(57)【要約】本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に結合し、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する治療用抗体を使用して、ヒト被験体における自己免疫疾患および自己免疫障害を処置するための免疫療法用の組成物および方法に関する。本発明は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明は、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明はまた、ヒトＡＤＣＣを媒介する、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物にも関する。好ましい実施形態において、本発明は、モノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。
2008540447.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体を薬学的に許容可能なキャリア中に含む、薬学的組成物。
【請求項２】
治療有効量のＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体を薬学的に許容可能なキャリア中に含む、薬学的組成物。
【請求項３】
ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体の前記治療有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ患者体重未満である、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体の前記治療有効量が、約２ｍｇ／ｋｇ患者体重よりも多い、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプ抗体である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ＩｇＧ３ヒトアイソタイプ抗体である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
ヒト抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する、治療有効量のモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体を、薬学的に許容可能なキャリア中に含む薬学的組成物。
【請求項８】
ヒト抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体を薬学的に許容可能なキャリア中に含む、薬学的組成物。
【請求項９】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプの抗体である、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ１９抗体が、少なくとも４〜７日の半減期を有する、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、１５００ｍｇ／ｍ２以下の用量の前記抗ＣＤ１９抗体を含む、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、３７５ｍｇ／ｍ２以下の用量の前記抗ＣＤ１９抗体を含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、１．５ｍｇ／ｍ２未満の用量の前記抗ＣＤ１９抗体を含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、０．５μｇ／ｍ２以下の用量の前記抗ＣＤ１９抗体を含む、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記抗ＣＤ１９抗体が、検出可能に標識されている、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ１９抗体が、裸の抗体である、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記抗ＣＤ１９抗体が、治療的化合物に結合体化されている、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記抗ＣＤ１９抗体が、細胞傷害性因子に結合体化されている、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ１９抗体が、診断用因子に結合体化されている、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記抗ＣＤ１９抗体が、細胞分裂抑制因子に結合体化されている、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記抗ＣＤ１９抗体が、アポトーシスを誘導する因子に結合体化されている、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記抗ＣＤ１９抗体が、二重特異性である、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記二重特異性抗ＣＤ１９抗体が、エフェクター細胞への結合特異性を有する、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
前記抗ＣＤ１９抗体のＡＤＣＣ機能が、インビトロにおいてエフェクター細胞によって標的細胞溶解を媒介する該抗ＣＤ１９抗体の能力を測定することにより評価される、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａもしくはＨＢ１２ｂの重鎖ＣＤＲ３領域またはＨＢ１２ａもしくはＨＢ１２ｂ抗体の該重鎖ＣＤＲ３領域と少なくとも２５％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３領域を含む、請求項１、２、７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ＨＢ１２ａもしくはＨＢ１２ｂ抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域、またはＨＢ１２ａもしくはＨＢ１２ｂ抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域と少なくとも２５％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域を含む、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
ヒトにおける自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法であって、それらを必要とするヒトに、循環Ｂ細胞を枯渇させるのに十分な量のヒトＡＤＣＣを媒介する抗ＣＤ１９抗体を投与する工程を含む、方法。
【請求項２８】
ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒト患者への、治療的に有効なレジメンによるヒトＡＤＣＣを媒介する抗ＣＤ１９抗体の投与を含む、方法。
【請求項２９】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプの抗体である、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプの抗体である、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記自己免疫疾患または自己免疫障害が、前記抗ＣＤ１９抗体の前記投与の前に処置される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記前処置が、ＮＳＡＩＤ、ＣＯＸ２インヒビター、ステロイド、Ｅｍｂｒｅｌ、Ｈｕｍｉｒａ、Ｒｅｍｉｃａｄｅまたはそれらの任意の組み合わせである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記前処置が、化学療法、放射免疫療法、トキシン治療、プロドラッグ活性化酵素治療、抗体治療、単球またはマクロファージ増強治療、免疫調節性治療、外科的治療またはそれらの任意の組み合わせである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記自己免疫疾患または自己免疫障害が、前記抗ＣＤ１９抗体の投与の後で、抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療法で処置される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記後の処置が、化学療法、放射免疫療法、トキシン治療、プロドラッグ活性化酵素治療、抗体治療、単球またはマクロファージ増強治療、免疫調節性治療、外科的治療またはそれらの任意の組み合わせである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ヒト患者において初期の自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトへの、治療的に有効なレジメンによる抗ＣＤ１９抗体の投与を含む、方法。
【請求項３７】
ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法であって、該自己免疫疾患または該自己免疫障害のための処置を以前に受けたことがない、そのような処置を必要とするヒト被験体への、治療的に有効なレジメンによる抗ＣＤ１９抗体の投与を含む、方法。
【請求項３８】
前記ヒト患者への抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療の後の投与をさらに含む、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記その後の治療が、化学療法、放射線治療、トキシンベースの治療、放射化学ベースの治療または外科的治療である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法であって、該方法は、そのような処置を必要とするヒト患者への、治療的に有効なレジメンによる抗ＣＤ１９抗体の投与を含み、ここで、該自己免疫疾患または自己免疫障害が、ＣＤ１９陽性である、方法。
【請求項４１】
ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法であって、該方法は、そのような処置を必要とするヒト患者への、治療的に有効なレジメンによる抗ＣＤ１９抗体の投与を含み、ここで、該ヒト患者が、少なくとも１／ｄＬの単球数を有する、方法。
【請求項４２】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒト抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記抗ＣＤ１９抗体が、循環Ｂ細胞を枯渇させるのに十分な量でヒト抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗ＣＤ１９抗体が、モノクローナル抗ＣＤ１９抗体である、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記レジメンが、単一治療薬として前記抗体の投与を含む、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４６】
前記レジメンが、別の治療薬と組み合わせた前記抗体の投与を含む、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４７】
前記レジメンが、有毒な副作用を低減する因子と組み合わせた前記抗体の投与を含む、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４８】
前記投与レジメンが、循環Ｂ細胞を枯渇させる、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４９】
前記レジメンが、循環Ｂ細胞を枯渇させるのに十分な量の前記抗体の反復投与を含む、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗ＣＤ１９抗体が、少なくとも４〜７日の半減期を有する、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体である、請求項３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒトＩｇＧ３アイソタイプ抗体である、請求項３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５３】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体である、請求項３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５４】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体である、請求項３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５６】
前記自己免疫疾患または自己免疫障害が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、特発性／自己免疫性血小板減少性紫斑病、天疱瘡関連障害、糖尿病または強皮症である、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５７】
前記レジメンが、単球またはマクロファージの機能を増強する化合物を投与する工程をさらに含む、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項５８】
前記ヒトが、免疫無防備状態である、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗ＣＤ１９抗体が、非経口経路、腹腔内経路または筋肉内経路によって投与される、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗ＣＤ１９抗体が、静脈内経路または皮下経路によって投与される、請求項２７、２８、３６、３７、４０または４１に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗ＣＤ１９抗体が、３７．５ｍｇ／ｍ２以下の用量で皮下経路によって投与される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗ＣＤ１９抗体が、１．５ｍｇ／ｍ２以下の用量で投与される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
循環Ｂ細胞の少なくとも７５％枯渇が達成される、請求項４９に記載のいずれかの方法。
【請求項６４】
循環Ｂ細胞の前記枯渇が、少なくとも７日間に亘って観察される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
循環Ｂ細胞の前記枯渇が、少なくとも３０日間に亘って観察される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記循環Ｂ細胞の枯渇が、少なくとも６ヶ月間に亘って観察される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６７】
前記レジメンが、前記ヒトへの前記抗ＣＤ１９抗体の２回以上の投与を含む、請求項４０または４１のいずれかに記載の方法。
【請求項６８】
前記レジメンが、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体またはそれらの任意の組み合わせを投与する工程をさらに含む、請求項４０または４１のいずれかに記載の方法。
【請求項６９】
ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法であって、それらを必要とするヒト患者に、ヒトＡＤＣＣを媒介する抗ＣＤ１９抗体を治療的に有効なレジメンによって投与する工程を含む、方法。
【請求項７０】
前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ヒト抗体または前記ヒト化抗体が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプの抗体である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療による処置の前に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗ＣＤ１９抗体の投与の後に抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療を施す工程をさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
抗ＣＤ１９抗体治療以外の前記治療が、化学療法、放射線治療、トキシンベースの治療、放射化学ベースの治療または外科的治療である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療と同時投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７６】
抗ＣＤ１９抗体治療以外の前記治療が、化学療法、放射線治療、トキシンベースの治療、放射化学ベースの治療または外科的治療である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
低減された有毒な副作用が、抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療の施与から観察される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記自己免疫疾患または自己免疫障害が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、特発性／自己免疫性血小板減少性紫斑病、天疱瘡関連障害、糖尿病または強皮症である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７９】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも２５％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲを含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項８０】
前記重鎖ＣＤＲが、ＨＣＤＲ３である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＨＣＤＲ３が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂのＨＣＤＲ３のアミノ酸配列と１００％の配列同一性を有する、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の各々のアミノ酸配列と少なくとも２５％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲを含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の各々のアミノ酸配列と１００％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲを含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂの軽鎖ＣＤＲをさらに含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８５】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂの軽鎖ＣＤＲを含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
前記抗ＣＤ１９抗体が、配列番号１６または配列番号１８と少なくとも２５％のアミノ酸配列同一性を有する可変軽鎖を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項８７】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂの重鎖可変ドメインアミノ酸配列と少なくとも２５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項８８】
前記抗ＣＤ１９抗体が、抗体ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂの軽鎖可変ドメインアミノ酸配列と少なくとも２５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインをさらに含む、請求項８７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  ＨｅａｌｔｈのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって資金援助されたグラント番号ＣＡ１７７６、ＣＡ１０５００１、およびＣＡ９６５４７の下、ならびにＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  ＨｅａｌｔｈのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅによって資金援助されたグラント番号ＡＩ５６３６３の下、部分的に政府の支持によってなされた。米国合衆国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
本願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下、２００５年５月５日に出願された米国仮特許出願第６０／６７９，０９５号に対する優先権を主張する。米国仮特許出願第６０／６７９，０９５号は、その全体が参考として援用される。
【０００３】
（１．緒言）
本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に結合する治療用抗体を使用した、ヒト被験体における自己免疫障害または自己免疫疾患を処置するための方法に関する。好ましい実施形態において、本発明の組成物および方法の治療用抗ＣＤ１９抗体は、好ましくはヒト抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する。本発明は、さらに、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む組成物に関する。本発明は、さらに、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する、ＩｇＧ２および／またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む組成物に関する。本発明はまた、モノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を包含する。
【０００４】
（２．発明の背景）
Ｂ細胞表面マーカーは、一般に、Ｂ細胞の障害または疾患、自己免疫疾患および移植拒絶を処置するための標的として提唱されている。Ｂ細胞表面マーカーの例としては、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６白血球表面マーカーが挙げられる。これらのマーカーと特異的に結合する抗体が開発されており、そのいくつかは、疾患および障害を処置するために試験されている。
【０００５】
例えば、成熟Ｂ細胞およびその悪性の対応物に特異的なＣＤ２０細胞表面分子に対するキメラモノクローナル抗体（ｍＡｂ）または放射性標識されたモノクローナル抗体に基づく治療が、非ホジキンリンパ腫の有効なインビボ処置であることが示されている（Ｔｅｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１５：４５０−４５４（１９９４）；Ｐｒｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２２１−２４０（２００１）；Ｋａｍｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ，３２９：４５９−４６５（１９９３）；Ｗｅｉｎｅｒ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，２６：４３−５１（１９９９）；Ｏｎｒｕｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇｓ，５８：７９−８８（１９９９）；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１２：１７６３−１７６９（１９９８）；Ｒｅｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，８３：４３５−４４５（１９９４）；Ｍａｌｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，９０：２１８８−２１９５（１９９７）；Ｍａｌｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，１５：３２６６−３２７４（１９９７）；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃ，２５：７０５−７０８（１９９７））。抗ＣＤ２０モノクローナル抗体治療はまた、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、特発性血小板減少性紫斑病および溶血性貧血、ならびに他の免疫媒介性疾患の症状を寛解させることが見出されている（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，４８：１４８４−１４９２（２００２）；Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４０：１−７（２００１）；Ｄｅ  Ｖｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，４６：２０２９−２０３３（２００２）；Ｌｅａｎｄｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，６１：８８３−８８８（２００２）；Ｌｅａｎｄｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，４６：２６７３−２６７７（２００１））。抗ＣＤ２０（ＩｇＧ１）抗体であるＲＩＴＵＸＡＮＴＭは、特定の疾患（例えば、成人免疫血小板減少性紫斑病、関節リウマチおよび自己免疫性溶血性貧血の処置にうまく使用されている（Ｃｕｒｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，特許文献１）。これらの治療が有効であるにもかかわらず、Ｂ細胞がＣＤ２０を発現していないか、もしくはＣＤ２０を低レベルで発現している場合、またはＣＤ２０免疫療法の後にＣＤ２０を発現しなくなった場合には、Ｂ細胞を枯渇させることは、あまり有効でない（非特許文献１）。
【０００６】
ヒトＣＤ１９分子は、ヒトＢ細胞（プレＢ細胞、発達初期のＢ細胞（すなわち、未成熟Ｂ細胞）、分化末期から血漿細胞の成熟Ｂ細胞および悪性Ｂ細胞が挙げられるがこれらに限定されない）の表面上で発現している、構造が特徴的な細胞表面レセプターである。ＣＤ２０とは異なり、ＣＤ１９抗原は、高レベルで発現しており、抗ＣＤ１９抗体と結合すると細胞によって内部に取り込まれると考えられていた。
【０００７】
ＣＤ１９抗原はまた、免疫療法のために提唱された多くの標的の１つである。しかしながら、細胞の内部に取り込まれるために、標的として入手が不可能であるとの認識から、ヒト被験体においてうまく使用し得る治療用のプロトコールの開発の障壁と考えられていた。好ましい内部移行およびＢ細胞を枯渇させる際の有効性の高さに加えて、抗ＣＤ１９抗体治療は、血清免疫グロブリンレベルを枯渇させるためのものと認識されていなかった。
【特許文献１】国際公開第００／６７７９６号パンフレット
【非特許文献１】Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２２：７３５９−７３６８（２００３）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（３．発明の要旨）
本発明は、ヒトＣＤ１９抗原に結合し、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する治療用抗体を使用した、ヒト被験体における自己免疫疾患および自己免疫障害を処置するための免疫療法用の組成物および方法に関する。本発明は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明は、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明は、ヒトＡＤＣＣを媒介するＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。好ましい実施形態において、本発明は、モノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。
【０００９】
自己免疫疾患または自己免疫障害（関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｉｓ）（ＳＬＥ）、特発性／自己免疫性血小板減少紫斑病（ＩＴＰ）、天疱瘡関連障害、糖尿病または強皮症が挙げられるがこれらに限定されない）と診断されているか、またはそれらを発症する危険性があるヒト被験体を処置するための治療用の処方物およびレジメンを記載する。
【００１０】
本発明の方法は、例として、ヒト被験体においてＣＤ１９に対する免疫療法を評価するためにトランスジェニックマウスモデルを使用して証明される。
【００１１】
１つの実施形態において、本発明は、薬学的に許容可能なキャリア中にＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、薬学的に許容可能なキャリア中にＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプの治療有効量のモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物を提供する。関連する実施形態において、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体の治療有効量は、１ｍｇ／ｋｇ患者体重未満である。他の関連する実施形態において、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体の治療有効量は、２ｍｇ／ｋｇ患者体重より多い。
【００１２】
１つの態様によれば、本発明は、ヒト抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する、治療有効量のモノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を薬学的に許容可能なキャリア中に含む薬学的組成物を提供する。別の態様によれば、本発明は、ヒト抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体を薬学的に許容可能なキャリア中に含む薬学的組成物を提供する。
【００１３】
本発明は、ヒトにおける自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法に関し、その方法は、そのような処置を必要とするヒトに、循環Ｂ細胞を枯渇させるのに十分な量のＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を投与する工程を含む。本発明はまた、ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法に関し、その方法は、そのような処置を必要とするヒト患者への、ヒトＡＤＣＣを媒介する抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの投与を含む。本発明はまた、自己免疫障害を処置する方法に関し、その方法は、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの投与を含む。
【００１４】
１つの実施形態において、本発明は、ヒト患者における自己免疫障害を処置する方法を提供し、その方法は、そのような処置を必要とするヒト患者への、ＡＤＣＣを媒介するモノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの投与を含む。別の実施形態において、本発明は、初期の自己免疫障害を処置する方法を提供し、そのような処置を必要とするヒトに、ＡＤＣＣを媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの投与を含む。さらなる実施形態において、本発明は、ヒト患者における自己免疫障害を処置する方法を提供し、その方法は、それらを必要とするヒト被験体への、ＡＤＣＣを媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの投与を含み、ここで、そのヒト被験体は、その障害のための処置を以前に受けていない。本発明のなおも別の実施形態は、ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法を提供し、その方法は、そのような処置を必要とするヒト患者への、ＡＤＣＣを媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの投与を含み、ここで、その自己免疫疾患または自己免疫障害は、ＣＤ１９陽性である。さらなる実施形態において、本発明は、ヒト患者における自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法を提供し、その方法は、そのような処置を必要とするヒト患者への、ヒトＡＤＣＣを媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの投与を含み、ここで、そのヒト患者は、循環血液中、少なくとも１個／ｄＬの単球数を有する。本発明は、自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法を提供し、ここで、その自己免疫疾患または自己免疫障害は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、特発性／自己免疫性の血小板減少紫斑病、天疱瘡関連障害、糖尿病または強皮症である。
【００１５】
３．１．定義
本明細書中で使用されるとき、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」（免疫グロブリン）とは、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２種のインタクトな抗体から形成される多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化（ｃａｍｅｌｉｓｅｄ）抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、所望の生物学的活性を示す抗体フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体が挙げられる）、細胞内抗体ならびに上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントのことをいう。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント、すなわち、抗原結合部位を含む分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または任意のサブクラスであり得る。
【００１６】
ネイティブな抗体は、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質であり、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖から構成される。各軽鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によって重鎖と連結されているが、ジスルフィド結合の数は、様々な免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変化する。各重鎖および各軽鎖もまた、規則正しい間隔をおいて鎖間ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに多くの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、他方の末端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１定常ドメインと整列しており、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている。このような抗体は、任意の哺乳動物（ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウスなどが挙げられるがこれらに限定されない）から得られうる。
【００１７】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で配列が大きく異なり、そして各特定の抗体の、その特定の抗原に対する結合特異性に関与するという事実のことをいう。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインを通して均等に分配されない。可変領域は、軽鎖と重鎖の両方の可変ドメインにおける相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるセグメントに集中している。より高度に保存された可変ドメインの部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれている。ネイティブな重鎖および軽鎖の各々の可変ドメインは、４つのＦＲ領域を含む。ＦＲ構造は、たいていの場合、βシート配置をとり、また、ループ連結を形成し、いくつかの場合においてβシート構造を形成する３つのＣＤＲに連結している。各鎖におけるＣＤＲは、他方の鎖からのＣＤＲとともにＦＲ領域と近接して結合しており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、一般に抗原結合に直接関与しないが、抗原結合アフィニティーに影響を与えることがあり、そしてＡＤＣＣにおける抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示し得る。
【００１８】
用語「超可変領域」とは、本明細書中で使用されるとき、その抗原への結合に関与する抗体のアミノ酸残基のことをいう。超可変領域は、「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））由来のアミノ酸残基および／または「超可変ループ」由来の残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で定義されるような超可変領域残基以外の可変ドメイン残基であり、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ、ワクチボディ（ｖａｃｃｉｂｏｄｉｅｓ）、直鎖状抗体および二重特異性抗体を含む。
【００１９】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書中で使用されるとき、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体、すなわち、微量存在し得る天然に発生する可能性のある変異を除いて、その集団内の個々の抗体が同一である抗体のことをいう。モノクローナル抗体は、単一抗原部位に対して高度に特異的である。さらに、代表的には、様々な決定基（エピトープ）に対する様々な抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原における単一の決定基に対して特異的である。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリン産生細胞によって汚染されていないハイブリドーマ細胞によって合成されるという利点がある。あるいは、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体をコードする重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子を用いて安定的または一時的にトランスフェクトされた細胞によって産生され得る。
【００２０】
修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるような抗体の性質のことを指し、そして任意の特定の方法によって抗体を操作することが必要であると解釈されるべきでない。用語「モノクローナル」は、任意の真核生物、原核生物またはファージのクローンを含む、細胞のクローン集団から得られる抗体のことをいうために本明細書中で使用され、その抗体を操作した方法から得られる抗体のことをいわない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって初めて報告されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または任意の組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製され得る。その組換えＤＮＡ法としては、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載されている技術を使用したファージ抗体ライブラリーからの単離が挙げられる。これらの方法は、モノクローナルの哺乳動物抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ、ワクチボディ、直鎖状抗体および二重特異性抗体を作製するために使用され得る。
【００２１】
用語「キメラ」抗体は、所望の生物学的活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の少なくとも一部が、特定の種由来の抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一か、または相同であり、かつ、その鎖の他の少なくとも一部が、別の種由来の抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントにおける対応配列と同一か、または相同である抗体を含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書中の目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル（例えば、ヒヒ、アカゲザルまたはカニクイザル））由来の可変ドメイン抗原結合配列およびヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体（米国特許第５，６９３，７８０号）を含む。
【００２２】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類）の、所望の特異性、アフィニティーおよび能力を有する超可変領域由来の残基で置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見られない残基を含み得る。これらの改変がなされることにより、抗体の性能がさらに高められる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全部または実質的に全部が、非ヒト免疫グロブリンのそれらに対応し、かつ、ＦＲの全部または実質的に全部が、ヒト免疫グロブリン配列のそれらである、少なくとも１つの（代表的には２つの）可変ドメインの実質的に全部を含む。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、代表的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含む。詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ，２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。
【００２３】
「ヒト抗体」は、ヒト由来の抗体、または抗原投与（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に応答して特定のヒト抗体を産生するように「操作された」トランスジェニック生物体由来の抗体であり得、また、当該分野で公知の任意の方法によって作製され得る。好ましい技術によれば、ヒト重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座のエレメントは、内在性の重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座が標的化されて破壊されている胚性幹細胞株由来の生物体の系統に導入される。そのトランスジェニック生物体は、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、そしてその生物体は、ヒト抗体を分泌するハイブリドーマを産生させるために使用され得る。ヒト抗体はまた、その重鎖および軽鎖が、ヒトＤＮＡの１以上の起源に由来するヌクレオチド配列によってコードされる抗体であり得る。完全なヒト抗体はまた、遺伝子または染色体のトランスフェクション法ならびにファージディスプレイ技術、またはインビトロで活性化されたＢ細胞（これらすべては当該分野で公知である）によって構築され得る。
【００２４】
「ＣＤ１９」抗原とは、例えば、ＨＤ２３７抗体またはＢ４抗体（Ｋｉｅｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩＩ，１２：１１１９（１９８７））によって識別される、約９０ｋＤａの抗原のことをいう。ＣＤ１９は、幹細胞段階から血漿細胞への最終的な分化までのＢ系列細胞（プレＢ細胞、Ｂ細胞（ナイーブＢ細胞、抗原に刺激されたＢ細胞、メモリーＢ細胞、血漿細胞およびＢリンパ球を含む）および濾胞樹状細胞が挙げられるがこれらに限定されない）の分化を通して細胞上に見られる。ＣＤ１９はまた、ヒト胎児組織におけるＢ細胞上に見られる。好ましい実施形態において、本発明の抗体によって標的化されるＣＤ１９抗原は、ヒトＣＤ１９抗原である。
【００２５】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」とは、非特異的な細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合している抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応のことをいう。好ましい実施形態において、そのような細胞は、ヒト細胞である。いかなる特定の作用メカニズムにも拘束することを望まないが、ＡＤＣＣを媒介するこれらの細胞傷害性細胞は、一般にＦｃレセプター（ＦｃＲ）を発現している。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞である、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩを発現し、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現している。造血細胞上のＦｃＲ発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）に要約されている。分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイが行われ得る。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて評価され得る。
【００２６】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の活性化を開始し、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力のことをいう。補体の活性化経路は、補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）が同族の抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）に結合することによって開始される。補体の活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されているようなＣＤＣアッセイが行われ得る。
【００２７】
「エフェクター細胞」は、１以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を発揮する白血球である。好ましくは、その細胞は、少なくともＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を発揮する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が挙げられ；ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。好ましい実施形態において、エフェクター細胞は、ヒト細胞である。
【００２８】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するために使用される。好ましいＦｃＲは、ネイティブな配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するレセプター（ガンマレセプター）であり、それらとしては、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶサブクラスのレセプター（対立遺伝子改変体、あるいは、これらのレセプターのスプライスされた形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩレセプターは、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）を含み、これらは、本来その細胞質ドメインが異なるが、類似のアミノ酸配列を有する。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｄａｅｕｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲについては、Ｒａｖｅｔｅｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４（１９９４）；およびｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１（１９９５）に要約されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲが、本明細書中の用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語はまた、母系ＩｇＧの胎児への導入に関与する、新生児レセプターＦｃＲｎを含む（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９（１９９４））。
【００２９】
「Ｆｖ」は、抗原認識部位および抗原結合部位を含む抗体フラグメントのことである。この領域は、堅固な会合、非共有結合の会合または共有結合の会合における、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインのダイマーからなる。Ｆｖ配置において、各可変ドメインの３つのＣＤＲは、相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマー表面上の抗原結合部位を規定する。集合的に、これらの６つのＣＤＲが、Ｆｖフラグメントに抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一可変ドメイン（または、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含む半分のＦｖ）であっても、全体の結合部位の場合よりも低いアフィニティーであるが、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【００３０】
本明細書中で記載される処置に使用されるエピトープに対する抗体の「アフィニティー」は、当該分野で十分に理解されている用語であり、抗体がエピトープに結合する程度または強度を意味する。アフィニティーは、当該分野で公知の多くの方法において測定および／または表示され得る。それらとしては、平衡解離定数（ＫＤまたはＫｄ）、見かけの平衡解離定数（ＫＤ’またはＫｄ’）およびＩＣ５０（競合アッセイにおいて５０％阻害に影響を与えるのに必要な量）が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の目的で、アフィニティーは、エピトープに結合する抗体の所与の集団についての平均アフィニティーであることが理解される。ｍｇ  ＩｇＧ／ｍＬまたはｍｇ／ｍＬとして本明細書中で記載されるＫＤ’の値は、血漿が使用され得るが、ｍｇ  Ｉｇ／ｍＬ血清を示す。抗体アフィニティーが、本明細書中に記載の処置方法における投与の基礎または本明細書中に記載の処置方法についての選択の基礎として使用されるとき、抗体アフィニティーは、処置の前および／または処置中に測定され得、そしてその得られた値は、ヒト患者が処置の適切な候補者であるか否かを評価する際に臨床医によって使用され得る。
【００３１】
「エピトープ」は、当該分野で十分に理解されている用語であり、抗体への特異的な結合を示す任意の化学部分を意味する。「エピトープ」はまた、エピトープを含む部分または分子、また、抗体に特異的に結合するような部分または分子である抗原を含み得る。
【００３２】
「Ｂ細胞表面マーカー」とは、本明細書中で使用されるとき、それらに結合する因子で標的化され得る、Ｂ細胞の表面上に発現している抗原のことである。例示的なＢ細胞表面マーカーとしては、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６白血球表面マーカーが挙げられる。目的の特定のＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較して、Ｂ細胞上で優先的に発現され、そして前駆体Ｂ細胞上と成熟Ｂ細胞上の両方において発現され得る。１つの実施形態において、好ましいマーカーは、プロ／プレＢ細胞段階から最終的に分化した血漿細胞段階までのその系列の分化を通じてＢ細胞上に見られるＣＤ１９である。
【００３３】
用語「抗体半減期」とは、本明細書中で使用されるとき、投与後の抗体分子の平均残存時間の基準である、抗体の薬物動態学的な特性を意味する。抗体半減期は、例えば、血清において測定されるような、すなわち、循環半減期または他の組織における患者の身体由来の免疫グロブリンまたはその特定のコンパートメントの既知の量の５０パーセントを排除するのに必要な時間として表され得る。半減期は、１つの免疫グロブリンまたは免疫グロブリンのクラスから別のものに変化させ得る。一般に、抗体半減期が延びると、投与された抗体に対する循環内での平均滞留時間（ＭＲＴ）も延びる。
【００３４】
用語「アイソタイプ」とは、抗体の分類のことをいう。抗体の定常ドメインは、抗原への結合に関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。重鎖定常領域のアミノ酸配列に応じて、所与の抗体または免疫グロブリンは、免疫グロブリンの５つの主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭのうちの１つに割り当てられ得る。これらのクラスのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１（ガンマ１）、ＩｇＧ２（ガンマ２）、ＩｇＧ３（ガンマ３）およびＩｇＧ４（ガンマ４）ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分類され得る。様々なクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域は、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。様々なクラスの免疫グロブリンの構造および３次元配置は、周知である。様々なヒト免疫グロブリンクラスのうち、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭだけが補体を活性化させることが知られている。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、ヒトにおいてＡＤＣＣを媒介することが知られている。
【００３５】
本明細書中で使用されるとき、用語「免疫原性」とは、化合物が免疫応答を誘発する（特定の抗体の産生および／または特定のＴ細胞の増殖を刺激する）ことができることを意味する。
【００３６】
本明細書中で使用されるとき、用語「抗原性」とは、化合物が抗体によって認識されるか、または抗体と結合して、そして免疫応答を誘導し得ることを意味する。
【００３７】
本明細書中で使用されるとき、用語「アビディティー」とは、抗体が抗原と結合する全体（すなわち、抗体の両腕）の結合強度の基準である。抗体アビディティーは、当該分野で公知の任意の手段（Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈ，４４：１１−２４（１９９３）に記載されているような、間接的な蛍光抗体の改変などが挙げられるがこれらに限定されない）を使用して、抗原過剰状態において抗原抗体結合の解離を計測することによって測定され得る。
【００３８】
用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「〜の処置」（または文法上の同義語）は、被験体の状態の重症度を低下させるか、または少なくとも部分的に改善させるか、もしくは寛解させること、および／あるいは、少なくとも１つの臨床症状のいくらかの軽減、緩和または低減が達成されること、および／あるいは、状態の進行を阻害または遅延させること、および／あるいは、疾患または疾病の発症を予防または遅延させることを意味する。用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「〜の処置」はまた、自己免疫疾患または自己免疫障害を管理することも意味する。従って、用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「〜の処置」（または文法上の同義語）は、予防的な処置管理と治療的な処置管理の両方のことをいう。
【００３９】
本明細書中で使用されるとき、「十分な量」または特定の結果を達成「するのに十分な量」とは、任意の治療的効果である（すなわち、治療有効量の投与によって）所望の作用をもたらすのに有効な本発明の抗体または組成物の量のことをいう。例えば、「十分な量」または「するのに十分な量」とは、Ｂ細胞を枯渇させるのに有効な量であり得る。
【００４０】
「治療有効」量とは、本明細書中で使用されるとき、いくらかの改善または利益を被験体にもたらす量である。別の述べ方としては、「治療有効」量は、少なくとも１つの臨床症状のいくらかの軽減、緩和および／または低減をもたらす量である。本発明の方法によって処置され得る障害に関連する臨床症状は、当業者に周知である。さらに、いくらかの利益が被験体にもたらされる限り、治療的効果が、完全または治癒的である必要がないことを当業者は理解する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４１】
（５．発明の詳細な説明）
本発明は、ＣＤ１９抗原に結合し、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する治療用抗体を使用して、ヒト被験体における自己免疫疾患および障害を処置するための免疫療法用の組成物および方法に関する。本発明は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明はまた、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介するＩｇＧ２またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。特定の実施形態において、本発明はまた、当該分野で公知の手段によって作製され得る、モノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。
【００４２】
自己免疫疾患または自己免疫障害（関節リウマチ、ＳＬＥ、ＩＴＰ、天疱瘡関連障害、糖尿病および強皮症が挙げられるがこれらに限定されない）と診断されたヒト被験体を処置するための治療用の処方物およびレジメンを説明する。
【００４３】
５．１．抗ＣＤ１９抗体の作製
５．１．１．ポリクローナル抗ＣＤ１９抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連抗原およびアジュバントを動物の皮下（ｓ．ｃ．）または腹腔内（ｉ．ｐ．）に複数回注入することによって産生される。免疫される種において免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリンまたはダイズトリプシンインヒビター）と関連抗原を、二機能性の因子または誘導化剤、例えば、マレイミドベンゾイル（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｒｔｚｏｙｌ）スルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介して結合体化）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸（ｓｕｃｃｕｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ＳＯＣｌ２を使用して、結合体化することが有用であり得る。
【００４４】
動物は、例えば、１００μｇまたは５μｇの（それぞれウサギまたはマウスに対して）タンパク質または結合体と３倍の体積のフロイント完全アジュバントとを組み合わせ、そして皮内の複数の箇所にその溶液を注入することによって、抗原、免疫原性の結合体または誘導体に対して免疫される。１ヵ月後、その動物に、もとの量の１／５〜１／１０量のフロイント不完全アジュバント中のペプチドまたは結合体を皮下の複数箇所に注入することによって追加免疫を行う。７〜１４日後に、その動物から採血し、その血清を抗体価についてアッセイする。その動物は、抗体価がプラトーに達するまで追加免疫を受ける。好ましくは、その動物は、同じ抗原であるが、異なるタンパク質および／または異なる架橋試薬を介して結合体化された結合体で追加免疫される。結合体はまた、タンパク質融合として組換え細胞培養中に生成され得る。また、ミョウバンなどの凝集剤は、免疫応答を増強するために適当に使用される。
【００４５】
５．１．２．モノクローナル抗ＣＤ１９抗体
本発明のモノクローナル抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９抗原への結合特異性を示し、そして好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介し得る。これらの抗体は、当該分野で公知の多岐にわたる技術を使用して作製され得る。それらとしては、ハイブリドーマ、組換えおよびファージディスプレイ技術の使用またはそれらの組み合わせが挙げられる。抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。さらに、代表的には様々な決定基（エピトープ）に対する様々な抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、ヒトＣＤ１９抗原における単一の決定基を対象としている。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって初めて報告されたハイブリドーマ法によって作製され得る。このハイブリドーマ法は、マウス抗体（または他の非ヒト哺乳動物、例えば、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ラクダなどに由来する抗体）またはトランスジェニック動物由来のヒト抗体（米国特許第６，０７５，１８１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１５０，５８４号および同第６，６５７，１０３号を参照のこと）を作製するために使用され得る。あるいは、モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製され得、そしてキメラ抗体およびヒト化抗体を含む。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載されている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【００４６】
操作された抗ＣＤ１９抗体は、当該分野で公知の任意の手段によって作製され得る。その手段としては、以下に記載する技術およびそれらの改良技術が挙げられるがこれらに限定されない。大規模な高収率の作製は、代表的には、操作された抗ＣＤ１９抗体を産生する宿主細胞を培養することおよびその宿主細胞培養物から抗ＣＤ１９抗体を回収することを含む。
【００４７】
５．１．３．ハイブリドーマ技術
モノクローナル抗体は、当該分野で公知の技術、および例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−ＣｅＩｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ＮＹ．，１９８１）（前記参考文献は、それらの全体が参考として援用される）に教示されている技術を含むハイブリドーマ技術を使用して作製され得る。例えば、ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物（例えば、ハムスターまたはマカクザル）を免疫することにより、免疫に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球が誘導される。あるいは、インビトロにおいてリンパ球を免疫してもよい。そして、ポリエチレングリコールなどの適当な融合剤を使用して、リンパ球をミエローマ細胞と融合することにより、ハイブリドーマ細胞が形成される（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【００４８】
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは、融合していない親ミエローマ細胞の増殖または生存を阻害する１以上の物質を含む適当な培地中に播種し、生育する。例えば、親ミエローマ細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を有していない場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、代表的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を妨害する物質であるヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む（ＨＡＴ培地）。
【００４９】
好ましいミエローマ細胞は、効率的に融合し、そして、選択された抗体産生細胞が抗体を安定して高レベルに産生するのをサポートし、そしてＨＡＴ培地などの培地に感受性である細胞である。これらのうち、好ましいミエローマ細胞株は、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ  ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞から得られるようなマウスミエローマ株である。ヒトミエローマおよびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の作製について報告されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，１９８７））。
【００５０】
ハイブリドーマ細胞を生育させる培養培地を、ヒトＣＤ１９抗原に特異的なモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって測定される。
【００５１】
所望の特異性、アフィニティーおよび／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定されたら、そのクローンを限界希釈手順によってサブクローニングし得、そして標準的な方法（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））によって生育し得る。この目的に適した培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍のようにインビボにおいて生育され得る。
【００５２】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順（例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィー）によって培養培地、腹水または血清から適当に分離される。
【００５３】
５．１．４．組換えＤＮＡ技術
本発明の抗ＣＤ１９抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗ＣＤ１９抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）容易に単離および配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。一旦単離されると、そのＤＮＡは、発現ベクターに組み込まれ得、そして宿主細胞（例えば、他に免疫グロブリンタンパク質を産生しない、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはミエローマ細胞）にトランスフェクトされることにより、組換え宿主細胞において抗ＣＤ１９抗体が合成される。
【００５４】
ファージディスプレイ法では、機能的な抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面上に提示される。特に、ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物のｃＤＮＡライブラリー（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組換えられ、そしてファージミドベクターにクローニングされる。そのベクターをＥ．ｃｏｌｉにエレクトロポレーションし、そしてそのＥ．ｃｏｌｉをヘルパーファージに感染させる。これらの方法において使用されるファージは、代表的には、ｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかと組換えで融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識された抗原、または固体表面もしくはビーズに結合しているか、もしくはそれらに捕捉されている抗原を使用して、選択され得るか、または同定され得る。本発明の抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８２：４１−５０；Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ，１８７：９−１８；Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，５７：１９１−２８０；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／Ｏ１  １３４；国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１およびＷＯ９７／１３８４４；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されているものが挙げられる。
【００５５】
上記の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体コード領域が、単離され得、ヒト抗体または他の任意の所望の抗原結合フラグメントを含む抗体全体を作製するために使用され得、そして、任意の所望の宿主（下に記載されるような、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含む）において発現される。Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換えで作製するための技術はまた、当該分野で公知の方法（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１２（６）：８６４−８６９；Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＡＪＲＩ  ３４：２６−３４；およびＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｏｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３（前記参考文献は、それらの全体が参考として援用される）に開示されている方法）を使用して利用され得る。
【００５６】
さらなる実施形態において、抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）．Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）に記載されている技術を使用して作製された抗体ファージライブラリーから単離され得る。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）では、ファージライブラリーを使用した、マウス抗体およびヒト抗体の単離についてそれぞれ記載されている。チェインシャフリング（Ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）は、高アフィニティー（ｎＭ範囲）のヒト抗体を作製するため（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））ならびに非常に大きなファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしてコンビナトリアル感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））において使用され得る。従って、これらの技術は、抗ＣＤ１９抗体を単離するための、従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に代わる実行可能な選択肢である。
【００５７】
抗体全体を作製するために、ＶＨまたはＶＬのヌクレオチド配列、制限酵素認識部位および制限酵素認識部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンにおいてＶＨ配列またはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技術を利用して、ＶＨドメインを増幅したＰＣＲを、ＶＨ定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターにクローニングし得、そしてＶＬドメインを増幅したＰＣＲを、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパーまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングし得る。好ましくは、ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメイン、定常ドメインおよびネオマイシンなどの選択マーカー用のクローニング部位を含む。ＶＨドメインおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングされ得る。そして、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを、細胞株に同時にトランスフェクトすることにより、全長抗体、例えばＩｇＧを安定的または一時的に発現する細胞株が当業者に公知の技術を使用して作製される。
【００５８】
このＤＮＡはまた、例えば、相同なマウス配列の代わりに、ヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインのためのコード配列を置換すること（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））または免疫グロブリンコード配列を非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部または一部と共有結合的に連結することによって改変され得る。
【００５９】
５．１．５．キメラ抗体
本明細書中の抗ＣＤ１９抗体は、特に、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応配列と同一か、あるいは、それと相同であり、その鎖の別の部分が、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスならびにそのような抗体のフラグメントに属する抗体における対応配列と同一であるか、あるいは相同である、キメラ抗体（免疫グロブリン）を所望の生物学的活性を示す限り含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書中で目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル（例えば、ヒヒ、アカゲザルまたはカニクイザル）由来の可変ドメイン抗原結合配列およびヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体（米国特許第５，６９３，７８０号）を含む。
【００６０】
５．１．６．ヒト化抗体
ヒト化抗体は、当該分野で公知の種々の技術を使用して作製され得る。その技術としては、ＣＤＲ移植（例えば、欧州特許第ＥＰ２３９，４００号；国際公開番号ＷＯ９１／０９９６７；および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または表面再処理（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（例えば、欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号および同第ＥＰ５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）、チェインシャフリング（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号（その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）および、例えば、公開されている米国特許出願ＵＳ２００５／００４２６６４、公開されている米国特許出願ＵＳ２００５／００４８６１７、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開番号ＷＯ９３１７１０５，Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９：１１１９−２５（２００２），Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，１３（５）：３５３−６０（２０００），Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７−７９（２０００），Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８−８４（１９９７），Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９（１０）：８９５−９０４（１９９６），Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ（１９９５），Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７−２２（１９９５），Ｓａｎｄｈｕ  ＪＳ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９−１０（１９９４）およびＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５（３）：９５９−７３（１９９４）（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）に開示されている技術が挙げられるがこれらに限定されない。しばしば、フレームワーク領域内のフレームワーク残基が、抗原結合を変化させる、好ましくは改善するＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換される。これらのフレームワーク置換は、当該分野で周知の方法、例えば、抗原結合および特定の位置における通常のものでないフレームワーク残基を同定する配列比較に重要なフレームワーク残基を同定するＣＤＲ残基およびフレームワーク残基の相互作用のモデル化によって同定される（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号；およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３（その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。
【００６１】
ヒト化抗ＣＤ１９抗体は、非ヒトである起源から導入された１以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「移入」残基と呼ばれることが多く、その残基は、代表的には「移入」可変ドメインから得られる。従って、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリン分子由来の１以上のＣＤＲおよびヒト由来のフレームワーク領域を含む。抗体のヒト化は、当該分野で周知であり、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に従い、げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列と置換することによって、すなわち、ＣＤＲ移植（ＥＰ２３９，４００；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０９９６７；および米国特許第４，８１６，５６７号；同第６，３３１，４１５号；同第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第６，５４８，６４０号（これらの内容は、それらの全体が本明細書中で参考として援用される））によって、本質的に行われ得る。このようなヒト化キメラ抗体において、実質的にインタクトでないヒト可変ドメインは、非ヒト種由来の対応配列によって置換される。実際のところ、ヒト化抗体は、代表的には、いくつかのＣＤＲ残基および潜在的にいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体の類似の位置からの残基によって置換されているヒト抗体である。抗ＣＤ１９抗体のヒト化もまた、ベニアリングまたは表面再処理（ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４（１９９４）；およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３（１９９４））またはチェインシャフリング（米国特許第５，５６５，３３２）によって達成され得る。これらの内容は、それらの全体が本明細書中で参考として援用される。
【００６２】
ヒト化抗体を作製する際に使用される軽鎖と重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低下させるものである。いわゆる「最良適合」方法に従って、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。そして、げっ歯類の配列に最も近いヒト配列がヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として許容される（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）（これらの内容は、それらの全体が本明細書中で参考として援用される）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、異なるいくつかのヒト化抗ＣＤ１９抗体のために使用され得る（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）（これらの内容は、それらの全体が本明細書中で参考として援用される）。
【００６３】
抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に対して高いアフィニティーおよび他の好ましい生物学的特性を保持するようにヒト化され得る。本発明の１つの態様によれば、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の３次元モデルを使用した親配列および様々な概念的なヒト化生成物の解析のプロセスによって調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性のある３次元高次構造を図示および表示するコンピュータプログラムが入手可能である。これらの表示を観察することによって、候補免疫グロブリン配列が機能する際の残基の可能性なる役割を解析することができ、すなわち、候補免疫グロブリンがＣＤ１９に結合する能力に影響を与える残基の解析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、レシピエントおよび移入配列から選択され得、そして組み合わされ得ることにより、ＣＤ１９に対するアフィニティーが高いなどの所望の抗体特性が達成される。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を与える際、直接かつほぼ実質的に関与する。
【００６４】
「ヒト化」抗体は、もとの抗体と類似の抗原特異性、すなわち、本発明においては、ヒトＣＤ１９抗原に結合する能力を保持する。しかしながら、特定のヒト化方法を使用する場合、ヒトＣＤ１９抗原に対する抗体のアフィニティーおよび／または結合の特異性は、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２９４：１５１（１９９９）（これらの内容はそれらの全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されているような「指向進化」方法を使用して増大され得る。
【００６５】
５．１．７．ヒト抗体
抗体をヒトのインビボにおいて使用することにむけて、ヒト抗体を使用することが好ましい場合がある。完全なヒト抗体は、ヒト被験体の治療用の処置に特に望ましい。ヒト抗体は、当該分野で公知の種々の方法によって作製され得る。その方法としては、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用した、上記のファージディスプレイ法（これらの技術の改良法を含む）が挙げられる。また、米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；およびＰＣＴ公開ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５およびＷＯ９１／１０７４１（これらの各々はそれらの全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。ヒト抗体はまた、重鎖および軽鎖が、ヒトＤＮＡの１以上の起源に由来するヌクレオチド配列によってコードされる抗体であり得る。
【００６６】
ヒト抗ＣＤ１９抗体はまた、機能性の内在性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して作製され得る。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子とヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子との複合体は、無作為に、または相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得る。あるいは、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域が、マウス胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子とマウス軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入によって、別々に、または同時に機能性を喪失し得る。例えば、キメラマウスおよび生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合の欠失によって、内在性の抗体産生が完全に阻害されることが報告されている。改変胚性幹細胞を殖やし、胚盤胞に微量注入することによりキメラマウスが作製される。次に、このキメラマウスを、ヒト抗体を発現するホモ接合の子孫を得るために交配する。そのトランスジェニックマウスを、選択された抗原、例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部を用いて、通常の様式で免疫する。その免疫されたトランスジェニックマウスから従来のハイブリドーマ技術を使用してヒトＣＤ１９抗原に対する抗ＣＤ１９抗体を得ることができる。トランスジェニックマウスに含まれるヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間に再構成され、続いてクラススイッチおよび体細胞変異を起こす。このようにして、このような技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体（例えば、ＩｇＧ１（ガンマ１）およびＩｇＧ３が挙げられるがこれらに限定されない）を作製することができる。ヒト抗体を作製するための上記技術の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ（Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：６５−９３（１９９５））を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を作製するための上記技術ならびにそのような抗体を作製するためのプロトコールの詳細な考察については、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５；ならびに米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８；および同第５，９３９，５９８号（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）などの会社は、上記と類似の技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体を提供することができる。抗原チャレンジにおいてヒト抗体を産生する生殖系列変異マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入についての特別な考察については、例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２��２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）；およびＤｕｃｈｏｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５５：２５８（１９９２）を参照のこと。
【００６７】
ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）；Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，１４：３０９（１９９６））からも得ることができる。ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５３（１９９０））を使用して、免疫されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからインビトロにおいてヒト抗体および抗体フラグメントを生成することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、Ｍ１３またはｆｄなどの繊維状バクテリオファージの主要なまたは少数のコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングし、そして機能的抗体フラグメントとしてファージ粒子の表面上に提示させる。この繊維状粒子が、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むため、抗体の機能特性に基づいた選択を行うことにより、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子が選択される。従って、ファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、種々の形式において行われ得る；それらの概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３：５６４−５７１（１９９３）を参照のこと。Ｖ−遺伝子セグメントのいくつかの供給源は、ファージディスプレイ用に使用され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫されていないマウスの脾臓由来のＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。免疫されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーが、構築され得、そして抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイに対する抗体は、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載の技術に本質的に従って単離され得る。また、米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）も参照のこと。
【００６８】
ヒト抗体はまた、インビトロで活性化されたＢ細胞によっても作製され得る（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。ヒト抗体はまた、ハイブリドーマ技術（例えば、Ｒｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１：１４０−１６７（１９８６））に記載されている技術が挙げられるがこれらに限定されない）を使用してインビトロで作製され得る。
【００６９】
５．１．８．変更された抗体／変異抗体
本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、変異抗体であり得る。本明細書中で使用されるとき、「抗体変異体」または「変更された抗体」とは、抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸残基の１以上が改変されている、抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列改変体のことをいう。抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列に対する改変は、抗原に対する抗体のアフィニティーまたはアビディティーを改善するための配列の改変を含み、そして／またはエフェクター機能を改善するための抗体のＦｃ部分に対する改変を含む。これらの改変は、公知の任意の抗ＣＤ１９抗体または本明細書中に記載されるように同定された抗ＣＤ１９抗体に対してなされ得る。このような変更された抗体は、公知の抗ＣＤ１９抗体と１００％未満の配列同一性または類似性を必ず有する。好ましい実施形態において、変更された抗体は、抗ＣＤ１９抗体の重鎖または軽鎖のいずれかの可変ドメインのアミノ酸配列と、少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％または７５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有する。より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％および最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、変更された抗体は、抗ＣＤ１９抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％または７５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有し、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％および最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、変更された抗体は、ヒトＣＤ１９結合能力を維持している。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ａの重鎖と対応する配列番号２（図５Ａ）のアミノ酸配列と約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である重鎖を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ｂの重鎖に対応する配列番号４（図５Ｂ）のアミノ酸配列と約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である重鎖を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ａの軽鎖に対応する配列番号１６（図６Ａ）のアミノ酸配列と約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である軽鎖を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ｂの軽鎖に対応する配列番号１８（図６Ｂ）のアミノ酸配列と約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である軽鎖を含む。好ましい実施形態において、変更された抗体は、抗ＣＤ１９抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％または７５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有し、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％および最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有する。ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体およびＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体を産生するハイブリドーマは、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−６５８０およびＰＴＡ−６５８１として寄託されている。
【００７０】
この配列に対する同一性または類似性は、抗ＣＤ１９抗体残基と同一（すなわち、同じ残基）または類似（すなわち、通常の側鎖特性に基づいた同じ群からのアミノ酸残基、以下を参照のこと）である、候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書中で定義される。これは、配列をアラインメントし、そしてギャップを挿入したあとに行われ、必要であれば、パーセント配列同一性が最大となるように行われる。可変ドメインの外側の抗体配列への、Ｎ末端、Ｃ末端または内部の伸長、欠失または挿入は、配列同一性または類似性に影響を与えないと解釈されるだろう。
【００７１】
「％同一性」は、当該分野で公知であるように、配列を比較することによって決定される２つのポリヌクレオチド間または２つのポリペプチド間の関係性の基準である。一般に、比較される２つの配列は、それらの配列の間に最大の相関が得られるようにアラインメントされる。この２つの配列のアラインメントを調べ、２つの配列間でアミノ酸またはヌクレオチドが正確に一致する位置の数を決定し、アラインメントの全長で割り、そして１００を掛けることによって、％同一性の数値が得られる。この％同一性の数値は、比較される配列の全長に亘って決定され得、これは、同じ長さか、または非常に似ている長さの配列に特に適しており、そしてそれらの配列が、高い相同性を有する場合に特に適している。あるいは、この％同一性の数値は、上記よりも短い規定された長さに亘って決定され得、これは、等しくない長さの配列により適しているか、またはそれらの配列が低いレベルの相同性を有する場合により適している。
【００７２】
例えば、配列は、Ｕｎｉｘ（登録商標）下のソフトウェアｃｌｕｓｔａｌｗでアラインメントされ得る。このソフトウェアは、「．ａｌｎ」拡張子を有するファイルを生成し、このファイルは、．ａｌｎファイルを開くＢｉｏｅｄｉｔプログラム（Ｈａｌｌ，Ｔ．Ａ．１９９９，ＢｉｏＥｄｉｔ：ａ  ｕｓｅｒ−ｆｒｉｅｎｄｌｙ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｅｄｉｔｏｒ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）  ９５／９８／ＮＴ．  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｓｙｍｐ  Ｓｅｒ．，４１：９５−９８）にインポートされ得る。Ｂｉｏｅｄｉｔウィンドウでは、個別の配列（一度の２つ）を選択することができ、それらをアラインメントすることができる。この方法により、配列全体の比較が可能になる。
【００７３】
２以上の配列の同一性を比較するための方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，１２：３８７−３９５，１９８４、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡから入手可能）におけるプログラムが利用可能である。２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。例えば、プログラムＢＥＳＴＦＩＴおよびＧＡＰを使用して、２つのポリヌクレオチド間の％同一性および２つのポリペプチド配列間の％同一性を決定してもよい。ＢＥＳＴＦＩＴは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，２：４８２−４８９，１９８１）の「局所ホモロジー」アルゴリズムを使用し、２つの配列間の類似性が最良の単一領域を探し出す。ＢＥＳＴＦＩＴは、長さの異なる２つのポリヌクレオチド配列または２つのポリペプチド配列を比較するのにより適しており、このプログラムは、短いほうの配列が長いほうの配列の一部であることを仮定している。相対的に、ＧＡＰは、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３−３５４，１９７０）のアルゴリズムに従って２つの配列をアラインメントして、「最大の類似性」を見出す。ＧＡＰは、ほぼ同じ長さの配列を比較するのにより適しており、アラインメントは、その全長に亘って予想される。好ましくは、各プログラムにおいて使用されるパラメータ「ギャップウェイト（Ｇａｐ  Ｗｅｉｇｈｔ）」および「レングスウェイト（Ｌｅｎｇｔｈ  Ｗｅｉｇｈｔ）」は、ポリヌクレオチドについてそれぞれ５０および３であり、ポリペプチドについてそれぞれ１２および４である。好ましくは、％同一性および類似性は、比較される２つの配列が最適にアラインメントされているときに決定される。
【００７４】
配列間の同一性および／または類似性を決定するための他のプログラムはまた、当該分野で公知であり、例えば、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラム（Ｋａｒｌｉｎ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８７：２２６４−２２６８，Ｋａｒｌｉｎ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：５８７３−５８７７で改変，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢ），Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡから入手可能であり、ＮＣＢＩのホームページ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）を介して利用可能である）である。これらのプログラムは、２つの配列を比較するために利用される数学的アルゴリズムの好ましい、非限定的な例を例示するこのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２で行うことにより、本発明の抗ＣＤ１９抗体の全部または一部をコードする核酸分子に相同なヌクレオチド配列が得られる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で行うことにより、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列が得られる。比較の目的でギャップが挿入されたアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載されているようなＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを使用して、分子間の遠い関係性を検出する反復検索を行うことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴおよびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用するとき、それぞれのプログラムのデフォルトのパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バーション２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためのＡＬＩＧＮプログラムを利用するとき、ＰＡＭ１２０重み残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペネルティ＝１２およびギャップペナルティ＝４を使用することができる。
【００７５】
配列間の同一性および／または類似性を決定するための、当該分野で公知であるプログラムの別の非限定的な例は、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｗ．Ｒ．ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ  Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８５：２４４４−２４４８，１９８８，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅの一部として入手可能）である。好ましくは、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換行列（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｓ．ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｊ．Ｇ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９，１９９２）は、ヌクレオチド配列が比較される前にまずアミノ酸配列に翻訳される場合を含む、ポリペプチド配列比較に使用される。
【００７６】
アミノ酸配列間の同一性および／または類似性を決定するための当該分野で公知であるプログラムのなおも別の非限定的な例は、ＳｅｑＷｅｂソフトウェア（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅに対するウェブベースのインターフェース：Ｇａｐプログラム）であり、これは、デフォルトのアルゴリズムおよびプログラムのパラメータ設定：ｂｌｏｓｕｍ６２、ギャップウェイト８、レングスウェイト２で利用される。
【００７７】
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを挿入するかまたは挿入しないで、上記の技術と類似の技術を使用して決定され得る。同一性パーセントを計算する際、代表的には、正確な一致を数える。
【００７８】
好ましくは、プログラムＢＥＳＴＦＩＴは、本発明のポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列に対する、クエリーのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の％同一性を決定するために使用され、クエリー配列および参照配列は、最適にアラインメントされ、プログラムのパラメータは、デフォルトの値に設定される。
【００７９】
変更された抗体を作製するために、１以上のアミノ酸変更（例えば、置換）が、種に依存する抗体の超可変領域の１以上に導入される。あるいは、またはさらに、フレームワーク領域残基の１以上の変更（例えば、置換）が、抗ＣＤ１９抗体に導入され得る。これらの結果、第２の哺乳動物種由来の抗原に対する抗体変異体の結合アフィニティーが改善される。改変するフレームワーク領域残基の例としては、直接抗原と非共有結合的に結合する残基（Ａｍｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３３：７４７−７５３（１９８６））；ＣＤＲの高次構造と相互作用する／影響する残基（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））；および／またはＶＬ−ＶＨ界面に関与する残基（ＥＰ２３９４００Ｂ１）が挙げられる。特定の実施形態において、このようなフレームワーク領域残基の１以上の改変により、第２の哺乳動物種由来の抗原に対する抗体の結合アフィニティーが改善される。例えば、約１〜約５個のフレームワーク残基が、本発明のこの実施形態において変更され得る。超可変領域残基のいずれもが改変されていない場合でも、時折、上記のフレームワークの変更が、前臨床試験における使用に適した抗体変異体を得るのに十分であり得る。しかしながら、通常、変更された抗体は、さらなる超可変領域の変更を含む。
【００８０】
変更される超可変領域残基は、ランダムに変更され得るが、その変更は、特に、第２の哺乳動物種由来の抗原に対する抗ＣＤ１９抗体の最初の結合アフィニティーが、ランダムに作製された、変更された抗体を容易にスクリーニングし得る程度である。
【００８１】
そのような変更された抗体を作製するための１つの有用な手順は、「アラニンスキャニング突然変異生成」（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９））と呼ばれる。ここで、超可変領域残基の１以上を、アラニン残基またはポリアラニン残基で置換することにより、第２の哺乳動物種由来の抗原とのアミノ酸の相互作用が影響を受ける。次いで、置換に対する機能的感度を示す超可変領域残基が、置換の部位において、またはその部位に対して、さらなる変異または他の変異を導入することによってさらに洗練される。従って、アミノ酸配列の改変を導入するための部位が事前に決定している場合、変異の性質自体は、事前に決められている必要はない。この方法で作製されたＡｌａ−変異体は、本明細書中で記載されるような生物学的活性についてスクリーニングされる。
【００８２】
このような変更された抗体を作製するための別の手順は、ファージディスプレイ（Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２５４：８８９−８９６（１９９２）およびＬｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０（４５）：１０８３２−１０８３７（１９９１））を使用したアフィニティー成熟を含む。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異させることにより、それぞれの部位においてすべての可能なアミノ酸置換が生成される。このようにして作製された抗体変異体は、各粒子内にまとめられたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合物として繊維状ファージ粒子から一価の様式で提示される。次いで、ファージによって提示された変異体を、本明細書中に開示されるようなその生物学的活性（例えば、結合アフィニティー）についてスクリーニングする。
【００８３】
抗体配列における変異としては、置換、欠失（内部欠失を含む）、付加（融合タンパク質をもたらす付加を含む）、またはアミノ酸配列内の、および／もしくはアミノ酸配列に隣接したアミノ酸残基の保存的置換が挙げられ得るが、この変異は、その変更が機能的に等しい抗ＣＤ１９抗体をもたらすという点で「静的な」変化を生じる。保存的アミノ酸置換は、関与する残基の、極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性の類似性に基づいてなされ得る。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが挙げられ；極性の中性アミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンが挙げられ；正に帯電した（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、リシンおよびヒスチジンが挙げられ；そして負に帯電した（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。さらに、グリシンおよびプロリンは、鎖配向に影響を及ぼし得る残基である。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーが別のクラスと交換されることを伴うことになる。さらに、所望であれば、従来のものではないアミノ酸または化学的なアミノ酸アナログが、抗体配列への置換または付加として導入され得る。従来のものではないアミノ酸としては、通常のアミノ酸のＤ−異性体、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロ−アミノ酸、デザイナー（ｄｅｓｉｇｎｅｒ）アミノ酸（例えば、β−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸および通常のアミノ酸アナログ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
別の実施形態において、改変のために選択された部位は、ファージディスプレイ（上記を参照のこと）を使用してアフィニティー成熟される。
【００８５】
抗体配列内にアミノ酸置換を行うため、またはさらなる操作を容易にする制限酵素認識部位を創出／除去するために、当該分野で公知の突然変異生成のための任意の技術を使用して、ＤＮＡ配列内の個々のヌクレオチドを改変することができる。このような技術としては、化学的突然変異生成、インビトロ部位特異的突然変異生成（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２：４８８（１９８５）；Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５３：６５５１（１９７８））、オリゴヌクレオチド指向性突然変異生成（Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ，１９：４２３−４６３（１９８５）；Ｈｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５５：５５８−５６８（１９８７））、ＰＣＲベースのオーバーラップ伸長（Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，７７：５１−５９（１９８９））、ＰＣＲベースのメガプライマー突然変異生成（Ｓａｒｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，８：４０４−４０７（１９９０））などが挙げられるがこれらに限定されない。改変は、二本鎖ジデオキシＤＮＡ配列決定により確かめることができる。
【００８６】
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、融合タンパク質；すなわち、異種のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに融合された抗体またはフラグメントを生成するために改変され得る。特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体の一部に融合されたタンパク質は、ＡＤＥＰＴの酵素成分である。抗ＣＤ１９抗体との融合タンパク質として操作され得る他のタンパク質またはポリペプチドの例としては、トキシン、例えば、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌性エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ジフテリン（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉｎ）トキシン、シュードモナス外毒素およびシュードモナスエンドトキシンが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｐａｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ，４４：４３（１９９４）を参照のこと。酵素的に活性なトキシンおよび使用され得るそれらのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリアトキシンの結合しない活性なフラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリインヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテシン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。
【００８７】
さらなる融合タンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エキソンシャフリングおよび／またはコドンシャフリング（集合的に「ＤＮＡシャフリング」といわれる）の技術を介して生成され得る。ＤＮＡシャフリングを使用して、抗体またはそれらのフラグメントの活性が変化され得る（例えば、高いアフィニティーおよび低い解離速度を有する抗体またはそのフラグメント）。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３０，７２１号；同第５，８３４，２５２号；および同第５，８３７，４５８号ならびにＰａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，８：７２４−３３；Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１６（２）：７６−８２；Ｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２８７：２６５−７６；およびＬｏｒｅｎｚｏ  ａｎｄ  Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２４（２）：３０８−３１３（これらの特許および出版物の各々は、その全体が本明細書によって参考として援用される）を参照のこと。上記抗体は、さらに、米国公開２００３０１１８５９２、米国公開２００３３０１３３９３９およびＰＣＴ公開ＷＯ０２／０５６９１０（これらはすべてＬｅｄｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．に対するものであり、その全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されているような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質であり得る。
【００８８】
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、等電点（ｐＩ）を変更するために改変され得る。すべてのポリペプチドと同様に抗体はｐＩを有し、ｐＩとは、一般に、ポリペプチドが実効電荷を保持しないｐＨと定義される。タンパク質溶解度は、代表的には、その溶液のｐＨがそのタンパク質の等電点（ｐＩ）に等しいときに最も低いことは当該分野で公知である。本明細書中で使用されるとき、ｐＩ値は、支配的な電荷型のｐＩと定義される。タンパク質のｐＩは、種々の方法によって測定され得る。その方法としては、等電点電気泳動および様々なコンピュータアルゴリズム（例えば、Ｂｊｅｌｌｑｖｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  １４：１０２３を参照のこと）が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、抗体のＦａｂドメインの熱的融解温度（Ｔｍ）は、抗体の熱的安定性の良好な指標であり得、さらに、有効期間の指標を提供し得る。低いＴｍは、凝集性が高いこと／安定性が低いことを示唆し、高いＴｍは、凝集性が低いこと／安定性が高いことを示唆する。従って、特定の実施形態において、高いＴｍを有する抗体が好ましい。タンパク質ドメイン（例えば、Ｆａｂドメイン）のＴｍは、当該分野で公知の標準的な任意の方法を使用して、例えば、示差走査熱量測定（例えば、Ｖｅｒｍｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．７８：３９４−４０４；Ｖｅｒｍｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．７９：２１５０−２１５４を参照のこと）によって測定され得る。
【００８９】
従って、本発明のさらなる非排他的な実施形態としては、特定の等電点（ｐＩ）または融解温度（Ｔｍ）などの特定の好ましい生化学的な特性を有する本発明の改変抗体が挙げられる。
【００９０】
より詳細には、１つの実施形態において、本発明の改変抗体は、５．５〜９．５の範囲のｐＩを有する。なおも別の特定の実施形態において、本発明の改変抗体は、約５．５〜約６．０または約６．０〜約６．５または約６．５〜約７．０または約７．０〜約７．５または約７．５〜約８．０または約８．０〜約８．５または約８．５〜約９．０または約９．０〜約９．５の範囲のｐＩを有する。他の特定の実施形態において、本発明の改変抗体は、５．５〜６．０または６．０〜６．５または６．５〜７．０または７．０〜７．５または７．５〜８．０または８．０〜８．５または８．５〜９．０または９．０〜９．５の範囲のｐＩを有する。なおもより詳細には、本発明の改変抗体は、少なくとも５．５または少なくとも６．０または少なくとも６．３または少なくとも６．５または少なくとも６．７または少なくとも６．９または少なくとも７．１または少なくとも７．３または少なくとも７．５または少なくとも７．７または少なくとも７．９または少なくとも８．１または少なくとも８．３または少なくとも８．５または少なくとも８．７または少なくとも８．９または少なくとも９．１または少なくとも９．３または少なくとも９．５のｐＩを有する。他の特定の実施形態において、本発明の改変抗体は、少なくとも約５．５または少なくとも約６．０または少なくとも約６．３または少なくとも約６．５または少なくとも約６．７または少なくとも約６．９または少なくとも約７．１または少なくとも約７．３または少なくとも約７．５または少なくとも約７．７または少なくとも約７．９または少なくとも約８．１または少なくとも約８．３または少なくとも約８．５または少なくとも約８．７または少なくとも約８．９または少なくとも約９．１または少なくとも約９．３または少なくとも約９．５のｐＩを有する。
【００９１】
抗体内のイオン化できる残基の数および位置を変化させて、ｐＩを調節することによって溶解度を最適化することができる。例えば、適切なアミノ酸置換を行うこと（例えば、リシンなどの帯電したアミノ酸を、アラニンなどの無電荷の残基に置換すること）によって、ポリペプチドのｐＩを操作することができる。任意の特定の理論に拘束するつもりはないが、前記抗体のｐＩの変化をもたらす抗体のアミノ酸置換は、その抗体の溶解性および／または安定性を改善し得る。いずれのアミノ酸置換が、所望のｐＩを達成するために特定の抗体について最も適しているかは、当業者は理解するであろう。１つの実施形態において、本発明の抗体において置換がなされることにより、ｐＩが変化する。ＦｃγＲ（前出に記載）に対する結合性の変化をもたらすＦｃ領域の置換によってもまた、ｐＩを変化させ得ることが特に企図される。別の実施形態において、Ｆｃ領域の置換は、ＦｃγＲ結合性の所望の変化とｐＩの任意の所望の変化の両方に影響を与えるように特に選択される。
【００９２】
１つの実施形態において、本発明の改変抗体は、６５℃〜１２０℃の範囲のＴｍを有する。特定の実施形態において、本発明の改変抗体は、約７５℃〜約１２０℃または約７５℃〜約８５℃または約８５℃〜約９５℃または約９５℃〜約１０５℃または約１０５℃〜約１１５℃または約１１５℃〜約１２０℃の範囲のＴｍを有する。他の特定の実施形態において、本発明の改変抗体は、７５℃〜１２０℃または７５℃〜８５℃または８５℃〜９５℃または９５℃〜１０５℃または１０５℃〜１１５℃または１１５℃〜１２０℃の範囲のＴｍを有する。なおも他の特定の実施形態において、本発明の改変抗体は、少なくとも約６５℃または少なくとも約７０℃または少なくとも約７５℃または少なくとも約８０℃または少なくとも約８５℃または少なくとも約９０℃または少なくとも約９５℃または少なくとも約１００℃または少なくとも約１０５℃または少なくとも約１１０℃または少なくとも約１１５℃または少なくとも約１２０℃のＴｍを有する。なおも他の特定の実施形態において、本発明の改変抗体は、少なくとも６５℃または少なくとも７０℃または少なくとも７５℃または少なくとも８０℃または少なくとも８５℃または少なくとも９０℃または少なくとも９５℃または少なくとも１００℃または少なくとも１０５℃または少なくとも１１０℃または少なくとも１１５℃または少なくとも１２０℃のＴｍを有する。
【００９３】
５．１．９．ドメイン抗体
本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、ドメイン抗体、例えば、ヒト抗体の重鎖（ＶＨ）または軽鎖（ＶＬ）の可変領域に対応する抗体の小さい機能的結合単位を含む抗体であり得る。ドメイン抗体の例としては、Ｄｏｍａｎｔｉｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）およびＤｏｍａｎｔｉｓ  Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）から入手可能な、治療用の標的に特異的なドメイン抗体（例えば、ＷＯ０４／０５８８２１；ＷＯ０４／００３０１９；米国特許第６，２９１，１５８号；同第６，５８２，９１５号；同第６，６９６，２４５号；および同第６，５９３，０８１号を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。ドメイン抗体の市販のライブラリーは、抗ＣＤ１９ドメイン抗体を同定するために使用され得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９機能的結合単位およびＦｃガンマレセプター機能的結合単位を含む。
【００９４】
５．１．１０．ダイアボディ
用語「ダイアボディ」とは、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体フラグメントのことをいい、このフラグメントは、同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。短すぎて、同じ鎖上の２つのドメイン間で対をなすことができないリンカーを使用することによって、それらのドメインは、別の鎖の相補的なドメインと対をなさざるえず、２つの抗原結合部位が創り出される。ダイアボディについては、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に十分に記載されている。
【００９５】
５．１．１１．ワクチボディ
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、ワクチボディである。ワクチボディは、二量体のポリペプチドである。ワクチボディの各モノマーは、ヒンジ領域およびＣγ３ドメインを介して第２のｓｃＦｖに連結される、ＡＰＣ上の表面分子に対する特異性を有するｓｃＦｖからなる。本発明の他の実施形態において、ｓｃＦｖの抗ＣＤ１９抗体フラグメントの１つとして含むワクチボディは、破壊されるＢ細胞とＡＤＣＣを媒介するエフェクター細胞とを並置するために使用され得る。例えば、Ｂｏｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許出願番号２００４０２５３２３８を参照のこと。
【００９６】
５．１．１２．直鎖状抗体
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、直鎖状抗体である。直鎖状抗体は、１対の抗原結合領域を形成する１対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直鎖状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る。Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）を参照のこと。
【００９７】
５．１．１３．親抗体
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、親抗体である。「親抗体」は、本明細書中で開示されているような変更された抗体／変異抗体と比較される、その１以上の超可変領域内、またはそれに隣接している１以上のアミノ酸残基を欠いているか、不足しているアミノ酸配列を含む抗体である。従って、親抗体は、本明細書中で開示されるような抗体変異体の対応する超可変領域よりも短い超可変領域を有する。親ポリペプチドは、ネイティブな配列（すなわち、天然に存在する）抗体（天然に存在する対立遺伝子変異体を含む）または天然に存在する配列の既存のアミノ酸配列改変（例えば、他の挿入、欠失および／または置換）を有する抗体を含み得る。好ましくは親抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
【００９８】
５．１．１４．抗体フラグメント
「抗体フラグメント」は、全長抗体の一部を含み、一般に抗原結合領域またはその可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成される多特異性抗体が挙げられる。
【００９９】
慣習的に、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク分解性の消化によって得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。しかしながら、これらのフラグメントは、現在、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。例えば、抗体フラグメントは、上で述べた抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、また化学的に結合されることにより、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成する（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体フラグメントを作製するための他の技術は、当業者に明らかである。他の実施形態において、選択抗体は、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）であり得る。例えば、ＷＯ９３／１６１８５を参照のこと。特定の実施形態において、抗体は、Ｆａｂフラグメントでない。
【０１００】
５．１．１５．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２種の異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーのうちの２種の異なるエピトープに結合し得る。他のこのような抗体は、第１のＢ細胞マーカーに結合し得、そして第２のＢ細胞表面マーカーにもさらに結合し得る。あるいは、抗Ｂ細胞マーカー結合腕は、細胞の防御メカニズムをＢ細胞に集中させるために、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）などの白血球上のトリガー分子またはＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃレセプターに結合する腕と組み合わされ得る。二重特異性抗体はまた、Ｂ細胞に細胞傷害性因子を局在化させるために使用され得る。これらの抗体は、Ｂ細胞マーカーに結合する腕および細胞傷害性因子（例えば、サポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトラエキセート（ｍｅｔｈｏｌａ−ｅｘａｔｅ）または放射性同位体ハプテン）と結合する腕を有する。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）：二重特異性抗体）として調製され得る。
【０１０１】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３）；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）；Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）；Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）；米国特許第４，４７４，８９３号；同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２０号；同第５，６０１，８１号；同第９５，７３１，１６８号；同第４，６７６，９８０号；および同第４，６７６，９８０号、ＷＯ９４／０４６９０；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；およびＥＰ０３０８９を参照のこと）。
【０１０２】
本発明の特定の実施形態において、組成物および方法は、Ｄａｎｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，９２：４７５０−４７５７（１９９８）に記載されている二重特異性抗体のようなヒトＣＤ１９およびＴ細胞レセプターのＣＤ３イプシロン鎖に対する特異性を有する二重特異性マウス抗体を含まない。好ましい実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体が、二重特異性である場合、その抗ＣＤ１９抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体であり、そして、ヒトＣＤ１９およびＴ細胞上のエピトープに対する特異性を有するか、またはヒトエフェクター細胞（例えば、単球／マクロファージおよび／または細胞死に影響を与えるナチュラルキラー細胞）に結合することができる。
【０１０３】
５．１．１６．エフェクター機能の操作
エフェクター機能に関して、例えば、自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する際の抗体の有効性を高めるために、本発明の抗ＣＤ１９抗体を改変することが望ましいことがある。例えば、システイン残基がＦｃ領域に導入され得ることによって、この領域において鎖間ジスルフィド結合が形成される。このようにして作製されたホモダイマーの抗体は、内部移行能力を改善し得、そして／または補体媒介性細胞殺傷および／もしくは抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を高め得る。Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。高められた活性を有するホモダイマーの抗体はまた、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５３．２５６０−２５６５（１９９３）に記載されているようなヘテロ二機能性のクロスリンカーを使用して調製され得る。あるいは、二重のＦｃ領域を有し、それによって補体溶解およびＡＤＣＣ能力が高められ得る抗体が操作され得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。
【０１０４】
エフェクター機能を変化させるために抗体のＦｃ領域を操作する他の方法は、当該分野で公知である（例えば、米国特許出願番号２００４０１８５０４５およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０１６７５０（両方がＫｏｅｎｉｇ  ｅｔ  ａｌに対してものであり、これらには、ＦｃγＲＩＩＢに対する結合アフィニティーを、ＦＣγＲＩＩＡに対する結合アフィニティーと比較して高くなるようにＦｃ領域を変化させることが説明されている；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／５８５７２（Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ９９／５１６４２（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．）および米国特許第６，３９５，２７２号（Ｄｅｏ  ｅｔ  ａｌ．）；（これらの開示は、それらの全体が本明細書中で援用される）も参照のこと）。ＦｃγＲＩＩＢに対する結合アフィニティーを低下させるためにＦｃ領域を改変する方法もまた、当該分野で公知である（例えば、米国特許公開番号２００１００３６４５９およびＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／７９２９９（両方ともＲａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．）（これらの開示は、その全体が本明細書中で援用される）。野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する結合アフィニティーが高められた改変Ｆｃ領域を有する改変抗体がまた、報告されている（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０６３３５１（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）；この開示の全体が本明細書中で援用される）。
【０１０５】
当該分野で公知のインビトロアッセイを使用して、本発明の組成物および方法において使用される抗ＣＤ１９抗体が、５．３．２．節に記載するようなＡＤＣＣを媒介することができるか否かを判定することができる。
【０１０６】
５．１．１７．改変Ｆｃ領域
本発明は、改変Ｆｃ領域を含むタンパク質の処方物を含む。それは、天然に存在しないＦｃ領域、例えば、１以上の天然に存在しないアミノ酸残基を含むＦｃ領域である。また、本発明の改変Ｆｃ領域によって包含されるのは、アミノ酸欠失、付加および／または改変を含むＦｃ領域である。
【０１０７】
Ｆｃ領域は、本明細書中で使用されるとき、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを含んでいない抗体の定常領域を含むポリペプチドを包含すると理解される。従って、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメインならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインならびにこれらのドメインのＮ末端の柔軟なヒンジのことをいう。ＩｇＡおよびＩｇＭについて、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧについて、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）ならびにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣガンマ２（Ｃγ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界が変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むと定義される。ここで、その付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）におけるようなＥＵ指標に従う。「Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標」とは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．前出で説明されるようなヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体の残基の付番のことをいう。Ｆｃとは、単離されたこの領域または抗体、抗体フラグメントもしくはＦｃ融合タンパク質の状態のこの領域のことをいうことがある。Ｆｃ改変タンパク質は、抗体、Ｆｃ融合物、またはＦｃ領域を含む任意のタンパク質もしくはタンパク質ドメインであり得る。特に好ましいのは、Ｆｃの天然に存在しない改変体である改変Ｆｃ領域を含むタンパク質である。注意：多くのＦｃ位置（Ｋａｂａｔ２７０、２７２、３１２、３１５、３５６および３５８が挙げられるがこれらに限定されない）で多型が観察されているため、示される配列と従来技術における配列との間にわずかな差が存在し得る。
【０１０８】
本発明は、対応する分子と比べて、Ｆｃリガンドに対して変更された結合特性を有するＦｃ改変タンパク質（例えば、Ｆｃレセプター、Ｃ１ｑ）（例えば、野生型Ｆｃ領域を有する以外は同じアミノ酸配列を有するタンパク質）を包含する。結合特性の例としては、結合特異性、平衡解離定数（ＫＤ）、解離速度および会合速度（それぞれｋｏｆｆおよびｋｏｎ）、結合アフィニティーおよび／またはアビディティーが挙げられるがこれらに限定されない。低いＫＤを有する結合分子（例えば、抗体などのＦｃ改変タンパク質）が、高いＫＤを有する結合分子よりも好ましいことが一般に理解されている。しかしながら、いくつかの場合において、ｋｏｎまたはｋｏｆｆの値は、ＫＤの値よりも関連性があり得る。当業者は、どの速度論パラメータが所与の抗体用途に対して最も重要であるかを判定することができる。
【０１０９】
Ｆｃドメインのリガンドに対するそのドメインのアフィニティーおよび結合特性は、Ｆｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、ＦｃγＲへのＦｃ領域の特定の結合を判定するための、当該分野で公知の種々のインビトロアッセイ法（生化学または免疫学ベースのアッセイ）によって測定され得る。そのアッセイ法としては、平衡状態の方法（例えば、酵素結合免疫吸着測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））または速度論（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析）および他の方法（例えば、間接的結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過））が挙げられるがこれらに限定されない。これらの方法および他の方法は、調べられる成分の１以上に対する標識を利用し得、そして／または種々の検出方法を使用し得る。それらとしては、色素生産性、蛍光、発光またはアイソトープ標識が挙げられるがこれらに限定されない。結合アフィニティーおよび速度論についての詳細な説明は、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）（抗体−免疫原相互作用に注目している）に見られ得る。
【０１１０】
例えば、１以上の正の制御因子（例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡ）に結合するＦｃを増強するが、変化させないままでいるか、または負の制御因子ＦｃγＲＩＩＢに結合するＦｃを低減しさえする改変は、ＡＤＣＣ活性を高めるためにより好ましいだろう。あるいは、１以上の正の制御因子への結合を低減する改変および／またはＦｃγＲＩＩＢへの結合を増大させる改変は、ＡＤＣＣ活性を低下させるためには好ましいだろう。従って、結合アフィニティーの比（例えば、平衡解離定数（ＫＤ））は、Ｆｃ改変体のＡＤＣＣ活性が増大しているか、または低下しているかを示唆し得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡ／ＦｃγＲＩＩＢ平衡解離定数（ＫＤ）の比の減少は、改善されたＡＤＣＣ活性と相関するが、その比の増加は、ＡＤＣＣ活性の減少と相関する。さらに、Ｃ１ｑに対する結合性を増大する改変は、ＣＤＣ活性を増大するために好ましいだろうし、Ｃ１ｑに対する結合性を減少させる改変は、ＣＤＣ活性を減少または排除するために好ましいだろう。
【０１１１】
１つの実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、対応する分子と比べて高いアフィニティーでＦｃγＲＩＩＩＡと結合する。別の実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、高いアフィニティーでＦｃγＲＩＩＩＡと結合し、対応する分子と比べて変わらない結合アフィニティーでＦｃγＲＩＩＢと結合する。さらに別の実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、高いアフィニティーでＦｃγＲＩＩＩＡと結合し、対応する分子と比べて低いアフィニティーでＦｃγＲＩＩＢと結合する。なおも別の実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、対応する分子と比べて低下した平衡解離定数（ＫＤ）ＦｃγＲＩＩＩＡ／ＦｃγＲＩＩＢの比を有する。
【０１１２】
１つの実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、対応する分子と比べて１以上のＦｃリガンドに対して高い結合性を有する。別の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、Ｆｃリガンドに対して、対応する分子のアフィニティーよりも、少なくとも２倍または少なくとも３倍または少なくとも５倍または少なくとも７倍または少なくとも（ａ  ｌｅａｓｔ）１０倍または少なくとも２０倍または少なくとも３０倍または少なくとも４０倍または少なくとも５０倍または少なくとも６０倍または少なくとも７０倍または少なくとも８０倍または少なくとも９０倍または少なくとも１００倍または少なくとも２００倍高いアフィニティーを有する。特定の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、Ｆｃレセプターに対する高い結合性を有する。別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、ＦｃレセプターＦｃγＲＩＩＩＡに対する高い結合性を有する。さらに別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、ＦｃレセプターＦｃＲｎに対する高い結合性を有する。なおも別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、対応する分子と比べてＣ１ｑに対する高い結合性を有する。
【０１１３】
本発明の１つの実施形態において、抗体は、１０−５Ｍ未満または１０−６Ｍ未満または１０−７Ｍ未満または１０−８Ｍ未満または１０−９Ｍ未満または１０−１０Ｍ未満または１０−１１Ｍ未満または１０−１２Ｍ未満または１０−１３Ｍ未満の解離定数またはＫｄ（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）でＣＤ１９およびその抗原性フラグメントと特異的に結合する。
【０１１４】
別の実施形態において、本発明の抗体は、１×１０−３ｓ−１未満または３×１０−３ｓ−１未満のｋｏｆｆでＣＤ１９およびその抗原性フラグメントと結合する。他の実施形態において、上記抗体は、１０−３ｓ−１未満、５×１０−３ｓ−１未満、１０−４ｓ−１未満、５×１０−４ｓ−１未満、１０−５ｓ−１未満、５×１０−５ｓ−１未満、１０−６ｓ−１未満、５×１０−６ｓ−１未満、１０−７ｓ−１未満、５×１０−７ｓ−１未満、１０−８ｓ−１，未満の５×１０−８ｓ−１未満、１０−９ｓ−１未満、５×１０−９ｓ−１または未満の１０−１０ｓ−１のｋｏｆｆでＣＤ１９および／またはその抗原性フラグメントと結合する。
【０１１５】
別の実施形態において、本発明の抗体は、少なくとも１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０７Ｍ−１ｓ−１または少なくとも１０８Ｍ−１ｓ−１または少なくとも１０９Ｍ−１ｓ−１の会合速度定数またはｋｏｎ速度でＣＤ１９および／またはその抗原性フラグメントと結合する。
【０１１６】
別の実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、対応する分子と比べて、約２倍〜約１０倍または約５倍〜約５０倍または約２５倍〜約２５０倍または約１００倍〜約５００倍または約２５０倍〜約１０００倍減少した平衡解離定数（ＫＤ）を有する。別の実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、対応する分子と比べて、２倍〜１０倍または５倍〜５０倍または２５倍〜２５０倍または１００倍〜５００倍または２５０倍〜１０００倍減少した平衡解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態において、前記Ｆｃ改変体は、対応する分子と比べて、ＦｃγＲＩＩＩＡに対して少なくとも２倍または少なくとも３倍または少なくとも５倍または少なくとも７倍または少なくとも１０倍または少なくとも２０倍または少なくとも３０倍または少なくとも４０倍または少なくとも５０倍または少なくとも６０倍または少なくとも７０倍または少なくとも８０倍または少なくとも９０倍または少なくとも１００倍または少なくとも２００倍または少なくとも４００倍または少なくとも６００倍減少した平衡解離定数（ＫＤ）を有する。
【０１１７】
Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合アフィニティーを増大させることによって延長され得る。１つの実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、対応する分子と比べて血清半減期が長い。
【０１１８】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃレセプター（ＦｃＲ）に結合している分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞と、抗原を有する標的細胞とを特異的に結合することを可能にし、続いて細胞毒によって標的細胞を殺滅することを可能にする、細胞傷害性の形態のことをいう。標的細胞の表面に対する特定の高アフィニティーＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞を「武装」しており、このような殺滅に絶対的に必要である。標的細胞の溶解は、細胞外であり、直接的な細胞と細胞との接触を必要とし、そして補体と関連しない。抗体に加えて、抗原を有する標的細胞に特異的に結合する能力を有する、Ｆｃ領域を含む他のタンパク質、特にＦｃ融合タンパク質が、細胞媒介性細胞傷害に影響を及ぼすことができることが企図される。簡単にするために、Ｆｃ融合タンパク質の活性から生じる細胞媒介性細胞傷害は、本明細書中でＡＤＣＣ活性とも呼ばれる。
【０１１９】
ＡＤＣＣによって標的細胞の溶解を媒介する、特定の任意のＦｃ改変タンパク質の能力がアッセイされ得る。ＡＤＣＣ活性を評価するために、目的のＦｃ改変タンパク質を、標的細胞の細胞溶解を生じる抗原抗体複合体によって活性化され得る免疫エフェクター細胞と組み合わせて標的細胞に加える。一般に、細胞溶解は、溶解された細胞からの標識（例えば、放射性の基質、蛍光色素または天然の細胞内タンパク質）の放出によって検出される。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。インビトロＡＤＣＣアッセイの特定の例は、Ｗｉｓｅｃａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，７９：２７７−２８２；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，１６６：１３５１−１３６１；Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２５８：１８３−１９１；Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：２９−３８に記載されている。あるいは、またはさらに、目的のＦｃ改変タンパク質のＡＤＣＣ活性は、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，９５：６５２−６５６に開示されているようにインビボ、例えば、動物モデルにおいて評価され得る。
【０１２０】
１つの実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、対応する分子と比べて高いＡＤＣＣ活性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、対応する分子のＡＤＣＣ活性よりも、少なくとも２倍または少なくとも３倍または少なくとも５倍または少なくとも１０倍または少なくとも５０倍または少なくとも１００倍高いＡＤＣＣ活性を有する。別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、ＦｃレセプターＦｃγＲＩＩＩＡに対する高い結合性を有し、対応する分子に比べて高いＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、対応する分子と比べて高いＡＤＣＣ活性と長い血清半減期の両方を有する。
【０１２１】
「補体依存性細胞傷害」および「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解のことをいう。補体の活性化経路は、補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が分子、例えば、同族の抗原と複合体化された抗体に結合することによって開始される。補体の活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３に記載されているようなＣＤＣアッセイが行われ得る。１つの実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、対応する分子と比べて高いＣＤＣ活性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、対応する分子のＣＤＣ活性よりも、少なくとも２倍または少なくとも３倍または少なくとも５倍または少なくとも１０倍または少なくとも５０倍または少なくとも１００倍高いＣＤＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、対応する分子と比べて高いＣＤＣ活性と長い血清半減期の両方を有する。
【０１２２】
１つの実施形態において、本発明は、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標によって付番された２３４、２３５、２３６、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５２、２５４、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６９、２９６、２９７、２９８、２９９、３１３、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３２、３３３および３３４からなる群から選択される１以上の位置において天然に存在しないアミノ酸残基を含む処方物を提供する。必要に応じて、Ｆｃ領域は、当業者に公知のさらなる位置および／または別の位置で天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；同第６，２７７，３７５号；同第６，７３７，０５６号；ＰＣＴ特許公開ＷＯ０１／５８９５７；ＷＯ０２／０６９１９；ＷＯ０４／０１６７５０；ＷＯ０４／０２９２０７；ＷＯ０４／０３５７５２およびＷＯ０５／０４０２１７を参照のこと）。
【０１２３】
特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変体タンパク質処方物を提供し、ここで、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標によって付番された２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４１、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５Ｉ、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０Ｉ、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ、２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５６Ｅ、２６２Ｉ、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３Ｉ、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４Ｉ、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５Ｉ、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６Ｉ、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６Ｉ、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８Ｉ、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９Ｉ、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３１３Ｆ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５Ｉ、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０Ｉ、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙおよび３３２Ａからなる群から選択される少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸残基を含む。必要に応じて、Ｆｃ領域は、当業者に公知のさらなるおよび／または別の天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；同第６，２７７，３７５号；同第６，７３７，０５６号；ＰＣＴ特許公開ＷＯ０１／５８９５７；ＷＯ０２／０６９１９；ＷＯ０４／０１６７５０；ＷＯ０４／０２９２０７；ＷＯ０４／０３５７５２およびＷＯ０５／０４０２１７を参照のこと）。
【０１２４】
別の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変タンパク質処方物を提供し、ここで、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標によって付番された２３９、３３０および３３２からなる群から選択される１以上の位置において少なくとも天然に存在しないアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変タンパク質処方物を提供し、ここで、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標によって付番された２３９Ｄ、３３０Ｌおよび３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含む。必要に応じて、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標によって付番された２５２、２５４および２５６からなる群から選択される、さらなる天然に存在しないアミノ酸を１以上の位置においてさらに含み得る。特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変タンパク質処方物を提供し、ここで、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標によって付番された２３９Ｄ、３３０Ｌおよび３３２Ｅからなる群から選択される、少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含み、そして１以上の位置における少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸が、Ｋａｂａｔにおいて説明されるようなＥＵ指標によって付番された２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅからなる群から選択される。
【０１２５】
１つの実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６３７−４０；Ｄｕｎｃａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：５６３−５６４；Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２６５７−２６６２；Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９：５３−５９；Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３；Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２：１１９８０−１１９８４；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．，４４：１１１−１１７；Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｆａｓｅｂ  Ｊ，９：１１５−１１９；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．，５４：１０１−１０４；Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７：４９６３−４９６９；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３−２６２４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：４１７８−４１８４；Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：１９２５−１９３３；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００：１６−２６；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６６：２５７１−２５７５；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：６５９１−６６０４；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ，８２：５７−６５；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．，３０：４８７−４９０）；米国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８５，５７３号；同第５，６７７，４２５号；同第６，１６５，７４５号；同第６，２７７，３７５号；同第５，８６９，０４６号；同第６，１２１，０２２号；同第５，６２４，８２１号；同第５，６４８，２６０号；同第６，５２８，６２４号；同第６，１９４，５５１号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，２７７，３７５号；米国特許公開番号２００４／０００２５８７およびＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１；ＷＯ９９／５８５７２；ＷＯ００／４２０７２；ＷＯ０２／０６０９１９；ＷＯ０４／０２９２０７；ＷＯ０４／０９９２４９；ＷＯ０４／０６３３５１に開示されているもののような他の公知のＦｃ改変体と組み合わされ得る。また、欠失、付加および／または改変を含むＦｃ領域もまた本発明によって包含される。Ｆｃドメインのなおも他の改変／置換／付加／欠失は、当業者に直ちに明らかになる。
【０１２６】
天然に存在しないＦｃ領域を作製するための方法は、当該分野で公知である。例えば、アミノ酸置換および／または欠失は、突然変異生成方法によって作製され得る。その方法としては、部位特異的突然変異生成（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４８８−４９２（１９８５））、ＰＣＲ突然変異生成（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ  “ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ｐｐ．１７７−１８３（１９９０））およびカセット突然変異生成（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，３４：３１５−３２３（１９８５））が挙げられるがこれらに限定されない。好ましくは、部位特異的突然変異生成は、オーバーラップ伸長ＰＣＲ法（Ｈｉｇｕｃｈｉ，“ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．６１−７０（１９８９））によって行われる。あるいは、オーバーラップ伸長ＰＣＲ（Ｈｉｇｕｃｈｉ，同書）の技術を使用して、任意の所望の変異を標的配列（出発ＤＮＡ）に導入することができる。例えば、オーバーラップ伸長法における初回のＰＣＲは、外側のプライマー（プライマー１）と内部の突然変異生成プライマー（プライマー３）、および第２の外側のプライマー（プライマー４）と内部のプライマー（プライマー２）を用いて別々に標的配列を増幅する工程を含み、その結果、２種のＰＣＲセグメント（セグメントＡおよびＢ）が得られる。内部の突然変異生成プライマー（プライマー３）は、所望の変異を特定する標的配列に対してミスマッチを含むように設計される。第２回目のＰＣＲにおいて、初回のＰＣＲ産物（セグメントＡおよびＢ）を、２種の外側のプライマー（プライマー１および４）を使用してＰＣＲによって増幅する。得られた全長ＰＣＲセグメント（セグメントＣ）を、制限酵素で消化し、得られた制限フラグメントを、適切なベクターにクローニングする。突然変異生成の第１の工程として、出発ＤＮＡ（例えば、Ｆｃ融合タンパク質、抗体または単にＦｃ領域をコードするＤＮＡ）を、突然変異生成ベクターに作動可能にクローニングする。所望のアミノ酸置換を反映するようにプライマーを設計する。改変Ｆｃ領域を作製するために有用な他の方法は、当該分野で公知である（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８５，５７３号；同第５，６７７，４２５号；同第６，１６５，７４５号；同第６，２７７，３７５号；同第５，８６９，０４６号；同第６，１２１，０２２号；同第５，６２４，８２１号；同第５，６４８，２６０号；同第６，５２８，６２４号；同第６，１９４，５５１号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，２７７，３７５号；米国特許公開番号２００４／０００２５８７およびＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１；ＷＯ９９／５８５７２；ＷＯ００／４２０７２；ＷＯ０２／０６０９１９；ＷＯ０４／０２９２０７；ＷＯ０４／０９９２４９；ＷＯ０４／０６３３５１を参照のこと）。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、Ｆｃ改変タンパク質は、１以上の操作された糖型（ｇｌｙｃｏｆｏｒｍ）、すなわち、Ｆｃ領域を含む分子に共有結合した炭水化物組成物を含む。操作された糖型は、種々の目的に有用であり得る。その目的としては、エフェクター機能を増大させることまたは低減させることが挙げられるがこれらに限定されない。操作された糖型は、当業者に公知の任意の方法によって、例えば、操作された発現株または改変発現株を使用することによって、１以上の酵素、例えば、ＤＩ  Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）とともに同時発現することによって、様々な生物体または様々な生物体由来の細胞株においてＦｃ領域を含む分子を発現することによって、または、Ｆｃ領域を含む分子が発現された後に炭水化物を改変することによって、作製され得る。操作された糖型を作製するための方法は、当該分野で公知であり、それらとしては、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１７  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．，７４：２８８−２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８：３４６６−３４７３）、米国特許第６，６０２，６８４号；米国出願番号１０／２７７，３７０；米国出願番号１０／１１３，９２９；ＰＣＴ  ＷＯ００／６１７３９Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０１／２９２２４６Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０２／３１１１４０Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０２／３０９５４Ａ１；ＰｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔＴＭ技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）；ＧｌｙｃｏＭＡｂＴＭグリコシル化操作技術（ＧＬＹＣＡＲＴ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載されている方法が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、ＷＯ０００６１７３９；ＥＡ０１２２９１２５；ＵＳ２００３０１１５６１４；Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＪＭＢ，３３６：１２３９−４９を参照のこと。
【０１２８】
５．１．１８．抗体のグリコシル化
なおも別の実施形態において、本発明に従って利用される抗体のグリコシル化が改変される。例えば、グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｌａｔｅｄ）抗体が作製され得る（例えば、抗体はグリコシル化を欠く）。グリコシル化を変化させることによって、例えば、標的抗原に対する抗体のアフィニティーを増大することができる。このような炭水化物改変は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１以上の部位を変化させることによって達成され得る。例えば、１以上のアミノ酸置換がなされ得ることにより、１以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位が除去され、これによって、その部位におけるグリコシル化が排除される。このようなグリコシル化は、抗原に対する抗体のアフィニティーを高め得る。このようなアプローチは、米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載されている。あるいは、１以上のアミノ酸置換がなされ得ることにより、Ｆｃ領域に存在するグリコシル化部位（例えば、ＩｇＧのアスパラギン２９７）を除去できる。さらに、グリコシル化抗体は、必要なグリコシル化機構を欠く細菌細胞において産生され得る。
【０１２９】
さらに、またはあるいは、フコシル残基の量が少ない低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体または二分されたＧｌｃＮＡｃ構造を多く有する抗体などの変更されたタイプのグリコシル化を有する抗体が作製され得る。そのような変更されたグリコシル化パターンによって、抗体のＡＤＣＣ能力が増大することが証明された。このような炭水化物改変は、例えば、変更されたグリコシル化機構を用いて宿主細胞において抗体を発現することによって達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当該分野で報告されており、本発明の組換え抗体を発現することによって、変更されたグリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ，（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１７：１７６−１ならびに欧州特許第ＥＰ１，１７６，１９５号；ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５；ＷＯ９９／５４３４２を参照のこと。また、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２４：２１０−２１５；および公開されている米国特許出願ＵＳ２００６／００４０３５３；ＵＳ２００６／０３４８３０；ＵＳ２００６／００３４８２９；ＵＳ２００６／００３４８２８；ＵＳ２００６／００２９６０４およびＵＳ２００６／００２４３０４（これらは、抗体の変更されたグリコシル化について記載されている）も参照のこと。
【０１３０】
５．２．抗ＣＤ１９抗体の製造／産生
一旦、所望の抗ＣＤ１９抗体が設計されると、その抗ＣＤ１９抗体は、抗体の大規模製造のための当該分野で周知の方法を使用して工業規模で作製され得る。例えば、これは、組換え発現系を使用して達成され得る。その系としては、下に記載するものが挙げられるがそれに限定されない。
【０１３１】
５．２．１．組換え発現系
本発明の抗体またはその改変体の組換え発現は、一般に、その抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。一旦、本発明の抗体分子あるいは抗体の重鎖もしくは軽鎖またはそれらの部分（好ましくは、重鎖または軽鎖の可変ドメインを含むが、必ずしもそうでなくてもよい）をコードするポリヌクレオチドが得られると、その抗体分子を生成するためのベクターが、当該分野で周知の技術を使用した組換えＤＮＡ技術によって創り出され得る。例えば、米国特許第６，３３１，４１５号（その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。従って、ヌクレオチド配列をコードする抗体を含むポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を調製する方法を、本明細書中で記載する。当業者に周知の方法を使用して、抗体コード配列および適切な転写および翻訳の調節シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術およびインビボ遺伝的組換えが挙げられる。従って、本発明は、プロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体の重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインまたはその一部あるいは重鎖ＣＤＲもしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、国際公開番号ＷＯ８６／０５８０７およびＷＯ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２２，４６４号を参照のこと）、そしてその抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体または重鎖全体と軽鎖全体の両方の発現のためのこのようなベクターにクローニングされ得る。
【０１３２】
別の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体を、標的化された相同組換えを使用して作製することにより、抗ＣＤ１９抗体の全部または一部が作製され得る（米国特許第６，０６３，６３０号、同第６，１８７，３０５号および同第６，６９２，７３７号）。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体を、ランダムな組換え技術を使用して作製することにより、抗ＣＤ１９抗体の全部または一部が作製され得る（米国特許第６，３６１，９７２号、同第６，５２４，８１８号、同第６，５４１，２２１号および同第６，６２３，９５８号を参照のこと）。抗ＣＤ１９抗体はまた、Ｃｒｅ−媒介性部位特異的相同組換え（米国特許第６，０９１，００１号を参照のこと）を使用して、改変免疫グロブリン遺伝子座を含む細胞のゲノム配列から抗体を発現する細胞において産生され得る。ヒト抗体の産生が所望である場合、宿主細胞は、ヒト細胞株であるべきである。これらの方法を使用することにより、抗体分子を恒久的に発現する安定な細胞株を有利に操作することができる。
【０１３３】
一旦、発現ベクターが、従来の技術によって宿主細胞に移入されると、トランスフェクトされた細胞は、次に従来の技術によって培養されることにより、本発明の抗体が産生される。従って、本発明は、異種プロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体またはそのフラグメントまたはその重鎖もしくは軽鎖またはその一部または本発明の一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む。好ましい実施形態において、二本鎖抗体の発現にむけて、重鎖と軽鎖の両方をコードするベクターは、下に詳述されるように、免疫グロブリン分子全体を発現するために宿主細胞において同時発現され得る。
【０１３４】
種々の宿主発現ベクターシステムは、抗ＣＤ１９抗体の操作および作製に使用され得る、本発明の抗ＣＤ１９抗体またはその一部を発現するために利用され得る（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照のこと）。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期（ｍａｊｏｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ）遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと併せたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞は、抗体のための有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，４５：１０１（１９８６）；およびＣｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：２（１９９０））。さらに、挿入された抗体配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で抗体遺伝子産物を改変し、そして処理する宿主細胞系統が、選択され得る。タンパク質産物のこのような改変（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能のために重要であり得る。様々な宿主細胞が、タンパク質および遺伝子産物の転写後プロセシングおよび改変のための特徴的なメカニズムおよび特定のメカニズムを有する。適切な細胞株または宿主系は、正確な改変および発現される抗体またはその一部の正確なプロセシングを保証するように選択され得る。この目的を達成するために、最初の転写物の適切なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化およびリン酸化のための細胞機構を有する真核生物宿主細胞が使用され得る。このような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内因的にいかなる免疫グロブリン鎖も生成しないマウスミエローマ細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３ＯおよびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１３５】
好ましい実施形態において、ヒトリンパ球を不死化することによって作製されたヒト細胞株を使用して、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体を組換えで作製することができる。好ましい実施形態において、ヒト細胞株ＰＥＲ．Ｃ６．（Ｃｒｕｃｅｌｌ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体を組換えで作製することができる。
【０１３６】
細菌の系では、多くの発現ベクターが、発現される抗体分子について意図された用途に応じて有利に選択され得る。例えば、抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物の製造のために、大量のこのような抗体が作製されるとき、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現をもたらすベクターが望ましいことがある。このようなベクターとしては、融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列がｌａｃＺコード領域とインフレームで個別にベクターに連結され得るＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ，１２：１７９１（１９８３））；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  ＆  Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：３１０１−３１０９（１９８５）；Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  ＆  Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４：５５０３−５５０９（１９８９））；などが挙げられるが、これらに限定されない。ｐＧＥＸベクターもまた、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来性ポリペプチドを発現するために使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は、可溶性であり、そして溶解された細胞から、マトリックスグルタチオンアガロースビーズに吸着および結合させた後、遊離グルタチオンの存在下で溶出することより容易に精製され得る。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたはファクターＸａプロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【０１３７】
昆虫の系では、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現するベクターとして使用される。このウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で生育する。抗体コード配列は、このウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の支配下に配置され得る。
【０１３８】
哺乳動物宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列は、アデノウイルスの転写／翻訳調節複合体、例えば、後期プロモーターおよび３つからなる（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列に連結され得る。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボにおける組換えによってアデノウイルスゲノム内に挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域における挿入（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）により、感染した宿主において生存可能であり、抗体分子を発現することができる組換えウイルスがもたらされる（例えば、Ｌｏｇａｎ  ＆  Ｓｈｅｎｋ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８１：３５５−３５９（１９８４）を参照のこと）。特定の開始シグナルもまた、挿入された抗体コード配列の有効な翻訳に必要であり得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含む。さらに、この開始コドンは、通常、挿入断片全体の翻訳を保証する所望のコード配列の読み枠とインフレーム（ｉｎ  ｐｈａｓｅ）であるべきである。これらの外来性の翻訳調節シグナルおよび開始コドンは、種々の起源、天然および合成の両方であり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含むことによって増大され得る（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５３：５１−５４４（１９８７）を参照のこと）。
【０１３９】
組換えタンパク質の長期にわたる高収率の産生のためには、安定な発現が好ましい。例えば、抗体分子を安定的に発現する細胞株が設計され得る。ウイルス起源の複製を含む発現ベクターの複製を使用する一次的な発現系ではなく、宿主細胞が、適切な発現調節領域（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）によって調節されるＤＮＡおよび選択可能マーカーで形質転換され得る。外来ＤＮＡが導入された後、操作された細胞を、強化培地中で１〜２日間生育し、その後、選択培地に切り替えた。組換えプラスミド内の選択可能マーカーにより、選択に対する耐性が付与され、細胞がプラスミドを染色体に安定的に組み込むことができ、そして生育することにより、クローン化されて、そして細胞株に増殖され得る細胞の集合体を形成することができる。抗ＣＤ１９抗体をコードするプラスミドを使用して、培養下での産生に適した任意の細胞株に遺伝子／ｃＤＮＡを導入することができる。あるいは、「標的化ベクター」と呼ばれるプラスミドを使用して、発現調節領域（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）を宿主細胞中の適切な染色体の位置に導入することができ、それによって、抗ＣＤ１９抗体についての内在性遺伝子を「活性化」する。
【０１４０】
多数の選択系が使用され得るが、それらとしては、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＆  Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，４８：２０２（１９９２））およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２２：８−１７（１９８０））が挙げられるがこれらに限定されず、それらの遺伝子は、それぞれｔｋ−細胞、ｈｇｐｒｔ−細胞またはａｐｒＴ−細胞において使用され得る。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：３５７（１９８０）；Ｏ’Ｈａｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８：１５２７（１９８１））；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＆  Ｂｅｒｇ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８：２０７２（１９８１））；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ，３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６０：９２６−９３２（１９９３）；およびＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢ  ＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５（１９９３））；およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，３０：１４７（１９８４））についての選択の基礎として使用され得る。組換えＤＮＡ技術の通常当該分野で公知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用され得、そしてそのような方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の１２章および１３章；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５０：１（これらの全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
【０１４１】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増大され得る（概説として、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８７）を参照のこと）。抗体を発現するベクターシステム中のマーカーが増幅可能であるとき、宿主細胞の培養物中に存在するインヒビターのレベルの上昇は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅される領域が抗体遺伝子と関連しているため、抗体の産生も増大することになる（Ｃｒｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ，３：２５７（１９８３））。抗体発現レベルは、組換えタンパク質産生の当業者に公知の組換えの方法およびツールの使用（周囲のクロマチンを再構築する技術および活性な人工の転写ドメインの形態でトランスジーン発現を増大する技術などを含む）によって増幅され得る。
【０１４２】
宿主細胞は、本発明の２種類の発現ベクターで同時にトランスフェクトされ得る。その２種類のベクターとは、重鎖のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖のポリペプチドをコードする第２のベクターである。この２種類のベクターは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドが等しく発現することを可能にする同一の選択可能なマーカーを含み得る。あるいは、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターが使用され得る。このような場合において、軽鎖は、有毒な遊離重鎖が過剰になるのを回避するために、重鎖の前に位置するべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，Ｎａｔｕｒｅ，３２２：５６２−５６５（１９８６）；およびＫｏｈｌｅｒ，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：２１９７−２１９９（１９８０））。重鎖および軽鎖についてのコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。
【０１４３】
本発明の抗体分子が、組換え発現によって産生されると、その抗体分子は、免疫グロブリン分子を精製するための当該分野で公知の任意の方法によって精製され得る。その方法としては、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティークロマトグラフィー、特に、プロテインＡクロマトグラフィーの後に特定の抗原に対するアフィニティークロマトグラフィーおよびサイズ分離（ｓｉｚｅｉｎｇ）カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ）またはタンパク質を精製するための他の任意の標準的な技術による方法が挙げられる。さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントを、本明細書中に記載されているかまたは他に当該分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合することにより、精製が容易になることがある。
【０１４４】
５．２．２．抗体の精製および単離
組換え技術を使用するとき、抗体は、細胞内の細胞周辺腔に産生され得るか、または培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第１の工程として、宿主細胞または溶解したフラグメントのいずれかである粒状の破片を、例えば、遠心分離または限外濾過により除去する。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１６３−１６７（１９９２）では、Ｅ．ｃｏｌｉの細胞周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順が記載されている。簡潔には、すりつぶした細胞を、酢酸ナトリウム（ｐＨ  ３．５）、ＥＤＴＡおよびフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間にわたって解凍する。細胞の破片が遠心分離により除去され得る。抗体変異体が培地中に分泌される場合、そのような発現系由来の上清を、一般には最初に市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して濃縮する。タンパク質分解を阻害するために、前述の工程のいずれかにＰＭＳＦなどのプロテアーゼインヒビターを含ませてもよいし、外来性の混入物の増殖を防ぐために抗生物質を含ませてもよい。
【０１４５】
細胞から調製させた抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および／または単独もしくは他の精製工程と組み合わせたアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製され得る。アフィニティーリガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体変異体に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖に基づいて、抗体を精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．，６２：１−１３（１９８３））。プロテインＧは、マウスのアイソタイプのすべておよびヒトγ３を対象としている（Ｇｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．５：１５６７１５７５（１９８６））。アフィニティーリガンドが結合するマトリックスは、アガロースであることが最も多いが、他のマトリックスも利用可能である。多孔質ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの力学的に安定なマトリックスを使用することにより、アガロースを用いて達成できたときよりも流速が速くなり、処理時間が短くなる。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，ＮＪ）が精製に有用である。タンパク質精製のための他の技術（例えば、イオン交換カラム、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカによるクロマトグラフィー、ヘパリンによるクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）によるセファロースクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび硫安塩析による分画）もまた回収する抗体に応じて利用可能である。
【０１４６】
任意の予備精製工程の後、目的の抗体および夾雑物を含む混合物を、ｐＨが約２．５〜４．５の溶出緩衝液を使用した低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し得、好ましくは、低い塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍの塩）で行い得る。
【０１４７】
５．３．治療用の抗ＣＤ１９抗体
本発明の組成物および方法に使用される抗ＣＤ１９抗体は、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する、好ましくはヒト抗体またはヒト化抗体であるか、または好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介する公知の抗ＣＤ１９抗体から選択される。特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、キメラ抗体であり得る。好ましい実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、モノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体である。本発明の組成物および方法に使用される抗ＣＤ１９抗体は、好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗体またはヒト化抗体である。他の実施形態において、本発明の組成物および方法に使用される抗ＣＤ１９抗体は、好ましくはＡＤＣＣを媒介するＩｇＧ２またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプの好ましくはヒト抗体またはヒト化抗体である。
【０１４８】
このような抗体が上記の技術を使用して作製され得る一方で、本発明の他の実施形態において、本明細書中に記載されるようなマウス抗体であるＨＢ１２ａおよびＨＢ１２ｂまたは他の市販の抗ＣＤ１９抗体をキメラ化すること、ヒト化することまたはヒト抗体にすることができる。
【０１４９】
例えば、使用され得る公知の抗ＣＤ１９抗体としては、ＨＤ３７（ＩｇＧ１）（ＤＡＫＯ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）、ＢＵ１２（Ｇ．Ｄ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）、４Ｇ７（ＩｇＧ１）（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｊ４．１１９（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｋｒｅｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｂ４３（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＳＪ２５Ｃ１（ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ）（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔ’ｌ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３４：１１５７−１１６５（１９９７）；Ｐｉｅｔｅｒｓｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，４１：５３−６０（１９９５）；およびＺｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，６９：４１１−４２２（１９９１））、Ｂ４（ＩｇＧ１）（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３）および／またはＨＤ２３７（ＩｇＧ２ｂ）（Ｆｏｕｒｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ，１９８９；およびＰｅｚｚｕｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８：２７９３−２７９９（１９８７））が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２のアミノ酸配列（図５Ａ）を含むＨＢ１２ａの重鎖を含む。他の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号４のアミノ酸配列（図５Ｂ）を含むＨＢ１２ｂの重鎖を含む。
【０１５１】
特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列（図６Ａ）を含むＨＢ１２ａの軽鎖を含む。他の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列（図６Ｂ）を含むＨＢ１２ｂの軽鎖を含む。
【０１５２】
特定の実施形態において、抗体は、上記の（例えば、ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂ）のような既知抗体のアイソタイプスイッチされた（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプに）改変体である。
【０１５３】
本発明の組成物および方法に使用される抗ＣＤ１９抗体は、裸の抗体、免疫結合体または融合タンパク質であり得る。好ましくは、本発明の組成物および方法に使用するための上記抗ＣＤ１９抗体は、それらで処置されたヒトにおいてＢ細胞および循環免疫グロブリンを減少または枯渇させることができる。Ｂ細胞の枯渇は、循環Ｂ細胞または特に組織においてであり得る。それらの組織としては、骨髄、脾臓、消化管関連リンパ系組織および／またはリンパ節が挙げられるがこれらに限定されない。このような枯渇は、様々なメカニズム（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞死（例えば、アポトーシスを介した）の誘導）を介して達成され得る。Ｂ細胞の「枯渇」とは、５．４．３．節に記載するような、少なくとも約２５％、４０％、５０％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上の循環Ｂ細胞および／またはＢ細胞、特に組織中のＢ細胞の減少を意味する。特定の実施形態において、実質的にすべての検出可能なＢ細胞が、循環および／または特定の組織から枯渇される。循環免疫グロブリン（Ｉｇ）の「枯渇」とは、５．４．３節に記載するような、少なくとも約２５％、４０％、５０％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上の減少を意味する。特定の実施形態において、実質的にすべての検出可能なＩｇが循環から枯渇される。
【０１５４】
５．３．１．ヒトＣＤ１９に結合する抗体のスクリーニング
結合アッセイを使用して、ヒトＣＤ１９抗原に結合する抗体を同定することができる。結合アッセイは、直接的な結合アッセイまたは競合結合アッセイのいずれかとして行われ得る。結合は、標準的なＥＬＩＳＡまたは標準的なフローサイトメトリーアッセイを使用して検出され得る。直接的な結合アッセイでは、ヒトＣＤ１９抗原への結合について候補抗体を試験する。特定の実施形態において、スクリーニングアッセイは、第２の工程において、ヒトＣＤ１９を発現するＢ細胞の細胞死またはアポトーシスを引き起こす能力を測定する工程を含む。他方で、競合結合アッセイでは、候補抗体が、公知の抗ＣＤ１９抗体またはヒトＣＤ１９と結合する他の化合物と競合する能力を評価する。
【０１５５】
直接的な結合アッセイでは、候補抗体がヒトＣＤ１９抗原に結合し得る条件下でヒトＣＤ１９抗原を候補抗体と接触させる。結合は、溶液中または固体表面上で生じ得る。好ましくは、候補抗体は、予め検出用に標識しておく。任意の検出可能な化合物を標識用として使用し得る。それらとしては、例えば、発光性のもの、蛍光性のものもしくは放射性同位体または同じものを含む群あるいは酵素もしくは色素などの非同位体標識が挙げられるがこれらに限定されない。結合が十分に生じるのに十分なインキュベーション時間のあと、反応物を過剰量の抗体または非特異的に結合している抗体を除去する条件および操作に供する。代表的には、その操作は、適切な緩衝液で洗浄する工程を含む。最終的に、ＣＤ１９抗体複合体の存在が検出される。
【０１５６】
競合結合アッセイでは、公知の抗ＣＤ１９抗体（または他の化合物）がヒトＣＤ１９抗原に結合することを候補抗体が阻害する能力またはその結合を候補抗体が置換する能力について評価する。標識された公知のＣＤ１９の結合剤が候補抗体と混合され得、そしてそれらの相互作用が候補抗体を加えても加えなくても正常に生じる条件下に置かれ得る。ヒトＣＤ１９と結合する標識された公知のＣＤ１９の結合剤の量が、候補抗体の存在下または不在下で結合している量と比較され得る。
【０１５７】
好ましい実施形態において、抗体抗原複合体の形成および検出を促進するために、固体表面に固定された１以上の成分を用いて結合アッセイが行われる。様々な実施形態において、固体支持体は、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ガラス、ニトロセルロース、デキストラン、ナイロン、ポリアクリルアミドおよびアガロースであり得るが、これらに限定されない。支持体形態としては、ビーズ、膜、微小粒子、反応容器（例えば、マイクロタイタープレート、試験管または他の反応容器）の内側表面が挙げられる。ヒトＣＤ１９または他の成分の固定化は、共有結合または非共有結合によって達成され得る。１つの実施形態において、その結合は、間接的、すなわち、結合された抗体を介してであってもよい。別の実施形態において、抗ＧＳＴ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）などの市販の抗体によって固体表面への結合が媒介され得るように、ヒトＣＤ１９抗原およびネガティブコントロールは、エピトープ（例えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ））でタグ化される。
【０１５８】
例えば、そのようなアフィニティー結合アッセイは、固体支持体に固定化されたヒトＣＤ１９抗原を使用して行われ得る。代表的には、候補抗ＣＤ１９抗体の場合において、結合反応の移動性でない成分が検出できるように標識される。種々の標識方法が利用可能であり、例えば、発光、発色団、蛍光または放射性同位体または同じものを含む群および酵素または色素などの非同位体の標識が使用され得る。好ましい実施形態において、候補抗ＣＤ１９抗体は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓから入手可能）などのフルオロフォアで標識される。
【０１５９】
最終的には、固体表面上に残存している標識が、当該分野で公知の任意の検出方法によって検出され得る。例えば、候補抗ＣＤ１９抗体が、フルオロフォアで標識されている場合、蛍光光度計を使用して、複合体を検出し得る。
【０１６０】
好ましくは、ヒトＣＤ１９抗原を発現するインタクトな細胞またはヒトＣＤ１９抗原を含む単離された膜の形態でヒトＣＤ１９抗原が結合アッセイに加えられる。従って、ヒトＣＤ１９抗原との直接の結合が、培養されたインタクトな細胞または動物モデルの候補抗ＣＤ１９抗体の存在下および不在下でアッセイされ得る。標識された候補抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９抗原を発現する細胞またはそのような細胞から得られた粗抽出物と混合され得、そしてその候補抗ＣＤ１９抗体が加えられ得る。単離された膜を使用して、ヒトＣＤ１９と相互作用する候補抗ＣＤ１９抗体が同定され得る。例えば、単離された膜を使用した代表的な実験において、ヒトＣＤ１９抗原を発現するように細胞が遺伝的に操作され得る。膜は、標準的な技術によって回収され得、そしてインビトロ結合アッセイに使用され得る。標識された候補抗ＣＤ１９抗体（例えば、蛍光標識された抗体）は、膜に結合し、そして特定の活性についてアッセイされる；過剰量の非標識（非放射性）候補抗ＣＤ１９抗体の存在下で行われる結合アッセイと比較することによって、特異的な結合が決定される。あるいは、可溶性ヒトＣＤ１９抗原を組換えで発現させて、非細胞ベースのアッセイに利用することによって、ヒトＣＤ１９抗原に結合する抗体が同定され得る。組換えで発現させたヒトＣＤ１９ポリペプチドは、非細胞ベースのスクリーニングアッセイに使用され得る。あるいは、ヒトＣＤ１９抗原の結合部分の１以上に対応するペプチドまたはヒトＣＤ１９抗原の結合部分の１以上を含む融合タンパク質を非細胞ベースのアッセイ系で使用することにより、ヒトＣＤ１９抗原の部分に結合する抗体が同定され得る。非細胞ベースのアッセイにおいて、組換えで発現したヒトＣＤ１９は、当業者に周知の手段によって固体の基材（例えば、試験管、マイクロタイターウェルまたはカラム）に結合される（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，前出を参照のこと）。次いで、試験抗体が、ヒトＣＤ１９抗原に結合する能力についてアッセイされる。
【０１６１】
あるいは、結合反応は、溶液中で行われ得る。このアッセイにおいて、標識された成分は、溶液中でその結合パートナーと相互作用することが可能になる。標識された成分とその結合パートナーとの大きさの差が分離を可能にする場合、その分離は、結合反応の生成物を限外濾過膜を通すことによって達成され得る。ここで、その限外濾過膜は、未結合の標識された成分は通過できるが、その結合パートナーまたはそのパートナーに結合している標識された成分は通過できない細孔を有する。分離はまた、標識された成分の結合パートナーを溶液から捕捉することができる任意の試薬（例えば、結合パートナーに対する抗体など）を使用して達成され得る。
【０１６２】
１つの実施形態において、例えば、ファージライブラリーは、プラスチックビーズなどの固相に連結されている、精製されたヒトＣＤ１９抗原またはその誘導体、アナログ、フラグメントもしくはドメインを含むカラムに連続的なファージディスプレイライブラリー由来のファージを通すことによってスクリーニングされ得る。洗浄緩衝液のストリンジェンシーを変化することによって、ヒトＣＤ１９抗原に対するアフィニティーが高いペプチドを発現するファージを濃縮することが可能である。そのカラムから単離されたファージをクローニングすることができ、そしてアフィニティーを直接測定することができる。どの抗体およびそのアミノ酸配列がヒトＣＤ１９抗原に最も強い結合性をもたらすかが分かると、コンピュータモデルを使用して、ＣＤ１９抗原と候補抗体との間の分子接触を同定することができる。
【０１６３】
本発明のこの態様の別の特定の実施形態において、固体支持体は、マイクロタイターディッシュに結合したヒトＣＤ１９抗原を含む膜である。候補抗体は、例えば、マイクロタイターディッシュ中でライブラリーメンバーが発現され得る条件下で培養された、ライブラリー抗体を発現する細胞と結合し得る。ヒトＣＤ１９に結合するライブラリーメンバーが回収される。このような方法は、一般に例えば、ＰａｒｍＬｅｙ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，１９８８，Ｇｅｎｅ，７３：３０５−３１８；Ｆｏｗｌｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１３：４２２−４２７；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／１８３１８；および本明細書の上で引用された参考文献に記載されている。ヒトＣＤ１９抗原に結合すると同定された抗体は、いずれかのタイプまたは改変の上記の抗体であり得る。
【０１６４】
特定の実施形態において、スクリーニングアッセイは、第２の工程において、ヒトＣＤ１９を発現するＢ細胞の細胞死またはアポトーシスを引き起こす能力を測定する工程を含む。細胞生死判定色素（ｖｉａｂｌｅ  ｄｙｅ）を利用するアッセイ、カスパーゼを検出および解析する方法ならびにＤＮＡ切断を測定するアッセイを使用して、インビトロで培養される細胞のアポトーシス活性を目的の抗ＣＤ１９抗体を用いて評価することができる。アポトーシス活性を検出するために、例えば、アネキシンＶアッセイまたはＴｄＴ−媒介性ｄＵＴＰニックエンドラベリング（ＴＵＮＥＬ）アッセイを、Ｄｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（ＵＳＡ）１０３：２７１８−２７２５（２００４）に記載されているように行うことができる。ＴＵＮＥＬアッセイは、ＤＮＡ鎖が切断した部分に取り込ませるために、フルオレセイン標識されたｄＵＴＰとともに目的の細胞を培養する工程を含む。次いで、その細胞をフローサイトメトリーによって解析する。アネキシンＶアッセイでは、アポトーシス細胞の表面上で、曝露されているホスファチジルセリン（ＰＳ）を特異的に認識するフルオレセイン結合体化抗体を使用して、原形質膜の外側にＰＳが曝露されているのを検出する。同時に、ヨウ化プロピジウムなどの細胞生死判定色素を使用して、初期のアポトーシス細胞から後期のアポトーシス細胞を排除することができる。目的の細胞を抗体で染色し、フローサイトメトリーで解析する。さらに、抗体のアポトーシス活性をアッセイするための技術は、当該分野で周知である。例えば、Ｃｈａｏｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４（７）：３０９６−１０４（１９９５）；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，９９（４）：１３１４−１３１８（２００２）；Ａｌｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ；Ｓｔｅｅｎｓｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．，８５：３２３−３２，（２００３））を参照のこと。
【０１６５】
５．３．２．ヒトＡＤＣＣエフェクター機能についての抗体のスクリーニング
ヒトＩｇＧクラスの抗体は、血清中の半減期が長いなどの機能的な特徴を有し、また、様々なエフェクター機能を媒介することができるので（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １（１９９５））、それらは、本発明の用途にとって好ましい。ヒトＩｇＧクラス抗体は、以下の４つのサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４にさらに分類される。多くの研究は、これまでＩｇＧクラス抗体のエフェクター機能としてのＡＤＣＣおよびＣＤＣについて行われてきており、ヒトＩｇＧクラスの抗体のうち、ＩｇＧ１サブクラスが、ヒトにおいて最も高いＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性を有することが報告されている（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））。
【０１６６】
ヒトＩｇＧ１サブクラス抗体のＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性の発現は、一般に、抗体のＦｃ領域が、エフェクター細胞（例えば、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞または活性化マクロファージ）の表面上に存在する、抗体に対するレセプター（本明細書で以後「ＦｃγＲ」と呼ばれる）に結合することに関与する。様々な補体成分が結合され得る。結合に関して、その抗体のヒンジ領域およびＣ領域の第２のドメイン（本明細書で以後「Ｃγ２ドメイン」と呼ばれる）のいくつかのアミノ酸残基が重要であること（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３，１０９８（１９９３），Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８６，３１９（１９９５），Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））およびＣγ２ドメイン中の糖鎖（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））もまた重要であることが示唆されている。
【０１６７】
本発明の抗ＣＤ１９抗体は、エフェクター機能に関して、例えば、その抗体のＡＤＣＣおよび／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を増強するように改変され得る。このことは、抗体のＦｃ領域に１以上のアミノ酸置換を導入することによって達成され得る。あるいは、またはさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入し得ることにより、この領域における鎖間ジスルフィド結合の形成が可能になる。このようにして、改善された内部移行能力およびまたは高い補体媒介性細胞殺滅およびＡＤＣＣを有し得るホモダイマーの抗体が作製され得る（Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８−２９２２（１９９２））。ヘテロ二機能性クロスリンカーを使用して、活性が高いホモダイマーの抗体を作製することもできる（Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５３：２５６０−２５６５（１９９３））。抗体はまた、２以上のＦｃ領域を有するように操作され得る。これにより、補体溶解およびＡＤＣＣ能力が高まる（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，（３）２１９−２３０（１９８９））。
【０１６８】
エフェクター機能を変更するために抗体のＦｃ領域を操作する他の方法は、当該分野で公知である（例えば、米国特許公開番号２００４０１８５０４５およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０１６７５０（両方がＫｏｅｎｉｇ  ｅｔ  ａｌに対するものであり、ＦｃγＲＩＩＡに対する結合アフィニティーと比較してＦｃγＲＩＩＢに対する結合アフィニティーを増大するためにＦｃ領域を変更することを説明している）を参照のこと；また、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／５８５７２（Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ９９／５１６４２（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．）および米国特許第６，３９５，２７２号（Ｄｅｏ  ｅｔ  ａｌ．）；（これらの開示の全体が本明細書中に援用される）も参照のこと））。ＦｃγＲＩＩＢに対する結合アフィニティーを低下させるためにＦｃ領域を改変する方法も、当該分野で公知である（例えば、米国特許公開番号２００１００３６４５９およびＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／７９２９９（両方がＲａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌに対するものであり、これらの開示の全体が本明細書中に援用される）を参照のこと）。野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する結合アフィニティーが高い改変Ｆｃ領域を有する改変抗体もまた、報告されている（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０６３３５１（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）；この開示の全体が本明細書中に援用される）。
【０１６９】
少なくとも４種の異なるタイプのＦｃγＲが見出されており、それらは、それぞれＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）およびＦｃγＲＩＶと呼ばれている。ヒトにおいて、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、それぞれ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂならびにＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂにさらに分類される。ＦｃγＲは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜タンパク質であり、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶは、２つの免疫グロブリン様ドメインを含む細胞外領域を有するα鎖を有し、ＦｃγＲＩは、構成要素として３つの免疫グロブリン様ドメインを含む細胞外領域を有するα鎖を有し、また、そのα鎖は、ＩｇＧ結合活性に関与する。さらに、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、α鎖と関連してシグナル伝達機能を有する構成要素としてγ鎖またはζ鎖を有する（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１８，７０９（２０００），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９，２７５（２００１））。ＦｃγＲＩＶは、Ｂｒｕｈｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（Ｃａｎａｄａ）２７：３Ｄ（２００４）によって報告されている。
【０１７０】
目的の抗ＣＤ１９抗体のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイが使用され得る。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。例えば、補体活性化および／またはＡＤＣＣによって任意の特定の抗体が標的細胞の溶解を媒介する能力がアッセイされ得る。目的の細胞を生育し、そしてインビトロで標識する；抗原抗体複合体によって活性化され得る免疫細胞、すなわち、ＡＤＣＣ反応に関与するエフェクター細胞と組み合わせて細胞培養物に抗体を加える。抗体はまた、補体活性化について試験され得る。いずれかの場合において、標的細胞の細胞溶解は、溶解された細胞からの標識の放出によって検出される。実際に、抗体は、補体および／または免疫細胞の起源として患者自身の血清を使用してスクリーニングされ得る。次いで、インビトロ試験においてヒトＡＤＣＣを媒介することができる抗体が、その特定の患者において治療的に使用され得る。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性が、インビボ、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて評価され得る。さらに、抗体のＡＤＣＣのレベルをおよび必要に応じてＣＤＣ活性を調節（すなわち、増加または減少）するための技術は、当該分野で周知である。例えば、米国特許第６，１９４，５５１号を参照のこと。本発明の抗体は、好ましくはＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを誘導することができるか、またはそれらを誘導する能力を有するように改変される。好ましくは、ヒトエフェクター細胞を使用して、ＡＤＣＣ機能を測定するそのようなアッセイを行うことにより、ヒトＡＤＣＣ機能が評価される。
【０１７１】
５．３．３．免疫結合体および融合タンパク質
本発明の特定の態様によれば、治療薬またはトキシンは、本発明の組成物および方法において使用するために、キメラ化抗ＣＤ１９抗体、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体と結合体化され得る。特定の実施形態において、これらの結合体は、融合タンパク質として作製され得る（５．１．８節を参照のこと）。治療薬およびトキシンの例としては、エンジインファミリーのメンバーの分子（例えば、カリケアマイシンおよびエスペラミシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ））が挙げられるが、これらに限定されない。化学トキシンもまた、デュオカルマイシン（例えば、米国特許第５，７０３，０８０号および米国特許第４，９２３，９９０号を参照のこと）、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび５−フルオロウラシルからなる群から得ることができる。化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキシン（Ｃｙｔｏｘｉｎ）、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン（Ｖｉｎｃｒｅｉｓｔｉｎｅ）、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン（Ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照のこと）、メルファランおよび他の関連ナイトロジェンマスタードも挙げられる。
【０１７２】
他の実施形態において、例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ２シクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ２エトポシドおよび１５０〜２００ｍｇ／ｍ２カルムスチン）が、本発明の併用療法に使用され得る。ＣＶＢは、非ホジキンリンパ腫を処置するために使用されるレジメンである（Ｐａｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，５１：１８（１９９３））。他の適当な併用化学療法レジメンが当業者に周知である。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈｏｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２０２８−２０６８（Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９３）を参照のこと。例示として、中間段階の非ホジキンリンパ腫を処置するための第１世代の化学療法レジメンとしては、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジンおよびプレドニゾン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）が挙げられる。有用な第２世代の化学療法レジメンは、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾンおよびロイコボリン）であり、適当な第３世代のレジメンは、ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキサート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシンおよびロイコボリン）である。さらなる有用な薬物としては、フェニルブチレートおよびブロスタチン（ｂｒｏｓｔａｔｉｎ）−１が挙げられる。
【０１７３】
本発明の免疫結合体に使用され得る他のトキシンとしては、有毒なレクチン、植物トキシン、例えば、リシン、アブリン、モデクシン、ボツリヌストキシンおよびジフテリアトキシンが挙げられる。当然ながら、様々なトキシンの組み合わせもまた、１つの抗体分子に結合され得る。これにより、変化する細胞傷害に適応する。本発明の併用療法で適当に使用されるトキシンの例は、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌性エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルス性タンパク質、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ジフテリア（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉｎ）トキシン、シュードモナス外毒素およびシュードモナスエンドトキシンである。例えば、Ｐａｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ，４４：４３（１９９４）を参照のこと。使用され得る酵素的に活性なトキシンおよびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリアトキシンの非結合性の活性なフラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン、クロチン、Ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテシンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。
【０１７４】
適当なトキシンおよび化学療法剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）およびＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）に記載されている。他の適当なトキシンおよび／または化学療法剤は、当業者に公知である。
【０１７５】
本発明の抗ＣＤ１９抗体はまた、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照のこと）を活性な抗癌薬物に変換するプロドラッグ活性化酵素と抗ＣＤ１９抗体を結合体化することによって、ＡＤＥＰＴにおいて使用され得る。例えば、ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照のこと。ＡＤＥＰＴに有用な免疫結合体の酵素成分としては、その成分をより活性な細胞傷害性型に変換するような方法でプロドラッグに対して作用することができる任意の酵素が挙げられる。
【０１７６】
本発明の方法において有用な酵素としては、リン酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアルカリホスファターゼ；硫酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアリールスルファターゼ；無毒の５−フルオロシトシンを抗癌薬物の５−フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なプロテアーゼ（例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびＬ））；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するために有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化されたプロドラッグを遊離薬物に変換するために有用な炭水化物切断酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ）；α−ラクタムで誘導体化される薬物を遊離薬物に変換するために有用なβ−ラクタマーゼ；および、それぞれフェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基によってそれらのアミン窒素において誘導体化される薬物を遊離薬物に変換するために有用なペニシリンアミダーゼ（例えば、ペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼ）が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、「アブザイム」としても当該分野で公知である酵素活性を有する抗体が、本発明のプロドラッグを遊離した活性な薬物に変換するために使用され得る（例えば、Ｍａｓｓｅｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３２８：４５７−４５８（１９８７）を参照のこと）。抗体−アブザイム結合体は、自己免疫疾患または自己免疫障害に罹患しているヒトの部分に所望のアブザイムを送達するために、本明細書中に記載されるように調製され得る。
【０１７７】
本発明の酵素は、当該分野で周知の技術（例えば、上で述べたヘテロ二機能性の架橋試薬の使用など）によって抗体と共有結合され得る。あるいは、本発明の酵素の少なくとも機能的に活性な一部と連結した本発明の抗体の少なくとも抗原結合領域を含む融合タンパク質は、当該分野で周知の組換えＤＮＡ技術を使用して構築され得る（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照のこと）。
【０１７８】
本発明の抗ＣＤ１９抗体の共有結合性の改変は、本発明の範囲内に含まれる。その改変は、化学合成または適用可能であれば抗体の酵素的切断もしくは化学的切断によってなされ得る。抗ＣＤ１９抗体の他のタイプの共有結合性の改変は、この抗体の標的化されたアミノ酸残基を、選択された側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端の残基と反応することができる有機誘導化剤と反応させることによって分子に導入されるものである。
【０１７９】
最も一般的には、システイニル残基を、クロロ酢酸またはクロロアセトアミドなどのα−ハロアセテート（および対応するアミン）と反応させることにより、カルボキシメチル誘導体またはカルボキシアミドメチル誘導体が得られる。同様に、ヨード試薬も使用され得る。システイニル残基もまた、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリベンゾエート、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノールまたはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールと反応することにより、誘導体化される。
【０１８０】
ピロ炭酸ジエチルがヒスチジル側鎖に相対的に特異的であるため、ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５〜７．０でピロ炭酸ジエチルと反応することによって誘導体化される。ｐ−ブロモフェナシルブロミドもまた有用である；この反応は、好ましくはｐＨ６．０の０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中で行われる。
【０１８１】
リシル残基およびアミノ末端残基が、無水コハク酸または他の無水カルボン酸と反応する。これらの因子による誘導体化は、リシニル残基の電荷を逆転する作用を有する。α−アミノ−含有残基および／またはε−アミノ−含有残基を誘導体化するための他の適当な試薬としては、イミドエステル（例えば、メチルピコリンイミデート、ピリドキサールリン酸、ピリドキサール、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、０−メチルイソ尿素、２，４−ペンタンジオン）およびグリオキシレートとのトランスアミナーゼ触媒反応が挙げられる。
【０１８２】
アルギニル残基は、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオンおよびニンヒドリンのうちの１つまたはいくつかの従来試薬との反応によって改変される。アルギニル残基の誘導体化は、グアニジン官能基のｐＫａが高いため、一般に、その誘導体化の反応がアルカリ性条件において行われることが必要である。さらに、これらの試薬は、リシンのε−アミノ基ならびにアルギニンイプシロン−アミノ基と反応し得る。
【０１８３】
チロシル残基の特定の改変は、芳香族のジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によってスペクトル標識をチロシル残基に導入することに特に関心を持ってなされ得る。最も一般には、Ｎ−アセチルイミジゾールおよびテトラニトロメタンを使用して、それぞれＯ−アセチルチロシル種および３−ニトロ誘導体が形成される。チロシル残基が、１２５Ｉまたは１３１Ｉを使用してヨウ素化されることにより、ラジオイムノアッセイで使用するための標識されたタンパク質が調製される。
【０１８４】
カルボキシル側鎖（アスパルチルまたはグルタミル）は、カルボジイミド類（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）（ここで、ＲおよびＲ’は、異なるアルキル基（例えば、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド）である）との反応によって選択的に改変される。さらに、アスパルチル残基およびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によってアスパラギニル残基およびグルタミニル残基に変換される。
【０１８５】
グルタミニル残基およびアスパラギニル残基は、それぞれ対応するグルタミル残基およびアスパルチル残基に脱アミド化されることが多い。これらの残基は、中性または塩基性の条件下で脱アミド化される。これらの残基の脱アミド型は、本発明の範囲内である。
【０１８６】
他の改変としては、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルのヒドロキシル基またはトレオニル残基のリン酸化、リシン、アルギニンおよびヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６（１９８３））、Ｎ末端のアミンのアセチル化ならびに任意のＣ末端のカルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【０１８７】
別のタイプの共有結合性の改変は、グリコシドを抗体に化学的または酵素的に結合することを含む。これらの手順は、Ｎ結合型またはＯ結合型のグリコシル化に対するグリコシル化能力を有する宿主細胞における抗体の産生を必要としないという点で有利である。使用される結合様式に応じて、糖は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）遊離スルフヒドリル基（例えば、システインの遊離スルフヒドリル基）（ｄ）遊離ヒドロキシル基（例えば、セリン、トレオニンまたはヒドロキシプロリンの遊離ヒドロキシル基）、（ｅ）芳香族残基（例えば、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンの芳香族残基）または（ｆ）グルタミンのアミド基に結合され得る。これらの方法は、１９８７年９月１１日公開のＷＯ８７／０５３３０およびＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載されている。
【０１８８】
５．４．薬学的処方物、投与および投薬
本発明の薬学的処方物は、活性成分として、ヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む。この処方物は、ヒト患者への投与に適した単位体重または単位体積内で所望の応答をもたらすために有効な量で裸の抗体、免疫複合体または融合タンパク質を含み、好ましくは滅菌されている。その応答は、例えば、抗ＣＤ１９抗体組成物の生理学的効果を計測することによって測定され得る。その効果としては、循環Ｂ細胞枯渇、組織Ｂ細胞枯渇、自己免疫疾患もしくは自己免疫障害の後退または疾患症状の低減が挙げられるがこれらに限定されない。他のアッセイが当業者に公知であり、応答レベルを測定するために使用され得る。
【０１８９】
５．４．１．薬学的処方物
抗ＣＤ１９抗体組成物は、薬学的に許容可能なキャリアとともに処方され得る。用語「薬学的に許容可能な」とは、活性成分の生物学的活性の有効性を干渉しない１以上の無毒の材料を意味する。このような調製物は、通常、塩類、緩衝剤、保存剤、適合性のキャリアおよび必要に応じて他の治療薬を含み得る。このような薬学的に許容可能な調製物はまた、通常、ヒトへの投与に適した、適合性の固体もしくは液体の賦形剤、希釈剤または封入物質を含み得る。薬物中で使用されるとき、塩類は、薬学的に許容可能でなければならないが、薬学的に許容可能でない塩が日常的にその薬学的に許容可能な塩を調製するために使用され得、また、それらは、本発明の範囲から排除されない。このような薬理学的および薬学的に許容可能な塩としては、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ホウ酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから調製される塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、薬学的に許容可能な塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩）として調製され得る。用語「キャリア」とは、活性成分が適用を容易にするように組み合わされている有機または無機の、天然または合成の成分のことをいう。薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的有効性を実質的に損なう相互作用が生じないような様式で本発明の抗体と、および互いに混合することもできる。
【０１９０】
本発明の特定の態様によれば、抗ＣＤ１９抗体組成物は、貯蔵のために凍結乾燥された処方物または水溶液の形態で、所望の程度の純度を有する抗体または免疫複合体を任意の生理的に許容可能なキャリア、賦形剤または安定剤と混合することによって調製され得る（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９９９））。許容可能なキャリア、賦形剤または安定剤は、使用される投与量および濃度において、レシピエントにとって無毒であり、そのようなものとしては、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸）；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシン）；単糖類、二糖類およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
【０１９１】
抗ＣＤ１９抗体組成物もまた、必要に応じて適当な保存剤、例えば：塩化ベンザルコニウム；クロロブタノール；パラベンおよびチメロサールを含んでもよい。
【０１９２】
抗ＣＤ１９抗体組成物は、便利に単位剤形中に含まれ得、また、薬学分野で周知の任意の方法によって調製され得る。すべての方法は、活性因子を１以上の副成分を構成するキャリアに会合させる工程を含む。一般に、この組成物は、活性な化合物を液体キャリア、微粉化された固体キャリアまたはその両方と均一かつ完全に会合させることによって調製され、そして、必要であれば、生成物を成形する。
【０１９３】
非経口投与に適した組成物は、好ましくはレシピエントの血液と等張性である、抗ＣＤ１９抗体の滅菌された水性調製物または非水性調製物を便利に含む。この調製物は、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、公知の方法に従って処方され得る。滅菌された注射可能な調製物はまた、無毒な非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の、例えば、１，３−ブタンジオール溶液としての滅菌された注射可能な溶液または懸濁液であり得る。使用され得る許容可能なビヒクルおよび溶媒は、水、リンガー溶液および等張性塩化ナトリウム溶液である。さらに、溶媒または懸濁溶媒として、滅菌された固定油を慣習的に使用する。この目的で、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油が使用され得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製に使用され得る。経口、皮下、静脈内、筋肉内投与などに適したキャリア処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見出され得る。特定の実施形態において、様々な投与経路に適したキャリア処方物は、ＲＩＴＵＸＡＮＴＭについて記載されているものと同じであるか、または類似のものであり得る。Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ，２００５），ｐｐ．９５８−９６０および１３５４−１３５７（この全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体組成物は、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、ポリソルベート８０および滅菌水とともに静脈内投与用として処方される。ここで、この組成物のｐＨは約６．５に調節されている。静脈内注射により、迅速な抗体の分配が循環によって徹底されることに起因して、有用な投与様式がもたらされることに当業者は気づく。しかしながら、静脈内投与は、脈管構造の内皮細胞および内皮マトリックスを含む血管の障壁のために限界がある。リンパ管内の投与経路（例えば、皮下または筋肉内注射）またはリンパ管のカテーテル法により、自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する有用な手段がもたらされる。好ましい実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、皮下に自己投与される。このような好ましい実施形態において、本組成物は、凍結乾燥された薬物としてか、または約５０ｍｇ／ｍＬで液体緩衝液（例えば、ＰＢＳおよび／またはクエン酸）中に処方される。
【０１９４】
本明細書中の処方物はまた、処置される特定の適応症に必要な２つ以上の活性な化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含み得る。例えば、さらに免疫抑制剤を提供することが望ましいことがある。このような分子は、意図される目的に有効な量と組み合わせて適切に含まれる。
【０１９５】
活性成分はまた、コロイド性薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されるマイクロカプセル（例えばそれぞれ、ヒドロキシメチルセルロースマイクロカプセルまたはゼラチンマイクロカプセル、およびポリ−（メチルメタアクリレート）マイクロカプセル）内に封入され得る。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０１９６】
インビボ投与用に使用される処方物は、代表的には滅菌されている。この滅菌は、滅菌された濾過膜に通して濾過することによって容易に達成される。
【０１９７】
徐放調製物が調製され得る。徐放調製物の適当な例としては、抗ＣＤ１９抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、成形されたもの、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタアクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸との共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル共重合体、分解性乳酸−グリコール酸共重合体（例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドから構成される注入可能なミクロスフェア））およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーが、１００日間に亘って分子を放出することができるが、特定のヒドロゲルは、それよりも短い時間に亘ってタンパク質を放出する。カプセルに入った抗体が、体内に長時間残存すると、それらは、３７℃の水分に曝露された結果として、変性または凝集し得る。その変性または凝集は、生物学的活性の損失をもたらし、また、免疫原性の変化をもたらし得る。合理的なストラテジーは、関与するメカニズムに応じて安定性について工夫され得る。例えば、凝集メカニズムが、チオ−ジスルフィド交換による分子間Ｓ−Ｓ結合の形成であることが見出される場合は、スルフヒドリル残基を改変すること、酸性溶液から凍結乾燥すること、適切な添加物を使用して水分含有量を制御すること、および特定のポリマーマトリックス組成物を使用することによって、安定性は達成され得る。特定の実施形態において、本発明の組成物に使用される薬学的に許容可能なキャリアは、ヒトＡＤＣＣまたはヒトＣＤＣに影響を与えない。
【０１９８】
本明細書中で開示される抗ＣＤ１９抗体組成物はまた、免疫リポソームとしても処方され得る。「リポソーム」とは、ヒトへの薬物（例えば、本明細書中で開示される抗ＣＤ１９抗体）の送達に有用である、様々なタイプの脂質、リン脂質および／または界面活性剤から構成される小型のベシクルのことである。リポソームの構成要素は、通常、生物学的膜の脂質配列と類似の二重層を形成して並ぶ。本発明の抗体を含むリポソームは、当該分野で公知の方法、例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；および米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されているような方法によって調製される。循環時間の長いリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって作製され得る。リポソームを、規定のポアサイズのフィルターに通すことにより、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体は、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されているようなリポソームと、ジスルフィド交換反応を介して結合体化され得る。治療薬がまた、リポソーム内に含まれ得る。Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，（１９）１４８４（１９８９）を参照のこと。
【０１９９】
好ましい薬学的処方物のいくつかとしては、以下のものが挙げられるがこれらに限定されない：
（ａ）１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）のいずれかの使い捨てバイアルに入って１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される、抗ＣＤ１９抗体の静脈内（ｉ．ｖ．）投与用の、保存剤を含まない滅菌された液体濃縮物。この生成物は、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、ポリソルベートおよび注射用滅菌水を使用して、ｉ．ｖ．投与用に処方され得る。例えば、この生成物は、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０および注射用滅菌水中に処方され得る。ｐＨは、６．５に調節される。
【０２００】
（ｂ）使い捨てのガラスバイアルに入った、皮下（ｓ．ｃ．）注射用の滅菌された、凍結乾燥粉末。この生成物は、スクロース、Ｌ−塩酸ヒスチジン一水和物、Ｌ−ヒスチジンおよびポリソルベート２０とともに処方され得る。例えば、使い捨てバイアルの各々は、１５０ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、１２３．２ｍｇのスクロース、６．８ｍｇのＬ−塩酸ヒスチジン一水和物、４．３ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび３ｍｇのポリソルベート２０を含み得る。１．３ｍＬの滅菌された注射用水でその使い捨てのバイアルを再構成することにより、約１．５ｍＬの溶液が得られ、１２５ｍｇ／１．２５ｍＬ（１００ｍｇ／ｍＬ）の抗体がもたらされる。
【０２０１】
（ｃ）静脈内（ＩＶ）投与用の、保存剤を含まない滅菌された凍結乾燥粉末。この生成物は、α−トレハロース二水和物、Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ、ヒスチジンおよびポリソルベート２０（米国薬局方）とともに処方され得る。例えば、各バイアルは、４４０ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、４００ｍｇのα，α−トレハロース二水和物、９．９ｍｇのＬ−ヒスチジンＨＣｌ、６．４ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび１．８ｍｇのポリソルベート２０（米国薬局方）を含み得る。保存剤として１．１％ベンジルアルコールを含む２０ｍＬの静菌性の注射用水（ＢＷＦＩ）（米国薬局方）で再構成することにより、ｐＨが約６の２１ｍｇ／ｍＬの抗体を含む複数回分の用量の溶液が得られる。
【０２０２】
（ｄ）抗ＣＤ１９抗体がスクロース、ポリソルベート、リン酸二水素ナトリウム一水和物およびリン酸水素ナトリウム二水和物とともに処方される、静脈内注入用の滅菌された凍結乾燥粉末。例えば、使い捨てバイアルの各々は、１００ｍｇの抗体、５００ｍｇのスクロース、０．５ｍｇのポリソルベート８０、２．２ｍｇのリン酸二水素ナトリウム一水和物および６．１ｍｇのリン酸水素ナトリウム二水和物を含み得る。保存剤は含まない。１０ｍＬの注射用滅菌水（米国薬局方）で再構成した後、得られるｐＨは、約７．２である。
【０２０３】
（ｅ）事前に充填されている１ｍＬの使い捨て注射器に入った状態で供給される皮下投与用の、保存剤を含まない滅菌された溶液。この生成物は、塩化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム二水和物、リン酸水素ナトリウム二水和物、クエン酸ナトリウム、クエン酸一水和物、マンニトール、ポリソルベート８０および注射用水（米国薬局方）とともに処方され得る。ｐＨを約５．２に調節するために水酸化ナトリウムを加えてもよい。
【０２０４】
例えば、各注射器は、０．８ｍＬ（４０ｍｇ）の薬物生成物がもたらされるように処方され得る。この各０．８ｍＬは、４０ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、４．９３ｍｇの塩化ナトリウム、０．６９ｍｇのリン酸二水素ナトリウム二水和物、１．２２ｍｇのリン酸水素ナトリウム二水和物、０．２４ｍｇのクエン酸ナトリウム、１．０４クエン酸一水和物、９．６ｍｇのマンニトール、０．８ｍｇのポリソルベート８０および注射用水（米国薬局方）を含む。
【０２０５】
（ｆ）注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）（米国薬局方）で再構成され、皮下（ｓ．ｃ．）注射として投与される、使い捨てバイアルに入った、保存剤を含まない滅菌された凍結乾燥粉末。この生成物は、スクロース、塩酸ヒスチジン一水和物、Ｌ−ヒスチジンおよびポリソルベートとともに処方され得る。例えば、７５ｍｇのバイアルは、１２９．６ｍｇまたは１１２．５ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、９３．１ｍｇのスクロース、１．８ｍｇのＬ−塩酸ヒスチジン一水和物、１．２ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび０．３ｍｇのポリソルベート２０を含み得、そして、０．９ｍＬのＳＷＦＩ（米国薬局方）で再構成した後で、０．６ｍＬ中に７５ｍｇの抗体がもたらされるように作られている。１５０ｍｇのバイアルは、２０２．５ｍｇまたは１７５ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、１４５．５ｍｇのスクロース、２．８ｍｇのＬ−塩酸ヒスチジン一水和物、１．８ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび０．５ｍｇのポリソルベート２０を含み得、そして１．４ｍＬのＳＷＦＩ（米国薬局方）で再構成した後で１．２ｍＬ中に１５０ｍｇの抗体がもたらされるように作られている。
【０２０６】
（ｇ）注射用滅菌水による再構成用の滅菌された凍結乾燥（ｈｙｏｐｈｙｌｉｚｅｄ）生成物。この生成物は、マンニトール、ヒスチジンおよびグリシンを使用した、筋肉内（ＩＭ）注射用の使い捨てバイアルとして処方され得る。例えば、使い捨てバイアルの各々は、１００ｍｇの抗体、６７．５ｍｇのマンニトール、８．７ｍｇのヒスチジンおよび０．３ｍｇのグリシンを含み得、そして１．０ｍＬの注射用滅菌水で再構成されるときに１．０ｍＬ中に１００ｍｇの抗体がもたらされるように作られている。あるいは、使い捨てバイアルの各々は、５０ｍｇの抗体、４０．５ｍｇのマンニトール、５．２ｍｇのヒスチジンおよび０．２ｍｇのグリシンを含み得、そして０．６ｍＬの注射用滅菌水で再構成されるとき、５０ｍｇの抗体がもたらされるように作られている。
【０２０７】
（ｈ）１００ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される筋肉内（ＩＭ）注射用の、保存剤を含まない滅菌された溶液。この生成物は、ヒスチジン、グリシンおよび注射用滅菌水とともに使い捨てバイアル中に処方され得る。例えば、使い捨てバイアルの各々は、１ｍＬ中に１００ｍｇの抗体がもたらされるように作られている１．２ｍＬの体積中に１００ｍｇの抗体、４．７ｍｇのヒスチジンおよび０．１ｍｇのグリシンとともに処方され得る。あるいは、使い捨てバイアルの各々は、０．５ｍＬ中に５０ｍｇの抗体がもたらされるように作られている、０．７ｍＬまたは０．５ｍＬの体積中に５０ｍｇの抗体、２．７ｍｇのヒスチジンおよび０．０８ｍｇのグリシンとともに処方され得る。
【０２０８】
特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、４℃で安定である。特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、室温で安定である。
【０２０９】
５．４．２．抗体半減期
特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の半減期は、少なくとも約４〜７日である。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の平均半減期は、少なくとも約２〜５日、３〜６日、４〜７日、５〜８日、６〜９日、７〜１０日、８〜１１日、８〜１２、９〜１３、１０〜１４、１１〜１５、１２〜１６、１３〜１７、１４〜１８、１５〜１９または１６〜２０日である。他の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の半減期は、約５０日までであり得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗体の半減期は、当該分野で公知の方法によって延長され得る。このような延長により、本発明の抗体組成物の投薬の量および／または頻度を次々と減少させていくことができる。改善されたインビボ半減期を有する抗体およびそれらを調製するための方法は、米国特許第６，２７７，３７５号；および国際公開ＷＯ９８／２３２８９およびＷＯ９７／３４６１に開示されている。
【０２１０】
インビボにおける本発明の抗ＣＤ１９抗体の血清循環は、不活性なポリマー分子（例えば、高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））を抗ＣＤ１９抗体に、多機能性リンカーを用いて、または用いずに結合することによって延長され得る。ここで、その結合は、上記ＰＥＧを上記抗体のＮ末端もしくはＣ末端に部位特異的に結合体化することによるものであるか、またはリシル残基上に存在するイプシロン−アミノ基を介した結合のいずれかである。生物学的活性の損失を最小にする直鎖状または分枝状のポリマー誘導体化が使用される。結合体化の程度をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって詳しくモニターすることにより、上記抗体へのＰＥＧ分子の適切な結合体化を確かめることができる。未反応ＰＥＧは、サイズ排除クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーによって抗体−ＰＥＧ結合体から分離され得る。ＰＥＧ誘導体化抗体は、当業者に公知の方法、例えば、本明細書中に記載するイムノアッセイを使用して、結合活性ならびにインビボにおける有効性について試験され得る。
【０２１１】
重鎖遺伝子および／または軽鎖遺伝子の核酸配列に１以上の変化を導入して、抗体のアミノ酸配列が変更することにより、所望のアミノ酸変化をもたらすことによって、組成物中の抗体の血漿半減期が延長され得る。このような変更としては、可変領域フレームワーク領域および／またはＦｃ定常領域における変更が挙げられ得るが、これらに限定されない。抗体遺伝子配列を変化させるための技術は、当該分野で周知である。
【０２１２】
さらに、インビボにおいてより安定であるか、またはインビボにおいてより長い半減期を有する抗体を作製するために、本発明の組成物および方法の抗体は、アルブミンと結合体化され得る。上記の技術は、当該分野で周知であり、例えば、国際公開番号ＷＯ９３／１５１９９、ＷＯ９３／１５２００およびＷＯ０１／７７１３７；および欧州特許第ＥＰ４１３，６２２号（これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。
【０２１３】
５．４．３．投与および投薬
本発明によれば、本明細書中の５．４．３節に記載される投与方法および用量の各々は、５．６．節に記載される抗ＣＤ１９免疫療法プロトコールに使用され得る。
【０２１４】
ヒト患者への本発明の組成物の投与は、任意の経路であり得る。その経路としては、静脈内、皮内、経皮的、皮下、筋肉内、吸入（例えば、エアロゾルによる）、頬側（例えば、舌下）、局所的（すなわち、皮膚と粘膜（気道表面を含む）の表面の両方）、鞘内、関節内、胸膜内（ｉｎｔｒａｐｌｕｒａｌ）、脳内、動脈内、腹腔内、経口、リンパ管内、鼻腔内、直腸または膣への投与、局所カテーテルを通した灌流または直接的な病変内への注入が挙げられるがこれらに限定されない。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、規定時間（例えば、０．５〜２時間）に亘る静脈内注入（ｐｕｓｈ）または静脈内注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）によって投与される。本発明の組成物は、蠕動性手段によってか、または持効性製剤の形態で送達され得るが、任意の所与の場合において、当該分野で周知であるような最も適した経路は、被験体の種、年齢、性別および全般的な状態、処置される状態の種類および重症度ならびに／または投与される特定の組成物の性質（すなわち、投与量、処方物）などの因子に依存する。特定の実施形態において、投与経路は、ある期間に亘って、１週間に１回または２回のボーラスまたは持続注入を介したものである。他の特定の実施形態において、投与経路は、必要に応じて１週間に１回または２回、１以上の部位（例えば、大腿、腰、殿部、腕）への皮下注入によるものである。１つの実施形態において、本発明の組成物および／または方法は、外来患者に投与される。
【０２１５】
特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、ｍｇ／ｋｇ患者体重の単位である。他の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、ｍｇ／ｋｇ患者除脂肪体重（すなわち、体脂肪含有量を引いた体重）の単位である。なおも他の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、ｍｇ／ｍ２患者体表面積の単位である。なおも他の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、患者に投与する用量あたりのｍｇの単位である。用量の任意の度量法が、本発明の組成物および方法と組み合わせて使用され得、投与量の単位は、当該分野で標準的な手段によって変換され得る。
【０２１６】
投与量は、被験体の年齢、性別、種および状態（例えば、自己免疫疾患または自己免疫障害の活性度）、細胞性抗体もしくは自己免疫性抗体の枯渇の所望の程度、処置されるべき疾患ならびに／または使用される特定の抗体もしくは抗原結合フラグメントを含む多くの因子に基づいて選択され得、また、投与量は、当業者によって決定され得ることを当業者は理解するだろう。例えば、本発明の組成物の有効量は、インビトロ試験システムまたは動物モデル（例えば、コトンラットまたはサル）試験システムから得られる用量反応曲線から推定され得る。抗体の効果を評価するためのモデルおよび方法は、当該分野で公知である（Ｗｏｏｌｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，８９（８）：２９９４−２９９８（１９９７）（この全体が本明細書中に参考として援用される））。特定の実施形態において、特定の自己免疫疾患または自己免疫障害について、抗体治療の分野における標準的な治療的レジメンは、本発明の組成物および方法とともに使用され得る。
【０２１７】
本発明の方法で使用され得る投薬レジメンの例としては、毎日、１週間に３回（間欠性）、毎週または１４日毎が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、投薬レジメンとしては、毎月の投薬または６〜８週間毎の投薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１８】
維持レジメンと比べて、一般に、最初の処置では投与量が多いことおよび／または投与の頻度が高いことを当業者は理解するだろう。
【０２１９】
本発明の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、Ｂ細胞に結合するため、より効果的な（すなわち、少ない投与量で）Ｂ細胞の枯渇（本明細書中に記載するように）がもたらされ得る。患者のＢ細胞表面上のヒトＣＤ１９の密度が高い場合、高い程度の結合が達成され得る。代表的な実施形態において、抗体の投与量（必要に応じて、薬学的組成物の一部としての薬学的に許容可能なキャリア中）は、少なくとも約０．０００５、０．００１、０．０５、０．０７５、０．１、０．２５、０．３７５、０．５、１、２．５、５、１０、２０、３７．５もしくは５０ｍｇ／ｍ２、および／または約５００、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３２５、３００、２７５、２５０、２２５、２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、６０、５０、３７．５、２０、１５、１０、５、２．５、１、０．５、０．３７５、０．１、０．０７５または０．０１ｍｇ／ｍ２未満である。特定の実施形態において、投与量は、約０．０００５〜約２００ｍｇ／ｍ２、約０．００１〜１５０ｍｇ／ｍ２、約０．０７５〜１２５ｍｇ／ｍ２、約０．３７５〜１００ｍｇ／ｍ２、約２．５〜７５ｍｇ／ｍ２、約１０〜７５ｍｇ／ｍ２および約２０〜５０ｍｇ／ｍ２である。関連する実施形態において、使用される抗ＣＤ１９抗体の投与量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。特定の実施形態において、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜１０、５〜１５、１０〜２０または１５〜２５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。特定の実施形態において、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜２０、３〜１５または５〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。好ましい実施形態において、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約５、６、７、８、９または１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。特定の実施形態において、抗体の単一投薬単位（必要に応じて、薬学的組成物の一部としての薬学的に許容可能なキャリア中）は、少なくとも約０．５、１、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８または２５０マイクログラム／ｍ２であり得る。他の実施形態において、用量は、１ｇ／単一投薬単位までである。
【０２２０】
上記用量のすべては、例示であり、本発明の組成物および方法と組み合わせて使用され得るが、しかしながら、トキシンまたは放射性治療薬と組み合わせて抗ＣＤ１９抗体を使用する場合、上記の用量よりも低い用量が好ましい。特定の実施形態において、患者が低いレベルのＣＤ１９密度を有する場合、上記の用量よりも低い用量が好ましい。
【０２２１】
本発明の特定の実施形態において、キメラ抗ＣＤ１９抗体を使用する場合、そのキメラ抗体の用量または量は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６ｍｇ／ｋｇ患者体重よりも多い。本発明の他の実施形態において、キメラ抗ＣＤ１９抗体を使用する場合、そのキメラ抗体の用量または量は、約１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２または０．１ｍｇ／ｋｇ患者体重未満である。
【０２２２】
本発明の方法のいくつかの実施形態では、本発明の抗体および／または組成物は、約３７５ｍｇ／ｍ２より少ない用量；約３７．５ｍｇ／ｍ２より少ない用量；約０．３７５ｍｇ／ｍ２より少ない用量および／または約０．０７５ｍｇ／ｍ２〜約１２５ｍｇ／ｍ２の用量で投与され得る。本発明の方法の好ましい実施形態において、投与レジメンは、低用量を含み、複数の間隔で投与される。例えば、１つの実施形態において、本発明の組成物は、約３７５ｍｇ／ｍ２より少ない用量で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５または２００日ごとの間隔で投与され得る。
【０２２３】
明記される投薬により、少なくとも約１、２、３、５、７、１０、１４、２０、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０または１８０日以上の期間に亘って本発明の組成物および方法を使用して処置されるヒトにおいてＢ細胞枯渇をもたらすことができる。特定の実施形態において、プレＢ細胞（表面免疫グロブリンを発現していない）を枯渇する。特定の実施形態において、成熟Ｂ細胞（表面免疫グロブリンを発現している）を枯渇する。他の実施形態において、非悪性タイプのＢ細胞のすべてが、枯渇を示し得る。これらのタイプのＢ細胞いずれかを使用して、Ｂ細胞枯渇を測定することができる。Ｂ細胞枯渇は、体液（例えば、血液血清または骨髄などの組織）において測定され得る。本発明の方法の好ましい実施形態において、Ｂ細胞は、本発明の組成物および方法を使用する前の処置される患者におけるＢ細胞レベルと比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％枯渇する。本発明の方法の好ましい実施形態において、Ｂ細胞は、ヒトの代表的な標準的Ｂ細胞レベルと比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％枯渇する。関連する実施形態において、ヒトについての代表的な標準的Ｂ細胞レベルは、年齢、性別、体重および他の因子に関して、処置される患者と比較できる患者を使用して測定される。
【０２２４】
本発明の特定の実施形態において、約１２５ｍｇ／ｍ２以下の抗体または抗原結合フラグメントの投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０または２００日間に亘ってＢ細胞枯渇がもたらされる。別の代表的な実施形態において、約３７．５ｍｇ／ｍ２以下の投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０または２００日間に亘ってＢ細胞が枯渇する。なおも他の実施形態において、約０．３７５ｍｇ／ｍ２以下の投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５または６０日間に亘ってＢ細胞の枯渇がもたらされる。別の実施形態において、約０．０７５ｍｇ／ｍ２以下の投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０または２００日間に亘るＢ細胞の枯渇がもたらされる。なおも他の実施形態において、約０．０１ｍｇ／ｍ２、約０．００５ｍｇ／ｍ２または約０．００１ｍｇ／ｍ２以下の投薬でさえも、少なくとも約３、５、７、１０、１４、２１、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０または２００日間、Ｂ細胞が枯渇する。これらの実施形態によれば、上記投薬を、任意の適当な経路によって投与することができるが、必要に応じて、皮下経路によって投与してもよい。
【０２２５】
別の態様として、本発明は、Ｂ細胞枯渇および／またはＢ細胞障害の処置が、現在利用可能な方法で使用されている用量よりも低い用量の抗体または抗体フラグメントによって達成され得るという発見を提供する。従って、別の実施形態において、本発明は、Ｂ細胞を枯渇する方法および／またはＢ細胞障害を処置する方法を提供し、その方法は、ＣＤ１９と特異的に結合する抗体の有効量をヒトに投与する工程を含み、ここで、約５００、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３２５、３００、２７５、２５０、２２５、２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、６０、５０、３７．５、２０、１０、５、２．５、１、０．５、０．３７５、０．２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．００１、０．０００５ｍｇ／ｍ２以下の投薬により、少なくとも約３、５、７、１０、１４、２１、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０、１８０または２００日以上に亘って２５％、３５％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上のＢ細胞（循環Ｂ細胞および／または組織Ｂ細胞）の枯渇がもたらされる。代表的な実施形態において、約１２５ｍｇ／ｍ２または７５ｍｇ／ｍ２以下の投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０、６０、７５、９０、１２０、１５０または１８０日間、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％のＢ細胞の枯渇がもたらされる。他の実施形態において、約５０、３７．５または１０ｍｇ／ｍ２の投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０、６０、７５、９０、１２０または１８０日間、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％のＢ細胞の枯渇がもたらされる。なおも他の実施形態において、約０．３７５または０．１ｍｇ／ｍ２の投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０、６０、７５または９０日間、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％のＢ細胞の枯渇がもたらされる。さらなる実施形態において、約０．０７５、０．０１、０．００１または０．０００５ｍｇ／ｍ２の投薬により、少なくとも約７、１４、２１、３０または６０日間、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％のＢ細胞の枯渇がもたらされる。
【０２２６】
本発明の特定の実施形態において、上記用量を増大させるか、または減少させることにより、血液または組織（例えば、骨髄が挙げられるがこれらに限定されない）中で一定用量を維持することができる。関連する実施形態において、本発明の組成物および方法の抗体の所望のレベルを維持するために、上記用量を約２％、５％、８％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および９５％増大または減少させる。
【０２２７】
特定の実施形態において、投薬を、調節することができ、そして／または本発明の組成物および方法に対する患者の免疫原性応答に基づいて注入速度を遅くすることができる。
【０２２８】
本発明の方法の１つの態様によれば、抗ＣＤ１９抗体および／または本発明の組成物の負荷投与量を、初めに投与し得、その後、処置される自己免疫疾患または自己免疫障害が進行するまで維持用量を投与し得るか、または規定の処置経過（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨＴＭ、ＭＹＬＯＴＡＲＧＴＭまたはＲＩＴＵＸＡＮＴＭ（最後のものは、さらなるデータが得られる場合、増加させた規定数の用量について患者を処置することが可能である）を続け得る。
【０２２９】
本発明の方法の別の態様によれば、患者は、免疫原性応答を検出するためか、免疫原性応答を最小にするためか、または本発明の組成物および方法の有害作用を最小にするために本発明の組成物および方法で前処置され得る。
【０２３０】
５．４．４．毒性試験
例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死の用量）、ＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）およびＩＣ５０（５０％阻害を達成するのに有効な用量）を決定するために、本発明の組成物および／または処置レジメンの寛容、毒性および／または有効性を、細胞培養物または実験動物において標準的な薬学的手順によって測定し得る。好ましい実施形態において、上記用量は、循環Ｂ細胞もしくは循環免疫グロブリンまたはその両方の枯渇を少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％達成するのに有効な用量である。毒性作用と治療的作用との用量比は、治療用の指標であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表され得る。大きな治療的指標を示す治療が好ましい。有毒な副作用を示す治療を使用し得る場合、ＣＤ１９を有しない細胞に対する損傷の可能性を最小にすることによって、副作用を低減するためにそのような因子をＣＤ１９発現細胞に標的化する送達系を想定するような治療がなされるべきである。
【０２３１】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、組成物の一連の投薬および／またはヒトにおける使用についての処置レジメンを処方する際に使用され得る。そのような因子の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたは全くないＥＤ５０を含む一連の循環濃度内である。投与量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。本発明の方法に使用される任意の治療について、治療的に有効な用量は、適切な動物モデルによって推定され得る。動物モデルの種に依存して、用量は、例えば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，ＮＣＩ  ４０：２１９−２４４（１９６６）に提供されているような当該分野で認められている式に従って、ヒトにおいて使用するために見積もられる。細胞培養アッセイから得られるデータは、潜在的な毒性を予測するために有用であり得る。動物研究は、細胞培養において決定されたようなＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度の範囲を達成する特定の用量を処方するために使用され得る。このような情報を使用して、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿薬物レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー、ＥＬＩＳＡまたは細胞ベースのアッセイにおいて測定され得る。
【０２３２】
５．５．患者診断、活性および治療用のレジメン
本発明の特定の態様によれば、本発明の組成物および方法とともに使用される処置レジメンおよび用量は、多くの因子に基づいて選択される。その因子としては、処置される自己免疫疾患または自己免疫障害の段階が挙げられるがこれらに限定されない。患者または患者集団における自己免疫疾患または自己免疫障害の特定の段階に対する適切な処置レジメンが、当業者によって決定され得る。様々な段階の自己免疫疾患または自己免疫障害を有する患者を処置するための本発明の組成物の有効量を決定するために、当該分野の標準的なプロトコールを使用して、用量反応曲線を作成することができる。一般に、自己免疫疾患または自己免疫障害の活性がより高い患者は、自己免疫疾患または自己免疫障害の活性が低い患者と比較して、より長い期間にわたって投与され得る、より多い用量の投薬および／またはより高い頻度の投薬が必要である。
【０２３３】
本発明の抗ＣＤ１９抗体、組成物および方法を使用して、自己免疫疾患または自己免疫障害が処置され得る。用語「自己免疫疾患または自己免疫障害」とは、被験体自身の細胞、組織および／または器官に対する被験体の免疫学的反応によって引き起こされる、細胞、組織および／または器官の損傷を特徴とする被験体における状態のことをいう。用語「炎症性疾患」は、炎症、好ましくは慢性炎症を特徴とする被験体における状態のことをいうための用語「炎症性障害」と交換可能に使用される。自己免疫障害は、炎症を伴う場合もあるし、伴わない場合もある。さらに、炎症は、自己免疫障害によって引き起こされる場合もあるし、引き起こされない場合もある。従って、ある特定の障害が、自己免疫性障害と炎症性障害の両方として特徴付けられ得る。代表的な自己免疫疾患または自己免疫障害としては、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および自己免疫性睾丸炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡（ｃｉｃａｔｒｉｃａｌ  ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素病、クローン病、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、糖尿病、好酸球性筋膜炎（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ｆａｓｃｉｔｅｓ）、線維筋痛症−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーヴズ病、ギランバレー、橋本病、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性肺線維症、特発性／自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパシー、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデス（ｌｕｐｕｓ  ｅｒｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、メニエール病、混合結合組織病、多発性硬化症、１型糖尿病または免疫媒介性真性糖尿病、重症筋無力症、天疱瘡関連障害（例えば、尋常性天疱瘡）、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎（ｐｏｌｙｃｈｒｏｎｄｒｉｔｉｓ）、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー（Ｒａｙｎａｕｌｄ’ｓ）現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身硬直症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、スウィート症候群、スティル病、エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ  ａｒｔｅｒｉｓｔｉｓ）／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、疱疹状皮膚炎血管炎などの血管炎、白斑ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられるがこれらに限定されない。炎症性障害の例としては、喘息、脳炎（ｅｎｃｅｐｈｉｌｉｔｉｓ）、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー性障害、敗血症性ショック、肺線維症、未分化型（ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｔａｔｅｄ）脊椎関節症、未分化型関節症、関節炎、炎症性骨溶解、移植片対宿主病、じんま疹、Ｖｏｇｔ−Ｋｏｙａｎａｇｉ−Ｈａｒｅｄａ症候群および慢性ウイルス感染症または慢性細菌感染症から生じる慢性炎症が挙げら���るが、これらに限定されない。
【０２３４】
ＣＤ１９は、成熟Ｂ細胞上で発現し、例えば、ＣＤ２０よりも早い分化段階のＢ細胞において発現するため、例えば、骨髄中のプレＢ細胞および未成熟Ｂ細胞（すなわち、細胞表面上にＩｇを発現していないＢ細胞）を枯渇させるのに特に適している。
【０２３５】
５．５．１．自己免疫疾患または自己免疫障害の診断
自己免疫疾患または自己免疫障害の診断は、それぞれのタイプの自己免疫疾患または自己免疫障害が患者の間で異なって現れるという点で複雑になる。この症状の異質性は、代表的には複数の因子を使用して、臨床診断に至ることを意味する。一般に、臨床医は、因子（例えば、自己抗体の存在、サイトカインレベルの上昇、特定の器官の機能不全、発疹、関節腫脹、疼痛、骨再形成および／または運動性の低下が挙げられるがこれらに限定されない）を自己免疫疾患または自己免疫障害の主要な指標として使用する。ＲＡおよびＳＬＥなどの特定の自己免疫疾患または自己免疫障害についての診断の基準は、当該分野で公知である。特定の自己免疫疾患または自己免疫障害について、疾患の段階が特徴付けられており、それは当該分野で周知である。当該分野で周知の疾患の段階ならびに活性のスケールおよび／または疾患の重症度と同様に自己免疫疾患および自己免疫障害を診断するための当該分野で認識されている方法を使用して、本発明の組成物および方法を使用した自己免疫疾患または自己免疫障害に対する処置が必要な患者および患者集団を同定することができる。
【０２３６】
５．５．２．自己免疫疾患または自己免疫障害を診断するための臨床基準
様々な自己免疫疾患または自己免疫障害についての診断基準が当該分野で公知である。これまで、診断は、代表的には、身体的症状の組み合わせに基づくものであった。より最近では、遺伝子発現プロファイリングなどの分子技術を適用することにより、自己免疫疾患または自己免疫障害の分子定義が開発されている。特定の自己免疫疾患または自己免疫障害についての臨床診断の代表的な方法を、下に提供する。他の適当な方法は、当業者に明らかであろう。
【０２３７】
本発明の特定の実施形態において、自己免疫疾患の活性レベルが低い患者または初期の自己免疫疾患である患者（段階が判明している疾患について）は、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物および方法を使用した処置の対象と同定され得る。自己免疫疾患の初期の診断は、その症状が一般的であることおよび疾患間の症状が重複していることに起因して、困難である。このような実施形態において、初期の段階で処置される患者または自己免疫疾患活性のレベルが低い患者は、自己免疫疾患または自己免疫障害の少なくとも１つの症状を含む症状を有する。関連する実施形態において、初期の段階で処置される患者または自己免疫疾患活性のレベルが低い患者は、自己免疫疾患または自己免疫障害の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個の症状を含む症状を有する。それらの症状は、任意の自己免疫疾患および自己免疫障害の症状またはそれらの組み合わせであり得る。自己免疫疾患および自己免疫障害の症状の例を、下に記載する。
【０２３８】
５．５．２．１．関節リウマチ
関節リウマチは、主に関節の裏打ち（ｌｉｎｉｎｇ）または滑膜の炎症を特徴とする慢性疾患である。関節リウマチは、長期間に亘る関節の損傷を引き起こすことにより、慢性疼痛、機能喪失および障害を生じ得る。関節リウマチに対する処置が必要である患者または患者集団を同定することは、１つのプロセスである。関節リウマチが陽性であるか、または陰性であるとの診断をもたらすような確定的な検査は存在しない。臨床医は、病歴、理学的検査、研究室における検査およびＸ線を含む多くのツールに頼る。
【０２３９】
身体的症状は、患者間で広く異なり、その症状としては、通常、関節腫脹、関節の圧痛、関節の動きの低下、関節のアライメント不良、骨再形成、疲労、硬直（特に、朝および長時間座っているとき）、虚弱、インフルエンザに似た症状（微熱を含む）、長時間の着座に伴う疼痛、緩解または疾患不活性の前の疾患活性の発赤の発生、リウマチ小結節または皮膚下組織の塊（代表的には肘関節に見られ、それはより重篤な疾患活性を示唆し得る）、筋痛、食欲不振、うつ、体重減少、貧血、手足の冷えおよび／または汗ばみならびに涙および唾液の産生の低下を生じる眼および口の周辺の腺の介入（シェーグレン症候群）が挙げられるが、これらに限定されない。特に、シェーグレン症候群については、以下の参考文献が使用され得る。Ｆｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，（１９８６）２９：５７７−５８６，およびＶｉｔａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，（２００２）．６１：５５４−５５８。
【０２４０】
身体的症状とは別に、臨床医は、通常、検査（例えば、全血球計算値、赤血球沈降速度（ＥＳＲまたは沈降速度）、Ｃ反応性タンパク質、リウマチ因子、抗ＤＮＡ抗体、抗核抗体（ＡＮＡ）、抗カルジオリピン抗体、画像化研究、Ｘ線写真（Ｘ線）、関節または器官の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、関節超音波、骨スキャンおよび骨密度測定（ＤＥＸＡ）が挙げられるがこれらに限定されない）を使用する。これらの検査は、存在し得る異常を調べる（すなわち、処置を必要とする患者または患者集団を同定する）ため、または薬物の副作用をモニターするためおよび進行を調べるために本発明の組成物および方法と組み合わせて使用され得る検査の例である。
【０２４１】
関節リウマチの初期の症状は、通常、指、手および手首の小さい関節に見られる。関節の介入は、通常、対称的であり、これは、左手の関節が損傷すると、右手の同じ関節が損傷することになるということを意味する。一般に、関節の侵食が多くなるにつれて、疾患活性がより重篤になる。
【０２４２】
より進行した疾患活性の症状としては、変形を引き起こす軟骨、腱、靭帯および骨に対する損傷ならびに関節の不安定性が挙げられる。その損傷によって、動きの範囲が制限されることになり、日常的な作業（フォークを握る、髪の毛を梳かす、シャツのボタンをかける）がより困難になっていく。皮膚潰瘍、感染に対する高い罹患率および健康状態の全般的な低下もまた、より進行した疾患活性の指標である。
【０２４３】
関節リウマチの進行は、通常、３つの段階に分割される。第１の段階は、疼痛、温覚、硬直、赤みおよび関節周辺の腫れを引き起こす滑膜の裏打ちの腫れである。第２の段階は、細胞の急速な分裂および増殖または滑膜を肥厚させるパンヌスである。第３の段階では、炎症性細胞が、骨および軟骨を消化し得る酵素を放出し、それにより、関与する関節の形状およびアラインメントが失われ、ひどい疼痛および運動性の低下がもたらされることが多い。
【０２４４】
分子技術を使用することによってもまた、処置を必要とする患者または患者集団を同定することができる。例えば、関節リウマチは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−ＤＲ４およびＨＬＡ−ＤＲＢ１遺伝子の対立遺伝子多型と関連することが示されている（Ｏｉｌｉｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｎｃｈｅｓｔｅｒ，１９９９，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；Ｓｔａｓｔｎｙ，１９７８，Ｎ．Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２９８：８６９−８７１；およびＧｒｅｇｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ３０：１２０５−１２１３）。関節リウマチ患者は、２つの疾患関連ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊０４対立遺伝子を発現していることが多い（Ｗｅｙａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２  Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １１７：８０１−８０６）。当該分野で標準的な方法を使用して対立遺伝子多型について患者を検査することができる。ＭＨＣ遺伝子は、ＲＡに対する感受性に影響を与える、生殖細胞系列によってコードされる唯一の遺伝子ではないが、処置を必要とする患者または患者集団を診断または同定するために使用され得る。女性であることが、明らかに関節リウマチの危険性を高め、そして女性患者は、男性患者よりも疾患の様々な表現型を示す。関節リウマチの任意の分子指標を使用して、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物および方法を用いた処置を必要とする患者または患者集団を同定することができる。
【０２４５】
活性のスケールに関して患者における関節リウマチの活性を測定するための方法は、当該分野で周知であり、本発明の薬学的組成物および方法と関連して使用され得る。例えば、米国リウマチ学会分類基準（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｉｓｔｓ  Ｓｃｏｒｅ；ＡＣＲスコア）を使用して、患者または患者集団の関節リウマチの活性を決定することができる。この方法によれば、患者は、改善と相関するスコアが与えられる。例えば、ＡＣＲによって定義されたファクターにおいて２０％改善した患者は、ＡＣＲ２０スコアが与えられる。
【０２４６】
関節リウマチの症状を示している患者は、最初に鎮痛薬で処置され得る。他の実施形態において、関節リウマチと診断された患者または関節リウマチの症状を示す患者は、最初に非ステロイド系抗炎症性（ＮＳＡＩＤ）化合物で処置される。その疾患が進行しているとき、および／またはその症状の重症度が増しているとき、関節リウマチは、ステロイド（例えば、デキサメタゾンおよびプレドニゾンであるがこれらに限定されない）の投与によって処置され得る。より重篤な場合は、関節リウマチの症状を軽減するために化学療法剤（例えば、メトトレキサートまたはサイトキシンであるがこれらに限定されない）が、投与され得る。
【０２４７】
特定の場合において、関節リウマチは、金の投与によって処置され得るが、他の場合において、抗体またはレセプター（またはレセプターアナログ）などの生物学的物質が投与され得る。このような治療用抗体の例は、ＲｉｔｕｘｉｎおよびＲｅｍｉｃａｄｅである。関節リウマチを処置するために投与され得る可溶性レセプターの代表例は、Ｅｎｂｒｅｌである。
【０２４８】
関節リウマチの極度に重篤な場合は、外科手術が必要となることがある。外科的アプローチとしては、患部滑膜または関節の裏打ちを除去することによって炎症組織の量を減少させる滑膜切除術；組織サンプルを取り出すか、はがれた軟骨を除去するか、断裂を修復するか、粗い表面を滑らかにするか、または患部滑膜組織を除去する、関節鏡視下手術；骨切り術（「骨を切断すること」という意味で、この手順は、関節にかかる体重を再分配することによって安定度を高めるために使用される）；再建手術もしくは関節の置換のための関節置換術または関節形成術；あるいは関節固定術もしくは２本の骨を一緒して融合する融合術が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４９】
本発明の方法の特定の実施形態において、患者は、上記のいずれかの治療の前、治療中または治療後に抗ＣＤ１９抗体で処置され得る。さらに、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上で述べた鎮痛薬、ＮＳＡＩＤ、ステロイドまたは化学療法剤のいずれかと組み合わせて、ならびに、関節リウマチを処置するために投与される生物学的物質と組み合わせて投与され得る。
【０２５０】
５．５．２．２．全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、関節、筋肉および他の身体の部分に影響を及ぼす慢性（持続性）リウマチ性疾患である。ＳＬＥの処置を必要とする患者または患者集団は、身体的症状を調べることおよび／または研究室の検査結果によって同定され得る。身体的症状は、患者間で大きく異なる。例えば、ＳＬＥでは、代表的には、患者がＳＬＥと診断される前に以下の１１の症状のうち４つが存在する：１）頬部発疹：頬の発疹；２）円板状の発疹：赤い斑が生じる；３）羞明：太陽光に対する反応、それにより、皮膚発疹を起こすか、または皮膚発疹が広がる；４）口腔潰瘍：鼻または口の内部の潰瘍、通常、無痛；５）関節炎：２以上の末梢関節に関与する非びらん性関節炎（関節周辺の骨が破壊されない関節炎）；６）漿膜炎胸膜炎または心膜炎：（肺または心臓の裏打ちの炎症）；７）腎障害：尿中の過剰タンパク質（０．５ｇ／日超またはテストスティック上の３＋）および／または細胞円柱（赤血球細胞および／もしくは白血球細胞ならびに／または腎臓尿細管細胞由来の尿の異常な成分）；８）神経性障害：てんかん発作（痙攣）および／またはそのような作用を引き起こすことが知られている薬物または代謝障害のない精神病；９）血液学的障害：溶血性貧血または白血球減少症（４，０００細胞／立方ミリメートル未満の白血球数）またはリンパ球減少症（１，５００リンパ球／立方ミリメートル未満）または血小板減少症（１００，０００血小板／立方ミリメートル未満）（白血球減少症およびリンパ球減少症は、２回以上検出されていなければならない。血小板減少症は、それを誘導することが知られている薬物が存在しない状況で検出されなければならない）；１０）抗核抗体：それを誘導することが知られている薬物が存在しない状況で抗核抗体（ａｎａ）についての検査が陽性、ならびに／あるいは１１）免疫性障害：抗二本鎖抗ＤＮＡ検査が陽性、抗ｓｍ検査が陽性、抗カルジオリピンなどの抗リン脂質抗体が陽性または梅毒検査（ｖｄｒｌ）が偽陽性。
【０２５１】
ＳＬＥを示唆し得る他の身体的症状としては、貧血、疲労、発熱、皮膚発疹、筋痛、悪心、嘔吐および下痢、腫大した腺、食欲不振、冷たいと感じる（レイノー現象）、および体重減少が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５２】
研究室の検査はまた、処置を必要とする患者または患者集団を同定するために使用され得る。例えば、血液検査は、ＳＬＥを有するほぼすべての人の血液中に見られる自己抗体を検出するために使用され得る。このような検査としては、それを誘導することが知られている薬物が存在しない状況下での抗核抗体（ＡＮＡ）（Ｒａｈｍａｎ，Ａ．ａｎｄ  Ｈｉｅｐｅ，Ｆ．，Ｌｕｐｕｓ．（２００２），ｌｌ（１２）：７７０−７７３）、抗二本鎖抗ＤＮＡ（Ｋｅｒｅｎ，Ｄ．Ｆ．，Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．，（２００２），２２（２）：４４７−４７４．）、抗Ｓｍ、抗カルジオリピンなどの抗リン脂質抗体（Ｇｅｚｅｒ，Ｓ．Ｄｉｓ．Ｍｏｎ．，２００３，４９（１２）：６９６−７４１）についての検査または梅毒（ＶＤＲＬ）検査の偽陽性が挙げられ得るがこれらに限定されない。
【０２５３】
他の検査としては、血液中を循環している補体タンパク質の量を測定するために使用され得る補体検査（Ｃ３、Ｃ４、ＣＨ５０、ＣＨ１００）（Ｍａｎｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ，２００４，１３（５）：２９８−３０３）、炎症レベルを測定するために使用され得る沈降速度（ＥＳＲ）またはＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、腎臓問題を検出するために使用され得る尿解析、肺損傷を検出するために撮影され得る胸部Ｘ線および心臓問題を検出するために使用され得るＥＫＧが挙げられ得る。
【０２５４】
慢性ＳＬＥは、付帯的損害を関係器官、特に腎臓に蓄積することに関与する。従って、初期の治療用介入が望ましく、すなわち、例えば、腎不全の前の治療用介入が望ましい。ＳＬＥに対して利用可能な処置は、関節リウマチに対して利用可能な処置と類似している。これらとしては、鎮痛性または非ステロイド性のいずれかの抗炎症性（ＮＳＡＩＤ）化合物による初期の処置が挙げられる。疾患が進行し、そして／またはその症状の重症度が増すと、ＳＬＥは、ステロイド（例えば、デキサメタゾンおよびプレドニゾンであるがこれらに限定されない）の投与によって処置され得る。
【０２５５】
より重篤な場合は、ＳＬＥの症状を軽減するために化学療法剤（例えば、メトトレキサートまたはサイトキシンであるがこれらに限定されない）を投与し得る。しかしながら、このアプローチは、患者が妊娠可能年齢の女性である場合、好ましくない。そのような場合は、患者の生殖能力を干渉しない治療用アプローチが、非常に好ましい。
【０２５６】
特定の場合では、ＳＬＥは、抗体またはレセプター（またはレセプターアナログ）などの生物学的物質の投与によって処置され得る。そのような治療用抗体の例は、ＲｉｔｕｘｉｎおよびＲｅｍｉｃａｄｅである。ＳＬＥを処置するために投与され得る炎症性サイトカインに対する可溶性レセプターの代表例は、Ｅｎｂｒｅｌである。
【０２５７】
本発明の方法の特定の実施形態において、患者は、ＳＬＥの処置に使用される上記のいずれかの治療の前、治療中または治療後に抗ＣＤ１９抗体で処置され得る。さらに、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上で述べた鎮痛薬、ＮＳＡＩＤ、ステロイドまたは化学療法剤のいずれかと組み合わせて、ならびに、ＳＬＥを処置するために投与される生物学的物質と組み合わせて投与され得る。
【０２５８】
５．５．２．３．特発性／自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）
特発性／自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）は、血小板細胞と相互作用し、そしてその血小板細胞を破壊する免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）自己抗体を特徴とする血液の障害である。代表的には、その抗体は、血小板膜糖タンパク質に特異的である。その障害は、急性（一時的、２ヶ月未満の継続）であることもあり、または慢性（６ヶ月より長く持続する）であることもある。ＩＴＰの処置を必要とする患者または患者集団は、患者の病歴、身体的症状および／または研究室の検査結果を調べることによって同定され得る（Ｐｒｏｖａｎ，Ｄ．，ａｎｄ  Ｎｅｗｌａｎｄ，Ａ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．（２００２），１１８（４）：９３３−９４４；Ｇｅｏｒｇｅ，Ｊ．Ｎ．，Ｃｕｒｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ（２００３），２（５）：３８１−３８７；Ｋａｒｐｔｋｉｎ，Ｓ．，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．（２００４），３７（４）：３６３−３６８；Ｃｉｎｅｓ，Ｄ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｂｌａｎｃｈｅｔｔｅ，Ｖ．Ｓ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ（２００２），３４６（１３）９９５−１００８）。
【０２５９】
身体的症状としては、紫がかって見える皮膚および粘膜（口の裏打ちなど）の領域が挙げられ、その部分では、出血が起き、結果として、血小板細胞数が減少する。主な症状は、出血であり、挫傷（「斑状出血」）および皮膚または粘膜上の小さな赤い斑点（「点状出血」）が挙げられ得る。いくつかの場合において、鼻、歯肉、消化管または尿路からの出血も起きることがある。稀に、脳内で出血が起きる。通常の徴候、症状および増悪因子としてはまた、突発性の発症（小児ＩＴＰ）、漸進的な発症（成人ＩＴＰ）、触知不可能な点状出血、紫斑、月経過多、鼻出血、歯肉出血、粘膜上の易出血性水疱、ＧＩ出血の徴候、機能性子宮出血、頭蓋内出血のエビデンス、触知不可能な脾臓、網膜の出血、最近の生ウイルス免疫（小児ＩＴＰ）、最近のウイルス疾病（小児ＩＴＰ）、血小板数が２０，０００／ｍｍ３未満のときの自発性出血および挫傷の傾向が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６０】
ＩＴＰを診断するために使用され得る研究室の検査としては、全血球計算値検査、または骨髄中に適切な血小板形成細胞（巨核球）が存在することを確認するためならびに転移性癌および白血病などの他の疾患を除外するための骨髄検査が挙げられるが、これらに限定されない。単一性の血小板減少症は、研究室での評価に関して重要な知見である。末梢血スメアにおける巨大な血小板は、先天性血小板減少症を示唆する。頭蓋内出血に関する懸念がある場合、頭部ＣＴスキャンによって、保証され得る。
【０２６１】
ＩＴＰのための現在の処置としては、血小板輸血および脾臓摘出が挙げられる。他の処置としては、糖質コルチコイドの投与、免疫抑制剤の投与、血小板産生を促進する因子（例えば、ＩＬ−１１）および血小板を産生する巨核球を活性化する因子（例えば、トロンボポエチン（ＴＰＯ））の投与が挙げられる。
【０２６２】
より重篤な場合は、ＩＴＰの症状を軽減するために、化学療法剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチンであるがこれらに限定されない）を投与し得る。しかしながら、このアプローチは、患者が妊娠可能年齢の女性である場合、好ましくない。そのような場合は、患者の生殖能力を干渉しない治療用アプローチが、非常に好ましい。
【０２６３】
特定の場合では、ＩＴＰは、抗体またはレセプター（またはレセプターアナログ）などの生物学的物質の投与によって処置され得る。このような治療用抗体の例は、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体である。
【０２６４】
本発明の方法の特定の実施形態において、患者は、ＩＴＰの処置に使用される上記のいずれかの治療の前、治療中または治療後に抗ＣＤ１９抗体で処置され得る。さらに、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上で述べた因子のいずれかと組み合わせて、ならびに、ＩＴＰを処置するために投与される生物学的物質と組み合わせて投与され得る。
【０２６５】
５．５．２．４．天疱瘡関連障害および類天疱瘡関連障害
天疱瘡関連障害と類天疱瘡関連障害の両方が、皮膚および／または粘膜表面の水疱形成状態を特徴とする自己免疫疾患の異種群である。両方の疾患において、水疱形成は、真皮および／または表皮の上皮細胞の表面上に発現している様々なタンパク質を認識する自己免疫性抗体によって引き起こされる。
【０２６６】
天疱瘡関連疾患を有する患者において、水疱形成は、表皮内で起き、デスモグレイン１（Ｄｓｇ１）および／またはデスモグレイン３（Ｄｓｇ３）に特異的な自己抗体の結合に起因する。天疱瘡の古典的なサブタイプは、抗デスモグレイン抗体の特異性によって識別され得る。落葉状天疱瘡（ＰＦ）を有する患者は、抗Ｄｓｇ１抗体のみを産生する。尋常性天疱瘡（ＰＶ）および腫瘍随伴性天疱瘡（ＰＮＰ）を有する患者は、その病変が粘膜組織に限定されている場合、抗Ｄｓｇ３抗体を産生する。対照的に、皮膚および粘膜の病変を有するＰＶおよびＰＮＰ患者は、抗Ｄｓｇ１自己抗体と抗Ｄｓｇ３自己抗体の両方を産生する（Ｎａｇａｓａｋａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２００４，１１４：１４８４−１４９２；Ｓｅｉｓｈｅｍａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２００４．１４０（１２）：１５００−１５０３；Ａｍａｇａｉ，Ｍ．，ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ，１９９９．２０（２）：９２−１０２）。
【０２６７】
類天疱瘡関連疾患（類天疱瘡（ｂｕｌｏｕｓ  ｐｈｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、じんま疹類天疱瘡（ｕｒｔｉｃａｒｉａｌ  ｂｕｌｌｏｕｓ  ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、瘢痕性類天疱瘡、後天性表皮水疱症および線状ＩｇＡ水疱症が挙げられるがこれらに限定されない）を有する患者において、水疱形成は、表皮と真皮との界面に生じる。類天疱瘡疾患の最も通常な形態は、水疱性類天疱瘡抗原１８０（ＢＰ１８０）、水疱性類天疱瘡抗原２３０（ＢＰ２３０）、ラミニン５および／またはベータ４インテグリンと結合する自己抗体の存在を特徴とする類天疱瘡（ＢＰ）である（Ｆｏｎｔａｏ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．２００３），１４（５）：１９７８−１９９２；Ｃｈａｌｌａｃｏｍｂｅ，Ｓ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｏｄｏｎｔｏｌ  Ｓｃａｎｄ．（２００１），５９（４）：２２６−２３４．）。
【０２６８】
天疱瘡関連障害または類天疱瘡関連障害の処置を必要とする患者または患者集団は、患者の病歴、身体的症状および／または研究室の検査結果を調べることによって同定され得る（概説：Ｍｕｔａｓｉｍ，Ｄ．Ｆ．，Ｄｒｕｇｓ  Ａｇｉｎｇ．（２００３），２０（９）：６６３−６８１；Ｙｅｈ，Ｓ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２００３），１６（３）：２１４−２２３；Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｔｚ，Ｗ．Ｓ．，Ｖｅｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１５（２）：９０−９８．）。
【０２６９】
代表的には、これらの天疱瘡関連障害または類天疱瘡関連障害の診断は、皮膚バイオプシーによってなされる。バイオプシー皮膚サンプルは、疱疹（例えば、表皮または真皮と表皮の間）の解剖学的部位を顕微鏡で決定するために調べられる。これらの知見は、病変の部位における自己抗体の存在を検出する直接的または間接的な免疫組織化学的解析と相関する。患者由来の血清サンプルもまた、特定のタンパク質についてＥＬＩＳＡベースの検査を使用して、循環自己抗体の存在について調べられ得る。ヒトサンプル中のデスモグレイン抗体を検出するためのいくつかのＥＬＩＳＡベースのアッセイが、報告されている（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｒｅｓ．（２００３），２９５Ｓｕｐｐｌ．１：Ｓ２−１１）。バイオプシーサンプル中のこれらのデスモグレイン自己抗体が存在する場合、天疱瘡と診断される。
【０２７０】
臨床的には、尋常性天疱瘡は、口腔内の疱疹の存在によって診断され得る。炎症またはびらんは、眼および眼瞼の裏打ちならびに鼻または生殖管の膜にも存在し得る。半数の患者は、皮膚、しばしば、鼠径部、腋下、顔面、頭皮および胸部にも疱疹またはびらんを発症する。落葉状天疱瘡は、表層性で、天疱瘡の比較的穏やかな形態である。落葉状天疱瘡は、通常、顔面および頭皮上に現れるが、背中および胸部も関わる。病変は、口腔内には生じない。疱疹は、最外側の表面に限局されることが多く、かゆみを伴うことが多い。腫瘍随伴性天疱瘡は、非常に稀であり、一般に癌を有する人に起きる。この病変は、有痛性であり、皮膚と同様に口腔、口唇および食道（嚥下管）に生じる。気道が関与するため、呼吸器疾患の徴候が生じ得、生命を危うくすることがある。
【０２７１】
天疱瘡関連疾患または類天疱瘡関連疾患の現在の処置としては、皮膚状態に関連する不快感を軽減するためのクリーム剤および軟膏の局所的適用、抗炎症剤の投与または免疫抑制剤の投与が挙げられる。
【０２７２】
本発明の方法の特定の実施形態において、患者は、類天疱瘡関連疾患または類天疱瘡関連疾患の処置に使用される上記のいずれかの治療の前、治療中または治療後に抗ＣＤ１９抗体で処置され得る。さらに、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上で述べた因子のいずれかと組み合わせて投与され得る。
【０２７３】
５．５．２．５．自己免疫性糖尿病
本発明の特定の態様によれば、１Ａ型糖尿病としても知られる自己免疫性糖尿病の処置を必要とする患者は、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物および方法で処置され得る。１Ａ型糖尿病は、最終的に膵臓のβ細胞を破壊する、遺伝的、環境的および免疫学的因子の相乗効果によって引き起こされる自己免疫疾患である。膵臓のβ細胞が破壊される影響は、β細胞質量の減少、インスリン産生／分泌の低下および血中グルコースレベルの漸進的上昇である。
【０２７４】
１Ａ型糖尿病の処置を必要とする患者または患者集団は、患者の病歴、身体的症状および／または研究室の検査結果を調べることによって同定され得る。症状は、突然生じることが多く、その症状としては、低血中インスリンレベルまたは血中インスリンが存在しないこと、口渇の増加、排尿増加、不断の空腹感、体重減少、かすみ目および／または疲労が挙げられるが、これらに限定されない。顕性糖尿病は、通常、大部分のβ細胞が破壊される（＞８０％）まで現れない。代表的には、患者が、ランダムな（最後の食事からの時間に関係ない）血中グルコース濃度≧１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）および／または空腹時（少なくとも８時間カロリー摂取していない）血漿グルコース≧７．０ｍｍｏｌ／Ｌ（１２６ｍｇ／ｄＬ）および／または２時間後血漿グルコース≧１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を有する場合、糖尿病が臨床的に診断される。理想的には、これらの検査は、診断が確定する前に、結果を比較するために異なる日に繰り返されるべきである（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６ｔｈｅｄ．／ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｄｅｎｎｉｓ  Ｌ．Ｋａｓｐｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．２００５  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０２７５】
１Ａ型糖尿病の正確な病因は不明であるが、特定のＨＬＡ血清型との明らかな遺伝的関連が存在する。特に、自己免疫性糖尿病は、ＨＬＡ  ＤＲ３およびＤＲ４血清型に関連する。ＤＲ３とＤＲ４の両方が存在する場合、公知の最も高い遺伝的リスクがある。自己免疫性糖尿病の罹患率もまた、ＨＬＡクラスＩＩ（ＨＬＡ−ＤＱＢ１＊０３０２と関連する。対照的に、ＤＲＢ１−１５０１およびＤＱＡ１−０１０２−ＤＱＢ１−０６０２を有するＨＬＡハプロタイプは、１Ａ型糖尿病の防護に関連する（Ｒｅｄｏｎｄｏ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２０００），１０：３７９３−３７９７）。
【０２７６】
インスリンを産生するβ島細胞の破壊は、島細胞自己抗体（ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｉｄｅｓ）、膵臓内および流入領域リンパ節内の活性化リンパ球浸潤、島細胞に対するＴリンパ球応答性タンパク質、ならびに島内の炎症性サイトカインの放出を伴い得る（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６ｔｈ  ｅｄ．／ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｄｅｎｎｉｓ  Ｌ．Ｋａｓｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．２００５，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０２７７】
１Ａ型糖尿病と関連する自己抗体としては、インスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、ＩＣＡ−５１２／ＩＡ−２、フォグリン（ｐｈｏｇｒｉｎ）、島ガングリオシド（ｉｓｌｅｔ  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ）およびカルボキシペプチダーゼＨと結合する抗体が挙げられるがこれらに限定されない（Ｇｉａｎａｎｉ，Ｒ．ａｎｄ  Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ，Ｇ．Ｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｒｅｖ．（２００５），２０４：２３２−２４９；Ｋｅｌｅｍｅｎ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００４），１７２（６）：３９５５−３９６２）；Ｆａｌｏｒｎｉ，Ａ．ａｎｄ  Ｂｏｒｏｚｚｅｔｔｉ，Ａ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００５，１９（１）：１１９−１３３）。
【０２７８】
自己免疫性糖尿病に対する現在の処置としては、ビタミンＤ、コルチコステロイド、血圧を制御する因子および血糖症（血中糖レベル）を制御する因子の投与が挙げられる。
【０２７９】
本発明の方法の特定の実施形態において、患者は、自己免疫性糖尿病の処置に使用される上記のいずれかの治療の前、治療中または治療後に抗ＣＤ１９抗体で処置され得る。さらに、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、上で述べた因子のいずれかと組み合わせて投与され得る。
【０２８０】
５．５．２．６．全身性硬化症（強皮症）および関連障害
強皮症としても知られる全身性硬化症は、不均一な群の疾患を包含する。その疾患としては、限局性（ｌｉｍｉｔｅｄ）皮膚疾患、広汎性皮膚疾患、サイン強皮症（Ｓｉｎｅ  ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、未分化結合組織疾患、重複症候群、限局性強皮症、モルヘア、線状強皮症、Ｅｎ  ｃｏｕｐ  ｄｅ  ｓａｂｅｒ、Ｂｕｓｃｈｋｅの成年性浮腫性硬化症、硬化性粘液水腫、慢性移植片対宿主疾患、好酸球性筋膜炎、糖尿病における手指硬化および原発性アミロイドーシス（Ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｙｌｏｏｉｄｏｓｉｓ）および多発性骨髄腫に関連するアミロイドーシス（ａｎｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）が挙げられるがこれらに限定されない（概説：Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６ｔｈｅｄ．／ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｄｅｎｎｉｓ  Ｌ．Ｋａｓｐｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．２００５  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０２８１】
強皮症に関連する臨床的特徴としては、レイノー現象、皮膚肥厚、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｉｏｕｓ）石灰沈着症、毛細血管拡張、関節痛／関節炎、ミオパシー、食道運動障害、肺線維症、突発性（ｉｓｏｌａｔｅｄ）肺動脈高血圧症、うっ血性心不全および腎発症が挙げられ得る。患者がこれらの疾患症状の１以上を示す程度は、診断および有望な処置計画に影響を与え得る。
【０２８２】
自己抗体としては：抗トポイソメラーゼ（ｔｏｐｉｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ）１、抗セントロメア、抗ＲＮＡポリメラーゼＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩ、抗Ｔｈ  ＲＮＰ、抗Ｕ、ＲＮＰ（抗フィブリラリン）、抗ＰＭ／Ｓｃｉ、抗核抗体（ＡＮＡ）が挙げられる。
【０２８３】
強皮症の処置を必要とする患者および患者集団の同定は、病歴および身体所見に基づき得る。強皮症の処置を必要とする患者および患者集団は、患者の病歴、身体的症状および／または研究室の検査結果を調べることによって同定され得る。診断は、顕著な皮膚肥厚を有しない患者においては遅れることがある。研究室の検査、Ｘ線検査、肺機能検査および皮膚または腎（腎臓）バイオプシーを使用して、体内器官の関与の程度および重症度を決定することができる。
【０２８４】
疾患発症の初期の年月においては、強皮症は、多くの他の結合組織疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎および関節リウマチであるがこれらに限定されない）と似ていることがある。
【０２８５】
全身性硬化症（強皮症）のほとんどの古典的な症状は、手足指硬化である。初期症状としては、時折、先細りおよび爪様の変形に進行する手の腫脹が挙げられる。強皮症を有するすべての人がこの程度の皮膚硬化を発症するわけではない。他の症状としては、モルヘア、線状の手足指硬化（指の硬化）、レイノー症候群、石灰沈着および毛細血管拡張が挙げられ得る。
【０２８６】
抗核抗体（ＡＮＡ）検査などの血液検査は、限局性強皮症と全身性強皮症の両方の診断において使用され得る。例えば、抗セントロメア抗体（ＡＣＡ）および抗Ｓｃｌ−７０抗体は、全身性硬化症の処置を必要とする患者であることの示唆である（Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ．，５：８０−９３）；抗ｔｏｐｏ  ＩＩアルファ抗体は、限局性（ｌｏｃａｌ）強皮症の処置を必要とする患者の示唆である；および抗ｔｏｐｏＩアルファ抗体は、全身性強皮症の処置を必要とする患者の示唆である。いくつかのタイプの強皮症およびこれらのタイプを診断するための方法が認識されており、当該分野で周知である。その強皮症のタイプとしては、若年性強皮症（Ｆｏｅｌｄｖａｒｉ，２００２，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，１４：６９９−７０３；Ｃｅｆｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ，５８：６３５−６３８）；限局性強皮症；結節性強皮症（Ｃａｎｎｉｃｋ，２００３，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，３０：２５００−２５０２）；および全身性強皮症（石灰沈着症、レイノー、食道、手足指硬化および毛細血管拡張（ＣＲＥＳＴ）、限局性全身性強皮症およびびまん性全身性強皮症が挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられるがこれらに限定されない。全身性強皮症は、全身性硬化症（ＳＳｃ）としても知られている。全身性硬化症はまた、進行性全身性硬化症（ＰＳＳｃ）または家族性進行性全身性硬化症（ＦＰＳＳｃ）とも呼ばれ得る（Ｎａｄａｓｈｋｅｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ，１０：ＣＲ６１５−６２１；Ｆｒａｎｃｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｒｅｖ  Ｐｒａｔ．５２：１８８４−９０）。全身性硬化症は、結合組織硬化症、細くなった動脈に関する血管異常および微小循環ならびに自己免疫性変化の存在を特徴とする多システムの障害である。
【０２８７】
ＣＲＥＳＴとして知られる全身性強皮症のタイプは、任意の皮膚の張り（ｔｉｇｈｔｅｎｉｎｇ）を特徴としない。ＣＲＥＳＴは、通常、指における石灰沈着症（カルシウム沈着）；レイノー；嚥下が困難となり得る食道の筋肉制御の低下；手足指硬化、指の骨の先細り変形；および毛細血管拡張、指、顔面の皮膚または口腔内における小さな赤い斑を特徴とする。代表的には、これらの症状のうちの２つがＣＲＥＳＴの診断に十分である。ＣＲＥＳＴは、単独または任意の他の形態の強皮症もしくは他の自己免疫疾患と組み合わせて発症し得る。
【０２８８】
限局性強皮症は、くぼむ指の潰瘍（ｐｉｔｔｉｎｇ  ｄｉｇｉｔａｌ  ｕｌｃｅｒ）（レイノーに続発）および／または肺線維症を伴う指に限られた堅い皮膚を特徴とする。顔面および頸部の皮膚もまた、限局性強皮症に関連し得る。
【０２８９】
びまん性強皮症は、いずれのときでも近位の堅い皮膚が存在するときに診断される。近位とは、基準点に最も近い位置を意味する。近位の堅い皮膚は、手首より上または肘より上の皮膚緊張であり得る。代表的には、肘と手首の間のみの皮膚緊張を有する患者は、びまん性全身性強皮症または限局性全身性強皮症のいずれかの診断を受けるが、それは、診断する臨床医が使用する近位の意味に依存する。
【０２９０】
強皮症の現在の治療としては、６−メトキシプソラレンの後の体外フォトフェレーシス（ｐｈｏｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）および自家幹細胞移植が挙げられる。
【０２９１】
強皮症のための現在の処置としては、以下の薬剤、ペニシラミン、コルヒチン（ｃｈｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、インターフェロンアルファ、インターフェロン（ｉｎｔｅｒｐｈｅｒｏｎ）ガンマ、クロラムブシル、シクロスポリン、５−フルオロウラシル、シクロホスファミド、ミノサイクリン、サリドマイド、エタネルセプトまたはメトトレキサートの投与が挙げられる。
【０２９２】
５．５．３．サンプルまたは被験体中のＣＤ１９密度の測定
必要ではないのだが、ＣＤ１９密度についてのアッセイを使用して患者の診断をさらに特徴付けることができる。細胞に結合する抗体の密度を測定するための方法は、当業者に公知である（例えば、Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６５：６６３５−６６４３（２０００）（これは、特異的なＣＤ抗原の細胞表面密度を評価する方法を開示している）を参照のこと）。他の標準的な方法としては、スキャッチャード解析が挙げられる。例えば、抗体またはフラグメントを、単離し、放射標識し得る。そして、その放射標識された抗体の特異的な活性を測定する。次いで、その抗体を、ＣＤ１９を発現している標的細胞と接触させる。この細胞に関連する放射能を、測定し得、そして、特異的な活性に基づいて、その細胞に結合している抗体または抗体フラグメントの量が決定される。
【０２９３】
あるいは、蛍光励起細胞分取（ＦＡＣＳ）解析が使用され得る。一般に、上記抗体または抗体フラグメントは、ＣＤ１９を発現している標的細胞に結合する。その抗体に結合する第２の試薬、例えば、蛍光色素（ｆｌｏｕｒｏｃｈｒｏｍｅ）標識された抗免疫グロブリン抗体を加える。次いで、蛍光色素染色が測定され得、そしてそれを使用して、その細胞に結合している抗体または抗体フラグメントの密度が決定される。
【０２９４】
別の適当な方法としては、上記抗体または抗体フラグメントをフルオロフォアなどの検出可能な標識で直接標識し、そして標的細胞に結合させることができる。標識とタンパク質との比が、決定され、そして、基準ビーズに結合している既知量の標識を有するビーズと比較される。その細胞に結合している標識の量と既知基準との比較を使用することにより、その細胞に結合している抗体の量を計算することができる。
【０２９５】
なおも別の態様において、本発明は、サンプルまたは個体におけるＣＤ１９の存在および／または密度をインビトロまたはインビボにおいて検出するための方法を提供する。この方法はまた、疾患および処置の効果をモニターするためならびに投与される抗体の用量を決定するためおよびその用量を調節するために有用であり得る。このインビボにおける方法は、画像化技術（例えば、ＰＥＴ（ポジトロン放出断層撮影）またはＳＰＥＣＴ（単一光子放射型コンピュータ断層撮影））を使用して行うことができる。あるいは、共有結合したキレート剤を使用してインジウムで抗ＣＤ１９抗体を標識することができる。得られる抗体は、ＺＥＶＡＬＩＮＴＭ（インジウム標識抗ＣＤ２０ｍＡｂ）（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）を使用してＣＤ２０抗原を画像化するのと同じ方法で、標準的なガンマカメラを使用して画像化され得る。
【０２９６】
１つの実施形態において、上記インビボ方法は、本発明の抗体とヒトＣＤ１９抗原との複合体が形成され得る条件下で、試験されるサンプルを（必要に応じて、コントロールサンプルとともに）本発明のヒト抗ＣＤ１９抗体と接触させることによって行われ得る。次いで、複合体の形成を（例えば、ＦＡＣＳ解析またはウエスタンブロッティングを使用して）検出する。試験サンプルとともにコントロールサンプルを使用する場合、複合体は、両方のサンプルにおいて検出され、サンプル間の複合体の形成における任意の統計的有意差が、試験サンプル中のヒトＣＤ１９の存在を示唆する。
【０２９７】
他の実施形態において、平均蛍光（ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）強度が、ＣＤ１９密度の尺度として使用され得る。このような実施形態において、Ｂ細胞を患者から取り出し、そして蛍光（ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｔ）標識で標識されているＣＤ１９抗体で染色し、その蛍光強度をフローサイトメトリーを使用して測定する。蛍光強度は、Ｂ細胞あたりの強度の平均として測定および表示され得る。このような方法を用いることにより、ＣＤ１９密度を表す平均蛍光強度が、本発明の方法および組成物を使用して、処置の前後の患者について、または患者間で、およびＢ細胞上の正常レベルのｈＣＤ１９と比較され得る。
【０２９８】
Ｂ細胞上のＣＤ１９発現の密度が決定された患者において、ＣＤ１９の密度は、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体とともに使用される投薬レジメンおよび／または処置レジメンの決定および／または調節に影響を与え得る。例えば、ＣＤ１９の密度が高い場合、ヒトにおいてＡＤＣＣをそれほど効果的に媒介しない抗ＣＤ１９抗体を使用することが可能であり得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者のＣＤ１９密度が低い場合、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体がより多く投薬され得る。他の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者のＣＤ１９密度が低い場合、少ない投与量の本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体が使用され得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者のＣＤ１９密度が高い場合、より少ない投与量の本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体が使用され得る。特定の実施形態において、ＣＤ１９密度は、患者におけるＣＤ２０密度と比較され得るか、ＣＤ１９密度は、ヒトまたは特定の患者集団についての平均ＣＤ１９密度と比較され得るか、またはＣＤ１９密度は、治療前または自己免疫疾患または自己免疫障害の発症前の患者（ｐａｔｉｅｔｎ）におけるＣＤ１９レベルと比較され得る。特定の実施形態において、ＣＤ１９が、Ｂ細胞の表面上に存在する場合、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者は、自己免疫疾患または自己免疫障害を有する。
【０２９９】
５．６．免疫療法のプロトコール
本発明によれば、本明細書中の５．６節に記載されている免疫療法のプロトコールの各々は、５．４．３節に記載されている投与経路および投与方法ならびに用量を利用することができる。
【０３００】
「抗ＣＤ１９免疫療法」と本明細書中でよばれる治療用レジメン／治療用プロトコールにおいて使用される抗ＣＤ１９抗体組成物は、裸の抗体、免疫結合体および／または融合タンパク質であり得る。本発明の組成物は、単一薬剤治療として、または他の治療薬または他のレジメンと組み合わせて使用され得る。上記抗ＣＤ１９抗体または免疫結合体は、１以上の治療薬の投与前、投与と同時または投与後に投与され得る。本発明の組成物との併用療法レジメンにおいて使用され得る治療薬は、細胞の機能を阻害または妨害し、そして／または細胞の破壊を引き起こす任意の物質を含む。例としては、放射性同位体、化学療法剤およびトキシン（例えば、細菌、真菌、植物または動物起源の酵素的に活性なトキシンまたはそれらのフラグメント）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０１】
本明細書中に記載される治療用レジメンまたは任意の所望の処置レジメンは、ネイティブなＣＤ１９抗原に加えてまたはその代わりにヒトＣＤ１９抗原を発現する、下の６．２節に記載されるマウスモデルなどのトランスジェニック動物モデルを使用して、有効性について試験され得る。従って、抗ＣＤ１９抗体処置レジメンは、動物モデルにおいて試験されることにより、ヒトへの投与前に有効性を判定することができる。
【０３０２】
本発明の抗ＣＤ１９抗体、組成物および方法は、自己免疫疾患または自己免疫障害を処置するために用いられ得る。
【０３０３】
５．６．１．抗ＣＤ１９免疫療法
本発明によれば、「抗ＣＤ１９免疫療法」は、本明細書中に記載される治療用レジメンのいずれかに従う本発明の抗ＣＤ１９抗体のいずれかの投与を包含する。その抗ＣＤ１９抗体は、裸の抗体または免疫結合体または融合タンパク質として投与され得る。
【０３０４】
抗ＣＤ１９免疫療法は、自己免疫疾患または自己免疫障害を処置するための治療用の単一の薬剤としての抗ＣＤ１９抗体の投与を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、自己免疫疾患または自己免疫障害の活性のレベルが低いヒト患者を処置する方法を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、自己免疫疾患または自己免疫障害の活性のレベルが高いヒト患者を処置する方法を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、段階によって特徴付けられている自己免疫疾患または自己免疫障害の初期であるヒト患者を処置する方法を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、段階によって特徴付けられている自己免疫疾患または自己免疫障害の後期であるヒト患者を処置する方法を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、自己免疫疾患または自己免疫障害処置する方法を包含し、ここで、前記抗ＣＤ１９抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたはアポトーシスを媒介する。抗ＣＤ１９免疫療法は、自己免疫疾患または自己免疫障害を処置する方法を包含し、ここで、前記抗ＣＤ１９抗体は、患者が、自己免疫疾患または自己免疫障害の任意の処置を受ける前に投与される。
【０３０５】
好ましい実施形態において、自己免疫疾患または自己免疫障害を有するヒト被験体は、抗ＣＤ１９抗体を投与することによって処置され得る。特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、好ましくはヒトＡＤＣＣを媒介するヒト抗体またはヒト化抗体である。初期の疾患または単一薬剤治療の場合、好ましくはＡＤＣＣを媒介する任意の抗ＣＤ１９抗体が、ヒト被験体（マウス抗体およびキメラ抗体を含む）において使用され得る；しかしながら、ヒト抗体およびヒト化抗体が好ましい。
【０３０６】
ＩｇＧ１またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプの抗体が治療用として好ましい。しかしながら、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプがヒトＡＤＣＣを媒介する場合、それらが使用され得る。このようなエフェクター機能は、対象とする抗体が、インビトロまたはインビボにおいてエフェクター細胞による的細胞の溶解を媒介する能力を測定することによって評価され得る。
【０３０７】
使用される抗体の用量は、循環Ｂ細胞を枯渇させるのに十分であるべきである。治療の進行は、血液サンプルを分析することによって、患者においてモニターされ得る。他の臨床的な改善の徴候を使用して、治療をモニターすることができる。
【０３０８】
本発明の組成物および方法に関連して使用され得る、Ｂ細胞の枯渇を測定するための方法は、当該分野で周知であり、その方法としては、以下の実施形態が挙げられるがこれらに限定されない。１つの実施形態において、循環Ｂ細胞の枯渇は、Ｂ細胞の量を規定するためにＢ細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体以外の試薬を使用したフローサイトメトリーによって測定され得る。他の実施形態において、血液中の抗体レベルは、標準的な血清分析を使用してモニターされ得る。このような実施形態において、Ｂ細胞の枯渇は、Ｂ細胞によって産生されることが知られている抗体に対する量を規定することによって間接的に測定される。次いで、その抗体のレベルをモニターすることによって、Ｂ細胞の枯渇および／または機能的な枯渇が判定される。別の実施形態において、Ｂ細胞の枯渇は、Ｂ細胞を同定する免疫化学的染色によって測定され得る。このような実施形態において、患者組織から抽出されるＢ細胞を、顕微鏡用スライド上に置き、標識し、そして存在の有無について調べることができる。関連する実施形態において、治療前と治療後に抽出されたＢ細胞との比較を行うことにより、Ｂ細胞の存在の差を判定する。
【０３０９】
本発明の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体が単一薬剤治療として投与される場合、本発明は、様々な処置レジメンの使用を企図する。その処置レジメンは、自己免疫疾患または自己免疫障害の活性に応じた１以上の処置サイクルを含み得る。一般に、疾患活性が低い場合、より少ない処置が施される。２サイクル以上が必要である場合、任意の２つの処置サイクル間の時間を固定してもよいし、疾患活性、疾患反応性、薬物忍容性、回復時間、薬物動態学的（ＰＫ）パラメータおよび／または薬理学的反応性における患者特異的な差を適応させるために変動させてもよい。例えば、特定の実施形態において、任意の２つの処置サイクル間の時間は、約２ヶ月、４ヶ月、８ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月または２４ヶ月であり得る。特定の実施形態において、任意の２つの処置サイクル間の時間は、約１ヶ月、３ヶ月、５ヶ月、９ヶ月、１１ヶ月、１７ヶ月、１９ヶ月、２１ヶ月または２５ヶ月であり得る。特定の実施形態において、任意の２つの処置サイクル間の時間は、約２〜４、３〜５、６〜８、７〜９、８〜１０、９〜１１、１０〜１２、１１〜１３、１２〜１４、１３〜１５、１４〜１６、１５〜１７、１６〜１８、１７〜１９、１８〜２０、１９〜２１、２０〜２２、２１〜２３または２２〜２４ヶ月であり得る。特定の実施形態において、任意の２つの処置サイクル間の時間は、約２４ヶ月であり得る。
【０３１０】
本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物の１サイクルあたりの注入回数は、固定してもよいし、疾患活性、疾患反応性、薬物忍容性、回復時間、ＰＫパラメータおよび／または薬理学的反応性における患者特異的な差を許容するために変動させてもよい。特定の実施形態において、１サイクルあたりの注入回数は、１、２、３、４、５または６回の注入であり得る。特定の実施形態において、１サイクルあたりの注入回数は、１回の注入であり得る。
【０３１１】
いずれの注入についても、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物の投与用量は、固定してもよいし、初回薬物負荷を許容するため、ならびに／または質量、体表面積、疾患活性、疾患反応性、薬物忍容性、回復時間、ＰＫパラメータおよび／もしくは薬理学的反応性の患者特異的な差を相殺するために変動させてもよい。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物の１注入あたりの投与用量は、約０．１ｍｇ／Ｋｇ患者体重、０．３ｍｇ／Ｋｇ患者体重、１．０ｍｇ／Ｋｇ患者体重、２．０ｍｇ／Ｋｇ患者体重、４．０ｍｇ／Ｋｇ患者体重または１０ｍｇ／Ｋｇ患者体重である。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物の１注入あたりの投与用量は、約０．１〜０．３、０．３〜０．５、０．５〜０．７、０．７〜０．９、０．９〜１．１、１．１〜１．３、１．３〜１．５、１．５〜１．７、１．７〜１．９、１．９〜２．１、２．１〜２．３、２．３〜２．５、２．５〜２．７、２．７〜２．９、２．９〜３．１、３．１〜３．３、３．３〜３．５、３．５〜３．７、３．７〜３．９、３．９〜４．１、４．１〜４．３、４．３〜４．５、４．５〜４．７、４．７〜４．９、４．９〜５．１、５．１〜５．３、５．３〜５．５、５．５〜５．７、５．７〜５．９、５．９〜６．１、６．１〜６．３、６．３〜６．５、６．５〜６．７、６．７〜６．９、６．９〜７．１、７．１〜７．３、７．３〜７．５、７．５〜７．７、７．７〜７．９、７．９〜８．１、８．１〜８．３、８．３〜８．５、８．５〜８．７、８．７〜８．９、８．９〜９．１、９．１〜９．３、９．３〜９．５、９．５〜９．７、９．７〜９．９または９．９〜１０．１ｍｇ／Ｋｇ患者体重である。特定の実施形態において、１注入あたりの投与用量は、約０．３ｍｇ／Ｋｇ患者体重である。
【０３１２】
２回以上の注入が必要である場合、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物の任意の２回の注入間の時間は、固定してもよいし、疾患活性、疾患反応性、薬物忍容性、回復時間、ＰＫパラメータおよび／または薬理学的反応性の患者特異的な差を適応させるために変動させてもよい。特定の実施形態において、任意の２回の注入間の時間は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８日、２９、３０、３２、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４または４５日である。特定の実施形態において、任意の２回の注入間の時間は、約１〜３、１〜５、１〜１０、１〜１５、１〜２０、１〜２５、１〜３０、１〜３５、１〜４０または１〜４５日である。特定の実施形態において、任意の２回の注入間の時間は、１日である。
【０３１３】
本発明の特定の態様によれば、本発明の組成物および方法に使用される抗ＣＤ１９抗体は、裸の抗体である。関連する実施形態において、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。特定の実施形態において、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜１０、５〜１５、１０〜２０または１５〜２５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。特定の実施形態において、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約１〜２０、３〜１５または５〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。好ましい実施形態において、使用される裸の抗ＣＤ１９抗体の用量は、少なくとも約５、６、７、８、９または１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。
【０３１４】
特定の実施形態において、上記用量は、４〜８週間連続して、毎週投与される約３７５ｍｇ／ｍ２の抗ＣＤ１９抗体を含む。特定の実施形態において、上記用量は、４〜８週間連続して、毎週投与される少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。
【０３１５】
上で記載した抗ＣＤ１９抗体の代表的な用量は、５．４．３．節に記載したように投与され得る。１つの実施形態において、上記用量は、単回注入の用量である。他の実施形態において、上記用量は、一定期間に亘って投与される。他の実施形態において、上記用量は、一定期間に亘って複数回投与される。その期間の単位は、何日、何ヶ月または何週であり得る。抗ＣＤ１９抗体の反復投与が、有毒な副作用とのバランスをとりながら、治療有益性を達成するのに適した間隔で行われ得る。例えば、反復投与が用いられる場合、抗体による処置を繰り返す前に患者の単球数が回復し得る時間間隔が好ましい。単球集団が、患者におけるＡＤＣＣ機能を反映するため、この投薬レジメンによって、処置の有効性が最適化される。
【０３１６】
特定の実施形態において、患者が治療に対して応答性である限り、本発明の組成物は、ヒト患者に投与される。他の実施形態において、患者の疾患が進行しない限り、本発明の組成物はヒト患者に投与される。関連する実施形態において、本発明の組成物は、患者の疾患が進行しなくなるまでか、または一定期間進行しなくなるまでヒト患者に投与される。そして、その疾患が再発しないか、または再度進行を始めない限り、その患者は本発明の組成物を投与されない。例えば、患者は、約４〜８週間、上記用量のいずれかで処置され得、その間、患者は、疾患の進行（すなわち、自己免疫疾患または自己免疫障害の活性）についてモニターされる。疾患進行が停止するか、または逆行したら、その患者が再発するまで、すなわち、処置される疾患が再び発症するか、または進行するまで、患者は、本発明の組成物を投与されなくなる。この再発時または進行時に、患者は、最初に使用していたのと同じ投薬レジメンを用いて、または上記の他の用量を使用して、再び処置され得る。
【０３１７】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、負荷投与量として投与され得、その後、一定期間に亘って複数回、低用量（維持用量）で投与され得る。このような実施形態において、上記用量は、時期を選び得、また、量は、効果的なＢ細胞の枯渇を維持するように調節され得る。好ましい実施形態において、負荷投与量は、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８ｍｇ／ｋｇ患者体重であり、維持用量は、少なくとも約５〜１０ｍｇ／Ｋｇ患者体重である。好ましい実施形態において、維持用量は、７、１０、１４または２１日ごとの間隔で投与される。維持用量は、毒性が現れるまで、血小板数が減少するまで、疾患進行がなくなるまで、患者がその薬物に対して免疫応答を示すまで、または疾患が末期の状態に進行するまで、無期限に継続され得る。なおも他の実施形態において、本発明の組成物は、疾患が末期の段階に進行するまで、ヒト患者に投与される。
【０３１８】
本発明の実施形態において、患者の循環単球レベルが、処置レジメンの一部としてモニターされる場合、投与される抗ＣＤ１９抗体の投薬は、単球数が回復し得るように間隔があけられ得る。例えば、本発明の組成物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日ごとの間隔で投与され得る。
【０３１９】
本発明の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体がトキシンと結合体化されている場合、またはトキシンと併せて投与される場合、抗ＣＤ１９抗体の用量は、トキシン用量に基づいて調節され得、そしてそのトキシン用量は、使用される特定のタイプのトキシンに依存することを当業者は理解するだろう。代表的には、１つのトキシンが使用される場合、抗ＣＤ１９抗体の用量は、裸の抗ＣＤ１９抗体で使用される用量より少ない。適切な用量は、当該分野で周知の技術を使用して特定のトキシンについて決定され得る。例えば、トキシンとともに投与されるとき、またはトキシンと結合体化されるとき、抗ＣＤ１９抗体の最大耐用量を決定するために、用量設定試験が行われ得る。
【０３２０】
本発明の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体が放射性治療薬と結合体化されるか、または放射性治療薬と併せて投与される場合、抗ＣＤ１９抗体の用量は、使用される放射線治療薬に応じて変動する。特定の好ましい実施形態において、２工程プロセスが使用される。第１に、裸の抗ＣＤ１９抗体を含む組成物をヒト患者に投与し、約６、７、８、９または１０日後に少量の放射線治療薬を投与する。第２に、低用量治療の寛容、分配およびクリアランスが測定されたら、患者にある用量の裸の抗ＣＤ１９抗体を投与し、続いて、治療量の放射線治療薬を投与する。このような処置レジメンは、ＺＥＶＡＬＩＮＴＭ（インジウム標識された抗ＣＤ２０ｍＡｂ）（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）またはＢＥＸＸＡＲＴＭ（ＧＳＫ，Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）を使用した非ホジキンリンパ腫の処置に認められている処置レジメンに類似している。
【０３２１】
５．６．２．免疫調節性因子との併用
本発明の抗ＣＤ１９免疫療法はまた、免疫調節性因子と併用してもよい。このアプローチにおいて、キメラ化抗体の使用が好ましく、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体の使用が最も好ましい。用語「免疫調節性因子」とは、併用療法に対して本明細書中で使用されるとき、宿主の免疫系を抑制、遮断または増強するように作用する物質のことをいう。
【０３２２】
免疫調節性因子の例としては、タンパク質性物質（例えば、サイトカイン、ペプチド模倣物および抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）２フラグメントまたはエピトープ結合フラグメント））、核酸分子（例えば、アンチセンス核酸分子、ｉＲＮＡおよび三重らせん）、小分子、有機化合物および無機化合物が挙げられるが、これらに限定されない。特に、免疫調節性因子としては、メトトレキサート、レフルノミド、シクロホスファミド、サイトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）、Ｉｍｍｕｒａｎ、シクロスポリンＡ、ミノサイクリン、アザチオプリン、抗生物質（例えば、ＦＫ５０６（タクロリムス））、メチルプレドニゾロン（ＭＰ）、コルチコステロイド、ステロイド（ｓｔｅｒｉｏｄｓ）、ミコフェノール酸モフェチル、ラパマイシン（シロリムス）、ミゾリビン、デオキシスペルグアリン、ブレキナル、マロノニトリノアミンド（ｍａｌｏｎｏｎｉｔｒｉｌｏａｍｉｎｄｅ）（例えば、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎａｍｉｄｅ））、Ｔ細胞レセプター調節因子（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）およびサイトカインレセプター調節因子が挙げられるが、これらに限定されない。免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｒｅｓｓａｎｔ）の例としては、ミコフェノール酸モフェチル（ＣＥＬＬＣＥＰＴＴＭ）、Ｄ−ペニシラミン（ＣＵＰＲＩＭＩＮＥＴＭ、ＤＥＰＥＮＴＭ）、メトトレキサート（ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸＴＭ、ＴＲＥＸＡＬＬＴＭ）および硫酸ヒドロキシクロロキン（ＰＬＡＱＵＥＮＩＬＴＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２３】
免疫調節性因子はまた、サイトカイン産生を抑制し、自己抗原発現をダウンレギュレートするかもしくは抑制し、またはＭＨＣ抗原を遮蔽する物質を含み得る。このような因子の例としては、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号）、アザチオプリン（または、アザチオプリンに有害作用がある場合、シクロホスファミド）；ブロモクリプチン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載されているようにＭＨＣ抗原を遮蔽する）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣフラグメントに対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロンおよびデキサメタゾン）などのステロイド；サイトカインまたはサイトカインレセプターアンタゴニスト（抗インターフェロン−γ、−βまたは−α抗体を含む）；抗腫瘍壊死因子−α抗体；抗腫瘍壊死因子−β抗体；抗インターロイキン−２抗体および抗ＩＬ−２レセプター抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３抗体または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（１９９０年７月２６日公開のＷＯ９０／０８１８７）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスペルグアリン；ラパマイシン；Ｔ細胞レセプター（米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞レセプターフラグメント（Ｏｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ９０／１１２９４；およびＷＯ９１／０１１３３）；ならびにＴ１０Ｂ９などのＴ細胞レセプター抗体（ＥＰ３４０，１０９）が挙げられる。
【０３２４】
サイトカインの例としては、リンフォカイン、モノカインおよび従来のポリペプチドホルモンが挙げられるがこれらに限定されない。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン）；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン（例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ））；肝臓成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトーゲン；腫瘍壊死因子−α；ミュラー阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｏｔｉｎ）（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−αなどの神経成長因子；血小板成長因子；トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）（例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−α）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリトロポイエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子（ｏｓｔｅｏｉｎｄｕｃｔｉｖｅ  ｆａｃｔｏｒ）；インターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣｇＰ（ＧＭ−ＣＳＰ）；ならびに顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、１Ｌ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５）；腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；ならびにＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書中で使用されるとき、用語サイトカインは、天然の起源由来または組換え細胞培養由来のタンパク質およびネイティブな配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。特定の実施形態において、この方法は、１以上の免疫調節性因子、好ましくはサイトカインを被験体に投与する工程をさらに含む。好ましいサイトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トロンボポエチンおよびγインターフェロンからなる群から選択される。
【０３２５】
特定の実施形態において、免疫調節性因子は、サイトカインレセプター調節因子である。サイトカインレセプター調節因子の例としては、可溶性サイトカインレセプター（例えば、ＴＮＦ−αレセプターの細胞外ドメインまたはそのフラグメント、ＩＬ−１βレセプターの細胞外ドメインまたはそのフラグメントおよびＩＬ−６レセプターの細胞外ドメインまたはそのフラグメント）、サイトカインまたはそのフラグメント（例えば、インターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γおよびＧＭ−ＣＳＦ）、抗サイトカインレセプター抗体（例えば、抗ＩＬ−２レセプター抗体、抗ＩＬ−４レセプター抗体、抗ＩＬ−６レセプター抗体、抗ＩＬ−１０レセプター抗体および抗ＩＬ−１２レセプター抗体）、抗サイトカイン抗体（例えば、抗ＩＦＮレセプター抗体、抗ＴＮＦ−α抗体、抗ＩＬ−１β抗体、抗ＩＬ−６抗体および抗ＩＬ−１２抗体）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、サイトカインレセプター調節因子は、ＩＬ−４、ＩＬ−１０またはそれらのフラグメントである。別の実施形態において、サイトカインレセプター調節因子は、抗ＩＬ−１β抗体、抗ＩＬ−６抗体、抗ＩＬ−１２レセプター抗体、抗ＴＮＦ−α抗体である。別の実施形態において、サイトカインレセプター調節因子は、ＴＮＦ−αレセプターの細胞外ドメインまたはそのフラグメントである。特定の実施形態において、サイトカインレセプター調節因子は、ＴＮＦ−αアンタゴニストでない。
【０３２６】
特定の実施形態において、免疫調節性因子は、Ｔ細胞レセプター調節因子である。Ｔ細胞レセプター調節因子の例としては、抗Ｔ細胞レセプター抗体（例えば、抗ＣＤ４抗体（例えば、ｃＭ−Ｔ４１２（Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ）、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１（登録商標）（ＩＤＥＣおよびＳＫＢ）、ｍＡＢ  ４１６２Ｗ９４、ＯｒｔｈｏｃｌｏｎｅおよびＯＫＴｃｄｒ４ａ（Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ））、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ５抗体（例えば、抗ＣＤ５リシン連結免疫複合体）、抗ＣＤ７抗体（例えば、ＣＨＨ−３８０（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４０リガンドモノクローナル抗体、抗ＣＤ５２抗体（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ  １Ｈ（Ｉｌｅｘ））、抗ＣＤ２モノクローナル抗体）およびＣＴＬＡ４−免疫グロブリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２７】
特定の実施形態において、免疫調節性因子は、ＴＮＦ−αアンタゴニストである。ＴＮＦ−αアンタゴニストの例としては、抗体（例えば、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥＴＭ；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、Ｄ２Ｅ７（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ／Ｋｎｏｌｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．，Ｍｔ．Ｏｌｉｖｅ，Ｎ．Ｊ．）、ＨＵＭＩＲＡＴＭおよびＣＤＰ−８７０（両方ともＣｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｓｌｏｕｇｈ，Ｕ．Ｋ．）としても知られるＣＤＰ５７１ならびにＴＮ３−１９．１２（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：２７６２−２７６６；Ｔｈｏｒｂｅｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７３７５−７３７９））、可溶性ＴＮＦ−αレセプター（例えば、ｓＴＮＦ−Ｒ１（Ａｍｇｅｎ）、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬＴＭ；Ｉｍｍｕｎｅｘ）およびそのラットホモログＲＥＮＢＲＥＬＴＭ、ＴＮＦｒＩ、ＴＮＦｒＩＩから得られるＴＮＦ−αの可溶性インヒビター（Ｋｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：８３３１−８３３５）およびＴＮＦ−α  Ｉｎｈ（Ｓｅｃｋｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：５１８８−５１９２））、ＩＬ−１０、ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１０５３５−１０５３９）、マウス生成物ＴＢＰ−１（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｙｅｄａ）、ワクチンＣｙｔｏＴＡｂ（Ｐｒｏｔｈｅｒｉｃｓ）、アンチセンス分子１０４８３８（ＩＳＩＳ）、ペプチドＲＤＰ−５８（ＳａｎｇＳｔａｔ）、サリドマイド（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＣＤＣ−８０１（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＤＰＣ−３３３（Ｄｕｐｏｎｔ）、ＶＸ−７４５（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＡＧＩＸ−４２０７（ＡｔｈｅｒｏＧｅｎｉｃｓ）、ＩＴＦ−２３５７（Ｉｔａｌｆａｒｍａｃｏ）、ＮＰＩ−１３０２１−３１（Ｎｅｒｅｕｓ）、ＳＣＩＯ−４６９（Ｓｃｉｏｓ）、ＴＡＣＥターゲッター（Ｉｍｍｕｎｉｘ／ＡＨＰ）、ＣＬＸ−１２０５００（Ｃａｌｙｘ）、Ｔｈｉａｚｏｌｏｐｙｒｉｍ（Ｄｙｎａｖａｘ）、オーラノフィン（Ｒｉｄａｕｒａ）（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、キナクリン（メパクリンジクロロ水和物）、テニダプ（Ｅｎａｂｌｅｘ）、Ｍｅｌａｎｉｎ（Ｌａｒｇｅ  Ｓｃａｌｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）ならびにＵｒｉａｃｈによる抗ｐ３８ＭＡＰＫ因子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２８】
これらの免疫調節性因子は、本発明の抗ＣＤ１９抗体と同時にまたは別々の時間に投与され、そして当該分野で説明されているのと同じかまたはそれより少ない投与量で使用される。好ましい免疫調節性因子は、処置される自己免疫疾患または自己免疫障害のタイプならびに患者の病歴を含む多くの因子に依存するが、全般として好ましいのは、その因子が、シクロスポリンＡ、副腎皮質ステロイド（最も好ましくは、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロン）、ＯＫＴ−３モノクローナル抗体、アザチオプリン、ブロモクリプチン、異種性抗リンパ球グロブリンまたはそれらの混合物から選択されることである。
【０３２９】
５．６．３．抗炎症剤および抗炎症治療との併用
本発明の抗ＣＤ１９免疫療法はまた、抗炎症剤と併用してもよい。抗炎症剤は、炎症性障害および自己免疫障害の処置を成功に導いており、現在では、このような障害に対する通常の処置および標準的な処置である。当業者に周知の任意の抗炎症剤は、本発明の組成物および方法に使用され得る。
【０３３０】
抗炎症剤の非限定的な例としては、非ステロイド性抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド系抗炎症性薬物、ベータ−アゴニスト、抗コリン剤（ａｎｔｉｃｈｏｌｉｎｇｅｒｉｃ  ａｇｅｎｔ）およびメチルキサンチンが挙げられる。ＮＳＡＩＤの例としては、アスピリン、イブプロフェン、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸＴＭ）、ジクロフェナク（ＶＯＬＴＡＲＥＮＴＭ）、エトドラク（ＬＯＤＩＮＥＴＭ）、フェノプロフェン（ＮＡＬＦＯＮＴＭ）、インドメタシン（ＩＮＤＯＣＩＮＴＭ）、ケトロラク（ｋｅｔｏｒａｌａｃ）（ＴＯＲＡＤＯＬＴＭ）、オキサプロジン（ＤＡＹＰＲＯＴＭ）、ナブメントン（ｎａｂｕｍｅｎｔｏｎｅ）（ＲＥＬＡＦＥＮＴＭ）、スリンダク（ＣＬＩＮＯＲＩＬＴＭ）、トルメチン（ｔｏｌｍｅｎｔｉｎ）（ＴＯＬＥＣＴＩＮＴＭ）、ロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸＴＭ）、ナプロキセン（ＡＬＥＶＥＴＭ、ＮＡＰＲＯＳＹＮＴＭ）、ケトプロフェン（ＯＲＵＤＩＳＴＭおよびＡＣＴＲＯＮＴＭ）、ナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮＴＭ）、ジクロフェナクおよびミソプロストール（ＡＲＴＨＲＯＴＥＣＴＭ）、イブプロフェン（ＭＯＴＲＩＮＴＭ、ＡＤＶＩＬＴＭ、ＮＵＰＲＩＮＴＭ）、ケトロラク（ＴＯＲＡＤＯＬＴＭ）、バルデコキシブ（ＢＥＸＴＲＡＴＭ）、メロキシカム（ＭＯＢＩＣＴＭ）、フルルビプロフェン（ＡＮＳＡＩＤＴＭ）ならびにピロキシカム（ＦＥＬＤＥＮＥＴＭ）が挙げられる。このようなＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼ（ｃｙｃｌｏｏｘｇｅｎａｓｅ）酵素（例えば、ＣＯＸ−１および／またはＣＯＸ−２）を阻害することによって機能する。
【０３３１】
ステロイド系抗炎症性薬物の例としては、糖質コルチコイド、デキサメタゾン（ＤＥＣＡＤＲＯＮＴＭ）、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン（ＤＥＬＴＡＳＯＮＥＴＭ）、プレドニゾロン、トリアムシノロン、アズルフィジン（ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ）およびエイコサノイド（例えば、プロスタグランジン、トロンボキサンおよびロイコトリエン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３２】
疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）もまた、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体と併せて使用することができる。ＤＭＡＲＤは、免疫系を抑制することおよび炎症を低減することによって機能するが、しかしながらＤＭＡＲＤは、他の薬物と比べて結果を示すまで時間がかかる。ＤＭＡＲＤの例としては、ヒドロキシクロロキン（ＰＬＡＱＵＥＮＩＬＴＭ）、クロラムブシル（ＬＥＵＫＥＲＡＮＴＭ）、シクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮＴＭ）、レフルノミド（ＡＲＡＶＡＴＭ）、メトトレキサートおよびシクロスポリン（ＮＥＯＲＡＬＴＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３３】
特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法はまた、抗炎症性治療と併用してもよい。このような治療の非限定的な例は、プロテインＡ免疫吸着治療である。この治療によれば、患者の血液を濾過することにより、炎症を促進する抗体および免疫複合体を除去する。この濾過は、当業者に周知の方法によって達成され得る。
【０３３４】
これらの抗炎症剤および治療は、本発明の抗ＣＤ１９抗体と同時にまたは別々の時間に投与され、そして当該分野で説明されているのと同じかまたはそれより少ない投与量で使用される。好ましい抗炎症剤は、処置される自己免疫疾患または自己免疫障害のタイプならびに患者の病歴を含む多くの因子に依存する。
【０３３５】
５．６．４．治療用抗体との併用
本明細書中に記載される抗ＣＤ１９免疫療法は、他の抗体と併用して投与され得る。その抗体としては、抗ＣＤ２０ｍＡｂ、抗ＣＤ５２ｍＡｂ、抗ＣＤ２２抗体（例えば、米国特許第５，４８４，８９２号、米国出願番号１０／３７１，７９７の米国特許公開番号２００４／０００１８２８、米国出願番号１０／３７２，４８１の米国特許公開番号２００３／０２０２９７５および米国仮出願番号６０／４２０，４７２（これらの各々の内容全体が、ＣＤ２２抗原および抗ＣＤ２２抗体について教示するために参考として本明細書中で援用される）に記載されているような）およびＲＩＴＵＸＡＮＴＭ（Ｃ２Ｂ８；ＲＩＴＵＸＩＭＡＢＴＭ；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）などの抗ＣＤ２０抗体が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の抗体と併せて使用され得るか、または本発明の組成物中に使用され得る治療用抗体の他の例としては、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮＴＭ（トラスツズマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＭＹＬＯＴＡＲＧＴＭ（ゲムツズマブオゾガミシン；Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＣＡＭＰＡＴＨＴＭ（アレムツズマブ；Ｂｅｒｌｅｘ）、ＺＥＶＡＬＩＮＴＭ（イブリツモマブチウキセタン（Ｉｐｒｉｔｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ）；Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ＢＥＸＸＡＲＴＭ（トシツモマブ；Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｃｏｒｉｘａ）、ＥＲＢＩＴＵＸＴＭ（セツキシマブ；Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ（ベバシズマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）およびＬｙｍｐｈｏＳｔａｔＴＭ（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３６】
特定の実施形態において、抗ＣＤ１９ｍＡｂおよび抗ＣＤ２０ｍＡｂならびに／または抗ＣＤ２２ｍＡｂは、必要に応じて同じ薬学的組成物として、任意の適当な比で投与され得る。例えば、抗ＣＤ１９抗体と抗ＣＤ２０抗体との比は、約１０００：１、５００：１、２５０：１、１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０；１、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３，１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０、１：１００、１：２５０、１：５００または１：１０００またはそれ以上の比であり得る。同様に、抗ＣＤ１９抗体と抗ＣＤ２２抗体との比は、約１０００：１、５００：１、２５０：１、１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０；１、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３，１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０、１：１００、１：２５０、１：５００または１：１０００またはそれ以上の比であり得る。
【０３３７】
５．６．５．単球またはマクロファージの機能を増強する化合物の併用
本発明の方法の特定の実施形態において、単球またはマクロファージの機能を増強する（例えば、少なくとも約２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９％またはそれ以上）化合物は、抗ＣＤ１９免疫療法と併せて使用され得る。このような化合物は、当該分野で公知であり、それらとしては、サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１２）およびインターフェロン（例えば、アルファまたはガンマインターフェロン）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３３８】
単球またはマクロファージの機能または強化を増強する化合物は、抗体、免疫複合体または抗原結合フラグメントとして同じ薬学的組成物中に処方され得る。別々に投与されるとき、抗体／フラグメントおよび化合物は、同時に（互いに何時間か以内に）投与され得るし、同じ経過の治療の間に投与され得るし、連続的に投与され得る（すなわち、患者は、最初に抗体／フラグメント処置の経過を受け、そしてマクロファージ／単球の機能を増強する化合物の経過を受けるが、その逆でもよい）。このような実施形態において、単球またはマクロファージの機能を増強する化合物は、他の治療用レジメンおよび／または本発明の組成物による処置の前、処置と同時、または処置後にヒト被験体に投与される。１つの実施形態において、ヒト被験体は、ヒトについて正常範囲内の血中白血球数、単球数、好中球数、リンパ球数および／または好塩基球数を有する。ヒト血中白血球（総数）の正常範囲は、約３．５〜約１０．５（１０９／Ｌ）である。ヒト血中好中球の正常範囲は、約１．７〜約７．０（１０９／Ｌ）であり、単球の正常範囲は、約０．３〜約０．９（１０９／Ｌ）であり、リンパ球の正常範囲は、約０．９〜約２．９（１０９／Ｌ）であり、好塩基球の正常範囲は、約０〜約０．３（１０９／Ｌ）であり、そして好酸球の正常範囲は、約０．０５〜約０．５（１０９／Ｌ）である。他の実施形態において、ヒト被験体は、ヒトについての正常範囲よりも少ない血中白血球数、例えば、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８（１０９／Ｌ）白血球を有する。
【０３３９】
本発明のこの実施形態は、本発明の抗体、免疫結合体もしくは抗体フラグメントまたは当該分野で公知の他の抗体を用いて行われ得、また、抗ＣＤ１９抗体治療、抗ＣＤ２０抗体治療および／または抗ＣＤ２２抗体治療（例えば、Ｃ２Ｂ８などの既存の抗体による治療）に耐性である被験体、化学療法による処置を現在受けているか、または以前受けていた被験体、Ｂ細胞障害を再発したことのある被験体、免疫無防備状態の被験体、または他でマクロファージまたは単球の機能に障害を有する被験体に特に適している。自己免疫疾患または自己免疫障害を治療するのに耐性である患者またはそれらを再発する患者の有病率は、少なくとも部分的に、マクロファージまたは単球の機能の障害に起因し得る。従って、本発明は、抗ＣＤ１９抗体および抗原結合フラグメントを投与する方法と併せて使用される、ＡＤＣＣならびに／またはマクロファージおよび／もしくは単球の機能を増強する方法を提供する。
【０３４０】
５．６．６．化学療法剤との併用
抗ＣＤ１９免疫療法（裸の抗体、免疫結合体または融合タンパク質を使用）は、他の治療と併せて使用され得る。その治療しては、化学療法、放射免疫療法（ＲＩＴ）、化学療法および外照射（放射線併用化学療法、ＣＭＴ）または放射線併用放射免疫療法（ＣＭＲＩＴ）の単独または併用などが挙げられるがこれらに限定されない。特定の好ましい実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体治療は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド−ヒドロキシドキソルビシン−オンコビン（ビンクリスチン）−プレドニゾロン）と併せて投与され得る。本明細書中で使用されるとき、用語「と併せて投与される」とは、抗ＣＤ１９免疫療法が、用いられる他の治療の前、治療中または治療後に施され得ることを意味する。
【０３４１】
特定の実施形態において、抗ＣＤ１９免疫療法は、細胞傷害性放射性核種または放射線療法用同位体と併用される。例えば、２２５Ａｃ、２２４Ａｃ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２２４Ｒａまたは２２３Ｒａなどのアルファ放射同位体。あるいは、細胞傷害性放射性核種は、ベータ放射同位体（例えば、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、９０Ｙ、１３１Ｉ、６７Ｃｕ、１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏまたは６４Ｃｕ）であり得る。さらに、細胞傷害性放射性核種は、オージェ電子および低速電子を放出し得、同位体１２５１、１２３Ｉまたは７７Ｂｒを含む。他の実施形態において、上記同位体は、１９８Ａｕ、３２Ｐなどであり得る。特定の実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約０．００１ｍＣｉ／ｋｇ〜約１０ｍＣｉ／ｋｇである。
【０３４２】
いくつかの好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約０．１ｍＣｉ／ｋｇ〜約１．０ｍＣｉ／ｋｇである。他の好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約０．００５ｍＣｉ／ｋｇ〜０．１ｍＣｉ／ｋｇである。
【０３４３】
特定の実施形態において、抗ＣＤ１９免疫療法は、化学トキシンまたは化学療法剤と併用される。好ましくは、化学トキシンまたは化学療法剤は、エンジイン、例えば、カリケアマイシンおよびエスペラミシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；デュオカルマイシン、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび５−フルオロウラシルからなる群から選択される。
【０３４４】
抗ＣＤ１９免疫療法との併用療法において使用され得る適当な化学トキシンまたは化学療法剤としては、カリケアマイシンおよびエスペラミシンなどの分子のエンジインファミリーのメンバーが挙げられる。化学トキシンはまた、デュオカルマイシン（例えば、米国特許第５，７０３，０８０号および米国特許第４，９２３，９９０号を参照のこと）、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび５−フルオロウラシルからなる群から得られる。化学療法剤の例としてはまた、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキシン、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンｃ、ミトキサントロン、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｅｉｓｔｉｎｅ）、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照のこと）、メルファランおよび他の関連ナイトロジェンマスタードが挙げられる。
【０３４５】
他の実施形態において、例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ２シクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ２エトポシドおよび１５０〜２００ｍｇ／ｍ２カルムスチン）は、本発明の併用療法に使用され得る。他の適当な併用化学療法レジメンは、当業者に周知である。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ”Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈｏｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２０２８−２０６８（Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９３）を参照のこと。他の適当な併用化学療法レジメンとしては、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジンおよびプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン，およびプレドニゾン）、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾンおよびロイコボリン）およびＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキサート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシンおよびロイコボリン）が挙げられる。さらなる有用な薬物としては、フェニルブチレートおよびブロスタチン−１が挙げられる。好ましい多様式治療において、化学療法用薬物とサイトカインの両方が、本発明に記載の抗体、免疫複合体または融合タンパク質と同時投与される。サイトカイン、化学療法用の薬物および抗体、免疫複合体または融合タンパク質は、任意の順序でまたは一緒に投与され得る。
【０３４６】
本発明の組成物および方法における使用に好ましい他のトキシンとしては、有毒なレクチン、植物トキシン、例えば、リシン、アブリン、モデクシン、ボツリヌストキシンおよびジフテリアトキシンが挙げられる。当然のことながら、様々なトキシンの組み合わせもまた、１つの抗体分子に結合され得る。これにより、変化する細胞傷害に適応する。本発明の併用療法で適当に使用されるトキシンの例は、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅＩ、ブドウ球菌性エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルス性タンパク質、ゲロニン、ジフテリアトキシン、シュードモナス外毒素およびシュードモナスエンドトキシンである。例えば、Ｐａｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ，４４：４３（１９９４）を参照のこと。使用され得る酵素的に活性なトキシンおよびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリアトキシンの非結合性の活性なフラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテシンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。
【０３４７】
適当なトキシンおよび化学療法剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）およびＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）に記載されている。他の適当なトキシンおよび／または化学療法剤は、当業者に公知である。
【０３４８】
本発明の抗ＣＤ１９免疫療法はまた、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照のこと）を活性な抗癌薬物に変換するプロドラッグ活性化酵素と併用され得る。例えば、ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照のこと。このような組み合わせの酵素成分は、その成分をより活性な細胞傷害性型に変換するような方法でプロドラッグに作用することができる任意の酵素を含む。用語「プロドラッグ」とは、本出願で使用されるとき、親薬物と比べて腫瘍細胞に対する細胞傷害性が低く、酵素的に活性化され得るか、またはより活性な親型に変換され得る、薬学的に活性な物質の形態の前駆体または誘導体のことをいう。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４，ｐｐ．３７５−３８２，６１５ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）およびＳｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．），ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照のこと。本発明の抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて使用され得るプロドラッグとしては、リン酸含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、硫酸含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸改変プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、α−ラクタム含有プロドラッグ、必要に応じて置換されるフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは必要に応じて置換されるフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンおよびより活性な細胞傷害性遊離薬物に変換され得る他の５−フルオロウリジンプロドラッグが挙げられるが、これらに限定されない。本発明における使用のためのプロドラッグ型に誘導体化され得る細胞傷害性薬物の例としては、上記の化学療法剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３４９】
特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の投与により、有毒な治療を延期することが可能であり得、また、不要な副作用および化学療法に関連する合併症の危険性を回避するのに役立ち得、そして化学療法への耐性の発生を遅延させる。特定の実施形態において、有毒な治療および／または有毒な治療に対する耐性は、本発明の組成物および方法を投与される患者において約６ヶ月、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０年まで遅延される。
【０３５０】
５．６．７．他の治療薬との併用
腫瘍新生血管系に作用する因子もまた、抗ＣＤ１９免疫療法と併せて使用され得、そのような因子としては、チューブリン結合因子（例えば、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）Ａ４（Ｇｒｉｇｇｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．，２：８２，（２００１））およびアンジオスタチン）およびエンドスタチン（Ｒｏｓｅｎ，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，５：２０，２０００に概説されており、本明細書中に参考として援用される）が挙げられる。抗ＣＤ１９抗体と組み合わせた使用に適した免疫調節因子としては、α−インターフェロン、γ−インターフェロンおよび腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用した併用療法において使用される治療薬は、ペプチドである。
【０３５１】
特定の実施形態において、抗ＣＤ１９免疫療法は、１以上のカリケアマイシン分子と併用される。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ｐＭ以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断を生じることができる。使用され得るカリケアマイシンの構造アナログとしては、γ１１、γ２１、γ３１、Ｎ−アセチル−γ１１、ＰＳＡＧおよび０１１（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５３：３３３６−３３４２（１９９３）およびＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５８：２９２５−２９２８（１９９８））が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３５２】
あるいは、本発明の抗ＣＤ１９抗体および細胞傷害性因子を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製され得る。
【０３５３】
なおも別の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、腫瘍を予め標的化するときに利用するための「レセプター」（ストレプトアビジンなど）に結合体化され得る。ここで、そのアンタゴニスト−レセプター結合体が、患者に投与され、続いて、清掃剤（ｃｌｅａｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を使用して循環から未結合の結合体が除去され、その後、治療薬（例えば、放射性ヌクレオチド）と結合体化されている「リガンド」（例えば、ビオチン）が投与される。
【０３５４】
特定の実施形態において、処置レジメンは、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物の細胞傷害性作用を緩和する化合物を含む。このような化合物としては、鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン）、ビスホスホネート、抗ヒスタミン剤（例えば、マレイン酸クロルフェニラミン）およびステロイド（例えば、デキサメタゾン、レチノイド、デルトイド（ｄｅｌｔｏｉｄ）、ベタメタゾン、コルチゾル、コルチゾン、プレドニゾン、デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、エストロゲン、テストステロン、プロゲスチン）が挙げられる。
【０３５５】
特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法と組み合わせて使用される治療薬は、小分子（すなわち、分子量が約２５００ダルトン未満である無機化合物または有機化合物）である。例えば、小分子のライブラリーは、Ｓｐｅｃｓ  ａｎｄ  ＢｉｏＳｐｅｃｓ  Ｂ．Ｖ．（Ｒｉｊｓｗｉｊｋ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ｃｏｍｇｅｎｅｘ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）およびＭａｙｂｒｉｄｇｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ  ＰＬ３４  ＯＨＷ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）から商業的に入手可能であり得る。
【０３５６】
特定の実施形態において、抗ＣＤ１９免疫療法は、抗細菌剤と組み合わせて投与され得る。抗細菌剤の非限定的な例としては、細菌感染を阻害および／もしくは低減させるか、細菌の複製を阻害および／もしくは低減させるか、または他の細胞または被験体に細菌が広がるのを阻害および／もしくは低減させる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体、核酸分子、有機分子、無機分子および小分子が挙げられる。抗細菌剤の特定の例としては、抗生物質、例えば、ペニシリン、セファロスポリン、イミペネム、アズトレオナム（ａｘｔｒｅｏｎａｍ）、バンコマイシン、サイクロセリン、バシトラシン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、トリメトプリム、ノルフロキサシン、リファンピン、ポリミキシン、アンホテリシンＢ、ナイスタチン、ケトコナゾール（ｋｅｔｏｃａｎａｚｏｌｅ）、イソニアジド、メトロニダゾールおよびペンタミジンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３５７】
特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、抗真菌薬と組み合わせて投与され得る。抗真菌薬の特定の例としては、アゾール薬物（例えば、ミコナゾール、ケトコナゾール（ＮＩＺＯＲＡＬ（登録商標））、カスポファンギンアセテート（ＣＡＮＣＩＤＡＳ（登録商標））、イミダゾール、トリアゾール（例えば、フルコナゾール（ＤＩＦＬＵＣＡＮ（登録商標）））およびイトラコナゾール（ＳＰＯＲＡＮＯＸ（登録商標）））、ポリエン（例えば、ナイスタチン、アンホテリシンＢ（ＦＵＮＧＩＺＯＮＥ（登録商標））、アンホテリシンＢ脂質複合体（「ＡＢＬＣ」）（ＡＢＥＬＣＥＴ（登録商標））、アンホテリシンＢコロイド分散（「ＡＢＣＤ」）（ＡＭＰＨＯＴＥＣ（登録商標））、リポソームアンホテリシンＢ（ＡＭＢＩＳＯＮＥ（登録商標）））、ヨウ化カリウム（ＫＩ）、ピリミジン（例えば、フルシトシン（ＡＮＣＯＢＯＮ（登録商標）））ならびにボリコナゾール（ＶＦＥＮＤ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。抗細菌薬および抗真菌薬の投与は、患者のＢ細胞が顕著に枯渇される場合の、本発明の方法において起きうる感染性疾患の作用または悪化を緩和し得る。
【０３５８】
本発明の特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、本発明の組成物の投与に伴い得る有毒な副作用を緩和する上記の因子の１以上と組み合わせて投与され得る。他の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、抗体投与、化学療法、トキシンまたは薬物の副作用を緩和する際に使用するための当該分野で周知の１以上の因子と組み合わせて投与され得る。
【０３５９】
本発明の特定の実施形態において、本発明の組成物は、カルシウムチャネル遮断薬を用いる処置レジメンと組み合わせて、またはその処置レジメンにおいて投与され得る。そのカルシウムチャネル遮断薬としては、ニフェジピン（ＰＲＯＣＡＲＤＩＡ（登録商標）、ＡＤＡＬＡＴ（登録商標））、アムロジピン（ａｍｌｏｄｏｐｉｎｅ）（ＮＯＲＶＡＳＣ（登録商標））、イスラジピン（ＤＹＮＡＣＩＲＣ（登録商標））、ジルチアゼム（ＣＡＲＤＩＺＥＭ（登録商標）、ＤＩＬＡＣＯＲ  ＸＲ（登録商標））、ニカルジピン（ＣＡＲＤＥＮＥ（登録商標））、ニソルジピン（ＳＵＬＡＲ（登録商標））およびフェロジピン（ＰＬＥＮＤＩＬ（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３６０】
本発明の特定の実施形態において、本発明の組成物は、アンギオテンシンＩＩレセプターアンタゴニストを用いる処置レジメンと組み合わせて、またはその処置レジメンにおいて投与され得る。そのアンギオテンシンＩＩレセプターアンタゴニストとしては、ロサルタン（ＣＯＺＡＡＲ（登録商標））およびバルサルタン（ＤＩＯＶＡＮ（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３６１】
本発明の特定の実施形態において、本発明の組成物は、プラゾシン（ＭＩＮＩＰＲＥＳＳ（登録商標））、ドキサゾシン（ＣＡＲＤＵＲＡ（登録商標））およびペントキシフィリン（ＴＲＥＮＴＡＬ（登録商標））を用いる処置レジメンと組み合わせて、またはその処置レジメンにおいて投与され得る。
【０３６２】
本発明の特定の実施形態において、本発明の組成物は、高用量化学療法（メルファラン、メルファラン／プレドニゾン（ＭＰ）、ビンクリスチン／ドキソルビシン／デキサメタゾン（ＶＡＤ）、リポソームのドキソルビシン／ビンクリスチン、デキサメタゾン（ＤＶｄ）、シクロホスファミド、エトポシド／デキサメタゾン／シタラビン、シスプラチン（ＥＤＡＰ））、幹細胞移植（例えば、自家幹細胞移植もしくは同種幹細胞移植および／またはミニ同種（非骨髄破壊的）幹細胞移植）、放射線治療、ステロイド（例えば、コルチコステロイド、デキサメタゾン、サリドマイド／デキサメタゾン、プレドニゾン、メルファラン／プレドニゾン）、支持的治療（例えば、ビスホスホネート、成長因子、抗生物質、静脈内免疫グロブリン、低線量放射線治療および／または整形外科的介入）、ＴＨＡＬＯＭＩＤＴＭ（サリドマイド、Ｃｅｌｇｅｎｅ）および／またはＶＥＬＣＡＤＥＴＭ（ボルテゾミブ、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）による処置レジメンと組み合わせて、またはその処置レジメンにおいて投与され得る。
【０３６３】
本発明の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法が、別の抗体および／または因子と組み合わせて投与される場合、さらなる抗体および／または因子は、本発明の抗体の投与に対して任意の順所で投与され得る。例えば、さらなる抗体は、本発明の抗ＣＤ１９抗体または免疫複合体の投与の前、投与と同時、および／または投与の後にヒト被験体に投与され得る。さらなる抗体は、本発明の抗体と同じ薬学的組成物中に存在してもよいし、そして／または異なる薬学的組成物中に存在してもよい。本明細書中に提供され、また、当該分野で周知であるような投薬量および投与の様式についての教示のいずれかに従って、本発明の抗体の投与の用量および様式ならびにさらなる抗体の用量は、同じであってもよいし、異なっていてもよい。
【０３６４】
５．７．自己免疫疾患または自己免疫障害を診断する際の抗ＣＤ１９抗体の使用
本発明はまた、ヒトＣＤ１９抗原に免疫特異的に結合する抗ＣＤ１９抗体およびその組成物を包含し、その抗ＣＤ１９抗体は、診断薬または検出可能な因子と結合体化されている。好ましい実施形態において、上記抗体は、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体である。このような抗ＣＤ１９抗体は、特定の治療の有効性を判定するなどの臨床的な試験の手順の一部として、自己免疫疾患または自己免疫障害の発症または進行をモニターまたは予後診断するために有用であり得る。このような診断および検出は、ヒトＣＤ１９抗原に免疫特異的に結合する抗ＣＤ１９抗体を検出可能な物質に連結することによって達成され得る。その検出可能な物質としては、様々な酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼであるがこれらに限定されない）；補欠分子族（例えば、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンであるがこれらに限定されない）；蛍光材料（例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ｉｓｏｔｈｉｏｃｙｎａｔｅ）、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンであるがこれらに限定されない）；発光材料（例えば、ルミノールであるがこれらに限定されない）；生物発光材料（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンであるがこれらに限定されない）；放射性材料（例えば、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）およびテクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎおよび１１７Ｔｉｎであるがこれらに限定されない）；様々なポジトロン放出断層撮影を使用するポジトロン放出金属、非放射性の常磁性金属イオンおよび放射標識されているか、または特定の放射性同位体と結合体化されている分子が挙げられるがこれらに限定されない。容易に測定され得る任意の検出可能な標識は、抗ＣＤ１９抗体と結合体化され得、そして自己免疫疾患または自己免疫障害を診断する際に使用され得る。検出可能な物質は、当該分野で公知の技術を使用して、抗体に直接、または中間体（例えば、当該分野で公知のリンカー）を介して間接的のいずれかによって連結され得るか、または結合体化され得る。例えば、米国特許第４，７４１，９００号（本発明に従って診断薬として使用するための抗体に結合体化され得る金属イオンについて）を参照のこと。特定の実施形態において、本発明は、診断薬または検出可能な因子と結合体化された抗ＣＤ１９抗体を備える診断キットを提供する。
【０３６５】
５．８．キット
本発明は、自己免疫疾患もしくは自己免疫障害、あるいは自己免疫疾患もしくは自己免疫障害によって増強されているか、またはそれを増強しているその１以上の症状を予防、処置、管理または回復するための本発明の組成物が入っている１以上の容器を備える薬学的パックまたは薬学的キットを提供する。
【０３６６】
本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形態において、キットは、１以上の容器に本発明の組成物を備える。別の実施形態において、キットは、１以上の容器に本発明の組成物を備え、そして自己免疫疾患もしくは自己免疫障害、あるいは自己免疫疾患もしくは自己免疫障害によって増強されているか、またはそれを増強している１以上の症状の予防、管理または処置に有用な１以上の他の予防薬または治療薬を１以上の他の容器に備える。好ましくは、上記キットは、自己免疫疾患または自己免疫障害を予防、処置、管理または回復するための指示書ならびに副作用および投与方法についての投薬情報をさらに備える。医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を管理している行政機関によって規定されている形態の注意書きが、必要に応じてそのような容器に添付され得る。この注意書きは、ヒト投与用の製品の製造、使用または販売に関する機関による承認を反映している。
【実施例】
【０３６７】
以下の実施例において、トランスジェニックマウスモデルを、ヒトＣＤ１９を対象とした免疫療法を評価するために使用した。これらのデータは、ＣＤ１９抗原に結合し、かつＡＤＣＣを媒介する抗体が、ＦｃγＲ（好ましくは、ＦｃγＲＩＩＩまたはＦｃγＲＩＶ）を発現し、ＡＤＣＣを行うエフェクター細胞を有する被験体においてインビボにおけるＢ細胞枯渇を誘導する際に有効であることを示す。このような抗体を使用して、インビボにおいてＢ細胞の永続性のある枯渇を誘導することができ、特定の実施形態においては、循環、脾臓およびリンパ節から実質的にすべてのＢ細胞を除去することができる。驚いたことに、骨髄Ｂ細胞およびＣＤ１９抗原を比較的低密度で発現している骨髄Ｂ細胞の前駆体が、同様に枯渇される。Ｂ細胞枯渇の有効性は、抗ＣＤ１９抗体が結合するヒトＣＤ１９の領域に依存されないが、ＣＤ１９密度によって影響される（患者サンプル中）。Ｂ細胞クリアランスの効率は、抗ＣＤ１９抗体のＡＤＣＣを媒介する能力と相関し得る。抗ＣＤ１９抗体を使用したＢ細胞クリアランスの効率は、宿主エフェクターＦｃγＲの発現／機能と相関し得る。
【０３６８】
６．１．材料および方法
本明細書中に記載のマウスＨＢ１２ａおよびＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９に結合する代表的な抗体である。このような抗体は、上の５．１節に記載した技術を使用して、ヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を作り出すことができる。ヒトＣＤ１９またはその部分に対して、ＨＢ１２ａおよびＨＢ１２ｂ抗体と同じ特異性を有するヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体は、本発明の組成物および方法における使用について企図されている。特に、ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂと同じか、または類似の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域を有するヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体は、本発明の組成物および方法における使用について企図されている。
【０３６９】
６．１．１．材料および方法
抗体作製および配列解析。ＨＢ１２ａ抗体およびＨＢ１２ｂ抗体を、ヒトＣＤ１９をコードするｃＤＮＡ（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，．１４：３８８４−９４（１９９４））でトランスフェクトしたマウスプレＢ細胞株で免疫したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて作製した。両方の抗体を１９９３年１１月３〜７日にＢｏｓｔｏｎで開催されたＦｉｆｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ａｎｄ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓに提出した。
【０３７０】
ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）ミニキット（ＱＩＡＧＥＮ（登録商標），Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用して１〜５×１０６ハイブリドーマ細胞から抽出したＲＮＡを使用して重鎖遺伝子利用を決定した。２００単位のＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ  ＩＩＩ（登録商標）逆転写酵素およびＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（登録商標）（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）製のファーストストランドｃＤＮＡ合成緩衝液、２０ｎｇのランダムヘキサマープライマーおよびＰＲＯＭＥＧＡ（登録商標）（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）製の２０単位のＲＮＡｓｅインヒビターおよびＤｅｎｖｉｌｌｅ（Ｍｅｔｕｃｈｅｎ，ＮＪ）製の８０ナノモルのｄＮＴＰを使用して、２μｇの全ＲＮＡから２０μＬの体積中でファーストストランドｃＤＮＡを合成した。１μＬのｃＤＮＡ溶液を、重鎖（ＶＨ）遺伝子のＰＣＲ増幅のための鋳型として使用した。ＰＣＲ反応を、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、５ｍＭ  ＮＨ４Ｃｌ、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、８００μＭ  ｄＮＴＰ（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ）、４００ｐｍｏｌの各プライマーおよび１０％ｐｆｕプルーフリーディングポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）を含む２．５ＵのＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から構成される反応混合物の５０μＬの体積中で行った。ＶＬについては、ＰＣＲ反応は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ８．４）、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、８００μＭ  ｄＮＴＰ（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ）、４００ｐｍｏｌの各プライマーおよび１０％ｐｆｕプルーフリーディングポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を加えた２．５ＵのＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から構成される反応混合物の５０μＬの体積中で行った。３分間の変性工程の後、増幅を３２サイクル（９４℃１分、５８℃１分、７２℃１分）行った後、７２℃で１０分間伸長した（Ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）。重鎖ｃＤＮＡを、以前に報告されているような（Ｋａｎｔｏｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：１１７５−１１８６（１９９７））無差別な（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）センス５’ＶＨプライマー（ＭｓＶＨＥ；５’ＧＧＧＡＡＴＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧ３’）（配列番号１９）およびＣγコード領域に相補的なアンチセンスプライマー（プライマーＣγ１；５’ＧＡＧＴＴＣＣＡＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＣＴＣＡＧＧＧＡ３’）（配列番号２０）を使用して増幅した。
【０３７１】
軽鎖遺伝子利用を、重鎖について記載したように抽出された細胞質ＲＮＡを使用して決定した。５’可変領域ヌクレオチド配列を、ＧｅｎｅＲａｃｅｒＴＭキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して生成したｃＤＮＡから得た。全ＲＮＡを、子ウシ腸管ホスファターゼで脱リン酸化した。タバコ酸性ピロホスファターゼを用いて、５’キャップ構造をインタクトな全長ｍＲＮＡから除去した。ＧｅｎｅＲａｃｅｒ  ＲＮＡオリゴを、Ｔ４  ＲＮＡリガーゼを使用してそのｍＲＮＡの５’末端に連結することにより、そのｍＲＮＡがｃＤＮＡに転写された後、ＧｅｎｅＲａｃｅｒ  ＰＣＲプライマーに既知の５’開始部位を提供する。連結されたｍＲＮＡを、ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＴＭＩＩＩ  ＲＴおよびＧｅｎｅＲａｃｅｒランダムプライマーを用いて逆転写した。ファーストストランドｃＤＮＡを、ＧｅｎｅＲａｃｅｒ５’プライマー（ＧｅｎｅＲａｃｅｒ  ＲＮＡオリゴと相同）および定常領域特異的アンチセンス３’プライマー（ＧＡＣＴＧＡＧＧＣＡＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＡＡＣＴＧ）（配列番号２１）を使用して増幅した。タッチダウンＰＣＲ増幅を、１０％ｐｆｕプルーフリーディングポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を加えた２．５ＵのＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎによって推奨されているような緩衝液を含む５０μＬ体積中で行った。２分間の変性工程の後、Ｔａｑおよびｐｆｕを加え、そして増幅を３工程：９４℃３０秒、７２℃６０秒を５サイクル；９４℃３０秒、７２℃６０秒を５サイクル；９４℃３０秒、６５℃３０秒、７２℃６０秒を２０サイクル行い、その後、７２℃で１０分間の伸長を行った。２．５ＵのＴａｑを加え、そしてさらに１０分間伸長を進めることによって、インタクトな３’Ａ−オーバーハングを確実にした。増幅されたＰＣＲ産物を、塩基配列決定のためおよびＯｎｅＳｈｏｔ（登録商標）ＴＯＰ１０コンピテントセルに形質転換するためのｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクターにクローニングした。重鎖について記載したように、ｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター特異的「Ｍ１３順方向」および「Ｍ１３逆方向」プライマーを使用して、８クローンからのＤＮＡ挿入断片を各ｍＡｂ軽鎖について塩基配列決定した。
【０３７２】
軽鎖について記載したように、ＡｍｐｌｉＴａｑ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼおよび最初のＰＣＲ増幅に使用したのと同じプライマーまたはｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター特異的プライマーを用いて、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇシステムを使用して増幅した後、精製された重鎖および軽鎖ＰＣＲ産物を、ＡＢＩ３７７ＰＲＩＳＭ（登録商標）ＤＮＡ配列分析装置を使用して両方向から直接塩基配列決定した。ＨＢ１２ａおよびＨＢ１２ｂの重鎖領域および軽鎖領域をセンスＤＮＡ鎖とアンチセンスＤＮＡ鎖の両方において完全に配列決定した。
【０３７３】
抗体および免疫蛍光解析。本明細書中で使用されるヒトＣＤ１９抗原に結合するモノクローナルマウス抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ａ（ＩｇＧ１）およびＨＢ１２ｂ（ＩｇＧ１）、ＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ，Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）、Ｂ４（ＩｇＧ１，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）（Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３））およびＨＤ２３７（ＩｇＧ２ｂ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ，１９８９）、ＨＤ３７抗体のアイソタイプスイッチ改変体（Ｐｅｚｚｕｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８：２７９３−２７９９（１９８７））を含んでいた。他の抗体としては：マウスＣＤ１９に結合するモノクローナルマウス抗ＣＤ１９抗体、ＭＢ１９−１（ＩｇＡ）（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７：４３７１−４３７８（１９９６））；モノクローナルマウスＣＤ２０特異的抗体（Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６：１１９−１２９（２００４））；Ｂ２２０抗体ＲＡ３−６Ｂ２（ＤＮＡＸ  Ｃｏｒｐ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）；Ｔｈｙ１．２抗体（ＣＡＬＴＡＧＴＭ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）；ならびにＣＤ５、ＣＤ４３およびＣＤ２５抗体（ＢＤ  ＰＨＡＲＭＩＮＧＥＮＴＭ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を含んでいた。アイソタイプ特異的および抗マウスＩｇ抗体または抗マウスＩｇＭ抗体は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）製であった。
【０３７４】
マウスプレＢ細胞株、３００．１９（Ａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２７：３８１−３８８（１９８１））、ｈＣＤ１９ｃＤＮＡ（Ｔｅｄｄｅｒ  ａｎｄ  Ｉｓａａｃｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４３：７１２−７１７（１９８９））でトランスフェクトされたマウスプレＢ細胞株または単一細胞白血球懸濁液を、確立された方法（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ，１４：３８８４−３８９４（１９９４））に従って、２０〜３０分間、所定の最適濃度の各抗体を使用して氷上で染色した。リンパ球の前方散乱光および側方散乱光の特性を有する細胞を、ＦＡＣＳＣＡＮ（登録商標）またはＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲ（登録商標）フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）において解析した。非反応性コントロール抗体（ＣＡＬＴＡＧＴＭ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用して、バックグラウンド染色を測定し、ゲートをそれらの細胞の９８％以上を排除するように設定した。各試験サンプルについて、単核細胞の前方散乱光および側方散乱光の特性を有する１万個の細胞を、各サンプルについて解析し、可能である場合はいつも、蛍光強度を４ディケードログスケール（ｄｅｃａｄｅ  ｌｏｇ  ｓｃａｌｅ）で示した。
【０３７５】
マウス。ヒトＣＤ１９（ｈ１９−１）を発現しているトランスジェニックマウスおよびそれらの野生型（ＷＴ）同腹仔を、以前に報告されているように（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４：３８８４−３８９４（１９９４））作製した。ＴＧ−１マウスを最初のｈ１９−１創始者（Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂ６／ＳＪＬ）から作製し、そして少なくとも７世代に亘ってＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドと交配した。ＴＧ−２マウスを、最初のｈ１９−４創始者（Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂ６／ＳＪＬ）から作製した。戻し交配を複数世代行った後、ＴＧ−１＋／＋マウスが得られ、そのＢ細胞は、ヒトＢ細胞上で見られるのとほぼ同じ密度でヒトＣＤ１９が発現された細胞表面密度を有した。ヒトＣＤ１９を発現するマウスは、さらに、いくつかの研究（Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３：３９−５０（１９９５）；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：１１５５８−１１５６２（１９９５）；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７：４３７１−４３７８（１９９６）；Ｔｅｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，６：１０７−１１８（１９９７）；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：４６６２−４６６９（１９９７）；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５９：３２７８−３２８７（１９９７）；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ，９４：１３１５８−１３１６２（１９９７）；Ｉｎａｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．，１８６：１９２３−１９３１（１９９７）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２：７０８８−７０９４（１９９９）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１１：１９１−２００（１９９９）；Ｓａｔｔｅｒｔｈｗａｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：６６８７−６６９２（２０００）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１３：４７−５７（２０００）；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６５：６６３５−６６４３（２０００）；Ｚｉｐｆｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６５：６８７２−６８７９（２０００）；Ｑｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６６：２４１２−２４１９（２００１）；Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６７：２４６９−２４７８（２００１）；Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６７：３１９０−３２００（２００１）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：４４８２０−４４８２７（２００１）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６８：５４６５−５４７６（２００２）；Ｓａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ，１０９：１４５３−１４６２（２００２）；Ｙａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０２：１３７４−８０（２００３）；Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７１：４０６２−４０７２（２００３））において報告されており、それらの中でモデルとして使用されている。ＣＤ１９欠損（ＣＤ１９−／−）マウスおよびそれらのＷＴ同腹仔もまた、以前に報告されている（Ｅｎｇｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３：３９−５０（１９９５））。トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＤ１９の発現は、内在性マウスＣＤ１９発現を低下させることが示されており（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７：４３７１−４３７８（１９９６）；およびＳａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：４６６２−４６６９（１９９７））、この内在性マウスＣＤ１９発現の低下に関する仮説もまた、評価されている（Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７１：４０６２−４０７２（２００３））。ヒトＣＤ１９を発現しているトランスジェニックマウスにおけるＣＤ１９発現の密度もまた、評価されている（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６５：６６３５−６６４３（２０００））。
【０３７６】
ＴＧ−１＋／＋マウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＮＹ）からのＦｃＲ（Ｆｃレセプター）共通γ鎖（ＦｃＲγ）欠損マウス（ＦｃＲγ−／−，Ｂ６．１２９Ｐ２−Ｆｃｅｒｇ１ｔｍ１）と交配することにより、ｈＣＤ１９＋／−ＦｃＲγ−／−およびＷＴ同腹仔が作製された。ｃ−Ｍｙｃ導入遺伝子についてヘミ接合のマウス（Ｅμ−ｃＭｙｃＴＧ，Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ−ＴｇＮ（ＩｇｈＭｙｃ）；Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）が報告された（Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１６７：３５３（１９８８）およびＡｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１８：５３３（１９８５））。ｃ−ＭｙｃＴＧマウス（Ｂ６／１２９バックグラウンド）をｈＣＤ１９ＴＧ−ｌ＋／＋マウスと交配することにより、ヘミ接合のｈＣＤ１９ＴＧ−ｌ＋／−ｃＭｙｃＴＧ＋／−子孫を作製し、ＰＣＲスクリーニングによって判定した。Ｒａｇ１−／−（Ｂ６．１２９Ｓ７−Ｒａｇ１ｔｍ１Ｍｏｍ／Ｊ）マウスは、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ出身である。標準的な方法（Ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７４：８３−９３（１９９４））に従って−２日目、１日目および４日目に、クロドロネートが封入されたリポソーム（０．１ｍＬ／１０ｇ体重；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）をＣ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈に注入することによってマクロファージ欠損マウスを作製した。すべてのマウスを病原体のない特別な仕切り設備内で飼育し、６〜９週齢で初めて使用した。
【０３７７】
ＥＬＩＳＡ。アフィニティー精製されたマウスＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３およびＩｇＡ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ）を使用して、血清Ｉｇ濃度をＥＬＩＳＡによって測定することにより、報告されているように（Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３：３９（１９９５））検量線を作成した。報告されているように（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７：４３７１（１９９６））、子ウシ胸腺二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ−  Ａｌｄｒｉｃｈ）、子ウシ胸腺煮沸ＤＮＡ（一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡを含む）またはヒストン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でコーティングされたマイクロタイタープレートを使用して、ｄｓＤＮＡ、ｓｓＤＮＡおよびヒストンに対する血清ＩｇＭおよびＩｇＧ自己抗体レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。
【０３７８】
免疫療法。滅菌抗ＣＤ１９抗体および非反応性アイソタイプコントロール抗体（０．５〜２５０μｇ）の２００μＬリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液を、外側の尾静脈を介して注入した。他に示されない限り、すべての実験において、２５０μｇの抗体を使用した。血中白血球数を赤血球溶解後に血球計算板によって数量化し、Ｂ２２０＋Ｂ細胞頻度を、フローサイトメトリー解析を用いた免疫蛍光法によって測定した。ヒトおよびマウスにおける抗体用量を、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｔｏｏｌ  Ｄｏｓｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ（ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ａｎｉｍａｌｆｒａｍｅ．ｈｔｍ）を使用して比較した。
【０３７９】
免疫。２月齢のＷＴマウスを、食塩水中の５０μｇの２，４，６−トリニトロフェニル（ＴＮＰ）−結合体化リポ多糖（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）または食塩水中の２５μｇの２，４−ジニトロフェノール−結合体化（ＤＮＰ）−ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｒａｆａｅｌ，ＣＡ）でｉ．ｐ．により免疫した。マウスを、フロイント完全アジュバント中の１００μｇのＤＮＰ−結合体化キーホールリンペットヘモシアニン（ＤＮＰ−ＫＬＨ，ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）−ＮＯＶＡＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）Ｃｏｒｐ．，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）でもｉ．ｐ．により免疫し、２１日後にフロイント不完全アジュバント中のＤＮＰ−ＫＬＨで追加免疫した。示されるように、免疫の前後でマウスから採血した。個々の血清サンプルにおけるＤＮＰ特異的抗体価またはＴＮＰ特異的抗体価を、標準的な方法（Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３：３９−５０（１９９５））に従って、ＤＮＰ−ＢＳＡ（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）−ＮＯＶＡＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）Ｃｏｒｐ．，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）またはＴＮＰ−ＢＳＡ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｒａｆａｅｌ，ＣＡ）でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを使用して、２つ組で測定した。ＴＮＰ−ＬＰＳ免疫マウス由来の血清を、ＤＮＰ−ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）の血清と１：４００希釈し、ＤＮＰ−ＢＳＡ免疫マウス由来の血清を、ＥＬＩＳＡ解析のために１：１０００希釈した。
【０３８０】
統計解析。すべてのデータは、平均±ＳＥＭとして示す。スチューデントｔ検定を使用して、サンプル平均間の差の有意性を判定した。
【０３８１】
６．２．実施例１：トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＤ１９発現
本明細書中に記載のトランスジェニックｈＣＤ１９ＴＧマウスまたはヒトＣＤ１９を発現している他のトランスジェニック動物を使用して、ヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む様々な治療的レジメン（例えば、投薬の濃度、量または時期のバリエーション）を評価することができる。ヒト患者における様々な治療的レジメンの有効性を、以下に記載する２つの指標、すなわち、特定の体液および／または組織におけるＢ細胞枯渇ならびにモノクローナルのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞に結合する能力、を使用して予測することができる。特定の実施形態において、ヒトＣＤ１９トランスジェニックマウスにおいて有効な処置レジメンは、ヒトにおける自己免疫疾患または自己免疫障害を処置するための本発明の組成物および方法と共に使用され得る。
【０３８２】
ヒトＣＤ１９が、ヒトＣＤ１９導入遺伝子を発現しているトランスジェニックマウス（ヘミ接合のＴＧ−１＋／−）由来のＢ細胞上で発現しているか否かを判定するために、これらのマウスの骨髄、血液、脾臓および腹腔洗浄からＢ細胞を抽出した。これらの細胞を、ＣＤ１９と結合するマウスモノクローナル抗ＣＤ１９抗体と接触させることによって、ヒトＣＤ１９およびマウスＣＤ１９の発現をそれらの細胞において評価した。Ｂ系列細胞への抗体の結合を、フローサイトメトリー解析を用い、２色免疫蛍光染色を使用して検出した。
【０３８３】
結果を図１Ａに、骨髄（ＢＭ）、血液、脾臓および腹腔洗浄（ＰＬ）についての、検出されたヒトＣＤ１９（ｈＣＤ１９）の発現（ｙ軸）に対してプロットされた、検出されたマウスＣＤ１９（ｍＣＤ１９）の発現（ｘ軸）のグラフとして示す。軸の単位は、左下の１から始まる４ディケードログスケールで表している。ヒトＣＤ１９（Ｂｅｃｋｍａｎ／Ｃｏｕｌｔｅｒ）に結合するＢ４抗ＣＤ１９抗体を使用して、ヒトＣＤ１９発現を可視化し、マウスＣＤ１９（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）に結合する１Ｄ３ＣＤ１９抗体を使用して、マウスＣＤ１９発現を可視化した（図１Ｂおよび１Ｃにも使用した）。ヒトＣＤ１９発現は、ヒトＢ細胞の発達の間に徐々に増えるが、マウスＣＤ１９は、マウス骨髄Ｂ細胞発達の間、高レベルで発現される。図１Ａは、ヒトＣＤ１９発現が、血液、脾臓および腹腔洗浄（ＰＬ）に見られる末梢Ｂ細胞上のマウスＣＤ１９発現と相関していることを示しており、このことから、マウス抗ｈＣＤ１９抗体（ヒトＣＤ１９に結合する）が末梢Ｂ細胞集団に結合することが証明される。さらに、小集団の骨髄（ＢＭ）由来のＢ細胞は、ヒトＣＤ１９ではなく内在性マウスＣＤ１９を発現する（ヒトＣＤ１９に結合するモノクローナルマウス抗ＣＤ１９抗体）。従って、骨髄Ｂ細胞は、ヘミ接合のＴＧ−１＋／−マウスにおいて２つのカテゴリー、すなわち、ｈＣＤ１９＋ｍＣＤ１９＋である成熟Ｂ系列細胞およびｍＣＤ１９＋だけでありあまり成熟していないＢ系列細胞に分類される（図１Ａ）。これらの結果は、これらのトランスジェニックマウスにおけるヒトＣＤ１９発現がＢ細胞成熟と相関することを示唆したＺｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ，１４：３８８４−３８９４（１９９４））の知見と一致する。血液、脾臓および腹膜腔内のすべての成熟Ｂ細胞は、ｈＣＤ１９＋かつｍＣＤ１９＋であった。
【０３８４】
平均蛍光強度（ｈＣＤ１９に対するマウス抗ＣＤ１９およびｍＣＤ１９に対するマウス抗ＣＤ１９）を測定することによって評価されるｍＣＤ１９およびｈＣＤ１９の相対的な発現レベルをそれぞれ図１Ｂに示す。ｈＣＤ１９導入遺伝子についてホモ接合であるＴＧ−１マウス（ＴＧ−１＋／＋）のうち、血液中のＢ細胞におけるｈＣＤ１９発現は、ヒトＢ細胞におけるｈＣＤ１９発現に匹敵した。ＴＧ−１＋／＋、ＴＧ−１＋／−およびＴＧ−２＋／＋トランスジェニックマウス系統におけるｈＣＤ１９発現とｍＣＤ１９発現との相対的な密度を比較するために、血液由来のＢ細胞を抽出し、上記のようにＣＤ１９発現についてアッセイした。その結果を、ヒト血中Ｂ細胞、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＴＧ−１＋／＋、ＴＧ−１＋／−およびＴＧ−２＋／＋の血中Ｂ細胞についてのパーセントヒトＣＤ１９発現（左）および野生型（ＷＴ）マウス血中Ｂ細胞、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＴＧ−１＋／＋、ＴＧ−１＋／−およびＴＧ−２＋／＋のＣＤ１９＋血中Ｂ細胞についてのパーセントマウスＣＤ１９発現（右）を示しているヒストグラムとして図１Ｂに示す。値（平均蛍光強度の線形値（ｌｉｎｅａｒ  ｖａｌｕｅ））は、ヒトまたは野生型（ＷＴ）マウス由来の血中Ｂ細胞（１００％として表示）と比較したＣＤ１９発現の平均相対的密度（±ＳＥＭ）を表す。ホモ接合のＴＧ−１＋／＋マウスにおいて、血中Ｂ細胞を測定したとき、ヒト血中Ｂ細胞よりも平均蛍光強度が約７２％高い密度でｈＣＤ１９を発現したという結果を示す。ＴＧ−１＋／−マウスにおける血中Ｂ細胞は、ヒト血中Ｂ細胞と類似の密度でｈＣＤ１９を発現し、ＴＧ−２＋／＋マウスにおける血中Ｂ細胞は、ヒト血中Ｂ細胞よりも６５％低い密度でｈＣＤ１９を発現した。
【０３８５】
ＴＧ−１＋／−マウス組織由来のＢ細胞におけるｈＣＤ１９発現とｍＣＤ１９発現との相対的密度のさらなる比較を、ｈＣＤ１９（左）およびｍＣＤ１９（右）についての、骨髄、血液、脾臓、リンパ節およびＰＬ由来のＢ細胞について抗ＣＤ１９抗体染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ±ＳＥＭ）を示すヒストグラムとして図１Ｃに示す。これらの結果から、ＴＧ−１＋／−マウスにおいて、ｈＣＤ１９が骨髄（ヒト血液レベルの６３％）＜血液（１００％）＜脾臓（１２１％）＝リンパ節（１２０％）そして＜腹膜腔（１７７％）においてＢ２２０＋細胞によって上昇したレベルで発現したことが証明された。ヒトＣＤ１９発現は、ｍＣＤ１９発現に対して少し影響を与えた。ｈＣＤ１９およびｍＣＤ１９についてのｍＲＮＡのレベルは変化しなかった。
【０３８６】
ＩｇＧ１（ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂ、Ｂ４）、ＩｇＧ２ａ（ＦＭＣ６３）およびＩｇＧ２ｂ（ＨＤ２３７）アイソタイプのマウス抗ｈＣＤ１９抗体（ヒトＣＤ１９に結合する）が異なって反応するか否かを判定するために、血中および脾臓のＢ２２０＋Ｂ細胞をＴＧ−１＋／−マウスから単離した。単離された細胞をインビトロにおいて上記の抗ＣＤ１９抗体と接触させ、そしてそれらのヒトＣＤ１９を発現するトランスジェニックマウス（ｈＣＤ１９ＴＧ）Ｂ細胞と結合する能力についてモノクローナル抗体染色を使用して評価した。その染色を、フローサイトメトリー解析を用いて、アイソタイプ特異的ＰＥ結合体化２次抗体を使用して可視化した。
【０３８７】
その結果を、５μｇ／ｍＬの、ＩｇＧ２ｂ（マウスアイソタイプ）、ＩｇＧ２ａ（マウスアイソタイプ）およびＩｇＧ１（マウスアイソタイプ）抗ＣＤ１９抗体に対する蛍光強度（ｘ軸）対相対Ｂ細胞数（ｙ軸）のグラフとして図１Ｄに示す。抗ＣＤ１９抗体で染色されるＢ２２０＋細胞の蛍光強度を実線で示し、アイソタイプ一致コントロール（ＣＴＬ）の蛍光強度を破線で示す。各抗体は、５μｇ／ｍＬの濃度で脾臓Ｂ細胞との反応性の飽和レベルに達した。この結果から、ＴＧ−１＋／−マウス由来のマウス血中Ｂ２２０＋細胞および脾臓Ｂ２２０＋細胞上の抗ＣＤ１９抗体結合密度が、試験された抗体アイソタイプについて一様であり、血中Ｂ細胞と脾臓Ｂ細胞の両方について一様であることが証明された。
【０３８８】
平均蛍光強度が抗ＣＤ１９抗体アイソタイプに対して非依存的であるか否かを判定するために、ｈＣＤ１９ｃＤＮＡでトランスフェクトしたマウスプレＢ細胞株の３００．１９を同じ抗マウスＩｇ２次抗体を使用して染色することによって、個別の抗ＣＤ１９抗体（５μｇ／ｍＬで）の結合活性を評価した。マウスＩｇ特異的ＰＥ結合体化２次抗体を使用し、フローサイトメトリー解析を用いて、抗体染色（ＭＦＩ±ＳＥＭ）を可視化した。その結果を、ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂ、Ｂ４、ＦＭＣ６３、ＨＤ２３７抗ＣＤ１９抗体およびコントロール抗体（ＣＴＬ）に対する、ｈＣＤ１９ｃＤＮＡでトランスフェクトした３００．１９細胞との抗ＣＤ１９抗体結合（染色強度によって示される、ｙ軸）のヒストグラムとして図１Ｅに示す。各抗体は、抗ＣＤ１９抗体アイソタイプに対して非依存的である特徴的な平均蛍光強度を有する細胞を染色し、ＨＢ１２ｂが、染色の最低レベルを示し、ＨＤ２３７が、最高レベルを示した。従って、示された結果から、３００．１９細胞は、抗ＣＤ１９抗体がインビトロにおいてＣＤ１９と結合する能力の比較のためのインビトロ系のモデルであることが証明される。
【０３８９】
従って、まとめると、図１に示される結果から、ｈＣＤ１９が一連の密度で発現しているとき、ｈＣＤ１９ＴＧマウスおよび３００．１９細胞は、Ｂ細胞に結合する抗ｈＣＤ１９抗体の能力を評価するための適切なインビトロおよびインビボモデル系であることを表す。
【０３９０】
図１Ａ〜Ｄは、各遺伝子型について３匹以上のマウスで得られた結果を示している。
【０３９１】
６．３．実施例２：インビボにおけるＢ細胞の抗ＣＤ１９抗体枯渇
マウス抗ＣＤ１９抗体（ヒトＣＤ１９に結合する）が、インビボにおいてｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１＋／−）の血中Ｂ細胞、脾臓Ｂ細胞およびリンパ節Ｂ細胞を枯渇させる能力について評価した。ヒトにおける抗ＣＤ２０治療に対して最初に４回投与される用量の３７５ｍｇ／ｍ２（Ｍａｌｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，１５：３２６６−７４（１９９７）およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１２：１７６３−９（１９９８））よりも約１０〜５０倍少ない単一用量である２５０または５０μｇ／マウスのいずれかで各抗体をマウスに投与した。
【０３９２】
その結果を、ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂまたはＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプ一致コントロール（ＣＴＬ）による処置の７日後のＢ細胞量のプロットである図２Ａに示す。別々のプロットは、各抗ＣＤ１９抗体に対するリンパ節、脾臓および血液組織について提供される。各プロットに示されている７日目で枯渇したゲーティングがかけられたリンパ球のパーセンテージは、フローサイトメトリー解析を用いて免疫蛍光染色によって測定したとき、ＴＧ−１＋／−マウスの血液、脾臓およびリンパ節由来の代表的なＢ細胞枯渇を証明している。図２Ｂは、抗ＣＤ１９（黒丸）またはアイソタイプコントロール（白丸）抗体による処置後のＢ２２０＋血中Ｂ細胞の平均数（±ＳＥＭ／ｍＬ）を示す。時間０の後に示される値は、１時間後に得たデータを示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、示されている用量の抗ＣＤ１９（黒棒）またはコントロール（白棒）抗体でＴＧ−１＋／−マウスを処置した後の脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）をそれぞれ示す。図２Ｂ〜Ｄにおいて、抗ＣＤ１９またはアイソタイプ−コントロール抗体で処置されたマウスについての平均結果間の有意差（データポイントあたり３匹以上のマウス）が示されている；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、コントロールとの比較。
【０３９３】
各抗体は、処置の１時間以内に大部分の循環Ｂ細胞を枯渇させ（図２Ｂ）、強力な枯渇が、７日目まで、脾臓およびリンパ節のＢ細胞の頻度（図２Ａ）および数（図２Ｃ〜Ｄ）に影響を与えた。ＨＢ１２ａ抗体は、血中Ｂ細胞の９８％および脾臓およびリンパ節のＢ細胞の９０〜９５％を７日目まで枯渇させた。同様に、ＨＢ１２ｂ、Ｂ４、ＦＭＣ６３およびＨＤ２３７抗体は、血中Ｂ細胞の９９％、９６％、９９％および９７％をそれぞれ枯渇させた。ＨＢ１２ｂ、Ｂ４、ＦＭＣ６３およびＨＤ２３７抗体は、脾臓およびリンパ節のＢ細胞の８８〜９３％、６４〜８５％、７２〜９５％および８８〜９０％をそれぞれ枯渇させた。ほんの少し残っていた末梢Ｂ細胞は、骨髄からの潜在的な移出（ｅｍｉｇｒａｎｔ）であった主に未成熟細胞の表現型を示した。ＷＴマウスに投与したとき、いずれのＣＤ１９抗体も有意な効果を有しなかった。また、同一の条件下で投与したアイソタイプ一致コントロール抗体は、Ｂ細胞の数に影響を与えなかった（図２Ａ〜Ｄ）。従って、抗ｈＣＤ１９抗体は、７日目まで、ｈＣＤ１９ＴＧマウスの循環、脾臓およびリンパ節から効果的にＢ細胞を枯渇させた。ＴＧ−１＋／−マウスにおけるＢ細胞枯渇を表１にまとめた。
【０３９４】
【表１】
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ａＢ細胞サブセットは：骨髄（ＢＭ）プロＢ（ＣＤ４３＋ＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏ）、プレＢ（ＣＤ４３−ＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏ）、未成熟Ｂ（ＩｇＭ＋Ｂ２２０ｌｏ）、成熟Ｂ（ＩｇＭ＋Ｂ２２０ｈｉ）；腹膜のＢ１ａ（ＣＤ５＋Ｂ２２０ｌｏ）、Ｂ２（ＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉ）であった。
【０３９５】
ｂ値（±ＳＥＭ）は、抗体処置（２５０μｇ）の７日後のマウスに存在する細胞数（×１０−６）を示す。ＢＭ値は、両大腿骨についてである。血球数は、１ｍＬあたりである。ＬＮ数は、両鼠径部および両腋窩の節についてである。マウス数は、括弧内に示す。平均間の有意差を；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。
【０３９６】
６．３．１．骨髄Ｂ細胞の枯渇
公知の抗ＣＤ１９抗体が様々な体液および組織由来のＢ細胞を枯渇させる際に有効であるか否か判定するために、このような抗体をｈＣＤ１９ＴＧマウスにおいて試験した。本明細書中に記載されるアッセイを使用して、他の抗ＣＤ１９抗体、例えば、ヒトＣＤ１９抗原の特定の部分に結合する抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞を効果的に枯渇させるか否かを判定することができる。Ｂ細胞を枯渇させることができると同定された抗ＣＤ１９抗体を使用した結果は、ヒトにおける使用と相関し得る。その同定された抗体の特性を有する抗体は、ヒトにおける自己免疫疾患および自己免疫障害を処置するための本発明の組成物および方法に使用され得る。図３Ａ〜３Ｆは、ＣＤ１９抗体処置後の骨髄Ｂ細胞の枯渇を示す。
【０３９７】
図３Ａは、ＴＧ−１＋／−骨髄Ｂ細胞亜集団によるｈＣＤ１９およびｍＣＤ１９の発現についての蛍光強度（ｘ軸）対Ｂ細胞の相対数（ｙ軸）のグラフを示す。この蛍光強度は、リンパ球の前方散乱特性および側方散乱特性による細胞のフローサイトメトリー解析を用いた４色免疫蛍光染色によって評価した。プロＢ細胞をＣＤ４３＋ＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏ、プレＢ細胞をＣＤ４３−ＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏ、未成熟Ｂ細胞をＩｇＭ＋Ｂ２２０ｌｏそして成熟Ｂ細胞をＩｇＭ＋Ｂ２２０ｈｉと定義した。棒グラフ（右）は、各Ｂ細胞サブセット（データポイントあたり３匹以上のマウス）についてのＣＤ１９発現に対する相対平均ＭＦＩ（±ＳＥＭ）値を示す。ｈＣＤ１９ＴＧマウス（図１Ａ）では、Ｂ細胞が成熟し、骨髄を出るときのヒトにおけるＣＤ１９発現は、不均一である。少数のプロＢ細胞だけが（２０％，ＣＤ４３ｈｉＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏ）、ＴＧ−１＋／−マウスにおいてｈＣＤ１９を発現したが、ほとんどのプレＢ細胞は、ｈＣＤ１９＋であり、骨髄中の大部分の成熟Ｂ細胞は、比較的高レベルでｈＣＤ１９を発現した。半数のプロＢ細胞（５５％，ＩｇＭ−２２０＋）がＴＧ−１＋／−マウスにおいてｍＣＤ１９を発現していたが、ｍＣＤ１９は、骨髄中の大部分のプレＢ細胞および成熟Ｂ細胞によって比較的高レベルで発現していた。
【０３９８】
図３Ｂは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）による処置の７日後のｈＣＤ１９ＴＧマウスにおけるｈＣＤ１９＋細胞の枯渇を示す。これはフローサイトメトリー解析を用いた２色免疫蛍光染色によって評価した。数値は、示されたゲート内の細胞の相対度数を表す。結果は、マウス遺伝子型の各々の３つの同腹仔対で得られた結果を表す。ＣＤ１９抗体処置後、ＴＧ−１＋／、ＴＧ−１＋／−およびＴＧ−２＋／＋マウスの骨髄中のかなり大部分のｈＣＤ１９＋細胞が、２５０μｇ／マウスで投与されたＦＭＣ６３抗体によって枯渇した。
【０３９９】
図３Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウスの抗ＣＤ１９またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）による処置の７日後の代表的なＢ２２０＋Ｂ細胞枯渇を示す。棒グラフ値は、抗体処置マウスの両大腿骨内のＢ２２０＋細胞の総数（±ＳＥＭ）を表す。サンプル平均間の有意差（１群あたり３匹以上のマウス）を示す；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。予想外にも、低レベルから検出不可能なレベルでｈＣＤ１９を発現していた多数のｍＣＤ１９＋プレＢ細胞もまた、骨髄から枯渇した。このことと一致して、ＦＭＣ６３、ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂ、Ｂ４およびＨＤ２３７抗体は、大部分の骨髄Ｂ２２０＋細胞を枯渇させた。
【０４００】
図３Ｄは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置した７日後のＴＧ−１＋／−マウスの代表的な骨髄Ｂ細胞サブセットの枯渇を示す。これは、３色免疫蛍光染色によって評価した。ＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏプロ／プレＢ細胞をＣＤ４３発現に基づいてさらに細分した（下のパネル）。図３Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統をＦＭＣ６３またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置した７日後の骨髄のＣＤ２５＋Ｂ２２０ｌｏプレＢ細胞の代表的な枯渇を示す。これは、２色免疫蛍光染色によって評価した。結果は、異なる日に行われた実験からの結果であるため、ゲートは、同一ではない。個々の骨髄亜集団を解析したとき、大部分のＣＤ４３ｈｉＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏプロＢ細胞（図３Ｄ）は、ＴＧ−１＋／＋、ＴＧ−１＋／−またはＴＧ−２＋／＋マウスにおいてＦＭＣ６３抗体の処置によって影響を受けなかったが、大部分のＣＤ２５＋ＣＤ４３ｌｏＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏプレＢ細胞（図３Ｅ）は、枯渇した。図３Ｆは、３対以上の同腹仔をＦＭＣ６３（黒棒）またはコントロール（白棒）抗体で処置した７日後の両大腿骨内のプロＢ、プレＢ、未成熟および成熟Ｂ細胞の数値（±ＳＥＭ）を表す棒グラフを示す。これらの結果から、ＴＧ−１＋／＋、ＴＧ−１＋／−およびＴＧ−２＋／＋マウスの未成熟Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の大部分が骨髄から枯渇したことが証明された。従って、ＣＤ１９抗体処置によってほとんどのｈＣＤ１９＋細胞（低レベルでｈＣＤ１９を発現していたプレＢ細胞を含む）が骨髄から枯渇した。
【０４０１】
６．３．２．腹膜Ｂ細胞の枯渇
ＴＧ−１＋／−マウスにおける腹膜腔Ｂ細胞は、ＣＤ５−ＩｇＭｌｏＢ２２０ｈｉのサブセットの通常の（Ｂ２）Ｂ細胞よりも約２５％高い密度でｈＣＤ１９を発現していたＣＤ５＋ＩｇＭｈｉＢ２２０ｌｏＢ１細胞の存在（図４Ａ）に主に起因して、他の組織Ｂ細胞よりも高いレベルでｈＣＤ１９を発現する（図１Ａおよび図１Ｃ）。図４Ｂ〜４Ｃにより、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に感受性であることが証明される。
【０４０２】
図４Ａは、ヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現（ｘ軸）対腹膜腔のＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａおよびＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２（通常）Ｂ細胞（ｙ軸）の相対数のプロットを示す。腹膜腔リンパ球の単一細胞の懸濁液を、フローサイトメトリー解析を用いた３色免疫蛍光染色によって調べた。棒グラフは、ＴＧ−１＋／−マウスの３対の同腹仔によるＣＤ１９発現についての平均ＭＦＩ（±ＳＥＭ）値を表す。
【０４０３】
図４Ｂは、ＣＤ１９（２５０μｇのＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂおよびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）抗体またはコントロール抗体（２５０μｇ）で処置されたＴＧ−１＋／−マウス由来の腹膜腔Ｂ２２０＋細胞の枯渇を示す。数値は、７日目における、示されているゲート内のＢ２２０＋細胞の相対度数を表している。棒グラフ値は、抗体処置マウス（１群あたり３匹以上のマウス）の腹膜内のＢ２２０＋細胞の総数（±ＳＥＭ）を表している。サンプル平均間の有意差を；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。これらの結果から、２５０μｇ／マウスでの抗ＣＤ１９抗体処置が腹膜Ｂ２２０＋Ｂ細胞のかなりの部分を７日目までに枯渇させたことが証明される。図４Ｂに示される結果は、Ｂ１細胞と通常のＢ２細胞の両方の枯渇を部分的に説明する。ｈＣＤ１９がＴＧ−１＋／＋マウスにおいて最も高い密度で発現されるとき、大部分のＢ１細胞およびＢ２細胞が枯渇した。しかしながら、ｈＣＤ１９レベルが低い場合、Ｂ１細胞およびＢ２細胞のＣＤ１９媒介性枯渇は、ＴＧ−１＋／−およびＴＧ−２＋／＋マウスにおいてそれほど効率的でなかった。従って、ＣＤ１９抗体処置により、平均蛍光強度を使用して評価されるようにＣＤ１９発現の密度に依存して腹膜Ｂ１細胞および腹膜Ｂ２細胞が枯渇したが、腹膜Ｂ細胞が脾臓およびリンパ節のＢ細胞よりも抗ＣＤ１９抗体媒介性枯渇に対して抵抗性であった。
【０４０４】
図４Ｃは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスを抗ＣＤ１９抗体またはコントロール抗体で処置した７日後のＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａＢ細胞およびＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。数値は、示されたゲート内の各Ｂ細胞サブセットの相対度数を表している。棒グラフ値は、抗体処置マウス（１群あたり３匹以上のマウス）の腹膜内の各細胞サブセットの総数（±ＳＥＭ）を表している。サンプル平均間の有意差を；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。
【０４０５】
６．３．３．異なる抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞クリアランスを媒介する
ＨＢ１２ａおよびＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体が公知の抗ＣＤ１９抗体と異なるか否かを判定するために、本明細書中で使用される抗ＣＤ１９抗体の可変領域の各々のアミノ酸配列を解析した（図５Ａおよび５Ｂ、６Ａおよび６Ｂ、７Ａおよび７Ｂ）。
【０４０６】
図５Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の重鎖ＶＨ−Ｄ−ＪＨ接合配列についてのヌクレオチド（配列番号１）および予測アミノ酸（配列番号２）配列を示す。５’ＰＣＲプライマーと重複する配列を二重下線で示す。重複プライマーを使用するため、その配列は、実際のＤＮＡ配列と異なり得る。Ｖ配列とＤ配列とＪ配列との間の接合部境界のおよその位置を配列中に縦棒（｜）で示す。小文字のヌクレオチドは、接合部境界または体細胞超変異のための潜在的な部位のいずれかにおけるヌクレオチド付加を示す。抗体のアミノ末端残基（Ｅ）を残基１と標識する。
【０４０７】
図５Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の重鎖ＶＨ−Ｄ−ＪＨ接合配列についてのヌクレオチド（配列番号３）および予測アミノ酸（配列番号４）配列を示す。５’ＰＣＲプライマーと重複する配列を二重下線で示す。重複プライマーを使用するため、その配列は、実際のＤＮＡ配列と異なり得る。Ｖ配列とＤ配列とＪ配列との間の接合部境界のおよその位置を配列中に縦棒（｜）で示す。小文字のヌクレオチドは、接合部境界または体細胞超変異のための潜在的な部位のいずれかにおけるヌクレオチド付加を示す。抗体のアミノ末端残基（Ｅ）を残基１と標識する。
【０４０８】
図６Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖Ｖκ−Ｊκ接合配列についてのヌクレオチド（配列番号１５）および予測アミノ酸（配列番号１６）配列を示す。図６Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖Ｖ−Ｊ接合配列についてのヌクレオチド（配列番号１７）および予測アミノ酸（配列番号１８）配列を示す。アミノ酸配列解析によって推定される成熟分泌タンパク質のアミノ末端アミノ酸を１番と付番する。３’ＰＣＲプライマーと重複する配列を二重下線で示す。Ｖ−Ｊ−Ｃ領域についてのＪ領域ヌクレオチドとの予測接合部境界を（／）で示し、体細胞超変異を起こす可能性のある部位を太字で示す。
【０４０９】
図７Ａおよび７Ｂは、公開されているマウス抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列アラインメントを示す。図７Ａは、コンセンサス配列（配列番号５）、ＨＢ１２ａ（配列番号２）；４Ｇ７（配列番号６）、ＨＢ１２ｂ（配列番号４）、ＨＤ３７（配列番号７）、Ｂ４３（配列番号８）およびＦＭＣ６３（配列番号９）を含む重鎖ＶＨ−Ｄ−ＪＨ接合配列についての配列アラインメントを示す。各抗体のＶ領域、Ｄ領域およびＪ領域についてのコード配列の起源の、アミノ酸の付番および命名は、従来の方法（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））に従う。ここで、アミノ酸の１〜９４位および相補性決定領域ＣＤＲ１および２は、ＶＨ遺伝子によってコードされる。ダッシュ記号は、類似のアミノ酸配列のアラインメントを最大にするために配列中に挿入されたギャップを示す。中点は、各抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列とすべての抗体についてのコンセンサスアミノ酸配列とが同一であることを示す。ＣＤＲ領域は、明確にするために強調されている。図７Ｂは、抗ＣＤ１９抗体の軽鎖Ｖκアミノ酸配列解析を示す。コンセンサス配列（配列番号１０）、ＨＢ１２ａ（配列番号１６）；ＨＢ１２ｂ（配列番号１８）；ＨＤ３７（配列番号１１）、Ｂ４３（配列番号１２）、ＦＭＣ６３（配列番号１３）および４Ｇ７（配列番号１４）をアラインメントした。各抗ＣＤ１９抗体についてのコード配列の起源のアミノ酸の付番および命名は、従来の方法（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）に従う。予測されるシグナル配列切断部位の後ろのアミノ酸を１番とする。ダッシュ記号は、類似のアミノ酸配列のアラインメントを最大にするために配列中に挿入されたギャップを示す。ＣＤＲ領域は、明確にするために強調されて（四角で囲われて）いる。
【０４１０】
この研究において調べられた各抗ＣＤ１９抗体は、かなりの数のＢ細胞をインビボにおいて枯渇させたため、これらの抗体の配列が異なっているか否か、およびこれらの抗体が、潜在的に異なるＣＤ１９エピトープと結合するのか否かを判定するために各抗ＣＤ１９抗体の可変領域のアミノ酸配列を評価した。抗体は、各抗体分子の可変領域内の特定のアミノ酸によって媒介される分子相互作用によって標的抗原と結合する。従って、タンパク質抗原とこれらの抗原上の特定のエピトープに結合するその抗体との間の複雑な相互作用は、各抗体およびその特定のアミノ酸配列に対してほぼ独特である。抗原と抗体の相互作用におけるこの複雑さのレベルは、ほとんどのタンパク質抗原に対する多様な抗体レパートリーを反映している。標的抗原との抗体の相互作用は、抗体分子の相補性決定領域（ＣＤＲ）内のアミノ酸によって主に媒介されるが、フレームワークアミノ酸もまた、抗原結合活性にとって不可欠である。従って、構造的に似ている抗体は、同じ抗原または同じ標的分子領域に結合する可能性があるが、異なるＶ領域およびＣＤＲ領域を有する構造的に異なる抗体は、異なる分子相互作用によって抗原の異なる領域と相互作用する可能性がある。
【０４１１】
標的抗原の同じ分子領域（またはエピトープ）と相互作用し、それに結合する抗体は、定義上は構造的に似ている。ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂ、ＦＭＣ６３ならびにＨＤ３７（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９６：５１−６２（１９９６）；Ｌｅ  Ｇａｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４５３：１６４−１６８（１９９９））、２Ｇ７（Ｍｅｅｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，３：３０５−３２０（１９８４）；Ｂｒａｎｄｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，２７：１２６４−１２７０（１９９９））およびＢ４３（Ｂｅｊｃｅｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５：２３４６−２３５１（１９９５））抗体を含む他の公開されている抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列を比較した。抗ＣＤ１９抗体の重鎖を、Ｖ（Ｄ）Ｊ遺伝子セグメントと、Ｖ１Ｓ３９、Ｖ１Ｓ５６、Ｖ１Ｓ１３６またはＶ２Ｓ１遺伝子セグメント由来のＶ領域、ＦＬ１６．１遺伝子セグメント由来のＤ領域およびＪ２またはＪ４遺伝子セグメントのいずれか由来のＪ領域との異なる組み合わせによって作製した（表２）。Ｂ４３抗体およびＨＤ３７抗体の公開されている重鎖および軽鎖の可変領域は、アミノ酸配列において実質的に同じであった（図７Ａ〜Ｂ）。この変換のレベルは、これらの抗体の各々が、同一のＶＨ（Ｄ）ＪＨおよびＶＬＪＬ接合部を有し、ヌクレオチドレベルでも顕著に似ているという事実を反映しており、ほとんどの差は、各ｃＤＮＡ配列をＰＣＲ増幅するための重複プライマーの使用が原因である。このことにより、ＨＤ３７抗体およびＢ４３抗体が、同一ではないにしても共通の起源を共有していることが示唆され、従って、これらの抗体は、ＣＤ１９タンパク質上の同一のエピトープに結合することが示唆される。ＨＢ１２ａ抗体および４Ｇ７抗体はまた、他の抗ＣＤ１９抗体とも異なっていた。ＨＢ１２ａ抗体および４Ｇ７抗体の重鎖領域が似ていて、そして同じ生殖細胞系列ＶＨ（Ｄ）ＪＨ遺伝子セグメント由来であった可能性があるにもかかわらず、異なる接合部境界がＤ−ＪＨ構築に使用された（図７Ａ）。ＨＢ１２ｂ抗体が異なるＶＨ遺伝子セグメントを利用し（表２）、他の抗ＣＤ１９抗体由来の明確に異なるＣＤＲ３配列を有した（図７Ａ）。ＦＭＣ６３抗体もまた、他の抗ＣＤ１９抗体と非常に異なったアミノ酸配列を有していた。
【０４１２】
【表２】
2008540447.tif 000004
Ｎ．Ｄ．，測定せず
ａ括弧内の数値は、ＰＣＲプライマーと重複する領域を除外したときの、ＣＤ１９抗体をコードする遺伝子と、現在のデータベースにおいて同定される最も相同な生殖細胞系列配列とのヌクレオチドの差の数を示す。
ｂ遺伝子配列についてのＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号
図７Ｂに示されるように、ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂ、ＦＭＣ６３、４Ｇ７およびＨＤ３７／Ｂ４３抗体の各々は、異なる軽鎖遺伝子を利用する（図７Ｂ）。軽鎖は、複数のＶ遺伝子セグメントとＪ遺伝子セグメントから作製された。これらの６つの抗ＣＤ１９抗体のＨ鎖配列とＬ鎖配列との間の均一性がないということは、これらの抗体が、ヒトＣＤ１９上のいくつかの異なる部位に結合することを示唆する。対をなした重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の比較から、これらの抗ＣＤ１９抗体のほとんどが、構造的に異なり、それゆえ、異なる分子相互作用によってヒトＣＤ１９と結合することがさらに示唆される。従って、抗ＣＤ１９抗体がインビボにおいてＢ細胞を枯渇させる能力は、同一の部位でＣＤ１９と結合する限られた数の抗体に制限されるものではないが、分類としての抗ＣＤ１９抗体の一般特性である。
【０４１３】
６．３．４．ＣＤ１９密度はＣＤ１９抗体に誘導されるＢ細胞枯渇の有効性に影響を及ぼす
Ｂ細胞を枯渇させる抗ＣＤ１９抗体の能力がＣＤ１９密度に依存するか否かを判定するために、ＨＢ１２ｂおよびＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体を、異なるレベルでＣＤ１９を発現しているマウスに投与した。その結果から、Ｂ細胞上のヒトＣＤ１９密度および抗体アイソタイプが、抗ＣＤ１９抗体の存在下でのＢ細胞の枯渇に影響を及ぼし得ることが証明された。同じアッセイを使用して、他の抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞を効果的に枯渇させ得るか否かを判定することができ、その結果は、異なるレベルのＣＤ１９発現によるヒト患者の処置と相関し得る。従って、５．５．３節に記載されているヒト被験体におけるＣＤ１９の存在および密度を調べるための方法を使用して、特定の抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞を枯渇させ得る患者または患者集団を同定することができ、そして／または適当な投与量を決定することができる。
【０４１４】
上で示した結果から、試験した５つすべての抗ＣＤ１９抗体が２５０または５０μｇで使用したとき、ＴＧ−１＋／−マウスにおいて同様に有効であったが、血液骨髄および脾臓由来のＢ細胞についてのＢ細胞枯渇の程度は、抗体アイソタイプと相関していると考えられることが示唆される。ＩｇＧ２ａ＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ２ｂ（図２Ａ〜２Ｄ）。それゆえ、ＨＢ１２ｂ（ＩｇＧ１）およびＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ）抗体の有効性を、様々な密度でＣＤ１９を発現している、ホモ接合であるＴＧ−１＋／＋、ヘテロ接合であるＴＧ−１＋／−およびホモ接合であるＴＧ−２＋／＋マウスにおいて比較した（図１Ａ〜Ｅ）。
【０４１５】
ＣＤ１９密度が、抗ＣＤ１９抗体に誘導されるＢ細胞枯渇の有効性に影響を及ぼすか否かを判定するために、ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体で処置（７日、２５０μｇ／マウス）した後のｈＣＤ１９ＴＧマウスにおいて代表的な血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の枯渇を調べた。数値は、ゲーティングがかけられたＢ２２０＋リンパ球のパーセンテージを表している。棒グラフは、抗ＣＤ１９抗体（黒棒）またはアイソタイプコントロール（白棒）抗体で処置した後の、血中（１ｍＬあたり）Ｂ細胞または脾臓（総数）Ｂ細胞の数値（±ＳＥＭ）を示している。抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプコントロール抗体で処置マウス（データポイントあたり３匹以上のマウス）についての平均結果間の有意差を；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。
【０４１６】
図８Ａ〜８Ｄで示される結果から、ＣＤ１９密度が、インビボにおいて抗ＣＤ１９抗体によってＢ細胞枯渇の効率に影響を与えることが証明される。ＴＧ−２＋／＋のマウスにおける低レベルのＣＤ１９発現は、ＨＢ１２ｂ抗体によって７日目に循環Ｂ細胞または組織Ｂ細胞の枯渇に顕著な影響を有した（図８Ａ）。ＴＧ−１＋／＋、ＴＧ−１＋／−およびＴＧ−２＋／＋マウスによるＣＤ１９発現の差もまた、ＦＭＣ６３抗体によって循環Ｂ細胞および組織Ｂ細胞の枯渇に影響を与えたが、循環Ｂ細胞の枯渇を有意に変化させなかった（図８Ｂ）。
【０４１７】
ＣＤ１９密度が、ＣＤ１９ｍＡｂ媒介性Ｂ細胞枯渇における重要な因子であるか否かをさらに検証するために、ＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋およびＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋Ｂ細胞の相対的な枯渇速度を直接比較した。ｈＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋およびｈＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋マウス由来の分画されていない脾細胞をそれぞれ０．１および０．０１μＭのＶｙｂｒａｎｔＴＭ  ＣＦＤＡ  ＳＥ（ＣＦＳＥ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で製造者の指示に従って標識することによって、ＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋およびＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋マウス由来の脾細胞を、ＣＦＳＥで区別して標識した。ＣＦＳＥ標識脾細胞のうちのＢ２２０＋細胞の相対度数を、フローサイトメトリー解析を用いた免疫蛍光染色によって測定した。続いて、等しい数のＣＦＳＥ標識Ｂ２２０＋ｈＣＤ１９ＴＧ−ｌ＋／＋およびｈＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋脾細胞（２．５×１０５）を３匹の野生型Ｂ６マウスの腹膜腔に注入した。１時間後、そのマウスにＦＭＣ６３またはコントロールｍＡｂ（２５０μｇ，ｉ．ｐ．）のいずれかを投与した。２４時間後、標識脾細胞を混合し、野生型マウスに導入した。２４時間後、標識リンパ球を回収し、ＣＦＳＥ標識Ｂ２２０＋およびＢ２２０−細胞の相対度数をフローサイトメトリーによって評価した。図８Ｃ中の各ヒストグラム内のゲートは、ＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋（ＣＦＳＥｈｉｇｈ）およびＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋（ＣＦＳＥｌｏｗ）脾細胞集団内のＢ２２０＋細胞の頻度を示す。棒グラフは、コントロールｍＡｂ処置マウスに対する抗ＣＤ１９ｍＡｂ処置マウス中に存在するＣＦＳＥ標識細胞集団の数を示す。結果は、３匹以上の野生型レシピエントマウスに導入したｈＣＤ１９ＴＧ−ｌ＋／＋脾細胞（黒棒）およびｈＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋脾細胞（白棒）を表し、サンプル平均（±ＳＥＭ）間の有意差を＊＊ｐ＜０．０１として示す。
【０４１８】
個々のマウスを抗ＣＤ１９またはコントロールｍＡｂで処置した２４時間後にＢ細胞クリアランスを評価した。ＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋Ｂ２２０＋Ｂ細胞は、抗ＣＤ１９ｍＡｂ処置マウスにおいて、コントロールｍＡｂ処置マウスと比較してＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋Ｂ細胞よりも有意に速い速度で（ｐ＜０．０１）枯渇していた（図８Ｃ）。さらに、抗ＣＤ１９ｍＡｂ処置マウスにおけるＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋Ｂ２２０＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋Ｂ２２０＋Ｂ細胞の相対度数は、コントロールｍＡｂ処置マウスにおけるＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋Ｂ２２０＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋Ｂ２２０＋Ｂ細胞の比よりも有意に低かった（ｐ＜０．０１）。同様に、抗ＣＤ１９またはコントロールｍＡｂマウスにおけるＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋およびＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋ＣＦＳＥ標識Ｂ２２０−細胞の数もまた似ていた。このようにして、高密度でＣＤ１９を発現するＣＤ１９ＴＧ−１＋／＋Ｂ細胞は、低密度でＣＤ１９を発現するＣＤ１９ＴＧ−２＋／＋Ｂ細胞よりも速い速度で枯渇した。
【０４１９】
図８Ｄは、ＣＤ１９抗体（太線）、ＣＤ２０抗体（細線）またはアイソタイプ一致コントロール（ＣＴＬ、破線）抗体（５μｇ／ｍＬ）で染色したＢ２２０＋細胞の蛍光強度を示しており、抗体染色は、アイソタイプ特異的ＰＥ結合体化２次抗体を使用して、フローサイトメトリー解析により可視化した。結果は、４つの実験において得られたものを表している。これらの結果は、ＴＧ−１＋／−マウス由来の脾臓Ｂ２２０＋Ｂ細胞上の相対的な抗ｈＣＤ１９抗体および抗ｍＣＤ２０抗体の結合密度を示す。抗ｍＣＤ２０抗体結合の密度は、各抗体について使用した抗体アイソタイプと無関係に抗ＣＤ１９抗体結合よりも１０〜６４％高かった（図８Ｄ）。ｍＣＤ２０発現は、概してｈＣＤ１９発現よりも低かったが、ＴＧ−１＋／−マウスにおけるｈＣＤ１９発現のレベルは、ヒトＢ細胞上で見られたｈＣＤ１９発現のレベル（図１Ｂ）に匹敵した。従って、ＴＧ−１＋／＋およびＴＧ−１＋／−Ｂ細胞による高レベルのＣＤ１９発現が、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１抗体の有効性における相対的な差を混乱させたが、抗ＣＤ１９抗体は、比較的低密度でｈＣＤ１９を発現していた（図１Ｂ）ＴＧ−２＋／＋Ｂ細胞を効果的に枯渇させた。ＴＧ−１およびＴＧ−２トランスジェニックマウスにおけるＢ細胞の数とｈＣＤ１９発現の密度との間に直接的な逆相関があるが、ｈＣＤ１９の密度が、Ｂ細胞の枯渇に寄与する重要な因子である。２５０μｇ／マウスで投与したとき、抗ＣＤ１９抗体レベルは飽和した（図１２における飽和レベルもまた参照のこと）。従って、Ｂ細胞数にかかわらず、遊離抗ＣＤ１９抗体レベルは、過剰であった。
【０４２０】
６．４．実施例３：組織Ｂ細胞枯渇はＦＣγＲ依存性である
以下のアッセイを使用して、抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇がＦｃγＲ発現に依存するか否かを判定した。ｈＣＤ１９ｔｇと、特定のＦｃγＲの発現を欠くマウスとを交配させるプロセスによって、ｈＣＤ１９を発現し、かつ特定のＦｃγＲを発現しないマウスを作製した。このようなマウスを使用して、ＦｃγＲ発現が関与する経路、例えば、ＡＤＣＣを介して抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞を枯渇させる能力について評価するアッセイを行った。つまり、これらのアッセイにおいて同定された抗ＣＤ１９抗体は、上の５．１．節に記載した技術を使用して、キメラ抗ＣＤ１９抗体、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を操作するために使用され得る。このような抗体は、ヒトにおける自己免疫疾患および自己免疫障害を処置するための本発明の組成物および方法に次々と使用され得る。
【０４２１】
先天免疫系は、抗ＣＤ２０抗体で処置した後、ＦｃγＲ依存性プロセスを介してＢ細胞枯渇を媒介する。マウスエフェクター細胞は、ＩｇＧに対する４つの異なるＦｃγＲクラス、すなわち、高アフィニティーＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）および低アフィニティーＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）およびＦｃγＲＩＶ分子を発現する。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶは、それぞれのリガンド結合α鎖が通常のγ鎖（ＦｃＲγ）と会合するヘテロオリゴマー複合体である。ＦｃＲγ鎖発現は、ＦｃγＲの構築およびＦｃγＲがエフェクター機能（マクロファージによるファゴサイトーシスを含む）を引き起こすのに必要である。ＦｃＲγ−／−マウスは、高アフィニティーＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）および低アフィニティーＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）およびＦｃγＲＩＶ分子を欠いているため、ｈＣＤ１９を発現するＦｃＲγ−／−マウスを使用して、抗ＣＤ１９抗体による処置の後の組織Ｂ細胞枯渇におけるＦｃγＲの役割を評価した。図９Ａは、ＦｃＲγ＋／−またはＦｃＲγ−／−同腹仔を抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプコントロール抗体で処置した７日後の代表的な血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の枯渇を示す。数値は、示されたゲート内のＢ２２０＋リンパ球のパーセンテージを示している。図９Ｂは、０日目にＦｃＲγ−／−同腹仔を抗体で処置した７日後の血中Ｂ細胞および組織Ｂ細胞の枯渇を示している。血液について、時間０の後の値は、１時間後に得られたデータを示している。棒グラフは、マウス（１群あたり３匹以上のマウス）を抗ＣＤ１９（黒棒）抗体またはアイソタイプコントロール（白棒）抗体で処置した後の平均Ｂ２２０＋Ｂ細胞数（±ＳＥＭ）を示している。抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプコントロール抗体で処置マウスに対する平均結果間の有意差を＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。図９Ａおよび９Ｂに示される結果から、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞枯渇は、ＦｃＲγ依存性であることが証明される。コントロールＩｇＧ２ａ抗体で処置したＦｃＲγ−／−同腹仔と比較して、ＦＭＣ６３抗体で処置した後のＦｃＲγ−／−マウスにおける骨髄、血液、脾臓、リンパ節および腹膜腔のＢ細胞の数に有意な変化はなかった。対照的に、抗ＣＤ１９抗体処置により、ＦｃＲγ＋／−同腹仔中のほとんどのＢ細胞が枯渇した。従って、抗ＣＤ１９抗体処置により、主に、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩＩ発現を必要とする経路を介して血中Ｂ細胞および組織Ｂ細胞が枯渇される。
【０４２２】
図９Ｃは、単球が枯渇したｈＣＤ１９ＴＧ−１＋／−マウス中の代表的なＢ細胞数を示している。マウスを、−２、１および４日目にクロドロネートリポソームで処置し、また、ＦＭＣ６３（ｎ＝９）、アイソタイプコントロール（ｎ＝６）またはＣＤ２０（ｎ＝３）ｍＡｂ（２５０μｇ）を０日目に投与した。ＰＢＳリポソームおよびＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体（ｎ＝３）で処置されたマウスは、コントロールとして役立つ。抗体で処置した７日後の代表的な血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の枯渇を示し、示されたゲート内のリンパ球のパーセンテージを示す。
【０４２３】
図９Ｄは、（Ｃ）における抗体で処置した７日後の血中Ｂ細胞および組織Ｂ細胞の枯渇を示している。棒グラフは、マウス（１群あたり３匹以上のマウス）を抗体で処置した後の平均Ｂ２２０＋Ｂ細胞数（±ＳＥＭ）を表している。血液について、値は、ＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体（黒三角）で処置されたＰＢＳ処置マウスまたはコントロール抗体（白丸）、ＣＤ２０抗体（黒四角）もしくはＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体（黒丸）で処置された単球枯渇マウスにおける循環Ｂ細胞の数を示している。アイソタイプコントロールｍＡｂ処置マウスおよび他の群についての平均結果間の有意差を＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。
【０４２４】
図９に示される結果は、抗ＣＤ１９抗体で処置した後のＢ細胞枯渇が、ＦｃＲγ依存性かつ単球依存性であることを示している。リポソーム被包性クロドロネートで処置することによってマクロファージ欠損となったマウスは、ＦＭＣ６３、抗ＣＤ２０（ＭＢ２０−１１）またはコントロール抗ＣＤ１９抗体で処置した１日後に循環Ｂ細胞を有意に枯渇しなかったが、ＦＭＣ６３抗体処置により、ＰＢＳリポソームで処置されたマウス中の循環Ｂ細胞は排除された（図９Ｃ〜Ｄ）。４〜７日後、循環Ｂ細胞数は、ＦＭＣ６３と抗ＣＤ２０抗体の両方の処置によって有意に枯渇し、抗ＣＤ１９抗体処置は、クロドロネート処置マウス中のＢ細胞数に対してより劇的な効果を有した。同様に、抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ２０抗体の処置によって、７日目のクロドロネート処置マウスにおいて、コントロール抗体で処置された同腹仔と比べて骨髄Ｂ２２０＋細胞数が５５％減少し、抗ＣＤ１９抗体処置により、ＰＢＳ処置マウスにおいて骨髄Ｂ２２０＋細胞数が８８％減少した。抗ＣＤ１９抗体処置によって、コントロール抗体で処置された同腹仔と比べて７日目のクロドロネート処置マウス中の脾臓Ｂ細胞数が５２％減少し、抗ＣＤ２０抗体は、Ｂ細胞を最小限に枯渇させ、そして抗ＣＤ１９抗体処置によって、ＰＢＳ処置マウスにおける脾臓Ｂ細胞数が８９％減少した。抗ＣＤ１９抗体と抗ＣＤ２０抗体の両方の処置により、コントロール抗体で処置した同腹仔と比べて、７日目のクロドロネート処置マウス中のリンパ節Ｂ細胞数が４８〜５３％減少し、抗ＣＤ１９抗体処置によって、ＰＢＳ処置マウス中のリンパ節Ｂ細胞数が９３％減少した。血液、脾臓およびリンパ節において、抗ＣＤ１９抗体処置は、ＰＢＳ処置同腹仔よりもクロドロネート処置マウスでは有意に効果が低かった（ｐ＜０．０１）。これらの知見から、インビボにおけるＣＤ１９＋およびＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇にとってマクロファージが主要なエフェクター細胞であると意味づけられ、また、単球数または単球の機能が低下しているとき、抗ＣＤ１９抗体治療が、抗ＣＤ２０抗体治療よりも有効であり得ることが示唆される。
【０４２５】
６．５．実施例４：抗ＣＤ１９抗体に誘導されるＢ細胞枯渇は永続的である
Ｂ細胞枯渇の有効性および持続を評価するために、ｈＣＤ１９ＴＧマウスに、抗ＣＤ１９抗体の単回低用量の２５０μｇを投与した。図１０Ａ〜１０Ｃは、抗ＣＤ１９抗体で処置した後のＢ細胞枯渇の持続および用量応答を示している。図１０Ａは、０日目にＦＭＣ６３またはアイソタイプコントロール抗体で処置した後のＴＧ−１＋／−マウスの血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞およびＴｈｙ−１＋Ｔ細胞の数を示している。値は、各群６匹のマウスにおける平均（±ＳＥＭ）結果を表している。これらの結果から、１３週間に亘って循環Ｂ細胞が枯渇し、そのあとの１３週間に亘って血液中のＢ細胞が徐々に回復したことが証明される。抗ＣＤ１９処置の結果、Ｔｈｙ−１＋Ｔ細胞の提示は、変化しなかった。
【０４２６】
図１０Ｂ〜１０Ｃは、抗体処置の１１、１６および３０週間後における図１０Ａで示されたマウス中の代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示している。数値は、示されたゲート内のＢ２２０＋リンパ球のパーセンテージを示している。図１０Ｂの結果から、骨髄、血液、脾臓、リンパ節および腹膜腔は、抗体処置の１１週間後、本質的にＢ細胞を欠いていることが示される（サンプル平均間の有意差を＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す）。循環Ｂ細胞が初めて見られた後、循環Ｂ細胞数が正常範囲に達するまでにさらに１０週を超える時間がかかった。抗体処置後の第１６週までに、血液、脾臓、ＬＮおよびＰＬのＢ細胞数は、回復し始めていたが、ＢＭのＢ細胞コンパートメントは、図１０Ｃに示されるように未処置コントロールと有意に異ならなかった。第３０週までに、すべての組織において、正常コントロールにおける数に匹敵するレベルにＢ細胞の数が戻った。
【０４２７】
図１０Ｄは、血液、骨髄および脾臓のＢ細胞枯渇に対する抗ＣＤ１９抗体の用量反応を示す。マウスを０日目に抗ＣＤ１９抗体で処置し、組織Ｂ細胞の提示を７日目に評価した。結果は、各抗体用量について、各群３匹のマウスで得られた結果を表している。コントロール抗体用量は、２５０μｇとした。サンプル平均間の有意差を＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。２μｇ／マウスという低い単回ＦＭＣ６３抗体用量によって、かなりの数の循環Ｂ細胞が枯渇したが、循環Ｂ細胞数を有意に減少させるのに１０μｇのＨＢ１２ｂ抗体が必要であった（図１０Ｄ）。７日目まで骨髄および脾臓のＢ細胞を有意に枯渇させるためには、５倍より多い抗体用量である１０〜５０μｇ／マウスが必要であった。従って、比較的低用量でのＣＤ１９抗体処置によって、かなりの期間に亘って大部分の循環Ｂ細胞および組織Ｂ細胞を枯渇させることができる。
【０４２８】
６．５．１．ＣＤ１９は抗ＣＤ１９抗体の投与後もＢ細胞表面上に残存する
ＣＤ１９の内部移行がインビボにおけるＢ細胞枯渇に影響を及ぼすか否かを、ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂおよびＦＭＣ６３抗体で処置（２５０μｇ）した後の細胞表面ＣＤ１９発現を比較することによって評価した。
【０４２９】
図１１Ａ〜１１Ｃは、インビボにおいて、ＨＢ１２ａ（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３（図１１Ｃ）またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置されたＴＧ−１＋／−マウスにおける細胞表面ＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランスを示している。時間０（抗ＣＤ１９投与前）ならびに抗体投与の１、４および２４時間後に、脾臓Ｂ細胞を回収して、ＣＤ１９（太線）抗体およびコントロール（細線）抗体の結合について、インビトロにおいてアイソタイプ特異的２次抗体で細胞を処置することによってフローサイトメトリー解析を用いて評価した。単離されたＢ細胞を、飽和濃度の各ＣＤ１９抗体でインビトロにおいて処置し、さらに、アイソタイプ特異的２次抗体でインビトロにおいて処置し、フローサイトメトリー解析を用いて細胞表面ＣＤ１９発現全体を可視化した。各時点は、１匹のマウスにおける結果を示している。図１１Ａ〜１１Ｃに示される結果により、細胞表面ＣＤ１９が、インビボにおいて抗体が結合した後も細胞表面から排除されないことが証明され、また、Ｂ細胞の一部がＦＭＣ６３抗体処置の１時間後にｈＣＤ１９の発現レベルが低下したが（図１１Ｃ）、大部分の脾臓Ｂ細胞が、抗体処置の２４時間後までの間、一定の高レベルの細胞表面ｈＣＤ１９を発現していたことが示される。図１１Ａ〜１１Ｃに示される結果はまた、Ｂ細胞表面上のＣＤ１９の量が一定であることも証明し、このことから、Ｂ細胞がＡＤＣＣを媒介する能力が維持されていることが示唆される。
【０４３０】
これらの結果は、驚いたことに、ＣＤ１９は、抗ＣＤ１９抗体の投与後、予想されたレベルよりも低いレベルの内部移行を示したことを証明する。特に、これらの結果は、抗ＣＤ１９抗体が結合した後もＣＤ１９が予想外に細胞表面上に残存しており、ゆえに、そのＢ細胞は、ＡＤＣＣ活性を受けやすいままであることを証明する。これらの結果は、どうして本発明の抗ＣＤ１９抗体および処置レジメンが自己免疫疾患および自己免疫障害を処置する際に有効であるかを部分的に証明するものである。
【０４３１】
図１２Ａ〜１２Ｃは、Ｂ細胞枯渇の程度および抗ｈＣＤ１９抗体がｈＣＤ１９と結合することにより、他の抗ｈＣＤ１９抗体の結合を阻害する能力を実証している。図１２Ａにおける結果から、ＴＧ−１＋／−マウスへのＦＭＣ６３（２５０μｇ）の単回投与により、抗体投与の１時間以内に血中Ｂ細胞と脾臓Ｂ細胞の両方が有意に枯渇することが証明される。この実験では、血液細胞および脾臓細胞を回収し、そして、抗ＣＤ１９抗体の投与前または投与後の様々な時点（１、４または２４時間）におけるＢ細胞頻度について評価した。血液サンプルを抗Ｔｈｙ１．２および抗Ｂ２２０で染色することにより、四分割の右下のＢ細胞を同定した。脾臓細胞を抗ＩｇＭ抗体および抗Ｂ２２０抗体で染色することにより、示されたゲート内のＢ細胞を同定した。各時点は、１匹のマウスにおける結果を示す。予想外にも、血中Ｂ細胞は、脾臓Ｂ細胞よりも速く除去された。
【０４３２】
図１２Ａに示されるＢ細胞枯渇により、投与された抗体が、投与の１時間以内にｈＣＤ１９上の利用可能な抗体結合部位を迅速に飽和させたことが示唆された。この観察結果を検証するために、マウスをＦＭＣ６３（ｈＣＤ１９結合抗体）またはアイソタイプコントロール抗体のいずれかで処置した。処置後の様々な時点において、血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞を蛍光色素結合体化Ｂ４抗体で染色することにより、ｍＣＤ１９＋またはｍＣＤ２０＋Ｂ細胞の表面上の非占有の抗体結合部位を同定した。四分割の上部および右下内の細胞の頻度を示す。各時点は、１匹のマウスにおける結果を示す。これらの結果から、ＦＭＣ６３処置により、実験経過に亘ってｈＣＤ１９を有する細胞の進行性の枯渇が生じ、血中Ｂ細胞は、脾臓Ｂ細胞よりも速く枯渇したことが示唆される。各時点で残存しているそれらのＢ細胞は、ｍＣＤ１９またはｍＣＤ２０の発現によって同定され得たが、Ｂ４によって染色されなかった。このことから、投与されたＦＭＣ６３が、残存しているＢ細胞に結合していたことが示唆される。これらの知見から、インビボにおいてＦＭＣ６３がＢ細胞と結合し、Ｂ細胞を枯渇させる能力が確かめられた。さらに、ＦＭＣ６３は、Ｂ４の結合を妨害することから、これらの抗体が、ｈＣＤ１９上の重複したエピトープを認識していることが示唆される。図１２Ｃにおける結果から、ＨＢ１２ｂ抗体による処置（２５０μｇ）もまた、投与の１時間以内にｈＣＤ１９上の抗体結合部位を飽和させ、その結果、ｈＣＤ１９陽性Ｂ細胞を枯渇させることが確かめられた。予想外にも、ＨＢ１２ｂ抗体は、Ｂ４抗体の結合を完全に阻害しなかったことから、ＦＭＣ６３とは異なり、ＨＢ１２ｂは、Ｂ４によって認識されているｈＣＤ１９上のエピトープと異なるエピトープを認識していることが示唆される。図１２Ｂ〜１２Ｃに示される結果から、ほとんどの抗ＣＤ１９抗体が他のほとんどの抗ＣＤ１９抗体の結合を阻害することが証明され、このことから、ほとんどの抗ＣＤ１９抗体が、ＣＤ１９タンパク質上の類似か、同じか、または重複した領域またはエピトープに結合することが示唆される。あるいは、これらの観察結果はまた、抗体分子の大きさと比べて比較的小さいＣＤ１９細胞外ドメインに起因し得る。
【０４３３】
６．６．実施例５：抗ＣＤ１９抗体処置は体液性免疫および自己免疫を抑制する
この実施例において説明されるアッセイを使用して、抗ＣＤ１９抗体が、免疫応答を排除または減弱させることができるか否かを判定することができる。これらのアッセイにおいて同定された抗ＣＤ１９抗体は、上の５．１．節で記載した技術を使用して、キメラ抗ＣＤ１９抗体、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を操作するために使用され得る。このような抗体は、ヒトにおける自己免疫疾患および自己免疫障害を処置するために本発明の組成物および方法に次々と使用され得る。
【０４３４】
血清抗体レベルに対する、抗ＣＤ１９抗体に誘導されるＢ細胞枯渇の作用を、ｈＣＤ１９ＴＧ＋／−マウスへの抗ＣＤ１９抗体の単回注射を行うことによって評価した。図１３Ａは、ＣＤ１９抗体処置が、ＴＧ−１＋／−マウス中の血清免疫グロブリンレベルを低下させることを示している。２月齢の同腹仔を、０日目に、ＦＭＣ６３（黒丸）またはコントロール（白丸）抗体（２５０μｇ）の単回注射により処置した。抗体レベルをＥＬＩＳＡによって測定し、平均値（±ＳＥＭ）は、各群５匹以上のマウスについて示した。ＣＤ１９またはコントロールｍＡｂで処置されたマウス間の差は有意であった：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。これらの結果は、１〜２週間後の血清ＩｇＭ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３およびＩｇＡ抗体レベルが有意に減少しており、また、少なくとも１０週間減少したままであったことを示す（図１３Ａ）。ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ血清レベルは、処置の６および４週間後において正常レベルよりも有意に低かった。
【０４３５】
２月齢以上のｈＣＤ１９ＴＧ＋／−マウスが検出可能な自己抗体を産生する（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７：４３７１（１９９６））ため、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡおよびヒストンに結合する血清自己抗体を評価した。図１３Ｂは、抗ＣＤ１９抗体処置によって、抗ＣＤ１９抗体処置後に自己抗体の抗ｄｓＤＮＡ、抗ｓｓＤＮＡおよび抗ヒストン自己抗体レベルが減少することを示している。これらの結果から、抗ＣＤ１９抗体処置が、２週間後に血清ＩｇＭ自己抗体レベルを有意に低下させることおよび１０週までの間、アイソタイプスイッチしたＩｇＧ自己抗体の生成を妨害することが示される（図１３Ｂ）。従って、Ｂ細胞枯渇は、実質的に、急性および長期間の抗体応答を減少させ、正常な免疫応答および病原性の免疫応答のクラススイッチを減弱した。
【０４３６】
Ｔ細胞非依存性のタイプ１（ＴＩ−１）およびタイプ２（ＴＩ−２）抗体応答に対するＢ細胞枯渇の影響を、ＴＮＰ−ＬＰＳまたはＤＮＰ−フィコール（０日目）でｈＣＤ１９ＴＧ＋／−マウスを免疫し、７日後に抗ＣＤ１９抗体（ＦＭＣ６３）またはコントロール抗体処置することによって評価した。いずれかの抗原で免疫され、抗ＣＤ１９抗体で処置されたマウスにおいて、有意なハプテン特異的ＩｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＡ抗体の反応が観察されなかった（図１４Ａおよび１４Ｂ）。Ｔ細胞依存性（ＴＤ）Ａｇ、ＤＮＰ−ＫＬＨに対する抗体応答もまた、免疫の７日前に抗ＣＤ１９抗体で処置したマウスを使用して評価した（図１４Ｂ）。図１４Ｃは、ＤＮＰ−ＫＬＨで免疫され、抗ＣＤ１９抗体で処置されたマウスの体液性免疫が低下したことを示している。０日目の初回免疫の７日前に同腹仔をＦＭＣ６３（黒丸）またはコントロール（白丸）抗体（２５０μｇ）で処置し、示した日に血清を採取した。ＤＮＰ−ＫＬＨ免疫について、２１日目にすべてのマウスに１００μｇのＤＮＰ−ＫＬＨを投与した。すべての値は、各群５匹のマウス由来の血清を使用して得られた平均（±ＳＥＭ）ＥＬＩＳＡ  ＯＤ単位である。抗ＣＤ１９またはコントロール抗体処置マウス間の差が有意であった。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。これらの結果から、コントロール抗体で処置された同腹仔が、ＤＮＰ−ＫＬＨ免疫の７日後の最初のＩｇＭ抗体応答および２１日目の抗原チャレンジ後の２次応答を示したことが示される（図１４Ｃ）。しかしながら、有意なハプテン特異的ＩｇＭ、ＩｇＧまたはＩｇＡ抗体応答は、抗原で免疫されたか、または再負荷を受けたＣＤ１９ｍＡｂ処置マウスにおいて検出されなかった。２次抗体応答に対するＢ細胞枯渇の作用を評価するために、マウスを、ＤＮＰ−ＫＬＨで免疫し、そして１４日後に抗ＣＤ１９抗体で処置した（矢頭）（図１４Ｄ）。２１日目まで、血清ＩｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＡ抗ＤＮＰ抗体応答は、ＣＤ１９ｍＡｂ処置マウスにおいて、コントロールｍＡｂで処置された免疫マウスの反応よりも低いレベルに低下した。しかしながら、コントロールｍＡｂで処置されたマウスのＤＮＰ−ＫＬＨによる２１日目の再負荷が、有意な２次抗体応答を誘導したが、ＣＤ１９ｍＡｂで処置されたマウスは、ＤＮＰ−ＫＬＨ再負荷後、抗ＤＮＰ抗体を産生しなかった。従って、ＣＤ１９ｍＡｂに誘導されるＢ細胞枯渇は、１次抗体応答と２次抗体応答の両方を実質的に減少させ、また、体液性免疫応答の間のクラススイッチを妨害した。
【０４３７】
６．７．実施例６：抗ＣＤ２０抗体処置と併用した抗ＣＤ１９抗体処置
本明細書中に記載のアッセイを使用して、他の併用療法または結合体治療、例えば、化学療法、トキシン治療または放射線治療と組み合わせた抗ＣＤ１９抗体が、有益な効果（例えば、相加的または相加的以上のＢ細胞の枯渇）を有するか否かを判定することができる。動物モデルにおいて試験される併用療法の結果は、当該分野で周知の手段によってヒトと相関させることができる。
【０４３８】
抗ＣＤ２０抗体は、ヒトおよびマウスのＢ細胞をインビボにおいて枯渇させる際に有効である。従って、抗ＣＤ１９（ＦＭＣ６３）および抗ＣＤ２０（ＭＢ２０−１１）抗体で同時に処置する利点を評価することにより、この処置がＢ細胞枯渇を増大させるか否かを判定した。各抗体を個々に最適以下の２μｇの用量で、または両方の抗体を１μｇずつ組み合わせて、２μｇずつの用量を合わせて、マウスを処置した。図１５は、０日目に、コントロール（２５０μｇ）、ＦＭＣ６３（ＣＤ１９，２μｇ）、ＭＢ２０−１１（ＣＤ２０，２μｇ）、ＦＭＣ６３＋ＭＢ２０−１１（各々１μｇ）またはＦＭＣ６３＋ＭＢ２０−１１（各々２μｇ）抗体で処置したＴＧ−１＋／−マウスの結果を示す。血中Ｂ細胞数を、時間０、１時間後および１日目、４日目および７日目に計測した。組織Ｂ細胞数を７日目に測定した。値は、各群３匹のマウスからの平均（±ＳＥＭ）として示す。図１５に示される結果から、抗ＣＤ１９抗体と抗ＣＤ２０抗体の同時処置が有益であることが証明される。両方の抗体を１μｇずつあわせて処置されたマウスにおけるＢ細胞枯渇は、個々の抗体の２μｇでマウスを処置した後に観察された枯渇の中間であったか、またはそれに似たものであった（図１５）。しかしながら、２μｇずつ両方の抗体で同時に処置したマウスでは、どちらか単独の抗体で観察されたものよりも有意に大きいＢ細胞枯渇がもたらされる。従って、抗ＣＤ１９抗体治療と抗ＣＤ２０抗体治療との併用は、Ｂ細胞枯渇を増大させる有益な効果を有した。これは、おそらく、個々のＢ細胞の表面上に治療的により有効な抗体分子の蓄積に起因する。
６．８．実施例７：皮下（Ｓ．Ｃ．）抗ＣＤ１９抗体投与は治療的に有効である
本明細書中に記載のアッセイを使用して、抗ＣＤ１９抗体を皮下経路によって投与することが、効果的にＢ細胞を枯渇させ得るか否かを判定することができる。動物モデルにおいて試験される様々な送達経路の有効性についての結果は、当該分野で周知の手段によってヒトに相関させることができる。
【０４３９】
ｉ．ｖ．投与された抗ＣＤ１９抗体は、循環Ｂ細胞および組織Ｂ細胞を効果的に枯渇させるため、ｓ．ｃ．またはｉ．ｐ．投与された抗ＣＤ１９抗体が、Ｂ細胞を同程度に枯渇させるか否かを評価した。皮下（ｓ．ｃ）、腹腔内（ｉ．ｐ．）またはｉ．ｖ．のいずれかによって、２５０μｇのＦＭＣ６３抗体で野生型マウスを処置した。値は、フローサイトメトリーによって評価したときの７日目の平均（±ＳＥＭ）血液（１ｍＬあたり）、骨髄、脾臓、リンパ節および腹膜腔のＢ２２０＋Ｂ細胞数（ｎ≧３）を表している。各群のマウスの平均結果間の有意差をコントロールと比較して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１として示す。図１６における結果は、ＣＤ１９抗体の皮下（ｓ．ｃ）、腹腔内（ｉ．ｐ．）およびｉ．ｖ．投与が、効果的に循環および組織Ｂ細胞をインビボにおいて枯渇させることを証明している。ｉ．ｖ．、ｉ．ｐ．またはｓ．ｃ．のいずれかで２５０μｇ用量の抗ＣＤ１９抗体を投与されたマウスにおいて、大部分の循環Ｂ細胞および組織Ｂ細胞が枯渇した（図１６）。予想外にも、ｉ．ｐ．による抗ＣＤ１９抗体の投与は、ｉ．ｖ．処置よりも有意に良好に腹膜Ｂ細胞を枯渇させなかった。従って、抗ＣＤ１９抗体の６４ｍｇ以下をｓ．ｃ．注射によって投与するとき、循環Ｂ細胞および組織Ｂ細胞の両方を効果的に枯渇させることができる。抗ＣＤ１９抗体は、１０μｇ用量ｉ．ｖ．まで少なくても有効である（図１０Ｄ）ため、一層少ないｓ．ｃ．抗体用量が有効である可能性がある。
【０４４０】
本発明は、本明細書中に記載された特定の実施形態によって制限されるべきでない。実際に、記載したものに加えて本発明の様々な改変が、前述の記載および添付の図面から当業者に明らかになるだろう。そのような改変は、付属の特許請求の範囲の範囲内に入ると解釈される。
【０４４１】
本発明は、本明細書中に記載された特定の実施形態によって制限されるべきでない。実際に、記載したものに加えて本発明の様々な改変が、前述の記載および添付の図面から当業者に明らかになるだろう。そのような改変は、付属の特許請求の範囲の範囲内に入ると解釈される。
【０４４２】
様々な出版物が本明細書中に引用されるが、それらの開示は、その全体が参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０４４３】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統によるＣＤ１９発現を示す。図１Ａは、ｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１＋／−）マウス由来のＢ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図１Ｂは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＣＤ１９＋血中Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現の相対的な平均密度を示す。図１Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウス組織由来のＣＤ１９＋Ｂ細胞によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対的密度を示す。図１Ｄは、ＴＧ−１＋／−マウス由来のマウス血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞および脾臓Ｂ２２０＋Ｂ細胞におけるＣＤ１９抗体結合密度を示す。図１Ｅは、ｈＣＤ１９ｃＤＮＡをトランスフェクトした３００．１９細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体を示す。
【図１−２】図１Ａ〜１Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統によるＣＤ１９発現を示す。図１Ａは、ｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１＋／−）マウス由来のＢ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図１Ｂは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＣＤ１９＋血中Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現の相対的な平均密度を示す。図１Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウス組織由来のＣＤ１９＋Ｂ細胞によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対的密度を示す。図１Ｄは、ＴＧ−１＋／−マウス由来のマウス血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞および脾臓Ｂ２２０＋Ｂ細胞におけるＣＤ１９抗体結合密度を示す。図１Ｅは、ｈＣＤ１９ｃＤＮＡをトランスフェクトした３００．１９細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体を示す。
【図１−３】図１Ａ〜１Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統によるＣＤ１９発現を示す。図１Ａは、ｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１＋／−）マウス由来のＢ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図１Ｂは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＣＤ１９＋血中Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現の相対的な平均密度を示す。図１Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウス組織由来のＣＤ１９＋Ｂ細胞によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対的密度を示す。図１Ｄは、ＴＧ−１＋／−マウス由来のマウス血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞および脾臓Ｂ２２０＋Ｂ細胞におけるＣＤ１９抗体結合密度を示す。図１Ｅは、ｈＣＤ１９ｃＤＮＡをトランスフェクトした３００．１９細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体を示す。
【図２−１】図２Ａ〜２Ｄは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける血中、脾臓およびリンパ節のＢ細胞の枯渇を示す。図２Ａは、ＴＧ−１＋／−マウスを抗ＣＤ１９またはアイソタイプ一致コントロール（ＣＴＬ）抗体で処置した７日後の血液、脾臓およびリンパ節由来の代表的なＢ細胞枯渇を示す。図２Ｂは、抗ＣＤ１９抗体による経時的な循環Ｂ細胞枯渇を示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、示した用量の抗ＣＤ１９（黒棒）抗体またはコントロール（白棒）抗体でＴＧ−１＋／−マウスを処置した後の脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）をそれぞれ示す。
【図２−２】図２Ａ〜２Ｄは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける血中、脾臓およびリンパ節のＢ細胞の枯渇を示す。図２Ａは、ＴＧ−１＋／−マウスを抗ＣＤ１９またはアイソタイプ一致コントロール（ＣＴＬ）抗体で処置した７日後の血液、脾臓およびリンパ節由来の代表的なＢ細胞枯渇を示す。図２Ｂは、抗ＣＤ１９抗体による経時的な循環Ｂ細胞枯渇を示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、示した用量の抗ＣＤ１９（黒棒）抗体またはコントロール（白棒）抗体でＴＧ−１＋／−マウスを処置した後の脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）をそれぞれ示す。
【図３】図３Ａ〜３Ｆは、抗ＣＤ１９抗体処置後の骨髄Ｂ細胞の枯渇を示す。図３Ａは、ＴＧ−１＋／−骨髄Ｂ細胞亜集団による代表的なｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現を示す。これは、フローサイトメトリー解析を用いた４色免疫蛍光染色によって評価した。図３Ｂは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）による処置の７日後のｈＣＤ１９ＴＧマウスの骨髄中のｈＣＤ１９＋細胞の枯渇を示す。これは、フローサイトメトリー解析を用いた２色免疫蛍光染色によって評価した。図３Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウスをＣＤ１９またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置した７日後の骨髄中の代表的なＢ２２０＋Ｂ細胞の枯渇を示す。図３Ｄは、ＴＧ−１＋／−マウスをＦＭＣ６３またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置した７日後の代表的なＢ細胞サブセット枯渇を示す。これは、３色免疫蛍光染色によって評価した。ＩｇＭ−Ｂ２２０ｌｏプロ／プレＢ細胞を、ＣＤ４３発現に基づいてさらに細分した（下のパネル）。図３Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統をＦＭＣ６３またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置した７日後のＣＤ２５＋Ｂ２２０ｌｏプレＢ細胞の代表的な枯渇を示す。これは、２色免疫蛍光染色によって評価した。図３Ｆは、３対以上の同腹仔をＦＭＣ６３（黒棒）またはコントロール（白棒）抗体で処置した７日後の両大腿骨内のプロＢ、プレＢ、未成熟Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の数（±ＳＥＭ）を表す棒グラフを示す。
【図４Ａ】図４Ａは、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に感受性であることを示す。図４Ａは、腹膜腔ＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａおよび腹膜腔ＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２（通常）Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図４Ｂは、ＣＤ１９（２５０μｇのＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂおよびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）抗体またはコントロール抗体（２５０μｇ）で処置したＴＧ−１＋／−マウス由来の腹膜腔Ｂ２２０＋細胞の枯渇を示す。図４Ｃは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスを抗ＣＤ１９またはコントロール抗体で処置した７日後のＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａＢ細胞およびＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に感受性であることを示す。図４Ａは、腹膜腔ＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａおよび腹膜腔ＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２（通常）Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図４Ｂは、ＣＤ１９（２５０μｇのＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂおよびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）抗体またはコントロール抗体（２５０μｇ）で処置したＴＧ−１＋／−マウス由来の腹膜腔Ｂ２２０＋細胞の枯渇を示す。図４Ｃは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスを抗ＣＤ１９またはコントロール抗体で処置した７日後のＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａＢ細胞およびＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に感受性であることを示す。図４Ａは、腹膜腔ＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａおよび腹膜腔ＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２（通常）Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図４Ｂは、ＣＤ１９（２５０μｇのＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂおよびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）抗体またはコントロール抗体（２５０μｇ）で処置したＴＧ−１＋／−マウス由来の腹膜腔Ｂ２２０＋細胞の枯渇を示す。図４Ｃは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスを抗ＣＤ１９またはコントロール抗体で処置した７日後のＣＤ５＋Ｂ２２０＋Ｂ１ａＢ細胞およびＣＤ５−Ｂ２２０ｈｉＢ２Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。
【図５】図５Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の重鎖ＶＨ−Ｄ−ＪＨ接合配列についてのヌクレオチド（配列番号１）配列および予測アミノ酸（配列番号２）配列を示す。図５Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の重鎖ＶＨ−Ｄ−ＪＨ接合配列についてのヌクレオチド（配列番号３）配列および予測アミノ酸（配列番号４）配列を示す。
【図６】図６Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖配列についてのヌクレオチド（配列番号１５）配列および予測アミノ酸（配列番号１６）配列を示している。図６Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖配列についてのヌクレオチド（配列番号１７）配列および予測アミノ酸（配列番号１８）配列を示している。
【図７Ａ】図７Ａは、公開されているマウス抗（ヒト）ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列アラインメントを示している。図７Ａは、コンセンサス配列（配列番号５）、ＨＢ１２ａ（配列番号２）、４Ｇ７（配列番号６）、ＨＢ１２ｂ（配列番号４）、ＨＤ３７（配列番号７）、Ｂ４３（配列番号８）およびＦＭＣ６３（配列番号９）を含む重鎖ＶＨ−Ｄ−ＪＨ接合配列についての配列アラインメントを示している。図７Ｂは、抗ＣＤ１９抗体の軽鎖Ｖκアミノ酸配列解析を示している。コンセンサス配列（配列番号１０）、ＨＢ１２ａ（配列番号１６）、ＨＢ１２ｂ（配列番号１８）、ＨＤ３７（配列番号１１）、Ｂ４３（配列番号１２）、ＦＭＣ６３（配列番号１３）および４Ｇ７（配列番号１４）をアラインメントしている。
【図７Ｂ】図７Ｂは、公開されているマウス抗（ヒト）ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列アラインメントを示している。図７Ａは、コンセンサス配列（配列番号５）、ＨＢ１２ａ（配列番号２）、４Ｇ７（配列番号６）、ＨＢ１２ｂ（配列番号４）、ＨＤ３７（配列番号７）、Ｂ４３（配列番号８）およびＦＭＣ６３（配列番号９）を含む重鎖ＶＨ−Ｄ−ＪＨ接合配列についての配列アラインメントを示している。図７Ｂは、抗ＣＤ１９抗体の軽鎖Ｖκアミノ酸配列解析を示している。コンセンサス配列（配列番号１０）、ＨＢ１２ａ（配列番号１６）、ＨＢ１２ｂ（配列番号１８）、ＨＤ３７（配列番号１１）、Ｂ４３（配列番号１２）、ＦＭＣ６３（配列番号１３）および４Ｇ７（配列番号１４）をアラインメントしている。
【図８Ａ】図８Ａは、ＣＤ１９密度がインビボにおける抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇の効率に影響を与えることを証明している。ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体で処置した（７日、２５０μｇ／マウス）後のｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける代表的な血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の枯渇を示している。図８Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウス由来の血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞上の相対的な抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ２０抗体の結合密度を示している。
【図８Ｂ】図８Ｂは、ＣＤ１９密度がインビボにおける抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇の効率に影響を与えることを証明している。ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体で処置した（７日、２５０μｇ／マウス）後のｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける代表的な血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の枯渇を示している。図８Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウス由来の血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞上の相対的な抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ２０抗体の結合密度を示している。
【図８Ｃ】図８Ｃは、ＣＤ１９密度がインビボにおける抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞枯渇の効率に影響を与えることを証明している。ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体で処置した（７日、２５０μｇ／マウス）後のｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける代表的な血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の枯渇を示している。図８Ｃは、ＴＧ−１＋／−マウス由来の血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞上の相対的な抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ２０抗体の結合密度を示している。
【図８Ｄ】図８Ｄは、ＴＧ−１＋／−マウス由来の脾臓Ｂ２２０＋Ｂ細胞上の相対的な抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ２０抗体の結合密度を示している。
【図９】図９Ａ〜９Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞枯渇が、ＦｃＲγ依存性かつ単球依存性であることを示している。図９Ａ。ｈＣＤ１９ＴＧ−１＋／−ＦｃＲγ＋／−またはＴＧ−１＋／−ＦｃＲγ−／−同腹仔をＣＤ１９またはアイソタイプコントロール抗体で処置した７日後の代表的な血中Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の枯渇。図９Ｂ。ＦｃＲγ−／−同腹仔を０日目に抗体で処置した７日後の血中Ｂ細胞および組織Ｂ細胞の枯渇。図９Ｃ。単球が枯渇したｈＣＤ１９ＴＧ−１＋／−マウス中の代表的なＢ細胞数。図９Ｄ。抗体で処置した７日後の血中Ｂ細胞および組織Ｂ細胞の枯渇。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞枯渇の持続および用量反応を示している。図１０Ａは、０日目にＴＧ−１＋／−マウスをＦＭＣ６３またはアイソタイプコントロール抗体で処置した後の血中Ｂ２２０＋Ｂ細胞およびＴｈｙ−１＋Ｔ細胞の数を示している。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞枯渇の持続および用量反応を示している。図１０Ｂは、抗体処置の１１、１６および３０週間後における図１０Ａに示されるマウス中の代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示している。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞枯渇の持続および用量反応を示している。図１０Ｃは、抗体処置の１１、１６および３０週間後における図１０Ａに示されるマウス中の代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示している。図１０Ｄは、血中、骨髄および脾臓のＢ細胞枯渇に対する抗ＣＤ１９抗体用量反応を示している。
【図１０Ｄ】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞枯渇の持続および用量反応を示している。図１０Ｄは、血中、骨髄および脾臓のＢ細胞枯渇に対する抗ＣＤ１９抗体用量反応を示している。
【図１１Ａ】図１１Ａは、インビボにおいて抗体結合後もＣＤ１９が内部移行されないことを示している。インビボにおいて、ＨＢ１２ａ（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３（図１１Ｃ）またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置されたＴＧ−１＋／−マウスにおける細胞表面ＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランス。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、インビボにおいて抗体結合後もＣＤ１９が内部移行されないことを示している。インビボにおいて、ＨＢ１２ａ（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３（図１１Ｃ）またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置されたＴＧ−１＋／−マウスにおける細胞表面ＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランス。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、インビボにおいて抗体結合後もＣＤ１９が内部移行されないことを示している。インビボにおいて、ＨＢ１２ａ（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３（図１１Ｃ）またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置されたＴＧ−１＋／−マウスにおける細胞表面ＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランス。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｃは、インビボにおける抗ＣＤ１９抗体結合後のＣＤ１９飽和を示している。図１２Ａは、インビボにおいてＦＭＣ６３またはアイソタイプ一致コントロール抗体（２５０μｇ）で処置されたＴＧ−１＋／−マウスにおけるＢ細胞クリアランスを示している。図１２Ｂは、ｈＣＤ１９上のＦＭＣ６３抗体処置（２５０μｇ）が、投与の１時間以内に抗体結合部位を飽和させたことを示している。図１２Ｃは、図１２Ｂにおいて評価されたように、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体処置（２５０μｇ）が、投与の１時間以内にｈＣＤ１９上の抗体結合部位を飽和させたことを示している。
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｂは、抗ＣＤ１９抗体処置によって、ＴＧ−１＋／−マウスにおける血清免疫グロブリンおよび自己抗体のレベルが低下することを示している。図１３Ａは、抗ＣＤ１９抗体処置後の血清免疫グロブリンレベルを示しており、図１３Ｂは、抗ＣＤ１９抗体処置後の抗ｄｓＤＮＡ、抗ｓｓＤＮＡおよび抗ヒストン自己抗体レベルを示している。
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｂは、ＴＧ−１＋／−マウスにおける抗ＣＤ１９抗体処置が体液性免疫応答を阻止することを示している。抗体で処置されたマウスを、図１４ＡはＴＮＰ−ＬＰＳで、図１４ＢはＤＮＰ−フィコールで、そして図１４Ｃ〜１４ＤはＤＮＰ−ＫＬＨで免疫した。０日目の初回免疫の後、（Ａ〜Ｃ）７日前または（Ｄ）１４日後にＦＭＣ６３（黒丸）またはコントロール（白丸）抗体（２５０μｇ）で同腹仔を処置した。
【図１５】図１５は、抗ＣＤ１９抗体と抗ＣＤ２０抗体との同時処置が相加的であることを示している。
【図１６】図１６は、抗ＣＤ１９抗体の皮下（ｓ．ｃ）、腹腔内（ｉ．ｐ．）およびｉ．ｖ．投与が、循環Ｂ細胞および組織Ｂ細胞をインビボにおいて効果的に枯渇させることを示している。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年1月29日(2008.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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