(57)【要約】本発明はカスパーゼ（Caspase）阻害剤として用いられる下記一般式（１）の環状カルボン酸ヘミケタール部分を有するイソオキサゾリン誘導体、その製造方法、及びそれを含む薬学的組成物に関するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）の化合物：
【化１】
2008531551.tif 000013
式中、
Ｒ１はアルキル基またはアリール基を表し、及び
Ｒ２はアルキル基を表す。
【請求項２】
Ｒ１はイソキノリニル基、キノリニル基またはナフチル基を表し、及び
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１はイソキノリニル基を表し、及び
Ｒ２はイソプロピル基を表す請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
（ａ）下記一般式（２）の化合物を活性化した後、下記一般式（４）の化合物と反応させて下記一般式（１３）の化合物を製造する段階；
（ｂ）下記一般式（１３）の化合物を加水分解して下記一般式（１４）の化合物を製造する段階；
（ｃ）下記一般式（１４）の化合物を脱保護化する段階；及び
（ｄ）結晶化−誘導動的変換反応（Crystallization-induced dynamic transformation）を遂行する段階；
を含む下記一般式（１）の化合物の製造方法。
【化２】
2008531551.tif 000014
式中、
Ｒ１はアルキル基またはアリール基を表し、
Ｒ２はアルキル基を表し、
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、またはＲ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【請求項５】
Ｒ１はイソキノリニル基、キノリニル基またはナフチル基を表し、
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表し、
Ｒ３及びＲ´３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表わすか、またはＲ３及びＲ´３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項４に記載の方法。
【請求項６】
段階（ａ）で、一般式（２）の化合物をオキサリルクロリド、トリメチルアセチルクロリド、ホスホリルトリクロリド及び塩化チオニルよりなる群から選択された活性化試薬で活性化する請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
段階（ａ）の反応をトリエチルアミン、トリ（ｎ−ブチル）アミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン及び４−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）−ピリジンよりなる群から選択された塩基の存在下で、遂行する請求項４または５に記載の方法。
【請求項８】
段階（ｂ）の加水分解を水酸化リチウム、水酸化ナトリウム,水酸化カリウム及び水酸化カルシウムよりなる群から選択された塩基の存在下で、遂行する請求項４または５に記載の方法。
【請求項９】
段階（ｃ）の脱保護化を塩酸、硫酸及びトリフルオロ酢酸よりなる群から選択された酸の存在下で、遂行する請求項４または５に記載の方法。
【請求項１０】
段階（ｃ）の脱保護化をジクロロメタンまたはクロロホルムから選択された溶媒の存在下または不在下で、遂行する請求項４または５に記載の方法。
【請求項１１】
段階（ｄ）の結晶化−誘導動的変換反応を一般式（１）の化合物をシード（seed）として添加して遂行する請求項４または５に記載の方法。
【請求項１２】
段階（ｄ）の結晶化−誘導動的変換反応をシード及び触媒量の塩基の存在下で遂行する請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
塩基がトリエチルアミン、トリ（ｎ−ブチル）アミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン、４−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）−ピリジン、光学活性のある１−フェニルエチルアミン、及び光学活性のある１−ナフチルエチルアミンよりなる群から選択されたアミンである請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
アミンを一般式（１４）の化合物に対して、０．００１〜１．０当量の量で用いる請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
下記一般式（４）の化合物：
【化３】
2008531551.tif 000015
式中、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【請求項１６】
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表すか、またはＲ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
（ａ）下記一般式（９）の化合物を保護化及び脱保護化して下記一般式（１０）の化合物を製造する段階；
（ｂ）下記一般式（１０）の化合物に対し、炭素−炭素結合反応を遂行して下記一般式（１１）の化合物を製造する段階；
（ｃ）下記一般式（１１）の化合物をベンジルアミンと反応し、還元して下記一般式（１２）の化合物を製造する段階；及び
（ｄ）下記一般式（１２）の化合物を水素化反応する段階；
を含む下記一般式（４）の化合物の製造方法。
【化４】
2008531551.tif 000016
式中、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【請求項１８】
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表すか、またはＲ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
段階（ａ）の保護化反応をトリメチルオルトホルメートまたはトリエチルオルトホルメートを用いて遂行する請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
段階（ａ）の脱保護化反応を水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム及び炭酸水素ナトリウムから選択された塩基の存在下で、遂行する請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２１】
段階（ｂ）の反応をエチルクロロホルメートまたはメチルクロロホルメートを使用して遂行する請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２２】
段階（ｂ）の反応をｎ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミンまたはリチウムヘキサメチルジシラジドから選択された塩基の存在下で、遂行する請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
段階（ｃ）の還元反応を酢酸及び水素化ホウ素ナトリウムを用いて遂行する請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２４】
段階（ｄ）の反応を金属触媒の存在下で遂行する請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２５】
金属触媒がパラジウム系触媒またはラネーニッケル系触媒である請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の一般式（１）の化合物と薬剤学的に許容しうる担体とを含む、消炎またはアポトーシス防止用薬学的組成物。
【請求項２７】
認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死のために用いられる請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
下記Ｘ線回折パターンを示す結晶形である請求項３に記載の化合物：
【表１】
2008531551.tif 000017
【請求項２９】
対象物に治療学的有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、対象物の消炎またはアポトーシス防止方法。
【請求項３０】
認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死のために用いられる請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
消炎またはアポトーシス防止用薬剤の製造のための請求項１に記載の一般式（１）の化合物の用途。
【請求項３２】
薬剤が認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死のために用いられる請求項３１に記載の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はカスパーゼ（Caspase）阻害剤として使用する環状カルボン酸ヘミケタール部分を有するイソオキサゾリン誘導体、その製造方法、それを含む薬学的組成物、及びその用途に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
カスパーゼの阻害剤は、カスパーゼの活動を妨害することで、カスパーゼの作用によって誘発される炎症またはアポトーシスを調節しうる化合物である。カスパーゼ阻害剤の中で、不可逆的阻害剤は酵素を不可逆的に不活性化してアポトーシスを抑制する機構を有するので、より効果的な抑制効果を示すものと知られている（Wu J. et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 1999, 17, 320）。下記化合物は不可逆的阻害剤として知られており、共通的に３−アミノ−５−フルオロ−４−オキソペンタン酸部分を有している。
【化１】
2008531551.tif 000002
【０００３】
上記化合物を投与して症状の治療または緩和できる疾患としては、例えば、リウマチ性関節炎（rheumatoid arthritis）、炎症性腸疾患（inflammatory bowel disease）、移植片対宿主疾患（Graft vs. host disease）、敗血症（sepsis）、骨関節炎（Osteoarthritis）、骨粗鬆症（Osteoporosis）、急性及び慢性骨髄白血病（acute and chronic myelogenous leukemia）、脳膜炎（meningitis）、卵管炎（salpingitis）、敗血性ショック（septic shock）、胆管炎（cholangitis）、大腸炎（colitis）、脳炎（encephalitis）、心内膜炎（endocarditis）、糸球体腎炎（glomerulonephritis）、肝炎（hepatitis）、心筋炎（myocarditis）、膵臓炎（pancreatitis）、I型糖尿病（Type I diabetes mellitus）、多発性硬化症（Multiple sclerosis）、アルツハイマー病（Alzheimer's disease）、パーキンソン病（Parkinson's disease）、肝硬変（hepatocirrhosis）などがある。
【０００４】
参考文献：
認知症（Dementia）：Arch Neurol 2003 Mar; 60(3): 369-76, Caspase gene expression in the brain as a function of the clinical progression of Alzheimer disease. Pompl PN, Yemul S, Xiang Z, HoL, Haroutunian V, Purohit D, Mohs R, Pasinetti GM.；
脳卒中（Cerebral stroke）：Proc Natl Acad Sci USA 2002 Nov 12; 99(23): 15188-93, Caspase activation and neuroprotection in caspase-3-deficient mice after in vivo cerebral ischemia and in vitro oxygen glucose deprivation. LeDA, Wu Y, Huang Z, Matsushita K, Plesnila N, Augustinack JC, Hyman BT, Yuan J, Kuida K, Flavell RA, Moskowitz MA.；
ＡＩＤＳに因る脳損傷（Brain impairment due to AIDS）：J Neurosci 2002 May 15; 22(10): 4015-24, Caspase cascades in human immunodeficiency virus-associated neurodegeneration. Garden GA, Budd SL, Tsai E, Hanson L, Kaul M, D'Emilia DM, Friedlander RM, Yuan J, Masliah E, Lipton SA.；
糖尿（Diabetes）：Diabetes 2002 Jun; 51(6): 1938-48, Hyperglycemia-induced apoptosis in mouse myocardium: mitochondrial cytochrome C-mediated caspase-3 activation pathway. Cai L, Li W, Wang G, Guo L, Jiang Y, Kang YJ.；
胃潰瘍（Gastric ulcer）：J Physiol Pharmacol 1998 Dec; 49(4): 489-500, Role of basic fibroblast growth factor in the suppression of apoptotic caspase-3 during chronic gastric ulcer healing. Slomiany BL, Piotrowski J, Slomiany A.；
肝炎に因る脳損傷（Cerebral injury by hepatitis）：J Viral Hepat 2003 Mar; 10(2): 81-6, Cerebral dysfunction in chronic hepatitis C infection. Forton DM, Taylor-Robinson SD, Thomas HC.；
劇症肝不全（Fulminant hepatic failure）：Gastroenterology 2000 Aug; 119(2): 446-60, Tumor necrosis factor alpha in the pathogenesis of human and murine fulminant hepatic failure. Streetz K, Leifeld L, Grundmann D, Ramakers J, Eckert K, Spengler U, Brenner D, Manns M, Trautwein C.；
敗血症（Sepsis）：Nat Immunol 2000 Dec; 1(6): 496-501, Caspase inhibitors improve survival in sepsis: a critical role of the lymphocyte. Hotchkiss RS, Chang KC, Swanson PE, Tinsley KW, Hui JJ, Klender P, Xanthoudakis S, Roy S, Black C, Grimm E, Aspiotis R, Han Y, Nicholson DW, Karl IE.；
臓器移植拒絶反応（Organ transplantation rejection）: Xenotransplantation 2001 May; 8(2): 115-24, In vitro prevention of cell-mediated xeno-graft rejection via the Fas/FasL-pathway in CrmA-transducted porcine kidney cells. Fujino M, Li XK, Suda T, Hashimoto M, Okabe K, Yaginuma H, Mikoshiba K, Guo L, Okuyama T, Enosawa S, Amemiya H, Amano T, Suzuki S.；
リウマチ性関節炎（Rheumatic arthritis）：Prog Med Chem 2002; 39: 1-72, Caspase inhibitors as anti-inflammatory and antiapoptotic agents. Graczyk PP.；
虚血性心臓疾患（Ischemic cardiac diseases）：Am J Physiol Heart Circ Physiol 2002 Sep; 283(3): H990-5, Hypoxia-induced cleavage of caspase-3 and DFF45/ICAD in human failed cardiomyocytes. Todor A, Sharov VG, Tanhehco EJ, Silverman N, Bernabei A, Sabbah HN.；
抗炎症（Anti-inflammation）：J Immunol 2003 Mar 15; 170(6): 3386-91, A broad-spectrum caspase inhibitor attenuates allergic airway inflammation in murine asthma model. Iwata A, Nishio K, Winn RK, Chi EY, Henderson WR Jr, Harlan JM.；
肝硬変（Hepatocirrhosis）：i) J Pharmacol Exp Ther. 2004 Mar; 308(3): 1191-6, The caspase inhibitor Idn-6556 attenuates hepatic injury and fibrosis in the bile duct ligated mouse. Canbay A., Fledstein A., Baskin-Bey E., Bronk FS. Gores GJ.; ii) Hepatology. 2004 Feb; 39(2): 273-8, Apoptosis: the nexus of liver injury and fibrosis. Canbay A, Friedman S, Gores GJ.; iii) Hepatology. 2003 Nov; 38(5): 1188-98, Kupffer cell engulfment of apoptotic bodies stimulates death ligand and cytokine expression. Canbay A, Feldstein AE, Higuchi H, Werneburg N, Grambihler A, Bronk SF, Gores GJ.］
【０００５】
一方、カスパーゼ阻害剤の３−アミノ−５−フルオロ−４−オキソペンタン酸部分は下記反応式１のような合成法が知られている（Revesz et al., Tetrahedron Lett. 1994, 35, 9693）。
反応式１
【化２】
2008531551.tif 000003
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、カスパーゼに対する効果的な阻害剤として使用しうる化合物及びその製造方法について持続的な研究を行ってきた。
【０００７】
その結果、本発明に係る環状カルボン酸ヘミケタール部分を有するイソオキサゾリン誘導体が優れたカスパーゼ阻害活性を有し、これを結晶化−誘導動的変換反応（Crystallization-induced dynamic transformation）を用いて高純度で製造できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
従って、本発明の目的は、環状カルボン酸ヘミケタール部分を有するイソオキサゾリン誘導体の構造を持つ下記一般式（１）の化合物及びそれを效果的に製造する新しい方法を提供することにある。
【０００９】
本発明の別の目的は、下記一般式（１）の化合物を製造する中間体である、下記一般式（４）のアミン誘導体及びそれを製造する方法を提供することにある。
【００１０】
本発明のさらに別の目的は、薬剤学的に許容される担体と共に下記一般式（１）の化合物を含有する消炎またはアポトーシス防止用薬学的組成物を提供することにある。
【００１１】
本発明のさらに別の目的は、対象物に薬学的有効量の下記一般式（１）の化合物を投与すること含む、対象物の消炎またはアポトーシス防止方法を提供することに有る。
【００１２】
本発明のさらに別の目的は、消炎またはアポトーシス防止用薬剤の製造のための下記一般式（１）の化合物の用途を提供することにある。
【００１３】
本発明のさらに別の目的は、安全性に優れた下記一般式（１）の化合物の結晶形を提供することにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明で用いる一部重要な用語を下記のように定義する。
本発明で用いる一般式と反応式におけるアルキル基は、炭素数１〜８からなる直鎖状または分枝鎖状アルキル基、または炭素数３〜１０からなる単純シクロアルキル基を意味する。
【００１５】
また、本発明で用いる一般式と反応式におけるアリール基は、芳香族基とヘテロ芳香族基、及びその部分的に還元された誘導体を全て含む。上記芳香族基は単純または融合環状であって、５−１５員の不飽和炭化水素を意味し、上記ヘテロアロマチック基は酸素、硫黄及び窒素よりなる群から選択される１〜５個のヘテロ原子を有する芳香族基を意味する。
さらに、上記アルキル基と上記アリール基の一つ以上の水素が別の置換基で置換されていてもよい。例えば、選択可能な置換基はアシル、アミノ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、チオール、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、スルホキシ、グアニド基などが挙げられる。
【００１６】
本発明は、カスパーゼ阻害剤として使用される下記一般式（１）の環状カルボン酸ヘミケタール部分を有するイソオキサゾリン誘導体に関するものである。
【化３】
2008531551.tif 000004
式中、
Ｒ１はアルキル基またはアリール基を表し、及び
Ｒ２はアルキル基を示す。
好ましくは、
Ｒ１はイソキノリニル基、キノリニル基またはナフチル基を表し、及び
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す。
より好ましくは、Ｒ１はイソキノリニル基を表し、Ｒ２はイソプロピル基を表す。
【００１７】
Ｒ１がイソキノリニル基を表し、Ｒ２はイソプロピル基を示す一般式（１）の化合物は下記のＸ線回折パターンを示す結晶形として存在しうる：
【表１】
2008531551.tif 000005
【００１８】
本発明は、また
（ａ）下記一般式（２）の化合物を活性化した後、下記一般式（４）の化合物と反応させて下記一般式（１３）の化合物を製造する段階；
（ｂ）下記一般式（１３）の化合物を加水分解して一般式（１４）の化合物を製造する段階;
（ｃ）一般式（１４）化合物を脱保護化する段階；及び
（ｄ）結晶化-誘導動的変換反応を遂行する段階を含む、一般式（１）の化合物を製造する方法に関するものである。
【化４】
2008531551.tif 000006
式中、
Ｒ１はアルキル基またはアリール基を表し、
Ｒ２はアルキル基を表し、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
好ましくは,
Ｒ１はイソキノリニル基、キノリニル基またはナフチル基を表し、
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表し、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれメチル基,エチル基またはプロピル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す。
【００１９】
上記のような一般式（１）の製造方法の各段階を具体的に説明すれば、次の通りである。
上記段階（ａ）で、一般式（２）の化合物を活性化させる活性化試薬は、オキサリルクロリド、トリメチルアセチルクロリド、ホスホリルトリクロリド、及び塩化チオニルよりなる群から選択されたものを使用することが好ましい。
また、段階（ａ）の反応は、トリエチルアミン、トリ（ｎ−ブチル）アミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン及び４−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）-ピリジンよりなる群から選択された塩基の存在下で、遂行することが好ましく、塩基は一般式（２）の化合物に対して、１．０〜１０．０当量の量で使用することが好ましい。
【００２０】
さらに、段階（ａ）の反応は、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジオキサン及びエチルアセテートよりなる群から選択された１種以上の溶媒中で遂行することが好ましい。
一方、段階（ａ）で使用される一般式（４）の化合物は一般式（２）の化合物に対し、１．０〜３．０当量の量で使用することが好ましい。
【００２１】
段階（ｂ）の加水分解は、水酸化リチウム（好ましくは、無水または１水和の結晶）、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム及び水酸化カルシウムよりなる群から選択された塩基の存在下で、遂行することが好ましく、塩基は一般式（１３）に対し、０．１〜１０．０当量の量で使用することが好ましい。
また、段階（ｂ）の反応は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジオキサン及びジクロロメタンよりなる群から選択された１種以上の溶媒中で遂行するか、または上記群から選択された溶媒と水との混合溶媒中で遂行することが好ましい。
【００２２】
段階（ｃ）の脱保護化反応は塩酸、硫酸及びトリフルオロ酢酸よりなる群から選択された酸の存在下で遂行することが好ましく、酸は一般式（１４）の化合物に対し、０．１〜２０．０当量の量で使用することが好ましい。
また、段階（ｃ）の脱保護化反応はジクロロメタンまたはクロロホルムから選択された溶媒の存在または不在下で遂行することが好ましい。
【００２３】
段階（ｄ）の結晶化−誘導動的変換反応は、一般式（１）の化合物をシード（seed）として添加して遂行するか、またはシードと触媒量の塩基の存在下で遂行することができる。この時、塩基にはトリエチルアミン、トリ（ｎ−ブチル）アミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン、４−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）−ピリジン、光学活性のある１−フェニルエチルアミン及び光学活性のある１−ナフチルエチルアミンよりなる群から選択されたアミンが好ましい。
段階（ｄ）において、上記アミンの量は、一般式（１４）の化合物に対し、０．００１〜１．０モル当量を使用することが好ましく、より好ましくは０．０３〜０．５モル当量を使用する。使用されたアミンの量が少な過ぎると反応速度が遅くなり、多すぎると一般式（１）の化合物の収率が減少する。
また、段階（ｄ）の結晶化−誘導動的変換反応は、トルエン、ベンゼン、ジクロロベンゼン、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジオキサン、エチルアセテート、ジクロロメタン、アセトニトリル、ｔ−ブチルメチルエーテル、及びジエチルエーテルよりなる群から選択された１種以上の溶媒中で遂行することが好ましい。
【００２４】
以下、本願発明に係る一般式（１）の化合物の製造方法を、反応式２を参照して下記通りに詳細に説明する。
高光学活性を有する一般式（２）のイソオキサゾリン誘導体を、本出願人が２００４年８月１７日付出願し、係属中のＰＣＴ／ＫＲ２００４／００２０６０に開示された方法に従って合成した後、一般式（４）の化合物と結合させて一般式（１３）の化合物を製造し、次いで、一般式（１３）の化合物をエステル加水分解させて一般式（１４）の化合物を製造し、一般式（１４）の化合物からアルキルケタールの脱保護化反応により、一般式（１５）と一般式（１６）との化合物の混合物を得た後、一般式（１）の化合物を效果的に結晶化して得ることができる。
具体的に、一般式（１５）と一般式（１６）との混合物を有機溶媒に溶かした後、一般式（１）の化合物の結晶（seed）を添加すれば、混合物中の一般式（１５）の化合物のみを一般式（１）の化合物に変換させ、固体として分離することができる。
反応式２
【化５】
2008531551.tif 000007
式中、
Ｒ１はアルキル基またはアリール基を表し、
Ｒ２はアルキル基を表し、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、またはＲ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【００２５】
また、一般式（１５）と一般式（１６）との混合物を化合物の結晶（seed）と共に触媒量の塩基で処理すれば、一般式（１５）と一般式（１６）の化合物がいずれも一般式（１）の化合物に変換されるので、より高い収率で一般式（１）の化合物を製造することができる（反応式３）。溶液中に存在する塩基により、一般式（１６）と一般式（１５）の化合物が平衡を取る。また、一般式（１５）の化合物は一般式（１７）と一般式（１）の化合物と、また一般式（１６）の化合物は一般式（１８）と一般式（１９）の化合物と平衡を取る。この中で、結晶性の良い一般式（１）の化合物が選択的に沈澱することで、全体化合物の平衡が一般式（１）の化合物に移動し、結果的に一般式（１５）と一般式（１６）との化合物の混合物から一般式（１）の化合物のみを選択的に高収率で得ることができる。
【００２６】
反応式３
【化６】
2008531551.tif 000008
【００２７】
また、本発明は一般式（１）の化合物の製造に用いる中間体である下記一般式（４）の化合物に関するものである：
【化７】
2008531551.tif 000009
式中、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
好ましくは,
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表すか、または
Ｒ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す。
【００２８】
また、本発明は、
（ａ）下記一般式（９）の化合物を保護化及び脱保護化して下記一般式（１０）の化合物を製造する段階；
（ｂ）下記一般式（１０）の化合物に対して炭素−炭素結合反応を行って一般式（１１）の化合物を製造する段階；
（ｃ）下記一般式（１１）の化合物をベンジルアミンと反応し、還元して下記一般式（１２）の化合物を製造する段階；及び
（ｄ）下記一般式（１２）の化合物を水素化反応させる段階を含む、下記一般式（４）の化合物を製造する方法に関するものである。
【化８】
2008531551.tif 000010
式中、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
好ましくは、
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表すか、または
Ｒ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す。
【００２９】
上記一般式（４）の化合物を製造する方法を下記通りにさらに具体的に説明する。
段階（ａ）において、一般式（９）の化合物は、トリメチルオルトホルメートまたはトリエチルオルトホルメートを使用して保護化反応を行うことが好ましく、脱保護化反応は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム及び炭酸水素ナトリウムから選択された塩基の存在下で遂行することが好ましい。一方、上記脱保護化反応で塩基は一般式（９）の化合物に対し、１．０〜２．０当量の量を使用することが好ましい。
また、段階（ａ）の保護化反応はメタノールまたはエタノール溶媒で遂行することが好ましく、脱保護化反応はメタノール、エタノール、ジクロロメタン、クロロホルム及び水よりなる群から選択された１種以上の溶媒で遂行することが好ましい。
また、段階（ｂ）の反応は、ｎ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミンまたはリチウムヘキサメチルジシラジドから選択された塩基の存在下でエチルクロロホルメートまたはメチルクロロホルメートを使用して反応させることが好ましく、塩基は一般式（１０）の化合物に対し、０．５〜３．０当量使用することが好ましく、エチルクロロホルメートまたはメチルクロロホルメートは一般式（１０）の化合物に対し、０．５〜３．０当量使用することが好ましい。
また、段階（ｂ）の反応はテトラヒドロフラン、エチルエーテル及びメチル−ｔ−ブチルエーテルから選択された溶媒で遂行することが好ましい。
段階（ｃ）の還元反応は酢酸及び水素化ホウ素ナトリウムを使用して遂行することが好ましく、上記水素化ホウ素ナトリウムは一般式（１１）の化合物に対し、１．０〜５．０当量使用することが好ましく、上記酢酸は一般式（１１）の化合物に対し、１．０当量〜２０．０当量の量で使用することが好ましい。
また、段階（ｃ）で上記ベンジルアミンは一般式（１１）の化合物に対し、１．０〜１０．０当量の量で使用することが好ましい。
さらに、段階（ｃ）の反応はエチルアセテート、テトラヒドロフラン、エチルエーテル及びメチル−ｔ−ブチルエーテルから選択された溶媒の存在下でまたは溶媒の不在下で遂行することが好ましく、必要に応じて、同一容器内で反応を遂行できる。
段階（ｄ）の反応は金属触媒の存在下で遂行することが好ましく、より好ましくはパラジウム系触媒またはラネーニッケル系触媒を使用することである。特に、炭素、シリカ及びアルミナよりなる群から選択された支持体に担持された、１〜２０重量％のパラジウム（Ｐｄ）担持量範囲を持つパラジウム系触媒または１重量％以上のラネーニッケル担持量範囲を持つラネーニッケル系触媒を金属成分を基準にして一般式（１２）の化合物に対し、０．０１〜１０重量％の量で使用することができる。
【００３０】
また、段階（ｄ）の反応は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジオキサン、エチルアセテート及びジクロロメタンよりなる群から選択された１種以上の溶媒中で遂行することが好ましい.
さらに、段階（ｄ）の水素化反応は０〜５０℃の温度及び水素圧力１〜１００気圧下で遂行することが好ましい。
【００３１】
本発明者らは、一般式（１）の化合物の中間体である高収率の一般式（４）の化合物を製造できる新規方法を開発しており、これを下記反応式４に図示した。
反応式４
【化９】
2008531551.tif 000011
式中、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【００３２】
また、本発明は薬剤学的に許容される担体と共に上記定義された一般式（１）の化合物を含有する消炎またはアポトーシス防止用薬学的組成物に関するものであり、特に、認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳに因る脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死に対する治療剤組成物に関するものである。
【００３３】
また、本発明は対象物に治療学的有効量の上記定義された一般式（１）の化合物を投与することを含む対象物の消炎またはアポトーシス防止方法に関するものであり、特に、認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳに因る脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死に対する治療方法に関するものである。
【００３４】
また、本発明は消炎またはアポトーシス防止用薬剤の製造のための上記定義された一般式（１）の化合物の用途に関するものであり、特に、認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳに因る脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死に対する治療薬剤のための用途に関するものである。
本発明に係る一般式（１）の化合物は投与目的のために様々な薬剤学的投与形態で剤形化できる。本発明に係る薬剤学的組成物を製造するために、有効量の一般式（１）の化合物を製造しようとする剤形によって選択できる様々な薬剤学的に許容される担体と混合される。
【００３５】
一般式（１）の化合物は適用目的によって、注射用製剤、経皮用製剤または経口用製剤に剤形化でき、投与の容易性及び容量の均一性の側面から好ましくは単一投与形で製造される。
【００３６】
経口用製剤を製造する場合には、通常の薬剤学的担体を使用することができる。例えば、懸濁液、シロップ剤、エリキシル剤及び溶液剤のような経口用液体製剤の場合、水、グリコール、油、アルコールなどを担体として使用でき；散剤、丸剤、カプセル剤及び錠剤のような固体製剤の場合にはでんぷん、砂糖、カオリン、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などを使用することができる。投与の容易性によって、錠剤及びカプセル剤が最も便利な服用形態であり、錠剤及び丸剤は腸溶性錠剤に製造することが好ましい。
【００３７】
非経口製剤の場合、担体としては通常滅菌水を使用し、溶解助剤のような別の成分も含むことができる。注射用製剤、例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁液は公知された技術によって好適な分散剤、湿潤剤、または懸濁剤を用いて製造できる。このとき用いられる溶媒には水、リンガー液及び等張性ＮａＣｌ溶液が挙げられ、滅菌固定油も通例的に溶媒または懸濁媒体として使用される。モノ−、ジ−グリセリドを含むあらゆる無刺激性固定油もこの目的のために用いられる。また、オレイン酸のような脂肪酸も注射用製剤のために用いられる。
【００３８】
経皮製剤の場合には担体として浸透促進剤及び／又は適当な湿潤剤を任意に皮膚に対する刺激性のない適当な添加剤と共に使用することができる。上記添加剤は皮膚を通して投与を促進し、及び／又は目的する組成物を製造するのに役立つものを選択する。経皮製剤は経皮用パッチ、点滴剤または軟膏のような様々な方式で投与される。
【００３９】
一般式（１）の化合物を臨床的な目的で投与するとき、単一容量または分離容量で宿主に投与されるトータル一日投与量は、体重１ｋｇ当たり０．１〜１００ｍｇの範囲が好ましいが、特定患者に対する特異容量水準は用いられる特定化合物、患者の体重、性別、健康状態、食餌、薬剤の投与時間、投与方法、排泄率、薬剤混合及び疾患の重症度などによって変わる。
以下、本発明を下記実施例に基づいてさらに詳しく説明する。しかし、これらは本発明の範囲を何ら制限するものではない。
【実施例】
【００４０】
製造例１
１−フルオロ−４−トリメチルシラニル−３−ブチン−２−オン（９）
トリメチルシリルアセチレン（４９．１ｇ、４９９ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）に溶かし、約−５５℃に内部温度を下げ、ブチルリチウム（２．５  Ｍｎ−ＢｕＬｉ  ｉｎ  ｎ−ヘキサン；２１０ｍＬ、５２５ｍｍｏｌ）を−３０℃以下を保持しながら、約２５分かけて添加した。約４０分間撹拌した後、反応混合物にエチルフルオロアセテート（５２．９ｇ、４９９ｍｍｏｌ）を内部温度−２５℃以下を保持しながら５分かけて添加し、次いで、ＢＦ３・ＯＥｔ（７４．４ｇ、５２４ｍｍｏｌ）を１５分かけて内部温度を−５５℃〜−６５℃を保持しながら、添加した。添加完了後、反応混合物を約２０℃で２時間撹拌し、１０％塩化アンモニウム水溶液（２５０ｍＬ）を入れて反応を終結した。有機層を分離し、水層はエチルアセテート（２００ｍＬ）で抽出した。合わせられた有機層を塩水（２５０ｍＬ）で洗浄した後、減圧して溶媒を除去した。残留分を１０ｍｂａｒ、６８℃で真空蒸留して一般式（９）の透明な液体の表題化合物（６７．３ｇ、８５％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):  4.90 (d, J = 47.1 Hz, 2H), 0.26 (s, 9H)
13C NMR (125 MHz, CDCl3):  181.0 (d, J = 21.5 Hz), 104.0, 98.1, 84.8 (d, J = 187 Hz)
【００４１】
製造例２
４−フルオロ−３，３−ジメトキシ−１−ブチン（１０、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル）
製造例１で得た一般式（９）の化合物（５０．０ｇ、３１６ｍｍｏｌ）をトリメチルオルトホルメート（３３．６ｇ、３１６ｍｍｏｌ）及びｐ−ＴｓＯＨ−Ｈ２Ｏ（６．０ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）と共に、メタノール（２６０ｍＬ）に入れて約６時間、還流温度（内部温度６０〜６４℃）で撹拌した。反応混合物を減圧蒸留して約１３０ｍＬの溶媒を除去した後、メチレンクロリド（２６０ｍＬ）で希釈した。１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１３０ｍＬ）を添加して層分離した後、水層をメチレンクロリド（１３０ｍＬ）で抽出した。合わせられた有機層を減圧蒸留して表題化合物（１０）の前駆体である４−フルオロ−３，３−ジメトキシ−１−トリメチルシリルブチン（５９．０ｇ、９２％）を中間体として得た。この化合物はさらに精製することなく、次の段階反応で用いた。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):  4.38 (d, J = 47.1 Hz, 2H), 3.40 (s, 6H), 0.20 (s, 9H)
【００４２】
上記で得た表題化合物（１０）の前駆体の４−フルオロ−３，３−ジメトキシ−１−トリメチルシリルブチン（５９．０ｇ、２８９ｍｍｏｌ）をメチレンクロリド（２８０ｍＬ）に溶かし、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロマイド（５９ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）と１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３４７ｍＬ、３４７ｍｍｏｌ）を添加して約２時間反応させた。有機層を分離して水層をメチレンクロリド（１１０ｍＬ）で抽出した。合わせられた有機層を塩水（１１０ｍＬ）で洗浄し、減圧蒸留して表題化合物（１０、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル；４０．９ｇ、定量的収率）を得た。この化合物はさらに精製することなく、次の段階反応で用いた。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):  4.42 (d, J = 47.1 Hz, 2H), 3.42 (s, 6H), 2.64 (s, 1H)
13C NMR (125 MHz, CDCl3):  96.1 (d, J = 20.3 Hz), 82.9 (d, J = 180 Hz), 77.5, 75.5, 51.0
【００４３】
製造例３
エチル５−フルオロ−４，４−ジメトキシ−２−ペンチノエート（１１、Ｒ３，Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル）
テトラヒドロフラン（２７０ｍＬ）にジイソプロピルアミン（４０．９ｇ、４０５ｍｍｏｌ）を入れて０℃に温度を下げ、ｎ−ＢｕＬｉ（２．５Ｍ  ｎ−ＢｕＬｉ  ｉｎ  ｎ−ヘキサン、１１２ｇ、４０５ｍｍｏｌ）を内部温度１４℃以下に調節しながら、約１時間かけて添加した。反応混合液を０℃で約３０分間撹拌した後、−７８℃に温度を調節した。テトラヒドロフラン（１６０ｍＬ）に製造例２で得た化合物（１０，Ｒ３、Ｒ'３＝メチル；４１．０ｇ、３１１ｍｍｏｌ）を溶かして作った溶液を約２時間かけて内部温度−４０℃以下を保持しながら添加し、連続的にエチルクロロホルメート（６０．４ｇ、５５７ｍｍｏｌ）を約１時間かけて内部温度−４０℃以下を保持しながら添加した後、反応混合物を０℃で約２時間撹拌した。反応混合物に１０％塩化アンモニウム水溶液（２５０ｍＬ）を入れて反応を終結し、有機層を分離した。水層をエチルアセテート（１００ｍＬ）で抽出し、合わせられた有機層を塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧蒸留して不純物が含まれた表題化合物（１１、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル；９５．０ｇ、計算された収率７０％）を得た。この化合物はさらに精製することなく、次の段階反応で用いた。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):  4.45 (d, J = 46.5 Hz, 2H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.43 (s, 6H), 1.31 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
【００４４】
製造例４
エチル３−（ベンジルアミノ）−５−フルオロ−４，４−ジメトキシペンタノエート（１２、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル）
製造例３で得た不純物が含まれた表題化合物（１１，Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル；８８ｇ、４３１ｍｍｏｌ）をメチル−ｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ；４３０ｍＬ）に溶かし、０℃に温度を調節した。反応混合物にベンジルアミン（３１．４ｇ、２９３ｍｍｏｌ）を添加した後、２０℃で約１時間撹拌し、メチル−ｔ−ブチルエーテル（４５０ｍＬ）で希釈した。また反応混合物の温度を０℃に調節し、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４；３３ｇ、８７３ｍｍｏｌ）を添加し、約３０分かけて酢酸（２５９ｇ、４３２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に保持し、３Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（８８０ｍＬ、２６４０ｍｍｏｌ）を約２時間かけてゆっくり添加した。有機層を分離し、分離された有機層を１０％塩化アンモニウム水溶液（８８０ｍＬ）で洗浄し、有機層に１Ｎ塩酸水溶液（８８０ｍＬ）を添加した。水層を分離し、メチル−ｔ−ブチルエーテル（４００ｍＬ）で洗浄した後、１０Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２４６ｍＬ）で塩基化し、メチル−ｔ−ブチルエーテル（７００ｍＬ×２）で抽出した。合わせられた有機層を塩水（４００ｍＬ）で洗浄し、減圧蒸留して表題化合物（１２、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル；６０．０ｇ、４４％、一般式（１０）の化合物（１０）からは６５％）を得た。この化合物はさらに精製することなく、次の段階反応で用いた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):  7.35-7.21 (m, 5H), 4.53 (2dd, J = 46.8, 10.4 Hz, 2H), 4.13 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.80 (2d, J = 12.8 Hz, 2H), 3.53 (dd, J = 8.4, 4.0 Hz, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 2.79 (dd, J = 15.6, 3.6 Hz, 1H), 2.40 (ddd, J = 15.6, 8.0, 1.6 Hz, 1H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
【００４５】
実施例１
エチル３−アミノ−５−フルオロ−４，４−ジメトキシペンタノエート（４、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル)
製造例４で得た化合物（１２、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル；１８．３ｇ、５８．５ｍｍｏｌ）をエタノール（１８０ｍＬ）に溶かし、水素圧力５０ｐｓｉで約４時間、活性炭素５％パラジウム触媒（５％Ｐｄ／Ｃ）を用いて、脱ベンジル反応を行った。セライト（５．０ｇ）で濾過し、エタノール（９０ｍＬ）で洗浄した後、減圧蒸留して表題化合物（４、１２．８ｇ、９８％）を得た。この化合物はさらに精製することなく、次の段階反応で用いた。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):  4.53 (2dd, J = 46.5, 10.4 Hz, 2H), 4.14 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.57 (dd, J = 11.0, 1.9 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 11.7 Hz, 6H), 2.73 (dd, J = 16.5, 2.5 Hz, 1H), 2.36 (ddd, J = 16.5, 10.4, 2.5 Hz, 1H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
【００４６】
製造例５
５−フルオロ−３−［（（Ｒ）−５−イソプロピル−３−（１−イソキノリニル）−４，５−ジヒドロ-イソキサゾール−５−カルボニル）−アミノ］−４，４−ジメトキシ−ペンタン酸エチルエステル（１３、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル)
（５Ｒ）−５−イソプロピル−３−（１−イソキノリニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾールカルボン酸（２、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル；１５．５ｇ、５４．５ｍｍｏｌ）をメチレンクロリド（１５０ｍＬ）に溶かし、０℃に温度を調節した後、オキサリルクロリド（７．１ｍＬ、８１．７ｍｍｏｌ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ；０．２ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ)を内部温度１２℃以下に保持しながら添加した。反応混合物を２０℃で、約２時間、撹拌した後、減圧蒸留した。メチレンクロリド（１５０ｍＬ）で希釈した後、混合物の温度を０℃に調節し、トリエチルアミンを入れ、実施例１で得た化合物（４、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル；１２．８ｇ、５７．４ｍｍｏｌ）をメチレンクロリド（３０ｍＬ）に溶かした溶液を２０分かけてゆっくり添加した。反応混合物を２５℃で１．５時間、撹拌した後、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１２０ｍＬ）と１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（６０ｍＬ）の混合溶液を添加して反応を終結した。有機層を分離し、水層をメチレンクロリド（１５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせられた有機層を減圧蒸留して表題化合物（１３、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル；３０．１ｇ、定量的収率）を得た。この化合物はさらに精製することなく、次の段階反応で用いた。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):  9.12 (q, 1H), 8.53 (m, 1H), 7.85-7.25 (m, 4H), 4.80 (m, 1H), 4.54-4.34 (m, 2H), 4.14 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 3.99 (2d, J = 18.4 Hz, 1H), 3.81 (m, 1H), 3.78 (2d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.33 (d, 3H), 3.20 (d, 3H), 2.75 (m, 3H), 2.53 (m, 1H), 2.39 (heptet, J = 6.7 Hz, 1H), 1.27 (t, J = 7.4 Hz, 1.5H), 1.07 (m, 6H), 0.97 (t, J = 7.4 Hz, 1.5H)
【００４７】
製造例６
５−フルオロ−３−［（（Ｒ）−５−イソプロピル−３−（１−イソキノリニル）−４，５−ジヒドロ−イソキサゾール−５−カルボニル）−アミノ］−４，４−ジメトキシ-ペンタン酸（１４、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル）
製造例５で得た化合物（１３、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル、Ｒ４＝エチル；３０．１ｇ、６１.６ｍｍｏｌ）を添加し、水酸化リチウム一水和物（７．７６ｇ、１８５ｍｍｏｌ)と共にテトラヒドロフラン（１６８ｍＬ)と水（４２ｍＬ）の混合溶媒に添加し、約４０℃で４時間、撹拌した。反応混合物を減圧蒸留して溶媒中のテトラヒドロフランを除去した後、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１８０ｍＬ）を添加してトルエン（１２０ｍＬ×２）で混合物を洗浄した。水層を６Ｎ塩酸水溶液（６６ｍＬ）で酸性化し、メチレンクロリド（１５０ｍＬ×３）で抽出した後、有機層を減圧蒸留して表題化合物（１４、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル；２５．４ｇ、８９％）を得た。この化合物はさらに精製することなく、次の段階反応で用いた。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):  9.10-8.92 (m, 1H), 8.52 (m, 1H), 7.86-7.13 (m, 4H), 4.77 (m, 1H), 4.54-4.34 (m, 2H), 3.95 (2d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.75 (2d, J = 18.4 Hz, 1H), 3.35-3.16 (2d, 6H), 2.78 (2dd, J = 16.0, 4.4 Hz 1H), 2.54 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 2.35 (s, 1H), 1.06 (m, 6H)
【００４８】
実施例２
（４Ｓ，５Ｓ）−５−フルオロメチル−５−ヒドロキシ−４−（［（５Ｒ）−５−イソプロピル−３−（１−イソキノリニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソオキサゾリル］カルボニルアミノ）−２−ジヒドロフラノン（１、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル）
製造例６で得た化合物（１４、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル、Ｒ３、Ｒ'３＝メチル；１７．０ｇ、３６.９ｍｍｏｌ）と酢酸（６．６ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）を６Ｎ塩酸水溶液（１２３ｍＬ、７３８ｍｍｏｌ）に溶かし、約４時間、撹拌した。反応混合物の内部温度を０℃に調節し、エチルアセテート（１５０ｍＬ）を添加した。３Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２２０ｍＬ、６６０ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、ｐＨを約３に調節した後、有機層を層分離と分離された水層をエチルアセテート（１５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせられた有機層を塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧蒸留した後、トルエン（５０ｍＬ）を添加し、再び減圧蒸留して一般式（１５）と一般式（１６）の化合物（Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル）の混合物（１５．４ｇ、定量的収率、化学純度：８７．０％）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6):  8.99 (m, 1H), 8.65 (m, 1H), 8.19-7.78 (m, 4H), 5.15 (m, 1.5H), 4.77 (m, 1H), 4.42 (m, 0.5H), 3.91 (2d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.74 (m, 1H), 2.99 (m, 0.2H), 2.82 (m, 1H), 2.63 (m, 0.8H), 2.33 (m, 1H), 0.97 (m, 6H)
【００４９】
一般式（１５）と一般式（１６）の化合物（Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル）の混合物（１４．６ｇ、３５．２ｍｍｏｌ、化学純度：８７．０％）にトルエン（１４６ｍＬ）を加え、１００℃まで加熱して完全に溶かした後、表題化合物のシード（１、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル；１４ｍｇ）を添加した後、ゆっくり温度を20℃に下げ、固体が生成されるように撹拌した。ジイソプロピルアミン（０．２５ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を添加し、約２０℃で約２週間撹拌し、ＨＰＬＣで一般式（１５）の化合物と一般式（１６）の化合物（Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル）の比率が９２．８：７．２になったことを確認した。減圧蒸留してトルエンを除去し、エチルアセテート（８８ｍＬ）を入れ、６５℃まで加熱して完全に溶かした後、ｎ−ヘキサン（８８ｍＬ）を添加してゆっくり温度を下げ、２日間、約２０℃で撹拌した。生成された固体を濾過して濾過された固体をエチルアセテート（１５ｍＬ）とｎ−ヘキサン（１５ｍＬ）の混合溶液で洗浄した。窒素で乾燥した後、一般式（２）の化合物から５４．７％（８．０ｇ、化学純度９８．６％）の収率で白色固体の表題化合物（１、Ｒ１＝１−イソキノリニル、Ｒ２＝イソプロピル）を得た。
結晶形の固体ＮＭＲはＶＡＣＰＭＡＳ（variable amplitude cross polarization magic angle spinning）方法を利用して９ｋＨ  ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｒａｔｅで実験して得た。
1H NMR (CDCl3):  9.02 (bs, 1H), 8.54 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.95 Hz, 1H), 7.70 (m, 3H), 7.60 (bs, 1H), 4.86 (bs, 1H), 4.2-5.2 (bs, 2H), 4.05 (b, J = 19.0 Hz, 1H), 3.78 (b, J = 19.0 Hz, 1H), 2.7-3.1 (bm, 2H), 2.40 (m, 1H). 1.08 (dd, J = 6.7, 4.9 Hz, 6H)  
13C NMR (CDCl3):  173.8, 172.4, 160.2, 147.6, 141.7, 136.8, 130.7, 129.0, 127.4, 127.3, 126.8, 122.9, 92.3, 82.7 (d, J = 215 Hz), 48.9 (b), 44.6, 34.4, 33.9, 17.7, 16.3  
13C NMR (solid):  176.4, 171.8, 160.3, 150.2, 139.5, 137.5, 132.3 (2C), 127.7 (3C), 123.0, 104.3, 94.1, 86.4, 48.8, 42.9, 32.7 (2C), 19.6, 15.4
Mass (ESI):  416.14 (M+1)
(c=1.0, アセトニトリル)
【００５０】
実験例１
安全性試験
図２に示されるように化合物の安全性試験結果、非結晶形（amorphous form）の化合物は苛酷条件（６０℃）で２８日後、５０％が破壊される程度に不安定であったが、結晶形（crystalline form）の化合物は苛酷条件（６０℃）で２８日後にも定量値の減少が全く観察されなかった。この結果より、結晶形の化合物が阻害剤あるいは治療剤の組成物として使用する好適な十分な安全性を確保していることが判る。
【００５１】
実験例２
マウスでＬＰＳ−誘発性急性肝炎の治療効果
段階１：血液サンプルの製造
雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（６週齢、Charles River Laboratory, Osaka, Japan）を２２℃及び５５％の相対湿度下で１２時間ずつ昼／夜を変えながら飼育した。このとき、飼料と水は制限無く供給した。発熱物質（pyrogen）が除去された食塩水にＬＰＳ（lipopolysaccaride）とＤ−ガラクトサミン（galactosamine）をそれぞれ０．４ｍｇ／ｍＬの濃度と２８０ｍｇ／ｍＬ濃度で溶解し、１：１で混合した溶液を５ｍＬ／ｋｇの量で注射した。試験化合物が溶解されているビヒクル（ＰＥＧ４００：エタノール：Ｔｗｅｅｎ８０＝１５：７．５：２．５で構成された混合物を食塩水で１／５希釈）またはビヒクル単独をＬＰＳとＤ−ガラクトサミン（galactosamine）を注射した直後に実験動物に投与した。薬物を注射して８時間後、心臓採血を介して血液サンプルを得た。
【００５２】
段階２：血漿アミノトランスフェラーゼ活性アッセイ
段階１で得た血液サンプルに対し、血漿ＡＬＴ活性を製造者の案内書に従ってＡＬＴアッセイキット（試験ｋｉｔ：アサン製薬製）を使用して測定した。両実験でＬＰＳとＤ−ガラクトサミンの投与が血漿内ＡＬＴ活性を急激に上昇させ、試験物質は容量−依存的な方式で上記上昇された酵素活性を抑制していることが確認された。これらの結果を土台に各試験物質に対し、プリズム（Prism）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社製）を使用してＥＤ５０数値を算出した。
【００５３】
実験例３
マウスでＦａｓ抗体誘発性急性肝炎の治療効果
雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（６週齢、Charles River Laboratory, Osaka, Japan）を２２℃及び５５％の相対湿度下で１２時間ずつ昼／夜を変えながら飼育した.このとき、飼料と水は制限無く供給した。発熱物質（pyrogen）が除去されたＦａｓ抗体をそれぞれ３０ｕｇ／ｍＬの濃度で溶解し、５ｍＬ／ｋｇの量で尾静脈に注射した。試験化合物が溶解されているビヒクル（ＰＥＧ４００：エタノール：Ｔｗｅｅｎ８０＝１５：７．５：２．５で構成された混合物を食塩水で１／５希釈）またはビヒクル単独をＦａｓ抗体を注射した直後に実験動物に投与した。薬物を注射して８時間後、心臓採血を介して血液サンプルを得た。このとき、得られた血液を蒸気試験方法を使用してＥＤ５０数値を算出した。下記表１に実施例２で得た化合物１の投与経路に伴う急性肝炎モデルでの薬効試験結果を示した。
【表２】
2008531551.tif 000012
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明に係る一般式（１）の環状カルボン酸ヘミケタールを含むイソオキサゾリン誘導体は優れたカスパーゼ阻害活性を有し、優れた安全性を有する。また、本発明の方法によれば、結晶化−誘導動的変換反応を使用して一つのジアステレオ異性質体のみを高純度で製造することができる。さらに、本発明のケタールを含むアミン誘導体を中間体として用いれば、さらに精製することなく、容易に本発明の環状カルボン酸ヘミケタールを含むイソオキサゾリン誘導体を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】本発明に係る一般式（１）（Ｒ１＝イソキノリニル基、Ｒ２＝イソプロピル基）の化合物の結晶形構造のＸ線回折分析スペクトルである。
【図２】本発明に係る一般式（１）の化合物（Ｒ１＝イソキノリニル基、Ｒ２＝イソプロピル基）の結晶形と非結晶形の安全性試験結果を図示したグラフである。
【図１】
2008531551.tif 000018
【図２】
2008531551.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】平成20年3月14日(2008.3.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）の化合物：
【化１】
2008531551.tif 000020
式中、
Ｒ１はアルキル基またはアリール基を表し、及び
Ｒ２はアルキル基を表す。
【請求項２】
Ｒ１はイソキノリニル基、キノリニル基またはナフチル基を表し、及び
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１はイソキノリニル基を表し、及び
Ｒ２はイソプロピル基を表す請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
（ａ）下記一般式（２）の化合物を活性化した後、下記一般式（４）の化合物と反応させて下記一般式（１３）の化合物を製造する段階；
（ｂ）下記一般式（１３）の化合物を加水分解して下記一般式（１４）の化合物を製造する段階；
（ｃ）下記一般式（１４）の化合物を脱保護化する段階；及び
（ｄ）結晶化−誘導動的変換（Crystallization-induced dynamic transformation）を行う段階；
を含む下記一般式（１）の化合物の製造方法。
【化２】
2008531551.tif 000021
式中、
Ｒ１はアルキル基またはアリール基を表し、
Ｒ２はアルキル基を表し、
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、またはＲ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【請求項５】
Ｒ１はイソキノリニル基、キノリニル基またはナフチル基を表し、
Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表し、
Ｒ３及びＲ´３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表わすか、またはＲ３及びＲ´３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項４に記載の方法。
【請求項６】
段階（ａ）で、一般式（２）の化合物をオキサリルクロリド、トリメチルアセチルクロリド、ホスホリルトリクロリド及び塩化チオニルよりなる群から選択された活性化試薬で活性化する請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
段階（ａ）の反応をトリエチルアミン、トリ（ｎ−ブチル）アミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン及び４−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）−ピリジンよりなる群から選択された塩基の存在下で、行う請求項４または５に記載の方法。
【請求項８】
段階（ｂ）の加水分解を水酸化リチウム、水酸化ナトリウム,水酸化カリウム及び水酸化カルシウムよりなる群から選択された塩基の存在下で、行う請求項４または５に記載の方法。
【請求項９】
段階（ｃ）の脱保護化を塩酸、硫酸及びトリフルオロ酢酸よりなる群から選択された酸の存在下で、行う請求項４または５に記載の方法。
【請求項１０】
段階（ｃ）の脱保護化をジクロロメタンまたはクロロホルムから選択された溶媒の存在下または不在下で、行う請求項４または５に記載の方法。
【請求項１１】
段階（ｄ）の結晶化−誘導動的変換を一般式（１）の化合物をシード（seed）として添加して行う請求項４または５に記載の方法。
【請求項１２】
段階（ｄ）の結晶化−誘導動的変換をシード及び触媒量の塩基の存在下で行う請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
塩基がトリエチルアミン、トリ（ｎ−ブチル）アミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン、４−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）−ピリジン、光学活性のある１−フェニルエチルアミン、及び光学活性のある１−ナフチルエチルアミンよりなる群から選択されたアミンである請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
アミンを一般式（１４）の化合物に対して、０．００１〜１．０当量の量で用いる請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
下記一般式（４）の化合物：
【化３】
2008531551.tif 000022
式中、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【請求項１６】
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表すか、またはＲ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
（ａ）下記一般式（９）の化合物を保護化及び脱保護化して下記一般式（１０）の化合物を製造する段階；
（ｂ）下記一般式（１０）の化合物に対し、炭素−炭素結合反応を遂行して下記一般式（１１）の化合物を製造する段階；
（ｃ）下記一般式（１１）の化合物をベンジルアミンと反応し、還元して下記一般式（１２）の化合物を製造する段階；及び
（ｄ）下記一般式（１２）の化合物を水素化反応する段階；
を含む下記一般式（４）の化合物の製造方法。
【化４】
2008531551.tif 000023
式中、
Ｒ３とＲ'３はそれぞれアルキル基を表すか、または
Ｒ３とＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共に複素環を形成し、及び
Ｒ４はアルキル基を表す。
【請求項１８】
Ｒ３及びＲ'３はそれぞれメチル基、エチル基またはプロピル基を表すか、またはＲ３及びＲ'３はこれらが付着された酸素原子と共にジオキソランまたはジオキサン基を形成し、及び
Ｒ４はメチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基を表す請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
段階（ａ）の保護化反応をトリメチルオルトホルメートまたはトリエチルオルトホルメートを用いて行う請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
段階（ａ）の脱保護化反応を水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム及び炭酸水素ナトリウムから選択された塩基の存在下で、行う請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２１】
段階（ｂ）の反応をエチルクロロホルメートまたはメチルクロロホルメートを使用して行う請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２２】
段階（ｂ）の反応をｎ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミンまたはリチウムヘキサメチルジシラジドから選択された塩基の存在下で、行う請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
段階（ｃ）の還元反応を酢酸及び水素化ホウ素ナトリウムを用いて行う請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２４】
段階（ｄ）の反応を金属触媒の存在下で行う請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２５】
金属触媒がパラジウム系触媒またはラネーニッケル系触媒である請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の一般式（１）の化合物と薬剤学的に許容しうる担体とを含む、消炎またはアポトーシス防止用薬学的組成物。
【請求項２７】
認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死のために用いられる請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
下記Ｘ線回折パターンを示す結晶形である請求項３に記載の化合物：
【表１】
2008531551.tif 000024
【請求項２９】
対象物に治療学的有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、対象物の消炎またはアポトーシス防止方法。
【請求項３０】
認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死のために用いられる請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
消炎またはアポトーシス防止用薬剤の製造のための請求項１に記載の一般式（１）の化合物の使用。
【請求項３２】
薬剤が認知症（痴呆）、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死のために用いられる請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
次の構造式を有する化合物：
【化５】
2008531551.tif 000025
【請求項３４】
請求項３３に記載の化合物および１以上の医薬的に許容し得る担体を含む組成物。
【請求項３５】
請求項３３に記載の化合物の製造方法であって、反応スキーム３に記載の工程を含む方法：
【化６】
2008531551.tif 000026
【請求項３６】
消炎またはアポトーシスを防止すための薬剤の製造のための請求項３３に記載の化合物の使用。
【請求項３７】
薬剤が、痴呆、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変、敗血症、臓器移植拒絶反応、リウマチ性関節炎、または虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死のために用いられる請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
薬剤が肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎ウイルスによる肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、肝硬変のために用いられる請求項３６に記載の使用。
【国際調査報告】
2008531551.tif 000027
2008531551.tif 000028
2008531551.tif 000029