(57)【要約】  本発明は５−（１，３−ジアリル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩とその製造方法、及びそれを活性成分として含有する抗癌剤組成物に関するものである。【選択図】  図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１に表される化合物またはその薬剤学的に許容される塩。
（化学式１）
【化１】
2008532999.tif 000030
前記式中、
Ｘは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ハロゲン原子、非置換またはＣ１−Ｃ４アルキルカルボキシルで置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、Ｃ２−Ｃ４アシル基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルオキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基、またはニトロ基を表し、
Ｙは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、Ｃ２−Ｃ４アシル基、シアノ基、またはニトロ基を表し、
ｎは１〜５の整数であり、
Ｒは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ２−Ｃ４アルケニル基、Ｃ３−Ｃ４アルキニル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ２−Ｃ４アルコキシアルキル基、またはベンジル基を表す。
【請求項２】
ＸがＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ハロゲン原子、非置換されるか、またはＣ１−Ｃ４アルキルカルボキシルで置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルオキシ基、
ヒドロキシ基、 Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、またはニトロ基を表し、
Ｙが水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、Ｃ２−Ｃ４アシル基、シアノ基、またはニトロ基を表し、
ｎが１〜３の定数であり、
Ｒが水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ２−Ｃ４アルコキシアルキル基、またはベンジル基を表す、請求項１記載の前記化学式１に表される化合物またはその薬剤学的に許容される塩。
【請求項３】
下記化学式２に表される化合物と下記化学式３に表される化合物を反応させて下記化学式４に表される化合物を製造する工程；
下記化学式４に表される化合物をビルスマイヤー・ハック（Vilsmeier−Haack）反応をさせ、下記化学式５に表される化合物を製造する工程；
下記化学式５に表される化合物をチアゾロ−２，４−ジオンと反応させて、ＲがＨである下記化学式１に表される化合物を製造するか、または製造した化合物を化学式６に表される化合物と反応させてＲが下記物質である化学式１に表される化合物を製造する工程；
とを含む、化学式１に表される化合物またはその薬剤学的に許容される塩。
（化学式１）
【化２】
2008532999.tif 000031
（化学式２）
【化３】
2008532999.tif 000032
(化学式３）
【化４】
2008532999.tif 000033
（化学式４）
【化５】
2008532999.tif 000034
（化学式５）
【化６】
2008532999.tif 000035
（化学式６）
【化７】
2008532999.tif 000036
Ｘ、Ｙ、ｎ及びＲは請求項１で定義したものと同一であり、
Ｚは離脱基を表す。
【請求項４】
薬剤学的有効量の下記化学式１の化合物またはその薬剤学的に許容される塩を含む抗癌組成物。
（化学式１）
【化８】
2008532999.tif 000037
前記式中、
Ｘ、Ｙ、ｎ及びＲは請求項１で定義したものと同一である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は５−（１，３−ジアリール−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩とその製造方法、及びそれを活性成分として含有する抗癌剤組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤＣ２５Ｂは、細胞分裂をする際Ｇ２／Ｍ周期への移行を決定する非常に重要なホスファターゼであり、ＣＤＣ２５Ｂの活性を阻害すると細胞分裂が阻害され、結局細胞の死滅に至る。即ち、CDC25Bは、抗癌作用と関連している。ＣＤＣ２５Ｂは胃癌（Jpn. K. Cancer Res. 1997, 88, 9947）、大腸癌（Exp. Cell Res. 1998, 240, 236; Lab.
Invest. 2001, 81, 465）、肺癌（Cancer Res. 1998, 58, 4082）、脳腫瘍および喉頭癌（Cancer Res. 1997, 57, 2366）、乳癌（Cancer statistics in Japan 1997 Foundation for Promotion of Cancer
Research, Tokyo, Jpn.）などの大部分の腫瘍から過発現されることが観察され、ＣＤＣ２５Ｂが過発現された遺伝子導入マウスから乳腺の異常増殖が観察され（Oncogene １９９９、１８、４５６１）、遺伝子導入マウスを発癌物質（９，１０−ジメチル−１，２−ベンズアントラセン）で処理する際、乳癌が非常に容易に発生されると報告された。したがって、ＣＤＣ２５Ｂは抗癌剤の開発において重要なターゲットとなり、ＣＤＣ２５Ｂを阻害することが可能で正常細胞に対する細胞毒性が少ない新しい抗癌剤の開発が望まれている。
【０００３】
欧州特許公開３７９９７９Ａ１には、チアゾールの５−位置に連結されたピラゾール基がピラゾロピリジン構造をしている５−（置換−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体がアデノシン拮抗薬として使用することができると記述されている。
【０００４】
また、日本特許第５５０２９８０４号には、チアゾールの５−の位置に連結されたピラゾール基がピラゾロン構造をしている５−（置換−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体化合物のハロゲン化銀が、光線感作物質内でのぼやけと光電子放出を阻害する染料として有用であると記述されている。
【特許文献１】欧州特許公開３７９９７９Ａ１
【特許文献２】日本特許第５５０２９８０４号
【非特許文献１】Jpn. K. CancerRes. 1997, 88, 9947
【非特許文献２】Exp. Cell Res. 1998, 240, 236; Lab. Invest. 2001, 81, 465
【非特許文献３】Cancer Res. 1998, 58, 4082
【非特許文献４】Cancer Res. 1997,57, 2366
【非特許文献５】Cancer statisticsin Japan 1997 Foundation for Promotion of Cancer Research, Tokyo, Jpn.
【非特許文献６】Oncogene １９９９，１８，４５６１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、５−（１，３−ジアリール−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体がＣＤＣ２５Ｂに対する選択的阻害活性、及び別の類似したホスファターゼに対する選択性を有し、また抗癌効果を有する化合物であることを明らかにすることで本発明を完成させるに至った。
【０００６】
従って、本発明の目的は、５−（１，３−ジアリール−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体またはその薬学的に許容される塩を提供することである。
【０００７】
本発明の別の目的は、５−（１，３−ジアリール−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体またはその薬学的に許容される塩の製造方法を提供することである。
【０００８】
本発明のまた別の目的は、５−（１，３−ジアリール−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体またはその薬学的に許容される塩を含む抗癌剤組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は下記化学式１に表される５−（１，３−ジアリール−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体またはその薬剤学的に許容される塩を提供する。
（化学式１）
【化９】
2008532999.tif 000002
【００１０】
前記式において、
Ｘは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ハロゲン原子、非置換またはＣ１−Ｃ４アルキルカルボキシルで置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、Ｃ２−Ｃ４アシル基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルオキシ基、ヒドロキシ基、シアノ基、またはニトロ基を表し、
【００１１】
Ｙは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、Ｃ２−Ｃ４アシル基、シアノ基、またはニトロ基を表し、
【００１２】
ｎは１〜５の整数であり、
【００１３】
Ｒは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ２−Ｃ４アルケニル基、Ｃ３−Ｃ４アルキニル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ２−Ｃ４アルコキシアルキル基、またはベンジル基を表す。
【００１４】
本発明の好ましい様態として、前記化学式１において、
【００１５】
ＸがＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ハロゲン原子、非置換されるか、またはＣ１−Ｃ４アルキルカルボキシルで置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルアルコキシ基、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルオキシ基、ヒドロキシ基、Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、またはニトロ基を表し、
【００１６】
Ｙが水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ３−Ｃ４アルケニルオキシ基、Ｃ２−Ｃ４アシル基、シアノ基、またはニトロ基を表し、
【００１７】
ｎは１〜３の定数であり、
【００１８】
Ｒは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ２−Ｃ４アルコキシアルキル基、またはベンジル基を表す。
【００１９】
また、本発明の別の好ましい様態として、前記化学式１において、
【００２０】
Ｘがイソプロピル基、トリフルオロメチル基、ｔ−ブチル基、臭素、塩素、ヨウ素、エチル基、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、ベンジルオキシ基、アリルオキシ基、シクロプロピルメトキシ基、シクロペンチルオキシ基、ヒドロキシ基、フルオロメトキシ基、エチルカルボキシル基で置換されたメトキシ基、またはニトロ基を表し、
【００２１】
Ｙが水素、メチル基、エチル基、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、メトキシ基、エトキシ基、シアノ基またはニトロ基を表し、
【００２２】
ｎが１〜３の整数であり、
【００２３】
Ｒが水素、メチル基、エチル基、プロパン基、プロピル基、プロペニル基、プロピニル基、Ｃ１−Ｃ４フルオロアルキル基、ベンジル基、またはベンジルオキシ基を表す。
【００２４】
更に好ましい様態として、前記化学式１において、
【００２５】
Ｘは、２−位置が臭素、塩素、メトキシまたはニトロ基で置換され、４−位置がトリフルオロメタン基、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、プロピニルオキシ基、フルオロメチル基、ヨウ素、ベンジルオキシまたはアリルオキシ基で置換され、３−位置及び５−位置がイソプロピル基、ｔ−ブチル基、臭素、ヨウ素、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、シクロプロピルメトキシ、シクロペンチルオキシヒドロキシ基、またはエチルカルボキシルで置換されたメトキシ基、またはニトロ基を表し、
【００２６】
Ｙが水素、メチル基、またはエチル基を表し、
【００２７】
ｎが１〜３の整数であり、
【００２８】
Ｒが水素、メチル基、エチル基、プロピル基、プロペニル基、プロピニル基、ベンジルオキシ基、ナトリウム、ベンジル基、またはエチルカルボキシル基で置換されたメトキシ基を表す。
【００２９】
前記化学式１に表される化合物において、Ｘはフェニル基の１〜５−位置に置くことができ、好ましくは２−、３−、４−または５−位置である。Ｙは１〜５−位置に置くことができ、好ましくは１−、２−または３−位置である。
【００３０】
本発明の最も好ましい様態として、前記化学式１に表される化合物は、
５−［３−（２−クロロ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン、
５−［３−（３−ニトロ）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−メチル−チアゾリジン−２，４−ジオン、
５−［３−（３−トリフルオロメチル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン、
５−［３−（３−クロロ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−メチル−チアゾリジン−２，４−ジオン、
５−［３−（３−クロロ−４−プロピルオキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン、
５−［３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−メチル−チアゾリジン−２，４−ジオン、
５−［３−（３−ブロモ−４−プロピルオキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−メチル−チアゾリジン−２，４−ジオン、またはこれらの薬剤学的に許容される塩である。
【００３１】
本発明で使用した用語“アルキル”は、別に指定しない限り、炭素数１〜４の、直鎖または側鎖の飽和炭化水素基を意味する。
【００３２】
本発明で使用した用語“ハロゲン”または“ハロ”は、別に指定しない限りハロゲン原子を表し、フルオロ、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素などを含む。
【００３３】
本発明で使用した用語“アルコキシ”は、別に指定しない限り、Ｏ−アルキル基（アルキルは上記で定義）を意味する。
【００３４】
本発明で使用した用語“アルケニル“は、別に指定しない限り、二重結合を有し炭素数２〜４の不飽和炭化水素基を意味する。
【００３５】
本発明で使用した用語“アルキニル“は、別に指定しない限り、三重結合を有し炭素数３〜４の不飽和炭化水素基を意味する。
【００３６】
本発明で使用した用語“アシル”は、別に指定しない限り、アセチル、プロピオニルのような脂肪族カルボキシル酸から誘導された“アロイル”基を意味する。
【００３７】
本発明で使用した用語“シクロアルキルアルコキシ”は、別に指定しない限り、飽和炭化水素環にアルコキシが結合した炭素数３〜１０のラジカルを意味する。
【００３８】
本発明で使用した用語“シクロアルキルオキシ”は、別に指定しない限り、炭素数３〜１０の飽和された炭化水素環に酸素が結合したラジカルを意味する。
【００３９】
本発明で使用した用語“アルケニルオキシ”は、別に指定しない限り、二重結合を有する不飽和炭化水素が酸素と結合した炭素数３〜４のラジカルを意味する。
【００４０】
本発明で使用した用語“ハロアルキル”は、別に指定しない限り、水素がハロゲン原子で置換されたアルキル（上記で定義）基を意味する。
【００４１】
本発明で使用した用語“ハロアルコキシ”は、別に指定しない限り、水素原子がハロゲン原子で置換されたアルコキシ（上記で定義）基を意味する。
【００４２】
本発明はまた、化学式１に表される化合物の薬剤学的に許容可能な塩を提供する。前記塩は当分野の既知の技術を利用して製造することができる。前記薬剤学的に許容な塩は、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩のような有機または無機酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩のようなアルカリ金属塩、またはアンモニウム塩等の任意の薬剤学的に許容可能な塩である。
【００４３】
また、本発明は下記化学式２に表される化合物と下記化学式３に表される化合物を反応させて下記化学式４に表される化合物を製造する工程；下記化学式４に表される化合物をビルスマイヤー・ハック（Vilsmeier−Haack）反応をさせ、下記化学式５に表される化合物を製造する工程；下記化学式５に表される化合物をチアゾロ−２，４−ジオンと反応させて、ＲがＨである下記化学式１に表される化合物を製造するか、または製造した化合物を化学式６に表される化合物と反応させてＲが後述する基である化学式１に表される化合物を製造する工程とを含む、化学式１に表される化合物またはその薬剤学的に許容される塩を製造する方法を提供する。
（化学式２）
【化１０】
2008532999.tif 000003
（化学式３）
【化１１】
2008532999.tif 000004
（化学式４）
【化１２】
2008532999.tif 000005
（化学式５）
【化１３】
2008532999.tif 000006
（化学式６）
【化１４】
2008532999.tif 000007
【００４４】
前記式において、
Ｘ、Ｙ、ｎおよびＲは前記で定義した通りであり、
【００４５】
Ｚは離脱基として、塩素、臭素、ヨウ素のようなハロゲン原子、トルエンスルホニルオキシ基、またはメタンスルホニルオキシ基を表す。
【００４６】
本発明の製造方法を図式化すると下記反応式１のように表される。
（反応式１）
【化１５】
2008532999.tif 000008
【００４７】
ａ：酢酸または安息香酸
ｂ：メタノール、エタノール等のアルコール類、水または有機溶剤
ｃ：無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）／オキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）、塩化チオニルまたは塩化オキサリル
ｄ：水酸化ナトリウム水溶液
ｅ：酢酸、安息香酸等の弱酸の塩やピリジン、アミン、アニリンのような弱塩基
ｆ：ベンゼン、トルエン等の有機溶剤
ｇ：炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸セシウム等の無機塩基、またはトリエチルアミン、ピリジン等の有機塩基
ｈ：ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトン、水、または他の有機溶剤
【００４８】
まず、化学式２の置換されたアセトフェノン及び化学式３の置換されたヒドラジンを反応させて化学式４のヒドラゾン誘導体を製造する。この反応で溶媒としてメタノールまたはエタノール等のアルコール類、または水や他の有機溶剤を使用することができ、メタノールまたはエタノール等のアルコール類が使用することが好ましい。触媒として、は少量の、酢酸または安息香酸等の弱酸を使用することができる。
【００４９】
続いて、化学式４のヒドラゾン誘導体は、無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を溶媒として使用し、触媒としてオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）や塩化チオニル、または塩化オキサリル、好ましくはオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）を使用して、化学式５の３−アリール−ピリジル−ピラゾール−４−カルボキシアルデヒド誘導体に変換することができる。
【００５０】
その後、前記化学式５のピラゾールカルボキシアルデヒド及びチアゾリジン−２，４−ジオンを反応させ、ＲがＨである前記化学式１に表される化合物が得られる。この反応で溶媒としてベンゼンやトルエンまたは他の有機溶剤を使用することができるが、ベンゼンやトルエンを使用することが好ましい。触媒は酢酸とピペリジンを混合して使用するか、または酢酸、安息香酸等の弱酸塩、またはピリジン、アミン、アニリン等の弱塩基を単独で使用することができ、酢酸とピペリジンの混合物を使用することが好ましい。
【００５１】
ＲがＨではない前記化学式１に表される化合物を製造するために、塩基存在下で、生成物を前記化学式６の化合物と反応させる。この反応で溶媒はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトン、水または他の有機溶剤を使用することができ、好ましくはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を使用する。塩基は炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム及び炭酸セシウム等の無機塩基、またはトリエチルアミン、ピリジンのような有機塩基を使用することができ、好ましくは炭酸カリウムまたは炭酸ナトリウムを使用する。
【００５２】
本発明はまた、本発明は前記化学式１に表される５−（１，３−ジアリル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体、またはその薬剤学的に許容される塩を有効成分として含む抗癌剤を提供する。
【００５３】
前記化学式１に表される５−（１，３−ジアリル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体は細胞分裂の周期のＧ２／Ｍでの進行を決定するのに決定的な役割を行うＣＤＣ２５Ｂホスファターゼに対して阻害活性を有しており、細胞分裂を阻害する特性を有し、また、人体内の他のホスファターゼに対して選択性を表すと同時に、異種移植ヌードマウスを利用した実験で人の癌細胞を破壊する効果があることが明らかになった。
【００５４】
従って、前記化学式１に表される化合物を有効成分とする抗癌剤または薬剤組成物は、薬剤学的に許容可能な無毒性の担体、補強剤または賦形剤などを添加して、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、液剤、懸濁剤のような経口投与用製剤を製造することができる。
【００５５】
また、前記化学式１に表される化合物の投与容量は患者の年齢、体重、性別あるいは、健康状態、投与形態及び疾患程度によって変わってくる。体重が約７０ｋｇの成人患者を基準とする時、一般的に１０〜４００ｍｇ／日の投与量が許容でき、医師または薬剤師の指示に従って一定間隔で１日１回または数回に分けて投与することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５６】
以下、本発明を下記実施例によって更に詳細に説明する。但し、下記実施例は本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲を制限しない。
【００５７】
（実施例１）
５−［３−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号５８）の製造
（１）（３’，５’−ジフルオロメトキシ）アセトフェノン（化学式２）の製造
（３’，５’−ジヒドロキシ）アセトフェノン（１．００ｇ、６．５７ｍｍｏｌ）を３０ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、炭酸カリウム（２．００ｇ、１４．４５ｍｍｏｌ）及びヨウ化カリウム（１０．９１ｍｇ、６．５７×１０−２ｍｍｏｌ）を加えた後、８０℃で１時間還流させた。５５〜６０℃まで冷却させ、クロロジフルオロ酢酸メチル（１．７５ｍＬ、１６．４３ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、３０分間攪拌した。７０〜８０℃で３時間還流させた後、混合物を室温までゆっくり冷却させた。酢酸エチル（３０ｍＬ）を入れ、混合物を水（１０ｍＬ）で２回洗浄した後、有機層を２Ｎ塩酸水溶液（１０ｍＬ）で３回、塩水（１０ｍＬ）で２回洗浄した。有機層を分離して無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１０：１）により精製し、目的物１．１３ｇ（６８％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ２．６１（ｓ、３Ｈ）、６．５８（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７４Ｈｚ）、７．１４（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｓ、１Ｈ）
【００５８】
（２）（３’，５’−ジフルオロメトキシ）アセトフェノンのフェニルヒドラゾン（化学式４）の製造
（３’，５’−ジフルオロメトキシ）アセトフェノン（１．０ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水エタノールに溶解し、フェニルヒドラジン（０．３９ｍＬ、３．９７ｍｍｏｌ）、触媒として氷酢酸（１１．００μL、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を室温で３時間攪拌した。酢酸エチル（２０ｍＬ）を混合し、混合物を水（１０ｍＬ）で３回、塩水（１０ｍＬ）で２回洗浄した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮させると目的物１．２９ｇ（９５％）が得られた。
【００５９】
（３）３−（３’，５’−ジフルオロメトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシルアルデヒド（化学式５）の製造
２ｍＬの無水ジメチルホルムアミドにオキシ塩化リン（０．４５ｍＬ、７．０２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で１時間攪拌した。５ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解させた（３’，５’−ジフルオロメトキシ）アセトフェノンのフェニルヒドラゾン（１．２ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、混合物を７０〜８０℃で６時間攪拌した。氷水で０℃まで冷却し、３０％水酸化ナトリウム水溶液をゆっくり滴下してｐＨ７〜８に調整し、生成した固体を濾過した後、水（１０ｍＬ）で３回洗浄した。濾過した固体を乾燥させ、目的物０．９４ｇ（７０％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ６．６３（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７４Ｈｚ）、７．０２（ｓ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、７．５４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．６３（ｓ、２Ｈ）、７．７９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、８．５５（ｓ、１Ｈ）、１０．０６（ｓ、１Ｈ）
【００６０】
（４）５−［３−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号５８）の製造
３−（３，５−ジフルオロメトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシルアルデヒド（０．５０ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）及びチアゾリジン−２，４−ジオン（１５３．００ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水トルエンに加えて、触媒として氷酢酸（３．７０μｌ、６．５５×１０−２ｍｍｏｌ）及びピペラジン（７．８０μｌＬ、７．８６×１０−２ｍｍｏｌ）を加えた後、ディーン・スターク蒸留装置（Dean−Stark
trap）を利用して１２時間還流させた。温度を室温まで下げて６時間攪拌した。生成された固体を濾過してジエチルエテール（１０ｍＬ）で３回洗浄した。濾過した固体を乾燥させ、目的物０．５６ｇ（８９％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ７．２４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７４Ｈｚ）、７．３７（ｓ、１Ｈ）、７．４１−７．５５（ｍ、２Ｈ）、７．６１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝２．８Ｈｚ）、８．０６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、８．７９（ｓ、１Ｈ）、１２．６１（ｂｒ、１Ｈ、ＮＨ）
【００６１】
（実施例２）５−［３−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−メチル−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号５９）の製造
５−［３−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号５８、０．１０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を１．０ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解した後、窒素雰囲気下で炭酸ナトリウム（２６．５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、１０分後にヨードメタン（２０．００μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え混合物を室温で２時間攪拌した。反応が終了したら水を加え、生成された固体を水（１０ｍＬ）で３回洗浄した。濾過した固体を乾燥させると目的物９０．０ｍｇ（８７％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ３．２６（ｓ、３Ｈ）、６．６１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７４Ｈｚ）、７．０３（ｓ、１Ｈ）、７．３０（ｓ、１Ｈ）、７．４２（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、７．５４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．７８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、７．８７（ｓ、１Ｈ）、８．１９（ｓ、１Ｈ）
【００６２】
（実施例３）５−［３−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−エチル−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号６０）の製造
５−［３−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号５８、０．１０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を１．０ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解した後、窒素雰囲気下で炭酸ナトリウム（２６．５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、１０分後に臭化エチル（２３．９０μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４時間攪拌した。反応が終了したら水を加え、生成された固体を水（１０ｍＬ）で３回洗浄して乾燥させ、目的物８５．３ｍｇ（８０％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １．２９（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、３．８３（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、６．６１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７４Ｈｚ）、７．０３（ｓ、１Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、７．４２（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、７．５４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、７．７９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、７．８６（ｓ、１Ｈ）、８．１９（ｓ、１Ｈ）
【００６３】
（実施例４）５−［３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号７７）の製造
（１）（３’−ブロモ−４’−エトキシ）アセトフェノンのフェニルヒドラゾン（化学式４）の製造
（３’−ブロモ−４’−エトキシ）アセトフェノン（４００ｇ、１６．４５ｍｍｏｌ）を１００ｍＬの無水エタノールに溶解し、フェニルヒドラジン（２．１４ｇ、１９．７５ｍｍｏｌ）及び触媒として氷酢酸（９．１６μｌ、０．１６ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を室温で５時間攪拌した。反応が終了したら５０ｍＬの酢酸エチルを加えて、溶液を２Ｎ塩酸溶液（３０ｍＬ）で３回抽出して塩水（３０ｍＬ）で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、白色固体の目的物３．９ｇ（７４．３％）が得られた。
【００６４】
（２）３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシルアルデヒド（化学式５）の製造
２ｍＬの無水ジメチルホルムアミドにオキシ塩化リン（３．１３ｍＬ、３３．６ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を０℃の窒素雰囲気下で１時間攪拌した。５ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解させた（３’−ブロモ−４’−エトキシ）アセトフェノンのフェニルヒドラゾン（３．９０ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、混合物を７０〜８０℃で６時間攪拌した。氷水で温度を０℃まで冷却させて３０％水酸化ナトリウム水溶液をゆっくり滴下し、ｐＨ７〜８に合わせて生成された固体を濾過した後、水（１０ｍＬ）で３回洗浄して乾燥させ、目的物２．１０ｇ（４８．４％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １．５２（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝６．９２Ｈｚ）、４．１９（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝６．９２Ｈｚ）、７．０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．５５Ｈｚ）、７．４−８．１５（ｍ、７Ｈ）、８．５２（ｓ、１Ｈ）、１０．０４（ｓ、１Ｈ）
【００６５】
（３）５−［３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号７７）の製造
３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシルアルデヒド（０．５０ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）及びチアゾリジン−２，４−ジオン（１５８．４０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水トルエンに加え、触媒として氷酢酸（３．８１μL、６．７５×１０−２ｍｍｏｌ）及びピペリジン（８．０４μL、８．１０×１０−２ｍｍｏｌ）を加えた後、ディーン・スターク蒸留装置を利用して水を除去しながら３時間還流した。室温まで冷却し、混合物を６時間攪拌した。生成した固体をジエチルエテール（１０ｍＬ）で３回洗浄して乾燥させ、目的物０．５２ｇ（８２％）が得られた。
【００６６】
（実施例５）５−［３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−メチル−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号７８）の製造
５−［３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号７７、０．１０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を１．００ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、窒素雰囲気下で水酸化ナトリウム（１２．７４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えて５分後にヨウ化メタン（１９．７８μｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間攪拌した。反応が終了したら１０ｍＬの水を加え、溶液をジクロロメタン（１０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を塩水で洗った後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４：１）により精製し、黄色固体の目的物４８ｍｇ（４６．７％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １．５３（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．２５（ｓ、３Ｈ）、４．１９（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、７．０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．３９−７．５５（ｍ、４Ｈ）、７．７８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．９２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝２．１Ｈｚ）、８．１７（ｓ、１Ｈ）
【００６７】
（実施例６）５−［３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−３−エチル−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号７９）の製造
５−［３−（３−ブロモ−４−エトキシ−フェニル）−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン］−チアゾリジン−２，４−ジオン（化合物番号７７、０．１０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を１．００ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、窒素雰囲気下で水素化ナトリウム（１２．７４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えて５分後に臭化エタン（２３．７２μL、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間攪拌した。反応が終了したら１０ｍＬの水を加えて、溶液をジクロロメタン（１０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４：１）により精製し、黄色固体の目的物５２ｍｇ（４９．２％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ １．２８（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．５３（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）、３．８２（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、４．１８（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ）、７．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）、７．３９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、７．４９−７．５５（ｍ、３Ｈ）、７．７８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．８９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１６．８Ｈｚ）、８．１６（ｓ、１Ｈ）
【００６８】
前記実施例１〜６と類似した方法により下記表１に列挙した化合物を合成した。
（表１）
【表１ａ】
2008532999.tif 000009
【表１ｂ】
2008532999.tif 000010
【表１ｃ】
2008532999.tif 000011
【表１ｄ】
2008532999.tif 000012
【表１ｅ】
2008532999.tif 000013
【表１ｆ】
2008532999.tif 000014
【表１ｇ】
2008532999.tif 000015
【表１ｈ】
2008532999.tif 000016
【表１ｉ】
2008532999.tif 000017
【表１ｊ】
2008532999.tif 000018
【表１ｋ】
2008532999.tif 000019
【表１ｌ】
2008532999.tif 000020
【表１ｍ】
2008532999.tif 000021
【表１ｎ】
2008532999.tif 000022
【表１ｏ】
2008532999.tif 000023
【表１ｐ】
2008532999.tif 000024
【００６９】
（実施例７）前記化学式１に表される化合物を活性成分として含有させた製剤化方法
前記化学式１に表される化合物は目的により様々な形態に製剤化することができる。以下、本発明による前記化学式１に表される化合物を活性成分として含有させた、数種類の製剤化方法を表したものであるが、本発明はこれに限定されない。
【００７０】
（製剤１）錠剤（直接圧縮）
活性成分５．０ｍｇを篩にかけた後、ラクトース１４．１ｍｇ、Crospovidone USNF
０．８ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム０．１ｍｇを混合し、混合物を圧縮して錠剤を製剤した。
【００７１】
（製剤２）錠剤（湿式造粒）
活性成分５．０ｍｇを篩にかけた後、ラクトース１６．０ｍｇおよび澱粉４．０ｍｇを混合させた。ポリソルベート８０
０．３ｍｇを純粋な水に溶解し、添加し、混合物を微粒化した。乾燥後に微粒を篩にかけ、コロイド状二酸化ケイ素２．７ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２．０ｍｇとを混合させた。微粒を圧縮して錠剤を製剤した。
【００７２】
（製剤３）粉末剤およびカプセル剤
活性成分５．０ｍｇを篩にかけた後、ラクトース１４．８ｍｇ、ポリビニルピロリドン１０．０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム０．２ｍｇとを混合させた。混合物を適当な装置を利用してＮｏ．５ゼラチンカプセルに注入した。
【００７３】
（実施例８）ＣＤＣ２５Ｂ酵素アッセイ
ＣＤＣ２５Ｂの触媒ドメイン（ａａ
３７８−５６６）をＧＳＴ融合タンパク質によりＥ．ｃｏｌｉの中で発現、生産し、酵素原として使用した。酵素アッセイは９６−ウェルプレートの上でウェル当り最終反応容積を２００μＬになるようにして行った。緩衝液（３０ｍＭ
トリス緩衝液、ｐＨ８．５、７５ｍＭ ＮａＣｌ、０．６７ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ）１７０μL、ＣＤＣ２５Ｂ酵素２０μL（０．２μｇ）、ＤＭＳＯに溶かした試験化合物１０μLを各々添加し、最終反応濃度をＣＤＣ２５Ｂ酵素１μｇ／ｍＬ、ＦＤＰ２０μＭとなるようした。室温で１時間培養後測定した。この時、ＦＤＰおよびＤＴＴはアッセイ直前に緩衝液に添加し、常に新鮮な状態で検定を実施するようにした。１時間培養した後、酵素反応により生成される蛍光を４８５ｎｍ（励起）、５３８ｎｍ（発光）で測定した。
【００７４】
試験化合物を最終濃度が１０μＭとなるように処理し、スクリーニングを行った後、優れた抑制能力を示した化合物を選別し、ＩＣ５０の値を求めた。スクリーニングされた化合物を最終濃度が１、２、５、１０μＭとなるように処理し、％抑制率の値を求めた。抑制効果が低い場合（２０μｍで５０％）には、化合物の濃度を２０μＭまで上げて、％抑制率及びＩＣ５０の値を得た。
【００７５】
前記表１に挙げた化合物の中、優れた活性を有する化合物に対してＣＤＣ２５Ｂに対する％抑制率及びＩＣ５０の値を下記表２に表した。
【表２】
2008532999.tif 000025
【００７６】
（実施例９）細胞毒性アッセイ
（１）癌細胞培養
Ａ５４９、ＨＴ２９及びＭＣＦ−７を抗癌活性測定に使用した。これらの癌細胞は全て、ヒト腫瘍細胞株から由来した、米国の国立癌研究所（ＮＣＩ）から分譲された後、韓国化学研究院で培養しているものを使用した。この細胞は５％のウシ胎仔血清で補強されたＲＰＭＩ１６４０培養液を使用し、３７℃の恒温恒湿の５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。細胞の継代培養は３〜４日に１度ずつ行い、細胞を分離するために０．２５％トリプシンと３ｍＭ
トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−四酢酸（ＣＤＴＡ）を溶解させた燐酸緩衝生理食塩水溶液を使用した。
【００７７】
（２）活性測定
１９８９年米国の国立癌研究所で薬物の試験管内（in vitro）の抗癌活性を測定するために開発されたＳＲＢ分析法（スルホローダミン B アッセイ法）を使用した。トリプシン−ＣＤＴＡ溶液を利用して細胞を分離させ、９６ウエルマイクロプレート（Falcon社）にウェル当り細胞数が約２×１０３となるように分注した。分注された細胞はＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養し、底に付着させた。吸引装置で培養液を除去し、化合物番号７８及び７９の化合物と対照薬剤としてのドキソルビシンを各々培養液で希釈し、６当量のログ投与量（log dose）で、細胞が含まれているウェルに一度に各々１００ｍＬずつ３回入れ、細胞を４８時間更に培養した。化合物を溶解させるために必要によってジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を使用した。また、このように希釈した化合物溶液を細胞に加える前に０．２２ｍＬフィルターで濾過した。４８時間培養した後、各ウェルから培養液を除去し、１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を１００ｍＬずつ加えて、プレートを４℃で１時間保持し、細胞をプレートに固定させた。細胞の固定が終了した後、プレートを水で５〜６回洗浄し、残ったＴＣＡ溶液を完全に除去して、室温で乾燥させた。乾燥させたプレートに、ウェル当り１％酢酸溶液１００ｍＬに０．４％ＳＲＢを溶解させた染色溶液を加え、３０分間細胞を染色して、プレートを１％酢酸溶液で５〜６回洗浄し、細胞に結合しなかったＳＲＢを除去した。このように染色された細胞プレートを室温で乾燥させ、ウェル当り１０ｍＭのバッファリングされていないトリズマ塩基溶液（unbuffered trisma base solution）１００ｍＬを加えて滴定プレートシェーカーで１０分間混ぜ、染色薬を溶出させた後、マイクロプレートリーダーを使用して５２０ｎｍで吸光度を測定した。化合物の癌細胞に対する効果を定量するために、薬物を加えた時の細胞数（Ｔｚ）と、薬物が入っていない培養液により４８時間培養した時の細胞数（Ｃ）および薬物が含まれている培養液に４８時間培養した時の細胞数（Ｔ）を測定し、抗癌活性を下記数式１及び２により計算した。
（数式１）
【数１】
2008532999.tif 000026
（数式２）
【数２】
2008532999.tif 000027
【００７８】
ロータス・ソフトを用いるデータ回帰法によって薬物の癌細胞の成長に対する抑制効果を阻害％として得た。結果を下記表３に表した。
【表３】
2008532999.tif 000028
前記表３によると、本発明による化学式１に表される５−（１，３−ジアリル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体は数種の癌細胞、即ち、Ａ−５４９（非小細胞肺癌）、ＨＴ２９（肝臓癌）及びＭＣＦ−７（乳癌）に対して細胞毒性を示した。
【００７９】
（実施例１０）ヒト腫瘍モデルを利用した数種のＣＤＣ２５Ｂ阻害剤候補物質の生体内抗腫瘍効果の比較検証
本発明による化合物の生体内の抗癌効果を検証するために、生後６〜８週のオスのヌードマウスの腹壁に皮下にＣ３３Ａヒト子宮癌細胞株を注射した後、腫瘍が約５０〜８０ｍｍ３の大きさに成長した時、化合物番号７８と陰性対照物質として０．２％Ｔｗｅｅｎ８０とを共に各々腹腔に投与した。陽性対照物質としては現在抗癌剤として臨床に広く使用されたシスプラチン（４ｍｇ／ｋｇ）を用いた。投与量は１投与当たり０．２５ｍＬの量とし、一日１回ずつ７日間投与し続けた。腫瘍の体積はキャリパーを利用して腫瘍の長軸と短軸を測定した後、下記数式３により計算した。
（数式３）
【数３】
2008532999.tif 000029
【００８０】
これに対する結果が図１に図示されている。これによると、化合物７８はシスプラチンに相当する抗癌活性を示しているが、シスプラチンの毒性による運動性低下および食欲不振等のネガティブ反応は全く観察されなかった。従って、化学式１に表される５−（１，３−ジアリル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体は副作用が小さい低毒性抗癌剤として使用することができる。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
前述の通り、本発明による化学式１に表される５−（１，３−ジアリル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチレン）−チアゾリジン−２，４−ジオン誘導体及びその薬剤学的に許容可能な塩は、細胞分裂の際、Ｇ２／Ｍ周期での移行を決定するのに重要な役割を行うホスファターゼであるＣＤＣ２５Ｂに対する優れた阻害活性を示し、毒性による運動性定低下及び食欲不振の反応などの副作用が小さいので、低毒性抗癌剤として使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】ヒト腫瘍モデルを利用したＣＤＣ２５Ｂ阻害候補物質の生体内での抗腫瘍効果を表す。
【図１】
2008532999.tif 000038
【国際調査報告】
2008532999.tif 000039
2008532999.tif 000040