(57)【要約】本願は、増大した生物活性を有する改良生物活性化学物質、およびそのような物質を製造するための方法を提供する。活性成分の活性を増大させるために、生物活性化学物質中に最適粒子サイズまたは少数の最適粒子サイズを有する改良化学物質が提供される。最適粒子サイズの使用は、生物活性化学物質における特定の生物学的効果のために必要な活性成分量の低減を可能とする。この調合物は、体積または質量で少なくとも５０％の粒子が、０．５Ｍ〜１．５Ｍの範囲にある微粒子形態の生物活性物質を含む。Ｍは、最も生物学的に活性な粒子サイズクラスまたはモードであり、微粒子サイズのクラス数は、微粒子分布を効果的に特徴付け、モードを正しく規定し得るように、少なくとも１２、好ましくは少なくとも２０である。
2008531717.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
増大した生物活性の、活性成分を有する改良生物活性化学物質であって、該生物活性化学物質の粒子形態は、体積または質量で少なくとも５０％の粒子を有し、該粒子は、０．５Ｍ〜１．５Ｍの範囲にあり、ここで、Ｍは最も頻繁に得られる粒子サイズクラスであり、そして最適サイズクラスとなるように選択され、該サイズは、直径、体積または質量のうちの任意の好都合な測量値として用いられ、該粒子サイズクラスの数は、少なくとも１２である、改良生物活性化学物質。
【請求項２】
請求項１に記載の改良生物活性化学物質であって、前記粒子サイズクラスの数が、少なくとも２０である、改良生物活性化学物質。
【請求項３】
請求項１に記載の改良生物活性化学物質であって、前記粒子サイズが、所定の最適粒子サイズまたはモード付近に狭められた分布を有し、該改良生物活性化学物質の元の調合よりも実質的により対称的な粒子サイズ分布を有する、改良生物活性化学物質。
【請求項４】
請求項１に記載の改良生物活性化学物質であって、前記粒子サイズが、狭いほぼ正規分布を有する、改良生物活性化学物質。
【請求項５】
増大した生物活性を有する、活性成分を含む改良生物活性化学物質であって、該活性成分は、最適化された粒子サイズ分布内の粒子サイズおよびより少数の大小の浪費される粒子を含む、改良生物活性化学物質。
【請求項６】
請求項１または５に記載の改良生物活性化合物であって、該生物活性化学物質が、薬学的調合物、または殺虫剤、除草剤、殺菌剤、成長調整剤もしくは毒性緩和剤の調合物を含む農薬調合物である、改良生物活性化合物。
【請求項７】
請求項１または５に記載の改良生物活性化学物質であって、該生物活性化学物質が、非生物学的物質または半生物学的物質である、改良生物活性化学物質。
【請求項８】
活性成分を有する生物活性化学物質の改良調合物を製造するための方法であって：
ａ）生物活性化学物質の元の調合物中の該活性成分の最適粒子サイズを、粒子サイズクラスに従って決定する工程；および
ｂ）慣習的な分離技術および装置ならびに回収技術および装置を使用して、該生物活性化学物質の該元の調合物から該活性成分の最適粒子サイズを選択する工程
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、農業および製薬産業における使用のための、増大した活性を有する生物活性化学物質に関し、これらの生物活性化学物質は、それらの調合物の統計学的特性を改変することにより得られる。
【０００２】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００５年３月１日出願の米国特許出願第６０／６５７，４６４号による優先権を主張しており、その明細書全体が、本明細書中で参考として援用される。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
生物活性化学物質の多くの調合物（農薬調合物および薬学的調合物を含む）は、標的生物または生物中の標的部位に微粒子形態で与えられる活性成分（ＡＩ）からなり、これらの調合物は、カプセル化形態もしくはマイクロカプセル化形態の固体かまたは液体のいずれかであり得る。一般的に、そのような調合物のいずれにおいても、粒子サイズの広範な分布が存在する。過去において、そのような調合物における粒子サイズの重要性に向けられた注目は、無いとは言わないまでもほとんど無かった。
【０００４】
さらに、農業および園芸における農薬調合物の適用は、歴史的にみて非常に非効率的なプロセスであった（Ｇｒａｈａｍ−Ｂｒｙｃｅ、１９８３年）。実際にその目的の標的に到達し、かつ害虫の死亡をもたらした噴霧農薬量の推定値（適用効率＝送達効率＊生物学的効率）は、出芽後の葉に適用される一部の広域除草剤についての約１％（Ｇｒａｈａｍ−Ｂｒｙｃｅ、１９８３年）から、多くの殺虫剤についての＜０．００１％（Ｈａｌｌ  ＆  Ａｄａｍｓ、１９９０年）の範囲に及ぶ。殺虫剤噴霧の一部（例えば、標的植物にたどり着いた部分）は、所望の生物学的効果にとって最適ではない空間分布を示し得、死亡に十分な殺虫剤を害虫に蓄積することができなくなることがある（Ｈａｌｌ  ＆  Ａｄａｍｓ、１９９０年）。標的が得た殺虫剤のうち、ほんの僅かな部分のみが、生物内の感受性部位に到達する（Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ  ＆  Ｙｅｎｄｏｌ、１９９３年、Ｅｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９９ａ年、およびＥｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９９ｂ年）。使用されなかった農薬の大部分が環境に侵入し、排水、直接流出または漂流を介して土壌、水または他の非標的生物を汚染する。このことは、過剰の農薬を浪費するだけでなく、農薬耐性生物の発生に寄与し得る（Ｒｏｕｓｈ、１９８９年）。害虫の殺虫剤に対する耐性だけでも、５４０種を超える作物害虫について記録されており（ＭＳＵ、２００４年）、潜在的な化学物質（特に、一部のより環境にやさしい製品）の大きな損失をもたらしている。新たな化学農薬を開発し登録するには５，０００万ドルを超えるコストがかかるため、害虫による耐性の急速な発達は、害虫防除のコストを実質的に増加させる。
【０００５】
大多数の農業用農薬は、ノズルを通じて流れる流体を作物キャノピー内および作物キャノピー上に堆積される噴霧雲へと分解するノズルを介して水力により送達される。所与の活性成分（ＡＩ）について、噴霧雲の効力は、ノズルの選択、アジュバントの選択またはそれら２つの組み合わせにより影響され得る（Ｃｈａｐｐｌｅ、１９９３年、Ｃｈａｐｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９３ａ年、およびＣｈａｐｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９４年）。しかしながら、通常、生物学的効率および漂流傾向はいずれも液滴サイズに反比例するので、生物学的効率を最大化するノズルおよび／またはアジュバントの選択は、標的から外れた漂流をしばしば増加させる。また、小液滴の噴霧雲は、作物キャノピーに十分に浸透しないため、たとえＡＩがより効率のよい粒子サイズで送達され得るとしても、作物の適切な部分に到達し得ない。このような理由により、ＡＩは、付随的なＡＩの浪費を伴う大液滴中で適用されなければならない。
【０００６】
殺虫剤の生物学的効率は、葉上の噴霧堆積の２つの性質：堆積の量（質量／葉の単位面積）および堆積の質（液滴サイズ分布および葉上の空間的な液滴の分布；Ｄｏｗｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、１９９８年）により影響される。堆積の量は、キャノピー中の活性成分（ＡＩ）の分布に対するおおよその指標を与える。しかしながら、葉上に堆積した農薬の直径８００μｍの単一の液滴は、葉上に無原則にまたは均一に分布した５１２個の直径１００μｍの液滴として堆積した同じ体積とは、同じ生物学的結果を与えない。したがって、堆積の質が、適用プロセスの重要な要素である。
【０００７】
殺虫剤の生物学的効果が滴サイズと反比例し得ることもまた、周知である：小滴は同量のＡＩに対してよりよく作用する（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、１９９０年）。同様な関係が除草剤および殺菌剤に対して存在する。したがって、適用される総ＡＩを減少させながらも、所望の効力を達成するように、植物上の液滴の分布を最適化することが可能であるはずである。これを達成し得る３つの公知の方法がある：１）ノズルチップまたは霧化デバイスの選択によりノズルの動態を操作する、２）アジュバントの選択を通じて調合物の性質を操作する、または、３）これら２つの組み合わせである。しかしながら、研究室における農薬の堆積の質と生物学的効率との間の相関の発見は、圃場において裏づけられていない（Ｇｒａｈａｍ−Ｂｒｙｃｅ、１９８３年、およびＨｉｓｌｏｐ、１９８７年）。実際には、圃場において同程度の制御を達成するためには、通常、大液滴の場合と同量のＡＩ（堆積量）が、小液滴の場合にも必要とされる（Ａｒｎｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．、１９８４ａ年、Ａｒｎｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．、１９８４ｂ年、およびＡｒｎｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．、１９８４ｃ年）。圃場における小液滴の効力低減の主要原因は、漂流および乏しいキャノピーへの浸透であり、これらもまた、液滴サイズと反比例する。したがって、適切なキャノピー浸透を得、漂流を最小化するために大液滴を使用する必要性のため、過剰投薬が必ず必要となる。そのような過剰投薬は、漂流を最小化するための大容量ノズルチップの使用を指定する規制により義務付けられ得る。
【０００８】
適用効率を改善するのに必要な農薬の送達および取得の適切な理解が、用量−輸送のプロセスの、複雑であって非線形の、そして時に拮抗的な性質により妨げられてきた。用量輸送は、殺生物剤の霧化から生物学的効果までの全プロセスである。このプロセスは、ノズルによる霧化、標的への輸送、固着および保持、ＡＩの分解および標的を外れる運命、用量取得、および標的に対する生物学的効果を含む。要素が半解析的および数値的に調査されたことはあるが、解析的に追跡可能な用量輸送の理論は導かれなかった（Ｓａｌｔ  ＆  Ｆｏｒｄ、１９９３年、Ｃｈａｐｐｌｅ  ＆  Ｈａｌｌ、１９９３年、Ｃｈａｐｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９３ｂ年、およびＣｈａｐｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．、１９９５年）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本願は、増大した生物活性を有する新規な生物活性化学物質およびそのような物質を製造するための方法を提供する。特に、本願は、活性成分の活性を得るために、生物活性化学物質中に最適粒子サイズまたは最適粒子サイズの少数の組を提供する。粒子サイズの分布がこれらの最適条件付近に狭められれば特定の生物学的効果のために必要とされる活性成分（「ＡＩ」）の量を低減し得るため、最適粒子サイズの使用が望ましい。
【００１０】
本願は、体積または質量で少なくとも５０％の粒子が０．５Ｍ〜１．５Ｍの範囲にある、微粒子形態中に生物活性物質を含む調合物を提供する。Ｍは生物学的に最も活性な粒子サイズクラス（すなわち、モード）であり、サイズクラス数は、分布を効果的に特徴付け、モードを正確に規定し得るように、少なくとも１２、好ましくは、少なくとも２０である。より具体的には、そのような生物活性化学物質に対する代替的な調合物においては、体積または質量で少なくとも９０％の生物活性物質粒子が０．５Ｍ〜１．５Ｍの範囲にあり、体積または質量で５０％の粒子が０．７５Ｍ〜１．２５Ｍの範囲にあることもまた好ましい。そのような実施形態において、２種以上の粒子サイズクラスがＡＩの効力を増大させることが見出される場合、当該ＡＩについて実験的に決定された最適割合で、数種の分画が一緒に混合され得る。
【００１１】
本願はまた、改良生物活性物質について、粒子サイズ分布を狭める前に必ずしも最適粒子サイズを見出す必要がないということを提示する。本願では、広範なモード粒子サイズを包含する多数の狭められた粒子サイズ分布を使用し得、その全てが元の粒子サイズ分布と比較して能力を改善する。異なる標的に対して使用される場合、必ずしも全ての分画が同様な効力増大を示すわけではないが、生物活性の増大が見られ、生物活性の最高の増大を達成するには単に特定の標的に対して最適な粒子サイズを決定するだけでよい。
【００１２】
一般的に、生物活性化学物質が、慣習的な手段を使用して粉砕された調合物をバイオアッセイし、最良の生物学的結果（例えば、農薬についての、昆虫または雑草のより高い死亡率、選択的な除草剤についての作物の安全限界の上昇、植物成長調節剤、除草剤毒性緩和剤などの所与の用量に対する植物高のより大きな低下など、薬剤、抗体、薬物などについてのより大きな効力）を提供する調合を確かめることにより選択されることは、当業者に公知である。所与のクラスの生物活性化学物質についてのバイオアッセイまたは圃場試験技術は、文献中に容易に見出される（例えば、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓにより出版された農業用農薬についてのＥＰＰＯ会報）。さらに、用語「サイズ」は、粒径、体積または質量のうちの任意の好都合な測定値を含むべきであるということ、および粒子サイズの分類に関して使用される場合、用語「クラス」の意味は、粒子サイズについての観測値が属する間隔または複数の間隔を意味することが意図され、例えば、１０μｍより大きく１２μｍまでの直径および１２μｍより大きく１４μｍまでの直径は、２つの隣接する粒子サイズクラスであることが理解されるべきである。
【００１３】
生物活性な化学物質の統計的性質を調査するためのモデル系の一例として殺虫剤を使用して、本願は、粒子が所望の範囲内に入る生物活性化学物質は、粒子が所望の範囲外に外れる生物活性化学物質よりも大きな活性を有することを提示する。用語生物活性化学物質は、本明細書中で使用される場合、少なくとも農薬（殺菌剤、殺草剤、殺虫剤および成長調節剤を含む）ならびに薬剤を含むと理解されるべきである。本願はまた、一部の物質について、効力がモードからほぼ独立し、度数分布を狭める行為が効力を増大させることを開示する。この出願まで、粒子形態で適用される任意の所与の農薬または薬剤は、最も活性なサイズクラスよりも小さな活性であるか、または過剰なＡＩを含む粒子が大きな割合で含まれていた。このことは、生物活性化学調合物が、本発明により規定される範囲内のみに入るサイズの粒子を有する場合は、ＡＩ化学物質の量を減少させて、粒子サイズのより広範な分布で、先に得られた結果と同じ結果を達成し得る。例えば、Ａｒｎｏｌｄ  ＆  Ａｒｎｏｌｄ（１９９９）によるＣｌｅａｎｉｎｇ  Ａｐｐａｒａｔｕｓに関する国際特許出願第９９／４２１９８号に記載されるサイクロン分離器系を使用して、分離して除かれる不要な粒子は再粉砕または任意の他の公知の方法で処理されて、所望のサイズ範囲の少なくとも数個の粒子を含む別の材料バッチが得られ、この材料バッチをさらなる分離に供し得る。
【００１４】
次いで、慣習的な調合物の度数分布は、例えば、上記のタイプのサイクロン分離器系を使用して、改良生物活性化学調合物を得るために狭められ、ＡＩ減少の割合が計算される。また、国際特許出願第９９／４２１９８号に記載されるタイプのサイクロン分離器または他の市販の同等なデバイスを使用しても、粒子を分類し得る。
【００１５】
代替アプローチは、ＡＩが不活性粒子（例えば、カオリン粘土）の表面に付着している調合物を使用することである。次いで、調合物は、より狭い度数分布の範囲に分別され、これらをテストして、どの度数分布が最大の生物学的効果を示すかが決定される。次いで、元の不活性なキャリヤーを溶解し、その不活性なキャリヤーを分別して同様な狭い度数分布を得、最適にサイズ分類した粒子上のＡＩの充填を変更して、最適な生物学的効力を与える粒子サイズとＡＩ濃度との組み合わせを見出し得る。
【００１６】
本発明は、特に農薬調合物（例えば、殺虫剤、ダニ駆除剤、殺菌剤、除草剤、除草剤毒性緩和剤、昆虫および植物成長調節剤、ならびに寄生性でかつ毒性の生物の農薬）、特に適用段階において、農薬が粒子形態（例えば、水和剤（ＷＰ）、懸濁濃縮物（ＥＣ）または純粋な活性成分）であり得るものに対して適用可能である。活性成分は、キャリヤー液（農業目的用には、通常は水であるが、他の液体（例えば、油）でもあり得る）中で低溶解性を有するか、または適用の間、大多数のＡＩが粒子形態のままであるように調合されなければならない。
【００１７】
本発明は、より小さなサイズに分類される粒子がほとんど存在しないように、粒子サイズが限定された、平均して、より少ない合計粒子を含む改良調合物を提供する。この総粒子数の減少の１つの結果は、噴霧された農薬の標的外汚染（漂流）に対する性向の低減である。噴霧雲中の小液滴は、生物活性物質（農薬、成長調節剤など）の任意の粒子を含む可能性が低下している。漂流に対する性向は、ある程度、滴サイズとは逆に相関するので、小滴中の生物活性物質量のどのような低下も漂流を減少させる。
【００１８】
農業用生物活性物質および薬学的生物活性物質に加えて、本発明はまた、数種の半生物活性物質に対する適用（例えば、風味が成分（例えば、チョコレート）の肌理と関連することがある食品加工産業における適用）および非生物活性物質（例えば、材料産業および金属産業で使用されるようなセラミック粉末および金属粉末）における適用を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（実施形態の詳細な説明）
本発明は、７種の昆虫に対して異なる作用様式を有する３種の元の殺虫剤調合物（すなわち、生物活性化学物質）（カルバメート、フィプリオール（ｆｉｐｒｉｏｌｅ）およびピレスロイド）と組み合せて本明細書において開示される原理の適用を記載することにより、最も好ましく実証される。本発明を実証するために、１種の生物活性化学物質に対して５種が試された。使用される種は、３つの重要な昆虫目：双翅目（ハエ）、鞘翅目（甲虫）および鱗翅目（ガ）を代表する。試験環境は、研究室内でのセラミックタイルおよび葉の表面、温室中の葉の表面、そして圃場での土壌混和に及ぶ。標的、基材および環境の範囲、ならびに応答の大きさが、活性成分を有する種々の生物活性化学物質への適用の有効性を実証する。以下の記載は、あらゆるクラスの農薬を同様に代表するモデル系としてベクターコントロールおよび作物保護の分野において使用される殺虫剤の例、ならびに抗体および他の薬剤の明白なアナログを用いる。
【００２０】
適用効率を上昇させるための現在の方法は：１）送達効率、２）生物学的効率、または３）その両方を上昇させることの３つのみである。適用効率は、送達効率と生物学的効率との間の逆の関係により制限されるため、いずれかまたは両方が液滴サイズから切り離され得る場合に限り、適用効率の顕著な上昇が可能となる。したがって、製造業者による生物活性物質調合化学の選択、ならびに適用者によるノズルおよび／またはアジュバントの選択は、適用効率を漸増的に増加させ得るに過ぎない。送達効率と生物学的効率を切り離すには、送達および／または調合技術への根本的に新しいアプローチを必要とする。
【００２１】
送達効率と生物学的効率との間の逆の関係を断ち切る噴霧器の開発は、有用な適用ツールを提供する。噴霧器は、キャノピーに到達するのに十分な動態エネルギーを噴霧雲に与えるために必要とされる大液滴を保持しながらも、生物学的に活性な小液滴にのみＡＩを含ませることにより、噴霧雲の物理的要求と生物学的要求とを分離する。米国特許第６，３７５，０８９号で開示される種類の噴霧器デバイスであるＤｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅ（Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｃｈａｐｐｌｅ  ２００２）は、用量−輸送プロセスの研究によりもたらされた。Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅ噴霧器の適用効率は、従来の送達系の少なくとも２倍である。Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅを使用して、栽培者は、通常量の５０％のＡＩ／エーカーのみを使用すればよく、その量で効力を損なわず、多くの場合、効力を増大させる。
【００２２】
用量−輸送プロセスの研究はまた、基材上の堆積には最適な滴サイズがあることを示した。大きな液滴は明らかに非効率であるということが、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅの成功により確認される。しかしながら、極めて小さな液滴が、高度に漂流傾向を有することに加え、所望のレベルの効力に十分な物質を送達せず、標的による化学物質に対する耐性につながる致死未満の用量となる可能性があるということも示された。液滴サイズに対する単位ＡＩ当たりの死亡率のプロットは、最適液滴サイズにてモードを有するほぼ二次曲線を示す。
【００２３】
同時に、物質固有の毒性と関連する用量−死亡応答がある。これらの因子は互いにほぼ独立しており、図１に示されるとおり、通常はＳ字状曲線であるが、明確にするために本明細書中では、直線として示される効力を規定する峰として視覚化され得る。大粒子（図１のｘ軸の左端）を適用することによる生じる浪費は、作物保護およびベクターコントロールにとっての直接的なコストであり；非常に小さな粒子（図１の原点）を適用する結果として生ずる浪費は、致死未満の用量を受けた標的による耐性の発達の原因の１つであるということから長期的なコストである。抗生物質および他の薬物に対する疾患生物による耐性の発達と平行することは明らかである。
【００２４】
通常の水力噴霧系を使用したほぼ単分散の堆積物を生成する方法は、固体粒子（粉末）として不水溶性のＡＩを調合し、最適なサイズクラスを分離することである。最適サイズクラスのサイズ分布が狭くなるほど、より多くが最適サイズクラスよりも大きなサイズクラスとなり、浪費が少なくなる。さらに、最適サイズクラスに非常に小さな粒子が含まれないことは、漂流可能なＡＩの量および致死未満用量を必然的に減少させる。用語「微粒子」は、農薬の粒子サイズを最適化するための製造アプローチに対する定義を提供し、本明細書中ではまた、その生成物を「拡張粉末剤」（「ＥＰ」）という。Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅ（ＡＩを含む液滴の度数分布を最適化する）と微粒子（堆積物内の粒子サイズ分布を最適化する）との関連は明確である。
【００２５】
Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅおよび微粒子技術の両方の基礎を成す原理は、噴霧適用において生物学的効率と送達効率とを切り離すという概念である。送達と生物学との切り離しは、送達効率と生物学的効率の両部分系の独立した最適化を可能とする。前者は送達系の物理学と毒性取得プロセスの生物学とを分離することにより、適用中にこれを可能とする。対照的に、微粒子技術は製造プロセス中に物理学と生物学とを分離する。Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅは、可溶性および不溶性の活性成分に対して同様にうまく作用するのに対し、この実施は不水溶性の活性成分に限定される。下記の実施例に示された結果により裏付けられるシミュレーションは、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅを用いた５０％〜７５％の量の低減と比較して微粒子については８５％を超える量の低減を示唆する。
【００２６】
用語「微粒子技術」の使用は、本明細書中で示される場合、調合物中に存在する粒子の度数分布を狭めることにより不水溶性ＡＩの性能を改善しようとするこの適用の新規のアプローチを参照するために使用される。葉に適用されるＡＩについては、噴霧タンク中のＡＩの＜５％が可溶性であるべきであり、土壌への適用については、＜１％が可溶性であるべきである。ある意味で「微粒子」は水和剤（ＷＰ）または懸濁濃縮（ＳＣ）調合物の拡張であり、そのようなものとして、本発明者らは、得られた調合物を「拡張粉末剤」またはＥＰ調合物という。ＥＰの本質は、粒子のサイズ分布が最適化され、狭められている調合物であることである。最適よりも小さな粒子は、不十分な投薬の原因となり得、一方で、最適よりも大きな粒子は、過剰投薬および／または浪費の原因となる。粒子サイズ（直径）と粒子内に存在するＡＩの量（体積または質量）との関係は三次関数（ｃｕｂｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）に従い、その結果、最適よりも大きな粒子の数のいかなる減少も、所与の生物学的効果に必要とされるＡＩの量の実質的な節約をもたらす。また、他の効果（例えば、効果の加速、選択性の拡大および耐性取得の緩徐化）も見込まれ得る。
【００２７】
噴霧散布機（例えば、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅ系）の使用は、少量堆積の効力およびＡＩの標的への十分な送達を達成するための噴霧雲中の大液滴に対する必要性を利用することにより、散布率を少なくとも５０％減少させる。微粒子の概念は、その原理をさらに一歩前進させる。ＡＩの大量堆積（したがって、大液滴）は明らかに非効率的であり、小液滴に含まれて高度な漂流傾向を有する故の非常に少量な堆積もまた同様に浪費的である。さらに、少量堆積は、所望のレベルの効力に十分な量の物質を基質に送達しない。これらの事実は、堆積に最適なサイズがあるということ（すなわち堆積サイズに対する単位ＡＩ当たりの死亡率のプロットは、中間堆積サイズにおいて最大値を有するほぼ二次曲線を示すこと（図１を参照のこと））を示唆しており、シミュレーションおよび実験により確認される。
【００２８】
実際には、液滴および堆積は、正確に特定のサイズとなるようには作製され得ない；すなわち、典型的に、液滴および堆積は、ほぼ対数正規的に分布する（Ａｉｔｃｈｉｓｏｎ  ＆  Ｂｒｏｗｎ  １９５７）。微粒子アプローチは、サイズ度数分布を狭め、変動係数を低下させることにより、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅの原理を拡張する。粒子サイズ度数分布を狭めることの一局面は、小粒子の数の減少である。１つの結果として最も漂流傾向が大きな滴の充填に変化があることは、直感的に明らかである。
【００２９】
微粒子形成は、漂流および浪費に寄与する非効率な超微粒子および非常に大きな粒子の度数を低下させることにより散布率を低下させるため、噴霧器の液剤タンク中の粒子密度も低減する。これにより、微粒子が漂流傾向を有する小液滴によりサンプリングされる可能性が確実に低下する。さらに、散布率の低減は、標的を外れた漂流の減少がさらに漂流を減少させることを含意している。粒子サイズ度数分布を実質的に狭めることの一局面は、多数の小粒子の除去による存在する粒子数の減少である。１つの結果として、最も漂流傾向が大きな滴の充填の変化があることは明らかである。霧化系により生成される滴がサンプリング系であると考えられる場合、噴霧体積中に存在する粒子数および種々の滴の体積を用いて、所与の滴がＡＩを全く含まない蓋然性が容易に計算され得る。粒子がより少ない場合は、いかなる所与の滴についても１つ以上のＡＩの粒子を捕捉する可能性が小さくなることは明らかである。
【００３０】
上記は、ＡＩの粒子の度数分布は同じ状態のままで、モードのみが変化することを想定している。実際はそうはならない。直径と体積との間の三次関数の関係は、その関係が非線形であることを意味する。例えば、ＡＩの粒子が単分散（全てが同じサイズ）である場合、粒径の２分の１の増大は、８倍の粒子数の減少をもたらし、各粒子が８倍のＡＩを含むことになる。非単分散（現実の状況）の分布を採ること、すなわち、粒子サイズ分布の直径Ｘμｍから２Ｘμｍへのモード変更は、新たな分布中のより大きな粒子が非常に大きくなるだけでなく、非常に希少になるため、結果的に粒子がさらに少なくなる。サンプリング系として噴霧雲中の滴を採ると、ここでも、単分散噴霧については、異なる滴の充填における差異は全く見られない。しかしながら、現実の噴霧雲中の滴サイズの分布は、右に歪められ（対数正規分布が良いモデルである）、したがって、多かれ少なかれ滴がＡＩを含む蓋然性は、噴霧機の液剤タンク中のＡＩ粒子のサイズ度数分布に依存する。明らかに、得られるべき利点がある。すなわち、サンプルに対する噴霧が利用可能なＡＩ粒子が少なくなると、単に、ＡＩが存在しない体積をサンプリングする蓋然性の関数として、より多くの最小滴が、大きく占有率を減少させたＡＩを含むか、またはＡＩを全く含まない。
【００３１】
タンク中のＡＩの体積（α）およびキャリヤー流体の体積（φ）が与えられると、混合物の単位体積当たりのＡＩの体積は、α／（α＋φ）＝ρである。タンク中のＡＩが凝集しないように十分に混合されていると想定すると、サイズδの液滴がｎ個の粒子を含む蓋然性は、以下のポアソン級数の条件により与えられる：
Ｐ（ｎ）＝μｎ・ｅｘｐ（−μ）／ｎ！
ここで、単分散粒子について、μ＝δρである。非単分散粒子については、各サイズクラス（δｉ、ｉ＝１．．．ｋ）を別個に計算しなければならない。各粒子サイズについては、その蓋然性を、種々の滴サイズの１、２、．．．ｎ個の粒子を含む尤度について計算する。各粒子サイズについてこの手順を繰り返し、その滴サイズより小さな全てのサイズクラスの粒子を含む各サイズクラスの液滴の数の分布を与えるマトリックスが構築される。全ての粒子サイズにわたる粒子数を統合すると、その滴サイズに対する充填が与えられる。この手順を各滴サイズについて繰り返し、得られたマトリックスの集合を合わせて各滴サイズクラス中の全てのＡＩ粒子サイズクラスに存在するＡＩの量を得る。これらの計算は、任意の利用可能なコンピュータプログラムまたはプログラミング言語を使用して行われ得る。
【００３２】
このコンピュータプログラムを使用して、漂流可能な液滴の農薬充填が、生物活性化学物質であるベンジオカルブ（Ｆｉｃａｍ（登録商標）ＷＰ８０、Ｂａｙｅｒ  ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ）とサイクロン分離器系を使用してＦｉｃａｍ  ＷＰ８０から得られる３種の拡張粉末（ＥＰ）（大、中、小とする）との市販の調合物について計算された。漂流結果および粒子サイズ分類統計が、表１に与えられる。Ｄ１０、Ｄ５０およびＤ９０は、粒子サイジングに対する標準測定値であり、サンプル中の粒子の１０、５０（中央値）および９０パーセンタイル値の粒子直径に相当する。相対距離は、分布幅の推定値であり、（Ｄ９０−Ｄ１０）／Ｄ５０により与えられる。
【００３３】
ＥＰ調合物の異なるサイズ分画を、親ＷＰ調合物と比較した。漂流可能サイズの液滴中に含まれるＡＩの体積は、表面密度の数値積分により容易に決定される。次いで、合計漂流可能ＡＩは、表２に示されるように、散布１ｇ当たりのｍｇで表され得る。以下の実施例に記載されるようなさらなる実験を導くための予備調査として、元の製品の調合物、すなわちＯＥＭ調合物製品、および３種のＦｉｃａｍの分画を、Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ  Ｄｒｏｐｌｅｔ  Ｓｉｍｕｌａｔｏｒモデル（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９３、Ｔｈｅ  Ｏｈｉｏ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ，Ｗｏｏｓｔｅｒ，Ｏｈｉｏより入手可能）を用いたコンピュータプログラムのシミュレーションに使用して、処理された表面上にシミュレーションされた蚊のうちの９５％を殺すのに要する殺虫剤の最小量（ＬＤ９５）および９５％を殺すのに要する時間（ＫＴ９５）を決定した。これらのシミュレーションのために、シミュレーションされる昆虫を、摂食が経たれ、毒素捕捉セットと接触させながら、表面上を歩かせた。
【００３４】
微粒子技術アプローチにより用いられる別の新規の原理は、所与の滴がＡＩを全く含まないか、または規定されたサイズのＡＩ粒子を含む蓋然性を計算することが可能なサンプリング系として霧化系を使用するという考えである。所与の粒子サイズについて、存在する粒子が少ないほど、それらの粒子が任意の規定のサイズの液滴により補足される可能性が小さくなることは明らかである。本発明者らは、小粒子数を減少させることにより、漂流傾向を有する小液滴によりそれらの粒子がサンプリングされる可能性を低減させる。したがって、農薬調合物に対する微粒子アプローチは、害虫防除に要するＡＩの量を減少させるだけでなく、標的を外れた漂流をも減少させる。この漂流減少特性が、ノズルの選択から本質的に独立していることに留意すべきである。すなわち、この特性は、完全に調合物の作用である。したがって、微粒子技術の使用は、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅによる散布と十分に両立し得る。実際には、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅは、送達を改善することによりその効率を上昇させ、微粒子は、捕捉を促進して生物学的効率を改善することによりその効率を上昇させるため、発明者らは、これら２つの技術を合わせた場合の相乗的な効果を期待する。
【実施例】
【００３５】
（実施例）
（１．ベンジオカルブ）
ベンジオカルブを、親Ｆｉｃａｍ  ＷＰ８０（Ｂａｙｅｒ  ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ）調合物の３つに分けた分画（小分画ＥＰ、中分画ＥＰおよび大分画ＥＰ）としてテストした。このテストには、表面としてセラミックタイル、テスト生物として媒介蚊Ｃｕｌｅｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓを使用した。推奨される「圃場」量、２分の１、４分の１および８分の１の４種の用量をテストした。元のＷＰ８０および生成された３つの分画の分布を表１に示す。
【００３６】
ベンジオカルブが、従来的な市販の調合物（Ｆｉｃａｍ  ＷＰ８０）または粒子サイズ度数分布が狭められた調合物（ＥＰ）のいずれかの残留堆積物として蚊に与えられる場合、狭められた度数分布は、元のＷＰ８０調合物よりも大きな生物学的効力を有する。さらにこれは、モードが低下したか否かとは無関係である。図２ａに示されるように、中分画ＥＰのモードは、ＷＰ８０の元の調合物すなわち親調合物のモードと同じであったが、図２ｂに示されるように、大分画ＥＰのモードは低下した。両分画において、殺虫剤の活性を増大させたのは分布の幅を縮小することの作用である。図３に最もよく示されるように、用量レベルが１００ｍｇ／ｍ２から７５ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、そして２５ｍｇ／ｍ２へと低下するにつれ、狭められた粒子サイズの調合物は、蚊の９０％をノックダウンする時間（ＫＴ９０）が元のＷＰ８０調合物よりも顕著に速くなった。粒子サイズ分布を狭めることは、元のＦｉｃａｍ  ＷＰ８０調合物を使用して必要とされる用量の４分の１のＥＰを用いて同じ生物学的結果で、元の調合物と比較してノックダウンの速度を加速した。
【００３７】
この結果は、シミュレーションされた３ヶ月齢のタイルにおけるノックダウンおよび死亡率データにより証明されるように、短期的な効果ではない。人工的に加齢したタイル（バイオアッセイに先立ち散布後、５４℃で２週間保たれたタイル）を用い、Ｆｉｃａｍ  ＷＰ８０についての死亡率は観察されなかったが、ＥＰについての様々なレベルの死亡率が得られた（表３）。したがって、ＥＰ調合物の効果は親ＷＰよりも長い持続期間を有する。死亡率の改善は、ベクターコントロール製品としてベンジオカルブに商業的競争力を与え得るため、ベクターコントロールの観点から大いに興味深い。
【００３８】
（２．フィプロニル（Ｆｉｐｒｏｎｉｌ））
Ｖｏｒｔａｋサイクロン分離器系を使用して、フィプロニルの３つの分画を、Ｒｅｇｅｎｔ  ８０ＷＰ（ＢＡＳＦ）から分離した。次いで、最小分画を再処理し、微細分画および小分画へと分離した。
【００３９】
標準的な長期持続効力についての圃場試験を、サザンコーンルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ  ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ）に対し、２種の最小分画および元の親ＷＰ８０の６等級を使用して実施した。土壌をフィプロニル親ＷＧ８０およびＥＰで処理し、Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａの卵を処理当日（０ＤＡＴ）および処理後２１日目（２１ＤＡＴ）に処理土壌に導入した。Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａの生存を１４日後に評価した。
【００４０】
結果は、標準的な用量−死亡率パラメータ（ＤＬ５０、ＬＤ９５およびＬＤ９９）として表４に示される。重要なデータは、図４にも示されているＥＰ小調合物と親ＷＧ８０の調合物との間の比較である。対数の用量尺度を用いており、これにより処理物間の比例した差異が与えられることに留意されたい。処理後２１日目（ＤＡＴ）において、効力が有意に３倍〜５倍に増大した。図４で見られるように、散布直後（０ＤＡＴ）の死亡率の調査は、ＥＰ小とＷＧ８０との間でほとんど差異を示さなかったが、２１ＤＡＴまでに、小ＥＰについての用量−死亡率曲線は変化しないが、表４に示されるように、親ＷＧ８０についての曲線は勾配が緩やかになって右に移動し、ＷＧ８０についてのＬＤを上昇させる。したがって、ＷＰについては、長期にわたって同じ効力を得るためには、より高い用量が必要とされる。これらの結果により、ＥＰの性能の改善が、最適化した粒子サイズを用いた調合物による効果の加速によるものであることが確認される。
【００４１】
（３．デルタメトリン（Ｄｅｌｔａｍｅｔｈｒｉｎ））
デルタメトリンの４つの分画が分離され、サイズにより分類した（表１）。予備実験において、ヨトウムシの幼虫（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｅｘｉｇｕａ）を用いた試験で、全ての分画を親Ｄｅｃｉｓ  ＷＰ８０（Ｂａｙｅｒ  ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ）と比較した。手順は、散布がコットンリーフディスク上へのトラック噴霧機によること以外、ベンジオカルブと同様である。結果は、ベンジオカルブと同じであった：親ＷＰ８０よりも低率でより速いノックダウンが得られた。小ＥＰとＷＰ８０とを比較した結果を図５に示す。
【００４２】
この結果の普遍性をテストするために、３種の蛾（Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ａｒｍｉｇｅｒａおよびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）の幼虫、および甲虫（Ｐｈａｅｄｏｎ  ｃｏｃｈｅａｒｉａｅ）に対するデルタメトリンの試験も実施した。これらは温室試験であり、標的昆虫で汚染された植物に、人力噴霧機を用いて７等級で親および小ＥＰ分画を噴霧した。効力を３ＤＡＴにて評価した。
【００４３】
Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａについての用量−死亡率曲線を図６に示す。全ての標的に対する用量死亡率パラメータ（ＤＬ５０、ＬＤ９５およびＬＤ９９）を表４に示す。これらは、ＥＰと親ＷＰ８０との間の明確な区別を示している。用量はこの場合も対数であり、曲線間の距離は、少なくとも４倍のＥＰの活性の増大を示していることになる。
【００４４】
（改良生物活性化学物質を製造する方法）
農薬および薬剤生産の分野において微粒子技術を使用することの第一工程は、求められる生物学的効果のための生物活性化学物質の最適粒子サイズを決定することである。これは、異なるサイズの粒子を用いた化学物質の調合物を、標的昆虫、雑草、病原体または病因物質（ｄｉｓｅａｓｅ  ａｇｅｎｔ）に対して試すことにより達成される。これらの異なるサイズの粒子分画は、選択されたモードサイズ付近に狭められた粒子サイズの分布を有する。これらの分画は、従来方法により（例えば、サイクロン分離器系を用いることにより）分離され、本明細書中に記載されるような標準実験室試験、温室試験および圃場試験においてテストされる。１つまたは少数の最適粒子サイズを同定し、この情報は生物活性化学物質の生産および調合プロセスで用いられる。
【００４５】
最適化した生物活性化学物質の製造および合成は、生物活性化学物質の非最適化固体調合物に現在使用されている微粒子プロセスとほぼ同じプロセスを使用する。
【００４６】
実際には、微粒子技術は、化学物質製造または合成の次に一段階を挿入することにより適用され、製品梱包が後に続く。この段階により、製造された生物活性化学物質から、前述の方法で同定された最適化粒子サイズが分離される。この技術を実施するための機械は前述の方法で使用されるものと同様であるが、適切な量の改良生物活性化学物質を製造するのに適した規模の機械である。適切と思われる量は、市場の規模およびその市場に供給するのに必要とされる物質の量を考慮することにより決定される。
【００４７】
最適化した生物活性化学物質の適用は、生物活性化学物質の非最適化固体調合物に現在使用されているような微粒子プロセスと同じプロセスを使用する。農業においては、この適用には、ブーム噴霧機（Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｏｚｚｌｅを備えたブーム噴霧機、静電噴霧機、エアアシスト噴霧機および回転盤噴霧機を含む）；また、飛行機搭載型噴霧機、全地形型車両（例えば、ゴルフコースで使用されるもの）を利用した小型噴霧機、温室一体化噴霧系、および動力型および無動力型の手持ち式噴霧機が含まれるが、これらに限定されない。ベクターコントロールにおいても、現在、非最適化生物活性化学物質に対して使用されているのと同様に、飛行機搭載型噴霧機、ブーム噴霧機および動力型および無動力型の人力噴霧機もまた使用される。薬物、抗生物質および他の製薬の分野においても、適用は、現在の方法と極めて類似する。
【００４８】
本発明を使用して、微粒子技術により調合された活性成分（ＥＰ）は、それらの元の調合物すなわちＯＥＭ製品調合物と比較して効力を増大させた。これらの効果は、用量−死亡率曲線の急勾配化として図４に見られ得、そして／または、図６のように、元の製品の調合物と比較して用量−死亡率曲線の左への移動として見られ得る。粒子サイズ分布を最適化することによりもたらされる用量−死亡率の関係におけるこれらの変化は、所与の結果が得られ得る速度での加速として、そして、所与の生物学的効果に要する活性成分量の実質的な減少として、２方面から作用する。示された結果は殺虫剤についてのものであるが、そのような生物活性化学物質の調合物は、他の生物活性物質（他の農薬および薬剤を含む）のクラス全体のサイズ分布を最適化した結果の典型である。さらに、本発明の種々の実施形態が本明細書中に詳細に記載されたが、それらの実施形態に対する種々の修正物および代替物が、この開示内容の教示全体に照らして開発され得ることが、当業者に理解される。したがって、特定の物質および設定は、例示するためだけのものであり、あらゆる全ての等価物の全範囲に与えられるべき本発明の範囲を限定することは意図されていない。
（表１：ベンジオカルブ８０％ＷＰ、フィプロニル８０％ＷＧおよびデルタメトリンＷＰならびに分離したＥＰ分画についての度数分布統計）
【００４９】
【表１】
2008531717.tif 000003
（表２：ベンジオカルブ  Ｆｉｃａｍ  ＷＰ８０の親および３つの最適化ＥＰ分画のサイズ分布を用いた計算の結果は、粒子サイズ分布を最適化することにより、噴霧雲中の最も漂流傾向のある液滴の液滴充填を変更することにより、農薬の標的を外れた漂流に含まれる可能性が低減され得ることを示している）
【００５０】
【表２】
2008531717.tif 000004
（表３：ベンジオカルブ（Ｆｉｃａｍ  ＷＰ８０）で処理し、処理後５４℃にて２週間経過したセラミックタイルに曝露させた蚊（Ｃｕｌｅｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ）の死亡率）
【００５１】
【表３】
2008531717.tif 000005
（表４：フィプロニル（Ｒｅｇｅｎｔ  ＷＧ８０）についての用量−死亡率統計は、土壌バイオアッセイにおいて、９０〜９９％のサザンコーンルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ  ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ）を死なせるのに要するＥＰ小分画の用量ではほぼ５分の１に減少したことを示す。葉へのデルタメトリン（Ｄｅｃｉｓ  ＷＰ８０）の適用についての３種の蛾（Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａおよびＨｅｌｉｏｔｈｉｓ  ａｒｍｉｇｅｒａ）および甲虫（Ｐｈａｅｄｏｎ  ｃｏｃｈｌｅａｒｉａｅ）に対する用量−死亡率統計は、親ＷＰ８０と比較して拡張粉末（ＥＰ小）の活性が大きく増大したことを示している）
【００５２】
【表４】
2008531717.tif 000006
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、粒子サイズおよび濃度が、互いにほぼ独立していることを図示しており、効力に対するそれらの効果は、上昇する峰（ｒｉｄｇｅ）として視覚化され得、この峰の正確な形状は、生物活性化学物質に依存する。通常、この関係はＳ字状曲線であるが、ここで示されるように、明確にするために直線にしてある。峰から外れた堆積は、一般的に、非効率でかつ浪費的であり、そして潜在的な負担である。峰の高い位置の堆積を伴う生物活性物質製品は、所望の生物学的結果のためにより少量の化学物質を必要とする。
【図２】図２ａは、１１．４μｍのモードを有する元のＯＥＭ調合物と比較して１３．７μｍのモードを有するベンジオカルブＷＰ調合物（８０％ＡＩ）の狭められた分布に対するサイズ別の粒子の数分布を示すグラフである。調合物の相対距離は、元の調合物の２．９０と比較して１．８４であった。図２ｂは、元のＯＥＭ調合物の１１．４μｍと比較して１９．７μｍにおけるモードを有するベンジオカルブＷＰ調合物（８０％ＡＩ）の狭められた分布に対するサイズ別の粒子の数分布を示すグラフである。調合物の相対距離は、元の調合物の２．９０と比較して１．８１であった。
【図３】図３は、元のＯＥＭベンジオカルブ（Ｆｉｃａｍ  ＷＰ８０）調合物および小、中および大の拡張粒子（「ＥＰ」）サイズ区分をそれぞれ使用した、粒子サイズを変更することの効果およびセラミックタイル上の９０％の蚊（Ｃｕｌｅｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ）を殺す時間（ＫＴ９０）に関する度数分布の幅を示すグラフである。
【図４】図４は、ｆｉｐｒｏｎｉｌ（Ｒｅｇｅｎｔ  ＷＧ８０）で処理したサザンコーンルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ  ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ）についての用量−死亡率曲線を示すグラフであり、土壌バイオアッセイ中の導出されたＥＰは左方への大きなシフトおよび応答曲線の急勾配を示し、元のＯＥＭ調合物に比例したＥＰの活性の増大を示している。対数用量尺度であることに注意されたい。
【図５】図５は、１０日間にわたって小型のＥＰ調合物および元のＯＥＭ  ｄｅｌｔａｍｅｔｈｒｉｎ（Ｄｅｃｉｓ  ＷＰ８０）に曝露したヨトウムシの幼虫（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｅｘｉｇｕａ）の死亡百分率を示すグラフである。
【図６】図６は、ｄｅｌｔａｍｅｔｈｒｉｎ（Ｄｅｃｉｓ  ＷＰ８０）で処理したｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）についての用量−死亡率曲線を示すグラフであり、導出されたＥＰを適用したｆｏｌｉａｒｌｙは、応答曲線の左方への大きなシフトを示し、元のＯＥＭ調合物に比例したＥＰの活性の増大を示している。対数用量尺度であることに注意されたい。
【図１】
2008531717.tif 000007
【図２】
2008531717.tif 000008
【図３】
2008531717.tif 000009
【図４】
2008531717.tif 000010
【図５】
2008531717.tif 000011
【図６】
2008531717.tif 000012
【国際調査報告】
2008531717.tif 000013