(57)【要約】  アテローム性動脈硬化症に対する素因およびアテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性の診断、予知、または同定のための方法について述べられており、前記方法は、複数のTリンパ球の亜集団の頻度割合を決定するために試料を分析することならびに得られたデータを比較データおよび／または対照データと比較することを含んでなる。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アテローム性動脈硬化症に対する素因およびアテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性の診断、予知、または同定のための方法であって、少なくとも2のT-リンパ球の亜集団の頻度割合を決定するために試料を分析すること、ならびに得られたデータを比較データおよび／または対照データと比較することを含んでなる方法。
【請求項２】
前記試料が血液または生検試料である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
請求項1または2に記載の方法であって、少なくとも1の前記Tリンパ球の亜集団が、CD8+/CD11L+/CD45RA+、CD8+/CD11L+/CD45RO+、CD8+CD11a+、CD8+CD62L+、CD8+CD11highRO+ 、およびCD8+CD38+RO+からなる群より選択されるCD8 T細胞の集団である方法。
【請求項４】
請求項1または2に記載の方法であって、少なくとも1の前記Tリンパ球の亜集団が、CD4+/62L+、CD4+CD49d+、CD4+CD25+、CD4+DRII+、CD4+CD44+、およびCD4+CD3+RO+からなる群より選択されるCD4 T細胞の集団である方法。
【請求項５】
請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法であって、少なくとも1の前記Tリンパ球の亜集団がCD8+/CD11L+/CD45RA+、CD8+/CD11L+/CD45RO+、CD8+CD11a+、CD8+CD62L+、CD8+CD11highRO+、およびCD8+CD38+RO+からなる群より選択されるCD8 T細胞の集団であり、他の少なくとも1の前記Tリンパ球の亜集団がCD4+/62L+、CD4+CD49d、CD4+CD25+、CD4+DRII+、CD4+CD44+、およびCD4+CD3+RO+からなる群より選択されるCD4 T細胞の集団である方法。
【請求項６】
請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法であって、さらに、血漿または血清中において、細胞内の1以上の可溶性因子の濃度を決定すること、ならびに得られたデータを比較データおよび対照データと比較することを含んでなる方法。
【請求項７】
請求項6に記載の方法であって、前記可溶性因子が、サイトカインおよびケモカインからなる群より選択される方法。
【請求項８】
請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法であって、さらに、1以上の付加的な下記のステップ(a)および(b)を含み、且つ得られたデータを比較データおよび対照データと比較することを含んでなる方法：
(a)   試料中において活性化サイトカイン、および／またはケモカイン、および／またはインテグリン、および／またはセレクチンを発現している細胞の頻度割合を決定すること；
(b)   細胞活性化の原因となる細胞表面分子の頻度を決定すること。
【請求項９】
請求項7または8に記載の方法であって、前記サイトカインが、インターロイキン-1 (αまたはβ)、インターロイキン-2、インターロイキン-3、インターロイキン-4、インターロイキン-5、インターロイキン-6、インターロイキン-7、インターロイキン-8、インターロイキン-9、インターロイキン-10、インターロイキン-11、インターロイキン-12、インターロイキン-13、インターロイキン-14、インターロイキン-15、インターロイキン-16、インターロイキン-17、インターフェロン-α、インターフェロン-β、インターフェロン-γ、TNF-αおよびTNF-βのような腫瘍壊死因子、線維芽細胞成長因子(FGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、G-CSF、GM-CSF、M-LSFのようなコロニー刺激因子、TGF-βのようなトランスフォーミング成長因子のうちの1以上である方法。
【請求項１０】
前記サイトカインがTNF-α、IL-12、インターフェロン-α、FGF、およびPDGFである、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記ケモカインにCCおよびCXCケモカインが含まれる、請求項7または8に記載の方法。
【請求項１２】
請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法であって、さらに、同じ患者からの試料におけるマクロファージ化学誘導タンパク質1(MCP-1)の濃度を決定する付加的なステップを含んでなる方法。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法であって、さらに、免疫学的パラメーターにおける統計学的変化を決定する付加的なステップを含んでなる方法。
【請求項１４】
前記免疫学的パラメーターがリンパ球の割合である、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法であって、さらに、アテローム性動脈硬化症またはアテローム硬化性プラークの存在または可能性を示している肥厚があるかどうかを決定するために、血管内膜の厚さを評価するステップを含んでなる方法。
【請求項１６】
血管内膜の厚さの評価を超音波検査によって行う、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
データをコンピュータソフトウェアおよび画像診断を用いて解析する、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１８】
血液試料の分析が、単一のチューブにおける全血を標識化することを含んでなる、請求項2に記載の方法。
【請求項１９】
請求項18に記載の方法であって、前記血液試料の分析が、赤血球を溶解するステップおよびフローサイトメトリーを用いて解析するステップをさらに含んでなる方法。
【請求項２０】
請求項18に記載の方法であって、前記血液試料の分析が、さらに、標識された細胞を固相に加えるステップおよび細胞をカウントするために画像分析機器を用いるステップを含んでなる方法。
【請求項２１】
請求項19または20に記載の方法であって、プラーク形成の正確な予測を促進するために、コンピュータソフトウェアを用いて、単一の患者の結果を、健康な個体の結果のデータベースおよび疾患の変動する段階に由来するデータのデータベースと比較する方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、アテローム性動脈硬化症に対するマーカーに関する。さらに詳細に言うと、本発明は、血中に見られる多数のマーカーの同定ならびに診断もしくは予知を助けること、またはアテローム性動脈硬化症に対する素因および特に、アテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性を同定することにおけるそれらの使用に関する。
【０００２】
アテローム性動脈硬化症は、動脈の病理学的なリモデリングであり、先進国において罹患率および死亡率の主要な原因であって；この病態は、心筋梗塞、脳卒中、および末梢血管障害の基礎をなす。アテローム性動脈硬化症は、動脈壁内で起こる慢性的な炎症の異常な形態として考えることができる。多数のデータが、アテローム性動脈硬化症の病因学における炎症の病原的な役割を支持し；炎症は免疫学的な現象である。この記載に対する最も確かな証拠の1つは、脂肪線条、すなわちアテローム性動脈硬化症において最も初期に検出可能な病変が、循環している単球に由来するマクロファージ誘導泡沫状細胞を含むという知見に由来する。Tリンパ球も、アテローム硬化性プラークに存在し、そのほとんどがCD3+CD4+ αβT細胞である。このような細胞は、進行型のヒトの病変において、全てのCD3+ T細胞の約2/3を示し、血管のマクロファージ活性化、血管の活性化および炎症を引き起こすIFNγ、IL-2、TNFαおよびβを分泌する。IFNγは、繊維性のキャップを減少させることにより、プラークの不安定化を起こすと考えられている。CD8+も病変部に存在するが、アテローム性動脈硬化症においてそれらが寄与する役割はあまり明確ではない。
【０００３】
内皮において末梢血中を循環する免疫細胞（単球およびCD4 Tリンパ球）のローリング、接着、および浸潤は、免疫細胞の表面および内皮細胞の表面において発現するタンパク質の2つの主要なファミリーによって調節され：これらのタンパク質ファミリーは、セレクチンおよびインテグリンである。ケモカインまたは化学誘導サイトカインもまた、細胞輸送の調節および炎症部位における免疫細胞の補充において非常に重要である。いくつかのケモカインは、単球の遊走およびマクロファージの分化の強力なメディエータとして作用することができ、ヒトのアテローム硬化性病変部に発現する。特に、マクロファージ化学誘導タンパク質1(MCP-1)およびその特異的受容体CCR2が、アテローム性動脈硬化症の初期の段階に関与していると強く信じられている。
【０００４】
アテローム硬化性プラークの発生における炎症の病原性の役割に対する付加的な支持は、別のサイトカインが優先的に、アテローム硬化性プラークの発生を引き起こすという、本発明者によってなされた知見に由来する（例えば、TH1-様サイトカインは、この生物学的なシナリオにおいては「悪いサイトカイン」であり、それらは、アテローム硬化性プラークの発生を引き起こすかまたは誘発に関与している）。これは、TH1サイトカインがプロトタイプの炎症性サイトカインであると考えた場合に、より明らかになる。アテローム硬化性の病変部に存在するサイトカインおよび他の免疫学的なタンパク質は、CD4 Tリンパ球によって産生されるだけでなく；実際に、線維芽細胞成長因子(FGFs)および血小板由来成長因子(PDGF)は、マクロファージ由来の成長因子であって、アテローム性動脈硬化症の病理学において重要な影響を有することが見出されており、マクロファージ由来のタンパク質である。アテローム硬化性プラークの組成および病変部に見られる細胞の寄与に対する化学的な知識が増加し続ける一方で、アテローム性動脈硬化症の簡単且つ確かな診断法は、特に臨床症状がない場合において、病変部の細胞集団における変化を測定し且つ検出することを臨床実務においては実施できないので、挑戦として残っている。従って、末梢血試料中に検出されうる、予測的および簡便に評価するためのマーカーに対する必要性がある。
【０００５】
本発明者は、アテローム硬化性プラークの免疫病理学および上記で述べた因子の変化、ならびにそれらの特異的受容体が、結果として、末梢血の血液試料および血管組織診において評価することができる複数の細胞集団の特徴における変化を引き起こすことを見出した。使用される基準は：細胞濃度（百分率）、細胞表面マーカーの発現、サイトカイン、ケモカイン、もしくはインテグリンの細胞内濃度であり、単独でまたは他のパラメーターと一緒に用いることによって、アテローム性動脈硬化症の診断もしくは予知を助けること、またはそれに対する素因、特に、アテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性を同定することにおいて有用である。
【０００６】
本発明の1つの目的は、アテローム性動脈硬化症に対する素因の診断、予知、もしくは同定のための方法であって、同定することまたは侵襲性の光学画像技術を使用することの必要性を目的としたプラークの除去のような侵襲性の技術に対する必要性を、除去または減らすための方法を提供することである。
【０００７】
従って、本発明は、アテローム性動脈硬化症に対する素因ならびにアテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性の診断、予知、もしくは同定のための方法であって、Tリンパ球の複数の亜集団の頻度割合を決定するために試料を分析すること、ならびに得られたデータを比較データおよび／または対照データと比較することを含んでなる方法を提供する。
【０００８】
ここで用いられる場合、「複数の」とは、少なくとも2を意味する。
【０００９】
好ましくは、特異的な細胞集合の割合または比が決定される。
【００１０】
都合のいいことには、前記試料は血液または生検試料である。
【００１１】
好ましい実施形態において、前記方法は、特異的Tリンパ球の1以上の亜集団の頻度割合を決定するために試料を分析することならびに得られたデータを比較データおよび／または対照データと比較することを含んでなる。
【００１２】
好ましくは、前記方法は、ここで述べる実験1および2において挙げられている亜集団（表現型）から選択されるTリンパ球の1以上の亜集団の頻度割合を決定することを含んでなる。
【００１３】
特に、前記方法は、CD8+ Tリンパ球の表面に発現する接着、活性化、およびローリングマーカーの決定を含んでなる。これらの細胞は、免疫の細胞アームのエフェクター細胞であるので、また、それらの活性化が、標的細胞の破壊を介して（例えば、肝炎ウイルスに感染した肝細胞の破壊は、CD8 T細胞によって媒介され、疾患の悪化を伴う）または慢性の炎症状態の誘導を介して疾患の発生に対して負の影響を有する可能性があることが既知であるので、本発明者は、これらの細胞に焦点を合わせることは、アテローム性動脈硬化症に対する素因およびアテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性のより正確な決定を可能にするであろうと考えている。
【００１４】
さらに、前記方法は、リンパ球の複数の亜集団の同時の頻度割合を決定することを含んでなる。この提案は、アテローム性動脈硬化症に対する素因ならびにアテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性が多機能性であり、それ故、単一のマーカーの分析によって、そのような素因を正確に予測することは不可能であるという事実に由来する。
【００１５】
それ故、1つの実施形態において、前記方法は、Tリンパ球の複数の亜集団の頻度割合を決定することを含んでなり、ここで、少なくとも1の前記亜集団は、CD8+/CD11L+/CD45RA+、CD8+/CD11L+/CD45RO+、CD8+CD11a+、CD8+CD62L+ 、およびCD8+CD38+RO+の亜集団(表現型)から選択されるCD8+ Tリンパ球の亜集団である。
【００１６】
もう1つの実施形態において、前記方法は、Tリンパ球の複数の亜集団の頻度割合を決定することを含んでなり、ここで、1以上の前記亜集団は、以下の表現型から選択されるCD4+ Tリンパ球の亜集団である：CD4+CD25+、CD4+DRII+、CD4+CD44+、CD4+CD62L+、およびCD4+CD49d+。
【００１７】
好ましい実施形態において、前記方法は、Tリンパ球の複数の亜集団の頻度割合を決定することを含んでなり、ここで、少なくとも1の前記亜集団は、CD8+ Tリンパ球の亜集団であり、少なくとも1の他の前記亜集団は、CD4+ Tリンパ球の亜集団である。好ましくは、CD8+およびCD4+の亜集団は、上記で挙げた表現型から選択される。
【００１８】
特に好ましいCD8+の亜集団は：CD8+/CD11L+/CD45RA+ および CD8+/CD11L+/CD45RO+である。特に好ましいCD4+の亜集団は、CD4+CD62L+ および CD4+CD49d+である。理想的には、1以上の前記CD8+およびCD4+の亜集団のそれぞれは一緒に評価される。
【００１９】
そのようなパネルの決定に導いた生物学的な理由は、以下のように説明される：
・ CD8/CD11L/CD45RA;低い発現密度でCD11（別名 LFA-1α）を発現するポストナイーブ細胞であり、それ故、これらは低いレベルで接着因子CD11を発現する細胞であり；この低い発現は、それらを内皮にあまり固着させない。アテローム性動脈硬化症におけるこれらの細胞の減少は、内皮に対する低い「固着能」を有する循環細胞がより少ないことを意味する。これらの細胞は、中枢のメモリー細胞に似ており、プラーク形成の結果である「ネガティブフィードバック」の適当な効果として末梢に遊走する。
【００２０】
・ CD8+/CD11L+/CD45RO+;これらは、炎症において増大し、エフェクターメモリー細胞の表現型に似ているCD8 T細胞であり；これらの細胞もまた、上皮に対する固着能を減少させ、プラーク形成の結果としての「ネガティブフィードバック」の産物であってよい。
【００２１】
・ CD4/CD62L; CD62Lは、接着因子（別名Lセレクチン）であり、それ故、CD4上に発現する接着マーカーであり、高内皮小静脈(HERV)に対して接着するためおよび血管壁内に侵入するためにこれらの細胞によって利用される。
【００２２】
・ CD4/CD25 および CD8/DRII; CD25は、IL-2に対する受容体であり、その発現は炎症と関連している。DRIIは、活性化に基づいてCD4およびCD8によって発現されるので、本発明者のデータは、アテローム性動脈硬化症に付随する炎症性の状態を確信させる。
【００２３】
・ CD4/CD44 および CD4/CD49d; (cd44、別名M-CAM; CD49d、別名 VLA-4α); CD44およびCD49dは、接着分子であり；理論上、それらはアテローム性動脈硬化症において増加すべきであり；減少はネガティブフィードバック（すなわち、体がアテローム発生の過程を止めようとする方向）に対する二次的なものである可能性がある。
【００２４】
本発明の方法の予測値は、異なるリンパ球の亜集団の分析とアテローム硬化性プラークおよび血管閉塞の発生に関係する他の免疫マーカーに対する試験を追加することによって増大してもよい。複数のマーカーを使用することは、よりよい予測値を用いた疾患の進行の予測を促進し、それ故、適切な治療がより早く開始されるため、患者に対してよりよい結果を提供する。相互に依存する結果がほとんどない日常的な診断とは対照的に、マーカー間の相互依存があるので、複数の免疫の相互関係は強力な予測手段を提供する。
【００２５】
あるいは、さらなる実施形態において、本発明は、上記で述べたように、アテローム性動脈硬化症に対する素因ならびにアテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性の診断、予知、または同定のための方法であって、さらに血漿または血清中において、細胞内の1以上の可溶性因子の濃度を決定すること、ならびに得られたデータを比較データおよび対照データと比較することを含んでなる方法を提供する。好ましくは、前記可溶性因子は、サイトカインおよびケモカインからなる群より選択される。最も好ましくは、前記サイトカインは活性化サイトカインである。
【００２６】
さらなる実施形態において、本発明は上記で述べたように、アテローム性動脈硬化症に対する素因ならびにアテローム硬化性プラークおよび／または血管閉塞の発生に対する感受性の診断、予知、または同定のための方法であって、さらに1以上の付加的な下記のステップ(a)および(b)を含み、且つ得られたデータを比較データおよび対照データと比較することを含んでなる方法を提供する：
(a)   試料中における活性化サイトカイン、および／またはケモカイン、および／またはインテグリン、および／またはセレクチンの頻度割合を決定すること；
(b)   細胞活性化の原因である細胞表面分子の頻度を決定すること。
【００２７】
上記の情報は全て同じ血液試料から得ることが好ましく、加えて、ケモカインおよびサイトカインのデータは血漿または血清から得てもよい。加えて、前記情報は、生検試料から得てもよい。しかしながら、生検試料を摂取する必要性を回避または減らすために、前記方法は血液試料を用いることが好ましい。
【００２８】
好ましいサイトカインには、インターロイキン-1 (αまたはβ)、インターロイキン-2、インターロイキン-3、インターロイキン-4、インターロイキン-5、インターロイキン-6、インターロイキン-7、インターロイキン-8、インターロイキン-9、インターロイキン-10、インターロイキン-11、インターロイキン-12、インターロイキン-13、インターロイキン-14、インターロイキン-15、インターロイキン-16、インターロイキン-17、インターフェロン-α、インターフェロン-β、インターフェロン-γ、TNF-αおよびTNF-βのような腫瘍壊死因子、線維芽細胞成長因子(FGF)、血小板由来成長因子(PDGF)、G-CSF, GM-CSF, M-LSFのようなコロニー刺激因子、ならびにTGF-βのようなトランスフォーミング成長因子が含まれる。これらのうち、TNF-α、IL-12、インターフェロン-α、FGF、およびPDGFが特に好ましい。
【００２９】
好ましいケモカインにはCCおよびCXCケモカインが含まれる。
【００３０】
前記方法には、同じ患者からの試料におけるマクロファージ化学誘導タンパク質1(MCP-1)の濃度を決定する付加的なステップが含まれてよい。
【００３１】
任意に、前記方法は、リンパ球の集合比を含んでよい免疫学的なパラメーターにおける統計学的変化を決定する数学的ステップも含んでよく；例えばCD8+/CD11L+/CD45RA+リンパ球のCD8+/CD11L+/CD45RO+リンパ球に対する比において、これら2つの集合はリンパ球成熟過程の一部である可能性があり、前記比は、それ故、成熟過程が変化したかどうかを決定するための助けとなり得る。
【００３２】
本発明の実施形態は、図を参照して、非限定的な例によって純粋に述べられている。
【００３３】
実験1：T細胞集合は、HIV感染個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血において評価した。性別および年齢が一致する10の健康な対照からのデータも得た。そのデータを表IおよびIIならびに図1に表した。
【００３４】
表I。HIV感染個体であって、実験1においてエコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血における、FACS法による多数の異なるリンパ球亜集団の分析。
【表１】
2008501972.tif 000002
【００３５】
患者（N=15/グループ）は、インビトロの免疫条件で比較され、PIに基づくARVを受けた。
【００３６】
表II。実験1において性別および年齢が一致する健康な対照から得られたデータ。
【表２】
2008501972.tif 000003
【００３７】
実験2：T細胞の集合を、HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血において評価した。そのデータは、表IIIおよび図2に表されている。
【００３８】
本発明者の最初の観察は、HIV感染患者についてなされた。HIVは免疫不全であるため、HIV感染患者において観察されたリンパ球の集合における違いが、HIVに感染していない個体において正確に反映されない可能性がある。従って、本発明者は、他の疾患は有していないが、エコードップラー評価によって測定した場合に内膜肥厚の陽性診断を有する患者およびエコードップラー評価によって確認した場合に健康な対照である患者におけるリンパ球の集合について研究した。
【００３９】
これらのデータをHIV感染患者のものと比較した場合、HIV感染患者において明らかに観察されたように、HIV非感染患者において、リンパ球集合のマーカーのいくつかが同じ方向に変化したことが観察された（すなわち、プラークを発生している患者において、発生していない患者と比較した場合の増加または減少の頻度）。実験1におけるHIV+の患者は、HIV疾患の進行段階にあり、統計学的に循環器疾患のリスクの有意な増加を伴うプロテアーゼ阻害剤を用いて治療されていた。HIV疾患は免疫不全であり、リンパ球マーカーにおける劇的な変化は、進行型の疾患に伴って進行性により大きくなることが予想される。両方の実験のアテローム性動脈硬化症の患者における複数のリンパ球集合における変化の均一性は、免疫不全HIVに感染した集合とHIV非感染患者との間の予想された不一致の観点から、驚くべきものである。従って、これらのデータは、これらのリンパ球集合における変化の、アテローム性動脈硬化症に対するマーカーとしての有用性を確信させる。
【００４０】
実験1の結果（HIV感染患者）および実験2の結果（HIV非感染患者）の間にはいくつかの不一致があるが、これはHIVによって影響されるということが既知のリンパ球集合におけるものである。
【００４１】
プラークが発生した患者であって、HIV感染および非感染の患者の両方で同じ方向の変化が観察されたリンパ球集合は、アテローム性動脈硬化症に対する最も有望な診断マーカーである。しかしながら、どちらの方向でも、患者の集団において観察された変化は、さらなる研究が正当化されることの指標となりうるので、2つの実験において反対方向に変化することが観察されたリンパ球集合もマーカーとして有用であることが主張されてもよいであろう。
【００４２】
興味深いことに、CD86およびCD80を発現している単球の集合は、アテローム性動脈硬化症の患者において減少が見られた。これらの減少は、単球のアテローム硬化性プラークへの遊走の反映である可能性がある。
【００４３】
表IIIaおよびbは、aにおいては、アテローム硬化性プラークを生じた個体（ATHERO1）および健康な対照(HC)である個体の末梢血における多数の異なるリンパ球亜集団の表現型分析を示し、bにおいては、血漿サイトカインのレベルを示している。予想したMCP-1のレベルは、健康な対照と比較してアテローム性動脈硬化症の患者のほうが高いことを述べる。
【表３ａ−１】
2008501972.tif 000004
【表３ａ−２】
2008501972.tif 000005
【表３ｂ】
2008501972.tif 000006
【表４】
2008501972.tif 000007
【００４４】
2008501972.tif 000008
【００４５】
2008501972.tif 000009
【００４６】
好ましくは、アテローム性動脈硬化症またはアテローム硬化性プラークの存在または可能性を示す可能性がある肥厚があるか否かを評価するために、前期方法には、血管内膜の厚さを評価するステップがさらに含まれる。これを達成するために、ドップラー超音波技術を含む超音波診断のような他の非侵襲性の技術が、本発明の方法と組み合わせて用いられることが好ましい。さらに、本発明は、通常の侵襲的な画像診断技術の代替またはそれに加えて用いられてよい。
【００４７】
本発明者は、上記で述べたパラメーターにおける変化、特に、CD8+/CD11L+/CD45RA+、CD8+/CD11L+/CD45RO+、CD8+CD11a+、CD8+CD62L+、CD4+CD3+RO+と共に評価されるCD8+CD38+RO+、CD8+CD11highRO+、CD4+CD62L+、CD4+CD49d+、CD4+CD25+、CD4+DRII+、CD4+CD44+のようなT細胞の集合における変化がプラーク形成を示しているということを示した。本発明による分析によって、プラークが形成されるまたは形成されそうであるという高いリスクが示された場合、これは侵襲的な試験によって確認される。好都合に、本発明による試験は、初めは定期的な間隔で行われ、1以上の指標細胞の集合が観察される頻度が上昇した場合にのみ、侵襲的な試験が行われる。
【００４８】
本発明の方法から得られたデータがコンピュータソフトウェアおよび図形表示を用いて解析されるであろうことは想像される。
【００４９】
細胞を測定するために用いられる方法には：単一のチューブ中の全血を標識化すること；赤血球を溶解すること；およびフローサイトメトリーを用いて解析することが含まれる。あるいは、標識細胞は、固相に加えられてよく、それによって細胞は画像分析機器を用いてカウントされ、データの自動化された出力を提供するためにカストマイズされたソフトウェアが用いられ：出力は、プラーク形成の正確な予測を促進するために、単一の患者の結果を、健康な個体からの結果のデータベースおよび疾患の変動する段階からのデータベースを比較する目的に合わせて作られてよい。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１ａ】HIVに感染した個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の、健康な対照に対する末梢血中のリンパ球亜集団における変化について述べている。
【図１ｂ】HIVに感染した個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の、健康な対照に対する末梢血中のリンパ球亜集団における変化について述べている。
【図１ｃ】HIVに感染した個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の、健康な対照に対する末梢血中のリンパ球亜集団における変化について述べている。
【図１ｄ】HIVに感染した個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の、健康な対照に対する末梢血中のリンパ球亜集団における変化について述べている。
【図１ｅ】HIVに感染した個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の、健康な対照に対する末梢血中のリンパ球亜集団における変化について述べている。
【図１ｆ】HIVに感染した個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合にアテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の、健康な対照に対する末梢血中のリンパ球亜集団における変化について述べている。
【図２ａ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図２ｂ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図２ｃ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図２ｄ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図２ｅ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図２ｆ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図２ｇ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図２ｈ】HIV陰性の個体であって、エコードップラー評価によって測定した場合に、アテローム硬化性プラーク（頚動脈）を発生している(pl+)または発生していない(pl-)個体の末梢血中のT細胞集合における変化について述べている。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図１ｅ】
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【図１ｆ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図２ｅ】
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【図２ｆ】
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【図２ｇ】
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【図２ｈ】
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【国際調査報告】
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