(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）【化１】2008518040.tif 000045の新規ピリミドチエノインダゾール類、それらの製造方法、および障害、とりわけ過剰増殖性障害の処置若しくは予防のための医薬品の製造のためのそれらの使用に関する。
2008518040.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2008518040.tif 000042
［式中、
Ｒ１は水素、メチル、エチルおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ２は水素、メチル、エチルおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ３は、水素、アルキル、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、トリフルオロメトキシ、ベンジルオキシ、ハロゲン化ベンジルオキシ、アルキル化ベンジルオキシ、ピリドキシ、アルキル化ピリドキシ、ハロゲン化ピリドキシ、ピリジルメトキシ、ハロゲン化ピリジルメトキシおよびＮ−モルホリニルよりなる群から選択されるか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合されている炭素原子と一緒になってピラゾール環を形成し、前記ピラゾール環は、アルキル、ベンジル、ハロゲン化ベンジル、ピリジルメトキシおよびハロゲン化ピリジルメトキシよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得；
Ｒ４は水素、アルキル、シアノおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ５は水素、アルキルおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ６は水素およびアルキルよりなる群から選択され；
Ｒ７は水素およびアルキルよりなる群から選択されるか、または
Ｒ７はピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニルおよびピペラジニルよりなる群から選択される複素環であるか、あるいは
Ｒ７は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチルおよびｔ−ブチルよりなる群から選択されるアルキルであり、前記アルキルは１、２若しくは３個の独立に選択される置換基Ｒ７−１で置換され、
Ｒ７−１は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルスルホニルオキシおよびアミノよりなる群から選択されるか、または、
Ｒ７−１はアルキルアミノであり、前記アルキルアミノは、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、ピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニルおよびピペラジニルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、または
Ｒ７−１はアルケニルアミノであり、前記アルケニルアミノは、オキソ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−モルホリニル、Ｎ−ピペリジニルおよびＮ−ピペラジニルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、または
Ｒ７−１は、ピロリジニル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニルおよびチオモルホリニルよりなる群から選択される複素環であり、前記複素環は、アルキル、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニ
ル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、ピラジニル、ベンジルおよびピリジルメチルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、あるいは
Ｒ７は、アリル、プロプ−１−エニル、２−メチル−プロプ−１−エニル、ブト−１−エニル、ブト−２−エニル、ブト−３−エニル、ペント−１−エニル、ペント−２−エニル、ペント−３−エニル、ペント−４−エニルよりなる群から選択されるアルケニルであり、前記アルケニルは、１、２若しくは３個の独立に選択される置換基Ｒ７−２で置換され、
Ｒ７−２はオキソであるか、または
Ｒ７−２はアルキルアミノであり、前記アルキルアミノは、オキソ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノおよびアルキルアミノよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得る］
の化合物；
若しくはその塩、溶媒和物または塩の溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１が水素であり；
Ｒ２が水素であり；
Ｒ３が、水素、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、トリフルオロメトキシ、ベンジルオキシ、ハロゲン化ベンジルオキシ、ピリドキシ、メチル化ピリドキシ、エチル化ピリドキシ、ハロゲン化ピリドキシ、ピリジルメトキシ、ハロゲン化ピリジルメトキシおよびＮ−モルホリニルよりなる群から選択されるか、または
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合されている炭素原子と一緒になってピラゾール環を形成し、前記ピラゾール環が０若しくは１個の置換基ベンジルで場合によっては置換され得；Ｒ４が、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、シアノおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ５が水素であり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルおよびアミノよりなる群から選択されるか、または
Ｒ７が、メチル、エチルおよびｎ−プロピルよりなる群から選択されるアルキルであり、前記アルキルが１若しくは２個の独立に選択される置換基Ｒ７−１で置換され、
Ｒ７−１が、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、メチルスルホニルオキシ、アミノよりなる群から選択されるか、または
Ｒ７−１がアルキルアミノであり、前記アルキルアミノが、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、メチルスルホニル、Ｎ−ピロリジニルおよびＮ−モルホリニルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、または
Ｒ７−１が、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−イミダゾリル、Ｎ−モルホリニル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニルおよびＮ−チオモルホリニルよりなる群から選択される複素環であり、前記複素環が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、メトキシメチル、メトキシエチル、カルボキシル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロピルオキシカルボニル、ｉ−プロピルオキシカルボニル、ｎ−ブチルオキシカルボニル、ｉ−ブチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、ピラジニル、ベンジルおよびピリジルメチルよりなる群から独立に選択される０若しくは１個の置換基で場合によっては置換され得る、
請求項１に記載の化合物；
若しくはその塩、溶媒和物または塩の溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ５が水素であり、Ｒ３が２−ピリジルメトキシであり、ならびにＲ４がクロロである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ５が水素であり、Ｒ３がフルオロであり、ならびにＲ４がクロロである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が水素であり、ならびにＲ３が３−フルオロベンジルオキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式（ＩＩ）
【化２】
2008518040.tif 000043
［式中、Ｒ１ないしＲ７は上で示される意味するところを有する］
の化合物が酸化作用剤（ｏｘｉｄｉｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）若しくは酸化剤（ｏｘｉｄａｎｔ）で酸化される、式（Ｉ）の化合物の製造方法。
【請求項７】
障害の処置および／若しくは予防のための請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項９】
最低１種の製薬学的に許容できる賦形剤と組合せの、請求項８に記載の製薬学的組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の最低１種の化合物を、最低１種の製薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせること、該組合せを混合すること、および該組合せを適する投与形態物に至らせることを含んでなる、請求項９に記載の製薬学的組成物の製造方法。
【請求項１１】
過剰増殖性障害の処置若しくは予防のための請求項８に記載の製薬学的組成物。
【請求項１２】
過剰増殖性障害の処置若しくは予防のための医薬品の製造のための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
それの必要な哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含んでなる、哺乳動物における疾患若しくは状態の処置方法。
【請求項１４】
疾患若しくは状態が過剰増殖性障害である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
式（ＩＩ）
【化３】
2008518040.tif 000044
［式中、Ｒ１ないしＲ７は請求項１で示される意味するところを有する］
の化合物。
【請求項１６】
哺乳動物における疾患若しくは状態を処置するための、請求項８に記載の製薬学的組成物を含んでなる容器、および該製薬学的組成物の使用説明書を含んでなる、包装された製薬学的組成物。
【請求項１７】
疾患若しくは状態が過剰増殖性障害である、請求項１６に記載の包装された製薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年１０月２７日出願の米国仮出願第６０／６２２，６４０号（その内容はそっくりそのまま引用することにより本明細書に組み込まれる）の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、新規ピリミドチエノインダゾール類、それらの製造方法、および障害、とりわけ過剰増殖性障害の処置若しくは予防のための医薬品の製造のためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、４種の既知のチロシンキナーゼ受容体、ＨＥＲ１（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１）、ＨＥＲ２（ｎｅｕ、ＥｒｂＢ２）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）よりなる１ファミリーを含んでなる。これらの受容体は、ＥＧＦ、ＴＧＦα、エピレグリン、アンフィレグリンおよびヘレグリン（ニューレグリン）を包含する多数のリガンドにより活性化される。ＨＥＲファミリー受容体は、細胞外刺激を、増殖、分化およびアポトーシスを包含する多様な細胞機能を制御する細胞内事象に伝達する細胞シグナル伝達カスケードを生成する。これらの受容体は多数の充実性腫瘍中で上昇されており、そして、この増大は、より攻撃的な腫瘍および不良の疾患予後をもたらす正常細胞制御の破壊と関連づけられている。上皮成長因子受容体の阻害剤は、広範な腫瘍型において腫瘍増殖の安定化若しくは退縮をもたらした（非特許文献１）。本発明の化合物は、上皮成長因子受容体（とりわけＥｒｂＢ１およびＥｒｂＢ２）のチロシンキナーゼ活性の阻害によりそれらの抗増殖効果を提供すると考えられる。
【０００４】
特許文献１および２は、上皮成長因子受容体ファミリーのチロシンキナーゼを阻害することが可能な三環性化合物を記述する。
【０００５】
特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２および特許文献１３は、ＰＤＥ阻害剤としての三環性化合物を開示する。
【０００６】
特許文献１４は、ＰＤＥ７Ｂ媒介性疾患の処置のためのヘテロピリミジンおよびヘテロ−４−ピリミドンを記述する。
【特許文献１】第ＵＳ  ５，６７９，６８３号（Ｐｆｉｚｅｒ）
【特許文献２】第ＷＯ  ９７／１３７６０号（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）
【特許文献３】第ＵＳ  ６，４８２，９４８号（日本曹達）
【特許文献４】第ＵＳ  ６，１３０，２２３号
【特許文献５】第ＵＳ  ６，４９５，５５７号
【特許文献６】第ＷＯ  ００／７８７６７号
【特許文献７】第ＷＯ  ０１／０１９３６９号
【特許文献８】第ＷＯ  ０１／０２１６２０号
【特許文献９】第ＵＳ  ２００３／１５３５８５号
【特許文献１０】第ＵＳ  ２００３／０２２９０６号
【特許文献１１】第ＵＳ  ２００４／０５８９４０号
【特許文献１２】第ＵＳ  ２００４／０７７６６４号
【特許文献１３】第ＷＯ  ０２／０７２１００号（Ｍｅｒｃｋ  ＧｍｂＨ）
【特許文献１４】第ＷＯ  ０３／０５７１４９号（Ｂａｙｅｒ）
【非特許文献１】Ｈｏｌｂｒｏ，Ｔ．、Ｃｉｖｅｎｎｉ，Ｇ．とＨｙｎｅｓ，Ｎ．Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２８４：９９−１１０、２００３
【発明の開示】
【０００７】
［発明の要約］
本発明は、式（Ｉ）
【０００８】
【化１】
2008518040.tif 000003
【０００９】
［式中、
Ｒ１は水素、メチル、エチルおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ２は水素、メチル、エチルおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ３は、水素、アルキル、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、トリフルオロメトキシ、ベンジルオキシ、ハロゲン化ベンジルオキシ、アルキル化ベンジルオキシ、ピリドキシ、アルキル化ピリドキシ、ハロゲン化ピリドキシ、ピリジルメトキシ、ハロゲン化ピリジルメトキシおよびＮ−モルホリニルよりなる群から選択されるか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合されている炭素原子と一緒になってピラゾール環を形成し、前記ピラゾール環は、アルキル、ベンジル、ハロゲン化ベンジル、ピリジルメトキシおよびハロゲン化ピリジルメトキシよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得；
Ｒ４は水素、アルキル、シアノおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ５は水素、アルキルおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ６は水素およびアルキルよりなる群から選択され；
Ｒ７は水素およびアルキルよりなる群から選択されるか、または
Ｒ７はピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニルおよびピペラジニルよりなる群から選択される複素環であるか、あるいは
Ｒ７は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチルおよびｔ−ブチルよりなる群から選択されるアルキルであり、前記アルキルは１、２若しくは３個の独立に選択される置換基Ｒ７−１で置換され、
Ｒ７−１は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルスルホニルオキシおよびアミノよりなる群から選択されるか、または、
Ｒ７−１はアルキルアミノであり、前記アルキルアミノは、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、ピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニルおよびピペラジニルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、または
Ｒ７−１はアルケニルアミノであり、前記アルケニルアミノは、オキソ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−モルホリニル、Ｎ−ピペリジニルおよびＮ−ピペラジニルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、または
Ｒ７−１は、ピロリジニル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニルおよびチオモルホリニルよりなる群から選択される複素環であり、前記複素環は、アルキル、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、ピラジニル、ベンジルおよびピリジルメチルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、あるいは
Ｒ７は、アリル、プロプ−１−エニル、２−メチル−プロプ−１−エニル、ブト−１−エニル、ブト−２−エニル、ブト−３−エニル、ペント−１−エニル、ペント−２−エニル、ペント−３−エニル、ペント−４−エニルよりなる群から選択されるアルケニルであり、前記アルケニルは、１、２若しくは３個の独立に選択される置換基Ｒ７−２で置換され、
Ｒ７−２はオキソであるか、または
Ｒ７−２はアルキルアミノであり、前記アルキルアミノは、オキソ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノおよびアルキルアミノよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得る］
の化合物：
若しくはその塩、溶媒和物または塩の溶媒和物に関する。
【００１０】
［発明の詳細な記述］
それらの構造に依存して、本発明の化合物は立体異性体（鏡像異性体、ジアステレオマー）で存在し得る。本発明は従って、鏡像異性体若しくはジアステレオマー、およびそれらのそれぞれの混合物に関する。鏡像異性体および／若しくはジアステレオマーのこうした混合物は、既知の様式で立体異性的に単一の構成要素に分離し得る。
【００１１】
本発明はまた、化合物の構造に依存して、該化合物の互変異成体にも関する。
【００１２】
本発明の目的上の塩は、好ましくは、本発明の化合物の薬理学的に許容できる塩である。
【００１３】
化合物（Ｉ）の薬理学的に許容できる塩は、無機酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩を包含する。
【００１４】
化合物（Ｉ）の薬理学的に許容できる塩はまた、例えばおよび好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）のような通例の塩基の塩、ならびに、アンモニア、または具体的にかつ好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジヒドロアビエチルアミン、アルギニン、リシン、エチレンジアミンおよびメチルピペリジンのような１ないし１６個の炭素原子を有する有機アミン由来のアンモニウム塩も包含する。
【００１５】
本発明の目的上の溶媒和物は、固体若しくは液体状態で溶媒分子と配位して錯体を形成する化合物の形態である。水和物は、配位が水とである、特殊な形態の溶媒和物である。
【００１６】
本発明の目的上、置換基は、別の方法で明記されない限り、以下の意味するところを有
する：
アルキルそれ自体、ならびに他の基中の「アルク（ａｌｋ）」および「アルキル」は、具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルを表す、１ないし６、若しくは別の態様においては１ないし４、若しくはなお別の態様においては１ないし３個の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝状アルキル基を表す。
【００１７】
アルケニルは、具体的にはアリルを表す、１個若しくはそれ以上の二重結合および２ないし６、若しくは別の態様においては２ないし４、若しくはなお別の態様においては２ないし３個の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝状アルキル基を表す。
【００１８】
アルコキシは、１ないし６、若しくは別の態様においては１ないし４、若しくはなお別の態様においては１ないし３個の炭素原子を有しかつ酸素原子を介して結合されている直鎖若しくは分枝状炭化水素基を表す。制限しない例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ペントキシ、イソペントキシ、ヘキソキシ、イソヘキソキシを包含する。「アルコキシ」および「アルキルオキシ」という用語は同義に使用し得る。
【００１９】
アルキルアミノは、具体的にはメチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、ｎ−ペンチルアミノ、ｎ−ヘキシルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−ｎ−ペンチルアミノおよびＮ−ｎ−ヘキシル−Ｎ−メチルアミノを表す、１若しくは２個の（独立に選択される）アルキル置換基を有するアミノ基を表す。
【００２０】
アルケニルアミノは、具体的にはアリルアミノを表す、１若しくは２個の（独立に選択される）アルケニル置換基を有するアミノ基を表す。
【００２１】
アルキルスルホニルオキシは＊−ＯＳ（Ｏ）２アルキルを表す。
【００２２】
アルキルスルホニルは＊−Ｓ（Ｏ）２アルキルを表す。
【００２３】
アルコキシカルボニルは、カルボニル基を介して結合されたアルコキシ基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ｎ−ペントキシカルボニルおよびｎ−ヘキソキシカルボニルを表す。
【００２４】
アリールは、具体的にはフェニル、ナフチルおよびフェナントレニルを表す、一般に６ないし１４個の炭素原子を有する、少なくとも１個の環で芳香族でありかつ酸素原子を介して結合されている一ないし三環性炭素環基を表す。
【００２５】
ヘテロアリールは、少なくとも１個の環で芳香族である、一般に５ないし１０および好ましくは５若しくは６個の環原子、ならびに５個までおよび好ましくは４個までの窒素、酸素およびイオウよりなる群から選択されるヘテロ原子を有する一若しくは二環基を表す。それは環炭素原子若しくは環窒素原子を介して結合され得る。それが一方の環が芳香族でありかつ他方がそうでない二環を表す場合、それは双方の環で結合され得る。具体的に説明する例は、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、インドリル、インダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、キノリニル、イソキノリニルである。
【００２６】
ヘテロシクリルは、４ないし１０、若しくは別の態様においては５ないし８、若しくはなお別の態様においては５若しくは６個の環原子、および３個まで、または別の態様においては１若しくは２個の窒素、酸素およびイオウ、ＳＯならびにＳＯ２よりなる群から選択されるヘテロ原子および／若しくはヘテロ基を有する一若しくは多環、好ましくは一若しくは二環の非芳香族複素環基を表す。それは環炭素原子若しくは環窒素原子を介して結合され得る。具体的に説明する例は、テトラヒドロフラン−２−イル、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、ピロリニル、ピペリジニル、モルホリニル、パーヒドロアゼピニルである。
【００２７】
ピリジルメトキシは、メトキシ基の炭素原子に結合されたピリジル置換基、例えば２−ピリジルメトキシを表す。
【００２８】
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を表す。
【００２９】
結合の隣の＊記号は、分子中の結合点を示す。
【００３０】
芳香族ピラゾール環に向けられた結合を伴う式（Ｉ）中のＲ７の描写は、１個のＲ７が前記芳香族ピラゾール環中の２個の窒素原子の１個、すなわちＲ６で置換されている炭素原子の隣の窒素原子若しくは他のもののいずれかに結合され得ることを意味している。
【００３１】
接続詞「若しくは（または、あるいは）」が、１より大きい数で存在し得る置換基の代替の定義を定義する請求項の２部分の文を結合している場合、前記「若しくは（または、あるいは）」はまた「および（ならびに）」としても解釈しうる。
【００３２】
本発明の化合物中の基が置換されている場合、該基は、別の方法で明記されない限り、１個若しくはそれ以上の同一若しくは異なる置換基により置換され得る。３個までの同一若しくは異なる置換基での置換が好ましい。１個の置換基での置換が非常にとりわけ好ましい。窒素含有分子がさらに置換される場合、該置換は、好ましくは、こうした置換が前記窒素原子の四級化に至る場合、例えばアルキル化の場合に、窒素原子で起こらない。
【００３３】
中間体を除き、化学的に不安定な化合物は本発明の情況でより少なく好ましい。化学的に不安定なという発現は、ここで、胃腸管の酸性若しくは塩基性の条件のような、それの必要な患者に投与される場合に該化合物が曝露される条件を包含することを意味している。例えば、化学的に不安定な化合物は、２個の窒素若しくは酸素置換基が単一の脂肪族炭素原子に結合されているものであることができる。化学的に不安定な化合物の別の例は、アルコキシ基がアルケンの不飽和炭素に結合されてエノールエーテルを形成するものであることができる。さらに、酸素に結合された脂肪族炭素原子は、クロロ、ブロモ若しくはヨード置換基もまた担持しないことがあり、かつ、いずれかのアルキル基がＯ、Ｓ若しくはＮに結合されかつヒドロキシル置換基を担持する場合には、該ヒドロキシル置換基は、該アルキル基が結合されているＯ、Ｓ若しくはＮから最低２個の炭素原子だけ分離される。
【００３４】
別の態様において、本発明は、式（Ｉ）、
［式中、
Ｒ１は水素であり；
Ｒ２は水素であり；
Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、トリフルオロメトキシ、ベンジルオキシ、ハロゲン化ベンジルオキシ、ピリドキシ、メチル化ピリドキシ、エチル化ピリドキシ、ハロゲン化ピリドキシ、ピリジルメ
トキシ、ハロゲン化ピリジルメトキシおよびＮ−モルホリニルよりなる群から選択されるか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合されている炭素原子と一緒になってピラゾール環を形成し、前記ピラゾール環は０若しくは１個の置換基ベンジルで場合によっては置換され得；Ｒ４は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、シアノおよびハロよりなる群から選択され；
Ｒ５は水素であり；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルおよびアミノよりなる群から選択されるか、または
Ｒ７は、メチル、エチルおよびｎ−プロピルよりなる群から選択されるアルキルであり、前記アルキルは１若しくは２個の独立に選択される置換基Ｒ７−１で置換され、
Ｒ７−１は、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、メチルスルホニルオキシ、アミノよりなる群から選択されるか、または
Ｒ７−１はアルキルアミノであり、前記アルキルアミノは、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、メチルスルホニル、Ｎ−ピロリジニルおよびＮ−モルホリニルよりなる群から独立に選択される０、１若しくは２個の置換基で場合によっては置換され得るか、または
Ｒ７−１は、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−イミダゾリル、Ｎ−モルホリニル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニルおよびＮ−チオモルホリニルよりなる群から選択される複素環であり、前記複素環は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、メトキシメチル、メトキシエチル、カルボキシル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロピルオキシカルボニル、ｉ−プロピルオキシカルボニル、ｎ−ブチルオキシカルボニル、ｉ−ブチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、ピラジニル、ベンジルおよびピリジルメチルよりなる群から独立に選択される０若しくは１個の置換基で場合によっては置換され得る］
の化合物；
若しくはその塩、溶媒和物または塩の溶媒和物
を提供する。
【００３５】
別の態様において、本発明は、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ５が水素であり、Ｒ３が２−ピリジルメトキシであり、ならびにＲ４がクロロである、
式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００３６】
別の態様において、本発明は、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ５が水素であり、Ｒ３がフルオロであり、ならびにＲ４がクロロである、
式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００３７】
別の態様において、本発明は、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が水素であり、ならびにＲ３が３−フルオロベンジルオキシである、
式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００３８】
別の態様において、本発明は、式（ＩＩ）
【００３９】
【化２】
2008518040.tif 000004
【００４０】
［式中、Ｒ１ないしＲ７は上に示される意味するところを有する］
の化合物がＤＤＱのような酸化剤（ｏｘｉｄｉｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）若しくは酸化剤（ｏｘｉｄａｎｔ）で酸化される、式（Ｉ）の化合物の製造方法を提供する。
【００４１】
別の態様において、本発明は、式
【００４２】
【化３】
2008518040.tif 000005
【００４３】
［式中、Ｒ１ないしＲ６は上で示されたところの意味するところを有し、ｑは２、３若しくは４であり、およびＸはハロ若しくはＭｓＯである］
の化合物が、式
（Ｒ’’）２ＮＨ
［式中、Ｒ’’は水素、アルキルであるか、若しくは結合されて複素環を形成しうる］
の化合物と反応される、
式（Ｉｃ）
【００４４】
【化４】
2008518040.tif 000006
【００４５】
［式中、Ｒ１ないしＲ６は上に示された意味するところを有し、ｑは２、３若しくは４であり、およびＲ’’は水素、アルキルであるか、若しくは結合されて複素環を形成しうる］
の化合物の製造方法を提供する。
【００４６】
従って、式（ＩＩ）の化合物、ならびに式（Ｉｂ）の化合物は、本発明の化合物を作成するための有益な前駆体であり、そしてそれら自体また本発明の一部でもある。
【００４７】
本発明の化合物の製造法は以下の合成スキームによって具体的に説明し得る。これらのスキーム中で、別の方法でとりわけ指定されない限り、Ｒ１〜Ｒ７は上の式（Ｉ）について定義されたとおりである。
【００４８】
一般に、式（Ｉ）の化合物は反応スキーム１に概説される経路から製造し得る。このスキームで、式（１）の一保護シクロヘキサン−１−４−ジオンを、イオウおよび塩基の存在下で、式（２）のシアノ酢酸エステルと反応させて、式（３）の二環性アミノチオフェンカルボン酸エステルを生じる。この化合物のホルムアミジン若しくはホルムアミドいずれかとの反応が、式（４）の三環性チオピリミドンを生じる。ＰＯＣｌ３のようなハロゲン化剤との式（４）の化合物の反応は式（５）のクロロ誘導体を生じる。式（５）の三環性化合物を、塩基およびエタノールのような極性溶媒の存在下に、式（６）の置換アニリンと反応させて式（７）の中間体を生じる。水性の酸性条件下での（７）の加水分解は式（８）のケトンを提供する。ＤＭＦジメチルアセタールのようなＮ，Ｎ−ジメチルアミドジメチルアセタールとの（８）の反応は、式（９）のエナミノン中間体を生じる。この中間体をその後、一般式ＨＯ−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨＮＨ２（式中ｑ＝２、３若しくは４）のヒドラジンと縮合して、式（１０）の化合物を生じる。ＤＤＱのような試薬を使用する（１０）の酸化が式（Ｉａ）［（Ｒ７がヒドロキシ置換アルキル基である式（Ｉ）］の化合物を供給する。この式（Ｉａ）の化合物は、ＳＯＢｒ２のようなハロゲン化剤、若しくは塩化メタンスルホニルのような塩化アルカンスルホニルとの（Ｉａ）の反応により、対応する式（Ｉｂ）の化合物［Ｒ７がハロアルキル若しくはアルキスルホニルオキシアルキルである（Ｉ）］に転化し得る。式（Ｉｂ）の化合物は、ジエチルアミンのような二級若しくは一級アミン、またはピロリジン、ピペリジン若しくはモルホリンのような場合によっては置換されている窒素複素環とそれを反応させることにより、式（Ｉｃ）［Ｒ７がＲ７−１（式中Ｒ７−１はアミノ、アルキルアミノ若しくは複素環である）により置換されているアルキルである（Ｉ）］の化合物に転化しうるが、但し、複素環のＮ原子は未置換のまま留まる。
【００４９】
【化５】
2008518040.tif 000007
【００５０】
反応スキーム１に記述される化合物（１０）は、Ｒ７基の位置が縮合ピラゾール環のいずれの窒素原子上にあってもよい、位置異性体混合物を提供しうる。これらの位置異性体
は標準的クロマトグラフィー法により所望のとおり分離しうる。しかしながら、反応スキーム２および３は、化合物（１０）の個々の位置異性体の一般的製造方法、および式（Ｉ）の化合物を製造するためのそれらのその後の使用を具体的に説明する。
【００５１】
【化６】
2008518040.tif 000008
【００５２】
反応スキーム２で、ピラゾール環形成反応は、式（９）のエナミノン、および一般式ＨＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｎ（ＮＨ２）−ＣＯ２アルキル（式中ｑは２、３若しくは４である）の１−ヒドロキシアルキルヒラジンカルボキシレ―トを使用して実施する。この方法により式（１０ａ）の位置異性体が製造される。（１０ａ）のＤＤＱとの反応、次いで反応スキーム１に記述されるものに類似の様式でのハロゲン化若しくはスルホニル化剤での処理が、式（Ｉｂ−１）の位置異性体を提供する。（Ｉｂ−１）の（Ｒ’’）２ＮＨとの反応は式（Ｉｃ−１）の位置異性体を生じる。
【００５３】
【化７】
2008518040.tif 000009
【００５４】
反応スキーム３に、他の式（Ｉ）の位置異性体の例すなわち式１０ｂ、Ｉａ−２、Ｉｂ−２およびＩｃ−２の化合物の製造法が具体的に説明される。本スキームの第一段階でピラゾール環が形成される。すなわち、二重に保護されたヒドラジンすなわち２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アルキルヒドラジンを式（９）の化合物と反応させて、式（１０ｂ）の化合物を提供する。式（Ｉａ−２）および（Ｉｂ−２）の化合物の製造をその後、式（Ｉａ−１）および（Ｉｂ−１）について記述されたものに同一の様式で実施する。すなわち、ヒドロキシアルキルピラゾール（Ｉａ−２）をハロゲン化若しくはアルキルスルホニル化により（Ｉｂ−２）に転化し、そして、（Ｉｂ−２）をその後、一般式（Ｒ’’）２ＮＨのアミンとの反応により（Ｉｃ−２）に転化する。
【００５５】
これらの一般的方法を使用し、かつ、出発原料および条件を必要とされるとおり調節することにより、当業者は本発明の化合物を製造し得る。
【００５６】
式（Ｉ）の付加的な化合物は、存在する官能基の精緻化（ｅｌａｂｏｒａｔｉｏｎ）により他の式（Ｉ）の化合物から製造し得る。こうした精緻化は、限定されるものでないが、加水分解、還元、酸化、アルキル化、アシル化、エステル化、アミド化および脱水反応（ｒｅａｃｔｉｖｅ）を挙げることができる。こうした変換は、いくつかの場合に、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅとＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｗｉｌｅｙ：ニューヨーク、（１９９９）に開示されかつ引用することにより本明細書に組み込まれる方法による保護基の使用を必要としうる。こうした方法は、当業者に容易に明らかであろう合成経路での所望の化合物の合成後若しくは別の場所で開始しうる。
【００５７】
本発明の化合物は予見できない有用な薬理学的および薬物動態活性範囲を表す。それらは従って、ヒトおよび動物における障害の処置および／若しくは予防のための医薬品としての使用に適する。
【００５８】
本発明の化合物は、それらの薬理学的特性のため、過剰増殖性障害、とりわけ癌を処置および／若しくは予防するために、単独で若しくは他の有効成分と組合せで有用である。
【００５９】
別の態様において、本発明は最低１種の本発明の化合物を含有する医薬品を提供する。別の態様において、本発明は、１種若しくはそれ以上の薬理学的に安全な賦形剤若しくは担体物質と一緒の最低１種の本発明の化合物を含有する医薬品、およびまた前述の目的上のそれらの使用を提供する。
【００６０】
該有効成分は全身かつ／若しくは局所で作用し得る。この目的上、それは、例えば経口、非経口、肺、鼻、舌下、舌、頬側、直腸、皮膚、経皮、眼若しくは耳投与により、または植込物若しくはステントの形態でのような適する様式で投与し得る。有効成分はこれらの投与様式に適する形態で投与し得る。
【００６１】
経口投与の適する形態物は、迅速にかつ／または改変若しくは制御された様式で有効成分を放出することにより機能し、また、例えば錠剤（コーティングされないか、あるいは、例えば腸溶コーティングまたは時間の遅延後に溶解するコーティング、若しくは有効成分の放出を制御する不溶性コーティングでコーティングされている）、口腔内で迅速に崩壊する錠剤若しくは薄膜／ウエハース、または薄膜／凍結乾燥物、カプセル（例えば硬若しくは軟ゼラチンカプセル）、糖衣錠、ペレット、粉末、乳剤、懸濁剤および溶液のような、結晶および／若しくは無形体および／若しくは溶解された形態の有効成分を含有する、従来技術のものである。
【００６２】
非経口投与は、（例えば静脈内、動脈内、心内、脊髄内若しくは腰椎内投与により）吸収段階を回避することにより、または（例えば筋肉内、皮下、皮内若しくは腹腔内投与により）吸収を包含することにより実施し得る。適する非経口投与形態物は、例えば、溶液、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥物および滅菌粉末の形態の注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）および注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）製剤である。
【００６３】
他の投与様式のための適する投与形態は、例えば吸入装置（例えば粉末吸入器、噴霧器のような）、点鼻薬、溶液およびスプレー；舌、舌下若しくは頬側投与のための錠剤若しくは薄膜／ウエハース、またはカプセル、坐剤、耳および眼の製剤、膣カプセル、水性懸濁剤（ローション剤若しくは振とう混合物）、親油性懸濁剤、軟膏剤、クリーム剤、経皮治療系、乳様ローション剤、パスタ剤、泡沫剤、粉剤、植込物若しくはステントである。
【００６４】
有効成分は、不活性の非毒性の製薬学的に適する補助物質を使用して、当業者に既知の
様式でおよび従来技術に従って、前述の投与形態物に転化し得る。後者は、例えば賦形剤（例えば結晶セルロース、乳糖、マンニトールなど）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール）、乳化剤、および分散剤若しくは湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、オレイン酸ポリオキシソルビタンなど）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および／若しくは天然のポリマー（例えばアルブミン）、安定剤（例えば、例えばアスコルビン酸のような抗酸化剤）、色素（例えば酸化鉄のような無機色素）または矯味および／若しくは矯臭剤を包含する。
【００６５】
一般に、有効な結果を得るために、およそ０．００１から３００ｍｇ／ｋｇ体重まで、および好ましくはおよそ０．１０から１５０ｍｇ／ｋｇ体重までの１日量を投与することが、非経口投与に有利と判明している。
【００６６】
しかしながら、体重、投与様式、有効成分に対する個々の患者の応答、製剤の型および投与時間若しくは間隔に依存して、前述の量から逸脱することが必要であることがある。
【００６７】
後に続く試験および実施例中のパーセンテージは、別の方法で述べられない限り重量であり；部分は重量である。液体／液体溶液について報告される溶媒比、希釈比および濃度はそれぞれ容量に基づく。
【００６８】
〈Ａ．実施例〉
略語および頭字語
以下の略語が本開示を通じて使用される場合、それらは以下の意味するところを有する：
ａｑ                    水性
Ｂｏｃ                  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＣＤＣｌ３−ｄ          クロロホルム−ｄ
ＣＤ２Ｃｌ２−ｄ４      ジクロロメタン−ｄ
ＣＤ３ＯＤ−ｄ４        メタノール−ｄ４
Ｃｅｌｉｔｅ（Ｒ）      ケイ藻土の銘柄、Ｃｅｌｉｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
ｄ                      ダブレット
ｄｄ                    ダブレットダブレット
ＤＤＱ                  ２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノベンゾキノン
ＤＭＦ                  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ−ｄ６          ジメチルスルホキシド−ｄ６
ＥｔＯＡｃ              酢酸エチル
ＥｔＯＨ                エタノール
ｅｑｕｉｖ              同等物（１種若しくは複数）
ｈ                      時間（１若しくは複数）
１Ｈ  ＮＭＲ            プロトン核磁気共鳴
ＨＰＬＣ                高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ                液体クロマトグラフィー／質量分析
ｍｉｎ                  分（１若しくは複数）
Ｍｅ                    メチル
ＭｅＯＨ                メタノール
ＭＳ                    質量分析法
Ｍｓ                    メタンスルホニル（メシル）
ｒｔ                    室温
ＲＴ                    保持時間（ＨＰＬＣ）
ｓ                      一重項
ｔ                      三重項
ｔｄ                    三重二重項
ＴＦＡ                  トリフルオロ酢酸
【００６９】
一般的分析手順
本発明の代表的化合物の構造を、以下の手順を使用して確認した。
【００７０】
電子衝撃イオン化質量スペクトル（ＥＩ−ＭＳ）は、Ｊ＆Ｗ  ＤＢ−５カラム（０．２５μＭコーティング；３０ｍ×０．２５ｍｍ）を伴うＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ（Ｒ）  ５８９０ガスクロマトグラフ装置を装備したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ（Ｒ）  ５９８９Ａ質量分析計を用いて得た。イオン源は２５０℃に維持し、そしてスペクトルは走査あたり２秒で５０〜８００ａｍｕから走査した。
【００７１】
高速液体クロマトグラフィー−エレクトロスプレー質量スペクトル（ＬＣ−ＭＳ）は：（Ａ）四連式ポンプ、２５４ｎｍに設定した波長可変式検出器、ＹＭＣ  ｐｒｏ  Ｃ−１８カラム（２×２３ｍｍ、１２０Ａ）を装備したＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ（Ｒ）
１１００  ＨＰＬＣ、およびエレクトロスプレーイオン化を用いるＦｉｎｎｉｇａｎ（Ｒ）  ＬＣＱイオントラップ質量分析計。スペクトルは、イオン源中のイオンの数に従って可変イオン時間を使用して、１２０〜１２００ａｍｕから走査した。溶離液は、Ａ：０．０２％ＴＦＡを含む水中２％アセトニトリル、およびＢ：０．０１８％ＴＦＡを含むアセトニトリル中２％水であった。１．０ｍＬ／分の流速で３．５分にわたる１０％Ｂから９５％までの勾配溶離を、０．５分の初期保持および０．５分の９５％Ｂでの最終保持を伴い使用する。総分析時間は６．５分である。
または
（Ｂ）２個のＧｉｌｓｏｎ  ３０６ポンプ、Ｇｉｌｓｏｎ  ２１５オートサンプラー、Ｇｉｌｓｏｎ（Ｒ）ダイオードアレイ検出器、ＹＭＣ  Ｐｒｏ  Ｃ−１８カラム（２×２３ｍｍ、１２０Ａ）を装備したＧｉｌｓｏｎ（Ｒ）  ＨＰＬＣ装置、およびｚ−ｓｐｒａｙエレクトロスプレーイオン化を伴うＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＬＣＺシングル四重極型質量分析計。スペクトルは１．５秒にわたり１２０〜８００ａｍｕから走査した。ＥＬＳＤ（蒸発光散乱検出器）データもまたアナログチャンネルとして取得する。溶離液は、Ａ：０．０２％ＴＦＡを含む水中２％アセトニトリル、およびＢ：０．０１８％ＴＦＡを含むアセトニトリル中２％水であった。１．５ｍＬ／分の流速で３．５分にわたる１０％Ｂから９０％までの勾配溶離を、０．５分の初期保持および０．５分の９０％Ｂでの最終保持を伴い使用する。総分析時間は４．８分である。余分の切り替えバルブをカラム切り替えおよび再生のため使用する。
のいずれかを使用して得た。
【００７２】
慣例の一次元１Ｈ  ＮＭＲ分光法は３００ＭＨｚのＶａｒｉａｎ（Ｒ）  Ｍｅｒｃｕｒｙ−ｐｌｕｓ分光器で実施する。サンプルをＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｓ（Ｒ）から得た重水素化溶媒に溶解し、そして５ｍｍ直径のＷｉｌｍａｄ（Ｒ）  ＮＭＲチューブに移した。スペクトルは２９３Ｋで取得した。化学シフトをｐｐｍ尺度で記録し、そして、１Ｈスペクトルについて、ＤＭＳＯ−ｄ６について２．４９ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ−ｄ３について１．９３ｐｐｍ、ＣＤ３ＯＤ−ｄ４について３．３０ｐｐｍ、ＣＤ２Ｃｌ２−ｄ４について５．３２ｐｐｍおよびＣＤＣｌ３−ｄについて７．２６ｐｐｍのような適切な溶媒シグナルを参照した。
【００７３】
［実施例１］
２−［６−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザシクロペンタ［ａ］フルオレン−２−イル］−エタノールの製造
【００７４】
【化８】
2008518040.tif 000010
【００７５】
段階１．２−アミノ−４，７−ジヒドロ−５Ｈ−スピロ［１−ベンゾチオフェン−６，２’−［１，３］ジオキソラン］−３−カルボン酸エチルの製造
【００７６】
【化９】
2008518040.tif 000011
【００７７】
６００ｍＬのエタノールに、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−８−オン（２５．０ｇ、０．１６０ｍｏｌ）、シアノ酢酸エチル（１８．１ｇ、０．１６０ｍｏｌ）、モルホリン（１４．０ｇ、０．１６０ｍｏｌ）およびイオウ（５．５ｇ、０．１６０ｍｏｌ）を連続的にであった。不均一な内容物を室温で４日間攪拌し、その時間の後に全部のイオウが溶解していた。均一な内容物を減圧下に濃縮し、そして残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈した。混合物を水（２００ｍＬ）で洗浄しかつ層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして減圧下に濃縮して所望の生成物を暗色油状物（４５．０ｇ、９９％）として提供した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．２０（ｓ、２Ｈ）、４．１０（ｑ、２Ｈ）、３．８７（ｓ、４Ｈ）、２．６６（ｔ、２Ｈ）、２．５９（ｓ，２Ｈ）、１．７１（ｔ、２Ｈ）、１．１８（ｔ、３Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．５８分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８４．２。
【００７８】
段階２．３，５，６，８−テトラヒドロ−４Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］−４−オンの製造
【００７９】
【化１０】
2008518040.tif 000012
【００８０】
ホルムアミド（２２５ｍＬ）中の２−アミノ−４，７−ジヒドロ−５Ｈ−スピロ［１−ベンゾチオフェン−６，２’−［１，３］ジオキソラン］−３−カルボン酸エチル（４０．０ｇ、０．１４２ｍｏｌ）の攪拌溶液にギ酸アンモニウム（１７．８ｇ、０．２８２ｍｏｌ）を添加した。生じる混合物を１４０℃で１６時間攪拌し、その時間の後に不均一な内容物を加熱から除去しかつｒｔに冷まさせた。内容物を濾過し、固体のフィルターケーキを水（２×６０ｍＬ）で洗浄しかつ一夜吸引乾燥して、所望の生成物を灰白色固形物（３３．０ｇ、８８％）として提供した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３５（ｂｒｏａｄ  ｓ、１Ｈ）、８．００（ｓ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、４Ｈ）、２．９５（ｔ、２Ｈ）、２．９１（ｓ、２Ｈ）、１．８３（ｔ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝１．８７分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６５．２。
【００８１】
段階３．４−クロロ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］の製造
【００８２】
【化１１】
2008518040.tif 000013
【００８３】
０℃のＰＯＣｌ３（２００ｍＬ）中の３，５，６，８−テトラヒドロ−４Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］−４−オン（２０．０ｇ、０．０７６ｍｏｌ）の攪拌溶液に、トリエチルアミン（２００ｍＬ）を１５分にわたり添加した。生じる混合物をｒｔに温まらせ、そしてその後８０℃に加熱した。３時間後に内容物を加熱から除去し、そしてｒｔに冷まさせた。不均一な混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈しかつ再度濃縮して揮発性物質をさらに除去した。残渣をその後ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、そして不均一な混合物を氷水／ａｑ  ＮａＨＣＯ３（８００ｍＬ）の攪拌混合物上に注いだ。５分の攪拌後に内容物（ｐＨ約７）を濾過し、そして固体のフィルターケーキを水で洗浄した。生成物を真空オーブン中で一夜乾燥して、所望の生成物（２０．７ｇ、９７％）を灰白色固形物として提供した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８２（ｓ、１Ｈ）、３．９７（ｓ、４Ｈ）、３．１０（ｔ、２Ｈ）、３．０７（ｓ、２Ｈ）、１．９５（ｔ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．４５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８３．１。
【００８４】
段階４．Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］−４−アミンの製造；
【００８５】
【化１２】
2008518040.tif 000014
【００８６】
エタノール（１００ｍＬ）中の４−クロロ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］（７．０ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、４−フルオロ−３−クロロアニリン（３．６ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）およびＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ、０．０５ｍＬ）を添加した。内容物を還流に５時間加熱し、その時間の後に内容物を加熱から除去しかつｒｔに冷まさせた。溶媒を減圧下に除去し、粗残渣をａｑ  ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）に懸濁しかつ１５分間攪拌した。内容物を再度濾過し、そして固体のフィルターケーキを水で洗浄した。収集した黄色固形物をジエチルエーテル（５０ｍＬ）とともに摩砕して、最終生成物（５．５ｇ、５７％）を淡黄色固形物として提供した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４１（ｓ、１Ｈ）、８．２８（ｓ、１Ｈ）、７．７８（ｄｄ、１Ｈ）、７．５８（ｍ、１Ｈ）、７．３５（ｔ、１Ｈ）、３．９７（ｓ、４Ｈ）、３．２２（ｔ、２Ｈ）、３．００（ｓ、２Ｈ）、１．９３（ｔ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．２６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９２．３。
【００８７】
段階５．４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オンの製造
【００８８】
【化１３】
2008518040.tif 000015
【００８９】
攪拌酢酸／水溶液（４：１、３００ｍＬ）に、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］−４−アミン（５．５ｇ、１４ｍｍｏｌ）を添加し、そして内容物を８０℃で１２時間加熱した。暗色混合物をｒｔに冷却し、そして溶媒を減圧下に除去した。粗残渣をａｑ  ＮａＨＣＯ３（１Ｎ、１００ｍＬ）に懸濁し、１０分間攪拌しかつ濾過した。濾過した固形物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）とともに摩砕して、所望の生成物（４．８ｇ、９８％）を暗黄色固形物として提供した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５３（ｓ、１Ｈ）、８．４６（ｓ、１Ｈ）、７．８７（ｄｄ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、１Ｈ）、３．７３（ｓ、２Ｈ）、３．４３（ｔ、２Ｈ）、２．６４（ｓ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．０１分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４８．２。
【００９０】
段階６．４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−８−ジメチルアミノメチレン−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オンの製造
【００９１】
【化１４】
2008518040.tif 000016
【００９２】
トルエン（８０ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（８．０ｇ、０．０２３ｍｏｌ）のスラリーを調製し、そしてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（３．２ｍＬ、０．０２４ｍｏｌ）を添加した。橙色のスラリーが、油浴中８０℃での加熱に際して暗紫色に変わった。１時間後に溶媒を真空中で蒸発させて中褐色固形物を生じ、それを直接次段階に持ち込んだ。ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．０６分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０３．２。
【００９３】
段階７．２−｛６−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−４，５−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミド［５’，４’：４，５］チエノ［２，３−ｅ］インダゾル−２−イル｝エタノールの製造
【００９４】
【化１５】
2008518040.tif 000017
【００９５】
エタノール（９３ｍＬ）中の４−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−８−ジメチルアミノメチレン−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（０．０２３ｍｏｌ）の攪拌溶液にヒドロキシエチルヒドラジン（２．１４ｇ、０．０２４ｍｏｌ）を添加した。スラリーを油浴中５０℃で３時間加熱し、そしてその後一夜室温に冷まさせた。反応混合物を濾過し、そして生じる固形物をブフナー漏斗上で２時間の真空濾過により乾燥して、橙色粉末状固形物（７．６８ｇ、８０％）を生じた。１Ｈ  ＮＭＲは位置異性体の混合物（実施例１に有利に３：２）を示す。アルコールの上のバッチ（７．２ｇ）を別のバッチ（３．０ｇ、実施例１に有利に３：１の位置異性体比）と合わせ、そしてメトキシベンゼン（２５０ｍＬ）中還流で均一近くまで加熱した。混合物を８０℃に冷却し、そして、内的温度を約８０℃に維持しつつＥｔＯＨ（１００ｍＬ）を添加した。混合物を攪拌しながら室温に冷まさせた。橙色固形物が沈殿し、そして真空濾過により収集した（８．５ｇ、実施例１に有利に７：３の位置異性体比）。収集した固形物をフラスコに移し、メトキシベンゼン（３００ｍＬ）とともに還流に再加熱し、約８０℃に冷却し、そしてＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）で希釈した。混合物を一夜室温に冷まさせた。橙色固形物を真空濾過により収集した（３．８ｇ、ＬＣにより９３％位置異性的純度）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５８（ｓ、１Ｈ）、８．３９（ｓ、１Ｈ）、７．９４（ｓ、１Ｈ）、７．８８（ｍ、１Ｈ）、７．６１（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、１Ｈ）、４．９３（ｔ、１Ｈ）、４．１１（ｔ、２Ｈ）、３．７５（ｄｔ、２Ｈ）、３．３９（ｔ、２Ｈ）、２．９４（ｔ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．７８分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１６．４。
【００９６】
段階８．２−［６−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザシクロペンタ［ａ］フルオレン−２−イル］−エタノールの製造
【００９７】
【化１６】
2008518040.tif 000018
【００９８】
ジオキサン（２５ｍＬ）中の２−｛６−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−４，５−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミド［５’，４’：４，５］チエノ［２，３−ｅ］インダゾル−２−イル｝エタノール（２．６ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノベンゾキノン（２．１ｇ、９．３８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を９０℃に２．５時間加熱した。固形物を濾過し、そしてカラムクロマトグラフ装置（９０％ジクロロメタン／１０％メタノール）により分離して、２−［６−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザシクロペンタ［ａ］フルオレン−２−イル］−エタノールを褐色固形物（３．０ｇ、若干の持ち越されたシリカゲルを含有して収率１１６％）として生じた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．２５（ｂｓ、１Ｈ）、８．８０（ｓ、１Ｈ）、８．６０（ｓ、１Ｈ）、８．４０（ｔ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、１Ｈ）、４．５０（ｔ、２Ｈ）、３．９０（ｔ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝２．９５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１４．２。
【００９９】
［実施例２］
メタンスルホン酸２−［６−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザ−シクロペンタ［ａ］フルオレン−２−イル］−エチルエステルの製造
【０１００】
【化１７】
2008518040.tif 000019
【０１０１】
アセトニトリル（６０ｍＬ）中の２−［６−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザシクロペンタ［ａ］フルオレン−２−イル］−エタノール（２．５３ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、無水メタンスルホン酸（２．１ｇ、１２．２３ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．９６５ｇ、１２．２３ｍｍｏｌ）を添加した。それを室温で２時間攪拌した。固形物を濾過し、そしてジエチルエーテルとともにさらに摩砕し、一夜オーブン乾燥して、メタンスルホン酸２−［６−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザ−シクロペンタ［ａ］フルオレン−２−イル］−エチルエステルを褐色固形物（２．０ｇ、６６．５％）として生じた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３０（ｂｓ、１Ｈ）、８．９０（ｓ、１Ｈ）、８．８０（ｔ、１Ｈ）、８．４０（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｍ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、１Ｈ）、５．００（ｔ、２Ｈ）、３．９０（ｔ、２Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．２９分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９２．１。
【０１０２】
［実施例３］
（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−｛２−［２−（２−メタンスルホニル−エチルアミノ）−エチル］−２Ｈ−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザ−シクロペンタ［ａ］フルオレン−６−イル｝−アミンの製造
【０１０３】
【化１８】
2008518040.tif 000020
【０１０４】
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のメタンスルホン酸２−［６−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニルアミノ）−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザ−シクロペンタ［ａ］フルオレン−２−イル］−エチルエステル（１９０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（９９ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）および２−アミノエチルメチルスルホン（１４３ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を添加した。それを８０℃に一夜加熱した。粗混合物をメタノール（５ｍＬ）で希釈し、そしてそれを調製的ＨＰＬＣにより分離した。調製的ＨＰＬＣ画分を収集しかつ溶媒を真空により除去した。固形物を酢酸エチル（１５ｍＬ）および水（１０ｍＬ）により再溶解し、飽和炭酸ナトリウム溶液（３ｍＬ）を添加した。有機層を分離しかつ硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒の蒸発が（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−｛２−［２−（２−メタンスルホニル−エチルアミノ）−エチル］−２Ｈ−１０−チア−２，３，７，９−テトラアザ−シクロペンタ［ａ］フルオレン−６−イル｝−アミンを白色固形物（１０．３ｍｇ、５．１％）として生じた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．２５（ｂｓ、１Ｈ）、８．８０（ｄ、１Ｈ）、８．６０（ｄ、１Ｈ）、８．４０（ｔ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、１Ｈ）、７．６０（ｔ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、１Ｈ）、４．６０（ｔ、２Ｈ）、３．２０（ｔ、２Ｈ）、２．９０（ｓ、３Ｈ）、２．１０（ｔ、２Ｈ）、２．０５（ｔ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ
ＲＴ＝２．８９分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１９．２。
【０１０５】
［実施例２１］
２−［６−（｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝アミノ）−３Ｈ−ピリミド［５’，４’：４，５］チエノ［２，３−ｅ］インダゾル−３−イル］エタノールの製造
【０１０６】
【化１９】
2008518040.tif 000021
【０１０７】
段階１．Ｎ−（３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミン）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］−４−アミンの製造
【０１０８】
【化２０】
2008518040.tif 000022
【０１０９】
２−プロパノール（３００ｍＬ）に、４−クロロ−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］（２０．７ｇ、７３．２ｍｍｏｌ）、３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミン（１８．４ｇ、７３．２ｍｍｏｌ）およびジオキサン中ＨＣｌ（４Ｎ、０．９２ｍＬ）を連続して添加した。懸濁液を８０℃に加熱しながら攪拌し、それに際して内容物が褐色かつ均一になった。１５時間後に暗橙黄色の不均一な混合物を加熱から除去し、そしてｒｔに冷まさせた。内容物を濾過しかつ収集した固体生成物を真空下で乾燥した。濾液を減圧下に濃縮しそして残渣をＣＨ３ＯＨ（５０ｍＬ）に懸濁し、それに際して生成物の第二の収穫物（ｃｒｏｐ）の形成が結果として起こる。第二の収穫物を収集し、そしてこの濾液から第三の収穫物もまた得ることができた。固体生成物の収穫物を合わせて、最終生成物（３３．５ｇ、９２％）を灰白色固形物として提供した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．９０（ｔ、２Ｈ）、３．００（ｓ、２Ｈ）、３．２６（ｔ、２Ｈ）、３．９７（ｓ、４Ｈ）、５．２２（ｓ、２Ｈ）、７．１１−７．３０（ｍ、４Ｈ）、７．４１−７．５５（ｍ、２Ｈ）、７．７４（ｓ、１Ｈ）、８．３３（ｓ、１Ｈ）、８．３９（ｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．６３分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９８．３。
【０１１０】
段階２．Ｎ−（３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミン）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オンの製造
【０１１１】
【化２１】
2008518040.tif 000023
【０１１２】
攪拌酢酸／Ｈ２Ｏ溶液（４：１、６００ｍＬ）に、Ｎ−（３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミン）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−スピロ［１−ベンゾチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７，２’−［１，３］ジオキソラン］−４−アミン（３４．８ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）を添加し、そして内容物を８０℃で１６時間加熱した。暗色混合物をｒｔに冷却し、そして溶媒を減圧下に除去した。粗残渣を１Ｎ  ＮａＨＣＯ３  ａｑ溶液（５００ｍＬ）に懸濁し、１０分間攪拌しかつ濾過した。収集した固形物をＨ２Ｏ（５００ｍＬ）で再度活発に洗浄し、そして濾過して所望の生成物を提供し、それを４０℃で加熱しながら２４時間真空乾燥した。最終生成物を橙色固形物として収集した（３０．８ｇ、９７％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．６６（ｔ、２Ｈ）、３．４４（ｔ、２Ｈ）、３．７４（ｓ、２Ｈ）、５．２３（ｓ、２Ｈ）、７．１４−７．３２（ｍ、４Ｈ）、７．４０−７．５２（ｍ、２Ｈ）、７．７５（ｄ、１Ｈ）、８．３４（ｓ、１Ｈ）、８．３９（ｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．５０分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝４５４．１。
【０１１３】
段階３．Ｎ−（３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミン）−８−ジメチルアミノメチレン−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オンの製造
【０１１４】
【化２２】
2008518040.tif 000024
【０１１５】
１５０ｍＬのトルエンに、Ｎ−（３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミン）−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（９．６ｇ、１８ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド−ジメチルアセタール（４．７８ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）を添加した。内容物を７０℃で４時間攪拌し、その時間の後にそれらをｒｔに冷まさせた。不均一な混合物を濾過し、収集した固形物をアセトン（５ｍＬ）で洗浄しかつ高真空下で乾燥した。最終生成物を黄色固形物として収集した（７．０ｇ、７０％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（主回転異性体）δ
２．５３（ｔ、２Ｈ）、３．１０（ｓ、６Ｈ）、３．２４（ｔ、２Ｈ）、５．２１（ｓ、２Ｈ）、７．１０−７．２１（ｍ、３Ｈ）、７．２６−７．３３（ｍ、２Ｈ）、７．４０−７．５０（ｍ、２Ｈ）、７．７５（ｓ、１Ｈ）、８．１５−８．４０（ｂｒｏａｄ  ｓ、１Ｈ）、８．３０（ｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．７５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５０９．２。
【０１１６】
段階４．２−［６−（｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝アミノ）−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−ピリミド［５’，４’：４，５］チエノ［２，３−ｅ］インダゾル−３−イル］エタノールの製造
【０１１７】
【化２３】
2008518040.tif 000025
【０１１８】
２００ｍＬのエタノールに、Ｎ−（３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミン）−８−ジメチルアミノメチレン−５，８−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］チエノ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（１２．０ｇ、２３．６ｍｍｏｌ）、およびその後５０ｍＬのエタノール溶液として２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−ヒドロキシエチルヒドラジン（６．２３ｇ、３５．４ｍｍｏｌ）を５分にわたり滴下漏斗を介して添加した。反応体を還流で２４時間攪拌し、その時間の後にそれらを加熱から除去しかつｒｔに冷まさせた。不均一な混合物をその後０℃に冷却し、そして淡黄褐色固形物を濾過により取り出し、高真空下で乾燥して９．８ｇ（６５％）の固形物を提供した。この固形物をその後ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解しかつ０℃に冷却した。攪拌懸濁液に、ＴＦＡ（６０ｍＬ、９９％）を滴下漏斗を介して１５分の期間にわたり添加し、その時間の間に内容物が暗褐色かつ均一になった。混合物を１２時間にわたりｒｔに温めつつ攪拌した。内容物をその元の容量の約１０％に濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ、２：１）で希釈し、そして０℃に冷却しながら攪拌した。該攪拌混合物に１７５ｍＬのａｑ  １Ｎ  ＮａＯＨを添加してｐＨ＝１０の混合物を提供し、それは塩基の完全な添加に際し不均一になった。該不均一な混合物を濾過し、そしてフィルターケーキを水で洗浄した。収集した固形物をエタノールから再結晶して最終生成物（４．０ｇ、６７％、２段階について４４％）を淡黄褐色固形物として供給した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．０２（ｔ、２Ｈ）、３．３３（ｔ、２Ｈ）、３．６６（ｍ、２Ｈ）、４．１２（ｍ、２Ｈ）、４．８７（ｍ、１Ｈ）、５．２４（ｓ、２Ｈ）、７．１０−７．３０（ｍ、４Ｈ）、７．４０−７．５３（ｍ、２Ｈ）、７．６１（ｓ、１Ｈ）、７．７３（ｓ、１Ｈ）、８．３１（ｓ、１Ｈ）、８．３８（ｓ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．３０分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５２２．１。
【０１１９】
段階５．２−［６−（｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝アミノ）−３Ｈ−ピリミド［５’，４’：４，５］チエノ［２，３−ｅ］インダゾル−３−イル］エタノールの製造
【０１２０】
【化２４】
2008518040.tif 000026
【０１２１】
ジオキサン（１ｍＬ）中の２−［６−（｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝アミノ）−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−ピリミド［５’，４’：４，５］チエノ［２，３−ｅ］インダゾル−３−イル］エタノール（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノベンゾキノン（６５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を９０℃に２．５時間加熱した。固形物を濾過し、そしてカラムクロマトグラフ装置（９０％ジクロロメタン／１０％メタノール）により分離して、若干の不純物を含む最終生成物を生じた（ＬＣＭＳにより約７５％純度）。それをその後メタノール中で再結晶して、純粋な２−［６−（｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝アミノ）−３Ｈ−ピリミド［５’，４’：４，５］チエノ［２，３−ｅ］インダゾル−３−イル］エタノールを褐色固形物（７．５ｍｇ、収率７．５％）として生じた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１０（ｓ、１Ｈ）、８．５０（ｄ、２Ｈ）、８．４５（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、１Ｈ）、７．８０（ｓ、１Ｈ）、７．５０（ｄ、１Ｈ）、７．４５（ｍ、１Ｈ）、７．３５−７．２０（ｍ、４Ｈ）、５．２５（ｓ、２Ｈ）、４．９０（ｂｓ、１Ｈ）、４．６０（ｔ、２Ｈ）、３．８０（ｔ、２Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．４５分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝５２０．２。
【０１２２】
中間体の製造
１−（２−ヒドロキシエチル）ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの製造
【０１２３】
【化２５】
2008518040.tif 000027
【０１２４】
表題化合物は文献（Ｋｒａｐｃｈｏ，Ａ．Ｐ．Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．２０００、３７、４７）に従って製造した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ３．８１（ｔ、２Ｈ）、３．７３（ｂｒ、３Ｈ）、３．５７（ｔ、２Ｈ）、１．４８（ｓ、９Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝１．７４分＠１００％水；［Ｍ＋Ｈ］＋＝１７６．９。
２−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−エチルヒドラジンの製造
【０１２５】
【化２６】
2008518040.tif 000028
【０１２６】
３００ｍＬのトルエンに、（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）アセトアルデヒド（９．６ｇ、４９．６ｍｍｏｌ）およびカルバジン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．７５ｇ、４９．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６５℃で１２時間攪拌し、その時間の後に内容物を加熱から除去しかつｒｔに冷まさせた。溶媒を減圧下に除去して無色粘性油状物（１４．２ｇ、９７％）を提供した。この油状物をエタノール（２２０ｍＬ）に溶解し、該溶液を１ＬのＰａｒｒ容器に移し、そして２．８４ｇのＰｄ／Ｃ（１０％）を添加した。混合物を５０ｐｓｉのＨ２雰囲気のＰａｒｒ振とう器中で１５時間水素化した。内容物をＣｅｌｉｔｅ（Ｒ）の薄いパッドを通して濾過して触媒を除去し、そして濾液を真空中で濃縮して最終生成物（１４ｇ、９８％）を白色固形物として提供した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２）δ０．０６（ｓ、６Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、１．４３（ｓ、９Ｈ）、２．９０（ｔ、２Ｈ）、３．６９（ｔ、２Ｈ）、４．１６（ｂｒ、１Ｈ）、６．３４（ｂｒ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝３．１１分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９０．８。
３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミンの製造
【０１２７】
【化２７】
2008518040.tif 000029
【０１２８】
９０ｍＬのＣＨ３ＣＮに、２−クロロ−４−ニトロフェノール（１５ｇ、８６．４ｍｍｏｌ）、次いで炭酸カリウム（１７．９ｇ、１２９．６ｍｍｏｌ）を添加した。攪拌懸濁液に、１０ｍＬの臭化３−フルオロ−ベンジル（１６．３ｇ、８６．４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ溶液を滴下漏斗を介して添加した。内容物を７０℃で１８時間攪拌かつ加熱し、その時間の後に明黄色混合物をｒｔに冷まさせた。該黄色内容物をＨ２０（２００ｍＬ）上に注ぎかつ攪拌し、それに際して固形物の形成が発生した。固形物を濾過し、そしてフィルターケーキを追加のＨ２０（５０ｍＬ）で洗浄した。収集した固形物を真空中で乾燥して、２−クロロ−１−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−４−ニトロ−ベンゼン（２３ｇ、９４％）を白色固形物として生じた。
【０１２９】
２−クロロ−１−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−４−ニトロ−ベンゼン（１０ｇ、３５．５ｍｍｏｌ）を、５００ｍＬフラスコ中の５０ｍＬの酢酸および１５０ｍＬのＥｔＯＡｃに懸濁した。鉄（９．９ｇ（１７７．５ｍｍｏｌ）をこの懸濁液に添加し、そして混合物をｒｔで一夜攪拌した。反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（Ｒ）の薄いパッドを通して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、そして飽和Ｎａ２ＣＯ３  ａｑ溶液で中和し、次いでＥｔＯＡｃ抽出した。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥しかつ真空中で濃縮した。生じる粗物質を、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３−クロロ−４−（３−フルオロ−ベンジルオキシ）−フェニルアミンを褐色固形物［８．５ｇ、９５％、ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４、３０％ＥｔＯＡｃ／ＨＥＸ．（３：７）］として生じた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ４．９４（ｓ、２Ｈ）、５．００（ｓ、２Ｈ）、６．４０（ｄｄ、１Ｈ）、６．６０（ｓ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、１Ｈ）、７．１０−７．１８（ｍ、１Ｈ）、７．２０−７．２８（ｍ、２Ｈ）、７．３７−７．４４（ｍ、１Ｈ）。
３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）−フェニルアミンの製造
【０１３０】
【化２８】
2008518040.tif 000030
【０１３１】
２−クロロ−４−ニトロフェノール１０ｇ（５７．６ｍｍｏｌ、１等量）、２−（クロロメチル）ピリジン塩化水素９．４５ｇ（５７．６ｍｍｏｌ、１等量）、炭酸セシウム（４１．３ｇ、１２６．８ｍｍｏｌ、２．２等量）およびヨウ化ナトリウム８．６４ｇ（５７．６ｍｍｏｌ、１等量）を２００ｍＬアセトニトリルに懸濁した。反応混合物を６０℃で５時間攪拌した。生じる懸濁液を濾過し、そして４００ｍＬの水で洗浄して２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェノキシメチル）−ピリジン（８ｇ、５２％）を赤色固形物として生じた。
【０１３２】
１００ｍＬの酢酸および５０ｍＬのＥｔＯＡｃ中の２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェノキシメチル）−ピリジン（８ｇ、３０．２ｍｍｏｌ、１等量）および８．４４ｇの鉄（１５１．１ｍｍｏｌ、５等量）をｒｔで一夜攪拌した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（Ｒ）のパッドを通して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、そして飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で中和した。該溶液をＥｔＯＡｃで抽出し、そして有機層を塩水で洗浄しかつ真空中で濃縮した。生じる粗物質を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：７）で溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）−フェニルアミン（３．２ｇ、５２％）を白色固形物として生じた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ５．１８（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｄｄ、１Ｈ）、６．７６（ｄ、１Ｈ）、．６．８０（ｄ、１Ｈ）、７．２２（ｍ、１Ｈ）、７．６４（ｄ、１Ｈ）、７．７３（ｔｄ、１Ｈ）、８．５５（ｍ、１Ｈ）；ＬＣＭＳ  ＲＴ＝０．８９分；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３５．１。
【０１３３】
上述された方法、若しくはそれに類似の方法を使用することにより、および適切な出発原料を代わりに使用することにより、本発明の他の実施例を製造した。実施例を下の表１に要約する。
【０１３４】
【表１】
2008518040.tif 000031
【０１３５】
【表２】
2008518040.tif 000032
【０１３６】
【表３】
2008518040.tif 000033
【０１３７】
【表４】
2008518040.tif 000034
【０１３８】
【表５】
2008518040.tif 000035
【０１３９】
【表６】
2008518040.tif 000036
【０１４０】
【表７】
2008518040.tif 000037
【０１４１】
【表８】
2008518040.tif 000038
【０１４２】
【表９】
2008518040.tif 000039
【０１４３】
【表１０】
2008518040.tif 000040
【０１４４】
【表１１】
2008518040.tif 000041
【０１４５】
Ｂ．生理学的活性の評価
本発明の化合物の利用性は、例えば下述されるｉｎ  ｖｉｔｒｏチロシンキナーゼ阻害アッセイでのｉｎ  ｖｉｔｒｏでのそれらの活性により具体的に説明され得る。
【０１４６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏチロシンキナーゼ阻害アッセイ
本発明の化合物の細胞系でのＥＧＦＲ（ｅｒｂＢ１）およびＨＥＲ２（ｅｒｂＢ２）のチロシンキナーゼ活性を阻害する能力を、下に示されるＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫測定法）を使用して測定した。
【０１４７】
Ａ４３１細胞中でのＨＥＲ１のチロシンリン酸化の阻害
材料：
本質的に脂肪酸を含まないウシアルブミン：ＳＩＧＭＡ  ＃Ａ９２０５  ３０％溶液
９６ウェル組織培養処理プレート
９６ウェルＥＩＡ／ＲＩＡプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ  ＃９０１８
ブロッキングのためのＢＳＡ  Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ：＃５０−６１−００カルシウムおよびマグネシウムを含まないＤＰＢＳ：Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
＃１４１９０
洗浄緩衝液：ＴＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ
ＲｈＥＧＦ：Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ３１３４２７−０５１
Ｈｅｒ−１  Ａｂ：Ｕｐｓｔａｔｅ抗ＥＧＦ受容体（中和）マウスモノクローナルＩｇＧクローンＬＡ１＃０５−１０１。
Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  リン酸化型特異的抗ＥＦＧ受容体（ｐＹ１０６８）：＃４４−７８８Ｇ
Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＥＣＬ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼ結合抗体：＃ＮＡ９３４
ＴＭＢ基質：Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ−８６６５
【０１４８】
溶解緩衝液（氷上保存）：
ＴＢＳ
１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００
１ｍＭ  ＥＤＴＡ
１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム
１０ｍＭ  β−グリセロールリン酸
１ｍＭフッ化ナトリウム
１０μｇ／ｍｌアプロチニン
１×Ｒｏｃｈｅ完全無ＥＤＴＡプロテアーゼインヒビターカクテル（１錠／２ｍＬ  Ｈ２０＝２５×）
【０１４９】
方法：注意：全部の抗体プレート洗浄はプレート洗浄機で実施した。
ＥＧＦはＺｙｍａｒｋ自動液体取扱装置を使用して実施した。
【０１５０】
第１日
血清含有培地中の３０ＫのＡ４３１細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種する。
３７°Ｃでインキュベートする。
【０１５１】
抗体プレート：Ｈｅｒ−１中和抗体をＰＢＳで１μｇ／ｍＬの最終濃度に希釈する。
１００μＬ／ウェルを９６ウェルＥＩＡ／ＲＩＡプレートに添加する。回転機上４℃で一夜インキュベートする。
【０１５２】
第２日
抗体プレートをＢＳＡブロッキングする：３％ＫＰＬ  ＢＳＡを含有するＴＢＳＴのストックを作成する。プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄する。１００μＬ／ウェルのＴＢＳＴ／３％ＢＳＡを添加する。
３７℃で最低１時間インキュベートする。
【０１５３】
０．１％ＢＳＡを含有する基礎培地のストックおよび滅菌フィルターを作成する。
プレートを基礎培地で２×１００μＬ／ウェル洗浄し、そして１００μＬ／ウェルの基礎培地／０．１％ＢＳＡを添加する。
３７°Ｃで２時間インキュベートする。
【０１５４】
最終濃度の３倍濃度のマスター化合物希釈プレートを創製する。
【０１５５】
初期濃度は０．１％ＢＳＡ／培地中である。その後の希釈は、初期薬物濃度に見出されるものと一致するように、０．１％ＢＳＡ／０．３％ＤＭＳＯ含有培地で実施した。薬物を含まない比較のため２列は薬物を含まないまま保つ。これらの列は培地／０．１％ＢＳＡ／ＤＭＳＯのみを含有すべきである。５０μＬ／ウェルを、０．１％ＢＳＡ／培地を含有する細胞プレートに移す。
３７°Ｃで２時間インキュベートする。
【０１５６】
ＥＧＦ刺激：０．１％ＢＳＡ／培地中でｒｈＥＧＦの５００ｎｇ／ｍｌストック（１０×）を作成する。１つの薬物を含まない列を未刺激のまま保ち、１５μＬ／ウェルを細胞プレートの残りに添加する（最終５０ｎｇ／ｍｌ）。各化合物について、その化合物の全濃度について等しい刺激時間を保証するため、一連の薬物濃度全体に同時に添加する。定期的に揺らしつつｒ．ｔ．で５分インキュベートする。直ちに氷上に５分置く。
【０１５７】
培地を除去し、そしてプレートを冷ＤＰＢＳで２×１５０ｕＬ／ウェル洗浄する。１５０μＬ／ウェルのプロテアーゼインヒビター含有冷溶解緩衝液を添加する。氷上で回転して３０分インキュベートする。
【０１５８】
抗体被覆プレート：プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄する。１００μＬ／ウェルのライセートを抗体被覆プレートに移す。回転して４℃で一夜インキュベートする。
【０１５９】
第３日
プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄し、そしてＴＢＳ／３％ＢＳＡ  １ｍｌあたり希釈１ｍｌあたりＡｂ１００ｎｇに希釈した１００μＬ／ウェルのＥＧＦＲリン酸化型特異的Ａｂを添加する。回転機上ｒ．ｔ．で１時間インキュベートする。
【０１６０】
プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄し、そして１００μＬ／ウェルの９０００倍に希釈した抗ウサギＩｇＧ  Ａｂを添加する。
回転機上ｒ．ｔ．で１時間インキュベートする。
【０１６１】
プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄し、そして５０μＬ／ウェルのＴＭＢ基質を添加する。発色（用量応答を維持する間青色）するまでｒ．ｔ．でインキュベートする。１００μＬ／ウェルの１Ｍ  ＨＣＬで停止し、そして４５０ｎｍで読み取る。
【０１６２】
ＢＴ４７４細胞中でのＨＥＲ２のチロシンリン酸化の阻害
材料：
ＲＰＭＩ  １６４０  Ｇｉｂｃｏ  ＃１１８７５−０９３、１０％ＦＣＳ中で増殖させたＢＴ４７４細胞
本質的に脂肪酸を含まないウシ：アルブミン  ＳＩＧＭＡ  ＃Ａ９２０５  ３０％溶液
９６ウェル組織培養処理プレート
ＥＩＡ／ＲＩＡ  ９６ウェルプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ  ＃９０１８
ＨＥＲ２／ａｂ−２：ＮｅｏＭａｒｋｅｒｓ，Ｉｎｃ．ｃ−ｅｒｂＢ−２／ＨＥＲ−２／ｎｅｕ癌タンパク質／Ａｂ−２（クローン９Ｇ６．１０）＃ＭＳ−２２９−ＰＡＢＸ
ＨＥＲ２／Ａｂ−１８：ＮｅｏＭａｒｋｅｒｓ，Ｉｎｃ．ｃ−ｅｒｂＢ−２／ＨＥＲ−２／ｎｅｕビオチン標識（リン酸化型特異的）Ａｂ−１８（クローンＰＮ２Ａ）：＃ＭＳ−１０７２−ＢＯ
Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈストレプトアビジン−ワサビペルオキシダーゼ複合物：＃ＲＰＮ  １２３１
ＴＭＢ基質：Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ−８６６５
洗浄緩衝液：ＴＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ
溶解緩衝液：
ＴＢＳ
１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００
１ｍＭ  ＥＤＴＡ
１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム
１０ｍＭ  β−グリセロールリン酸
１ｍＭフッ化ナトリウム
１０ｕｇ／ｍｌアプロチニン
１×Ｒｏｃｈｅ完全無ＥＤＴＡプロテアーゼインヒビターカクテル（１錠／２ｍｌ  Ｈ２０）
【０１６３】
方法：
第１日
組織培養処理９６ウェル皿の列２〜１２に３０ＫのＢＴ４７４細胞／ウェル（ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳ）を播種する。
列１に、Ｓ／Ｎ係数として作用するために１００μＬの増殖培地を添加する。
３７°Ｃでインキュベートする。
【０１６４】
抗体プレートを被覆する：Ｈｅｒ−２  Ａｂ−２をＰＢＳで２μｇ／ｍｌの最終濃度に希釈する。
１００μＬ／ウェルを９６ウェルＥＩＡ／ＲＩＡプレートに添加する。回転機上４℃で一夜インキュベートする。
【０１６５】
第２日
抗体プレートをブロッキングする：プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄する。１００μＬ／ウェルのＴＢＳＴ／３％ＢＳＡを添加する。
３７°Ｃを最低１時間インキュベートする。
０．１％ＢＳＡを含有する基礎培地のストックおよび滅菌フィルターを作成する。
細胞プレートを基礎培地で２×１００μＬ／ウェル洗浄し、そして１００μＬ／ウェルの基礎培地／０．１％ＢＳＡを添加する。
３７℃をインキュベートする。３７で２時間インキュベートする。
【０１６６】
所望の最終濃度の３倍濃度のマスター化合物希釈プレートを創製する。
初期濃度は０．１％ＢＳＡ／培地中である。その後の希釈は、初期薬物濃度に見出されるものと一致するように、０．１％ＢＳＡ／０．３％ＤＭＳＯ含有培地で実施した。薬物を含まない比較のため２列は薬物を含まないまま保つ。これらの列は培地／０．１％ＢＳＡ／ＤＭＳＯのみを含有すべきである。５０μＬ／ウェルを、０．１％ＢＳＡ／培地を含有する細胞プレートに移す。
３７℃で２時間インキュベートする。
【０１６７】
培地を除去し、そしてプレートを冷ＤＰＢＳで２×１５０μＬ／ウェル洗浄する。１５０μＬ／ウェルのプロテアーゼインヒビター含有冷溶解緩衝液を添加する。氷上で３０分回転してインキュベートする。
【０１６８】
ブロッキングした抗体被覆プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄する。１００μＬ／ウェルのライセートを抗体被覆プレートに移す。回転機上４℃で一夜インキュベートする。
【０１６９】
第３日
プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄し、そしてＴＢＳ／３％ＢＳＡで２０ｎｇ／ｍＬに希釈した１００μＬ／ウェルのビオチン標識ホスホＨｅｒ−２抗体を添加する。回転機上ｒ．ｔ．で１時間インキュベートする。
【０１７０】
プレートをＴＢＳＴで３×２００ｕＬ／ウェル洗浄し、そしてＴＢＳ／３％ＢＳＡで１００ｎｇ／ｍＬに希釈した１００ｕＬ／ウェルのストレプトアビジン−ワサビペルオキシダーゼ複合物を添加する。回転機上ｒ．ｔ．で１時間インキュベートする。
【０１７１】
プレートをＴＢＳＴで３×２００μＬ／ウェル洗浄し、そして５０μＬ／ウェルのＴＭＢ基質を添加する。発色（用量応答を維持する間青色）するまでｒ．ｔ．でインキュベートする。１００μＬ／ウェルの１Ｍ  ＨＣＬで停止し、そして４５０ｎｍで読み取る。
【０１７２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞増殖アッセイ
本発明の化合物の利用性は、例えば、下述されるｉｎ  ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞増殖アッセイでのｉｎ  ｖｉｔｒｏでのそれらの活性により示し得る。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞増殖アッセイでの活性と臨床の設定での抗腫瘍活性の間の連関は、当該技術分野で非常に良好に確立されている。例えば、タキソール（Ｓｉｌｖｅｓｔｒｉｎｉら  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  １９９３、１１（６）、５２８−３５）、タキソテール（Ｂｉｓｓｅｒｙら
Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  １９９５、６（３）、３３９）およびトポイソメラーゼ阻害剤（Ｅｄｅｌｍａｎら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９６、３７（５）、３８５−９３）の治療上の利用性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ腫瘍増殖アッセイの使用で示された。
【０１７３】
本明細書に記述される化合物および組成物の多くは、以下の指定された細胞株のいずれかでＩＣ５０≦５０μＭを伴う抗増殖活性を表し、そして従って過剰増殖を伴う障害を予防若しくは処置するのに有用である。以下のアッセイは、本明細書で同定される障害の処
置に関する化合物の活性を測定し得る方法の一である。
【０１７４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞増殖アッセイ
本発明の化合物を試験するのに使用される腫瘍細胞増殖アッセイは、細胞増殖の阻害を測定する、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｒ）により開発されたＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏｗ（Ｒ）発光細胞生存率アッセイと呼ばれる読み出しを必要とする（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ＢＡ“Ａ  Ｇｒｏｗｉｎｇ  Ｉｓｓｕｅ：Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ，Ｍｏｄｅｒｎ  ｋｉｔｓ  ｅａｓｅ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ”Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ  ２００１、１５（１３）、２６、およびＣｒｏｕｃｈ，ＳＰら、“Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ＡＴＰ  ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｓ  ａ  ｍｅａｓｕｒｅ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ａｎｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９９３、１６０、８１−８８）。発光シグナルの生成は存在するＡＴＰの量に対応し、その量は代謝活性の（増殖）細胞の数に直接比例する。
【０１７５】
Ａ４３１細胞（ヒト類表皮癌、ＡＴＣＣ  ＃  ＨＴＢ−２０）およびＢＴ４７４（ヒト乳癌、ＡＴＣＣ  ＃  ＣＲＬ−１５５５）を、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中で９６ウェル黒色透明底組織培養プレート中に２．５×１０３細胞／ウェルの密度で播種し、そして３７℃でインキュベートした。２４時間後、試験化合物を、０．１％の最終ＤＭＳＯ濃度の連続希釈中で、試験される化合物の活性に依存して１００μｍくらい高くから６４ｐＭくらい低くまでの最終濃度範囲で添加する。細胞は、試験化合物の添加後、完全増殖培地中３７℃で７２時間インキュベートした。７２時間の薬物曝露後に、プレートをおよそ３０分間室温に平衡化した。その後、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ（Ｒ）アッセイキットを使用して、１００マイクロリットルの酵素ルシフェラーゼおよびその基質ルシフェリン混合物を含有する溶解緩衝液を各ウェルに添加した。プレートをオービタルシェーカー上で２分間混合して細胞の溶解を確実にし、そして室温で１０分間インキュベートして発光シグナルを安定化した。サンプルは、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅプロトコルを使用してＶＩＣＴＯＲ  ２で読み取り、そしてＡｎａｌｙｚｅ５ソフトウェアで解析してＩＣ５０値を生成させた。本発明の代表的化合物は、本アッセイで腫瘍細胞増殖の阻害を示した。
【０１７６】
ＩＣ５０の決定のため、直線回帰分析を使用して、本アッセイ形式を使用して細胞増殖の５０％阻害をもたらす薬物濃度を決定し得る。選択的な化合物組の抗増殖活性を下に列挙する。Ａ４３１細胞で、実施例１〜７、９〜１１、１４〜１８および２０〜２１は≦５μＭのＩＣ５０を有する一方、実施例８、１２、１３、１９および２２は≦５０μＭのＩＣ５０を有する。ＢＴ４７４細胞で、実施例１〜７、９〜１１、１３〜１８および２０〜２２は≦５μＭのＩＣ５０を有する一方、実施例８、１２および１９は≦５０μＭのＩＣ５０を有する。
【０１７７】
Ｃ．製薬学的組成物に関する操作実施例
本発明の化合物は後に続くとおり製薬学的組成物に転化し得る。
錠剤：
組成：
１００ｍｇの実施例１の化合物、５０ｍｇの乳糖（一水和物）、５０ｍｇのトウモロコシデンプン（天然）、１０ｍｇのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ  ２５）（ＢＡＳＦ（Ｒ）、ドイツ・ルートヴィヒスハーフェンから）および２ｍｇのステアリン酸マグネシウム。
錠剤重量２１２ｍｇ、直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
【０１７８】
製造法：
有効成分、乳糖およびデンプンの混合物を、水中ＰＶＰの５％溶液（ｍ／ｍ）を用いて造粒する。乾燥した後、顆粒をステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を通例の打錠機を使用して成形する（錠剤形式、上を参照されたい）。適用される成形力は典型的に１５ｋＮである。
【０１７９】
経口で投与可能な懸濁剤：
組成：
１０００ｍｇの実施例１の化合物、１０００ｍｇのエタノール（９６％）、４００ｍｇのロディゲル（Ｒｈｏｄｉｇｅｌ）（ＦＭＣ（Ｒ）、米国ペンシルバニア州からのキサンタンガム）および９９ｇの水。
１００ｍｇの本発明の化合物の単一用量が１０ｍＬの経口懸濁剤により提供される。
【０１８０】
製造法：
ロディゲル（Ｒｈｏｄｉｇｅｌ）をエタノールに懸濁し、そして有効成分を懸濁液に添加する。水を攪拌しながら添加する。攪拌は、ロディゲル（Ｒｈｏｄｉｇｅｌ）の膨潤が完了するまで約６時間継続する。
【国際調査報告】
2008518040.tif 000046
2008518040.tif 000047
2008518040.tif 000048
2008518040.tif 000049