(57)【要約】  本発明ではヒトの自閉症感受性遺伝子の同定について開示しており、該遺伝子は治療的に活性な薬剤のスクリーニングの他、自閉症および関連する障害の診断、予防および処置に有用となりうる。本発明ではより具体的には、３番染色体上のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子およびその特定の対立遺伝子が自閉症への感受性と関連しており、治療的診断の新しい標的を示すことを開示している。本発明は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子内の特定の突然変異および発現産物、そしてこれらの突然変異に基づいた診断ツールおよびキットに関する。本発明は、アスペルガー症候群、広汎性発達障害、小児期崩壊性障害、精神遅滞、不安、憂うつ、注意不足活動過多症障害、発語の遅れ、てんかん、代謝異常、免疫障害、双極性疾患および統合失調症などの他の精神疾患および神経疾患の素因の診断、発見、予防および／または治療に使用可能である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因を検出する方法であって、（ｉ）被験者から検体の提供、および（ｉｉ）該検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項２】
被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害からの防御を検出する方法であって、（ｉ）被験者からの検体の提供、および（ｉｉ）該検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項３】
自閉症または関連する障害の処置に対する被験者の反応を評価する方法であって、（ｉ）被験者からの検体の提供、および（ｉｉ）該検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項４】
自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の有害反応を評価する方法であって、（ｉ）被験者からの検体の提供、および（ｉｉ）該検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項５】
被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を予防する方法であって、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の素因の徴候である被験者からの検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出すること、および自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害に対する予防的処置を施行することからなる方法。
【請求項６】
ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在が、塩基配列決定、選択的ハイブリダイゼーション、および／または選択的増幅によって検出される、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
該変化が自閉症と関連する1個または数個のＳＮＰまたはＳＮＰのハプロタイプである、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその遺伝子またはその断片とを接触させること、および該試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド、またはその遺伝子またはその断片との結合能を測定することを含む方法。
【請求項９】
自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドを発現する組換え宿主細胞とを接触させること、および該試験化合物と該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドとの結合能、およびＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド活性の調節能を測定することを含む方法。
【請求項１０】
自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子とを接触させること、および該試験化合物による該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の発現調節能を測定することを含む方法。
【請求項１１】
自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物と、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子プロモーターの制御下にあるレポーター遺伝子を含むレポーターコンストラクトを含む組換え宿主細胞とを接触させること、および該レポーター遺伝子の発現を調節する（例えば、促進または減少させる）試験化合物を選択することを含む方法。
【請求項１２】
該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子、またはそのポリペプチドまたはその断片が、変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子、または該変化または突然変異を含むそのポリペプチドまたはその断片である、請求項８〜１１のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
該調節が活性化である、請求項８〜１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
該調節が抑制である、請求項８〜１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
被験者における自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害の処置または予防のための医薬組成物の製造における、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のアゴニストまたはアンタゴニスト、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のアンチセンスまたはＲＮＡｉ、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに対して特異的なその抗体、その断片、またはその派生物からなるグループから選択される化合物の使用法。
【請求項１６】
該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１がＳＬＣ６Ａ１である、請求項１〜１４のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１がＳＬＣ６Ａ１１である、請求項１〜１４のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、遺伝学および医学の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
自閉症は、社会的相互作用および言葉・非言語コミュニケーションにおける障害、限定的で、型にはまったパターンの興味および活動、そして３歳までの発育障害の存在を特徴とする、神経精神病学的な発育障害である（Baileyら, 1996）。彼の小児自閉症に関する先駆的な記述において、Kanner（1943年）は以下の症状を挙げた：言語障害、アイコンタクトの欠如、社会的相互作用の欠如、反復行動、日常的に融通が利かない。彼は、大半の症例において、子供の行動が幼児期から異常であったことを指摘した。これに基づき、彼は、生まれつきの、恐らくは遺伝性の異常の存在を示唆した。１年後、ドイツのHans Aspergerは同様の患者について記載しており、この症状を「自閉的精神病質」と呼んだ。
【０００３】
自閉症については、これまで疾患を診断するための具体的、生物学的指標は知られていないため、行動基準を利用して定義されている。自閉症の臨床像については、重症度が変動し、教育、能力、気質などの多くの因子によって変わる。さらに、臨床像は個人の発育過程においても変わる。また、自閉症は、注意欠陥障害、運動失調、心配や憂うつなどの精神科的症状といった他の障害と関連付けられることが多い。自閉症が、てんかん性、代謝性、そして免疫性障害も含みうるとの証拠が存在する。該変動性に関する臨床的認識に沿って、全てのレベルの知能、言語能力および全ての重症度にある個人を含めた、一連の自閉症障害が存在するとの一般的な合意が現在存在する。
【０００４】
自閉症領域の一部であるが、特別なサブグループと見なされているのが、アスペルガー症候群（ＡＳ）である。ＡＳは、自閉症領域障害（ＡＳＤ）の特徴である、社会的相互作用の障害および限定された反復的行動、興味、活動の存在下で、臨床上の有意な言語発達の遅れの欠如によって自閉性障害とは区別される。
【０００５】
ＡＳＤは広汎性発達障害（ＰＰＤ）の類型である。ＰＰＤ−ＮＯＳ（ＰＰＤ，"not otherwise specified"「他に規定のない限り」）は、非定型自閉症を呈する、または２、３の重要な領域においてほぼ診断基準を満たすことによって、自閉症についての厳密な基準を満たさないが、自閉症に近い小児を分類するために使用される。
【０００６】
自閉症の診断を標準化するために、診断基準が世界保健機構（国際疾病分類第１０改訂(ICD-10), 1992）およびアメリカ精神医学協会（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,4th edition(DSM-IV), 1994）によって定義された。自閉症診断インタビュー（ＡＤＩ）が開発された（Le Couteurら, 1989;Lordら, 1994）。ＡＤＩは、標準化され、厳しく検証され、そして広く一般に認識されているＡＳＤ診断のために利用可能な唯一の診断ツールである。ＡＤＩは、国際疾病分類第１０改訂および自閉症の診断に関するＤＳＭ−ＩＶ基準に基づく、採点方式による親の半構造的面接である。ここでは、３つの主要分野（社会的相互作用の質、コミュニケーションおよび言語、限定的かつ反復的で型にはまった関心および行動）において、行動に焦点を合わせる。これらの基準を利用した場合、自閉症が稀な障害であるとはもはや見なされない。Kannerの基準に基づいた１０，０００人毎に４−５症例という過去に報告された有病率（Folstein and Rosen-Sheidley, 2001）と比較して、１０，０００人毎に１０−１２症例という高い有病率が最近の研究において報告された（Gillberg and Wing, 1999）。自閉性障害の全領域の有病率に関する推定値は１．５〜２．５倍高い。女性と比較して、男性では４倍高い発生率の報告には矛盾がない。精神遅滞がＡＳＤ症例の２５〜４０％に存在する（Bairdら. 2000; Chakrabarti and Fombonne, 2001）。脳が関与する別の病状が、母集団の約１０％で認められる（Gillberg and Coleman, 2000）。
【０００７】
自閉症の報告症例数の増加の根本にあるメカニズムは不明である。この差が、自閉症の有病率の増加、診断基準の段階的変化、病気発現のより大きな変動性の認識、あるいは障害に関する意識の高まりを反映しているのか否かについては大いに議論の余地がある。また、見掛け上の増加が主に環境因子に起因するという広範囲に及ぶ一般の認識がある（Nelson,1991; Rodier and Hyman, 1998）。しかし、有病率の上昇の大部分が、これらの基準のより広範な適用と共に、診断基準の広幅化によって説明できる可能性は高いと思われる。
【０００８】
病気を改善させるための有効な処置が存在するとはいえ、利用可能な治療法はなく、処置の有益性は低くなる傾向がある。様々な行動・発育上の戦略を利用したいくつかのプログラムにおいて有望な結果が得られている。最も有望なものに、応用挙動解析（ＡＢＡ）に基づくプログラムがある。いくつかの薬物療法が、自閉症に関連する様々な症状を改善して、それによって教育的および行動的診断からの個人の受益能を高めると思われた。最も広範に研究されている薬剤はドーパミンアンタゴニストである。数例の研究によって、様々な選択的セロトニン再取り込み阻害薬の有用性が示唆されている。
【０００９】
双生児に関する研究３例が、自閉症の遺伝率を推定するために実施されている（Folstein and Rutter, 1977; Baileyら, 1995; Steffenburgら, 1989）。地理的に定義された集団内に生活していた全ての双生児を探し出した。統合データにおいて、一卵性（ＭＺ）双生児３６人および二卵性（ＤＺ）双生児３０人が調査された。ＤＺ率０％と比較して、平均ＭＺ一致率は７０％である。ＭＺとＤＺとの一致率および約２〜４％と推定された兄弟での再発リスクから、遺伝率９０％以上が算出された（Jordeら, 1991 Szatmariら, 1998）。自閉症ではない血縁者に関する研究によって、社交場での寡黙、コミュニケーションにおける困難、日常での嗜好、変化の困難を含めた、ＡＳＤのいくつかの特徴が、対照とする親よりも、自閉症の子供達の親においてより頻繁に見いだされることが明らかにされた（Folstein and Rutter, 1977）。発語開始の遅れおよび読みの困難も自閉症患者の家族においてより多く見られ、再発性の憂うつ、不安障害、血小板セロトニンの上昇、そして頭囲の増大も同様であった（Folstein and Rosen-Sheidley, 2001）。
【００１０】
自閉症の発生率は罹患した個人との血縁度の低下に応じて有意に低下し、一遺伝子モデルによって大半の自閉症症例が説明される可能性は低いことを示している（Jordeら, 1990）。報告された分離比解析は、多遺伝子性遺伝様式と全く矛盾がなかった（Jordeら, 1991）。最も節約的な遺伝モデルは、数種の遺伝子が自閉症表現型を生じるために互いに相互作用するモデルである（Folstein and Rosen-Sheidley, 2001）。
【００１１】
相当な状況証拠によって、自閉症における自己免疫の果たし得る役割が示されている。１例の研究では、対照の発端者と比較して、自閉症の発端者のいる家族においてより多くの自己免疫疾患を患う家族メンバーが認められた（Comiら, 1999）。２，３例の研究では、自閉症を患う一部の子供、または彼らの母親に存在する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）遺伝子座のハプロタイプによって、彼らの自閉症の子供たちが自己免疫病にかかりやすくなると報告されている（Burger and Warren, 1998）。２例の研究では、ミエリン塩基性タンパク質、神経細線維タンパク質、脈管上皮などの特定の脳組織およびタンパク質に対する自己抗体が、対照と比較して、自閉症の子供たちにおいてより多く認められた（Singhら, 1993; Connollyら, 1999; Weizmanら, 1982）。
【００１２】
自閉症の大半の症例について、oligogenicityおよびエピスタシスという示されたメカニズムと矛盾はないが、少数については染色体異常および特定の病因を伴う障害と関連して認められた。Smalley（1997年）は、既知の遺伝性疾患または染色体異常を伴う５〜１４％を含めた、自閉症症例の約１５〜３７％が合併症を伴うと記述している。ほぼ全てのヒト染色体の関与する染色体異常が報告されている。これらには常染色体の異数性、性染色体異常、欠失、重複、転座、環状染色体、逆位、およびマーカー染色体が含まれる（Gillberg, 1998）。１５番染色体上のプラダーウィリ／アンジェルマン症候群の領域の異常が最も多く見られる。自閉症とメンデルの条件または遺伝的症候群との関連には、未治療のフェニルケトン尿症、脆弱Ｘ症候群、結節性脳硬化症、および神経線維腫症が含まれる。近年、Carneyら(2003)は、ＭＥＣＰ２遺伝子（メチルＣｐＧ−結合タンパク質２）の突然変異が症例の８０％における原因となっている、レット症候群の症状を伴わない、自閉症を患う２人の女性におけるＭＥＣＰ２遺伝子の突然変異を同定した。
【００１３】
様々なグループが、自閉症またはＡＳＤのより広範な表現型に関するゲノムスキャンを実施している。このアプローチは、組織的でモデルを使用しないため、非常に有望と思われる。また、既に成功していることが示されている。このように比較的小さな試験群での解析によってでさえ、陽性の連鎖結果が得られている。より重要なことは、一部の知見が既に再現されていることである。最も安定した結果が染色体７ｑにおいて得られたが、染色体２ｑおよび１６ｐにもかなりの重複が認められる（Folstein and Rosen-Sheidley, 2001）。染色体領域の特定における重要な進歩が、同じく１５番染色体およびＸ染色体上において成されている。ＮＬＧＮ（ニューロリジン）３およびＮＬＧＮ４をコード化する２つのＸ連鎖遺伝子における突然変異が、自閉症領域障害を患う兄弟において同定された（Jamainら, 2003）。いくつかの証拠によって、ニューロリジンの突然変異が自閉性障害に関与しているという事実が裏付けられた。第一に、報告された突然変異は予測されたタンパク質の立体構造に重大な変化を生じる。第二に、ＮＬＧＮ４を含むＸｐ２２．３の欠失が数人の自閉症の小児において報告されている。第三に、ＮＬＧＮ４の突然変異が、１人の罹患者の母親においてデノボで現れた。
【００１４】
発明の概要
本発明では、治療効果のある薬剤のスクリーニングの他、自閉症、自閉症領域障害、自閉症関連の障害の診断、予防、治療のために利用可能なヒトの自閉症感受性遺伝子の同定について開示されている。
【００１５】
本発明では特に、治療効果のある薬剤のスクリーニングの他、自閉症および関連する障害の診断、予防、治療のために利用可能なヒトの自閉症感受性遺伝子の同定について開示されている。本発明では、より具体的には、自閉症への感受性と関連しており、治療的介入の新しい標的の代表である、溶質輸送体（solute carrier）ファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１）および／または溶質輸送体（solute carrier）ファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１１）の特定の対立遺伝子が開示されている。本発明は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子内の特定の突然変異および発現産物、そしてこれらの突然変異に基づいた診断ツールおよびキットと関連する。本発明は、アスペルガー症候群、広汎性発達障害、小児期崩壊性障害、精神遅滞、心配、憂うつ、注意不足活動過多症障害、発語の遅れまたは言語機能障害、てんかん、代謝異常、免疫障害、双極性疾患および統合失調症などの他の精神疾患および神経疾患の素因の診断、発見、予防および／または治療に使用可能である。
【００１６】
本発明は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の素因の診断、防御、発見、予防および／または治療において使用可能であり、該方法は、被験者の検体におけるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチドにおける変化の存在、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因の徴候となる該変化の存在の検出を含む。該変化の存在は自閉症からの防御においても徴候となりうる。好ましい第一の実施態様では、該方法は、被験者の検体におけるＳＬＣ６Ａ１遺伝子またはポリペプチドの変化の存在を検出することを含む。好ましい第二の実施態様では、方法は、被験者からの検体におけるＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチドの変化の存在を検出することを含む。
【００１７】
特に本発明の目的は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因の検出方法にあり、該方法は、被験者の検体でのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因の徴候となる該変化の存在の検出を含む。好ましい第一の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。好ましい第二の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。
【００１８】
特に本発明の別の目的は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害からの防御を検出する方法にあり、該方法は、被験者の検体におけるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害からの防御の徴候となる該変化の存在を検出することを含む。好ましい第一の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。好ましい第二の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。
【００１９】
特に本発明の別の目的は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の反応の評価方法にあり、該方法は、被験者の検体でのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在、該処置に対する特定の反応の徴候となる該変化の存在の検出を含む。好ましい第一の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。好ましい第二の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。
【００２０】
特に本発明の別の目的は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の有害反応の評価方法にあり、該方法は、被験者の検体でのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在、該処置に対する有害反応の徴候となる該変化の存在の検出を含む。好ましい第一の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。好ましい第二の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。
【００２１】
本発明は、被験者の検体におけるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の素因の徴候となる該変化の存在の検出；および自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害に対する予防的処置の施行を含む、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の予防方法とも関連する。好ましい第一の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。好ましい第二の実施態様では、方法は、ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む。
【００２２】
好ましい一実施態様では、該変化は、自閉症と関連する１つ以上のＳＮＰまたはＳＮＰのハプロタイプである。
【００２３】
好ましくは、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化は、ハイブリダイゼーションアッセイ、シークエンシングアッセイ、マイクロシークエンシングアッセイ、対立遺伝子特異的増幅アッセイの実施によって判定される。
【００２４】
本発明の特定の態様は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子を含むゲノム領域内の自閉症と関連する少なくとも１つのＳＮＰまたはハプロタイプを特異的に検出するように設計された、プライマー、プローブ、および／またはオリゴヌクレオチドを含む組成物、またはそれらの組み合わせにある。
【００２５】
本発明は、ＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１の発現または活性の調節を介した、被験者における自閉症および／または関連する障害の処置法にもある。該処置には、例えば、ＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１の発現または活性を調節する、ＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド、ＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１  ＤＮＡ配列（ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座を標的とするアンチセンス配列およびＲＮＡｉを含む）、抗ＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１抗体または薬剤が使用される。
【００２６】
本発明は、遺伝子治療、タンパク質の補給療法、またはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１タンパク質の模倣薬および／または阻害剤の投与などの、発症前処置または併用処置を含めた、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の有害対立遺伝子を有する個人の処置法とも関連している。
【００２７】
本発明のさらなる態様は、自閉症または関連する障害に関わるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の対立遺伝子、またはその遺伝子産物の調節または結合に基づく、自閉症または関連する障害の治療薬のスクリーニングにある。
【００２８】
本発明のさらなる態様には、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド断片に特異的な抗体および該抗体の派生物、該抗体を分泌するハイブリドーマ、これらの抗体を含む診断キットが含まれる。より好ましくは、該抗体は、変化を含むＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドまたはその断片に特異的であり、該変化はＳＬＣ６Ａ１の活性を変える。または、前記抗体が、変化（該変化はＳＬＣ６Ａ１１の活性を改変する）を含むＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片に特異的である。
【００２９】
本発明は、変化を含むＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはその断片にも関しており、該変化はＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１の活性をそれぞれ改変する。本発明は、変化を含むＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片にも関しており、該変化はＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１の活性を改変する。
【００３０】
発明の詳細な説明
本発明では、ヒトの自閉症感受性遺伝子としてＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１の同定を開示している。自閉症を患う１１４の家族からの様々な核酸検体が、特別なＧｅｎｏｍｅＨＩＰプロセスに提出された。このプロセスによって、自閉症の被験者において変化している、該集団における特定の同一家系（identical-by-descent）内の断片が同定された。ＩＢＤ断片のスクリーニングによって、自閉症および関連する表現型に対する候補として、３番染色体上の溶質キャリアファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１）および溶質キャリアファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１１）を同定した。これらの遺伝子は実際に重要な間隔内に存在しており、自閉症における遺伝子調節と一致した機能的表現型を発現する。
【００３１】
このように本発明は、治療効果のある薬剤のスクリーニングの他、自閉症、自閉症領域障害、自閉症関連の障害の、診断、予防、治療のためにＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子および対応する発現産物を使用することを提案している。
【００３２】
定義
自閉症および自閉症領域障害（ＡＳＤ）：自閉症は通常、アスペルガー症候群（ＡＳ）、小児期崩壊性障害（ＣＤＤ）および他の広汎性発達障害（ＰＰＤ）といった領域障害（ＡＳＤ）の一部と特徴付けられる。自閉症は、健康が損なわれうる程度にまで、３歳までの行動、興味、活動の様式が限定的、反復的で、型にはめられている、社会的相互作用およびコミュニケーションが損なわれた状態と解釈される。ＡＳは、自閉症領域障害（ＡＳＤ）の特徴である、社会的相互作用の障害および限定された反復的行動、興味、活動の存在下で、言語発達における臨床上の有意な遅れの欠如によって、自閉性障害から区別される。ＣＤＤは、過去に完全に健常と思われた小児において発症する。通常、言語、社会環境に対する興味、そしてしばしば排泄やセルフケア能力が失われており、環境に対する興味が全般的に喪失している可能性がある。小児は通常、非常に「自閉症的（autistic）」に見える（つまり、臨床所見（病歴ではない）が自閉症を患う小児に特有である）。ＰＰＤ−ＮＯＳ（ＰＰＤ，not otherwise specified「他に規定のない限り」）は、非定型自閉症を呈する、または２、３の重要な部位においてほぼ診断基準を満たすことによって、自閉症についての厳密な基準を満たさないが、自閉症に近い子供たちを分類するために使用される。
【００３３】
自閉症関連の障害、疾患、病状として、より具体的には代謝異常、免疫障害、てんかん、心配、憂うつ、注意不足活動過多症障害、発語の遅れまたは言語機能障害、運動失調、統合失調症、双極性疾患が挙げられる。
【００３４】
本発明は、様々な被験者、特に成人、子供および胎児を含めたヒトにおいて使用可能である。
【００３５】
本発明の文脈中で、ＳＬＣ６Ａ１遺伝子座とは、ＳＬＣ６Ａ１コード配列、ＳＬＣ６Ａ１非コード配列（例えば、イントロン）、転写、翻訳（例えば、プロモーター、エンハンサー、ターミネーターなど）、ＲＮＡおよび／またはタンパク質の安定性をコントロールするＳＬＣ６Ａ１調節配列を含めた、細胞または生物内の全てのＳＬＣ６Ａ１配列または産物、そしてＳＬＣ６Ａ１  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）およびＳＬＣ６Ａ１ポリペプチド（例えば、タンパク質前駆体および成熟タンパク質）などの対応する発現産物を示す。ＳＬＣ６Ａ１遺伝子座は、ＳＬＣ６Ａ１遺伝子内に位置するＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを含むＳＬＣ６Ａ１遺伝子の周辺配列も含む。
【００３６】
本発明の文脈中で、ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座とは、ＳＬＣ６Ａ１１コード配列、ＳＬＣ６Ａ１１非コード配列（例えば、イントロン）、転写、翻訳（例えば、プロモーター、エンハンサー、ターミネーターなど）、ＲＮＡおよび／またはタンパク質の安定性をコントロールするＳＬＣ６Ａ１１調節配列を含めた、細胞または生物内の全てのＳＬＣ６Ａ１１配列または産物、そしてＳＬＣ６Ａ１１  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）およびＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド（例えば、タンパク質前駆体および成熟タンパク質）などの対応する発現産物を示す。ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座は、ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子内に位置するＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを含むＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の周辺配列も含む。
【００３７】
本出願において使用されているとおり、「ＳＬＣ６Ａ１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１  ｇｅｎｅ）」という用語は、自閉症および自閉症関連の障害への感受性と関係する、ヒト３番染色体上の溶質キャリアファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１）、そしてその対立遺伝子（例えば、生殖細胞系突然変異）を含めた、その変異体、類似体および断片を示す。ＳＬＣ６Ａ１遺伝子の別名は、ＧＡＴ１、ＧＡＢＡＴＲ、ＧＡＢＡＴＨＧである。
【００３８】
本出願において使用されているとおり、「ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１１  ｇｅｎｅ）」という用語は、自閉症および自閉症関連の障害への感受性と関係する、ヒト３番染色体上の溶質キャリアファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１１）、そしてその対立遺伝子（例えば、生殖細胞系突然変異）を含めた、その変異体、類似体および断片を示す。ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の別名は、ＧＡＴ３、ＧＡＴ−３である。
【００３９】
「遺伝子（ｇｅｎｅ）」という用語は、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、合成または半合成ＤＮＡ、対応する任意の形のＲＮＡを含めた、任意の種類のコード核酸を含むと解釈される。遺伝子という用語は特に、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１をコードする組換え核酸、つまり人工的に作成された（例えば、配列の組み立て、切断、連結、増幅による）非天然核酸を含む。通常、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子は二本鎖であるが、一本鎖などの他の形も検討できる。ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子は、ＤＮＡライブラリーのスクリーニング、または様々な天然材料からの増幅など、様々な材料から、そして周知の様々な技術によって得ることができる。組換え核酸は、化学合成、遺伝子工学、酵素技術またはこれらの組み合わせを含めた、従来の方法によって調製可能である。適当なＳＬＣ６Ａ１遺伝子配列は、Ｕｎｉｇｅｎｅ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｆｏｒ  ＳＬＣ６Ａ１（Ｈｓ．４４３８７４）およびＵｎｉｇｅｎｅ  Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ＮＭ＿００３０４２などのジーンバンクにおいて見出すことができる。ＳＬＣ６Ａ１遺伝子の特定の実施例は配列番号１を含む。適当なＳＬＣ６Ａ１１遺伝子配列は、Ｕｎｉｇｅｎｅ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｆｏｒ  ＳＬＣ６Ａ１１（Ｈｓ．１０１７９１）およびＵｎｉｇｅｎｅ  Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ＮＭ＿０１４２２９などのジーンバンクにおいて見出すことができる。ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の特定の実施例は配列番号３を含む。
【００４０】
「ＳＬＣ６Ａ１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１  ｇｅｎｅ）」という用語は、配列番号１の変異体、断片もしくは類似体、または先に同定された任意のコード配列を含んでいる。「ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子（ＳＬＣ６Ａ１１  ｇｅｎｅ）」という用語は、配列番号３の変異体、断片もしくは類似体、または先に同定された任意のコード配列を含んでいる。該変異体には、例えば、個人間での対立遺伝子のバリエーションに起因する天然の変異体（例えば、多型）、自閉症と関連する突然変異対立遺伝子、選択的スプライシングの型などが含まれる。変異体という用語には、別の材料または生物由来のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子配列も含まれる。変異体は、好ましくは配列番号１または３とかなりの相同性を有しており、つまり配列番号１または３とそれぞれ少なくとも約６５％、通常は少なくとも約７５％、好ましくは少なくとも約８５％、より好ましくは少なくとも約９５％のヌクレオチド配列の同一性を示す。ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の変異体および類似体は核酸配列も含んでおり、これはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で先に定義された配列（またはその相補鎖）とハイブリダイズする。
【００４１】
通常のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件として、温度３０℃以上、好ましくは３５℃以上、より好ましくは４２℃以上、および／または塩分約５００ｍＭ未満、好ましくは２００ｍＭ未満が挙げられる。ハイブリダイゼーション条件は、温度、塩分および／またはＳＤＳ、ＳＳＣなどの他の薬剤の濃度を変えることで当業者によって調節可能である。
【００４２】
ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子断片は、先に開示された少なくとも約８個、好ましくは少なくとも約１５個、より好ましくは少なくとも約２０個、さらに好ましくは少なくとも約３０個の連続するヌクレオチド配列の任意の一部分を示す。断片には、ヌクレオチド８〜１００個、好ましくは１５〜１００個、より好ましくは２０〜１００個の全ての可能なヌクレオチド長を含む。
【００４３】
ＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドとは、先に開示されたＳＬＣ６Ａ１遺伝子によってコード化される任意のタンパク質またはポリペプチドを示す。「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸の伸長を含む任意の分子を示している。この用語は、ペプチドおよびタンパク質のなどの様々な長さの分子を含む。ポリペプチドは、グリコシル化および／またはアセチル化および／または化学反応または結合などによって改変が可能であり、１つ以上の非天然型アミノ酸または合成アミノ酸を含みうる。ＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドの特定の例には、配列番号２（ＮＰ＿００３０３３）の全体または一部を含む。
【００４４】
ＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドとは、先に開示されたＳＬＣ６Ａ１１遺伝子によってコード化される任意のタンパク質またはポリペプチドを示す。「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸の伸長を含む任意の分子を示している。この用語は、ペプチドおよびタンパク質のなどの様々な長さの分子を含む。ポリペプチドは、グリコシル化および／またはアセチル化および／または化学反応または結合などによって改変が可能であり、１つ以上の非天然型アミノ酸または合成アミノ酸を含みうる。ＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの特定の例には、配列番号４（ＮＰ＿０５５０４４）の全体または一部を含む。
【００４５】
「処置への反応」という用語は、治療化合物の代謝能力、プロドラッグの活性薬剤への変換能ならびに個人における薬剤の薬物動態（吸収、分布、排出）および薬力学（受容体関連）といった処置効果を示すが、これらに限定されない。
【００４６】
「処置に対する有害反応」という用語は、薬剤の主な薬理作用の延長に起因する治療の有害反応、または薬剤と固有の宿主因子との相互作用に起因する特有の有害反応を示す。「処置に対する副作用」として、皮膚、血液、肝臓への毒性などの有害反応、さらに胃腸での潰瘍形成、血小板機能の障害、腎臓傷害、全身性の蕁麻疹、気管支狭窄、低血圧、ショックが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
診断
本発明では、ここで被験者におけるＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座のモニタリングに基づく診断方法が提供されている。本発明の文脈中において、「診断」という用語は、成人、子供および胎児における、初期、発症前および後期を含めた様々な段階での、検出、モニタリング、投薬、比較などを含む。通常、診断には、予後、素因または発症リスクの評価、最適な処置を決定するための被験者の特性付け（薬理遺伝）などが含まれる。
【００４８】
本発明は、個人において、自閉症、自閉症領域障害、自閉症関連の障害を発症するリスクがあるのか、もしくはＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の突然変異または多型に起因する自閉症、自閉症領域障害、自閉症関連の障害を患うか否かを判定するための診断方法を提供する。本発明は、個人が治療薬に対して治療効果を示す可能性があるのか否か、または個人が治療薬に対する有害反応を生じるリスクがあるのか否かを判定する方法を提供する。
【００４９】
本発明の特定の目的は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因を検出する方法にあり、該方法は被験者の検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在の検出を含む。該変化の存在は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因の徴候である。場合により、該方法は被験者から検体を提供する前段階を含む。好ましくは、該検体中のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座内の変化の存在は、検体の遺伝子型決定によって検出される。
【００５０】
本発明の別の特定の目的は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害からの防御を検出する方法にあり、該方法は被験者の検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在の検出を含み、該変化の存在は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害からの防御の徴候である。
【００５１】
好ましい一実施態様では、該変化は、自閉症と関連する１つ以上のＳＮＰまたはＳＮＰのハプロタイプである。
【００５２】
本発明の別の特定の目的は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の反応を評価する方法であり、該方法は（ｉ）被験者の検体の提供、および（ｉｉ）該検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在の検出を含む。
【００５３】
本発明の別の特定の目的は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の反応を評価する方法にあり、該方法は被験者の検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在の検出を含む。該変化の存在は、該処置に対する特定の反応の徴候である。好ましくは、該検体中のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座内の変化の存在は、検体の遺伝子型決定によって検出される。
【００５４】
本発明の別の特定の目的は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の有害反応を評価する方法にあり、該方法は被験者の検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在の検出を含む。該変化の存在は、該処置に対する有害反応の徴候である。好ましくは、該検体中のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座内における変化の存在は、検体の遺伝子型決定によって検出される。
【００５５】
好ましい一実施態様では、該変化は、自閉症と関連する１つ以上のＳＮＰまたはＳＮＰのハプロタイプである。
【００５６】
別の一実施態様では、本発明は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の予防方法に関するものであり、被験者の検体のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在の検出（該変化の存在が自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の素因の徴候となる）；および自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害に対する予防的処置の施行を含む。該予防的処置は、薬物投与でありうる。
【００５７】
処置または薬剤に対する反応、または処置または薬剤に対する副作用を解析および予測する診断法を利用して、個人を特定の処置薬で治療すべきか否かを判断できる。例えば、仮に診断において個人が特定の薬物処置に対して効果を示す可能性が示される場合、その個人に薬剤を投与できる。反対に、仮に診断において個人が特定の薬物処置に対して効果を示さない可能性が示される場合、代わりの処置コースを処方できる。効果を示さない反応とは、有効な反応の欠如または有毒な副作用の存在のいずれかとして定義できる。
【００５８】
臨床試験ではＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１  ＳＮＰの別の用途が示される。上記の方法を利用して、薬剤への反応または薬剤への副作用の徴候となる１つ以上のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１  ＳＮＰを同定可能である。その後、該薬剤の臨床試験における潜在的な参加者をスクリーニングして、該薬剤に良好な反応を示す可能性の最も高い個人を特定して、副作用を経験する可能性の高い個人を除外できる。このようにして、試験において効果を示す可能性の低い個人を含めた結果として、測定値を低下させることなく、また好ましくない安全性の問題という危険を冒すことなく、薬剤に効果を示す個人において薬物療法の有効性を判定可能である。
【００５９】
変化は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１  ｇＤＮＡ、ＲＮＡ、またはポリペプチドのレベルで判定可能である。場合により、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の全体または一部分の塩基配列決定、またはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の全体または一部分の選択的ハイブリダイゼーションまたは選択的増幅によって検出される。より好ましくは、変化の同定段階より前に、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子を特異的に増幅させる。
【００６０】
ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化は、単独または様々な組み合わせで、遺伝子座のコード領域および／または非コード領域内の突然変異、欠失、再配列および／または挿入の任意の形でありうる。突然変異はより具体的には点変化を含む。欠失は、残基２個から遺伝子または遺伝子座全体までの、遺伝子座のコード部分または非コード部位内の２つ以上の残基の任意の領域を含みうる。典型的な欠失は、約５０個未満の連続する塩基対のドメイン（イントロン）または反復配列または断片などの、小さな領域に影響を及ぼすが、より大きな欠失も生じうる。挿入は、遺伝子座のコード部位または非コード部位内の１個または数個の残基の付加を含みうる。挿入は通常、遺伝子座内の１〜５０個の塩基対の付加を含みうる。再配列には配列の逆位が含まれる。ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化は、停止コドンの形成、フレームシフト変化、アミノ酸置換、特定のＲＮＡスプライシングまたはプロセシング、産物の不安定化、切断ポリペプチドの産生などをもたらしうる。該変化は、機能、安定性、標的化、構造の変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの産生をもたらしうる。該変化は、タンパク質発現の減少、あるいは該生産量の増加の原因にもなりうる。
【００６１】
本発明に従った方法での特定の一実施態様では、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子または対応する発現産物における点突然変異、欠失および挿入、より好ましくは点突然変異および欠失から選択される。該変化は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１  ｇＤＮＡ、ＲＮＡ、またはポリペプチドのレベルで判定されうる。
【００６２】
本発明に従った任意の方法では、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子内の１つまたは数個のＳＮＰ、およびＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子内のＳＮＰを含む特定のハプロタイプを、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害と関連している、また他の遺伝子内に存在する、別のＳＮＰまたはハプロタイプと併用可能である。
【００６３】
別の変形では、方法には、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１  ＲＮＡ発現の変化の存在の検出が含まれる。ＲＮＡ発現の変化には、ＲＮＡ配列の変化の存在、ＲＮＡスプライシングまたはプロセシングの変化の存在、ＲＮＡ量の変化の存在などが含まれる。これらは周知の様々な技術、例えば、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１  ＲＮＡの全体または一部分の塩基配列決定、または該ＲＮＡの全体または一部分の選択的ハイブリダイゼーションまたは選択的増幅によって検出可能である。
【００６４】
さらなる形では、方法には、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド発現の変化の存在の検出が含まれる。ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド発現の変化には、ポリペプチド配列の変化の存在、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド量の変化の存在、組織分布における変化の存在などが含まれる。これらは公知の様々な技術、例えば、配列決定および／または特定リガンド（抗体など）への結合によって検出可能である。
【００６５】
上記のとおり、配列決定、ハイブリダイゼーション、増幅および／または特定リガンド（抗体）への結合など、公知の様々な技術を利用して、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子／ＲＮＡ発現または配列の変化を検出または定量可能である。他の適当な方法には、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、対立遺伝子特異的増幅、サザンブロッティング（ＤＮＡ）、ノーザンブロッティング（ＲＮＡ）、一本鎖高次構造解析（ＳＳＣＡ）、ＰＦＧＥ、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ）、ゲル移動、クランプ変性ゲル電気泳動法、ヘテロ二本鎖解析、ＲＮａｓｅプロテクション法、化学的ミスマッチ切断、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および免疫酵素アッセイ（ＩＥＭＡ）が含まれる。
【００６６】
これらの方法の一部（例えば、ＳＳＣＡおよびＣＧＧＥ）は、配列の変化の存在に起因する、核酸の電気泳動移動度の変化に基づいている。これらの技術に従って、配列の変化をゲル上での移動度の変化によって可視化させる。次に、断片の配列を決定して、変化を確認する。
【００６７】
他の一部は、被験者の核酸と野生型または変異ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはＲＮＡに特異的なプローブとの特異的ハイブリダイゼーションに基づいている。プローブは、浮遊状態にするか、もしくは基質に固定できる。プローブは通常、標識して、ハイブリッドの検出を容易にする。
【００６８】
これらのアプローチの一部（ノーザンブロット、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡなど）は、ポリペプチド配列または発現レベルの評価に特に適している、これらの後者では、ポリペプチドに特異的なリガンド、より好ましくは特異的抗体の使用が必要となる。
【００６９】
特に、好ましい一実施態様では、方法には、被験者の検体におけるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子発現プロファイルの変化の存在の検出が含まれる。上記のとおり、これは、より好ましくは、該検体に存在する核酸の配列決定、選択的ハイブリダイゼーションおよび／または選択的増幅によって達成可能である。
【００７０】
配列決定
自動シークエンサーを用いて、周知の技術を利用して配列決定を実施可能である。完全なＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子、より好ましくは、通常、有害突然変異またはその他の変化を有することが判明している、または有することが疑われるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の特異的領域について配列決定を実施可能である。
【００７１】
増幅
増幅は、核酸複製の開始に役立つ相補的な核酸配列間での特異的ハイブリッドの形成に基づいている。
【００７２】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）などの公知の様々な技術に従って増幅を実施する。これらの技術は、市販の試薬およびプロトコルを利用して実施可能である。好ましい技術では、対立遺伝子特異的ＰＣＲまたはＰＣＲ−ＳＳＣＰが利用される。通常、増幅において、反応を開始させるために特異的な核酸プライマーの使用が必要である。
【００７３】
ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子または遺伝子座からの配列の増幅に有用な核酸プライマーは、該遺伝子座の標的領域に隣接するＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の一部に特異的にハイブリダイズ可能であり、該標的領域は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を患う特定の個人において変化している。
【００７４】
ＳＮＰを含むＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１標的領域を増幅させるために使用可能なプライマーは、配列番号１または３の配列またはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のゲノム配列に基づいて設計されうる。
【００７５】
本発明の別の特定の目的は、周辺領域を含めたＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子または遺伝子座からの配列の増幅に有用な核酸プライマーにある。該プライマーは、好ましくはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座内の核酸配列と相補的であり、特異的にハイブリダイズする。特定のプライマーは、該遺伝子座の標的領域に隣接するＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の一部と特異的にハイブリダイズ可能であり、該標的領域は、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を患う特定の個人において変化している。
【００７６】
本発明は核酸プライマーとも関連しており、該プライマーは自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を患う特定の被験者において変化しているＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１コード配列（例えば、遺伝子またはＲＮＡ）の一部と相補的であり、特異的にハイブリダイズする。この点について、本発明の特定のプライマーはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子／ＲＮＡの変化した配列に特異的である。該プライマーを使用した増幅産物の検出は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における変化の存在を示す。対照的に、増幅産物の非存在は、検体中に特定の変化が存在しないことを示す。
【００７７】
本発明の通常のプライマーは、約５〜６０ヌクレオチド長、より好ましくは約８〜２５ヌクレオチド長の一本鎖核酸分子である。配列は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の配列に直接由来できる。高い特異性を保証するには、完全な相補性が好ましい。しかし、一定のミスマッチは許容できる。
【００７８】
本発明は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因の検出方法、または自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の反応の評価方法における上記の核酸プライマーまたは核酸プライマー対の使用とも関連している。
【００７９】
選択的ハイブリダイゼーション
ハイブリダイゼーションの検出方法は、核酸配列の変化の検出に役立つ相補的な核酸配列間での特異的ハイブリッドの形成に基づいている。
【００８０】
特定の検出方法には、野生型または変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはＲＮＡに特異的な核酸プローブの使用、そしてその後のハイブリッドの存在の検出が含まれる。プローブは、浮遊状態にするか、または基質または担体上に固定できる（核酸アレイまたはチップ技術など）。プローブは通常、標識付きで、ハイブリッドの検出を容易にする。
【００８１】
この点について、本発明の特定の一実施態様は、被験者の検体と変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座に対して特異的な核酸プローブとを接触させること、およびハイブリッド形成を評価することを含む。特に、好ましい一実施態様では、該方法は、検体と野生型ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座およびその様々な変化型に対して特異的な一連のプローブとが同時に接触することを含む。この実施態様では、検体中のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座における様々な変化のその存在を直接検出できる。また、様々な被験者の様々な検体を同時に処理できる。
【００８２】
本発明の文脈中では、プローブは、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはＲＮＡ（の標的部位）と相補的かつ特異的なハイブリダイゼーションが可能であり、また自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害に罹りやすくする、または関連するＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１対立遺伝子と関連するポリヌクレオチド多型の検出に適したポリヌクレオチド配列を示す。プローブは好ましくはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子、ＲＮＡ、またはその標的部位と完全に相補的である。通常、プローブは、８〜１，０００ヌクレオチド長、例えば１０〜８００、より好ましくは１５〜７００、通常は２０〜５００ヌクレオチド長の一本鎖核酸を含んでいる。より長いプローブも使用可能であることを理解する必要がある。本発明の好ましいプローブは、８〜５００ヌクレオチド長の一本鎖核酸分子であり、これは変化を有するＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはＲＮＡの領域に特異的にハイブリダイズできる。
【００８３】
本発明の具体的な一実施態様は、変化した（例えば、突然変異を起こした）ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはＲＮＡに特異的な核酸プローブ、つまり該変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはＲＮＡに特異的に結合するが、該変化を欠くＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはＲＮＡには本質的にハイブリダイズしない核酸プローブである。特異性とは、標的配列へのハイブリダイゼーションが、非特異的ハイブリダイゼーションによって生じるシグナルとは区別可能な特異的シグナルを生じることを示している。本発明に従ったプローブを設計するためには、完全に相補的な配列が好ましい。一方で、特異的シグナルが非特異的シグナルと区別可能である限り、ある程度のミスマッチは許容可能であることを理解する必要がある。
【００８４】
該プローブの配列は、本出願において示されるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子およびＲＮＡの配列由来とすることができる。プローブの化学的改変の他、ヌクレオチドの置換も可能である。該化学的改変は、ハイブリッドの安定性の向上（例えば、挿入基）またはプローブの標識化のために実施できる。標識の典型例として放射能、蛍光、発光、酵素標識などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８５】
本発明は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因の検出方法、または自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の反応の評価方法における上記の核酸プローブの使用にも関する。
【００８６】
特異的なリガンド結合
上記のとおり、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド配列または発現レベルにおける変化をそれぞれスクリーニングすることによっても検出可能である。この点において、本発明の具体的な一実施態様には、検体とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに特異的なリガンドとの接触、および複合体の形成の決定が含まれる。
【００８７】
特異的抗体などの異なる種類のリガンドを使用可能である。具体的な一実施態様では、検体をＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに特異的な抗体と接触させて、免疫複合体の形成を判定する。ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および免疫酵素アッセイ（ＩＥＭＡ）などの免疫複合体を検出するための様々な方法を使用可能である。
【００８８】
本発明の文脈中では、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、そして実質的に同じ抗原特異性を有するこれらの断片または派生物を示す。断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＣＤＲ領域などが含まれる。派生物には、一本鎖抗体、ヒト化抗体、多機能性抗体などが含まれる。
【００８９】
ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに特異的な抗体とは、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドにそれぞれ選択的に結合する抗体、つまりＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはそのエピトープを含む断片に対して作成された抗体を示す。他の抗原に対して非特異的な結合も生じるが、標的であるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに高い親和性で結合し、非特異的な結合とは確実に識別可能である。
【００９０】
具体的な一実施態様では、該方法は、被験者からの検体と変化した型のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに対して特異的な抗体（でコーティングされた担体）とを接触させること、および免疫複合体の存在を測定することを含む。特定の一実施態様では、野生型およびその様々な変化型などのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの異なる型に特異的な様々な抗体（でコーティングされた担体）と検体とを同時または並行して、または連続的に接触させることができる。
【００９１】
本発明は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在または素因の検出方法、または自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の処置に対する被験者の反応の評価方法における上記のリガンド、好ましくは抗体、断片またはその派生物の使用にも関する。
【００９２】
本発明は、被験者の検体におけるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチド、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチドの発現、および／またはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１活性における変化の存在を検出するための物および試薬を含む診断キットにも関する。本発明に従った該診断キットは、本発明に記載の任意のプライマー、プライマー対、核酸プローブおよび／またはリガンド、好ましくは抗体を含む。本発明に従った該診断キットはさらにハイブリダイゼーション、増幅、または抗原−抗体免疫反応を実施するための試薬および／またはプロトコルをさらに含むことができる。
【００９３】
診断方法は、インビトロ、エクスビボ、またはインビボ、好ましくはインビトロまたはエクスビボで実施可能である。これらにおいては、被験者の検体を用いて、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の状態を評価する。検体は、核酸またはポリペプチドを含む、被験者由来の任意の生物検体が可能である。該検体の例として、体液、組織、細胞検体、器官、生検などが挙げられる。最も好ましい検体は、血液、血漿、唾液、尿、精液などである。例えば胎児細胞や胎盤細胞の検査によって出生前診断を実施することも可能である。従来の方法に従って検体を採取して、診断に直接使用するか、保存することが可能である。検査において核酸またはポリペプチドの可用性を与える、もしくは向上させるために、該方法の実施前に検体を処理可能である。処理としては、例えば溶解（例えば、機械的、物理的、化学的など）、遠心分離などが挙げられる。また、核酸および／またはポリペプチドを従来の方法で前精製または濃縮する、および／または複雑性を低減させることができる。核酸およびポリペプチドに酵素処理、または他の化学的処理または物理的処理を施して、その断片を作成することもできる。請求の範囲に記載されている方法の高い感度を考慮すると、アッセイの実施にはごく微量の検体で十分である。
【００９４】
示されたように、変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の存在を評価するために、好ましくはプローブ、プライマーまたはリガンドなどの試薬を検体と接触させる。プレート、チューブ、ウェル、ガラスなどの適当なデバイス内で接触させることができる。具体的な実施態様では、核酸アレイまたは特異的リガンドアレイなど、試薬でコーティングされた基質上で接触させることができる。該基質は、ガラス、プラスチック、ナイロン、紙、金属、ポリマーなどを含む任意の担体といった固形または半固形基質でありうる。基質は、スライド、メンブレン、ビーズ、カラム、ゲルなどの様々な形状および大きさでありうる。試薬と検体の核酸またはポリペプチドとの間で複合体を形成するのに適した条件下で接触させることができる。
【００９５】
検体中の変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド、ＲＮＡまたはＤＮＡに関する知見は、被験者における変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の存在の徴候であり、これは自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の存在、素因、または進行の段階と相関する可能性がある。例えば、生殖細胞系にＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１突然変異を有する個体では、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を発症するリスクが増大している。被験者における変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の存在の判定によっても、より効果的でオーダーメイドされた、適切な治療的診断の計画が可能となる。また、発症前の段階でのこの判定によって、予防計画の適用が可能となる。
【００９６】
連鎖不平衡
第一のＳＮＰが目的のゲノム領域内、より具体的にはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座内で同定されれば、通常の技量を有する専門家であれば、最初のＳＮＰと連鎖不平衡にある追加のＳＮＰを容易に同定可能である。実際に、自閉症または関連する障害と関連する第一のＳＮＰと連鎖不平衡にある任意のＳＮＰは、この特性と関連しうる。したがって、ひとたび任意のＳＮＰと自閉症または関連する障害との関連が実証されれば、この特定領域内においてＳＮＰ密度を増すために、この特性と関連する追加のＳＮＰを発見することが重要となる。
【００９７】
任意のＳＮＰと連鎖不平衡にある追加のＳＮＰの同定には、（ａ）複数の個体由来の第一のＳＮＰを含む、または第一のＳＮＰの周辺のゲノム領域からの断片の増幅、（ｂ）第一の該ＳＮＰを含む、または第一のＳＮＰの周辺のゲノム領域内の第二のＳＮＰの同定、（ｃ）第一のＳＮＰと第二のＳＮＰとの間での連鎖不平衡解析の実施、および（ｄ）第一の該マーカーと連鎖不平衡にあるものとしての第二の該ＳＮＰの選択が含まれる。（ｂ）および（ｃ）の段階を含むサブコンビネーションも検討される。
【００９８】
ＳＮＰを同定して、連鎖不平衡解析を実施するための方法は、過度の実験もなく、周知の方法によって当業者によって実施可能である。
【００９９】
連鎖不平衡にあるこれらのＳＮＰは、本発明に従った方法、より特には本発明に従った診断方法においても使用可能である。
【０１００】
例えば、クローン病の連鎖遺伝子座は、染色体５ｑ３１上の１８ｃＭに及ぶ広範な領域にマッピングされている（Riouxら, 2000 and 2001）。領域全体に及ぶマイクロサテライトマーカーおよびＳＮＰの高密度マップを利用して、連鎖不平衡（ＬＤ）の有力な証拠が見出された。ＬＤの証拠を発見したため、著者らは、超高密度ＳＮＰマップを作成して、このマップから選択されたマーカーのより高密度な一群について研究した。多遺伝子座解析によって、ＴＤＴを利用してそれぞれ個別に関連付けられた複数のＳＮＰを特徴とする単一の共通したリスクハプロタイプを明確にした。これらのＳＮＰはリスクハプロタイプに固有であり、互いにほぼ完全なＬＤにあるために、本質的に情報の内容は同一である。これらのＳＮＰの同等の特性によって、遺伝的証拠のみに基づいてこの領域内の原因となる突然変異の同定が不可能となる。
【０１０１】
原因となる突然変異
自閉症または関連する障害に関与するＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の突然変異は、自閉症または関連する障害を呈する患者と対照の個体由来のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の配列を比較することで同定できる。ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のＳＮＰと自閉症または関連する障害との同定された関連に基づいて、同定された遺伝子座の突然変異をスキャンできる。好ましい一実施態様では、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子のエクソンおよびスプライシング部位、プロモーターなどの機能的領域およびその他の調節領域の突然変異がスキャンされる。好ましくは、自閉症または関連する障害を呈する患者が、自閉症または関連する障害と関連することが示されている突然変異を有しており、対照の個体は自閉症または関連する障害と関連する突然変異または対立遺伝子を有していない。自閉症または関連する障害を呈する患者が、対照である個体よりも高い頻度で、自閉症または関連する障害と関連することが示される突然変異を有することもありうる。
【０１０２】
該突然変異を検出するために使用される方法は、通常、以下の段階：自閉症または関連する障害を呈する患者および対照である個体由来のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子のＤＮＡ検体からの、自閉症または関連する障害と関連するＳＮＰまたはＳＮＰ群を含むＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子領域の増幅；増幅された領域の配列決定；自閉症または関連する障害を呈する患者および対照である個体由来のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子のＤＮＡ配列の比較；自閉症または関連する障害を呈する患者に対して特異的な突然変異の決定、からなる。
【０１０３】
したがって、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の原因となる突然変異の同定は、過度の実験もなく、周知の方法によって当業者によって実施可能である。
【０１０４】
例えば、原因となる突然変異は、以下の実施例において通常の方法を利用して同定されている。
【０１０５】
Ｈｕｇｏｔら（２００１）は、ポジショナルクローニング戦略を適用して、過去にクローン病に対する感受性と関連していることが見出されている１６番染色体の領域内においてクローン病への感受性の強い遺伝子変異体を同定した。潜在的な感受性の遺伝子座の位置を絞り込むために、２６個の遺伝子座のマイクロサテライトマーカーについて遺伝子型を特定して、伝達不平衡試験（transmission disequilibrium test）を利用してクローン病との関連を調べた。マクロサテライトマーカーＤ１６Ｓ１３６の１つの対立遺伝子間においてボーダーライン上の有意な関連性（borderline significant association）が発見された。周辺領域から１１個の追加のＳＮＰを選択して、数種のＳＮＰが有意な関連性を示した。ＮＯＤ２／ＣＡＲＤ１５遺伝子の１つのエクソン内にこの領域由来のＳＮＰ５−８が存在することが発見されており、非同義変化体であることが示されている。これによって、著者らによる５０ＣＤ患者におけるこの遺伝子の完全コード配列の配列決定が促された。さらに２つの非同義突然変異（ＳＮＰ１２およびＳＮＰ１３）が見出された。家系伝達不平衡試験（pedigree transmission disequilibrium test）を利用して、ＳＮＰ１３が最も有意に関連していた（ｐ＝６ｘ１０−６）。別の独立した研究では、４人の対照と比較して、１２人の罹患者由来のこの遺伝子のコード領域の配列決定によっても同じ変異体が発見された（Oguraら, 2001）。ＳＮＰ１３の稀な対立遺伝子は、ＮＯＤ２／ＣＡＲＤ１５タンパク質を切断することが予測される１ｂｐの挿入と一致した。この対立遺伝子は、対照と比較して頻度はかなり低いものの、健常な個人にも存在していた。
【０１０６】
同様に、Lesageら(2002)は、散発性症例１６６例および家族性症例２８７例、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）患者１５９例、健常な対照患者１０３例を含むＣＤ患者４５３例において、コード領域の系統的配列決定によってＣＡＲＤ１５の突然変異解析を実施した。同定された６７個の配列変化の内、９個はＣＤ患者における対立遺伝子頻度が５％以上であった。これらの内６例は多型と考えられ、３つ（ＳＮＰ１２−Ｒ７０２Ｗ、ＳＮＰ８−Ｇ９０８ＲおよびＳＮＰ１３−１００７ｆｓ）はＣＤの感受性と独立して関連していることが確認された。２７の稀な突然変異も潜在的な疾患の原因となる突然変異（ＤＣＭ：disease-causing mutation）と見なされた。３つの主な変異（Ｒ７０２Ｗ、Ｇ９０８Ｒ、１００７ｆｓ）は、全てのＣＤ突然変異のそれぞれ３２％、１８％、３１％を占めていたが、合計２７の稀な突然変異はＤＣＭの１９％を占めていた。全体で、突然変異の９３％は、遺伝子の３番目の末端に位置していた。ＵＣと関連する突然変異は発見されなかった。対照的に、二重突然変異を有する１７％を含め、ＣＤ患者の５０％は少なくとも１つのＤＣＭを有していた。
【０１０７】
薬剤スクリーニング
本発明は、新しい標的および薬剤候補のスクリーニング方法も提供もしくは導く。方法には、結合解析および／または機能解析が含まれ、インビトロ、細胞系、動物などにおいて実施できる。
【０１０８】
本発明の特定の目的は、生物活性化合物の選択方法にあり、該方法は、試験化合物と本発明のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチドとをインビトロで接触させること、および該試験化合物と該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチドとの結合能を測定することを含む。該遺伝子またはポリペプチドとの結合は、化合物が該標的の活性を調節して、ひいては被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を招く経路に影響を及ぼす能力に関する徴候となる。好ましい一実施態様では、該方法は、試験化合物と本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片とをインビトロで接触させること、および該試験化合物が該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたは断片と結合する能力を測定することを含む。該断片は好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの結合部位を含む。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１遺伝子またはポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１遺伝子またはポリペプチドまたはその断片である。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはポリペプチドまたはその断片である。
【０１０９】
本発明の特定の目的は、自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害に対して活性を有する化合物の選択方法にあり、該方法は、試験化合物と本発明のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたは結合部位を含むその断片とをインビトロで接触させること、および該試験化合物が該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片と結合する能力を測定することを含む。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドまたはその断片である。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片である。
【０１１０】
さらなる特定の一実施態様では、方法は、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドを発現する組換え宿主細胞と試験化合物とを接触させること、および該試験化合物が該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１に結合してＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの活性を調節する能力を測定することを含む。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドまたはその断片である。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片である。
【０１１１】
試験化合物の標識化、標識済み対照リガンドとの競合など、様々な方法を利用して結合を決定できる。
【０１１２】
本発明のさらなる目的は、生物活性化合物の選択方法にあり、該方法は、試験化合物と本発明のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドとをインビトロで接触させること、および該試験化合物による該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの活性調節能を測定することを含む。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１ポリペプチドまたはその断片である。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片である。
【０１１３】
本発明のさらなる目的は、生物活性化合物の選択方法にあり、該方法は、試験化合物と本発明のＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子とをインビトロで接触させること、および該試験化合物による該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の発現調節能を測定することを含む。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１遺伝子またはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１遺伝子またはその断片である。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはその断片である。
【０１１４】
別の一実施態様では、本発明は、活性のある化合物、特に自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害に対して活性を有する化合物のスクリーニング、選択または同定の方法と関連しており、該方法は、試験化合物とレポーターコンストラクト（該レポーターコンストラクトはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子プロモーターの制御下にあるレポーター遺伝子を含む）を含む組換え宿主細胞とを接触させること、およびレポーター遺伝子の発現を調節する（例えば、刺激または減少させる）試験化合物を選択することを含む。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１遺伝子プロモーターまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１遺伝子プロモーターまたはその断片である。好ましくは、該ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子プロモーターまたはその断片は、変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１１遺伝子プロモーターまたはその断片である。
【０１１５】
スクリーニング方法の特定の一実施態様では、調節は抑制である。スクリーニング方法の別の特定の一実施態様では、調節は活性化である。
【０１１６】
上記のスクリーニングアッセイは、プレート、チューブ、ディッシュ、フラスコなどの適当なデバイス内において実施可能である。通常、アッセイはマルチウェルプレート内で実施する。数種の試験化合物を同時にアッセイ可能である。さらに、試験化合物の由来、性質および組成は多様でありうる。単離された、または他の物質との混合物においての、脂質、ペプチド、ポリペプチド、核酸、小分子などの有機物質または無機物質でありうる。化合物は、例えば物の組み合わせライブラリーの全体または一部でありうる。
【０１１７】
薬学的組成物、治療
本発明のさらなる目的は、（ｉ）ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸、上記のベクターまたは組換え宿主細胞、および（ｉｉ）医薬的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物である。
【０１１８】
本発明は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を治療または予防する方法とも関連しており、該方法は機能的（例えば、野生型）ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはこれをコード化する核酸の該被験者への投与を含む。
【０１１９】
本発明の別の一実施態様は、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害を治療または予防する方法にあり、該方法は、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはタンパク質の発現または活性を調節する、好ましくは活性化または模倣する化合物の該被験者への投与を含む。該化合物は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のアゴニストまたはアンタゴニスト、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のアンチセンスまたはＲＮＡｉ、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに対して特異的な抗体または断片またはその派生物でありうる。該方法の特定の一実施態様では、調節は抑制である。該方法の別の特定の一実施態様では、調節は活性化である。
【０１２０】
本発明は概して、被験者における自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の治療または予防のための医薬組成物の製造における、機能的なＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド、これをコード化する核酸、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはタンパク質の発現または活性を調節する化合物の使用とも関連している。化合物は、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のアゴニストまたはアンタゴニスト、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１のアンチセンスまたはＲＮＡｉ、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドに対して特異的な抗体または断片またはその派生物でありうる。該方法の特定の一実施態様では、調節は抑制である。該方法の別の特定の一実施態様では、調節は活性化である。
【０１２１】
本発明によって、自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座との相関が実証される。このように、本発明によって治療的診断の新しい標的が提供される。被験者、特に変化したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座を有する被験者におけるＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１の活性または機能を回復または調節するための様々なアプローチを検討可能である。野生型の機能を該被験者に与えることで、病的な細胞または生物における自閉症、自閉症領域障害、および自閉症関連の障害の表現型の発現が抑制されることが期待される。該機能の供給は、遺伝子またはタンパク質治療、またはＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの活性を調節または模倣する化合物（例えば、上記のスクリーニングアッセイにおいて同定されたアゴニスト）の投与によって達成可能である。
【０１２２】
上記のベクターを利用して、野生型ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはその機能的部分を、これらを必要としている被験者の細胞内に導入可能である。ベクターはウイルスベクターまたはプラスミドでありうる。該遺伝子を裸のＤＮＡとしても導入可能である。レシピエントの宿主細胞のゲノム内に取り込ませる、または染色体外に残存させるように、該遺伝子を供給可能である。組み込みは、相同組換えなどによって、ランダムに、または正確に定められた部位で生じうる。特に、相同組換えによる細胞内の変化したバージョンとの置換で機能的ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子のコピーを挿入可能である。別の方法として、遺伝子銃、リポソーム媒介のトランスフェクション、陽イオン性脂質媒介のトランスフェクションなどが挙げられる。遺伝子治療は、直接の遺伝子注入、または機能的なＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドを発現するエクスビボで調製された遺伝子組換え細胞の投与によって達成可能である。
【０１２３】
ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１活性を伴う他の分子（例えば、ペプチド、薬剤、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１アゴニスト、または有機化合物）を使用して、被験者における機能的なＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１活性を回復させる、または細胞内の有害な表現型を抑制させることが可能である。
【０１２４】
細胞内での機能的なＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の機能の回復を利用して、自閉症、自閉症領域障害、または自閉症関連の障害の発症を予防する、または該疾患の進行を低下させることが可能である。該処置は、細胞、特に有害対立遺伝子を有する細胞の自閉症と関連する表現型を抑制可能である。
【０１２５】
本発明の別の態様および利点は、以下の実験の項で開示されており、これらは実例として見なすべきであり、本出願の範囲を限定しない。
【０１２６】
遺伝子、ベクター、組換え細胞、ポリペプチド
本発明の別の態様は、診断、治療またはスクリーニングに使用される新規な物にある。これらの物には、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片をコード化する核酸分子、これらを含むベクター、組換え宿主細胞、および発現ポリペプチドがある。
【０１２７】
特に、本発明は、該変化または突然変異を含む、変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはその断片と関連する。本発明は、該変化または突然変異を含む、変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片をコード化する核酸分子とも関連する。該変化または突然変異によってＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１の活性が改変される。改変された活性は増減しうる。本発明はさらに、該変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはその断片、または該変化または突然変異を含む変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその断片をコード化する核酸分子を含むベクター、組換え宿主細胞、および発現ポリペプチドに関連している。
【０１２８】
本発明の別の目的は、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドをコード化する核酸を含むベクターである。該ベクターとして、クローニングベクター、より好ましくは発現ベクター、つまりコンピテント宿主細胞内の該ベクターからＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドを発現させる調節配列を含むベクターが可能である。
【０１２９】
これらのベクターを使用して、インビトロ、エクスビボまたはインビボでのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの発現、トランスジェニックまたは「ノックアウト」のヒト以外の動物の作成、核酸の増幅、アンチセンスＲＮＡの発現などが可能となる。
【０１３０】
本発明のベクターは通常、調節配列（例えば、プロモーター、ポリＡなど）と機能的に連結された、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１コード配列を含む。「機能的に連結された（operably linked）」という用語は、コード配列および調節配列が機能的に関連しており、該調節配列がコード配列の発現（例えば、転写）を起こすことを示す。ベクターはさらに１個または数個の複製起点および／または選択マーカーを含みうる。プロモーター領域は、コード配列に関してホモ接合性またはヘテロ接合性であり、インビボでの使用を含め、適当な任意の宿主細胞内において普遍的かつ構成的な、調節された、および／または組織特異的発現をもたらしうる。プロモーターの例として、細菌プロモーター（Ｔ７、ｐＴＡＣ、Ｔｒｐプロモーターなど）、ウイルスプロモーター（ＬＴＲ、ＴＫ、ＣＭＶ−ＩＥなど）、哺乳動物遺伝子のプロモーター（アルブミン、ＰＧＫなど）などが挙げられる。
【０１３１】
ベクターは、プラスミド、ウイルス、コスミド、ファージ、ＢＡＣ、ＹＡＣなどが可能である。プラスミドベクターは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＵＣ、ｐＢＲなどの市販のベクターから調製可能である。ウイルスベクターは、周知の組換えＤＮＡ技術に従って、バキュロウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、ＡＡＶなどから作成可能である。
【０１３２】
この点について、本発明の特別な目的は、先に定義されているＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドをコードする組換えウイルスにある。組換えウイルスは、好ましくは複製能を欠いており、さらに好ましくは、Ｅ１および／またはＥ４欠損アデノウイルス、Ｇａｇ、ｐｏｌおよび／またはｅｎｖ欠損レトロウイルス、ならびにＲｅｐおよび／またはＣａｐ欠損ＡＡＶから選択される。該組換えウイルスは、パッケージング細胞へのトランスフェクション、またはヘルパープラスミドまたはウイルスの一過性トランスフェクションなどの周知の技術によって作成可能である。ウイルスのパッケージング細胞の典型例として、ＰＡ３１７細胞、ＰｓｉＣＲＩＰ細胞、ＧＰｅｎｖ＋細胞、２９３細胞などが挙げられる。複製能を欠損した該組換えウイルスの作成のための詳細なプロトコールは、例えばＷＯ９５／１４７８５、ＷＯ９６／２２３７８、ＵＳ５，８８２，８７７、ＵＳ６，０１３，５１６、ＵＳ４，８６１，７１９、ＵＳ５，２７８，０５６、およびＷＯ９４／１９４７８において見ることができる。
【０１３３】
本発明の別の目的は、先の定義されている組換えＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはベクターを含む組換え宿主細胞にある。適当な宿主細胞として、原核生物細胞（細菌など）および真核生物細胞（酵母細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞など）が挙げられるが、これらに限定されない。具体例として、哺乳動物の初代培養細胞または細胞株（例えば、繊維芽細胞、胚細胞、上皮細胞、神経細胞、脂肪細胞などから作成）の他、E. coli、KluyveromycesまたはSaccharomyces酵母、哺乳動物細胞（例えば、Ｖｅｒｏ細胞、ＣＨＯ細胞、３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞など）が挙げられる。
【０１３４】
本発明は、本発明に従ったＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドを発現する組換え宿主細胞の作成方法とも関連しており、該方法は、（ｉ）コンピテント宿主細胞への上記組換え核酸またはベクターのインビトロまたはエクスビボでの導入、（ｉｉ）得られた組換え宿主細胞のインビトロまたはエクスビボでの培養、および（ｉｉｉ）任意で、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドを発現する細胞の選択を含む。
【０１３５】
該組換え宿主細胞は、下記のとおり、活性分子のスクリーニングの他、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドの生産に使用可能である。該細胞は、自閉症を研究するためのモデル系としても使用可能である。これらの細胞は、適当な培養器（プレート、フラスコ、ディッシュ、チューブ、ポーチなど）内で、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ、ＨＡＭなどの適当な培地で維持可能である。
【０１３６】
実施例
１．３番染色体の感受性遺伝子を同定するためのＧｅｎｏｍｅＨＩＰプラットフォーム
自閉症の感受性遺伝子を迅速に同定するために、ＧｅｎｏｍｅＨＩＰプラットフォームを適用可能であった。
【０１３７】
簡単に説明すると、該技術は、関係する個体でのＤＮＡ対形成を含む。各ＤＮＡを特異的標識で印を付けて、同定可能にする。次に、２つのＤＮＡ間でハイブリッドを形成させる。次に、特定のプロセス（ＷＯ００／５３８０２）を適用して、複数段階の手順で２つのＤＮＡから同祖的な（ＩＢＤ）全ての断片を選択する。次に、ＩＢＤ分画の染色体ポジショニングを可能にするＢＡＣクローン由来のＤＮＡマイクロアレイに対して、残りのＩＢＤ濃縮ＤＮＡをスコアリングする。
【０１３８】
多くの異なる家族にこのプロセスを適用することで、各家族由来の各対についてＩＢＤ分画のマトリクスがもたらされる。次に、統計解析によって、被験家族間で共有される最小ＩＢＤ領域が計算される。有意な結果（ｐ値）は、目的の特性（自閉症）を伴う陽性領域での連鎖の証拠である。有意なｐ値を示す最も遠い２つのクローンによって連鎖間隔の範囲を定めることが可能である。
【０１３９】
今回の研究では、厳密な自閉症（ＡＤＩ−Ｒにより定義）と一致する米国の１１４の家族（独立した１１４の同胞対）が、ＧｅｎｏｍｅＨＩＰプロセスを受けた。次に、結果として得られたＩＢＤ濃縮ＤＮＡ分画をＣｙ５蛍光色素で標識して、平均間隔１．２Ｍｂｐのヒトゲノム全体をカバーする２，２６３個のＢＡＣクローンからなるＤＮＡアレイに対してハイブリダイズさせた。Ｃｙ３標識された非選択ＤＮＡを使用して、各クローンのシグナル値を標準化し、比率を計算した。次に、比率結果のクラスタリングを実施して、各クローンおよび対になったクローンのＩＢＤ状態を判定した。
【０１４０】
この手順を適用することで、自閉症との連鎖に関する有意な証拠（ｐ＝６．４ｅ−０５）を示すＢＡＣクローン（ＦＥ０ＤＢＡＣＡ１７ＺＧ０５ｖ）を同定した。KruglyakとLander(1995)が提示した全ゲノムスクリーニングのための有意水準として、連鎖を示唆する有意水準に相当するｐ値２．４ｅ−０４を利用した。連鎖の有意な証拠を示すＢＡＣクローンの近位、遠位のクローンによって定められる連鎖領域は、３番染色体上の約２．１８Ｍｂｐの領域に及んでいた（塩基９２８３６７０〜１１４６４５７７）。
【０１４１】
表１：ＳＬＣ６Ａ１およびＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座内の３番染色体に関する連鎖結果：連鎖の証拠を示すＢＡＣクローンと一致する領域が示されている。クローンの開始および停止位置は、染色体の開始位置（p-ter）に関するＮＣＢＩ  Ｂｕｉｌｄ３４に基づくゲノム位置と一致する。
【０１４２】
【表１】
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【０１４３】
２．  ３番染色体上の自閉症感受性遺伝子の同定
連鎖している染色体領域内の上記の２．１８Ｍｂｐをスクリーニングすることで、自閉症および関連する表現型の候補遺伝子として、溶質キャリアファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１遺伝子および溶質キャリアファミリー６（神経伝達物質輸送体、ＧＡＢＡ）メンバー１１遺伝子を同定した。これらの遺伝子は実際に重要な間隔内に存在しており、上にまとめたクローンによって範囲の定められた連鎖が証拠である。
【０１４４】
ＳＬＣ６Ａ１遺伝子は、ＮＰ＿００３０３３（ｍＲＮＡ  ＮＭ＿００３０４２，４４９３ｂｐ）の推定５９９アミノ酸のポリペプチドをコード化しており、ゲノム配列の４６．５ｋｂにわたって広がっている。この遺伝子によってコード化されるタンパク質は、γアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を輸送するナトリウム：神経伝達物質シンポーター（ＳＮＦ）ファミリーの一員であり、シナプス前終末への高親和性のナトリウム依存的な再取り込みによってＧＡＢＡの作用を終結させる。このタンパク質は、アンフェタミンまたはコカインなどの精神運動興奮薬の標的である。
【０１４５】
ＳＬＣ６Ａ１１遺伝子は、ＮＰ＿０５５０４４（ｍＲＮＡ  ＮＭ＿０１４２２９，１９９１ｂｐ）の推定６３２アミノ酸のポリペプチドをコード化しており、ゲノム配列の１２２．２ｋｂにわたって広がっている。この遺伝子によってコード化されるタンパク質は、主要な抑制性神経伝達物質であるγアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を輸送するナトリウム：神経伝達物質シンポーター（ＳＮＦ）ファミリーの一員である。ＧＡＢＡによる神経伝達は、ＳＬＣ６Ａ１１などのナトリウム依存性輸送体によるシナプス前終末および周囲の星状膠細胞内へのＧＡＢＡの取り込みによって終結する。
【０１４６】
自閉症で認められる重度の破壊は、ＧＡＢＡによる抑制と関連しており、グルタミン酸特異的ニューロンの過剰な刺激および感覚ゲートの喪失を招きうるとの仮説が立てられている（Hussman, 2001）。
【０１４７】
低グルタミン酸作動性げっ歯類モデルで、自閉症において見られる認識機能障害と関連しうるある種の行動が認められている（Nilssonら, 2001）。
【０１４８】
グルタミン酸脱炭酸酵素の６５および６７ｋＤａのレベルの減少は、報告されている、自閉症の被験者における血液および血小板中のグルタミン酸の増加を説明しうる（Fatemiら, 2002）。グルタミン酸脱炭酸酵素の欠乏は、グルタミン酸／γアミノ酪酸のレベル、または自閉症の脳における輸送体／受容体の密度における異常に起因するか、関連する可能性がある。さらに、グルタミン酸受容体の密度の低下が、自閉症患者の小脳において認められている（Purcellら, 2001）。
【０１４９】
まとめると、本出願において提供された、ＧＡＢＡ輸送に関与する３番染色体上の自閉症と関連する遺伝子変化の重要な間隔内においてヒトのＳＬＣ６Ａ１およびＳＬＣ６Ａ１１遺伝子を同定している連鎖結果から、ＳＬＣ６Ａ１および／またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子またはその調節配列の変化（例えば、突然変異および／または多型）がヒトでの自閉症発症の一因となり、診断または治療的診断の新しい標的を示している可能性があると結論付けた。
【０１５０】
【表２】
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【図面の簡単な説明】
【０１５１】
【図１】Genomic Hybrid Identity Profiling（ＧｅｎｏｍｅＨＩＰ）を利用した高密度マッピング。
【図１】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年10月30日(2007.10.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者における自閉症または自閉症領域障害の存在または素因を検出するインビトロでの方法であって、被験者からの検体でのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項２】
被験者における自閉症または自閉症領域障害からの防御を検出するインビトロでの方法であって、被験者からの検体でのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項３】
自閉症または自閉症領域障害の処置に対する被験者の反応を評価するインビトロでの方法であって、被験者からの検体でのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項４】
自閉症または自閉症領域障害の処置に対する被験者の有害反応を評価するインビトロでの方法であって、被験者の検体でのＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在を検出することを含む方法。
【請求項５】
ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子座の変化の存在が、塩基配列決定、選択的ハイブリダイゼーション、および／または選択的増幅によって検出される、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
該変化が、自閉症と関連する1個または数個のＳＮＰまたはＳＮＰのハプロタイプである、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
自閉症または自閉症領域障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドまたはその遺伝子またはその断片とを接触させること、および該試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド、またはその遺伝子またはその断片との結合能を測定することを含む方法。
【請求項８】
自閉症または自閉症領域障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドを発現する組換え宿主細胞とを接触させること、および該試験化合物と該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチドとの結合能、およびＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１ポリペプチド活性の調節能を測定することを含む方法。
【請求項９】
自閉症または自閉症領域障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物とＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子とを接触させること、および該試験化合物による該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子の発現調節能を測定することを含む方法。
【請求項１０】
自閉症または自閉症領域障害に対する生物学的活性化合物の選択方法であって、試験化合物と、ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子プロモーターの制御下にあるレポーター遺伝子を含むレポーターコンストラクトを含む組換え宿主細胞とを接触させること、および該レポーター遺伝子の発現を調節する（例えば、促進または減少させる）試験化合物を選択することを含む方法。
【請求項１１】
該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子、またはそのポリペプチドまたはその断片が、変化または突然変異したＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１遺伝子、または該変化または突然変異を含むそのポリペプチドまたはその断片である、請求項７〜１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
該調節が活性化である、請求項７〜１１のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
該調節が抑制である、請求項７〜１１のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１がＳＬＣ６Ａ１である、請求項１〜１３のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
該ＳＬＣ６Ａ１またはＳＬＣ６Ａ１１がＳＬＣ６Ａ１１である、請求項１〜１３のいずれか一項記載の方法。
【国際調査報告】
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