(57)【要約】【化１】2008546737.tif 000088  本発明は、ヒストン・デアセチラーゼ阻害酵素活性をもつ、式（Ｉ）［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、Ｙ及びＺは定義された意味をもつ］の新化合物、それらの製造、それらを含有する組成物並びに医薬としてのそれらの使用を含んでなる。
2008546737.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2008546737.tif 000081
［式中、
Ｘはそれぞれ独立してＮ又はＣＨであり、
Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、ＣＨ又はＣＨ２であり、そしてＹがＣＨである時は、置換基が環構造のＹ原子に結合されており、
Ｚはそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、ＣＨ２又はＣＨであり、そしてＺがＣＨである時は、点線が１つの結合であり、
ｎは０又は１であり、そしてｎが０である時は、直接結合が意図されており、
Ｒ１はフェニル、ナフタレニル、ヘテロシクリル、フェニルＣ１−６アルキル、ナフタレニルＣ１−６アルキル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルはそれぞれ、場合により、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ１−６アルキル、フェニル、フェニルオキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよく、あるいは２個の置換基が一緒になって２価の基−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−を形成してもよく、
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル又はフェニルであり、ここで該フェニルはそれぞれ場合により、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルオキシ又はシアノからそれぞれ独立して選択される１個又は２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ３はヒドロキシあるいは、式（ａ−１）
【化２】
2008546737.tif 000082
（式中、
Ｒ４はヒドロキシ又は−ＮＨ２であり、
Ｒ５は水素、チエニル、フラニル又はフェニルであり、そしてチエニル、フラニル又はフェニルはそれぞれ、場合によりハロ、アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、Ｃ１−６アルキル、（ジＣ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルＣ１−６アルキルオキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル、ポリハロＣ１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、ヒドロキシカルボニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、アミノスルホニル、アミノスルホニルＣ１−６アルキル、イソオキサゾリル、アミノカルボニル、フェニルＣ２−６アルケニル、フェニルＣ３−６アルキニル又はピリジニルＣ３−６アルキニルで置換されていてもよく、
Ｒ６、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立して水素、−ＮＨ２、ニトロ、フラニル、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、トリフルオロメチル、チエニル、フェニル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、アミノカルボニルＣ１−６アルキル又は−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−Ｒ９であり、ここでＲ９は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、アミノ又はＣ１−６アルキルオキシである）の基であり、そして
前記のヘテロシクリルはフラニル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ジオキソリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピラニル、ピリジニル、ピペリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピペラジニル、トリアジニル、トリチアニル、インドリジニル、インドリル、インドリニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、プリニル、キノリジニル、キノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノオキサリニル又はナフチリジニルである］、そのＮ−オキシド形態物、製薬学的に許容できる付加塩及び立体化学的異性体形態物。
【請求項２】
ＸがそれぞれＮであり、Ｙがそれぞれ独立してＯ又はＣＨであり、ｎが１であり、Ｒ１がフェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルはそれぞれ場合により水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ１−６アルキル、フェニル、フェニルオキシ又はシアノからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよく、あるいは２個の置換基が一緒になって２価の基−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−を形成してもよく、Ｒ２が水素、Ｃ１−６アルキル又はフェニルであり、そしてＲ３がヒドロキシルである、
請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ＸがそれぞれＮであり、ＹがそれぞれＣＨであり、ＺがそれぞれＣＨであり、Ｒ１がフェニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルはそれぞれ場合により水素、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はフェニルオキシからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ２が水素であり、そしてＲ３がヒドロキシである、
請求項１及び２記載の化合物。
【請求項４】
化合物が化合物第３、化合物第２及び化合物第３５である、請求項１、２及び３記載の化合物。
【表１】
2008546737.tif 000083
【請求項５】
製薬学的に許容できる担体及び、有効成分として治療的有効量の、請求項１〜４に記載された化合物を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項６】
製薬学的に許容できる担体及び請求項１〜４に記載された化合物が密接に混合されている、請求項５に記載の製薬学的組成物を製造する方法。
【請求項７】
医薬として使用するための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
増殖性疾患の処置用の医薬の製造のための、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項９】
抗癌剤と請求項１〜４のいずれかに記載されたＨＤＡＣインヒビターの組み合わせ物。
【請求項１０】
ａ）式（ＩＩ）の中間体を適当な溶媒中で適切な酸と反応させて、ここで式（Ｉ−ａ）の化合物と呼ばれる、そのＲ３がヒドロキシである式（Ｉ）の化合物を生成し、
【化３】
2008546737.tif 000084
ｂ）式（ＸＶ）の中間体を塩化錫（ＩＩ）水和物又は水素と、適当な溶媒中で木炭上１０％パラジウムの存在下で反応させて、ここで式（Ｉ−ｂ）と呼ばれる、そのＲ３が式（ａ−１）の基でありそしてＲ４が−ＮＨ２である式（Ｉ）の化合物を形成し、
【化４】
2008546737.tif 000085
ｃ）式（ＸＶＩ）の中間体を適当な酸と適当な溶媒中で反応させて、式（Ｉ−ｂ）の化合物を形成し、
【化５】
2008546737.tif 000086
ｄ）ＴＢＤＭＳがｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シラニルの意味である式（ＸＶＩＩ）の中間体をテトラブチルアンモニウムフルオリドと適当な溶媒中で反応させて、ここで式（Ｉ−ｃ）の化合物と呼ばれる、そのＲ３が式（ａ−１）の基でありそしてＲ４がヒドロキシである式（Ｉ）の化合物を形成する、
【化６】
2008546737.tif 000087
ことを特徴とする、請求項１に記載の化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヒストン・デアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害酵素活性を有する化合物に関する。それは更に、それらの製造方法、それらを含んでなる組成物並びに、ＨＤＡＣを阻害するための、そして医薬としての、例えば癌及び乾癬のような増殖性状態を阻害するための医薬としての、インビトロ及びインビボ双方におけるそれらの使用を対象に関する。
【背景技術】
【０００２】
核のヒストンは、遺伝子の転写並びに、複製、修復、組み換え及び染色体分離のような他のＤＮＡ−テンプレート過程を調節する原因となる機構の不可欠な、動的成分として知られる。それらはアセチル化、リン酸化、メチル化、ユビキチン化及びＡＤＰ−リボシル化を包含する翻訳後修飾の対象である。
【０００３】
本明細書で「ＨＤＡＣ」と呼ばれる１種又は複数のヒストン・デアセチラーゼは、核のヌクレオソームのヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３及びＨ４を包含する、タンパク質のリシン残基上のアセチル修飾物の除去を触媒する酵素である。ＨＤＡＣは、本明細書で「ＨＡＴ」と呼ばれる１種又は複数のヒストン・アセチルトランスフェラーゼと一緒に、ヒストンのアセチル化レベルを調節する。ヌクレオソームのヒストンのアセチル化の平衡は多数の遺伝子の転写に重要な役割を果たす。ヒストンの低アセチル化は遺伝子転写の抑制をもたらす凝縮されたクロマチン構造を伴ない、他方アセチル化ヒストンは、より開放されたクロマチン構造及び転写の活性化を伴なう。
【０００４】
１１種の構造的に関連したＨＤＡＣが記載されており、２群に分類される。第Ｉ群のＨＤＡＣはＨＤＡＣ１、２、３、８及び１１よりなり、一方、第ＩＩ群のＨＤＡＣはＨＤＡＣ４、５、６、７、９及び１０よりなる。第３群のＨＤＡＣのメンバーは第Ｉ群及び第ＩＩ群のＨＤＡＣに構造的に関連していない。第Ｉ／ＩＩ群のＨＤＡＣは亜鉛依存性機序により機能し、他方第ＩＩＩ群のＨＤＡＣはＮＡＤ−依存性である。
【０００５】
ヒストンに加えて、その他のタンパク質、とりわけｐ５３、ＧＡＴＡ−１及びＥ２Ｆのような転写因子；グルココルチコイド受容体、甲状腺ホルモン受容体、エストローゲン受容体のような核受容体；並びにｐＲｂのような細胞周期調節タンパク質、もまた、アセチル化のための基質であった。タンパク質のアセチル化は、ｐ５３の安定化、コファクターの採用及び増加したＤＮＡ結合のようなタンパク質の安定化と関連付けられてきた。ｐ５３は、ＤＮＡ損傷のような種々のストレス信号に反応して細胞周期の停止又は細胞死を誘発する可能性がある、腫瘍サプレッサーである。ｐ５３誘発細胞周期停止の主要標的はｐ２１遺伝子であるように思われる。ｐ５３によるその活性化の次に、ｐ２１は、Ｇ１及びＧ２相の両方における細胞周期停止、衰退的過程中のそのアップレギュレーション及び増殖している細胞核抗原とのその相互反応をもたらすサイクリン／サイクリン−依存性キナーゼ複合物との関連により同定されてきた。
【０００６】
ＨＤＡＣのインヒビターの研究はそれらが、細胞周期停止、細胞分化、細胞死及び形質転換された表現型の復帰において重要な役割を果たすことを示す。
【０００７】
例えば、インヒビターのトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）はＧ１及びＧ２相の両方において細胞周期停止を誘起し、異なる細胞系列の形質転換表現型を逆転し、そしてフレンド白血病細胞及び他の細胞の分化を誘起する。ＴＳＡ（及びスベロイルアニリドヒドロキサム酸ＳＡＨＡ）は細胞増殖を阻害し、末端分化（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ
ｔｉｏｎ）を誘発し、そしてマウスの腫瘍の形成を予防することが報告された（非特許文献１参照）。
【０００８】
トリコスタチンＡはまた、繊維症、例えば肝臓繊維症及び肝硬変の処置に有用であることが報告された（Ｇｅｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，特許文献１、１９９８年３月１１日公開参照）。
【０００９】
ＨＤＡＣインヒビターについての薬作用発生団は、ＨＤＡＣの亜鉛含有活性部位と相互反応する金属結合領域、リンカー領域及び活性部位の縁上の残基と相互反応する表面認識領域又はキャッピング領域よりなる。
【００１０】
ＨＤＡＣのインヒビターはまた、ｐ２１遺伝子発現を誘発することが報告されている。これらのインヒビターによるｐ２１遺伝子の転写活性化は、ｐ２１プロモーター領域における、ヒストンＨ３及びＨ４のアセチル化の後のクロマチンリモデリングにより促進される。ｐ２１のこの活性化はｐ５３−依存性様式で起り、従ってＨＤＡＣインヒビターは多数の腫瘍の証明の突然変異ｐ５３遺伝子をもつ細胞中で作用する。
【００１１】
更にＨＤＡＣインヒビターは宿主の免疫反応の増強及び腫瘍脈管形成の阻害のような間接的作用をもつことができ、従って原発腫瘍の増殖を抑制し、転移を妨げることができる（非特許文献２参照）。
【００１２】
以上を考察すると、ＨＤＡＣインヒビターは突然変異ｐ５３遺伝子をもつ腫瘍を包含する細胞増殖疾患又は症状の処置に大きな可能性をもつことができる。
【００１３】
２００３年８月１４日付で公開された特許文献２はヒストン・デアセチラーゼのインヒビターとしての２環式ヒドロキサメートを開示している（特許文献２参照）。
【００１４】
なかでも２００３年９月１８日付で公開された特許文献３、４、５、６、７、８、９、１０はヒストン・デアセチラーゼのインヒビターとしての置換ピペラジニルピリミジニルヒドロキサム酸を開示しており、更に特許文献１１はＲ３０６４６５を開示している（特許文献３〜１１参照）。
【００１５】
２００３年１０月９日付で公開された特許文献１２はＨＤＡＣインヒビターとしての、ピペラジン結合を含んでなるカルバミン酸化合物を開示している（特許文献１２参照）。
【００１６】
２００３年１０月２３日付で公開された特許文献１３はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしての置換ピペラジニルフェニルベンズアミド化合物を開示している（特許文献１３参照）。
【００１７】
２００３年１１月１３日付で公開された特許文献１４はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのベンズアミドを開示している（特許文献１４参照）。
【００１８】
２００４年１月２９日付で公開された特許文献１５はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのアリール基とヒドロキサメート間にアルキルリンカーを含有する誘導体を開示している（特許文献１５参照）。
【００１９】
２００４年２月１２日付で公開された特許文献１６はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしての、（ヘテロ）アリールアルケニル置換２環式ヒドロキサメートを開示している（特許文献１６参照）。
【００２０】
２００４年６月２４日付で公開された特許文献１７は薬理学的作用物質としてのアリーレン−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド誘導体を開示している（特許文献１７参照）。
【００２１】
２００４年７月２９付で公開された特許文献１８は抗炎症及び抗腫瘍活性をもつＮ−ヒドロキシ−ベンズアミド誘導体の誘導体を開示している（特許文献１８参照）。
【００２２】
２００４年７月２９日付で公開された特許文献１９はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしての、置換アリールヒドロキサメート誘導体を開示している（特許文献１９参照）。
【００２３】
２００４年８月１９日付で公開された特許文献２０は薬理学的物質としてのモノ−アシル化Ｏ−フェニレンジアミン誘導体を開示している（特許文献２０参照）。
【００２４】
２００４年８月１９日付で公開された特許文献２１はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのジアミノフェニレン誘導体を開示している（特許文献２１参照）。
【００２５】
２００４年８月２６日付で公開された特許文献２２はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのベンズアミド誘導体を開示している（特許文献２２参照）。
【００２６】
２００４年８月２６日付で公開された特許文献２３はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのインドール、ベンズイミダゾール及びナフトイミダゾールを開示している（特許文献２３参照）。
【００２７】
２００４年９月３０日付で公開された特許文献２４はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしての非芳香族複素環式環系に結合されたヒドロキサメートを開示している（特許文献２４参照）。
【００２８】
２００４年１０月１４日付で公開された特許文献２５はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのオキシム誘導体を開示している（特許文献２５参照）。
【００２９】
２００４年１０月２８日付で公開された特許文献２６はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのヒドロキサメート誘導体を開示している（特許文献２６参照）。
【００３０】
２００５年３月３１日付で公開された特許文献２７はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのベンズイミダゾールを開示している（特許文献２７参照）。
【００３１】
２００５年４月７日付で公開された特許文献２８及び２９はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのベンズアミドを開示している（特許文献２８、２９参照）。
【００３２】
２００５年５月６日付で公開された特許文献３０はヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのアシル尿素に結合された及びスルホニル尿素に結合されたヒドロキサメートを開示している（特許文献３０参照）。
【００３３】
２００５年５月６日付で公開された特許文献３１はまた、ヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしての二アリール結合ヒドロキサメートを開示している（特許文献３１参照）。
【００３４】
２００５年８月１８日付で公開された特許文献３２は、ヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのチアゾリルヒドロキサム酸及びチアジアゾリルヒドロキサム酸を開示し
ている（特許文献３２参照）。
【００３５】
２００５年９月２２日付で公開された特許文献３３は、ヒストン・デアセチラーゼインヒビターとしてのヘテロ五環式ヒドロキサム酸を開示している（特許文献３３参照）。
【００３６】
２００５年１０月６日付で公開された特許文献３４は、ヒストン・デアセチラーゼとしてのアルケニルベンズアミドを開示している（特許文献３４参照）。
【００３７】
【特許文献１】欧州特許第０  ８２７  ７４２号明細書
【特許文献２】欧州特許第１４７２２１６号明細書
【特許文献３】欧州特許第１４８５０９９号明細書
【特許文献４】欧州特許第１４８５３４８号明細書
【特許文献５】欧州特許第１４８５３５３号明細書
【特許文献６】欧州特許第１４８５３５４号明細書
【特許文献７】欧州特許第１４８５３６４号明細書
【特許文献８】欧州特許第１４８５３６５号明細書
【特許文献９】欧州特許第１４８５３７０号明細書
【特許文献１０】欧州特許第１４８５３７８号明細書
【特許文献１１】欧州特許第１４８５３６５号明細書
【特許文献１２】欧州特許第１４９２５３４号明細書
【特許文献１３】欧州特許第１４９５００２号明細書
【特許文献１４】国際公開出願第０３／０９２６８６号パンフレット
【特許文献１５】国際公開出願第０４／００９５３６号パンフレット
【特許文献１６】欧州特許第１５２５１９９号明細書
【特許文献１７】欧州特許第１５７２６２６号明細書
【特許文献１８】欧州特許第１５８１４８４号明細書
【特許文献１９】欧州特許第１５８５７３５号明細書
【特許文献２０】欧州特許第１５９２６６７号明細書
【特許文献２１】欧州特許第１５９０３４０号明細書
【特許文献２２】欧州特許第１５９２６６５号明細書
【特許文献２３】国際公開出願第０４／０７２０４７号パンフレット
【特許文献２４】欧州特許第１６０８６２８号明細書
【特許文献２５】欧州特許第１６１３６２２号明細書
【特許文献２６】欧州特許第１６１１０８８号明細書
【特許文献２７】国際公開出願第０５／０２８４４７号パンフレット
【特許文献２８】国際公開出願第０５／０３０７０４号パンフレット
【特許文献２９】国際公開出願第０５／０３０７０５号パンフレット
【特許文献３０】国際公開出願第０５／０４０１０１号パンフレット
【特許文献３１】国際公開出願第０５／０４０１６１号パンフレット
【特許文献３２】国際公開出願第０５／０７５４６９号パンフレット
【特許文献３３】国際公開出願第０５／０８６８９８号パンフレット
【特許文献３４】国際公開出願第０５／０９２８９９号パンフレット
【非特許文献１】Ｆｉｎｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０１：１８８−１９３．１９９９
【非特許文献２】Ｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２５：２６１−３０９，２００５
【発明の開示】
【００３８】
本発明の化合物は構造、それらの薬理作用及び／又は薬理学的効力において先行技術と異なる。
【００３９】
解決するべき問題は、増加した生体利用能を有する、高い酵素活性及び細胞活性をもつヒストン・デアセチラーゼインヒビターを提供することである。
【００４０】
本発明の新化合物は前記の問題を解決する。本発明の化合物は優れたヒストン・デアセチラーゼ阻害酵素活性及び細胞活性を示す。それらはｐ２１遺伝子を活性化する高い能力を有する。それらは望ましい薬物動態学的プロファイルをもち、Ｐ４５０酵素に低い親和性をもつことができ、それが更により広範な安全性領域を許す不都合な薬剤−薬剤相互反応の危険を減少させる。
【００４１】
本発明は式（Ｉ）
【００４２】
【化１】
2008546737.tif 000003
【００４３】
［式中、
Ｘはそれぞれ独立してＮ又はＣＨであり、
Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、ＣＨ又はＣＨ２であり、そしてＹがＣＨである時は、置換基が環構造のＹ原子に結合されており、
Ｚはそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、ＣＨ２又はＣＨであり、そしてＺがＣＨである時は、点線が１つの結合であり、
ｎは０又は１であり、そしてｎが０である時は、直接結合が意図され、
Ｒ１はフェニル、ナフタレニル、ヘテロシクリル、フェニルＣ１−６アルキル、ナフタレニルＣ１−６アルキル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルはそれぞれ、場合により、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ１−６アルキル、フェニル、フェニルオキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよく、あるいは２個の置換基が一緒になって２価の基−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−を形成してもよく、
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル又はフェニルであり、ここで該フェニルはそれぞれ場合により、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルオキシ又はシアノからそれぞれ独立して選択される１個又は２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ３はヒドロキシあるいは、式（ａ−１）
【００４４】
【化２】
2008546737.tif 000004
【００４５】
（式中、
Ｒ４はヒドロキシ又は−ＮＨ２であり、
Ｒ５は水素、チエニル、フラニル又はフェニルであり、そしてチエニル、フラニル又はフェニルはそれぞれ、場合によりハロ、アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、Ｃ１−６アルキル、（ジＣ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルＣ１−６アルキルオキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル、ポリハロＣ１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、ヒドロキシカルボニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、アミノスルホニル、アミノスルホニルＣ１−６アルキル、イソオキサゾリル、アミノカルボニル、フェニルＣ２−６アルケニル、フェニルＣ３−６アルキニル又はピリジニルＣ３−６アルキニルで置換されていてもよく、
Ｒ６、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立して水素、−ＮＨ２、ニトロ、フラニル、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、トリフルオロメチル、チエニル、フェニル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、アミノカルボニルＣ１−６アルキル又は−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−Ｒ９であり、ここでＲ９は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、アミノ又はＣ１−６アルキルオキシである）の基であり、そして
前記のヘテロシクリルはフラニル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ジオキソリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピラニル、ピリジニル、ピペリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピペラジニル、トリアジニル、トリチアニル、インドリジニル、インドリル、インドリニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、プリニル、キノリジニル、キノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノオキサリニル又はナフチリジニルである］、の化合物、それらのＮ−オキシド形態物、製薬学的に許容できる付加塩及び立体化学的異性体形態物を対象とする。
【００４６】
置換基から環系中に引かれた線は、その結合が環系の適当な環原子のいずれにも結合されることができることを示す。
【００４７】
用語「ヒストン・デアセチラーゼインヒビター」又は「ヒストン・デアセチラーゼのインヒビター」はヒストン・デアセチラーゼと相互反応することができ、その活性、より具体的にはその酵素活性を阻害することができる化合物を同定するために使用される。ヒストン・デアセチラーゼ酵素活性を阻害するとは、ヒストンからアセチル基を除去するヒストン・デアセチラーゼの能力を減少させることを意味する。このような阻害は好ましくは特異的である、すなわちヒストン・デアセチラーゼインヒビターが何か他の、無関係の生物学的効果をもたらすために要するインヒビターの濃度より低い濃度で、ヒストンからアセチル基を除去するためのヒストン・デアセチラーゼの能力を低下させる。
【００４８】
以上の定義及び以後に使用されるハロはフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを包含し、Ｃ１−４アルキルは例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、１−メチルエチル、２−メチルプロピル等のような１〜４個の炭素原子を有する直鎖及び分枝鎖飽和炭化水素基を定義し、Ｃ１−６アルキルはＣ１−４アルキル及び、例えばペンチル、２−メチルーブチル、ヘキシル、２−メチルペンチル等のような、５〜６個の炭素原子を有する、より高次の同族体を包含し、Ｃ２−６アルケニルは、例えば、エテニル、２−プロペニル、３−ブテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、３−メチル−２−ブテニル、等のような、１個の二重結合を含有し、そして２〜６個の炭素原子を有する直鎖及び分枝鎖炭化水素基
を定義し、Ｃ３−６アルキニルは例えば２−プロピニル、３−ブチニル、２−ブチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、３−ヘキシニル、等のような、１個の三重結合を含有し、そして３〜６個の炭素原子を有する直鎖及び分枝鎖の炭化水素基を定義し、ポリハロＣ１−６アルキニルは３個の同一の又は異なるハロ置換基を含有するＣ１−６アルキル、例えばトリフルオロメチルを定義し、そしてＣ３−６シクロアルキルはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル等のような３〜６個の炭素を有する環式炭化水素基を包含する。
【００４９】
製薬学的に許容できる付加塩は、製薬学的に許容できる酸付加塩及び製薬学的に許容できる塩基の付加塩を包含する。前記の製薬学的に許容できる酸付加塩は、式（Ｉ）の化合物が形成することができる治療的に有効な無毒の酸付加塩形態を含んでなることを意味する。塩基性を有する式（Ｉ）の化合物は、前記の塩基形態を適当な酸で処理することにより、それらの製薬学的に許容できる酸付加塩に転化させることができる。適当な酸は例えば、ハロゲン化水素酸（例えば塩酸又は臭化水素酸）、硫酸、硝酸、リン酸等の酸のような無機酸、あるいは例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、蓚酸、マロン酸、琥珀酸（すなわちブタンジオン酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノ−サリチル酸、パモエ酸等の酸のような有機酸を含んでなる。酸性を有する式（Ｉ）の化合物は、前記の酸形態を適当な有機又は無機塩基で処理することにより、それらの製薬学的に許容できる塩基付加塩に転化させることができる。適当な塩基塩形態は例えば、アンモニウム塩、アルカリ及びアルカリ土類金属塩（例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩等）、有機塩基との塩（例えばベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩）及び、例えばアルギニン、リシン等のようなアミノ酸との塩を含んでなる。用語の「酸又は塩基付加塩」はまた、式（Ｉ）の化合物が形成することができる水和物及び溶媒付加物形態を含んでなる。このような形態の例は例えば、水和物、アルコラート等である。
【００５０】
本明細書で使用される用語「式（Ｉ）の化合物の立体化学的異性体形態物」は、式（Ｉ）の化合物が所有することができる、同一配列の結合により結合された同一原子よりなるが、互換性でない異なる三次元構造を有するすべての可能な化合物を定義する。別に言及され又は示されない限り、化合物の化学名は、該化合物が所有することができるすべての可能な立体化学的異性体形態物の混合物を包含する。該混合物は該化合物の基礎分子構造のすべてのジアステレオマー及び／又はエナンチオマーを含有することができる。純粋な形態又は相互に混合された、双方の、式（Ｉ）の化合物のすべての立体化学的異性体形態が本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００５１】
式（Ｉ）の化合物のＮ−オキシド形態物はそこで、１個又は複数の窒素原子がいわゆるＮ−オキシド、特にその１個又は複数のピペリジン−、ピペラジン又はピリダジニル−窒素がＮ−酸化されているＮ−オキシドに酸化されている式（Ｉ）化合物を含んでなることを意味する。
【００５２】
幾つかの式（Ｉ）化合物はまた、それらの互変異性体形態で存在することができる。前記の式中には明白に記載されていないが、このような形態は本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００５３】
用語「式（Ｉ）の化合物」はまた、以後使用される時はいつも、製薬学的に許容できる付加塩及びすべての立体異性体形態物を包含することを意味する。
【００５４】
本明細書で使用される用語「ヒストン・デアセチラーゼ」及び［ＨＤＡＣ］は、ヒスト
ンのＮ−末端のリシン残基のε−アミノ基からアセチル基を除去する酵素の１族のいずれか１個を表すことが意図される。文脈により別に示されない限り、用語「ヒストン」はあらゆる種からのＨ１、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４及びＨ５を包含するいずれかのヒストンタンパク質を表すことを意味する。ヒトのＨＤＡＣタンパク質又は遺伝子生産物はそれらに限定はされないが、ＨＤＡＣ−１、ＨＤＡＣ−２、ＨＤＡＣ−３、ＨＤＡＣ−４、ＨＤＡＣ−５、ＨＤＡＣ−６、ＨＤＡＣ−７、ＨＤＡＣ−８、ＨＤＡＣ−９、ＨＤＡＣ−１０及びＨＤＡＣ−１１を包含する。ヒストン・デアセチラーゼはまた、原生動物又はカビ・真菌源から誘動することができる。
【００５５】
興味深い化合物の第１の群は、１個又は複数の以下の制限が適用される式（Ｉ）の化合物よりなる：
ａ）ＸがそれぞれＮである、
ｂ）Ｙがそれぞれ独立してＯ又はＣＨである、
ｃ）ｎが１である、
ｄ）Ｒ１がフェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルはそれぞれ、場合により、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ１−６アルキル、フェニル、フェニルオキシ又はシアノからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよく、あるいは２個の置換基が一緒になって２価の基−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−を形成してもよい、
ｅ）Ｒ２が水素、Ｃ１−６アルキル又はフェニルである、そして
ｆ）Ｒ３がヒドロキシである。
【００５６】
興味深い化合物の第２の群は、１個又は複数の以下の制限が適用される式（Ｉ）の化合物よりなる：
ａ）ＸがそれぞれＮである、
ｂ）ＹがそれぞれＣＨである、
ｃ）ＺがそれぞれＣＨである、
ｄ）Ｒ１がフェニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルはそれぞれ、場合により、水素、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はフェニルオキシからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよい、
ｅ）Ｒ２が水素である、そして
ｆ）Ｒ３がヒドロキシである。
【００５７】
興味深い化合物の第３の群は、１個又は複数の以下の制限が適用される式（Ｉ）の化合物よりなる：
ａ）Ｒ３が式（ａ−１）の基である、
ｂ）Ｒ４が−ＮＨ２である、
ｃ）Ｒ５が水素又はチエニルである、そして
ｄ）Ｒ６、Ｒ７及びＲ８がそれぞれ独立して水素である。
【００５８】
好ましい化合物の群は、式中、ＸがそれぞれＮであり、Ｙがそれぞれ独立してＯ又はＣＨであり、ｎが１であり、Ｒ１がフェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル、ナフタレニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルはそれぞれ場合により水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、ポリハロＣ１−６アルキル、フェニル、フェニルオキシ又はシアノからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよく、あるいは２個の置換基が一緒になって２価の基−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）
２−Ｏ−を形成してもよく、Ｒ２が水素、Ｃ１−６アルキル又はフェニルであり、そしてＲ３がヒドロキシルである、式（Ｉ）の化合物よりなる。
【００５９】
より好ましい化合物の群は、式中、ＸがそれぞれＮであり、ＹがそれぞれＣＨであり、ＺがそれぞれＣＨであり、Ｒ１がフェニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルであり、ここで該フェニル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルはそれぞれ場合により水素、Ｃ１−６アルキル、フェニル又はフェニルオキシからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ２が水素であり、そしてＲ３がヒドロキシである、式（Ｉ）の化合物よりなる。
【００６０】
もっとも好ましい化合物は化合物第３、化合物第２及び化合物第３５である。
【００６１】
【表１】
2008546737.tif 000005
【００６２】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの製薬学的に許容できる塩及びＮ−オキシド及び立体化学的異性体形態物は、従来の方法で調製することができる。出発材料及び幾つかの中間体は知られた化合物でありそして市場で入手することができるか又は当該技術分野で一般に知られた従来の反応方法に従って製造することができる。幾つかの製造方法は以下に更に詳細に説明されるであろう。式（Ｉ）の最終化合物を得る他の方法は実施例に記載される。
【００６３】
本明細書で式（Ｉ−ａ）と呼ばれる、そのＲ３がヒドロキシである式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の中間体を例えばトリフルオロ酢酸のような適当な酸と反応させることにより製造することができる。該反応は例えばメタノール又はジクロロメタンのような適当な溶媒中で実施される。
【００６４】
【化３】
2008546737.tif 000006
【００６５】
本明細書で式（Ｉ−ｂ）の化合物と呼ばれる、そのＲ３が式（ａ−１）の基でありそしてＲ４が−ＮＨ２である式（Ｉ）の化合物は、式（ＸＶ）の中間体を塩化錫（ＩＩ）水和物と反応させることにより製造することができる。該反応は例えば、テトラヒドロフラン、メタノール及び水の混合物のような適当な溶媒中で実施することができる。あるいはまた、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、式（ＸＶ）の中間体を水素と、例えばメタノールのような適当な溶媒中で１０％木炭上パラジウムの存在下で反応させることにより製造することができる。
【００６６】
【化４】
2008546737.tif 000007
【００６７】
式（Ｉ−ｂ）の化合物はまた、式（ＸＶＩ）の中間体を例えばトリフルオロ酢酸のような適当な酸と反応させることにより製造することができる。該反応は例えばメタノール又はジクロロメタンのような適当な溶媒中で実施される。
【００６８】
【化５】
2008546737.tif 000008
【００６９】
本明細書で式（Ｉ−ｃ）の化合物と呼ばれる、そのＲ３が式（ａ−１）の基でありそしてＲ４がヒドロキシである式（Ｉ）の化合物は、式（ＸＶＩＩ）の中間体をテトラブチルアンモニウムフルオリドと、例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒中で反応させることにより製造することができる。式（ＸＶＩＩ）の中間体中のＴＢＤＭＳはｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シラニルを意味する。
【００７０】
【化６】
2008546737.tif 000009
【００７１】
式（ＩＩ）の中間体は、式（ＩＩＩ）の中間体を式（ＩＶ）の中間体と、（３−ジメチルアミノ−プロピル）−エチル−カルボジイミド）塩酸（ＥＤＣ）及び１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）のような適当な試薬の存在下で反応させることにより製造することができる。該反応はジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及びテトラヒドロフランの混合物又はジクロロメタン及びテトラヒドロフランの混合物のような適当な溶媒中でトリエチルアミンのような塩基の存在下で実施することができる。
【００７２】
【化７】
2008546737.tif 000010
【００７３】
式（ＸＶ）の中間体は、式（ＩＩＩ）の中間体を式（ＸＶＩＩＩ）の適当なニトロフェニルアミンと、ベンゾトリアゾル−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）及び水素化ナトリウムの存在下で反応させることにより製造することができる。該反応は例えばピリジンのような適当な溶媒中で実施することができる。
【００７４】
【化８】
2008546737.tif 000011
【００７５】
更に、式（ＸＶＩ）の中間体は、式（ＩＩＩ）の中間体を式（ＸＩＸ）の適当なｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護フェニルアミンと、ベンゾトリアゾル−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）及び水素化ナトリウムの存在下で反応させることにより製造することができる。該反応は例えばピリジンのような適当な溶媒中で実施することができる。
【００７６】
【化９】
2008546737.tif 000012
【００７７】
式（ＸＶＩＩ）の中間体は、式（ＩＩＩ）の中間体を式（ＸＸ）の適当なｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シラニル（ＴＢＤＭＳ）保護フェニルアミンと、ベンゾトリアゾル−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）及びトリエチルアミンの存在下で反応させることにより製造することができる。該反
応は例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような適当な溶媒中で実施される。
【００７８】
【化１０】
2008546737.tif 000013
【００７９】
本明細書で式（ＩＩ−ａ）の中間体と呼ばれる、そのＺがＣ＝ＯでありそしてＲ２がＣ１−６アルキル（図を参照されたい）又はフェニルである式（ＩＩ）の中間体は、そのＲ２がＣ１−６アルキル（図を参照）又はフェニルである式（ＶＩ）の中間体を式（ＶＩＩ）の中間体と、テトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下で反応させることにより製造することができる。
【００８０】
【化１１】
2008546737.tif 000014
【００８１】
式（ＩＩＩ）の中間体は、式（Ｖ）の中間体を適当な酸性溶液（例えば塩酸）又は塩基性溶液（例えば水酸化リチウム又は水酸化ナトリウム）と、ジオキサンのような適当な溶媒又は、アルコール、アセトニトリル及び水のような適当な溶媒の混合物中で反応させることにより製造することができる。
【００８２】
【化１２】
2008546737.tif 000015
【００８３】
本明細書で式（Ｖ−ａ）の中間体と呼ばれる、そのＺがＣＨ２でありそしてＲ２が水素である式（Ｖ）の中間体は、例えば炭素上パラジウム（１０％）のような触媒の存在下で、式（Ｖ−ｂ）の中間体の水素による触媒水素化により、本明細書で式（Ｖ−ｂ）の中間体と呼ばれる、そのＺがＣＨでありそして点線が１つの結合を表す式（Ｖ）の中間体を転化することにより製造することができる。その反応はテトラヒドロフランのような適当な溶媒中で、トリエチルアミンのような塩基の存在下で実施することができる。
【００８４】
【化１３】
2008546737.tif 000016
【００８５】
そのＲ２がＣ１−６アルキル（図を参照）又はフェニルである式（ＶＩ）の中間体は、式（ＶＩＩＩ）の中間体を、そのＲ２がＣ１−６アルキル（図を参照）又はフェニルでありそしてハロが例えばクロロ又はブロモである式（ＩＸ）の中間体と、炭酸カリウムの存在下で、アセトニトリルのような適当な溶媒の存在下で反応させることにより製造することができる。
【００８６】
【化１４】
2008546737.tif 000017
【００８７】
本明細書で式（Ｖ−ｃ）の中間体と呼ばれる、そのＺがＣ＝ＯでありそしてＲ２がＣ１−６アルキル又はフェニル（図を参照）である式（Ｖ）の中間体は、そのＲ２がＣ１−６アルキル又はフェニル（図を参照）である式（Ｘ）中間体を式（ＶＩＩ）の中間体と、テトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下で反応させることにより、製造することができる。
【００８８】
【化１５】
2008546737.tif 000018
【００８９】
そのＲ２がＣ１−６アルキル又はフェニル（図を参照）である式（Ｘ）の中間体は、式（ＸＩ）の中間体を、そのＲ２がＣ１−６アルキル又はフェニル（図を参照）でありそしてハロが例えばクロロ又はブロモである式（ＸＩＩ）の中間体と、炭酸カリウムのような適当な試薬の存在下で、アセトニトリルのような適当な溶媒の存在下で反応させることにより製造することができる。
【００９０】
【化１６】
2008546737.tif 000019
【００９１】
式（Ｖ−ｂ）の中間体は、メタノールのような適当な溶媒中でギ酸又は塩酸のような適当な酸の存在下で式（ＸＩＩＩ）の中間体を転化させることにより製造することができる。
【００９２】
【化１７】
2008546737.tif 000020
【００９３】
式（ＸＩＩＩ）の中間体は、式（ＸＩＶ）の中間体を式（ＶＩＩ）の中間体と、ジクロロメタン又はテトラヒドロフランのような適当な溶媒中でトリエチルアミンのような塩基の存在下で反応させることにより製造することができる。
【００９４】
【化１８】
2008546737.tif 000021
【００９５】
式（ＸＩＶ）の中間体は、例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下で式（ＸＩ）の中間体をグリオキサルジメチルアセタール及びナトリウムトリアセトキシホウ水素化物と、あるいは、例えばアセトニトリルのような適当な溶媒の存在下で２−ブロモ−１，１−ジエトキシエタン及び炭酸カリウムと反応させることにより製造することができる。
【００９６】
【化１９】
2008546737.tif 000022
【００９７】
式（ＸＶＩＩＩ）の中間体は、そのＷが例えばブロモのような適当な離脱基である式（ＸＸＩ）の中間体を式（ＸＸＩＩ）の適当なボロン酸と、トリ−ｏ−トリルホスフィン及び炭酸カリウムの存在下で反応させることにより製造することができる。該反応は炭酸カ
リウムのような塩基の存在下で、例えばジメチルエーテルのような適当な溶媒中で実施することができる。
【００９８】
【化２０】
2008546737.tif 000023
【００９９】
式（ＸＸＩ）の中間体は、式（ＸＸＩＩＩ）の適当なニトロベンゼンを、Ｏ−メチル−ヒドロキシルアミン塩酸と、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド及び塩化銅（Ｉ）の存在下で反応させることにより製造することができる。該反応はジメチルエーテルのような適当な溶媒中で実施することができる。
【０１００】
【化２１】
2008546737.tif 000024
【０１０１】
式（ＸＩＸ）の中間体は、式（ＸＸＩＶ）の中間体を水素と、例えばメタノールのような適当な溶媒中で１０％木炭上パラジウムの存在下で反応させることにより製造することができる。
【０１０２】
【化２２】
2008546737.tif 000025
【０１０３】
式（ＸＸＩＶ）の中間体は、適当なｔｅｒｔ−ブチルニトロフェニルカルバメート又は、そのＷが例えば臭素のような適当な離脱基である式（ＸＸＶ）を、式（ＸＸＩＩ）のボロン酸と、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム及び炭酸ナトリウムの存在下で反応させることにより製造することができる。該反応は例えばジメチルエーテルと水の混合物のような適当な溶媒中で実施することができる。
【０１０４】
【化２３】
2008546737.tif 000026
【０１０５】
式（ＸＸＶ）の中間体は、式（ＸＸＶＩ）の適当なニトロアニリンを第三級ブトキシカルボニル無水物と、水素化ナトリウムの存在下で、そして例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような適当な溶媒中で反応させることにより製造することができる。
【０１０６】
【化２４】
2008546737.tif 000027
【０１０７】
式（ＸＸ）の中間体は、式（ＸＸＶＩＩ）の適当なアミノフェノールをｔｅｒｔ−ブチル−クロロ−ジメチル−シランと、テトラヒドロフランのような適当な溶媒中で、トリエチルアミンの存在下で、反応させることにより製造することができる。
【０１０８】
【化２５】
2008546737.tif 000028
【０１０９】
式（Ｉ）の化合物及び幾つかの中間体はそれらの構造中に少なくとも１個のステレオジェン中心をもつかも知れない。このステレオジェン中心はＲ又はＳ形態で存在することができる。
【０１１０】
前述の方法で製造される式（Ｉ）の化合物は一般に、当該技術分野で知られた分割法に従って相互から分割することができる、エナンチオマーのラセミ混合物である。式（Ｉ）のラセミ化合物は適当なキラル酸との反応により、対応するジアステレオマー塩形態物に転化させることができる。該ジアステレオマー塩形態物を次に、例えば選択的又は分別結晶化により分離して、エナンチオマーをアルカリによりそれらから遊離させる。式（Ｉ）
の化合物のエナンチオマー形態物を分離する代りの方法は、キラル固定相を使用する液体クロマトグラフィーを伴なう。該純粋な立体化学異性体形態物はまた、その反応が立体特異的に起る場合は、適当な出発材料の、対応する純粋な立体化学的異性体形態物から誘動することができる。特定の立体異性体が所望される場合は、該化合物は好ましくは立体特異的製造方法により合成されるであろう。これらの方法は有利にはエナンチオマーとして純粋な出発材料を使用するであろう。
【０１１１】
式（Ｉ）の化合物、それらの製薬学的に許容できる酸付加塩及び立体異性体形態は、それらがヒストン・デアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害効果を有するという貴重な薬理学的特性を有する。
【０１１２】
本発明は、有効量の本発明の化合物を投与することにより、形質転換細胞を包含する細胞の異常増殖を抑制する方法を提供する。細胞の異常増殖は正常な制御機構と独立した細胞増殖（例えば接触阻止の喪失）を表す。これは直接には増殖の停止、癌細胞の末端分化及び／又は細胞死を誘発することによる、そして間接的には、腫瘍の新生血管形成を抑制する双方による、腫瘍増殖の抑制を包含する。
【０１１３】
本発明はまた、有効量の本発明の化合物をこのような処置を要する被験体、例えば哺乳動物（そしてより特にはヒト）に投与することによる、腫瘍の増殖を抑制する方法を提供する。とりわけ本発明は、有効量の本発明の化合物の投与による腫瘍の増殖を抑制する方法を提供する。抑制することができる腫瘍の例は、限定はされないが、肺癌（例えば腺癌及び非小細胞肺癌を包含する）、膵臓癌（例えば外分泌膵癌のような膵癌）、結腸癌（例えば結腸腺癌及び結腸腺腫のような、例えば結腸直腸癌）、進行疾患を包含する前立腺癌、リンパ系の造血器官腫瘍（例えば急性リンパ性白血病、Ｂ−細胞リンパ腫、ブルキットリンパ腫）、骨髄性白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））、甲状腺濾胞腺癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、間葉細胞源の腫瘍（例えば繊維肉腫及び横紋筋肉腫）、メラノーマ、奇形癌、神経芽細胞腫、神経膠腫、皮膚の良性腫瘍（例えば、角化棘細胞腫）、乳癌（例えば進行乳癌）、腎臓癌、卵巣癌、膀胱癌及び表皮癌である。
【０１１４】
本発明に従う化合物は、他の治療目的、例えば、
ａ）癌を処置するための腫瘍の放射線照射前、その間又はその後に本発明に従う化合物を投与することにより放射線治療に対して腫瘍を感受性化させる、
ｂ）関節リューマチ、変形性関節炎、若年性関節炎、痛風、多発性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎及び全身性エリテマドーデスのような関節症及び骨病理状態を処置する、ｃ）血管増殖障害、アテローム性動脈硬化症及び再狭窄を包含する平滑筋細胞増殖を抑制する、
ｄ）潰瘍性大腸炎、クローン病、アレルギー性鼻炎、移植片対宿主病、結膜炎、喘息、ＡＲＤＳ、ベーチェット病、移植拒絶、蕁麻疹、アレルギー性皮膚炎、円形脱毛症、強皮症、発疹、湿疹、皮膚筋炎、ニキビ、糖尿病、全身性エリテマドーデス、川崎病、多発性硬化症、気腫、嚢胞性繊維症及び慢性気管支炎のような炎症性状態及び皮膚状態を処置する、
ｅ）子宮内膜症、子宮筋腫、不正子宮出血及び子宮内膜増殖症を処置する、
ｆ）網膜及び脈絡膜血管に影響する血管疾患を包含する眼科血管形成を処置する、
ｇ）心機能不全を処置する、
ｈ）ＨＩＶ感染症の処置のような免疫抑制状態を抑制する、
ｉ）腎機能不全を処置する、
ｊ）内分泌障害を抑制する、
ｋ）糖新生の機能不全を抑制する、
ｌ）神経病理、例えばパーキンソン病あるいは、認識障害、例えばアルツハイマー病又はポリグルタミン関連神経疾患をもたらす神経病理を処置する、
ｍ）精神障害、例えば精神分裂病、双極性障害、鬱病、心配症及び精神病を処置する、
ｎ）神経筋肉病理、例えば筋萎縮性測索硬化症を抑制する、
ｏ）脊髄筋萎縮症を処置する、
ｐ）遺伝子の発現を強化することにより、処置に敏感な他の病理学的状態を処置する、
ｑ）遺伝子治療を高める、
ｒ）脂質生成を抑制する、
ｓ）マラリアのような寄生虫症を処置する、
のために、使用することができる。
【０１１５】
従って、本発明は、医薬としての使用のための式（Ｉ）の化合物並びに、１種又は複数の前記の状態を処置するための医薬の製造のための、式（Ｉ）のこれらの化合物の使用を開示する。
【０１１６】
式（Ｉ）の化合物、それらの製薬学的に許容できる酸付加塩及び立体異性体形態は、それらを、標識化合物とＨＤＡＣ間の複合体の形成を検出又は測定する工程を含んでなる、生体サンプル中のＨＤＡＣを検出又は同定するために使用することができるという貴重な診断的特性を有することができる。
【０１１７】
検出又は同定法は、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質、等のような標識薬で標識される化合物を使用することができる。放射性同位元素の例は１２５Ｉ、１３１Ｉ、３Ｈ及び１４Ｃを包含する。酵素は通常、順次検出可能な反応を触媒する適当な基質の共役により検出可能にさせられる。それらの例は、例えばベータ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ及びマレートデヒドロゲナーゼ、好ましくはホースラディッシュのペルオキシダーゼを包含する。発光物質は例えばルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、エクオリン及びルシフェラーゼを包含する。
【０１１８】
生体サンプルは体組織又は体液と定義することができる。体液の例は脳脊髄液、血液、血漿、血清、尿、喀痰、唾液等である。
【０１１９】
それらの有用な薬理学的特性を考慮すると、主題化合物は投与目的のための種々の製薬学的剤形に調合することができる。
【０１２０】
本発明の製薬学的組成物を調製するためには、有効成分として有効量の、塩基又は酸付加塩形態の特定の化合物を、投与に所望される調製物の形態に応じて広範な形態を採ることができる製薬学的に許容できる担体と密接な混合物に組み合わせる。これらの製薬学的組成物は望ましくは、好ましくは経口、直腸内、経皮的又は非経口注射による投与に適した単一の投与剤形にある。例えば、経口投与剤形の組成物を調製する際には、懸濁剤、シロップ、エリキシル及び液剤のような経口液体調製物の場合には、例えば水、グリコール、油、アルコール、等のようないずれかの通常の製薬学的媒質、あるいは散剤、ピル、カプセル及び錠剤の場合にはデンプン、糖、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のような固形担体を使用することができる。
【０１２１】
それらの投与の容易さのために錠剤及びカプセルがもっとも有利な経口投与単位剤形を表し、その場合には明らかに固形の製薬学的担体が使用される。非経口組成物のための担体は、例えば溶解性を補助するための他の成分を包含することはできるが、通常、少なくとも大部分は滅菌水を含んでなるであろう。例えば、その担体が生理食塩水、ブドウ糖液又は生理食塩水とブドウ糖液の混合物を含んでなる注射液を調製することができる。適当な液体担体、懸濁剤等を使用することができる注射用懸濁液もまた調製することができる。経皮的投与に適した組成物中では、担体は、場合により、少量の、皮膚に対して有意な
有害効果を誘発しない、あらゆる性状の適当な添加剤と組み合わせてもよい浸透促進剤及び／又は適当な湿潤化剤を場合により含んでなる。該添加剤は皮膚に対する投与を容易にし、そして／又は所望の組成物を調製する補助になることができる。これらの組成物は種々の方法で、例えば経皮的パッチとして、スポットオン剤として又は軟膏として投与することができる。
【０１２２】
投与の容易さ及び用量の均一性のために、前記の製薬学的組成物を投与単位剤形に調合することは特に有益である。本明細書及び請求項に使用される投与単位剤形は、各単位が、必要な製薬学的担体と一緒に所望の治療効果をもたらすように計算された、前以て決定された量の有効成分を含有する、単一投与物として適した物理的に分割された単位を表す。このような投与単位形態の例は錠剤（刻み目付き錠剤又はコート錠）、カプセル、ピル、散剤分包、ウエファー、注射液又は懸濁液、小匙１杯、大匙１杯等並びにそれらの分離複数物である。
【０１２３】
当業者は、以後に提示される試験結果から、有効量を容易に決定することができるであろう。概括的に治療的有効量は０．００５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、そしてとりわけ０．００５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと推測される。必要量を１日に適当な間隔を空けてで２、３、４又は５回以上の分割量として投与することが適当かも知れない。該分割量は例えば、単位投与剤形当たり０．５〜５００ｍｇ、そしてとりわけ１０ｍｇ〜５００ｍｇの有効成分を含有する単位投与剤形として調合することができる。
【０１２４】
本発明のもう１つのアスペクトとして、特に医薬としての使用に対し、より具体的には癌又は関連疾患の処置における、もう１種の抗癌剤とＨＤＡＣ−インヒビターの組み合わせ物が想定される。
【０１２５】
前記の状態の処置のために、本発明の化合物を有利には、１種又は複数の他の医薬、より具体的には他の抗癌剤と組み合わせて使用することができる。抗癌剤の例は、
−白金配位化合物、例えばシスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチン、
−タキサン化合物、例えばパクリタキセル又はドセタキセル、
−カンプトテシン化合物のようなトポイソメラーゼＩインヒビター、例えばイリノテカン又はトポテカン、
−抗癌性ポドフィロトキシン誘導体のようなトポイソメラーゼＩＩインヒビター、例えばエトポシド又はテニポシド、
−抗腫瘍ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン又はビノレルビン−抗腫瘍ヌクレオシド誘導体、例えば５−フルオロウラシル、ゲンシタビン又はカペシタビン、
−ナイトロジェン・マスタード又はニトロソ尿素のようなアルキル化剤、例えばシクロホスホアミド、クロランブシル、カルムスチン又はロムスチン、
−抗腫瘍、アントラサイクリン誘導体、例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン又はミトキサントロン、
−ＨＥＲ２抗体、例えばトラストズマブ、
−エストロゲン受容体アンタゴニスト又は選択的エストロゲン受容体モジュレーター、例えばタモキシフェン、トレミレン、ドロロキシフェン、ファスロデックス又はラロキシフェン、
−エキセメスタン、アナストロゾール、レトラゾール及びボロゾールのようなアロマターゼインヒビター、
−レチノイド、ビタミンＤ及びレチノイン酸代謝阻害剤（ＲＡＭＢＡ）のような分化剤、例えばアキュタン、
−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼインヒビター、例えばアザシチジン、
−キナーゼインヒビター、例えばフラボペリドール、イマチニブメシレート又はゲフィチニブ、
−ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、
−他のＨＤＡＣインヒビター、
−ユビキチン−プロテアソム経路のインヒビター、例えばＶｅｌｃａｄｅ、あるいは
−Ｙｏｎｄｅｌｉｓ、
である。
【０１２６】
用語「白金配位化合物」は本明細書では、イオンの形態の白金を提供するいずれかの腫瘍細胞増殖阻害白金配位化合物を表すために使用される。
【０１２７】
用語［タキサン化合物］はタキサン環系を有し、イチイの木（Ｔａｘｕｓ）の特定の種からの抽出物に関連した又はそれから誘動された化合物の１クラスを示す。
【０１２８】
用語「トポイソメラーゼインヒビター」は真核細胞中のＤＮＡ位相を変えることができる酵素を示すために使用される。それらは重要な細胞機能及び細胞増殖に必須である。真核細胞には２種のトポイソメラーゼ、すなわちＩ型及びＩＩ型がある。トポイソメラーゼＩは約１００，０００の分子量のモノマー酵素である。この酵素はＤＮＡに結合して、一時的な単鎖分解を誘動し、二重らせんを解き（又は解かせ）、そして次にＤＮＡ鎖から解離する前にその分解を再シールする。トポイソメラーゼＩＩはＤＮＡ鎖分解物の導入又は遊離ラジカルの分解又は形成に関与する、同様な作用機序を有する。
【０１２９】
用語「カンプトテシン化合物」は中国茶のカンプトテシン・アクミナタ（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  ａｃｕｍｉｎａｔａ）及びインドの木のノタポヂテ・フェチダ（Ｎｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ  ｆｏｅｔｉｄａ）から誘動される非水溶性アルカロイドである親カンプトテシン化合物に関連した、又はそれから誘動される化合物を表すために使用される。
【０１３０】
用語［ポドフィロトキシン化合物］はマンドレークの植物から抽出される親ポドフィロトキシンに関連した、又はそれから誘動される化合物を示すために使用される。
【０１３１】
用語「抗腫瘍ビンカアルカロイド」はツルニチソウ（Ｖｉｎｃａ  ｒｏｓｅａ）の抽出物に関連した、又はそれから誘動される化合物を示すために使用される。
【０１３２】
用語「アルキル化剤」は生理学的条件下で、ＤＮＡのような生物学的に必須の高分子にアルキル基を与える能力を有する一般的特徴をもつ化学薬品の広範な群を包含する。大部分はナイトロジェンマスタード及びニトロソ尿素のような、より重要な物質であるが、有効なアルキル化部分は、その幾つかは酵素による複雑な分解反応後にインビボで生成される。アルキル化剤のもっとも重要な薬理学的作用は、細胞増殖、とりわけＤＮＡ合成及び細胞分裂に関与する基本的機序を乱すことである。急速に増殖している組織中のＤＮＡ機能及び完全性を阻害するアルキル化剤の能力が、それらの治療的適用及び多数のそれらの毒性の基礎を提供する。
【０１３３】
用語「抗腫瘍アントラサイクリン誘導体」は、グリコシド結合により結合される稀有な糖のダウノスアミンをもつテトラサイクリン環構造をもつことを特徴とする、カビ・真菌のＳｔｒｅｐ．ｐｅｕｔｉｃｕｓ  ｖａｒ．ｃａｅｓｉｕｓから得られる抗生物質及びそれらの誘導体を含んでなる。
【０１３４】
原発性乳癌におけるヒト表皮増殖因子受容体２タンパク質（ＨＥＲ２）の増殖は、特定の患者に対する低い臨床予後と関連することが示されている。トラストズマブはＨＥＲ２受容体の細胞外領域に高い親和性及び特異性をもって結合する、著しく精製された組み換
えＤＮＡ−誘動ヒト化モノクローナルＩｇＧ１カッパ抗体である。
【０１３５】
多数の乳癌はエストロゲン受容体を有し、これらの腫瘍の増殖はエストロゲンにより刺激され得る。用語「エストロゲン受容体アンタゴニスト」及び「選択的エストロゲン受容体モジュレーター」は、エストロゲン受容体（ＥＲ）に結合するエストラジオールの競合的インヒビターを示すために使用される。選択的エストロゲン受容体モジュレーターはＥＲに結合されると、受容体の三次元形態に変化を誘発し、ＤＮＡ上のエストロゲン反応性要素（ＥＲＥ）に対するその結合を変化させる。
【０１３６】
閉経後の女性においては、循環エストロゲンの主要な生成源は、末梢組織におけるアロマターゼ酵素による、副腎及び卵巣のアンドローゲン（アンドロステンジオン及びテストステロン）のエストロゲン（エストロン及びエストラジオール）への転化からである。アロマターゼ阻害又は不活性化によるエストロゲンの剥奪はホルモン依存性乳癌をもつ何人かの閉経後患者に対する有効な選択的処置である。
【０１３７】
用語「抗エストロゲン剤」は本明細書では、エストロゲン受容体アンタゴニスト及び選択的エストロゲン受容体モジュレーターのみならずまた、前記のようなアロマターゼインヒビターを包含するために使用される。
【０１３８】
用語「分化剤」は種々の方法で、細胞増殖を阻害し、分化を誘発することができる化合物を包含する。ビタミンＤ及びレチノイドは、広範な正常の及び悪性の細胞タイプの増殖及び分化を制御するのに重要な役割を果たすことが知られている。レチノイン酸代謝阻害剤（ＲＡＭＢＡ）は、レチノイン酸のチトクロームＰ４５０−媒介異化作用を阻害することにより内在レチノイン酸のレベルを増加する。
【０１３９】
ＤＮＡメチル化の変化はヒト新生物におけるもっとも一般的な異常の１つである。選択される遺伝子のプロモーター内のメチル化亢進は通常、関与する遺伝子の不活性化を伴なう。用語「ＤＮＡメチルトランスフェラーゼインヒビター」は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼの薬理学的阻害及び腫瘍サプレッサーの遺伝子発現の再活性化により作用する化合物を示すために使用される。
【０１４０】
用語「キナーゼインヒビター」は細胞周期進行及びプログラムされた細胞死（細胞死）に関与するキナーゼの強力なインヒビターを含んでなる。
【０１４１】
用語「ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター」はＲａｓ及び他の細胞内タンパク質のファルネシル化を抑制するようにされた化合物を示すために使用される。それらは悪性細胞増殖及び生存に影響をもつことが示されている。
【０１４２】
用語「他のＨＤＡＣインヒビター」は、限定はされないが、
−カルボキシレート、例えばブチレート、桂皮酸、４−フェニルブチレート又はバルプロ酸、
−ヒドロキサム酸、例えばスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ピペラジン含有ＳＡＨＡ類似体、二アリールヒドロキサメートＡ−１６１９０６及びそのカルボゾリルエーテル−、テトラヒドロピリジン−及びテトラロン−類似体、二環式アリール−Ｎ−ヒドロキシカルボキシアミド、ピロキシアミド、ＣＧ−１５２１、ＰＸＤ−１０１、スルホンアミドヒドロキサム酸、ＬＡＱ−８２４、ＬＢＨ−５８９、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、オキサムフラチン、スクリプタイド、スクリプタイド関連三環分子、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサム酸（ＣＢＨＡ）、ＣＢＨＡ−様ヒドロキサム酸、トラポキシン−ヒドロキサム酸類似体、ＣＲＡ−０２４７８１、Ｒ３０６４６５及び関連ベンゾイル−及びヘテロアリール−ヒドロキサム酸、アミノスベレート及びマロニルジアミド、
−環式テトラペプチド、例えばトラポキシン、アピジシン、デプシペプチド、スピルコスタチン−関連化合物、ＲｅｄＦＫ−２２８、スルフヒドリル−含有環式テトラペプチド（ＳＣＯＰ）、ヒドロキサム酸含有環式テトラペプチド（ＣＨＡＰ）、ＴＡＮ−１７４及びアズムアミド、
−ベンズアミド、例えばＭＳ−２７５又はＣＩ−９９４、あるいは
−デプデシン
を含んでなる。
【０１４３】
用語「ユビキチイン−プロテアソム経路のインヒビター」は細胞周期制御タンパク質を包含するプロテアソム中の細胞タンパク質の標的とされた破壊を阻害する化合物を識別するために使用される。
【０１４４】
癌の処置のための、本発明に従う化合物は、放射線照射と一緒に、前記のような患者に投与することができる。放射線照射はイオン化光線、そしてとりわけ癌マ光線、特に線形加速器により又は今日一般に使用されている放射性核種により放出されるものを意味する。放射性核種による腫瘍の照射は外部でも内部でもよい。
【０１４５】
本発明はまた、抗癌剤及び本発明に従うＨＤＡＣインヒビターの本発明に従う組み合わせ物を対象にする。
【０１４６】
本発明はまた、例えば腫瘍細胞の増殖を抑制するための医学的治療における使用のための本発明に従う組み合わせ物を対象とする。
【０１４７】
本発明はまた、腫瘍細胞の増殖を抑制するための本発明に従う組み合わせ物を対象とする。
【０１４８】
本発明はまた、有効量の本発明に従う組み合わせ物を被験体に投与する工程を含んでなる、ヒトの被験者における腫瘍細胞の増殖を抑制する方法を対象とする。
【０１４９】
本発明は更に、有効量の本発明に従う組み合わせ物を投与することにより、形質転換細胞を包含する細胞の異常増殖を抑制する方法を提供する。
【０１５０】
他の医薬及びＨＤＡＣインヒビターは同時に（例えば別の組成物又は単一組成物中で）又はどんな順序でも連続的に投与することができる。後者の場合には、２種の化合物は有益な又は相乗的効果が確実に達成されるのに十分な期間内そして量及び方法で投与されるであろう。投与の好ましい方法及び順序並びに組み合わせ物の各成分それぞれの投与量及び計画は、投与される特定のその他の医薬及びＨＤＡＣインヒビター、それらの投与経路、処置される特定の腫瘍及び処置される特定の宿主に左右されるであろう。投与の最適な方法及び順序並びに投与量及び計画は、従来の方法を使用し、そして本明細書に提示された情報を考慮して当業者により容易に決定されることができる。
【０１５１】
白金配位化合物は有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき１〜５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０〜４００ｍｇ／ｍ２、特にシスプラチンに対しては約７５ｍｇ／ｍ２、そしてカルボプラチンに対しては約３００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５２】
タキサン化合物は有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき５０〜４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７５〜２５０ｍｇ／ｍ２、特にパクリタキセルに対しては約１７５〜２５０ｍｇ／ｍ２、そしてドセタキセルに対しては約７５〜１５０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５３】
カンプトテシン化合物は有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき０．１〜４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１〜３００ｍｇ／ｍ２、特にイリノテカンに対しては約１００〜３５０ｍｇ／ｍ２、そしてトポテカンに対しては約１〜２ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５４】
抗腫瘍ポドフィロトキシン誘導体は有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき３０〜３００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０〜２５０ｍｇ／ｍ２、特にエトポシドに対しては約３５〜１００ｍｇ／ｍ２、そしてテニポシドに対しては約５０〜２５０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５５】
抗腫瘍ビンカアルカロイドは有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき２〜３０ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、特にビンブラスチンに対しては約３〜１２ｍｇ／ｍ２、ビンクリスチンに対しては約１〜２ｍｇ／ｍ２、そしてビノレルビンに対しては約１０〜３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５６】
抗腫瘍ヌクレオシド誘導体は有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき２００〜２５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７００〜１５００ｍｇ／ｍ２、特に５−ＦＵに対しては約２００〜５００ｍｇ／ｍ２、ゲムシタビンに対しては約８００〜１２００ｍｇ／ｍ２、そしてカペシタビンに対しては約１０００〜２５００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５７】
ナイトロジェンマスタード又はニトロソ尿素のようなアルキル化剤は有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき１００〜５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１２０〜２００ｍｇ／ｍ２、特にシクロホスホアミドに対しては約１００〜５００ｍｇ／ｍ２、クロランブシルに対しては約０．１〜０．２ｍｇ／ｍ２、カルムスチンに対しては約１５０〜２００ｍｇ／ｍ２、そしてロムスチンに対しては約１００〜１５０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５８】
抗腫瘍アントラサイクリン誘導体は有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき１０〜７５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１５〜６０ｍｇ／ｍ２、特にドキソルビシンに対しては約４０〜７５ｍｇ／ｍ２、ダウノルビシンに対しては約２５〜４５ｍｇ／ｍ２、そしてイダルビシンに対しては約１０〜１５ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１５９】
トラストズマブは有利には、１コースの処置当たり、体表面積１平方メーターにつき１〜５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、特に２〜４ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【０１６０】
抗エストロゲン剤は有利には、特定の薬剤及び処置される状態に応じて１日に約１〜１００ｍｇの用量で投与される。タモキシフェンは有利には５〜５０ｍｇ、好ましくは１０〜２０ｍｇを１日２回の用量で経口投与され、治療効果を達成し、維持するために十分な期間治療を継続する。トレミフェンは有利には１日１回約６０ｍｇの用量で経口投与され、治療効果を達成し、維持するために十分な期間治療を継続する。アナストロゾールは有利には１日１回約１ｍｇの用量で経口投与される。ドロロキシフェンは有利には１日１回約２０〜１００ｍｇの用量で経口投与される。ラロキシフェンは有利には１日１回約６０ｍｇの用量で経口投与される。エキセメスタンは有利には１日１回約２５ｍｇの用量で経口投与される。
【０１６１】
これらの用量は例えば１コースの治療当たり１回、２回又は３回以上投与することができ、それを例えば７、１４、２１又は２８日毎に反復することができる。
【０１６２】
それらの有用な薬理学的特性を考慮すると、本発明に従う組み合わせ物の成分、すなわち他の医薬及びＤＮＡインヒビターは、投与目的のための種々の製薬学的剤形に調合することができる。成分は個々の製薬学的組成物中に別々に又は両成分を含有する単一の製薬学的組成物中に調合することができる。
【０１６３】
従って、本発明は１種又は複数の製薬学的担体と一緒に、他の医薬及びＨＤＡＣインヒビターを含んでなる製薬学的組成物を対象とする。
【０１６４】
本発明はまた、１種又は複数の製薬学的担体と一緒に、抗癌剤及び本発明に従うＨＤＡＣインヒビターを含んでなる製薬学的組成物の形態の本発明に従う組み合わせ物を対象とする。
【０１６５】
本発明はまた、腫瘍細胞の増殖を抑制するための製薬学的組成物の製造における本発明に従う組み合わせ物の使用を対象とする。
【０１６６】
本発明は更に、癌を罹患する患者の処置における、同時の、別々の又は連続的使用のための組み合わせ調製物としての、第１の有効成分として本発明に従うＨＤＡＣインヒビター及び第２の有効成分として抗癌剤を含有する製品を対象とする。
【０１６７】
実験部門
以下の実施例は本発明を具体的に示す。
【０１６８】
以後、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、「ＤＣＭ」はジクロロメタン、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフラン、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチル、「ＥｔＯＨ」はエタノール、「ＭｅＯＨ」はメタノール、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテル、「ＥＤＣ」はＮ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸そして「ＨＯＢＴ」は１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールと定義される。
【０１６９】
Ａ．中間体化合物の製造
実施例Ａ１
ａ）中間体１の製造
【０１７０】
【化２６】
2008546737.tif 000029
【０１７１】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．００５０モル）及びジメトキシ−アセトアルデヒド（０．００６５モル）の混合物（３０ｍｌのＴＨＦ中）を５０℃で１時間撹拌した。混合物を室温に冷却した。ナトリウムトリアセトキシホウ水素化物（０．００６５モル）を添加し、反応混合物を室温で１晩震盪した。ＤＣＭ（２０ｍｌ）を添加した。反応物を水（１０ｍｌ）及びＮａＨＣＯ３でクエンチした。層を分離した。有機層を乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発させると、中間体１を収穫した（更に精製せずに次の反応工程で使用した）。
ｂ）中間体２の製造
【０１７２】
【化２７】
2008546737.tif 000030
【０１７３】
中間体１（０．００１０モル）及びトリエチルアミン（０．００２０モル）をＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解した。１−イソシアナト−４−フェノキシ−ベンゼン（０．００１５モル）を添加した。反応混合物を室温で１晩震盪した。次に、トリス−（２−アミノエチル）−アミンポリスチレンＨＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ；Ｃａｔ．Ｎｏ．０１−６４−０１７０）（０．００１６モル）を添加した。反応混合物を室温で３時間震盪し、次に濾過し、濾液を濃縮すると、中間体２を収穫した。
ｃ）中間体３の製造
【０１７４】
【化２８】
2008546737.tif 000031
【０１７５】
ギ酸（２ｍｌ）を中間体２（０．００１０モル）に添加した。反応混合物を閉鎖反応容器中で５０℃で１時間震盪した。溶媒をＧｅｎｅｖａｃ中で５０℃で蒸発させた。残渣をＤＣＭ（１５ｍｌ）中に取り、１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍｌ）で２回洗浄し、乾燥し、次に再度ＤＣＭですすいだ。溶媒を蒸発させると中間体３を収穫した（更に精製せずに次の反応工程で使用した）。
ｄ）中間体４の製造
【０１７６】
【化２９】
2008546737.tif 000032
【０１７７】
中間体３（０．０００５モル）をＴＨＦ（４ｍｌ）に溶解した。１Ｎの水酸化ナトリウム（２ｍｌ）を添加し、反応混合物を閉鎖容器中で室温で１晩震盪した。１Ｎの塩酸（２ｍｌ）を添加し、混合し、次に溶媒を蒸発させると、中間体４を収穫した（更に精製せずに次の反応工程に使用した）。
ｅ）中間体５の製造
【０１７８】
【化３０】
2008546737.tif 000033
【０１７９】
中間体４（最高０．０００５モル）、Ｎ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（０．０００６５モル）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．０００６５モル）及びトリエチルアミン（０．０００７５モル）をＴＨＦ（１５ｍｌ）に室温で溶解した。次にＯ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン［６７２３−３０−４］（０．０００６５モル）を添加し、反応混合物を室温で６時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。ＤＣＭ（２５ｍｌ）を添加した。有機層を分離し、１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（３ｍｌ）で洗浄し、次にＥｘｔｒｅｌｕｔ（Ｒ）カートリッジを通して乾燥（濾過）し、溶媒を蒸発させた。各残渣を逆相分取ＨＰＬＣにより精製した。生成物画分を回収し、溶媒を蒸発させると中間体５を収穫した。
【０１８０】
以下の表は前記実施例の１つに従って製造された中間体を挙げる。
【０１８１】
【表２】
2008546737.tif 000034
【０１８２】
実施例Ａ２
ａ）中間体１０の製造
【０１８３】
【化３１】
2008546737.tif 000035
【０１８４】
中間体１（０．０００３モル）をＤＣＭ（２６ｍｌ）中に取った。１−フルオロ−４−イソシアナト−ベンゼン（０．０００４モル）を添加した。次いで、トリエチルアミン（０．０００６モル）を添加した。反応混合物を室温で１晩震盪した。トリス−（２−アミノエチル）−アミンポリスチレンＨＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ；Ｃａｔ．Ｎｏ．０１−６４−０１７０）（０．０００４モル）を添加し，混合物を室温で３時間震盪し、次に濾過し、濾液を蒸発させると、中間体１０を収穫した。
ｂ）中間体１１の製造
【０１８５】
【化３２】
2008546737.tif 000036
【０１８６】
ギ酸（１ｍｌ）を中間体１０（０．０００３モル）に添加した。反応混合物を５０℃で１時間震盪した。溶媒を蒸発すると中間体１１を収穫した。
ｃ）中間体１２の製造
【０１８７】
【化３３】
2008546737.tif 000037
【０１８８】
１Ｎの水酸化ナトリウム／ＴＨＦの１：１水溶液（０．００１０モル）を中間体１１（０．０００３モル）に添加し、混合物を５０℃で１晩震盪した。１Ｎの塩酸水溶液（０．００１０モル）を添加し、溶媒を蒸発させると中間体１２を収穫した。
ｄ）中間体１３の製造
【０１８９】
【化３４】
2008546737.tif 000038
【０１９０】
中間体１２（＜０．０００３モル）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解した。次いでＮ’−（エ
チルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（０．０００４モル）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．０００４モル）及びトリエチルアミン（０．０００４５モル）の溶液（３ｍｌのＴＨＦ及び１ｍｌのＤＣＭ中）を添加した。次いで、Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０００４モル）の溶液（１ｍｌのＤＣＭ中）を添加した。反応混合物を室温で１晩震盪した。ＤＣＭ（２０ｍｌ）を添加し、反応混合物を１０％ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、次いでＥｘｔｒｅｌｕｔ（Ｒ）上で乾燥した。濾液を蒸発させた。残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物画分を回収し、溶媒を蒸発させると中間体１３を収穫した。
【０１９１】
以下の表は前記の実施例の１つに従って製造された中間体を挙げる。
【０１９２】
【表３】
2008546737.tif 000039
【０１９３】
実施例Ａ３
ａ）中間体１４の製造
【０１９４】
【化３５】
2008546737.tif 000040
【０１９５】
中間体１（０．００１０モル）及びトリエチルアミン（０．００２０モル）をＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解した。１−イソシアナト−ナフタレン（０．００１５モル）を添加した。次いで、トリス−（２−アミノエチル）−アミンポリスチレンＨＬ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ；Ｃａｔ．Ｎｏ．０１−６４−０１７０）（０．００１６モル）を添加した。反応混合物を室温で３時間震盪し、次に濾過し、濾液を蒸発させると、中間体１４を収穫した。ｂ）中間体１５の製造
【０１９６】
【化３６】
2008546737.tif 000041
【０１９７】
ギ酸（２ｍｌ）を中間体１４（０．００１０モル）に添加した。反応混合物を閉鎖反応容器中で５０℃で１時間震盪した。溶媒を５０℃で蒸発させた。残渣をＤＣＭ（１５ｍｌ）中に取り、１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍｌ）で２回洗浄し、次いでＥｘｔｒｅｌｕｔ（Ｒ）上で乾燥し、次いでＤＣＭで再度すすいだ。溶媒を蒸発させると中間体１５を収穫した（更に精製せずに次の反応工程に使用した）。
ｃ）中間体１６の製造
【０１９８】
【化３７】
2008546737.tif 000042
【０１９９】
中間体１５（０．０００５モル）及びトリエチルアミン（０．１００ｇ）の混合物（３０ｍｌのＴＨＦ中）を触媒として１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１００ｇ）とともに室温で１晩水素化した。Ｈ２（１当量）の取り込み後、触媒をジカライト上で濾去し、濾液を蒸発させると中間体１６を収穫した。
ｄ）中間体１７の製造
【０２００】
【化３８】
2008546737.tif 000043
【０２０１】
中間体１６（０．０００５モル）を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（３ｍｌ）中に溶解した。ＴＨＦ（３ｍｌ）を添加した。反応混合物を閉鎖容器内で室温で１晩震盪した。１Ｎの塩酸水溶液（３ｍｌ）を添加し、溶媒を蒸発させると中間体１７を収穫した（更に精製せずに次の反応工程に使用した）。
ｅ）中間体１８の製造
【０２０２】
【化３９】
2008546737.tif 000044
【０２０３】
中間体１７（０．０００５モル）及びＮ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（０．０００６５モル）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．０００６５モル）及びトリエチルアミン（０．０００７５モル）をＴＨＦ（１５ｍｌ）中に室温で溶解した。次いで、Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０００６５モル）を添加した。反応混合物を室温で６時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。ＤＣＭ（２５ｍｌ）を残渣に添加し、有機溶液を１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（３ｍｌ）で洗浄し、次いでＥｘｔｒｅｌｕｔ（Ｒ）カートリッジを通して乾燥した。溶媒を蒸発させた。残渣を分取逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．０２６ｇの中間体１８を収穫した。
【０２０４】
実施例Ａ４
ａ）中間体１９の製造
【０２０５】
【化４０】
2008546737.tif 000045
【０２０６】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．０１８９モル）、α−クロロ−ベンゼン酢酸、エチルエステル（０．０１９９モル）及び炭酸カリウム（５．２ｇ）の混合物（１２５ｍｌのアセトニトリル中）を１５時間撹拌、還流し、水中に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（８．５ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  ９５／５〜９０／１０）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、３．５ｇ（４３％）の中間体１９を収穫した。
ｂ）中間体２０の製造
【０２０７】
【化４１】
2008546737.tif 000046
【０２０８】
４−イソシアナト−ベンゾニトリル（０．００２１モル）を中間体１９（０．００１４モル）の混合物（２５ｍｌのＴＨＦ中）に添加した。混合物を室温で２４時間撹拌し、水中に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（１ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（５μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０〜９４／６）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．４７ｇ）をＥｔＯＡｃ中に取り、乾燥すると、０．３６ｇの中間体２０、融点２０４℃を収穫した。
ｃ）中間体２１の製造
【０２０９】
【化４２】
2008546737.tif 000047
【０２１０】
中間体２０（０．０００７モル）の混合物（１５ｍｌの３Ｎの塩酸及び１５ｍｌのジオキサン中）を８時間撹拌、還流した。溶媒を蒸発させた。水中（３０ｍｌ）を添加した。沈殿物を濾取し、水、次いでＤＩＰＥで洗浄し、乾燥すると０．３４ｇ（９４％）の中間体２１を収穫した。
ｄ）中間体２２の製造
【０２１１】
【化４３】
2008546737.tif 000048
【０２１２】
１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．００１モル）、次いでＮ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（０．００１モル）を中間体２１（０．０００７モル）、Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００１モル）及びトリエチルアミン（０．００２モル）の溶液（３５ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ中）にＮ２流下で添加した。混合物を室温で３日間撹拌し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．５ｇ）をｋｒｏｍａｓｉｌ（Ｒ）上カラムクロマトグラフィー（５μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０〜９５／５）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．３ｇ）をＤＩＰＥ／ジエチルエーテルから結晶化させた。沈殿物を濾取し、乾燥した。残渣（０．２５ｇ）を７０℃で４時間乾燥すると、０．２２ｇ（５４％）の中間体２２、融点１８２℃を収穫した。
【０２１３】
実施例Ａ５
ａ）中間体２３の製造
【０２１４】
【化４４】
2008546737.tif 000049
【０２１５】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．００７２モル）の混合物（４０ｍｌのＴＨＦ及び４０ｍｌの１Ｎの水酸化ナトリウム中）を室温で１晩撹拌した。１Ｎの塩酸（４０ｍｌ）を添加した。混合物を１０分間撹拌した。炭酸ナトリウム（０．０２１６モル）を添加した。混合物を１０分間撹拌した。１−［［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］オキシ］−２，５−ピロリジンジオン（０．００７２モル）を分割して添加した。混合物を室温で６時間撹拌し、次いで０℃に冷却し、塩酸で酸性化した。沈殿物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥すると４．１ｇ（１００％）の中間体２３を収穫した。
ｂ）中間体２４の製造
【０２１６】
【化４５】
2008546737.tif 000050
【０２１７】
トリエチルアミン（０．０２モル）、Ｎ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（０．００８２モル）及び１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．００８２モル）を中間体２３（０．００６８モル）の混合物（２００ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ中）にＮ２流下、室温で添加した。混合物を室温で１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００８２モル）を添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を１０％ＮａＨＣＯ３で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（４ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．１）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると３．４ｇ（８９％）の中間体２４を収穫した。
ｃ）中間体２５の製造
【０２１８】
【化４６】
2008546737.tif 000051
【０２１９】
中間体２４（０．０３５５モル）及びピペリジン（０．０８９モル）の混合物（４００ｍｌのＤＣＭ中）を３５℃で７５時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ
８０／２０／２）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると６．７ｇ（５６％）を収穫した。画分（０．７９ｇ）をジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると、０．６２ｇの中間体２５、融点１２９℃を収穫した。
ｄ）中間体２６の製造
【０２２０】
【化４７】
2008546737.tif 000052
【０２２１】
中間体２５（０．００５３モル）、２−ブロモ−プロパン酸、メチルエステル（０．００５６モル）及び炭酸カリウム（０．０１モル）の混合物（７５ｍｌのアセトニトリル中）を３時間撹拌、還流し、次いで水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（２．２ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３０／０．１〜９６／４／０．５）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．６２ｇ（２８％）の中間体２６を収穫した。
ｅ）中間体２７の製造
【０２２２】
【化４８】
2008546737.tif 000053
【０２２３】
４−イソシアナト−１，１’−ビフェニル（０．０００９モル）を中間体２６（０．０００６モル）の溶液（１４ｍｌのＴＨＦ中）に室温で添加した。混合物を室温で７２時間撹拌し、水中に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。この画分（０．７５ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（５μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０〜９０／１０）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．１５ｇ（４３％）の中間体２７を収穫した。
【０２２４】
実施例Ａ６
ａ）中間体３２の製造
【０２２５】
【化４９】
2008546737.tif 000054
【０２２６】
２−クロロ−５−ピリミジンカルボン酸、メチルエステル（０．０５８モル）の溶液（８０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチル−アセトアミド中）を４−ピペリジンメタンアミン（０．１１６モル）及びＮ−エチル−Ｎ−（１−メチルエチル）−２−プロパンアミン（０．１４５モル）の溶液（１５０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチル−アセトアミド中）にＮ２流下で滴下した。混合物を室温で１時間３０分間撹拌し、氷水中に注入し、ＥｔＯＡｃ、次いでＤＣＭで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。
残渣をＤＩＰＥから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると１０ｇ（６５％）の中間体３２を収穫した。
ｂ）中間体３３の製造
【０２２７】
【化５０】
2008546737.tif 000055
【０２２８】
中間体３２（０．０１２モル）及び炭酸カリウム（０．０３８３モル）の混合物（１５０ｍｌのアセトニトリル中）を２時間撹拌、還流した。２−ブロモ−１−ジエトキシ−エタン（０．０４７９モル）を添加した。混合物を１５時間撹拌、還流し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（８ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．１）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると１．９ｇ（４３％）の中間体３３を収穫した。
ｃ）中間体３４の製造
【０２２９】
【化５１】
2008546737.tif 000056
【０２３０】
中間体３３（０．００２２モル）及びトリエチルアミン（０．００３モル）の溶液（２５ｍｌのＴＨＦ中）をトリクロロ−メタノール、炭酸塩（２：１）（０．０００９モル）の溶液（１５ｍｌのＴＨＦ中）に５℃で滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した。２−メチル−１Ｈ−インドール−３−エタンアミン（０．００２６モル）及びトリエチルアミン（０．００３モル）の溶液（２５ｍｌのＴＨＦ中）を滴下した。混合物を５０℃で１５時間撹拌し、氷水中に注入し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（１．６ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（５μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９９／１／０．０５〜９４／６／０．３）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．７３ｇの中間体３４を収穫した。
ｄ）中間体３５の製造
【０２３１】
【化５２】
2008546737.tif 000057
【０２３２】
中間体３４（０．００１３モル）の混合物（２０ｍｌの１Ｎの塩酸及び２０ｍｌのＭｅＯＨ中）を５５℃で３時間撹拌した。メタノールを蒸発させた。残渣を炭酸カリウムで塩基性にした。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．６４ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１５〜４０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３／０．１）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．５２ｇ（８７％）の中間体３５、融点８５℃を収穫した。
ｅ）中間体３６の製造
【０２３３】
【化５３】
2008546737.tif 000058
【０２３４】
中間体３５（０．００１１モル）及び水酸化リチウム（０．０２２モル）の混合物（２０ｍｌのＴＨＦ及び１０ｍｌの水中）を室温で１５時間撹拌し、次いでｐＨが４に設定されるまで３Ｎの塩酸中に取った。混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させると０．５ｇ（１００％）の中間体３６を収穫した。
ｆ）中間体３７の製造
【０２３５】
【化５４】
2008546737.tif 000059
【０２３６】
Ｎ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（０．００１６モル）及び１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．００１６モル）を中間体３６（０．００１モル）、Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００１６モル）及びトリエチルアミン（０．００３２モル）の溶液（４０ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ（５０／５０）中）に室温で添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．７４ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３／０．１）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．４９ｇ（８０％）の中間体３７、融点１１６℃を収穫した。
【０２３７】
実施例Ａ７
ａ）中間体３８の製造
【０２３８】
【化５５】
2008546737.tif 000060
【０２３９】
２−（メチルスルホニル）−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．０１１８モル）の溶液（３０ｍｌのアセトニトリル中）を（２−モルホリニルメチル）−カルバミン酸、１，１−ジメチルエチルエステル（０．００９８モル）及び炭酸カリウム（０．０１９６モル）の溶液（８０ｍｌのアセトニトリル中）にＮ２流下で滴下した。混合物を室温で１２時間撹拌し、水中に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発乾燥させた。残渣（５．６ｇ）をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（１５〜３５μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９９／１）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣をジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．３ｇの中間体３７、融点１００℃を収穫した。ｂ）中間体３９の製造
【０２４０】
【化５６】
2008546737.tif 000061
【０２４１】
ＴＦＡ（７．５ｍｌ）を中間体３８（０．０３７モル）の混合物（１５０ｍｌのＤＣＭ中）に０℃で添加した。混合物を室温で４８時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。ジエチルエーテルを添加した。沈殿物を濾取し、乾燥すると１３．５ｇ（９６％）の中間体３９、融点１８０℃を収穫した。
ｃ）中間体４０の製造
【０２４２】
【化５７】
2008546737.tif 000062
【０２４３】
中間体３９（０．０１０５モル）を１０％炭酸カリウム（１００ｍｌ）の溶液（１００ｍｌのＤＣＭ中）に添加した。混合物を室温で１５分間撹拌し、次いでＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させると２．６ｇの中間体４０を収穫した。
【０２４４】
実施例Ａ８
ａ）中間体４２の製造
【０２４５】
【化５８】
2008546737.tif 000063
【０２４６】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．０００７モル）、２−ブロモ−プロパン酸、メチルエステル（０．０００７モル）及び炭酸カリウム（０．００１５モル）の混合物（５ｍｌのアセトニトリル中）を３時間撹拌、還流し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させると０．２４ｇの中間体４２を収穫した。
ｂ）中間体４３の製造
【０２４７】
【化５９】
2008546737.tif 000064
【０２４８】
４−イソシアナト−ベンゾニトリル（０．０００６モル）を中間体４２（０．０００６モル）の溶液（１５ｍｌのＴＨＦ中）に室温で添加した。混合物を１５時間撹拌、還流した。４−イソシアナト−ベンゾニトリル（１当量）を添加した。混合物を２４時間撹拌還流し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣を最少量のＤＣＭ中に取った。沈殿物を濾去した。濾液を蒸発させ、シリカゲル上カラムクロマトグラフィー（２０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．１）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．１６ｇ（４８％）の中間体４３を収穫した。
ｃ）中間体４４の製造
【０２４９】
【化６０】
2008546737.tif 000065
【０２５０】
中間体４３（０．０００３モル）及び水酸化リチウム一水和物（０．０００７モル）の混合物（５ｍｌのＴＨＦ及び２ｍｌの水中）を室温で１５時間撹拌した。１Ｎの塩酸を添加した。混合物を蒸発乾燥させた。この生成物を次の反応工程に直接使用すると中間体４４を収穫した。
ｄ）中間体４５の製造
【０２５１】
【化６１】
2008546737.tif 000066
【０２５２】
中間体４４（０．０００３モル）、Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０００４モル）、ＥＤＣ（０．０００４モル）、ＨＯＢＴ（０．０００４モル）及びトリエチルアミン（０．０００５モル）の混合物（２０ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ中）を室温で４８時間撹拌し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．２ｇ）をｋｒｏｍａｓｉｌ（Ｒ）上カラムクロマトグラフィー（１０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９９／１）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると０．１０８ｇ（５９％）の中間体４５、融点１２０℃を収穫した。
【０２５３】
Ｂ．最終化合物の製造
実施例Ｂ１
化合物１の製造
【０２５４】
【化６２】
2008546737.tif 000067
【０２５５】
５％ＴＦＡ（２ｍｌのＤＣＭ／ＭｅＯＨ中）を中間体１８（０．００００５モル）に添加し、生成された溶液をシール管中で室温で１晩震盪した。溶媒を室温、Ｎ２流下で蒸発させた。５％ＴＦＡ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ中）を再度添加し、混合物を脱保護が完了するまで（ＬＣ／ＭＳにより確認）震盪した。溶媒を室温、Ｎ２流下で蒸発させた。１，４−ジオキサン（２ｍｌ）を添加し、４０℃で蒸発手順を反復すると最終生成物を与えて、０．０２２ｇの化合物１を収穫した。
【０２５６】
実施例Ｂ２
化合物２の製造
【０２５７】
【化６３】
2008546737.tif 000068
【０２５８】
５％ＴＦＡ（４ｍｌのＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １／１中）を中間体５（最大０．０００５モル）に添加し、生成された溶液をシール管中で室温で１晩震盪した。溶媒を室温、Ｎ２流下で蒸発させた。５％ＴＦＡ（４ｍｌのＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １／１中）を再度添加し、混合物を脱保護が完了するまで（ＬＣ／ＭＳにより確認）震盪した。溶媒を室温、Ｎ２流下で蒸発させた。１，４−ジオキサン（２ｍｌ）を添加し、４０℃で蒸発手順を反復すると最終生成物を与えて、化合物２を収穫した。
【０２５９】
実施例Ｂ３
化合物３の製造
【０２６０】
【化６４】
2008546737.tif 000069
【０２６１】
５％ＴＦＡ（４ｍｌのＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １／１中）を中間体９（最大０．０００５モル）に添加し、生成された溶液をシール管中で室温で１晩震盪した。溶媒を室温、Ｎ２流下で蒸発させた。５％ＴＦＡ（４ｍｌのＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １／１中）を再度添加し、混合物を脱保護が完了するまで（ＬＣ／ＭＳにより確認）震盪した。溶媒を室温、Ｎ２流下で蒸発させた。１，４−ジオキサン（２ｍｌ）を添加し、４０℃で蒸発手順を反復すると化合物３を与えた。
【０２６２】
実施例Ｂ４
化合物４の製造
【０２６３】
【化６５】
2008546737.tif 000070
【０２６４】
５％ＴＦＡ（２ｍｌのＤＣＭ／ＭｅＯＨ中）を中間体１３（０．０００３モル）に添加し、生成された溶液を室温で３日間静置した。溶媒をＮ２流下で蒸発させ、生成物が純粋になるまでこの手順を反復すると化合物４を収穫した。
【０２６５】
実施例Ｂ５
化合物５の製造
【０２６６】
【化６６】
2008546737.tif 000071
【０２６７】
中間体２２（０．０００３モル）（１ｍｌのＴＦＡ中）、ＭｅＯＨ（２０ｍｌ）及びＤＣＭ（５ｍｌ）の混合物を室温で９６時間撹拌した。ＤＣＭを蒸発させた。沈殿物を濾取し、最少量のＭｅＯＨ、次いでジエチルエーテルで洗浄し、乾燥すると０．１３５ｇ（８３％）の化合物５、融点１８７℃を収穫した。
【０２６８】
実施例Ｂ６
化合物６の製造
【０２６９】
【化６７】
2008546737.tif 000072
【０２７０】
ＴＦＡ（０．５ｍｌ）を中間体２７（０．０００２モル）の溶液（１０ｍｌのＭｅＯＨ中）に５℃で添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を蒸発乾燥させた。残渣をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（２５〜４０μｍ）（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／水  ８０／２０／２）により精製した。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．０９ｇ）をジエチルエーテルに取った。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．０７２ｇ（５６％）の化合物６、融点１６９℃を収穫した。
【０２７１】
実施例Ｂ７
化合物１２の製造
【０２７２】
【化６８】
2008546737.tif 000073
【０２７３】
５％ＴＦＡ（２ｍｌのＤＣＭ／ＭｅＯＨ中）を中間体３１（０．０００３モル）に添加し、生成された溶液を室温で３日間静置した。溶媒をＮ２流下で蒸発させ、生成物が純粋になるまでこの手順を反復すると化合物１２を収穫した。
【０２７４】
実施例Ｂ８
化合物３５の製造
【０２７５】
【化６９】
2008546737.tif 000074
【０２７６】
中間体３７（０．０００８モル）の混合物（２．２ｍｌのＴＦＡ及び４４ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。沈殿物を濾過し、ＭｅＯＨ、次いでジエチルエーテルで洗浄すると０．３１ｇ（８４％）の化合物３５、融点２４６℃を収穫した。
【０２７７】
実施例Ｂ９
化合物３６の製造
【０２７８】
【化７０】
2008546737.tif 000075
【０２７９】
中間体４５（０．０００２モル）の混合物（０．５ｍｌのＴＦＡ及び１０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌し、溶媒を蒸発乾燥させた。残渣をジエチルエーテル／２−プロパノンから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．０５ｇ（６６％）の化合物３６、融点１３５℃を収穫した。
【０２８０】
【表４】
2008546737.tif 000076
【０２８１】
【表５】
2008546737.tif 000077
【０２８２】
【表６】
2008546737.tif 000078
【０２８３】
【表７】
2008546737.tif 000079
【０２８４】
一般的ＨＰＬＣ方法Ａ
ＨＰＬＣ勾配は、脱気装置、自動サンプル採取装置、カラムオーブン（４０℃に設定）及びＤＡＤ検出器を伴なう４基ポンプよりなる、Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ  ２７９０（Ｗａｔｅｒｓ）システムにより供給された。カラムからの流れはＭＳ検出器に分離された。ＭＳ検出器はエレクトロスプレイイオン化源を伴なって設定された。質量スペクトルは０．１秒の滞留時間を使用して１秒間に１００〜１０００を走査することにより獲得した。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、イオン化源温度は１４０℃に維持された。ネブライザーガスとして窒素を使用した。データ獲得はＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ
ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムにより実施した。
【０２８５】
一般的ＨＰＬＣ方法Ｂ
ＨＰＬＣ勾配は脱気装置、自動サンプル採取装置及びＤＡＤ検出器を伴なう４基ポンプよりなるＡｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ  ２７９５（Ｗａｔｅｒｓ）システムにより供給された。カラムからの流れはＭＳ検出器に分離された。ＭＳ検出器は電子スプレイイオン発生源を伴なって設定された。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、イオン化源温度は１００℃に維持された。ネブライザーガスとして窒素を使用した。データ獲得はＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムにより実施した。
【０２８６】
方法１
一般的方法Ａに加えて：１．６ｍｌ／分の流速でＸｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８（３．５ｍｍ、４．６×１００ｍｍ）上で逆相ＨＰＬＣを実施した。３移動相（移動相Ａ：９５％の２５ｍＭの酢酸アンモニウム＋５％アセトニトリル；移動相Ｂ：アセトニトリル；移動相Ｃ：メタノール）を使用して、６．５分間１００％Ａ〜５０％Ｂ及び５０％Ｃから、１分間１００％Ｂに、１分間１００％Ｂの勾配条件を実施し、そして１．５分間１００％Ａで再平衡化させた。１０μｌの注入容量を使用した。コーン電圧は正のイオン化モードに
対して１０Ｖであり、負のイオン化モードに対して２０Ｖであった。
【０２８７】
方法２
一般的方法Ａに加えて：１．２ｍｌ／分の流速でＸｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８（３．５ｍｍ、４．６×１００ｍｍ）上で逆相ＨＰＬＣを実施した。３移動相（移動相Ａ：９５％の２５ｍＭの酢酸アンモニウム＋５％アセトニトリル；移動相Ｂ：アセトニトリル；移動相Ｃ：メタノール）を使用して、１０分間１００％Ａ〜５０％Ｂ及び５０％Ｃから、１分間１００％Ｂに、３分間１００％Ｂの勾配条件を実施し、そして１．５分間１００％Ａで再平衡化させた。１０μｌの注入容量を使用した。
【０２８８】
方法３
一般的方法Ｂに加えて：１．０ｍｌ／分の流速でＸｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８（５μｍｍ、３．９×１５０ｍｍ）上で逆相ＨＰＬＣを実施した。２移動相（移動相Ａ：１００％の７ｍＭの酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル）を使用して、８５％Ａ、１５％Ｂ（３分間維持）〜５分間２０％Ａ，８０％Ｂ、６分間２０％Ａ及び８０％Ｂの勾配条件を実施し、そして３分間最初の条件で再平衡させた。２０μｌの注入容量を使用した。コーン電圧は正のイオン化モードに対して２０Ｖであった。質量スペクトルは０．０８秒のインタースキャン遅延を使用して０．８秒間に１００〜９００を走査することにより獲得した。
【０２８９】
方法４
一般的方法Ｂに加えて：イオン化が正及び負双方であることを除いて方法３と同様であった。コーン電圧は正及び負の双方のイオン化モードに対して２０Ｖであった。
【０２９０】
Ｃ．薬理学的実施例
ヒストン・デアセチラーゼの阻害のインビトロアッセイ（実施例Ｃ．１参照）は式（Ｉ）の化合物により得られるＨＤＡＣ酵素活性の阻害を測定する。
【０２９１】
式（Ｉ）の化合物の細胞活性は、細胞毒性又は生存率に対する比色法を使用して、Ａ２７８０腫瘍細胞について測定した（Ｍｏｓｍａｎｎ  Ｔｉｍ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３，１９８３）（実施例Ｃ．２参照）。
【０２９２】
化合物の溶解度は溶液中に滞留する化合物の能力を測定する。異なるｐＨにおける化合物の溶解度を化学発光窒素検出器の使用により測定することができる（実施例Ｃ．３参照）。
【０２９３】
ＤＮＡ損傷剤及びヒストン・デアセチラーゼインヒビターを包含する広範な抗腫瘍剤がｐ２１タンパク質を活性化することが示されている。ＤＮＡ損傷剤は腫瘍サプレッサーｐ５３によりｐ２１遺伝子を活性化し、他方ヒストン・デアセチラーゼインヒビターは転写因子Ｓｐ１によりｐ２１遺伝子を転写により活性化する。従って、ＤＮＡ損傷剤はｐ２１プロモーターをｐ５３反応性要素により活性化し、他方、ヒストン・デアセチラーゼインヒビターはｓｐ１部位（ＴＡＴＡボックスに対して−６０ｂｐ〜＋４０ｂｐ領域に位置する）によりｐ２１プロモーターを活性化し、両者がｐ２１タンパク質の増加した発現をもたらす。細胞中のｐ２１プロモーターがｐ５３反応性要素を含まないｐ２１の１３００ｂｐプロモーターフラグメントよりなる時は、それに従ってＤＮＡ損傷剤に非反応性である。化合物のｐ２１を誘発する能力は幾つかの方法で評価することができる。第１の方法は腫瘍細胞を問題の化合物で処理し、細胞溶解後に、ｐ２１酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＯｎｃｏｇｅｎｅのＷＡＦ１  ＥＬＩＳＡ）によりｐ２１誘動を検出する。ｐ２１アッセイはマウスのモノクローナル及びウサギのポリクローナル抗体両者を使用する「サ
ンドイッチ」酵素免疫アッセイである。ヒトｐ２１タンパク質に特異的なウサギのポリクローナル抗体はキット中に提供されるプラスチック壁の表面上に固定されている。アッセイされるサンプル中に存在するいずれのｐ２１も、捕捉抗体に結合するであろう。ビオチニル化検出モノクローナル抗体はまたヒトｐ２１タンパク質を認識し、捕捉抗体により保持されていたいずれのｐ２１にも結合するであろう。検出抗体は順次、ホースラディッシュペルオキシダーゼ−共役ストレプトアビジンにより結合される。ホースラディッシュペルオキシダーゼはその強度がプレートに結合されたｐ２１タンパク質の量に比例する、無色の溶液から青色溶液（又は停止試薬の添加後は黄色）への発色基剤のテトラーメチルベンジジンの転化を触媒する。発色反応生成物を分光光度計を使用して定量する。定量はｐ２１（凍結乾燥して提供される）の既知の濃度を使用する標準曲線の構成により達成される。このアッセイはＤＮＡ損傷の結果として又はヒストン・デアセチラーゼ阻害の結果としてのｐ２１誘発量を測定する（実施例Ｃ．４．ａ．を参照）。
【０２９４】
もう１つの方法は細胞レベルのＨＤＡＣ阻害の結果としてｐ２１を誘発する化合物の能力を試験する。細胞はｐ５３反応性要素を含有しないｐ２１の１３００ｂｐプロモーターフラグメントを含有する発現ベクトルで安定にトランスフェクションすることができ、そこで対照レベルに比較してリポーター遺伝子発現の増加が化合物をｐ２１誘発能をもつものと識別する。リポーター遺伝子は蛍光タンパク質であり、リポーター遺伝子の発現は発光される蛍光の量として測定される（実施例Ｃ．４．ｂ．参照）。
【０２９５】
特異的ＨＤＡＣインヒビターは豊富なＣＹＰ  Ｐ４５０タンパク質のような他の酵素を阻害するべきではない。ＣＹＰ  Ｐ４５０（大腸菌発現）タンパク質３Ａ４、２Ｄ６及び２Ｃ９はそれらの特異的基質を蛍光分子に転化させる。ＣＹＰ３Ａ４タンパク質は７−ベンジルオキシ−トリフルオロメチルクマリン（ＢＦＣ）を７−ヒドロキシ−トリフルオロメチルクマリンに転化させる。ＣＹＰ２Ｄ６タンパク質は３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｎ−メチルアミノ）エチル］−７−メトキシ−４−メチルクマリン（ＡＭＭＣ）を３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−７−ヒドロキシ−４−メチルクマリン塩酸に転化し、そしてＣＹＰ２Ｃ９タンパク質は７−メトキシ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＭＦＣ）を７−ヒドロキシ−トリフルオロメチルクマリンに転化させる。酵素反応を阻害する化合物は蛍光信号の減少をもたらすであろう（実施例Ｃ．５参照）。
【０２９６】
実施例Ｃ．１．
ヒストン・デアセチラーゼの阻害のインビトロアッセイ
ＨＤＡＣ蛍光活性アッセイ／Ｂｉｏｍｏｌの薬剤発見キット（カタログ番号：ＡＫ−５００−０００１）を使用した。ＨＤＡＣ蛍光活性アッセイはＦｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ（Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅＡｃｅｔｙｌａｓｅ  Ｌｙｓｙｌ（蛍光発生ヒストン・デアセチラーゼリシル））基質及び発色剤の組み合わせ物に基づく。Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ基剤はアセチル化リシン側鎖を含んでなる。その基質の脱アセチル化は、第２工程において、Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ発色剤による処理が発蛍光団を生成するように基剤を感受性にさせる。ＨｅＬａ核抽出物（供給会社：Ｂｉｏｍｏｌ）を７５μＭの基質とともに６０μｇ／ｍｌにおいてインキュベートした。Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ基質を２５ｍＭのトリス、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ及び１ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ（ｐＨ７．４）を含有するバッファー中に添加した。３０分後、１容量の発色剤を添加した。発蛍光団を３５５ｎｍ光線で励起し、発光（４５０ｎｍ）を蛍光プレート読み取り装置上で検出した。各実験につき、対照（ＨｅＬａ核抽出物及びバッファーを含有）、ブランクインキュベート（バッファーを含有するが、ＨｅＬａ核抽出物を含まない）及びサンプル（ＤＭＳＯに溶解され、更にバッファー及びＨｅＬａ核抽出物中に希釈された化合物を含有）を平行して実施した。第１に、化合物を１０−５Ｍの濃度で試験した。化合物が１０−５Ｍで活性を示した時に、そこで化合物が１０−５Ｍと１０−９Ｍの間の濃度で試験される濃度−反応曲線を作成した。すべてのサンプルを４回試験
した。各試験において、ブランク値を対照及びサンプル値の両方から差し引いた。対照サンプルは１００％の基質の脱アセチル化を表した。各サンプルに対する蛍光は対照の平均値の百分率として表した。適当なＩＣ５０−値（代謝物量を対照の５０％に減少させるために要する薬剤濃度）を漸増データに対するｐｒｏｂｉｔ分析を使用して計算した。ここで試験化合物の効果はｐＩＣ５０（ＩＣ５０−値のマイナス対数値）として表される（表Ｆ−３参照）。
【０２９７】
実施例Ｃ．２．
Ａ２７８０細胞に対する抗増殖作用の測定
試験されるすべての化合物をＤＭＳＯに溶解し、更に培養培地中に希釈した。細胞増殖アッセイにおける最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％（ｖ／ｖ）を決して超えなかった。対照は化合物を含まずにＡ２７８０細胞及びＤＭＳＯを含有し、そしてブランクはＤＭＳＯを含有したが、細胞を含まなかった。ＭＴＴをＰＢＳ中５ｍｇ／ｍｌに溶解した。ＮａＯＨ（１Ｎ）でｐＨ１０．５にバッファーされた、０．１Ｍのグリシン及び０．１ＭのＮａＣｌよりなるグリシンバッファーを製造した（すべての試薬はＭｅｒｃｋから購入した）。ヒトＡ２７８０卵巣ガン細胞（Ｔ．Ｃ．Ｈａｍｉｌｔｏｎ博士［Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ］からの提供品）を、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシン及び１０％のウシ胎仔血清を添加されたＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した。細胞を３７℃の湿潤化５％ＣＯ２雰囲気内で単層培養物として定常的に維持した。細胞は１：４０の分離比率のトリプシン／ＥＤＴＡ溶液を使用して、毎週１回通過させた（ｐａｓｓａｇｅｄ）。すべての培地及び補助物はＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した。細胞はＧｅｎ−Ｐｒｏｂｅ  マイコプラズマ組織培養キット（供給会社：ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）を使用して決定されるようにマイコプラズマ汚染はなかった。細胞をＮＵＮＣＴＭ９６−ウェル培養プレート（供給会社：Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に播種し、１晩プラスチックに付着させた。プレート付着に使用された密度は，２００μｌの培地総量でウェル当たり１５００の細胞であった。プレートに細胞付着後に、培地を変え、薬剤及び／又は溶媒を２００μｌの最終容量まで添加した。４日間のインキュベート後、培地を２００μｌの新鮮な培地と交換し、細胞密度及び生存性をＭＴＴ−基剤のアッセイを使用して測定した。各ウェルに対し、２５μｌのＭＴＴ溶液を添加し、細胞を更に３７℃で２時間インキュベートした。次いで培地を注意して吸引し、青色のＭＴＴ−フォルマザン生成物を、２５μｌのグリシンバッファー、次いで１００μｌのＤＭＳＯの添加により可溶化させた。微量試験プレートを微量プレートシェーカー上で１０分間震盪し、５４０ｎｍにおける吸収をＥｍａｘ  ９６−ウェル分光比色計（供給会社：Ｓｏｐａｃｈｅｍ）を使用して測定した。１回の実験中、各実験条件に対する結果は３回の重複ウェルの平均である。最初のスクリーニングの目的のためには、化合物を１０−６Ｍの単一の固定濃度で試験した。有効化合物に対しては実験を反復して、完全な濃度−反応曲線を確立した。各実験に対し、対照（薬剤を含まない）及びブランクインキュベート（細胞も薬剤も含まない）を平行して実施した。ブランク値をすべての対照及びサンプル値から差し引いた。各サンプルに対し、細胞増殖に対する平均値（吸収単位における）は対照の細胞増殖の平均値の百分率として表された。適当な場合には、ＩＣ５０−値（対照の５０％まで細胞増殖を減少させるために要する薬剤の濃度）を漸増データに対するｐｒｏｂｉｔ分析を使用して計算した（Ｆｉｎｎｅｙ，Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｂｉｔ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，Ｇｒａｄｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎ���ｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  １９６２）。ここで試験化合物の効果はｐＩＣ５０（ＩＣ５０−値のマイナス対数値）として表される（表Ｆ−３参照）。
【０２９８】
実施例Ｃ．３．
溶解度／安定性
異なるｐＨにおける化合物の溶解度を化学発光窒素検出計の使用により測定することが
できる。
【０２９９】
実施例Ｃ．４．
ｐ２１誘発能
実施例Ｃ．４．ａ
ｐ２１酵素結合イムノソルベントアッセイ
ヒトＡ２７８０卵巣ガン細胞中のｐ２１タンパク質発現レベルを測定するために以下のプロトコールを適用した。Ａ２７８０細胞（２００００細胞／１８０μｌ）を、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン及び１０％のウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ  １６４０培地中で、９６微量ウェルプレートに播種した。細胞の溶解の２４時間前に、化合物を１０−５、１０−６、１０−７及び１０−８Ｍの最終濃度で添加した。試験したすべての化合物をＤＭＳＯに溶解し、培養培地中に更に希釈した。化合物の添加の２４時間後に、上澄み液を細胞から除去した。細胞を２００μｌの氷冷ＰＢＳで洗浄した。ウェルを吸引し、３０μｌの溶解バッファー（５０ｍＭのＴｒｉｓ．ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＮｏｎｉｄｅｔ  ｐ４０及び１０％のグリセロール）を添加した。プレートを−７０℃で１晩インキュベートした。
【０３００】
適当数の微量滴定ウェルをフォイルのポーチから取り出して、空のウェルホールダー中に入れた。洗浄バッファー（２０×プレート洗浄濃度：１００ｍｌのＰＢＳの２０倍濃厚溶液及び界面活性剤、２％のクロロアセトアミドを含有する）の作業溶液（１×）を製造した。凍結乾燥ｐ２１ＷＡＦ標準物を蒸留Ｈ２Ｏで再構成し、更に、サンプル希釈剤（キット中に提供されている）で希釈した。
【０３０１】
サンプル希釈剤中にそれらを１：４に希釈することにより、サンプルを製造した。サンプル（１００μｌ）及びｐ２１ＷＡＦ１標準物（１００μｌ）を適当なウェルにピペット添加し、室温で２時間インキュベートした。ウェルを１×洗浄バッファーで３回洗浄し、次いで１００μｌの検出用抗体試薬（ビオチニル化モノクローナルｐ２１ＷＡＦ１抗体の溶液）を各ウェルに滴下した。ウェルを室温で１時間インキュベートし、次いで１×洗浄バッファーで３回洗浄した。４００×共役物（ペルオキシダーゼストレプトアビジン共役物：４００倍濃厚溶液）を希釈し、１００μｌの１×溶液をウェルに添加した。ウェルを室温で３０分間インキュベートし、次いで１×洗浄バッファーで３回、そして蒸留Ｈ２Ｏで１回洗浄した。基質溶液（発光性基質）（１００μｌ）をウェルに添加し、ウェルを室温の暗所で３０分間インキュベートした。前記の添加基質溶液と同様な順序で停止溶液を各ウェルに添加した。４５０／５９５ｎｍの二重波長における分光比色プレート読み取り装置を使用して各ウェル中の吸収を測定した。各実験に対し、対照（薬剤を含まない）及びブランク培養（細胞も薬剤も含まない）を平行した実施した。ブランク値をすべての対照及びサンプル値から差し引いた。各サンプルに対し、ｐ２１ＷＡＦ１誘発の値（吸収単位における）を対照中に存在するｐ２１ＷＡＦ１の値の百分率として表した。１３０％を超える誘発百分率が有意な誘発と定義された。１１種の化合物が試験され、有意な誘発を示した。
【０３０２】
実施例Ｃ．４．ｂ．
細胞法
Ａ２７８０細胞（ＡＴＣＣ）を１０％ＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン及びゲンタマイシンを添加されたＲＰＭＩ  １６４０培地中で、３７℃の５％ＣＯ２を含む湿潤化インキュベーター内で培養した。すべての細胞培養液はＧｉｂｃｏ−ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）により提供される。他の材料はＮｕｎｃにより提供される。
【０３０３】
ゲノムＤＮＡを、増殖しているＡ２７８０細胞から抽出し、ｐ２１プロモーターのネスト化されたＰＣＲ単離物のテンプレートとして使用した。第１の増殖を、テンプレートと
してゲノムＤＮＡを含むオリゴヌクレオチド対ＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＴＧＣＴＴＧＧ及びＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＡＣＣを使用して５５℃のアニーリング温度で２０周期につき実施した。ＴＡＴＡボックスに対して−４５５１〜＋８８フラグメントを含有する生成された４．５ｋｂフラグメントを、８８℃のアニーリングにより２０周期間、オリゴヌクレオチドＴＣＧＧＧＴＡＣＣＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＴＧＣＴＴＧＧ及びＡＴＡＣＴＣＧＡＧＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＡＣＣで再増殖させて４．５ｋｂフラグメントを生成し、次いで８８℃のアニーリングにより２０周期間に、オリゴヌクレオチド対ＴＣＧＧＧＴＡＣＣＧＧＴＡＧＡＴＧＧＧＡＧＣＧＧＡＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣ及びＡＴＡＣＴＣＧＡＧＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＡＣＣにより、ＴＡＴＡボックスに対して−１３００〜＋８８フラグメントを含有する１．３ｋｂフラグメントをもたらした。オリゴヌクレオチド中に存在する制限部位ＸｈｏＩ及びＫｐｎＩ（下線配列）をサブクローン作成に使用した。
【０３０４】
ルシフェラーゼリポーターをＫｐｎＩ及びＸｂａＩ制限部位においてｐＧＬ３−塩基から除去し、ＺｓＧｒｅｅｎリポーター（ｐＺｓＧｒｅｅｎ１−Ｎ１プラスミドから）により置き換えた。ＸｈｏＩ及びＫｐｎＩ部位のｐＧＬ３−塩基−ＺｓＧｒｅｅｎ中へのヒトｐ２１プロモーター領域の前記の１．３ｋｂフラグメントの挿入により、ｐＧＬ３−塩基−ＺｓＧｒｅｅｎ−１３００を構成した。すべての制限酵素はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｈｅｉｍ（ドイツ）により提供されている。Ａ２７８０細胞を２×１０５細胞の密度で６−ウェルのプレートに添加し、２４時間インキュベートし、製造業者により説明されるようにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，ベルギー）を使用することにより、２μｇのｐＧＬ３−塩基−ＺｓＧｒｅｅｎ−１３００及び０．２μｇのｐＳＶ２ｎｅｏベクトルによりトランスフェクションさせた。トランスフェクション細胞をＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）とともに１０日間選択し、単一の細胞懸濁物を増殖させた。３週間後、単一のクローンを得た。
【０３０５】
Ａ２７８０の選択されたクローンを増量させ（ｅｘｐａｎｄｅｄ）、９６−ウェルのプレート中にウェル当たり１００００細胞で播種した。播種の２４時間後に、細胞を化合物（近位のｐ２１プロモーター領域中のｓｐ１部位に影響する）とともに更に２４時間処理した。次いで、細胞を３０’、４％のＰＦＡで固定し、Ｈｏｅｃｈｓｔの染料で対比染色した。ＺｓＧｒｅｅｎ生産及び従って蛍光をもたらすｐ２１プロモーターの活性化をＡｓｃｅｎｔ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，ベルギー）によりモニターした。
【０３０６】
各実験につき、対照（薬剤を含まない）及びブランクインキュベート（細胞も薬剤も含まない）を平行して実施した。ブランク値をすべての対照及びサンプル値から差し引いた。各サンプルにつき、ｐ２１誘発の値は、対照中に存在するｐ２１の値の百分率として表した。１３０％を超える誘動百分率を有意な誘発と定義した。
【０３０７】
１１種の化合物が試験され、有意な誘発を示した。
【０３０８】
実施例Ｃ．５．
Ｐ４５０阻害能
試験されたすべての化合物をＤＭＳＯ（５ｍＭ）に溶解し、アセトニトリル中に５  １０−４Ｍに更に希釈した。アッセイバッファー（０．１ＭのＮａＫリン酸バッファー、ｐＨ７．４）中に更に希釈し、最終溶媒濃度は２％を決して超えなかった。
【０３０９】
ＣＹＰ３Ａ４タンパク質のアッセイは、１００μｌの総アッセイ容量において、ウェル当たり１５ｐモルのＰ４５０／ｍｇタンパク質（０．０１ＭのＮａＫリン酸バッファー＋
１．１５％のＫＣｌ中）、ＮＡＤＰＨ生成系（アッセイバッファー中、３．３ｍＭのグルコース−６−リン酸、０．４Ｕ／ｍｌのグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、１．３ｍＭのＮＡＤＰ及び３．３ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ）及び化合物を含んでなる。３７℃で５分間の前インキュベート後に、アッセイバッファー中に１５０μＭの蛍光プローブ基剤ＢＦＣの添加により酵素反応を開始した。室温で３０分間のインキュベート後に、２容量のアセトニトリルの添加後に反応は終結した。４０５ｎｍの励起波長及び５３５ｎｍの発光波長で蛍光の測定を実施した。本実験の対照化合物としてケトコナゾール（ＩＣ５０−値＝３×１０−８Ｍ）を包含した。
【０３１０】
ＣＹＰ２Ｄ６タンパク質のアッセイは、１００μｌの総アッセイ容量において、ウェル当たり、６ｐモルのＰ４５０／ｍｇタンパク質（０．０１ＭのＮａＫリン酸バッファー＋１．１５％のＫＣｌ中）、ＮＡＤＰＨ生成系（アッセイバッファー中、０．４１ｍＭのグルコース−６−リン酸、０．４Ｕ／ｍｌのグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、０．００８２ｍＭのＮＡＤＰ及び０．４１ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ）及び化合物を含んでなる。３７℃で５分間の前インキュベート後に、アッセイバッファー中に３μＭの蛍光プローブ基剤ＡＭＭＣの添加により酵素反応を開始した。室温で４５分間のインキュベート後に、２容量のアセトニトリルの添加後に反応を終結した。４０５ｎｍの励起波長及び４６０ｎｍの発光波長で蛍光の測定を実施した。本実験の対照化合物としてキニジン（ＩＣ５０−値＜５×１０−８Ｍ）を包含した。
【０３１１】
ＣＹＰ２Ｃ９タンパク質のアッセイは、１００μｌの総アッセイ容量において、ウェル当たり、１５ｐモルのＰ４５０／ｍｇタンパク質（０．０１ＭのＮａＫリン酸バッファー＋１．１５％のＫＣｌ中）、ＮＡＤＰＨ生成系（アッセイバッファー中、３．３ｍＭのグルコース−６−リン酸、０．４Ｕ／ｍｌのグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、１．３ｍＭのＮＡＤＰ及び３．３ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ）及び化合物を含んでなる。３７℃で５分間の前インキュベート後に、アッセイバッファー中に２００μＭの蛍光プローブ基剤ＭＦＣの添加により酵素反応を開始した。室温で３０分間のインキュベート後に、２容量のアセトニトリルの添加後に反応は終結した。４０５ｎｍの励起波長及び５３５ｎｍの発光波長で蛍光の測定を実施した。本実験の対照化合物としてスルファフェナゾール（ＩＣ５０−値＝６．８×１０−７Ｍ）を包含した。
【０３１２】
最初のスクリーニングの目的のためには、化合物は１×１０−５Ｍの単一の固定濃度で試験された。有効な化合物に対しては、全体の濃度−反応曲線を確立するために実験を反復した。各実験につき、対照（薬剤を含まない）及びブランクインキュベート（酵素も薬剤も含まない）を平行して実施した。すべての化合物を４重実験で測定した。ブランク値をすべての対照及びサンプル値から引いた。各サンプルにつき、サンプルのＰ４５０活性の平均値（相対的蛍光単位で）を対照のＰ４５０活性の平均値の百分率として表した。抑制百分率は１００％引く、サンプルのＰ４５０活性の平均値として表した。適当な場合には、ＩＣ５０−値（対照の５０％までＰ４５０活性を減少させるために要する薬剤の濃度）を計算した。
【０３１３】
【表８】
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【０３１４】
Ｄ．組成物実施例：フィルムコート錠
錠剤コアの製造
１００ｇの式（Ｉ）の化合物、５７０ｇのラクトース及び２００のデンプンの混合物を十分混合し、その後、５ｇのナトリウムドデシルスルフェート及び１０ｇのポリビニル−ピロリドンの溶液（約２００ｍｌの水中）で湿潤化する。湿った粉末混合物をふるい、乾燥し、再度ふるう。次いで１００ｇの微細結晶セルロース及び１５ｇの水素化植物油を添加する。全体を十分に混合し、打錠すると、各１０ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含んでなる１０．０００錠を与える。
【０３１５】
コーティング
１０ｇのメチルセルロースの溶液（７５ｍｌの変性エタノール中）に５ｇのエチルセルロースの溶液（１５０ｍｌのジクロロメタン中）を添加する。次いで７５ｍｌのジクロロメタン及び２．５ｍｌの１，２，３−プロパントリオールを添加する。１０ｇのポリエチレングリコールを融解し、７５ｍｌのジクロロメタン中に溶解する。後者の溶液を前者に添加し、２．５ｇのマグネシウムオクタデカノエート、５ｇのポリビニルピロリドン及び３０ｍｌの濃厚色素懸濁液を添加し、全体を均一化する。コーティング装置内で、錠剤のコアをこのように得た混合物でコートする。
【国際調査報告】
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