(57)【要約】流体サンプルを移動させるためのサンプルアプリケータは、開口端部および出口端部を有する中空ボアを規定する注射器本体、一端においてピストンを有して中空ボア内に嵌るために効果的であるプランジャーを備える。このプランジャーは、このピストンが中空ボア内に位置する場合に開口端部から延びる第二の端部を備える。この注射器アプリケータは、試薬および濃縮材料および流体染料材料のうちの少なくとも１種をさらに備え、この材料は、ピストンと出口との間に位置する。このサンプルアプリケータの内容物は、このサンプルアプリケータの内部で凍結乾燥される。
2008506930.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
流体サンプルを移動させるためのアプリケータであって、
開口端部および出口を有する中空ボアを規定する、本体；
第一の端部および第二の端部を有するプランジャーであって、該プランジャーは、該中空ボア内に嵌るために効果的であり、該第二の端部は、該第一の端部が該中空ボアの内部に位置する場合に、該開口端部から延びる、プランジャー；ならびに
試薬であって、該第一の端部が該中空ボアの内部にある場合に、該第一の端部と該出口との間に位置する、試薬、
を備える、アプリケータ。
【請求項２】
前記アプリケータが、注射器である、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項３】
前記プランジャーの第一の端部が、ピストンを規定している、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項４】
入口／出口アセンブリをさらに備え、該アセンブリは、前記出口において前記本体に取り付けられている、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項５】
前記出口と前記中空ボアとの間にシールをさらに備える、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項６】
前記試薬が、検出可能なマーカーに連結された抗体、およびルシフェリン／ルシフェラーゼ複合体からなる群より選択される、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項７】
前記マーカーが、重金属または蛍光標識、化学標識、比色標識もしくは放射能標識からなる群より選択される、請求項６に記載のアプリケータ。
【請求項８】
前記アプリケータが、濃縮材料を収容し、そして該濃縮材料が、超吸収性ポリマーである、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項９】
前記超吸収性材料が、ポリアクリレート、セルロース誘導体、Ｆａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００、およびヒドロゲルからなる群より選択される、請求項６に記載のアプリケータ。
【請求項１０】
前記超吸収性材料が、Ｆａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００である、請求項８に記載のアプリケータ。
【請求項１１】
前記超吸収性材料が、カルボキシメチルセルロースである、請求項８に記載のアプリケータ。
【請求項１２】
濃縮材料をさらに備え、該濃縮材料は、前記第一の端部が前記中空ボアの内部に位置する場合に前記第一の端部と前記出口との間に位置する、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項１３】
前記超吸収性材料は、ポリアクリレート、セルロース誘導体、Ｆａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００、およびヒドロゲルからなる群より選択され、そして前記試薬は、検出可能なマーカーに連結した抗体およびルシフェリン／ルシフェラーゼ複合体からなる群より選択される、請求項１２に記載のアプリケータ。
【請求項１４】
アッセイデバイス上のコントロールスポットに結合するために効果的な抗体をさらに備える、請求項６に記載のアプリケータ。
【請求項１５】
前記入口／出口アセンブリは、第一の端部および第二の端部を有し、該第一の端部は、該出口を規定するフランジに結合されており、そして該第二の端部は、流体材料のサンプルを引き込むために、該流体材料の供給源に挿入され得る、請求項４に記載のアプリケータ。
【請求項１６】
前記試薬が、濃縮材料であり、そして該濃縮材料が、超吸収性ポリマーの粒子を含有し；そして
前記入口／出口アセンブリが、第一のチューブを備え、該第一のチューブは、該超吸収性ポリマーの粒子のサイズより小さい内径を有し；そして該入口／出口アセンブリは、第二のチューブを備え、該第二のチューブは、熱収縮性チューブから作製され、そして該第一のチューブを該フランジに結合させ得る、
請求項１５に記載のアプリケータ。
【請求項１７】
前記出口をシールするために前記アプリケータの本体に取り付けられる、キャップをさらに備える、請求項１に記載のアプリケータ。
【請求項１８】
前記キャップが、切り取り線によって前記アプリケータの本体に取り付けられる、請求項１５に記載のアプリケータ。
【請求項１９】
液体サンプル中に存在する分析物を濃縮する方法であって、該方法は、
開口端部および出口を有する中空ボアを規定するアプリケータ本体を備える、アプリケータを提供する工程；
第一の端部および第二の端部を有するプランジャーを提供する工程であって、該プランジャーは、該中空ボア内に嵌るために効果的であり、そして該第二の端部は、該第一の端部が該中空ボアの内部に位置する場合に、該開口端部から延びる、工程；
濃縮材料を提供する工程であって、該濃縮材料は、該第一の端部が該中空ボアの内部に位置する場合に、該第一の端部と該出口との間に位置する、工程；
該液体サンプルの少なくとも一部を該アプリケータに引き込む工程；
該一部を該濃縮材料と混合し、そして該流体を該濃縮材料によって吸収させることによって該一部を濃縮するために充分な時間にわたってインキュベートする工程；ならびに
該一部のある量を該出口に通して排出する工程、
を包含する、方法。
【請求項２０】
前記アプリケータが、注射器である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記プランジャーの第一の端部が、ピストンを規定している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
液体サンプル中に存在する分析物を反応させるための方法であって、該方法は、
開口端部および出口を有する中空ボアを規定するアプリケータ本体を備える、アプリケータを提供する工程；
第一の端部および第二の端部を有するプランジャーを提供する工程であって、該プランジャーは、該中空ボア内に嵌るために効果的であり、そして該第二の端部は、該第一の端部が該中空ボア内に位置する場合に該開口端部から延びる、工程；
濃縮材料であって、該濃縮材料は、該第一の端部が該中空ボア内に位置する場合に、該第一の端部と前記出口との間に位置する、工程；
該液体サンプルの少なくとも一部を、該アプリケータに引き込む工程；
該一部を該試薬と混合し、そして該一部の中の分析物が該試薬と反応するために充分な時間にわたってインキュベートする工程；ならびに
該一部のある量を、該出口に通して排出する工程、
を包含する、方法。
【請求項２３】
前記アプリケータが、注射器である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記プランジャーの第一の端部が、ピストンを規定している、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
得られる分析物−試薬複合体を、固定された特異的結合パートナーと接触させて配置する工程をさらに包含する、請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、流体サンプル中に存在し得る分析物の検出および定量のための、その流体サンプルにおける、調製のためのデバイスおよび方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
毒性細菌、酵母およびカビを含む微生物は、米国だけで年間数百万件の食物に関連する疾病、および９，０００件の死亡の原因となる。汚染された家禽および肉製品は、これらの死亡および疾病の主な原因である。家禽および肉製品に感染する４種の最も一般的な病原体は、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ／ｃｏｌｉ、サルモネラ種、ならびにリステリア種およびＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである。
【０００３】
汚染された供給水もまた、健康を害する。ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｇｅｎｃｙは、供給水中のＥ．ｃｏｌｉのレベルが、健康危機のよい指標であることを決定している。他の一般的な指標は、全大腸菌、糞便大腸菌、糞便連鎖球菌および腸球菌である。
【０００４】
例えば細菌感染およびウイルス感染、ガン、心臓発作および脳卒中のような多くの疾患状態は、特定の状態に関連するマーカーについて血液および組織（間質液、唾液、尿、精液、糞便、遺伝暗号および組織切片を含む）を試験することを介して決定され得る。処置効力の初期かつ迅速な診断および測定は、首尾よい処置を増強することが所望される。
【０００５】
食物および水の中、食物が調製される表面上、ならびに衛生基準を満たさねばならない他の表面上の、微生物（例えば、細菌、ウイルス、真菌もしくは他の感染性生物）および指標の正確な定量および迅速な検出は、差し迫って必要である。患者の微生物のマーカーおよび疾患のマーカーの正確かつ迅速な同定もまた、深刻に必要である。
【０００６】
代表的な試験アッセイにおいて、流体サンプルは、特定の分析物（例えば、抗原）に特異定的な抗体のような試薬と混合される。分析物と試薬との反応は、視覚的に観察され得る変色を生じ得るか、または顕微鏡で観察され得るかもしくは光検出デバイス（例えば、分光光度計）によって検出される、化学発光、生物発光もしくは蛍光の種類を生じ得る。この試薬はまた、分析物に結合する、蛍光標識試薬もしくは他のそのような検出可能標識試薬でもあり得る。この流体サンプルによって拡散されるか、反射されるか、透過されるか、または吸収される放射線照射もまた、この流体サンプル中の分析物の性質および種類の指標であり得る。
【０００７】
一般的に使用されるアッセイ技術において、２種類の抗体が使用され、これらは両方とも分析物に特異的である。１種類の抗体は、固体支持体上に固定化される。他の種類の抗体は、検出可能マーカーとの結合体化によって標識され、そしてサンプルと混合される。第１抗体と試験される物質と第２抗体との間の複合体が形成され、マーカーを固定化する。また、特異的マーカーを同定する標識は、酵素または蛍光マーカーもしくは放射活性マーカーであってもよく、その場合これらが検出され得る。反応成分は、全て、反応の一工程で、１つの反応液中で混合される。例えば、特許文献１を参照。この反応液は、同時に固定化された捕捉抗体に接触し、分析物とマーカー抗体との吸着によって捕捉抗体を固定化することを可能にする。結合反応物の間の競合干渉は、代表的に、試験プロセスの間の不安定性を誘導する。マーカー抗体対分析物の比は、試験液体中に存在しやすい分析物濃度に依存して最適化されるべきである。これらの種類のアッセイは、「サンドイッチ」イムノアッセイとして当該分野で公知であり、代表的に、目的の分析物についての閾値濃度のみを提供し、そして定量的な、陽性もしくは陰性の結果として解読される。
【０００８】
流体サンプルは、分析物粒子の数を確実に検出し得るレベルまで増大するために、多くの場合、濃縮されなければならない。次いで、この流体サンプルは、試薬と混合するために容器（例えば、試験管）に移される。反応した流体サンプルは、分析のためにアッセイデバイスに移されるか、または他の試薬との混合のために別の容器に移される。多くの場合ピペットによって行われるこのような移動は、時間がかかり、労力がかかり、そして流体サンプルと分析を行うヒトとを汚染に曝す。分析物を濃縮し、流体サンプルを移動し、そして流体サンプルを試薬および試験のために必要な他の化合物と混合し、一方で競合干渉を最小化する、より簡便な無菌の方法の需要が存在する。
【特許文献１】米国特許第５，６１０，０７７号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、流体を移動させるための、サンプルを処理および標識するアプリケータデバイスを提供し、このデバイスは、開口端部および出口を有する中空ボアを規定するアプリケータ本体；第一の端部および第二の端部を有するプランジャーであって、このプランジャーは上記中空ボア内に嵌るために効果的であり、その第二の端部は、その第一の端部が上記中空ボアの内部に位置する場合に上記開口端部から延びる、プランジャー；ならびにピストンが上記中空ボアの内部に位置する場合にそのピストンと上記出口との間に位置する試薬、を備える。
【００１０】
本発明の別の局面にしたがって、流体サンプル中に存在する分析物を濃縮するための方法が提供され、この方法は、開口端部および出口を有する中空ボアを規定するアプリケータ本体；一方の端部に第一の端部、および第二の端部を有するプランジャーであって、このプランジャーは上記中空ボア内に嵌るために効果的であり、その第二の端部は、ピストンが上記中空ボアの内部に位置する場合に上記開口端部から延びる、プランジャー；ならびに上記第一の端部が上記中空ボアの内部に位置する場合にその第一の端部と上記出口との間に位置する試薬、を提供する工程；上記分析物および上記試薬を、その分析物とその試薬とが反応するために充分な時間にわたって混合およびインキュベートする工程；ならびに一部の制御量を上記出口を通して排出する工程、を包含する。
【００１１】
本発明の別の局面にしたがって、液体サンプル中に存在する分析物を反応させるための方法が提供され、この方法は、開口端部および出口を有する中空ボアを規定するアプリカータ本体；一方の端部に第一の端部、および第二の端部を有するプランジャーであって、このプランジャーは、上記中空ボア内に嵌るために効果的であり、その第二の端部はピストンが上記中空ボアの内部に位置する場合に上記開口端部から延びる、プランジャー；ならびに上記第一の端部が上記中空ボアの内部に位置する場合にその第一の端部と上記出口との間に位置する試薬、を提供する工程；上記分析物および上記試薬を、その分析物とその試薬とが反応するために充分な時間にわたって混合およびインキュベートする工程；ならびに一部の制御量を上記出口を通して排出する工程、を包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
サンプルアプリケータ１０が、図１に示される。サンプルアプリケータ１０は、アプリケータ本体を備え、この本体は、好ましくは、注射器本体１２であり、そして好ましくは、形状が円筒形である。注射器本体１２は、第一の端部６２および第二の端部６４を有する。注射器本体１２は、第一の開口端部１６を有する中空ボア１４を規定する。プランジャー１８は、第一の端部（好ましくは、その第一の端部において、ボア１４の内部でピストン２０を規定する）および第二の端部２１（ボア１４の第一の開口端部１６から延びる）を有する。第二の端部２１は、好ましくは、使用者による係合のために、広くされる。注射器本体１２は、注射器本体１２の第二の端部６４において、出口２２を規定する。フランジ２４は、好ましくは、注射器本体１２の第二の端部６４に取り付けられる。フランジ２４は、好ましくは、円筒形である。このフランジは、出口２６を規定し、この出口は、注射器本体１２の出口２２と流体連絡する。フランジ２４の外側表面は、ルアーロックまたはテーパの形状を有し得る。試薬４３、および好ましくは、流体サンプルの分析を容易にするための濃縮材料４５が、プランジャー２０と出口２２との間に提供される。濃縮材料４５は、好ましくは、超吸収性ポリマー粒子である。これらの試薬は、好ましくは、与えられる分析物に対して特異的な、モノクローナル抗体である。最も好ましくは、これらの試薬は、サンプル流体との混合の際に迅速に再構築される、凍結乾燥されたモノクローナル抗体である。これらの試薬はまた、凍結していても、液体形態であっても、ペレットにフリーズドライされていても、注射器本体１２の内側表面上で乾燥していてもよい。
【００１３】
体積指標目盛線４７、４９が、好ましくは、使用を容易にするために、提供される。１ｍｌの注射器本体について、例えば、第一の体積線４７は、供給源から２００ｍｌ引き込むことに対応し得、そして第二の体積線４９は、注射器ボア１４内にさらに１００ｍｌ〜１５０ｍｌ引き込むことに対応し得る。
【００１４】
注射器アプリケータ１０は、好ましくは、円筒形の入口／出口アセンブリ２５を備え、このアセンブリは、上部領域８０および下部領域８２を備える。上部部分８０の内径は、下部部分８２の外径とおよそ同じであるか、またはわずかに大きい。上部領域８０は、注射器本体１２の第二の端部６４に結合された、第一の端部４６を有する。下部領域は、流体サンプルを受けるための端部４８を有する。入口／出口アセンブリ２５は、端部４８において、サンプル流体の通過のための開口部４２を規定する。入口／出口アセンブリ２５は、フランジ２４から供給源までの距離を延び、注射器本体１２の使用を容易にするため、およびこの注射器本体１２をこの供給源に挿入することを回避するために、提供される。この注射器本体の表面の流体サンプルは、使用者および周囲のものを汚染し得る。
【００１５】
入口／出口アセンブリ２５の長さＬは、少なくとも約２ｃｍのものが好ましく、３ｃｍがより好ましい。好ましい範囲は、約２ｃｍ〜約７ｃｍである。入口／出口アセンブリ２５の構成は、注射器アプリケータ１０を使用して実施されるべき用途に従って、変動し得る。
【００１６】
キャップ３０が、好ましくは、入口／出口アセンブリ２５の下部部分８２の端部４８に取り付けられ、これによって、開口部４２を覆い、そして注射器アプリケータ１０をシールして、使用前の汚染を防止する。キャップ３０は、好ましくは、外向きにテーパ状の第一の円錐形状の円筒形状セクションおよび平坦な先端部７６を有する。キャップ３０は、好ましくは、切り取り線７０によって、入り口／出口アセンブリ２５に取り付けられる。したがって、このキャップは、入り口／出口アセンブリ２５からちぎり取られなければならない。取り付けられた無傷のキャップは、注射器アプリケータ１０が使用されていないことを示す。キャップ３０は、下部領域８２に、流体密に嵌って係合するように適合される。キャップ３０は、好ましくは、剛性の成型プラスチック（例えば、ポリスチレン、アクリルまたはポリプロピレン）である。半剛性材料もまた、代替の実施形態において使用され得る。
【００１７】
本発明のサンプルアプリケータ１０を使用するためには、キャップ３０は、入口／出口アセンブリ２５の下部領域８２から切り離され、そして流体サンプルが、流体供給源から引き込まれる。この流体供給源は、単数または複数の培養培地であり得、この流体サンプル中の分析物の濃度および供給源マトリックスの性質に依存する。例えば、この供給源が食物サンプルである場合、代表的に、培養が必要とされる。この供給源が排泄物である場合、培養は、必要ではないかもしれない。下部領域８２は、この供給源に挿入され、そしてプランジャー１８が引き込まれて、流体サンプルを、この供給源から入口／出口アセンブリ２５を通して、注射器本体１２のボア１４内へと引き込まれる。例えば、約３００μｌ〜３５０μｌが、適切な量である。体積線４７および４９が提供される場合、第一の体積４７は、好ましくは、プランジャー１８が第一の体積線４７まで引き込まれる場合に適切な量の流体サンプルが注射器アプリケータ内に引き込まれるように、位置する。次いで、サンプルアプリケータ１０は、この供給源から取り出され、そしてプランジャー１８は、好ましくは、第二の体積線４９まで、さらに引き込まれる。キャップ３０は、入口／出口アセンブリ２５を覆って配置され、注射器本体１２をキャップし、そしてこの注射器本体の内部の流体をシールする。次いで、注射器アプリケータ１０は、数回反転されて、試薬４３を再構成し、そしてこの試薬を流体サンプルと充分に混合する。濃縮材料４５が存在する場合、この流体サンプルは、約２０分間インキュベートされる。濃縮材料４５が存在しない場合、これらの試薬（代表的に、凍結乾燥された抗体である）を再構築するために、約５分間のインキュベーションで充分であり、これによって、水和されて結合されたばかりのマーカーのみが、分析物と、制御された様式で特異的に反応することを可能にし、これによって、妨害を防止し、そして過剰の利用可能なマーカー抗体（捕捉抗体と同じ固体支持体に同様に固定された構成アレイを標識するために必要とされる）を維持する。充分なインキュベーション後、キャップ３０は取り外され、そしてプランジャーが進められて、充分な量の流体サンプルを、ボア１４から入口／出口アセンブリ２５を通して、分析のためのアッセイデバイス内へと排出される。アッセイデバイスに移動される代わりに、この流体サンプルは、別の位置（例えば、他の試薬との反応のための別の容器内）に移動され得る。
【００１８】
濃縮材料４５のみが注射器本体１２内に提供される場合、この流体サンプルは、試薬との反応のために、反応チャンバ内へと移動され得る。試薬が反応チャンバ内に存在する場合でさえも、さらなる試薬との反応が必要とされ得る。
【００１９】
一旦サンプルアプリケータ１０内の試薬に曝露された流体サンプルは、分析物の存在について分析されるために、アッセイデバイスに移動され得る。この分析物は、微生物（例えば、細菌、ウイルスまたは真菌）であり得る。この分析物はまた、生物学的物質（例えば、ペプチド、アミノ酸、核酸、またはタンパク質（例えば、酵素、抗体、抗原、免疫グロブリンもしくはホルモン）であり得る。この分析物はまた、化学物質（例えば、化学元素、化合物、またはポリマー）であり得る。
【００２０】
この流体サンプルはまた、反応容器に移動され得る。流体サンプルの供給源は、例えば、疑わしい食物、水または排泄物質を含有する培養培地であり得る。この供給源はまた、培養されないかもしれない。サンプルアプリケータ１０は、流体サンプル中の分析物と反応するための試薬、およびこの分析物の同定を可能にするための試薬を収容する。これらの試薬は、当該分野において公知であるように、例えば、蛍光標識、化学標識、比色標識または放射能標識で標識され得る。この標識はまた、ラテックスビーズ、金属コロイド粒子、染料、酵素またはＳｔｏｋｅ効果変換器であり得る。他の型の試薬もまた、当該分野において公知であるように、使用され得る。
【００２１】
上記分析物が存在し上記試薬が抗体である場合、試薬抗体は分析物に結合し、その分析物を検出可能なマーカーで標識する。次いで、流体サンプルおよび標識された分析物は、分析用の適切なアッセイデバイスに移され得る。好ましいアッセイデバイスは、米国特許出願公開番号第２００２００１９０６２号（発明の名称「ＡｓｓａｙＤｅｖｉｃｅｓ」）（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）に開示されている。
【００２２】
１つの適用において、上記分析物は、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７である。サンプルアプリケータは、例えば、Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓａｃｏ，Ｍａｒｉｎｅ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能な凍結乾燥モノクローナルマウス−抗−Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７抗体を含む。抗体は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｈｉｏ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能なＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光色素と予め結合され得る。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓはまた、抗体を色素に結合させるためのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ａ−２０１７３）を提供する。標識された抗体は、好ましくは、当該分野であるように凍結乾燥される。あるいは、凍結した標識された抗体が使用され得る。別の代替において、液体懸濁液中の標識された抗体のアリコートは、注射器本体に引き込まれるかまたは他の場合には注射器本体の内部に配置され得、サンプルアプリケータ１０は、その懸濁液を凍結させるために冷凍庫に配置され得る。サンプルアプリケータ１０は、冷凍庫から取り出した後に使用され得る。
【００２３】
別の例において、試薬は、サンプルの生物学的汚染の存在の指標としてＡＴＰを検出するために、ルシフェリン／ルシフェラーゼ複合体であり得る。ＡＴＰは、酸素およびマグネシウムイオン（Ｍｇ２＋）の存在下で、ルシフェリン／ルシフェラーゼ複合体と反応して、５６２ナノメートルの波長の可視光を生成する。すべての生細胞はＡＴＰを含むので、５６２ナノメートルの光の検出は、生細胞の存在を示す。ルシフェリン／ルシフェラーゼは、一般に、ホタルから抽出される。ルシフェラーゼ／ルシフェリン試薬は市販されている。例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｕ．Ｓ．Ａから入手可能なアデノシン５’三リン酸（ＡＴＰ）生物発光アッセイキット（ＦＬ−ＡＡＭ）が使用され得る。ＦＬ−ＡＡＭは、トリシン緩衝液中のホタルルシフェラーゼ、ルシフェリン、ＭｇＳＯ４、ＥＤＴＡ、ジチオトレイトール（「ＤＴＴ」）およびウシ血清アルブミン（「ＢＳＡ」）を含む凍結乾燥された粉末である。試薬を混合した後、流体サンプルは、反応から生じる発酵種の検出のための適切なアッセイデバイスに移され得る。例えば、光電子増倍管を備えるデバイスが使用され得る。
【００２４】
標識された抗体または分析物に特有の他のそのような試薬に加えて、第二の型の標識された抗体または他のそのような試薬が、アッセイデバイスのコントロールスポットに特有に提供され得る。アッセイデバイスへの流体サンプルの適用は、コントロールスポットに結合する第二の型の抗体を生じる。これは、分析物の検出のために流体サンプル中に存在する分析物が不十分である場合でさえ、そのアッセイデバイスが使用されることを示す徴候を提供する。
【００２５】
標識された抗体または分析物に特有の他のそのような試薬および第二の型の標識された抗体または他のそのような試薬に加えて、流体色素が予め凍結乾燥された混合物に添加されて、染色された流体サンプルの存在および染色された流体サンプルの別の容器もしくはアッセイデバイスへの成功した移動が確認され得る。代表的な色素は、ブロモフェノールブルー（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ  ６３１７８）である。
【００２６】
濃縮材料４５は、流体サンプルから液体を吸収し、流体サンプル中の分析物（例えば、細菌）の濃度を増加させる。濃縮材料は、流体を吸収し、流体サンプル中の分析物とは反応しない任意の材料であり得る。例えば、超吸収性ポリマー（例えば、ポリアクリラート、セルロース誘導体およびヒドロゲル）が好ましい。超吸収性ポリマーは、Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ８，Ｌｉｓａ  Ｂｒａｎｎｏｎ−ＰｅｐｐｅｓおよびＲｏｎａｌｄ  Ｓ．Ｈａｒｌａｎｄ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９０（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）で議論されている。適切な市販の超吸収性ポリマーは、Ｓｔｏｃｋａｕｓｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｇｒｅｅｎｓｂｏｒｏｕｇｈ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎｅ，Ｕ．Ｓ．Ａ製のＦａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００である。Ｆａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００は、架橋されたポリアクリル酸とグラフトコポリマーの塩であると言われている。製造業者によると、このポリマーのカルボン酸基は、水または水ベースの液体と接触されたときに溶媒和する。結果として、この基は部分的に、負に荷電したカルボン酸イオンに解離する。この状態では、ポリマー鎖は、多数の同様に荷電した互いに反発するイオン性基を含む。このポリマーコイルはより嵩高くなり、それゆえ、液体を吸収するその性向が拡大する。ポリマー鎖間の架橋に起因して、ゲルが形成される。水は、水素結合によってそのゲルに強力に結合される。製造業者によって提供されるように、Ｆａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００の物理的性質は、以下である：
物理的形状                                白色の顆粒
粒径                                      １００ミクロン〜８５０ミクロン
製品密度                                  ５４０ｇ／＋／−３０
ふるい特性                                自由に流動する
含水量                                    ５％＋／−２
ｐＨ値（０．９％  ＮａＣｌ中の１％ゲル）  ６．０＋／−０．５
保管                                      乾燥条件下で１年より長期間。
【００２７】
３０ミリグラムのＦａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００が、分析物濃度を３倍に増加させるために、約３００マイクロリットル〜３５０マイクロリットルの流体サンプルとともに使用するのに適切な量のＦａｖｏｒ（登録商標）−Ｐａｃ  １００であることが見出されている。過度の濃度（例えば、１０倍またはそれ以上）は、一般的に、望ましくない。濃縮材料が凍結乾燥された抗体とともに提供される場合、流体とともに濃縮材料によって吸収され得る抗体、およびサンプル中の初期の高レベルの流体を補うために、さらなる抗体が追加されることが望ましくあり得る。上記のように、超吸収性ポリマー粒子は、好ましくは約０．８０ミリメートルよりも大きいサイズを有する。より小さい粒子は、機械的分離プロセス（例えば、ふるい）を用いて除去され得る。超吸収性ポリマーの別の例は、カルボキシメチルセルロースである。
【００２８】
検出システムの感度および流体サンプル中の分析物濃度によっては、流体サンプルの濃縮が必要とされない可能性がある。
【００２９】
濃縮材料４５は、試薬を伴わずに提供され得る。例えば、濃縮は有利であり得るが、その後に分析物を標識することが望ましくあり得る。分析物は、例えば、アッセイデバイス中で標識され得る。いくつかの適用において、標識する前に流体サンプルを濃縮する必要がある。
【００３０】
本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されることを意図されない。本発明は、例示目的のために詳細に記載されているが、本明細書に記載されるものに加えて、開示されるような本発明の種々の改変が上記の説明のために当業者に明らかとなる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、本発明のサンプルアプリケータの正面斜視図である。
【図２】図２は、図１の線２−２に沿ったサンプルアプリケータの断面図である。
【図３】図３は、サンプルアプリケータから取り外された本発明のキャップの斜視図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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