(57)【要約】  Ｔ細胞リンパ腫を患っている患者に、薬学的に有効な量の１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンを投与することにより、Ｔ細胞リンパ腫を治療した。ヒト患者では、薬物抵抗性Ｔ細胞リンパ腫を患っている場合でさえも、３０ｍｇ／ｍ２の低い１週間の投与量での寛解が観察された。一般的に、１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンは、１用量当たり３０から２７５ｍｇ／ｍ２の量で投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ細胞リンパ腫の治療用薬剤の製剤における、１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンの使用。
【請求項２】
１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンが、１０−デアザアミノプテリンを実質的に含んでいない請求項１に記載の使用。
【請求項３】
薬剤が、１用量当たり１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンを３０から２７５ｍｇ／ｍ２の量で投与するように製剤される請求項１又は２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、参照により本明細書に組み込まれる、２００４年５月３０日に出願した米国仮出願第６０／５２１，５９３号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本願は、１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンの組合せ、及びＴ細胞リンパ腫の治療における使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリン（「ＰＤＸ」又は「１０−プロパルギル−１０ｄＡＭ」）は、腫瘍の治療において試験され、あるケースで有用であることが見出されている大きなクラスの化合物の１員である。この化合物は、図１に示す構造式を有し、ＤｅＧｒａｗら、「１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンの合成及び抗腫瘍活性」、Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍ．３６、２２２８〜２２３１頁（１９９３年）によって開示され、マウスＬ１２１０細胞系における成長阻害剤として、より少ない程度に酵素ジヒドロ葉酸還元酵素（「ＤＨＦＲ」）の阻害剤として、作用することが示されている。加えて、Ｅ０７７１マウス乳房腫瘍モデルを用いた、この化合物の抗腫瘍特性に関する幾つかの結果が提出されている。試験に用いられたマウスが少数であること（投与量当たり３匹）、データの信頼性を定量化する標準偏差情報が無いこと、及び最高投与量が実際にはマウスに有害であったという事実のために、このデータは不確かである。いずれにせよ、このデータが、ヒト腫瘍の治療における薬物の有効性に関する予見的価値をいくらか有するとしても、同レベルの耐性において、メトトレキサートに匹敵しうるか、又はやや良好な特性を有する薬物をせいぜい予測するに過ぎない。
【０００４】
ＰＣＴ公報第ＷＯ０９８／０２１６３は、より高度に精製されたＰＤＸ組成物が、ヒト腫瘍に対するこれらの有効性を異種移植モデルにおいて試験した時に、メトトレキサート（「ＭＴＸ」）よりもはるかに優れており、より最近の臨床候補であるエダトレキサート（「ＥＴＸ」）に対してさえより優れていることを示した、という驚くべき観察結果を開示している。さらに、１０−プロパルギル−１０ｄＡＭは、腫瘍を治癒した結果、治療中断後の数週間にわたって腫瘍増殖の徴候が認められないという驚くべき能力を示した。よって、１０−プロパルギル−１０ｄＡＭを含有する高度に精製された組成物は、本発明に従って、固形腫瘍及び白血病のいずれをも含む腫瘍を治療するのに用いることができる。この組成物は、ヒト乳房腫瘍及びヒト肺癌の治療における使用が例証されている。
【０００５】
ＰＤＸに関するその後の試験により、これが、単独でも、また他の治療薬と組合せても、有用であることが示されている。例えば、Ｓｉｒｏｔｎａｋら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｖｏｌ．６、３７０５〜３７１２頁（２０００年）は、ＰＤＸと、ｃＭＯＡＴ／ＭＲＰ様原形質膜ＡＴＰアーゼの阻害剤であるプロベネシドとの同時投与が、生体内でのヒト固形腫瘍に対するＰＤＸの有効性を非常に高めることを報告している。ＰＤＸ、及びＰＤＸと白金を用いた化学療法薬（ｐｌａｔｉｎｕｍ  ｂａｓｅｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ）との組合せは、中皮腫に対して有効であることが示されている（Ｋｈｏｋａｒら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７、３１９９〜３２０５頁（２００１年））。
【０００６】
「リンパ腫」の語は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；濾胞性リンパ腫（ＦＬ）；ホジキン病；バーキットリンパ腫；皮膚Ｔ細胞性リンパ腫；中枢神経系原発リンパ腫、及びリンパ腫様転移を含む、様々な病状をいう。殆どの場合、リンパ腫は癌性Ｂ細胞の存在を特徴とする。しかしながら、Ｔ細胞リンパ腫では、病状は癌性Ｔリンパ球によって特徴づけられる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明によれば、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫は、ＰＤＸを用いて治療される。よって、本発明の一態様によれば、リンパ腫を患っている患者への、治療上有効な量のＰＤＸの投与を含む、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫の治療のための方法が提供される。ヒトにおける予備的な臨床結果は、この治療が特に有効であり、他の治療方法では難治性であるリンパ腫に対してさえも有効であることを示している。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本出願は、Ｔ細胞リンパ腫の治療における、１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンの使用に関する。
【０００９】
Ｔ細胞リンパ腫は、患者のＴ細胞が癌性であると判定されたリンパ腫である。Ｔ細胞リンパ腫は以下のものを含むが、これらに限定されず様々な状態を包含する：
（ａ）胸腺からの原始的リンパ性前駆細胞に悪性腫瘍が生じる、リンパ芽球性リンパ腫；
（ｂ）Ｔ細胞前リンパ球性白血病、Ｔ細胞顆粒リンパ球性白血病、活動性ＮＫ細胞白血病、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（菌状息肉腫セザリー症候群）、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ細胞型、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、ＨＴＬＶ−１に関連するものを含む成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、及び血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、及び皮下脂肪織炎性Ｔ細胞リンパ腫を含む、成熟又は末梢Ｔ細胞新生物；並びに
（ｃ）最初にリンパ節副皮質を冒し、真の濾胞状パターンに成長することのない、末梢Ｔ細胞リンパ腫。
【００１０】
本発明の実施形態の１つにおいては、組成物は「高度に精製された」ＰＤＸを含む。本明細書と本明細書の請求の範囲に用いる際、「高度に精製された」組成物とは、ＰＤＸの抗腫瘍活性を妨害する可能性のある他の葉酸誘導体、特に１０−デアザアミノプテリン、を実質的に含まずにＰＤＸを含有する。本発明の範囲内の組成物は、ＰＤＸを治療用の適当な投与単位形態に製剤化するための担体又は賦形剤、並びにさらなる非葉酸治療薬を含んでいてもよい。
【００１１】
ＰＤＸは、上記のＤｅＧｒａｗの論文、又は参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，３５４，７５１号の実施例７に開示された方法を用いて合成することができる。この方法によって調製された生成物のＨＰＬＣ評価は、実質的な量（〜４．６％）の不純物Ａの存在を示し（図２）、この不純物は１０−デアザアミノプテリンと一致する保持時間を有する。よって、この合成アプローチを採用するならば、ＤｅＧｒａｗらの論文に開示されている方法を超えるさらなる精製が必要である。このような精製を付加的なＨＰＬＣ又は結晶化によって実施することができ、これにより存在しているかもしれない１０−デアザアミノプテリンと他の葉酸誘導体とを除去することができる。
【００１２】
図３は、実施例１に記載した方法を用いて調製された、本質的に本発明による１０−プロパルギル−１０ｄＡＭからなる、高度に精製された製剤のＨＰＬＣを示す。この場合においては、ＰＤＸの量（ＨＰＬＣピーク面積によって測定される）は９８％に近く、該当エリアに小さい基線の波が存在するものの、１０−デアザアミノプテリンに対応するピークは処理ソフトウェアによっては検出されない。
【００１３】
ＰＤＸは、薬物抵抗性Ｔ細胞リンパ腫を患っている３人を含む、活動型リンパ腫を患っている患者が参加した、第１相／第２相試験に用いられている。以下のケースサマリーが得られている。これらの患者は、それぞれ、葉酸（毎日１ｍｇ／ｍ２を、ＰＤＸを用いた治療の１週間前に開始）とＢ１２（毎月１ｍｇ／ｍ２）の補給を伴う治療も受けていた。
【００１４】
患者１
診断：          末梢Ｔ細胞リンパ腫、ステージＩＶ
人口統計：      ４８歳男性
前治療：        ＣＨＯＰ×４サイクル（２００２年７月〜２００２年１１月）−難治性
ＩＣＥ×２サイクル（２００２年１２月）−難治性
キャンパス（２００３年３月〜２００３年６月）−複合反応
治療前病期診断：広範な疾患、皮膚疾患
試験対象の治療：ＰＤＸ  １３５ｍｇ／ｍ２×１投与
毒性：          グレード３の口内炎；グレード３の好中球減少症；敗血症
反応：          ＰＥＴスキャンによる本質的に完全な寛解
コメント：      この患者は最終的には、グラム陽性菌による皮膚外傷開口部からの菌血症と敗血症を発症した後に死亡した。
【００１５】
患者２
診断：          リンパ芽球性リンパ腫、Ｔ細胞前駆体、ステージＩＶ
人口統計：      ６５歳女性
前治療：        ２００２年５月よりＬ−２０複合体併用化学治療が行われ、２年間にわたって投与された。２００２年５月から２００４年２月までＭＴＸを受けた。２００４年１２月に再発した。
治療前病期診断：広範囲に広がる再発
試験対象の治療：ＰＤＸ  ３０ｍｇ／ｍ２×３週間、４週間毎。これまでに３サイクルを完了
毒性：          なし
反応：          ＰＥＴ及びＣＴスキャンによる完全な寛解
コメント：      広範囲の洞に起因する疾患を伴う、本質的にメトトキサレート抵抗性の疾患を患っている患者であるが、ＰＤＸを１投与後に解消し始めた。
【００１６】
患者３
診断：          Ｔ細胞リンパ腫に関連するＨＴＬＶ
人口統計：      ３８歳男性
前治療：        ＥＰＯＣＨ−注入投与併用化学治療  ２００３年１０月から２００４年２月
治療前病期診断：左腋窩疾患
試験対象の治療：ＰＤＸ  毎週３０ｍｇ／ｍ２×３を４週間毎×２サイクル
毒性：          なし
反応：          完全な寛解
コメント：      最初のサイクル完了までに臨床的に明白な疾患は完全に消滅、非常に良好に耐容され、毒性なし。
【００１７】
患者４
診断：          脂肪織炎性Ｔ細胞リンパ腫
人口統計：      ２５歳男性
前治療：        Ｏｎｔａｋ（難治性）、２００２年９月〜２００２年１１月；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ及びＩＦＮα  ２００３年１月〜２００３年１０月（永続的な部分的寛解）；ＣＨＯＰ  ２００４年４月〜２００４年６月；ＩＣＥ  ２００４年６月、ＣｙＰｅｎ  ２００４年７月〜２００４年８月、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ／ＭＴＸ  ２００４年９月から２００５年２月。
試験対象の治療：ＰＤＸ  毎週３０ｍｇ／ｍ２×４
反応：          ＰＥＴによる臨床的に完全な寛解
毒性：          なし
コメント：      皮下傷治癒、多数のためカウント不可、大きな潰瘍性肉芽傷
【００１８】
これまでにＴ細胞リンパ腫を患っているたった４人の患者しかＰＤＸによる治療を受けていないが、４人全員が、高感度のＰＥＴ画像技術に基づいてさえも、完全な寛解の基準を満たしている。興味深いことに、１３５ｍｇ／ｍ２の治療を受けた患者はただ一度の薬物投与だけで劇的な治療反応を示している一方、他の患者は週毎のスケジュールで少量の投与のみを受けたに過ぎなかった。
【００１９】
本発明における使用のため、ＰＤＸは製剤の一部として有利に製剤化される。具体的な投与形態は投与方法に依存すると思われるが、錠剤、カプセル、経口液体、及び静脈内、筋肉内若しくは腹腔内投与のための注射可能な溶液を包含しうる。適切な投与スケジュールの１つは、２週間毎に１５０ｍｇ／ｍ２の投与を含む。個々の患者の耐容性によっては、又はより頻繁な投与が適用される場合には、勿論より低いレベルが示されることもある。例えば、約４０から１２０ｍｇ／体表面積ｍ２／日のレベルが適当である。毎週３０ｍｇ／ｍ２で３週間投与した後に１週間の休み、毎週３０ｍｇ／ｍ２×６週間の後に１週間の休み、又は週毎のＰＤＸ投与量を徐々に増加×６週間のスケジュールもまた、適当である。投与頻度がより低い場合には、より高いレベルを用いることができる。よって、一般的な意味では、様々な投与スケジュールで３０から２７５ｍｇ／ｍ２の投与量を適切に用いることができ、例えば隔週の投与では１３５から２７５ｍｇ／ｍ２を、毎週投与では３０から１５０ｍｇ／ｍ２を適切に用いることができる。参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第６，３２３，２０５号に記載されているものと類似のプロトコルを用いた適切な投与量の決定は、従来技術の範囲内である。
【００２０】
ＰＤＸは、例えばビンブラスチン、ナベルビン及びビンデシンのようなビンカアルカロイド；例えばゲムシタビン、５−フルオロウラシル及びシタラビンのようなプロベニシド、ヌクレオチド類似物；例えばシクロホスファミド又はイホスファミドのようなアルキル化剤；シスプラチン又はカルボプラチン；ロイコボリン；例えばパクリタキセル又はドセタキセルのようなタキサン；放射性同位体を含む又は含まない抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、並びに、ドキソルビシン及びマイトマイシンのような抗生物質を含む、他の細胞毒性及び抗腫瘍性化合物と組合せて用いてもよい。ＰＤＸと、これらの他の抗腫瘍剤の幾つか、又は増殖因子阻害剤及び血管新生阻害剤との組合せを用いてもよい。
【００２１】
ＰＤＸと他の薬剤とは、同時に投与してもよく、ＰＤＸと他の薬剤が異なる時に投与されるような一般的な治療レジメンの一部として組合せて利用してもよい。例えば、ＰＤＸの投与に対して、その前、直後、又は一定期間（例えば２４時間）後に、他の薬剤を投与してもよい。よって、本出願の目的のために、他に特定しない限り、投与という用語は一般に、薬物の同時投与又は連続投与を意味し、並行治療レジメンにおける順序は何れであっても、薬物間の時間差はあってもなくてもよい。
【００２２】
ＰＤＸは、治療の副作用を減らすために、葉酸及びビタミンＢ１２補給と組合せて適切に用いることができる。例えば、葉酸（１日当たり１ｍｇ／ｍ２を、ＰＤＸを用いた治療に１週間先行して開始）及びＢ１２（１月当たり１ｍｇ／ｍ２）を用いて患者を治療してもよい。
【実施例】
【００２３】
（実施例１）
図４は、本発明による１０−プロパルギル−１０ｄＡＭの調製に有用な合成スキームを示す。１８ｍｌのシーブ乾燥ＴＨＦ中の油分散液における６０％ＮａＨ（１．０６ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の混合物を０℃に冷却した。この低温混合物を、乾燥ＴＨＦ（７ｍＬ）中のホモテレフタル酸ジメチルエステル（５．０ｇ、２４ｍｍｏｌ、図４における化合物１）の溶液で処理し、この混合物を０℃で１時間撹拌した。臭化プロパルギル（２６．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃においてさらに１時間、次いで室温において１６時間撹拌した。生じた混合物を２．４ｍＬの５０％酢酸で処理し、次いで２４０ｍＬの水中に注いだ。この混合物を、エーテル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。このエーテル抽出物を混合し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、橙黄色油状物になるまで濃縮した。シクロヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８：１）によって溶離させるシリカゲル（６００ｍｌの２３０〜４００メッシュ）上でのクロマトグラフィにより、生成物α−プロパルギルホモテレフタル酸ジメチルエステル（化合物２）が白色固体（４．６６）として得られ、これはＴＬＣ（シクロヘキサン−ＥｔＯＡｃ、３：１）によって均質であるように見受けられた。しかしながら、この生成物の質量スペクトルデータは、これが、目的生成物２とジプロパルギル化化合物との混合物であることを示した。出発物質１は検出されなかった。ＨＰＬＣは、モノプロパルギル化生成物のジプロパルギル化生成物に対する比率が約３：１であることを示している。化合物１とは異なり、ジプロパルギル化生成物は次の工程の反応において好ましくない副産物を生成する可能性がないため、この物質は化合物３への変換のために適切であった。合成を進行させるために用いられる生成物中に出発化合物１が存在しないことは、最終生成物を生じる変換中の１０−ｄＡＭの逐次形成を避けるために非常に重要であるが、これは１０−プロパルギル−１−ｄＡＭから１０−ｄＡＭを完全に除去することが非常に困難であるからである。
【００２４】
油分散液における０．３６ｇの６０％ＮａＨ（９ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの乾燥ＤＭＦと混合して混合物を形成し、０〜５℃に冷却した。この低温混合物を、１０ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の第１反応の生成物（化合物２）（２．９４ｇ、１２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して処理し、次いで０℃で３０分間撹拌した。−２５℃に冷却した後に、温度を−２５℃付近に維持しながら、１０ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の２，４，ジアミノ−６−（ブロモメチル）−プテリジン臭化水素酸塩０．２  ２−プロパノール（１．００ｇ、２．９ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。撹拌混合物の温度を、２時間にわたって−１０℃まで上昇させた。−１０℃にさらに２時間維持した後に、温度を２０℃まで上昇させ、室温における撹拌を２時間より長く続けた。次いで、固体ＣＯ２の添加によって、反応物をｐＨ７に調整した。真空下で濃縮して溶媒を除去した後に、残渣にジエチルエーテルを加えて撹拌し、エーテル不溶物質を回収して、水によって洗浄し、真空下で乾燥させて１．４９ｇの粗生成物を得た。この粗生成物を、シリカゲルカラムに供給するために、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（１０：１）中に溶解させた。同溶媒系による溶離は１０−プロパルギル−１０−カルボメトキシ−４−デオキシ−４−アミノ−１０−デアザプテロイン酸メチルエステル（化合物３）を与え、これは４０％収率（４８５ｍｇ）でＴＬＣに対して均質であった。
【００２５】
２−メトキシエタノール（５ｍｌ）中の化合物３（４００ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液を、水（５ｍｌ）で処理し、次いで１０％水酸化ナトリウム溶液（３．９ｍＬ）で処理した。この混合物を室温において４時間撹拌すると、この間に溶液が生じた。この溶液を、酢酸を用いてｐＨ８に調整し、高真空下で濃縮した。生じた残渣を、１５ｍＬの水に溶解させ、ｐＨ５．５〜５．８に酸性化して沈殿を形成させた。この沈殿を回収し、水を用いて洗浄して真空下で乾燥させ、３４０ｍｇの化合物４（９１％収率）を回収した。ＨＰＬＣ分析は９０％の生成物純度を示した。
【００２６】
化合物４（３３０ｍｇ）を、１５ｍｌのＤＭＳＯ中で１０分間１１５〜１２０℃に加熱することによって脱炭酸した。１０分間後のＨＰＬＣによる試験で、変換が本質的に完了していることを確認した。真空下で蒸留する（４０℃の浴）ことにより、ＤＭＳＯを除去した。残渣を０．５Ｎ  ＮａＯＨと共に撹拌し、透明な溶液を得た。１Ｎ  ＨＣｌを用いてｐＨ５．０に酸性化すると、１０−プロパルギル−４−デオキシ−４−アミノ−１０−デアザプテロイン酸（化合物５）が黄色固体として７０％収率で得られた。ＨＰＬＣは、この段階における生成物純度を９０％と示した。
【００２７】
化合物５（２２５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（１４８ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＢＯＰ試薬（ベンゾトリアゾル−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（２８７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．））を用いて、ジメチルＬ−グルタミン酸塩酸塩（１３７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。この混合物を、２０〜２５℃で３時間撹拌し、次いで蒸発乾固させた。残渣に水を加えて撹拌し、水に不溶な粗生成物を回収して、真空下で乾燥させた。この粗生成物（３５０ｍｇ）を、トリエチルアミン（０．２５容量％）を含有するＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（１０：１）によって溶離させるシリカゲルクロマトグラフィによって精製し、１６５ｍｇの１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンジメチルエステル（化合物６、５０％収率）を回収したが、これはＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ  ５：１）に関して均質であった。
【００２８】
化合物６（１６５ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの撹拌ＭｅＯＨ中に懸濁させて、これに０．７２ｍＬ（０．７２ｍｅｑ）の１Ｎ  ＮａＯＨを加えた。数時間後に溶液が生じるまで、室温における撹拌を続けた。この溶液を２０〜２５℃に８時間維持し、次いで１０ｍｌの水で希釈した。減圧下での蒸発によってメタノールを除去し、濃縮した水溶液を２０〜２５℃でさらに２４時間放置した。その後のＨＰＬＣは、エステル加水分解が完了したことを示した。透明な水溶液を、酢酸を用いてｐＨ４．０に酸性化し、１０−プロパルギル−１０−デアザアミノプテリンを淡黄色固体として沈殿させた。回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥させた生成物は、１２２ｍｇ（７９％収率）の重量であった。元素分析、プロトンＮＭＲ、及び質量分光測定によるアッセイは、割り当てられた構造と完全に一致した。ＨＰＬＣ分析は、９８％の純度を示し、生成物が１０−デアザアミノプテリンを含まないことを立証した。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】ＰＤＸ及びメトトレキサートの構造を示す図である。
【図２】先行技術によって調製された、純粋でない１０−プロパルギル−１０ｄＡＭ製剤のＨＰＬＣを示す図である。
【図３】本発明による、高度に精製されたＰＤＸ製剤のＨＰＬＣを示す図である。
【図４】本発明によって化合物を調製するのに有用な合成スキームを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2008501038.tif 000007
2008501038.tif 000008