(57)【要約】  ４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウの葉の抽出物を調製するための方法、この方法によって得られる、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウ抽出物、およびその使用が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウの葉の抽出物を調製するための方法であって、下記工程、すなわち、
（ａ）溶媒中でイチョウ抽出物溶液を調製する工程、
（ｂ）前記溶液を吸着樹脂へ適用した後、溶媒を用いて、前記吸着樹脂から精製抽出物を溶出させて除去されるべきビフラボンを前記吸着樹脂に残す工程、および／または、
（ｃ）前記溶液を酸性イオン交換体へ適用した後、溶媒を用いて、前記イオン交換体から精製抽出物を溶出させて除去されるべき４’−Ｏ−メチルピリドキシンを前記イオン交換体に残す工程、および任意に、
（ｄ）前記抽出物溶液を濃縮および乾燥させることによって乾燥抽出物を得る工程、
を含んでなり、そして
工程（ｂ）および工程（ｃ）は、逆の順序で実施されてもよい、
ことを特徴とする前記方法。
【請求項２】
工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）における溶媒は、独立して、炭素数が１〜３の含水アルカノールおよび炭素数が３〜６の含水ケトンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アルカノールはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノールであり、前記ケトンはアセトンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
含水量が３０〜７０重量％の範囲内にある、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）における溶媒の含水量は等しいかまたは異なっている、請求項２〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記吸着樹脂は、スチレンおよびジビニルベンゼンを基礎とする共重合体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記吸着樹脂は、臭素化スチレンおよびジビニルベンゼンを基礎とする共重合体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記イオン交換体は、強酸性イオン交換体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の方法によって得られうる、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウ抽出物。
【請求項１０】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、最大で２０ｐｐｍである、請求項９に記載の抽出物。
【請求項１１】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、最大で１０ｐｐｍである、請求項９に記載の抽出物。
【請求項１２】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、最大で５ｐｐｍである、請求項９に記載の抽出物。
【請求項１３】
ビフラボンの含有量は、原抽出物の元値の最大で２５％である、請求項９〜１２のいずれかに記載の抽出物。
【請求項１４】
ビフラボンの含有量は、原抽出物の元値の最大で１１％である、請求項９〜１２のいずれかに記載の抽出物。
【請求項１５】
ビフラボンの含有量は、原抽出物の元値の最大で６％である、請求項９〜１２のいずれかに記載の抽出物。
【請求項１６】
請求項９〜１５のいずれかに記載の抽出物の、認知症およびその症状および／または脳および末梢血液循環障害の治療のための薬剤、食品または他の調合物の調製のための使用。
【請求項１７】
請求項９〜１５のいずれかに記載のイチョウ抽出物を含有することを特徴とする薬剤、食品または他の調合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウの葉の抽出物を調製するための方法であって、下記工程、すなわち、
（ａ）溶媒中でイチョウ抽出物溶液を調製する工程、
（ｂ）前記溶液を吸着樹脂へ適用した後、溶媒を用いて、前記吸着樹脂から精製抽出物を溶出させて除去されるべきビフラボンを前記吸着樹脂に残す工程、および／または、
（ｃ）前記溶液を酸性イオン交換体へ適用した後、溶媒を用いて、前記イオン交換体から精製抽出物を溶出させて除去されるべき４’−Ｏ−メチルピリドキシンを前記イオン交換体に残す工程、および任意に、
（ｄ）前記抽出物溶液を濃縮および乾燥させることによって乾燥抽出物を得る工程、
を含んでなり、そして
工程（ｂ）および工程（ｃ）は、逆の順序で実施されてもよい、
ことを特徴とする方法に関する。
【０００２】
さらに本発明は、本発明による前記方法によって得られうる、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウ抽出物、およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
何十年にもわたって、イチョウの葉からの抽出物は薬物として利用されている。現在、それら抽出物は、異なる種類の認知症およびその症状ならびに脳および末梢血液循環障害の治療に利用されている。その効力に関与している成分は、テルペンラクトン（ギンゴライドＡ、ＢおよびＣおよびビロバライド）およびフラボンのグリコシド（ケルセチン、ケンペロールおよびイソラムネチン）である。しかしながら、イチョウの葉には、所望の効力には寄与しないが危険や副作用をもたらす可能性のある成分も含まれている。ギンコール酸のごとき非寒帯植物成分に加えて、それらの成分は、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよびビフラボンである。効能があると同時に可能な限り安全で可能な限り副作用が少ないイチョウ抽出物には、これらの化合物は、できる限り存在してはならない。４’−Ｏ−メチルピリドキシンは、痙攣発作および意識不明のごとき中毒症状を発症させる原因となり得る。従って、この化合物もギンコトキシンと呼ばれる。イチョウに含有されるビフラボンは、免疫毒性を示し、接触アレルギーを誘発することがある。イチョウに含有されるこれらビフラボンは、主に、アメントフラボン、ビロベチン、ギンゲチン、イソギンゲチンおよびシアドピチシンといった化合物である。
４’−Ｏ−メチルピリドキシン：
【０００４】
【化１】
2008540355.tif 000002
【０００５】
ビフラボン：
【０００６】
【化２】
2008540355.tif 000003
【０００７】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよびビフラボンを除去するための方法および得られる抽出物は、ＥＰ１０３７６４６Ｂ１にすでに記載されている。その文献では、４’−Ｏ−メチルピリドキシンは酸性カチオン交換体を用いて保持され、ビフラボンは活性炭に吸着される。これらの除去工程は、ＥＰ１０３７６４６Ｂ１による方法の工程ｆ）（３ページ目）の後、すなわち、「溶液を鉛化合物または不溶性ポリアミドで処理した」後で実施されることが好ましい。
ＥＰ１０３７６４６Ｂ１では、ビフラボンおよび４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去は、前記方法における一段階（工程ｆ））において実施される。ここでは、鉛塩およびアンモニウム塩が比較的高い含有率で存在するので、使用するイオン交換体を増量させなければならない。
しかしながら、この方法は、複雑な一連の後処理工程に限定される。
【０００８】
さらに、ビフラボンおよび４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去は、組み合わせでのみ、記載およびクレームされている。しかしながら、将来的に設けられる可能性がある制限によっては、および、抽出物の組成の変更を最小限にするという要件に鑑みると、ビフラボンのみ、あるいは、４’−Ｏ−メチルピリドキシンのみを除去することが望ましいことがあり得る。
さらに、前記除去は、４’−Ｏ−メチルピリドキシンの場合、単一のイオン交換体（Ｍｅｒｃｋ  Ｉ）を用いた除去のみが記載されており、ビフラボンの場合、単一の吸着剤（活性炭）を用いた除去のみが記載されている。この用途において、活性炭には、一般的に、非常に選択的な方法では結合せず、かつ、再生することができないという欠点がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、本発明の目的は、イチョウ抽出物を調製するための方法であって、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンを原抽出物と比べてできる限り除去することができ、その上、単純かつ費用効率の高い方法で実施することができる前記調製方法を提供することである。本発明のさらなる対象は、この方法に従って得られうるイチョウ抽出物である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
この目的は、ビフラボンを吸着樹脂によって分離すること、および／または、４’−Ｏ−メチルピリドキシンを酸性イオン交換体によって分離することによって達成することができる。
【００１１】
本発明による方法では、下記工程、すなわち、
（ａ）好適な溶媒中でイチョウ抽出物溶液を調製する工程、
（ｂ）前記溶液を吸着樹脂へ適用した後、好適な溶媒を用いて前記吸着樹脂から精製抽出物を溶出させる（除去されるべきビフラボンは前記吸着樹脂に残り、前記樹脂が再利用できるようにアセトンのごとき有機溶媒を用いて前記樹脂から溶出させてもよい）工程、
および／または、
（ｃ）前記溶液を酸性イオン交換体へ適用した後、好適な溶媒を用いて前記イオン交換体から精製抽出物を溶出させる（除去されるべき４’−Ｏ−メチルピリドキシンは前記イオン交換体に残り、前記イオン交換体が再利用できるように含水塩酸の如き酸を用いて前記イオン交換体から洗い流してもよい）工程、
および任意に、
（ｄ）前記抽出物溶液を濃縮および乾燥させることによって乾燥抽出物を得る工程、
が実施される。ここで、
工程（ｂ）および工程（ｃ）は、逆の順序で実施されてもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）における特に好適な溶媒は、独立して、（アセトン、２−ブタノンのごとき）炭素数が３〜６の含水ケトンおよび（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールおよびイソプロパノールのごとき）炭素数が１〜３のアルカノールである。含水アセトンおよびエタノールが好ましく、濃度が３０〜６０重量％であることが好ましい。工程（ｂ）における好ましい吸着樹脂は、ダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）  ＨＰ−２０、ＨＰ−２１またはセパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）  ＳＰ−２０７およびＳＰ−８５０のごとき、任意に置換されたスチレン／ジビニルベンゼンを基礎とする樹脂である。特に好ましい吸着樹脂は、スチレンおよびジビニルベンゼンを基礎とする共重合体および臭素化スチレンおよびジビニルベンゼンを基礎とする共重合体である。工程（ｃ）における好ましいイオン交換体は、メルク（Ｍｅｒｃｋ）  Ｉまたはアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０のごとき、強酸性イオン交換体である。
元値を求めるために用いられる原抽出物は、原溶液（工程（ａ）によるイチョウ抽出物溶液）を乾燥させて乾燥抽出物にすることによって得られる。
【００１３】
本発明方法の工程（ｂ）において、使用される樹脂の量および使用される溶媒の極性または組成は、抽出物の所望の成分を、ビフラボンは前記樹脂に残しながら、前記樹脂からできる限り溶出させるように調節されなければならない。これにより、溶媒中の水の含有量が高いほど、ビフラボンの除去率が高くなる、すなわち、ビフラボンが樹脂に残ることになる。抽出物の溶解性に応じて、溶媒の含水量は、３０〜７０重量％という上記範囲内である。
【００１４】
吸着樹脂によって４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンから分離されるべき（工程（ａ）によるまたは工程（ａ）から得られるイチョウ抽出物溶液の形態にある）原抽出物として、下記が考えられる。
・  乾燥したイチョウの葉を、有機溶媒または有機溶媒と水との混合物、例えば、エタノール／水混合物またはアセトン／水混合物を用いて抽出することによって、それ自体が公知である方法、例えば、ヨーロッパ薬局方に従って調製された単層抽出物、または
・  １つ以上のさらなる工程により、下層の単層抽出物とは組成が大なり小なり異なる抽出物（いわゆる特殊抽出物）。
後者の抽出物は、例えば、ＥＰ３６０５５６Ｂ１に記載の液液分配によって、工程（ａ）〜（ｃ）のごときＥＰ４３１５３５Ｂ１に記載の幾つかの工程、または、ＥＰ４３１５３５Ｂ１あるいはＵＳ６１１７４３１記載の全方法によって調製することができる。
工程（ａ）によるイチョウ抽出物溶液は、抽出物の製造方法から直接得ることもできるし、乾燥抽出物または他の抽出物を溶解することによって得ることもできる。
【００１５】
本発明のさらなる対象は、抽出物、とりわけ、本発明の方法によって得られうる、かつ、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が用いられる原抽出物に比べて低減されていることを特徴とする乾燥抽出物である。４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、本発明による抽出物の場合、最大で２０ｐｐｍ、好ましくは最大で１０ｐｐｍ、とりわけ最大で５ｐｐｍである。ビフラボンの含有量は、原抽出物の元値の最大で２５％、好ましくは最大で１１％、とりわけ最大で６％である。
ヨーロッパ薬局方によれば、乾燥抽出物は、一般に、少なくとも９５重量％の乾燥残留物を有する。
【００１６】
本発明による抽出物は、粉末、顆粒、錠剤、糖衣錠（コーティングされた錠剤）またはカプセルの形態で、好ましくは経口で、投与することができる。錠剤を調製するには、抽出物を、好適な薬学的に許容範囲にあるアジュバント、例えばラクトース、セルロース、二酸化ケイ素、クロスカルメロースおよびステアリン酸マグネシウムと混ぜ合わせ、プレス成形して錠剤にし、任意に前記錠剤に、例えばヒドロキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、顔料（例えば二酸化チタン、酸化鉄）および滑石粉から成る好適なコーティングを施す。また、本発明による抽出物はカプセルに充填してもよく、その際に任意に安定剤、充填剤等のごときアジュバントを添加してもよい。投与量としては、１日当たり、１〜２，０００ｍｇ、好ましくは５０〜１，０００ｍｇ、特に好ましくは１００〜５００ｍｇの抽出物が投与される。
【００１７】
さらに、本発明の対象は、これらの抽出物と、任意に活性成分および／またはアジュバントのごとき他の物質とを含有する薬剤、食品または他の製剤である。ここで用いられる「食品」という用語は、特に、ダイエット食品、栄養補助食品ならびに医療食品および健康補助食品を指す。
【実施例】
【００１８】
比較例１および本発明による実施例１〜３のための原溶液
２００ｇの乾燥および粉末化されたイチョウ葉を、その重量（ｗ／ｗ）の７倍のエタノール／水（６０／４０）（ｗ／ｗ）を用いて、約５０℃の温度で２度抽出し、ろ過した。
【００１９】
比較例１（原抽出物としての単層抽出物の調製）
上記で得られた原溶液の２５％を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。１４．０ｇ（乾燥葉に基づいて２８．０％）。
本発明による実施例１（ビフラボンの除去）
上記で得られた原溶液の２５％を、１００ｍｌのセパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）  ＳＰ−８５０吸着樹脂を備えたカラムに適用し、３００ｍｌの４０ｗｔ％エタノールで溶出させた。溶出液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。１１．５ｇ（乾燥葉に基づいて２３．０％）。
【００２０】
本発明による実施例２（４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去）
上記で得られた原溶液の２５％を、２０ｍｌの強酸性イオン交換体であるアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０を備えたカラムに適用し、６０ｍｌの６０ｗｔ％エタノールで溶出させた。溶出液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。１３．０ｇ（乾燥葉に基づいて２６．０％）。
【００２１】
本発明による実施例３（ビフラボンおよび４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去）
上記で得られた原溶液の２５％を、１００ｍｌのセパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）  ＳＰ−８５０吸着樹脂を備えた第１カラムに適用し、３００ｍｌの４０ｗｔ％エタノールで溶出させた。溶出液を、２０ｍｌの強酸性イオン交換体であるアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０を備えた第２カラムに適用し、１００ｍｌの４０ｗｔ％エタノールで溶出させた。得られた溶液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。１０．１ｇ（乾燥葉に基づいて２０．２％）。
【００２２】
比較例２および本発明による実施例４〜６のための原溶液
２００ｇの乾燥および粉末化されたイチョウ葉を、その重量（ｗ／ｗ）の７倍のエタノール／水（６０／４０）（ｗ／ｗ）を用いて、約５０℃の温度で２度抽出し、ろ過した。抽出物溶液を高濃縮し（１４５ｇ）、水で約４００ｇにまで希釈し、１０℃で約１９時間貯蔵した。形成された沈殿物をろ過により取り除いた。
【００２３】
比較例２（原抽出物としての特殊抽出物の調製）
上記で得られた原溶液の２５％を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。９．４ｇ（乾燥葉に基づいて１８．８％）。
【００２４】
本発明による実施例４（ビフラボンの除去）
上記で得られた原溶液の２５％を、５０ｍｌのセパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）  ＳＰ−２０７吸着樹脂を備えたカラムに適用し、１５０ｍｌの４０ｗｔ％エタノールで溶出させた。溶出液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。９．４ｇ（乾燥葉に基づいて１８．８％）。
【００２５】
本発明による実施例５（４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去）
上記で得られた原溶液の２５％を、２０ｍｌの強酸性イオン交換体であるアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０を備えたカラムに適用し、１００ｍｌの４０ｗｔ％エタノールで溶出させた。溶出液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。８．７ｇ（乾燥葉に基づいて１７．４％）。
【００２６】
本発明による実施例６（ビフラボンおよび４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去）
上記で得られた原溶液の２５％を、５０ｍｌのセパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）  ＳＰ−２０７吸着樹脂を備えた第１カラムに適用し、１５０ｍｌの４０ｗｔ％エタノールで溶出させた。溶出液を、２０ｍｌの強酸性イオン交換体であるアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０を備えた第２カラムに適用し、１００ｍｌの４０ｗｔ％エタノールで溶出させた。得られた溶液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥させた。８．３ｇ（乾燥葉に基づいて１６．６％）。
得られた抽出物のビフラボン含有量および４’−Ｏ−メチルピリドキシン含有量は、下記表から読み取ることができる。本発明による実施例１、３、４および６におけるビフラボンの合計は、対応する比較例１および２におけるビフラボンの合計よりも著しく低いことは理解されるべきである。同様に、４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、比較例１および２と比べて、本発明による実施例２、３、５および６において著しく低減されている。
【００２７】
【表１】
2008540355.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月8日(2007.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウの葉の抽出物を調製するための方法であって、下記工程、すなわち、
（ａ）溶媒中でイチョウ抽出物溶液を調製する工程、
（ｂ）前記溶液を吸着樹脂へ適用した後、溶媒を用いて、前記吸着樹脂から精製抽出物を溶出させて除去されるべきビフラボンを前記吸着樹脂に残す工程、および／または、
（ｃ）前記溶液を酸性イオン交換体へ適用した後、溶媒を用いて、前記イオン交換体から精製抽出物を溶出させて除去されるべき４’−Ｏ−メチルピリドキシンを前記イオン交換体に残す工程、
ここで工程（ｂ）および工程（ｃ）は、逆の順序で実施されてもよく、
（ｄ）前記抽出物溶液を濃縮および乾燥させることによって乾燥抽出物を得る工程、ここで乾燥抽出物中の４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は最大２０ｐｐｍであり、且つ乾燥抽出物中のビフラボンの含有量は原抽出物の元値の最大２５％である、
を含んでなることを特徴とする前記方法。
【請求項２】
工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）における溶媒は、独立して、炭素数が１〜３の含水アルカノールおよび炭素数が３〜６の含水ケトンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アルカノールはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノールであり、前記ケトンはアセトンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
含水量が３０〜７０重量％の範囲内にある、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）における溶媒の含水量は等しいかまたは異なっている、請求項２〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記吸着樹脂は、スチレンおよびジビニルベンゼンを基礎とする共重合体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記吸着樹脂は、臭素化スチレンおよびジビニルベンゼンを基礎とする共重合体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記イオン交換体は、強酸性イオン交換体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
乾燥抽出物中の４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は最大２０ｐｐｍであり、かつ乾燥抽出物中のビフラボンの含有量が原抽出物の元値の最大２５％である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法によって得られうる、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が原抽出物に比べて低減されたイチョウ抽出物。
【請求項１０】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、最大で１０ｐｐｍである、請求項９に記載の抽出物。
【請求項１１】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、最大で５ｐｐｍである、請求項９に記載の抽出物。
【請求項１２】
ビフラボンの含有量は、原抽出物の元値の最大で１１％である、請求項９〜１１のいずれかに記載の抽出物。
【請求項１３】
ビフラボンの含有量は、原抽出物の元値の最大で６％である、請求項９〜１１のいずれかに記載の抽出物。
【請求項１４】
請求項９〜１３のいずれかに記載の抽出物の、認知症およびその症状および／または脳および末梢血液循環障害の治療のための薬剤、食品または他の調合物の調製のための使用。
【請求項１５】
請求項９〜１３のいずれかに記載のイチョウ抽出物を含有することを特徴とする薬剤、食品または他の調合物。
【国際調査報告】
2008540355.tif 000005
2008540355.tif 000006
2008540355.tif 000007