(57)【要約】  本発明は、ノナデプシペプチド（リソバクチン誘導体）およびそれらの製造方法、および疾患、特に細菌感染疾患の処置および／または予防に使用される医薬の製造についてのそれらの使用に関するものである。上記新規リソバクチン誘導体は、そのもの自体３−（３−ピリジル）−アラニル基を含むＮ−末端ペプチド鎖により天然物質とは区別される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2008518982.tif 000042
［式中、
Ｒ１は水素を表し、
Ｒ２は、２,２−ジメチルブタ−１−イル、２−エチル−２−メチルブタ−１−イル、２,２−ジエチルブタ−１−イル、２,２−ジメチルペンタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表すか、または
Ｒ１はトリフルオロメチルを表し、
Ｒ２は、２,２−ジメチルプロパ−１−イル、２,２−ジメチルブタ−１−イル、２−エチル−２−メチルブタ−１−イル、２,２−ジエチルブタ−１−イル、２,２−ジメチルペンタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表す］
で示される化合物またはその塩、その溶媒和物またはその塩の溶媒和物のうちの一つ。
【請求項２】
Ｒ１が水素を表し、Ｒ２が２,２−ジメチルブタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表すか、またはＲ１がトリフルオロメチルを表し、Ｒ２が、２,２−ジメチルプロパ−１−イル、２,２−ジメチルブタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表すことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素を表し、Ｒ２が、２,２−ジメチルブタ−１−イル、２−エチル−２−メチルブタ−１−イル、２,２−ジエチルブタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表すことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
以下の構造３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチン
【化２】
2008518982.tif 000043
を有する請求項１記載の化合物またはその塩、その溶媒和物またはその塩の溶媒和物のうちの一つ。
【請求項５】
請求項１記載の式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、式
【化３】
2008518982.tif 000044
で示される化合物を、式
【化４】
2008518982.tif 000045
［式中、
Ｒ１およびＲ２は請求項１記載の意味を有し、Ｘ１は、ハロゲン、好ましくは臭素、塩素またはフッ素、またはヒドロキシを表す］
で示される化合物と反応させることを特徴とする、方法。
【請求項６】
病気の処置および／または予防を目的とする、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
病気の処置および／または予防用の医薬の製造を目的とする、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項８】
細菌感染症の処置および／または予防用の医薬の製造を目的とする、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項９】
不活性で非毒性の医薬上許容される賦形剤と組み合わせて請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物を含む医薬。
【請求項１０】
細菌感染症の処置および／または予防を目的とする、請求項９記載の医薬。
【請求項１１】
請求項１〜４のいずれか１項記載の少なくとも１種の化合物、請求項９記載の医薬または請求項７または８に従って得られる医薬の抗菌有効量を投与することによる、ヒトおよび動物における細菌感染症の制御方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ノナデプシペプチドおよびそれらの製造方法、並びに疾患、特に細菌感染疾患の処置および／または予防用の医薬の製造を目的とするそれらの使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
細菌細胞壁は、若干の酵素により合成され（細胞壁生合成）、微生物の生存および繁殖には不可欠である。この高分子の構造、およびその合成に関与するタンパク質は、細菌内で高度に保存されている。その本質的性質および均一性故に、細胞壁生合成は、新規抗生物質についての理想的な攻撃ポイントである（D.W.Green、The bacterial cell wall as a source of antibacterial targets、Expert Opin.Ther.Targets、２００２、６、１−１９）。
【０００３】
バンコマイシンおよびペニシリンは、細菌細胞壁生合成の阻害剤であり、この作用原理の抗菌効能の有効な例を代表している。それらは、特にグラム陽性病原菌による細菌感染症の処置に数十年間臨床的に使用されてきた。耐性菌、例えばメチシリン耐性スタフィロコッカス（ブドウ球菌、Staphlococci）、ペニシリン耐性ニューモコッカス（肺炎球菌、pneumococci）およびバンコマイシン耐性エンテロコッカス（腸球菌、enterococci）（F.Baquero、Gram-positive resistance ： challenge for the development of new antibiotics、J.Antimicrob.Chemother.、１９９７、３９、補遺Ａ：１−６； A.P.Johnson、D.M.Livermore、G.S.Tillotson、Antimicrobial susceptibility of Gram-positive bacteria： what's current, what's anticipated ?、J.Hosp.Infect.、２００１、（４９）、補遺Ａ：３−１１）、さらにまた最近では初めてのバンコマイシン耐性スタフィロコッカス（ブドウ球菌、staphylococci）（B.Goldrick、First reported case of VRSA in the United States, Am.J.Nurs.、２００２、１０２、１７）の発生が増大しているため、これらの物質は治療効力をますます失いつつある。
【０００４】
本発明は、既知種類の抗生物質との交差耐性を伴わない新規種類の細胞壁生合成阻害剤について報告している。
【０００５】
天然産物リソバクチンおよび若干の誘導体は、米国特許第４７５４０１８号において抗菌活性を有するものとして報告されている。また、リソバクチンの単離および抗菌活性は、ＥＰ−Ａ−１９６０４２号およびＪＰ０１１３２６００号にも記載されている。国際公開第０４／０９９２３９号は、抗菌活性を有するリソバクチンの誘導体について報告している。
【０００６】
リソバクチンおよびカタノシンＡの抗菌活性は、さらに O'Sullivan,J. et al.、J.Antibiot.１９８８、４１、１７４０−１７４４、Bonner,D.P. et al.、J.Antibiot.１９８８、４１、１７４５−１７５１、Shoji,J. et al.、J.Antibiot.１９８８、４１、７１３−７１８および Tymiak,A.A. et al., J.Org.Chem.１９８９、５４、１１４９−１１５７に記載されている。
【０００７】
ヒトおよび動物における細菌性疾患の処置について、同等または改善された抗菌活性およびより良好な耐容性、例えば低い神経傷害性、およびより良好な生体内分布、すなわちより良好な薬物動態特性、例えば非結合型分率（ｆｕ）の増加を示す代替化合物を提供することが、本発明の一目的である。
【発明の開示】
【０００８】
本発明は、式
【化１】
2008518982.tif 000002
［式中、
Ｒ１は水素を表し、
Ｒ２は、２,２−ジメチルブタ−１−イル、２−エチル−２−メチルブタ−１−イル、２,２−ジエチルブタ−１−イル、２,２−ジメチルペンタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表すか、または
Ｒ１はトリフルオロメチルを表し、
Ｒ２は、２,２−ジメチルプロパ−１−イル、２,２−ジメチルブタ−１−イル、２−エチル−２−メチルブタ−１−イル、２,２−ジエチルブタ−１−イル、２,２−ジメチルペンタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表す］
で示される化合物およびそれらの塩、それらの溶媒和物またはそれらの塩の溶媒和物に関するものである。
【０００９】
本発明化合物は、式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩、溶媒和物、塩およびプロドラッグの溶媒和物、式（Ｉ）により包含され、下記に挙げられている化合物が、既に塩、溶媒和物、塩およびプロドラッグの溶媒和物ではない限り、式（Ｉ）により包含され、下記で挙げられている式で示される化合物、およびそれらの塩、溶媒和物、塩およびプロドラッグの溶媒和物、並びに、式（Ｉ）により包含され、実施態様として下記で挙げられている化合物、およびそれらの塩、溶媒和物、塩およびプロドラッグの溶媒和物である。
【００１０】
本発明化合物は、その構造によっては立体異性体形態（鏡像体、ジアステレオマー）で存在し得る。従って、本発明は、鏡像体またはジアステレオマーおよびそれらの各混合物に関するものである。立体異性体的に純粋な構成成分は、鏡像体および／またはジアステレオマーの上記混合物から公知方法で分離され得る。
【００１１】
本発明化合物が互変異性体形態で存在し得る場合、本発明は互変異性体形態を全て包含する。
【００１２】
本発明の目的に好適な塩は、本発明化合物の生理学的に許容される塩である。しかしながら、その物自体医薬適用に適切ではないが、例えば本発明化合物または混合塩の分離または精製に使用され得る塩も包含される。混合塩は、本発明の目的の場合、２種またはそれ以上の異なる酸または塩基を含む付加塩を意味し、例えばトリフルオロ酢酸−メシル酸塩がある。
【００１３】
本発明化合物の生理学的に許容される塩は、無機酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩を包含する。
【００１４】
本発明化合物の生理学的に許容される塩はまた、通常塩基の塩、例えば例を挙げると、そして好ましくはアルカリ金属塩（例、ナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例、カルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは１〜１６個のＣ原子を有する有機アミン、例えば、そして好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リシン、エチレンジアミンおよびＮ−メチルピペリジンから誘導されたアンモニウム塩を包含する。
【００１５】
本発明の目的に適う溶媒和物は、溶媒分子との配位結合を通して固体または液体状態で錯体を形成する本発明化合物の形態をいう。水和物は、配位結合が水と行なわれている溶媒和物の一特殊形態である。
【００１６】
好ましいのは、式（Ｉ）において、
Ｒ１が水素を表し、
Ｒ２が、２,２−ジメチルブタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表すか、または
Ｒ１がトリフルオロメチルを表し、
Ｒ２が、２,２−ジメチルプロパ−１−イル、２,２−ジメチルブタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表す
場合の化合物およびそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００１７】
また、好ましいのは、式（Ｉ）において、
Ｒ１が水素を表し、
Ｒ２が、２,２−ジメチルブタ−１−イル、２−エチル−２−メチルブタ−１−イル、２,２−ジエチルブタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表す
場合の化合物およびそれらの塩、それらの溶媒和物またはそれらの塩の溶媒和物である。
【００１８】
また、好ましいのは、式（Ｉ）において、
Ｒ１が水素を表し、
Ｒ２が、２,２−ジメチルブタ−１−イル、２−エチル−２−メチルブタ−１−イル、２,２−ジエチルブタ−１−イル、２,２−ジメチルペンタ−１−イルまたはトリメチルシリルメチルを表す
場合の化合物である。
【００１９】
特に好ましいのは、化合物３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）−リソバクチン
【化２】
2008518982.tif 000003
またはその塩、その溶媒和物またはその塩の溶媒和物のうちの一つである。
【００２０】
さらに本発明は、式
【化３】
2008518982.tif 000004
で示される化合物を、式
【化４】
2008518982.tif 000005
［式中、
Ｒ１およびＲ２は前記の意味を有し、Ｘ１は、ハロゲン、好ましくは臭素、塩素またはフッ素、またはヒドロキシを表す］
で示される化合物と反応させる、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関するものである。
【００２１】
Ｘ１がハロゲンである場合、反応は、一般的に、不活性溶媒中、適切な場合塩基の存在下、好ましくは大気圧下−３０℃〜５０℃の温度範囲で行なわれる。
【００２２】
不活性溶媒は、例えばテトラヒドロフラン、メチレンクロリド、ピリジン、ジオキサンまたはジメチルホルムアミドであり、メチレンクロリドまたはジメチルホルムアミドが好ましい。
【００２３】
塩基は、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリンであり、ジイソプロピルエチルアミンが好ましい。
【００２４】
Ｘ１がヒドロキシである場合、反応は、一般的に不活性溶媒中、適切な場合塩基の存在下における、脱水試薬の存在下、好ましくは大気圧下−３０℃〜５０℃の温度範囲で行なわれる。
【００２５】
不活性溶媒は、例えば、ハロ炭化水素、例えばジクロロメタンまたはトリクロロメタン、炭化水素、例えばベンゼン、ニトロメタン、ジオキサン、ジメチルホルムアミドまたはアセトニトリルである。同様に、これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。ジクロロメタンまたはジメチルホルムアミドが特に好ましい。
【００２６】
本発明による適切な脱水試薬は、塩基の存在下における、例えば、カルボジイミド、例えばＮ,Ｎ'−ジエチル−、Ｎ,Ｎ'−ジプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ'−プロピルオキシメチル−ポリスチレン（ＰＳ−カルボジイミド）またはカルボニル化合物、例えばカルボニルジイミダゾール、または１,２−オキサゾリウム化合物、例えば２−エチル−５−フェニル−１,２−オキサゾリウム−３−スルフェートまたは２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウムペルクロレート、またはアシルアミノ化合物、例えば２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキノリン、またはプロパンホスホン酸無水物、またはイソブチルクロロホルメート、またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロリドまたはベンゾトリアゾリルオキシ−トリ（ジメチルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェート、またはＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、またはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、またはそれらの混合物である。
【００２７】
塩基は、例えば、アルカリ金属炭酸塩、例えば、炭酸または炭酸水素ナトリウムまたはカリウム、または有機塩基、例えばトリアルキルアミン、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンまたはジイソプロピルエチルアミンである。
【００２８】
好ましくは、縮合は、ＨＡＴＵを用いるか、またはＨＯＢｔの存在下ＥＤＣを用いて実施される。
【００２９】
式（ＩＩＩ）で示される化合物は所望により保護基をもっていてもよく、そのためこれらの場合では、式（ＩＩ）で示される化合物と式（ＩＩＩ）で示される化合物の反応の後、当業者に周知の方法に従ってトリフルオロ酢酸により保護基が除去される。
【００３０】
式（Ｉ）で示される化合物の塩の遊離塩基は、例えば塩基の付加およびそれに続く化合物の抽出または沈澱により、または当業者に公知の方法によるクロマトグラフィーでの分離により、特にポリマー結合塩基、例えばポリマー結合炭酸水素の使用により得られる。
【００３１】
さらに本発明は、請求項１記載の式（Ｉ）で示される化合物またはそれらの溶媒和物の製造方法であって、化合物の塩または化合物の塩の溶媒和物が塩基を加えることにより同化合物に変換される方法に関するものである。
【００３２】
式（ＩＩ）の化合物は、実験の項における実施例２Ａ記載の要領で、二重エドマン分解法によりリソバクチンから合成され得る（実施例１Ａ）。
【００３３】
式（ＩＩＩ）の化合物は、公知であるか、または公知方法により対応する出発材料から合成され得る。
【００３４】
本発明化合物の製造法は、以下の合成スキームにより説明され得る。
合成スキーム：
【化５】
2008518982.tif 000006
【００３５】
本発明化合物は、予測され得なかった貴重なスペクトルの薬理学的および薬物動態効果を示す。それらは抗菌効果を示す。
【００３６】
従って、それらは、ヒトおよび動物における疾患の処置および／または予防を目的とする医薬としての使用に適切である。
【００３７】
本発明化合物は、リソバクチンと比べて低い神経傷害性を特徴とする。
【００３８】
本発明化合物は、リソバクチンと比べて優れた薬物動態を特徴とする。薬理学的活性が同じかまたは改善されており、同化合物は生体内でより良好な分布を示すため、治療有効量が低用量ですみ、治療的処置の領域が広いものとなる。
【００３９】
本発明化合物は、リソバクチンより高い血漿中での非結合型分率（ｆｕ）を有する。
【００４０】
報告されたノナデプシペプチドは、細菌細胞壁生合成の阻害剤として作用する。
【００４１】
本発明の調製物は、細菌および細菌様微生物に対して特に有効である。従って、それらは、ヒトおよび動物の医学分野においてこれらの病原体により誘発される局所および全身感染症の予防および化学療法に特に適切である。
【００４２】
原則として、本発明調製物は、細菌細胞壁（ムレイン・サックラス）または関連性のある酵素系を有する全ての細菌および細菌様微生物、例えば以下の病原体または以下の病原体の混合物に対して使用され得る：
【００４３】
グラム陰性球菌（ナイセリア・ゴノロエエ（Neisseria gonorrhoeae））およびグラム陰性桿菌、例えばエンテロバクテリアセエ（Enterobacteriaceae）、例えばエシェリキア・コリ（Escherichia coli）、ヘモフィルス・インフルエンゼ（Haemophilus influenzae）、シュードモナス（Pseudomonas）、クレブシエラ（Klebsiella）、シトロバクター（Citrobacter）（シトロバクター・フロインディ（C.freundii）、シトロバクター・ディベルニス（C.divernis））、サルモネラ（Salmonella）およびシゲラ（Shigella）；さらにはエンテロバクター（Enterobacter）（エンテロバクター・アエロゲネス（E.aerogenes）、エンテロバクター・アグロメランス（E.agglomerans））、ハフニア（Hafnia）、セラチア（Serratia）（セラチア・マルセッセンス（S.marcescens））、プロビデンシア（Providencia）、エルシニア（Yersinia）、並びにアシネトバクター（Acinetobacter）、ブランハメラ（Branhamella）およびクラミジア属。さらに、抗菌スペクトルは、厳密に嫌気性の細菌、例えばバクテロイデス・フラギリス（Bacteroides fragilis）、ペプトコッカス（Peptococcus）、ペプトストレプトコッカス（Peptostreptococcus）属、並びにクロストリジウム（Clostridium）属を代表するもの；さらにはマイコバクテリア（Mycobacteria）、例えばマイコバクテリア・ツベルクロスス（M.tuber culosus）を含む。本発明化合物は、グラム陽性球菌、例えばスタフィロコッカス（Staphylococci）（（スタフィロコッカス・アウレウス（S.aureus）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（S.epidermidis）、スタフィロコッカス・ヘモリティクス（S.haemolyticus）、スタフィロコッカス・カルノスス（S.carnosus））、エンテロコッカス（enterococci）（エンテロコッカス・フェカリス（E.faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（E.faecium））およびストレプトコッカス（streptococci）（ストレプトコッカス・アガラクチエ（S.agalactiae）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（S.pneumoniae）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（S.pyogenes））に対して特に顕著な効果を示す。
【００４４】
病原体の上記リストは、例として挙げられたものに過ぎず、いかなる意味にせよ限定的なものと解釈すべきではない。上記病原体または混合感染により誘発され、本発明調製物により予防、改善または治療され得る疾患としては、例えば以下のものが挙げられる：
【００４５】
ヒトにおける感染性疾患、例えば非複雑型および複雑型尿路感染症、非複雑型皮膚および表在性感染症、複雑型皮膚および柔組織感染症、病院で外来患者として感染した肺炎、院内感染による肺炎、慢性気管支炎の急性増悪および二次細菌感染、急性中耳炎、急性副鼻腔炎、連鎖球菌性咽頭炎、細菌性髄膜炎、非複雑型淋菌性および非淋菌性尿道炎／子宮頚炎、急性前立腺炎、心内膜炎、非複雑型および複雑型腹腔内感染症、婦人科感染症、骨盤炎症性疾患、細菌性膣炎、急性および慢性骨髄炎、急性細菌性関節炎、有熱好中球減少症患者における経験療法、さらには菌血症、ＭＲＳＡ感染、急性伝染性下痢、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）感染症、術後感染症、歯原性感染症、眼科感染症、術後感染症（肛門周囲膿瘍、創傷感染、胆管感染、乳腺炎および急性虫垂炎を含む）、嚢胞性線維症および気管支拡張症。
【００４６】
ヒトの場合以外に、細菌感染症はまた、他の種においても処置され得る。挙げられるものとしては、例えば以下のものがある：
ブタ：下痢、腸性毒血症、敗血症、赤痢、サルモネラ症、乳腺炎−子宮炎−アガラクシア症候群、乳腺炎；
反芻動物（ウシ、ヒツジ、ヤギ）：下痢、敗血症、気管支肺炎、サルモネラ症、パスツレラ症、生殖器感染症；
ウマ：気管支肺炎、子ウマの関節炎、産褥および産褥後感染症、サルモネラ症；
イヌおよびネコ：気管支肺炎、下痢、皮膚炎、耳炎、尿路感染症、前立腺炎；
家禽（ニワトリ、七面鳥、ウズラ、ハト、観賞用鳥類など）：エシェリキア・コリ（E.coli）感染症、慢性気道疾患、サルモネラ症、パスツレラ症、オウム病。
【００４７】
同様に、養殖および観賞魚を飼育および管理する上で細菌性疾患を処置することも可能であるため、抗菌スペクトルは、上記病原体に加えて、さらなる病原体、例えばパスツレラ（Pasteurella）、ブルセラ（Brucella）、カンピロバクター（Campylobacter）、リステリア（Listeria）、エリジペロスリス（Erysipelothris）、コリネバクテリア（Corynebacteria）、ボレリア（Borellia）、トレポネマ（Treponema）、ノカルディア（Nocardia）、リケッチア（Rickettsia）、エルシニア（Yersinia）をも包含する。
【００４８】
さらに本発明は、疾患、特に細菌感染性疾患の処置および／または予防を目的とする本発明化合物の使用に関するものである。
【００４９】
さらに本発明は、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防を目的とする本発明化合物の使用に関するものである。
【００５０】
さらに本発明は、疾患、特に上記疾患の処置および／または予防用の医薬の製造を目的とする本発明化合物の使用に関するものである。
【００５１】
本発明化合物は、好ましくは細菌性疾患の予防および／または処置に適切な医薬の製造に使用される。
【００５２】
さらに本発明は、抗菌有効量の本発明化合物を用いることによる、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防方法に関するものである。
【００５３】
さらに本発明は、特に上述の疾患の処置および／または予防を目的とする、少なくとも１種の本発明化合物および少なくとも１種またはそれ以上のさらなる活性化合物を含む医薬に関するものである。併用に好ましい活性化合物は、抗菌活性化合物であり、それらは異なる活性スペクトル、特に補助的活性スペクトルを有し、および／または本発明化合物と相乗作用を示す。
【００５４】
本発明化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。この目的の場合、それらは、適切な方法、例えば経口、非経口、肺、鼻、舌下、舌側、頬側、直腸、皮膚、経皮、結膜、耳経路または移植片またはステントとして投与され得る。
【００５５】
本発明化合物は、これらの投与経路に適切な投与形態で投与され得る。
【００５６】
経口投与に適切なのは、先行技術に従って機能し、本発明化合物を迅速に、および／または修飾した形で送達し、本発明化合物を結晶および／または非結晶型および／または溶解形態で含む投与形態、例えば錠剤（非コーティングまたはコーティング錠剤、例えば腸溶コーティングまたは遅延型で溶解するかまたは不溶性であり、本発明化合物の放出を制御するコーティングを有するもの）、口腔内で急速に崩壊する錠剤またはフィルム／カシェ剤、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル）、糖衣錠、顆粒、ペレット、散剤、エマルジョン、懸濁液、エーロゾルまたは溶液である。
【００５７】
非経口投与は、吸収段階を回避（例、静脈内、動脈内、心臓内、脊椎内または腰椎内）するかまたは吸収を封入（例、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）して行われ得る。非経口投与に適切な投与形態は、特に、溶液、懸濁液、エマルジョン、凍結乾燥物または滅菌粉末形態の注射および注入用調製物である。
【００５８】
他の投与経路に適切なのは、例えば、吸入用医薬形態（特に粉末吸入器、ネブライザー）、点鼻薬、溶液、スプレー、舌側、舌下または頬側投与用の錠剤、フィルム／カシェ剤またはカプセル剤、坐剤、耳または眼用調製物、膣用カプセル剤、水性懸濁液（ローション、振とう混合物）、親油性懸濁液、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えばパッチ）、ミルク、ペースト、泡沫、散布剤、移植片またはステントである。
【００５９】
本発明化合物は、上述の投与形態に変換され得る。これは、不活性非毒性の医薬上許容される賦形剤と混合することにより自体公知の方法で行われ得る。これらの賦形剤には、特に担体（例えば微晶性セルロース、乳糖、マンニトール）、溶媒（例、液体ポリエチレングリコール）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定剤（例、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸）、着色料（例、無機顔料、例えば酸化鉄）並びに風味および／または臭気矯正剤がある。
【００６０】
さらに本発明は、少なくとも１種の本発明化合物を、通常１種またはそれ以上の不活性非毒性の医薬上許容される賦形剤と一緒に含む医薬、および上記目的についてのそれらの使用に関するものである。
【００６１】
一般に、有効な成果を挙げるのに、静脈内投与では体重に基づいて約０.００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０.１〜１０ｍｇ／ｋｇの量を投与すると有利であることが判明しており、経口投与では、用量は、体重に基づくと約０.０１〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０.５〜１０ｍｇ／ｋｇである。
【００６２】
それにもかかわらず、適切な場合には、特に体重、投与経路、有効成分に対する個々の行動、調製のタイプおよび投与が行われる時間または間隔の関数として、上記の量から逸脱することも必要であり得る。すなわち、上述の最少量に満たない量で十分な場合もあれば、上述の上限を超えなければならない場合もあり得る。大量投与の場合、１日の間にこれらを複数の個別用量に分割して投与するのが賢明であり得る。
【００６３】
以下の試験および実施例におけるパーセンテージデータは、特記しない場合、重量によるパーセンテージであり、部とあるは重量部である。液体／液状溶液についての溶媒比、希釈率および濃度データは、それぞれの場合において体積に基づいている。
【実施例】
【００６４】
Ａ．実施例
略語
【表１】
2008518982.tif 000007
【００６５】
【表２】
2008518982.tif 000008
【００６６】
参考文献
ペプチドおよびシクロペプチドの命名法については、下記参照：
１．A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds（Recommendations １９９３）、１９９３、ブラックウェル・サイエンティフィック・パブリケーションズ。
２．Nomenclature and symbolism for amino acids and peptides．Recommendations １９８３．IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature、イギリス国、Biochemical Journal、１９８４、２１９、３４５−３７３、および引用文献。
【００６７】
一般的ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＨＲ−ＭＳ、ＨＰＬＣおよびゲルクロマトグラフィー方法
方法１（ＴＯＦ−ＨＲ−ＭＳ）：Micromass ＬＣＴ器具（キャピラリー電圧：３.２ＫＶ、コーン電圧：４２Ｖ、ソース温度：１２０℃、デソルベーション（脱溶媒和）温度：２８０℃）を用いて、ＴＯＦ−ＨＲ−ＭＳ−ＥＳＩ＋スペクトルを記録する。この目的のため、シリンジポンプ（Harvard Apparatus）を試料導入に用いる。ロイシンエンセファリン（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ）を標準として用いる。
【００６８】
方法２（分取ＨＰＬＣ）：器具：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；ＵＶ検出器２１０ｎｍ；バイナリーポンプシステム；カラム：Waters Symmetry-Prep（登録商標）Ｃ１８、７μｍ、３００×１９ｍｍ、溶離液Ａ：水中０.２％のトリフルオロ酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル；流速：２５ｍｌ／分；カラム温度ＲＴ；０分２０％Ｂ、ランプ０〜１０分７０％Ｂ、ランプ１０〜１０.１分２０％Ｂ、１５分２０％Ｂ。
【００６９】
方法３（Sephadex ＬＨ−２０でのゲルクロマトグラフィー）：Sephadex ＬＨ−２０（Pharmacia）を加圧せずにゲルクロマトグラフィーを実施する。分画（ＩＳＣＯ Foxy ２００フラクションコレクター）は、ＵＶ活性に従って実施される（２５４ｎｍについてのＵＶ検出器、Knauer）。カラム寸法：３２×７ｃｍ（１０００−１００μｍｏｌスケール）；３０×４ｃｍ（１００−１０μｍｏｌスケール）；２５×２ｃｍ（１０−１μｍｏｌスケール）。８０×３０ｃｍ寸法のカラムを、１ｍｍｏｌ〜１１ｍｍｏｌのスケールについて用いる。この場合、上流ＵＶ検出器を用いずにフラクションを手動で集める。フラクションをＨＰＬＣにより割当てる（方法９）。
【００７０】
方法４（分取ＨＰＬＣ；Kromasil、酢酸）：器具：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；ＵＶ検出器２１０ｎｍ；バイナリーポンプシステム；カラム：Kromasil−１００Ａ Ｃ１８、５μｍ；２５０×２０ｍｍ；流速：２５ｍｌ／分；溶離液Ａ：水／０.２５〜０.５％酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜３分５％Ｂ、３〜３０分５〜１００％Ｂ、３０〜３８分１００％Ｂ、次いでクロマトグラフィーカラムの再生。
【００７１】
方法５（ＬＣ‐ＭＳ）：器具：Micromass Quattro ＬＣＺ mit ＨＰＬＣ Agilent シリーズ１１００；カラム：Phenomenex Synergi２μ Hydro−ＲＰ Mercury ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：１リットルの水＋０.５ｍｌの５０％蟻酸、溶離液Ｂ：１リットルのアセトニトリル＋０.５ｍｌの５０％蟻酸；勾配；０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分 １ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分 ２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２０８〜４００ｎｍ。
【００７２】
方法６（ＬＣ‐ＭＳ）：ＭＳ器具タイプ：Micromass ＺＱ；ＨＰＬＣ器具タイプ：Waters Alliance ２７９５；カラム：Phenomenex Synergi ２μ Hydro-ＲＰ Mercury ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：１リットルの水＋０.５ｍｌの５０％蟻酸、溶離液Ｂ：１リットルのアセトニトリル＋０.５ｍｌの５０％蟻酸；勾配：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分 １ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分 ２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７３】
方法７（ＬＣ‐ＭＳ）：ＭＳ器具タイプ：Micromass ＺＱ；ＨＰＬＣ器具タイプ：ＨＰ１１００シリーズ；ＵＶ ＤＡＤ；カラム：Phenomenex Synergi ２μ Hydro-ＲＰMercury ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：１リットルの水＋０.５ｍｌの５０％蟻酸、溶離液Ｂ：１リットルのアセトニトリル＋０.５ｍｌの５０％蟻酸；勾配：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分 １ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分 ２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７４】
方法８（分析ＨＰＬＣ）：ＨＰＬＣ器具タイプ：ＨＰ１０５０シリーズ；ＵＶ ＤＡＤ１１００シリーズ；カラム：Kromasil Ｃ１８、６０×２ｍｍ、３.５μｍ；溶離液Ａ：水／０.５％過塩素酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜０.５分２％Ｂ、０.５〜４.５分２〜９０％Ｂ、４.５〜９.０分９０％Ｂ、９.０〜９.２分９０〜２％Ｂ、９.２〜１０.０分２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分、オーブン：３０℃、ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００７５】
方法９（分析ＨＰＬＣ、Agilent Zorbax Ｃ８）：器具：ＤＡＤ（Ｇ１３１５Ｂ）を備えたAgilent １１００、バイナリーポンプ（Ｇ１３１２Ａ）、オートサンプラー（Ｇ１３１３Ａ）、溶媒脱気装置（Ｇ１３７９Ａ）およびカラムサーモスタット（Ｇ１３１６Ａ）；カラム：Agilent Zorbax Eclipse ＸＤＢ−Ｃ８ ４.６×１５０×５ｍｍ；溶離液Ａ：０.０５％水中７０％の過塩素酸；溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜１分１０％Ｂ、ランプ、４〜５分９０％Ｂ、ランプ、５.５分１０％Ｂ；流速：２.００ｍｌ／分；カラム温度：３０℃。
【００７６】
方法１０（Sephadex LH−２０でのゲル・クロマトグラフィー）：Sephadex ＬＨ−２０（Pharmacia）を加圧せずにゲルクロマトグラフィーを実施する。分画（ＩＳＣＯ Foxy ２００フラクションコレクター）は、ＵＶ活性に従って実施される（２５４ｎｍについてのＵＶ検出器、Knauer）。カラム寸法：３２×７ｃｍ（１０００−１００μｍｏｌスケール）；３０×４ｃｍ（１００−１０μｍｏｌスケール）；２５×２ｃｍ（１０−１μｍｏｌスケール）。
【００７７】
方法１１（分取ＨＰＬＣシンメトリー）：器具：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；バイナリー・ポンプシステム；カラム：SymmetryPrep（登録商標）Ｃ１８、Waters、７μｍ；３００ｍｍ×１９ｍｍ；溶離液Ａ：水／０.２％トリフルオロ酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜１０分１５〜６５％Ｂ、次いでクロマトグラフィー・カラムの再生；流速：２５ｍｌ／分；ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００７８】
方法１２（分取ＨＰＬＣクロマシル）：器具：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；バイナリーポンプシステム；カラム：Kromasil Ｃ１８、５μｍ、１００オングストローム、２５０×２０ｍｍ；溶離液Ａ：水中０.０５％のトリフルオロ酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０.０５％のトリフルオロ酢酸；勾配：０〜３分１０％Ｂ、ランプ、３０〜３８分９０％Ｂ、３８〜４５分１０％Ｂ；流速：２０ｍｌ／分、ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００７９】
方法１３（分取ＨＰＬＣ Waters Symmetry）：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；バイナリーポンプシステム；カラム：Waters Symmetry−Prep（登録商標）Ｃ１８、７μｍ、３００×１９ｍｍ；溶離液Ａ：水中０.０５％のトリフルオロ酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０.０５％のトリフルオロ酢酸；勾配：０〜３分１０％Ｂ、ランプ、３０〜３８分９０％Ｂ、３８〜４５分１０％Ｂ；流速：２０ｍｌ／分、ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００８０】
方法１４（分取ＨＰＬＣ）：器具：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；バイナリーポンプシステム；カラム：Waters Symmetry-Prep（登録商標）Ｃ１８、７μｍ、３００×１９ｍｍ；溶離液Ａ：水／０.２％トリフルオロ酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜１０分２５〜６５％Ｂ、次いでクロマトグラフィー・カラムの再生；流速：２５ｍｌ／分、ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００８１】
方法１５（キラルＨＰＬＣ Daicel Chiralpak）：Agilent １００ＨＰＬＣ；カラム：Daicel Chiralpak ＡＤ−Ｈ５μｍ；２５０×２０ｍｍ；無勾配：７５％イソへキサン、２５％２−プロパノール＋０.２％トリフルオロ酢酸および１％水；流速：１.０ｍｌ／分、オーブン：２５℃；ＵＶ検出器２１２ｎｍ。
【００８２】
方法１６（分取ＨＰＬＣ）：器具：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；バイナリーポンプシステム；カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＱ ５μｍ、２５０×３０ｍｍ；溶離液Ａ：水中０.０５％のトリフルオロ酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル中０.０５％のトリフルオロ酢酸；勾配：０〜３分１０％Ｂ、ランプ、３０〜３８分９０％Ｂ、３８〜４５分１０％Ｂ；流速：５０ｍｌ／分、ＵＶ検出器２１０ｎｍ。
【００８３】
方法１７（ＧＣ‐ＭＳ）：器具：Micromass ＧＣＴ、ＧＣ６８９０；カラム：Restek ＲＴＸ−３５ＭＳ、３０ｍ×２５０μｍ×０.２５μｍ；勾配：６０℃（０.３０分間維持）、５０℃／分 → １２０℃、１６℃／分 → ２５０℃、３０℃／分 → ３００℃（１.７分間維持）；ヘリウムと共に一定の流速：０.８８ｍｌ／分；オーブン：６０℃；入口：２５０℃。
【００８４】
方法１８（ＨＰＬＣ）：ＨＰＬＣ器具タイプ：ＨＰ１１００シリーズ；ＵＶ ＤＡＤカラム：Zorbax Eclipse ＸＢＤ−Ｃ８（Agilent）、１５０ｍｍ×４.６ｍｍ、５μｍ、溶離液Ａ：５ｍｌのＨＣｌＯ４／水１リットル、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜１分１０％Ｂ、１〜４分１０〜９０％Ｂ、４〜５分９０％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；オーブン：３０℃；ＵＶ検出２１０および２５４ｎｍ。
【００８５】
方法１９（ＨＰＬＣ）：カラム：Kromasil ＲＰ−１８、６０ｍｍ×２ｍｍ、３.５μｍ；溶離液Ａ：５ｍｌのＨＣｌＯ４／水１リットル、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０分２％Ｂ、０.５分２％Ｂ、４.５分９０％Ｂ、９分９０％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；オーブン：３０℃；ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００８６】
方法２０（ＨＰＬＣ）：カラム：Kromasil ＲＰ−１８、２５０ｍｍ×４ｍｍ、５μｍ；溶離液Ａ：５ｍｌのＨＣｌＯ４／水１リットル、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０分５％Ｂ、１０分９５％Ｂ；流速：１ｍｌ／分；オーブン：４０℃；ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００８７】
方法２１（ＨＰＬＣ）：カラム：Kromasil ＲＰ−１８、２５０ｍｍ×４ｍｍ、５μｍ；溶離液Ａ：２ｍｌのＨＣｌＯ４／水１リットル、溶離液Ｂ：アセトニトリル；無勾配：４５％Ｂ、５５％Ａ；流速：１ｍｌ／分；オーブン：４０℃；ＵＶ検出２１０ｎｍ。
【００８８】
方法２２（ＬＣ‐ＭＳ）：ＭＳ器具タイプ：Micromass ＺＱ；ＨＰＬＣ器具タイプ：ＨＰ１１００シリーズ；ＵＶ ＤＡＤ；カラム：Gromsil １２０ ＯＤＳ−４ ＨＥ ５０×２ｍｍ、３.０μｍ；溶離液Ａ：水／０.０２５％蟻酸／ｌ、溶離液Ｂ：アセトニトリル／０.０２５％蟻酸；勾配：０〜２.９分０〜７０％Ｂ、２.９〜３.１分７０〜９０％Ｂ、３.１〜４.５分７０〜９０％Ｂ；オーブン：５０℃、流速：０.８ｍｌ／分、ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８９】
方法２３（ＨＰＬＣ）：ＨＰＬＣ器具タイプ：ＨＰ１０５０シリーズ；ＵＶ ＤＡＤ １１００シリーズ；カラム SymmetryPrep（登録商標）Ｃ１８、Waters、５０×２.１ｍｍ、３.５μｍ；溶離液Ａ： 水／０.０５％トリフルオロ酢酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０〜９分 ０〜１００％Ｂ、９〜１１分 １００％Ｂ、１１〜１２分 １００〜０％Ｂ、次いでクロマトグラフィーカラムの再生；オーブン：４０℃、流速：０.４ｍｌ／分、ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９０】
方法２４（定量的１９Ｆ−ＮＭＲ分光法）：正確に秤量された試料物質約１０ｍｇおよび正確に秤量された１,４−ジブロモテトラフルオロベンゼン２０ｍｇを、ピリジンに溶かし、１９Ｆ−ＮＭＲ分光法により測定する。δ‐７４（ＴＦＡ）および−１３２.０（１,４−ジブロモテトラフルオロベンゼン）の総和を示し、比較する。ＴＦＡ含有量を、試料物質の質量のＴＦＡパーセントとして示す。
【００９１】
方法２５（イオンクロマトグラフィー）：サプレッサーシステムおよび伝導度検出器を備えたイオンクロマトグラフィーシステム；プレカラム：Ａ ＳＵＰＰ４／５ Guard、分離カラム：Ａ ＳＵＰＰ ５ ４.０×２５０ｍｍ；溶離液：３.２ｍＭ炭酸ナトリウムおよび２.４ｍＭ炭酸水素ナトリウム、水中；流速：０.７ｍｌ／分。試料をメタノールに溶かし（最終試料体積の２０％）、超音波浴中で３分間処理し、水を補って完全にする。試料をイオン不含有酢酸セルロースフィルター（０.４５μｍ孔）により濾過し、注入する。外部標準に対して定量する（０.５ｍｇ／ｌ〜１０ｍｇ／ｌ）。
【００９２】
出発化合物
実施例１Ａ
Ｄ−ロイシル−Ｎ１−｛（３Ｓ,６Ｓ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｒ,２１Ｓ,２４Ｓ,２７Ｓ,２８Ｒ）−６−［（１Ｓ）−２−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル］−１８−（３−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝プロピル）−１２−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）−２４−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル］−２１−イソブチル−１５−［（１Ｓ）−１−メチルプロピル］−２,５,８,１１,１４,１７,２０,２３,２６−ノナオキソ−２８−フェニル−１−オキサ−４,７,１０,１３,１６,１９,２２,２５−オクタアザシクロオクタコサン−２７−イル｝−Ｌ−ロイシンアミドビストリフルオロアセテート（リソバクチン）
【化６】
2008518982.tif 000009
【００９３】
発酵：
培養培地：
ＹＭ：酵母−麦芽寒天：Ｄ−グルコース（４ｇ／ｌ）、酵母抽出物（４ｇ／ｌ）、麦芽抽出物（１０ｇ／ｌ）、１リットルの Lewatit 水。滅菌（１２１℃で２０分）前、ｐＨを７.２に調節する。
ＨＰＭ：マンニトール（５.４ｇ／ｌ）、酵母抽出物（５ｇ／ｌ）、肉ペプトン（３ｇ／ｌ）。
実験用保存材料：凍結乾燥株（ＡＴＣＣ５３０４２）を、５０ｍｌのＹＭ培地中で生育する。
【００９４】
フラスコ発酵：１リットルのエルレンマイヤーフラスコ中における１５０ｍｌのＹＭ培地または１００ｍｌのＨＰＭ培地に、２ｍｌの実験用保存材料を接種し、２８℃で３０〜４８時間、２４０ｒｐｍでの振とう器において生育する。
【００９５】
３０リットルの発酵：３００ｍｌのフラスコ発酵物（ＨＰＭ培地）を用いて、滅菌３０リットル栄養培地溶液（１ｍｌの消泡剤ＳＡＧ５６９３／ｌ）に接種する。この培養物を、２８℃、３００ｒｐｍで２１時間、０.３ｖｖｍでの滅菌空気で曝気しながら生長させる。ｐＨを１Ｍ塩酸によりｐＨ＝７.２で一定に保つ。全部で、培養期間中８８０ｍｌの１Ｍ塩酸を加える。
【００９６】
主培養物（２００リットル）：１リットルエルレンマイヤーフラスコにおける１５×１５０ｍｌのＹＭ培地に、２ｍｌの実験用保存材料を接種し、２８℃で４８時間および２４０ｒｐｍでの振とう器において生長させる。この培養物２２５０ｍｌを用いて、滅菌２００リットル栄養培地溶液（ＹＭ）（１ｍｌの消泡剤５６９３／ｌ）に接種し、２８℃、１５０ｒｐｍで１８.５時間、０.３ｖｖｍでの滅菌空気で曝気しながら生長させる。
【００９７】
１時間毎に試料（５０ｍｌ）を採取して発酵の経過をチェックし、１ｍｌのメタノール（０.５％トリフルオロ酢酸）をこの培養ブロス２ｍｌに加え、混合物を０.４５μｍフィルターで濾過する。この懸濁液３０μｌを、ＨＰＬＣ（方法１８および方法１９）手段により分析する。
【００９８】
１８.５時間後、主培養物の培養ブロスを、上清中へ分離し、１７０００ｒｐｍで沈降させる。
【００９９】
分離：
上清（１８３リットル）を、濃トリフルオロ酢酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ６.５〜７に調節し、Lewapol カラム（ＯＣ １０６４、６０リットル含有量）にローディングする。それに続いて、純水、水／メタノール１：１、次いで純メタノール（０.１％トリフルオロ酢酸含有）で溶離を実施する。この有機相を真空下、残留する水性残さが１１.５リットルとなるまで濃縮する。
【０１００】
残留水相を、シリカゲルＣ１８に結合させ、分離する（ＭＰＬＣ、Biotage Flash ７５、７５×３０ｃｍ、ＫＰ‐Ｃ１８‐ＷＰ、１５〜２０μｍ、流速：３０ｍｌ／分；溶離液：アセトニトリル／０.１％トリフルオロ酢酸含有水；勾配：１０％、１５％および４０％アセトニトリル）。主たる量の実施例１Ａの生成物を含む４０％アセトニトリル相を、真空中で濃縮し、それに続いて凍結乾燥する（〜１３ｇ）。この固体混合物を、１.２ｇ分量でまず分取ＨＰＬＣ（方法７）、次いでSephadex ＬＨ−２０（５×７０ｃｍ、アセトニトリル／水 １：１、それぞれの場合において０.０５％トリフルオロ酢酸を含有する）でのゲル濾過およびさらなる分取ＨＰＬＣ（方法２０）により分離する。
【０１０１】
この工程により、実施例１Ａの生成物２２５０ｍｇを得る。
【０１０２】
沈降物を４リットルのアセトン／水（４：１）中にとり、２ｋｇのセライトを加え、トリフルオロ酢酸を用いて混合物をｐＨ＝６に調節し、攪拌し、遠心分離する。溶媒を真空中で濃縮し、残さを凍結乾燥する。得られた凍結乾燥物（８９.９ｇ）を、メタノール中に取り、濾過し、濃縮し、シリカゲルで分離する（方法２１）。次いで、実施例１Ａの生成物をゲル濾過（Sephadex ＬＨ‐２０、５×６８ｃｍ、水／アセトニトリル９：１（０.０５％トリフルオロ酢酸含有）、流速：２.７ｍｌ／分、フラクションサイズ１３.５ｍｌ）により精製し、純粋な物質を得る。
この工程により、４４７ｍｇの実施例１Ａ生成物を得る。
ＨＰＬＣ（方法１８）：Ｒｔ＝６.１９分（ｍｉｎ）
ＭＳ （ＥＳＩpos）： ｍ／ｚ ＝ 1277 （Ｍ＋Ｈ）＋
1Ｈ ＮＭＲ （500.13 MHz, ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ = 0.75 （d, 3H）, 0.78 （d, 6H）, 0.80 （t, 3H）, 0.82 （d, 3H）, 0.90 （d, 3H）, 0.91 （d, 3H）, 0.92 （d, 3H）, 0.95 （d, 3H）, 0.96 （d, 3H）, 1.05 （m, 1H）, 1.19 （d, 3H）, 1.25 （m, 2H）, 1.50 （m, 4H）, 1.51 （m, 2H）, 1.55 （m, 1H）, 1.61 （m, 1H）, 1.65 （m, 1H）, 1.84 （m, 1H）, 1.85 （m, 1H）, 1.86 （m, 1H） , 1.89 （m, 1H）, 1.95 （m, 1H）, 2.75 （m, 2H）, 3.40 （m, 1H）, 3.52 （m, 2H）, 3.53 （dd, 1H）, 3.64 （m, 2H）, 3.66 （m, 1H）, 3.68 （dd, 1H）, 3.73 （m, 2H）, 4.00 （dd, 1H）, 4.02 （bｒ., 1H）, 4.13 （bｒ., 1H）, 4.32 （dd, 1H）, 4.39 （t, 1H）, 4.55 （m, 1H）, 4.75 （dd, 1H）, 5.19 （t, 1H）, 5.29 （d, 1H）, 5.30 （bｒ., 1H）, 5.58 （m, 2H）, 6.68 （m, 3H）, 6.89 （d, 1H）, 6.93 （m, 3H）, 6.94 （bｒ., 1H）, 6.98 （d, 1H）, 7.12 （bｒ., 1H）, 7.20 （bｒ., 2H）, 7.23 （m, 2H）, 7.42 （m, 2H）, 7.54 （d, 1H）, 7.58 （d, 1H）, 8.32 （bｒ., 1H）, 9.18 （bｒ., 1H）, 9.20 （m, 2H）, 9.50 （bｒ., 1H）。
13Ｃ−ＮＭＲ （125.77 MHz, ｄ6−ＤＭＳＯ）： δ ＝ 10.3, 15.3, 19.0, 19.2, 19.6, 20.0, 20.9, 22.0, 22.4, 23.0, 23.2, 24.3, 24.4, 25.0, 25.4, 26.0, 27.8, 30.9, 35.4, 39.5, 40.8, 40.9, 41.6, 44.1, 51.5, 52.7, 55.9, 56.2, 56.4, 57.9, 58.8, 60.2, 61.1, 62.6, 70.1, 71.6, 71.7, 75.5, 128.1, 128.6, 136.7, 156.8, 168.2, 170.1, 170.4, 171.2, 171.5, 171.9, 172.2, 172.4, 173.7。
【０１０３】
文献に記載された割当て法に従って、シグナルの割当てを実施した（T.Kato、H.Hinoo、Y.Terui、J.Antibiot.、１９８８、６１、７１９−７２５）。
【０１０４】
実施例２Ａ
デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチンビストリフルオロアセテート（エドマン２.０分解産物）
【化７】
2008518982.tif 000010
【０１０５】
リソバクチンビストリフルオロアセテート（６０.０ｇ、３９.８８ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下でピリジン（８４０ｍｌ）に溶かす。次いで、フェニルイソチオシアネート（３２.３５ｇ、２３９.２８ｍｍｏｌ、６当量）を加え、反応混合物を３７℃で７ｈ（時間）攪拌する。次いで、溶媒を浴温４０℃のロータリー蒸発装置で蒸発させる。残さをメチル・ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１４００ｍｌ）と混合し、３０分間激しく攪拌する。次いで、ガラスフリット（孔幅３、１３ｃｍ直径）を通して混合物を吸引濾過する。中間生成物（エドマン０.５分解生成物）を７２ｇの粗収量で分離し、後処理せずにさらに反応させる。
【０１０６】
この目的のため、粗生成物を、アルゴン雰囲気下でトリフルオロ酢酸（１０２６ｍｌ）に溶かし、ＲＴで３０分間攪拌する。次いで、溶液を、２０℃の浴温で真空中ロータリー蒸発装置において濃縮する。残さをメチル・ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１４００ｍｌ）中に取り、粉末状非結晶固体が生成されるまで、激しく攪拌する。これをフリット（孔幅３、１８ｃｍ直径）での真空濾過により集める。次いで、固体をジエチルエーテル（１４００ｍｌ）と攪拌し、再び濾過により集める。同手順を２回分量のジクロロメタン（各々９００ｍｌ）で反復する。粗生成物を真空中で乾燥する。５８ｇの粗デ（１−Ｄ−ロイシル）リソバクチンビストリフルオロアセテート（エドマン１.０分解生成物）を得る。
【０１０７】
さらなる後処理はせずに、粗生成物をアルゴン雰囲気下でピリジン（１０８０ｍｌ）に溶かす。次いで、フェニルイソチオシアネート（１０７ｇ、０.８０ｍｏｌ、２０当量）を加え、反応混合物を３７〜４０℃で７時間攪拌する。次いで、溶媒を浴温４０℃のロータリー蒸発装置で蒸発させる。残さをメチル・ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１４００ｍｌ）と混合し、激しく攪拌する。次いで、ガラスフリット（孔幅３、１３ｃｍ直径）で混合物を吸引濾過する。中間生成物（エドマン１.５分解生成物）を６５ｇの粗収量で分離し、オイルポンプ吸引下で乾燥後、アルゴン雰囲気下で直接トリフルオロ酢酸（１２４０ｍｌ）に溶かし、ＲＴで３０分間攪拌する。次いで、溶液を、浴温２０℃で真空中ロータリー蒸発装置において濃縮する。残さをメチル・ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１４００ｍｌ）中に取り、粉末状非結晶固体が生成されるまで、激しく攪拌する。これをフリット（孔幅３、１８ｃｍ直径）での真空濾過により集める。次いで、固体をまずジエチルエーテル（１４００ｍｌ）、次いでジクロロメタン（１４００ｍｌ）と攪拌し、毎回濾過により集める。５５ｇの粗生成物を得る。これを分取ＨＰＬＣ（方法１４）により精製する。標記化合物２８.５５ｇ（理論値の５６％）を得る。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法２３）：Ｒｔ＝ ４.７１分、
λmax （定性的）＝ ２２０ｎｍ （ｓ）, ２５５-２７０（ｗ）。
ＬＣ−ＭＳ（方法２２）： Ｒｔ＝1.65分;
ＭＳ（ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝５２６（１００）［Ｍ＋２Ｈ］2+, １０５１（１５）［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１０８】
実施例３Ａ
メチル・（２Ｚ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）アクリレート
【化８】
2008518982.tif 000011
６−トリフルオロメチルピリジン−３−カルボアルデヒド（４.８５ｇ、２７.７０ｍｍｏｌ）および｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝（ジメトキシホスホリル）酢酸メチル（９.１７ｇ、２７.７０ｍｍｏｌ、１.０当量）を、ＴＨＦ（７０ｍｌ）に溶かし、−７０℃に冷却する。−７０℃で、Ｎ,Ｎ,Ｎ,Ｎ−テトラメチルグアニジン（６.３８ｇ、５５.３９ｍｍｏｌ、６.９５ｍｌ、２.０当量）をゆっくりと滴下し、次いで混合物を−７０℃で４時間、それに続いてＲＴで１２時間攪拌する。反応混合物を濃縮し、次いで水から酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機相を合わせ、飽和ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する。真空中で濃縮後、粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液：トルエン、次いでトルエン／酢酸エチル１０：１）にかける。６.９３ｇ（理論値の６６％）の標記化合物を得る。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法８）： Ｒｔ＝ ４.６０分、
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒｔ＝ ４.５４分。
１Ｈ-ＮＭＲ （400 ＭＨｚ, ｄ６−ＤＭＳＯ）： δ = 3.74 （s, 3H, OMe）, 5.10 （s, 2H, CH2）, 7.27 （s, 1H, ＰｙｒＨ）, 7.33-7.38 （m, 5H, AｒH）, 7.94 （d,Ｊ＝8.5 Hz, 1H, ＰｙｒＨ）, 8.27 （d,Ｊ＝ 8.5 Hz, 1H, ＰｙｒＨ）, 8.93 （s, 1H, β−CH）, 9.51 （s, 1H, NH）。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）：Ｒｔ＝2.44分; ＭＳ（ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝381 （100） ［Ｍ＋Ｈ］+；ＭＳ（ＥＳＩneg.）：ｍ／ｚ（％）＝ 379 （100）［Ｍ−Ｈ］-。
ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ （方法１）： Ｃ18Ｈ16Ｎ2Ｏ4Ｆ3 ［Ｍ＋Ｈ］+ 計算値 381.1062, 実測値 381.1065。
【０１０９】
実施例４Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−３−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステル
【化９】
2008518982.tif 000012
実施例３Ａからの化合物（１０.１５ｇ、２６.６９ｍｍｏｌ）を、メタノールｐ.ａ.（１００ｍｌ）に溶かす。注射針を用いて、アルゴンを約５分間通し、次いで（＋）−１,２−ビス［（２Ｓ,５Ｓ）ジエチルホスホラノ］ベンゼン（シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）トリフレート（２８９ｍｇ、４００μｍｏｌ、０.０１５当量）を加える。４ｂａｒの水素圧下およびＲＴで１２時間水素添加を実施する。次いで、キーゼルグール（メタノール）による濾過の後、溶出液を濃縮する。粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液：トルエン／酢酸エチル５：１）にかける。標記化合物９.９ｇ（理論値の９７％）を得る。
［α］20Na＝-24°（ｃ＝0.093、メタノール中）.
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法８）： Ｒt＝ 4.50分。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒt＝ 4.49分.
1Ｈ-ＮＭＲ （４００ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ = 2.99 （dd,Ｊ＝3.5, 11.0Ｈｚ, 1H, β-CH）, 3.22 （dd,Ｊ＝3.5, 11.0Ｈｚ, 1H, β-CH）, 3.66 （s, 3H, OMe）, 4.40 （m, 1H, α-CH）, 4.97 （s, 2H, CH2）, 7.23 （m, 2H）, 7.29-7.33 （m, 3H）, 7.83 （d,Ｊ＝6.5Ｈｚ, 1H）, 7.93-7.98 （m, 2H）, 8.65 （s, 1H, NH）.
ＬＣ-ＭＳ （方法７）： Ｒt＝2.40分; ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ （％）＝383 （100） ［Ｍ＋Ｈ］+; ＭＳ （ＥＳＩneg.）： ｍ／ｚ （％）＝ 273 （100）, 381 （50） ［Ｍ−Ｈ］-.
ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ （方法１）： Ｃ18Ｈ18Ｎ2Ｏ4Ｆ3 ［Ｍ＋Ｈ］+ 計算値 383.1219, 実測値 383.1223。
【０１１０】
実施例５Ａ
３−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステル
【化１０】
2008518982.tif 000013
実施例４Ａの化合物（９.９０ｇ、２５.８９ｍｍｏｌ）を、メタノール（１００ｍｌ）に溶かす。注射針を用いて、アルゴンを約５分間通し、次いでパラジウム・炭素（１０％、９９０ｍｇ）を加える。４ｂａｒの水素圧下、ＲＴで１２時間水素添加を実施する。次いで、キーゼルグールにより濾過した後、濃縮し、オイルポンプ吸引下で乾燥する。収量：標記化合物５.８ｇ（理論値の９０％）
［α］19.9Na＝＋3°（ｃ＝0.186 メタノール中）。
ＨＰＬＣ／ＵＶ−Ｖｉｓ（方法８）： Ｒｔ＝3.34分.
ＨＰＬＣ／ＵＶ−Ｖｉｓ（方法９）： Ｒｔ＝3.22分.
ＩＲ ｖmax （ＮａＣｌ, cm-1）： 3415, 1734, 1339, 1136, 1087.
1Ｈ-ＮＭＲ （500ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ = 2.85 （dd,Ｊ＝5.5, 13.5Ｈｚ, 1H, β-ＣＨ）, 3.01 （dd,Ｊ＝5.5, 13.5Ｈｚ, 1H, β-CH）, 3.61 （s, 3H, ＯＭｅ）, 3.63-3.69 （m, 1H, α-ＣＨ）, 7.82 （d,Ｊ＝7.5 Ｈｚ, 1Ｈ）, 7.93 （ｄ,Ｊ＝7.5Ｈｚ, 1Ｈ）, 8.61 （s, 1H）。
ＬＣ-ＭＳ （方法７）： Ｒｔ＝1.74分; ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ （％）＝249 （100） ［Ｍ＋Ｈ］+。
ＨＲ-ＴＯＦ-ＭＳ （方法１）： Ｃ12Ｈ15Ｎ3Ｏ2Ｆ3 ［Ｍ＋ ＣＨ3ＣＮ＋Ｈ］+ 計算値 290.1116, 実測値 290.1122。
【０１１１】
実施例６Ａ
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブチル）−Ｄ−アラニル−３−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステル
【化１１】
2008518982.tif 000014
Ｎ−メチルモルホリン（１２.９２ｇ、１２７.７２ｍｍｏｌ、１４.０４ｍｌ、５当量）およびＨＡＴＵ（９.７１ｇ、２５.５４ｍｍｏｌ、１当量）を、−３０℃の乾燥ＤＭＦ（２４０ｍｌ）中の実施例５Ａからの化合物（６.３４ｇ、２５.５４ｍｍｏｌ）およびＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｄ−アラニン（６.２７ｇ、２５.５４ｍｍｏｌ、１.０当量）の溶液にゆっくりと加える。反応混合物がゆっくりとＲＴまで温まると（約３時間）、ＨＰＬＣ手段（方法９）により完全な変換が観察される。リン酸二水素カリウム（３４.７６ｇ、２５５.４４ｍｍｏｌ、１０当量）を加え、反応混合物を２０分間攪拌し、次いで濾過し、酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１０：１〜２：１ シクロヘキサン／酢酸エチル勾配）で精製することにより、標記化合物９.７４ｇ（理論値の７３％）を得る。
［α］19.9Na＝＋７.0°（ｃ＝0.044 メタノール中）.
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法８）： Ｒt＝4.89 分。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒt＝4.75 分。
ＩＲ ｖmax （NaCl, cm-1）： 2959, 1742, 1655, 1520, 1336, 1160, 1136, 1087, 1050, 1027.
1Ｈ-ＮＭＲ （500 ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ = 0.74 （s, 9H, tBu）, 0.97-1.00 （m, 1H, β−CH2）, 1.20-1.25 （m, 1H, β−CH2）, 1.35 （s, 9H, OtBu）, 2.99-3.05 （m, 1H, β−CH2）, 3.23-3.26 （m, 1H, β−CH2）, 3.66 （s, 3H, OMe）, 3.94 （m, 1H, α−CH）, 4.60 （m, 1H, α−CH）, 6.82 （d,Ｊ＝8.5Ｈｚ, 1H, NH）, 7.78 （d,Ｊ＝8.0Ｈｚ, 1H, ＰｙｒＨ）, 7.94 （d,Ｊ＝8.0Ｈｚ, 1H, ＰｙｒＨ）, 8.34 （d,Ｊ＝8.5Ｈｚ, 1H, NH）, 8.64 （s, 1H, ＰｙｒＨ）。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）： Ｒt＝2.67分; ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ （％）＝476 （100）, ［Ｍ＋Ｈ］+; ＭＳ （ＥＳＩneg.）： ｍ／ｚ （％）＝400 （80）, 474 （40） ［Ｍ−Ｈ］-.
ＨＲ-ＴＯＦ-ＭＳ （方法１）： Ｃ22Ｈ33Ｎ3Ｏ5Ｆ3 ［Ｍ＋Ｈ］+ 計算値 476.2372、実測値 476.2364。
【０１１２】
実施例７Ａ
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｄ−アラニル−３−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニン
【化１２】
2008518982.tif 000015
水（２０ｍｌ）中の水酸化リチウム水和物（１.１６ｇ、２.５当量、４８.３７ｍｍｏｌ）の溶液を、−２０℃のＴＨＦ（３６０ｍｌ）および水（１００ｍｌ）中の実施例６Ａからの化合物（９.２ｇ、１.０当量、１９.３５ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応混合物が＋１５℃まで温まると（約１.５時間）、ＨＰＬＣ手段（方法９）により完全な変換が観察される。後処理のため、リン酸二水素カリウム（２６.３３ｇ、１０当量、１９３.５ｍｍｏｌ）を加える（約ｐＨ７）。反応混合物を濾過し、真空中で濃縮する。粗生成物をゲルクロマトグラフィー（方法１０、移動相メタノール／アセトン ４：１）で精製することにより、４.７２ｇ（理論値の５３％）の生成物を得る。
［α］20Na＝＋51.3°（ｃ＝0.402 メタノール中）。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法８）： Ｒt＝4.63 分。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒt＝4.55 分。
ＩＲ ｖmax （ＮａＣｌ, cm-1）： 3305, 2959, 1663, 1519, 1336, 1173, 1134, 1086.
1Ｈ-ＮＭＲ （500ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ＝0.77 （s, 9H, tBu）, 1.06-1.13 （m, 1H, β−CH2）, 1.23-1.26 （m, 1H, β−CH2）, 1.34 （s, 9H, OtBu）, 3.01 （tapp,Ｊ＝ 11.0Ｈｚ, 1H, β−CH2）, 3.23 （bｒ d、Ｊ＝11.0Ｈｚ, 1H,β−CH2）, 3.94 （t,Ｊ＝ 8.0Ｈｚ, 1H, α−CH）, 4.42 （bｒ s, 1H, α−CH）, 6.90 （d,Ｊ＝8.5Ｈｚ, 1H, NH）, 7.74 （d,Ｊ＝7.5Ｈｚ, 1H, ＰｙｒＨ）, 7.86 （d,Ｊ＝7.5Ｈｚ, 1H, ＰｙｒＨ）, 8.00 （bｒ s, 1H, NH）, 8.56 （s, 1H, ＰｙｒＨ）。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）： Ｒt＝2.42分; ＭＳ （ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝406 （100）, 462 （85） ［Ｍ＋Ｈ］+; ＭＳ （ＥＳＩneg.）：ｍ／ｚ（％）＝ 460 （100） ［Ｍ−Ｈ］-。
ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ（方法１）： Ｃ21Ｈ31Ｎ3Ｏ5Ｆ3 ［Ｍ＋Ｈ］+ 計算値 462.2216, 実測値 462.2203。
【０１１３】
実施例８Ａ
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｄ−アラニル−３−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリフルオロアセテート
【化１３】
2008518982.tif 000016
Ｎ−メチルモルホリン（２.７７ｇ、３.０１ｍｌ、５当量、２７.３８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４.３７ｇ、２.１当量、１１.５０ｍｍｏｌ）を、−３０℃の乾燥ＤＭＦ（１１９ｍｌ）中の実施例２Ａからの化合物（７.００ｇ、１.０当量、５.４８ｍｍｏｌ）および実施例７Ａからの化合物（３.０３ｇ、１.２当量、６.５７ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加える。反応混合物がＲＴまでゆっくりと温まると（約１時間）、ＨＰＬＣ／ＵＶ−Ｖｉｓ手段（方法９）により完全な変換が観察される。リン酸二水素カリウム（７.４５ｇ、１０.０当量、５４.７６ｍｍｏｌ）で反応をクエンチングする。反応混合物をゲルクロマトグラフィー（方法１０、移動相 メタノール／アセトン ４：１）で精製することにより、１２.６３ｇ（定量的）の生成物を得る。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法８）： Ｒt＝ 4.78分.
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒt＝ 4.35分.
ＬＣ-ＭＳ （方法７）： Ｒt＝2.28分; ＭＳ （ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝697 （100） ［Ｍ＋２Ｈ］2+, 1493 （15） ［Ｍ＋Ｈ］+; ＭＳ （ＥＳＩneg.）：ｍ／ｚ（％）＝745 （100） ［Ｍ - 2H］2-, 1491 （5） ［Ｍ - Ｈ］-.
ＨＲ-ＴＯＦ-ＭＳ （方法１）： Ｃ67Ｈ104Ｎ16Ｏ19Ｆ3 ［Ｍ＋Ｈ］+ 計算値 1493.7616, 実測値 1493.7594。
【０１１４】
実施例９Ａおよび実施例１０Ａ
（２Ｓ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（トリメチルシリル）アラニンおよび（２Ｒ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（トリメチルシリル）アラニン
M.Merget、K.Gunther、M.Bernd、E.Gunther、R.Tacke、J.Organomet.Chem.２００１、６２８、１８３〜１９４に従って合成を行う。キラル相での分取ＨＰＬＣ：Gilson Abimed ＨＰＬＣ；カラム：Daicel Chiralpak ＡＤ−Ｈ ５μｍ；２５０×２０ｍｍ；溶離液Ａ：イソへキサン、溶離液Ｂ：０.２％酢酸／１％水／２−プロパノール；無勾配；流速：１５ｍｌ／分；ＵＶ検出器２１２ｎｍにより、鏡像体の分離を行う。Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−３−トリメチルシリルアラニン（２Ｒ化合物、Mercachem、ＡＭＲ３９.２６０）の本物のサンプルとのＨＰＬＣ比較により異性体を割当てる。
【０１１５】
実施例９Ａ
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−３−トリメチルシリルアラニン（２Ｓ化合物）
【化１４】
2008518982.tif 000017
キラルＨＰＬＣ（方法１５）：Ｒt＝ 4.16 分, e.e.＞９９％。
［α］D20＝ ＋1.1 （ｃ＝ 0.83 メタノール中）。
【０１１６】
実施例１０Ａ
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−３−トリメチルシリルアラニン（２Ｒ化合物）
【化１５】
2008518982.tif 000018
キラルＨＰＬＣ（方法１５）：Ｒt＝ 9.27 分, e.e.＞９９％。
［α］D20＝ −1.6 （ｃ＝0.66 メタノール中）。
【０１１７】
実施例１１Ａ
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステル
【化１６】
2008518982.tif 000019
B.Neises、W.Steglich、Org.Synth.１９８５、６３、１８３−１８７と同様にして製造する。
【０１１８】
（２Ｓ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（ピリジン−３−イル）アラニン（２５.００ｇ、９３.８８ｍｍｏｌ）を、アルゴン下３００ｍｌのジクロロメタンに溶かす。メタノール（１１.４ｍｌ、９.０２ｇ、２８１ｍｍｏｌ、３当量）およびＤＭＡＰの小さな結晶を加える。次いで、混合物を０℃に冷却する。ＥＤＣ（１９.８０ｇ、１０３ｍｍｏｌ、１.１当量）を加える。５分後、氷浴を除去し、混合物をＲＴで１時間攪拌する。次いで、混合物を真空中で濃縮し、残さを酢酸エチルと混合し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で抽出する。水相を酢酸エチルで１回逆抽出し、次いで有機相を合わせ、０.５Ｍクエン酸で洗浄し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム溶液でもう１回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空中で濃縮する。澄明油状物が残存し、これをオイルポンプ吸引で乾燥すると結晶化する。収量：２３.６０ｇ（理論値の９０％）。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒｔ＝3.28 分。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）： Ｒt ＝ 1.21分, ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ （％）＝ 281 （100） ［Ｍ＋Ｈ］+。
1Ｈ−ＮＭＲ （400ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ ＝ 1.30 （s, 9H）, 2.86 （m, 1H）, 3.04 （m, 1H）, 3.63 （s, 3H）, 4.22 （m, 1H）, 7.28 - 7.39 （m, 2H）, 7.69 （d, 1H）, 8.43 （m, 2H）。
【０１１９】
実施例１２Ａ
３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステルビストリフルオロアセテート
【化１７】
2008518982.tif 000020
実施例１１Ａからの化合物（１１.８ｇ、４２.０９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸（１６０ｍｌ、３０％溶液）に溶かし、ＲＴで３０分間攪拌する。次いで、混合物を真空中で濃縮する。残さを少量の水中に取り、凍結乾燥する。次いで、凍結乾燥物をトルエンと混合し、真空中で濃縮する。最後に生成物を、オイルポンプ吸引下で恒量になるまで乾燥する。収量：１７.１５ｇ（定量）。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒｔ＝0.88 分。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）： Ｒｔ ＝ 0.46分, ＭＳ（ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝181 （100） ［Ｍ＋Ｈ］+。
1Ｈ−ＮＭＲ （400ＭＨｚ, ｄ６-ＤＭＳＯ）： δ ＝2.79 （dd, 1H）, 2.92 （dd, 1H）, 3.60 （s, 3H）, 3.63 （m, 1H）, 7.30 （m, 1H）, 7.62 （d, 1H）, 8.41 （m, 2H）。
【０１２０】
実施例１３Ａ
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステル
【化１８】
2008518982.tif 000021
実施例９Ａからの化合物（１０.３１ｇ、３９.４ｍｍｏｌ）および実施例１２Ａからの化合物（１６.１０ｇ、３９.４ｍｍｏｌ、１当量）を０℃のＤＭＦ（１８６ｍｌ）に溶かす。次いで、Ｎ−メチルモルホリン（１７.３４ｍｌ、１６.００ｇ、４当量）およびＨＡＴＵ（２２.４９ｇ、５９.１６ｍｍｏｌ、１.５当量）を加える。混合物をＲＴで２時間攪拌する。ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを加え、混合物を飽和炭酸ナトリウム溶液で洗浄する。水相をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで１回逆抽出し、次いで有機相を合わせ、１Ｍクエン酸水溶液で洗浄し、飽和炭酸ナトリウム溶液で再度洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空中で濃縮する。シリカゲルによる濾過を実施する（シクロヘキサン／酢酸エチル２：１）。収量：１４.１ｇ（理論値の８４％）
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒｔ＝3.91 分。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）： Ｒｔ ＝ 1.90分, ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ （％）＝424 （100） ［Ｍ＋Ｈ］+。
1Ｈ−ＮＭＲ （４００ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ ＝ -0.09 （s, 9H）, 0.56 - 0.75 （m, 2H）, 1.47 （s, 9H）, 2.90 （dd, 1H）, 3.09 （dd, 1H）, 3.62 （s, 3H）, 3.98 （m, 1H）, 4.49 （m, 1H）, 6.68 （d, 1H）, 7.26 （dd, 1H）, 7.61 （m, 1H）, 8.20 （d, 1H）, 8.40 （m, 2H）。
【０１２１】
実施例１４Ａ
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニン
【化１９】
2008518982.tif 000022
実施例１３Ａからの化合物（７.４ｇ、１７.５６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／水（６：４）中に取り、０℃に冷却し、水酸化リチウム一水和物（１.４７ｇ、３５.１３ｍｍｏｌ、２当量）を加える。混合物を０℃で攪拌する。１時間後、さらに１当量（０.７４ｇ）の水酸化リチウム一水和物を加え、攪拌を１時間続行する。ＴＨＦの大部分を減圧留出し、水相を２回分量のメチル・ｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄し、次いでクエン酸を加えることによりｐＨ４に調節する。固体が沈澱する。混合物を３回分量の酢酸エチルで抽出することにより、固体が溶解する。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。粗生成物を、ゲルクロマトグラフィー（方法３、移動相：メタノール）により精製する。収量：６.６７ｇ（理論値の９３％）。
ＨＰＬＣ／ＵＶ-Ｖｉｓ（方法９）： Ｒｔ＝３.７３分。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）： Ｒｔ ＝ 1.68 分, ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝410 （40） ［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（300ＭＨｚ, ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ＝ -0.090 （s, 9H）, 0.56 - 0.75 （m, 2H）, 1.35 （s, 9H）, 2.90 （dd, 1H）, 3.09 （dd, 1H）, 3.98 （m, 1H）, 4.41 （m, 1H）, 6.70 （d, 1H）, 7.26 （dd, 1H）, 7.60 （m, 1H）, 8.00 （d, 1H）, 8.37 （m, 2H）。
【０１２２】
実施例１５Ａ
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリフルオロアセテート
【化２０】
2008518982.tif 000023
実施例２Ａからの化合物（３.００ｇ、２.３５ｍｍｏｌ）および実施例１４Ａからの化合物（１.４４ｇ、３.５２ｍｍｏｌ、１.５当量）を、ＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶かし、０℃に冷却する。次いで、まずＤＭＦ中の４−メチルモルホリンの１Ｍ溶液４.７ｍｌ（４.７ｍｍｏｌ、２当量）を加える。その直後、ＨＡＴＵ（１.５２ｇ、３.９９ｍｍｏｌ、１.７当量）を加え、混合物を０℃で１５分間攪拌する。次いで、ＤＭＦ中の４−メチルモルホリンの１Ｍ溶液をさらに４.７ｍｌ（４.７ｍｍｏｌ、２当量）滴下する。次いで混合物をＲＴで２時間攪拌する。粗生成物をゲルクロマトグラフィー（方法３）にかける。それ以上精製せずに生成物を反応させる。収量：３.６ｇ（理論値の８２％）。
ＨＰＬＣ（方法９）： Ｒｔ＝3.90 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）： Ｒｔ＝2.00 分, ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ （％）＝721.8 （100） [Ｍ＋2 Ｈ］２＋; 1442.1 （5）［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２３】
別法：実施例２Ａからの化合物（１４.００ｇ、１０.９５ｍｍｏｌ）および実施例１４Ａからの化合物（５.３８ｇ、１３.１４ｍｍｏｌ、１.２当量）を、ＤＭＦ（２８０ｍｌ）に溶かし、−２０℃に冷却する。次いで、Ｎ−メチルモルホリン（５.５４ｇ、６.０２ｍｍｏｌ、５当量）、それに続いてＨＡＴＵ（６.６６ｇ、１７.５２ｍｍｏｌ、１.６当量）を加える。混合物をゆっくりとＲＴに温め、一晩（約１６時間）攪拌する。次いで、リン酸二水素カリウム（１４.９１ｇ、１０当量）を攪拌しながら加え、攪拌を３０分間続行する。粗生成物をゲルクロマトグラフィー（方法３、移動相：メタノール）にかける。それ以上精製せずに生成物を反応させる。収量：１４.３５ｇ（理論値の６１％）。
【０１２４】
実施例１６Ａ
２,２−ジメチル−１−ブタナール
【化２１】
2008518982.tif 000024
２,２−ジメチル−１−ブタノール（４.０ｇ、３９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１３６ｍｌ）に溶かし、酸化アルミニウム（７.９８ｇ、７８ｍｍｏｌ、２当量）およびクロロクロム酸ピリジニウム（１６.８８ｇ、７８ｍｍｏｌ、２当量）を加える。混合物をＲＴで１時間攪拌し、次いで一層のシリカゲルにより濾過する。濾液を注意深く濃縮し、残さを大気圧下で蒸発させる（沸点：１０２℃（９９０ｍｂａｒ））。収量：２.９７ｇ（理論値の７５％）。
ＧＣ-ＭＳ （方法１７）： Ｒｔ ＝ 2.21 分, ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ （％）＝ 99.9 （5） ［Ｍ］＋;
１Ｈ−ＮＭＲ （400ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３） δ 0.83 （t, 3H）, 1.03 （s, 6H）, 1.51 （q, 2H）, 9.42 （s, 1H）。
【０１２５】
実施例１７Ａ
（２Ｚ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４,４−ジメチルヘキサ−２−エン酸メチル
【化２２】
2008518982.tif 000025
実施例１６Ａからの化合物（２.５５ｇ、２５.４６ｍｍｏｌ）および｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝（ジメトキシホスホリル）酢酸メチル（８.４３ｇ、２５.４６ｍｍｏｌ）を、５０ｍｌのＴＨＦに溶かし、０℃に冷却する。Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルグアニジンを滴下し、次いで混合物をまず０℃で１５分間、次いでＲＴで５日間攪拌する。約２０ｇのシリカゲルを混合物に加え、それを濃縮し、クロマトグラフィーにかける（シリカゲル Biotage ４０Ｍ、ZIF−SIM、シクロヘキサン／酢酸エチル８７：１３）。収量：１.２０ｇ（理論値の１３％）。
ＨＰＬＣ （方法９）： Ｒｔ＝3.71 分。
ＭＳ （ＤＣＩ）： ｍ／ｚ （％） ＝ 323.3 （100）［Ｍ＋ＮＨ４］。
１Ｈ−ＮＭＲ （400ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３）： δ＝0.83 （m, 3H）, 1.13 （s, 6H）, 1.49 （q, 2H）, 3.75 （br s, 3H）, 5.72 （br s, 1H）, 6.58 （br s, 1H）, 5.12 （s, 2H）, 7.36 （m, 5H）。
【０１２６】
実施例１８Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−４,４−ジメチル−Ｄ−ノルロイシンメチルエステル
【化２３】
2008518982.tif 000026
実施例１７Ａからの化合物（１.２ｇ、粗生成物、３.２６ｍｍｏｌ）を、エタノールｐ.ａ.（６０ｍｌ）に溶かす。注射針を使って、アルゴンを約５分間通し、次いで（＋）−１,２−ビス［（２Ｒ,５Ｒ）ジエチルホスホラノ］ベンゼン（シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）トリフレート（２８ｍｇ、０.０４ｍｍｏｌ、０.０１２当量）を加え、超音波浴中で溶かす。３ｂａｒの水素圧下ＲＴで２４時間水素添加を行う。混合物を濃縮し、クロマトグラフィーにかける（シリカゲル Biotage ２５Ｍ、シクロヘキサン／酢酸エチル９：１）。収量： ９２０ｍｇ（理論値の９２％）。
ＨＰＬＣ（方法９）： Ｒｔ ＝ 4.96 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）： Ｒｔ ＝ 2.76 分; ＭＳ （ＥＳＩpos.）： m／z （％） ＝ 308 （25）［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ （400ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３）： δ ＝ 0.80 （t, 3H）, 0.86 （s, 6H）, 1.29 （q, 2H）, 1.41 （dd, 1H）, 1.73 （dd, 1H）, 3.72 （s, 3H）, 4.40 （m, 1H）, 5.02 （d, 1H）, 5.11 （m, 2H）, 7.35 （m, 5H）。
【０１２７】
実施例１９Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−４,４−ジメチル−Ｄ−ノルロイシン
【化２４】
2008518982.tif 000027
実施例１８Ａからの化合物（９１５ｍｇ、２.９８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１２ｍｌ）に溶かす。溶液を０℃に冷却し、次いで水酸化リチウム一水和物の２Ｍ水溶液３.７ｍｌ（７.４ｍｍｏｌ、２.５当量）を加え、１時間激しく攪拌する。次いで、反応物が酸性になるまでクエン酸（１Ｍ）を滴下し、混合物を酢酸エチルで抽出する。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、クロマトグラフィー（方法１６）にかける。収量：４３４ｍｇ（理論値の５０％）。
ＨＰＬＣ（方法９）： Ｒｔ＝4.54 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）： Ｒｔ ＝2.44 分, ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％） ＝ 294 （20）［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ （400ＭＨｚ, ｄ６-ＤＭＳＯ）： δ ＝ 0.80 （t, 3H）, 0.83 （s, 6H）, 1.21 （q, 2H）, 1.53 （dd, 1H）, 1.60 （dd, 1H）, 3.99 （m, 1H）, 5.02 （s, 2H）, 7.35 （m, 5H）, 7.58 （d, 2H）, 12.52 （br s, 1H）。
【０１２８】
実施例２０Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−４,４−ジメチル−Ｄ−ノルロイシル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステル
【化２５】
2008518982.tif 000028
実施例１９Ａからの化合物（４３０ｍｇ、１.４７ｍｍｏｌ）および実施例１２Ａからの化合物（８０９ｍｇ、１.４７ｍｍｏｌ、１当量）を、０℃のＤＭＦ（５ｍｌ）に溶かし、次いで４−メチルモルホリン（６４４μｌ、５.８６ｍｍｏｌ、４当量）およびＨＡＴＵ（８３６ｍｇ、２.２０ｍｍｏｌ、１.５当量）を加える。混合物をＲＴで３時間攪拌する。酢酸エチルを加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄する。水相を酢酸エチルで１回抽出し、次いで有機相を合わせ、１Ｍクエン酸水溶液、そして再び飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空中で濃縮する。残さをクロマトグラフィー（方法１６）にかける。収量：４９６ｍｇ（理論値の７４％）。
ＨＰＬＣ（方法９）： Ｒｔ＝ 3.94 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）： Ｒｔ＝1.85 分; ＭＳ（ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝ 456 （100）［Ｍ＋Ｈ］＋。
1Ｈ−ＮＭＲ （300ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ ＝0.80 （m, 9H）, 1.10 （m, 3H）, 1.30 （dd, 1H）, 2.91 （dd, 1H）, 3.12 （dd, 1H）, 3.30 （s, 3H）, 4.02 （m, 1H）, 4.51 （m, 1H）, 5.01 （d, 1H）, 5.06 （d, 1H）, 7.22 （dd, 1H）, 7.30 （m, 5H）, 7.63 （m, 1H）, 8.40 （m, 2H）。
【０１２９】
実施例２１Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−４,４−ジメチル−Ｄ−ノルロイシル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニン
【化２６】
2008518982.tif 000029
実施例２０Ａからの化合物（４９０ｍｇ、１.０８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶かす。溶液を０℃に冷却し、次いで水酸化リチウム一水和物の２Ｍ水溶液１.３５ｍｌ（２.７ｍｍｏｌ、２.５当量）を加え、１時間激しく攪拌する。次いで、反応物が酸性になるまでクエン酸（１Ｍ水溶液）を滴下し、混合物を酢酸エチルで抽出する。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。収量：４８４ｍｇ（定量）。
ＨＰＬＣ（方法９）：Ｒｔ＝3.76 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝1.88 分；ＭＳ（ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝442 （100）［Ｍ＋Ｈ］＋。
1Ｈ−ＮＭＲ （400ＭＨｚ, ｄ6-ＤＭＳＯ）： δ ＝ 0.70 （m, 9H）, 1.14 （m, 3H）, 1.30 （dd, 1H）, 2.64 （d, 1H）, 2.75 （d, 1H）, 2.89 （dd, 1H）, 3.11 （dd, 1H）, 4.03 （m, 1H）, 4.45 （m, 1H）, 4.98 （d, 1H）, 5.05 （d, 1H）, 7.22 （dd, 1H）, 7.30 （m, 5H）, 7.61 （m, 1H）, 8.40 （m, 2H）。
【０１３０】
実施例２２Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−４,４−ジメチル−Ｄ−ノルロイシル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）−リソバクチントリフルオロアセテート
【化２７】
2008518982.tif 000030
実施例２Ａからの化合物（０.２８ｇ、０.２２ｍｍｏｌ）および実施例２１Ａからの化合物（１４８ｍｇ、０.３３ｍｍｏｌ、１.５当量）をＤＭＦ（４ｍｌ）に溶かし、０℃に冷却する。次いで、まずＤＭＦ中のＮ−メチルモルホリンの１Ｍ溶液０.４７ｍｌ（０.４４ｍｍｏｌ、２当量）を加える。その直後、ＨＡＴＵ（１４１ｍｇ、０.３７ｍｍｏｌ、１.７当量）を加え、混合物を０℃で１５分間攪拌する。次いで、ＤＭＦ中の４−メチルモルホリンの１Ｍ溶液をさらに０.４４ｍｌ（０.４７ｍｍｏｌ、２当量）滴下する。次いで、混合物をＲＴで一晩攪拌する。混合物をセファデックスＬＨ２０で精製する（方法３、移動相：メタノール）。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）により精製する。収量：１４９ｍｇ（理論値の４３％）。
ＨＰＬＣ（方法９）：Ｒｔ＝3.93 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝2.13 分、ＭＳ（ESIpos.）：ｍ／ｚ（％）＝737.4 （100）［Ｍ＋２Ｈ］２＋, 1473 （2）［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３１】
具体的実施態様
実施例１
３−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｄ−アラニル−３−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）−リソバクチンビストリフルオロアセテート
【化２８】
2008518982.tif 000031
トリフルオロ酢酸（１５０ｍｌ）を、ＲＴでジクロロメタン（１５０ｍｌ）中の実施例８Ａからの化合物（１０.３ｇ、１.０当量、４.４８ｍｍｏｌ、粗生成物）の溶液にゆっくりと滴下する。反応混合物をＲＴで攪拌する（１０分）と、ＨＰＬＣ（方法９）手段により完全な変換が観察される。反応混合物をロータリー蒸発装置で濃縮し、分取ＨＰＬＣ（方法１１）により精製し、３.４８ｇ（理論値の４８％）の生成物を得る。
ＨＰＬＣ／ＵＶ−Ｖｉｓ（方法８）：Ｒｔ＝4.03分。
ＨＰＬＣ／ＵＶ−Ｖｉｓ（方法９）：Ｒｔ＝3.64分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝1.69分；ＭＳ（ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝697（100）［Ｍ＋２Ｈ］２＋, 1393 （5）［Ｍ＋Ｈ］＋；ＭＳ（ＥＳＩneg.）： ｍ／ｚ（％）＝695（100）［Ｍ−２Ｈ］2-, 1391 （20）［Ｍ−Ｈ］−。
１９Ｆ−ＮＭＲ （４００ＭＨｚ, ｄ５-ピリジン）：δ＝-67 （Ａｒ-ＣＦ３）, -74 （ＣＦ3ＣＯＯＨ）, -132 （レファレンスとして１,４−ジブロモテトラフルオロベンゼン）。ＴＦＡ含有率：14.3重量％。
ＨＲ−ＭＳ（方法１）：Ｃ62Ｈ96Ｎ16Ｏ17Ｆ3 ［Ｍ＋Ｈ］＋ 計算値 1393.7091,実測値 1393.7119。
【０１３２】
実施例２
３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）−リソバクチントリストリフルオロアセテート
【化２９】
2008518982.tif 000032
実施例１５Ａからの化合物（９.１２ｇ、４.９３ｍｍｏｌ、粗生成物）を、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸（６５ｍｌ；３０％溶液）中に取る。混合物をＲＴで２０分間攪拌する。溶媒を留出する。残さをオイルポンプ吸引下で乾燥し、次いでクロマトグラフィー（方法１４）により精製する。収量：５.５４ｇ（理論値の６７％）。
ＨＰＬＣ（方法９）：Ｒｔ＝3.32 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝1.41 分、ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝ 671.7 （100）［Ｍ＋２Ｈ］２＋。
ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ（方法１）：Ｃ60Ｈ97Ｎ16Ｏ17Ｓｉ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 計算値 1341.6987、実測値 1341.7019。
１Ｈ−ＮＭＲ（500ＭＨｚ,ｄ５-ピリジン）： δ ＝ -0.172 （s, 9H）, 0.611 （d, Ｊ ＝ 6.9 Hz, 3H）, 0.881 （d, J ＝ 7.9Hz, 3H）, 0.948 （d, Ｊ ＝ 6.3 Hz, 3H）, 0.954 - 0.997 （m, 6H）, 1.135 （d, Ｊ ＝ 6.0 Hz, 3H）, 1.208 （m, 2H）, 1.361 （d, Ｊ ＝ 5.4 Hz, 3H）, 1.439 （m, 1H）, 1.497 （m, 1H）, 1.953 （m, 2H）, 2.04 （m, 1H）, 2.154 （m, 3H）, 2.372 （m, 3H）, 3.111 （m, 1H）, 3.266 （m, 1H）, 3.563 （d, Ｊ＝ 14.95 Hz, 1H）, 3.726 （dd, Ｊ ＝ 12.2, 14.95 Hz, 1H）, 3.840 （d, Ｊ ＝ 9.6 Hz, 1H）, 3.960 （m, 1H）, 4.152 （m, 1H）, 4.198 （m, 1H）, 4.278 （m, 1H）, 4.382 （m, 1H）, 4.488 （m, 1H）, 4.565 （dd, Ｊ ＝ 9.5, 9.6 Hz, 1H）, 4.628 （m, 1H）, 4.630 （m, 1H）, 4.779 （d, Ｊ＝ 12.2 Hz, 1H）, 5.069 （m, 1H）, 5.159 （dd, Ｊ ＝ 9.3 Hz, 1H）, 5.264 （m, 1H）, 5.362 （s, 1H）, 5.98 （d, Ｊ ＝ 9.9 Hz, 1H）,6.351 （dd, Ｊ ＝ 8.5 Hz, Ｊ ＝ 8.7 Hz, 1H）, 7.169 （m, 1H）, 7.246 （m, 1H）, 7.382 （d, Ｊ ＝ 9.9 Hz, 1H）, 7.512 （m, 2H）, 7.583 - 7.614 （m, 2H）, 7.728 （m, 2H）, 7.90 （d, Ｊ ＝ 8.7 Hz, 1H）, 8.126 （m, 3H）, 8.341 （m, 1H）, 8.576 （d, J ＝ 3.6 Hz, 1H）, 8.695 （m, 2H）, 8.793 （m, 1H）, 9.139 （br s, 1H）, 9.715 （m, 1H）, 10.957 （br s, 1H）, 11.268 （br s, 1H）。
13Ｃ−ＮＭＲ （126ＭＨｚ、ｄ５-ピリジン）： δ ＝ -1.8, 11.08, 15.84, 18.8, 18.8, 19.79, 20.89, 20.93, 21.65, 23.38, 24.78, 26.57, 26.88, 28.80, 31.04, 34.06, 36.84, 40.95, 41.25, 44.38, 50.94, 52.82, 55.99, 56.10, 56.74, 58.40, 59.10, 60.34, 60.72, 62.33, 62.55, 70.72, 72.06, 75.58, 75.65, 123.66, 128.25, 128.95, 129.80, 132.39, 136.77, 137.18, 149.17, 158.11, 162.15, 162.41, 162.70, 162.96, 169.01, 169.69, 170.21, 172.57, 173.27, 173.44, 173.66, 174.07, 174.36, 175.34, 175.56。
１９Ｆ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ｄ５−ピリジン）： δ＝−74 （ＣＦ3ＣＯＯＨ）, -132（レファレンスとして１,４−ジブロモテトラフルオロベンゼン）。ＴＦＡ含有率：１９.３重量％。構造を単結晶Ｘ線構造解析により確認する。
【０１３３】
実施例３
３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）−リソバクチントリスメタンスルホネート
【化３０】
2008518982.tif 000033
３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリストリフルオロアセテート（４４７ｍｇ、０.２７ｍｍｏｌ）を、２２ｍｌの水に溶かす。メタンスルホン酸（７０％）を加える。混合物を激しく攪拌し、次いで凍結乾燥する。凍結乾燥物を水（３.４ｍｌ）中に取り、７０％メタンスルホン酸ナトリウム溶液（０.９ｍｌ）を加える。混合物をＲＴで１０分間攪拌する。次いで、生成物を遠心分離により除去する。４７２ｍｇの粗生成物を得る。
【０１３４】
幾つかのバッチから合わせた粗生成物（合計１０５３ｍｇ、０.６３ｍｍｏｌ）を水（５ｍｌ）に懸濁し、ＲＴで４日間攪拌する。遠心分離を反復し、得られた固体を真空中で乾燥する。５７５ｍｇ（理論値の５５％）の生成物を得る。
【０１３５】
ＨＰＬＣ（方法９）：Ｒｔ ＝3.30 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝1.49 分、ＭＳ（ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝ 671.8 （100）［Ｍ＋２Ｈ］２＋, 1342.1 （5） ［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ （５００ＭＨｚ、ｄ5-ピリジン）： δ ＝ -0.170 （s, 9H）, 0.702 （d, Ｊ ＝ 6.3 Hz, 3H）, 0.867 （d, Ｊ ＝ 6.1 Hz, 3H）, 0.972 （d, Ｊ ＝ 6.2 Hz, 3H）, 0.966 - 1.069 （m, 9H）, 1.186 （d, Ｊ ＝ 6.5 Hz, 3H）, 1.315 （m, 2H）, 1.448 - 1.501 （m, 6H）, 2.010 （m, 1H） , 2.084 （m, 3H）, 2.180 - 2.365 （m, 4H）, 2.540 （m, 1H）, 3.082 （s, 9H）, 3.166 （m, 1H）, 3.325 （m, 1H）, 3.623 （d, Ｊ＝ 14.05 Hz, 1H）, 3.865 （dd, Ｊ ＝ 13.7, 14.05 Hz, 1H）, 3.967 - 3.986 （m, 2H）, 4.257 （m, 1H）, 4.339 （m, 2H）, 4.410 （m, 1H）, 4.566 （m, 1H）, 4.591 - 4.686 （m, 2H）, 4.75 （d, 1 H, Ｊ ＝ 12.1 Hz, 1H）, 4.859 （m, 1H）, 5.086 （m, 1H）, 5.229 （m, 1H）, 5.348 （m, 1H）, 5.375 （s, 1H） 6.02 （d, Ｊ ＝ 10.0 Hz, 1H）, 6.403 （m, 1H）, 7.068 （d, Ｊ ＝ 9.8 Hz, 1H）, 7.222 （m, 3H）, 7.544 （m, 3H）, 7.625 （m, 1H）, 7.681 （m, 1H）, 7.830 （d, Ｊ ＝ 7.6 Hz, 1H）, 7.921 （d, Ｊ ＝ 9.35 Hz, 1H）, 8.071 （m, 2H）, 8.188 （br s, 1H）, 8.285 （br s, 1H）, 8.420 （d, Ｊ ＝ 8.4 Hz, 1H）, 8.614 （d, Ｊ ＝ 4.0 Hz, 1H）, 8.701 （m, 1H）, 8.874 （br s, 1H）, 10.175 （m, 1H）, 10.279 （m, 1H）, 10.941 （br s, 1H）。
１９Ｆ−ＮＭＲ （ピリジン、 400 ＭＨｚ, 方法２４）： δ -74.0 （s, ＴＦＡ, 0.20）, -132.0 （s, 1,4-ジブロモテトラフルオロベンゼン、 1000.0）,ＴＦＡ＝０.０２重量％。
【０１３６】
別法：３２ｇの Dowex １Ｘ８−４００（ＨＣｌ形態）を、カラム（直径３５ｍｍ）に充填する。約６０ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウム溶液をカラムに注いだ後、６０ｍｌのＨＰＬＣ水を注入する。この後、１Ｍメタンスルホン酸６０ｍｌでコンディショニングし、それに続いて溶出液が中和反応するまで、約１００ｍｌの水で洗浄する。（Macherey & Nagel Tritest）。次いで、２.００ｇ（１.１９ｍｍｏｌ）の３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリストリフルオロアセテート（実施例２）を、９０ｍｌの水に溶かし、溶液をローディングし、ゆっくりと溶出させる。カラムを約２０ｍｌの水で洗浄する。生成物含有溶出液を合わせ、精密濾過（孔サイズ０.２０μｍ）にかけ、凍結乾燥する。カラムを再コンディショニングおよび再使用する。実施例３の生成物１.７９ｇ（１.１０ｍｍｏｌ、理論値の９２％）が、実施例２の生成物２０００ｍｇ（１.１９ｍｍｏｌ）から得られる。
【０１３７】
実施例４
４,４−ジメチル−Ｄ−ノルロイシル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリストリフルオロアセテート
【化３１】
2008518982.tif 000034
実施例２２Ａからの化合物（１４９ｍｇ、０.０９ｍｍｏｌ）を、０.０５％トリフルオロ酢酸含有メタノール（１０ｍｌ）に溶かす。パラジウム・活性炭（１０％；２０ｍｇ）を加え、次いでＲＴで合計２.５時間、大気圧での水素により水素添加を実施する。粗生成物を濾過することにより、触媒を除去し、濾液を濃縮する。残さをクロマトグラフィー（方法１３）により精製する。収量：６８ｍｇ（理論値の４６％）。
ＨＰＬＣ（方法９）：Ｒｔ＝3.29 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝1.49 分、ＭＳ（ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝671.0 （100）［Ｍ＋２Ｈ］２＋, 1340 （5） ［Ｍ＋Ｈ］＋。
ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ（方法１）：Ｃ62Ｈ98Ｎ16Ｏ17［Ｍ＋Ｈ］+ 計算値 1339.7369、実測値 1339.7368。
【０１３８】
実施例５（比較例）
３−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリストリフルオロアセテート
【化３２】
2008518982.tif 000035
【０１３９】
実施例６
（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリス−塩酸塩
【化３３】
2008518982.tif 000036
３２ｇのDowex １Ｘ８−４００（ＨＣｌ形態）を、カラム（直径３５ｍｍ）に充填する。約６０ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウム溶液をカラムに注いだ後、６０ｍｌのＨＰＬＣ水を注入する。この後、６０ｍｌの１Ｍ塩酸でコンディショニングし、それに続いて溶出液が中和反応するまで約１００ｍｌの水で洗浄する。（Macherey & Nagel Tritest）。次いで、２.００ｇ（１.１９ｍｍｏｌ）の３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリストリフルオロアセテート（実施例２）を９０ｍｌの水に溶かし、溶液をローディングし、ゆっくりと溶出させる。カラムを約２０ｍｌの水で洗浄する。生成物含有溶出液を合わせ、精密濾過（孔サイズ０.２０μｍ）にかけ、凍結乾燥する。カラムを再コンディショニングおよび再使用する。実施例６の生成物１.５４ｇ（１.０６ｍｍｏｌ、理論値の８９％）が、実施例２の生成物２０００ｍｇ（１.１９ｍｍｏｌ）から得られる。
【０１４０】
ＨＰＬＣ（方法９）： Ｒｔ ＝3.30 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ ＝1.47分、ＭＳ（ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝671.5 （100） ［Ｍ＋２Ｈ］２＋, 1341.4 （20）, ［Ｍ＋Ｈ］＋。
イオンクロマトグラフィー（方法２５）：Ｃｌ− （計算値） ＝ 7.43％, Ｃｌ− 実測値 ＝ 7.1％； ＴＦＡ（実測値）＜ 0.1％。
１Ｈ−ＮＭＲ （500 MHz, ｄ５-ピリジン） δ ＝ -0.170 （s, 9H）, 0.580 （d, Ｊ ＝ 6.3 Hz, 3H）, 0.772 （d, Ｊ ＝ 5.7 Hz, 3H）, 0.920 （d, Ｊ ＝ 5.8 Hz, 3H）, 0.974 - 0.985 （m, 6H）, 1.147 （d, Ｊ ＝ 6.4 Hz, 3H）, 1.250 - 1.358 （m, 2H）, 1.411 （d, Ｊ ＝ 5.7 Hz, 3H）, 1.468 （m, 1H）, 1.604 （m, 1H）, 1.959 - 2.049 （m, 3H）, 2.154 - 2.228 （m, 3H）, 2.380 （m, 3H）, 2.935 （m, 1H）, 3.120 （m, 1H）, 3.300 （m, 1H）, 3.607 （d, Ｊ＝ 14.9 Hz, 1H）, 3.762 （dd, Ｊ＝ 14.7 Hz, 1H）, 3.882 （d, Ｊ ＝ 9.1 Hz, 1H）, 3.938 （m, 1H）, 4.204 （m, 1H）, 4.253 （m, 1H）, 4.389 （m, 1H）, 4.465 （m, 1H）, 4.589 - 4.661 （m, 4H）, 4.806 （d, Ｊ＝ 12.1 Hz, 1H）, 5.027 （m, 1H）, 5.202 （dd, Ｊ＝ 9.4 Hz, 1H）, 5.289 （m, 1H）, 5.390 （s, 1H）, 6.000 （d, Ｊ ＝ 9.5 Hz, 1H）、6.394 （dd, Ｊ＝ 9.0 Hz, 1H）, 7.173 （m, 2H）, 7.428 （m, 1H）, 7.54 （d, Ｊ ＝ 7.0 Hz, 1H）, 7.664 - 7.973 （m, 3H）, 7.767 （d, Ｊ ＝ 8.6, 1H）, 7.918 - 7.973 （m, 3H）, 8.038 （br s, 2H）, 8.098 （br s, 1H）, 8.185 （br s, 1H）, 8.253 （d, Ｊ ＝ 8.6 Hz, 1H）, 8.582 （m, 1H）, 8.684 （d, Ｊ ＝ 9.8 Hz, 1H）, 8.741 （br s, 1H）, 8.782 （m, 1H）, 9.928 （br s, 1H）, 10.272 （d, Ｊ ＝ 8.3 Hz, 1H）, 10.886 （br s, 1H）, 11.135 （br s, 1H）。
１９Ｆ−ＮＭＲ（ピリジン、４００ＭＨｚ、方法２４）：ＴＦＡ＜検出限界。
【０１４１】
実施例７
（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリス−Ｌ−ラクテート
【化３４】
2008518982.tif 000037
３２ｇのDowex １Ｘ８−４００（ＨＣｌ形態）を、カラム（直径３５ｍｍ）に充填する。約６０ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウム溶液をカラムに注いだ後、６０ｍｌのＨＰＬＣ水を注入する。この後、６０ｍｌの１Ｍ乳酸でコンディショニングし、それに続いて溶出液が中和反応するまで約１００ｍｌの水で洗浄する。（Macherey & Nagel Tritest）。次いで、２.００ｇ（１.１９ｍｍｏｌ）の３−（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリストリフルオロアセテート（実施例２）を９０ｍｌの水に溶かし、溶液をローディングし、ゆっくりと溶出させる。カラムを約２０ｍｌの水で洗浄する。生成物含有溶出液を合わせ、精密濾過（孔サイズ０.２０μｍ）にかけ、凍結乾燥する。カラムを再コンディショニングおよび再使用する。実施例７の生成物１９０３ｍｇ（１.１８ｍｍｏｌ、理論値の９９％）が、実施例２の生成物２０００ｍｇ（１.１９ｍｍｏｌ）から得られる。
【０１４２】
ＨＰＬＣ （方法９）： Ｒｔ ＝3.29 分。
ＬＣ−ＭＳ （方法７）： Ｒｔ＝ 1.38 分、ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝ 671.7 （100） ［Ｍ＋２Ｈ］２＋, 1341.8 （20）,［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ （500 ＭＨｚ,ｄ５−ピリジン）： δ＝ -0.170 （s, 9H）, 0.754 （d, Ｊ＝6.3 Hz, 3H）, 0.836 （d, Ｊ ＝ 6.1 Hz, 3H）, 0.922 （d, Ｊ ＝ 6.2 Hz, 3H）, 0.922 - 0.957 （m, 6H）, 1.054 （d, Ｊ ＝ 6.4 Hz, 3H）, 1.190 （m, 2H）, 1.416 （d, Ｊ ＝ 5.8 Hz, 3H）, 1.439 - 1.662 （m, 4H）, 1.529 （d, Ｊ ＝ 7.0 Hz, 3H）, 1.598 （d, Ｊ ＝ 6.5 Hz, 3H）, 1.669 （d, Ｊ ＝ 6.9 Hz, 3H）, 1.923 - 2.280 （m, 9H）, 3.057 （m, 1H）, 3.266 （m, 1H）, 3.564 （d, Ｊ＝ 14.5 Hz, 1H）, 3.761 （dd, Ｊ＝ 13.7 Hz, 1H）, 3.840 （m, 1H）, 4.049 （m, 1H）, 4.109 （m, 1H）, 4.164 （m, 1H）, 4.202 （m, 1H）, 4.410 （m, 1H）, 4.484 （m, 1H）, 4.616 （dd, Ｊ ＝ 6.7, 13.6 Hz, 1H）, 4.656 （m, 1H）, 4.669 （dd, Ｊ ＝ 7.0, 13.9 Hz, 1H）, 4.780 （d, Ｊ＝ 13.0 Hz, 1H）, 4.921 （m, 1H）, 5.144 （dd, Ｊ＝ 9.6 Hz, 1H）, 5.281 （m, 1H）, 5.363 - 5.426 （m, 3H） 5.362 （s, 1H）, 5.989 （d, Ｊ ＝ 9.8 Hz, 1H）, 6.323 （m, 1H）, 7.122 （m, 1H）, 7.180 （m, 1H）, 7.381 （m, 1H）, 7.596 （m, 1H）, 7.671 - 7.925 （m, 6H）, 8.036 （br s, 1H）, 8.208 （m, 3H）, 8.412 （m, 1H）, 8.551 （d, Ｊ ＝ 3.6 Hz, 1H）, 8.714 （m, 2H）, 8.794 （m, 1H）, 10.298 （br s, 1H）, 10.938 （br s, 1H）.
１９Ｆ−ＮＭＲ（ピリジン、４００ＭＨｚ、方法２４）：ＴＦＡ＜検出限界。
【０１４３】
実施例８
（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチントリス−Ｄ−タートレート
【化３５】
2008518982.tif 000038
イオン交換体のコンディショニング：溶出液がアルカリ反応を示すまで、５ｇの DOWEX １Ｘ８ ４００（ＨＣｌ塩）を１Ｍ水酸化ナトリウム溶液で洗浄する。この後、溶出液が酸性反応を示すまで、２カラム容量の水、次いで１ＭのＤ−酒石酸で洗浄する。この後、溶出液が中性になるまで水で洗浄する（Macherey & Nagel Tritest）。
【０１４４】
次いで、実施例２の生成物１００ｍｇ（５９μｍｏｌ）を、１０ｍｌの水に溶かし、カラムにローディングする。それに続いて、約１０ｍｌの水数回分で洗浄する。前駆物質は僅かしか溶けず、一部はカラムに残存する。生成物含有溶出液フラクションを合わせ、凍結乾燥する。５７ｍｇ（３１μｍｏｌ、理論値の５２％）の生成物を得る。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを統合すると、（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチン：Ｄ−酒石酸について１：３という化学量論が示される。
【０１４５】
ＨＰＬＣ（方法 ９）：Ｒｔ ＝ 3.29 分。
ＬＣ−ＭＳ（方法 ７）：Ｒｔ ＝ 1.37 分、ＭＳ （ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝671.7 （100） [Ｍ＋２Ｈ]２＋, 1341.9 （20）,［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ （500 MHz, ｄ５-ピリジン）： δ ＝ -0.172 （s, 9H）, 0.597 （d, Ｊ ＝ 6.3 Hz, 3H）, 0.776 （d, Ｊ ＝ 5.7 Hz, 3H）, 0.924 （d, Ｊ ＝ 5.8 Hz, 3H）, 0.954 - 0.997 （m, 6H）, 1.173 （d, Ｊ ＝ 5.7 Hz, 3H）, 1.303 （m, 2H）, 1.434 （d, Ｊ ＝ 5.7 Hz, 3H）, 1.468 （m, 1H）, 1.632 （m, 1H）, 1.972 （m, 2H）, 2.051 （1H, m）, 2.174 （m, 3H）, 2.402 （m, 3H）, 3.129 （m, 1H）, 3.305 （m, 1H）, 3.602 （d, Ｊ＝ 15.2 Hz, 1H）, 3.799 （dd, Ｊ＝ 14.6 Hz, 1H）, 3.893 （d, Ｊ ＝ 12.3 Hz, 1H）, 3.967 （m, 1H）, 4.228 （m, 1H）, 4.276 （m, 1H）, 4.409 （m, 1H）, 4.468 （m, 1H）, 4.578 - 4.669 （m, 4H）, 4.791 （d, Ｊα,β ＝ 11.5 Hz, 1H）, 5.044 （m, 1H）, 5.226 （dd, Ｊ＝ 9.4 Hz, 1H）, 5.190 （m, 1H）, 5.362 （s, 1H）, 5.417 （s, 6H）, 5.997 （d, Ｊ ＝ 9.7 Hz, 1H）, 6.403 （dd, Ｊ＝ 8.9 Hz, 1H）, 7.182 （m, 1H）, 7.551 - 8.210 （m, 13H）, 8.589 （d, Ｊ ＝ 3.6 Hz, 1H）, 8.711 （d, Ｊ ＝ 10.0 Hz, 1H）, 8.782 （m, 2H）, 9.902 （br s, 1H）, 10.358 （m, 1H）, 10.882 （br s, 1H）, 11.093 （br s, 1H）。
【０１４６】
実施例９
（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチン
【化３６】
2008518982.tif 000039
ポリマー結合炭酸水素塩ＰＬ−ＨＣＯ３（Polymer Labs、容量１.８ｍｍｏｌ／ｇ）をカラムに充填する。３９６ｍｇ（１２当量の炭酸水素塩に相当）の樹脂を用いて、実施例２の化合物１００ｍｇ（５９μｍｏｌ）と反応させる。樹脂をピリジンで洗浄する。次いで、ピリジン（０.７５ｍｌ）中の実施例２の溶液（１００ｍｇ、５９μｍｏｌ）を、カラムに注入し、ゆっくりと溶出させる。カラムをまずさらなるピリジン（２ｍｌ）、次いで水（約２ｍｌ）で洗浄する。溶出液を全て合わせ、入熱せずにオイルポンプ吸引下で濃縮する。ガラス質樹脂を数滴の水に溶かし、即刻凍結乾燥する。無色非結晶性粉末として標記化合物を得る。
ＨＰＬＣ （方法 ９）： Ｒｔ ＝ 3.30 分。
ＬＣ−ＭＳ （方法 ７）：Ｒｔ ＝ 1.49 分。ＭＳ （ＥＳＩpos.）： ｍ／ｚ（％）＝ 671.8 （100） ［Ｍ＋２Ｈ］２＋, 1341.9 （10）, ［Ｍ＋Ｈ］+, ＭＳ （ＥＳＩneg）： ｍ／ｚ（％）＝ 669.9 （100） ［Ｍ−２Ｈ］2-, 1340.0 （100） Ｍ−Ｈ］-。
19Ｆ−ＮＭＲ（ピリジン、４００ＭＨｚ、方法２４）：ＴＦＡ２.９％。
【０１４７】
実施例１０
（トリメチルシリル）−Ｄ−アラニル−３−（ピリジン−３−イル）−Ｌ−アラニル−デ（１−Ｄ−ロイシル−２−Ｌ−ロイシル）リソバクチンメシレートトリフルオロアセテート
【化３７】
2008518982.tif 000040
ＲＴでＴＦＡ−ドープ水から実施例３の生成物を再結晶化することにより（溶液の緩慢な蒸発）、標記化合物が結晶性物質として得られる。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ ＝1.41 分。ＭＳ（ＥＳＩpos.）：ｍ／ｚ（％）＝ 671.9 （100）［Ｍ＋２Ｈ］2+, 1342.1 （10）, ［Ｍ＋Ｈ］+, ＭＳ（ＥＳＩneg）：ｍ／ｚ（％）＝669.9 （100）［Ｍ−２Ｈ］2-, 1340.1 （80）Ｍ−Ｈ］-。
ＨＲ−ＴＯＦ−ＭＳ（方法１）：Ｃ60Ｈ97Ｎ16Ｏ17Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］+ 計算値 1341.6982, 実測値 1341.7006。
単結晶Ｘ線構造解析により構造および塩形態を確認する。
【０１４８】
Ｂ．生理学的活性の評価
本発明化合物のインビボ活性は、以下の検定法で立証され得る：
最小阻害濃度（ＭＩＣ）の測定：
ＮＣＣＬＳガイドラインに従って液体希釈試験でＭＩＣを測定する。スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）１３３、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）２７１５９、エンテロコッカス・フェシウム（E.faecium）４１４７およびストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus pneumoniae）Ｇ９aの一晩培養物を、１：２希釈系列で記載された試験物質とインキュベーションする。Isosensitest 培地（Difco、アーヴィン／米国）中１ｍｌ当たり１０５微生物の細胞数によりＭＩＣ測定を実施するが、ただし、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus pneumoniae）については、１ｍｌ当たり１０６微生物の細胞数で１０％牛血清含有ＢＨＩブロス（Difco、アーヴィン／米国）において試験する。培養物を３７℃で１８〜２４時間、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus pneumoniae）については１０％ＣＯ２の存在下でインキュベーションする。
【０１４９】
目に見える細菌の成長がそれ以上起こらないそれぞれの場合における最低物質濃度を、ＭＩＣとして定義する。ＭＩＣ値をμｇ／ｍｌで記録する。
【０１５０】
本発明化合物に関する典型的インビトロ活性データおよびｆｕデータを表Ａに示す：
表Ａ
2008518982.tif 000041
【０１５１】
細菌感染症の処置についての本発明化合物の適合性は、以下の動物モデルにおいて立証され得る。
【０１５２】
スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）１３３による全身感染
スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）１３３の細胞を、ＢＨＩブロス（Oxoid、ニューヨーク／米国）において一晩生育する。一晩培養物を、新鮮なＢＨＩブロス中で１：１００に希釈し、３時間インキュベーションする。次いで、対数成長期にある細胞を遠心分離にかけ、緩衝生理食塩水で２回洗浄する。次いで、食塩水中の細胞懸濁液を、測光法により５０単位の吸光度に調節する。希釈（１：１５）段階後、懸濁液を１：１で１０％ムチン溶液と混合する。この感染液０.２５ｍｌ／２０ｇマウスを、腹腔内投与する（１×１０６微生物／マウスに相当）。感染の３０分後、腹腔内または静脈内経路により治療を実施する。雌ＣＦＷ１マウスを感染実験に使用する。動物の生存を、６日間にわたって記録する。
【０１５３】
腎臓耐容性に関する本発明化合物の特性は、以下の動物モデルにおいて立証され得る：
腎毒性作用測定用マウスモデル
ノナデプシペプチドの腎毒性副作用を、特定用量の多剤投与後のマウスにおいて腎臓の組織病理学的試験により分析する。このため、５〜６動物を、水溶液に溶かしたかまたはソルトールを加えた物質により静脈内（ｉ.ｖ.）または腹腔内（ｉ.ｐ.）経路で毎日処置する。腎臓のヘマトキシリンおよびエオシン（H & E）染色パラフィン切片の光学顕微鏡評価により、腎毒性作用を測定する。糖タンパク質の視覚化をより明確にするため、所望により「過ヨウ素酸シッフ」（ＰＡＳ）反応を実施してもよい。腎細管好塩基球増加症および変性／再生発生の重症度として（重症度：０＝作用無し、１＝極微の作用、１＝軽微な作用、３＝中等度の作用、４＝重症病変）腎毒性作用を各動物について半定量的に定義する。腎細管変性／再生の平均重症度および発病率（罹患動物の数）を、各動物群または誘導体について計算する。これを凌ぐ腎臓変化、例えば腎細管拡張および壊死並びに壊死物質の蓄積も同様に列挙する。
【０１５４】
腎毒性作用測定用ラットモデル
ノナデプシペプチドの腎毒性副作用を、特定用量の多剤投与後のラットにおいて腎臓の組織病理学的試験により分析する。このため、５動物を、食塩水またはリンガー乳酸溶液に溶かした物質により静脈内（ｉ.ｖ.）経路で毎日処置する。腎臓のヘマトキシリンおよびエオシン（H & E）染色パラフィン切片の光学顕微鏡評価により、腎毒性作用を測定する。糖タンパク質の視覚化をより明確にするため、所望により「過ヨウ素酸シッフ」（ＰＡＳ）反応を実施してもよい。腎細管好塩基球増加症および変性／再生発生の重症度として（重症度：０＝作用無し、１＝極微の作用、１＝軽微な作用、３＝中等度の作用、４＝重症病変）腎毒性作用を各動物について半定量的に定義する。腎細管変性／再生の平均重症度および発病率（罹患動物の数）を、各動物群または誘導体について計算する。これを凌ぐ腎臓変化、例えば腎細管拡張および壊死並びに壊死物質の蓄積も同様に列挙する。
【０１５５】
Transilによる非結合型分率の測定原理
試験物質の非結合型分率（ｆｕ）測定についての本明細書記載の方法は、２部分に分けられる：
ａ）Transil（登録商標）緩衝液（ｐＨ７.４）分散液中で試験物質をインキュベーションし、それに続いて分散液および緩衝液上清における濃度を測定することによる、Transil（登録商標）／緩衝液分配比（ＭＡｂｕｆｆｅｒ）の測定。
ｂ）Transil（登録商標）血漿分散液中で試験物質をインキュベーションし、それに続いて分散液および血漿中における濃度を測定することによる、Transil（登録商標）／血漿分配比（ＭＡｐｌａｓｍａ）の測定。
２つの分配比の商によりｆｕが与えられる。
【０１５６】
物質が高度タンパク質結合している場合、通常、血漿を等張リン酸緩衝液（ｐＨ７.４）で希釈し、次いで Transil（登録商標）により懸濁する。この希釈タンパク質溶液におけるｆｕ'（希釈血漿中における非結合型分率）の測定も、ｆｕの測定と同じ要領で行う。未希釈血漿における非結合型分率を、ｆｕ’および希釈係数から計算する。
【０１５７】
この方法に関しては、以下の文献についても参照：Shuhmacher、Joachim; Kohlsdorfer、Christian; Buehner、Klaus; Brandenburger、Tim; Kruk、Renate、“High-throughput determination of the free fraction of drugs strongly bound to plasma proteins”、Journal of Pharmaceutical Sciences ２００４、９３、８１６−８３０。
【０１５８】
Transil（登録商標）および緩衝液間での分配（ＭＡｂｕｆｆｅｒ）後における試験物質の膜親和力の測定。
インキュベーションは全て、適切なガラス容器、例えばガラス瓶、底部連結試験管中で実施される。総体積は、通常０.５〜５ｍｌであり、Transil（登録商標）の体積は１０〜１００μｌである。膜親和力が高いと予測される場合、Transil（登録商標）分散液は、ｐＨ７.４のリン酸緩衝液、例えばダルベッコのＰＢＳで２０倍以下に希釈され得る。ｐＨ７.４のリン酸緩衝液をインキュベーション容器に入れ、十分に混合した後、Transil（登録商標）をピペットで移す。試験物質を例えば２００ｎｇ／ｍｌの濃度、ｎ＝６でピペットにより移し入れる。有機溶媒の比率は２％以下とするべきである。混合物を室温で、３０分間、約４００ｒｐｍ、角度約４５°で小型振とう器においてインキュベーションする。例えば１００μｌの少なくとも１アリコートを取ることにより、１００％値を決定し、残りの混合物を約１８００ｇで約１０分間遠心分離にかける。少なくとも２アリコート（例、１００μｌ）の上清を、濃度測定用に各試料から採取する。
【０１５９】
未希釈または希釈血漿におけるＭＡｐｌａｓｍａの測定：
総インキュベーション体積およびTransil（登録商標）の追加体積は、予測される非結合型分率により変化する。総体積は通常０.５〜１ｍｌであり、Transil（登録商標）体積は１０〜１００μｌである。非結合型分率が非常に低い場合、研究する種の血漿を、ｐＨ７.４の等張緩衝液で例えば１０〜４００倍に希釈し、次いで Transil（登録商標）を加える。後続手順は、ＭＡｂｕｆｆｅｒ値測定についての上記要領と同じである。
【０１６０】
限外濾過による非結合型分率測定の原理：
研究する種の血漿を、半透膜により濾過する。濾液中の物質の濃度を測定し、非結合型分率ｆｕをそこから算出する。Millipore／Amicon からの Centrifree マイクロパーティションシステムを使用する。限外濾過膜は、３００００Ｄａの排除サイズを有する。１ｍｌの血漿を、約１μｇ／ｍｌの濃度の物質で処理する。溶媒の比率は２％未満とするべきである。室温で３０分間インキュベーション後、血漿をピペットで限外濾過システムへ移し入れ、１８００ｇで１０分間の遠心分離にかける。限外濾液における物質濃度（Ｃｕ；未結合物質濃度）および遠心分離前の血漿における同濃度（Ｃ；総物質濃度）を測定する。非結合型分率を、式：ｆｕ（％）＝Ｃｕ／Ｃ＊１００により算出する。
【０１６１】
Ｃ．医薬組成物の実施態様
本発明化合物は、以下の方法で医薬製剤に変換され得る：
錠剤：
組成：
実施例１の化合物１００ｍｇ、乳糖（一水和物）５０ｍｇ、コーンスターチ（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）（ＢＡＳＦ、ドイツ国ルドヴィヒシャーフェン）１０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ。直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
【０１６２】
製法：
有効成分、乳糖および澱粉の混合物を、水中ＰＶＰの５％溶液（ｍ／ｍ）により造粒する。顆粒を乾燥し、次いでステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を慣用的錠剤機により圧縮する（錠剤の形式については上記参照）。圧縮に使用される圧縮力に関するガイドラインは１５ｋＮである。
【０１６３】
経口投与され得る懸濁液：
組成：
実施例１の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、ロージゲル（Rhodigel）（米国ペンシルベニア、ＦＭＣによるキサンタンガム）４００ｍｇおよび水９９ｇ。
【０１６４】
経口懸濁液１０ｍｌは、本発明化合物１００ｍｇの単一用量に相当する。
【０１６５】
製法：
ロージゲルをエタノールに懸濁し、活性化合物を懸濁液に加える。攪拌しながら水を加える。ロージゲルの膨張が完了するまで、混合物を約６時間攪拌する。
【０１６６】
静脈内投与され得る溶液：
組成：
実施例１の化合物１００〜２００ｍｇ、１５ｇのポリエチレングリコール４００および注射用水２５０ｇ。
【０１６７】
製法：
実施例１の化合物をポリエチレングリコール４００と一緒に攪拌しながら水に溶かす。溶液を濾過（孔直径０.２２μｍ）により滅菌し、無菌条件下で加熱滅菌注入瓶へ分配する。同瓶を注入栓およびクリンプキャップで密閉する。
【国際調査報告】
2008518982.tif 000046
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2008518982.tif 000049
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2008518982.tif 000051
2008518982.tif 000052
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