(57)【要約】  試験対象の個体から採取された生物学的サンプルにおいて、心血管疾患又は心血管疾患を発達させるリスクが増大することを同定するために、ＧＩＰ遺伝子の−（９７）位の一塩基多型（ＳＮＰ）を使用すること。【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験対象の個体から採取された生物学的サンプルにおいて、心血管疾患又は心血管疾患を発達させるリスクが増大することを同定するためのＧＩＰ遺伝子の−９７位の一塩基多型（ＳＮＰ）の使用。
【請求項２】
個体の心血管疾患又は心血管疾患を発達させるリスクが増大することを同定する方法であって、この方法は、個体から採取されたサンプルを、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシンを有するか否かについて試験することを含むものであり、このグアノシンの存在は、この個体が心血管疾患を患うか又は心血管疾患を発達させるリスクが増大することを示すものである方法。
【請求項３】
個体の心血管疾患又は心血管疾患を発達させるリスクが増大することを同定する方法であって、この方法は、個体から採取されたサンプルを、このサンプルに存在しているＧＩＰ  ｍＲＮＡ量及び／又はタンパク質量が、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が−９７位にグアノシン以外のヌクレオチドを有する１つ又はそれ以上の個体由来の１つ又はそれ以上の参照サンプルの量と異なるか否かについて試験することを含むものであり、この異なる量の存在は、この個体が、心血管疾患を患うか又は発達させるリスクが増大することを示すものである方法。
【請求項４】
心血管疾患を予防及び／又は処置する医薬品の投薬量を適合させるためのＧＩＰ遺伝子の−９７位の一塩基多型（ＳＮＰ）の使用。
【請求項５】
個体の心血管疾患を予防及び／又は処置する医薬品の投薬量を適合させる方法であって、この方法は、ＧＩＰ遺伝子−９７位の対立遺伝子のいずれか又は両方に存在しているヌクレオチドタイプについて個体の単離サンプルを試験することを含むものであり、この投薬量は、この−９７位のヌクレオチドタイプにより適合されるものである方法。
【請求項６】
単離サンプルを、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシンを有するか否かについて試験することを含む請求項５に記載の方法であって、この医薬品の投薬量は、グアノシンが存在すると減少又は増大されるものである方法。
【請求項７】
単離サンプルを、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシン以外のヌクレオチドを有するか否かについて試験することを含み、医薬品の投薬量は、別のヌクレオチドが存在すると減少又は増大されるものである請求項５に記載の方法。
【請求項８】
個体の心血管疾患を処置及び／又は予防する医薬品の投薬量を適合させる方法であって、この方法は、個体から採取されたサンプルを、このサンプルに存在しているＧＩＰ  ｍＲＮＡ量及び／又はタンパク質量が、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が−９７位にグアノシン以外のヌクレオチドを有する１つ又はそれ以上の個体由来の１つ又はそれ以上の参照サンプル量と異なるか否かについて試験することを含むものであり、この投薬量は、この個体のサンプルと参照サンプルとのタンパク質量及び／又はｍＲＮＡ量が異なるか否かによって適合されるものである方法。
【請求項９】
心血管疾患を処置及び／又は予防する医薬品に応答する個体を同定するための、ＧＩＰ遺伝子の−９７位の一塩基多型（ＳＮＰ）の使用。
【請求項１０】
心血管疾患の予防及び／又は処置に活性な物質を同定するための、ＧＩＰタンパク質若しくはポリヌクレオチド若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の使用。
【請求項１１】
心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法であって、この方法は、以下：
ａ．ＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体を、試験物質と接触させること；及び
ｂ．この試験物質が、ＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の活性を調節するか否かを決定すること
を含むものである方法。
【請求項１２】
心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法であって、この方法は、以下：
ａ．ＧＩＰ若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の検出可能な量又は活性を有する細胞を、試験物質と接触させること；
ｂ．この試験物質が、この細胞に存在しているＧＩＰ若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の量又は活性を調節し得るか否かを決定すること
を含むものである方法。
【請求項１３】
心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法であって、この方法は、以下：
ａ．ＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体をコードする核酸を、転写活性系で試験物質と接触させること；
ｂ．この物質の存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又は誘導体をコードするｍＲＮＡ量を測定すること；
ｃ．この物質の非存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又は誘導体をコードするｍＲＮＡ量を測定すること；
ｄ．この物質が、この系に存在しているＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又は誘導体をコードするｍＲＮＡ量を調節し得るか否かを決定すること
を含むものである方法。
【請求項１４】
心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法であって、この方法は、以下：
ｂ．ＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体をコードする核酸を、翻訳活性系で試験物質と接触させること；
ｃ．この物質の存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の量を測定すること；
ｄ．この物質の非存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の量を測定すること；
ｅ．この物質が、この系に存在しているＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の量を調節し得るか否かを決定すること
を含むものである方法。
【請求項１５】
心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法であって、この方法は、以下：
ａ．レポーター遺伝子又はその機能的フラグメントに作動的に結合したＧＩＰ遺伝子又はその機能的フラグメントのプロモーターを含む核酸ベクターでトランスフェクトされる細胞を提供すること；
ｂ．機能的なＧＩＰプロモーターに作動的に結合していないレポーター遺伝子又はその機能的フラグメントを含むコントロールベクターでトランスフェクトされる細胞を提供すること；
ｃ．試験物質の存在下で、ａ）及びｂ）に従って細胞のレポーター遺伝子活性を測定すること；
ｄ．試験物質の非存在下で、ａ）及びｂ）に従って細胞のレポーター遺伝子活性を測定すること；
を含むものであり、
ここで活性物質は、ｂ）のレポーター遺伝子活性を調節せずに、レポーター遺伝子活性を調節し得る物質である方法。
【請求項１６】
請求項２、３、５又は１１〜１５のいずれか１項に記載の方法に基づいたハイスループットアッセイ（ＨＴＳ）。
【請求項１７】
翻訳開始部位の上流の配列を含むＧＩＰポリヌクレオチドが使用される、請求項１、４、９若しくは１０のいずれか１項に記載の使用又は請求項２、３、５若しくは１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
ＧＩＰポリヌクレオチドが、ゲノムポリヌクレオチド配列を基準にして−９７位にグアノシンを有する、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
試験対象の個体の体から採取された生物学的サンプルを分析することによる、心血管疾患又は心血管疾患に対する素因を診断するためのＧＩＰ検出手段の使用。
【請求項２０】
試験対象の個体の体から採取された生物学的サンプルにおいて、心血管疾患又は心血管疾患に対する素因を診断する試験キットを調製するためのＧＩＰ検出手段の使用。
【請求項２１】
−９７位のＧの存在が、リスクの増大を示すものである、請求項１、１９又は２０に記載の使用。
【請求項２２】
心血管疾患又は心血管疾患に対する素因を診断する試験キットであって、この試験キットが、生物学的サンプル中のＧＩＰを検出する少なくとも１つの手段を含むものであるキット。
【請求項２３】
検出手段が、ＧＩＰ遺伝子の−９７位のグアノシンを検出する手段である、請求項１９若しくは２０に記載の使用又は請求項２２に記載の試験キット。
【請求項２４】
検出手段が、生物学的サンプルに存在しているＧＩＰ  ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質を検出する手段である、請求項１９若しくは２０に記載の使用又は請求項２２に記載の試験キット。
【請求項２５】
ＧＩＰ遺伝子の−９７位のヌクレオチドタイプが、ＰＣＲ又はゲノムプローブの助けにより同定されるものである、請求項４若しくは９に記載の使用又は請求項２及び５〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
ヌクレオチドタイプが、以下
ａ．ゲノムＤＮＡを含む試験対象の個体の単離された生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．好ましくは、ａ）のサンプルからゲノムＤＮＡを単離すること；
ｃ．ＧＩＰ遺伝子のゲノム配列の−９７位を含むポリヌクレオチドを増幅し得るプライマーを用いたＰＣＲ反応を行うことにより、ポリヌクレオチドを増幅すること；
ｄ．ｃ）で定義されたポリヌクレオチドを配列決定すること
によって決定されるものである、請求項２５に記載の方法又は使用。
【請求項２７】
ヌクレオチドタイプが、以下
ａ．ゲノムＤＮＡを含む試験対象の個体の単離された生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．ａ）で定義されたサンプルからゲノムＤＮＡを単離すること；
ｃ．好適な支持体上に単離ＤＮＡを固定化すること；
ｄ．標準的な条件下でゲノムＧＩＰ配列を有するポリヌクレオチドに特異的に結合することができ、そしてこれに関して、ＧＩＰ遺伝子の−９７位の特定のヌクレオチドに対する特異性を有する１つ又はそれ以上のプローブを固定化ＤＮＡとハイブリダイズすることによって決定されるものである、請求項２５に記載の方法又は使用。
【請求項２８】
ｍＲＮＡ量の変化が、ＰＣＲ又はｍＲＮＡプローブの使用により分析されるものである、請求項３又は８に記載の方法。
【請求項２９】
タンパク質量の変化が、少なくとも１つの抗体により測定されるものである、請求項３又は８に記載の方法。
【請求項３０】
以下、
ａ．ｍＲＮＡを含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．好ましくは、ａ）のサンプルからｍＲＮＡを単離すること；
ｃ．ＧＩＰ  ｍＲＮＡ由来のポリヌクレオチドを増幅する能力を有するプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲにより、ポリヌクレオチドを増幅すること；
ｄ．増幅されたポリヌクレオチド量を定量化し、そしてこれを、少なくとも１つの参照サンプル中で増幅されたポリヌクレオチド量と比較すること
を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
以下、
ａ．ｍＲＮＡを含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．ａ）のサンプルからｍＲＮＡを単離すること；
ｃ．好適な支持体にｍＲＮＡを移すこと；
ｄ．少なくとも１つの好適なプローブにより、支持体上のＧＩＰ  ｍＲＮＡを検出及び定量化すること；
ｅ．参照サンプルのＧＩＰ  ｍＲＮＡ量と比較すること
を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
検出が、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット又はタンパク質チップによって行われるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
以下、
ａ．タンパク質を含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．好ましくは、ａ）のサンプルからタンパク質を単離すること；
ｃ．好適な支持体にタンパク質を移すこと；
ｄ．少なくとも１つの特異的なＧＩＰ抗体によりタンパク質を検出し、そしてシグナルを定量化すること；
ｅ．少なくとも１つの参照サンプルから得られたシグナルと比較すること
を含む、請求項３、８及び３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
以下、
ａ．個体の組織学的サンプルを提供すること；
ｂ．好適なＧＩＰ抗体との結合反応、この量を検出及び定量化することにより、ＧＩＰタンパク質量を検出すること；
ｃ．参照サンプル中のＧＩＰタンパク質量とこのＧＩＰタンパク質量を比較すること
を含む、請求項３、８及び３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
検出が、免疫組織化学的又は免疫放射化学的検出方法によって行われるものである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
以下、
ａ．個体の組織学的サンプルを提供すること；
ｂ．好適なｍＲＮＡプローブとのハイブリダイゼーション反応、ハイブリダイズしたプローブを検出及び定量化することにより、ＧＩＰ  ｍＲＮＡ量を検出すること、
ｃ．参照サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ量とこのＧＩＰ  ｍＲＮＡ量を比較すること
を含む、請求項３、８及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
翻訳開始部位の上流−９７位を含むゲノムＧＩＰ配列を有する単離核酸であって、Ｇ以外のヌクレオチドが、−９７位に存在している核酸。
【請求項３８】
ヌクレオチドがＡである、請求項３７に記載の単離核酸。
【請求項３９】
配列番号２で定義された配列を有する、請求項３８に記載の単離核酸。
【請求項４０】
ゲノムＧＩＰポリヌクレオチド配列が、ＮＭ−００４１２３（配列番号１）で定義された配列を有する、請求項１〜３９のいずれかに記載の方法、使用又は試験キット。
【請求項４１】
対立遺伝子の両方がＧを有する、請求項９若しくは２１に記載の使用又は請求項２、５及び６のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
ヌクレオチドがＡである、請求項３又は７に記載の方法。
【請求項４３】
採取されたサンプルが試験される個体が、グルコース代謝障害、好ましくは糖尿病及び特に好ましくはＩ型糖尿病を患う、請求項１、４及び９のいずれかに記載の使用、請求項２、３、５〜８、１９及び２０のいずれかに記載の方法、又は請求項２２に記載の試験キット。
【請求項４４】
採取されたサンプルが試験される個体が、高血圧を患うかそして／又はすでに心筋梗塞を患っている、請求項１、４及び９のいずれかに記載の使用、請求項２、３、５〜８、１９及び２０のいずれかに記載の方法、又は請求項２２に記載の試験キット。
【請求項４５】
サンプルがヒトサンプルである、請求項１、４及び９のいずれかに記載の使用、請求項２、３、５〜８、１９及び２０のいずれかに記載の方法、又は請求項２２に記載の試験キット。
【請求項４６】
サンプルが、組織学的サンプル、生検サンプル、細胞抽出物、１つ若しくはそれ以上の細胞又は採取された体液である、請求項１、４及び９のいずれかに記載の使用、請求項２、３、５〜８、１９及び２０のいずれかに記載の方法、又は請求項２２に記載の試験キット。
【請求項４７】
検出手段が、ゲノムプローブ、又は配列番号５若しくは配列番号６で定義される配列の１つ若しくはそれ以上のプライマーを含むプライマーセットである、請求項１９若しくは２０に記載の使用又は請求項２２に記載の試験キット。
【請求項４８】
生物学的サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡを検出する手段が、ｍＲＮＡプローブ又はＧＩＰ  ｃＤＮＡを増幅するプライマーセットである、請求項２２に記載の試験キット又は使用。
【請求項４９】
ＧＩＰタンパク質を検出する手段が抗体である、請求項２４に記載の使用又は試験キット。
【請求項５０】
心血管疾患を処置又は予防する薬剤を製造するための、生体系のＧＩＰの量及び／又は活性の調節に活性な物質の使用。
【請求項５１】
生体系のＧＩＰの量及び／又は活性の調節に活性な物質又は物質の混合物を投与することを含む、心血管疾患を患う個体を処置する方法。
【請求項５２】
心血管疾患を処置又は予防する薬剤の製造に関して、心血管疾患の処置又は予防に活性であることが公知の物質又は物質の組み合わせの使用であって、心血管疾患が、場合により１つ又はそれ以上の他の診断方法と一緒に、請求項２及び３に記載の方法のうちの１つ又は両方によって診断されることを特徴とする使用。
【請求項５３】
心血管疾患を患う個体を処置する方法であって、以下、
ａ）場合により１つ又はそれ以上の他の診断方法と一緒に、請求項２及び３に記載の方法のうちの１つ又は両方によって、個体の心血管疾患の存在を診断すること；並びに
ｂ）心血管疾患の処置に活性であることが公知の物質又は物質の混合物を投与することを含む方法。
【請求項５４】
物質又は物質の混合物が、生体系のＧＩＰの量及び／又は活性の調節に活性な物質又は物質の混合物である、請求項５３に記載の方法又は請求５２に記載の使用。
【請求項５５】
生体系が、個体、細胞又は体のコンパートメント若しくは個体の細胞のコンパートメントである、請求項５０若しくは５２に記載の使用、又は請求項５１、５３若しくは５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
個体が、ヒト又は動物である、請求項５５に記載の使用又は方法。
【請求項５７】
物質が、生体系に存在している１つ又はそれ以上のＧＩＰ受容体の活性又は量を調節し得るものである、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【請求項５８】
物質が、プレプロ−ＧＩＰの発現、その転写、その翻訳、そのタンパク質若しくはｍＲＮＡの安定性、その翻訳後修飾、ＧＩＰへのプレプロ−ＧＩＰのプロセシング、又はＧＩＰの細胞放出を調節し得るものである、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【請求項５９】
物質が、生体系に存在しているＧＩＰへのプレプロ−ＧＩＰのプロセシングに関与する１つ又はそれ以上のプロテアーゼの活性又は量を調節し得るものである、請求項５８に記載の使用又は方法。
【請求項６０】
プロテアーゼが、ジペプチジルペプチダーゼＩＶである、請求項５９に記載の使用又は方法。
【請求項６１】
物質が、ＧＩＰ受容体アンタゴニストである、請求項５５に記載の使用又は方法。
【請求項６２】
ＧＩＰ受容体アンタゴニストが、調節ペプチド、例えばＧＩＰ（６−３０）−ＮＨ2又はＧＩＰ（７−３０）−ＮＨ2である、請求項６１に記載の使用又は方法。
【請求項６３】
物質が、低分子量の分子である、請求項５０〜６１のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【請求項６４】
物質が、メチリデンヒドラジド化合物である、請求項６３に記載の使用又は方法。
【請求項６５】
心血管疾患が、冠動脈心疾患、狭心症、急性冠症候群又は心筋梗塞である、請求項１、４、９及び１０、１９、２０、５０若しくは５２のいずれかに記載の使用、請求項２、３、５〜８、１１〜１５、５１若しくは５３のいずれかに記載の方法、請求項１６に記載のハイスループットスクリーニング、又は請求項２２に記載の試験キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心血管疾患のリスクが増大することを同定するための一塩基多型（ＳＮＰ）の使用、並びにこの使用に好適なプライマー、プローブ及びポリヌクレオチドに関する。さらに、本発明は、心血管疾患を予防及び処置する活性物質を発見するためのグルコース誘導性タンパク質（ＧＩＰ）の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
西欧諸国において、心血管疾患群は、男女共に主要な死亡原因であり、そして冠動脈心疾患、特に冠動脈疾患は、心血管疾患の主要な原因であると考えられ得るものである。アンギナ（また、狭心症とも呼ばれる）は、心筋に酸素が十分に供給されないと生じる一時的な胸痛又は圧迫感である。冠動脈が狭くなるか又は遮断され、その結果心筋への血流が増大されず、酸素の需要増大に見舞われると、その結果として虚血が生じる可能性があり、この疼痛（すなわち狭心症）が生じるのである。
【０００３】
通常は、狭心症は冠動脈疾患から生じるが、他の冠動脈心疾患によってもまた引き起こされ得る。心筋の虚血すべてが、狭心症に関連した疼痛又は圧迫感を引き起こすわけではない。この種の、すなわち狭心症を引き起こさない心筋の虚血は、無症候性虚血といわれる。無症候性虚血の危険性は、心筋への損傷が、冒されている個体に気づかれていないという事実にある。従って、患者又は主治医はしばしば、この損傷が最終的に心筋梗塞に至るまで、起こり得る心臓組織への損傷を認識することができない。この理由のために、一刻も早く診断従って治療的介入を可能にする、脈管変性及び特に冠動脈変性（本明細書では以下心血管疾患という）を認識する診断方法及び手段に対する大きな需要が存在している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、心血管疾患の診断及び処置のための改良方法を提供することが本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明に従って、この目的は、試験対象の個体から採取された生物学的サンプルの心血管疾患のリスクが増大することを同定するために、ＧＩＰ遺伝子の−９７位での一塩基多型（ＳＮＰ）を使用することによって達成される。
【０００６】
−９７位のヌクレオチドタイプは、ここでは慣用法に基づいて決定される。この位置のヌクレオチドタイプを知ることにより、当業者は、サンプルが由来する個体の属するリスク群を容易に決定し得る。これに最も好適なものは、−９７位の２つの最も一般的なＳＮＰ、アデノシン（Ａ）及びグアノシン（Ｇ）である。
【０００７】
ポリペプチドホルモンである胃抑制ペプチド又はグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）は、インクレチンであり、これは、小腸粘膜と接触した炭水化物、脂肪及びアミノ酸が原因となり、十二指腸及び空腸の内分泌細胞から放出される。このＧＩＰ遺伝子は、染色体１７ｑ２１．３〜ｑ２２上に位置しており、そして１５３アミノ酸（ａａ）のタンパク質であるプレプロ−ＧＩＰをコードしており、Ｎ末端及びＣ末端からそれぞれ５１ａａ及び６０ａａが除去された後、４２ａａのＧＩＰが与えられる。このＧＩＰは、ジペプチジルペプチダーゼＩＶにより、Ｎ末端からさらに２つのａａが除去されることを経てＧＩＰ［３−４２アミド］に転換される。（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：７００５−７００８、１９８７）
ＧＩＰ遺伝子の配列は公知である。この遺伝子のコードポリヌクレオチド配列は、ＮＣＢＩヌクレオチドデータベースにおいてＮＭ＿００４１２３という番号で検索され得る。これに由来するタンパク質配列もまた、ＮＣＢＩヌクレオチドデータベースにおいてＮＭ＿００４１２３という番号でアクセス可能である。このゲノムＧＩＰ配列も同様に、ＮＭ＿００４１２３という番号で検索され得る。ＮＣＢＩは、全米バイオテクノロジー情報センター（郵便宛先：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ３８Ａ，Ｂｅｔｈｓｅｄａ，ＭＤ  ２０８９４，ＵＳＡ；ウェブアドレス：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｈｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）である。ＧＩＰ遺伝子のクローニングは、Ｔａｋｅｄａら、１９８７に記載されている。
【０００８】
このホルモンＧＩＰは、既存の血糖濃度の機能としてインスリン放出を刺激するインスリン分泌性因子として作用し、従って、レギュレーターとしてグルコースホメオスタシスの維持に関与している。重要なＧＩＰ機能は、胃酸分泌の阻害、及び上部消化管運動性の阻害である。ＧＩＰ機能を決定する先行技術で確認されたデータは、動物実験研究からのデータである（Ｍｅｉｅｒら、２００２）。
【０００９】
互いに関連した本発明群は、このような変異体のキャリアの臨床像及び表現型像に対するＧＩＰ遺伝子及び／又はタンパク質の変異の影響を見積るために本発明者らによって行われた、患者の臨床コホートの染色体レベルでのＧＩＰ遺伝子の研究に基づいている。
【００１０】
一塩基多型（ＳＮＰ）は、一つの位置に置換を含む特定のヌクレオチド配列の変異体であり、そして当業者に周知である。
【００１１】
先行技術は、ＧＩＰ遺伝子の長さの多型を記載しており（Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４３１３、１９９１）、そしてさらに、公にアクセス可能なデータベースにおいては、イントロン多型及びアミノ酸置換変異体、すなわちプレプロ−ＧＩＰ  １０３位のＳｅｒからＧｌｙが記載されている。ＮＣＢＩデータベースクラスターレポート：ｒｓ２２９１７２５、コンティグＮＴ０１０７８３、ｍＲＮＡ００４１２３、ＮＰ００４１１４を参照のこと（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＳＮＰ／ｓｎｐ＿ｒｅｆ．ｃｇｉ？ｌｏｃｕｓＩｄ＝２６９５＆ｍｒｎａ＝ＮＭ＿００４１２３＆ｃｔｇ＝ＮＴ＿０１０７８３＆ｐｒｏｔ＝ＮＰ＿００４１１４＆ｏｒｉｅｎ＝ｒｅｖｅｒｓｅ＆ｖｉｅｗ＋ｒｓ＋＝ｖｉｅｗ＋ｒｓ＋＆ｃｈｏｏｓｅＲｓ＝ａｌｌ）。
【００１２】
しかし、本発明が基づくＧＩＰ遺伝子の遺伝子多型、及び特にこの遺伝子多型に関連したＧＩＰの意味合いは、心血管疾患において以前から公知であった。
【００１３】
本発明者らの実験は、ＧＩＰ遺伝子の変異が、心血管疾患を患うヒトにおいて統計上有意な頻度で生じることを初めて実証している。このタイプの疾患におけるＧＩＰ遺伝子の意味合いは、以前にはまったく記載されておらず、そしてグルコースホメオスタシスの領域でのＧＩＰの公知の機能を考慮して、まったく驚異的だとみなされるべきである。
【００１４】
−９７位、すなわちＧＩＰ遺伝子配列の参照配列を基準にして２位に最も頻繁に現れるヌクレオチドはＧである。従って、このＧＩＰ遺伝子変異体は、本明細書で以下「野生型」といわれる。従って、本願において、問題になっている部位のヌクレオチドの置換若しくは突然変異、又はこのＧＩＰ遺伝子のそれほど頻度の高くない変異体について述べるとき、これは、参照配列（配列番号１）の２位、すなわち翻訳開始部位を基準にして−９７位にＧ以外の核酸塩基が存在することを指している。
【００１５】
配列番号１は、ＮＣＢＩ受入番号ＮＭ＿００４１２３によって定義されたＧＩＰ野生型配列を指し、配列番号２は、参照配列の開始を基準にして２位、すなわち翻訳開始部位を基準にして−９７位にＡを有する、発見された配列を指す。
【００１６】
さらに本発明は、個体の心血管疾患のリスクが増大することを同定する方法に関し、この方法は、個体から採取されたサンプルを、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシンを有するか否かについて試験することを含むものであり、このグアノシンの存在は、この個体のリスクが増大することを示すものである。
【００１７】
本発明が基づく研究において、本発明者らは、７つの異なる遺伝子多型を同定した。その後の遺伝子型−表現型関連分析は、これに関連して、参照配列ＮＭ＿００４１２３（ＧからＡ）の２位の多型が、特にクリニカルエンドポイントと統計的に有意に関連することを示した。この多型は、ＡＴＧ翻訳開始コドンの上流の−９７位であり、ＧＩＰ遺伝子のプロモーター領域にある（図１Ａ）。本発明が基づくこの多型は、転写制御、従ってＧＩＰ遺伝子の発現及び対応するタンパク質の発現のために存在する領域内に位置しているので、この観察された関連は、本明細書において以下に記載されるクリニカルエンドポイントと必然的に関連する可能性があり、これはすなわち、−９７位にＧ以外のヌクレオチドを有する個体と比較して、ＧＩＰ遺伝子の異なる発現が、本明細書において以下に記載されるクリニカルエンドポイントの出現に対する影響を有するＧＩＰレベル（例えば、細胞レベル又は血液レベル）の変化をもたらすことになる。
【００１８】
従って本発明はまた、個体の心血管疾患のリスクが増大することを同定する方法に関し、この方法は、グアノシン以外のヌクレオチドが、−９７位でこのＧＩＰ遺伝子のいずれか又は両方の対立遺伝子に存在する個体由来の比較サンプルと比較して、個体から採取されたサンプルが、変化したＧＩＰ  ｍＲＮＡ量及び／又はタンパク質量を含むか否かについてこの採取されたサンプルを試験することを含むものであり、この変化した量の存在は、この個体のリスクが増大することを示すものである。
【００１９】
ＧＩＰ量の変化、すなわちＧＩＰレベルの変化は、ここでは、発現（転写、翻訳、スプライシング）、翻訳後修飾、タンパク質若しくはプロタンパク質の輸送又はタンパク質安定性に対する影響力のすべてのレベルに影響を及ぼすことよって、そしてＧＩＰ発現に作用するシグナル伝達経路に起因した影響によって引き起こされ得る。ＧＩＰ機能に作用するＧＩＰプレプロタンパク質／プロタンパク質又は成熟タンパク質の変化が、変化したレベルと同様に作用すること、すなわちプレプロＧＩＰ／プロＧＩＰ若しくは成熟ＧＩＰの安定性若しくは輸送にポジティブ若しくはネガティブに影響を及ぼし、従ってＧＩＰレベルに対して直接的効果を有することがまた可能であり得る。しかし、本明細書で同定された最も重要な多型は、開始部位の上流の非翻訳領域に位置しているので、転写レベルでＧＩＰ量に影響を及ぼすことが、心血管疾患に最も必然的に関連する可能性があるとみなされ得るし、そして本発明の状況に好ましい。
【００２０】
以下の略語が、本明細書において以下で使用され（示されるすべての位置は、図１Ａの参照配列ＮＭ＿００４１２３のヌクレオチドの位置を指す）、そして１から始まるこの配列内での位置を指すか、又は翻訳開始部位に相対的な位置（この場合、位置は、＋又は−が前に付く）を指す。
【００２１】
ＧＩＰ−Ｇ２Ｇは、ＧＩＰ遺伝子の２位の両方の対立遺伝子上にグアノシン（Ｇ）を有する人々の群を記載している。この人々は、このＧＩＰ変異体に関してホモ接合体である。
【００２２】
ＧＩＰ−Ｇ２Ａは、ＧＩＰ遺伝子の２位の一方の対立遺伝子上にグアノシン（Ｇ）を有し、そしてＧＩＰ遺伝子の２位の他方の対立遺伝子上にアデノシン（Ａ）を有する人々の群を記載している。この人々は、このＧＩＰ変異体に関してヘテロ接合体である。
【００２３】
ＧＩＰ−Ａ２Ａは、ＧＩＰ遺伝子の２位の両方の対立遺伝子上にアデノシン（Ａ）を有する人々の群を記載している。この人々は、このＧＩＰ変異体に関してホモ接合体である。
【００２４】
標準的な略語が、本明細書において以下、ヌクレオチド及びアミノ酸に対して同義的に使用される（すなわち、３文字表記又は１文字表記）。
本願において、用語タンパク質配列、アミノ酸配列及びポリペプチド配列は、同義的に使用される。
【００２５】
ＧＩＰ遺伝子の参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位の遺伝子変異は、例えば以下
ａ）この遺伝子変異を含み得るＧＩＰ遺伝子、ここでは特に、ＧＩＰ遺伝子の参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位周辺の領域を分子生物学的に分析することによって、染色体ＤＮＡレベルでの遺伝子変異を直接検出することによって、
ｂ）ＧＩＰ  ｍＲＮＡ発現の測定により検出することを介して、
ｃ）タンパク質−化学分析による、細胞、組織又は体液中に存在するＧＩＰタンパク質の量及び／又は活性の測定から間接的に検出することによって、
検出され得る。
【００２６】
参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位のＧＩＰ遺伝子の核酸レベル（ここでは染色体ＤＮＡ）での遺伝子変異又は多型は、例えば以下
１）ＧＩＰ遺伝子のこの領域の核酸配列を配列決定することに基づく方法（例えば、パイロシーケンス（ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、放射性標識若しくは蛍光色素標識されたヌクレオチドを用いるか、又はこの核酸配列の質量    分析を介した配列決定）；
２）ＧＩＰ遺伝子のこの領域の核酸配列のハイブリダイゼーションに基づく方法（例えば、「ＤＮＡマイクロアレイ」による方法）；
３）ＧＩＰ遺伝子のこの領域の核酸配列の増幅産物を分析することに基づく方法（例えば、ＴａｑＭａｎ分析）
によって検出され得る。
【００２７】
参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位のＧＩＰ遺伝子の核酸レベル（ここでは染色体ＤＮＡ）での遺伝子変異又は多型はまた、例えば、以下
１）ＧＩＰ遺伝子の核酸配列のハイブリダイゼーションに基づく方法（例えば、「ＤＮＡマイクロアレイ」、ノーザンブロット分析による方法）；
２）ＧＩＰ遺伝子の核酸配列の増幅産物を分析することに基づく方法（例えば、「ＴａｑＭａｎ」分析、ディファレンシャルＲＮＡディスプレイ、ＲＤＡ法（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  ａｎａｌｙ  ｓｉｓ））
を介して、発現したＧＩＰ  ｍＲＮＡを測定することに基づいて検出され得る。
【００２８】
さらに、参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位のＧＩＰ遺伝子の遺伝子変異又は多型は、ＧＩＰタンパク質の量及び／又は活性の分析を介して検出され得る。このＧＩＰタンパク質の量及び／又は活性は、例えば、以下
１）ＧＩＰタンパク質量の定量検出に基づく方法（例えば、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡ試験）
２）例えば、ヒト細胞、動物細胞、細菌及び／又は酵母細胞中でのインビトロ試験系を介したＧＩＰタンパク質活性の機能的検出に基づく方法
に基づいて検出され得る。
【００２９】
参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位のＧＩＰ遺伝子の遺伝子変異又は多型の検出は、例えば、（ａ）心筋梗塞、早発性心筋梗塞、急性冠症候群、冠動脈心疾患（＞５０％狭窄）及び不安定狭心症のリスクを評価するための遺伝子マーカー（ｂ）対応する遺伝子変異体のキャリアの心筋梗塞、早発性心筋梗塞、急性冠症候群、冠動脈心疾患（＞５０％狭窄）及び不安定狭心症の予防的処置のためのマーカー（ｃ）心筋梗塞、早発性心筋梗塞、急性冠症候群、冠動脈心疾患（＞５０％狭窄）及び不安定狭心症に対する薬学的に活性な物質の投与されるべき投薬量を適合させるためのマーカー（ｄ）心筋梗塞、早発性心筋梗塞、急性冠症候群、冠動脈心疾患（＞５０％狭窄）及び不安定狭心症に対する薬学的に活性な物質を同定するハイスループットスクリーニングストラテジーを決定するためのマーカー（ｅ）心筋梗塞、早発性心筋梗塞、急性冠症候群、冠動脈心疾患（＞５０％狭窄）及び不安定狭心症に対する薬学的物質の適合性、安全性及び有効性を試験するために、臨床研究に関連する個体又は患者を同定するためのマーカー、並びに（ｆ）  ＤＮＡレベル、ＲＮＡレベル又はタンパク質レベルで、ＧＩＰ遺伝子の遺伝子変異を分析するための試験系の開発の基礎、として使用され得る。
【００３０】
これまで、臨床効果とヒトのＧＩＰ変異体とを結び付けるデータは開示されていなかった。驚くべきことに、本発明者らによる研究は、ＧＩＰ  Ｇ２Ａ若しくはＧＩＰ  Ａ２Ａ又はＧ２Ｇの存在、特にＧＩＰ遺伝子のＧ２Ｇ変異体と冠動脈心疾患の素因とを密接に結び付けることができた。
【００３１】
ＧＩＰ遺伝子の遺伝子多型、特にＧＩＰ  Ｇ２Ａ若しくはＡ２Ａ又はＧ２Ｇ、そして特に好ましくはＧ２Ｇ変異体の検出は、例えば、（ａ）冠動脈心疾患、好ましくは冠動脈疾患、特に好ましくは狭心症の発症を遅延若しくは予防さえするか、若しくは後の経過及び病理学的続発症が重症化することを軽減若しくは阻止するための予防的処置及び予防策（投薬、ライフスタイル）のための遺伝子マーカーとして、又は（ｂ）薬学的投薬量を適合させるための遺伝子マーカーとして、又は（ｃ）医薬品のスクリーニングを設計するための遺伝子マーカーとして、又は（ｄ）特定の処置若しくは医学研究において、患者を同定、及び必要に応じて選択するための遺伝子マーカーとして役立ち得る。
【００３２】
本発明の方法は、早期に同定されるべき冠動脈心疾患に対する素因の決定を可能にし、これによって、アンギナのような症状、又は心筋組織への損傷が生じる前に、予防的又は治癒的な処置策を早期に用いることを可能にする。すなわち、当業者による本発明の多型の同定により、処置しているか又は試験している医師が、対応する損傷又は疼痛が生じる前でさえ、すでに持続している血管若しくは心臓組織への損傷をスクリーニングすること、又は予防的医薬品を投与すること、又はライフスタイルを変えるように提案することについてはっきりと示すことができる。
【００３３】
さらに、この変異体と冠動脈心疾患の素因との間の関連を新たに発見することにより、特定の医薬品の投薬量変化又はＧＩＰ遺伝子にこの突然変異を有さない患者の処置を変える必要性をほのめかすことによって、より有効な処置を用いることを可能にする。
【００３４】
従って本発明はまた、心血管疾患を予防及び／又は処置する医薬品の投薬量を調整するためのＧＩＰ遺伝子の−９７位の一塩基多型（ＳＮＰ）の使用に関し、そしてまた、個体の心血管疾患を処置及び／又は予防する医薬品の投薬量を適合させる方法に関し、この方法は、個体から採取されたサンプルを、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方に存在しているゲノムＧＩＰ配列の−９７位のヌクレオチドタイプについて試験することを含むものであり、この投薬量は、−９７位のこのヌクレオチドタイプの機能として適合されているものである。
【００３５】
有利な実施態様は、個体から採取されたサンプルを、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシンを有するか否かについて試験することを含むものであり、医薬品の投薬量は、グアノシンが存在すると減少又は増大される。特に好ましくは、ここで、両方の対立遺伝子がこの位置にグアノシンを有するもの（ＧＩＰ  Ｇ２Ｇ）である。
【００３６】
別の有利な実施態様は、個体から採取されたサンプルを、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシン以外のヌクレオチドを有するか否かについて試験することを含むものであり、医薬品の投薬量は、別のヌクレオチドが存在すると減少又は増大される。他のヌクレオチドは、好ましくはアデノシンである。
【００３７】
さらに本発明は、個体の心血管疾患を処置及び／又は予防する医薬品の投薬量を適合させる方法に関し、この方法は、ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、−９７位にＧ以外のヌクレオチドを有する個体由来の比較サンプルと比較して、個体から採取されたサンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ量及び／又はタンパク質量が変化したか否かについてこの採取されたサンプルを試験することを含むものであり、この投薬量は、タンパク質量及び／又はｍＲＮＡ量の変化に応じて適合される。
【００３８】
ＧＩＰ遺伝子変異体の存在、特にＧＩＰ  Ｇ２Ａ、Ａ２Ａ又はＧＩＰ  Ｇ２Ｇ変異体の存在は、指標機能を有している。先行技術は、心血管疾患の処置又は予防のための医薬品が多様であることを認めている。すべての医薬品が、同じ疾患の患者すべてに対して同じ効果を有するわけではないので、心血管の医薬品で処置される患者は、通常は初めて、医薬品に「適合される」必要性がある。すなわち、事実上処置している医師は、どの医薬品のどの投薬量が、所望の効果を有しているか、同時に副作用を最小限にすることについて個々の患者を試験する必要性がある。ここでの不利な点は、患者の症状が、投与される医薬品によって（与えられた投薬量で）軽減又は阻止されるか否かがあらかじめわからないという事実である。この患者が、望ましくない副作用を患うか否かをあらかじめ正確に評価することもまた不可能である。
【００３９】
この状況において、処置の前に、患者が特定のＧＩＰ遺伝子変異体を有する患者であると同定することは、特定の医薬品での処置が成功するかどうかの予測を改善し得ることになり、すなわち、心血管疾患の発生とＧＩＰ遺伝子の特定の変異体との関連は、この種のＧＩＰ変異が、個体の生理学的変化に一致し、これは最終的に、この個体が他の個体よりも心血管疾患を患う可能性がより高いか又はより低いといった効果を有することを示唆している。異なる個体において各医薬品の効能が異なることは、個々の患者ごとに生理学的条件が異なるという背景を理解しなければならない。個体を、特定の生理学的背景を有するこのような患者群に割り当てることにより、臨床研究においてこの場合特に活性であると証明された特定の医薬品を好ましく使用することができ、そしてこの変異体を有さない患者と比較して、この患者群においてあまり活性ではないか、又は望ましくない副作用により関係しそうな医薬品を最初から使用しないようにすることが可能である。
【００４０】
通常は、処置の前に個々の患者をこのように分類することは不可能である。本発明が基づく多型と心血管疾患の発生との間の関連を認識することによってのみ、これが可能になる。従って、臨床研究において同じ遺伝子変異体を有する患者群の処置の際にすぐれた成功を示した医薬品が、ＧＩＰ遺伝子に変異を有する患者に対して好ましくは使用され得るが、一方この患者群にあまり有効ではないか、又は異なる遺伝子変異体を有する患者群よりも望ましくない副作用の可能性がより高い医薬品は、最初から使用されないことになる。これは、医薬品に「適合された」患者のリスクを減少させ、そして首尾良い処置の可能性を増大することになる。
【００４１】
従って、本発明のさらなる局面はまた、心血管疾患を処置及び／又は予防する医薬品に応答する個体を同定するためのＧＩＰ遺伝子の−９７位のＳＮＰの使用に関する。このような同定は、例えば以下、
ａ．ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシン以外のヌクレオチド（特に、Ａ）を有するか否かであって、このヌクレオチドの存在は、サンプルが由来している個体が医薬品に応答する指標となるものであるか、又は
ｂ．ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシンを有するか否かであって、この存在は、サンプルが由来している個体が医薬品に応答する指標となるものであり、
ｃ．サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ量及び／又はタンパク質量が、１つ又はそれ以上の比較サンプルと１つ又はそれ以上の参照個体とで異なるか否かであって、異なる量の存在は、サンプルが由来している個体が医薬品に応答する指標となるものである、
に関して、個体から採取されたサンプルを試験することによって実施され得る。このような同定はまた、例えば以下、
ａ．ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシン以外のヌクレオチドを有するか否かであって、このヌクレオチドの存在は、サンプルが由来している個体が医薬品に不十分にしか応答しない指標となるものであるか、又は
ｂ．ＧＩＰ遺伝子の対立遺伝子のいずれか又は両方が、ゲノムＧＩＰ配列の−９７位にグアノシンを有するか否かであって、この存在は、サンプルが由来している個体が医薬品に応答する指標となるものであるか、又は
ｃ．サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ量及び／又はタンパク質量が、１つ又はそれ以上の比較サンプルと１つ又はそれ以上の参照個体とで異なるか否かであって、異なる量の存在は、サンプルが由来している個体が医薬品に不十分にしか応答しない指標となるものである、
に関して、個体から採取されたサンプルを試験することによって実施され得るものであり、同定のための他の方法及び手順もまた考えられる。
【００４２】
２位、すなわち参照配列（配列番号１）の−９７位のＳＮＰは、好ましくはグアノシン又はアデノシンである。
【００４３】
これに関して、単離されたサンプルは、患者から採取された生物学的物質をいう。生物学的物質としては、とりわけ、細胞又は調製物又は組織若しくは器官若しくは体液（例えば、リンパ、唾液、血液、皮膚、結合組織）の一部、又は細胞、好ましくは容易に取り出せる細胞、例えば粘膜細胞が挙げられ得る。この種の生物学的物質は、一般的技術、例えば綿棒での採取、血液サンプルの採取、組織穿刺又は外科的技術（例えば、生検）によって得られ得る。このサンプルは、好ましくは、組織学的標本、細胞調製物、細胞、例えば粘膜細胞、細胞組織、精製ＤＮＡ、ｍＲＮＡ若しくはタンパク質、又は体液、例えば唾液、リンパ若しくは血液、又はこのサンプルの抽出物若しくは調製物である。細胞又は組織由来の天然に存在する分子の精製、及び細胞又は組織の抽出物の調製は、当業者に周知である（また、以下に列挙した標準的な文献の例を参照のこと）。ＤＮＡ／ＲＮＡ又はタンパク質調製物は、一般的技術によりこれらから得られる。
【００４４】
ＧＩＰは、本願において初めて心血管疾患と関連があると同定されたので、互いに関連する本発明群はまた、心血管疾患を処置及び／又は予防するための活性物質を発見するために、ＧＩＰタンパク質若しくはポリヌクレオチド又はこの機能的フラグメントを使用することに関する。
【００４５】
本発明に従った使用により、心血管疾患を予防及び／又は処置するための新規な物質を同定することが可能になる。本発明に従った使用は、所望の特性を有する物質の同定、並びに心血管の予防及び／又は処置に有用であることがすでに同定された物質のさらなる特性決定を含む（すなわち、本発明に従った使用は、例えば、化合物スクリーニング及び化合物プロファイリングに有用である）。
【００４６】
本発明の異なる局面で利用される物質は、生化学的方法又は分子生物学的方法によって精製、部分精製、合成又は製造されたかのいずれかであるすべての生物学的若しくは化学的物質又は天然物の抽出物であり得る。
【００４７】
本発明の異なる局面という意味で心血管疾患の予防又は処置に活性であるとみなされる物質は、ＧＩＰの機能のうちの１つ、すなわちＧＩＰ若しくはＧＩＰＲの量若しくは生体系の定常状態レベル、又はＧＩＰ若しくはＧＩＰＲの発現への影響力を有するすべての物質であり得る。
【００４８】
この目的のために、この物質は、ＧＩＰの機能のいずれかを調節し得るものである（例えば、上記で定義されたもの）。ＧＩＰタンパク質活性は、例えば、ＧＩＰポリペプチド／タンパク質又はそのフラグメントの直接相互作用及び干渉によって、この物質により調節され得る。この物質はまた、例えば転写レベル（開始、伸長、プロセシングなど）でのＧＩＰ又はＧＩＰＲの発現、転写産物の安定性、翻訳を調節し得る。さらにこれは、ＧＩＰの翻訳後プロセシング、修飾、タンパク質フォールディングなどを調節し得る。この物質は、直接又は間接的に（間接的とは、すなわちＧＩＰ又はＧＩＰＲの機能／タンパク質活性／発現などに対する影響力を有する自然のシグナリングカスケードを（ポジティブ又はネガティブに）妨げることによるものであることを意味する）、上記の効果に影響を及ぼし得る。さらにこの物質はまた、ＧＩＰ活性を模倣し得る（すなわち、その機能／役割を引き継ぎ得る）。
【００４９】
ＧＩＰのフラグメントは、対応する野生型よりも短いすべてのポリペプチド又はポリヌクレオチド、例えば配列番号１若しくは配列番号２のポリヌクレオチドのホモサピエンス（ｈｓ）ＧＩＰ、又は配列番号１若しくは配列番号４のポリペプチドよりも短いものであり得る。
【００５０】
ＧＩＰの誘導体又はＧＩＰフラグメントの誘導体は、ＧＩＰポリヌクレオチド、ポリペプチド又はそれらのフラグメントのすべての修飾物であり得る。誘導体は、例えば、アミノ酸配列若しくはヌクレオチド配列の修飾、又は化学修飾若しくは生物学的修飾のようなすべての他の種の修飾、例えば、ポリペプチド若しくはポリヌクレオチドの安定化を導く修飾（例えば、ホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ）修飾、又は核酸骨格若しくはアミノ酸間の結合交換といった他の種の修飾など）、又はある細胞へのポリペプチド若しくはポリヌクレオチドの特異的標的化を可能にする修飾、又は細胞への侵入若しくは細胞による取り込みを促進する修飾（例えば、細胞浸透性リンペプチド、細胞浸透性ペプチドベクター、例えば、アンテナペディア／ペネトラチン（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ）、ＴＡＴ及びシグナルペプチドベースの配列に基づいたものへのオルトカップリング；又は、特異的なトランスポーター若しくはインポーターのリガンドの一部分へのカップリング）を含む。
【００５１】
ＧＩＰの機能的フラグメントは、少なくとも１つのＧＩＰ機能を示すすべてのフラグメント（ポリペプチド又はポリヌクレオチドのいずれか）である。
【００５２】
用語ＧＩＰの「機能的誘導体」は、ＧＩＰの機能のうちの１つを少なくとも有する天然に存在する形態（ポリペプチド又はポリヌクレオチドのいずれか）に関するすべての種類のＧＩＰの修飾を含む。本発明はまた、ＧＩＰフラグメントの機能的誘導体も含む。
【００５３】
ＧＩＰの機能は、上記の機能、例えばＧＩＰタンパク質又はタンパク質フラグメントが、インスリン産生若しくはリポタンパク質リパーゼ活性を増大する能力、膵β細胞の増殖を促進する能力、ＧＩＰ受容体（ＧＩＰＲ）を活性化する能力、又はＧＩＰに典型的な様式で別の分子、例えば別のタンパク質、例えばＧＩＰＲ若しくはそのフラグメントと相互作用する能力を含み、ＧＩＰ核酸若しくはフラグメントに関しては、例えば他の分子、例えば、特異的ハイブリダイゼーションプライマー若しくはプローブと相互作用する能力、下流のコード配列の転写を制御する能力、ＧＩＰをコードする能力などを含む。ＧＩＰの機能はまた、一般に、ＧＩＰ（タンパク質若しくは核酸）又はそのフラグメントが、他の分子（タンパク質（すなわちＧＩＰＲ）、核酸、合成分子が挙げられるがこれらに限定されない）と相互作用する能力を含む。
【００５４】
本発明の別の局面は、心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法に関し、この方法は、以下：
ａ．ＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体を、試験物質と接触させること；及び
ｂ．この試験物質が、ＧＩＰタンパク質若しくは機能的フラグメント又はその誘導体の活性を調節するか否かを決定すること
を含むものである。
【００５５】
本発明の別の局面は、心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法に関し、この方法は、以下：
ａ．ＧＩＰ又はその機能的フラグメントの検出可能な量又は活性を有する細胞を、試験物質と接触させること；
ｂ．この試験物質が、この細胞に存在しているＧＩＰ又はその機能的フラグメントの量又は活性を調節し得るか否かを決定すること
を含むものである。
【００５６】
ＧＩＰの量又は活性を検出可能なほど増大し得る物質は、心血管疾患の予防又は処置に活性な物質であるとみなされる。検出可能な量のＧＩＰは、検出可能な量のＧＩＰ  ＤＮＡ（ｃＤＮＡ若しくはゲノムＤＮＡ）、タンパク質（プレプロタンパク質／プロタンパク質／成熟タンパク質）及び／又はｍＲＮＡのいずれかをいうことができる。検出可能な活性は、ＧＩＰ  ＤＮＡ／ｍＲＮＡ又はタンパク質の転写活性及び／又は翻訳活性及び／又はタンパク質活性のいずれかをいうことができる。
【００５７】
本発明の異なる局面及び実施態様内において、用語、調節は、活性化又は阻害をいう。
【００５８】
本発明のなお別の局面は、心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法に関し、この方法は、以下：
ａ．ＧＩＰタンパク質、その誘導体又はフラグメントをコードする核酸を、転写活性系で試験物質と接触させること；
ｂ．この物質の存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質、その誘導体又はフラグメントをコードするｍＲＮＡ量を測定すること；
ｃ．この物質の非存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質、誘導体又はフラグメントをコードするｍＲＮＡ量を測定すること；
ｄ．この物質が、この系に存在しているＧＩＰ  ｍＲＮＡ量を調節し得るか否かを決定すること、
を含むものである。
【００５９】
この系に存在しているＧＩＰ  ｍＲＮＡ量を調節し得る物質は、炭水化物代謝又は脂質代謝の機能不全に関連するか又はこの機能不全によって引き起こされる疾患の予防又は処置に活性な物質であるとみなされる。
【００６０】
転写活性系は、転写単位の転写反応を行う能力を少なくとも有するすべての生化学的系又は細胞系である。このような系は、当該分野で周知であり、そして細胞（例えば、通常の実験室株又は細胞系、及び真核細胞又は原核細胞の初代培養物）及びインビトロ転写系又はキット（例えば、細胞抽出物に基づいたもの）を含み、これらはまた市販されている。本発明の場合、これは、プレプロ−ＧＩＰ  ｍＲＮＡを発現するか、又はＧＩＰ（１−４２）若しくはＧＩＰのフラグメント（例えば、ＧＩＰ（３−４２）若しくはＧＩＰ（１−３０））をコードするｍＲＮＡを発現する生化学的系又は細胞系であり得る。
【００６１】
この系に存在しているｍＲＮＡ量の測定は、当該分野で周知の技術（例えば、放射性標識若しくは蛍光標識による産物の直接標識、又は特異的プライマー若しくはプローブの使用による産物の検出など）に従って行われ得る。
【００６２】
本発明の別の局面は、心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法に関し、この方法は、以下：
ａ．ＧＩＰタンパク質、その誘導体又はフラグメントをコードする核酸を、翻訳活性系で物質と接触させること；
ｂ．この物質の存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質、誘導体又はフラグメントの量を測定すること；
ｃ．この物質の非存在下で、この系に存在しているＧＩＰタンパク質、誘導体又はフラグメントの量を測定すること；
ｄ．この物質が、この系に存在しているＧＩＰタンパク質、誘導体又はフラグメントの量を調節し得るか否かを決定すること、
を含むものである。
【００６３】
この系に存在しているＧＩＰタンパク質、誘導体又はフラグメントの量を調節し得る物質は、炭水化物代謝又は脂質代謝の機能不全に関連するか又はこの機能不全によって引き起こされる疾患の予防又は処置に活性な物質であるとみなされる。
【００６４】
翻訳活性系は、転写産物の翻訳反応を行う能力を少なくとも有するすべての生化学的系又は細胞系である。このような系は、当該分野で周知であり、そして細胞（例えば、通常の実験室株又は細胞系、及び真核細胞又は原核細胞の初代培養物）及びインビトロ翻訳系（これらはまた、例えばキットとして市販されている）を含む。ポリヌクレオチドのインビトロ翻訳に関して、このポリヌクレオチドは、好適なベクターにサブクローニングされ、その後好適な緩衝液及び細胞抽出物（例えば、網状赤血球溶血液）中でポリペプチドが発現される。ベクター、必要な試薬及び好適な条件のプロトコルは当該分野で公知であり、そして市販されている。
【００６５】
本発明の関連では、用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合により互いに結合したアミノ酸を含む分子をいい、これは、直線様式で互いに結合した少なくとも１０のアミノ酸を含むものである。この種のより短い分子は、ペプチドという。用語「タンパク質」は、少なくとも１つのポリペプチド鎖を含む分子をいうが、互いに会合又は結合した２つ又はそれ以上のポリペプチド鎖を含む分子のこともいうことができる。従って、用語「タンパク質」は、用語「ポリペプチド」を含む。
【００６６】
この系に存在しているＧＩＰタンパク質の検出は、当該分野で周知の技術（例えば、翻訳物を直接放射性標識若しくは蛍光標識すること、又は特異的抗体を利用すること、タンパク質をタグ化し、そしてこのタグを検出することなど）に従って行われ得る。
【００６７】
本発明の別の局面は、心血管疾患の予防又は処置に活性な物質を同定する方法に関し、この方法は、以下：
ａ．レポーター遺伝子又はその機能的フラグメントに作動的に結合したＧＩＰプロモーター又はその機能的フラグメントを含む核酸ベクターでトランスフェクトされる細胞を提供すること；
ｂ．機能的なＧＩＰプロモーターに作動的に結合していないレポーター遺伝子又はその機能的フラグメントを含むコントロールベクターでトランスフェクトされる細胞を提供すること；
ｃ．物質の非存在下で、ａ）及びｂ）に従ってこの細胞のレポーター遺伝子活性を測定すること；
ｂ．この物質の存在下で、このレポーター遺伝子活性を測定すること；
を含むものである。
【００６８】
ｂ）のレポーター遺伝子活性を有意に調節せずに、ａ）のレポーター遺伝子活性を有意に調節（すなわち、増大又は減少）し得る（すなわち、ＧＩＰプロモーター活性を特異的に増大し得る）物質は、炭水化物代謝又は脂質代謝の機能不全に関連するか又はこの機能不全によって引き起こされる疾患の予防又は処置に活性な物質であるとみなされる。
【００６９】
有意な調節とは、標準偏差よりも高いすべての調節（すなわち、増大又は減少）であり、好ましくは、標準偏差より少なくとも２倍高い調節のことである。
【００７０】
上記の本発明の局面は、当該分野で一般的に公知の典型的なレポーター遺伝子アッセイに基づいている。この目的のために、選択したプロモーターは、このプロモーターが活性である場合にレポーター遺伝子の発現を可能にする様式で、選択したレポーター遺伝子の上流で選択した宿主細胞タイプに好適な発現ベクターに挿入される。続いてこの構築物は、選択した宿主細胞に導入される。形質転換又はトランスフェクションの好適な方法、並びに細胞培養条件及びレポーター遺伝子発現の検出は、当該分野で周知である（例えば、以下に列挙した標準的な文献を参照のこと）。好適な条件、並びにベクター、レポーター遺伝子及び必要な試薬は、当該分野で周知であり、これらはまた市販されている。
【００７１】
ベクターは、環状又は直線のポリヌクレオチド分子、例えばＤＮＡプラスミド、バクテリオファージ又はコスミドであり、これを利用して、ポリヌクレオチドフラグメント（例えば、他のベクターから切り取られるか、又はＰＣＲによって増幅され、そしてクローニングベクターに挿入される）は、好適な細胞又は生物中で特異的に増幅され得る。発現ベクターは、宿主細胞又は生物中で目的の遺伝子（例えばレポーター遺伝子）の異種発現を可能にする。細胞又は生物のタイプは、目的次第であるところが大きく、そしてこの選択は、当業者の知識の範囲内である。核酸の増幅に好適な生物は、例えば主に高い増殖率の単細胞生物、例えば、細菌又は酵母である。好適な生物はまた、多細胞組織、例えば、種々の生物から産生された細胞系（例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  Ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ由来のＳＦ９細胞など）から単離されそして培養された細胞であり得る。好適なクローニングベクターは、当該分野で公知であり、そして種々のバイオテクノロジー業者、例えばＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅなどから市販されている。好適な細胞系は、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）で市販されている。
【００７２】
タンパク質又はポリペプチドの異種発現に関して、この細胞は、核酸ベクターでのトランスフェクション及び目的遺伝子（例えば、レポーター遺伝子）発現に好適なすべての原核細胞又は真核細胞であり得る。可能なこの例は、初代細胞又は培養細胞、好ましくは真核細胞培養物であり、これは、例えば多細胞生物若しくは組織（例えば、ＨｅＬＡ、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＳＦ９又は３Ｔ３）から元来得られているか、又はこれ自身が、単細胞生物、例えば酵母細胞（例えば、Ｓ．ｐｏｍｂｅ若しくはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）若しくは原核細胞培養物、すなわちＰｉｃｈｉａ若しくはＥ．ｃｏｌｉであるものである。細胞及び組織由来のサンプルは、先行技術の公知技術（例えば、血液サンプルの採取、組織穿刺又は外科的技術）によって得られ得る。本発明のＧＩＰの使用に好適なものはまた、ＧＩＰを自然に産生し、そしてしかるべき場合にＧＩＰを分泌する単離細胞であり（例えば、内分泌Ｋ細胞）、これは、産生されたＧＩＰ量を増大又は減少させる心血管医薬品の能力を直接測定し得るものである。
【００７３】
本願との関連では、用語「トランスフェクション」は、（原核生物又は真核生物の）宿主細胞への核酸ベクターの導入をいい、従って用語「形質転換」を含む。このトランスフェクションは、永続性又は一過性であり得、そして慣用法に基づいて行われ得る。
【００７４】
このＧＩＰプロモーター領域は、目的の遺伝子のコード配列が、好適なベクター中プロモーター／エンハンサーの下流に機能的にクローニングされ、そして好適な宿主細胞にトランスフェクトされると、目的の遺伝子産物の転写を制御し得るＧＩＰ遺伝子の一部である。一実施態様に従って、このＧＩＰプロモーターは、配列番号１又は配列番号２のヌクレオチド１〜９８（−９７〜＋１位）を含むか又はこれからなる。このＧＩＰプロモーターの機能的フラグメントは、与えられた条件下で、下流のコード配列の転写を同様に制御し得るＧＩＰプロモーターフラグメントである。好ましいフラグメントは、配列番号１又は配列番号２のヌクレオチド１〜９８のヌクレオチドのＧＩＰプロモーターの機能的フラグメントを含むものである。
【００７５】
レポーター遺伝子は、その遺伝子産物の定量化を容易にするすべての遺伝子であり得る。真核生物又は原核生物宿主のための広範な種々のレポーター遺伝子、並びに検出方法、及び必要な試薬は当該分野で公知であり、そして市販されている。これらは、例えば、βラクタマーゼ（ｌａｃＺ）、ルシフェラーゼ、緑色又は青色蛍光タンパク質（ＧＦＰ若しくはＢＦＰ）、ＤｓＲｅｄ、ＨＩＳ３、ＵＲＡ３、ＴＲＰ１若しくはＬＥＵ２又はβガラクトシダーゼの遺伝子を含む。これらの遺伝子は、可視（色又は発光）反応（例えば、ｌａｃＺ、ルシフェラーゼ）により容易に検出され得るタンパク質をコードしている。これらは、可視（色若しくは発光）反応により容易に検出され得る遺伝子産物、又は発現されると抗生物質、例えばアンピシリン若しくはカナマイシンに対する耐性を与える遺伝子産物を含む。他のレポーター遺伝子産物は、発現している細胞に特定の条件下で成長できるようにし得るものであり、例えば栄養要求性遺伝子である。
【００７６】
レポーター遺伝子の機能的フラグメントは、その遺伝子産物の定量化を容易にする与えられたレポーター遺伝子のすべてのフラグメントである。
【００７７】
本発明の上記の局面の状況において、このコントロールベクターは、レポーター遺伝子又はその機能的フラグメントを含むが、レポーター遺伝子発現が、（機能的）ＧＩＰプロモーターによって駆動されないすべての好適なベクターであり得る。これは、例えば、レポーター遺伝子又はその機能的フラグメントが、機能的ＧＩＰプロモーターに作動的に結合していないこと（すなわち、ＧＩＰプロモーターを完全に欠くか、非機能的なＧＩＰ  ４プロモーター若しくはプロモーターフラグメントを含むか、又はこのプロモーターとレポーター遺伝子とのカップリングが機能的ではないといういずれか）を意味し得る。これはまた、レポーター遺伝子又はその機能的フラグメントが、ＧＩＰプロモーター（例えば、ＳＶ４０又は別の標準的なプロモーター）以外の別のプロモーターに作動的に結合されることを意味し得る。この機能的なベクター及びコントロールベクターはまた、同じ細胞にトランスフェクトされ得るが、この場合、レポーター遺伝子が異なる必要がある。
【００７８】
本発明の別の局面は、活性物質の同定のための上記の新規な方法のうちの１つに従った方法（このような方法はまた、「アッセイ」と呼ばれる）に基づいたハイスループットスクリーニングに関する。
【００７９】
定義された標的分子（いわゆる標的、主にタンパク質又は核酸）の活性又は濃度を、可能性のある薬学的化合物の有効性のパラメーターとして測定するために使用される分析法又は分析系、いわゆるアッセイは、当該分野で周知である。アッセイは、例えば確定された空間及び時間内で反応混合物と一緒に入れられた単離又は部分単離コンポーネントを用いる生化学的な分析法又は系を含み、これにおいて、可能性のある薬学的化合物の有効性が試験され得る。アッセイの他の例は、標的分子の活性及びこの活性に影響を及ぼす可能性に対する有効性を細胞内で測定し得る生化学的分析法又は系を含む。
【００８０】
アッセイは、生物学的プロセスをモニターするすべてのタイプの分析法又は系（例えば、上記の分析法を参照のこと）であり得る。好適には、生理学的な代謝経路の一部を表すが、また病理学的状態の一部も表す分子カスケード及びメカニズムが、細胞系又は生化学的（インビトロ）系で再現される。従って、可能性のある薬学的化合物の薬理学的活性は、これらのカスケード又はメカニズムを妨害又は調節する能力に従って測定され得る。
【００８１】
薬物スクリーニング、特に新規な薬学的化合物のハイスループットスクリーニングでの使用に関して、このアッセイは、再現可能であることが必要であり、そして好ましくはまた、拡張可能であり、かつ強力であることが必要である。本発明の範囲において、ハイスループットスクリーニングは、本発明の方法が、極めて小規模、例えば９６、３８６又は１５３６ウェルプレート上で、数ミリリットル〜数ナノリットル又はそれ以下でさえの範囲の極めて少量のサンプル中で行われることを意味している。従って、極めて大量のサンプルが、短時間で分析され得る。ハイスループットスクリーニングは、ただ１つのアッセイにより、特定の能力に関するおよそ５００,０００までの異なる化合物をスクリーニングすることを主に含む。このアッセイは、好ましくは、研究中の標的分子の活性を調節する能力に関する化学物質のハイスループットスクリーニングに好適である。このタイプのアッセイは、例えば、使用される標的分子のタイプ（例えば、ポリペプチド又はポリヌクレオチド）、及び「読出し」、すなわちパラメーターに左右され、これらに従って、標的分子の活性が測定される（以下参照）。
【００８２】
異なるタイプのアッセイは、当該分野で一般的に公知であり、そして商業的業者から市販されている。
【００８３】
異なる目的に好適なアッセイは、放射性同位体アッセイ又は蛍光アッセイ、例えば蛍光偏光アッセイ（標識群と非標識群との相互作用（例えば、標識化タンパク質受容体とその非標識リガンドとの相互作用）の測定）を含む。
【００８４】
それ以外の例としては、細胞系が、目的の組換えタンパク質を安定して（誘導性若しくは非誘導性；染色体若しくはエピソーム）又は一過性に発現する細胞ベースのアッセイが挙げられる。これらのアッセイは、例えば、特定のプロモーター又はシグナル伝達カスケード群のシグナル伝達経路の調節が、レポーター酵素の活性に従って測定されるレポーター遺伝子アッセイを含み、この酵素の発現は、この特定のプロモーターの制御下にある。このタイプのアッセイに関して、それ自身研究されているか、又は研究中のシグナリングカスケードによって調節されている定義されたプロモーターの制御下にあるレポーター遺伝子を含む組換え細胞系が構築される。好適なレポーター酵素及び細胞系は、アッセイの目的次第であり、例は上記で挙げられており、そしてその選択は当業者の範囲内である（また、上記を参照のこと）。
【００８５】
これに関して本発明に好適な例は、例えば、レポーター遺伝子が、ＧＩＰプロモーター領域（すなわち、下流の遺伝子の転写を引き起こすことができ、そして好ましくは−９７位周囲の領域を含む翻訳開始部位の上流に位置する配列又はその一部）の制御下にある細胞性レポーター遺伝子アッセイである。ここで、活性な化合物が、−９７位に突然変異を有するプロモーターを含む反応混合物中でレポーター遺伝子量を変更（すなわち、減少又は増大）し得るか否かを、この量を、野生型プロモーター／エンハンサーを含む比較反応混合物中の量と対応させる様式で試験することができる。
【００８６】
細胞内のイオンレベルを測定するアッセイは、当業者に一般的に公知である。イオンチャネル活性（これは、例えば細胞内イオン濃度を制御し、従って細胞内イオン濃度の測定に利用され得る）の測定に関して、例えば膜電位感受性アッセイ及び色素が使用され得る。
【００８７】
ｃＡＭＰレベルの測定に関して、例えばＡＬＰＨＡＳｃｒｅｅｎTM、蛍光偏光又はＨＴＲＦテクノロジーが好適である。
【００８８】
ＧＰＣＲ活性の測定に関して、例えば、Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎTM  ｃＡＭＰ検出系によるｃＡＭＰ測定、Ｃａ２＋動員アッセイ又はレポーター遺伝子アッセイが好適である。
【００８９】
タンパク質リン酸化の測定に関して、例えば、キナーゼ活性、蛍光偏光アッセイが一般的に公知であり、そして他のタイプのアッセイ及び「読出し」は、当該分野で周知である。
【００９０】
本発明の異なる局面の一実施態様に従って、ＧＩＰが、これに関して単離分子として使用される。本発明との関連では、用語「単離される」は、ポリペプチド／タンパク質／ポリヌクレオチド／核酸及びフラグメント並びにそれらの誘導体に関して、この分子が、天然の供給源から精製されるか、又は組換えで調製されて精製されるかのいずれかであることを意味している（用語「精製される」はまた、用語「部分精製される」も含み、例えば、タンパク質調製物全体の形態、部分濃度の形態（例えば、サイズ分画によるもの）などを含む）。
【００９１】
本発明の異なる局面のさらなる実施態様に従って、翻訳開始部位の上流の配列を含むＧＩＰポリヌクレオチドが使用される。１つの好ましい実施態様に従って、このＧＩＰポリヌクレオチドは、ゲノムポリヌクレオチド配列を基準にして−９７位にグアノシンを有する。
【００９２】
心血管疾患の発症に最も有意に関連していると同定されたＧＩＰ遺伝子変異体は、ＧＩＰ  Ｇ２Ｇであるので、本発明の好ましい実施態様は、翻訳開始部位の上流の配列領域を含み、そしてゲノムポリヌクレオチド配列を基準にして−９７位にグアノシンを有するＧＩＰポリヌクレオチドの使用に関する。従って、別の好ましい実施態様に従って、このＧＩＰポリヌクレオチドは、変異体ＧＩＰ  Ｇ２Ｇである。
【００９３】
通常は、研究されるべき遺伝子の野生型配列の個々のＳＮＰは、標的遺伝子（「分子標的」）を用いた活性化合物のスクリーニングに考慮されない。本願は、特にゲノム配列の−９７位にグアノシンを有するＧＩＰ変異体（ＧＩＰ  Ｇ２Ａ及びＧ２Ｇ）が、心血管疾患の発生に関連していると同定されているので、この種の（特に、これに伴う細胞の特定の生理学的構成の背景に対する）変異体の使用により、心血管疾患の処置及び／又は予防に好適な活性化合物を発見する可能性がより高くなるはずである。実際に、この種の遺伝子構成及び生理学的構成を有する個体はまた、心血管疾患によりかかりやすいようであるので、本明細書で発見された活性化合物の大多数は、正確にこの患者群を標的化する。一方、ＧＩＰ  Ｇ２Ａ及びＧＩＰ  Ａ２Ａ変異体の使用は、特にこの遺伝子変異体を有する患者が応答する活性化合物の発見をもたらすはずである。従って、ＧＩＰ  Ｇ２Ａ又はＡ２Ａ変異体の使用は、本発明の別の実施態様に相当する。
【００９４】
好適なタイプのアッセイ及び他のタイプの読出しは、同様に当業者に周知である。
【００９５】
さらに、ＧＩＰ遺伝子のＳＮＰは、ＧＩＰ自身以外の標的を用いた活性化合物のスクリーニングでの使用に好適である。従って、心血管疾患を処置及び／又は予防する活性化合物の発見のために、細胞アッセイ中で細胞を使用することが可能であり、この化合物は、ＧＩＰ以外の標的（特に、ゲノムが、−９７位に関するＧＩＰ遺伝子の定義された変異体、すなわちＧＩＰ  Ｇ２Ｇ、ＧＩＰ  Ｇ２Ａ又はＧＩＰ  Ａ２Ａを有する細胞）の機能及び／又は活性及び／又は量に影響を及ぼす能力を有する。このように、処置されるべき疾患に好ましくは関連した遺伝的背景に対して、活性化合物、突然変異した遺伝子以外の遺伝子の機能に干渉するものさえをも特異的にスクリーニングすることが可能である。
【００９６】
従って、本発明を用いるさらなる実施態様は、活性化合物を発見するために、ＧＩＰ  Ｇ２Ａ、Ａ２Ａ及び特にＧ２Ｇ遺伝子型を有する単離細胞を使用することに関する。
【００９７】
本発明のさらなる局面は、試験されるべき個体の体から採取された生物学的サンプルを分析することにより心血管疾患に対する素因を検出するために、ＧＩＰを検出する手段を使用することに関する。
【００９８】
本発明の別の局面は、試験されるべき個体の体から採取された生物学的サンプルを分析することにより、心血管疾患に対する素因を決定するための試験キットを調製するために、ＧＩＰを検出する手段を使用することに関する。
【００９９】
これに関して、Ｇが存在すること、特に、好ましくは−９７位の両方の対立遺伝子上にＧが存在することは、リスクが増大することを示している。
【０１００】
ＧＩＰを検出する手段は、生物学的サンプル中でＧＩＰタンパク質又はポリヌクレオチドを検出するのに好適なすべての手段であり得る。
【０１０１】
生物学的サンプル中のＧＩＰ量（すなわち、定常状態レベル）を検出する手段は、ＧＩＰ発現を検出及び定量化するに好適なすべての手段であり得、これはすなわち、例えばＧＩＰ  ｍＲＮＡ又はタンパク質を検出するすべての手段であり得る。これは、例えばＧＩＰ  ｃＤＮＡを特異的に増幅し得るプライマーセット（例えば、定量ＲＴ  ＰＣＲで使用するためのもの）であり得る。別のタイプの手段は、例えば、標準的な条件下でＧＩＰ  ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡに特異的にハイブリダイズし得る核酸プローブであり、これは例えばノーザンブロット又はマイクロアレイで使用するためのものである。この種の別の手段は、例えばＧＩＰタンパク質に結合し得る特異的抗体又は抗体フラグメントであり、これは例えば、免疫組織学的技術、免疫組織化学的技術又は免疫化学的技術（例えば、好適な支持体、例えば膜、タンパク質チップ、ＥＬＩＳＡプレートなどに固定されたＧＩＰタンパク質の検出）で使用するためのものである。
【０１０２】
好適なプライマーの設計及び合成は、先行技術で公知であり、このようなプライマーはまた、市販されているかもしれない。好ましい実施態様に従って、これらは、配列番号５及び配列番号６のプライマーである。ポリヌクレオチドは、慣用かつ常用の方法、例えば、慣用の研究室ロボット（これは例えば、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＢｉｏＲａｄなどのような会社から販売されている）を用いることにより配列決定される。
【０１０３】
好適なプローブの設計及び調製は同様に、先行技術で公知である（例えば、列挙された標準的な文献を参照のこと）。
【０１０４】
好適な抗体又はその機能的フラグメントの調製は、先行技術で公知であり、これは例えば、しかるべき場合に、好適なアジュバント（フロイントアジュバント又は水酸化アルミニウムゲル、例えば、Ｄｉａｍｏｎｄ，Ｂ．Ａ．ら（１９８１）Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：１３４４−１３４９を参照のこと）の存在下で、ＧＩＰタンパク質又はそのフラグメントで哺乳動物、例えばウサギを免疫することにより行われる。免疫反応の結果として動物内に産生されるポリクローナル抗体は、その後単離され、そして公知の方法、例えばカラムクロマトグラフィーにより精製され得る。モノクローナル抗体は、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ、３４９、２９３〜２９９）による公知の方法に従って得られ得る。モノクローナル抗体の調製及び精製に好適な方法は、先行技術で公知である（標準的な文献を参照のこと）。ＧＩＰを検出するための既知の抗体の例は、以下の通りである：カタログ番号ＧＩＰ７１−Ａ、Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．ウサギ抗ヒトＧＩＰ抗血清；Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，  ５４１５  Ｌｏｓｔ  Ｌａｎｅ，  Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ  ７８２３８  ＵＳＡ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．４ａｄｉ．ｃｏｍ／；ポリクローナルＧＩＰ（胃抑制ペプチド）抗体  カタログ番号ＲＤＩ−ＰＲＯ１６０２６；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ  Ｐｌｅａｓａｎｔ  Ｈｉｌｌ  Ｒｏａｄ  Ｆｌａｎｄｅｒｓ  ＮＪ  ０７８３６  ＵＳＡ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｅｓｅａｒｃｈｄ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ；ＧＩＰポリクローナル抗体、カタログ番号ＡＢ９５３、ＣＨＥＭＩＣＯＮ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，２８８２０  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｏａｋ  Ｄｒｉｖｅ−Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ  ９２５９０，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈｅｍｉｃｏｎ．ｃｏｍ／ｈｏｍｅ．ａｓｐ；ヒトＧＩＰに対するＹ１０１抗体、Ｙａｎａｉｈａｒａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｙａｎａｉｈａｒａ．ｃｏ．ｊｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；Ｈ−０２７−０２  ＧＩＰ（ヒト）、免疫組織化学としての抗体、及びＲＡＢ−０２７−０２  ＧＩＰ（ヒト）、ＲＩＡとしての抗体、Ｇ−０２７−０２  ＧＩＰ（ヒト）、抗体、精製ＩｇＧ抗体、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，５３０  Ｈａｒｂｏｒ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｂｅｌｍｏｎｔ，ＣＡ  ９４００２，Ｕ．Ｓ．Ａ．，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｈｏｅｎｉｘｐｅｐｔｉｄｅ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔａｃｔ＿ｕｓ．ｈｔｍｌ。
【０１０５】
本関連発明群の関連では、用語、抗体又は抗体フラグメントはまた、組換えで産生される抗体又はその抗原結合部位をいい、これはまた、しかるべき場合に修飾され得るものであり、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性抗体若しくはオリゴ特異性抗体又はＦ（ａｂ）若しくはＦ（ａｂ）2フラグメントである（例えば、ＥＰ−Ｂ１−０  ３６８  ６８４、ＵＳ  ４,８１６,５６７、ＵＳ  ４,８１６,３９７、ＷＯ  ８８／０１６４９、ＷＯ  ９３／０６２１３又はＷＯ  ９８／２４８８４を参照のこと）。
【０１０６】
抗体反応を検出する慣用の免疫化学的又は免疫放射線学的方法は、当業者に周知である。慣用法は、例えば、同定されている抗原への特異的な一次抗体の結合、この一次抗体に対する種特異的エピトープを通常認識する二次抗体の結合に基づいている。この二次抗体の結合は、ここでは、検出可能なシグナル（例えば、放射性標識された二次抗体が使用される場合は放射性シグナル、又は蛍光結合した二次抗体が使用される場合は蛍光シグナル、又は例えば、酵素結合した二次抗体が使用される場合は比色測定可能なシグナル、など）を生成するために使用されており、また標準的な方法に関しては、以下に列挙される文献を参照されたい。
【０１０７】
さらに互いに関連した本発明群はまた、心血管疾患に対する素因を検出する試験キットに関し、この試験キットは、生物学的サンプル中のＧＩＰを検出する少なくとも１つの手段を含むものである。
【０１０８】
本発明の関連では、用語「キットパーツ」（省略形式ではキット）は、空間的及び機能的に関連したユニット（これは、さらなるパーツをさらに含み得る）を与えるように組み合わされている本明細書で同定されたコンポーネントのすべての組み合わせを意味している。
【０１０９】
本発明の診断キットは、生物学的サンプル中のＧＩＰを検出する少なくとも１つの手段を含んでいる。好適には、これはさらに、ＧＩＰを検出し、そして／又はサンプルを調製若しくは系統的にする（ｍｅｔｈｏｄｉｎｇ）好適な緩衝液及び／又はさらなる試薬、そしてまたしかるべき場合に、特定の検出方法を行うための説明書を含み得るものである。
【０１１０】
検出手段は、例えば、サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ又はタンパク質の検出手段であり得、これは好ましくは、サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ又はタンパク質の量が定量され得ることに基づく手段（例えば、好適なプライマー、プローブ、抗−ＧＩＰ抗体など）であり得る。別の例は、ＧＩＰ遺伝子の−９７位のヌクレオチドタイプの決定手段に関し、これは例えば、好適なＰＣＲプライマーセット、プローブ又は特別なＤＮＡ抗体である。
【０１１１】
都合の良い実施態様に従って、検出手段は、ＧＩＰ遺伝子の−９７位のグアノシン又はアデノシン、好ましくはグアノシンを検出する手段である。
【０１１２】
別の都合の良い実施態様に従って、検出手段は、生物学的サンプル中に存在しているＧＩＰ  ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質の量を検出する手段である。
【０１１３】
本発明はさらに、ＧＩＰ遺伝子の−９７位を含む単離ＧＩＰ核酸又はそのフラグメントに関し、これは、−９７位のグアノシン以外のヌクレオチドの存在によって特徴付けられ、これは好ましくは、−９７位にＡを有するＧＩＰ核酸であり、そして特に好ましくは、配列番号２で定義された配列を有する核酸である。
【０１１４】
これに関して、検出手段は、好ましくは、特に配列番号５及び配列番号６で定義されたプライマー又はＧＩＰを検出するためのｍＲＮＡプローブ若しくは抗体を含むゲノムプローブ又はプライマーセットである。
【０１１５】
互いに関連した本発明群のさらなる局面は、ＧＩＰ遺伝子又はＧＩＰ  ｍＲＮＡのヌクレオチド変異体を検出するプローブであり、これは、−９７位を含むゲノムＧＩＰ配列のうち少なくとも１７、好ましくは１９〜１００の隣接したヌクレオチドを含むか又はこれからなるものである。
【０１１６】
本発明はさらに、ＧＩＰポリヌクレオチドを増幅するためのプライマー、ＧＩＰ遺伝子の−９７位を含む増幅されたポリヌクレオチドに関する。
【０１１７】
本発明の方法の好ましい実施態様に従って、ＧＩＰ遺伝子中の変異の存在は、ＰＣＲ、及びしかるべき場合にはその後の配列決定により検出されるか、又はゲノム核酸プローブを利用して検出される。
【０１１８】
ＰＣＲに関する好適なプロトコル及び試薬、又は例えば好適な支持体（例えば、膜又はチップ）上に固定されたゲノムＤＮＡに結合する好適なプローブとのハイブリダイゼーションは、先行技術で周知である。
【０１１９】
新しい二重鎖核酸分子を形成するために、一本鎖形態の両方の分子が、好適な反応条件（周囲の培地の温度及びイオン濃度）下で互いに結合し得るとき、核酸分子は、別の分子と「ハイブリダイズ」し得る。
【０１２０】
ハイブリダイズするために、互いに結合する核酸分子は、必ず相補配列を有する。しかし、選択したストリンジェンシー（ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ）条件如何により、結合を妨げることのない塩基のミスマッチがまた可能である。
【０１２１】
用語「ストリンジェンシー」は、２つの一本鎖核酸分子が互いに結合するときのハイブリダイゼーションの特異性に影響を及ぼす反応条件、すなわち従ってまた、結合の間に許容される２つの分子間のミスマッチの数又はミスマッチの強度を決定する反応条件を記載している。ストリンジェンシー、すなわち従ってまた反応の特異性は、ここで、とりわけ温度及び緩衝液条件に左右される。従って、温度を上げ、そしてイオン強度を下げることによって、ストリンジェンシー、すなわち従ってまた特異性を増大させることができる。２つの与えられた核酸分子を結合させる適切なストリンジェンシー条件はまた、核酸分子の長さ、タイプ、相補性の程度に左右される。このパラメーターは、先行技術で公知である。２つのヌクレオチド配列の一致程度、すなわち相同性の程度が高いほど、２つのハイブリダイズした核酸分子のハイブリッドの融点（Ｔｍ）も高くなる。ここで互いに結合した核酸タイプの機能としての核酸ハイブリッドの相対的安定性は、以下の通りである：すなわち、ＲＮＡ：ＲＮＡ＞ＤＮＡ：ＲＮＡ＞ＤＮＡ：ＤＮＡ。１００を超えて長いヌクレオチドのハイブリダイゼーション産物の融点を計算する等式は、先行技術で公知である。より短いハイブリダイゼーション産物（例えば、オリゴヌクレオチド）の場合、ミスマッチはより決定的であるので、融点の計算は長さに左右される。
【０１２２】
低ストリンジェンシー条件（すなわちまた、より低い反応又はハイブリダイゼーション特異性）は、例えば、ハイブリダイゼーションが２×ＳＳＣ溶液中室温で行われる場合に存在している。対照的に、高ストリンジェンシー条件は、例えば、ハイブリダイゼーションが０.１×ＳＳＣ及び０.１％  ＳＤＳ溶液中６８℃で行われるときに普及している。中程度のストリンジェンシー条件は、その中間である。
【０１２３】
本発明の関連では、用語「ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーション」は、互いに少なくとも５０、５５、６０、６５、７０及び好ましくは７５％以上の相補性を有するヌクレオチド配列が、代表的にはハイブリダイズしたままである条件下で、ハイブリダイゼーション反応及び続く洗浄工程を行う条件を意味している。このような条件の決定は、当業者に周知であり、そしてまた、標準的な実験方法の文献に見出され得る（例えば、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、６．３．１〜６．３．６）。
【０１２４】
本願に従ったストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、ここでは好ましくは以下を意味する：
１） ５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７.５、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％  ＳＤＳ、１０％硫酸デキストラン、０.５ｍｇ／ｍｌ変性ニシン又はサケ精子ＤＮＡ中、一晩の６５℃、又はオリゴヌクレオチドの場合は、オリゴヌクレオチドとサンプルとの二本鎖の融点より５℃低い温度（この融点はまた、アニーリング温度ともいわれる）での試験対象のサンプルとの標識プローブのハイブリダイゼーション。
２） ２×ＳＳＣ中、室温で１０分間の洗浄。
３） １×ＳＳＣ／０.１％  ＳＤＳ中、６５℃（又は、オリゴヌクレオチドの場合は、アニーリング温度より５℃低い温度）で３０分間の洗浄。
４） ０.２×ＳＳＣ／０.１％  ＳＤＳ中、６５℃（又は、オリゴヌクレオチドの場合は、アニーリング温度より５℃低い温度）で３０分間の洗浄。
５） ０.１×ＳＳＣ／０.１％  ＳＤＳ中、６５℃（又は、オリゴヌクレオチドの場合は、アニーリング温度より５℃低い温度）で３０分間の洗浄。
【０１２５】
オリゴヌクレオチドは、ポリヌクレオチドフラグメントであり、好ましくは、１５〜３０ヌクレオチド長のＤＮＡフラグメントである。このアニーリング温度は、以下の式によってここでは計算される。
Ｔｍ＝２×（Ａ＋Ｔの数）＋４×（Ｇ＋Ｃの数）℃
２×ＳＳＣ又は０.１×ＳＳＣ溶液を調製するために、例えば、２０×ＳＳＣ溶液をそれに応じて希釈する。この２０×ＳＳＣ溶液は、３Ｍ  ＮａＣｌ／０.３Ｍクエン酸ナトリウム×２Ｈ2Ｏからなる。
【０１２６】
ハイブリダイゼーションの実施前に、研究対象のポリヌクレオチドを、しかるべき場合に、電気泳動分画（「サザン」（ＤＮＡ）若しくは「ノーザン」ブロット（ＲＮＡ））後、又は電気泳動分画なし（「ドット」若しくは「スロット」ブロット）で、好適な膜、例えばナイロン又はニトロセルロース膜に移す。このハイブリダイゼーションを、好適な様式で標識されたプローブを用いて行う。従って、放射能標識又は蛍光色素での標識が都合良く、他のタイプの標識も同様に考えられる。プローブは、最初から一本鎖であるか、又は通常は二本鎖であるが変性状態で使用される一本鎖ポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドである。このプローブは、塩基対形成により、同様に一本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡを含む生物学的サンプルに結合する。
【０１２７】
本発明の方法のさらに都合の良い実施態様に従って、ＧＩＰ遺伝子中の変異の存在は、以下によって決定される。
ａ．ゲノムＤＮＡを含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．好ましくは、ａ）で定義されたサンプルからゲノムＤＮＡを単離すること；
ｃ．ＧＩＰ遺伝子のゲノム配列の−９７位を含むポリヌクレオチドを増幅し得るプライマーを用いたＰＣＲ反応を行うことにより、ポリヌクレオチドを増幅すること；
ｄ．ｃ）で定義されたポリヌクレオチドを配列決定すること。
【０１２８】
別の好ましい実施態様に従って、ＧＩＰ遺伝子中の変異の存在は、以下によって決定される。
ａ．ゲノムＤＮＡを含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．ａ）で定義されたサンプルからゲノムＤＮＡを単離すること；
ｃ．好適な支持体上に単離ＤＮＡを固定化すること；
ｄ．標準的な条件下でゲノムＧＩＰ配列を有するポリヌクレオチドに特異的に結合し得るものであり、そしてこれに関して、ＧＩＰ遺伝子の−９７位の特定のヌクレオチドに対する特異性を有する１つ又はそれ以上のプローブを固定化ＤＮＡとハイブリダイズすること。
【０１２９】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様に従って、ｍＲＮＡ量の変化は、ＰＣＲ又はｍＲＮＡプローブ（すなわち、標準的な条件下で、ＧＩＰ  ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡとハイブリダイズし得る核酸プローブ）を用いることによって分析される。これは、好ましくは以下によって行われる。
ａ．ｍＲＮＡを含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．好ましくは、ａ）のサンプルからｍＲＮＡを単離すること；
ｃ．ＧＩＰ  ｍＲＮＡ由来のポリヌクレオチドを増幅する能力を有するプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲにより、ポリヌクレオチドを増幅すること；
ｄ．増幅されたポリヌクレオチド量を定量化し、そしてこれを、少なくとも１つの参照サンプル中で増幅されたポリヌクレオチド量と比較すること。
【０１３０】
別の好ましい実施態様に従って、これは、以下によって行われる。
ａ．ｍＲＮＡを含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．ａ）のサンプルからｍＲＮＡを単離すること；
ｃ．好適な支持体（例えば、好適な膜又はチップマトリックス）にｍＲＮＡを移すこと；
ｄ．少なくとも１つの好適なプローブにより、この支持体上のＧＩＰ  ｍＲＮＡを検出及び定量化すること；
ｅ．参照サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ量と比較すること。
【０１３１】
別の好ましい実施態様に従って、このような方法は、以下の工程を含む。
ａ．個体の組織学的サンプルを提供すること；
ｂ．好適なｍＲＮＡプローブとのハイブリダイゼーション反応、すなわちハイブリダイズしたプローブを検出及び定量化することにより、ＧＩＰ  ｍＲＮＡ量を検出すること、並びに
ｃ．参照サンプル中のＧＩＰ  ｍＲＮＡ量とそのＧＩＰ  ｍＲＮＡ量を比較すること。
【０１３２】
本発明の方法のさらに好ましい実施態様において、タンパク質量の変化は、少なくとも１つの抗体を用いて測定される。ここでの好ましい検出方法は、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、タンパク質チップ及び分光測定法である。
【０１３３】
好ましい実施態様に従って、これは、以下によって行われる。
ａ．タンパク質を含む試験対象の個体の生物学的サンプルを提供すること；
ｂ．好ましくは、ａ）のサンプルからタンパク質を単離すること；
ｃ．好適な支持体（好適な膜、ＥＬＩＳＡプレート、チップマトリックスなど）にタンパク質を移すこと；
ｄ．少なくとも１つの特異的なＧＩＰ抗体によりタンパク質を検出し、そして慣用法に基づいてシグナルを定量化すること；
ｅ．少なくとも１つの参照サンプルから得られたシグナルと比較すること。
【０１３４】
別の好ましい実施態様に従って、ＧＩＰタンパク質量は、以下によって検出される。
ａ．個体の組織学的サンプルを提供すること；
ｂ．好適なＧＩＰ抗体との結合反応、すなわちこの量を検出及び定量化することにより、ＧＩＰタンパク質量を検出すること；
ｃ．参照サンプル中のＧＩＰタンパク質量とそのＧＩＰタンパク質量を比較すること、
ｄ．都合良く、ここでは、例えば免疫組織化学的又は免疫放射化学的検出方法を使用し得ること。
【０１３５】
互いに関連した本発明群の関連では、ゲノムＧＩＰポリヌクレオチド配列は、好ましくは、ＮＭ−００４１２３（配列番号１）で定義される配列である。
【０１３６】
別の好ましい実施態様に従って、このゲノムＧＩＰポリヌクレオチド配列は、参照配列を基準にして、−９７位又は２位にＡを有する（配列番号２を参照のこと）。
【０１３７】
互いに関連した本発明群の好ましい実施態様に従って、個体は、グルコース代謝障害を有する患者、好ましくは、糖尿病患者であり、そして特に好ましくは、ＩＩ型糖尿病を有する患者である。さらに、この個体はまた、高血圧であるかもしれないし、そして／又はすでに心筋梗塞を患っているかもしれない。心血管疾患は、好ましくは、冠動脈心疾患（＞５０％狭窄）、冠動脈疾患、心筋梗塞、早発性心筋梗塞、急性冠症候群又は狭心症（特に、不安定狭心症）である。
【０１３８】
本発明の別の局面は、心血管疾患を処置又は予防する薬剤を製造するために、生体系のＧＩＰの量及び／又は活性を調節するのに活性な物質を使用することに関する。
【０１３９】
本発明のなお別の局面は、心血管疾患を患う個体を処置する方法に関し、この方法は、生体系のＧＩＰの量及び／又は活性を調節するのに活性な物質を投与することを含む。
【０１４０】
本発明のさらなる局面は、心血管疾患を処置又は予防する薬剤を製造するために、心血管疾患の処置又は予防に活性であることが公知の物質又はこの物質の組み合わせを使用することに関し、これは、心血管疾患が、場合により１つ又はそれ以上の他の診断方法と一緒に、上記の方法の一方又は両方によって診断されることを特徴とする。
【０１４１】
本発明の別の局面は、心血管疾患を患う個体を処置する方法に関し、この方法は、以下
ａ）場合により、１つ又はそれ以上の当該分野の他の診断方法と一緒に、１つ又はそれ以上の上記の方法によって、個体の心血管疾患の存在を診断すること；及び
ｂ）心血管疾患の処置に活性であることが公知の物質又は物質の混合物を投与すること、
を含むものである。
【０１４２】
心血管疾患の処置に活性であることが公知の物質は、当該分野で周知である。一実施態様に従って、この物質又は物質の混合物は、生体系のＧＩＰの量及び／又は活性の調節に活性なものである。
【０１４３】
生体系は、すべての生物又はその一部であり得る。一実施態様に従って、この生体系は、ヒトである。別の実施態様に従って、この生体系は、動物、例えば哺乳動物であり、そして好ましくは、家畜である。なお別の実施態様に従って、この生体系は、例えば細胞又は体のコンパートメント又は細胞のコンパートメントである。
【０１４４】
本発明の別の局面に従って、この物質は、生体系に存在している１つ又はそれ以上のＧＩＰ受容体の活性又は量を調節し得るものである。
【０１４５】
本発明の別の局面に従って、この物質は、プレプロ−ＧＩＰの発現、その転写、その翻訳、そのタンパク質若しくはｍＲＮＡの安定性、その翻訳後修飾、ＧＩＰへのプレプロ−ＧＩＰのプロセシング又はＧＩＰの細胞放出を調節し得るものである。
【０１４６】
本発明の別の局面に従って、この物質は、生体系に存在しているＧＩＰへのプレプロ−ＧＩＰのプロセシングに関与する１つ又はそれ以上のプロテアーゼ、例えばジペプチジルペプチダーゼＩＶの活性又は量を調節し得るものである。
【０１４７】
この物質は、例えば、ＧＩＰ受容体アンタゴニストであり得る。
【０１４８】
このようなアンタゴニストは、当該分野で公知である。これらは例えば、調節ペプチド、例えばＧＩＰ（６−３０）−ＮＨ2（Ｇｅｌｌｉｎｇら、１９９７を参照のこと）又はＧＩＰ（７−３０）−ＮＨ2（Ｔｓｅｎｇら、１９９９を参照のこと）に及ぶ。
【０１４９】
一実施態様に従って、この物質は、低分子量の分子である。このような分子は、当該分野で公知であり、例えば、メチリデン（ｍｅｔｈｙｌｉｄｅｎｅ）ヒドラジド化合物である。このような化合物、その構造及び調製は、例えばＥＰ  １  ５０６  ７７７  Ａ１に開示されている。
【０１５０】
本発明の方法、使用又は試験キットに使用される単離サンプルは、好ましくはヒトサンプルであり、そして試験対象の個体は、好ましくはヒトである。このサンプルは、特に、組織学的サンプル、生検サンプル、細胞（例えば、粘膜細胞）、細胞抽出物、細胞組織、体液、好ましくは血液、唾液、リンパ又は尿であり得る。
【０１５１】
本発明は、図及び表と組み合わせて、実施例（これは、限定とはみなされない）に基づいて以下により詳細に例示される。
【０１５２】
図面の説明
図１：ＮＭ＿００４１２３（配列番号１）で定義されたヒトＧＩＰ遺伝子のゲノム配列のサブ領域；２位、すなわち翻訳開始を基準にすると−９７位を太字で表している；翻訳開始部位に下線を引いている。
図２：２位、すなわち翻訳開始を基準にして−９７位にアデノシン（太字）を有するヒトＧＩＰ遺伝子のゲノム配列のサブ領域（配列番号２）；翻訳開始部位に下線を引いている。
図３：  ＮＭ＿００４１２３（配列番号３）で定義されたヒトＧＩＰ遺伝子のコード配列。このコード配列は、ＮＭ＿００４１２３の９９位〜５６０位（太字で表示）である。
図４：ＮＭ＿０４１２３で定義されたヒトＧＩＰ遺伝子に由来するタンパク質配列（配列番号４）。
図５：ヒトＧＩＰ遺伝子のゲノム配列の２位周辺領域を増幅するためのプライマー（配列番号５及び配列番号６）。
表１：試験される患者群（研究群）の特徴。
表２：参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位に基づいた研究群のＧＩＰ遺伝子型の分布。
表３：参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位のＧＩＰ変異体Ｇ／Ａと分析される患者群のクリニカルエンドポイントとの関連。
【実施例】
【０１５３】
実施例１：配列決定及び結果の分析によるＳＮＰ検出
胃抑制ペプチド（ＧＩＰ）遺伝子のプロモーターのゲノム領域の増幅
増幅のためのオリゴヌクレオチド（プライマー）：
参照数ＮＭ＿００４１２３のＧＩＰ配列の２位のＧからＡへのヌクレオチド置換を検出するために、以下のプライマーを使用した：
プライマー１：５’−ＧＣＴＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＴＣＴＡＴＧＣＣＴＡＡＴ−３’
プライマー２：５’−ＧＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＣＣＴＧＡＴＴＴＣＴＧ−３’
増幅のためのＰＣＲプロトコル：
使用される試薬は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＵＳＡ）のものであった：
ゲノムＤＮＡ２０ｎｇ；ＴａｑＧｏｌｄ  ＤＮＡポリメラーゼ１単位；１×Ｔａｑポリメラーゼ緩衝液；５００μＭ  ｄＮＴＰ；２.５ｍＭ  ＭｇＣｌ2；２００ｎＭ各増幅プライマー対（１．Ａの配列）；Ｈ2Ｏ  ５μｌ。
【０１５４】
遺伝子型同定のためのＰＣＲ増幅プログラム：
９５℃で１０分間×１サイクル
９５℃で３０秒間
７０℃で３０秒間×２サイクル；
９５℃で３０秒間
６５℃で３０秒間×２サイクル；
９５℃で３０秒間
６０℃で３０秒間×２サイクル；
９５℃で３０秒間
５６℃で３０秒間
７２℃で３０秒間×４０サイクル；
７２℃で１０分間
４℃で３０秒間×１サイクル；
【０１５５】
ＳＮＰの同定
ミニ配列決定及びＳＮＰの検出のためのプロトコル
すべての試薬は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＵＳＡ）のものであった。精製ＰＣＲ産物２μｌ、ＢｉｇＤｙｅターミネーターキット１.５μｌ、２００ｎＭ配列決定プライマー（配列については、１．Ａを参照のこと）、Ｈ2Ｏ  １０μｌ。
【０１５６】
配列決定のための増幅プログラム：
９６℃で２分間×１サイクル；
９６℃で１０秒間
５５℃で１０秒間
６５℃で４分間×３０サイクル；
７２℃で７分間
４℃で３０秒間×１サイクル；
【０１５７】
配列決定産物の分析：
最初に、生データを得るために、「Ｓｅｑｕｅｎｚ  Ａｎａｌｙｓｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ」（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＵＳＡ）を用いて配列を分析し、次いでＰｈｒｅｄ、Ｐｈｒａｐ、Ｐｏｌｙｐｈｒｅｄ及びＣｏｎｓｅｄで系統的にした。Ｐｈｒｅｄ、Ｐｈｒａｐ、Ｐｏｌｙｐｈｒｅｄ及びＣｏｎｓｅｄは、ワシントン大学のＰｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎによって作製されたソフトウェアである（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ．ｅｄｕ）。
【０１５８】
実施例２：同定されたＳＮＰの統計分析
本願に関して、参照配列ＮＭ＿００４１２３  ＧＩＰのＧ２Ａ多型を、１１４０人の患者において、臨床パラメーターとの関連について研究した（表１）。分析される患者群の参照配列ＮＭ＿００４１２３に基づいて、２位のＧＩＰ遺伝子型の分布を表２に示した。すべての統計分析を、ＳＡＳバージョン８．２（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ＧｍｂＨ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて行った。
【０１５９】
参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位のＧＩＰ変異体Ｇ／Ａと分析される患者群のクリニカルエンドポイントとの関連は、表３に見出され得る。ｐ値は、観察される関連に対する統計的有意性に関するパラメーターであり、ＲＲ（リスク比）は、ＧＩＰ−Ａ２Ａ及びＧＩＰ−Ａ２Ｇを有する患者と比較して、ＧＩＰ−２Ｇ２を有する患者に示されるクリニカルエンドポイントが発生するリスクが増大することに関するパラメーターである。ＲＲを、年齢、性別、喫煙、血圧及びコレステロールレベルに関して患者群を調整して計算した。
【０１６０】
分析される患者群は、ＧＩＰ変異体ＧＩＰ−Ｇ２Ａ及びＧＩＰＡ２Ａのキャリアと比較して、心筋梗塞、急性冠症候群、不安定狭心症、早発性心筋梗塞の傾向及び冠動脈心疾患とＧＩＰ変異体Ｇ２Ｇのホモ接合キャリアとの統計的に有意な関連を明らかにした。リスク比（ＲＲ）を計算するためのロジスティック回帰分析を行った後、心筋梗塞のリスクが３.７倍に増大し、急性冠症候群のリスクが３.４倍に増大し、不安定狭心症のリスクが２.９倍に増大し、早発性心筋梗塞のリスクが２.９倍に増大し、そして冠動脈心疾患のリスクが２.５倍に増大したことが、ＧＩＰ−Ｇ２Ａ及びＧＩＰ−Ａ２Ａ変異体のキャリアと比較して、ＧＩＰ−Ｇ２Ｇ変異体のキャリアに見出された（表３）。
【０１６１】
参考文献：
実験方法の標準的な文献：
（別段の通知がない限り、本明細書で言及される実験方法は、以下に列挙される標準的な文献に従って行われるか、又はこれらに従って行われ得る。）
Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ．５４５頁；
Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ；定期的に更新、例えば、第２０００巻；Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ；編者：Ｆｒｅｄ  Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｒｏｇｅｒ  Ｂｒｅｎｔ、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｅｇ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ、Ｄａｖｉｄ  Ｄ．Ｍｏｏｒｅ、Ｊ．Ｇ．Ｓｅｉｄｍａｎ、Ｊｏｈｎ  Ａ．Ｓｍｉｔｈ、Ｋｅｖｉｎ  Ｓｔｒｕｈｌ。
Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ；定期的に更新；Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ；編者：Ｎｉｃｈｏｌａｓ  Ｃ．Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ、Ｈｏｎａｔｈａｎ  Ｌ．Ｈａｉｎｅｓ、Ｂｒｕｃｅ  Ｒ．Ｋｏｒｆ、Ｃｙｎｔｈｉａ  Ｃ．Ｍｏｒｔｏｎ、Ｃｈｒｉｓｔｉｎｅ  Ｅ．Ｓｅｉｄｍａｎ、Ｊ．Ｇ．Ｓｅｉｇｍａｎ、Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｒ．Ｓｍｉｔｈ。
Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ；定期的に更新；Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ；編者：Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ、Ｂｅｎ  Ｍ．Ｄｕｎｎ、Ｈｉｄｄｅ  Ｌ．Ｐｌｏｅｇｈ、Ｄａｖｉｄ  Ｗ．Ｓｐｅｉｃｈｅｒ、Ｐａｕｌ  Ｔ．Ｗｉｎｇｆｉｅｌｄ。
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ；第３版；Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．、Ｂｒａｙ，Ｄ．、Ｌｅｗｉｓ，Ｊ．、Ｒａｆｆ，Ｍ．、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｋ．、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．；Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ＆Ｌｏｎｄｏｎ、１９９４；
Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｍ．Ａｎｓｕｂｅｌ（編者）、Ｒｏｇｅｒ  Ｂｒｅｎｔ（編者）、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｅ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ（編者）、Ｄａｖｉｄ  Ｄ．Ｍｏｏｒｅ（編者）、Ｊ．Ｇ．Ｓｅｉｄｍａｎ（編者）、Ｊｏｈｎ  Ａ．Ｓｍｉｔｈ（編者）、Ｋｅｖｉｎ  Ｓｔｒｕｈｌ（編者）、２００２年１０月、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ
Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ．  Ｃ．Ａ．Ｐｉｎｋｅｒｔ、編者；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、１９９４（ＩＳＢＮ：０１２５５７１６５８）
Ｇｅｎｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、第２版、Ｊｏｙｎｅｒ  ＡＬ編、２０００．ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；
Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．Ｎａｇｙ，Ａ、Ｇｅｒｔｓｅｎｓｔｅｉｎ，Ｍ．、Ｖｉｎｔｅｒｓｔｅｎ，Ｋ．、Ｂｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｒ．、２００３、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；
ＧＩＰ又はＧＩＰ調節物質に関する文献：
Ｇｒｅｍｌｉｃｈ  Ｓ．、Ｐｏｒｒｅｔ  Ａ、Ｈａｎｉ  ＥＨ、Ｃｈｅｒｉｆ  Ｄ、Ｖｉｏｎｎｅｔ  Ｎ、Ｆｒｏｇｕｅｌ  Ｐ、Ｔｈｏｒｅｔ  Ｂ；Ｃｌｏｎｉｎｇ，  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｉｓｌｅｔ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｕｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  １９９５、４４：１２０２〜８
Ｔａｋｅｄａ  Ｊ、Ｓｅｉｎｏ  Ｙ、Ｔａｎａｋａ  Ｋ、Ｆｕｋｏｍｏｔｏ  Ｈ、Ｋａｙａｎｏ  Ｔ、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｈ、Ｍｉｔａｎｉ  Ｔ、Ｋｕｒｏｎｏ  Ｍ、Ｓｕｚｕｋｉ  Ｔ、Ｔｏｂｅ  Ｔ、Ｉｍｕｒａ  Ｈ；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｎ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃＤＮＡ  Ｅｎｃｏｄｉｎｇ  Ｈｕｍａｎ  Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ；ＰＮＡＳ  １９８７、第８４巻、第２０号；７００５〜７００８
Ｇｅｌｌｉｎｇ  ＲＷ、Ｃｏｙ  ＤＨ、Ｐｅｄｅｒｓｏｎ  ＲＡ、Ｗｈｅｅｌｅｒ  ＭＢ、Ｈｉｎｋｅ  Ｓ、Ｋｗａｎ  Ｔ、ＭｃＩｎｔｏｓｈ  ＣＨＳ；ＧＩＰ6-30amide  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ｔｈｅ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ
ｏｆ  ＧＩＰ  ａｎｄ  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ＧＩＰ1-42  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ；Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ６９（１９９７）１５１〜１５４；
Ｔｓｅｎｇ  ＣＣ、Ｚｈａｎｇ  ＸＹ、Ｗｏｌｆｅ  Ｍ；Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＧＩＰ  ａｎｄ  ＧＬＰ−１  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｎ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ；ＡＪ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ−Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２７６：１０４９〜１０５４、１９９９
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【図面の簡単な説明】
【０１６２】
【図１】ＮＭ＿００４１２３（配列番号１）で定義されたヒトＧＩＰ遺伝子のゲノム配列のサブ領域；２位、すなわち翻訳開始を基準にすると−９７位を太字で表している；翻訳開始部位に下線を引いている。
【図２】２位、すなわち翻訳開始を基準にして−９７位にアデノシン（太字）を有するヒトＧＩＰ遺伝子のゲノム配列のサブ領域（配列番号２）；翻訳開始部位に下線を引いている。
【図３】ＮＭ＿００４１２３（配列番号３）で定義されたヒトＧＩＰ遺伝子のコード配列。このコード配列は、ＮＭ＿００４１２３の９９位〜５６０位（太字で表示）である。
【図４】ＮＭ＿０４１２３で定義されたヒトＧＩＰ遺伝子に由来するタンパク質配列（配列番号４）。
【図５−１】ヒトＧＩＰ遺伝子のゲノム配列の２位周辺領域を増幅するためのプライマー（配列番号５及び配列番号６）。  図中、  表１：試験される患者群（研究群）の特徴。  表２：参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位に基づいた研究群のＧＩＰ遺伝子型の分布。  表３：参照配列ＮＭ＿００４１２３の２位のＧＩＰ変異体Ｇ／Ａと分析される患者群のクリニカルエンドポイントとの関連を示す。
【図５−２】図５−１の続きである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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