である、単離ＩＬ−１７Ａタンパク質。
【請求項７０】
ＩＬ−１７Ａタンパク質が天然ソースから単離される、請求項６９に記載のＩＬ−１７Ａタンパク質。
【請求項７１】
天然ソースが少なくとも１個のＴ細胞である、請求項７０に記載のＩＬ−１７Ａタンパク質。
【請求項７２】
ＩＬ−１７Ｆ拮抗物質を投与することを含む、ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する少なくとも１つの活性を阻害する方法。
【請求項７３】
ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体を実質的に含まないＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を単離する方法であって、
ａ）培地で培養した宿主細胞において、第一アフィニティータグに融合したＩＬ−１７Ａタンパク質又はそのフラグメントを含むＩＬ−１７Ａ融合タンパク質及び第二アフィニティータグに融合したＩＬ−１７Ｆタンパク質又はそのフラグメントを含むＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質を発現させること；
ｂ）宿主細胞にＩＬ−１７Ａ融合タンパク質及びＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質を培地中に分泌させること；
ｃ）ＩＬ−１７Ａ融合タンパク質が第一アフィニティーカラムに結合するように、非還元条件下で培地を第一アフィニティーカラムに加えること；
ｄ）非還元条件下で結合タンパク質を第一アフィニティーカラムから溶出すること；
ｅ）工程ｄ）から得た溶離液を、ＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質が第二アフィニティーカラムに結合するように、非還元条件下で第二アフィニティーカラムに加えること；及び
ｆ）非還元条件下で結合タンパク質を第二アフィニティーカラムから溶出すること
を含み、
工程ｆ）から得た溶離液が、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の形態でＩＬ−１７Ａ融合タンパク質とＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質の両方を含む、前記方法。
【請求項７４】
ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体を実質的に含まないＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を単離する方法であって、
ａ）培地で培養した宿主細胞において、第一アフィニティータグに融合したＩＬ−１７Ｆタンパク質又はそのフラグメントを含むＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質及び第二アフィニティータグに融合したＩＬ−１７Ａタンパク質又はそのフラグメントを含むＩＬ−１７Ａ融合タンパク質を発現させること；
ｂ）宿主細胞にＩＬ−１７Ａ融合タンパク質及びＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質を培地中に分泌させること；
ｃ）ＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質が第一アフィニティーカラムに結合するように、非還元条件下で培地を第一アフィニティーカラムに加えること；
ｄ）非還元条件下で結合タンパク質を第一アフィニティーカラムから溶出すること；
ｅ）工程ｄ）から得た溶離液を、ＩＬ−１７Ａ融合タンパク質が第二アフィニティーカラムに結合するように、非還元条件下で第二アフィニティーカラムに加えること；及び
ｆ）非還元条件下で結合タンパク質を第二アフィニティーカラムから溶出すること
を含み、
工程ｆ）から得た溶離液が、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の形態でＩＬ−１７Ａ融合タンパク質とＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質の両方を含む、前記方法。
【請求項７５】
請求項７３又は７４のいずれかに記載の方法に従って単離されるＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２００５年２月１４日出願の米国仮特許出願第６０／６５３，２６０号；及び２００５年４月１日出願の米国仮特許出願第６０／６６７，４９２号に基づく優先権を主張し、どちらもその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、インターロイキン−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ）シグナル伝達、特にヒトＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に干渉する抗体、例えばインタクトな抗体及びその抗原結合フラグメント、及び他のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、例えば可溶性ＩＬ−１７Ｆ受容体、並びにＩＬ−１７Ｆ関連活性を調節する上でのそれらの使用に関する。本明細書で開示する抗体及び関連ＩＬ−１７Ｆ分子は、ＩＬ−１７Ｆ関連疾患、例えば炎症性疾患（例えば自己免疫疾患（例えば関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症）、呼吸器疾患（例えばＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶反応（固形臓器移植拒絶反応を含む）、及び炎症性腸疾患又は障害（ＩＢＤ、例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）を診断する、予後を判定する、観測する、予防する及び／又は治療する上で有用である。
【背景技術】
【０００３】
サイトカインは、免疫及び炎症応答に関わる多面発現作用を有する分泌可溶性タンパク質であり、例えばサイトカインは、標的細胞による分化、動員又は他の生理的応答、例えば炎症の特徴であるタンパク質の分泌を引き起こし得る。サイトカインは、細胞の活性化、増殖及び分化を導くシグナル伝達経路の引き金を引く、特異的細胞表面受容体に結合する。１つのそのようなサイトカインである、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）（最初はＣＴＬＡ−８と命名された）は、マウスハイブリドーマから単離され、クローン化されて、Ｔリンパ球向性ヘルペスウイルス・サイミリのオープンリーディングフレーム１３と相同性を有することが示された(Rouvier et al. (1993) J. Immunol. 150:5445- 56; Yao et al. (1996) Gene 168:223-25; Golstein et al.,国際公開公報ＷＯ９５／０１８２６)。それ以後、ＩＬ−１７と２０〜５０％の相同性を有する５個の関連サイトカインが特定された(Moseley et al. (2003) Cytokine & Growth Factor Reviews 14: 155-74参照)。ＩＬ−１７をＩＬ−１７サイトカインファミリーの基本成員として示すため、ＩＬ−１７Ａと命名された (Moseley, supra)；その他の成員は、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆと命名された。ＩＬ−１７サイトカインファミリー成員は保存されたシステイン残基を共有する。興味深いのは、５０％の同一性を共有する、ＩＬ−１７Ａ及び特にＩＬ−１７Ｆである；どちらのサイトカインも、Ｔ細胞によって共発現される、ＩＬ−２３によって誘導され、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患のための潜在的標的とみなされる。ＩＬ−１７Ａと同様に、ＩＬ−１７Ｆ内の保存されたシステイン残基は、骨誘導因子（ＢＭＰ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、神経成長因子（ＮＧＦ）及び血小板由来因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）において認められる古典的システインノットモチーフ（knot motif）の特徴を示す(Hymowitz et al. (2001) EMBO J. 20:5332-41; McDonald et al. (1993) Cell 73:421-24)。
【０００４】
ＩＬ−１７Ｆは、活性化ヒトＰＢＭＣライブラリー（ＳＳＴ）からクローン化された１７ｋＤの分泌タンパク質である（米国特許第６，０４３，３４４号及び同第６，０７４，８４９号)。ＩＬ−１７Ｆは、３０−３５ｋＤのジスルフィド結合ホモ二量体(Hymowitz, supra)を形成し、ＩＬ−１７Ａと同様に、主として活性化Ｔ細胞によって発現される(Moseley, supra)。しかし、活性化単球、活性化好塩基球及び肥満細胞によるＩＬ−１７Ｆの発現も示されている(Kawaguchi et al. (2002) J. Immunol. 167:4430-35)。ＩＬ−１７Ｆは、マクロファージ、内皮細胞、上皮細胞及び線維芽細胞による多くのサイトカイン及びケモカインの発現を誘導する(Moseley, supra)。
【０００５】
ＩＬ−１７Ｆは、一部には、炎症性サイトカインの産生及び好中球増加を誘導することにより、炎症応答において役割を果たす。ＩＬ−１７Ｆは、いくつかの自己免疫疾患、例えば関節炎（慢性関節リウマチ及びライム関節炎を含む）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及び喘息の発症に関連する(Bettelli and Kuchroo (2005) J. Exp. Med. 201 :169-71)。例えば最近になって、ＩＬ−２３が、中でも特にＩＬ−１７Ｆの産生によって特徴付けられるＴ細胞集団の増殖のために必須であること、このＴ細胞集団の受動輸送が、中枢神経系自己免疫に関連する器官特異的炎症の確立のために必須であること(Langrish et al. (2005) J. Exp. Med. 201:233-40)、及びＩＬ−１７欠損マウスは実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ；多発性硬化症のための動物モデル）に抵抗性であること(Nakae et al. (2003) J. Immunol. 171:6173-77)が示された。ＩＬ−１７Ｆは、関節軟骨によるプロテオグリカン分解を上昇させ、プロテオグリカン合成を低下させるという点で、公知の炎症性サイトカインの中で特異である(Hymowitz, supra)。加えて、喘息に罹患している患者からアレルゲン攻撃誘発後に採取した気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）において、対照としてこれらの患者から採取したＢＡＬと比較してＩＬ−１７Ｆの発現上昇が明らかにされた(Kawaguchi, supra)。また、潰瘍性大腸炎及びクローン病を有する患者ではＩＬ−１７Ｆ  ｍＲＮＡ発現が上昇する(Gurney et al. (2003) GTCBIO Conf: Cytokines and Beyond)。これらの所見は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達の遮断がプロ炎症性サイトカインの産生を低減し、骨びらんを低下させることを示唆する。その結果として、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路は、炎症性疾患、例えば動員された好中球が、例えば自己免疫疾患（例えば関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症）、呼吸器疾患（例えばＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶反応（固形臓器移植拒絶反応を含む）、及び炎症性腸疾患又は障害（ＩＢＤ、例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）の発症の間の、組織損傷の決定的に重要なメディエイタである炎症性疾患を治療する及び／又は予防するための魅力的な標的である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
現在、ＩＬ−１７ファミリーの成員の受容体について多くは知られていない。ＩＬ−１７Ａについての受容体であるＩＬ−１７Ｒは、これまでに検査された全ての組織において発現されること、及びＩＬ−１７ＡによるＩＬ−１７Ｒの結合は、一般にＮＦ−κＢの活性化を通してプロ炎症性サイトカインの誘導を生じさせることが示された(Moseley, supra)。ＩＬ−１７Ｒと部分的配列相同性を共有する４個の付加的な受容体が特定された：１）ＩＬ−１７ＲＨ１（ＩＬ−１７ＲＢとも呼ばれる）、２）ＩＬ−１７受容体様タンパク質（ＩＬ−１７ＲＬ又はＩＬ−１７ＲＣとも呼ばれる）、３）ＩＬ−１７ＲＤ（ＳＥＦ又はＩＬ−１７ＲＬＭとも呼ばれる）、及び４）ＩＬ−１７ＲＥ(Moseley, supra)。これら４個の付加的な受容体のうちで、ＩＬ−１７ＲＨ１だけがＩＬ−１７サイトカイン、すなわちＩＬ−１７Ｂ及びＩＬ−１７Ｅに結合することが示された；しかし、ＩＬ−１７ＲＨ１へのＩＬ−１７Ｂ及びＩＬ−１７Ｅ結合の機能は示されていない(Shi et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:19167-76; Lee et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:1660-64)。これまでのところ、ＩＬ−１７Ｆについての受容体は報告されていない。それ故、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達は、組織（例えば関節組織）のホメオスタシス及び様々な疾患（例えば関節炎、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、潰瘍性大腸炎、クローン病等）の進行において重要な役割を果たすと考えられるが、疾患の予防及び／又は治療のための標的とすることはできなかった。本発明は、ＩＬ−１７Ｆタンパク質のシグナル伝達経路に関わるキープレイヤーを特定し、標的することによってこの問題を解決する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の１つの目的は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路の成分、例えばＩＬ−１７Ｆ及びその受容体を特定すること、及びＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患を治療する方法においてこれらの成分を標的することである。そのようなＩＬ−１７Ｆ関連疾患及びＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患は、炎症性疾患、例えば自己免疫疾患（例えば関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症）、呼吸器疾患（例えばＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶反応（固形臓器移植拒絶反応を含む）、及び炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）を含むが、これらに限定されない。
【０００８】
本発明の基礎となる研究は、ＩＬ−１７Ｆが、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣへのその結合を通して、プロテオグリカン破壊及び炎症応答を媒介する証拠を提供する。ＩＬ−１７Ｆの受容体としてのＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣの測定は、これらの分子をＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患の治療のための標的として顕在化する。
【０００９】
本明細書では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が提供され、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体及び拮抗性低分子を含むがこれらに限定されない。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の好ましい例は、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣに対するｓｉＲＮＡ、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣ（又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメント）を含む可溶性融合タンパク質、及び阻害性（すなわち拮抗性）ＩＬ−１７Ｆ抗体を含む。本発明のもう１つの好ましい実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、例えばＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣに対するｓｉＲＮＡ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ（又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメント）を含む可溶性融合タンパク質、又は阻害性ＩＬ−１７Ｆ抗体は、ＩＬ−１７Ｆ生物活性及び／又はＮＦ−κＢ応答遺伝子を活性化するＮＦ−κＢの能力を低下させる。
【００１０】
加えて、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆとの間の構造及び配列類似性に基づき、本発明者らは新規ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の形成を仮定し、明らかにした。ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の存在を明らかにするにあたって、本発明者らは初めて、ＩＬ−２１がＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の産生上昇を生じさせることを明らかにし、ＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合して、ＩＬ−２１Ｒを活性化することに関連する作用が、少なくとも一部には、ＩＬ−１７シグナル伝達によるものであると考えられることを示唆する。本発明者らはまた、初めて、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体をこれらのサイトカインの天然ソース、例えば活性化Ｔ細胞から単離する。それ故、本発明はまた、ＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合してＩＬ−２１Ｒを活性化することに関連する作用を、例えばＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を阻害することによって、軽減する方法を提供する。加えて、本発明は、天然（すなわち非組換え）ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、及び、例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患及び／又はＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合してＩＬ−２１Ｒを活性化することに関連する疾患を治療する方法において、これらを単離し、標的する方法を提供する。加えて、組換えＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、及びＩＬ−１７Ａホモ二量体とＩＬ−１７Ｆホモ二量体を実質的に含まないＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体（組換え又は天然）を単離する方法が本明細書で開示される。
【００１１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を標的する方法は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質としてのＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチド（阻害性ポリヌクレオチド、例えばアンチセンス、ｓｉＲＮＡ及びアプタマーを含む）、ポリペプチド及びそれらのフラグメントを含み得る。加えて、ＩＬ−１７Ｆタンパク質（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体として又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体として）とその受容体との相互作用を阻害することができる抗体も使用し得る。
【００１２】
本発明はまた、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路を標的することができ、かつＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患を診断する、予後判定する、観測する及び／又は治療することができる試験化合物をスクリーニングする方法において、本明細書で開示する分子を使用することに関する。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ｒを含む試料を化合物と接触させる工程；及び試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用が、化合物と接触していない試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用に比べて低下しているかどうかを判定する工程を含み、化合物と接触させた試料中のＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用のそのような低下が、その化合物を、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒとの相互作用を阻害し、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することができるものとして特定する、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することができる試験化合物をスクリーニングする方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７ＲＣに関する同様のスクリーニング方法を提供する。
【００１４】
他の実施形態では、本発明は、被験者においてＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患を診断する方法を提供し、被験者からの試料においてＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物の試験量を検出する工程；及び上記試験量を、対照試料中の同じＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物の正常量と比較する工程を含む。これにより、正常量を有意に上回る試験量が、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患の診断における陽性指標を与える。他の実施形態では、疾患は、自己免疫疾患、呼吸器疾患及び炎症性腸疾患から成る群より選択される。他の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物は、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物、ＩＬ−１７Ｒ遺伝子産物又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物である。
【００１５】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の治療有効量を被験者に投与することを含む、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患の危険性がある又は上記疾患と診断された被験者を治療する方法を提供する。他の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチド、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７Ｒ抗体、阻害性抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体及び拮抗性低分子から成る群より選択される。一部の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチド又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチドである。一部のさらなる実施形態では、阻害性ポリヌクレオチドは、配列番号１７〜３２に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、ＩＬ−１７Ｒ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む、又はＩＬ−１７ＲＣ又はそのＩＬ−１７Ｆ結合フラグメントを含む可溶性ポリペプチドである。一部のさらなる実施形態では、可溶性ポリペプチドは、配列番号３４又は配列番号３５に示すアミノ酸配列を有する。一部の他の実施形態では、（１）ＩＬ−１７Ｆ阻害性ポリヌクレオチドは、配列番号１に示すヌクレオチド配列、又は配列番号１に示すヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、又は配列番号１のフラグメント、又はそれらのＲＮＡ等価物を含み、かつ、細胞における阻害性ポリヌクレオチドの発現はＩＬ−１７Ｆの発現低下を生じさせる；（２）ＩＬ−１７Ｒ阻害性ポリヌクレオチドは、配列番号５に示すヌクレオチド配列、又は配列番号５に示すヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、又は配列番号５のフラグメント、又はそれらのＲＮＡ等価物を含み、かつ、細胞における阻害性ポリヌクレオチドの発現はＩＬ−１７Ｒの発現低下を生じさせる；及び（３）ＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチドは、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列、又は配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、又は配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３及び配列番号１５に示すヌクレオチド配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列のフラグメント、又はそれらのＲＮＡ等価物を含み、かつ、細胞における阻害性ポリヌクレオチドの発現はＩＬ−１７ＲＣの発現低下を生じさせる。一部の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患は炎症性疾患である。一部のさらなる実施形態では、炎症性疾患は、自己免疫疾患、呼吸器疾患及び炎症性腸疾患から成る群より選択される。一部のさらなる実施形態では、炎症性疾患が自己免疫疾患であり、自己免疫疾患は、関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス及び多発性硬化症から成る群より選択される。一部のさらなる実施形態では、炎症性疾患は呼吸器疾患であり、呼吸器疾患は嚢胞性線維症であるか、又は炎症性疾患は炎症性腸疾患である。
【００１６】
他の実施形態では、本発明は、少なくとも１つの付加的な治療薬の治療有効量を被験者に投与することをさらに含む。他の実施形態では、少なくとも１つの付加的な治療薬は、サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝阻害物質、酵素阻害剤、細胞傷害性物質及び細胞増殖抑制物質から成る群より選択される。他の実施形態では、少なくとも１つの付加的な治療薬は、ＴＮＦ拮抗物質、抗ＴＮＦ薬、ＩＬ−１２拮抗物質、ＩＬ−１５拮抗物質、ＩＬ−１７拮抗物質、ＩＬ−１８拮抗物質、ＩＬ−２２拮抗物質、Ｔ細胞除去剤、Ｂ細胞除去剤、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、ＣＣＩ−７７９、エタネルセプト、インフリキシマブ、リツキシマブ、アダリムマブ、プレドニゾロン、アザチオプリン、金、スルファサラジン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ミノサイクリン、アナキンラ、アバタセプト、メトトレキサート、レフルノミド、ラパマイシン、ラパマイシン類似体、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、ｐ３８阻害剤、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳ及び／又はＣＤ２８の拮抗物質、及びＣＴＬＡ４の作動物質から成る群より選択される。
【００１７】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を細胞集団又は被験者に投与することを含む、細胞集団又は被験者においてＮＦ−κＢ応答性プロモーターを活性化するＮＦ−κＢの能力を阻害する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を細胞集団又は被験者に投与することを含む、細胞集団又は被験者においてＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害する方法を提供する。他の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆ生物活性は、好中球分化、好中球動員及びサイトカイン誘導から成る群より選択される。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質及び製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、及び自己抗原、アレルゲン、同種抗原及びそれらのフラグメントから成る群より選択される抗原を含むワクチンアジュバントを提供する。他の実施形態では、本発明は、配列番号６、７、９、１１、１３及び１５に示すものを含む、本発明に関連するアミノ酸配列に特異的に結合することができる単離抗体を提供する；一部の実施形態では、抗体はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗する。
【００１９】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆタンパク質に特異的に結合することができる単離抗体を提供し、かつ、ＩＬ−１７Ｆタンパク質がヒト又は霊長動物に由来する、さらなる実施形態；ＩＬ−１７Ｆタンパク質が多量体である、さらなる実施形態；ＩＬ−１７Ｆタンパク質がＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ｆへテロ二量体である、さらなる実施形態；ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、さらなる実施形態；及び抗体がＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害する、さらなる実施形態を提供する。
【００２０】
他の実施形態では、本発明は、上記で特定した方法を提供し、ここでＩＬ−１７Ｆシグナル伝達及び／又はＩＬ−１７Ｆ生物活性が、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方によって媒介され、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである場合を含む。
【００２１】
他の実施形態では、本発明は、上記で特定した医薬組成物及び／又は上記で特定したワクチンアジュバントを提供し、ここでＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方に拮抗する。
【００２２】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することを含む、ＩＬ−２１シグナル伝達に関連する少なくとも１つの活性を阻害する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に拮抗することを含む、ＩＬ−２３シグナル伝達に関連する少なくとも１つの活性を阻害する方法を提供する。一部のさらなる実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達は、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである場合を含む、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方によって媒介される。
【００２３】
他の実施形態では、本発明は、培地中でＴ細胞を活性化すること；及び培地からＩＬ−１７Ａタンパク質を免疫沈降させること、を含む、天然ＩＬ−１７Ａタンパク質を精製する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、培地中でＴ細胞を活性化すること；及び培地からＩＬ−１７Ｆタンパク質を免疫沈降させること、を含む、天然ＩＬ−１７Ｆタンパク質を精製する方法を提供する。一部のさらなる実施形態では、ＩＬ−１７Ａタンパク質がＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ａホモ二量体とＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の両方であり、及び／又はＩＬ−１７Ｆタンパク質がＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、又はＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方であり、及びＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆである、そのような方法が提供される。他の実施形態では、培地はＩＬ−２１及び／又はＩＬ−２３を含む。
【００２４】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆタンパク質がＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体であり、ＩＬ−１７Ｆタンパク質が天然ソースから単離され、天然ソースが少なくとも１個のＴ細胞である、単離ＩＬ−１７Ｆタンパク質を提供する。他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ａタンパク質がＩＬ−１７Ａホモ二量体又はＩＬ−１７Ａヘテロ二量体であり、ＩＬ−１７Ａタンパク質が天然ソースから単離され、天然ソースが少なくとも１個のＴ細胞である、単離ＩＬ−１７Ａタンパク質を提供する。
【００２５】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆ拮抗物質を投与することを含む、ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する少なくとも１つの活性を阻害する方法を提供する。
【００２６】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体を実質的に含まないＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を単離する方法を提供し、（ａ）培地で培養した宿主細胞において、第一アフィニティータグに融合したＩＬ−１７Ａタンパク質又はそのフラグメントを含むＩＬ−１７Ａ融合タンパク質及び第二アフィニティータグに融合したＩＬ−１７Ｆタンパク質又はそのフラグメントを含むＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質を発現させること；（ｂ）宿主細胞にＩＬ−１７Ａ融合タンパク質及びＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質を培地中に分泌させること；（ｃ）ＩＬ−１７Ａ融合タンパク質が第一アフィニティーカラムに結合するように、非還元条件下で培地を第一アフィニティーカラムに加えること；（ｄ）非還元条件下で結合タンパク質を第一アフィニティーカラムから溶出すること；（ｅ）工程（ｄ）から得た溶離液を、ＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質が第二アフィニティーカラムに結合するように、非還元条件下で第二アフィニティーカラムに加えること；及び（ｆ）非還元条件下で結合タンパク質を第二アフィニティーカラムから溶出することを含む。ここで、工程（ｆ）から得た溶離液は、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の形態でＩＬ−１７Ａ融合タンパク質とＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質の両方を含む。他の実施形態では、この方法の変法が提供される。他の実施形態では、本発明は、これらの様々な方法に従って単離されるＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
インターロイキン−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ）は、タンパク質のＩＬ−１７ファミリーに属するサイトカインであり、炎症性サイトカイン及びケモカイン、例えばＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＲＯ−α、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β等の発現を誘導する。ＩＬ−１７Ｆの発現は好中球増加症及び様々な自己免疫疾患と相関する(Bettelli and Kuchroo, supra)。例えばＩＬ−１７Ｆは、関節軟骨によるプロテオグリカン破壊の上昇及びプロテオグリカン合成の低下(Hymowitz, supra)、中枢神経系自己免疫(Langrish, supra)、アレルギー及び喘息応答（Kawaguchi, supra）及び炎症性腸疾患(Gurney, supra)に関連する。それ故、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達は、炎症性疾患、例えば自己免疫疾患（例えば関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症）、呼吸器疾患（例えばＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶反応（固形臓器移植拒絶反応を含む）、及び炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）を含むが、これらに限定されない疾患に関与すると考えられる。
【００２８】
本発明の一部として、本発明者らは、ＩＬ−１７Ｆの投与に対する以下の応答を明らかにすることによって炎症性疾患へのＩＬ−１７Ｆの関与を確認した。例えば腹膜への好中球流入（実施例１．１）、一次軟骨細胞による炎症性サイトカインの分泌上昇と相関する炎症性サイトカインの一次転写因子の活性化（実施例１．２）、肺線維芽細胞による炎症性サイトカインの分泌上昇（実施例１．３）、及び一次ヒト軟骨細胞におけるアグリカナーゼレベルの上昇（実施例７）。本発明者らはまた、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ａの両方が、自己免疫性関節炎（実施例７）、乾癬（実施例９）及び炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（実施例９）に関与し得ると判定した。本発明者らはまた、ＩＬ−１７Ｆについての受容体としてＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣを特定し（実施例２）、それ故ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路の阻害のための新規標的を提供する。本発明者らはまた、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を作製し、各々の抗体の結合特異性、親和性及びＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を阻害する能力、すなわちＩＬ−１７Ｆ生物活性に関して特性決定した（実施例３及び５）。一実施形態では、抗体は、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ認識のために必要と考えられるＩＬ−１７Ｆエピトープを特性決定するのに役立つ。すなわち、６個のマウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体のうち５個がＩＬ−１７ＲへのＩＬ−１７Ｆの結合に干渉することができ、５個のうち２個はＩＬ−１７ＲＣへのＩＬ−１７Ｆの結合にも干渉することができる。本発明者らはまた、ＩＬ−１７Ｆ生物活性、例えば炎症性サイトカインについての一次転写因子のＩＬ−１７Ｆを介した活性化、及びその後、一次線維芽細胞様滑膜細胞によるＩＬ−１７Ｆを介したサイトカイン分泌を阻害する（すなわち低下させる、制限する、ブロックする又はさもなければ低減する）、これらの抗体の一部の能力を明らかにした（実施例４）。また、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣを通してのＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を低下させる阻害性ポリヌクレオチドも本明細書で開示する（実施例８）。本発明者らはまた、ＩＬ−２１とＩＬ−１７Ｆの直接の関係、すなわちＩＬ−２１が活性化Ｔ細胞によってＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆの両方の産生を増強する能力も明らかにした。そこで、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達の阻害はまた、ＩＬ−２１のＩＬ−２１Ｒへの結合及びＩＬ−２１Ｒの活性化に関連する少なくとも１つの作用も阻害し得る、例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を阻害する方法は、ＩＬ−１７Ｆ関連疾患及び／又はＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合してＩＬ−２１Ｒを活性化することに関連する疾患を治療する方法において使用し得ると推論される。本発明者らはまた、初めてサイトカインの天然ソースからＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆを単離した。本発明者らはまた、新規ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を明らかにし、精製して（それぞれ、例えばＴ細胞において、及びＨＥＫ−２９３及びＣＯＳ細胞において）、このヘテロ二量体が、例えばＧＲＯ−αレベルの発現を誘導することによって、ＩＬ−１７Ｆシグナルを伝達することを示した（実施例５）。それ故本発明者らは、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路の阻害のための、及び／又は炎症性疾���及び／又はＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合してＩＬ−２１Ｒを活性化することに関連する疾患の治療における、新規標的として上記へテロ二量体を提供した。
【００２９】
そこで、本発明は、インビボでのＩＬ−１７Ｆを介した（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を介する場合を含む）炎症性応答を抑制するために使用し得る、及びその結果としてＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇に関連する疾患、すなわちＩＬ−１７Ｆ関連疾患及び／又はＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合してＩＬ−２１Ｒを活性化することに関連する疾患の診断、予後判定、観測及び／又は治療において使用し得る、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント（例えばＩＬ−１７Ｆ結合フラグメント）及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子）を提供する。新規ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の特定と単離は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患がＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体によって媒介され得ることを示唆する。そこで、本明細書で使用する「ＩＬ−１７Ｆ」という用語は、適切な場合、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を指す。例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路は、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体のいずれか又は両方を含み得るシグナル伝達経路を包含する。
【００３０】
従って、本願は、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチド及びポリペプチドを含む、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連するポリヌクレオチド及びポリペプチドを提供する。本発明はまた、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含むがこれらに限定されない、ＩＬ−１７Ｆ、特にヒトＩＬ−１７Ｆに結合する抗体、すなわちインタクトな抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態では、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、少なくとも１つのＩＬ−１７Ｆ関連（例えばＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体）活性を阻害する又は活性に拮抗する。例えば抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、ＩＬ−１７Ｆに結合して、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｆ受容体複合体、例えばＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣを含む複合体との間の相互作用に干渉する（例えばブロックする）ことができる。そこで、本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ｆ生物活性、例えばＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｆ受容体複合体又はそのサブユニットの間の結合を検出し、場合により阻害する（例えば低下させる、制限する、ブロックする又はさもなければ低減する）ために使用し得る。それ故、本発明の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患及び／又はＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合してＩＬ−２１Ｒを活性化することに関連する疾患を診断する、予後判定する、観測する及び／又は治療又は予防するために使用し得る。
（ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣのポリヌクレオチド及びポリペプチド）
【００３１】
本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達経路のさらなる特性決定、すなわちＩＬ−１７Ｆ受容体としてＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣの決定、阻害性分子、例えば抗体、受容体融合タンパク質及びｓｉＲＮＡを用いた、ＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣへの結合に干渉する作用の解明、及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の精製を提供する。本発明は、阻害性ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチド及びポリペプチドを含む、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチド及びポリペプチドに関する。
【００３２】
ＩＬ−１７Ｆヌクレオチド及びアミノ酸配列は当分野において公知であり、提供される。ヒトＩＬ−１７Ｆのヌクレオチド配列を配列番号１に示す。そのヌクレオチド配列によってコードされる完全長ＩＬ−１７Ｆタンパク質のアミノ酸配列を配列番号２に示す。成熟ＩＬ−１７Ｆのアミノ酸配列は、配列番号２のおよそアミノ酸３１から始まるタンパク質に対応する（例えばその全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願第１０／１０２，０８０号参照）。
【００３３】
ＩＬ−１７Ａヌクレオチド及びアミノ酸配列は当分野において公知であり、提供される。ポリ（Ａ）尾部を含む、ヒトＩＬ−１７Ａのヌクレオチド配列を配列番号３に示す。そのヌクレオチド配列に対応する完全長ＩＬ−１７Ａタンパク質のアミノ酸配列を配列番号４に示す。
【００３４】
ＩＬ−１７Ｒヌクレオチド及びアミノ酸配列は当分野において公知であり、提供される。ポリ（Ａ）尾部を含む、ヒトＩＬ−１７Ｒのヌクレオチド配列を配列番号５に示す。そのヌクレオチド配列に対応する完全長ＩＬ−１７Ｒタンパク質のアミノ酸配列を配列番号６に示す。
【００３５】
ＩＬ−１７ＲＣヌクレオチド及びアミノ酸配列は当分野において公知であり、提供される。ポリ（Ａ）尾部を含む、いくつかのヒトＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を配列番号７、９、１１、１３及び１５に示す。それらのヌクレオチド配列に対応するいくつかの完全長ヒトＩＬ−１７ＲＣタンパク質のアミノ酸配列を配列番号８、１０、１２、１４及び１６に示す。
【００３６】
本発明に関連する核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡを含んでもよく、完全に又は部分的に合成することができる。本明細書で述べるヌクレオチド配列への言及は、文脈が異なる意味を求めない限り、特定された配列を有するＤＮＡ分子（又はその相補物）を包含し、ＵがＴを置換している特定配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
【００３７】
本発明に関連する単離ポリヌクレオチドは、開示するポリヌクレオチドをコードする配列と同一又は類似の配列を有する核酸を特定し、単離するためのハイブリダイゼーションプローブ及びプライマーとして使用し得る。核酸を特定し、単離するためのハイブリダイゼーション法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、サザンハイブリダイゼーション、インサイチューハイブリダイゼーション及びノーザンハイブリダイゼーションを含み、当業者には周知である。
【００３８】
ハイブリダイゼーション反応は種々のストリンジェンシー条件下で実施し得る。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーは、任意の２個の核酸分子がお互いにハイブリダイズすることの難易度を含む。好ましくは、各々のハイブリダイズするポリヌクレオチドは低いストリンジェンシー条件下でその対応するポリヌクレオチドにハイブリダイズし、より好ましくはストリンジェントな条件下で、最も好ましくは高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。ストリンジェンシー条件の例を以下の表１に示す：高度にストリンジェントな条件は、少なくとも、例えば条件Ａ−Ｆと同程度に厳密な条件であり；ストリンジェントな条件は、少なくとも、例えば条件Ｇ−Ｌと同程度に厳密な条件であり；及び低いストリンジェンシー条件は、少なくとも、例えば条件Ｍ−Ｒと同程度に厳密な条件である。
【表１】
2008532936.tif 000003
【００３９】
１：ハイブリッド長は、ハイブリダイズするポリヌクレオチドのハイブリダイズ領域に関して予想されるものである。ポリヌクレオチドが未知の配列の標的ポリヌクレオチドにハイブリダイズするとき、ハイブリッド長はハイブリダイズするポリヌクレオチドの長さと仮定される。公知の配列のポリヌクレオチドがハイブリダイズするとき、ハイブリッド長は、ポリヌクレオチドの配列を整列し、最適配列相補性の領域（１又はそれ以上）を特定することによって決定できる。
２：ハイブリダイゼーション及び洗浄緩衝液においてＳＳＰＥ（１×ＳＳＰＥは、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４及び１．２５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４である）をＳＳＣ（１×ＳＳＣは、０．１５Ｍ ＮａＣｌ及び１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）の代わりに使用することができる；洗浄は、ハイブリダイゼーションが完了した後１５分間実施する。
ＴＢ＊−ＴＲ＊：５０塩基対未満の長さであると予想されるハイブリッドについてのハイブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融点（Ｔｍ）より低い５−１０℃にすべきである［Ｔｍは以下の方程式に従って決定される］。１８塩基対未満の長さのハイブリッドに関しては、Ｔｍ（℃）＝２（Ａ＋Ｔ塩基の数）＋４（Ｇ＋Ｃ塩基の数）。１８−４９塩基対の長さのハイブリッドに関しては、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０Ｎａ＋）＋０．４１（Ｇ＋Ｃ％）−（６００／Ｎ）［Ｎはハイブリッド中の塩基の数であり、Ｎａ＋はハイブリダイゼーション緩衝液中のナトリウムイオンの濃度である（１×ＳＳＣについてのＮａ＋＝０．１６５Ｍ）］。
ポリヌクレオチドハイブリダイゼーションについてのストリンジェンシー条件のさらなる例は、参照により本明細書に組み込まれる、Sambrook, J., E.F. Fritsch, and T. Maniatis, 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, chapters 9 and 11, and Current Protocols in Molecular Biology, 1995, F.M. Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., sections 2.10 and 6.3-6.4の中で提供される。
【００４０】
本発明に関連する単離ポリヌクレオチドは、開示するポリヌクレオチドの対立遺伝子変異型をコードする配列を有するＤＮＡを特定し、単離するためのハイブリダイゼーションプローブ及びプライマーとしても使用し得る。対立遺伝子変異型は、開示するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと同一であるか又は有意の類似性を有するポリペプチドをコードする、開示するポリヌクレオチドの天然に生じる選択的形態である。好ましくは、対立遺伝子変異型は、開示するポリヌクレオチドと少なくとも９０％の配列同一性（より好ましくは少なくとも９５％の同一性；最も好ましくは少なくとも９９％の同一性）を有する。あるいは、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で開示ポリヌクレオチドにハイブリダイズするとき、有意の類似性が存在する。
【００４１】
本発明に関連する単離ポリヌクレオチドは、開示するポリヌクレオチドに相同なポリペプチドをコードする配列を有するＤＮＡを特定し、単離するためのハイブリダイゼーションプローブ及びプライマーとして使用し得る。これらの相同体は、開示ポリペプチド及びポリヌクレオチドの種とは異なる種から単離されるポリヌクレオチド及びポリペプチドであるか、又は同じ種内であるが、開示ポリヌクレオチド及びポリペプチドと有意の配列類似性を有するポリヌクレオチド及びポリペプチドである。好ましくは、ポリヌクレオチド相同体は、開示するポリヌクレオチドと少なくとも５０％の配列同一性（より好ましくは少なくとも７５％の同一性；最も好ましくは少なくとも９０％の同一性）を有し、一方ポリペプチド相同体は、開示するポリペプチドと少なくとも３０％の配列同一性（より好ましくは少なくとも４５％の同一性；最も好ましくは少なくとも６０％の同一性）を有する。好ましくは、開示ポリヌクレオチド及びポリペプチドの相同体は、哺乳動物種から単離されるものである。
【００４２】
２個の配列の間の「相同性」又は「配列同一性」（これらの用語は本明細書では交換可能に使用される）の算定は以下のように実施される。配列を最適比較のために整列し（例えば最適整列のために第一と第二アミノ酸又は核酸配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、また比較目的のために非相同配列は無視することができる）。好ましい実施形態では、比較目的のために整列される標準配列の長さは、標準配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらに一層好ましくは少なくとも６０％、さらに一層好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第一配列内の位置が第二配列内の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められているとき、分子はその位置において同一である（本明細書で使用する、アミノ酸又は核酸の「同一性」は、アミノ酸又は核酸の「相同性」に等しい）。２個の配列の間の同一性パーセントは、２個の配列の最適整列のために導入する必要がある、ギャップの数及び各々のギャップの長さを考慮に入れて、２個の配列によって共有される同一位置の数の関数である。
【００４３】
配列の比較及び２個の配列の間の配列同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて実施し得る。好ましい実施形態では、２個のアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、及びギャップ加重１６、１４、１２、１０、８、６又は４とギャップ長加重１、２、３、４、５又は６を使用して、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）内のＧＡＰプログラムに組み込まれた、ＮｅｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈ ((1970) J. Mol. Biol. 48:444-53)のアルゴリズムを用いて決定される。さらにもう１つの好ましい実施形態では、２個のヌクレオチド配列の間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス及びギャップ加重４０、５０、６０、７０又は８０とギャップ長加重１、２、３、４、５又は６を使用して、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）内のＧＡＰプログラムを用いて決定される。パラメータの特に好ましいセット（及び実施者が、分子が本発明の配列同一性又は相同性限界内であるかどうかを判定するためにどのようなパラメータを適用すべきかについて確信がない場合に使用すべきセット）は、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２スコアリングマトリックス及びギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４及びフレームシフトギャップペナルティ５である。２個のアミノ酸又はヌクレオチド配列の間の同一性パーセントはまた、ＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれた、ＭｅｙｅｒｓとＭｉｌｌｅｒ((1989) CABIOS 4:11-17)のアルゴリズムを用いて決定することもできる。
【００４４】
本発明に関連する単離ポリヌクレオチドはまた、本発明に関連するポリペプチドを発現する細胞及び組織及びそれらが発現される条件を特定するためのハイブリダイゼーションプローブ及びプライマーとしても使用し得る。
【００４５】
加えて、本発明に関連するポリペプチドの機能は、細胞又は生物において本発明に関連するポリヌクレオチドに対応する遺伝子の発現を変化させる（すなわち増強する、低減する又は調節する）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを使用することによって直接検討し得る。これらの「対応する遺伝子」は、本発明に関連するポリヌクレオチドが由来するｍＲＮＡを生産するために転写される、本発明に関連するゲノムＤＮＡ配列である。
【００４６】
本発明に関連する遺伝子の変化した発現は、様々な阻害性ポリヌクレオチド、例えばアンチセンスポリヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及び本発明に関連する遺伝子から転写されるｍＲＮＡに結合する及び／又はｍＲＮＡを切断するリボザイムの使用を通して細胞又は生物において達成され得る（例えばGalderisi et al. (1999) J. Cell Physiol. 181:251-57; Sioud (2001) Curr. Mol. Med. 1:575-88参照)。例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣに対する阻害性ポリヌクレオチドは、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質として有用であると考えられ、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患を予防する又は治療する上でも有用であり得る。阻害性ポリヌクレオチドはまた、アプタマー、すなわちタンパク質に結合して、タンパク質活性、例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣの活性を調節するポリヌクレオチドから成り得る。アプタマーは文献において広く記述されており、例えば Nimjee et al. (2005) Annu. Rev. Med. 56:555-83 and Patel (1997) Curr. Opin. Chem. Biol. 1:32-46参照。
【００４７】
本発明に関連するアンチセンスポリヌクレオチド又はリボザイムは、本発明に関連する遺伝子のコード鎖全体に又はその一部だけに相補的であり得る。あるいは、アンチセンスポリヌクレオチド又はリボザイムは、本発明に関連する遺伝子のコード鎖の非コード領域に相補的であり得る。アンチセンスポリヌクレオチド又はリボザイムは、当分野で周知の手順を用いて化学合成及び酵素結合反応を使用して構築できる。化学合成したポリヌクレオチドのヌクレオシド結合は、ヌクレアーゼを介した分解に抵抗するそれらの能力を増強するように並びにそれらの配列特異性を高めるように修飾することができる。そのような結合修飾は、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホロアミデート、ボラノホスフェート、モルホリノ及びペプチド核酸（ＰＮＡ）結合を含むが、これらに限定されない(Galderisi et al., supra; Heasman (2002) Dev. Biol. 243:209-14; Micklefield (2001) Curr. Med. Chem. 8:1157-79)。あるいは、これらの分子は、本発明に関連するポリヌクレオチドをアンチセンス（すなわち逆）方向にサブクローニングした発現ベクターを用いて生物学的に生産することができる。
【００４８】
本発明の阻害性ポリヌクレオチドはまた、高い特異性と親和性で二重鎖ＤＮＡの主溝に結合する三重鎖形成性オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）を含む(Knauert and Glazer (2001) Hum. Mol. Genet. 10:2243-51)。本発明に関連する遺伝子の発現は遺伝子の調節領域（すなわちプロモーター及び／又はエンハンサー配列）に相補的なＴＦＯを標的にし、遺伝子の転写を妨げる三重らせん構造を形成することによって阻害できる。
【００４９】
本発明の一実施形態では、本発明の阻害性ポリヌクレオチドは短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子である。これらのｓｉＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡの配列特異的分解を生じさせる短い（好ましくは１９〜２５ヌクレオチド；最も好ましくは１９又は２１ヌクレオチド）、二本鎖ＲＮＡ分子である。この分解はＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として公知である（例えばBass (2001) Nature 411 :428-29参照）。下等生物において最初に特定されたＲＮＡｉは、哺乳動物細胞に有効に適用されており、最近、Ｆａｓ  ｍＲＮＡを標的するｓｉＲＮＡ分子で処置したマウスにおいて劇症肝炎を予防することが示された(Song et al. (2003) Nature Med. 9:347-51)。加えて、最近、髄腔内経路で送達されたｓｉＲＮＡが、ラットでの２つのモデル（作動物質誘導性疼痛モデル及び神経障害性疼痛モデル）において疼痛応答をブロックすることが報告された(Dorn et al. (2004) Nucleic Acids Res. 32(5):e49)。
【００５０】
本発明のｓｉＲＮＡ分子は、２個の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子（そのうちの１個は標的ｍＲＮＡの一部にマッチする）を一緒にアニーリングすることによって（Fire et al., 米国特許第６，５０６，５５９号）又は必要な二本鎖部分を生成するためにそれ自体で折り返す１個のヘアピンＲＮＡ分子の使用を通して(Yu et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:6047-52) 作製し得る。ｓｉＲＮＡ分子は、化学合成し得るか(Elbashir et al. (2001) Nature 411 :494-98)又は一本鎖ＤＮＡ鋳型を使用したインビトロ転写によって生産し得る(Yu et al., supra)。あるいは、ｓｉＲＮＡ分子は、センス及びアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含む発現ベクターを使用して、一過性に(Yu et al., supra; Sui et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:5515-20)又は安定に(Paddison et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:1443-48)、生物学的に生産することができる。最近、効率的且つ配列特異的な方法での、一次ヒト細胞における標的ｍＲＮＡのレベルの低下が、ｓｉＲＮＡへとさらにプロセシングされるヘアピンＲＮＡを発現するアデノウイルスベクターを使用して明らかにされた(Arts et al. (2003) Genome Res. 13:2325-32)。
【００５１】
本発明に関連するポリヌクレオチドを標的するｓｉＲＮＡ分子は、当分野で周知の判定基準（例えばElbashir et al. (2001) EMBO J. 20:6877-88)に基づいて設計することができる。例えば標的ｍＲＮＡの標的セグメントは、好ましくはＡＡ（最も好ましい）、ＴＡ、ＧＡ又はＣＡで始まるべきであり；ｓｉＲＮＡ分子のＧＣ比は、好ましくは４５〜５５％であるべきであり；ｓｉＲＮＡ分子は好ましくは１つの列に同じヌクレオチド３個を含むべきではなく；ｓｉＲＮＡ分子は、好ましくは1つの列に７個の混合Ｇ／Ｃを含むべきではなく；並びに標的セグメントは、好ましくは標的ｍＲＮＡのＯＲＦ領域内にあるべきであり、好ましくは開始ＡＴＧの少なくとも７５ｂｐ後及び終結コドンの少なくとも７５ｂｐ前にあるべきである。これらの判定基準又は他の公知の判定基準（例えばReynolds et al. (2004) Nature Biotechnol. 22:326-30)に基づき、本発明に関連するｍＲＮＡポリヌクレオチドを標的する本発明のｓｉＲＮＡ分子は当業者によって設計され得る。開示する方法における使用のためのｓｉＲＮＡの好ましい例は、配列番号１７〜３２に示されており、ＩＬ−１７Ｒ（配列番号１７〜２４）及びＩＬ−１７ＲＣ（配列番号２５〜３２）を標的するために有用なｓｉＲＮＡに対応する。
【００５２】
生物における、本発明に関連する遺伝子の変化した発現はまた、それらのゲノム内に本発明に関連するポリヌクレオチドが導入された非ヒトトランスジェニック動物の作製を通して達成され得る。そのようなトランスジェニック動物は、本発明の遺伝子（すなわち導入遺伝子）の多数のコピーを有する動物を含む。本発明に関連するポリペプチドの発現を特定細胞又は特定発生段階に指令するために、組織特異的調節配列を導入遺伝子に作動可能に連結し得る。胚操作と微量注入によってトランスジェニック動物、特にマウス等の動物を作製するための方法は慣例的になりつつあり、当分野において周知である（例えばBockamp et al., Physiol. Genomics 11:115-32 (2002))。
【００５３】
生物における、本発明に関連する遺伝子の変化した発現はまた、本発明に関連するポリヌクレオチドに対応する内在性遺伝子が外来性ポリヌクレオチド配列の挿入を通して破壊された動物（すなわちノックアウト動物）の作製を通して達成され得る。内在性遺伝子のコード領域を破壊し、それによって非機能性タンパク質を生成し得る。あるいは、内在性遺伝子の上流調節領域を異なる調節エレメントで破壊又は置換して、まだ機能性であるタンパク質の変化した発現を生じさせ得る。ノックアウト動物を作製するための方法は相同的組換えを含み、当分野において周知である（例えばWolfer et al., Trends Neurosci. 25:336-40 (2002))。
【００５４】
本発明の単離ポリヌクレオチドはまた、発現調節配列に作動可能に連結し得る及び／又は本発明に関連するポリペプチド（その活性フラグメント及び／又は融合ポリペプチドを含む）の組換え生産のための発現ベクターに連結し得る。組換えタンパク質を発現する一般的方法は当分野において周知である。
【００５５】
発現ベクターは、本明細書で使用するとき、それが連結されているもう１つ別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図されている。ベクターの１つの種類は、付加的なＤＮＡセグメントをその中に連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す、プラスミドである。ベクターのもう１つの種類は、付加的なＤＮＡセグメントをウイルスゲノム内に連結し得る、ウイルスベクターである。ある種のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律複製することができる（例えば細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれることができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指令することができる。そのようなベクターを本明細書では組換え発現ベクター（又は単に、発現ベクター）と称する。一般に、組換えＤＮＡ手法において有用な発現ベクターはしばしばプラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドはベクターの最も一般的に使用される形態であるので、プラスミドとベクターは交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、他の形態の発現ベクター、例えば等しい機能を果たすウイルスベクター（例えば複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルス）を包含することが意図されている。
【００５６】
一実施形態では、本発明に関連するポリヌクレオチドは、組換えＩＬ−１７Ｆ作動物質、例えば少なくとも１つの「ＩＬ−１７Ｆ受容体結合モチーフ」の存在に基づいて特定できるものを生成するために使用される。本明細書で使用する、「ＩＬ−１７Ｆ受容体結合モチーフ」という用語は、ＩＬ−１７Ｆのその必要な受容体への結合のために重要なアミノ酸配列又は残基を含む。ＩＬ−１７Ｆ作動物質の一例は、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体、それらのフラグメント、例えばＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ結合フラグメント、及び／又は低分子（以下で述べるような）を含む。そのような作動物質は、造血の調節において、及びその結果として、骨髄性又はリンパ系細胞欠損症の治療において有用であると考えられる。他の実施形態では、本発明に関連するポリヌクレオチドは、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント（例えばＩＬ−１７Ｆ結合フラグメント）及び／又は融合タンパク質を含む）；ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の生物活性を阻害し得る、阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）を生成するために使用される。
【００５７】
融合ポリペプチド、すなわち第二ポリペプチド部分と結合した第一ポリペプチド部分を生成する方法は、当分野において周知である。例えばＩＬ−１７Ｆポリペプチド又はＩＬ−１７Ｆ受容体ポリペプチド（例えばそのフラグメントを含む、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ）は、第二ポリペプチド部分、例えば免疫グロブリン又はそのフラグメント（例えばそのＦｃ結合フラグメント）に融合され得る。一部の実施形態では、第一ポリペプチド部分は、例えば完全長ＩＬ−１７ＲＣポリペプチドを含む。あるいは、第一ポリペプチドは完全長未満のＩＬ−１７ＲＣポリペプチドを含み得る。加えて、例えばＩＬ−１７ＲＣの可溶性形態は、「リンカー」配列を通して免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され得る。他の融合タンパク質、例えばグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、Ｌｅｘ−Ａ、チオレドキシン（ＴＲＸ）又はマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）との融合タンパク質も使用し得る。
【００５８】
第二ポリペプチド部分は、好ましくは可溶性である。一部の実施形態では、第二ポリペプチド部分は、結合ポリペプチドの半減期（例えば血清半減期）を延長させる。一部の実施形態では、第二ポリペプチド部分は、第二ＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ｒポリペプチドと融合ポリペプチドとの結合を促進する配列を含む。好ましい実施形態では、第二ポリペプチドは、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも１つの領域を含む。免疫グロブリン融合ポリペプチドは当分野において公知であり、例えば、全てが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５１６，９６４号；同第５，２２５，５３８号；同第５，４２８，１３０号；同第５，５１４，５８２号；同第５，７１４，１４７号；及び同第５，４５５，１６５号に述べられている。融合タンパク質は、第一ポリペプチド部分、例えばそのフラグメントを含むＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ｒを、第二部分に連結するリンカー配列を付加的に含み得る。そのようなリンカー配列の使用は当分野において周知である。例えば融合タンパク質は、ペプチドリンカー、例えば約２−２０個、より好ましくは１０個未満のアミノ酸長のペプチドリンカーを含み得る。一実施形態では、ペプチドリンカーは２アミノ酸長であり得る。
【００５９】
他の実施形態では、組換えタンパク質は、そのＮ末端に異種シグナル配列（すなわちＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ核酸によってコードされるポリペプチド内には存在しないポリペプチド配列）を含む。例えばもう１つ別のタンパク質からのシグナル配列が、そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含むＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチドと融合され得る。ある種の宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）では、異種シグナル配列の使用を通して組換えタンパク質の発現及び／又は分泌を高めることができる。融合タンパク質に含まれ得る１つのシグナルペプチドは、メリチンシグナルペプチドＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡ（配列番号３３）である。
【００６０】
本発明の融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ手法によって生産し得る。例えば種々のポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントは、例えば連結のための平滑末端又は付着末端、適切な末端を与えるための制限酵素消化、適宜に付着末端を埋めること、望ましくない結合を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、及び酵素結合を使用することにより、従来の手法に従ってインフレームで共に連結される。他の実施形態では、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成機を含む従来の手法によって合成することができる。あるいは、２個の連続する遺伝子フラグメントの間に相補的突出部を生じさせるアンカープライマーを使用して遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅を実施してもよく、その後相補的突出部をアニーリングし、キメラ遺伝子配列を生成するために再増幅することができる（例えばAusubel et al. (Eds.) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1992参照)。さらに、融合部分（例えば免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする多くの発現ベクターが市販されている。ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣをコードする核酸を、融合部分が免疫グロブリンタンパク質にインフレームで連結されるようにそのような発現ベクターにクローニングし得る。一部の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ融合ポリペプチドは、オリゴマー、例えば二量体又は三量体として存在する。
【００６１】
本発明の組換え発現ベクターは、付加的な配列、例えば宿主細胞においてベクターの複製を調節する配列（例えば複製起点）及び選択マーカー遺伝子を担持し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする。例えば典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に薬剤、例えばＧ４１８、ハイグロマイシン又はメトトレキサートに対する耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅に関するｄｈｆｒ−宿主細胞での使用のため）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）を含む。
【００６２】
プロモーター配列を含む適切な調節配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子及び適宜に他の配列、例えば宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば複製起点）を含む適切なベクターを選択し、構築することができる。ベクターは、適宜にプラスミド又はウイルス、例えばファージ又はファージミドであり得る。さらなる詳細については、例えばMolecular Cloning: a Laboratory Manual: 2nd ed., Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989参照。例えば核酸構築物の作製、突然変異誘発、塩基配列決定、細胞へのＤＮＡの導入及び遺伝子発現における核酸の操作、及びタンパク質の分析のための多くの公知の手法及びプロトコールが、Current Protocols in Molecular Biology, 2nd ed., Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons, 1992の中で詳細に述べられている。
【００６３】
そこで、本発明のさらなる態様は、本明細書で開示する核酸を含む宿主細胞を提供する。さらなる態様は、そのような核酸を宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。導入は、任意の使用可能な手法を使用し得る。真核細胞については、適切な手法は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、電気穿孔法、リポソームを介したトランスフェクション、及びレトロウイルス又は他のウイルス、例えばワクシニア、又は昆虫細胞に関してはバキュロウイルスを使用する形質導入を含み得る。細菌細胞については、適切な手法は、塩化カルシウム形質転換、電気穿孔法及びバクテリオファージを用いるトランスフェクションを含み得る。導入に続いて、例えば遺伝子の発現のための条件下で宿主細胞を培養することにより、核酸からの発現を生じさせ得る又は発現を可能にし得る。
【００６４】
多くの細胞系が、本発明に関連するポリペプチドの組換え発現のための適切な宿主細胞として働き得る。哺乳動物宿主細胞系は、例えばＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、Ａ４３１細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｌ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｕ９３７細胞、ＨａＫ細胞、ジャーカット細胞、並びに一次組織及び一次外植片のインビトロ培養に由来する細胞系を含む。
【００６５】
あるいは、下等真核生物、例えば酵母又は原核生物において本発明に関連するポリペプチドを組換え生産することが可能であり得る。潜在的に適切な酵母菌株は、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、クルイベロミセス（Kluyveromyces）菌株及びカンジダ（Candida）菌株を含む。潜在的に適切な細菌株は、大腸菌（Escherichia coli）、枯草菌（Bacillus subtilis）及びネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）を含む。本発明に関連するポリペプチドを酵母又は細菌において作製する場合、機能性を得るためにそれらを、例えば適切な部位のリン酸化又はグリコシル化によって、修飾することが必要であり得る。そのような共有結合は、周知の化学的又は酵素的方法を用いて達成され得る。
【００６６】
細菌における発現は、組換えタンパク質を組み込んだ封入体の形成を生じさせ得る。それ故、活性な又はより活性な物質を生産するために組換えタンパク質のリフォールディングが必要であり得る。細菌封入体から正しく折りたたまれた異種タンパク質を得るためのいくつかの方法が当分野において公知である。これらの方法は一般に、封入体からタンパク質を可溶化すること、次にカオトロピック試薬を用いてタンパク質を完全に変性することを含む。システイン残基がタンパク質の一次アミノ酸配列内に存在するときは、しばしばジスルフィド結合の正しい形成を可能にする環境（酸化還元系）でリフォールディングを実施することが必要である。リフォールディングの一般的な方法は、Kohno (1990) Meth. Enzymol. 185:187-95に開示されている。欧州特許第ＥＰ０４３３２２５号及び米国特許第５，３９９，６７７号は他の適切な方法を述べている。
【００６７】
本発明に関連するポリペプチドはまた、１又はそれ以上の昆虫発現ベクター、例えばバキュロウイルスベクターにおいて本発明の単離ポリヌクレオチドを適切な制御配列に作動可能に連結すること、及び昆虫細胞発現系を使用することによって組換え生産し得る。バキュロウイルス／Ｓｆ９発現系のための材料及び方法は、キット形態で市販されている（例えばＭＡＸＢＡＣ（登録商標）キット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）。
【００６８】
適切な宿主細胞における組換え発現に続いて、本発明の組換えポリペプチドは、その後、公知の精製方法、例えば免疫沈降法、ゲルろ過及びイオン交換クロマトグラフィーを用いて培地又は細胞抽出物から精製し得る。例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、例えばＩＬ−１７Ｒタンパク質及び／又はＩＬ−１７ＲＣタンパク質（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）の可溶性形態；又はＩＬ−１７Ｆ作動物質、例えば可溶性ＩＬ−１７Ｆ（ホモ二量体又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体形態）は、馴化培地から精製し得る。例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の膜結合形態は、発現細胞から全膜分画を調製し、非イオン性洗浄剤、例えばＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で膜を抽出することによって精製し得る。本発明に関連するポリペプチドは、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡＭＩＣＯＮ（登録商標）又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＰＥＬＬＩＣＯＮ（登録商標）限外ろ過ユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を用いて濃縮し得る。濃縮工程後、濃縮物を精製マトリックス、例えばゲルろ過培地にアプライすることができる。あるいは、陰イオン交換樹脂、例えばペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックス又は基質を用いることができる。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース又はタンパク質精製において一般的に使用される他の種類であり得る。あるいは、陽イオン交換工程が使用できる。適切な陽イオン交換体は、スルホプロピル又はカルボキシメチル基を含む様々な不溶性マトリックスを含む。スルホプロピル基が好ましい（例えばＳ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）カラム、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。培養上清からの組換えタンパク質の精製はまた、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）（Ｔｏｙｏ  Ｓｏｄａ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）又はＣｉｂａｃｒｏｍ  ｂｌｕｅ  ３ＧＡ  ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）等のアフィニティー樹脂での；又はフェニルエーテル、ブチルエーテル又はプロピルエーテル等の樹脂を用いる疎水性相互作用クロマトグラフィーによる；又は免疫アフィニティークロマトグラフィーによる、１又はそれ以上のカラム工程を含み得る。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ培地、例えばペンダントメチル基又は他の脂肪族基を有するシリカゲルを用いる１又はそれ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程が、組換えタンパク質をさらに精製するために使用できる。組換えタンパク質に対する抗体を含むアフィニティーカラム（例えば本明細書での方法を用いて記述されているもの）も、公知の方法に従った精製において使用し得る。様々な組合せでの又は他の公知の方法と組み合わせた、上記精製工程の一部又は全部は、実質的に精製された単離組換えタンパク質を提供するためにも使用し得る。好ましくは、単離組換えタンパク質は、実質的に他の哺乳動物タンパク質を含まないように精製される。加えて、これら���精製方法はまた、天然ソースを含む他のソースから本発明のポリペプチドを精製するためにも使用し得る。例えば、トランスジェニック動物の生成物として、例えばトランスジェニックウシ、ヤギ、ブタ又はヒツジの乳の成分として発現される、本発明に関連するポリペプチド、例えばＩＬ−１７Ｆ作動物質（例えば可溶性ＩＬ−１７Ｆ）又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばそのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む、可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又は可溶性ＩＬ−１７ＲＣタンパク質）は、上述したように精製し得る。
【００６９】
あるいは、ポリペプチドはまた、精製を容易にする形態で組換え発現され得る。例えばポリペプチドは、タンパク質、例えばマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）又はチオレドキシン（ＴＲＸ）との融合物として発現され得る。そのような融合タンパク質の発現及び精製のためのキットは、それぞれＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ（Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ），Ｐｈａｒｍａｃｉａ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから市販されている。組換えタンパク質はまた、小さなエピトープで標識し、その後エピトープに対する特異的抗体を使用して特定又は精製することができる。好ましいエピトープは、Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ（Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）から市販されている、ＦＬＡＧエピトープである。
【００７０】
あるいは、組換えＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ融合タンパク質は、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の精製を可能にするために異なるエピトープで標識し得る。ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ上の異なる標識の存在は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体の両方を実質的に含まないＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の単離を可能にする。例えばＩＬ−１７ＡをＦＬＡＧ又はｍｙｃエピトープ等のエピトープで標識してもよく、一方、同時にＩＬ−１７ＦをＨｉｓ又はＧＳＴエピトープ等のエピトープで標識し、両方のタンパク質を細胞内で同時に発現させる。組換え宿主細胞又は宿主細胞が培養される培地からの抽出物を得、非還元条件下で二段階アフィニティークロマトグラフィー精製に供する。第一アフィニティーカラムは、２個の異なる標識の一方、例えばＩＬ−１７Ａ（又はＩＬ−１７Ａのフラグメント）に融合したＦＬＡＧエピトープに結合し、それ故第一カラムからの洗浄液は（主として）ＩＬ−１７Ｆホモ二量体を含み、第一カラムからの溶離液はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体とＩＬ−１７Ａホモ二量体の両方を含む。次に第一カラムからの溶離液を、２個の異なる標識の他方、例えばＩＬ−１７Ｆに融合したＨｉｓ標識に特異的に結合する第二アフィニティーカラムに加える。それ故、第二カラムからの洗浄液はＩＬ−１７Ａホモ二量体を含み、第二カラムからの溶離液は、主として又は独占的にＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む（すなわちＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体の両方を実質的に含まない）。組換え宿主細胞又は宿主細胞培地からの抽出物を、タンパク質−タンパク質相互作用が妨げられないように非還元条件下で得るか、又は還元条件下で得て、次にその中に含まれるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ単量体の正しいリフォールディングと相互作用を可能にするように処理することができる。当業者は、宿主細胞はＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ａ融合タンパク質の両方を発現する必要がないこと；むしろ、単一トランスフェクタント、例えばＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質のいずれかを発現する宿主細胞からの細胞又は培地抽出物を得て、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ単量体が二量体化することを可能にする条件下で併合できることを容易に認識する。
【００７１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を含む、本発明に関連するポリペプチドはまた、公知の慣例的化学合成によっても生産し得る。そのようなポリペプチドを化学的に合成する方法は当業者に周知である。そのような化学合成ポリペプチドは、天然の精製ポリペプチドと共通の生物学的性質を有し得、それ故天然ポリペプチドの生物学的に活性な又は免疫学的な代用物として使用し得る。
【００７２】
本発明者らはまた、ＩＬ−１７Ａの天然形態を含む、本発明のポリペプチドの「天然」、すなわち非組換え形態を単離することができた（例えば実施例５参照）。それ故、本発明のポリペプチドは、天然ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体等を包含する。
【００７３】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を含む、本発明に関連するポリペプチドはまた、開示するポリペプチドとは構造的に異なる（例えばわずかに変化した配列を有する）が、開示ポリペプチドと実質的に同じ生化学的性質を有する（例えば機能的に必須でないアミノ酸残基においてのみ変化している）分子を包含する。そのような分子は、天然に生じる対立遺伝子変異体及び変化、置換、交換、挿入又は欠失を含む意図的に工作された変異体を含む。そのような変化、置換、交換、挿入又は欠失のための手法は当業者に周知である。一部の実施形態では、ポリペプチド部分は、タンパク質分解に対してより抵抗性の（非突然変異配列に比べて）配列を生じさせる、天然に生じる配列（野生型）内の突然変異を有する変異型ポリペプチドとして提供される。
【００７４】
ＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７ＲＣポリペプチド、そのフラグメント及び／又は融合ポリペプチド、その組換え形態及び天然形態、及び／又は天然ＩＬ−１７Ａは、ＩＬ−１７Ｆに結合する及び／又はＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害することができる物質（例えば他のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、例えば抗ＩＬ−１７Ｆ抗体）をスクリーニングするために使用し得る。固定化されているか又は固定化されていない、所望の結合タンパク質を利用する結合アッセイは当分野において周知であり、本発明のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、例えばＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣを含む、本発明に関連するポリペプチドに関してこの目的のために使用し得る。精製細胞ベースの又はタンパク質ベースの（無細胞）スクリーニングアッセイは、そのような物質を特定するために使用し得る。例えばＩＬ−１７Ｆタンパク質を精製形態で担体上に固定化し、精製ＩＬ−１７Ｆへの潜在的リガンドの結合を測定し得る。
（抗体）
【００７５】
他の実施形態では、本発明は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を、ＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）、好ましくは哺乳動物（例えばヒト）ＩＬ−１７Ｆ、又はＩＬ−１７Ｆについての受容体、例えばＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣに特異的に結合する抗体として、すなわちインタクトな抗体及びその抗原結合フラグメントとして提供する。一実施形態では、抗体は阻害性抗体であり、すなわちそれらは、少なくとも１つのＩＬ−１７Ｆ生物活性（例えばＩＬ−１７Ｆとその受容体の結合、ＩＬ−１７Ｆを介したシグナル伝達成分（例えばＮＦ−κＢ）の活性化、ＩＬ−１７Ｆを介したサイトカイン産生の誘導、ＩＬ−１７Ｆを介したアグリカナーゼの上昇等）を阻害し、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患を診断する、予後判定する、観測する及び／又は治療する上で有用であり得る。ＩＬ−２１によるＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ産生の上方調節（実施例５参照）は、ＩＬ−２１がＩＬ−２１Ｒに結合してＩＬ−２１Ｒを活性化すること（例えばＩＬ−２１シグナル伝達）に関連するプロ炎症作用が、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体によって媒介されることを示唆する。その結果として、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を低減する本発明の抗体はまた、ＩＬ−２１シグナル伝達に関連する少なくとも１つの活性（例えばサイトカイン産生の調節、炎症性／自己免疫疾患（例えば炎症性腸疾患又は障害（ＩＢＤ）、慢性関節リウマチ、移植組織／移植片拒絶反応及び乾癬）における炎症等；米国特許出願第６０／５９９，０８６号及び同第６０／６３９，１７６号参照）に対する阻害性抗体であり得、ＩＬ−２１シグナル伝達に関連する疾患を診断する、予後判定する、観測する及び／又は治療する上で有用であり得る。
【００７６】
加えて、本発明は、ＩＬ−１７Ｆに特異的に結合するが、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を阻害しない抗ＩＬ−１７Ｆ抗体（すなわち検出抗体）を提供する；そのような抗体は、例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患を診断する、予後判定する及び／又は観測するためのキットの一部として、ＩＬ−１７Ｆタンパク質（例えばホモ二量体及び／又はヘテロ二量体として）の存在を検出するために使用し得る。一実施形態では、抗体はＩＬ−１７Ｆを対象とする。他の実施形態では、抗体はモノクローナル又は単一特異性抗体である。抗体はまた、ヒトＩＬ−１７Ｆに対するヒト、ヒト化、キメラ又はインビトロ生成抗体であり得る。
【００７７】
当業者は、本明細書で使用する、「抗体」という用語が、少なくとも１、好ましくは２個の重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）及び少なくとも１、好ましくは２個の軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）を含むタンパク質を指すことを認識する。ＶＨ及びＶＬ領域は、より保存された、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と称される領域が組み入れられた、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と称される超可変領域へとさらに細分することができる。ＦＲ及びＣＤＲの範囲は正確に定義されている（参照により本明細書に組み込まれる、Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; and Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917参照)。各々のＶＨ及びＶＬは、以下の順でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置された、３個のＣＤＲと４個のＦＲから成る：ＦＲｌ、ＣＤＲｌ、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００７８】
抗体は、それによってそれぞれ重及び軽免疫グロブリン鎖が形成される、重及び軽鎖定常領域をさらに含み得る。一実施形態では、抗体は、重免疫グロブリン鎖と軽免疫グロブリン鎖が、例えばジスルフィド結合によって、相互に連結されている、２本の重免疫グロブリン鎖と２本の軽免疫グロブリン鎖の四量体である。重鎖定常領域は３個のドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から成る。軽鎖定常領域は１個のドメイン、ＣＬから成る。重及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、典型的には宿主組織又は因子、例えば免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）への抗体の結合を媒介する。
【００７９】
免疫グロブリンは、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる１又はそれ以上のポリペプチドから成るタンパク質を指す。認識されるヒト免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε及びμ定常領域遺伝子、並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄ又は２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端の可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）及びＣＯＯＨ末端のκ又はλ定常領域遺伝子によってコードされる。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄ又は４４６アミノ酸）は、同様に可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）及びその他の上記定常領域遺伝子の１個、例えばγ（約３３０アミノ酸をコードする）によってコードされる。免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子は、抗体クラス、すなわちアイソタイプ（例えばＩｇＭ又はＩｇＧ１）をコードする。抗体の抗原結合フラグメント（又は単に「抗体部分」又は「フラグメント」）は、本明細書で使用するとき、抗原（例えばＣＤ３）に特異的に結合する能力を保持する、完全長抗体の１又はそれ以上のフラグメントを指す。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから成る一価フラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結された２個のＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインから成るＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の一本の腕のＶＬ及びＶＨドメインから成るＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインから成るｄＡｂフラグメント；及び（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むが、これらに限定されない。さらに、Ｆｖフラグメントの２個のドメイン、ＶＬとＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を用いて、それらをＶＬとＶＨ領域が一価分子を形成するように対合する１本のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーによって連結され得る（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）。そのような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることが意図されている。これらの抗体フラグメントは当業者に公知の従来の手法を用いて得られ、フラグメントは、インタクトな抗体と同じようにして有用性に関してスクリーニングされる。
【００８０】
本発明のポリペプチドに対する抗体分子、例えばＩＬ−１７Ｆタンパク質、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣに対する抗体は、当業者に周知の方法によって作製し得る。例えばモノクローナル抗体は、公知の方法に従ったハイブリドーマの生成によって作製し得る。このようにして形成されたハイブリドーマを、次に、本発明のポリペプチドと特異的に結合する抗体を産生する１又はそれ以上のハイブリドーマを特定するために、標準的な方法、例えば酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いてスクリーニングする。例えば本発明のＩＬ−１７Ｆタンパク質はまた、ＩＬ−１７Ｆタンパク質と反応して、ＩＬ−１７Ｆ（例えばＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体）のその受容体、例えばＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣへの結合を阻害し得るポリクローナル及びモノクローナル抗体を得るために動物を免疫するのに使用し得る。同様に、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣタンパク質は、それぞれＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣと特異的に反応して、これらの受容体のＩＬ−１７Ｆタンパク質（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）への結合を特異的に阻害し得るポリクローナル及びモノクローナル抗体を得るために使用し得る、すなわちこれらの抗体は、他のＩＬ−１７Ｆファミリー成員、例えばＩＬ−１７Ａホモ二量体へのこれらの受容体のいずれか又は両方の結合を阻害しない。ペプチド免疫原は、付加的にカルボキシル末端にシステイン残基を含んでもよく、ハプテン、例えばキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合し得る。付加的なペプチド免疫原は、チロシン残基を硫酸化チロシン残基で置換することによって作製し得る。そのようなペプチドを合成するための方法は当分野において周知である。本発明の完全長ポリペプチドを免疫原として使用してもよく、あるいはポリペプチドの抗原性ペプチドフラグメントを使用し得る。本発明のポリペプチドの抗原性ペプチドは、少なくとも７個の連続アミノ酸残基を含み、ペプチドに対して惹起される抗体がポリペプチドと特異的免疫複合体を形成するようにエピトープを含む。好ましくは、抗原性ペプチドは、少なくとも１０個のアミノ酸残基、より好ましくは少なくとも１５個のアミノ酸残基、さらに一層好ましくは少なくとも２０個のアミノ酸残基、最も好ましくは少なくとも３０個のアミノ酸残基を含む。
【００８１】
モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡテクノロジーの当業者に公知の他の方法によって作製し得る。モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを作製する代わりに、組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリー（例えば抗体ファージディスプレイライブラリー）を本発明に関連するポリペプチド（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７ＲＣ）に関してスクリーニングし、それによって本発明に関連するポリペプチド（例えばそれぞれＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７ＲＣ）に結合する免疫グロブリンライブラリー成員を単離することにより、本発明のポリペプチドに対するモノクローナル抗体を特定し、単離し得る。ファージディスプレイライブラリーを作製し、スクリーニングするための手法及び市販のキットは当業者に周知である。加えて、抗体ディスプレイライブラリーを作製し、スクリーニングする上での使用に特に適合させやすい方法及び試薬の例は、文献中に見出すことができる。例えば「コンビナトリアル抗体ディスプレイ」法は周知であり、特定の抗原特異性を有する抗体フラグメントを特定し、単離するために開発されたものであって、モノクローナル抗体を生産するために利用できる。上述したように動物を免疫原で免疫した後、生じるＢ細胞プールの抗体レパートリーをクローン化する。オリゴマープライマーの混合物とＰＣＲを使用することによって免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡ配列を得るための方法は一般的に公知である。例えば５’リーダー（シグナルペプチド）配列及び／又はフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマー、並びに保存された３’定常領域に対するプライマーが、多くのマウス抗体からの重及び軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅のために使用できる；同様の戦略がまた、ヒト抗体からヒトの重及び軽鎖可変領域を増幅するために使用されてきた。
【００８２】
ポリクローナル血清及び抗体は、適切な被験者を本発明のポリペプチドで免疫することによって生産し得る。免疫した被験者における抗体力価を、固定化タンパク質を用いるＥＬＩＳＡ等の標準的な手法によって経時的に観測し得る。所望する場合は、本発明のポリペプチドに対する抗体分子を被験者又は培地から単離してもよく、ＩｇＧ分画を得るために周知の手法、例えばプロテインＡクロマトグラフィーによってさらに精製し得る。
【００８３】
本発明のポリペプチドに対する抗体のフラグメントは、当分野で周知の方法に従った抗体の切断によって作製し得る。例えば免疫学的に活性なＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体をペプシン等の酵素で処理することによって生成し得る。
【００８４】
加えて、ヒト及び非ヒト部分の両方を含む、本発明のポリペプチドに対するキメラ、ヒト化及び一本鎖抗体は、標準的な組換えＤＮＡ手法及び／又は組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリーを用いて生産し得る。ヒト化抗体はまた、内因性免疫グロブリン重及び軽鎖遺伝子を発現することはできないが、ヒト重及び軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて生産し得る。例えば、例えばＩＬ−１７Ｆタンパク質に対するヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、マウス免疫グロブリン遺伝子ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを使用して作製し得る。対象抗原で免疫したこれらのトランスジェニックマウスからの脾細胞を、次に、ヒトタンパク質からのエピトープに対して特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを生産するために使用し得る。
【００８５】
キメラ免疫グロブリン鎖を含むキメラ抗体は、当分野で公知の組換えＤＮＡ手法によって生産し得る。例えばマウス（又は他の種の）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子を、マウスＦｃをコードする領域を除去するために制限酵素で消化し、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の相当部分で置換する。
【００８６】
抗体又は免疫グロブリン鎖は当分野で公知の方法によってヒト化し得る。ヒト化免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体は、抗原結合に直接関与しないＦｖ可変領域の配列をヒトＦｖ可変領域からの相当配列で置換することによって作製し得る。ヒト化抗体を作製するための一般的方法は、その全ての内容が参照により本明細書に組み込まれる、Morrison (1985) Science 229:1202-07; Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214; Queen et al.,米国特許第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号に述べられている。それらの方法は、重又は軽鎖の少なくとも１本から免疫グロブリンＦｖ可変領域の全部又は一部をコードする核酸配列を単離し、操作して、発現することを含む。そのような核酸配列のソースは当業者に周知であり、例えばあらかじめ定められた標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから入手し得る。ヒト化抗体又はそのフラグメントをコードする組換えＤＮＡを、その後、適切な発現ベクターにクローン化することができる。
【００８７】
ヒト化又はＣＤＲ移植抗体分子又は免疫グロブリンは、免疫グロブリン鎖の１個、２個又は全部のＣＤＲを置換することができる、ＣＤＲ移植又はＣＤＲ置換によって生産し得る。例えばその全ての内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，２２５，５３９号; Jones et al. (1986) Nature 321:552-25; Verhoeyan et al. (1988) Science 239:1534; Beidler et al. (1988) J. Immunol. 141:4053-60; Winter,米国特許５，２２５，５３９号参照。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を作製するために使用し得るＣＤＲ移植法を述べている(その内容が参照により本明細書に組み込まれる、イギリス特許出願第ＧＢ ２１８８６３８Ａ号; Winter, 米国特許第５，２２５，５３９号)。特定のヒト抗体のＣＤＲ全部を非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置換してもよく、又はＣＤＲの一部だけを非ヒトＣＤＲで置換してもよい。あらかじめ定められた抗原へのヒト化抗体の結合のために必要なＣＤＲの数を置換することが唯一必要である。
【００８８】
ヒト抗体は、付加的に、抗原による攻撃誘発に応答する動物の内因性抗体ではなく完全なヒト抗体を生産するように改変されたトランスジェニック非ヒト動物を用いて生産し得る。例えば国際公開公報ＷＯ ９４／０２６０２参照。非ヒト宿主における重及び軽免疫グロブリン鎖をコードする内在性遺伝子を無効にして、ヒト重及び軽鎖免疫グロブリンをコードする活性遺伝子座を宿主のゲノムに挿入する。ヒト遺伝子は、例えば必要なヒトＤＮＡセグメントを含む酵母人工染色体を用いて組み込む。全ての所望の修飾を提供する動物は、その後、修飾の完全なセットよりは少ない修飾を含む中間トランスジェニック動物を異種交配することによる子孫として得られる。そのような非ヒト動物の好ましい実施形態はマウスであり、国際公開公報ＷＯ９６／３３７３５及び同ＷＯ９６／３４０９６に開示されているようにＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）と称される。この動物は、完全なヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を生産する。抗体は、例えばポリクローナル抗体の製剤として、対象免疫原による免疫後の動物から、あるいはモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ等の、動物に由来する不死化Ｂ細胞から直接入手できる。付加的に、ヒト可変領域を有する免疫グロブリンをコードする遺伝子は、抗体を直接得るために回収して発現することができ、又は例えば一本鎖Ｆｖ分子等の抗体の類似体を得るためにさらに修飾することができる。
【００８９】
例えば抗体の他の部分、例えば定常領域を欠失させる、付加する又は置換することによって修飾されたモノクローナル、キメラ及びヒト化抗体も本発明の範囲内である。非限定的な例として、定常領域を欠失させることによって、定常領域をもう１つ別の定常領域、例えば抗体の半減期、安定性又は親和性を高めることを意図した定常領域又はもう１つ別の種又は抗体クラスからの定常領域で置換することによって、及び例えばグリコシル化部位の数、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、補体結合等を変化させるために定常領域内の１又はそれ以上のアミノ酸を修飾することによって、抗体を修飾することができる。
【００９０】
抗体定常領域を変化させるための方法は当分野において公知である。変化した機能、例えばエフェクターリガンド、例えば細胞上のＦｃＲ又は補体のＣ１成分に対する変化した親和性を有する抗体は、抗体の定常部分内の少なくとも１個のアミノ酸残基を異なる残基で置換することによって生産できる（例えばその全ての内容が参照により本明細書に組み込まれる、欧州特許第ＥＰ  ３８８，１５１Ａｌ号、米国特許第５，６２４，８２１号及び米国特許第５，６４８，２６０号参照）。マウス（又は他の種の）免疫グロブリンへの同様の種類の変化は、これらの機能を低減する又は排除するために適用でき、当分野において公知である。
【００９１】
例えば、特定残基をその側鎖上に適切な官能基を有する残基で置換することによって、又は電荷を有する官能基、例えばグルタミン酸又はアスパラギン酸、又は芳香族非極性残基、例えばフェニルアラニン、チロシン、トリプトファン又はアラニンを導入することによって、ＦｃＲ（例えばＦｃγＲ１）又はＣ１ｑ結合に対する抗体（例えばＩｇＧ、例えばヒトＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を変化させることが可能である（例えば米国特許第５，６２４，８２１号参照）。
【００９２】
本発明の抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又は抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体は、上清中、細胞溶解産物中又は細胞表面上の、それぞれＩＬ−１７Ｆタンパク質（例えば単量体、ホモ二量体又はヘテロ二量体構造で）、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチドを単離する、精製する及び／又は検出するために有用であり得る。本発明において開示する抗体はまた、臨床試験手順の一部として、例えばＩＬ−１７Ｆタンパク質レベルを観測するために診断的に、又は抗体の抗原を含む細胞又は組織に治療的調節剤を標的するために臨床的に使用し得る。例えば低分子等の治療薬、又は本発明の他の治療薬は、それぞれＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣを発現する細胞又は組織に治療薬を標的するために抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又は抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体に結合し得る。ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣタンパク質に結合する拮抗性抗体（好ましくはモノクローナル抗体）はまた、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患、及び／又はＩＬ−２１とＩＬ−１７Ｆ産生との間の関係により、ＩＬ−２１シグナル伝達（例えばＩＬ−２１のＩＬ−２１Ｒへの結合及びＩＬ−２１Ｒの活性化）に関連する疾患の治療においても有用であり得る。そこで、本発明はさらに、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達を低下させる、制限する、ブロックする又はさもなければ低減する、ＩＬ−１７Ｆ（単量体及び／又は二量体形態）、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣに特異的に結合する阻害性抗体を含む組成物を提供する。同様に、抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又は抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体は、それぞれＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣを単離する、精製する、検出する及び／又は診断的に観測する上で、及び／又はそれぞれＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣを含む細胞又は組織における治療的調節剤を臨床的に標的する上で有用であり得る。
【００９３】
本発明における使用のための抗体に加えて、抗体に基づく分子も、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ａホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａホモ二量体の活性を調節するために使用し得る。そのような抗体に基づく分子は、スモール・モジュラー・イムノファーマシューティカル（small modular immunopharmaceutical）（ＳＭＩＰ（商標））薬(Trubion Pharmaceuticals, Seattle, WA)を含む。ＳＭＩＰは、コグネイト構造、例えば抗原、対抗受容体（counterreceptor）等についての結合ドメイン、１個のシステイン残基を有する又はシステイン残基を持たないヒンジ領域ポリペプチド、及び免疫グロブリンＣＨ２及びＣＨ３ドメインから成る一本鎖ポリペプチドである（ｗｗｗ．ｔｒｕｂｉｏｎ．ｃｏｍも参照のこと）。ＳＭＩＰは、モノクローナル抗体の結合特異性と活性を示すが、従来の治療的モノクローナル抗体の約３分の１から２分の１の大きさであり、長いインビボ半減期を有する。ＳＭＩＰ及びそれらの使用と適用は、全てが全体として参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００３／０１１８５９２号、同第２００３／０１３３９３９号、同第２００４／００５８４４５号、同第２００５／０１３６０４９号、同第２００５／０１７５６１４号、同第２００５／０１８０９７０号、同第２００５／０１８６２１６号、同第２００５／０２０２０１２号、同第２００５／０２０２０２３号、同第２００５／０２０２０２８号、同第２００５／０２０２５３４号及び同第２００５／０２３８６４６号、及びその関連特許ファミリー成員に開示されている。
（スクリーニングアッセイ）
【００９４】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連するポリヌクレオチド及びポリペプチドは、細胞又は生物においてＩＬ−１７Ｆの活性を調節することができ、それによって炎症応答の潜在的調節剤である、薬理的物質又は薬剤のための先導化合物を特定するためのスクリーニングアッセイにおいて使用し得る。例えばＩＬ−１７Ｆ（天然又は組換え）を含む試料を複数の試験化合物（生物学的物質又は有機低分子）の１つと接触させ、処置した試料の各々におけるＩＬ−１７Ｆの生物活性を未処置試料又は異なる試験化合物と接触させた試料におけるＩＬ−１７Ｆの生物活性と比較することができる。そのような比較は、試験化合物のいずれかが、１）それによってＩＬ−１７Ｆの拮抗物質を示す、ＩＬ−１７Ｆの実質的に低い発現レベル又は生物活性、又は２）それによってＩＬ−１７Ｆの作動物質を示す、ＩＬ−１７Ｆの実質的に高いレベルの発現又は生物活性、を生じさせるかどうかを判定する。一実施形態では、ＩＬ−１７Ｆ活性を調節することができる試験化合物の特定は、ハイスループットスクリーニングアッセイ、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（Biacore International AB, Uppsala, Sweden）、ＢＲＥＴ（生物発光共鳴エネルギー転移法）及びＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー転移法）アッセイ、並びにＥＬＩＳＡ及び細胞ベースのアッセイを用いて実施される。
（低分子）
【００９５】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患（及び／又はＩＬ−２１のＩＬ−２１Ｒへの結合及びＩＬ−２１Ｒの活性化に関連する疾患）、例えば炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、移植片拒絶反応、乾癬等に罹患している（又はその危険性がある）生物（又は被験者）における、又はそのような疾患に関わるそのような生物（又は被験者）からの細胞における、ＩＬ−１７Ｆ活性（及び／又はＩＬ−２１のＩＬ−２１Ｒへの結合及びＩＬ−２１Ｒの活性化に関連する少なくとも１つの活性）の低下はまた、ＩＬ−１７Ｆに拮抗する、すなわちＩＬ−１７Ｆの活性を阻害する低分子（通常は有機低分子）の使用を通して達成され得る。新規拮抗性低分子は、上述したスクリーニング方法によって特定することができ、本明細書で述べる本発明の治療方法において使用し得る。
【００９６】
逆に、免疫欠損、例えば好中球減少症に罹患している（又はその危険性がある）生物（又は被験者）における、又はそのような疾患に関わるそのような生物（又は被験者）からの細胞における、ＩＬ−１７Ｆ活性（及び／又はＩＬ−２１関連活性）の上昇も、ＩＬ−１７Ｆを作動する、すなわちＩＬ−１７Ｆの活性を増強する低分子（通常は有機低分子）の使用を通して達成され得る。新規作動性低分子は、上述したスクリーニング方法によって特定することができ、例えばその全てが全体として参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７０７，８２９号；同第６，０４３，３４４号；同第６，０７４，８４９号及び米国特許出願第１０／１０２，０８０号に述べられているように、免疫欠損を治療する方法において使用し得る。
【００９７】
低分子という用語は、高分子ではない化合物を指す（例えば Karp (2000) Bioinformatics Ontology 16:269-85; Verkman (2004) AJP-CeIl Physiol. 286:465-74参照）。それ故、低分子はしばしば、例えば１，０００ダルトン未満である化合物とみなされる（例えばVoet and Voet, Biochemistry, 2nd ed., ed. N. Rose, Wiley and Sons, New York, 14 (1995)参照）。例えばDavis et al. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:5981-86は、葉酸塩、メトトレキサート及び神経ペプチドを示すために低分子という語句を使用し、一方Halpin and Harbury (2004) PLos Biology 2:1022-30は、低分子遺伝子産物、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ及びペプチドを示すためにこの語句を使用する。天然低分子の例は、コレステロール、神経伝達物質及びｓｉＲＮＡを含むが、これらに限定されず；合成低分子は、数多くの市販の低分子データベース、例えばＦＣＤ（Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓデータベース）、ＳＭＩＤ（低分子相互作用データベース）、ＣｈＥＢＩ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｔｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）及びＣＳＤ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅ）に列挙されている様々な化学物質を含むが、これらに限定されない（例えばAlfarano et al. (2005) Nuc. Acids Res. Database Issue 33:D416-24参照）。
（ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患の進行を診断する、予後判定する及び観測するための方法）
【００９８】
動物モデル、特にマウスモデルにおいて検討された免疫機構がヒト免疫系に当てはめることが可能であると考えられ、しばしば実際にそうであることが当分野において周知である。本明細書で開示する実施例の多くは、ヒト試料に加えて、動物モデルにおいてＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害するＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の能力を開示するが、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患を診断する、予後判定する及び観測するための開示方法は、ヒトにおいてそのような疾患を診断する、予後判定する及び観測するために特に有用である。
【００９９】
本発明は、ＩＬ−１７Ｆ活性の上方調節を検出することにより、例えばＩＬ−１７Ｆの上方調節を検出することにより、被験者においてＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患（例えばＩＬ−１７Ｆの生物活性の上昇を直接又は間接的に含む）の進行を診断する、予後判定する及び観測するための、ヒト被験者におけるそのような方法の使用を含むがこれに限定されない方法を提供する。ＩＬ−２１とＩＬ−１７Ｆの間の直接関係の故に、本発明はまた、ＩＬ−１７Ｆ活性の上方調節を検出することにより、例えばＩＬ−１７Ｆの上方調節を検出することにより、被験者においてＩＬ−２１のＩＬ−２１Ｒへの結合及びＩＬ−２１Ｒの活性化に関連する疾患（例えばＩＬ−２１の生物活性の上昇を直接又は間接的に含む）の進行を診断する、予後判定する及び観測するための、ヒト被験者におけるそのような方法の使用を含むがこれに限定されない方法を提供する。これらの方法は、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチド又はそのフラグメント、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド又はそのフラグメント（その融合タンパク質を含む）、又はＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド又はその誘導体に対する抗体、又は例えば臨床環境で、好都合に使用し得る、本明細書で述べるようなＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドの調節剤を含む群の少なくとも１つを含むあらかじめ包装された診断キットを使用することによって実施し得る。当業者は、他の間接的方法、例えば免疫細胞、例えば好中球の数を数えることが、例えばＩＬ−１７Ｆの上方調節を確認するために使用し得ることを認識する。
【０１００】
「診断」又は「診断すること」は、病的状態の存在又は不在を特定することを意味する。診断方法は、被験者（ヒト又は非ヒト哺乳動物）からの生物学的試料中のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣの遺伝子産物（例えばそのフラグメントを含む、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ又はポリペプチド）の試験量を測定すること、及び上記試験量を正常量又は範囲（すなわちＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患に罹患していないことが知られる個体からの量又は範囲）と比較することによってＩＬ−１７Ｆシグナル伝達（及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達）の上方調節を検出することを含む。特定診断方法はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患の決定的診断を提供しないことがあり得るが、その方法が診断に役立つ明確な指標を提供すれば十分である。
【０１０１】
本発明はまた、ＩＬ−１７Ｆ活性の上方調節を検出することによって、例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣの上方調節を検出することによって、そのような疾患を予後判定するための方法を提供する。「予後判定」又は「予後判定すること」は、病的状態の起こり得る発現及び／又は重症度を予測することを意味する。予後判定方法は、被験者からの生物学的試料中のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣの遺伝子産物の試験量を測定すること、及び上記試験量を、それぞれＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣの遺伝子産物についての予後判定量又は範囲（すなわち様々な重症度のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達に関連する疾患を有する個体からの量又は範囲）と比較することを含む。試験試料中のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の様々な量が、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達に関連する疾患についてのある種の予後と一致する。特定予後判定レベルのＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の量の検出は、被験者についての予後を提供する。
【０１０２】
本発明はまた、ＩＬ−１７Ｆ活性の上方調節を検出することによって、例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣの上方調節を検出することによって、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連するそのような疾患（及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達に関連する疾患）の進行又は経過を観測するための方法を提供する。観測方法は、１回目と２回目に被験者から採取した生物学的試料中のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の試験量を測定すること、及び上記量を比較することを含む。１回目と２回目の間でのＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の量の変化は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達関連疾患（及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達関連疾患）の経過の変化を示し、量の低下はそのような疾患の寛解を示し、量の上昇はそのような疾患の進行を示す。そのような観測アッセイはまた、自己免疫疾患のために治療されている患者において特定治療処置の効果を評価するためにも有用である。
【０１０３】
上記で概説した方法におけるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達上昇は、様々な生物学的試料、例えば体液（例えば全血、血漿及び尿）、細胞（例えば全細胞、細胞分画及び細胞抽出物）及び他の組織において検出され得る。生物学的試料はまた、組織の切片、例えば組織学的目的のために採取された生検及び凍結切片を含む。好ましい生物学的試料は、血液、血漿、リンパ、組織生検、尿、ＣＳＦ（脳脊髄液）、滑液及びＢＡＬ（気管支肺胞洗浄液）を含む。生物学的試料の分析が必ずしも被験者からの細胞又は組織の採取を必要としないことは認識される。例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達遺伝子産物（例えば抗体、核酸）に結合する適切に標識された物質を被験者に投与し、標準的な画像化テクノロジー（例えばＣＡＴ、ＮＭＲ（ＭＲＩ）及びＰＥＴ）を用いて視覚化することができる（標的に結合したとき）。
【０１０４】
本発明の診断及び予後判定アッセイでは、試験量を調べるためにＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物を検出し、定量する。次に試験量を正常量又は範囲と比較する。正常量又は範囲を有意に上回る量は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患（及び／又はＩＬ−２１のＩＬ−２１Ｒへの結合及びＩＬ−２１Ｒの活性化に関連する疾患）の診断における陽性表示である。ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の検出と定量の特定方法を以下で述べる。
【０１０５】
ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の正常量又は基線レベルは、任意の特定試料型及び集団について決定し得る。一般に、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣタンパク質又はｍＲＮＡの基線（正常）レベルは、正常（すなわち健常）被験者からの生物学的試料型におけるＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣタンパク質又はｍＲＮＡのそれぞれの量を測定することによって決定される。あるいは、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の正常値は、罹患した（又はおそらく罹患した）試験細胞又は組織が採取された被験者と同じ被験者から採取された健常細胞又は組織の量を測定することによって決定し得る。ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の量（正常量又は試験量）は、細胞当り、総タンパク質当り又は容積当りのベースで測定又は発現され得る。試料の細胞量を決定するために、生物学的試料が採取された型の細胞において、構成的に発現される遺伝子産物又は公知のレベルで発現される他の遺伝子産物のレベルを測定することができる。
【０１０６】
本発明のアッセイ方法が必ずしもＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の絶対値の測定を必要としないことは認識される。これらの方法の多くの適用に関しては相対値で十分だからである。また、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物の量又は存在率に加えて、変異型又は異常ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物又はそれらの発現パターン（例えば突然変異転写産物、トランケート型ポリペプチド）を、正常遺伝子産物及び発現パターンとの比較によって特定し得る。
【０１０７】
２つの試料中の特定遺伝子の発現が有意に類似する又は有意に異なるかどうか、例えば所与のレベルを有意に上回る又は有意に下回るかどうかは、遺伝子自体、中でも特に異なる個体又は異なる試料の間での発現のその変動性に依存する。発現レベルが有意に類似する又は異なるかどうかを判定することは当分野の技術範囲内である。２つの試料の間で、例えばＩＬ−１７Ｆ及び／又はＩＬ−１７Ａの発現のレベルが有意に類似する又は有意に異なるかどうか、例えば所与のレベルを有意に上回るかどうかを判定するときは、個体、種、器官、組織又は細胞の間での、例えばＩＬ−１７Ｆ及び／又はＩＬ−１７Ａ発現レベルの遺伝的変異等の因子を考慮し得る（必要なとき及び場合）。個体、種、器官、組織又は細胞の間での遺伝子発現の天然の異質性の結果として、「有意に類似」又は「有意に上回る」等の語句は、厳密なパーセンテージ又は数値として定義することはできず、むしろ本発明を実施するときに当業者によって確認され得る。
【０１０８】
本発明の診断、予後判定及び観測アッセイは、生物学的試料中のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物を検出し、定量することを含む。ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物は、ｍＲＮＡ及びポリペプチドを含み、どちらも当業者に周知の方法を用いて測定することができる。
【０１０９】
例えばｍＲＮＡは、ハイブリダイゼーションに基づくアッセイ、例えばノーザンハイブリダイゼーション、インサイチューハイブリダイゼーション、ドット及びスロットブロット法、及びオリゴヌクレオチドアレイを用いて直接検出し、定量することができる。ハイブリダイゼーションに基づくアッセイは、プローブ核酸を標的核酸にハイブリダイズするアッセイを指す。一部の形式では、標的、プローブ又は両方を固定化する。固定化核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はもう１つ別のオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドであり得、天然又は非天然に生じるヌクレオチド、ヌクレオチド類似体又は骨格を含み得る。本発明における使用のための核酸プローブ配列を選択する方法は、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣの核酸配列に基づき、当分野において周知である。
【０１１０】
あるいは、検出及び定量の前にｍＲＮＡを増幅することができる。そのような増幅に基づくアッセイは当分野において周知であり、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＰＣＲ−酵素免疫測定法（ＰＣＲ−ＥＬＩＳＡ）及びリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）を含む。増幅されたＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ遺伝子産物（例えばｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ）を生産し、検出するためのプライマー及びプローブは、それぞれＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣの核酸配列に基づき、当業者によって過度の実験を伴わずに容易に設計され、生産され得る。非限定的な例として、増幅されたＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物は、例えばゲル電気泳動によって；プローブ拡散へのハイブリダイゼーションによって；塩基配列決定によって；蛍光、リン光又は放射性シグナルの検出によって；又は様々な周知の方法にいずれかによって、直接分析し得る。加えて、標的核酸配列の増幅によって生成されるシグナルを上昇させるための方法は当業者に公知である。当業者はいずれの増幅方法を使用するかを認識し、遺伝子産物の定量を所望する場合は、当分野で公知の様々な定量方法（例えば定量的ＰＣＲ）を使用し得る。
【０１１１】
ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（又はそのフラグメント）は、上述したように作製し得るそれぞれの抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又は抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体を用いた様々な周知の免疫学的測定法を使用して検出し得る。免疫学的測定法は、例えばＩＬ−１７Ｆポリペプチド（又はそのフラグメント）に特異的に結合する抗体（例えばポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化、ｓｃＦｖ及び／又はそのフラグメント）を利用するアッセイを指す。本発明の実施に適するそのような周知の免疫学的測定法は、ＥＬＩＳＡ、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫沈降法、免疫蛍光検査法、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）及びウエスタンブロット法を含む。ＩＬ−１７Ｆポリペプチドはまた、標識ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチドを用いて検出し得る。逆に、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣは標識ＩＬ−１７Ｆポリペプチドを用いて検出し得る。
【０１１２】
当業者は、上記方法がＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患に適用され得ることを理解する。
（治療におけるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する分子の使用）
【０１１３】
本発明者らは、中でも特に、以下の事柄を初めて明らかにした：１）ＩＬ−１７Ｆ又は他のＩＬ−１７Ｆ作動物質によるＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣの結合は、好中球浸潤の上昇、軟骨破壊等と相関する；２）ＩＬ−１７Ｆに対する抗体は、ＩＬ−１７Ｆタンパク質を検出するため及び少なくとも１つのＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害するために使用し得る；３）ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣに対するｓｉＲＮＡは、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ生物活性を低下させるために使用し得る；４）ＩＬ−１７Ｆタンパク質はＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を形成することができ、それ故、ＩＬ−１７Ｆを対象とする阻害性抗体はまた、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体によって媒介されるＩＬ−１７Ａ生物活性も阻害し得る；５）ＩＬ−２１は、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を上方調節するためにＣＤ２８と相乗作用的に働き、それ故ＩＬ−１７Ｆ活性（例えばＩＬ−１７Ｆホモ二量体活性及び／又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体活性）を阻害する抗体はＩＬ−２１シグナルを調節し得る；６）天然及び組換えＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を単離し、精製し得る；７）ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体はＩＬ−１７Ｆ生物活性を有する；８）ヒトＩＬ−１７Ｆに対する抗体は霊長動物ＩＬ−１７Ｆと交差反応し、霊長動物ＩＬ−１７Ｆを部分的に中和する；及び９）ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａはいずれも、乾癬を有するヒト患者からの病変組織、及びクローン病及び潰瘍性大腸炎を有するヒト患者における関係組織において上昇する。上記の相関の一部を特定するためにいくつかの動物モデルを使用したが、動物モデルにおいて検討された免疫機構をヒト免疫系に当てはめることが可能であると考えられ、しばしば実際にそうであることは当分野において周知である。加えて、一次ヒトＴ細胞からホモ二量体及びヘテロ二量体形態の天然ＩＬ−１７Ｆを単離するために本発明の抗体を使用したが、アグリカナーゼのＩＬ−１７Ｆ調節に関連する実験、及び乾癬病変及び炎症性腸疾患における関係組織でのＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの発現レベルをプロファイリングする実験は、ヒト細胞及び組織で実施した。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達に関連する疾患を治療するためにＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する分子、例えばＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を使用するための本明細書で開示する方法は、ヒトにおけるそのような疾患を治療するために特に有用である。
【０１１４】
本明細書で開示するＩＬ−１７Ｆシグナル伝達関連分子、例えば上述した方法を用いて特定されるＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド活性の調節剤は、インビトロ、エクスビボで使用し得る、又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリペプチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又は抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）の投与によって、例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達に関連する疾患を治療するために、医薬組成物に組み込んで、インビボで個体に投与し得る。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達関連分子を投与すべきかどうかを決定するときに考慮すべきいくつかの薬理遺伝学的アプローチは、当業者に周知であり、ゲノムワイド関連解析、候補遺伝子アプローチ及び遺伝子発現プロファイリングを含む。本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路（例えば経口組成物は一般に不活性希釈剤又は食用担体を含む）と適合性であるように製剤される。投与経路の他の非限定的な例は、非経口（例えば静脈内）、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（局所）、経粘膜、及び経直腸投与を含む。各々の意図される経路と適合性の医薬組成物は当分野において周知である。
【０１１５】
ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、製薬上許容される担体と組み合わせたとき、医薬組成物として使用し得る。そのような組成物は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達関連分子（例えばＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質）及び担体に加えて、様々な希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤及び当分野で周知の他の物質を含有し得る。「製薬上許容される」という用語は、有効成分の生物学的活性の有効性に干渉しない非毒性物質を意味する。担体の特徴は投与経路に依存する。
【０１１６】
本発明の医薬組成物はまた、サイトカイン、リンホカイン又は他の造血因子、例えばＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、Ｇ−ＣＳＦ、幹細胞因子及びエリスロポエチンを含有し得る。医薬組成物はまた、以下でより詳細に述べる抗サイトカイン抗体を含有し得る。医薬組成物は、血栓崩壊性又は抗血栓因子、例えばプラスミノーゲン活性化因子及び第ＶＩＩＩ因子を含有し得る。医薬組成物は、以下でより詳細に述べる他の抗炎症性物質をさらに含有し得る。そのような付加的な因子及び／又は物質は、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質との相乗作用を生じさせるため、又はＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質によって引き起こされる副作用を最小限に抑えるために医薬組成物に含め得る。逆に、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓崩壊性又は抗血栓因子、又は抗炎症性物質の副作用を最小限に抑えるために特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓崩壊性又は抗血栓因子、又は抗炎症性物質の製剤中に含め得る。
【０１１７】
本発明の医薬組成物は、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が、他の製薬上許容される担体に加えて、両親媒性物質、例えば水溶液中にミセル、不溶性単層、液晶又は薄層として集合形態で存在する脂質と組み合わされた、リポソームの形態であり得る。リポソーム製剤のための適切な脂質は、限定を伴わずに、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等を含む。
【０１１８】
本明細書で使用する、「治療有効量」という用語は、有意義な患者の利益、例えばそのような状態の症状の改善、治癒又は治癒率の上昇を示すのに十分な、医薬組成物又は方法の各々の活性成分の総量を意味する。単独で投与される、個々の有効成分に適用するとき、この語はその成分だけを指す。組合せに適用するとき、この語は、連続的に又は同時に組み合わせて投与されるかどうかに関わらず、治療作用を生じさせる有効成分の組合せ合計量を指す。
【０１１９】
本発明の治療又は使用の方法を実施するとき、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の治療有効量を被験者、例えば哺乳動物（例えばヒト）に投与する。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達関連分子は、単独で又は他の治療、例えばサイトカイン、リンホカイン又は他の造血因子、又は抗炎症性物質を用いる治療と組み合わせて、本発明の方法に従って投与し得る。１又はそれ以上の物質と併用投与するとき、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、第二の物質と同時に又は連続的に投与し得る。連続的に投与する場合、医師が投与の適切な順序、例えば他の薬剤と併用するＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（又はその融合タンパク質）及び／又は阻害性抗体を決定する。
【０１２０】
ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の治療有効量を経口的に投与するとき、結合（併用）薬剤（binding agent）は、錠剤、カプセル、粉末、溶液又はエリキシルの形態である。錠剤形態で投与するとき、本発明の医薬組成物は、固体担体、例えばゼラチン又はアジュバントを付加的に含み得る。錠剤、カプセル及び粉末は、約５〜９５％の結合薬剤、好ましくは約２５〜９０％の結合薬剤を含む。液体形態で投与するとき、液体担体、例えば水、石油、動物又は植物由来の油、例えば落花生油、鉱物油、ダイズ油又はゴマ油、又は合成油を添加し得る。医薬組成物の液体形態は、生理食塩水、デキストロース又は他の糖類溶液、又はグリコール、例えばエチレングリコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールをさらに含み得る。液体形態で投与するとき、医薬組成物は、約０．５〜９０重量％の結合薬剤、好ましくは約１〜５０重量％の結合薬剤を含む。
【０１２１】
ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の治療有効量を静脈内、皮膚又は皮下注射によって投与するとき、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、発熱物質不含の非経口的に許容される水溶液の形態である。ｐＨ、等張性、安定性等を十分に顧慮した、そのような非経口的に許容されるタンパク質溶液の製造は、当業者の技術範囲内である。静脈内、皮膚又は皮下注射のための好ましい医薬組成物は、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質に加えて、等張賦形剤、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、乳酸化リンガー注射液、又は当分野で公知の他の賦形剤を含有すべきである。本発明の医薬組成物はまた、安定剤、防腐剤、緩衝剤、抗酸化剤、又は当業者に公知の他の添加物を含み得る。
【０１２２】
本発明の医薬組成物中のＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の量は、治療する状態の性質及び重症度並びに患者が受けた事前の治療の性質に依存する。最終的には、主治医が、各々個々の患者を治療するためのＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の量を決定する。最初に、主治医は、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の低用量を投与し、患者の応答を観察する。患者にとって最適治療効果が得られるまでより高用量のＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を投与してもよく、その時点で用量は一般にそれ以上増加させない。本発明の方法を実施するために使用される様々な医薬組成物は、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、例えばＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ（その融合タンパク質を含む）約０．１μｇ−約１００ｍｇ／ｋｇ体重を含有すべきであると考えられる。
【０１２３】
本発明の医薬組成物を使用する静脈内（ｉ．ｖ．）治療の期間は、治療する疾患の重症度及び各々個々の患者の状態及び潜在的特異体質性応答に依存して異なる。ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の各々の適用期間は、１２−２４時間の連続ｉ．ｖ．投与の範囲内であり得ると考えられる。また、本発明の医薬組成物を使用する皮下（ｓ．ｃ．）治療も考慮される。これらの治療薬は、毎日、週に１回、又はより好ましくは２週に１回、又は月に１回投与することができる。また、ＩＬ−１７Ｆ作動物質又はＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質が低分子（例えば経口送達のため）である場合、治療薬は、毎日、１日２回、１日３回等で投与され得る。最終的には、主治医がｉ．ｖ．又はｓ．ｃ．治療又は低分子による治療の適切な期間、及び本発明の医薬組成物を使用する治療の投与の時期を決定する。
【０１２４】
本発明のポリヌクレオチド及びタンパク質は、以下で特定する用途又は生物学的活性（本明細書で言及するアッセイに関連するものを含む）の１又はそれ以上を示すと予想される。本発明のタンパク質について述べる用途又は活性は、そのようなタンパク質の投与又は使用、あるいはそのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与又は使用（例えば遺伝子治療又はＤＮＡの導入に適するベクターにおいて）によって提供され得る。
（炎症を軽減するためのＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の使用）
【０１２５】
１つの態様では、本発明は、例えばＩＬ−２１シグナル伝達に起因する、炎症応答を低下させる方法を特徴とする。その方法は、細胞の集団を、細胞又は細胞集団のＩＬ−１７Ｆ活性を阻害するために十分な量のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）と接触させることを含み得る。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に対する拮抗物質はまた、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達（及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達）の抑制が望ましい被験者に投与し得る。これらの状態は、炎症性疾患、例えば自己免疫疾患（例えば関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症）、呼吸器疾患（例えばＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶反応（固形臓器移植拒絶反応を含む）、及び炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）を含むが、これらに限定されない。
【０１２６】
これらの方法は、少なくとも一部には、例えば干渉性抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を使用することによって、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に干渉することはＩＬ−１７Ｆ関連炎症応答、例えば一次線維芽細胞様滑膜細胞によるサイトカイン産生を低下させるという所見に基づく（実施例４．２）。したがって、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、すなわちＩＬ−１７Ｆ活性を阻害する分子（例えば抗ＩＬ−１７Ｆ抗体）は、インビボで炎症を軽減させるため、例えばＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患及び／又はＩＬ−２１シグナル伝達に関連する疾患を治療する又は予防するために使用し得る。
【０１２７】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質を使用する方法はまた、ＩＬ−１７Ｆ炎症活性を阻害するために使用でき、それ故、様々な免疫疾患を治療する又は予防するために使用できる。治療又は予防することができる疾患の非限定的な例は、移植片拒絶反応、自己免疫疾患（例えば糖尿病、関節炎（慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、反応性関節炎を含む）、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎及び湿疹性皮膚炎を含む）、ライター症候群、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、内因性喘息、アレルギー性喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、らい逆転反応、らい性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性知覚神経性聴力喪失、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、慢性活性肝炎、スティーヴンズ-ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴズ病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎及び間隙性肺線維症を含む）、対宿主性移植片病、肺増悪（pulmonary exacerbation）（例えば細菌感染による）、及びアレルギー、例えばアトピー性アレルギーを含むが、これらに限定されない。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質、例えば阻害性ＩＬ−１７Ｆ抗体の投与を含む方法を用いて治療できる好ましい疾患は、炎症性疾患、例えば自己免疫疾患（例えば関節炎（慢性関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症）、呼吸器疾患（例えばＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶反応（固形臓器移植拒絶反応を含む）、及び炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）を含むが、これらに限定されない。
【０１２８】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）を使用して、多くの方法で免疫応答を調節することが可能である。下方調節は、既に進行している炎症応答を阻害する又はブロックすることの形態であり得るか、又は炎症応答の誘導を予防することを含み得る。
【０１２９】
一実施形態では、その医薬組成物を含むＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、併用療法において、すなわち病的状態又は疾患、例えば免疫障害及び炎症性疾患を治療するために有用な他の物質、例えば治療薬と併用投与される。これに関して「併用（組合せ）」という用語は、薬剤を実質的に同時期に、同時に又は連続的に与えることを意味する。連続的に与える場合、２番目の化合物の投与の開始時に、２つの化合物のうちの最初の化合物が、好ましくは治療部位において有効濃度でまだ検出可能である。
【０１３０】
例えば併用療法は、１又はそれ以上の付加的な治療薬、例えば以下でより詳細に述べるような、１又はそれ以上のサイトカイン及び増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝阻害物質、酵素阻害剤、及び／又は細胞傷害性又は細胞増殖抑制性物質と共製剤される及び／又は同時投与される、１又はそれ以上のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）を含み得る。さらに、本明細書で述べる１又はそれ以上のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、本明細書で述べる２又はそれ以上の治療薬と組み合わせて使用し得る。そのような併用療法は、有利には、投与する治療薬のより低用量を使用でき、それ故様々な単独療法に関連して起こり得る毒性又は合併症を回避し得る。さらに、本明細書で開示する治療薬は、ＩＬ−１７Ｆ受容体シグナル伝達経路とは異なる経路で作用し、それ故ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の作用を増強する及び／又は相乗作用すると予想される。
【０１３１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用して使用される好ましい治療薬は、炎症応答における種々の段階で干渉する薬剤である。一実施形態では、本明細書で述べる１又はそれ以上のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、１又はそれ以上の付加的な物質、例えば他のサイトカイン又は増殖因子拮抗物質（例えば可溶性受容体、ペプチド阻害剤、低分子、リガンド融合物）；又は他の標的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば他のサイトカイン又は増殖因子、それらの受容体又は他の細胞表面分子に結合する抗体）；及び抗炎症性サイトカイン又はその作動物質と共製剤され得る及び／又は同時投与され得る。本明細書で述べるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と組み合わせて使用できる物質の非限定的な例は、１又はそれ以上のインターロイキン（ＩＬ）又はそれらの受容体の拮抗物質、例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１及びＩＬ−２２の拮抗物質；サイトカイン又は増殖因子又はそれらの受容体の拮抗物質、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦの拮抗物質を含むが、これらに限定されない。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質はまた、細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０（例えばＣＤ２０阻害剤リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、又はＣＤ１５４（ｇｐ３９又はＣＤ４０Ｌ）を含むそれらのリガンド、又はＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１及びＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１の阻害剤、例えばそれらに対する抗体と組み合わせることができる（Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med. Res. Rev. 22:146-67)。本明細書で述べるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用使用できる好ましい拮抗物質は、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＩＬ−２２の拮抗物質を含む。
【０１３２】
それらの物質の例は、ＩＬ−１２拮抗物質、例えばＩＬ−１２（好ましくはヒトＩＬ−１２）に結合するキメラ、ヒト化、ヒト又はインビトロ作製抗体（又はその抗原結合フラグメント）、例えば国際公開公報ＷＯ００／５６７７２において開示される抗体；ＩＬ−１２受容体阻害剤、例えばヒトＩＬ−１２受容体に対する抗体；及びＩＬ−１２受容体、例えばヒトＩＬ−１２受容体の可溶性フラグメントを含む。ＩＬ−１５拮抗物質の例は、ＩＬ−１５又はその受容体に対する抗体（又はその抗原結合フラグメント）、例えばヒトＩＬ−１５又はその受容体に対するキメラ、ヒト化、ヒト又はインビトロ作製抗体、ＩＬ−１５受容体の可溶性フラグメント、及びＩＬ−１５結合タンパク質を含む。ＩＬ−１８拮抗物質の例は、ヒトＩＬ−１８に対する抗体、例えばキメラ、ヒト化、ヒト又はインビトロ作製抗体（又はその抗原結合フラグメント）、ＩＬ−１８受容体の可溶性フラグメント、及びＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）を含む。ＩＬ−１拮抗物質の例は、インターロイキン１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、例えばＶｘ７４０、ＩＬ−１拮抗物質、例えばＩＬ−１ＲＡ（ａｎｉｋｉｎｒａ、ＫＩＮＥＲＥＴ（商標）、Ａｍｇｅｎ）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、及び抗ＩＬ−１受容体抗体（又はその抗原結合フラグメント）を含む。
【０１３３】
ＴＮＦ拮抗物質の例は、ＴＮＦ（例えばヒトＴＮＦα）に対するキメラ、ヒト化、ヒト又はインビトロ作製抗体（又はその抗原結合フラグメント）、例えば（ＨＵＭＩＲＡ（商標）、Ｄ２Ｅ７、ヒトＴＮＦα抗体）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＴＮＦ抗体フラグメント（例えばＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えばｐ５５又はｐ７５ヒトＴＮＦ受容体又はその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標）；Ｉｍｍｕｎｅｘ）、ｐ５５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５  ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（登録商標））；酵素拮抗物質、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤（例えばα−スルホニルヒドロキサム酸誘導体及びＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ３３３３，−００５又は−０２２）；及びＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質）を含む。好ましいＴＮＦ拮抗物質は、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えばｐ５５又はｐ７５ヒトＴＮＦ受容体又はその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ、及びＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤である。
【０１３４】
他の実施形態では、本明細書で述べるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、以下の１又はそれ以上と併用投与し得る：ＩＬ−１３拮抗物質、例えば可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）及び／又はＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２拮抗物質、例えばＤＡＢ４８６−ＩＬ−２及び／又はＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質、Ｓｅｒａｇｅｎ）、及び／又はＩＬ−２Ｒに対する抗体、例えば抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ）。さらにもう１つの併用は、ｎｏｎｄｅｐｌｅｔｉｎｇ抗ＣＤ４阻害剤（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ２１０３９６；ｎｏｎｄｅｐｌｅｔｉｎｇ霊長動物化抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）と組み合わせたＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）、拮抗性低分子、及び／又は阻害性抗体を含む。さらなる他の好ましい併用は、抗体、可溶性受容体又は拮抗性リガンドを含む、共刺激経路の拮抗物質、ＣＤ８０（Ｂ７．１）又はＣＤ８６（Ｂ７．２）；並びにｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２０００；組換えＩＬ−１０  ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β、及びその作動物質（例えば作動性抗体）を含む。
【０１３５】
他の実施形態では、１又はそれ以上のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、１又はそれ以上の抗炎症薬、免疫抑制剤、あるいは代謝又は酵素阻害剤と共製剤する及び／又は同時投与することができる。本明細書で述べるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）と併用して使用できる薬剤又は阻害剤の非限定的な例は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えばイブプロフェン、テニダプ、ナプロキセン、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク及びインドメタシン；スルファサラジン；コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン；サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成の阻害剤、例えばプリン生合成の阻害剤、葉酸拮抗物質（例えばメトトレキサート（Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）；及びピリミジン生合成の阻害剤、例えばジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤の１又はそれ以上を含むが、これらに限定されない。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と組み合わせた使用のための好ましい治療薬は、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えばレフルノミド）及び葉酸拮抗物質（例えばメトトレキサート）を含む。
【０１３６】
付加的な阻害剤の例は、コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注入）；免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；及びｍＴＯＲ阻害剤、例えばシロリムス（ラパマイシン−ＲＡＰＡＭＵＮＥ（商標））又はラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えばエステルラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９）；プロ炎症性サイトカイン、例えばＴＮＦα又はＩＬ−１によるシグナル伝達に干渉する物質（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブ、ロフェコキシブ及びその変種；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばＲ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害剤）；ホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤（例えばトリフルオロメチルケトン類似体）；血管内皮細胞増殖因子又は増殖因子受容体の阻害剤、例えばＶＥＧＦ阻害剤及び／又はＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤；及び血管新生の阻害剤の１又はそれ以上を含む。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）と組み合わせた使用のための好ましい治療薬は、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばシロリムス（ラパマイシン）又はラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えばエステルラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブ及びその変種；及びホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤、例えばトリフルオロメチルケトン類似体である。
【０１３７】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用することができる治療薬の付加的な例は、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）；アザチオプリンスルファサラジン；メサラジン；オルサラジン；クロロキン／ヒドロキシクロロキン（ＰＬＡＱＵＥＮＩＬ（登録商標））；ペニシラミン；金チオルナレート（aurothiornalate）（筋肉内及び経口）；アザチオプリン；コルヒチン；β−２アドレナリン作用性受容体作動物質（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラル）；キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリケート；ネドクロミル；ケトティフェン；イプラトロピウム及びオキシトロピウム；ミコフェノール酸モフェチル；アデノシン作動物質；抗血栓薬；補体阻害剤；及びアドレナリン作動薬の１又はそれ以上を含む。
【０１３８】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する特定疾患を治療する又は予防するための、他の治療薬と組み合わせた本明細書で開示するＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質の使用を以下でさらに詳細に論じる。
【０１３９】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用し得る、関節炎疾患（例えば慢性関節リウマチ、炎症性関節炎、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症及び乾癬性関節炎）を治療する又は予防するための物質の非限定的な例は、以下の１又はそれ以上を含む：本明細書で述べるＩＬ−１２拮抗物質；ＮＳＡＩＤ；ＣＳＡＩＤ；本明細書で述べるようなＴＮＦ、例えばＴＮＦαの拮抗物質；本明細書で述べるｎｏｎｄｅｐｌｅｔｉｎｇ抗ＣＤ４抗体；本明細書で述べるＩＬ−２拮抗物質；抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦα、又はその作動物質；本明細書で述べるＩＬ−１又はＩＬ−１受容体拮抗物質；本明細書で述べるホスホジエステラーゼ阻害剤；本明細書で述べるＣｏｘ−２阻害剤；イロプロスト；メトトレキサート；サリドマイド及びサリドマイド関連薬（例えばセルゲン）；レフルノミド；プラスミノーゲン活性化阻害剤、例えばトラネキサム酸；サイトカイン阻害剤、例えばＴ−６１４；プロスタグランジンＥ１；アザチオプリン；インターロイキン１変換酵素（ＩＣＥ）の阻害剤；ｚａｐ−７０及び／又はｌｃｋ阻害剤（チロシンキナーゼｚａｐ−７０又はｌｃｋの阻害剤）；本明細書で述べる血管内皮細胞増殖因子又は血管内皮細胞増殖因子受容体の阻害剤；本明細書で述べる血管新生の阻害剤；コルチコステロイド抗炎症薬（例えばＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦ−コンバターゼ阻害剤；ＩＬ−１１；ＩＬ−１３；ＩＬ−１７阻害剤；金；ペニシラミン；クロロキン；ヒドロキシクロロキン；クロラムブシル；シクロホスファミド；シクロスポリン；全リンパ節照射；抗胸腺細胞グロブリン；ＣＤ５毒素；経口投与ペプチド及びコラーゲン；ロベンザリット二ナトリウム；サイトカイン調節剤（ＣＲＡ）ＨＰ２２８及びＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカンポリスルフェート；ミノサイクリン（ＭＩＮＯＣＩＮ（登録商標））；抗ＩＬ−２Ｒ抗体；マウス及び植物脂質（魚及び植物種子脂肪酸）；オーラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナミン酸；静脈内免疫グロブリン；ジロイトン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（テラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；及びアザリビン。好ましい併用は、メトトレキサート又はレフルノミドと組み合わせた、及び中等度又は重症の慢性関節リウマチ症例ではシクロスポリンと組み合わせた、１又はそれ以上のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）を含む。
【０１４０】
関節炎疾患を治療するためにＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用して使用する阻害剤の好ましい例は、ＴＮＦ拮抗物質（例えばＴＮＦに結合するキメラ、ヒト化、ヒト又はインビトロ作製抗体、又はその抗原結合フラグメント；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えばｐ５５又はｐ７５ヒトＴＮＦ受容体又はその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ｐ５５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素拮抗物質、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２の拮抗物質；Ｔ細胞及びＢ細胞除去剤（例えば抗ＣＤ４又は抗ＣＤ２２抗体）；低分子阻害剤、例えばメトトレキサート及びレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）及びその類似体、例えばＣＣＩ−７７９；ｃｏｘ−２及びｃＰＬＡ阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２及びＮＦｋｂ阻害剤；ＲＡＧＥ又は可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチン又はＰＳＧＬ−１阻害剤（例えば低分子阻害剤、それに対する抗体、例えばＰ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体β（ＥＲβ）作動物質又はＥＲβ−ＮＦｋｂ拮抗物質を含む。１又はそれ以上のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）と同時投与する及び／又は共製剤することができる最も好ましい付加的な治療薬は、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えばｐ５５又はｐ７５ヒトＴＮＦ受容体又はその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））；メトトレキサート、レフルノミド又はシロリムス（ラパマイシン）又はその類似体、例えばＣＣＩ−７７９の１又はそれ以上を含む。
【０１４１】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用することができる、多発性硬化症を治療する又は予防するための物質の非限定的な例は以下を含む：インターフェロン、例えばインターフェロン−アルファ１ａ（例えばＡＶＯＮＥＸ（商標）；Ｂｉｏｇｅｎ）及びインターフェロン−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（商標）Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（商標）Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラドリビン；上述したＴＮＦ拮抗物質；コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；シクロスポリンＡ、メトトレキサート；４−アミノピリジン；及びチザニジン。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と組み合わせて使用できる付加的な拮抗物質は、他のヒトサイトカイン又は増殖因子、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦに対する抗体又は拮抗物質を含む。本明細書で述べるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、細胞表面分子、例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０又はそれらのリガンドに対する抗体と併用することができる。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質はまた、薬剤、例えばメトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン作動物質、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、本明細書で述べるプロ炎症性サイトカインによるシグナル伝達に干渉する物質、ＩＬ−１ｂ変換酵素阻害剤（例えばＶｘ７４０）、抗Ｐ７、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えばキナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、本明細書で述べる可溶性サイトカイン受容体及びその誘導体、及び抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦと併用し得る。
【０１４２】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用することができる多発性硬化症のための治療薬の好ましい例は、インターフェロンβ、例えばＩＦＮβ−１ａ及びＩＦＮβ−１ｂ；コパキソン、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体、ＩＬ−１２拮抗物質を含む。
【０１４３】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）と併用することができる、炎症性腸疾患（例えばクローン病、潰瘍性大腸炎）を治療する又は予防するための物質の非限定的な例は以下を含む：ブデゾニド；上皮増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体拮抗物質；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書で述べるＴＮＦ拮抗物質；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及び／又はＴＧＦβサイトカイン又はその作動物質（例えば作動性抗体）；ＩＬ−１１；プレドニゾロン、デキサメタゾン又はブデゾニドのグルクロニド又はデキストラン複合プロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；徐放性メサラジン；メトトレキサート；血小板活性化因子の拮抗物質（ＰＡＦ）；シプロフロキサシン；及びリグノカイン。
【０１４４】
一実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）は、免疫応答、例えば移植片拒絶反応を調節することに関与する他の標的を対象とする１又はそれ以上の抗体と併用して使用することができる。本発明のＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質と併用することができる、免疫応答を治療する又は予防するための物質の非限定的な例は以下を含む：ＣＤ２５（インターロイキン２受容体−ａ）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４（ＣＤ８０（Ｂ７．１）、例えばＣＴＬＡ４  Ｉｇ−アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標））、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳ及び／又はＣＤ８６（Ｂ７．２）を含むがこれらに限定されない、他の細胞表面分子に対する抗体。さらに他の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質は、１又はそれ以上の一般的な免疫抑制剤、例えばシクロスポリンＡ又はＦＫ５０６と組み合わせて使用される。
【０１４５】
他の実施形態では、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）は、自己免疫疾患、炎症性疾患等に対するワクチンアジュバントとして使用される。これらの種類の疾患の治療のためのアジュバントの組合せは、自己免疫に関与する標的自己抗原、すなわち自己抗原、例えばミエリン塩基性タンパク質；炎症性自己抗原、例えばアミロイドペプチドタンパク質、又は移植抗原、例えば同種抗原からの多種多様な抗原と組み合わせた使用に適する。抗原は、以下のいずれかのタンパク質並びにフラグメントに由来するペプチド又はポリペプチドを含み得る：糖類、タンパク質、ポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド、自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質、移植抗原、アレルゲン、又は他の高分子成分。一部の場合、２個以上の抗原が抗原組成物中に含まれる。
【０１４６】
例えば、本発明のアジュバントの組合せを含む、脊椎動物宿主においてアレルゲンに対する応答を抑えるための望ましいワクチンは、アレルゲン又はそのフラグメントを含有するものを含む。そのようなアレルゲンの例は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８３０，８７７号及び国際公開公報ＷＯ９９／５１２５９に述べられており、花粉、昆虫毒液、動物のふけ、真菌胞子及び薬物（例えばペニシリン）を含む。ワクチンは、アレルギー反応の公知の原因であるＩｇＥ抗体の産生に干渉する。もう１つの例では、本発明のアジュバントの組合せを含む、脊椎動物宿主においてアミロイド沈着によって特徴付けられる疾患を予防する又は治療するための望ましいワクチンは、アミロイドペプチドタンパク質（ＡＰＰ）の部分を含有するものを含む。この疾患は、アルツハイマー病、アミロイドーシス又はアミロイド原性疾患のように様々に称される。それ故、本発明のワクチンは、本発明のアジュバントの組合せプラスＡβペプチド並びにＡβペプチドのフラグメント及びＡβペプチド又はそのフラグメントに対する抗体を含有する。
【０１４７】
１）細胞機能を示す抗原を下方調節すること；及び２）免疫抑制を管理するための併用療法、の方法は、当分野において周知である（例えばXiao et al. (2003) BioDrugs 17:103-11; Kuwana (2002) Hum. Immunol. 63:1156-63; Lu et al. (2002) Transplantation 73:S19-S22; Rifle et al. (2002) Transplantation 73:S1-S2; Mancini et al. (2004) Crit. Care. Nurs. Q. 27:61-64参照）。
【０１４８】
本発明のもう１つの態様は、従って、他の治療化合物と共にＩＬ−１７Ｆシグナル伝達拮抗物質（例えばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ阻害性ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント及び／又は融合タンパク質を含む）；阻害性抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ｒ又はＩＬ−１７ＲＣ抗体；及び／又は拮抗性低分子等）の投与を実施するためのキットに関する。一実施形態では、キットは、１又はそれ以上の別々の医薬製剤中に、製薬担体中に製剤された１又はそれ以上の結合薬剤、及び適切に製剤された少なくとも１つの作用物質、例えば治療薬を含む。
【０１４９】
本明細書を通じて言及される全ての参考文献、特許及び公開特許出願の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１５０】
以下の実施例は、本発明を説明するための実施形態を提供するものであり、いかなる意味においても本発明を限定しない。当業者は、数多くの他の実施形態が本発明の範囲内に包含されることを認識する。
【０１５１】
実施例は、従来の方法、すなわちベクターの構築、ポリペプチドをコードする遺伝子のそのようなベクター及びプラスミドへの挿入、そのようなベクター及びプラスミドの宿主細胞への導入、及び宿主細胞におけるそのようなベクター及びプラスミドからのポリペプチドの発現において使用するそのような方法の詳細な説明を含まない。そのような方法は当業者に周知である。
（実施例１）
ＩＬ−１７Ｆを介した炎症応答及び炎症性疾患、例えば慢性関節リウマチ、炎症性呼吸器疾患及び炎症性腸疾患への関与
実施例１．１：ナイーブマウスにおけるヒトＩＬ−１７Ｆ投与は腹腔への好中球流入を誘導する
【０１５２】
ＩＬ−１７Ｆ処置が関節軟骨によるプロテオグリカン破壊の上昇及びプロテオグリカン合成の低下を生じさせるという所見(Hymowitz et al. (2001) EMBO J. 20:5332-41)は、関節組織の炎症性疾患の発症におけるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達の役割を示唆する。実際に、慢性関節リウマチ及び変形性関節症を有する患者からの滑液試料は、プロテオグリカン、例えばアグリカン、ケラチン及びコラーゲンの破壊を示し（例えばWitter et al. (1987) Arth. Rheum. 30:519-29 and Yagi et al. (2005) J. Orthop. Res. 23(5):1128-38参照）、インビトロでの関節炎モデルは、マトリックス及びプロテオグリカン破壊を呈示することによってこの現象を模倣する(Neidhart et al. (2000) Arth. Rheum. 43:1719-28)。
【０１５３】
加えて、喘息に罹患している患者から単離したＢＡＬ試料(Kawaguchi et al. (2002) J. Immunol.167:4430-35)及び炎症性腸疾患、例えば潰瘍性大腸炎又はクローン病に罹患している患者から単離した結腸試料(Gurney et al. (2003) GTCBIO Conference: Cytokines and Beyond)において認められるＩＬ−１７Ｆの発現上昇は、肺及び腸組織の炎症性疾患におけるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達についての付加的な役割を示唆する。炎症応答におけるＩＬ−１７Ｆシグナル伝達の役割を検討するため、ナイーブマウスにＰＢＳ（対照として）又はヒトＩＬ−１７Ｆ（配列番号２）１００μｇを腹腔内注射した。処置の数時間後に、末梢血（ＰＢ；１、２、４、６、８及び１０時間後）及び腹腔（ＰＥＣ；２、４、６、８及び１０時間後）からの試料を採取し、各々の試料中の絶対好中球数（ＡＮＣ）を測定した。表２のデータは、血液及び腹腔中の好中球数を上昇させるＩＬ−１７Ｆの能力を反映する。この作用は、慢性関節リウマチ及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に罹患している患者で認められる好中球増加を説明すると考えられる。
表２．ＰＢＳ（ｎ＝５）又はＩＬ−１７Ｆ（ｎ＝５）を注射したマウスから単離した末梢血（ＰＢ）及び腹腔（ＰＥＣ）試料における絶対好中球数（ＡＮＣ；平均±ＳＥＭ）。星印は、対照試料と比較してｐ値＜０．０５を表わす。
【表２】
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実施例１．２：ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達は炎症性関節疾患において役割を果たす
【０１５４】
炎症、特に関節疾患（例えば関節炎）に関わる炎症応答へのＩＬ−１７Ｆシグナル伝達の関与をさらに評価するため、一次軟骨細胞おける炎症性サイトカインの転写に関与する主要因子、すなわちＮＦ−κＢを活性化するＩＬ−１７Ｆの能力を測定した。一次ヒト又はブタ軟骨細胞をＮＦ−κＢレポーター遺伝子系を発現するアデノウイルスに感染させた（１００ＭＯＩ）。これは、ＮＦ−κＢ応答性プロモーター（ＢＤ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍｓ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）によって制御されるルシフェラーゼ遺伝子の発現を測定することにより、内因性ＮＦ−κＢの活性化（すなわち細胞質から核へのＮＦ−κＢの転移）を検出する。４８−７２時間後、感染軟骨細胞を様々な濃度のＩＬ−１７Ａ（配列番号４）又はＩＬ−１７Ｆと共に培養した。ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆとのインキュベーションの４時間後、細胞を室温で２０分間、溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）２５μｌに溶解し、自動発光測定装置を用いてＮＦ−κＢの活性化を測定した。データは、ＩＬ−１７Ｆが一次ヒト軟骨細胞（図１Ａ）及び一次ブタ軟骨細胞（図１Ｂ）においてＮＦ−κＢを用量依存的に活性化したことを示す。最後に、ＮＦ−κＢをバックグラウンド以上のレベルまで活性化するために必要なＩＬ−１７Ｆの量は、ＮＦ−κＢをバックグラウンド以上のレベルまで活性化するために必要なＩＬ−１７Ａの量と同様であった（図１Ａ）。
【０１５５】
一次軟骨細胞においてサイトカイン転写因子、ＮＦ−κＢを活性化するＩＬ−１７Ｆの能力は、ＩＬ−１７Ｆが、例えば関節炎の発症の間に、関節組織の炎症において果たす役割が炎症性サイトカインの誘導を含むことを示唆する。関節組織による炎症性サイトカイン産生へのＩＬ−１７Ｆの作用を試験するため、慢性関節リウマチ（ＲＡ）と診断された２名の患者から単離したヒト線維芽細胞様滑膜細胞を２４穴プレートに半集密（semi-confluence）に接種し、１５０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆの不在下又は存在下で培養した。４８時間目に上清を収集し、多重サイトカインシステム（Ｐｉｅｒｃｅ−Ｂｉｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いてサイトカイン産生を評価した。図２に示すように、ＩＬ−１７Ｆは、ＲＡ患者から単離したヒト線維芽細胞様滑膜細胞による炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−６及びＩＬ−８、及びケモカイン、例えばＭＣＰ−１及びＧＲＯ−αの産生を誘導した。
【０１５６】
一次軟骨細胞においてＮＦ−κＢを活性化し、ＲＡ患者からのヒト線維芽細胞様滑膜細胞による炎症性サイトカイン及びケモカイン、特に好中球動員に関与するケモカインの産生を誘導するＩＬ−１７Ｆの能力は、関節組織による炎症応答を媒介する上でのＩＬ−１７Ｆの役割を裏付ける。これらのデータは、対照動物と比較してコラーゲン誘導の関節炎に罹患しているマウスの足におけるＩＬ−１７Ｆ発現上昇を明らかにしたデータ（データは示していない）及び変性関節軟骨及び関節腔内の好中球の存在（データは示していない）と合わせて考慮すると、ＩＬ−１７Ｆが、その後周辺組織への損傷を引き起こす免疫細胞（例えば好中球）を炎症部位へと動員する、サイトカイン及びケモカイン産生を誘導することによって炎症性関節疾患（例えば慢性関節リウマチ）を媒介することを示唆する。
実施例１．３：一次マウス肺線維芽細胞は、炎症性ケモカイン及びサイトカインの産生を上方調節することによってＩＬ−１７Ｆに応答する
【０１５７】
炎症性呼吸器疾患の発症におけるＩＬ−１７Ｆの役割を試験するため、マウス肺線維芽細胞（ＭＦＬ）を２４穴プレートで半集密に増殖させ、ＩＬ−１７Ｆ（５０ｎｇ／ｍｌ）で処置した。４８時間目に上清を収集し、多重サイトカインシステム（Ｐｉｅｒｃｅ−Ｂｉｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ)を用いてサイトカイン産生を評価した。図３は、ＩＬ−１７Ｆが、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−６、及びケモカイン、例えばＪＥ（ＣＣＬ２）及びＫＣのＭＦＬ産生を誘導したことを示す。これらの結果は、ＩＬ−１７Ｆが、炎症性サイトカイン及び白血球化学誘引物質の産生を誘導することによって肺の炎症性疾患（例えばＣＯＰＤ、喘息、アレルギー、嚢胞性線維症）に関わる炎症応答に寄与することを示唆する。
（実施例２）
ＩＬ−１７Ｆ受容体の特性決定
実施例２．１：ＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣに結合する
【０１５８】
ＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７ファミリーの中でＩＬ−１７Ａとの最大の相同性を持ち、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７受容体を通してシグナル伝達することが示唆されているので、ＩＬ−１７ＦがＩＬ−１７Ａについての受容体（すなわちＩＬ−１７Ｒ；配列番号６）に結合する能力を測定した。ＩＬ−１７Ｆが、そのリガンドが現在まで特定されていないＩＬ−１７受容体であるＩＬ−１７ＲＣに結合する能力も試験した。
【０１５９】
ＥＬＩＳＡプレートを１．５μｇ／ｍｌ ヒトＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ（配列番号３４）又は１．５μｇ／ｍｌ ヒトＩＬ−１７ＲＣ−Ｉｇ（配列番号３５）と共に一晩インキュベートした。プレートをＰＢＳ／１％ＢＳＡで洗い、ビオチン複合ＩＬ−１７Ａ又はビオチン複合ＩＬ−１７Ｆの連続希釈と共に室温（ＲＴ）で２時間インキュベートした。洗浄後、飽和濃度のアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を添加し、プレートをさらに１時間ＲＴでインキュベートした。非結合アビジン−ＨＲＰをＰＢＳ／１％ＢＳＡを用いて洗い流し、ＴＢＭを用いてＥＬＩＳＡを展開した。結合ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆを、４０５ｎｍでの吸光度を測定することによって検出した。
【０１６０】
図４Ａ及び４Ｂは、それぞれＩＬ−１７ＦがＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣの両方に結合することを明らかにし、ＩＬ−１７Ｆは、ＩＬ−１７ＲＣに対するその親和性に比べてＩＬ−１７Ｒにより大きな親和性を有する（ＩＬ−１７Ｒ：ＩＬ−１７ＦについてのＥＣ５０値＝１．２３μｇ／ｍｌ；ＩＬ−１７ＲＣ：ＩＬ−１７ＦについてのＥＣ５０値＝１５μｇ／ｍｌ）。しかし、ＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７Ｒに結合したが、この受容体に対するその親和性は、同じ受容体に対するＩＬ−１７Ａの親和性よりも低かった（ＩＬ−１７Ｒ：ＩＬ−１７ＦについてのＥＣ５０値＝１．２３μｇ／ｍｌ；ＩＬ−１７Ｒ：ＩＬ−１７Ａ＝０．３５μｇ／ｍｌ；図４Ａ）。
実施例２．２：抗ＩＬ−１７Ｒ抗体及びＩＬ−１７ＲＣ−Ｉｇ融合タンパク質はＩＬ−１７Ｆ活性をブロックするが、ＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質はＩＬ−１７Ｆ活性をブロックしない
【０１６１】
ＩＬ−１７Ｆ受容体結合をさらに特性決定するため、ヒト線維芽細胞（１０４細胞／穴）を、漸増濃度のＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質、ＩＬ−１７ＲＣ−Ｉｇ融合タンパク質又は抗ＩＬ−１７Ｒ抗体の存在下に０．５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ａ又は２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆで刺激した。２４時間後、市販のＥＬＩＳＡ（R&D, Minneapolis, MN）を使用し、収集した上清のＧＲＯ−α濃度を測定した。ＧＲＯ−αの濃度は標準曲線に基づいて測定した。
【０１６２】
図５は、ＩＬ−１７Ａ（Ａ）又はＩＬ−１７Ｆ（Ｂ）と共にインキュベートしたときのヒト線維芽細胞のＧＲＯ−α産生上昇を明らかにし、実施例１．２の所見（ＩＬ−１７Ｆと共に培養したヒト線維芽細胞様滑膜細胞による炎症性サイトカイン産生の上昇を明らかにする）をさらに確証付ける。図５Ａは、３つの受容体拮抗物質全てが、すなわちＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ（ｈ１７Ｒ．Ｆｃ）、ＩＬ−１７ＲＣ−Ｉｇ（ｈ１７ＲＨ２．Ｆｃ）及び抗ＩＬ−１７Ｒ抗体（ａｈＩＬ１７Ｒ）が、ＧＲＯ−αを誘導するＩＬ−１７Ａの能力をブロックしたことを付加的に示す。これらのデータは、ＩＬ−１７ＡがＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣ受容体の両方に結合し、ＩＬ−１７Ａシグナル伝達のために両方の受容体を必要とすることを示唆する。これに対し、抗ＩＬ−１７Ｒ抗体とＩＬ−１７ＲＣ−Ｉｇ融合タンパク質だけがＩＬ−１７Ｆ活性を著明にブロックし、ＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質はＩＬ−１７Ｆ活性をブロックしなかった（図５Ｂ）。図５Ｂに示すデータは、ＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７Ｒに結合するが（図４参照）、ＩＬ−１７Ｆを介したシグナル伝達のためにはこの受容体を必要としないことを示唆する。合わせて考慮すると、これらのデータは、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆはヒト線維芽細胞へのそれらの活性を媒介するために異なる受容体を使用し得ることを示唆する。
（実施例３）
抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の作製と特性決定
実施例３．１：抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の作製
【０１６３】
５匹のマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，Ｍａｉｎｅ）の群にヒトＩＬ−１７ＦをコードするｃＤＮＡ２μｇを注射した。精製プラスミドｃＤＮＡを、１μｇ ｃＤＮＡ／０．５ｍｇ金の濃度まで金ビーズ上に沈殿させた。金ビーズ及び沈殿ｃＤＮＡを、２回の重複しないショットで毎月、遺伝子充填Ｈｅｌｉｏｓを使用して１１週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスの腹部に皮内送達した。これらの動物を４週ごとに免疫し、この期間の終了時に脾臓を切除した。ＩＬ−１７Ｆ  ｃＤＮＡに加えて精製ＩＬ−１７Ｆタンパク質を用いて再免疫を実施した。リンパ球懸濁液を得るために脾臓を処理し、生じた懸濁液を、確立された手順により(Oi and Herzenberg (1980) in Selected Methods in Cellular Immunology, Mishel and Schigi, eds. W. J. Freeman Co., San Francisco, CA, p. 351)、５０％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール１５００を用いて骨髄腫細胞系６５３／Ｐ３と融合した。融合細胞を２×１０５細胞／穴の密度で９６穴マイクロタイタープレートに塗布し、２４時間後にＨＡＴ選択に供した。推定上の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を固相及び液相ＥＬＩＳＡによって特定した。上記アッセイに関して陽性のハイブリドーマを含むウエルを増殖させ、限界希釈によってクローン化して、凍結保存した。固相ＥＬＩＳＡを用いて抗体のアイソタイプを決定した。精製ヒトＩＬ−１７Ｆ−Ｉｇを使用して９６穴マイクロタイタープレートを被覆し、種々のアイソタイプ特異的ビオチン複合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｚｙｍｅｄ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）によって検出した。ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と複合したストレプトアビジンを添加し、比色定量基質を用いて特異的に結合した酵素を測定した。
実施例３．２：一部の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体はＩＬ−１７ＲへのＩＬ−１７Ｆ結合を阻害する
【０１６４】
ＩＬ−１７ＲへのＩＬ−１７Ｆの結合をブロックする抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の能力を評価するため、実施例２．１で述べたＥＬＩＳＡに修正を加えて阻害アッセイを実施した。簡単に述べると、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の連続希釈を７μｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆと共にＲＴで１時間プレインキュベートした。次に各々のサイトカイン：抗体混合物を、１．５μｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ  １００μｌ／穴であらかじめ被覆したＥＬＩＳＡプレートの別々のウエルに添加した。混合物をウエル中ＲＴで１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／１％ＢＳＡで洗浄した後、飽和濃度のアビジン−ＨＲＰを添加し、プレートをさらに１時間ＲＴでインキュベートした。非結合アビジン−ＨＲＰをＰＢＳ／１％ＢＳＡを用いて洗い流した。ＴＭＢを用いてアッセイを展開した。図６は、試験した６個の抗体のうち５個、すなわち抗ＩＬ−１７Ｆ−０１、抗ＩＬ−１７Ｆ−０２、抗ＩＬ−１７Ｆ−０６、抗ＩＬ−１７Ｆ−０７及び（より小さな程度であるが）抗ＩＬ−１７Ｆ−０５が、ＩＬ−１７ＲへのＩＬ−１７Ｆの結合をブロックできたことを明らかにする。これに対し、抗ＩＬ−１７Ｆ−０３抗体はＩＬ−１７ＲへのＩＬ−１７Ｆ結合を阻害しなかった（図６）。
実施例３．３：一部の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体はＩＬ−１７ＲＣへのＩＬ−１７Ｆ結合を阻害する
【０１６５】
ＩＬ−１７ＲＣへのＩＬ−１７Ｆの結合をブロックする抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の能力を評価するため、１．５μｇ／ｍｌ ＩＬ−１７ＲＣ−Ｉｇ及び２０μｇ／ｍｌの濃度のＩＬ−１７Ｆであらかじめ被覆したプレートを使用して、上記で述べたように、修正ＥＬＩＳＡを用いて阻害アッセイを実施した。図７は、試験した６個の抗体のうち２個（抗ＩＬ−１７Ｆ−０１及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７）がＩＬ−１７ＲＣへのＩＬ−１７Ｆの結合を阻害できたことを明らかにする。これに対し抗ＩＬ−１７Ｆ−０２、抗ＩＬ−１７Ｆ−０３、抗ＩＬ−１７Ｆ−０５及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０６抗体は、ＩＬ−１７ＲＣへのＩＬ−１７Ｆ結合を阻害しなかった（図７）。図６と７を合わせて考慮すると、データは、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体がＩＬ−１７Ｆ上の異なる部位に結合することを示唆するのみならず、抗ＩＬ−１７Ｆ−０２及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０６抗体はＩＬ−１７Ｆ：ＩＬ−１７Ｒ相互作用のための独自のＩＬ−１７Ｆ上の部位に結合する及び／又は上記部位への結合を阻害するが、一方抗ＩＬ−１７Ｆ−０１及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体はＩＬ−１７ＲとＩＬ−１７ＲＣの間で共有されるＩＬ−１７Ｆ上の部位に結合する及び／又は上記部位への結合を阻害することも示唆する。その結果として、これら６個の抗体は、ＩＬ−１７Ｆ上の異なる部位、すなわちエピトープを定義するために使用し得る。
（実施例４）
抗ＩＬ−１７Ｆ抗体はＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害する
実施例４．１：抗ＩＬ−１７Ｆ抗体はＩＬ−１７Ｆを介したサイトカイン産生を阻害する
【０１６６】
実施例３で述べた抗ＩＬ−１７Ｆ抗体のいずれかがＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害するかどうかを調べるため、ヒト線維芽細胞（１０４細胞／穴）を、漸増濃度の対照抗体（ｍＩｇＧ１）又はＩＬ−１７Ｆに対する抗体、すなわち抗ＩＬ−１７Ｆ−０１、抗ＩＬ−１７Ｆ−０２、抗ＩＬ−１７Ｆ−０３、抗ＩＬ−１７Ｆ−０５、抗ＩＬ−１７Ｆ−０６又は抗ＩＬ−１７Ｆ−０７の存在下にヒト２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆで刺激した。２４時間後、上清を収集し、市販のＥＬＩＳＡを用いてＧＲＯ−α濃度を測定した。産生されたＧＲＯ−αの濃度を標準曲線に基づいて決定した。
【０１６７】
図８は、抗ＩＬ−１７Ｆ−０１、抗ＩＬ−１７Ｆ−０２及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体が、ヒト線維芽細胞によるヒトＩＬ−１７Ｆを介したＧＲＯ−α産生を阻害することを明らかにする。図６、７及び８に示す結果は、その後の動員及びＩＬ−１７ＲＣを通しての必要なシグナル伝達を生じさせる、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達がＩＬ−１７ＲへのＩＬ−１７Ｆ結合によって開始されるモデルを示唆する。
実施例４．２：炎症性疾患の治療における抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の潜在的使用
【０１６８】
ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患（例えば自己免疫疾患、呼吸器疾患、炎症性腸疾患等）の治療における治療薬としての抗ＩＬ−１７Ｆ抗体、特に抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体の潜在的可能性を調べるため、ＮＦ−κＢレポーターベクターに感染させたブタ一次軟骨細胞を、以下の１つの不在下又は存在下にＲＴで１時間プレインキュベートした１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ａ又は５００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆと共に４８時間インキュベートした：２０μｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質（ＩＬ１７Ｒ／Ｆｃ）、１０μｇ／ｍｌ 抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体（抗ＩＬ１７Ｆ）又は１０μｇ／ｍｌ対照抗体（マウスＩｇＧ）。図９は、ＩＬ−１７Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質のインキュベーションはＩＬ−１７Ａを介したＮＦ−κＢの活性化を阻害したが、ＩＬ−１７Ｆを介したＮＦ−κＢの活性化には影響を及ぼさなかった。これに対し、抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体は、ＩＬ−１７Ｆを介したＮＦ−κＢの活性化を阻害することができたが、ＩＬ−１７Ａを介したＮＦ−κＢの活性化には影響を及ぼさなかった（図９）。
【０１６９】
抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の存在下で阻害されたＮＦ−κＢの活性化がサイトカイン産生の阻害と相関するかどうかを評価するため、実施例１．２で述べたように、ＩＬ−１７Ｆと共にインキュベートしたヒト線維芽細胞様滑膜細胞を、アイソタイプ対照抗体、抗ＩＬ−１７Ｆ−０１抗体又は抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体と共にインキュベートした。ＩＬ−６、ＩＬ−８又はＧＲＯ−αの濃度を実施例１．２で述べたように評価した。図１０は、ＩＬ−１７ＦのＮＦ−κＢ活性化を阻害する抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の能力が、慢性関節リウマチを有する２名の患者から単離した一次線維芽細胞様滑膜細胞によるＩＬ−６、ＩＬ−８及びＧＲＯ−αの産生低下と相関したことを明らかにする。これらのデータは、ＩＬ−１７Ｆに対する阻害性抗体を含むがこれらに限定されない、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達の拮抗物質が炎症応答を軽減するために使用し得ることを示唆する。特に、ＩＬ−１７Ｆの阻害剤は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達に関連する疾患、すなわちＩＬ−１７Ｆ関連疾患に結びつく炎症応答の治療において使用し得る。
（実施例５）
ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａに対する抗体は、組換え及び天然ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を検出し、精製するために使用し得る
実施例５．１：ＥＬＩＳＡによる組換えＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆの検出
【０１７０】
ヒトＩＬ−１７Ａ、ヒトＩＬ−１７Ｆ又はヒトＩＬ−１７ＡとヒトＩＬ−１７Ｆの両方をコードするｃＤＮＡを、２９３細胞を修飾するために使用した。これらのｃＤＮＡの発現は、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆ二量体の生産を生じさせた。これらの細胞、すなわち組換えサイトカインに由来する馴化培地、及び市販の抗体又は上述した抗体を、ＩＬ−１７Ａタンパク質、ＩＬ−１７Ｆタンパク質又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出のためのＥＬＩＳＡ形式を開発するために使用した。ＩＬ−１７Ａタンパク質の検出、すなわちＩＬ−１７Ａホモ二量体又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体としての検出のために、抗ＩＬ−１７Ａ抗体を捕獲抗体として使用し、ビオチン標識抗ＩＬ−１７Ａ抗体を検出抗体として使用した（どちらの抗体もＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮより入手可能である）。ＩＬ−１７Ｆタンパク質の検出、すなわちＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体としての検出のために、抗ＩＬ−１７Ｆ−０１抗体（上述した）及びビオチン標識抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体（上述した）をそれぞれ捕獲及び検出抗体として使用した。ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出のために、抗ＩＬ−１７Ａ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を捕獲抗体として使用し、ビオチン標識抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体を検出抗体として使用した。ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆ抗体は交差反応性ではない（データは示していない）。
【０１７１】
ＥＬＩＳＡを周知のプロトコールに従って実施した。簡単に述べると、ＥＬＩＳＡプレートを捕獲抗体２μｇ／ｍｌと共に一晩インキュベートした。過剰の捕獲抗体を除去するためにプレートをＰＢＳ／１％ＢＳＡで洗い、馴化培地（すなわち組換えＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆサイトカイン）の連続希釈と共にＲＴで２時間インキュベートした。非結合サイトカインを洗い流した後、ビオチン複合展開抗体（developing antibody）０．０７〜０．５μｇ／ｍｌを添加し、プレートをＲＴで２時間インキュベートした。非結合展開抗体を除去するためにプレートを洗浄し、飽和濃度のアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を添加して、プレートをＲＴで１時間インキュベートした。非結合アビジン−ＨＲＰを、ＰＢＳ／１％ＢＳＡを用いて洗い流した。ＴＢＭを用いてアッセイを展開した。
【０１７２】
図１１は、組換えＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体の検出、並びに組換えＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出を示す。捕獲及び検出抗体がどちらも１つのサイトカイン（すなわちＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆ）を対象とする場合、そのサイトカインのホモ二量体とヘテロ二量体の両方が検出された（図１１Ａ及び１１Ｂ）。これに対し、抗ＩＬ−１７Ａ抗体及び抗ＩＬ−１７Ｆ抗体をそれぞれ捕獲及び検出抗体として使用するときは、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体だけが検出される（図１１Ｃ）。これらのデータは、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆ抗体対が、一次細胞に由来する馴化培地中の天然（すなわち非組換え）ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を検出し、潜在的に精製するために使用し得ることを示唆する。加えて、これらの結果は、抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体も、上述したように抗ＩＬ−１７Ｆ−０１抗体及び他の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体と同様に、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を対象とし得ることを示唆する。
実施例５．２：天然ＩＬ−１７Ａホモ二量体、天然ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び天然ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出
【０１７３】
ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞（５×１０５細胞／ｍｌ）を、ＩＬ−２１（６０ｎｇ／ｍｌ）又はＩＬ−２３（０．５ｎｇ／ｍｌ）の不在下又は存在下に、抗ＣＤ３結合ビーズ（５μｇ／１０７ビーズ）及び漸増濃度の抗ＣＤ２８抗体（Ｒ＆Ｄ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で活性化した。一次活性化の７２時間後に上清を収集し、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆの濃度を、上述したように（実施例５．１）それぞれＩＬ−１７Ａタンパク質又はＩＬ−１７Ｆタンパク質に関してＥＬＩＳＡによって測定した。図１２は、ＩＬ−２１又はＩＬ−２３が、一次活性化を受けるＴ細胞によるＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆ産生を増強するために使用し得ることを明らかにする。ＩＬ−２、ＩＬ−７及びＩＬ−１５も、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激時にＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ産生を誘導した（データは示していない）。
【０１７４】
ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞（５×１０５細胞／ｍｌ）を、抗ＣＤ３結合ビーズ（５μｇ／１０７ビーズ）及び可溶性抗ＣＤ２８抗体で４８時間活性化した。活性化Ｔ細胞を採集し、一晩休止させて、ビーズ結合抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８抗体、ＩＬ−２１（６０ｎｇ／ｍｌ）又はＩＬ−２３（０．５ｎｇ／ｍｌ）の存在下で再活性化した。二次活性化の７２時間後に上清を収集し、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆの産生を、上述したようにそれぞれＩＬ−１７Ａタンパク質又はＩＬ−１７Ｆタンパク質に関してＥＬＩＳＡによって測定した。図１３は、ＩＬ−２１又はＩＬ−２３が、二次活性化を受けるＴ細胞によるＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆ産生を増強するためにＣＤ２８共刺激と相乗作用することを明らかにする。
【０１７５】
ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞（２×１０６細胞／ｍｌ）を、抗ＣＤ３結合ビーズ（５μｇ／１０７ビーズ）及び可溶性抗ＣＤ２８抗体（０．５μｇ／ｍｌ）による一次活性化に供した。４８時間の一次活性化後、馴化培地（ＣＭ１）を収集し、細胞を一晩休止させた。その翌日、細胞を計数し、上記一次活性化に関して述べたように２×１０６細胞／ｍｌで、及び６０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−２１の存在下で再刺激した。７２時間の再刺激後、馴化培地（ＣＭ２）を収集した。そのまま及び１：１０希釈のＣＭ１及びＣＭ２におけるＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の存在又は不在を、実施例５．１で述べたＥＬＩＳＡ形式を用いて評価した。
【０１７６】
データは、ＣＭ１培地、すなわち一次活性化を受けたＴ細胞の培地中ではＩＬ−１７Ａホモ二量体又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体がほとんど若しくは全く検出されなかったことを示す（図１４Ａ及び１４Ｃ）。これに対し、再刺激したＴ細胞の馴化培地（ＣＭ２）は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体だけでなく、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体も含んだ（図１４Ａ、１４Ｂ及び１４Ｃ）。これらのデータは、ＩＬ−１７サイトカインの「天然」ソースであるＴ細胞が、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆのホモ二量体とヘテロ二量体の両方を発現することを示す。これらの結果はまた、ＩＬ−１７Ｆを対象とする抗体がＩＬ−１７Ｆホモ二量体とＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の両方を認識し、それらと反応できること、及びそのような抗体はＩＬ−１７Ｆホモ二量体及び／又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を単離し、それらの生物学的活性を阻害するために使用し得ることを示唆する。
実施例５．３：Ｔ細胞からの天然ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の免疫沈降
【０１７７】
実施例５．２で述べたように、ＩＬ−２１の存在下で二次活性化を受けるＴ細胞に由来する馴化培地（ＣＭ２）を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ−０２（Ｗｙｅｔｈ）又はマウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆ−０１（Ｗｙｅｔｈ）モノクローナル抗体２０μｇ／ｍｌと、静かに回転させながら４℃で１時間混合した。各々の混合物からの抗体複合体を、静かに回転させながら４℃で一晩、水和プロテインＡ−セファロース５０μｌで別々に免疫沈降させた。次に免疫沈降ペレットをＰＢＳ／１％トゥイーン２０、ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０及びＰＢＳ／０．０５％トゥイーン２０で連続的に洗った。免疫沈降ペレットを非還元試料緩衝液に再懸濁し、抗ヒトＩＬ−１７Ａビオチン複合体（Ｒ＆Ｄ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）又はウサギ抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体（Ｗｙｅｔｈ）のいずれかによるウエスタンブロット分析のために１０％トリシンゲルに負荷した。
【０１７８】
ＩＬ−１７Ｆホモ二量体（３５ｋＤａ）を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆ−０１抗体を用いて免疫沈降させ、ウサギ抗ヒトＩＬ−１７Ｆポリクローナル抗体でのウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ５００μｌから検出した。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体（３２ｋＤａ）を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ−０２抗体を用いて免疫沈降させ、ウサギ抗ヒトＩＬ−１７Ｆポリクローナル抗体でのウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ５００μｌから検出した（図１５）。モノクローナル又はポリクローナル抗体のいずれもＩＬ−１７Ａと交差反応しなかった（データは示していない）。同様に、ＩＬ−１７Ａホモ二量体（３１ｋＤａ）及びＩＬ−１７Ｆ／Ａヘテロ二量体を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ−０２抗体を用いて免疫沈降させ、ポリクローナルヤギ抗ＩＬ−１７Ａビオチニル化抗体を用いたウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ７００μｌから検出した。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆ−０１抗体を用いて免疫沈降させ、ポリクローナルヤギ抗ＩＬ−１７Ａビオチニル化抗体を用いたウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ７００μｌから検出した（図１６）。上記ポリクローナル抗体は、高タンパク質濃度でＩＬ−１７Ｆホモ二量体と交差反応する（データは示していない）。
【０１７９】
対照（図１５及び１６のレーン２）として、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体を、Ｈｉｓ標識ヒトＩＬ−１７Ｆを過剰発現する濃縮馴化培地から精製した。簡単に述べると、濃縮馴化培地を１００ｍＭトリスｐＨ８／１Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭイミダゾールで１：１希釈し、Ｎｉｃｋｅｌ−ＮＴＡ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗカラム（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）に負荷した。ホモ二量体を２５０ｍＭイミダゾール緩衝液で段階溶出した。タンパク質をＰＢＳ−ＮＳＯに対して透析した。次にＨｉｓ６タグを除去するためにホモ二量体を室温で４時間、ＥＫ（エンテロキナーゼ）で消化した。消化したタンパク質を５０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ８／２０ｍＭイミダゾール／３００ｍＭ ＮａＣｌで１：１希釈し、Ｎｉｃｋｅｌ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）に結合した。標識除去したタンパク質を４０ｍＭイミダゾール緩衝液で溶出し、ＰＢＳ  ＮＳＯに対して透析した。対照（図１５のレーン５）として使用するための精製ＩＬ−１７Ａホモ二量体をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）より購入した。
実施例５．４：トランスフェクトＣＯＳ細胞からの組換えＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の免疫沈降
【０１８０】
組換えヒトＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７ＡがＣＯＳ細胞における発現時にヘテロ二量体を形成するかどうか、及び抗ＩＬ−１７Ｆ及び抗ＩＬ−１７Ａ抗体が免疫沈降することができ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を検出できるかどうかを調べるための実験を実施した。ＣＯＳ細胞培養物にＩＬ−１７Ｆ  ｃＤＮＡ、ＩＬ−１７Ａ  ｃＤＮＡ又はＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ａの両方のｃＤＮＡをトランスフェクトし、トランスフェクト細胞培養物に、生じたタンパク質を培地中に分泌させた。ＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ａのいずれかの発現又はＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ａの共発現に由来する馴化培地を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ−０２（Ｗｙｅｔｈ）又はマウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆ−０１（Ｗｙｅｔｈ）モノクローナル抗体２０μｇ／ｍｌと、静かに回転させながら４℃で１時間混合した。各々の混合物からの抗体複合体を、静かに回転させながら４℃で一晩、水和プロテインＡ−セファロース５０μｌで別々に免疫沈降させた。次に免疫沈降ペレットをＰＢＳ／１％トゥイーン２０、ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０及びＰＢＳ／０．０５％トゥイーン２０で連続的に洗った。免疫沈降ペレットを非還元試料緩衝液に再懸濁し、ヤギ抗ヒトＩＬ−１７Ａ（Ｒ＆Ｄ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）又はウサギ抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体（Ｗｙｅｔｈ）のいずれかによるウエスタンブロット分析のために１０％トリシンゲルに負荷した。
【０１８１】
ＩＬ−１７Ｆホモ二量体（３５ｋＤａ）及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆ−０１抗体を用いて免疫沈降させ、ウサギ抗ヒトＩＬ−１７Ｆポリクローナル抗体でのウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ５０μｌから検出した（図１７Ａ；それぞれレーン３及び４）。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体（３２ｋＤａ）はまた、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ−０２抗体を用いて免疫沈降させ、ウサギ抗ヒトＩＬ−１７Ｆポリクローナル抗体でのウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ５０μｌから検出した（図１７Ａ；レーン９）。図１７Ａのレーン８〜１０の免疫沈降のために使用したＩＬ−１７Ａ抗体は、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体に対応するバンドがレーン１０において抗ＩＬ−１７Ｆ抗体プローブによって検出されるので、高タンパク質濃度でＩＬ−１７Ｆと交差反応すると思われた。図１７Ｂに示すように、ＩＬ−１７Ａホモ二量体（３１ｋＤａ）及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ−０２抗体を用いて免疫沈降させ、ポリクローナルヤギ抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体を用いたウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ５０μｌから検出した（図１７Ｂ；それぞれレーン３及び４）。また、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を、マウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆ−０１抗体を用いて免疫沈降させ、ポリクローナルヤギ抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体を用いたウエスタンブロット分析によってＣＭ２  ５０μｌから検出した（図１７Ｂ；レーン６）。図１７Ａにおいて免疫沈降のために使用したＩＬ−１７Ａ抗体と異なり、図１７Ｂのレーン５〜７で免疫沈降のために使用したＩＬ−１７Ｆ抗体は、ＩＬ−１７Ａホモ二量体に対応するバンドがレーン５において抗ＩＬ−１７Ａ抗体プローブによってほとんど検出されないので、ＩＬ−１７Ａと有意に交差反応しなかった。
【０１８２】
対照（図１７Ａのレーン６〜７）として、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体を実施例５．３で述べたように精製した。対照（図１７Ａのレーン５）として使用するための精製ＩＬ−１７Ａホモ二量体をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）より購入した。対照精製ＩＬ−１７Ｆホモ二量体は、馴化培地から免疫沈降させたＩＬ−１７Ｆホモ二量体よりもわずかに速く移動する。これはおそらく、グリコシル化の差及び／又は精製試料中のＩＬ−１７Ｆタンパク質上のエピトープタグの欠如によるものであると考えられる。
実施例５．５：組換えＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の精製
【０１８３】
ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を精製する２つの方法を本明細書で提供する。最初の方法では、ＣＯＳ細胞をＨｉｓ６標識ＩＬ−１７Ｆ（配列番号３６）及び非標識ＩＬ−１７Ａでコトランスフェクトした。塩化ナトリウムとイミダゾールをそれぞれ５００ｍＭ及び６ｍＭの最終濃度で馴化培地に添加した。次に馴化培地をＮｉｃｋｅｌ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）に負荷した。それ故、Ｈｉｓタグを含むＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体だけがニッケルカラム上に捕獲された。次にＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体をイミダゾール勾配で分離し、その後Ｈｉｓ６タグを除去するためにＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体をＥＫで消化した。タンパク質をＰＢＳに対して透析した。ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａタンパク質がＩＬ−１７Ｆ／Ａへテロ二量体試料中で検出されることを確認するためにエドマン配列分析法を実施した。Ｎ末端配列の結果は、ヘテロ二量体の存在を確認し、すなわちＩＬ−１７Ｆについての最初の５個のアミノ酸がＲＫＩＰＫ（配列番号３７）であることを示し、ＩＬ−１７ＡについてはＩＶＫＡＧ（配列番号３８）であることを示した。
【０１８４】
第二の方法は、図１８に提示するフローチャートで示される、二元カラム精製スキームを使用した。Ｆｌａｇ標識ヒトＩＬ−１７Ａ（配列番号３９）及びＨｉｓ６標識ヒトＩＬ−１７Ｆ（配列番号３６）を別々のｐＳＭＥＤ２ベクター（Ｗｙｅｔｈ）にクローン化し、リポフェクションによってＨＥＫ２９３細胞において共発現させた。簡単に述べると、細胞をトランスフェクションの２４時間前に２つの１７５ｃｍ２フラスコに接種した。各々のフラスコについて、ｐＳＭＥＤ２／Ｆｌａｇ−ＩＬ−１７Ａ  ２４μｇ＋ｐＳＭＥＤ２／Ｈｉｓ６−ＩＬ−１７Ｆ  ２４μｇを、無血清培地２ｍｌ中でＴＲＡＮＳＩＴ（登録商標）試薬−ＬＴ１（Ｍｉｒｕｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）１２０μｌと混合し、細胞（９０％集密）及び１０％熱不活化ウシ胎仔血清を含むＤＭＥＭ培地２５ｍｌを含むフラスコに添加した。トランスフェクションの１日後、培地を取り出し、細胞を無血清培地で１回洗浄して、新鮮無血清培地を添加した（４０ｍｌ／フラスコ）。馴化培地を４８時間後に採集し、細胞を除去するためにろ過して（０．４５μ）、−２０℃で凍結した。特異抗体を用いたウエスタン分析によってタンパク質発現を確認した。
【０１８５】
馴化培地を、４℃で２時間抗ＦｌａｇＭ２アフィニティー樹脂（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）にバッチ結合した。結合タンパク質、ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を、５０ｍＭトリスｐＨ８／５００ｍＭ ＮａＣｌ／２００μｇ／ｍｌ Ｆｌａｇペプチド（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて溶出した。次にＦｌａｇ溶出物を４℃で一晩Ｎｉｃｋｅｌ−ＮＴＡ樹脂（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）にバッチ結合した。結合タンパク質、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を、５０ｍＭトリスｐＨ８／１Ｍ ＮａＣｌ／５００ｍＭイミダゾールを用いて溶出した。
【０１８６】
ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａホモ二量体を実質的に含まない組換えＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の精製後、ＢＪ細胞培養培地においてＧＲＯ−αレベルを刺激するヘテロ二量体の能力を測定することにより、へテロ二量体の活性をＢＪ細胞で試験した。そこで、ＢＪ培養物を様々な濃度のＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ａホモ二量体又は精製組換えＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体で刺激した。２４時間後、ＢＪ培養物からの上清を収集し、市販のＥＬＩＳＡを用いてＧＲＯ−α濃度を測定した。簡単に述べると、ＢＪ細胞を平底９６穴プレートに５×１０３細胞／穴で接種し、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を含む培地１５μｌを添加した。次にプレートを３７℃で１６−２４時間インキュベートし、その後上清を取り、ＧＲＯ−αに対する抗体による標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いてＧＲＯ−αの濃度を測定した。産生されたＧＲＯ−αの濃度を標準曲線に基づいて測定した。結果を図１９Ａに示す。ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａホモ二量体と同様に、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体はＢＪ細胞においてＩＬ−１７  ＧＲＯ−α濃度を刺激することができる。さらに、図１９Ｂに示すように、抗ＩＬ−１７Ａ抗体又は抗ＩＬ−１７Ｆ抗体と組み合わせた抗ＩＬ−１７Ａ抗体によるＢＪ培養物の処理は、ＧＲＯ−αレベルを刺激するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の能力を無効にした。
実施例５．６：ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の質量分析
【０１８７】
２個のＩＬ−１７単量体の間のジスルフィド結合の直接証拠を提供するために、タンデム型質量分析によってジスルフィド結合の存在を確認し、分子間ジスルフィド結合ペプチド（ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体）を特定した。ジスルフィド結合ペプチドを単離するためにトリプシン切断及び逆相高速液体クロマトグラフィー（ｒｐＨＰＬＣ）を使用し、単離したペプチドをその後ナノＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。簡単に述べると、精製非還元組換えＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体１〜２μｇを１０％ビス−トリスゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で泳動させ、ＩＭＰＥＲＩＡＬ（商標）タンパク質染色液（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）で染色した。陽性染色バンドを切り出し、質量分析のために手動でトリプシン消化した（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。消化のために、切り出したゲル切片をアセトニトリル（ＡＣＮ）中で脱水し、２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）で再水和し、洗浄して、ＡＣＮ中で再び脱水した。プロテアーゼトリプシン（２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液に溶解したトリプシン０．５μｇ）を添加し、再水和によってゲル片に推進(drive)して、３７℃で４時間インキュベートした。生じたペプチドを、６０％ＡＣＮ／１％ギ酸（ＦＡ）及び９０％ＡＣＮ／５％ＦＡのアリコートを用いた３回の連続洗浄によってゲルからさらに抽出した。これらの抽出物を併合し、蒸発させて、最終試料を２％ＡＣＮ及び０．１％ＦＡに再溶解した。
【０１８８】
消化した試料を、Ｍａｇｉｃ  Ｃ１８ビーズ（５μｍ、７５μｍ×１１ｃｍ、Ｍｉｃｈｒｏｍ  ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）を充填したＣ１８  ＰＩＣＯＦＲＩＴ（登録商標）マイクロキャピラリーカラム（Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）に加圧負荷した。次にカラムを線形イオントラップ質量分析計（ＬＴＱ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）に結合した。ＨＰＬＣ勾配は、溶媒Ｂを調節剤として使用して（溶媒Ａ、２％ＡＣＮ及び０．１％ＦＡ；溶媒Ｂ、９０％ＡＣＮ及び０．１％ＦＡ）２５０ｎｌ／分の流速で７０分間にわたって４〜６０％ＡＣＮに直線的に上昇した。タンデム質量分析モード（ＭＳ／ＭＳと称する）でＬＴＱを使用して質量スペクトルを収集し、このモードでは、各々のＭＳ取得の後に事前のＭＳスペクトル内の最初の６個の最も強いペプチドイオンの６つのＭＳ／ＭＳ取得が続いた。一部の場合は、ＭＳ／ＭＳ取得の後に事前のＭＳ／ＭＳ取得の最初の２個の最も強いペプチドイオンの２つのＭＳ／ＭＳ／ＭＳ取得が続いた。ペプチド質量を３７５〜１５００のｍ／ｚ（質量電荷比）範囲を走査することによって記録した。製造者によって提供される取得ソフトウエアの動的排除も、分析する対象ペプチドイオンの数を増加させるために使用した。ＭＳ／ＭＳデータを手動で解釈した。
【０１８９】
ＭＳレベルで、ペプチドフラグメントの認められたｍ／ｚ（ＩＬ−１７Ａホモ二量体について［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝９１９．７；ＩＬ−１７Ｆホモ二量体について［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１１９６．９；ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体について［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１１３８．１又は８０７．９）は、算定候補ジスルフィド結合ペプチドと一致した。さらに、これらの標的質量のＭＳ／ＭＳデータに従ってペプチド配列が得られ、それらが、図２０に示すようなジスルフィド結合形成のためのＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆに由来する予想されたシステイン（Ｃ）含有ペプチドであることが確認された。加えて、ＭＳ／ＭＳレベルでの低いフラグメント化のためにＩＬ−１７Ａホモ二量体ペプチドについてのＭＳ３データを取得した（［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝９０７．７及び［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝８４３．３）。これは、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体がジスルフィド結合による二量体として存在することを明らかにする。結論として、２個のホモ二量体及びヘテロ二量体のジスルフィド結合パターンを解明し、それらは各々の単量体の間のＣ１及びＣ４であると一致した。分子内ジスルフィド結合形成についての他のシステイン（Ｃ２／Ｃ３及びＣ５／Ｃ６）の関与を明らかにするためにこの試験において同様にアプローチを使用した。
（実施例６）
ヒトＩＬ−１７Ｆに対する抗体は霊長動物ＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害する
【０１９０】
抗ＩＬ−１７Ｆ抗体が霊長動物ＩＬ−１７Ｆと交差反応することができるかどうかを調べるため、様々な濃度のマカクＩＬ−１７Ｆ馴化培地又は精製ヒトＩＬ−１７Ｆを、１００μｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１７Ｆ−０１又は抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体の存在下又は不在下でＢＪ細胞を刺激するために使用した。この実験で使用するためのマカクＩＬ−１７Ｆ馴化培地は、ｐＣＲＩＩにサブクローニングしたマカクＩＬ−１７Ｆ  ｃＤＮＡ（配列番号４０）をＨＥＫ２９３細胞において発現し、マカクＩＬ−１７Ｆホモ二量体を含む馴化培地を採集することによって生産した。ヒト又はマカクＩＬ−１７Ｆのいずれかによる処置の１６〜２４時間後、処置培地から収集した上清のＧＲＯ−α濃度を、実施例５．５で述べたように市販のＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて測定した。ＧＲＯ−αの濃度は標準曲線に基づいて測定した。
【０１９１】
図２１は、マカクＩＬ−１７Ｆ馴化培地又はヒトＩＬ−１７Ｆタンパク質と共にインキュベートしたＢＪ細胞によるＧＲＯ−α産生上昇を明らかにする。先に述べたように（図２及び図８参照）、ヒトＩＬ−１７ＦはＧＲＯ−αレベルを刺激し、この刺激は抗ＩＬ−１７Ｆ−０１及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体の両方によって阻害される（図２１Ａ）。図２１Ｂに示すように、マカクＩＬ−１７Ｆはまた、ＢＪ細胞におけるＧＲＯ−αの産生を刺激する。抗ＩＬ−１７Ｆ−０１及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体はどちらも、ＧＲＯ−αサイトカインレベルを刺激するマカクＩＬ−１７Ｆ馴化培地の能力を阻害することができる。それ故、ヒトＩＬ−１７Ｆに対する拮抗性抗体は、霊長動物ＩＬ−１７Ｆ生物活性を阻害するように霊長動物ＩＬ−１７Ｆと交差反応することができる。
（実施例７）
ヒト軟骨細胞におけるアグリカナーゼ１レベルのＩＬ−１７Ｆ刺激は、ＩＬ−１７Ｆ抗体での同時処置によって低減する
【０１９２】
ＩＬ−１７Ｆが、例えば慢性関節リウマチに伴う炎症応答に関与し得るかどうかを調べるため、非関節炎ヒト軟骨をＮａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ（ＮＤＲＩ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）より入手し、死後４８時間以内にプロナーゼ（１ｍｇ／ｍｌ、３７℃で３０分間）及びコラゲナーゼＰ（１ｍｇ／ｍｌ、３７℃で一晩）の連続酵素消化によって軟骨細胞を単離した。単離後、細胞を、２μＭ Ｌ−グルタミン及び１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む１００Ｕ／ｍｌペニシリン／１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｆ−１２培地に再懸濁した。細胞を１×１０６細胞／穴で２４穴プレートに接種した。７２時間後に培地を無血清培地に交換し、軟骨細胞を、抗ＩＬ−１７Ｆ−０７又はそのアイソタイプ対照（ＩｇＧ）の存在下又は不在下に３７℃で６時間、ヒトＩＬ−１７Ｆで刺激した。細胞を直ちに、β−メルカプトエタノールを含むＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）キット）に採集し、ＲＮＡ単離の準備ができるまで−８０℃で保存した。ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）ミニキットを用いてＲＮＡを調製し、製造者のプロトコールに従って室温で１５分間ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）カラムでＤＮアーゼ処理を実施した。ＡＤＡＭＴＳ−４（アグリカナーゼ１）ｍＲＮＡ発現レベルをＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＰＣＲ分析（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）によって観測した。簡単に述べると、単離ＲＮＡ１００ｎｇを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより入手したＡＤＡＭＴＳ−４プローブ／プライマーによるＱＰＣＲ反応のために使用した。ＡＤＡＭＴＳ−４の発現を各々の試料についてＧＡＰＤＨの発現（単離ＲＮＡ１０ｎｇを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより入手したＧＡＰＤＨプライマーと共に使用した）に基準化した。試料外挿のための標準曲線を、種々の組織のプールから成るＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）０．１６ｎｇ〜１００ｎｇを用いて作成した。
【０１９３】
ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）単位として表わした結果を図２２に示す。このように、ＩＬ−１７Ｆ処置はヒト軟骨細胞におけるアグリカナーゼ１の発現を上昇させ、抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体による処置はこの刺激を無効にする。これらのデータは、自己免疫性関節炎、例えば反応性関節炎及び慢性関節リウマチにおいて起こるような、炎症及び関節破壊へのＩＬ−１７Ｆの関与が、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体での処置によって軽減され得ることを示唆する。
（実施例８）
ＢＪ細胞における受容体ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣのｓｉＲＮＡノックダウンによるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ生物活性の調節
【０１９４】
ＩＬ−１７Ｒ及び／又はＩＬ−１７ＲＣ転写産物のレベル低下がＩＬ−１７Ｆ及び／又はＩＬ−１７Ａの生物活性を低下させるかどうかを調べるための実験を設計した。トランスフェクションの２４時間前にＢＪ細胞を９×１０３細胞／１００μｌ培地／穴で９６穴プレートに接種した。細胞を、０．３μｌ／穴のＤＨＡＲＭＡＦＥＣＴ（登録商標）１（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ，Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，ＣＯ）及び１０ｎＭ又はそれ以下の個別又はプールｓｉＲＮＡ（配列番号１７〜３２）を用いて化学合成ＲＮＡｉ試薬（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ，Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，ＣＯ）でトランスフェクトした。ｓｉＲＮＡトランスフェクション後、細胞をトランスフェクション複合体と共に１８時間インキュベートした。その後トランスフェクション培地を標準培地に交換し、さらに６時間インキュベートした。次に標準培地を、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａ又は５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ｆを含む培地１５０μｌと交換した。指定サイトカインと共に１６時間インキュベートした後、培養上清を、ＩＬ−６、ＩＬ−８及びＧＲＯ−αのレベルを誘導するＩＬ−１７Ｆ及び／又はＩＬ−１７Ａの能力の標準サンドイッチＥＬＩＳＡによる分析のために収集した（図２）。ｈＧＲＯ−α、ｈＩＬ−６及びｈＩＬ−８についてのマッチする抗体対をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）より購入した。
【０１９５】
ｓｉＲＮＡ処理後のＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣ受容体レベルの低下を測定するため、ＴＵＲＢＯＣＡＰＴＵＲＥ（登録商標）ｍＲＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を、製造者の指示に従ってＢＪ線維芽細胞からｍＲＮＡを単離するために使用した。１段階ＲＴ  ｑＰＣＲ  ＭＡＳＴＥＲＭＩＸ  ＰＬＵＳ（登録商標）（Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）プロトコールを使用し、それにより試料当り１０μｌのｍＲＮＡを、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７７００  ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で実施したＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＰＣＲ反応２５μｌ中で使用した。ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＰＣＲについての条件は以下の通りであった：ＭＩＣＲＯＡＭＰ  ＯＰＴＩＣＡＬ（登録商標）キャップで覆ったＭＩＣＲＯＡＭＰ  ＯＰＴＩＣＡＬ（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）９６穴プレートで、４８℃で３０分間、９５℃で１０分間、次に９５℃で１５秒間及び６０℃で１分間の各々４０サイクル。各プレートは、各々の反応混合物に関して試験ｃＤＮＡ鋳型又は鋳型なし対照を３つずつ(triplicates)含んだ。各々のマウス遺伝子についての発現をヒトβ２ミクログロブリン遺伝子発現に基準化した。ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣについてのＴＡＱＭＡＮ（登録商標）遺伝子発現アッセイプローブ−プライマーセットをＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより入手した。
【０１９６】
図２３に示す結果は、ＢＪ培養物のｓｉＲＮＡ処理後のＧＲＯ−αレベルの低下パーセント（β２ミクログロブリンに基準化）を表わす。ＢＪ培養物のｓｉＲＮＡ処理は、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣ転写レベルを約８０％低下させた（図２３Ａ及び図２３Ｂ−“Ｔａｑｍａｎ”）。ＩＬ−１７ＲとＩＬ−１７ＲＣの両方のレベル低下は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＦがＧＲＯ−αレベルを刺激する能力を低下させたが（図２３Ａ及び図２３Ｂ）、ＩＬ−１７ＲＣレベルの低下（図２３Ｂ）は、ＩＬ−１７Ｒレベルの低下（図２３Ａ）よりもＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方の生物活性により著明な作用を及ぼした。興味深いことに、ＩＬ−１７ＲＣの低下は、ＧＲＯ−αレベルを刺激するＩＬ−１７Ａの能力により大きな作用を及ぼした（図２３Ｂ）。ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣを標的するｓｉＲＮＡの好ましい例を図２３Ｃに開示する（配列番号１７〜３２も参照のこと）。これらのデータは、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆの両方がＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣを通してシグナル伝達できること、及びＩＬ−１７ＲＣはＧＲＯ−α刺激に関連する両方の分子にとって好ましい受容体であると考えられることを示唆する。
（実施例９）
ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは、乾癬、クローン病及び潰瘍性大腸炎を有するヒト患者からの罹患組織において上方調節される
【０１９７】
乾癬組織生検試料を、Ｗｙｅｔｈが主催する臨床試験Ｎｏ．３０６７Ｋ６−２０７（活動性乾癬を有する患者における組換えヒトインターロイキン１１、ｒｈＩＬ−１１の無作為化・二重盲検・プラセボ対照・探索的薬理ゲノム試験）に登録された患者から収集した。４８名の患者からの基線（２回目の訪問）乾癬病変及び非病変皮膚生検を収集直後に液体窒素中で瞬間凍結し、Ｗｙｅｔｈ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｉｎ  Ａｎｄｏｖｅｒ，ＭＡに輸送した。
【０１９８】
クローン病試料を、Ｗｙｅｔｈが主催する臨床試験Ｎｏ．３０６７Ｋ６−２０４（活動性クローン病を有する患者の治療のための経口投与組換えヒトインターロイキン１１（ＲｈＩＬ−１１）の多施設・無作為化・二重盲検・プラセボ対照・安全性及び探索的薬理ゲノム試験）に登録された患者から収集し、潰瘍性大腸炎試料を、臨床試験Ｎｏ．３０６７Ｋ５−１１４（軽度から中等度の左側潰瘍性大腸炎を有する患者における経口投与組換えヒトインターロイキン１１（ＲｈＩＬ−１１）の多施設・無作為化・二重盲検・プラセボ対照・用量漸増・安全性及び探索的薬理ゲノム試験）に登録された患者から収集した。Ｎｏ．３０６７Ｋ６−２０４患者（１６名の患者）からの基線（２回目の訪問）対合関与（baseline paired involved）及び非関与組織生検、及びＮｏ．３０６７Ｋ５−１１４患者（１２名の患者）からのＳ状結腸及び左結腸の同じ解剖学的領域からの基線（１回目の訪問）対合組織生検を収集直後に液体窒素中で瞬間凍結し、Ｗｙｅｔｈ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｉｎ  Ａｎｄｏｖｅｒ，ＭＡに輸送した。
【０１９９】
ポリトロンを用いて組織を均質化し、ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて溶解産物の上清からＲＮＡを単離して、ＤＮアーゼ（Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮａｓｅ−ｆｒｅｅ  ＤＮａｓｅキット）で処理した。ＤＮアーゼ処理したＲＮＡ試料を、Ｐｈａｓｅ  Ｌｏｃｋ  Ｇｅｌカラム（Ｂｒｉｎｋｍａｎ，Ｗｅｓｔｂｕｒｙ  ＮＹ）を用いてさらに精製し、フェノール：クロロホルム：ＩＡＡ（イソアミルアルコール）抽出して（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）、ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）ミニカラムを用いて濃縮した。ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いてＲＮＡを定量し、ＲＮＡの品質をＡｇｉｌｅｎｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒゲル（２１００型；Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）によって評価した。上記試料からの全ＲＮＡ２μｇのｃＤＮＡへの変換を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ａｒｃｈｉｖｅキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて製造者の指示に従って実施した。完了した反応を含むプレートを−２０℃（短期間）又は−８０℃（長期間）の温度で保存した。
【０２００】
Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍのＡｓｓａｙｓ−ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ（ＡＯＤ）遺伝子特異的プライマー−プローブ対をあらかじめ有効性確認し、品質管理試験を実施して、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）配列検出システムでの使用のために最適化した（全てＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより）。製造者のＡＯＤプロトコールに従って、ＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ａプライマーをを含むＴＡＱＭＡＮ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してマスターミックスを調製し、最終容量５０μｌ／穴になるように９６穴プレートに等分した。連続希釈標準品及びｃＤＮＡ試料（５０ｎｇ／穴）のための２つの（duplicate）ウエルを、５０℃で２分間、９５℃で１０分間、９５℃で１５秒間（４０サイクル）及び６０℃で１分間の伸長の汎用熱サイクリング条件を用いてＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７７００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒソフトウエアバージョン１．７）で検定した。
【０２０１】
ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７ＡのＲＮＡ転写レベルの相対的定量を、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に関して述べられている製造者のガイドラインに従って実施した。詳細には、標的の標準物質及び内部対照についての標準曲線を算定し、標準曲線の勾配とｙ切片を用いて標的と内部対照に関する入力値を算定して、標的入力値を内部対照に基準化した。標準物質５０ｎｇをキャリブレーターとして使用してＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ発現の倍率変化を算定し、キャリブレーターに倍率変化を乗じて、その後平均することにより、試料の相対濃度を得た。
【０２０２】
標準曲線法を利用するため、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＡＯＤ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて標的遺伝子を発現する組織を経験的に決定した。１０以上の候補標的陽性組織からの全ＲＮＡをＷｙｅｔｈ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ／Ａｎｄｏｖｅｒ）及び外部販売元より入手した。単一ＲＮＡ試料からの多数の２μｇアリコートをｃＤＮＡに変換し（上述したように）、プールして、−８０℃でアリコートとして保存し、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって標的遺伝子の発現に関して検定した。≧３５の閾値サイクル数（Ｃｔ）を検出限界以下とみなした。標準曲線の作成のために、ゴールはｃＤＮＡ  １００ｎｇに関して１８〜２５のＣｔ値を達成することであった；これは適切な標準曲線ダイナミックレンジを可能にした。これらの必要条件を満たす陽性対照組織の試料を、各々のアッセイについての標準曲線を作成するために使用した。標準曲線は、１００ｎｇ／穴から１．５ｎｇ／穴までの全ｃＤＮＡの２倍連続希釈から成った。標準曲線をアッセイごとに各々のプレートに関して実施し、試料の定量及びアッセイ成績の観測のために使用した。９６穴プレートの空間的制約のため、試料を移動させるときは２５ｎｇ及び３ｎｇの標準曲線希釈点を除外した。プレート間のＣＶ％は、乾癬試料については＜３％、クローン病及び潰瘍性大腸炎試料については＜５％であった。
【０２０３】
全ての試料（すなわち処置及び未処置、病変及び非病変等）において同様のレベルで発現される遺伝子を、相対標準曲線法における内部対照として使用するために選択した。候補内部対照のリストから、ＺＮＦ５９２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１４６３０）と称される遺伝子が許容される標準曲線を生成し、病変組織と非病変組織及び関与組織と非関与組織において有意に異ならないと判定した（乾癬試料についてはｐ＜０．０５、クローン病及び潰瘍性大腸炎試料についてはｐ＜０．０９）。相対濃度値を決定するときに全ての試験試料をＺＮＦ５９２レベルに基準化した。
【０２０４】
対応あるスチューデントｔ検定（各々の患者からの対応ある病変試料と非病変試料又は関与組織と非関与組織）を、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ発現レベルと病変（乾癬）又は炎症表現型（クローン病又は潰瘍性大腸炎）との間の結びつきの有意性を評価するために使用した。乾癬試験についての倍率変化を、病変相対濃度値を非病変相対濃度値で除することによって算定した。クローン病及び潰瘍性大腸炎（ＩＢＤ）試験についての倍率変化は、関与相対濃度値を非関与相対濃度値で除することによって得た。ＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ａレベルに関する全患者からの倍率変化を平均することによって要約倍率変化を算定した。
【０２０５】
これらの試験の結果を図２４及び図２５に示す。図２４に示すように、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ発現レベルの両方が罹患患者からの病変組織において有意に上昇しており、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａがインビボで乾癬に関与することを示唆する。図２５に示すように、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方が、クローン病に罹患している患者からの関与組織並びに潰瘍性大腸炎に罹患している患者からの関与組織において上昇している。クローン病と潰瘍性大腸炎を有する患者の間でのかなりの不均質性は、比較的小さい標本サイズと合わせて、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆと関与表現型との統計的に有意の結びつきを特定することを抑制した（mitigated）。しかし、クラスター化ツールは、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆの両方がクローン病試料セットにおいて関与表現型と良好に相関することを示した（ｒ＝０．６５）（データは示していない）。これらのデータは、関与組織におけるＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆのレベル上昇が、インビボでＩＢＤに関連する炎症状態に役割を果たし得ることを示唆する。
（実施例１０）
オボアルブミンで免疫したマウスからのＬＮ細胞はＩＬ−１７Ｆを生産する
【０２０６】
８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを、側腹部において、完全フロイントアジュバントに乳化したオボアルブミンタンパク質１００μｇで免疫した。７日後、鼠径リンパ節を採取した。リンパ節を分離し、細胞をホルボールエステル１２−テトラデカノイルホルボール−１３アセテート５０ｎｇ、１μｇ／ｍｌイオノマイシン及び１μｇ／ｍｌ ＧＯＬＧＩＰＬＵＧ（商標）で１２時間再刺激した。その後細胞を採取し、抗マウスＣＤ４  ＰｅｒＣＰ  Ｃｙ５．５（Ｐｈａｒｍａｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて表面ＣＤ４に関して染色した。細胞を固定し、ＣＹＴＯＦＩＸ／ＣＹＴＯＰＥＲＭ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ．Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で透過性を上げて、その後細胞を４μｇ／ｍｌラットＩｇＧ１  ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７複合体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）又は４μｇ／ｍｌラット抗ＩＬ−１７Ｆ（クローン１５−１）ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で３０分間染色した。次に細胞をＰＥＲＭ／ＷＡＳＨ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ．Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で２回洗い、ＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ．Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて分析した。ラット抗ＩＬ−１７Ｆ（クローン１５−１）ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）は、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７複合キットを用いて作製した。結果を図２６に示す。このように、オボアルブミン免疫マウスのリンパ節からのインビボＣＤ４＋Ｔ細胞はＩＬ−１７Ｆタンパク質を生産する。
（実施例１１）
結論及び考察
【０２０７】
いくつかの所見の中で、これらのデータは、ＩＬ−２１及びＩＬ−２３がＴＣＲ／ＣＤ２８共刺激時にＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆを誘導すること、及びＩＬ−２３とＩＬ−２１はＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ産生のために共刺激と相乗作用することを指し示す。ＩＬ−２３とＩＬ−２１はＩＬ−１７誘導において等しく有効である。これらのデータは、ＩＬ−１７Ａ、及び特にＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ａと比較して１０−２０倍高いレベルで生産されるので）は、ＩＬ−２１に帰せられるプロ炎症作用の一部を媒介し得ること、及びＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ｆへテロ二量体として）の阻害は、ＩＬ−２１シグナル伝達をブロックするのと類似の治療作用を有し得ること（例えば米国特許出願第６０／５９９，０８６号及び同第６０／６３９，１７６号参照）を示唆する。ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達とＩＬ−２１シグナル伝達の作用の類似性は、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達の阻害がＩＬ−２１シグナル伝達を阻害するのと同等の治療的価値があると考えられるという強力な結論を導く。加えて、上記結果は、初めて、Ｔ細胞がＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体のほかにＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を発現することを示す。結果はまた、そのようなサイトカインをそれらの天然及び組換え形態で単離し、精製し得ることを示す。本明細書で示すデータはまた、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣを標的するｓｉＲＮＡから成る融合タンパク質、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体がＩＬ−１７Ｆ生物活性を低下させることを示す。さらに、上記結果は、ＩＬ−１７Ｆ処置がヒト軟骨細胞におけるアグリカナーゼ発現を上昇させ、それが抗ＩＬ−１７Ｆ抗体によって低減され得ること、及びＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ａがヒト生検からの乾癬病巣及びＩＢＤに関与する組織において上昇することを示す。
【０２０８】
ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは、活性化Ｔ細胞によって産生される新規プロ炎症性サイトカインである。これらのサイトカインは、システインノットモチーフの構造的特徴を示す保存されたシステインを含む、高度のアミノ酸同一性を共有する。両サイトカインは、受容体鎖を共有し、類似の生物学的機能を示すことが提起された。ＩＬ−１７サイトカインファミリーの成員は、異常免疫応答によって媒介される疾患、例えば慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び喘息に関係付けられてきた。上記に列挙した類似性の故に、活性化時にヒトＴ細胞によって産生されるＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆを特性決定した。ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＣＤ２８共刺激、γ共通サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１）又はＩＬ−２３の存在下又は不在下に抗ＣＤ３で活性化した。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの最適産生は、ＴＣＲ並びにＣＤ２８共刺激を必要とした。加えて、ＣＤ２８とＩＬ−２１はＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ産生において相乗作用的に働き、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７ＦがＩＬ−２１シグナル伝達に帰せられるプロ炎症作用を媒介し得ることを示唆する。全ての活性化条件下で、ＩＬ−１７Ｆのタンパク質レベルはＩＬ−１７Ａに関して得られたものを１０〜２０倍上回った。興味深いことに、ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体に加えて、Ｔ細胞はまた、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体も生産した。これらの所見は、これらのサイトカインの多数の形態がインビボで存在し、それらの各々の形態が異なる生物学的機能を説明すること、例えばＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体は炎症性疾患の治療における新しいサイトカイン標的を構成し得ることを示唆する。
【図面の簡単な説明】
【０２０９】
【図１】ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆの様々な濃度（ｎｇ／ｍｌ）（ｘ軸）で培養した（Ａ）一次ヒト軟骨細胞又は（Ｂ）一次ブタ軟骨細胞における、ＮＦ−κＢを介したレポータートランス活性化（相対的ルシフェラーゼ活性；ｙ軸）を図１に示す。
【図２】培地中（対照；□）又は２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆの存在下で（ＩＬ−１７Ｆ；■）培養したヒト線維芽細胞様滑膜細胞から収集した上清における、２名の患者（Ｐ１、Ｐ２；ｘ軸）の各々からのサイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１又はＧＲＯ−α；ｘ軸）の濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を図２に示す。
【図３】図３は、培地中で（０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１７Ｆ）、又は１ｎｇ／ｍｌ、３．３ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ又は３０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１７Ｆと共に培養した一次マウス肺線維芽細胞の培養物から収集した上清中の炎症性サイトカイン（ＩＬ−６、ＪＥ（ＣＣＬ２）、ＫＣ；ｘ軸）の濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。
【図４】図４は、ＥＬＩＳＡで測定した、（Ａ）ＩＬ−１７Ｒ−ＩｇＧ（上のパネル）又は（Ｂ）ＩＬ−１７ＲＣ−ＩｇＧ（下のパネル）への漸増濃度のヒトＩＬ−１７Ｆ（左のパネル）又はヒトＩＬ−１７Ａ（右のパネル）（ｘ軸）の結合（ＯＤ４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。また、各々の受容体／サイトカイン相互作用についてのＥＣ５０値も示す。
【図５】（Ａ）０．５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ａ（左のパネル）又は（Ｂ）２０ｎｇ／ｍｌＩＬ−１７Ｆ（右のパネル）の存在下に、単独で（培地；−）又は漸増濃度（μｇ／ｍｌ；ｘ軸）のＩＬ−１７Ｒ−ＩｇＧ融合タンパク質（ｈ１７Ｒ．Ｆｃ；●）、ＩＬ−１７ＲＣ−ＩｇＧ融合タンパク質（ｈ１７ＲＨ２．Ｆｃ；■）、対照ＩｇＧタンパク質（ｈＩｇＧ１；▲）、抗ＩＬ−１７Ｒ抗体（ａｈＩＬ１７Ｒ；□）又は対照抗体（ヤギＩｇＧ；△）と共に培養したヒト線維芽細胞から収集した上清中のＧＲＯ−αの濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を図５に示す。
【図６】図６は、以下の６個の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体：抗ＩＬ−１７Ｆ−０１（□）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０２（−）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０３（▲）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０５（◆）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０６（●）及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７（△）の１個の漸増濃度（μｇ／ｍｌ；ｘ軸）の存在下でＩＬ−１７ＲへのＩＬ−１７Ｆの結合を阻害する抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体の能力（ＯＤ４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。
【図７】図７は、以下の６個の抗ＩＬ−１７Ｆ抗体：抗ＩＬ−１７Ｆ−０１（□）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０２（−）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０３（▲）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０５（◆）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０６（●）及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７（△）の各々の漸増濃度（μｇ／ｍｌ；ｘ軸）の存在下でＩＬ−１７ＲＣへのＩＬ−１７Ｆの結合を阻害する抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体の能力（ＯＤ４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。
【図８】２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ並びに漸増濃度（μｇ／ｍｌ；ｘ軸）の抗ＩＬ−１７Ｆ−０１（ａＩＬ−１７Ｆ−０１）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０２（ａＩＬ−１７Ｆ−０２）又は抗ＩＬ−１７Ｆ−０３（ａＩＬ−１７Ｆ−０３）（左のパネル）及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０５（ａＩＬ−１７Ｆ−０５））、抗ＩＬ−１７Ｆ−０６（ａＩＬ−１７Ｆ−０６）又は抗ＩＬ−１７Ｆ−０７（ａＩＬ−１７Ｆ−０７）又は対照ｍＩｇＧ１抗体（右のパネル）中で培養したヒト線維芽細胞から収集した上清中のＧＲＯ−αの濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を図８に示す。
【図９】培地単独（なし）、１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ（１００ｎｇ／ｍｌ））、ＩＬ−１７Ｒ−ＩｇＧ融合タンパク質の存在下での１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ１７Ｒ／Ｆｃ）、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の存在下での１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ＋抗ＩＬ１７Ｆ）、対照マウスＩｇＧの存在下での１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ＋マウスＩｇＧ）、５００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ（５００ｎｇ／ｍｌ））、ＩＬ−１７Ｒ−ＩｇＧ融合タンパク質の存在下での５００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ＋ＩＬ１７Ｒ／Ｆｃ）、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の存在下での５００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ＋抗ＩＬ１７Ｆ）、対照マウスＩｇＧの存在下での５００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ＋マウスＩｇＧ）中で培養したブタ一次軟骨細胞における、ＮＦ−κＢを介したレポータートランス活性化（相対的ルシフェラーゼ活性；ｙ軸）を図９に示す。
【図１０】２０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１７Ｆ、アイソタイプ対照抗体（アイソタイプＡｂ）、抗ＩＬ−１７Ｆ−０１抗体又は抗ＩＬ−１７Ｆ−０７抗体の存在下で培養したヒト線維芽細胞様滑膜細胞から収集した上清における、２名の患者（Ｐ１、Ｐ２；ｘ軸）の各々からのサイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−８又はＧＲＯ−α；ｘ軸）の濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を図１０に示す。
【図１１−１】図１１は、（Ａ）ＩＬ−１７Ａタンパク質（ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を含む）、（Ｂ）ＩＬ−１７Ｆタンパク質（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）又は（Ｃ）ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出に特異的なＥＬＩＳＡ形式を用いて、ＩＬ−１７Ａホモ二量体（ＩＬ−１７Ａ／Ａ；ｘ軸）、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体（ＩＬ−１７Ｆ／Ｆ；ｘ軸）又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ；ｘ軸）の検出（ＯＤ４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。
【図１１−２】図１１は、（Ａ）ＩＬ−１７Ａタンパク質（ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を含む）、（Ｂ）ＩＬ−１７Ｆタンパク質（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）又は（Ｃ）ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出に特異的なＥＬＩＳＡ形式を用いて、ＩＬ−１７Ａホモ二量体（ＩＬ−１７Ａ／Ａ；ｘ軸）、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体（ＩＬ−１７Ｆ／Ｆ；ｘ軸）又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ；ｘ軸）の検出（ＯＤ４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。
【図１２】図１２は、ビーズ結合ＣＤ３抗体、漸増濃度の抗ＣＤ２８抗体の存在下で（抗−ＣＤ２８（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）、及びＩＬ−２１とＩＬ−２３の不在下（□）、又はＩＬ−２１の存在下（■）又はＩＬ−２３の存在下で一次活性化を受けるＴ細胞から単離した培地中の（Ａ）ＩＬ−１７Ａ又は（Ｂ）ＩＬ−１７Ｆの濃度（産生されるサイトカイン（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸））を示す。
【図１３】図１３は、以下の刺激条件（ｘ軸）：ＩＬ−２３単独（ＩＬ−２３）；ＩＬ−２１単独（ＩＬ−２１）；ビーズ結合抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体（ＣＤ３／ＣＤ２８）；ＩＬ２３、ビーズ結合抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体（ＩＬ−２３／ＣＤ３／ＣＤ２８）；ＩＬ−２１、ビーズ結合抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体（ＩＬ−２１／ＣＤ３／ＣＤ２８）；又は培地、の下で二次活性化を受けるＴ細胞から単離した培地中のＩＬ−１７Ａ（■）又はＩＬ−１７Ｆ（□）の濃度（産生されるサイトカイン（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。
【図１４−１】図１４は、（Ａ）ＩＬ−１７Ａタンパク質（ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を含む）、（Ｂ）ＩＬ−１７Ｆタンパク質（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）又は（Ｃ）ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出に特異的なＥＬＩＳＡ形式を用いて、一次活性化（ＣＭ１）又は再刺激（ＣＭ２）（ｘ軸）に供したＴ細胞から得た非希釈（原液）又は希釈（１：１０）培地中のＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出（ＯＤ４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。
【図１４−２】図１４は、（Ａ）ＩＬ−１７Ａタンパク質（ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を含む）、（Ｂ）ＩＬ−１７Ｆタンパク質（ＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）又は（Ｃ）ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出に特異的なＥＬＩＳＡ形式を用いて、一次活性化（ＣＭ１）又は再刺激（ＣＭ２）（ｘ軸）に供したＴ細胞から得た非希釈（原液）又は希釈（１：１０）培地中のＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体又はＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の検出（ＯＤ４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。
【図１５】二次活性化を受けるＴ細胞から得た馴化培地５００μｌから抗ヒトＩＬ−１７Ｆ−０１免疫沈降物を検出するために、ポリクローナルウサギ抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体で実施したウエスタンブロット分析を図１５に示す。対照は、実施例５．３で述べるように作製したＩＬ−１７Ｆホモ二量体（２番目のレーン）、又はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から購入したＩＬ−１７Ａホモ二量体（５番目のレーン）から成る。分子量標準を最初のレーンに示す。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の位置を矢印で示す。
【図１６】図１６は、二次活性化を受けるＴ細胞から得た馴化培地５００μｌから抗ヒトＩＬ−１７Ａ−０２免疫沈降物を検出するために、ビオチン複合ヤギ抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体で実施したウエスタンブロット分析の結果を示す。対照（レーン２）は、実施例５．３で述べるように作製したＩＬ−１７Ｆホモ二量体から成る。分子量標準をレーン１に示す。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の位置を矢印で示す。
【図１７Ａ】図１７Ａは、抗ＩＬ−１７Ｆ抗体で免疫プローブした（immunoprobed）抗ＩＬ−１７Ｆ免疫沈降物（レーン２〜７）又は抗ＩＬ−１７Ａ免疫沈降物（レーン８〜１０）を示す。免疫沈降物は、ＩＬ−１７Ａ（レーン２及び８）、ＩＬ−１７Ｆ（レーン３及び１０）、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆ（レーン４及び９）、精製ＩＬ−１７Ａホモ二量体（レーン５）又は精製ＩＬ−１７Ｆホモ二量体（レーン６及び７）を過剰発現するＣＯＳ細胞の馴化培地（ＣＭ）から得た。対照（「Ａ／Ａ精製」、レーン５及び「Ｆ／Ｆ精製」、レーン６〜７）は、実施例５．４で述べる精製組換えＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体から成る。分子量標準をレーン１に示す。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の位置を矢印で示す。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、抗ＩＬ−１７Ａ抗体で免疫プローブした抗ＩＬ−１７Ａ免疫沈降物（レーン２〜４）又は抗ＩＬ−１７Ｆ免疫沈降物（レーン５〜７）を示す。免疫沈降物は、ＩＬ−１７Ａ（レーン３及び５）、ＩＬ−１７Ｆ（レーン２及び７）又はＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆ（レーン４及び６）を過剰発現するＣＯＳ細胞の馴化培地（ＣＭ）から得た。分子量標準をレーン１に示す。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の位置を矢印で示す。
【図１８】図１８は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体を実質的に含まない組換えＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を精製する方法を示す一覧図である。この方法は、２つの異なるアフィニティータグを有するＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆを使用して、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体を単離するために２つの別個の連続的なアフィニティーカラムを用いる。
【図１９Ａ】図１９Ａは、組換え精製ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体（Ｘ）が、ＩＬ−１７Ａ（◆）及びＩＬ−１７Ｆ（□）ホモ二量体と同様に、ＢＪ細胞培養の培地中でＧＲＯ−αレベル（ｐｇ／ｍｌ）を刺激することを示す。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは、抗ＩＬ−１７Ａ抗体（■）又は抗ＩＬ−１７Ｆ抗体と組み合わせた抗ＩＬ−１７Ａ抗体（△）によるＢＪ培養物の共処理は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体のＧＲＯ−αレベルの刺激を無効にするが、ＩＬ−１７Ｆ抗体単独（□）では、上記刺激を無効にしないことを示す。対照は、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ抗体の両方を欠く培地を与えた培養物（Ｘ）から成った。
【図２０】図２０は、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、ＩＬ−１７Ａホモ二量体及びＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロ二量体の消化によって作製されるトリプシンペプチド質量に関するＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析データを要約した表である。表の最初の欄は、分析したペプチドフラグメントの由来を示し、２番目の欄（構造）はペプチドフラグメント配列を示し、３番目の欄（ＭＷ  Ｃａｌ）はフラグメントの算定分子量を示し、４番目の欄はフラグメントの算定質量電荷比（ｍ／ｚ値）（算定）を示し、５番目の欄は、質量分析によって測定した実際の質量電荷比（ｍ／ｚ値）（所見）を示す。
【図２１Ａ】図２１は、抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体が霊長動物ＩＬ−１７Ｆの生物活性を部分的に阻害できることを示す。図２１Ａは、ヒト又は霊長動物（マカク）ＩＬ−１７Ｆで刺激したＢＪ細胞が、漸増レベルのＩＬ−１７Ｆに応答してＧＲＯ−αの高レベルを示すことを明らかにする。図２１Ａは、抗ＩＬ−１７Ｆ−０１（□）及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７（Ｘ）抗体が、ＧＲＯ−αレベルを刺激するヒトＩＬ−１７Ｆの能力（◆）を低下させることを示す。
【図２１Ｂ】図２１は、抗ヒトＩＬ−１７Ｆ抗体が霊長動物ＩＬ−１７Ｆの生物活性を部分的に阻害できることを示す。２１Ｂは、ヒト又は霊長動物（マカク）ＩＬ−１７Ｆで刺激したＢＪ細胞が、漸増レベルのＩＬ−１７Ｆに応答してＧＲＯ−αの高レベルを示すことを明らかにする。図２１Ｂは、抗ＩＬ−１７Ｆ−０１（□）及び抗ＩＬ−１７Ｆ−０７（Ｘ）抗体が、ヒトＩＬ−１７Ｆ生物活性を低下させるよりは小さい程度であるが、ＧＲＯ−αレベルを刺激する霊長動物ＩＬ−１７Ｆの能力（◆）を低下させることを示す。
【図２２】図２２は、ＩＬ−１７Ｆ処置が、ヒトドナーから得た軟骨細胞におけるＡＤＡＭＴＳ−４（アグリカナーゼ１）の発現を上昇させること、及び抗ＩＬ−１７Ｆ抗体による処置がこの刺激を無効にすることを示す。培養した軟骨細胞を２５０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ、２５０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ及び２５μｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１７Ｆ、２５μｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１７Ｆ、２５０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１７Ｆ及び２５μｇ／ｍｌ対照ＩｇＧ１、又は２５μｇ／ｍｌ対照ＩｇＧ１（ｘ軸）で処置し、アグリカナーゼ１の転写レベルをリアルタイムＰＣＲによって測定した（ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）単位として表わした；ｙ軸）。ＧＡＰＤＨ発現レベルをノーマライザーとして使用した。
【図２３Ａ】図２３は、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣの転写産物に対するｓｉＲＮＡによるＢＪ細胞の処置が、ＧＲＯ−αレベルを上昇させるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａの能力を低下させることを示す。図２３Ａ：Ｔａｑｍａｎ＝ＩＬ−１７Ｒに対するｓｉＲＮＡで処置した細胞におけるＩＬ−１７Ｒ転写産物の低下％；ＩＬ−１７Ｆ＝ＩＬ−１７Ｒに対するｓｉＲＮＡで処置した細胞におけるＧＲＯ−αレベルを刺激するＩＬ−１７Ｆの能力の低下％；ＩＬ−１７Ａ＝ＩＬ−１７Ｒに対するｓｉＲＮＡで処置した細胞におけるＧＲＯ−αレベルを刺激するＩＬ−１７Ａの能力の低下％。
【図２３Ｂ】図２３は、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣの転写産物に対するｓｉＲＮＡによるＢＪ細胞の処置が、ＧＲＯ−αレベルを上昇させるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａの能力を低下させることを示す。図２３Ｂは、ＩＬ−１７ＲＣの転写産物に対するｓｉＲＮＡによるＢＪ細胞の処置が、ＧＲＯ−αレベルを上昇させるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａの能力を低下させることを示す。Ｔａｑｍａｎ＝ＩＬ−１７ＲＣに対するｓｉＲＮＡで処置した細胞におけるＩＬ−１７ＲＣ転写産物の低下％；ＩＬ−１７Ｆ＝ＩＬ−１７ＲＣに対するｓｉＲＮＡで処置した細胞におけるＧＲＯ−αレベルを刺激するＩＬ−１７Ｆの能力の低下％；ＩＬ−１７Ａ＝ＩＬ−１７ＲＣに対するｓｉＲＮＡで処置した細胞におけるＧＲＯ−αレベルを刺激するＩＬ−１７Ａの能力の低下％。
【図２３Ｃ】図２３は、ＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣの転写産物に対するｓｉＲＮＡによるＢＪ細胞の処置が、ＧＲＯ−αレベルを上昇させるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａの能力を低下させることを示す。図２３Ｃは、本発明に関連するｍＲＮＡポリヌクレオチド（すなわちＩＬ−１７Ｒ及びＩＬ−１７ＲＣ）を標的する本発明のいくつかのｓｉＲＮＡ分子（配列番号１７〜３２）を開示する。
【図２４】図２４は、乾癬に罹患している患者からの４８対の組織生検試料におけるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ転写産物発現の平均倍率変化（病変／非病変（非罹患）組織）を示す。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方の転写レベルが、非罹患組織に比べて乾癬病変組織では上昇する。対応あるｔ検定からのＰ値は以下の通りである：ＩＬ−１７Ａ  ｐ＝２．８×１０−１３、ＩＬ−１７Ｆ  ｐ＝１．１×１０−９。
【図２５】図２５は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）（□）（１２対）又はクローン病（ＣＤ）（■）（１６対）に罹患している患者からの対の組織生検試料におけるＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ転写産物発現の平均倍率変化（関連／非関連組織）を示す。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方の転写レベルが、両方のセットのＩＢＤ試料において非関連組織に比べて罹患組織では上昇する。対応あるｔ検定からのＰ値は以下の通りである：ＩＬ−１７Ａ（ＵＣ）、ｐ＝０．３０９；ＩＬ−１７Ａ（ＣＤ）、ｐ＝０．０６９；ＩＬ−１７Ｆ（ＵＣ）、ｐ＝０．４０６；ＩＬ−１７Ｆ（ＣＤ）、ｐ＝０．２０６。
【図２６】図２６は、ＩＬ−１７Ｆについての細胞内サイトカイン染色を示す。ＩＬ−１７Ｆについての染色を、完全フロイントアジュバントに乳化したオボアルブミン１００μｇで免疫したＣ５７ＢＬ／６マウスからのＬＮ（リンパ節）細胞に関して実施した。細胞をＣＤ４に関して表面染色し、固定して、透過性を上げ、抗ＩｇＧ１アイソタイプ対照又はラット抗マウスＩＬ−１７Ｆ（クローン１５−１）で染色した。数字は陽性細胞のパーセントを表わす。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
2008532936.tif 000029
【図２１Ｂ】
2008532936.tif 000030
【図２２】
2008532936.tif 000031
【図２３Ａ】
2008532936.tif 000032
【図２３Ｂ】
2008532936.tif 000033
【図２３Ｃ】
2008532936.tif 000034
【図２４】
2008532936.tif 000035
【図２５】
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【図２６】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年1月22日(2008.1.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008532936000001.app
【国際調査報告】
2008532936.tif 000082
2008532936.tif 000083
2008532936.tif 000084
2008532936.tif 000085
2008532936.tif 000086
2008532936.tif 000087
2008532936.tif 000088