(57)【要約】  本発明は、患者においてＣ型肝炎感染を処置または予防するための抗ウイルス療法および組成物に関し、本明細書中で開示する他の方法に関する。本発明はまた、組成物および剤形を含むキットおよび医薬的パッケージに関する。本発明はまた、これらの組成物、投与量、キット、およびパッケージを製造するための方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１００mgから約１５００mg；
約３００mgから約１５００mg；
約３００mgから約１２５０mg；
約４５０mg；
約７５０mg；または
約１２５０mgのＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩を、１日当たり１回、２回または３回投与することを含む、治療レジメン。
【請求項２】
前記ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩が、
約３００mgから約１５００mg;
約３００mgから約１２５０mg；
約４５０mg；
約７５０mg；または
約１２５０mgである（その量を、１日当たり１回、２回または３回投与する）、請求項１に記載の治療レジメン。
【請求項３】
患者においてＣ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための方法であって、約１００mgから約１５００mgのＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩を該患者に投与することを含む、方法。
【請求項４】
前記ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩が、約３００mgから約１５００mgである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩が、約３００mgから約１２５０mgである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩が、約４５０mgである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩が、約７５０mgである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩が、約１２５０mgである、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記ＶＸ−９５０量を１日１回投与する、請求項３から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＶＸ−９５０量を１日２回投与する、請求項３から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＶＸ−９５０量を１日３回投与する、請求項３から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
該方法が、免疫調節剤；抗ウイルス剤；ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼの他の阻害剤；ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ以外のＨＣＶ生活環における標的の阻害剤；内部リボソーム侵入の阻害剤；広域ウイルス阻害剤；他のシトクロムＰ−４５０阻害剤；ウイルスの細胞侵入阻害剤；または、それらの組合せ、から選択されるさらなる薬剤を投与することを含む、請求項３から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫調節剤が、α−、β−、またはγ−インターフェロンまたはチモシンであるか；前記抗ウイルス剤が、リバビリン、アマンタジン、またはテルビブジンであるか；または、ＨＣＶ生活環の他の標的の阻害剤が、ＨＣＶヘリカーゼ、ポリメラーゼ、またはメタロプロテアーゼの阻害剤である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
約７５０mgのＶＸ−９５０を、１日３回、８時間毎に患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法。
【請求項１５】
血漿中Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡの少なくとも約２ｌｏｇ１０の減少が達成されるのに有効な量のＶＸ−９５０を患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法。
【請求項１６】
血漿中Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡの少なくとも約４ｌｏｇ１０の減少が達成されるのに有効な量のＶＸ−９５０を患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法。
【請求項１７】
Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡが血漿中検出不可能なレベルまで減少するのに有効な量のＶＸ−９５０を患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法。
【請求項１８】
持続的ウイルス応答を達成するのに有効な量のＶＸ−９５０を患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法。
【請求項１９】
前記患者が、遺伝子型１型のＣ型肝炎ウイルスに感染している、請求項３から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
１日約１３５０mg（例えば、約４５０mg、８時間毎）、１日約２２５０mg（例えば、約７５０mg、８時間毎）、または１日約２５００mg（例えば、約１２５０mg、１２時間毎）のＶＸ−９５０を患者に投与することを含む、患者における肝臓障害、肝炎、脂肪症、脂肪肝、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、アルコール性脂肪症、またはライ症候群の処置方法。
【請求項２１】
１日約１３５０mg（例えば、約４５０mg、８時間毎）、１日約２２５０mg（例えば、約７５０mg、８時間毎）、または１日約２５００mg（例えば、約１２５０mg、１２時間毎）のＶＸ−９５０を患者に投与することを含む、患者の肝保護のための方法。
【請求項２２】
患者にＶＸ−９５０を投与することを含む、患者のＡＬＴレベルを減少させるための方法。
【請求項２３】
患者にＶＸ−９５０を投与することを含む、高ＡＬＴレベルを有する患者においてＡＬＴレベルを正常化するための方法。
【請求項２４】
前記ＶＸ−９５０を、１日約１３５０mg（例えば、約４５０mg、８時間毎）、１日約２２５０mg（例えば、約７５０mg、８時間毎）、または１日約２５００mg（例えば、約１２５０mg、１２時間毎）のＶＸ−９５０を患者に投与する、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記患者がＨＣＶに感染している、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者が、ＨＣＶに感染していない、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＶＸ−９５０を含む剤形をヒトに投与することを含む、ＶＸ−９５０を必要とするヒトにそれを提供するための方法であって、ここで該剤形が、投与後、少なくとも約７５０ng/mLのＶＸ−９５０の平均血漿濃度（Ｃａｖｇ）を該ヒトに提供する、方法。
【請求項２８】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度（Ｃａｖｇ）が、投与後、約７５０ng/mLから約１２５０ng/mLである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度（Ｃａｖｇ）が、投与後、約１０００ng/mLである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記Ｃａｖｇが、投与後３時間以内に得られる／達成される、請求項２７から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記Ｃａｖｇが、投与後２時間以内に得られる／達成される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記Ｃａｖｇが、投与後、１時間以内に得られる／達成される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度を、２４時間の間、７５０ng/mLの最低レベルから約１５００ng/mLまでの間に維持することをさらに含む、請求項２７から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
２４時間の間に、ＶＸ−９５０を含む少なくとも１個の剤形をヒトに投与することを含む、ＨＣＶ感染を有するヒトの処置方法であって、ここで、前記剤形を、ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度を、２４時間の間、７５０ng/mLの最低レベルから約１５００ng/mLまでの間に維持するために投与する、方法。
【請求項３５】
前記剤形を、ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度を、２４時間の間、約７５０ng/mLの最低レベルに維持するために投与する、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記剤形を、ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度を、２４時間の間、約１０００ng/mLの最低レベルに維持するために投与する、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＶＸ−９５０が、約７５０mgの量で剤形中に存在する、請求項２７から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記剤形を１日３回投与する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
Ｃａｖｇおよびトラフ濃度の一方または両方を、約１２週間維持する、請求項２７から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
インターフェロンを投与する段階をさらに含む、請求項３から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記インターフェロンが、ＰＥＧ化インターフェロンである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記インターフェロンを、約１８０μｇ／ｍｌの量で投与する、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
リバビリンを投与する段階をさらに含む、請求項４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＶＸ−９５０が、本明細書中の実施例６に記載の通りに製剤される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染症の処置のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（“ＨＣＶ”）による感染は、切実なヒトの医学的問題である。ＨＣＶは、世界的にヒト血清陽性率３％であると概算される、非Ａ型、非Ｂ型肝炎のほとんどの場合の原因因子として認識されている［A. Alberti et al., “Natural History of Hepatitis C,” J. Hepatology, 31., (Suppl. 1), pp. 17−24 (1999)］。米国だけで４００万人近くの人々が、感染しているかもしれない［M.J. Alter et al., “The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States,” Gastroenterol. Clin. North Am., 23, pp. 437−455 (1994)；M. J. Alter “Hepatitis C Virus Infection in the United States,” J. Hepatology, 31., (Suppl. 1), pp. 88−91 (1999)］。
【０００３】
ＨＣＶに感染したヒトのうち２０−２５％は、急性感染後にウイルスを排除し得るが、７５−８０％は、慢性Ｃ型肝炎感染を発症し得る［preface, Frontiers in Viral Hepatitis. Ed. RF Schinazi, J−P Sommadossi, and CM Rice. p. xi. Elsevier (2003)］。これは、通常、肝硬変および肝細胞癌のようなより重度の疾患状態をしばしばもたらす、肝炎の再発および漸進的悪化をもたらす［M.C. Kew, “Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma”, FEMS Microbiology Reviews, 14, pp. 211−220 (1994)；I. Saito et. al., “Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 6547−6549 (1990)］。残念なことに、慢性ＨＣＶの進行を遅らせるのに広く有効な処置は存在しない。
【０００４】
ＨＣＶゲノムは、３０１０−３０３３アミノ酸のポリタンパク質をコードする［Q.L. Choo, et. al., “Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus.” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, pp. 2451−2455 (1991)；N. Kato et al., “Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non−A, Non−B Hepatitis,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 9524−9528 (1990)；A. Takamizawa et. al., “Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers,” J. Virol., 65, pp. 1105−1113 (1991)］。ＨＣＶ非構造（ＮＳ）タンパク質は、ウイルス複製に必須の触媒機構を提供すると考えられている。ＮＳタンパク質は、ポリタンパク質のタンパク質分解的切断によって得られる［R. Bartenschlager et. al., “Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine−Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions,” J. Virol., 67, pp. 3835−3844 (1993)；A. Grakoui et. al., “Characterization of the Hepatitis C Virus −Encoded Serine Proteinase:  Determination of Proteinase−Dependent Polyprotein Cleavage Sites,” J. Virol., 67, pp. 2832−2843 (1993)；A. Grakoui et. al., “Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products,” J. Virol., 67, pp. 1385−1395 (1993)；L. Tomei et. al., “NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein”,  J. Virol., 67, pp. 4017−4026 (1993)］。
【０００５】
ＨＣＶ ＮＳタンパク質３（ＮＳ３）には、大部分のウイルス酵素の合成を補助するセリンプロテアーゼ活性が含まれ、故に、ウイルス複製および感染性に必須であると見なされる。黄熱病ウイルスＮＳ３プロテアーゼにおける変異は、ウイルス感染性を減少することが知られている［Chambers, T.J. et. al., “Evidence that the N−terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever virus is a Serine Protease Responsible for Site−Specific Cleavages in the Viral Polyprotein”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 8898−8902 (1990)］。ＮＳ３の最初の１８１アミノ酸（ウイルスポリタンパク質の残基１０２７−１２０７）は、ＨＣＶポリタンパク質の４つ全ての下流部位を処理するＮＳ３のセリンプロテアーゼドメインを含むことが示されている［C. Lin et al., “Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase:  Trans−Cleavage Requirements and Processing Kinetics”, J. Virol., 68, pp. 8147−8157 (1994)］。
【０００６】
ＨＣＶ ＮＳ３ セリンプロテアーゼおよびそれに関係する補因子ＮＳ４Ａは、全てのウイルス酵素の過程を補助し、故に、ウイルス複製に必須であると見なされる。この過程は、ウイルス酵素過程にも関与する、ヒト免疫不全ウイルス アスパルチルプロテアーゼにより行われるのと同様のようである。ウイルスのタンパク質処理を阻害するＨＩＶプロテアーゼ阻害剤は、ヒトにおいて強力な抗ウイルス剤であり、ウイルス生活環のこの段階を中断することは、治療的活性剤の結果となることを示す。結果として、それは、創薬の魅力的な標的である。
【０００７】
現在のところ、満足のいく抗ＨＣＶ剤または処置法は存在しない。最近まで、ＨＣＶ疾患の確立された治療は、インターフェロン処置のみであった。ＨＣＶ感染のための最初に認可された治療は、標準（非ＰＥＧ化）インターフェロンαを用いる処置であった。しかしながら、インターフェロンは、重大な副作用を有し［M. A. Wlaker et al., “Hepatitis C Virus: An Overview of Current Approaches and Progress,” DDT, 4, pp. 518−29 (1999)；D. Moradpour et al., “Current and Evolving Therapies for Hepatitis C,” Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 11, pp. 1199−1202 (1999)；H. L. A. Janssen et al. “Suicide Associated with Alfa−Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis,” J. Hepatol., 21, pp. 241−243 (1994)；P.F. Renault et al., “Side Effects of Alpha Interferon,” Seminars in Liver Disease, 9, pp. 273−277. (1989)］、インターフェロンαの単剤療法は、症例のごく一部（〜２５％）だけで長期寛解を示す［O. Weiland, “Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”, FEMS Microbiol. Rev., 14, pp. 279−288 (1994)］。前記処置レジメンへのリバビリンの追加は、応答率をわずかに増加する。リバビリンと併用されている、最近導入されたＰＥＧ化型インターフェロン（ＰＥＧ−イントロン（登録商標）およびＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））は、寛解率のごく限られた改善および副作用の一部分のみの減少という結果となっている。現在の標準的な治療は、ＨＣＶ遺伝子型のような予後因子、および治療への初期応答の現れに依存して、２４−４８週間継続する処置レジメンである。さらに、有効な抗ＨＣＶワクチンの見込みは、不明確なままである。
【０００８】
よって、抗ＨＣＶ治療および抗ＨＣＶ化合物に適当な用量レジメンが必要である。
【０００９】
ＨＣＶならびに他の疾患および障害は、肝臓障害と関係がある。治療法および肝臓障害を処置するのに適当な用量レジメンも必要である。
【発明の開示】
【００１０】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の処置法を提供する。故に、本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の臨床的続発症の予防法を提供する。
【００１１】
本発明はまた、肝臓障害および肝炎の処置法を提供する。
【００１２】
（図面の簡単な説明）
図１Ａおよび図１Ｂは、用量レベルによる平均濃度時間プロフィールを示す（実施例３）。
【００１３】
図２Ａ−２Ｄは、誘導された薬物動態パラメーターを示す。棒グラフ内の線は中央値を示し、棒グラフは、データの中央半分の範囲を示す（実施例３）。
【００１４】
図３は、１４日間の試験期間中のＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU/mL)を示す（実施例５）。
【００１５】
図４は、１４日間の試験期間中のベースラインと比べたＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU/mL)の変化を示す（実施例５）。
【００１６】
図５は、７５０mgを８時間毎の投与群における、個々の対象についての１４日間の試験期間中のベースラインと比べたＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU/mL)の変化を示す（実施例５）。
【００１７】
図６は、全ての投与群におけるネオプテリン、ＡＬＴ（アラニンアミノ転移酵素）、およびＨＣＶ ＲＮＡの平均値±ＳＥＭを示す。下記の記号を図６において用いる：ＡＬＴレベルの平均±ＳＥＭ（上、白抜き記号の４本線）、ネオプテリン血漿濃度の平均±ＳＥＭ（中、白抜き記号の４本線）、および血漿ＨＣＶ ＲＮＡ負荷の平均±ＳＥＭ（下、黒塗り記号の４本線）におけるベースラインからの変化を、３つ全ての投与群およびプラセボについて示す。患者を、ＶＸ−９５０で１４日間処置した。＊４５０mgを８時間毎の群における１２日目の平均ＡＬＴレベルの一過性増加は、アーチファクトである（１０症例中５症例には見られなかった、中央値３８U/l、範囲２５−１２５U/l）（実施例５）。
【００１８】
図７は、全ての群におけるネオプテリン値の平均±ＳＥＭを示す。３つ全ての投与群およびプラセボについての、処置前、７日目および１４日目のネオプテリン血漿濃度の平均±ＳＥＭ。平均ネオプテリンの減少は、処置前に最高値であり、１４日目に最低の平均値を示す、７５０mgを８時間毎の投与群で最大であることに留意すべきである。７５０mgを８時間毎の投与群において、ベースラインおよびプラセボと比較したネオプテリンの減少は、１４日目に最大となった（＊対応のない両側ｔ検定、＊＊Mann Whitney検定）。Ｙ＝７．７nmol/lの横破線は、ＵＬＮを示す（実施例５）。
【００１９】
図８、９、および１０は、ＨＣＶ ＮＳ３／４ＡプロテアーゼによるＴＲＩＦ（ＴＬＲ３アダプタータンパク質）のインビトロ切断が、ＶＸ−９５０により阻害されることを示す。
【００２０】
図８（ＩＦＮ−β、ＴＲＩＦまたはＴＩＣＡＭ−１を誘導するアダプターを含むtoll−IL１受容体ドメイン）は、様々なタンパク質結合ドメインを示すＴＲＩＦの略図を示す。Ｃｙｓ３７２でのＨＣＶ ＮＳ３ プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断により、２つの断片−ΔＣ３４０およびΔＮ３７２が生じる（Li et al 2005, PNAS, 102, p2992−2997の改訂版）。
【００２１】
図９は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断の速度（kinetics）を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦタンパク質インビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０−２４０分の範囲の様々な時間、６μＭのｔＮＳ３ プロテアーゼと共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。ゲルを、切断産物を定量するために、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、時間関数として図中に示す。
【００２２】
図１０は、ＮＳ３ プロテアーゼ依存的ＴＲＩＦ切断およびＶＸ−９５０によるＴＲＩＦ切断の阻害を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦタンパク質インビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、１０μＭ ＶＸ−９５０の存在下（○）または不存在下（□）のどちらかで、０−４μＭの範囲のｔＮＳ３ プロテアーゼ酵素の増加濃度下でインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【００２３】
図１１、１２、および１３は、ウイルス変異株の減少した適応力を示す。
【００２４】
図１１は、ＶＸ−９５０耐性変異体のインビトロでの表現型の特徴を示す。野生型プロテアーゼと比較してＶＸ−９５０に対する増加した耐性が、インビトロ酵素反応（Ｋｉ）または２日間のレプリコン分析（ＩＣ５０）において、Ａ１５６Ｖ／Ｔ変異により得られた。野生型酵素と比較した変異体のＫｃａｔ／Ｋｍ比を、表に示す(Lin et al 2005, JBC, 280, p36784−36791の改訂版)。
【００２５】
図１２は、野生型（ＷＴ）ＮＳ３プロテアーゼと比較したＡ１５６Ｖ／Ｔ変異体によるＨＣＶ ４Ａ／Ｂ基質の切断を示す：３５Ｓメチオニン標識結合、間に４Ａ／Ｂ結合点を有するＳＥＡＰタンパク質と融合した不活性化ＨＣＶ変異プロテアーゼのインビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０．００８μＭから６μＭの範囲の野生型（ＷＴ）（□）またはＡ１５６Ｖ／Ｔ（△および○）ｔＮＳ３ プロテアーゼのどちらかの変化量と共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【００２６】
図１３は、野生型（ＷＴ）ＮＳ３プロテアーゼと比較したＡ１５６Ｖ／Ｔ変異体によるＴＲＩＦ基質の切断を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦのインビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０．００８μＭから６μＭの範囲の野生型（ＷＴ）（□）またはＡ１５６Ｖ／Ｔ（△および○）ｔＮＳ３プロテアーゼのどちらかの変化量と共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【００２７】
図１４は、ベースライン、７日目、および１４日目における平均ＨＣＶ ＲＮＡ、ネオプテリンおよびＡＬＴを示す（実施例５）。
【００２８】
図１５および１６は、ＶＸ−９５０が、センダイウイルス感染Ｈｕｈ７細胞においてＩＦＮβ依存性遺伝子発現を元に戻すというデータを示す。
【００２９】
図１５は、センダイウイルスで刺激したＨｕｈ７細胞におけるＨＣＶプロテアーゼによるＩＦＮ−βプロモーター活性の抑制を示す。Ｈｕｈ７細胞を、野生型（ＷＴ）または不活性変異体（ＭＴ）プロテアーゼのどちらかと、ＩＦＮ−βプロモーター制御下でルシフェラーゼ遺伝子を発現するプラスミドで共トランスフェクトし、次いでセンダイウイルス（ＳｅＶ）で刺激した。センダイウイルス非誘導性対照と比較したルシフェラーゼ遺伝子の活性化倍数を、この図に示す。
【００３０】
図１６は、ＶＸ−９５０を用いる処理が、センダイウイルス刺激ＩＦＮ−βプロモーター活性に対するＨＣＶプロテアーゼの抑制効果を克服し得ることを示す。Ｈｕｈ７細胞を、野生型（ＷＴ）または不活性化変異体（ＭＴ）プロテアーゼのどちらかと、ＩＦＮ−βプロモーターの制御下でルシフェラーゼ遺伝子を発現するプラスミドで共トランスフェクトした。これらの細胞を、ＤＭＳＯ（対照）または１０μＭ ＶＸ−９５０のどちらかで処理した。細胞をセンダイウイルス（ＳｅＶ）で刺激し、ルシフェラーゼ活性を感染の１６時間後に測定した。センダイウイルス非誘導性対照と比較したルシフェラーゼ遺伝子の活性化倍数を、この図に示す。
【００３１】
図１７は、ＶＸ−９５０処置が、ＨＣＶ治療に以前非応答性であった患者（図１７Ａ）および未処置患者（図１７Ｂ）においてＨＣＶ ＲＮＡの減少をもたらすというデータを示す。各処置レジメンにおける患者の平均ＨＣＶ ＲＮＡレベルを示す。血漿ＨＣＶ ＲＮＡ濃度を、Ｒｏｃｈｅ ＣＯＢＡＳ ＴａｑＭａｎ ＨＣＶ／ＨＰＳ分析を用いて決定した。
【００３２】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＶＸ−９５０を投与するための特定の用量および投与量レジメンに関する。ＶＸ−９５０は、７ｎＭの定常結合定数（ｋｉ＊）を有する競合性、可逆性ペプチド模倣性ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤である［ＷＯ０２／０１８３６９］。
【化１】
2008518943.tif 000003
【００３３】
ＶＸ−９５０は、ヒトにおいて単回用量で試験され、良好な耐容性を示すことが発見されている（実施例３）。有害事象の発生または程度は、ＶＸ−９５０用量と共に増加しなかった。重症（グレード３またはグレード４）であると見なされた有害事象はなかった。血液学または臨床化学パラメーターについては、ベースライン実験値から臨床的に顕著な変化はなかった。試験した患者は全て、身体検査、バイタルサイン、または心電図に臨床的に顕著な変化はなかった。
【００３４】
分析を、ＶＸ−９５０薬物動態プロフィールを決定するために行った。データを図１および図２に示す。
【００３５】
ＶＸ−９５０に暴露した肝臓を、前臨床および臨床の総合データを基に予測した。予測されたヒト暴露肝臓を、より良好な耐容性が見込まれ、治療上の利点をもたらす用量を決定するため、ＶＸ−９５０レプチコン分析および感染性ウイルス分析（下記参照）の結果と合わせた。肝臓濃度の予測された平均値は、試験した用量範囲において、レプリコン分析ＩＣ９０の５７倍まで、およびレプリコン分析ＩＣ５０の１１３倍までである。
【００３６】
これらの結果は、本出願人の用量レジメンが、非臨床試験にて決定されたＩＣ５０およびＩＣ９０を実質的に上回るＶＸ−９５０の肝臓濃度を達成し得ることを示す。
【００３７】
従って、本発明の一態様は、
ａ）約１００mgから約１５００mg；
約３００mgから約１５００mg；
約３００mgから約１２５０mg；
約４５０mg；
約７５０mg；または
約１２５０mgの、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩：および
ｂ）薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物を提供する。
【００３８】
また、本発明は、
約１００mgから約１５００mg；
約３００mgから約１５００mg；
約３００mgから約１２５０mg；
約４５０mg；
約７５０mg；または
約１２５０mgのＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩を、１日１回、２回または３回投与することを含む、治療レジメンを提供する。本発明の治療レジメンは、１個以上の剤形でのＶＸ−９５０の投与を含むことを意図する。
【００３９】
本発明の他の態様は、約３００mgから約１５００mgのＶＸ−９５０またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、患者のＨＣＶ感染を処置または予防するための方法を提供する。
【００４０】
ある態様において、ＶＸ−９５０の用量は、少なくとも約３００mgである。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、少なくとも約４５０mgである。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、少なくとも約５００mgである。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、少なくとも約７５０mgである。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、少なくとも約１２５０mgである。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、少なくとも約１５００mgである。
【００４１】
さらに他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、約１５００mg未満である。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、約１２５０mg未満である。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、約７５０mg未満である。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、約４５０mg未満である。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、約５００mg未満である。他の態様において、ＶＸ−９５０の用量は、約３００mg未満である。
【００４２】
これらの下限量および上限量は、ＶＸ−９５０の投与に好ましい用量範囲を提供するために組み合わせ得ると理解されるはずである。例えば、一態様において、ＶＸ−９５０またはその薬学的に許容される塩は、約３００mgから約１２５０mgである。
【００４３】
ある態様において、ＶＸ−９５０は、約４５０mg投与される。ＶＸ−９５０は、約５００mg投与される。他の態様において、ＶＸ−９５０は、約６００mg投与される。他の態様において、ＶＸ−９５０は、約７５０mg投与される。他の態様において、ＶＸ−９５０は、約１０００mg投与される。さらに他の態様において、ＶＸ−９５０は、約１２５０mg投与される。
【００４４】
これらの態様のいくつかにおいて、前記ＶＸ−９５０量は、１日１回投与される。あるいは、前記ＶＸ−９５０量は、１日２回投与される（例えば、ＢＩＤ；１２時間毎）。あるいは、前記ＶＸ−９５０量は、１日３回投与される（例えば、ＴＩＤ；８時間毎）。ＶＸ−９５０は、食事と共にまたは別に投与され得る。
【００４５】
ＶＸ−９５０はまた、ヒトにおいても試験されており、ＨＣＶ複製の阻害に効果があることが発見された。本発明者らは、ＶＸ−９５０の投与が、ＨＣＶ ＲＮＡレベルを実質的に減少し得ることを証明した。重要なことに、本発明者らは、ＨＣＶに感染した対象へのＶＸ−９５０の投与が、ウイルスＲＮＡが、Ｒｏｃｈｅ ＣＯＢＡＳ ＴａｑＭａｎ（商標）ＨＣＶ／ＨＰＳ分析（Roche Molecular Diagnosticsから市販されている）を用いて検出不可能になるように、ウイルスを阻害し得ることを証明した。７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎（ｑ８ｈ）に受容する８名の対象のうち、４名は、定量限界未満（ＬＬＱ ３０IU/mL）のＨＣＶ ＲＮＡレベルを有し、４名のうち２名の対象は、検出限度未満（ＬＬＤ １０IU/mL）のＨＣＶ ＲＮＡレベルを有する。
【００４６】
７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎に受容する対象は、１４日間の処置の最後に、ＨＣＶ−ＲＮＡの４ｌｏｇ１０より大きな平均減少（すなわち、１０，０００倍の低下）を達成した。ＨＣＶ−ＲＮＡの２ｌｏｇ１０より大きな平均減少が、１４日間の処置の最後に、他の２つのＶＸ−９５０用量群のそれぞれで見られた。ＶＸ−９５０を受容する各対象は、ＨＣＶ−ＲＮＡの２ｌｏｇ１０より大きな減少を処置の最初の３日以内に達成し、ＶＸ−９５０を受容する２８名の対象のうち２６名が、処置の最初の３日以内に、ＨＣＶ−ＲＮＡを３ｌｏｇ１０減少した。実施例５および図３−５を参照のこと。
【００４７】
血漿ウイルス量が、ＶＸ−９５０で処置された患者において迅速に減少することが証明された。さらに、投与終了後、ＨＣＶ ＲＮＡのベースラインレベルにゆっくりと戻ることが証明された。特に、処置終了後にＨＣＶ ＲＮＡベースラインレベルに戻る速度は、処置によるＨＣＶ ＲＮＡの減少速度よりゆっくりであった。検出不可能なＨＣＶ ＲＮＡレベルに達することと合わせてこれらの結果は、単剤療法としてのＶＸ−９５０の有効性を示す。
【００４８】
従って、本発明は、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩を、ａ）約４５０mg、１日３回、８時間毎；ｂ）約７５０mg、１日３回、８時間毎；ｃ）約１２５０mg、１日２回、１２時間毎；または、ｄ）約１２５０mg、１日３回、８時間毎の量で、患者に投与することを含む、ＨＣＶに感染した患者を処置するための方法を提供する。
【００４９】
他の態様において、本発明は、患者のＨＣＶ ＲＮＡレベルが、処置前より処置後のほうが、少なくとも約２ｌｏｇ（好ましくは、少なくとも約４ｌｏｇ）低くなるように、ＨＣＶに感染した患者にＶＸ−９５０を投与するための方法を提供する。他の態様において、本発明は、患者のウイルスＲＮＡレベルが検出不可能なレベルに減少し、“持続的ウイルス応答”が達成されるまで検出不可能なレベルのままであるように、ＨＣＶに感染した患者にＶＸ−９５０を投与するための方法を提供する。現在のところ“持続的ウイルス応答”の定義としては、投与終了後２４週間、ウイルスＲＮＡレベルが検出不可能なままであることを意味する。
【００５０】
理論はともかく、７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎に用いる本発明の方法は、その方法が、より高いトラフ濃度をもたらすため、好ましいと考えられる。トラフ濃度とは、薬剤が、次回投与直前の血漿中で低下する濃度である（すなわち、投与間での最低濃度である）。特にウイルス性疾患において、ウイルス複製を阻害するのに適する濃度に維持するために上記のある濃度に薬剤レベルを維持することは、重要である。有利には、本発明者らは、７５０mgのＶＸ−９５０を、８時間毎に投与する１つのレジメンが、試験したレジメンの最高トラフ濃度をもたらすことを発見した。
【００５１】
従って、好ましい態様において、本発明は、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩を、約７５０mgを１日３回８時間毎に、患者に投与することを含む方法を提供する。
【００５２】
フレキシブルな投与スケジュールが都合よいことは、認められるであろう。従って、本発明の他の態様において、前記投与は１日３回であるが、８時間毎ではなく、要すれば食事と共に投与する。ある態様において、ＶＸ−９５０は、食事と共に投与される。
【００５３】
本発明はまた、ヒトにＶＸ−９５０を含む組成物の経口用量を投与することを含む（ここで、該用量は、該ヒトに対して、投与後に少なくとも約７５０ng/mLのＶＸ−９５０の平均血漿濃度（Ｃａｖｇ）を供する。）、それを必要とするヒトにＶＸ−９５０を供するための方法を提供する。ある態様において、前記Ｃａｖｇは、約１０００ng/mLまたは約１２５０ng/mLである。ある態様において、該用量は本質的に、７５０mgのＶＸ−９５０を包含する。これらの態様において、前記Ｃａｖｇは、投与後３時間以内、好ましくは２時間以内、より好ましくは投与後１時間以内に得られる／達せられる。これらの態様の好ましい形態において、前記Ｃａｖｇは、約２４時間以上、好ましくは１２週以上、維持される。
【００５４】
ある態様において、本発明は、患者におけるＨＣＶ感染を、ＶＸ−９５０を含む少なくとも１個の剤形を２４時間かけて投与すること（ここで、前記剤形は、２４時間の間、血漿ＶＸ−９５０を約７５０ng/mLの最低トラフ濃度に維持するために投与される。）により処置するための方法を提供する。
【００５５】
この態様のある形態において、前記剤形は、２４時間の間、血漿ＶＸ−９５０を、約８００ng/mL、好ましくは約９００ng/mL、より好ましくは２４時間の間、約１０００ng/mLの最低トラフ濃度に維持するために投与される。
【００５６】
ある好ましい態様において、治療的に有効な血漿濃度が得られ、あるトラフ濃度が維持される。これらの方法は、特に、ＶＸ−９５０製剤を投与することによりＨＣＶ感染を有するヒトを処置するのに有用であり、ここで、前記ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度は、２４時間の間、約７５０ng/mLの最低レベル、８００ng/mL、９００ng/mLまたは１０００ng/mLに維持される。理論はともかく、約１５００ng/mLより大きいトラフ濃度は、本発明に必要とされないと考えられる。従って、約７５０、８００、９００、１０００ng/mLから約１５００ng/mL（特に、１０００から約１５００）のトラフ濃度は、本発明の範囲内である。
【００５７】
ＶＸ−９５０をヒトに送達するためのＶＸ−９５０を含む剤形であって、該剤形が
２４時間の間に少なくとも１回投与されるとき、ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度が、２４時間の間、少なくとも約７５０ng/mL、８００ng/mL、９００ng/mL、または１０００ng/mLから、２４時間の間、約１５００ng/mL（特に、１０００ng/mLから約１５００ng/mL）に維持される剤形もまた、提供する。
【００５８】
理想的には、本発明の方法が、ＨＣＶに感染した患者を処置することを包含するとき、本方法は、ＶＸ−９５０の治療的に有効な血漿濃度を比較的迅速に達成し、その後、効果的な治療応答を達成するように前記トラフ濃度を維持することを含む。効果的な治療応答とは、好ましくは、ａ）持続的ウイルス応答を達成すること；そして、ｂ）少なくとも１２週間（１２週間またはそれ以上）、検出不可能な血漿中ＨＣＶ ＲＮＡを達成すること、の一方または両方である。本明細書中で用いる、ＨＣＶ ＲＮＡについての“検出不可能”とは、ＨＣＶ ＲＮＡが、現在商業的に利用可能な分析により決定される、好ましくは、Ｒｏｃｈｅ ＣＯＢＡＳ ＴａｑＭａｎＴＭ ＨＣＶ／ＨＰＳ分析により決定される、１０ＩＵ／ｍｌ未満で存在することを意味する。
【００５９】
血漿濃度の比較的迅速な低下は、患者に負荷用量を投与することにより得られ得る。１つの態様において、負荷用量は、約１２５０mgのＶＸ−９５０である。
【００６０】
本発明のある剤形において、（負荷用量を投与するために用いられる剤形以外の）剤形には、約７５０mgのＶＸ−９５０が含まれ、該剤形は、各２４時間に３回投与される。
【００６１】
ある態様において、ＶＸ−９５０を用いる処置期間は、現在の標準的な治療よりも短い。
【００６２】
ある態様において、本発明の方法は、遺伝子型１型のＣ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置を含む。遺伝子型１型のＨＣＶ感染は、治療するＨＣＶの最も困難な株および米国で最も蔓延している株である。
【００６３】
本発明者らはまた、ＶＸ−９５０の投与が、ネオプテリンおよびＡＬＴレベルをインビボで減少させることを証明した（図６、図７および図１４）。ＡＳＴ（アルパラギン酸アミノ転移酵素）レベルもまた、ＶＸ−９５０の投与により減少した。ＡＬＴは、肝臓細胞に存在する酵素であり；肝臓細胞が、損傷を受けるかまたは炎症を起こすとき、ＡＬＴが細胞から血中へ流れ出す。血中ＡＬＴレベルは、肝炎または肝臓損傷のマーカーとして有用である。Tatyana Yashina ＆ J. Sanders Sevall, “Hepatitis C Virus” in Use and Interpretation of Laboratory Tests in Gastroenterology, James B. Peter, ed., p. 127, (1998)；and Andres T. Blei, “Liver and Biliary Tract” in Laboratory Medicine, D. A. Noe and Robert C. Rock, eds., ch. 19, p. 363 (1994)を参照のこと。
【００６４】
ネオプテリン（６−ｄ−エリスロ−トリヒドロキシプロピルプテリジン）は、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）の代謝中に生産されるプテリジン誘導体である。ネオプテリンは、インターフェロンγまたはインターフェロンαによる活性化により単球およびマクロファージによって最初に生産され、炎症のマーカーである。ネオプテリンレベルは、しばしば、慢性的ＨＣＶ感染において上昇する（Quiroga, et al. Dig Dis Sci 1994;39(11): 2485−96)。健康な個体において予期されるネオプテリンの血漿レベルは、３．１から７．７nmol/lである。
【００６５】
従って、本発明者らは、単球／マクロファージ活性のマーカーとして、（ＨＣＶ）ＮＳ３・４Ａプロテアーゼの阻害剤の投与期間中の血清ネオプテリン濃度の変化を決定した。本明細書で記載の通り、ＶＸ−９５０を、遺伝子型１型のＨＣＶに感染した３４名の患者における、無作為化、二重盲検、プラセボ−対照、多数回投与試験において１４日間投与した（表１）。患者は、ＶＸ−９５０を、４５０mg、８時間毎（ｎ＝１０）、７５０mg、８時間毎（ｎ＝８）、１２５０mg、１２時間毎（ｎ＝１０）、またはプラセボ（ｎ＝６）を受容した。血清ネオプテリン濃度を、定量的競合ＥＬＩＳＡ（ELItest（登録商標） Neopterin, Brahms, Hennigsdorf, Germany)により、処置前、処置７日目、１４日目、およびフォローアップ１０日目に測定した。検出の下限値（ＬＬＤ）は、２nmol/lであった。ＨＣＶ ＲＮＡを、リアルタイムＰＣＲ (COBAS（登録商標） TaqMan ＨＣＶ検定；３．０×１０１から２．０×１０８ ＨＣＶ ＲＮＡ IU/mlの線形ダイナミックレンジ；１０ ＨＣＶ ＲＮＡ IU/mlのＬＬＤ；Roche Diagnostics, Branchburg, NJ)により、試験中頻繁に評価した。
【００６６】
ＶＸ−９５０の投与期間中、各患者は、全ての用量群においてウイルス量が＞２−ｌｏｇ１０に下がることを証明した（表２）。７５０mg、８時間毎の用量群において、平均ＨＣＶ ＲＮＡは、３日目に３．６ｌｏｇ１０に低下し、１４日目に４．３ｌｏｇ１０に低下した。４５０mg、８時間毎、および１２５０mg、１２時間毎の用量群において、最大効果は、３日目から７日目に見られ、その後、７日目から１４日目の間に平均ウイルス量が増加した。平均ウイルス量は、全ての用量群において、フォローアップ中に増加した。有利なことに、ＨＣＶ未処置患者および以前処置した患者の両方において、本発明の方法が有効である。図１７Ａおよび図１７Ｂに示す通り、以前処置した患者および未処置患者の両方が、ＶＸ−９５０に応答した。疑いを避けるために、本発明の方法で処置され得る患者には、ＨＣＶ処置が、試されなかった患者か、または、非応答、リバウンド、再発および進行した患者を含む、処置に失敗した患者が含まれる。
【００６７】
ネオプテリンベースラインは、２３／３４名の患者で上昇した（平均９．３３nmol/l；正常上限（ＵＬＮ）７．７nmol/l）。７５０mgの用量群において、ベースラインおよびプラセボと比較したネオプテリンの減少は、１４日目に顕著となった（７５０mg、８時間毎の用量群のベースライン ｖ １４日目 １０．４８±０．８４nmol/l ｖ ７．３２±０．４８nmol/l Ｐ＝０．０１０４、マンホイットニー検定；７５０mg、８時間毎の用量群 ｖ プラセボ、１４日目 ７．３２±０．４８nmol/l ｖ ９．８１±１．３６nmol/l Ｐ＝０．００３６、対応のない両側ｔ検定）。平均ネオプテリンレベルは、７５０mg、８時間毎の用量群においてのみ、１４日目にて正常値内であった（図７および図１４）。４５０mg、８時間毎の用量群、および１２５０mg、１２時間毎の用量群において、平均ネオプテリンレベルの減少は、より小さかった（図６、７、および１４）。平均ネオプテリンレベルは、プラセボ群で変化しなかった（図６および図７）。平均ネオプテリンレベルは、フォローアップ中に全ての用量群で増加した。
【００６８】
平均ＡＬＴレベルは、ベースライン時に高く、全ての群にて投与中に減少した（図６）。平均ＡＬＴレベルは、フォローアップ中に全ての用量群で増加し、ベースラインに戻った。
【００６９】
ＨＣＶ ＲＮＡは、４５０mgの用量群、および１２５０mgの用量群で７日後に増加するが、ネオプテリンおよびとりわけＡＬＴは、減少し続ける。平均ネオプテリン濃度の変化は、ＶＸ−９５０の投与中のＨＣＶ ＲＮＡおよびＡＬＴレベルの減少と関係があった。平均ネオプテリン濃度は、７５０mg、８時間毎の用量群において１４日目に最大に減少した。これはまた、１４日目に、ＨＣＶ ＲＮＡの最大の減少を有する用量群でもあった。４５０mg、８時間毎、および１２５０mg、１２時間毎の用量群において７日目の後、ＡＬＴおよびネオプテリンレベルは減少したが、ＨＣＶ ＲＮＡレベルは増加した。これらのデータは、ＶＸ−９５０によるＨＣＶ複製の阻害が、結果としてウイルス感染と関係のある全身性炎症性活性の著しい減少となることを示唆する。
【００７０】
ＶＸ−９５０はまた、動物モデルにおいて高ＡＬＴレベルを改善する（ＷＯ２００５／０２５５１７を参照のこと）。特に、ＳＣＩＤマウスにおけるＷＴ−ＨＣＶプロテアーゼ−ＳＥＡＰの発現は、ＶＸ−９５０で処置することにより改善される高ＡＬＴレベルをもたらす。ＳＣＩＤマウスにおけるＷＴ−ＨＣＶプロテアーゼのみの発現は、ＡＬＴレベルの時間および用量依存的上昇ももたらす。
【００７１】
従って、本発明の他の態様は、ＨＣＶ陽性またはＨＣＶ陰性のどちらかである患者において、肝臓障害、肝炎、脂肪症、脂肪肝、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、アルコール性脂肪症、およびライ症候群の１種以上を処置または予防するための方法を提供する。本発明はまた、ＨＣＶ陽性または陰性のどちらかである患者における、肝臓保護のための方法を提供する。
【００７２】
本発明者らはまた、ＶＸ−９５０が、インビトロで免疫回避を阻止することを証明した。
【００７３】
ＶＸ−９５０は、センダイウイルス感染Ｈｕｈ７細胞におけるＩＦＮβ依存的遺伝子発現を元に戻す。ＩＦＮβプロモーター活性は、ＷＴ ＨＣＶｐｒｏの存在下で、センダイウイルス刺激に応答して減少する。ＶＸ−９５０は、ＷＴ ＨＣＶｐｒｏが仲介するＩＦＮβプロモーター活性化の抑制を克服する。図１５および図１６。
【００７４】
さらに、ＮＳ３／４Ａは、例えば、ＴＲＩＦ依存的機序（ならびに、ウイルスポリタンパク質プロセシング）により、先天的防御の回避を伴うことが知られている。この免疫回避は、ウイルスの存続をもたらす。従って、ウイルスポリタンパク質プロセシングおよび先天的防御の回避の両方を阻害する化合物が望ましい。有利には、ＶＸ−９５０は、該両方を行うことが示されている。特に、ＶＸ−９５０は、インビトロで、ＴＬＲ３アダプタータンパク質であるＴＲＩＦの切断を阻害する。図８−１０。
【００７５】
理論はともかく、モデル化は、ＶＸ−９５０が、ＮＳ３プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断を阻害することを示唆する。ＴＲＩＦは、ＮＳ３プロテアーゼ活性部位の非プライム（non−prime）側に結合する。ＶＸ−９５０は、ＴＲＩＦと、同じ活性部位の非プライム側に結合し、ＴＲＩＦ切断を阻止する。
【００７６】
さらに、本発明者らは、２種のＶＸ−９５０ウイルス変種、Ａ１５６ＴおよびＡ１５６Ｖが、ＴＲＩＦまたは４Ａ／４Ｂのどちらかを切断する能力の低下を示すことを明らかにした（C. Lin et al. “In Vitro Studies of Cross−resistance Mutations Against two Hepatitis C Virus Serine Protease Inhibitors VX−950 and BILN 2061”, J. Biol. Chem., (August 8, 2005)。これらのウイルス変種は、適合性が小さく、それらは、ウイルスポリタンパク質プロセシングおよびウイルスの存続の両方に影響しない。理論は別にして、これは、４Ａ／４ＢおよびＴＲＩＦ基質に結合して影響を与えるＡ１５６Ｖの立体障害と関係する。図１１−１３。
【００７７】
これは、ＶＸ−９５０が、直接的抗ウイルス剤および免疫回避の阻害剤の両方として作用することを示す。従って、本発明はまた、ＨＣＶプロテアーゼが仲介する宿主の防御の回避を阻害する方法を提供する。
【００７８】
本明細書中で開示されるインビボデータと共にこれらの結果は、単剤療法としてのＶＸ−９５０の有効性を示す。
【００７９】
本発明のＶＸ−９５０の量は、単一剤形または２つ以上の剤形で投与される。分割剤形であるとき、各剤形は、ほぼ同時に投与される。疑いを避けるために、１日１回以上の投与を求める投与レジメンについては、１個以上のピルまたは用量が、１日につき各回で投与される（例えば、１個のピルを１日３回、または３個のピルを１日３回）。本発明の最も好ましい態様は、１回の投与につき少なくとも２個のピルを用い得る。
【００８０】
ＶＸ−９５０は、１個以上の不斉炭素原子を含むことができ、従って、ラセミ体およびラセミ混合物、単一のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして存在し得る。これらの化合物の全てのそのような異性体は、本発明に明示的に包含される。各立体中心の炭素は、ＲまたはＳ配置であり得る。ＶＸ−９５０のＮ−プロピル側鎖におけるＤ−およびＬ−異性体は、本発明の範囲内に明示的に包含される。本発明の好ましい態様は、ＶＸ−９５０を用いる。
【００８１】
当業者に実施可能なように、本発明の方法が患者の予防的処置に用いられ、その患者がＣ型肝炎ウイルスに感染するとき、該方法は、その後感染を処置し得る。故に、本発明の１つの態様は、患者におけるＣ型肝炎感染を処置または予防するための方法を提供する。
【００８２】
Ｃ型肝炎に感染した患者の処置に加えて、本発明の方法は、Ｃ型肝炎の感染から患者を予防するために用いることができる。従って、本発明の１つの態様は、本発明の組成物または剤形を患者に投与することを含む、患者におけるＣ型肝炎ウイルス感染を予防するための方法を提供する。
【００８３】
本発明の方法はまた、免疫調節剤；抗ウイルス剤；ＨＣＶプロテアーゼの阻害剤（ＶＸ−９５０以外）；ＨＣＶ生活環の他の標的の阻害剤（ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ以外）；内部リボソーム侵入の阻害剤、広域的ウイルス阻害剤；または、シトクロムＰ−４５０阻害剤；または、それらの組み合わせ、から選択されるさらなる薬剤を含む他の成分の投与を含み得る。さらなる薬剤はまた、ウイルスの細胞侵入の阻害剤から選択される。
【００８４】
従って、他の態様において、本発明は、ＶＸ−９５０および他の抗ウイルス剤、好ましくは抗ＨＣＶ剤を投与することを含む方法を提供する。そのような抗ウイルス剤には、α−、β−、およびγ−インターフェロンまたはチモシン、ＰＥＧ化誘導インターフェロン−α化合物、およびチモシンのような免疫調節剤；リバビリン、アマンタジン、およびテルビブジンのような他の抗ウイルス剤；Ｃ型肝炎プロテアーゼの他の阻害剤（ＮＳ２−ＮＳ３阻害剤およびＮＳ３−ＮＳ４Ａ阻害剤）；ヘリカーゼ、ポリメラーゼ、およびメタロプロテアーゼ阻害剤を含む、ＨＣＶ生活環における他の標的の阻害剤；内部リポソーム侵入の阻害剤；ＩＭＰＤＨ阻害剤のような広域的ウイルス阻害剤（例えば、ＶＸ−４９７、ＶＸ−１４８、および／またはＶＸ−９４４を含むが、それらに限定されない、米国特許第５，８０７，８７６号、同第６，４９８，１７８号、同第６，３４４，４６５号、同第６，０５４，４７２号、ＷＯ９７／４００２８、ＷＯ９８／４０３８１、ＷＯ００／５６３３１の化合物、ならびにミコフェノール酸およびその誘導体）；または、上記のいずれかの組み合わせが含まれるが、それらに限定されない。
【００８５】
本発明の化合物と併用され得る他の薬剤（例えば、非免疫調節または免疫調節化合物）には、参照により本明細書中に包含されるＷＯ０２／１８３６９（例えば、２７３頁、９−２２行目、および２７４頁、４行目から２７６頁、１１行目、本開示は、参照により明確に本明細書中に包含される）に記載されるものが含まれるが、それらに限定されない。
【００８６】
様々な公開された米国特許出願に記載されるさらに他の薬剤が包含される。これらの刊行物は、本発明の方法、特に肝炎の処置においてＶＸ−９５０と併用し得る化合物および方法のさらなる教示を提供する。そのような方法および組成物は全て、本発明の方法および組成物と併用し得ると考えられる。簡潔には、それらの刊行物の開示内容は、公開番号を参照することにより参照されるが、化合物の開示が、特に、参照により本明細書中に明確に包含されることは、注意されるべきである。そのような刊行物の例には、米国特許公開番号第２００４００５８９８２号；米国特許公開番号第２００５０１９２２１２号；米国特許公開番号第２００５００８０００５号；米国特許公開番号第２００５００６２５２２号；米国特許公開番号第２００５００２０５０３号；米国特許公開番号第２００４０２２９８１８号；米国特許公開番号第２００４０２２９８１７号；米国特許公開番号第２００４０２２４９００号；米国特許公開番号第２００４０１８６１２５号；米国特許公開番号第２００４０１７１６２６号；米国特許公開番号第２００４０１１０７４７号；米国特許公開番号第２００４００７２７８８号；米国特許公開番号第２００４００６７９０１号；米国特許公開番号第２００３０１９１０６７号；米国特許公開番号第２００３０１８７０１８号；米国特許公開番号第２００３０１８６８９５号；米国特許公開番号第２００３０１８１３６３号；米国特許公開番号第２００２０１４７１６０号；米国特許公開番号第２００４００８２５７４号；米国特許公開番号第２００５０１９２２１２号；米国特許公開番号第２００５０１８７１９２号；米国特許公開番号第２００５０１８７１６５号；米国特許公開番号第２００５００４９２２０；および、米国特許公開番号第ＵＳ２００５／０２２２２３６が含まれる。
【００８７】
さらなる他の薬剤には、Human Genome Sciencesから市販されるアルブフェロン（商標）（アルブミン−インターフェロンα）；ＰＥＧ−イントロン（登録商標）(ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ、Schering Corporation, Kenilworth, NJから市販される）；イントロン−Ａ（登録商標）（ＶＩＲＡＦＥＲＯＮ（登録商標）、インターフェロンα−２ｂ、Schering Corporation, Kenilworth, NJから市販されている）；リバビリン（1−β−D−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド、ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CAから市販される；the Merck Index, entry 8365, Twelfth Editionに記載される）；ＲＥＢＥＴＲＯＬ（登録商標）（Schering Corporation, Kenilworth, NJ）；コーペガス（登録商標）（Hoffmann−La Roche, Nutley, NJ）；ペガシス（登録商標）（ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ、Hoffmann−La Roche, Nutley, NJから市販される）；ロフェロン（登録商標）（組換えインターフェロンα−２ａ、Hoffmann−La Roche, Nutley, NJから市販される）；ＢＥＲＥＦＯＲ（登録商標）（インターフェロンα２、Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CTから市販される）；スミフェロン（登録商標）（スミフェロンのような、精製物と天然のαインターフェロンの混合物、Sumitomo, Japanから市販される）；ウェルフェロン（登録商標）（インターフェロン α ｎ１、Glaxo Wellcome Ltd., Great Britainから市販される）；アルフェロン（登録商標）（Interferon Sciencesにより作製される天然αインターフェロンの混合物、およびPurdue Frederick Co., CTから市販される）；α−インターフェロン；天然αインターフェロン ２ａ；天然αインターフェロン ２ｂ；ＰＥＧ化αインターフェロン ２ａまたは２ｂ；コンセンサスαインターフェロン（Amgen, Inc., Newbury Park, CA）；レベトロン（登録商標）（Schering Plough、インターフェロン−α ２Ｂ＋リバビリン）；ＰＥＧ化インターフェロンα（Reddy, K.R. et al. “Efficacy and Safety of Pegylated (40−kd) Interferon alpha−2a Compared with Interferon alpha−2a in Noncirrhotic Patients with Chronic Hepatitis C”(Hepatology, 33, pp. 433−438 (2001)；コンセンサスインターフェロン（インファゲン（登録商標））（Kao, J.H., et al., “Efficacy of Consensus Interferon in the Treatment of Chronic Hepatitis” J. Gastroenterol. Hepatol. 15, pp. 1418−1423 (2000)；リンパ芽球様または“天然”インターフェロン；インターフェロン ｔａｕ（Clayette, P. et al., “IFN−tau, A New Interferon Type I with Antiretroviral activity” Pathol. Biol. (Paris) 47, pp. 553−559 (1999)；インターロイキン−２（Davis, G.L. et al., “Future Options for the Management of Hepatitis C.” Seminars in Liver Disease, 19, pp. 103−112 (1999)；インターロイキン−６（Davis et al. "Future Options for the Management of Hepatitis C.” Seminars in Liver Disease 19, pp. 103−112 (1999)；インターロイキン−１２（Davis, G.L. et al., "Future Options for the Management of Hepatitis C." Seminars in Liver Disease, 19, pp. 103−112 (1999)；および、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を増強する化合物（Davis et al., “Future Options for the Management of Hepatitis C.” Seminars in Liver Disease, 19, pp. 103−112 (1999))、が含まれるが、それらに限定されない。また、二本鎖ＲＮＡ単独、またはトブラマイシンおよびイミキモドとの組み合わせを含むが、これらに限定されない（3M Pharmaceuticals；Sauder, D.N. “Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod” J. Am. Acad. Dermatol., 43 pp. S6−11 (2000)）、細胞におけるインターフェロンの��成を刺激する化合物（Tazulakhova, E.B. et al., “Russian Experience in Screening, analysis, and Clinical Application of Novel Interferon Inducers” J. Interferon Cytokine Res., 21 pp. 65−73）も含まれる。また、ＷＯ０２／１８３６９、特に２７２頁、１５行目から２７３頁、８行目を参照のこと、この開示内容は、参照により本明細書中に明確に包含される。
【００８８】
当業者に認められる通り、ＶＸ−９５０は、好ましくは経口投与される。インターフェロンは、通常、経口投与されないが、経口投与剤形が開発される。それにもかかわらず、本明細書中、本発明の方法または組み合わせを、何らかの特定の剤形またはレジメンに限定すべきではない。よって、本発明の組み合わせの各構成成分は、個別に、共に、またはその何らかの組み合わせで投与され得る。当業者に認められる通り、インターフェロンの投与量は、一般的に、ＩＵで測定される（例えば、約４００万ＩＵから約１２００万ＩＵ）。インターフェロンはまた、マイクログラム単位で投与され得る。例えば、ＰＥＧ化イントロンの標準的用量は、１．０−１．５μｇ／ｋｇ／週であり、ペガシスのそれは、１８０μｇ／週である。
【００８９】
本発明に関連して用いられるシトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ（“ＣＹＰ”）阻害剤は、ＶＸ−９５０の代謝を阻害すると予想される。それ故に、シトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ阻害剤は、ＶＸ−９５０の代謝を阻害するのに有効な量だろう。従って、ＣＹＰ阻害剤は、ＶＸ−９５０の生物学的利用率またはＶＸ−９５０への暴露が、ＣＹＰ阻害剤の不存在下でのＶＸ−９５０と比較して増加するような量で投与される。ＣＹＰ阻害剤には、リトナビル（ＷＯ９４／１４４３６）、ケトコナゾール、トロレアンドマイシン、４−メチルピラゾール、シクロスポリン、クロメチアゾール、シメチジン、イトラコナゾール、フルコナゾール、ミコナゾール、フルボキサミン、フルオキセチン、ネファゾドン、セルトラリン、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ホスアンプレナビル、サキナビル、ロピナビル、デラビルジン、エリスロマイシン、ＶＸ−９４４およびＶＸ−４９７が含まれるが、これらに限定されない。好ましいＣＹＰ阻害剤には、リトナビル、ケトコナゾール、トロレアンドマイシン、４−メチルピラゾール、シクロスポリンおよびクロメチアゾールが含まれる。
【００９０】
シトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ活性を阻害する化合物の能力を測定するための方法は、公知である（ＵＳ６，０３７，１５７、およびYun, et al. Drug Metabolism ＆ Disposition, vol. 21, pp. 403−407 (1993)を参照のこと)。ＶＸ−９５０およびＣＹＰ阻害剤の対象への共投与の影響を評価するための方法もまた、公知である（ＵＳ２００４／００２８７５５）。かかる方法は全て、組み合わせの薬物動態への影響を決定するために本発明に関連して用いられ得る。
【００９１】
本発明の１つの態様は、ＣＹＰ３Ａ４およびＶＸ−９５０の阻害剤を投与するための方法を提供する。
【００９２】
本明細書中の方法は、ａ）ＶＸ−９５０および他の薬剤の組み合わせ；または、ｂ）２個以上の剤形のＶＸ−９５０、を投与または共投与することを含み得る。共投与は、同一の剤形または異なる剤形にて、各阻害剤を投与することを包含する。異なる剤形で投与されるとき、該阻害剤は、ほぼ同時または他の剤形の投与中のいずれかの時間を含む、異なる時間に投与され得る。分割剤形は、任意の順序で投与され得る。すなわち、いずれかの剤形は、他の剤形の前、共に、またはその後に投与され得る。
【００９３】
ＶＸ−９５０、および何らかのさらなる薬剤を、分割剤形で製剤することができる。あるいは、患者に投与すべき剤形の数を減らすために、ＶＸ−９５０、および何らかのさらなる薬剤を、何らかの組み合わせで製剤できる。いずれかの分割剤形を、同時に、または異なる時間に投与することができる。剤形を、その生物学的効果が有利になるように時間内に投与すべきであることが理解されるはずである。
【００９４】
本発明のレジメンおよび剤形によれば、ＶＸ−９５０は、試料中または患者のウイルス量（該ウイルスは、ウイルス生活環に必須のＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼをコードする）を減少させるのに有効な量（または、本発明の方法を実行するのに有効な量）で、薬学的に許容される担体と共に存在する。あるいは、本発明の組成物には、本明細書中に記載のさらなる薬剤が包含される。各成分は、個々の組成物、組合せ組成物、または単一組成物中に存在し得る。
【００９５】
化合物の薬学的に許容される塩を、これらの組成物に用いるとき、それらの塩は、好ましくは、無機または有機の、酸および塩基から誘導される。そのような酸性塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩（camphorate）、カンファースルホン酸塩（camphor sulfonate）、シクロペンタン−プロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（pectinate）、過硫酸塩、３−フェニル−プロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩およびウンデカン酸塩が含まれる。塩基性塩には、アンモニウム塩、ナトリウムおよびカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩、ＮメチルＤグルカミンのような有機塩基との塩、ならびにアルギニン、リジンのようなアミノ酸との塩などが含まれる。
【００９６】
また、塩基性窒素を含む基は、塩化、臭化およびヨウ化、メチル、エチル、プロピルおよびブチルのような低級ハロゲン化アルキル；硫化ジメチル、硫化ジエチル、硫化ジブチルおよび硫化アミルのような硫化ジアルキル、塩化、臭化およびヨウ化、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルのような長鎖ハロゲン化物、ベンジルおよびフェネチル臭化物のようなハロゲン化アラルキルなどのような物質と四級化し得る。それにより。水または油に可溶性または分散性の生成物が得られる。
【００９７】
本発明の組成物および方法に利用される化合物はまた、選択的な生物学的特性を高めるのに適当な機能性を追加することにより修飾され得る。そのような修飾は、当技術分野で公知であり、一定の生物系（例えば、血液系、リンパ系、中枢神経系）への生物学的浸透を増加し、経口アベイラビリティーを増加し、注射による投与を可能にするための溶解性を増加し、代謝を変化させ、排泄速度を変化させることが含まれる。
【００９８】
これらの組成物に用いることのできる薬学的に許容される担体には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸のような部分的グリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの基質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂のような塩または電解質が含まれるが、これらに限定されない。
【００９９】
好ましい態様によれば、本発明の組成物を、哺乳動物、特にヒトに対する薬剤投与のために製剤する。
【０１００】
かかる本発明の医薬組成物（ならびに、本発明の、方法において使用するための組成物、組み合わせ、キットおよびパッケージ）を、経口で、非経腸で、舌下に、吸入スプレーにより、局所に、経直腸に、経鼻的に、口腔内に、経膣的に、または埋め込みリザーバー（implanted reservoir）により投与することができる。本明細書中で用いる用語“非経腸”には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病変内および頭蓋内注射または注入技術が含まれる。好ましくは、前記組成物を、経口または静脈内投与する。より好ましくは、前記組成物を経口投与する。
【０１０１】
本発明の組成物の滅菌注射剤は、水性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適する分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤を用いて、当技術分野で公知の技術により製剤することができる。前記滅菌注射製剤はまた、非毒性の非経腸投与可能な希釈剤または溶媒中、例えば１，３−ブタンジオール溶液として、滅菌注射溶液または懸濁液であり得る。用いることのできる許容されるビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル溶液および生理食塩水である。さらに、滅菌した不揮発性油が、溶媒または懸濁化媒体として都合よく用いられる。この目的に関して、合成モノまたはジグリセリドを含む、何らかの無菌性の不揮発性油を用いることができる。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体のような脂肪酸が、注射剤の製造において、オリーブ油またはヒマシ油のような天然の薬学的に許容される油、とりわけそれらのポリオキシエチル化型として有用である。これらの油剤または油懸濁液にはまた、エマルジョンおよび懸濁液を含む薬学的に許容される剤形の構築において通常用いられる、カルボキシメチルセルロースまたは類似の分散剤のような、長鎖アルコール希釈剤または分散剤が含まれ得る。他の通常用いられる、トゥイーン系、スパン系（Span）および他の乳化剤のような界面活性剤、または薬学的に許容される固体、液体または他の剤形の製造に通常用いられる生物学的利用率のエンハンサーはまた、製剤目的に使用することもできる。
【０１０２】
ＶＸ−９５０およびさらなる薬剤を含む本発明の組成物において、ＶＸ−９５０および前記さらなる薬剤は、約１０から１００％の投与量レベルで存在すべきであり、より好ましくは、単剤療法レジメンにおいて通常投与される投与量の約１０から８０％で存在すべきである。
【０１０３】
本発明の医薬組成物は、カプセル、錠剤、ピル、粉剤、粒剤、水性懸濁液または溶液を含むが、これらに限定されない何らかの経口的に許容される剤形で経口投与され得る。経口用錠剤の場合において、通常用いられる担体には、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムのような滑剤もまた、一般的に添加される。カプセル形態での経口投与に関して、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁液が経口用に必要とされるとき、活性成分を、乳化剤および懸濁化剤と結合させる。要すれば、ある甘味剤、香味剤または着色剤を、添加することもできる。許容される液体剤形には、乳剤、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤が含まれる。
【０１０４】
あるいは、本発明の医薬組成物は、直腸投与用に坐剤の形態で投与され得る。これらは、前記薬剤と、室温で固体であるが、直腸温で液体であり、故に直腸で薬剤を放出し得る、適する無刺激性の賦形剤を混合することにより製造できる。そのような物質には、ココアバター、蜜蝋およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１０５】
本発明の医薬組成物はまた、とりわけ処置の標的が、眼、皮膚、または下部消化管の疾患を含む、局所適用により到達しやすい領域または器官を含むとき、局所投与され得る。適する局所製剤は、これらの領域または器官のそれぞれ用に容易に製造される。
【０１０６】
当技術分野で認識される通り、医薬組成物はまた、リポソームの形態で投与することができる。
【０１０７】
本発明者らは、ＶＸ−９５０が、経口投与可能であることを証明した。従って、本発明の好ましい医薬組成物は、経口投与用に製剤される。
【０１０８】
ＣＹＰ阻害剤に関して、１日につき体重１ｋｇ当たり約０．００１から約２００mgの投与量レベルが、典型的であろう。より典型的には、１日当たり約０．１から約５０mg/kg、または約１．１から約２５mg/kgの間の投与量レベルであり得る。
【０１０９】
リトナビルの好ましい剤形に関しては、米国特許第６，０３７，１５７号、およびそこに引用される文献：米国特許第５，４８４，８０１号、米国特許出願第０８／４０２，６９０号、および国際特許出願ＷＯ９５／０７６９６およびＷＯ９５／０９６１４を参照のこと)。
【０１１０】
本発明に関係する投与を、長期または短期療法として用いることができる。単一剤形を製造するために担体物質と結合され得る活性成分の量は、処置する宿主および特定の投与方法に依存して変化し得る。典型的な製剤は、約５％から約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含み得る。好ましくは、かかる製剤は、約２０％から約８０％の活性化合物を含む。
【０１１１】
患者の状態が改善された場合、本発明の化合物、組成物または組み合わせの維持量を、必要ならば、投与することができる。その後、投与の投与量あるいは頻度、または両方を、その症状の関数として、改善された状態が、症状が所望のレベルに軽減され、処置を終えるべきときを維持するレベルに減らすことができる。しかしながら、患者は、疾患症状の何らかの再発により長期的に断続的な処置を必要とし得る。
【０１１２】
何らかの特定の患者に対する特定の投与量および処置レジメンが、用いる特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、混合薬、担当医の判断、および処置すべき特定の疾患の重症度、これまでの治療歴、共存疾患または併用薬、ベースラインのウイルス量、種、疾患の期間、肝機能の状態および肝線維症／肝硬変の程度、ならびに治療目標（移植によるウイルス循環の排除またはウイルスの根絶)を含む、様々な因子に依存して変化し得ることも理解されるべきである。活性成分の量は、特定の記載した化合物、組成物中のさらなる抗ウイルス剤の存在または不存在、および性質にも依存し得る。
【０１１３】
他の態様によれば、本発明は、本発明の薬学的に許容される組成物を該患者に投与することにより、ウイルスの生活環に必要なＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼをコードするウイルスにより特徴付けられるウイルスに感染した患者を処置するための方法を提供する。好ましくは、本発明の方法は、ＨＣＶ感染を有する患者の処置に用いられる。かかる処置は、ウイルス感染を完全に根絶するか、またはその重症度を低減し得る。好ましくは、患者は哺乳動物である。より好ましくは、患者はヒトである。
【０１１４】
本明細書中の投与量は、好ましくはインビボでの使用用である。それにもかかわらず、これは、目的に応じてこれらの量のＶＸ−９５０の使用に限定されるものと意図されない。さらに他の態様において、本発明は、生物学的物質と、本発明の化合物を含む薬学的に許容される組成物を結合する段階を含む、患者に投与することを目的として該生物学的物質を前処理する方法を提供する。かかる生物学的物質には、血液および血漿、血小板、血液細胞の亜集団などのその成分；腎臓、肝臓、心臓、肺などの器官；精子および卵子；骨髄およびその成分、ならびに食塩水、デキストロースなどの患者に注入される他の液体が含まれるが、それらに限定されない。
【０１１５】
本発明はまた、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを組み合わせる段階を含む、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含む組成物を製造するための方法を提供する（ここで、組成物中のＶＸ−９５０の投与量は、本発明のいずれかの態様と一致する。）。本発明の別の態様は、前記組成物が、本明細書中に記載の１個またはそれ以上のさらなる薬剤を含む方法を提供する。
【０１１６】
本発明はまた、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩を、本明細書中に記載の投与量で含む治療レジメンを提供する。本発明の別の態様において、治療レジメンはさらに、本明細書中に記載の１個またはそれ以上のさらなる薬剤を含む。
【０１１７】
医薬組成物はまた、単一パッケージ、通常ブリスターパッケージに一連の処置全体を含む“患者パック（patient pack）”で患者に処方され得る。患者パックは、患者が、従来の処方において通常紛失される患者パックに含まれる添付文書をいつでも利用できる点で、薬剤師が、大量購入物から患者への薬剤分配を行なう従来の処方よりも有利である。添付文書の包含は、患者に医者の指示の順守を改善させることが明らかにされている。
【０１１８】
患者が本発明の正しい使用をするように指示する添付文書を包含する単一の患者パック、または各製剤の患者パックを用いる本発明の組み合わせの投与は、本発明の望ましいさらなる特徴であることが理解されるだろう。
【０１１９】
さらなる局面によれば、本発明は、少なくともＶＸ−９５０（本発明の投与量）および本発明の組み合わせの使用指示書を含む添付情報を含むパッケージである。何らかの組成物、剤形、治療レジメンまたは本発明の他の態様は、医薬的パッケージで存在し得る。本発明の別の態様において、前記医薬的パッケージは、本明細書中に記載の１個以上のさらなる薬剤をさらに含む。さらなる薬剤または複数の薬剤は、同一のパッケージまたは異なるパッケージで提供され得る。
【０１２０】
本発明の他の局面は、各医薬成分の単一または複数の医薬製剤；貯蔵中および投与前に医薬製剤（複数可）を保存する容器；および、ＨＣＶ感染を処置または予防するのに有効な方法で薬剤投与を行うための指示書を含む、ＨＣＶ感染の処置またはＨＣＶ感染の予防における患者への使用のための（または、本発明の他の方法における使用のための）パッケージ化されたキットを包含する。
【０１２１】
従って、本発明は、ＶＸ−９５０（および、所望によりさらなる薬剤）の用量の同時または連続投与のためのキットを提供する。典型的に、そのようなキットは、例えば、薬学的に許容される担体中（および、単一または複数の医薬製剤中）、各化合物の組成物および任意のさらなる薬剤（複数可）、ならびに同時または連続投与のための指示書を含み得る。
【０１２２】
他の態様において、パッケージキットは、自己投与のための１個またはそれ以上の剤形；貯蔵中および使用前に前記剤形を保存するための、好ましくは密閉された容器；および、薬剤投与を行うための指示書を包含して提供される。指示書は、一般的に、添付文書、ラベル、および／またはキットの他の成分の指示書であり、剤形または複数の剤形が、本明細書中に記載されている。各剤形は、一枚の金属箔−プラスチック薄板で形成される個々の空間（cell）または半球形（bubble）中に、他から分離されたそれぞれの剤形を包含させるか、または剤形は、プラスチック容器のような単一の容器中に包含され得る。本発明のキットはまた、典型的には、個々のキット成分をパッケージングするための手段、すなわち、剤形、容器、および使用のための指示書を含み得る。そのようなパッケージング手段は、段ボール箱または紙箱、プラスチック容器または金属箔容器などの形態であり得る。
【０１２３】
本発明のキットは、何らかの組成物、剤形、治療レジメン、または医薬的パッケージのような、本発明のいずれかの局面を具現化し得る。
【０１２４】
本発明のパッケージおよびキットは、所望により、複数の組成物または剤形を含む。従って、本発明は、１個の組成物または２個以上の組成物を含むパッケージおよびキットであり得る。
【０１２５】
ある例示的態様は、下記に描写および記載されているが、本発明の化合物を、当業者に一般的に利用可能な適当な出発物質を用いて、概して上記に記載の方法に従い製造することができることは、当然のことである。
【０１２６】
全ての引用文献は、参照により本明細書中に包含される。
【０１２７】
本発明をより十分に理解するために、下記に調製および実験例を記載する。これらの実施例は、説明のみを目的とし、いかなる点でも本発明の範囲を制限するものと解釈してはならない。
【実施例】
【０１２８】
実施例１
ＨＣＶレプリコン細胞分析プロトコール
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）レプリコンを含む細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、０．２５mg／ｍｌのＧ４１８、適当な添加剤を含むＤＭＥＭ（媒体Ａ）中で維持した。
【０１２９】
１日目に、レプリコン細胞単層を、トリプシン：ＥＤＴＡ混合物で処理し、除き、その後、媒体Ａを、最終濃度１００，０００細胞／ｍｌまで希釈した。１０，０００細胞／１００μｌを、９６ウェル組織培養プレートの各ウェル中に播種し、３７℃にて、組織培養インキュベーター中で一晩培養した。
【０１３０】
２日目、化合物（１００％ＤＭＳＯ中）を、２％ＦＢＳ、０．５％ＤＭＳＯ、適当な添加剤を含むＤＭＥＭ（媒体Ｂ）中に連続的に希釈した。ＤＭＳＯの最終濃度を、一連の希釈を通して０．５％に維持した。
【０１３１】
レプリコン細胞単層上の媒体を除去し、その後、様々な濃度の化合物を含む媒体Ｂおｗ添加した。化合物を含まない媒体Ｂを、化合物なしの対照として、他のウェルに添加した。
【０１３２】
細胞を、３７℃の組織培養インキュベーター中、化合物または０．５％ＤＭＳＯを含む媒体Ｂ中で、４８時間インキュベートした。４８時間のインキュベーションの最後に、媒体を取り除き、レプリコン細胞単層をＰＢＳで一度洗浄し、ＲＮＡ抽出前に−８０℃で貯蔵した。
【０１３３】
処理したレプリコン細胞単層を含む培養プレートを解凍し、一定量のウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）のような他のＲＮＡウイルスを、各ウェルにて細胞に添加した。ＲＮＡ抽出試薬（ＲＮｅａｓｙキットの試薬のような）を、ＲＮＡ分解を避けるために細胞に直ちに添加した。全ＲＮＡを、抽出効率および一貫性を改善するための改良を含む、製造業者の指示書に従って抽出した。最後に、ＨＣＶレプリコンＲＮＡを含む全細胞ＲＮＡを、溶出させ、さらなる処理まで−８０℃で貯蔵した。
【０１３４】
ＴａｑｍａｎリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ定量化分析を、特定のプライマーおよびプローブの２個のセットを用いて行った。１つは、ＨＣＶについて、もう１つは、ＢＶＤＶについて行った。処理したＨＣＶレプリコン細胞由来の全ＲＮＡ抽出物を、同じＰＣＲウェル中に、ＨＣＶおよびＢＶＤＶ ＲＮＡの両方の定量のために、ＰＣＲ反応に追加した。実験的失敗に印をつけ、各ウェル中のＢＶＤＶ ＲＮＡレベルを基に却下した。各ウェル中のＨＣＶ ＲＮＡのレベルを、同じＰＣＲプレートで実行する標準曲線に従い計算した。化合物処理によるＨＣＶ ＲＮＡレベルの阻害または減少の割合を、ＤＭＳＯを用いて計算し、化合物なしの対照を０％阻害とした。ＩＣ５０（ＨＣＶ ＲＮＡレベルの５０％阻害が見られる濃度）を、いずれかの既知化合物の滴定曲線から計算した。
【０１３５】
ＶＸ−９５０は、レプリコン分析において顕著な活性を証明された。ＶＸ−９５０は、２４０ng/mLのＩＣ５０および４７６ng/mLのＩＣ９０を有することが示された。
【０１３６】
実施例２
ＨＣＶ Ｋｉ分析プロトコール
５ＡＢ基質および産物の単離のためのＨＰＬＣマイクロボア方法
基質：
ＮＨ２−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−（α）Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−ＣＯＯＨ。
【０１３７】
２０ｍＭ ５ＡＢの原液（または、選択した濃度）を、ＤＭＳＯ ｗ／０．２Ｍ ＤＴＴで作製した。これを、−２０℃にて、アリコートで貯蔵した。
【０１３８】
緩衝液：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．８；２０％グリセロール；１００ｍＭ ＮａＣｌ。
【０１３９】
全分析量は、１００μＬである。
【表１】
2008518943.tif 000004
【０１４０】
緩衝液、ＫＫ４Ａ、ＤＴＴ、およびｔＮＳ３を合わせ；９６ウェルプレートの各ウェルに各７８μＬずつ分配した。これを、３０℃で５から１０分間、インキュベートした。
【０１４１】
２．５μＬの適当な濃度の試験化合物を、ＤＭＳＯ中に溶解し（ＤＭＳＯのみを対照とする）、各ウェルに添加した。これを、室温で１５分間、インキュベートした。
【０１４２】
２０μＬの２５０μＭ ５ＡＢ基質の添加により反応を開始し（２５μＭ濃度は、５ＡＢのＫｍ値と等しいかわずかに低い）、
３０℃で２０分間、インキュベートし、
２５μＬの１０％ＴＦＡを添加して反応を終了し、
ＨＰＬＣバイアルに１２０μＬアリコートを移した。
【０１４３】
下記の方法により、基質およびＫＫ４Ａから単離したＳＭＳＹ産物：
マイクロボア単離方法：
装置：
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００
Ｄｅｇａｓｓｅｒ Ｇ１３２２Ａ
Ｂｉｎａｒｙ ｐｕｍｐ Ｇ１３１２Ａ
Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ Ｇ１３１３Ａ
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｅｄ ｃｈａｍｂｅｒ Ｇ１３１６Ａ
Ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ Ｇ１３１５Ａ
カラム：
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ；５マイクロン Ｃ１８；３００オングストローム；１５０×２ｍｍ；Ｐ／Ｏ ００Ｆ−４０５３−Ｂ０
カラム温度自動調節器：４０℃
注入量：１００μＬ
溶媒Ａ＝ＨＰＬＣ等級純水＋０．１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ＝ＨＰＬＣ等級アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
【０１４４】
【表２】
2008518943.tif 000005
停止時間：１７分
実行後：１０分。
【０１４５】
実施例３
ＶＸ−９５０を無作為化、二重盲検、プラセボ−対照、単回用量漸増試験において調べた。２５名の健康な男性ボランティアが登録された。各対象は、ＶＸ−９５０の複数の単回用量を、少なくとも７日間、３種の用量のＶＸ−９５０を増加用量で、そして１種の用量のプラセボを個別に受けた。
【０１４６】
２５mgから１２５０mgの用量を評価した。２倍ずつ増量しながら、より低用量範囲で攻撃的であり、より高用量範囲で保守的になるようにフィボナッチ数を変更した、用量漸増スキームを用いた。
【０１４７】
ＶＸ−９５０は、全ての用量レベルで良好な耐容性を示し、重大な有害事象は、試験中には報告されなかった。用量の増加により有害事象が増加することはなかった。
【０１４８】
薬物動態分析を、統計学的モーメント手法を用いて行った。図１Ａおよび図１Ｂは、平均濃度−時間プロフィールを説明する。選択した導き出された薬物動態パラメーターを、図２Ａ−２Ｄに示す。薬物動態分析が、ＶＸ−９５０が、３時間の平均ｔｍａｘで吸収されたことを示した。２％未満のＶＸ−９５０は、尿中で変化なく除かれ、薬剤が、主に代謝経路から排泄されることを示す。
【０１４９】
実施例４
感染ウイルス分析
ＶＸ−９５０は、感染ウイルス分析において、１９６ng/mLのＩＣ５０を証明した。
【０１５０】
実施例５
ＶＸ−９５０を、２４名の健康な対象および３４名のＣ型肝炎陽性対象において、無作為化、プラセボ−対照、反復投与、盲検、用量漸増試験で調べた。
【０１５１】
健康な対象を、３つのパネルにそれぞれ８名の対象に分けた。各パネルにおいて、６名の対象がＶＸ−９５０を受容し、２名の対象がプラセボを受容した。健康な対象に、５日間連続して、４５０mg、７５０mg、または１２５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎に投与した。前記健康な対象は、１８歳から６５歳までであり（１８歳と６５歳を含む）、肝炎Ｂ、Ｃ型肝炎、およびＨＩＶ陰性であった。男性は、１８．５−２９．０ｋｇ／ｍ２（１８．５ｋｇ／ｍ２と２９．０ｋｇ／ｍ２を含む）の肥満度指数を有していた。女性は、１８．５−３２．５ｋｇ／ｍ２（１８．５ｋｇ／ｍ２と３２．５ｋｇ／ｍ２を含む）の肥満度指数を有していた。
【０１５２】
Ｃ型肝炎（遺伝子型１型）陽性の対象を、３つのパネルにそれぞれ１２名の対象に分けた。各パネルにおいて、１０名の対象がＶＸ−９５０を受容し、２名の対象がプラセボを受容した；７５０mgを８時間毎の群において、２名の対象が、ＶＸ−９５０を受容した８名の対象およびプラセボを受容した２名の対象よりも早く投与を中止した。ＨＣＶ陽性対象に、１４日間連続して、４５０mgまたは７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎、または１２５０mgのＶＸ−９５０を１２時間毎に投与した。
【０１５３】
ＶＸ−９５０は、全ての用量で良好な耐容性を示し、重大な有害事象は、試験中には報告されなかった；軽度および中程度の有害事象が、報告された。全ての対象が、試験を完了した。増加用量で有害事象が増加することはなかった。
【０１５４】
ＨＣＶ陽性対象について、下記の対象の割合が、プラセボ、４５０mg、８時間毎、７５０mg、８時間毎、および１２５０mg、１２時間毎の群それぞれの未治療患者の割合：３３．２％、１０％、１２．５％、および３０％であった。
【０１５５】
ＨＣＶ陽性対象を、処置後、ＨＣＶ ＲＮＡレベルがベースラインに戻るまで測定するために試験した。
【表３】
2008518943.tif 000006
【０１５６】
＊４名の患者由来の試料は、それが、遺伝子型１ａ型または１ｂ型であるかどうかを決定することができない分析のため、遺伝子型１型として分類した。
ＢＭＩ、肥満度指数；ＨＣＶ、Ｃ型肝炎ウイルス；ｑ８ｈ、８時間毎；ｑ１２ｈ、１２時間毎；ＳＤ、標準偏差。
ベースラインからのＨＣＶ ＲＮＡの変化、ＶＸ０４−９５０−１０１で試験した。
【０１５７】
【表４】
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値は、ｎ（％）である。ｑ８ｈ、８時間毎；ｑ１２ｈ、１２時間毎。
【０１５８】
実施例６
経口投与量剤形を、下記の通りに製造した。ＶＸ−９５０およびポビドンＫ２９／３２を塩化メチレン中に溶解し、その後、ラウリル硫酸ナトリウムを添加し、均一な懸濁液を形成するために溶液を分散させた。この懸濁液を、９０℃の入り口温度および５６℃の出口温度を用いてスプレー乾燥させ、生成物をサイクロンから集めた。スプレー乾燥した分散物を、７５℃で８時間、流動層乾燥させた。得られた粉末を、ガラスバイアル中で前もって測定し、投与直前に、対象への投与のために水（３０ｍＬ）に懸濁した。投与に関して、各バイアルを、水全量が９０ｍＬである水の３分割量で洗浄した。
【表５】
2008518943.tif 000008
【０１５９】
実施例７
ＨＣＶ ＲＮＡの検出を、Roche molecular Diagnosticsから市販されているＲｏｃｈｅ ＣＯＢＡＳ ＴａｑＭａｎ ＨＣＶ／ＨＰＳ分析器を用いて行った。他の分析器も利用可能である。
【０１６０】
実施例８
血清ネオプテリン濃度を、処置前、７日目および１４日目、ならびに処置後７−１０日目に、定量的競合ＥＬＩＳＡ（ＥＬＩｔｅｓｔ（登録商標）ネオプテリン、Brahms, Hennigsdorf, Germany）で測定した。検出下限（ＬＬＤ）は、２nmol/lであった。
【０１６１】
実施例９
血清ＡＬＴを、商業的に利用可能な方法で測定した。
【０１６２】
実施例１０
ヒト血漿中、ＶＸ−９５０の確認方法
ＶＸ−９５０
原液：２−プロパノール中、０．９６１mg／ｍｌのＶＸ−９５０（１０．０ｍｌ）
希釈した原液１：２−プロパノール中、９６．１μｇ／ｍｌのＶＸ−９５０（５．００ｍｌ）
希釈した原液２：２−プロパノール中、９．６１μｇ／ｍｌのＶＸ−９５０（１０．０ｍｌ）
希釈した原液３：２−プロパノール中、０．９６１μｇ／ｍｌのＶＸ−９５０（１０．０ｍｌ）
原液および希釈した原液を、ふた付きホウケイ酸チューブ（１１．５ｍｌ）中、−２０℃で貯蔵した。
【０１６３】
９．１．３  内部標準（化合物１）
原液：２−プロパノール中、１．００mg／ｍｌの化合物１（ＶＸ−９５０の閉環構造類似体）（５．００ｍｌ）
希釈溶液（working solution）：アセトニトリル中、３００ng/mLの化合物１（１００ｍｌ）
原液を、ふた付きホウケイ酸チューブ（１１．５ｍｌ）中で、希釈溶液を、ふた付きホウケイ酸チューブ（１００ｍｌ）中で、全て−２０℃で保存した。
【０１６４】
試料調製
血漿１００μｌのアリコート、１００μｌの内部標準希釈溶液（または、空試料用のアセトニトリル）を、抽出チューブに添加した。３０秒間ボルテックス混合後、５００μｌのトルエンを添加し、抽出を３０秒間のボルテックス混合により行った。＋４℃にて５分間、３０００ｒｐｍでの遠心後、水層をアセトン混合物およびドライアイス中で凍結し、有機層を別のチューブに移した。５０μｌの２，２−ジメトキシプロパンを添加し、試料を、約＋３０℃にて、窒素下で、乾燥するまで蒸発した。残渣を、３００μｌのヘプタン：アセトン（９０：１０、ｖ／ｖ）［または、ヘプタン：ＴＨＦ（８０：２０、ｖ／ｖ）］中に、６０秒間のボルテックス混合により再溶解した。試料を、注入バイアルに移し、６０μｌのアリコートを、クロマトグラフ系に注入した。
【０１６５】
クロマトグラフ条件
移動相：（定組成溶出）ヘプタン：アセトン：メタノール（８０：１９：１、ｖ／ｖ／ｖ）
作製（Make−up）溶媒：アセトニトリル：アセトン：メタノール：ギ酸（４０：６０：１：１、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）
カラム温度：−１℃
流速：１．００ｍｌ／分（その内：０．７５０ｍｌ／分が移動相および０．２５０ｍｌ／分が、作製溶媒）（検出器に完全に移る）
注入量：６０μｌ
オートサンプラー温度：＋３℃。
【０１６６】
さらなる参考文献
Wasley A, Alter MJ. Epidemiology of hepatitis C: geographic differences and temporal trends. Semin liver Dis 2000;20:1−16.
Alter HJ, Seeff LB. Recovery, persistence, and sequelae in hepatitis C virus infection: a perspective on long−term outcome. Semin liver Dis 2000;20:17−35.
Brown RS Jr, Gaglio PJ. Scope of worldwide hepatitis C problem. liver Transpl 2003;9:S10−S13.
DeFrancesco R, Migliaccio G. Challenges and successes in developing new therapies for hepatitis C. Nature 2005;436(7053):953−60.
Bowen DG, Walker CM. The origin of quasispecies: cause or consequence of chronic hepatitis C viral infection? J Hepatol 2005;42:408−17.
Hoofnagle JH. Course and outcome of hepatitis C. Hepatology 2002;36:S21−S29.
Brown RS Jr. hepatitis C and liver transplantation. Nature 2005;436(7053):973−8.
Chisari FV. Unscrambling hepatitis C virus−host interactions. Nature 2005;436(7053):930−2。
【０１６７】
本明細書中に引用される全ての文献は、参照により本明細書中に包含される。
【０１６８】
本発明者らは、本発明の多数の態様を記載しているが、本発明者らの基本例を、本発明の化合物および方法を利用する他の態様を提供するために変形してもよいことは、明白である。故に、本発明の範囲は、上記の実施例として示されている特定の態様というよりむしろ、添付の特許請求の範囲により定義されるべきであることは、当然である。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】図１Ａおよび図１Ｂは、用量レベルによる平均濃度時間プロフィールを示す（実施例３）。
【図２】図２Ａ−２Ｄは、誘導された薬物動態パラメーターを示す。棒グラフ内の線は中央値を示し、棒グラフは、データの中央半分の範囲を示す（実施例３）。
【図３】図３は、１４日間の試験期間中のＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU/mL)を示す（実施例５）。
【図４】図４は、１４日間の試験期間中のベースラインと比べたＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU/mL)の変化を示す（実施例５）。
【図５】図５は、７５０mgを８時間毎の投与群における、個々の対象についての１４日間の試験期間中のベースラインと比べたＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU/mL)の変化を示す（実施例５）。
【図６】図６は、全ての投与群におけるネオプテリン、ＡＬＴ（アラニンアミノ転移酵素）、およびＨＣＶ ＲＮＡの平均値±ＳＥＭを示す。下記の記号を図６において用いる：ＡＬＴレベルの平均±ＳＥＭ（上、白抜き記号の４本線）、ネオプテリン血漿濃度の平均±ＳＥＭ（中、白抜き記号の４本線）、および血漿ＨＣＶ ＲＮＡ負荷の平均±ＳＥＭ（下、黒塗り記号の４本線）におけるベースラインからの変化を、３つ全ての投与群およびプラセボについて示す。患者を、ＶＸ−９５０で１４日間処置した。＊４５０mgを８時間毎の群における１２日目の平均ＡＬＴレベルの一過性増加は、アーチファクトである（１０症例中５症例には見られなかった、中央値３８U/l、範囲２５−１２５U/l）（実施例５）。
【図７】図７は、全ての群におけるネオプテリン値の平均±ＳＥＭを示す。３つ全ての投与群およびプラセボについての、処置前、７日目および１４日目のネオプテリン血漿濃度の平均±ＳＥＭ。平均ネオプテリンの減少は、処置前に最高値であり、１４日目に最低の平均値を示す、７５０mgを８時間毎の投与群で最大であることに留意すべきである。７５０mgを８時間毎の投与群において、ベースラインおよびプラセボと比較したネオプテリンの減少は、１４日目に最大となった（＊対応のない両側ｔ検定、＊＊Mann Whitney検定）。Ｙ＝７．７nmol/lの横破線は、ＵＬＮを示す（実施例５）。
【図８】図８（ＩＦＮ−β、ＴＲＩＦまたはＴＩＣＡＭ−１を誘導するアダプターを含むtoll−IL1受容体ドメイン）は、様々なタンパク質結合ドメインを示すＴＲＩＦの略図を示す。Ｃｙｓ３７２でのＨＣＶ ＮＳ３ プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断により、２つの断片−ΔＣ３４０およびΔＮ３７２が生じる（Li et al 2005, PNAS, 102, p2992−2997の改訂版）。
【図９】図９は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断の速度（kinetics）を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦタンパク質インビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０−２４０分の範囲の様々な時間、６μＭのｔＮＳ３ プロテアーゼと共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。ゲルを、切断産物を定量するために、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、時間関数として図中に示す。
【図１０】図１０は、ＮＳ３ プロテアーゼ依存的ＴＲＩＦ切断およびＶＸ−９５０によるＴＲＩＦ切断の阻害を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦタンパク質インビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、１０μＭ ＶＸ−９５０の存在下（○）または不存在下（□）のどちらかで、０−４μＭの範囲のｔＮＳ３ プロテアーゼ酵素の増加濃度下でインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【図１１】図１１は、ＶＸ−９５０耐性変異体のインビトロでの表現型の特徴を示す。野生型プロテアーゼと比較してＶＸ−９５０に対する増加した耐性が、インビトロ酵素反応（Ｋｉ）または２日間のレプリコン分析（ＩＣ５０）において、Ａ１５６Ｖ／Ｔ変異により得られた。野生型酵素と比較した変異体のＫｃａｔ／Ｋｍ比を、表に示す(Lin et al 2005, JBC, 280, p36784−36791の改訂版)。
【図１２】図１２は、野生型（ＷＴ）ＮＳ３プロテアーゼと比較したＡ１５６Ｖ／Ｔ変異体によるＨＣＶ ４Ａ／Ｂ基質の切断を示す：３５Ｓメチオニン標識結合、間に４Ａ／Ｂ結合点を有するＳＥＡＰタンパク質と融合した不活性化ＨＣＶ変異プロテアーゼのインビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０．００８μＭから６μＭの範囲の野生型（ＷＴ）（□）またはＡ１５６Ｖ／Ｔ（△および○）ｔＮＳ３ プロテアーゼのどちらかの変化量と共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【図１３】図１３は、野生型（ＷＴ）ＮＳ３プロテアーゼと比較したＡ１５６Ｖ／Ｔ変異体によるＴＲＩＦ基質の切断を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦのインビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０．００８μＭから６μＭの範囲の野生型（ＷＴ）（□）またはＡ１５６Ｖ／Ｔ（△および○）ｔＮＳ３プロテアーゼのどちらかの変化量と共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【図１４】図１４は、ベースライン、７日目、および１４日目における平均ＨＣＶ ＲＮＡ、ネオプテリンおよびＡＬＴを示す（実施例５）。
【図１５】図１５は、センダイウイルスで刺激したＨｕｈ７細胞におけるＨＣＶプロテアーゼによるＩＦＮ−βプロモーター活性の抑制を示す。Ｈｕｈ７細胞を、野生型（ＷＴ）または不活性変異体（ＭＴ）プロテアーゼのどちらかと、ＩＦＮ−βプロモーター制御下でルシフェラーゼ遺伝子を発現するプラスミドで共トランスフェクトし、次いでセンダイウイルス（ＳｅＶ）で刺激した。センダイウイルス非誘導性対照と比較したルシフェラーゼ遺伝子の活性化倍数を、この図に示す。
【図１６】図１６は、ＶＸ−９５０を用いる処理が、センダイウイルス刺激ＩＦＮ−βプロモーター活性に対するＨＣＶプロテアーゼの抑制効果を克服し得ることを示す。Ｈｕｈ７細胞を、野生型（ＷＴ）または不活性化変異体（ＭＴ）プロテアーゼのどちらかと、ＩＦＮ−βプロモーターの制御下でルシフェラーゼ遺伝子を発現するプラスミドで共トランスフェクトした。これらの細胞を、ＤＭＳＯ（対照）または１０μＭ ＶＸ−９５０のどちらかで処理した。細胞をセンダイウイルス（ＳｅＶ）で刺激し、ルシフェラーゼ活性を感染の１６時間後に測定した。センダイウイルス非誘導性対照と比較したルシフェラーゼ遺伝子の活性化倍数を、この図に示す。
【図１７Ａ】図１７Ａは、ＶＸ−９５０処置が、ＨＣＶ治療に以前非応答性であった患者においてＨＣＶ ＲＮＡの減少をもたらすというデータを示す。各処置レジメンにおける患者の平均ＨＣＶ ＲＮＡレベルを示す。血漿ＨＣＶ ＲＮＡ濃度を、Ｒｏｃｈｅ ＣＯＢＡＳ ＴａｑＭａｎ ＨＣＶ／ＨＰＳ分析を用いて決定した。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、ＶＸ−９５０処置が、未処置患者においてＨＣＶ ＲＮＡの減少をもたらすというデータを示す。各処置レジメンにおける患者の平均ＨＣＶ ＲＮＡレベルを示す。血漿ＨＣＶ ＲＮＡ濃度を、Ｒｏｃｈｅ ＣＯＢＡＳ ＴａｑＭａｎ ＨＣＶ／ＨＰＳ分析を用いて決定した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【国際調査報告】
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