(57)【要約】  ウイルス性疾患の治療および予防の新規方法が提供される。特に、本発明は、ウイルス感染、ならびにこのようなウイルス感染に関連する疾患を抑制するための組成物および方法に関する。さらに具体的には、本発明は、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を含む天然および人工組成物を含んでなる疾患抑制性化合物に関する。【選択図】図１
2008524223.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物におけるウイルス感染を治療する方法であって、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む治療上有効量の組成物を、該治療を必要とする被験体に投与することを含む、上記方法。
【請求項２】
１種以上のウイルス性疾患または徴候を有する哺乳動物における１種以上のウイルス性疾患または徴候に関連する疼痛もしくは症状を軽減または改善する方法であって、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、治療上有効な疼痛または症状低減量の医薬組成物を、該軽減または改善を必要とする哺乳動物に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、１種以上のウイルス性疾患または徴候に関連する疼痛もしくは症状を軽減または改善するのに十分である、上記方法。
【請求項３】
１種以上のウイルス性疾患または徴候を有する哺乳動物における１種以上のウイルス性疾患または徴候に関連する疼痛もしくは症状を軽減または改善する方法であって、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、治療上有効な疼痛または症状低減量の医薬組成物を、該軽減または改善を必要とする哺乳動物に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、１種以上のミコバクテリア疾患または徴候に関連する疼痛もしくは症状を軽減または改善するのに十分である、上記方法。
【請求項４】
前記治療上有効量の１種以上のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を、治療上有効量の１種以上の抗炎症化合物および／または治療上有効量の１種以上の免疫調節剤と一緒に、前記治療を必要とする被験体に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗炎症化合物および免疫調節剤が、インターフェロン；ベータセロン、βインターフェロンなどのインターフェロン誘導体；イロプロスト、シカプロストなどのプロスタン誘導体；コルチゾール、プレドニゾロン、メチル−プレドニゾロン、デキサメタソンなどのグルココルチコイド；シクロスポリンＡ、FK-506、メトクスサレン、タリドミド、スルファサラジン、アザチオプリン、メトトレキセートなどの免疫抑制剤；ジロイトン、MK-886、WY-50295、SC-45662、SC-41661A、BI-L-357などのリポキシゲナーゼ阻害剤；ロイコトリエンアンタゴニスト；ACTHおよびその類似体などのペプチド誘導体；可溶性TNF-受容体；TNF-抗体；インターロイキン、その他のサイトカイン、Ｔ細胞タンパク質の可溶性受容体；インターロイキン、その他のサイトカイン、Ｔ細胞タンパク質の受容体に対する抗体；ならびにカルシポトリオールおよびその類似体を単独で、または組み合わせて含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
治療上有効量の１種以上のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を、１種以上の抗微生物もしくは抗ウイルス組成物、またはその組合せと一緒に、治療を必要とする被験体に投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
１種以上のウイルス性徴候に関連する疼痛および／または症状の低減または抑制が、約10〜20％、30〜40％、50〜60％、もしくは75〜100％の低減または抑制である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
所与のウイルス感染に曝露される危険性があると考えられる被験体における所与のウイルス感染の症状を予防する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を上記被験体に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、所与のウイルスと１以上のウイルス受容体との結合を阻害し、被験体がウイルスに曝露された場合、その曝露による症状が予防される、上記方法。
【請求項９】
所与のウイルス感染に曝露されたことが疑われる被験体における所与のウイルス感染の症状を予防する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を上記被験体に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、所与のウイルスと１以上のウイルス受容体との結合を阻害し、被験体がウイルスに曝露された場合、その曝露による症状が予防される、上記方法。
【請求項１０】
改善を必要とする被験体における所与のウイルス感染の症状を改善する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を上記被験体に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、所与のウイルスと１以上のウイルス受容体との結合を阻害する、上記方法。
【請求項１１】
阻害または予防されるウイルス感染の症状が、倦怠感、発熱、悪寒、鼻炎、下痢、アトピー性湿疹、脳炎、角結膜炎、咽頭炎、歯肉口内炎、ヘルペス性肝炎、再発性口顔粘膜皮膚病変すなわち口唇ヘルペス、痘瘡皮膚痛、水痘皮膚痛、多形性紅斑、突発性口内炎、アフタ性潰瘍、ベーチェット症候群、単核症、バーキットリンパ腫、原発性滲出リンパ腫、多発性骨髄腫、免疫芽球性血管リンパ節炎、キャッスルマン病、後天性免疫不全症候群（AIDS）関連リンパ腫、移植後リンパ球増殖性疾患、ホジキン病、Ｔ細胞リンパ腫、口腔毛髪状白斑症、リンパ球増殖症、リンパ上皮癌、体腔性リンパ腫すなわちＢ細胞リンパ腫、非角化癌、扁平上皮鼻咽頭癌、腎移植片関連上皮腫瘍、悪性中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、血管リンパ過形成、前立腺腫瘍、子宮頚癌、外陰の腫瘍、網膜芽腫、リー・フラウメニ症候群、ガードナー症候群、ヴェルナー症候群、神経様基底細胞癌症候群、神経線維腫症１型、ポリニューロパシー、運動性ニューロパシー、感覚性ニューロパシー、多発神経根ニューロパシー、自律神経ニューロパシー、病巣性または多病巣性頭蓋ニューロパシー、神経根ニューロパシー、および典型的に腫瘍浸潤から生じる神経叢障害、性的または周生期的に感染したヘルペス、倦怠感、発熱、虚咳、筋痛症、および胸の疼痛、人工呼吸器障害、発汗、Ｘ線検査時の縦隔の広がり、頚部および胸部の水腫、壊死性縦隔洞リンパ節炎、非圧痕水腫、、痂（かさ）、吐気、嘔吐、発熱、腹痛、出血性下痢、粘膜潰瘍、出血性腸間膜リンパ腺炎、もしくはこれらいずれかの組合せから選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
医薬組成物を、経口、全身、インプラントを介して、静脈内、局所、鞘内、吸入により、または鼻内投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体は、融合ポリペプチドの一部であってもよく、その際、該融合ポリペプチドは、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体に対し異種のアミノ酸配列とを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
治療または予防を必要とする患者における前炎症性サイトカイン産生を阻害することにより、１種以上のウイルス性疾患を治療または予防する方法であって、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を該患者に投与することからなる、上記方法。
【請求項１５】
前記サイトカインが、IL-1、TNFα、IL-18、または一酸化窒素、もしくはそのいずれかの組合せを阻害する、請求項14に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、2004年12月16日に出願された米国仮特許出願第60/636,091号の優先権の利益を請求する。
【０００２】
本発明は、ウイルス感染を抑制するための組成物および方法、ならびに、このようなウイルス感染を原因とする疾患または障害の治療に関する。さらに具体的には、本発明は、天然ツベルシン(Tubercin)および人工ツベルシン、丸山ワクチンまたはその機能的誘導体を含む疾患抑制性化合物にも関する。
【背景技術】
【０００３】
ヒト免疫不全ウイルス
ヒト免疫不全ウイルス（HIV）は、後天性免疫不全症候群（AIDS）と呼ばれる緩徐変性免疫系疾患の主な原因であると考えられている（Barre-Sinoussi, F.ら、1983, Science 220:868-870；Gallo, R.ら、1984, Science 224:550-503）。HIVには少なくとも２つの異なる型：HIV-1（Barre-Sinoussi, F.ら、1983, Science 220:868-870；Gallo, R.ら、1984, Science 224:550-503）とHIV-2（Clavel, F.ら、1986, Science 223:Guyader, M.ら、1987, Nature 326:662-669）がある。さらに、これらの型の各々の集団内に大量の不均質性が存在する。ヒトの場合、HIV複製はCD4+Ｔリンパ球集団において顕著に行なわれ、HIV感染によってこの細胞型の欠失、次いで免疫不全、日和見感染、神経機能異常、腫瘍増殖が起こり、最終的には死に到る。
【０００４】
HIVはレトロウイルスのレンチウイルスファミリーのメンバーである（Teich, N.ら、1984, RNA Tumor Viruses, Weiss, R.ら編、CSH-Press, pp.949-956）。レトロウイルスは、外被で覆われた小さなウイルスであり、このウイルスは、一本鎖RNAゲノムを含み、ウイルスによりコードされた逆転写酵素、RNA依存性DNAポリメラーゼにより産生されるDNA中間体を介して複製する（Varmus, H., 1988, Science 240:1427-1439）。
【０００５】
HIVウイルス粒子は、ウイルスコアを含み、該ウイルスコアは、ウイルスRNAゲノムおよび初期複製事象に必要な酵素と一緒に、その一部がキャプシドタンパク質から構成される。ミリスチル化ギャップタンパク質は、ウイルスコアの周りに外部シェルを形成し、このシェルも、感染した細胞膜に由来する脂質エンベロープで取り囲まれている。HIVエンベロープ表面糖タンパク質が単一の16.0キロダルトン前駆体タンパク質として合成され、このタンパク質は、ウイルス出芽中に細胞プロテアーゼにより２つの糖タンパク質、すなわち、gp41とgp120に切断される。gp41は膜貫通糖タンパク質であり、gp120は、恐らく三量体または多量体の形態で、gp41と非共有結合したままの細胞外糖タンパク質である（Hammarskjold, M.およびRekosh, D.、1989, Biochem. Biophys. Acta 989: 269-280）。
【０００６】
CD4細胞表面タンパク質（CD4）はHIV-1ウイルスの細胞受容体として働くため、HIVは、CD4+細胞に向けてターゲッティングされる（Dalgleish, A.ら、1984, Nature 312:763-767；Klatzmannら、1984, Nature 312:767-768；Maddonら、1986, Cell 47:333-348）。細胞へのウイルスの侵入は、細胞CD4受容体分子と結合するgp120に左右される（McDougal, J. S.ら、1986, Science 231:382-385；Maddon, P. J.ら、1986, Cell 47:333-348）が、これはCD4+細胞に対する向性を示しており、また、gp41はウイルス膜中のエンベロープ糖タンパク質複合体を足場にする。これらのウイルス対細胞相互作用は感染に必要であるが、別のウイルス対細胞相互作用も必要である。
【０００７】
HIV治療
HIV感染は汎流行性であり、HIVに関連する疾患は世界的に健康に関する主要な問題となっている。有効な治療薬の設計のために、相当の努力はなされているが、現在、AIDSに対し治効ある抗レトロウイルス薬は存在しない。このような薬剤を開発するために、治療介入の標的として、数段階のHIV生活環が考慮されている（Mitsuya, H.ら、1991, FASEB J. 5: 2369-2381）。優勢な見解によれば、宿主細胞タンパク質の干渉は有害な副作用をもたらすため、HIV生活環への介入のための多数のウイルス標的が提案されている。例えば、ウイルスによりコードされた逆転写酵素は、薬剤開発の１つの焦点となっている。多数の逆転写酵素をターゲッティングした薬剤（2’,3’-ジデオキシヌクレオシド類似体、例えば、AZT、ddI、ddC、テノファビル、ネベリピン、エファビレンズ、デラビルジン、ならびにd4Tなどを含む）が開発され、これらは、HIVに対して活性であることが示されている（Mitsuya, H.ら、1991, Science 249:1533-1544）。
【０００８】
HIV-1の新しい治療計画によって、逆転写酵素（RT）をターゲッティングする抗HIV化合物（例えば、アジドチミジン（AZT）、ラミブジン（3TC）、ジデオキシノジン（ddI）、ジデオキシシチジン（ddC））の組合せをHIV-1プロテアーゼインヒビターと一緒に用いると、AZTを単独で用いた場合（約１ログ減少）と比較して、ウイルス負荷にはるかに大きな効果（２〜３ログ減少）をもたらすことが証明された。例えば、近年、AZT、ddI、3TCおよびリトナビルの組合せにより、印象的な結果が得られている（Perelson, A.S.ら、1996, Science 15:1582-1586）。しかし、これらの化学薬品の組合せを長期にわたって使用すると、特に骨髄に対し、毒性を招くことになる。また、長期の細胞傷害性治療は、キラー細胞活性を介し（Blazevic, V.ら、1995, AIDS Res. Hum. Retroviruses 11:1335-1342）、ならびに、抑制因子、特に、ケモカインランテス、MIP-1.αおよびMIP-1.βの放出により（Cocchi, F.ら、1995, Science 270:1811-1815）、HIVの制御に必須であるCD8+Ｔ細胞の抑制も引き起こしうる。抗レトロウイルスによる長期化学療法における別の大きな懸念事項として、部分的または完全耐性を有するHIV突然変異の発生が挙げられる（Lange, J. M., 1995, AIDS Res. Hum. Retroviruses 10:S77-82）。このような突然変異は、抗ウイルス治療に不可避の結果であると考えられる。野生型ウイルスの消失および突然変異ウイルスの出現のパターンと、同時に起こるCD4+Ｔ細胞数減少とを組み合わせると、少なくともいくつかの化合物を用いた場合、ウイルス突然変異体の出現がAIDS治療の失敗の主な根源的要因である可能性が高いと考えられる。
【０００９】
細胞内へのウイルスの侵入、すなわち、HIV感染の最初の段階を阻害することのできる薬剤を開発する試みもなされている。この場合、焦点はこれまでCD4、すなわちHIVの細胞表面受容体であった。例えば、組換え可溶性CD4は、いくつかのHIV-1株によるCD4+Ｔ細胞の感染を阻害することがわかっている（Smith, D. H.ら、1987, Science 238:1704-707）。しかし、特定の一次HIV分離物は、組換えCD4による阻害に対して比較的感受性が低い（Daar, E.ら、1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6574-6579）。加えて、組換え可溶性CD4臨床試験から、要領を得ない結果も得られている（Schooley, R.ら、1990, Ann. Int. Med. 112:247-253；Kahn, J. O.ら。1990, Ann. Int. Med. 112:254-261；Yarchoan, R.ら、1989, Proc. Vth Int. Conf. On AIDS, p.564, MCP 137）。
【００１０】
また、特定のウイルスコードタンパク質の極めて重要なウイルス特異的プロセシングを含むHIV複製の後期段階も、考えられる抗HIV薬の標的として提案されている。後期プロセシングは、ウイルスプロテアーゼの活性に左右され、このプロテアーゼを阻害する薬剤が開発されている（Erickson, J., 1990, Science 249:527-533）。近年、CD8+Ｔ細胞により産生されるケモカインがHIV感染の抑制に提案されている（Paul, W.E., 1994, Cell 82:177；Bolongnesi, D.P., 1993, Semin. Immunol. 5:203）。CD8+Ｔ細胞により分泌されるケモカインランテス（RANTES）、MIP-1.αおよびMIP-1.βは、in vitroでHIV-1またはHIV-2分離物に感染させた細胞におけるHIV-1 p24抗原産生を抑制することがわかった（Cocchi, Fら、1995, Science 270:1811-1815）。従って、前記および他のケモカインが、HIV感染の治療に有用であることがわかるだろう。しかし、前記および他の候補薬剤についての臨床結果には依然として疑問点が残る。
【００１１】
また、HIV感染治療のためのワクチンの開発にも注意が向けられている。HIV-1エンベロープタンパク質（gp160、gp120、gp41）は、AIDS患者に存在する抗HIV抗体の主要抗原であることが明らかにされている（Barinら、1985, Science 228:1094-1096）。従って、これまでのところ、これらのタンパク質が、抗HIVワクチン開発のための抗原として作用する最も有望な候補であると思われる。複数のグループが、宿主免疫系の免疫原標的として、gp160、gp120、および／またはgp41の様々な部分を使用し始めている。例えば、Ivanoff, L.ら、米国特許第5,141,867号；Saith, G.ら、WO92/22,654；Shafferman, A.、WO91/09,872、Formoso, C.ら、WO90/07,119を参照されたい。HIVタンパク質に対して指令されるワクチンには、ウイルスが急速に突然変異して、これらのワクチンの多くを無効にするという問題がある。従って、抗レトロウイルス薬の設計および試験に多大な努力が向けられてきたが、有効で、非毒性の治療薬が未だに必要とされている。
【００１２】
HIV-１の従来の治療に伴う困難および不適切さのために、新しい治療方法が依然として望まれる。
【００１３】
ヘルペスウイルス
ヘルペスウイルスは、宿主細胞核で複製する二本鎖DNAである。ヘルペスビリオンは、30以上の異なるタンパク質から構成され、これらのタンパク質は宿主細胞内に集合している。約６〜８個がキャプシドに用いられる。ヘルペスウイルスに好ましい宿主細胞は脊椎動物細胞である。ヘルペスウイルスは、様々な疾患の原因因子であるため、臨床的に極めて重要な動物ウイルスである。エプスタイン−バーウイルスは、癌イニシエーションに関与すると考えられており；サイトメガロウイルス（CMV）は、AIDS患者にとって感染の恐れが最も高く；また、水痘−帯状疱疹ウイルスは、水痘および帯状疱疹の原因因子である。単純ヘルペスウイルスサブタイプ１および２（HSV-1、HSV-2）は、ヒトが遭遇する最も一般的感染因子に属するヘルペスウイルスである。これらのウイルスは、再発性口唇単純ヘルペスのように比較的軽度の感染から、単純ヘルペス脳炎のような重症で、生命を危険にさらす疾患まで、極めて多様な疾患を引き起こす。米国では人口の高い比率が何らかの形態のヘルペスウイルスに感染している。推定９千８百万人が毎年口唇ヘルペス（HSV-1）に感染し、約３千万人の陰部ヘルペス（HSV-2）患者が毎年報告されている。一般に、これらのウイルスは、粘膜表面および擦過した皮膚でのウイルス曝露により、ウイルスの侵入および表皮および真皮でのウイルス複製が起こることによって、感染する。臨床的に明らかな病変に加え、潜伏性感染が、特に神経細胞中で持続する可能性もある。これは根絶するのが難しい感染である。このように厄介な疾患が、利用可能な治療が不適切であったために、抑制されないまま、ほとんど見過ごされてきた。
【００１４】
これらの感染でヒトが経験するもののほとんどは、比較的良性の症状、例えば、倦怠感、発熱、悪感、鼻炎および下痢を伴う。しかし、ヘルペスウイルスは、さらに重症の疾患、例えば、軟組織肉腫、癌、転移性疾患、プラズマ細胞腫、骨髄腫、リンパ腫、特定の遺伝性状態（網膜芽種など）、リー・フラウメニ症候群、ガードナー症候群、ヴェルナー症候群、神経様（nervoid）基底細胞癌症候群、神経線維腫症１型、ならびにいくつかの免疫不全症候群に関与していると考えられる。臨床上特に関心の高い他の症状として、白斑症、水泡潰瘍性疾患、突発性口内炎、アフタ（性）潰瘍がある。
【００１５】
例えば、ヘルペス科ウイルスの単一種、すなわち、エプスタイン・バーウイルス（BBV）は、地方流行性バーキットリンパ腫、後天性免疫不全症候群（AIDS）関連リンパ腫、移植後リンパ球増殖性疾患、ホジキン病（HD）、および稀有なＴ細胞リンパ腫に関連する。エプスタイン・バーウイルスはまた、口腔毛髪状白斑症、リンパ球増殖症、リンパ上皮癌、Ｂ細胞リンパ腫、ならびに非角化および扁平上皮鼻咽頭癌にも関連する。
【００１６】
ヒトヘルペスウイルス-8は、カポジ肉腫、原発性滲出リンパ腫、多発性骨髄腫、免疫芽球性血管リンパ節炎、ならびにキャッスルマン病のあらゆる形態に関与している。HHV-8はまた、体腔性リンパ腫と呼ばれる希有なＢ細胞リンパ腫、腎移植片の受容者における上皮腫瘍、悪性中皮腫、血管肉腫、ならびに血管リンパ過形成にも関連する。
【００１７】
ヒトヘルペスウイルス-6が検出され、リンパ球増殖性疾患、リンパ腫、ホジキン病および口腔扁平上皮癌に関連することがわかった。
【００１８】
HSV-1への一次感染は、稀に有意な問題を引き起こすが、アトピー性湿疹への広範な関与は、脳炎を伴う場合もあることから、命を危険にさらす可能性がある。角結膜炎、咽頭炎および肝炎も併発性の一次感染となりうる。人口の20〜40％はいずれかの段階でHSVへの再発性口唇感染を有するが、その再発が重症なのはこれらの患者の１％に過ぎない。再発性多形性紅斑は、その患者の65％が以前口唇ヘルペスに罹患したと考えられることから、HSV-1に関連すると思われる。
【００１９】
帯状疱疹感染は、ポリニューロパシー、運動性ニューロパシー、感覚性ニューロパシー、多発神経根ニューロパシー、自律神経ニューロパシー、病巣性または多病巣性頭蓋ニューロパシー、神経根ニューロパシー、および神経叢障害（典型的に、腫瘍浸潤から生じる）を引き起こすと考えられる。
【００２０】
後天性免疫不全症候群（AIDS）を有する人は、カポジ肉腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、結膜の扁平上皮癌、および小児性平滑筋肉腫に罹患する危険性が高くなる。驚くことに、これらの癌のほとんどが、特定のヒトヘルペスウイルス（HHV）感染、すなわち、HHV-8はカポジ肉腫に、近縁のエプスタイン−バーウイルスは非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、さらには恐らく小児性平滑筋肉腫に関連する。さらに、これらウイルスと癌の同様の関連が、一貫性がないにもかかわらず、免疫抑制されていない人々に認められている。ヘルペスウイルス関連疾患のいくつかの形態についての概要は、FlaitzおよびHicks（Flaitz CM, Hicks MJ. Molecular piracy: the viral link to carcinogenesis.  Oral Oncol 1998 Nov; 34(6):448-53）に記載されている。
【００２１】
ヘルペスウイルス感染に対する従来の治療の難しさおよび不足のために、新規の治療方法が依然として望まれる。
【００２２】
痘瘡
痘瘡の原因因子である痘瘡ウイルスは、オルソポックスウイルス属に属し、これにはサル痘瘡、牛痘およびワクシニアウイルスも含まれる。痘瘡ウイルスを原因とする疾患は、低い感染量（10〜100ビリオン）、長い潜伏期（平均12日）、発熱、全身症状、膿泡期まで進行する皮疹、患者の30％以下が死亡、生存者には顔に瘢痕が残ることを特徴とする。この疾患は、呼吸経路を介して、接触（飛沫）、また恐らくはエアゾルによりヒトからヒトへ感染する。
【００２３】
痘瘡は、20世紀前半全体を通して、世界的に疾病および死亡の最も重要な原因の１つであった。しかし、一部には、ウイルスを保有する動物がいなかったため、ワクチン（生、弱毒ワクシニアウイルス）の全身使用がこの疾患を予防する上で非常に有効であった。実際、1967〜1977の間、痘瘡根絶の世界的プログラムの結果、天然の疾患を排除するに到った（Fernerら、WHO、ジュネーブ、p. 1460, 1988）。痘瘡がなくなり、しかもワクチン伴う有害な事象の危険性が存在しないために、子供、病院職員、および軍人員の日常的な予防接種はなくなり、研究所でワクシニアおよび関連ウイルスを扱う職員のみが現在免疫を受けている。従って、世界人口のかなりの割合が痘瘡に対して免疫がない。残りの人口についても、ワクチン免疫が初回ワクチン接種から５年しか持続しないため、残留免疫はわずかである。従って、痘瘡の根絶およびワクチン接種の停止は、痘瘡ウイルスを用いた目に見えない攻撃、または生物兵器に対し、人々を脆弱にしてしまった。万が一このような事象が起これば、疫病は、人々の免疫障壁によって抑制されることなく蔓延するだろう（Anon.（総説）、Lancet 353:1539, 1999；Henderson, Science 283:1279-1282, 1999；Hendersonら、J.A.M.A. 281:2127-2137, 1999）。
【００２４】
痘瘡根絶が不確実であることから、緊急使用のためにワクチンが貯蔵されている。例えば、米国では、Wyeth Laboratoriesにより産生された155,000ワクチンバイアル（公称1,550万用量）が、初め、疾病予防管理センター（CDC）、米国ジョージア州アトランタの管理下で貯蔵された。1999年１月に開催された全国ワクチン諮問委員会の会議で、CDCは、国内の痘瘡ワクチン貯蔵所の状況について報告した。そのとき、Wyethが保有する1,550万用量のうち、340万用量が品質管理試験で不合格となり、さらに、1,030万が日付延長のための先回の管理試験により指定された使用期限を超えており、放出規格を満たしたのは残る170万用量であった（LeDuc, Presentation to the National Vaccines Advisory Committee、ワシントンD.C.、Jan. 11-12, 1999）。供給が限られているだけでなく、ワクチンは、100用量バイアルずつパッケージングされるため、分配が制限され、緊急時での無駄の可能性が高くなる。
【００２５】
米国の貯蔵以外にも、国立衛生局（オランダ、Bilthoven）に貯蔵されたワクチン（Lister, Elstree strian）の供給があり、その他の国でも痘瘡ワクチンの供給を有し、これらは痘瘡根絶の際には、合計３億用量に達するはずであった。しかし、前記と同様の貯蔵安定性の問題により、上記供給は5,000万用量以下に減少してしまった（Henderson, Science 283:1279-1282, 1999）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
従って、多種多様な抗ウイルス剤および／またはヌクレオシド類似体を用いて成功したいくつかの治療薬があるにもかかわらず、他のウイルスを標的とする、改善された治療法が依然として強く求められる。
【００２７】
本発明は、ウイルス感染を治療する安全かつ有効な組成物および方法に対する長年にわたる要求に取り組む。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
本発明は、治療上活性の化合物、該化合物を含む医薬製剤、ならびに、特にウイルス感染の治療および予防のためのの該化合物の使用に関する。
【００２９】
好ましい実施形態では、哺乳動物におけるウイルス感染またはウイルス産生を阻害する治療上活性の化合物は、ツベルシン（Tubercin）、ツベルシン-3、ツベルシン-5、ツベルシン-7、SSM（SSMAまたは丸山ワクチンとしても知られる）、またはZ-100、もしくはこれらいずれかの組合せを含む。別の好ましい実施形態では、哺乳動物におけるウイルス感染またはウイルス産生を阻害する薬剤は、ツベルシン、ツベルシン-3、ツベルシン-5、ツベルシン-7、SSM、あるいはZ-100をベースとするオリゴ糖−タンパク質コンジュゲートまたは脂質アラビノマンナン−タンパク質コンジュゲート、もしくはこれらいずれかの組合せを含む。
【００３０】
哺乳動物におけるウイルス感染または産生を阻害する薬剤としては、限定するものではないが、天然、合成および生合成分子を含む小有機分子、天然および／または合成分子を含む小無機分子が挙げられる。
【００３１】
本発明の一形態は、比較的低い濃度で比較的高い抗ウイルス活性を示す、臨床的に許容されるウイルス阻害剤を提供することである。
【００３２】
本発明はさらに、このような薬剤を含む医薬組成物も提供する。
【００３３】
本発明は、哺乳動物におけるウイルス感染を治療する方法であって、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む治療上有効量の組成物を、該治療を必要とする被験体に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【００３４】
また、本発明は、哺乳動物のウイルス感染を阻害する方法であって、ウイルス感染を被りやすい哺乳動物に、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、薬学的に許容される賦形剤を投与することを含んでなる、上記方法を提供する。
【００３５】
一実施形態では、哺乳動物への感染を阻害しようとするウイルスとして、ヘパドナウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、パポバウイルス、ポックスウイルス、イリドウイルス、およびヘルペスウイルスを含む属またはそのいずれかの組合せから選択されるDNAウイルスが挙げられる。
【００３６】
別の実施形態では、哺乳動物への感染を阻害しようとするウイルスとして、ピコルナウイルス、カルシウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、オルソミクソウイルス、ブンヤウイルス、アレナウイルス、レオウイルス、およびビルナウイルスを含む属、およびそのいずれかの組合せから選択されるRNAウイルスが挙げられる。
【００３７】
さらに別の実施形態では、哺乳動物への感染を阻害しようとするウイルスとして、レンチウイルス（例えば、HTLV-I、HTLV-II、HTLV-III（HIV-1）およびHIV-2など）、ならびに肝炎ウイルス（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、δ型、Ｅ型および／またはＧ型肝炎ウイルスなど）を含む属、またはそのいずれかの組合せから選択されるウイルスが挙げられる。
【００３８】
一実施形態では、本発明の方法を用いて、AIDSの症状を予防または改善する。一実施形態では、本発明の方法を用いて、倦怠感、発熱、虚咳、筋痛症、および胸の疼痛、人工呼吸器障害、発汗、発熱、腹痛、下痢、および粘膜潰瘍またはそのいずれかの組合せから選択されるAIDSの症状を予防または改善する。
【００３９】
別の実施形態では、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を投与することにより、哺乳動物において抑制される具体的ウイルス性疾患として、中でも、以下のものが挙げられる：ウイルス性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、δ型、Ｅ型およびＧ型）、インフルエンザ、ウイルス性肺炎、ウイルス性気管支炎、ヘルペス感染（単純ヘルペス、エプスタイン・バーウイルス（感染性単核症）、帯状疱疹（水痘−帯状ヘルペスウイルス（VZV））、灰白髄炎、AIDS（HIV-1感染）、成人T細胞白血病（ATL）、パピローマ（HPV）、麻疹、風疹、突発性発疹、伝染性紅斑、ウイルス性脳炎、ウイルス性脊髄炎、ヒツジおよびウマ貧血、サイトメガロウイルス感染、流行性耳下腺炎、水痘、狂犬病、ウイルス性腸炎、ウイルス性心筋炎、ウイルス性心膜炎、またはそのいずれかの組合せ。
【００４０】
別の実施形態では、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を投与することにより、哺乳動物において抑制しようとする具体的ウイルス性疾患として、中でも、以下のものが挙げられる：倦怠感、鷲口瘡、寝汗およびインフルエンザ様症状、発熱、悪寒、鼻炎、下痢、アトピー性湿疹、脳炎、角結膜炎、咽頭炎、歯肉口内炎、ヘルペス性肝炎、再発性口顔粘膜皮膚病変すなわち口唇ヘルペス、帯状疱疹、痘瘡皮膚痛、水痘皮膚痛、多形性紅斑、突発性口内炎、アフタ性潰瘍、ベーチェット症候群、単核症、バーキットリンパ腫、原発性滲出リンパ腫、多発性骨髄腫、免疫芽球性血管リンパ節炎、キャッスルマン病、後天性免疫不全症候群（AIDS）関連リンパ腫、移植後リンパ球増殖性疾患、ホジキン病、Ｔ細胞リンパ腫、口腔毛髪状白斑症、リンパ球増殖症、リンパ上皮癌、体腔性リンパ腫すなわちＢ細胞リンパ腫、非角化癌、扁平上皮鼻咽頭癌、腎移植片関連上皮腫瘍、悪性中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、血管リンパ過形成、前立腺腫瘍、子宮頚癌、外陰の腫瘍、網膜芽腫、リー・フラウメニ症候群、ガードナー症候群、ヴェルナー症候群、神経様（nervoid）基底細胞癌症候群、神経線維腫症１型、ポリニューロパシー、運動性ニューロパシー、感覚性ニューロパシー、多発神経根ニューロパシー、自律神経ニューロパシー、病巣性または多病巣性頭蓋ニューロパシー、神経根ニューロパシー、および神経叢障害（典型的に、腫瘍浸潤から生じる）、慢性泌尿管系感染、膣疾患、膣炎、子宮頸部形成異常、性器いぼ、足底いぼ、性的または周生期的に感染したヘルペス、もしくはそのいずれかの組合せ。
【００４１】
本発明のさらに別の態様では、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を投与することにより、哺乳動物において抑制される、あるいは、治療することができる具体的疾患および／または状態として、伝染性海綿状脳障害（TSE）として知られる進行性変形神経病を含む伝染性因子が挙げられる。特定の実施形態では、伝染性海綿状脳障害（TSE）には、スクラピー、慢性消耗病（CWD）、ウシ海綿状脳症（BSE）（「狂牛病」と呼ばれることもある）およびその変種、ならびにクロイツフェルト−ヤコブ病（CJD）もしくはそのいずれかの組合せが含まれる。
【００４２】
一実施形態では、前記ウイルス性疾患および／または徴候の１以上に関連する疼痛および／または症状の低減または抑制は、約10〜20％の低減または抑制である。別の実施形態では、疼痛の低減または抑制は、約30〜40％である。別の実施形態では、疼痛の低減または抑制は、約50〜60％である。さらに別の実施形態では、前記ウイルス性疾患および／または徴候の各々に関連する疼痛の低減または抑制は、約75〜100％である。本明細書に記載する範囲は、その範囲に含まれる百分率の具体的値をすべて含むものとする。例えば、約75〜100％までの範囲には、実際に具体的範囲を逐一記載しないが、76〜99％、77〜98％、なども含まれる。
【００４３】
従って、本発明の別の態様は、レトロウイルス感染を治療する新規の方法であって、治療上有効量の（ａ）ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と（ｂ）レトロウイルス逆転写酵素阻害剤、レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤、または侵入阻害剤からなる群より選択される１以上の化合物との組合せを、必要とする宿主に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。従って、逆転写酵素阻害剤は、以下のものを含む群から選択することができる：ヌクレオシドRT阻害剤：レトロビル（AZT／ジドブジン；Glaxo Wellcome）；コンビビル（Glaxo Wellcome）；エピビル（3TC、ラミブジン；Glaxo Wellcome）；ビデックス（ddI／ジダノシン；Bristol-Myers Squibb）；ヒビド（ddC／ザルシタビン；Hoffmann-La Roche）；ゼリト（d4T／スタブジン；Bristol-Myers Squibb）；ジアゲン（アバカビル、1592U89；Glaxo Wellcome）；テノフォビル、エントリシタビン、ヒドレア（ヒドロキシ尿素／HO；Bristol-Myers Squibb製のヌクレオシドRT増強剤）または非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（NNRTI）：ビラムン（ネビラピン；Roxane Laboratories）；レスクリプター（デラビルジン；Pharmacia & Upjohn）；ススチバ（エファビレンツ、DMP-266；DuPont Merck）；プレベオン（アデフォビルジピボキシル、ビス−POM PMEA；Gilead）。プロテアーゼ阻害剤（PI）は、以下に挙げるものから選択する：ホルトバース（サキナビル、Hoffmann-La Roche）；ノルビル（リトナビル；Abbott Laboratories）；クリキシバン（インジナビル；Merck & Company）；ビラセプト（ネルフィナビル；Agouron Pharmaceuticals）；アンゲネラーゼ（アンプレナビル／141W94；Glaxo Wellcome）、アタザナビル、カレトラ（ロピナビル／リトナビル）VX-478、KNI-272、CGP-61775、およびU-103017、または侵入阻害剤T20（フゼオンまたはエンフビルチド）、もしくはそのいずれかの組合せ。
【００４４】
前述した本発明の方法の各々について、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１以上の物質またはその機能的誘導体と、その薬学的に許容される賦形剤は、治療上有効量の１以上の抗ウイルス薬剤および／または抗炎症化合物および／または治療上有効量の１以上の免疫調節剤と一緒に、必要とする被験体に投与してもよい。
【００４５】
本発明の方法の特定の実施形態では、抗炎症化合物または免疫調節剤は、以下に挙げるものを含み、これらは単独で用いても、組み合わせて用いてもよい：インターフェロン；ベータセロン、βインターフェロンなどのインターフェロン誘導体；イロプロスト、シカプロストなどのプロスタン誘導体；コルチゾール、プレドニゾロン、メチル−プレドニゾロン、デキサメタソンなどのグルココルチコイド；シクロスポリンＡ、FK-506、メトクスサレン、タリドミド、スルファサラジン、アザチオプリン、メトトレキセートなどの免疫抑制剤；ジロイトン、MK-886、WY-50295、SC-45662、SC-41661A、BI-L-357などのリポキシゲナーゼ阻害剤；ロイコトリエンアンタゴニスト；ACTHおよびその類似体などのペプチド誘導体；可溶性TNF-受容体；TNF-抗体；インターロイキン、その他のサイトカイン、Ｔ細胞タンパク質の可溶性受容体；インターロイキン、その他のサイトカイン、Ｔ細胞タンパク質の受容体に対する抗体；ならびにカルシポトリオールおよびその類似体。
【００４６】
さらに別の態様では、本発明は、前記ウイルス性疾患または徴候のいずれか１以上に罹患した哺乳動物における前記ウイルス性疾患および／または徴候のいずれか１以上に関連する疼痛または症状を軽減または改善する方法であって、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物の、疼痛または症状を軽減する治療有効な量を、単独で、あるいは、１種以上の抗炎症化合物または免疫調節剤と組み合わせて、該軽減または改善を必要とする哺乳動物に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１以上の物質またはその機能的誘導体が、ウイルス性疾患および／または徴候を阻害するのに十分である、上記方法に関する。
【００４７】
本発明はまた、前記ウイルス性疾患および／または徴候のいずれか１つ、もしくはそのいずれかの組合せを治療するために、１以上の抗微生物または抗ウイルス組成物もしくはそのいずれかの組合せと一緒に、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を併用することにも関する。
【００４８】
従って、本発明は、被験体におけるウイルス感染および／または徴候を治療または予防的に治療する方法を提供する。
【００４９】
一実施形態では、ウイルス感染を治療するための方法は、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と薬学的に許容される賦形剤を、ウイルス性疾患および／またはウイルス性徴候が発生する前に、被験体に投与するステップを含む。
【００５０】
別の実施形態では、ウイルス感染を予防的に治療するための方法は、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と薬学的に許容される賦形剤を、ウイルス性疾患および／またはウイルス性徴候が発生する前に、被験体に投与するステップを含む。
【００５１】
いずれの方法も哺乳動物のウイルス感染を阻害する。
【００５２】
一実施形態では、HIV-1、肝炎ウイルス、またはマウスヘルペスウイルスのいずれかを原因とする症状を予防、改善もしくは治療するための本発明の組成物および方法の使用に関して、具体的に、Yutakaらの参照文献に開示されているようなZ-100の使用は本発明範囲では考慮しない（Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication by Z-100, an immunomodulator extracted from human-type tubercle bacilli, in macrophages Yutaka Emori1ら、J Gen Virol 85 (2004), 2603-2613））。
【００５３】
さらに別の実施形態では、ヘルペスウイルス１型の症状を予防、改善もしくは治療するための本発明の組成物および方法の使用に関して、具体的に、Kobayashi Mらの参照文献に開示されているようなZ-100の使用は本発明の範囲では考慮しない（Lipid-arabinomannan extracted from Mycobacterium tuberculosis, improves the resistance of thermally injured mice to herpes virus infections (Kobayashi Mら、Immunol Lett. 1994 Jun; 40 (3):199-205)）。
【００５４】
投与のための好ましい用量は、製剤１mlまたはmg当たり約10 ng〜約10 mgの範囲内のいずれでもよい。治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体は、モル濃度で測定することもでき、約１nM〜約10 mMの範囲内でよい。また、薬学的または化粧用に許容される担体と組み合わせた上記製剤も考慮される。正確な用量は、過度の実験なしに、よく知られる日常的臨床試験により確認することができる。
【００５５】
さらに別の態様では、本発明は、所与のウイルス感染に曝露される危険性があると考えられる被験体における所与のウイルス感染の症状を予防する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を上記被験体に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、所与のウイルスと１以上のウイルス受容体との結合を阻害し、従って、被験体がウイルスに曝露された場合、その曝露による症状が予防される、上記方法を提供する。
【００５６】
別の態様では、本発明は、所与のウイルス感染に曝露されたことが疑われる被験体における所与のウイルス感染の症状を予防する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を上記被験体に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、所与のウイルスと１以上のウイルス受容体との結合を阻害し、従って、被験体がウイルスに曝露された場合、その曝露による症状が予防される、上記方法を提供する。
【００５７】
別の態様では、本発明は、改善を必要とする被験体における所与のウイルス感染の症状を改善する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を上記被験体に投与することを含んでなり、その際、上記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体が、所与のウイルスと１以上のウイルス受容体との結合を阻害する、上記方法を提供する。
【００５８】
また、曝露後に予防を提供することにより、職業および非職業環境における感染を被りやすい個体のヘルペス感染の可能性を低減する方法も考慮される。ウイルス感染を低減するという同様の目的は、有効な抗ウイルス量のツベルシンおよび／またはSSM化合物またはその機能的誘導体を口、直腸および／または膣腔に投与して、ヘルペスの性的感染を予防する、および／または子宮内感染を阻害することにより、達成される。
【００５９】
この好ましい実施形態から派生したものとして、患者におけるヘルペスウイルス複製を抑制または予防する方法であって、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM化合物またはその機能的誘導体を、抗ヘルペスウイルス活性を示す他の化合物、例えば、ヌクレオシド（例：アシクロビル）薬と組み合わせて投与することからなる、上記方法が提供される。
【００６０】
本発明はまた、ヘルペスウイルス感染に関連する皮膚または粘膜の既存の病変および瘢痕の治療、ならびに、ヘルペスウイルスに関連する皮膚または粘膜の将来の病変および瘢痕の予防のための方法であって、これらの病変の治療および／または予防のために薬学的に有効量の前記組成物のいずれか１種以上を投与することを含む、上記方法も包含する。
【００６１】
さらに、本発明には、ウイルス感染により媒介される病状を有する哺乳動物の一般的治療方法も考慮され、この方法は、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を投与することを含む。このような病状、例えば、炎症反応、腫瘍発生、自己免疫病などは、前述したウイルス感染から直接または間接的に起こりうる。
【００６２】
新規の医学的治療および薬剤を提供することにより、ヘルペスおよびその他のウイルス感染を早期かつ安全に解消する。局所製剤を使用し、疾患の身体的症状が消失し、患者が快適になると同時に正常の外観を回復するまで、患部に維持することができる。
【００６３】
前記の好ましい実施形態に加えて、体腔を覆う皮膚、粘膜表面の表面ウイルス感染に起因する、表面ウイルス感染または生理学的状態を有する個体を治療することからなる方法も考慮されることは明らかである。ヘルペスウイルスに感染する可能性がある粘膜表面の例として、口腔軟組織；中耳；胃腸管；尿生殖管；気道／肺組織、眼；ならびに腹膜の感染が挙げられる。
【００６４】
この実施形態によれば、ウイルス感染を局所的に阻害する、または病状を局所的に治療する方法であって、その際、治療の標的が、前述した組織および器官であって、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を有する化合物またはその機能的誘導体と該器官を十分な時間接触させる、上記方法が提供される。
【００６５】
このようなウイルスを治療するための好ましい化合物として、実質的に精製された天然もしくは合成ツベルシンおよび／またはSSM化合物またはその機能的誘導体が挙げられる。ツベルシンおよび／またはSSMおよび同様に活性の化合物は、一連のアッセイにより同定することができ、その際、アッセイにおいて、化合物（天然もしくは合成ツベルシンおよび／またはSSMまたはその機能的誘導体）は、対照と比較して、ウイルス阻害活性を示す。例えば、しかし限定するものではないが、これらのアッセイの１つは、U1単球細胞におけるインターロイキン-18すなわちIL-18誘導性ヒト免疫不全ウイルス（HIV）産生を阻止することを含む。他のアッセイには、当分野で周知のIL-6、NaCl、LPS、TNFおよびその他のHIV刺激のような刺激物質を阻止することを含むものがある。これ以外のアッセイとして、MAGI-CCR-5細胞アッセイおよび本明細書に詳細に記載するPBMCアッセイなどがある。その他、同様のウイルス阻害に基づく当業者には周知のアッセイを用いて、本発明の前記方法のいずれかに用いる天然もしくは合成ツベルシンおよび／またはSSM化合物またはその機能的誘導体を同定することもできる。
【００６６】
ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を投与することによるウイルス誘導性腫瘍の治療および予防も本発明の別の態様である。本発明のさらに別の好ましい実施形態は、ウイルス誘導性であってもなくてもよいが、転移性の各種癌を治療するために、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を提供することである。このような腫瘍として以下のものが挙げられる：線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨形成肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜性肉腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴音神経腫、希突起グリオーマ、髄膜腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、リンパ腫、および白血病、またはこれらのいずれかの組合せ。
【００６７】
本発明のさらに別の態様では、哺乳動物におけるウイルス感染を治療および／または予防するための方法であって、ツベルシンおよび／またはSSMを1以上のタンパク質またはペプチドと組み合わせて投与することを含む、上記方法が提供される。ツベルシンおよび／またはSSM‐タンパク質／ペプチド組合せ療法に関する本発明の態様では、前記ウイルス、ウイルス徴候および／または疾患のいずれか１つを治療する好ましい化合物として、実質的に精製された天然もしくは組換えタンパク質またはペプチドが挙げられる。当業者には周知の化学合成により、前記タンパク質またはそのペプチド断片を１以上の改変した糖または改変したオリゴ糖と結合させることにより、糖タンパク質または糖ポリペプチドを形成することもできる。分子の非糖部分として用いることができるタンパク質のクラスの代表例として、抗体、酵素、成長因子、サイトカインおよびケモカインが挙げられる。前述のように、改変した糖と結合させることができる抗体として、以下のものが挙げられる：CDP-571、ゲムツズマブ、オゾガミシン、ビシロマブ、イムシロマブ、カプロマブ、111インジウムサツモマブペンデチド、ベバシズマブ、イブリツモマブチウキセタン、セツキシマブ、スレソマブ、アフェリモマブ、HuMax-CD4、MDX-RA、パリビズマブ、バシリキシマブ、イモリモマブ、レルデリムマブ、ペムツモマブ、イディオタイプワクチン（CEA）、チタン（Titan）、ロイコトロピン、エタネルセプト、ペキセリズマブ、アレムツズマブ、ナタリズマブ、エファリズマブ、トラツズマブ、エパリブマブ、パリビズマブ、ダクリズマブ、リツズマブ、サイトガム、エンゲリクス-B、エンブレル、ガミムン（IgG）、メニンギテク、リツクサン、シナギス、レオプロ、ヘルセプチン、サンドグロブリン、メンジュゲート、およびBMS-188667。非糖成分として用いることができる成長因子、酵素および受容体として、以下のものが挙げられる：ベネフィクス、メニンギテク、レファクト、プロシト、エポーゲン、エプレクス、イントロンＡ、ニューポゲン、フミリン、アボネクス、ベタセロン、セレザイム、ゲノトロピン、コゲネート、ネオレコルモン、ゴナール-F、フマローグ、ノボセブン、プレゴン、ノルジトロピン、レビフ、ヌトロピン、アクチベース、エスポ、ニューポゲン、インテグリリン、ロフェロン、インスマン、セロスチム、プロラスチン、プルモザイム、グラノサイト、クレオン、ヘトロジンHP、ダセン、サイゼン、ロイキン、インフェルゲン、レタベーズ、プロロイキン、レグラネクス、Z-100、ソマトロピン、フマトロープ、ヌトロピンデポト、ソマトロピン、エポエチンδ、ユートロピン、ランピルナーゼ、インフリキシマブ、チファコギン、オプレルベキン、インターフェロンα、アルデスロイキン、OP-1、ドロテレコギンα、タソネルミン、オプレルベキン、エタネルセプト、アフェリモマブ、ダクリズマブ、チモシンα1、ベカプレルミン、およびA-74187。これ以外にも、用いることができる非糖成分として、以下のものが挙げられる：ペキセリズマブ、アナキンラ、ダルベポエチンα、インスリングラルギン、アボネクス、アレムツズマブ、ロイコトロピン、ベータセロン、アルデスロイキン、ドルナーゼα、テネクテプラーゼ、オプレルベキン、コリオゴ��ドロピンα、およびナサルプレーゼ、またはこれらいずれかの組合せ。
【００６８】
さらに別の態様では、本発明は、セリンタンパク質分解（SP）活性により促進されるウイルス感染を治療および／または予防する新規の方法であって、治療上有効量の、セリンプロテアーゼ阻害またはセルピン活性を有する化合物、あるいは哺乳動物α1-アンチトリプシン（AAT）またはα1-アンチトリプシン活性（AAT）を含むAAT様活性を示す化合物を、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と組み合わせて投与することを含んでなり、その際、上記組合せ療法が、ウイルス複製、１以上のウイルス受容体とウイルスの結合および／または１以上のウイルス症状および／または徴候を有効に阻害する、上記方法に関する。
【００６９】
ツベルシンおよび／またはSSM-AAT組合せ療法に関する本発明の態様では、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を１つの製剤中で一緒に混合してもよいし、あるいは、ツベルシンおよび／またはSSM活性化合物またはその機能的誘導体を、治療上有効量のセリンプロテアーゼ阻害またはセルピン活性を有する化合物、あるいは哺乳動物α1-アンチトリプシン（AAT）またはα1-アンチトリプシン活性（AAT）を含むAAT様活性を示す化合物の投与前、投与と同時もしくはその後のいずれかに、治療上有効量投与してもよい。
【００７０】
ツベルシンおよび／またはSSM-AAT組合せ療法に関する本発明の態様では、化学分野の当業者には周知の通常または高度な合成化学反応のいずれかを用いて、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体をAAT化合物またはその機能的誘導体と直接結合させてもよい。
【００７１】
ツベルシンおよび／またはSSM-AAT組合せ療法に関する本発明の態様では、前記ウイルス、ウイルス徴候および／または疾患のいずれか１つを治療するための好ましい化合物として、実質的に精製された天然または組換えAATが挙げられる。AATは、野生型、突然変異型、またはトランスジェニック哺乳動物起源から精製するか、あるいは、野生型、突然変異型、または形質転換細胞から単離したものが好ましい。
【００７２】
目的のペプチドは、相同および類似のペプチドである。相同体が、配列相同性を有する天然ペプチドであるのに対し、類似体は、ペプチジル誘導体、例えば、このようなペプチドのアルデヒドまたはケトン誘導体である。AATおよびAATのペプチド誘導体に限定するわけではないが、オキサジアゾール、チアジアゾールおよびトリアゾールペプトイドのような化合物、ならびに特定のフェニレンジアルカノエートエステルを含む物質が好ましい。
【００７３】
前述した方法の各々において、本発明のツベルシンおよび／またはSSM-AAT組合せ療法に用いるのに考えられる哺乳動物α1-アンチトリプシンまたはセリンプロテアーゼ活性物質の阻害剤は、AATの部分または断片に対応するアミノ酸ペプチドを含む一連のペプチドをさらに含む。例えば、しかし限定するわけではないが、本発明の組成物および方法に用いるのに、AATの10アミノ酸断片に対応するアミノ酸ペプチドが具体的に考えられる。特に、以下のアミノ酸ペプチドが挙げられる：MPSSVSWGIL（配列番号19）；LAGLCCLVPV （配列番号20）；SLAEDPQGDA（配列番号21）；AQKTDTSHHD（配列番号22）；QDHPTFNKIT（配列番号23）；PNLAEFAFSL（配列番号24）；YRQLAHQSNS（配列番号25）；TNIFFSPVSI（配列番号26）；ATAFAMLSLG （配列番号27）；TKADTHDEIL（配列番号28）；EGLNFNLTEI（配列番号29）；PEAQIHEGFQ（配列番号30）；ELLRTLNQPD（配列番号31）；SQLQLTTGNG（配列番号32）；LFLSEGLKLV（配列番号33）；DKFLEDVKKL（配列番号34）；YHSEAFTVNF（配列番号35）；GDHEEAKKQI（配列番号36）；NDYVEKGTQG（配列番号37）；KIVDLVKELD（配列番号38）；RDTVFALVNY（配列番号39）；IFFKGKWERP （配列番号40）；FEVKDTEDED（配列番号41）；FHVDQVTTVK （配列番号42）；VPMMKRLGMF（配列番号43）；NIQHCKKLSS（配列番号44）；WVLLMKYLGN（配列番号45）；ATAIFFLPDE（配列番号46）；GKLQHLENEL（配列番号47）；THDIITKFLE（配列番号48）；NEDRRSASLH （配列番号49）；LPKLSITGTY（配列番号50）；DLKSVLGQLG（配列番号51）；ITKVFSNGAD（配列番号52）；LSGVTEEAPL （配列番号53）；KLSKAVHKAV（配列番号54）；LTIDEKGTEA（配列番号55）；AGAMFLEAIP（配列番号56）；MSIPPEVKFN（配列番号57）；KPFVFLMIEQ（配列番号58）；NTKSPLFMGK（配列番号59）；VVNPTQK （配列番号60）、またはこれらのうちいずれかの組合せ。
【００７４】
さらに、本発明のツベルシンおよび／またはSSM-AAT組合せ治療方法に用いるのに考えられるAATペプチドは、前文に示した配列番号１の10アミノ酸AATペプチド以外のあらゆる具体的AATペプチドを包含するものとする。例えば、本発明には、配列番号１のAATペプチド：アミノ酸１〜10、アミノ酸11〜20、アミノ酸21〜30などを挙げたが、組成物および該組成物の使用方法の範囲には、配列番号１の具体的AATペプチドを逐一実際に記載はしないが、例えば、配列番号１のアミノ酸２〜12、アミノ酸３〜13、４〜14などのようなAATペプチドの考えうるあらゆる組合せ、ならびに配列番号１の選択アミノ酸に対応するあらゆるAATペプチド断片を包含するものとする。従って、例示のために、限定するわけではなく、本発明出願者らは、本発明において、配列番号１に示したアミノ酸配列に基づくあらゆるAATペプチド変異型を用いた組成物、ならびに本発明の方法へのこのような組成物の使用を所有する権利がある。
【００７５】
前述した方法の各々において、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体は、融合ポリペプチドの一部であってもよく、その際、該融合ポリペプチドは、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体に対し異種のアミノ酸配列とを含む。
【００７６】
特定の実施形態では、本発明の方法で用いるのに考えられる融合ポリペプチドは、ヒト免疫グロビン定常部、例えば、ヒトIgG１定常部（改変ヒトIgG１定常部など）を含み、その際、IgG１定常部はFc受容体とは結合しない、および／または抗体依存性細胞傷害（ADCC）反応を開始しない。
【００７７】
さらに別の実施形態では、本発明の方法で用いるのに考えられる融合ポリペプチドは、融合ポリペプチドを同定、追跡または精製するのに有用なアミノ酸配列をさらに含んでもよく、例えば、融合ポリペプチドはFLAGまたはHISタグ配列をさらに含んでもよい。また上記融合ポリペプチドは、さらに、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体から、異種アミノ酸配列を除去するのに用いることができるタンパク質分解切断部位を含んでいてもよい。
【００７８】
本発明のさらに別の態様では、前記方法の各々に関して、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１以上の物質またはその機能的誘導体自体をアジュバントとして投与することもでき、その際、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１以上の物質またはその機能的誘導体は、後述するPhysicians Desk Referenceに記載されている１以上の薬剤と一緒に用いられる免疫刺激物質または免疫調節物質として作用する。
【００７９】
本発明のさらにまた別の態様では、前記方法の各々に関して、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１以上の物質またはその機能的誘導体自体をワクチン調製物中のアジュバントとして投与することにより、既知のあらゆる細菌、ウイルスもしくは寄生生物抗原調製物に対するワクチン応答を改善することもでき、その際、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１以上の物質またはその機能的誘導体は、後述するPhysicians Desk Referenceに記載されている１以上の薬剤と一緒に用いられる免疫刺激物質または免疫調節物質として作用する。
【００８０】
前記方法の各々に関して、哺乳動物へのウイルス感染を阻害するツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体は、小有機分子または化合物（例えば、天然に存在する、合成、および生合成分子または化合物など）、小無機分子または化合物（例えば、天然に存在するおよび／または合成分子または化合物など）を含むが、その際、これらの分子または化合物は、以下に詳述するin vitroアッセイにより試験することができるツベルシンおよび／またはSSM活性もしくはツベルシンおよび／またはSSM様活性を特異的に示すものとする。
【００８１】
本発明の一形態では、本発明の医薬組成物は、経口、全身、インプラントを介して、静脈内、局所、鞘内、頭蓋内、脳室内、吸入により、または鼻内投与する。
【００８２】
本発明の方法の特定の実施形態では、被験体または哺乳動物はヒトである。
【００８３】
本発明の方法の他の実施形態では、被験体または哺乳動物は、獣類および／または家畜動物である。
【００８４】
本発明は、前記方法の各々について、ツベルシン、SSMおよびその機能的誘導体を用いて説明してきたが、前述した方法の各々が、免疫刺激物質および抗腫瘍薬として以前使用されていた他の細菌細胞壁を用いた過度の実験をしなくても、実施できることは容易に理解されよう。従って、前記方法の各々で用いることができるこのような細菌細胞壁抽出物の代表的例として、ミコバクテリウム属、プロピオニバクテリウム属、ナコルジア属、および放線菌属のあらゆる細菌種、ならびにバチルス・カルメット−ゲラン（BCG）、多糖K、β1,3-グルカン、さらには、ビフィドバクテリウム、乳酸桿菌、発酵乳酸桿菌、好酸性乳酸桿菌および乳酸桿菌（S. lactis）の抽出物を挙げることができる（その全体を本明細書に具体的に記載したのと同様に）。例えば、限定するわけではないが、ムラミルペプチジルグリカン複合体（MPGC）は、発酵乳酸桿菌の非毒性細菌細菌壁抽出物であり、これは、マンノースが豊富な可変長さの多糖に結合するムラミン酸部分を含む。マンノースが豊富な多糖は、ムラミン酸含有複合体全体のインターナリゼーションを促進することから、本発明の方法の各々に用いることができる。
【００８５】
以上、後述する本発明の詳細な説明がよりよく理解され、本発明の寄与がよりよく評価されるように、本発明の重要な特徴についてかなり広範に概説してきた。本発明にはさらに別の特徴があり、それらについても以下に説明する。
【００８６】
そのため、本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明が、以下の説明および図面に記載する詳細事項にその適用を限定されるわけではないことを理解すべきである。本発明は、他の実施形態も可能であり、様々な方法で実用および実施することができる。加えて、本明細書で用いる用語および表現は、説明を目的とするものであり、制限的とみなすべきではない。
【００８７】
このように、当業者は、本明細書が基づく概念を、本発明の複数の特徴および利点を実施する他の方法を設計する基礎として容易に使用できることを理解されよう。従って、このような同等の構成が本発明の思想および範囲を逸脱しない限り、特許請求の範囲がこれらの構成を含むとみなされることに留意されたい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００８８】
（発明の詳細な説明）
標準的方法
本発明に従い、当業者の技量の範囲内で、通常の分子生物学、微生物学、および組換えDNA技術を用いることができる。このような技術は、文献に詳しく記載されている。例えば、Sambrook, FritschおよびManiatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第２版、1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.；Animal Cell Culture, R. I. Freshney編、1986）を参照されたい。
【００８９】
治療方法
本発明は、ウイルス感染を治療する方法であって、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、治療上有効量の組成物を、該治療を必要とする患者に投与することを含んでなる上記方法を提供する。
【００９０】
従って、本発明の組成物、すなわちツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体の投与は、ウイルス性疾患または障害の治療に有益であると考えられる。好ましい形態では、上記薬剤は、血液−脳関門を通過することができる、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体の類似体であり、これによって静脈内または経口投与が可能になる。血液−脳関門を通過するために多くの戦略が利用可能であり、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：分子の疎水性を高める；担体とのコンジュゲートとして、血液−脳関門中の受容体にターゲッティングした分子、例えば、トランスフェリンを導入するなど。別の実施形態では、頭蓋内、またはさらに直接的に、脳室内に薬剤を投与することができる。さらに別の実施形態では、吸入または鼻内経路により、薬剤を投与することもできる。
【００９１】
別の実施形態では、本発明の方法および組成物は、免疫系のウイルス性疾患または障害の治療に有用である。さらに別の実施形態では、症状の発症、または兆候前、あるいは、重度の症状の発症またはウイルス性疾患の徴候前の適切な時機に、本発明の薬剤を予防薬として投与することにより、疾患を予防することができる。従って、予防対策として、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を用いて、特定のウイルス性疾患の危険性がある患者を治療することができる。
【００９２】
本発明の薬剤の有効量、および適切な治療計画は、症状および患者の状態、ならびに、分子自体の特性、例えば、そのin vivo半減期および活性レベルに応じて変動しうる。これらのパラメーターは、当業者により容易に扱われ、通常の実験により決定することができる。
【００９３】
投与する好ましい用量は、治療しようとする患者の体液１ml当たり約１ピコグラム〜約500μgの範囲内でよい。ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と同様の抗ウイルス活性を有する、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体は、モル濃度で測定することも可能であり、約１nM〜約２mMの範囲内でよい。
【００９４】
本発明が関係するウイルス性疾患
本発明の哺乳動物におけるウイルス感染を阻害する治療方法が有益な具体的ウイルス性疾患または障害としては、限定するものではないが、DNAウイルス、RNAウイルスおよびレトロウイルスに起因するウイルス性疾患または障害がある。
【００９５】
一実施形態では、哺乳動物への感染を阻害しようとするウイルスとして、ヘパドナウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、パポバウイルス、ポックスウイルス、イリドウイルス、およびヘルペスウイルスを含む属またはそのいずれかの組合せから選択されるDNAウイルスが挙げられる。
【００９６】
別の実施形態では、哺乳動物への感染を阻害しようとするウイルスとして、ピコルナウイルス、カルシウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、オルソミクソウイルス、ブンヤウイルス、アレナウイルス、レオウイルス、およびビルナウイルスを含む属、およびそのいずれかの組合せから選択されるRNAウイルスが挙げられる。
【００９７】
さらにまた別の実施形態では、哺乳動物への感染を阻害しようとするウイルスとして、レンチウイルス（例えば、HTLV-I、HTLV-II、HTLV-III（HIV-1）およびHIV-2など）、ならびに肝炎ウイルス（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、δ型および／またはＥ型肝炎ウイルスなど）を含む属、またはそのいずれかの組合せから選択されるウイルスが挙げられる。
【００９８】
本発明の方法により治療可能なウイルス性疾患および／または徴候
別の実施形態では、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を投与することにより、哺乳動物において抑制される具体的ウイルス性疾患として、中でも、以下のものが挙げられる：ウイルス性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型）、インフルエンザ、ウイルス性肺炎、ウイルス性気管支炎、ヘルペス感染（単純ヘルペス、エプスタイン・バーウイルス（感染性単核症）、帯状疱疹）、灰白髄炎、AIDS（HIV-1感染）、成人T細胞白血病（ATL）、パピローマ（HPV）、麻疹、風疹、突発性発疹、伝染性紅斑、ウイルス性脳炎、ウイルス性脊髄炎、サイトメガロウイルス感染、流行性耳下腺炎、水痘、狂犬病、ウイルス性腸炎、ウイルス性心筋炎、ウイルス性心膜炎など。
【００９９】
一実施形態では、本発明の方法を用いて、AIDSの症状を予防または改善する。一実施形態では、本発明の方法を用いて、以下のものからなる群より選択されるAIDSの症状を予防または改善する：倦怠感、発熱、虚咳、筋痛症、および胸の疼痛、人工呼吸器障害、発汗、Ｘ線検査時の縦隔の広がり、頚部および胸部の水腫、壊死性縦隔洞リンパ節炎、非圧痕水腫、、痂（かさ）、吐気、嘔吐、発熱、腹痛、出血性下痢、粘膜潰瘍、および出血性腸間膜リンパ節炎、またはこれらのうちいずれかの組合せ。
【０１００】
別の実施形態では、有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を投与することにより、哺乳動物において阻害される具体的症状および／または疾患として、中でも、以下のものが挙げられる：倦怠感、発熱、悪寒、鼻炎、下痢、アトピー性湿疹、脳炎、角結膜炎、咽頭炎、歯肉口内炎、ヘルペス性肝炎、再発性口顔面粘膜病変すなわち口唇ヘルペス、痘瘡皮膚痛、水痘皮膚痛、多形性紅斑、突発性口内炎、アフタ性潰瘍、ベーチェット症候群、単核症、バーキットリンパ腫、原発性滲出リンパ腫、多発性骨髄腫、免疫芽球性血管リンパ節炎、キャッスルマン病、後天性免疫不全症候群（AIDS）関連リンパ腫、移植後リンパ球増殖性疾患、ホジキン病、Ｔ細胞リンパ腫、口腔毛髪状白斑症、リンパ球増殖症、リンパ上皮癌、体腔性リンパ腫、すなわちＢ細胞リンパ腫、非角化癌、扁平上皮鼻咽頭癌、腎移植片関連上皮腫瘍、悪性中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、血管リンパ過形成、前立腺腫瘍、子宮頚癌、外陰の腫瘍、網膜芽腫、リー・フラウメニ症候群、ガードナー症候群、ヴェルナー症候群、神経様（nervoid）基底細胞癌症候群、神経線維腫症１型、ポリニューロパシー、運動性ニューロパシー、感覚性ニューロパシー、多発神経根ニューロパシー、自律神経ニューロパシー、病巣性または多病巣性頭蓋ニューロパシー、神経根ニューロパシー、および神経叢障害（典型的に、腫瘍浸潤から生じる）、性的または周生期的に感染したヘルペス、もしくはこれらいずれかの組合せ。
【０１０１】
従って、以上のことを鑑み、本発明は、HIV-1への曝露が疑われる、または曝露の危険性が高いと考えられる被験体におけるAIDSの症状を予防する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を該被験体に投与することを含んでなる、上記方法を提供する。本発明はまた、改善が必要な被験体におけるAIDSの症状を改善する方法であって、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を該被験体に投与することを含んでなる、上記方法も提供する。
【０１０２】
本発明の方法に使用する組成物
ツベルシン
ツベルシン-3およびツベルシン-5
本発明の方法に用いることができるツベルシン組成物として、ツベルシン-3およびツベルシン-5と称するツベルシン炭水化物複合体が挙げられる。ツベルシン-3は、Chung, T. H., J. Korean Med. Ass., 17, 427-431(1974)；Chung, T. H.ら、Yonsei Med. J., 17, 131-135（1976）に記載のように調製することができる。ツベルシン-5は、米国特許第6,274,356号（その全文を参照として本明細書に組み込む）に記載されているヒト結核菌（M. tuberculosis）から抽出することができる。ツベルシン-5は、必須単糖（例えば、マンノース、アラビノース、グルコースおよびガラクトース）同士の間に形成される直鎖および側鎖グリコシド結合を有する多糖の混合物である。このような多糖の分子量は、7,000以下、好ましくは2,500〜3,500ダルトンの範囲に位置する。
【０１０３】
例えば、ツベルシン-5炭水化物複合体は、その成分としてマンノース、アラビノース、グルコースおよびガラクトースを含む多糖から主に構成されるヒト結核菌の抽出物からなり、その際、各多糖の重量平均分子量は、7,000以下であり、上記多糖の部分的酸加水分解産物は：
【化１】
2008524223.tif 000003
【０１０４】
（ここで、ｎ、ｏおよびｐはそれぞれ整数であり；ｘはグルコースおよびガラクトース残基の鎖である）
を含む。
【０１０５】
別の実施形態では、構造Ａに表されるツベルシン-5の抽出物の部分的酸加水分解産物はさらに、
【化２】
2008524223.tif 000004
【０１０６】
（ここで、ｌおよびｍはそれぞれ整数であり；ｘはグルコースおよびガラクトース残基の鎖である）
を含む。
【０１０７】
別の実施形態では、構造Ｂに記載されるツベルシン-5の抽出物の部分的酸加水分解産物は、
【化３】
2008524223.tif 000005
【０１０８】
を含んでもよい。
【０１０９】
別の実施形態では、構造Ａに記載されるツベルシン-5の抽出物の部分的酸加水分解産物はさらに、前記のいずれかの部分的酸加水分解産物を含んでもよく、このようなものとして、限定するものではないが：
【化４】
2008524223.tif 000006
【０１１０】
が挙げられる。
【０１１１】
丸山ワクチン（Specific Substance of Maruyama：SSM）
SSMとは、結核菌株に由来するワクチンであり、その名称は日本医科大学の故丸山千里教授にちなんで付けられた。SSM（本明細書ではSSMAとも呼ぶ）は、多糖としてアラビノマンナンを含み、エステル結合により該アラビノマンナンに結合する脂肪酸を有し、このリポ多糖における脂肪酸の含有率は、３〜28％である。上記多糖は、ヒト結核菌（Mycobacterium tumerculosis）株Aoyama Bまたはヒト結核菌株H37 Rvの細胞体の温水抽出および精製により得られる。SSMは、従って、リポアラビノマンナンであり、明確な化学組成を有するリポ多糖を含むが、これは、米国特許第4,394,502号（その全文を参照として本明細書に組み込む）または米国特許第4,329,452号（その全文を参照として本明細書に組み込む）のいずれかに記載のように、単離および精製することができる。いくつかの実施形態では、SSM多糖は、エステル結合を介して脂肪酸とアラビノマンナンを結合することにより調製することができ、該アラビノマンナンは、ヒト結核菌（Mycobacterium tumerculosis）株Aoyama Bまたはヒト結核菌株H37 Rvの細胞体のアルカリ抽出および精製により取得し、このリポ多糖における脂肪酸の含有率は、３〜28％である。別の実施形態では、SSMリポ多糖は、エステル結合を介して脂肪酸とリポアラビノマンナンを結合することにより調製することができ、該リポアラビノマンナンは、ヒト結核菌（Mycobacterium tumerculosis）株Aoyama Bまたはヒト結核菌株H37 Rvの細胞体の温水抽出および精製により取得し、このリポ多糖における脂肪酸の含有率は、３〜28％である。いずれの場合にも、脂肪酸はパルミチン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ツバキュロステアリン酸、ヘプタデカン酸、オレイン酸およびリノール酸であり、前記リポ多糖は、30〜74％のアラビノース、20〜50％のマンノース、０〜10％のグルコースおよび０〜13％のガラクトースからなる単糖組成を有する。
【０１１２】
HBe抗原のSSMの効果を調べる試験では、Satomura Kらが、SSMがヒト末梢血球におけるIFN-γの産生を刺激することを証明し、また、SSMでHBe抗原陽性慢性Ｂ型肝炎患者を治療すれば、IL-10の阻害およびIFN-γの刺激により、HBe抗原のクリアランスおよび血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼレベルの正常化が達成されることを示唆した（Effects of SSM (specific substance maruyama) on HBe antigen-positive chronic hepatitis B-clinical efficacy and modulation of cytokines J Nippon Med Sch. 2000 Aug; 67(4):261-6）。
【０１１３】
Z-100
Z-100は、SSMのさらに強力な形態である。Z-100は、SSMと同じ薬剤であるが、異なる濃度で用いられる。Z-100は、インターロイキン12、インターフェロンγ（IFN-）および−ケモカインの誘導のような様々な免疫調節活性を有するヒト結核菌から抽出されるアラビノマンナンである（Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication by Z-100, an immunomodulator extracted from human-type tubercle bacilli, in macrophages Yutaka Emori1ら、J Gen Virol 85 (2004), 2603-2613）。Yutakaらは、ヒト単球由来マクロファージ（MDM）におけるヒト免疫不全ウイルス１型（HIV-1）に対するZ-100の効果を調べた。MDMにおいて、Z-100は、マクロファージ−トロピック（M-トロピック）HIV-1株だけではなく、両種性モロニーマウス白血病ウイルスまたは水泡性口内炎ウイルスＧエンベロープを有するHIV-シュードタイプの複製も顕著に抑制した。Yutakaらはまた、Z-100が、感染から24時間後に添加したときでも、HIV-1発現を阻害することをみいだした。さらに、Yutakaらは、pNL-43lucenvベクター（該ベクターにおいて、env遺伝子は欠陥を有し、nef遺伝子はホタルルシフェラーゼ遺伝子で置換されている）をMDMに直接トランスフェクションすると、Z-100が上記ベクターの発現を実質的に阻害することも証明した。これらの知見を総合すると、主としてHIV-1転写のレベルで、Z-100はウイルス複製を阻害することが示唆される。しかし、Yutakaらはまた、Z-100が、MDMにおいて細胞表面受容体CD4およびCCR5の発現をダウンレギュレートすることも明らかにしており、これは、HIV-1侵入に対するある程度の阻害効果を示している。Yutakaらによるさらなる実験から、Z-100がこれら細胞においてIFN産生を誘導することが明らかになり、その結果、16-kDa CCAAT／エンハンサー結合タンパク質（C/EBP）転写因子の誘導が起こり、該因子がHIV-1長末端反復転写を抑制することが証明された。これらの効果は、SB 203580、すなわち、p38マイトゲン活性化タンパク質キナーゼ（MAPK）の特異的阻害剤により軽減されたが、これは、p38 MAPKシグナル化経路が、MDMにおけるHIV-1複製のZ-100誘導性抑制に関与することを示している。以上を合せて考えると、Yutakaらのこれらの知見は、Z-100がHIV-1感染を抑制するのに有用な免疫調節物質となりうることを示唆している。
【０１１４】
さらに、Z-100、すなわち、ヒト結核菌株Aoyama Bから抽出した脂質−アラビノマンナンの効果を、単純ヘルペスウイルス１型（HSV）感染に対する熱傷マウス（TI-マウス）の耐性について試験した（Kobayashi Mら）。Z-100、すなわち、ヒト結核菌株Aoyama Bから抽出した脂質−アラビノマンナンは、ヘルペスウイルス感染に対する熱傷マウスの耐性を高める（Kobayashi Mら、Immunol Lett. 1994 Jun；40(3):199-205）。Kobayashi Mらは、TIマウスの感染に対する感受性が正常なマウス（Nマウス）と比較して約100倍高いことを証明した。しかし、TIマウスの感染に対する高い感受性は、Z-100で処理する（10 mg／kg腹腔内投与；熱傷から１、３および５日後）と、Nマウスで認められるレベルまで実際に阻止された。Kobayashi Mらは、TIマウスから調製した熱傷関連CD8+ CD11b+ TCRγ／δ＋サブレッサーＴ（BAST）細胞の養子免疫伝達により、HSVによる感染に対するNマウスの感受性が増大するのに対し、Z-100処理TIマウス（ZTC）から調製したCD8+Ｔ細胞画分を接種したＮマウスの感受性は不変であることを証明した。加えて、Kobayashi Mらは、抗IL-4モノクローナル抗体（mAb）の存在下in vitroでBAST細胞をアッセイすると、BAST細胞のサプレッサー細胞活性が呈示されないことも明らかにした。BAST細胞は刺激がなくてもその培養液にIL-4を放出した。ZTCのサプレッサー細胞活性およびZTCによるIL-4産生はわずかであった。以上を考え合せると、Kobayashi Mらの結果から、Z-100は、BAST細胞の調節および／または該細胞からのIL-4放出により、HSV感染に対するTIマウスの耐性を改善しうることが明らかにされた。
【０１１５】
前文に開示したツベルシンおよびSSM（Z-100）化合物および／または物質以外にも、別の実施形態では、本発明の前記方法のすべてにおいて用いるためのSSMおよび／またはツベルシン組成物は、中でも、ヒト結核菌の高温水性溶剤抽出により産生される多糖を含むSSMおよび／またはツベルシンの機能的誘導体組成物であってもよく、その際、上記多糖は、アラビノース、マンノースおよびグルコース残基からなる。さらに詳しくは、本発明の方法で用いるSSMおよび／またはツベルシンの機能的誘導体組成物として、上記多糖の分子量が、5×102〜5×104（ゲルろ過により決定される）であるものも考えられる。一実施形態では、本発明のSSM／ツベルシンの機能的誘導体組成物の多糖は、10〜72重量％のマンノース、３〜30重量％のアラビノースおよび５〜30重量％のグルコースからなる。別の実施形態では、本発明のSSM／ツベルシンの機能的誘導体組成物の多糖は、40〜50重量％のマンノース、15〜25重量％のアラビノースおよび５〜15重量％のグルコースからなる。SSM／ツベルシンの機能的誘導体組成物は、米国特許第6.015,796号にさらに詳述されているように、調製および単離することができる。本明細書では、記載する範囲は、その範囲に含まれる百分率の具体的値のすべてを含むものとする。例えば、約10〜72％の範囲には、実際に具体的範囲を逐一記載しないが、11〜71％、12〜70％などの範囲も含まれる。
【０１１６】
ツベルシンおよび／またはSSM-AAT組合せ治療に用いるセリンプロテアーゼインヒビター
本発明の別の態様は、セリンタンパク質分解（SP）活性により促進されるウイルス感染を治療および／または予防する新規の方法であって、治療上有効量の、セリンプロテアーゼ阻害またはセルピン活性を有する化合物、あるいは哺乳動物α1-アンチトリプシン（AAT）またはα1-アンチトリプシン活性（AAT）を含むAAT様活性を示す化合物を、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と組み合わせて、ウイルス感染、または感染する可能性のある被験体に投与することを含んでなり、その際、上記組合せ療法が、ウイルス複製、１以上のウイルス受容体とウイルスの結合および／または１以上のウイルス症状および／または徴候を有効に阻害する、上記方法に関する。
【０１１７】
哺乳動物α1-アンチトリプシン（AAT）またはα1-アンチトリプシン活性（AAT）を含むAAT様活性を示す化合物と組み合わせて、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体を用いて、１以上のウイルス感染を有する哺乳動物におけるウイルス感染を改善および／または治療することにより、別の方法と比較して複数の利点が得られる。このような利点として限定するものではないが、以下のものが挙げられる：
１．セリンプロテアーゼの合成阻害剤（AAT様擬似物）は、調製することができ、すでに開発されている（後掲CE-2072を参照）。このような薬剤は、現場での経口摂取用の丸薬に製剤化してもよいし、あるいは、吸入を用いて、伝染性のウイルス性疾患を治療するための吸入器として製剤化することもできる。
【０１１８】
２．ヒトへの別の用途についてすでに認可されている市販の薬剤がウイルス感染の治療薬として役立つことがある。これらの薬剤は、ウイルス感染以外の適応症に現在用いられており、そのようなものとして、注射用AAT、血漿製剤、アプロチニンなど（American J. OfResp Critical Care Med 1998, V11 158:49-59）が挙げられる。本発明について考えられる例を挙げれば、それはすぐに実際に適用が可能であろう。例えば、限定するものではないが、セリンプロテアーゼインヒビターは、吸入により患者に送達されている。
【０１１９】
３．抗ウイルス治療のためのこの手法は安全性が高い。遺伝子的AAT欠損を有する患者を治療するために、注射用AATを用いた臨床経験は豊富にある。長期にわたる不都合な作用はこれまで検出されていない（American J. Of Resp Critical Care Med 1998, Vll 158: 49-59；Wenckerら、Chest 2001 119:737-744）。さらに、宿主セリンプロテアーゼの小分子阻害剤を川崎病患者に投与したところ（Ulinistatin, Ono pharmaceuticals）、安全性および耐性共に優れた記録が得られた。加えて、ウイルス感染を治療するための宿主セリンプロテアーゼの阻害は、短期の治療コースしか必要としないため、AATもしくはAAT様擬似物／またはその他のセリンプロテアーゼの阻害剤に対する長期曝露に伴う潜在的懸念を最小限にすることができる。
【０１２０】
従って、α1-アンチトリプシン（AAT）またはα1-アンチトリプシン活性（AAT）を含むAAT様活性を、薬学的に有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質またはその機能的誘導体と組み合わせて用いる本発明の前記実施形態について、使用が考えられるセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼインヒビターを以下にさらに詳しく記載する。
【０１２１】
セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼインヒビター
セリンプロテアーゼは、生命機能の活性化を媒介することによりヒトの生理に重要な役割を果たす。その正常な生理学的機能のほかに、セリンプロテアーゼは、ヒトにおける多数の病状に関与している。セリンプロテアーゼは、アスパルギン酸、ヒスチジンおよびセリンからなる触媒三つ組を特徴とする。
【０１２２】
天然に存在するセリンプロテアーゼインヒビターは、通常、しかし常にとは限らないが、主に、ジスルフィド結合パターンおよび反応性部位の配列相同性に基づき、各ファミリーに分類したポリペプチドおよびタンパク質である。セルピンとして知られる群を含むセリンプロテアーゼインヒビターは、微生物に、また植物、動物、昆虫およびその他の生物の組織および体液に存在している。プロテアーゼインヒビターの活性は、1894年FermiおよびPemossiにより初めてヒト血漿に発見された。少なくとも９つの十分に特性決定された個別のタンパク質が現在同定されており、これらはいずれも様々なプロテアーゼの活性を阻害する能力を有する。数種のインヒビター、すなわち、様々なセリンプロテアーゼ（すなわち、白血球エラスターゼ、トロンビン、カテプシンＧ、キモトリプシン、プラスミノーゲン活性化因子、およびプラスミン）に対するα1-アンチトリプシンプロテアーゼインヒビター、アンチトロンビンIII、アンチキモトリプシン、C1-インヒビター、およびα2-アンチプラスミンは、一緒に分類される。これらのインヒビターは、α1-アンチトリプシンプロテアーゼインヒビタークラスのメンバーである。タンパク質α2-マクログロブリンは、４つの触媒クラスすべてのメンバー：セリン、システイン、アスパラギン酸、およびメタロプロテアーゼを阻害する。しかし、他のタイプのプロテアーゼインヒビターは、クラス特異的である。例えば、α1-アンチトリプシンプロテイナーゼインヒビター（α1-アンチトリプシンまたはAATとしても知られる）およびインターαトリプシンインヒビターは、セリンプロテアーゼだけを、α1-システインプロテアーゼインヒビターはシステインプロテアーゼだけを阻害し、また、α1-アンチコラゲナーゼは、金属酵素クラスのコラーゲン分解酵素を阻害する。
【０１２３】
ヒト好中球エラスターゼ（NE）は、様々な炎症性刺激に応答して、多形核白血球により分泌されるタンパク質分解酵素である。通常の状態におけるNEの分解能力は、α1-アンチトリプシンの比較的高い血漿濃度により調節される。しかし、刺激された好中球は、一度に大量の活性酸素代謝物を産生し、その一部（例えば、次亜塩素酸）は、α1-アンチトリプシン中の臨界メチオニン残基を酸化することができる。酸化されたα1-アンチトリプシンは、NEインヒビターとしての効力が制限されることがわかっており、このプロテアーゼ／アンチプロテアーゼバランスの改変により、局在化および制御された環境でNEがその分解機能を果たすようにすることが提案されている。
【０１２４】
α1-アンチトリプシンは、417個のアミノ酸と３本のオリゴ糖側鎖を有するNW51,000の糖タンパク質である。ヒトα1-アンチトリプシンは、初めに膵トリプシンを不活性化する能力が発見されたことから、アンチトリプシンと名付けられた。ヒトα1-アンチトリプシンは、内部ジスルフィド結合がなく、通常、システインまたはグルタチオンのいずれかに分子間ジスルフィド結合した単一システイン残基だけを有する一本鎖ポリペプチドである。α1-アンチトリプシンの反応部位は、メチオニン残基を含み、これは、タバコの煙またはその他の酸化汚染因子への曝露時の酸化に対し不安定である。このような酸化は、α1-アンチトリプシンの生物学的活性を低下させる。従って、その位置を別のアミノ酸（すなわち、アラニン、バリン、グリシン、フェニルアラニン、アルギニンまたはリシン）で置換すれば、さらに安定した形態のα1-アンチトリプシンが産生される。α1-アンチトリプシンは、以下に示す式により表すことができる：
【化５】
2008524223.tif 000007
【０１２５】
Cilibertoら、Cell 1985, 41, 531-540。α1-アンチトリプシンのカルボキシ末端付近の重要なアミノ酸配列を太字で示し、下線を引いたが、これは、本発明に関する（この配列の詳細は、米国特許第5470970号にみいだすことができる；尚、該文献の前文を参照として本明細書に組み込む）。
【０１２６】
ATTの正常な血漿濃度は、1.3〜3.5 mg／mlであるが、これは、急性相反応物として挙動する可能性があり、妊娠、急性感染、および腫瘍のような炎症および／または組織傷害に対する宿主応答時には、３〜４倍増加する。これは、組織空間に容易に分散し、標的プロテアーゼ、主に好中球エラスターゼとの１：１複合体を形成する。トリプシン、キモトリプシン、カテプシンＧ、プラスミン、トロンビン、組織カリクレイン、およびXa因子も基質として用いることができる。次に、セルピン酵素複合体（SEC）に結合することにより、循環から酵素／インヒビター複合体を取り出し、肝臓および膵臓により異化する。α1-アンチトリプシンの循環レベルが正常の15％以下であるヒトは、若年で肺疾患、例えば、家族性気腫が発現しやすい。家族性気腫は、セリンプロテアーゼ、特にエラスターゼに対する低比率α1-アンチトリプシンに関連している。従って、このインヒビターは、セリンプロテアーゼによる攻撃に対する防御機構の重要な部分を占めることがわかる。
【０１２７】
α1-アンチトリプシンは、プロテアーゼ不均衡の臨床治療に現在認可されている、天然に存在する数種の哺乳動物セリンプロテアーゼインヒビターの１つである。治療用α1-アンチトリプシンは、80年代半ばから市販されており、様々な精製方法により調製される（例えば、Bollenら、米国特許第4,629,567号；Thompsonら、米国特許第4,760,130号；第5,616,693号；WO 98/56821）。プロラスチンは、α1-アンチトリプシンの精製変異型の商標であり、現在Bayer Companyにより販売されている（米国特許第5,610,285号、Lebingら、Mar. 11, 1997）。遺伝子工学的方法により産生される組換え非改変および突然変異体も知られており（米国特許第4,711,848号）；使用方法も周知である（例えば、French Andersonらのα1-アンチトリプシン遺伝子／治療（米国特許第5,399,346号））。
【０１２８】
セリンプロテアーゼの作用として知られる２つの細胞機構は、直接分解作用、ならびに、Ｇプロテインに結合したプロテイナーゼ活性化受容体（PAR）の活性化による。PARは、プロテアーゼの結合、これに続く特定のペプチド結合の加水分解により活性化され、その結果、新しいＮ末端配列が受容体を刺激する。PAR活性化の結果は、刺激されるPARの種類、および患部細胞または組織に応じて変動し、ホスホリパーゼＣβの活性化、タンパク質キナーゼＣの活性化およびアデニレートキナーゼの阻害を含むこともある（Dery, O.およびBunnett, N. W. Biochem Soc Trans 1999, 27, 246-254；Altieri, D. C. J. Leukoc Biol 1995, 58, 120-127；Dery, O.ら、Am J. Physiol 1998, 274, C1429-C1452）。
【０１２９】
本発明は、本明細書に記載した例に限定されるわけではなく、当分野で周知の他のセリンプロテアーゼインヒビターも本発明の範囲内で使用できることに留意すべきである。例えば、当業者は、WO 98/24804（セリンプロテアーゼインヒビターとして、置換オキサジアゾール、チアジアゾールおよびトリアゾールを開示する）に記載されたようなインヒビターを容易に採用することができる。米国特許第5,874,585号には、セリンプロテアーゼのインヒビターとして有用な置換ヘテロ環化合物が開示されており、以下のものを含む：
(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミドベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(2-フェニルエチル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(2-メトキシベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(トリフルオロメチル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(メチル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(ジフルオロメチル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(ベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-メトキシベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(2,6-ジフルオロベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(トランス−スチリル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(トランス-4-トリフルオロメチルスチリル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(トランス-4-メトキシスチリル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-チエニルメチル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(フェニル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；および(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-フェニルプロピル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド。米国特許第5,216,022号には、本発明の実施に有用な、以下に挙げる他の小分子が教示されいる：ベンジルオキシカルボニル-L-バリル-N-[1-(2-[5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル]カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド（CE-2072としても知られる）、ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(2-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル]-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[-(2-(5-(メチル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；ベンジルオキシカルボニル-L-バリル-N-[1-(2-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(2-(5-(4-ジメチルアミノベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；ベンジルオキシカルボニル]-L-バリル-N-[1-(2-(5-(1-ナフチレニル)-1,3,4-オキサジア���リル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-[1-(3-(5-(3,4-メチレンジオキシベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；ベンジルオキシカルボニル]-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3,5-ジメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3,5-ジメトキシベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3,5-ジトリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-メチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(ビフェニルメチン)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(4-フェニルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-フェニルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-フェノキシベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(シアクロヘキシメチレン)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルジメチルメチレン)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(1-ナフチルメチレン)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3-ピリジルメチル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(3,5-ジフェニルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-N-[1-(3-(5-(4-ジメチルアミノベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-L-プロリナミド；2-(5-[(ベンジルオキシカルボニル)アミノ]-6-オキソ-2-(4-フルオロフェニル)-1,6-ジヒドロ-1-ピリミジニル)-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-(S)-2-メチルプロピル]アセトアミド； 2-(5-アミノ-6-オキソ-2-(4-フルオロフェニル)-1,6-ジヒドロ-1-ピリミジニル)-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；2-(5-[(ベンジルオキシカルボニル)アミノ]-6-オキソ-2-(4-フルオロフェニル)-1,6-ジヒドロ-1-ピリミジニル)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-(S)-2-メチルプロピル]アセトアミド；2-(5-アミノ-6-オキソ-2-(4-フルオロフェニル)-1,6-ジヒドロ-1-ピリミジニル)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-メチルプロピル]アセトアミド；(ピロール-2-カルボニル)-N-(ベンジル)グリシル-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アミド；(ピロール-2-カルボニル)-N-(ベンジル)グリシル-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル))-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル]-(S)-メチルプロピル]アミド；(2S,5S)-5-アミノ-1,2,4,5,6,7-ヘキサヒドロアゼピノ-[3,2,1]-インドール-4-オン-カルボニル-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-(R,S)-2-メチルプロピル]アミド；BTD-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アミド；(R,S)-3-アミノ-2-オキソ-5-フェニル-1,4,-ベンゾジアゼピン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-2-L-(2,3-ジヒドロ-1H-インドール)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アミド；(ベンジルオキシカルボニル)-L-バリル-2-L-(2,3-ジヒドロ-1H-インドール)-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アミド；アセチル-2-L-(2,3-ジヒドロ-1H-インドール)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アミド；3-(S)-(ベンジルオキシカルボニル)アミノ)-.エプシロン.-ラクタム-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；3-(S)-(アミノ)-.エプシロン.-ラクタム-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミドトリフルオロ酢酸塩；3-(S)-[(4-モルホリノカルボニル-ブタノイル)アミノ]-.エプシロン.-ラクタム-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(R,S)-メチルプロピル]アセトアミド；6-[4-フルオロフェニル]-.エプシロン.-ラクタム-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；2-(2-(R,S)-フェニル-4-オキサチアゾリジン-3-イル)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド； 2-(2-(R,S)-フェニル-4-オキソチアゾリジン-3-イル)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)ヒドロキシメチル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；2-(2-(R,S)-ベンジル-4-オキソチアゾリジン-3-イル)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；2-(2-(R,S)-ベンジル-4-オキソチアゾリジン-3-イルオキシド)-N-[1-(3-(5-(3トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(R,S,)-メチルプロピル]-アセトアミド；(1-ベンゾイル-3,8-キナゾリンジオン)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；(1-ベンゾイル-3,6-ピペラジンジオン)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；(1-フェニル-3,6-ピペラジンジオン)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；[(1-フェニル-3,6-ピペラジンジオン)-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)]-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；3-[(ベンジルオキシカルボニル)アミノ]-キノリン-2-オン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1, 3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；3-[(ベンジルオキシカルボニル)アミノ]-7-ピペリジニル-キノリン-2-オン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；3-(カルボメトキシ-キノリン-2-オン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；3-(アミノ-キノリン-2-オン)-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；3-[(4-モルホリノ)アセト]アミノ-キノリン-2-オン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；3,4-ジヒドロ-キノリン-2-オン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；1-アセチル-3-(4-フルオロベンジリデン) ピペラジン-2,5-ジオン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニルl)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；1-アセチル -3-(4-ジメチルアミノベンジリデン)ピペラジン-2,5-ジオン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；1-アセチル-3-(4-カルボメト
キシベンジリデン)ピペラジン-2,5-ジオン -N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；1-アセチル-3-[(4-ピリジル)メチレン]ピペラジン-2,5-ジオン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[1-ベンジル-3-(R)-ベンジル-ピペラジン-2,5,-ジオン]-N-[1-(2-[5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル]カルボニル)-2-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[1-ベンジル-3-(S)-ベンジルピペラジン-2,5,-ジオン]-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[1-ベンジル-3(R)-ベンジルピペラジン-2,5,-ジオン]-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[1-ベンジル-3-(S)-ベンジルピペラジン-2,5,-ジオン]-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[1-ベンジル-3-(S)-ベンジルピペラジン2,5,-ジオン]-N-[1-(3-(5-(2-ジメチルアミノエチル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[1-メチル-3-(R,S)-フェニルピペラジン-2,5,-ジオン]-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[[-メチル-3-(R,S)-フェニルピペラジン-2,5,-ジオン]-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；4-[1-(4-モルホリノエチル)3-(R)-ベンジルピペラジン-2,5,-ジオン]-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]-アセトアミド；5-(R,S)-フェニル-2,4-イミダゾリジンジオン-N-[1-(2-(5-(3-メチベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；5-(R)-ベンジル-2,4-イミダゾリジンジオン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；5-(S)-ベンジル-2,4-イミダゾリジンジオン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)- メチルプロピル]アセトアミド；5-(S)-ベンジル-2,4-イミダゾリジンジオン -N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；5-(R)-ベンジル-2,4-イミダゾリジンジオン-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；1-ベンジル-4-(R)-ベンジル-2,5-イミダゾリジンジオン-N-[1-(2-(5-(3-メチルベンジル)-1,3,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド；および1-ベンジル-4-(R)-ベンジル-2,5-イミダゾリジンジオン-N-[1-(3-(5-(3-トリフルオロメチルベンジル)-1,2,4-オキサジアゾリル)カルボニル)-2-(S)-メチルプロピル]アセトアミド。
【０１３０】
同様に、米国特許第5,869,455号は、Ｎ置換誘導体を；米国特許第5,861,380号は、環系を有するプロテアーゼインヒビター−ケトおよびジ−ケトを；米国特許第5,807,829号は、セリンプロテアーゼインヒビター−トリペプトイド類似体を；米国特許第5,801,148号は、セリンプロテアーゼインヒビター−プロリン類似体を；また、米国特許第5,618,792号は、セリンプロテアーゼの阻害剤として有用な置換ヘテロ環化合物をそれぞれ開示している。これらの特許およびPCT公開、その他以下に挙げる文献は、参照としてその全文を本明細書に組み込むものとする。上記以外に、α1-アンチトリプシンの代わりに、またはα1-アンチトリプシンと組み合わせて用いることができる、同様に有利な分子がWO 98/20034（ノミ由来のセリンプロテアーゼインヒビターを開示する）などで考慮されている。この参照文献だけに限定されることなく、当業者は、セリンプロテアーゼを阻害するのに有用な化合物（例えば、アミノグアニジンおよびアルコキシグアニジン化合物を開示するWO 98/23565に記載のような化合物）を容易に、しかも過度の実験をせずに採用することができよう。
【０１３１】
本発明の方法を用いてウイルス性疾患を治療するための別の組合せ療法
本発明の前記形態および実施形態の各々において、以上挙げたもの以外の組合せ療法も本明細書において具体的に考えられる。特に、本発明の組成物は、１以上のマクロライドまたは非マクロライド抗生物質、抗菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、および駆虫薬、抗炎症または免疫調節剤または物質と一緒に投与してもよい。
【０１３２】
本発明の組成物と組み合わせて用いることができるマクロライド抗生物質の例として特に、以下合成、半合成または天然に存在するマクロライド抗生化合物が挙げられる：メチマイシン、ネオメチマイシン、YC-17、リトリン、エリトロマイシンＡ〜Ｆ、オレアンドマイシン、ロキシトロマイシン、ジリトロマイシン、フルリトロマイシン、クラリトロマイシン、ダベルシン、アジトロマイシン、ジョサマイシン、キタサマイシン、スピラマイシン、ミデカマイシン、ロキタマイシン、ミオカマイシン、ランカシジン、およびこれら化合物の誘導体。従って、エリトロマイシンおよびエリトロマイシンに由来する化合物は、「マイクロライド」として知られる抗生物質のおおまかなクラスに属する。好ましいエリトロマイシンおよびエリトロマイシン様化合物の例として、エリトロマイシン、クラリトロマイシン、アジトロマイシン、およびトロレアンドマイシンが挙げられる。
【０１３３】
本発明の方法に用いるのに適した、前記マクロライド抗生物質以外の抗生物質には、例えば、生命を阻止、阻害もしくは破壊する傾向のあるあらゆる分子が含まれ、そのようなものとして、また本発明で使用できるものとして、抗菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、および駆虫薬が挙げられる。これらの薬剤は、該薬剤を産生する生物から単離してもよいし、また供給業者（例えば、Eli Lilly（インディアナポリス州）；Sigma（ミズリー州セントルイス）などの製薬会社）から購入することもできる。
【０１３４】
例えば、抗TB抗生物質イソニアジド（イソニコリン酸ヒドラジド）は有効であることが多いが、イソニアジドは往々にして重症の、時には致死的な肝炎を引き起こす。肝炎の危険性は患者の年齢に応じて高くなる。加えて、イソニアジドは、患者によっては、用量に関連して、末梢神経障害を引き起こすこともある。TBを治療するのに用いられる別の抗生物質、リファンピンは、イソニアジドのような別の薬剤と一緒に用いなければならない。リファンピンを用いた組合せ療法は、肺TBの初期治療および再治療での使用に限られる。
【０１３５】
通常、イソニアジド、リファンピン、エタンブトールおよびエチオナミドは経口投与する。ストレプトマイシンは、典型的に筋内投与する。アミカシンは、筋内または静脈内投与する。らい病の治療にも用いられるクロファジミンは、経口投与する。
【０１３６】
アミカシンは、カナマイシンＡ由来の半合成アミノグリコシド抗生物質である。その調製については、米国特許第3,781,268号を参照されたい。詳しくは、Kerridge, Pharmacological and Biochemical Properties of Drug Substances 1:125-153, M.E. Goldbergら（1977）を参照のこと。アミカシンは、通常筋内または静脈内投与する。臨床薬理学、適応症、副作用および用量を含むさらに詳細な情報については、Physicians Desk Reference（以後PDRと略称）第42版（1988）第744〜746ページを参照のこと。
【０１３７】
クロファジミンは、LAMPRENE,RTMとしても知られる抗菌剤である。その調製については、Barryら、Nature 179:1013（1957）を参照されたい。詳しくは、Karatら、Brit. Med. J. 3:175（1971）を参照のこと。クロファジミンは、一般に経口投与する。臨床薬理学、注意事項および用量を含むさらに詳細な情報については、PDRの第982ページを参照のこと。
【０１３８】
エチオナミドは、AMIDAZINE.RTM.およびTRECATOR.RTM.としても知られる抗菌剤である。これについては英国特許第800,250号を参照されたい。この薬剤は、典型的には経口投与する。注意事項および用量を含むさらに詳細な情報については、PDRの第2310ページを参照のこと。
【０１３９】
シクロフロキサシンは、経口投与用の合成広域スペクトル抗菌剤である。これはCIPRO.RTMとしても知られる。典型的には、１日当たり500〜1,000ミリグラムの合計用量を投与し、通常24時間に２回の等用量を投与する。さらに詳細な情報については、PDR（1989）の第1441〜1443ページを参照のこと。このフルオロキノンクラス抗菌剤の他のメンバーとして、オフロキサシン、レボフロキサシン、トロベオフロキサシン、ペフロキサシン、ガチフロキサシン、およびミクシフロキサシンが挙げられる。
【０１４０】
抗菌抗生物質の他の例を以下にあげるが、これらに限定されるわけではない：ペニシリン、セファロスポリン、カルバセフェム、セファマイシン、カルバペネム、モノバクタム、アミゴグリコシド、グリコペプチド、キノロン、テトラサイクリン、マクロライド、オキサザリジノン、およびフルオロキノロン。抗生物質の例を以下にあげるが、これらに限定されるわけではない：ペニシリンＧ（CAS登録番号：61-33-6）；メチシリン（CAS登録番号：61-32-5）；ナフシリン（CAS登録番号：147-52-4）；オキサシリン（CAS登録番号：66-79-5）；クロキサシリン（CAS登録番号：61-72-3）；ジクロキサシリン（CAS登録番号：3116-76-5）；アンピリシン（CAS登録番号：69-53-4）；アモキシシリン（CAS登録番号：26787-78-0）；チカルシリン（CAS登録番号：34787-01-4）；カルベニシリン（CAS登録番号：4697-36-3）；メズロシリン（CAS登録番号：51481-65-3）；アズロシリン（CAS登録番号：37091-66-0）；ピペラシリン（CAS登録番号：61477-96-1）；イミペネム（CAS登録番号：74431-23-5）；アズトレナム（CAS登録番号：78110-38-0）；セファロチン（CAS登録番号：153-61-7）；セファゾリン（CAS登録番号：25953-19-9）；セファクロル（CAS登録番号：70356-03-5）；ギ酸セファマンドールナトリウム（CAS登録番号：42540-40-9）；セフォキシチン（CAS登録番号：35607-66-0）；セフロキシム（CAS登録番号：55268-75-2）；セフォニシド（CAS登録番号：61270-58-4）；セフメタゾール（CAS登録番号：56796-20-4）；セフォテタン（CAS登録番号：69712-56-7）；セフプロジル（CAS登録番号：92665-29-7）；ロラカルベフ（CAS登録番号：121961-22-6）；セフェタメト（CAS登録番号：65052-63-3）；セフォペラゾン（CAS登録番号：62893-19-0）；セフォタキシム（CAS登録番号：63527-52-6）；セフチゾキシム（CAS登録番号：68401-81-0）；セフトリアキソン（CAS登録番号：73384-59-5）；セフタジジム（CAS登録番号：72558-82-8）；セフェピム（CAS登録番号：88040-23-7）；セフィキシム（CAS登録番号：79350-37-1）；セフポドキシム（CAS登録番号：80210-62-4）；セフスロジン（CAS登録番号：62587-73-9）；フレロキサシン（CAS登録番号：79660-72-3）；ナリジクス酸（CAS登録番号：389-08-2）；ノルフロキサシン（CAS登録番号：70458-96-7）；シプロフロキサシン（CAS登録番号：85721-33-1）；オフロキサシン（CAS登録番号：82419-36-1）；エノキサシン（CAS登録番号：74011-58-8）；ロメフロキサシン（CAS登録番号：98079-51-7）；シノキサシン（CAS登録番号：28657-80-9）；ドキシクリン（CAS登録番号：564-25-0）；ミノシクリン（CAS登録番号：10118-90-8）；テトラシクリン（CAS登録番号：60-54-8）；アミカシン（CAS登録番号：37517-28-5）；ゲンタミシン（CAS登録番号：1403-66-3）；カナマイシン（CAS登録番号：8063-07-8）；ネチルミシン（CAS登録番号：56391-56-1）；トブラマイシン（CAS登録番号：32986-56-4）；ストレプトマイシン（CAS登録番号：57-92-1）；アジトロマイシン（CAS登録番号：83905-01-5）；クラリトロマイシン（CAS登録番号：81103-11-9）；エリスロマイシン（CAS登録番号：114-07-8）；エリスロマイシンエストレート（CAS登録番号：3521-62-8）；エチルコハク酸エリスロマイシン（CAS登録番号：41342-53-4）；グルコヘプタン酸エリスロマイシン（CAS登録番号：23067-13-2）；エリスロマイシンラクトビオネート（CAS登録番号：3847-29-8）；ステアリン酸エリスロマイシン（CAS登録番号：643-22-1）；バンコマイシ���（CAS登録番号：1404-90-6）；テイコプラニン（CAS登録番号：61036-64-4）；クロラムフェニコール（CAS登録番号：56-75-7）；クリダマイシン（CAS登録番号：18323-44-9）；トリメトプリム（登録番号：738-70-5）；スルファメトキサゾール（CAS登録番号：723-46-6）；ニトロフラントイン（CAS登録番号：67-20-9）；Rifampin (CAS登録番号：13292-46-1)；ムピロシン（CAS登録番号：12650-69-0）；メトロニダゾール(CAS登録番号：443-48-1)；セファレキシン（CAS登録番号：15686-71-2）；ロキシトロマイシン（CAS登録番号：80214-83-1）；ならびに、これらの塩、酸、塩基、およびその他の誘導体。
【０１４１】
抗真菌剤の例を以下に挙げるが、これらに限定されるわけではない：カスポフンギン、テルビナフィン、塩酸塩、ニスタチン、アンホテリシンＢ、グリセオフルビン、ケトコナゾール、硝酸ミコナゾール、フルシトシン、フルコナゾール、イトラコナゾール、クロトリマゾール、安息香酸、サリチル酸、ならびに硫化セレン。
【０１４２】
抗ウイルス剤の例を以下に挙げるが、これらに限定されるわけではない：バルガンシクロビル、塩酸アマタジン、リマンタジン、アシクロビル、ファムシクロビル、フォスカルネト、ガンシクロビルナトリウム、イドクスリジン、リバビリン、ソリブジン、トリフルリジン、バラシクロビル、ビダラビン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ジドブジン、インターフェロンα、およびエドクスジン。
【０１４３】
駆虫剤の例を以下に挙げるが、これらに限定されるわけではない：ピレトリン／ピペロニルブトキシド、ペルメトリン、ヨードキノール、メトロニダゾール、クエン酸ジエチルカルバマジン、ピペラジン、ピランテルパモエート、メベンダゾール、チアベンダゾール、プラジカンテル、アルベンダゾール、プログアニル、グルコン酸キニジン注射液、硫酸キニン、リン酸クロロキン、塩酸メフロキン、リン酸プリマキン、アトバクオン、コ−トリモキサゾール（スルファメトキサゾール／トリメトプリム）、およびペンタミジンイセチオネート。
【０１４４】
本発明の方法における別の態様では、例えば、治療上有効量の１種以上の抗炎症もしくは免疫調節剤の投与により、組成物を補充してもよい。「免疫調節剤」とは、例えば、免疫系における細胞（例：Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、もしくは抗原提示細胞（APT））の細胞活性を刺激または抑制する、あるいは、免疫系以外の成分（例：ホルモン、受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、および神経伝達物質）に作用して、これらの成分が、免疫系を刺激、抑制、もしくは調節することにより、免疫系に直接または間接的に作用する薬剤を意味し；免疫調節物質は、例えば、免疫抑制物質または免疫刺激物質であってもよい。「抗炎症薬」とは、例えば、炎症応答、すなわち、傷害に対する組織反応を治療する物質、例えば、免疫、血管、もしくはリンパ系を治療する物質を意味する。
【０１４５】
本発明での使用に適した抗炎症もしくは免疫調節剤の例を以下に挙げるが、これらに限定されるわけではない：インターフェロン誘導体、例えば、ベータセロン、βインターフェロン；プロスタン誘導体、例えば、PCT/DE93/0013に開示された化合物（例：イロプロスト、シカプロスト）；グルココルチコイド、例えば、コルチゾール、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン；免疫抑制物質、例えば、シクロスポリンＡ、FK-506、メトキサレン、タリドミド、スルファサラジン、アザチオプリン、メトトリキセート；リポキシゲナーゼインヒビター、例えば、ジロイトン、MK-886、WY-50295、SC-45662、SC-41661A、BI-L-357；ロイコトリエンアンタゴニスト、例えば、DE 40091171 ドイツ国特許出願P 42 42 390.2；WO 9201675に開示された化合物；SC-41930；SC-50605；SC-51146；LY 255283（D. K. Herronら、FASEB J. 2: Abstr. 4729, 1988）；LY 223982（D. M. Gapinskiら、J. Med. Chem. 33: 2798-2813, 1990）；U-75302および類似体、例えば、J. MorrisらによりTetrahedron Lett. 29: 143-146, 1988、C. E. BurgosらによりTetrahedron Lett. 30: 5081-5084, 1989；B. M. TaylorらによりProstaglandins 42: 211-224, 1991に記載されたもの；米国特許第5,019,573号に開示された化合物；ONO-LB-457および類似体、例えば、K. KishikawaらによりAdv. Prostagl. Thombox. Leukotriene Res. 21:407-410, 1990；M. KonnoらによりAdv. Prostagl. Thrombox. Leukotriene Res. 21: 411-414, 1990に記載されたもの；WF-11605および類似体、例えば、米国特許第4,963,583号に開示されたもの；WO 9118601、WO 9118879；WO 9118880、WO 9118883に開示された化合物、抗炎症物質、例えば、L. Noronha-Blab.らによりGastroenterology 102 (Suppl.): A 672, 1992に記載されたNPC 16570、NPC 17923；R. M. Burch らによりProc. Nat. Acad. Sci. USA 88: 355-359, 1991に、また、S. PouらによりBiochem. Pharmacol. 45: 2123-2127, 1993に記載されたNPC 15669および類似体；ペプチド誘導体、例えば、ACTHおよび類似体；可溶性TNF-受容体；TNF-抗体；インターロイキン、その他のサイトカイン、およびT細胞タンパク質の可溶性受容体；インターロイキン、その他のサイトカイン、およびT細胞タンパク質の受容体に対する抗体。
【０１４６】
前記方法の各々について、本発明のさらに別の態様では、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１種以上の物質もしくはその誘導体は、それ自体をアジュバントとして投与することもでき、その際、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１種以上の物質もしくはその誘導体は、免疫刺激物質または免疫調節物質として作用し、これらは、単独でも、以下に挙げる１種以上の医薬剤と一緒に用いてもよい。
【０１４７】
前記方法の各々について、本発明のさらに別の態様では、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１種以上の物質もしくはその誘導体は、それ自体をワクチン製剤中のアジュバントとして投与することにより、あらゆる既知の細菌、ウイルスまたは寄生生物抗原製剤に対するワクチン応答を高めることができ、その際、治療上有効量のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す１種以上の物質もしくはその誘導体は、免疫刺激物質または免疫調節物質として作用し、これらは、単独でも、１種以上の医薬剤と一緒に用いてもよい。本発明に従い用いることができる医薬剤の代表例として、以下のもの、ならびに本明細書にその全部が記載されているかのように各薬剤の使用について具体的に列挙した各指標、およびPhysician’s Desk Reference（PDR）（その全内容を参照として本明細書に組み込む）に記載されているものが挙げられる。
【０１４８】
本発明の治療薬は、動物被験体または患者、さらに好ましくはヒトなどの哺乳動物、ならびにヒト以外の霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、モルモット、およびげっ歯類動物などの哺乳動物の治療に用いることができる。
【０１４９】
融合タンパク質
本発明の前記形態および実施形態の各々において、融合ポリペプチドもまた具体的に考慮される。
【０１５０】
一実施形態では、本発明の融合ポリペプチドは組換えDNA技術により産生する。組換え発現に代わるものとして、標準的ペプチド合成技術により、本発明の融合ポリペプチドを化学的に合成する。本発明はまた、本発明の融合ポリペプチドと、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む組成物も提供する。
【０１５１】
前記方法の各々において、前記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体が融合ポリペプチドの一部であってもよく、その際、この融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドは、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体と、該ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体に対し異種のアミノ酸配列とを含む。
【０１５２】
本発明の融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドは、例えば、前記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体を含む融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドである。
【０１５３】
本発明の融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドは、前記異種アミノ酸配列が、ヒトIgG1定常部のようなヒト免疫グロブリン定常部を含むようなものでもよく、このようなヒトIgG1定常部として、IgG1定常部がFc受容体と結合しない、および／または抗体依存性細胞傷害（ADCC）反応を開始しない改変ヒトIgG1定常部が挙げられる。
【０１５４】
特に、一実施形態では、融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドは、免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバー由来の配列である異種配列、例えば、免疫グロブリン定常部（例：ヒトIgG1定常部のようなヒト免疫グロブリン定常部）を含む。融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドは、例えば、米国特許第5,714,147号、米国特許第5,116,964号、米国特許第5,514,582号、および米国特許第5,455,165号に開示されているように、免疫グロブリン定常部のアミノ末端またはカルボキシル末端と融合または結合した、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体を含むものでもよい。本発明のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体の全部または一部が、免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバー由来の配列と融合した実施形態では、免疫グロブリンのFcR領域は野生型または突然変異型のいずれでもよい。特定の実施形態では、Fc受容体と相互反応せず、しかもADCC反応を開始しない免疫グロブリン融合タンパク質を用いるのが望ましい。このような場合、上記のような反応を阻害するように、融合タンパク質の免疫グロブリン異種配列を突然変異させることもできる。例えば、米国特許第5,985,279号およびWO 98/06248を参照されたい。
【０１５５】
本発明の一部として使用される融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドの異種アミノ酸配列は、融合ポリペプチドを同定、追跡または精製するのに有用なアミノ酸配列を含むものでもよく、例えば、FLAGまたはHisタグタンパク質を含むことができる。融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドはさらに、例えば、前記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体から、あるいは、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体／α1-アンチトリプシンまたはプロテアーゼ誘導体の阻害物質もしくは合成擬似配列コンジュゲート融合ポリペプチドから、異種アミノ酸配列を除去するのに有用となりうるタンパク質分解切断部位を含むアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１５６】
特に、本発明の融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドの異種アミノ酸配列はまた、融合ポリペプチドを同定、追跡または精製するのに有用なアミノ酸配列を含むものでもよく、例えば、FLAG（例えば、Hoop, T. P.ら、Bio/Technology 6, 1204-1210 (1988)；Prickett, K. S.ら、BioTechniques 7, 580-589 (1989)を参照）またはHisタグ（Van Reeth, T.ら、BioTechniques 25, 898-904 (1998)）配列を含むことができる。融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドはさらに、例えば、前記ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体から、異種アミノ酸配列を除去するのに有用となりうるタンパク質分解切断部位を含むアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１５７】
さらに別の実施形態では、融合ポリペプチドまたはコンジュゲート融合ポリペプチドは、本発明のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体、あるいは、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体／α1-アンチトリプシンまたはプロテアーゼ誘導体の阻害物質もしくは合成擬似配列コンジュゲート融合ポリペプチドがGST配列のＣ末端に融合した、GST融合タンパク質を含む。このような融合タンパク質は、本発明の組換えポリペプチドの精製を容易にすることができる。ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体の構築にGST、FLAGまたはHisタグ融合構築物を用いる実施形態では、融合物と、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体との結合部にタンパク質分解切断部位を随意に導入することにより、ツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体の精製後、融合物からツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体を分離できるようにしてもよい。このような酵素およびそれらのコグネイト認識配列として、例えば、限定するものではないが、Xa因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼが挙げられる。典型的な融合発現ベクターとして、pGEX（Pharmacia Biotech Inc.; Smith and Johnson (1988) Gene 67:31-40）、pMAL（New England Biolabs、マサチューセッツ州ベヴァリー.）およびpRIT5（Pharmacia、ニュージャージー州ピスカタウエー）が挙げられるが、これらを用いて、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（GST）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡをそれぞれ、標的のツベルシンおよび／またはSSM活性を示す物質もしくはその誘導体に融合する。
【０１５８】
発現ベクターは、原核生物（例えば、大腸菌）または真核生物細胞（例えば、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを用いて）、酵母細胞もしくは哺乳動物細胞）において、本発明の融合ポリペプチドの発現用に容易に設計することができる。好適な宿主細胞については、Goeddel（前掲）に詳しく記載されている。上記以外にも、例えば、T7プロモーター調節配列およびT7ポリメラーゼを用いて、組換え発現ベクターをin vitroで転写および翻訳することもできる。
【０１５９】
原核生物でのタンパク質の発現は、ほとんどの場合、融合または非融合タンパク質いずれかの発現を指令する構成的または誘導性プロモーターを含むベクターを用いて、大腸菌において実施される。融合ベクターは、そこにコードされたタンパク質、通常、組換えタンパク質のアミノ末端にいくつかのアミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、典型的には、次の３つの目的のために役立つ：１）組換えタンパク質の発現を増大する；２）組換えタンパク質の可溶性を高める；および３）アフィニティー精製におけるリガンドとして作用することにより、組換えタンパク質の精製を助ける。往々にして融合発現ベクターでは、融合物部分と組換えタンパク質との結合部にタンパク質分解切断部位を導入することにより、融合タンパク質の精製後、融合物部分から組換えタンパク質を分離できるようにする。このような酵素およびそれらの同種認識配列として、Xa因子、トロンビンおよびエンテロキナーゼが挙げられる。典型的な融合発現ベクターとして、pGEX（Pharmacia Biotech Inc.; SmithおよびJohnson (1988) Gene 67:31-40）、pMAL（New England Biolabs、マサチューセッツ州ベヴァリー.）およびpRIT5（Pharmacia、ニュージャージー州ピスカタウエー）が挙げられるが、これらは、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（GST）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡをそれぞれ、標的組換えタンパク質に融合する。
【０１６０】
好適な誘導性非融合大腸菌発現ベクターの例として、pTrc（Amannら、 (1988) Gene 69:301-315）およびpET 11d（Studierら、Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press、カリフォルニア州サンディエゴ (1990) 60-89）が挙げられる。pTrcベクター由来の標的遺伝子発現は、ハイブリッドtrp-lac融合プロモーターからの宿主RNAポリメラーゼ転写に基づく。また、pET11dベクター由来の標的遺伝子発現は、共発現したウイルスRNAポリメラーゼが媒介するT7 gn10-lac融合プロモーターからの転写に基づく。このウイルスポリメラーゼは、lacUV5プロモーターの転写制御下で、T7 gn1を保有する常在性プロファージ由来の宿主株BL21（DE3）またはHMS174（DE3）により供給される。
【０１６１】
大腸菌において組換えタンパク質発現を最大にするための戦略の１つは、タンパク質分解により組換えタンパク質を切断する能力が欠損した宿主細菌においてタンパク質を発現させるものである（Gottesman, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press、カリフォルニア州サンディエゴ(1990) 119-128）。別の戦略は、発現ベクターに挿入しようとする核酸の核酸配列を改変して、各アミノ酸について個別のコドンが優先的に大腸菌で使用されるようにするものである（Wadaら、 (1992) Nucleic Acids Res. 20:2111-2118）。本発明のこのような核酸配列の改変は、標準的DNA合成技術により実施することができる。
【０１６２】
別の実施形態では、発現ベクターは酵母発現ベクターである。酵母サッカロミセルセレビシエにおける発現のためのベクターの例として、pYepSec1（Baldariら、 (1987) EMBO J. 6:229-234）、pMFa（KurjanおよびHerskowitz, (1982) Cell 30:933-943）、pJRY88（Schultzら、(1987) Gene 54:113-123）、pYES2（Invitrogen Corporation、カリフォルニア州サンディエゴ）、およびpPicZ（Invitrogen Corp、カリフォルニア州サンディエゴ）が挙げられる。
【０１６３】
あるいは、発現ベクターはバキュロウイルス発現ベクターである。培養した昆虫細胞（例：Sf 9細胞）におけるタンパク質の発現に利用できるバキュロウイルスとして、pAcシリーズ（Smithら（1983）Mol. Cell Biol. 3:2156-2165）およびpVLシリーズ（LucklowおよびSummers (1989) Virology 170:31-39）が挙げられる。
【０１６４】
さらに別の実施形態では、哺乳動物発現ベクターを用いて、本発明の核酸を哺乳動物に発現させる。哺乳動物発現ベクターの例として、pCDM8（Seed（1987）Nature 329:840）およびpMT2PC（Kaufmanら（1987）EMBO J. 6:187-195）が挙げられる。哺乳動物細胞で用いるとき、発現ベクターの制御機能は、ウイルス調節エレメントにより賦与されることが多い。例えば、一般に用いられるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルスおよびサルウイルス40に由来するものである。原核生物および真核生物細胞両方に関し、その他の好適な発現系については、Sambrookら（前掲）の第16および17章を参照されたい。
【０１６５】
別の実施形態では、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型において優先的に核酸の発現を指令することができる（例えば、組織特異的調節エレメントを用いて、核酸を発現する）。組織特異的調節エレメントは当分野では周知である。好適な組織特異的プロモーターの非制限的例を以下に挙げる：アルブミンプロモーター（肝特異的；Pinkertら（1987）Genes Dev. 1:268-277）、リンパ特異的プロモーター（CalameおよびEaton（1988）Adv. Immunol. 43:235-277）、特に、T細胞受容体のプロモーター（WinotoおよびBaltimore (1989) EMBO J. 8:729-733）および免疫グロブリン（Banerjiら、(1983) Cell 33:729-740；QueenおよびBaltimore (1983) Cell 33:741-748）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、ニューロフィラメントプロモーター；ByrneおよびRuddle (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5473-5477）、膵特異的プロモーター（Edlundら、（1985）Science 230:912-915）、ならびに乳腺特異的プロモーター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第4,873,316号および欧州出願公開番号264,166）。発生調節プロモーターも含まれ、このようなプロモーターとして、例えば、マウスhoxプロモーター（KesselおよびGruss (1990) Science 249:374-379）およびαフェトプロテインプロモーター（CampesおよびTilghman (1989) Genes Dev. 3:537-546）が挙げられる。
【０１６６】
宿主細菌は原核生物（例えば、大腸菌）または真核生物細胞（例えば、昆虫細胞、酵母または哺乳動物細胞）のいずれでもよい。
【０１６７】
ベクターDNAは、通常の形質転換またはトランスフェクション技術を用いて、原核生物または真核生物細胞に導入することができる。本明細書で用いる用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、宿主細胞に外来の核酸を導入する、当分野では周知の様々な技術を意味し、このような技術として、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム沈降、DEAE-デキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、もしくはエレクトロポレーションが挙げられる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションするのに適した方法は、Sambrookら（前掲）およびその他の研究室マニュアルにみいだすことができる。
【０１６８】
投与方法
本発明で用いる各種治療薬の投与方法の例を以下に示す。しかし、薬剤は、注射（例えば、皮下、筋内、静脈内、動脈内、腹腔内）、連続的静脈内注入、皮膚、真皮、経皮、経口（例えば、錠剤、丸薬、液剤）インプラントした浸透圧ポンプ（例えば、Alza Corp.）、座薬またはエーロゾルスプレーを含む様々な経路のいずれによっても送達することもできる。
【０１６９】
過剰のセリンプロテアーゼ活性が全部または部分的に引き起こした生理学的（特に病気）状態の治療に、本発明のツベルシンおよび／またはSSM-タンパク質／ペプチド（例えば、AAT）組合せ療法で用いるペプチドコンジュゲートをベースとするセリンプロテアーゼインヒビターを治療薬として用いる。ペプチドコンジュゲートを遊離ペプチドまたはその薬学的に許容される塩として投与することもできる。生化学合成の当業者は、ペプチドコンジュゲートの商業スケール量生産の場合、好ましくは、組換えDNA技術、合成技術、もしくは生物学的または化学的に合成したペプチドの化学的誘導体化を用いて、このようなペプチドコンジュゲートを調製することを認識するだろう。
【０１７０】
ツベルシンおよび／またはSSM-タンパク質／ペプチド（例えば、AAT）組合せ療法で用いるペプチドコンジュゲートを基材とするセリンプロテアーゼインヒビターは、Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, p 2149（1963）により最初に記載されているものなど、あらゆる好適な合成方法により調製することができる。セリンプロテアーゼに対する阻害活性を発揮する合成ペプチドと、これを調製および使用する方法は、例えば、Gloverの米国特許第4,829,052号、第5,157,019号；Millerの米国特許第5,420,110号；Katunumaの米国特許第4,963,654号（いずれも参照として本明細書に組み込む）に開示されている。加えて、タンパク質に糖を添加する方法が当業者には周知である。例えば、ターゲッティングの目的のために、抗体にシアリルルイス酸Ｘを付加することが米国特許5,723,583号に記載されており；ワクチンを形成するためのオリゴ糖の改変が米国特許第5,370,872号に記載されている。タンパク質−糖コンジュゲートを形成する一般的戦略については、米国特許第5,554,730号に概説されている。さらに、別の合成方法は米国特許出願番号20040214228（その全文を参照として本明細書に組み込む）にみいだすことができよう。
【０１７１】
本明細書で用いる用語は、Budavari, Susan（編者）"The Merck Index" An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals; Merck & Co., Inc.に記載のものと一致する。用語「薬学的に許容される塩」とは、ツベルシンおよび／またはSSM化合物および／またはその機能的均等物、あるいは、ツベルシンおよび／またはSSM-AAT組合せ療法で用いるペプチドコンジュゲートを基材とするセリンプロテアーゼインヒビターの酸性付加塩または金属錯体であって、上記化合物またはペプチドコンジュゲートの治療特性（例えば、効力、毒性など）に有意または有害な影響を与えない上記酸性付加塩または金属錯体を指す。化合物またはペプチドコンジュゲートは、ほとんどの場合、化合物またはペプチドおよび／またはそれらの医薬用塩を薬学的に許容される担体と一緒に、医薬組成物として個体に投与しなければならない。用語「薬学的に許容される担体」とは、上記化合物またはペプチドコンジュゲートの治療特性に有意または有害な影響を与えない固体および液体担体を指す。
【０１７２】
本発明の化合物またはペプチドコンジュゲートを含む医薬組成物は、静脈内、皮下、筋内、鼻内、経口、局所、経皮、非経口、胃腸、経気管支および経肺胞のいずれかの経路で、個体、特にヒトに投与することができる。局所投与は、治療上有効量のセリンプロテアーゼインヒビターを含む、局所適用されるクリーム、ゲル、リンスなどにより達成される。経皮投与は、セリンプロテアーゼインヒビターを皮膚に浸透させ、血流に進入させることができるクリーム、ゲル、リンスなどを適用することにより達成される。非経口投与経路として、限定するものではないが、静脈内、筋内、腹腔内または皮下注射のような直接注射が挙げられる。胃腸投与経路としては、限定するものではないが、摂取および直腸が挙げられる。経気管支および経肺胞投与経路としては、限定するものではないが、口または鼻内のいずれかを介した吸入、ならびに気管切開、気管開口術、気管内チューブ、または定量もしくは連続吸入器などを用いた気道への直接注射が挙げられる。加えて、浸透圧ポンプを投与に用いてもよい。必要な用量は、治療する具体的状態、投与方法、および身体からの分子のクリアランス速度に応じて変動する。
【０１７３】
本明細書に記載するツベルシンおよび／またはSSM化合物および／またはそれらの機能誘導体は、純粋な化学薬品として投与してもよいが、活性成分は医薬組成物の形態をしているのが好ましい。従って、本発明は、１種以上のツベルシンおよび／またはSSM化合物および／またはそれらの機能的誘導体および／または薬学的に許容されるそれらの塩を含む医薬組成物を、薬学的に許容されるそれらの担体、さらには、随意にその他の治療および／または予防成分と組み合わせた使用も提供する。上記担体は、組成物のその他の成分と適合性であり、かつその受容者に対し有害ではないという意味で、許容されるものでなければならない。
【０１７４】
医薬組成物は、経口または非経口（筋内、皮下、皮膚、吸入および静脈内）投与に適したものが挙げられる。組成物は、必要に応じて、個別の単位用量形態をしているのが好都合であり、薬学の分野では周知の方法のいずれかにより調製することができる。このような方法は、活性化合物を液体担体、固体マトリックス、半固体担体、微粉固体担体、もしくはこれらの組合せと結合させた後、必要であれば、得られた生成物を所望の送達系に造形する、各ステップを含む。
【０１７５】
経口投与に適した医薬組成物は、以下のような個別の単位用量形態で提供することができる：各々、予め定めた量の活性成分を含む硬質または軟質ゼラチンカプセル、カシェまたは錠剤；粉末または顆粒；溶液、懸濁液もしくはエマルション。活性成分は、ボーラス、舐剤もしくはペースト状であってもよい。経口投与のための錠剤およびカプセルは、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤、もしくは湿潤剤など、通常の賦形剤を含んでもよい。錠剤には、当分野で周知の方法に従い、例えば、腸溶コーティングでコーティングしてもよい。
【０１７６】
経口液体製剤は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、エマルション、シロップまたはエリキシルの形態でもよいし、あるいは、使用前に水またはその他の好適なビヒクルで構成するための乾燥製剤の形態をしていてもよい。このような液体製剤は、懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル（食用油を含みうる）、または防腐剤など、通常の添加剤を含んでもよい。化合物はまた、非経口（例：注射、例えば、ボーラス注射または連続注入）用に製剤化することもでき、防腐剤を添加して、アンプル、予め充填した注射器、小ボーラス注入容器、もしくは多用量容器に入った単位用量形態で提供してもよい。これらの組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、もしくはエマルションの形態をしていてもよいし、懸濁、安定および／または分散剤のような製剤用薬剤を含んでもよい。このほかにも、活性成分は、適したビヒクル、例えば、発熱物質を含まない滅菌水で使用前に構成するための、滅菌固体の無菌単離、または溶液からの凍結乾燥により得られる粉末形態であってもよい。
【０１７７】
表皮への局所投与の場合、化合物またはペプチドコンジュゲートは、軟膏、クリームもしくはローション、または経皮パッチの活性成分として製剤化することができる。好適な経皮送達系は、例えば、Fisherら、（米国特許第4,788,603号）またはBawasら、（米国特許第4,931,279号、第4,668,504号および第4,713,224号）に開示されている。軟膏およびクリームは、例えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性基剤と一緒に製剤化する。ローションは、水性または油性基剤と一緒に製剤化するが、一般に、１種以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、または着色剤も含む。例えば、米国特許第4,140,122号、第4,383,529号、もしくは第4,501,842号に開示されているように、活性成分をイオン電気導入により送達することもできる。これらの系では、少なくとも２種類の放出が可能である。マトリックスが非孔質の場合には、分散による放出が行なわれる。薬学的に有効量の化合物がマトリックス内で溶解し、このマトリックス自体を通じて分散する。薬学的に有効量の化合物がマトリックスの細孔内の液相を通して輸送される場合には、ミクロ細孔からの流れによる放出が起こる。
【０１７８】
口腔内の局所投与に適した組成物としては、以下のような単位用量形態が挙げられる：香味を加えた基材、通常ショ糖およびアラビアゴムまたはトラガカントに活性成分を含むロゼンジ；ゼラチンおよびグリセリンまたはショ糖およびアラビアゴムのような不活性基剤に活性成分を含む香錠；好適な液体担体に活性成分を含む粘着性ゲル、および含そう薬。
【０１７９】
所望であれば、用いた活性成分の持続的放出を達成するために、例えば、特定の親水性ポリマーマトリックス（例えば、天然ゲル、合成ポリマーゲルもしくはそれらの混合物を含む）と組み合わせて、前記組成物を改変することもできる。
【０１８０】
本発明の医薬組成物はまた、香味剤、着色剤、抗微生物剤、または防腐剤などの他のアジュバントを含んでもよい。
【０１８１】
治療に使用するのに必要なツベルシンおよび／またはSSMおよび／またはそれらの機能的誘導体化合物、または活性塩もしくは誘導体の量は、選択した特定の塩だけではなく、投与経路、治療しようとする状態の性質、患者の年齢および状態に応じても変動し、最終的に担当医師の判断により決定される。
【０１８２】
本発明の医薬組成物は、前文に定義した薬学的に許容される適切な担体を含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、持続的放出製剤などの形態をとることができる。好適な医薬担体は、Remington's Pharmaceutical Sciences 1990, pp. 1519-1675, Gennaro, A. R., 編、Mack Publishing Company（ペンシルバニア州イーストン）に記載されている。本明細書に記載したツベルシンおよび／またはSSM化合物および／またはそれらの機能的誘導体は、単独で、または本発明のセリンプロテアーゼインヒビター分子と組み合わせて、リポソームまたはポリマーを用いて投与することができる（Langer, R. Nature 1998, 392, 5参照）。このような組成物は、被験体への適切な投与のための形態を提供するように、好適な量の担体と一緒に、治療上有効量の活性化合物を含む。
【０１８３】
一般に、本発明の化合物は、単位投与剤型で投与するのが好適であり；例えば、１単位投与剤型につき、５〜2,000 mg、好ましくは10〜1,000 mg、最も好ましくは50〜500 mgの活性成分を含む。
【０１８４】
所望の血中レベルは、約0.01〜5.0 mg／kg／時を達成するような連続的注入により、または約0.4〜20 mg／kgの活性成分を含む断続的注入により、維持することができる。必要に応じて、バッファー、防腐剤、抗酸化剤などを含有させてもよい。
【０１８５】
所望の用量は、単一用量、または好適な間隔、例えば、１日当たり２、３、４回以上の小用量として投与する分割用量で提供するのが好適である。小用量をさらに分割することも可能であり、例えば、吸入器からの多数回吸入、または数滴の点眼など、不規則な間隔をおいた多数回の投与に分割することができる。
【０１８６】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際投薬レベルは、具体的患者の所望の治療応答を達成するのに有効となる活性化合物の量に達するべく変動し、また、組成および投与方法に応じても変動しうる。選択した投薬レベルは、本発明の具体的医薬化合物またはその類似体の活性、投与経路、治療しようとする状態の重症度、ならびに治療患者の状態および以前の病歴に応じて変わってくる。しかし、当業者であれば、所望の治療効果を達成するのに必要なレベルより低いレベルで医薬化合物の投与を開始し、所望の効果が達成されるまで、投薬量を徐々に増加することができる。
【０１８７】
本発明の医薬組成物は、獣医療およびヒトの治療のいずれにも用いることができる。前述した疾患または徴候に関連する疼痛の急性または慢性管理における本発明の医薬組成物の予防または治療用量の範囲は、治療しようとする状態の重症度、および投与経路に応じて変動する。用量、また恐らく投与頻度も、個々の患者の年齢、体重、および応答に応じて変動する。一般に、本発明の医薬組成物の一日当たりの総用量の範囲は、一般に、哺乳動物に投与する場合、１日当たり体重１kgにつき活性化合物が約１〜約100 mg、好ましくは約１〜約20 mg、さらに好ましくは約１〜約10 mgである。所望であれば、１日当たりの有効用量を、投与の目的で複数用量、例えば、１日当たり２〜４の個別用量に分割してもよい。
【０１８８】
このほかに、本発明の活性成分の１日当たりの合計用量は、プロテアーゼインヒビターの血清濃度を10〜100マイクロモル上昇させるのに十分なものでなければならない。
【０１８９】
このような具体的範囲を挙げることにより、記載した範囲は、記載した範囲内に含まれるすべての用量の範囲も含むものとする。例えば、約１〜100の範囲では、実際に逐一具体的範囲を記載しないが、２〜99、３〜98などを包含するものとする。活性成分の好ましい実際量は、症例毎に、哺乳動物の種、治療しようとする具体的疾患の種類および重症度、ならびに投与方法に応じて変動する。
【０１９０】
また、明記はしないが、前記範囲内の30 mg、50 mg、75 mgなどの用量も、該範囲を若干超える量と共にに、記載した範囲に含まれることは理解されたい。
【０１９１】
活性成分の好ましい実際量は、症例毎に、哺乳動物の種、治療しようとする具体的疾患の種類および重症度、ならびに投与方法に応じて変動する。
【０１９２】
一般に、本発明の医薬組成物は、治療しようとする具体的疾患の症状を改善する必要に応じて、個々の患者に定時に投与する。組成物を投与する期間、および合計投与量は、症例毎に、治療しようとする具体的疾患の種類および重症度、ならびにこのような治療を受ける被験体または患者の身体的条件に応じて変動する。
【０１９３】
小児、年齢が65歳を超える患者、および腎および肝機能に欠陥のある者には、最初に低用量を投与し、それから、個々の応答または血中レベルに基づいて滴定することが推奨される。当業者には明らかなように、症例によっては、前記範囲を超える量の使用を必要とすることもある。さらに、臨床医または治療医は、通常の実験で、個々の患者の応答に応じて、治療をどのように、いつ中断、調節または停止するかがわかるだろう。
【０１９４】
本発明の化合物の有用な用量は、動物モデルにおけるそのin vitro活性とin vivo活性を比較することにより決定することができる。マウス、およびその他の動物、ヒトに有効な用量の外挿方法は当分野では周知である（例えば、米国特許第4,938,949号参照）。
【実施例】
【０１９５】
本発明を実施する各形態の理解をさらに助けるために、以下に具体的実施例を記載する。これらの具体的実施例は説明を目的にするにすぎず、以下の記載するいずれも本発明を制限するものとして解釈すべきではない。言うまでもなく、このような制限は添付の特許請求の範囲によってのみ定められる。
【０１９６】
実施例１
序／材料および方法：
HIVは、宿主のゲノムに組み込まれるヒトレトロウイルスである。プロウイルスとして宿主ゲノムに組み込まれると、HIVは、複数の内因性および外因性前炎症性分子による刺激の後、誘発されて、この潜伏保有宿主から複製することができる。内因性前炎症性分子の例として、インターロイキン（IL）-1、IL-18、および腫瘍壊死因子（TNF）などの特定のサイトカインが挙げられる。外因性前炎症性物質としては、細菌細胞壁産物であるリポ多糖（LPSまたは内毒素）およびグラム陽性細胞壁物質であるリポテイコ酸が挙げられる。U1細胞は、プロウイルスとして細胞核に取り込まれたヒト免疫不全ウイルス１型（HIV）の２コピーを含むヒト単球U937細胞由来のヒト細胞系である。数種の前炎症メディエーターのいずれかによる刺激で、発現されたウイルスの量が急激に増加しうる。従って、これらの細胞は、慢性HIV感染のin vitroモデルを構成する。図１に示すように、これらの細胞を、24ウェルポリスチレン組織培養プレート（Falcon）において１ml当たり１×106細胞の密度で24時間培養した。ペニシリン／ストレプトマイシン（100単位／ml／100μg／ml、Life Technologies）と一緒に、10％ vol/volウシ胎子血清（FCS、Life Technologies）を含むRPMI組織培養培地（Cellgro、バージニア州ハーンドン）からなる培地において細胞を培養した。24時間のインキュベーション（37℃、５％CO2雰囲気）後、トリトン-X-100（Sigma、ミズリー州セントルイス）を用いて、細胞培養物を溶解させた後、p24ELISA（Beckman-Coulter）を用いて、HIVp24の総量を定量した。
【０１９７】
結果：
図１に示すように、U1細胞を培地中に単独で（対照）、刺激のみとしてIL-18（MBL、2nM最終濃度）と一緒に、あるいは、ツベルシンまたはSSMA（Colm King氏により供給）（SSMAはSSMまたは丸山ワクチン）の存在下でIL-18と一緒に（最終濃度は横軸に示す）培養した。ツベルシンまたはSSMAは、IL-18刺激の添加より２時間前に培地に添加した。図示するように、ツベルシンは、IL-18誘発HIVを用量依存的に阻害した。ツベルシン50μg／ml の濃度で、IL-18単独と比較して100％の最大阻害効果が観察された。ツベルシンによる有意な阻害が、6.25μg／mlの最小濃度まで観察された。加えて、800μg／mlのSSMAもこれらの培養物においてHIVを実質的に阻害した。
【０１９８】
考察：
これらの結果から、慢性的にHIVに感染したヒト細胞系におけるツベルシンおよびSSMAの抗HIV活性が確認される。観察された阻害は強力（100％まで）であり、阻害効果は用量依存的であることが証明された。IL-18誘発HIVの統計学的に有利な阻害が、6.25μg／mlという低いツベルシン濃度で観察された。
【０１９９】
実施例２
序／材料および方法：
図１で用いた同じU1細胞において、ツベルシンおよびSSMA阻害活性の一般化可能性（genneralizability）を評価した。これを達成するために、IL-18ではなく、リポ多糖（LPS、また内毒素とも呼ばれる）を用いて、U1細胞を刺激することにより、HIVを産生させた。図１についての記載と同じプロトコルを用いて、ツベルシンまたはSSMAの非存在または存在下でU1細胞を刺激することにより、LPS誘発HIVに対するツベルシンの効果を評価した。
【０２００】
結果：
図２に示すように、最終濃度50または25μg／mlのツベルシンが存在すると、５μg／mlのLPSにより刺激されたHIVの量が有意に阻害された。加えて、800μg／mlのSSMAの存在により、これら実験におけるHIV産生が実質的に阻害された。
【０２０１】
考察：
これらの結果、図１に示したデータを拡大して、ツベルシンおよびSSMAが、刺激されたHIVを有意に阻害できることが証明される。従って、ツベルシンおよびSSMA阻害効果は刺激特異的ではない。
【０２０２】
実施例３
序／材料および方法：
U1細胞生存能およびU1細胞複製に対するツベルシンおよびSSMAの効果を試験した。図１および２で観察された結果は、真の抑制抗HIV効果の可能性を示すものであった。他方で、これらのデータは、ツベルシンの有毒作用、またはツベルシンの抗増殖作用から得られた可能性もある。これらの可能性を排除するために、血球計での細胞計数およびトリパンブルー生体染色を用いて、考えられる有毒または抗増殖ツベルシン作用を決定した。増殖および毒性試験は、ツベルシンまたはSSMAの非存在（対照）または存在下で、全く同じ３つのU1細胞培養物において24時間実施した。24時間のインキュベーション後、血球計を用いて、盲検方式で細胞を計数し、生体染色トリパンブルーを用いて、細胞生存能（トリパンブルーが浸透した細胞は生存できないため、青く染色した細胞は死滅細胞として計数した）を評価した。
【０２０３】
結果：
図３に示すように、24時間のインキュベーション後、ツベルシンは、存在するU1細胞の数を用量依存的に減少させた（ツベルシンの非存在下で実施した対照培養物と比較して）。従って、U1細胞におけるツベルシンの統計的に有意な抗増殖効果が証明された。増殖の最大抑制は、50μg／mlでの約30％であった。しかし、試験したすべてのツベルシン濃度で、トリパンブルー排除による細胞傷害性は観察されなかった。SSMAに曝露した培養物では、U1細胞増殖に対する顕著な効果はなく、従って、トリパンブルー排除により評価したU1細胞生存能に対するSSMA効果はなかった。
【０２０４】
考察：
上記のデータから、ツベルシンがU1細胞において、大きくはないが、統計的に有意な抗増殖効果を有することがわかる。しかし、ツベルシンによる付随のU1細胞傷害性はなかった。IL-8またはLPSで刺激したU1細胞で得られた最大HIV抑制はほぼ100％であった（図１および２参照）ため、抗増殖活性の最大の大きさ（50μg／mlで約30％）では、U1細胞培養物で観察されたツベルシンの抗レトロウイルス効果を説明することができない。これらの結果から、U1細胞における毒性の非存在が確認できる。従って、刺激U1細胞におけるHIVのツベルシン誘導性抑制（図１および２）は、真の抗ウイルスツベルシン効果によるものである。
【０２０５】
加えて、有意で、かつ用量依存的なツベルシンの抗増殖効果が認められる。このツベルシンの抗増殖活性は、ツベルシン抗HIV活性の一部を説明しうるが、図１および２で観察された全（100％）抗HIV効果を説明するには不十分である。ツベルシンがin vitroおよびin vivoで抗腫瘍（抗癌）活性を有すると報告されていることは特に注目に値する。この効果は、宿主の抗腫瘍免疫応答のアップレギュレーションから起こると考えられるが、図３のデータは、補足的抗腫瘍効果が、腫瘍細胞への直接抗増殖効果から起こりうることを示唆している。
【０２０６】
実施例４
序／材料および方法：
図１および２においてU1細胞で得られた抗HIV結果から、ツベルシンは、慢性HIV感染U1細胞系において刺激されたHIV産生を阻害することがわかる。これらの実験には、次の２つの制限事項が考えられる：ａ）U1細胞はヒト不死化細胞系であり、従って、感染患者に存在するHIV感染した天然細胞とは異なる；ｂ）U1細胞はプロウイルスとしてHIVを含むため、HIV合成の純粋な産生モデルであり；これらの細胞には新たなHIV感染がない。
【０２０７】
初代（天然）ヒト細胞におけるツベルシン効果を評価するため、健康なヒトのボランティアから単離したヒト末梢血液単核細胞（PBMC）を用いた。ヘパリン処理血液を健康なボランティアから単離し、フィコール−ハイパック（ficoll-hypaque）による遠心分離を用いて、PBMCを単離した。次に、本発明者らの研究室で以前記載されたプロトコル（Shapiro L, Pott GB, Ralston AH.  Alpha-1-antitrypsin inhibits human immunodeficiency virus type 1.  FASEB J, 15:115-122, 2001）に従い、100万PBMC当たり100 TCID50HIVを用いて、HIVのM-トロピック株にPBMCを感染させた。RPMI培地、10％（vol/vol）FCS、５％（vol/vol）IL-2、およびペニシリン／ストレプトマイシン（100単位／ml／100μg／ml）からなるR3培地においてHIV感染PBMCを培養した。感染後、PBMCをRPMI培地で洗浄して、遊離ウイルスを除去した。１アリコートの細胞を溶解させ（１％vol/volトリトン-X-100）、全HIVを定量した；これをＴ＝０サンプルと呼ぶが、これはインキュベーション前の培養物におけるウイルスの量を示す。0.5 mlの最終容量において、１ml当たり１×106細胞の細胞密度で、24ウェルポリスチレン組織培養プレート（Falcon）のウェルにHIV感染PBMCを等分した。３日のインキュベーション（37℃、５％CO2）後、細胞培養物を１％（vol/vol）トリトン-X-100で溶解し、p24 ELISAを用いたHIVについてアッセイするまで、培養物を−70℃で保存した。
【０２０８】
結果：
図４は、２人のドナーからのPBMCを用いて得られた結果を示す。図からわかるように、３日間の細胞培養物から、培養物に初め添加したウイルスの量と比較して実質的な量の新たなウイルスが合成された（グラフでは、それぞれＴ＝０および自然HIV産生として示す）。図４に示すように、培養物へのツベルシンの添加により、２つの個体に由来する感染PBMCにおけるHIV産生の実質的、かつ容量依存的阻害が誘導された。実際、阻害の大きさは、ツベルシン50μg／mlでほぼ100％であった。
【０２０９】
考察：
これらの結果から、ツベルシンの抗HIV活性の範囲を初代感染細胞まで拡大することができる。このHIV産生モデルは、in vivoでの状態をより近似的に表していることから、ツベルシンが感染患者におけるHIV産生を阻害する可能性が高くなる。さらに、感染PBMCにおけるHIV産生は、感染と産生両方の連続的ラウンドを示すことから、これらの結果は、HIV感染において考えられるツベルシンの阻害役割を示している。
【０２１０】
実施例５
序／材料および方法：
HIV感染PBMCにおけるツベルシンの毒性、ならびにこれらの初代感染細胞におけるツベルシン抗レトロウイルス効果の特異性について評価した。図４に示すHIV感染PBMC培養物の１つに産生したサイトカインの量を定量することにより、前記２つの事項を同時に評価した。
【０２１１】
結果：
図５はこの培養物で測定したIL-8を示し、図６は同じ培養物で測定したIL-6を示す。グラフに示すように、３日の培養後、IL-8（図５）とIL-6（図６）の両方とも、Ｔ＝０（３日のインキュベーション前の培養物に存在する量）と比較して、培地だけ（自然発生培養）で実施した培養中で増加した。IL-8とIL-6の両方について図示したように、３日の培養時にツベルシンが存在しても、自然発生培養物と比べ、いずれのサイトカインの量も減少しなかった。
【０２１２】
考察：
これらの結果から、ツベルシンについて次の２つの結論が導き出される：
ａ．ツベルシンはHIV感染PBMCに対し有毒ではない。もしツベルシンがこれらの細胞に対し有毒であるなら、損傷または死滅した細胞はサイトカインを合成することはできないから、３日の培養後サイトカインの量は減少しているはずである。
【０２１３】
ｂ．ツベルシンはHIV産生を実質的に抑制した（図４）が、同時にIL-8またはIL-6に対する抑制効果を持たないため、抗HIV活性は特異的である。実際に、ツベルシンは、25および12.5μg／mlの濃度でIL-6産生に若干の誘導効果を示した。
【０２１４】
実施例６
MAGI-CCR-5細胞感染
序／材料および方法：
U1単球細胞およびHIV感染PBMCで実施する実験により、HIV産生（U1細胞）またはHIV感染および産生（PBMC）を評価する。HIV感染に対するツベルシンの効果を評価するために、MAGI（ガラクトシダーゼインジケーターの多核活性化）-CCR-5細胞を用いた。これらの細胞は、細胞内部にウイルスが侵入するのに必要な細胞表面HIV受容体のすべてを発現するヒトHeLa細胞である。HIVが細胞内に入ると、ウイルスは核に組み込まれる。ウイルスタンパク質が細胞内で発現するとすぐに、HIV tatタンパク質はβガラクトシダーゼの合成を誘導するゲノムリポーター構築物と相互作用する。このとき、展開液（developing solution）を用いて、βガラクトシダーゼ含有細胞を染色する。このアッセイは、HIV感染生活環の早期事象を示すシステムを構成する。
【０２１５】
1.0 ml容量において、１ウェル当たり４×104の密度で、24ウェルポリスチレンプレート（Falcon）にMAGI-CCR-5細胞（NIH AIDS Research and Reference Reagent Program, NIAID）を等分した。24時間のインキュベーション（37℃、５％CO2）後、各ウェルから全培地（RPMI、10％v/vウシ胎子血清、ペニシリン／ストレプトマイシン）を除去し、200μlの新鮮な培地を添加したが、その際、横軸に示す最終濃度のツベルシンを含有するものと、しないものを添加した。次に、300 TCID50のHIV-1のAO18A株と、200μl培地中の20μg／ml DEAEデキストランを、細胞を含むウェルに添加した。バックグラウンドリポーター活性化を評価するため、個別の細胞含有ウェルに、ウイルスを含まない培地中のDEAEデキストランを添加した。２時間のインキュベーション後、培地を各培養物に添加し、最終容量を1,000μlに調節し、培養物を48時間インキュベートした。培地を吸引し、細胞を固定した後、βガラクトシダーゼ染色液を添加した。50分のインキュベーション後、顕微鏡の下で、染色した（リポーター活性化）細胞の盲検式カウントを実施した。
【０２１６】
結果：
図７からわかるように、培地だけで培養した細胞は、100％で示される大量のHIV感染を生み出した。横軸に示した濃度でツベルシンに曝露したMAGI-CCR-5細胞では、ウイルスによる細胞の感染の用量依存的および統計的に有意な減少が起こった。試験したすべてのツベルシン濃度（Ｐ＜0.01またはＰ＜0.001）を用いて、有意な阻害が観察された。10フェムトグラム／mlという低いツベルシン濃度でもHIV感染を有意に阻害したことは注目に値する。最大の阻害度は、500μg／mlのツベルシンを用いたとき観察され、この場合、HIV感染の約90％が阻害された。
【０２１７】
考察：
これらのデータは、ツベルシンがHIV感染のin vitroモデルにおいて早期のHIV感染を阻害できることを証明している。既述したU1細胞データと一緒に、これらの結果から、個々の細胞においてHIV感染およびHIV産生の両方を阻害できることが確認される。これらの結果は、感染したヒトの抗レトロウイルス薬としてツベルシンが臨床的に使用可能であることを意味している。ツベルシンには、感染患者において極めて低濃度で抗HIV効果があることが示唆される。１〜500 pg／mlの範囲の濃度は、in vivoでHIV産生を阻害するのに十分である。
【０２１８】
実施例７
一般化可能性についての記述：
ツベルシン抗HIV効果の範囲は別のウイルスの阻害まで拡大する可能性がある。この推定は、ツベルシンが細胞自体に影響を及ぼすと思われ、ウイルス特異的物質をターゲッティングしないことを考えると妥当である。その最大の理由は、U1細胞における抗HIVツベルシン効果を表すデータ（前文参照）である。純粋にプロウイルス状態からのHIVの産生の上記モデルでは、ツベルシン効果は、ウイルス産生を起こすシグナル伝達事象の改変に関与すると考えられる。具体的には、ツベルシンは、ウイルス産生を起こすU1細胞のIL-8およびLPS刺激に関連するシグナル伝達経路を妨害する（図７および８を参照）。多くの（全部ではなくとも）ウイルスは、ウイルス感染および合成を可能にするために、細胞関連シグナル伝達活性を必要とすることに留意すべきである。従って、HIV感染および産生に対するツベルシンの阻害効果の範囲は、ヒト細胞に感染するあらゆる（全部ではなくとも）ウイルスに拡大すると考えられる。
【０２１９】
均等物
本発明全体を通じ、様々な刊行物および特許を参照にした。本発明が関連する最新技術をさらに詳しく説明するために、これらの刊行物および特許の開示内容は、その全文を参照として本明細書に組み込むものとする。
【０２２０】
本発明をその具体的実施形態に関して説明してきたが、さらなる変形も可能であり、本発明は、一般に、本発明の原理に従う本発明のあらゆる変更、使用または改変を包含するものとし、さらには、本発明が関連する分野での周知または慣用的実施の範囲内にある、また、既述した主要な特徴に適用できる、ならびに、添付の特許請求の範囲に記載される範囲内に準ずるような、本発明の開示内容からの逸脱も含む。
【図面の簡単な説明】
【０２２１】
【図１】U1細胞におけるツベルシンの効果を示す図である。
【図２】U1細胞におけるツベルシンおよびリポ多糖の効果を示す図である。
【図３】U1細胞において実施した増殖および毒性試験を示す図である。
【図４】HIVに感染したヒト末梢血液単核細胞（PBMC）におけるツベルシンの効果を示す図である。
【図５】図４に示すPBMC培養物の１つにおけるIL-8の定量の結果を示す図である。
【図６】図５に記載したのと同じ培養物で測定したIL-6の結果を示す図である。
【図７】MAGI細胞におけるHIV-1感染のツベルシン阻害の結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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