(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の新規テトラヒドロキノリン誘導体（式中、Ｒ１は、シクロヘキシルまたはシクロペンチルを表し、Ｒ２およびＲ３は、各々メチルを表すか、または、一体となってシクロブタンを形成しており、Ｒ４は、シクロペンチルまたはイソプロピルを表す）、並びにそれらの塩および溶媒和物、および塩の溶媒和物に関する。それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のための、単独でまたは組合せ中でのその使用、並びに医薬製造のためのそれらの使用、特に、心血管障害、特に低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症および動脈硬化症を処置および／または予防するためのコレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤としてのものに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2008524137.tif 000091
（式中、Ｒ１は、シクロヘキシルまたはシクロペンチルを表し、Ｒ２およびＲ３は、各々メチルを表すか、または、一体となってシクロブタンを形成しており、Ｒ４は、シクロペンチルまたはイソプロピルを表す）
の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項２】
式（Ｉａ）
【化２】
2008524137.tif 000092
の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項３】
式（Ｉｂ）
【化３】
2008524137.tif 000093
の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項４】
式（Ｉｃ）
【化４】
2008524137.tif 000094
の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項５】
式（Ｉｄ）
【化５】
2008524137.tif 000095
の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項６】
式（Ｉｅ）
【化６】
2008524137.tif 000096
の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項７】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
冠動脈心疾患の一次的および／または二次的予防のための医薬を製造するための、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項９】
低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症、動脈硬化症、再狭窄、肥満、肥満症、糖尿病、卒中およびアルツハイマー病の処置および／または予防のための医薬を製造するための、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１０】
請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１１】
請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、抗糖尿病剤、血小板凝集阻害剤、抗凝血剤、カルシウム拮抗薬、アンジオテンシンＡＩＩアンタゴニスト、ＡＣＥ阻害剤、ベータ遮断薬、ホスホジエステラーゼ阻害剤、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤、ｃＧＭＰ増強剤、利尿剤、甲状腺受容体アゴニスト、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレンシンターゼ阻害剤、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤、オキシドスクアレンシクラーゼ阻害剤、ＡＣＡＴ阻害剤、ＭＴＰ阻害剤、ＰＰＡＲアゴニスト、フィブラート、リパーゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、胆汁酸再吸収阻害剤、ポリマー性胆汁酸吸着剤およびリポタンパク質（ａ）アンタゴニストからなる群から選択される１種またはそれ以上のさらなる活性化合物と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１２】
冠動脈心疾患の一次的および／または二次的予防のための、請求項１０または請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症、動脈硬化症、再狭窄、肥満、肥満症、糖尿病、卒中およびアルツハイマー病の処置および／または予防のための、請求項１０または請求項１１に記載の医薬。
【請求項１４】
有効量の請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物または請求項１０ないし請求項１３のいずれかに記載の医薬を投与することによる、ヒトおよび動物の冠動脈心疾患の一次的および／または二次的予防方法。
【請求項１５】
有効量の請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物または請求項１０ないし請求項１３のいずれかに記載の医薬を投与することによる、ヒトおよび動物の低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症、動脈硬化症、再狭窄、肥満、肥満症、糖尿病、卒中およびアルツハイマー病の処置および／または予防方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
式（ＩＩ）の化合物（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、各々上記定義の通りである）を、最初に、不斉還元により、式（ＩＩＩ）の化合物に変換し、次いで、それを、
［Ａ］ヒドロキシル保護基の導入により、式（ＩＶ）の化合物｛式中、ＰＧは、ヒドロキシル保護基、好ましくは式−ＳｉＲ１Ｒ２Ｒ３のラジカル（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同一かまたは異なり、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを表す）を表す｝に変換し、次いで、ジアステレオ選択的還元により、式（Ｖ）の化合物（式中、ＰＧは上記定義の通りである）に変換するか、
または、
［Ｂ］最初にジアステレオ選択的に還元し、式（ＶＩ）の化合物を得、次いで、それを、ヒドロキシル保護基ＰＧの位置選択的導入により、式（Ｖ）の化合物に変換し、
次いで、式（Ｖ）の化合物を、フッ素化剤を使用して、式（ＶＩＩ）の化合物（式中、ＰＧは上記定義の通りである）の化合物に変換し、
次いで、ヒドロキシル保護基ＰＧを、常套の方法により切断し、式（Ｉ）の化合物を得、
そして、式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、その溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換すること、
を特徴とする、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、新規テトラヒドロキノリン誘導体、その製造方法、疾患の処置および／または予防のための、単独でまたは組合せ中でのその使用、並びに医薬製造のためのその使用、特に、心血管障害、特に低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症および動脈硬化症の処置および／または予防用のコレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤としてのものに関する。
【背景技術】
【０００２】
動脈硬化症に起因する冠動脈心疾患は、現代社会における主な死亡原因の１つである。多数の研究において、ＨＤＬコレステロールの血漿濃度が低いことは、動脈硬化症発症の重要なリスク因子であることが示された [Barter and Rye, Atherosclerosis 121, 1-12 (1996)］。ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）およびＶＬＤＬ（超低密度リポタンパク質）に加えて、ＨＤＬ（高密度リポタンパク質）は、その最も重要な機能が、血液中での、例えばコレステロール、コレステロールエステル、トリグリセリド、脂肪酸またはリン脂質などの脂質の輸送である、リポタンパク質のクラスである。高いＬＤＬコレステロール濃度（＞１６０ｍｇ／ｄｌ）および低いＨＤＬコレステロール濃度（＜４０ｍｇ／ｄｌ）は、動脈硬化症の発症に実質的に寄与する［ATP III Guidelines, Report of the NCEP Expert Panel］。冠動脈心疾患に加えて、不都合なＨＤＬ／ＬＤＬ比も、末梢血管障害および卒中の発症を促進する。従って、血漿中のＨＤＬコレステロールを高める新しい方法は、動脈硬化症およびそれに関連する障害の予防および処置において、治療的に有用な進歩である。
【０００３】
コレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）は、血液中で異なるリポタンパク質間でのコレステロールエステルとトリグリセリドの交換を媒介する［Tall, J. Lipid Res. 34, 1255-74 (1993)］。ここで特に重要なのは、血漿ＨＤＬコレステロール濃度の低下をもたらすＨＤＬからＬＤＬへのコレステロールエステルの転送ある。従って、ＣＥＴＰの阻害は、血漿ＨＤＬコレステロール濃度の上昇および血漿ＬＤＬコレステロール濃度の低下をもたらし、かくして血漿中の脂質プロフィールに対して治療的に有効な効果をもたらすであろう［McCarthy, Medicinal Res. Rev. 13, 139-59 (1993); Sitori, Pharmac. Ther. 67, 443-47 (1995); Swenson, J. Biol. Chem. 264, 14318 (1989)]。
【０００４】
薬理活性を有するテトラヒドロキノリンは、ＥＰ−Ａ−８１８４４８、ＷＯ９９／１４２１５、ＷＯ９９／１５５０４およびＷＯ０３／０２８７２７から公知である。薬理活性を有する置換テトラヒドロナフタレンは、ＷＯ９９／１４１７４から公知である。
【発明の開示】
【０００５】
本発明の目的は、障害、特に心血管障害を制御するための、改善された治療プロフィールを有する新規物質を提供することである。
【０００６】
本発明は、構造式（Ｉ）
【化１】
2008524137.tif 000002
（式中、Ｒ１は、シクロヘキシルまたはシクロペンチルを表し、Ｒ２およびＲ３は、各々メチルを表すか、または、一体となってシクロブタンを形成しており、Ｒ４は、シクロペンチルまたはイソプロピルを表す）
の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【０００７】
本発明は、特に、体系的名称（５'Ｓ）−４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'−オールおよび構造式（Ｉａ）
【化２】
2008524137.tif 000003
を有する化合物並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【０００８】
本発明は、また、特に、体系的名称（５'Ｓ）−２',４'−ジシクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'−オールおよび構造式（Ｉｂ）
【化３】
2008524137.tif 000004
を有する化合物並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【０００９】
本発明は、また、特に、体系的名称（５'Ｓ）−４'−シクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−２'−イソプロピル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−５'−オールおよび構造式（Ｉｃ）
【化４】
2008524137.tif 000005
を有する化合物並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【００１０】
本発明は、また、体系的名称（５Ｓ）−２,４−ジシクロペンチル−３−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−５−オールおよび構造式（Ｉｄ）
【化５】
2008524137.tif 000006
を有する化合物並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【００１１】
本発明は、また、特に、体系的名称（５Ｓ）−４−シクロヘキシル−３−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−５−オールおよび構造式（Ｉｅ）
【化６】
2008524137.tif 000007
を有する化合物並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【００１２】
これ以降、本発明による式（Ｉａ）−（Ｉｅ）の化合物群を、本発明による式（Ｉ）の化合物と１個にまとめて表す。
【００１３】
本発明による化合物は、他の立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在することもできる。本発明は、全てのエナンチオマー、ジアステレオマーおよびそれらの各々の混合物を含む。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、立体異性体的に均一な成分を既知のやり方で単離できる。好ましいのは、式（Ｉ）中に示すＣ−５'およびＣ−３'でのＳ−配置である。
【００１４】
本発明に関して、好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容し得る塩である。しかしながら、それら自体は医薬適用に適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も含まれる。
【００１５】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１６】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、また、常套の塩基の塩が含まれる。例えば、そして好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは１個ないし１６個の炭素原子を有する有機アミン（例えば、そして好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびＮ−メチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩が含まれる。
【００１７】
本発明に関して、溶媒和物は、固体または液体状態で、溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明による化合物の形態を表す。水和物は、配位が水とのものである、溶媒和物の特別な形態である。本発明に関して、好ましい溶媒和物は水和物である。
【００１８】
さらに、本発明は、また、本発明による化合物のプロドラッグも含む。用語「プロドラッグ」には、それら自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、それらの体内残留時間中に（例えば代謝的または加水分解的に）本発明による化合物に変換される化合物が含まれる。
【００１９】
本発明に関して、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルを表す。以下のラジカルは、例として、そして好ましいものとして言及し得る：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチル。
【００２０】
本発明は、さらに、本発明による式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、各々上記定義の通りである）の製造方法を提供し、それを、例示的に式（Ｉａ）の化合物について示すと、式（ＩＩ）
【化７】
2008524137.tif 000008
の化合物を、最初に、不斉還元により、式（ＩＩＩ）
【化８】
2008524137.tif 000009
の化合物に変換し、次いで、それを、
【００２１】
［Ａ］ヒドロキシル保護基の導入により、式（ＩＶ）
【化９】
2008524137.tif 000010
｛式中、ＰＧは、ヒドロキシル保護基、好ましくは式−ＳｉＲ１Ｒ２Ｒ３のラジカル（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、同一かまたは異なり、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを表す）を表す｝
の化合物に変換し、次いで、ジアステレオ選択的還元により、式（Ｖ）
【化１０】
2008524137.tif 000011
（式中、ＰＧは上記定義の通りである）
の化合物に変換するか、
【００２２】
または、反応順序を逆にして、
［Ｂ］最初に、ジアステレオ選択的に還元し、式（ＶＩ）
【化１１】
2008524137.tif 000012
の化合物を得、次いで、それを、ヒドロキシル保護基ＰＧの位置選択的導入により、式（Ｖ）の化合物に変換し、
【００２３】
次いで、式（Ｖ）の化合物を、フッ素化剤を使用して反応させ、式（ＶＩＩ）
【化１２】
2008524137.tif 000013
（式中、ＰＧは上記定義の通りである）
の化合物を得、次いで、ヒドロキシル保護基ＰＧを、常套の方法により切断し、式（Ｉ）の化合物を得る、
そして、式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、その溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換する、
ことを特徴とする。
【００２４】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）および（Ｘ）
【化１３】
2008524137.tif 000014
の化合物を、３成分反応で、プロトン酸またはルイス酸の存在下、相互に反応させ、式（ＸＩ）
【化１４】
2008524137.tif 000015
の化合物を得、次いで、この化合物を式（ＩＩ）の化合物に酸化することにより製造できる。
【００２５】
式（ＶＩＩＩ）および（Ｘ）の化合物は、購入できるか、文献から知られているか、または文献からわかる方法と同様に製造できる（ＷＯ９９／１４２１５およびＷＯ０３／０２８７２７参照）。
【００２６】
式（ＩＸ）の化合物は、酸に触媒されるシクロプロパノンアセタールの１−（トリフェニルホスホルアニリデン）アセトンのウィティッヒ反応により、１−シクロプロピリデンアセトンを得、続いてマロン酸エステルと反応させることにより、得ることができる（スキーム１参照；ＷＯ０３／０２８７２７並びに I. Kortmann, B. Westermann, Synthesis 1995, 931-933 参照)。
【００２７】
個々の工程に適する不活性溶媒は、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、グリコールジメチルエーテルもしくはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル類、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン、シクロヘキサンもしくは鉱油留分などの炭化水素類、または、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素、１,２−ジクロロエタン、トリクロロエチレンもしくはクロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素類である。言及した溶媒の混合物を使用することも可能である。
【００２８】
工程（ＩＩ）→（ＩＩＩ）、（ＩＶ）→（Ｖ）および（ＩＩＩ）→（ＶＩ）の還元は、一般的に、ケトンをヒドロキシル化合物に還元するのに適する還元剤を使用して実施する。これらには、特に、錯体のアルミニウムヒドリドまたはボロヒドリド、例えば、水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化ホウ素亜鉛、水素化リチウムアルミニウム、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＨ）、ナトリウムビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムジヒドリド、リチウムトリアルキルボロヒドリドまたはリチウムトリアルコキシアルミニウムヒドリド、または、ボラン錯体、例えば、ボランテトラヒドロフラン、ボランジメチルスルフィド、またはボランＮ,Ｎ−ジエチルアニリン錯体が含まれる。
【００２９】
工程（ＩＩ）→（ＩＩＩ）の不斉還元は、キラル誘導剤としての触媒量（０.０１ないし０.３ｍｏｌ当量）のエナンチオマー的に純粋な（１Ｒ,２Ｓ）−１−アミノインダン−２−オールの存在下で実施する。この目的で好ましく使用される還元剤は、ボランＮ,Ｎ−ジエチルアニリン錯体である。この反応は、一般的には、上記に挙げたエーテル類の１種またはトルエン中で、好ましくはテトラヒドロフラン中で、−８０℃ないし＋５０℃、好ましくは０℃ないし＋３０℃の温度範囲で実施する。
【００３０】
還元（ＩＶ）→（Ｖ）および（ＩＩＩ）→（ＶＩ）に使用する還元剤は、好ましくは水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＨ）である。この反応は、一般的には、上記に挙げたエーテル類の１種またはトルエン中で、好ましくはテトラヒドロフランまたはトルエン中で、−８０℃ないし＋５０℃、好ましくは−６０℃ないし＋３０℃の温度範囲で実施する。
【００３１】
工程（ＩＩＩ）→（ＩＶ）または（ＶＩ）→（Ｖ）に好ましいヒドロキシル保護基は、シリル基、例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリルまたはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである。特に好ましいのは、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである。シリル基は、一般的に、溶媒としての上述の炭化水素類、ハロゲン化炭化水素類、エーテル類の１種中、またはジメチルホルムアミド中で、塩基の存在下、例えば、トリエチルアミン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、２,６−ルチジンまたは４−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下に導入する。
【００３２】
工程（ＩＩＩ）→（ＩＶ）では、使用するシリル化剤は、好ましくは、塩基としての２,６−ルチジンと組み合わせたｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートである。この反応は、好ましくは、ジクロロメタンまたはトルエン中、−４０℃ないし＋４０℃、好ましくは−２０℃ないし＋３０℃の温度範囲で実施する。
【００３３】
工程（ＶＩ）→（Ｖ）では、使用するシリル化剤は、好ましくは、塩基としてのトリエチルアミンおよびＤＭＡＰと組み合わせたｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドである。この反応は、好ましくは、ジメチルホルムアミド中、０℃ないし＋１００℃、好ましくは＋２０℃ないし＋８０℃の温度範囲で実施する。
【００３４】
工程（ＶＩ）→（ＶＩＩ）のフッ素付加は、一般的に、上述の炭化水素類またはハロゲン化炭化水素類またはアセトニトリル中、好ましくはトルエンまたはジクロロメタン中、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）または三フッ化モルホリノ硫黄をフッ素化剤として使用して実施する。この反応は、一般的に、−８０℃ないし＋４０℃、好ましくは−６０℃ないし＋２０℃で実施する。
【００３５】
工程（ＶＩＩ）→（Ｉ）におけるシリル保護基の除去は、一般的に、例えば塩酸またはトリフルオロ酢酸などの酸を利用して、または、例えばフッ化水素またはフッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）などのフッ化物を利用して、実施する。適する不活性溶媒は、上述のエーテル類、メタノールもしくはエタノールなどのアルコール類、または、上述の溶媒の混合物である。この除去は、好ましくは、溶媒としてのテトラヒドロフラン中、ＴＢＡＦを使用して実施する。この反応は、一般的に、−２０℃ないし＋６０℃、好ましくは０℃ないし＋３０℃の温度範囲で実施する。
【００３６】
縮合反応（ＶＩＩＩ）＋（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ）は、一般的に、上述のエーテル類の１種中、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールもしくはイソプロパノールなどのアルコール類中、アセトニトリル中、または上述の溶媒の混合物中で実施する。好ましいのは、ジイソプロピルエーテルの使用である。
【００３７】
この工程に適するプロトン酸は、一般に、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸もしくはパラ−トルエンスルホン酸などの有機酸、または、例えば、塩酸、硫酸もしくはリン酸などの無機酸である。例えば塩化アルミニウムまたは塩化亜鉛などのルイス酸も適する。好ましいのはトリフルオロ酢酸である。
【００３８】
一般に、この反応は、０℃ないし＋１２０℃、好ましくは＋２０℃ないし＋８０℃の温度範囲で実施する。
【００３９】
工程（ＸＩ）→（ＩＩ）の酸化（脱水素）は、一般的に、上述のハロゲン化炭化水素の１種中、または、必要に応じて、メタノールもしくはエタノールなどのアルコール中、アセトニトリル中、または水中で実施する。適する酸化剤は、例えば、硝酸、硝酸セリウム（ＩＶ）アンモニウム、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）、四酸化オスミウム、二酸化マンガン、または二酸化白金もしくはパラジウム／炭素を使用する触媒的脱水素である。好ましいのは、溶媒としてのジクロロメタン中でＤＤＱを使用する酸化である。この酸化は、一般的に、−５０℃ないし＋１００℃、好ましくは０℃ないし＋４０℃の温度範囲で実施する。
【００４０】
個々の工程は、大気圧、高圧または低圧（例えば０.５ないし５ｂａｒ）で実施できる。一般に、各工程は大気圧で実施する。
【００４１】
本発明による式（Ｉｂ）−（Ｉｅ）の化合物の製造は、同様に実施され、下記の合成スキームにより例示説明される：
スキームａ１
【化１５】
2008524137.tif 000016
【００４２】
スキームａ２
【化１６】
2008524137.tif 000017
【００４３】
スキームｂ１
【化１７】
2008524137.tif 000018
【００４４】
スキームｂ２
【化１８】
2008524137.tif 000019
【００４５】
スキームｃ
【化１９】
2008524137.tif 000020
【００４６】
スキームｄ
【化２０】
2008524137.tif 000021
【００４７】
スキームｅ
【化２１】
2008524137.tif 000022
【００４８】
［略号：ｔＢｕ＝ｔｅｒｔ−ブチル；ＤＡＳＴ＝三フッ化ジメチルアミノ硫黄；ＤＤＱ＝２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン；ＤＩＢＡＨ＝水素化ジイソブチルアルミニウム；Ｅｔ＝エチル；Ｍｅ＝メチル；Ｐｈ＝フェニル；ｐ−ＴｓＯＨ＝パラ−トルエンスルホン酸；ＴＢＡＦ＝フッ化テトラブチルアンモニウム；ＴＢＤＭＳＯＴｆ＝ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸］
【００４９】
本発明による化合物は、予見できない有用な薬理活性スペクトルを有する。従って、それは、ヒトおよび動物における疾患の処置および／または予防のための医薬的に活性な化合物としての使用に適する。
【００５０】
本発明による化合物は、さらなる処置選択肢を開拓し、これは薬学の進歩を意味する。既知の過去に採用された製剤と比較して、本発明による化合物は、改善された作用スペクトルを示す。
【００５１】
それは、好ましくは、高い特異性、良好な耐容性および少ない副作用、並びに特に心血管領域および肝臓領域における低い毒性により、卓越している。
【００５２】
本発明による化合物の利点は、ヒト血漿における高い活性である。本発明による化合物のさらなる利点は、代謝性の酵素、特にチトクロムＰ４５０酵素およびことさらにチトクロムＰ４５０３Ａ４酵素との相互作用の可能性が低いことである。加えて、本発明による化合物は、それ自体が脂肪組織に沈着する傾向が低い。
【００５３】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、有用な薬理特性を有し、障害の予防および処置に使用できる。本発明による化合物は、特に、コレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）の効果の高い阻害剤であり、コレステロール逆転送を刺激する。それは、血液中のＨＤＬコレステロール濃度を高める。本発明による化合物は、冠動脈心疾患、例えば心筋梗塞の処置および一次的または二次的予防に特に適する。加えて、本発明による化合物は、動脈硬化症、再狭窄、卒中およびアルツハイマー病の処置および予防に使用できる。さらに、本発明による化合物は、低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症、肥満、肥満症、膵炎、インシュリン依存性および非インシュリン依存性糖尿病、糖尿病の後遺症、例えば、網膜症、腎症および神経障害、複合型高脂血症および代謝症候群の処置および予防にも使用できる。
【００５４】
本発明による化合物の薬理作用は、下記のＣＥＴＰ阻害試験を使用して決定できる。
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用を提供する。
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用を提供する。
本発明は、さらに、有効量の本発明による化合物を使用する、障害、特に上述の障害の処置および／または予防方法を提供する。
【００５５】
本発明は、さらに、障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物および１種またはそれ以上のさらなる活性化合物を含む医薬を提供する。組合せに適する活性化合物は、例えば、そして好ましくは、以下のものである：
・抗糖尿病剤、
・抗血栓作用を有する物質、
・降圧性物質、
・脂質代謝を改変する物質、
・抗炎症性物質、
・動脈硬化斑を安定化する物質。
【００５６】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、好ましくは、以下の１種またはそれ以上と組み合わせることができる；
・Roten Liste 2002/II、１２章に記載の抗糖尿病剤、
・例えば、そして好ましくは、血小板凝集阻害剤または抗凝血剤の群からの、抗血栓作用を有する物質、
・例えば、そして好ましくは、カルシウム拮抗薬、アンジオテンシンＡＩＩアンタゴニスト、ＡＣＥ阻害剤、ベータ遮断薬、ホスホジエステラーゼ阻害剤、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤、ｃＧＭＰ増強剤および利尿剤の群からの降圧剤、および／または、
・例えば、そして好ましくは、甲状腺受容体アゴニスト、コレステロールシンターゼ阻害剤、例えばＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、スクアレンシンターゼ阻害剤、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤またはオキシドスクアレンシクラーゼ阻害剤、ＡＣＡＴ阻害剤、ＭＴＰ阻害剤、ＰＰＡＲアゴニスト、フィブラート、リパーゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、胆汁酸再吸収阻害剤、ポリマー性胆汁酸吸着剤およびリポタンパク質（ａ）アンタゴニストの群からの、脂質代謝を改変する活性化合物。
【００５７】
抗糖尿病剤は、例えば、そして好ましくは、インシュリンおよびインシュリン誘導体並びに血糖降下作用を有する経口で有効な化合物を意味すると理解される。
ここで、インシュリンおよびインシュリン誘導体には、動物、ヒトまたは生物工学的起源のインシュリンおよびそれらの混合物が含まれる。
【００５８】
血糖降下作用を有する経口で有効な化合物には、例えば、そして好ましくは、スルホニルウレア類、ビグアニジン（biguanidine）類、メグリチニド（meglitinide）誘導体、オキサジアゾリジノン類、チアゾリジンジオン類、グルコシダーゼ阻害剤、グルカゴンアンタゴニスト、ＧＬＰ−１アゴニスト、インシュリン増感剤、糖新生および／またはグリコーゲン分解の刺激に関与する肝臓の酵素の阻害剤、グルコース取込の調節因子およびカリウムチャネルオープナー、例えば、ＷＯ９７／２６２６５およびＷＯ９９／０３８６１に記載のものが含まれる。
【００５９】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、インシュリンと組み合わせて投与する。
【００６０】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、スルホニルウレア、例えば、そして好ましくは、トルブタミド、グリベンクラミド、グリメピリド、グリピジドまたはグリクラジドと組み合わせて投与する。
【００６１】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ビグアナイド、例えば、そして好ましくは、メトホルミンと組み合わせて投与する。
【００６２】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、メグリチニド誘導体、例えば、そして好ましくは、レパグリニドまたはナテグリニドと組み合わせて投与する。
【００６３】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、例えば、チアゾリジンジオン類のクラスからのＰＰＡＲガンマアゴニスト、例えば、そして好ましくは、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾンと組み合わせて投与する。
【００６４】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、混合型ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト、例えば、そして好ましくは、ＧＩ−２６２５７０（ファルグリタザル（farglitazar））、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＡＶＥ８０４２、ＡＶＥ８１３４、ＡＶＥ０８４７、ＭＫ−０７６７（ＫＲＰ−２９７）またはＡＺ−２４２と組み合わせて投与する。
【００６５】
抗血栓作用を有する物質は、好ましくは、血小板凝集阻害剤の群、例えば、そして好ましくは、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジンもしくはジピリダモール、または、抗凝血剤の群からの化合物を意味すると理解される。
【００６６】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、トロンビン阻害剤、例えば、そして好ましくは、キシメラガトラン、メラガトラン、ビバリルジンまたはクレキサン（clexane）と組み合わせて投与する。
【００６７】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、チロフィバンまたはアブシキシマブと組み合わせて投与する。
【００６８】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、Ｘａ因子阻害剤、例えば、そして好ましくは、ＤＸ９０６５ａ、ＤＰＣ９０６、ＪＴＶ８０３またはＢＡＹ５９−７９３９と組み合わせて投与する。
【００６９】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ヘパリンまたは低分子量（ＬＭＷ）ヘパリン誘導体と組み合わせて投与する。
【００７０】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ビタミンＫアンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、クマリンと組み合わせて投与する。
【００７１】
降圧剤は、例えば、そして好ましくは、カルシウムアンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、化合物ニフェジピン、アムロジピン、ニトレンジピン、ニソルジピン、ベラパミルまたはジルチアゼムの群、アンジオテンシンＡＩＩアンタゴニスト、ＡＣＥ阻害剤、ベータ遮断薬および利尿剤の群からの化合物を意味すると理解される。
【００７２】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、アルファ１受容体のアンタゴニストと組み合わせて投与する。
【００７３】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、レセルピン、ミノキシジル、ジアゾキシド、ジヒドララジン、ヒドララジンおよび亜硝酸オキシド放出物質、例えば、そして好ましくは、硝酸グリセロールまたはニトロプルシドナトリウムと組み合わせて投与する。
【００７４】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、アンジオテンシンＡＩＩアンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、ロサルタン、バルサルタン、カンデサルタン、テルミサルタン、エンブサルタン（embusartan）、イルベサルタン、オルメサルタン、タソサルタンまたはサプリサルタン（saprisartan）と組み合わせて投与する。
【００７５】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ＡＣＥ阻害剤、例えば、そして好ましくは、エナラプリル、カプトプリル、ラミプリル、デラプリル、ホシノプリル、キノプリル（quinopril）、ペリンドプリルまたはトランドラプリルと組み合わせて投与する。
【００７６】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ベータ遮断薬、例えば、そして好ましくは、プロプラノロールまたはアテノロールと組み合わせて投与する。
【００７７】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、利尿剤、例えば、そして好ましくは、フロセミドと組み合わせて投与する。
【００７８】
脂質代謝を改変する物質は、例えば、そして好ましくは、甲状腺受容体アゴニスト、コレステロール合成阻害剤、例えばＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤またはスクアレン合成阻害剤、ＡＣＡＴ阻害剤、ＭＴＰ阻害剤、ＰＰＡＲアゴニスト、フィブラート類、コレステロール吸収阻害剤、胆汁酸再吸収阻害剤、リパーゼ阻害剤、ポリマー性胆汁酸吸着剤およびリポタンパク質（ａ）アンタゴニストの群からの化合物を意味すると理解される。
【００７９】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、甲状腺受容体アゴニスト、例えば、そして好ましくは、Ｄ−チロキシン、３,５,３'−トリヨードサイロニン（Ｔ３）、ＣＧＳ２３４２５またはアキシチロム（axitirome）（ＣＧＳ２６２１４）と組み合わせて投与する。
【００８０】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、スクアレン合成阻害剤、例えば、そして好ましくは、ＢＭＳ−１８８４９４またはＴＡＫ４７５と組み合わせて投与する。
【００８１】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ＡＣＡＴ阻害剤、例えば、そして好ましくは、アバシミブ（avasimibe）、エフシミブ（eflucimibe）またはＣＳ−５０５と組み合わせて投与する。
【００８２】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、コレステロール吸収阻害剤、例えば、そして好ましくは、エゼチミブ、チクエシド（tiqueside）またはパマクエシドと組み合わせて投与する。
【００８３】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、胆汁酸再吸収阻害剤、例えば、そして好ましくは、バリキシバト（barixibat）、ＡＺＤ７５０８、ＳＣ４３５、ＳＣ６３５、Ｓ−８９２１、２６４Ｗ９４またはＨＭ１４５３と組み合わせて投与する。
【００８４】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ＭＴＰ阻害剤、例えば、そして好ましくは、インプリタピド（implitapide）、ＢＭＳ−２０１０３８またはＲ−１０３７５７と組み合わせて投与する。
【００８５】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ＰＰＡＲアルファアゴニスト、例えば、フィブラート類のフェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラートまたはゲムフィブロジル、または、例えば、そして好ましくは、ＧＷ９５７８、ＧＷ７６４７、ＬＹ−５１８６７４もしくはＮＳ−２２０と組み合わせて投与する。
【００８６】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ＰＰＡＲデルタアゴニスト、例えば、そして好ましくは、ＧＷ５０１５１６と組み合わせて投与する。
【００８７】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、混合型ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト、例えば、そして好ましくは、ＧＩ−２６２５７０（ファルグリタザル）、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＡＶＥ８０４２、ＡＶＥ８１３４、ＡＶＥ０８４７、ＭＫ−０７６７（ＫＲＰ−２９７）またはＡＺ−２４２と組み合わせて投与する。
【００８８】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、混合型ＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタアゴニスト、例えば、そして好ましくは、ＭＣＣ−５５５と組み合わせて投与する。
【００８９】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、内皮のリパーゼ阻害剤、膵臓のリパーゼ阻害剤、胃のリパーゼ阻害剤、ホルモン感受性リパーゼ阻害剤または肝臓のリパーゼ阻害剤の群からのリパーゼ阻害剤と組み合わせて投与する。
【００９０】
本発明の特に好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、膵臓のリパーゼ阻害剤、好ましくはリパスタチン（lipstatin）類のクラスのもの、例えば、オーリスタットと組み合わせて投与する。
【００９１】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ポリマー性胆汁酸吸着剤、例えば、そして好ましくは、コレスチラミン、コレスチポール、コレソルバム（colesolvam）、コレスタゲル（CholestaGel）またはコレスチミドと組み合わせて投与する。
【００９２】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、リポタンパク質（ａ）アンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、ゲンカベン（gemcabene）カルシウム（ＣＩ−１０２７）またはニコチン酸と組み合わせて投与する。
【００９３】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ナイアシン受容体のアンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、ナイアスパン（niaspan）、アシピモックスまたはニセリトロールと組み合わせて投与する。
【００９４】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、抗酸化剤、例えば、そして好ましくは、プロブコール、ＡＧＩ１０６７またはＢｏ６５３と組み合わせて投与する。
【００９５】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、ＬＤＬ受容体誘導剤、例えば、リフィブロール（lifibrol）と組み合わせて投与する。
【００９６】
本発明の好ましい実施態様では、式（Ｉ）の化合物を、スタチン類のクラスからのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、例えば、そして好ましくは、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチンまたはピタバスタチンと組み合わせて投与する。
【００９７】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの遺伝子発現を低減する物質との組合せ剤を提供する。そのような物質は、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの転写またはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの翻訳の阻害剤であり得る。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの遺伝子発現の阻害は、例えば、Ｓ１Ｐ（Site-1）プロテアーゼの阻害により、または、ＳＲＥＢＰ（ステロール受容体結合タンパク質）濃度の低下により、実行し得る。
【００９８】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の、抗炎症作用を有し得る、および／または、動脈硬化斑を安定化し得る物質との組合せ剤を提供する。そのような物質は、例えば、ＮＳＡＩＤ、ＰＡＦ−ＡＨアンタゴニストまたはケモカイン受容体アンタゴニストのクラスからの活性化合物、例えば、ＩＬ−８受容体アンタゴニストまたはＭＣＰ−１アンタゴニストであり得る。
【００９９】
本発明による活性化合物の組合せ剤は、有用な薬理特性を有し、障害の予防および処置に使用できる。
【０１００】
本発明による活性化合物の組合せ剤は、冠動脈心疾患、例えば心筋梗塞の処置および一次的または二次的予防に特に適する。加えて、それらは、動脈硬化症、再狭窄、卒中およびアルツハイマー病の処置および予防に使用できる。加えて、言及した活性化合物の組合せ剤は、低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症、肥満、肥満症、膵炎、インシュリン依存性および非インシュリン依存性糖尿病、糖尿病の後遺症、例えば、網膜症、腎症および神経障害、複合型高脂血症および代謝症候群の処置および予防にも用いることができる。さらに、本発明による活性化合物の組合せ剤は、高血圧、心不全、狭心症、虚血および炎症性障害の処置に適する。
【０１０１】
本発明は、さらに、本発明による化合物を、通常は１種またはそれ以上の、不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と共に含む医薬、および上述の目的でのそれらの使用を提供する。
【０１０２】
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜に、耳に、またはインプラントもしくはステントとしてなど、適するやり方で投与できる。
【０１０３】
これらの投与経路のために、本発明による化合物を、適する投与形で投与できる。
経口投与に適するのは、先行技術に準じて働き、本発明による化合物を迅速におよび／または改変された形態で送達し、本発明による化合物を結晶形および／または不定形および／または溶解形で含む投与形、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、腸溶性被覆、または、遅れて溶解するか、または不溶であり、本発明による化合物の放出を制御する被覆を施された錠剤）、口腔中で迅速に崩壊する錠剤、またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、粉末剤、乳剤、懸濁剤、エアゾル剤または液剤である。
【０１０４】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、実施できる。非経腸投与に適する投与形は、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤形態の注射および点滴用製剤である。
【０１０５】
他の投与経路に適するのは、例えば、吸入用医薬形態（なかんずく、粉末吸入器、噴霧器）、点鼻薬、液またはスプレー、舌に、舌下にまたは頬側に投与するための錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐剤、耳用または眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチ）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末剤（dusting powder）、インプラントまたはステントである。
好ましいのは、経口または非経腸投与、特に経口投与である。
【０１０６】
本発明による化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助剤と混合することにより、それ自体既知のやり方で行い得る。これらの補助剤には、なかんずく、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および味および／または臭気の矯正剤が含まれる。
【０１０７】
一般に、非経腸投与の場合、約０.００１ないし１ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし０.５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を得るために有利であると見出された。経口投与の場合、投与量は、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし２０ｍｇ／体重ｋｇ、ことさら特に好ましくは約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【０１０８】
それにも拘わらず、必要に応じて、即ち、体重、投与経路、活性化合物に対する個体の応答、製剤のタイプおよび投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり得、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。比較的大量に投与する場合、これらを１日に亘る数回の個別投与に分割するのが望ましいことがある。
【０１０９】
以下の例示的実施態様は、本発明を例示説明する。本発明は、これらの実施例に限定されない。
下記の試験および実施例における百分率は、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および記述する濃度は、各場合で体積に基づく。
【０１１０】
式（Ｉａ）の化合物についての実験の部
Ａ. 実施例
略語および頭字語：
【表１】
2008524137.tif 000023
【０１１１】
出発物質および中間体：
実施例１Ａ
１−シクロプロピリデンアセトン
【化２２】
2008524137.tif 000024
［（１−エトキシシクロプロピル）オキシ］（トリメチル）シラン２７４ｇ（１.５７ｍｏｌ）、１−（トリフェニルホスホルアニリデン）アセトン６５０ｇ（２.０４ｍｏｌ）およびパラ−トルエンスルホン酸一水和物２９.９ｇ（１５７ｍｍｏｌ）を、１,２−ジクロロベンゼン１.５８ｌに懸濁し、１００℃で２.５時間撹拌する。加熱すると、１−（トリフェニルホスホルアニリデン）アセトンは溶解する。次いで、反応混合物を室温に冷却し、粗生成物をシリカゲルでクロマトグラフィーする（移動相：最初に石油エーテル、次いでジクロロメタン）。生成物画分を濃縮し、短時間高真空下で乾燥させる。
収量：７８.５ｇ（理論値の４６％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 6.42 (t, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.53-1.46 (m, 2H), 1.36-1.29 (m, 2H)
ＭＳ（ＤＣＩ,ＮＨ３）：ｍ／ｚ＝１１４［Ｍ＋ＮＨ４］＋.
【０１１２】
実施例２Ａ
スピロ［２.５］オクタン−５,７−ジオン
【化２３】
2008524137.tif 000025
ナトリウムメトキシド３７.０９ｇ（６８７ｍｍｏｌ）を、最初にメタノール３８８ｍｌに入れ、撹拌しながら、還流で加熱する。マロン酸ジメチル９６.２ｇ（７２８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流でさらに１０分間撹拌し、次いで室温に冷却する。次いで、実施例１Ａ由来の１−シクロプロピリデンアセトン６６ｇ（６８７ｍｍｏｌ）を滴下して室温で添加し、続いて混合物を還流で４時間撹拌する。加熱槽の除去後、水２６４ｍｌ中の水酸化カリウム８４.７５ｇ（１.５１ｍｏｌ）の溶液を、迅速に滴下して添加し、還流での撹拌を１時間継続する。次いで、準濃塩酸を使用してｐＨを１−２に調節し（発泡する）、混合物をさらに１５分間撹拌する。減圧下、ロータリーエバポレーターで、浴温度５５℃で、６０ｍｂａｒの圧力に達するまで、メタノールを除去する。フラスコの内容物を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られる油状物を濃縮し、ジクロロメタンに溶解し、シリカゲルでクロマトグラフィーする（移動相：ジクロロメタン／メタノール９５：５）。生成物画分を濃縮し、次いで、残っている油状物をジエチルエーテルでトリチュレートする。得られる固体を吸引濾過し、室温、高真空下で乾燥させる。
収量：３７.２ｇ（理論値の３９％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 3.49 (s, 2H), 2.47 (s, 4H), 0.58 (s, 4H)
ＭＳ（ＤＣＩ,ＮＨ３）：ｍ／ｚ＝１５６［Ｍ＋ＮＨ４］＋.
【０１１３】
実施例３Ａ
４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−３'−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−４',８'−ジヒドロ−１'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'（６'Ｈ）オン
【化２４】
2008524137.tif 000026
３−アミノ−３−シクロペンチル−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペノン（ＷＯ０３／０２８７２７、実施例４に従い製造）８.０ｇ（２８.２４ｍｍｏｌ）を、最初にジイソプロピルエーテル３５０ｍｌに入れ、トリフルオロ酢酸３.６３ｍｌ（４７.１ｍｍｏｌ）およびスピロ［２.５］オクタン−５,７−ジオン（実施例２Ａ）３.２５ｇ（２３.５３ｍｍｏｌ）を添加する。１０分間室温で撹拌した後、シクロヘキサンカルボアルデヒド５.７０ｍｌ（４７.１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、混合物を還流下に１８時間加熱する。冷却後、混合物を氷浴中で１５分間撹拌し、得られる沈殿を吸引濾過し、冷たいジイソプロピルエーテルで洗浄する。
収量：２.９２ｇ（理論値の２５％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.80 (d, 2H), 7.67 (d, 2H), 5.88 (s, 1H), 3.80 (d, 1H), 3.51 (quin, 1H), 2.85 (d, 1H), 2.69 (d, 1H), 2.26-2.14 (m, 1H), 2.00 (t, 2H), 1.80-1.46 (m, 9H), 1.44-1.31 (m, 2H), 1.25-1.13 (m, 1H), 1.12-0.96 (m, 4H), 0.93-0.75 (m, 2H), 0.62-0.43 (m, 4H)
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝４９８［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１１４】
実施例４Ａ
４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−３'−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'（８'Ｈ）オン
【化２５】
2008524137.tif 000027
実施例３Ａ由来の化合物１.９０ｇ（３.８２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６０ｍｌに溶解し、室温で、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）９５０ｍｇ（４.２０ｍｍｏｌ）と１時間撹拌する。混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル２０：１→１０：１）により精製する。
収量：１.３ｇ（理論値の６９％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 8.10-7.82 (br. s, 2H), 7.74 (d, 2H), 3.41-3.14 (br. s, 1H), 3.05 (dd, 2H), 2.71-2.50 (m, 3H), 1.98-1.36 (m, 16H), 1.24-1.05 (m, 2H), 0.62-0.50 (m, 4H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９６［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１１５】
実施例５Ａ
［（５'Ｓ）−４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−５'−ヒドロキシ−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−３'−イル］［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化２６】
2008524137.tif 000028
（１Ｒ,２Ｓ）−１−アミノインダン−２−オール１９０ｍｇ（１.２４ｍｍｏｌ）を、最初にＴＨＦ１５０ｍｌに入れ、ボラン−Ｎ,Ｎ−ジエチルアニリン錯体５.４０ｇ（３３.１ｍｍｏｌ）を室温で添加する。気体の放出が止まった後、混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦ１５０ｍｌに溶解した実施例４Ａ由来の化合物４.１０ｇ（８.２７ｍｍｏｌ）を添加する。撹拌しながら、混合物を数時間かけて室温に温まらせる。反応が終了した後、メタノールを添加し、反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取る。混合物を、１Ｎ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で、各場合で２回ずつ洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：最初にシクロヘキサン、次いでシクロヘキサン／酢酸エチル１０：１）により精製する。
収量：３.４ｇ（理論値の８３％）
エナンチオマー過剰は、７１％ｅｅと測定される。
【０１１６】
続くキラル相でのエナンチオマーのクロマトグラフィー的分離［カラム：Chiralpak AD, ５００ｍｍｘ４０ｍｍ；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：５０ｍｌ／分；温度：２５℃；検出：２５４ｎｍ］により、エナンチオマー的に純粋な表題化合物２.８３ｇを得る：
Ｒｔ＝４.９６分［Chiralpak AD、250 mm x 4.6 mm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：１.０ｍｌ／分；検出：２５４ｎｍ］.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 8.50-7.35 (m, 4H), 5.48-5.02 (m, 1H), 3.43-3.14 (m, 2H), 2.71-2.27 (m, 3H), 2.18-0.93 (m, 19H), 0.83-0.73 (m, 1H), 0.72-0.56 (m, 1H), 0.52-0.43 (m, 2H)
MS (ESIpos): m/z = 498 [M+H]+.
【０１１７】
実施例６Ａ
（（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−３'−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化２７】
2008524137.tif 000029
アルゴン下、実施例５Ａ由来の化合物１００ｍｇ（０.２０ｍｍｏｌ）および２,６−ジメチルピリジン８６ｍｇ（０.８０ｍｍｏｌ）を、無水トルエン０.７５ｍｌに溶解し、−２０℃に冷却する。この温度で、無水トルエン０.２５ｍｌ中のｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート１０６ｍｇ（０.４０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して添加し、続いて、混合物を−２０℃で１５分間撹拌し、次いで０℃に温め、この温度でさらに１時間撹拌する。０.１Ｎ塩酸３ｍｌを混合物に添加し、次いでそれを酢酸エチルで繰り返し抽出する。合わせた有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液の１：１混合物で１回洗浄し、飽和塩化ナトリウム溶液で１回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をクロマトグラフィー的にシリカゲルで精製する（移動相：最初にシクロヘキサン、次いでシクロヘキサン／酢酸エチル１５：１）。
収量：１１５ｍｇ（理論値の９４％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 8.02-7.48 (m, 4H), 5.51-5.18 (br. s, 1H), 3.25-2.68 (m, 2H), 2.65-2.45 (m, 1H), 2.13-1.03 (m, 21H), 0.93-0.83 (m, 9H), 0.81-0.70 (m, 1H), 0.68-0.58 (m, 1H), 0.44-0.39 (m, 1H), 0.38-0.28 (m, 1H), 0.25-0.14 (m, 6H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１１８】
実施例７Ａ
（Ｓ）−（（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−３'−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
【化２８】
2008524137.tif 000030
アルゴン下、実施例６Ａ由来の化合物３.１０ｇ（５.０７ｍｍｏｌ）を、最初に無水トルエン５０ｍｌに入れ、−５０℃に冷却する。この温度で、水素化ジイソブチルアルミニウムの１Ｍトルエン溶液２５.４ｍｌ（２５.４ｍｍｏｌ）を、ゆっくりと滴下して添加する。混合物を−５０℃で１０分間撹拌し、次いで１時間かけて室温に温める。氷冷しながら、２０％強度酒石酸カリウムナトリウム溶液を混合物に添加し、次いでそれを酢酸エチルで繰り返し抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。これにより、粗生成物３.２ｇを得る。
【０１１９】
続くキラル相でのクロマトグラフィー的ジアステレオマー分離［カラム：Chiralpak AD, 500 mm x 40 mm, 20 μm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：５０ｍｌ／分；室温；検出：２５４ｎｍ］により、ジアステレオマー的に純粋な表題化合物（アンチ−異性体）１.４ｇ（理論値の４５％）およびジアステレオマーのシン異性体１.３ｇ（理論値の４２％）を得る。
【０１２０】
アンチ−ジアステレオマー：
Ｒｔ＝８.０９分［カラム：Chiralpak IA, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン３：９７；流速：１.０ｍｌ／分；検出：２５４ｎｍ］
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 7.58 (d, 2H), 7.42 (d, 2H), 6.68 および 6.49 (2 br. s, 一体になって 1H), 5.58 および 5.21 (2 br. s, 一体になって 1H), 3.45-3.22 (m, 1H), 2.99-2.78 (m, 2H), 2.33-2.18 (m, 1H), 2.14-1.05 (m, 20H), 0.95-0.82 (m, 9H), 0.80-0.70 (m, 1H), 0.68-0.43 (m, 2H), 0.42-0.26 (m, 1H), 0.25-0.02 (m, 6H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１２１】
シン−ジアステレオマー：
Ｒｔ＝５.７０分［カラム：Chiralpak IA, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン３：９７；流速：１.０ｍｌ／分；検出：２５４ｎｍ］
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 7.59-7.51 (m, 2H), 7.48-7.28 (m, 2H), 6.64 および 6.49 (2 br. s, 一体になって1H), 5.58 および 5.22 (2 br. s, 一体になって1H), 3.45-3.22 (m, 1H), 3.10-2.76 (m, 2H), 2.33-2.18 (m, 1H), 2.12-1.05 (m, 20H), 0.94-0.82 (m, 9H), 0.80-0.70 (m, 1H), 0.68-0.43 (m, 2H), 0.42-0.27 (m, 1H), 0.26-0.01 (m, 6H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１２２】
実施例８Ａ
（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］
【化２９】
2008524137.tif 000031
アルゴン下、実施例７Ａ由来の化合物８１３ｍｇ（１.３２ｍｍｏｌ）を、トルエン１７ｍｌに溶解し、−２０℃に冷却する。この温度で、三フッ化ジエチルアミノ硫黄０.２９ｍｌ（２.１９ｍｍｏｌ）を滴下して添加する。冷却を取りやめ、次いで、混合物をさらに２時間撹拌する。水を混合物に添加し、次いで、それをジクロロメタンで繰り返し抽出する。合わせた有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で１回、飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗生成物を高真空下で乾燥させ、これ以上精製せずに反応させる。
収量：７７０ｍｇ（理論値の９４％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.60 (d, 2H), 7.46-6.98 (m, 3H), 5.59 および 5.22 (2 br. s, 一体になって 1H), 3.42-3.20 (m, 1H), 3.02-2.67 (m, 3H), 2.20-0.99 (m, 20H), 0.90 (s, 9H), 0.82-0.68 (m, 1H), 0.67-0.48 (m, 2H), 0.44-0.27 (m, 1H), 0.25-0.01 (m, 6H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１６［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１２３】
実施例：
実施例１
（５'Ｓ）−４'−シクロヘキシル−２'−シクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'−オール
【化３０】
2008524137.tif 000032
アルゴン下、実施例８Ａ由来の化合物７７０ｍｇ（１.２５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ１ｍｌに溶解し、ＴＢＡＦの１Ｍ ＴＨＦ溶液６.２５ｍｌ（６.２５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌する。０.２Ｎ塩酸５０ｍｌを混合物に添加し、次いで、酢酸エチルで繰り返し抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をクロマトグラフィー的にシリカゲルでで精製する（移動相：最初にシクロヘキサン、次いでシクロヘキサン／酢酸エチル１０：１）。
収量：５９４ｍｇ（理論値の９５％）
【０１２４】
キラル相のクロマトグラフィー［カラム：KBD 5945, 400 mm x 30 mm、キラルセレクターのポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ.−ブチルアミドをベースとする；移動相：ＭＴＢＥ／イソヘキサン２０：８０；流速：５０ｍｌ／分；室温；検出：２５４ｎｍ］を使用して、生成物中にまだ存在するジアステレオマーをさらに分離し、ジアステレオマー的に純粋な表題化合物５４０ｍｇを得る：
Ｒｔ＝３.７６分［カラム：KBD 5945, 250 mm x 4.6 mm；移動相：ＭＴＢＥ／イソヘキサン３：７；流速：１.０ｍｌ／分；検出：２６５ｎｍ］
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.61 (d, 2H), 7.48-7.29 (m, 3H), 5.47-5.39 および 5.18-5.07 (2 m, 一体になって 1H), 3.60-3.46 (m, 1H), 3.31-3.11 (m, 1H), 2.96-2.68 (m, 1H), 2.47-2.20 (m, 2H), 2.10-1.10 (m, 19H), 0.84-0.70 (m, 2H), 0.66-0.58 (m, 1H), 0.50-0.38 (m, 2H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５０２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１２５】
Ｂ. 薬理活性の評価
Ｂ−Ｉ. ＣＥＴＰ−阻害試験
Ｂ−Ｉ.１. ＣＥＴＰの入手
ＣＥＴＰを、ヒト血漿から、分画遠心法およびカラムクロマトグラフィーにより部分的に精製された形態で入手し、試験に使用する。この目的で、ＮａＢｒを使用してヒト血漿を１.２１ｇ／ｍｌの密度に調節し、４℃、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。底部の画分（ｄ＞１.２１ｇ／ｍｌ）を Sephadex（登録商標）Phenyl-Sepharose 4B (Pharmacia) カラムに載せ、０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.００１Ｍトリス−ＨＣｌ ｐＨ７.４で洗浄し、次いで蒸留水で溶出する。ＣＥＴＰ−活性画分を集め、５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４.５で透析し、CM-Sepharose（登録商標）カラム (Pharmacia) に載せる。次いで、線状グラジエント（０−１Ｍ ＮａＣｌ）を使用して混合物を溶出する。集めたＣＥＴＰ画分を１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４で透析し、次いで Mono Q（登録商標） カラム (Pharmacia）でのクロマトグラフィーによりさらに精製する。
【０１２６】
Ｂ−Ｉ.２. ＣＥＴＰ蛍光試験
ＣＥＴＰに触媒されるリポソーム間の蛍光コレステロールエステルの転送の測定［Bisgaier et al., J. Lipid Res. 34, 1625 (1993) の方法に準じて改変］：
ドナーリポソームの生成のために、コレステリル４,４−ジフルオロ−５,７−ジメチル−４−ボラ−３ａ,４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ドデカノエート（コレステリル BODIPY（登録商標） FL C12, Molecular Probes）を、トリオレイン５.３５ｍｇおよびホスファチジルコリン６.６７ｍｇを含むジオキサン６００μｌに、超音波槽中で穏やかに温めながら溶解し、この溶液を、超音波処理しながら、６３ｍｌの５０ｍＭトリス／ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡバッファーｐＨ７.３に室温で非常にゆっくりと添加する。次いで、懸濁液を、Ｎ２雰囲気下、３０分間、Branson 超音波槽中、約５０ワットで、温度を約２０℃に維持して超音波処理する。
【０１２７】
同様にして、ジオキサン１.２ｍｌおよび上記のバッファー１１４ｍｌに溶解したコレステリルオレエート８６ｍｇ、トリオレイン２０ｍｇおよびホスファチジルコリン１００ｍｇから、５０ワット（２０℃）、３０分間の超音波処理により、アクセプターリポソームを得る。
【０１２８】
Ｂ−Ｉ.２.１. 富化（enriched）ＣＥＴＰを用いるＣＥＴＰ蛍光試験
試験するために、上記のバッファー１部、ドナーリポソーム１部およびアクセプターリポソーム２部からなる試験混合物を使用する。
試験混合物５０μｌを、ヒト血漿から疎水性クロマトグラフィーを利用して得た富化ＣＥＴＰ画分（１−３μｇ）４８μｌおよび試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液２μｌで処理し、３７℃で４時間インキュベートする。
【０１２９】
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の尺度である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表２】
2008524137.tif 000033
【０１３０】
Ｂ−Ｉ.２.２. ヒト血漿を用いるＣＥＴＰ蛍光試験
ドナーリポソーム６μｌ（１２％ｖ／ｖ）および試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液１μｌ（２％ｖ／ｖ）を、ヒト血漿（Sigma P9523）４２μｌ（８６％ｖ／ｖ）に添加し、混合物を３７℃で２４時間インキュベートする。
５１０／５２０ｎｍ（ギャップ幅２.５ｎｍ）の蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表３】
2008524137.tif 000034
【０１３１】
Ｂ−Ｉ.２.３. エクスビボ−ＣＥＴＰ蛍光試験
バッファー１０μｌおよび血清２μｌを、試験混合物８０μｌに添加し、混合物を３７℃で４時間インキュベートする。
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【０１３２】
Ｂ−Ｉ.３. 放射性標識化ＨＤＬの入手
新鮮なヒトＥＤＴＡ血漿５０ｍｌを、ＮａＢｒを使用して１.１２の密度に調節し、４℃、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を非標識ＬＤＬの入手に使用する。下相をＰＤＢバッファー（１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４、０.１５ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０２％ＮａＮ３）３ｘ４ｌで透析する。次いで、透析保持液（retentate）の体積１０ｍｌにつき、３Ｈ−コレステロール（Dupont NET-725；１μＣ／μｌ、エタノールに溶解）２０μｌを添加し、混合物を、３７℃、Ｎ２下で、７２時間インキュベートする。
【０１３３】
次いで、ＮａＢｒを使用してバッチを１.２１の密度に調節し、２０℃で、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を回収し、リポタンパク質画分を勾配遠心分離により精製する。この目的で、単離した標識化リポタンパク質画分を、ＮａＢｒを使用して１.２６の密度に調節する。この溶液各４ｍｌを、遠心管（ＳＷ４０ローター）中、密度１.２１の溶液４ｍｌおよび密度１.０６３の溶液４.５ｍｌで覆い（ＰＤＢバッファーおよびＮａＢｒの密度溶液）、次いで、２４時間３８０００ｒｐｍで、２０℃で、ＳＷ４０ローター中で遠心分離する。標識化ＨＤＬを含有する、密度１.０６３と１.２１との間にある中間層を、３ｘ１００量のＰＤＢバッファーで、４℃で透析する。
保持液は放射性標識化３Ｈ−ＣＥ−ＨＤＬを含有し、それを、約５ｘ１０６ｃｍｐ／ｍｌに調節し、試験に使用する。
【０１３４】
Ｂ−Ｉ.４. ＣＥＴＰ−ＳＰＡ試験
ＣＥＴＰ活性を試験するために、３Ｈ−コレステロールエステルのヒトＨＤリポタンパク質からビオチン化ＬＤリポタンパク質への転送を測定する。ストレプトアビジン−ＳＰＡ（登録商標）ビーズ（Amersham）の添加により反応を終了させ、転送された放射能を液体シンチレーションカウンターで直接測定する。
【０１３５】
試験バッチでは、ＨＤＬ−３Ｈ−コレステロールエステル（〜５００００ｃｐｍ）１０μｌを、３７℃で１８時間、ビオチン−ＬＤＬ（Amersham）１０μｌと共に、ＣＥＴＰ（１ｍｇ／ｍｌ）１０μｌおよび試験しようとする物質の溶液（１０％ＤＭＳＯ／１％ＲＳＡに溶解）３μｌを含有する５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ／０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.１％ウシ血清アルブミン／０.０５％ＮａＮ３ ｐＨ７.４中でインキュベートする。次いで、ＳＰＡ−ストレプトアビジンビーズ溶液（ＴＲＫＱ７００５）２００μｌを添加し、さらに１時間振盪しながらインキュベートし、次いで、シンチレーションカウンターで測定する。バッファー１０μｌ、４℃のＣＥＴＰ１０μｌおよび３７℃のＣＥＴＰ１０μｌを用いる対応するインキュベーションを対照に供する。
【０１３６】
３７℃のＣＥＴＰを用いる対照バッチで転送される放射活性を、１００％の転送とみなす。この転送を半分に低減させる物質濃度を、ＩＣ５０値と特定する。
【表４】
2008524137.tif 000035
【０１３７】
Ｂ−ＩＩ.１. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに対するエクスビボ活性の測定
ＣＥＴＰ−阻害活性を試験するために、自家飼育した遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに、胃管を使用して物質を経口投与する［Dinchuk et al. BBA 1295-301 (1995)］。この目的で、実験開始の前日に、オスの動物を、等数の動物（原則としてｎ＝４）を有するグループに無作為に割り当てる。物質投与前に、血清中の基底ＣＥＴＰ活性（Ｔ１）の測定のために、後眼窩静脈叢（retro orbital venous plexus）の穿刺により各マウスから血液を採取する。次いで、胃管を使用して試験物質を動物に投与する。試験物質の投与後、特定の時間に、一般に物質の投与後１６または２４時間後に、二回目の穿刺により血液を動物から採取する（Ｔ２）が、必要に応じて、これを他の時間で実施することもできる。
【０１３８】
物質の阻害活性を評価できるように、各時間、即ち、１６または２４時間に、動物が物質を含まない製剤化物質のみを受容する、対応する対照群を用いる。対照動物では、対応する実験期間（１６または２４時間）に亘る、阻害剤のない場合のＣＥＴＰ活性の変化を測定できるように、動物毎の２回目の血液サンプル採取を物質で処置した動物と同様に実施する。
【０１３９】
凝血の終了後、血液サンプルを遠心分離し、血清をピペットで取り出す。ＣＥＴＰ活性の決定のために、４時間に亘るコレステリルエステル転送を測定する。この目的で、一般に試験バッチで血清２μｌを用い、Ｂ−Ｉ.２.３で記載の通りに試験を実施する。
【０１４０】
コレステリルエステル転送の差異［ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ２）−ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ１）］を各動物について算出し、グループ内で平均する。何れかの時間でコレステリルエステル転送を＞２０％まで低減する物質を、活性であるとみなす。
【表５】
2008524137.tif 000036
【０１４１】
Ｂ−ＩＩ.２. シリアンゴールデンハムスターにおけるインビボ活性の測定
自家飼育した体重１５０−２００ｇの雌のシリアンゴールデンハムスター（系統ＢＡＹ：ＤＳＮ）を、ＣＥＴＰ阻害剤の血清リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用の測定に使用する。動物をケージ当たり６匹の動物にグループ分けし、飼料と水を自由にとらせ、２週間順応させる。
【０１４２】
実験開始直前および物質投与の後に、血液を後眼窩静脈叢の穿刺により採取し、３０分間室温でのインキュベーションおよび２０分間３００００ｇでの遠心分離の後、血清を得るために使用する。物質を２０％ Solutol／８０％水に溶解し、胃管を利用して経口投与する。対照の動物は、試験物質を含まない同体積の溶媒を受容する。
【０１４３】
トリグリセリド、総コレステロール、ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬコレステロールを、分析装置 COBAS INTEGRA 400 plus (Roche Diagnostics より）を製造業者に指示に従い使用して測定する。測定値から、各パラメーターについて、物質による処置に起因する割合の変化を、各動物について算出し、グループ毎の平均として標準偏差と共に示す（ｎ＝６またはｎ＝１２）。溶媒処置群と比較して、物質の効果が有意であれば、ｔ試験の適用により、ｐ−値を加える（＊ｐ＜０.０５；＊＊ｐ＜０.０１；＊＊＊ｐ＜０.００５）。
【０１４４】
Ｂ−ＩＩ.３. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスにおけるインビボ活性の測定
リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用を測定するために、胃管を使用して試験物質を遺伝子組換えマウスに投与する［Dinchuk et al., BBA, 1295-1301 (1995)］。実験開始前に、血清中のコレステロールおよびトリグリセリドを測定するために、マウスから後眼窩的（retro-orbitally）に血液を採取する。ハムスターについて上記した通りに、４℃で終夜インキュベートし、続いて６０００ｇで遠心分離することにより血清を入手する。３日後に、リポタンパク質およびトリグリセリドを測定するために、血液を再度マウスから採取する。測定されるパラメーターの変化を、出発値と比較した変化割合として表す。
【表６】
2008524137.tif 000037
【０１４５】
Ｃ. 医薬組成物の実施例
本発明の化合物は、以下のやり方で医薬製剤に変換できる：
錠剤：
組成：
本発明の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）１０ｍｇ（BASFより、Ludwigshafen, Germany）およびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ、直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明の化合物、ラクトースおよびスターチの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状について、上記参照）。打錠のガイドラインの打錠力は、１５ｋＮである。
【０１４６】
経口投与できる懸濁剤：
組成：
本発明の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel（登録商標） (FMCのキサンタンガム、Pennsylvania, USA) ４００ｍｇおよび水９９ｇ。
経口懸濁液１０ｍｌは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、本発明の化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel の膨潤が完了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０１４７】
経口投与できる液剤：
組成：
本発明の化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２.５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。経口液剤２０ｇは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコールおよびポリソルベートの混合物に撹拌しながら懸濁する。本発明の化合物が完全に溶解するまで、混合過程を継続する。
【０１４８】
ｉ.ｖ.溶液：
本発明の化合物を、生理的に耐容される溶媒（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に飽和溶解度より低い濃度で溶解する。溶液を濾過滅菌し、無菌のパイロジェンを含まない注射容器に満たすのに使用する。
【０１４９】
式（Ｉｂ）の化合物についての実験の部
Ａ. 実施例
略語および頭字語：
【表７】
2008524137.tif 000038
【０１５０】
出発物質および中間体：
実施例１Ａ
１−シクロプロピリデンアセトン
【化３１】
2008524137.tif 000039
［（１−エトキシシクロプロピル）オキシ］（トリメチル）シラン２７４ｇ（１.５７ｍｏｌ）、１−（トリフェニルホスホルアニリデン）アセトン６５０ｇ（２.０４ｍｏｌ）およびパラ−トルエンスルホン酸一水和物２９.９ｇ（１５７ｍｍｏｌ）を、１,２−ジクロロベンゼン１.５８ｌに懸濁し、１００℃で２.５時間撹拌する。加熱すると、１−（トリフェニルホスホルアニリデン）アセトンは溶解する。次いで、反応混合物を室温に冷却し、粗生成物をシリカゲルでクロマトグラフィーする（移動相：最初に石油エーテル、次いでジクロロメタン）。生成物画分を濃縮し、短時間高真空下で乾燥させる。
収量：７８.５ｇ（理論値の４６％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 6.42 (t, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.53-1.46 (m, 2H), 1.36-1.29 (m, 2H)
ＭＳ（ＤＣＩ,ＮＨ３）：ｍ／ｚ＝１１４［Ｍ＋ＮＨ４］＋.
【０１５１】
実施例２Ａ
スピロ［２.５］オクタン−５,７−ジオン
【化３２】
2008524137.tif 000040
ナトリウムメトキシド３７.０９ｇ（６８７ｍｍｏｌ）を、最初にメタノール３８８ｍｌに入れ、撹拌しながら、還流で加熱する。マロン酸ジメチル９６.２ｇ（７２８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を還流でさらに１０分間撹拌し、次いで室温に冷却する。次いで、実施例１Ａ由来の１−シクロプロピリデンアセトン６６ｇ（６８７ｍｍｏｌ）を滴下して室温で添加し、続いて混合物を還流で４時間撹拌する。加熱槽の除去後、水２６４ｍｌ中の水酸化カリウム８４.７５ｇ（１.５１ｍｏｌ）の溶液を、迅速に滴下して添加し、還流での撹拌を１時間継続する。次いで、準濃塩酸を使用してｐＨを１−２に調節し（発泡する）、混合物をさらに１５分間撹拌する。減圧下、ロータリーエバポレーターで、浴温度５５℃で、６０ｍｂａｒの圧力に達するまで、メタノールを除去する。フラスコの内容物を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られる油状物を濃縮し、ジクロロメタンに溶解し、シリカゲルでクロマトグラフィーする（移動相：ジクロロメタン／メタノール９５：５）。生成物画分を濃縮し、次いで、残っている油状物をジエチルエーテルでトリチュレートする。得られる固体を吸引濾過し、室温、高真空下で乾燥させる。
収量：３７.２ｇ（理論値の３９％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 3.49 (s, 2H), 2.47 (s, 4H), 0.58 (s, 4H)
ＭＳ（ＤＣＩ,ＮＨ３）：ｍ／ｚ＝１５６［Ｍ＋ＮＨ４］＋.
【０１５２】
実施例３Ａ
２',４'−ジシクロペンチル−３'−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−４',８'−ジヒドロ−１'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'（６'Ｈ）−オン
【化３３】
2008524137.tif 000041
３−アミノ−３−シクロペンチル−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペノン（ＷＯ０３／０２８７２７、実施例４に従い製造）９.０ｇ（３１.７７ｍｍｏｌ）を、最初にジイソプロピルエーテル３５０ｍｌに入れ、トリフルオロ酢酸４.０８ｍｌ（５２.９５ｍｍｏｌ）およびスピロ［２.５］オクタン−５,７−ジオン（実施例２Ａ）３.６６ｇ（２６.４７ｍｍｏｌ）を添加する。室温で１０分間撹拌した後、シクロペンタンカルボアルデヒド５.２０ｇ（５２.９５ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、混合物を還流下で１８時間加熱する。冷却後、混合物を氷浴中で１５分間撹拌し、得られる沈殿を吸引濾過し、冷たいジイソプロピルエーテルで洗浄する。
収量：１.９ｇ（理論値の１５％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.81 (d, 2H), 7.67 (d, 2H), 5.91 (s, 1H), 3.88 (d, 1H), 3.52 (quin, 1H), 2.88 (d, 1H), 2.70 (d, 1H), 2.26-2.14 (m, 1H), 1.94 (dd, 2H), 1.80-1.24 (m, 14H), 1.16-0.88 (m, 2H), 0.62-0.40 (m, 4H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１５３】
実施例４Ａ
２',４'−ジシクロペンチル−３'−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'（８'Ｈ）−オン
【化３４】
2008524137.tif 000042
実施例３Ａ由来の化合物４.８０ｇ（９.９３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１５０ｍｌに溶解し、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）２.４８ｇ（１０.９２ｍｍｏｌ）と共に室温で１時間撹拌する。混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル２０：１→１０：１）により精製する。
収量：２.７ｇ（理論値の５６％）
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 7.98 (d, 2H), 7.76 (d, 2H), 3.18-2.97 (m, 3H), 2.72-2.55 (m, 3H), 1.98-1.64 (m, 10H), 1.60-1.36 (m, 6H), 0.64-0.49 (m, 4H)
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝４８２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１５４】
実施例５Ａ
［（５'Ｓ）−２',４'−ジシクロペンチル−５'−ヒドロキシ−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−３'−イル］［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化３５】
2008524137.tif 000043
（１Ｒ,２Ｓ）−１−アミノインダン−２−オール１３０ｍｇ（０.８４ｍｍｏｌ）を、最初にＴＨＦ１００ｍｌに入れ、ボラン−Ｎ,Ｎ−ジエチルアニリン錯体３.６６ｇ（２２.４３ｍｍｏｌ）を室温で添加する。気体の放出が止まった後、混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦ１５０ｍｌに溶解した実施例４Ａ由来の化合物２.７０ｇ（５.６１ｍｍｏｌ）を添加する。撹拌しながら、混合物を数時間かけて室温に温まらせる。反応が終わった後、メタノールを反応混合物に添加し、混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取る。混合物を、１Ｎ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で、各場合で２回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：最初にシクロヘキサン、次いでシクロヘキサン／酢酸エチル２０：１）により精製する。
収量：２.８ｇ（化学的純度：約８３％、エナンチオマー過剰：９１％ｅｅ）.
【０１５５】
続いてエナンチオマーをキラル相でクロマトグラフィー的に分離し[カラム: Chiralpak AD, ５００ｍｍｘ４０ｍｍ；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：５０ｍｌ／分；温度：２４℃；検出：２５４ｎｍ］、上記で得た生成物２.６５ｇから、エナンチオマー的に純粋な表題化合物２.４ｇを得る：
Ｒｔ＝６.７８分［Chiralpak AD, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：１.０ｍｌ／分；検出：２５４ｎｍ］
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 8.00-7.89 (m, 2H), 7.72 (d, 2H), 5.68-5.59 (m, 1H), 3.36-3.14 (m, 2H), 2.65-2.50 (m, 2H), 2.34 (d, 1H), 2.20-2.04 (m, 2H), 1.94-1.30 (m, 16H), 0.83-0.73 (m, 1H), 0.72-0.59 (m, 1H), 0.53-0.41 (m, 2H)
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１５６】
実施例６Ａ
（（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２',４'−ジシクロペンチル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−３'−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化３６】
2008524137.tif 000044
アルゴン下、実施例５Ａ由来の化合物２.２５ｇ（４.６５ｍｍｏｌ）および２,６−ジメチルピリジン１.９９ｇ（１８.６１ｍｍｏｌ）を、無水トルエン２０ｍｌに溶解し、−２０℃に冷却する。この温度で、無水トルエン５ｍｌ中のｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート２.４６ｇ（９.３１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して添加し、続いて、混合物を−２０℃で１５分間撹拌し、次いで０℃に温め、この温度でさらに１時間撹拌する。０.１Ｎ塩酸７５ｍｌを混合物に添加し、次いで、それを酢酸エチルで繰り返し抽出する。合わせた有機相を、飽和重炭酸ナトリウム溶液と飽和塩化ナトリウム溶液の１：１混合物で１回、飽和塩化ナトリウム溶液で１回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をクロマトグラフィー的にシリカゲルで精製する（移動相：最初にシクロヘキサン、次いでシクロヘキサン／酢酸エチル１５：１）。
収量：２.１８ｇ（理論値の７８％）
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 8.00-7.87 (m, 2H), 7.71 (d, 2H), 5.28-5.18 (m, 1H), 3.38-3.11 (m, 1H), 2.96 (d, 1H), 2.80 (d, 1H), 2.65-2.43 (m, 1H), 2.08-1.23 (m, 18H), 0.87 (s, 9H), 0.76-0.58 (m, 2H), 0.46-0.38 (m, 1H), 0.37-0.25 (m, 1H), 0.18 (s, 3H), 0.10 (s, 3H).
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５９８［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１５７】
実施例７Ａ
（Ｓ）−（（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２',４'−ジシクロペンチル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−３'−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
【化３７】
2008524137.tif 000045
アルゴン下、実施例６Ａ由来の化合物２.１０ｇ（３.５１ｍｍｏｌ）を、最初に無水トルエン３５ｍｌに入れ、−５０℃に冷却する。この温度で、水素化ジイソブチルアルミニウムの１Ｍトルエン溶液１７.５６ｍｌ（１７.５６ｍｍｏｌ）を、ゆっくりと滴下して添加する。混合物を−５０℃で１０分間撹拌し、次いで１時間かけて室温に温める。氷冷しながら、２０％強度酒石酸カリウムナトリウム溶液を混合物に添加し、次いでそれを酢酸エチルで繰り返し抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。これにより、２.４ｇを粗生成物として得る。
【０１５８】
続いて、キラル相でクロマトグラフィー的にジアステレオマーを分離し［カラム：Chiralpak AD, 500 mm x 40 mm, 20 μm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：５０ｍｌ／分；温度：２４℃；検出：２５４ｎｍ］、ジアステレオマー的に純粋な表題化合物（アンチ異性体）１.２ｇ（理論値の５６％）およびジアステレオマーのシン異性体０.９ｇ（理論値の４２％）を得る。
【０１５９】
アンチ−ジアステレオマー：
Ｒｔ＝５.２５分［カラム：Chiralpak AD, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：１.５ｍｌ／分；検出：２５０ｎｍ］
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.58 (d, 2H), 7.41 (d, 2H), 6.23 (br. s, 1H), 5.20 (t, 1H), 3.68-3.55 (m, 1H), 3.08-2.70 (m, 3H), 2.29-2.18 (m, 1H), 2.12-1.94 (m, 2H), 1.90-1.22 (m, 15H), 0.89 (s, 9H), 0.76-0.68 (m, 1H), 0.62-0.55 (m, 1H), 0.43-0.36 (m, 1H), 0.33-0.25 (m, 1H), 0.13 (s, 3H), 0.11 (s, 3H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６００［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１６０】
シンジアステレオマー：
Ｒｔ＝４.３６分［カラム：Chiralpak AD, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソプロパノール／イソヘキサン２.５：９７.５；流速：１.５ｍｌ／分；検出：２５０ｎｍ］
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.56 (d, 2H), 7.34 (d, 2H), 6.23 (br. s, 1H), 5.20 (t, 1H), 3.68-3.55 (m, 1H), 3.13-2.60 (m, 3H), 2.29-2.11 (m, 2H), 2.10-1.98 (m, 1H), 1.90-1.22 (m, 15H), 0.89 (s, 9H), 0.76-0.68 (m, 1H), 0.62-0.55 (m, 1H), 0.43-0.36 (m, 1H), 0.33-0.25 (m, 1H), 0.13 (s, 3H), 0.11 (s, 3H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６００［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１６１】
実施例８Ａ
（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２',４'−ジシクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］
【化３８】
2008524137.tif 000046
アルゴン下、実施例７Ａ由来の化合物５００ｍｇ（０.８３ｍｍｏｌ）を、トルエン１０ｍｌに溶解し、−２０℃に冷却する。この温度で、三フッ化ジエチルアミノ硫黄０.１８ｍｌ（１.３８ｍｍｏｌ）を滴下して添加する。冷却を取り止めた後、混合物をさらに２時間撹拌する。水を混合物に添加し、次いでそれをジクロロメタンで繰り返し抽出する。合わせた有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で１回、飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗生成物を高真空下で乾燥させ、これ以上精製せずに反応させる。
収量：４８５ｍｇ（理論値の９６％）
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.61 (d, 2H), 7.38 (d, 2H), 6.91 (d, 1H), 5.21 (t, 1H), 3.66-3.55 (m, 1H), 2.97-2.80 (m, 3H), 2.16-2.00 (m, 2H), 1.98-1.60 (m, 12H), 1.50-1.22 (m, 3H), 1.20-1.05 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.78-0.70 (m, 1H), 0.63-0.57 (m, 1H), 0.44-0.37 (m, 1H), 0.35-0.28 (m, 1H), 0.13 (s, 1H), 0.11 (s, 3H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６０２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１６２】
実施例：
実施例１
（５'Ｓ）−２',４'−ジシクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１,７'−キノリン］−５'−オール
【化３９】
2008524137.tif 000047
アルゴン下、実施例８Ａ由来の化合物４７５ｍｇ（０.７９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ１ｍｌに溶解し、ＴＢＡＦの１Ｍ ＴＨＦ溶液３.９５ｍｌ（３.９５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌する。０.２Ｎ塩酸５０ｍｌを混合物に添加し、次いでそれを酢酸エチルで繰り返し抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をクロマトグラフィー的にシリカゲルで精製する（移動相：最初にシクロヘキサン、次いでシクロヘキサン／酢酸エチル１０：１）。
収量：２９３ｍｇ（理論値の７６％）、ジアステレオマー過剰率９０％。
【０１６３】
生成物中にまだ存在するジアステレオマーを、キラル相のクロマトグラフィー［カラム：KBD 5945, 400 mm x 30 mm、キラルセレクターのポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシン−ｔｅｒｔ−ブチルアミドをベースとする；移動相：ＭＴＢＥ／イソヘキサン２０：８０；流速：５０ｍｌ／分；温度：２４℃；検出：２５４ｎｍ］を使用してさらに分離し、ジアステレオマー的に純粋な表題化合物２５１ｍｇを得る：
Ｒｔ＝４.６７分［カラム：KBD 5945, 250 x 4.6 mm；移動相：ＭＴＢＥ／イソヘキサン３：７；流速：１.０ｍｌ／分；検出：２８０ｎｍ］
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.62 (d, 2H), 7.36 (d, 2H), 6.97 (d, 1H), 5.12 (br. s, 1H), 3.84 (quin, 1H), 3.24 (dd, 1H), 2.98-2.86 (m, 1H), 2.48 (d, 1H), 2.36 (d, 1H), 2.22-1.52 (m, 14H), 1.49-1.20 (m, 3H), 1.06-0.90 (m, 1H), 0.80-0.72 (m, 1H), 0.67-0.58 (m, 1H), 0.51-0.40 (m, 2H)
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８８［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１６４】
Ｂ. 薬理活性の評価
Ｂ−Ｉ. ＣＥＴＰ−阻害試験
Ｂ−Ｉ.１. ＣＥＴＰの入手
ＣＥＴＰを、ヒト血漿から、分画遠心法およびカラムクロマトグラフィーにより部分的に精製された形態で入手し、試験に使用する。この目的で、ＮａＢｒを使用してヒト血漿を１.２１ｇ／ｍｌの密度に調節し、４℃、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。底部の画分（ｄ＞１.２１ｇ／ｍｌ）を Sephadex（登録商標）Phenyl-Sepharose 4B (Pharmacia) カラムに載せ、０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.００１Ｍトリス−ＨＣｌ ｐＨ７.４で洗浄し、次いで蒸留水で溶出する。ＣＥＴＰ−活性画分を集め、５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４.５で透析し、CM-Sepharose（登録商標）カラム (Pharmacia) に載せる。次いで、線状グラジエント（０−１Ｍ ＮａＣｌ）を使用して混合物を溶出する。集めたＣＥＴＰ画分を１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４で透析し、次いで Mono Q（登録商標） カラム (Pharmacia）でのクロマトグラフィーによりさらに精製する。
【０１６５】
Ｂ−Ｉ.２. ＣＥＴＰ蛍光試験
ＣＥＴＰに触媒されるリポソーム間の蛍光コレステロールエステルの転送の測定［Bisgaier et al., J. Lipid Res. 34, 1625 (1993) の方法に準じて改変］：
ドナーリポソームの生成のために、コレステリル４,４−ジフルオロ−５,７−ジメチル−４−ボラ−３ａ,４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ドデカノエート（コレステリル BODIPY（登録商標） FL C12, Molecular Probes）を、トリオレイン５.３５ｍｇおよびホスファチジルコリン６.６７ｍｇを含むジオキサン６００μｌに、超音波槽中で穏やかに温めながら溶解し、この溶液を、超音波処理しながら、６３ｍｌの５０ｍＭトリス／ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡバッファーｐＨ７.３に室温で非常にゆっくりと添加する。次いで、懸濁液を、Ｎ２雰囲気下、３０分間、Branson 超音波槽中、約５０ワットで、温度を約２０℃に維持して超音波処理する。
【０１６６】
同様にして、ジオキサン１.２ｍｌおよび上記のバッファー１１４ｍｌに溶解したコレステリルオレエート８６ｍｇ、トリオレイン２０ｍｇおよびホスファチジルコリン１００ｍｇから、５０ワット（２０℃）、３０分間の超音波処理により、アクセプターリポソームを得る。
【０１６７】
Ｂ−Ｉ.２.１. 富化ＣＥＴＰを用いるＣＥＴＰ蛍光試験
試験するために、上記のバッファー１部、ドナーリポソーム１部およびアクセプターリポソーム２部からなる試験混合物を使用する。
試験混合物５０μｌを、ヒト血漿から疎水性クロマトグラフィーを利用して得た富化ＣＥＴＰ画分（１−３μｇ）４８μｌおよび試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液２μｌで処理し、３７℃で４時間インキュベートする。
【０１６８】
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の尺度である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表８】
2008524137.tif 000048
【０１６９】
Ｂ−Ｉ.２.２. ヒト血漿を用いるＣＥＴＰ蛍光試験
ドナーリポソーム６μｌ（１２％ｖ／ｖ）および試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液１μｌ（２％ｖ／ｖ）を、ヒト血漿（Sigma P9523）４２μｌ（８６％ｖ／ｖ）に添加し、混合物を３７℃で２４時間インキュベートする。
５１０／５２０ｎｍ（ギャップ幅２.５ｎｍ）の蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表９】
2008524137.tif 000049
【０１７０】
Ｂ−Ｉ.２.３. エクスビボ−ＣＥＴＰ蛍光試験
バッファー１０μｌおよび血清２μｌを、試験混合物８０μｌに添加し、混合物を３７℃で４時間インキュベートする。
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【０１７１】
Ｂ−Ｉ.３. 放射性標識化ＨＤＬの入手
新鮮なヒトＥＤＴＡ血漿５０ｍｌを、ＮａＢｒを使用して１.１２の密度に調節し、４℃、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を非標識ＬＤＬの入手に使用する。下相をＰＤＢバッファー（１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４、０.１５ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０２％ＮａＮ３）３ｘ４ｌで透析する。次いで、保持液の体積１０ｍｌにつき、３Ｈ−コレステロール（Dupont NET-725；１μＣ／μｌ、エタノールに溶解）２０μｌを添加し、混合物を、３７℃、Ｎ２下で、７２時間インキュベートする。
【０１７２】
次いで、ＮａＢｒを使用してバッチを１.２１の密度に調節し、２０℃で、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を回収し、リポタンパク質画分を勾配遠心分離により精製する。この目的で、単離した標識化リポタンパク質画分を、ＮａＢｒを使用して１.２６の密度に調節する。この溶液各４ｍｌを、遠心管（ＳＷ４０ローター）中、密度１.２１の溶液４ｍｌおよび密度１.０６３の溶液４.５ｍｌで覆い（ＰＤＢバッファーおよびＮａＢｒの密度溶液）、次いで、２４時間３８０００ｒｐｍで、２０℃で、ＳＷ４０ローター中で遠心分離する。標識化ＨＤＬを含有する、密度１.０６３と１.２１との間にある中間層を、３ｘ１００量のＰＤＢバッファーで、４℃で透析する。
保持液は放射性標識化３Ｈ−ＣＥ−ＨＤＬを含有し、それを、約５ｘ１０６ｃｍｐ／ｍｌに調節し、試験に使用する。
【０１７３】
Ｂ−Ｉ.４. ＣＥＴＰ−ＳＰＡ試験
ＣＥＴＰ活性を試験するために、３Ｈ−コレステロールエステルのヒトＨＤリポタンパク質からビオチン化ＬＤリポタンパク質への転送を測定する。ストレプトアビジン−ＳＰＡ（登録商標）ビーズ（Amersham）の添加により反応を終了させ、転送された放射能を液体シンチレーションカウンターで直接測定する。
【０１７４】
試験バッチでは、ＨＤＬ−３Ｈ−コレステロールエステル（〜５００００ｃｐｍ）１０μｌを、３７℃で１８時間、ビオチン−ＬＤＬ（Amersham）１０μｌと共に、ＣＥＴＰ（１ｍｇ／ｍｌ）１０μｌおよび試験しようとする物質の溶液（１０％ＤＭＳＯ／１％ＲＳＡに溶解）３μｌを含有する５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ／０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.１％ウシ血清アルブミン／０.０５％ＮａＮ３ ｐＨ７.４中でインキュベートする。次いで、ＳＰＡ−ストレプトアビジンビーズ溶液（ＴＲＫＱ７００５）２００μｌを添加し、さらに１時間振盪しながらインキュベートし、次いで、シンチレーションカウンターで測定する。バッファー１０μｌ、４℃のＣＥＴＰ１０μｌおよび３７℃のＣＥＴＰ１０μｌを用いる対応するインキュベーションを対照に供する。
【０１７５】
３７℃のＣＥＴＰを用いる対照バッチで転送される放射活性を、１００％の転送とみなす。この転送を半分に低減させる物質濃度を、ＩＣ５０値と特定する。
【表１０】
2008524137.tif 000050
【０１７６】
Ｂ−ＩＩ.１. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに対するエクスビボ活性の測定
ＣＥＴＰ−阻害活性を試験するために、自家飼育した遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに、胃管を使用して物質を経口投与する［Dinchuk et al. BBA 1295-301 (1995)］。この目的で、実験開始の前日に、オスの動物を、等数の動物（原則としてｎ＝４）を有するグループに無作為に割り当てる。物質投与前に、血清中の基底ＣＥＴＰ活性（Ｔ１）の測定のために、後眼窩静脈叢の穿刺により各マウスから血液を採取する。次いで、胃管を使用して試験物質を動物に投与する。試験物質の投与後、特定の時間に、一般に物質の投与後１６または２４時間後に、二回目の穿刺により血液を動物から採取する（Ｔ２）が、必要に応じて、これを他の時間で実施することもできる。
【０１７７】
物質の阻害活性を評価できるように、各時間、即ち、１６または２４時間に、動物が物質を含まない製剤化物質のみを受容する、対応する対照群を用いる。対照動物では、対応する実験期間（１６または２４時間）に亘る、阻害剤のない場合のＣＥＴＰ活性の変化を測定できるように、動物毎の２回目の血液サンプル採取を物質で処置した動物と同様に実施する。
【０１７８】
凝血の終了後、血液サンプルを遠心分離し、血清をピペットで取り出す。ＣＥＴＰ活性の決定のために、４時間に亘るコレステリルエステル転送を測定する。この目的で、一般に試験バッチで血清２μｌを用い、Ｂ−Ｉ.２.３で記載の通りに試験を実施する。
【０１７９】
コレステリルエステル転送の差異［ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ２）−ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ１）］を各動物について算出し、グループ内で平均する。何れかの時間でコレステリルエステル転送を＞２０％まで低減する物質を、活性であるとみなす。
【表１１】
2008524137.tif 000051
【０１８０】
Ｂ−ＩＩ.２. シリアンゴールデンハムスターにおけるインビボ活性の測定
自家飼育した体重１５０−２００ｇの雌のシリアンゴールデンハムスター（系統ＢＡＹ：ＤＳＮ）を、ＣＥＴＰ阻害剤の血清リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用の測定に使用する。動物をケージ当たり６匹の動物にグループ分けし、飼料と水を自由にとらせ、２週間順応させる。
【０１８１】
実験開始直前および物質投与の後に、血液を後眼窩静脈叢の穿刺により採取し、３０分間室温でのインキュベーションおよび２０分間３００００ｇでの遠心分離の後、血清を得るために使用する。物質を２０％ Solutol／８０％水に溶解し、胃管を利用して経口投与する。対照の動物は、試験物質を含まない同体積の溶媒を受容する。
【０１８２】
トリグリセリド、総コレステロール、ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬコレステロールを、分析装置 COBAS INTEGRA 400 plus (Roche Diagnostics より）を製造業者に指示に従い使用して測定する。測定値から、各パラメーターについて、物質による処置に起因する割合の変化を、各動物について算出し、グループ毎の平均として標準偏差と共に示す（ｎ＝６またはｎ＝１２）。溶媒処置群と比較して、物質の効果が有意であれば、ｔ試験の適用により、ｐ−値を加える（＊ｐ＜０.０５；＊＊ｐ＜０.０１；＊＊＊ｐ＜０.００５）。
【０１８３】
Ｂ−ＩＩ.３. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスにおけるインビボ活性の測定
リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用を測定するために、胃管を使用して試験物質を遺伝子組換えマウスに投与する［Dinchuk et al., BBA, 1295-1301 (1995)］。実験開始前に、血清中のコレステロールおよびトリグリセリドを測定するために、マウスから後眼窩的に血液を採取する。ハムスターについて上記した通りに、４℃で終夜インキュベートし、続いて６０００ｇで遠心分離することにより血清を入手する。３日後に、リポタンパク質およびトリグリセリドを測定するために、血液を再度マウスから採取する。測定されるパラメーターの変化を、出発値と比較した変化割合として表す。
【表１２】
2008524137.tif 000052
【０１８４】
Ｃ. 医薬組成物の実施例（ａ）
本発明の化合物は、以下のやり方で医薬製剤に変換できる：
錠剤：
組成：
本発明の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）１０ｍｇ（BASFより、Ludwigshafen, Germany）およびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ、直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明の化合物、ラクトースおよびスターチの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状について、上記参照）。打錠のガイドラインの打錠力は、１５ｋＮである。
【０１８５】
経口投与できる懸濁剤：
組成：
本発明の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel（登録商標） (FMCのキサンタンガム、Pennsylvania, USA) ４００ｍｇおよび水９９ｇ。
経口懸濁液１０ｍｌは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、本発明の化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel の膨潤が完了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０１８６】
経口投与できる液剤：
組成：
本発明の化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２.５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。経口液剤２０ｇは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコールおよびポリソルベートの混合物に撹拌しながら懸濁する。本発明の化合物が完全に溶解するまで、混合過程を継続する。
【０１８７】
ｉ.ｖ.溶液：
本発明の化合物を、生理的に耐容される溶媒（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に飽和溶解度より低い濃度で溶解する。溶液を濾過滅菌し、無菌のパイロジェンを含まない注射容器に満たすのに使用する。
【０１８８】
式（Ｉｃ）の化合物についての実験の部
Ａ. 実施例
略語および頭字語：
【表１３】
2008524137.tif 000053
【０１８９】
ＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳの方法：
方法１：カラム：Chiralpak IA, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソヘキサン／１−プロパノール９７：３；流速：１.０ｍｌ／分；ＵＶ−検出：２５４ｎｍ。
【０１９０】
方法２：装置：DAD 検出を有するHP 1100；カラム：Kromasil RP-18, 60 mm x 2 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：ＨＣｌＯ４５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→９分９０％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１９１】
方法３（ＬＣ／ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD; カラム: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１９２】
出発物質および中間体：
実施例１Ａ
４'−シクロペンチル−２'−イソプロピル−３'−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−４',８'−ジヒドロ−１'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−５'（６'Ｈ）−オン
【化４０】
2008524137.tif 000054
３−アミノ−３−イソプロピル−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペノン（ＷＯ０３／０２８７２７、実施例２に従い製造）６.３ｇ（２４.５ｍｍｏｌ、１.２当量）を、最初にジイソプロピルエーテル１８８ｍｌに入れ、トリフルオロ酢酸３.１４ｍｌ（４０.８ｍｍｏｌ、２.０当量）およびスピロ［３.５］ノナン−６,８−ジオン（ＷＯ０３／０２８７２７、実施例５に従い製造）３.１ｇ（２０.４ｍｍｏｌ、１当量）を添加する。室温で１０分間撹拌した後、シクロペンタンカルボアルデヒド３.０ｇ（３０.６ｍｍｏｌ、１.５当量）を添加する。次いで、混合物を、還流下、水分離装置（water separator）を装着して、１８時間加熱する。冷却後、混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、得られる沈殿を吸引濾過し、冷たいジイソプロピルエーテルで洗浄し、残っている溶媒を高真空下で除去する。
収量：４.３７ｇ（理論値の４５.５％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.91 (m, 2H), 1.05 (d, 3H), 1.28 (d, 3H), 1.21-2.07 (m, 13H), 2.43 および 2.70 (2d, 2H), 2.63 (s, 2H), 3.47 (sept, 1H), 3.80 (d, 1H), 6.03 (s, 1H), 7.66 (d, 2H), 7.77 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１９３】
実施例２Ａ
４'−シクロペンチル−２'−イソプロピル−３'−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−５'（８'Ｈ）−オン
【化４１】
2008524137.tif 000055
実施例１Ａ由来の化合物５.１９ｇ（１１.０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１８０ｍｌに溶解し、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）２.７５ｇ（１２.１ｍｍｏｌ、１.１当量）を少しずつ室温で添加する。混合物を室温で１時間撹拌する。混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル１００：０→５０：５０）により精製する。
収量：４.７４ｇ（理論値の９１.６％）
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 1.10 (d, 3H), 1.19 (d, 3H), 1.33-2.10 (m, 14H), 2.59 (sept, 1H), 2.82 (s, 2H), 2.99 (sept, 1H), 3.30 (s, 2H), 7.75 (d, 2H), 7.94 (m, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７０［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１９４】
実施例３Ａ
［（５'Ｓ）−４'−シクロペンチル−５'−ヒドロキシ−２'−イソプロピル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−３'−イル］［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化４２】
2008524137.tif 000056
（１Ｒ,２Ｓ）−１−アミノインダン−２−オール１２０ｍｇ（０.８１ｍｍｏｌ、０.０８当量）を、最初にＴＨＦ２５０ｍｌに入れ、ボラン−Ｎ,Ｎ−ジエチルアニリン錯体６.６ｇ（４０.４ｍｍｏｌ、４.０当量）を室温で添加する。気体の放出が止まった後、混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦ２５０ｍｌに溶解した実施例２Ａ由来の化合物４.７４ｇ（１０.１ｍｍｏｌ、１当量）を添加する。撹拌しながら、混合物を１８時間かけて室温に温まらせる。反応が終わった後、メタノール２０ｍｌを反応混合物に添加し、次いで、それを蒸発乾固する。粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル混合物）により精製する。
収量：４.３３ｇ（理論値の９１.１％）
方法１に従い、エナンチオマー過剰率を９４.０％ｅｅと決定する。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 0.99-1.19 (m, 6H), 1.29-2.41 (m, 14H), 2.53 (sept, 1H), 2.93 (d, 1H), 3.15-3.54 (m, 2H), 5.13 (m, 1H), 7.73 (d, 2H), 7.94 (m, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１９５】
実施例４Ａ
（（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４'−シクロペンチル−２'−イソプロピル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−３'−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化４３】
2008524137.tif 000057
アルゴン下、実施例３Ａの化合物４.００ｇ（８.４８ｍｍｏｌ）を、最初に乾燥トルエン３０ｍｌに入れる。次いで、室温で、２,６−ルチジン３.６４ｇ（３３.９ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、混合物を−１６℃に冷却する。トルエン１０ｍｌに溶解したｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート３.９０ｍｌ（１７.０ｍｍｏｌ、２当量）を、この溶液に滴下して添加する。１５分後、反応混合物を０℃に温め、この温度でさらに８０分間撹拌する。後処理に、０.１Ｎ塩酸１２４ｍｌを添加し、混合物を、室温に温めた後、酢酸エチルで抽出する。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液と飽和重炭酸ナトリウム溶液の１：１混合物で洗浄する。合わせた水相を酢酸エチルで２回再抽出する。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９：１）により精製する。
収量：４.６１ｇ（理論値の９２.７％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.12 (s, 3H), 0.23 (s, 3H), 0.86 (s, 9H), 1.06 (d, 3H), 1.12 (d, 3H), 1.24-2.12 (m, 14H), 2.19-2.35 (m, 2H), 2.51 (m, 1H), 2.89-3.44 (m, 3H), 5.17 (m, 1H), 7.73 (d, 2H), 7.84-8.02 (m, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８６［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０１９６】
実施例５Ａ
（Ｓ）−（（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４'−シクロペンチル−２'−イソプロピル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−３'−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
【化４４】
2008524137.tif 000058
水素化リチウムアンモニウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液５.１ｍｌ（５.１ｍｍｏｌ、１.１当量）を、乾燥ＴＨＦ４６ｍｌ中の実施例４Ａ由来の化合物２.７１ｇ（４.６ｍｍｏｌ）の溶液に、滴下して添加する。撹拌しながら、混合物を３.５時間かけて室温に温める。後処理に、飽和酒石酸ナトリウムカリウム溶液１２０ｍｌを注意深く添加する。気体の放出が止まった後、混合物を酢酸エチルで４回抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をクロマトグラフィー的に精製し、生成物のジアステレオマーの分離をもたらす（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９５：５）。
収量：１.３９ｇ（理論値の５１.２％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.16 (s, 3H), 0.25 (s, 3H), 0.67-0.98 (m, 18H), 1.02-2.34 (m, 14H), 2.80-3.76 (m, 4H), 5.19 (m, 1H), 6.21 (br. s, 1H), 7.43 (d, 2H), 7.59 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８８［Ｍ＋Ｈ］＋
ＬＣ／ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝３.０３分.
【０１９７】
シンジアステレオマー：
（Ｒ）−（（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４'−シクロペンチル−２'−イソプロピル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−３'−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
収量：１.０４ｇ（理論値の３８.１％）
【０１９８】
実施例６Ａ
（５'Ｓ）−５'−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４'−シクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−２'−イソプロピル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］
【化４５】
2008524137.tif 000059
−１５℃、アルゴン下で、三フッ化ジエチルアミノ硫黄０.４２ｍｌ（３.２ｍｍｏｌ、２.０当量）を、乾燥トルエン１５ｍｌ中の実施例５Ａ由来の化合物０.９４ｇ（１.６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。混合物を５時間撹拌し、０℃に温める。後処理に、飽和重炭酸ナトリウム溶液４０ｍｌを、氷冷しながら注意深く添加する。混合物を酢酸エチルで全部で３回抽出する。次いで、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗生成物を濾過によりシリカゲルを通して精製する（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル９：１）。
収量：０.６５ｇ（理論値の６９.０％）
Ｒｆ＝０.７２（イソヘキサン／酢酸エチル９：１）
【０１９９】
実施例：
実施例１
（５'Ｓ）−４'−シクロペンチル−３'−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−２'−イソプロピル−５',８'−ジヒドロ−６'Ｈ−スピロ［シクロブタン−１,７'−キノリン］−５'−オール
【化４６】
2008524137.tif 000060
０℃で、フッ化テトラブチルアンモニウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液４.４ｍｌ（４.４ｍｍｏｌ、４.０当量）を、乾燥ＴＨＦ６ｍｌ中の実施例６Ａ由来の化合物０.６５ｇ（１.１ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。反応混合物を氷浴中で４時間撹拌する。後処理に、混合物を酢酸エチル２０ｍｌで希釈し、水２０ｍｌで洗浄する。水相を、各場合で２０ｍｌの酢酸エチルで、２回再抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液５０ｍｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗生成物をクロマトグラフィー的に精製する（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９：１→４：１）。
収量：０.４７ｇ（理論値の８８.６％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.75 (d, 3H), 1.11 (d, 3H), 1.30-2.33 (m, 17H), 2.89 (m, 1H), 2.89 and 3.33 (2d, 2H), 3.82 (s, 1H), 5.12 (m, 1H), 6.94 (d, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.62 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７６［Ｍ＋Ｈ］＋
Ｒｆ＝０.１４（イソヘキサン／酢酸エチル９：１）.
【０２００】
Ｂ. 薬理活性の評価
Ｂ−Ｉ. ＣＥＴＰ−阻害試験
Ｂ−Ｉ.１. ＣＥＴＰの入手
ＣＥＴＰを、ヒト血漿から、分画遠心法およびカラムクロマトグラフィーにより部分的に精製された形態で入手し、試験に使用する。この目的で、ＮａＢｒを使用してヒト血漿を１.２１ｇ／ｍｌの密度に調節し、４℃、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。底部の画分（ｄ＞１.２１ｇ／ｍｌ）を Sephadex（登録商標）Phenyl-Sepharose 4B (Pharmacia) カラムに載せ、０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.００１Ｍトリス−ＨＣｌ ｐＨ７.４で洗浄し、次いで蒸留水で溶出する。ＣＥＴＰ−活性画分を集め、５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４.５で透析し、CM-Sepharose（登録商標）カラム (Pharmacia) に載せる。次いで、線状グラジエント（０−１Ｍ ＮａＣｌ）を使用して混合物を溶出する。集めたＣＥＴＰ画分を１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４で透析し、次いで Mono Q（登録商標） カラム (Pharmacia）でのクロマトグラフィーによりさらに精製する。
【０２０１】
Ｂ−Ｉ.２. ＣＥＴＰ蛍光試験
ＣＥＴＰに触媒されるリポソーム間の蛍光コレステロールエステルの転送の測定［Bisgaier et al., J. Lipid Res. 34, 1625 (1993) の方法に準じて改変］：
ドナーリポソームの生成のために、コレステリル４,４−ジフルオロ−５,７−ジメチル−４−ボラ−３ａ,４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ドデカノエート（コレステリル BODIPY（登録商標） FL C12, Molecular Probes）を、トリオレイン５.３５ｍｇおよびホスファチジルコリン６.６７ｍｇを含むジオキサン６００μｌに、超音波槽中で穏やかに温めながら溶解し、この溶液を、超音波処理しながら、６３ｍｌの５０ｍＭトリス／ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡバッファーｐＨ７.３に室温で非常にゆっくりと添加する。次いで、懸濁液を、Ｎ２雰囲気下、３０分間、Branson 超音波槽中、約５０ワットで、温度を約２０℃に維持して超音波処理する。
【０２０２】
同様にして、ジオキサン１.２ｍｌおよび上記のバッファー１１４ｍｌに溶解したコレステリルオレエート８６ｍｇ、トリオレイン２０ｍｇおよびホスファチジルコリン１００ｍｇから、５０ワット（２０℃）、３０分間の超音波処理により、アクセプターリポソームを得る。
【０２０３】
Ｂ−Ｉ.２.１. 富化ＣＥＴＰを用いるＣＥＴＰ蛍光試験
試験するために、上記のバッファー１部、ドナーリポソーム１部およびアクセプターリポソーム２部からなる試験混合物を使用する。
試験混合物５０μｌを、ヒト血漿から疎水性クロマトグラフィーを利用して得た富化ＣＥＴＰ画分（１−３μｇ）４８μｌおよび試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液２μｌで処理し、３７℃で４時間インキュベートする。
【０２０４】
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の尺度である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表１４】
2008524137.tif 000061
【０２０５】
Ｂ−Ｉ.２.２. ヒト血漿を用いるＣＥＴＰ蛍光試験
ドナーリポソーム６μｌ（１２％ｖ／ｖ）および試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液１μｌ（２％ｖ／ｖ）を、ヒト血漿（Sigma P9523）４２μｌ（８６％ｖ／ｖ）に添加し、混合物を３７℃で２４時間インキュベートする。
５１０／５２０ｎｍ（ギャップ幅２.５ｎｍ）の蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表１５】
2008524137.tif 000062
【０２０６】
Ｂ−Ｉ.２.３. エクスビボ−ＣＥＴＰ蛍光試験
バッファー１０μｌおよび血清２μｌを、試験混合物８０μｌに添加し、混合物を３７℃で４時間インキュベートする。
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【０２０７】
Ｂ−Ｉ.３. 放射性標識化ＨＤＬの入手
新鮮なヒトＥＤＴＡ血漿５０ｍｌを、ＮａＢｒを使用して１.１２の密度に調節し、４℃、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を非標識ＬＤＬの入手に使用する。下相をＰＤＢバッファー（１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４、０.１５ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０２％ＮａＮ３）３ｘ４ｌで透析する。次いで、保持液の体積１０ｍｌにつき、３Ｈ−コレステロール（Dupont NET-725；１μＣ／μｌ、エタノールに溶解）２０μｌを添加し、混合物を、３７℃、Ｎ２下で、７２時間インキュベートする。
【０２０８】
次いで、ＮａＢｒを使用してバッチを１.２１の密度に調節し、２０℃で、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を回収し、リポタンパク質画分を勾配遠心分離により精製する。この目的で、単離した標識化リポタンパク質画分を、ＮａＢｒを使用して１.２６の密度に調節する。この溶液各４ｍｌを、遠心管（ＳＷ４０ローター）中、密度１.２１の溶液４ｍｌおよび密度１.０６３の溶液４.５ｍｌで覆い（ＰＤＢバッファーおよびＮａＢｒの密度溶液）、次いで、２４時間３８０００ｒｐｍで、２０℃で、ＳＷ４０ローター中で遠心分離する。標識化ＨＤＬを含有する、密度１.０６３と１.２１との間にある中間層を、３ｘ１００量のＰＤＢバッファーで、４℃で透析する。
保持液は放射性標識化３Ｈ−ＣＥ−ＨＤＬを含有し、それを、約５ｘ１０６ｃｍｐ／ｍｌに調節し、試験に使用する。
【０２０９】
Ｂ−Ｉ.４. ＣＥＴＰ−ＳＰＡ試験
ＣＥＴＰ活性を試験するために、３Ｈ−コレステロールエステルのヒトＨＤリポタンパク質からビオチン化ＬＤリポタンパク質への転送を測定する。ストレプトアビジン−ＳＰＡ（登録商標）ビーズ（Amersham）の添加により反応を終了させ、転送された放射能を液体シンチレーションカウンターで直接測定する。
【０２１０】
試験バッチでは、ＨＤＬ−３Ｈ−コレステロールエステル（〜５００００ｃｐｍ）１０μｌを、３７℃で１８時間、ビオチン−ＬＤＬ（Amersham）１０μｌと共に、ＣＥＴＰ（１ｍｇ／ｍｌ）１０μｌおよび試験しようとする物質の溶液（１０％ＤＭＳＯ／１％ＲＳＡに溶解）３μｌを含有する５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ／０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.１％ウシ血清アルブミン／０.０５％ＮａＮ３ ｐＨ７.４中でインキュベートする。次いで、ＳＰＡ−ストレプトアビジンビーズ溶液（ＴＲＫＱ７００５）２００μｌを添加し、さらに１時間振盪しながらインキュベートし、次いで、シンチレーションカウンターで測定する。バッファー１０μｌ、４℃のＣＥＴＰ１０μｌおよび３７℃のＣＥＴＰ１０μｌを用いる対応するインキュベーションを対照に供する。
【０２１１】
３７℃のＣＥＴＰを用いる対照バッチで転送される放射活性を、１００％の転送とみなす。この転送を半分に低減させる物質濃度を、ＩＣ５０値と特定する。
【表１６】
2008524137.tif 000063
【０２１２】
Ｂ−ＩＩ.１. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに対するエクスビボ活性の測定
ＣＥＴＰ−阻害活性を試験するために、自家飼育した遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに、胃管を使用して物質を経口投与する［Dinchuk et al. BBA 1295-301 (1995)］。この目的で、実験開始の前日に、オスの動物を、等数の動物（原則としてｎ＝４）を有するグループに無作為に割り当てる。物質投与前に、血清中の基底ＣＥＴＰ活性（Ｔ１）の測定のために、後眼窩静脈叢の穿刺により各マウスから血液を採取する。次いで、胃管を使用して試験物質を動物に投与する。試験物質の投与後、特定の時間に、一般に物質の投与後１６または２４時間後に、二回目の穿刺により血液を動物から採取する（Ｔ２）が、必要に応じて、これを他の時間で実施することもできる。
【０２１３】
物質の阻害活性を評価できるように、各時間、即ち、１６または２４時間に、動物が物質を含まない製剤化物質のみを受容する、対応する対照群を用いる。対照動物では、対応する実験期間（１６または２４時間）に亘る、阻害剤のない場合のＣＥＴＰ活性の変化を測定できるように、動物毎の２回目の血液サンプル採取を物質で処置した動物と同様に実施する。
【０２１４】
凝血の終了後、血液サンプルを遠心分離し、血清をピペットで取り出す。ＣＥＴＰ活性の決定のために、４時間に亘るコレステリルエステル転送を測定する。この目的で、一般に試験バッチで血清２μｌを用い、Ｂ−Ｉ.２.３で記載の通りに試験を実施する。
【０２１５】
コレステリルエステル転送の差異［ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ２）−ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ１）］を各動物について算出し、グループ内で平均する。何れかの時間でコレステリルエステル転送を＞２０％まで低減する物質を、活性であるとみなす。
【表１７】
2008524137.tif 000064
【０２１６】
Ｂ−ＩＩ.２. シリアンゴールデンハムスターにおけるインビボ活性の測定
自家飼育した体重１５０−２００ｇの雌のシリアンゴールデンハムスター（系統ＢＡＹ：ＤＳＮ）を、ＣＥＴＰ阻害剤の血清リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用の測定に使用する。動物をケージ当たり６匹の動物にグループ分けし、飼料と水を自由にとらせ、２週間順応させる。
【０２１７】
実験開始直前および物質投与の後に、血液を後眼窩静脈叢の穿刺により採取し、３０分間室温でのインキュベーションおよび２０分間３００００ｇでの遠心分離の後、血清を得るために使用する。物質を２０％ Solutol／８０％水に溶解し、胃管を利用して経口投与する。対照の動物は、試験物質を含まない同体積の溶媒を受容する。
【０２１８】
トリグリセリド、総コレステロール、ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬコレステロールを、分析装置 COBAS INTEGRA 400 plus (Roche Diagnostics より）を製造業者に指示に従い使用して測定する。測定値から、各パラメーターについて、物質による処置に起因する割合の変化を、各動物について算出し、グループ毎の平均として標準偏差と共に示す（ｎ＝６またはｎ＝１２）。溶媒処置群と比較して、物質の効果が有意であれば、ｔ試験の適用により、ｐ−値を加える（＊ｐ＜０.０５；＊＊ｐ＜０.０１；＊＊＊ｐ＜０.００５）。
【０２１９】
Ｂ−ＩＩ.３. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスにおけるインビボ活性の測定
リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用を測定するために、胃管を使用して試験物質を遺伝子組換えマウスに投与する［Dinchuk et al., BBA, 1295-1301 (1995)］。実験開始前に、血清中のコレステロールおよびトリグリセリドを測定するために、マウスから後眼窩的に血液を採取する。ハムスターについて上記した通りに、４℃で終夜インキュベートし、続いて６０００ｇで遠心分離することにより血清を入手する。３日後に、リポタンパク質およびトリグリセリドを測定するために、血液を再度マウスから採取する。測定されるパラメーターの変化を、出発値と比較した変化割合として表す。
【０２２０】
Ｃ. 医薬組成物の実施例
本発明の化合物は、以下のやり方で医薬製剤に変換できる：
錠剤：
組成：
本発明の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）１０ｍｇ（BASFより、Ludwigshafen, Germany）およびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ、直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明の化合物、ラクトースおよびスターチの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状について、上記参照）。打錠のガイドラインの打錠力は、１５ｋＮである。
【０２２１】
経口投与できる懸濁剤：
組成：
本発明の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel（登録商標） (FMCのキサンタンガム、Pennsylvania, USA) ４００ｍｇおよび水９９ｇ。
経口懸濁液１０ｍｌは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、本発明の化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel の膨潤が完了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０２２２】
経口投与できる液剤：
組成：
本発明の化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２.５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。経口液剤２０ｇは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコールおよびポリソルベートの混合物に撹拌しながら懸濁する。本発明の化合物が完全に溶解するまで、混合過程を継続する。
【０２２３】
ｉ.ｖ.溶液：
本発明の化合物を、生理的に耐容される溶媒（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に飽和溶解度より低い濃度で溶解する。溶液を濾過滅菌し、無菌のパイロジェンを含まない注射容器に満たすのに使用する。
【０２２４】
式（Ｉｄ）の化合物についての実験の部
Ａ. 実施例
略語および頭字語：
【表１８】
2008524137.tif 000065
【０２２５】
ＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳの方法：
方法１Ａ：カラム：Chiralpak IA, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソヘキサン／１−プロパノール９７：３；流速：１.０ｍｌ／分；ＵＶ−検出：２５４ｎｍ。
方法１Ｂ：カラム：Chiralpak AD, 250 mm x 4.6 mm, 10 μm；移動相：イソヘキサン／１−プロパノール９７.５：２.５；流速：１.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２５４ｎｍ。
【０２２６】
方法２：装置：DAD 検出を有するHP 1100；カラム：Kromasil RP-18, 60 mm x 2 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：ＨＣｌＯ４５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→９分９０％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０２２７】
方法３（ＬＣ／ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD; カラム: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０２２８】
出発物質および中間体：
実施例１Ａ
２,４−ジシクロペンチル−７,７−ジメチル−３−（４−トリフルオロメチルベンゾイル）−４,６,７,８−テトラヒドロ−１Ｈ−キノリン−５−オン
【化４７】
2008524137.tif 000066
３−アミノ−３−シクロペンチル−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペノン（ＷＯ０３／０２８７２７、実施例４に従い製造）１６.８ｇ（５９.４ｍｍｏｌ、１.０当量）を、最初に、ジイソプロピルエーテル６００ｍｌに入れ、トリフルオロ酢酸９.１６ｍｌ（１１８.９ｍｍｏｌ、２.０当量）および５,５−ジメチルシクロヘキサン−１,３−ジオン８.３ｇ（５９.４ｍｍｏｌ、１当量）を添加する。３０分間室温で撹拌した後、シクロペンタンカルボアルデヒド７.０ｇ（７１.３ｍｍｏｌ、１.２当量）を添加し、次いで、混合物を、還流下、水分離装置を装着して、１５時間加熱する。室温に冷却後、さらに１.０ｇ（１０.２ｍｍｏｌ、０.１７当量）のシクロペンタンカルボアルデヒドを添加する。混合物を再度還流に加熱し、溶媒の体積を約５００ｍｌに減らす。混合物を、還流下、水分離装置を装着して、さらに２０時間加熱する。後処理に、混合物を、冷却後、減圧下で蒸発乾固し、残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（移動相：イソヘキサン／酢酸エチル４：１）により予精製する。かくして得られる生成物画分を少量のジイソプロピルエーテルに取り、室温で１６時間撹拌する。得られる沈殿を吸引濾過し、冷たいジイソプロピルエーテルで洗浄し、残っている溶媒を高真空下で除去する。
収量：３.８ｇ（理論値の１３％）
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 1.14 (s, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.21-2.00 (m, 16H), 2.20 (m, 1H), 2.28 and 2.51 (2d, 2H), 2.34 (s, 2H), 3.50 (sept, 1H), 3.83 (d, 1H), 5.91 (s, 1H), 7.66 (d, 2H), 7.78 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８６［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２２９】
実施例２Ａ
２,４−ジシクロペンチル−７,７−ジメチル−３−（４−トリフルオロメチルベンゾイル）−７,８−ジヒドロ−６Ｈ−キノリン−５−オン
【化４８】
2008524137.tif 000067
実施例１Ａ由来の化合物３.７９ｇ（７.８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン７８ｍｌに溶解し、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）１.９５ｇ（８.６ｍｍｏｌ、１.１当量）を少しずつ０℃で添加する。撹拌しながら、混合物を３時間かけて室温に温める。混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９：１、４：１）により精製する。
収量：３.５３ｇ（理論値の９３.６％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 1.10 (d, 3H), 1.17 (d, 3H), 1.35-1.97 (m, 16H), 2.51-2.71 (m, 3H), 2.94-3.15 (m, 3H), 7.75 (d, 2H), 7.93 (m, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２３０】
実施例３Ａ
［（５Ｓ）−２,４−ジシクロペンチル−５−ヒドロキシ−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル］（４−トリフルオロメチルフェニル）メタノン
【化４９】
2008524137.tif 000068
（１Ｒ,２Ｓ）−１−アミノインダン−２−オール８７ｍｇ（０.５８ｍｍｏｌ、０.０８当量）を、最初にＴＨＦ３４０ｍｌに入れ、ボラン−Ｎ,Ｎ−ジエチルアニリン錯体４.７６ｇ（２９.２ｍｍｏｌ、４.０当量）を室温で添加する。ガスの放出が止まった後、混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦ２５ｍｌに溶解した実施例２Ａ由来の化合物３.５３ｇ（７.３ｍｍｏｌ、１当量）を添加する。撹拌しながら、混合物を１６時間かけて室温に温まらせる。反応が終わった後、メタノール２０ｍｌを反応混合物に添加し、次いで、それを濃縮する。残渣を水１５０ｍｌと酢酸エチル１５０ｍｌとに分配する。水相を各場合で１００ｍｌの酢酸エチルで２回抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液５０ｍｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。次いで、粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル１００：０、次いで４：１）により精製する。
収量：３.１３ｇ（理論値の８８.２％）
【０２３１】
方法１Ａに従い、エナンチオマー過剰率を９３.５％ｅｅと決定する。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 1.00 (m, 3H), 1.23 (m, 3H), 1.29-2.03 (m, 19H), 2.56 (m, 1H), 2.64-3.08 (m, 2H), 3.29 (m, 1H), 5.17 (m, 1H), 7.73 (d, 2H), 7.93 (m, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８６［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２３２】
実施例４Ａ
（（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２,４−ジシクロペンチル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化５０】
2008524137.tif 000069
アルゴン下、実施例３Ａ由来の化合物３.１２ｇ（６.４３ｍｍｏｌ）を、最初に乾燥トルエン６４ｍｌに入れる。次いで、室温で、２,６−ルチジン２.７６ｇ（２５.７ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、混合物を−１８℃に冷却する。ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート２.９５ｍｌ（１２.９ｍｍｏｌ、２当量）を溶液に滴下して添加する。反応混合物を０℃で２時間撹拌する。後処理に、飽和塩化アンモニウム溶液（１００ｍｌ）を添加し、混合物を、室温に温めた後、酢酸エチルで抽出する。水相を酢酸エチルでさらに２回抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９：１）により精製する。
収量：３.９０ｇ（定量的）
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 0.08 (s, 3H), 0.18 (s, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.91 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.28-2.06 (m, 18H), 2.47-3.23 (m, 3H), 3.32 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 7.73 (d, 2H), 7.81-8.03 (m, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６００［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２３３】
実施例５Ａ
（Ｓ）−（（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２,４−ジシクロペンチル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
【化５１】
2008524137.tif 000070
０℃で、水素化リチウムアンモニウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液９.８ｍｌ（９.８ｍｍｏｌ、１.５当量）を、乾燥ＴＨＦ６５ｍｌ中の実施例４Ａ由来の化合物３.９ｇ（６.５ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。後処理に、飽和酒石酸ナトリウムカリウム溶液１２０ｍｌを注意深く添加する。気体の放出が止まった後、混合物を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機相を飽和塩化アンモニウム溶液で、そして飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をクロマトグラフィー的に精製し、生成物のジアステレオマーの分離をもたらす（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９５：５）。
収量：１.８７ｇ（理論値の４７.８％）
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 0.13 (s, 3H), 0.19 (s, 3H), 0.82-0.97 (m, 15H), 1.09-2.12 (m, 18H), 2.19 (m, 1H), 2.56 (d, 1H), 2.86-3.05 (m, 2H), 3.70 (m, 1H), 5.21 (t, 1H), 6.23 (br. s, 1H), 7.42 (d, 2H), 7.59 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝６０２［Ｍ＋Ｈ］＋
Ｒｆ＝０.２６（イソヘキサン／酢酸エチル９：１）.
【０２３４】
シンジアステレオマー：
（Ｒ）−（（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２,４−ジシクロペンチル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
収量：２.１６ｇ（理論値の５３.９％）
Ｒｆ＝０.３４（イソヘキサン／酢酸エチル９：１）.
【０２３５】
実施例６Ａ
（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−２,４−ジシクロペンチル−３−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン
【化５２】
2008524137.tif 000071
−１７℃、アルゴン下、三フッ化ジエチルアミノ硫黄０.５９ｍｌ（４.４ｍｍｏｌ、１.５当量）を、乾燥ジクロロメタン２９ｍｌ中の実施例５Ａ由来の化合物１.７８ｇ（３.０ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。混合物を−６６℃に冷却し、次いで、撹拌しながら、６時間かけて０℃に温める。反応溶液を再度−７８℃に冷却し、さらに三フッ化ジエチルアミノ硫黄０.２５ｍｌ（１.９ｍｍｏｌ、０.６４当量）を添加する。次いで、撹拌しながら、混合物を１６時間かけて１０℃に温める。後処理に、飽和重炭酸ナトリウム溶液４０ｍｌを、氷冷しながら注意深く添加する。混合物を酢酸エチルで全部で３回抽出する。次いで、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗生成物を濾過によりシリカゲルを通して精製する（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル９：１）。
収量：１.６７ｇ（理論値の９３.３％）
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 0.13 (s, 3H), 0.19 (s, 3H), 0.90 (3, 9H), 0.93 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.58-2.15 (m, 17H), 2.51-3.05 (m, 4H), 3.70 (m, 1H), 5.21 (t, 1H), 6.92 (d, 1H), 7.38 (d, 2H), 7.62 (d, 2H) ppm.
HPLC (方法 2): Rt = 6.30 分.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６０４［Ｍ＋Ｈ］＋
Ｒｆ＝０.６８（イソヘキサン／酢酸エチル９：１）.
【０２３６】
実施例：
実施例１
（５Ｓ）−２,４−ジシクロペンチル−３−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−５−オール
【化５３】
2008524137.tif 000072
０℃で、フッ化テトラブチルアンモニウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液１１.０ｍｌ（１１.０ｍｍｏｌ、４.０当量）を、乾燥ＴＨＦ１６ｍｌ中の実施例６Ａの化合物１.６７ｇ（２.８ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。反応混合物を氷浴中で４時間撹拌する。後処理に、混合物を酢酸エチル１００ｍｌで希釈し、各回１００ｍｌの水および５０ｍｌの飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗生成物をクロマトグラフィー的に精製する（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９：１→４：１）。
収量：０.７４ｇ（理論値の５５.１％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 1.02 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.34-2.19 (m, 18H), 2.61-2.97 (m, 3H), 3.72 (m, 1H), 3.84 (sept, 1H), 5.14 (q, 1H), 6.96 (d, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.61 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９０［Ｍ＋Ｈ］＋
Ｒｆ＝０.１３（イソヘキサン／酢酸エチル９：１）.
【０２３７】
生成物中にまだ存在するジアステレオマーのさらなる分離を、クロマトグラフィー的に実施する（カラム：Chiralpak AD, 250 mm x 20 mm, 5 μm；移動相：イソヘキサン／イソプロパノール９７：３；流速：１５ｍｌ／分）.
収量：０.５７ｇ（理論値の４２.４％）.
ＨＰＬＣ（方法１Ｂ）：Ｒｔ＝５.６０分.
【０２３８】
Ｂ. 薬理活性の評価
Ｂ−Ｉ. ＣＥＴＰ−阻害試験
Ｂ−Ｉ.１. ＣＥＴＰの入手
ＣＥＴＰを、ヒト血漿から、分画遠心法およびカラムクロマトグラフィーにより部分的に精製された形態で入手し、試験に使用する。この目的で、ＮａＢｒを使用してヒト血漿を１.２１ｇ／ｍｌの密度に調節し、４℃、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。底部の画分（ｄ＞１.２１ｇ／ｍｌ）を Sephadex（登録商標）Phenyl-Sepharose 4B (Pharmacia) カラムに載せ、０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.００１Ｍトリス−ＨＣｌ ｐＨ７.４で洗浄し、次いで蒸留水で溶出する。ＣＥＴＰ−活性画分を集め、５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４.５で透析し、CM-Sepharose（登録商標）カラム (Pharmacia) に載せる。次いで、線状グラジエント（０−１Ｍ ＮａＣｌ）を使用して混合物を溶出する。集めたＣＥＴＰ画分を１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４で透析し、次いで Mono Q（登録商標） カラム (Pharmacia）でのクロマトグラフィーによりさらに精製する。
【０２３９】
Ｂ−Ｉ.２. ＣＥＴＰ蛍光試験
ＣＥＴＰに触媒されるリポソーム間の蛍光コレステロールエステルの転送の測定［Bisgaier et al., J. Lipid Res. 34, 1625 (1993) の方法に準じて改変］：
ドナーリポソームの生成のために、コレステリル４,４−ジフルオロ−５,７−ジメチル−４−ボラ−３ａ,４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ドデカノエート（コレステリル BODIPY（登録商標） FL C12, Molecular Probes）を、トリオレイン５.３５ｍｇおよびホスファチジルコリン６.６７ｍｇを含むジオキサン６００μｌに、超音波槽中で穏やかに温めながら溶解し、この溶液を、超音波処理しながら、６３ｍｌの５０ｍＭトリス／ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡバッファーｐＨ７.３に室温で非常にゆっくりと添加する。次いで、懸濁液を、Ｎ２雰囲気下、３０分間、Branson 超音波槽中、約５０ワットで、温度を約２０℃に維持して超音波処理する。
【０２４０】
同様にして、ジオキサン１.２ｍｌおよび上記のバッファー１１４ｍｌに溶解したコレステリルオレエート８６ｍｇ、トリオレイン２０ｍｇおよびホスファチジルコリン１００ｍｇから、５０ワット（２０℃）、３０分間の超音波処理により、アクセプターリポソームを得る。
【０２４１】
Ｂ−Ｉ.２.１. 富化ＣＥＴＰを用いるＣＥＴＰ蛍光試験
試験するために、上記のバッファー１部、ドナーリポソーム１部およびアクセプターリポソーム２部からなる試験混合物を使用する。
試験混合物５０μｌを、ヒト血漿から疎水性クロマトグラフィーを利用して得た富化ＣＥＴＰ画分（１−３μｇ）４８μｌおよび試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液２μｌで処理し、３７℃で４時間インキュベートする。
【０２４２】
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の尺度である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表１９】
2008524137.tif 000073
【０２４３】
Ｂ−Ｉ.２.２. ヒト血漿を用いるＣＥＴＰ蛍光試験
ドナーリポソーム６μｌ（１２％ｖ／ｖ）および試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液１μｌ（２％ｖ／ｖ）を、ヒト血漿（Sigma P9523）４２μｌ（８６％ｖ／ｖ）に添加し、混合物を３７℃で２４時間インキュベートする。
５１０／５２０ｎｍ（ギャップ幅２.５ｎｍ）の蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表２０】
2008524137.tif 000074
【０２４４】
Ｂ−Ｉ.２.３. エクスビボ−ＣＥＴＰ蛍光試験
バッファー１０μｌおよび血清２μｌを、試験混合物８０μｌに添加し、混合物を３７℃で４時間インキュベートする。
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【０２４５】
Ｂ−Ｉ.３. 放射性標識化ＨＤＬの入手
新鮮なヒトＥＤＴＡ血漿５０ｍｌを、ＮａＢｒを使用して１.１２の密度に調節し、４℃、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を非標識ＬＤＬの入手に使用する。下相をＰＤＢバッファー（１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４、０.１５ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０２％ＮａＮ３）３ｘ４ｌで透析する。次いで、保持液の体積１０ｍｌにつき、３Ｈ−コレステロール（Dupont NET-725；１μＣ／μｌ、エタノールに溶解）２０μｌを添加し、混合物を、３７℃、Ｎ２下で、７２時間インキュベートする。
【０２４６】
次いで、ＮａＢｒを使用してバッチを１.２１の密度に調節し、２０℃で、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を回収し、リポタンパク質画分を勾配遠心分離により精製する。この目的で、単離した標識化リポタンパク質画分を、ＮａＢｒを使用して１.２６の密度に調節する。この溶液各４ｍｌを、遠心管（ＳＷ４０ローター）中、密度１.２１の溶液４ｍｌおよび密度１.０６３の溶液４.５ｍｌで覆い（ＰＤＢバッファーおよびＮａＢｒの密度溶液）、次いで、２４時間３８０００ｒｐｍで、２０℃で、ＳＷ４０ローター中で遠心分離する。標識化ＨＤＬを含有する、密度１.０６３と１.２１との間にある中間層を、３ｘ１００量のＰＤＢバッファーで、４℃で透析する。
保持液は放射性標識化３Ｈ−ＣＥ−ＨＤＬを含有し、それを、約５ｘ１０６ｃｍｐ／ｍｌに調節し、試験に使用する。
【０２４７】
Ｂ−Ｉ.４. ＣＥＴＰ−ＳＰＡ試験
ＣＥＴＰ活性を試験するために、３Ｈ−コレステロールエステルのヒトＨＤリポタンパク質からビオチン化ＬＤリポタンパク質への転送を測定する。ストレプトアビジン−ＳＰＡ（登録商標）ビーズ（Amersham）の添加により反応を終了させ、転送された放射能を液体シンチレーションカウンターで直接測定する。
【０２４８】
試験バッチでは、ＨＤＬ−３Ｈ−コレステロールエステル（〜５００００ｃｐｍ）１０μｌを、３７℃で１８時間、ビオチン−ＬＤＬ（Amersham）１０μｌと共に、ＣＥＴＰ（１ｍｇ／ｍｌ）１０μｌおよび試験しようとする物質の溶液（１０％ＤＭＳＯ／１％ＲＳＡに溶解）３μｌを含有する５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ／０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.１％ウシ血清アルブミン／０.０５％ＮａＮ３ ｐＨ７.４中でインキュベートする。次いで、ＳＰＡ−ストレプトアビジンビーズ溶液（ＴＲＫＱ７００５）２００μｌを添加し、さらに１時間振盪しながらインキュベートし、次いで、シンチレーションカウンターで測定する。バッファー１０μｌ、４℃のＣＥＴＰ１０μｌおよび３７℃のＣＥＴＰ１０μｌを用いる対応するインキュベーションを対照に供する。
【０２４９】
３７℃のＣＥＴＰを用いる対照バッチで転送される放射活性を、１００％の転送とみなす。この転送を半分に低減させる物質濃度を、ＩＣ５０値と特定する。
【表２１】
2008524137.tif 000075
【０２５０】
Ｂ−ＩＩ.１. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに対するエクスビボ活性の測定
ＣＥＴＰ−阻害活性を試験するために、自家飼育した遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに、胃管を使用して物質を経口投与する［Dinchuk et al. BBA 1295-301 (1995)］。この目的で、実験開始の前日に、オスの動物を、等数の動物（原則としてｎ＝４）を有するグループに無作為に割り当てる。物質投与前に、血清中の基底ＣＥＴＰ活性（Ｔ１）の測定のために、後眼窩静脈叢の穿刺により各マウスから血液を採取する。次いで、胃管を使用して試験物質を動物に投与する。試験物質の投与後、特定の時間に、一般に物質の投与後１６または２４時間後に、二回目の穿刺により血液を動物から採取する（Ｔ２）が、必要に応じて、これを他の時間で実施することもできる。
【０２５１】
物質の阻害活性を評価できるように、各時間、即ち、１６または２４時間に、動物が物質を含まない製剤化物質のみを受容する、対応する対照群を用いる。対照動物では、対応する実験期間（１６または２４時間）に亘る、阻害剤のない場合のＣＥＴＰ活性の変化を測定できるように、動物毎の２回目の血液サンプル採取を物質で処置した動物と同様に実施する。
【０２５２】
凝血の終了後、血液サンプルを遠心分離し、血清をピペットで取り出す。ＣＥＴＰ活性の決定のために、４時間に亘るコレステリルエステル転送を測定する。この目的で、一般に試験バッチで血清２μｌを用い、Ｂ−Ｉ.２.３で記載の通りに試験を実施する。
【０２５３】
コレステリルエステル転送の差異［ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ２）−ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ１）］を各動物について算出し、グループ内で平均する。何れかの時間でコレステリルエステル転送を＞２０％まで低減する物質を、活性であるとみなす。
【表２２】
2008524137.tif 000076
【０２５４】
Ｂ−ＩＩ.２. シリアンゴールデンハムスターにおけるインビボ活性の測定
自家飼育した体重１５０−２００ｇの雌のシリアンゴールデンハムスター（系統ＢＡＹ：ＤＳＮ）を、ＣＥＴＰ阻害剤の血清リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用の測定に使用する。動物をケージ当たり６匹の動物にグループ分けし、飼料と水を自由にとらせ、２週間順応させる。
【０２５５】
実験開始直前および物質投与の後に、血液を後眼窩静脈叢の穿刺により採取し、３０分間室温でのインキュベーションおよび２０分間３００００ｇでの遠心分離の後、血清を得るために使用する。物質を２０％ Solutol／８０％水に溶解し、胃管を利用して経口投与する。対照の動物は、試験物質を含まない同体積の溶媒を受容する。
【０２５６】
トリグリセリド、総コレステロール、ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬコレステロールを、分析装置 COBAS INTEGRA 400 plus (Roche Diagnostics より）を製造業者に指示に従い使用して測定する。測定値から、各パラメーターについて、物質による処置に起因する割合の変化を、各動物について算出し、グループ毎の平均として標準偏差と共に示す（ｎ＝６またはｎ＝１２）。溶媒処置群と比較して、物質の効果が有意であれば、ｔ試験の適用により、ｐ−値を加える（＊ｐ＜０.０５；＊＊ｐ＜０.０１；＊＊＊ｐ＜０.００５）。
【０２５７】
Ｂ−ＩＩ.３. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスにおけるインビボ活性の測定
リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用を測定するために、胃管を使用して試験物質を遺伝子組換えマウスに投与する［Dinchuk et al., BBA, 1295-1301 (1995)］。実験開始前に、血清中のコレステロールおよびトリグリセリドを測定するために、マウスから後眼窩的に血液を採取する。ハムスターについて上記した通りに、４℃で終夜インキュベートし、続いて６０００ｇで遠心分離することにより血清を入手する。３日後に、リポタンパク質およびトリグリセリドを測定するために、血液を再度マウスから採取する。測定されるパラメーターの変化を、出発値と比較した変化割合として表す。
【表２３】
2008524137.tif 000077
【０２５８】
Ｃ. 医薬組成物の実施例
本発明の化合物は、以下のやり方で医薬製剤に変換できる：
錠剤：
組成：
本発明の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）１０ｍｇ（BASFより、Ludwigshafen, Germany）およびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ、直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明の化合物、ラクトースおよびスターチの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状について、上記参照）。打錠のガイドラインの打錠力は、１５ｋＮである。
【０２５９】
経口投与できる懸濁剤：
組成：
本発明の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel（登録商標） (FMCのキサンタンガム、Pennsylvania, USA) ４００ｍｇおよび水９９ｇ。
経口懸濁液１０ｍｌは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、本発明の化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel の膨潤が完了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０２６０】
経口投与できる液剤：
組成：
本発明の化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２.５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。経口液剤２０ｇは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコールおよびポリソルベートの混合物に撹拌しながら懸濁する。本発明の化合物が完全に溶解するまで、混合過程を継続する。
【０２６１】
ｉ.ｖ.溶液：
本発明の化合物を、生理的に耐容される溶媒（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に飽和溶解度より低い濃度で溶解する。溶液を濾過滅菌し、無菌のパイロジェンを含まない注射容器に満たすのに使用する。
【０２６２】
式（Ｉｅ）の化合物についての実験の部
Ａ. 実施例
略語および頭字語：
【表２４】
2008524137.tif 000078
【０２６３】
ＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳの方法：
方法１Ａ：カラム：Chiralpak IA, 250 mm x 4.6 mm；移動相：イソヘキサン／１−プロパノール９７：３；流速：１.０ｍｌ／分；ＵＶ−検出：２５４ｎｍ。
方法１Ｂ：カラム：Chiralpak AD, 250 mm x 4.6 mm, 10 μm；移動相：イソヘキサン／イソプロパノール９７.５：２.５；流速：１.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２５４ｎｍ。
方法１Ｃ：カラム：Chiralpak AD, 250 mm x 4.6 mm, 10 μm；移動相：イソヘキサン／イソプロパノール９７.５：２.５；流速：１.５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２５４ｎｍ。
【０２６４】
方法２：装置：DAD 検出を有する HP 1100；カラム：Kromasil RP-18, 60 mm x 2 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：ＨＣｌＯ４５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→９分９０％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０２６５】
方法３（ＬＣ／ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD; カラム: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０２６６】
出発物質および中間体：
実施例１Ａ
４−シクロヘキシル−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−４,６,７,８−テトラヒドロキノリン−５（１Ｈ）−オン
【化５４】
2008524137.tif 000079
３−アミノ−３−イソプロピル−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロペノン（ＷＯ０３／０２８７２７、実施例２に従い製造）５.０ｇ（１９.４ｍｍｏｌ、１.２当量）を、最初にジイソプロピルエーテル１５０ｍｌに入れ、トリフルオロ酢酸２.５０ｍｌ（３２.４ｍｍｏｌ、２.０当量）および５,５−ジメチルシクロヘキサン−１,３−ジオン２.３ｇ（１６.２ｍｍｏｌ、１当量）を添加する。室温で１０分間撹拌した後、シクロヘキサンカルボアルデヒド２.７ｇ（２４.３ｍｍｏｌ、１.５当量）を添加する。次いで、混合物を、還流下、水分離装置を装着して、１８時間加熱する。冷却後、混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、得られる沈殿を吸引濾過し、冷たいジイソプロピルエーテルで洗浄し、残っている溶媒を高真空下で除去する。
収量：２.６３ｇ（理論値の３４.３％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.78-1.36 (m, 6H), 1.04 (d, 3H), 1.16 (2s, 6H), 1.29 (d, 3H), 1.28 (d, 3H), 1.46-1.67 (m, 5H), 2.32 and 2.49 (2d, 2H), 2.34 (s, 2H), 3.46 (sept, 1H), 3.75 (d, 1H), 5.89 (s, 1H), 7.65 (d, 2H), 7.77 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝４７４［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２６７】
実施例２Ａ
４−シクロヘキシル−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−３−［４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−７,８−ジヒドロキノリン−５（６Ｈ）−オン
【化５５】
2008524137.tif 000080
実施例１Ａ由来の化合物２.３０ｇ（４.９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５０ｍｌに溶解し、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）１.１０ｇ（４.９ｍｍｏｌ、１当量）を少しずつ０℃で添加する。混合物を０℃で１時間、次いで室温で１８時間撹拌する。混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル５：１）で精製する。
収量：２.１６ｇ（理論値の９４.２％）
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 1.00-1.89 (m, 10H), 1.08 (d, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.14 (d, 3H), 1.17 (s, 3H), 2.48-2.69 (m, 3H), 3.09 (s, 2H), 3.27 (m, 1H), 7.75 (d, 2H), 7.94 (m, 2H) ppm.
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝４７２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２６８】
実施例３Ａ
［（５Ｓ）−４−シクロヘキシル−５−ヒドロキシ−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル］［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化５６】
2008524137.tif 000081
（１Ｒ,２Ｓ）−１−アミノインダン−２−オール５５ｍｇ（０.３７ｍｍｏｌ、０.０８当量）を、最初にＴＨＦ１１５ｍｌに入れ、ボラン−Ｎ,Ｎ−ジエチルアニリン錯体２.９８ｇ（１８.３ｍｍｏｌ、４.０当量）を室温で添加する。気体の放出が止まった後、混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦ１１５ｍｌに溶解した実施例２Ａ由来の化合物２.１６ｇ（４.６ｍｍｏｌ、１当量）を添加する。撹拌しながら、混合物を１８時間かけて室温に温まらせる。反応が終了した後、メタノール２０ｍｌを反応混合物に添加し、次いで、それを蒸発乾固する。次いで、粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル混合物）により精製する。
収量：２.０１ｇ（理論値の９３.０％）
【０２６９】
方法１Ａに従い、エナンチオマー過剰率を８８％ｅｅと決定する。
エナンチオマーをキラル相のクロマトグラフィー（カラム：Chiralpak AD-H, 250 mm x 20 mm, 20 μm；移動相：イソヘキサン／イソプロパノール９７：３；流速：１５ｍｌ／分）により分離する：
収量：１.７０ｇ（理論値の７８.５％）
方法１Ａに従い、エナンチオマー過剰率を＞９９％ｅｅと決定する；Ｒｔ（方法１Ａ）＝５.２２分
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 0.88-2.12 (m, 26H), 2.50 (sept, 1H), 2.71 (d, 1H), 2.98 (d, 1H), 5.18 (m, 1H), 7.45-8.50 (br. m, 4H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２７０】
実施例４Ａ
（（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４−シクロヘキシル−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノン
【化５７】
2008524137.tif 000082
アルゴン下、実施例３Ａ由来の化合物２.８２ｇ（５.９５ｍｍｏｌ）を、最初に乾燥トルエン２２ｍｌに入れる。次いで、２,６−ルチジン２.５５ｇ（２３.８ｍｍｏｌ、４当量）を室温で添加し、混合物を−１６℃に冷却する。トルエン７ｍｌに溶解したｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート２.７４ｍｌ（１１.９ｍｍｏｌ、２当量）を、この溶液に滴下して添加する。１５分後、反応混合物を０℃に温め、この温度でさらに８０分間撹拌する。後処理に、０.１Ｎ塩酸１２４ｍｌを添加し、混合物を、室温に温めた後、酢酸エチルで抽出する。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液と飽和重炭酸ナトリウム溶液の１：１混合物で洗浄する。合わせた水相を酢酸エチルで２回再抽出する。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：イソヘキサン／酢酸エチル９：１）により精製する。
収量：３.１７ｇ（理論値の９０.７％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.14 (s, 3H), 0.19 (s, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.65-1.83 (m, 24H), 1.96-2.07 (m, 1H), 2.47 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 3.10 (m, 1H), 5.25 (m, 1H), 7.43-8.54 (br. m, 4H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８８［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２７１】
実施例５Ａ
（Ｓ）−（（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ.−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４−シクロヘキシル−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
【化５８】
2008524137.tif 000083
０℃で、水素化リチウムアンモニウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液５.９ｍｌ（５.９ｍｍｏｌ、１.１当量）を、乾燥ＴＨＦ７５ｍｌ中の実施例４Ａ由来の化合物３.１７ｇ（５.４ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。撹拌しながら、混合物を５時間かけて室温に温める。後処理に、飽和酒石酸ナトリウムカリウム溶液１２０ｍｌを注意深く添加する。気体の放出が止まった後、混合物を酢酸エチルで４回抽出し、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をクロマトグラフィー的に精製し、生成物のジアステレオマーの分離をもたらす（カラム：Chiralpak AD, 500 mm x 40 mm, 20 μm；移動相：イソヘキサン／イソプロパノール９７.５：２.５；流速：５０ｍｌ／分；温度：２４℃；ＵＶ検出：２５４ｎｍ）。
収量：０.９５ｇ（理論値の２９.８％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.20 (br. s, 6H), 0.76-2.03 (m, 30H), 1.02-2.34 (m, 14H), 2.17 (m, 1H), 2.43-3.10 (m, 3H), 3.36 (m, 1H), 5.26 (m, 1H), 6.66 (br. s, 1H), 7.32-7.65 (m, 4H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５９０［Ｍ＋Ｈ］＋
ＬＣ／ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝３.０３分.
ＨＰＬＣ（方法１Ｂ）：Ｒｔ＝２.８４分.
【０２７２】
シンジアステレオマー：
（Ｒ）−（（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４−シクロヘキシル−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−３−イル）［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メタノール
収量：１.２５ｇ（理論値の３９.２％）
【０２７３】
実施例６Ａ
（５Ｓ）−５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−４−シクロヘキシル−３−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン
【化５９】
2008524137.tif 000084
−６０℃、アルゴン下で、三フッ化ジエチルアミノ硫黄０.４５ｍｌ（３.４ｍｍｏｌ、１.５当量）を、乾燥トルエン３０ｍｌ中の実施例５Ａ由来の化合物１.３５ｇ（２.３ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。−１０℃に温めながら、混合物を３時間撹拌する。後処理に、飽和重炭酸ナトリウム溶液４０ｍｌを、氷冷しながら注意深く添加する。混合物を酢酸エチルで全部で３回抽出する。次いで、合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗生成物を濾過によりシリカゲルを通して精製する（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル９：１）。
収量：１.２８ｇ（理論値の９４.８％）
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ = 0.20 (br. s, 6H), 0.71 (d, 3H), 0.91 (s, 9H), 0.77-2.06 (m, 21H), 2.60 and 3.03 (2d, 2H), 2.78 (m, 1H), 3.36 (m, 1H), 5.25 (m, 1H), 7.10-7.50 (m, 3H), 7.63 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５９２［Ｍ＋Ｈ］＋.
【０２７４】
実施例：
実施例１
（５Ｓ）−４−シクロヘキシル−３−｛（Ｓ）−フルオロ［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−２−イソプロピル−７,７−ジメチル−５,６,７,８−テトラヒドロキノリン−５−オール
【化６０】
2008524137.tif 000085
０℃で、テトラブチル塩化アンモニウム（５.４ｍｍｏｌ、２.５当量）の１Ｍ ＴＨＦ溶液５.４ｍｌを、乾燥ＴＨＦ２５ｍｌ中の実施例６Ａ由来の化合物１.２８ｇ（２.２ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。混合物を氷浴中で４時間撹拌する。後処理に、混合物を酢酸エチル２０ｍｌで希釈し、水２０ｍｌで洗浄する。水相を各場合で２０ｍｌの酢酸エチルで２回再抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液５０ｍｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗生成物をクロマトグラフィー的に精製し、まだ存在するジアステレオマーの分離をもたらす（カラム：Chiralpak AD-H, 250 mm x 20 mm, 5 μm；移動相：イソヘキサン／イソプロパノール９７：３；流速：２５ｍｌ／分）。
収量：０.６７ｇ（理論値の６５.３％）
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 0.60 (d, 3H), 1.03 (s, 3H), 1.12 (d, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.08-1.51 (m, 4H), 1.67-2.14 (m, 9H), 2.61-2.94 (m, 3H), 3.52 (m, 1H), 5.14 (m, 1H), 7.33 (d, 2H), 7.37 (d, 1H), 7.61 (d, 2H) ppm.
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７８［Ｍ＋Ｈ］＋
ＨＰＬＣ（方法１Ｃ）：Ｒｔ＝４.３３分.
【０２７５】
Ｂ. 薬理活性の評価
Ｂ−Ｉ. ＣＥＴＰ−阻害試験
Ｂ−Ｉ.１. ＣＥＴＰの入手
ＣＥＴＰを、ヒト血漿から、分画遠心法およびカラムクロマトグラフィーにより部分的に精製された形態で入手し、試験に使用する。この目的で、ＮａＢｒを使用してヒト血漿を１.２１ｇ／ｍｌの密度に調節し、４℃、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。底部の画分（ｄ＞１.２１ｇ／ｍｌ）を Sephadex（登録商標）Phenyl-Sepharose 4B (Pharmacia) カラムに載せ、０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.００１Ｍトリス−ＨＣｌ ｐＨ７.４で洗浄し、次いで蒸留水で溶出する。ＣＥＴＰ−活性画分を集め、５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４.５で透析し、CM-Sepharose（登録商標）カラム (Pharmacia) に載せる。次いで、線状グラジエント（０−１Ｍ ＮａＣｌ）を使用して混合物を溶出する。集めたＣＥＴＰ画分を１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４で透析し、次いで Mono Q（登録商標） カラム (Pharmacia）でのクロマトグラフィーによりさらに精製する。
【０２７６】
Ｂ−Ｉ.２. ＣＥＴＰ蛍光試験
ＣＥＴＰに触媒されるリポソーム間の蛍光コレステロールエステルの転送の測定［Bisgaier et al., J. Lipid Res. 34, 1625 (1993) の方法に準じて改変］：
ドナーリポソームの生成のために、コレステリル４,４−ジフルオロ−５,７−ジメチル−４−ボラ−３ａ,４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ドデカノエート（コレステリル BODIPY（登録商標） FL C12, Molecular Probes）を、トリオレイン５.３５ｍｇおよびホスファチジルコリン６.６７ｍｇを含むジオキサン６００μｌに、超音波槽中で穏やかに温めながら溶解し、この溶液を、超音波処理しながら、６３ｍｌの５０ｍＭトリス／ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡバッファーｐＨ７.３に室温で非常にゆっくりと添加する。次いで、懸濁液を、Ｎ２雰囲気下、３０分間、Branson 超音波槽中、約５０ワットで、温度を約２０℃に維持して超音波処理する。
【０２７７】
同様にして、ジオキサン１.２ｍｌおよび上記のバッファー１１４ｍｌに溶解したコレステリルオレエート８６ｍｇ、トリオレイン２０ｍｇおよびホスファチジルコリン１００ｍｇから、５０ワット（２０℃）、３０分間の超音波処理により、アクセプターリポソームを得る。
【０２７８】
Ｂ−Ｉ.２.１. 富化ＣＥＴＰを用いるＣＥＴＰ蛍光試験
試験するために、上記のバッファー１部、ドナーリポソーム１部およびアクセプターリポソーム２部からなる試験混合物を使用する。
試験混合物５０μｌを、ヒト血漿から疎水性クロマトグラフィーを利用して得た富化ＣＥＴＰ画分（１−３μｇ）４８μｌおよび試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液２μｌで処理し、３７℃で４時間インキュベートする。
【０２７９】
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の尺度である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表２５】
2008524137.tif 000086
【０２８０】
Ｂ−Ｉ.２.２. ヒト血漿を用いるＣＥＴＰ蛍光試験
ドナーリポソーム６μｌ（１２％ｖ／ｖ）および試験しようとする物質のＤＭＳＯ溶液１μｌ（２％ｖ／ｖ）を、ヒト血漿（Sigma P9523）４２μｌ（８６％ｖ／ｖ）に添加し、混合物を３７℃で２４時間インキュベートする。
５１０／５２０ｎｍ（ギャップ幅２.５ｎｍ）の蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【表２６】
2008524137.tif 000087
【０２８１】
Ｂ−Ｉ.２.３. エクスビボ−ＣＥＴＰ蛍光試験
バッファー１０μｌおよび血清２μｌを、試験混合物８０μｌに添加し、混合物を３７℃で４時間インキュベートする。
４８５／５３５ｎｍの蛍光の変化は、ＣＥ転送の測定値である；転送の阻害を、物質を含まない対照バッチと比較して測定する。
【０２８２】
Ｂ−Ｉ.３. 放射性標識化ＨＤＬの入手
新鮮なヒトＥＤＴＡ血漿５０ｍｌを、ＮａＢｒを使用して１.１２の密度に調節し、４℃、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を非標識ＬＤＬの入手に使用する。下相をＰＤＢバッファー（１０ｍＭトリス／ＨＣｌ ｐＨ７.４、０.１５ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０２％ＮａＮ３）３ｘ４ｌで透析する。次いで、保持液の体積１０ｍｌにつき、３Ｈ−コレステロール（Dupont NET-725；１μＣ／μｌ、エタノールに溶解）２０μｌを添加し、混合物を、３７℃、Ｎ２下で、７２時間インキュベートする。
【０２８３】
次いで、ＮａＢｒを使用してバッチを１.２１の密度に調節し、２０℃で、Ｔｙ６５ローター中、５００００ｒｐｍで１８時間遠心分離する。上相を回収し、リポタンパク質画分を勾配遠心分離により精製する。この目的で、単離した標識化リポタンパク質画分を、ＮａＢｒを使用して１.２６の密度に調節する。この溶液各４ｍｌを、遠心管（ＳＷ４０ローター）中、密度１.２１の溶液４ｍｌおよび密度１.０６３の溶液４.５ｍｌで覆い（ＰＤＢバッファーおよびＮａＢｒの密度溶液）、次いで、２４時間３８０００ｒｐｍで、２０℃で、ＳＷ４０ローター中で遠心分離する。標識化ＨＤＬを含有する、密度１.０６３と１.２１との間にある中間層を、３ｘ１００量のＰＤＢバッファーで、４℃で透析する。
保持液は放射性標識化３Ｈ−ＣＥ−ＨＤＬを含有し、それを、約５ｘ１０６ｃｍｐ／ｍｌに調節し、試験に使用する。
【０２８４】
Ｂ−Ｉ.４. ＣＥＴＰ−ＳＰＡ試験
ＣＥＴＰ活性を試験するために、３Ｈ−コレステロールエステルのヒトＨＤリポタンパク質からビオチン化ＬＤリポタンパク質への転送を測定する。ストレプトアビジン−ＳＰＡ（登録商標）ビーズ（Amersham）の添加により反応を終了させ、転送された放射能を液体シンチレーションカウンターで直接測定する。
【０２８５】
試験バッチでは、ＨＤＬ−３Ｈ−コレステロールエステル（〜５００００ｃｐｍ）１０μｌを、３７℃で１８時間、ビオチン−ＬＤＬ（Amersham）１０μｌと共に、ＣＥＴＰ（１ｍｇ／ｍｌ）１０μｌおよび試験しようとする物質の溶液（１０％ＤＭＳＯ／１％ＲＳＡに溶解）３μｌを含有する５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ／０.１５Ｍ ＮａＣｌ／０.１％ウシ血清アルブミン／０.０５％ＮａＮ３ ｐＨ７.４中でインキュベートする。次いで、ＳＰＡ−ストレプトアビジンビーズ溶液（ＴＲＫＱ７００５）２００μｌを添加し、さらに１時間振盪しながらインキュベートし、次いで、シンチレーションカウンターで測定する。バッファー１０μｌ、４℃のＣＥＴＰ１０μｌおよび３７℃のＣＥＴＰ１０μｌを用いる対応するインキュベーションを対照に供する。
【０２８６】
３７℃のＣＥＴＰを用いる対照バッチで転送される放射活性を、１００％の転送とみなす。この転送を半分に低減させる物質濃度を、ＩＣ５０値と特定する。
【表２７】
2008524137.tif 000088
【０２８７】
Ｂ−ＩＩ.１. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに対するエクスビボ活性の測定
ＣＥＴＰ−阻害活性を試験するために、自家飼育した遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスに、胃管を使用して物質を経口投与する［Dinchuk et al. BBA 1295-301 (1995)］。この目的で、実験開始の前日に、オスの動物を、等数の動物（原則としてｎ＝４）を有するグループに無作為に割り当てる。物質投与前に、血清中の基底ＣＥＴＰ活性（Ｔ１）の測定のために、後眼窩静脈叢の穿刺により各マウスから血液を採取する。次いで、胃管を使用して試験物質を動物に投与する。試験物質の投与後、特定の時間に、一般に物質の投与後１６または２４時間後に、二回目の穿刺により血液を動物から採取する（Ｔ２）が、必要に応じて、これを他の時間で実施することもできる。
【０２８８】
物質の阻害活性を評価できるように、各時間、即ち、１６または２４時間に、動物が物質を含まない製剤化物質のみを受容する、対応する対照群を用いる。対照動物では、対応する実験期間（１６または２４時間）に亘る、阻害剤のない場合のＣＥＴＰ活性の変化を測定できるように、動物毎の２回目の血液サンプル採取を物質で処置した動物と同様に実施する。
【０２８９】
凝血の終了後、血液サンプルを遠心分離し、血清をピペットで取り出す。ＣＥＴＰ活性の決定のために、４時間に亘るコレステリルエステル転送を測定する。この目的で、一般に試験バッチで血清２μｌを用い、Ｂ−Ｉ.２.３で記載の通りに試験を実施する。
【０２９０】
コレステリルエステル転送の差異［ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ２）−ｐＭ ＣＥ／ｈ（Ｔ１）］を各動物について算出し、グループ内で平均する。何れかの時間でコレステリルエステル転送を＞２０％まで低減する物質を、活性であるとみなす。
【表２８】
2008524137.tif 000089
【０２９１】
Ｂ−ＩＩ.２. シリアンゴールデンハムスターにおけるインビボ活性の測定
自家飼育した体重１５０−２００ｇの雌のシリアンゴールデンハムスター（系統ＢＡＹ：ＤＳＮ）を、ＣＥＴＰ阻害剤の血清リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用の測定に使用する。動物をケージ当たり６匹の動物にグループ分けし、飼料と水を自由にとらせ、２週間順応させる。
【０２９２】
実験開始直前および物質投与の後に、血液を後眼窩静脈叢の穿刺により採取し、３０分間室温でのインキュベーションおよび２０分間３００００ｇでの遠心分離の後、血清を得るために使用する。物質を２０％ Solutol／８０％水に溶解し、胃管を利用して経口投与する。対照の動物は、試験物質を含まない同体積の溶媒を受容する。
【０２９３】
トリグリセリド、総コレステロール、ＨＤＬコレステロールおよびＬＤＬコレステロールを、分析装置 COBAS INTEGRA 400 plus (Roche Diagnostics より）を製造業者に指示に従い使用して測定する。測定値から、各パラメーターについて、物質による処置に起因する割合の変化を、各動物について算出し、グループ毎の平均として標準偏差と共に示す（ｎ＝６またはｎ＝１２）。溶媒処置群と比較して、物質の効果が有意であれば、ｔ試験の適用により、ｐ−値を加える（＊ｐ＜０.０５；＊＊ｐ＜０.０１；＊＊＊ｐ＜０.００５）。
【０２９４】
Ｂ−ＩＩ.３. 遺伝子組換えｈＣＥＴＰマウスにおけるインビボ活性の測定
リポタンパク質およびトリグリセリドに対する経口作用を測定するために、胃管を使用して試験物質を遺伝子組換えマウスに投与する［Dinchuk et al., BBA, 1295-1301 (1995)］。実験開始前に、血清中のコレステロールおよびトリグリセリドを測定するために、マウスから後眼窩的に血液を採取する。ハムスターについて上記した通りに、４℃で終夜インキュベートし、続いて６０００ｇで遠心分離することにより血清を入手する。３日後に、リポタンパク質およびトリグリセリドを測定するために、血液を再度マウスから採取する。測定されるパラメーターの変化を、出発値と比較した変化割合として表す。
【表２９】
2008524137.tif 000090
【０２９５】
Ｃ. 医薬組成物の実施例
本発明の化合物は、以下のやり方で医薬製剤に変換できる：
錠剤：
組成：
本発明の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）１０ｍｇ（BASFより、Ludwigshafen, Germany）およびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ、直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明の化合物、ラクトースおよびスターチの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状について、上記参照）。打錠のガイドラインの打錠力は、１５ｋＮである。
【０２９６】
経口投与できる懸濁剤：
組成：
本発明の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel（登録商標） (FMCのキサンタンガム、Pennsylvania, USA) ４００ｍｇおよび水９９ｇ。
経口懸濁液１０ｍｌは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、本発明の化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel の膨潤が完了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０２９７】
経口投与できる液剤：
組成：
本発明の化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２.５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。経口液剤２０ｇは、本発明の化合物１００ｍｇの単回用量に相当する。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコールおよびポリソルベートの混合物に撹拌しながら懸濁する。本発明の化合物が完全に溶解するまで、混合過程を継続する。
【０２９８】
ｉ.ｖ.溶液：
本発明の化合物を、生理的に耐容される溶媒（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に飽和溶解度より低い濃度で溶解する。溶液を濾過滅菌し、無菌のパイロジェンを含まない注射容器に満たすのに使用する。
【国際調査報告】
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