(57)【要約】  本発明は、置換インダゾール、それらを含有する組成物、それらの調製及びそれらの使用に関する。本発明は、特に、キナーゼ阻害活性を示し、特に腫瘍学において治療活性を有する、新規の特異的置換インダゾールに関する。2008501669.tif 000059
2008501669.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）に対応する生成物：
【化１】
2008501669.tif 000056
（式中、
１）Ａは、Ｈ、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換へテロアリールからなる群から選択され；
２）Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換へテロアリールからなる群から選択され；
３）Ｌは、結合、ＣＯ、ＮＨ、ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ、ＮＨ−ＳＯ、ＮＨ−ＳＯ２、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＳＯ２、ＳＯ２ＮＨ、ＮＨ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＮＨ、ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ、ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−Ｏ、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ、ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２からなる群から選択され；
４）Ｍは、結合、ＣＯ、ＮＨ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＳ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ、ＮＨ−ＳＯ、ＮＨ−ＳＯ２、ＣＯ−ＮＨ−ＳＯ２、ＮＨ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ、ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨからなる群から選択され；
５）Ｒ３は、独立に、Ｈ、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、複素環、置換アルキル、置換アルキレン、置換アルキニル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換シクロアルキル、置換複素環、アルキレン、置換アルキレン、置換アルキニルからなる群から選択され；
６）Ｒ４、Ｒ５及びＲ７は、独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｒ２、ＣＮ、Ｏ（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、ＯＳ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ＝Ｃ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ２）（Ｒ１）、Ｃ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１））（Ｒ２）、Ｃ（＝Ｎ（ＯＲ１））（Ｒ２）、Ｓ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｏ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）からなる群から選択され；各Ｒ２、Ｒ１、Ｒ６は、独立に、Ｈ、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、複素環、置換アルキル、置換アルキレン、置換アルキニル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換シクロアルキル、置換複素環、アルキレン、置換アルキレン、置換アルキニルからなる群から選択され；Ｒ２及びＲ１が同時にＲ４、Ｒ５及びＲ７のうち１つにおいて存在する場合、Ｒ２及びＲ１は、互いに結合して環を形成してもよい。）。
【請求項２】
Ａｒ−Ｌ−Ａが、
【化２】
2008501669.tif 000057
（式中、
各Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、独立に、Ｎ及びＣ−Ｒ１１から選択され、Ｒ１１は、Ｈ、ハロゲン、Ｒ２、ＣＮ、Ｏ（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、ＯＳ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ＝Ｃ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ２）（Ｒ１）、Ｃ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１））（Ｒ２）、Ｃ（＝Ｎ（ＯＲ１））（Ｒ２）、Ｓ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｏ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）からなる群から選択され；各Ｒ２、Ｒ１、Ｒ６は、独立に、Ｈ、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、複素環、置換アルキル、置換アルキレン、置換アルキニル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換シクロアルキル、置換複素環、アルキレン、置換アルキレン、置換アルキニルからなる群から選択され；Ｒ２及びＲ１が同時にＲ１１において存在する場合、Ｒ２及びＲ１は、互いに結合して環を形成してもよい。）であることを特徴とする、請求項１に記載の生成物。
【請求項３】
Ｒ１１が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、メチル、ＮＨ２、ＯＣＦ３及びＣＯＮＨ２からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の生成物。
【請求項４】
Ｒ４、Ｒ５及びＲ７が、独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びメチルから選択されることを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載の生成物。
【請求項５】
Ｒ７が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びメチルからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１から請求項４の何れか１項に記載の生成物。
【請求項６】
Ｒ７がＦであることを特徴とする、請求項５に記載の生成物。
【請求項７】
Ｒ４がＨであることを特徴とする、請求項１から請求項５の何れか１項に記載の生成物。
【請求項８】
Ｒ５がＨであることを特徴とする、請求項１から請求項５の何れか１項に記載の生成物。
【請求項９】
Ｌ−Ａが、ＮＨ２、ＮＨ−Ａ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−Ａ及びＮＨ−ＳＯ２−Ａから選択されることを特徴とする、請求項１から請求項８の何れか１項に記載の生成物。
【請求項１０】
Ａが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズオキサゾリル及びベンゾチアゾリルからなる群から選択され；場合によっては置換されていることを特徴とする、請求項１から請求項９の何れか１項に記載の生成物。
【請求項１１】
Ａが、フェニル、イソキサゾリル、置換フェニル及び置換イソキサゾリルから選択されることを特徴とする、請求項１０に記載の生成物。
【請求項１２】
Ａが、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリール、Ｓ−アルキル、Ｓ−アリール、Ｓ−ヘテロアリール（それぞれ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルから選択される置換基により場合によっては置換されている。）からなる群から選択される第一の置換基で置換されていることを特徴とする、請求項９から請求項１１の何れか１項に記載の生成物。
【請求項１３】
Ａが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＳＨ、ＳＯ３Ｍ、ＣＯＯＭ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＮ（Ｒ８）（Ｒ９）、Ｎ（Ｒ８）（Ｒ９）ＣＯ（Ｒ８）、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−Ｎ（Ｒ８）（Ｒ９）、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（Ｒ１０）、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ＣＯＯＨ、Ｎ（Ｒ８）（Ｒ９）からなる群から選択される第二の置換基（ここで、Ｒ８及びＲ９は、独立に、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＯＨ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＣＯＯＭ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＳＯ３Ｍから選択され；Ｒ８及びＲ９が同時にＨ以外のものである場合、Ｒ８及びＲ９は連結して環を形成し得；Ｍは、Ｈであり、又はＬｉ、Ｎａ及びＫから選択されるアルカリ金属陽イオンであり；Ｒ１０は、Ｈ又は非芳香族複素環（２個から７個の炭素原子並びにＮ、Ｏ及びＳから選択される１個から３個のヘテロ原子を含有することにより場合によっては置換されている。）である。）で置換されていることを特徴とする、請求項９から請求項１２の何れか１項に記載の生成物。
【請求項１４】
Ａが、フェニル又はイソキサゾリル（ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン化（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、Ｓ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン化Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル及びハロゲン化Ｓ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで置換されている。）であることを特徴とする、請求項９から請求項１２の何れか１項に記載の生成物。
【請求項１５】
Ｍが、結合、ＣＯ、ＣＯ−ＮＨ及びＳＯ２からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１から請求項１４の何れか１項に記載の生成物。
【請求項１６】
Ｒ３が、アリール、ヘテロアリール、置換アリール及び置換ヘテロアリールからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１から請求項１５の何れか１項に記載の生成物。
【請求項１７】
Ｒ３が、置換ヘテロアリールであることを特徴とする、請求項１６に記載の生成物。
【請求項１８】
前記ヘテロアリールが、チエニル、ピロリル、フリル、インドリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピラゾリル及びピリダジニルから選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の生成物。
【請求項１９】
Ｒ４及びＲ５がＨであることを特徴とする、請求項１から請求項１８の何れか１項に記載の生成物。
【請求項２０】
次の化合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の生成物：
１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
Ｎ−｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）フェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝（チオフェン−３−イル−カルボキサミド）
Ｎ−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−フェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド。
【請求項２１】
次の化合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の生成物：
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）−３−｛４−［７−フルオロ−３−（チオフェン−３−イル−カルボニルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−イル］フェニル｝尿素
Ｎ−｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）フェニル］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝−（チオフェン−３−イル−カルボキサミド）
Ｎ−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−フェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド
１−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）−３−｛４−［４，５，７−トリフルオロ−３−（チオフェン−３−イル−カルボニルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−イル］フェニル｝尿素
Ｎ−［６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル］（チオフェン−３−イルカルボキサミド）。
【請求項２２】
次の化合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の生成物：
１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−７−フルオロフェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド塩酸塩
１−（４−｛４，５，７−トリフルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）−尿素
１−（４−｛３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−２−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−フェニル尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−イソキサゾール−３−イル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロフェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（フラン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［フェニルカルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（３−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−フェニル尿素
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチルイソキサゾール−３−イル）−尿素
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−フェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−２−メチル−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（５−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−ピリジン−２−イル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（Ｌ−ピロリジン−２−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−アセチルアミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（４−｛７−フルオロ−３−ホルミルアミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素。
【請求項２３】
化合物３０から化合物３９のうち１個から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の生成物。
【請求項２４】
化合物４０から化合物４９のうち１個から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の生成物。
【請求項２５】
次の化合物から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の生成物：
【化３】
2008501669.tif 000058
【請求項２６】
１）非キラル形態又は
２）ラセミ形態又は
３）立体異性的に濃縮されている形態又は
４）鏡像異性的に濃縮されている形態
であり、塩の形態に場合によっては変換されていることを特徴とする、請求項１から請求項２５の何れか１項に記載の生成物。
【請求項２７】
医薬適合性の賦形剤と組み合わせて、請求項１から請求項２６の何れか１項に記載の生成物を含む、医薬組成物。
【請求項２８】
キナーゼにより触媒される反応の阻害剤としての、請求項１から請求項２５の何れか１項に記載の生成物の使用。
【請求項２９】
前記キナーゼが、Ａｕｒｏｒａ２、ＣＤＫ４、ＫＤＲ及びＴｉｅ２から選択されることを特徴とする、請求項２８に記載の生成物の使用。
【請求項３０】
病的状態を治療するのに有用な医薬品の調製のための、請求項１から請求項２９の何れか１項に記載の生成物の使用。
【請求項３１】
病的状態が癌であることを特徴とする、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
病的状態が、乾癬、緑内障、白血病、中枢神経系に関連する疾患、炎症、タンパク質ＪＮＫ１の脱制御に関連する疾患、乾癬、アルツハイマー病、異常な細胞増殖に関連する疾患及び糖尿病から選択されることを特徴とする、請求項３０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の化合物、特に新規の置換インダゾール、それらを含む組成物及び医薬としてのそれらの使用に関する。
【０００２】
とりわけ、本発明は、タンパク質、特にキナーゼ類の活性を調節することにより抗癌活性を示す特異的な新規インダゾールに関する。
【背景技術】
【０００３】
これまで、化学療法において使用されている市販化合物の大多数は、患者側での副作用及び耐性に関して重大な問題を抱えてきた。これらの効果は、使用される医薬品が癌細胞に選択的に作用する場合は、正常細胞を除外するように限定され得る。したがって、化学療法の望ましくない作用を限定するためのある解決策としては、癌細胞で主に発現され、正常細胞での発現が僅かであるか全くない、代謝経路において、又は、これらの経路の構成要素において作用する医薬品を用いることが挙げられる。
【０００４】
タンパク質キナーゼは、チロシン、セリン又はスレオニン残基などの特異的タンパク質残基のヒドロキシル基のリン酸化を触媒する酵素の１クラスである。このようなリン酸化により、タンパク質の機能が多様に変化し、例えば、タンパク質キナーゼは、幅広い種類の細胞プロセス（特に、代謝、細胞増殖、細胞分化、細胞移動又は細胞の生存を含む。）の制御において重要な部分を担っている。タンパク質キナーゼの活性が関与する様々な細胞機能の中で、ある一定のプロセスは、癌疾患、ならびにまた、その他の疾患を治療するための魅力的なターゲットである。
【０００５】
したがって、本発明の目的のうち１つは、特にキナーゼに関して作用する、抗癌活性を有する組成物を提供することである。活性の調節が望まれるキナーゼの中で、Ａｕｒｏｒａ２、ＣＤＫ４、ＫＤＲ及びＴｉｅ２が好ましい。
【０００６】
市販の医薬品の中でインダゾールの表示は比較的少ない。
【０００７】
以下の文献は、アミドにより３位で、及び置換アリールにより６位で置換されているインダゾールの治療的使用を提案する。
【０００８】
特許出願ＷＯ０３／０７８４０３は、アミドにより３位で置換されており、多くの病態、特に中枢神経系に関与する病態の治療に有用であるインダゾールを開示する。癌に対する使用は、開示されているが、明示されていない。
【０００９】
特許出願ＷＯ０３／０５１８４７は、アミドにより３位で置換されており、多くの病態、特に中枢神経系に関与する病態の治療に有用であるインダゾールを開示する。癌に対する使用は、開示されているが、明示されていない。
【発明の開示】
【００１０】
驚くべきことに、今回、置換基ＮＨ−Ｍ−Ｒ３（Ｍ及びＲ３は、下記で定義するとおりである。）により３位で置換され、置換へテロ芳香族又は芳香族置換基により６位で置換されているインダゾールが、キナーゼ、特に、ＫＤＲ及びＴｉｅ２において十分な阻害活性を示すことが分かった。
【００１１】
本発明の長所の１つは、適切な部分によって６位でインダゾールを置換することにより、キナーゼＫＤＲ及びＴｉｅ２の十分な阻害がもたらされることが分かったということである。本発明の別の長所は、置換基ＮＨ−Ｍ−Ｒ３（Ｍ及びＲ３は、下記で定義するとおりである。）による３位でのインダゾールの置換が、上記２つのキナーゼに対して満足のいく活性を獲得することにおける決定因子であることが分かったということである。したがって、インダゾールの３位での官能基の変化により、体系的に、ＫＤＲ及びＴｉｅ２阻害活性が低下する。
【００１２】
さらに、本発明の別の長所は、インダゾールが適切な部分により正しく置換されている場合でも、十分な阻害活性を保持するためには、このインダゾールの１位の窒素が置換されていないことが必須であるということである。
【００１３】
これらの生成物は、下記の式（Ｉ）に対応する：
【００１４】
【化４】
2008501669.tif 000003
（式中、
１）Ａは、Ｈ、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換へテロアリールからなる群から選択され；
２）Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、置換アリール、置換へテロアリールからなる群から選択され；
３）Ｌは、結合、ＣＯ、ＮＨ、ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ、ＮＨ−ＳＯ、ＮＨ−ＳＯ２、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＳＯ２、ＳＯ２ＮＨ、ＮＨ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＮＨ、ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ、ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−Ｏ、Ｏ−ＣＯ−ＮＨ、ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２からなる群から選択され；
４）Ｍは、結合、ＣＯ、ＮＨ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＳ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ、ＮＨ−ＳＯ、ＮＨ−ＳＯ２、ＣＯ−ＮＨ−ＳＯ２、ＮＨ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ、ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２、ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ、ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨからなる群から選択され；
５）Ｒ３は、独立に、Ｈ、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、複素環、置換アルキル、置換アルキレン、置換アルキニル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換シクロアルキル、置換複素環、アルキレン、置換アルキレン、置換アルキニルからなる群から選択され；
６）Ｒ４、Ｒ５及びＲ７は、独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｒ２、ＣＮ、Ｏ（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、ＯＳ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ＝Ｃ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ２）（Ｒ１）、Ｃ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１））（Ｒ２）、Ｃ（＝Ｎ（ＯＲ１））（Ｒ２）、Ｓ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｏ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）からなる群から選択され；各Ｒ２、Ｒ１、Ｒ６は、独立に、Ｈ、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、複素環、置換アルキル、置換アルキレン、置換アルキニル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換シクロアルキル、置換複素環、アルキレン、置換アルキレン、置換アルキニルからなる群から選択され；Ｒ２及びＲ１が同時にＲ４、Ｒ５及びＲ７のうち１つにおいて存在する場合、Ｒ２及びＲ１は、互いに結合して環を形成する。）。
【００１５】
式（Ｉ）の生成物において、Ａｒ−Ｌ−Ａは、有利に、
【００１６】
【化５】
2008501669.tif 000004
である（式中、
各Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、独立に、Ｎ及びＣ−Ｒ１１から選択され、Ｒ１１は、Ｈ、ハロゲン、Ｒ２、ＣＮ、Ｏ（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）（Ｒ２）、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、ＯＳ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ＝Ｃ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ２）（Ｒ１）、Ｃ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒ２）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）、Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１））（Ｒ２）、Ｃ（＝Ｎ（ＯＲ１））（Ｒ２）、Ｓ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｏ（Ｒ２）、Ｓ（Ｏ２）Ｎ（Ｒ２）（Ｒ１）からなる群から選択され；各Ｒ２、Ｒ１、Ｒ６は、独立に、Ｈ、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、複素環、置換アルキル、置換アルキレン、置換アルキニル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換シクロアルキル、置換複素環、アルキレン、置換アルキレン、置換アルキニルからなる群から選択され；Ｒ２及びＲ１が同時にＲ１１において存在する場合、Ｒ２及びＲ１は、互いに結合して環を形成する。）。
【００１７】
置換基Ｒ１１が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、メチル、ＮＨ２、ＯＣＦ３及びＣＯＮＨ２からなる群から選択されることが好ましい。
【００１８】
Ｒ４、Ｒ５及びＲ７は、有利に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びメチルから選択される。
【００１９】
Ｒ７は、好ましくは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びメチルから選択され、特に好ましいものはＦである。これは、フッ素原子によりＲ７を置換することにより、生化学的活性（特に、キナーゼ、とりわけＴｉｅ２及びＫＤＲに対する阻害活性に関して）が顕著に向上することが分かったからである。
【００２０】
Ｌ−Ａは、有利に、ＮＨ２、ＮＨ−Ａ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−Ａ及びＮＨ−ＳＯ２−Ａから選択される。
【００２１】
好ましい置換基Ａは、有利に、フェニル、ピリジル、ピリミジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズオキサゾリル及びベンゾチアゾリルからなる群から選択され、先述の置換基のそれぞれが場合によっては置換されている可能性がある。
【００２２】
より好ましい置換基Ａは、フェニル、イソキサゾリル、置換フェニル及び置換イソキサゾリルから選択される。
【００２３】
Ａは、好ましくは、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリール、Ｓ−アルキル、Ｓ−アリール、Ｓ−ヘテロアリール（それぞれ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ３）アルキルから選択される置換基により場合によっては置換されている。）からなる群から選択される第一の置換基で置換されている。
【００２４】
Ａは、好ましくは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＳＨ、ＳＯ３Ｍ、ＣＯＯＭ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＮ（Ｒ８）（Ｒ９）、Ｎ（Ｒ８）（Ｒ９）ＣＯ（Ｒ８）、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−Ｎ（Ｒ８）（Ｒ９）、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（Ｒ１０）、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ＣＯＯＨ、Ｎ（Ｒ８）（Ｒ９）からなる群から選択される第二の置換基（ここで、Ｒ８及びＲ９は、独立に、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＯＨ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＣＯＯＭ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルＳＯ３Ｍから選択され；Ｒ８及びＲ９が同時にＨ以外のものである場合、Ｒ８及びＲ９は連結して環を形成し得；Ｍは、Ｈ又はＬｉ、Ｎａ及びＫから選択されるアルカリ金属陽イオンであり；Ｒ１０は、Ｈ又は非芳香族複素環（２個から７個の炭素原子及びＮ、Ｏ及びＳから選択される１個から３個のヘテロ原子を含有することにより場合によっては置換されている。）である。）で置換されている。
【００２５】
キナーゼ活性の阻害を得るのに特に効果的である置換基Ａは、フェニル又はイソキサゾリル（それぞれ、ハロゲン、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン化（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、Ｓ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロゲン化Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル及びハロゲン化Ｓ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択される少なくとも１つの置換基で置換されている。）から選択される。
【００２６】
さらに、好ましい置換基Ｍは、有利に、結合、ＣＯ、ＣＯ−ＮＨ及びＳＯ２からなる群から選択される。
【００２７】
Ｒ３は、好ましくは、アリール、ヘテロアリール、置換アリール及び置換ヘテロアリールからなる群から選択される。とりわけ好ましいＲ３は、置換へテロアリールである。置換へテロアリールの中で、選択肢としては、チエニル、ピロリル、フリル、インドリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピラゾリル及びピリダジニルが挙げられる。
【００２８】
Ｒ４及びＲ５は、有利にＨである。これは、この場合、キナーゼＫＤＲ及び／又はＴｉｅ２に関する活性の顕著な向上が観察され、全体的に溶解性が向上するからである。
【００２９】
必要とする阻害活性状態に対応する許容可能な生成物は、次の化合物からなる群から選択され得る：
１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
Ｎ−｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）フェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝（チオフェン−３−イル−カルボキサミド）
Ｎ−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−フェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド。
【００３０】
必要とする阻害活性状態に対応し、Ｒ７がハロゲン以外のものである類似体よりも実際に高い活性を示す、Ｒ７が好ましくはハロゲンであり、より好ましくはフッ素であるその他の許容可能な生成物は、次の化合物からなる群から選択される：
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
１−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）−３−｛４−［７−フルオロ−３−（チオフェン−３−イル−カルボニルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−イル］フェニル｝尿素
Ｎ−｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）フェニル］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝−（チオフェン−３−イル−カルボキサミド）
Ｎ−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド
１−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）−３−｛４−［４，５，７−トリフルオロ−３−（チオフェン−３−イル−カルボニルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−イル］フェニル｝尿素
Ｎ−［６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル］（チオフェン−３−イルカルボキサミド）。
【００３１】
本発明による生成物は、
１）非キラル形態又は
２）ラセミ形態又は
３）立体異性的に濃縮されている形態又は
４）鏡像異性的に濃縮されている形態
で存在し得、塩の形態に場合によっては変換され得る。
【００３２】
本発明による生成物は、病的状態の治療、とりわけ癌の治療に有用な医薬品の調製に使用することができる。
【００３３】
本発明はまた、選択する投与形態に応じた医薬適合性の賦形剤と組み合わせて、本発明による生成物を含む治療用組成物にも関する。この医薬組成物は、固体又は液体の形態、あるいはリポソームの形態であり得る。
【００３４】
固体組成物としては、散剤、ゼラチンカプセル及び錠剤が挙げられる。経口剤型には、胃の酸性環境から保護される固体形態も含まれ得る。この固体形態に使用される担体としては、とりわけ、リン酸塩及び炭酸塩などの無機担体又はラクトース、セルロース、デンプン又はポリマーなどの有機担体が挙げられる。液体形態としては、液剤、懸濁剤又は分散剤が挙げられる。これらは、分散性担体として、水もしくは有機溶媒（エタノール、ＮＭＰなど）又は界面活性剤と溶媒との混合物又は錯化剤と溶媒との混合物を選択的に含む。
【００３５】
液体形態は、好ましくは注射可能であり、したがって、このような用途に対して許容可能な処方を有するものとなろう。
【００３６】
注射による投与の許容可能な経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内及び皮下経路が含まれ、一般に静脈内経路が好ましい。
【００３７】
本発明化合物の投与用量は、患者に対する投与経路及び患者の状態に応じて、医師により調整される。
【００３８】
本発明の化合物は、単独で、又は他の抗癌剤との混合物として投与することができる。可能な併用薬を下記に示す。
【００３９】
アルキル化剤、とりわけ、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド、クロランブシル、ブスルファン、チオテパ、プレドニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ステプトゾトシン、デカルバジン、テモゾロミド、プロカルバジン及びヘキサメチルメラミン。
【００４０】
白金誘導体、とりわけ、シスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチン。
【００４１】
抗生物質剤、とりわけ、ブレオマイシン、マイトマイシン及びダクチノマイシン。
【００４２】
抗微小管剤、とりわけ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンオレルビン又はタキソイド（パクリタキセル、ドセタキセル）。
【００４３】
アントラサイクリン、とりわけ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン及びロソキサントロン。
【００４４】
トポイソメラーゼ  グループＩ及びＩＩ阻害剤、例えば、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン及びトムデックス。
【００４５】
フルオロピリミジン、例えば、５−フルオロウラシル、ＵＦＴ及びフロクスウリジン。
【００４６】
シチジン類似体、例えば、５−アザシチジン、シタラビン、ゲムシタビン、６−メルカプトムリン及び６−チオグアニン。
【００４７】
アデノシン類似体、例えば、ペントスタチン、シタラビン又はリン酸フルダラビン。
【００４８】
メトトレキセート及びフォリン酸。
【００４９】
各種酵素及び化合物、例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ、ヒドロキシ尿素、トランス−レチノイン酸、スラミン、デクスラゾキサン、アミホスチン、ハーセプチンならびにエストロゲン及びアンドロゲンホルモン。
【００５０】
抗血管形成剤、例えば、コンブレタスタチン又はコルヒチンの誘導体及びそれらのプロドラッグ。
【００５１】
また、本発明の化合物を放射線療法と組み合わせることもできる。これらの治療は、同時に、別々に、又は順次に行い得る。この治療は、治療する患者に応じて医者により調整される。
【００５２】
本発明の生成物は、キナーゼにより触媒される反応を阻害するための薬剤として有用である。ＫＤＲ及びＴｉｅ２は、本発明の生成物が阻害剤として特に有用であるキナーゼである。
【００５３】
これらのキナーゼを選択する理由を以下に挙げる。
【００５４】
ＫＤＲ
ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）としても知られるＫＤＲ（キナーゼインサートドメイン受容体）は、内皮細胞でのみ発現される。この受容体は、血管形成増殖因子ＶＥＧＦに結合し、したがって、その細胞内キナーゼドメインの活性化を介して伝達シグナルに対するメディエーターとして働く。ＶＥＧＦ−Ｒ２のキナーゼ活性の直接的阻害により、外因性のＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）の存在下で血管形成現象を抑えることができる（Ｓｔｒａｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９６，ｖｏｌ．５６、ｐ．３５４０−３５４５）。このプロセスは、特に、ＶＥＧＦ−Ｒ２突然変異体を用いて明らかになっている（Ｍｉｌｌａｕｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９６，ｖｏｌ．５６，ｐ．１６１５−１６２０）。ＶＥＧＦ−Ｒ２受容体は、ＶＥＧＦの血管形成活性に関するもの以外は、成体において機能がないと思われる。したがって、ＶＥＧＦ−Ｒ２のキナーゼ活性の選択的阻害剤が示す毒性はわずかであろう。
【００５５】
血管形成の動的プロセスでの中心的役割に加えて、最近の結果から、ＶＥＧＦの発現が、化学療法及び放射線療法後の腫瘍細胞の生存に寄与することが示唆されており、このことから、ＫＤＲ阻害剤と他の薬剤との相乗効果の可能性が強調される（Ｌｅｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０００，ｖｏｌ．６０，ｐ．５５６５−５５７０）。
【００５６】
Ｔｉｅ２
ＴｉＥ−２（ＴＥＫ）は、内皮細胞に特異的な、チロシンキナーゼ受容体の１クラスの一員である。Ｔｉｅ２は、受容体の自己リン酸化及び細胞シグナリングを刺激するアゴニスト（アンジオポイエチン−１又はＡｎｇ１）（Ｓ．Ｄａｖｉｓら、（１９９６）Ｃｅｌｌ  ８７，１１６１−１１６９）及びアンタゴニスト（アンジオポイエチン−２又はＡｎｇ２）（Ｐ．Ｃ．Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅら、（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７,５５−６０）の両方が知られている、チロシンキナーゼ活性を有する最初の受容体である。アンジオポイエチン１は、血管新生の最終段階においてＶＥＧＦと相乗的に作用することができる（Ａｓａｈａｒａ，Ｔ．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．（１９９８）２３３−２４０）。Ｔｉｅ２又はＡｎｇ１発現のノックアウト実験及びトランスジェニック操作の結果、動物において血管形成における欠陥が見られた（Ｄ．Ｊ．Ｄｕｍｏｎｔら（１９９４）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．８，１８９７−１９０９及びＣ．Ｓｕｒｉ（１９９６）Ｃｅｌｌ  ８７，１１７１−１１８０）。Ａｎｇ１がその受容体へ結合する結果、血管新生に必須であり、血管が周皮細胞及び平滑筋細胞を動員し相互作用するのにも必須である、Ｔｉｅ２のキナーゼドメインの自己リン酸化が起こるが、これらの現象は、新たに形成される血管の成熟及び安定性に寄与する（Ｐ．Ｃ．Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅら（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７，５５−６０）。Ｌｉｎら（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００，８：２０７２−２０７８及びＰ．Ｌｉｎ（１９９８）ＰＮＡＳ  ９５，８８２９−８８３４において、腫瘍成長及び血管形成の阻害ならびに、乳癌及びメラノーマゼノグラフ（ｘｅｎｏｇｒａｐｈ）モデルにおける、アデノウイルス感染時又はＴｉｅ−２（Ｔｅｋ）の細胞外ドメインの注入時の肺転移の減少も示されている。
【００５７】
Ｔｉｅ２阻害剤は、血管新生が不適切に起こる状況において（即ち、糖尿病性網膜症、慢性的炎症、乾癬、カポジ肉腫、黄斑変性による慢性血管新生、関節リウマチ、小児血管腫及び癌において）使用することができる。
【００５８】
ＣＤＫ
細胞周期の進行は、サイクリンクラスに属するタンパク質との相互作用により活性化され、基質のリン酸化、究極的には細胞分裂により活性化が終了する、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）により調節されることが多い。さらに、活性化される内因性ＣＤＫ阻害剤（ＩＮＫ４及びＫＩＰ／ＣＩＰクラス）は、ＣＤＫ活性を負の方向に制御する。正常細胞の増殖は、ＣＤＫ活性化因子（サイクリン）と内因性ＣＤＫ阻害剤との間のバランスによるものである。多くの種類の癌において、これらの多くの細胞周期制御因子の異常な活性又は発現が報告されている。
【００５９】
サイクリンＥは、Ｃｄｋ２キナーゼを活性化し、続いて、タンパク質ｐＲｂ（網膜芽細胞腫タンパク質）をリン酸化するように作用し、その結果、不可逆的に細胞分裂が促進され、Ｓ期への移行が起こる（ＰＬ  Ｔｏｏｇｏｏｄ，Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００１）、２１（６）；４８７−４９８）。キナーゼＣＤＫ２及びおそらくＣＤＫ３は、Ｇ１期の進行及びＳ期への移入に必要である。サイクリンＥとの複合体形成中、Ｇ１期からＳ期への進行を促進するように、これらは、ｐＲｂの過剰リン酸化を維持する。サイクリンＡとの複合体において、ＣＤＫ２は、Ｅ２Ｆの不活性化に関与し、Ｓ期の実現に必要である（ＴＤ．Ｄａｖｉｅｓら（２００１）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ９，３８９−３）。
【００６０】
ＣＤＫ１／サイクリンＢ複合体は、Ｇ２期とＭ期との間の細胞周期の進行を制御する。ＣＤＫ／サイクリンＢ複合体の負の方向への制御により、Ｇ２期が適正かつ完全に実現する前に正常細胞がＳ期に移入することが妨げられる（Ｋ．Ｋ．Ｒｏｙ及びＥ．Ａ．Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，２００１，７，１６６９−１６８７）。
【００６１】
ＣＤＫ活性の制御レベルが存在する。サイクリン依存性キナーゼ活性化因子（ＣＡＫ）は、ＣＤＫにおいて正の方向の制御作用を有する。ＣＡＫは、標的酵素が完全に活性化されるように、スレオニン残基においてＣＫＤをリン酸化する。
【００６２】
細胞周期に関与する分子に欠陥が存在することにより、ＣＤＫの活性化が起こり、細胞周期が進行する。癌細胞における細胞増殖を阻止するためにＣＤＫ酵素の活性を阻害したいと考えることは理にかなっている。
【００６３】
Ａｕｒｏｒａ
染色体分離及び紡錘体アセンブリーに関与する多くのタンパク質が酵母及びショウジョウバエにおいて同定されている。これらのタンパク質が崩壊すると、染色体が非分離となり、紡錘体が単極になるか、又は乱れる。これらのタンパク質の中でも、それぞれショウジョウバエ及びＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（Ｓ．セレビシエ、出芽酵母）由来の、Ａｕｒｏｒａ及びｌｐｌ１を含むある一定のキナーゼが、染色体分離及び中心体分離に必要である。最近、酵母ｌｐｌ１のヒト類似体が様々な研究グループによりクローニングされ、特徴が調べられている。Ａｕｒｏｒａ２、ＳＴＫ１５又はＢＴＡＫと呼ばれるこれらのキナーゼは、セリン／スレオニンキナーゼクラスに属する。Ｂｉｓｃｈｏｆｆらは、Ａｕｒｏｒａ２が発癌性であり、ヒト結腸直腸癌で増幅されることを明らかにした（ＥＭＢＯ  Ｊ．１９９８，１７，３０５２−３０６５）。これはまた、乳癌などの上皮腫瘍を含む癌においても示されている。
【００６４】
定義
「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから選択される要素を指す。
【００６５】
「アルキル」という用語は、１個から１２個の炭素原子を有する、飽和直鎖又は飽和分枝鎖炭化水素置換基を指す。アルキル置換基の例としては、置換基メチル、メチル、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、ヘキシル、１−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル、３，３−ジメチルブチル、ヘプチル、１−エチルペンチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシルが挙げられる。
【００６６】
「アルキレン」という用語は、１又は複数の不飽和部分及び２個から１２個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝鎖炭化水素置換基を指す。アルキレン置換基の例としては、置換基エチルエニル、１−メチルエチルエニル、プロプ−１−エニル、プロプ−２−エニル、Ｚ−１−メチルプロプ−１−エニル、Ｅ−１−メチルプロプ−１−エニル、Ｚ−１，２−ジメチルプロプ−１−エニル、Ｅ−１，２−ジメチルプロプ−１−エニル、ブタ−１，３−ジエニル、１−メチリデニルプロプ−２−エニル、Ｚ−２−メチルブタ−１，３−ジエニル、Ｅ−２−メチルブタ−１，３−ジエニル、２−メチル−１−メチリデニル−プロプ−２−エニル、ウンデク−１−エニル及びウンデク−１０−エニルが挙げられる。
【００６７】
「アルキニル」という用語は、隣接する炭素原子の対により形成される少なくとも２個の不飽和部分及び２個から１２個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝鎖炭化水素置換基を指す。アルキニル置換基の例としては、置換基エチニル；プロプ−１−イニル；プロプ−２−イニル及びブト−１−イニルが挙げられる。
【００６８】
「アリール」という用語は、６個から１４個の炭素原子を有する、単環式又は多環式芳香族置換基を指す。アリール置換基の例としては、置換基フェニル、ナフト−１−イル；ナフト−２−イル；アントラセン−９−イル；１，２，３，４−テトラヒドロナフト−５−イル；及び１，２，３，４−テトラヒドロナフト−６−イルが挙げられる。
【００６９】
「ヘテロアリール」という用語は、１個から１３個の炭素原子及び１個から４個のヘテロ原子を有する、単環式又は多環式の複素環式芳香族置換基を指す。ヘテロアリール置換基の例としては、置換基ピロール−１−イル；ピロール２−イル；ピロール３−イル；フリル；チエニル；イミダゾリル；オキサゾリル；チアゾリル；イソキサゾリル；イソチアゾリル；１，２，４−トリアゾリル；オキサジアゾリル；チアジアゾリル；テトラゾリル；ピリジル；ピリミジル；ピラジニル；１，３，５−トリアジニル；インドリル；ベンゾ［ｂ］フリル；ベンゾ［ｂ］チエニル；インダゾリル；ベンズイミダゾリル；アザインドリル；キノリル；イソキノリル；カルバゾイル；及びアクリジルが挙げられる。
【００７０】
「ヘテロ原子」という用語は、炭素以外の少なくとも２価の原子を指す。ヘテロ原子の例としては、Ｎ；Ｏ；Ｓ及びＳｅが挙げられる。
【００７１】
「シクロアルキル」という用語は、３個から１２個の炭素原子を有する、飽和又は部分不飽和の、環状炭化水素置換基を指す。シクロアルキル置換基の例としては、置換基シクロプロピル；シクロブチル；シクロペンチル；シクロペンテニル；シクロペンタジエニル；シクロヘキシル；シクロへキセニル；シクロヘプチル；ビシクロ［２．２．１］ヘプチル；シクロオクチル；ビシクロ［２．２．２］オクチル；アダマンチル；及びペルヒドロナフチルが挙げられる。
【００７２】
「複素環」という用語は、１個から１３個の炭素原子及び１個から４個のヘテロ原子を有する、飽和又は部分不飽和の環状炭化水素置換基を指す。好ましくは、飽和又は部分不飽和環状炭化水素置換基は、単環式であり、４個又は５個の炭素原子及び１個から３個のヘテロ原子を含む。
【００７３】
「置換されている」という用語は、Ｈ以外の置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、複素環、アルキレン、アルキニル、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキレン、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリール、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アリール、ＮＨ−ヘテロアリール、ＳＨ、Ｓ−アルキル、Ｓ−アリール、Ｓ（Ｏ２）Ｈ、Ｓ（Ｏ２）−アルキル、Ｓ（Ｏ２）−アリール、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ３−アルキル、ＳＯ３−アリール、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、ＯＣ（Ｏ）−アルキル、ＯＣ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アリール、ＮＨＣＨＯ、ＮＨＣ（Ｏ）−アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、ＮＨ−シクロアルキル及びＮＨ−ヘテロシクリルを指す。
【００７４】
本発明はまた、式（Ｉ）の生成物を調製するための方法を提供する。
【００７５】
本発明による生成物は、有機化学の従来の方法に基づいて調製することができる。下記のスキーム１は、実施例６を調製するために使用する方法の一例である。この状況において、主張する化合物を調製するための方法に関する限りは、これは、本発明の範囲を何ら限定しない。
【００７６】
【化６】
2008501669.tif 000005
【００７７】
当業者にとって当然のことながら、上述の本発明による方法を実施するために、副反応を避けるため、アミノ、カルボキシル及びアルコール官能基に対して保護基を導入することが必要である場合がある。これらの基は、分子の他の部分に影響を与えることなく除去することができる基である。アミノ官能基に対する保護基の例には、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（ヨウ化トリメチルシランにより再生することができる。）；アセチル（酸性溶媒（例えば塩酸）により再生することができる。）が含まれる。カルボキシル官能基に対する保護基として可能なものには、エステル（例えば、メトキシメチルエステル、ベンジルエステル）が含まれる。アルコール官能基に対する保護基として可能なものには、エステル（例えばベンゾイルエステル）（酸性溶媒において、又は接触水素化により再生することができる。）が含まれる。使用できるその他の保護基は、Ｔ．Ｗ．Ｂｒｅｅｎｅら、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第三版、１９９９、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅにより述べられている。
【００７８】
式（Ｉ）の化合物を単離し、例えば、結晶化、クロマトグラフィー又は抽出などの通常の公知の方法により精製することができる。
【００７９】
式（Ｉ）の化合物の鏡像異性体及びジアステレオ異性体もまた本発明に含まれる。
【００８０】
溶媒（例えばアルコール、ケトン、エーテル又は塩素系溶媒などの有機溶媒）中の酸などの作用により、塩基性残基を含有する式（Ｉ）の化合物を場合によっては有機酸もしくは無機酸との付加塩に変換することができる。
【００８１】
それ自体公知の方法に従い、酸性残基を含有する式（Ｉ）の化合物を金属塩又は窒素含有塩基との付加塩に場合によっては変換し得る。溶媒中で式（Ｉ）の化合物に対して金属塩基（例えば、アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩基）、アンモニア、アミン又はアミン塩を作用させることにより、これらの塩を得ることができる。形成された塩を従来の方法により分離する。
【００８２】
これらの塩もまた本発明に含まれる。
【００８３】
本発明による生成物が少なくとも１個の遊離塩基性官能基を示す場合、本発明による生成物を有機酸又は無機酸と反応させることにより、医薬適合性の塩を調製することができる。医薬適合性の塩には、塩化物、硝酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、ピロ硫酸塩、二硫酸塩、亜硫酸塩、二亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、アクリル酸塩、４−ヒドロキシ酪酸塩、カプリル酸塩、カプロン酸塩、デカン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、グルタル酸塩、アジピン酸塩、ピメリン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、フェニル酢酸塩、マンデル酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、安息香酸塩、フタル酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、サリチル酸塩、ケイ皮酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、グルクロン酸塩及びガラクツロン酸塩が含まれる。
【００８４】
本発明による生成物が少なくとも１個の遊離酸性官能基を示す場合、本発明による生成物を有機塩基又は無機塩基と反応させることにより、医薬適合性の塩を調製し得る。医薬適合性の塩基には、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ及びＣａなどのアルカリ金属又はアルカリ土類金属陽イオンの水酸化物及びアンモニア、アルギニン、ヒスチジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン及びトリエチルアミンなどの塩基性アミン化合物が含まれる。
【００８５】
塩の形態、特に塩酸塩の形態で調製される本発明による生成物は、公知の技術に従い、有機塩基又は無機塩基の作用により塩の形態から戻すことができる。
【００８６】
本発明を以下の実施例によっても説明するが、この実施例は、本発明を説明するために提供するものである。
【００８７】
ＬＣ／ＭＳ分析は、ＨＰ１１００機器に接続したＭｉｃｒｏｍａｓｓモデルＬＣＴ装置で行った。２００から６００ｎｍの波長範囲にわたるＨＰ  Ｇ１３１５Ａダイオードアレー検出器及びＳｅｄｅｘ６５光散乱検出器を用いて、生成物の存在度を測定した。１８０から８００の範囲にわたり、マススペクトルを得た。Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアを用いてデータを分析した。Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＢＤＳ  Ｃ１８カラム、３μｍ（５０ｘ４．６ｎｍ）において、１ｍＬ／分の流速で３．５分間にわたって、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）０．０５％（ｖ／ｖ）を含有する水中で、０．０５％（ｖ／ｖ）のＴＦＡを含有するアセトニトリルの５％から９０％までの直線的勾配を用いて溶出し、分離を行った。総分析時間は、カラムを再平衡化するための時間を含めて、７分間である。
【００８８】
ＰｌａｔｆｏｒｍＩＩ（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）機器において電子スプレー（ＥＳ＋）技術を用いて、ＭＳスペクトルを行った。観察した主イオンを述べる。
【００８９】
３０℃から３００℃の範囲で、１分に２℃ずつ温度を上昇させ、Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ６２機器において、毛細管技術を用いて融点を測定した。
【００９０】
ＬＣ／ＭＳによる精製
Ｗａｔｅｒｓモデル６００勾配ポンプ、Ｗａｔｅｒｓモデル５１５再生ポンプ、Ｗａｔｅｒｓ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｍａｎａｇｅｒ希釈ポンプ、Ｗａｔｅｒｓモデル２７００自動注入器、２個のＲｈｅｏｄｙｎｅＬａｂＰｒｏモデルのバルブ、Ｗａｔｅｒｓモデル９９６ダイオードアレイ検出器、ＷａｔｅｒｓモデルＺＭＤマススペクトロメーター及びＧｉｌｓｏｎモデル２０４フラクションコレクターからなるＷａｔｅｒｓＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘシステムを用いて、ＬＣ／ＭＳにより生成物を精製した。このシステムをＷａｔｅｒｓＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘソフトウェアにより制御した。２本のＷａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙカラム（Ｃ１８、５μｍ、１９ｘ５０ｍｍ、カタログ参照番号  １８６０００２１０）において交互に分離を行い、トリフルオロ酢酸０．０７％（ｖ／ｖ）を含有する９５／５（ｖ／ｖ）の水/アセトニトリル混合液により一方のカラムを再生し、もう一方のカラムを分離に使用した。１０ｍＬ／分の流速で、トリフルオロ酢酸０．０７％（ｖ／ｖ）を含有する水中でトリフルオロ酢酸０．０７％（ｖ／ｖ）を含有するアセトニトリルの５％から９５％の直線的勾配により、カラムの溶出を行った。分離カラムの出口において１０００番目の流出物をＬＣ  Ｐａｃｋｉｎｇ  Ａｃｃｕｒａｔｅで分離し、０．５ｍｌ／分の流速にてメチルアルコールで希釈し、検出装置に送るが、そのうちダイオードアレー検出器には７５％、質量分析計には残りの２５％を送る。流出物の残り（９９９／１０００）はフラクションコレクターに送り、そこにおいて、予想生成物の質量がＷａｔｅｒｓＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘソフトウェアにより検出されるまで流液を捨てる。予想生成物の分子式はＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘソフトウェアに送られ、このソフトウェアは、検出された質量シグナルがイオン［Ｍ＋Ｈ］＋及び／又は［Ｍ＋Ｎａ］＋に相当する場合に、生成物の回収を行わせる。ある場合において、分析ＬＣ／ＭＳの結果に応じて、［Ｍ＋２Ｈ］＋＋に相当する強いイオンが検出された場合には、計算分子量の半分の値（ＭＷ／２）に相当する値もまた、ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘソフトウェアに送られる。これらの条件下で、イオン［Ｍ＋２Ｈ］＋＋及び／又は［Ｍ＋Ｎａ＋Ｈ］＋＋の質量シグナルが検出された場合にも回収を行わせる。風袋測定したガラス試験管に生成物を回収した。回収後、Ｓａｖａｎｔ  ＡＥＳ２０００又はＧｅｎｅｖａｃＨＴ８遠心蒸発器で溶媒を蒸発させ、溶媒蒸発後の試験管を秤量することにより、生成物の質量を決定した。
【実施例】
【００９１】
（実施例１）
１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素塩酸塩
【００９２】
【化７】
2008501669.tif 000006
【００９３】
エタノール中の３７％塩酸（４．２ｍＬ）を用いて、１−（４−｛３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロ−メチルフェニル）尿素０．４ｇを還流温度にて２４時間加水分解することにより、１−［４−（３−アミノフルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素塩酸塩を得る。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を得てアセトニトリル１０ｍＬとともに撹拌し、次いでメタノール７ｍＬから熱いまま再結晶化させる。ろ過を行い、真空下で乾燥させて、１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素塩酸塩７０ｍｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【００９４】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４１３；１６５６；１５５０；１４４２；１３４０；１１１７及び８１６ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．３８から７．４５（ｍ，２Ｈ）；７．４９から７．５６（ｍ，２Ｈ）；７．６０（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．７０（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．９０（ｄ，J＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．６５（広幅ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．９８（広幅ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）；９．４２（ｓ，１Ｈ）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４３０［ＭＨ＋］
【００９５】
１−（４−｛３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
テトラヒドロフラン７０ｍＬ中の、６−（４−アミノフェニル）−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩１．７２ｇ及びトリエチルアミン０．６５ｍＬの溶液を、２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート０．６７ｍＬとアルゴン雰囲気下でゆっくり混合する。反応混合物を、２４℃で３．５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。ジクロロメタン／メタノール（体積比９７／３）の混合液で溶出する、シリカカラム（６０；３５−７０μＭ）上でのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製し、１−（４−｛３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素０．４ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４０［ＭＨ＋］
【００９６】
６−（４−アミノフェニル）−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩
メタノール３０ｍＬ中の６−（４−ｔeｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール４．２ｇの溶液を、４Ｎ塩酸ジオキサン１２ｍＬと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で１４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。イソプロピルエーテル２５ｍＬとともに固形の残渣を撹拌し、ろ過し、吸引処理して、６−（４−アミノフェニル）−１−［３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩３．４５ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３３５［ＭＨ＋］
【００９７】
６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール
ジオキサン３５０ｍＬ中の６−ブロモ−１−［（チオフェン−３−イル）カルボニル］−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］インダゾール６ｇの溶液を４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）フェニルボロン酸４．９３ｇと混合する。水９０ｍＬ中の炭酸ナトリウム４．１２ｇの溶液を添加し、続いてテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム１．９３ｇを添加する。反応混合物を９０℃で４時間撹拌し、次いで蒸留水１２０ｍＬに注ぐ。酢酸エチルで抽出し、次いで抽出物を塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄した後、有機相を減圧下で濃縮して固形物１３．１８ｇを得て、シクロヘキサン／酢酸エチル（体積比６０／４０）の混合液で溶出する、シリカカラム（６０；３５−７０μＭ）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール４．２ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４３５［ＭＨ＋］
【００９８】
６−ブロモ−１−［（チオフェン−２−イル）カルボニル］−３−［（チオフェン−２−イル）カルボニルアミノ］インダゾール
ピリジン２５０ｍＬ中の６−ブロモ−３−アミノ−１Ｈ−インダゾール１０ｇの溶液を３−チオフェンカルボン酸クロリド１３．８ｇと混合する。アルゴン雰囲気下でほぼ２５℃の温度にて１６時間、反応混合物を撹拌し、次いで水４００ｍＬに注ぐ。次いで懸濁液をろ過し、生成物を水２ｘ８０ｍＬで洗浄し、吸引処理して乾燥させ、６−ブロモ−１−［（チオフェン−２−イル）カルボニル］−３−［（チオフェン−２−イル）カルボニルアミノ］インダゾール１９．２７ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４３３［ＭＨ＋］
【００９９】
６−ブロモ−３−アミノ−１Ｈ−インダゾール
エタノール３００ｍＬ中の４−ブロモ−２−フルオロベンゾニトリル１０ｇの溶液をヒドラジン水和物７．２９ｍＬと混合する。反応混合物を還流温度で２２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。取得した残渣を蒸留水２００ｍＬ中で３０分間撹拌する。懸濁した固形物をろ過により単離し、水で洗浄して、吸引処理する。真空乾燥後、６−ブロモ−３−アミノ−１Ｈ−インダゾール１０ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１００】
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２１３［ＭＨ＋］
融点：２４９℃
【０１０１】
（実施例２）
１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド塩酸塩
【０１０２】
【化８】
2008501669.tif 000007
【０１０３】
３−チオフェンカルボン酸｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）フェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝アミド０．５４ｇをエタノール４０ｍＬ中の３７％塩酸（５ｍＬ）により還流温度にて２４時間加水分解することにより、１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド塩酸塩を得る。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を得て、アセトニトリル１０ｍＬとともに撹拌する。ろ過を行い、イソプロピルエーテル１０ｍＬで洗浄し、１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド塩酸塩０．４６ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１０４】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４２６；３１３４；２９０２；２７１１；１６５９；１４０４；１１６４；９２４；７０５及び５９３ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．２１（広幅ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）；７．２９（広幅ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．４４（広幅ｓ，１Ｈ）；７．５８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．６２（広幅ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）；７．８５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．９３（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．０９（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；１０．９５（広幅ｓ，１Ｈ）；１１．９から１２．４（非常に拡散したｍ，１Ｈ）。
【０１０５】
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４３３［ＭＨ＋］
【０１０６】
（実施例３）
３−チオフェンカルボン酸｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝アミド
【０１０７】
【化９】
2008501669.tif 000008
【０１０８】
０℃にて、ピリジン６９ｍＬ中の６−（４−アミノフェニル）−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩１．７２ｇの溶液をジクロロメタン２３ｍＬ中の２，３−ジクロロベンゼンスルホニルクロリド１．１４ｇの溶液と混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で３時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。乾燥残渣を酢酸エチル中で希釈し、水で洗浄して、次いで塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、減圧下で濃縮する。ジクロロメタン／メタノール／アセトニトリル（体積比９６／２／２）の混合液で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより、取得した泡状物質を精製し、３−チオフェンカルボン酸｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）フェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝アミド０．６９ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１０９】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３８８；３２７４；３１０７；１６５６；１５２８；１４０４；１２６８；１１６７；７３７；７０５及び５９８ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．２０（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び９．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．５２から７．５９（ｍ，２Ｈ）；７．６２（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．６７（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７１（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．９２（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．０９（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．４４（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び２．５Ｈｚ，１Ｈ）；１０．６５（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．９（拡散したｍ，１Ｈ）；１２．８（広幅ｓ，１Ｈ）。
【０１１０】
融点：１９６℃
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝５４２［Ｍ＋Ｏ］
【０１１１】
（実施例４）
６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩
【０１１２】
【化１０】
2008501669.tif 000009
【０１１３】
メタノール２０ｍＬ中の６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール０．６３ｇの溶液を４Ｎ塩酸ジオキサン１．７４ｍＬと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で１４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。固形の残渣をイソプロピルエーテル１０ｍＬとともに撹拌し、ろ過により単離し、吸引処理して、６−（４−アミノフェニル）−１−［３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール塩酸塩０．５２ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１１４】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）
２９３２；１７２８；１６０７；１５１９；１５０４；１４３２；１３８０；１２８８；１１９４；１０９１；９１４；７５８及び７０１ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．１８（ｄｄ，Ｊ＝７．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．３３（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．６２から７．７６（ｍ，５Ｈ）；８．４９（ｍ，１Ｈ）；１０．９（ｓ，１Ｈ）；１３．３から１３．６（非常に拡散したｍ，１Ｈ）。
【０１１５】
６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール
１５℃にて、ピリジン１０ｍＬ中の６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール０．５４ｇの溶液を３−クロロカルボニルチオフェン０．２３ｇと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で１２時間撹拌し、次いでジクロロメタン５０ｍＬ中で希釈し、蒸留水４ｘ５０ｍＬで洗浄する。次いで有機相を減圧下で濃縮する。取得した固形の残渣をイソプロピルエーテル１０ｍＬとともに撹拌し、ろ過して吸引処理し、６−（４−アミノフェニル）−１−［３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール０．６３ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１１６】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３２４８；２９７７；１７２３；１６５８；１５９１；１５３３；１３４２；１２３８；１１６０；１０５２及び８０５ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：１．５２（ｓ，９Ｈ）；７．１７（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．５６（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．５９から７．６５（ｍ，３Ｈ）；７．７０（ｄｄ，Ｊ＝３．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び３．０Ｈｚ，１Ｈ）；９．５２（ｓ，１Ｈ）；１０．８（ｓ，１Ｈ）；１３．４（広幅ｓ，１Ｈ）
【０１１７】
３−アミノ−７−フルオロ−６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１Ｈ−インダゾール
無水エタノール２５ｍＬ中の２，３−ジフルオロ−４−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−ベンゾニトリル０．８ｇの溶液をヒドラジン水和物０．３５ｍＬと混合する。反応混合物を溶媒の還流温度にて１９時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。固形の残渣を蒸留水２５ｍＬとともに撹拌し、ろ過して、ジクロロメタン２ｘ５ｍＬで洗浄する。吸引処理後、３−アミノ−７−フルオロ−６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１Ｈ−インダゾール０．５４ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１１８】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４２２；３３７４；２９８１；１７３２；１６１２；１５３０；１３６８；１２２２；１１５９；１０５０；８４４及び８０６ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：１．５２（ｓ，９Ｈ）；５．５０（ｓ，２Ｈ）；６．９８（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．４８から７．６１（ｍ，５Ｈ）；９．４８（ｓ，１Ｈ）；１１．９（広幅ｓ，１Ｈ）
【０１１９】
２，３−ジフルオロ−４−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）ベンゾニトリル
ジオキサン６０ｍＬ中の２，３−ジフルオロ−４−トリフルオロメチルスルホニルオキシベンゾニトリルの溶液をアルゴン雰囲気下にて４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシルカルボニルアミノ）フェニルボロン酸１．２４ｇと混合する。水１５ｍＬ中の炭酸ナトリウム１．０３ｇの溶液を添加し、続いてテトラキストリフェニルホスフィンパラウジウム０．４８ｇを添加する。反応混合物を９０℃で３時間撹拌し、次いで蒸留水８０ｍＬに注ぐ。酢酸エチルで抽出し、次いで塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄した後、有機相を減圧下で濃縮して、２，３−ジフルオロ−４−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）ベンゾニトリル０．８ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１２０】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３４５；２９８１；２２４７；１７１９；１５９５；１５３２；１４７０；１４０９；１３２５；１２３９；１１５８；１０５７；８９８；８２５；６６５及び５５２ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３３１［ＭＨ＋］
【０１２１】
２，３−ジフルオロ−４−トリフルオロメチルスルホニルオキシベンゾニトリル
ジメチルホルムアミド２０ｍＬ中の２，３−ジフルオロ−４−ヒドロキシベンゾニトリル２ｇの溶液を水素化ナトリウム０．４３ｇと少量ずつ混合する。周囲温度で１０分間撹拌した後、Ｎ−フェニルトリフルオロメタンスルホンイミド４．８４ｇを添加する。２０℃の領域温度で１０時間撹拌した後、反応混合物を蒸留水１００ｍＬに注ぎ、酢酸エチルで抽出する。有機相を塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、次いで減圧下で濃縮して、油状物質３．６８ｇを得て、シクロヘキサン／酢酸エチル（体積比９２／８）の混合液で溶出するシリカカラム（６０；３５−７０μＭ）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、２，３−ジフルオロ−４−トリフルオロメチルスルホニルオキシベンゾニトリル０．５２ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１２２】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：２２４５；１４９７；１４４２；１２３２；１１３８；１０３５；９６０；８３４及び６０３ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２８８［ＭＨ＋］
【０１２３】
（実施例５）
３−チオフェンカルボン酸｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）−７−フルオロフェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝アミド
【０１２４】
【化１１】
2008501669.tif 000010
【０１２５】
ピリジン２０ｍＬ中の６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩の溶液を０℃にてジクロロメタン６．５ｍＬ中の２，３−ジクロロベンゼンスルホニルクロリド０．３１５ｇの溶液に添加する。反応混合物を２０℃の領域温度で１６時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。乾燥残渣をジクロロメタン中で希釈し、水で洗浄して、塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、次いで減圧下で濃縮する。ジクロロメタン／メタノール／アセトニトリル（体積比９６／２／２）の混合液で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより、取得した泡状物質を精製し、３−チオフェンカルボン酸｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）−７−フルオロフェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝アミド０．２ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１２６】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４２１；１６５９；１５２７；１４０５；１３４０；１１６６；１０９１；９１３；７３９；７０５及び５９８ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．１０（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．２１（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．５１（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．５３から７．６２（ｍ，２Ｈ）；７．６７（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７１（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．９２（広幅ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．１０（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び２．５Ｈｚ，１Ｈ）；１０．７５（広幅ｓ，１Ｈ）；１１．０（拡散したｍ，１Ｈ）；１３．３５（広幅ｓ，１Ｈ）。
【０１２７】
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５６０［ＭＨ＋ｏ］
【０１２８】
（実施例６）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１２９】
【化１２】
2008501669.tif 000011
【０１３０】
テトラヒドロフラン８０ｍＬ中の６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１−［３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩０．８８ｇの溶液を２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート０．４６ｇ及びトリエチルアミン０．６３６ｍＬと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で１２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。ジクロロメタン／アセトニトリル／メタノール（体積比９６／２／２）の混合物で溶出する、シリカカラム（６０；３５−７０μＭ）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素０．５１ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１３１】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４１８；１６５９；１６０８；１５４２；１４４２；１３３９；１２６４；１２００；１１２２；７４１及び６１４ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．２０（ｄｄ，Ｊ＝７．５及び９．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．４２（ｍ，１Ｈ）；７．５３（ｄｄ，Ｊ＝９．０及び１０．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．６０から７．７２（ｍ，６Ｈ）；７．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．０及び３．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．６５（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．０４（広幅ｍ，１Ｈ）；９．４４（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．８（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．４（非常に広幅ｓ，１Ｈ）。
【０１３２】
（実施例７）
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素塩酸塩
【０１３３】
【化１３】
2008501669.tif 000012
【０１３４】
エタノール中の３７％塩酸（４．２ｍＬ）を用いて、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素を還流温度にて２４時間加水分解することにより、１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素塩酸塩を得る。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を得て、アセトニトリル１５ｍＬとともに撹拌する。ろ過を行い、真空下で乾燥させ、１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素塩酸塩０．３８ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１３５】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３２７；３１６８；１６５３；１６０１；１５４４；１４４３；１３４２；１３２２；１１８７；１１１７；１０７０；８０９及び６１５ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．０８（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．４２（ｍ，１Ｈ）；７．４９から７．６５（ｍ，６Ｈ）；８．６５（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．９９（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．４０（ｓ，１Ｈ）；１１．８から１２．５（非常に拡散したｍ，１Ｈ）。
【０１３６】
（実施例８）
１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−７−フルオロフェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド塩酸塩
【０１３７】
【化１４】
2008501669.tif 000013
【０１３８】
エタノール１１ｍＬ中の３７％塩酸（１．３６ｍＬ）を用いて、３−チオフェン−カルボン酸｛６−［４−（２，３−ジクロロベンゼンスルホニルアミノ）−７−フルオロフェニル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝アミド０．１５ｇを還流温度にて１６時間加水分解することにより、１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−７−フルオロフェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド塩酸塩を得る。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を得て、アセトニトリル５ｍＬとともに撹拌する。ろ過により、１−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−７−フルオロフェニル］−２，３−ジクロロベンゼンスルホンアミド塩酸塩９０ｍｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１３９】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４３５；１６５６；１５０７；１４０４；１１６４；１１３９；９１２；７０４及び５９３ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．００（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．２２（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．５０（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．５４から７．６２（ｍ，２Ｈ）；７．９４（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．１０（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；１１．０（広幅ｓ，１Ｈ）。
【０１４０】
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝４５０［Ｍ＋ｏ］
【０１４１】
（実施例９）
１−（４−｛４，５，７−トリフルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１４２】
【化１５】
2008501669.tif 000014
【０１４３】
テトラヒドロフラン１０ｍＬ中の６−（４−アミノフェニル）−４，５，７−トリフルオロ−１−［３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩０．１７５ｇの溶液を２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート８４．５ｍｇ及びトリエチルアミン５８μＬと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で１６時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。取得した残渣を酢酸エチル１５ｍＬ中で撹拌し、次いでろ過して、吸引処理し、１−（４−｛４，５，７−トリフルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素２９ｍｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１４４】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）
３２８８；１６８６；１６３５；１５３５；１４４０；１３１９；１１２６及び９９２ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．４１（ｍ，１Ｈ）；７．４８から７．５７（ｍ，３Ｈ）；７．６０から７．７０（ｍ，４Ｈ）；８．４１（広幅ｓ，１Ｈ）；８．６３（広幅ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．０１（広幅ｍ，１Ｈ）；９．４３（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．６（拡散したｍ，１Ｈ）；１３．６から１４．０（非常に拡散したｍ，１Ｈ）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５９４［ＭＨ＋］
【０１４５】
６−（４−アミノフェニル）４，５，７−トリフルオロ−１−［３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール塩酸塩
メタノール１０ｍＬ中の６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロ−１Ｈ−インダゾール０．６５ｇの溶液を４Ｎ塩酸ジオキサン１．６６ｍＬと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で４８時間撹拌し、次いでろ過して、吸引処理し、６−（４−アミノフェニル）−１−［３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロ−１Ｈ−インダゾール塩酸塩０．２１ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３８９［ＭＨ＋］
【０１４６】
６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロ−１Ｈ−インダゾール
ジオキサン４０ｍＬ中の６−ブロモ−１−［３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロ−１Ｈ−インダゾール０．５ｇの溶液を４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）フェニルボロン酸０．３１ｇと混合する。水５ｍＬ中の炭酸ナトリウム０．４２ｇの溶液を添加し、続いてテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム０．１８４ｇを添加する。反応混合物を９０℃で４２時間撹拌し、次いで蒸留水４０ｍＬに注ぐ。ジクロロメタンで抽出し、次いで塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄した後、有機相を減圧下で濃縮し、固形物を得て、シクロヘキサン／酢酸エチル（体積比５０／５０）の混合液で溶出するシリカカラム（６０；３５−７０μＭ）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロ−１Ｈ−インダゾール０．６５ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４８９［ＭＨ＋］
【０１４７】
６−ブロモ−１−［３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロ−１Ｈ−インダゾール
ジオキサン１３０ｍＬ中の６−ブロモ−１−［（チオフェン−３−イル）カルボニル］−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロインダゾール１．８ｇの溶液を水４５ｍＬ中の炭酸ナトリウム１．１ｇの溶液に添加する。反応混合物を９０℃で４時間加熱し、減圧下で濃縮し、固形物を得て、シクロヘキサン／酢酸エチル（体積比８５／１５）の混合液で溶出するシリカカラム（６０；３５−７０μＭ）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、６−ブロモ−１−［３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロ−１Ｈ−インダゾール０．３２ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３７７［ＭＨ＋］
【０１４８】
６−ブロモ−１−［（チオフェン−３−イル）カルボニル］−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロインダゾール
ピリジン６０ｍＬ中の６−ブロモ−３−アミノ−４，５，７−１Ｈ−インダゾール３ｇの溶液をチオフェン−３−カルボン酸クロリド３．３ｇと混合する。反応混合物をアルゴン雰囲気下でほぼ２５℃にて１６時間撹拌し、次いで水１２０ｍＬに注ぐ。懸濁液をジクロロメタン２ｘ１００ｍＬで洗浄し、次いでろ過して、吸引処理し、乾燥させ、６−ブロモ−１−［（チオフェン−３−イル）カルボニル］−３−［（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−４，５，７−トリフルオロインダゾール１．８５ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４８７［ＭＨ＋］
【０１４９】
６−ブロモ−３−アミノ−４，５，７−１Ｈ−インダゾール
エタノール９０ｍＬ中の４−ブロモ−２，３，５，６−テトラフルオロベンゾニトリル５ｇの溶液をヒドラジン水和物９．７ｍＬと混合する。反応混合物を還流温度にて１７時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。取得した残渣を蒸留水８０ｍＬ中で３０分間撹拌する。懸濁固体をろ過により単離し、水で洗浄し、吸引処理して、エチルエーテル２００ｍＬ中で摩砕し、ろ過により単離し、６−ブロモ−３−アミノ−４，５，７−１Ｈ−インダゾール１．０３ｇを得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１５０】
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２６７［ＭＨ＋］
【０１５１】
（実施例１０）
１−（４−｛３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１５２】
【化１６】
2008501669.tif 000015
【０１５３】
実施例１に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素を黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１５４】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４０６；１６５６；１５３６；１４４１；１３３９；１２６５；１１１８及び８０８ｃｍ−１
１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ，ｐｐｍでのδ）：７．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び９．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．４１（部分的にマスクされたｍ，１Ｈ）；７．５１（ｄｄ，Ｊ＝８．５及び１１．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．５５から７．７８（ｍ，７Ｈ）；７．７１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び３．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．６３（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．９８（拡散したｍ，１Ｈ）；９．３５（拡散したｍ，１Ｈ）；１０．７（広幅ｓ，１Ｈ）；１２．８（拡散したｍ，１Ｈ）。
【０１５５】
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４０［ＭＨ＋］
【０１５６】
（実施例１１）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−２−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１５７】
【化１７】
2008501669.tif 000016
【０１５８】
テトラヒドロフラン３０ｍＬ中の（７−フルオロ−６−｛３−フルオロ−４−アミノフェニル｝−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−チオフェン−３−カルボキサミド塩酸塩０．６１０ｇの溶液を２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート０．３ｇ及びトリエチルアミン０．２１１ｍＬと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で１２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。シクロヘキサン及び酢酸エチル（体積比５０／５０）の混合液で溶出するシリカカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより精した後、溶媒を蒸発させて黄色の粉末０．２８７ｇを得て、酢酸エチルから再結晶化させる。こうして、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−２−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素０．１５４ｇを白色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１５９】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
７．２１（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．４１（ｍ，１Ｈ）；７．５０（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．５９（広幅ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．６３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．３２（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．４８（広幅ｍ，１Ｈ）；８．６７（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．３４（拡散したｍ，１Ｈ）；９．４６（拡散したｍ，１Ｈ）；１０．８（非常に拡散したｍ，１Ｈ）；１３．４５（非常に拡散したｍ，１Ｈ）。
【０１６０】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４３５；１７０６；１５４７；１４４２；１３４１；１２６５；１２００；１１２７及び８２２ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５７６［ＭＨ＋］
【０１６１】
（７−フルオロ−６−｛３−フルオロ−４−アミノフェニル｝−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−チオフェン−３−カルボキサミド：
メタノール３０ｍＬ中の（７−フルオロ−６−｛３−フルオロ−４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノフェニル｝−１Ｈ−インダゾール−３−イル）チオフェン−３−カルボキサミド０．９９ｇの溶液を周囲温度にてジオキサン中の４Ｎ塩酸溶液２．６３ｍＬと混合する。反応混合物を４０℃で４時間加熱し、次いで減圧下で濃縮乾固する。取得した固形物をイソプロピルエーテル中で摩砕し、ろ過により単離する。真空下で乾燥させ、（７−フルオロ−６−｛３−フルオロ−４−アミノフェニル｝−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−チオフェン−３−カルボキサミド０．９９ｇを黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝３７０［Ｍ＋］
【０１６２】
（７−フルオロ−６−｛３−フルオロ−４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノフェニル｝−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−チオフェン−３−カルボキサミド：
１５℃にて、ピリジン３４ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−２−フルオロ−フェニル］カルバメート１．５ｇの溶液をチオフェン−３−カルボニルクロリド０．６１ｇと混合する。反応混合物を１８時間撹拌し、次いで蒸留水に注ぎ、酢酸エチルで抽出する。有機相を蒸留水で何度も洗浄し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄して、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮乾固する。こうして、（７−フルオロ−６−｛３−フルオロ−４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノフェニル｝−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−チオフェン−３−カルボキサミド１．５８ｇを淡黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝４７０［Ｍ＋］
【０１６３】
ｔｅｒｔ−ブチル［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−２−フルオロフェニル］カルバメート：
エタノール４０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル（４’−シアノ−３，２’，３’−トリフルオロビフェニル−４−イル）−カルバメート１．４９ｇの溶液をヒドラジン水和物２．１４ｇと混合し、次いで混合物を１８時間還流温度で加熱する。反応媒体を減圧下で濃縮乾固し、残渣を蒸留水中で処理し、このように得た固形物をろ過により単離し、次いで乾燥させる。こうして、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）−２−フルオロフェニル］カルバメート１．５ｇを白色の固体の形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝３６０［Ｍ＋］
【０１６４】
ｔｅｒｔ−ブチル（４’−シアノ−３，２’，３’−トリフルオロビフェニル−４−イル）カルバメート：
ジオキサン２２０ｍＬ中の４−シアノ−２，３−ジフルオロフェニルトリフルオロメタンスルホネート３．７５ｇの溶液を、周囲温度にてＮ−Ｂｏｃ−４−アミノ−３−フルオロフェニルボロン酸５ｇ、蒸留水５６ｍＬ中の炭酸ナトリウム３．８７ｇの溶液、次いでテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム１．８１ｇと混合する。反応混合物を還流温度で３時間加熱し、冷却後、蒸留水に注ぐ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機相をデカントし、蒸留水で何度も洗浄して、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、次いで減圧下で濃縮乾固する。取得した固体をシリカカラムでのクロマトグラフィーにかける（溶出液：シクロヘキサン／酢酸エチル、体積比９０／１０）。目的生成物を含有する画分を減圧下で蒸発乾固することにより、ｔｅｒｔ−ブチル（４’−シアノ−３，２’，３’−トリフルオロビフェニル−４−イル）カルバメート０．７５ｇを淡いピンク色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝３４８［Ｍ＋］
【０１６５】
４−シアノ−２，３−ジフルオロフェニルトリフルオロメタンスルホネート：
周囲温度にて、ジメチルホルムアミド６０ｍＬ中の２，３−ジフルオロ−４−ヒドロキシベンゾニトリル５ｇの溶液を７５％水素化ナトリウム１．０５ｇ、次いでＮ−フェニルトリフルオロメタンスルホンイミド１２．０９ｇと混合する。反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、次いで蒸留水に注ぐ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機相をデカントして、蒸留水で何度も洗浄し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、次いで減圧下で濃縮乾固する。取得した固体をシリカカラムでのクロマトグラフィーにかける（溶出液：シクロヘキサン／酢酸エチル、体積比８０／２０）。目的生成物を含有する画分を減圧下で蒸発乾固することにより、４−シアノ−２，３−ジフルオロフェニルトリフルオロメタンスルホネート３．３４ｇをモービル油の形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１６６】
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝２８７［Ｍ＋］
【０１６７】
（実施例１２）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−フェニル尿素
【０１６８】
【化１８】
2008501669.tif 000017
【０１６９】
実施例６に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−フェニル尿素を黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１７０】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
６．９９（広幅ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．１９（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈ，１Ｈ）；７．３０（広幅ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．４９（広幅ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．５２から７．６５（ｍ，５Ｈ）；７．６９（ｄｄ，Ｊ＝３．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７２（広幅ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．４８（広幅ｍ，１Ｈ）；８．８３（広幅ｓ，１Ｈ）；８．９５（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．８（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．３５（広幅ｓ，１Ｈ）．
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３９６；１６５０；１５９７；１５３２；１４９８；１２３４；７４２及び６９３ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４７２［ＭＨ＋］
【０１７１】
（実施例１３）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチルイソキサゾール−３−イル）尿素
【０１７２】
【化１９】
2008501669.tif 000018
【０１７３】
実施例６に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチルイソキサゾール−３−イル）尿素を黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１７４】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
１．３０（ｓ，９Ｈ）；６．５２（ｓ，１Ｈ）；７．１８（広幅ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．５２から７．６４（ｍ，５Ｈ）；７．６８（ｄｄ，Ｊ＝３．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７２（広幅ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．４８（広幅ｍ，１Ｈ）；９．１９（拡散したｍ，１Ｈ）；９．７２（拡散したｍ，１Ｈ）；１０．８（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．３５（拡散したｍ，１Ｈ）。
【０１７５】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４３４；１６０７；１５３１；１２７７；８０３及び７４１ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５１９［ＭＨ＋］
【０１７６】
（実施例１４）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロフェニル）尿素
【０１７７】
【化２０】
2008501669.tif 000019
【０１７８】
実施例６に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロフェニル）尿素を黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１７９】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
７．０２（ｍ，１Ｈ）；７．１０から７．３０（ｍ，３Ｈ）；７．５２から７．６５（ｍ，５Ｈ）；７．６８（ｄｄ，Ｊ＝３．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７２（広幅ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．１８（ｄｔ，Ｊ＝２．０及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．４７（広幅ｍ，１Ｈ）；８．６５（広幅ｍ，１Ｈ）；９．３０（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．８（拡散したｍ，１Ｈ）；１３．３５（拡散したｍ，１Ｈ）．
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３２６７；１６５０；１５９８；１５３２；１４５５；１２４９；１１８４及び７４６ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４９０［ＭＨ＋］
【０１８０】
（実施例１５）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１８１】
【化２１】
2008501669.tif 000020
【０１８２】
実施例６に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−トリフルオロメチルフェニル）尿素を白色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１８３】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
７．１９（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．３１（広幅ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．５２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．５５から７．６８（ｍ，６Ｈ）；７．６８（ｄｄ，Ｊ＝３．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．０４（広幅ｓ，１Ｈ）；８．４８（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び３．０Ｈｚ，１Ｈ）；９．２８（広幅ｓ，１Ｈ）；９．４２（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．８（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．３５（広幅ｓ，１Ｈ）．
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３３４；１６９１；１６４４；１５３４；１３４１；１１１４；８０７及び６９９ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４０［ＭＨ＋］
【０１８４】
（実施例１６）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）尿素
【０１８５】
【化２２】
2008501669.tif 000021
【０１８６】
実施例６に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）尿素を黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１８７】
融点：１９６−１９７℃
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
１．２９（ｓ，９Ｈ）；２．３９（ｓ，３Ｈ）；６．３７（ｓ，１Ｈ）；７．１６（ｍ，１Ｈ）；７．３２（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．４２（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．５６（広幅ｓ，４Ｈ）；７．６１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．６８（広幅ｍ，１Ｈ）；７．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．４７（広幅ｍ，１Ｈ）；８．６７（拡散したｍ，１Ｈ）；９．４２（拡散したｍ，１Ｈ）；１０．７５（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．４５（拡散したｍ，１Ｈ）。
【０１８８】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４３５；１６４６；１５３３；１４１０；１２０２；８２３及び７４１ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝６０８［ＭＨ＋］
【０１８９】
（実施例１７）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（フラン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１９０】
【化２３】
2008501669.tif 000022
【０１９１】
周囲温度にて、ピリジン５ｍＬ中の１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素（実施例７に記載の方法に従って得た。）２２３．７ｍｇの溶液を塩化２−フロイル６５．３ｍｇと混合する。反応混合物を周囲温度で４８時間撹拌し、次いで蒸留水に注ぐ。この混合物を酢酸エチルで抽出して、有機相をデカントし、蒸留水で何度も洗浄し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄して、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮乾固する。取得した固体をシリカカラムでのクロマトグフィーにかける（溶出液：シクロヘキサン／酢酸エチル、体積比５０／５０）。目的生成物を含有する画分を減圧下で蒸発乾固することにより、白色固体７２ｍｇを得て、ＬＣＭＳにより再精製する。こうして、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（フラン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素２２．７ｍｇを淡黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１９２】
融点：１５２−１５３℃
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
６．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．０及び３．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．１９（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．４０（ｍ，１Ｈ）；７．４７から７．５４（ｍ，２Ｈ）；７．５８から７．６５（ｍ，５Ｈ）；７．９８（広幅ｍ，１Ｈ）；８．６２（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．０２（広幅ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）；９．４１（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．８５（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．４（広幅ｓ，１Ｈ）．
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４３５；１６６９；１６０３；１５４５；１４４２；１３４１；１１２２；７１１及び６１４ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝５４１［Ｍ＋ｏ］
【０１９３】
（実施例１８）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［フェニルカルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１９４】
【化２４】
2008501669.tif 000023
【０１９５】
ピリジン５ｍＬ中の１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素（実施例７に記載の方法に従い得た。）２２３．７ｍｇの溶液を周囲温度にて塩化ベンゾイル７０ｍｇと混合する。反応混合物を周囲温度で４８時間撹拌し、次いで蒸留水に注ぐ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機相をデカントして、蒸留水で何度も洗浄し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮乾固する。取得した固体をシリカカラムでのクロマトグラフィーにかける（溶出液：シクロヘキサン／酢酸エチル、体積比５０／５０）。目的生成物を含有する画分を減圧下で蒸発乾固することにより、ベージュ色から灰色の固体１１５ｍｇを得て、ＬＣＭＳにより再精製する。こうして、１−（４−｛７−フルオロ−３−［フェニルカルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素４６ｍｇを淡黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０１９６】
融点：２０６−２０７℃
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
７．１９（広幅ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．４０（ｍ，１Ｈ）；７．４７から９．６７（ｍ，９Ｈ）；８．０９（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；８．６２（ｄｄ，Ｊ＝２．０及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．１９（広幅ｓ，１Ｈ）；９．６０（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．９（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．４（拡散したｍ，１Ｈ）．
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４１９；１６６９；１５９９；１５５２；１４４３;１３４２；１１９０；１１１８；８０４；７６０及び６１４ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝５５１［Ｍ＋ｏ］
【０１９７】
（実施例１９）
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（３−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０１９８】
【化２５】
2008501669.tif 000024
【０１９９】
無水テトラヒドロフラン７ｍＬ中の６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イルアミン１５０ｍｇの溶液を周囲温度にて３−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート１２８．７ｍｇと混合する。反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮乾固する。取得した固体をＬＣＭＳにより精製する。こうして、１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−尿素８４ｍｇを白色固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２００】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
５．４７（広幅ｓ，２Ｈ）；６．９９（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．３０（広幅ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．４７から７．６９（ｍ，７Ｈ）；８．０４（広幅ｓ，１Ｈ）；９．６０（拡散したｍ，１Ｈ）；９．７８（拡散したｍ，１Ｈ）；１１．８５（広幅ｓ，１Ｈ）。
【０２０１】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４０３；１６５８；１６０５；１５３３；１４４８；１３３８；１１２５；７９８及び６９８ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４３０［ＭＨ＋］
【０２０２】
６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イルアミン：
ジクロロメタン６０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−カルバメート３ｇの懸濁液を周囲温度にてトリフロオロ酢酸６ｍＬと混合する。反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、減圧下で濃縮乾固する。取得した固体を酢酸エチル中で吸収させ、溶液を４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で処理し、次いでデカントする。続いて、有機相を蒸留水、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮乾固する。取得した黄色の固体（２．０８ｇ）をシリカカラムでのクロマトグラフィーにかける（溶出液：酢酸エチル）。目的生成物を含有する画分を減圧下で蒸発乾固することにより、６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イルアミン１．８８ｇを黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝２４２［Ｍ＋］
【０２０３】
ｔｅｒｔ−ブチル［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］カルバメート
イソプロパノール５０ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル（４’−シアノ−２’，３’−ジフルオロビフェニル−４−イル）−カルバメート７．８９ｇの懸濁液を５０℃に加熱し、次いで同温度にてヒドラジン水和物５．８ｍＬと混合する。反応混合物を還流温度で１８時間撹拌し、冷却後、蒸留水５００ｍＬに注ぐ。形成された白い沈殿物をろ過により単離し、５０℃にて真空下で乾燥させる。こうして、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］カルバメート８．３９ｇを黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
ＭＳスペクトル（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３４３［ＭＨ＋］
【０２０４】
ｔｅｒｔ−ブチル（４’−シアノ−２’，３’−ジフルオロビフェニル−４−イル）カルバメート：
ジオキサン４００ｍＬ中の４−シアノ−２，３−ジフルオロフェニルトリフルオロメタンスルホネート７ｇの溶液を周囲温度にてＮ−Ｂｏｃ４−アミノ−３−フルオロフェニルボロン酸８．６７ｇ、蒸留水１００ｍＬ中の炭酸ナトリウム７．２３５ｇの溶液、次いでテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム３．３８ｇと混合する。反応混合物を９０℃で３時間加熱し、次いで減圧下で濃縮乾固する。取得した固体を酢酸エチル中で吸収させ、この有機相を蒸留水で何度も洗浄し、次いで飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄して、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、次いで減圧下で濃縮乾固する。取得した固体をシリカカラムでのクロマトグラフィーにかける（溶出液：シクロヘキサン／酢酸エチル、体積比９０／１０）。目的生成物を含有する画分を減圧下で蒸発乾固することにより、ｔｅｒｔ−ブチル（４’−シアノ−３，２’，３’−トリフルオロビフェニル−４−イル）カルバメート７．８９ｇを淡黄色−白色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２０５】
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝３３０［Ｍ＋］
【０２０６】
（実施例２０）
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−フェニル尿素
【０２０７】
【化２６】
2008501669.tif 000025
【０２０８】
実施例１９に記載の方法に従って処理し、１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−フェニル尿素を白色固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２０９】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
５．４６（広幅ｓ，２Ｈ）；６．９８（ｍ，２Ｈ）；７．２９（広幅ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）；７．４５から７．６１（ｍ，７Ｈ）；８．９３（拡散したｍ，１Ｈ）；９．０３（拡散したｍ，１Ｈ）；１１．８５（広幅ｓ，１Ｈ）。
【０２１０】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４１５；１６４６；１５９８；１５３２；１４４３；１３１６；１２３４；７５２及び６９３ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝３６１［Ｍ＋ｏ］
【０２１１】
（実施例２１）
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチルイソキサゾール−３−イル）尿素
【０２１２】
【化２７】
2008501669.tif 000026
【０２１３】
実施例１９に記載の方法に従って処理し、１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチルイソキサゾール−３−イル）尿素を白色固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２１４】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
１．３０（ｓ，９Ｈ）；５．４７（広幅ｓ，２Ｈ）；６．５２（ｓ，１Ｈ）；６．９８（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．５０から７．６１（ｍ，５Ｈ）；９．２２（拡散したｍ，１Ｈ）；９．７９（拡散したｍ，１Ｈ）；１１．８５（広幅ｓ，１Ｈ）。
【０２１５】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４１４；１６９６；１６０７；１５３０；１４３１；１３１７；１２０２；９１２及び８００ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝４０８［Ｍ＋ｏ］
【０２１６】
（実施例２２）
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロフェニル）尿素
【０２１７】
【化２８】
2008501669.tif 000027
実施例１９に記載の方法に従って処理し、１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロフェニル）尿素を白色固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２１８】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
５．４７（広幅ｓ，２Ｈ）；６．９８（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．０３（ｍ，１Ｈ）；７．１５（広幅ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝２．０−８．５及び１２．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．５０から７．６１（ｍ，５Ｈ）；８．１６（ｄｔ，Ｊ＝２．０及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．６５（拡散したｍ，１Ｈ）；９．２７（広幅ｓ，１Ｈ）；１１．８５（広幅ｓ，１Ｈ）。
【０２１９】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３４７；１６５５；１６０３；１５３３；１４５７；１２５１；１１９３；７９７及び７５２ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝３７９［Ｍ＋ｏ］
【０２２０】
（実施例２３）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−２−メチルフェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０２２１】
【化２９】
2008501669.tif 000028
【０２２２】
実施例１１に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−２−メチルフェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素を淡黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２２３】
融点：３１２−３１３℃
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
２．３７（ｓ，３Ｈ）；７．１８（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．３９（ｍ，１Ｈ）；７．４３から７．５４（ｍ，３Ｈ）；７．６２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．６８（ｄｄ，Ｊ＝３．０及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．０３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．４７（広幅ｍ，１Ｈ）；８．６２（ｓ，１Ｈ）；８．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．４１（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．８（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．４（拡散したｍ，１Ｈ）。
【０２２４】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３０１；１６６０；１５４２；１４４２；１３３９；１２６３；１１２６；８１９；７４２及び６１９ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＣＩ）：ｍ／ｚ＝５７２［ＭＨ＋］
【０２２５】
（実施例２４）
１−（５−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝ピリジン−２−イル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０２２６】
【化３０】
2008501669.tif 000029
【０２２７】
実施例１１に記載の方法に従って処理し、１−（５−｛７−フルオロ−３−［（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝ピリジン−２−イル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素を固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２２８】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
７．２４（ｄｄ，Ｊ＝６．５及び８．５Ｈｚ，１Ｈ）；７．４５（ｍ，１Ｈ）；７．５５（ｄｄ，Ｊ＝８．５及び１１．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．６３から７．７０（ｍ，３Ｈ）；７．７３（ｄｄ，Ｊ＝１．５及び５．０Ｈｚ，１Ｈ）；８．１１（ｄｍ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．４７（ｍ，１Ｈ）；８．５８（ｍ，１Ｈ）；８．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；１０．１（ｓ，１Ｈ）；１０．８（ｓ，１Ｈ）；１１．６（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．５（拡散したｍ，１Ｈ）。
【０２２９】
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５５９［ＭＨ＋］
【０２３０】
（実施例２５）
１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）尿素
【０２３１】
【化３１】
2008501669.tif 000030
【０２３２】
実施例１９に記載の方法に従って処理し、１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）尿素を白色固体の形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２３３】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
１．２９（ｓ，９Ｈ）；２．３８（ｓ，３Ｈ）；５．４８（広幅ｓ，２Ｈ）；６．３８（ｓ，１Ｈ）；６．９７（ｍ，１Ｈ）；７．３４（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．４１（広幅ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）；７．４８から７．５７（ｍ，５Ｈ）；８．４０（広幅ｓ，１Ｈ）；９．１７（広幅ｓ，１Ｈ）；１１．８５（拡散したｍ，１Ｈ）。
【０２３４】
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４９８［ＭＨ＋］
【０２３５】
（実施例２６）
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（Ｌ−ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０２３６】
【化３２】
2008501669.tif 000031
【０２３７】
ジオキサン２０ｍＬ中の１−（４−｛７−フルオロ−３−［（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素０．２３ｇの溶液を周囲温度にて４Ｎ塩酸水溶液１ｍＬと混合する。反応混合物を５０℃で３時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮乾固する。取得した固体をジクロロメタン中で吸収させ、ろ過により沈殿物を単離する。取得した固体（９６ｍｇ）をＬＣＭＳにより精製する。こうして、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（Ｌ−ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素１６ｍｇをベージュ色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２３８】
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３２７１；１７０３；１６２５；１５３８；１４４２；１３４１；１２５７；１１９８；１１１７及び８０７ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝５４４［Ｍ＋ｏ］
【０２３９】
１−（４−｛７−フルオロ−３−［（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝−フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素：
実施例１７に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−［（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ピロリジン−２−イル）カルボニルアミノ］−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素を鮮黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２４０】
ＭＳスペクトル（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝６４５［ＭＨ＋］
【０２４１】
（実施例２７）
１−（４−｛７−フルオロ−３−アセチルアミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０２４２】
【化３３】
2008501669.tif 000032
【０２４３】
実施例１７に記載の方法に従って処理し、１−（４−｛７−フルオロ−３−アセチルアミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素を鮮黄色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２４４】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準：
２．１１（ｓ，３Ｈ）；７．１４（ｍ，１Ｈ）；７．４０（ｍ，１Ｈ）；７．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．５及び１１．０Ｈｚ，１Ｈ）；７．５５から７．６４（ｍ，４Ｈ）；７．６７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．６２（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；９．１１（広幅ｓ，１Ｈ）；９．５０（広幅ｓ，１Ｈ）；１０．５（広幅ｓ，１Ｈ）；１３．２（広幅ｓ，１Ｈ）．
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３４２２；１７１０；１６７０；１６０４；１５５０；１４４２；１３４１；１３４１；１１２５；８１８及び６１４ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４９０［ＭＨ＋］
【０２４５】
（実施例２８）
１−（４−｛７−フルオロ−３−ホルミルアミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素
【０２４６】
【化３４】
2008501669.tif 000033
【０２４７】
酢酸アルデヒド０．６３３ｍＬ及びギ酸０．２５３ｍＬの溶液を５０℃で２時間加熱し、次いでピリジン７ｍＬ中の１−［４−（３−アミノ−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル］−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素（実施例７に記載の方法に従って得た。）３００ｍｇの溶液と滴下混合する。反応混合物を周囲温度で２４時間撹拌し、次いで蒸留水に注ぐ。この混合物をろ過し、次いで取得した固体（２５６ｍｇ）をＬＣＭＳにより精製する。こうして、１−（４−｛７−フルオロ−３−ホルミルアミノ−１Ｈ−インダゾール−６−イル｝フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）尿素３４ｍｇをベージュ色の固体形態で得る（その特性は次のとおりである。）。
【０２４８】
化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−３００分光計における３００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、酢酸−ｄ４（ＣＤ３ＣＯＯＤ）１滴の添加後に２．５０ｐｐｍで基準：
目的生成物の２種類のイミノアルコール形態の、６０−４０％混合物が見られる。
【０２４９】
７．１９（ｍ，１Ｈ）；７．４０（ｍ，１Ｈ）；７．５１（ｍ，１Ｈ）；７．５５から７．６５（ｍ，４Ｈ）；７．６９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，０．６Ｈ）；７．７７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，０．４Ｈ）；８．３２（ｓ，０．４Ｈ）；８．６５（ｄｄ，Ｊ＝２．５及び７．５Ｈｚ，１Ｈ）；８．９８（ｓ，０．６Ｈ）．
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：３３７２；３３０８；１６８０；１６０４；１５５１；１４４３；１３４１；１２６３；１１１８；８１２及び６１４ｃｍ−１
ＭＳスペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ＝４７５［Ｍ＋ｏ］
【０２５０】
（実施例２９）
Ｎ−［６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル］チオフェン−３−カルボキサミド
【０２５１】
【化３５】
2008501669.tif 000034
【０２５２】
ジクロロメタン２０ｍＬ中の６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）カルボニルアミノ］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール１．４６ｇの溶液をトリフルオロ酢酸１０ｍＬ及び水１ｍＬと混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で１６時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。固形の残渣を酢酸エチル中で吸収させ、ｐＨ９の水相を得るまで重炭酸ナトリウム飽和溶液で洗浄し、この時点で水で洗浄する。有機相を減圧下で濃縮し、Ｎ−［６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル］チオフェン−３−カルボキサミド１．０２ｇを重量収率９１％で得る。
【０２５３】
その特性は次のとおりである：
ＬＣＭＳ分析：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５３．２；保持時間２．９２分
実施例４において、６−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル）−１−［３−（チオフェン−３−イル）−カルボニルアミノ］−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾールの合成を説明する。
【０２５４】
（実施例３０から３９）
ピリジン４．５ｍＬ中のＮ−［６−（４−アミノフェニル）−７−フルオロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル］チオフェン−３−カルボキサミド１００ｍｇ（０．２８４ｍｍｏｌ）の溶液を０℃にてジクロロメタン１ｍＬ中の塩化スルホニル０．２８４ｍｍｏｌの溶液と混合する。反応混合物を２０℃の領域温度で７２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。乾燥残渣をメタノール中で吸収させ、減圧下で濃縮する。乾燥残渣をｍｅｔｈ２２２ｏｌ／酢酸／ジメチルスルホキシドの混合液１．５ｍＬ中で吸収させ、分取ＬＣ／ＭＳにより精製する。
【０２５５】
ＮＭＲ分析を次のとおり実行する：化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで基準。
生成物を次の表中で説明する。
【０２５６】
【表１】
2008501669.tif 000035
2008501669.tif 000036
2008501669.tif 000037
2008501669.tif 000038
2008501669.tif 000039
2008501669.tif 000040
【０２５７】
（実施例４０から４８）
１２０℃にて３０分間、マイクロ波オーブン内で撹拌しながら、Ｅｍｒｙｓ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒマイクロ波管中でメタノール１．７８ｍＬと３７％塩酸溶液０．２２ｍＬ中の実施例３０から３９の各溶液とを反応させる。溶液を減圧下で濃縮し、ジメチルスルホキシド１ｍＬ中で吸収させ、分取ＬＣ／ＭＳにより精製する。ＮＭＲ分析を次のとおり実行する：化学シフト（ｐｐｍでのδ）を含む、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＰＸ−４００分光計における４００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル−溶媒としてのジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）中、２．５０ｐｐｍで参照。
生成物を次の表中で説明する。
【０２５８】
【表２】
2008501669.tif 000041
2008501669.tif 000042
2008501669.tif 000043
2008501669.tif 000044
【０２５９】
化合物の活性測定−実験プロトコル
１．ＫＤＲ
シンチレーション技術（９６−ウェルプレート、ＮＥＮ）を使用し、インビトロのＫＤＲ酵素による基質リン酸化アッセイにおいて、化合物の阻害効果を測定する。
【０２６０】
ＧＳＴ融合形態で、ヒトＫＤＲ酵素の細胞質ドメインをバキュロウイルス発現ベクターｐＦｓｔＢａｃへとクローニングした。ＳＦ２１細胞中でタンパク質を発現させ、約６０％の均一性になるように精製した。
【０２６１】
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１００μＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１ｍＭ  ＮａＦの存在下において、２０ｍＭ  ＭＯＰＳ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１ｍＭ  ＤＤＴ、２．５ｍＭ  ＥＧＴＡ、１０ｍＭ  β−グリセロリン酸、ｐＨ＝７．２中で、ＫＤＲキナーゼ活性を測定する。４℃にて、ＫＤＲ酵素１００ｎｇを含有するキナーゼ緩衝液７０μＬに化合物１０μＬを添加する。基質２μｇ（ＧＳＴ融合タンパク質の形態で発現させたＰＬＣγのＳＨ２−ＳＨ３断片）、２μＣｉ  γ３３Ｐ［ＡＴＰ］及び２μＭ非放射性ＡＴＰを含有する溶液２０μＬを添加することにより、反応を開始させる。３７℃にて１時間インキュベートした後、２００ｍＭ  ＥＤＴＡ  １体積（１００μｌ）を添加することにより、反応を停止させる。インキュベーション緩衝液を除去し、ウェルをＰＢＳ３００μＬで３回洗浄する。Ｔｏｐ  Ｃｏｕｎｔ  ＮＸＴ放射能カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）を使用し、放射能を各ウェル中で測定する。
【０２６２】
放射性ＡＴＰ及び基質のみを含有する４個の異なるウェル中の放射能を測定することにより、バックグラウンドノイズを測定する。
【０２６３】
全試薬（γ３３Ｐ−［ＡＴＰ］、ＫＤＲ及びＰＬＣγ基質）を含有するが化合物は含有しない４個の異なるウェル中で、全活性に対する対照を測定する。
【０２６４】
化合物を添加せず測定した対照活性の阻害％として、本発明の化合物を用いた場合のＫＤＲ活性の阻害を表す。
【０２６５】
化合物ＳＵ５６１４（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）（１μＭ）を阻害対照として各プレートに含める。
【０２６６】
２．Ｔｉｅ２
モデルとしてヒト胎盤から単離したｃＤＮＡを使用し、細胞内ドメイン７７６−１１２４のアミノ酸に対応するヒトＴｉｅ２のコード配列をＰＣＲにより得た。ＧＳＴ融合タンパク質の形態で、バキュロウイルス発現ベクターｐＦａｓｔＢａｃＧＴにこの配列を組み込んだ。
【０２６７】
約８０％の均一性に精製したＧＳＴ−Ｔｉｅ２の存在下での、Ｔｉｅ２によるＰＬＣリン酸化のアッセイにおいて、分子の阻害効果を測定する。基質は、ＧＳＴ融合タンパク質形態で発現させたＰＬＣのＳＨ２−ＳＨ３断片から成る。
【０２６８】
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、グリセロールリン酸１０ｍＭを含有する、２０ｍＭ  ＭＯＰＳ緩衝液、ｐＨ７．２中で、Ｔｉｅ２のキナーゼ活性を測定する。氷上に置いた９６−ウェルＦｌａｓｈＰｌａｔｅプレートに、各ウェルにつきＧＳＴ−Ｔｉｅ２酵素１００ｎｇを含有するキナーゼ緩衝液７０μＬから成る反応混合物を入れる。その後、ＤＭＳＯ中最高１０％の濃度に希釈した試験分子１０μＬを添加する。定められた濃度において各測定を４回行う。ＧＳＴ−ＰＬＣ２μｇ、非放射性のＡＴＰ２μＭ及び３３Ｐ［ＡＴＰ］１μＣｉを含有する溶液２０μＬを添加することにより、反応を開始させる。３７℃にて１時間インキュベートした後、２００ｍＭ  ＥＤＴＡ  １体積（１００μｌ）を添加することにより、反応を停止させる。インキュベーション緩衝液を除去した後、ウェルをＰＢＳ３００μｌで３回洗浄する。Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ１４５０上で放射能を測定する。
【０２６９】
Ｔｉｅ２活性の阻害度を計算し、化合物を添加せずに測定した対照活性に対する阻害パーセントとして表す。
【０２７０】
３．Ａｕｒｏｒａ１及びＡｕｒｏｒａ２
放射能検出を行う酵素アッセイにより、Ａｕｒｏｒａ１及びＡｕｒｏｒａ２キナーゼに対する化合物の阻害効果を測定する。
【０２７１】
マイクロプレートの表面にニッケルキレートを固定した９６−ウェルＦｌａｓｈｐｌａｔｅプレートを使用し、放射性標識ＡＴＰ（［３３Ｐ］ＡＴＰ）の存在下での基質Ｎｕｍａ−ヒスチジンのリン酸化により、Ａｕｒｏｒａ１及びＡｕｒｏｒａ２のキナーゼ活性を測定する。ＮｕＭＡ基質中に取り込まれた３３Ｐリン酸の量は、Ａｕｒｏｒａ１又はＡｕｒｏｒａ２の酵素活性に比例する。
【０２７２】
タンパク質：
Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓグループのタンパク質産生研究室（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）において、タンパク質生成を行う。
【０２７３】
Ａｕｒｏｒａ１：Ａｕｒｏｒａ−ＢのＮ末端をヒスチジンで標識した、約５０％精製の、Ａｕｒｏｒａ−Ｂ／ＮＣＥＮＰ−Ｃ３組み換え複合体
Ａｕｒｏｒａ２：Ｅ．コリで発現させ、８２％超に精製した、Ｎ末端ヒスチジンテイルを含む組み換えタンパク質全体
Ｅ．コリで発現され、Ｎ末端がヒスチジンで標識され、２種類のＡｕｒｏｒａ酵素に対する基質として使用される、４２４のアミノ酸のＮｕＭＡ（分裂装置に関与する核タンパク質）断片。
【０２７４】
プロトコル：
使用したマイクロプレートは、ニッケルキレートを含む９６−ウェルＦｌａｓｈ−Ｐｌａｔｅプレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、モデルＳＭＰ１０７）である。
【０２７５】
３７℃にて、５０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２（Ａｕｒｏｒａ−Ｂ）又は１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２（Ａｕｒｏｒａ−Ａ）及び１ｍＭ  ＤＴＴから成る緩衝液中のＡｕｒｏｒａ１又はＡｕｒｏｒａ２  １０ｎＭ、ＮｕＭＡ基質５００ｎＭの存在下にて、各ウェルにつき１００μＬの反応体積で、測定する生成物をインキュベートする。
【０２７６】
各ウェルにおいて、酵素／基質インキュベーション緩衝液８０μＬを分配し、続いて測定する生成物１０μＬを様々な濃度で分配する。［３３Ｐ］ＡＴＰ（１０μＬ）０．２μＣｉを含有する最終ＡＴＰ  １μＭを添加することにより、反応を開始させる。３０分間インキュベートした後、単に反応緩衝液を取り除くことにより反応を停止させ、各ウェルをＴｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液３００μｌで２回洗浄する。次いでＰａｃｋａｒｄのＴｏｐカウントモデルのシンチレーション装置を用い、放射能を各ウェル中で測定する。
【０２７７】
バックグラウンドノイズを差し引いた後（酵素を含有しない反応混合物）、３０分以内に得たカウント数／分により、Ａｕｒｏｒａの対照酵素活性を表す。様々な試験生成物の測定結果を対照に対するＡｕｒｏｒａ活性の阻害パーセントで表す。
【０２７８】
４．ＣＤＫ４／サイクリンＤ１
ＩＭＡＣ（固定化金属アフィニティクロマトグラフィー）によるＣＤＫ４−ＨＡ／サイクリンＤ１−（Ｈｉｓ）６複合体の精製
ＣＤＫ４−ＨＡ（ヘマググルチニンタグ付きのＣ端末融合物）及びサイクリンＤ１−（Ｈｉｓ）６をそれぞれコード化するヒト配列を持つ２種類の組み換えバキュロウイルスを使用し、Ｓｆ９昆虫細胞に重感染させる。重感染の開始から６０時間後、遠心分離により細胞を回収し、次いで使用時まで−２０℃で冷凍する。緩衝液Ａ（ＨＥＰＥＳ  ２００ｍＭ  ｐＨ７．０、ＮａＣｌ  ５０ｍＭ、ＭｇＣｌ２２ｍＭ、イミダゾール２５ｍＭ、ＴＣＥＰ  １ｍＭ、グリセロール１０％（ｗ／ｖ）、ＮａＦ  １ｍＭ、Ｎａ３ＶＯ４１ｍＭ）中で解凍し、４℃で１時間撹拌して、遠心分離を行なった後、ニッケルでのアフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により溶解上清に存在する複合体を精製し、−８０℃で保存する。
【０２７９】
９６−ウェル形式でのＣＤＫ４／サイクリンＤ１  Ｆｌａｓｈｐｌａｔｅアッセイ
ストレプトアビジンでコーティングした９６−ウェル「Ｆｌａｓｈｐｌａｔｅ」（シンチレーションプレート）プレートにおけるアッセイを行い、本発明の生成物によるＣＤＫ４／サイクリンＤ１キナーゼ複合体の阻害を測定する。この試験を実行するため、キナーゼ緩衝液（ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ５０ｍＭ、ＮａＣｌ  １ｍＭ、ＭｇＣｌ２５ｍＭ、ｐＨ＝７．５）中で濃度２ｍＭにて、ｐＲｂタンパク質の断片（ビオチニル−ＲＰＰＴＬＳＰＩＰＨＩＰＲＳＰＹＫＦＰＳＳＰＬＲ−アミド）であるビオチン化ペプチド基質を溶解し、１１０μｌの分注液の形態で−２０℃にて保存するストック溶液を調製する。実験当日、この溶液の分注液を解凍し、ジチオスレイトール１ｍＭを含有するキナーゼ緩衝液中で希釈し、使用時に添加して、最終ペプチド濃度が２．５７１μＭになるようにする。この溶液７０μＬをＦｌａｓｈｐｌａｔｅプレートの各ウェルに添加し、１００μＬの最終体積で実行する酵素反応中の最終基質濃度が１．８μＭになるようにする（下記参照）。別の管において、１０ｍＭストック溶液から、様々な濃度の阻害物質（本発明の生成物）の中間希釈物をＤＭＳＯ中で調製する。こうして、１０００μＭ、３３３．３μＭ、１１１．１μＭ、３７．０３μＭ、１２．３５μＭ、４．１１μＭ及び１．３７μＭの希釈物を得る。次いで、これらの各溶液１μＬ（又は対照用のＤＭＳＯ１μＬ）をアッセイプレートのウェルに添加する。続いて、総濃度５．２６μＭのＡＴＰ及び３３Ｐ７８．９μＣｉ／ｍＬである、キナーゼ緩衝液中のアデノシン３リン酸（ＡＴＰ）とＡＴＰγ３３Ｐとの混合物の溶液１９μｌを各ウェルに添加する。ジチオスレイトール１ｍＭを含有するキナーゼ緩衝液中の２５０ｎＭのＣＤＫ４／サイクリンＤ１複合体の溶液を各ウェルにつき１０μＬ（又はブランク反応用のジチオスレイトール１ｍＭを含有するキナーゼ緩衝液１０μＬ）添加することにより、酵素反応を開始させる。様々な添加を行なった後、各ウェルの最終体積は１００μＬ、最終基質濃度は１．８μＭ、最終阻害物質濃度は１０μＭ、３．３３μＭ、１．１１μＭ、０．３７μＭ、０．１２３μＭ、０．０４１μＭ及び０．０１４μＭ（中間希釈物の濃度による。）、最終ＡＴＰ濃度は１μＭ、３３Ｐの最終量は１．５μＣｉ／ウェル、ＣＤＫ４／サイクリンＤ１複合体の最終濃度は２５ｎＭとなる。
【０２８０】
全試薬を添加した後、６５０ｒｐｍにて回転撹拌しながら３０℃でアッセイプレートをインキュベートする。インキュベーション後、各ウェルにつきＰＢＳ緩衝液３００μＬ（リン酸緩衝生理食塩水、カルシウム及びマグネシウム不含、ｐＨ＝７．４、参照番号１００１０−０１５、Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）でプレートを３回洗浄する。Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔ．ＮＸＴ機器を使用し、シンチレーションカウントにより、基質ペプチド中への３３Ｐの取り込みを測定する。酵素活性を５０％減少させる阻害物質の濃度を測定することにより、本発明の生成物の阻害活性を測定する（ＩＣ５０）。
【０２８１】
【表３】
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【国際調査報告】
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