(57)【要約】  ヒト癌抑制遺伝子、それによりコードされるタンパク質、前述のものを含む発現ベクターおよび該ベクターで形質転換された微生物が開示される。本発明の癌抑制遺伝子は、ヒト癌を診断し、予防し、および治療するために効率的に使用されるであろう。【選択図】      図146
2008534006.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：2；配列番号：6；配列番号：10；配列番号：14；配列番号：18；配列番号：22；配列番号：26；配列番号：30；配列番号：34；配列番号：38；配列番号：42；配列番号：46；配列番号：50；配列番号：54；配列番号：58；配列番号：62；配列番号：66；配列番号：70；配列番号：74；配列番号：78；配列番号：82；配列番号：86；配列番号：90；配列番号：94；配列番号：98；配列番号：102；配列番号：106；配列番号：110および配列番号：114からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質。
【請求項２】
前記癌が正常な乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血からなる群より選択される組織の癌である、請求項1に記載のヒト癌抑制タンパク質。
【請求項３】
請求項1で定義されたプロトオンコタンパク質をコードするヒト癌抑制遺伝子であって、前記ヒト癌抑制遺伝子が配列番号：1；配列番号：5；配列番号：9；配列番号：13；配列番号：17；配列番号：21；配列番号：25；配列番号：29；配列番号：33；配列番号：37；配列番号：41；配列番号：45；配列番号：49；配列番号：53；配列番号：57；配列番号：61；配列番号：65；配列番号：69；配列番号：73；配列番号：77；配列番号：81；配列番号：85；配列番号：89；配列番号：93；配列番号：97；配列番号：101；配列番号：105；配列番号：109；および配列番号：113からなる群より選択されるDNA配列に記載されているヒト癌抑制遺伝子。
【請求項４】
前記癌が正常な乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血からなる群より選択される組織の癌である、請求項3に記載のヒト癌抑制遺伝子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト癌抑制遺伝子、それによりコードされるタンパク質、前述のものを含む発現ベクターおよびベクターで形質転換された細胞に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍抑制遺伝子産物は、正常細胞が一定の癌細胞に形質転換されるのを抑制するように機能し、したがって、腫瘍抑制遺伝子産物のこの機能の喪失により、正常細胞が悪性形質転換体になってしまう（Klein, G., FASEB J., 7, 821-825 （1993））。癌細胞が癌へと増殖できるようになるためには、細胞は、正常なコピー数の腫瘍抑制遺伝子を制御する機能を喪失しているはずである。p53腫瘍抑制遺伝子のコード配列の修飾は、ヒト癌において最も一般的な遺伝的変化のうちの1つであることが見いだされた（Bishop, J.M., Cell, 64, 235-248 （1991）; and Weinberg, R.A., Science, 254, 1138-1146 （1991））。
【０００３】
しかし、p53突然変異は、乳癌全体の30%の範囲の乳癌の総計になることが報告されており、乳癌組織のうちの一部のみが、p53突然変異を示すものと推定された（Keen, J.C. & Davidson, N. E., Cancer, 97, 825-833 （2003））および Borresen-Dale, A-L., Human Mutation, 21, 292-300 （2003））。また、p53突然変異は、白血病全体の20%の範囲の白血病の層系になることが報告されており、白血病組織の一部のみが、p53突然変異を示すものと推定された。（Boyapati, A., et al., Acta Haematol., 111（1-2）, 100-106 （2004））。
【０００４】
p53突然変異は、肝臓癌の、特にアフラトキシンB1に曝露されたか、またはB型肝炎ウイルスによる感染の頻度が高い領域において、少なくとも50%までの原因であり、これは、主p53腫瘍遺伝子のコドン249におけるミスセンス突然変異によって特徴づけられる（Montesano, R. et al., J. Natl. Cancer Inst., 89, 1844-1851 （1997）; Szymanska, K. & Hainaut, P. Acta Biochimica Polonica, 50, 231-238 （2003））。しかし、p53突然変異は、米国および西ヨーロッパにおける肝臓癌のたった30%の範囲に達するだけで、このような突然変異が頻繁に生じるホットスポットはないことが報告されていた（Szymanska, K. & Hainaut, P. Acta Biochimica Polonica, 50, 231-238 （2003））。
【０００５】
一方、子宮頚癌で報告されたp53突然変異は、子宮頚癌全体（toatal）の2〜11%の範囲だけであり、頚部癌組織の一部のみが、p53突然変異を示すものと推定された（Crook, T. et al., Lancet, 339, 1070-1073 （1992）; and Busby-Earle, R.M.C. et al., Br. j. Cancer, 69, 732-737 （1994））。
【０００６】
また、非小細胞肺癌および小細胞型肺癌量におけるp53腫瘍抑制遺伝子の突然変異頻度は、それぞれ肺癌全体のおよそ50%および70%に達することが報告されていた（Takahashi, T. et al., Science, 246, 491-494 1989; Bodner, S.M. et al., Oncogene, 7, 743-749 （1992）; Mao, L. Lung Cancer, 34, S27-S34 （2001））。喫煙は、肺癌の発症および進行の最も重要な要因の1つであり、p53に加えて、その他の種々の腫瘍抑制遺伝子および癌遺伝子も肺癌の発症および進行に同時に関与する（Osada, H. & Takahashi, T. Oncogene, 21, 7421-7434 （2002））。
【０００７】
従って、本発明者らは、乳房、肝臓、頚部および肺などの正常組織と乳癌、肝臓癌、子宮頚癌および肺癌などの癌組織との間で差動的に発現される遺伝子をより効率的に示すために、mRNAディファレンシャルディスプレイ（DD）法を使用して、乳房、肝臓、頚部、肺、その他などの正常組織から新規腫瘍抑制遺伝子を分離することを熱心に試みた（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 （1992）; and Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 （1993））。
【発明の開示】
【０００８】
従って、本発明は、従来技術の問題を解決するようにデザインされており、したがって、新規ヒト癌抑制遺伝子を提供することが本発明の目的である。
【０００９】
癌抑制遺伝子によってコードされる癌抑制タンパク質を提供することも、もう一つの本発明の目的である。
【００１０】
癌抑制遺伝子を含む発現ベクターを提供することも、さらにもう一つ本発明の目的である。
【００１１】
上記目的の1つを達成するために、本発明は、配列番号：1；配列番号：5；配列番号：9；配列番号：13；配列番号：17；配列番号：21；配列番号：25；配列番号：29；配列番号：33；配列番号：37；配列番号：41；配列番号：45；配列番号：49；配列番号：53；配列番号：57；配列番号：61；配列番号：65；配列番号：69；配列番号：73；配列番号：77；配列番号：81；配列番号：85；配列番号：89；配列番号：93；配列番号：97；配列番号：101；配列番号：105；配列番号：109および配列番号：113からなる群より選択されるDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子を提供する。
【００１２】
上記目的のもう一つに従って、本発明は、配列番号：2；配列番号：6；配列番号：10；配列番号：14；配列番号：18；配列番号：22；配列番号：26；配列番号：30；配列番号：34；配列番号：38；配列番号：42；配列番号：46；配列番号：50；配列番号：54；配列番号：58；配列番号：62；配列番号：66；配列番号：70；配列番号：74；配列番号：78；配列番号：82；配列番号：86；配列番号：90；配列番号：94；配列番号：98；配列番号：102；配列番号：106；配列番号：110；および配列番号：114からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するヒト癌抑制タンパク質を提供する。
【００１３】
上記目的のさらにもう一つに従って、本発明は、該癌抑制遺伝子を含む発現ベクターを提供する。
【００１４】
上記目的のさらにもう一つに従って、本発明は、該発現ベクターで形質転換された細胞を提供する。
【００１５】
本発明の好ましい態様のこれらのおよびその他の特色、側面および利点は、図面を伴って、以下の詳細な説明においてより完全に記述してある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下に、本発明の好ましい態様を添付の図面を参照して詳述する。
【００１７】
1. GIG8
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに受託番号AY634687で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：1のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子8（GIG8）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_002166で寄託されたドミナント・ネガティブ・ヘリックス・ループ・ヘリックス・タンパク質（ID2）遺伝子のDNA結合2のヒト阻害剤のものに類似している。しかし、この研究結果から、GIG8遺伝子は、種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG8腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００１８】
配列番号：1のDNA配列は、DNA配列の塩基位置120〜524に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（塩基位置522〜524は、終止コドンを表す）。
【００１９】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、134アミノ酸残基からなり、配列番号：2のアミノ酸配列およびおよそ15kDaの分子量を有する。
【００２０】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：1に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される163bp cDNA断片は、配列番号：3（5'-AAGCTTGCTGCTC-3'）のランダムプライマーH-AP33および配列番号：4（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリーとプラークハイブリダイズ(plaque-hybridized)させてもよい。
【００２１】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.3kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００２２】
2. GIG10
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに受託番号AY634687で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：5のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子10（GIG10）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、mRNA遺伝子がデータベースに受託番号AF230904で寄託されたヒトc-Cbl相互作用タンパク質（CIN85）のものに類似している。
【００２３】
しかし、この研究結果から、GIG10遺伝子は、種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG10腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００２４】
配列番号：5のDNA配列は、DNA配列の塩基位置52〜2,049に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（塩基位置2,047〜2,049は、終止コドンを表す）。
【００２５】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、665アミノ酸残基からなり、および配列番号：6のアミノ酸配列およびおよそ73kDaの分子量を有する。
【００２６】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、本発明の遺伝子は、配列番号：5に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される321bp cDNA断片は、配列番号：7（5'-AAGCTTCCACGTA-3'）のランダムプライマーH-AP10および配列番号：8（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００２７】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ3.5kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００２８】
3. GIG13
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY493418で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：9のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子13（GIG13）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_016831で寄託されたヒトperiod相同体3（ショウジョウバエ）（PER3）遺伝子のものに類似している。
【００２９】
この研究結果から、GIG13遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG13腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。配列番号：9のDNA配列は、DNA配列の塩基位置72〜3,677に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（3,675〜3,677塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００３０】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、1,201アミノ酸残基からなり、配列番号：10のアミノ酸配列およびおよそ132kDaの分子量を有する。
【００３１】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：1に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される347bp cDNA断片は、配列番号：11（5'-AAGCTTAGTAGGC-3'）のランダムプライマーH-AP5および配列番号：12（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００３２】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房および肝臓に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.3kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。特に、本発明の遺伝子は、正常組織のみにおいて差動的に発現される。たとえば、本発明の遺伝子は、乳癌組織および乳癌株化細胞MCF-7などの癌組織および癌細胞においてまれに発現されるか、または発現されないが、正常な胸部組織のみにおいて差動的に次第に発現される。
【００３３】
4. GIG15
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY927233で寄託された（予定公表日：2006年10月1日）配列番号：13のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子15（GIG15）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号AC116533で寄託されたヒト第11染色体、クローンRP11-466H18遺伝子のものに類似している。この研究結果から、GIG15遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG15腫瘍抑制遺伝子が白血病を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００３４】
配列番号：13のDNA配列は、DNA配列の塩基位置18〜338に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（336〜338塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００３５】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、106アミノ酸残基からなり、配列番号：14のアミノ酸配列およびおよそ12kDaの分子量を有する。
【００３６】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：13に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、まれに癌組織または癌株化細胞において発現されるが、正常組織において差動的に発現される133bp cDNA断片は、配列番号：15（5'-AAGCTTCGACTGT-3'）のランダムプライマーH-AP2および配列番号：16（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００３７】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ0.5kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。特に、本発明の遺伝子は、正常組織のみにおいて差動的に発現される。たとえば、本発明の遺伝子は、まれに白血病細胞および白血病株化細胞K562などの癌組織および癌細胞において発現されるが、差動的に正常な胸部組織のみにおいて次第に発現される。
【００３８】
5. GIG16
本発明の遺伝子は米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY513277で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）、配列番号：17のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子16（GIG16）であり、寄託された遺伝子のいくつかのDNA配列は、データベースに受託番号NM_016527で寄託されたヒトヒドロキシ酸酸化酵素2（長鎖）（HAO2）遺伝子のものとは異なり、HAO2遺伝子は、2-ヒドロキシ酸酸化酵素活性を有する3つの遺伝子のうちの1つであることが公知である（Jones, J.M., et al., J. Biol. Chem. 275（17）, 12590-12597 （2000））。しかし、この研究結果から、GIG16腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍における全てにて発現されるわけではなく、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００３９】
配列番号：17のDNA配列は、DNA配列の塩基位置41〜1,096に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,094〜1,096塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００４０】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、351アミノ酸残基からなり、配列番号：18のアミノ酸配列およびおよそ39kDaの分子量を有する。
【００４１】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：17に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される213bp cDNA断片は、配列番号：19（5'-AAGCTTTTACCGC-3'）のランダムプライマーH-AP8および配列番号：20（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長GIG16 cDNAを挿入し、次いで、生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【００４２】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓および腎臓に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ2.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。特に、本発明の遺伝子は、正常組織のみにおいて差動的に発現される。たとえば、本発明の遺伝子は、肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞HepG2などの癌組織および癌細胞において発現されないが、正常な胸部組織のみにおいて差動的に発現される。
【００４３】
6. GIG24
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY513275で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：21のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子24（GIG24）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号AK093049で寄託されたALPHA-1-ANTICHYMOTRYPSIN PRECURSOR遺伝子に高度に類似するヒトcDNA FLJ35730 fis、クローンTESTI2003131のものに類似している。しかし、この研究結果から、GIG24腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍における全てにて発現されるわけではなく、その一方で、その発現は正常肝組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００４４】
配列番号：21のDNA配列は、DNA配列の塩基位置34〜1,305に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,303〜1,305塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００４５】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、423アミノ酸残基からなり、配列番号：22のアミノ酸配列およびおよそ47kDaの分子量を有する。
【００４６】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：1に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される221bp cDNA断片は、配列番号：23（5'-AAGCTTAACGAGG-3'）のランダムプライマーH-AP7および配列番号：24（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長GIG24 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【００４７】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓、心臓および筋肉に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ2.4kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００４８】
7. GIG26
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY544126で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：25のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子26（GIG26）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、それぞれデータベースに受託番号NM_153696およびAF261715で寄託された、ヒト前立腺特異的膜抗原様（PSMAL）遺伝子およびヒト前立腺特異的膜抗原様タンパク質（PSMAL／GCP III）mRNA遺伝子のものに類似しており、前立腺特異的膜抗原は、主に前立腺上皮に発現されるマーカータンパク質であることが公知である（（Lee, S.J., et al., J. Mol. Biol. 330（4）, 749-760 （2003））。しかし、この研究結果から、GIG26腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍における全てにて発現されるわけではなく、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００４９】
配列番号：25のDNA配列は、DNA配列の塩基位置26〜1,354に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,352〜1,354塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００５０】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、442アミノ酸残基からなり、配列番号：26のアミノ酸配列およびおよそ50kDaの分子量を有する。
【００５１】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：25に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される204bp cDNA断片は、配列番号：27（5'-AAGCTTCGGGTAA-3'）のランダムプライマーH-AP11および配列番号：28（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００５２】
本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長GIG26 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【００５３】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓、腎臓、脳および心臓に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ2.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００５４】
8. GIG29
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY544127で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：29のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子29（GIG29）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、遺伝子がデータベースに受託番号NM_003049で寄託されたヒト溶質担体ファミリー10（ナトリウム／胆汁酸共輸送体ファミリー）のものに類似している。しかし、この研究結果から、GIG29腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍における全てにて発現されるわけではなく、その一方で、その発現は正常肝組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００５５】
配列番号：29のDNA配列は、DNA配列の塩基位置62〜1,111に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,109〜1,111塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００５６】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、349アミノ酸残基からなり、配列番号：30のアミノ酸配列およびおよそ38kDaの分子量を有する。
【００５７】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：29に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される277bp cDNA断片は、配列番号31（5'-AAGCTTTGGTCAG-3'）：のランダムプライマーH-AP3および配列番号：32（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長GIG29 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【００５８】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.4kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００５９】
9. GIG30
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY524045で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：33のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子30（GIG30）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号AY358814で寄託されたヒトクローンDNA43305 RIPK2（UNQ277）遺伝子のものに類似している。この研究結果から、GIG30遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG30腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００６０】
配列番号：33のDNA配列は、DNA配列の塩基位置88〜1,710に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,708〜1,710塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００６１】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、540アミノ酸残基からなり、配列番号：34のアミノ酸配列およびおよそ61kDaの分子量を有する。
【００６２】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：35に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される278bp cDNA断片は、配列番号：35（5'-AAGCTTCTCAACG-3'）のランダムプライマーH-AP4および配列番号：36（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００６３】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、心臓、筋肉および肝臓に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.9kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００６４】
10. GIG32
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY762103で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：37のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子32（GIG32）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_001753で寄託された22kDa（CAV1）の遺伝子であるヒトカベオリン1、カベオラタンパク質のものに類似している。この研究結果から、GIG32遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG32腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００６５】
配列番号：37のDNA配列は、DNA配列の塩基位置43〜579に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（577〜579塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００６６】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、178アミノ酸残基からなり、配列番号：38のアミノ酸配列およびおよそ20kDaの分子量を有する。
【００６７】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：37に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される172bp cDNA断片は、配列番号：39（5'-AAGCTTTTACCGC-3'）のランダムプライマーH-AP8および配列番号：40（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００６８】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は主にこれらの組織においておよそ、4.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００６９】
11. GIG33
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY871273で寄託された（予定公表日：2006年10月1日）配列番号：41のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子33（GIG33）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_000996で寄託されたヒトリボソームタンパク質L35a（RPL35A）遺伝子のものに類似している。リボソームの遺伝子は、タンパク質合成を触媒し、小さな40Sサブユニットおよび大きな60Sサブユニットからなる細胞内小器官である。しかし、遺伝子の機能は、特定されていないままである（Herzog, H., et al., Nucleic Acids Res., 18（15）, 4600 （1990）; Kenmochi, N., et al., Genome Res., 8（5）, 509-523 （1998）; Lopez, C.D., et al., Cancer Lett. 180（2）, 195-202 （2002））。この研究結果から、GIG33遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG33腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００７０】
配列番号：41のDNA配列は、DNA配列の塩基位置74〜406に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（404〜406塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００７１】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、110アミノ酸残基からなり、配列番号：42のアミノ酸配列およびおよそ12kDaの分子量を有する。
【００７２】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：41に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される182bp cDNA断片は、配列番号：43（5'-AAGCTTGCTGCTC-3'）のランダムプライマーH-AP33および配列番号：44（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００７３】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ0.6kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００７４】
12. GIG34
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY871274で寄託された（予定公表日：2006年10月1日）配列番号：45のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子34（GIG34）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC018970で寄託されたヒトリボソームタンパク質L11遺伝子のものに類似している。この研究結果から、GIG34遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG34腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００７５】
配列番号：45のDNA配列は、DNA配列の塩基位置5〜538に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（536〜538塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００７６】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、177アミノ酸残基からなり、配列番号：46のアミノ酸配列およびおよそ20kDaの分子量を有する。
【００７７】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：45に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される205bp cDNA断片は、配列番号：47（5'-AAGCTTCAGGGCA-3'）のランダムプライマーH-AP35および配列番号：48（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００７８】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ0.6kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００７９】
13. GIG35
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY542307で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：49のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子35（GIG35）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_001404で寄託されたヒト成熟核翻訳伸長１因子γ（EEF1G）遺伝子のものに類似している。本遺伝子は、アミノアシルtRNAをリボソームへ移動させるのに重要な役割を果たす伸長因子1のサブユニットである（（Kumabe, T., et al., Nucleic Acids Res., 20（10）, 2598 （1992））。この研究結果から、GIG35遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG35腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現され、その一方で、その発現は種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００８０】
配列番号：49のDNA配列は、DNA配列の塩基位置9〜1,332に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する1（1,330〜1,332塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００８１】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、437アミノ酸残基からなり、配列番号：50のアミノ酸配列およびおよそ50kDaの分子量を有する。
【００８２】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：49に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される212bp cDNA断片は、配列番号：51（5'-AAGCTTTGGTCAG-3'）のランダムプライマーH-AP3および配列番号：52（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００８３】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。
【００８４】
本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.3kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００８５】
14. GIG38
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY550970で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：53のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子38（GIG38）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_005870で寄託された18kDaの遺伝子であるヒトsin3結合ポリペプチド（SAP18）のものに類似している。この研究結果から、GIG38遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG38腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００８６】
配列番号：53のDNA配列は、DNA配列の塩基位置17〜478に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（476〜478塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００８７】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、153アミノ酸残基からなり、配列番号：54のアミノ酸配列およびおよそ17kDaの分子量を有する。
【００８８】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：53に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される172bp cDNA断片は、配列番号：55（5'-AAGCTTGAGTGCT-3'）のランダムプライマーH-AP12および配列番号：56（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００８９】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、心臓、筋肉、腎臓、肝臓および胎盤に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ0.7kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００９０】
15. GIG39
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY550972で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：57のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子39（GIG39）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC030531で寄託されたヒト染色体1オープンリーディングフレーム24遺伝子のものに類似している。この研究結果から、GIG39遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG39腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００９１】
配列番号：57のDNA配列は、DNA配列の塩基位置70〜2,856に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（2,854〜2,856塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００９２】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、928アミノ酸残基からなり、配列番号：58のアミノ酸配列およびおよそ103kDaの分子量を有する。
【００９３】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：57に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される327bp cDNA断片は、配列番号：59（5'-AAGCTTGAGTGCT-3'）のランダムプライマーH-AP12および配列番号：60（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【００９４】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房および肝臓に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ2.4kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【００９５】
16. GIG40
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY550966で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：61のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子40（GIG40）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_005228で寄託されたヒト上皮細胞成長因子受容体（赤芽球白血病ウイルス発癌遺伝子（v-erb-b）相同体、トリ）（EGFR）のものに類似している。しかし、この研究結果から、GIG40腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現され、その一方で、その発現は正常肝組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【００９６】
配列番号：61のDNA配列は、DNA配列の塩基位置47〜3,679に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（3,677〜3,679塩基位置は、終止コドンを表す）。
【００９７】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、1,210アミノ酸残基からなり、配列番号：62のアミノ酸配列およびおよそ134kDaの分子量を有する。
【００９８】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：61に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される275bp cDNA断片は、配列番号：63（5'-AAGCTTAACGAGG-3'）のランダムプライマーH-AP7および配列番号64（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）：のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長GIG40 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【００９９】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓、心臓および筋肉に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.5kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１００】
17. GIG42
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY550967で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：65のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子42（GIG42）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC034023で寄託されたヒトアルブミン遺伝子のものに類似している。しかし、この研究結果から、GIG42腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍における全てにて発現されるわけではなく、その一方で、その発現は種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１０１】
配列番号：65のDNA配列は、DNA配列の塩基位置8〜1,837に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,835〜1,837塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１０２】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、609アミノ酸残基からなり、配列番号：66のアミノ酸配列およびおよそ69kDaの分子量を有する。
【０１０３】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：65に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される327bp cDNA断片は、配列番号：67（5'-AAGCTTTTACCGC-3'）のランダムプライマーH-AP8および配列番号：68（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長GIG42 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０１０４】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ2.5kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１０５】
18. GIG43
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY550971で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：69のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子43（GIG43）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC028354で寄託された、ヒトリン脂質スクランブラーゼ4遺伝子のものに類似している。この研究結果から、GIG43遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG43腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１０６】
配列番号：69のDNA配列は、DNA配列の塩基位置96〜1,085に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,083〜1,085塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１０７】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、329アミノ酸残基からなり、配列番号：70のアミノ酸配列およびおよそ37kDaの分子量を有する。
【０１０８】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：69に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される273bp cDNA断片は、配列番号：71（5'-AAGCTTCCACGTA-3'）のランダムプライマーH-AP10および配列番号：72（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１０９】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、心臓、腎臓、肝臓、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、3.5kb主にこれらの組織においておよそのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１１０】
19. GIG46
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY692464で寄託された（予定公表日：2006年5月1日）配列番号：73のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子1（GIG46）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_001613で寄託されたヒトアクチン、α2、平滑筋、大動脈（ACTA2）遺伝子のものに類似している。しかし、以前に報告されたその機能に反して、この研究結果から、GIG46遺伝子は、種々のヒト発癌に関連したことが見いだされた。研究結果から、GIG8腫瘍抑制遺伝子は、子宮癌を含む種々のヒト腫瘍において非常にまれに発現され、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１１１】
配列番号：73のDNA配列は、DNA配列の塩基位置393〜1,526に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,524〜1,526塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１１２】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、377アミノ酸残基からなり、配列番号：74のアミノ酸配列およびおよそ42kDaの分子量を有する。
【０１１３】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：73に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される255bp cDNA断片（1,323〜1,577塩基位置は、終止コドンを表す）は、配列番号：75（5'-AAGCTTTAGAGCG-3'）のランダムプライマーH-AP16および配列番号：76（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１１４】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは子宮、脳、心臓、骨格筋、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主におよそ1.5kbのサイズを有するmRNA転写物としてこれらの組織において過剰発現され、1.5kbのmRNA転写物に加えて、およそ2.0kbのサイズを有するmRNA転写物も発現される。
【０１１５】
20. PIG33
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY513278で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：77のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子（PIG33）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC033721で寄託されたヒトSPARC様1（mast9、hevin）遺伝子のものに類似している。しかし、この研究結果から、PIG35腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現され、その一方で、その発現は正常肝組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１１６】
配列番号：77のDNA配列は、DNA配列の塩基位置81〜2,075に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（2,073〜2,075塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１１７】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、664アミノ酸残基からなり、配列番号：78のアミノ酸配列およびおよそ75kDaの分子量を有する。
【０１１８】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：77に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される256bp cDNA断片は、配列番号：79（5'-AAGCTTCGACTGT-3'）のランダムプライマーH-AP2および配列番号：80（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長PIG33 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG33／pBAD／Thio-Topoと命名した。
【０１１９】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、小腸、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ3.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１２０】
21. PIG35
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY513280で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：81のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子（PIG35）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_002615で寄託されたヒトセリン（またはシステイン）プロテイナーゼ阻害剤のものに類似している。しかし、この研究結果から、PIG35腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現され、その一方で、その発現は正常肝組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１２１】
配列番号：81のDNA配列は、DNA配列の塩基位置50〜1,306に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,304〜1,306塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１２２】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、418アミノ酸残基からなり、配列番号：82のアミノ酸配列およびおよそ46kDaの分子量を有する。
【０１２３】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：81に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される312bp cDNA断片は、配列番号：83（5'-AAGCTTCATTCCG-3'）のランダムプライマーH-AP9および配列番号：84（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１２４】
本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長PIG35 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０１２５】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓、心臓、筋肉、脳、小腸、肺および胎盤に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、その遺伝子発現を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.7kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１２６】
22. PIG36
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY544129で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：85のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子（PIG36）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_001685で寄託されたヒトATPシンターゼ、Ｈ+輸送、ミトコンドリアF0複合体、サブユニットF6（ATP5J）のものと類似している。しかし、この研究結果から、PIG36腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現され、その一方で、その発現は種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１２７】
配列番号：85のDNA配列は、DNA配列の塩基位置102〜428に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（426〜428塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１２８】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、108アミノ酸残基からなり、配列番号：86のアミノ酸配列およびおよそ13kDaの分子量を有する。
【０１２９】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：85に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される162bp cDNA断片は、配列番号：87（5'-AAGCTTCATTCCG-3'）のランダムプライマーH-AP9および配列番号：88（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１３０】
本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長PIG36 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG36／pBAD／Thio-Topoと命名した。
【０１３１】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓、心臓、筋肉、腎臓および胎盤に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、本発明の遺伝子を白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１３２】
23. MIG20
配列番号：89のDNA配列は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY871271で寄託された（予定公表日：2006年10月1日）されており、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BX537651で寄託されたヒトmRNA；cDNA DKFZp686C0390遺伝子のものと類似している。しかし、この研究結果から、MIG20腫瘍抑制遺伝子は、子宮癌を含む種々のヒト腫瘍における全てにて発現されるわけではなく、その一方で、その発現は種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１３３】
配列番号：89のDNA配列は、DNA配列の塩基位置8〜202に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（200〜202塩基位置は、終止コドンを表す）。また、配列番号：89のDNA配列は、233〜442に対応するもう一つのオープンリーディングフレームを有する（440〜442塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１３４】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、64アミノ酸残基からなり、配列番号：90のアミノ酸配列およびおよそ7kDaの分子量を有する。
【０１３５】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：89に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されていないが、正常組織において差動的に発現される311bp cDNA断片（2,067〜2,377へのプリズム基底方向に対応する）は、配列番号：91（5'-AAGCTTCCTGCAA-3'）のランダムプライマーH-AP32および配列番号：92（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１３６】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは子宮、心臓、骨格筋、腎臓および肝臓に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主におよそ4.4kbのサイズを有するmRNA転写物としてこれらの組織において過剰発現され、4.4kbのmRNA転写物に加えて、およそ2.4kbおよび1.5kbのサイズを有するmRNA転写物も発現される。
【０１３７】
24. PIG49
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY524047で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：93のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子（GIG49）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_005749で寄託されたERBB2,1のヒトトランスデューサー遺伝子（TOB1）のものに類似している。この研究結果から、GIG49遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG49腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１３８】
配列番号：93のDNA配列は、DNA配列の塩基位置11〜1,048に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,046〜1,048塩基位置は、終止コドンを表す）。しかし、コドンの縮重のため、または遺伝子を発現する生きた生物にとってのコドンの優先度を考慮して、本発明の遺伝子は、コード領域から発現されるタンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、コード領域に様々に修飾がなされてもよく、遺伝子発現に影響を及ぼさない範囲内で、コード領域を除く領域において更に様々に修飾され、または変更されていてもよい。このような修飾された遺伝子も、本発明の範囲内に含まれる。従って、本発明は、また、上述の遺伝子；および遺伝子の断片と実質的に同じDNA配列を有するポリヌクレオチドを含む。「実質的に同じポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%および最も好ましくは少なくとも95%びの配列相同性を有するDNA配列を意味する。
【０１３９】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、345アミノ酸残基からなり、配列番号：94のアミノ酸配列およびおよそ38kDaの分子量を有する。また、1つまたは複数アミノ酸が、タンパク質の機能に影響を及ぼさない範囲内で、タンパク質のアミノ酸配列が置換され、付加され、またはさらに欠失されていてもよく、タンパク質の一部のみをこれらの使用法に応じて使用してもよい。このような修飾されたアミノ酸配列も、本発明の範囲内に含まれる。従って、本発明は、また、タンパク質；およびこれらの断片と実質的に同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。「実質的に同じポリペプチド」という用語は、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%および最も好ましくは少なくとも95%の配列相同性を有するポリペプチドを意味する。
【０１４０】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：93に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される272bp cDNA断片は、配列番号：95（5'-AAGCTTCCACGTA-3'）のランダムプライマーH-AP10および配列番号：96（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１４１】
したがって、調製される遺伝子を当該技術分野において既知の微生物または動物細胞における発現のためのベクターに挿入して発現ベクターを得て、次いで遺伝子のDNAを大量に複製してもよく、またはそのタンパク質を、発現ベクターを適切な宿主細胞、たとえば大腸菌MCF-7株化細胞などに導入することによって市販の量で産生してもよい。発現ベクターを構築する際に、プロモーターおよびターミネーターなどの発現制御配列、自己複製配列、分泌シグナル、その他を遺伝子またはタンパク質を産生する宿主細胞の種類に応じて、適当に選択し、および組み合わせてもよい。
【０１４２】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、筋肉、心臓、腎臓、肝臓および胎盤に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ2.4kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。また、2.4kbのmRNA転写物に加えて、およそ1.5kbのサイズを有するmRNA転写物も発現される。
【０１４３】
25. PIG51
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY542308で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：97のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子（PIG51）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC007054で寄託されたヒトTBC1ドメインファミリー、メンバー7遺伝子のものに類似している。遺伝子の具体的機能は、特定されていないままである。この研究結果から、PIG51遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、PIG51腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１４４】
配列番号：97のDNA配列は、DNA配列の塩基位置59〜802に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（800〜802塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１４５】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、247アミノ酸残基からなり、配列番号：98のアミノ酸配列およびおよそ28kDaの分子量を有する。
【０１４６】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：97に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される211bp cDNA断片は、配列番号：99（5'-AAGCTTTTGATCC-3'）のランダムプライマーH-AP22および配列番号：100（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤および末梢血白血球に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は主にこれらの組織においておよそ、1.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１４７】
26. MIG12
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY453400で寄託された（予定公表日：2005年3月31日）配列番号：101のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子（MIG12）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC016731で寄託されたヒトチモシン、β10遺伝子のそれに類似している。しかし、この研究結果から、MIG12腫瘍抑制遺伝子は、肺癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現され、その一方で、その発現は種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１４８】
配列番号：101のDNA配列は、DNA配列の塩基位置29〜163に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（161〜163塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１４９】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、44アミノ酸残基からなり、配列番号102：のアミノ酸配列およびおよそ5kDaの分子量を有する。
【０１５０】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：101に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、非常にまれに癌組織または癌株化細胞において発現されるが、正常組織において差動的に発現される161bp cDNA断片は、配列番号：103（5'-AAGCTTGAGTGCT-3'）のランダムプライマーH-AP12および配列番号：104（5'-AAGCTTTTTTTTTTTC-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１５１】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肺、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および末梢血白血球に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主におよそ0.5kbのサイズを有するmRNA転写物としてこれらの組織において過剰発現され、0.5kbのmRNA転写物に加えて、およそ1.0kbおよび0.8kbのサイズを有するmRNA転写物も発現される。
【０１５２】
27. PIG37
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY513281で寄託された（予定公表日：2005年12月31日）配列番号：105のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子（PIG37）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_002221で寄託されたヒトイノシトール1,4,5-三リン酸エステル3-キナーゼB（ITPKB）遺伝子のものに類似している。しかし、この研究結果から、PIG37腫瘍抑制遺伝子は、肝臓癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現され、その一方で、その発現は正常肝組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１５３】
配列番号：105のDNA配列は、DNA配列の塩基位置4〜1,422に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（1,420〜1,422塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１５４】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、472アミノ酸残基からなり、配列番号：106のアミノ酸配列およびおよそ53kDaの分子量を有する。
【０１５５】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：105に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される263bp cDNA断片は、配列番号：107（5'-AAGCTTCCACGTA-3'）のランダムプライマーH-AP10および配列番号：108（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。本発明の発明者らは、発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に全長PIG33 cDNAを挿入し、次いで生じる発現ベクターで大腸菌DH5αを形質転換して、形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０１５６】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは肝臓、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、小腸、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。また、発癌を誘導するために、本発明の遺伝子を白血病、子宮癌、大腸癌、肺癌および皮膚癌において抑制させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ7.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１５７】
28. GIG44
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY971350で寄託された（予定公表日：2006年5月31日）配列番号：109のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子44（GIG44）であり、寄託された遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号BC042127で寄託されたヒト推定上インスリン様増殖因子II結合タンパク質遺伝子のものに類似している。この研究結果から、GIG44遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG44腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１５８】
配列番号：109のDNA配列は、DNA配列の塩基位置59〜400に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（398〜400塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１５９】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、113アミノ酸残基からなり、配列番号：110のアミノ酸配列およびおよそ12kDaの分子量を有する。
【０１６０】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：109に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される221bp cDNA断片は、配列番号：111（5'-AAGCTTGAGTGCT-3'）のランダムプライマーH-AP12および配列番号：112（5'-AAGCTTTTTTTTTTTG-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１６１】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、心臓、腎臓、肝臓、胎盤および肺に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.0kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１６２】
29. GIG31
本発明の遺伝子は、米国国立衛生研究所（NIH）のGenBankデータベースに、受託番号AY971351で寄託された（予定公表日：2006年5月31日）寄託された配列番号：113のDNA配列を有するヒト癌抑制遺伝子31（GIG31）であり、遺伝子のDNA配列は、データベースに受託番号NM_002923で寄託されたヒトGタンパク質シグナリング2の制御因子遺伝子のものに類似している。この研究結果から、GIG31遺伝子が種々のヒト発癌に密接に関連することが見いだされた。研究結果から、GIG31腫瘍抑制遺伝子は、乳癌を含む種々のヒト腫瘍においてまれに発現されるか、または発現されず、その一方で、その発現は、種々の正常組織において有意に増大されたことが見いだされた。
【０１６３】
配列番号：113のDNA配列は、DNA配列の塩基位置14〜649に対応する1つのオープンリーディングフレーム（ORF）を有する（647〜649塩基位置は、終止コドンを表す）。
【０１６４】
本発明の遺伝子から発現されるタンパク質は、211アミノ酸残基からなり、配列番号：114のアミノ酸配列およびおよそ24kDaの分子量を有する。
【０１６５】
本発明の遺伝子およびタンパク質は、人体組織から分離してもよく、またはDNAもしくはペプチドを合成するための公知の方法に従って合成してもよい。たとえば、本発明の遺伝子は、配列番号：113に記載されたDNA配列上の情報に基づいて従来法に従ってスクリーニングしても、クローニングしてもよい。もう一つの例として、癌組織または癌株化細胞において発現されないか、またはまれに発現されるが、正常組織において差動的に発現される223bp cDNA断片は、配列番号：115（5'-AAGCTTCTCAACG-3'）のランダムプライマーH-AP4および配列番号：116（5'-AAGCTTTTTTTTTTTA-3'）のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用して、正常組織および癌組織または癌株化細胞から抽出した総RNAに対して逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法（RT-PCR）を実施することによって得てもよく、生じる断片をプローブとして使用し、全長cDNAクローンを得るために、cDNAライブラリとプラークハイブリダイズさせてもよい。
【０１６６】
本発明の遺伝子は、発癌を抑制するために、正常組織、好ましくは乳房、心臓、大腸、脾臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球に過剰発現させることが考えられる。本発明の遺伝子は、主にこれらの組織においておよそ1.4kbのサイズを有するmRNA転写物として過剰発現される。
【０１６７】
一方、コドンの縮重のため、または遺伝子を発現する生きた生物にとってのコドンの優先度を考慮して、本発明の遺伝子は、コード領域から発現されるタンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、コード領域に様々に修飾がなされてもよく、遺伝子発現に影響を及ぼさない範囲内で、コード領域を除く領域において更に様々に修飾され、または変更されていてもよい。このような修飾された遺伝子も、本発明の範囲内に含まれる。従って、本発明は、また、上述の遺伝子；および遺伝子の断片と実質的に同じDNA配列を有するポリヌクレオチドを含む。「実質的に同じポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%および最も好ましくは少なくとも95%の配列相同性を有するDNA配列を意味する。
【０１６８】
また、1つまたは複数アミノ酸が、タンパク質の機能に影響を及ぼさない範囲内で、タンパク質のアミノ酸配列が、置換され、付加され、またはさらに欠失されていてもよく、タンパク質の一部のみをこれらの使用法に応じて使用してもよい。このような修飾されたアミノ酸配列も、本発明の範囲内に含まれる。従って、本発明は、また、タンパク質；およびこれらの断片と実質的に同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。「実質的に同じポリペプチド」という用語は、少なくとも80%、好ましくは少なくとも90%および最も好ましくは少なくとも95%の配列相同性を有するポリペプチドを意味する。
【０１６９】
一部の態様において、こうして調製される遺伝子を、当該技術分野において既知の微生物または動物細胞における発現のためのベクターに挿入して発現ベクターを得て、次いで遺伝子のDNAを大量に複製してもよく、またはそのタンパク質を発現ベクターを適切な宿主細胞、たとえば大腸菌MCF-7株化細胞などに導入することによって市販の量で産生してもよい。発現ベクターを構築する際に、プロモーターおよびターミネーターなどの発現制御配列、自己複製配列、分泌シグナル、その他を遺伝子またはタンパク質を産生する宿主細胞の種類に応じて、適当に選択し、および組み合わせてもよい。
【０１７０】
特に、本発明の遺伝子は、正常組織のみにおいて差動的に発現される。たとえば、これらの遺伝子発現は、乳癌組織、乳癌株化細胞MCF-7、白血病細胞、白血病株化細胞K562、肝臓癌組織、肝臓癌株化細胞HepG2、頚部癌組織、子宮頚癌株化細胞、肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌株化細胞（A549およびNCI-H358）などの癌組織および癌細胞においてわずかに検出されるか、または検出されず、正常な子宮組織のみにおいて差動的に増大される。
【０１７１】
本発明の遺伝子を導入した癌株化細胞は、高い死亡率を示し、したがって、本発明の遺伝子は、癌の治療および予防のために効率的に使用されるであろう。
【０１７２】
以下に、好ましい実施例を参照して本発明を詳述する。従って、本明細書において提唱される記述は、ほんの例証のみのための好ましい実施例であり、本発明の範囲を限定することは意図されない。
【０１７３】
参照実施例：総RNAの分離
総RNA試料は、RNeasy総RNAキット（Qiagen Inc., Germany）を使用して、新鮮な組織または培養細胞から分離して、次いで混入したDNAをメッセージ・クリーン・キット（GenHunter Corp., MA, U.S.）を使用して、RNA試料から除去した。
【０１７４】
実施例1：総RNAの分離およびmRNAのディファレンシャルディスプレイ
遺伝子の差動的発現パターンを、以下の通りに、正常な胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において調査した。
【０１７５】
正常乳房組織試料は、乳房切除術の間に乳癌患者から得て、原発性乳癌組織試料は、外科的療法の前に放射線療法および／または抗癌化学療法を受けていなかった乳癌患者から、根治的乳房切断術の間に得た。MCF-7（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション；HTB ATCC番-22）をヒト乳癌株化細胞として使用した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１７６】
また、GIG15のmRNAディファレンシャルディスプレイを行うために、骨髄組織を正常者から得て、原発性白血病骨髄組織は、以前に抗癌化学療法および／または放射線療法を受けていなかった白血病患者から骨髄生検の間に得た。K-562（アメリカン・タイプ・セル・コレクション；ATCC数CCL-243）をディファレンシャルディスプレイ法におけるヒト慢性骨髄性白血病株化細胞として使用した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１７７】
一方、肝臓癌関連遺伝子の場合、遺伝子の差動的発現パターンを、以下の通りに、正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において調査した。
【０１７８】
正常肝組織試料および肝臓癌組織試料は、組織生検間に肝臓癌患者から得て、肝臓癌株化細胞HepG2（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション；ATCC数HB-8065）をヒト肝臓癌株化細胞として使用した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１７９】
また、関心対象の遺伝子の差動的発現パターンを、以下の通りに、正常頚部外組織、一次頚部癌組織および子宮頚癌株化細胞において測定した。正常頚部外組織試料は、子宮筋腫に罹患している患者から子宮摘出の間に得て、原発性頚部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科的療法の前に放射線療法および／または抗癌化学療法を受けていなかった患者から、根治的子宮摘出の間に得た。CUMC-6（Kim, J. W. et al., Gynecol. Oncol. 62：230-240, 1996）をヒト子宮頚癌株化細胞として使用した。総RNA試料は、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１８０】
また、関心対象の遺伝子の差動的発現パターンを、以下の通りに、正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌株化細胞において測定した。正常肺組織試料、肺癌組織試料および転移性肺癌組織試料は、外科手術の間に肺癌患者から得た。肺癌株化細胞A549（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション；ATCC数CCL-185）およびNCI-H358（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション；ATCC数CRL-5807）をヒト肺癌株化細胞として使用した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１８１】
RT-PCR反応は、開示文献に記載されている改変法に従って組織および細胞から分離したそれぞれの総RNA試料を使用して、以下の通りに行った（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 （1992）; and Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 （1993））。
【０１８２】
1-1. GIG8
0.2μgの総RNAを、キット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：4のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：3のランダム5'-13merプライマーH-AP33（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動（electrophoresized）し、次いでオートラジオグラフした。
【０１８３】
図1は、配列番号：3のランダム5'-13merプライマーH-AP33および配列番号：4のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図1において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図1に示したように、163bp cDNA断片（全長GIG8遺伝子配列のうちの317〜479の塩基位置）は、乳癌組織および乳癌株化細胞において非常にまれに発現されたが、正常肺組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC33と命名した。
【０１８４】
163bpバンド（FC33断片）を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC33 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC33をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１８５】
1-2. GIG10
0.2μgの総RNAを、キット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：7のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：8のランダム5'-13merプライマーH-AP10（RNAimageプライマーセット2、GenHunter Corporation, US）をアンカーしを使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０１８６】
図2は、配列番号：7のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：8のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図2において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図2に示したように、321bp cDNA断片（全長GIG10遺伝子配列のうちの1,716〜2,036の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC42と命名した。
【０１８７】
321bpバンド（FC42断片）を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、cDNA次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC42 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC42をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１８８】
1-3. GIG13
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：12のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：11のランダム5'-13merプライマーH-AP5（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０１８９】
図3は、配列番号：11のランダム5'-13merプライマーH-AP5および配列番号：12のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図3において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図3に示したように、347bp cDNA断片（全長GIG13遺伝子配列のうちの3,253〜3,599の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC59と命名した。
【０１９０】
347bpバンドのFC59断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC59 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC59をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１９１】
1-4. GIG15
また、mRNAディファレンシャルディスプレイを行うために、骨髄組織を正常患者から得て、原発性白血病骨髄組織は、抗癌化学療法および／または放射線療法を以前に受けていなかった白血病患者から骨髄生検の間に得た。K-562（アメリカン・タイプ・セル・コレクション；ATCC数CCL-243）をディファレンシャルディスプレイ方法におけるヒト慢性骨髄性白血病株化細胞として使用した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１９２】
RT-PCR反応は、開示文献に記載されている改変法に従って組織および細胞から分離したそれぞれの総RNA試料を使用して、以下の通りに行った（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 （1992）; and Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 （1993））。0.2μgの総RNAを、キット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して、配列番号：16のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：15のランダム5'-13merプライマーH-AP2（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０１９３】
図4は、配列番号：15のランダム5'-13merプライマーH-AP2および配列番号：16のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図4に示したように、ディファレンシャルディスプレイ（DD）法を使用して、遺伝子が正常骨髄組織および白血病細胞とK-562細胞とにおいて異なるレベルで発現されることが確認された。図４に示すように、133bp cDNA断片GV2（全長GIG15遺伝子配列のうちの212〜344の塩基位置）は、非常にまれに白血病組織およびK-562細胞において発現されたが、正常骨髄組織のみにおいて高度に発現された。このcDNA断片をGV2と命名した。133bpバンドのGV2断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってGV2 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片GV2を、TAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１９４】
1-5. GIG16
遺伝子の差動的発現パターンを、以下の通りに、正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において調査した。正常肝組織試料および肝臓癌組織試料は、組織生検の間に肝臓癌患者から得て、肝臓癌株化細胞HepG2（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション；ATCC数HB-8065）をヒト肝臓癌株化細胞として使用した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１９５】
RT-PCR反応は、開示文献に記載されている改変法に従って組織および細胞から分離したそれぞれの総RNA試料を使用して、以下の通りに行った（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 （1992）; and Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 （1993））。0.2μgの総RNAを、キット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：20のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：19のランダム5'-13merプライマーH-AP8（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０１９６】
図5は、配列番号：19のランダム5'-13merプライマーH-AP8および配列番号：の20アンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図5において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図5に示したように、213bp cDNA断片（全長GIG16遺伝子配列のうちの867〜1,079の塩基位置）は、肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において発現されていないが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP8と命名した。
【０１９７】
213bpバンドのHP8断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP8 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP8をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０１９８】
1-6. GIG24
遺伝子の差動的発現パターンを、以下の通りに、正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において調査した。正常肝組織試料および肝臓癌組織試料は、組織生検の間に肝臓癌患者から得て、肝臓癌株化細胞HepG2（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション；ATCC数HB-8065）をヒト肝臓癌株化細胞として使用した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０１９９】
RT-PCR反応は、開示文献に記載されている改変法に従って組織および細胞から分離したそれぞれの総RNA試料を使用して、以下の通りに行った（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 （1992）; and Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 （1993））。0.2μgの総RNAを、キット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：24のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよびを使用して、PCR反応を行った。配列番号：23のランダム5'-13merプライマーH-AP7（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）をアンカーした。PCR反応は、95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２００】
図6は、配列番号：23のランダム5'-13merプライマーH-AP7および配列番号24：のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図6において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図6に示したように、221bp cDNA断片（全長GIG42遺伝子配列のうちの1,057〜1,277の塩基位置）は、肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において発現されていないが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP71と命名した。
【０２０１】
221bpバンドのHP71断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP71 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP71を、TAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２０２】
1-7. GIG26
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：28のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよびを使用して、PCR反応を行った。配列番号：27のランダム5'-13merプライマーH-AP11（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）。PCR反応は、95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２０３】
図7は、配列番号：27のランダム5'-13merプライマーH-AP11および配列番号：28のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図7において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図7に示したように、204bp cDNA断片（全長GIG26遺伝子配列のうちの1,036〜1,239の塩基位置）は、肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において発現されていないが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP115と命名した。
【０２０４】
204bpバンドのHP115断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP115 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP115をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２０５】
1-8. GIG29
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：32のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：31のランダム5'-13merプライマーH-AP3（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２０６】
図8は、配列番号：31のランダム5'-13merプライマーH-AP3および配列番号：32のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図8において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図8に示したように、277bp cDNA断片（全長GIG29遺伝子配列のうちの823〜1,099の塩基位置）は、肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において発現されていないが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP3と命名した。
【０２０７】
277bpバンドのHP3断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP3 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP3をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２０８】
1-9. GIG30
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：36のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：35のランダム5'-13merプライマーH-AP4（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２０９】
図9は、配列番号：35のランダム5'-13merプライマーH-AP4および配列番号：36のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図9において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図9に示したように、278bp cDNA断片（全長GIG30遺伝子配列のうちの1,462〜1,739の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC48と命名した。
【０２１０】
78bpバンドのFC48断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC48 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC48をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２１１】
1-10. GIG32
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：40のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：39のランダム5'-13merプライマーH-AP8（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２１２】
図10は、配列番号：39のランダム5'-13merプライマーH-AP8および配列番号：40のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図10において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図10に示したように、172bp cDNA断片組織（全長GIG32遺伝子配列のうちの428〜599の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常乳房のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC82と命名した。
【０２１３】
172bpバンドのFC82断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC82 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC82をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２１４】
1-11. GIG33
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：44のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号43：のランダム5'-13merプライマーH-AP33（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２１５】
図11は、配列番号：43のランダム5'-13merプライマーH-AP33および配列番号：44のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図11において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図11に示したように、182bp cDNA断片（全長GIG33遺伝子配列のうちの216〜397の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC86と命名した。
【０２１６】
182bpバンドのFC86断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC86 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC86をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２１７】
1-12. GIG34
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：48のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：47のランダム5'-13merプライマーH-AP35（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２１８】
図12は、配列番号：47のランダム5'-13merプライマーH-AP35および配列番号：48のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図12において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図12に示したように、205bp cDNA断片（全長GIG34遺伝子配列のうちの343〜547の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC35と命名した。
【０２１９】
05bpバンドのFC42断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC35 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC35をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２２０】
1-13. GIG35
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：52のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：51のランダム5'-13merプライマーH-AP3（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２２１】
図13は、配列番号：51のランダム5'-13merプライマーH-AP3および配列番号：52のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図13において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図13に示したように、212bp cDNA断片（全長GIG35遺伝子配列のうちの1,108〜1,319の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC38と命名した。
【０２２２】
212bpバンドのFC38断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC38 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC38をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２２３】
1-14. GIG38
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：56のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：55のランダム5'-13merプライマーH-AP12（RNAimageプライマーセット2、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２２４】
図14は、配列番号：55のランダム5'-13merプライマーH-AP12および配列番号：56のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図14において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図14に示したように、172bp cDNA断片（全長GIG38遺伝子配列のうちの328〜499の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をたFC122と命名した。
【０２２５】
172bpバンドのFC122断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC122 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC122をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２２６】
1-15. GIG39
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：60のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：59のランダム5'-13merプライマーH-AP12（RNAimageプライマーセット2、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２２７】
図15は、配列番号：59のランダム5'-13merプライマーH-AP12および配列番号：60のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図15において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図15に示したように、327bp cDNA断片（全長GIG39遺伝子配列のうちの2,533〜2,859の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC126と命名した。
【０２２８】
327bpバンドのFC126断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC126 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC126をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２２９】
1-16. GIG40
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：64のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：63のランダム5'-13merプライマーH-AP7（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２３０】
図16は、配列番号：63のランダム5'-13merプライマーH-AP7および配列番号：64のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図16において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図16に示したように、275bp cDNA断片（全長GIG40遺伝子配列のうちの3,112〜3,386の塩基位置）は、まれに肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において発現されたが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP79と命名した。
【０２３１】
275bpバンドのHP79断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP79 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP79をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２３２】
1-17. GIG42
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：68のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：67のランダム5'-13merプライマーH-AP8（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２３３】
図17は、配列番号：67のランダム5'-13merプライマーH-AP8および配列番号：68のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図17において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図17に示したように、327bp cDNA断片（全長GIG42遺伝子配列のうちの1,473〜1,799の塩基位置）は、肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において発現されていないが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP85と命名した。
【０２３４】
327bpバンドのHP85断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP85 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP85をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２３５】
1-18. GIG43
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：72のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：71のランダム5'-13merプライマーH-AP10（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２３６】
図18は、配列番号：71のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：72のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図18において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図18に示したように、273bp cDNA断片（全長GIG43遺伝子配列のうちの727〜999の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC102と命名した。
【０２３７】
273bpバンドのFC102断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC102 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC102を、TAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２３８】
1-19.GIG46  
関心対象の遺伝子の差動的発現パターンを、以下の通りに、正常頚部外組織、原発性頚部癌組織および子宮頚癌株化細胞において測定した。正常頚部外組織試料は、子宮筋腫に罹患する患者から、子宮摘出の間に得て、原発性頚部腫瘍組織試料および転移性腸骨リンパ節腫瘍組織試料は、外科的療法の前に放射線療法および／または抗癌化学療法を受けていなかった患者から根治的子宮摘出の間に得た。CUMC-6（Kim, J. W. et al., Gynecol. Oncol. 62：230-240, 1996）をヒト子宮頚癌株化細胞として使用した。総RNA試料は、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。総RNAは、これらの組織および細胞から、参照実施例に記載したものと同様に分離した。
【０２３９】
RT-PCR反応は、開示文献に記載されている改変法に従って組織および細胞から分離したそれぞれの総RNA試料を使用して、以下の通りに行った（Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 （1992）; and Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 （1993））。0.2μgの総RNAを、キット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：76のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：75のランダム5'-13merプライマーH-AP16（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２４０】
図19は、配列番号75：のランダム5'-13merプライマーH-AP16および配列番号：76のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図19において、レーン1は、正常頚部外組織を表し；レーン2は、頚部癌組織を表し；レーン3は、転移性腸骨リンパ節組織を表し；およびレーン4は、子宮頚癌株化細胞CUMC-6を表す。図19に示したように、255bp cDNA断片は、頚部癌組織、転移性腸骨リンパ節組織および子宮頚癌株化細胞CUMC-6において発現されていないが、正常頚部外組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をCA161と命名した。
【０２４１】
255bpバンドのCA161断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってCA161 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片CA161をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２４２】
1-20. PIG33
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：80のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：79のランダム5'-13merプライマーH-AP2（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２４３】
図20は、配列番号：79のランダム5'-13merプライマーH-AP2および配列番号：80のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図20において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図20に示したように、256bp cDNA断片（全長PIG33遺伝子配列のうちの1,623〜1,878の塩基位置）は、発現されなかったか、または肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞においてまれに発現されたが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現しされたことが確認された。このcDNA断片をHP29と命名した。
【０２４４】
256bpバンドのHP29断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP29 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP29をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２４５】
1-21. PIG35
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：84のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：83のランダム5'-13merプライマーH-AP9（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２４６】
図21は、配列番号：83のランダム5'-13merプライマーH-AP9および配列番号：84のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図21において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図21に示したように、312bp cDNA断片（全長PIG35遺伝子配列のうちの966〜1,277の塩基位置）は、発現されなかったか、または肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞においてまれに発現されたが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP95と命名した。
【０２４７】
312bpバンドのHP95断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP95 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP95をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２４８】
1-22. PIG36
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：88のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：87のランダム5'-13merプライマーH-AP9（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２４９】
図22は、配列番号：87のランダム5'-13merプライマーH-AP9および配列番号：88のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図22において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図22に示したように、162bp cDNA断片（全長PIG36遺伝子配列のうちの238〜399の塩基位置）は、発現されなかったか、または肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞においてまれに発現されたが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP96と命名した。
【０２５０】
162bpバンドのHP96断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP96 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP96をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２５１】
1-23. MIG20
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：92のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：91のランダム5'-13merプライマーH-AP32（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２５２】
図23は、配列番号：91のランダム5'-13merプライマーH-AP32および配列番号：92のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す・図23において、レーン1は、正常頚部外組織を表し；レーン2は、頚部癌組織を表し；レーン3は、転移性腸骨リンパ節組織を表し；およびレーン4は、子宮頚癌株化細胞CUMC-6を表す。図23に示したように、311bp cDNA断片は、頚部癌組織、転移性腸骨リンパ節組織および子宮頚癌株化細胞CUMC-6において発現されていないが、正常頚部外組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をCA324と命名した。
【０２５３】
311bpバンドのCA324断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってCA324 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片CA324をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２５４】
1-24. PIG49
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：96のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：95のランダム5'-13merプライマーH-AP10（RNAimageプライマーセット2、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２５５】
図24は、配列番号：95のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：96のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図24において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図24に示したように、272bp cDNA断片（全長PIG49遺伝子配列のうちの767〜1,038の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC101と命名した。
【０２５６】
272bpバンドのFC101断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC101 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC101をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２５７】
1-25. PIG51
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：100のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：99のランダム5'-13merプライマーH-AP22（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２５８】
図25は、配列番号：99のランダム5'-13merプライマーH-AP22および配列番号：100のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図25において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図25に示したように、211bp cDNA断片（全長PIG51遺伝子配列のうちの519〜729の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて、差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC22と命名した。
【０２５９】
211bpバンドのFC22断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC22 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC22をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２６０】
1-26. MIG12
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：104のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：103のランダム5'-13merプライマーH-AP12（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２６１】
図26は、配列番号：103のランダム5'-13merプライマーH-AP1および配列番号104：のアンカーされたオリゴdTプライマー2を使用したPCR結果を示す。図26において、レーン1は、正常肺組織を表し；レーン2は、肺癌組織を表し；レーン3は、転移性肺癌組織を表し；およびレーン4は、肺癌株化細胞A549を表す。図26に示したように、161bp cDNA断片（全長MIG12遺伝子配列のうちの35〜195の塩基位置）は、まれに肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌株化細胞において発現されたが、正常肺組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をL927と命名した。
【０２６２】
161bpバンドのL927断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってL927 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片L927をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２６３】
1-27. PIG37
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：108のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：107のランダム5'-13merプライマーH-AP10（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２６４】
図27は、配列番号：107のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：108のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図27において、レーン1、2および3は、正常肝組織を表し；レーン4、5および6は、肝臓癌組織を表し；およびレーン7は、肝臓癌株化細胞HepG2を表す。図27に示したように、263bp cDNA断片（全長PIG37遺伝子配列のうちの1,217〜1,479の塩基位置）は、発現されなかった、または肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞においてまれに発現されたが、正常肝組織のみにおいて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をHP102と命名した。
【０２６５】
263bpバンドのHP102断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってHP102 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片HP102をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２６６】
1-28. GIG44
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：112のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：111のランダム5'-13merプライマーH-AP12（RNAimageプライマーセット5、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２６７】
図28は、配列番号：111のランダム5'-13merプライマーH-AP12および配列番号：112のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図28において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図28に示したように、221bp cDNA断片（全長GIG44遺伝子配列のうちの179〜399の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC123と命名した。
【０２６８】
221bpバンドのFC123断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC123 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC123をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２６９】
1-29. GIG31
0.2μgの総RNAをキット（RNAimageキット、GenHunter）を使用して配列番号：116のアンカーされたオリゴdTプライマーで逆転写し、次いで、0.5mM[α-35S］標識されたdATP（1,200Ci/mmol）の存在下において、同じアンカーされたオリゴdTプライマーおよび配列番号：115のランダム5'-13merプライマーH-AP4（RNAimageプライマーセット1、GenHunter Corporation, US）を使用して、PCR反応を行った。PCR反応は、以下の条件下で行った：95℃にて40秒間の変性工程、40℃にて2分間のアニーリング工程および72℃にて40秒間の伸長工程からなる合計40回の増幅サイクル、続く72℃にて5分間の1回の伸長工程。増幅された断片は、DNA塩基配列について6%のポリアクリルアミドゲル中で電気泳動し、次いでオートラジオグラフした。
【０２７０】
図29は、配列番号：115のランダム5'-13merプライマーH-AP4および配列番号：116のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示す。図29において、レーン1、2および3は、正常胸部組織を表し；レーン4、5および6は、乳癌組織を表し；およびレーン7は、乳癌株化細胞MCF-7を表す。図29に示したように、223bp cDNA断片（全長GIG31遺伝子配列のうちの445〜667の塩基位置）は、非常にまれに乳癌組織および乳癌株化細胞において発現されたが、正常胸部組織のみにおいてレベルが増大されて差動的に発現されたことが確認された。このcDNA断片をFC47と命名した。
【０２７１】
223bpバンドのFC47断片を乾燥ゲルから除去し、cDNAを溶出させるために15分煮沸して、次いで[α-35S］標識されたdATPおよび20μM dNTPをここで使用しなかったことを除いて、上記のものと同じプライマーセットを使用して同じ前記条件下でPCR反応を行ってFC47 cDNAを再度増幅した。再度増幅したcDNA断片FC47をTAクローニング系（Promega）を使用して発現ベクターpGEM-T Easyにクローニングし、次いでそのDNA配列をSequenase Version 2.0 DNA Sequencing System（United States Biochemical Co.）を使用して決定した。
【０２７２】
実施例2：cDNAライブラリースクリーニング
実施例1-1において得られたcDNA断片FC33；FC42；FC59；GV2；H-AP8；HP71；HP115；HP3；FC48；FC82；FC86；FC35；FC38；FC122；FC126；HP79；HP85；FC102；CA161；HP29；HP95；HP96；CA324；FC101；FC22；L927；HP102；FC123およびFC47を、開示の方法に従って標識し（Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13 （1983））、32P-標識プローブFC33；FC42；FC59；GV2；H-AP8；HP71；HP115；HP3；FC48；FC82；FC86；FC35；FC38；FC122；FC126；HP79；HP85；FC102；CA161；HP29；HP95；HP96；CA324；FC101；FC22；L927；P102；FC123およびFC47 cDNAをそれぞれ得て、32P-標識プローブを開示文献に記載された方法に従ってバクテリオファージλgt11ヒト肺胎生期線維芽細胞cDNAライブラリー（Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 （1989））とプラークハイブリダイズさせ（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））、ヒト癌抑制遺伝子GIGの全長cDNAクローンを得た。
【０２７３】
全長cDNAクローンをシーケンスし、次のように、GIG8のDNA塩基配列結果は、配列番号：1と同一であった。GIG8のDNA配列は、134アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：2と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ15kDaの分子量を有した。
【０２７４】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG8遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２７５】
図30は、GIG8タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図30において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG8遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図30に示したように、発現されたGIG8タンパク質は、およそ15kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２７６】
GIG10のDNA塩基配列結果は、配列番号：5と同一であった。GIG10のDNA配列は、665アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：6と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ73kDaの分子量を有した。
【０２７７】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG10遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２７８】
図31は、GIG10タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図31において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG10遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図31に示したように、発現されたGIG10タンパク質は、およそ73kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２７９】
GIG13のDNA塩基配列結果は、配列番号：9と同一であった。GIG13のDNA配列は、1,201アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：10と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ132kDaの分子量を有した。
【０２８０】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG13遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２８１】
図32は、GIG13タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図32において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG13遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図32に示したように、発現されたGIG13タンパク質は、およそ132kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２８２】
GIG15のDNA塩基配列結果は、配列番号：13と同一であった。GIG15のDNA配列は、106アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：14と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ12kDaの分子量を有した。
【０２８３】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG GIG15遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２８４】
図33は、GIG15タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図33において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG15遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図33に示したように、発現されたGIG15タンパク質は、およそ12kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２８５】
GIG16のDNA塩基配列結果は、配列番号：17と同一であった。GIG16のDNA配列は、351アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：18と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ39kDaの分子量を有した。生じる全長GIG16 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで、大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０２８６】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG16遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２８７】
図34は、GIG16タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図34において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG16遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図34に示したように、発現されたGIG16タンパク質は、およそ39kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２８８】
GIG24のDNA塩基配列結果は、配列番号：21と同一であった。GIG24のDNA配列は、423アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：22と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ47kDaの分子量を有した。生じる全長GIG24 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで、大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０２８９】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG24遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２９０】
図35は、GIG24タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図35において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG24遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図35に示したように、発現されたGIG24タンパク質は、およそ47kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２９１】
GIG26のDNA塩基配列結果は、配列番号：25と同一であった。GIG26のDNA配列は、442アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：26と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ50kDaの分子量を有した。生じる全長GIG26 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで、大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０２９２】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG26遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２９３】
図36は、GIG26タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図36において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG26遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図36に示したように、発現されたGIG26タンパク質は、およそ50kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２９４】
GIG29のDNA塩基配列結果は、配列番号：29と同一であった。GIG29のDNA配列は、349アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：30と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ38kDaの分子量を有した。生じる全長GIG29 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで、大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０２９５】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG29遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２９６】
図37は、GIG29タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図37において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG29遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図37に示したように、発現されたGIG29タンパク質は、およそ38kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０２９７】
GIG30のDNA塩基配列結果は、配列番号：33と同一であった。GIG30のDNA配列は、540アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：34と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ61kDaの分子量を有した。
【０２９８】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG30遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０２９９】
図38は、GIG30タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図38において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG30遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図38に示したように、発現されたGIG30タンパク質は、およそ61kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３００】
GIG32のDNA塩基配列結果は、配列番号：37と同一であった。GIG32のDNA配列は、178アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：38と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ20kDaの分子量を有した。
【０３０１】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG32遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３０２】
図39は、GIG32タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図39において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG32遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図39に示したように、発現されたGIG32タンパク質は、およそ20kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３０３】
GIG33のDNA塩基配列結果は、配列番号：41と同一であった。GIG33のDNA配列は、110アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：と42同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ12kDaの分子量を有した。
【０３０４】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG34遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３０５】
図40は、GIG33タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図40において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG33遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図40に示したように、発現されたGIG33タンパク質は、およそ12kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３０６】
GIG34のDNA塩基配列結果は、配列番号：45と同一であった。GIG34のDNA配列は、177アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：46と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ20kDaの分子量を有した。
【０３０７】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG34遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３０８】
図41は、GIG34タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図41において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG34遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図41に示したように、発現されたGIG34タンパク質は、およそ20kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３０９】
GIG35のDNA塩基配列結果は、配列番号：49と同一であった。. GIG35のDNA配列は、437アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：50と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ50kDaの分子量を有した。
【０３１０】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG35遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３１１】
図42は、GIG35タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図42において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG35遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図42に示したように、発現されたGIG35タンパク質は、およそ50kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３１２】
GIG38のDNA塩基配列結果は、配列番号：53と同一であった。GIG38のDNA配列は、153アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：54と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ17kDaの分子量を有した。
【０３１３】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG38遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３１４】
図43は、GIG38タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図43において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG38遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図43に示したように、発現されたGIG38タンパク質は、およそ17kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３１５】
GIG39のDNA塩基配列結果は、配列番号：57と同一であった。GIG39のDNA配列は、928アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：58と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ103kDaの分子量を有した。
【０３１６】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG39遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３１７】
図44は、GIG39タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図44において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG39遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図44に示したように、発現されたGIG39タンパク質は、およそ103kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３１８】
GIG40のDNA塩基配列結果は、配列番号：61と同一であった。GIG40のDNA配列は、1,210アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：62と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ134kDaの分子量を有した。生じる全長GIG40 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで、大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０３１９】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG40遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３２０】
図45は、GIG40タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図45において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG40遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図45に示したように、発現されたGIG40タンパク質は、およそ134kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３２１】
GIG42のDNA塩基配列結果は、配列番号：65と同一であった。GIG42のDNA配列は、609アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：66と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ69kDaの分子量を有した。生じる全長GIG42 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで、大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０３２２】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG42遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３２３】
図46は、GIG42タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図46において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG42遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図46に示したように、発現されたGIG42タンパク質は、およそ69kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３２４】
GIG43のDNA塩基配列結果は、配列番号：69と同一であった。GIG43のDNA配列は、329アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：70と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ37kDaの分子量を有した。
【０３２５】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG43遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３２６】
図47は、GIG43タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図47において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、GIG43レーン2は、遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図47に示したように、発現されたGIG43タンパク質は、およそ37kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３２７】
GIG46のDNA塩基配列結果は、配列番号：73と同一であった。GIG46のDNA配列は、377アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：74と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ42kDaの分子量を有した。
【０３２８】
生じる全長GIG46 cDNAクローンを原核生物発現ベクターpBAD/thio-Topo（Invitrogen, US）のマルチクローニング部位に挿入してベクターpBAD/thio-Topo/GIG46を得て、次いで大腸菌Top10（Invitrogen, US）を生じるpBAD/thio-Topo/GIG46で形質転換した。発現タンパク質HT-チオレドキシンをベクターpBAD/thio-Topoのマルチクローニング部位の上流に挿入する。形質転換された大腸菌株を振盪しながらLBブロス中でインキュベートし、生じる培養ブロスを1/100を希釈し、次いで再び3時間インキュベートした。0.5mM L-アラビノース（Sigma, US）をインキュベートした培養液に添加し、タンパク質の産生を誘導した。培養液中の大腸菌細胞をL-アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで12%のドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）を超音波処理したホモジネートで行った。
【０３２９】
図48は、SDS-PAGEを使用してベクターpBAD/thio-Topo/GIG46で形質転換した大腸菌Top10株のタンパク質の発現パターンを示す図であり、およそ57kDaの分子量を有する融合タンパク質のバンドがL-アラビノース誘導後に明瞭に観察された。57kDaの融合タンパク質は、ベクターpBAD/thio-Topo/GIG46に挿入されたおよそ15kDaのHT-チオレドキシン・タンパク質およびおよそ42kDaのGIG46タンパク質を含む。
【０３３０】
図48は、GIG46タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図48において、レーン1は、L-アラビノース誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG46遺伝子の発現がL-アラビノースによって誘導された後のタンパク質試料を表す。
【０３３１】
PIG33のDNA塩基配列結果は、配列番号：77と同一であった。PIG33のDNA配列は、664アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：78と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ75kDaの分子量を有した。生じる全長PIG33 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０３３２】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、PIG33遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３３３】
図49は、PIG33タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図49において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、PIG33遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図49に示したように、発現されたPIG33タンパク質は、およそ75kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３３４】
PIG35のDNA塩基配列結果は、配列番号：81と同一であった。PIG35のDNA配列は、418アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：82と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ46kDaの分子量を有した。生じる全長PIG35 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０３３５】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、PIG35遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３３６】
図50は、PIG35タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図50において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、PIG35遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図50に示したように、発現されたPIG35タンパク質は、およそ46kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３３７】
PIG 36のDNA塩基配列結果は、配列番号：85と同一であった。PIG36のDNA配列は、108アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：86と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ13kDaの分子量を有した。生じる全長PIG36 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG36/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０３３８】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、PIG36遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３３９】
図51は、PIG36タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図51において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、PIG36遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図51に示したように、発現されたPIG36タンパク質は、およそ13kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３４０】
MIG20のDNA塩基配列結果は、配列番号：89と同一であった。MIG20のDNA配列は、64アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：90と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ7kDaの分子量を有した。
【０３４１】
生じる全長MIG20 cDNAクローンを原核生物発現ベクターpBAD/thio-Topo（Invitrogen, US）のマルチクローニング部位に挿入し、ベクターpBAD/thio-Topo／MIG20を得て、次いで大腸菌Top10（Invitrogen, US）を生じるpBAD/thio-Topo／MIG20で形質転換した。発現タンパク質HT-チオレドキシンをベクターpBAD/thio-Topoのマルチクローニング部位の上流で挿入する。形質転換された大腸菌株を振盪しながらLBブロス中でインキュベートし、生じる培養ブロスを1/100を希釈し、次いで再び3時間インキュベートした。0.5mM L-アラビノース（Sigma, US）をインキュベートした培養液に添加し、タンパク質の産生を誘導した。培養液中の大腸菌細胞をL-アラビノース誘導の前後で超音波処理し、次いで12%のドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）を超音波処理したホモジネートで行った。図52は、SDS-PAGEを使用してベクターpBAD/thio-Topo／MIG20で形質転換した大腸菌Top10株のタンパク質の発現パターンを示す図であり、およそ22kDaの分子量を有する融合タンパク質のバンドが、L-アラビノース誘導後に明瞭に観察された。22kDaの融合タンパク質は、ベクターpBAD/thio-Topo／MIG20に挿入されるおよそ15kDaのHT-チオレドキシンタンパク質およびおよそ7kDaのMIG20タンパク質を含む。
【０３４２】
図52は、MIG20タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図52において、レーン1はL-アラビノース誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、MIG20遺伝子の発現がL-アラビノースによって誘導された後のタンパク質試料を表す。
【０３４３】
PIG49のDNA塩基配列結果は、配列番号：93と同一であった。PIG49のDNA配列は、345アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：94と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ38kDaの分子量を有した。
【０３４４】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、PIG49遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３４５】
図53は、PIG49タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図53において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、PIG49遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図53に示したように、発現されたPIG49タンパク質は、およそ38kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３４６】
PIG51のDNA塩基配列結果は、配列番号：97と同一であった。PIG51のDNA配列は、247アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：98と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ28kDaの分子量を有した。
【０３４７】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、PIG51遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３４８】
図54は、PIG51タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図54において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、PIG51遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図54に示したように、発現されたPIG51タンパク質は、およそ28kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３４９】
MIG12のDNA塩基配列結果は、配列番号：101と同一であった。MIG12のDNA配列は、44アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：102と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ5kDaの分子量を有した。
【０３５０】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、MIG12遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３５１】
図55は、MIG12タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図55において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、MIG12遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図55に示したように、発現されたMIG12タンパク質は、およそ5kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３５２】
PIG37のDNA塩基配列結果は、配列番号：105と同一であった。PIG37のDNA配列は、472アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：106と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ53kDaの分子量を有した。生じる全長PIG37 cDNAを原核生物発現ベクターpBAD／Thio-Topo（Invitrogen、U.A.）に挿入し、次いで大腸菌DH5αを生じる発現ベクターで形質転換して形質転換体を得て、これを大腸菌DH5α/PIG37/pBAD/Thio-Topoと命名した。
【０３５３】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、PIG37遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３５４】
図56は、PIG37タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図56において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、PIG37遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図56に示したように、発現されたPIG37タンパク質は、およそ53kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３５５】
GIG44のDNA塩基配列結果は、配列番号：109と同一であった。GIG44のDNA配列は、113アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：110と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ12kDaの分子量を有した。
【０３５６】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG44遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３５７】
図57は、GIG44タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図57において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG44遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図57に示したように、発現されたGIG44タンパク質は、およそ12kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３５８】
GIG31のDNA塩基配列結果は、配列番号：113と同一であった。GIG31のDNA配列は、211アミノ酸残基をコードするオープンリーディングフレームを有し、かつオープンリーディングフレームに由来するアミノ酸配列は、配列番号：114と同一であった。また、誘導タンパク質は、およそ24kDaの分子量を有した。
【０３５９】
形質転換した大腸菌株をLBブロス中でインキュベートし、次いで、1mM イソプロピル-1-β-D-チオガラクトピラノシド（IPTG）を培養液に添加して、GIG31遺伝子を発現するために37℃にて3時間反応させた。タンパク質試料を培養液から得て、次いで開示文献に記載された方法（Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory （1989））に従ってSDS-PAGEをタンパク質試料で行った。
【０３６０】
図58は、GIG31タンパク質のSDS-PAGE解析を示す図である。図58において、レーン1は、IPTG誘導の前のタンパク質試料を表し、レーン2は、GIG31遺伝子の発現がIPTGによって誘導された後のタンパク質試料を表す。図58に示したように、発現されたGIG31タンパク質は、およそ24kDaの分子量を有し、これは、そのDNA配列に由来するタンパク質の分子量に対応する。
【０３６１】
実施例3：GIG遺伝子のノーザンブロッティング。
【０３６２】
3-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44およびGIG31
GIGおよびPIG遺伝子の発現レベルを評価するために、以下の通りに、ノーザンブロット法を行った。3つの正常胸部組織、3つの原発性乳癌組織および実施例1の乳癌株化細胞MCF-7から得た20μgのそれぞれの総RNA試料を変性して、1%のホルムアルデヒド・アガロースゲル中で電気泳動し、次いで、生じるアガロースゲルをそれぞれナイロン膜（Boehringer-Mannheim、Germany）に移した。次いで、Rediprime IIランダム標識系（Amersham、United Kingdom）を使用して、ナイロン膜を、全長GIG cDNAの部分配列FC33；FC42；FC59；FC48；FC82；FC86；FC35；FC38；FC122；FC126；FC102；FC101；FC22；FC123およびFC47から調製した32P標識したランダムプライムプローブと42℃にて一晩ハイブリダイズさせた。ノーザンブロット法を2回繰り返し；一方は、ブロットを、デンシトメーターを使用して定量化したものであり、他方は、ブロットをmRNAの総量を決定するためにβ-アクチンプローブとハイブリダイズさせたものである。
【０３６３】
図59は、GIG8遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図59の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図59および図59の下段に示したように、GIG8遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかになったが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料では、著しく低いか、また検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３６４】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数の組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３６５】
図88は、GIG8遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図88の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図88に示したように、およそ1.3kbのサイズを有する優性のGIG8 mRNA転写物は、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血などの正常組織において過剰発現された。およそ2.5kbのサイズを有するGIG8 mRNA転写物は、肝臓および末梢血などの正常組織においても同時に発現された。図117は、GIG8遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図117の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図117に示したように、GIG8遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかった。このような結果から、本発明のGIG8遺伝子は、乳房、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、大腸および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有することが分かるであろう。
【０３６６】
図60は、GIG10遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図60の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図60に示したように、GIG10遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかになったが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３６７】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３６８】
図89は、GIG10遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図89の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図89に示したように、およそ3.5kbのサイズを有する優性のGIG10 mRNA転写物は、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血などの正常組織において過剰発現されたが、大腸組織において発現されなかった。およそ2.2kbのサイズを有するGIG10 mRNA転写物は、心臓および胎盤などの正常組織においても同時に発現された。
【０３６９】
図118は、GIG10遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図118の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図118に示したように、GIG8遺伝子は、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかったが、その発現は、前骨髄球性白血病HL-60、リンパ芽球状白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫RajiおよびSW480大腸癌細胞において検出された。
【０３７０】
このような結果から、本発明のGIG10遺伝子は、乳房、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有することが分かるであろう。
【０３７１】
図61は、GIG13遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図61の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図61に示したように、GIG13遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３７２】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３７３】
図90は、GIG13遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図90の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図90に示したように、およそ1.3kbのサイズを有する優性のGIG13 mRNA転写物は、正常肝組織のみにおいて過剰発現された。図119は、GIG13遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図119の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図119に示したように、GIG13遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかった。このような結果から、本発明のGIG13遺伝子は、乳房および肝臓などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３７４】
図67は、GIG30遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図67の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図67に示したように、GIG30遺伝子の発現レベルが正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことは明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３７５】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３７６】
図96は、GIG30遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図96の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図96に示したように、およそ1.9kbのサイズを有する優性のGIG30 mRNA転写物は、心臓、筋肉および肝臓などの正常組織において過剰発現された。およそ1.0kbのサイズを有するGIG30 mRNA転写物は、肝臓および末梢血などの正常組織においても同時に発現された。図125は、GIG30遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図125の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図125に示したように、GIG30遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかった。このような結果から、本発明のGIG30遺伝子は、乳房、心臓、筋肉および肝臓などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３７７】
図68は、GIG32遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図68の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図68に示したように、GIG32遺伝子の発現レベルが正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことは明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３７８】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３７９】
図97は、GIG32遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図97の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図97に示したように、およそ4.0kbのサイズを有する優性のGIG32 mRNA転写物は、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、胎盤、肺および末梢血などの正常組織において過剰発現された。およそ1.0kbのサイズを有するGIG32 mRNA転写物は、筋肉および大腸などの正常組織においても同時に発現された。図126は、GIG32遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図126の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図126に示したように、GIG32遺伝子は、HeLa子宮頚癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されたが、前骨髄球性白血病HL-60、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球状白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫RajiおよびSW480大腸癌細胞において発現されなかった。
【０３８０】
このような結果から、本発明のGIG32遺伝子は、乳房、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、胎盤および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３８１】
図70は、GIG34遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図70の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図70に示したように、GIG34遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３８２】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３８３】
図99は、GIG34遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図99の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図99に示したように、およそ0.6kbのサイズを有する優性のGIG34 mRNA転写物は、脳、心臓などの正常組織において過剰発現された。図128は、GIG34遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図128の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図128に示したように、GIG34遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、まれに発現された。
【０３８４】
このような結果から、本発明のGIG34遺伝子は、乳房、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３８５】
図71は、GIG35遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図71の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図71に示したように、GIG35遺伝子の発現レベルが正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、乳癌組織の3つの試料において、正常組織よりも有意に低く、乳癌株化細胞のある試料においてさえ非常にわずかに検出されただけであった。
【０３８６】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３８７】
図100は、GIG35遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図100の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図100に示したように、およそ1.3kbのサイズを有するGIG35 mRNA転写物は、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血などの正常組織においても発現された。図129は、GIG35遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図129の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図129に示したように、GIG35遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織においてまれに発現された。このような結果から、本発明のGIG35遺伝子は、乳房、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、大腸および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３８８】
図72は、GIG38遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図72の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図72に示したように、GIG38遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことは明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３８９】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３９０】
図101は、GIG38遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図101の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図101に示したように、およそ0.7kbのサイズを有する優性のGIG38 mRNA転写物は、心臓、筋肉、腎臓、肝臓および胎盤などの正常組織において過剰発現された。およそ1.5kbおよび2.0kbのサイズを有するGIG38 mRNA転写物は、心臓および筋肉などの正常組織においての同時に発現された。図130は、GIG38遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図130の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図130に示したように、GIG38遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、非常にまれに発現されたか、またはほとんど発現されなかった。全て正常組織において発現されることが証明されたおよそ1.5kbおよび2.0kbのサイズを有するGIG38 mRNA転写物は、癌株化細胞において発現されなかった。このような結果から、本発明のGIG38遺伝子は、乳房、心臓、筋肉、腎臓、肝臓および胎盤などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３９１】
図73は、GIG39遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図73の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図73に示したように、GIG39遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３９２】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３９３】
図102は、GIG39遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図102の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図102に示したように、2.4kbのサイズを有する優性のGIG39 mRNA転写物は、肝臓正常組織のみにおいて過剰発現された。図131は、GIG39遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図131の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図131に示したように、GIG39遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかった。このような結果から、本発明のGIG39遺伝子は、乳房および肝臓などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３９４】
図76は、GIG43遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図76の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図76に示したように、GIG43遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３９５】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３９６】
図105は、GIG43遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図105の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図105に示したように、およそ3.5kbのサイズを有する優性のGIG43 mRNA転写物は、心臓、腎臓、肝臓、胎盤および肺などの正常組織において過剰発現された。図134は、GIG43遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図134の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図134に示したように、GIG8遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかった。このような結果から、本発明のGIG8遺伝子は、乳房、心臓、腎臓、肝臓、胎盤および肺などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０３９７】
図82は、PIG49遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図82の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図82に示したように、PIG49遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０３９８】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０３９９】
図111は、PIG49遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図111の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図111に示したように、およそ2.4kbのサイズを有する優性のPIG49 mRNA転写物は、心臓、筋肉、腎臓、肝臓および胎盤などの正常組織において過剰発現された。およそ1.5kbのサイズを有するPIG49 mRNA転写物は、正常筋組織においても同時に発現された。図140はPIG49遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図140の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図140に示したように、PIG49遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、リンパ芽球状白血病MOLT-4、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球状白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、発現されなかったか、または非常にまれに発現された。
【０４００】
このような結果から、本発明のPIG49遺伝子は、乳房、心臓、筋肉、腎臓、肝臓および胎盤などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４０１】
図83は、PIG51遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図83の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図83に示したように、PIG51遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０４０２】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４０３】
図112は、PIG51遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図112の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図112に示したように、およそ1.0kbのサイズを有する優性のPIG51 mRNA転写物は、心臓、筋肉(muscles)、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤および末梢血などの正常組織において過剰発現された。図141は、PIG51遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図141の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図141に示したように、PIG51遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかった。このような結果から、本発明のPIG51遺伝子は、乳房、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、胎盤および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４０４】
図86は、GIG44遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図86の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図86に示したように、GIG44遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０４０５】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４０６】
図115は、GIG44遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図115の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図115に示したように、およそ1.0kbのサイズを有する優性のGIG44 mRNA転写物は、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および白血球などの正常組織において過剰発現された。およそ0.5kbのサイズを有するGIG44 mRNA転写物も同時に正常組織において発現された。
【０４０７】
図144は、GIG44遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図144の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図144に示したように、GIG44遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、非常にまれに発現された。このような結果から、本発明のGIG44遺伝子は、脳、心臓、筋肉、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４０８】
図87は、GIG31遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図87の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図87に示したように、GIG31遺伝子の発現レベルは、正常胸部組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、正常組織よりも乳癌組織の3つの試料において著しく低いか、または検出されず、乳癌株化細胞のある試料でさえも非常にわずかしか検出されなかった。
【０４０９】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４１０】
図116は、GIG31遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図116の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図116に示したように、およそ1.4kbのサイズを有する優性のGIG31 mRNA転写物は、乳房、心臓、大腸、脾臓、小腸、胎盤、肺および白血球などの正常組織において過剰発現された。図145は、GIG31遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図145の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図145に示したように、GIG31遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球状白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されていないが、HeLa子宮頚癌細胞およびA549肺癌細胞において非常にまれに発現された。このような結果から、本発明のGIG31遺伝子は、乳房、心臓、大腸、脾臓、小腸、胎盤、肺および白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４１１】
3-2. GIG15
GIG15遺伝子の発現レベルを評価するために、以下の通りに、ノーザンブロッティングを行った。20μgのそれぞれの総RNA試料を変性して、1%のホルムアルデヒド・アガロースゲル中で電気泳動し、次いで、生じるアガロースゲルをそれぞれナイロン膜（Boehringer-Mannheim、Germany）に移した。Rediprime IIランダム標識系（Amersham、United Kingdom）を使用して、ナイロン膜を、全長全長GIG15 cDNAの部分配列GV2から調製した32P標識したランダムプライムプローブと42℃にて一晩ハイブリダイズさせた。ノーザンブロット法を2回繰り返し；一方は、ブロットを、デンシトメーターを使用して定量化したものであり、他方は、ブロットをmRNAの総量を決定するためにβ-アクチンプローブとハイブリダイズさせたものである。
【０４１２】
図62は、GIG15遺伝子が正常骨髄組織、白血病骨髄組織およびK-562細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図62の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図62に示したように、GIG15遺伝子の発現レベルが正常骨髄組織の試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、白血病骨髄組織の試料において正常組織よりも有意に低かく、白血病株化細胞のある試料においてさえ、わずかに検出されただけであった。
【０４１３】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４１４】
図91は、GIG15遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図91の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図91に示したように、およそ0.5kbのサイズを有する優性のGIG15 mRNA転写物は、などの正常組織脳、心臓において過剰発現された。およそ1.0kbのサイズを有するGIG15 mRNA転写物は、同時に肝臓および腎臓などの正常組織においてまた発現された。図120は、GIG15遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図120の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図120に示したように、GIG15遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、まれに発現された。このような結果から、本発明のGIG15遺伝子は、骨髄、脳、心臓、筋肉、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺、大腸および末梢血などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４１５】
3-3. GIG16、GIG24、GIG26、GIG29 GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36、PIG37
GIGおよびPIG遺伝子の発現レベルを評価するために、以下の通りに、ノーザンブロット法を行った。3つの正常胸部組織、3つの原発性肝臓癌組織および実施例1の肝臓癌株化細胞HepG2から得た20μgのそれぞれの総RNA試料を変性して、1%のホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、生じるアガロースゲルをそれぞれナイロン膜（Boehringer-Mannheim、Germany）に移した。次いで、Rediprime IIランダム標識系（Amersham、United Kingdom）を使用して、ナイロン膜を、全長GIG cDNAの部分配列FC33；FC42；FC59；FC48；FC82；FC86；FC35；FC38；FC122；FC126；FC102；FC101；FC22；FC123およびFC47から調製した32P標識したランダムプライムプローブと42℃にて一晩ハイブリダイズさせた。ノーザンブロット法を2回繰り返し；一方は、ブロットを、デンシトメーターを使用して定量化したものであり、他方は、ブロットを、mRNAの総量を決定するためにβ-アクチンプローブとハイブリダイズさせたものである。
【０４１６】
図63は、GIG16遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図63の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図63に示したように、GIG16遺伝子の発現レベルは、正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料においては検出されなかった。
【０４１７】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４１８】
図92は、GIG16遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図92の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図92に示したように、およそ2.0kbのサイズを有する優性のGIG16 mRNA転写物は、肝臓および腎臓などの正常組織において過剰発現された。
【０４１９】
図121は、GIG16遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図121の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図121に示したように、GIG16遺伝子が、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織における全てにて発現されるというわけではなかった。このような結果から、本発明のGIG16遺伝子は、肝臓および腎臓などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のGIG16遺伝子は、その発現が白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４２０】
図64は、GIG24遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図64の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図64に示したように、GIG24遺伝子の発現レベルは、正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞の一試料では検出されなかった。
【０４２１】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４２２】
図93は、GIG24遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図93の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図93に示したように、およそ2.4kbのサイズを有する優性のGIG24 mRNA転写物は、肝臓、心臓および筋肉などの正常組織において過剰発現された。
【０４２３】
図122は、GIG24遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図122の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図122に示したように、GIG24遺伝子が、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織における全てにて発現されるというわけではなかった。このような結果から、本発明のGIG24遺伝子は、肝臓、心臓および筋肉などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のGIG24遺伝子は、その発現が腫瘍形成を誘導するために白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４２４】
図65は、GIG26遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図65の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図65に示したように、GIG26遺伝子の発現レベルは、正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料にいては、検出されなかった。
【０４２５】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４２６】
図94は、GIG26遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図94の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図94に示したように、およそ2.0kbのサイズを有する優性のGIG26 mRNA転写物は、正常肝組織において過剰発現されており、およそ2.5kbおよび1.5kbのサイズを有するGIG26 mRNA転写物は、腎臓、脳および心臓においても同時に発現された。図123は、GIG26遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図123の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図123に示したように、GIG26遺伝子が、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織における全てにて発現されるというわけではなかった。このような結果から、本発明のGIG26遺伝子は、肝臓、腎臓、脳および心臓などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のGIG16遺伝子は、その発現が白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４２７】
図66は、GIG29遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図66の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図66に示したように、GIG29遺伝子の発現レベルが正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞の一試料では検出されなかった。
【０４２８】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４２９】
図95は、GIG29遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図95の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図92に示したように、およそ1.4kbのサイズを有する優性のGIG29 mRNA転写物は、正常肝組織において過剰発現された。
【０４３０】
図124は、GIG29遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図124の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図124に示したように、GIG29遺伝子が、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織における全てにて発現されるというわけではなかった。このような結果から、本発明のGIG29遺伝子は、正常肝組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のGIG29遺伝子は、その発現が白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４３１】
図74は、GIG40遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図74の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図74に示したように、GIG40遺伝子の発現レベルが正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料にいては、検出されなかった。
【０４３２】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４３３】
図103は、GIG40遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図103の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図103に示したように、およそ1.5kbのサイズを有する優性のGIG40 mRNA転写物は、肝臓、心臓および筋肉などの正常組織において過剰発現された。およそ5.0kbのサイズを有するGIG40 mRNA転写物も同時に発現された。
【０４３４】
図132は、GIG40遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図132の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図132に示したように、GIG40遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、非常にまれに発現された。このような結果から、本発明のGIG40遺伝子は、肝臓、心臓および筋肉などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のGIG40遺伝子がその発現は、白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４３５】
図75は、GIG42遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図75の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図75に示したように、GIG42遺伝子の発現レベルが正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料にいては、検出されなかった。
【０４３６】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４３７】
図104は、GIG42遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図104の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図104に示したように、およそ2.5kbのサイズを有する優性のGIG42 mRNA転写物は、正常肝組織において過剰発現された。
【０４３８】
図133は、GIG42遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図133の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図133に示したように、GIG42遺伝子が、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織における全てにて発現されるというわけではなかった。このような結果から、本発明のGIG42遺伝子は、正常肝組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のGIG42遺伝子がその発現が腫瘍形成を誘導するために白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４３９】
図78は、PIG33遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図78の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図78に示したように、PIG33遺伝子の発現レベルは、正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料にいては、検出されなかった。
【０４４０】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４４１】
図107は、PIG33遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図107の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図107に示したように、およそ3.0kbのサイズを有する優性のPIG33 mRNA転写物は、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺などの正常組織において過剰発現された。
【０４４２】
図136は、PIG33遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図136の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図136に示したように、PIG33遺伝子は、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球状白血病MOLT-4、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織の全てに発現されるというわけではなく、前骨髄球性白血病HL-60およびバーキットリンパ腫Rajiでは、まれに発現された。このような結果から、本発明のPIG33遺伝子は、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のPIG33遺伝子は、その発現が白血病、子宮癌、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４４３】
図79は、PIG35遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図79の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図79に示したように、PIG35遺伝子の発現レベルが正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料にいては、検出されなかった。
【０４４４】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４４５】
図108は、PIG35遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図108の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図108に示したように、およそ1.7kbのサイズを有する優性のPIG35 mRNA転写物は、脳、心臓、骨格筋、肝臓、小腸、胎盤および肺などの正常組織において過剰発現された。
【０４４６】
図137は、PIG35遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図137の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図137に示したように、PIG35遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、リンパ芽球状白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織の全てに発現されるというわけではなく、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562では、まれに発現された。このような結果から、本発明のPIG35遺伝子は、脳、心臓、骨格筋、肝臓、小腸、胎盤および肺などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のPIG35遺伝子は、その発現が白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４４７】
図80は、PIG36遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図80の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図80に示したように、PIG36遺伝子の発現レベルは、正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料にいては、検出されなかった。
【０４４８】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４４９】
図109は、PIG36遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図109の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図109に示したように、およそ1.0kbのサイズを有する優性のPIG36 mRNA転写物は、正常肝組織において過剰発現された。
【０４５０】
図138は、PIG36遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図138の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図138に示したように、PIG36遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、全く発現されなかったか、またはまれに発現された。このような結果から、本発明のPIG36遺伝子は、肝臓、心臓、筋肉、腎臓および胎盤などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のPIG36遺伝子は、その発現が白血病、子宮癌、悪性リンパ腫、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４５１】
図85は、PIG37遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図85の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図85に示したように、PIG37遺伝子の発現レベルは、正常肝組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現は、肝臓癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、肝臓癌株化細胞のある試料にいては、検出されなかった。
【０４５２】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４５３】
図114は、PIG37遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図114の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図114に示したように、およそ7.0kbのサイズを有する優性のPIG37 mRNA転写物は、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺などの正常組織において過剰発現された。およそ2.0および1.0kbのサイズを有するPIG37 mRNA転写物は、同時に正常組織において過剰発現された。
【０４５４】
図143は、PIG37遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図143の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図143に示したように、PIG37遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球状白血病MOLT-4、SW480大腸癌細胞およびA549肺癌細胞などの組織においてほとんど発現されていないが、HeLa子宮頚癌細胞、バーキットリンパ腫RajiおよびG361黒色腫細胞においてまれに発現された。このような結果から、本発明のPIG37遺伝子は、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤および肺になどの正常組織おいて腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。また、本発明のPIG37遺伝子は、その発現が白血病、子宮癌、大腸癌、肺癌および皮膚癌においてさえ腫瘍形成を誘導するのを抑制したという事実から、腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４５５】
3-4. GIG46、MIG20
GIGおよびPIG遺伝子の発現レベルを評価するために、以下の通りに、ノーザンブロット法を行った。3つの正常頚部外組織、3つの原発性頚部癌組織および実施例1に記載したように2つの子宮頚癌株化細胞から得た20μgのそれぞれの総RNA試料を変性して、1%のホルムアルデヒド・アガロースゲル中で電気泳動し、次いで、生じるアガロースゲルをそれぞれナイロン膜（Boehringer-Mannheim、Germany）に移した。次いで、Rediprime IIランダム標識系（Amersham、United Kingdom）を使用して、ナイロン膜を、全長GIG46およびMIG20 cDNAを使用して32P標識したランダムプライムプローブと42℃にて一晩ハイブリダイズさせた。ノーザンブロット法を2回繰り返し；一方は、ブロットを、デンシトメーターを使用して定量化したものであり、他方は、ブロットをmRNAの総量を決定するためにβ-アクチンプローブとハイブリダイズさせたものである。
【０４５６】
図77は、GIG46遺伝子が正常頚部外組織、原発性頚部癌組織および子宮頚癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図77は、β-アクチンの発現を示すノーザンブロッティング結果である。図77において、レーン1〜3は、正常頚部外組織試料を表し、レーン4〜6は、子宮頚癌組織試料を表し、レーン7は、子宮頚癌株化細胞HeLaの試料を表し、レーン8は、子宮頚癌株化細胞CUMC-6の試料を表す。図77に示したように、GIG46遺伝子の発現レベルは、正常頚部外組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現レベルは、頚部癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、子宮頚癌株化細胞の2つの試料では、検出されなかった。
【０４５７】
図106は、GIG46遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図106は同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図106に示したように、およそ1.5kbのサイズを有する優性のGIG46 mRNA転写物は、子宮、脳、心臓、骨格筋、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球などの正常組織において過剰発現されており、1.5kb-GIG46 mRNA転写物に加えておよそ2.0kbのサイズを有する転写物も発現された。
【０４５８】
図135は、GIG46遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図135の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図135に示したように、GIG46遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、まれに発現された。しかし、正常組織において発現されることが証明された2.0kb-mRNA転写物（transcrip）は、癌株化細胞において発現されなかった。
【０４５９】
このような結果から、本発明のGIG46遺伝子は、子宮、脳、心臓、骨格筋、大腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４６０】
図81は、MIG20遺伝子が正常頚部外組織、原発性頚部癌組織および子宮頚癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図81は、β-アクチンの発現を示すノーザンブロッティング結果である。図81において、レーン1〜3は、正常頚部外組織試料を表し、レーン4〜6は子宮頚癌組織試料を表し、レーン7は、子宮頚癌株化細胞HeLaの試料を表し、レーン8は子宮頚癌株化細胞CUMC-6の試料を表す。図81に示したように、MIG20遺伝子の発現レベルは、正常頚部外組織の3つの試料において全て高度に検出されたことが明らかにされたが、その発現レベルは、頚部癌組織の3つの試料において正常組織よりも有意に低く、子宮頚癌株化細胞の2つの試料では、検出されなかった。
【０４６１】
図110は、MIG20遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図110は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図110に示したように、およそ4.4kbのサイズを有する優性のMIG20 mRNA転写物は、心臓、骨格筋および肝臓などの正常組織において過剰発現されており、4.4kb-MIG20 mRNA転写物に加えて、およそ2.4kbおよび1.5kbのサイズを有する転写物も発現された。
【０４６２】
図139は、MIG20遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図139の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図139に示したように、MIG20遺伝子は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において発現されなかった。このような結果から、本発明のMIG2遺伝子は、頚部、心臓、骨格筋および肝臓などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４６３】
3-5. MIG12
MIG12遺伝子の発現レベルを評価するために、以下の通りに、ノーザンブロット法を行った。3つの正常肺組織、2つの原発性肺癌組織、2つの転移性肺癌組織および実施例1に記載したように肺癌株化細胞（A549およびNCI-H358）から得た20μgのそれぞれの総RNA試料を変性して、1%のホルムアルデヒドアガロースゲル中で電気泳動し、次いで、生じるアガロースゲルをそれぞれナイロン膜（Boehringer-Mannheim、Germany）に移した。次いで、Rediprime IIランダム標識系（Amersham、United Kingdom）を使用して、ナイロン膜を、全長MIG12 cDNAから調製した32P標識したランダムプライムプローブと42℃にて一晩ハイブリダイズさせた。ノーザンブロット法を2回繰り返し；一方は、ブロットをデンシトメーターを使用して定量化したものであり、他方は、ブロットをmRNAの総量を決定するためにβ-アクチンプローブとハイブリダイズさせたものである。
【０４６４】
図84は、MIG12遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図84の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図84に示したように、MIG9遺伝子の発現レベルは、正常肺組織の3つの試料において全て高度に検出されたが、肺癌組織の2つの試料、転移性肺癌組織の2つの試料および肺癌株化細胞の2つの試料において、わずかに検出されたことが明らかになった。
【０４６５】
ノーザンブロッティングは、正常ヒト複数組織（Clontech）およびヒト癌株化細胞（Clontech）に対して行った。すなわち、ノーザンブロッティングは、上記と同じ様式で、ブロットを、正常組織および癌株化細胞から抽出した総RNA試料のそれぞれを転写したものに対してハイブリダイズすることによって行い、該ブロットは、Clontech社（U.S）から市販されており、正常組織は、たとえば脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球からなる群より選択され、癌株化細胞は、たとえば前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞からなる群より選択される。
【０４６６】
図113は、MIG12遺伝子が種々の正常組織において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図113は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図113に示したように、およそ0.5kbのサイズを有する優性のMIG12 mRNA転写物は、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球などの正常組織において過剰発現された。0.5kb-MIG12 mRNA転写物に加えて、およそ1.0kbおよび0.8kbのサイズを有する転写物も心臓、筋肉、肝臓および腎臓などの正常組織において発現された。
【０４６７】
図142は、MIG12遺伝子が種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示しており、図142の下段は、同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す。図142に示したように、正常組織において発現される優性の0.5kb-MIG12 mRNA転写物は、前骨髄球性白血病HL-60、HeLa子宮頚癌細胞、慢性骨髄性白血病株化細胞K-562、リンパ芽球腫白血病MOLT-4、バーキットリンパ腫Raji、SW480大腸癌細胞、A549肺癌細胞およびG361黒色腫細胞などの組織において、まれに発現された。このような結果から、本発明のMIG12遺伝子は、脳、心臓、骨格筋、結腸、胸腺、脾臓、腎臓、肝臓、小腸、胎盤、肺および末梢血白血球などの正常組織において腫瘍抑制機能を有したことが分かるであろう。
【０４６８】
実施例4：発現ベクターの構築およびトランスフェクション。
【０４６９】
4-1. GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44、GIG31
GIGおよびPIG遺伝子のそれぞれのコード領域を含む発現ベクターは、以下の通りに構築した。最初に、実施例2で調製した全長cDNAクローンを真核生物発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogen, US）に挿入して、発現ベクターpcDNA3.1/GIG8；pcDNA3.1/GIG10；pcDNA3.1/GIG13；pcDNA3.1/GIG30；pcDNA3.1/GIG32；pcDNA3.1/GIG33；pcDNA3.1/GIG34；pcDNA3.1/GIG35；pcDNA3.1/GIG38；pcDNA3.1/GIG39；pcDNA3.1/GIG43；pcDNA3.1/PIG49；pcDNA3.1/PIG51；pcDNA3.1/GIG44およびpcDNA3.1/GIG31をそれぞれ得た。それぞれの発現ベクターを、リポフェクトアミン（Gibco BRL）を使用してMCF-7乳癌株化細胞にトランスフェクトし、次いでトランスフェクト細胞を選択するために0.6mg/mlのG418（Gibco）を含むDMEM培地中でインキュベートした。この時に、GIG cDNAを欠いた発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞を対照群として使用した。
【０４７０】
4-2. GIG15
GIG15遺伝子のコード領域を含む発現ベクターは、以下の通りに構築した。最初に、実施例2で調製した全長GIG15 cDNAクローンを真核生物発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogen, US）に挿入し、発現ベクターpcDNA3.1/GIG15を得た。発現ベクターを、リポフェクトアミン（Gibco BRL）を使用してK562白血病株化細胞にトランスフェクトして、次いでトランスフェクト細胞を選択するためにG418（Gibco）の0.6mg/mlを含むDMEM培地中でインキュベートした。この時に、GIG cDNAを欠いた発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたK562細胞を対照群として使用した。
【０４７１】
4-3. GIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36、PIG37
GIGおよびPIG遺伝子のそれぞれのコード領域を含む発現ベクターは、以下の通りに構築した。最初に、実施例2で調製した全長cDNAクローンGIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36およびPIG37を真核生物発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogen, US）に挿入し、発現ベクターpcDNA3.1/GIG16；pcDNA3.1/GIG24；pcDNA3.1/GIG26；pcDNA3.1/GIG29；pcDNA3.1/GIG40；pcDNA3.1/GIG42；pcDNA3.1/PIG33；pcDNA3.1/PIG35；pcDNA3.1/PIG36；およびpcDNA3.1/PIG37をそれぞれ得た。それぞれの発現ベクターを、リポフェクトアミン（Gibco BRL）を使用してHepG2肝臓癌株化細胞にトランスフェクトし、次いでトランスフェクト細胞を選択するために0.6mg/mlのG418（Gibco）を含むDMEM培地中でインキュベートした。この時に、GIG cDNAを欠いた発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞を対照群として使用した。
【０４７２】
4-4. GIG46、MIG20
GIGおよびMIG遺伝子のそれぞれのコード領域を含む発現ベクターは、以下の通りに構築した。最初に、実施例2で調製した全長GIG46 cDNAクローンを真核生物発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogen, US）に挿入し、発現ベクターpcDNA3.1/GIG46；およびpcDNA3.1／MIG20をそれぞれ得た。それぞれの発現ベクターを、リポフェクトアミン（Gibco BRL）を使用してHeLa子宮頚癌株化細胞（ATCC CCL-2）にトランスフェクトし、次いで、トランスフェクト細胞を選択するために0.6mg/mlのG418（Gibco）を含むDMEM培地中でインキュベートした。この時に、GIG46またはMIG20 cDNAを欠いた発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHeLa細胞を対照群として使用した。
【０４７３】
4-5. MIG12
MIG12遺伝子のコード領域を含む発現ベクターは、以下の通りに構築した。最初に、実施例2で調製した全長MIG12 cDNAクローンを真核生物発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogen, US）に挿入し、発現ベクターpcDNA3.1／MIG12を得た。発現ベクターを、リポフェクトアミン（Gibco BRL）を使用してA549肺癌株化細胞にトランスフェクトし、次いで、トランスフェクト細胞を選択するために0.6mg/mlのG418（Gibco）を含むDMEM培地中でインキュベートした。この時に、MIG12 cDNAを欠いた発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトされるA549細胞を対照群として使用した。
【０４７４】
実施例5：GIG 遺伝子をトランスフェクトした乳癌細胞の増殖曲線
5-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44、GIG31
乳癌細胞の増殖に対するGIGおよびPIG遺伝子の効果を調べるために、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/GIG8；pcDNA3.1/GIG10；pcDNA3.1/GIG13；pcDNA3.1/GIG30；pcDNA3.1/GIG32；pcDNA3.1/GIG33；pcDNA3.1/GIG34；pcDNA3.1/GIG35；pcDNA3.1/GIG38；pcDNA3.1/GIG39；pcDNA3.1/GIG43；pcDNA3.1/PIG49；pcDNA3.1/PIG51；pcDNA3.1/GIG44およびpcDNA3.1/GIG31をそれぞれトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びにベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞を、それぞれDMEM培地中にて1×105細胞／mlの細胞密度に9日間インキュベートした。培養液中の細胞をトリプシン（Sigma）で処理することによってこれらが付着するフラスコからそれぞれ単離し、次いで、生存細胞をトリパンブルー色素排除法（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York （1987））により、1、3、5、7および9日にそれぞれカウントした。
【０４７５】
図146は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/GIG8をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図146に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG8をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG8をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ30%のみが生存した。このような結果から、GIG8遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４７６】
図147は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG10をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図147に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG10をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG10をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ40%のみが生存した。このような結果から、GIG10遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４７７】
図148は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG13をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図148に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG13をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG13をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ30%のみが生存した。このような結果から、GIG13遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４７８】
図154は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG30をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図154に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG30をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG30をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ30%のみが生存した。このような結果から、GIG30遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４７９】
図155は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG32をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図155に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG32をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG32をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ50%のみが生存した。このような結果から、GIG32遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８０】
図156は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG33をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図156に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG33をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG33をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、GIG33遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８１】
図157は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG34をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図157に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG34をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG34をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ80%のみが生存した。このような結果から、GIG34遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８２】
図158は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG35をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図158に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG35をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG35をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、GIG35遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８３】
図159は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG38をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図159に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG38をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG38をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、GIG38遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８４】
図160は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG39をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図160に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG39をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG39をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ40%のみが生存した。このような結果から、GIG39遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８５】
図163は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG43をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図163に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG43をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG43をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、GIG43遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８６】
図169は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ PIG49をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図169に示したように、ベクターpcDNA3.1/PIG49をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/PIG49をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、PIG49遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８７】
図170は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ PIG51をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図170に示したように、ベクターpcDNA3.1/PIG51をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/PIG51をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ40%のみが生存した。このような結果から、PIG51遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８８】
図173は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG44をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図173に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG44をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG44をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、GIG44遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４８９】
図174は、野生型MCF-7細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/ GIG31をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。図174に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG31をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞および野生型MCF-7細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型MCF-7細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG31をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、GIG31遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９０】
5-2. GIG15
白血病細胞の増殖に対するGIG遺伝子の効果を調べるために、野生型K562細胞；K562実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/GIG15それぞれトランスフェクトした白血病細胞；およびベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたK562細胞をそれぞれDMEM培地中にて1×105細胞／mlの細胞密度に9日間インキュベートした。培養液中の細胞をトリプシン（Sigma）で処理することによってこれらが付着するフラスコからそれぞれ単離し、次いで、生存細胞をトリパンブルー色素排除法（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York （1987））により、1、3、5、7および9日にそれぞれカウントした。
【０４９１】
図149は、野生型K562細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/GIG15をトランスフェクトしたK562白血病細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたK562細胞の増殖曲線を示す図である。図149に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG15をトランスフェクトしたK562細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたK562細胞および野生型K562細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型K562細胞と比較したときにベクターpcDNA3.1/GIG15をトランスフェクトしたK562細胞のおよそ80%が生存した。このような結果から、GIG15遺伝子が乳癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９２】
5-3. GIG16、GIG24、GIG26、GIG29 GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36、PIG37
肝臓癌細胞の増殖に対するGIGおよびPIG遺伝子の効果を調べるために、野生型HepG2細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/GIG16；pcDNA3.1/GIG24；pcDNA3.1/GIG26；pcDNA3.1/GIG29；pcDNA3.1/GIG40；pcDNA3.1/GIG42；pcDNA3.1/PIG33；pcDNA3.1/PIG35；pcDNA3.1/PIG36；およびpcDNA3.1/PIG37をそれぞれトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；並びにベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞をそれぞれDMEM培地中にて1×105細胞／mlの細胞密度に9日間インキュベートした。培養液中の細胞をトリプシン（Sigma）で処理することによってこれらが付着するフラスコからそれぞれ単離し、次いで、生存細胞をトリパンブルー色素排除法（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York （1987））により、1、3、5、7および9日にそれぞれカウントした。
【０４９３】
図150は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/GIG16実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図150に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG16をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときにベクターpcDNA3.1/GIG16をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、GIG16遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９４】
図151は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/GIG24実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図151に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG24をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG24をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、GIG24遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９５】
図152は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/GIG26実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図152に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG26をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG26をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ50%のみが生存した。このような結果から、GIG26遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９６】
図153は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/GIG29実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図153に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG29をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG29をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、GIG29遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９７】
図161は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/GIG40実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図161に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG40をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG40をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ80%のみが生存した。このような結果から、GIG40遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９８】
図162は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/GIG42実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図162に示したように、ベクターpcDNA3.1/GIG42をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/GIG42をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、GIG42遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０４９９】
図165は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/PIG33実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図165に示したように、ベクターpcDNA3.1/PIG33をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/PIG33をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、PIG33遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０５００】
図166は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/PIG35実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図166に示したように、ベクターpcDNA3.1/PIG35をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/PIG35をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、PIG35遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０５０１】
図167は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/PIG36実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図167に示したように、ベクターpcDNA3.1/PIG36をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/PIG36をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、PIG36遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０５０２】
図172は、野生型HepG2細胞；HepG2肝臓癌細胞は、ベクターpcDNA3.1/PIG37実施例4で調製したベクターpcDNA3.1/をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。図172に示したように、ベクターpcDNA3.1/PIG37をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞および野生型HepG2細胞よりも高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型HepG2細胞と比較したときに、ベクターpcDNA3.1/PIG37をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、PIG37遺伝子が肝臓癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０５０３】
5-4. GIG46、MIG20
それぞれ、頚部癌細胞の増殖に対するGIGおよびMIG遺伝子の効果を決定するために、正常HeLa細胞、実施例4で調製したGIG46遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮頚癌細胞、並びにベクターpcDNA3.1（Invitrogen）のみをトランスフェクトしたHeLa細胞をそれぞれDMEM培地中にて1×105細胞／mlの細胞密度に9日間インキュベートした。培養液中の細胞をトリプシン（Sigma）で処理することによってこれらが付着するフラスコからそれぞれ単離し、次いで、生存細胞をトリパンブルー色素排除法（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York （1987））により、1、3、5、7および9日にそれぞれカウントした。
【０５０４】
図164は、正常HeLa細胞；実施例4で調製したGIG46遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮頚癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHeLa細胞の増殖曲線を示す図である。図164に示したように、GIG46遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮頚癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHeLa細胞および正常HeLa細胞のものと比較したときに、より高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、正常HeLa細胞と比較したときに、GIG46遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮頚癌細胞の80%のみが生存した。このような結果から、GIG46遺伝子が頚部癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０５０５】
図168は、正常HeLa細胞；実施例4で調製したMIG20遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮頚癌細胞；並びに現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたHeLa細胞の増殖曲線を示す図である。図168に示したように、MIG20遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮頚癌細胞は、発現ベクターをトランスフェクトしたpcDNA3.1HeLa細胞および正常HeLa細胞のものと比較したときに、より高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、正常HeLa細胞と比較したときに、MIG20遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮頚癌細胞のおよそ60%のみが生存した。このような結果から、MIG20遺伝子が頚部癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０５０６】
5-5. MIG12
肺癌細胞の増殖に対するMIG12遺伝子の効果を決定するために、野生型A549細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1／MIG12をトランスフェクトしたA549肺癌細胞；並びにベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたA549細胞をそれぞれDMEM培地中にて1×105細胞／mlの細胞密度に9日間インキュベートした。培養液中の細胞をトリプシン（Sigma）で処理することによってこれらが付着するフラスコからそれぞれ単離し、次いで、生存細胞をトリパンブルー色素排除法（Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York （1987））により、1、3、5、7および9日にそれぞれカウントした。
【０５０７】
図171は、野生型A549細胞；実施例4で調製したベクターpcDNA3.1／MIG12をトランスフェクトしたA549肺癌細胞；並びに発現ベクターpcDNA3.1のみをトランスフェクトしたA549細胞の増殖曲線を示す図である。図171に示したように、ベクターpcDNA3.1／MIG12をトランスフェクトしたA549肺癌細胞は、発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたA549細胞および野生型A549細胞のものと比較したときに、より高い死亡率を示したことが明らかになった。9日のインキュベーション後、野生型A549細胞と比較したときにベクターpcDNA3.1／MIG12をトランスフェクトしたA549肺癌細胞のおよそ70%のみが生存した。このような結果から、MIG12遺伝子が肺癌細胞の増殖を抑制したことが分かるであろう。
【０５０８】
産業上の利用可能性
本発明のGIG、PIGまたはMIG遺伝子は、ヒト癌を診断し、予防し、および治療するために効果的に使用されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０５０９】
【図１】配列番号：3のランダム5'-13merプライマーH-AP33および配列番号：4のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２】配列番号：7のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：8のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図３】配列番号：11のランダム5'-13merプライマーH-AP5および配列番号：12のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図４】配列番号：15のランダム5'-13merプライマーH-AP2および配列番号：16のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図５】配列番号：19のランダム5'-13merプライマーH-AP8および配列番号：20のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図６】配列番号：23のランダム5'-13merプライマーH-AP7および配列番号：24のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図７】配列番号：27のランダム5'-13merプライマーH-AP11および配列番号：28のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図８】配列番号：31のランダム5'-13merプライマーH-AP3および配列番号：32のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図９】配列番号：35のランダム5'-13merプライマーH-AP4および配列番号：36のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１０】配列番号：39のランダム5'-13merプライマーH-AP8および配列番号：40のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１１】配列番号：43のランダム5'-13merプライマーH-AP33および配列番号：44のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１２】配列番号：47のランダム5'-13merプライマーH-AP35および配列番号：48のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１３】配列番号：51のランダム5'-13merプライマーH-AP3および配列番号：52のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１４】配列番号：55のランダム5'-13merプライマーH-AP12および配列番号：56のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１５】配列番号：59のランダム5'-13merプライマーH-AP12および配列番号：60のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１６】配列番号：63のランダム5'-13merプライマーH-AP7および配列番号：64のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１７】配列番号：67のランダム5'-13merプライマーH-AP8および配列番号：68のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１８】配列番号：71のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：72のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図１９】配列番号：75のランダム5'-13merプライマーH-AP16および配列番号：76のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２０】配列番号：79のランダム5'-13merプライマーH-AP2および配列番号：80のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２１】配列番号：83のランダム5'-13merプライマーH-AP9および配列番号：84のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２２】配列番号：87のランダム5'-13merプライマーH-AP9および配列番号：88のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２３】配列番号：91のランダム5'-13merプライマーH-AP32および配列番号：92のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２４】配列番号：95のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：96のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２５】配列番号：99のランダム5'-13merプライマーH-AP22および配列番号：100のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２６】配列番号：103のランダム5'-13merプライマーH-AP12および配列番号：104のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２７】配列番号：107のランダム5'-13merプライマーH-AP10および配列番号：108のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２８】配列番号：111のランダム5'-13merプライマーH-AP12および配列番号：112のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図２９】配列番号：115のランダム5'-13merプライマーH-AP4および配列番号：116のアンカーされたオリゴdTプライマーを使用したPCR結果を示すゲル図である。
【図３０】本発明のGIG8遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３１】本発明のGIG10遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３２】本発明のGIG13遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３３】本発明のGIG15遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３４】本発明のGIG16遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３５】本発明のGIG24遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３６】本発明のGIG26遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３７】本発明のGIG29遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３８】本発明のGIG30遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図３９】本発明のGIG32遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４０】本発明のGIG33遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４１】本発明のGIG34遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４２】本発明のGIG35遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４３】本発明のGIG38遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４４】本発明のGIG39遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４５】本発明のGIG40遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４６】本発明のGIG42遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４７】本発明のGIG43遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４８】本発明のGIG46遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図４９】本発明のPIG33遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５０】本発明のPIG35遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５１】本発明のPIG36遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５２】本発明のMIG20遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５３】本発明のPIG49遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５４】本発明のPIG51遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５５】本発明のMIG12遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５６】本発明のPIG37遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５７】本発明のGIG44遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５８】本発明のGIG31遺伝子産物のSDS-PAGE解析結果を示す図である。
【図５９】GIG8遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６０】GIG10遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６１】GIG13遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６２】は、本発明のGIG15遺伝子が正常骨髄組織、白血病骨髄組織およびK562白血病細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６３】GIG16遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６４】GIG24遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６５】GIG26遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６６】GIG29遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６７】GIG30遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６８】GIG32遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図６９】GIG33遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７０】GIG34遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７１】GIG35遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７２】GIG38遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７３】GIG39遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７４】GIG40遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７５】GIG42遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７６】GIG43遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７７】GIG46遺伝子が正常頚部外組織、原発性子宮癌組織および子宮癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７８】PIG33遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図７９】PIG35遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８０】PIG36遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８１】MIG20遺伝子が正常頚部外組織、原発性子宮癌組織および子宮癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８２】PIG49遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８３】PIG51遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８４】図84は、本発明のMIG12遺伝子が正常肺組織、原発性肺癌組織、転移性肺癌組織および肺癌株化細胞において差動的に発現される示すノーザンブロッティング結果を示す図であり、図59〜87下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８５】PIG37遺伝子が正常肝組織、原発性肝臓癌組織および肝臓癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８６】GIG44遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８７】GIG31遺伝子が正常胸部組織、原発性乳癌組織および乳癌株化細胞において差動的に発現されているノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８８】GIG8遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図８９】GIG10遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９０】GIG13遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９１】GIG15遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９２】GIG16遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９３】GIG24遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９４】GIG26遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９５】GIG29遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９６】GIG30遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９７】GIG32遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９８】GIG33遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図９９】GIG34遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１００】GIG35遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０１】GIG38遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０２】GIG39遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０３】GIG40遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０４】GIG42遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０５】GIG43遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０６】GIG46遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０７】PIG33遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０８】PIG35遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１０９】PIG36遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１０】MIG20遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１１】PIG49遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１２】PIG51遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１３】MIG12遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１４】PIG37遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１５】GIG44遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１６】GIG31遺伝子が、種々の正常組織において差動的に発現されることを示す図であり、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１７】GIG8遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１８】GIG10遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１１９】GIG13遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２０】GIG15遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２１】GIG16遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２２】GIG24遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２３】GIG26遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２４】GIG29遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２５】GIG30遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２６】GIG32遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２７】GIG33遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２８】GIG34遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１２９】GIG35遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３０】GIG38遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３１】GIG39遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３２】GIG40遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３３】GIG42遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３４】GIG43遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３５】GIG46遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３６】PIG33遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３７】PIG35遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３８】PIG36遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１３９】MIG20遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１４０】PIG49遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１４１】PIG51遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１４２】MIG12遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１４３】PIG37遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１４４】GIG44遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１４５】GIG31遺伝子が、種々の癌株化細胞において差動的に発現されるノーザンブロッティング結果を示し、下段は、それぞれ同じブロットをβ-アクチンプローブとハイブリダイズすることによって得られたノーザンブロッティング結果を示す図である。
【図１４６】野生型MCF-7細胞；GIG10遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１４７】野生型MCF-7細胞；GIG13遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１４８】野生型MCF-7細胞；GIG30遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１４９】図149は、野生型K562株化細胞； GIG15遺伝子をトランスフェクトしたK562白血病細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたK562細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５０】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；GIG16遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５１】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；GIG24遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５２】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；GIG26遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５３】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；GIG29遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５４】野生型MCF-7細胞；GIG32遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５５】野生型MCF-7細胞；GIG33遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５６】野生型MCF-7細胞；GIG34遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５７】野生型MCF-7細胞；GIG35遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５８】野生型MCF-7細胞；GIG38遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１５９】野生型MCF-7細胞；GIG39遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６０】野生型MCF-7細胞；PIG49遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６１】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；GIG40遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６２】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；GIG42遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６３】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；GIG43遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６４】野生型HeLa細胞；GIG46遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHeLa細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６５】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；PIG33遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６６】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；PIG35遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６７】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；PIG36遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６８】野生型HeLa細胞；MIG20遺伝子をトランスフェクトしたHeLa子宮癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHeLa細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１６９】野生型MCF-7細胞；PIG33遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１７０】野生型MCF-7細胞；GIG44遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１７１】野生型A549肺癌株化細胞；MIG12遺伝子をトランスフェクトしたA549肺癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたA549細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１７２】野生型HepG2肝臓癌株化細胞；PIG37遺伝子をトランスフェクトしたHepG2肝臓癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたHepG2細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１７３】野生型MCF-7細胞；GIG8遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１７４】野生型MCF-7細胞；GIG31遺伝子をトランスフェクトしたMCF-7乳癌細胞；および発現ベクターpcDNA3.1をトランスフェクトしたMCF-7細胞の増殖曲線を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
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【図８９】
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【図９０】
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【図９１】
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【図９２】
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【図９３】
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【図９４】
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【図９５】
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【図９６】
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【図９７】
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【図９８】
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【図９９】
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【図１００】
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【図１０１】
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【図１０２】
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【図１０３】
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【図１０４】
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【図１０５】
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【図１０６】
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【図１０７】
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【図１０８】
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【図１０９】
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【図１１０】
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【図１１１】
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【図１１２】
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【図１１３】
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【図１１４】
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【図１１５】
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【図１１６】
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【図１１７】
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【図１１８】
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【図１１９】
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【図１２０】
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【図１２１】
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【図１２２】
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【図１２３】
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【図１２４】
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【図１２５】
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【図１２６】
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【図１２７】
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【図１２８】
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【図１２９】
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【図１３０】
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【図１３１】
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【図１３２】
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【図１３３】
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【図１３４】
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【図１３５】
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【図１３６】
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【図１３７】
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【図１３８】
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【図１３９】
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【図１４０】
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【図１４１】
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【図１４２】
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【図１４３】
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【図１４４】
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【図１４７】
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【図１４８】
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【図１４９】
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【図１５０】
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【図１５１】
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【図１５２】
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【図１５３】
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【図１５４】
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【図１５５】
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【図１５６】
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【図１５８】
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【図１５９】
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【図１６０】
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【図１６１】
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【図１６２】
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【図１６３】
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【図１６４】
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【図１６５】
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【図１６６】
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【図１６７】
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【図１６８】
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【図１６９】
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【図１７０】
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【図１７１】
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【図１７２】
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【図１７３】
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【図１７４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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