(57)【要約】本発明は、免疫応答を刺激するのに有用な、短いＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドのクラスに関する。好ましくは、この短いオリゴヌクレオチドは、軟質または半軟質オリゴヌクレオチドである。本発明は、ＢクラスおよびＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドならびに他の安定化免疫刺激性オリゴヌクレオチドの免疫刺激特性が、特定のヌクレオチド間の１つ以上の安定化されていない結合を選択的に含めることによって維持され得るか、またはさらには改善され得ることに基づく。
2008531018.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有する少なくとも一つのＹＺジヌクレオチドと、少なくとも４つのＴヌクレオチドとを含む、長さ３〜２４ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドであって、ここでＹは、ピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドであり、Ｚは、グアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドであり、かつ、該オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
ＴＴＴＴモチーフを含む、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
唯一のＹＺジヌクレオチドを有する、請求項２に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
請求項３に記載のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ（配列番号１６）またはＧ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号１１）であり、ここで、＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいい、そして＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう、オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
２つのＹＺジヌクレオチドのみを有する、請求項２に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
請求項５に記載のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号３）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ（配列番号１０）、Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１２）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１３）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号１４）、およびＧ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号１５）からなる群より選択され、ここで、＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいい、そして＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう、オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
請求項２に記載のオリゴヌクレオチドであって、３つのＹＺジヌクレオチドのみを有する、オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７に記載のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号８）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号９）、およびＴ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ（配列番号１０）からなる群より選択され、ここで、＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいい、そして＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう、オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
請求項２に記載のオリゴヌクレオチドであって、４つのＹＺジヌクレオチドのみを有する、オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項９に記載のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号４）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号５）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＿Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＿Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号６）、Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１７）、Ｔ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１８）、Ｔ＊ＭｅＣ＿Ｇ＊Ｔ＊ＭｅＣ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊ＭｅＣ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊ＭｅＣ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１９）、Ｔ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２０）、Ｔ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２１）、およびＵ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｕ（配列番号２２）からなる群より選択され、ここで＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいい、＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいい、Ｉはヒポキサンチン塩基を含むイノシンであり、ＭｅＣは５’−メチル−シトシンであり、Ｈは、５−ヒドロキシ−シトシンであり、７は、７−デアザ−グアニンであり、そしてＵはウラシルである、オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
各々のＹＺジヌクレオチドがホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有する、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
Ｙがメチル化されていないシトシンを含むヌクレオチドである、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
Ｚがグアニンを含むヌクレオチドである、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
前記ホスホジエステル様結合が、ボラノホスホネートまたはジアステレオ異性体的に純粋なＲｐホスホロチオエートである、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
前記安定化されたヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、およびこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
Ｙが、シトシン、または、５−メチルシトシン、５−メチルイソシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ハロゲン化シトシン、ウラシル、Ｎ４−エチルシトシン、５−フルオロウラシル、および水素からなる群より選択される改変シトシン塩基を含むヌクレオチドである、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
Ｚが、グアニン、または、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、８−ヒドロキシグアニンのような８−置換グアニンおよび６−チオグアニン、２−アミノプリン、および水素からなる群より選択される改変グアニン塩基を含むヌクレオチドである、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
１つまたは２つの接近可能な５’末端を有する３’−３’結合を有する、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
請求項１に記載のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、２つの接近可能な５’末端を有し、これらの各々が５’ＴＣＧである、オリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
２〜７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有する少なくとも一つのＹＺジヌクレオチドを有し、ここで、Ｙはピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドであり、Ｚはグアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドであり、そして該オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
唯一のＹＺジヌクレオチドを有する、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項２０に記載のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２３）、Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２４）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２５）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２６）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ（配列番号２７）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ（配列番号２８）、Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２９）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号３０）、およびＣ＿Ｇ（配列番号３１）からなる群より選択され、ここで、＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいい、＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう、オリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
Ｙがメチル化されていないＣである、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
Ｚがグアニンを含むヌクレオチドである、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
前記安定化されたヌクレオチド間結合がホスホロチオエートである、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項２０に記載のオリゴヌクレオチドであって、Ｙが、シトシン、または、５−メチルシトシン、５−メチルイソシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ハロゲン化シトシン、ウラシル、Ｎ４−エチルシトシン、５−フルオロウラシル、および水素からなる群より選択される改変シトシン塩基を含むヌクレオチドである、オリゴヌクレオチド。
【請求項２７】
請求項２０に記載のオリゴヌクレオチドであって、Ｚが、グアニン、または、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、８−ヒドロキシグアニンのような８−置換グアニンおよび６−チオグアニン、２−アミノプリン、および水素からなる群より選択される改変グアニン塩基を含むヌクレオチドである、オリゴヌクレオチド。
【請求項２８】
１つまたは２つの接近可能な５’末端を有する３’−３’結合を有する、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２９】
請求項２０に記載のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが２つの接近可能な５’末端を有し、これらの各々が５’ＴＣＧである、オリゴヌクレオチド。
【請求項３０】
７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドは少なくとも一つのＣＧジヌクレオチドを有し、かつ該オリゴヌクレオチドは少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項３１】
前記ヌクレオチド間結合の全てがホスホロチオエート結合である、請求項３０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３２】
５〜７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドはＧＴＣＧＴまたはＴＣＧＴＴを含み、かつ該オリゴヌクレオチドは少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項３３】
前記ヌクレオチド間結合の全てがホスホロチオエート結合である、請求項３２に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３４】
エチルホスフェートまたはメチルホスホネートである結合を有する少なくとも一つのＹＺジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであって、ここで、Ｙはピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドであり、Ｚはグアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドである、オリゴヌクレオチド。
【請求項３５】
４〜１００ヌクレオチドの長さを有する、請求項３４に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３６】
ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有する少なくとも一つのＹＺジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであって、ここで、Ｙはピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドであり、Ｚはグアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドであり、そして該オリゴヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチドの３’末端にアミノヘキシル基を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項３７】
ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有する少なくとも一つのＹＺジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであって、ここで、Ｙはピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドであり、Ｚはグアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドであり、そして該オリゴヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチドの５’末端にアミノヘキシル基を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項３８】
ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有する少なくとも一つのＹＺジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドであって、ここで、Ｙはピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドであり、Ｚはグアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドであり、そして該オリゴヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチドの５’末端および３’末端にアミノヘキシル基を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項３９】
少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４０】
４〜１００ヌクレオチドの長さを有する、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４１】
Ｙがメチル化されていないシトシンを含むヌクレオチドである、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４２】
癌を処置する方法であって、癌を有する被験体に、該癌を処置する有効量の請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項４３】
アレルギーを処置する方法であって、アレルギーを有するか、またはアレルギーを有する危険性を有する被験体に、該アレルギーを処置する有効量の請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項４４】
喘息を処置する方法であって、喘息を有するか、または喘息を有する危険性を有する被験体に、該喘息を処置する有効量の請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項４５】
感染症を処置する方法であって、感染症を有するか、または感染症を有する危険性を有する被験体に、該感染症を処置する有効量の請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項４６】
請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと薬学的に受容可能なキャリアとを含む医薬。
【請求項４７】
被験体におけるウイルス感染、真菌感染、細菌感染または寄生生物感染を処置または予防する方法に使用するための医薬の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項４８】
前記ウイルス感染がＢ型肝炎ウイルスによって引き起こされる、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
前記ウイルス感染がＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる、請求項４７に記載の使用。
【請求項５０】
被験体の癌を処置または予防する方法に使用するための医薬の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項５１】
被験体の喘息またはアレルギーを処置または予防する方法に使用するための医薬の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項５２】
免疫療法／化学療法の前にか、免疫療法／化学療法とともにか、または免疫療法／化学療法の後に投与するための医薬の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般的に、短い免疫刺激性オリゴヌクレオチド、および腎臓の炎症効果（ｒｅｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ）が低い免疫刺激性オリゴヌクレオチド、それらの組成物ならびに、これらの免疫刺激性オリゴヌクレオチド．を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
細菌性ＤＮＡは、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化する免疫刺激効果を有するが、脊椎動物のＤＮＡは、そのような効果は有さない（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；および非特許文献４においてＫｒｉｅｇ、１９９８に概説される）。細菌性ＤＮＡのこれらの免疫刺激効果が、特定の塩基の状況（ＣｐＧモチーフ）でのメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドの存在の結果であり、これは細菌性ＤＮＡにおいては一般的であるが、脊椎動物のＤＮＡにおいてはメチル化されかつ多量には存在しないことが理解されている（非特許文献５；非特許文献６）。細菌性ＤＮＡの免疫刺激効果は、これらのＣｐＧモチーフを含む合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）によって模倣され得る。このようなＣｐＧ  ＯＤＮは、ヒトおよびマウスの白血球に高い刺激効果（Ｂ細胞増殖；サイトカインおよび免疫グロブリンの分泌；ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞溶解活性（ｃｅｌｌ  ｌｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）およびＩＦＮ−γ分泌；ならびに、共起刺激分子を発現しサイトカイン（特に、Ｔｈ１様Ｔ細胞応答の発生を促進するのに重要なＴｈ１様サイトカイン）を分泌する樹状細胞（ＤＣ）および他の抗原提示細胞の活性化が挙げられる）を有する。天然ホスホジエステル骨格のＣｐＧ  ＯＤＮの、これらの免疫刺激効果は、ＣｐＧモチーフがメチル化されるか、ＧｐＣへ変更されるか、またはその他の方法で除去されるかもしくは改変される場合、これらの効果が劇的に低減される点で極めてＣｐＧ特異的である（非特許文献５；非特許文献７）。
【０００３】
初期の研究において、免疫刺激性ＣｐＧモチーフが式プリン−プリン−ＣｐＧ−ピリミジン−ピリミジン（非特許文献５；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）にしたがうことが考えられてきた。しかしながら、現在、マウスリンパ球が、この「式」にしたがわないホスホジエステルＣｐＧモチーフに対してきわめて良好に応答すること（非特許文献１１）、そして同様のことがヒトＢ細胞および樹状細胞にも当てはまること（非特許文献７；非特許文献１２）が明らかになっている。
【０００４】
数種の異なるクラスのＣｐＧ核酸が、最近記載されている。一つのクラスは、Ｂ細胞を活性化するのには強力だが、ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞の活性化を誘導するには比較的弱い（このクラスは、Ｂクラスと呼ばれている）。代表的に、ＢクラスのＣｐＧ核酸は、十分に安定化され、特定の好ましい塩基の状況（ｂａｓｅ  ｃｏｎｔｅｘｔ）内に、メチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含む。例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５および特許文献６を参照のこと。別のクラスのＣｐＧ核酸は、Ｂ細胞およびＮＫ細胞を活性化し、そしてＩＦＮ−αを誘導する（このクラスは、Ｃクラスと呼ばれている）。最初に特徴付けられたように、代表的にＣクラスのＣｐＧ核酸は、十分に安定化され、Ｂクラス型の配列およびＧＣリッチなパリンドロームまたは擬似パリンドローム（ｎｅａｒ−ｐａｌｉｎｄｒｏｍｅ）を含む。このクラスは、２００１年８月１７に出願された、同時係属中の米国仮特許出願第６０／３１３，２７３号、および２００２年８月１９日に出願された、同第１０／２２４，５２３号、ならびに関連するＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ０２／２６４６８号（特許文献７のもとで公開された）に記載されている。
【特許文献１】米国特許第６，１９４，３８８号明細書
【特許文献２】米国特許第６，２０７，６４６号明細書
【特許文献３】米国特許第６，２１４，８０６号明細書
【特許文献４】米国特許第６，２１８，３７１号明細書
【特許文献５】米国特許第６，２３９，１１６号明細書
【特許文献６】米国特許第６，３３９，０６８号明細書
【特許文献７】国際公開第０３／０１５７１１号パンフレット
【非特許文献１】Ｔｏｋｕｎａｇａ，  Ｔ．ら、Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９８８）７９：６８２−６８６
【非特許文献２】Ｔｏｋｕｎａｇａ，  Ｔ．ら、ＪＮＣＩ（１９８４）７２：９５５−９６２
【非特許文献３】Ｍｅｓｓｉｎａ，  Ｊ．Ｐ．ら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１）１４７：１７５９−１７６４
【非特許文献４】Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃ．Ａ．  ＳｔｅｉｎおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ（編），  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ，（１９９８）ｐｐ．  ４３１−４４８
【非特許文献５】Ｋｒｉｅｇら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９５）３７４：５４６−５４９
【非特許文献６】Ｋｒｉｅｇ、Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ（１９９９）９３３２１：１−１０
【非特許文献７】Ｈａｒｔｍａｎｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９９）９６：９３０５−１０
【非特許文献８】Ｐｉｓｅｔｓｋｙ、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９６）１５６：４２１−４２３
【非特許文献９】Ｈａｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９９８）１７：６２３０−６２４０
【非特許文献１０】Ｌｉｐｆｏｒｄら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（１９９８）６：４９６−５００
【非特許文献１１】Ｙｉら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９８）１６０：５８９８−５９０６
【非特許文献１２】Ｌｉａｎｇ、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９６）９８：１１１９−１１２９
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
驚くべきことに、ＢクラスおよびＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドならびに他の安定化免疫刺激性オリゴヌクレオチドの免疫刺激特性が、特定のヌクレオチド間の１つ以上の安定化されていない結合を選択的に含めることによって維持され得るか、またはさらには改善され得ることが発見された。この安定化されていない結合は、好ましくは、天然の結合（すなわち、ホスホジエステル結合またはホスホジエステル様結合）である。代表的に、安定化されていない結合は、ヌクレアーゼ消化に対し比較的感受性であるが、必ずしもそうである必要はない。本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ピリミジン（Ｙ）塩基（好ましくはＣ）を含む５’ヌクレオチドと、プリン（Ｚ）塩基（好ましくは、グアニン（Ｇ））を含む隣接する３’ヌクレオチドとの間に位置している、少なくとも１つの安定化されていない結合を含み、ここで、５’Ｙと３’Ｚとの両方は、内部のヌクレオチド（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）である。より短い長さのオリゴヌクレオチドが、免疫応答を促進するのに有効であることもまた発見されている。
【０００６】
一部の局面において、本発明は、長さ３〜２４ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドであり、このオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様のヌクレオチド間結合を含む少なくとも一つのＹＺジヌクレオチド、および少なくとも４つのＴヌクレオチドを含む。Ｙは、ピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドである。Ｚは、グアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドである。このオリゴヌクレオチドはまた、少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む。一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、ＴＴＴＴモチーフを含む。
【０００７】
他の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、唯一のＹＺジヌクレオチドを有する。必要に応じて、上記オリゴヌクレオチドは、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ（配列番号１６）、または、Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号１１）である。＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいう。＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう。
【０００８】
他の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、２つのＹＺジヌクレオチドのみを有する。必要に応じて、上記オリゴヌクレオチドは、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号３）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ（配列番号１０）、Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１２）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１３）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号１４）、またはＧ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号１５）である。＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいう。＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう。
【０００９】
さらに他の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、３つのＹＺジヌクレオチドのみを有する。このオリゴヌクレオチドは、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号８）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ（配列番号９）、またはＴ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ（配列番号１０）であり得る。＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいう。＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう。
【００１０】
他の実施形態にしたがって、上記オリゴヌクレオチドは、４つのＹＺジヌクレオチドのみを有する。上記オリゴヌクレオチドは、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号４）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号５）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＿Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｔ＿Ｔ＊Ｇ＿Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号６）、Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１７）、Ｔ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｉ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１８）、Ｔ＊  ＭｅＣ  ＿Ｇ＊Ｔ＊  ＭｅＣ  ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊  ＭｅＣ  ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊  ＭｅＣ  ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１９）、Ｔ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｈ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２０）、Ｔ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿７＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２１）、またはＵ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｕ＊Ｕ（配列番号２２）であり得る。＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいう。＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう。Ｉは、ヒポキサンチン塩基を含むイノシンであり、ＭｅＣは、５’−メチル−シトシンであり、Ｈは、５−ヒドロキシ−シトシンであり、７は、７−デアザ−グアニンであり、そしてＵはウラシルである。
【００１１】
一部の実施形態において、各ＹＺジヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様のヌクレオチド間結合を有する。一部の実施形態において、このホスホジエステル様結合は、ボラノホスホネート（ｂｏｒａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）またはジアステレオ異性体的に（ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃａｌｌｙ）純粋なＲｐホスホロチオエートである。
【００１２】
上記の安定化されたヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、エチルホスフェートまたはまたはこれらの任意の組み合わせであり得る。
【００１３】
好ましい実施形態において、Ｙは、メチル化されていないシトシンを含むヌクレオチドであり、そして／または、Ｚは、グアニンを含むヌクレオチドである。Ｙは、必要に応じて、シトシンまたは改変シトシン塩基（例えば、５−メチルシトシン、５−メチルイソシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ハロゲン化シトシン（５−ｈａｌｏｇｅｎｏ  ｃｙｔｏｓｉｎｅ）、ウラシル、Ｎ４−エチルシトシン、５−フルオロウラシル）を含むヌクレオチドまたは水素であり得る。
【００１４】
必要に応じて、Ｚは、グアニンまたは改変グアニン塩基（例えば、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン）、および６−チオグアニン、２−アミノプリン）を含むヌクレオチドまたは水素であり得る。
【００１５】
一部の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、１つまたは２つの接近可能な５’末端を有する３’−３’結合を有する。他の実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、２つの接近可能な５’末端を有し、これらの各々は、５’ＴＣＧである。
【００１６】
２〜７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドが、本発明の他の局面にしたがって提供される。このオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様のヌクレオチド間結合を有する少なくとも一つのＹＺジヌクレオチドを有し、そして、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む。Ｙは、ピリミジンまたは改変ピリミジン塩基を含むヌクレオチドである。Ｚは、グアニンまたは改変グアニンを含むヌクレオチドである。
【００１７】
一部の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、唯一のＹＺジヌクレオチドを有する。このオリゴヌクレオチドは、Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２３）、Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２４）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２５）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２６）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ（配列番号２７）、Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ（配列番号２８）、Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号２９）、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号３０）、または、Ｃ＿Ｇ（配列番号３１）であり得る。＊とは、安定化されたヌクレオチド間結合の存在をいう。＿とは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在をいう。この安定化されたヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエートであり得る。
【００１８】
一部の実施形態において、Ｙは、メチル化されていないシトシン、または、５−メチルシトシン、５−メチルイソシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ハロゲン化シトシン、ウラシル、Ｎ４−エチルシトシン、５−フルオロウラシルからなる群より選択される改変シトシン塩基を含むヌクレオチドまたは水素である。他の実施形態において、Ｚは、グアニン、または、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン）、および６−チオグアニン、２−アミノプリンからなる群より選択される改変グアニン塩基または水素である。
【００１９】
一部の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、１つまたは２つの接近可能な５’末端を有する３’−３’結合を有する。他の実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、２つの接近可能な５’末端を有し、これらの各々は、５’ＴＣＧである。
【００２０】
他の実施形態において、上記のオリゴヌクレオチドは、３’−アミノヘキシル基を有する。他の実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、５’−アミノヘキシル基を有する。他の実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、３’−アミノヘキシル基および５’−アミノヘキシル基を有する。
【００２１】
一部の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、スペーサーによって連結された２つのＹＺジヌクレオチドを有する。一部の実施形態において、このスペーサーは、ダブラー（ｄｏｕｂｌｅｒ）によって連結された２つのヘキサエチレングリコール基から構成される。一部の実施形態において、このダブラーは、ホスホラアミダイトである。一部の実施形態において、このアミダイトは、Ｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  Ｄｏｕｂｌｅｒ  Ｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｉｔｅ（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１０−１９２０−９０）である。一部の実施形態において、このアミダイトは、このアミダイトに結合したブチラート基を有する。このオリゴヌクレオチドは（Ｃ−Ｇ−Ｌ）−２ｄｏｕｂ−ｂｕｔ（配列番号４３）であり得る。
【００２２】
他の局面において、本発明は、７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドである。このオリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＣＧジヌクレオチドを有し、そして少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む。一部の実施形態において、ヌクレオチド間結合の全ては、ホスホロチオエート結合である。
【００２３】
本発明の他の局面にしたがって、５〜７ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドが提供される。このオリゴヌクレオチドはＧＴＣＧＴまたはＴＣＧＴＴを有し、かつ少なくとも一つの安定化されたヌクレオチド間結合を含む。必要に応じて、このヌクレオチド間結合の全てはホスホロチオエート結合である。
【００２４】
完全に安定化された免疫刺激性オリゴヌクレオチドのように、本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、Ｔｈ１様免疫応答を誘発するのに有用である。したがって、本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ワクチン接種のためのアジュバントとして有用であり、これらは、疾患（癌、感染症、アレルギー、および喘息を含む）を処置するために有用である。これらは、任意の目的のための免疫刺激性オリゴヌクレオチドの長期投与または反復投与を必要とする任意の状態において特に有用であると考えられる。
【００２５】
別の局面において、本発明は、アレルギーを処置する方法である。この方法は、アレルギーを有するか、またはアレルギーを有する危険性を有する被験体に、アレルギーを処置する有効量の本明細書に記載の免疫刺激性ＣｐＧオリゴヌクレオチドを投与することによって実行される。
【００２６】
別の局面において、本発明は喘息を処置する方法である。この方法は、喘息を有するか、または喘息を有する危険性を有する被験体に、喘息を処置する有効量の本明細書に記載の免疫刺激性ＣｐＧオリゴヌクレオチドを投与することによって実行される。
【００２７】
一実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、粘膜表面に投与される。他の実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、エアロゾル処方物中に投与される。必要に応じて、上記オリゴヌクレオチドは、鼻腔内投与される。
【００２８】
別の局面において、本発明は、抗原または他の治療化合物（例えば、抗微生物剤（ａｎｔｉ−ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｇｅｎｔ））と組み合わせた、本明細書に記載のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの組成物である。この抗微生物剤は、例えば、抗ウイルス剤、抗寄生生物剤、抗菌剤または抗真菌剤であり得る。
【００２９】
本明細書に記載のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含む徐放性デバイスの組成物が、本発明の別の局面にしたがって提供される。
【００３０】
上記の組成物は、必要に応じて、薬学的キャリアを含み得るか、および／または、送達デバイス中に処方され得る。一部の実施形態において、この送達デバイスは、陽イオン性脂質、細胞透過性タンパク質（ｃｅｌｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、および徐放性デバイスからなる群より選択される。一実施形態において、この徐放性デバイスは、生分解性ポリマーまたは微小粒子である。
【００３１】
本発明の別の局面にしたがって、免疫応答を刺激する方法が提供される。この方法は、被験体の免疫応答を誘発する有効量でのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを被験体に投与する工程を包含する。好ましくは、このＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、経口投与されるか、局所投与されるか、徐放性デバイスにおいて投与されるか、粘膜に投与されるか、全身投与されるか、非経口投与されるか、または筋肉内投与される。このＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが粘膜表面に投与される場合、それは、粘膜の免疫応答または全身性免疫応答を誘発する有効量で送達され得る。好ましい実施形態において、この粘膜表面は、口、直腸、鼻、膣、および眼の表面からなる群より選択される。
【００３２】
一部の実施形態において、上記方法は、抗原に被験体を曝露する工程を包含し、ここで、免疫応答は抗原特異的免疫応答である。一部の実施形態において、この抗原は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生生物抗原およびペプチド抗原からなる群より選択される。
【００３３】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、広範な免疫応答を惹起することができる。例えば、これらのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを使用して、Ｔｈ２免疫応答をＴｈ１免疫応答に再方向付けることができる。また、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを使用して、免疫細胞（例えば、リンパ球（例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞）、樹状細胞、およびＮＫ細胞）を活性化し得る。この活性化は、インビボ、インビトロまたは生体外（すなわち、免疫細胞を被験体から単離し、免疫細胞と、この免疫細胞を活性化する有効量のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドとを接触させ、そして活性化された免疫細胞を被験体に再投与することによって）で実行することができる。一部の実施形態において、この樹状細胞は、癌抗原を提示する。この樹状細胞を、生体外で癌抗原に曝露することができる。
【００３４】
なお別の実施形態において、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、癌を処置するのに有用である。本発明の他の局面にしたがって、このＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、癌を発症する危険性を有する被験体において癌を予防する（例えば、癌を発症する危険性を減少させる）のに有用である。この癌は、胆道癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸癌、子宮内膜癌、胃癌、上皮内腫瘍、リンパ腫、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）、メラノーマ、神経芽細胞腫、口腔癌（ｏｒａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、甲状腺癌、および腎臓癌ならびに他の癌腫および肉腫からなる群より選択され得る。一部の重要な実施形態において、この癌は、骨癌、脳癌およびＣＮＳ癌、結合組織の癌、食道癌、眼癌、ホジキンリンパ腫、咽頭癌、口腔癌（ｏｒａｌ  ｃａｖｉｔｙ  ｃａｎｃｅｒ）、皮膚癌および精巣癌からなる群より選択される。
【００３５】
必要に応じて、このＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、抗癌療法と組み合わせて投与される場合に、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、癌療法（例えば、抗癌療法）に対する癌細胞の応答性を増大させるために使用され得る。この抗癌療法は、化学療法、ワクチン（例えば、インビトロで予め刺激された樹状細胞ワクチンまたは癌抗原ワクチン）または抗体ベースの治療であり得る。この後者の治療はまた、例えば、癌細胞の細胞表面抗原に特異的な抗体を投与する工程を含み得、この免疫応答は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）をもたらす。一実施形態において、この抗体は、Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ、Ｑｕａｄｒａｍｅｔ、Ｐａｎｏｒｅｘ、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、Ｏｎｃｏｌｙｍ、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、Ｏｖａｒｅｘ、Ｂｅｘｘａｒ、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、Ｚｅｎａｐａｘ、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ  ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  ＡｂおよびＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群より選択され得る。
【００３６】
したがって、本発明の一部の局面にしたがって、癌を有するか、癌を有する危険性を有する被験体に、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよび抗癌療法が投与される。一部の実施形態において、この抗癌療法は、化学療法剤、免疫療法剤（ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）および癌ワクチンからなる群より選択される。
【００３７】
他の局面において、本発明は、先天性免疫応答を活性化する有効量のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを被験体に投与することによって、先天性免疫応答を誘発する方法である。
【００３８】
本発明の別の局面にしたがって、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を処置する方法が提供される。この方法は、ウイルス感染もしくはレトロウイルス感染を有するか、またはウイルス感染またはレトロウイルス感染を有する危険性を有する被験体に、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を処置する有効量の本発明の任意の組成物を投与する工程を包含する。一部の実施形態において、このウイルスは、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス）、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、またはパピローマウイルスに起因する。
【００３９】
本発明の別の局面にしたがって、細菌感染を処置する方法が提供される。この方法は、細菌感染を有するか、または細菌感染を有する危険性を有する被験体に、細菌感染を処置する有効量の本発明の任意の組成物を投与する工程を包含する。一実施形態において、この細菌感染は、細胞内細菌に起因する。
【００４０】
別の局面において、寄生生物感染を有するか、または寄生生物感染を有する危険性を有する被験体に、寄生生物感染を処置する有効量の本発明の任意の組成物を投与することによって寄生生物感染を処置する方法が提供される。一実施形態において、この寄生生物感染は、細胞内寄生生物に起因する。別の実施形態において、この寄生生物感染は、非蠕虫感染に起因する。
【００４１】
一部の実施形態において、上記被験体はヒトであり、そして、他の実施形態において、この被験体は、非ヒト脊椎動物（イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、シチメンチョウ、ヤギ、魚、サル、ニワトリ、ラット、マウスまたはヒツジ）である。
【００４２】
別の局面において、本発明は、自己免疫疾患を有するか、または自己免疫疾患を有する危険性を有する被験体に、自己免疫疾患を処置または予防する有効量の本発明の任意の組成物を投与することによって自己免疫疾患を処置する方法が提供される。
【００４３】
他の実施形態において、上記オリゴヌクレオチドは、サイトカイン発現を誘発する有効量で被験体に送達される。必要に応じて、このサイトカインは、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＦＮγおよびＩＰ−１０からなる群より選択される。他の実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、Ｔｈ２に偏った応答からＴｈ１に偏った応答へシフトさせるか、またはＴｈ２に偏った応答の発生を阻害する有効量で被験体に投与される。
【００４４】
一部の局面において、本発明は、気道再構築（ａｉｒｗａｙ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）を処置する方法であり、この方法は、被験体の気道再構築を処置する有効量の本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドを被験体に投与する工程を包含する。一実施形態において、この被験体は喘息、慢性閉塞性肺疾患を有するか、または、この被験体は喫煙者である。他の実施形態において、この被験体は、喘息の症状を有さない。
【００４５】
免疫応答を刺激するための本発明のオリゴヌクレオチドの使用がまた、本発明の一局面として提供される。
【００４６】
免疫応答を刺激するための本発明のオリゴヌクレオチドの医薬を製造する方法もまた提供される。
【００４７】
本発明の他の局面にしたがって、先に記載されるオリゴヌクレオチドと薬学的に受容可能なキャリアとを含む医薬が提供される。
【００４８】
本発明の他の局面において、被験体のウイルス感染、真菌感染、細菌感染もしくは寄生生物感染、癌または喘息またはアレルギーを処置または予防する方法に使用する医薬の製造における、先に記載されるオリゴヌクレオチドの使用が提供される。
【００４９】
一実施形態において、上記ウイルス感染はＢ型肝炎ウイルスに起因する。別の実施形態において、このウイルス感染はＣ型肝炎ウイルスに起因する。
【００５０】
免疫療法／化学療法の前にか、免疫療法／化学療法とともにか、免疫療法／化学療法の後に投与するための医薬の製造における、オリゴヌクレオチドの使用もまた提供される。
【００５１】
本発明の各々の限定は、本発明の種々の実施形態を包含し得る。したがって、任意の一構成要素または構成要素の組み合わせを含む本発明の各々の限定が本発明の各局面に含まれ得ることが想定される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
（詳細な説明）
軟質（ｓｏｆｔ）および半軟質（ｓｅｍｉ−ｓｏｆｔ）の免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、本発明により提供される。本明細書中に記載される本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、一部の実施形態において、同様もしくは増強された効力、腎臓、肝臓および脾臓に対する全身的曝露の減少を含む改良された特性を有し、そして注射部位での減少した反応発生性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）を有し得る。出願人はメカニズムにとらわれないが、これらの改良された特性は、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様「ヌクレオチド間結合」の免疫刺激性オリゴヌクレオチド内での戦略的な配置に関連すると考えられる。用語「ヌクレオチド間結合」とは、本明細書中で使用される場合、オリゴヌクレオチド分子において２つの隣接するヌクレオチドを連結する共有骨格結合をいう。上記共有骨格結合は、代表的に、改変型もしくは非改変型のリン酸結合であるが、他の改変も可能である。したがって、ヌクレオチド長がｎである直鎖オリゴヌクレオチドは、合計ｎ−１個のヌクレオチド間結合を有する。これらの共有骨格結合は、本発明の教示にしたがって免疫刺激性オリゴヌクレオチドにおいて改変されても、改変されなくてもよい。
【００５３】
２０ヌクレオチド長未満の完全に安定化された免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、より長い（例えば、２４ヌクレオチド長）完全に安定化されたオリゴヌクレオチドと比べて適度の（ｍｏｄｅｓｔ）免疫刺激活性を有し得ることが先に認識されている一方で、１６ヌクレオチド長ほど短い半軟質のオリゴヌクレオチドは、２０ヌクレオチド長を超える完全に安定化されたオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性と少なくとも等しい免疫刺激活性を有することが発見されている。例えば、配列番号３２および配列番号３３（両方とも、配列番号３４に対して部分的な配列類似性を有する１６マー）は、配列番号３４（２４マー）の免疫刺激活性に匹敵する免疫刺激活性を示す。これらのＯＤＮは、以下の配列を有する：
【００５４】
【化１】
2008531018.tif 000003
５マーのホスホロチオエートオリゴヌクレオチドが免疫刺激活性を欠くようである一部の例において、ホスホロチオエート結合についてほんの１つのホスホジエステル内部のＹＺヌクレオチド間結合の置換でさえ、免疫刺激活性を有する対応する５マーを生じることが見出された（表３および図２において配列番号２７と配列番号２８とを比較のこと）。より高い濃度では、一部の例において、２〜３マー（すなわち、配列番号３１）でさえ活性を示す。他の例において、軟質、半軟質または完全に硬化された骨格のいずれか、および５ヌクレオチドと７ヌクレオチドとの間の長さを有する最適なオリゴヌクレオチドが同定されている。例えば、配列番号２７および配列番号２９を参照のこと。このサイズ範囲の完全に硬化された骨格を有するオリゴヌクレオチドは、より高い濃度で特に活性である。
【００５５】
特に、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、「内部ジヌクレオチド」を含む。内部ジヌクレオチドは、一般に、ヌクレオチド間結合によって結合された隣接するヌクレオチドの任意の対であって、そのヌクレオチド対においていずれのヌクレオチドも末端ヌクレオチドではない（すなわち、そのヌクレオチド対においていずれのヌクレオチドもそのオリゴヌクレオチドの５’末端もしくは３’末端を規定するヌクレオチドではない）ものを意味するものとする。したがって、ヌクレオチド長がｎである直鎖オリゴヌクレオチドは、合計ｎ−１個のジヌクレオチドおよびわずかｎ−３個の内部ジヌクレオチドを有する。内部ジヌクレオチドにおける各ヌクレオチド間結合は、内部ヌクレオチド間結合である。したがって、ヌクレオチド長がｎである直鎖オリゴヌクレオチドは、合計ｎ−１個のヌクレオチド間結合およびわずかｎ−３個の内部ヌクレオチド間結合を有する。したがって、戦略的に置かれたホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合とは、核酸配列中の任意のヌクレオチド対の間に位置付けられたホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合をいう。一部の実施形態において、上記ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、５’または３’末端に最も近いヌクレオチド対のいずれかの間には位置付けられない。
【００５６】
本発明は、少なくとも一部の局面において、本明細書中に記載される軟質および半軟質のオリゴヌクレオチドが、多くの例において、同じヌクレオチド配列を有する対応する完全に安定化された免疫刺激性オリゴヌクレオチドと少なくとも同一、または多くの場合ではそれよりも大きい免疫刺激活性を有するという驚くべき発見に基づく。長さがより短いオリゴヌクレオチド（例えば、２ヌクレオチド〜２４ヌクレオチド）が、ＣｐＧモチーフのヌクレオチド間に「軟化」結合が置かれても、免疫刺激特性を維持することがさらに発見された。このことは予期されなかった。なぜなら、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、一般に、安定化されていないオリゴヌクレオチドよりも免疫刺激性であると広く考えられているからである。この結果は、驚くべきことである。なぜなら、「軟化」結合が重要な免疫刺激性モチーフ（すなわち、ＣＧ）間に置かれた場合、そのオリゴヌクレオチドはインビボでＣＧを含有しないフラグメントに容易に破壊されるのでそのオリゴヌクレオチドは活性が減少し得ると予期されたからである。
【００５７】
軟質のオリゴヌクレオチドは、部分的に安定化された骨格を有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドであり、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合がピリミジン−プリン塩基（ＹＺ）を含む少なくとも一つの内部ジヌクレオチド内およびそれに直接隣接してのみ生じる。好ましくは、ＹＺはＹＧであり、ピリミジン−グアニン塩基（ＹＧ）を含むジヌクレオチドである。上記少なくとも一つの内部ＹＺジヌクレオチド自体は、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有する。上記少なくとも一つの内部ＹＺジヌクレオチドに直接隣接して生じるホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、その少なくとも一つの内部ＹＺジヌクレオチドに対して５’、３’または５’と３’との両方であり得る。好ましくは、上記少なくとも一つの内部ＹＺジヌクレオチドに直接隣接して生じるホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、それ自体内部ヌクレオチド間結合である。したがって、配列Ｎ１ＹＺＮ２（式中、Ｎ１およびＮ２は、それぞれ互いに独立して、任意の単一ヌクレオチドである）について、ＹＺジヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合を有し、そしてさらに（ａ）Ｎ１が内部のヌクレオチドである場合、Ｎ１およびＹは、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合によって連結されているか、（ｂ）Ｎ２が内部のヌクレオチドである場合、ＺおよびＮ２は、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合によって連結されているか、または（ｃ）Ｎ１が内部のヌクレオチドである場合、Ｎ１およびＹは、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合によって連結されており、かつＮ２が内部のヌクレオチドである場合、ＺおよびＮ２は、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合によって連結されている。
【００５８】
半軟質のオリゴヌクレオチドは、部分的に安定化された骨格を有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドであり、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合がピリミジン−プリン塩基（ＹＺ）を含む少なくとも一つの内部ジヌクレオチド内でのみ生じる。半軟質オリゴヌクレオチドは、一般に、対応する安定化された免疫刺激性オリゴヌクレオチドと比較して、増大された免疫刺激効力を有する。例えば、半軟質の配列番号３５の免疫刺激効力は、すべてホスホロチオエートの配列番号３４の免疫刺激効力の２倍〜５倍であり、ここで、その２つのオリゴヌクレオチドは、同一のヌクレオチド配列を共有し、以下のとおり内部ＹＺヌクレオチドについてのみ異なる（以下において、＊は、ホスホロチオエートを示し、＿は、ホスホジエステルを示す）：
【００５９】
【化２】
2008531018.tif 000004
配列番号３５は、両方ともＣＧおよびＴＧ（両方ともＹＺ）ジヌクレオチドに関する内部のホスホジエステルヌクレオチド間結合を組み込む。半軟質のオリゴヌクレオチドのより大きい効力に起因して、半軟質のオリゴヌクレオチドは、多くの例において、所望の生物学的効果を達成するために、より低い有効濃度で使用され得、従来の完全に安定化された免疫刺激性オリゴヌクレオチドよりも低い有効用量を有し得る。
【００６０】
本発明のオリゴヌクレオチドは、一般に、好ましい内部位置でのホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合に加えて、分解に耐性である５’末端および３’末端を含む。そのような分解耐性末端は、対応する非改変型末端を上回るエキソヌクレアーゼ消化に対する耐性の増加を生じる任意の適切な改変を含み得る。例えば、５’末端および３’末端は、骨格の少なくとも一つのリン酸改変を含めることによって安定化され得る。好ましい実施形態において、各末端における骨格の少なくとも一つのリン酸改変は、独立して、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、エチルホスフェートまたはメチルホスホロチオエートヌクレオチド間結合である。別の実施形態において、上記分解耐性末端は、３’末端においてペプチド結合もしくはアミド結合によって結合された１以上のヌクレオチド単位を含む。さらに他の安定化された末端（以下でさらに記載されるものが挙げられるがこれらに限定されない）が、本発明によって包含されることが意味される。
【００６１】
上に記載されるように、本発明のオリゴヌクレオチドは、内部ＹＺジヌクレオチド内に、そして必要に応じて内部ＹＺジヌクレオチドに隣接してホスホジエステルまたはホスホジエステル様結合を含む。そのようなＹＺジヌクレオチドは、しばしば、免疫刺激性モチーフの一部である。しかし、オリゴヌクレオチドがあらゆる免疫刺激性モチーフ内にホスホジエステルまたはホスホジエステル様結合を含む必要はない。
【００６２】
ホスホジエステルヌクレオチド間結合は、天然に見出されるオリゴヌクレオチドの結合特徴の一種である。ホスホジエステルヌクレオチド間結合は、２つの架橋する酸素原子によって挟まれ、２つのさらなる酸素原子（一方は帯電しており、他方は帯電していない）によっても結合されるリン原子を含む。ホスホジエステルヌクレオチド間結合は、オリゴヌクレオチドの組織半減期を減少することが重要である場合に特に好ましい。
【００６３】
ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、化学的および／またはジアステレオ異性体的にホスホジエステルと類似するリン含有架橋基である。ホスホジエステルに対する類似性の測定は、ヌクレアーゼ消化に対する感受性およびＲＮＡｓｅ  Ｈを活性化する能力を含む。したがって、例えば、ホスホジエステルはヌクレアーゼ消化に感受性であるが、ホスホロチオエート、オリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ消化に感受性ではなく、一方で、ホスホジエステルおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは両方ともＲＮＡｓｅ  Ｈを活性化する。好ましい実施形態において、ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、ボラノホスフェート（または同等に、ボラノホスホネート）結合である。米国特許第５，１７７，１９８号；同第５，８５９，２３１号；同第６，１６０，１０９号；同第６，２０７，８１９号；Ｓｅｒｇｕｅｅｖら、（１９９８）Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２０：９４１７−２７。別の好ましい実施形態において、上記ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、ジアステレオ異性体的に純粋なＲｐホスホロチオエートである。ジアステレオ異性体的に純粋なＲｐホスホロチオエートは、ヌクレアーゼ消化に感受性であり、混合型またはジアステレオ異性体的に純粋なＳｐホスホロチオエートよりもＲＮＡｓｅ  Ｈを活性化すると考えられる。本発明の目的のために、用語「ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合」は、ホスホロジチオエートおよびメチルホスホネートヌクレオチド間結合を明確に排除することに留意されたい。
【００６４】
本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチド分子は、キメラ骨格を有し得る。本発明の目的のために、キメラ骨格とは、部分的に安定化された骨格をいい、ここで、少なくとも一つのヌクレオチド間結合はホスホジエステルまたはホスホジエステル様であり、そして少なくとも一つの他のヌクレオチド間結合は安定化されたヌクレオチド間結合であり、上記少なくとも一つのホスホジエステルまたはホスホジエステル様結合および上記少なくとも一つの安定化された結合とは異なる。ボラノホスホネート結合はホスホジエステル結合と比較して安定化されることが報告されているので、骨格のキメラの性質の目的のために、ボラノホスホネート結合は、文脈に依存してホスホジエステル様または安定化されたもののいずれかとして分類され得る。例えば、本発明によるキメラ骨格としては、一実施形態において、少なくとも一つのホスホジエステル（ホスホジエステルまたはホスホジエステル様）結合、および少なくとも一つのボラノホスホネート（安定化された）結合が挙げられ得る。別の実施形態において、本発明によるキメラ骨格としては、ボラノホスホネート（ホスホジエステルまたはホスホジエステル様）結合、およびホスホロチオエート（安定化された）結合が挙げられ得る。「安定化されたヌクレオチド間結合」は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合と比べて、（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）インビボ分解に対して相対的に耐性であるヌクレオチド間結合を意味するものとする。好ましい安定化されたヌクレオチド間結合としては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、エチルホスフェートおよびメチルホスホロチオエートが挙げられるが、これらに限定されない。他の安定化されたヌクレオチド間結合としては、ペプチド、アルキル、脱リン、および上に記載されるようなその他のものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
ホスホロチオエートのような改変された骨格は、ホスホルアミデート化学またはＨ−ホスホネート化学のいずれかを利用する自動化技術を用いて合成され得る。アリールホスホネートおよびアルキル−ホスホネートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載されるように作製され得、アルキルホスホトリエステル（帯電した酸素部分が、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載されるようにアルキル化される）は、市販の試薬を用いて自動化固相合成によって調製され得る。他のＤＮＡ骨格改変および置換を作製するための方法が記載されている。Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅら、（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ  Ｊ（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １：１６５。キメラオリゴヌクレオチドを調製するための方法もまた公知である。例えば、Ｕｈｌｍａｎｎらに発行された特許は、そのような技術を記載している。
【００６６】
混合型骨格改変ＯＤＮは、市販のＤＮＡ合成装置および標準的なホスホルアミド化学を用いて合成され得る（Ｆ．Ｅ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ−Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ，１９９１，およびＭ．Ｄ．Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ａｎｄ  Ｍ．Ｈ．Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２１，７１９（１９８０））。カップリング後、ＰＳ結合が、Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬（Ｒ．Ｐ．Ｉｙｅｒ，Ｗ．Ｅｇａｎ，Ｊ．Ｂ．ＲｅｇａｎおよびＳ．Ｌ．Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２，１２５３（１９９０））（アセトニトリル中０．０７５Ｍ）またはフェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）を用いる硫化によって導入され、その後、無水酢酸、テトラヒドロフラン中の２，６−ルチジン（１：１：８；ｖ：ｖ：ｖ）およびＮ−メチルイミダゾール（テトラヒドロフラン中１６％）とカップリングされる。このカップリング工程は、ホスホロチオエート結合が配置されるべきである位置での望ましくないホスホジエステル（ＰＯ）結合の形成を最小限にするために、硫化反応後に行われる。例えば、ＣｐＧジヌクレオチドでのホスホジエステル結合の導入の場合、中間体リン−ＩＩＩが水／ピリジン中のヨウ素の溶液での処理によって酸化される。固体支持体からの切断および濃アンモニアでの処理による最終的な脱保護（５０℃で１５時間）の後、ＯＤＮは、ＮａＣｌ勾配（例えば、緩衝液Ａ：アセトニトリル／水＝１：４／ｖ：ｖ中１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ６．８）；緩衝液Ｂ：アセトニトリル／水＝１：４／ｖ：ｖ中１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、１．５Ｍ  ＮａＣｌ；１ｍｌ／分にて３０分で５％〜６０％のＢ）を用いてＧｅｎ−Ｐａｋ  Ｆａｘカラム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｗａｔｅｒｓ）でＨＰＬＣによって、またはキャピラリーゲル電気泳動によって分析される。ＯＤＮは、Ｓｏｕｒｃｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）でＨＰＬＣまたはＦＰＬＣによって精製され得る。ＨＰＬＣで同質の画分が合わせられ、Ｃ１８カラムを通してかもしくは限外濾過によって脱塩される。ＯＤＮは、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって分析されて、計算された質量が確認される。
【００６７】
本発明のオリゴヌクレオチドはまた、他の改変を含み得る。これらとしては、アルキル−ホスフェートおよびアリール−ホスフェートのような非イオン性ＤＮＡアナログ（帯電したホスホネート酸素がアルキル基またはアリール基で置換されている）、ホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステル（帯電した酸素部分がアルキル化されている）が挙げられる。いずれかの末端または両方の末端にジオールを含むオリゴヌクレオチド（例えば、テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコール）もまた、ヌクレアーゼ分解に実質的に耐性であることが示されている。
【００６８】
本発明のオリゴヌクレオチドは、免疫応答を導くことが見出された特定の配列を含む核酸である。免疫応答を導くこれらの特定の配列は、「免疫刺激性モチーフ」と称され、そして免疫刺激性モチーフを含むオリゴヌクレオチドは、「免疫刺激性核酸分子」および同等に、「免疫刺激性核酸」または「免疫刺激性オリゴヌクレオチド」と称される。したがって、本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つの免疫刺激性モチーフを含む。好ましい実施形態において、上記免疫刺激性モチーフは、「内部免疫刺激性モチーフ」である。用語「内部免疫刺激性モチーフ」とは、より長いオリゴヌクレオチド配列（これは、その免疫刺激性モチーフ配列の５’末端および３’末端の両方に連結された少なくとも一つのヌクレオチドにより、長さがモチーフ配列より長い）内のモチーフ配列の位置をいう。
【００６９】
本発明の一部の実施形態において、上記免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、「ＣｐＧジヌクレオチド」である免疫刺激性モチーフを含む。ＣｐＧジヌクレオチドは、メチル化されていてもメチル化されていなくてもよい。少なくとも一つのメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含む免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、メチル化されていないシトシン−グアニンジヌクレオチド配列（すなわち、メチル化されていない５’シチジンに続いて３’グアノシンがあり、リン酸結合によって連結されている）を含み、そして免疫系を活性化するオリゴヌクレオチド分子である；そのような免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドである。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、多数の発行された特許、公開された特許出願、および他の刊行物（米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２１４，８０６号；同第６，２１８，３７１号；同第６，２３９，１１６号；および６，３３９，０６８が挙げられる）に記載されている。少なくとも一つのメチル化されたＣｐＧジヌクレオチドを含む免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、メチル化されたシトシン−グアニンジヌクレオチド配列（すなわち、メチル化された５’シチジンに続いて３’グアノシンがあり、リン酸結合によって連結されている）を含み、そして免疫系を活性化するオリゴヌクレオチドである。他の実施形態において、上記免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧジヌクレオチドを含まない。ＣｐＧジヌクレオチドを含まないこれらのオリゴヌクレオチドは、非ＣｐＧオリゴヌクレオチドと称され、それらは非ＣｐＧ免疫刺激性モチーフを有する。したがって、本発明はまた、メチル化されていてもメチル化されていなくてもよい、他の型の免疫刺激性モチーフを有するオリゴヌクレオチドを包含する。本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドはさらに、メチル化されたＣｐＧ免疫刺激性モチーフおよびメチル化された非ＣｐＧ免疫刺激性モチーフならびにメチル化されていないＣｐＧ免疫刺激性モチーフおよびメチル化されていない非ＣｐＧ免疫刺激性モチーフの任意の組み合わせを含み得る。
【００７０】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドに関して、最近、異なるクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドが存在することが記載された。１つのクラスは、Ｂ細胞を活性化するのに強力であるが、ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞活性化を誘発することにおいては比較的弱い；このクラスはＢクラスと呼ばれている。このＢクラスのＣｐＧ核酸は、代表的に、完全に安定化されており、特定の好ましい塩基コンテクスト内にメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含む。例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２１４，８０６号；同第６，２１８，３７１号；同第６，２３９，１１６号；および同第６，３３９，０６８号を参照のこと。別のクラスは、ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞活性化を誘発するのに強力であるが、Ｂ細胞を刺激することにおいては比較的弱い；このクラスは、Ａクラスと呼ばれている。このＡクラスのＣｐＧ核酸は、代表的に、５’末端および３’末端に安定化されたポリＧ配列、ならびに少なくとも６ヌクレオチドのパリンドローム状のホスホジエステルＣｐＧジヌクレオチド含有配列を有する。例えば、公開された特許出願ＰＣＴ／ＵＳ００／２６５２７（ＷＯ  ０１／２２９９０）を参照のこと。なお別のクラスのＣｐＧ核酸は、Ｂ細胞およびＮＫ細胞を活性化し、ＩＦＮ−αを誘発する；このクラスは、Ｃクラスと呼ばれている。このＣクラスのＣｐＧ核酸は、最初に特徴付けされたように、代表的に完全に安定化されており、Ｂクラス型の配列およびＧＣリッチなパリンドロームまたはパリンドロームに近いものを含む。このクラスは、共有に係る米国特許出願ＵＳ１０／２２４，５２３（２００２年８月１９日出願）（その全内容は、参考として本明細書に援用される）に記載されている。
【００７１】
したがって、本発明は、一局面において、キメラ骨格を有するＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの特定のｓｕＢクラスが、免疫刺激性効果を媒介するのに非常に有効であるという知見に関する。これらのＣｐＧ核酸は、感染症、アレルギー、喘息、自己免疫疾患、および他の障害を処置するため、そして癌治療後の日和見感染に対する保護を補助するために、免疫系を刺激するのに治療的および予防的に有用である。ＣｐＧ刺激によって生じる強くさらに均衡のとれた細胞性免疫応答および体液性免疫応答は、病原体および癌細胞が浸潤することに対する身体自体の生まれながらの防御システムを反映する。
【００７２】
本発明は、一局面において、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドのサブセットが、改良された免疫刺激性特性および減少された腎炎症性効果を有することの発見に関する。一部の例において、腎炎症は、完全な（ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ）ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを投与された被験体において観察されている。本明細書中に記載されるキメラオリゴヌクレオチドは、完全な（ｆｕｌｌｙ）ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドよりも腎炎症を生じないと考えられる。さらにこれらのオリゴヌクレオチドは、免疫応答を刺激するのに非常に有効である。したがって、その分子のホスホジエステル領域は、その有効性（ａｆｆｅｃｔｉｖｉｔｙ）を減少させなかった。
【００７３】
オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合に関して使用される記号＊は、安定化されたヌクレオチド間結合の存在を指す。＊で印をつけられていないヌクレオチド間結合は、そのオリゴヌクレオチドが少なくとも２〜３個のホスホジエステルヌクレオチド間結合を含む限りは、安定化されていても安定化されていなくてもよい。一部の実施形態において、オリゴヌクレオチドが３〜６個のホスホジエステル結合を含むことが好ましい。一部の場合において、ＣＧモチーフ間の結合はホスホジエステルであり、他の場合において、ＣＧモチーフ間の結合はホスホロチオエートまたは他の安定化された結合である。
【００７４】
オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合に関して使用される記号＿は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合の存在を指す。
【００７５】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はまた、（例えば、塩基および／または糖において）置換または改変を有する核酸またはオリゴヌクレオチドを包含する。例えば、それらとしては、２’位においてヒドロキシル基以外の低分子量の有機基、そして５’位においてリン酸基もしくはヒドロキシ基以外の低分子量の有機基に共有結合している骨格糖を有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。したがって、改変されたオリゴヌクレオチドは、２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含み得る。さらに、改変されたオリゴヌクレオチドは、リボースの代わりにアラビノースまたは２’−フルオロアラビノースのような糖を含み得る。したがって、上記オリゴヌクレオチドは、骨格の組成において異種であり得、それによって、ペプチド核酸（核酸塩基を含むアミノ酸骨格を有する）のような一緒に連結されたポリマー単位の任意の可能性のある組み合わせを含む。
【００７６】
オリゴヌクレオチドはまた、置換されたプリンおよびピリミジン（例えば、Ｃ−５プロピンピリミジンおよび７−デアザ−７−置換プリン改変塩基）を含む。Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷら、（１９９６）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０−４。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−フルオロシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、ならびに他の天然に存在するおよび天然に存在しない核酸塩基、置換および非置換の芳香族部分が挙げられるが、これらに限定されない。他のそのような改変は当業者に周知であり、それらの多くは以下に記載される。
【００７７】
本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、天然のＲＮＡおよびＤＮＡ（ホスホジエステルヌクレオチド間架橋、β−Ｄ−リボース単位および／または非天然のヌクレオチド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）を含む）と比較して、種々の化学的改変および置換を包含する。化学的改変の例は当業者に公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅら、（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４３；「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｅｄ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ  １９９３；Ｃｒｏｏｋｅ  ＳＴら、（１９９６）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３６：１０７−１２９；およびＨｕｎｚｉｋｅｒ  Ｊら、（１９９５）Ｍｏｄ  Ｓｙｎｔｈ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７：３３１−４１７に記載されている。本発明によるオリゴヌクレオチドは、１以上の改変を有し得、ここで各改変は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオチド間架橋および／または特定のβ−Ｄ−リボース単位および／または特定の天然のヌクレオチド塩基位置に配置される。
【００７８】
例えば、本発明は、１以上の改変を含み、各改変が独立して以下から選択されるオリゴヌクレオチドに関する：
ａ）改変されたヌクレオチド間架橋によるヌクレオチドの３’末端および／または５’末端でのホスホジエステルヌクレオチド間架橋の置換、
ｂ）脱リン（ｄｅｐｈｏｓｐｈｏ）架橋によるヌクレオチドの３’末端および／または５’末端でのホスホジエステル架橋の置換、
ｃ）別の単位による糖リン酸骨格からの糖リン酸単位の置換、
ｄ）改変された糖単位によるβ−Ｄ−リボースの置換、および
ｅ）改変されたヌクレオチド塩基による天然のヌクレオチド塩基の置換。
【００７９】
オリゴヌクレオチドの化学的改変についてのより詳細な例は、以下のとおりである。
【００８０】
ヌクレオチドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオチド間架橋は、改変されたヌクレオチド架橋によって置換され得、ここで、その改変されたヌクレオチド間架橋は、例えば、ホスホロチオエート、エチルホスフェートホスホロジチオエート、ＮＲ１Ｒ２−ホスホルアミデート、ボラノホスフェート、α−ヒドロキシベンジルホスホネート、リン酸−（Ｃ１−Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル、リン酸−［（Ｃ６−Ｃ１２）アリール−（Ｃ１−Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルホスホネートおよび／または（Ｃ６−Ｃ１２）アリールホスホネート架橋、（Ｃ７−Ｃ１２）−α−ヒドロキシメチル−アリール（例えば、ＷＯ  ９５／０１３６３に開示されるもの）から選択され、ここで、（Ｃ６−Ｃ１２）アリール、（Ｃ６−Ｃ２０）アリールおよび（Ｃ６−Ｃ１４）アリールは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノによって、必要に応じて置換され、そしてここで、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ１８）−アルキル、（Ｃ６−Ｃ２０）−アリール、（Ｃ６−Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１−Ｃ８）−アルキル、好ましくは、水素、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキル、好ましくは、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよび／またはメトキシエチルであるか、あるいはＲ１およびＲ２は、それらを有する窒素原子と一緒になって、５〜６員の複素環を形成し、この複素環は、Ｏ、ＳおよびＮの群に由来するさらなるヘテロ原子をさらに含み得る。
【００８１】
脱リン架橋（脱リン架橋は、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  ＥおよびＰｅｙｍａｎ  Ａ「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｖｏｌ．２０，「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ  １９９３，Ｃｈａｐｔｅｒ  １６，ｐｐ．３５５  ｆｆに記載されている）によるヌクレオチドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステル架橋の置換であり、ここで、脱リン架橋は、例えば、脱リン架橋ホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチル−ヒドラゾ、ジメチレンスルホンおよび／またはシリル基から選択される。
【００８２】
糖リン酸骨格（すなわち、糖リン酸骨格は、糖リン酸単位から構成される）に由来する糖リン酸単位（すなわち、糖リン酸単位を一緒に形成するβ−Ｄ−リボースおよびホスホジエステルヌクレオチド間架橋）は、別の単位によって置換され得、ここで、他のユニットは、例えば、「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ  ＥＰら、（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １７：６１２９−４１に記載されるようなもの）（すなわち、例えば、モルホリノ誘導体単位による置換）を構築する；またはポリアミド核酸（「ＰＮＡ」；例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ＰＥら、（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ５：３−７に記載されるようなもの）（すなわち、ＰＮＡ骨格単位（例えば、２−アミノエチルグリシン）による置換）を構築するのに適している。
【００８３】
β−リボース単位またはβ−Ｄ−２’デオキシリボース単位は、改変された糖単位によって置換され得、ここで、その改変された糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−リボース（好ましくは、２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−リボースは、２’−Ｏ−メチルリボースである）、２’−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル−リボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル］−リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロ−フラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、ならびに炭素環式（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  Ｊ（１９９２）Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１４：８３２０に記載されるもの）および／または開鎖糖アナログ（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅら、（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９：７２２３に記載されるもの）および／または二環式糖アナログ（例えば、Ｔａｒｋｏｖ  Ｍら、（１９９３）Ｈｅｌｖ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  ７６：４８１に記載されるもの）から選択される。
【００８４】
一部の実施形態において、上記糖は、２’−Ｏ−メチルリボースであり、特に、一方または両方のヌクレオチドに対してホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオチド間結合によって連結されている。
【００８５】
オリゴヌクレオチドはまた、置換されたプリンおよびピリミジン（例えば、Ｃ−５プロピンピリミジンおよび７−デアザ−７−置換プリン改変塩基）を含む。Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷら、（１９９６）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０−４。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、およびチミン、ならびに他の天然に存在するおよび天然に存在しない核酸塩基、置換および非置換の芳香族部分が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８６】
改変された塩基は、ＤＮＡおよびＲＮＡにおいて代表的に見出される天然に存在する塩基（例えば、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、およびＵ）と化学的に異なるが、これらの天然に存在する塩基と基本的な化学構造を共有する任意の塩基である。改変されたヌクレオチド塩基は、例えば、ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、プソイドウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換された７−デアザプリン（好ましくは、７−デアザ−７−置換および／または７−デアザ−８−置換プリン）、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン（例えば、Ｎ４−エチルシトシン）、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン（例えば、Ｎ４−エチルデオキシシチジン）、６−チオデオキシグアノシン、ならびにニトロピロールのデオキシリボヌクレオチド、Ｃ５−プロピニルピリミジン、およびジアミノプリン（例えば、２，６−ジアミノプリン）、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチン、あるいは天然のヌクレオチド塩基の他の改変体から選択され得る。この列挙は例示であることが意味され、限定と解釈されるべきではない。
【００８７】
本明細書中に示される特定の式において、一連の改変された塩基が規定される。例えば、文字Ｙは、シトシンまたは改変されたシトシンを含むヌクレオチドを指すために使用される。改変されたシトシンは、本明細書中で使用される場合、そのオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなくピリミジン塩基を置換し得る、シトシンの天然に存在するかまたは天然に存在しないピリミジン塩基アナログである。改変されたシトシンとしては、５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、ならびに非置換もしくは置換５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいシトシンの一部としては、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、およびＮ４−エチル−シトシンが挙げられる。本発明の別の実施形態において、シトシン塩基は、ユニバーサル塩基（例えば、３−ニトロピロール、Ｐ塩基）、芳香族環系（例えば、フルオロベンゼンまたはジフルオロベンゼン）あるいは水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される。
【００８８】
文字Ｚは、グアニンまたは改変されたグアニン塩基を指すために使用される。改変されたグアニンは、本明細書中で使用される場合、そのオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなくプリン塩基を置換し得る、グアニンの天然に存在するかまたは天然に存在しないプリン塩基アナログである。改変されたグアニンとしては、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニンおよび８−ブロモグアニン）、ならびに６−チオグアニンが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の別の実施形態において、グアニン塩基は、ユニバーサル塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、およびＫ塩基）、芳香族環系（例えば、ベンゾイミダゾールまたはジクロロ−ベンゾイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される。
【００８９】
上記オリゴヌクレオチドは、１以上の接近可能な５’末端を有し得る。２つのそのような５’末端を有する改変されたオリゴヌクレオチドを作製することが可能である。これは、例えば、２つのオリゴヌクレオチドを３’−３’結合を通じて結合して。１または２つの接近可能な５’末端を有するオリゴヌクレオチドを生成することによって達成され得る。上記３’−３’結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたは任意の他の改変されたヌクレオチド間架橋であり得る。そのような結合を達成するための方法は、当該分野で公知である。例えば、そのような結合は、Ｓｅｌｉｇｅｒ，Ｈ．ら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｗｉｔｈ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ３’−３’−  ａｎｄ  ５’−５’−ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃ  ｂｏｎｄ  ａｓ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（１９９１），１０（１−３），４６９−７７およびＪｉａｎｇら、Ｐｓｅｕｄｏ−ｃｙｃｌｉｃ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９９），７（１２），２７２７−２７３５に記載されている。
【００９０】
オリゴヌクレオチドの接近可能な５’末端および３’末端はまた、アミノ基で置換され得る。そのアミノ基としては、アミノヘキシル残基が挙げられるが、これに限定されない。
【００９１】
さらに、３’末端ヌクレオチド間の結合がホスホジエステル、ホスホロチオエートまたは任意の他の改変された架橋ではない、３’３’連結したオリゴヌクレオチドは、さらなるスペーサー（例えば、トリエチレングリコールホスフェート部分またはテトラエチレングリコールホスフェート部分）を用いて調製され得る（Ｄｕｒａｎｄ，Ｍ．ら、Ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｎ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｅ（ｄＡ）１２  ａｎｄ  ｔｗｏ（ｄＴ）１２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｂｒｉｄｇｅｄ  ｂｙ  ｔｗｏ  ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｃｈａｉｎｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９２），３１（３８），９１９７−２０４、米国特許第５６５８７３８号、および同第５６６８２６５号）。あるいは。上記非ヌクレオチドリンカーは、エタンジオール、プロパンジオールから誘導されるか、または標準的なホスホルアミド化学を用いて無塩基デオキシリボース（ｄＳｐａｃｅｒ）単位（Ｆｏｎｔａｎｅｌ，Ｍａｒｉｅ  Ｌａｕｒｅｎｃｅ  ら、Ｓｔｅｒｉｃａｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｔ４  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｉｃ  ｍｏｉｅｔｉｅｓ  ５’−ａｔｔａｃｈｅｄ  ｔｏ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９４），２２（１１），２０２２−７）から誘導され得る。非ヌクレオチド性リンカーは、１回もしくは複数回組み込まれるか、または互いに結合し得、連結される２つのＯＤＮの３’末端間の任意の望ましい距離を可能する。
【００９２】
本発明で使用するために、本発明のオリゴヌクレオチドは、当該分野で周知の多数の手順のいずれかを用いてデノボ合成され得る。例えば、ｂ−シアノエチルホスホルアミド法（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．，およびＣａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９，１９８１）；ヌクレオチド  Ｈ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５１〜４０５４，１９８６；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９〜５４０７，１９８６，；Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５５〜４０５８，１９８６，Ｇａｆｆｎｅｙら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２９：２６１９〜２６２２，１９８８）。これらの化学は、市場で入手可能な種々の自動化核酸合成装置によって実施され得る。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと称される。単離されたオリゴヌクレオチドとは、一般に、通常は天然において関連する成分から分離されるオリゴヌクレオチドをいう。例として、単離されたオリゴヌクレオチドは、細胞、核、ミトコンドリア、またはクロマチンから分離されるものであり得る。
【００９３】
本発明により、本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドのサブセットがヒト細胞（例えば、ＮＫ細胞）において劇的な免疫刺激効果を有することが発見された。このことは、これらのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、ヒトワクチン接種、癌免疫療法、喘息免疫療法、免疫機能の一般的増強、放射線療法もしくは化学療法後の造血回復の増強、自己免疫疾患および他の免疫調節性の適用に有効な治療因子であることを示唆する。
【００９４】
したがって、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、本発明の一部の局面において、アレルギーまたは喘息、感染性生物による感染、または特定の癌抗原が同定されている癌を発症する危険性がある被験体の処置のためのワクチンとして有用である。上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、感染、アレルギーまたは癌に対する防御のために抗原もアレルゲンも伴わずに与えられ得、この場合において、反復用量によりより長期間の防御が可能であり得る。危険性がある被験体は、本明細書中で使用される場合、感染を生じる病原体、または癌、またはアレルゲンへの曝露の任意の危険性、あるいは癌を発症する危険性を有する被験体である。例えば、危険性がある被験体は、特定の型の感染因子が見出されている地域への旅行を計画している被験体であるか、あるいは危険性がある被験体は、ライフスタイルまたは医学的手順を通して感染性生物を含み得る体液、またはその生物に直接曝露される被験体、あるいは感染性生物またはアレルゲンが同定されている地域で生活している任意の被験体でさえあり得る。感染を発症する危険性がある被験体としてはまた、医療機関が特定の感染性生物抗原を含むワクチン接種を推奨する一般住民が挙げられる。その抗原がアレルゲンであり、その被験体がその特定の抗原に対してアレルギー反応を発症し、その被験体がその抗原に曝露され得る（すなわち、花粉の季節の間）場合、その被験体は、その抗原に対する曝露の危険性がある。アレルギーまたは喘息を発症する危険性がある被験体としては、アレルギーまたは喘息を有すると同定されたが、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド処置の間に活性な疾患を有さない被験体、および遺伝的因子もしくは環境的因子が理由でこれらの疾患を発症する危険性があると考えられる被験体が挙げられる。
【００９５】
癌を発症する危険性のある被験体は、癌を発症する高い可能性を有するものである。これらの被験体としては、例えば、遺伝的異常性を有する被験体（この遺伝的異常性の存在は、癌を発症するより高い尤度と相関関係を有することが実証されている）、および癌を誘導する因子（例えば、タバコ、アスベスト、または他の化学的毒素）に曝露されている被験体、または以前に癌についての処置をされており、見かけ上寛解にある被験体が挙げられる。癌を発症する危険性がある被験体が、その被験体が発症する危険性がある癌の型に対して特異的な抗原およびＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドで処置される場合、その被験体は、その癌細胞を、それが発達するにつれて殺傷し得る。腫瘍がその被験体中で形成され始めると、その被験体は、上記腫瘍抗原に対する特異的免疫応答を発症する。
【００９６】
予防的処置のためのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用に加えて、本発明はまた、感染、アレルギー、喘息、または癌を有する被験体の処置のためのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用も包含する。
【００９７】
感染を有する被験体は、感染性病原体に曝露されており、身体中に急性の、または慢性の検出可能なレベルの病原体を有する。上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、その感染性病原体のレベルを低減することができるかまたはその感染性病原体を根絶することができる抗原特異的全身性免疫応答または粘液性免疫応答に載せる（ｍｏｕｎｔ）ために、抗原と一緒にかまたは抗原なしで使用され得る。本明細書中で使用される場合、感染症とは、身体中の外来微生物の存在から生じる疾患である。病原体の進入の第一の部位である身体粘膜表面を保護するための、効果的なワクチン戦略および処置を開発することが、特に重要である。
【００９８】
アレルギーを有する被験体は、アレルゲンに応答してアレルギー反応を有しているか、またはアレルギー反応を発症する危険性がある被験体である。アレルギーとは、基質（アレルゲン）に対する、後天性の過敏症をいう。アレルギー状態とは、湿疹、アレルギー性鼻炎または鼻感冒、枯草熱、結膜炎、気管支喘息、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））および食物アレルギー、ならびに他のアトピー性状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
アレルギーは、一般的に、無害のアレルゲンに対するＩｇＥ抗体の生成によって引き起こされる。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの全身性または粘膜性投与によって誘導されるサイトカインは、優先的に、Ｔｈ１と呼ばれるクラスのもの（例は、ＩＬ−１２、ＩＰ−１０、ＩＦＮ−α、およびＩＦＮ−γである）であり、これらが体液性免疫応答および細胞性免疫応答の双方を誘導する。ＩＬ−４およびＩＬ−５サイトカインの産生と関連している、免疫応答の他の主要な型は、Ｔｈ２免疫応答と呼ばれる。一般的に、アレルギー疾患は、Ｔｈ２免疫応答によって媒介されるようである。被験体における免疫応答を、Ｔｈ２優勢（ＩｇＥ抗体の産生およびアレルギーに関連する）から、均衡したＴｈ２／Ｔｈ１応答（これは、アレルギー反応に対して保護的である）にシフトさせる、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの能力に基づいて、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの免疫応答を誘導するための効果的な用量が、喘息およびアレルギーを処置するために被験体に投与され得る。
【０１００】
従って、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、アレルギー、および喘息のような非アレルギー状態の処置において、顕著な治療的有用性を有する。Ｔｈ２サイトカイン、特にＩＬ−４およびＩＬ−５は、喘息被験体の気道において増加されている。これらのサイトカインは、喘息性炎症応答の重要な局面（ＩｇＥアイソトープスイッチ、好酸球走化性および活性化、および肥満細胞増殖が挙げられる）を促進する。Ｔｈ１サイトカイン、特にＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２は、Ｔｈ２クローンの形成およびＴｈ２サイトカインの産生を抑制し得る。喘息とは、炎症、気道の狭窄、および吸入した因子に対する気道の反応性増加によって特徴付けられる呼吸系の障害をいう。喘息は、排他的にではないが頻繁に、アトピーまたはアレルギー症状と関連する。
【０１０１】
癌を有する被験体は、検出可能な癌性細胞を有する被験体である。癌は、悪性であることもあるし、非悪性癌であることもある。癌または腫瘍としては、胆管癌；脳の癌；乳癌；頚部癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；上皮内新生物；リンパ腫；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）；メラノーマ；神経芽腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫；皮膚癌；精巣癌；甲状腺癌；および腎臓癌、ならびに他の癌腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、上記癌は、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚性Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性メラノーマ、扁平上皮細胞癌、腎細胞癌、前立腺癌、膀胱扁平上皮癌、または結腸癌である。
【０１０２】
被験体とは、ヒトまたは脊椎動物を意味するべきであり、この脊椎動物としては、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、シチメンチョウ、ニワトリ、霊長類（例えば、サル）および魚類（水産養殖種、例えばサケ）が挙げられる。従って、本発明はまた、非ヒト被験体における癌および腫瘍、感染、ならびにアレルギー／喘息を処置するためにも使用され得る。癌は、コンパニオン・アニマル（すなわち、ネコおよびイヌ）において、死亡の主要な原因の一つである。
【０１０３】
本明細書中で使用される場合、感染症、癌、アレルギーまたは喘息のような障害に関して使用されるときの用語「処置（ｔｒｅａｔ）」、「処置された（ｔｒｅａｔｅｄ）」、または「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、それらの疾患の発症（例えば、病原体による感染）に対する被験体の耐性を増加させる（言い換えると、その被験体がそれらの疾患を発症する（例えば、上記病原体に感染するようになる）尤度を減少させる）予防的処置、ならびに被験体がそれらの疾患を発症した後のそれらの疾患と戦う（例えば、その感染を軽減させるか、または取り除く）ため、またはそれらの疾患が悪化するのを防ぐための処置をいう。
【０１０４】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドが抗原と一緒に投与される場合の例において、上記被験体は、その抗原に曝露され得る。本明細書中で使用される場合、用語「曝露される」とは、その被験体と抗原とを接触させる能動的工程、またはインビボでのその被験体のその抗原への受動的曝露のいずれかをいう。被験体の抗原への能動的曝露のための方法は、当該分野において周知である。一般的に、抗原が、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、経皮投与、粘膜投与、鼻内投与、気管内投与、または皮下投与のような任意の手段によって、上記被験体に直接的に投与される。上記抗原は、全身的に投与されてもよいし、局所的に投与されてもよい。上記抗原および上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを投与するための方法は、以下により詳細に記載されている。被験体は、抗原が体以内で免疫細胞への曝露のために利用可能になった場合には、受動的に投与される。被験体は、例えば、体内への外来病原体の侵入、またはその表面上に外来抗原を発現する腫瘍細胞の開発によって、抗原に受動的に曝露され得る。
【０１０５】
被験体が抗原に受動的に曝露される方法は、特に、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの投与のタイミングに依存し得る。例えば、癌または感染症またはアレルギーもしくは喘息応答を発症する危険性のある被験体において、この被験体は、危険性が最大であるとき（すなわち、アレルギー期間の間、または発癌因子への曝露後）に、定期的に、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを投与され得る。さらに、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、旅行者に、彼らが感染性因子への曝露の危険のある外国への旅行の前に投与され得る。同様に、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、細菌戦争への曝露の危険のある兵士または民間人に投与され得、被験体が上記抗原へ曝露された場合にその抗原に対する全身性免疫応答または粘膜性免疫応答を誘導し得る。
【０１０６】
本明細書中で使用される場合、抗原とは、免疫応答を誘発することができる分子である。抗原としては、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖類、多糖類結合体、多糖類および他の分子のペプチド模倣物および非ペプチド模倣物、低分子、脂質、糖脂質、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに多細胞生物（寄生虫およびアレルゲン）が挙げられるが、これらに限定されない。用語「抗原」は、宿主免疫系によって外来物として認識される任意の型の分子を広範に包含する。抗原としては、癌抗原、微生物抗原、およびアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０７】
本明細書中で使用される場合、癌抗原は、腫瘍または癌細胞の表面に結合し、そしてＭＨＣ分子に関して抗原提示細胞の表面上に発現されたときに免疫応答を誘発することができる化合物（例えば、ペプチドまたはタンパク質）である。癌抗原は、例えばＣｏｈｅｎら、１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４：１０５５に記載されるように癌細胞の粗抽出物を調製することによって、その抗原を部分的に精製することによって、組み換え技術によって、または公知の抗原の新規合成によってのいずれかによって、癌細胞から調製され得る。癌抗原としては、組み換え的に発現される抗原、その免疫原性部分、または腫瘍もしくは癌全体が挙げられるが、これらに限定されない。そのような抗原は、組み換え的に、または当該分野において公知の任意の他の手段によって、単離され得る。
【０１０８】
本明細書中で使用される場合、微生物抗原は微生物の抗原であり、ウイルス、細菌、寄生虫および菌類が挙げられるが、これらに限定されない。そのような抗原としては、インタクトな微生物、ならびに天然単離体およびそのフラグメントまたは誘導体、ならびにまた天然の微生物抗原と同一または類似しており、その微生物に特異的な免疫応答を誘導する合成化合物が挙げられる。化合物は、それが天然の微生物抗原に対する免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘導する場合、天然の微生物抗原に類似している。そのよな抗原は、当該分野で慣習的に使用されており、当業者に周知である。
【０１０９】
ヒトにおいて見出されているウイルスの例としては、レトロウイルス科（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ−１）（ＨＤＴＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶＥまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも呼ばれる；ならびに他の単離体、例えば、ＨＩＶ−ＬＰ；ピコナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えば、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒａｄａｅ）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科  （例えば、パラインフルエンザ、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ハンターンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ  ｖｉｒｕｓ）、フレボウイルス（ｐｈｌｅｂｏｖｉｒｕｓ）およびナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルス（ｏｒｂｉｖｉｕｒｓ）およびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水疱瘡ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス科、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えば、アフリカスワイン熱ウイルス（Ａｆｒｉｃａｎ  ｓｗｉｎｅ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ））；ならびに未分類のウイルス（例えば、デルタ肝炎の因子（Ｂ型肝炎の不完全サテライトであると考えられている）、非Ａ型非Ｂ型肝炎の因子（クラス１＝内部伝染（ｉｎｔｅｒｎａｌｌｙ  ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ）；クラス２＝非経口感染（すなわち、Ｃ型肝炎）；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、およびアストロウイルス）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１０】
グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌の双方が、脊椎動物において抗原として機能する。そのようなグラム陽性細菌としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ種、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種が挙げられるが、これらに限定されない。グラム陰性細菌としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種が挙げられるが、これらに限定されない。感染性細菌の具体的な例としては、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ、Ｂｏｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｓ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ、Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群ストレプトコッカス）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群ストレプトコッカス）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ビリダンス群）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（嫌気性種）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、病原性Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ、ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、およびＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｌｉが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１１】
真菌類の例としては、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１２】
他の感染性生物（すなわち、原生生物）としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘおよびＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種が挙げられる。血液感染性および／または組織寄生虫としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種、Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種、  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅおよびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ  （アフリカ睡眠病）、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ（シャーガス病）、およびＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
他の医学的に関連する微生物は、文献に広範に記載されている。例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ  Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３を参照のこと（その全内容が、本明細書中に参考として援用される）。
【０１１４】
アレルゲンとは、感受性の被験体においてアレルギー反応または喘息応答を誘導し得る物質（抗原）をいう。アレルゲンの列挙は膨大であり、花粉、昆虫の毒、動物の鱗屑のほこり、菌類の胞子、および薬物（例えば、ペニシリン）が挙げられ得る。天然の動物および植物アレルゲンの例としては、以下の属に特異的なタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない：Ｃａｎｉｎｅ（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ（例えば、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）；Ｆｅｌｉｓ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）；Ａｍｂｒｏｓｉａ（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ；Ｌｏｌｉｕｍ（例えば、Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅまたはＬｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ）；Ａｌｄｅｒ；  Ａｌｎｕｓ（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏａｓａ）；Ｂｅｔｕｌａ（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）；Ｑｕｅｒｃｕｓ（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ）；Ｏｌｅａ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ）；Ａｒｔｅｍｉｓｉａ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）；Ｐｌａｎｔａｇｏ（例えば、Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）；Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ（例えば、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓまたはＰａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ（例えば、Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ）；Ａｐｉｓ（例えば、Ａｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ（例えば、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａおよびＣｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）；Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ（例えば、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓおよびＪｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ）；Ｔｈｕｙａ（例えば、Ｔｈｕｙａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）；Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ（例えば、Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ）；Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ（例えば、Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）；Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ（例えば、Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ）；Ｓｅｃａｌｅ  （例えば、Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）；Ｔｒｉｔｉｃｕｍ（例えば、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）；Ｄａｃｔｙｌｉｓ（例えば、Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ）；Ｆｅｓｔｕｃａ（例えば、Ｆｅｓｔｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ）；Ｐｏａ（例えば、Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓまたはＰｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）；Ａｖｅｎａ（例えば、Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）；Ｈｏｌｃｕｓ（例えば、Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）；Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ（例えば、Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ）；Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ（例えば、Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ）；Ａｇｒｏｓｔｉｓ（例えば、Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ）；Ｐｈｌｅｕｍ（例えば、Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ）；Ｐｈａｌａｒｉｓ（例えば、Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒ��ｎｄｉｎａｃｅａ）；Ｐａｓｐａｌｕｍ（例えば、Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ）；Ｓｏｒｇｈｕｍ（例えば、Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ）；ならびにＢｒｏｍｕｓ（例えば、Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎｅｒｍｉｓ）。
【０１１５】
本明細書中で使用される場合、用語「実質的に精製された」とは、他のタンパク質、脂質、炭水化物または天然には関連する他の物質を実質的に含まないポリペプチドをいう。当業者は、タンパク質精製のための標準的な技術を使用して、ウイルス性ポリペプチドまたは細菌性ポリペプチドを精製し得る。この実質的に純粋なポリペプチドは、しばしば、非還元性ポリアクリルアミドゲル上で一本の太いバンドをもたらす。部分的にグリコシル化されたポリペプチドまたはいくつかの開始コドンを有するポリペプチドの場合には、非還元性ポリアクリルアミドゲル上にいくつかのバンドが存在し得るが、これらはそのポリペプチドについて別個のパターンを形成する。ウイルス性ポリペプチドまたは細菌性ポリペプチドの純度はまた、アミノ末端アミノ酸配列分析によっても決定され得る。多糖類、低分子、模倣物などのような、核酸ベクターによってコードされない他の型の抗原は、本発明に包含される。
【０１１６】
本発明のオリゴヌクレオチドは、抗微生物剤と一緒に被験体に投与され得る。本明細書中で使用される場合、抗微生物剤とは、感染性微生物を殺傷または阻害することができる、天然に存在する化合物または合成化合物をいう。本発明に従って有用な抗微生物剤の型は、その被験体が感染している微生物、またはその被験体が感染する危険性のある微生物の型に依存する。抗微生物剤としては、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生虫剤が挙げられるが、これらに限定されない。「抗感染剤」、「抗菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生虫剤」、および「寄生虫駆除剤」は、当業者にとって十分に確立された意味を有し、そして標準的な医学書において定義されている。簡潔に述べると、抗菌剤は、細菌を殺傷または阻害し、抗生物質、ならびに類似の機能を有する他の合成化合物または天然化合物を包含する。抗生物質は、微生物のような細胞によって二次代謝物として産生される低分子量分子である。一般的に、抗生物質は、その微生物に特異的であり、宿主細胞中には存在しない１種以上の細菌の機能または構造に干渉する。抗ウイルス剤は、天然供給源から単離されることもできるし、合成されることもでき、ウイルスを殺傷または阻害するために有用である。抗真菌剤は、表在性真菌感染ならびに日和見性および原発性全身性真菌感染を処置するために使用される。抗寄生虫剤は、寄生虫を殺傷または阻害する。
【０１１７】
ヒト投与のために有用な抗寄生虫剤（寄生虫駆除剤とも呼ばれる）としては、アルベンダゾール、アンフォテリシンＢ、ベンズイミダゾール（ｂｅｎｚｎｉｄａｚｏｌｅ）、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、リン酸クロロキン、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフロエート（ｄｉｌｏｘａｎｉｄｅ  ｆｕｒｏａｔｅ）、エフロルニチン、フラゾリドン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、糖質コルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノリン（ｉｏｄｏｑｕｉｎｏｌ）イベルメクチン、メベンダゾル、メフロキン、メグルミンアンチモニエート（ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ  ａｎｔｉｍｏｎｉａｔｅ）、メラルソプロール、メトリホナート、メトロニダゾール、ニクロサミド、ニフルティモックス（ｎｉｆｕｒｔｉｍｏｘ）、オキサムニキン、パロモマイシン、イセチオン酸ペンタミジン、ピペラジン、プラジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル、パモ酸ピランテル、ピリメタミン−スルホンアミド（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ）、ピリメタミン−スルファドキシン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆａｄｏｘｉｎｅ、キナクリンＨＣｌ、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコネートナトリウム（グルコン酸アンチモンナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトプリムスルファメトキサゾール（ｔｒｉｍｅｔｈｒｏｐｒｉｍ−ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）、およびトリパルサミドが挙げられるが、これらに限定されない。これらのうちのいくつかは単独で使用されるか、または他のものと併用される。
【０１１８】
抗菌剤は、細菌の増殖または機能を殺傷または阻害する。抗菌剤の大きなクラスは、抗生物質である。広範な範囲の細菌を殺傷または阻害するのに有効な抗生物質は、広域抗生物質と呼ばれる。他の型の抗生物質は、グラム陽性またはグラス陰性のクラスの細菌に対して主に有効である。これらの型の抗生物質は、狭域抗生物質と呼ばれる。単一の生物または疾患に対して有効で、他の型の細菌には有効ではない他の抗生物質は、限定域抗生物質（ｌｉｍｉｔｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）と呼ばれる。抗菌剤は、時折、その主要な作用様式に基づいて分類される。一般的に、抗菌剤は、細胞壁合成インヒビター、細胞膜インヒビター、タンパク質合成インヒビター、核酸合成または機能インヒビター、および競合的インヒビターである。
【０１１９】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞の感染またはその細胞内でのウイルスの複製を妨げる化合物である。ウイルス複製のプロセスは宿主内でのＤＮＡ複製と密接に関連しているので非特異的抗ウイルス剤はしばしばその宿主に対して毒性であるため、抗ウイルス剤は抗菌剤よりもかなり少数しか存在しない。抗ウイルス剤によってブロックまたは阻害され得るウイルス感染のプロセス内には、いくつかの段階が存在する。これらの段階としては、ウイルスの宿主細胞への付着（免疫グロブリンまたは結合性ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＥＮＡまたはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオチドアナログ）、新規ウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼインヒビター）、ならびにウイルスの出芽および放出が挙げられる。
【０１２０】
ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドと類似しているが、不完全または異常なデオキシリボースまたはリボース基を有する合成化合物である。一旦そのヌクレオチドアナログが細胞内に入ると、それらはリン酸化され、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡへの組み込みについて正常なヌクレオチドと競合するように形成された三リン酸を生じる。一旦そのヌクレオチドアナログの三リン酸形態が伸長している核酸鎖内に組み込まれると、それは、ウイルスポリメラーゼとの非可逆的な結合、およびそれゆえ鎖終結を引き起こす。ヌクレオチドアナログとしては、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの処置のために使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置のために有用）、イドクスウリジン、ジデオキシシチジン、ジドブジン（アジドチミジン）、イミキモド、およびレシミキモド（ｒｅｓｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２１】
インターフェロンは、ウイルス感染細胞および免疫細胞によって分泌されるサイトカインである。このインターフェロンは、感染した細胞に隣接する細胞上の特異的レセプターに結合することによって機能し、ウイルスによる感染からその細胞を保護する変化をその細胞に引き起こす。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、感染した細胞の表面上のクラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣ分子の発現もまた誘導し、宿主細胞認識のための抗原提示の増加をもたらす。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、組み換え形態として利用可能であり、慢性Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎の感染の処置のために使用されている。抗ウイルス治療のために効率的な用量においては、インターフェロンは、発熱、不快感、および体重減少のような重篤な副作用を有する。
【０１２２】
本発明において有用な抗ウイルス剤としては、免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオチドアナログ、およびプロテアーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。抗ウイルス剤の具体的な例としては、アセマンナン；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデホビル；アロブジン（Ａｌｏｖｕｄｉｎｅ）；Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ  Ｓｕｄｏｔｏｘ；塩酸アマンタジン；アラノチン；アリルドン（Ａｒｉｌｄｏｎｅ）；メシル酸アテルジン（Ａｔｅｖｉｒｄｉｎｅ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；アルビジン；シドホビル；シパムフィリン（Ｃｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）；塩酸シタラビン；  メシル酸デラビルジン；デスシクロビル（Ｄｅｓｃｉｃｌｏｖｉｒ）；  ディダノシン；ジソキサリル（Ｄｉｓｏｘａｒｉｌ）；エドクスジン；エンビラデン（Ｅｎｖｉｒａｄｅｎｅ）；エンビロキシム（Ｅｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ファムシクロビル；塩酸ファモチン（Ｆａｍｏｔｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；フィアシタビン（Ｆｉａｃｉｔａｂｉｎｅ）；フィアルリジン；ホサリラート（Ｆｏｓａｒｉｌａｔｅ）；ホスカルネットナトリウム；ホスホネットナトリウム；ガンシクロビル；ガンシクロビルナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）；ラミブジン；ロブカビル（Ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）；塩酸メモチン；メチサゾン；ネビラピン；ペンシクロビル；ピロダビル；リバビリン；塩酸リマンタジン；メシル酸サキナビル；塩酸ソマンタジン；ソリブジン；スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）；スタブジン；塩酸チロロン；トリフルリジン；塩酸バラシクロビル；ビダラビン；リン酸ビダラビン；ビダラビンリン酸ナトリウム；ビロキシム；ザルシタビン；ジドブジン；およびジンビロキシムが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２３】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防のために有用である。抗真菌剤は、時折、その作用機構によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコース合成を阻害することによって、細胞壁インヒビターとして機能する。これらとしては、ｂａｓｉｕｎｇｉｎ／ＥＣＢが挙げられるが、これに限定されない。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化させることによって機能する。これらとしては、イミダゾール（例えば、クロトリマゾール、セルタコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、およびボリコナゾール）、ならびにＦＫ  ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ  ３８−９５０２、ＭＫ  ９９１、プラディマイシン、ＵＫ  ２９２、ブテナフィン、およびテルビナフィンが挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌剤は、キチンを破壊する（例えば、キチナーゼ）ことによって、または免疫抑制（５０１  クリーム）機能する。
【０１２４】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、免疫応答を強化するためのアジュバントのような他の治療剤と組み合わされ得る。このＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよび他の治療剤は、同時に、または連続的に投与され得る。この他の治療剤が同時に投与される場合、それらは、同じ処方物において投与されることもできるし、別個の処方物において投与されることもできるが、ただし同時に投与される。上記他の治療剤と上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドとが一時的に分離されている場合、他の治療剤は、互いに、そしてＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドど連続的に投与される。これらの化合物の投与の間のこの分離の時間は、せいぜい数分であってもよいし、その時間はより長いものであってもよい。他の治療剤としては、アジュバント、サイトカイン、抗体、抗原などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２５】
本発明の組成物はまた、非核酸アジュバントとも一緒に投与され得る。非核酸アジュバントは、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を刺激し得る、本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド以外の任意の分子または化合物である。非核酸アジュバントとしては、例えば、沈着効果をもたらすアジュバント、免疫刺激アジュバント、および沈着効果をもたらし、かつ免疫系を刺激するアジュバントが挙げられる。
【０１２６】
上記免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、粘膜アジュバントとして有用である。全身免疫および粘膜免疫の両方が、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの粘膜送達によって誘導されることが先に発見されている。それ故、これらオリゴヌクレオチドは、その他の粘膜アジュバントと組み合わせて投与され得る。
【０１２７】
免疫応答はまた、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドとの、サイトカイン（Ｂｕｅｌｅｒ＆Ｍｕｌｌｉｇａｎ、１９９６；Ｃｈｏｗら、１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒら、１９９７；Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｋｉｍら、１９９７）またはＢ−７同時刺激性分子（Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；  Ｔｓｕｊｉら、１９９７）の同時投与または同時線形順序発現によって誘導または増強され得る。用語サイトカインは、ナノモル濃度〜ピコモル濃度で体液性レギュレーターとして作用し、そして正常状態または病的状態のいずれかで個々の細胞および組織の機能的活性を調製する可溶性タンパク質およびペプチドの多様なグループに対する一般名として用いられる。これらのタンパク質はまた、細胞間の相互作用を直接調製し、そして細胞外環境で起こるプロセスを調節する。サイトカインの例は、制限されないで、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−γ（γ−ＩＦＮ）、ＩＦＮ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＧＦ−β、ＦＬＴ−３リガンド、およびＣＤ４０リガンドを含む。
【０１２８】
上記オリゴヌクレオチドはまた、免疫応答をＴｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答に再方向付けるために有用である。これは、相対的にバランスのとれたＴｈ１／Ｔｈ２環境の産生を生じる。Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答への免疫応答の再方向付けは、上記オリゴヌクレチドに応答して産生されるサイトカインのレベルを測定することにより（例えば、単球細胞またはＩＬ−１２、ＩＦＮ−γおよびＧＭ−ＣＳＦを含むＴｈ１サイトカインを産生するその他の細胞を誘導することにより）評価され得る。Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答への免疫応答の再方向付けまたは再バランスは、喘息の処置または予防のために特に有用である。例えば、喘息を処置するための有効量は；喘息にともなうＴｈ２タイプの免疫応答を、Ｔｈ１タイプの応答またはバランスされたＴｈ１／Ｔｈ２環境に再方向付けするために有用である。Ｔｈ２サイトカイン、特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５は、喘息患者の気道で高められている。本発明のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、Ｔｈ１サイトカインの増加を引き起こし、これは、免疫系の再バランスを支援し、優勢にＴｈ２免疫応答にともなう副作用を防ぐか、または低減する。
【０１２９】
上記オリゴヌクレチドはまた、樹状細胞の生存、分化、活性化および成熟を改善するために有用である。このＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、樹状細胞の生存、分化、活性化および成熟を促進する特有の能力を有している。
【０１３０】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、ナチュラルキラー細胞溶解活性および抗体依存性細胞細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を増加する。ＡＤＣＣは、癌細胞のような細胞標的に特異的な抗体と組み合わせてＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを用いて実施され得る。このＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが上記抗体と組み合わせて被験体に投与されるとき、被験体の免疫系は、腫瘍細胞を殺傷するように誘導される。ＡＤＣＣ手順で有用な抗体は、身体中の細胞と相互作用する抗体を含む。細胞標的に特異的な多くのこのような抗体は、当該技術分野で報告され、そして多くが市販され入手可能である。
【０１３１】
上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、抗癌療法と組み合わせて投与され得る。抗癌療法は、癌医薬、照射および外科的手順を含む。本明細書で用いられるとき、「癌医薬」は、癌を処する目的のために患者に投与される薬剤をいう。本明細書で用いられるとき、「癌を処置すること」は、癌の発生を防ぐこと、癌の症状を低減すること、および／または確立された癌の増殖を阻害することを含む。その他の局面では、上記癌医薬は、癌の発症のリスクを低減する目的のために癌の発症のリスクのある患者に投与される。癌の処置のための種々のタイプの医薬が本明細書に記載されている。本明細書の目的には、癌医薬は、化学療法薬剤、免疫療法薬剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および生物学的応答改変剤として分類される。
【０１３２】
さらに、本発明の方法は、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドとともに１つ以上の癌医薬の使用を包含することが意図される。例として、適切な場合には、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、化学療法薬剤および免疫療法薬剤の両方と投与され得る。あるいは、この癌医薬は、免疫療法薬剤および癌ワクチン、または化学療法薬剤および癌ワクチン、または化学療法薬剤、免疫療法薬剤および癌ワクチンを包含し得、すべては、癌を有するか、または癌を発症するリスクにある一被験体に投与される。
【０１３３】
上記化学療法薬剤は、メトトレキセート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、糖を含まないクロロエチルニトロソウレア、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタインおよびポリフェルポサン、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ  １２−９５６６、ＲＡＳファメシルトランスフェラーゼインヒビター、ファメシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレック、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ヒカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン、メタレット／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、インセル／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ  ６９８、ＴＡ  ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ  ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ  ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソームドキソルビシン、ヨータキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルチュロン／ドキシフルリジン、シクロパックス／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳ発癌遺伝子インヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）、エルガミソル／レバミソール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミソール、カンプトサール／イリノテカン、ツモデックス／ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パキセックス／パクリタキセル、ドキシル／リポソームドキソルビシン、カエリックス／リポソームドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン／エピルビシン、デポサイト、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタルイミド、ＬＵ  １０３７９３／ドラスタイン、カエチクス／リポソームドキソルビシン、ゲムザール／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメド、ＹＭ１１６、ロジンシード、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／デキシフォサミド、アイフェス／メスネックス／イフォサミド、ブモン／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プラチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテレ／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサンアナログ、ニトロソウレア、メルファランおよらびシクロホスホアミドのようなアルキル化剤、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シトアラビンＨＣｌ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロックスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシウレア（ヒドロキシカルバミド）、アイフォスファミド、インターフェロンＡｌｆａ−２ａ、Ａｌｆａ−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ−放出因子アナログ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロルエタミンＨＣｌ（ナトトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メシナ、ミトタン（ｏ．ｐ´−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクレオチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトドシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポイエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン、（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコフォルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）および硫酸ビンデシンからなる群から選択され得るが、そのように制限されない。
【０１３４】
免疫療法薬剤は、リボタキシン、ヘルセプチン、クアドラメット、パノレックス、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス、ベクスキサール、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗−ＶＥＧＦ、ゼナパックス、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット、ノボＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンフォシド、ＣＭＡ  ６７６、モノファーム−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗−ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  ＡｂおよびＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群から選択され得るが、そのように限定されない。
【０１３５】
癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗−イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫメラノーマワクチン、ＭＧＶガングリオシド複合体ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ，Ｏｖａｒｅｘ、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬテラトープ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソームイディオタイプワクチン、メラシン、ペプチド抗原ワクチン、トキシン／抗原ワクチン、ＭＶＡ−を基礎にしたワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルスおよびＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群から選択され得るが、そのように限定されない。
【０１３６】
モノクローナル抗体のような免疫療法薬剤と組み合わせたＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用は、多くの機構により長期間生存を増加し得、（上記で論議されたような）ＡＤＣＣの有意な増大、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、およびＩＮＦαレベルの増加を含む。モノクローナル抗体と組み合わせて用いられるとき、上記オリゴヌクレチドは、生物学的結果を達成するために必要な抗体の用量を減少するために供される。
【０１３７】
本明細書で用いられるとき、用語「癌抗原」および「腫瘍抗原」は交換可能に用いられ、癌細胞によって鑑別的に発現され、そしてそれによって癌細胞を標的にするために利用され得る抗原をいう。癌抗原は、見かけ上腫瘍特異的免疫応答を潜在的に刺激し得る抗原である。これら抗原のいくつかはコードされているが、正常細胞によっては必ずしも発現されない。これらの抗原は、正常細胞では通常はサイレント（すなわち発現されない）であるもの、分化の特定ステージでのみ発現されるもの、および胚抗原および胎児抗原のように一時的に発現されるものとして特徴付けられる。その他の癌抗原は、発癌遺伝子（例えば、活性化ｒａｓ発癌遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）、内部欠失または染色体転座から得られる融合タンパク質のような、変異体細胞遺伝子によってコードされる。なおその他の癌抗原は、ＲＮＡおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上に保持されるようなウイルス遺伝子によってコードされ得る。
【０１３８】
上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、自己免疫疾患を処置および予防するために有用である。自己免疫疾患は、被験体自体の抗体が宿主組織と反応し、免疫エフェクターＴ細胞が内性自己ペプチドに自己反応性であり、そして組織の破壊を引き起こす疾患のクラスである。それ故、免疫応答は、自己抗原と称される被験体自体の抗原に対して載せられる。自己免疫疾患は、制限されないで、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）自己免疫脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グレーヴズ病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体をともなう強皮症、混合連結組織疾患、多発性筋炎、悪性貧血、突発性アディソソン病、自己免疫関連不妊症、糸球体腎炎（例えば、半月形糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン病、インシュリン耐性、および自己免疫糖尿病を含む。
【０１３９】
本明細書で用いられるとき、「自己抗原」は、正常宿主組織の抗原をいう。正常宿主組織は、癌細胞を含まない。それ故、自己抗原に対して載せられた免疫応答は、自己免疫疾患の文脈では、所望されない免疫応答であり、そして正常組織の破壊および損傷に寄与し、その一方、癌抗原に対して載せられた免疫応答は、所望される免疫疾患であり、そして腫瘍または癌の破壊に寄与する。それ故、自己免疫障害を処置することを狙う本発明のいくつかの局面では、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、特に自己免疫障害の標的であるような自己抗原とともに投与されることが推奨される。
【０１４０】
その他の例では、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、低用量の自己抗原とともに送達され得る。多くの動物研究は、低用量の抗原の粘膜投与が免疫欠乏応答性または「寛容」の状態を生じ得ることを示した。活性機構は、Ｔｈ１から離れ、優勢なＴｈ２およびＴｈ３（すなわち、ＴＧＦ−β優位）応答に向かうサイトカイン媒介免疫偏向のように見える。低用量抗原送達での活性抑制はまた、自己免疫疾患、例えば、慢性関節リウマチおよびＳＬＥの治療ではかなり重要である非関連免疫応答を抑制し得る（傍観者抑制）。傍観者（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ）抑制は、炎症前である局所環境中でＴｈ１−対抗−調節のサプレッサーサイトカインの分泌を含み、そしてＴｈ１サイトカインは、抗原特異的または抗原非特異的様式のいずれかで放出される。本明細書中で用いられる「寛容」は、この現象をいうために用いられる。実際、経口寛容は、実験自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）、実験自己免疫重症筋無力症、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）、およびインシュリン依存性糖尿病を含む、動物における多くの自己免疫疾患の処置で有効である。これらのモデルでは、自己免疫疾患の予防および抑制は、抗原特異的体液性および細胞性応答におけるＴｈ１からＴｈ２／Ｔｈ３応答のシフトをともなう。
【０１４１】
本発明はまた、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを用いて抗原非特異的な生来の免疫の活性化および感染性抗原投与への広範なスペクトルの抵抗性を誘導する方法を含む。本明細書で用いられるとき、この用語、生来の免疫の活性化は、Ｂ細胞以外の免疫細胞の活性化をいい、そして例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞もしくは抗原とは独立の様式で応答し得るその他の免疫細胞、またはこれらの細胞の特定の組み合わせの活性化を誘導し得る。感染性抗原投与への広範なスペクトルの抵抗性は、免疫細胞が活性な形態にあり、そして任意の侵入する化合物または微生物に応答するようにプライムされるので誘導される。細胞は、特定の抗原に対して特異的にプライムされる必要はない。これは、特に細菌戦、および旅人のような上記に記載したその他の状況で有用である。
【０１４２】
上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは被験体に直接投与され得るか、または核酸送達複合体と組み合わせて投与され得る。
核酸送達複合体は、標的化手段（例えば、標的細胞へのより高い親和性の結合を生じる分子）と結合された（例えば、イオン結合もしくは共有結合で結合されるか；または中にカプセル化される）核酸分子を意味する。核酸送達複合体の例は、ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、カチオン性脂質、ビロソームまたはリポソーム）と結合した核酸、または標的細胞特異的結合試薬（例えば、標的細胞特異的レセプターによって認識されるリガンド）を含む。好ましい複合体は、インビボで十分に安定であり得、標的細胞によるインターナリゼーションの前に有意な脱結合を防ぐ。しかし、この複合体は、細胞内の適切な条件下で切断可能であり得、その結果、上記オリゴヌクレチドは機能的形態で放出される。
【０１４３】
用語、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの有効量は、所望の生物学的効果を実現するに必要または十分な量をいう。例えば、粘膜免疫を誘導するために抗原とともに投与されたＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの有効量は、抗原への曝露の再にこの抗原に応答してＩｇＡの発生を引き起こすために必要な量であり、その一方、全身免疫を誘導するために必要なその量は、抗原への曝露の再にこの抗原に応答してＩｇＧの発生を引き起こすために必要な量である。本明細書で提供される教示と組み合わせ、種々の活性化合物の中で、そして能力、相対的生物利用性（バイオアベイラビリティ）、患者の体重、有害な副作用の重篤度、および投与の好ましい様式のような重み付け因子を選択することにより、実質的な毒性を引き起こさず、そしてなお特定の被験体を処置するために完全に有効である、有効な予防または治療処置養生法が計画され得る。任意の特定の適用のための有効量は、疾患、処置される症状、投与される特定のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド、被験体のサイズ、または疾患もしくは症状の重篤度のような因子に依存して変動し得る。当業者は、特定のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよび／または抗原および／またはその他の治療薬剤の有効量を、過度の実験を要することなく、実験により決定し得る。
【０１４４】
粘膜または局所送達のために本明細書中に記載される化合物の被験体用量は、代表的には、投与あたり０．１μｇ〜５０ｍｇの範囲であり、これは、毎日、毎週、または毎月、およびそれらの間の任意の長さの時間に与えられ得る適用に依存する。より代表的には、粘膜または局所用量は、投与あたり約１０μｇ〜１０ｍｇ、そして必要に応じて約１００μｇ〜１ｍｇの範囲であり、２〜４の投与が数日または数週間離れて間隔を置かれる。より代表的には、免疫刺激用量は、投与あたり約１μｇ〜１０ｍｇ、そして最も代表的には約１０μｇ〜１ｍｇの範囲であり、毎日または毎週投与される。抗原特異的な免疫応答を誘導する目的のための非経口送達のために本明細書中に記載される化合物の目的用量は、これら化合物が別の治療薬剤ではなく抗原とともに送達される場合、代表的には、ワクチンアジュバントまたは免疫刺激適用のための有効な粘膜用量より５〜１０，０００倍より高く、そしてより代表的には１０〜１，０００倍より高く、そして最も代表的には２０〜１００倍より高い。例えば、生来の免疫応答を誘導するため、ＡＤＣＣを増加するため、抗原特異的免疫応答を誘導するために、非経口送達のために本明細書中に記載される化合物の用量は、上記ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドがその他の治療薬剤と組み合わせるか、または特別の送達ビビクル中で投与されるとき、代表的には、投与あたり約０．１μｇ〜１０ｍｇの範囲であり、これは、適用に依存し、毎日、毎週、または毎月、およびそれらの間の任意のその他の長さの時間で与えられ得る。より代表的には、これらの目的のための非経口用量は、投与あたり約１０μｇ〜５ｍｇ、そして最も代表的には約１００μｇ〜１ｍｇの範囲であり、２〜４の投与が数日または数週間離れて間隔を置かれる。いくつかの実施形態では、しかし、これらの目的のための非経口用量は、上記に記載された代表的な用量より５〜１０，０００倍より高い範囲で用いられ得る。
【０１４５】
本明細書中に記載される任意の化合物について、上記治療的に有効な量は、最初、動物モデルから決定され得る。治療的に有効な用量はまた、ヒトで試験された（ヒト臨床試験が開始された）、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドに対する、そしてその他のアジュバント、例えば、ワクチン化目的のためのＬＴおよびその他の抗原のような、類似の薬学的活性を示すことが知られる化合物についてのヒトデータから決定され得る。より高い用量が、非経口投与のために必要であり得る。適用された用量は、投与された化合物の相対的生物利用性および能力に基づいて調節され得る。最大の効き目を達成するために用量を調節することは、上記に記載の方法に基づき、そしてその他の方法は、当該技術分野で周知であり、当業者の能力内に十分にある。
【０１４６】
本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液中で投与され、これは、慣用的に、塩、緩衝化試薬、保存剤、適合可能なキャリア、アジュバント、および必要に応じたその他の治療成分の薬学的に受容可能な濃度を含み得る。
【０１４７】
治療における使用には、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの有効量は、このオリゴヌクレオチドを所望の表面、例えば、粘膜、全身に送達する任意の様式によって被験体に投与され得る。本発明の薬学的組成物を投与することは、当業者に公知の任意の手段によって達成され得る。投与の好ましいルートは、制限されないで、経口、非経口、筋肉内、鼻内、舌下、気管内、吸入、眼、膣、および直腸を含む。
【０１４８】
経口投与には、上記化合物（すなわち、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド、抗原およびその他の治療薬剤）は、活性化合物（単数または複数）を、当該技術分野で周知の薬学的受容可能なキャリアと組み合わせることにより容易に処方され得る。このようなキャリアは、本発明の化合物が、処置される被験体による経口摂取のために、錠剤、ピル、糖衣丸、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などとして処方され得ることを可能にする。経口使用のための薬学的調製物は、固形賦形剤として得られ得、必要に応じて得られる混合物を粉砕し、そして顆粒の混合物を処理し、所望であれば、適切な補助剤を添加した後、錠剤または糖衣錠コアを得る。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、シュークロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖のような充填剤；例えば、トウモロコシスターチ、小麦スターチ、コメスターチ、ポテトスターチ、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のようなセルロース調製物である。所望であれば、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩のような崩壊剤が添加され得る。必要に応じて、この経口処方物はまた、生理食塩水または緩衝液、すなわち、内部の酸状態を中和するためのＥＤＴＡ中で処方され得るか、任意のキャリアなしで投与され得る。
【０１４９】
詳細にまた企図されるのは、上記の１つの成分または複数の成分の経口用量形態である。この１つの成分または複数の成分は、誘導体の経口送達が効き目があるように化学的に改変され得る。一般に、企図される化学的改変は、上記化合物分子自体への少なくとも１つの成分の付着であり、ここで、この成分は、（ａ）タンパク質分解の阻害；および（ｂ）胃または腸から血流中への取り込みを許容する。また望ましいのは、上記成分または複数の成分の全体の安定性における増加、および身体中の循環時間における増加である。このような成分の例は：ポリエチレングリコール、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンおよびポリプロリンを含む。ＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉおよびＤａｖｉｓ、１９８１、「Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｄｄｕｃｔｓ」  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ、ＨｏｃｅｎｂｅｒｇおよびＲｏｂｅｒｔｓ編、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、３６７−３８３頁；Ｎｅｗｍａｒｋら、１９８２、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５−１８９。用いられ得るその他のポリマーは、ポリ−１，３−ジオキソランおよびポリ−１，３，６−チオキソカンである。薬学的用途のために好ましいのは、上記に示されたように、ポリエチレングルコール成分である。
【０１５０】
上記成分（または誘導体）にとって、放出の位置は、胃、小腸（十二指腸、空腸、または回腸）、または大腸であり得る。当業者は、胃で溶解せず、なお十二指腸または小腸中のいずれかで材料を放出する利用可能な処方物を有する。好ましくは、この放出は、上記オリゴヌクレチド（または誘導体）の保護によるか、または小腸中のように胃環境を超える生物学的活性材料の放出によるかのいずれかで、胃環境の有害な影響を避ける。
【０１５１】
完全な胃耐性を確実にするために、少なくともｐＨ５．０まで不透過性である被覆が必須である。腸被覆として用いられるより一般的な不活性成分の例は、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ５０、ＨＰＭＣＰ５５、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ、セルロレースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ、およびＳｈｅｌｌａｃである。これらの被覆は、混合されたフィルムとして用いられ得る。
【０１５２】
被覆または被覆の混合物はまた、錠剤上で用いられ得、これらは、胃に対する保護のためには意図されない。これは、糖被覆、またはこの錠剤をより容易に嚥下する被覆を含み得る。カプセルは、乾燥治療薬、すなわち、粉末の送達のための（ゼラチンのような）ハードシェルからなり得；液体形態のためには、軟質シェルが用いられ得る。カシュ剤のシェル材料は、厚いスターチまたはその他の食用紙であり得る。ビル、口内錠、成形錠剤または錠剤粉砕物には、湿度集塊（ｍａｓｓｉｎｇ）技法が用いられ得る。
【０１５３】
治療薬は、約１ｍｍの粒子サイズの顆粒またはペレットの形態にある微細な複数粒子として処方物中に含められ得る。カプセル投与のための材料の処方物はまた、粉末、軽く圧縮されたプラグまたは錠剤でさえあり得る。この治療薬は、圧縮によって調製され得る。
【０１５４】
着色剤および芳香剤もまた含められ得る。例えば、上記オリゴヌクレチド（または誘導体）は、（リポソームによるか、またはマイクロスフェアカプセル化によるように）処方され得、そして次に、着色剤および芳香剤を含む冷蔵飲料のような食用製品内にさらに含まれ得る。
【０１５５】
不活性な材料で治療薬の容量を希釈または増加し得る。これらの希釈剤は、炭水化物、特にマンニトール、ａ−ラクトース、無水ラクトース、セルロース、シュークロース、改変デキストランおよびスターチを含み得る。特定の無機塩もまた、充填剤として用いられ得、三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウムおよび塩化ナトリウムを含む。いくつかの市販され、入手可能な希釈剤は、Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ  １５００、  ＥｍｃｏｍｐｒｅｓｓおよびＡｖｉｃｅｌｌである。
【０１５６】
固形投薬形態への治療薬の処方物には崩壊剤が含められ得る。崩壊剤として用いられる材料は、制限されないで、スターチに基づく市販の崩壊剤、Ｅｘｐｌｏｔａｂを含むスターチを含む。スターチグリコレートナトリウム、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ウルトラアミロペクチン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジ皮、酸カルボキシメチルセルロース、天然スポンジおよびベントナイトがすべて用いられ得る。崩壊剤の別の形態は、不溶性カチオン性交換樹脂である。粉末化ガムが崩壊剤としておよびバインダーとして用いられ得、そしてこれらは、寒天、Ｋａｒａｙａまたはトラガカントゴムのような粉末化ガムを含み得る。アルギン酸およびそのナトリウム塩はまた、崩壊剤として有用である。
【０１５７】
バインダーは、上記治療薬剤を一緒に保持するために用いられ得、ハード錠剤を形成し、そしてアラビアゴム、トラガカントゴム、スターチおよびゼラチンのような天然産物からの材料を含む。その他は、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）およびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を含む。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は両者、アルコール性溶液中で用いられ得、上記治療薬を顆粒にする。
【０１５８】
抗摩擦剤が、上記治療薬の処方物中に含められ得、処方プロセスの間の粘着を防ぐ。潤滑剤が、上記治療薬とダイの壁との間の層として用いられ得、そしてこれらは、制限されないで；そのマグネシウムおよびカルシウム塩を含むステアリン酸、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、液体パラフィン、植物油およびワックスを含む。可溶性潤滑剤がまた用いられ得、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、種々の分子量のポリエチレングリコール、Ｃａｒｂｏｗａｘ  ４０００および６０００がある。
【０１５９】
処方の間の薬物の流れ性質を改善し得、そして圧縮の間の再配列を支援し得る滑沢剤が添加され得る。これら滑沢剤は、スターチ、タルク、発熱性シリカ、および水和シリコアルミネートを含み得る。
【０１６０】
上記治療薬の水性環境への溶解を支援するために、湿潤剤として界面活性剤が添加され得る。界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホサクシネートナトリウムおよびジオクチルスルホネートナトリウムのようなアニオン性界面活性剤を含み得る。カチオン性界面活性剤が用いられ得、そして塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含み得る。界面活性剤として処方物中に含められ得る可能な非イオン性界面活性剤のリストは、ラウロマクロゴール４００、ポリオキシ４０ステアレート、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油１０、５０および６０、グリセロールモノステアレート、ポリソルベート４０、６０、６５および８０、シュークロース脂肪酸エステル、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性剤は、上記オリゴヌクレチドまたは誘導体の処方物中に、単独または異なる比率で混合物としてのいずれかで存在し得る。
【０１６１】
経口的に用いられ得る薬学的調製物は、ゼラチンから作製される押しばめカプセル、ならびに、ゼラチン、およびグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤から作製される軟質のシールされたカプセルを含む。この押しばめカプセルは、ラクトースのような充填剤との混合物中の活性成分、スターチのようなバインダー、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、そして必要に応じて安定化剤を含み得る。軟質カプセルでは、活性化合物は、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールのような適切な液体中に溶解または懸濁され得る。さらに、安定化剤が添加され得る。経口投与のために処方されるマイクロスフェアもまた用いられ得る。このようなマイクロスフェアは、当該技術分野で良好に規定されている。経口投与のためのすべての処方物は、このような投与のために適切な投薬量であるべきである。
【０１６２】
頬投与には、上記組成物は、従来様式で処方された錠剤または口内錠の形態をとり得る。
【０１６３】
吸入による投与には、本発明による使用のための化合物は、加圧パックまたは噴霧器からのエアロゾルスプレー提示の形態で、適切な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適切なガスの使用とともに首尾良く送達され得る。
加圧エアロゾルの場合には、投薬量単位は、計測された量を送達するためのバルブを提供することにより決定され得る。吸入器または注入器におけるの使用のために、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジが、上記化合物の粉末混合物、およびラクトースまたはスターチのような適切な粉末ベースを含んで処方され得る。
【０１６４】
本明細書中でまた企図されるのは、上記オリゴヌクレチド（またはその誘導体）の肺送達である。この  オリゴヌクレチド（またはその誘導体）は、吸入の間に哺乳動物の肺に送達され、そして肺の上皮内層を横切って血流中に入る。吸入された分子のその他の報告は、Ａｄｊｅｉら、１９９０、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、７：５６５〜５６９；Ａｄｊｅｉら、１９９０、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、６３：１３５〜１４４（ロイプロリドアセテート）；Ｂｒａｑｕｅｔら、１９８９、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３（補遺５）：１４３〜１４６（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄら、１９８９、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＩＩＩ巻、２０６〜２１２頁（ａ１−アンチトリプシン）；Ｓｍｉｔｈら、１９８９、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１１４５−１１４６（ａ−１−プロテイナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎら、１９９０、「タンパク質のエアロゾル化」、  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ＩＩ，  Ｋｅｙｓｔｏｎｅ、Ｃｏｌｏｒａｄｏ、Ｍａｒｃｈ（組み換えヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓら、１９８８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３４８２〜３４８８（インターフェロン−ｇおよび腫瘍壊死因子α）およびＰｌａｔｚら、米国特許番号第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）。全身効果のための薬物の肺送達のための方法および組成物が、１９９５年９月１９日にＷｏｎｇらに発行された米国特許第５，４５１，５６９号に記載されている。
【０１６５】
本発明の実施における使用のために企図されるのは、治療薬産物の肺送達のために設計された広範な範囲の機械的デバイスであり、制限されないで、噴霧器、計測用量吸入器、および粉末吸入器を含み、これらすべては当業者に親しまれている。
【０１６６】
本発明の実施のために適切な市販され、入手可能なデバイスのいくつかの詳細な例は、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ、Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉによって製造されるＵｌｔｒａｖｅｎｔ噴霧器；Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ、Ｃｏｌｏｒａｄｏによって製造されるＡｃｏｒｎ  ＩＩ噴霧器；Ｇｌａｘｏ  Ｉｎｃ．、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａによって製造されるＶｅｎｔｏｌｉｎ計測用量吸入器；およびＦｉｓｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｂｅｄｆｏｒｄ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓによって製造されるＳｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器である。
【０１６７】
すべてのこのようなデバイスは、オリゴヌクレチド（または誘導体）の分与のために適切な処方物の使用を必要とする。代表的には、各処方物は、採用されるデバイスのタイプに特異的であり、そして治療において有用な通常の希釈剤、アジュバントおよび／またはキャリアに加え、適切な推進剤材料の使用を含み得る。また、リポソーム、マイクロカプセルまたはマイクロスフェア、封入複合体、またはその他のタイプのキャリアの使用が企図される。化学的に改変されたオリゴヌクレチドがまた、化学的改変のタイプまたは採用されるデバイスのタイプに依存して異なる処方物で調製され得る。
【０１６８】
噴霧器との使用のために適切な処方物は、ジェットまたは超音波のいずれにせよ、代表的には、溶液のｍＬあたり約０．１〜２５ｍｇの生物学的に活性なオリゴヌクレチドの濃度で水中に溶解されたオリゴヌクレチド（または誘導体）を含む。この処方物はまた、緩衝液および単純糖（例えば、オリゴヌクレチド安定化および浸透圧の調節のため）を含み得る。噴霧器処方物もまた、界面活性剤を含み得、エアロゾルを形成することで溶液の噴霧化によって引き起こされるオリゴヌクレチドの表面で誘導される凝集を減少または防ぐ。
【０１６９】
計測用量吸入器デバイスとの使用のための処方物は、一般に、界面活性剤の支援で推進剤中に懸濁されたオリゴヌクレチド（または誘導体）を含む微細に分割された粉末を含む。この推進剤は、この目的のために採用される任意の従来材料であり得、例えば、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、またはヒドロカーボンであり、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、および１，１，１，２−テトラフルオロエタン、またはそれらの組み合わせを含む。適切な界面活性剤は、ソルビタントリオレエートおよびダイズレシチンを含む。オレイン酸もまた、界面活性剤として有用であり得る。
【０１７０】
粉末吸入器デバイスから分与するための処方物は、オリゴヌクレチド（または誘導体）を含む微細に分割された乾燥粉末を含み、そしてまた、例えば、処方物の５０〜９０重量％の、デバイスから粉末の散布を容易にする量のラクトース、ソルビトール、シュークロース、またはマンニトールのようなバルキング剤を含み得る。上記オリゴヌクレチド（または誘導体）は、遠位肺への最も効果的な送達のために、１０ｍｍ（またはミクロン）より小さい、最も好ましくは０．５〜５ｍｍの平均粒子サイズを備えた粒子で最も有利には調製されるべきである。
【０１７１】
本発明の薬学的組成物の鼻送達がまた、企図される。鼻送達は、肺中の上記産物の堆積の必要性なくして、鼻に治療産物を投与した後、本発明の薬学的組成物の直接的な血流中への通過を可能にする。鼻送達のための処方物は、デキストランまたはシクロデキストランとのものを含む。
【０１７２】
鼻投与のためには、有用なデバイスは、計測された用量のスプレーが取り付けられる、小さな、ハードボトルである。１つの実施形態では、この計測された用量は、本発明の薬学的組成物の溶液を規定された容積のチャンバー中に引くことによって送達され、このチャンバーは、このチャンバー中の液体が圧縮されるとき、スプレーを形成することにより処方物をエアロゾル化し、そして噴霧するような寸法のアパーチャを有する。このチャンバーは圧縮されて本発明の薬学的組成物を投与する。特定の実施形態では、このチャンバーはピストン配列である。このようなデバイスは、市販され入手可能である。
【０１７３】
あるいは、アパーチャまたは開口部を備えたプラスチック圧搾ボトルは、圧搾されるときスプレーを形成することにより、エアロゾル処方物をエアロゾル化するような寸法である。この開口部は、通常、このボトルの頂部に見出され、そしてこの頂部は、ほぼテーパー状であり、上記エアロゾル処方物の効率的な投与のために鼻通路中に部分的に適合する。好ましくは、この鼻吸入器は、薬物の測定された用量の投与のために、計測された量のエアロゾル処方物を提供する。
【０１７４】
上記化合物は、全身的にそれらを送達することが所望されるとき、注入による、例えばボーラス注射または連続的注入による非経口投与のために処方され得る。注入のための処方物は、単位用量形態、例えば、添加された保存剤とともに、アンプル中または複数用量コンテナ中に調製され得る。これら組成物は、懸濁物、溶液または油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中のエマルジョンのような形態をとり得、そして懸濁剤、安定化剤および／または分散剤のような処方剤を含み得る。
【０１７５】
非経口投与のための薬学的処方物は、水溶性形態にある活性化合物の水溶液を含む。さらに、活性化合物の懸濁物が、適切な油性注入懸濁物として調製され得る。適切な親油性溶媒またはビヒクルは、ゴマ油のような脂肪油、またはエチルオレエートまたはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、またはリポソームを含む。水性注入懸濁物は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランのような、この懸濁物の粘度を増加する物質を含み得る。必要に応じて、上記懸濁物はまた、上記化合物の溶解度を増加し、高度に濃縮された溶液の調製を可能にする適切な安定化剤または試薬を含み得る。
【０１７６】
あるいは、上記活性化合物は、使用前に適切なビヒクル、例えば、滅菌発熱物質フリーの水との調製のための粉末形態であり得る。
【０１７７】
上記化合物はまた、例えば、ココアバターまたはその他のグリセリドのような従来の坐剤を含む坐剤または保持浣腸のような直腸または膣組成物中に処方され得る。
【０１７８】
先に記載された処方物に加え、上記化合物はまた、デポー調製物として処方され得る。このような長期に作用する処方物は、適切なポリマー材料または疎水性材料（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）もしくはイオン交換樹脂とともに、または、控え目な可溶性誘導体として、例えば、控え目な可溶性塩として処方され得る。
【０１７９】
薬学的組成物はまた、適切な固形またはゲル相キャリアまたは賦形剤を含み得る。このようなキャリアまたは賦形剤の例は、制限されないで、炭酸カリウム、リン酸カリウム、種々の糖、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールのようなポリマーを含む。
【０１８０】
適切な液体または固体の薬学的調製物形態は、例えば、吸入のための水溶液また塩溶液であり、顕微鏡的金粒子上のマイクロカプセル化、キレート化（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）、被覆であり、リポソームに含まれ、噴霧化され、エアロゾルであり、皮膚中への移植のためのペレットであり、または皮膚中にひっかかれる鋭い目的物に乾燥される。上記薬学的組成物はまた、顆粒、粉末、錠剤、被覆錠剤、（マイクロカプセル）、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁物、クリーム、ドロップまたは活性化合物の遅延放出をともなう調製物であって、これらの調製物では、上記に記載のように、賦形剤および添加物および／または補助剤、例えば、崩壊剤、バインダー、被覆剤、膨潤剤、潤滑剤、芳香剤、甘味剤または可溶化剤が通例として用いられる。上記薬学的組成物は、種々の薬物送達システムにおける使用のために適切である。薬物送達のための方法の簡単な総説には、本明細書中に参考として援用される、Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３、１９９０を参照のこと。
【０１８１】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよび必要に応じてその他の治療薬および／または抗原は、それ自体（ニート）または薬学的に受容可能な塩の形態で投与され得る。医薬で用いられるとき、塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能でない塩が、その薬学的に受容可能な塩を調製するために首尾良く用いられ得る。このような塩は、制限されないで：塩化水素、塩化臭素、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸を含む。また、このような塩は、カルボン酸基のナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩のような、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩として調製され得る。
【０１８２】
適切な緩衝化剤は：酢酸および塩（１−２％Ｗ／Ｖ）；クエン酸および塩（１−３％Ｗ／Ｖ）；ホウ酸および塩（０．５−２．５％Ｗ／Ｖ）；およびリン酸および塩（０．８−２％Ｗ／Ｖ）を含む。適切な保存剤は、塩化ベンザルコニウム（０．００３−０．０３％Ｗ／Ｖ）；クロロブタノール（０．３−０．９％Ｗ／Ｖ）；バラベン（０．０１−０．２５％Ｗ／Ｖ）およびチメロザール（０．００４−０．０２％Ｗ／Ｖ）を含む。
【０１８３】
本発明の薬学的組成物は、有効量のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよび必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア中に含められる抗原および／またはその他の治療薬剤を含む。用語薬学的に受容可能なキャリアは、ヒトまたはその他の脊椎動物への投与に適切である１つ以上の適合性の固体または液体充填剤、希釈剤またはカプセル化剤を意味する。用語キャリアは、有機または無機成分、天然または合成を示し、それらと活性成分が組み合わされ、その適用を容易にする。薬学的組成物の成分はまた、本発明の化合物、および互いと、所望の薬学的効率を実質的に損なう相互作用がないような様式で混ざり合わされ得る。
【０１８４】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、Ｔｏｌｌ様レセプター９（ＴＬＲ９）との相互作用を通じてそれらの免疫刺激効果を奏するらしいことが最近報告された。Ｈｅｍｍｉ  Ｈら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：７４０−５。ＴＬＲ９シグナル伝達活性は、それ故、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたはその他の免疫刺激オリゴヌクレオチドに応答して、ＮＦ−κＢ、ＮＦ−κＢ関連シグナル、およびＮＦ−κＢの上流の適切な事象および中間体を測定することによって測定され得る。
【０１８５】
本発明は、以下の実施例によってさらに示され、実施例はいかなる様式においてもさらなる限定として解釈されるべきではない。本出願の全体で引用されるすべての参考文献（文献参照物、発行された特許、公開特許出願、および同時係属中の特許出願）の全体の内容は、本明細書によって明示して参考として援用される。
【実施例】
【０１８６】
（材料および方法：）
（オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）および試薬）
すべてのＯＤＮは、Ｂｉｏｓｐｒｉｎｇ（Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入されたか、またはＣｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＧｍｂＨ（Ｌａｎｇｅｎｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によって提供され、同一性および純度はＣｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＧｍｂＨによってコントロールされ、そしてＬｉｍｕｌｕｓアッセイ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ、Ｖｅｒｖｉｅｒｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）によっては検出されないエンドトキシンレベルを有していた  （＜０．１ＥＵ／ｍｌ）。ＯＤＮは、滅菌エンドトキシンフリーのＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ、Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中に懸濁され、そして無菌状態下で貯蔵および取り扱われ、微生物およびエンドトキシン汚染の両方を防いだ。すべての希釈は、エンドトキシンフリーのＴｒｉｓ−ＥＤＴＡを用いて実施した。
【０１８７】
（ＴＬＲアッセイ）
ＨＥＫ２９３細胞を、ヒトＴＬＲ９および６ｘＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレセプタープラスミドを発現するベクターでエレクトロポーレーションによってトランスフェクトした。安定なトランスフェクタント（３ｘ１０４細胞／ウェル）をＯＤＮと１６時間の間３７℃でインキュベートした。各データ点は、三重で行った。細胞を溶解し、そしてルシフェラーゼ活性についてアッセイした（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｚａｖｅｎｔｅｍ、ＢｅｌｇｉｕｍからのＢｒｉｔｅＬｉｔｅ  ｋｉｔを用いた）。刺激指数は、ＯＤＮの添加のない培地のリポーター活性を参照して算出した。
【０１８８】
細胞精製
健常ヒトドナーからの末梢血軟膜（バフィーコート）調製物をＤuｓｓｅｌｄｏｒｆ（Ｇｅｒｍａｎｙ）大学の血液バンクから得、そしてＰＢＭＣをＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）上の遠心分離によって精製した。細胞は、５％（ｖ／ｖ）熱不活性化ヒトＡＢ血清（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）または１０％（ｖ／ｖ）熱不活性化ＦＣＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリンおよび１００mｇ／ｍｌのストレプトマイシン（すべてはＳｉｇｍａから）を補填したＲＰＭＩ１６４０培地中３７℃で、湿潤化インキュベーター中で培養した。
【０１８９】
（サイトカイン検出およびフローサイトメトリー分析）
ＰＢＭＣを再懸濁し、そして９６ウェルの丸底プレートに添加した。ＰＢＭＣを種々のＯＤＮ濃度とインキュベートしそして培養上清液（ＳＮ）を示された時点の後に回収した。直ちに用いない場合には、ＳＮは、必要となるまで−２０℃で貯蔵した。
【０１９０】
ＳＮ中のサイトカインの量は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６およびＩＬ−１０に対するＥＬＩＳＡキット（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎcｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）または市販され入手可能な抗体（ＰＢＬ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ、ＵＳＡ）を用いて開発されたＩＦＮ−αに対する社内（ｉｎ−ｈｏｕｓｅ）のＥＬＩＳＡを用いて評価した。
【０１９１】
（実施例１：ヒトＰＢＭＣからＩＦＮ−α発現を誘導する短い半軟質ＣｐＧ  ＯＤＮの能力
ヒトＰＢＭＣから、これら細胞の本明細書中に記載されるＣｐＧオリゴヌクレオチドへの曝露の後に分泌されるインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）のレベルは、添付した図１に示される。調べられた試験オリゴヌクレオチドは、配列番号によって図面中に描写される。特定のデータ点を生成するために用いたオリゴヌクレオチドの濃度は、Ｘ軸（μＭ）に沿って描写される。
【０１９２】
図１に示されるように、これらアッセイで調査されたオリゴヌクレオチドの各々は、顕著なＩＦＮ−α分泌を生成し得た。完全なホスホジエステルＯＤＮ（配列番号７）は、バックグラウンドレベルのみのＩＦＮ−α産生を引き起した。
【０１９３】
この研究で用いたＯＤＮを説明する表を以下に提示する（表１）。
【０１９４】
【表１】
2008531018.tif 000005
（実施例２：）ＴＬＲ９を活性化する短い半軟質ＣｐＧ  ＯＤＮの能力
実施例１で試験されたのと同じＯＤＮを、材料および方法で説明されたようなＴＬＲ９レポーター遺伝子システム中でアッセイした。
【０１９５】
ＥＣ５０は、Ｓｉｇｍａ  Ｐｌｏｔ（Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８．０用のＳｉｇｍａＰｌｏｔ  ２００２）を用いて算出した。最大刺激指数（最大ＳＩ）は、任意のＯＤＮについて試験された全ての濃度の最高値と培地コントロールとの間の商（ｑｕｏｔｉｅｎｔ）として算出した。これらの値は、三重で決定された各データ点での、２つの独立した実験の平均である。
【０１９６】
（表２  短い半軟質ＯＤＮによるＴＬＲ９発現細胞の刺激指数）
【０１９７】
【表２】
2008531018.tif 000006
（実施例３．異なる濃度における短いＯＤＮ半軟質および完全硬化が示すＴＬＲ９活性）
ヒトＴＬＲ９およびＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、ＤＯＴＡＰ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルサルフェート）の存在下、示されたＯＤＮ濃度で１６時間インキュベートした。細胞を溶解し、そしてＴＬＲ９活性化を、ルシフェラーゼ活性をアッセイすることによって決定した。刺激指数（ＳＩ）は、−非刺激細胞の活性を参照してＴＲＬ９活性化の倍数で表す。１．５未満のＳＩはバックグラウンドと考えられる。試験されたＯＤＮとデータは表３に提示される。
【０１９８】
【表３】
2008531018.tif 000007
（実施例４．異なる濃度における短いＯＤＮ半軟質および完全硬化が示すＩＦＮ−α誘導）
図２Ａおよび２Ｂに示されるように、両者半軟質ＣｐＧ含有ＯＤＮである、２６（７ｍｅｒ）および２４（６ｍｅｒ）は、ＤＯＴＡＰの存在下で、強力なＩＦＮ−α誘導を示した。この誘導は、対応する完全に硬化されたＣｐＧ  ＯＤＮ  ２５および２３（これらのＯＤＮは同じ配列であるが、ＣとＧとの間にホスホジエステル結合を欠いている）のそれよりも強力であった。同じ効果が、硬化されたＯＤＮ２７および２９と比較したとき、より短いＯＤＮ２８および３０（ホスホジエステル結合を含む）で検出された。バックグラウンドを超えるＩＦＮ−αの誘導はまた、ＯＤＮ３１でも観察された。
【０１９９】
（実施例５：改変されたリンカーをもつ短いＯＤＮのＴＬＲ−９を活性化する能力）
改変されたリンカーのＴＲＲ−９レセプターを活性化する能力を調査した。同じ配列であるが、中央Ｃ−Ｇ塩基間に異なるリンカーをもつ４つのＯＤＮを調査した（ＯＤＮ配列は表４を参照のこと）。ヒトＴＬＲ９およびＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞をことなるＯＤＮとともに１６時間インキュベートした。細胞を溶解し、そしてＴＬＲ９活性化をルシフェラーゼ活性をアッセイすることによって決定した。図３Ａに見られ得るように、短いオリゴのいずれもＴＬＲを活性化することはできなかった。ポジティブコントロールとして用いられたＯＤＮ３８はＴＬＲ９の誘導をまさに示した。
【０２００】
ＴＬＲ誘導に対するリポソームトランスフェクション剤の影響を調査するために、ＯＤＮを、ＤＯＴＡＰ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルサルフェート）で予め複合体化することによって実験を繰り返した。ＤＯＴＡＰに対するＯＤＮの比は、１μＭ  ＯＤＮ対１０μｇ／ｍｌ  ＤＯＴＡＰで一定に保った。図３Ｂは、ＤＯＴＡＰへの複合体化の後、半軟質ＯＤＮ（配列番号２６）がＴＬＲを活性化することができたことを示す。
【０２０１】
（実施例６：改変されたリンカーをもつ短いＯＤＮのヒトＰＢＭＣ中のサイトカインを誘導する能力）
実施例５で調べたのと同じＯＤＮを、ＰＢＭＣ中のサイトカイン発現を誘導するそれらの能力について試験した。ＯＤＮを細胞に添加する前にＤＯＴＡＰに予め複合体化した。ＤＯＴＡＰに対するＯＤＮの比は、１μＭ  ＯＤＮ対１０μｇ／ｍｌ  ＤＯＴＡＰで一定に保った。４Ａに見られるように、これらのＯＤＮは、ＩＦＮ−α分泌を誘導する異なる能力を示す。半軟質ＯＤＮ（配列番号２６）および非改変リンカーをもつＯＤＮは、最も強力な誘導プロフィールを示した。コントロールＯＤＮ（配列番号３８）は、非常に低い濃度でさえ、強力なＩＦＮ−α分泌を誘導し得た。ＩＬ−１０の場合、コントロールＯＤＮは、再び、試験されたすべての濃度でサイトカインの分泌を誘導した。試験されたＯＤＮのいずれも、ＩＬ−１０分泌の強力な誘導は示さなかった（図４Ｂ）。
【０２０２】
ＩＬ−６分泌がモニターされたとき、異なるプロフィールが観察された。強力な誘導がメチルホスホネートおよびエチルホスホネートリンカーを有するＯＤＮ（配列番号３６および配列番号３７）で観察され、その一方、改変されたリンカーは、かなりより低い応答を示した。より少ない誘導が、ホスホロチオエートＯＤＮ（配列番号２５）で観察され、そしてコントロールＯＤＮ（配列番号３８）に近いレベルが、半軟質ＯＤＮ（配列番号２６）について観察された（Ｆｉｇ  ４Ｃ）。ＩＦＮ−γサイトカインの分泌は、再びなお異なる状況を示した。分泌は、半軟質または非改変ＯＤＮへの曝露によって容易に達成された。メチルホスホネートまたはエチルホスホネートリンカーをもつＯＤＮは、適度の誘導をのみを示し、その一方、コントロールＯＤＮ（配列番号３８）は、ＩＦＮ−γ分泌を誘導することはできなかった（図４Ｄ）。
【０２０３】
（実施例７：改変されたリンカーをもつオリゴジヌクレオチドのヒトＰＢＭＣ中のサイトカイン発現を誘導する能力）
異なるリンカーをもつ５つのＧＣジヌクレオチドを、ＰＢＭＣ中のサイトカイン分泌を誘導するそれらの能力について試験した。ＯＤＮを、それらを細胞に添加する前に、ＤＯＴＡＰと、１μＭ  ＯＤＮ対１０μｇ／ｍｌ  ＤＯＴＡＰの比で予め複合体化した。このＯＤＮジヌクレオチドは、高濃度でＩＦＮ−α分泌を誘導することができた（図５Ａ）。実施例６で観察されたように、コントロールＯＤＮ（配列番号３８）は、試験されたすべての濃度でＩＦＮ−α分泌を誘導することができた。サイトカインＩＬ−１０の分泌は、類似の誘導プロフィールを示した。ＩＬ−１０は、試験されたすぺての濃度でＯＤＮ（配列番号３８）によって誘導され得た。試験された最も高い濃度でのみ、ダイマーＯＤＮは、ＩＬ−１０分泌の誘導を示した。３’アミノヘキシル改変ＯＤＮ（配列番号４０）は、ＩＬ−１０分泌を誘導する能力を示さなかった（図５Ｂ）。ＩＬ−６サイトカインの分泌がモニターされたとき、異なるパターンが出現した。コントロールＯＤＮ（配列番号３８）は、試験された濃度の各々で適度のレベルのＩＬ−６分泌を誘導し得た。試験されたすべてのジヌクレオチドＯＤＮは、コントロールＯＤＮ（配列番号３８）によって誘導されるより高いレベルのＩＬ−６を誘導し得たが、より高い濃度でのみであった（図５Ｃ）。
【０２０４】
（実施例８：二重−ジヌクレオチド（Ｃ−Ｇ−Ｌ）−２ｄｏｕｂ−ｂｕｔのヒトＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−α分泌を誘導する能力）
ヒトＰＢＭＣからの、これら細胞がＯＤＮ（Ｃ−Ｇ−Ｌ）−２ｄｏｕｂ−ｂｕｔ（配列番号４３）に曝された後の分泌されたＩＦＮ−αおよびコントロールＯＤＮ（配列番号３８）のレベルを図６Ａに示す。ＯＤＮの濃度は、Ｘ軸（μＭ）に沿って描写される。ＤＯＴＡＰに対するＯＤＮの比は、４μＭ  ＯＤＮ対１０μｇ／ｍｌ  ＤＯＴＡＰで一定に保った。ＯＤＮは、ＤＯＴＡＰと、複合体のＰＢＭＣへの添加前に予め複合体化された。両方のＯＤＮは、ＩＦＮ−α分泌を誘導し得るが、ＯＤＮ（配列番号３８）は、かなりより低い濃度で活性である。
【０２０５】
図６Ｂに示されるように、この（Ｃ−Ｇ−Ｌ）−２ｄｏｕｂ−ｂｕｔ  ＯＤＮは、（コントロールとは対照的にＯＤＮ）ＩＬ−１０分泌を誘導しなかった。ＩＬ−６サイトカインの場合、この（Ｃ−Ｇ−Ｌ）−２ｄｏｕｂ−ｂｕｔは、より高い濃度で分泌の誘導を示したが、まさにＤＯＴＡＰを用いたネガティブコントロール実験は、類似の誘導を示した（図６Ｃ）
【０２０６】
【表４−１】
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【０２０７】
【表４−２】
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前述の書面の詳細は、当業者が本発明を実施することを可能にするに十分であると考えられる。本発明は、提供された実施例により範囲は制限されない。なぜなら、これらの実施例は、本発明の１つの局面の１つの例示として意図され、そしてその他の機能的に等価な実施形態が本発明の範囲内であるからである。本明細書に示され、そして記載されるものに加え、本発明の種々の改変が前述の説明から当業者に明らかになり、そして添付の請求項の範囲内に入る。本発明の利点および目的は、本発明の各々の実施形態によって必ずしも包含されない。
【図面の簡単な説明】
【０２０８】
【図１】図１は、グラフの頂部のＸ軸に沿った番号によって列挙されるオリゴヌクレオチドへのヒトＰＢＭＣの曝露後の、これらの細胞から分泌されたインターフェロンαのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を示すグラフのセットである。図１に示される試験したオリゴヌクレオチドは、１Ａ＝配列番号１、１Ｂ＝配列番号２、１Ｃ＝配列番号３、１Ｄ＝配列番号４を含む。具体的なデータ点を生じさせるために使用したオリゴヌクレオチドの濃度を、Ｘ軸（μＭ）に沿って示す。示されるデータは、４〜６人のドナーの平均を表す。ｐｇ／ｍｌでの絶対的なレベルは、直接比較することができない。なぜなら、互いの間に変動性を示す種々のドナー由来のＰＢＭＣを使用したからである。
【図２】図２は、種々の濃度でのＩＦＮ−αに対する半軟質の短いＣｐＧ  ＯＤＮと完全に硬化された短いＣｐＧ  ＯＤＮとの比較を示すグラフのセットである。配列番号２３および２４が図２Ａに示される。配列番号２５、２６、２７、２８、２９、３０、および３１が図２Ｂに示される。
【図３】図３は、以下の５つの異なるＯＤＮに関して種々のＯＤＮ濃度でのＴＬＲ  ９の誘導を示すグラフのセットである：配列番号２５（円）、配列番号２６（逆三角形）、配列番号３６（正方形）、配列番号３７（菱形）、配列番号３８（三角形）およびＤＯＴＡＰのみ（六角形）。ヒトＴＬＲ９およびＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、示されるＯＤＮ濃度で１６時間インキュベートした。細胞を溶解し、そしてルシフェラーゼ活性をアッセイすることによりＴＬＲ９活性化を決定した。各データ点は三連で行った。図３Ｂは、ＤＯＴＡＰ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ（ｄｉｏｌｅｏｙｌｏｘｙ））プロピル］―Ｎ，Ｎ，Ｎ―トリエチルアンモニウムメチルスルフェート）によって事前に複合体化させたＯＤＮを使用した実験を示し、一方、図３Ａは、ＤＯＴＡＰを用いない実験を示す。
【図４】図４は、以下の種々の安定化されたヌクレオチド間結合を有するＯＤＮへのヒトＰＢＭＣの曝露後の、これらの細胞から分泌されたサイトカインのレベルを示すグラフのセットである：配列番号３８（円）、配列番号２５（逆三角形）、配列番号２６（正方形）、配列番号３６（菱形）および配列番号３７（三角形）。図４Ａは、ＩＦＮ−α分泌の誘導を示す。一方、図４Ｂ〜４Ｄは、それぞれＩＬ−１０、ＩＬ−６およびＩＦＮ−γの分泌を示す。具体的なデータ点を生じさせるために使用したオリゴヌクレオチドの濃度を、Ｘ軸に沿って示す（μＭ）。示されるデータは、３人のドナーの平均を表す。
【図５】図５は、以下の種々の安定化されたヌクレオチド間結合を有するＯＤＮジヌクレオチドへのヒトＰＢＭＣの曝露後の、これらの細胞から分泌されたサイトカインのレベルを示すグラフのセットである：配列番号３８（円）、配列番号４０（逆三角形）、配列番号４１（正方形）、配列番号４２（菱形）、配列番号３９（三角形）および配列番号３１（六角形）。図５Ａは、ＩＦＮ−α分泌の誘導を示す。一方、図５Ｂおよび図５Ｃは、それぞれＩＬ−１０およびＩＬ−６の分泌を示す。具体的なデータ点を生じさせるために使用したオリゴヌクレオチドの濃度を、Ｘ軸に沿って示す（μＭ）。示されるデータは、３人のドナーの平均を表す。
【図６】図６は、ＯＤＮ  （Ｃ−Ｇ−Ｌ）−２ｄｏｕｂ−ｂｕｔ（配列番号４３；明るい円）、ポジティブコントロールＯＤＮ（配列番号３８；逆三角形）またはＤＯＴＡＰのみ（暗い円）へヒトＰＢＭＣを曝露した後の、これらの細胞から分泌されたサイトカインのレベルを示すグラフのセットである。図６Ａは、ＩＦＮ−α分泌の誘導を示す。一方、図６Ｂおよび６Ｃは、それぞれＩＬ−１０およびＩＬ−６の分泌を示す。具体的なデータ点を生じさせるために使用したオリゴヌクレオチドの濃度を、Ｘ軸に沿って示す（μＭ）。示されるデータは、３人のドナーの平均を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図４】
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【図５】
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【図５】
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【図６】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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