(57)【要約】  ＩＬ−２１ポリペプチド又は他のＩＬ−２１経路アゴニストは、アトピー性疾患、例えば喘息を治療するために使用することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アトピー性疾患の少なくとも１つの症状を改善するために有効な量でＩＬ−２１経路アゴニストを被験者に投与することを含む、被験者においてアトピー性疾患の症状を改善する方法。
【請求項２】
ＩＬ−２１経路アゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＬ−２１ポリペプチドがヒトである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＩＬ−２１ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
ＩＬ−２１経路アゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドをコードする核酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
アトピー性疾患が、アトピー性皮膚炎、喘息、外因性気管支喘息、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎から成る群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
被験者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＩｇＥレベルが、投与前の被験者におけるレベルと比べて少なくとも４０％低下する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
被験者においてアトピー性疾患の１又はそれ以上の症状を評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
被験者においてＩＬ−２１関連パラメータを評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
被験者において内因性ＩｇＥのレベルを評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
アトピー性疾患を治療する又は予防するために有効な量でＩＬ−２１経路アゴニストを被験者に投与することを含む、ヒト被験者においてアトピー性疾患を治療する又は予防する方法。
【請求項１３】
ＩＬ−２１経路アゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＩＬ−２１ポリペプチドがヒトである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＩＬ−２１ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
アトピー性疾患が、アトピー性皮膚炎、喘息、外因性気管支喘息、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎から成る群より選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
ＩＬ−２１経路調節剤を、ＩｇＧ産生を調節するのに十分な量で細胞に接触させることを含む、細胞においてＩｇＧ産生を調節する方法。
【請求項１８】
ＩｇＧ産生が上昇し、ＩＬ−２１経路調節剤がＩＬ−２１経路アゴニストである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＩＬ−２１経路アゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＩｇＧ産生が低下し、ＩＬ−２１経路調節剤がＩＬ−２１経路アンタゴニストである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ＩＬ−２１経路アンタゴニストが、ＩＬ−２１に結合する抗体又は可溶性形態のＩＬ−２１受容体を含む作用物質である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＩＬ−２１経路アンタゴニストが、ＩＬ−２１、ＩＬ−２１受容体又はＩＬ−２１経路成分の発現を低下させる核酸である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
細胞がインビトロである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
細胞がインビボである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
ＩＬ−２１経路調節剤を、ＩｇＥ産生を調節するのに十分な量で細胞に接触させることを含む、細胞においてＩｇＥ産生を調節する方法。
【請求項２６】
ＩｇＥ産生が低下し、ＩＬ−２１経路調節剤がＩＬ−２１経路アゴニストである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＩｇＥレベルが少なくとも４０％低下する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＩｇＥ産生が上昇し、ＩＬ−２１経路調節剤がＩＬ−２１経路アンタゴニストである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
ＩｇＥレベルが少なくとも２０％上昇する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＩＬ−２１経路調節剤を、ＩｇＥとＩｇＧの相対レベルを調節するのに十分な量で細胞に接触させることを含む、ＩｇＥとＩｇＧの相対レベルを調節する方法。
【請求項３１】
ＩｇＥ／ＩｇＧ比が低下し、ＩＬ−２１経路調節剤がＩＬ−２１経路アゴニストである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＩＬ−２１経路アゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記比が少なくとも４０％低下する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
ＩｇＥ／ＩｇＧ比が上昇し、ＩＬ−２１経路調節剤がＩＬ−２１経路アンタゴニストである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記比が少なくとも２０％上昇する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
Ｉε転写産物のために必要なスイッチ組換えを阻害することによって前記相対レベルを調節する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
Ｔ細胞の存在下で相対レベルを調節する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３８】
ＩＬ−２１経路アゴニスト及びアトピー性疾患を治療するための第二作用物質を含有する医薬組成物。
【請求項３９】
１又はそれ以上の用量のＩＬ−２１経路アゴニストの医薬組成物及びアトピー性疾患又は障害を治療するために一定用量の前記組成物を投与するための指示を含むラベルを含む容器。
【請求項４０】
アトピー性疾患を有する被験者に関してＩＬ−２１関連パラメータを評価すること、
前記評価の結果を標準パラメータと比較すること、及び
前記比較に応じて疾患のための治療の推奨を提供すること
を含む、アトピー性疾患を有する又は有することが疑われる被験者を評価する方法。
【請求項４１】
ＩＬ−２１関連パラメータが、ＩＬ−２１ポリペプチドの存在率又はＩＬ−２１  ｍＲＮＡについての定量的又は定性的値を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＩＬ−２１関連パラメータが、ＩＬ−２１受容体タンパク質又はｍＲＮＡについての、又はＩＬ−２１経路活性についての定量的又は定性的値を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
アトピー性疾患が、アトピー性皮膚炎、喘息、外因性気管支喘息、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎から成る群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
被験者に関してＩＬ−２１関連パラメータを評価すること、
前記評価の結果を標準パラメータと比較すること、及び
前記比較に応じてアトピー性疾患についての危険度評価を提供すること
を含む、アトピー性疾患の危険度に関して被験者を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その内容が参照して本明細書に組み込まれる、２００４年５月１９日出願の米国特許出願第６０／５７２，４０７号の優先権を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
アレルゲンの攻撃に応答して生成されるＩｇＥは、アトピー性疾患に関連する強力なアゴニスト機構の引き金となる。マスト細胞及び好塩基球上の高親和性受容体に結合したとき、ＩｇＥはアレルゲンによって架橋することができ、脱顆粒及びヒスタミン、ロイコトリエン及び他の炎症メディエイタの放出を導く。これらの作用物質は、早発型及び遅発型アレルギー反応に関連する喘鳴、気管支収縮及び鼻炎の症状を直接媒介するが、一方マスト細胞及び好塩基球によって放出されるサイトカイン及びケモカインは局所炎症反応に寄与する。これらの応答におけるＩｇＥの中心的な役割は、健常対照と比較したアトピー被験者におけるアレルゲン特異的ＩｇＥの検出によってのみならず、ＩｇＥの中和がアトピー性疾患の治療のために有効な治療戦略であることの証明によっても裏付けられる。例えばKawakami and Galli (2002) Nat Rev Immunol 2 (10); 773-86; Prussin and Metcalfe (2003) J Allergy Clin Immunol 111(2 Suppl); S486-94; Holgate (2000) Clin Exp Allergy 30 Suppl 1; 28-32; Busse and Neaville, (2001) Curr Opin Allergy Clin Immunol 1(1); 105-8参照。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者らは、中でも特に、ＩＬ−２１ポリペプチドがアトピー性反応に対する防御環境を生成し得ることを発見した。従って、ＩＬ−２１経路アゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチド及び同様にＩＬ−２１経路を調節する他の作用物質は、アレルゲン暴露に応答して産生されるＩｇＥとＩｇＧ４の間のバランスを調節するために使用できる。例えばＩＬ−２１経路アゴニストは、被験者においてＩｇＥのレベル又は産生を低下させるため、被験者においてアトピー性疾患の少なくとも１つの症状を改善する及び／又はＩｇＥの産生を阻害するために使用できる。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
１つの態様では、本発明は、被験者においてアトピー性疾患に関連する１又はそれ以上の症状を改善する方法を特徴とする。この方法は、アトピー性疾患の１又はそれ以上の症状を改善するために有効な量でＩＬ−２１経路アゴニストを被験者に投与することを含む。例示的なアトピー性疾患は、アトピー性皮膚炎、喘息、外因性気管支喘息、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎を含む。
【０００５】
「ＩＬ−２１経路」という用語は、ＩＬ−２１シグナル伝達を媒介する生物学的成分を指す。前記経路は、例えばＩＬ−２１ポリペプチド自体、ＩＬ−２１受容体、及びＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５、キナーゼ及び／又は転写因子を含む、受容体活性化によって調節される細胞質成分を含む。「ＩＬ−２１経路アゴニスト」という用語は、ＩＬ−２１経路の活性を上昇させる物質、例えばＩＬ−２１受容体ポリペプチドの１又はそれ以上の生物活性、例えば本明細書で述べる生物活性を増強する、誘導する又はさもなければ促進させる物質を指す。例えばアゴニストは、ＩＬ−２１受容体ポリペプチドと相互作用する、例えば結合する。１つの実施形態では、アゴニストは、ＩＬ−２１受容体及びもう１つ別の受容体鎖、例えばγサイトカイン受容体鎖と相互作用し得る。例えばアゴニストはＩＬ−２１受容体及びγサイトカイン受容体鎖と架橋する。
【０００６】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、その活性フラグメント又は変異体である。例えばＩＬ−２１ポリペプチドは、約０．１μｇから約１００μｇ、約１００μｇから約５ｍｇ、又は約５ｍｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ＩＬ−２１ポリペプチドは、例えばヒト又は実質的にヒトであり得る。ＩＬ−２１ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列又は配列番号２と少なくとも８５、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
【０００７】
もう１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１受容体と相互作用する物質である。ＩＬ−２１受容体と相互作用する物質は、受容体を活性化する又はさもなければ経路シグナル伝達を作動させる（agonize）ことができる。例えばＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１受容体と相互作用するタンパク質である。このタンパク質は、ＩＬ−２１受容体と相互作用して活性化する、アゴニスト性抗ＩＬ−２１受容体抗体（例えば完全長抗体又は抗原結合フラグメント）を含み得る。
【０００８】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節する作用物質である。細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節する作用物質は、例えば正に作用する細胞質経路成分を活性化するか又は負に作用する細胞質成分を阻害することができる。例示的な正に作用する細胞質成分は、ＳＴＡＴキナーゼを含む。作用物質はまた、正に作用する成分のミミック、例えばＳＴＡＴキナーゼの恒常的活性化形態であり得る。
【０００９】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチドをコードする核酸、ＩＬ−２１受容体と相互作用する（例えば結合する及び／又は活性化する）タンパク質、及び細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節するタンパク質である。前記物質は、正に作用する成分、例えばＳＴＡＴキナーゼ又はＳＴＡＴキナーゼの恒常的活性化形態をコードする核酸をコードし得る。
【００１０】
被験者は哺乳動物であり得、典型的にはヒト（例えば女性又は男性、及び成人又は若年ヒト被験者）である。被験者におけるＩｇＥレベルは、局所的又は全身的に、標準パラメータに比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、８５、９０又は９５％低下し得る。例えば標準パラメータは、治療前の当該被験者についてのパラメータであり得るか、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る。
【００１１】
ＩＬ−２１経路アゴニストは非経口的又は局所的に投与することができる。例えばアゴニストは、アトピー性皮膚炎の部位に局所的に送達できる。例えば噴霧化した組成物の、例えば吸入によって、呼吸粘膜に送達することができる。非経口的に、例えば注射によって、例えば皮下、筋肉内又は静脈内注射によって、送達することができる。例えば移植又は他の医療装置によって、送達することができる。他の例示的な様式も本明細書で述べる。
【００１２】
前記方法は、例えば投与の前、投与中又は投与後に、被験者においてアトピー性疾患の１又はそれ以上の症状を評価することをさらに含み得る。そのような症状の例を本明細書で述べる。前記方法は、被験者においてＩＬ−２１関連パラメータ、例えばＩＬ−２１ポリペプチド、ＩＬ−２１受容体又はＩＬ−２１経路活性のレベルに関連するパラメータを評価することをさらに含み得る。「パラメータ」という用語は、定性的及び定量的説明、例えば数値、レベル、測定等を含む情報を指す。「ＩＬ−２１関連パラメータ」は、ＩＬ−２１経路成分を説明するパラメータ、例えば、ＩＬ−２１ポリペプチド、ＩＬ−２１受容体又は他の細胞質成分などのＩＬ−２１経路成分の、存在、不在、レベル、発現、安定性、細胞内局在、又は活性を指す。パラメータはまた、ＩＬ−２１経路成分をコードするｍＲＮＡも説明し得る。
【００１３】
前記方法は、被験者において内因性免疫グロブリン（例えばＩｇＧ又はＩｇＥ）を評価すること、例えば内因性免疫グロブリンのレベルを評価することをさらに含み得る。
【００１４】
前記方法は、本明細書で述べる他の特徴を含み得る。
【００１５】
もう１つの態様では、本発明は、アトピー性疾患を治療する又は予防するために有効な量でＩＬ−２１経路アゴニストを被験者に投与することを含む、被験者においてアトピー性疾患を治療する又は予防する方法を特徴とする。例示的アトピー性疾患は、アトピー性皮膚炎、喘息、外因性気管支喘息、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎を含む。
【００１６】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストはＩＬ−２１ポリペプチドである。例えばＩＬ−２１ポリペプチドは、約０．１μｇから約１００μｇ、約１００μｇから約５ｍｇ又は約５ｍｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ＩＬ−２１ポリペプチドは、例えばヒト又は実質的にヒトであり得る。ＩＬ−２１ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列又は配列番号２と少なくとも８５、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
【００１７】
もう１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１受容体と相互作用する物質、細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節する物質又はＩＬ−２１ポリペプチドをコードする核酸、ＩＬ−２１受容体と相互作用する（例えば活性化する）タンパク質、及び細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節するタンパク質である。
【００１８】
被験者は哺乳動物であり得、典型的にはヒト（例えば女性又は男性、及び成人又は若年ヒト被験者）である。被験者におけるＩｇＥレベルは、局所的又は全身的に、標準パラメータに比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、８５、９０又は９５％低下し得る。例えば標準パラメータは、治療前の当該被験者についてのパラメータであり得るか、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る。
【００１９】
ＩＬ−２１経路アゴニストは非経口的又は局所的に投与することができる。例えばアゴニストは、アトピー性皮膚炎の部位に局所的に送達できる。例えば噴霧化した組成物の、例えば吸入によって、呼吸粘膜に送達することができる。非経口的に、例えば注射、例えば皮下、筋肉内又は静脈内注射によって、送達することができる。例えば移植又は他の医療装置によって、送達することができる。他の例示的な様式も本明細書で述べる。
【００２０】
前記方法は本明細書で述べる他の特徴を含み得る。
【００２１】
もう１つの態様では、本発明は、細胞（例えばＢ細胞、例えば哺乳動物、例えばヒト、マウス又は他のげっ歯動物細胞）におけるＩｇＧ産生を調節する方法を特徴とする。その方法は、ＩＬ−２１経路調節剤を、ＩｇＧ産生（例えば発現又は細胞からの分泌）を調節するのに十分な量で細胞に接触させることを含む。細胞は、接触工程の間インビトロ又はインビボであり得る。例えばインビボ接触は、被験対象となる哺乳動物、例えばヒト被験者において実施できる。
【００２２】
１つの実施形態では、ＩｇＧ産生が上昇し、ＩＬ−２１経路調節剤はＩＬ−２１経路アゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチド、ＩＬ−２１受容体と相互作用する物質、又は細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節する物質である。ＩｇＧレベルは、例えば標準パラメータに比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、１００、１２０又は１５０％上昇し得る。例えば標準パラメータは、治療前の当該被験者についてのパラメータであり得るか、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る。
【００２３】
もう１つの実施形態では、ＩｇＧ産生が低下し、ＩＬ−２１経路調節剤はＩＬ−２１経路アンタゴニストである。ＩｇＧレベルは、例えば標準パラメータ（例えば治療前の当該被験者についてのパラメータ、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る）に比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、８５、９０又は９５％低下し得る。
【００２４】
最初の例では、アンタゴニストは、ＩＬ−２１又はＩＬ−２１受容体に結合する物質、例えばＩＬ−２１に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、又は可溶性形態のＩＬ−２１受容体を含む物質、例えばその細胞外ドメイン（例えば細胞外ドメイン単独又はＦｃ融合物などの融合物として）である。２番目の例では、ＩＬ−２１経路アンタゴニストは、例えばＩＬ−２１受容体の成分に結合する物質、及びＩＬ−２１受容体の活性化を妨げる物質である。ＩＬ−２１受容体に結合して、ＩＬ−２１が受容体に結合するのを防ぐ抗体は、これらの性質を有する１つの物質である。３番目の例では、ＩＬ−２１経路アンタゴニストは、ＩＬ−２１、ＩＬ−２１受容体又はＩＬ−２１経路成分の発現を低下させる核酸（例えばアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム）である。
【００２５】
前記方法は本明細書で述べる他の特徴を含み得る。
【００２６】
もう１つの態様では、本発明は、細胞においてＩｇＥ産生を調節する方法を特徴とする。その方法は、ＩＬ−２１経路調節剤を、ＩｇＥ産生を調節するのに十分な量で細胞に接触させることを含む。「ＩＬ−２１経路調節剤」という用語は、ＩＬ−２１経路の活性を変化させる作用物質を指し、ＩＬ−２１経路アゴニスト及びアンタゴニストを包含する。
【００２７】
１つの実施形態では、ＩｇＥ産生が低下し、ＩＬ−２１経路調節剤はＩＬ−２１経路アゴニスト、例えば本明細書で述べるアゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドである。例えばＩｇＥレベルは、標準パラメータ（例えば治療前の当該被験者についてのパラメータ、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る）に比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、８５、９０又は９５％低下する。
【００２８】
もう１つの実施形態では、ＩｇＥ産生が上昇し、ＩＬ−２１経路調節剤はＩＬ−２１経路アンタゴニスト、例えば本明細書で述べるアンタゴニストである。例えばレベルは、標準パラメータ（例えば治療前の当該被験者についてのパラメータ、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る）に比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、１００、１２０又は１５０％上昇する。前記方法は本明細書で述べる他の特徴を含み得る。
【００２９】
もう１つの態様では、本発明は、ＩＬ−２１経路調節剤を、ＩｇＥとＩｇＧの相対レベルを調節するのに十分な量で細胞に接触させることを含む、ＩｇＥとＩｇＧの相対レベルを調節する方法を特徴とする。
【００３０】
１つの実施形態では、ＩｇＥ／ＩｇＧ比が低下し、ＩＬ−２１経路調節剤はＩＬ−２１経路アゴニスト、例えば本明細書で述べるアゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドである。例えば前記比は、標準比（例えば治療前の当該被験者についての比、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る）に比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、８５、９０又は９５％低下する。
【００３１】
もう１つの実施形態では、ＩｇＥ／ＩｇＧ比が上昇し、ＩＬ−２１経路調節剤はＩＬ−２１経路アンタゴニスト、例えば本明細書で述べるアンタゴニストである。例えば前記比は、標準比（例えば治療前の当該被験者についての比、あるいは正常又は対照被験者又は被験者の母集団（例えば、同様の年齢及び性別などの、正常被験者のコホート）の特徴的な統計的値であり得る）に比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０、８０、１００、１２０又は１５０％上昇する。
【００３２】
Ｉε転写産物のために必要なスイッチ組換えを阻害することによってＩｇＥとＩｇＧの相対レベルを調節することが可能である。これらの相対レベルはまた、Ｔ細胞の存在下で調節され得る。
【００３３】
さらにもう１つの態様では、本発明は、ＩＬ−２１経路アゴニスト及びアトピー性疾患を治療するための第二作用物質を含有する医薬組成物を特徴とする。１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストはＩＬ−２１ポリペプチドである。例えばＩＬ−２１ポリペプチドは、約０．１μｇから約１００μｇ、約１００μｇから約５ｍｇ、又は約５ｍｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ＩＬ−２１ポリペプチドは、例えばヒト又は実質的にヒトであり得る。ＩＬ−２１ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列又は配列番号２と少なくとも８５、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
【００３４】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１受容体と相互作用する物質、細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節する物質又はＩＬ−２１ポリペプチドをコードする核酸、ＩＬ−２１受容体と相互作用する（例えば活性化する）タンパク質、及び細胞質ＩＬ−２１経路成分を調節するタンパク質である。
【００３５】
もう１つの態様では、本発明は、１又はそれ以上の用量のＩＬ−２１経路アゴニストの医薬組成物及びアトピー性疾患又は障害を治療又は予防するために一定用量の前記組成物を投与するための指示を含むラベルを含む容器を特徴とする。１つの実施形態では、前記組成物はアトピー性疾患を治療するための第二作用物質を含有する。
【００３６】
本発明はまた、薬剤を製造するための方法を含む。その方法は、ＩＬ−２１経路アゴニストを提供すること及びアゴニストを容器中に包装することを含む。前記方法はまた、ラベル、例えばアトピー性疾患又は障害を治療する又は予防するための指示を含むラベルを、容器に結合する（例えば添付する）ことを含み得る。１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストはＩＬ−２１ポリペプチドである。前記方法は、ＩＬ−２１ポリペプチドを組換え発現すること及び前記ポリペプチドを少なくとも部分的に精製することを含み得る。
【００３７】
もう１つの態様では、本発明は、アトピー性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、喘息、外因性気管支喘息、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎を有する又は有することが疑われる被験者を評価する方法を特徴とする。前記方法は、アトピー性疾患を有する被験者に関してＩＬ−２１関連パラメータを評価すること、前記評価の結果を標準パラメータと比較すること、及び前記比較に応じて疾患のための治療の推奨を提供することを含む。「標準パラメータ」は、標準被験者又は細胞、例えば対照、正常又は野生型被験者又は細胞からの対応する情報を指す。標準パラメータはまた、個体の対照群又は正常群の平均又は中央値であり得る。例えばＩＬ−２１関連パラメータは、ＩＬ−２１ポリペプチド存在率又はＩＬ−２１  ｍＲＮＡ存在率についての定量的又は定性的値を含む。もう１つの例では、ＩＬ−２１関連パラメータは、ＩＬ−２１受容体タンパク質又はｍＲＮＡについての、又はＩＬ−２１経路活性についての定量的又は定性的値を含む。推奨される治療は、ＩＬ−２１経路アゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドの投与を含み得る。前記方法は本明細書で述べる他の特徴を含み得る。
【００３８】
もう１つの態様では、本発明は、アトピー性疾患の危険度に関して被験者を評価する方法を特徴とする。その方法は、被験者に関してＩＬ−２１関連パラメータを評価すること、前記評価の結果を標準パラメータと比較すること、及び前記比較に応じてアトピー性疾患についての危険度評価を提供することを含む。例えば危険度評価は、評価したパラメータと標準パラメータの偏差の関数であり得る。１つの実施形態では、危険度評価は、基準からの標準偏差の数として表される。前記方法は本明細書で述べる他の特徴を含み得る。
【００３９】
異なる規定がない限り、本明細書で使用する全ての技術及び学術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で述べるものと類似の又は等価の方法及び材料を本発明の実施又は試験において使用することができるが、適切な方法及び材料を以下で述べる。本明細書で言及する全ての出版物、特許出願、特許及び他の参考文献は、それらの全体が参照して本明細書に組み込まれる。２００４年３月２２日出願の米国特許出願第１０／８０６，６１１号及び米国特許第２００３−０１０８５４９号は、それらの全体が参照して本明細書に組み込まれる。紛争の場合は、定義を含む本明細書が支配する。加えて、材料、方法及び実施例は単なる例示であり、限定を意図しない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
ＩＬ−２１は、免疫細胞の挙動を調節するサイトカインである。本発明者らは、ＩＬ−２１がＩｇＥ産生を調節するために使用できることを発見した。ＩｇＥによって引き起こされる反応性は、アトピー性疾患を含む多くの疾患に寄与する。ＩＬ−２１ポリペプチド又は同様に作用するＩＬ−２１経路アゴニストは、例えば被験者において局所的又は全身的にＩｇＥレベルを低下させ、それによってアトピー性疾患を改善するために使用することができる。
【００４１】
ＩＬ−２１経路アゴニスト
本発明の１つの態様では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、免疫系を調節するため、例えばアトピー性疾患を治療する、予防する又は改善するために使用される。例示的なＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２１受容体を活性化する又は作動させる物質、及びＩＬ−２１経路シグナル伝達を活性化する他のＩＬ−２１経路成分を調節する物質を含む。例示的なアゴニストは、高い親和性で、例えば約１０7Ｍ-1、約１０8Ｍ-1、又は約１０9Ｍ-1未満から約１０10Ｍ-1又はそれ以上の親和定数で、ＩＬ−２１ポリペプチド又はＩＬ−２１受容体に結合する。
【００４２】
例示的なＩＬ−２１経路成分は、ＩＬ−２１ポリペプチド、ＩＬ−２１受容体、受容体β鎖、共通γサイトカイン鎖）、及び細胞内シグナル伝達成分、例えばＪａｋ１、Ｊａｋ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５を含む。
【００４３】
ＩＬ−２１
その成熟形態では、ヒトＩＬ−２１サイトカインは約１３１アミノ酸の長さであり、ＩＬ−２、ＩＬ−４及びＩＬ−１５と配列相同性を有する（Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408:57-63）。インターロイキンサイトカインの間での低い配列相同性にもかかわらず、これらのサイトカインとＩＬ−２１は、特徴的な「４本ヘリックスバンドル」構造を含む共通フォールドを共有する。
【００４４】
ＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列は公知である。例えばヒトＩＬ−２１のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号Ｘ＿０１１０８２において入手可能である。例示的な開示されているヒトＩＬ−２１ヌクレオチド配列を以下に示す：
【化１】
2008501042.tif 000003
【００４５】
付加的なヌクレオチド配列情報は、例示的ＩＬ−２１ポリペプチドをコードする６４２ｂｐのｍＲＮＡ配列を提供する、例えばＡＦ２５４０６９［ｇｉ：１１０９３５３５］から入手可能である。一部の実施形態では、例えばシグナル配列をコードする領域なしで、成熟ＩＬ−２１をコードするヌクレオチド配列の領域を使用することで十分である。Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408: 57-63に基づく、例示的成熟ヒトＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す：
【化２】
2008501042.tif 000004
【００４６】
例示的ヒトＩＬ−２１ポリペプチドの完全長配列は：
【化３】
2008501042.tif 000005
である。
【００４７】
ヒトＩＬ−２１ポリペプチドについてのアミノ酸配列を提供する付加的な登録は以下の通りである：ｇｉ｜１１１４１８７５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０６８５７５．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜１１０９３５３６｜ｇｂ｜ＡＡＧ２９３４８．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］；
ｇｉ｜４２５４２５８６｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２５９．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］；
ｇｉ｜４２５４２５８８｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６０．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］；
ｇｉ｜４２５４２６５７｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６１．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］；
ｇｉ｜４２５４２６５９｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２５８．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］；及び
ｇｉ｜４２５４２８０７｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６２．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ］。ヒトＩＬ−２１ポリペプチドは、機能性を保持することを条件として、本明細書で述べるポリペプチドの変異体であり得る。
【００４８】
他の種からの例示的ＩＬ−２１ポリペプチドは以下を含む：
シカシロアシマウス(Peromyscus maniculatus)からのインターロイキン−２１：
【化４】
2008501042.tif 000006
ハツカネズミ(Mus musculus)からのインターロイキン−２１：
【化５】
2008501042.tif 000007
ウシ(Bos taurus)からのインターロイキン−２１：
【化６】
2008501042.tif 000008
【００４９】
「インターロイキン−２１」、「ＩＬ−２１」及び「ＩＬ−２１ポリペプチド」という用語は、ＩＬ−２１受容体（例えば哺乳動物、例えばマウス又はヒトタンパク質）と相互作用する、例えば結合することができ、以下の特徴の１つを有するタンパク質（例えば哺乳動物、例えばマウス又はヒトタンパク質）を指す：（ｉ）天然に生じる哺乳動物ＩＬ−２１のアミノ酸配列又はそのフラグメント、例えば配列番号２（ヒト、成熟）、配列番号９（ヒト、完全長）、配列番号１０（シカシロアシマウス）、配列番号１２（ウシ）、配列番号４（マウス、成熟）又は配列番号１１（マウス、完全長）に示すアミノ酸配列又はそのフラグメント；（ｉｉ）配列番号２（ヒト、成熟）、配列番号９（ヒト、完全長）、配列番号１０（シカシロアシマウス）、配列番号１２（ウシ）、配列番号４（マウス、成熟）又は配列番号１１（マウス、完全長）に示すアミノ酸配列又はそのフラグメントと実質的に相同な、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同なアミノ酸配列；（ｉｉｉ）天然に生じる哺乳動物ＩＬ−２１ヌクレオチド配列又はそのフラグメント（例えば配列番号１（ヒト）又は配列番号３（マウス）、又はそのフラグメント、例えば成熟形態をコードする領域）によってコードされるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１（ヒト）又は配列番号３（マウス）に示すヌクレオチド配列又はそのフラグメント（例えば成熟形態をコードする領域））と実質的に相同な、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同なヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；（ｖ）天然に生じるＩＬ−２１ヌクレオチド配列又はそのフラグメント、例えば配列番号１（ヒト）又は配列番号３（マウス）、又はそのフラグメント（例えば成熟形態をコードする領域）に対する縮重ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；又は（ｖｉ）ストリンジェント条件下で、例えば高ストリンジェント条件下で（例えばヌクレオチド配列が成熟ＩＬ−２１タンパク質をコードする領域内でハイブリダイズする）、前記ヌクレオチド配列の１つの相補物にハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる、少なくとも１１５アミノ酸のアミノ酸配列。ＩＬ−２１受容体に結合しているＩＬ−２１は、ＳＴＡＴ５又はＳＴＡＴ３シグナル伝達を導くことができる（Ozaki et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 11439-11444）。ＩＬ−２１ポリペプチドは、シグナル配列を含む新生タンパク質から、シグナル配列が除去された成熟タンパク質へとプロセシングされ得る。
【００５０】
本明細書で開示する配列に類似の又は相同な（例えば少なくとも約８５％の配列同一性）配列も、本出願の一部である。一部の実施形態では、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上であり得る。あるいは、核酸セグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば高ストリンジェントハイブリダイゼーション条件）下で鎖の相補物にハイブリダイズするとき、実質的な同一性が存在する。核酸は、全細胞、細胞溶解産物、又は部分精製又は実質的精製形態で存在し得る。
【００５１】
２つの配列の間の「相同性」又は「配列同一性」（これらの用語は本明細書では交換可能に使用される）の算定は以下のように実施される。配列を最適比較のために並べる（例えば最適なアライメントのために第一及び第二アミノ酸又は核酸配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、非相同配列は比較のために無視することができる）。好ましい実施形態では、比較のために並べる標準配列の長さは、標準配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらに一層好ましくは少なくとも６０％、さらに一層好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第一配列内のある位置が第二配列内の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められているとき、２つの分子はその位置において同一である（本明細書で使用するとき、アミノ酸又は核酸の「同一性」はアミノ酸又は核酸の「相同性」と等価である）。２つの配列の間の同一性パーセントは、２つの配列の最適アライメントのために導入する必要のある、ギャップの数及び各々のギャップの長さを考慮に入れた、配列が共有する同一部分の数の関数である。
【００５２】
配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて実施することができる。比較は、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍ）からのＧＡＰプログラム及びギャップペナルティー１２、ギャップ伸張ペナルティー４、及びフレームシフトギャップペナルティー５を用いたＢｌｏｓｓｕｍ  ６２スコアリングマトリックスを含むパラメータを使用する。
【００５３】
本明細書で使用するとき、「ストリンジェント条件下でハイブリダイズする」という用語は、ハイブリダイゼーション及び洗浄のための条件を表す。ストリンジェント条件は当業者に公知であり、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6に見出すことができる。水性及び非水性方法が前記参考文献中に述べられており、いずれも使用できる。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件の好ましい例は、６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中５０℃での１回又はそれ以上の洗浄である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件のもう１つの例は、６ＸＳＳＣ中約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中５５℃での１回又はそれ以上の洗浄である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、６ＸＳＳＣ中約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中６０℃での１回又はそれ以上の洗浄である。好ましくは、ストリンジェントハイブリダイゼーション条件は、６ＸＳＳＣ中約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで０．２ＸＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中６５℃での１回又はそれ以上の洗浄である。特に好ましい高ストリンジェントハイブリダイゼーション条件（及び実施者が、ある分子がハイブリダイゼーション限界内であるかどうかを決定するためにどのような条件を適用するべきかについて確信がない場合に使用すべき条件）は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中約６５℃、次いで０．２ＸＳＳＣ、１％ＳＤＳ中６５℃での１回又はそれ以上の洗浄である。
【００５４】
ＩＬ−２１ポリペプチドは、それらの機能に実質的な影響を及ぼさない、付加的な保存的又は非必須アミノ酸置換を有し得る。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
【００５５】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１ポリペプチドは実質的にヒトである。「実質的にヒト」のＩＬ−２１ポリペプチドは、ポリペプチドが正常ヒトにおいて免疫応答を惹起しないように及びＩＬ−２１ポリペプチドがヒトＩＬ−２１受容体と相互作用するように、十分な数のヒトアミノ酸位置を含むＩＬ−２１ポリペプチドである。
【００５６】
完全長未満のＩＬ−２１ポリペプチドの形態は、そのような形態がＩＬ−２１受容体に結合する能力を保持していることを条件として、本明細書で述べる方法及び組成物において使用することができる。１つの実施形態では、前記形態は、機能性ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばＩＬ−２１経路シグナル伝達を活性化することができる形態である。
【００５７】
完全長未満のＩＬ−２１ポリペプチドは、例えば完全長ＩＬ−２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドの対応するフラグメントを宿主細胞において発現することによって、又は修飾タンパク質をコードするポリヌクレオチドを発現することによって（例えば１又はそれ以上の内部アミノ酸が除去されている場合）生産できる。完全長未満のＩＬ−２１ポリペプチドの１つの形態は、成熟ＩＬ−２１、例えば配列番号２のＩＬ−２１である。もう１つの形態は、完全長の成熟ＩＬ−２１より短いポリペプチド、例えば１３１、１３０、１２９、１２８又は１２５アミノ酸未満、例えば１１５−１３０アミノ酸の長さのポリペプチドである。例えば配列番号２に由来するＩＬ−２１ポリペプチドは、最後の８アミノ酸又はそのサブセットを欠くことができる、例えばＩＬ−２１ポリペプチドは配列番号２のアミノ酸１−１２２を含む。対応するポリヌクレオチドフラグメントも、本明細書で述べる方法及び組成物において使用できる。上述した修飾ポリヌクレオチドは、適切な所望欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発法又は適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応を含む、標準的な分子生物学手法によって作製し得る。
【００５８】
ＩＬ−２１ポリペプチドは標識することができる。例えば標識ポリペプチドは、被験者に投与したとき、被験者におけるポリペプチドのレベルを観測するために使用できる。同様に、標識ポリペプチドは、例えば被験者を画像化することにより、被験者におけるポリペプチドの分布を観測するために使用できる。ポリペプチドは、放射性標識又はＭＲＩ検出可能標識で標識することができる。例示的な放射性標識は、131Ｉ、111Ｉｎ、123Ｉ、99mＴｃ、32Ｐ、125Ｉ、3Ｈ、14Ｃ及び188Ｒｈを含む。例示的なＭＲＩ検出可能標識は、造影剤、例えば磁性物質、常磁性物質（主としてＴ１を変化させる）及び強磁性又は超常磁性（主としてＴ２応答を変化させる）物質を含む。キレート（例えばＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ及びＮＴＡキレート）は、一部の常磁性物質（例えばＦｅ+3、Ｍｎ+2、Ｇｄ+3）と結合するために（及びその毒性を低下させるために）使用することができる。また、19Ｆ原子のようなＮＭＲ活性原子を結合することも可能である。
【００５９】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、（ｉ）成熟ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒト又はマウスＩＬ−２１ポリペプチド、又はそのフラグメント及び（ｉｉ）Ｆｃドメイン又は精製タグなどの第二成分、例えばポリペプチドを含む融合タンパク質である。本明細書で使用するとき、「融合タンパク質」は、２又はそれ以上の作動可能に結びついた、例えば結合した成分、例えばタンパク質成分を含むタンパク質を指す。好ましくは、前記成分は共有結合している。成分は、直接結合するか、あるいはスペーサー又はリンカーを通して結合し得る。ＩＬ−２１融合タンパク質のさらなる説明は、２００４年３月２２日出願の米国特許出願第１０／８０６，６１１号において入手可能である。
【００６０】
ＩＬ−２１受容体
大部分のサイトカインは、クラスＩ又はクラスＩＩのいずれかのサイトカイン受容体に結合する。クラスＩＩサイトカイン受容体は、ＩＬ−１０及びインターフェロンについての受容体を含み、一方クラスＩサイトカイン受容体は、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１１−１３及びＩＬ−１５並びに造血成長因子、レプチン及び成長ホルモンについての受容体を含む（Cosman (1993) Cytokine 5:95-106）。
【００６１】
ヒトＩＬ−２１受容体は、リンパ系細胞、特にＮＫ、Ｂ及びＴ細胞によって発現されるクラスＩサイトカイン受容体である（Parrish-Novak et al. (2000) supra）。ヒトインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）及びその受容体（ＩＬ−２１Ｒ）をコードする例示的な核酸配列は、対応するアミノ酸配列と共に、国際公開公報第ＷＯ００／５３７６１号、国際公開公報第ＷＯ０１／８５７９２号、Parrish-Novak et al. (2000) supra and Ozaki et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 11439-11444に述べられている。ＩＬ−２１受容体は、ＩＬ−２受容体β鎖及びＩＬ−４受容体α鎖に高い配列相同性を示す（Ozaki et al. (2000) supra）。リガンド結合したとき、ＩＬ−２１受容体は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３及びＩＬ−１５についての受容体によって共有される共通γサイトカイン受容体鎖（γｃ）と結びつく（Ozaki et al. (2000) supra; Asao et al. (2001) J. Immunol. 167: 1-5）。
【００６２】
「ＭＵ−１」、「ＭＵ−１タンパク質」、「インターロイキン−２１受容体」又は「ＩＬ−２１Ｒ」という用語は、ＩＬ−２１（例えば哺乳動物の、例えばマウス又はヒトＩＬ−２１）と相互作用する、例えば結合することができ、以下の特徴の１つを有する受容体（例えば哺乳動物の、例えばマウス又はヒト起源）を指す：（ｉ）天然に生じる哺乳動物ＩＬ−２１受容体のアミノ酸配列又はそのフラグメント、例えば配列番号６（ヒト）又は配列番号８（マウス）に示すアミノ酸配列又はそのフラグメント（例えば成熟領域）；（ｉｉ）配列番号６（ヒト）又は配列番号８（マウス）に示すアミノ酸配列又はそのフラグメント（例えば成熟領域）と実質的に相同な、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同なアミノ酸配列；（ｉｉｉ）天然に生じる哺乳動物ＩＬ−２１受容体ヌクレオチド配列（例えば配列番号５（ヒト）又は配列番号７（マウス））又はそのフラグメント（例えば成熟領域）によってコードされるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号５（ヒト）又は配列番号７（マウス）に示すヌクレオチド配列又はそのフラグメント（例えば成熟領域））と実質的に相同な、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同なヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；（ｖ）天然に生じるＩＬ−２１受容体ヌクレオチド配列又はそのフラグメント、例えば配列番号５（ヒト）又は配列番号７（マウス）、又はそのフラグメント（例えば成熟領域）に関する縮重ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；又は（ｖｉ）ストリンジェント条件下で、例えば高ストリンジェント条件下で、前記ヌクレオチド配列の１つにハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる、少なくとも４５０アミノ酸からなるアミノ酸配列。配列番号６に列挙するヒトＩＬ−２１受容体の成熟領域は、およそアミノ酸２０−５３８である。使用できる例示的な細胞外ドメインフラグメントは、およそアミノ酸２０−２１８又は２０−２３２を含む。
【００６３】
以下は、ヒトＩＬ−２１受容体の例示的アミノ酸配列（配列番号６）である：
【化７】
2008501042.tif 000009
【００６４】
以下は、マウスＩＬ−２１受容体の例示的アミノ酸配列（配列番号８）である：
【化８】
2008501042.tif 000010
【００６５】
例示的ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１  ｃＤＮＡは、アクセッション番号ＡＴＣＣ９８６８７として１９９８年３月１０日に米国菌培養収集所に寄託された。ＩＬ−２１受容体は、それらの機能に実質的な影響を及ぼさない、付加的な保存的又は非必須アミノ酸置換、例えば本明細書で述べる置換を有し得る。
【００６６】
ＩＬ−２１受容体は、ＮＩＬＲとしても知られる、クラスＩサイトカインファミリーの受容体である（国際公開公報第ＷＯ０１／８５７９２号；Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408: 57-63; Ozaki et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:11439-11444）。ＩＬ−２１受容体は、リンパ系組織において発現される。ＩＬ−２１受容体は、ＩＬ−２及びＩＬ−１５受容体の共有β鎖及びＩＬ−４受容体α鎖に相同である（Ozaki et al. (2000)supra）。リガンド結合したとき、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１は共通γサイトカイン受容体鎖（γｃ）と相互作用することができ（Asao et al. (2001) J. Immunol. 167: 1-5）、ＳＴＡＴ１及びＳＴＡＴ３（Asao et al. (2001) J. Immunol.167:1-5）又はＳＴＡＴ５ (Ozaki et al. (2000))のリン酸化を誘導することができる。「ＩＬ−２１受容体複合体」という用語は、ＩＬ−２１受容体及び少なくとも１つの付加的な細胞関連タンパク質成分、例えばβ鎖又は共通γサイトカイン受容体鎖を含むタンパク質複合体を指す。典型的には、ＩＬ−２１受容体複合体は、ＩＬ−２１受容体、β鎖及び共通γサイトカイン受容体鎖を含む。
【００６７】
ＩＬ−２１受容体の「生物活性」という語句は、（１）ＩＬ−２１ポリペプチド（例えばヒトＩＬ−２１ポリペプチド）と相互作用する、例えば結合すること；（２）シグナル伝達分子、例えばγｃ、ｊａｋ１と結合すること；（３）ＳＴＡＴタンパク質、例えばＳＴＡＴ５及び／又はＳＴＡＴ３のリン酸化及び／又は活性化を刺激すること；及び／又は（４）免疫細胞、例えばＴ細胞（ＣＤ８＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ及び巨核球の増殖、分化、アゴニスト細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌及び／又は生存を調節する、例えば刺激する又は低下させることを含むが、これらに限定されない、対応する成熟ＩＬ−２１受容体の生物活性の１又はそれ以上を指す。
【００６８】
付加的な例示的ＩＬ−２１経路アゴニスト
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１受容体と相互作用するが、ＩＬ−２１ポリペプチド以外である作用物質である。例えば前記物質は、ＩＬ−２１受容体と相互作用し、例えば受容体を作動させることによって、ＩＬ−２１経路シグナル伝達活性を活性化する免疫グロブリン、例えば完全長抗体又は抗体フラグメントであり得る。
【００６９】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、ＩＬ−２１受容体及びもう１つ別の受容体サブユニット、例えばγｃと相互作用する物質である。例えば前記物質は、ＩＬ−２１受容体及びもう１つ別の受容体サブユニット、例えばγｃと相互作用するタンパク質であり得る。前記タンパク質は、例えばＩＬ−２１受容体と相互作用する１つの抗原結合部位及びγｃと相互作用するもう１つ別の抗原結合部位を含む二重特異性抗体であり得る。そのようなタンパク質の結合は、受容体に架橋して作動させる、例えばＳＴＡＴ３又はＳＴＡＴ５シグナル伝達を活性化する又は上昇させるために使用できる。
【００７０】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、例えばＩＬ−２１及びＩＬ−２１受容体の一方又は両方に結合することによって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ相互作用を安定化する物質（例えば免疫グロブリン）である。
【００７１】
ＩＬ−２１経路アゴニストは、例えば当技術分野で公知の手法を用いてＩＬ−２１受容体の結合及び／又は活性化に関して、例えばタンパク質ライブラリー、化学物質ライブラリーをスクリーニングすること、試験化合物を構築及び設計すること又は評価することによって、特定することができる。固定化又は非固定化された所望の結合タンパク質を用いる結合アッセイは当技術分野で公知であり、本明細書で述べるＩＬ−２１受容体タンパク質を用いてこの目的のために使用し得る。精製細胞に基づく又はタンパク質に基づく（無細胞）スクリーニングアッセイは、そのようなアゴニストを特定するために使用し得る。例えばＩＬ−２１受容体タンパク質を精製形態で担体上に固定化し、精製ＩＬ−２１受容体タンパク質への結合又は潜在的リガンドを測定し得る。ＩＬ−２１受容体活性及びＳＴＡＴ（例えばＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３又はＳＴＡＴ５）シグナル伝達を評価するための細胞アッセイは公知である。例は、本文中及びAsao et al. (2001) J. Immunol. 167: 1-5, Ozaki et al. (2000) supra、２００４年３月２２日出願の米国特許出願第１０／８０６，６１１号及び米国特許第２００３−０１０８５４９号に述べられている。
【００７２】
ＩＬ−２１経路アンタゴニスト
本発明のもう１つの態様では、ＩｇＥ産生を上昇させる及び／又はＩｇＧ産生を低下させるためにＩＬ−２１経路アンタゴニストを使用することができる。「ＩＬ−２１経路アンタゴニスト」は、ＩＬ−２１経路シグナル伝達を低下させる作用物質である。例えばそのような物質はＩＬ−２１受容体活性を低下させることができる。
【００７３】
例示的なＩＬ−２１経路アンタゴニストは、ＩＬ−２１又はＩＬ−２１受容体に結合する物質を含む。ＩＬ−２１に結合する抗体は、ＩＬ−２１がＩＬ−２１受容体と相互作用すること又はＩＬ−２１受容体を活性化することを妨げ得る。ＩＬ−２１に結合して、経路アンタゴニストとして機能することができるもう１つの物質は、可溶性形態のＩＬ−２１受容体、例えばＩＬ−２１受容体細胞外ドメイン、又はＩＬ−２１と相互作用するのに十分な受容体の他の領域である。１つの実施形態では、前記物質は、Ｆｃドメイン及びＩＬ−２１と相互作用するのに十分な受容体の領域を含むＦｃ融合タンパク質である。ＩＬ−２１受容体に結合する抗体も経路アンタゴニストとして機能し得る。そのような抗体は、ＩＬ−２１が受容体と相互作用する又は受容体を活性化するのを妨げ得る。
【００７４】
さらなる他の経路アンタゴニストは、細胞質シグナル伝達成分の低分子阻害剤、例えばＳＴＡＴ３又はＳＴＡＴ５の低分子阻害剤を含む。経路アンタゴニストとして機能することができる核酸分子を以下で述べる。
【００７５】
免疫グロブリン
免疫グロブリン分子は、ＩＬ−２１経路活性を調節するために使用できる。例えば免疫グロブリン分子の１つのクラスは、ＩＬ−２１受容体に結合して、ＩＬ−２１経路活性を上昇させる分子を含む。免疫グロブリン分子のもう１つの例示的なクラスは、ＩＬ−２１ポリペプチド又はＩＬ−２１受容体に結合して、ＩＬ−２１経路活性を低下させる分子を含む。
【００７６】
典型的な免疫グロブリンは抗体である。本明細書で使用するとき、「抗体」は、少なくとも１つ、好ましくは２つの重（Ｈ）鎖可変ドメイン（本明細書ではＶＨと略する）、及び少なくとも１つ、好ましくは２つの軽（Ｌ）鎖可変ドメイン（本明細書ではＶＬと略する）を含むタンパク質を指す。ＶＨ及びＶＬドメインはさらに、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と称される超可変領域、ところどころに散在する「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称されるより保存された領域に細分することができる。フレームワーク領域及びＣＤＲの範囲は厳密に定義されている（参照して本明細書に組み込まれる、Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, and Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917参照）。各々のＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置された、３つのＣＤＲと４つのＦＲから成る：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。ラクダ抗体は、単一可変免疫グロブリンドメインを含み得る。
【００７７】
前記抗体は、それぞれ免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖を形成するために、重鎖及び軽鎖定常領域をさらに含み得る。１つの実施形態では、抗体は、免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖が、例えばジスルフィド結合によって、相互に連結されている、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖の四量体である。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から成る。軽鎖定常領域は１つのドメイン、ＣＬから成る。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の様々な細胞（例えばアゴニスト細胞）及び古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織又は因子への抗体の結合を媒介する。
【００７８】
本明細書で使用するとき、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリンフォールドを形成するドメインを有する１又はそれ以上のポリペプチドを含むタンパク質を指す。免疫グロブリンドメインは、おおよそ、２つの伸長したタンパク質層を有する円柱状（約４×２．５×２．５ｎｍ）である：１つの層は３本のポリペプチド鎖を含み、他方の層は４本の鎖を含む。各々の層において隣接する鎖は逆平行であり、βシートを形成する。２層はおおよそ平行であり、しばしば１本の鎖内のジスルフィド結合によって連結されている。
【００７９】
免疫グロブリンは、免疫グロブリン遺伝子によってコードされる領域を含み得る。認識されるヒト免疫グロブリンは、κ、λ、α（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε及びμ定常領域遺伝子、並びに種々様々な免疫グロブリン遺伝子及び遺伝子セグメントを含む。完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄ又は２１４アミノ酸）は、ＮＨ2末端の可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）及びＣＯＯＨ末端のκ又はλ定常領域遺伝子によってコードされる。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄ又は４４６アミノ酸）は、同様に可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）及びその他の前記定常領域遺伝子の１個、例えばγ（約３３０アミノ酸をコードする）によってコードされる。本明細書で使用するとき、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えばＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を指す。
【００８０】
抗体の「抗原結合フラグメント」（又は単に「抗体部分」又は「フラグメント」）という用語は、本明細書で使用するとき、抗原（例えばＩＬ−２１受容体）に特異的に結合する能力を保持する、完全長抗体の１又はそれ以上のフラグメントを指す。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから成る一価フラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結された２個のＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントである、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインから成るＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の１本の腕のＶＬ及びＶＨドメインから成るＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインから成る、ｄＡｂフラグメント（Ward et al., (1989) Nature 341:544-546）；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬとＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、それらを、ＶＬとＶＨドメインが一価分子を形成するように対合する一本鎖タンパク質（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えばBird et al. (1988) Science 242: 423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883参照）にすることができる合成リンカーにより、組換え法を用いて結合することができる。そのような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることが意図されている。これらの抗体フラグメントは当業者に公知の従来の手法を用いて得られ、前記フラグメントは、インタクトな抗体と同じように有用性に関してスクリーニングされる。「実質的にヒト」の免疫グロブリン可変ドメインは、その免疫グロブリン可変ドメインが正常ヒトにおいて免疫応答を惹起しないように十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含む免疫グロブリン可変ドメインである。「実質的にヒト」の抗体は、その抗体が正常ヒトにおいて免疫応答を惹起しないように十分な数のヒトアミノ酸位置を含む抗体である。ヒト及び実質的にヒトの免疫グロブリン可変ドメイン及び抗体が使用できる。
【００８１】
ＩＬ−２１ポリペプチド及びＩＬ−２１受容体タンパク質は、ＩＬ−２１ポリペプチド又はＩＬ−２１受容体タンパク質と特異的に反応し、ＩＬ−２１受容体を活性化し得るポリクローナル及びモノクローナル抗体を得るために動物（例えば非ヒト動物、非ヒト動物はヒト免疫グロブリン遺伝子を含む）を免疫するのに使用し得る。そのような抗体は、成熟タンパク質全体を免疫原として使用して、又はＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒのフラグメント（例えば可溶性フラグメント及び低分子量ペプチド）を使用することによって入手し得る。ペプチド免疫原は、カルボキシル末端にシステイン残基を付加的に含んでもよく、ハプテン、例えばキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に複合される。付加的なペプチド免疫原は、チロシン残基を硫酸化チロシン残基で置換することによって生成され得る。そのようなペプチドを合成するための方法は、例えばR. P. Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963) ; J. L. Krstenansky, et al., FEBS Lett. 211, 10 (1987)におけるように、当技術分野において公知である。
【００８２】
ＩＬ−２１又はＩＬ−２１受容体に対するヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、マウス系ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを使用して作製できる。ヒトタンパク質からのエピトープに特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを生産するために、対象抗原で免疫したこれらのトランスジェニックマウスからの脾細胞が使用される（例えば国際公開公報第ＷＯ９１／００９０６号；同第ＷＯ９１／１０７４１号；同第ＷＯ９２／０３９１８号；同第ＷＯ９２／０３９１７号; Lonberg, N. et al. 1994 Nature 368:856-859; Green, L. L. et al. 1994 Nature Genet. 7: 13-21; Morrison, S. L. et al. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855; Bruggeman et al. 1993 Year Immunol 7:33-40; Tuaillon et al. 1993 PNAS 90: 3720-3724; Bruggeman et al. 1991 Eur J Immunol 21: 1323-1326参照）。
【００８３】
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡテクノロジーにおける当業者に公知の他の方法によっても作製できる。「コンビナトリアル抗体ディスプレイ」と称される選択的方法が、特定抗原特異性を有する抗体フラグメントを特定し、単離するために開発されており、モノクローナル抗体を生産するために利用できる（コンビナトリアル抗体ディスプレイの説明については、例えばSastry et al. 1989 PNAS 86: 5728; Huse et al. 1989 Science 246: 1275; and Orlandi et al. 1989 PNAS 86: 3833参照）。上述したように動物を免疫原で免疫した後、生じるＢ細胞プールの抗体レパートリーをクローン化する。オリゴマープライマーの混合物とＰＣＲを使用することによって免疫グロブリン分子の多種多様な個体群の可変ドメインのＤＮＡ配列を得るための方法は一般的に知られている。例えば５’リーダー（シグナルペプチド）配列及び／又はフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマー、並びに保存された３’定常領域に対するプライマーが、多くのマウス抗体からの重鎖及び軽鎖可変ドメインのＰＣＲ増幅のために使用できる（Larrick et al.,1991, Biotechniques 11:152-156）。同様の戦略は、ヒト抗体からヒト重鎖及び軽鎖可変ドメインを増幅するためにも使用できる（Larrick et al., 1991, Methods: Companion to Methods in Enzymology 2: 106-110）。
【００８４】
キメラ免疫グロブリン鎖を含む、キメラ抗体は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ手法によって生産できる。例えばマウス（又は他の種の）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子を、マウスＦｃをコードする領域を除去するために制限酵素で消化し、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の等価部分で置換する（例えばロビンソン(Robinson)ら、  国際特許公開第ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号；  Ａｋｉｒａ，ら、欧州特許出願第１８４，１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ,  Ｍ．，  欧州特許出願第１７１，４９６号；モリソン(Morrison)ら、  欧州特許出願第１７３，４９４号；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際公開公報第ＷＯ８６／０１５３３号；  Ｃａｂｉｌｌｙら、  米国特許第４，８１６，５６７号；  Ｃａｂｉｌｌｙら、  欧州特許出願第１２５，０２３号； Better et al. (1988 Science 240: 1041-1043); Liu et al. (1987) PNAS 84: 3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139: 3521-3526; Sun et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al. , 1987, Canc. Res. 47: 999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314: 446-449; and Shaw et al., 1988, J. Natl Cancer Inst. 80: 1553-1559参照）。
【００８５】
抗体又は免疫グロブリン鎖は、当技術分野で公知の方法によってヒト化することができる。ヒト化免疫グロブリン鎖を含む、ヒト化抗体は、抗原結合に直接関与しないＦｖ可変ドメインの配列をヒトＦｖ可変ドメインからの等価配列で置換することによって作製できる。ヒト化抗体を作製するための一般的方法は、その内容が参照して本明細書に組み込まれる、Morrison, S. L., 1985, Science 229: 1202-1207, by Oi et al., 1986, BioTechniques 4: 214, and by Queen et al. 米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号及び米国特許第５，６９３，７６２号によって提供される。それらの方法は、重鎖又は軽鎖の少なくとも１つからの免疫グロブリンＦｖ可変ドメインの全部又は一部をコードする核酸配列を単離すること、操作すること及び発現することを含む。そのような核酸のソースは当業者に周知であり、例えばあらかじめ定められた標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから入手し得る。ヒト化抗体又はそのフラグメントをコードする組換えＤＮＡを、次に、適切な発現ベクターにクローニングすることができる。
【００８６】
ヒト化又はＣＤＲ移植抗体分子又は免疫グロブリンは、ＣＤＲ移植、又は免疫グロブリン鎖の１、２又は全部のＣＤＲを置換することができる、ＣＤＲ置換によって生産できる。例えばその内容が参照して明白に本明細書に組み込まれる、米国特許第５，２２５，５３９号; Jones et al. 1986 Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. 1988 Science 239: 1534; Beidler et al. 1988 J. Immunol. 141:4053-4060; Ｗｉｎｔｅｒ  米国特許第５，２２５，５３９号参照。Ｗｉｎｔｅｒは、ヒト化抗体を作製するために使用し得るＣＤＲ移植法を述べている  （その内容が参照して明白に本明細書に組み込まれる、１９８７年３月２６日出願のイギリス特許出願第ＧＢ  ２１８８６３８Ａ号；  Ｗｉｎｔｅｒ  米国特許第５，２２５，５３９号）。特定ヒト抗体のＣＤＲの全部を非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置換してもよく又はＣＤＲの一部だけを 非ヒトＣＤＲで置換してもよい。あらかじめ定められた抗原に対するヒト化抗体の結合のために必要なＣＤＲの数を置換する必要があるだけである。
【００８７】
一部の実施においては、モノクローナル、キメラ及びヒト化抗体を、例えば抗体の他の部分、例えば定常領域を、欠失させる、付加する又は置換することによって修飾することができる。例えば抗体を以下のように修飾することができる：（ｉ）定常領域を欠失させることによって；（ｉｉ）定常領域をもう１つ別の定常領域で、例えば抗体の半減期、安定性又は親和性を上昇させることを目的とする定常領域で、又はもう１つ別の種又は抗体クラスからの定常領域で、置換することによって；又は（ｉｉｉ）中でも特に、例えばグリコシル化部位の数、アゴニスト細胞機能、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、補体結合を変化させるために、定常領域内の１又はそれ以上のアミノ酸を修飾することによって、修飾することができる。
【００８８】
抗体定常領域を変化させるための方法は公知である。変化した機能、例えばアゴニストリガンド、例えば細胞上のＦｃＲ又は補体のＣ１成分に対する変化した親和性を有する抗体は、抗体の定常部分の少なくとも１個のアミノ酸残基を異なる残基で置換することによって生産できる（例えば欧州特許第３８８，１５１  Ａ1号、米国特許第５，６２４，８２１号及び米国特許第５，６４８，２６０号参照）。マウス又は他の種の免疫グロブリンに適用した場合に、これらの機能を低下させる又は排除する同様のタイプの変化も説明できる。
【００８９】
ＩＬ−２１経路の核酸アンタゴニスト
ある種の実施形態においては、ＩＬ−２１経路活性を低下させるため、例えばＩｇＧ産生を低下させるために核酸アンタゴニストを使用する。１つの実施形態では、核酸アンタゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド又はＩＬ−２１受容体をコードするｍＲＮＡを標的するｓｉＲＮＡであり、あるいは他の正に作用するＩＬ−２１経路成分を、ＩＬ−２１経路活性を低下させるために使用することができる。他の種類のアンタゴニスト核酸、例えば核酸アプタマー、ｄｓＲＮＡ、リボザイム、三重らせん形成体又はアンチセンス核酸も使用できる。
【００９０】
ｓｉＲＮＡは、場合により突出部を含む低分子二重鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。例えばｓｉＲＮＡの二重鎖領域は、約１８−２５ヌクレオチドの長さ、例えば約１９、２０、２１、２２、２３又は２４ヌクレオチドの長さである。典型的には、ｓｉＲＮＡ配列は標的ｍＲＮＡに厳密に相補的である。ｄｓＲＮＡ及び特にｓｉＲＮＡは、哺乳動物細胞（例えばヒト細胞）において遺伝子発現を沈黙化するために使用できる。例えばClemens, J. C. et al. (2000) Proc. Natl. Sci. USA 97, 6499- 6503; Billy, E. et al. (2001) Proc. Natl. Sci. USA 98, 14428-14433; Elbashir et al. (2001) Nature. 411 (6836):494-8;Yang, D. et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 9942-9947、米国特許第２００３０１６６２８２号、同第２００３０１４３２０４号、同第２００４００３８２７８号及び同第２００３０２２４４３２号参照。
【００９１】
他の種類の核酸物質の説明も入手可能である。例えば米国特許第４，９８７，０７１号；米国特許第５，１１６，７４２号；米国特許第５，０９３，２４６号; Woolf et al. (1992) Proc Natl Acad Sci USA; Antisense RNA and DNA, D. A. Melton, Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y. (1988) ; 89:7305-9; Haselhoff and Gerlach (1988) Nature 334: 585-59; Helene, C. (1991) Anticancer Drug Des. 6: 569-84; Helene(1992) Ann. N. Y. Acad. Sci. 660: 27-36; and Maher, L. J. (1992) Bioassays 14: 807-15参照。
【００９２】
組換えタンパク質生産
本明細書で述べる方法のための作用物質として機能するタンパク質をコードする核酸は、組換えによってタンパク質を生産するために、ベクター（例えばKaufman et al., Nucleic Acids Res. 19, 4485-4490(1991)に開示されているｐＭＴ２又はｐＥＤ発現ベクター）内で発現制御配列に作動可能に連結し得る。多くの適切な発現制御配列が知られている。組換えタンパク質を発現する一般的な方法も公知であり、R. Kaufman, Methods in Enzymology 185,537-566 (1990), Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (2001) and Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y. (1989)に例示されている。本明細書で定義する「作動可能に連結された」は、対象タンパク質（例えばＩＬ−２１又はもう１つ別のＩＬ−２１経路アゴニスト）が、連結されたポリヌクレオチド／発現制御配列で形質転換（トランスフェクト）された宿主細胞によって発現されるように、対象タンパク質をコードする特定ポリヌクレオチドと発現制御配列の間で共有結合を形成するように酵素的又は化学的に連結されていることを意味する。
【００９３】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用するとき、それが連結されているもう１つ別の核酸を輸送することができる、あるいはそれが連結されているもう１つ別の核酸の維持又は複製を支持することができる核酸分子を指す。１つの種類のベクターは、付加的なＤＮＡセグメントを連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す、「プラスミド」である。もう１つの種類のベクターは、付加的なＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結し得る、ウイルスベクターである。ある種のベクターは、それらが導入された宿主細胞において自律複製することができる（例えば細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれることができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指令することができる。そのようなベクターを本明細書では「組換え発現ベクター」又は「発現ベクター」と称する。例示的なウイルスベクターは、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルスを含む。
【００９４】
「調節配列」という用語は、抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー及び他の発現制御エレメント（例えばポリアデニル化シグナル）を含むことが意図されている。そのような調節配列は、例えばGoeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)に述べられている。調節配列の選択は、形質転換する宿主細胞の選択、所望するタンパク質の発現レベル等のような因子に依存し得る。哺乳動物宿主細胞発現のための例示的な調節配列は、哺乳動物細胞において高レベルのタンパク質発現を指令するウイルスエレメント、例えばＦＦ−１ａプロモーター及びＢＧＨポリＡ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えばＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えばＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス（例えばアデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））及びポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーを含む。ウイルス制御エレメント及びそれらの配列のさらなる例示的説明については、例えば米国特許第５，１６８，０６２号、米国特許第４，５１０，２４５号及び米国特許第４，９６８，６１５号参照。
【００９５】
組換え発現ベクターは、付加的な配列、例えば宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば複製起点）及び選択マーカー遺伝子を担持し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号及び同第５，１７９，０１７号参照）。例えば典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に薬剤、例えばＧ４１８、ハイグロマイシン又はメトトレキサートに対する耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅に関するｄｈｆｒ−宿主細胞での使用のため）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）を含む。多くの細胞型が、タンパク質治療薬の発現のための適切な宿主細胞として働き得る。タンパク質治療薬を発現することができるいかなる細胞型も使用し得る。例示的な哺乳動物宿主細胞は、例えばサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎２９３細胞、ヒト表皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換霊長動物細胞系、正常二倍体細胞、一次組織のインビトロ培養に由来する細胞株、一次外植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、Ｈａｋ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ−１、ＰＣ１２、Ｍ１ｘ又はＣ２Ｃ１２細胞を含む。
【００９６】
タンパク質治療薬は、１又はそれ以上の昆虫発現ベクター内でそのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドを適切な制御配列に作動可能に連結し、昆虫発現系を使用することによって生産し得る。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系のための材料及び方法は、例えばSummers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No.1555 (1987)に述べられているように、例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（ＭＡＸＢＡＣ（登録商標）キット）からキット形態で、市販されている。可溶性形態のＩＬ−２１受容体タンパク質も、適切な単離ポリヌクレオチド、例えば膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの１又はそれ以上の又は十分なセグメントをコードする領域が除去された形態を用いて昆虫細胞において生産し得る。
【００９７】
タンパク質治療薬は、下等真核生物、例えば酵母又は原核生物、例えば細菌において生産し得る。適切な酵母株は、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、クルイベロミセス（Kluyveromyces）株、ピヒア（Pichia）、カンジダ、又は異種タンパク質を発現することができる任意の酵母株を含む。適切な細菌株は、大腸菌、枯草菌（Bacillus subtilis）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、又は異種タンパク質を発現することができる任意の細菌株を含む。
【００９８】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１ポリペプチドは、シグナル配列なしで（例えば原核生物又は真核生物シグナル配列なしで）細菌細胞において生産される。細菌における発現は、組換えタンパク質を取り込んだ封入体の形成を生じさせることがある。それ故、活性な又はより活性な物質を生産するために組換えタンパク質のリフォールディングが必要であり得る。細菌封入体から正しく折りたたまれた異種タンパク質を得るためのいくつかの方法が当技術分野において公知である。これらの方法は一般に、封入体からタンパク質を可溶化し、その後カオトロピック試薬を用いてタンパク質を完全に変性することを含む。
【００９９】
タンパク質の一次アミノ酸配列内にシステイン残基が存在するとき、タンパク質は、ジスルフィド結合の正しい形成を促進する環境（例えば酸化還元系）でリフォールディングされ得る。リフォールディングの一般的方法は、Kohno, Meth. Enzym. , 185: 187-195 (1990)、欧州特許第０４３３２２５号及び米国特許第５，３９９，６７７号に開示されている。 Asano et al. (2002) FEBS Lett. 528 (1-3):70-6は、細菌細胞において生産されるＩＬ−２１をリフォールディングするための例示的方法を述べている。例えばｒＩＬ−２１（組換えＩＬ−２１）を大腸菌において不溶性封入体として発現させ、次に可溶化して（例えば変性剤を用いて）、酸化還元試薬を導入する改変透析法を使用することによってリフォールディングする。
【０１００】
ＩＬ−２１経路アゴニストタンパク質又はその融合タンパク質はまた、トランスジェニック動物の生成物として、例えばＩＬ−２１経路アゴニストタンパク質又はその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む体細胞又は生殖細胞によって特徴付けられる、トランスジェニックウシ、ヤギ、ブタ又はヒツジの乳の成分として、発現され得る。
【０１０１】
治療
本発明の１つの態様では、ＩＬ−２１経路アゴニストはアトピー性疾患を治療する又は予防するために使用される。
【０１０２】
本明細書で使用するとき、「治療する」又は「治療」という用語は、被験者（例えばヒト被験者、例えば疾患、例えばアトピー性疾患の危険性がある患者又は人物）への組成物の適用又は投与と定義される。ある種の実施においては、治療は、被験者、例えば患者から単離した組織又は細胞、例えば細胞株への作用物質の適用又は投与を含み得る。一般に、治療は、疾患（例えば本明細書で述べる疾患）、疾患の症状、疾患の高い危険度、又は疾患に対する素因を有する被験者に、その疾患、疾患の症状又は疾患に対する素因を治療する、治癒させる、軽減する、緩和する、変化させる、矯正する、改善する、好転させる又は作用することを目的として提供される。治療は、組成物を単独で又は第二の作用物質と組み合わせて投与すること又は適用することを含み得る。これに関して「組み合わせて」という用語は、異なる薬剤を実質的に同時に、すなわち同時に又は連続的に、与えることを意味する。連続的に与える場合は、第二化合物の投与の発生時に、２つの薬剤のうちの最初の薬剤が、好ましくは治療部位において有効濃度でまだ検出可能である。
【０１０３】
「細胞を治療すること」は、例えば細胞の挙動又は状態を変化させるために、細胞、例えば免疫細胞に作用物質を接触させることを指す。１つの実施形態では、細胞をＩＬ−２１経路の調節剤で治療することは、ＩｇＧ又はＩｇＥの産生を調節する（例えば上昇させる又は低下させる）ために使用できる。
【０１０４】
本明細書で使用するとき、疾患を治療するために有効な作用物質の量又は「治療有効量」は、被験者への単回又は多回投与時に、被験者を治療する上で、例えば被験者における疾患の少なくとも１つの症状を、そのような治療がない場合に予想される程度を超える程度に治療する、軽減する、緩和する又は改善する上で有効である化合物の量を指す。例えば疾患は、アトピー性疾患、例えば本明細書で述べるアトピー性疾患であり得る。
【０１０５】
「局所的有効量」は、組織において、例えばアトピー性疾患の領域において、細胞活性を調節するために細胞を検出可能に調節するのに有効な化合物の量（例えば濃度）を指す。調節の証拠は、例えばＩｇＧ又はＩｇＥ産生の調節を含み得る。
【０１０６】
本明細書で使用するとき、「疾患を予防するために有効な」作用物質の量、又は化合物の「予防有効量」は、被験者への単回又は多回投与時に、疾患、例えばアトピー性疾患の発症又は再発の発生を予防する又は遅延させる上で有効な作用物質の量を指す。
【０１０７】
医薬組成物は、本明細書で述べる作用物質、例えばＩＬ−２１ポリペプチド、抗体、ある形態のＩＬ−２１受容体の、「治療有効量」又は「予防有効量」を含み得る。「治療有効量」は、所望の治療効果を達成するために、必要な用量及び期間で、有効な量を指す。組成物の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、生物及び体重、及び個体において所望の応答を惹起する化合物の能力などの因子に応じて異なり得る。治療有効量はまた、治療上の有益作用が組成物の毒性又は有害作用を上回る量である。「治療有効量」は、好ましくは、測定可能なパラメータ、例えば未治療被験者と比較した免疫グロブリン産生又はアトピー性疾患の測定可能な症状を、例えば統計的に有意な程度に、調節する。化合物が測定可能なパラメータを阻害する能力は、インビトロアッセイ、例えば本明細書で述べるアッセイを用いて、ヒト疾患における効果を予測する動物モデル系において、又は適切なヒト治験を用いて、評価することができる。
【０１０８】
ＩＬ−２１経路アゴニスト又はアンタゴニストによって媒介される特定作用は、統計的に有意の差（例えばＰ値＜０．０５又は０．０２）を示し得る。統計的有意性は当技術分野で公知の任意の方法によって決定できる。例示的な統計検定は、スチューデントｔ検定、マン−ホイットニーＵノンパラメトリック統計検定及びウィルコクソンノンパラメトリック検定を含む。一部の統計的に有意の関係は、０．０５又は０．０２未満のＰ値を有する。「誘導する」、「阻害する」、「増強する」、「高める」、「上昇させる」、「低下させる」等の用語は、例えば２つの状態の間の識別可能な定性的又は定量的相違を表し、２つの状態の間の差、例えば統計的有意差（例えばＰ値＜０．０５又は０．０２）を示し得る。
【０１０９】
用量計画は、最適な所望の応答（例えば治療応答）を提供するように調整される。例えば単回ボーラスを投与し得るか、いくつかの分割用量を経時的に投与し得るか、又は治療状況の緊急性によって指示されるのに比例して用量を低下又は上昇させ得る。投与の容易さ及び用量の均一さのために非経口組成物を投与単位形態で製剤することが可能である。本明細書で使用する単位投与形態は、治療する被験者への単一投与として適する物理的に分離した単位を指す；各々の単位は、必要な製薬担体と協力して所望治療効果を生じさせるように算定された、あらかじめ定められた量の活性化合物を含む。
【０１１０】
本明細書で述べる作用物資の治療又は予防有効量についての例示的な非限定的範囲は、０．１−２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１−１０ｍｇ／ｋｇである。作用物質は、約１−５０ｍｇ／ｍ2又は、約５−２０ｍｇ／ｍ2の用量に達するまで２０、１０、５又は１ｍｇ／分未満の速度で静脈内注入によって投与することができる。用量値は、軽減すべき状態の種類及び重症度によって変化し得る。個々の被験者に関して、詳細な用量計画は、個体の必要性及び組成物を投与する又は組成物の投与を監視する人物の専門的判断に従って経時的に調整され得る。従って、本明細書で述べる用量範囲は単なる例示である。
【０１１１】
本明細書で使用するとき、「被験者」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を含むことが意図されている。本発明の「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば非哺乳動物（例えばニワトリ、両生動物、爬虫動物）及び哺乳動物、例えば非ヒト霊長動物、マウス、ヒツジ、イヌ、ウシ、ブタ等を含む。
【０１１２】
化合物を投与する一部の例示的方法を「医薬組成物」の中で述べる。医薬組成物はまた、医療装置を用いて投与することもできる。例えば１つの実施形態では、本発明の医薬組成物は、無針皮下注射器、例えば米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号又は同第４，５９６，５５６号に開示されている装置で投与することができる。使用できる周知の移植物及びモジュールの例は、薬剤を制御速度で投薬するための移植可能な微量注入ポンプを開示する、米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を通して薬剤を投与するための治療装置を開示する、米国特許第４, ４８６，１９４号；薬剤を厳密な注入速度で送達するための薬剤持続注入ポンプを開示する、米国特許第４，４４７，２３３号；持続的薬剤送達のための可変流量移植可能注入装置を開示する、米国特許４，４４７，２２４号；多チェンバーコンパートメントを有する浸透圧薬剤送達システムを開示する、米国特許第４，４３９，１９６号；及び浸透圧薬剤送達システムを開示する、米国特許第４，４７５，１９６号を含む。言うまでもなく、多くの他のそのような移植物、送達システム及びモジュールも公知である。
【０１１３】
１つの実施形態では、作用物質を、例えば医療装置、例えば吸入器を使用して、呼吸器又は粘膜送達用に製剤する。例えば米国特許第６，１０２，０３５号（粉末吸入器）及び同第６，０１２，４５４号（ドライパウダー吸入器）参照。１つの実施形態では、吸入器は定量吸入器である。薬剤を肺気道に局所的に送達するために使用される３つの一般的なシステムは、ドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）、定量吸入器（ＭＤＩ）及び噴霧器（ネブライザ）である。吸入投与の最も一般的な方法であるＭＤＩは、薬剤を可溶性形態で又は分散として送達するために使用し得る。典型的にはＭＤＩは、フレオン又は装置の活性化時にエーロゾル化された薬剤を気道へと押し進める他の比較的高い蒸気圧の推進薬を含有する。ＭＤＩと異なり、ＤＰＩは一般に、乾燥粉末形態の薬剤を肺へと導入するために全面的に患者の吸息努力に頼る。噴霧器は、液体溶液にエネルギーを与えることによって吸入される薬剤エーロゾルを形成する。フルオロケミカル媒質を用いる液体換気又は肺洗浄の間の薬剤の直接肺送達も可能である。
【０１１４】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストを局所的に投与する。「局所投与」は、製剤を被験者の表面に直接接触させることによる被験者への送達を指す。局所送達の最も一般的な形態は皮膚に対してであるが、本明細書で開示する組成物は身体の他の表面、例えば眼、粘膜、体腔の表面又は内部表面にも直接適用できる。この用語はまた、経皮経路の投与も包含する。局所様式の投与は、典型的には皮膚の透過性障壁の透過及び標的組織又は標的層への効率的な送達を含む。局所投与は、表皮及び真皮に浸透し、組成物の局所又は全身送達を達成するための手段として使用できる。局所投与はまた、ＩＬ−２１経路アゴニストを被験者の皮膚（例えば表皮又は真皮）又はその特定層又は下にある組織に選択的に送達するための手段としても使用できる。「皮膚」という用語は、本明細書で使用するとき、動物の表皮及び／又は真皮を指す。
【０１１５】
いくつかの因子が、投与される作用物質に対する皮膚の透過性を決定する。これらの因子は、治療される皮膚の特徴、送達物質の特徴、薬剤と送達物質の間及び薬剤と皮膚の間の相互作用、適用される薬剤の用量、治療の形態、及び後治療計画を含む。表皮及び真皮を選択的に標的するために、時として、あらかじめ選択された層への薬剤の浸透を可能にする１又はそれ以上の浸透促進剤を含有する組成物を製剤することが可能である。
【０１１６】
経皮送達は、脂溶性治療薬の投与のために貴重な経路である。真皮は表皮よりも透過性であり、それゆえ擦過、やけど又は露出した皮膚を通しての吸収ははるかに迅速である。炎症及び皮膚への血流を上昇させる他の生理的条件も経皮吸収を高める。この経路による吸収は、油性賦形剤の使用（塗擦）又は１つ若しくはそれ以上の透過性促進剤の使用によって増強され得る。本明細書で開示する組成物を経皮経路によって送達するための他の有効な方法は、皮膚の水和及び制御放出性局所パッチの使用を含む。経皮経路は、全身及び／又は局所治療のために本明細書で開示する組成物を送達するための潜在的に有効な手段を提供する。
【０１１７】
加えて、イオン導入（電場の影響下で生物学的膜を通してのイオン性溶質の移入）（Lee et al.,Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.163）、超音波導入（フォノフォレシス又はソノフォレシス）（生物学的膜、特に皮膚及び角膜を通過する様々な治療薬の吸収を高めるための超音波の使用）（Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p.166）、及び投与部位における用量状態（dose position）及び貯留に関する賦形剤特性の最適化(Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, p. 168)は、皮膚及び粘膜部位を通過する局所適用作用物質の輸送を増強するために有用な方法であり得る。
【０１１８】
医薬組成物
ＩＬ−２１経路アゴニストは、製薬上許容される担体と組み合わせたとき医薬組成物として使用し得る。そのような組成物は、ＩＬ−２１経路アゴニスト及び担体に加えて、様々な希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤及び当技術分野で周知の他の物質を含み得る。「製薬上許容される」という用語は、有効成分の生物活性の有効性に干渉しない非毒性物質を意味する。担体の特徴は、典型的には投与経路に依存する。
【０１１９】
医薬組成物は、以下でより詳細に説明する他の抗炎症薬をさらに含み得る。そのような付加的な因子及び／又は物質は、ＩＬ−２１経路アゴニストと相乗作用を生じさせるため、又はＩＬ−２１経路アゴニストによって引き起こされる副作用を最小限に抑えるために医薬組成物に含めてもよい。逆にＩＬ−２１経路アゴニストを、抗炎症薬の副作用を最小限に抑えるために特定抗炎症薬の製剤に含めてもよい。
【０１２０】
医薬組成物は、ＩＬ−２１経路アゴニストが、他の製薬上許容される担体に加えて、両親媒性物質、例えば水性溶液中にミセル、不溶性単層、液晶又は薄層として凝集体で存在する脂質と組み合わされたリポソームの形態であり得る。リポソーム製剤のための適切な脂質は、限定を伴わずに、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等を含む。そのようなリポソーム製剤の製造は、例えば全て参照して本明細書に組み込まれる、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；及び米国特許第４，７３７，３２３号に開示されているように、当技術分野の技術レベルの範囲内である。
【０１２１】
治療又は使用の方法を実施するときは、ＩＬ−２１経路アゴニスト又はアンタゴニストの治療有効量を被験者（例えば哺乳動物）（例えばヒト）に投与する。ＩＬ−２１経路アゴニストは、単独で又は他の治療、例えばアトピー性疾患のための他の治療と組み合わせて投与しうる。１又はそれ以上の作用物質と同時投与するとき、ＩＬ−２１経路アゴニストは、第二作用物質と同時に又は連続的に投与し得る。連続的に投与する場合は、主治医が、他の作用物質と組み合わせてＩＬ−２１経路アゴニストを投与する適切な順序を決定することができる。
【０１２２】
アトピー性疾患を治療するときに使用するための例示的な付加作用物質は：他の免疫調節剤（例えばタクロリムス軟膏（ＰＲＯＴＯＰＩＣ（商標））及びピメクロリムスクリーム（ＥＬＩＤＥＬ（商標））、コルチコステロイド（局所及び全身）、抗ヒスタミン薬、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン、メトトレキサート又はアザチオプリン）を含む。アレルギー性疾患を治療するときに使用するための例示的な付加作用物質は：ＣＬＡＲＩＴＩＮ（登録商標）（ロラタジン）、ジフェンヒドラミン及び他の抗ヒスタミン薬及びフマル酸ケトチフェンを含む。
【０１２３】
ＩＬ−２１経路アゴニストの投与は、例えば経口摂取、頭蓋内、吸入、又は皮膚、皮下又は静脈内注射又は投与を含む、様々な方法で実施できる。例えば組成物は、硬膜外液として又はさもなければ、例えば脳脊髄液に送達することができる。
【０１２４】
ＩＬ−２１経路アゴニストの治療有効量を経口投与するために、前記物質は錠剤、カプセル、粉末、溶液又はエリキシルの形態であり得る。錠剤形態で投与するとき、医薬組成物は、付加的に固体担体、例えばゼラチン又はアジュバントを含み得る。錠剤、カプセル及び粉末は、約５から９５％の前記物質又は約２５から９０％の前記物質を含む。液体形態で投与するときは、液体担体、例えば水、石油、動物又は植物起源の油、例えば落花生油、鉱物油、ダイズ油又はゴマ油、又は合成油を添加してもよい。液体形態の医薬組成物は、生理食塩水、デキストロース又は他のサッカリド溶液、又はグリコール、例えばエチレングリコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールをさらに含み得る。液体形態で投与するとき、医薬組成物は、約０．５から９０重量％の作用物質、好ましくは約１から５０重量％の作用物質を含む。
【０１２５】
例えば静脈内、皮膚又は皮下注射によって、ＩＬ−２１経路アゴニストの治療有効量を投与するために、前記物質は、発熱物質不含の非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。ｐＨ、等張性、安定性等を十分に顧慮した、そのような非経口的に許容されるタンパク質溶液の製造は、当技術分野の技術範囲内である。静脈内、皮膚又は皮下注射のための例示的な医薬組成物は、作用物質に加えて、等張性賦形剤、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンガー液、又は当技術分野で公知の他の賦形剤を含み得る。本発明の医薬組成物もまた、安定剤、防腐剤、緩衝液、酸化防止剤、又は当業者に公知の他の添加剤を含む。
【０１２６】
本発明の医薬組成物中のＩＬ−２１経路アゴニストの量は、治療する状態の性質及び重症度、及び患者が受けたそれまでの治療の性質に依存し得る。主治医は、各々個々の患者を治療するためのアゴニストの量を決定することができる。最初に主治医は、例えば、低用量の作用物質を投与し、患者の応答を観察することができる。その患者に関して最適治療効果が得られるまでより高用量の物質を投与してもよく、その時点で一般には用量をさらに増加させないか、又は免疫グロブリンレベル（例えばＩｇＧ又はＩｇＥレベル）又は１又はそれ以上の症状を監視することによってより高い用量の物質を投与し得る。例示的な医薬組成物は、体重ｋｇ当り約０．１μｇから約１００ｍｇのＩＬ−２１経路アゴニストを含有し得る。例えば有用な用量は、体重ｋｇ当り約１０μｇから１ｍｇ、０．１−５ｍｇ、及び３−５０ｍｇのＩＬ−２１経路アゴニストを含み得る。ＩＬ−２１の有用な用量は、体重ｋｇ当り約５μｇから１ｍｇ、０．１−５ｍｇ、及び３−２０ｍｇのＩＬ−２１経路アゴニストをさらに含み得る。
【０１２７】
医薬組成物を用いた静脈内治療の期間は、治療する疾患の重症度及び各々個々の患者の状態及び潜在的特異体質反応に依存して異なり得る。ＩＬ−２１経路アゴニストの各々の適用の期間は、例えば１２から２４時間の持続的静脈内投与の範囲内であり得る。主治医は、本発明の医薬組成物を用いた静脈内治療の適切な期間を決定することができる。
【０１２８】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストは、微粒子又は他の持続放出性製剤として製剤される。微粒子は噴霧乾燥によって生産できるが、凍結乾燥、蒸発、流動床乾燥、真空乾燥又はこれらの手法の組合せを含む他の方法によっても生産し得る。制御又は持続放出は、アゴニストを、その放出を妨げる構造又は物質内に配置することによって実現できる。例えば、一定期間にわたるアゴニストの放出を可能にする、多孔性マトリックス又は腐食性マトリックス内にアゴニストを配置することができる。
【０１２９】
１つの実施形態では、ＩＬ−２１経路アゴニストを含む混合ミセル製剤が、経皮膜を通して作用物質を送達するために使用される。前記製剤は、例えばＩＬ−２１経路アゴニストの水溶液、及びミセル形成化合物、及び場合によりアルカリ金属、例えばＣ8−Ｃ22アルキル硫酸塩を混合することによって製造し得る。例示的なミセル形成化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の製薬上許容される塩、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、モノオレイン、モノオレイン酸塩、モノラウリン酸塩、ルリヂサ油、月見草油、メントール、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン及びその製薬上許容される塩、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、トリオレイン、ポリオキシエチレンエーテル及びその類似体、ポリドカノールアルキルエーテル及びその類似体、ケノデオキシコール酸塩、デオキシコール酸塩、及びそれらの混合物を含む。ミセル形成化合物は、アルカリ金属アルキル硫酸塩の添加と同時に又は添加後に添加し得る。混合ミセルは、成分の実質的にいかなる種類の混合によっても形成されるが、より小さなサイズのミセルを提供するために強く混合することが好ましい。「ミセル」は、本明細書では、両親媒性分子が、分子の全ての疎水性部分が内側に向き、親水性部分は周囲の水相に接触している球状構造に配置された、特定型の分子集合体と定義される。環境が疎水性である場合は逆の配置が存在する。
【０１３０】
ＩＬ−２１経路アンタゴニストは、ＩＬ−２１経路アゴニストについて述べたのと同様にして、製薬上許容される担体と組み合わせた医薬組成物として処方及び製造し得る。
【０１３１】
タンパク質であるＩＬ−２１経路アゴニスト及びアンタゴニストに関して、そのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与又は使用によって疾患又は障害を治療又は予防することもできる（例えば遺伝子治療又はＤＮＡの導入に適するベクターにおいて）。ＩＬ−２１経路アゴニストをコードするポリヌクレオチド（例えばＩＬ−２１ポリペプチド）をベクターに挿入し、遺伝子治療ベクターとして使用することができる。遺伝子治療ベクターは、例えば静脈内注射、局所投与（米国特許第５，３２８，４７０号）、注入（例えば米国特許第２００４００３０２５０号又は同第２００３０２１２０２２号）又は定位注入（例えばChen et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3054-3057, 1994）によって被験者に送達することができる。遺伝子治療ベクターの医薬製剤は、許容される希釈剤中に遺伝子治療ベクターを含み得るか、又は遺伝子送達賦形剤が包埋されている徐放性マトリックスを含み得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクター、例えばレトロウイルスベクターが組換え細胞からインタクトな状態で生産できる場合、医薬製剤は、遺伝子送達システムを生産する１又はそれ以上の細胞を含み得る。
【０１３２】
キット
本明細書で述べるＩＬ−２１経路アゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチド又はＩＬ−２１受容体に結合する抗体は、キットとして提供することができる。キットは、（ａ）ＩＬ−２１経路アゴニスト、例えばＩＬ−２１経路アゴニストを含む組成物、及び場合により（ｂ）情報資料を含む。情報資料は、本明細書で述べる方法及び／又は本明細書で述べる方法のためのＩＬ−２１経路アゴニストの使用に関する説明、指示、マーケティング又は他の資料であり得る。
【０１３３】
キットの情報資料はその形態に関して限定されない。１つの実施形態では、情報資料は、化合物（すなわちＩＬ−２１経路アゴニスト）の生産についての情報、化合物の分子量、濃度、使用期限日、バッチ又は生産場所情報等を含み得る。１つの実施形態では、情報資料は、アトピー性疾患を治療する又は予防するための化合物の投与に関する。
【０１３４】
１つの実施形態では、情報資料は、本明細書で述べる方法を実施するために適切な方法で、例えば適切な用量、投与形態又は投与の様式（例えば本明細書で述べる用量、投与形態又は投与様式）で、ＩＬ−２１経路アゴニストを投与するための指示を含み得る。例示的な用量、投与形態又は投与様式は、体重ｋｇ当り約１０μｇ−１ｍｇ、０．１−５ｍｇ、及び３−５０ｍｇのＩＬ−２１ポリペプチドである。もう１つの実施形態では、情報資料は、ＩＬ−２１経路アゴニストを適切な被験者、例えばヒト、例えばアトピー性疾患を有する又はその危険性があるヒトに投与するための指示を含み得る。例えば資料は、アトピー性疾患の少なくとも１つの系統、例えば喘息、アトピー性皮膚炎又はアレルギー性鼻炎を改善するためにＩＬ−２１経路アゴニストを投与するための指示を含み得る。
【０１３５】
キットの情報資料はその形態に関して限定されない。多くの場合、情報資料、例えば指示は、印刷物、例えば印刷されたテキスト、図面及び／又は写真、例えばラベル又は印刷されたシートとして提供される。しかし、情報資料はまた、他の形式、例えばコンピュータ読取り可能媒体、ビデオ記録又はオーディオ記録としても提供され得る。もう１つの実施形態では、キットの情報資料は、キットの使用者がＩＬ−２１経路アゴニスト及び／又は本明細書で述べる方法におけるその使用について実質的な情報を得ることができる、連絡先情報、例えば医師の住所、ｅメールアドレス、ウエブサイト又は電話番号である。言うまでもなく、情報資料はいかなる形式の組合せでも提供され得る。
【０１３６】
ＩＬ−２１経路アゴニストに加えて、キットの組成物は、他の成分、例えば溶媒又は緩衝液、安定剤、防腐剤、着香剤（例えば苦味抑制剤又は甘味料）、香料又は他の化粧品成分、及び／又は本明細書で述べる状態又は疾患、例えばアトピー性疾患、例えば喘息、アトピー性皮膚炎又はアレルギー性鼻炎を治療するための第二作用物質を含み得る。あるいは、他の成分がキットに含まれ得るが、ＩＬ−２１経路アゴニストとは異なる組成物又は容器中に含まれ得る。そのような実施形態では、キットは、ＩＬ−２１経路アゴニストとその他の成分を混合するため、又はＩＬ−２１経路アゴニストをその他の成分と共に使用するための指示を含み得る。
【０１３７】
ＩＬ−２１経路アゴニストは、いかなる形態でも、例えば液体、乾燥又は凍結乾燥形態で提供され得る。ＩＬ−２１経路アゴニストは実質的に純粋及び／又は無菌であることが好ましい。ＩＬ−２１経路アゴニストが液体溶液中で提供されるとき、液体溶液は、好ましくは水溶液であり、無菌水溶液が好ましい。ＩＬ−２１経路アゴニストが乾燥形態として提供されるとき、再溶解は一般に適切な溶媒の添加による。溶媒、例えば無菌水又は緩衝液は、場合によりキット中で提供することができる。
【０１３８】
キットは、ＩＬ−２１経路アゴニストを含む組成物のための１又はそれ以上の容器を含み得る。一部の実施形態では、キットは、組成物と情報資料のための別々の容器、仕切り又は区画を含む。例えば組成物はビン、バイアル又は注射器内に含まれ、情報資料はプラスチックケース又はパケットに含まれ得る。他の実施形態では、キットの別々の要素が単一の分割されていない容器内に含まれる。例えば組成物は、ラベルの形態の情報資料が貼り付けられたビン、バイアル又は注射器に含まれる。一部の実施形態では、キットは、各々が１又はそれ以上の単位投与形態（例えば本明細書で述べる投与形態）のＩＬ−２１経路アゴニストを含む、複数（例えばパック）の個別容器を含む。例えばキットは、各々が単一単位用量のＩＬ−２１経路アゴニストを含む、複数の注射器、アンプル、ホイルパケット又はブリスターパックを含む。キットの容器は、気密性、防水性（例えば湿度の変化又は蒸発に対して不透過性）及び／又は耐光性であり得る。
【０１３９】
キットは、場合により組成物の投与に適する装置、例えば注射器、吸入器、ピペット、鉗子、計量スプーン、点滴注入器（例えば点眼器）、スワブ（例えば綿棒又は木製スワブ）、又は何らかの組成物のような送達装置を含む。好ましい実施形態では、装置は吸入器又は移植ポンプである。
【０１４０】
アトピー性疾患及びその症状
「アトピー性」は、しばしばアレルギー反応を発現する遺伝性傾向が存在する疾患のグループを指す。アトピー性疾患の例は、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、喘息及び枯草熱を含む。
【０１４１】
喘息は、間欠的な呼吸器症状、例えば気管支過応答性及び可逆性気流閉塞に関連する、表現型において不均質な疾患である。喘息の免疫組織病理学的特徴は、例えば気道上皮の露出、基底膜の下のコラーゲン沈着；水腫；マスト細胞の活性化；及び炎症細胞浸潤（例えば好中球、好酸球及びリンパ球による）を含む。気道炎症はさらに、気道過応答性、気流制限、急性気管支収縮、粘液栓形成、気道壁再造形、及び他の呼吸器症状に寄与し得る。ＩＬ−２１経路アゴニストはこれらの症状の１又はそれ以上を改善するために投与することができる。
【０１４２】
アレルギー性鼻炎（枯草熱）の症状は、鼻のかゆみ、鼻水、くしゃみ又は鼻づまり、及び眼のかゆみを含む。ＩＬ−２１経路アゴニストはこれらの症状の１又はそれ以上を改善するために投与できる。
【０１４３】
アトピー性皮膚炎は、皮膚を侵す慢性（長期持続性）疾患である。アトピー性皮膚炎についての情報は、例えばＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．０３−４２７２から入手可能である。アトピー性皮膚炎では、皮膚が極度にかゆくなり、発赤、腫脹、亀裂、透明液の浸出、そして最終的に痂皮形成及び落屑を導く。多くの症例では、疾患が悪化する期間（増悪又は再燃と呼ばれる）があり、その後皮膚が改善する又は完全に治る期間（寛解と呼ばれる）が続く。
【０１４４】
アトピー性皮膚炎はしばしば、皮膚の炎症のいくつかのタイプについての一般的な用語である、「湿疹」と称される。アトピー性皮膚炎は湿疹の多くのタイプのうち最も一般的なものである。アトピー性皮膚炎の例は：アレルギー性接触湿疹（皮膚炎：皮膚が、免疫系が異物と認識する物質、例えばツタウルシ又はクリーム及びローション中のある種の防腐剤と接触した場合の発赤、かゆみ、湿潤性反応）；接触湿疹（皮膚がアレルゲン（アレルギーの原因物質）又は刺激原、例えば酸、洗浄剤又は他の化学物質）と接触した場合の発赤、かゆみ及び灼熱感を含む限局性反応）；発汗障害性湿疹（痒くて灼熱感のある透明で深い水疱を特徴とする、手掌又は足底の皮膚の刺激）；神経皮膚炎（引っ掻いたとき強く刺激性となる限局性のかゆみ（例えば昆虫の咬傷）によって引き起こされる頭部、下肢、手首又は前腕の皮膚の落屑性の斑）；貨幣状湿疹（痂皮形成、落屑を生じることがあり、極度にかゆみのある、刺激性皮膚のコイン型の斑−腕、背、臀部及び下肢に最も一般的）；脂漏性湿疹（頭皮、顔及び時として身体の他の部分の皮膚の黄色っぽい油性の落屑性斑）を含む。付加的な特定症状は、うっ血性皮膚炎、アトピー性ひだ（デニー−モルガンひだ）、口唇炎、過線状手掌（hyperlinear palms）、色素沈着眼瞼：炎症又は枯草熱から色が濃くなった眼瞼、魚燐癬、毛孔性角化症、苔癬化、丘疹及び蕁麻疹を含む。ＩＬ−２１経路アゴニストはこれらの症状の１又はそれ以上を改善するために投与することができる。
【０１４５】
候補物質を評価するためのアッセイ
例えばＩＬ−２１経路アゴニスト又はＩＬ−２１経路アンタゴニストとして使用するための、候補物質を評価するために様々なアッセイが使用可能である。ＩＬ−２１ポリペプチド及びＩＬ−２１受容体タンパク質についての例示的な活性アッセイは、例えばKasaian et al. (2002)Immunity 16: 1-20に述べられている。これらのアッセイは、ＩＬ−２１ポリペプチド又は他の作用物質の機能性を評価するために使用できる。例えばＩＬ−２１ポリペプチドは、Kasaian et al. (2002), supraからの以下のアッセイ：Ｔ細胞増殖アッセイ（例えば前記参考文献の図７Ａにおけるような）、ＩＦＮ−γ産生（例えば前記参考文献の図７Ｃにおけるような）、及びＮＫ細胞傷害性アッセイ（例えばＩＬ−１５の存在下での、前記参考文献の図４におけるような）、の１又はそれ以上において活性（例えば野生型の少なくとも２５、５０、７５、８０又は９５％の比活性）を有し得る。
【０１４６】
胸腺細胞又は脾細胞の細胞傷害性に関する適切なアッセイは、限定を伴わずに、Current Protocols in Immunology, Ed by J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Chapter 7, Immunologic studies in Humans) ; Herrmann et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:2488-2492, 1981; Herrmann et al., J. Immunol. 128: 1968 - 1974, 1982; Handa et al., J. Immunol. 135:1564-1572, 1985; Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai et al., J. Immunol. 140:508-512, 1988; Herrmann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:2488-2492, 1981; Herrmann et al. , J. Immunol. 128:1968-1974, 1982; Handa et al., J. Immunol. 135:1564-1572, 1985; Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Bowmanet al., J. Virology 61:1992-1998; Takai et al., J. Immunol. 140:508-512, 1988; Bertagnolli et al., Cellular Immunology 133:327-341, 1991; Brown et al., J. Immunol. 153:3079-3092, 1994に述べられているものを含む。
【０１４７】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答及びアイソタイプスイッチに関するアッセイ（中でも特に、Ｔ細胞依存性抗体応答を調節し、Ｔｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響を及ぼすタンパク質を特定する）は、限定を伴わずに、Maliszewski, J. Immunol. 144:3028-3033, 1990；及びＢ細胞機能に関するアッセイ：In vitro antibody production, Mond, J. J. and Brunswick, M. In Current Protocols in Immunology. J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 3.8.1-3.8.16, John Wiley and Sons, Toronto. 1994に述べられているものを含む。
【０１４８】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（中でも特に、主としてＴｈ１及びＣＴＬ反応を生じるタンパク質を特定する）は、限定を伴わずに、Current Protocols in Immunology, Ed by J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Chapter 7, Immunologic studies in Humans) ; Takai et al., J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai et al., J.Immunol. 140:508-512, 1988; Bertagnolli et al., J. Immunol. 149: 3778-3783, 1992に述べられているものを含む。
【０１４９】
樹状細胞依存性アッセイ（中でも特に、ナイーブＴ細胞を活性化する樹状細胞によって発現されるタンパク質を特定する）は、限定を伴わずに、 Guery et al., J. Immunol. 134:536-544, 1995; Inaba et al., Journal of Experimental Medicine 173:549-559, 1991; Macatonia et al., Journal of Immunology 154:5071-5079, 1995; Porgador et al., Journal of Experimental Medicine 182:255-260, 1995; Nair et al., Journal of Virology 67:4062-4069, 1993; Huang et al., Science 264:961-965, 1994; Macatonia et al., Journal of Experimental Medicine 169:1255- 1264, 1989; Bhardwaj et al., Journal of Clinical Investigation 94:797-807, 1994; 及び Inaba et al., Journal of Experimental Medicine 172:631-640, 1990に述べられているものを含む。
【０１５０】
リンパ球生存／アポトーシスに関するアッセイ（中でも特に、スーパー抗原誘導後のアポトーシスを防ぐタンパク質及びリンパ球ホメオスタシスを調節するタンパク質を特定する）は、限定を伴わずに、Darzynkiewicz et al. , Cytometry 13:795-808, 1992; Gorczyca et al., Leukemia 7:659- 670, 1993; Gorczyca et al., Cancer Research 53:1945-1951, 1993; Itoh et al., Cell 66:233-243, 1991; Zacharchuk, Journal of Immunology 145:4037-4045, 1990; Zamai et al., Cytometry 14:891-897, 1993; Gorczyca et al., International Journal of Oncology 1:639-648, 1992に述べられているものを含む。
【０１５１】
Ｔ細胞へのコミットメント及び発生の初期段階に影響を及ぼすタンパク質についてのアッセイは、限定を伴わずに、Antica et al., Blood 84:111-117, 1994; Fine et al., Cellular Immunology 155:111-122, 1994; Galy et al., Blood 85:2770-2778, 1995; Toki et al., Proc. Nat. Acad Sci. U.S.A. 88:7548-7551, 1991に述べられているものを含む。
【０１５２】
ＳＴＡＴの活性化を評価するためのアッセイは、例えば Gilmour et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 10772-10776に述べられている。例えば評価する細胞（例えばアゴニスト又は候補アゴニストで処理した細胞）を溶解し、チロシンリン酸化タンパク質を抗ホスホチロシン抗体で免疫沈降させることができる。次に、沈降した物質を、シグナル伝達経路成分、例えばＳＴＡＴタンパク質に対する抗体、例えばＳＴＡＴ５に特異的な抗体を用いて評価することができる。
【０１５３】
サイトカインレベルを評価するためのアッセイ
いかなる標準アッセイも、試料又は被験者におけるサイトカインレベルを評価するため、例えばＩＬ−２１パラメータを評価するために使用できる。例えば試料は、被験者から入手するか又は培養細胞を含み得る。例示的な試料は、１又はそれ以上の細胞、組織又は体液、例えば血液、尿、リンパ液、脳脊髄液又は羊水、培養細胞（例えば組織培養細胞）、口腔スワブ、うがい液、便、組織切片、及び生検材料（例えば生検吸引物）から入手し得るか又はそれらに由来し得る。
【０１５４】
サイトカインレベルを評価するための方法は、対象サイトカイン（例えばＩＬ−２１）をコードするｍＲＮＡ又はｃＤＮＡを検出するために核酸を評価すること又はサイトカイン自体を検出するためにタンパク質を評価することを含む。核酸は、例えばＲＴ−ＰＣＲ（例えば定量ＰＣＲ）又は核酸マイクロアレイを使用して評価することができる。タンパク質は、例えば質量分析法又は免疫検定法を用いて評価することができる。
【０１５５】
ＥＬＩＳＡは１つの好都合な形態の免疫検定法である。例えばＢｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ  ＣＡは、ＩＬ−２１、ＩＬ−１０及びＩＬ−１２を検出するために使用できるアッセイ試薬を提供する。Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ は、ＩＦＮ−γを＜８ｐｇ／ｍｌの感度で又はＴＧＦ−β１を＜７ｐｇ／ｍｌの感度で検出するための試薬を提供する。ＳＥＡＲＣＨＬＩＧＨＴ（商標）プロテオームアレイシステム（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｂｏｓｔｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ）は、多数のサイトカインを同時に評価するための包括的試薬を提供する。
【０１５６】
これらの方法は、例えばＩＬ−２１経路調節剤（例えばアゴニスト又はアンタゴニスト）の投与前、投与中又は投与後に被験者を評価するために使用することができる。例えばそのようなアゴニストがサイトカイン、例えばＩＬ−２１、ＩＬ−１０又はＩＦＮγのレベルに統計的に有意の変化を生じさせるかどうかを判定するため、又は許容される変化、例えばサイトカイン、例えばＩＬ−２１、ＩＬ−１０又はＩＦＮγの正常範囲内のレベルへの変化を生じさせるかどうかを判定するためである。評価により得られた情報は、アゴニストの用量を調節するために使用できる。
【０１５７】
同様に、ＩｇＧ及びＩｇＥレベルを評価するための方法が使用可能である。例えばＡｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ）は、Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．と同様に、ヒトＩｇＥを評価するためのＥＬＩＳＡキットを提供する。１つの実施形態では、ＩｇＥレベルが正常被験者の範囲内のレベルに低下しない場合、ＩＬ−２１アゴニストの投与を、例えば用量又は頻度を高める、例えば比例又は対応する量だけ、又は少なくとも約１．５、１．８又は２倍に、高めることによって上昇させ得る。
【実施例】
【０１５８】
ヒトアトピー性疾患において、ＩｇＥはアレルギー反応を感作し、一方ＩｇＧ４は防御的である。ＩＬ−４及びＩＬ−１３は、ＩｇＥ及びＩｇＧ４の両方へのＩｇスイッチ組換えの引き金となるので、付加的な作用物質が、アトピーに対する感受性又は耐性に影響を及ぼすこれらのアイソタイプの間のバランスを調節すると考えられる。ＩＬ−２１は、ＩＬ−４が駆動するＩｇＥスイッチ組換えを低下させるが、ヒトＰＢＭＣによるＩｇＧ４分泌を上昇させる。マウス系におけるその作用とは著しく異なり、ヒトＩｇＥ産生のＩＬ−２１による阻害はＢ細胞への直接作用ではなく、Ｂ細胞ＣＤ４０を抗ＣＤ４０抗体と架橋することによって克服することができた。さらに、ＩＬ−２１は、ＩＬ−１３に応答して産生されるＩｇＥをブロックしなかった。Ｔ細胞は、ＩＬ−４に応答するが、ＩＬ−１３には応答せず、Ｔ細胞増殖はＩｇＥ産生に対するＩＬ−２１の阻害作用に寄与すると思われる。ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＣＤ４０発現又はアポトーシスのいずれもが、阻害作用の原因ではなかった。
【０１５９】
ＩｇＥ産生の間接的阻害とは対照的に、ＩＬ−２１はＰＢＭＣからのＩｇＧ４の分泌を刺激した。本発明者らは、ＩＬ−２１がヒトＩｇＥ及びＩｇＧ４の両方の産生に影響を及ぼし得ること、そしてそれ故、アトピー性反応の調節に寄与し得ることを認めた。
【０１６０】
実験材料及び方法
ＰＢＭＣの単離と培養。健常ヒトドナーからの末梢血を、ヘパリンを加えたＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（商標）チューブ（ＢＤ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）に採取した。単核細胞を  ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ−１０７７（商標）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）での遠心分離によって単離した。全ＰＢＭＣの培養のために、細胞を、１０％熱不活化ＦＣＳ、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ中で、１×１０6／ｍｌ照射（１５００ラド）自己ＰＢＭＣをフィーダーとして含む９６穴丸底プレートに２×１０6／ｍｌでプレートした。ＰＨＡ活性化のために、ＰＢＭＣを２μｇ／ｍｌＰＨＡ−Ｐ（Ｓｉｇｍａ）と共にプレートした。２日後、ＰＨＡを欠くが、２５ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−４又は５０ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−１３、±２０ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−２１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を含む、新鮮培地を添加した。これらのレベルは各々のサイトカインに関する用量滴定によって測定した。抗ＣＤ４０モノクローナル抗体活性化のために、サイトカインの存在下でＰＢＭＣを１μｇ／ｍｌ抗ヒトＣＤ４０（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共にプレートした。ＰＨＡ及び抗ＣＤ４０活性化培養のために、新鮮サイトカインを含む培地を４日ごとに添加した。ＰＨＡ培養の１４−２１日目、又は抗ＣＤ４０モノクローナル抗体培養の６−１２日目に、抗体レベルの定量のための培地を採集した。これらの時点は、ＰＨＡ刺激に比べて抗ＣＤ４０処理条件下でのＩｇＥ産生のより迅速な時間経過を反映している。細胞を、ＲＮＡ単離のために培養期間の初期（３−５日目）又は後期（１０−１４日目）に単離した。
【０１６１】
Ｂ細胞の濃縮。上述したように単離したＰＢＭＣをＢ細胞濃縮カクテル（ＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）、ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ，Ｃａｎａｄａ）と共にインキュベートし、使用説明書に従ってＢ細胞を単離した。生じた個体群は、＞８８％ＣＤ２０＋Ｂ細胞であった。Ｂ細胞を、１×１０6／ｍｌ照射（１５００ラド）自己ＰＢＭＣをフィーダーとして含む培地に２×１０5／ｍｌでプレートし、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体又はサイトカインで上述したように処理した。培養の６−１２日目に、抗体レベルの測定のために培地を採集した。
【０１６２】
ヒトＩｇアイソタイプに関するＥＬＩＳＡ。ＥＬＩＳＡプレート（ＥＩＡ／ＲＩＡプレート；Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）を、０．１Ｍ炭酸ナトリウム、０．１Ｍ 重炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ９．６中の１μｇ／ｍｌヤギ抗ヒトＩｇＥ（ＫＰＬ  Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ  ＭＤ）又は３μｇ／ｍｌマウス抗ヒトＩｇＧ４（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）により、４℃で一晩被覆した。プレートをＰＢＳ中０．５％ゼラチン及び１％ポリビニルピロリドン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で１時間ブロックした。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で洗い、次に血清又はヒトＩｇＥ（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｉｎｔ，Ｋｅｎｎｅｂｕｎｋ，ＭＥ）又はＩｇＧ４（Ｓｉｇｍａ）アイソタイプ標準品と共に室温で４時間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗った後、プレートを、ヒトＩｇＥ（ＫＰＬ）又はＩｇＧ４（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）に対するビオチニル化抗体と共に室温で２時間インキュベートした。プレートを洗い、ＨＲＰ−標識ストレプトアビジン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）と共に室温で１時間インキュベートした。プレートを洗い、ペルオキシダーゼ基質、Ｓｕｒｅ  Ｂｌｕｅ（ＫＰＬ）と共にインキュベートした。０．１Ｎ  ＨＣLを添加することによって反応を停止させ、４５０ｎｍでの吸光度をＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（商標）プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で読み取った。アイソタイプ特異性を明らかにするために、精製ヒトＩｇＭ、ＩｇＧアイソタイプ又はＩｇＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）をＩｇＥ及びＩｇＧ４  ＥＬＩＳＡに供したところ、シグナルを生じなかった。ＩｇＥ  ＥＬＩＳＡの感度の限界は０．３ｎｇ／ｍｌであった。ＩｇＧ４  ＥＬＩＳＡの感度の限界は４ｎｇ／ｍｌであった。
【０１６３】
サイトカイン分析。培養上清中のサイトカインレベルを、ＩＬ−１０（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ；感度＜０．２ｐｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１２（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；感度＜２ｐｇ／ｍｌ）、ＩＦＮ−γ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；感度＜８ｐｇ／ｍｌ）又はＴＧＦ−β１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；感度＜７ｐｇ／ｍｌ）に関するアッセイキットを用いて測定した。
【０１６４】
増殖アッセイ。濃縮ヒトＢ細胞を９６穴丸底プレートにおいて２×１０5／ｗｅｌｌで、１０％ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ中で培養した。抗ＣＤ４０モノクローナル抗体及びサイトカインを上述したように添加した。３日目に、培養物を０．５μＣｉ／穴の３Ｈ−チミジン（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）と共にパルスし、５時間後にガラス繊維ろ過マットに採集した。３Ｈ−チミジンの取込みを液体シンチレーション計数によって測定した。
【０１６５】
アポトーシスアッセイ。アネキシンＶ−ＦＩＴＣアポトーシス検出キット（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用いたフローサイトメトリーによってアポトーシスを測定した。ＰＢＭＣを上述したように算定し、サイトカインの添加後２４時間目と４８時間目にアポトーシスを測定した。細胞をアネキシンＶ−ＦＩＴＣ及びＡＰＣ複合抗ヒトＣＤ１９（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共に室温で１５分間インキュベートし、洗浄した。ヨウ化プロピジウムを添加し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒサイトメーター及びＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウエア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて蛍光を分析した。
【０１６６】
ＲＮＡの単離。ＰＢＭＣ又はＢ細胞培養の５日目に、細胞をマイクロタイターウエルからプールし、ＰＢＳで洗って、ＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）で溶解し、ＱＩＡＳＨＲＥＤＤＥＲ（商標）で調製した。使用説明書に従ってＲＮＡ  ＭＩＮＩ（商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してＲＮＡを調製した。
【０１６７】
無菌転写産物の逆転写及びＰＣＲ分析。
上記のように調製したｍＲＮＡを、Ｐｒｏｍｅｇａ逆転写キット（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてｃＤＮＡに転写した。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  ＡＤＶＡＮＴＡＧＥ（商標）  ＰＣＲキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）及び以下のプライマー配列と条件を用いてＰＣＲを実施した。ＧＡＰＤＨは、プライマーを使用して９４℃、６５℃及び７２℃で各々１分間の２５サイクルで増幅した。Ｉε生殖細胞系転写産物は、プライマー（４２）を使用して９４℃、６５℃及び７４℃で各々１分間の３８サイクルで増幅した。Ｉγ４生殖細胞系転写産物は、プライマー（４３）を使用して９４℃、６５℃及び７６℃で各々１分間の３８サイクルで増幅した。成熟ＩｇＥ転写産物は、Ｉε逆プライマーと組み合わせたＪＨコンセンサス正プライマー：５’（４４）を使用して９４℃、６９℃及び７４℃で各々１分間の３８サイクルで増幅した。プライマーはＥｕｒｏｇｅｎｔｅｃ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって作製された。増幅産物を、臭化エチジウムを含む１．２％アガロースゲルで泳動させた。
【０１６８】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ。ＲＮＥＡＳＹ（商標）ミニキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて全ＲＮＡを細胞から単離した。オリゴヌクレオチドを、ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳ（商標）ソフトウエア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｃｏｒｐ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いてヒトＧＡＰＤＨ、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１０及びＩＬ−１２Ｒβ２に設計し、Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃが合成した。プローブを、５’末端でレポーター染料、６−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）によって及び３’末端で消光剤染料、６−カルボキシテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）によって標識した。逆転写酵素であるｑ−ＰＣＲ  ＭＡＳＴＥＲＭＩＸ（商標）（Ｅｕｒｏｇｅｎｅｔｅｃ）及び反応当り５０ｎｇの鋳型ＲＮＡを用いて反応を設定した。試料を、以下のＲＴ−ＰＣＲプログラム：４８℃で３０分の１サイクル、９５℃で１０分間の５０サイクル、９５℃で１５秒間の１サイクル及び６０℃で１分間の１サイクル、を使用してＰＲＩＳＭ７０００（商標）配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で２つ組で実施した。ＰＲＩＳＭ７０００（商標）ソフトウエアを用いてデータを解析した。各々の結果を、ＲＮＡの陽性対照ソースから作成した標準曲線に適合させ、発現値をＧＡＰＤＨで基準化した。
【０１６９】
統計分析。全ての所見を２−６回の別々の実験において再現した。スチューデントｔ検定を用いて処置群の間のデータを比較した。ミクロ培養におけるＩｇＥ産生へのサイトカインの作用を分析するために、所与の処置を施した各々のマイクロウエルにおけるＩｇＥレベルを、処置当りｎ＝２４−３６の別々の定量として得た。バルク培養におけるＩｇＥ又はサイトカイン産生へのサイトカインの作用を分析するために、処置ごとに同型培養を樹立した。＜０．０５のｐ値を有意とみなした。
【０１７０】
結果：
ＩＬ−２１は、ヒトＢ細胞においてＩＬ−４及びＩＬ−１３が駆動するＩｇＥ産生を増強する。ＩｇＥスイッチ組換えは、Ｂ細胞がＩＬ−４又はＩＬ−１３の存在下でＣＤ４０架橋剤に暴露することが引き金となり得る。この過程に対するＩＬ−２１の作用を検討するため、Ｂ細胞をヒトＰＢＭＣから＞８８％純度へと濃縮し、ＩＬ−４又はＩＬ−１３の存在下に抗ＣＤ４０ｍＡｂで刺激した。ＣＤ３＋細胞は検出不能であった。処置当り２４−３６マイクロタイターウエルにおいて個々の培養を樹立した。ＩＬ−４又はＩＬ−１３の不在下では、検出可能なＩｇＥ産生細胞が存在しないことと一致して、いずれのウエルもＩｇＥを含んでいなかった。ＩＬ−４又はＩＬ−１３を添加したときは、ミクロ培養物の大部分がＩｇＥ産生細胞を含んでおり（図１Ａ）、上清中に検出可能なＩｇＥが存在した（図１Ｂ）。正確な頻度を算定するための限界希釈分析は実施しなかったが、ＩｇＥ陽性ミクロ培養物の数の増加は、ＩｇＥ産生Ｂ細胞の発生率上昇を指示するとみなした。ＩＬ−４又はＩＬ−１３へのＩＬ−２１の添加は、ＩｇＥ産生をＩＬ−４又はＩＬ−１３単独で見られるレベルよりも一貫して上昇させた（図１Ａ、Ｂ）。ＩｇＥ産生ウエルのパーセンテージは、ＩＬ−４又はＩＬ−４＋ＩＬ−２１に関して実質的に１００％であり、ＩＬ−１３単独での６１％からＩＬ−１３＋ＩＬ−２１では７８％に上昇した。ＩＬ−４及びＩＬ−１３はまた、Ｃε遺伝子座への新規Ｉｇスイッチ組換えに結びつく、Ｉε生殖細胞系転写産物の産生も誘導した（図１Ｃ）。
【０１７１】
ＩＬ−４及びＩＬ−１３はまた、Ｉγ４生殖細胞系転写産物の生成も誘導したが（図１Ｃ）、本発明者らの培養系では、ＩＬ−４又はＩＬ−１３単独ではＩｇＧ４の産生及び細胞からの放出を支持するには十分でなかった（図１Ｄ）。これに対し、ＩＬ−２１は単独で、わずかにバックグラウンドレベルのＩγ４生殖細胞系転写産物を生成したが（図１Ｃ）、抗ＣＤ４０ｍＡｂ処置Ｂ細胞の上清中への低レベルのＩｇＧ４の放出を刺激した。ＩＬ−４又はＩＬ−１３へのＩＬ−２１の添加は、ＩｇＧ４産生をＩＬ−４又はＩＬ−１３単独で見られるレベルよりも強力に上昇させた（図１Ｄ）。実際に、ＩＬ−２１を培養物に添加しなかった場合は、細胞からごくわずかなＩｇＧ４しか放出されなかった。
【０１７２】
ＩＬ−２１は、抗ＣＤ４０ｍＡｂ処置で処置したヒトＢ細胞の増殖を刺激し（２２）、細胞分裂に伴ってアイソタイプスイッチ組換えを受ける細胞の割合を上昇させる（３４）。Ｂ細胞増殖の上昇が、ＩＬ−２１の存在下で認められるＩｇＥ及びＩｇＧ４のレベル上昇を説明するのに役立つかどうかを判定するために、本発明者らは、上記で使用した培養条件下で精製Ｂ細胞による３Ｈ−チミジンの取込みを評価した。結果は、ＩＬ−２１がＩＬ−４又はＩＬ−１３単独で見られるレベルよりもＢ細胞増殖を上昇させたことを示す（図２）。
【０１７３】
ＩＬ−２１は、抗ＣＤ４０ｍＡｂ及びＩＬ−４又はＩＬ−１３で刺激した未分画ＰＢＭＣにおけるＩｇＥ合成を増強する。Ｂ細胞へのその報告されている作用に加えて、ＩＬ−２１はヒトＴ細胞への強力な作用を有する。Ｔ細胞増殖を誘導し（２２、２３、３５）、ＴＣＲ架橋剤及び適切な共刺激の存在下でサイトカインの産生を増強する（２３、３６）。それ故、Ｔ細胞が同時に存在し、サイトカインに応答し得る条件下でＩｇＥ産生へのＩＬ−２１の作用を検討するのは興味深いことであった。
【０１７４】
未分画ＰＢＭＣを、ＩｇＥ産生を駆動するためにＩＬ−４又はＩＬ−１３と組み合わせた抗ＣＤ４０ｍＡｂで処置した。７から１４日後に上清中のＩｇＥを測定した。ＩＬ−４又はＩＬ−１３と組み合わせると、ＩＬ−２１はＩｇＥ及びＩｇＧ４タンパク質のレベルの中等度の上昇を生じさせた（図３Ａ、Ｂ、Ｄ）。ＩｇＥ産生ウエルのパーセンテージは、ＩＬ−４単独での８６％からＩＬ−４＋ＩＬ−２１では１００％に上昇し、ＩＬ−１３単独での１９％からＩＬ−１３＋ＩＬ−２１では５６％に上昇した。これと一致して、ＩＬ−４又はＩＬ−１３が誘導するＩε生殖細胞系転写産物、Ｊ−Ｃε成熟転写産物及びＩγ４生殖細胞系転写産物は全て、ＩＬ−２１の存在下で維持された（図３Ｃ）。
【０１７５】
ＩＬ−２１は、ＰＨＡ及びＩＬ−４で刺激した未分画ＰＢＭＣにおけるＩｇＥ合成をブロックする。活性化Ｔ細胞はＩＬ−２１の唯一の公知のソースである。次の一連の実験では、Ｉｇクラススイッチ組換えがＴ細胞活性化に依存する条件下でＩＬ−２１の作用を検討した。ＣＤ４０Ｌ発現を誘導するために、未分画ＰＢＭＣをＴ細胞マイトジェンである、ＰＨＡで処置した（５１）。ＩＬ−４又はＩＬ−１３を添加すると、１４−２１日以内にＩｇＥが上清中に放出された。このＴ細胞依存系においては、ＩＬ−４が駆動するＩｇＥ産生はＩＬ−２１によってブロックされ、上清中に放出されるＩｇＥのレベルは大きく低下した（図４Ａ、Ｂ）。ＩｇＥ産生ウエルのパーセンテージは、ＩＬ−４単独での４７％からＩＬ−４＋ＩＬ−２１では６％に低下した。興味深いことに、ＩｇＥ合成をＩＬ−１３で開始したときにはこの作用が見られなかった。ＩＬ−１３＋ＩＬ−２１で処置した細胞は、精製Ｂ細胞で認められたように（図１Ａ）、ＩＬ−１３単独で処置したものよりも多くのＩｇＥを産生した（図４Ａ、Ｂ）。ＩｇＥ産生ウエルのパーセンテージは、ＩＬ−１３単独での３１％からＩＬ−１３＋ＩＬ−２１では６８％に上昇した。Ｔ細胞がＩＬ−４には応答するがＩＬ−１３には応答しないことを考慮すると、これらの所見は、この系におけるＩＬ−４駆動性ＩｇＥ産生へのＩＬ−２１の阻害活性についてのＴ細胞依存性機構を指し示す。
【０１７６】
この阻害作用をさらに調べるため、Ｉε生殖細胞系転写を検討した。ＰＨＡ刺激により、Ｉε生殖細胞系転写産物はＩＬ−４又はＩＬ−１３の添加後すぐに（培養の３−５日目）検出可能であった。ＩＬ−２１はＩＬ−４処置培養におけるＩｇＥ産生をブロックしたが、ＩＬ−４又はＩＬ−１３のいずれかによるＩε生殖細胞系転写産物のこの初期誘導を妨げなかった（図４Ｃ）。
【０１７７】
ＩＬ−２１は、ＰＨＡで刺激した未分画ＰＢＭＣにおけるＩｇＧ４産生を上昇させる。ＰＨＡで刺激したＰＢＭＣ培養において、ＩＬ−４又はＩＬ−１３による処置は高レベルのＩγ４生殖細胞系転写産物を誘導した。ＩＬ−２１で処置した又はサイトカインを添加しなかったＰＢＭＣも検出可能な転写産物を示した（図４Ｃ）。１４−１５日目までに、ＩＬ−２１で処置しておいた培養では、ＩＬ−４又はＩＬ−１３単独で処置したものよりもはるかに高いレベルのＩｇＧ４が認められた（図４Ｄ）。ＩＬ−４の添加はＩＬ−２１が誘導するＩｇＧ４産生に対して阻害性であったが、ＩＬ−１３の添加は阻害性ではなかった（図４Ｄ）。
【０１７８】
ＣＤ４０Ｌ発現はＩＬ−２１の存在下で維持される。ＩＬ−４駆動性ＩｇＥ産生についての共刺激シグナルを誘導するためにＰＨＡを使用したとき、ＩｇＥ及びＩｇＧ４産生へのＩＬ−２１の阻害作用が認められた（図４）。これに対しＰＢＭＣ培養中のＣＤ４０に直接架橋するために抗ＣＤ４０を使用したとき、ＩＬ−２１はＩＬ−４に応答したＩｇＥ産生をブロックしなかった（図３）。それ故本発明者らは、ＩＬ−２１が、ＰＨＡ及びＩＬ−４で刺激したＰＢＭＣによるＣＤ４０Ｌ発現を低下させる可能性を考慮した。ＣＤ４０Ｌ  ｍＲＮＡは不安定であり、発現は転写的に調節されると思われる（３７、３８）。リアルタイムＰＣＲを用いて、本発明者らは、サイトカイン添加後の早期（４日目）、又はＩｇＥが細胞上清中で測定可能であった後期時点（１４日目）で、ＰＨＡで刺激したＰＢＭＣ培養中のＣＤ４０Ｌ転写産物レベルを検討した。両方の時点で、ＩＬ−４又はＩＬ−４＋ＩＬ−２１で処置した細胞は強いＣＤ４０Ｌ  ｍＲＮＡ発現を示したが、ＩＬ−２１単独での転写産物レベルはＰＨＡで見られたものよりも上昇しなかった（図５Ａ）。これらの所見は、ＣＤ４０Ｌコード領域全体に及ぶプライマーを用いたＰＣＲ増幅によって裏付けられた（図５Ｂ）。この結果は、ＩＬ−２１の存在がＣＤ４０Ｌ転写をブロックしないことを明らかに示しており、ＩｇＥ産生が阻害される条件下でＣＤ４０Ｌ発現が低下しないことを示唆する。
【０１７９】
ＩＬ−２１はＩＦＮ−γの発現を誘導する。ＰＨＡで刺激し、ＩＬ−４で活性化したＰＢＭＣのＩＬ−２１による処理が、ＩｇＥ産生をブロックするサイトカインの生成を生じさせるかどうかを調べるためにいくつかの実験を実施した。ＩＦＮ−γがＩｇＥ合成に拮抗する能力は広く特性決定されており（１０、１３、１４、３９）、ＩＬ−２１はヒトＴ及びＮＫ細胞においてＩＦＮ−γ遺伝子の転写を刺激することが知られている（３６、４０）。それ故、ＩＦＮ−γ転写産物の発現を、ＩＬ−４、ＩＬ−１３又はＩＬ−２１で処置したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣにおいて検討した。Ｉε生殖細胞系転写産物が検出可能であった培養の初期には、全ての処置条件下でＩＦＮ−γ遺伝子発現が認められた。ＩｇＥが上清から測定できた培養の１４日目までに、ＩＦＮ−γ遺伝子発現は、ＩＬ−４で処置した培養又はＩＬ−２１で処置した培養においてのみ認められた（図５）。それ故、ＩＦＮ−γ転写産物は、ＩｇＥ産生が低下した、ＩＬ−４＋ＩＬ−２１で処置した培養、及びＩｇＥ産生が維持された、ＩＬ−１３＋ＩＬ−２１で処置した培養の両方で認められた。
【０１８０】
ＩＬ−２１はＰＢＭＣによるＩＬ−１０産生を誘導するが、ＩＬ−１２の産生又はＩＬ−１２Ｒβの発現には影響を及ぼさない。ＩＬ−１０は、他のサイトカイン又は共刺激シグナルの存在に依存して、Ｂ細胞のＩｇＥ合成を刺激する（４１）又は阻害する（２１）ことが報告されている多能性サイトカインである。本発明者らは、ＩＬ−１０がＩＬ−２１処置ＰＢＭＣ培養において産生されるかどうか及びＩＬ−４の存在下で見られたＩｇＥ産生の阻害を説明するのに役立つかどうかを検討した。ＩＬ−２１は、ＩｇＥ産生が阻害された（図４）ＰＨＡ刺激培養において（図６Ａ）、及びＩｇＥ産生が阻害されなかった（図３）抗ＣＤ４０ｍＡｂ刺激培養において（図６Ｂ）、ＰＢＭＣによるＩＬ−１０産生を上昇させることが認められた。さらに、ＩＬ−４又はＩＬ−１３の存在下で比肩し得るＩＬ−１０レベルが認められた（図６Ａ、Ｂ）。リアルタイムＰＣＲ分析は、ＩＬ−２１がＩＬ−１０産生を上昇させることを確認したが、その上昇はＩｇＥが放出されるか否かに関わらず認められた。ＩＬ−１０の役割をより直接的に調べるため、ＩＬ−１０に対する中和抗体をＰＨＡ刺激培養に添加したが、ＩｇＥ産生へのＩＬ−２１の阻害作用を克服しなかった。
【０１８１】
ＩＬ−１２（１９）及びＴＧＦ−β（１０）を含むいくつかの他のサイトカインが、ＩｇＥ産生をブロックすることが報告されている。ＩＬ−１２（図６Ｃ）及びＴＧＦ−βの両方がＰＢＭＣ培養中で検出できたが、レベルは、ＩＬ−２１の存在下又は不在下で、ＩＬ−４又はＩＬ−１３で処置した細胞において同様であった。ＩＬ−２１はまた、ＰＨＡ、ＩＬ−４又はＩＬ−１３によって誘導されるＩＬ−１２Ｒβ遺伝子発現には影響を及ぼさなかった（図６Ｄ）。それ故、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２又はＴＧＦ−βのいずれもが、ＩＬ−４が駆動するＩｇＥ産生へのＩＬ−２１の阻害作用を十分に説明することはできなかった。
【０１８２】
ＩＬ−２１は、ＰＨＡで刺激したＰＢＭＣ培養におけるＢ細胞アポトーシスを推進しない。ＩＬ−２１は、一次マウスＢ細胞のアポトーシスを誘導することが示されている（２５）。したがって、ＩＬ−２１で処置したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣ培養のＢ細胞はアポトーシスへと推進された可能性があり、このことは、ＩｇＥ産生の低下を説明する。この問題を調べるために、Ｂ細胞を特定する抗ＣＤ１９でＰＨＡ刺激ＰＢＭＣを染色し、フローサイトメトリーによってＰＩとＦＩＴＣ−アネキシンの結合を検定した。後期アポトーシス細胞（ＰＩ+／ＦＩＴＣ−アネキシン+）は、初期アポトーシス（ＰＩ-／ＦＩＴＣ−アネキシン+）又は生存（ＰＩ―／ＦＩＴＣ−アネキシン-）Ｂ細胞と区別することができた。結果は、ＩＬ−２１の添加は、ＩＬ−４処置培養中のアポトーシスＣＤ１９＋細胞のパーセンテージをわずかに上昇させたが、アポトーシスのレベルはＩＬ−１３又はＩＬ−１３＋ＩＬ−２１で処置した培養で見られたものと差がなかった（図７）。それ故、Ｂ細胞アポトーシスの誘導はＩｇＥ産生に対するＩＬ−２１の阻害作用を説明しない。
【０１８３】
ＩＬ−１３の補充添加はＩＬ−４及びＩＬ−２１で処置したＰＢＭＣにおけるＩｇＥ産生を回復させない。ＩＬ−２１は、ＩＬ−４に応答したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣからのＩｇＥ産生を阻害したが、ＩＬ−１３に応答したＩｇＥ産生は阻害しなかった（図４）ので、本発明者らは、３つのサイトカイン全ての存在が正味の活性化又は阻害作用を有するかどうかを検討した。結果は、ＩＬ−４とＩＬ−１３の組合せはＩｇＥ産生に対して阻害性であることを示した。それ故、ＩＬ−１３は、ＩＬ−４及びＩＬ−２１で処置したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣからのＩｇＥ産生を救済しなかったが（図８Ａ）、ＩＬ−４の添加は、ＩＬ−１３及びＩＬ−２１で処置したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣにおいて正常に認められるＩｇＥ産生を低下させた（図８Ｂ）。
【０１８４】
ＣＤ４０連結はＩｇＥ産生へのＩＬ−２１の阻害作用を克服する。本発明者らは、抗ＣＤ４０とＩＬ−４で刺激したヒトＰＢＭＣにおいて、ＩＬ−２１の添加がＩｇＥ産生を促進することを認めた（図３）。これに対し、ＰＨＡとＩＬ−４によって刺激したＰＢＭＣでは、ＩＬ−２１の添加はＩｇＥ産生をブロックする（図４）。これらの所見を一致させるのを助けるために、ＰＨＡ活性化ＰＢＭＣを、ＩＬ−２１の存在下又は不在下に、ＩＬ−４と組み合わせた抗ＣＤ４０で処置した。これらの条件下で、ＩＬ−２１はＩｇＥ産生を阻害せず、むしろＩｇＥのレベルをＩＬ−４単独で見られるレベルよりも上昇させた（図９）。それ故抗ＣＤ４０は、マイトジェン活性化ＰＢＭＣによるＩｇＥ産生へのＩＬ−２１の阻害作用を克服することができた。
【０１８５】
ＩＬ−２１は、ＰＨＡで刺激した照射ＰＢＭＣによるＩｇＥ産生を低下させない。これらの試験において、ＰＨＡで刺激したＴ細胞の増殖はＩＬ−４＋ＩＬ−２１の組合せによって大きく増強された。Ｔ細胞はＩＬ−４に応答することができるので、ＩＬ−４がこれらの培養から枯渇する可能性がある。このシナリオによれば、初期Ｉε転写産物は３−５日目には認められるが（図４Ｃ）、ひとたびＴ細胞数が高くなりすぎると、ＩＬ−４レベルはＢ細胞のＩｇＥ又はＩｇＧ４産生を維持することができない。Ｔ細胞はＩＬ−１３と相互作用しないので、このサイトカインが枯渇することはなく、Ｂ細胞のＩｇＥ産生はＰＨＡ及びＩＬ−１３処置培養において維持され得る。
【０１８６】
Ｔ細胞増殖が、ＩＬ−４とＩＬ−２１で処置したＰＨＡ刺激培養におけるＩｇＥ産生の低下に寄与するという仮説を調べるために、ＰＢＭＣをＰＨＡ刺激後に照射した。精製Ｂ細胞を、正常ＰＢＭＣのＢ細胞存在率に近い、培養の２０％を構成するように補充添加した。細胞を上記のようにサイトカインで処置し、１３日目にＩｇＥ産生を検査した。Ｔ細胞増殖が照射によって妨げられたことにより、ＩＬ−２１の添加は、ＩＬ−４が媒介するＩｇＥ産生を低下させなかった（図１０Ａ）。平行して設定した非照射培養では、しかしながら、図４Ａ、Ｂに示す結果と一致して、ＩＬ−２１はＩｇＥ産生の低下を生じさせた（図１０Ｂ）。これらの所見は、ＩＬ−４で処置したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣへのＩＬ−２１の添加から生じるＩｇＥ産生の明らかな低下は、リンパ球増殖に続いて起こるものであり、Ｂ細胞への直接作用ではなかったことを示唆する。
【０１８７】
考察
インビトロでのＩｇＥスイッチ組換えは、２つの異なるシグナル：（ｉ）Ｉε生殖細胞系転写産物の生成を推進するためのサイトカイン、ＩＬ−４又はＩＬ−１３；及び（ｉｉ）欠失スイッチ組換えを促進するためのＢ細胞表面ＣＤ４０抗原の関与（４２）、を必要とする。サイトカインはこの過程の重要な調節を提供する。ＩＬ−２１はマウス系においてＩｇＥ産生を阻害することが示されているが（２６、２７）、ヒトＩｇＥ産生へのその作用は詳細には検討されていなかった。本発明者らは、３つの異なる活性化モデルの下でヒトＩｇＥ産生へのＩＬ−２１の作用を検討し、条件に依存して、ＩＬ−２１が刺激性又は阻害性であり得ることを認めた。
【０１８８】
ＩＬ−２１は、活性化Ｔ細胞によって産生され、多くの免疫細胞型に影響を及ぼす多面発現性サイトカインである（２２、２３）。適切な条件下で、Ｂ細胞増殖（２２）又はＢ細胞アポトーシス（２５）を誘導する。マウス系では、ＩＬ−２１は、インビトロでＩＬ−４及びマイトジェン刺激の両方に応答したＩｇＥ産生、及びインビボで特異的免疫をブロックする（２６、２７）。従って、ＩＬ−２１Ｒ欠損マウスは、野生型マウスと比較して高い休止レベルの血清ＩｇＥを有しており（２３）、免疫又は感染後により高いレベルのＩｇＥを産生する（２６）。単離マウスＢ細胞において、ＩＬ−２１はＩＬ−４及びＬＰＳ誘導のＩεスイッチ組換えに直接拮抗する（２７）。
【０１８９】
本発明者らは本明細書で、ＩＬ−２１が、単離ヒトＢ細胞によるＩＬ−４又はＩＬ−１３媒介性ＩｇＥ産生を上昇させることを報告する。ＩＬ−２１は、精製Ｂ細胞によってのみならず、Ｂ細胞活性化が抗ＣＤ４０ｍＡｂによって達成されるＩＬ−４又はＩＬ−１３処置ＰＢＭＣによるＩｇＥ合成も増強した。休止ヒト末梢血Ｂ細胞はＩＬ−２１受容体を発現し、ＩＬ−２１は抗ＣＤ４０誘導性Ｂ細胞増殖を増強することができる（２２）。本発明者らは、ＩＬ−２１の存在下でＩＬ−４又はＩＬ−１３処置Ｂ細胞による高い３Ｈ−チミジン取込みを認めた。それ故、ＩＬ−２１の存在下で見られるＩｇＥ産生の増強は、少なくとも一部には、ＩＬ−２１が媒介するＢ細胞増殖の結果であると考えられる。
【０１９０】
これに対し、ＰＨＡ活性化Ｔ細胞をＩｇＥ産生のための共刺激シグナルのソースとして使用したとき、ＩＬ−２１の阻害作用が認められた。これらの条件下で、ＩＬ−２１はＩＬ−４によって駆動されるＩｇＥ産生をブロックしたが、ＩＬ−１３が駆動するＩｇＥ合成はブロックしなかった。決定的ではないが、ＰＨＡはＴ細胞マイトジェンであり、Ｔ細胞はＩＬ−４に応答するがＩＬ−１３には応答しないので、これらの所見はＴ細胞依存性機構を示唆する。抗ＣＤ４０抗体は阻害を克服することができたので、ＣＤ４０Ｌの機能又は発現が関与している。さらに、本発明者らは、ＣＤ４０Ｌ発現の欠損（４３、４４）又はＣＤ４０シグナル伝達の欠損（４５）の特徴である、ＩｇＥ合成の不在下でのＩε生殖細胞系転写産物を認めた。それにもかかわらず、不安定であり、タンパク質発現を制限する（３７，３８）ＣＤ４０Ｌ転写産物は、ＩＬ−２１によって低下しなかった。そこで本発明者らは、ＩＬ−２１は、この系におけるＴ細胞−Ｂ細胞相互作用をブロックする、又はＣＤ４０Ｌシグナルの強度を低下させる付加的な細胞表面シグナルを惹起し得ると推測する。
【０１９１】
ＴＧＦ−β（１０、４６、４７）、ＩＦＮ−γ（１０、１３、１４、４６）、ＩＬ−１０（２１、４８）及びＩＬ−１２（１８）を含むいくつかのサイトカインがＩｇＥ産生に拮抗することが記述されている。本発明者らは、ＩｇＥが産生される又は阻害される培養中でのこれらのサイトカインのレベルを比較した。ＴＧＦ−βは全ての培養において検出されたが、ＩｇＥレベルとの結びつきを示さなかった。ＩＦＮ−γ転写は、これまでの報告と一致して（３６、４０）、ＰＨＡ刺激ＰＢＭＣ培養においてＩＬ−２１によって惹起されたが、ＩｇＥ合成の喪失とは関連しなかった。ＩｇＥ産生がブロックされたＩＬ−４＋ＩＬ−２１処置、又は阻害が存在しなかったＩＬ−１３＋ＩＬ−２１処置に関しては維持された。
【０１９２】
ＩＬ−１０は、ＩＬ−２１に関する今回の所見と同様に、精製Ｂ細胞には阻害作用を及ぼさないように（４９）、単球依存的にＩｇＥ産生をブロックする。ＩＬ−１０はＰＢＭＣ培養において認められたが、ＩｇＥ産生の阻害には関連しなかった。抗ＣＤ４０ｍＡｂ又はＰＨＡで刺激した培養において等しいレベルが認められたが、ＩｇＥはＰＨＡに関してのみ阻害された。ＰＨＡ処置ＰＢＭＣでは、ＩｇＥ産生に阻害性であるＩＬ−４＋ＩＬ−２１、及び刺激性であるＩＬ−１３＋ＩＬ−２１に関して比肩し得るレベルのＩＬ−１０が産生された。ＩＬ−１０に対する中和抗体はＩＬ−２１の阻害作用を逆転させなかった。これらの所見は、ＩＬ−１０がこの系で見られるＩＬ−２１の作用の原因ではないことを示す。
【０１９３】
ＩＬ−１２も、ＩＬ−２１に関する今回の所見と同様に、未分画ＰＢＭＣによるＩＬ−４駆動性ＩｇＥ産生を低下させるが、精製Ｂ細胞によるＩｇＥ産生は低下させないことが報告されている（１８）。さらに、ＩＬ−２１はＩＬ−１２に対するリンパ球応答に影響を及ぼし得る。ＩＬ−２１は、ヒトＮＫ細胞系及び一次ヒトＴ細胞におけるＩＬ−１２Ｒβ２の転写を上方調節し（４０）、マウスＮＫ細胞によるＩＬ−１２を介したＩＦＮ−γ分泌を大きく上昇させ（２３）、ＩＬ２Ｒα遺伝子のＩＦＮ−γ活性化配列へのＩＬ−１２媒介性ＳＴＡＴ４結合を促進する（４０）。
【０１９４】
ＩＬ−２１は、ＬＰＳで刺激されたものでさえも、マウスＢ細胞のアポトーシスを推進する（２５、５０）。ＩＬ−４はＩＬ−２１で処置したＢ細胞をアポトーシスから救済することができないが、抗ＣＤ４０ｍＡｂによる前活性化は予防的である（２５）。それ故、ＩＬ−４とＰＨＡで刺激した未分画ＰＢＭＣは、Ｂ細胞が既にアポトーシスを受けているので、低いＩｇＥ産生を有し得るが、抗ＣＤ４０ｍＡｂで刺激したものは保護された。本発明者らはＰＢＭＣ培養におけるＢ細胞のアポトーシスを認め、これはＩＬ−２１によってわずかに上昇したが、ＩＬ−４の添加はＩＬ−２１単独又はＩＬ−１３＋ＩＬ−２１よりも多くのアポトーシスを生じさせなかった。それ故、低いＩｇＥ産生を導く条件はＢ細胞アポトーシスの上昇とは関連しなかった。
【０１９５】
ＩＬ−４又はＩＬ−１３を欠くマウスは野生型レベルのＩｇＥを生成せず（５１、５２）、１つのサイトカイン単独ではその他の喪失を十分に補うことはできないことを示唆した。実際に、ＩＬ−１３の選択的中和（５３）又は欠失（５４）は、ＩＬ−４の存在にもかかわらず喘息病変の発症からマウスを保護したので、ＩＬ−１３はアトピー性反応の主要推進因子であると考えられる。最近、Ｈａｊｏｕｉら（５５）は、ＩＬ−４に応答したＩｇＥの生成のためにはＢ細胞自体によるＩＬ−１３の産生が必要であることを示し、Ｂ細胞のＩＬ−１３産生がＩＬ−４誘導性ＩｇＥ合成のために必要であることを提案している。本発明者らは、ＩＬ−４で処置したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣにおけるＩＬ−１３産生を認め、これはＩＬ−２１の添加によって半分に低下した。さらに、ＩＬ−１３応答は堅調なままであったが、ＩＬ−２１がＰＨＡ刺激ＰＢＭＣにおけるＩＬ−４誘導性ＩｇＥ産生に拮抗したという本発明者らの所見は、この自己分泌経路の調節におけるＩＬ−２１の役割を示唆すると考えられる。
【０１９６】
アレルゲンに対するＩｇＥはアトピー性疾患の発症のために必要且つ十分であるが（５６）、ＩｇＧ４は長年にわたって防御的であると考えられてきた（４、５、６、７）。本発明者らは、マイトジェンで活性化したＰＢＭＣのＩＬ−２１単独による処置がＩｇＧ４の放出を刺激することを認めた。これらの条件下ではＩｇＥは産生されず、ＩＬ−２１が適切な状況下でＩｇＧ４とＩｇＥの間のバランスをシフトし得ることを示唆する。これに対し、ＩＬ−４又はＩＬ−１３は高レベルのＩγ４生殖細胞系転写産物を生成したが、本発明者らや他の研究者達（５７）は、これらのサイトカイン単独ではヒト末梢Ｂ細胞から検出可能なＩｇＧ４タンパク質放出を生じさせないことを認めた。Ｉｇ遺伝子再構成と抗体分泌は別個に調節される事象である（５８）。ＩＬ−４はナイーブＢ細胞においてＩｇＧ４スイッチ組換えを誘導するが、既にＩｇＧ４にスイッチされた細胞では成熟タンパク質の分泌を抑制し得る（５９）。逆の事象がＩＬ−２１単独に関して認められ、ＩＬ−２１は非刺激レベルを上回るＩγ４生殖細胞系転写産物を誘導したが、ＩｇＧ４タンパク質の分泌を強く増強した。ＩＬ−２１は全てのヒトＩｇＧアイソタイプの分泌を誘導するが、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３に対してのみ特異的に新規スイッチ組換えを促進する（５７）。新規転写を伴わないタンパク質の放出は、ＩＬ−２１が、以前にインビトロでＩｇＧ４のＩＬ−４／ＩＬ−１３非依存性生成の原因となることが示された過程である（６０）、ＩｇＧ４のインビボでの生成に関わったＢ細胞クローンの活性化又は増殖を促進したことを示唆する。
【０１９７】
合わせて考えると、これらの試験は、ＩＬ−２１が、活性化の条件に依存してヒトＢ細胞によるＩｇＥ及びＩｇＧ４産生を刺激するか又は阻害することを示す。ＩＬ−２１は他の系においても同様に相反する反応を有する。適切な条件下で、ＮＫ細胞の活性化及び／又はアポトーシスを誘導し、Ｔ細胞の増殖を刺激するか又は制限し、Ｔ細胞のＩＦＮγ産生を誘導するか又は阻害することができる（６１）。マウス系では、ＩＬ−２１は、ＬＰＳで処置したＢ細胞のアポトーシスの引き金を引くが、抗ＣＤ４０又は抗ＩｇＭで処置したＢ細胞増殖を共刺激する（２５、５０、６２）。ＩＬ−２１は増殖性免疫応答のためのチェックポイントとして働き、許容条件下で活性化と増殖を推進するが、不適切に活性化された又は好ましくない環境でのリンパ球のアポトーシスを促進することが提示されてきた（５０、６１、６２）。今回の試験に関して、ＩＬ−２１はヒトＩｇＥ産生に対して調節作用を及ぼし、この決定的に重要なエフェクター分子のレベルを上昇させるか又は過剰産生から保護すると思われる。
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【０１９８】
当業者であれば、本明細書に記載された本発明に特有の実施態様に相当する多くの態様を、理解するであろうし、又は通常の範囲内の実験を用いて確認できるであろう。そのような等価物は上記の請求項に包含されることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０１９９】
【図１】ＩＬ−２１は精製Ｂ細胞からのＩｇＥ及びＩｇＧ４放出を増強する。Ｂ細胞は、磁気ビーズ分離によってヒトＰＢＭＣから単離した。実験材料及び方法で述べるように、細胞を抗ＣＤ４０プラス所定のサイトカインで処理した。６日目に、細胞と上清を採集した。（Ａ，Ｂ）個々のマイクロウエルの上清中のＩｇＥレベル。（Ｃ）ＧＡＰＤＨ、Ｉε無菌転写産物及びＩγ４無菌転写産物の発現についてのＰＣＲ。（Ｄ）所定のサイトカインで処理したプール（ｐｏｏｌｅｄ）ウエル中のＩｇＧ４レベル。抗ＣＤ４０単独で処理した細胞ではＩｇＧ４は検出されなかった。
【図２】ＩＬ−２１は、ＩＬ−４又はＩＬ−１３と相乗的に働いてＢ細胞増殖を推進する。Ｂ細胞は、磁気ビーズ分離によってヒトＰＢＭＣから単離した。細胞を、抗ＣＤ４０プラス所定のサイトカインで４８時間処理した。最後の２４時間に３Ｈ−チミジンを添加し、液体シンチレーション計数によって取込みを測定した。
【図３】ＩＬ−２１は、抗ＣＤ４０で刺激したＰＢＭＣからのＩｇＥ及びＩｇＧ４放出を増強する。実験材料及び方法で述べるように、未分画ヒトＰＢＭＣを抗ＣＤ４０プラス所定のサイトカインで処理した。（Ａ）培養２１日目に検定した、個々のマイクロウエルの上清中のＩｇＥレベル。ＩＬ−２１単独で処理したウエルではＩｇＥは検出されなかった。（Ｂ）培養２１日目に検定した、所定のサイトカインで処理したプールウエル中のＩｇＥレベル。（Ｃ）培養３日目に単離した細胞を用いてＩε及びＩγ４無菌転写産物についてのＰＣＲを実施した。１０日目に単離した細胞を用いてＣε成熟転写産物についてのＰＣＲを実施した。（Ｄ）培養２１日目に検定した、所定のサイトカインで処理したプールウエル中のＩｇＧ４レベル。
【図４】ＩＬ−２１は、ＰＨＡで刺激したＰＢＭＣにおけるＩｇＥ産生を阻害するが、ＩｇＧ４放出は阻害しない。未分画ヒトＰＢＭＣをＰＨＡ及びサイトカインで処理した。（Ａ）培養２１日目に検定した、個々のマイクロウエルの上清中のＩｇＥレベル。（Ｂ）培養２１日目に検定した、所定のサイトカインで処理したプールウエル中のＩｇＥレベル。（Ｃ）培養３日目に単離した細胞を用いた、Ｉε及びＩγ４無菌転写産物についてのＰＣＲ。（Ｄ）培養２１日目に検定した、所定のサイトカインで処理したプールウエル中のＩｇＧ４レベル。
【図５】（Ａ，Ｂ）は、以下で述べるようなＣＤ４０Ｌ発現の変化を示す。
【図６】ＰＢＭＣ培養中のサイトカインレベル。（Ａ）実験材料及び方法で述べるように、未分画ＰＢＭＣをＰＨＡ及びサイトカインで処理した。培養７日目に収集した上清プールにおいてＩＬ−１０レベルを測定した。（Ｂ）未分画ヒトＰＢＭＣを抗ＣＤ４０プラス所定のサイトカインで４８時間処理した。２日目及びその後４日ごとに、培地を交換し、新鮮サイトカインを添加した。７日目に収集したプール上清においてＩＬ−１０レベルを測定した。（Ｃ）ＰＨＡで刺激したＰＢＭＣを所定のサイトカインで処理した。培養６日目に収集したプール上清においてＩＬ−１２レベルを測定した。（Ｄ）ＰＨＡで刺激したＰＢＭＣを所定のサイトカインで処理した。培養６日目に収集した細胞においてリアルタイムＰＣＲによってＩＬ−１２Ｒｂ転写産物を定量した。データは、相対的ＴＡＱＭＡＮ（商標）単位（ＲＴＵ）で表している。
【図７】図７は、以下で述べるようなアポトーシスＣＤ１９+細胞数の変化を示す。
【図８】ＩＬ−１３は、ＩＬ−４及びＩＬ−２１で処理したＰＨＡ刺激ＰＢＭＣからのＩｇＥ産生を救済しない。未分画ヒトＰＢＭＣをＰＨＡ及びサイトカインで処理した。培養１４日目に検定した、所定のサイトカインで処理したプールウエルにおいてＩｇＥレベルを測定した。（Ａ）ＩＬ−４が推進するＩｇＥ産生へのＩＬ−２１及びＩＬ−１３の作用。（Ｂ）ＩＬ−１３が推進するＩｇＥ産生へのＩＬ−２１及びＩＬ−４の作用。
【図９】図９は、様々な条件下でのＩｇＥレベルの変化を示す。
【図１０】ＩＬ−２１は、照射したＰＢＭＣにおけるＩｇＥ産生を低下させない。未分化ＰＢＭＣを（Ａ）照射した；又は（Ｂ）照射しなかった。実験材料及び方法で述べるように、細胞をＰＨＡによって３７℃で２日間刺激し、その後ＩＬ−４＋／−ＩＬ−２１で処理した。培養１３日目に収集したプール上清においてＩｇＥレベルを測定した。データは、ＩＬ−４で刺激した培養物において認められるＩｇＥレベルのパーセンテージとして表している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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