(57)【要約】本発明は、リンパ管平滑筋肉腫（ＬＡＭ）の処置が必要なヒト被験体におけるリンパ管平滑筋肉腫の処置の方法を提供する。本方法は、被験体に有効量のドキシサイクリンもしくはその塩を投与する工程を包含する。本発明はさらに、処置の有効性をモニタリングする方法を提供する。処置の有効性は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）レベルの測定によりモニターされる。ＭＭＰレベルの減少は、処置が有効だということを示している。
2008540669.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンパ管平滑筋肉腫（ＬＡＭ）の処置が必要な被験体におけるリンパ管平滑筋肉腫のための方法であって、ドキシサイクリンまたはその塩の有効量を該被験体へ投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記ドキシサイクリン投与量は、１日当たり、２０ミリグラムから４００ミリグラムの間である、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記ドキシサイクリン量は、１日当たり、４０ミリグラム以下である、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記ドキシサイクリン量は、１日当たり、１００ミリグラム以下である、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、処置後の第１期間後に、少なくとも１つのＭＭＰのレベルを測定する工程をさらに包含する、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、該方法は、処置前に前記少なくとも１つのＭＭＰのレベルを測定する工程をさらに含み、処置後の該ＭＭＰレベルの減少は、該処置が効果的であることを示している、方法。
【請求項７】
請求項５に記載の方法であって、前記第１期間は１０日より長いか、２０日よりも長いか、または３０日よりも長い、方法。
【請求項８】
請求項５に記載の方法であって、前記ＭＭＰは、１５０ｋＤａよりも大きいＭＭＰ、１２５ｋＤａよりも大きいＭＭＰ、９２ｋＤａよりも大きいＭＭＰ、および７２ｋＤａよりも大きいＭＭＰからなる群から選択される、方法。
【請求項９】
請求項５に記載の方法であって、前記ＭＭＰは、ＮＧＡＬと複合体化している、方法。
【請求項１０】
請求項７に記載の方法であって、少なくとも２つのＭＭＰが測定される、方法。
【請求項１１】
請求項７に記載の方法であって、少なくとも３つのＭＭＰが測定される、方法。
【請求項１２】
リンパ管平滑筋肉腫（ＬＡＭ）を有していると疑われている患者における、ＬＡＭの診断を確認するための方法であって、該患者から尿サンプルを得る工程；および該尿サンプル中のＭＭＰの存在を検出する工程を包含し、該ＭＭＰの存在は、ＬＡＭの存在を示している、方法。
【請求項１３】
リンパ管平滑筋肉腫の処置のための医薬の調製における、ドキシサイクリンまたはその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２００５年５月１６日に出願された米国仮特許出願番号第６０／６８１，４１２号および２００６年３月１日に出願された同６０／７７８，３０６号（これらの内容は、本明細書中で参考として援用される）に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
リンパ管平滑筋肉腫（ＬＡＭ）は、進行性の肺疾患である。本疾患は、胸部および腹部のリンパ管の軸に沿った肺間質における正常平滑筋細胞（通常ではＬＡＭ細胞と称される）の増殖によって特徴づけられる。時間を経るにつれて、本平滑筋細胞は、肺へおよび肺からの、空気の流れ、血液の流れおよびリンパの流れをさえぎり、肺が適切に機能しないようになる。
【０００３】
目下のところ、ＬＡＭに対する好結果の処置はない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は、リンパ管平滑筋肉腫（ＬＡＭ）を処置するための方法を提供する。本方法は、その処置が必要な被験者に、有効な量のドキシサイクリンもしくはその塩を投与する工程を包含する。
【０００５】
本発明はさらに、本発明の方法によるＬＡＭに対する処置の有効性をモニターする方法を提供する。本方法は、処置後の第１期間（ｆｉｒｓｔ  ｐｅｒｉｏｄ  ｏｆ  ｔｉｍｅ）後に少なくとも１つのＭＭＰのレベルを測定する工程を包含する。第１期間は、１０日より長くてもよいし、２０日より長くてもよいし、もしくは３０日より長くてもよい。ＭＭＰは、１５０ｋＤａ、１２５ｋＤａ、９２ｋＤａ、および７２ｋＤａより大きいＭＭＰからなる群から選択され得る。ＭＭＰはＮＧＡＬと複合体化され得る。少なくとも２つのＭＭＰが測定され得る。少なくとも３つのＭＭＰが測定され得る。
【０００６】
本方法は、処置前に少なくとも１つのＭＭＰレベルを測定する工程をさらに包含し得える。ここで、処置後のＭＭＰレベルの減少は、その処置が効果的であることを示している。
【０００７】
本発明はまた、ＬＡＭ処置のための医薬の調製における、ドキシサイクリンもしくはその塩の使用を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
（発明の詳細な説明）
本発明者らは、意外にも、ＬＡＭはドキシサイクリン投与によって処置され得るということを発見した。しかるべく、本発明は、その処置が必要な被験体へ有効量のドキシサイクリンもしくはその塩を投与する工程を含むＬＡＭの処置方法を提供する。
【０００９】
本発明の方法における使用のために、ドキシサイクリンは、好ましくは、経口投与もしくは吸入投与のために処方される。投与用量は、抗生物質としての使用に必要な用量よりも低くたり得る。しかしながら、高用量もまた使用され得る。投与されるドキシサイクリン量は、疾患の性質および重症度ならびに患者の状態のような通常因子によって決定される。
【００１０】
１つの実施形態においては、肺での送達のための適切なデバイスにおいてドキシサイクリンを処方すること、ならびにデバイスを肺へ局所的に送達することは有利なことである。これは、当業者に公知の肺のシステムの範囲および処方技術の範囲を使用することで達成され得る。それらの範囲としては、例えば、ネブライザー、複数用量吸入器、ドライパウダー吸入器、および与圧された定量複数用量吸入器が挙げられるが、それらに限定されない。
【００１１】
経口の組成物は一般的に、非活性の賦形剤もしくは食用に適する担体を含んでいる。それらは、ゼラチンカプセルに封入され得るか、もしくは錠剤へと圧縮され得る。経口治療投与の目的のため、活性化合物が賦形剤とともに一体化され、そして錠剤、トローチ剤、もしくはカプセル剤の形状で使用され得る。薬学的に適合の結合剤、および／またはアジュバント物質は、組成物の一部分として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、任意の次の成分、もしくは似た性質の化合物を含み得る：結合剤としては、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンが挙げられ；賦形剤としては、例えば、デンプンもしくは乳糖が挙げられ、崩壊剤としては、例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはコーンスターチが挙げられ；滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、Ｓｔｅｒｏｔｅｓが挙げられ；流動化剤としては、例えば、コロイド状二酸化ケイ素が挙げられ；甘味料としては、例えば、ショ糖、サッカリンが挙げられ；矯味矯臭剤としては、例えば、ハッカ、メチルサリチレート、もしくはオレンジフレーバーが挙げられ得る。
【００１２】
特に、投与の容易さおよび用量の均一性のため、用量単位形態にてドキシサイクリン組成物を処方することは特に有利である。本明細書中に述べられている用量単位形態は、処置される被験体への単位用量として適合した物理的に分離した単位に言及している；それぞれの単位は、必要とされた薬学的担体と共同して所望の治療効果を生じるよう計算された活性化合物の、前もって決定された量を含む。本発明の用量単位形態の仕様は、活性化合物の独特な特性および達成される特別な治療効果、ならびに個体の処置のためにそのような活性化合物を合成する当該技術分野における固有の限界によって規定され、そしてそれらに直接的に依存している。
【００１３】
ドキシサイクリンは、好ましくは１日当たり２０ミリグラムから４００ミリグラムの用量で経口的に投与される。ある実施形態においては、用量は１日当たり２００ミリグラムより下である。対照的な実施形態においては、ドキシサイクリン用量は１日あたり４０ミリグラムもしくはそれより少ない。しかし他の実施形態においては、ドキシサイクリン用量は、１日あたり１００ミリグラムもしくはそれより少ない。
【００１４】
本発明はさらに、ＬＡＭを診断する方法、ＬＡＭの診断を確認する方法、および処置の有効性をモニターする方法を提供する。それらのそれぞれの方法は、患者からの生物学的サンプル（例えば、尿サンプル）におけるＭＭＰレベルを測定する工程（例えば、Ｍｏｓｅｓらが米国特許第６，８１１，９９５号およびＷＯ０２／３１５０７において示している方法（それらの開示は、本明細書中で参考として援用される）を使用して）を包含している。処置をモニターする方法において、ドキシサイクリン投与後、次のＭＭＰのうちの少なくとも１つのレベルの変化を調べる：１５０ｋＤａより大きいＭＭＰ、約９２ｋＤａのＭＭＰ（ＭＭＰ−９）、７２ｋＤａのＭＭＰ（ＭＭＰ−２）およびリポカリン（ｌｉｐｏｃａｌｉｎ）とのＭＭＰ複合体、例えば、約１２５ｋＤａのＭＭＰ（ＭＭＰ−９／ＮＧＡＬ複合体）。少なくとも１つのＭＭＰレベルの減少は、処置が有効であることを示している。好ましくは、少なくとも２，３もしくはそれより多いＭＭＰ（リポカリン（例えば、ＮＧＡＬ）と複合体化したのＭＭＰが挙げられる）を調べる。好ましくは、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９および／またはＭＭＰ−９／ＮＧＡＬ複合体を調べる。ＭＭＰレベルが、投与後に、例えば、１ヵ月後に、減少していない場合、ドキシサイクリン用量を増加し、そしてＭＭＰレベルを再測定する。これは、妥当な用量が決定されるまで続き得る。ＭＭＰモニタリングは、処置がさらに効果的だということを確実にするまでずっと、続き得る。例えば、患者は月に１回モニターされ得る。
【００１５】
診断の方法において、患者の生物学的サンプル（例えば、尿）におけるＭＭＰの存在を調べる。一実施形態においては、患者はＬＡＭを有すると疑われている患者であり、そして生物学的サンプルにおけるＭＭＰの存在は確証的なものである。ＬＡＭの徴候としては、呼吸困難−息切れ；喀血−咳をして血に染まった痰もしくは血を吐き出す；乳びの滲出液−胸腔内への白色液（ｗｈｉｔｅ  ｆｌｕｉｄ）の漏出；および反復性の気胸−胸腔内への空気の漏出が挙げられる。
【００１６】
ＭＭＰのレベルは、当業者に公知の任意の手段によって測定し得る。例えば、米国特許番号第６，８１１，９９５号および米国特許出願番号２００２００８１６４１号，同２００３０２１５９００号（それらの内容は、本明細書中で参考として援用される）に開示されている方法が挙げられる。本発明においては、ＭＭＰレベルを検出するために抗体の使用もしくは抗体に等価のものの使用が、一般的に好ましい。しかしながら、検出のための他の方法もまた使用され得る。例えば、ＭＭＰレベルは、質量分析によってモニターされ得る。
【００１７】
「生物学的サンプル」という用語は、被験体から得られた生物学的サンプルを包含する。そのようなサンプルの例としては、尿、指を針で穿刺することからもしくは静脈のような他の源から得られた血液、血清および血漿のような血液分画、糞便ならびに便の物質および便の抽出物、唾液、脳脊髄液、羊水、粘膜、および頬のスミア、Ｐａｐスミア、細針吸引、胸骨穿刺、ならびに標準医学的手技および開放性外科的手技を通じて得られた任意の他のバイオプシー材料のような細胞材料および組織材料が挙げられる。好ましい実施形態においては、生物学的サンプルは尿サンプルである。
【００１８】
酵素の分離のための電気泳動の技術（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）の使用において、電気泳動図は酵素電気泳動図として現像され得る。「酵素電気泳動」という用語は、本明細書においては、酵素活性およびそれに続く検出を可能にする条件へ分離システムのマトリックスを曝すことにより、電気泳動に続いて酵素の検出を可能にする化学的に不活性のマトリックスもしくは支持マトリックスを利用している任意の分離システムを包含することを意味する。もっと厳密には、酵素電気泳動という用語は、不活性なマトリックス内への、目的の酵素のための適当な基質の取り込みを示し、その結果、電気泳動が停止した後に活性状件へマトリックスを曝すことは、活性酵素の正確な位置（この故に移動度）を視覚化するシステムを生じる。当業者に周知の技術によって、タンパク質の分子の質量が、酵素電気泳動での位置から得られる移動度に基づいて計算される。そのような技術は、分子量標準との比較（その移動度は、一般的タンパク質染色からもしくはそれら標準に特異的な予備染色（ｐｒｅ−ｓｔａｉｎ）から決定される）そして、精製分離された目的の酵素の陽性対照との比較（それは酵素電気泳動、すなわち、酵素活性の技術により視覚化される）を包含する。
【００１９】
特に、酵素電気泳動によるプロテアーゼの検出のための基質は、電気泳動マトリックスに含まれている。ＭＭＰ、すなわちタイプＩＶコラゲナーゼ、にとっての本来の基質は、酵素電気泳動基質として使用されるタイプＩＶコラーゲンおよびゼラチン、タイプＩコラーゲン誘導体である。しかしながら、ＬＡＭ診断における目的のさらなるプロテアーゼの検出に適切な他のタンパク質としては、例えば、フィブロネクチン；ビトロネクチン；タイプＩ型からＩＩＩ型までおよびＶ型からＸＩＩ型までのコラーゲン；プロコラーゲン；エラスチン；ラミニン；プラスミン；プラスミノゲン；エンタクチン；ニドジェン；ｓｙｎｄｅｃａｎ；テネイシン；ならびにヒアルロン酸、コンドロイチン−６−硫酸、コンドロイチン−４−硫酸、ヘパリン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸およびヘパリンのようなサッカリドによって置換される硫酸化プロテオグリカンが挙げられる。さらに、カゼインのような重宝な安い基質タンパク質（それは、目的のプロテアーゼの本来の標的でないかもしれないが、技術的に適正）は、本発明の酵素電気泳動技術の適切な基質組成物として含まれている。天然に存在するタンパク質基質の化学的に合成した擬似物はまた、潜在的な酵素電気泳動の基質でもあり、そして、酵素による開裂に際して色の変化または蛍光の変化を生じる色素産生能力または蛍光産生能力のような、有望な特性を持つようにすら設計され得る。
【００２０】
タンパク質の一般的な染色、例えば、クマシーブルー染色，アミドブラック染色、およびＳＹＰＲＯオレンジ染色（Ｂｉｏｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）の使用により、酵素電気泳動図を現像し得る。さらに、酵素活性を、染色されたマトリックスでの消化によるによる透明な区域の酵素電気泳動図のほかに、追加の技術により、例えば、放射線標識された基質を有する放射能領域の欠損によって、放射線標識された基質の移動度における変化によって、もしくは、蛍光基質または色素の基質を使用をして、それぞれ（ｒｅｓｐｅｃｔｆｕｌｌｙ）蛍光バンドの移動度または発色の移動度の、欠如または変化によって検出し得る。
【００２１】
定量的デンシトメトリーは、ゲルを直接的に、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆ．）の活性化プレートへ置くことによる酵素電気泳動図によって行い得るか、もしくは、８ビットビデオカードおよびＭｃＩｍａｇｅ（ゼロックスイメージングシステム）を装備したマッキントッシュコンピュータに取り付けられたデータコピーＧ８プレートスキャナーにより行い得る。バックグラウンド（すなわち、サンプルレーンから分離したゲルの範囲）の測定は、同じくスキャンされ得、値を酵素活性の読み取りから差し引かれ得る。
【００２２】
特定のタンパク質の存在に関して生物学的サンプルを分析するための他の電気泳動に基づいた技術は、親和力に基づいた移動度変化システム（Ｌａｎｄｅｒ，Ａ．（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８８（７）：２７６８−２７７２）である。例えば、本質的に酵素に不可逆的に結合する（それにより、移動度を減少させている）基質アナログを含めることにより、ＭＭＰまたはＭＭＰ−複合体が検出され得る。親和性材料が、電気泳動の間に存在しており、そしてマトリックス中へ混合され、その結果、目的の酵素の検出が、その材料の非存在下での移動度と対照的に、移動度の変化の結果として起こる。電気泳動によるタンパク質分離のさらに他の技術は、緩衝剤のｐＨの関数としてのタンパク質の生得の電荷に基づいており、その結果、どのタンパク質種についてもｐＨが存在し、そのｐＨにおいては、そのタンパク質が電界、もしくはｐＩと称される等電点へ移動しない。尿サンプルのような、生物学的サンプルのタンパク質を、等電点電気泳動により分離し得、その後、例えば、基質を含む物質へ移すことにより、すなわち、酵素電気泳動図により、酵素活性のアッセイによって現像させ得る。電気泳動をしばしば、免疫学的検出の基礎として使用する。そこにおいては、分離の工程に続いて、ペーパーもしくはナイロンのような不活性支持体への物理的もしくは電気泳動的なタンパク質の転写（「ブロット」として知られている）が行われ、そして、タンパク質の転写されたパターンは、抗体による特異的一次結合（ウエスタンブロット）の使用、続いてホースラディッシュペルオキシダーゼのような検出酵素に結合させた二次抗体による結合抗体の発色により検出し得る。ＭＭＰ酵素複合体と結合した、ＬＡＭに対しての追加の免疫学的検出システムは、目下のところ下部に詳細が述べられている。
【００２３】
一実施形態において、ＭＭＰタンパク質のレベルを、生物学的サンプル、例えば、尿サンプルと抗体に基づいた結合部分（ＭＭＰまたはＭＭＰのフラグメントに特異的に結合する）とを接触させることにより測定する。抗体−ＭＭＰ複合体の形成は、その後ＭＭＰレベルの尺度として検出される。
【００２４】
ＭＭＰの検出のために、抗体に基づいた結合部分を使用する本発明の方法において、
生物学的サンプル（例えば、尿サンプル）に存在するＭＭＰタンパク質のレベルは、検出可能に標識された抗体から送られるシグナルの強度に相関している。
【００２５】
抗体に基づいた結合部分は、抗体を酵素（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ）へ連結させることにより、検出可能に標識されている。その酵素は、順番に、その基質へ曝された場合、例えば、分光測光的手段、蛍光的手段、化学ルミネセンス的手段または視覚的手段により検出され得る化学的部分を産生するような手法にて、その基質と反応する。あるいは、抗体を、放射性に（例えば、３Ｈ、１３１Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、１２５Ｉで）標識し得；蛍光化合物（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｅｒｉｎ））で標識し得；蛍光を発する金属（例えば、１５２Ｅｕ、またはランタニド系列の他のもの）で標識し得、または化学発光化合物（例えば、ルミノール、ルシフェリン、イソルミノール）とカップリングすることによって標識し得る。これらの標識した因子の存在の検出方法は、当業者に公知である
「ラジオイムノアッセイ」は、抗原（例えば、ＭＭＰ）の標識された（例えば、放射性に標識された）形態を使用して、その抗原の濃度を、検出および測定する技術である。抗原への放射性標識の例としては、３Ｈ、１４Ｃ、および１２５Ｉが挙げられる。生物学的サンプル中のＭＭＰ抗原の濃度を、生物学的サンプル中の抗原を、その抗原に対する抗体の結合について、標識された（例えば、放射性に）抗原と競合させることによって測定する。標識された抗原と標識されていない抗原との間での競合結合を確実にするために、標識された抗原は、抗体の結合部位を飽和させるのに十分な濃度で存在している。サンプル中の抗原濃度が高くなればなるほど、抗体に結合する標識された抗原の濃度は低くなる。
【００２６】
「イムノラジオメトリックアッセイ」（ＩＲＭＡ）は、免疫アッセイであり、そこでは抗体試薬は放射性標識されている。ＩＲＭＡは、タンパク質（例えば、ウサギ血清アルブミン（ＲＳＡ））への結合のような技術により、多価抗原結合体の産生を必要とする。多価抗原結合体は、１分子当たり少なくとも２抗原残基を、持たなければならない。そして、その抗原残基は、その抗原に対して少なくとも２抗体による結合を可能にするために、十分な距離だけ離れていなければならない。例えば、ＩＲＭＡにおいては、多価抗原結合体は、プラスチックの球のような固体表面に付着させられ得る。標識されていない「サンプル」抗原および放射性標識された抗原に対する抗体を、多価抗原結合体でコートされた球を含んでいる試験チューブに加える。サンプル中の抗原は、抗原抗体結合部位について、多価抗原結合体と競合する。適正なインキュベーション期間の後、非結合反応物は洗浄により除去され、そして、固体相での放射活性の量が決定される。結合した放射活性抗体の量は、サンプル中の抗原濃度に反比例している。
【００２７】
最も一般的な、酵素免疫アッセイは、「酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）」である。ＥＬＩＳＡは、抗体の標識された（例えば、酵素結合）型を使用して、抗原の濃度を検出および測定するための技術である。例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡまたは競合型ＥＬＩＳＡなどの、異なった型のＥＬＩＳＡがあり、それらは当業者に周知である。ＥＬＩＳＡのための当該分野で公知の標準的な技術は、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ」，第２版，Ｒｏｓｅ  ａｎｄ  Ｂｉｇａｚｚｉ編，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９８０；Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」，Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｉｎｃ．，１９６４；およびＯｅｌｌｅｒｉｃｈ，Ｍ．  １９８４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：８９５−９０４に述べられている。
【００２８】
「免疫組織化学的アッセイ」において、組織切片を、アッセイされるタンパク質に特異的な抗体へ組織を曝すことにより、特定のタンパク質について試験する。この抗体をその後、存在しているタンパク質の存在および量を決定する多くの方法のうちのいずれかにより視覚化する。抗体を視覚化するために使用する方法の例は、例えば、抗体に連結されている酵素（例えば、ルシフェラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ホースラディシュペルオキシダーゼ、またはベータ−ガラクトシダーゼ）、もしくは化学的方法（例えば、ＤＡＢ／基質色素原（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ））を通してである。
【００２９】
実施者の好みによると、他の技術をＭＭＰを検出するために使用し得る（例えば、ウエスタンブロット（Ｔｏｗｂｉｎ  ｅｔ  ａｔ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ.７６：４３５０（１９７９））。抗体アレイまたはタンパク質チップをまた、用い得る。例えば、米国特許出願番号第２００３００１３２０８Ａ１号；同２００２０１５５４９３Ａ１号；同２００３００１７５１５号および米国特許番号第６，３２９，２０９号；同６，３６５，４１８号（それらは、全体として本明細書中において参考として援用される）を参照せよ。
【００３０】
加えて、ＭＭＰを、ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ（飛行時間（ｔｉｍｅ−ｏｆ−ｆｌｉｇｈｔ））、ＳＥＬＤＩ／ＴＯＦ、液体クロマトグラフィ−質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）、ガスクロマトグラフィ−質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）、高性能液体クロマトグラフィ−質量分析法（ＨＰＬＣ−ＭＳ）、キャピラリー電気泳動−質量分析法、核磁気共鳴スペクトロメトリー、もしくはタンデム型質量分析法（例えば、ＭＳ／ＭＳ、ＭＳ／ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳなど）のような質量分析法を使用して検出し得る。例えば、米国特許出願番号第：２００３０１９９００１号、同２００３０１３４３０４号，同２００３００７７６１６号（それらは、本明細書中で参考として援用される）を参照せよ。
【００３１】
本発明において使用する抗体を、商業的な源（例えば、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔ’ｌ  Ｉｎｃ．，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ；ＱＥＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から得ることができる。あるいは、本発明において使用する抗体を、抗体を産生するための標準的な方法（例えば、モノクローナル抗体産生）を使用して産生し得る。その標準的な方法としては、Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ａ．Ｍ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ（１９８４）；Ｓｔ．Ｇｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（１９９０）３５：１−２１；およびＫｏｚｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ（１９８３）４：７２が挙げられる。抗体をまた、当該分野で周知の方法によって、ファージディスプレイライブラリーのような抗体ライブラリーをスクリーニングをするために、タンパク質の抗原性部分を使用することにより容易に得ることができる。例えば、米国特許番号第５，７０２，８９２号（Ｕ．Ｓ．Ａ．  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）およびＷＯ０１／１８０５８（Ｎｏｖｏｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）は、バクテリオファージディスプレイライブラリー、および抗体結合ドメインフラグメントを産生するための選択方法を開示している。
【００３２】
上記もしくは以下で引用されるすべての参考文献は、本明細書中において参考として援用される。
【００３３】
本発明はさらに、次の実施例により例示される。実施例は、本発明の理解における助けとして提供され、本発明の限定として解釈されるものではない。
【実施例】
【００３４】
リンパ管平滑筋肉腫（ＬＡＭ）、すなわち生殖年齢の女性に典型的に影響を及ぼす稀な肺疾患、は、平滑筋細胞の異常な増殖および組織破壊による肺機能の進行性損失（１）によって特徴づけられる。長期生存は稀であり；ＬＡＭ患者はしばしば、診断１０年以内に呼吸器不全で倒れる。目下、ＬＡＭに対する治療基準は存在しない。しかしながら、限定的な成功がホルモン治療もしくは肺移植において報告されている。
【００３５】
肺実質の破壊は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の増加した発現および活性から起こる前タンパク質分解の環境に、特徴があるとされている。ＭＭＰ−２は、特にＬＡＭ肺組織において有意にアップレギュレートされている（２）。本発明者らは、抗生物質ドキシサイクリン（ＭＭＰ阻害剤）（４）により、肺毛細血管性血管腫症（３）を治療した。本発明者らは、ＬＡＭのドキシサイクリンでの処置が、ＭＭＰ誘導組織分解を阻害し、それにより臨床上の利益を提供しているとの仮説を設けた。尿ＭＭＰｓの存在が、癌（５）および血管腫症（３）のような調節異常のＥＣＭ分解により特徴づけられる疾患を保有している患者における疾患状態の予測因子（ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ）であることが、以前報告されていたので、本発明者らは、ＬＡＭへのドキシサイクリン処置の治療有効性を、治療経過の間、尿ＭＭＰプロフィールを分析することによりモニターした。ここで、本発明者らは、ドキシサイクリン治療後、実質的および迅速な治療上の改善を経験したＬＡＭ患者を紹介する。
【００３６】
６６歳の女性が、１９７５年、血管筋脂肪腫による部分腎臓摘出の後、ＬＡＭであると診断された。何年も安定していたが、彼女の状態はＦＥＶ１が０．４８リットル（予測値の２１パーセント）と同程度に低く悪化し、そして彼女は肺移植リストに入れられた。ドキシサイクリン治療に先だって、いくつかのＭＭＰ種が患者の尿中において有意に上昇した。それらとしては、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−９／ＮＧＡＬ複合体が挙げられる（図１Ａ）。これらの上昇したＭＭＰレベルに基づき、ドキシサイクリン投与を、初期投与量２０ｍｇ／日で開始した。投与量の漸増（１００ｍｇ／日まで）を、毎月の尿ＭＭＰプロファイリング（図１Ａ）および薬物がどの程度十分に許容されたかによって決定した。肺の容量は増加し（最近のＦＥＶ１は０．９１リットル，予測値の３５パーセント）、そして増大した酸素飽和度が観察された（図１Ｂ）。症状としてあった電信スピーチが解決した。本患者は、尿ＭＭＰレベルの減少により予測されたように、クオリティオブライフにおいて明確な改善をしており、そして肺移植リストから除外された（図１Ａ）。
【００３７】
このケースは、尿ＭＭＰモニタリングによりガイドされたドキシサイクリンが、ＬＡＭの処置に対する将来有望な治療法に相当し得る、ならびにバイオマーカー（このケースでは尿ＭＭＰレベル）を処理することにより、この疾患を改善するための潜在的な方法に相当し得るという仮説を裏付けている。
【００３８】
本出願中のすべての参照は、本明細書中に参照として援用される。
【００３９】
（参考文献）
【００４０】
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１Ａ−図１Ｂは、ドキシサイクリンを用いたＬＡＭの好結果の処置：治療の有効性のモニタリングおよび臨床的改善の測定を示している。図１Ａは、患者の尿中ＭＭＰの定量分析を示しており、ドキシサイクリン処置経過の間での尿ＭＭＰ活性の有意な減少を示している。図１Ｂは、処置経過の間での長期の酸素飽和度；酸素補給を外した後の９０％酸素までの脱飽和時間の増加（左パネル）、およびドキシサイクリン治療の間の運動後の維持酸素飽和度（右パネル；臨床的に行われた６分間歩行試験からの代表的結果）を示している。データのポイントは、ドキシサイクリン治療前または治療後に採取された単回の測定値を表している。
【図１】
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