(57)【要約】  肥満または肥満関連障害を治療する方法が開示される。これらの方法は、後脳に指向される抗肥満剤と組み合わせた前脳に指向される抗肥満剤の使用を含む。
2008518963.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効量の少なくとも２つの異なる抗肥満剤を末梢投与することを含む対象における肥満の治療方法であって、少なくとも１つの抗肥満剤が、食物摂取または体重変調に関与する前脳における構造に作用し、かつ少なくとも１つの抗肥満剤が食物摂取または体重変調に関与する後脳における構造に作用し；
１つの抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストである場合、他の抗肥満剤が、アミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログ、CCK、CCKアナログまたはCCKアゴニストではなく；および
１つの抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、他の抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではないことを特徴とする該方法。
【請求項２】
少なくとも１つの抗肥満剤が、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、GLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニスト、ヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメート、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
少なくとも１つの抗肥満剤が、フェンテルミン、リモナバン、シブトラミンまたはプラムリンチドである請求項２記載の方法。
【請求項４】
治療上有効量の少なくとも２つの抗肥満剤を末梢投与することを含む対象における肥満の治療方法であって、
第１の抗肥満剤は、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、GLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニスト、ヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメートよりなる群から選択され、
第２の抗肥満剤は、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択され、
第１の抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストでない場合、および第１の抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、第２の抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではないことを特徴とする該方法。
【請求項５】
対象が体重を最小でも１０％低下させることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１記載の方法。
【請求項６】
対象が体脂肪量を低下させることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１記載の方法。
【請求項７】
少なくとも２つの異なる抗肥満剤を対象に末梢投与することを含む、それを必要とする対象における栄養素利用可能性を低下させる方法であって、
少なくとも１つの抗肥満剤は、食物摂取または体重変調に関与する前脳における構造に作用し、少なくとも１つの抗肥満剤は、食物摂取または体重変調に関与する後脳における構造に作用し、
１つの抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストである場合、もう一つの抗肥満剤は、アミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログ、CCK、CCKアナログまたはCCKアゴニストではなく；
１つの抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、もう一つの抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではなく、
抗肥満剤は、対象における栄養素利用可能性を低下するのに有効な量にて投与されることを特徴とする該方法。
【請求項８】
少なくとも１つの抗肥満剤が、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、GLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニストヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメート、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択されることを特徴とする請求項７記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの抗肥満剤が、フェンテルミン、リモナバン、シブトラミンまたはプラムリンチドであることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１０】
１つの抗肥満剤が、アミリン、アミリンアナログまたはアミリンアゴニストであって、もう一つの抗肥満剤が、レプチン、レプチン誘導体またはレプチンアゴニストであることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１１】
治療上有効量の少なくとも２つの抗肥満剤を末梢投与することを含む対象における栄養素利用可能性を低下させる方法であって、
第１の抗肥満剤は、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、GLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニスト、ヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメートよりなる群から選択され、
第２の抗肥満剤は、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択され、
第１の抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストでない場合、および第１の抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、第２の抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではなく、
抗肥満剤は、該対象における栄養素利用可能性を低下させるのに有効な量にて投与されることを特徴とする該方法。
【請求項１２】
栄養素利用可能性の低下が、体重損失によって、脂肪量の損失、または異所性の脂肪の損失によって対象において示されることを特徴とする請求項７〜１１のいずれか１記載の方法。
【請求項１３】
対象が、肥満、肥満関連障害、肥満関連疾患、肥満関連状態、糖尿病、インスリン抵抗症候群、リポジストロフィー（lypodystrpohy）、非アルコール性脂肪肝炎（steatohepatitis）、心疾患、多嚢胞性卵巣症候群および代謝症候群よりなる群から選択される少なくとも１つの疾患を有する請求項７〜１２のいずれか１記載の方法。
【請求項１４】
治療上有効量の少なくとも２つの異なる抗肥満剤を末梢投与することを含む対象における体重を低下させる方法であって、
少なくとも１つの抗肥満剤は、食物摂取または体重変調に関与する前脳における構造に作用し、少なくとも１つの抗肥満剤は、食物摂取または体重変調に関与する後脳における構造に作用し、
１つの抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストである場合、もう一つの抗肥満剤は、アミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログ、CCK、CCKアナログまたはCCKアゴニストではなく；
１つの抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、もう一つの抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではなく、
抗肥満剤は、対象の体重を少なくとも１０％低下させるのに有効な量にて投与されれることを特徴とする該方法。
【請求項１５】
少なくとも１つの抗肥満剤が、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、GLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニスト、ヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメート、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択されることを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つの抗肥満剤が、フェンテルミン、リモナバン、シブトラミンまたはプラムリンチドであることを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
１つの抗肥満剤が、アミリン、アミリンアナログまたはアミリンアゴニストであり
、もう一つの抗肥満剤がレプチン、レプチン誘導体またはレプチンアゴニストであることを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
治療上有効量の少なくとも２つの抗肥満剤を末梢投与することを含む対象における体重を低下させる方法であって、
第１の抗肥満剤は、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、GLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニスト、ヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメートよりなる群から選択され、
第２の抗肥満剤は、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択され、
第１の抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストでない場合、および第１の抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、第２の抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではなく、
抗肥満剤は、対象の体重を少なくとも１０％低下させるのに有効な量にて投与されれることを特徴とする該方法。
【請求項１９】
対象の体重を少なくとも１０％低下させるのに有効な量にて、レプチン、レプチン誘導体またはレプチンアゴニストの少なくとも１つ、およびアミリン、アミリンアゴニストまたはアミリンアナログの少なくとも１つを投与することを特徴とする対象における体重を低下させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療分野、特に、健康、食事および栄養の分野に関する。本発明は抗肥満剤の使用に関する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本願は、2004年11月1日に出願した米国仮特許出願第60/624,357号の優先権を主張し、それらの全内容をすべての目的のために本願明細書に組み込む。
【背景技術】
【０００３】
肥満およびその関連疾患は、米国内および世界中で共通し、非常に重大な公衆衛生問題である。上半身肥満は、２型糖尿病で知られている最も高い危険因子で、心疾患につき高い危険因子である。肥満は、高血圧症、アテローム性動脈硬化、うっ血性心不全、卒中、胆嚢疾患、骨関節炎、睡眠無呼吸、多嚢胞性卵巣症候群のごとき生殖障害、乳癌、前立腺および結腸の癌、ならびに全身麻酔の合併症の発生率の増加についての認識された危険因子である(例えば、Kopelman、Nature 404:635-43(2000)参照)。
【０００４】
肥満は寿命を低下させ、前記にリストされた共罹患（co-morbidity）、さらに感染、静脈瘤、黒色表皮症、湿疹、運動不耐性、インシュリン抵抗性、高血圧高コレステロール血症、胆石症、整形外科的損傷および血栓塞栓性疾患のごとき疾患の重大なリスクを運ぶ(Rissanenら, Br. Med. J. 301: 835-7 (1990))。また、肥満は、インスリン抵抗症候群、または「Ｘ症候群」および代謝症候群と呼ばれる疾患の群についての危険因子である。肥満および関連障害の世界的な医療費は膨大である。
【０００５】
肥満の病因は多因子性であると考えられる。問題は、肥満対象において、過剰脂肪組織が存在するまで、栄養素利用可能性およびエネルギー消費がバランスの状態にならないことである。中枢神経系(CNS)はエネルギーバランスを制御し、動物の代謝状態に適当な様々な行動、自律神経および内分泌腺の活動を調整する。これらの活動を制御する機構または系は、前脳(例えば、視床下部)、後脳(例えば、脳幹)および脊髄を横切って広く分布する。結局、これらの系からの代謝(すなわち、燃料利用可能性（fuel availability）および認知(すなわち、学習的優先)情報は統合され、食欲(食物追求)および完了(食物摂取)行動に携わる決定は、作動(食事獲得および開始)または停止(食事終了)される。視床下部は、これらのシグナルを統合し、次いで脳幹へ指令を発することに主に責任を担うと考えられる。完了（consummatory）運動制御系の要素（例えば、咀嚼およびえん下を担う筋肉）を制御する脳幹核。従って、これらのCNS核は、食物摂取行動につき「最終的共通路」を構成すると文字通りに言われてきた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
神経解剖学的および薬理学的な証拠は、エネルギーおよび栄養性のホメオスタシスのシグナルが前脳核において統合され、完了運動制御系は脳幹核、恐らくは三叉神経運動核を囲む領域に存在することを支持する。視床下部および脳幹間の広範囲な相互の連絡が存在する。様々なCNS指令の抗肥満治療(例えば、小さな分子およびペプチド)は、視床下部に存在する前脳基質および／または脳幹に存在する後脳基質に主に焦点を合わせる。
【０００７】
肥満は、貧弱に治療可能で、慢性的で、本質的に難治性の代謝障害のままである。従って、対象における減量および／または体重の維持に有用な新しい療法につき必要性は存在する。かかる療法は、対象の健康上の重大な有益な効果に導くであろう。
【０００８】
本明細書に引用された特許、特許出願および刊行物のすべてをここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、肥満および肥満に関連した状態、障害および疾患の制御、治療および予防に有用な方法および組成物を提供する。本発明の方法は、肥満および肥満に関連した状態、障害および疾患の制御、治療および予防するのに有効な量での対象への少なくとも２つの抗肥満剤の投与を含む。
【００１０】
１つの態様において、本発明は、対象における栄養素利用可能性を低下させる方法を提供する。もう一つの態様において、本発明は、対象の体重を低下させる方法を提供する。１つの態様において、本発明は、化合物群中の相乗的な抗肥満効果を誘導する方法を提供する。
【００１１】
１つの態様において、本発明は、治療上有効量の少なくとも２つの異なる抗肥満剤を末梢投与することを含み、少なくとも１つの抗肥満剤は食物摂取または体重変調に関与する前脳における構造に作用し、少なくとも１つの抗肥満剤は食物摂取または体重変調に関与する後脳における構造に作用し、１つの抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストである場合、もう一つの抗肥満剤は、アミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログ、CCK、CCKアナログまたはCCKアゴニストではなく、１つの抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、もう一つの抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではないことを特徴とする対象における肥満を治療する方法を提供する。
【００１２】
ある具体例において、本発明の方法は、少なくとも２つの異なる抗肥満剤の対象への投与を含み、抗肥満剤の少なくとも１つは、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト、GLP-1、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニスト、ヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメート、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択される。１つの具体例において、投与される抗肥満剤はフェンテルミン、リモナバン、シブトラミンまたはプラムリンチドである。
【００１３】
１つの具体例において、本発明は、治療上有効量の少なくとも２つの抗肥満剤を末梢投与することを含み、第１の抗肥満剤はNPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、NPY2受容体アゴニスト、NPY4受容体アゴニスト、レプチン、レプチン誘導体、レプチンアゴニスト、CNTF、CNTFアゴニスト/モジュレーター、CNTF誘導体、MCH1Rアンタゴニスト、MCH2Rアンタゴニスト、メラノコルチン4アゴニスト、MC4受容体アゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト/インバースアゴニスト、グレリンアンタゴニスト、5HT2cアゴニスト、セロトニン再取込み阻害物質、セロトニン輸送阻害物質、エキセンディン、エキセンディン誘導体、エキセンディンアゴニスト(GLP-1)、GLP-1アナログ、GLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ５アンタゴニスト、ヒスタミン3アンタゴニスト/インバースアゴニスト、トピラメートよりなる群から選択され、第２の抗肥満剤は、CCK、CCKアナログ、CCKアゴニスト、アミリン、アミリンアナログおよびアミリンアゴニストよりなる群から選択され、第１の抗肥満剤がPYY(3-36)、PYY(3-36)アナログまたはPYY(3-36)アゴニストでない場合、および第１の抗肥満剤がエキセンディン、エキセンディン誘導体またはエキセンディンアゴニストである場合、第２の抗肥満剤はアミリン、アミリンアゴニスト、アミリンアナログではないことを特徴とする対象における肥満を治療する方法を提供する。
【００１４】
１つの具体例において、本発明は、レプチン、レプチン誘導体またはレプチンアゴニストから選択された第２の抗肥満剤と組み合わせた、アミリン、アミリンアナログまたはアミリンアゴニストから選択された第１の抗肥満剤の投与を含み、その剤の投与の結果、単独での一方の剤の投与と比較して、相乗効果を生じることを特徴とする肥満を治療する方法を提供する。
【００１５】
ある具体例において、本発明は、対象が体重を最小にて１０％低下する、対象が体脂肪量を低下する、対象が異所性脂肪を損失する方法、またはそのいずれかの組合せを提供する。
【００１６】
いくつかの具体例において、この方法は、肥満、肥満関連障害、肥満関連疾患、肥満関連状態、糖尿病、インスリン抵抗症候群、リポジストロフィー、非アルコール性脂肪肝炎、心疾患、多嚢胞性卵巣症候群、代謝症候群または体重を損失する要望に苦しむ対象に指向される。
【００１７】
１つの態様において、組合せにおける抗肥満剤の投与は同時、併存的、連続的な投与であり得る。
【００１８】
また、本発明は、肥満および肥満関連の状態、障害および疾患の治療、ならびにこれらの疾患を治療するのに有用な薬物の製造用の本発明の抗肥満剤および組成物の使用に関する。
【００１９】
（図面の詳細な記載）
図１は、食物摂取に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【００２０】
図2は、体重に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【００２１】
図3は、体内成分に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【００２２】
図4は、体内成分に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【００２３】
図5は、エネルギー消費に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【００２４】
図6Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるレプチン(500μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。図6Bは、単独または組合せにおけるレプチン(500μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の２週間投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。図6Cは、単独または組合せにおけるレプチン(500mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の２週間投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【００２５】
図7は、２週間にわたる、レプチン単独(500μg/kg/日)、１対で与えたレプチン単独(500μg/kg/日)、ならびに組み合せたレプチン(500μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【００２６】
図8は、２週間、ビヒクルを受けたか、アミリン処置群に１対で与えた、またはアミリン(100μg/kg/日)を受けた正常HSDおよびDIO傾向性（prone）動物における血清中レプチン濃度を示すグラフを示す。
【００２７】
図9Aは、正常動物におけるビヒクルまたはレプチン(500μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。図9Bは、DIO傾向性動物におけるビヒクルまたはレプチン(500μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【００２８】
図10Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるシブトラミン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の投与の体重に対する効果を示すグラフである。図10Bは、単独または組合せにおけるシブトラミン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。図10Cは、単独または組合せにおけるシブトラミン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【００２９】
図11Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるフェンテルミン(10mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。図11Bは、単独または組合せにおけるフェンテルミン(10mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。図11Cは、単独または組合せにおけるフェンテルミン(10mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【００３０】
図12Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるリモナバン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の投与の体重に対する効果を示すグラフである。図12Bは、単独または組合せにおけるリモナバン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。図12Cは、単独または組合せにおけるリモナバン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【００３１】
図13は、体重に対する、単独またはアミリン(100μg/kg/日)との組合せにおけるある用量範囲のCB-1アンタゴニストの投与の効果を示すグラフである。円で囲まれた領域内の組合せの時間経過を図14AおよびBに示す。
【００３２】
図14Aは、体重に対する、単独または組合せにおけるCB-1アンタゴニスト(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の効果を示すグラフである。図14Bは、体重に対する、単独または組合せにおけるCB-1アンタゴニスト(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の効果を示すグラフである。
【００３３】
図15Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるエキセンディン-4アナログ(10μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の投与の体重に対する効果を示すグラフである。図15Bは、単独または組合せにおけるエキセンディン-4アナログ(10μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。図15Cは、単独または組合せにおけるエキセンディン-4(10μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【００３４】
図16Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるPYY(3-36)(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。図16Bは、単独または組合せにおけるPYY(3-36)(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。図16Cは、単独または組合せにおけるPYY(3-36)(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
本発明者らは、食物摂取および／または体重変調に関与する後脳における構造に作用する抗肥満剤と組み合わせた、食物摂取および／または体重変調に関与する前脳における構造に作用する抗肥満剤の投与が栄養素利用可能性を低下させるのに、および肥満、肥満関連の状態、障害および疾患を治療するのに驚くべきことに有効であることを見出した。かかる抗肥満剤の投与をこのように組み合わせる場合、抗肥満剤が、それらの剤のうちの１つ単独の使用より、受容者において栄養素利用可能性を低下させるのにより有効であることを見出した。本願明細書に示すように、例えば、抗肥満剤の組合せは、例えば、栄養素利用可能性を低下させる、例えば、体重を低下させる、脂肪を低下させる、食物摂取を低下させる、またはこれらの３種のいずれもが組み合されるように相乗的に作用できる。
【００３６】
前脳(脳の終脳および中脳由来の構成要素)および後脳または脳幹(中脳、脳橋および延髄を含む)の特定の領域が、エネルギーバランスの制御に関与すると同定された。食物摂取および／または体重変調に関与する視床下部に存在する前脳構造または核は、例えば、弓状核(ARC)、傍室核(PVN)、背内側視床下部(DMH)、腹内側核(VMH)および外側視床下部核(LHA)を含む。食物摂取および／または体重変調に関与する脳幹に存在する後脳構造または核は、例えば、孤束核(NST)、最後野(AP)および外側傍小脳脚核(lPBN)を含む。完了運動制御系の要素を制御する脳幹核は、NST、APおよびlPBNのような脳幹領域から一次または二次の投射により制御されるようである。AP、NSTおよびlPBNがすべてそれら自体の統合能力を(集合的および独立して)所有することが示されたことは注目されるべきである。
【００３７】
種々のCNS指向の抗肥満剤は、食物摂取および／または体重変調に関与する視床下部に存在する前脳構造に作用する。加えて、CNS指向の抗肥満剤は、食物摂取および／または体重変調に関与する脳幹に存在する後脳構造に作用する。かかる抗肥満剤の例は本願明細書に記載されている。例につき、表１参照。かかる剤は、例えば、ニューロペプチドY1(NPY1)受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、レプチンおよびレプチンアゴニスト、繊毛様神経栄養因子(CNTF)およびCNTFアゴニスト、メラニン凝集ホルモン(MHC)およびMCHアンタゴニスト、メラコルチン（melacortins）(MC)およびMCアゴニスト、カンナビノイド受容体(CB-1)アンタゴニスト、セロトニン(5-HT)および5-HTアゴニスト、ペプチドYY(PYY)およびPYYアゴニスト、エキセンディンおよびエキセンディンアゴニスト、GLP-1およびGLP-1アゴニスト、DPP-IV阻害物質、グレリンおよびグレリンアンタゴニスト、コレシストキニン(CCK)およびCCKアゴニスト、ならびにアミリンおよびアミリンアゴニストを含む、
【００３８】
【表１】
2008518963.tif 000003
【００３９】
ある具体例において、方法は、ARC、PVN、VMおよびLHのごとき視床下部のエネルギーバランスセンターを主に標的とする第１の化合物を含む。ある具体例において、方法は、NST、APおよびlPBNのごとき後脳のエネルギーバランスセンターを主に標的とする第２の化合物を含む。
【００４０】
ある具体例において、これらの化合物は抗肥満剤である。ある具体例において、方法は、１以上の主に前脳作用の抗肥満剤の使用を含み得る。他の具体例において、方法は、１以上の主に後脳作用の抗肥満剤の使用を含み得る。典型的な抗肥満剤は、NPY1受容体アンタゴニスト、NPY5受容体アンタゴニスト、レプチンまたはレプチンアゴニストもしくはアナログ、CNTF(例えば、AXOKINER)、MCHアンタゴニスト、MC4アゴニスト、CB-1アンタゴニスト(例えば、リモナバン)、5-HT2Cアゴニスト、NPY2受容体アゴニスト(例えば、PYY(3-36)またはPYY(3-36)アゴニスト)、エキセンディンまたはエキセンディンアゴニストもしくはアナログ、GLP-1またはGLP-1アゴニストもしくはアナログ、DPP-IV阻害物質、グレリンアンタゴニスト、CCKまたはCCKアゴニストもしくはアナログ、およびアミリンまたはアミリンアゴニストもしくはアナログを含む。
【００４１】
本願明細書に例示されるように、本発明における抗肥満剤であるアゴニストおよびアンタゴニストは、例えば、ペプチド、ポリペプチドおよび低分子の剤のごとき分子を含む。
【００４２】
本発明の１以上の具体例の詳細は、添付図面および後記の記載に言及される。本発明の他の特徴、目的および利点は、その記載および図面、および特許請求の範囲から明らかにであろう。
【００４３】
定義
「抗肥満剤」は、投与に際して身体への栄養素利用可能性を低下できる化合物である。「体重誘導剤」は、身体への栄養素利用可能性を増加させる化合物である。１つの態様において、体重誘導剤は抗肥満剤のアンタゴニストである。
【００４４】
本願明細書に用いた「食物摂取および／または体重変調に関与する前脳構造に作用する」抗肥満剤は、前脳における特定の領域、例えば、特定の核および／または神経回路の活性を刺激または抑制する。この前脳の刺激または抑制は、身体への栄養素利用可能性の低下に導く。「食物摂取および／または体重変調に関与する後脳構造に作用する」抗肥満剤は、後脳における特定の領域、例えば、特定の核および／または神経回路の活性を刺激または抑制する。この後脳の刺激または抑制の結果、身体への栄養素利用可能性が低下する。
【００４５】
「栄養素利用可能性の低下」は、身体が脂肪として蓄積する身体に利用可能な栄養素を低下させるいずれの手段も含むことを意味する。換言すれば、栄養素利用可能性の低下は、限定されるものではないが、食欲の低下、満足の増加、食物選択/味覚嫌悪への影響、代謝の増大、および／または食物吸収の減少もしくは抑制を含む手段によりなし得る。影響し得る典型的な機序は、胃内容排出の遅延または腸における食物吸収の減少を含む。
【００４６】
「栄養素利用可能性の増加」は、身体が脂肪として蓄積する身体に利用可能な栄養素を増加させるいずれの手段も含むことを意味する。換言すれば、栄養素利用可能性の増加は、限定されるものではないが、食欲の増大、満足の減少、食物選択への影響、味覚嫌悪の減少、代謝の減少、および／または食物吸収の増加を含む手段によりなし得る。影響し得る典型的な機序は、胃の低運動性の減少または腸における食物吸収の増加を含む。
【００４７】
一般的に「肥満」は30以上の体格指数(BMI)として定義されるが、この開示の目的のために、体重を低下するもしくは体重増加を防止する必要を有するまたはそれを望む30未満の体格指数を持つものも含めたいずれの対象も「肥満」の範囲内に含まれる。かくして、また、30未満でかつ25以上（体重超過）または25未満のBMIを持つ対象も、本発明の対象に含まれる。病的肥満とは、40以上のBMIをいう。
【００４８】
栄養素利用可能性を低下させる方法に関して、本願明細書に用いた「それを必要とする対象」は、体重超過または肥満もしくは病的肥満、あるいは減量を望む対象を含む。加えて、インスリン耐性、グルコース不耐性である、あるいはいずれの形態の糖尿病（例えば、１、２または妊娠性の糖尿病）も有する対象は、栄養素利用可能性を低下させるためにこれらの方法から利益を得ることができる。
【００４９】
栄養素利用可能性を増加させる方法に関して、本願明細書に用いた「それを必要とする対象」は、体重不足であるかまたは体重の獲得を望む対象を含む。
【００５０】
「対象」は、ヒト、霊長類、およびラット、マウス、ネコ、イヌのごときペット、ウマ、ウシ、ヒツジおよびヤギのごとき家畜、ならびにトリ、七面鳥およびそれについて体重または身体成分の変更が問題となり得る他の動物を含めた他の哺乳動物を含めたいずれの動物も含むことを意味する。
【００５１】
「代謝率」により、単位時間当たりの発生した/消費されたエネルギー量を意味する。単位時間当たりの代謝は、食物消費、熱として放出されたエネルギー、または代謝プロセスに用いた酸素により見積もることができる。ヒトが減量したい場合、より高い代謝率を有することが一般的に望ましい。例えば、高代謝率の人は、その活性につき低代謝率の人より活動を行うためにより多くのエネルギー(例えば、身体がより多くのカロリーを燃焼する)を消費できるかもしれない。
【００５２】
本願明細書に用いた「除脂肪組織（lean mass）」または「除脂肪体組織（lean body mass）」とは筋肉および骨をいう。除脂肪体組織は必ずしも脂肪がない組織を示さない。除脂肪体組織は、中枢神経系(脳および脊髄)、骨髄および内臓内に低パーセンテージ(およそ３％)の脂肪を含む。除脂肪体組織は密度の点から測定される。脂肪量および除脂肪組織を測定する方法は、限定されるものではないが、水中体重測定、空気置換体積記録、Ｘ腺、DEXAスキャン、MRIおよびCTスキャンを含む。１つの具体例において、脂肪量および除脂肪組織は、水中体重測定を用いて測定される。
【００５３】
「脂肪分布」により、体内における脂肪沈着の位置を意味する。脂肪沈着のかかる位置は、例えば、皮下、内臓および異所性の脂肪沈着を含む。
【００５４】
「皮下脂肪」により、皮膚表面の直下の脂質沈着を意味する。対象における皮下脂肪量は皮下脂肪の測定に利用可能ないずれの方法を用いても測定できる。皮下脂肪の測定方法は、当該技術分野において知られ、例えば、米国特許第6,530,886号（ここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす）に記載されている。
【００５５】
「内臓脂肪」により、腹腔内脂肪組織としての脂肪沈着を意味する。内臓脂肪は重要な臓器を囲み、肝臓により代謝されて、血中コレステロールを生成できる。内臓脂肪は、多嚢胞性卵巣症候群、代謝症候群および心疾患のごとき疾患のリスク増加に関係している。
【００５６】
「異所性脂肪貯蔵」により、除脂肪体組織(例えば、骨格筋、心臓、肝臓、膵臓、腎臓、血管)を構成する、組織および器官内および組織および器官の周囲の脂質沈着を意味する。一般的に、異所性脂肪貯蔵は、体内の古典的脂肪沈着部位外の脂質の蓄積である。
【００５７】
本願明細書に用い、当該技術分野においてよく知られた「治療」は、臨床結果を含めた有益または所望の結果を得るためのアプローチである。疾患、障害または状態を「治療する」または「軽減する」とは、障害を治療しないことと比較して、状態、障害または疾患状態の範囲および／もしくは望ましくない臨床徴候を減少させる、ならびに／またはその進行の時間的経過を遅くするか延長することを意味する。例えば、肥満の治療において、体重における減少、例えば、体重における少なくとも5%の減少は、所望の治療結果の例である。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果は、限定されるものではないが、検出可能か検出できないかのいずれかの、１以上の症状の緩和または改善、疾患の範囲の減少、疾患状態の安定化(すなわち、悪化しない)、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善または緩和、および緩解(部分的または全体的)を含む。また、「治療」は、治療を受けない場合の予期された生存と比較して、生存を延長することを意味することができる。さらに、治療は、必ずしも１用量の投与により生じないが、一連の用量の投与に際してしばしば生じる。かくして、治療上有効な量、疾患、障害もしくは状態を軽減するのに十分な量、または疾患、障害もしくは状態を治療するのに十分な量を１以上の投与において投与し得る。
【００５８】
本願明細書に用いた「治療上有効量」なる用語は、研究者、獣医、医師または他の臨床医により追求されるべき組織、系、対象またはヒトにおける生物学的または医学的な応答を引き出す組成物における活性化合物の量を意味し、それは治療されるべき障害の症状の緩和を含む。本発明の新規な治療方法は当業者に知られていた障害のためのものである。
【００５９】
本願明細書に用いた「予防上有効量」なる用語は、肥満または肥満関連の障害、状態または疾患についてのリスクとしての対象における肥満関連の障害、状態または疾患の発生を防止するための研究者、獣医、医師または他の臨床医により追求されるべき組織、系、対象またはヒトにおける生物学的または医学的な応答を引き出す組成物における活性化合物の量を意味する。
【００６０】
本願明細書に用いた、単数形態「ある」、「その」は、特記しないまたは文脈から明確である限りは複数の引用を含む。例えば、文脈から明白なように、「ある」アミリンアゴニストは１以上のアミリンアゴニストを含むことができる。
【００６１】
本願明細書に用いた「アナログ」とは、その配列が、ベースの参照ペプチド、例えば、アミリン、カルシトニンの配列から由来し、例えば、そのべースペプチドと少なくとも50または55%のアミノ酸配列同一性、他の場合には、例えば、そのべースペプチドと少なくとも70%、80%、90%または95%のアミノ酸配列同一性を有するその参照アミノ酸配列の挿入、置換、伸張および／または欠失を含むペプチドをいう。かかるアナログは、保存的、非保存的なアミノ酸置換(非天然のアミノ酸ならびにＬおよびＤ形態を含む）を含み得る。アナログは、アゴニスト活性を有する化合物、およびアンタゴニスト活性を有する化合物を含む。また、アナログは本願明細書に定義のごとく、誘導体を含む。
【００６２】
「誘導体」は、１以上のそのアミノ酸側鎖基、α−炭素原子、末端アミノ基または末端カルボン酸基の化学的修飾を有する、前記のごとき参照ペプチドまたはアナログとして定義される。化学的修飾は、限定されるものではないが、化学部位の付加、新たな結合の創製および化学部位の除去を含む。アミノ酸側鎖基での修飾は、限定なくして、リジンε-アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンのＮ−アルキル化、グルタミンまたはアスパラギンのカルボン酸基のアルキル化、およびグルタミンまたはアスパラギンの脱アミド化を含む。末端アミノの修飾は、限定なくして、脱アミノ、Ｎ-低級アルキル、Ｎ-ジ-低級アルキルおよびＮ-アシル修飾を含む。その末端アミノの修飾は、限定されるものではないが、脱アミノ、Ｎ-低級アルキル、Ｎ-ジ-低級アルキルおよびＮ-アシル修飾、例えば、アルキルアシル、分岐アルキルアシル、アルキルアリール−アシルを含む。末端カルボキシ基の修飾は、限定なくして、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミド、アリールアミド、アルキルアリールアミドおよび低級アルキルエステル修飾を含む。低級アルキルはC1-C4アルキルである。さらに、１以上の側鎖基または末端基は、通常の熟練した合成化学者に知られた保護基により保護され得る。あるアミノ酸のα−炭素は、モノまたはジ−メチル化され得る。
【００６３】
一般的には、アミノ酸配列に関して、「修飾」なる用語は、単独または組み合わせて、置換、挿入、伸長、欠失および誘導体化を含む。本発明のポリペプチドは、「非必須の」アミノ酸残基の１以上の修飾を含み得る。本発明の文脈において、「非必須の」アミノ酸残基は、そのポリペプチド（例えば、アナログポリペプチド）の活性（例えば、アゴニスト活性）を消滅または実質的に低下させることなく、その新規なアミノ酸配列において、改変、例えば、欠失または置換できる残基である。本発明のポリペプチドは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10あるいはそれを超える非必須のアミノ酸残基の欠失を含み得る。本発明のポリペプチドは、そのポリペプチドの活性を消滅または実質的に低下させることなく、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10あるいはそれを超える非必須のアミノ酸残基の付加を含み得る。
【００６４】
置換は保存的アミノ酸置換を含む。ある「保存的アミノ酸置換」とは、類似する側鎖または物理化学的特性(例えば、静電的、水素結合、等配電子性（isosteric）、疎水性の特徴)を有するアミノ酸残基でアミノ酸残基が置換されるものである。アミノ酸は天然発生的または非天然（天然ではない）であり得る。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技術分野において知られている。これらのファミリーは、塩基性側鎖(例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸)、無荷電の極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、メチオニン、システイン)、無極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン)、β-分岐側鎖(例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン)および芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を持つアミノ酸を含む。また、置換は非保存的な変化を含み得る。
【００６５】
「アミノ酸」または「アミノ酸残基」により、天然アミノ酸、非天然アミノ酸および修飾アミノ酸を意味する。反して言及しない限りは、名称による一般的または具体的なアミノ酸へのいずれの参照も、それらの構造がかかる立体異性形態を可能とするならば、ＤおよびＬ立体異性体の双方への参照を含む。天然アミノ酸は、アラニン(Ala)およびアルギニン(Arg)、アスパラギン(Asn)、アスパラギン酸(Asp)、システイン(Cys)、グルタミン(Gln)、グルタミン酸(Glu)、グリシン(Gly)、ヒスチジン(His)、イソロイシン(Ile)、ロイシン(Leu)、リジン(Lys)、メチオニン(Met)、フェニルアラニン(Phe)、プロリン(Pro)、セリン(Ser)、トレオニン(Thr)、トリプトファン(Trp)、チロシン(Tyr)およびバリン(Val)を含む。非天然のアミノ酸は、限定されるものではないが、ホモリジン、ホモアルギニン、ホモセリン、アゼチジンカルボン酸、2-アミノアジピン酸、3-アミノアジピン酸、β‐アラニンアミノプロピオン酸、2-アミノ酪酸、4-アミノ酪酸、6-アミノカプロン酸、2-アミノヘプタン酸、2-アミノイソ酪酸、3-アミノイソ酪酸、2-アミノピメリン酸、三級ブチルグリシン、2,4-ジアミノイソ酪酸、デスモシン、2,2'-ジアミノピメリン酸、2,3-ジアミノプロピオン酸、Ｎ-エチルグリシン、Ｎ-エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリシン、アロ−ヒドロキシリシン、3-ヒドロキシプロリン、4-ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ-イソロイシン、Ｎ-メチルアラニン、Ｎ-メチルグリシン、Ｎ-メチルイソロイシン、Ｎ-メチルペンチルグリシン、Ｎ-メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸およびチオプロリンを含む。さらなる非天然のアミノ酸は、可逆的または不可逆的に化学的にブロックされるか、またはそれらのＮ末端アミノ基もしくはそれらの側鎖基で化学的に修飾された修飾アミノ酸残基、例えば、側鎖官能基が化学的にもう一つの官能基に修飾されたＮ−メチル化ＤおよびＬアミノ酸または残基を含む。例えば、修飾アミノ酸は、メチオニンスルホキシド；メチオニンスルホン；アスパラギン酸の修飾アミノ酸のアスパラギン酸−（ベータ−メチルエステル)；グリシンの修飾アミノ酸のＮ-エチルグリシン；あるいはアラニンの修飾アミノ酸のアラニンカルボキサミドを含む。組込むことができるさらなる残基はSandbergら, J. Med. Chem. 41: 2481-91, 1998に記載されている。
【００６６】
本願の全体にわたって、マーカッシュ群、例えば、１を超える可能なアミノ酸を含む各アミノ酸位置において代替物が記載されることは注目されるべきである。マーカッシュ群の各メンバーは別々に考えられるべきで、それにより、本発明のもう一つの具体例を含み、マーカッシュ群は単一ユニットと解釈することができないと特に考えられる。
【００６７】
本発明方法
一般的な態様において、本発明は、抗肥満剤の組合せの投与を介する栄養素利用可能性を低下させる方法を提供する。かくして、本発明は、栄養素利用可能性の低下から利益を得るであろう肥満、ならびに肥満関連の疾患、障害および／または状態を治療する方法を提供する。組合せて用いた場合に有効性の増加を与えると、本発明の方法は、単療法においてのごとき、単独での剤の使用と比較して、組み合わせて用いた低用量の１以上の抗肥満剤の投与を可能とし得る。
【００６８】
本発明方法は、抗肥満剤の組合せの投与を提供する。「組み合せた」剤の投与は、治療を必要とする対象に各剤を供することを意味すると理解されるべきである。剤の投与は、意図した抗肥満剤の全てを含有する単一の医薬投与処方としてまたはそれ自体の投与処方における意図された各剤と別々に生じ得る。
【００６９】
別々の投与処方を用いる場合、個々の抗肥満剤は本質的に同時に、すなわち、共にまたは別々の時差的な時間にて、すなわち、その方法の他の抗肥満剤の投与に先立ちまたは引き続いて投与できる。いくつかの具体例において、組合せ投与は、オーバーラップする間隔の間に別々の投与処方の投与を含む。例えば、抗肥満剤１は、第１日〜第３０日に投与され、かつ抗肥満剤２は第２０日〜第５０日に投与される。他の具体例において、組合せ投与は、引き続いてのオーバーラップしない間隔における別々の投与処方の投与を含む。例えば、抗肥満剤１は第１日〜第３０日投与され、かつ抗肥満剤２は第３５日〜第５０日に投与される。従って、本発明は、合計の治療経過にわたる同時、交互、もしくは完全に別々の治療のかかるすべての体制を含むと理解されるべきであり、「投与」、「投与する」、「組合せ投与」なる用語は、それに応じて解釈されるべきである。
【００７０】
１つの具体例において、本発明は、食物摂取および／または体重変調に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取および／または体重変調に関与する前脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与を介して栄養素利用可能性を低下させる方法を提供する。いくつかの場合において、本発明方法は、もしあれば、単独(単療法)で用いられた場合に有効性を制限する抗肥満剤の有効性を増加または増強する。かかる場合において、本発明方法は、例えば、継続的な使用による有効性の損失を防止または遅延させる、または効力の増加により抗肥満剤の有効性を増加または増強する。本発明方法は、一方の剤の単独での使用と比較して、組み合わせて用いた低用量の１以上の抗肥満剤の投与を可能とし得る。
【００７１】
１つの態様において、本発明方法は、投与される剤の間の相乗的な抗肥満効果を提供する。従って、１つの具体例において、抗肥満剤の組合せの投与の結果、効果、例えば、栄養素利用可能性の低下、体重の低下、食物摂取の低下、代謝の増加を生じ、その効果は、単独（単療法）での抗肥満剤の投与の結果の組合せより大きい。
【００７２】
本発明のもう一つの態様において、剤が投与される場合、肥満治療応答(例えば、栄養素利用可能性を低下させる、体重を減少させる、脂肪量を低下する)を導き出すことができるような抗肥満剤に対する対象の抵抗性を低下または除去する方法が提供される。例えばおよびこの理論または他の理論により結合されることを望むことなく、レプチン抵抗性は、肥満対象において見出された高レベルのレプチンに起因する（すなわち、身体がレプチンに脱感作するようになる）ことが理論化されている。従って、本発明の１つの方法は、レプチン抵抗性を低下または除去するように対象の体重を減少させるためのレプチン以外の抗肥満剤(例えば、アミリンまたはアミリンアゴニスト)を投与することを含む。次いで、一旦これが達成されたならば、レプチンはさらなる抗肥満効果のために、単独または抗肥満剤(例えば、アミリンまたはアミリンアゴニスト)と組み合わせて投与される。レプチン抵抗性を改善するための他の手段は、例えば、ダイエット、食事、運動、他のダイエット薬および外科的手段が考えられる。
【００７３】
１つの具体例において、本発明は、食物摂取および／または体重変調に関与する後脳構造に作用する第２の抗肥満剤の投与前に、身体を準備するための食物摂取および／または体重変調に関与する前脳構造に作用する第１の抗肥満剤の送達に指向される。ある具体例において、第１の剤の投与は、第２の剤の投与前の多数の日、週または月さえである。このポイントにて、第２の剤は単独または第１の剤と組み合わせて投与し得る。ある具体例において、第１の抗肥満剤はアミリンまたはアミリンアゴニストであって、第２の剤はレプチンまたはレプチンアゴニストである。いくつかの具体例において、抗肥満剤の投与に先立つ対象の血清中レプチン濃度は、10ng/mlを超え、他の具体例においては、それは20ng/mlを超える。
【００７４】
１つの具体例において、アミリンまたはアミリンアゴニストは、レプチンまたはレプチンのアゴニストの投与に先立つ少なくとも１日、2日、3日、5日、7日、10日、14日、21日、28日またはそれを超える日前に対象に投与される。いくつかの具体例において、レプチンまたはレプチンアゴニストの投与に先立ち、対象の血清中レプチン濃度が約4ng/ml、4ng/ml未満、2ng/ml未満、1ng/ml未満または約0.5ng/ml未満まで、アミリンまたはアミリンアゴニストは対象に投与される。いくつかの具体例において、レプチンまたはレプチンアゴニストは、血漿中でレプチンの生理的濃度付近に達する置換治療量において投与される。
【００７５】
本発明のもう一つの態様において、代謝障害を発生するリスクを低下させる方法が提供され、該方法は、対象における体重を低下させるのに有効な量での抗肥満剤の組合せを投与することを含む。
【００７６】
本発明のいくつかの具体例において、本発明方法を用いて、対象における代謝率を増加させる、対象における代謝率の低下を減少させる、または対象における代謝率を保つ。１つの具体例において、代謝率は、除脂肪体組織(tissue)に関するエネルギー源として身体の脂肪の優先的使用を含み得る。１つの態様において、除脂肪体組織（mass）は抗肥満剤の組合せの投与後に減少しない。もう一つの態様において、除脂肪体組織の低下は、抗肥満剤の組合せの投与後減少または予防される。依然としてもう一つの態様において、除脂肪体組織は抗肥満剤の組合せの投与後に増加する。エネルギー源としての脂肪についてのかかる優先は、治療期間の開始および終了での全身体重および脂肪含量を測定することにより確認された除脂肪体組織に対する脂肪組織の量を比較することにより決定し得る。代謝率における増加は、抗肥満剤の組合せ投与なくして、実質的に類似または同一の条件下でもう一つの期間にわたる対象によるカロリーまたは他のエネルギー源の高レベルの使用である。１つの具体例において、抗肥満剤の組合せ投与なくして、実質的に類似または同一の条件下でもう一つの期間にわたる対象によるカロリーまたは他のエネルギー源のレベルと比較して、代謝率は、対象において少なくとも約5%増加し、他の具体例において、代謝率は、少なくとも約10%、15%、20%、25%、30%、または35%増加する。代謝率における増加は、例えば、呼吸熱量計を用いて測定できる。この具体例に用いた抗肥満剤の有効量は、その複数の剤またはその複数の剤の一つだけを受けない対象に比較して組み合わせて投与した場合に、対象における代謝率を増加させるのに有効な各剤の量である。
【００７７】
もう一つの具体例において、対象における代謝率の減少を低下させる方法が提供される。代謝率のかかる減少は、例えば、低下したカロリー食、制限食または体重減により代謝率における低下に導くいずれかの状態または栄養上もしくは身体的な摂生の結果であり得る。制限食は、必ずしもカロリーに基づかない食事において可能とされる食物のタイプ、または食物量、または双方についての許可または禁止を含む。例えば、個々の食事におけるように、身体は、より低カロリー摂取に基づいた代謝率の低下で補う。本質的には、身体は、食物についての要求を下方調節し、それにより、より少ない食物で存続する。ダイエットを継続すると、カロリー摂取についての閾値が低下する。ダイエットが終了した時、個体は、低下したカロリー摂取閾値および低基礎代謝率のため、通常の食事を食べつつ典型的には体重が増加する(NIH Technology Assessment Conference Panel (1992) Ann. Intern. Med. 116:942-949；Wadden (1993) Ann. Intern. Med. 119:688-693)。１つの態様において、対象における代謝率の損失を低下させる方法が提供され、その代謝率の損失は、低下したカロリー食または体重損失の結果である。かかる方法を用いることにより、対象における代謝率の低下は、対象において、少なくとも約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、50%、60%、70%、80%、90%または95%減少する。かかる方法について、代謝率における損失または低下に導く状態または栄養上もしくは身体的な摂生が開始された時点に抗肥満剤の組合せを投与することが望ましいかも知れない。しかしながら、また、その剤の投与は、状態または栄養上身体的な摂生が開始される前に始められると考えられる。１つの例において、代謝率は呼吸熱量計を用いて測定される。この具体例に用いた有効量の抗肥満剤は、組合せ投与された場合、対象における代謝率の低下を減少させるのに有効な各剤の量である。
【００７８】
もう一つの態様において、代謝のプラトーを低下させる方法が提供され、該方法は、対象への組合せにおける有効量の抗肥満剤を投与することを含む。１つの具体例において、対象は、例えば、低下したカロリー食、運動の増加またはそれらの組合せにより減量中か、または減量をした。「代謝のプラトー」により、身体がカロリーまたはエネルギー入力の変化に適応しつつ安定した代謝率の時間間隔を意味する。カロリーの入力または消費の変化は、例えば、低下したカロリー食または身体活動度の増加の結果であり得る。かかるプラトーは、例えば、体重損失が遅くなるかまたは停止した場合、体重損失摂生の間に観察できる。１つの具体例において、本発明方法は、抗肥満剤の組合せの投与なくして実質的に同様または同一の条件下で同期間にわたる他の同一対象の代謝のプラトーの期間と比較して、対象における代謝のプラトーの期間を低下させる。もう一つの具体例において、本発明方法は、抗肥満剤の組合せの投与なくして実質的に同様または同一の条件下で同期間にわたる他の同一対象の代謝のプラトーの頻度と比較して、代謝のプラトーの頻度を低下させる。依然としてもう一つの具体例において、本発明方法は、抗肥満剤の組合せの投与なくして実質的に同様または同一の条件下で同期間にわたる他の同一対象の代謝のプラトーの発生と比較して、代謝のプラトーの発生を遅延する。１つの具体例において、代謝のプラトーは、体重損失が低下したまたはそれがない期間を図表にすることにより同定される。１つの具体例において、少なくとも１つの代謝のプラトーは低下する。他の具体例において、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9または10個の代謝のプラトーは低下する。もう一つの態様において、代謝のプラトーは、同一または同様の条件下の抗肥満剤の組合せを投与されない対象と比較して、１日遅延する。他の態様において、代謝のプラトーは、対象において2日、3日、4日、5日、6日、1週間、10日、2週間または3週間遅延する。
【００７９】
さらにもう一つの具体例において、対象における代謝率を保存する方法が提供される。１つの具体例において、対象は、例えば、低下したカロリー食、制限食または予想された体重損失の開始により、代謝率の損失のリスクがあり得る。代謝率の保存は、抗肥満剤の組合せの投与なくして実質的に同様または同一の条件下で同期間にわたる他の同一対象によるカロリーまたは他のエネルギー源の使用のレベルと比較した期間にわたるカロリーまたは他のエネルギー源の使用のレベルの維持である。１つの態様において、代謝率は、代謝率の減少を生じる事象の開始に先立ち、対象の代謝率の15%内に維持される。他の態様において、代謝率は、対象の代謝率の10%内、7%内、5%内、3%内に維持される。１つの態様において、抗肥満剤の組合せは、低下したカロリー食、制限食または運動摂生の開始にて投与される。
【００８０】
代謝率は、例えば、呼吸熱量計を用いることによりかかる率の決定に利用可能ないずれの方法を用いても評価できる。代謝率をアッセイするかかる方法および装置は当該技術分野において知られ、例えば、米国特許第4,572,208号、第4,856,531号、第6,468,222号、第6,616,615号、第6,013,009号および第6,475,158号に記載されている。別法として、動物の代謝率は、食事期間後に動物により異化された脂肪組織に対する除脂肪組織の量の測定により評価できる。かくして、全身体重および脂肪含量は、食事期間の終わりに測定できる。ラットにおいて、全身脂肪を決定するために頻繁に用いた方法は、腹膜後脂肪パッド、後腹膜に位置した脂肪塊、後腹壁と後部壁側腹膜との間の領域を外科的に摘出し、秤量することである。パッド重量は動物のパーセント体脂肪と直接的に関係すると考えられる。ラットにおける体重と体脂肪との関係は直線であるので、肥満動物は一致した高いパーセントの体脂肪および腹膜後脂肪パッド重量を有する。
【００８１】
本発明のもう一つの態様において、対象における代謝率を増加させることにより脂肪量を低下させる方法が提供され、該方法は対象の代謝率を増加させることにより脂肪量を低下するのに有効な量での抗肥満剤の組合せを投与することを含む。脂肪量は、全身量のパーセンテージとして表すことができる。いくつかの態様において、脂肪量は、治療の間に、少なくとも1%、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%または少なくとも25%低下する。１つの態様において、対象の除脂肪量（lean mass）は治療経過の間に減少しない。もう一つの態様において、対象の除脂肪量は治療の間に維持または増加する。もう一つの態様において、対象は、低下したカロリー食または制限食にある。「低下したカロリー食」により、対象が、同じ対象の普通食と比較されたより１日当たり少数のカロリーを摂取していることを意味する。１つの例において、対象は、１日当たりより少ない少なくとも50カロリーを消費している。他の例において、対象は、１日当たりより少ない少なくとも100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900または1000カロリーを消費している。
【００８２】
本発明の１つの具体例において、対象における脂肪分布を改変する方法が提供され、該方法は、対象における脂肪分布を改変するのに有効な量での抗肥満剤の組合せを投与することを含む。１つの態様において、その改変は、対象における内臓もしくは異所性の脂肪、またはその双方の代謝の増加に起因する。いくつかの具体例において、該方法は、皮下脂肪について、少なくとも約5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%または50%を超える率での内臓もしくは異所性の脂肪、またはその双方の代謝を含む。１つの態様において、該方法は、好ましい脂肪分布を生じる。１つの具体例において、好ましい脂肪分布は、内臓脂肪、異所性脂肪またはその双方に対する皮下脂肪の比率の増加である。１つの態様において、該方法は、例えば、筋細胞量の増加の結果としての、除脂肪体組織の増加を含む。
【００８３】
もう一つの具体例において、対象における皮下脂肪の量を低下させる方法が提供され、該方法は、対象における皮下脂肪量を低下させるのに有効な量での抗肥満剤の組合せをそれを必要とする対象に投与することを含む。１つの例において、皮下脂肪量は、対象において少なくとも約5%低下する。他の例において、皮下脂肪量は、抗肥満剤の投与に先立ち対象に比較して、少なくとも約10%、15%、20%、25%、30%、40%または50%低下する。
【００８４】
本願明細書に記載された方法を用いて、対象における内臓脂肪量を低下できる。１つの例において、内臓脂肪は対象において少なくとも約5%減少する。他の例において、内臓脂肪は抗肥満剤の組合せの投与に先立って対象と比較して、対象において少なくとも約10%、15%、20%、25%、30% 40%または50%低下する。内臓脂肪は、対象における内臓脂肪の量を決定するのに利用可能ないずれの手段を介しても測定できる。かかる方法は、例えば、CTスキャンおよびMRIによる腹部断層撮影法を含む。内臓脂肪を決定する他の方法は、例えば、米国特許第6,864,415号、第6,850,797号および第6,487,445号に記載されている。
【００８５】
１つの具体例において、対象における異所性の脂肪の蓄積を予防する、または異所性の脂肪量を低下させる方法が提供され、該方法はそれを必要とする対象に、その対象における異所性の脂肪の蓄積を予防するまたは対象の異所性の脂肪量を低下させるのに有効な量での抗肥満剤の組合せを投与することを含む。１つの例において、異所性の脂肪量は、抗肥満剤の組合せの投与に先立つ対象に比較して、対象において少なくとも約5%低下する。他の例において、異所性の脂肪量は、対象において、少なくとも約10%、または少なくとも約15%、20%、25%、30% 40%または50%低下する。あるいは、異所性の脂肪量は、対象における皮下脂肪に比較して、比例して5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%または100%低下する。異所性の脂肪は、異所性の脂肪を測定するために利用可能ないずれの方法を用いても、対象において測定できる。
【００８６】
もう一つの具体例において、対象におけるより好ましい脂肪分布を生成する方法が提供され、該方法は、より好ましい脂肪分布を生成するのに有効な量での抗肥満剤の組合せを対象に投与することを含む。１つの具体例において、抗肥満剤の組合せの投与は、対象における、内臓脂肪もしくは異所性の脂肪の量、またはその双方を低下する。例えば、食物摂取もしくは体重変調、またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取もしくは体重変調、またはその双方に関与する前脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の場合の抗肥満剤の組合せの投与。１つの具体例において、該方法は、皮下脂肪の減少につき、内臓もしくは異所性の脂肪量、または双方の組合せを優先的に低下させる。かかる方法は、高比率の皮下脂肪−対−内臓脂肪または異所性脂肪を生じる。かかる改善された比率の結果、心疾患、多嚢胞性卵巣症候群、代謝症候群またはそのいずれかの組合せの発生のリスクが低下し得る。１つの具体例において、異所性または内臓の脂肪は、皮下脂肪より大きい5%の率にて代謝される。他の具体例において、異所性または内臓の脂肪は、皮下脂肪より大きな、少なくとも10%、15%、 20%、25%、30%、50%、60%、70%、80%、90%、あるいは100%の率にて代謝される。
【００８７】
依然としてもう一つの態様において、本発明方法は、副腎皮質ステロイドと組み合わせて投与された抗肥満剤の治療上有効量の組合せの使用を含む。副腎皮質ステロイドは、脂肪量を増加させ、除脂肪量を減少させるという副作用を有する。従って、抗肥満剤の組合せは、副腎皮質ステロイド使用が有益である条件下で副腎皮質ステロイドと共に用いることができると考えられる。
【００８８】
また、最初に対象の体重を病的肥満より下のレベルに低下させ、次いで、対象の体重をさらに低下させるのに有効な量で抗肥満剤の組合せを対象に投与することにより病的肥満の対象の体重を低下させる方法が提供される。対象の体重を病的肥満より下のレベルに低下させる方法は、カロリー摂取の低下、身体活動を増加、薬物治療、胃バイパス手術のごとき肥満治療手術または前記の方法のいずれかの組合せを含む。１つの態様において、抗肥満剤の組合せを投与することは、対象の体重をさらに低下させる。もう一つの具体例において、対象の体重をさらに低下させるのに有効な量で抗肥満剤の組合せを投与することにより、40またはそれ未満の体格指数を有する対象における体格指数を低下させる方法が提供される。
【００８９】
体重の低下により、対象が、複数の日、週、月または年である治療の経過にわたり彼／彼女の全身体重の一部分を損失させることを意味する。あるいは、体重損失は、脂肪量−対−除脂肪量の割合における減少と定義できる(換言すれば、必ずしも全身体重における対応する損失なくして、対象は脂肪量を損失させるが、除脂肪量を維持または獲得した）。この具体例における組合せにおいて投与された抗肥満剤の有効量は、治療経過の間に対象の体重を低下するのに有効な量、または別法として治療経過の間に対象の脂肪量のパーセンテージを低下させるのに有効な量である。ある具体例において、対象の体重は、治療経過の間に、少なくとも約1%、少なくとも約5%、少なくとも約10%、少なくとも約15%、または少なくとも約20%低下する。あるいは、対象の脂肪量のパーセンテージは、治療経過の間に、少なくとも1%、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%または少なくとも25%低下する。
【００９０】
ある具体例において、対象における、栄養素利用可能性を低下させる、例えば、体重を低下させる方法は、１日１回以上のボーラス用量での有効量の抗肥満剤を対象に投与することを含む。ボーラス用量は、(連続注入に対立した)医薬の間欠性の投与である。対象を、1日当たり１以上のボーラス用量で投与できる。ボーラス用量は、対象にいつ投与されるかを問わず同一であり得、または他のものと比較して、対象はその日のある時間にて大きなボーラス用量で投与されるように調整できる。ある製剤、例えば、徐放性製剤中の剤の投与、ボーラス用量は、例えば、３日に１回、１週当たり１回、１か月当たり２回、月１回で余り頻繁ではなく投与できる。さらに、ボーラス投与間の時間は、先のボーラス投与において投与された薬物が対象の血流から除去されることを可能にするのに好ましくは十分に長い。
【００９１】
他の具体例において、対象における、栄養素利用可能性を低下させる、例えば、体重を低下させる方法は、連続投与における有効量の抗肥満薬を対象に投与することを含む。連続投与により、例えば、静脈注射または経皮パッチにより薬物の連続的な注入を意味することを意図する。あるいは、連続投与は、ある期間にわたる対象のシステムに薬物を放出する制御放出カプセルまたは錠剤の形態で経口投与できる。連続投与により投与される場合、約１時間にわたり薬物が放出され、いくらかの場合には、約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18または24時間の期間にわたり薬物が放出される。
【００９２】
「組合せ投与される」により、抗肥満剤が単回投与、別々の投与として同時に投与されるか、または連続投与されることを意味する。連続投与とは、抗肥満剤の前後のいずれかで抗肥満剤のうちの１つを投与することをいう。１つの具体例において、第１の抗肥満剤は、少なくとも１つの他の抗肥満剤の前後の約30分、他の具体的において、少なくとも１つの他の抗肥満剤の前後の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12時間に投与される。投与される抗肥満剤のいずれも、ボーラス投与または連続投与として投与できる。
【００９３】
本発明は、対象における熱発生を増加させる方法にさらに指向され、該方法は、食物摂取もしくは体重変調、またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取もしくは体重変調、またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効量の少なくとも１つの抗肥満剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。熱発生は、身体の代謝率を増加させることにより熱としてカロリーを発生するプロセスである。熱発生は、サプリメント、栄養、運動および寒冷に対する曝露を含めた機序により活性化される。
【００９４】
本発明は、対象における酸化的代謝を増加させる方法にまださらに指向され、該方法は、食物摂取もしくは体重変調、またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取もしくは体重変調、またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効量の少なくとも１つの抗肥満剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。酸化的代謝は酸素を用いて、炭水化物（糖）からエネルギーを作るプロセスである。
【００９５】
もう一つの態様において、対象における充足感を誘導する方法が提供され、該方法は該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。
【００９６】
さらにもう一つの態様において、対象における空腹を制御する方法が提供され、該方法は、該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。
【００９７】
まださらなる態様において、対象における満足感を延長する方法が提供され、該方法は、該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。
【００９８】
まださらなる態様において、食事のサイズを低下させることによりカロリー摂取量を低下させる方法が提供され、該方法は該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。
【００９９】
もう一つの態様において、食物摂取を制御する方法が提供され、該方法は該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。
【０１００】
さらにもう一つの態様において、低下したカロリー食または制限食に従って保証するか支援する方法が提供される、該方法は該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。
【０１０１】
さらなる態様において、ホメオスタシスのための身体傾向がより健康なセットポントに調整されるように対象のセットポイントを調整する方法が提供され、該方法は、該方法は該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。
【０１０２】
さらにさらなる態様において、体重損失を維持または体重損失を維持する方法が提供され、該方法は該対象に食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する有効な量の少なくとも１つの抗肥満剤を投与することを含む。本発明のこの態様の１つの具体例において、体重損失は対象のセットポイントにより維持される。
【０１０３】
さらに、ある具体例において、組合せにおける抗肥満剤の投与の結果、本願明細書に記載されたいずれの方法においても相乗効果を生じる。加えて、ある具体例において、組合せにおける抗肥満剤の投与の結果、同じ効果で、少なくとも１つの剤につきより低用量を必要とする。
【０１０４】
１つの具体例において、本発明方法は、栄養素利用可能性における低下からの利益を受ける代謝の状態または障害の治療および／または予防における使用である。従って、これらの方法は、肥満、糖尿病(例えば、２型または非インスリン依存型糖尿病、１型糖尿病および妊娠性糖尿病)、摂食障害、インスリン抵抗症候群および心疾患の治療および／または予防に有用であり得る。
【０１０５】
１つの具体例において、対象における脂肪分布を改変する、脂肪量を低下する、または双方における使用方法が提供される。従って、身体成分の改変が有益である対象も、この方法から利益を得ることができる。改変された身体成分は、本願明細書に意図されるように、除脂肪体組織の損失または維持または獲得の最小化での、体脂肪の損失または維持を含む。かかる状況において、体重は増加ならびに減少し得る。従って、対象は、除脂肪、体重超過または肥満であり得、それらの用語は、当該技術分野において用いられるものである。また、本発明方法は除脂肪量を容認しつつ非脂肪組織における脂肪を低下させることを含み得る。この方法についての使用は、非アルコール性脂肪肝炎(NASH)またはリポジストロフィーのごとき疾患を治療することを含む。
【０１０６】
本願明細書に記載された方法は、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する後脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与と組み合わせた、食物摂取、体重変調またはその双方に関与する前脳構造に作用する少なくとも１つの抗肥満剤の投与をかかる疾患または障害の制御、予防および／または治療のために用いる。
【０１０７】
もう一つの態様において、前脳および後脳に作用する剤の投与を介して、食物摂取を刺激する、体重増加を促進する、またはその双方の方法が提供される。かかる方法において、体重誘導剤は、対象における食物摂取を刺激する、体重増加を促進する、または双方の有効な組合せおよび量において対象に投与される。これらの方法は、対象における悪液質および拒食症のような疾患および障害、ならびに食欲不振、食物摂取の低下および体重損失により特徴づけられた他の消耗病に特に有益である。典型的な体重誘導剤は、NPY1受容体アゴニスト、NPY5受容体アゴニスト、レプチンアンタゴニスト、MCHアゴニスト、MC4アンタゴニスト、カンナビノイド受容体アゴニスト、5-HT2Cアンタゴニスト、エキセンディンアンタゴニスト、GLP-1アンタゴニスト、グレリンアゴニスト、CCKアンタゴニストおよびアミリンアンタゴニストを含む。従って、１つの具体例は、対象に少なくとも２以上の体重誘導剤を投与することを含む、それを必要とする対象における食物摂取を刺激する方法、体重増加を促進する方法、またはその双方の方法を提供する。
【０１０８】
体重誘導剤の投与について、体重誘導剤は、単回投与、別々の投与として同時に、連続投与として投与される。別々の投与処方が用いられる場合、個々の体重誘導剤は本質的に同時に、すなわち、共に、または別々に時差的な時間（staggered time）、例えば、該方法の他の体重誘導剤の投与に先立ちまたは引き続いて、投与できる。１つの具体例において、第１の体重誘導剤は、他のもう一つの体重誘導剤の前後の約30分、他の具体的において、他のもう一つの体重誘導剤の前後の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12時間に投与される。いくつかの具体例において、組合せ投与は、間隔をオーバーラップさせる間の別々の投与処方の投与を含む。例えば、体重誘導剤１は第１日〜第３０日に投与され、かつ体重誘導剤２は第２０日〜第５０日に投与される。他の具体例において、組合せ投与は、引き続いてのオーバーラップしない間隔における別々の投与処方の投与を含む。例えば、体重誘導剤１は第１日〜第３０日投与され、かつ体重誘導剤２は第３５日〜第５０日に投与される。従って、本発明は、合計の治療経過にわたる同時、交互、もしくは完全に別々の治療のかかるすべての体制を含むと理解されるべきである。いずれの投与された体重誘導剤も、ボーラス投与または連続投与として投与できる。
【０１０９】
さらに、ある具体例において、組合せにおける体重誘導剤の投与の結果、いずれの本発明の態様においても相乗効果を生じる。加えて、ある具体例において、組合せにおける体重誘導剤の投与の結果、同じ効果で、少なくとも１つの剤についてより低用量が必要とされる。
【０１１０】
本発明で用いる抗肥満剤は、レプチン、レプチン誘導体、組換えレプチンおよびレプチンアゴニストを含む。レプチン(細いを意味するギリシアのleptosから由来)は脂肪細胞により主に生成されるホルモンである。肥満のヒトにおいて、レプチン血中濃度は、一般的に、体内に貯蔵された脂肪量と関連する。一般的には、脂肪量が大きくなれば、レプチンの量が大きくなる。大多数の肥満のヒトにおいて血清中レプチン濃度レベルは高く、レプチン抵抗性の状態が存在すると考えられる(Mantzorosら (2000) J. Clin. Endocrinol. Metab. 85:4000-4002)。肥満を治療するためにレプチンを用いる治療の試みにもかかわらず、組換えヒトレプチンの効果は、もしあれば、肥満の個体の体重損失を引き起こすことに限定されている。この例外には、先天性レプチン欠失を持った個体の治療、および脂肪萎縮を持った個体の治療を含む。例えば、Heymsfieldら (1999) JAMA 282:1568-1575, Farooqiら (1999) N. Engl. J. Med. 341:879-884および米国特許公開2005/0020496号参照。
【０１１１】
ある具体例において、レプチンは血漿中でレプチンの生理的濃度付近に達するように補充療法の形態にて投与される。レプチンの生理的補充用量は、全ての年齢の男性につき１日当たり約0.02mg/kg体重、１８歳未満の女性につき１日当たり約0.03mg/kg体重、および成人女性につき約0.04mg/kg体重であると推測されている。レプチンの生理的濃度付近に達することを試みる場合、例えば、治療の第１月につき見積もられた補充用量の５０パーセント、治療の第２月につき見積もられた補充用量の１００パーセント、治療の第３月につき見積もられた補充用量の２００パーセント等で対象を治療し得る。血清中レプチンレベルは、例えば。商業的に入手可能なイムノアッセイを用いることを含めた当該技術分野において知られた方法により測定できる。
【０１１２】
レプチン抵抗性を治療するためのアミリンの投与のごとき手段により脂肪を低下さることは、本発明の１つの態様である。一旦レプチン抵抗性が改善される(減少する)と、レプチンはさらに肥満を治療するために投与できる。
【０１１３】
本願明細書に記載された方法に用いる適当なレプチン蛋白質およびレプチン蛋白質含有組成物は当該技術分野において知られ、限定されるものではないが、組換えヒトレプチン(PEG-OB, Hoffman La Roche)および組換えメチオニレプチン(Amgen)を含む。レプチン蛋白質、アナログ、誘導体、調製物、製剤、医薬組成物、用量および投与経路は、従前に以下の特許刊行物に記載され、ここに出典明示してそれらの全てを本明細書の一部とみなす:米国特許第5,552,524号；第5,552,523号；第5,552,522号；第5,521,283号；およびPCT出願公開WO 96/05309、WO 96/40912；WO 97/06816、WO 00/20872、WO 97/18833、WO 97/38014、WO 98/08512およびWO 98/284427。
【０１１４】
レプチンアゴニストおよびアンタゴニストは当該技術分野において知られ、特許データベースの検索を介して見出すこともできる。例えば、レプチンアゴニストは、米国公開2004/0072219、2003/049693、2003/0166847、2003/0092126および米国特許第6,777,388号および第6,936,439号に記載されている。レプチンアンタゴニストは米国特許公開2004/0048773、2002/0160935および米国特許第6,399,745号に記載されている。レプチンアゴニズムまたはアンタゴニズムをテストするための手段は、米国特許第6,007,998号および第5,856,098号に記載されている。これらの特許は例示であり、これらをここに出典明示してその全てを本明細書の一部とみなす。
【０１１５】
また、本発明に用いた抗肥満剤はアミリンおよびアミリンアゴニストを含む。アミリンは、栄養刺激に応じて膵臓のβ細胞からインスリンと共分泌される37個のアミノ酸ペプチドホルモンである。ヒトアミリン(hアミリン)は以下のアミノ酸配列を有する:Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr (配列番号：１)。ラットアミリン(rAmylin)は以下の配列を有する:KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY (配列番号：2)。いずれの種からのアミリンの使用も考えられる。
【０１１６】
アミリン、アミリンアゴニストおよびアミリンアンタゴニストの使用を介してのごときｉｎ ｖｉｖｏでの有効なアミリンレベルの変調が、有効なレベルのグレリンをｉｎ ｖｉｖｏにて調節できることが驚くべきことに見出された。
【０１１７】
本発明の使用において考えられるアミリンアゴニストは、米国特許第5,686,411号、第6,114,304号および第6,410,511号に記載されたものを含み、ここに出典明示してその全体を本明細書の一部とみなす。かかる化合物は、式Ｉ：
1A1-X-Asn-Thr-5Ala-Thr-Y-Ala-Thr-10Gln-Arg-Leu-B1-Asn-15Phe-Leu-C1-D1-E1-20F1-G1-Asn-H1-Gly-25I1-J1-Leu-K1-L1-30Thr-M1-Val-Gly-Ser-35Asn-Thr-Tyr-Z (配列番号：3)
［式中、A1はLys、Ala、Serまたは水素；
B1はAla、SerまたはThr；
C1はVal、LeuまたはIle；
D1はHisまたはArg；
E1はSerまたはThr；
F1はSer、Thr、GlnまたはAsn；
G1はAsn、GlnまたはHis；
H1はPhe、LeuまたはTyr；
I1はAlaまたはPro；
J1はIle、Val、AlaまたはLeu；
K1はSer、Pro、Leu、IleまたはThr；
L1はSer、ProまたはThr；
M1はAsn、Asp,またはGln；
XおよびYは、相互に化学的に結合して、分子内結合を形成する側鎖を有する独立して選択されたアミノ酸残基であり；および
Zは、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシまたはアラルキルオキシである］を有するものを含む。
【０１１８】
XおよびYに適当な側鎖は、ジスルフィド結合を形成し得るアルキルフルフヒドリル；環状ラクタムを形成し得るアルキル酸およびアルキルアミン；縮合および還元されてアルキルアミン架橋を形成し得るアルキルアルデヒドまたはハロゲン化アルキルおよびアルキルアミン；または連結してアルキル、アルケニル、アルキニル、エーテルまたはチオエーテル結合を形成し得る側鎖から誘導される基を含む。好ましいアルキル鎖は、約１〜約6個の炭素原子を有する低級アルキル基を含む。
【０１１９】
本発明のさらなる態様は、架橋していない配列番号：3のアゴニストアナログに指向され、ここに、XおよびYは、Ala、Ser、Cys、Val、LeuおよびIle、またはSerもしくはCysのアルキル、アリールもしくはアラルキルのエステルおよびエーテルから独立して選択される。
【０１２０】
また、前記のアゴニストアナログの生物学的に活性な誘導体は、本発明の範囲内に含まれ、ここに、個々のアミノ酸の立体化学は１以上の特定の部位にて(L)/Sから(D)/Rに逆転し得る。
【０１２１】
また、Asn、Serおよび／またはThr残基によりグリコシル化により修飾されたアゴニストアナログは、本発明の範囲内に含まれる。
【０１２２】
より少ないペプチド特性を含むアミリンの生物学的に活性なアゴニストアナログは、本発明の範囲内に含まれる。かかるペプチドミメティックは、例えば、--CO--NH--アミド結合に代えて１以上の以下の置換基を含み得る：デプシペプチド(--CO--O--)、イミノメチレン (--CH2 --NH--), トランス−アルケン (--CH＝CH--)、ベータ−エナミノニトリル(--C(＝CH--CN)--NH--)、チオアミド (--CS--NH--)、チオメチレン (--S--CH2 --もしくは--CH2 --S--)、メチレン(--CH2 --C2 --)およびレトロ−アミド(--NH--CO--)。
【０１２３】
本発明の化合物は、種々の無機および有機酸ならびに塩基と塩を形成する。かかる塩は、有機酸および無機酸、例えば、HCl、HBr、H2SO4、H3PO4、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸およびショウノウスルホン酸と調製された塩を含む。塩基と調製される塩は、例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属塩(ナトリウムおよびカリウム塩のごとき)およびアルカリ土類塩 (カルシウムおよびマグネシウム塩のごとき)を含む。酢酸塩、塩酸塩およびトリフルオロ酢酸塩が好ましい。
【０１２４】
本願を通して、アミノ酸配列とは、参照ペプチドに隣接するａ位〜ｂ位のアミノ酸配列をいうこともできる。例えば、1-7 hアミリンは、この例における参照ペプチドのヒトアミリン（配列番号：１）の１位〜７位のアミノ酸配列を包括的にいう。その参照ペプチドへの修飾は、その修飾に隣接する修飾の位置として示してもよい。例えば、(2Asp 7Lys) 1-7 hアミリンは、２位でのCysのAspへの修飾、および７位でのCysのLysへの修飾を持つヒトアミリンの１〜７位でのアミノ酸配列を表す。もう一つの例では、18Arg25,28Pro-h-アミリンは、１８位でのHisのArgへの修飾、25位でのAlaのProへの修飾および28位でのSerのProへの修飾を持つヒトアミリンのアミノ酸配列を表す。
【０１２５】
例示的な化合物は、限定されるものではないが、デス-1Lys-h-アミリン(配列番号：4)、28Pro-h-アミリン（配列番号： 5)、 25,28,29Pro-h-アミリン（配列番号：6)、18Arg25,28Pro-h-アミリン（配列番号：7)およびデス-1Lys18Arg25,28Pro-h-アミリン（配列番号：8)を含み、その全ては処置されたテスト動物においてｉｎ ｖｉｖｏにてアミリン活性（例えば、顕著な高ラクテミア（hyperlactemia）に続いて高血糖を誘発する）を示す。また、アミリンに特有の活性を有することに加えて、本発明のある種の好ましい化合物は、ヒトアミリンと比較した場合により望ましい溶解性および安定性の特性を所有することが判明した。これらの化合物の例は、25Pro26Val28,29 Pro-h-アミリン (配列番号：9)、25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：10)および18Arg25,28Pro-h-アミリン (配列番号：7)を含む。
【０１２６】
他の化合物は、18Arg25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：11)、デス-1Lys18Arg25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：12)、デス-1 Lys25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：13)、25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン (配列番号：14)、23Leu25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン (配列番号：15)、23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン (配列番号：16)、デス-1Lys23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン (配列番号：17)、18Arg23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン (配列番号：18)、18Arg23Leu25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：19)、18Arg23Leu25,28Pro-h-アミリン (配列番号：20)、17Ile23Leu25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：21)、17Ile25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：22)、デス-1Lys17Ile23Leu25,28,29Pro-h-アミリン (配列番号：23)、17Ile18Arg23Leu-h-アミリン (配列番号：24)、17Ile18Arg23Leu26Val29Pro-h-アミリン (配列番号：25)、17Ile18Arg23Leu25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン (配列番号：26)、13Thr21His23Leu26Ala28Leu29Pro31Asp-h-アミリン (配列番号：27)、13Thr21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-アミリン (配列番号：28)、デス-1Lys13Thr21His23Leu26Ala28Pro31Asp-h-アミリン (配列番号：29)、13Thr18Arg21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-アミリン (配列番号：30)、13Thr18Arg21His23Leu28,29Pro31Asp-h-アミリン (配列番号：31)、および 13Thr18Arg21His23Leu25Pro26Ala28,29Pro31Asp-h-アミリン (配列番号：32)を含む。
【０１２７】
有用なアミリンアゴニストアナログは、PCT出願公開WO 93/10146に記載されるものを含み、その内容をここに出典明示してその本明細書の一部とみなす。
【０１２８】
また、本発明に有用なアミリンアゴニストは、前記のアミリンおよびそのアナログの断片ならびにEP 289287（ここに出典明示してその内容を本明細書の一部とみなす）に記載されたものを含む。また、アミリンアゴニストは、アミリン活性を有する配列番号：１に少なくとも60、65、70、75、80、85、90、95または99%のアミノ酸配列同一性を有する化合物であり得る。また、アミリンアゴニストは、低分子、非ペプチド分子、例えば、低分子化学に基づいたものを含む。本願明細書に用いた「アミリン活性」は、体内におけるグレリンレベルに影響するアミリンの能力を含む。また、アミリンアゴニストは、配列番号：1の少なくとも１以上のアミノ酸位置にて挿入、欠失、伸張および／または置換を有するアミリンのアナログを含む。アミノ酸挿入、欠失または置換の数は、5、10、15、20、25または30以下であり得る。挿入、伸張または置換は、他の天然アミノ酸、合成アミノ酸、ペプチドミメティクスまたは他の化学化合物で有し得る。また、本発明で考えられるアミリンアゴニストは、硬骨類のカルシトニンのごときカルシトニンおよびそれらのアナログならびにカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)およびそれらのアナログであり得る。
【０１２９】
また、アミリンアゴニストは、2005年2月11日付で出願された米国特許出願第60/543,275号およびPCT出願PCT/US2005/004631（これらの各々をここに出典明示して本明細書の一部とみなす）に記載されたポリペプチド(本明細書ではＬＨＣ(ループらせんＣ末端)ペプチドという)、ならびにそれらのアナログおよび誘導体を含む。本発明に用いたＬＨＣペプチドは、カルシトニン、アミリン、CGRPまたは本願明細書に開示された3つのいずれかの組合せの少なくとも１つの生物学的効果についてアゴニストとして作用するか、またはアミリン、カルシトニンまたはCGRPの受容体の少なくとも1つに結合する。典型的なＬＨＣペプチドの受容体結合活性および生物活性は、米国特許出願第60/543,275号およびPCT出願PCT/US2005/004631に記載されている。一般的な態様において、これらのポリペプチドアゴニストは、アミリンまたはカルシトニンおよびそのアナログの少なくとも１つのループ領域、カルシトニンまたはそのアナログの少なくとも一部分のαらせん領域、またはアミリンαらせん領域およびカルシトニンαらせん領域またはそれぞれのアナログの一部分を有するαらせん領域、およびアミリンまたはカルシトニンもしくはそのアナログのＣ末端テールを有し、但し、カルシトニンまたはカルシトニンアナログのＣ末端テールは、プロリン(Pro)、ヒドロキシプロリン(Hyp)、ホモセリン(Hse)またはHseの誘導体ではない。
【０１３０】
ある具体例において、これらのＬＨＣペプチドは、アミリンもしくはアミリンアナログのループ領域、カルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分、およびアミリンもしくはアミリンアナログのＣ末端テールを有する。他の具体例において、これらのＬＨＣペプチドはカルシトニンもしくはカルシトニンアナログのループ領域、カルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分、およびアミリンもしくはアミリンアナログのＣ末端テールを有する。依然として他の具体例において、これらのＬＨＣペプチドはアミリンもしくはアミリンアナログのループ領域、アミリンもしくはアミリンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分およびカルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分、およびアミリンもしくはアミリンアナログのＣ末端テールを有する。さらに他の具体例において、これらのＬＨＣペプチドはカルシトニンもしくはカルシトニンアナログのループ領域、アミリンもしくはアミリンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分およびカルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分、およびアミリンもしくはアミリンアナログのＣ末端テールを有する。依然としてさらに他の具体例において、これらのＬＨＣペプチドはアミリンもしくはアミリンアナログのループ領域、カルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の一部分またはアミリンもしくはアミリンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分、およびカルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分およびカルシトニンもしくはカルシトニンアナログのＣ末端テールを有する。
【０１３１】
ある具体例において、これらのＬＨＣペプチドのループ領域は、アミリンまたはカルシトニンループおよびそのアナログからの置換、挿入または欠失を含めた１以下、２以下、３以下または４以下の修飾をさらに含み得る。それはさらに考えられる‥‥これらのＬＨＣペプチドは、アセチル、イソカプロイル、3,6-ジオシキオクタン酸または1-アミノ-4,7,10-トリオキサ-13-トリデカンアミンスクシニム酸のごとき疎水性または親水性の特徴を有し得るＮ-キャップ領域を含むループのＮ末端部分にてさらなる修飾を有し得るとさらに考えられる。さらに、修飾は、１、２、３またはそれを超えるさらなるアミノ酸を含み得る。これは、言及するにはあまりにも多数の修飾を可能とするが、本願においてさらに例示されるものに基づいて当業者により理解される領域である。
【０１３２】
また、これらのＬＨＣペプチドは、アミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化および環化のごとき化学的変換によりさらに誘導体化し得る。かかる化学的変換は、化学的または生化学的な方法、ならびにｉｎ ｖｉｖｏプロセス、またはそのいずれかの組合せを介して得てもよい。また、これらのＬＨＣペプチドの誘導体は、１以上のポリマーまたは低分子置換基へのコンジュゲーションを含み得る。１つのタイプのポリマーコンジュゲーションは、様々な長さのポリペプチドのＮもしくはＣ末端またはアミノ酸残基側鎖への、ポリエチレングリコール(「PEG」)ポリマー、ポリアミノ酸(例えば、ポリ-his、ポリ-arg、ポリ-lys等)および／または脂肪酸鎖の連結または結合である。低分子置換基は、短いアルキルおよび制約れたアルキル(例えば、分岐状、環状、融合された、アダマンチル)および芳香族基を含む。加えて、RおよびKのごとき塩基性残基は、ペプチドの代謝安定性を改善するために、homoRおよびhomoK、シトルリンまたはオルニチンと置換し得る。本発明に用いたポリペプチドは酸ならびにアミド形態を含む。
【０１３３】
ある具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域は、カルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも連続する4個のアミノ酸を含む。他の具体例において、αらせん領域は、カルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも連続する5、6、7、または8個のアミノ酸を含む。他の具体例において、αらせん領域は、カルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも連続する10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21またはそれを超える連続するアミノ酸を含む。ある具体例において、連続するアミノ酸数が8未満である場合、αらせん領域はさらにアミリンもしくはアミリンアナログのαらせん領域の少なくとも連続する4、5、6、7、9、10、11またはそれを超えるアミノ酸をさらに含むと考えられる。ある具体例において、カルシトニンまたはカルシトニンアナログのより少ないアミノ酸、アミリンまたはアミリンアナログのより多くのアミノ酸は、新規化合物のαらせん領域において見出し得ると想定される。αらせん領域を含むアミノ酸数は、約10〜23個のアミノ酸であり得る。結果的に、αらせん領域は、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22または23個のアミノ酸長で有り得る。さらに、アミノ酸は、約3〜約6個のαヘリカルターン（helical turn）を提供するであろう。化合物のαらせん領域は、カルシトニンおよび／またはアミリンαらせん領域およびそのアナログのものから、置換、挿入または欠失を含めた1、2、3、4、5、6、7、8あるいは10以下の修飾をさらに含むさらに考えられる。
【０１３４】
ある具体例において、ＬＨＣペプチドのＣ末端テールは、アミリンまたはカルシトニンのいずれかおよびそのアナログの最後の6、5または4個のアミノ酸を少なくとも含む。ある具体例において、新規化合物のＣ末端テールは、βターンを有するＣ末端の少なくとも一部分を含む。ある具体例において、βターンは、Gly-Serのアミノ酸の組合せにより導入される。結果的に、ＬＨＣペプチドは、Gly-Serを有し得るか、Gly-Serから開始するアミリンまたはカルシトニンのＣ末端テール(およびそのアナログ)の一部分を含むＣ末端を有し得る。
【０１３５】
ある具体例において、ＬＨＣペプチドのＣ末端テールは、アミリンまたはカルシトニンループおよびそのアナログからの置換、挿入または欠失を含めた1、2または3以下の修飾をさらに含み得る。ＬＨＣペプチドは、例えば、L-オクチルグリシン、4ABU(4-アミノ酪酸)、9Anc(9 アミノナン酸(amiononanoic acid))、3,6-ジオシキオクタン酸または1-アミノ-4,7,10-トリオキサ-13-トリデカンアミンスクシニム酸を含み得るＣ末端テールのＣ末端部分でのさらなる修飾を有し得ると考えられる。さらに、修飾は、1、2、3またはそれを超えるさらなるアミノ酸を含み得る。この領域において考えられた修飾のタイプは、本願においてさらに例示されるものに基づいて当業者により理解されるであろう。
【０１３６】
１つの態様において、ループ領域は、その第１のアミノ酸および最後のアミノ酸が結合を創製できる、少なくとも5〜8個のアミノ酸を含むＮ末端にて見出されたその領域、例えば、アミリンの2〜7位の残基またはカルシトニンの1〜7位の残基、それらの各々のアナログにおけるそれらの対応する領域と定義される。もう一つの態様において、αらせん領域は、ループ領域、およびαらせんを構造上形成するＣ末端テールにより近接して挟まれたアミリンまたはカルシトニンの内部部分、例えば、アミリンの8〜23位の残基またはカルシトニンの8〜7位の残基およびそれぞれのアナログにおけるそれらの対応する領域と定義される。さらにもう一つの態様において、Ｃ末端テールは、αらせん後のその領域、例えば、アミリンの33〜37位の残基もしくは27〜37位の残基ごときより長いものまたはカルシトニンの27位もしくは28位から32位までの残基と定義される。開示された化合物のアミドおよび酸の形態の双方がＬＨＣペプチドに含まれる。
【０１３７】
本明細書に定義されたアミリンおよびカルシトニンは、全ての天然および種変異を含む。アミリンおよびカルシトニンの例は、限定されるものではないが： 配列番号：1ヒトアミリン(配列番号：1)、ラットアミリン(配列番号：2)、サケカルシトニン(sCT) CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP(配列番号：33)およびヒトカルシトニン(hCT) CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP(配列番号：34)を含む。
【０１３８】
一般的な態様において、ＬＨＣペプチドは少なくともループ領域、αらせん領域およびＣ末端テールを含む。ループ領域は、式(II)X-Xaa1配列-Yを含むアミノ配列を含み、ここに、XおよびYは結合を創製でき、相互に化学的に結合するか、または化学的に結合でき、分子内結合、例えば、ジスルフィド結合；アミド結合；例えば、アルキル酸およびアルキルアミンにより形成された環状ラクタム；例えば、アルキルアルデヒドまたはアルキルハライドおよびアルキルアミンを縮合および還元することにより形成されたアルキルアミンまたはイミン架橋；ならびに例えば、側鎖の連結により形成されたアルキル、アルケニル、アルキニル、エーテルまたはチオエーテルを形成する側鎖を有する独立して選択された残基である。アルキル鎖は、約1〜約6個の炭素原子を有する低級アルキル基を含み得る。ある具体例において、分子内結合は、ジスルフィド、アミド、イミン、アミン、アルキルおよびアルケン結合であり得る。ある具体例において、式(II)のXおよびYは、Ser、Asp、Glu、Lys、Orn (オルニチン)またはCysから独立して選択される。ある具体例において、式(II)のXおよびYはCysおよびCysである。他の具体例において、式(II)のXおよびYはSerおよびSerである。依然として他の具体例において、式(II)のXおよびYはAspおよびLys、またはLysおよびAspである。
【０１３９】
式(II)のXaa1配列は、XおよびYの間の3、4、5または6個のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。ある具体例において、Xaa1配列は、Yの次に１以上の置換されたまたは置換されていないヒドロキシル含有残基を持つ領域を有するアミノ酸配列を含む。例えば、ヒドロキシル含有残基領域は、SerまたはThrのいずれかである３個のアミノ酸隣接Ｙの少なくとも２つを有し得る。Xaa1配列における他のアミノ酸はいずれのアミノ酸でもよい。ある具体例において、Xaa1配列は3個のアミノ酸である。他の具体例において、Xaa1配列は4個のアミノ酸である。依然として他の具体例において、Xaa1配列は5個のアミノ酸である。さらに他の具体例において、Xaa1配列は6個のアミノ酸である。結果的に、式(II)のXaa1は、Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7 (配列番号：35)により表わすことができる。ある具体例において、Xaa2、Xaa3、Xaa4、いずれか2つまたは3つすべては存在しないくてもよい。ある具体例において、Xaa5、Xaa6およびXaa7はヒドロキシ含有残基領域を含む。従って、3個のアミノ酸の少なくとも2個は、Ser、Hse、Thr、アロ-トレオニン(アロThr)、d-トレオニン(d-Thr)またはその他の非天然のアナログであり得る。Xaa2はいずれのアミノ酸でもあり得るかまたは存在しないくてもよく、Xaa3はいずれのアミノ酸でもあり得るかまたは存在しないくてもよく、Xaa4はいずれのアミノ酸でもあり得るかまたは存在しないくてもよく、Xaa6がSerまたはThrであってXaa7がSerまたはThrであるならば、Xaa5はいずれのアミノ酸でも有り得、Xaa5がSerまたはThrであってXaa7がSerまたはThrであるならば、Xaa6はいずれのアミノ酸でも有り得、Xaa5がSerまたはThrであってXaa6がSerまたはThrであるならば、Xaa7はいずれのアミノ酸でもあり得る。結果的に、ある具体例において、Xaa1は、存在しないXaa2、Xaa3はAla、Gly、Ser、Aspまたは存在せず、Xaa4はAsn、Ala、Asp、Glyまたは存在せず；Xaa5はAla、Leu、ThrまたはSer；Xaa6はAla、SerまたはThr；およびXaa7は、Ala、Ser、Val、Hse、(S)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-メチルブタン酸(Ahb)、(2S,3R)-2-アミノ-3 ヒドロキシ-メチルペンタン酸(Ahp)、d-Thr、Thrまたはその誘導体であると表わすことができる。他の具体例において、Xaa1は、Xaa2は存在せず、Xaa3はSer、Glyまたは存在せず、Xaa4はAsnまたはAsp、Xaa5はAla、Ser、ThrまたはLeu、Xaa6はAla、ThrまたはSer、およびXaa7はSer、d-Thr、アロThrまたはThrであると表わすことができる。ある具体例において、式(II)のループ領域は、Xaa3がAlaであるか、Xaa3はSerであるか、またはXaa3はGlyであるXaa1の前記の表示を含む。あるいはまたはさらに、ループ領域は、Xaa4がAlaであるか、Xaa4がAsnであるか、Xaa4がAspであるか、またはXaa4はGlyであるXaa1の前記の表示を含む。あるいはまたはさらに、ループ領域は、Xaa5がAlaであるか、Xaa5はThrであるか、またはXaa5がLeuであるXaa1の前記の表示を含む。あるいはまたはさらに、ループ領域は、Xaa6がSerであるか、またはXaa6はAlaであるXaa1の前記の表示を含む。あるいはまたはさらに、ループ領域は、Xaa7がThrであるか、またはXaa7はd-ThrであるXaa1の前記の表示を含む。挿入、欠失および／または誘導体化のごとき１以上、２以上、または３以上の修飾をそのループ領域になし得るとさらに考えられる。
【０１４０】
本発明のループ領域の例は、限定されるものではないが、CNTATC (配列番号：36)；CATATC (配列番号：37)；CDTATC (配列番号：38)；CGTATC (配列番号：39)；CNAATC (配列番号：40)；CNTSTC (配列番号：41)；CNTA-dThr-C (配列番号：42)；CNTA-T(OPO3H2)-C (配列番号：43)；CNTASC (配列番号：44)；CNTAAC (配列番号：45)；CNTAVC (配列番号：46)；CNTA-Hse-C (配列番号：47)；CNTA-Ahb-C (配列番号：48)；CNTA-Ahp-C (配列番号：49)；CSNLSTC (配列番号：50)；CGNLSTC (配列番号：51)；CANLSTC (配列番号：52)；CSALSTC (配列番号：53)；CSNASTC (配列番号：54)；CSNLATC (配列番号：55)；およびCSNLSAC (配列番号：56)を含む。前記のように、挿入、欠失および／または誘導体化のごとき１以上、２以上、または３以上の修飾をそのループ領域になし得るとさらに考えられる。
【０１４１】
ＬＨＣペプチドのループ領域は、Ｎ末端にて修飾またはさらなるアミノ酸をさらに含み得る。かかる修飾は、Lys、Ala、Phe、Ile、Ser、オクチルグリシン、Isocap、Fmoc-3,6-ジオシキオクタン酸、Fmoc-1-アミノ-4,7,10-トリオキサ-13-トリデカンアミンスクシニム酸、アセチル、および／または溶解性、送達、シグナリングのための基のごとき化合物の付加を含む。例示的な修飾されたループは、Xaa1の配列へのLysの付加またはXaa1の配列へのIleの付加を含む。例えば、修飾されたループ領域は、KCNTATC (配列番号：57)であり得る。ある具体例において、ループ領域のＮ末端終端での付加および／または修飾は、ループ領域を変化させ得る。例えば、ループ領域は以下のように修飾され得る:シクロ(2,7)1-7 hアミリン、シクロ(2Asp 7Lys)1-7 hアミリン、Ｎ-イソカプロイル 1-7 hアミリン、Ｎ-3,6-ジオキサオクタノイル 1-7 hアミリン、L-オクチルグリシン 1-7 hアミリン、アセチル(2Agy,7Agy)1-7 hアミリン（AgyはAllylグリシンである）、アセチル(1Ala)1-7 hアミリン、(1Thr 3Asp)1-7 hアミリン、Isocap(7Ala)5-7 sCT、アセチル(2Agy,7Agy)1-7 sCTおよびシクロ(1,7)(1Asp 7Lys)1-7 sCT。従って、Isocap(7Ala)5-7 sCTの例を挙げれば、ある具体例は、アミノ酸Xaa2〜Xaa5が存在しないようなループ領域のＮ末端領域での修飾を含む。
【０１４２】
ＬＨＣペプチドのαらせん領域は長さが約8〜23個のアミノ酸で有り得る。ある具体例において、αらせん領域は両親媒性である。ある具体例において、αらせん領域は約3〜6個のヘリカルターンを含む。ある具体例において、αらせん領域は3、4、5または6個のヘリカルターンを含む。他の具体例において、αらせん領域は、約3、4、5または6個のヘリカルターンと等価な強固な構造である。理想化されたらせんの一例は、LLQQLQKLLQKLKQY (配列番号：58)である。ある具体例において、αらせんは両親媒性構造である。結果的に、このタイプの構造を供する望ましいアミノ酸の特徴は選択され得る。
【０１４３】
カルシトニンαらせん領域、アミリンおよびカルシトニンαらせん領域の組合せもしくはその一部分、および／またはいくつかのCGRP要素がＬＨＣペプチドのαらせん領域に望ましいことが判明した。ループ領域のように、αらせん領域はいずれかのアミリンまたはカルシトニン、およびそのアナログからのものであり得ると考えられる。結果的に、ある具体例において、αらせん領域は、カルシトニンまたはカルシトニンのアナログのαらせん領域の少なくとも一部分である。他の具体例において、αらせん領域は、カルシトニンまたはカルシトニンアナログのαらせん領域の少なくとも一部分、およびアミリンまたはアミリンアナログのαらせんの少なくとも一部分である。依然として他の具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域は、CGRPの要素を含む。新規化合物は、置換、挿入、欠失および／または誘導体化を含めた1、2、3、4、5、6、7、8あるいは10以下のさらなる修飾をさらに含むさらに考えられる。
【０１４４】
ある具体例において、ＬＨＣのαらせん領域はαらせん領域タイプIを含み得る。
αらせん領域タイプIは、sCTの8位からsCTの18、19、20、21、22、23、24、25、26または27位までのアミノ酸を含む。さらに、αらせん領域タイプIは、同一または異なった種のカルシトニンもしくはカルシトニンアナログのαらせん領域の1を超える部分、例えば、8-21 sCT 19-27 sCT；8-21 sCT 18-27 sCT；または8-16 hCT 17-27 sCT；または(11Arg) 8-16 hCT (18Arg) 17-27 sCTを含み得る。あるいはまたはさらに、8-18 sCT〜8-27 sCTの前記のαらせんは、１以上の(10Aib)、(11Arg)、(11Orn)、(11hArg)、(11Cit)、(11hLys)、(11Lys(for))、(17Aib)、(18Arg)、(18Orn)、(18hArg)、(18Cit)、(18hLys)、(18Lys(for))、(18Lys(PEG5000))、(22Leu)、(24Pro)またはそのいずれかの組合せの置換をさらに含み得る。
【０１４５】
１つの具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域タイプIは、X1 V L Xaa10 Xaa11 L S Q Xaa15 L Xaa17 Xaa18 L Q T Xaa22 P Xaa24 T N T X1 (配列番号：59) 
［式中、Xaa10はGlyまたはAib；
Xaa11はLys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLysまたはLys(for)；
Xaa15はGlnまたはPhe；
Xaa17はHisまたはAib；
Xaa18はLys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLys、Lys(for)、Lys(PEG 5000)；
Xaa22はTryまたはLeu；
Xaa24はArgまたはPro；および
X1は存在しないか、または1〜4個のさらなるアミノ酸を含む］
により表わすことができる。
【０１４６】
マーカッシュ群の各メンバー、またはその組合せはそれぞれ本発明のもう一つの具体例であり、単一ユニットと解釈されるべきでないことは忘れるべきではない。これは、例として、ＬＨＣペプチドの具体例を言及する速記方法であり、Xaa18が、Lys、Arg、Orn、hArg、Cit、hLysまたはLys(for)になり得、各変形が本発明の別々の具体例であるαらせん領域タイプI式を含む。結果的に、αらせん領域タイプI式は、Xaa18がLysである１つの具体例を有する。それはXaa18がArgである等のもう一つの具体例を有する。αらせん領域は、置換、挿入または欠失および／または誘導体化のごとき1、2、3、4、5、6、7、8あるいは10以下の修飾を含み得るとさらに考えられる。結果的に、αらせん領域タイプIの化合物はＣ末端でのさらなる欠失を有し得る。ある具体例において、X1のアミノ酸はαヘリックスターンを形成できる。
【０１４７】
ＬＨＣペプチドのαらせん領域タイプIの例は、限定されるものではないが、8-18 sCT、8-21 sCT、8-24 sCT、8-27 sCT、(11Arg) 8-18 sCT、(18Arg) 8-18 sCT、(11Arg 18Arg) 8-18 sCT、(11Orn 18Orn) 8-18 sCT、(11Arg 18Cit) 8-18 sCT、(11hArg 18hArg) 8-18 sCT、(11Arg 18Orn) 8-18 sCT、(11Cit 18Arg) 8-18 sCT、(11Cit 18Cit) 8-18 sCT、(11hLys 18hLys) 8-18 sCT、(10Aib 11Arg 17Aib 18Arg) 8-18 sCT、(11Lys(for) 18Lys(for)) 8-18 sCT、(10Aib 11Lys(for) 17Aib 18Lys(for)) 8-18 sCT、(11Arg 18Lys(PEG 5000)) 8-18 sCT、(11Arg) 8-21 sCT、(18Arg) 8-21 sCT、(11Arg 18Arg) 8-21 sCT、(11Orn 18Orn) 8-21 sCT、(11Arg 18Cit) 8-21 sCT、(11hArg 18hArg) 8-21 sCT、(11Arg 18Orn) 8-21 sCT、(11Cit 18Arg) 8-21 sCT、(11Cit 18Cit) 8-21 sCT、(11hLys 18hLys) 8-21 sCT、(10Aib 11Arg 17Aib 18Arg) 8-21 sCT、(11Lys(for) 18Lys(for)) 8-21 sCT、(10Aib 11Lys(for) 17Aib 18Lys(for)) 8-21 sCT、(11Arg 18Lys(PEG 5000)) 8-21 sCT、(11Arg) 8-24 sCT、(18Arg) 8-24 sCT、(11Arg 18Arg) 8-24 sCT、(11Arg 18Arg 22Leu) 8-24 sCT、(11Arg 18Arg 24Pro) 8-24 sCT、(11Orn 18Orn) 8-24 sCT、(11Arg 18Cit) 8-24 sCT、(11hArg 18hArg) 8-24 sCT、(11Arg 18Orn) 8-24 sCT、(11Cit 18Arg) 8-24 sCT、(11Cit 18Cit) 8-24 sCT、(11hLys 18hLys) 8-24 sCT、(10Aib 11Arg 17Aib 18Arg) 8-24 sCT、(11Lys(for) 18Lys(for)) 8-24 sCT、(10Aib 11Lys(for) 17Aib 18Lys(for)) 8-24 sCT、(11Arg 18Lys(PEG 5000)) 8-24 sCT、(11Arg) 8-27 sCT、(18Arg) 8-27 sCT、(11Arg 18Arg) 8-27 sCT、(11Arg 18Arg 22Leu) 8-27 sCT、(11Arg 18Arg 24Pro) 8-27 sCT、(11Orn 18Orn) 8-27 sCT、(11Arg 18Cit) 8-27 sCT、(11hArg 18hArg) 8-27 sCT、(11Arg 18Orn) 8-27 sCT、(11Cit 18Arg) 8-27 sCT、(11Cit 18Cit) 8-27 sCT、(11hLys 18hLys) 8-27 sCT、(10Aib 11Arg 17Aib 18Arg) 8-27 sCT、(11Lys(for) 18Lys(for)) 8-27 sCT、(10Aib 11Lys(for) 17Aib 18Lys(for)) 8-27 sCT、(11Arg 18Lys(PEG 5000)) 8-27 sCT、(11Arg 18Arg) 8-21 sCT-19-27 sCT、および(11Arg 18Arg) 8-21 sCT-(18Leu) 18-27 sCTを含む。
【０１４８】
ある具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域はαらせん領域タイプIIを含み得る。αらせん領域タイプIIは、アミリンまたはアミリンアナログのαらせん領域の一部分、およびカルシトニンまたはカルシトニンアナログのαらせん領域の一部分を含む。αらせん領域タイプIIは、hアミリンの8位からhアミリンの11、12、13、14、15、16、17、19位までのアミノ酸、およびsCTの13、14、15、16、17、18あるいは19位から18、19、20、21、22、23、24、25、26または27位までのアミノ酸を含み得る。あるいはまたはさらに、アミリンおよびカルシトニンの前記のαらせん領域は、１以上の(8Val)、(9Leu)、(9Met)、(10Gly)、(10His)、(12Thr)、(13Thr)、(13Asn)、(13Phe)、(13Tyr)、(14Arg)、(14Ala)、(14Asp)、(14Glu)、(14Gln)、(14Thr)、(14Gly)、(15Leu)、(15Ser)、(15Glu)、(15Ala)、(15Tyr)、(16Asp)、(17Ser)、(17Phe)、(18Arg)、(17Aib)、(18Arg)、(18Orn)、(18hArg)、(18Cit)、(18hLys)、(18Lys(for))、(18Lys(PEG5000))、(19Phe)、(20His)、(21Asn)、(22Met)、(22Val)、(22Phe)、(22Leu)、(24Pro)またはその組合せの置換をさらに含み得る。ある具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域タイプIIにおけるアミノ酸数は、少なくとも10個のアミノ酸である。他の具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域タイプIIにおけるアミノ酸数は、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22または23である。他の具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域タイプIIにおけるアミノ酸数は、24またはそれを超えるものである。
【０１４９】
１つの具体例において、ＬＨＣペプチドのαらせん領域タイプIIは、X1 Xaa8 Xaa9 Xaa10 R Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 T N T X1 (配列番号：60) 
［式中、Xaa8はAlaまたはVal；
Xaa9はThr、MetまたはLeu；
Xaa10はGln、Gly、His；
Xaa12はLeuまたはThr；
Xaa13は、Ala、Thr、Asn、Phe、Tyr、SerまたはThr；
Xaa14は、Asn、Arg、Ala、Asp、Gln、Gln、ThrまたはGly；
Xaa15は、Phe、Leu、Ser、Gln、Ala、AspまたはTyr；
Xaa16はLeuまたはAsp；
Xaa17はVal、His、Ser、PheまたはAib；
Xaa18はHis、Arg、Lys、Orn、hArg、Cit、hLys、Lys(for)またはLys(PEG5000)；
Xaa19はLeu、SerまたはPhe；
Xaa20はGlnまたはHis；
Xaa21はThrまたはAsn；
Xaa22はTyr、Val、Phe、LeuまたはMet；
Xaa24はArgまたはPro；および
X1は存在しないか、または1-4個のさらなるアミノ酸を含む］
により表わすことができ、ここに、
【０１５０】
再度、マーカッシュ群の各メンバー、またはその組合せはそれぞれ本発明のもう一つの具体例であり、単一ユニットと解釈されない。αらせん領域は、本明細書に記載した化合物の置換、挿入または欠失および／または誘導体化のごとき1、2、3、4、5、6、7、8あるいは10以下の修飾を含み得るとさらに考えられる。例えば、ある具体例において、αらせん領域タイプIIは、27、26、25、24、または22位の欠失を生じるＣ末端での欠失を有し得る。しかしながら、他の具体例において、欠失は、19、20、21または22位のアミノ酸を取り去らない。
【０１５１】
ＬＨＣペプチドのタイプIIのαらせん領域の例は、限定されるものではないが、(8Val 9Leu 10Gly) 11-15 hアミリン 16-27 sCT、(8Val 9Leu 10Gly) 11-15 hアミリン (18Arg) 16-27 sCT、8-12 hアミリン (18Arg) 13-27 sCT、8-18 hアミリン 19-23 sCT、8-18 Hアミリン 19-27 sCT、(15Glu 18Arg) 8-18 hアミリン 19-24 sCT、(14Arg 15Ser) 8-18 hアミリン 19-22 sCT、(13Ala 14Ala 15Ala) 8-18 hアミリン 19-27 sCT、(13Ala 14Asp 15Ala) 8-18 hアミリン 19-22 sCT、(13Ala 14Asp) 8-18 hアミリン 19-23 sCT、(13Ala 14Asp) 8-18 hアミリン 19-27 sCT、(13Ala 14Ala) 8-18 hアミリン 19-22 sCT、(13Ala 14Glu) 8-18 hアミリン 19-22 sCT、(13Thr 14Asp 15Tyr) 8-18 hアミリン 19-22 sCT、(13Ala 14Gln) 8-18 hアミリン 19-22 sCT、(13Asn 14Glu 15Tyr) 8-18 hアミリン 19-27 sCT、(13Phe 14Asp) 8-18 hアミリン 19-27 sCT、(13Ala 14Asp) 8-18 hアミリン (15Glu 18Arg) 8-18 hアミリン 19-24 sCT、(19Phe 22Phe) 19-27 sCT、(13Ala 14Asp) 8-18 hアミリン (19Phe 20His 22Phe) 19-27 sCT、(13Ala 14Asp) 8-18 hアミリン (19Phe 22Phe) 19-27 sCT、(9Thr 10His) 8-18 hアミリン 19-22 sCT、(9Thr 10His 14Gly 15Leu 17Ser 18Arg) 8-19 hアミリン 20-23 sCT、8-18 hアミリン (21Asn 22Phe 23Val) 19-23 sCT、8-18 hアミリン (22Met) 19-27 sCT、8-18 hアミリン (22Val) 19-27 sCT、(9Met 12Thr 13Tyr 14Thr 15Glu 16Asp 17Phe) 8-17 hアミリン (18Arg) 18-20 sCT)を含む。他の具体例において、新規化合物は、sCTの22、23、24、25、26または27に対応して終端するαらせんを持つ前記の例示的な化合物の変形を含む。また、換言すれば、化合物8-18 hアミリン 19-24 sCTは、この化合物が単に24位で切形された前記の8-18のhアミリン 19-27 sCTであると特に記載される。もう一つの例として、化合物(13Ala 14Asp 15Ala)8-18 hアミリン 19-23は、(13Ala 14Asp 15Ala) 8-18 hアミリン 19-22に適用された前記の言語のために特に記載される。
【０１５２】
ある具体例において、ＬＨＣペプチドのＣ末端テールは、hアミリンの27、28、29、30、31あるいは33位から36または37位までのアミノ酸を含む。他の具体例において、ＬＨＣペプチドのＣ末端テールは、sCTの27または28位から32位までのアミノ酸を含む；しかしながら、ループ領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログからもので、αらせん領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログからのものである場合、Ｃ末端テールの最後の位置は、Pro、Hyp、HseまたはHseの誘導体ではない。あるいはまたはさらに、アミリンおよびカルシトニンの前記のαらせんは、さらに１以上の(27Tyr) hアミリン、(29Arg) hアミリン、(32Val) hアミリン、(32Thr) hアミリン、(34Glu) hアミリン、(35Lys) hアミリン、(36Phe) hアミリン、(36Ala) hアミリン、(37Phe) hアミリン、(30Asn) sCT、(32Tyr) sCTまたはそのいずれかの組合せの置換を含み得る。
【０１５３】
１つの具体例において、ＬＨＣペプチドのＣ末端テールは、Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 (配列番号：61) 
［式中、Xaa28はLys、Tyrまたは存在せず；
Xaa29はSer、Proまたは存在せず；
Xaa30はSer、Pro、Argまたは存在せず；
Xaa31はThrまたは存在せず；
Xaa32はAsnまたは存在せず；
Xaa33はVal、Thrまたは存在せず；
Xaa35はSer、Gln
Xaa36はAsn、LyまたはGly；
Xaa37はThr、PheまたはAla；
Xaa38はTyr、Phe、Proまたは存在せず；
但し、ＬＨＣアゴニストのループ領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログであって、αらせん領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログからものである場合、Ｃ末端テールの最後の位置は、Pro、Hyp、HseまたはHseの誘導体ではない］
により表わすことができる。
【０１５４】
再度、マーカッシュ群の各メンバー、またはその組合せはそれぞれ本発明のもう一つの具体例であり、単一ユニットと解釈されない。Ｃ末端テールは、本明細書に記載した化合物の置換、挿入または欠失および／または誘導体化のごとき1、2、または3以下の修飾を含み得るとさらに考えられる。
【０１５５】
ＬＨＣアゴニストのＣ末端テールの例は、限定されるものではないが、27-37 rアミリン、(27Tyr 29Arg 32Thr) 27-37 rアミリン、(29Arg 32Thr) 28-37 rアミリン、30-37 hアミリン、(32Thr) 30-37 hアミリン、(35Lys 36Ala 37Phe) 30-37 hアミリン、30-36 hアミリン、(32Val) 30-36 hアミリン、(34Glu 36Phe) 30-36 hアミリン、31-37 hAmyin、31-36 hアミリン、33-36 hアミリン、33-37 hアミリン、28-32 sCT、(30Asn 32Tyr) 28-32 sCTおよび27-32 sCTを含む。他の具体例において、Ｃ末端テールはアミノ酸配列：KSNFVPTN (配列番号：62)またはSNFVPTNV (配列番号：63)を含む。
【０１５６】
置換、挿入または欠失および／または誘導体化のごとき1、2または3以下の修飾を前記の段落に記載した本発明のＣ末端テールになし得るとさらに考えられる。ＬＨＣペプチドのＣ末端テールは、Ｃ末端にて修飾またはさらなるアミノ酸をさらに含み得る。かかる修飾は、Lys、4個までのLys、L-オクチルグリシン、4ABU(4-アミノ酪酸)、9Anc（9-アミノナン（amiononanoic）酸）および／または可溶性、安定または送達のための群のごとき化合物の付加を含む。例には、限定されるものではないが、33-37 hアミリン L-オクチルグリシン、33-37 hアミリン 4ABUおよび33-37 hアミリン 9Ancが含まれる。
【０１５７】
一般的な態様において、本発明に用いたＬＨＣペプチドは、
(a)いずれかの本願明細書に記載したＬＨＣアゴニストループ領域；
(b) いずれかの本願明細書に記載したＬＨＣアゴニストαらせん領域；および
(c)いずれかのＬＨＣアゴニストＣ末端テール
を含み、但し、ループ領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログからのものであって、αらせん領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログからのものである場合、Ｃ末端の最後の位置はPro、Hyp、HseまたはHseの誘導体ではない。
【０１５８】
もう一つの一般的な態様において、本発明に用いたＬＨＣペプチドは、
(a) 式(II)Xaa1またはＮ末端での修飾を持つXaa1を含むループ領域；
(b) αらせん領域タイプIまたはタイプIIを含むαらせん領域；
(c) 配列番号：61により表わされたＣ末端テール
を含み、但し、ループ領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログであって、αらせん領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログからのものである場合、Ｃ末端の最後の位置はPro、Hyp、HseまたはHseの誘導体ではない。Ｃ末端終端はさらなる修飾を含み得る。
【０１５９】
さらにもう一つの態様において、本発明に用いたＬＨＣペプチドは、式(III): Xaa1 X Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Y Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (配列番号：64) 
［式中、Xaa1はA、C、hC、D、E、F、I、L、K、hK、R、hR、S、Hse、T、G、Q、N、M、Y、W、P、Hyp、H、Vまたは存在せず；
Xaa3はA、D、E、N、Q、G、V、R、K、hK、hR、H、I、L、Mまたは存在せず；
Xaa4はA、I、L、S、Hse、T、V、Mまたは存在せず；
Xaa5はA、S、T、Hse、Y、V、I、LまたはM；
Xaa6はT、A、S、Hse、Y、V、I、LまたはM；
Xaa8はA、V、I、L、FまたはM；
Xaa9はL、T、S、Hse、V、IまたはM；
Xaa10はG、H、Q、K、R、N、hKまたはhR；
Xaa11はK、R、Q、N、hK、hRまたはH；
Xaa12はL、I、V、F、M、WまたはY；
Xaa13はA、F、Y、N、Q、S、HseまたはT；
Xaa14はA、D、E、G、N、K、Q、R、H、hRまたはhK；
Xaa15はA、D、E、F、L、S、Y、I、VまたはM；
Xaa16はL、F、M、V、YまたはI；
Xaa17はH、Q、N、S、Hse、TまたはV；
Xaa18はK、hK、R、hR、H、u (Cit)またはn (Orn)；
Xaa19はF、L、S、Hse,V、I、Tまたは存在せず；
Xaa20はH、R、K、hR、hK、N、Qまたは存在せず；
Xaa21はT、S、Hse、V、I、L、Q、Nまたは存在せず；
Xaa22はF、L、M、V、YまたはI；
Xaa23はP or Hyp；
Xaa24はP、Hyp、R,K、hR、hKまたはH；
Xaa25はT、S、Hse、V、I、L、FまたはY；
Xaa26はN,Q、DまたはE；
Xaa27はT、V、S、F、IまたはL；
Xaa28はG or A；Xaa29はS、Hse、T、V、I、LまたはY；
Xaa30はE、G、K、N、D、R、hR、hK、HまたはQ；
Xaa31はA、T、S、Hse、V、I、L、FまたはY；および
Xaa32はF、P、Y、Hse、S、TまたはHyp；
XおよびYは結合を創製でき、相互に化学的に結合して、分子内結合、例えば、ジスルフィド結合；アミド結合；環状ラクタムを形成し得るアルキル酸およびアルキルアミン；縮合および還元してアルキルアミンまたはイミン架橋を形成し得るアルキルアルデヒドまたはアルキルハライドおよびアルキルアミン；または連結してアルキル、アルケニル、アルキニル、エーテルまたはチオエーテルを形成する側鎖を有する独立して選択された残基である］で表されるアミノ酸配列を含む。アルキル鎖は約1〜約6個の炭素原子を有する低級アルキル基を含み得る。ある具体例において、分子内結合は、ジスルフィド、アミド、イミン、アミン、アルキルおよびアルケン結合で有り得る。ある具体例において、XおよびYは、Ser、Asp、Gln、Lys、OrnまたはCysから独立して選択される。ある具体例において、XおよびYはCysおよびCysである。他の具体例において、XおよびYはSerおよびSerである。依然として他の具体例において、XおよびYはAspおよびLysまたは、LysおよびAspである。
【０１６０】
さらにもう一つの態様において、本発明に用いたＬＨＣペプチドは、式(IV): Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G S Xaa30 Xaa31 Xaa32 (配列番号：65) 
［式中、Xaa1はA、C、D、F、I、K、S、Tまたは存在せず；
Xaa2はC、D、Sまたは存在せず；
Xaa3はA、D、Nまたは存在せず；
Xaa4はA、L、Tまたは存在せず；
Xaa5はAまたはS；
Xaa6はT、A、SまたはV；
Xaa7はC、KまたはA；
Xaa8はA、V、L、orM；
Xaa9はLまたはT；
Xaa10はG、HまたはQ；
Xaa11はK、R、QまたはhArg；
Xaa12はL、WまたはY；
Xaa13はA、F、N、Q、SまたはT；
Xaa14はA、D、E、G、N、K、QまたはR；
Xaa15はA、D、E、F、L、SまたはY；
Xaa16はLまたはF；
Xaa17はH、Q、SまたはV；
Xaa18はK、R、hArg、u (Cit)またはn (Orn)；
Xaa19はF、L、Sまたは存在せず；
Xaa20はH、Qまたは存在せず；
Xaa21はT、Nまたは存在せず；
Xaa22はF、L、M、VまたはY；
Xaa24はPまたはR；
Xaa27はTまたはV；
Xaa30はE、G、KまたはN；
Xaa31はAまたはT；および
Xaa32はF、PまたはYである］
で表されるアミノ酸配列を含む。
【０１６１】
さらにもう一つの態様において、本発明に用いたＬＨＣペプチドは、式(V): Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 T Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 L Xaa13 Xaa14 Xaa15 L Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G S Xaa30 Xaa31 Xaa32, (配列番号：66)
［式中、Xaa1はA、C、F、I、K、Sまたは存在せず；
Xaa2はC、DまたはS；
Xaa3はA、DまたはN；
Xaa4はA、LまたはT；
Xaa5はAまたはS；
Xaa7はCまたはK；
Xaa8はAまたはV；
Xaa9はLまたはT；
Xaa10はG、HまたはQ；
Xaa11はK、RまたはhArg；
Xaa13はA、F、N、SまたはT；
Xaa14はA、D、E、G、N、QまたはR；
Xaa15はA、E、F、L、SまたはY；
Xaa17はH、SまたはV；
Xaa18はK、R、hArg、u (Cit)またはn (Orn)；
Xaa19はF、LまたはS；
Xaa20はHまたはQ；
Xaa21はTまたはN；
Xaa22はF、L、M、VまたはY；
Xaa24はPまたはR；
Xaa27はTまたはV；
Xaa30はE、G、KまたはN；
Xaa31はAまたはT；および
Xaa32はF、PまたはYである］
で表されるアミノ酸配列を含む。
【０１６２】
一般的な態様において、式(III)、(IV)または(V)の配列は、置換、挿入、欠失、伸長および／または誘導体化1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12またはそれを超える修飾をさらに含む。ある具体例において、式(III)、(IV)または(V)の配列は、22および23位のアミノ酸の間に挿入されたValを含む。他の具体例において、式(III)、(IV)または(V)の配列は、22および23位の間に挿入されたGlnを含む。依然として他の具体例において、式(III)、(IV)または(V)の配列は、22および23位の間のGln-Thr-Tyrの配列を含む。さらに他の具体例において、式(III)、(IV)または(V)の配列は、22および23位の間のLeu-Gln-Thr-Tyr（配列番号：67）の配列を含む。もう一つの一般的な態様において、式(III)、(IV)または(V)の修飾は、Ｎ末端であり得る。ある具体例において、式(III)、(IV)または(V)のＮ末端部分は、さらなるオクチルグリシンを有する。他の具体例において、式(III)、(IV)または(V)のN末端部分は、さらなるisocapを有する。
【０１６３】
さらにもう一つの態様において、本発明に用いたＬＨＣペプチドは、式(VI): Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 T N Xaa27 G S Xaa30 Xaa31 Xaa32 (配列番号：68) 
［式中、Xaa1はA、C、D、F、K、Tまたは存在せず；
Xaa2はA、C、D、Sまたは存在せず；
Xaa3はA、D、Nまたは存在せず；
Xaa4はA、L、Tまたは存在せず；
Xaa5はAまたはS；
Xaa6はA、S、TまたはV；
Xaa7はA、CまたはK；
Xaa8はA、L、MまたはV；
Xaa9はLまたはT；
Xaa10はG、HまたはQ；
Xaa11はK、QまたはR；
Xaa12はL、WまたはY；
Xaa13はA、N、Q、SまたはT；
Xaa14はA、D、E、G、K、N、QまたはR；
Xaa15はA、D、E、F、L、SまたはY；
Xaa16はFまたはL；
Xaa17はH、Q、SまたはV；
Xaa18はKまたはR；
Xaa19はF、L、Sまたは存在せず；
Xaa20はH、K、Qまたは存在せず；
Xaa21はQ、Tまたは存在せず；
Xaa22はF、LまたはY；
Xaa24はPまたはR；
Xaa27はTまたはV；
Xaa30はE、KまたはN；
Xaa31はAまたはT；および
Xaa32はF,Yまたは存在しない］
で表されるアミノ酸配列を含む。
【０１６４】
一般的な態様において、式(VI)の配列は、置換、挿入、欠失、伸長および／または誘導体化の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12またはそれを超える修飾をさらに含む。ある具体例において、式(III)、(IV)、(V)または(VI)の配列は24位での欠失を含む。
【０１６５】
さらにもう一つの様態として,本発明で用いるLHCペプチドは以下を含むアミノ酸配列を含む；
a)式(II) Xaa1を含むループ領域; ここに、Xaa1 は X Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Y (配列番号:69)［式中、
Xaa2はいずれかのアミノ酸または存在せず;
Xaa3は Ala、 Gly、 Ser、 Aspまたは存在せず;
Xaa4は Asn、 Ala、 Asp、 Glyまたは存在せず;
Xaa5は Ala、 Leu、 Thr、または Ser; 
Xaa6は Ala、 Ser、 またはThr; および
Xaa7は Ala、 Ser、 Val、 Hse、 (S)-2-アミノ-3-ヒドロキシ -メチルブタン酸 (Ahb)、 (2S、3R)-2-アミノ -3ヒドロキシ-メチルペンタン酸 (Ahp)、d-Thr、 Thr、またはその誘導体であり;
X およびYは結合を生じさせることができるアミノ酸であって、互いに化学的に結合して、ジスルフィド結合; アミド結合; アルキル酸およびアルキルアミンによって形成される環状ラクタム;アルキルアルデヒドまたはハロゲン化アルキルおよびアルキルアミンを縮合および還元することによって形成されたアルキルアミンもしくはイミンブリッジ;および側鎖の結合により形成されたアルキル・アルケニル、アルキニル、エーテルもしくはチオエーテル結合のような分子内結合を形成することができる側鎖を有する独立して選択された残基である] 
のアミノ酸配列を含む。
b)配列 X1 V L Xaa10 Xaa11 L S Q Xaa15 L Xaa17 Xaa18 L Q T Xaa22 P Xaa24 T N T X1 (配列番号:70) ［式中、
Xaa10はGlyまたはAib; 
Xaa11はLys、 Arg、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys、またはLys(for);
Xaa15はGluまたはPhe;
Xaa17は HisまたはAib;
Xaa18は Lys、 Arg、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys、Lys(for)、 Lys(PEG 5000);
Xaa22はTryまたはLeu; 
Xaa24はArgまたはPro; および
X1は存在しないか、または1-4個のさらなるアミノ酸を含む]
を含む、αラセン領域タイプI
c)配列Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 (配列番号:71) ［式中、
Xaa28はLys、 Tyr、または存在せず;
Xaa29はSer、 Pro、または存在せず;
Xaa30はSer、 Pro、 Arg、または存在せず;
Xaa31はThr、または存在せず;
Xaa32はAsnまたは存在せず;
Xaa33はVal、 Thr、または存在せず;
Xaa35はSer、 Glu
Xaa36はAsn、 Lys、または Gly;
Xaa37はThr、 Phe、または Ala;
Xaa38はTyr、 Phe、 Pro、または存在せず;
但し、ループ領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログ由来であって、αラセン領域がカルシトニンまたはカルシトニンアナログ由来である場合、当該C -末端テールの最後の位置はPro、Hyp、Hse、またはHseの誘導体ではない]
を含む当該C -末端テール。
【０１６６】
さらにもう一つの様態として、本発明で用いるLHCペプチドは以下を含むアミノ酸配列を含む。
a) Xaa1を含むループ領域;
a) 化学式(II) Xaa1を含むループ領域； ここに、Xaa1はX Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Y (配列番号:72) [式中、
Xaa2はいずれかのアミノ酸または存在せず;
Xaa3はAla、 Gly、 Ser、 Aspまたは存在せず;
Xaa4はAsn、 Ala、 Asp、 Glyまたは存在せず;
Xaa5はAla、 Leu、 Thr、またはSer; 
Xaa6はAla、 Ser、またはThr; および
Xaa7はAla、 Ser、 Val、 Hse、 Ahb、 Ahp、 d-Thr、 Thr、またはその誘導体;
X およびYは結合を生じさせることができるアミノ酸であって、互いに化学的に結合して、ジスルフィド結合; アミド結合; アルキル酸およびアルキルアミンによって形成される環状ラクタム;アルキルアルデヒドまたはハロゲン化アルキルおよびアルキルアミンを縮合および還元することによって形成されたアルキルアミンもしくはイミンブリッジ;および側鎖の結合により形成されたアルキル、アルケニル、アルキニル、エーテルもしくはチオエーテル結合のような分子内結合を形成することができる側鎖を有する独立して選択された残基である] 
のアミノ酸配列を含む；
b)配列X1 Xaa8 Xaa9 Xaa10 R Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 T N T X1 (配列番号:73) [式中、
Xaa8はAlaまたはVal;
Xaa9はThr、 MetまたはLeu;
Xaa10はGln、 Gly、 His;
Xaa12はLeu、またはThr;
Xaa13 はAla、 Thr、 Asn、 Phe、 Tyr、 Ser、またはThr;
Xaa14はAsn、 Arg、 Ala、 Asp、 Glu、 Gln、 Thr、またはGly;
Xaa15はPhe、 Leu、 Ser、 Glu、 Ala、 Asp、またはTyr;
Xaa16はLeuまたはAsp;
Xaa17はVal、 His、 Ser、 Phe、またはAib;
Xaa18はHis、 Arg、 Lys、 Orn、 hArg、 Cit、 hLys、 Lys(for)、または Lys(PEG5000);
Xaa19 は Leu、 Serまたは Phe;
Xaa20 は Glnまたは His;
Xaa21 は Thrまたは Asn;
Xaa22 は Tyr、 Val、 Phe、 Leuまたは Met;
Xaa24 は ArgまたはPro; および
X1は存在しないか、または1-4個のさらなるアミノ酸]
を含むαラセン領域タイプII、および
c)配列Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 (配列番号:74) ［式中、
Xaa28はLys、Tyr、または存在せず;
Xaa29はSer、Pro、または存在せず;
Xaa30はSer、Pro、Arg、または存在せず;
Xaa31はThr、または存在せず;
Xaa32はAsnまたは存在せず;
Xaa33はVal、 Thr、または存在せず;
Xaa35はSer、またはGlu
Xaa36はAsn、 Lys、または Gly;
Xaa37はThr、 Phe、または Ala;
Xaa38はTyr、 Phe、 Pro、または存在しない]
を含むC-末端テール。
【０１６７】
さらにもう一つの様態として、本発明で用いるLHCペプチドは以下を含む:
(配列番号:75)  KCNTATCVLGKLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:76)  KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPRTNTGSNTY
(配列番号:77)  KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPPTNTGSNTY
(配列番号:78)  KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY
(配列番号:79)  KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPPTNVGSNTY
(配列番号:80)  KCNTATCVLGRLANFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:81)  ACNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:82)  KCNAATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:83)  KCNTAACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:84)  CANLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:85)  イソカプロイル-STAVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:86)  CSNASTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:87)  CSNLATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:88)  CSNLSACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:89)  KCNTATCVLGRLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:90)  KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSGTP
(配列番号:91)  CSALSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:92)  Ac-(Agy)SNLST(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:92)  Ac-K(Agy)NTAT(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:93)  イソカプロイル-STAVL(Aib)RLSQELRLQTYPRTNTGSGTP
(配列番号:94)  イソカプロイル-STAVLG[K(FOR)]LSQELH[K(FOR)]LQTYPRTNTGSGTP
(配列番号:95)  イソカプロイル-STAVL(Aib)[K(FOR)]LSQEL(Aib)[K(FOR)]LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:96)  イソカプロイル-STAVL(Aib)[K(FOR)]LSQEL(Aib)[K(FOR)]LQTYPRTNVGSNTY
(配列番号:97)  KCNTATCLLQQLQKLLQKLKQYPRTNTGSNTY
(配列番号:98)  KCNTASCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:99)  KCNTAVCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:100) KCNTATCVLGRLSQELHRYPRTNTGSNTY
(配列番号:101) KCNTATCVLGK(FOR)LSQELHK(FOR)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:102) KCNTA(d-Thr)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:103) KCNTA(dAh)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:104) Ac-ACNTATCVLGRLSQELHK(PEG5000)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:105) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:106) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:107) KCNTATCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:108) KCNTSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:109) KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:110) KCNTATCATQRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY
(配列番号:111) KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY
(配列番号:112) KCNTA(Hse)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:113) KCNTA(Ahb)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:114) KCNTA(Ahp)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:115) KCNTAT(OPO3H2)CVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:116) KCNTATCVLG(Orn)LSQELH(Orn)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:117) KCNTATCVLG(Cit)LSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:118) KCNTATCVLG(homoK)LSQELH(homoK)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:119) L-オクチルグリシン-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:120) N-3, 6-ジオキサオクタノイル -CNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY
(配列番号:121) KCNTATCMLGRYTQDFHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:122) DSNLSTKVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:123) KDNTATKVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:124) CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:125) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(9Anc)
(配列番号:126) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(L-オクチルグリシン)
(配列番号:127) N-イソカプロイル-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:128) KCNTATCVLG(ホモR)LSQELH(ホモR)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:129) FCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:130) KCNTATCVLGRLSQELH(Cit)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:131) KCNTATCVLGRLSQELH(Orn)LQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:132) ICNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:133) 1-オクチルグリシン-CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:134) イソカプロイル-CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:135) KCNTATCVLG(Cit)LSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:136) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(4ABU)
(配列番号:137) イソカプロイル-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(4ABU)
(配列番号:138) KCNTSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSEAF
(配列番号:139) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPTNVGSEAF
(配列番号:140) KCNTATCVLGRLSRSLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:141) KCNTATCVTHRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:142) KCNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:143) CNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNT
(配列番号:144) KCNTATCVLGRLSQELHRLQNFVPRTNTGSNTY
(配列番号:145) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSETF
(配列番号:146) ACDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:147) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSKAF
(配列番号:148) KCDTATCVTHRLAGLLSRSQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:149) KCNTATCVLGRLADALHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:150) KCNTATCVLGRLAAFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:151) SCNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:152) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTMPRTNTGSNTY
(配列番号:153) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTVPRTNTGSNTY
(配列番号:154) KCNTATCVLGRLNEYLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:155) SCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:156) KCNTATCVLGRLTEFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:157) KCNTATCVLGRLAEFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:158) KCNTATCVLGRLTDYLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:159) KCNTATCVLGRLAQFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:160) KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSNTY
(配列番号:161) KCNTATCVLGRLADFLHRFHTFPRTNTGSNTY
(配列番号:162) KCNTATCVLGRLADFLHRFQTFPRTNTGSGTP
(配列番号:163) CNTATCVLGRLADFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:164) KCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:165) KCNTATCVLGRLFDFLHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:166) KCNTATCVLGRLAAALHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:167) TCDTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:168) CSNLSTCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY
(配列番号:169) KCNTATCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY
(配列番号:170) CSNLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
(配列番号:171) KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY
【０１６８】
もう一つの様態として、本発明で用いるLHCペプチドは配列番号:75 から171の生物活性断片を含む。生物活性断片は1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15 もしくはより多くのアミノ酸における欠失部を含んでもよい。ある具体例においては、配列番号:75から171のアミノ酸配列は少なくとも 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10以上の、置換、挿入、欠失、および/または誘導体化などの修飾を含む。他の実施形態においては、配列番号:75から171のアミノ酸配列は1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10以下の置換、挿入、欠失、および/または誘導体化などの修飾を有する。本発明のもう一つの様態として、本発明における化合物は配列番号: 75ないし171のいずれに対しても、少なくとも75、80、85、90、95、または97 %のアミノ酸配列同一性を有するものを含む。パーセント同一性はVectorNTI（登録商標） (Invitrogen; Carlsbad CA)におけるAlignX（登録商標）モジュールによる解析によって決定する。前記の各パーセントの同定、または生物活性断片への言及もしくは修飾は各配列番号に対して: 個々に、適用されることを意図する。例として、前記の各実施形態について、断片、修飾、またはパーセント同定は配列番号:75、76、77、78、44、等、もしくは配列番号におけるいずれの基に対しても適用可能である。
【０１６９】
一般的に、アミリンアゴニストまたはアミリンアゴニストアナログは、１以上の受容体と直接的にまたは間接的に相互作用し、またはそれと結合することによって、アミリン活性を模倣する化合物として認識されている。従って、本発明における化合物は、カルシトニン、 アミリン、CGRP、もしくはこの３つの該化合物の本明細書中に開示されたいずれの組合せの少なくとも一つの生物学的効果に対するアゴニストとして作用し得る、あるいはアミリン、カルシトニン、または CGRPの受容体の少なくとも１つに結合し得る。逆に、アミリンアンタゴニストは、１以上の受容体と直接的または間接的に相互作用する、またはそれに結合することによって、アミリンの活性を抑制する。これらの相互作用もしくは結合事象はグレリンレベルに作用する事象を含む。  
【０１７０】
本発明での使用で考えられるアミリンアンタゴニストはAC66 (sCT[832]) (配列番号:172)および、 CGRP受容体上での選択的アミリン受容体アンタゴニストとして開発された、サケカルシトニンの25アミノ酸ペプチド断片であるAC187 (Ac 30Asn、32Tyr-sCT[8-32]) (配列番号:173)のような誘導体を含む。他の有用なアンタゴニストは米国特許第5、625、032号および第5、580、953号に記載されているアンタゴニストを含み、 参照することにより本発明に組み込む。このようなアンタゴニスト化合物は以下の式(VII):  X-R1-Thr-Gln-R2-Leu-Ala-Asn-R3-Leu-Val-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-R4-Asn-Thr-Tyr-NH2 (配列番号:174)
[式中、 
R1はAlまたは結合; 
R2はArg、Gln、Lys、AsnまたはLeu; 
R3はGln、Glu、Asn、AspまたはPhe; 
R4はAlaまたはSer;および 
Xは水素またはアセチル基] 
を含むものを含む。
【０１７１】
アミリンアンタゴニストはN末端がアセチル化されていても、アセチル化されていなくてもよく、当該分子の酸ならびに酸アミド形態を含む。アミリンアンタゴニストの例として、限定されるものではないが、アセチル-Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr (配列番号:175)、 Ala Thr GlnGln Leu Ala Asn Gln Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr (配列番号:176)、Ala Thr Gln Leu Leu Ala Asn Gln Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr (配列番号:177)、 Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Gln Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr (配列番号:178)、 Ala Thr Gln Leu Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr (配列番号:179)、Ala Thr Gln Gln Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr (配列番号:180) が含まれる。
【０１７２】
アミリン活性について化合物を試験する方法は当技術分野で知られている。アミリンアゴニストまたはアンタゴニストをテストするための例示的スクリーニング手法およびアッセイは本明細書中における実施例、特に実施例4、および米国特許第5、264、372号および第5、686、411号に記載されており、それらを参照することにより本発明に組み込む。  
【０１７３】
アミリンアゴニスまたはアナログとしての活性は、側坐核受容体結合アッセイを含む様々なスクリーニング分析、ヒラメ筋分析、 胃内容排出分析、もしくは低カルシウム血症を誘発するもしくは、ほ乳類における食後高血糖を減少させる能力によって確認および定量可能である。
【０１７４】
受容体結合アッセイ、特異的に膜結合アミリン受容体に結合する化合物の能力を測定する競合アッセイは、米国特許第5、264、372 号および5、686、411号に開示されており、参照することにより本発明に組み込む。該アッセイで用いる膜画分調製物の好ましい分析源は側坐核および周辺領域由来の膜を含む前脳基底部である。アッセイする化合物は125I Bolton Hunterラットアミリンと受容体への結合について競合する。(B)への結合量をリガンド濃度のログ関数としてプロットする競合曲線は、 4-パラメーターロジスティック方程式(INPLOT program; GraphPad Software、 San Diego、 Calif.)に対する非線形回帰もしくは、DeLean等におけるALLFITプログラム (ALLFIT、 Version 2.7 (NIH、 Bethesda、 Md. 20892)) による分析を用い、コンピューターによって分析される。Munson and Rodbard (1980) Anal. Biochem. 107:220-239。
【０１７５】
ヒラメ筋におけるアミリンアゴニスト/アナログの生物活性のアッセイは、前記の方法を用いて行うことができ(Leightonら (1988) Nature 335:632-635; Cooperら (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:7763-7766)、そこではアミリンアゴニスト活性は、インスリン刺激グリコーゲン合成の阻害を測定することによって評価できる。簡潔に述べると、典型的な方法は12時間絶食させた雄のウィスター系ラットから調製されたヒラメ筋断片を含む。筋腱はステンレス・スチール製クリップに付着させる前に結紮する。筋断片は3.5 mlのクレブス-リンゲル重炭酸塩緩衝液、7mMのN-2-ヒドロキシエチル -ビペラジン -N'-2-エタンスルホン酸、pH 7.4、および5.5 mMのピルビン酸塩を有するエルレンマイヤーフラスコでプレインキュベートする。フラスコは密封し、19:1 (v/v)の割合の酸素および二酸化炭素で継続的にガス処理する。この培地において37℃で30分間振動式水槽で筋肉をプレインキュベートした後、筋断片は、[U-14C]グルコース (0.5 μCi/ml)およびインスリン(100 μU/ml)を加えた同一の培地(ピルビン酸塩を除く)を含有する類似のバイアル瓶に移す。フラスコは密閉し、1時間のインキュベーションにおける最初の１５分間再びガス処理する。インキュベーション期間の最後に、筋肉はブロットし、液体窒素にて急速凍結する。インキュベート培地中の乳酸塩の濃度は分光光度法で測定可能であり、グリコーゲンへの[U-14C]グルコースの取り込みを測定した。100 nMラットアミリン、およびアミリンアンタゴニスト存在下における、インスリン刺激グリコーゲン合成の回収を測定することによって、アミリンアンタゴニスト活性を評価する。
【０１７６】
胃内容排出の割合を測定する方法は、例えば、Young等によって開示されている。フェノールレッド法においては、覚醒ラットにメチル・セルロースおよびフェノールレッド指標を含有する無色ゲルを、胃管注によって与える。20分後、実験動物はハロタンを用いて麻酔し、胃を露出し、幽門部分および食道括約筋部分で固定し、摘出し、アルカリ性溶液中で開いた。胃における内容物は560nmの波長における吸光度によって測定した、アルカリ性溶液中のフェノールレッドの強度に由来し得る。トリチウム化グルコース方法において、覚醒ラットに水溶中のトリチウム化グルコースを経口投与した。ラットは軽く尾を拘束し、尾の先端をリドカインを用いて麻酔した。尾の血中から分離した血漿中のトリチウムは様々な時点において収集し、ベータカウンターで検出する。試験化合物は通常胃管注の１分前に投与する。
【０１７７】
アミリンアゴニストおよびアンタゴニスト化合物は1ないし5 nM未満、望ましくは1 nM未満、より望ましくは50 pM未満のオーダーで受容体結合アッセイにおいて活性を呈することができる。ヒラメ筋のアッセイにおいて、アミリンアゴニスト化合物は約1ないし10マイクロモル未満のオーダーで、EC50の値を示すことができる。ヒラメ筋のアッセイにおいて、アミリンアンタゴニストは約1ないし2マイクロモル未満のオーダーで、IC50の値を示す。胃内容排出アッセイにおいて、望ましいアゴニスト化合物は100 μg/ラット未満のオーダーでED50の値を示す。アンタゴニスト化合物は胃内容排出アッセイにおいて、 全く効果を示さないか、または反対の効果を示す。 
【０１７８】
一つの例示的な化合物生成方法において、本発明の化合物は、標準固相ペプチド合成技術および、好ましくは自動もしくは半自動ペプチド合成器を用いて調製することができる。典型的には、そのような技術を用い、樹脂上のα-N-カルバモイル保護アミノ酸および成長するペプチド鎖に付着したアミノ酸は、ジメチルホルムアミド、N-メチルピロリドンまたは塩化メチレンのような不活性溶媒中、室温下で、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび1-ヒドロキシベンゾトリアゾールのようなカップリング剤存在下で、ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下でカップリングさせる。α-N-カルバモイル保護基はトリフルオロ酢酸もしくはビペリジンなどの試薬を使用して得られたペプチド-樹脂から除去し、カップリング反応は、ペプチド鎖に付加させるべき次の望ましいN-保護アミノ酸で繰り返す。適切なN-保護基は当技術分野で周知であり、ここにt-ブチルオキシカルボニル(tBoc)およびフルオレニルメトキシカルボニル (Fmoc)が好ましい。アミリンおよびアミリンアゴニストを合成し、または発現させ、それを精製する他の方法は、当業者に周知である。
【０１７９】
本発明で用いる抗肥満剤はエキセンディンペプチドホルモンおよびエキセンディンアゴニストも含む。機能性ペプチドアナログおよび誘導体がそうであるように、天然エキセンディンペプチドホルモンは当技術分野で知られている。ある種の天然ペプチド、ペプチドアナログおよび誘導体がここに記載されているが、いずれの公知のホルモン活性を示す既知のエキセンディンペプチドも、本発明と併用して使用できるということは認識すべきことである。例示的なエキセンディンペプチドはエキセンディン-3 (His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser (配列番号:181))およびエキセンディン-4 (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser (配列番号:182))を含む。
【０１８０】
何れの既知のエキセンディンペプチドアナログもしくは誘導体も本発明と併用して使用できる。１つの具体例においては、エキセンディンペプチドアナログおよび誘導体は天然エキセンディンペプチドの少なくとも１つのホルモン活性を持つ。ある具体例においては、エキセンディンペプチドアナログは天然エキセンディンペプチドが特異的に結合可能な受容体のアゴニストである。エキセンディン化合物は、１以上の天然に生じるアミノ酸が脱離もしくは他のアミノ酸と置換するエキセンディンペプチドアナログを含む。当技術分野で公知のように、そのようなエキセンディンアナログはアミド化されていてよく、または酸性型であってよい。 
【０１８１】
１つの具体例においては、エキセンディンアナログは天然もしくは天然に生じるエキセンディンと比較して、一もしくはそれ以上のアミノ酸における置換、欠失、逆位、もしくは付加を有することができる。このように、エキセンディンアナログは、天然に生じるエキセンディン、例えばエキセンディン-4と比較して、１以上のアミノ酸における置換、付加もしくは欠失を持つアミノ酸配列を有することができる。１つの具体例においては、エキセンディンアナログはエキセンディン-4のような天然に生じるエキセンディンと比較して、30以下、25以下、20以下、15以下、10以下、5以下、4以下、3以下、2以下、または1以下の置換、付加、もしくは欠失を持つアミノ酸配列を有する。
【０１８２】
例示的なエキセンディン化合物はエキセンディン-4であるアゴニストアナロを含み、 これは、限定されるものではないが、14Leu、25Phe-エキセンディン-4 (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser (配列番号:183)、5Ala、14Leu、25Phe-エキセンディン-4 (His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser (配列番号:184))、および14Leu、22Ala、25Phe-エキセンディン-4 (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser (配列番号:185))を含む。 他の典型的なエキセンディンアナログは、これらに限定されないが、エキセンディン-4 (1-30) (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly (配列番号:186))、 エキセンディン-4 (1-28)アミド(His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2 (配列番号:187))、 14Leu、25Phe エキセンディン-4 (1-28)アミド (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2 (配列番号:188))、 および14Leu、22Ala、25Phe エキセンディン-4 (1-28)アミド (His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2 (配列番号:189))を含む。
【０１８３】
さらに例示的なエキセンディンアゴニストは米国特許出願第10/181、102号およびPCT出願第PCT/US98/16387号に記載されており、両者共1997年8月8日に出願された、米国特許出願第60/055、404号の優先権を主張し、全て参照することにより組み込む。例示的なエキセンディンアゴニストは米国特許出願第10/181、102号およびPCT出願第PCT/US98/16387号の、式(I)、式(II)および式(III)の化合物を含む。
【０１８４】
他のエキセンディンアゴニストは米国特許出願第09/554、533号およびPCT出願第PCT/US98/24210号に記載されており、両者共1997年11月14日に出願された、米国仮特許出願第60/065、442号の優先権を主張し、全て参照することにより組み込む。さらに他のエキセンディンアゴニストは米国特許出願第09/554、531号およびPCT出願第PCT/US98/24273号に記載されており、両者共1997年11月14日に出願された、米国仮特許出願第60/066、029号の優先権を主張し、全て参照することにより組み込む。さらに他のエキセンディンアゴニストは1997年8月8日に出願された、PCT出願第PCT/US97/14199号に記載されており、これは1996年8月8日に出願された、米国特許出願第08/694、954号の一部継続出願であり、 両者共に参照することにより組み込む。さらに他のエキセンディンアゴニストは1997年1月7日に出願された、米国仮特許出願第60/034、905号の優先権を主張する、 米国特許出願第6、956、026号に記載されており、 両者共に参照することにより組み込む。その上さらに他のエキセンディンアナログおよび誘導体は2003年12月19日に出願された、 米国特許出願第2004/0209803 A1号に記載されており、参照することにより組み込む。
【０１８５】
本発明における抗肥満剤は、限定されるものではないが、AXOKINE（登録商標） (Regeneron)も含めた、毛様体神経栄養因子(CNTF)、CNTF関連ポリペプチド、修飾CNTFポリペプチド、CNTFアゴニスト、およびCNTFアナログを含む。本発明の方法で用いるのに適した、CNTF、CNTF関連ポリペプチド、CNTFおよびCNTF関連ポリペプチド含有組成物は、当技術分野で公知である。CNTFポリペプチド、CNTF関連ポリペプチド、 修飾CNTFポリペプチド、CNTFアゴニスト、アナログ、誘導体、製剤、剤形、医薬組成物、投与量、および投与経路については例として、米国特許出願第6、680、291号および米国特許出願第6、767、894号、 およびPCT国際公開番号第WO 94/09134号、第WO 98/22128号、および第WO 99/43813号に従前に記載されており、参照することにより全体として組み込む。  
【０１８６】
本発明における抗肥満剤は、限定されるものではないが、パロキセチン、フルオキセチン、フェンフルラミン、フルボキサミン、セルトラリン、およびイミプラミンを含めた、セロトニン (5HT) 輸送阻害剤も含む。本願発明における抗肥満剤は、限定されるものではないが、デキストロフェンフルラミン、フルオキセチン、シブトラミン (例えば、 MERIDIA（登録商標）)および参照することにより全体として組み込まれる米国特許出願第No. 6、365、633号および PCT出願第WO 01/27060 号およびWO 01/162341号に記載されたものを含めた、選択的セロトニン再取り込み阻害物質も含む。そのような5HT輸送阻害剤およびセロトニン再取り込み阻害物質、アナログ、誘導体、製剤、剤形、医薬組成物、投与量、および投与経路は先に記載した。
【０１８７】
本発明で用いる抗肥満剤は、限定されるものではないが、参照することにより全体として組み込まれる米国特許出願第3、914、250号; およびPCT国際公開番号第 WO 02/36596号、 第WO 02/48124号、 第WO 02/10169号、 第WO 01/66548号、 第WO 02/44152号; 第WO 02/51844号、 第WO 02/40456号、およびWO 02/40457号に記載されたものを含めた、選択的セロトニンアゴニストおよび選択的5-HT2C受容体アゴニストも含む。そのような選択的セロトニンアゴニストおよび5-HT2C受容体アゴニスト、そのようなアゴニストを含む化合物、および本発明の方法で用いるのに適した投与経路は当技術分野で公知である。例えば、Halfordら (2005) Curr. Drug Targets 6:201-213 and Weintraubら (1984) Arch. Intern. Med. 144:1143-1148参照。
【０１８８】
本発明で用いる抗肥満剤は、限定されるものではないがリモナバン (Sanofi Synthelabo)、およびSR-147778 (Sanofi Synthelabo)を含めた、中枢カンナビノイド受容体 (CB-1受容体)のアンタゴニスト/逆アゴニストも含む。CB-1アンタゴニスト/逆アゴニスト、誘導体、製剤、剤形、医薬組成物、投与量、および投与経路は、例えば、参照することにより全体として組み込まれる米国特許第 6、344、474号、第6、028、084号、第5、747、524号、第5、596、106号、第5、532、237号、第4、973、587号、第5、013、837号、第5、081、122号、第5、112、820号、第5、292、736号、第5、624、941号; 欧州特許出願第EP-656 354号および第EP-658546号;およびPCT国際公開番号WO 96/33159、WO 98/33765、WO98/43636、WO98/43635、WO 01/09120、WO98/31227、WO98/41519、WO98/37061、WO00/10967、WO00/10968、WO97/29079、WO99/02499、WO 01/58869、およびWO 02/076949において従前に記載されている。  
【０１８９】
本発明で用いる抗肥満剤はメラノコルチンおよびメラノコルチンアゴニストも含む。メラノコルチンはプロオピオメラノコルチン遺伝子由来のペプチドであり、α-メラニン細胞刺激ホルモン (α-MSH)および副腎皮質刺激ホルモン (ACTH)、およびMC1-5R として知られる5メラノコルチン受容体を含む。MC4Rはエネルギー・バランスおよび肥満において役割を演じているようである。例えば、Andersonら (2001) Expert Opin. Ther. Patents 11:1583-1592、 Speakeら (2002) Expert Opin. Ther. Patents 12:1631-1638、 Bednarekら (2004) Expert Opin. Ther. Patents 14:327-336参照。限定されるものではないがMC4R アゴニストを含めた、メラノコルチンアゴニスト、および本発明の方法で用いるのに適したアゴニストを含有する化合物は当技術分野で公知である。MCRアゴニスト、MC4Rアゴニスト、誘導体、製剤、剤形、医薬組成物、投与量、および投与経路は、例えば、参照することにより全体に組み込む以下のPCT特許出願: WO 03/007949、 WO 02/068388、WO 02/068387、WO 02/067869、WO 03/040117、WO 03/066587、WO 03/068738、WO 03/094918、およびWO 03/031410に従前に記載されている。
【０１９０】
本発明で用いる抗肥満剤は、限定されるものではないが、2-メチル-6-(フェニルエチニル)-ピリジン (MPEP) および(3-[(2-メチル-1,3-チアゾール-4-イル)エチル]ピリジン) (MTEP)のような化合物および、Andersonら (2003) J. Eur. J. Pharmacol. 473:35-40; Cosfordら (2003) Bioもしくはg. Med. Chem. Lett. 13(3):351-4; およびAndersonら (2002) J. Pharmacol. Exp. Ther. 303:1044-1051に記載されている化合物を含めた、代謝型グルタミン酸受容体サブタイプ5 (mGluR5) アンタゴニストも含む。
【０１９１】
本発明で用いる抗肥満剤は、抗けいれん剤および体重減少量を増加させることが知られている抗けいれん剤として示される、トピラメート (TOPIMAX（登録商標） (Ortho McNeil Pharmaceuticals)も含む。
【０１９２】
本発明で用いる抗肥満剤は、神経ペプチド Y1 (NPY1) アンタゴニストおよびNPY5 アンタゴニストを含む。NPY1および NPY5 アンタゴニストは当技術分野で公知である。例えば、 Duhaultら (2000) Can. J Physiol. Pharm. 78:173-185、および米国特許第 6,124,331号、第6,214,853号、および第6,340,683号参照。NPY1および NPY5アンタゴニスト、誘導体、 製剤、剤形、医薬組成物、投与量、および投与経路は従前に記載されている。本願発明において有用なNPY1アンタゴニストは以下を含み: 米国特許出願第6、001、836号; およびPCT国際公開番号WO 96/14307、 WO 01/23387、 WO 99/51600、WO 01/85690、WO 01/85098、WO 01/85173、およびWO 01/89528を、参照することにより全体として組み込む。本願発明において有用なNPY5アンタゴニストは、限定されるものではないが、米国特許第6,140,354号、第6,191,160号、 第6,258,837号、第6,313,298号、第6,337,332号、第6,329,395号、第6,340,683号、 第6,326,375号、および第6,335,345号; 欧州特許第EP-01010691号、および第EP-01044970号; およびPCT国際公開番号WO 97/19682、 WO 97/20820、WO 97/20821、WO 97/20822、WO 97/20823、WO 98/27063、WO 00/64880、 WO 00/68197、WO 00/69849、WO 01/09120、WO 01/85714、WO 01/85730、WO 01/07409、WO 01/02379、WO 01/02379、WO 01/23388、 WO、01/23389、 WO 01/44201、 WO 01/62737、 WO 01/62738、 WO 01/09120、WO 02/22592、WO 0248152、WO 02/49648およびWO 01/14376に記載された化合物も含む。
【０１９３】
本発明で用いる抗肥満剤は、T-226296 (Takeda)などのメラニン濃縮ホルモン1受容体 (MCH1R) アンタゴニストおよびメラニン濃縮ホルモン2受容体 (MCH2R)アンタゴニストを含めた、メラニン濃縮ホルモン(MCH)も含む。MCH受容体アンタゴニスト、誘導体、製剤、剤形、医薬組成物、投与量、および投与経路は、例えば参照することにより全体として組み込む、米国特許出願公開番号第2005/0009815号、第2005/0026915号、第2004/0152742号、第2004/0209865号; PCT国際公開番号WO 01/82925、WO 01/87834、 WO 02/06245、WO 02/04433、およびWO 02/51809; および日本特許出願第JP13226269号において従前に記載されている。
【０１９４】
本発明で用いる抗肥満剤は、限定されるものではないがPCT特許出願第WO 00/21509号に記載されているものを含めたオピオイドアンタゴニストも含む。本発明において有用な特定のオピオイドアンタゴニストは、限定されるものではないが、ナルメフェン(REVEX（登録商標）)、3-メトキシナルトレキソン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロキソナジン、 ベータ-フナルトレキサミン、 デルタ1 ([D-Ala2、Leu5、Cys6]- エンケファリン(DALCE)、 ナルトリンドール イソチオシアン酸塩、およびノル-ビナルトルファミンを含む。
【０１９５】
本発明で用いる抗肥満剤は、限定されるものではないが、PCT特許出願WO 01/96302、 WO 01/68609、WO 02/51232、およびWO 02/51838に記載されているものを含めた、オレキシンアンタゴニストも含む。本発明において有用な特定のオレキシンアンタゴニストは、 限定されるものではないが、SB-334867-Aを含む。
【０１９６】
本発明で用いる抗肥満剤は、限定されるものではないが、PYY3-36 (例えば、 Batterhamら (2003) Nature 418:650-654)、 NPY3-36のような化合物を含めた神経ペプチド Y2 (NPY2) アゴニスト、およびN アセチル[Leu(28、31)] NPY 24-36 (White-Smithら (1999) Neuropeptides 33:526-533)、 TASP-V (Malisら (1999) Br. J. Pharmacol. 126:989-996)、 シクロ-(28/32)-Ac-[Lys28-Glu32]-(25-36)-pNPY (Cabreleら (2000) J. Pept. Sci. 6:97-122) のような他の Y2 アゴニストも含む。 本発明における抗肥満剤は、限定されるものではないが、膵臓ペプチド (PP) (例として、 Batterhamら (2003) J. Clin. Endocrinol. Metab. 88:3989-3992)のような化合物を含めた、神経ペプチドY4 (NPY4) アゴニスト、および1229U91 (Raposinhoら (2000) Neuroendocrinology 71:2-7)のような他のY4 アゴニストも含む。NPY2 アゴニストおよびNPY4アゴニスト、誘導体、製剤、剤形、医薬組成物、投与量、および投与経路は、例えば、米国特許出願第2002/0141985号およびPCT 国際公開番号WO 2005/077094において従前に記載されている。    
【０１９７】
本発明で用いる抗肥満剤は、限定されるものではないが、PCT 出願WO 02/15905号に記載されたもの、O-[3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノール] カルバメート(Kiec-Kononowiczら (2000) Pharmazie 55:349-355)、ビペリジン-含有 ヒスタミンH3-受容体アンタゴニスト (Lazewskaら (2001) Pharmazie 56:927-932)、 ベンゾフェノン誘導体および関連化合物 (Sasseら (2001) Arch. Pharm.(Weinheim) 334:45-52)、 置換N-フェニルカルバメート (Reidemeisterら (2000) Pharmazie 55:83-86)、 およびプロキシファン（proxifan）誘導体(Sasseら (2000) J. Med. Chem. 43:3335-3343)を含めたヒスタミン3 (H3) アンタゴニスト/逆アゴニストも含む。本発明において有用な特定のH3 アンタゴニスト/逆アゴニストは、限定されるものではないが、 チオペルアミド（thioperamide）、 3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロピル N-(4-ペンテニル)カルバメート、 クロベンプロピット（clobenpropit）、 イオドフェンプロピット（iodophenpropit）、 イモプロキシファン（imoproxifan）、 およびGT2394 (Gliatech)を含む。
【０１９８】
本発明で用いる抗肥満剤は、コレシストキニン(CCK)およびCCK アゴニストも含む。本発明において有用なコレシストキニン-A (CCK-A) アゴニストは、限定されるものではないが、米国特許第5、739、106号に記載された化合物を含む。特異的なCCK-A アゴニストは、限定されるものではないが、AR-R 15849、GI 181771、JMV-180、A-71378、A-71623およびSR146131を含む。
【０１９９】
本発明で用いる抗肥満剤は、PCT国際公開番号WO 01/87335およびWO 02/08250に記載されたもののようなグレリンアンタゴニストも含む。グレリンアンタゴニストはGHS (成長ホルモン分泌促進因子) アンタゴニストとしても知られる。本発明の化合物および方法は、従って、グレリンアンタゴニストの代わりにGHS アンタゴニストを利用することを含む。  
【０２００】
用量/処方
抗肥満剤および体重増加誘導剤 (ここではこの章において「化合物」という）は、単独もしくは複数回服用のどちらにしても、単独で投与するかまたは薬剤上許容される担体もしくは賦形剤と組み合わせて投与する。これらの薬剤化合物は、Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martinにおいて開示されている等の確立された手法に従って、他の知られたアジュバントおよび賦形剤ならびに、薬剤上許容される担体もしくは希釈剤と共に処方する。Wangら (1988) J. of Parenteral Sci.および Tech.、 Technical Report No. 10、 Supp. 42:2Sも参照。
【０２０１】
一般に、化合物は患者への投与のために、安定して、安全な医薬組成物に処方することができる。本発明の方法で用いるのに考えられる製剤処方は、ほぼ0.01ないし1.0% (w/v)、場合によってはほぼ0.05ないし1.0%の化合物、約3.0からないし約7.0の最終組成物のpHを可能とする、ほぼ0.02ないし0.5% (w/v)のアセテート、リン酸塩、クエン酸塩もしくはグルタミン酸塩緩衝液; ほぼ1.0ないし10% (w/v)の炭水化物または多価アルコール等張剤および、所望により、ほぼ0.005ないし1.0% (w/v) のm-クレゾール、 ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルおよび ブチルパラベンおよびフェノールよりなる群からの選択された保存剤を含むことができる。そのような保存剤は、処方されるペプチドが多用途製品に含まれるべき場合において、一般的に、含まれている。
【０２０２】
本発明における特定の実施例においては、本発明の医薬処方は、ある濃度範囲の化合物を含んでいる。例えば、この具体例においては、約0.01%ないし98% w/wの間、または約1ないし98%w/wの間、好ましくは80%および 90% w/wの間、好ましくは約0.01%ないし50% w/wの間、より好ましくは約10%ないし25% w/wの間の化合物を含むことができる。溶液の望ましい濃度を得るために、十分な量の注射用水を使用する。
【０２０３】
塩化ナトリウムのようなさらなる等張剤、ならびに他の公知の賦形剤も、もし必要であれば存在させることができる。いくつかの場合においては、そのような賦形剤は化合物の全等張性の維持で有用である。賦形剤は様々な濃度でここに記載した剤形に含ませることができる。例えば、 賦形剤は約0.02%ないし20% w/w、好ましくは約0.02%ないし0.5% w/wの間、約0.02%ないし10% w/w、または約1 %ないし20% w/w間の濃度範囲で含めることができる。加えて、これらの処方と同様、賦形剤は固体 (粉末状を含む)、 液体、半固体もしくはゲル状の形態で含めることができる。
【０２０４】
医薬処方は様々な形態で構成でき、例えば、固体、液体、半固体もしくは液体状である。本明細書中で用いる「固体」という用語は、ここでは、例えば、粉末および凍結乾燥処方を含めた、この用語の全ての通常の使用を含むことを意図し、ここに記載した剤形は凍結乾燥することができる。
【０２０５】
緩衝液という用語は、緩衝溶液および緩衝化溶液であり、水素イオン濃度または pHを参照して用いる場合、酸またはアルカリの添加または溶媒での希釈に際してのpHの変化に対して抵抗する系、特に小溶液の能力をいう。緩衝化溶液の特徴は、酸または塩基の添加に際してpHの微小な変化を受ける緩衝溶液の特徴は、弱酸および弱酸の塩、または弱塩基および弱塩基の塩のいずれかの存在である。前者の系の例は酸および酢酸ナトリウムである。pHの変化は、加えられたヒドロニウムイオンもしくは水酸化イオンの量が、それを中和する緩衝溶液の能力を超えない限りはわずかである。
【０２０６】
前載したように、様々な液体状の賦形剤が、例えば、水または水性有機溶媒混合液または懸濁液が、ペプチド性抗肥満剤の処方で用いるのに適している。
【０２０７】
本発明で用いられるペプチド剤形の安定性は、剤形のpHを液体状の時に約3.0ないし7.0の範囲幅に維持することによって高めらる。ある具体例においては、剤形のpHは約3.5ないし5.0の範囲に、または約3.5ないし6.5の範囲に維持され、いくつかの具体例においては、およそ3.7ないし4.3、 または約3.8ないし4.2の範囲に維持される。いくつかの具体例においては、 pHは約4.0であり得る。この理論に拘束されるつもりはないが、剤形のpHが 5.5を上回ると、寿命が２年未満になるようにペプチドの化学分解が加速され得ると現在は理解される。
【０２０８】
ある具体例においては、抗肥満剤を含む緩衝液は酢酸緩衝液 (好ましくは最終的な剤形の濃度が約1-5ないし60 mM)、クエン酸緩衝液 (好ましくは最終的な剤形の濃度は約1-5ないし30 mM) またはグルタミン酸緩衝液(好ましくは最終的な剤形の濃度は約1-5ないし60 mM) である。いくつかの具体例においては、緩衝液は酢酸塩(好ましくは最終的な剤形の濃度は約5ないし30 mM) である。
【０２０９】
安定化剤を抗肥満剤製剤に含めることができるが、重要なことには、必ずしも必要ではないということである。しかしながらもし含まれていると、本発明の実施に有用な安定化剤は炭水化物もしくは多価アルコールである。本発明の実施に有用である適当な安定化剤は約1.0ないし10% (w/v)の炭水化物または多価アルコールである。多価アルコールおよび炭水化物はその骨格に同じ特徴、すなわち、タンパク質の安定化を担う-CHOH-CHOH-を有する。多価アルコールはソルビトール、マンニトール、グリセロール、およびポリエチレン・グリコール(PEGs)のような化合物を含む。これらの化合物は直鎖分子である。マンノース、リボース、スクロース、フルクトース、トレハロース、マルトース、イノシトール、およびラクトースのような炭水化物は、一方で、ケトンまたはアルデヒド基を含むことができる環状分子である。これら二つのクラスの化合物は温度上昇および、凍結融解もしくは凍結乾燥の工程によって引き起こされる変性に対しタンパク質を安定化するのに効果的なことが実証されている。適当な炭水化物は以下の:ガラクトース、アラビノース、ラクトースまたは糖尿病患者に悪影響のないいずれかの他の炭水化物を含み、すなわち、該炭水化物は代謝されて、血中で受け入れがたい程高濃度のグルコースを形成しない。そのような炭水化物は糖尿病に適当なものとして当該分野において周知である。スクロースおよびフルクトースは非糖尿病への適用において該化合物と共に用いるのに適している (例えば肥満治療)。
【０２１０】
ある具体例においては、もし安定化剤が含まれていると、化合物は、分子量が200、 400、 1450、 3350、 4000、 6000、および8000の様々なポリエチレン・グリコール(PEG)と同様、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、 グリセロール、キシリトール、およびポリエチレン/エチレングリコール共重合体のような多価アルコールで安定化する。マンニトールはいくつかの具体例では好ましい多価アルコールである。本発明の凍結乾燥剤形のもう１つの有用な特徴は、安定性を維持するように働く同剤形の成分と共に、ここに記載した凍結乾燥剤形の等張性を維持することである。いくつかの具体例においては、マンニトールがこの目的で用いるのに好ましい多価アルコールである。          
【０２１１】
米国薬局方は静菌性もしくは静真菌性の濃度下における抗微生物剤を、複数用量の容器内に含まれる製剤に対して加えなければいけないと述べている。抗微生物剤は、皮下注射針およびシリンジ、または、ペンインジェクターのような送達のための侵入的方法を用いて、内容物の一部を吸いつつ、製剤に不注意に持ち込まれた微生物の増大を防止するために、使用時に適当な濃度で存在していなければいけない。抗微生物剤は処方の他の全ての成分との相溶性を確かめるため評価されなければならず、および活性は、ある製剤に効果的な特定の薬剤が他においては有効ではないことを確かめるために、処方全体として評価されなければならない。特定の抗微生物剤がある製剤には効果的で、他の製剤には効果的でないということは珍しいことではない。
【０２１２】
保存剤は、一般的な薬学の感覚では、微生物の成長を防ぐまたは抑制する物質であって、微生物による製剤の結果としての損傷を防ぐ目的で製剤処方に添加することができる。保存剤の量が多くなくとも、それでもペプチドの総じての安定性に影響を及ぼし得る。 
【０２１３】
医薬組成物中の保存剤の使用量が0.005ないし1.0% (w/v)の範囲であっても、いくつかの具体例においては、各保存剤の範囲は、単独もしくは他との組み合わせで、以下の通りである: ベンジルアルコール(0.1-1.0%)、または m-クレゾール (0.1-0.6%)、またはフェノール(0.1-0.8%)、あるいはメチル(0.05-0.25%)およびエチル、またはプロピルもしくはブチル (0.005%-0.03%) パラベンの組合せ。パラベンはp-ヒドロキシ安息香酸の低級アルキルエステルである。各保存剤の詳細な記述についてはMartinによるRemington's Pharmaceutical Sciencesに記載されている。
【０２１４】
プラムリンチド、ヒト 25、28、29Pro-アミリンは、液体状の時にガラス容器内でガラス状に吸着する性質はなく、従って、界面活性剤が製剤処方をさらに安定化する必要はない。しかしながら、液体状の時に該性質がある化合物に関しては、界面活性剤をその剤型で用いるべきである。次いで、これらの剤形は凍結乾燥することができる。界面活性剤はしばしば、疎水性分解および塩橋による分離の両者によりタンパク質の変性を引き起こす。比較的低濃度の界面活性剤は界面活性剤部分およびタンパク質の反応部位の間の強い相互作用のために、強力な変性活性を及ぼす。しかしながら、この相互作用の賢明な利用は界面もしくは表面上の変性に対してタンパク質を安定化することができる。ペプチドを更に安定化する界面活性剤は任意に全剤形の約0.001ないし0.3% (w/v)の範囲で存在させることができ、およびポリソルベート 80 (すなわち、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレテートq)、 CHAPS（登録商標） (すなわち、3-[(3-コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ] 1-プロパンスルホン酸)、 Brij（登録商標） (すなわち、 Brij 35、それは(ポリオキシエチレン (23)ラウリルエーテルである)、ポロキサマー、もしくはもう一つの非イオン界面活性剤を含む。  
【０２１５】
製剤処方における等張性を調整するために、選択された等張剤に応じて塩化ナトリウムもしくは他の塩を添加するのも望ましいであろう。しかしながら、これは任意であり、選択された特定の剤形に依存する。非経口の剤形は好ましくは等張もしくは実質的に等張あるのがよい。
【０２１６】
非経口の製品のための好ましい賦形剤は水である。非経口投与における適切な品質の水は、蒸留もしくは逆浸透により調製される。注射用水は、製剤処方で用いられる好ましくは水性賦形剤である。
【０２１７】
他の成分も製剤処方中に存在させることは可能性である。これらの付加的な成分は例えば、湿潤剤、乳化剤、油、抗酸化物質、増量剤、張性修飾剤、キレート剤、金属イオン、 油性賦形剤、 タンパク質(例えば、 ヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質)および双性イオン(例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジンおよびヒスチジンなどのアミノ酸）を含む。加えて、ポリマー溶液、またはポリマーとの混合物はペプチドの制御された放出の機会を提供する。このような付加的な成分は、もちろん、本発明における製剤処方の安定性全体に無影響を及ぼしてはいけない。
【０２１８】
容器もまた注射処分における一体的な部分であり、構成要素と考えることができ、というのは、特に液体が水性である場合、全く不活性な容器というものはないからであり、 または何らかの点で含んでいる液体に影響を及ぼさない容器というものはないからである。従って、 特定の注射用容器の選択というのは、容器の組成ならびに容器の溶液、およびそれが付される処理にしなければならない。ペプチドのバイアルのガラス表面への吸着もまた、もし必要であれば、ホウケイ酸塩ガラス、例えば、Wheaton Type Iホウケイ酸塩ガラス#33 (Wheaton Type I-33)もしくは同等なもの (Wheaton Glass Co.)を使用することによって、最小化することもできる。 他の製造で許容できる、類似のホウケイ酸塩ガラスバイアルおよびカートリッジの販売業者はKimbel Glass Co.、 West Co.、 Buender Glas GMBH およびFORma Vitrumを含む。化合物の生物学的および化学的性質は、Wheaton Type I-33 ホウケイ酸塩血清容器内における、処方および凍結乾燥によって安定化することができる。 5%マンニトール、および0.02% Tween 80存在下での化合物の0.1 mg/mlおよび10 mg/mlの最終濃度までのとなる。  
【０２１９】
注射により送達されるべき処方では、皮下シリンジからの針の複数用量バイアルへの導入を行い、および針が引き出されたらできるだけ速く再シールするために、各バイアルの開放端は好ましくはアルミニウムのバンドで所定の位置に保存されたゴム栓クロージャーでシールする。
【０２２０】
West 4416/50、 4416/50 (Teflon面)および 4406/40、Abbott 5139またはいずれか同等の栓のようなガラスバイアルは、注射用薬剤のためのクロージャーとして用いることができる。ペプチド性抗肥満剤を含む処方では、これらの栓はペプチドならびに剤型の他の成分と相性がよい。発明者はまた、これらの栓が、患者の使用パターンを用いてテストした場合に栓一体性テストにパスすることも見い出しており、例えば、栓は約100回の注射に耐えることができる。別法として、ペプチドは続いての復元のためにバイアル、シリンジ、またはカートリッジに凍結乾燥することができる。本発明の液体状の剤形は１または２の空間のカートリッジ、または１または２チャンバーシリンジに充填することができる。
【０２２１】
前記の製剤処方の各成分は当技術分野で公知のことであり、参照することにより全体として組み込むPharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications、 Vol. 1、 2nd ed.、 Avisら Ed.、 Mercel Dekker、 New York、 N.Y. 1992に記載されている。
【０２２２】
該液体状剤形の製造過程は一般に調合物、滅菌および充填の工程を伴う。調合の工程は特定の順序での成分の溶解(保存剤の後に安定化剤/等張化剤、緩衝液およびペプチド) 、または同時溶解を伴う。
【０２２３】
代替剤形、 例えば、非経口のものは滅菌を必要としない。しかしながら、滅菌が望まれるもしくは必要とされるならば、どのような適切な滅菌過程も、本発明におけるペプチド製剤処方を開発においても利用できる。典型的な滅菌過程はろ過、蒸気 (湿式加熱)、 乾式加熱、ガス(例えば、エチレンオキシド、 ホルムアルデヒド、二酸化塩素、酸化プロピレン、ベータ-プロピオンラクトン、オゾン、クロロピクリン、過酢酸臭化メチルおよび等といったもの)、 放射線源への暴露、および殺菌操作を含む。ろ過は本発明における液体状剤形における好ましい滅菌方法である。滅菌ろ過は直列に連続することができる0.45 μmおよび 0.22 μm (1 もしくは 2)を通すろ過を含む。ろ過後、溶液は適切なバイアルまたは容器に充填される。
【０２２４】
１つの具体例において、 抗肥満剤は対象に末梢投与される。いくつかの具体例においては、本発明の液体製剤処方は非経口投与を意図する。適切な投与経路は筋肉内、静脈内、皮下、皮内、関節内、鞘内および等といったものを含む。いくつかの具体例においては、皮下投与経路が好ましい。ある具体例においては、粘膜送達も好ましい。これらの経路は、限定されるものではないが、液体状、半固体、もしくは固体状のペプチド投与を含むことができる経口、鼻経、舌下、肺および口腔経路を含む。ペプチド性抗肥満剤を含む処方では、これらの経路を経由する投与は、望ましい生物学的効果を得るには、非経口送達と比較してバイオアベイラビリティーが減少するので、実質的により多くのタンパク質が必要となる。加えて、非経口の放出制御送達は高分子マイクロカプセル、マトリックス、溶液、インプラントおよびデバイスを形成し、それらを非経口もしくは外科的な方法で投与することによって達成できる。放出制御処方の例は米国特許第6,368,630号、第6,379,704号、および第5,766,627号に記載されており、 参照することにより全体として組み込む。これらの投与形態はポリマー・マトリックス状またはデバイスへのペプチドのいくらかのデバイス包括のためにより低いバイオアベイラビリティーであろう。例えば、米国特許第6,379,704号、第6,379,703号、および第6,296,842号を参照されたい。
【０２２５】
化合物は、グレリンの効果を制御するのに単一または複数用量で効果的であろうインシュリンまたはグルコース (またはグルコース源)と共に、またはそれ無くして、一定量の化合物を含有する投与単位形態で提供することができる。グレリン関連疾病または疾患の治療のための治療上有効量の化合物グレリンの望ましくないレベルの生理的影響を処置し、予防しまたは軽減するには十分である。
【０２２６】
当技術分野でこのことは認識されるであろうが、 抗肥満剤の有効量は、患者の年齢および体重、患者の健康状態、治療を受けている疾患、および他の要因を含めた多くの要因によって変化する。抗肥満剤の有効量はまた特定の投与の組合せによっても変化する。本明細書中で記載したように、組合せによる薬剤の投与は、いずれの投与する薬剤の減少した量も、効果的な量であることを可能にする。
【０２２７】
しかしながら、典型的な用量は、一日当たりの医薬化合物の下限値が約1μg、5μg、10 μg、50 μgないし100 μg、上限値が約100 μg、500 μg、1 mg、5 mg、10 mg、50 mg または100 mgを含む。また、用量当たり0.1 μgないし1 mgのような他の用量も考えられる。一日当たりの用量は、24時間または24時間をいずれの部分で区切った間に継続的に供される区別される単位用量にて送達することができる。一日当たりの投与回数は1ないし約4回で、 それ以上もあり得る。継続的な送達は継続的な注入という形態とすることができる。例示的な用量および注入の速度は一投与当たり 0.005 nmol/kgないし約20 nmol/kg、または継続的な注入において約0.01/pmol/kg/分ないし10 pmol/kg/分を含む。これらの投与および注入は静脈内投与(i.v.)または皮下投与(s.c.)により行われる。i.v.投与される医薬組成物の例示的合計用量送達は一日当たり約2μgないし約8 mg、一方s.c投与される医薬組成物の合計用量は一日当たり約6μgないし約6 mgである。
【０２２８】
レプチンおよびレプチン誘導体は、例えば、約0.01 mg/kgないし約20 mg/kg、場合によっては、約0.01 mg/kgないし約0.3 mg/kgの日用量で投与することができる。投与は単一用量のまたは分割用量の注射によることができる。
【０２２９】
シブトラミンは、例えば、約0.01 mg/kgないし約10 mg/kg、場合によっては約0.01 mg/kgなしい1 mg/kgの日用量にて、単一用量にてまたは分割用量にて１日当たり２ないし３回、あるいは持続放出形態で投与することができる。いくつかの具体例において、シブトラミンは、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg または30 mgの単一用量にて経口投与することができる。
【０２３０】
リモナバンは、例えば、約0.01 mg/kgないし約8 mg/kg、ある場合には、約0.3 mg/kgないし約3 mg/kgの日用量にて、単一用量または分割用量にて、一日当たり２ないし３回、あるいは持続放出形態で投与することができる。
【０２３１】
以下の実施例は本発明を説明するために供するが、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０２３２】
実施例１
SDラットにおける食餌性肥満(DIO)は、肥満の研究およびエネルギー恒常性の制御において価値のあるモデルである。これらのラットは、相対的に高脂肪および高エネルギーの食事において肥満となる傾向のある(Crl:CD（登録商標）(SD)BR)系統のラットから由来して発育した。例としては、後記の文献を参照されたい。Levin (1994) Am. J.Physiol. 267:R527-R535, Levinら. (1997) Am. J. Physiol. 273:R725-R730. DIOの雄のマウスはCharles River Laboratories, Inc. (Wilmington, MA)から得た。このマウスは１２時間毎の明暗サイクルにおける２２℃の靴箱のケージにおいて個々に飼育した。ラットは、薬物療法の前に適度に高脂肪（32%kcalが脂肪からのエネルギーである； Research Diets D1226B）の食事を随意に取る状態下に６から７週間保った。肥育時期（薬物投与に先立つ）の最後に、この実験動物は概して平均体重がおよそ５００グラムにまで達した。
【０２３３】
DIO実験動物は４つの処理群に分割した。各群には皮下に、ビヒクル（vehicle）、レプチン（500μg/kg/日）、アミリン（100μg/kg/日）もしくはレプチン（500μg/kg/日）＋アミリン（100μg/kg/日）を１４日間投与するようデザインした浸透性のミニポンプ（DURECT Corp., Cupertino, CA）を埋め込んだ。ここに記載したとおり、アミリンは食物摂取量および体重変調に関与する後脳における構造に作用し、およびレプチンは食物摂取量および体重変調に関与する視床下部における構造に作用する。食物摂取量と体重は毎日記録した。身体組成は (Echo Medical Systems, Houston, TX)を用いて薬物療法の前後に測定した。間接熱量測定法を薬物療法の４，５日および６日目におけるエネルギー消費の変化を測定するために用いた（Oxymax; Columbus Instruments, Columbus, OH）。全てのデータは平均値に標準誤差を加えるもしくは差し引いた値を示している。分散分析（ANOVA）および事後テスト（post-hoc tests）による分析を、群間の差異をテストするために用いた。P値が0.05未満であればデータに意味があると考えた。統計学的分析およびグラフ作成は、PRISM（登録商標）4 for Windows (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)を用いて行った。研究の早期の段階においては、SYSTAT（登録商標）for Windows (Systat Software, Inc., Point Richmond CA)を分析のために用いた。
【０２３４】
図１および２は、薬物投与１４日後の累積食物摂取量および体重の変化におけるアミリンおよびレプチンの効果を示す。特に興味深いのは、（１）レプチン、前葉体に作用する薬剤は、この肥満モデルにおいてはそのままでは非効果的であった（食物摂取量および体重において効果がなかった）、および（２）アミリンおよびレプチンの組合せで処理したラットは、ビヒクルおよびアミリンおよびレプチン単独の場合と比べて（P < 0.05；異なる文字は群がお互い著しく異なることを示す）、著しくより少ない食物を消費し、および著しくより多くの体重が減少した。
【０２３５】
類似した傾向が身体組成においても観察された。図３は体脂肪における処理による変化を示し、図４は体タンパク質における処理による変化を示す。アミリンおよびレプチンの組合せでの処理による実験動物における脂肪の減少は、個々の薬剤もしくはビヒクルでの処理（p値は0.05未満）による実験動物の脂肪の減少に比べて、著しく大きかった。体内の脂肪におけるこれらの変化は除脂肪組織においては著しい減少は伴わなかった（p値は0.05未満；図４）。
【０２３６】
図５は処理群の暗期間のエネルギーの消費における変化を示す。食物摂取量および体重における薬剤（もしくは食物）誘発性の減少は、しばしば代謝速度（熱、kcal/h/kg）の減少に伴うのに対して、レプチンおよびアミリンの組合せにおいて処理したラットについては、他の群と比較して（p値は0.05未満）暗期において著しく高代謝速度であった。従って後脳および前脳の摂食中枢を、同時にアミリンおよびレプチンの組合せにおいて対象とすることで、食物摂取量、体重および体脂肪において、代謝速度は増加しているのにも関わらず、著しいおよび継続的な減少という結果が生じた。加えて、体重および体脂肪における減少は、除脂肪組織量においては同様ではなかった。
【０２３７】
実施例２
体重および身体組成における変化における、アミリンおよびレプチンの組合せでの相互依存的な効果をさらに調査するために、他の一連の実験を行った。近交系DIO (Levin)ラットはこれらの研究のためにCharles Rivers Labsから得た。これらのラットはBarry Levinによって、相対的に高脂肪および高エネルギーの食事において肥満となる傾向のあるCrl:CD（登録商標）(SD)BR系統のラットから由来して発育した。これらは１２時間毎の明暗サイクルにおける２２℃の靴箱のケージにおいて個々に飼育した。ラットは薬物療法に先立つおよそ６週間および、対投与したコントロール(PF)である例外との実験の間は、適度に高脂肪（32%kcalが脂肪からのエネルギーである； Research Diets D1226B）の食事を随意に取る状態下に保った。PFラットはアミリン処理群の何れかの取り込みに制限した。薬物投与に先だって、ラットは概して平均体重がおよそ５００グラムにまで達した。
【０２３８】
動物は体重においてカウンターバランスがとられた処理群に分け、および皮下に浸透性のミニポンプ（DURECT Corp., Cupertino, CA）を埋め込んだ。各ラットには薬剤もしくは適切なビヒクルを含んだ２つのミニポンプを埋め込んだ。ラットのアミリン（AC0128; Lot#28）は滅菌水中の50%DMSOに溶解し、およびマウスレプチン（Peprotech, catalog#450-31）は滅菌水に溶解した。ポンプはビヒクル、アミリン（100μg/kg/日）もしくはマウスレプチン（500μg/kg/日）を１４日間投与するようデザインした。
【０２３９】
各群には皮下に、ビヒクル、レプチン（500μg/kg/日）、アミリン（100μg/kg/日）もしくはレプチン（500μg/kg/日）＋アミリン（100μg/kg/日）を１４日間投与するようデザインした浸透性のミニポンプ（DURECT Corp., Cupertino, CA）を埋め込んだ。体重と食物摂取量は毎日記録した。身体組成はNMR(Echo Medical Systems, Houston, TX)を用いて薬物療法の前後に測定した。身体組成の測定のために、ラットは一時的に（〜１分）後に特別な齧歯類のNMRに挿入する、よく喚起したプレキシガラス上に置いた。ラットはポンプの移植前および実験の最終日に精査した。このことは実際の脂肪と乾燥した除脂肪組織のグラム数の変化 (例えば、処理後の体脂肪のグラム数 - 処理開始前の体脂肪のグラム数 = 体脂肪のグラム数における変化量)、および実際の脂肪と乾燥した除脂肪組織の体内比率%の変化（例えば、処理後の体脂肪の%- 処理開始前の体脂肪の%= 体脂肪の%における変化量）について測定することを可能とした。
【０２４０】
図6Aにおけるグラフは２週間にわたる処理による、ビヒクル修正した処理群における体重でのパーセンテージの変化を示す。この実験においては、レプチン投与は体重において全体で2%の減少という結果になり、およびアミリン投与は体重において全体で6%の減少という結果になった。注目に値するのは、アミリンおよびレプチンの組合せに反応した体重減少におけるパーセンテージが12%であったということであり、つまり個々の薬剤が単独投与した場合の効果を合わせた値より、大きな効果であったということである。従って、アミリンおよびレプチンは相乗的に体重減少に作用した。図6Bおよび6Cは体脂肪および体タンパクにおける変化を示し、それぞれ、２週間における処理後に作成した。再び、薬剤の組合せによる結果としての体脂肪における減少結果は、各薬剤における体脂肪における減少結果を合わせたものより多くなっている。これらの体脂肪における変化は体タンパク質の減少においては同じではなく、むしろパーセンテージとしてはタンパク質は増加している。これらの結果は、体重減少の効果と同様、代謝における薬剤の組合せによる効果を支持している。
【０２４１】
アミリンは受容体に対して食欲抑制の効果をもたらすことで知られている。アミリンの食欲抑制の効果と照らしてアミリンおよびレプチンにおける効果を調べるために、a pair-feeding実験を行った。DIOラットおよび薬物処理群は前記の通りに確立した。対投与したレプチン処理における取り込みはアミリン処理群によって消費された量に制限した一方で、ビヒクル、アミリンおよび、アミリンおよびレプチンの組合せで処理した群におけるDIOラットは随意に食事をとらせた。体重は２週間における処理の間毎日記録した。図７で示しているように、アミリン処理群および対投与、レプチン処理群は両者とも、ビヒクルによるコントロールと比較しておおよそ6%の体重減少がある。この結果はDIO実験動物における体重において、レプチンはほとんどもしくは全く影響をもたないという前記の結果と一致している。アミリンおよびレプチンの組合せはビヒクルによるコントロールと比較しておおよそ12%の体重減少という結果である。従って対投与実験は、アミリンおよびレプチンの組合せはカロリー制限によってもたらされるよりも多く体重を減少させるということを証明している。
【０２４２】
実施例３
ここに議論したとおり、肥満であるヒトにおける大半の血清レプチンの濃度は高く、およびこれらの個人においてはレプチン耐性である状態が存在すると考えられている。血漿レプチンの濃度およびレプチン耐性が、正常なHSDラットおよびDIO傾向のあるラットにおいて調べられた。
【０２４３】
DIO傾向のあるラットおよび正常なHSDラットは３つの処理群に分割した。２つの群には皮下に、ビヒクルもしくはアミリン（100μg/kg/日）を投与するようデザインした浸透性のミニポンプ（DURECT Corp., Cupertino, CA）を埋め込み、３番目の群は、アミリン処理群によって１４日間において消費された量まで対投与をした。血清レプチンの濃度は、市販キット（Linco Research, Inc., St. Charles, MO）を用いた免疫学的検定によって測定した。図８で示しているように、DIO傾向のあるラットにおける血清レプチンの濃度は、正常なHSDラットに比べておおよそ３倍高い。従って、DIO傾向のあるラットは、高レプチン濃度を持つ。アミリン処理および、アミリン処理群によって食べられた食事量までカロリー制限をした場合は、DIO傾向のあるラットおよび正常なラット両者について、血漿レプチン濃度は顕著に減少した。
【０２４４】
正常およびやせたHSDラットは、２つの処理群に分割した。各群には皮下に、ビヒクルもしくはレプチン（500μg/kg/日）を１４日間投与するようデザインした浸透性のミニポンプ（DURECT Corp., Cupertino, CA）を埋め込み、および体重が週単位で記録した。図９で示しているように、レプチン（500mg/kg/日）はDIO傾向のあるラットにおいて効果がなく、正常なHSDラットの体重においては、顕著および持続的な減少を引き出した。DIO傾向のあるラットはここに記載したとおり、レプチンにおける体重減少の効果に対して耐性があるように考えられる。
【０２４５】
実施例４
アミリンおよびセロトニン/ノルアドレナリン再摂取阻害剤の組合せにおける、体重および身体組成における変化の効果を明らかにするために、DIOの雄のラットを肥育させ、および実施例２で記載したように４つの処理群に分割した。ラットアミリンは滅菌水中の50%DMSOに溶解し、およびシブトラミンは滅菌水に溶解した。各群には皮下に、１４日間ビヒクル、シブトラミン（3mg/kg/日）もしくはアミリン（100μg/kg/日）を投与するようデザインした浸透性のミニポンプを埋め込んだ。体重および食物摂取量は毎日記録した。身体組成はNMR(Echo Medical Systems, Houston, TX)を用いて薬物療法の前後に測定した。身体組成の測定のために、ラットは一時的に（〜１分）後に特別な齧歯類のNMRに挿入する、よく喚起したプレキシガラス上に置いた。ラットはポンプの移植前および実験の最終日に精査した。このことは実際の脂肪と乾燥した除脂肪組織のグラム数の変化 (例えば、処理後の体脂肪のグラム数 - 処理開始前の体脂肪のグラム数 = 体脂肪のグラム数における変化量)、および実際の脂肪と乾燥した除脂肪組織の体内比率%の変化（例えば、処理後の体脂肪の%- 処理開始前の体脂肪の%= 体脂肪の%における変化量）について測定することを可能とした。
【０２４６】
図10Aにおけるグラフは２週間にわたる処理による、ビヒクル修正した処理群における体重でのパーセンテージの変化を示す。シブトラミン単独投与およびアミリン単独投与においては体重について約6%の減少という結果になった。アミリンおよびシブトラミンの組合せに対する体重減少のパーセンテージは約12%であった。図10Bおよび10Cは体脂肪の変化および体タンパク質の変化を示し、それぞれ、２週間における処理後に作成した。脂肪量の減少はアミリン単独もしくはシブトラミン単独の処理において明らかであり、アミリンおよびシブトラミン両者を組合せて投与した時に相乗的な効果を得た（図 10B）。アミリン単独投与では除脂肪(タンパク質)量において増加という結果になった。除脂肪(タンパク質)量は、シブトラミン単独で投与した、もしくはアミリンと組合せて投与したときは、相対的に変化がなかった（図 10C）。これらの結果は、体重減少の効果と同様、代謝における薬剤の組合せによる効果を支持している。
【０２４７】
アミリンおよびカテゴールアミンアゴニスト、フェンテルミンについてもまた、体重および身体組成における変化の効果があるかテストを行った。フェンテルミンは古典的に、実際にはNA/5-HTレセプターに反応する、カテゴールアミンアゴニストといわれている。DIOの雄のマウスが、前記の通り肥育しおよび４つの処理群に分割した。各群には皮下に、ビヒクル、フェンテルミン（10mg/kg/日）、アミリン（100μg/kg/日）もしくはフェンテルミン（10mg/kg/日）＋アミリン（100μg/kg/日）を１４日間投与するようデザインした浸透性のミニポンプを埋め込むか、経口投与を行った。経口投与では滅菌水もしくはフェンテルミンが提供した一方で、ミニポンプではビヒクル（50%DMSOが水溶したもの）もしくはアミリンが含まれた。体重は毎日記録し、および身体組成はNMRを用いて薬物療法の前後に測定した。
【０２４８】
図11Aにおけるグラフは２週間にわたる処理による、ビヒクル修正した処理群における体重でのパーセンテージの変化を示す。フェンテルミン単独投与では、体重においておよそ5%の減少という結果をもたらし、アミリン単独投与においては体重減少においておよそ7%の減少という結果をもたらした。アミリンおよびフェンテルミンの組合せに対する体重減少のパーセンテージは約12%であった。図11Bおよび11Cは体脂肪の変化および体タンパク質の変化を示し、それぞれ、２週間における処理後に作成した。適度な脂肪量の減少はフェンテルミン単独の処理において明らかであり、より多くの脂肪量の減少がアミリン単独の処理において明らかであった。アミリンおよびフェンテルミンが組合せとして投与した時、相乗的な効果を得た（図11B）。除脂肪(タンパク質)量においては変化がないか、もしくはフェンテルミン単独で投与した場合は減少する傾向があった。アミリン単独投与においては除脂肪(タンパク質)量はそのままであり、アミリンおよびフェンテルミンの組合せにおいては、実験動物の体重がおよそ12%減少する一方で、除脂肪(タンパク質)量において一番大きな増加が起こる傾向があった（図 11C）。これらの結果は、体重減少の影響と同様、薬剤の組合せによる代謝への影響を示唆している。
【０２４９】
実施例５
アミリンおよびCB-1アンタゴニストの組合せにおける、体重および身体組成における変化の効果を明らかにするために、近交系DIO(Levin)ラットをCharles Rivers Labsより得た。これらのラットはBarry Levinによって、相対的に高脂肪および高エネルギーの食事において肥満となる傾向のあるCrl:CD（登録商標）(SD)BR系統のラットから由来して発育した。これらは１２時間毎の明暗サイクルにおける２２℃の靴箱のケージにおいて個々に飼育した。ラットは薬物療法に先立つおよそ６週間および、実験の間をとおして、適度に高脂肪（32%kcalが脂肪からのエネルギーである； Research Diets D1226B）の食事を随意に取る状態下に保った。薬物投与に先だって、ラットは概して平均体重がおよそ５００グラムにまで達した。ラットは処理に先立つ一週間、経口投与に慣らした。リモナバンを経口投与によって一定範囲の用量（0.1, 0.3, 1.0, 3.0. 10 mg/kg/日）で投与した。アミリン（水溶した50%DMSOに溶解したもの）もしくはビヒクルは、ミニポンプによって投与した（100μg/kg/日）。リモナバンは常時消灯の直前において投与した。食物摂取量と体重においては処理後１および２週間目に測定した。身体組成はNMR(Echo Medical Systems, Houston, TX)を用いて薬物療法の前後に測定した。身体組成の測定のために、ラットは一時的に（〜１分）後に特別な齧歯類のNMRに挿入する、よく喚起したプレキシガラス上に置かれた。ラットはポンプの移植前および実験の最終日に精査した。このことは実際の脂肪と乾燥した除脂肪組織のグラム数の変化 (例えば、処理後の体脂肪のグラム数 - 処理開始前の体脂肪のグラム数 = 体脂肪のグラム数における変化量)、および実際の脂肪と乾燥した除脂肪組織の体内比率%の変化（例えば、処理後の体脂肪の%- 処理開始前の体脂肪の%= 体脂肪の%における変化量）について測定することを可能とした。
【０２５０】
図12Aは２週間にわたる処理による、ビヒクル修正した処理群における体重でのパーセンテージの変化を示す。リモナバン単独投与では、体重においておよそ4%の減少という結果をもたらし、アミリン単独投与においては体重減少においておよそ6%の減少という結果をもたらした。アミリンおよびリモナバンの組合せに対する体重減少のパーセンテージは約11%であった。図12Bおよび12Cは体脂肪の変化および体タンパク質の変化を示し、それぞれ、２週間における処理後に作成した。脂肪量の減少はアミリン単独もしくはリモナバン単独の処理において明らかであり、アミリンおよびリモナバン両者を組合せて投与した時に相乗的な効果を得た（図 12B）。アミリン単独投与、リモナバン単独投与およびアミリンおよびリモナバンを組合せた投与では、除脂肪(タンパク質)量においては相対的に同じ結果になった（図 12C）。これらの結果は、体重減少の効果と同様、代謝における薬剤の組合せによる効果を支持している。
【０２５１】
別の分析において、CB-1アンタゴニストであるリモナバン（AC163720）がアミリンと組合せて投与した。DIO傾向のあるラットが薬物療法に先立つおよそ６週間、適度に高脂肪（32%kcalが脂肪からのエネルギーである； Research Diets D1226B）の食事を随意に取る状態下に保たれた。肥育時期の最後に、この実験動物は概して平均体重がおよそ５００グラムにまで達した。ラットはその後処理群に分割し、皮下にミニポンプ（Durect Corp）が埋め込まれ、および経口投与のためのチューブが挿入した。経口投与では滅菌水もしくは一定範囲の用量（0.1, 0.3, 1.0, 3.0. 10 mg/kg/日）のリモナバン（AC163720）を投与した一方で、ミニポンプではビヒクル（50%DMSOが水溶したもの）もしくはアミリン（100 μg/kg/day）が含まれた。２週間後における体重の変化を図13で示しており、これらの組合せのうち２カ所について（囲まれた部分）図14Aおよび14Bの中で、さらに詳細を示している。
【０２５２】
実施例６
アミリンおよびエキセンディンアナログ、14Leu-エキセンディン-4:  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser (SEQ ID NO:190)、の組合せにおける体重および身体組成における変化の効果を明らかにするために、DIOの雄のラットを肥育させ、および前記の通り４つの処理群に分割した。薬物投与に先立って、概して平均体重がおよそ５００グラムにまで達した。エキセンディン-4アナログは、ミニポンプによって一定範囲の用量（0.3,1, 3, 10, 30 μg/kg/日）で投与した。アミリン（水溶した50%DMSOに溶解したもの）もしくはビヒクルは、ミニポンプによって投与した（100 μg/kg/日）。体重と食物摂取量は毎日記録した。身体組成はNMR(Echo Medical Systems, Houston, TX)を用いて薬物療法の前後に測定した。身体組成の測定のために、ラットは一時的に（〜１分）後に特別な齧歯類のNMRに挿入する、よく喚起したプレキシガラス上に置かれた。ラットはポンプの移植前および実験の最終日に精査した。このことは実際の脂肪および乾燥した除脂肪組織のグラム数の変化 (例えば、処理後の体脂肪量のグラム数 - 処理開始前の体脂肪量のグラム数 = 体脂肪量のグラム数における変化量)および、実際の脂肪および乾燥した除脂肪組織の体内比率%の変化（例えば、処理後の体脂肪の%- 処理開始前の体脂肪の%= 体脂肪の%における変化量）について測定することを可能とした。
【０２５３】
図15Aにおけるグラフは２週間にわたる処理による、ビヒクル修正した処理群における体重でのパーセンテージの変化を示す。エキセンディン-4アナログ単独投与およびアミリン単独投与では、体重においておよそ6%の減少という結果をもたらした。アミリンおよびエキセンディン-4アナログの組合せに対する体重減少のパーセンテージは約12%であった。図15Bおよび15Cは体脂肪の変化および体タンパク質の変化を示し、それぞれ、２週間における処理後に作成した。脂肪量の減少はエキセンディン-4アナログ単独の処理において明らかであった。アミリン単独投与、アミリンおよびエキセンディン-4アナログ両者を組合せた投与では、脂肪における減少量においては相対的に同じ結果になった（図 15B）。アミリン単独投与、エキセンディン-4アナログ単独投与、およびアミリンおよびAC3174両者を組合せた投与では、除脂肪(タンパク質)における減少量においては相対的に同じ結果になった（図 15C）。これらの結果は、体重減少の効果と同様、代謝における薬剤の組合せによる効果を支持している。
【０２５４】
実施例７
アミリンおよびPYYアゴニストの組合せにおける、体重および身体組成における変化の効果を明らかにするために、DIOの雄のラットを肥育させ、および前記の通り４つの処理群に分類した。各群には皮下に、ビヒクル、PYY(3-36)（1000μg/kg/日）、アミリン(100 μg/kg/日)、もしくはPYY(3-36) (1000 μg/kg/日)+アミリン(100 μg/kg/日)を１４日間投与するようデザインした浸透性のミニポンプを埋め込んだ。PYY(3-36)はミニポンプによって一定範囲の用量（100, 200, 400, 800, 1000 μg/kg/日）で投与した。アミリン100 μg/kg/日（水溶した50%DMSOに溶解したもの）、PYY(3-36) （水溶した50%DMSOに溶解したもの）もしくはビヒクルがミニポンプによって投与した。食物摂取量と体重は毎日記録した。身体組成はNMR(Echo Medical Systems, Houston, TX)を用いて薬物療法の前後に測定した。身体組成の測定のために、ラットは一時的に（〜１分）後に特別な齧歯類のNMRに挿入する、よく喚起したプレキシガラス上に置かれた。ラットはポンプの移植前および実験の最終日に精査した。このことは実際の脂肪および乾燥した除脂肪組織のグラム数の変化 (例えば、処理後の体脂肪のグラム数 - 処理開始前の体脂肪のグラム数 = 体脂肪のグラム数における変化量)および、実際の脂肪および乾燥除脂肪組織の身体組成中の体内比率%の変化（例えば、処理後の体脂肪の%- 処理開始前の体脂肪の%= 体脂肪の%における変化量）について測定することを可能とした。
【０２５５】
図16Aにおけるグラフは２週間にわたる処理による、ビヒクル修正した処理群における体重でのパーセンテージの変化を示す。PYY(3-36)単独投与では、体重においておよそ9%の減少という結果をもたらし、およびアミリン単独投与では、体重においておよそ7%の減少という結果をもたらした。アミリンおよびPYY(3-36)の組合せに対する体重減少のパーセンテージは約15%であった。図16Bおよび16Cは体脂肪の変化および体タンパク質の変化を示し、それぞれ、２週間における処理後に作成した。脂肪の減少量の増加はPYY(3-36)単独処理、アミリン単独処理、およびアミリン+ PYY(3-36)の組合せの処理において明らかであった（図16B）。アミリン単独投与およびアミリン+ PYY(3-36)の組合せの投与では、除脂肪(タンパク質)の増加という結果になった（図16C）。これらの結果は、体重減少の影響と同様、薬剤の組合せによる代謝への影響を示唆している。
【０２５６】
前記の内容が、図解という目的での実施例と共に本願発明を明らかにする一方で、当然のことながら、本願発明の実施は請求した発明の範囲内での全ての通常の変形、適用、もしくは変更を包含している。従って、内容および実施例は、補足している（特許）請求の範囲によって述べられている発明範囲の制限と解釈するべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０２５７】
【図１】図１は、食物摂取に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【図２】図2は、体重に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【図３】図3は、体内成分に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【図４】図4は、体内成分に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【図５】図5は、エネルギー消費に対するレプチンおよびアミリン投与の効果を示すグラフである。
【図６Ａ】図6Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるレプチン(500μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図６Ｂ】図6Bは、単独または組合せにおけるレプチン(500μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の２週間投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。
【図６Ｃ】図6Cは、単独または組合せにおけるレプチン(500mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の２週間投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【図７】図7は、２週間にわたる、レプチン単独(500μg/kg/日)、１対で与えたレプチン単独(500μg/kg/日)、ならびに組み合せたレプチン(500μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図８】図8は、２週間、ビヒクルを受けたか、アミリン処置群に１対で与えた、またはアミリン(100μg/kg/日)を受けた正常HSDおよびDIO傾向性動物における血清中レプチン濃度を示すグラフを示す。
【図９Ａ】図9Aは、正常動物におけるビヒクルまたはレプチン(500μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図９Ｂ】図9Bは、DIO傾向性動物におけるビヒクルまたはレプチン(500μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図１０Ａ】図10Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるシブトラミン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図１０Ｂ】図10Bは、単独または組合せにおけるシブトラミン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。
【図１０Ｃ】図10Cは、単独または組合せにおけるシブトラミン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【図１１Ａ】図11Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるフェンテルミン(10mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図１１Ｂ】図11Bは、単独または組合せにおけるフェンテルミン(10mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。
【図１１Ｃ】図11Cは、単独または組合せにおけるフェンテルミン(10mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【図１２Ａ】図12Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるリモナバン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図１２Ｂ】図12Bは、単独または組合せにおけるリモナバン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。
【図１２Ｃ】図12Cは、単独または組合せにおけるリモナバン(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【図１３】図13は、体重に対する、単独またはアミリン(100μg/kg/日)との組合せにおけるある用量範囲のCB-1アンタゴニストの投与の効果を示すグラフである。円で囲まれた領域内の組合せの時間経過を図14AおよびBに示す。
【図１４Ａ】図14Aは、体重に対する、単独または組合せにおけるCB-1アンタゴニスト(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の効果を示すグラフである。
【図１４Ｂ】図14Bは、体重に対する、単独または組合せにおけるCB-1アンタゴニスト(3mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の効果を示すグラフである。
【図１５Ａ】図15Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるエキセンディン-4アナログ(10μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図１５Ｂ】図15Bは、単独または組合せにおけるエキセンディン-4アナログ(10μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。
【図１５Ｃ】図15Cは、単独または組合せにおけるエキセンディン-4(10μg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【図１６Ａ】図16Aは、2週間にわたる単独または組合せにおけるPYY(3-36)(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)投与の体重に対する効果を示すグラフである。
【図１６Ｂ】図16Bは、単独または組合せにおけるPYY(3-36)(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体脂肪に対する効果を示すグラフである。
【図１６Ｃ】図16Cは、単独または組合せにおけるPYY(3-36)(1mg/kg/日)およびアミリン(100μg/kg/日)の2週間の投与の体内蛋白質に対する効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
2008518963.tif 000030
【図１６Ａ】
2008518963.tif 000031
【図１６Ｂ】
2008518963.tif 000032
【図１６Ｃ】
2008518963.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】平成19年7月3日(2007.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008518963000001.app
【国際調査報告】
2008518963.tif 000034
2008518963.tif 000035
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