(57)【要約】  癌と、血管新生機能に関連する疾患との治療用新規化合物。該化合物と、前記化合物を含む医薬品の組成物と、前記化合物を含む包装された製品とを調製する方法と、（例えば白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、卵巣癌、乳癌、腎臓癌及び前立腺癌のような）癌及び（例えば加齢黄斑変性症、黄斑ジストロフィー及び糖尿病のような）血管新生機能関連疾患を治療するためにこれらの分子を使用する方法と、前記治療を監視する方法と、遺伝子発現をプロファイリングする方法と、細胞増殖、細胞周期、アポトーシス又は遺伝子発現を変調させる方法とが開示される。【選択図】なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＸはＣＨ又はＮであり、ＺはＯ又はＳであり、Ｒはアルキル基、ハロゲン、アセチル基
、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｒ’はアルキル基、ハロゲン、アセチル基
、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｙはアルキル基、複素環芳香族基、脂肪族
基、糖又は脂質である、化学式Ｉの化合物。
【化１】
2008518964.tif 000063
化学式Ｉ
【請求項２】
ＲはＨ、アルキル基又はハロゲンであり、Ｒ’はＨ、アルキル基又はハロゲンであり、
ＸはＣＨ又はＮであり、Ｙは単素環又は複素環を含み、
ＲがＨで、Ｒ’がＨで、ＸがＣＨで、Ｙがピラジニル基かピリジニル基かであるときは
、Ｙは３−、５−又は６−ピラジニル基か、３−、４−、５−又は６−ピリジニル基かで
ある、化学式ＩＩの化合物。
【化２】
2008518964.tif 000064
化学式ＩＩ
【請求項３】
前記アルキル基はメチル基である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記ハロゲンはＦである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｙはピロリル基か、ピリジニル基か、ピラジニル基か、フルオロフェニル基か、キノキ
サリニル基か、ピロロ−キノキサリニル基かである、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＣＨであるか、
Ｒはメチル基でありＲ’はメチル基でありＸはＣＨであるか、
ＲはＦでありＲ’はＨでありＸはＣＨであるか、
ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＮであるかである、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙはピロリル基か、ピリジニル基か、ピラジニル基か、フルオロフェニル基か、キノキ
サリニル基か、ピロロ−キノキサリニル基かである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物は、ＳＣ１４１、ＳＣ１４２、ＳＣ１４３、ＳＣ１４４、ＳＣ１４８、ＳＣ
１６６、ＳＣ１６７、ＳＣ１６８、ＳＣ１６９、ＳＣ１７０、ＳＣ１７１、ＳＣ１７２、
ＳＣ１７３及びＳＣ１７４からなる群から選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物は化学式ＩＩＩの化合物であり、
【化３】
2008518964.tif 000065
化学式ＩＩＩ
Ｒはｏ−Ｃｌ、ｐ−Ｃｌ、ｐ−Ｆ、ｐ−ＣＮ、ｐ−ＯＭｅ又はｐ−ＣＦ３である、請求
項２に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物は、ＳＣ１６０、ＳＣ１６１、ＳＣ１６２、ＳＣ１６３、ＳＣ１６４又はＳ
Ｃ１６５である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物は化学式ＩＶの化合物であり、
【化４】
2008518964.tif 000066
化学式ＩＶ
Ｒ１は３−ＮＨ２でありＲ２は５−ＣＦ３であるか、
Ｒ１は５−ＮＨ２でありＲ２は２−ＮＯ２であるか、
Ｒ１は４−ＮＨ２でありＲ２は３−ＮＯ２であるか、
Ｒ１は２−ＮＨ２でありＲ２は５−ＯＨであるか、
Ｒ１は４−ＮＨ２でありＲ２はＨであるか、
Ｒ１は３−ＮＨ２でありＲ２はＨであるか、
Ｒ１は２−ＮＨ２でありＲ２はＨであるかである、請求項２に記載の化合物。
【請求項１２】
ＸはＣＨ又はＮであり、ＺはＯ又はＳであり、Ｒはアルキル基、ハロゲン、アセチル基
、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｙはアルキル基、複素環芳香族基、脂肪族
基、糖又は脂質である、化学式Ｖの化合物。
【化５】
2008518964.tif 000067
化学式Ｖ
【請求項１３】
前記化合物は、ＳＣ１５３、ＳＣ１５４、ＳＣ１５５、ＳＣ１５６、ＳＣ１５７及びＳ
Ｃ１５８からなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
ＺはＯ又はＳであり、Ｒはアルキル基、ハロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキル基又はＮ
−アルキル基であり、Ｙはアルキル基、複素環芳香族基、脂肪族基、糖又は脂質である、
化学式ＶＩの化合物。
【化６】
2008518964.tif 000068
化学式ＶＩ
【請求項１５】
前記化合物はＳＣ１７５又はＳＣ１７６である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
化学式ＶＩＩの化合物。
【化７】
2008518964.tif 000069
化学式ＶＩＩ
【請求項１７】
化学式ＩＸの化合物（各々１４ａ、１４ｂ、１４ｃ又は１４ｄ）を形成させるためにヒ
ドラジン一水和物を化学式ＶＩＩＩの化合物（１３ａ、１３ｂ、１３ｃ又は１３ｄ）と接
触させるステップと、
ＳＣ１４１を形成させるために１４ａをピロール−２−カルボン酸塩化物と接触させる
ステップと、
ＳＣ１４２を形成させるために１４ａをニコチノイル塩化物塩酸塩と接触させるステッ
プと、
ＳＣ１４３、ＳＣ１４４及びＳＣ１４８を形成させるために２，２’−ジピリルジスル
フィド及びトリフェニルホスフィンの存在下で１４ｂ、１４ｃ及び１４ｄを各々、２−ピ
ラジンカルボン酸と接触させるステップと、
ＳＣ１５３を形成させるために１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチル
カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）／４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）、その
後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／アニソールの存在下で１４ａをＮ−ＢＯＣ−チアゾリ
ジン−４−カルボン酸と接触させるステップと、
ＳＣ１５４を形成させるためにＥＤＣ／ＤＭＡＰ、その後、ＴＦＡ／アニソールの存在
下で１４ａをＮ−ＢＯＣ−β−アラニンと接触させるステップと、
ＳＣ１５５、ＳＣ１５６、ＳＣ１５７及びＳＣ１５８を形成させるためにＥＤＣ／ＤＭ
ＡＰの存在下で１４ａを２−インドールカルボン酸、５−インドールカルボン酸、６−イ
ンドールカルボン酸及び３−インドールカルボン酸と各々接触させるステップと、
ＳＣ１６０、ＳＣ１６１、ＳＣ１６２、ＳＣ１６３、ＳＣ１６４及びＳＣ１６５を形成
させるためにＥＤＣ／ＤＭＡＰ、その後、ＴＦＡ／アニソールの存在下で１４ａをＢｏｃ
−３−アミノ−３−（２−クロロフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４
−クロロフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）プ
ロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４−シアノフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−
アミノ−３−（４−メトキシフェニル）プロパン酸及びＢｏｃ−３−アミノ−３−（４−
トリフルオロメチルフェニル）プロパン酸と各々接触させるステップと、
ＳＣ１６６、ＳＣ１６７、ＳＣ１６８、ＳＣ１６９、ＳＣ１７０、ＳＣ１７１及びＳＣ
１７２を形成させるためにＥＤＣ／ＤＭＡＰ、その後、ＴＦＡ／アニソールの存在下で１
４ａを１５ａ−ｇと各々接触させるステップと、
ＳＣ１７３を形成させるために１４ａを２−キノキサリンカルボン酸、ジクロロメタン
、トリフェニルホスフィン及び２，２’−ジピリジルジスルフィドと接触させるステップ
と、
ＳＣ１７４を形成させるために１４ａをピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−カル
ボン酸、ジクロロメタン、トリフェニルホスフィン及び２，２’−ジピリジルジスルフィ
ドと接触させるステップとを含み、
【化８】
2008518964.tif 000070
化学式ＶＩＩＩ
化学式ＶＩＩＩにおいて、ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＣＨである（１３ａ）か、
Ｒはメチル基でありＲ’はメチル基でありＸはＣＨである（１３ｂ）か、
ＲはＦでありＲ’はＨでありＸはＣＨである（１３ｃ）か、
ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＮである（１３ｄ）かであり、
【化９】
2008518964.tif 000071
化学式ＩＸ
化学式ＩＸにおいてＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＣＨである（１４ａ）か、
Ｒはメチル基でありＲ’はメチル基でありＸはＣＨである（１４ｂ）か、
ＲはＦでありＲ’はＨでありＸはＣＨである（１４ｃ）か、
ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＮである（１４ｄ）かである、化合物を調製する方法
。
【請求項１８】
ＳＣ１４７を形成させるためにヒドラジン一水和物を化学式Ｘの化合物と接触させるス
テップを含む、化合物を調製する方法。
【化１０】
2008518964.tif 000072
化学式Ｘ
【請求項１９】
化合物Ｓ１７５及びＳＣ１７６を形成させるために、９−ヒドラジノ−９Ｈ−ピロロ［
１，２−ａ］インドール及びピリジンをニコチノイル塩化物塩酸塩及びピラジン−２−カ
ルボニル塩化物塩酸塩と各々接触させるステップを含む、化合物を調製する方法。
【請求項２０】
非小細胞肺癌、中枢神経系癌、卵巣癌、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、加齢黄斑変性症、黄
斑ジストロフィー又は糖尿病に罹患している患者か、その発症リスクがある患者かを特定
するステップと、化学式ＸＩ又はＸＩＩの化合物の有効量を前記患者に投与するステップ
とを含み、
【化１１】
2008518964.tif 000073
化学式ＸＩ
【化１２】
2008518964.tif 000074
化学式ＸＩＩ
化学式ＸＩ及びＸＩＩにおいてＡｒは芳香環を含みＨｅｔは複素環を含む、患者を治療
する方法。
【請求項２１】
癌又は血管新生機能関連疾患に罹患している患者か、その発症リスクがある患者かを特
定するステップと、化学式ＩＩの化合物の有効量を前記患者に投与するステップとを含み
、
【化１３】
2008518964.tif 000075
化学式ＩＩ
化学式ＩＩにおいてＲはＨ、アルキル基又はハロゲンであり、Ｒ’はＨ、アルキル基又
はハロゲンであり、ＸはＣＨ又はＮであり、Ｙは単素環又は複素環を含む、患者を治療す
る方法。
【請求項２２】
請求項１、２、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６に記載の化合物
の有効量をそれを必要とする患者に投与するステップを含む、患者を治療する方法。
【請求項２３】
前記患者は、癌又は血管新生機能関連疾患に罹患しているか、その発症リスクがあるか
である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記癌は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、卵巣癌、乳癌
、腎臓癌又は前立腺癌であり、前記血管新生機能関連疾患は、加齢黄斑変性症、黄斑ジス
トロフィー又は糖尿病である、請求項２１又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
癌細胞か、血管新生機能疾患を有する細胞かを有する患者に、請求項１、１２，１４又
は１６に記載の化合物か、化学式ＩＩ、ＸＩ又はＸＩＩの化合物かを投与するステップと
、前記細胞の生存か、前記細胞の増殖か、その組合せかをＰＥＴイメージング技術を使用
して測定するステップとを含み、
【化１４】
2008518964.tif 000076
化学式ＩＩ
化学式ＩＩにおいてＲはＨ、アルキル基又はハロゲンであり、Ｒ’はＨ、アルキル基又
はハロゲンであり、ＸはＣＨ又はＮであり、Ｙは単素環又は複素環を含み、
【化１５】
2008518964.tif 000077
化学式ＸＩ
【化１６】
2008518964.tif 000078
化学式ＸＩＩ
化学式ＸＩ及びＸＩＩにおいてＡｒは芳香環を含みＨｅｔは複素環を含む、患者の治療
を監視する方法。
【請求項２６】
前記患者は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、卵巣癌、乳
癌、腎臓癌、前立腺癌、加齢黄斑変性症、黄斑ジストロフィー又は糖尿病に罹患している
、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の各々は、水素か、ハロゲンか、ヒドロキシル基か、アルキル基か
、置換アルキル基か、アルケニル基か、置換アルケニル基か、フェニル基か、置換フェニ
ル基か、アリール基か、置換アリール基か、ヘテロアリール基か、置換ヘテロアリール基
か、直鎖状、分枝鎖状又は環状の構造で１−２０個の炭素原子を含む有機官能基かである
、化学式１−１９のいずれかの化合物。
【表１】
2008518964.tif 000079
【表２】
2008518964.tif 000080
【請求項２８】
前記置換アルキル基、置換アルケニル基、置換フェニル基、置換アリール基又は置換ヘ
テロアリール基は、ハロゲン（ｈａｌｏ）か、ヒドロキシル基か、アルコキシ基か、アル
キルチオ基か、フェノキシ基か、アロキシ基か、シアノ基か、イソシアノ基か、カルボニ
ル基か、カルボキシル基か、アミノ基か、アミド基か、スルフォニル基か、置換複素環、
糖又はペプチド置換かを含み、前記有機官能基は、酸素か、硫黄か、窒素かのヘテロ原子
を含む、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
ＳＣ２０−３７、ＳＣ２０１−２６６、ＳＣ２６８及びＳＣ２７０−２８０からなる群
から選択される化合物。
【請求項３０】
細胞を請求項２７又は２９に記載の化合物と接触させ、それにより細胞増殖を阻害する
ステップか、細胞周期を停止するステップか、アポトーシスを誘導するステップかを含む
、細胞増殖か、細胞周期か、アポトーシスかを変調させる方法。
【請求項３１】
前記細胞は、白血病細胞、非小細胞肺癌細胞、大腸癌細胞、中枢神経系癌細胞、メラノ
ーマ細胞、卵巣癌細胞、乳癌細胞、腎臓癌細胞又は前立腺癌細胞である、請求項３０に記
載の方法。
【請求項３２】
細胞を請求項２７又は２９に記載の化合物と接触させ、それにより前記細胞で１個又は
２個以上の遺伝子の発現を増加又は減少させるステップを含む、細胞での遺伝子発現を変
調させる方法。
【請求項３３】
前記１個又は２個以上の遺伝子は、ＢＣＬ２と、ＢＣＬ２Ｌ１と、ＪＵＮと、ＪＵＮＢ
と、ＭＡＤと、ＭＡＸと、ＴＮＦＲＳＦ１Ａと、ＴＰ５３と、ＮＦＫＢ１と、ＴＮＦＳＦ
１０と、ＣＡＳＰ１と、ＰＣＮＡと、ＴＮＦＡＩＰ１と、ＤＡＰと、ＫＤＲと、ＭＡＰ３
Ｋ１４と、ＣＣＮＡ２と、ＣＤＣ２と、ＣＤＫ７と、ＣＤＫ８と、ＣＤＫＮ１Ａと、ＣＤ
ＫＮ１Ｂと、ＣＤＫＮ２Ａと、ＣＤＫＮ２Ｃと、Ｅ２Ｆ１と、Ｅ２Ｆ４と、Ｅ２Ｆ５と、
ＭＹＣと、ＲＢ１と、ＲＢＬ２と、ＣＣＮＤ３と、ＣＣＮＧ１と、ＣＣＮＥ１と、ＣＤＣ
２５Ｃと、ＴＧＦＢＲ２と、ＴＧＩＦと、ＴＲＡＦ４と、ＣＹＰ１Ａ２と、ＰＴＧＳ２と
、ｐ２１と、ｐ２７と、サイクリンＡと、ｃｄｋ１と、ｐ５３と、サイクリンＥと、ｃｄ
ｃ２５と、ｐ１３０と、ＮＦＫＢと、ｃ−ＭＹＣと、ＣＯＸ２と、Ｂｃｌ−ＸＬと、アネ
キシンＶと、カスパーゼ１と、ＴＮＦ受容体と、微小管関連タンパク質４と、微小管親和
性調節キナーゼ２と、微小管親和性調節キナーゼ４と、ＥＲＢＢ２のトランスデューサー
と、血管内皮増殖因子Ｂと、血管内皮増殖因子と、アンキリンリピート及びＭＹＮＤドメ
イン含有１と、ＲＡＢ４Ｂと、推定前立腺癌腫瘍サプレッサーと、プレＢ細胞白血病転写
因子２と、Ｔ細胞白血病転座変更遺伝子と、白血病阻害因子と、インターフェロン調節因
子２結合タンパク質と、インターフェロン刺激遺伝子（２０ｋＤａ）と、インターフェロ
ンガンマ受容体２と、２８ｋＤインターフェロン応答性タンパク質と、ポリメラーゼ（Ｒ
ＮＡ）ＩＩＩと、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体Ａと相互作用する複合体２８５
、ＲＡＤ５０ホモログ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）と、ＭＡＸ二量体化タンパク質３と
、ｋｒｕｐｐｅｌ様因子１６と、アポリポタンパク質Ｌ（６）と、Ｘ線修復相補欠損修復
と、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ３と、ホスファチジルイノシトール４−キナ
ーゼタイプＩＩと、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ１２と、プロテインキナーゼ
（ＡＭＰ活性化、アルファ２触媒性サブユニット）と、ピルビン酸デヒドロゲナーゼホス
ファターゼ調節サブユニットと、ホスホリパーゼＤ３と、イノシトール１，４，５−三リ
ン酸受容体（タイプ３）と、レチノイン酸受容体（アルファ）と、腫瘍壊死因子受容体ス
ーパーファミリーと、エノラーゼ２（ガンマ、ニューロン型）と、スタニオカルシン２と
、アペリンと、プレキシンＢ２と、カテプシンＺと、ヒストン１（Ｈ２ｂｃ）と、ヒスト
ン１（Ｈ３ｈ）と、β−チューブリンと、ｍｙｃプロモーター結合タンパク質（ＭＰＢ−
１）と、網膜芽細胞腫遺伝子産物結合タンパク質７と、ビメンチンと、エノラーゼと、ホ
スホピルビン酸ヒドラターゼベータと、ミトコンドリアＡＴＰシンターゼベータ鎖とから
なる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
請求項２７又は２９に記載の化合物の有効量をこれを必要とする患者に投与するステッ
プを含む、患者を治療する方法。
【請求項３５】
前記患者は、癌に罹患している患者かその発症リスクがある患者かである、請求項３４
に記載の方法。
【請求項３６】
前記癌は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、卵巣癌、乳癌
、腎臓癌又は前立腺癌である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
１種類又は２種類以上の請求項２７又は２９に記載の化合物の有効量と、医薬品として
受け入れられるキャリアーとを含む、医薬品の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌と血管新生機能に関連する疾患との治療用化合物に関する。具体的には、
前記発明は新規化合物と、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、
卵巣癌、乳癌、腎臓癌及び前立腺癌のような癌の治療と、加齢黄斑変性症、黄斑ジストロ
フィー及び糖尿病のような血管新生機能に関連する疾患の治療とにおける、前記新規化合
物の使用方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
関連出願
本出願は、２００４年１２月２９日に出願された係属中の特許文献１に係る出願の一部
継続出願である。本出願も、２００４年１１月１日に出願された特許文献２に基づく優先
権を主張する。特許文献１及び２の内容は、引用によって本明細書に取り込まれる。
【特許文献１】米国特許出願第１１／０２７，４６５号明細書
【特許文献２】米国仮出願第６０／６２４，２５３号明細書
【０００３】
従来、たいていの抗癌剤は、細胞障害性を終点測定とするハイスループットスクリーニ
ング系により発見された（非特許文献１）。一般的には、これらの抗癌剤の全てとはいえ
ないにしてもほとんどは複数の作用機序と、複数の耐性機序とを有する。ほとんど例外な
く、前記抗癌剤の作用機序は、その発見よりもずっと後に特定された。ある抗癌剤の真の
作用機序は元々予想されていたものと異なることがわかった。薬剤の標的を特定するため
にさまざまな戦略が使用されたが、最近の技術で標的を特定するための簡単で直接的な方
法はないことが認識されつつある。この現象を説明するために２つの理由が提唱できる。
第１の理由は、例えば抗体抗原認識と比較して選択性及び特異性が欠如していることとつ
ながりがある、（例えば、多くの細胞タイプでの膜透過性のような）低分子抗癌剤固有の
性質と関係がある。第２の理由として、配列及び構造の相同性が高いために、標的として
機能する生物学的システムに組み込まれた圧倒的な冗長性がある。これは、なぜ多くのケ
ースで「ごちゃごちゃの（ｍｅｓｓｙ）抗癌剤」が、標的を定めた治療薬と同じ程度又は
それ以上に働くのかを、説明する場合がある。その機序が何であれ、いずれかの抗癌剤発
見プログラムにおける最初でかつ重要な段階は、リード化合物の同定作業である。
【非特許文献１】Ｎｅａｍａｔｉ  ａｎｄ  Ｂａｒｃｈｉ  Ｊｒ．（２００２）  Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  ２：２１１−２２７
【０００４】
ＦＤＡに承認された１００を超える抗癌剤のうち、幅広く使用されているのは２０未満
である。一方で、ＨＩＶ−１感染に対する１９のＦＤＡ承認薬の全てが、さまざまな組合
せで使用されている。抗ウィルス剤はほとんどいつでも経口投与されるが、経口で有効な
抗癌剤はほとんどない。したがって、たいていの標的を定めた将来の治療薬は経口で有効
であることが望ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
我々の腫瘍生物学への増加した理解を活用する、非常に有効で、忍用性が高く、使用し
やすい（理想的には経口で有効な）抗癌剤を開発する切実な必要性がある。しかし、抗癌
剤発見プログラムにおいて克服すべき１つの主要な障害は、所望の生物学的活性を有する
適切なリード化合物の同定である。テストされる化合物の１％未満が、さらなる研究のた
めに最終的に選択されることになる。新薬開発プロセスでは、薬物動態学的特性及び薬力
学的特性の前臨床評価と、薬物代謝の知識とが重要である。薬剤候補がさらなる研究のた
めに選択された後、ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングから得られる詳細な情報と、動物モ
デルでのｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性及び毒性の評価とが、選択された化合物のヒト治験に
おけるｉｎ  ｖｉｖｏでの結果を予測するために必要である。従来の薬物動態学的研究は
、必要不可欠ではあるが、煩雑で時間がかかり、多数の動物を必要とする。近年のコンピ
ューターシミュレーションにおける技術進歩は、吸収、分布、代謝、排泄及び毒性（ＡＤ
ＭＥＴ）の予測を、薬剤候補の治療薬としての可能性を評価するために必要とされる時間
及び資源を減少させる、信頼性があり迅速な手段にした（非特許文献１）。
【０００６】
以前に、我々は、我々のＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤の一部が、インテグラーゼに
対する選択性がないために、著しい細胞障害性を示すことを示した（非特許文献２−５）
。実際、レトロウィルスインテグラーゼとトポイソメラーゼとの間の類似性は、インテグ
ラーゼに対するトポイソメラーゼＩ及びＩＩ阻害薬（ｐｏｉｓｏｎ）の効果を評価する最
初の研究（非特許文献６）を促進した。結果的に、我々はトポイソメラーゼをインテグラ
ーゼ阻害剤に対するカウンタースクリーン剤として日常的に使用している（非特許文献４
、５及び７−９）。さらに最近の研究で我々は、今までに同定された最も選択的なインテ
グラーゼ阻害剤がＶＤＪの組換えに必須のＲＡＧ１／２酵素も阻害することを示した（非
特許文献１０）。これらの全ての酵素は、ＤＮＡの結合と、ＤＮＡの開裂と、組換えとに
２価の金属イオンを要求する（Ｍｎ２＋及びＭｇ２＋を要求するが、Ｃａ２＋は要求しな
い、非特許文献１１）という類似した化学的特性を有する。インテグラーゼはポリヌクレ
オチジルトランスフェラーゼの大規模なファミリーに属する（非特許文献１２）ので、我
々の阻害剤の一部が未知のＤＮＡプロセシング酵素を標的にしうる可能性が高い。
【非特許文献２】Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：９３０−６
【非特許文献３】Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：９３７−４１
【非特許文献４】Ｎｅａｍａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１：３２０２−９
【非特許文献５】Ｎｅａｍａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：５６６１−７０
【非特許文献６】Ｆｅｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２３９９−４０３
【非特許文献７】Ｎｅａｍａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｉｎ  Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉａ  ｏｎ  Ｍｏｌｏｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｆｅ．  Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉａ、ｐ．３２
【非特許文献８】Ｎｅａｍａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５２：１０４１−５５
【非特許文献９】Ｎｅａｍａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：９４２−５１
【非特許文献１０】Ｍｅｌｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：１３４−７
【非特許文献１１】Ｎｅａｍａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：１４７−６５
【非特許文献１２】Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．６：７６−８３
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
本発明は、少なくとも部分的に、下記の新規化合物が癌と、血管新生機能に関連する疾
患との治療に使用することができるという、予期しない発見に基づいている。
【０００８】
したがって、ある局面では、本発明は化学式Ｉの化合物を特徴とし、ここでＸはＣＨ又
はＮであり、ＺはＯ又はＳであり、Ｒはアルキル基、ハロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキ
ル基又はＮ−アルキル基であり、Ｒ’はアルキル基、ハロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキ
ル基又はＮ−アルキル基であり、Ｙはアルキル基、複素環芳香族基、脂肪族基、糖又は脂
質である。
【０００９】
【化１】
2008518964.tif 000002
化学式Ｉ
【００１０】
別の局面では、本発明は化学式ＩＩの化合物を特徴とし、ここでＲはＨ、アルキル基又
はハロゲンであり、Ｒ’はＨ、アルキル基又はハロゲンであり、ＸはＣＨ又はＮであり、
Ｙは単素環又は複素環を含む。ここでＲがＨで、Ｒ’がＨで、ＸがＣＨで、Ｙがピラジニ
ル基かピリジニル基かであるときは、Ｙは３−、５−又は６−ピラジニル基か、３−、４
−、５−又は６−ピリジニル基かである。
【００１１】
【化２】
2008518964.tif 000003
化学式ＩＩ
【００１２】
例えば、前記アルキル基はメチル基の場合があり、前記ハロゲンはＦの場合があり、Ｙ
はピロリル基、ピリジニル基、ピラジニル基、フルオロフェニル基、キノキサリニル基又
はピロロ−キノキサリニル基の場合がある。具体的には、１つの実施態様では、ＲはＨで
ありＲ’はＨでありＸはＣＨである。別の実施態様では、Ｒはメチル基でありＲ’はメチ
ル基でありＸはＣＨである。さらに別の実施態様では、ＲはＦでありＲ’はＨでありＸは
ＣＨである。また別の実施態様では、ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＮである。これら
の化合物の例はＳＣ１４１−１４４、ＳＣ１４８及びＳＣ１６６−１７４を含む。
【００１３】
【表１】
2008518964.tif 000004
【００１４】
【表２】
2008518964.tif 000005
【００１５】
１つの実施態様では、前記化合物は化学式ＩＩＩの化合物であり、ここでＲはｏ−Ｃｌ
、ｐ−Ｃｌ、ｐ−Ｆ、ｐ−ＣＮ、ｐ−ＯＭｅ又はｐ−ＣＦ３である。これらの化合物の例
はＳＣ１６０−１６５を含む。
【００１６】
【化３】
2008518964.tif 000006
化学式ＩＩＩ
【００１７】
【表３】
2008518964.tif 000007
【００１８】
【表４】
2008518964.tif 000008
【００１９】
別の実施態様では、前記化合物は化学式ＩＶの化合物であり、ここでＲ１は３−ＮＨ２
でありＲ２は５−ＣＦ３であるか、Ｒ１は５−ＮＨ２でありＲ２は２−ＮＯ２であるか、
Ｒ１は４−ＮＨ２でありＲ２は３−ＮＯ２であるか、Ｒ１は２−ＮＨ２でありＲ２は５−
ＯＨであるか、Ｒ１は４−ＮＨ２でありＲ２はＨであるか、Ｒ１は３−ＮＨ２でありＲ２
はＨであるか、Ｒ１は２−ＮＨ２でありＲ２はＨであるかである。
【００２０】
【化４】
2008518964.tif 000009
化学式ＩＶ
【００２１】
本発明は化学式Ｖの化合物も特徴とし、ここでＸはＣＨ又はＮであり、ＺはＯ又はＳで
あり、Ｒはアルキル基、ハロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であ
り、Ｙはアルキル基、複素環芳香族基、脂肪族基、糖又は脂質である。これらの化合物の
例はＳＣ１５３−１５８を含む。
【００２２】
【化５】
2008518964.tif 000010
化学式Ｖ
【００２３】
【表５】
2008518964.tif 000011
【００２４】
本発明の別の化合物は化学式ＶＩの化合物であり、ここでＺはＯ又はＳであり、Ｒはア
ルキル基、ハロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｙはアル
キル基、複素環芳香族基、脂肪族基、糖又は脂質である。これらの化合物の例はＳＣ１７
５−１７６を含む。
【００２５】
【化６】
2008518964.tif 000012
化学式ＶＩ
【００２６】
【表６】
2008518964.tif 000013
【００２７】
さらに、化学式ＶＩＩの化合物も本発明の範囲内に含まれる。
【００２８】
【化７】
2008518964.tif 000014
化学式ＶＩＩ、ＳＣ１４７
【００２９】
加えて本発明は、化学式１−１９のいずれかの化合物を特徴とし、ここでＲ１、Ｒ２及
びＲ３のそれぞれは、Ｈか、ハロゲンか、ヒドロキシル基か、アルキル基か、置換アルキ
ル基か、アルケニル基か、置換アルケニル基か、フェニル基か、置換フェニル基か、アリ
ール基か、置換アリール基か、ヘテロアリール基か、置換ヘテロアリール基か、直鎖状か
分枝鎖状か環状かの構造で１−２０の炭素原子を含む有機官能基かである。前記置換アル
キル基、置換アルケニル基、置換フェニル基、置換アリール基又は置換ヘテロアリール基
は、ハロゲン（ｈａｌｏ）か、ヒドロキシル基か、アルコキシ基か、アルキルチオ基か、
フェノキシ基か、アロキシ基か、シアノ基か、イソシアノ基か、カルボニル基か、カルボ
キシル基か、アミノ基か、アミド基か、スルフォニル基か、置換複素環、糖又はペプチド
置換かを含む場合がある。前記有機官能基は、酸素か、硫黄か、窒素かのヘテロ原子を含
む場合がある。
【００３０】
【表７】
2008518964.tif 000015
【００３１】
【表８】
2008518964.tif 000016
【００３２】
【表９】
2008518964.tif 000017
【００３３】
これらの化合物の具体例はＳＣ２０−３７、ＳＣ２０１−２６６、ＳＣ２６８及びＳＣ
２７０−２８０を含む。ＳＣ２０−３７、ＳＣ２０１−２６６、ＳＣ２６８及びＳＣ２７
０−２８０の化学構造は以下に示す。
【００３４】
本発明は、本発明の化合物を調製する方法を提供する。例えば、化合物ＳＣ１４１−１
４４、ＳＣ１４８、ＳＣ１５３−１５８及びＳＣ１６０−１７４は次のように調製するこ
とができる。最初に化学式ＩＸの化合物（それぞれ１４ａ、１４ｂ、１４ｃ又は１４ｄ）
を形成させるために、ヒドラジン一水和物を化学式ＶＩＩＩの化合物（１３ａ、１３ｂ、
１３ｃ又は１３ｄ）と接触させる。
【００３５】
【化８】
2008518964.tif 000018
化学式ＶＩＩＩ
【００３６】
化学式ＶＩＩＩにおいてＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＣＨである（１３ａ）か、Ｒ
はメチル基でありＲ’はメチル基でありＸはＣＨである（１３ｂ）か、ＲはＦでありＲ’
はＨでありＸはＣＨである（１３ｃ）か、ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＮである（１
３ｄ）かである。
【００３７】
【化９】
2008518964.tif 000019
化学式ＩＸ
【００３８】
化学式ＩＸにおいて、ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＣＨである（１４ａ）か、Ｒは
メチル基でありＲ’はメチル基でありＸはＣＨである（１４ｂ）か、ＲはＦでありＲ’は
ＨでありＸはＣＨである（１４ｃ）か、ＲはＨでありＲ’はＨでありＸはＮである（１４
ｄ）かである。次にＳＣ１４１は、１４ａをピロール−２−カルボン酸塩化物と接触させ
ることにより形成することができる。ＳＣ１４２は１４ａをニコチノイル塩化物塩酸塩と
接触させることにより形成することができる。ＳＣ１４３、ＳＣ１４４及びＳＣ１４８は
、それぞれ、１４ｂ、１４ｃ及び１４ｄを、２，２’−ジピリルジスルフィド及びトリフ
ェニルホスフィンの存在下で２−ピラジンカルボン酸と接触させることにより形成するこ
とができる。ＳＣ１５３は１４ａを、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エ
チルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）／４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）、
その後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／アニソールの存在下でＮ−ＢＯＣ−チアゾリジン
−４−カルボン酸と接触させることにより形成することができる。ＳＣ１５４は１４ａを
、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ、その後、ＴＦＡ／アニソールの存在下でＮ−ＢＯＣ−β−アラニン
と接触させることにより形成することができる。ＳＣ１５５、ＳＣ１５６、ＳＣ１５７及
びＳＣ１５８は１４ａを、ＥＤＣ／ＤＭＡＰの存在下で２−インドールカルボン酸、５−
インドールカルボン酸、６−インドールカルボン酸及び３−インドールカルボン酸と、そ
れぞれ接触させることにより形成することができる。ＳＣ１６０、ＳＣ１６１、ＳＣ１６
２、ＳＣ１６３、ＳＣ１６４及びＳＣ１６５は１４ａを、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ、その後、Ｔ
ＦＡ／アニソールの存在下でＢｏｃ−３−アミノ−３−（２−クロロフェニル）プロパン
酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４−クロロフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ
−３−（４−フルオロフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４−シアノフ
ェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）プロパン酸及
びＢｏｃ−３−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロパン酸と、それぞ
れ接触させることにより形成することができる。ＳＣ１６６、ＳＣ１６７、ＳＣ１６８、
ＳＣ１６９、ＳＣ１７０、ＳＣ１７１及びＳＣ１７２は１４ａを、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ、そ
の後、ＴＦＡ／アニソールの存在下で１５ａ−ｇ（１５ａ：２−フルオロ安息香酸、１５
ｂ：２−フルオロ−４−ヒドロキシ安息香酸、１５ｃ：３−フルオロ安息香酸、１５ｄ：
３−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）安息香酸、１５ｅ：４−フルオロ安息香酸、
１５ｆ：４−フルオロ−２−ヒドロキシ安息香酸、１５ｇ：３−フルオロ−５−ニトロ安
息香酸）とそれぞれ接触させることにより形成することができる。ＳＣ１７３は１４ａを
、２−キノキサリンカルボン酸、ジクロロメタン、トリフェニルホスフィン及び２，２’
−ジピリジルジスルフィドと接触させることにより形成することができる。ＳＣ１７４は
１４ａを、ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−カルボン酸、ジクロロメタン、トリ
フェニルホスフィン及び２，２’−ジピリジルジスルフィドと接触させることにより形成
することができる。
【００３９】
化合物ＳＣ１４７はヒドラジン一水和物を化学式Ｘの化合物と接触させることにより調
製することができる。
【００４０】
【化１０】
2008518964.tif 000020
化学式Ｘ
【００４１】
化合物ＳＣ１７５は、ニコチノイル塩化物塩酸塩を９−ヒドラジノ−９Ｈ−ピロロ［１
，２−ａ］インドール及びピリジンと接触させることにより調製することができる。化合
物ＳＣ１７６は、ピラジン−２−カルボニル塩化物塩酸塩を９−ヒドラジノ−９Ｈ−ピロ
ロ［１，２−ａ］インドール及びピラジンと接触させることにより調製することができる
。
【００４２】
本発明はさらに、本発明の１種類又は２種類以上の化合物の有効量と、医薬品として受
け入れられるキャリアー（ｃａｒｒｉｅｒ）とを含む医薬品の組成物を提供する。前記組
成物はさらに、例えばタキソール、ドキソルビシン又は５−ＦＵのような、癌か血管新生
機能関連疾患かを治療するための１種類又は２種類以上の他の医薬品の有効量を含む場合
がある。
【００４３】
本発明はまた、容器と、化学式ＸＩ又はＸＩＩの化合物の有効量と、前記容器に付属す
る説明書（ｉｎｓｅｒｔ）とを含み、該説明書は、非小細胞肺癌か、中枢神経系癌か、卵
巣癌か、乳癌か、腎臓癌か、前立腺癌か、加齢黄斑変性症か、黄斑ジストロフィーか、糖
尿病かの治療のために前記化合物を投与することを表示する、包装された製品も特徴とす
る。
【００４４】
【化１１】
2008518964.tif 000021
化学式ＸＩ
【００４５】
【化１２】
2008518964.tif 000022
化学式ＸＩＩ
【００４６】
化学式ＸＩ及びＸＩＩにおいてＡｒは芳香環を含みＨｅｔは複素環を含む。
【００４７】
さらに、本発明は、容器と、化学式ＩＩの化合物の有効量と、前記容器に付属する説明
書とを含み、該説明書は、癌か血管新生機能関連疾患かを治療するために前記化合物を投
与することを表示する、包装された製品を提供する。
【００４８】
【化１３】
2008518964.tif 000023
化学式ＩＩ
【００４９】
化学式ＩＩにおいてＲはＨ、アルキル基又はハロゲンであり、Ｒ’はＨ、アルキル基又
はハロゲンであり、ＸはＣＨ又はＮであり、Ｙは単素環又は複素環を含む。
【００５０】
別の包装された製品は、容器と、本発明の化合物の有効量と、前記容器に付属する説明
書とを含み、該説明書は、癌か血管新生機能関連疾患かを治療するために前記化合物を投
与することを表示する。
【００５１】
本発明の製品はさらに、例えばタキソール、ドキソルビシン又は５−ＦＵのような、癌
か血管新生機能関連疾患かを治療するための１種類又は２種類以上の他の医薬品の有効量
を含む場合がある。
【００５２】
癌の例は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、卵巣癌、乳癌
、腎臓癌及び前立腺癌を含む。血管新生機能関連疾患の例は、加齢黄斑変性症、黄斑ジス
トロフィー及び糖尿病を含む。
【００５３】
上記の化合物の有効量をそれを必要とする患者に投与することにより患者を治療する方
法も本発明の範囲内である。前記患者は、癌又は血管新生機能関連疾患に罹患しているか
、その発症リスクがあるかで特定される場合がある。特に前記癌は、白血病、非小細胞肺
癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、卵巣癌、乳癌、腎臓癌又は前立腺癌の場合があ
る。前記血管新生機能関連疾患は、加齢黄斑変性症、黄斑ジストロフィー又は糖尿病の場
合がある。前記方法はさらに、例えばタキソール、ドキソルビシン又は５−ＦＵのような
、癌か血管新生機能関連疾患かを治療するための１種類又は２種類以上の他の医薬品の有
効量を前記患者に投与することを含む場合がある。前記化合物と前記１種類又は２種類以
上の他の医薬品とは、同時に又は順番に、投与される場合がある。
【００５４】
加えて本発明は、癌細胞か血管新生機能疾患を有する細胞かを有する患者に上記の化合
物を投与すること、及び、前記細胞の生存か、前記細胞の増殖か、その組合せかをＰＥＴ
イメージング技術を使用して測定することにより、患者の治療を監視する方法を特徴とす
る。前記患者は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノーマ、卵巣癌、
乳癌、腎臓癌、前立腺癌、加齢黄斑変性症、黄斑ジストロフィー又は糖尿病に罹患してい
る場合がある。前記患者は例えばマウスのような動物である場合があり、前記細胞は異種
移植されたヒト細胞の場合がある。１つの実施態様では前記患者はヒトである。
【００５５】
さらに本発明は、遺伝子発現をプロファイリングする方法を提供する。前記方法は、試
験細胞を上記の化合物と接触させること、及び、前記試験細胞での遺伝子発現をプロファ
イリングすることを含む。前記試験細胞は、癌細胞か血管新生機能疾患を有する細胞かの
場合がある。具体的には前記試験細胞は、白血病細胞か、非小細胞肺癌細胞か、大腸癌細
胞か、中枢神経系癌細胞か、メラノーマ細胞か、卵巣癌細胞か、乳癌細胞か、腎臓癌細胞
か、前立腺癌細胞か、加齢黄斑変性症を有する細胞か、黄斑ジストロフィーを有する細胞
か、糖尿病を有する細胞かの場合がある。前記方法はさらに、前記試験細胞での遺伝子発
現を、対照細胞での遺伝子発現と比較することを含む場合があるが、ここで該対照細胞は
、周知の作用を有する別の化合物と接触させるか、前記試験細胞と接触させるのに使用さ
れる化合物に耐性であるかの場合がある。
【００５６】
本発明は、細胞での遺伝子発現を変調させる方法も提供する。前記方法は、細胞を上記
の化合物と接触させ、それにより前記細胞で１個又は２個以上の遺伝子の発現を変調させ
る（増加又は減少させる）ことを含む。前記細胞は癌細胞か血管新生機能疾患を有する細
胞かの場合がある。具体的には前記細胞は、白血病細胞か、非小細胞肺癌細胞か、大腸癌
細胞か、中枢神経系癌細胞か、メラノーマ細胞か、卵巣癌細胞か、乳癌細胞か、腎臓癌細
胞か、前立腺癌細胞か、加齢黄斑変性症を有する細胞か、黄斑ジストロフィーを有する細
胞か、糖尿病を有する細胞かの場合がある。前記１個又は２個以上の遺伝子の例は、プロ
リン−リッチ小タンパク質１Ａと、骨格筋で過剰発現するＧＴＰ結合タンパク質と、イン
ターロイキン２４と、セストリン（ｓｅｓｔｒｉｎ）２と、仮想タンパク質ＭＧＣ４５０
４と、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１Ａ（ｐ２１）と、初期増殖応答タンパク質１と
、Ｈ＋輸送性リソソームタンパク質の３８ｋＤａＡＴＰアーゼＶ０サブユニット  ｄ  ア
イソフォーム２と、ＡＸＩＮ１上向き調節１と、二重特異性フォスファターゼ５と、ミト
コンドリアのスーパーオキシドジスムターゼ２と、ヘパリン結合上皮増殖因子様増殖因子
と、ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ  ドメイン１９（メルトリン（ｍｅｌ
ｔｒｉｎ）  ベータ）と、内皮性ＰＡＳドメインタンパク質１と、イノシトール１，４，
５−三リン酸受容体タイプ１と、組織因子経路阻害剤（リポタンパク質結合性凝固阻害剤
）と、フィブリノーゲン  ガンマポリペプチドと、ＲＡＳ発癌遺伝子ファミリーのメンバ
ーであるＲＡＢ２０と、ＡＭＰ活性型（ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ）プロテインキナー
ゼのガンマ２非触媒性サブユニットと、オンコスタチンＭ受容体と、カテプシンＢと、Ｂ
細胞阻害剤におけるカッパ軽鎖ポリペプチドの遺伝子エンハンサーの核内因子アルファと
、ＢＣＬ２／アデノウィルスＥ１Ｂ１９ｋＤａ相互作用タンパク質３と、インテグリンベ
ータ３（血小板糖タンパク質ＩＩＩａ、抗原ＣＤ６１）と、二重特異性フォスファターゼ
１０と、細胞周期調節タンパク質ＳＤＰ３５と、プレキシン（ｐｌｅｘｉｎ）Ｃ１と、小
眼球症関連転写因子と、カルパイン小サブユニット２と、仮想タンパク質ＤＫＦＺｐ４３
４Ｌ１４２と、ＭＥＧＦ１０タンパク質と、ＥｐｈＡ２と、ｊａｇｇｅｄ１（アラジール
症候群）と、ヘミセンチン（ｈｅｍｉｃｅｎｔｉｎ）と、低密度リポタンパク質受容体（
ヘパリン結合上皮増殖因子様増殖因子）と、チロシナーゼ関連タンパク質１と、チロシナ
ーゼ（眼皮膚白皮症ＩＡ）と、ドパクロムトートメラーゼ（ドパクロム  デルタ−イソメ
ラーゼ、チロシン関連タンパク質２）と、ラミニンベータ３と、ＭＡＸ二量体化タンパク
質１と、ＣＤＫ４結合タンパク質ｐ３４ＳＥＩ１と、ホモサピエンスｃＤＮＡ  ＦＬＪ４
２４３５ｆｉｓクローンＢＬＡＤＥ２００６８４９と、増殖停止及びＤＮＡ損傷誘発性ベ
ータと、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤２Ｂ（ｐ１５、ＣＤＫ４を阻害する。）と、ジ
フテリア毒素受容体（ヘパリン結合上皮増殖因子様増殖因子）と、シンタキシン結合タン
パク質６（アミシン（ａｍｉｓｙｎ））と、輸送分泌タンパク質２．２と、Ａｒｇ／Ａｂ
ｌ相互作用タンパク質ＡｒｇＢＰ２と、仮想タンパク質ＤＪ６６７Ｈ１２．２と、ホモサ
ピエンスｃＤＮＡ  ＦＬＪ３７２８４ｆｉｓクローンＲＡＭＹ２０１３５９０と、ＢＣＬ
２と、ＢＣＬ２Ｌ１と、ＪＵＮと、ＪＵＮＢと、ＭＡＤと、ＭＡＸと、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ
と、ＴＰ５３と、ＮＦＫＢ１と、ＴＮＦＳＦ１０と、ＣＡＳＰ１と、ＰＣＮＡと、ＴＮＦ
ＡＩＰ１と、ＤＡＰと、ＫＤＲと、ＭＡＰ３Ｋ１４と、ＣＣＮＡ２と、ＣＤＣ２と、ＣＤ
Ｋ７と、ＣＤＫ８と、ＣＤＫＮ１Ａと、ＣＤＫＮ１Ｂと、ＣＤＫＮ２Ａと、ＣＤＫＮ２Ｃ
と、Ｅ２Ｆ１と、Ｅ２Ｆ４と、Ｅ２Ｆ５と、ＭＹＣと、ＲＢ１と、ＲＢＬ２と、ＣＣＮＤ
３と、ＣＣＮＧ１と、ＣＣＮＥ１と、ＣＤＣ２５Ｃと、ＴＧＦＢＲ２と、ＴＧＩＦと、Ｔ
ＲＡＦ４と、ＣＹＰ１Ａ２と、ＰＴＧＳ２と、（ｐ２１と、）ｐ２７と、サイクリンＡと
、ｃｄｋ１と、ｐ５３と、サイクリンＥと、ｃｄｃ２５と、ｐ１３０と、ＮＦＫＢと、ｃ
ＭＹＣと、ＣＯＸ２と、Ｂｃｌ−ＸＬと、アネキシン（ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖと、カスパー
ゼ１と、ＴＮＦ受容体と、微小管関連タンパク質４と、微小管親和性調節キナーゼ２と、
微小管親和性調節キナーゼ４と、ＥＲＢＢ２のトランスデューサーと、血管内皮増殖因子
Ｂと、血管内皮増殖因子と、アンキリンリピート及びＭＹＮＤドメイン含有１と、ＲＡＢ
４Ｂと、推定前立腺癌腫瘍サプレッサーと、プレＢ細胞白血病転写因子２と、Ｔ細胞白血
病転座変更遺伝子と、白血病阻害因子と、インターフェロン調節因子２結合タンパク質と
、インターフェロン刺激遺伝子（２０ｋＤａ）と、インターフェロンガンマ受容体２と、
２８ｋＤインターフェロン応答性タンパク質と、ポリメラーゼ（ＲＮＡ）ＩＩＩと、ペル
オキシソーム増殖因子活性化受容体Ａと相互作用する複合体２８５、ＲＡＤ５０ホモログ
（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）と、ＭＡＸ二量体化タンパク質３と、ｋｒｕｐｐｅｌ様因
子１６と、アポリポタンパク質Ｌ（６）と、Ｘ線修復相補欠損修復と、マイトジェン活性
化プロテインキナーゼ３と、ホスファチジルイノシトール４−キナーゼタイプＩＩと、マ
イトジェン活性化プロテインキナーゼ１２と、プロテインキナーゼ（ＡＭＰ活性化、アル
ファ２触媒性サブユニット）と、ピルビン酸デヒドロゲナーゼホスファターゼ調節サブユ
ニットと、ホスホリパーゼＤ３と、イノシトール１，４，５−三リン酸受容体（タイプ３
）と、レチノイン酸受容体（アルファ）と、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーと、
エノラーゼ２（ガンマ、ニューロン型）と、スタニオカルシン（ｓｔａｎｎｉｏｃａｌｃ
ｉｎ）２と、アペリン（ａｐｅｌｉｎ）と、プレキシンＢ２と、カテプシンＺと、ヒスト
ン１（Ｈ２ｂｃ）と、ヒストン１（Ｈ３ｈ）と、β−チューブリンと、ｍｙｃプロモータ
ー結合タンパク質（ＭＰＢ−１）と、網膜芽細胞腫遺伝子産物結合タンパク質７と、ビメ
ンチンと、エノラーゼと、ホスホピルビン酸ヒドラターゼベータと、ミトコンドリアＡＴ
Ｐシンターゼベータ鎖とを含む。
【００５７】
本発明はさらに、細胞増殖か、細胞周期か、アポトーシスかを変調させる方法を提供す
る。前記方法は、細胞を請求項１又は３に記載の化合物と接触させ、それにより細胞増殖
を阻害することか、細胞周期を停止することか、アポトーシスを誘導することかを含む。
前記細胞の例は、白血病細胞、非小細胞肺癌細胞、大腸癌細胞、中枢神経系癌細胞、メラ
ノーマ細胞、卵巣癌細胞、乳癌細胞、腎臓癌細胞又は前立腺癌細胞を含む。
【００５８】
本発明の上述した特徴及び他の特徴と、該特徴を取得及び使用する方法とは、添付した
図面と併せて以下の記述を参照することにより、より明らかとなり、非常によく理解され
るだろう。前記図面は本発明の典型的な実施態様を描いただけであるので、本発明の範囲
を限定しない。
【００５９】
図面の簡単な説明
図１は、ＳＣ１４４で処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞の細胞周期プロファイルの
フローサイトメトリー分析結果を示すグラフである。細胞はＳＣ１４４に１６時間、２４
時間及び４８時間曝され、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色され、細胞周期の撹乱につ
いて分析された。
【００６０】
図２は、ＳＣ１４４及びＣＰＴ（ＩＣ８０）で処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞の
アポトーシス分析結果を示すグラフである。細胞はアネキシンＶ／ＰＩで染色され、フロ
ーサイトメトリーにより分析された。それぞれのパネルの右下の四分区画（アネキシンＶ
−陽性、ＰＩ−陰性）における細胞はアポトーシスの初期段階にあり、右上の四分区画（
アネキシンＶ−陽性、ＰＩ−陽性）における細胞はアポトーシス及びネクローシスの後半
段階にあるのに対して、左下の四分区画（アネキシンＶ−陰性、ＰＩ−陰性）における細
胞は生存している。
【００６１】
図３（Ａ）は腫瘍の増殖と、異種移植モデルでの投与との概略模式図である。ＭＤＡ−
ＭＢ−４３５細胞を移植された胸腺欠損ヌードマウスは、５日間の連日腹腔内注射による
、表示投与量のＳＣ１４４投与で処理された。図３（Ｂ）はＳＣ１４４が０．３、０．８
及び４ｍｇ／ｋｇの投与量で、ヒト乳癌異種移植片のサイズを減少させたことを示すグラ
フである。腫瘍の増殖は５週間監視された。値はそれぞれの群についての腫瘍重量の中央
値を表す。図３（Ｃ）は、それぞれの処理群について実験の最終日に算出された％Ｔ／Ｃ
を示すグラフである。（バーは±標準偏差である。）
【００６２】
図４（Ａ）はＳＣ１４４で処理されたマウスの代表的な全身像を示す画像である。図４
（Ｂ）はＳＣ１４４（４ｍｇ／ｋｇ）で処理されたマウスと対照マウスとの腫瘍のサイズ
の比較を示す画像である。図４（Ｃ）はパネルＢで示されたマウスから切り出した腫瘍を
示す画像である。
【００６３】
図５は、ＳＣ１４４が腫瘍組織の顕著なネクローシスを誘発することを示す顕微鏡画像
である。処理されない腫瘍組織（Ａ）とＳＣ１４４で処理された組織（Ｂ）とのＨＥ染色
は、７０日目に調製された。概して、処理された腫瘍（パネルＢの左側）では８０％より
大きいネクローシスが観察され、ネクローシスでない細胞（パネルＢの右側）はアポトー
シスの初期段階にある。
【００６４】
図６は、ＳＣ１４４が臓器毒性を示さないことを示す顕微鏡画像である。ＳＣ１４４で
処理された腎臓組織（Ａ）と、ＳＣ１４４で処理された肝臓組織（Ｂ）と、ＳＣ１４４で
処理された心臓組織（Ｃ）とのＨＥ染色は通常のパターンを示す。
【００６５】
図７は、ケトコナゾールと、ＳＣ１４４と、ＳＣ１４４の類縁体であるＳＣ２４とによ
るヒトＣＹＰ３Ａ４の阻害を示すグラフである。ヒトｃＤＮＡ発現ＣＹＰ３Ａ４による蛍
光基質の代謝は、３７°Ｃ、９６ウェルプレートでのインキュベーションにより評価され
た。７−ベンジルオキシ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＢＦＣ）の代謝は、対応す
る７−ヒドロキシ−４−トリフルオロ−メチルクマリンの生成を測定することによりアッ
セイされた。
【００６６】
図８は、ヒト乳癌（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５）細胞を移植されたヌードマウスのＰＥＴイ
メージング画像（切片の厚さは０．６ｍｍである。）である。上段は、基準となるスキャ
ン結果である。（Ａ）平衡相ＦＤＧ、注射後３０分、（Ｂ）ＦＭＡＵ、注射後１０分、（
Ｃ）ＦＭＡＵ、注射後６０分。下段は、経過観察スキャン結果である。（Ｄ）ＦＤＧ、注
射後３０分、（Ｅ）ＦＭＡＵ、注射後１０分、（Ｆ）ＦＭＡＵ、注射後６０分。前記マウ
スは、連日ＦＤＧ及びＦＭＡＵ（基準）で撮像され、その後連日４ｍｇ／ｋｇのＳＣ１４
４の腹腔内注射で処理された。投与の５日後、薬剤処理は中断され、６日目及び７日目に
経過観察スキャンが取得された。
【００６７】
図９は、２つの独立した実験での遺伝子発現プロファイルの比較を示すグラフである。
図９（Ａ）は処理されない対照サンプルであるＤ５６５対Ｄ５６６のスキャッタープロッ
トで、図９（Ｂ）はＳＣ１４４で処理されたＤ５７１及びＤ５７２チップの対のスキャッ
タープロットである。図９（Ｃ）は、未処理対照細胞対ＳＣ１４４処理細胞での（倍率の
変化を表す）発現量の対数平均値の差に対して、有意水準を表すｔ−統計量（ｘ−軸）を
プロットしたグラフである。
【００６８】
図１０は、ＳＣ１４４が他のクラスの化合物と相異なる独特な活性のパターンを示すこ
とを示すグラフである。図１０（Ａ）及び（Ｂ）は、Ｇｅｎｅｔｒｉｘ（商標）により作
成された全１４回の観察結果についての遺伝子の３主成分系での主成分分析結果及び階層
クラスタ分析結果をそれぞれ示すグラフである。
【００６９】
図１１はＧｅｎｅｔｒｉｘ（商標）ツールを使用した、分子機能による遺伝子のバイオ
インフォマティクス分析結果を示す表である。
【００７０】
図１２はＧｅｎｅｔｒｉｘ（商標）で実行されるＩｎｔｅｒＰｒｏ分類ツールから導か
れた遺伝子のリストを示す表である。
【００７１】
図１３は、ＳＣ１４４及びエトポシドの間で同定された共通遺伝子のサブセット分類を
示す表である。
【００７２】
図１４は、ＳＣ１４４と、ミトキサントロンと、カンプトテシンとの間での共通遺伝子
のサブセット分類を示す表である。
【００７３】
図１５は、薬剤吸収の予測を示すグラフである。それぞれの化合物についての１平方オ
ングストローム単位の高速極性表面面積が、それらに対応する分配係数の算定値に対して
プロットされた。楕円により囲まれた領域は、ＡＤＭＥＴ特性に支障のない良好な吸収が
予測される。Ｅｇａｎら（（２０００）  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：３８６７−７７
）の吸収モデルに基づき、内側の楕円は９５％の信頼区間を表し、外側の楕円は９９％の
信頼区間を表す。
【００７４】
図１６は、ＳＣ２１及びＣＰＴによるＤＵ１４５細胞の経時的な阻害（Ａ）と、濃度依
存的な阻害（Ｂ）を示すグラフである。
【００７５】
図１７は、ＳＣ２１で処理されたＤＵ１４５細胞と、ＰＣ３細胞と、ＭＤＡ−ＭＢ−４
３５細胞と、ＨＥＹ細胞との細胞周期プロファイルの、フローサイトメトリー分析の結果
を描くグラフである。細胞はＳＣ２１（ＩＣ５０）に２４時間、４８時間及び７２時間曝
され、その後回収され、ヨウ化プロピジウムで染色され、細胞周期の撹乱について分析さ
れた。ＳＣ２１は、ＤＵ１４５細胞とＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞とではＧ０／Ｇ１期での
停止を誘発し、ＰＣ３細胞とＨＥＹ細胞とではＳ期での停止を誘発した。示された対照細
胞は２４時間後に測定され、予想されるとおり、４８時間及び７２時間後の対照細胞では
有意な変化は観察されなかった。
【００７６】
図１８は、フローサイトメトリーを使用してサブＧ０／Ｇ１集団を測定することにより
算出されたアポトーシスの百分率を示すグラフである。ＳＣ２１及びＣＰＴで処理された
ＰＣ３細胞及びＤＵ１４５細胞では、アポトーシス細胞の集団は経時的に増加した。
【００７７】
図１９は、ＳＣ２１又はＣＰＴ（ＩＣ８０）で処理されたＤＵ１４５細胞のアポトーシ
ス分析結果を示すグラフである。細胞は、２４時間、４８時間及び７２時間ＳＣ２１又は
ＣＰＴで処理され、回収され、アネキシンＶ／ヨウ化プロピジウムで染色され、フローサ
イトメトリーにより分析された。未処理対照細胞（２４時間及び４８時間）も前記分析に
含まれた。アネキシンＶＦＩＴＣシグナルはＦＬ１−Ｈ又は赤チャネルで記録され、ヨウ
化プロピジウムはＦＬ２−Ｈ又は緑チャネルで記録された。右の四分区画（アネキシンＶ
−陽性、ヨウ化プロピジウム−陰性）における細胞はアポトーシスの初期段階にあり、右
上の四分区画（アネキシンＶ−陽性、ヨウ化プロピジウム−陽性）における細胞はアポト
ーシス及びネクローシスの後半段階にあるのに対して、左下の四分区画（アネキシンＶ−
陰性、ヨウ化プロピジウム−陰性）における細胞は生存している。
【００７８】
図２０（Ａ）は腫瘍の増殖と、ＰＣ３異種移植マウスでの投与との概略模式図である。
図２０（Ｂ）はＳＣ２１がヒト前立腺癌異種移植片のサイズを減少させたことを示すグラ
フである。ＰＣ３細胞を移植された胸腺欠損ヌードマウスは、５日間の連日腹腔内注射に
よる、表示投与量のＳＣ２１で処理された。腫瘍の増殖は５週間監視された。値はそれぞ
れの群についての腫瘍重量（平均値±標準偏差）を表す。図２０（Ｃ）はＰＣ３異種移植
片でのＳＣ２１に対する用量反応曲線を描くグラフである。値はそれぞれの処理群から測
定の最終日（５週間後）に算出された％Ｔ／Ｃを表す。バーは±標準偏差である。ＳＣ２
１処理は、両方の投与量で、対照と比較して腫瘍の増殖を有意に減少させた（％Ｔ／ＣＶ
５０％）。
【００７９】
図２１は、ＲＴ−ＰＣＲ遺伝子発現分析を示す図である。Ｔ２４細胞由来の全ＲＮＡが
分離され、２．５μｇの全ＲＮＡでｃＤＮＡが合成された。標準ＲＴ−ＰＣＲはＧＥＮＥ
ｓｙｓｔｅｍ  Ｉ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｋｉｔ（Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅ
ｓｓ  Ｉｎｃ．）を用いて実施された。それぞれのキットは、内部競合テンプレートと、
対応するプライマーとの混合物を含む。
【００８０】
図２２は、表８から選択された遺伝子の、１０６分子のβ−アクチンで正規化されたＳ
Ｃ２３で誘発される発現量（分子数）を示すグラフである。Ｔ２４細胞由来全ＲＮＡはＳ
Ｃ２３への曝露の３時間、６時間、１２時間、２４時間及び４８時間後に分離された。
【００８１】
図２３（左）及び（右）はそれぞれ、細胞周期及びアポトーシスに関わる経路の略図で
ある。
【００８２】
図２４は、２つの独立した実験での遺伝子発現プロファイルの比較の代表例である。図
２４（Ａ）は処理されない対照サンプルであるＤ５６５対Ｄ５６６チップのスキャッター
プロットで、図２４（Ｂ）はエトポシドで処理されたＤ７２０及びＤ７２１チップの対の
スキャッタープロットで、図２４（Ｃ）はミトキサントロンで処理されたＤ７２４及びＤ
７２５チップの対のスキャッタープロットである。
【００８３】
図２５はＳＣ２３がタキソールに最も類似した活性のパターンを示すことを示すスキャ
ッタープロットである。図２５（Ａ）はＳＣ２３処理による遺伝子発現を５ＦＵと、ＣＰ
Ｔと、エトポシドと、タキソールと、ミトキサントロンとの処理による遺伝子発現（全て
のノイズと発現の弱い遺伝子とを除去した後の１８，０００種類の遺伝子の発現）と比較
する一連のスキャッタープロットである。図２５（Ｂ）はパネルＡと同じだが、少なくと
も５倍変化した遺伝子のみがプロットされたスキャッタープロットである。
【００８４】
図２６は３個の化合物の間で重複する遺伝子の数を示すベン図である。該ベン図は、Ｓ
Ｃ２３と、５−ＦＵと、タキソールとでの処理に応答して５倍より大きく変化した計８７
８個の遺伝子から作成された。
【００８５】
図２７はＳＣ２３がタキソールに最も類似した活性のパターンを示すことを示すグラフ
である。図２７（Ａ）及び（Ｂ）は、Ｇｅｎｅｔｒｉｘ（商標）により作成された全１０
回の観察結果についての遺伝子の３主成分系での主成分分析結果及び階層クラスタ分析結
果を示すグラフである。
【００８６】
図２８はＳＣ２３に誘発されるタンパク質の発現の変化を描いた電気泳動画像である。
Ｔ２４細胞はＩＣ５０用量（レーン２）及びＩＣ８０用量（レーン３）のＳＣ２３で７２
時間処理された。レーン１は対照未処理細胞である。
【００８７】
図２９はＳＣ２３で処理したＴ２４細胞の二次元ゲル電気泳動結果を示す画像である。
細胞は、ＳＣ２３（ＩＣ８０用量）で１２時間、２４時間、４８時間及び７２時間処理さ
れた。可溶性画分はその後抽出され定量された。８００Ｖ、１６時間の一次元目のゲル電
気泳動ゲルでは、５０ｍｇのタンパク質が装荷（ｌｏａｄ）された。その後ゲルは平衡に
達し、二次元目の１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分離され、ＣｙｐｒｏＲｕｂｙで染色さ
れ、Ｔｙｐｈｏｏｎ９１００により画像処理された。
【００８８】
図３０は、二次元ゲル電気泳動ゲル由来ＳＣ２３で処理された細胞の選択的領域（左）
を示す画像と、ＰＤＱｕｅｓｔを使用してスポットを定量した結果を示すグラフである。
【００８９】
図３１は、β−チューブリンペプチド（ＥＶＤＥＱＭＬＮＶＱＮＫ）とｍｙｃプロモー
ター結合タンパク質（ＭＰＢ−１）ペプチド（ＶＮＱＩＧＳＶＴＥＳＬＱＡＣＫ）とのＭ
Ｓ／ＭＳスペクトルを示すグラフである。
【００９０】
発明の詳細な説明
一連の化合物は、予測薬物動態（ＰＫ）シミュレーションと一体化された、（ＤＮＡプ
ロセシング酵素の阻害に対して特異的な）三次元抗腫瘍構造モデリングに基づき設計され
た。前記の化合物の一部は、ヒト癌株細胞のパネルに対して顕著な細胞障害パターンを示
した。一連の２００種類の化合物は、複数の薬剤耐性癌株細胞に対してテストされた。Ｓ
Ｃ１４４は、活性の高さと薬剤様特性に基づきリード分子として選択された。前記化合物
は、ヌードマウスでの乳癌異種移植片に対してｉｎ  ｖｉｖｏで有効性を示し、目立った
毒性は示さなかった。この化合物の活性は、ホルモン受容体（ＨＲ）、ｐ５３、ｐＲｂ、
ｐ２１又はｐ１６の状態には依存しなかった。さらにＳＣ１４４は、カンプトテシンの活
性に匹敵する活性で、Ｓ期の細胞の細胞周期を遮断し、シスプラチン耐性の卵巣癌株細胞
（ＨＥＹ）でアポトーシスを誘発させた。この化合物によりさまざまなｉｎ  ｖｉｔｒｏ
モデルで示された細胞障害性プロファイルと、細胞周期調節とアポトーシスとに及ぼす効
果とを考慮すると、ＳＣ１４４は、癌と血管新生機能関連疾患との治療のための新規でか
つ有望な候補化合物であるように思われる。
【００９１】
我々はまた、一定の範囲のヒト腫瘍細胞型に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＳＣ２１及び
ＳＣ２３の活性と、マウスでのＰＣ３ヒト前立腺癌異種移植モデルにおける化合物ＳＣ２
１のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性とを評価した。我々は細胞周期調節及びアポトーシスに及
ぼすＳＣ２１の効果を測定した。我々のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの結果は、サリチルヒドラジ
ドがホルモン受容体陽性癌細胞とホルモン受容体陰性癌細胞との両方で有効な、高い効力
のある化合物であることを示す。ＳＣ２１は使用された株細胞に依存し、またｐ５３と、
ｐ２１と、ｐＲｂと、ｐ１６との状態に関わりなく、アポトーシスを誘発させ、Ｇ０／Ｇ
１期又はＳ期の細胞周期を遮断した。ＳＣ２１はマウスで、目立った毒性なしに、効果的
に腫瘍の増殖を低減した。ＳＣ２１の作用機序は完全には解明されていないが、細胞周期
への効果と、アポトーシスの誘発と、異なる起源の腫瘍株細胞のパネルに対する活性とが
、我々がＳＣ２１の掘り下げた前臨床評価を行うことを促した。これらの化合物は癌の治
療に有用である可能性がある。
【００９２】
化合物
本発明の化合物は以下の化学式の化合物を含む。
【００９３】
【化１４】
2008518964.tif 000024
化学式Ｉ
【００９４】
化学式Ｉにおいて、ＸはＣＨ又はＮであり、ＺはＯ又はＳであり、Ｒはアルキル基、ハ
ロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｒ’はアルキル基、ハ
ロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｙはアルキル基、複素
環芳香族基、脂肪族基、糖又は脂質である。
【００９５】
【化１５】
2008518964.tif 000025
化学式ＩＩ
【００９６】
化学式ＩＩにおいて、ＲはＨ、アルキル基又はハロゲンであり、Ｒ’はＨ、アルキル基
又はハロゲンであり、ＸはＣＨ又はＮであり、Ｙは単素環又は複素環を含む。ここでＲが
Ｈで、Ｒ’がＨで、ＸがＣＨで、Ｙがピラジニル基かピリジニル基かであるときは、Ｙは
３−、５−又は６−ピラジニル基か、３−、４−、５−又は６−ピリジニル基かである。
【００９７】
【化１６】
2008518964.tif 000026
化学式ＩＩＩ
【００９８】
化学式ＩＩＩにおいて、Ｒはｏ−Ｃｌ、ｐ−Ｃｌ、ｐ−Ｆ、ｐ−ＣＮ、ｐ−ＯＭｅ又は
ｐ−ＣＦ３である。
【００９９】
【化１７】
2008518964.tif 000027
化学式ＩＶ
【０１００】
化学式ＩＶにおいて、Ｒ１は３−ＮＨ２でＲ２は５−ＣＦ３か、Ｒ１は５−ＮＨ２でＲ
２は２−ＮＯ２か、Ｒ１は４−ＮＨ２でＲ２は３−ＮＯ２か、Ｒ１は２−ＮＨ２でＲ２は
５−ＯＨか、Ｒ１は４−ＮＨ２でＲ２はＨか、Ｒ１は３−ＮＨ２でＲ２はＨか、Ｒ１は２
−ＮＨ２でＲ２はＨかである。
【０１０１】
【化１８】
2008518964.tif 000028
化学式Ｖ
【０１０２】
化学式Ｖにおいて、ＸはＣＨ又はＮであり、ＺはＯ又はＳであり、Ｒはアルキル基、ハ
ロゲン、アセチル基、Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｙはアルキル基、複素
環芳香族基、脂肪族基、糖又は脂質である。
【０１０３】
【化１９】
2008518964.tif 000029
化学式ＶＩ
【０１０４】
化学式ＶＩにおいて、ＺはＯ又はＳであり、Ｒはアルキル基、ハロゲン、アセチル基、
Ｏ−アルキル基又はＮ−アルキル基であり、Ｙはアルキル基、複素環芳香族基、脂肪族基
、糖又は脂質である。
【０１０５】
【化２０】
2008518964.tif 000030
化学式ＶＩＩ
【０１０６】
【表１０】
2008518964.tif 000031
2008518964.tif 000032
【０１０７】
【表１１】
2008518964.tif 000033
【０１０８】
【表１２】
2008518964.tif 000034
【０１０９】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のそれぞれは、別々に又はいっしょに、水素原子か、ハロゲン原子
か、ヒドロキシル基か、直鎖状、分枝鎖状又は環状の構造でいずれかの数の、望ましくは
１−２０個の炭素原子を含み、酸素、硫黄又は窒素のようなヘテロ原子を含む場合がある
他のいずれかの有機官能基かである。代表的なＲ１、Ｒ２及びＲ３は、アルキル基、置換
アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、フェニル基、置換フェニル基、アリール
基、置換アリール基、ヘテロアリール基、置換ヘテロアリール基を含むがこれらに限定さ
れない。代表的な置換基は、ハロゲンと、ヒドロキシル基と、アルコキシ基と、アルキル
チオ基と、フェノキシ基と、アロキシ基と、シアノ基と、イソシアノ基と、カルボニル基
と、カルボキシル基と、アミノ基と、アミド基と、スルフォニル基と、置換複素環、糖又
はペプチドとを含むがこれらに限定されない。
【０１１０】
「単素環」とは、同一種類の複数の原子、特に炭素原子の閉じた環状構造を指す。「複
素環」とは、少なくとも１個は炭素原子でない複数の原子の閉じた環状構造を指す。「芳
香族」基は、１個又は２個以上のベンゼン環を含む。糖は単糖、二糖及び三糖を指し、脂
質は親水性頭部基を有する、又は、有さない長鎖脂肪族化合物を指す。
【０１１１】
本発明の化合物は、置換した成分及び非置換の成分の両方を含む場合がある。「置換し
た」という用語は、１個、２個、３個又は４個以上の置換基を有する成分を指し、該置換
基は同一か異なるかの場合があり、それぞれが水素原子を置換する。置換基の例はアルキ
ル基、ヒドロキシル基、保護ヒドロキシル基、アミノ基、保護アミノ基、カルボキシ基、
保護カルボキシ基、シアノ基、アルコキシ基及びニトロ基を含むがこれらに限定されない
。「非置換の」という用語は、水素付加され原子価が満たされているそれぞれの原子を有
する成分を指す。反応性成分は一時的に、及び、化学的に変換されるとき「保護」され、
保護されない成分が反応する条件下で反応しない。例えばトリメチルシリル化は、ヒドロ
キシル基又はアミノ基のような反応性官能基をアニオン重合における成長アニオン種との
反応から保護するために使用される、典型的な変換である。
【０１１２】
前記化合物の保護形態は本発明の範囲内に含まれる。一般的に、前記化合物の他の位置
で後から起こるいずれかの反応の条件に対して安定であり、分子の残りに悪影響を及ぼす
ことなく適当な時点で除去することができるならば、前記保護基の種は重要ではない。加
えて、実質的な合成変換が完了した後、ある保護基は別の保護基に置換される場合がある
。さまざまな保護基の付加及び除去についての例及び条件は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅ
ｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１ｓｔ  ｅｄ
．，１９８１、及び、２ｎｄ  ｅｄ．，１９９１に記載がある。加えて、前記化合物の塩
も本発明の範囲内である。例えば塩は、正に荷電したアミノ置換基と負に荷電した対イオ
ンとの間で形成される場合がある。
【０１１３】
本発明の前記化合物の例は、ＳＣ１４１−１４４、ＳＣ１４８、ＳＣ１５３−１５８、
ＳＣ１６０−１７６、ＳＣ２０−３７、ＳＣ２０１−２６６、ＳＣ２６８及びＳＣ２７０
−２８０を含む。
【０１１４】
本発明の化合物は、例えば下記の模式図にしたがって調製される場合がある。
【０１１５】
一般的に、サリチルヒドラジド（ＳＣｓ）は次のように調製することができる。無水ジ
オキサン（４０ｍＬ）中の芳香族酸（１０ミリモル）、ペンタフルオロフェノール（１１
ミリモル）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１０ミリモル）の混合物は
、終夜室温で撹拌される。ジシクロヘキシル尿素はセライトを通じた濾過により除去され
、濾液は乾燥させられ、結晶化又はシリカゲルクロマトグラフィーにより直接精製される
（Ｚｈａｏ  ａｎｄ  Ｂｕｒｋｅ  （１９９７）  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５３：４２
１９−３０）。
【０１１６】
【表１３】
2008518964.tif 000035
【０１１７】
Ｐｆｐはペンタフルオロフェニル基である。Ｒ及びＲ’のそれぞれは、別々に又はいっ
しょに、水素原子か、ハロゲン原子か、ヒドロキシル基か、他のいずれかの有機官能基か
であり、該官能基は、直鎖状、分枝鎖状又は環状の構造でいずれかの数の、望ましくは１
−２０個の炭素原子を含み、酸素、硫黄又は窒素のようなヘテロ原子を含むこともできる
。代表的なＲ及びＲ’は、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル
基、フェニル基、置換フェニル基、アリール基、置換アリール基、ヘテロアリール基及び
置換へテロアリール基を含むがこれらに限定されない。代表的な置換基は、ハロゲンと、
ヒドロキシル基と、アルコキシ基と、アルキルチオ基と、フェノキシ基と、アロキシ基と
、シアノ基と、イオシアノ基と、カルボニル基と、カルボキシル基と、アミノ基と、アミ
ド基と、スルフォニル基と、置換複素環、糖又はペプチドとを含むがこれらに限定されな
い。
【０１１８】
サリチル酸ペンタフルオロフェニルエステルを調製するために、ジオキサン（１８０ｍ
Ｌ）中のサリチル酸（４．１４ｇ、３０ミリモル）、ペンタフルオロフェノール（５．５
２ｇ、３３ミリモル）及びＤＣＣ（６．３ｇ、３０ミリモル）の混合物は、室温、終夜撹
拌される。ジシクロヘキシル尿素はセライトを通じた濾過により除去され、濾液は乾燥さ
れる。残渣は融点１１１−１１１．５°Ｃの白色固体（４．５６ｇ、収率５０％）として
サリチル酸ペンタフルオロフェニルエステルを提供するために、エーテル：ヘキサンによ
り結晶化される。ＩＨ  ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）８  ９．８３（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｄ
ｄ、Ｊ＝８．１、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．６３−７．５６（ｍ、１Ｈ）、７．０８−６
．９７（ｍ、２Ｈ）。
【０１１９】
ピコリン酸ペンタフルオロフェニルエステルを調製するために、ピコリン酸（１．２３
ｇ、１０ミリモル）は上述のように、ジオキサン（３０ｍＬ）中のペンタフルオロフェノ
ール（１．８４ｇ、１０ミリモル）と反応させられる。シリカゲルクロマトグラフィーに
よる精製及びその後の結晶化が、融点６２−６４°Ｃ（エーテル：ヘキサン）の白色固体
（１．５２ｇ、収率５３％）としてピコリン酸ペンタフルオロフェニルエステルを提供す
る。ＪＨ  ＮＭＲ（ＣＤＣＩ３）８  ８．８７（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、ＩＨ）、８．２９
（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、ＩＨ）、７．９９−７．９２（ｍ、１Ｈ）、７．６４−７．５６
（ｍ、ＩＨ）。
【０１２０】
Ｎ，Ｎ’−Ｂｉｓ−サリチルヒドラジンを調製するために、サリチル酸ペンタフルオロ
フェニルエステル（３０４ｍｇ、１．０ミリモル）は上述のように、無水ヒドラジン又は
ヒドラジン一水和物と反応させられる。Ｎ，Ｎ’−Ｂｉｓ−サリチルヒドラジンは、融点
３１５−３１６°Ｃ（ＥｔＯＡｃ）（ｌｉｔ．５、３０２°Ｃ）の白色固体として（それ
ぞれ１２３ｍｇ、収率９０％、及び、１３０ｍｇ、収率９５％）提供される。ＩＨ  ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ  ６）５  １１．７８（ｓ、２Ｈ）、１０．８９（ｓ、２Ｈ）、７．９
２（ｄｄ、Ｊ＝７．８、１．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．４９−７．４２（ｍ、２Ｈ）、７．０
−６．９４（ｍ、４Ｈ）。ＩＲ（ＫＢｒ）３０８８、１６５４、１６０５、１４８４、１
２３４、７５４。ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ２７３  （ＭＨ＋）。Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＣＩ４Ｈ
ＩｚＮｚＯ４）：Ｃ、６１．７６；Ｈ、４．４４；Ｎ、１０．２９。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ、６
１．６６；Ｈ、４．５１；Ｎ、１０．３７。
【０１２１】
Ｎ，Ｎ’−Ｂｉｓ−ピコリノイルヒドラジンを調製するために、ピコリン酸ペンタフル
オロフェニルエステル（２８９ｍｇ、１．０ミリモル）は上述のように、無水ヒドラジン
又はヒドラジン一水和物と反応させられる。Ｎ，Ｎ’−Ｂｉｓ−ピコリノイルヒドラジン
は、融点２２４−２２５°Ｃ（ＥｔＯＡｃ）の白色固体として（それぞれ１１０ｍｇ、収
率９１％、及び、９６ｍｇ、収率８０％）提供される。ＩＨ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ  ６
）８  １０．６３（ｓ、２Ｈ）、８．７０（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、２Ｈ）、８．０５−８
．０４（ｍ、４Ｈ）、７．６９−７．６３（ｍ、２Ｈ）。ＩＲ（ＫＢｒ）３３２１、１６
７６、１５６０、１４８２。ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ２４３  （ＭＨ＋）。Ａｎａｌｙｓｉｓ
（ＣＩｅＨＩｏＮ４０：）：Ｃ、５９．５０；Ｈ、４．１６；Ｎ、２３．１３。Ｆｏｕｎ
ｄ：Ｃ、５９．４５；Ｈ、４．１７；Ｎ、２３．０７。
【０１２２】
ＳＣ１４１−ＳＣ１４４、ＳＣ１４８及びＳＣ１５３−１５８の合成は、それぞれ、本
質的に純粋な４−ヒドラジノピロロ［１，２−ａ］キノキサリン  １４ａ−ｃ及び６−ヒ
ドラジノイミダゾ［１，２−ａ］ピリド［３，２−ｅ］ピラジン  １４ｄを与えるために
、適当な４−クロロピロロ［１，２−ａ］キノキサリン  １３ａ−ｃ（Ｎａｇａｒａｊａ
ｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７２）Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．１０：３４４−３５０、及
び、Ｇｕｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１７：１９９７
−２００９）又は６−クロロイミダゾ［１，２−ａ］ピリド［３，２−ｅ］ピラジン  １
３ｄ（Ｃａｍｐｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：３６
７０−３６７８）と、ヒドラジン一水和物とから開始して完了させることができる（模式
図１）。その後に続くＮ−アクリル化段階は、異なる実験条件で実施することができる。
ＳＣ１４３、ＳＣ１４４及びＳＣ１４８は、２，２’−ジピリルジスルフィド及びトリフ
ェニルホスフィンの縮合試薬としての使用により、誘導体１４ｂ−ｄと業務用の２−ピラ
ジンカルボン酸との反応により得ることができるのに対して、前記ＳＣ１４１及びＳＣ１
４２は、それぞれ、化合物１４ａとピロール−２−カルボン酸塩化物及びニコチノイル塩
化物塩酸塩との反応により得ることができる（Ｄｉ  Ｆａｂｉｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９
３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４３：２２９−２３０６）。１−［３−（ジメチルアミノ
）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）／４−（ジメチルアミノ）ピ
リジン（ＤＭＡＰ）系によるヒドラジン誘導体１４ａと適切なインドールカルボン酸との
間の縮合反応は、化合物ＳＣ１５５−１５８を与える。化合物ＳＣ１５３及びＳＣ１５４
のＮ−ＢＯＣ−誘導体は、それぞれ、化合物１４ａとＮ−ＢＯＣ−チアゾリジン−４−カ
ルボン酸又はＮ−ＢＯＣ−β−アラニンとから開始し、再びＥＤＣ／ＤＭＡＰを脱水素系
として使用し、最後にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／アニソールを用いて脱保護され、合
成することができる。
【０１２３】
【表１４】
2008518964.tif 000036
【０１２４】
ｂｉｓ−誘導体ＳＣ１４７の調製は、ヒドラジン一水和物と、Ｎａｇａｒａｊａｎら（
（１９７２）Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．１０：３４４−３５０）の方法で次々に得ら
れるピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−カルボン酸エチル  １５の２モル当量との
直接的な反応により実施することができる（模式図２）。
【０１２５】
【表１５】
2008518964.tif 000037
【０１２６】
ＳＣ１６０、ＳＣ１６１、ＳＣ１６２、ＳＣ１６３、ＳＣ１６４及びＳＣ１６５は、そ
れぞれ、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ、その後、ＴＦＡ／アニソールの存在下での、１４ａとＢｏｃ
−３−アミノ−３−（２−クロロフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４
−クロロフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）プ
ロパン酸、Ｂｏｃ−３−アミノ−３−（４−シアノフェニル）プロパン酸、Ｂｏｃ−３−
アミノ−３−（４−メトキシフェニル）プロパン酸及びＢｏｃ−３−アミノ−３−（４−
トリフルオロメチルフェニル）プロパン酸との反応により得ることができる（模式図３）
。
【０１２７】
【表１６】
2008518964.tif 000038
【０１２８】
ＳＣ１６６、ＳＣ１６７、ＳＣ１６８、ＳＣ１６９、ＳＣ１７０、ＳＣ１７１及びＳＣ
１７２は、それぞれ、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ、その後、ＴＦＡ／アニソールの存在下での、１
４ａと模式図４に示された対応する酸（１５ａ−ｇ）との反応により得ることができる（
模式図４）。
【０１２９】
【表１７】
2008518964.tif 000039
【０１３０】
ＳＣ１７３は１４ａと、２−キノキサリンカルボン酸、ジクロロメタン、トリフェニル
ホスフィン及び２，２’−ジピリジルジスルフィドとの反応により得ることができる。Ｓ
Ｃ１７４は１４ａと、ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−カルボン酸、ジクロロメ
タン、トリフェニルホスフィン及び２，２’−ジピリジルジスルフィドとの反応により得
ることができる。
【０１３１】
ＳＣ１７５はニコチノイル塩化物塩酸塩と、９−ヒドラジノ−９Ｈ−ピロロ［１，２−
ａ］インドール及びピリジンとの反応により得ることができる。ＳＣ１７６はピラジン−
２−カルボニル塩化物塩酸塩又はピラジン−２−カルボニル塩化物と、９−ヒドラジノ−
９Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］インドール及びピラジンとの反応により得ることができる（
模式図５）。
【０１３２】
【表１８】
2008518964.tif 000040
【０１３３】
組成物
本発明の化合物は、医薬品の組成物に組み込まれる場合がある。そのような組成物は典
型的に、前記化合物と医薬品として受け入れられるキャリアーとを含む。「医薬品として
受け入れられるキャリアー」は、医薬品の投与に適した、溶媒と、分散媒と、被覆剤と、
抗細菌剤及び抗菌剤と、等張剤及び吸収遅延剤と、これらに類するものとを含む。（例え
ばタキソール、ドキソルビシン又は５−ＦＵのような）他の活性のある化合物も前記組成
物に組み込まれる場合がある。
【０１３４】
医薬品の組成物は、目的の投与径路に適合するように処方される。例えば米国特許Ｎｏ
．６，７５６，１９６を参照せよ。投与経路の例は、例えば静脈内投与、皮内投与及び皮
下投与のような非経口投与と、（例えば吸入のような）経口投与と、（局所的な）経皮投
与と、経粘膜投与と、直腸投与とを含む。非経口投与か、皮内投与か、皮下投与かのため
に使用される溶液又は懸濁液は、以下の成分を含む場合があり、該成分は、注射のための
水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール
又は他の合成溶媒のような無菌希釈液と、ベンジルアルコール又はメチルパラベンのよう
な抗細菌剤と、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムのような抗酸化剤と、エチレン
ジアミン四酢酸のようなキレート剤と、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液又はリン酸緩衝液の
ような緩衝液と、塩化ナトリウム又はブドウ糖のような張力調整剤とである。ｐＨは、塩
酸又は水酸化ナトリウムのような酸又は塩基で調整される場合がある。非経口製剤は、ガ
ラス製又はプラスチック製のアンプルか、ディスポーザブルシリンジか、複数回投与のバ
イアルかに封入される場合がある。
【０１３５】
注射用に適した医薬品の組成物は、（水溶性の場合には）無菌水溶液又は無菌分散液と
、無菌注射液又は無菌分散液の即時調製のための無菌パウダーとを含む。静脈内投与に適
したキャリアーは、生理食塩水か、静菌水か、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡ
ＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）か、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）かを含む。全ての
場合で前記組成物は、無菌でなければならず、かつ、容易なシリンジ作業性がある範囲で
流動性であるべきである。前記組成物は、製造及び貯蔵の条件下で安定であるべきであり
、かつ、細菌類や菌類のような微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。前
記キャリアーは例えば、水と、エタノールと、（例えばグリセロール、プロピレングリコ
ール、液体ポリエチレングリコール及びこれらに類するもののような）ポリオールと、そ
の適切な混合物とを含む溶媒又は分散媒である場合がある。前記適切な流動性は、例えば
、レシチンのようなコーティング剤の使用により、分散液の場合における必要な粒子サイ
ズの維持により、及び、界面活性剤の使用により、維持される場合がある。前記微生物の
汚染作用の予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、
チメローサル及びこれらに類するもののような、さまざまな抗細菌剤及び抗菌剤により達
成される場合がある。多くの場合で、例えば糖、マンニトール及びソルビトールのような
ポリアルコール、塩化ナトリウムのような等張剤を、組成物に含めることは望ましいだろ
う。前記注射用組成物の持続的吸収は、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチ
ンのような、吸収を遅延させる薬剤を組成物に含めることにより引き起こされる場合があ
る。
【０１３６】
無菌注射溶液は、必要量の前記化合物を、上に列挙された成分の１種類又は２種類以上
の組み合わせを有する適切な溶媒に組み込み、必要に応じて濾過滅菌を続けて行うことに
より調製される場合がある。一般的に分散液は、前記化合物を、基礎分散媒と上に列挙さ
れた成分から選択される必要とされる他の成分とを含む無菌の薬物送達手段（ｖｅｈｉｃ
ｌｅ）に組み込むことにより調製される。無菌注射溶液の調製のための無菌パウダーの場
合では、望ましい調製方法は、前に濾過滅菌した溶液から、前記活性成分といずれかの付
加的な必要とされる成分とのパウダーを作り出す真空乾燥及び凍結乾燥である。
【０１３７】
経口組成物は一般的に、不活性希釈液又は可食性キャリアーを含む。経口治療投与の目
的で、前記化合物は賦形剤と組み込まれ、かつ、タブレット剤か、トローチ剤か、例えば
ゼラチンカプセルのようなカプセル剤かの形態で使用される場合がある。経口組成物は、
うがい薬として使用するために、流動性のキャリアーを使用して調製される場合もある。
医薬品に適した結合剤、及び／又は、補助物質は、前記組成物の一部分として含まれる場
合がある。前記タブレット剤、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、及びこれらに類するもの
は、下記の成分又は性質の類似する化合物のいずれかを含む場合があり、該成分又は化合
物は、微晶質セルロース、トラガカント・ゴム又はゼラチンのような結合剤か、デンプン
又は乳糖のような賦形剤か、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ又はコーンスターチのような
崩壊剤か、ステアリン酸マグネシウム又はＳｔｅｒｏｔｅｓのような滑剤か、コロイド状
二酸化ケイ素のような流動促進剤か、ショ糖又はサッカリンのような甘味料か、ペパーミ
ント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料のような香料かである。
【０１３８】
前記化合物は、吸入による投与のために、例えば二酸化炭素ガスのような適切な高圧ガ
ス又は噴霧器を含む加圧容器又はディスペンサーからエアゾールスプレーの形態で送達さ
れる。
【０１３９】
体系的投与は、経粘膜的又は経皮的方法による場合もある。経粘膜的投与又は経皮的投
与のために、浸透させるべき障壁に対して適当な浸透剤が処方中で使用される。そのよう
な浸透剤は当業者に周知であり、例えば経粘膜的投与に対しては洗剤と、胆汁酸塩と、フ
シジン酸誘導体とを含む。経粘膜的投与は、鼻噴霧又は座薬の使用を通じて実施される場
合がある。経皮的投与に対しては、前記化合物は、当業者に周知である軟膏（ｏｉｎｔｍ
ｅｎｔｓ）、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）、ジェル又はクリーム中に処方される。
【０１４０】
前記化合物は、直腸への送達のために、（例えば、ココアバター及び他のグリセリドの
ような従来の座薬基剤を有する）座薬又は停留浣腸の形態で調製される場合もある。
【０１４１】
ある実施態様では、前記化合物は、制御放出処方のような身体からの迅速な排出から前
記化合物を保護するキャリアーで調製され、埋め込み及びマイクロカプセル化した送達シ
ステムを含む。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポ
リグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸のような生分解性及び生
体適合性ポリマーは使用される場合がある。そのような処方の調製方法は、当業者には明
らかであろう。前記物質は、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ  Ｐｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．より商業的に取得される場合もある。（ウィルス抗原
に対するモノクローナル抗体を有し、感染細胞を標的とするリポソームを含む）リポソー
ムの懸濁液は医薬品として受け入れられるキャリアーとして使用される場合もある。これ
らは、例えば米国特許Ｎｏ．４，５２２，８１１に記載されているような当業者に周知の
方法にしたがって調製することができる。
【０１４２】
投与の容易さと用量の均一性とのために、投与単位形態（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆ
ｏｒｍ）で経口又は非経口の組成物を処方することは有利である。本明細書で用いられる
ところの「投与単位形態」とは、治療されるべき患者に対する一定量の投与に適した物理
的に離散した単位であって、それぞれの単位は必要とされる医薬品のキャリアーとの関連
で目的の治療効果を生み出すために計算された所定量の活性化合物を含む単位を指す。
【０１４３】
医薬品の組成物は、包装された製品を形成するための投与についての取扱説明書といっ
しょに、容器か、箱か、ディスペンサーかに含められる場合がある。例えば包装された製
品は、容器と、本発明の化合物の有効量と、癌か血管新生機能関連疾患かを治療するため
の前記化合物の投与することを表示する、前記容器に付属する説明書とを含む場合がある
。
【０１４４】
別の実施例では、化学式ＸＩ又はＸＩＩの化合物の有効量は、説明書といっしょに容器
中に包装される場合がある。前記説明書は前記容器に付属され、非小細胞肺癌か、中枢神
経系癌か、卵巣癌か、乳癌か、腎臓癌か、前立腺癌か、加齢黄斑変性症か、黄斑ジストロ
フィーか、糖尿病かを治療するための前記化合物の投与についての取扱説明書を含む。
【０１４５】
【化２１】
2008518964.tif 000041
化学式ＸＩ
【０１４６】
【化２２】
2008518964.tif 000042
化学式ＸＩＩ
【０１４７】
化学式ＸＩ及びＸＩＩにおいてＡｒは芳香環を含みＨｅｔは複素環を含む。
【０１４８】
代替的に、化学式ＩＩの化合物の有効量は、説明書といっしょに容器中に包装される場
合がある。前記説明書は前記容器に付属され、癌か血管新生機能関連疾患かを治療するた
めの前記化合物の投与についての取扱説明書を含む。
【０１４９】
【化２３】
2008518964.tif 000043
化学式ＩＩ
【０１５０】
化学式ＩＩにおいてＲはＨ、アルキル基又はハロゲンであり、Ｒ’はＨ、アルキル基又
はハロゲンであり、ＸはＣＨ又はＮであり、Ｙは単素環又は複素環を含む。
【０１５１】
包装された製品はさらに、例えばタキソール、ドキソルビシン又は５−ＦＵのような、
癌か血管新生機能関連疾患かを治療するための１種類又は２種類以上の他の医薬品の有効
量を含む場合がある。
【０１５２】
用途
治療方法
本発明は、上記の化合物又は組成物の有効量を、該化合物又は組成物を必要とする患者
に処方する予防方法及び治療方法の両方を提供する。
【０１５３】
本明細書で用いられるところの「患者」とはヒト又は動物を指し、例えば哺乳類や非哺
乳類のような全ての脊椎動物を含むが、前記哺乳類は、霊長類（特に高等霊長類）、ヒツ
ジ、イヌ、（例えばマウス又はラットのような）齧歯類、テンジクネズミ、ヤギ、ブタ、
ネコ、ウサギ及びウシのようなものであり、前記非哺乳類はニワトリ、両生類、は虫類等
のようなものである。好適な実施態様では前記患者はヒトである。別の実施態様では前記
患者は実験動物か疾病モデルとして適した動物かである。
【０１５４】
治療されるべき患者は、例えば当業者に周知の診断法を用いて、癌又は血管新生機能関
連疾患に罹患しているか、その発症リスクがあるかで特定される場合があるが、前記血管
新生機能はすなわち、悪性組織の増殖に通常付随して起こる血管形成である。前記患者は
、患者かヘルスケアの専門家かの判断で特定される場合があり、（例えば意見のように）
主観的である場合か、（例えばテスト又は診断方法により測定可能である場合のように）
客観的である場合かがある。癌の例は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、
メラノーマ、卵巣癌、乳癌、腎臓癌又は前立腺癌を含む。血管新生機能関連疾患の例は、
加齢黄斑変性症、黄斑ジストロフィー又は糖尿病を含む。
【０１５５】
本明細書で用いられるところの「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、疾病か
、疾病の症状か、疾病の傾向かを治す（ｃｕｒｅ）か、癒す（ｈｅａｌ）か、軽減する（
ａｌｌｅｖｉａｔｅ）か、取り除く（ｒｅｌｉｅｖｅ）か、修正する（ａｌｔｅｒ）か、
是正する（ｒｅｍｅｄｙ）か、改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）か、向上させる（ｉｍ
ｐｒｏｖｅ）か、影響を及ぼす（ａｆｆｅｃｔ）かする目的での、疾病か、疾病の症状か
、疾病の傾向かを有する患者に対する治療薬の塗布又は投与、あるいは、前期患者由来の
単離組織又は株細胞に対する治療薬の塗布又は投与と定義される。
【０１５６】
「有効量」は、治療される患者で本明細書で示されるところの医学的に望まれる結果を
生み出すことのできる治療薬の量である。前記医学的に望まれる結果は客観的である（す
なわち、いくつかのテスト又は指標により測定可能である）か、主観的である（すなわち
、患者が効果について示唆する、又は、効果を感じる）かの場合がある。
【０１５７】
前記化合物の毒性及び治療上の有効性は、例えばＬＤ５０（母集団の５０％に対して致
死的な用量）及びＥＤ５０（母集団の５０％について治療上有効な用量）を決定するため
の細胞培養又は実験動物での標準的な薬学上の手順により決定することができる。毒性効
果及び治療効果の間の用量比は治療係数であり、治療係数はＬＤ５０／ＥＤ５０比として
表現することができる。高い治療係数を示す化合物が望まれる。毒性の副作用を示す化合
物が使用される場合には、非感染細胞に対する損傷の可能性を最小化し、それにより副作
用を低減するために、そのような化合物を標的とし患部組織の部位に届ける送達システム
を設計する際注意が払われるべきである。
【０１５８】
細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトでの使用のための用量の範
囲を設定する際に使用される場合がある。前記化合物の用量は、毒性がほとんど又は全く
ないＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にあるのが望ましい。前記用量は、採用される投与
形態と使用される投与経路とに依存して、この範囲内で変化する場合がある。本発明の方
法の中で使用されるいずれかの化合物について、最初は細胞培養アッセイから、治療上の
有効用量が評価される場合がある。用量は、細胞培養で決定されたＩＣ５０（すなわち、
症状の最大半量の阻害を達成する化合物の濃度）を含む血中血漿濃度範囲を実現するため
に、動物モデルで設定される場合がある。そのような情報はヒトでの有用な用量を、より
正確に決定するために使用される場合がある。血漿濃度は、例えば高速液体クロマトグラ
フィーにより測定される場合がある。
【０１５９】
前記化合物の治療上の有効量（すなわち、有効量）は、例えば約１μｇ／ｋｇから約５
００ｍｇ／ｋｇまでの範囲か、約１００μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇまでの範囲か、約
１μｇ／ｋｇから５０μｇ／ｋｇまでの範囲かの場合がある。前記化合物は例えば、約１
週間ないし１０週間の間の期間に、望ましくは２週間ないし８週間の間の期間に、より望
ましくは約３週間ないし７週間の間の期間に、さらに望ましくは約４、５又は６週間に、
１週間当り１回投与される場合がある。化合物の適当な用量は前記化合物の効力に依存す
ることがさらに理解される。これらの化合物の１種類又は２種類以上が（例えば動物又は
ヒトの）患者に投与されるべきであるとき、医師、獣医師又は研究者は、例えば、最初は
相対的に低い用量を処方し、その後、適当な応答が得られるまで用量を増加させる場合が
ある。加えて、いずれかの特定の患者に対する特有の用量水準はさまざまな要素に依存す
ることが理解されるが、前記さまざまな要素は、採用した特定の化合物の活性と、患者の
年齢、体重、全体的な健康状態、性別及び食事と、投与の時間と、投与の経路と、排出速
度と、いずれかの薬剤の組合せと、疾病又は疾患の重症度と、過去の治療と、現在の他の
疾病とを含む。さらに、化合物の治療上の有効量による患者の治療は、単一の治療を含む
場合があり、又は、望ましくは一連の治療を含む場合がある。
【０１６０】
前記治療はさらに、例えばタキソール、ドキソルビシン又は５−ＦＵのような、癌か血
管新生機能関連疾患かを治療するための１種類又は２種類以上の他の医薬品の有効量を患
者に投与することを含む場合がある。複数の治療薬が使用されるとき該治療薬は、同時に
又は順番に、混合投与又は個別投与で、投与される場合がある。
【０１６１】
ＰＥＴ技術を使用する治療監視方法
新規な検出技術を採用した小型高解像度ＰＥＴスキャナーは、特に小動物のイメージン
グのために設計された（Ｈｏｌｄｓｗｏｒｔｈ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ（２００２）
Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：Ｓ３４−３９、及び、Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  
ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３８：２１７３−２１８８）。このアプ
ローチは、ヒトでのテストの前に薬剤のＰＫ及び用法を最適化するためにマウスに移植さ
れたヒト腫瘍異種移植片での薬剤の効果の、迅速なテストを可能にする。そのようなｉｎ
ｖｉｖｏの評価が、薬剤候補の成功を予言し、その結果、薬剤発見パイプラインにおい
て臨床上の可能性のある薬剤候補を早期に選別する場合がある。薬剤の発見と開発に応用
されるのと同様に、機能性ＰＥＴイメージング技術により得られる情報は、（１）標識さ
れた薬剤候補の吸収、分布、代謝及び排泄、（２）（例えば腫瘍のような）関心のある特
定の標的への薬剤の送達、（３）薬剤又は薬剤候補の、（例えば酵素又は細胞表面受容体
のような）目的の分子標的との相互作用、及び、（４）（例えば細胞致死及び細胞周期停
止のような）望ましいＰＤ効果か、望ましくない副作用かの決定、という４つのカテゴリ
ーに分けられる場合がある。非侵襲的ＰＥＴイメージング技術は、治療上の用量のより正
確な設定と、薬剤の標識形態を使用するＰＫ及びＰＤのより迅速な特徴づけとを行い、ｉ
ｎ  ｖｉｖｏでの親和性を有効性と結びつけることを可能とする。これは必然的にデータ
の質を向上させ、費用と使用される動物の数とを減少させ、そして最も重要なことには、
新規化合物についての検査時間を減少させるだろう。
【０１６２】
グルコース類縁体［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース（［１８Ｆ］ＦＤＧ）でのＰ
ＥＴイメージング技術は、高精度で初期の癌を可視化するため、及び、抗腫瘍性治療に対
する癌の応答を定量化するために、ヒト患者で広範に使用されてきている。乳癌でのこの
例は参考文献中に見つけることができる（Ｂｅｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ａｍ
．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２７：４０７−４１０、及び、Ｅｕｂａｎｋ  ａｎｄ  Ｍ
ａｎｋｏｆｆ（２００４）Ｓｅｍｉｎ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３４：２２４−２４０）。Ｐ
ＥＴによる、マウスにおける新規薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性の早期評価は、将来の
臨床研究のための正しい薬剤の選択を大いに助けることができるだろう。腫瘍細胞による
一般的に高速の解糖は、ＰＥＴ／［１８Ｆ］ＦＤＧイメージングにより定量することがで
きる。ＦＤＧはヘキソキナーゼによりリン酸化され、細胞内で効果的に捕捉される負に荷
電したＦＤＧ−６−リン酸を生じる。ＰＥＴにより測定される腫瘍でのＦＤＧの取り込み
の増加は、生存腫瘍密度（ｖｉａｂｌｅ  ｔｕｍｏｒ  ｄｅｎｓｉｔｙ、すなわち、単位
組織体積当たりの生存細胞数）と大いに関係する。ＦＤＧの取り込みは腫瘍細胞の生存度
を代表する（Ｈｉｇａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３４：
７７３−７７９）ため、効果的な腫瘍治療でのＦＧＤ取り込みの減少は、腫瘍細胞の致死
を反映する。実験動物モデルでの腫瘍応答の評価は薬剤開発において最も重要であり、Ｆ
ＤＧ  ＰＥＴはこの目的にとって理想的なツールである。実際に多数の臨床試験が、腫瘍
の［１８Ｆ］−ＦＤＧ取り込みの変化の定量は抗癌剤の殺腫瘍効果の早期で高感度な薬力
学マーカーを提供する場合があることを既に示している。化学療法中のＦＤＧ  ＰＥＴ画
像の変化は、乳癌（Ａｖｒｉｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ
．１８：３４９５−３５０２）と、肺癌（Ｈｉｇａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ
．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４３：３９−４５）と、頭頸部癌（Ｈａｌｆｐｅｎｎｙ  ｅｔ  ａ
ｌ．（２００２）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８６：５１２−５１６）と、リンパ腫（Ｌｏ
ｗｅ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅｍａｎ（２００２）Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４３：１０２８−１
０３０）とのようなさまざまな癌を有する患者の応答を予言する。（総説については、Ｃ
ｚｅｒｎｉｎ  ａｎｄ  Ｐｈｅｌｐｓ（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５３：８
９−１１２、Ｃｏｈａｄｅ  ａｎｄ  Ｗａｈｌ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．８：１１
９−１３４、及び、Ｎａｂｉ  ａｎｄ  Ｚｕｂｅｌｄｉａ（２００２）Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍ
ｅｄ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３０：３−９、ｑｕｉｚ  １０−１１を参照せよ。）これらの研
究は、ＰＥＴが腫瘍サイズの変化に基づく従来の手順を使用して可能とするよりも、治療
計画のより早期段階での治療に対する臨床応答を特定することができることを証明する。
【０１６３】
高度に増殖している細胞の重要な特性は、その顕著なＤＮＡ合成速度である。ＤＮＡ合
成経路に組み込まれるＰＥＴプローブは、腫瘍の増殖速度と腫瘍細胞分裂に及ぼす治療の
影響とを測定する理想的な試薬である。このクラスのプロトタイプ試薬はチミジンである
。不幸にもチミジンの利用は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのその迅速な異化のために限定される（
Ｃｏｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２１：１０４５−
１０５１）。過去の１０年間に、酵素分解に耐性で、かつ、高い特異性及び親和性でＤＮ
Ａに組み込まれるいくつかのチミジンの放射標識類縁体が特定された。（例えば、Ｃｚｅ
ｒｎｉｎ  ａｎｄ  Ｐｈｅｌｐｓ（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５３：８９−
１１２、Ｃｏｈａｄｅ  ａｎｄ  Ｗａｈｌ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．８：１１９−
１３４を参照せよ。）１つのそのような放射性トレーサーである、（半減期が２０分の）
Ｃ−１１で標識された２’−フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルウ
ラシル（ＦＭＡＵ）は、ＰＥＴでの腫瘍イメージングにとって有望である（Ｃｏｎｔｉ  
ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２：７８３−７８９、Ｂａｄ
ｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２７：３６１−３６８
、及び、Ｂａｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３１：
４０７−４１８）。細胞取り込みの後で、ＦＭＡＵはチミジンキナーゼによりリン酸化さ
れ、ＤＮＡに組み込まれる。
【０１６４】
したがって本発明は、患者の治療を監視する方法を提供する。前記方法は癌細胞か血管
新生機能疾患を有する細胞かを有する患者に上記の化合物を投与すること、及び、前記細
胞の生存か、前記細胞の増殖か、その組合せかをＰＥＴイメージング技術を使用して測定
することを含む。前記患者は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、中枢神経系癌、メラノー
マ、卵巣癌、乳癌、腎臓癌又は前立腺癌に罹患している場合がある。前記患者は、例えば
マウスのような動物の場合があり、前記細胞は異種移植されたヒト細胞の場合がある。望
ましくは、前記患者はヒトである。
【０１６５】
遺伝子発現をプロファイリングする方法
薬剤治療に応答する遺伝子発現パターンは、作用機序と、耐性機序と、薬剤に対する細
胞の経路との強力な表示である。例えばＤＮＡマイクロアレイ技術による遺伝子発現のプ
ロファイリングは、薬剤標的を特定し有効にするためと、薬剤治療を監視するためとに有
用である。
【０１６６】
したがって本発明は、試験細胞を上記の化合物と接触させること、及び、前記試験細胞
での遺伝子発現をプロファイリングすることにより、遺伝子発現をプロファイリングする
方法を提供する。特に、前記試験細胞は、例えば白血病細胞、非小細胞肺癌細胞、大腸癌
細胞、中枢神経系癌細胞、メラノーマ細胞、卵巣癌細胞、乳癌細胞、腎臓癌細胞又は前立
腺癌細胞のような癌細胞か、例えば加齢黄斑変性症を有する細胞、黄斑ジストロフィーを
有する細胞又は糖尿病を有する細胞のような血管新生機能疾患を有する細胞かの場合があ
る。試験細胞での遺伝子発現は、対照細胞での遺伝子発現と比較される場合があり、前記
対照細胞は例えば、前記化合物に接触させられていない細胞か、作用が周知である別の化
合物に接触させられた細胞か、前記化合物に耐性の細胞かである。そのような比較は、前
記化合物の作用の理解のための有用な情報を提供する。
【０１６７】
遺伝子発現はｍＲＮＡ及びタンパク質のレベルで決定することができる。生物学的試料
中のタンパク質か核酸かの存在、レベル又は非存在は、試験患者由来の生物学的試料を得
ること、及び、前記生物学的試料を前記タンパク質か（例えば、ｍＲＮＡ又はゲノムＤＮ
Ａのような）前記タンパク質をエンコードする核酸かを検出できる試薬に接触させ、前記
生物学的試料中の前記タンパク質又は核酸を検出することにより評価することができる。
「生物学的試料」という用語は、患者の中に存在する、組織と、細胞と、流動体と同様に
、患者から単離された、組織と、細胞と、生物学的流動体とを含む。遺伝子発現のレベル
は、多数の方法で測定することができ、該方法は、遺伝子から転写されたｍＲＮＡを測定
すること、遺伝子によりエンコードされるタンパク質の量を測定すること、又は、遺伝子
によりエンコードされるタンパク質の活性を測定することを含むがこれらに限定されない
。
【０１６８】
細胞内の遺伝子から転写されたｍＲＮＡのレベルは、ｉｎ  ｓｉｔｕフォーマット及び
ｉｎ  ｖｉｔｒｏフォーマットの両方により決定することができる。前記単離されたｍＲ
ＮＡは、ハイブリダイゼーションアッセイ又は増幅アッセイに使用することができ、該ア
ッセイは、サザン分析又はノーザン分析と、ポリメラーゼ連鎖反応分析と、プローブアッ
セイとを含むがこれらに限定されない。ｍＲＮＡレベルの検出のための望ましい診断法は
、前記単離されたｍＲＮＡを、検出される遺伝子から転写されたｍＲＮＡとハイブリッド
形成することができる核酸分子（プローブ）と接触させることを含む。前記プローブはア
レイのアドレス上に配置される場合がある。
【０１６９】
あるフォーマットではｍＲＮＡ（又はｃＤＮＡ）は、例えば前記単離されたｍＲＮＡを
アガロースゲル上で泳動すること、及び、ゲルからニトロセルロースのような膜へ前記ｍ
ＲＮＡを移行させることにより、表面に固定化されプローブと接触させられる。代替的な
フォーマットでは、例えば二次元遺伝子チップアレイで、前記プローブは表面に固定化さ
れ、前記ｍＲＮＡ（又はｃＤＮＡ）はプローブと接触させられる。当業者は、遺伝子から
転写されたｍＲＮＡレベルの検出のために、周知のｍＲＮＡ検出方法を適応させることが
できる。
【０１７０】
試料中のｍＲＮＡのレベルは、核酸の増幅と、その後の、当業者に周知の技術を使用す
る増幅させた分子の検出と、により評価することができるが、前記核酸の増幅は例えば、
ＲＴ−ＰＣＲ（米国特許公報第４，６８３，２０２号明細書）か、リガーゼ連鎖反応（Ｂ
ａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８９
−１９３）か、自己持続配列複製（ｓｅｌｆ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  
ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）（Ｇｕａｔｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１８７４−１８７８）か、転写増幅システム
（Ｋｗｏｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８６：１１７３−１１７７）か、Ｑ−ベータレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ  ｅｔ  ａ
ｌ．（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７）か、ローリング・サー
クル複製（米国特許公報第５，８５４，０３３号明細書）か、いずれかの他の核酸増幅方
法かである。本明細書で用いられるところの増幅プライマーとは、遺伝子の５’領域又は
３’領域（それぞれ、プラス鎖及びマイナス鎖（ｓｔｒａｎｄｓ）、又は、逆もまた同じ
）にアニールでき、中間に短い領域（ｓｈｏｒｔ  ｒｅｇｉｏｎ）を含む核酸分子の対で
あると定義される。一般的に、増幅プライマーは約１０から３０までのヌクレオチド長で
あり、約５０から２００までのヌクレオチド長の領域を挟む。適当な条件下で、かつ、適
当な試薬で、かかるプライマーは、プライマーに挟まれるヌクレオチド配列を含む核酸分
子の増幅を可能とする。
【０１７１】
ｉｎ  ｓｉｔｕ法については、細胞試料又は組織試料が、調製／加工され、典型的には
ガラススライドのような支持体上に固定化され、それから、検出される遺伝子から転写さ
れたｍＲＮＡとハイブリッド形成することのできるプローブに接触させられる場合がある
。
【０１７２】
前記遺伝子によりエンコードされるタンパク質のレベルを決定するために、さまざまな
方法が使用される場合がある。一般的にこれらの方法は、試料中のタンパク質のレベルを
評価するために、試料に対する抗体のような、前記タンパク質に選択的に結合する試薬を
接触させることを含む。望ましい実施態様では、前記抗体は検出可能な標識を有する。抗
体はポリクローナルである場合があり、又は、より望ましくはモノクローナルである場合
がある。インタクトな抗体又は（例えばＦａｂ又はＦ（ａｂ’）２のような）その断片が
使用される場合がある。前記プローブ又は抗体に関連して「標識された（ｌａｂｅｌｅｄ
）」という用語は、検出可能な物質を前記プローブ又は抗体と結合する（すなわち、物理
的に結びつける）ことによる前期プローブ又は抗体の直接の標識と、検出可能な物質との
反応性による前記プローブ又は抗体の間接的な標識とを含むことを意図している。
【０１７３】
前記検出方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏと同様にｉｎ  ｖｉｔｒｏの生物学的試料中のタンパ
ク質を検出するために使用される場合がある。タンパク質の検出のためのｉｎ  ｖｉｔｒ
ｏの技術は、酵素免疫測定吸着法（ＥＬＩＳＡｓ）と、免疫沈降法と、免疫蛍光法と、酵
素免疫測定法（ＥＩＡ）と、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）と、ウェスタンブロット分析と
を含む。タンパク質の検出のためのｉｎ  ｖｉｖｏの技術は、患者に標識された抗体を導
入することを含む。例えば前記抗体は、患者の中でのそれの存在及び局在が標準的なイメ
ージング技術で検出することができる放射性マーカーで標識される場合がある。別の実施
態様では前記試料は、例えばビオチン化のように標識され、それから、例えば抗体アレイ
上に置かれた抗体のような抗体に接触させられる。前記試料は、例えば蛍光ラベルと結合
させたアビジンで検出される場合がある。
【０１７４】
ＤＮＡマイクロアレイ技術が数千個の遺伝子の発現の同時定量を可能にすることは、現
在では十分に確立されている。この方法論は現在、強力であり、再現可能であり、大いに
効果的である。前記技術は、細胞の経路を評価するために、及び、薬剤標的を有効にする
ために、使用される場合がある。（例えば、以下の参考文献を参照せよ。Ｃｌａｒｋｅ  
ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６２：１３１１−１３
３６、Ｏｎｙａｎｇｏ（２００４）Ｃｕｒｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ
４：１１１−１２４、及び、Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐ
ｈａｒｍａｃｏｌ．２：３６１−３６５）
【０１７５】
ＮＣＩの６０種類のヒト癌株細胞に対する化合物の増殖阻害プロファイルの類似性に基
づく、推定的な機構的グルーピングへの化合物のクラスタリングは、Ｐａｕｌｌらによっ
て最初に実現された（（１９８９）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８１：１０
８８−１０９２）。彼らは、化合物の細胞障害性プロファイルに基づき化合物の類似度を
評価するパターン認識アルゴリズムに基づく「ＣＯＭＰＡＲＥ」と呼ばれるコンピュータ
ープログラムを開発した。前記化合物のいくつかは、発表され広く受け入れられた該化合
物の分子標的にしたがって分類された。最近Ｊｏｈｎ  Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ博士とＮＣＩ
の彼の同僚とが、１，２００個の遺伝子を含むｃＤＮＡチップを使用して６０種類の株細
胞の遺伝子発現分析結果を比較するために「ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ」と呼ばれるソフトウェ
アパッケージを作成した（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ２７５：３４３−３４９）。特定の化合物に応答する、遺伝子発現パターンと６０種類
の株細胞に対する細胞障害性プロファイルとの間の相関関係を、決定することができた（
Ｓｃｈｅｒｆ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２４：２３６−２４４）
。この方法論を使用して、これらの化合物に対する標的又は経路を特定することが可能で
ある。それからＤＩＳＣＯＶＥＲＹは、相関関係のある遺伝子発現により、前記経路に共
通の遺伝子の特定を可能とする。この公的に入手可能なソフトウェアは、ＮＣＩの６０種
類のヒト癌株細胞中での５，０００種類の化合物のデータベースに対する化合物の比較を
可能とする。（ｄｉｓｃｏｖｅｒ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖでのＮＣＩウェブサイトを参
照せよ。）
【０１７６】
化合物の処理に反応するものとしてプロファイリングを通して特定された遺伝子は、治
療上の指標として使用される場合がある。これらの指標は前記化合物での患者の治療を監
視するために次には使用される場合がある。例えば、ＳＣ１４４に応答する遺伝子は、プ
ロリン−リッチ小タンパク質１Ａと、骨格筋で過剰発現するＧＴＰ結合タンパク質と、イ
ンターロイキン２４と、セストリン２と、仮想タンパク質ＭＧＣ４５０４と、サイクリン
依存性キナーゼ阻害剤１Ａ（ｐ２１）と、初期増殖応答タンパク質１と、Ｈ＋輸送性リソ
ソームタンパク質の３８ｋＤａＡＴＰアーゼＶ０サブユニット  ｄ  アイソフォーム２と
、ＡＸＩＮ１上向き調節１と、二重特異性フォスファターゼ５と、ミトコンドリアのスー
パーオキシドジスムターゼ２と、ヘパリン結合上皮増殖因子様増殖因子と、ディスインテ
グリン及びメタロプロテイナーゼ  ドメイン１９（メルトリン  ベータ）と、内皮性ＰＡ
Ｓドメインタンパク質１と、イノシトール１，４，５−三リン酸受容体タイプ１と、組織
因子経路阻害剤（リポタンパク質結合性凝固阻害剤）と、フィブリノーゲン  ガンマポリ
ペプチドと、ＲＡＳ発癌遺伝子ファミリーのメンバーであるＲＡＢ２０と、ＡＭＰ活性型
プロテインキナーゼのガンマ２非触媒性サブユニットと、オンコスタチンＭ受容体と、カ
テプシンＢと、Ｂ細胞阻害剤におけるカッパ軽鎖ポリペプチドの遺伝子エンハンサーの核
内因子アルファと、ＢＣＬ２／アデノウィルスＥ１Ｂ１９ｋＤａ相互作用タンパク質３と
、インテグリンベータ３（血小板糖タンパク質ＩＩＩａ、抗原ＣＤ６１）と、二重特異性
フォスファターゼ１０と、細胞周期調節タンパク質ＳＤＰ３５と、プレキシンＣ１と、小
眼球症関連転写因子と、カルパイン小サブユニット２と、仮想タンパク質ＤＫＦＺｐ４３
４Ｌ１４２と、ＭＥＧＦ１０タンパク質と、ＥｐｈＡ２と、ｊａｇｇｅｄ１（アラジール
症候群）と、ヘミセンチンと、低密度リポタンパク質受容体（ヘパリン結合上皮増殖因子
様増殖因子）と、チロシナーゼ関連タンパク質１と、チロシナーゼ（眼皮膚白皮症ＩＡ）
と、ドパクロムトートメラーゼ（ドパクロム  デルタ−イソメラーゼ、チロシン関連タン
パク質２）と、ラミニンベータ３と、ＭＡＸ二量体化タンパク質１と、ＣＤＫ４結合タン
パク質ｐ３４ＳＥＩ１と、ホモサピエンスｃＤＮＡ  ＦＬＪ４２４３５ｆｉｓクローンＢ
ＬＡＤＥ２００６８４９と、増殖停止及びＤＮＡ損傷誘発性ベータと、サイクリン依存性
キナーゼ阻害剤２Ｂ（ｐ１５、ＣＤＫ４を阻害する。）と、ジフテリア毒素受容体（ヘパ
リン結合上皮増殖因子様増殖因子）と、シンタキシン結合タンパク質６（アミシン）と、
輸送分泌タンパク質２．２と、Ａｒｇ／Ａｂｌ相互作用タンパク質ＡｒｇＢＰ２と、仮想
タンパク質ＤＪ６６７Ｈ１２．２と、ホモサピエンスｃＤＮＡ  ＦＬＪ３７２８４ｆｉｓ
クローンＲＡＭＹ２０１３５９０とを含む。これらの遺伝子の１個又は２個以上は、例え
ばＳＣ１４４の有効性を決定するためのような、ＳＣ１４４での患者の治療を監視するた
めの指標として使用される場合がある。
【０１７７】
細胞増殖、細胞周期、アポトーシス又は遺伝子発現を変調させる方法
本発明の別の局面は、治療上の目的で、細胞増殖か、細胞周期か、アポトーシスか、遺
伝子の発現又は活性かを変調させる方法に関連する。したがって本発明の変調方法は、細
胞を、細胞増殖か、細胞周期か、アポトーシスか、前記細胞に関連する１個又は２個以上
の遺伝子の発現かを変調させる上述の化合物と接触させることを含む。細胞増殖か、細胞
周期か、アポトーシスか、遺伝子の発現又は活性かを測定する方法は当業者に周知である
。そのような方法の例は、以下の実施例と上の記載とにおいて提供される。
【０１７８】
変調させられるべき前記遺伝子の例は、プロリン−リッチ小タンパク質１Ａと、骨格筋
で過剰発現するＧＴＰ結合タンパク質と、インターロイキン２４と、セストリン２と、仮
想タンパク質ＭＧＣ４５０４と、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１Ａ（ｐ２１）と、初
期増殖応答タンパク質１と、Ｈ＋輸送性リソソームタンパク質の３８ｋＤａＡＴＰアーゼ
Ｖ０サブユニット  ｄ  アイソフォーム２と、ＡＸＩＮ１上向き調節１と、二重特異性フ
ォスファターゼ５と、ミトコンドリアのスーパーオキシドジスムターゼ２と、ヘパリン結
合上皮増殖因子様増殖因子と、ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ  ドメイン
１９（メルトリン  ベータ）と、内皮性ＰＡＳドメインタンパク質１と、イノシトール１
，４，５−三リン酸受容体タイプ１と、組織因子経路阻害剤（リポタンパク質結合性凝固
阻害剤）と、フィブリノーゲン  ガンマポリペプチドと、ＲＡＳ発癌遺伝子ファミリーの
メンバーであるＲＡＢ２０と、ＡＭＰ活性型プロテインキナーゼのガンマ２非触媒性サブ
ユニットと、オンコスタチンＭ受容体と、カテプシンＢと、Ｂ細胞阻害剤におけるカッパ
軽鎖ポリペプチドの遺伝子エンハンサーの核内因子アルファと、ＢＣＬ２／アデノウィル
スＥ１Ｂ１９ｋＤａ相互作用タンパク質３と、インテグリンベータ３（血小板糖タンパク
質ＩＩＩａ、抗原ＣＤ６１）と、二重特異性フォスファターゼ１０と、細胞周期調節タン
パク質ＳＤＰ３５と、プレキシンＣ１と、小眼球症関連転写因子と、カルパイン小サブユ
ニット２と、仮想タンパク質ＤＫＦＺｐ４３４Ｌ１４２と、ＭＥＧＦ１０タンパク質と、
ＥｐｈＡ２と、ｊａｇｇｅｄ１（アラジール症候群）と、ヘミセンチンと、低密度リポタ
ンパク質受容体（ヘパリン結合上皮増殖因子様増殖因子）と、チロシナーゼ関連タンパク
質１と、チロシナーゼ（眼皮膚白皮症ＩＡ）と、ドパクロムトートメラーゼ（ドパクロム
デルタ−イソメラーゼ、チロシン関連タンパク質２）と、ラミニンベータ３と、ＭＡＸ
二量体化タンパク質１と、ＣＤＫ４結合タンパク質ｐ３４ＳＥＩ１と、ホモサピエンスｃ
ＤＮＡ  ＦＬＪ４２４３５ｆｉｓクローンＢＬＡＤＥ２００６８４９と、増殖停止及びＤ
ＮＡ損傷誘発性ベータと、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤２Ｂ（ｐ１５、ＣＤＫ４を阻
害する。）と、ジフテリア毒素受容体（ヘパリン結合上皮増殖因子様増殖因子）と、シン
タキシン結合タンパク質６（アミシン）と、輸送分泌タンパク質２．２と、Ａｒｇ／Ａｂ
ｌ相互作用タンパク質ＡｒｇＢＰ２と、仮想タンパク質ＤＪ６６７Ｈ１２．２と、ホモサ
ピエンスｃＤＮＡ  ＦＬＪ３７２８４ｆｉｓクローンＲＡＭＹ２０１３５９０と、ＢＣＬ
２と、ＢＣＬ２Ｌ１と、ＪＵＮと、ＪＵＮＢと、ＭＡＤと、ＭＡＸと、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ
と、ＴＰ５３と、ＮＦＫＢ１と、ＴＮＦＳＦ１０と、ＣＡＳＰ１と、ＰＣＮＡと、ＴＮＦ
ＡＩＰ１と、ＤＡＰと、ＫＤＲと、ＭＡＰ３Ｋ１４と、ＣＣＮＡ２と、ＣＤＣ２と、ＣＤ
Ｋ７と、ＣＤＫ８と、ＣＤＫＮ１Ａと、ＣＤＫＮ１Ｂと、ＣＤＫＮ２Ａと、ＣＤＫＮ２Ｃ
と、Ｅ２Ｆ１と、Ｅ２Ｆ４と、Ｅ２Ｆ５と、ＭＹＣと、ＲＢ１と、ＲＢＬ２と、ＣＣＮＤ
３と、ＣＣＮＧ１と、ＣＣＮＥ１と、ＣＤＣ２５Ｃと、ＴＧＦＢＲ２と、ＴＧＩＦと、Ｔ
ＲＡＦ４と、ＣＹＰ１Ａ２と、ＰＴＧＳ２と、（ｐ２１と、）ｐ２７と、サイクリンＡと
、ｃｄｋ１と、ｐ５３と、サイクリンＥと、ｃｄｃ２５と、ｐ１３０と、ＮＦＫＢと、ｃ
ＭＹＣと、ＣＯＸ２と、Ｂｃｌ−ＸＬと、アネキシンＶと、カスパーゼ１と、ＴＮＦ受容
体と、微小管関連タンパク質４と、微小管親和性調節キナーゼ２と、微小管親和性調節キ
ナーゼ４と、ＥＲＢＢ２のトランスデューサーと、血管内皮増殖因子Ｂと、血管内皮増殖
因子と、アンキリンリピート及びＭＹＮＤドメイン含有１と、ＲＡＢ４Ｂと、推定前立腺
癌腫瘍サプレッサーと、プレＢ細胞白血病転写因子２と、Ｔ細胞白血病転座変更遺伝子と
、白血病阻害因子と、インターフェロン調節因子２結合タンパク質と、インターフェロン
刺激遺伝子（２０ｋＤａ）と、インターフェロンガンマ受容体２と、２８ｋＤインターフ
ェロン応答性タンパク質と、ポリメラーゼ（ＲＮＡ）ＩＩＩと、ペルオキシソーム増殖因
子活性化受容体Ａと相互作用する複合体２８５、ＲＡＤ５０ホモログ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ）と、ＭＡＸ二量体化タンパク質３と、ｋｒｕｐｐｅｌ様因子１６と、アポリポ
タンパク質Ｌ（６）と、Ｘ線修復相補欠損修復と、マイトジェン活性化プロテインキナー
ゼ３と、ホスファチジルイノシトール４−キナーゼタイプＩＩと、マイトジェン活性化プ
ロテインキナーゼ１２と、プロテインキナーゼ（ＡＭＰ活性化、アルファ２触媒性サブユ
ニット）と、ピルビン酸デヒドロゲナーゼホスファターゼ調節サブユニットと、ホスホリ
パーゼＤ３と、イノシトール１，４，５−三リン酸受容体（タイプ３）と、レチノイン酸
受容体（アルファ）と、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーと、エノラーゼ２（ガン
マ、ニューロン型）と、スタニオカルシン２と、アペリンと、プレキシンＢ２と、カテプ
シンＺと、ヒストン１（Ｈ２ｂｃ）と、ヒストン１（Ｈ３ｈ）と、β−チューブリンと、
ｍｙｃプロモーター結合タンパク質（ＭＰＢ−１）と、網膜芽細胞腫遺伝子産物結合タン
パク質７と、ビメンチンと、エノラーゼと、ホスホピルビン酸ヒドラターゼベータと、ミ
トコンドリアＡＴＰシンターゼベータ鎖とを含む。
【０１７９】
１つの実施態様では、前記化合物は前記細胞における１個又は２個以上の前記遺伝子の
発現を促進する。例えば、ＳＣ１４４は、プロリン−リッチ小タンパク質１Ａと、骨格筋
で過剰発現するＧＴＰ結合タンパク質と、インターロイキン２４と、セストリン２と、仮
想タンパク質ＭＧＣ４５０４と、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１Ａ（ｐ２１）と、初
期増殖応答タンパク質１と、Ｈ＋輸送性リソソームタンパク質の３８ｋＤａＡＴＰアーゼ
Ｖ０サブユニット  ｄ  アイソフォーム２と、ＡＸＩＮ１上向き調節１と、二重特異性フ
ォスファターゼ５と、ミトコンドリアのスーパーオキシドジスムターゼ２と、ヘパリン結
合上皮増殖因子様増殖因子と、ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ  ドメイン
１９（メルトリン  ベータ）と、内皮性ＰＡＳドメインタンパク質１と、イノシトール１
，４，５−三リン酸受容体タイプ１と、組織因子経路阻害剤（リポタンパク質結合性凝固
阻害剤）と、フィブリノーゲン  ガンマポリペプチドと、ＲＡＳ発癌遺伝子ファミリーの
メンバーであるＲＡＢ２０と、ＡＭＰ活性型プロテインキナーゼのガンマ２非触媒性サブ
ユニットと、オンコスタチンＭ受容体と、カテプシンＢと、Ｂ細胞阻害剤におけるカッパ
軽鎖ポリペプチドの遺伝子エンハンサーの核内因子アルファと、ＢＣＬ２／アデノウィル
スＥ１Ｂ１９ｋＤａ相互作用タンパク質３と、インテグリンベータ３（血小板糖タンパク
質ＩＩＩａ、抗原ＣＤ６１）と、二重特異性フォスファターゼ１０との発現を促進する。
別の実施態様では、前記化合物は前記細胞における１個又は２個以上の前記遺伝子の発現
を阻害する。例えばＳＣ１４４は、細胞周期調節タンパク質ＳＤＰ３５と、プレキシンＣ
１と、小眼球症関連転写因子と、カルパイン小サブユニット２と、仮想タンパク質ＤＫＦ
Ｚｐ４３４Ｌ１４２との発現を阻害する。
【０１８０】
これらの変調方法は、例えば前記化合物といっしょに前記細胞を培養することにより、
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施される場合がある。例えば前記細胞は、（例えば、白血病細胞か
、非小細胞肺癌細胞か、大腸癌細胞か、中枢神経系癌細胞か、メラノーマ細胞か、卵巣癌
細胞か、乳癌細胞か、腎臓癌細胞か、前立腺癌細胞かのような）癌細胞か、（例えば、加
齢黄斑変性症を有する細胞か、黄斑ジストロフィーを有する細胞か、糖尿病を有する細胞
かのような）血管新生機能疾患を有する細胞かの場合がある。代替的に前記変調方法は、
例えば前記化合物を、癌又は血管新生機能関連疾患に罹患している、又は、その発症リス
クがある患者のような患者に投与することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏで実施される場合があ
る。このように本発明は、異常又は不要な細胞増殖か、細胞周期か、アポトーシスか、１
個又は２個以上の前記遺伝子の発現かによって特徴付けられる疾病又は疾患で苦しむ患者
の治療方法を提供する。遺伝子発現の促進は、前期遺伝子が異常に下向き調節される状況
、及び／又は、遺伝子発現の増大が有益な効果を有すると考えられる状況では望ましい。
同様に、遺伝子発現の阻害は、遺伝子発現が異常に上向き調節される状況、及び／又は、
遺伝子発現の減少が有益な効果を有すると考えられる状況では望ましい。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１８１】
以下の実施例は、本発明の範囲を例示することが意図されており、本発明の範囲を限定
することは意図されない。そのような実施例は、使用される場合がある典型的な実施例で
あるが、当業者に周知な他の手順が代替的に利用される場合がある。確かに当業者は、本
明細書での開示内容に基づき、必要以上の実験をせずとも、さらなる実施態様を容易に想
到し、及び、生み出すことができる。
【実施例１】
【０１８２】
化学。
全ての反応は窒素雰囲気下で実施された。前記反応の進行はシリカゲルプレート（Ｍｅ
ｒｃｋ６０、Ｆ２５４、０．２ｍｍ）上のＴＬＣにより監視された。有機溶液はＭｇＳＯ
４により乾燥させられた。エバポレーションとは、減圧下でのロータリーエバポレーター
による溶媒の除去を指す。融点は、Ｇａｌｌｅｎｋａｍｐ装置を使用して測定され、補償
はされなかった。ＩＲスペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ３９８とＦＴ  １６００
分光光度計とで、薄膜として記録された。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルはＴＭＳを内部標準と
して、Ｂｒｕｅｋｅｒ  ３００−ＭＨｚ分光計で記録された。化学シフトはδ値（ｐｐｍ
）とＨｚで表す結合定数（Ｊ）とで表現される。マススペクトルデータは、ＶＧ７０分光
計を７０ｅＶに直接挿入することにより決定された。フラッシュクロマトグラフィーのカ
ラムには、Ｍｅｒｃｋシリカゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０／２３０−４００メッシュ
）が使用された。元素分析は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ２４０Ｃ  ｅｌｅｍｅｎｔａ
ｌ  ａｎａｌｙｚｅｒで実施され、その結果は理論値の±０．４％以内である。収率は精
製後の生産物としての収率を指し、最適化は行っていない。
【０１８３】
化合物１４ａ−１４ｄの調製のための一般的な手順。
７−フルオロ−４−ヒドラジノピロロ［１，２−ａ］キノキサリン  １４ｃの調製は、
代表的な実施例として報告される。
【０１８４】
７−フルオロ−４−クロロピロロ［１，２−ａ］キノキサリン  １３ｃ（１００ｍｇ、
０．４５ミリモル）と、ヒドラジン一水和物（５ｍＬ）と、ＤＭＦ（２ｍＬ）との混合物
は７０−８０°Ｃまで１時間加熱された。その後粉砕された氷が加えられ、前記混合物は
ＥｔＯＡｃで抽出された。前記有機層は、分離され、続けて水及び塩水で振とうされた。
前記揮発性成分のエバポレーション後、化合物１４ｃが固体として取得され（８４ｍｇ、
収率８６％）、さらなる精製は行わずにその次の段階で使用された。分析サンプルは結晶
化により取得された。融点１５８°Ｃ（ｄｅｃ．）（ジクロロメタン／軽油）。ＩＲ（Ｋ
Ｂｒ）３３００ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  ４．５６（ｂｓ、２Ｈ）、
６．６６（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）、７．０３（ｍ、２Ｈ）、７．１８（ｄｄ、１Ｈ
、Ｊ＝１０．６、２．７Ｈｚ）、８．０２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．９、５．６Ｈｚ）、８
．１５（ｓ、１Ｈ）、８．８７（ｂｓ、１Ｈ）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１１
Ｈ９ＦＮ４：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１８５】
１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−イ
ル−ヒドラジド  １（ＳＣ１４１）。
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のピロール−２−カルボン酸塩化物（５８ｍｇ、０．４５ミ
リモル）とトリエチルアミン（１ｍＬ）との懸濁液は、無水ＴＨＦ（３ｍＬ）中に化合物
１４ａ（９０ｍｇ、０．４５ミリモル）が撹拌されている溶液に、少しずつ添加された。
前記混合物は終夜室温で撹拌された。揮発性成分のエバポレーション後に得られた残りの
成分は、酢酸エチル層と水層の間で分配された。前記有機層は、分離され、塩水で振とう
され、乾燥させられた。前記溶媒のエバポレーションは、融点２１０−２１２°Ｃ（メタ
ノール）の白色固体として化合物１を与えた（８２ｍｇ、収率６２％）。ＩＲ（ＫＢｒ）
３２５５、１６７５ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  ６．１４（ｓ、１Ｈ）
、６．７７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝３．１Ｈｚ）、６．９９（ｓ、１Ｈ）、７．１３（ｄ、１Ｈ
、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、７．２５（ｍ、２Ｈ）、７．４２（ｍ、２Ｈ）、８．０６（ｍ、１
Ｈ）、８．２７（ｍ、１Ｈ）、９．３２（ｂｓ、１Ｈ）、１０．１１（ｂｓ、１Ｈ）、１
１．５８（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ２９２（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ
．ｆｏｒ  Ｃ１６Ｈ１３Ｎ５Ｏ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１８６】
ニコチン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−イル−ヒドラジド  ２（
ＳＣ１４２）。
固体のニコチノイル塩化物塩酸塩（１５５ｍｇ、０．９０ミリモル）は、無水ピリジン
（１５ｍＬ）中に４−ヒドラジノピロロ［１，２−ａ］キノキサリン  １４ａ（２００ｍ
ｇ、１．０１ミリモル）が撹拌され氷冷されている溶液に、少しずつ添加された。前記混
合物は終夜室温で撹拌された。通常の検査の後、化合物１は、融点２３７°Ｃ（メタノー
ル／酢酸エチル）の黄白色固体として取得された（１２２ｍｇ、収率４０％）。ＩＲ（Ｋ
Ｂｒ）３２４５、１６８０ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  ６．７０（ｍ、
１Ｈ）、７．０７（ｍ、１Ｈ）、７．１８（ｍ、２Ｈ）、７．３６（ｍ、１Ｈ）、７．４
８（ｍ、１Ｈ）、７．９８（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｍ、２Ｈ）、８．６９（ｍ、１Ｈ）
、９．０５（ｍ、１Ｈ）、１０．７５（ｂｓ、１Ｈ）、１１．８０（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ
（ＣＩ）ｍ／ｚ３０４（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ１３Ｎ５Ｏ
：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１８７】
ピラジン−２−カルボン酸＝Ｎ’−（７，８−ジメチル−ピロロ［１、２−ａ］キノキ
サリン−４−イル）−ヒドラジド  ３（ＳＣ１４３）。
無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中に２−ピラジンカルボン酸（６２ｍｇ、０．５０ミリ
モル）が撹拌されている懸濁液に、トリフェニルホスフィン（２６２ｍｇ、１．００ミリ
モル）及び２，２’−ジピリジルジスルフィド（２２０ｍｇ、１．００ミリモル）が、１
時間以内に、少しずつ添加された。開始物質が消失した（ＴＬＣ）とき、同じ溶媒（６ｍ
Ｌ）中の４−ヒドラジノ−７，８−ジメチルピロロ［１、２−ａ］キノキサリン  １４ｂ
（１１３ｍｇ、０．５０ミリモル）の溶液が添加され、結果生じた混合物は終夜室温で撹
拌された。溶媒は除去され、残りの成分は酢酸エチル層と水層との間で分配された。有機
層は、分離され、塩水で振とうされ、乾燥させられた。溶媒のエバポレーション後で残さ
れた残りの成分は、融点１１６°Ｃ（メタノール／酢酸エチル）の黄白色固体として化合
物３を提供する（６３ｍｇ、収率３８％）ために、フラッシュ−クロマトグラフィー（ク
ロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム＝８９：１０：１）により精製された。Ｉ
Ｒ（ＫＢｒ）３２５０、１６７５ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）３．３５（
ｓ、６Ｈ）、６．７４（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、７．３１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．８
Ｈｚ）、７．４２（ｍ、１Ｈ）、７．６４（ｍ、２Ｈ）、７．８７（ｂｓ、１Ｈ）、８．
２８（ｂｓ、１Ｈ）、８．７１（ｓ、１Ｈ）、８．８７（ｍ、１Ｈ）、９．２０（ｓ、１
Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ３３３（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ１８Ｈ
１６Ｎ６Ｏ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１８８】
ピラジン−２−カルボン酸＝Ｎ’−（７−フルオロピロロ［１、２−ａ］キノキサリン
−４−イル）−ヒドラジド  ４（ＳＣ１４４）。
７−フルオロ−４−ヒドラジノピロロ［１、２−ａ］キノキサリン  １４ｃ（１０８ｍ
ｇ、０．５０ミリモル）を使用する以外は化合物３について述べた手順と同じ手順の後で
、融点１９６°Ｃ（メタノール／酢酸エチル）の黄白色固体として、化合物４が取得され
た（５６ｍｇ、収率３５％）。ＩＲ（ＫＢｒ）３２５５、１６９０ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ６）６．７５（ｍ、１Ｈ）、７．１５（ｍ、１Ｈ）、７．３７（ｂｓ、
１Ｈ）、７．６１（ｍ、２Ｈ）、８．１５（ｍ、１Ｈ）、８．３１（ｍ、１Ｈ）、８．８
７（ｓ、１Ｈ）、８．９７（ｍ、１Ｈ）、９．２６（ｓ、１Ｈ）、１１．５０（ｂｓ、１
Ｈ、Ｄ２Ｏでの交換）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ３２３（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．
ｆｏｒ  Ｃ１６Ｈ１１ＦＮ６Ｏ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１８９】
Ｎ’−イミダゾ［１、２−ａ］ピリド［３、２−ｅ］ピラジン−６−イルピラジン−２
−カルボヒドラジド  ５（ＳＣ１４８）。
６−ヒドラジノイミダゾ［１、２−ａ］ピリド［３、２−ｅ］ピラジン  １４ｄ（１０
０ｍｇ、０．５０ミリモル）を使用する以外は化合物３について述べた手順と同じ手順の
後で、融点２７１°Ｃ（メタノール）の黄白色固体として、化合物５が取得された（３８
ｍｇ、収率２５％）。ＩＲ（ＫＢｒ）３２５０、１６７５ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ６）７．５２（ｍ、１Ｈ）、７．７６（ｓ、１Ｈ）、８．０２（ｍ、１Ｈ）、８
．４１（ｓ、１Ｈ）、８．５７（ｓ、１Ｈ）、８．８５（ｓ、１Ｈ）、８．９６（ｓ、１
Ｈ）、９．２６（ｓ、１Ｈ）、１０．７６（ｂｓ、１Ｈ）、１３．９３（ｂｓ、１Ｈ）。
ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ３０７（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ１４Ｈ１０Ｎ
８Ｏ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１９０】
化合物６−９（ＳＣ１５５−１５８）の調製のための一般的な手順。
１Ｈ−インドール−２−カルボン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−
イル−ヒドラジド  ６（ＳＣ１５５）の調製は、代表的な実施例として報告される。
【０１９１】
酢酸エチル（１５ｍＬ）中にＥＤＣ（９４ｍｇ、０．４９ミリモル）及びＤＭＡＰ（ｃ
ａｔ．）が撹拌されいてる溶液に、化合物１４ａ（７７ｍｇ、０．３９ミリモル）及び２
−インドールカルボン酸（６３ｍｇ、０．３９ミリモル）は、１５分以内に少しずつ添加
された。結果生じた混合物は、室温で２４時間撹拌され、その後炭酸水素ナトリウム飽和
溶液及び水で振とうされた。前記無水抽出物のエバポレーションは、融点１８６°Ｃ（ジ
クロロメタン／軽油）の白色固体として化合物６を与える（８２ｍｇ、収率６２％）ため
に結晶化される残りの成分を与えた。ＩＲ（ＫＢｒ）３２５５、１６８０ｃｍ−１。１Ｈ
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）６．７５（ｓ、１Ｈ）、７．０５（ｍ、１Ｈ）、７．２０（
ｍ、４Ｈ）、７．４０（ｍ、３Ｈ）、７．６５（ｍ、１Ｈ）、８．１０（ｍ、１Ｈ）、８
．３５（ｓ、１Ｈ）、９．５５（ｂｓ、１Ｈ）、１０．６５（ｂｓ、１Ｈ），１１．８０
（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ３４２（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ
Ｃ２０Ｈ１５Ｎ５Ｏ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１９２】
１Ｈ−インドール−５−カルボン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−
イル−ヒドラジド  ７（ＳＣ１５６）。
２−インドールカルボン酸（６３ｍｇ、０．３９ミリモル）を使用する以外は化合物６
について述べた手順と同じ手順の後で、融点１６０°Ｃ（ジクロロメタン／軽油）の白色
固体として化合物７が取得された（６９ｍｇ、収率５２％）。ＩＲ（ＫＢｒ）３２５０、
１６８０ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）６．６０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６Ｈ
ｚ）、６．７５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）、７．２３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）
、７．２９（ｍ、２Ｈ）、７．５１（ｍ、３Ｈ）、７．８５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．５Ｈｚ
）、８．０３（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｍ、１Ｈ）、８．３９（ｓ、１Ｈ）、９．６０（
ｂｓ、１Ｈ）、１０．７０（ｂｓ、１Ｈ）、１１．４５（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ
／ｚ３４２（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ２０Ｈ１５Ｎ５Ｏ：Ｃ、Ｈ、
Ｎ。
【０１９３】
１Ｈ−インドール−６−カルボン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−
イル−ヒドラジド  ８（ＳＣ１５７）。
６−インドールカルボン酸（６３ｍｇ、０．３９ミリモル）を使用する以外は化合物６
について述べた手順と同じ手順の後で、融点１９８．５°Ｃ（ジクロロメタン／軽油）の
白色固体として化合物８が取得された（１７ｍｇ、収率１３％）。ＩＲ（ＫＢｒ）３２４
５、１６８５ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）６．５５（ｍ、１Ｈ）、６．８
５（ｍ、１Ｈ）、７．２８（ｍ、１Ｈ）、７．２８（ｍ、３Ｈ）、７．４５（ｍ、１Ｈ）
、７．６０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、８．７０（ｍ、２Ｈ）、８．１５（ｓ、１Ｈ
）、８．３９（ｍ、１Ｈ）、９．４４（ｂｓ、１Ｈ）、１０．５５（ｂｓ、１Ｈ）、１１
．５１（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ３４２（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．
ｆｏｒ  Ｃ２０Ｈ１５Ｎ５Ｏ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１９４】
１Ｈ−インドール−３−カルボン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−
イル−ヒドラジド  ９（ＳＣ１５８）。
３−インドールカルボン酸（６３ｍｇ、０．３９ミリモル）を使用する以外は化合物６
について述べた手順と同じ手順の後で、融点１６２．５°Ｃ（ジクロロメタン／軽油）の
白色固体として化合物９が取得された（４２ｍｇ、収率３２％）。ＩＲ（ＫＢｒ）３２５
０、１６８５ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）６．８０（ｍ、１Ｈ）、６．９０（
ｔ、１Ｈ、Ｊ＝３．３Ｈｚ）、７．０８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）、７．３０−７．
６０（ｍ、４Ｈ）、７．４８（ｍ、１Ｈ）、７．５８（ｍ、１Ｈ）、７．９０（ｍ、２Ｈ
）、８．１０（ｍ、１Ｈ）、８．１１（ｓ、１Ｈ）、８．３０（ｍ、１Ｈ）、９．２０（
ｂｓ、１Ｈ）、１０．２５（ｂｓ、１Ｈ）、１１．６０（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ
／ｚ３４２（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ２０Ｈ１５Ｎ５Ｏ：Ｃ、Ｈ、
Ｎ。
【０１９５】
化合物１０及び１１（ＳＣ１５３及び１５４）の調製のための一般的な手順。
化合物１０及び１１の調製は、適当なＮ−ＢＯＣ−アミノ酸を使用する以外は前述の化
合物について述べた手順と同じＥＤＣ／ＤＭＡＰ手順を使用し、その後脱保護を行う縮合
段階により完了させられた。
【０１９６】
チアゾリジン−４−カルボン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−イル
−ヒドラジド  １０（ＳＣ１５３）。
Ｎ−ＢＯＣ−チアゾリジン−４−カルボン酸（９０ｍｇ、０．３９ミリモル）から開始
し、結晶化（ヘキサン）の後で、４−［（２−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−
イルヒドラジノ）カルボニル］−１，３−チアゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチ
ルは、固体として取得され、その後の加水分解段階に直接使用された。取得された固体は
、０°ＣでＴＦＡ（２ｍＬ）及びアニソール（２ｍＬ）の撹拌された混合物に添加された
。反応混合物は、室温に戻され、さらに５０分間撹拌された。トルエン（３ｘ３ｍＬ）で
のアゼプトロピゼーション（ａｚｅｏｔｒｏｐｉｚａｔｉｏｎ）による揮発性成分のエバ
ポレーションは、融点１６２°Ｃ（酢酸エチル／ヘキサン）の黄白色固体として化合物１
０を与えた（６６ｍｇ、１４ａを基準として収率５５％）。ＩＲ（ＫＢｒ）３２５５、１
６９０ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）３．１５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝
１０．９、４．９）、３．３０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．９、７．１Ｈｚ）、４．１１（
ＡＢｑの０．５、１Ｈ、Ｊ＝９．７Ｈｚ）、４．２５（ＡＢｑの０．５、１Ｈ、Ｊ＝９．
７Ｈｚ）、４．４５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．１、４．９Ｈｚ）、６．９２（ｍ、１Ｈ）、
７．４１（ｍ、３Ｈ）、７．７１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、８．０９（ｄ、１Ｈ、
Ｊ＝９．３Ｈｚ）、８．３８（ｍ、１Ｈ）、１０．４０（ｂｓ、１Ｈ）、１１．２０（ｂ
ｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ３１４（ＭＨ＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ
１５Ｈ１５Ｎ５ＯＳ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１９７】
３−アミノ−プロパン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−イル−ヒド
ラジド  １１（ＳＣ１５４）。
Ｎ−ＢＯＣ−β−アラニン（７４ｍｇ、０．３９ミリモル）を使用する以外は化合物１
０について述べた手順と同じ手順の後で、融点１６４．５°Ｃ（ジクロロメタン／軽油）
の白色固体として、化合物１１が取得された（９２ｍｇ、１４ａを基準として収率８８％
）。ＩＲ（ＫＢｒ）３２５５、１６８０ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）２．
８０（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｍ、２Ｈ）、７．０５（ｍ、１Ｈ）、７．５０（ｍ、２Ｈ
）、７．９５（ｍ、２Ｈ）、８．３０（ｍ、１Ｈ）、８．６０（ｍ、１Ｈ）、１０．７０
（ｂｓ、１Ｈ）、１１．２５（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ２７０（ＭＨ＋）。Ａ
ｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ１４Ｈ１５Ｎ５Ｏ：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１９８】
Ｎ，Ｎ’−Ｂｉｓ−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−カルボヒドラジド  １２
（ＳＣ１４７）。
ヒドラジン一水和物（２２μＬ、０．４５ミリモル）とピロロ［１、２−ａ］キノキサ
リン−４−カルボン酸エチル  １５（２１６ｍｇ、０．９０ミリモル）とのエタノール（
２ｍＬ）中の混合物は、３時間加熱還流された。溶媒のエバポレーション後に取得された
残りの成分は、融点１３８−１３９°Ｃ（酢酸エチル／ヘキサン）の白色固体として化合
物１２を与える（１１５ｍｇ、収率６２％）ために、クロマトグラフィー（ジクロロメタ
ン：酢酸エチル＝９：１）により精製された。ＩＲ（ＫＢｒ）１６８０ｃｍ−１。１Ｈ  
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）６．２８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１．７Ｈｚ）、７．０１（ｄ、２Ｈ
、Ｊ＝１．７Ｈｚ）、７．４５（ｍ、８Ｈ）、７．９５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、
９．９５（ｂｓ、１Ｈ）、１０．８０（ｂｓ、１Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ４２１（ＭＨ
＋）。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ２４Ｈ１６Ｎ６Ｏ２：Ｃ、Ｈ、Ｎ。
【０１９９】
３−アミノ−３−（２−クロロフェニル）−プロパン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］
キノキサリン−４−イル−ヒドラジド  （ＳＣ１６０）。
酢酸エチル（１５ｍＬ）中にＥＤＣ（９４ｍｇ、０．４９ミリモル）及びＤＭＡＰ（ｃ
ａｔ．）が撹拌されている溶液に、４−ヒドラジノピロロ［１、２−ａ］キノキサリン  
１４ａ（７７ｍｇ、０．３９ミリモル）及びＢｏｃ−３−アミノ−３−（２−クロロフェ
ニル）プロパン酸（７８ｍｇ、０．３９ミリモル）は、１５分以上の間、少しずつ添加さ
れた。結果生じた混合物は、室温で２４時間撹拌され、その後、炭酸水素ナトリウム飽和
溶液及び水で振とうされた。前記無水抽出物のエバポレーションは、結晶化により精製さ
れる、及び、さらなる特徴づけはされずにその後の加水分解段階に使用される残りの成分
を与えた。取得された個体は、ＴＦＡ（２ｍＬ）及びアニソール（２ｍＬ）の０°Ｃで撹
拌された混合物に添加された。前記反応混合物は、室温に戻され、追加の５０分間撹拌さ
れた。トルエン（３ｘ３ｍＬ）でのアゼプトロピゼーションによる揮発性成分のエバポレ
ーションは、表記の化合物を固体として与えた。
【０２００】
キノキサリン−２−カルボン酸＝Ｎ’−ピロロ［１、２−ａ］キノキサリン−４−イル
−ヒドラジド  （ＳＣ１７３）。
無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中に２−キノキサリンカルボン酸（８７ｍｇ、０．５０
ミリモル）が撹拌されている懸濁液に、トリフェニルホスフィン（２６２ｍｇ、１．００
ミリモル）及び２，２’−ジピリジルジスルフィド（２２０ｍｇ、１．００ミリモル）が
、１時間以内に、少しずつ添加された。開始物質が消失した（ＴＬＣ）とき、同じ溶媒（
６ｍＬ）中の４−ヒドラジノピロロ［１、２−ａ］キノキサリン  １４ａ（１００ｍｇ、
０．５０ミリモル）の溶液が添加され、結果生じた混合物は終夜室温で撹拌された。溶媒
は除去され、残りの成分は酢酸エチル層と水層との間で分配された。有機層は、分離され
、塩水で振とうされ、乾燥させられた。溶媒のエバポレーション後で残された残りの成分
は、表記の化合物を固体として提供するために、フラッシュ−クロマトグラフィーにより
精製された。
【０２０１】
ニコチン酸＝Ｎ’−９Ｈ−ピロロ［１、２−ａ］インドール−９−イル−ヒドラジド  
（ＳＣ１７５）。
固体のニコチノイル塩化物塩酸塩（１５５ｍｇ、０．９０ミリモル）は、無水ピリジン
（１５ｍＬ）中に９−ヒドラジノピロロ−９Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］インドール（１８
７ｍｇ、１．０１ミリモル）が撹拌され氷冷されている溶液に、少しずつ添加された。前
記混合物は終夜室温で撹拌された。揮発性成分のエバポレーション後、表記の化合物は、
カラムクロマトグラフィー又は結晶化により精製される固体として単離された。
【０２０２】
ＳＣ１４４は、ホルモン依存性と非依存性との株細胞のパネルに対して顕著な効力を示
す。
７種類のヒト癌株細胞のパネルのＳＣ１４４に対する感受性は、ＭＴＴ−アッセイによ
り評価された。ＳＣ１４４は、０．７μＭないし１０μＭのＣＣ５０用量範囲で卓越した
活性を示した（表１）。ＳＣ１４４に対する感受性は、時間及び用量に依存的であった。
これらの株細胞でのＳＣ１４４の活性は、ＨＲ、ｐ５３、ｐＲｂ、ｐ２１及びｐ１６の状
態に依存しないようであった（表１）。ＳＣ１４４は、この株細胞が、卵巣癌で最も慣用
される薬剤であるシスプラチンに対して事実上耐性があるようにみえることを考慮すると
、ＨＥＹ細胞で顕著な活性を示した（ＣＣ５０＝１．０±０．０６μＭ）。さらにＳＣ１
４４は、前立腺癌のＰＣ３株細胞でよりも、ＨＥＹ細胞で１０倍効力が強かった（ＣＣ５
０＝１０．０±０．２μＭ）。ＳＣ１４４は、ＨＲ陽性のヒト乳癌細胞（ＭＣＦ−７及び
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）とＨＲ陰性のヒト乳癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５）とでも良好
な活性を示した。興味深いことに前記ＥＲ＋細胞はＳＣ１４４に対して、前記ＥＲ−株細
胞よりも、５．５倍（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＣＣ５０＝０．７±０．１μＭ）及び２．
３倍（ＭＣＦ−７、ＣＣ５０＝１．７±０．３μＭ）高い感受性を示した（ＭＤＡ−ＭＢ
−４３５、ＣＣ５０＝４．０±１．４μＭ）（表１）。
【０２０３】
【表１９】
2008518964.tif 000044
ａＣＣ５０は、細胞母集団の５０％減少を引き起こす薬剤濃度と定義される。ｂＨＲ：ホ
ルモン受容体、ＡＲ：アンドロゲン受容体、ＥＲ：エストロゲン受容体、ＷＴ野生型、Ｍ
ｕｔ：変異型、ＮＤ：決定されなかった。ＨＥＹ細胞はシスプラチンに耐性であり、ＭＣ
Ｆ／ＡＤＲ細胞はドキソルビシンに耐性である。
【０２０４】
ＳＣ１４４処理はＳ期の停止を誘発する。
ＳＣ１４４により誘発される細胞周期の撹乱は、ＨＥＹ細胞及びＭＤＡ−ＭＢ−４３５
細胞で試験された。フローサイトメトリーによるＤＮＡプロファイルの分析は、ＳＣ１４
４がカンプトテシン（ＣＰＴ）により誘発されるＳ期の停止に匹敵するＳ期の停止を誘発
することを示した。図１に示されたように、ＳＣ１４４（３μＭ）での処理の２４時間後
、前記細胞の８０％がＳ期であった。同様の効果が、非同期性の前立腺癌株細胞ＤＵ１４
５で得られた。前記最大の停止はＳＣ１４４への曝露２４時間で観察され、前記停止は４
８時間まで持続した。細胞周期停止を誘発するＳＣ１４４の本特性は、タキサンのような
細胞周期の異なる段階で作用する他の医薬品との併用療法にとってＳＣ１４４を理想的な
医薬品にする。
【０２０５】
ＳＣ１４４処理はアポトーシスを誘発する。
アポトーシスによる細胞死の初期事象は、細胞膜の外側部分へのホスファチジルセリン
残基の転位である。この事象は、核の機能停止と、ＤＮＡ断片化と、たいていのアポトー
シス関連分子の出現との前に起こり、アネキシンＶ結合アッセイにより容易に測定される
。この方法により、ＳＣ１４４はＣＰＴと比較された。図２に示されたようにＳＣ１４４
は、ＣＰＴにより誘発されるアポトーシス効果に匹敵する非常に強いアポトーシス効果を
引き起こした。初期アポトーシス細胞の百分率は、処理された細胞で増加し、４８時間で
、ＳＣ１４４に対しては３７％、及び、ＣＰＴに対しては３４％に、それぞれ到達した。
４８時間で、両方の化合物に対して、アポトーシス／ネクローシスの後期の細胞の増加も
観察された（それぞれ、ＳＣ１４４に対しては１６％、及び、ＣＰＴに対しては３９％）
。
【０２０６】
ＳＣ１４４はマウス異種移植モデルでｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性を示す。
ＳＣ１４４のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性は、ヒト乳腺ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞を移植
されたヌードマウス異種移植モデルで評価された。実験手順の概略模式図は、図３（Ａ）
に示される。動物は毎日、生理食塩水（対照）と、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ
及び４ｍｇ／ｋｇでのＳＣ１４４との腹腔内注射で処理された。５日間の投与期間の後、
前記薬剤処理は中断され、前記動物は５週間、週２回（ｂｉ−ｗｅｅｋｌｙ）監視された
。図３（Ｂ）は、ＳＣ１４４で処理したＭＤＡ−ＭＢ−４３５異種移植片の体積（平均値
±標準偏差）の経時変化を示す。
【０２０７】
統計的解析のための％Ｔ／Ｃ値は、投与の最終日で計算され、全ての処理群に対して図
示された（図３（Ｃ））。乳癌異種移植片においてＳＣ１４４の最低用量で限界的な減少
が観察された。より高いＳＣ１４４の用量では、腫瘍増殖の顕著な減少が観察された。Ｓ
Ｃ１４４は４ｍｇ／ｋｇで腫瘍増殖を６０％減少させた。前記研究の最後での、ＳＣ１４
４処理を行ったマウスと行わないマウスとの代表的な画像を、図４（Ａ）に示す。対照マ
ウスでは腫瘍の塊は、大きくなり、胸腔のまわりに分散され、密に血管新生されていたが
、ＳＣ１４４で処理した腫瘍は、サイズが顕著に減少し、血管新生は乏しく、局在化され
たままだった（図４（Ｂ）及び（Ｃ））。ＳＣ１４４での処理は、耐容性良好であり、薬
剤に関連する死をもたらさなかった。さらに、薬物送達対照に比較して、ＳＣ１４４では
体重の変化は観察されなかった。
【０２０８】
前記研究は、他の株細胞へ拡張された。ＳＣ１４４は、非小細胞肺癌細胞であるＨＯＰ
−６２、ＥＫＶＸ及びＨＯＰ−９２において、ナノモルの濃度レベルで効力を示すことが
わかった。ＣＣ５０値は、前記ＭＤＡ−ＭＢ−４３５株細胞に対するよりも約４００倍効
力が強い１０−２０ｎＭからの範囲である（表２）。ＨＣＴ−１１６及びＨＴ２９の大腸
癌株細胞において、ナノモル濃度以下から低いナノモル濃度までの効力も観察された（表
２）。
【０２０９】
【表２０】
2008518964.tif 000045
【０２１０】
ＳＣ１４４はｉｎ  ｖｉｖｏで選択的かつ顕著な腫瘍ネクローシスを誘発する。
薬剤処理後の腫瘍ネクローシスの範囲を評価するために、７０日での対照マウスと処理
されたマウスとから腫瘍試料は収集された。図５は、代表的なマウス由来の腫瘍試料のＨ
＆Ｅ染色結果を示す。一般的に、４ｍｇ／ｋｇのＳＣ１４４で処理された腫瘍組織の８０
％より大きいネクローシスが観察された（図５（Ｂ））。
【０２１１】
ＳＣ１４４は全身毒性を示さない。
ＳＣ１４４の全身毒性の可能性を評価するために、いくつかの臓器が顕微鏡的に試験さ
れた。図６は、４ｍｇ／ｋｇのＳＣ１４４の注射で処理されたマウス由来の腎臓組織、肝
臓組織及び心臓組織の代表的なＨ＆Ｅ染色結果を示す。糸球体のネクローシスも腎臓の尿
細管のネクローシスも観察されなかった（図６（Ａ））。肝臓組織の顕著な病理所見は観
察されなかった。図６（Ｂ）は、肝細胞の索は正常であることを示す。最後に、心筋は正
常であり、検出可能な損傷は観察できなかった（図６（Ｃ））。要約すれば、前記Ｈ＆Ｅ
染色結果は、それぞれの群の代表的なマウスのこれらの臓器には損傷がなかったことを証
明する。
【０２１２】
ＳＣ１４４は、抗腫瘍活性に関係がある濃度ではシトクロムＰ４５０酵素を阻害しない
。
有力な薬剤候補によるシトクロムＰ４５０酵素阻害の調査は、薬剤−薬剤の相互作用、
及び／又は、投与で発生する好ましくないＰＫプロファイルを予測するのに助けとなる場
合がある。重要なシトクロムＰ４５０酵素により仲介される薬剤代謝の競合阻害は、治療
上と毒物学上との理由で臨床上重要な血漿薬剤濃度の望ましくない上昇をもたらす場合が
ある。ＳＣ１４４がヒトシトクロムＰ４５０の触媒活性を阻害するかどうかを決定するた
めに、対照として周知の基質であるケトコナゾールと比較するＣＹＰ３Ａ４特異的なｉｎ
ｖｉｔｒｏアッセイが実施された（図７）。これらの結果は、ＳＣ１４４の類縁体であ
るＳＣ２４はＣＹＰ３Ａ４活性を有意には阻害しないことを示唆するが、ＳＣ１４４は、
８−２０μＭの範囲のＩＣ５０値を有し、ある程度のＣＹＰ３Ａ４阻害活性があることを
示唆する。しかしこの濃度はＳＣ１４４の抗腫瘍有効性を示す濃度を超える。
【０２１３】
ＳＣ１４４に対する腫瘍応答の監視。
［１８Ｆ］ＦＤＧは、ＰＥＴでの腫瘍学における治療応答を画像化するために現在最も
広範に使用される放射性トレーサーである。ＰＥＴ／［１８Ｆ］ＦＤＧは、腫瘍における
生存細胞密度を測定し、グルコーストランスポーター及びヘキソキナーゼ活性の発現につ
いての情報も提供する。（半減期が２０分の）Ｃ−１１で標識されたＦＭＡＵも、ＰＥＴ
で腫瘍細胞分裂を画像化するために効果的である（Ｂａｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００
４）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３１：４０７−４１８）。細胞の取り込み後、ＦＭＡ
Ｕはチミジンキナーゼによりリン酸化されＤＮＡに組み込まれる。この技術を用いる予備
的研究は、マウスヒト腫瘍異種移植モデルでのＳＣ１４４の効果を追跡するのに好適であ
ることを示した。
【０２１４】
基準線である平衡相ＦＤＧスキャンは、前記マウスの右肩の生存腫瘍を示す（矢印）。
初期（図８（Ｂ））ではＦＭＡＵは、前記腫瘍を取り囲む「熱い」周縁部を示し、灌流の
乏しい中心部を示唆する。３０分及び６０分での後期の画像（図８（Ｃ））では、ＦＭＡ
Ｕは腫瘍全体を満たしており、全体に分裂細胞が存在することを示した。
【０２１５】
図８（Ｄ）−（Ｆ）は、処理の５日後に行った同じマウスの追試結果を示す。ＦＤＧス
キャンは、前記腫瘍が（測定された体積は二倍以上と）相当に成長し今やネクローシス中
心を有することを示し、これは、基準線のＦＭＡＵ研究で見られた灌流低下に矛盾しない
。ＦＭＡＵスキャン（図８（Ｅ））は、１０分で完全に灌流低下した腫瘍を示す。しかし
前記腫瘍は、６０分までにＦＭＡＵでほとんど満たされ、前記腫瘍全体に分裂細胞が継続
的に存在することを示唆する。腫瘍サイズのノギス測定はこのマウスで５週間継続され、
対照処理された（ｓｈａｍ−ｔｒｅａｔｅｄ）対照マウスと比較して顕著で（＞５０％）
長期間の、腫瘍体積の減少を示した。
【０２１６】
前記予備研究は、ＳＣ１４４で処理された異種移植マウスにおいて［１８Ｆ］ＦＤＧ及
び［１１Ｃ］ＦＭＡＵでの連続的高分解能ＰＥＴ（ｍｉｃｒｏＰＥＴ）研究を実施する能
力を証明した。興味深いことにＳＣ１４４は投与後５日間、腫瘍の灌流を阻害するみたい
であることが観察され、抗血管新生効果の可能性を示唆した。
【０２１７】
ＳＣ化合物と機序が周知の薬剤との比較。
作用機序と細胞周期調節の機序とが周知の６種類の薬剤（表３）が、３種類のＳＣ化合
物と比較するために選択された。最初に、これら全ての薬剤の前記細胞毒性濃度５０％及
び８０％であるＣＣ５０値及びＣＣ８０値が、連続的な薬剤曝露下、４８時間のＭＴＴア
ッセイを使用して決定された（表３）。遺伝子発現分析のために、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５
細胞（１ｘ１０６）は、薬剤のＣＣ８０で２４時間処理された。２４時間でのＣＣ８０の
値は、リアルタイムＰＣＲ研究を使用する遺伝子発現分析での以前の経験のために、単一
濃度及び単一時点として選択されたが、前記リアルタイムＰＣＲ研究から、この条件下で
有意な数の遺伝子を処理に応答して一貫して、かつ、再現よく変化させることが可能なこ
とが分かった。目的は、アポトーシス又は非アポトーシスの細胞死に関連する最終的な共
通の経路の変化のパターンとは区別できる、異なる薬剤のクラスに特徴的な遺伝子発現で
の変化のパターンを特定することである。
【０２１８】
【表２１】
2008518964.tif 000046
【０２１９】
バイオインフォマティクス分析。
遺伝子発現分析をプロファイリングするために、５７，０００  Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ
ＧｅｎｅＣｈｉｐ（Ｕ１３３＋２）ａｒｒａｙを使用する薬剤処理を行う、及び、行わ
ない２つの独立した実験が使用された。発現値（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖａｌｕｅ）は
１０未満が切り捨てられ、対数変換された。最初の選別は、試料の１０％以上において５
０未満の発現値を有する全ての遺伝子を除去した。この基準より下に、評価試料中の実質
的な「ノイズ」が存在し、そのような低い値を示す多くの遺伝子はおそらく全く発現して
いない。１０％は非常に低い発現値を示す遺伝子であることを許容することにより、一定
の遺伝子に対して、（対照群のような）単一の群で発現していない遺伝子を含めることが
許容された。データの再現性は、二重に行った実験の間の高い相関関係の観察により確認
された（図９（Ａ）及び（Ｂ））。二重に行った実験で強い相関関係がみられたことの結
果は、これらの試料はいっしょにクラスタを形成する傾向があるということであった。（
図１０を参照せよ。）
【０２２０】
（対照試料と比較して）処理された試料で有意に上向き調節又は下向き調節された遺伝
子を特定するために、それぞれの遺伝子に対してｔ−テストが実施され、発現量の対数平
均値の差に対するｔ−統計量がプロットされた（図９（Ｃ））。このプロットから、一定
の基準ｐ値で統計的に有意であり、かつ同時に、定義された値より上の倍率の変化を示す
、遺伝子を特定することが可能である。代替的に、所定の偽発見率を有する一組の遺伝子
を作り出すために、ｐ−値のカットオフが選択される場合がある。
【０２２１】
作用モードが周知の６種類の薬剤のそれぞれへの曝露後に実質的に（１０倍）上向き調
節又は下向き調節された遺伝子のリストが取得された。（ＳＣ１４４に調節される遺伝子
については表４を参照せよ。）作用機序が周知である６種類の薬剤の間で識別することが
期待される場合がある７５３遺伝子の組を作り出すために、前記リストは組み合わされた
。（６種類の周知の薬剤のうち２種類は二重に分析し、前記３種類のＳＣ化合物を二重に
分析した）全１４回の観察結果についてのこれらの遺伝子の主成分分析は、２種類のトポ
イソメラーゼＩＩ阻害剤は１つの群を形成し、他の周知の薬剤は２つ目の群を形成し、３
種類のＳＣ化合物は異なる３つ目のクラスタを形成するというように、前記二重に行った
実験はいっしょに相対的に緊密にクラスタを形成する傾向があることを示した（図１０（
Ａ））。
【０２２２】
【表２２】
2008518964.tif 000047
【０２２３】
このパターンは、全ての遺伝子に基づく（距離計測は相関による。方法は、クラスタの
距離が２つのクラスタの地点間の平均距離としてコンピューターにより計算される。）階
層クラスタ分析により支持されたが、該分析はＳＣ化合物を別々のクラスタにした（図１
０（Ｂ））。これは、前記ＳＣ薬剤は作用機序が区別でき、その結果、下流の分子効果、
そして遺伝子発現プロファイルが異なるという仮説を支持する証拠を提供する。アポトー
シス又は非アポトーシスの細胞死に関連する最終的な共通の経路の変化のパターンとは異
なるものとして特定される場合がある多くの遺伝子が存在する。これはさらに、遺伝子発
現の変化のいくつかのパターンは異なるクラスの薬剤に特徴的であり、バイオインフォマ
ティクスのツールにより（例えばストレス感受性遺伝子のように）非特異的な遺伝子と区
別される場合があることを示す。
【０２２４】
表４の遺伝子の属性（遺伝子オントロジーコード、タンパク質分類、機能分類（ｐａｔ
ｈｗａｙ  ｍｅｍｂｅｒｓｈｉｐ））は、この遺伝子の組を最もよく特徴づける特徴を決
定するために、フルデータセットの属性と比較された（図１１）。
【０２２５】
この分析から、関心のある特別な特性で遺伝子のサブセットを試験することが可能であ
る。一つのそのような群は、（ＩｎｔｅｒＰｒｏ分類として）ＥＧＦ様のドメインを有す
る遺伝子のセットである。図１２は、Ｇｅｎｅｔｒｉｘ（商標）を使用するこの遺伝子リ
ストを示す。
【０２２６】
関心のある別のカテゴリーは、使用者に定義される遺伝子カテゴリー分類を代表する「
サブセット」カテゴリーである。この分析のために、少なくとも１０倍上向き調節又は下
向き調節された遺伝子の組が、そのような６種類のカテゴリーを作り出すためにそれぞれ
の薬剤に対して使用された。図１３からは、２つのリストの間に共通の１９個の遺伝子を
有し、ＳＣ１４４処理に関連する遺伝子と「エトポシド」サブセットとの間に顕著な重複
があったことを見ることができる（１６．１のオッズ比で、ｐ＜０．０００１）。
【０２２７】
全６種類の遺伝子を見るより詳細な分析（図１４）は、ミトキサントロンとＣＰＴとで
も顕著な重複があることを示した。
【０２２８】
総合するとこれらの結果は、ＳＣ１４４は（特に１０倍以上上向き調節又は下向き調節
された遺伝子の重複のように）トポイソメラーゼ阻害剤といくつかの特徴を共有するが、
全ての３種類の化合物ＳＣ化合物はトポイソメラーゼ阻害剤とは別々にクラスタを形成す
ることを示し、これらの薬剤が異なる作用モードを有することを示唆する。
【実施例２】
【０２２９】
我々は、報告され、かつ、特許されたインテグラーゼ阻害剤の１０，０００種類の化合
物のデータベースを構築したが、前記阻害剤は、付加的なＤＮＡプロセシング酵素を標的
とする場合がありそうであり、インテグラーゼよりさらに強力な場合もありそうである。
このデータベースを使用して、我々はさまざまなファルマコフォアモデルを開発したが、
該モデルの後で、ＡＤＭＥＴ  Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒソフトウェアパッケージ（Ｓｉｍｕｌ
ａｔｉｏｎｓ  Ｐｌｕｓ、Ｉｎｃ．、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、ＣＡ）を使用する毒性予測と
、細胞障害性化合物から主要な抗ウィルス化合物を分離するためのクラスタ分析とが行わ
れる。これらのファルマコフォアモデルに基づいて我々は、サリチルヒドラジドに分類さ
れる化合物を、我々の抗癌剤開発プログラムに含めるための有力なリード化合物として特
定した。このクラスの化合物の開発を求めて我々は、我々の研究室内の〜４．５百万種類
の化合物の多立体構造（ｍｕｌｔｉｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ）データベースを探索
し、共通の構造的特徴及びファルマコフォア断片を有する２，２００種類を超える化合物
を特定した。その後我々は、９５０種類の類縁体を商業的供給源から入手し、専有の誘導
体の掘り下げたテストの前に行われる最初のスクリーニングとして、該類縁体に対して３
−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化
物細胞障害性アッセイを行った。我々のＡＤＭＥＴ計算を満足しないさらなる７４０種類
の化合物はテストされなかった。
【０２３０】
ここで我々はこれらの化合物のうち１８種類のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの活性プロファイル
を提示し、詳細な分析については２種類の化合物、ＳＣ２１及びＳＣ２３、に焦点をあて
る。我々の結果は、ＳＣ２１及びＳＣ２３は腫瘍株細胞のパネルにおいて顕著な活性を示
すことを示すが、前記株細胞は、アンドロゲン受容体−陽性及び−陰性の前立腺癌細胞と
、エストロゲン受容体−陽性及び−陰性の乳癌細胞と、本来的にシスプラチン耐性の卵巣
癌株とを含む。加えて我々は、細胞周期調節とアポトーシスとに及ぼすＳＣ２１の影響を
テストし、並びに、ヒト前立腺癌異種移植モデルにおけるＳＣ２１のｉｎ  ｖｉｖｏでの
治療上の可能性を評価した。
【０２３１】
材料及び方法
細胞培養
ヒト前立腺癌細胞（ｐ５３なし、ＡＲ−のＰＣ３細胞。ｐ５３突然変異型、ＡＲ−のＤ
Ｕ１４５細胞。及びｐ５３野生型、ＡＲ＋のＬＮＣａＰ細胞。）及び乳癌細胞（過剰発現
した野生型ｐ５３、ＥＲ＋のＭＣＦ−７細胞。ｐ５３突然変異型、ＥＲ＋のＭＤＡ−ＭＢ
−４６８。及びｐ５３突然変異型、ＥＲ−のＭＤＡ−ＭＢ−４３５。）は、ＡＴＣＣ（バ
ージニア州、Ｍａｎａｓｓａｓ）から取得された。自然状態でシスプラチン（ＣＤＤＰ）
に耐性のヒト卵巣癌株細胞（ＨＥＹ）は、Ｄｕｂｅａｕ博士（南カリフォルニア大学ノリ
スがんセンター。Ｂｕｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４５：
３６６８−７６、及び、Ｈａｍａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  
Ｒｅｓ．５３：５２２５−３２）により親切にも提供された。ＣＥＭ細胞での結果は前述
した（Ｎｅａｍａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１：３２０
２−９）。細胞は、３７℃、加湿された５％ＣＯ２雰囲気下で、１０％ウシ胎児血清（Ｇ
ｅｍｉｎｉ−Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｗｏｏｄｌａｎｄ、ＣＡ）及び２ミリモル／Ｌ  
Ｌ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ  １６４０培地中で単層培養として維持された。継代
及び計数の目的でフラスコから接着細胞を除去するために、細胞は、カルシウム又はマグ
ネシウムを含まないＰＢＳで洗浄され、少量の０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（Ｓ
ｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で５分ないし１０分の間インキュ
ベーションされ、培養液で洗浄され、遠心分離された。全ての実験は指数的細胞増殖中の
細胞を使用して行われた。
【０２３２】
薬剤
全化合物の１０ミリモル／Ｌのストック溶液は、ＤＭＳＯ中で調製され、２０℃で保管
された。さらなる希釈はＰＢＳ中で使用直前に行われた。
【０２３３】
細胞障害性アッセイ
細胞障害性は、前述した３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジ
フェニルテトラゾリウム臭化物アッセイ（Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９８
７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：９３６−４２）により評価された。簡潔には、細胞は
９６−ウェルマイクロタイタープレート中に播かれ（ＰＣ３及びＤＵ１４５は１ウェル当
たり５，０００個、ＬＮＣａＰは１ウェル当たり１０，０００個、乳癌及び卵巣癌細胞は
１ウェル当たり４，０００個）、付着させた。その後細胞は、対応する薬剤への連続的な
曝露で７２時間処理された。（最終濃度０．５ｍｇ／ｍＬでの）３−（４，５−ジメチル
チアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物溶液がそれぞれのウ
ェルに添加され、細胞は３７℃で４時間インキュベーションされた。培地の除去後ＤＭＳ
Ｏが添加され、吸光度が５７０ｎｍで読まれた。全てのアッセイは三重に行われた。その
後ＩＣ５０はそれぞれの薬剤について、（薬剤濃度の）対数値対細胞致死の百分率のプロ
ットから決定された。
【０２３４】
細胞周期分析
ＳＣ２１及びカンプトテシン（ＣＰＴ）により誘発される細胞周期の撹乱は、ヨウ化プ
ロピジウムＤＮＡ染色により分析された。簡潔には指数的に増殖中のＰＣ３細胞及びＤＵ
１４５細胞は、異なる用量の前記薬剤で、２４時間、４８時間及び７２時間処理された。
それぞれの処理時間の終了時に細胞が収集され、２００ｘｇ、５分間の穏やかな遠心分離
の後で、ＰＢＳで洗浄された。細胞は、０．５ｍＬのＰＢＳ中に完全に再懸濁され、４°
Ｃで少なくとも２時間、７０％エタノール中で固定された。その後エタノールで懸濁され
た細胞は２００ｘ  ｇで５分間遠心され、残留するエタノールを除去するためにＰＢＳ中
で２度洗浄された。細胞周期分析のためにペレットは、０．０２ｍｇ／ｍＬのヨウ化プロ
ピジウム、０．５ｍｇ／ｍＬのＤＮａｓｅを含まないＲＮａｓｅ  Ａ、０．１％のＴｒｉ
ｔｏｎ  Ｘ−１００を含む１ｍＬのＰＢＳ中に懸濁され、３７°Ｃで３０分間インキュベ
ーションされた。細胞周期プロファイルは、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Ｂｅ
ｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用して取得され、データ
は、ＭｏｄＦｉｔ  ＬＴ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｖｅｒｉｔｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｈｏｕ
ｓｅ、Ｉｎｃ．、Ｔｏｐｓｈａｍ、ＭＥ）により分析された。
【０２３５】
アポトーシス分析
薬剤誘発性のアポトーシスを定量するために、アネキシンＶ／ヨウ化プロピジウム染色
が行われ、その後フローサイトメトリーが行われた。簡潔には（それぞれの薬剤について
ＩＣ８０で７２時間の）薬剤処理の後、浮遊細胞と接着細胞との両方が組み合わされ、ア
ネキシンＶ／ヨウ化プロピジウム染色に供されたが、該染色は、製品により提供されるプ
ロトコールにしたがいアネキシンＶ−ＦＩＴＣアポトーシス検出キット（Ｏｎｃｏｇｅｎ
ｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して行っ
た。（２４−７２時間の）未処理対照細胞は、薬剤処理された群と並列して維持された。
アポトーシスが進行中の細胞ではアネキシンＶが、細胞膜の内側の層から外側の層へ転移
するホスファチジルセリンに結合する。二重染色は、生存細胞と、初期アポトーシス細胞
と、ネクローシス細胞又は後期アポトーシス細胞との間を識別するために使用される（Ｆ
ａｄｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２２０７−１６）。
生じた蛍光（緑色の蛍光に対してはＦＬＨ−１チャネルで、及び、赤色の蛍光に対しては
ＦＬＨ−２チャネルで測定される）は、ＦＡＣＳｃａｎ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ
（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用するフローサイトメトリーにより測定され
た。この方法にしたがって、左下の四分区画は生存細胞を示し、左上の四分区画は細胞片
を示し、右下の四分区画は初期アポトーシス細胞を示し、右上の四分区画は後期アポトー
シス細胞及び後期ネクローシス細胞を示す。
【０２３６】
動物
５０匹のオス胸腺欠損ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）が、ｉｎ  ｖｉｖｏテストのた
めに使用された。前記動物は、自由に摂食させられ、１２時間の明暗期間を有し２０±２
°Ｃに空調管理された部屋中で飼育された。動物のケア及び操作は、実験動物のケア及び
使用についてのガイドラインに準拠する南カリフォルニア大学施設ガイドラインにしたが
った。
【０２３７】
腫瘍異種移植片の薬剤処理
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養由来のＰＣ３細胞は胸腺欠損ヌードマウスの両側脇腹中（脇
腹片側当たり細胞２ｘ１０６個）に無菌条件下で皮下注射で接種された。腫瘍増殖は、副
尺付きノギスで腫瘍の直径（長さｘ幅）を週２回測定することにより評価された。腫瘍重
量は公式にしたがって計算されたが、該公式はＴＷ（ｍｇ）＝腫瘍体積（ｍｍ３）＝ｄ２
ｘＤ／２であり、ここでｄ及びＤは、それぞれ、最短及び最長の直径である。細胞は平均
体積１００ｍｍ３まで増殖させた。その後動物は、１日１回、５日間の腹腔内注射により
対照としての薬物送達手段かＳＣ２１（等張生理食塩水溶液中に溶解された０．３及び３
ｍｇ／ｋｇ）かを受けるために、対照群及び処理群に対して無作為に割り当てられた。そ
れぞれの動物の処理は、個々の体重に基づいて行った。５日間の処理後、それぞれの群に
おける前記腫瘍体積は、１週間１回、４週間測定された。処理された動物は、処理の毒性
／死亡について毎日チェックされた。腫瘍増殖阻害の百分率は％Ｔ／Ｃ＝１００ｘ（処理
群の腫瘍重量の平均値／対照群の腫瘍重量の平均値）として計算された。
【０２３８】
コンピュータによるＡＤＭＥＴ分析
全ての化合物の構造は、Ｃａｔａｌｙｓｔ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃ
ｃｅｌｒｙｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）中で組立てられ、最小化された。
それぞれの化合物について２０ｋｃａｌ／モルのエネルギー幅を超える可能性のある独自
の立体構造は、ＣａｔａｌｙｓｔのＣａｔｃｏｎｆモジュール内にある最適立体構造生成
法（ｔｈｅ  ｂｅｓｔ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏ
ｄ）を使用して生成された。全ての化合物の低エネルギー配座異性体は、ＡｌｏｇＰ９８
及び高速極性表面面積を計算するために、Ａｃｃｏｒｄ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ）へエクスポ
ートされた。ｌｏｇＰ値は、ＡＤＭＥＴ  Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ（Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ
Ｐｌｕｓ）でも計算された。ヒト腸管吸収プロットは、前記ＡｌｏｇＰ９８と前述の化
合物（Ｅｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：３８６７−７
７、及び、Ｅｇａｎ  ａｎｄ  Ｌａｕｒｉ（２００２）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．
Ｒｅｖ．５４：２７３−８９）の前記高速極性表面面積値とを使用して構成された。
【０２３９】
統計解析
アッセイは三重に設定され、結果は平均値±標準偏差として表現された。統計解析とＰ
値の決定とは、処理群間の有意差の決定のための９５％信頼区間での両側ペアードｔ検定
により行われた。Ｐ＜０．０５が有意であると考えられた。ＡＮＯＶＡが、群間の有意性
を検定するために使用された。ＳＡＳ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｐ
ａｃｋａｇｅ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）が統計解析のために使用
された。
【０２４０】
結果
リピンスキーのルールオブファイブに基づく化合物の選択
ファルマコフォアモデリング分析、毒性予測及びクラスタ分析を使用して選択された２
，２００種類を超える化合物から、９５０種類の化合物の選択が、３−（４，５−ジメチ
ルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物細胞障害性アッセ
イにより評価された。１８種類の化合物は、異なる起源由来の癌株細胞のパネルに対して
優れた活性プロファイルを示した。これらの化合物の構造、物理化学的特性及び細胞障害
性は、表５に表される。全ての化合物はリピンスキーのルールオブファイブを満足させた
。このルールは、Ｗｏｒｌｄ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｄｅｘデータベース由来の２，２４５種類
の化合物の分析に基づくルールで、市販されている薬剤の〜９０％は（ａ）分子量＜５０
０、（ｂ）ＣｌｏｇＰ＜５、（ｃ）水素結合供与体（Ｏ−Ｈ及びＮ−Ｈの合計）＜５、（
ｄ）水素結合受容体（Ｎ及びＯ原子の合計）＜１０であるというルールであった（Ｌｉｐ
ｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２３：
３−２５）。
【０２４１】
【表２３】
2008518964.tif 000048
【０２４２】
【表２４】
2008518964.tif 000049
【０２４３】
１８種類の化合物全てが、ＣＥＭ細胞又はＨＥＹ細胞のどちらかで２０μモル／Ｌ未満
のＩＣ５０値を示した。活性の幅は、最も効力が強い（ＩＣ５０＝０．０６μモル／Ｌ）
ＳＣ２６及びＳＣ２７と、最も効力が弱い（ＩＣ５０＝２０μモル／Ｌ）ＳＣ３３、ＳＣ
３４及びＳＣ３６とで、３００倍を超える変化があった。
【０２４４】
極性表面面積に基づく化合物の選択
少数の化合物でのＰａｌｍらの最初の研究（（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１
：５３８２−９２、（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４：５６８−７１、及び、（１
９９６）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：３２−９）と、１，５９０種類の経口投与型薬
剤でのＫｅｌｄｅｒらによるより最近の研究（（１９９９）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１６：
１５１４−９）とから、受動拡散により経口的に吸収されることが意図される化合物につ
いては最大の極性表面面積は〜１２０平方オングストロームの値が推奨された。したがっ
て、６０平方オングストローム未満の極性表面面積を有する化合物は完全な（＞９０％）
吸収を示すことが予測される場合がある一方で、１４０平方オングストロームを超える極
性表面面積を有する化合物は吸収が悪い（＜１０％）傾向があるだろう。動的、位相的及
び高速極性表面面積のような極性表面面積計算のいくつかの変形が、さまざまなソフトウ
ェアパッケージに組み込まれる（Ｃｌａｒｋ  ａｎｄ  Ｇｒｏｏｔｅｎｈｕｉｓ（２００
３）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３：１１９３−２０３）。我々は、（Ｅｇａ
ｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３：３８６７−７７、及び、Ｅ
ｇａｎ  ａｎｄ  Ｌａｕｒｉ（２００２）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４
：２７３−８９）に説明したとおり、上記の吸収を予測するために高速極性表面面積プロ
ットを使用したが、データは図１５に示す。９５％信頼楕円により示された領域にある化
合物は、好ましい吸収と経口での生体利用性とを有することが期待される。全ての化合物
は、１４０平方オングストローム未満の高速極性表面面積と５未満のｌｏｇＰ値とを示し
た。したがって、９９％信頼楕円（外側の楕円）又は９５％信頼楕円（内側の楕円。図１
）のどちらを使用しても明らかな違反は観察されなかった。
【０２４５】
ＳＣ２１及びＳＣ２３は、ホルモン依存性及びホルモン非依存性の株細胞のパネルに対
して顕著な効力を示す
我々の独自の９５０種類の化合物の多くは好ましい計算物理化学特性を示したが、表５
に表された１８種類の化合物は、我々の最初のスクリーニングにおいて最も効力が強い化
合物に含まれた。薬剤耐性株細胞に対するその後のテストに基づき、我々はさらなる評価
のためにＳＣ２１及びＳＣ２３を選択した。７種類のヒト癌株細胞のパネルのＳＣ２１及
びＳＣ２３に対する感受性は、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５
−ジフェニルテトラゾリウム臭化物アッセイにより評価された。両方の薬剤が、異なる腫
瘍起源由来の癌株細胞のこのパネルにおいて高い効力を示し（表６）、時間−依存性及び
用量−依存性の増殖−阻害効果を示した（図１６）。したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの
細胞死は、ＳＣ２１及びＳＣ２３の濃度及び曝露時間の増加に伴い増加した。
【０２４６】
【表２５】
2008518964.tif 000050
略記：ＡＲ，アンドロゲン受容体、ＥＲ，エストロゲン受容体、ＷＴ、野生型、Ｍｕｔ、
突然変異型、ＮＤ、決定されなかった。
＊細胞障害性濃度（ＩＣ５０）は、細胞母集団の５０％減少を引き起こす薬剤濃度と定義
される。
【０２４７】
両方の薬剤の活性はＰＣ３細胞を例外として前立腺癌株細胞で顕著であり、ＰＣ３細胞
はＳＣ２１及びＳＣ２３に対して最も感受性の低い株細胞である（ＩＣ５０値はそれぞれ
、３．２±０．２μモル／Ｌ、及び、２．０±０．５μモル／Ｌ）ようにみえた。これら
の薬剤に対する感受性の違いは、（ＰＣ３及びＤＵ１４５では突然変異している）アンド
ロゲン受容体、（ＰＣ３ではヌル（ｎｕｌｌ）型であり、ＤＵ１４５では突然変異してお
り、ＬＮＣａＰでは野生型である）ｐ５３、（ＤＵ１４５では突然変異している）ｐ２１
又は（ＤＵ１４５では突然変異している。表６）ｐ１６の状態には依存しないかもしれな
い。興味深いことにＳＣ２３は、ｐＲｂ突然変異がある株細胞（ＤＵ１４５及びＭＤＡＭ
Ｂ４６８）で高い効力を示す。
【０２４８】
ＳＣ２１及びＳＣ２３は、（ＭＣＦ−７及びＭＤＡ−ＭＢ−４３５ではＥＲ＋である）
エストロゲン受容体の状態と（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５及びＭＤＡ−ＭＢ−４６８では突然
変異している）ｐ５３の状態とにかかわらず３種類の乳癌株細胞でも顕著な効力を示した
。卵巣癌由来株細胞ＨＥＹでのＳＣ２１の活性も、卵巣癌に最もよく使用される薬剤であ
るシスプラチン（Ｂｕｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４５：
３６６８−７６、及び、Ｈａｍａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  
Ｒｅｓ．５３：５２２５−３２）にこの株細胞が実質的に耐性であるようにみえることを
考慮すると顕著であった。しかしこの株細胞は、ＳＣ２３に対しては最も感受性が低いよ
うにみえた。
【０２４９】
ＳＣ２１処理はＧ１期及びＳ期の細胞周期停止を誘発する
ＳＣ２１により誘発される細胞周期の撹乱は、ＤＵ１４５及びＰＣ３前立腺癌細胞と、
高度に転移性のＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳癌細胞と、シスプラチン耐性のＨＥＹ卵巣癌細胞
とで試験された。フローサイトメトリーによるＤＮＡプロファイルの分析は、ＤＵ１４５
においてＳＣ２１がＧ０／Ｇ１期での細胞周期停止を誘発することを示した（図１７）。
７２時間のＳＣ２１への曝露で、対照では４６％がＧ０／Ｇ１期であったのに比較して前
記細胞の６５％はまだＧ０／Ｇ１期であった。観察されたＧ０／Ｇ１期の増加は、Ｓ期及
びＧ２−Ｍ期にある細胞数の減少と同時に起こった。同様の効果が、非同期性の乳癌ＭＤ
Ａ−ＭＢ−４３５細胞で得られた（図１７）。
【０２５０】
ＳＣ２１がＰＣ３株細胞及びＨＥＹ株細胞でＳ期停止を誘発することは注目に値した（
図１７）。７２時間のＳＣ２１処理は、ＰＣ３細胞及びＨＥＹ細胞で、それぞれ、５２％
及び６９％のＳ期への蓄積をもたらした。両方の株細胞で観察された効果は、ＣＰＴによ
り誘発される停止に匹敵した。
【０２５１】
ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞及びＰＣ３細胞での最大の停止は、ＳＣ２１処理４８時間で
観察され、該停止は７２時間まで維持された。細胞周期停止を誘発させるＳＣ２１の本特
性は、タキサンのような細胞周期の異なる段階で作用する薬剤との併用するうえでＳＣ２
１を理想的な医薬品にする。
【０２５２】
ＳＣ２１処理はアポトーシスを誘発する
ＳＣ２１及びＣＰＴに誘発されるアポトーシスは、フローサイトメトリーにより測定さ
れた（図１８）。ＩＣ８０用量での７２時間のＳＣ２１処理は、サブＧ０／Ｇ１集団を計
算することにより測定された１２％ないし１５％のアポトーシスを誘発した。ＣＰＴは同
様の条件下で３０％のアポトーシスをもたらした（図１８）。アポトーシスによる細胞死
の初期事象は、細胞膜の外側領域へのホスファチジルセリン残基の転移である。この事象
は、核の機能停止と、ＤＮＡ断片化と、たいていのアポトーシス関連分子の出現との前に
起こり、アネキシンＶ結合アッセイにより容易に測定される。この方法により、我々はＳ
Ｃ２１をＣＰＴと比較した。
図１９に示されたように初期プラス後期のアポトーシス細胞の百分率は、ＳＣ２１及びＣ
ＰＴへの７２時間の曝露後、それぞれ、７２％及び５９％に到達した。
【０２５３】
ＳＣ２１はマウス異種移植モデルでｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性を示す
ＳＣ２１のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性は、ヒト前立腺ＰＣ３細胞で接種されたヌードマ
ウスで評価された。実験手順の概略模式図は図１０（Ａ）に示される。動物は毎日、生理
食塩水（対照）と、０．３ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇでのＳＣ２１との腹腔内注射で処
理された。５日間の投与期間の後、前記薬剤処理は中断され、前記動物は５週間、週２回
監視された。図２０（Ｂ）はＳＣ２１で処理したＰＣ３異種移植片の体積（平均値±標準
偏差）の経時変化を示す。ＳＣ２１は、目立った毒性なしに、前立腺異種移植片における
腫瘍の負担を有意に減少させた（図２０（Ｃ））。ＳＣ２１での処理は、耐容性良好であ
り、いずれかの薬剤に関連する死と体重の変化とをもたらさなかった。未処理の対照マウ
スは実験前には３３．２±１．４５ｇの平均体重であり、実験後には３４．３±２．７９
ｇであった。０．３ｍｇ／ｋｇのＳＣ２１で処理されたマウスは３２．１±１．９２ｇの
平均体重であり、３．０ｍｇ／ｋｇのＳＣ２１で処理されたマウスは３３．３±１．８９
ｇの平均体重であった。
【０２５４】
考察
我々は、抗癌性化合物から抗ウィルス化合物を識別するためのファルマコフォアモデル
を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で顕著な活性プロファイルを有
する新しいクラスのリード化合物をうまく特定した。この新しいクラスの化合物のうち２
種類のメンバーであるＳＣ２１及びＳＣ２３は、さまざまなヒト腫瘍由来癌株細胞に対し
てさらに評価された。両方の化合物が、時間−及び用量−依存的に細胞増殖を阻害した。
前立腺癌細胞でのＳＣ２１及びＳＣ２３の有効性はＣＰＴの有効性に匹敵し、それらの細
胞障害性効果は、アンドロゲン受容体、ｐ５３、ｐ２１及びｐ１６の状態に依存しないか
もしれない。興味深いことにｐＲｂの発現の欠損が、ＤＵ１４５及びＭＤＡ−ＭＢ−４６
８株細胞におけるＳＣ２３に対する高い感受性を与えるようにみえた。ＳＣ２１は、ＰＣ
３前立腺癌細胞に比べるとＥＲ＋及びＥＲ−乳癌細胞で１６倍ないし９０倍効力が強いよ
うにみえ、この化合物がホルモン受容体陽性及び陰性乳癌の治療のための有力な候補薬剤
となるかもしれないことを示唆した。
【０２５５】
我々のデータがこの化合物の細胞周期の進行を停止させる能力も示したことは、ＳＣ２
１の細胞増殖阻害に及ぼす影響に矛盾しない。ＳＣ２１のこの特性は、タキサンのような
細胞周期の異なる段階で作用する他の医薬品との革新的な併用を調査する可能性を開示す
る。特に、現在の研究で使用される異なる株細胞は、ＳＣ２１処理の後で異なる細胞周期
の撹乱を示した。ＳＣ２１はＤＵ１４５及びＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞をＧ０／Ｇ１期で
停止させ、ＰＣ３及びＨＥＹ細胞をＳ期で停止させた。以前に異なる薬剤で報告された同
様の観察は、異なる細胞周期チェックポイントの状態とアポトーシスへの感受性の高さと
が原因と結論された（Ｚｕｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．６５：１２８１−９４、Ｓｃｈｉｆｆ  ａｎｄ  Ｈｏｒｗｉｔｚ（１９８０）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：１５６１−５、及び、Ｌａｎｚ
ｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ４８：２５４−６４）。ｐ５３がＧ０
／Ｇ１期での細胞周期保持に主要な役割を果たすことは十分に確立されている。我々は、
これらの株細胞でＳＣ２１により誘発される細胞周期停止は（ＤＵ１４５では突然変異が
あおり、ＰＣ３ではヌル型である）ｐ５３の状態に依存しない場合があると結論すること
ができる。ＳＣ２１処理に応答するｐ５３の役割をよりよく理解するために、さまざまな
ｐ５３突然変異株細胞及びｐ５３ヌル株細胞を使用するさらなる研究が必要である。
【０２５６】
アポトーシス−シグナリング経路と該経路を制御する細胞レベルの事象とが、癌の進行
に及ぼし、かつ、化学療法に応答する、深い影響を与えることは周知である（Ｓｕｎ  ｅ
ｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９６：６６２−７２、
Ａｓｓｕｎｃａｏ  Ｇｕｉｍａｒａｅｓ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｅｎ（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７１：１６３８−５０、Ｐｏｍｍｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００４
）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２３：２９３４−４９、及び、Ｎｏｒｂｕｒｙ  ａｎｄ  Ｚｈｉｖ
ｏｔｏｖｓｋｙ（２００４）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２３：２７９７−８０８）。アネキシン
Ｖ／ヨウ化プロピジウム染色とサブＧ０／Ｇ１分画とに基づき、ＳＣ２１活性がＣＰＴに
匹敵する形でアポトーシスにより仲介されることは明らかである。ＳＣ２１は、ＰＣ３腫
瘍異種移植片に対するｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍的有効性も示した。腫瘍増殖の有意な低
減が、テストされた全ての用量に対して判明した。さらにＳＣ２１は、耐容性良好であり
、薬剤に関連する死をもたらさなかった。最後にＳＣ２１が、ＰＣ３細胞がｉｎ  ｖｉｔ
ｒｏのモデルで最も感受性が低い細胞であるにも関わらずＰＣ３前立腺癌異種移植片に対
するｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性を示したという事実は、ＳＣ２１の新規抗癌剤としての可
能性を明らかに示す。
【０２５７】
結論として、既知の薬剤に先天的又は後天的な耐性を有する異なる株細胞を含むさまざ
まなｉｎ  ｖｉｔｒｏの系でのサリチルヒドラジドの細胞障害性プロファイルと、サリチ
ルヒドラジドのｉｎ  ｖｉｖｏでの好ましい特性とを考慮すると、サリチルヒドラジドは
、新しい作用機序により機能する新規のクラスの抗癌剤を表すようにみえる。これらの薬
剤は治療上の可能性を期待できるだろう。
【実施例３】
【０２５８】
【表２６】
2008518964.tif 000051
【０２５９】
【表２７】
2008518964.tif 000052
【０２６０】
【表２８】
2008518964.tif 000053
【０２６１】
【表２９】
2008518964.tif 000054
【０２６２】
【表３０】
2008518964.tif 000055
【０２６３】
【表３１】
2008518964.tif 000056
【０２６４】
【表３２】
2008518964.tif 000057
【０２６５】
【表３３】
2008518964.tif 000058
【０２６６】
【表３４】
2008518964.tif 000059
【実施例４】
【０２６７】
既知の薬剤に耐性の細胞のパネルに対するＳＣ２３の効力のその後の確証は、我々がそ
の作用機序を調査することを促した。新しい化学物質の実体としてＳＣ２３は、化学構造
及び生物学的活性に基づくその効力と、選択性と、新規性とのため、開発にとって非常に
期待できる。
【０２６８】
機構の研究。我々の予備的研究の結果は、ＳＣ２３が細胞をＧ０／Ｇ１期で停止させア
ポトーシスを誘発させることを示す。ＳＣ２３に誘発される細胞障害性に関わる分子機構
へのさらなる見識を得るために、次に我々はＳｔａＲＴ−ＰＣＲを使用して、細胞周期調
節と、アポトーシスと、腫瘍の進行とに関わる遺伝子のパネルの発現を評価した（表８及
び図２２）。
【０２６９】
【表３５】
2008518964.tif 000060
【０２７０】
【表３６】
2008518964.tif 000061
Ｔ２４膀胱癌株細胞は、表示された時間ＳＣ２３で処理され、試料はＳｔａＲＴ−ＰＣＲ
により分析された。ａＮＲ、結果なし。
【０２７１】
ＳｔａＲＴ−ＰＣＲ（商標、標準逆転写ポリメラーゼ連鎖反応法）。Ｗｉｌｌｅｙら（
（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５８：１３−４１）により最初に述
べられたこの技術は、多数の遺伝子に対する妥当かつ再現可能な数的遺伝子発現データを
作成するために、競合テンプレート（ＣＴ）の標準化混合物を内部標準として使用する。
ｍＲＮＡがｃＤＮＡへ変換された後、前記ｃＤＮＡは専有のＳｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ  
Ｍｉｘｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ（商標、ＳＭＩＳ（商標
）、ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）と混合された。標準混合物中には、（すなわち
、β−アクチン及びＧＡＰＤＨのような）参照遺伝子（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｇｅｎｅ）
に対する内部標準ＣＴと同様に、測定されるべきそれぞれの遺伝子に対する内部標準ＣＴ
が存在する。ＳｔａＲＴ−ＰＣＲ（商標）により作成された単位複製配列は、その後キャ
ピラリー電気泳動法で分離された。内部標準ＣＴ又はＮＴａｍｐｌｉｍｅｒの量は、それ
ぞれのピーク面積を測定することにより決定された。その後全てのデータは、参照遺伝子
（正規化遺伝子）１０６分子当たりの関心のある遺伝子に対するｍＲＮＡの分子の数とし
て報告された。ＳＭＩＳ（商標）の段階希釈は、細胞内で観察される参照遺伝子１０６分
子当たり１０未満ないし１０７分子の７ｌｏｇ幅を超える遺伝子発現の定量的測定を可能
にする。表８に表されたデータは、１０６分子のβ−アクチンで正規化されたコピー数で
ある。
【０２７２】
細胞周期調節及び細胞増殖に関わる遺伝子の変調。ＳＣ２３はＧ０／Ｇ１期での停止を
誘発したので、最初我々は細胞周期遺伝子に関心があった。したがって我々はＳｔａＲＴ
−ＰＣＲを使用して、ＳＣ２３による細胞周期調節に関わる鍵となる遺伝子の発現の変化
を研究した。遺伝毒性の損傷に応答してｐ５３が上向き調節され、Ｇ０／Ｇ１期での細胞
の停止をもたらし、ＤＮＡの修復を活性化する、又は、損傷が修復され得ないときは細胞
をアポトーシスに向わせることは十分に確立されている。Ｐ５３による細胞周期の停止は
ｐ２１及びｐ２７の活性化により仲介される（図２１）。ｐ２１及びｐ２７は、サイクリ
ン依存性キナーゼ阻害剤（ＣＤＫｉ）のＣｉｐ１／Ｋｉｐ１ファミリーのメンバーである
。ＣＤＫｉ’ｓの別のファミリーであるＩＮＫ４（ｐ１６、ｐ１５、ｐ１８及びｐ１９）
といっしょに、ｐ２１及びｐ２７はサイクリン／サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）複
合体の活性を阻害する。この阻害は、網膜芽細胞腫タンパク質（Ｒｂ）の減リン酸化を引
き起こし、転写因子Ｅ２Ｆの放出を防止し、かつ、細胞増殖関連遺伝子の転写を阻害する
。
【０２７３】
ＳＣ２３に誘発されるＧ１期での停止は、ｐ２１及びｐ２７の上向き調節と関係する。
ＳＣ２３での処理は、ｐ５３の過剰発現と同時に発生するサイクリンＡ及びｃｄｋ１の発
現の下向き調節を誘発した。これらのデータはＳＣ２３で処理された細胞でのＧ１期での
停留と関係がある。Ｔ２４細胞はプロモーターの過剰メチル化のためにｐ１６欠損細胞で
あるため、ｐ１６の発現は期待されたようには検出できなかった。ｐ１８発現に差は見ら
れなかったが、ＳＣ２３は、初期Ｓ期に関わる２種類のキナーゼであるｃｄｋ７及びｃｄ
ｋ８の発現の上向き調節を誘発した。
【０２７４】
サイクリンＥ、サイクリンＤ３及びサイクリンＧ１の発現はわずかに増加した。これら
のサイクリンのいくつかの過剰発現は、ＭＹＣの発現の増大と同時に起こった（図２２）
。Ｃｄｃ２５はＳＣ２３で処理された細胞で下向き調節された。しかしＰＣＮＡは変化し
ないままであった。
【０２７５】
転写因子Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ４及びＥ２Ｆ５は、ｐ１６ＩＮＫ−ｐＲＢ経路の下流の仲介
役であると考えられる。我々のデータは、ＳＣ２３の曝露でのＥ２Ｆ５転写因子と同様に
、（ｐ１３０としても知られる）Ｒｂ様タンパク質２の上向き調節を明らかにした（図２
２）。ＳＣ２３はＥ２Ｆ５の発現を誘発したが、Ｅ２Ｆ４の発現を減少させた。これらの
データは、Ｅ２Ｆ４阻害が、Ｔ２４細胞でＳＣ２３により誘発されるＧ１期での深刻な停
止と関係する場合があることを示唆する。これらのＥ２Ｆ因子の発現の調節は、ＳＣ２３
で処理されたＴ２４細胞で観察された細胞周期の停止を仲介する際のｐ１０７−及びｐ１
０３−結合性受容体複合体の重要性を反映する。これらのデータは、ｐＲＢファミリータ
ンパク質からのＥ２Ｆ４の解離がＳＣ２３に誘発される細胞障害において一定の役割を果
たす場合があることも示唆する（図２３）。この仮説を確証するためにさらなる研究が必
要である。
【０２７６】
観察されたＮＦＫＢの発現の上向き調節は、（サイクリンＤ３及びｃ−ＭＹＣのような
）増殖遺伝子か、（ＣＯＸ２のような）免疫遺伝子か、（Ｂｃｌ−ＸＬのような）抗アポ
トーシス遺伝子かのような他の遺伝子の過剰発現と関係する。
【０２７７】
アポトーシスに関わる遺伝子の変調。本研究で我々は、アポトーシスを調節することが
知られている鍵となる遺伝子の発現パターンも評価した。ＳＣ２３はアネキシンＶ遺伝子
の発現を誘発し、このデータはフローサイトメトリー分析結果と相関がある。ＳＣ２３は
、このアポトーシス促進性遺伝子の下向き調節を誘発した。しかし（Ｂｃｌ−ＸＬ及びＢ
ｃｌ−ＸＳのメンバーを含む）Ｂｃｌ２Ｌ１の発現は、対応する未処理対照細胞と比較し
て、ＳＣ２３で処理された細胞では実質的に変化しなかった（図２１及び２２、表８）。
【０２７８】
ＳＣ２３は、ＭＡＤ、ＴＮＦ−α（ＴＮＦＡＩＰ１）、ＪＵＮ、ＭＡＰ３Ｋ１４、ＮＦ
ＫＢ、アネキシンＶ及びＤＡＰ遺伝子の上向き調節を通してアポトーシス経路に影響を及
ぼすことも示した。ＳＣ２３は、カスパーゼ１及びＴＮＦ受容体の顕著な下向き調節と、
Ｂｃｌ２の下向き調節とを誘発し（図２１及び２２、表８）、ＳＣ２３に仲介されるアポ
トーシスはミトコンドリアが中心的な役割を果たす酸化的ストレスと関係があることを暗
示した。
【０２７９】
作用モード。可能性のあるＳＣ２３の作用モードを調査するために、我々は遺伝子発現
プロファイリングを適用し、５７，０００個のプローブセットが搭載されたＵ１１３＋２
発現アレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を使用して、薬剤処理したときの発現としないとき
の発現とを比較した。発現値は１０未満が切り捨てられ、対数変換された。最初の選別は
、試料の１０％以上において５０未満の発現値を有する全ての遺伝子を除去した。この基
準より下に、評価試料中の実質的な「ノイズ」が存在し、そのような低い値を示す多くの
遺伝子はおそらく全く発現していない。１０％は非常に低い発現値を示す遺伝子であるこ
とを許容することにより、一定の遺伝子に対して我々は、（対照群のような）単一の群で
発現していない遺伝子を含めることを許容した。データの再現性は、二重に行った実験の
間の高い相関関係の観察により確認された（図２４）。陽性対照として用いるために、作
用機序が既知である５種類の薬剤も研究された。
【０２８０】
これらのデータは、最も可能性のあるＳＣ２３の作用モードに関する手がかりを提供す
るために、Ｇｅｎｅｔｒｉｘソフトウェアパッケージを使用して下記の多数のやり方で分
析された。
【０２８１】
スキャッタープロット。最も単純なレベルでは、我々はＳＣ２３による遺伝子発現とそ
れぞれの陽性対照による遺伝子発現との相関関係を試験した（図２５）が、該試験では、
全部の遺伝子の相関関係（図２５（Ａ））と、いずれかの一種類の薬剤への曝露の後で少
なくとも５倍変化した遺伝子に限定した遺伝子の相関関係（図２５（Ｂ））とを検証した
。（相関係数ｒ＝０．８４の）ミトキサントロン、（ｒ＝０．８０の）ＣＰＴ、（ｒ＝０
．７２の）エトポシド及び（ｒ＝０．９３の）５ＦＵとの関係と比較すると、最も緊密な
関係は、（ｒ＝０．９６の）タキソールとの関係であった。
【０２８２】
発現が顕著に変化した遺伝子の試験。我々は次に、ＳＣ２３処理の後で少なくとも５倍
上向き調節された遺伝子を試験した（表９）。特に関心があるのは微小管関連タンパク質
４と、微小管親和性調節キナーゼ２及び４との、タキソールとの作用機序の類似性を暗示
する最初の３種類の遺伝子である。タキソールは周知の微小管毒であるが微小管調節キナ
ーゼ２及び４を調節することが示されなかったことは注目すべきである。
【０２８３】
【表３７】
2008518964.tif 000062
【０２８４】
我々は、ＳＣ２３と、タキソールと、５ＦＵとに応答して上向き調節される遺伝子にお
ける重複も試験した。３種類の化合物の間で共通する１７５個の遺伝子と、タキソール及
びＳＣ２３に共通する２９個の遺伝子、ＳＣ２３及び５−ＦＵに共通する１０個の遺伝子
、及び、タキソール及び５−ＦＵに共通する３１個の遺伝子とが存在した（図２６）。
【０２８５】
クラスタ分析。
６種類の薬剤のうちいずれか１種類での処理（Ｎ＝１１４７）に伴い５倍上向き調節さ
れることがわかった遺伝子は、他の５種類の薬剤との関係でＳＣ２３がどこにクラスタを
形成するかを検証するために、主成分分析及び階層クラスタ分析のための基礎として使用
された。全ての観察結果についてのこれらの遺伝子の主成分分析は、２種類のトポイソメ
ラーゼＩＩ阻害剤は１つの群を形成し、他の周知の薬剤は２つ目の群を形成し、ＳＣ２３
はタキソールといっしょにクラスタを形成するというように、前記二重に行った実験はい
っしょに相対的に緊密にクラスタを形成する傾向があることを示した（図２７）。同様の
パターンが階層クラスタ分析でも明らかであり、該分析は遺伝子発現の変化の観点から、
タキソールをＳＣ２３の最も近隣の化合物として再び特定した。
【０２８６】
要約すると我々の遺伝子発現分析は、ＳＣ２３及びタキソールという２種類の化合物は
構造的に異なり細胞周期の異なる段階で細胞を停止させるにもかかわらず、ＳＣ２３につ
いてタキソールに類似の作用機序を示唆する。
【０２８７】
プロテオーム解析
ＳＣ２３で処理された細胞は、８−５８ｋＤａの分子量範囲のさまざまなタンパク質を
上向き調節させる。
ＳＣ２３で処理されたＴ２４細胞と未処理のＴ２４細胞との全タンパク質抽出物のＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥゲル上での比較は、前記タンパク質含量の複雑性と、８−５８ｋＤａの分子
量範囲の特定のタンパク質の明確な上向き調節とを明らかにした（図２８）。その後二次
元ゲル電気泳動は、これらのタンパク質を分離するために使用された（図２９）。上述の
ようにＳＣ２３での処理は、多くのタンパク質の顕著な上向き調節を引き起こした。同様
の分析が、ＳＣ２３で処理されたＤＵ１４５細胞についても実施された。
【０２８８】
その後全ての二次元ゲルはＰＤＱｕｅｓｔ（ＢｉｏＲａｄ）で定量され、未処理試料に比
較して（２倍を超える）顕著に変化した約１２５個のスポットが特定された。代表的なゲ
ルの切片は図３０に示される。図３０で示されたスポットから特定されたタンパク質は、
β−チューブリン、ｍｙｃプロモーター結合タンパク質（ＭＰＢ−１）、網膜芽細胞腫遺
伝子産物結合タンパク質７、ビメンチン、エノラーゼ、ホスホピルビン酸ヒドラターゼベ
ータ及びミトコンドリアＡＴＰシンターゼベータ鎖である。
【０２８９】
ＳＣ２３で処理された細胞の二次元ゲル電気泳動分析結果から単離された４種類のタン
パク質の代表的なタンデムＭＳ分析が図３１に示される。簡潔には、前記ＣｙｐｒｏＲｕ
ｂｙで染色されたゲルスポットは、前記ゲルから切り出され、ゲル中でのトリプシン消化
に供された。消化の終了時に、トリプシンで消化されたゲルスポット由来のペプチドが抽
出され、当地南カリフォルニア大学でＡｕｓｔｉｎ  Ｙａｎｇ博士と共同しＴｈｅｒｍｏ
ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＴＱリニアイオントラップ質量分析装置により分析された。タンデ
ムＭＳ／ＭＳスペクトルは、Ｘｃａｌｉｂｕｒ  １．４  ｓｏｆｔｗａｒｅで取得された
。フルＭＳスキャンの後で、前記最初のフルスキャンから得られた上位３位までの大きさ
のイオンピークの、３個の連続的ＭＳ／ＭＳスキャンが行われた。動的排除が発動された
−１分以内にあるイオンが３回発生すると、該イオンは３分間排除リストに置かれた。他
の質量分析データ生成パラメーターは以下のとおりである。衝突エネルギー３５％、フル
スキャンＭＳの質量幅４００−１８００ｍ／ｚ、最小のＭＳ信号５ｘ１０４カウント、最
小のＭＳ／ＭＳ信号５ｘ１０３カウントである。ペプチドは、（２％アセトニトリル、１
．０％ギ酸の）９５％溶媒Ａ及び（９５％アセトニトリル、１．０％ギ酸の）５％溶媒Ｂ
でＭｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓぺプチドキャップトラップ上に装荷され、
その後、溶媒Ｂについて５％から９０％までの直線的グラジエントで溶出された。前記質
量分析装置は、コーティングされていない１０μｍ−ＩＤ  ＳｉｌｉｃａＴｉｐ（商標）
ＰｉｃｏＴｉｐ（商標）ナノスプレーエミッター（Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ、Ｗｏｂ
ｕｒｎ、ＭＡ）を使用するナノスプレーイオン源（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ）が
装備されていた。質量分析装置のスプレー電圧は１．９ｋＶであり、加熱キャピラリー温
度は１８０°Ｃであった。
【０２９０】
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析の終了後、取得されたスペクトルとＮＣＢＩマウスタンパク質の
ＦＡＳＴＡデータベースとの間の交差相関スコアを決定するために、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎ
ｎｉｇａｎ社からのベータ−テストサイト版であるＳＥＱＵＥＳＴＴＭアルゴリズムを利
用するＢｉｏｗｏｒｋｓ３．１を使用して、タンデムＭＳが分析された。下記のパラメー
ターが、ＴｕｒｂｏＳＥＱＵＥＳＴ検索分析のために使用された。全てのタンパク質が完
全に消化されるわけではないので、プロテアーゼとして酵素は選択されない。分子量範囲
：４００−４５００、閾値：１０００、モノアイソトピック、前駆体質量：１．４、グル
ープスキャン：１０、最小イオンカウント：２０、荷電状態：自動、ペプチド：１．５、
フラグメントイオン：０、差次的（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）アミノ酸修飾：Ｃｙｓ  
５７．０５２０。＋１イオンに対しては１．５より、＋２イオンに対しては２．０より、
及び、＋３イオンに対しては２．５より大きいＳＥＱＵＥＳＴ交差相関スコアを使用して
結果が選別された。図３１は、β−チューブリンペプチド（ＥＶＤＥＱＭＬＮＶＱＮＫ）
とｍｙｃプロモーター結合タンパク質（ＭＰＢ−１）ペプチド（ＶＮＱＩＧＳＶＴＥＳＬ
ＱＡＣＫ）とのＭＳ／ＭＳスペクトルを示す。一般的に我々は、４０％以上の配列カバー
度でたいていのタンパク質を特定することができる。不十分な試料量か、タンパク質の量
の低さか、信頼できるフラグメントがないことかのいずれかのために良好なペプチドカバ
ー度を示さないスポットは、それ以上調査されなかった。
【０２９１】
要約すると、我々はＳＣ２３処理に応答して顕著に変化した一連のタンパク質を分離す
ることができた。上述した我々のマイクロアレイ分析から特定された上位３位までの大き
さの遺伝子に関するβチューブリンは、少なくとも４倍の過剰発現したいくつかのスポッ
トの一つであった。
【０２９２】
前述の内容はかなり詳細に、かつ、好適な実施態様に関して説明されたが、これらは開
示内容の限定として解釈されるべきではない。当業者の想到する範囲内での修正及び変更
は本発明の範囲内にあることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０２９３】
【図１】ＳＣ１４４で処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞の細胞周期プロファイルのフローサイトメトリー分析結果を示すグラフ。
【図２】ＳＣ１４４及びＣＰＴ（ＩＣ８０）で処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞のアポトーシス分析結果を示すグラフ。
【図３】（Ａ）腫瘍の増殖と、異種移植モデルでの投与との概略模式図。（Ｂ）ＳＣ１４４が０．３、０．８及び４ｍｇ／ｋｇの投与量で、ヒト乳癌異種移植片のサイズを減少させたことを示すグラフ。（Ｃ）それぞれの処理群について実験の最終日に算出された％Ｔ／Ｃを示すグラフ。
【図４】（Ａ）ＳＣ１４４で処理されたマウスの代表的な全身像を示す画像。（Ｂ）ＳＣ１４４（４ｍｇ／ｋｇ）で処理されたマウスと対照マウスとの腫瘍のサイズの比較を示す画像。（Ｃ）パネルＢで示されたマウスから切り出した腫瘍を示す画像。
【図５】ＳＣ１４４が腫瘍組織の顕著なネクローシスを誘発することを示す顕微鏡画像。（Ａ）ＨＥ染色された処理されない腫瘍組織の顕微鏡画像。（Ｂ）ＨＥ染色されたＳＣ１４４で処理された組織の顕微鏡画像。
【図６】ＳＣ１４４が臓器毒性を示さないことを示す顕微鏡画像。（Ａ）ＨＥ染色されたＳＣ１４４で処理された腎臓組織の顕微鏡画像。（Ｂ）ＨＥ染色されたＳＣ１４４で処理された肝臓組織の顕微鏡画像。（Ｃ）ＨＥ染色されたＳＣ１４４で処理された心臓組織の顕微鏡画像。
【図７】ケトコナゾールと、ＳＣ１４４と、ＳＣ１４４の類縁体であるＳＣ２４とによるヒトＣＹＰ３Ａ４の阻害を示すグラフ。
【図８】ヒト乳癌（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５）細胞を移植されたヌードマウスのＰＥＴイメージング画像。上段：基準となるスキャン結果。（Ａ）平衡相ＦＤＧ、注射後３０分。（Ｂ）ＦＭＡＵ、注射後１０分。（Ｃ）ＦＭＡＵ、注射後６０分。下段：経過観察スキャン結果。（Ｄ）ＦＤＧ、注射後３０分。（Ｅ）ＦＭＡＵ、注射後１０分。（Ｆ）ＦＭＡＵ、注射後６０分。
【図９】２つの独立した実験での遺伝子発現プロファイルの比較を示すグラフ。（Ａ）処理されない対照サンプルであるＤ５６５対Ｄ５６６のスキャッタープロット。（Ｂ）ＳＣ１４４で処理されたＤ５７１及びＤ５７２チップの対のスキャッタープロット。（Ｃ）未処理対照細胞対ＳＣ１４４処理細胞での発現量の対数平均値の差に対して、有意水準を表すｔ−統計量をプロットしたグラフ。
【図１０】ＳＣ１４４が他のクラスの化合物と相異なる独特な活性のパターンを示すことを示すグラフ。（Ａ）全１４回の観察結果についての遺伝子の３主成分系での主成分分析結果を示すグラフ。（Ｂ）階層クラスタ分析結果を示すグラフ。
【図１１】分子機能による遺伝子のバイオインフォマティクス分析結果を示す表。
【図１２】ＩｎｔｅｒＰｒｏ分類ツールから導かれた遺伝子のリストを示す表。
【図１３】ＳＣ１４４及びエトポシドの間で同定された共通遺伝子のサブセット分類を示す表。
【図１４】ＳＣ１４４と、ミトキサントロンと、カンプトテシンとの間での共通遺伝子のサブセット分類を示す表。
【図１５】薬剤吸収の予測を示すグラフ。
【図１６】ＳＣ２１及びＣＰＴによるＤＵ１４５細胞の、（Ａ）経時的な阻害を示すグラフ。（Ｂ）濃度依存的な阻害を示すグラフ。
【図１７】ＳＣ２１で処理されたＤＵ１４５細胞と、ＰＣ３細胞と、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞と、ＨＥＹ細胞との細胞周期プロファイルの、フローサイトメトリー分析の結果を描くグラフ。
【図１８】フローサイトメトリーを使用してサブＧ０／Ｇ１集団を測定することにより算出されたアポトーシスの百分率を示すグラフ。
【図１９】ＳＣ２１又はＣＰＴ（ＩＣ８０）で処理されたＤＵ１４５細胞のアポトーシス分析結果を示すグラフ。
【図２０】（Ａ）腫瘍の増殖と、ＰＣ３異種移植マウスでの投与との概略模式図。（Ｂ）ＳＣ２１がヒト前立腺癌異種移植片のサイズを減少させたことを示すグラフ。（Ｃ）ＰＣ３異種移植片でのＳＣ２１に対する用量反応曲線を描くグラフ。
【図２１】ＲＴ−ＰＣＲ遺伝子発現分析を示す図。
【図２２】表８から選択された遺伝子の、１０６分子のβ−アクチンで正規化されたＳＣ２３で誘発される発現量（分子数）を示すグラフ。
【図２３】（左）細胞周期に関わる経路の略図。（右）アポトーシスに関わる経路の略図。
【図２４】２つの独立した実験での遺伝子発現プロファイルの比較の代表例。（Ａ）処理されない対照サンプルであるＤ５６５対Ｄ５６６チップのスキャッタープロット。（Ｂ）エトポシドで処理されたＤ７２０及びＤ７２１チップの対のスキャッタープロット。（Ｃ）ミトキサントロンで処理されたＤ７２４及びＤ７２５チップの対のスキャッタープロット。
【図２５】ＳＣ２３がタキソールに最も類似した活性のパターンを示すことを示すスキャッタープロット。（Ａ）ＳＣ２３処理による遺伝子発現を５ＦＵと、ＣＰＴと、エトポシドと、タキソールと、ミトキサントロンとの処理による遺伝子発現と比較する一連のスキャッタープロット。（Ｂ）パネルＡと同じだが、少なくとも５倍変化した遺伝子のみがプロットされたスキャッタープロット。
【図２６】３個の化合物の間で重複する遺伝子の数を示すベン図。
【図２７】ＳＣ２３がタキソールに最も類似した活性のパターンを示すことを示すグラフ。（Ａ）全１０回の観察結果についての遺伝子の３主成分系での主成分分析結果を示すグラフ。（Ｂ）階層クラスタ分析結果を示すグラフ。
【図２８】ＳＣ２３に誘発されるタンパク質の発現の変化を描いた電気泳動画像。
【図２９】ＳＣ２３で処理したＴ２４細胞の二次元ゲル電気泳動結果を示す画像。
【図３０】（左）二次元ゲル電気泳動ゲル由来ＳＣ２３で処理された細胞の選択的領域を示す画像。（右）ＰＤＱｕｅｓｔを使用してスポットを定量した結果を示すグラフ。
【図３１】β−チューブリンペプチド（ＥＶＤＥＱＭＬＮＶＱＮＫ）とｍｙｃプロモーター結合タンパク質（ＭＰＢ−１）ペプチド（ＶＮＱＩＧＳＶＴＥＳＬＱＡＣＫ）とのＭＳ／ＭＳスペクトルを示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【国際調査報告】
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2008518964.tif 000113
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