(57)【要約】本発明は、ＣＥＳＴイメージング用の造影剤化合物に関し、前記造影剤は、水移動シフトプロトンのプールを含有するプロトンプール封入システムを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＥＳＴイメージング用に混合された造影剤であって、前記造影剤が水移動シフトプロトンのプールを含有するプロトンプール封入システムを含む造影剤。
【請求項２】
前記造影剤が、１）シフトされる水移動プロトンのプールと、２）シフト剤とを含有するプロトンプール封入システムを含む請求項１に記載の造影剤。
【請求項３】
前記シフト剤がランタニドである請求項２に記載の造影剤。
【請求項４】
前記シフト剤がランタニドの錯体である請求項２に記載の造影剤。
【請求項５】
前記ランタニドが、鉄（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、エルビウム（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、ユーロピウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、プラセオジニウム（ＩＩＩ）、ネオジニウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、ツリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）から選択される請求項３または４に記載の造影剤。
【請求項６】
前記ランタニドが、ユーロピウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ユーロピウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）およびツリウム（ＩＩＩ）、およびエルビウム（ＩＩＩ）およびホルミウム（ＩＩＩ）から選択される請求項３または４に記載の造影剤。
【請求項７】
前記常磁性錯体が、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＢＯＰＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰＤＯ３Ａ、ＤＯＴＡＭ、ＤＯＴＡＭｇｌｙ、ＭＣＴＡ、ＤＯ３ＡＢ、およびそれらのポリアミド誘導体から選択されるキレートである、請求項４〜６のいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項８】
前記キレートが、Ｙｂ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ  ａｎ  Ｈｏ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−ＧｌｙまたはＴｍ（ＩＩＩ）−ＤＯＴＡＭ−ＧｌｙまたはＥｒ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−ＧｌｙおよびＥｕ−ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙから選択される請求項７に記載の造影剤。
【請求項９】
前記キレートが、Ｙｂ（ＩＩＩ）ＤＯＴＭＡ  ａｎ  Ｈｏ（ＩＩＩ）ＤＯＴＭＡまたはＴｍ（ＩＩＩ）−ＤＯＴＭＡまたはＥｒ（ＩＩＩ）ＤＯＴＭＡおよびＥｕ−ＤＯＴＭＡから選択される請求項７に記載の造影剤。
【請求項１０】
前記封入システムがリポソーム、ダブルエマルジョン、スフェルライトである請求項１〜８のいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項１１】
脂質を形成する前記封入システムが、ホスファチジルコリン（レシチン）（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールＤＰＰＧ、オレオイルパルミトイルホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸（ＰＡ）、脂肪酸、ガングリオシド、糖脂質、グリコ脂質、モノ−、ジ、またはトリグリセリド、セラミド、またはセレブロシド、およびコレステロールと関連したそれらの誘導体の、リン脂質もしくは水素化リン脂質またはそれらの誘導体を含む請求項９に記載の造影剤。
【請求項１２】
前記封入システムが直径２０−５０００ｎｍ、好ましくは５０−３００ｎｍの範囲である請求項９に記載の造影剤。
【請求項１３】
前記シフト剤が部分的にのみ前記封入システムに封入されている請求項１〜１２のいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項１４】
前記シフト剤が前記封入システムの親油性層に挿入されている請求項１〜１２のいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項１５】
前記封入システム構造が特定の標的化に適合される請求項１〜１４のいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項１６】
前記封入システムが、少なくとも標的化バイオベクターおよび最終的にステルス剤（furtive agent）、特に血管新生に関連した受容体を標的にするバイオベクター、腫瘍領域を標的にすることができるバイオベクター、メタロプロテアーゼを標的にすることができるバイオベクターを含む請求項１５に記載の造影剤。
【請求項１７】
異なるシフト剤および最終的に異なる標的化バイオベクターを含有する請求項１〜１５のいずれか一項に記載の封入システムの混合物を含む造影剤。
【請求項１８】
前記封入システム構造が血液プールイメージングに適合されている請求項１〜１４のいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項１９】
生理的に許容される担体および請求項１〜１８のいずれか一項に記載の造影剤を含む医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載のＣＥＳＴ造影剤が使用されるＣＥＳＴイメージングの方法。
【請求項２１】
ヒトまたは動物の体器官、体液、または体組織における化学物理パラメータのＭＲＩによる測定のための方法であって、飽和移動能が目的とする化学物理パラメータと相関するＣＥＳＴ造影剤が使用され、かつこの化学物理パラメータのＣＥＳＴ  ＭＲＩイメージが登録され、前記造影剤が請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬剤である方法。
【請求項２２】
水溶媒プロトンとの化学交換にある移動プロトンのプールを含み、かつ、適切な高周波ｒｆ照射野が前記交換可能なプロトンプールの共振周波数で適用される場合に、前記移動プールのプロトンの少なくとも一部と水プロトンとの間の飽和移動効果を生成することが可能であり、前記飽和移動が目的とする化学物理パラメータに関する、適切な量での少なくとも１つの造影製品の投与を含む化学物理パラメータの診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、造影剤封入システム、より詳しくは、かつ非限定的に、ＣＥＳＴイメージングのためのランタニドキレートを担持しているリポソームに関する。これらのシステムは、診断目的の物理化学パラメータのインビボまたはインビトロ測定に有用である。
【背景技術】
【０００２】
磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）法の潜在能力は、この診断モダリティが造影剤の投与と併用されるとさらに強化されうることが公知である。多くの造影剤、すなわち組織プロトンの緩和率における顕著な変化を促進することができる化学薬品、特に、主にＧｄ（ＩＩＩ）またはＭｎ（ＩＩ）イオンを含有する常磁性錯体によって表されるＴ１剤が記載されている。これらの錯体は、その配位圏内における水分子の交換によってバルク水の緩和率に影響を及ぼす（キャラバン（Ｃａｒａｖａｎ）Ｐら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ  １９９９年、９９、２２９３−２３５２頁（非特許文献１）、医用磁気共鳴イメージングにおける造影剤の化学（ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ）、Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ、英国：ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、２００１年、４５−１２０頁（非特許文献２））。プロトン緩和能は、常磁性物質の、この常磁性物質が溶解されている溶剤中の水プロトンの核緩和を加速する能力の尺度である。
【０００３】
水シグナルを有効に削減するための異なる方法が、それを飽和する交換可能なプロトンの共鳴周波数で適切な高周波（ｒｆ）照射野が適用されると起こることが証明されている。これは結果として、飽和移動効果によりバルク水シグナル強度の正味の減少をもたらす。バラバン（Ｂａｌａｂａｎ）らはこの造影強化法を化学交換依存飽和移動（ＣＥＤＳＴ、より一般的には、ＣＥＳＴ）と命名した（バラバン（Ｂａｌａｂａｎ）ＲＳ．：ヤング（Ｙｏｕｎｇ）ＩＲ編、生物医学磁気共鳴イメージングおよびスペクトロスコピーにおける方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、Ｃｈｉｃｈｅｎｓｔｅｒ、英国：ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、２０００年、第１巻、６６１−６６６７頁（非特許文献３））。ＣＥＳＴイメージング用の優れた造影剤は、その水との交換率がそれらの広がりがｒｆ照射を無力にする前に可能な限り高い移動プロトンを有する必要がある。大きな化学シフト差は迅速な交換の活用を可能にし、結果としてＣＥＳＴ効果の強化がもたらされる。
【０００４】
より正確には、ＣＥＳＴ造影剤は、その移動プロトンの共鳴がΔω／ｋ１＞＞１であり、
ｋ１＝水交換率、Δω＝ＣＥＳＴ造影剤の移動プロトンとバルク水の移動プロトンとの間の周波数シフト。
【０００５】
２ｐｐｍを超えるΔωがバルク水を照射しないために好ましい。高いΔωが大きな照射ゾーンの使用を可能にし、内因性水とバルク水との間の移動飽和効果を最小限に抑える。
【０００６】
ＣＥＳＴ剤の２つのカテゴリーが従来技術において記載されている。
【０００７】
ａ）反磁性剤
国際公開公報第００／６６１８０号（特許文献１）では、糖、アミノ酸、窒素含有複素環、プリン、グアニジン、ヌクレオシド、イミダゾール、およびそれらの誘導体、バンビツール酸、およびそれの類似体などの反磁性分子である化合物が記載されており、ここで複素環化合物は、５，６−ジヒドロウラシル、５−ヒドロキシトリプトファンなど交換可能なＯＨまたはＮＨ基を有する複素環化合物が、ｐＨが請求された方法に従って決定される場合に特に好ましい。
【０００８】
これらの薬剤は、交換されうる造影剤のプロトンの数を増大させる。
【０００９】
反磁性システムは、有利に短い緩和率が与えられる。しかし、残念ながら、それの交換可能なプロトンの化学シフトはバルク水シグナルからほんのわずかシフトされており（１−５ｐｐｍ）、したがって緩徐な交換率が併合が起こる前に活用されうる。
【００１０】
ｂ）常磁性剤
シェリー（Ｓｈｅｒｒｙ）らは、高度にシフト交換可能なプロトンの特に有用な供給源が、常磁性ＥＵ（ＩＩＩ）キレートに結合される水プロトンを緩徐に交換することによって提供されうることを示した。この錯体において、バルク水シグナルから５０ｐｐｍダウンフィールで共鳴するかかるプロトンの照射が、４．７Ｔ．で得られるイメージにおける顕著なＣＥＳＴ効果を決定した（シェリー（Ｓｈｅｒｒｙ）ら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ  ２００１年、１２３：１５１７−１５１８頁（非特許文献４））。しかし、標的組織と周囲組織との間の取込みが同様である場合にはコントラスが検出可能ではない。さらに、これらの造影剤は、一般に、標的組織または器官のイメージの生成を可能にするが、それらはすべて検査組織の代謝状態を測定し、それを決定する物理化学パラメータについて言及することができない。
【００１１】
ＣＥＳＴイメージング用の常磁性剤の改善が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−４酢酸（ＤＯＴＡ）の大環状テトラアミド誘導体もしくは１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−３酢酸（ＤＯ３Ａ）のトリアミド誘導体、特に１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−酢酸テトラグリシンアミド（ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ）のキレートなどその構造が修飾されているキレートを提示する欧州特許第１３３１０１２号明細書（特許文献２）に記載されている。この文献は、特に２つの磁気的に非同等の不安定なプロトンプールが与えられる単一のＣＥＳＴ分子を含む常磁性造影剤を用いてＣＥＳＴ効果を増大させることが記載されている。
【００１２】
欧州特許第１３３１０１２号明細書（特許文献２）のかかる化合物においては、試験された移動プロトンは、キレートの内圏におけるランタニドに連結された水プロトンおよび／またはランタニドの第１の配位圏において連結されているアミドのプロトンである。値Δωはこれらの薬剤により良好になる。
【００１３】
具体的には、ＤＯＴＡテトラアミドは低い水交換（水が内圏に連結）を有し、アミドプロトン（水が内圏に連結）を使用するためにデザインされている。内圏は錯体における金属イオンと接触し、かつバルク水分子と迅速交換する水分子に対応していることに変わりはない。
【００１４】
しかし、かかる生成物は、イメージング技術（特に各々のスキャンに適用する照射）に関して依然として感度を欠き、または困難を示しうる。
【００１５】
本願出願人は現在、ＣＥＳＴイメージングのきわめて満足できる感度を得るための完全に異なる方法の存在を特定した。実際に本願出願人はきわめて多数の移動プロトン有するプールを示す生成物を研究した。このプールは、封入システム（ＥＳ）、特に、移動プロトンを封入するリポソームもしくはダブルエマルジョンまたはスフェルライトにより得られる。
【００１６】
封入システムに封入された水分子は、
−封入システムに封入または封入システムの親油性層に挿入されたランタニド錯体（通常、ランタニドとキレートの錯体）などシフト剤と接触しており、
−かつ照射する移動プロトンを示す。
【００１７】
より正確には、従来技術では１つのキレート分子に対して１つのＨ２０分子のバルクとランタニド錯体（キレートおよびＥＵなど常磁性金属の錯体）との間に水交換がある。
【００１８】
本発明により、１つの常磁性金属イオンのために、封入システムの内側とバルクとの間にきわめて多数のＨ２０分子（例えば百万）の水交換がある。シフト剤の構造および濃度により、封入システム内の水プロトンの共鳴は外側の水の共鳴からシフトされる。次いで、得られたＥＳ溶液のＮＭＲスペクトル１Ｈは封入システムの外側の溶液の水に対する１つのシグナルおよび封入システムの内側の水に対する１つの分離シグナルを示す。きわめて満足できるＣＥＳＴ効果が、Δωを決定する常磁性金属、およびｋ１を決定する封入システムの構造の良い選択によって得られる。これは、患者に投与される１つの常磁性金属イオン（および１つのキレート分子）が従来技術と比べはるかに高いシグナルを有することを可能にする。最良の結果は、以下に記載されるもののように金属およびキレートの異なる適切な組合せで得ることができる。実際に、多数の水分子（交換可能なプロトン）を有するポリマーまたは樹状分子のような従来のシステムは、飽和に達するために高エネルギー（高磁場Ｂ１）を必要とする。従来技術では、Δωの関数である高エネルギーが、ＮＭＲスペクトル（大領域）で「分散」挙動を示すプロトンの飽和を得るために必要とされ、これは特に大分子のアミンプロトンについて、特にその分子における位置およびその物理化学的相互作用により当てはまった。この高エネルギーは現在までＣＥＳＴイメージングの主な不利点であった。
【００１９】
反対に、本発明の封入システムにより、必要とされるエネルギーは以下に記載される通りはるかに低い。これはシフトの低い分散、および封入システムの水交換率によるものであろう。すなわち、プロトンは封入システムにおいて同様に挙動する。
【００２０】
【特許文献１】国際公開公報第００／６６１８０号
【特許文献２】欧州特許第１３３１０１２号明細書
【非特許文献１】キャラバン（Ｃａｒａｖａｎ）Ｐら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ  １９９９年、９９、２２９３−２３５２頁
【非特許文献２】医用磁気共鳴イメージングにおける造影剤の化学（ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ）、Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ、英国：ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、２００１年、４５−１２０頁
【非特許文献３】バラバン（Ｂａｌａｂａｎ）ＲＳ．：ヤング（Ｙｏｕｎｇ）ＩＲ編、生物医学磁気共鳴イメージングおよびスペクトロスコピーにおける方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、Ｃｈｉｃｈｅｎｓｔｅｒ、英国：ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）、２０００年、第１巻、６６１−６６６７頁
【非特許文献４】シェリー（Ｓｈｅｒｒｙ）ら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ  ２００１年、１２３：１５１７−１５１８頁
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
したがって、第１の態様によれば、本発明は、ＣＥＳＴイメージング用の造影剤化合物に関するが、前記造影剤は、水移動シフトプロトンのプールを含有するプロトンプール封入システム（ＥＳ）を含む。
【００２２】
実施形態によれば、前記造影剤は、１）シフトされる水移動プロトンのプールと、２）シフト剤とを含有するプロトンプール封入システムを含む。
【００２３】
好ましい実施形態によれば、前記封入システムＥＳは、封入された水を含む封入システムであり、特にリポソーム、嚢状体、ミクロゲル、脂質多層粒子である。以下に記載されるダブルエマルジョンおよび修飾またはスフェルライトも有望なＥＳである。
【００２４】
封入システム内に含まれるＣＥＳＴ剤（したがって金属）を使用する必要はない。該剤は封入システム内の一部のみを有し、他の一部は封入されていない部分である（脂質層の内側もしくは外側にも位置している少なくとも一部）が、それは後者の部分がバルク水の低いシフトのみを示すためである。例えば、ＣＥＳＴ剤（キレート）を封入システムに挿入されたリン脂質と共有結合することが可能である。このために、キレートは、最終的にリンカーとともに、ＥＳ膜のリン脂質の親油性鎖と結合される。
【００２５】
プロトンプールのプロトンはシフト剤によるシフトである。シフト剤は、好ましくは、ランタニドもしくはランタニドの常磁性錯体である。
【００２６】
前記ランタニドは、鉄（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、エルビウム（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、ユーロピウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、プラセオジニウム（ＩＩＩ）、ネオジニウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、ツリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）から選択される。
【００２７】
具体化によれば、封入システムは高い水交換のものであり、特にｋ１＝水交換率＝１０〜１０Ｅ６ｓ−１である。
【００２８】
具体化によれば、ＥＳ（および特にリポソーム）形成脂質は、ホスファチジルコリン（レシチン）（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸（ＰＡ）、脂肪酸、ガングリオシド、糖脂質、グリコ脂質、モノ−、ジ、またはトリグリセリド、セラミド、またはセレブロシドの、リン脂質もしくは水素化リン脂質またはそれらの誘導体を含む。
【００２９】
有利には、飽和および不飽和リン脂質とコレステロールの混合物が、特に４０／１０／５０〜６０／５／３５、例えば５５／５／４０の割合で使用される。
【００３０】
有利には、ＥＳは、ほぼ１０程度の中間ＨＬＢ値を有するリン脂質で形成されたリポソームである。
【００３１】
具体化によれば、ＥＳ（および特にリポソーム）は直径が２０−５０００ｎｍの範囲である。
【００３２】
具体化によれば、ＥＳ（および特にリポソーム）構造は血液プールイメージングに適合されている。
【００３３】
具体化によれば、ＥＳ（および特にリポソーム）構造は特異的標的化に適合されている。特異的標的化は、造影剤によって具体的に認識される組織または病理領域など生物学的標的を標的にすることを指す。封入システムは少なくとも１つの標的化バイオベクターを含み、したがって分子イメージングにきわめて有用である。
【００３４】
本発明は、生理的に許容される担体および上記の造影剤を含む医薬組成物にも関する。
【００３５】
別の態様によれば、本発明は以下に関する。すなわち、
−ＣＥＳＴ造影剤が上記の通りであるＣＥＳＴイメージングの方法。
−ヒトまたは動物の体器官、体液、または体組織における化学物理パラメータのＭＲＩによる測定のための方法であって、その飽和移動能が目的とする化学物理パラメータと相関するＣＥＳＴ造影剤が使用され、かつこの化学物理パラメータのＣＥＳＴ  ＭＲＩイメージが登録され、前記造影剤が上記の通りの薬剤である方法
−水溶媒プロトンとの化学交換にある移動プロトンのプールを含み、かつ、適切な高周波ｒｆ照射野が前記交換可能なプロトンプールの共振周波数で適用される場合に、前記移動プールのプロトンの少なくとも一部と水プロトンとの間の飽和移動効果を生成することが可能であり、前記飽和移動が目的とする化学物理パラメータに関する、適切な量での少なくとも１つの造影製品の投与を含む化学物理パラメータの診断方法。
【００３６】
リポソーム封入ランタニドキレートは周知であるが、従来技術はＣＥＳＴイメージングのためのリポソーム技術を記載も提案していない。さらに、リポソームはＣＥＳＴイメージングのために適切である必要がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
封入システムＥＳは、患者内でプロトンのプールを運ぶことができる封入および輸送のシステムを指す。したがって、リポソームだけではなくシステムを形成する他の輸送ベシクルも水分子交換率がＣＥＳＴイメージングに適切である状態で使用されうる。リポソームを強調する以下の説明は、他のＥＳの一般的な調製にも適用され、便宜上、ＥＳ／リポソームという語も使用される。
【００３８】
リポソームは、中心腔を取囲む脂質層を有する球状のベシクルである。本発明は、特に、含水核を取囲む単一脂質二重層または多層脂質二重層をそれぞれ有する単層および多重膜リポソームに関する。多重脂質二重層を含むリポソームはスフェルライトとも呼ばれる。
【００３９】
リポソームは脂質、特にリン脂質の分散時に水溶液中で自発的に形成し、本発明の薬剤のリポソーム構造は従来の方法によって生成されうる。かかる従来の方法は、国際公開公報第９２／２１０１７号（ウンガー（Ｕｎｇｅｒ））において、かつＡｎｎ  Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１４：２５０−２６０頁（１９７９年）におけるパパハジョポロウス（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｌｏｕｓ）によって言及され、逆蒸発、凍結融解、界面活性剤透析、均質化、超音波処理、マイクロ乳化、および乾燥脂質膜の水和時の自発形成が含まれる。多重膜リポソームが本発明に従って使用され、または既知の方法によって低い層状性のリポソーム、または単層リポソームに変換されうる。単層リポソームは直接調製されうる。
【００４０】
リポソーム調製は通常、サイズが不均質であり、本発明に従って使用されるリポソームは、周知の方法、例えば、押出し、凍結融解、機械的断片化、均質化、および超音波処理によって所望の直径にサイジングされうる。本発明に従って使用されるリポソームは、有利には直径２０−５０００ｎｍの単層、または多重膜である。
【００４１】
ＥＳ／リポソームは凍結乾燥されて有効期間を増大しうるとともに、凍結乾燥ＥＳ／リポソームは使用前に水性緩衝液で強く攪拌することによって再構成されうる。製剤は、凍結乾燥法のためのＥＳ／リポソーム材料を安定化するために役立つ薬剤を含みうる。
【００４２】
２００ｎｍ未満のリポソームはろ過による形成後に滅菌されうる。
【００４３】
分子を形成するリポソーム膜として、かつより一般的には分子を形成するＥＳ膜として使用される脂質は通常、天然または合成ホスファチジルコリン（レシチン）（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸（ＰＡ）、脂肪酸、ガングリオシド、糖脂質、グリコ脂質、モノ−、ジ、またはトリグリセリド、セラミド、またはセレブロシド、例えば、国際公開公報第９２／２１０１７号に記載されているようなリポソーム膜形成化合物などリン脂質または水素化リン脂質である。
【００４４】
膜形成脂質は、重合性脂質、例えば、Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  第１巻、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｅｓ編、１２３−１２９頁（１９８３年）におけるジョンストン（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ）、およびＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｃｅｖｃ編、Ｄｅｋｋｅｒ、２３３−２９１頁（１９９３年）およびその中の文献におけるシング（Ｓｉｎｇｈ）によって記載されている、メタクリル酸塩脂質、チオールおよびジスルフィド脂質、ジエン酸脂質、スチリル脂質、およびジアセチル脂質をも含みうる。リポソームの形成における重合性脂質の使用は、リポソーム安定性を増大させるための１つの経路を提供する。
【００４５】
ＥＳおよびリポソーム膜は、その中へ組込まれ、例えば、リポソームの生体内分布に影響を及ぼすステロイドおよび他の化合物をも有しうる。適切なステロイドとしては、例えば、コレステロール、コレステロール誘導体、コレスタン、コール酸、および胆汁酸が挙げられるが、特にコレステロールである。
【００４６】
生体内分布修飾因子は、ペンダント生体内分布修飾機能を有するリン脂質誘導体の使用によって、ＥＳあるいはリポソーム膜と結合する疎水性「アンカー」部分を有する生体内分布修飾剤の使用によって、またはリポソーム膜に存在するアンカー分子（キレート連結に関連して上述）と生体内分布修飾因子を結合することによって、組込まれうる。
【００４７】
特に好ましい生体内分布修飾因子は、ステルス剤（ｆｕｒｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）とも呼ばれ、化合物、特に、リポソームとのインビボでのタンパク質結合を削減し、したがって、血液中のリポソームの半減期を延長するのに役立つ両親媒性ポリマーを含む。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＧｍ１などのガングリオシドなどのポリアルキレンオキシポリマーがこの点で効果的である。
【００４８】
したがって、ＰＥＧ−ＰＥ誘導体のリポソーム膜形成材料の重量に対して１−１０％の取込みは、血液の半減期を大幅に拡大する。
【００４９】
ペルフルオロリン脂質から調製されるリポソーム（サンタエラ（Ｓａｎｔａｅｌｌａ）、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３３６：４８１−４８４頁（１９９３年）およびＡｎｇｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇ．３０：５６７−５６８（１９９１年）参照）も血液半減期を拡大しうる。
【００５０】
ダブルエマルジョンは、水滴が事前に分散されている油性小球の分散である水／油／水のエマルジョンを指す。有利には、ダブルエマルジョンに使用される２つの界面活性剤は、そのそれぞれのＨＬＢが小球の形成を可能にし、一方の界面活性は高いＨＬＢを有し、他方の界面活性剤は低いＨＬＢを有するようになっている。その割合は、水の流出が小球の内側と外側との間で制御されうるようになっている。ダブルエマルジョンは、例えば、「いかにして放出は起こるか？（ｈｏｗ  ｄｏｅｓ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｃｃｕｒ？）」、ペイズ（Ｐａｙｓ）Ｋ、ジルマンスカ・カーン（Ｇｉｅｒｍａｎｓｋａ−Ｋａｈｎ）Ｊ、ポウリグニー（Ｐｏｕｌｉｇｎｙ）Ｂ、ビベッテ（Ｂｉｂｅｔｔｅ）Ｊ、リール・カルデロン（Ｌｅａｌ−Ｃａｌｄｅｒｏｎ）Ｆ、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ、２００２年２月１９日、７９（１−３）：１９３−２０５頁、および「ダブルエマルジョン：薄膜準安定をプロービングするための手段（Ｄｏｕｂｌｅ  ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ：ａ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｐｒｏｂｉｎｇ  ｔｈｉｎ−ｆｉｌｍ  ｍｅｔａｓｔａｂｉｌｉｔｙ）」ペイズ（Ｐａｙｓ）Ｋ、ジルマンスカ・カーン（Ｇｉｅｒｍａｎｓｋａ−Ｋａｈｎ）Ｊ、ポウリグニー（Ｐｏｕｌｉｇｎｙ）Ｂ、ビベッテ（Ｂｉｂｅｔｔｅ）Ｊ、リール・カルデロン（Ｌｅａｌ−Ｃａｌｄｅｒｏｎ）Ｆ、Ｐｈｙｓ  Ｒｅｖ  Ｌｅｔｔ．２００１年１０月２２日、８７（１７）：１７８３０４頁に記載されている。
【００５１】
ＥＳ内のキレートの量を最大限にするために、以下に詳述されるものなど、適切なプロトコルが使用されうる。
【００５２】
少なくとも部分的にＥＳ膜へ組込まれる化学修飾キレートを使用することも可能である。かかる親油性キレートは、米国特許第５８０４１６４号明細書、米国特許第５４６０７９９号明細書、国際公開公報第９１／１４１７８号に記載されている。より正確には、結合は基−（ＣＨ２）ａ−ＯＯ  ＮＲ１Ｒ２により行われうるが、ここで
ａ．ａは１、２、または３であり
ｂ．Ｒ１、Ｒ２は独立して鎖Ｃ７−Ｃ３０を表し、置換または非置換、直鎖または分岐、最終的にＯ、ＮＨ、Ｒ３、またはＳによって中断され、ここでＲ３はＣ１−Ｃ３アルキルであり、
ｃ．またはＲ１、Ｒ２は独立して基
【化１】
2008513533.tif 000002
を表し、ここでｂ＝０〜２であり、Ｒ５は少なくとも６個の炭素原子の飽和または不飽和基である。
【００５３】
シフト剤をリポソームの中に、すなわちリポソームの内層へ組込むために、リポソームに組込まれるＤｙ３＋またはＴｍ３＋ＤＴＰＡ  ＢＣ１４Ａなど親油性錯体が使用されうる。リポソームの調製後、外層に挿入される錯体は、Ｌａ３＋など非シフト金属剤でトランスメタル化される。Ｔ１またはＴ２リラクサー（ｒｅｌａｘｅｒ）金属（例えば、Ｇｄ３＋）によるトランスメタル化は多様なＣＥＳＴ／Ｔ１  ＭＲＩ造影剤を提供しうる。
【００５４】
スペーサーは、ホスホグリセリドから出される一部、例えば、ホスファチジルエタノールアミンなどホスホジグリセリドからのＣＨ２ＣＨ２を含みうる。スペーサーは、ペプチド、擬ペプチド、ポリアルキレングリコール、ＰＥＧ、および類似体由来の基を含みうる。かかるＥＳシステムにおいて、キレートは存在しうる。
【００５５】
ＥＳ／リポソーム生体内分布は、表面電荷にも大きく依存し、本発明によるリポソームは望ましくは、例えば、リポソーム膜形成材料の重量に対して１〜１０％のホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、およびホスファチジルイノシトールなど負に帯電したリン脂質を含みうる。
【００５６】
ランタニドキレート錯体を封入するためのリポソームは、例えば、欧州特許第３１４７６４号明細書、国際公開公報第９６２５９５５号、および国際公開公報第２００４０２３９８１号に記載されている。
【００５７】
ベシクル、例えば、ＮＭＲ造影剤の担体としてリポソーム封入された常磁性種の濃縮溶液を含有するマイクロベシクルの分散の使用は、封入された少なくとも１つの有機物を持つリポソームベシクルの注射用水性懸濁液を開示する欧州特許第３１４７６４号明細書に記載されている。
【００５８】
体液、すなわち以下のような肝および脾におけるリポソームの望ましくない除去を回避するためにいくつかの改良が記載されている。
−１）親水性および疎水性部分を含有するコポリマーによるリポソームのコーティング
−２）ベシクル形成脂質における保護物質の取込み（欧州特許第ＥＰ−Ａ−０３５４８５５明細書、国際公開公報第９１／０５５４５Ａ号）
−３「ステルス」因子として、血液中のリポソームの半減期を改善するためにパルミトイルグルクロン酸（ＰＧｌｃＵＡ）などの製品のベシクル形成脂質に取込み
−４）一方の末端で疎水性部分、他方の末端で親水性高分子鎖を含むリポソーム表面上のタンパク質の吸収を阻害する薬剤の使用。好ましい疎水性部分は長鎖脂肪族アルコールのアルコールラジカル、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸エステル、およびリン脂質であるが、好ましい親水性部分はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧおよび疎水性部分のアルコールラジカルがエーテル結合によって、または
ＰＥＧ結合リン脂質によって結合されている非イオン表面活性剤が特に好ましい。形成時に、薬剤はリポソーム形成リン脂質と混合され、「ステルス」リポソームを生成する。
−５）リポソームのサイズの低下：血液中のリポソームの寿命は、ベシクルをきわめて小さくすること、すなわち、それらをオプソニンによってサイズ認識可能ではなくすることによって大幅に延長されうる。
−６）以下の国際公開公報第９６２５９５５号に記載されたようなリポソーム懸濁組成物の調節、すなわち
（ａ）リポソーム形成脂質は８０〜９９モル％の中性リン脂質、およびそのホスファチジル部分がグリセロールに連結されている約１〜２０モル％の負に帯電したリン脂質を含み、
（ｂ）（ｂ）少なくとも８０％（体積比）のリポソームベシクルが０．２−１．０μｍ範囲にあり、かつ
（ｃ）リポソームサイズによって、懸濁液中の脂質濃度（ＣＬｉｐ）は、平均径が１．０μｍのリポソームで２０ｍｇ／ｍｌ未満、平均径が０．２μｍのリポソームで１００ｍｇ／ｍｌ未満である。
【００５９】
国際公開公報第９６２５９５５号に記載されたこれらのリポソーム懸濁液において、中性リン脂質は通常の飽和および不飽和ホスファチジルコリンおよびエタノールアミン、例えば、対応するモノ−およびジ−オレイン−、モノ−およびジ−ミリストイル−、モノ−およびジ−パルミトイル−、およびモノ−およびジ−ステアロイル化合物である。負に帯電したリン脂質は、ホスファチジルグリセロール、好ましくは、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、および場合により対応するリン脂質であり、ここでグリセロールはイノシトールによって置換されている。また、リポソームの脂質は、ステロールおよび一部のグリコ脂質のようなリポソーム製剤に一般的に存在する添加剤を含有し、ステロールは、コレステロール、エルゴステロール、コプロスタノール、ヘミコハク酸（ＣＨＳ）などコレステロールエステル、トコフェノールエステルなどを含みうる。グルコ脂質は、セレブロシド、ガラクト−セレブロシド、糖セレブロシド、スフィンゴ−ミエリン、スルファチド、およびモノ−、ジ−、およびトリヘキソシドで誘導体されたスフィンゴ−脂質を含みうる。
【００６０】
ＭＲＩによって試験するパラメータによれば、ＥＳ／リポソームは、生物学的環境に感受性でないリポソーム、および生物学的環境に感受性であるリポソームを記載する国際公開公報第２００４０２３９８１号に記載されているようなものでありうる。環境感受性のリポソームは、例えば、熱感受性リポソーム、ｐＨ感受性リポソーム、化学感受性リポソーム、および放射線感受性リポソームを含みうる。
【００６１】
−非感受性リポソームは、例えば、ＤＳＰＣ／コレステロール（５５：４５、ｍｏｌ：ｍｏｌ）を含みうる。熱感受性リポソームは、例えば、ＤＰＰＣ−ＰＥＧ２０００、ＤＰＰＣ−ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（９５：５、ｍｏｌ：ｍｏｌ）、ＤＰＰＣ−ＭＳＰＣ−ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（９０：１０：４、ｍｏｌ：ｍｏｌ）より成る群から選択される製剤を含みうる。
【００６２】
−「環境感受性リポソーム」は、ジパルミトイルホスファチジル−コリンおよびジパルミトイルホスファチジル−グリセロールリン脂質などであるがこれらに限定されない生理的に適合性の成分を使用して形成されるリポソームを意味する。
【００６３】
例えば、熱感受性リポソームは、
−ジパルミトイルホスファチジルコリン−ポリエチレングリコール（ＤＰＰＣ−ＰＥＧ２０００）
−ジパルミトイルホスファチジルコリン−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ポリエチレングリコール（ＤＰＰＣ−ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）（９５：５、ｍｏｌ：ｍｏｌ）
−ポリエニルホスファチジルコリン−ＭＳＰＣ−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ポリエチレングリコール（ＤＰＰＣ−ＭＳＰＣ−ＤＳＰＥ  −ＰＥＧ２０００）（９０：１０：４、ｍｏｌ：ｍｏｌ）
を含む脂質の組合せから形成されうる。
【００６４】
リポソームは、具体的には、唯一の環原子で付着した親油性アンカー基を有する大環状キラント部分を使用して、金属キレート部分がリポソーム膜に連結されるリポソーム剤を示す米国特許第６０４５８２１号明細書に記載されているものでありうるが、大環状キラントおよびアンカー基は、好ましくは、リポソーム形成後に、有利には生体分解性結合によって互いに結合されている。
【００６５】
これらのリポソーム剤は、その従来技術よりも良好なものとして示されている。すなわち、
−親油性アンカー基に付着するように誘導体化された１つもしくは２つのキレート官能基を有する、ＤＴＰＡなど直鎖キラント基を含む膜連結キレート：双親油性アンカー基を持つ直鎖キラント。
【００６６】
これらのリポソーム剤は一般に、アンカー／キレート分子に加えて、リポソーム膜形成化合物、すなわち脂質および具体的にはリン脂質のほか、リポソーム核およびその外環境、一般にいずれの場合にも、水性溶媒を構成する材料を含む。キレート金属は内側に（かつ最終的に外側にも）いくつかの方法、例えば、
（ｉ）プリフォームされたリポソームの表面に連結されたキラント基のメタル化によって、
（ｉｉ）キレート部分をプリフォームされたリポソームにおけるアンカー分子に結合することのよって、
（ｉｉｉ）キレートアンカー分子を含む脂質混合物を使用してリポソームを形成することによって
リポソームに連結されている。
【００６７】
ＥＳ特にリポソームは、ＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン）、ＤＰＰＣ（ジパルミトイルホスファチジルコリン）、ＤＰＰＧ（ジパルミトイルホスファチジルグリセロール）およびＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）など短いアシル鎖長さを有するリン脂質を含みうる。
【００６８】
ＥＳ／リポソームを通じた水移動の最適化を考慮し、ＥＳ／リポソーム組成物は、有利には、リポソームの水交換特性を調節するために適合されうる。かかる適合は、特にＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、２３３、２００２年、１３１−１４０頁、グロガード（Ｇｌｏｇａｒｄ）らにおいて記載されている。具体的には、高レベルのコレステロールが、リポソーム膜を剛性にし、膜上の水交換を減少させうる。減少した表面積と体積比および多重膜二重層の存在はリソームの内側と外側との水交換を減速させる。
【００６９】
ＣＥＳＴ分子イメージングに関する実施形態において、特定の器官もしくは組織への能動的標的化は、腫瘍関連性抗原、レクチン、またはペプチドに対して特異的であるモノクローナル抗体または抗体断片などそれらに付着したバイオベクターによる脂質の取込みによって達成されうる。リポソームまたはＥＳの標的化は特に米国特許第６３５０４６６明細書に記載されており、リポソームは、脂質シートにおける脂質の一部の親水性頭部基に付着した標的薬剤を含む。バイオベクターは、親油性基と適切に結合され、ＥＳ膜への挿入を可能にし、バイオベクターがＥＳの外面で少なくとも表示されるようになっている。
【００７０】
リポソームによる造影剤の標的送達についても、造影剤の標的送達の手引き（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、ウラジミール（Ｗｌａｄｉｍｉｒ）Ｐ．ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ編、マサチューセッツ（Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）、１９９５年、１４９−１５５および４０３頁、すなわち腫瘍および炎症に関して十分に記載されている。例えば、大きな単層リポソームＬＵＶが使用されうる。
【００７１】
多くの標的エンティティ（バイオベクターと呼ばれる）が、特に国際公開公報第２００４／１１２８３９号、特に６５〜８２頁、具体的には以下に言及されたものが使用されうる。
１）国際公開公報第０１／９７８５０号（標的ＶＥＧＦ受容体およびアンジオポイエチン）、米国特許第６，３７２，１９４号明細書（ポリヒスチジンなどのポリマー）、国際公開公報第２００１／９１８８号（フィブリン標的ポリペプチド）、国際公開公報第０１／７７１４５号（インテグリン標的ペプチド）、国際公開公報第０２／２６７７６号（αｖβ３インテグリン標的ペプチド）、国際公開公報第９９／４０９４７号（ペプチド標的、例えば、Ｒ−Ｘ−Ｋ−Ｘ−ＨおよびＲ−Ｘ−Ｋ−Ｘ−Ｈ、またはＴｉｅ−１および２受容体を含むＫＤＲ／ＦｌＫ−１受容体）、国際公開公報第０２／０６２８１０号、およびミュラー（Ｍｕｅｌｌｅｒ）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ、２００２年、３９６６−３９７３頁（シアリルルイスのグリコシド）、国際公開公報第０３／０１１１１５号（ＮおよびＣ末端に結合されたキレートを有するペプチド）、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｌｅｔｔｅｒｓ  １３、２００３年、１７０９−１７１２頁（ポリアシルアミド標的Ｐ選択）、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｌｅｔｔｅｒｓ  １４、２００４年、７４７−７４９頁（４−ニトロイミダゾール標的腫瘍、国際公開公報第０２／４００６０号（アスコルビン酸など酸化防止剤）、米国特許第６，５２４，５５４号明細書（タフトシンの標的）、国際公開公報第０２／０９４８７３号（Ｇタンパク質受容体ＧＰＣＲ、具体的にはコレシストキニン）、米国特許第６，４８９，３３３号明細書（インテグリン拮抗薬およびグアニジン模倣薬の組合せ）、米国特許第６，５１１，６４８号明細書（キノロン標的αｖβ３またはαｖβ５）、米国特許出願公開第Ａ２００２／０１０６３２５号明細書、国際公開公報第０１／９７８６１号（ベンゾジアゼピンおよび類似体標的インテグリン）、国際公開公報第０１／９８２９４号（イミダゾールおよび類似体）、国際公開公報第０１／６０４１６号（ＭＭＰ阻害剤、具体的にはヒドロキサマート）、国際公開公報第０２／０８１４９７号（ＲＧＤＷＸＥなどのαｖβ３標的ペプチド）、国際公開公報第０１／１０４５０号（ＲＧＤペプチド）、米国特許第６，２６１，５３５号明細書（抗体または抗体断片（ＴＮＦまたはＩＬで誘導可能なＦＧＦ、ＴＧＦｂ、ＧＶ３９、ＧＶ９７、ＥＬＡＭ、ＶＣＡＭ）、米国特許第５７０７６０５号明細書その標的との相互作用によって修飾される標的分子）、国際公開公報第０２／２８４４１号（アミロイド沈着標的剤）、国際公開公報第０２／０５６６７０号（カテプシン開裂ペプチド）、米国特許第６，４１０，６９５号明細書（ミトキサオロンまたはキノン）、米国特許第６，３９１，２８０号明細書（上皮細胞標的ポリペプチド）、米国特許第６，４９１，８９３号明細書（ＧＣＳＦ）、米国特許出願公開第２００２／０１２８５５３号明細書、国際公開公報第０２／０５４０８８号、国際公開公報第０２／３２２９２号、国際公開公報第０２／３８５４６号、国際公開公報第２００３／６０５９号、米国特許第６，５３４，０３８号明細書、国際公開公報第９９／５４３１７号（システインプロテアーゼ阻害剤）、国際公開公報第０１７７１０２号、欧州特許第１１２１３７７号明細��、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（５２、ｎ２、１７９、成長因子ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ等）、Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２２２、Ｗ．クラウゼ（Ｋｒａｕｓｅ）、種プリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１１、２００３年、１３１９−１３４１頁、αｖβ３標的テトラヒドロベンズアゼピノン誘導体）。
２）血管新生阻害剤、具体的には臨床試験で試験され、またはすでに市販されているもの、特に、
−ＳＵ１０１、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＺＤ４１９０、ＰＴＫ７８７、ＺＫ２２５８４６、アザシクル化合物（国際公開公報第００／２４４１５６号、国際公開公報第０２／０５９１１０号公報）などＦＧＦＲまたはＶＥＧＦＲ受容体を含む抗血管新生阻害剤、
−ＢＢ２５−１６（マリマスタット）、ＡＧ３３４０（プリノマスタット）、ソリマスタット、ＢＡＹ１２−９５６６、ＢＭＳ２７５２９１、メタスタット、ネオバスタットなどＭＭＰを含む血管新生阻害剤、
−ＳＭ２５６、ＳＧ５４５、ＥＣ−ＥＣＭ−遮断接着分子（（など）ＥＭＤ１２１−９７４、またはビタキシン）などインテグリンを含む血管新生阻害剤、
−カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ４７０、スクアールアミン、ＺＤ０１０１など抗血管新生のより間接的な機序を有する医薬品、
−文献国際公開公報第９９／４０９４７号に記載された阻害剤、ＫＤＲ受容体との結合に対してきわめて選択的なモノクローナル抗体、ソマトスタチン類似体（国際公開公報第９４／００４８９号）、セレクチン結合ペプチド（国際公開公報第９４／０５２６９号）、成長因子（ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦ、ＭＣＳＦ、インターロイキン）、Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９９年、２０に記載されたＶＥＧＦ標的化バイオベクター、
−文献国際公開公報第０２／０６６５１２号の阻害剤ペプチド。
３）受容体を標的にすることが可能なバイオベクター、すなわち、ＣＤ３６、ＥＰＡＳ−１、ＡＲＮＴ、ＮＨＥ３、Ｔｉｅ−１、１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｅｋ、ニューロピリン−１、エンドグリン、プレイオトロフィン、エンドシアリン、Ａｘｌ．、ａｌＰｉ、ａ２ｓｓｌ、ａ４Ｐ１、ａ５ｐｌ、ｅｐｈＢ４（エフリン）、ラミニンＡ受容体、ニュートロフィリン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｎ）６５受容体、ＯＢ−ＲＰレプチン受容体、ＣＸＣＲ−４ケモカイン受容体（および文献国際公開公報第９９／４０９４７号で言及された他の受容体）、ＬＨＲＨ、ボンベシン／ＧＲＰ、ガストリン受容体、ＶＩＰ、ＣＣＫ、Ｔｌｎ４。
４）チロシンキナーゼ阻害剤型のバイオベクター。
５）（１）ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩ受容体のモノクローナル抗体のｆａｂ断片、アブキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ）（ＲｅｏＰｒｏ（商標））、（２）エプチフィバチド（Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ（商標））およびチロフィバン（Ａｇｇｒａｓｔａｔ（商標））など静脈内注射される小さなペプチドおよびペプチド模倣分子から選択されるＧＰＩＩＢ／ＩＩＩａ阻害剤の既知の阻害剤。
６）フィブリノゲン受容体拮抗薬（欧州特許第４２５２１２号明細書）であるペプチド、ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体リガンド、フィブリノゲンリガンド、トロンビンリガンド、粥状斑を標的にすることが可能なペプチド、血小板、フィブリン、ヒルジンベースのペプチド、ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を標的にするグアニンベースの誘導体。
７）抗血栓作用、抗血小板凝集作用、アテローム性動脈硬化に対する作用、再狭窄に対する作用、および／または抗血液凝固作用を有する他のバイオベクターまたは医薬品として当業者に周知のバイオベクターの生物学的活性断片。
９）特定の型の癌を標的にする一部のバイオベクター、例えば、結腸直腸癌と関連したＳＴ受容体、またはタキキニン受容体を標的にするペプチド。
１０）ホスフィン型化合物を使用するバイオベクター。
１１）標的Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチンのバイオファクター（例えば、モリカワ（Ｍｏｒｉｋａｗａ）ら、１９９６年、９５１によって記載された８−アミノ酸ペプチド）。
１２）アネキシンＶおよびそれの誘導体
１３）非天然アミノ酸で任意に修飾される、ファージ提示法など標的化法によって得られるペプチド（ｈｔｔｐ／／ｃｈｅｍｌｉｂｒａｒｙ．ｂｒｉ．ｎｒｃ．ｃａ）、例えば、ファージ提示法ライブラリー由来のペプチド、すなわち、ＲＧＤ、ＮＧＲ、ＣＲＲＥＴＡＷＡＣ、ＫＧＤ、ＲＧＤ−４Ｃ、ＸＸＸＹ＊ＸＸＸ、ＲＰＬＰＰ、ＡＰＰＬＰＰＲ。
１４）具体的には文献国際公開公報第２００３／０１４１４５号で言及された粥状斑を標的にするための他の既知のペプチドバイオベクター。
１５）ビタミン。
１６）ホルモンおよびステロイドを含む、ホルモン受容体のリガンド。
１７）オピオイド受容体を標的にするバイオベクター。
１８）ＴＫＩ受容体を標的にするバイオベクター。
１９）ＬＢ４およびＶｎＲ拮抗薬。
２０）ニトリイミダゾールおよびベンジルグアニジン化合物。
２１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２２２巻、２６０−２７４頁におけるトピックス、受容体ベースの診断的金属薬剤の基礎（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｂａｓｅｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）でリコールされたバイオベクター、具体的には、
２２）腫瘍において過剰発現されるペプチド受容体（例えば、ＬＨＲＨ受容体、ボンベシン／ＧＲＰ、ＶＩＰ受容体、ＣＣＫ受容体、タキキニン受容体）を標的にするバイオベクター、具体的には、ソマトスタチン類似体またはボンベシン類似体、場合によりグリコシル化オクトレオチド由来ペプチド、ＶＩＰペプチド、アルファ−ＭＳＨ、ＣＣＫ−Ｂペプチド、
環状ＲＧＤペプチド、フィブリン−アルファ鎖、ＣＳＶＴＣＲ、タフトシン、ｆＭＬＦ、ＹＩＧＳＲ（受容体：ラミニン）から選択されるペプチド。
２３）スマート型の生成物に使用されるバイオベクター、例えば、生化学的局所反応の場合すなわち酵素的に開裂可能なバイオベクター。
２４）心筋生存度のマーカー（テトロフォミンおよびヘキサキス−２−メトキシ−２−メチルプロピルイソニトリル）。
２５）神経伝達物質受容体（Ｄ、５ＨＴ、Ａｃｈ、ＧＡＢＡ、ＮＡ受容体）のリガンド。
２６）チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ゲフィチニブ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、イマチニブ（Ｉｍａｔｉｎｉｂ）オリゴヌクレオチド。
２７）その腫瘍を標的にすることで知られる抗体。
【００７２】
国際公開公報第２００５／０４９００５号、国際公開公報第２００５／０４９０９５号、国際公開公報第２００５／０４２０３３号に記載されたものなど他のバイオベクター、チオフラビンまたはクリサミンＧ  ｏｕ  ｒｅｄ  ｃｏｎｇｏの誘導体などアミロイドベータプラーク（アルツハイマー）を標的にする部分。
【００７３】
特定の標的ＣＥＳＴ剤は、異なる標的部分および金属（異なる標的化バイオベクターおよびｃｅｓｔ剤を含有する封入システムの混合物（ｃｏｋｔａｉｌ））を有する少なくとも２つの異なる封入システムをも含みうる。例えば、診断薬は、ｉ）メタロプロテアーゼ  ＭＭＰ１に特異的なＴｍ３＋およびバイオベクターを組込むＥＳ／リポソーム、およびｉｉ）メタロプロテアーゼＭＭＰ９に対するＤｙ３＋およびバイオベクターを有するリポソームの混合物より成りうる。標的部分は、異なる機序と関連した、例えば、血管新生と関連したリガンド、および標的と関連したリガンドを標的にしうる。本発明のＣＥＳＴシステムは、幹細胞タギング（ｔａｇｉｎｇ）にも使用されうる。
【００７４】
本発明の造影剤組成物を製造するには、リポソームは製剤として生理的に許容される液体担体溶剤、例えば、ｐＨ修飾剤、キレート剤、抗酸化剤、等張化剤、抗凍結剤、別の造影剤等など１つもしくはそれ以上の添加剤を含みうる水溶液で形成される。
【００７５】
ｐＨを調節する適切な成分の例としては、生理的に許容される酸、塩基、緩衝剤、例えば酢酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、リンゴ酸、リン酸、硫酸、または酒石酸、アンモニア、炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、トロールアミン、リン酸アンモニウム、ホウ酸、クエン酸、乳酸、メタリン酸カリウム、第一リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、重リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、Ｔｒｉｓ、およびＮ−メチルグルカミンが挙げられる。
【００７６】
適切な抗酸化剤の例としては、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、システイン、モノチオグリセロール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次リン酸、没食子酸プロピル、重硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、またはトコフェノールが挙げられる。
【００７７】
適切な等張化剤の例としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、およびデキストロースが挙げられる。これらの薬剤は、好ましくは、製剤を血液と等張性または近等張性にするために使用される。
【００７８】
適切な抗菌剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メタクレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルおよびチメロサールが挙げられる。
【００７９】
好ましい実施形態において、本発明の封入システムにおいて使用するための反応性常磁性剤は、好ましくは、ＣＥＳＴイメージングに適合される常磁性金属イオンの少なくとも１つのキレート化錯体を含む。常磁性金属イオンは、ＣＥＳＴのために照射される移動プロトンの化学シフト値に大きく影響を及ぼすのに適切に短い電子緩和時間を有するランタニド（ＩＩＩ）金属である。好ましくは、常磁性金属イオンは、セリウム（ＩＩＩ）、プラセオジウム（ＩＩＩ）、ネオジミウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、ツリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、およびユーロピウム（ＩＩＩ）から成る群において選択される。特に好ましいのは、Ｄｙ３＋、Ｔｂ３＋、Ｔｍ３＋、Ｙｂ３＋、Ｅｕ３＋である。ＣＥＳＴに適合される他の金属イオン、すなわち、鉄（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）が使用されうる。
【００８０】
適切なキレート剤の例としては、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＢＯＰＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＣＴＡ、それらの誘導体（例えば、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００３年、第３巻、ｎ８におけるミニレビュー（Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖｉｅｗ）に記載）、およびそれらの塩および錯体、特にカルシウム、ナトリウム、またはメルグミン塩、例えば、エデト酸二ナトリウム、エデト酸、カルシウムＥＤＴＡが挙げられる。
【００８１】
本発明の方法において使用するための好ましい常磁性錯体は、例えば、Ａｃｃｏｕｎｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００３年、３６、１０、７８３−７９０に記載されている１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、およびそのテトラアミド誘導体、または１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラホスホン酸（ＤＯＴＰ）、または１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）もしくはＨＰＤＯ３Ａ、またはＤＯ３ＡＢおよびそのトリアミド誘導体、またはＰＣＴＡおよびそのトリアミド誘導体、またはＨＯＰＯおよび上記の好ましい金属イオンを有するその誘導体の大環状のキレートである。
【００８２】
好ましいランタニドは、Ｙｂ（ＩＩＩ）、Ｔｍ（ＩＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩＩ）、Ｈｏ（ＩＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）およびＥｕ（ＩＩＩ）である。
【００８３】
キレートは、国際公開公報第９６２５９５５号に記載されたＹｂ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ  ａｎ  Ｅｕ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−ＧｌｙまたはＴｍ−ＤＯＴＡＭ−ＧｌｙおよびＥｕ−ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ、ＤＯＴＭＡ−ＴｍまたはＤＯＴＭＡ−ＤｙまたはＤＯＴＡ−ＤｙまたはＤＯＴＡＴｍまたはＨＰＤＯ３Ａ−ＤｙまたはＨＰＤＯ３Ａ−Ｔｍからも選択されうる。
【００８４】
本発明は、キレートシフト剤および金属を含む有効な化合物の同定のためのスクリーニング方法、およびそれから得られる化合物にも関し、前記方法は、ＥＳにおけるキレート金属錯体を結合し、ＣＥＳＴイメージングを持ち、化合物を選択するステップを含む。
【００８５】
本発明の組成物は、金属常磁性イオンの第１のキレートを含むＥＳ／リポソームおよび金属常磁性イオンの別のキレートを含むリポソームを含みうる。
【００８６】
目的とするパラメータとしては、ヒトまたは動物の体器官または体組織における非限定的に温度、ｐＨ、代謝物濃度、Ｏ２もしくはＣＯ２分圧、酵素活性が挙げられる。
【００８７】
本発明による薬学的調製物は、管内（例えば静脈内、動脈内、心室内など）に適切に注射されるか、髄腔内、腹腔内、リンパ管内、腔内、経口、または腸内投与によって使用されうる。
【００８８】
注射用製剤は通常、活性成分および薬剤として許容される賦形剤を薬学的観点から適切な純度の水に溶解することによって調製される。結果として生じる製剤は適切に滅菌され、かかるものとして使用され、または代わりとして凍結乾燥され使用前に再構成されうる。
【００８９】
これらの製剤は診断要件によって０．０１〜０．５ｍｍｏｌ／ｋｇ体重の用量の濃度で投与されうる。
【００９０】
具体化によれば、封入システムは、米国特許第６６６７９６３号明細書に記載されたようなフルオロケミカル粒子で製造されるナノ液滴を含む。
【００９１】
イメージングパラメータは以下の通りでありうる。すなわち、
−７．０５Ｔで作動するブルカー  アバンス（Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ）３００分光計で実施される高解像度作業
−連続波前飽和方形波（出力１０５０Ｈｚ）で試料を照射し、またはｅ−ｂｕｒｐ１選択波の適切な列を使用することによって３１２ＤＥＧ  Ｋで実施される飽和異動実験。
−積極的にシールドされた勾配３００ｍＴ／ｍ）を有し、パラビジョン（ＰａｒａＶｉｓｉｏｎ）２．１．１ソフトウェアを実行する７．０５Ｔブルカー  ファルマスキャン（Ｂｒｕｋｅｒ  ＰｈａｒｍａＳｃａｎ）を使用して実施されるＮＭＲイメージング。
−ＳＥ（スピンエコー）イメージングシーケンス（エルミート形状の９０ＤＥＧおよび１８０ＤＥＧ波を使用）を使用して得られる標準ＰＤＷ（プロトン密度強調画像）。
−ＮＭＲ画像導入パラメータ（ＴＲ／ＴＥ／ＮＥ＝３．０ｓ／１８．３ｍｓ／１）、ＦＯＶ（視野）３０×３０ｍｍ＜２＞、スライス厚２ｍｍ、および画像行列２５６×２５６ポイント。スピンエコーシーケンスの前遅延で４秒間適用される２．２５ワット方形飽和波。一方はバルク水プロトンから−４７９４Ｈｚでアミドプロトンの飽和で、他方は４７９４Ｈｚでオフセットされるｒｆ照射で得られる２つの画像。
【００９２】
他の視野は１、１．５Ｔ〜３Ｔｅｓｌａなどが使用されうる。
【実施例】
【００９３】
実施例１
シフト剤としてのキレートＤＯＴＡもしくはＤＯＴＡＭＧｌｙまたはＤＯＴＡＭが飽和および不飽和リン脂質とコレステロールナトリウム塩の混合物から得られたリポソーム封入システム内に封入される。例えば、５０：１０：４０または５５：１５：３０ｗ／ｗ／ｗのジパルミトイルホスファチジルグリセロールＤＰＰＧ／オレオイルパルミトイルホスファチジルコリン／コレステロール。
【００９４】
０．１〜１ＭのＤＯＴＡの溶液を使用して調製されたリポソームが、０．０５〜０．５Ｍのリポソーム内のＤＯＴＡの濃度を得ることを可能にする。調製されたリポソームは０．５〜５ｍＭの範囲でシフト剤の濃度を有し、リポソームの濃度は、例えば、１〜５ｎＭ、好ましくは、２〜４ｎＭの範囲である。リポソームの平均径は、特にコレステロール比によって約０．２〜０．３μｍである。イメージングパラメータ：ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）７Ｔ、３１２ＤＥＧ  Ｋ、３秒照射時間。十分な結果を得るために必要とされる視野は、リポソームに封入されていないシフト剤よりもシフト剤を含有するリポソームではるかに低い。コントラストＣＥＳＴ画像は、リポソームで使用されるシフト剤の濃度に従ってほぼ０．０５ｎＭ以下の程度のリポソームの濃度でも得られうる。
【００９５】
実施例２
ＤＯＴＡまたはＤＴＰＡ親油性誘導体が従来技術に従って調製される。すなわち、米国特許第６０４５８２１号明細書（大環状キレート、特にＤＯ３Ａ−スクシニル−ＰＥ、ＤＯ３Ａ−グルタリル−ＰＥ、ＤＯ３Ａ−ＤＯＢＡ、ＤＯ３Ａ−ＤＯｍＢＡ、ＤＯ３Ａ−ＤＯｏＢＡ、ＤＯ３Ａ−ＤＯＩＡ、ＤＯ３Ａ−ＨＯＢＡ、ＤＯ３Ａ−ＯＯＢＡ、およびＡＥ−ＤＯ３Ａ−ドデセニル−ＰＥ、実施例３〜２４を参照）、米国特許５１５４９１４明細書（親油性鎖Ｃ１−Ｃ３０を持つＤＴＰＡ）、米国特許第５３１２６１７号明細書（親油性基ＣＨ２ＣＯＮＲを有するＤＴＰＡ）。
【００９６】
キレートシフト剤はリン脂質膜と結合されている。キレートはリポソーム膜の外面（「外部キレート」）または内面（「内部キレート」）のいずれかに位置している。
【００９７】
リポソームは、以下の通り、薄膜法によって調製された。すなわち、ＤＳＰＣ、親油性Ｔｍ錯体、ＦＡ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥおよびコレステロールをクロロホルム／メタノール混合物１：１（ｖ／ｖ）中に共溶解し、蒸発させ減圧下に乾燥させた。脂質の総量は通常、
−１０〜３０％の親油性Ｔｍ錯体
−３０〜５０％のＤＳＰＣ
−２０〜４０％のコレステロール
−５〜１５％のＦＡ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥ
から成る１２０μｍｏｌであった。
【００９８】
次いで、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１３５ｍＭ  ＮａＣｌによって構成されたｐＨ６．５での緩衝液３ｍｌで脂質薄膜を再水和した。結果として生じるリポソームを２時間、遷移温度（Ｔｃ＝５８℃）以上で静かに攪拌した。次に、脂質分散を連続的に１０回、４００ｎｍさらに１００ｎｍポリカーボネート膜フィルタを通じて押出した。
【００９９】
リン脂質濃度をルーザー（Ｒｏｕｓｅｒ）（１９７０年）によるリン分析によって測定した。Ｔｍキレート取込みの効率を誘導的に結合された血漿原子発光スペクトロスコピー（ＩＣＰ−ＡＥＳ）によって分析した。リポソームの平均径をマルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）４７００システム：約１２０ｎｍによる光子相関スペクトロスコピー（ＰＣＳ）によって９０°角度（２５℃）で測定した。
【０１００】
「内部キレート」比率を増大させるために、調整方法は「外部キレート」の金属交換反応のステップを含みうる。この方法では、金属交換反応液が「内部キレート」および「外部キレート」を表示するリポソームを含む組成物に添加される。金属交換反応溶液はＬａ３＋を含み、「外部キレート」の金属を錯体とすることを可能にする。したがって、残りのリポソームは、機能的に言えば、金属シフト剤を持つ「内部キレート」のみを、または実質的にこれのみを含有する。「外部キレート」は、ＣＥＳＴシフト効果の点で無効おなる。
【０１０１】
実施例３：ＰＣＴＡ誘導親油性化合物の使用
オクタデカン酸３−（｛２−［４−（３，９−ビス−カルボキシメチル−３，６，９，１５−テトラアザ−ビシクロ［９．３．１］ペンタデカ−１（１４），１１（１５），１２−トリエン−６−イル）−４−カルボキシ−ブチリルアミノ］−エトキシ｝−ヒドロキシ−ホスホリルオキシ）−２−オクタデカノイルオキシ−プロピルのエステルのジスプロシウムおよびツリウム錯体
【化２】
2008513533.tif 000003
２００ｍｇの化合物
【化３】
2008513533.tif 000004
を１０ｍｌのジメチルホルムアミド中に溶解する。この溶液に２０４ｍｇのＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび４０ｍｇのＮ−ヒドロキシスクニミドを添加する。混合物を１時間、室温下に攪拌し、５ｍｌのピリジン中２５０ｍｇの１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ，ＡＶＡＮＴＩ（登録商標）ポラー・リピド社（Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｉｎｃ．））の溶液を添加する。反応媒体を２０時間、室温下に攪拌し、エタノール５０ｍｌ中に沈殿させる。次いで、生成物をシリカゲル、ｍ＝１９０ｍｇで精製する。
【０１０２】
実施例４：ＰＥＧ挿入ステルス剤によるＤＴＰＡ誘導体のリポソーム調製
キレート錯体は水性内相でリポソーム内に封入される。
【０１０３】
リポソームを薄膜法によって以下の通り調製した。すなわち、リン脂質（ＤＰＰＣおよびＤＰＰＧ）、ＦＡ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、およびコレステロールをクロロホルム／メタノール混合物５：１（ｖ／ｖ）中に共溶解し、蒸発させ減圧下に乾燥させた。脂質の総量は通常、
−４０〜７０％のＤＰＰＣ
−５〜２０％のＤＰＰＧ
−２０〜４０％のコレステロール
−５〜１５％のＦＡ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥ
で構成された。
【０１０４】
次いで、脂質薄膜を０．２５Ｍ  Ｄｙ−ＤＴＰＡ−ＢＭＡの水溶液で再水和した。多重膜ベクシルを凍結融解によって５回処理した。結果として生じる大きなオリゴ層状ベクシルリポソームを二重ポリカーボネート膜フィルタ（１００および５０ｎｍ孔径）を通じて減圧下に押出した。未封入のＤｙのキレートをＳｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ膜（分子量カットオフ：１００００ダルトン）で、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１３５ｍＭ  ＮａＣｌによって構成されたｐＨ７．４の緩衝液に対して透析によって除去した。
【０１０５】
リン脂質濃度をルーザー（１９７０年）によるリン分析によって測定した。Ｄｙキレート取込みの効率を誘導的に結合された血漿原子発光スペクトロスコピー（ＩＣＰ−ＡＥＳ）によって分析した。リポソームの平均径をマルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）４７００システム：約１１０ｎｍによる光子相関スペクトロスコピー（ＰＣＳ）によって９０°角度（２５℃）で測定した。
【０１０６】
実施例５：封入システムと結合された親油性非ペプチド（葉酸誘導体）バイオベクター
【化４】
2008513533.tif 000005
【０１０７】
葉酸（１８８ｍｇ）を８ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解した。７００ｍｇのアミノ−ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥおよび３．８ｍｌのピリジンを添加した後、２３３ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した。反応を室温下に一夜、継続した。ピリジンを回転蒸発によって除去し、次いで５３０ｍｌの水を添加した。溶液を遠心分離し（４０００ｔｒ／分）、微量不溶性物質を除去した。上清を濃縮させ、最初に食塩水０．１Ｎに対して、次いで水で１Ｋｄ膜により限外ろ過した。ろ過物を凍結乾燥させ、残留物を真空下に乾燥させた。収量は６００ｍｇ（７５％）であった。分析：ＳＭ（エレクトロスプレーポジモード）：ｚ＝２によるｍ／ｚは１５９９に集中し、ｚ＝３では１０６６に集中し、ｚ＝４では８００に集中する。
【０１０８】
実施例６：親油性ペプチドバイオベクター
ステップ１：
【化５】
2008513533.tif 000006
２０ｍｌのジオキサンおよび８ｍｌのＤＭＦ中３．８５ｇのヘキサデカン酸および２．７６ｇのペンタフルオロフェノールから成る溶液に０℃下、２０ｍｌのジオキサン中３．１ｇのジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を添加する。混合物を一夜、室温下に攪拌し、反応媒体をろ過する。得られた溶液を低圧下に蒸発させる。得られた油をシクロヘキサンヘ入れ、白色固体（５ｇ）を得る。
融合温度：４２−４４℃
【０１０９】
ステップ２：ペプチドのアシル化
ペプチドを固体相で２．５等価物の各々のアミノ酸保護Ｆｍｏｃを使用して各々の結合サイクルで調製する。カルボン酸の活性化は、ＤＭＦ中ＨＡＴＵ、Ｎ−メチルモルホリンで行われる。Ｆｍｏｃ基はピペリジン処理（ＤＭＦ中２０％）によって結合される。ペプチド配列の最後のアミノ酸の導入および保護基Ｆｍｏｃの開裂後、ペプチドのＮ末端アミンは、ＨｏＢｔおよびＮ−メチルモルホリンの存在下にＣＨ２Ｃｌ２中に溶解されたステップ１で調製された化合物（２．５等価物）によってアシル化される。ペプチドはその後に樹脂から遊離し、側部機能の保護基が３０分間、０℃下、その後に２時間、室温下にトリフルオロ酢酸／チオアニソール（９５／５）の混合物の作用によって切断される。樹脂は除去され、溶剤は低圧下に蒸発される。リポペプチドはエチルエーテルで沈殿される。生成物は、カラムＶｙｄａｃ  ＯＤＳ（登録商標）で水／アセトニトリル／ＴＦＡ混合物で溶出することによってＨＰＬＣ調製で精製される。
【０１１０】
2008513533.tif 000007
【０１１１】
実施例７：ステルス剤リン脂質−ＰＥＧ
かかる親油性ＰＥＧ誘導体は公知であり、例えばＡＶＡＮＴＩ（登録商標）ｐｏｌａｒ  ｌｉｐｉｄｓ  ｏｎ  Ａｖａｎｔｉｌｉｐｉｄｓ．ｃｏｍから市販されており、特にＰＥＧ３５０、７５０、２０００、３０００、５０００、具体的には、
−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−３５０］
−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５５０］、
−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−７５０］
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−３０００］
である。好ましくは、ＰＥＧ化リン脂質のパーセンテージはほぼ１０程度である。
【０１１２】
本発明は、詳細に記載された封入システムに限定されていない。具体的には、本発明は、ＥＳの言及された脂質組成物、および適切なＣＥＳＴプロトコールによって詳細に記載されたものと類似した有効な優れた結果を示すキレートシフト剤を含むＣＥＳＴ  ＥＳ剤を含む。
【０１１３】
実施例８：多重膜リポソームの調製
多重膜リポソーム（またはＭＬＶ、多重膜嚢状体）を薄膜法によって以下の通り調製した。すなわち、リン脂質（ＤＰＰＣおよびＤＰＰＧ）、ＦＡ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、およびコレステロールをクロロホルム／メタノール混合物５：１（ｖ／ｖ）中に共溶解し、蒸発させ減圧下に乾燥させた。脂質の総量は通常、
−４０〜７０％のＤＰＰＣ
−５〜２０％のＤＰＰＧ
−２０〜４０％のコレステロール
−５〜１５％のＦＡ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥ
で構成された。
【０１１４】
次いで、脂質薄膜を０．２５Ｍ  Ｄｙ−ＤＴＰＡまたはＴｍ−ＤＯＴＡの水溶液で再水和した。未封入のＤｙまたはＴｍのキレートをＳｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ膜（分子量カットオフ：１００００ダルトン）で、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１３５ｍＭ  ＮａＣｌによって構成されたｐＨ７．４の緩衝液に対して透析によって除去した。
【０１１５】
リン脂質濃度をルーザー（１９７０年）によるリン分析によって測定した。Ｄｙまたは（ｏｔ）Ｔｍキレート取込みの効率を誘導的に結合された血漿原子発光スペクトロスコピー（ＩＣＰ−ＡＥＳ）によって分析した。リポソームの平均径をマルベルン（Ｍａｌｖｅｒｎ）４７００システム：約６００ｎｍによる光子相関スペクトロスコピー（ＰＣＳ）によって９０°角度（２５℃）で測定した。
【０１１６】
実施例９：ダブルエマルジョンの調製
Ｗ／Ｏ／Ｗダブルマイクロエマルジョンを２つのステップで調製した。最初に、７０℃下にＤｙ−ＤＯＴＡ（０．０５−０．２Ｍ）を含有する水溶液（３〜１０％）を、
−ステアリン酸（３５〜８０％）
−ＡＯＴ（１０〜２０％）
−ブタノール（２０〜３０％）
の混合物に添加することによって温かいＷ／Ｏマイクロエマルジョンを調製した。
【０１１７】
温かいＷ／Ｏマイクロエマルジョン（１０〜１５％）に、
−水（５０〜７０％）
−レシチン（３〜１０％）
−ブタノール（５〜１０％）
−タウロデオキシコール酸ナトリウム塩（ＴＤＣ）（５〜１０％）
の７０℃で温めた混合物を添加することによってＷ／Ｏ／Ｗダブルエマルジョンを得た。
【０１１８】
両方のステップは結果として光学的に透明なシステムをもたらした。Ｗ／Ｏ／Ｗマイクロエマルジョンを、ダイアフロ（Ｄｉａｆｌｏ）膜を使用するウルトラダイアフィルトレーション（ｕｌｔｒａｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）によって３回精製した。Ｄｙまたは（ｏｔ）Ｔｍキレート取込みの効率を誘導的に結合された血漿原子発光スペクトロスコピー（ＩＣＰ−ＡＥＳ）によって分析した。
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月25日(2007.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＥＳＴイメージング用の診断組成物の調製のための造影剤の使用であって、前記造影剤が水移動シフトプロトンのプールを含有するプロトンプール封入システムを含む造影剤の使用。
【請求項２】
前記造影剤が、１）シフトされる水移動プロトンのプールと、２）シフト剤とを含有するプロトンプール封入システムを含む請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記封入システムがリポソームである請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記シフト剤がランタニドである請求項２または３に記載の使用。 
【請求項５】
前記シフト剤がランタニドの常磁性錯体である請求項２または３に記載の使用。
【請求項６】
前記ランタニドが、鉄（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、エルビウム（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、ユーロピウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、プラセオジニウム（ＩＩＩ）、ネオジニウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、ツリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）から選択される請求項４または５に記載の使用。 
【請求項７】
前記ランタニドが、ユーロピウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、およびイッテルビウム（ＩＩＩ）から選択される請求項４または５に記載の使用。
【請求項８】
前記常磁性錯体が、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＢＯＰＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰＤＯ３Ａ、ＰＣＴＡ、ＤＯＴＡＭ、ＤＯＴＡＭｇｌｙ、ＭＣＴＡ、ＤＯ３ＡＢ、およびそれらのポリアミド誘導体から選択されるキレートである、請求項５〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記常磁性錯体が、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＢＯＰＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＣＴＡ、ＤＯＴＡのテトラアミド誘導体、およびＤＯ３ＡまたはＰＣＴＡのｔｒｉｓアミド誘導体から選択されるキレートである請求項５〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記キレートが、Ｙｂ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ、ａｎ  Ｈｏ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ、Ｔｍ（ＩＩＩ）−ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ、Ｅｒ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ、およびＥｕ−ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙから選択される請求項８または９に記載の使用。
【請求項１１】
前記常磁性錯体が、Ｙｂ（ＩＩＩ）ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ、Ｔｍ（ＩＩＩ）−ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙ、およびＥｕ−ＤＯＴＡＭ−Ｇｌｙから選択されるキレートである請求項５〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記キレートが、Ｙｂ（ＩＩＩ）ＤＯＴＭＡ、Ｈｏ（ＩＩＩ）ＤＯＴＭＡ、Ｔｍ（ＩＩＩ）−ＤＯＴＭＡ、Ｅｒ（ＩＩＩ）ＤＯＴＭＡ、およびＥｕ−ＤＯＴＭＡから選択される請求項８に記載の使用。
【請求項１３】
脂質を形成する前記封入システムが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールＤＰＰＧ、オレオイルパルミトイルホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸、脂肪酸、ガングリオシド、糖脂質、グリコ脂質、モノ−、ジ、またはトリグリセリド、セラミド、またはセレブロシドの、リン脂質もしくは水素化リン脂質またはそれらの誘導体を含む請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
前記リポソーム形成脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸、脂肪酸、ガングリオシド、糖脂質、グリコ脂質、モノ−、ジ、またはトリグリセリド、セラミド、またはセレブロシドの、リン脂質もしくは水素化リン脂質またはそれらの誘導体を含む請求項３〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記封入システム形成脂質が、飽和および不飽和リン脂質とコレステロールの混合物を、特に４０／１０／５０〜６０／５／３５の割合で含む請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
リポソームの脂質が、ステロール、特にコレステロール、エンゴステロール、コプロスタノール、コレステロールエステル、トコフェロールエステルを含有する請求項３〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
前記リポソーム形成脂質が、８０〜９９モル％の中性リン脂質、およびそのホスファチジル部分がグリセロールに連結されている約１〜２０モル％の負に帯電したリン脂質を含む請求項３または１４に記載の使用。
【請求項１８】
前記リポソームが、リポソーム膜形成材料の重量に対して１−１０％のＰＥＧ−ＰＥ誘導体を含む請求項３〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
前記封入システムは直径が２０−５０００ｎｍの範囲である請求項１〜１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
前記キレートが前記リポソーム膜に連結される請求項８〜１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
前記シフト剤が前記封入システムに部分的にのみ封入される請求項２〜１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
前記シフト剤が前記封入システムの親油層に挿入される請求項２〜１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
前記キレートが、最終的にリンカーにより、前記封入システム膜のリン脂質の親油性鎖と結合される請求項８〜２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
前記封入システム構造が特定の標的化に適合される請求項１〜２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
特定の器官または組織への能動的標的化が、それに付着したバイオベクターを有する脂質の取込みによって達成される請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
特定の器官または組織への能動的標的化が、腫瘍関連抗原、レクチン、またはペプチドに対して特異的であるそれに付着したモノクローナル抗体または抗体断片を有する脂質の取込みによって達成される請求項２４に記載の使用。
【請求項２７】
前記リポソームが、脂質シートの脂質の一部の親水性頭部基に付着される標的薬剤を含む請求項３〜２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記リポソームが、親油性基と適切に結合されたバイオベクターを含み、前記封入システム膜への挿入を可能にし、前記バイオベクターが前記リポソームの外面上に少なくとも表示されるようになっている請求項３〜２４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
前記封入システムが、少なくとも標的化バイオベクターおよび最終的にステルス剤、特に
−  血管新生と関連した受容体を標的にするバイオベクター、腫瘍領域を標的にすることができるバイオベクター、メタロプロテアーゼを標的にすることができるバイオベクター
−  次のうちの１つを標的にするバイオベクター：ＶＥＧＦ受容体、フィブリン、インテグリン、特にαｖβ３、ＫＤＲ／Ｆｌｋ−Ｉ受容体、タフトシン、Ｇ−タンパク質受容体ＧＰＣＲ、特にコレシストキニン、アミロイド沈着物、上皮細胞、受容体のうち、ＣＤ３６、ＥＰＡＳ−１、ＡＲＮＴ、ＮＨＥ３、Ｔｉｅ−１、１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｅｋ、ニューロピリン−１、エンドグリン、プレイオトロフィン、エンドシアリン、Ａｘｌ．、ａｌＰｉ、ａ２ｓｓｌ、ａ４ｐ１、ａ５ｐｌ、ｅｐｈ Ｂ４（エフリン）、ラミニンＡ受容体、ニュートロフィリン６５受容体、ＯＢ−ＲＰレプチン受容体、ＣＸＣＲ−４ケモカイン受容体、ＬＨＲＨ、ボンベシン／ＧＲＰ、ガストリン受容体、ＶＩＰ、ＣＣＫ、Ｔｌｎ４
−  次のうちの標的化バイオベクター：フィブリン標的ポリペプチド、インテグリン標的ペプチド、αｖβ３インテグリン標的ペプチド、シアリルルイスのグリコシド、キノロン標的αｖβ３またはαｖβ５、ベンゾジアゼピン標的インテグリン、イミダゾール、ＭＭＰ阻害剤、具体的にはヒドロキサマート、ＲＧＤペプチド、抗体または抗体断片、ＦＧＦＲまたはＶＥＧＦＲ受容体を含む血管新生阻害剤、ＭＭＰを含む血管新生阻害剤、インテグリンを含む血管新生阻害剤、セレクチン結合ペプチド、フィブリノゲン受容体拮抗薬であるペプチド、結腸直腸癌と関連したＳＴ受容体を標的にするペプチド、またはタキキニン受容体、Ｐ−セレクチンと、Ｅ−セレクチンと、ビタミンと、ニトリイミダゾールと、ベンジルグアニジン化合物とを標的にするためのバイオベクター、環状ＲＧＤペプチド、チロシンキナーゼ阻害剤、チオフラビンまたはクリサミンＧの誘導体
を含む請求項１〜２４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
前記造影剤が、異なる標的化部分および金属を有する少なくとも２つの異なる封入システムを含む請求項１〜２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
前記診断組成物が、金属常磁性イオンの第１のキレートを含む封入システムと、金属常磁性イオンの別のキレートを含むリポソームとを含む請求項１〜３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
前記封入システム構造が血液プールイメージングに適合されている請求項１〜２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
ヒトまたは動物の体器官、体液、または体組織における化学物理パラメータのＭＲＩによる測定用の診断組成物の調製のための造影剤の使用であって、前記造影剤が目的とする化学物理パラメータと相関した飽和移動能を有し、かつこの化学物理パラメータのＣＥＳＴ  ＭＲＩイメージが登録される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の造影剤の使用。
【請求項３４】
水溶媒プロトンとの化学交換における移動プロトンのプールを含み、かつ、適切な高周波ｒｆ照射野が前記交換可能なプロトンプールの共振周波数で適用される場合に、前記移動プールのプロトンの少なくとも一部と水プロトンとの間の飽和移動効果を生成することが可能であり、前記飽和移動が目的とする化学物理パラメータに関する、適切な量での少なくとも１つの造影剤の投与を含む化学物理パラメータのＭＲＩによる測定のための診断組成物を調製するための、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の造影剤の使用。
【国際調査報告】
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