(57)【要約】【課題】  ラテラルフローアッセイのための正確な内部較正システムを提供する。【解決手段】  試験サンプル内の試験検体を検出するためにラテラルフローアッセイ装置及び複数のアッセイ試薬を用いる診断キット。アッセイ試薬は、試験サンプル中の試験検体の存在又は量を表す検出信号を生成することができる検出プローブを含む。検出精度を更に高めるために、較正検体の存在又は量を表す較正信号を生成することができる較正プローブも用いられる。較正信号を利用して検出信号を較正することができる。【選択図】      図１
2008534956.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験サンプル内の試験検体の存在又は量を検出するための診断キットであって、
該診断キットは、ラテラルフローアッセイ装置と複数のアッセイ試薬とから構成され、
該ラテラルフローアッセイ装置は、検出区域及び較正区域を形成する多孔性膜を含み、該検出区域内に第１の受容材料が不動化され、該較正区域内に第２の受容材料が不動化されており、
該アッセイ試薬の１つ又はそれよりも多くが該ラテラルフローアッセイ装置上に配置されており、かつ該アッセイ試薬は、較正検体、検出プローブ及び較正プローブを含み、該検出プローブは、該試験検体、該第１の受容材料又はそれらの組合せと優先的に結合するように構成された第１の特異的結合メンバーに接合されており、該較正プローブは、該較正検体、該第２の受容材料又はそれらの組合せと優先的に結合するように構成された第２の特異的結合メンバーに接合されている、前記キット。
【請求項２】
前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー、前記第１の受容材料及び前記第２の受容材料が、免疫反応性結合メンバーである請求項１に記載の診断キット。
【請求項３】
前記較正検体及び前記試験検体が、同じタンパク質ファミリーのメンバーである請求項１又は２に記載の診断キット。
【請求項４】
前記較正検体及び前記試験検体が、異なるタンパク質ファミリーのメンバーである請求項１又は２に記載の診断キット。
【請求項５】
前記試験検体、前記較正検体又はその両方が、ペントラキシンタンパク質である請求項１〜４のいずれか１項に記載の診断キット。
【請求項６】
前記試験検体が、Ｃ反応性タンパク質である請求項５に記載の診断キット。
【請求項７】
前記較正検体が、ホスホコリン結合ペントラキシンタンパク質である請求項５に記載の診断キット。
【請求項８】
前記第１の特異的結合メンバーが、前記試験検体と結合するように構成され、前記第２の特異的結合メンバーが、前記較正検体と結合するように構成されている請求項１〜７のいずれか１項に記載の診断キット。
【請求項９】
前記第１の受容材料が、前記試験検体と結合してサンドイッチ錯体を形成するように構成されており、前記第２の受容材料が、前記較正検体と結合してサンドイッチ錯体を形成するように構成されている請求項８に記載の診断キット。
【請求項１０】
前記第１の受容材料及び試験検体が、前記第１の特異的結合メンバーと競合的に結合するように構成されており、前記第２の受容材料及び較正検体が、前記第２の特異的結合メンバーと競合的に結合するように構成されている請求項８に記載の診断キット。
【請求項１１】
前記第１の特異的結合メンバー及び前記試験検体が、前記第１の受容材料と競合的に結合するように構成されており、前記第２の特異的結合メンバー及び前記較正検体が、前記第２の受容材料と競合的に結合するように構成されている請求項１〜７のいずれか１項に記載の診断キット。
【請求項１２】
前記較正区域が、前記検出区域の下流に位置している請求項１〜１１のいずれか１項に記載の診断キット。
【請求項１３】
前記ラテラルフローアッセイ装置が、前記多孔性膜と流体連通した接合パッドを更に含み、
前記アッセイ試薬の１つ又はそれよりも多くが、前記接合パッド上に配置されている、
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の診断キット。
【請求項１４】
前記検出プローブ及び較正プローブが、前記接合パッド上に配置されている請求項１３に記載の診断キット。
【請求項１５】
前記接合パッドの上流に配置されており、かつ前記試験サンプルを適用する箇所を画成するサンプルパッドを更に含み、
前記較正検体が、前記サンプルパッド上に配置されている、
請求項１３又は１４に記載の診断キット。
【請求項１６】
第１の特異的結合メンバーに接合した検出プローブと第２の特異的結合メンバーに接合した較正プローブとに連通して検出区域及び較正区域を形成する多孔性膜を含むラテラルフロー装置を用いて、試験サンプル内の試験検体を定量的又は半定量的に検出する方法であって、
ｉ）ラテラルフロー装置を較正検体に接触させる工程と、
ｉｉ）前記ラテラルフロー装置を試験サンプルに接触させる工程と、
ｉｉｉ）検出区域で生成された検出信号の強度を測定する工程と、
ｉｖ）較正区域で生成された較正信号の強度を測定する工程と、
を含み、
試験検体の量が、前記較正信号の前記強度で較正したときの前記検出信号の前記強度に比例する、前記方法。
【請求項１７】
前記ラテラルフロー装置と接触させる前に前記較正検体を前記試験サンプルと混合する工程を更に含む請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
較正検体と、第１の特異的結合メンバーに接合した検出プローブと、第２の特異的結合メンバーに接合した較正プローブとに連通して検出区域及び較正区域を形成する多孔性膜を含むラテラルフロー装置を用いて、試験サンプル内の試験検体を定量的又は半定量的に検出する方法であって、
ｉ）ラテラルフロー装置を試験サンプルに接触させる工程と、
ｉｉ）検出区域で生成された検出信号の強度を測定する工程と、
ｉｉｉ）較正区域で生成された較正信号の強度を測定する工程と、
を含み、
試験検体の量が、前記較正信号の前記強度で較正した時の前記検出信号の前記強度に比例する、前記方法。
【請求項１９】
前記試験検体の前記量が、前記較正信号の前記強度で較正した時の前記検出信号の前記強度に正比例する請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記試験検体の前記量が、前記較正信号の前記強度で較正した時の前記検出信号の前記強度に反比例する請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
複数の所定の検体濃度に対して前記較正信号強度に対する前記検出信号強度の比をプロットすることによって較正曲線を作成する工程を更に含む請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
試験サンプルに存在すると考えられる検体の存在及び／又は濃度を判断するために、アッセイには様々な分析的手順及び装置が一般的に用いられる。例えば、イムノアッセイは、病原性であるか又は生物体に対して異物である抗原の存在に応答して抗体が生成される免疫系の機構を用いる。これらの抗体及び抗原、すなわち、免疫反応物質は、互いに結合することができ、それによって生物学的サンプル中のその特定の抗原の存在又は濃度を判断するのに用いることができる非常に特異的な反応機構を引き起こすことができる。
【０００２】
検体を分析的に検出することができるように検出可能な成分でラベル付けした免疫反応物質を用いるいくつかの公知のイムノアッセイ法が存在する。例えば、「サンドイッチ型」アッセイ型式は、一般的に、試験サンプルを、検体が検体と接合プローブの間に錯体を形成するための特異的結合メンバー（例えば、抗体）に接合した検出プローブと混合する工程を含む。これらの錯体は、次に、検出区域内に不動化された受容材料（例えば、抗体）と接触させられる。検体／プローブ接合錯体と不動化された受容材料の間に結合が起こると、それによって検体の存在を示すのに検出可能な「サンドイッチ」錯体が局在化する。この技術を用いて、定量的又は半定量的な結果を得ることができる。このようなサンドイッチ型アッセイの一部の例は、Ｇｒｕｂｂ他に付与された米国特許第４，１６８，１４６号、及びＴｏｍ他に付与された第４，３６６，２４１号に説明されている。代替的な技術は、「競合型」アッセイである。競合的アッセイでは、ラベル付けされたプローブは、一般的に、検体と同一又は類似する分子に接合される。従って、ラベル付けプローブは、利用可能な受容材料に関して関連の検体と競合する。競合的アッセイは、一般的に、ハプテンのような検体を検出するのに用いられ、各ハプテンは一価であり、かつ１つの抗体分子とのみ結合することができる。競合的イムノアッセイ装置の例は、Ｄｅｕｔｓｃｈ他に付与された米国特許第４，２３５，６０１号、Ｌｉｏｔｔａに付与された第４，４４２，２０４号、及びＢｕｅｃｈｌｅｒ他に付与された第５，２０８，５３５号に説明されている。
【０００３】
これらのアッセイの多くは、特に半定量的及び定量的検出に対して有効で意味のある結果を得るために較正に依存する。外部較正システムでは、通常は、一連の既知の量の検体を含有する標準サンプルから標準曲線が得られ、その後、サンプルから得られた結果を標準曲線と比較し、サンプル中の検体の存在及び／又は量を抽出する。外部較正法は、設計することが比較的容易で実施することが簡単である。しかし、これは、環境からの干渉及びバッチ毎の変動性を受けることが多く、従って、信頼性がない。
【０００４】
従って、これらの問題を克服するために、一部の内部較正システムが開発されている。例えば、Ｓｅｌｍｅｒ他に付与された米国特許第５，３８７，５０３号は、既知の容積のサンプルを所定の量の較正用検体と混合し、この混合物を固形支持体に接触させる工程を伴う内部較正技術を説明している。固形支持体は、第１の個別の区域の試験検体を選択的に結合することができる試薬と、第２の個別の区域の較正用検体を選択的に結合することができる試薬とを含有する。試験検体のためのラベル付けされた試薬及び較正用検体のための同様のラベル付け試薬の混合物も固形支持体に適用される。サンプル中の試験検体の量は、それぞれ試験及び較正用検体に結合されたラベル付け試薬のレベルを比較することによって判断される。不都合なことには、このような内部較正技術は、クロマトグラフ法を用いる検体の不均一な分離を伴うラテラルフロー装置に容易に組み込まれるわけではない。更に、アッセイ試薬を予め混合する要件は、特に、最終的な使用者が訓練を受けた医療専門家又は技術者でない処置時点用途では、厄介で複雑すぎる。
従って、正確であり、しかも比較的廉価かつ単純で用いるのが容易なラテラルフローアッセイのための正確な内部較正システムに対する必要性が現在存在している。
【発明の開示】
【０００５】
本発明の一実施形態により、試験サンプル内の試験検体の存在又は量を判断するための診断キットを開示する。診断キットは、多孔性膜を含むラテラルフローアッセイ装置を含む。多孔性膜は、検出区域及び較正区域を形成する。第１の受容材料が、検出区域内に不動化され、第２の受容材料が、較正区域内に不動化される。ラテラルフローアッセイ装置以外に、診断キットは、複数のアッセイ試薬も含み、その１つ又はそれよりも多くは、ラテラルフローアッセイ装置上に配置される。アッセイ試薬は、較正検体、検出プローブ、及び較正プローブを含む。検出プローブには、試験検体、第１の受容材料、又はその組合せに優先的に結合するように構成された第１の特異的結合メンバーが接合されている。較正プローブには、較正検体、第２の受容材料、又はその組合せに優先的に結合するように構成された第２の特異的結合メンバーが接合されている。
【０００６】
本発明の別の実施形態により、ラテラルフロー装置を用いて試験検体を定量的又は半定量的に検出する方法を開示する。装置は、第１の特異的結合メンバーに接合した検出プローブと、第２の特異的結合メンバーに接合した較正プローブとに連通した多孔性膜を含む。多孔性膜はまた、検出区域及び較正区域も形成する。本方法は、ラテラルフロー装置を較正検体に接触させる工程と、ラテラルフロー装置を試験サンプルに接触させる工程と、検出区域で生成された検出信号の強度を測定する工程と、較正区域で生成された較正信号の強度を測定する工程とを含む。試験検体の量は、較正信号の強度で較正された時の検出信号の強度に比例する。
【０００７】
本発明の更に別の実施形態により、ラテラルフロー装置を用いて試験検体を定量的又は半定量的に検出する方法を開示する。装置は、較正検体と、第１の特異的結合メンバーに接合した検出プローブと、第２の特異的結合メンバーに接合した較正プローブとに連通した多孔性膜を含む。多孔性膜はまた、検出区域及び較正区域も形成する。本方法は、ラテラルフロー装置を試験サンプルに接触させる工程と、検出区域で生成された検出信号の強度を測定する工程と、較正区域で生成された較正信号の強度を測定する工程とを含む。試験検体の量は、較正信号の強度で較正された時の検出信号の強度に比例する。
本発明の他の特徴及び態様を以下でより詳細に説明する。
当業者向けの本発明の最良のモードを含むその完全かつ権限賦与する開示内容は、添付図面を参照する本明細書の残りの部分により詳細に示すものとする。
本明細書及び図面で繰返して用いる参照文字は、本発明の同じか又は類似の特徴又は要素を表すものとする。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
定義
本明細書において、「検体」という用語は、一般的に、検出される物質を意味する。例えば、検体は、抗原性物質、ハプテン、抗体、及びその組合せを含むことができる。検体には、以下に限定されるものではないが、毒素、有機化合物、タンパク質、ペプチド、微生物、アミノ酸、核酸、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬物（治療目的で投与されるもの、並びに違法な目的で投与されるものを含む）、薬物中間物又は副産物、細菌、ウイルス粒子、及び以上の物質のいずれかの代謝産物又は抗体が含まれる。一部の検体の特定の例には、フェリチン；クレアチニンキナーゼＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）；ジゴキシン；フェニトイン；フェノバルビタール；カルバマゼピン；バンコマイシン；ゲンタマイシン；テオフィリン；バルプロ酸；キニジン；黄体形成ホルモン（ＬＨ）；卵胞茂樹ホルモン（ＦＳＨ）；エストラジオール、プロゲステロン；Ｃ反応性タンパク質；リポカリン；ＩｇＥ抗体；サイトカイン；ビタミンＢ２マイクログロブリン；糖化ヘモグロビン（Ｇｌｙ．Ｈｂ）；コルチゾール；ジギトキシン；Ｎ−アセチルプロカインアミド（ＮＡＰＡ）；プロカインアミド；風疹−ＩｇＧ及び風疹ＩｇＭのような風疹抗体；トキソプラズマ症ＩｇＧ（Ｔｏｘｏ−ＩｇＧ）及びトキソプラズマ症ＩｇＭ（Ｔｏｘｏ−ＩｇＭ）のようなトキソプラズマ症抗体；テストステロン；サリチレート；アセトアミノフェン；Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）；抗Ｂ型肝炎コア抗原ＩｇＧ及びＩｇＭ（抗ＨＢＣ）のようなＢ型肝炎コア抗原抗体；ヒト免疫不全ウイルス１型及び２型（ＨＩＶ１型及び２型）；ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型及び２型（ＨＴＬＶ）；肝炎Ｂｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）；肝炎Ｂｅ抗原抗体（抗ＨＢｅ）；インフルエンザウイルス；甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）；チロキシン（Ｔ４）；トータルトリヨードチロニン（トータルＴ３）；フリートリヨードチロニン（フリーＴ３）；ガン胎児性抗原（ＣＥＡ）；リポタンパク質、コレステロール、及びトリグリセリド；及びαフェトプロテイン（ＡＦＰ）が含まれる。乱用薬物及び規制物質には、限定することを意図しないが、アンフェタミン；メタンフェタミン；アモバルビタール、セコバルビタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、及びバルビタールのようなバルビツレート；リブリウム及びバリウムのようなベンゾジアゼピン；ハシシュ及びマリファナのようなカンナビノイド；コカイン；フェンタニール；ＬＳＤ；メタカロン；ヘロイン、モルヒネ、コデイン、ヒドロモルフォン、ヒドロコドン、メサドン、オキシコドン、オキシモルフォン及びアヘンのようなオピエート；フェンシクリジン；及びプロポキシフェンが含まれる。他の可能な検体は、Ｅｖｅｒｈａｒｔ他に付与された米国特許第６，４３６，６５１号、及びＴｏｍ他に付与された第４，３６６，２４１号に説明されていると考えられる。
【０００９】
本明細書において、「試験サンプル」という用語は、一般的に、検体を含有することが疑われる生物学的材料を意味する。試験サンプルは、血液、間質液、唾液、眼水晶体液、脳脊髄液、汗、尿、乳汁、腹水、粘液、鼻汁、痰、滑液、腹腔液、膣液、月経、羊水、及び精液などを含む生理液のようなあらゆる生物学的供給源からの由来とすることができる。生理液以外に、環境又は食品アッセイを行うために、水及び食品などのような他の液体サンプルを用いることもできる。更に、検体を含有することが疑われる固体材料も試験サンプルとして用いることができる。試験サンプルは、生物学的供給源から得られた時に直接用いることができ、又はサンプルの特性を修正する前処理の後に用いることができる。例えば、このような前処理には、血液から血漿を調製する工程及び粘性流体を希釈する工程などを含むことができる。前処理の方法はまた、濾過、沈殿、希釈、蒸留、濃縮、妨害成分の不活化、試薬の添加、溶解などを伴う場合がある。更に、固体試験サンプルを修正して液体媒体を形成するか又は検体を放出することも有利である場合がある。
【００１０】
詳細な説明
ここで、１つ又はそれよりも多くの実施例を以下に示す本発明の様々な実施形態を詳細に以下に参照する。各実施例は、本発明の説明のために挙げたものであり、本発明を制限するものではない。実際、本発明には、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく様々な修正及び変形を行うことができることが当業者には明らかであろう。例えば、一実施形態の一部として示すか又は説明する特徴を別の実施形態に用いて更に別の実施形態を生成することができる。従って、本発明は、特許請求の範囲及びその均等物の範囲に含まれるこのような修正及び変形を網羅するものとする。
【００１１】
一般的に、本発明は、試験サンプル内の試験検体を検出するためのラテラルフローアッセイ装置及び複数のアッセイ試薬を用いる診断キットに関する。アッセイ試薬には、試験サンプル中の試験検体の存在又は量を表す検出信号を生成することができる検出プローブが含まれる。検出精度を更に改善するために、較正信号を生成することができる較正プローブも用いられる。較正信号を用いて検出信号を較正することができる。
【００１２】
較正検体は、試験検体と較正検体とが容易に区別されるように、通常は、試験サンプルに対して異物であるか、又は一定の濃度で存在するかのいずれかである。更に、較正検体は、試験検体に対してｐＨ、温度、塩濃度等の条件に関して同様の分解プロフィール（又は経時的に活性が失われること）を示すことも通常望ましい。このようにして、較正検体は、較正検体の較正曲線が試験検体の較正曲線と実質的に同様とされることになるように、同じ反応条件及び保存時間では同様の挙動を示すことになる。必要に応じて、例えば、較正検体は、試験検体と同じタンパク質ファミリーのメンバーとすることができる。一実施形態では、試験検体は、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）であり、これは、連鎖球菌肺炎の体細胞性Ｃ多糖類と共に沈殿物を形成するグロブリンである。ＣＲＰは、タンパク質の「ペントラキシン」群に属し、これは、５つの非共有結合サブユニットの５角形の周期的対称を有するオリゴマーの血漿タンパク質である。「ペントラキシン（pentraxin）」ファミリー、すなわち、「ＣＲＰ状」タンパク質及び血清アミロイドＰ（ＳＡＰ）状タンパク質には、２つの共通する分岐がある。ホスホコリンに結合するタンパク質は、ＣＲＰ状であると考えられ、炭水化物成分に結合するタンパク質は、ＳＡＰ状であると考えられる。従って、ＣＲＰが試験検体である実施形態では、選択した較正検体は、ペントラキシン群のメンバーとすることができ、より望ましくは、ホスホコリンと結合するペントラキシンタンパク質とすることができる。このようなホスホコリン結合ペントラキシンタンパク質の例の一部には、以下に限定されるものではないが、ペントラキシン３（ＰＴＸ３）、ニューロンペントラキシン１、及びニューロンペントラキシン２が含まれる。例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｓ．Ｒｏｌｐｈ他著「動脈硬化、血栓症、及び血管生物学：進行型アテローム硬化プラークにおける長いペントラキシンＰＴＸ３の生成」、２００２年、２２：ｅ１０を参照されたい。しかし、較正検体が試験検体と同じ群のメンバーであることは必ずしも必要ではない。実際、多くの用途は、低レベルの較正精度しか必要でなく、従って、比較的廉価で容易に入手可能な較正検体を用いることができる。一実施形態では、例えば、ＣＲＰに対する較正検体は、アルブミン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、β−カゼイン、又はｈＣＧのようなタンパク質の非ペントラキシン群（例えば、二量体、三量体等）から選択されるタンパク質とすることができ、その全ては、ＣＲＰと同様の分解プロフィールを有すると考えられている。
【００１３】
上述のように、本発明では、試験検体及び較正検体をそれぞれ検出するために、検出及び較正プローブが用いられる。較正プローブは、一般的に、検出プローブと同じ種類の検出可能な物質を含む。検出又は較正プローブとして、視覚的に又は計器装置により検出可能な信号を生成することができるあらゆる物質を用いることができる。適切な検出可能物質は、例えば、発光化合物（例えば、蛍光、燐光等）；放射性化合物；可視化合物（例えば、着色染料又は金のような金属物質）；リポゾーム又は信号生成物質を含む他の小胞；酵素及び／又は基質などを含むことができる。他の適切な検出可能物質は、Ｊｏｕ他に付与された米国特許第５，６７０，３８１号、及びＴａｒｃｈａ他に付与された第５，２５２，４５９号に説明されていると考えられ、これらは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。検出可能物質が有色である場合には、理想的な電磁放射は、相補的な波長の光である。例えば、青色の検出プローブは、赤色光を強力に吸収する。
【００１４】
一部の実施形態では、検出可能物質は、光学的に検出可能な信号を生成する発光化合物とすることができる。例えば、適切な蛍光分子は、以下に限定されるものではないが、蛍光色素、ユウロピウムキレート、フィコビリタンパク質、ローダミン、及びその誘導体及び類似物を含むことができる。他の適切な蛍光化合物は、一般的に「量子ドット」と呼ばれる半導体ナノ結晶である。例えば、このようなナノ結晶は、式ＣｄＸ（ここで、Ｘは、Ｓｅ、Ｔｅ、及びＳなどである）のコアを含むことができる。更に、ナノ結晶は、式ＹＺ（ここで、Ｙは、Ｃｄ又はＺｎ、Ｚは、Ｓ又はＳｅである）の上を覆うシェルで不動態化することができる。更に、適切な半導体ナノ結晶の他の例は、Ｂａｒｂｅｒａ−Ｇｕｉｌｌｅｍ他に付与された米国特許第６，２６１，７７９号、及びＤａｐｐｒｉｃｈに付与された第６，５８５，９３９号に説明されていると考えられ、これらは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。
【００１５】
更に、適切な蛍光化合物は、ルテニウム、オスミウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、プラチナ、インジウム、パラジウム、モリブデン、テクネチウム、銅、鉄、クロム、タングステン、及び亜鉛などのような１つ又はそれよりも多くの金属の金属錯体を含むことができる。特に好ましいのは、ルテニウム、レニウム、オスミウム、プラチナ、及びパラジウムである。金属錯体は、水性又は非水性環境での錯体の溶解度を高める１つ又はそれよりも多くの配位子を含むことができる。例えば、配位子の一部の適切な例には、以下に限定されるものではないが、ピリジン；ピラジン；イソニコチンアミド；イミダゾール；ビピリジン；ターピリジン；フェナントロリン；ジピリドフェナジン；ポルフィリン、ポルフィン、及びその誘導体が含まれる。このような配位子は、例えば、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、カルボキシレート、カルボキサルデヒド、カルボキサミド、シアノ、アミノ、ヒドロキシ、イミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、アミジン、グアニジン、ウレイド、イオウ含有基、リン含有基、及びＮヒドロキシスクシンイミドのカルボン酸エステルで置換することができる。
【００１６】
ポルフィリン及びポルフィン金属錯体は、メチレン橋と共に連結して環状構造を形成するピロール基を有し、金属が内腔をキレート化する。これらの分子の多くは、室温で適切な溶媒（例えば、水）中かつ無酸素の環境で強い燐光特性を示している。燐光特性を示すことができる一部の適切なポルフィリン錯体には、以下に限定されるものではないが、プラチナ（ＩＩ）コプロポルフィリンＩ及びＩＩＩ、パラジウム（ＩＩ）コプロポルフィリン、ルテニウムコプロポルフィリン、亜鉛（ＩＩ）−コプロポルフィリンＩ、及びその誘導体等が含まれる。同様に、燐光特性を示すことができる一部の適切なポルフィン錯体には、以下に限定されるものではないが、プラチナ（ＩＩ）テトラ−メソ−フルオロフェニルポルフィン及びパラジウム（ＩＩ）テトラ−メソ−フルオロフェニルポルフィンが含まれる。更に別の適切なポルフィリン及び／又はポルフィン錯体は、Ｓｃｈｍｉｄｔ他に付与された米国特許第４，６１４，７２３号；Ｈｅｎｄｒｉｘに付与された第５，４６４，７４１号；Ｓｏｉｎｉに付与された第５，５１８，８８３号；Ｅｗａｒｔ他に付与された第５，９２２，５３７号；Ｓａｇｎｅｒ他に付与された第６，００４，５３０号；及びＰｏｎｏｍａｒｅｖ他に付与された第６，５８２，９３０号に説明されており、これらは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。
【００１７】
また、燐光化合物としてビピリジン金属錯体を用いることができる。適切なビピリジン錯体の一部の例には、以下に限定されるものではないが、ビス［（４，４’−カルボメトキシ）−２，２’−ビピリジン］２−［３−（４−メチル−２，２’−ビピリジン−４−イル）プロピル］−１，３−ジオキソランルテニウム（ＩＩ）；ビス（２，２’ビピリジン）［４−（ブタン−１−アール）−４’−メチル−２，２’−ビ−ピリジン］ルテニウム（ＩＩ）；ビス（２，２’−ビピリジン）［４−（４’−メチル−２，２’−ビピリジン−４’−イル）−酪酸］ルテニウム（ＩＩ）；トリス（２，２’ビピリジン）ルテニウム（ＩＩ）；（２，２’−ビピリジン）［ビス−ビス（１，２−ジフェニルホスフィノ）エチレン］２−［３−（４−メチル−２，２’−ビピリジン−４’−イル）プロピル］−１，３−ジオキソランオスミウム（ＩＩ）；ビス（２，２’−ビピリジン）［４−（４’−メチル−２，２’−ビピリジン）−ブチルアミン］ルテニウム（ＩＩ）；ビス（２，２’−ビピリジン）［１−ブロモ−４（４’−メチル−２，２’−ビピリジン−４−イル）ブタン］ルテニウム（ＩＩ）；ビス（２，２’−ビピリジン）マレイミドヘキサン酸、及び４−メチル−２，２’−ビピリジン−４’−ブチルアミドルテニウム（ＩＩ）等が含まれる。燐光特性を示すことができる更に別の適切な金属錯体は、Ｒｉｃｈｔｅｒ他に付与された米国特許第６，６１３，５８３号；Ｍａｓｓｅｙ他に付与された第６，４６８，７４１号；Ｍｅａｄｅ他に付与された第６，４４４，４２３号；Ｍａｓｓｅｙ他に付与された第６，３６２，０１１号；Ｂａｒｄ他に付与された第５，７３１，１４７号；及びＭａｓｓｅｙ他に付与された第５，５９１，５８１号に説明されていると考えられ、これらは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。
【００１８】
場合によっては、発光化合物は、比較的長い放出寿命及び比較的大きな「ストークスシフト」を有することができる。「ストークスシフト」という用語は、一般的に、発光放射のスペクトル線又は帯域を励起線又は帯域よりも長い放出波長に偏倚させることであると定められる。ストークスシフトが比較的大きければ、発光化合物の励起波長は、その放出波長から遠く離れて留まることができ、かつこれは、励起波長と放出波長の間の差が大きいと放出信号から反射励起放射を消失させることが容易になるので望ましい。更に、ストークスシフトが大きければ、サンプル中の発光分子からの妨害及び／又は体液の一部（例えば、血液）に存在するタンパク質又はコロイドによる光散乱が最低になる。更に、ストークスシフトが大きければ、背景干渉を消失させるための高価な高精度フィルタの必要性も最低になる。例えば、一部の実施形態では、発光化合物のストークスシフトは、約５０ナノメートルよりも大きく、一部の実施形態では、約１００ナノメートルよりも大きく、一部の実施形態では、約１００〜約３５０ナノメートルである。
【００１９】
例えば、ストークスシフトが大きな例示的な燐光化合物には、サマリウム（Ｓｍ（ＩＩＩ））、ジスプロシウム（Ｄｙ（ＩＩＩ））、ユウロピウム（Ｅｕ（ＩＩＩ））、及びテルビウム（Ｔｂ（ＩＩＩ））のランタニドキレートが含まれる。このようなキレートは、実質的に短い波長でキレートを励起した後には、強く赤方シフトした狭帯域の長寿命放出を示すことができる。一般的に、キレートは、分子内のランタニドの近くに位置する発色団のために、強い紫外線励起帯域を有する。発色団による励起に続き、励起エネルギは、励起発色団からランタニドに移行することができる。この後、ランタニドの燐光放出特性が生じる。例えば、ユウロピウムキレートのストークスシフトは、燐光色素に対しては僅か約２８ナノメートルであることに比較して、約２５０〜約３５０ナノメートルである。更に、ユウロピウムキレートの燐光は、長寿命であり、寿命は、他の燐光ラベル付けでは約１〜約１００ナノ秒であるのに比較して、約１００〜約１０００マイクロ秒である。更に、これらのキレートは、狭い放出スペクトルを有し、一般的に、帯域幅は約５０％放出で約１０ナノメートル未満である。適切なユウロピウムキレートの１つは、Ｎ−（ｐ−イソチオシアナトベンジル）−ジエチレントリアミン四酢酸−Ｅｕ+3である。
【００２０】
また、本発明には、溶解度が限定されており水溶液又は懸濁液の急冷問題を有するキレートを保護するために用いられることが多いミセル形成試薬の必要性をなくすために、水溶液又は懸濁液中で不活性かつ安定であり、本質的に蛍光性であるランタニドキレートを用いることができる。このようなキレートの一例は、４−［２−（４−イソチオシアナトフェニル）エチニル］−２，６−ビス（［Ｎ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）アミノ］メチル）−ピリジンである［参照：Ｌｏｖｇｒｅｎ，Ｔ．他、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、第４２巻、１１９６〜１２０１頁（１９９６年）］。更に、いくつかのランタニドキレートは、例外的に高いＳＮ比も示している。例えば、このようなキレートの１つは、四座β−ジケトネート−ユウロピウムキレートである［参照：Ｙｕａｎ，Ｊ．及びＭａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｋ．、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、第７０巻、５９６〜６０１頁（１９９８）］。上述の蛍光ラベル付けに加えて、本発明に用いるのに適切な他のラベル付けは、Ｍｕｌｌｉｎａｘ他に付与された米国特許第６，０３０，８４０号；Ｄａｖｉｄｓｏｎに付与された第５，５８５，２７９号；Ｓｉｎｇｅｒ他に付与された第５，５７３，９０９号；Ｗｉｅｄｅｒ他に付与された第６，２４２，２６８号；及びＨｅｍｍｉｌａ他に付与された第５，６３７，５０９号に説明されていると考えられ、これらは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。
【００２１】
上述のような検出可能物質は、単独で用いることができ、又は粒子（「ビーズ」又は「マイクロビーズ」と呼ばれることもある）と組み合わせて用いることができる。例えば、核、マイコプラズマ、プラスミド、プラスチド、哺乳類細胞（例えば、赤血球ゴースト）、単細胞生物（例えば、細菌）、多糖類（例えば、アガロース）などのような天然からの粒子を用いることができる。更に、合成粒子を用いることもできる。例えば、一実施形態では、蛍光又は有色染料でラベル付けされたラテックス微粒子が用いられる。本発明にはあらゆる合成粒子を用いることができるが、粒子は、一般的に、ポリスチレン、ブタジエンスチレン、スチレンアクリル−ビニルターポリマー、ポリメチルメタクリレート、ポリエチルメタクリレート、スチレン−無水マレイン酸コポリマー、ポリビニルアセテート、ポリビニルピリジン、ポリジビニルベンゼン、ポリブチレンテレフタレート、アクリロニトリル、塩化ビニル−アクリレートなど、又はそのアルデヒド、カルボキシル、アミノ、ヒドロキシル、又はヒドラジド誘導体で形成される。他の適切な粒子は、Ｊｏｕ他に付与された米国特許第５，６７０，３８１号及びＴａｒｃｈａ他に付与された第５，２５２，４５９号に説明されていると考えられる。適切な蛍光粒子の市販の例には、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．」により商品名「ＦｌｕｏＳｐｈｅｒｅ」（赤色５８０／６０５）及び「ＴｒａｎｓｆｌｕｏＳｐｈｅｒｅ」（５４３／６２０）で販売されている蛍光カルボキシル化微小球、並びにこれも「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．」により販売されている「Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ」及び５−及び６−カルボキシテトラメチルローダミンが含まれる。更に、適切な着色ラテックス微粒子の市販の例には、「Ｂａｎｇ’ｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｉｎｃ．」により販売されているカルボキシル化ラテックスビーズが含まれる。更に、本発明には、金属粒子（例えば、金粒子）を用いることができる。
【００２２】
用いる場合には、粒子の形状は、一般的に様々とすることができる。例えば、１つの特定的な実施形態では、粒子の形状は球形である。しかし、本発明では、板状、ロッド、円板、バー、管、不規則な形状などのような他の形状も意図されることを理解すべきである。更に、粒子の大きさも様々とすることができる。例えば、粒子の平均の大きさ（例えば、直径）は、約０．１ナノメートル〜約１，０００ミクロンとすることができ、一部の実施形態では、約０．１ナノメートル〜約１００ミクロン、一部の実施形態では、約１ナノメートル〜約１０ミクロンとすることができる。
【００２３】
それぞれの検体又はそれぞれの受容材料に更に容易に結合することができるように、検出及び較正プローブを何らかの様式で修正することが一般的に望ましい。このような場合には、プローブは、接合プローブを形成するようにそれに付着する特定の特異的結合メンバーで修飾することができる。特異的結合メンバーとは、一般的に、特定の結合対、すなわち、分子の１つが化学的及び／又は物理的に第２の分子に結合する２つの異なる分子のメンバーを意味する。特異的結合メンバーの選択は、一般的に、関連の試験検体及び対応する較正検体に依存する。独立したアッセイの性能を保証するために、検出プローブには、較正プローブと異なる特異的な結合対のメンバーを接合されることが通常望ましい。従って、接合較正プローブは、較正検体に結合されるか（サンドイッチ及び間接アッセイ型式）又は較正検体に対する特異的結合メンバーに結合される（競合的アッセイ型式）ことが好ましいことになる。しかし、接合較正プローブは、一般的に試験検体にも結合されず、試験検体に対する特異的結合メンバーにも結合されないことになる。従って、アッセイは、実質的な交差反応の恐れなく試験検体及び較正検体に対して同時に実施することができ、従って、試験抗原を較正するのに較正検体アッセイを用いることができる。更に、較正検体と試験検体の間の関係と同様に、特異的結合メンバーは、ｐＨ、温度、塩濃度、保存時間等の条件に関して同様の分解プロフィールを示すことが通常望ましい。
【００２４】
本発明で用いることができる適切な免疫反応性特異的結合メンバーの一部の例には、以下に限定されるものではないが、抗原、ハプテン、アプタマー、抗体（１次又は２次）、及び組換えＤＮＡ法又はペプチド合成によって形成されるものを含むその錯体が含まれる。抗体は、単クローン性又は多クローン性抗体、組換えタンパク質又はその混合物又は断片、並びに抗体及び他の特異的結合メンバーの混合物とすることができる。このような抗体の調製の詳細及びそれが特異的結合メンバーとして用いるのに適することは、当業者には公知である。他のよく用いられる特異的結合対には、以下に限定されるものではないが、ビオチン及びアビジン（又はその誘導体）、ビオチン及びストレプトアビジン、炭水化物及びレクチン、相補的ヌクレオチド配列（ターゲット核酸配列を検出するのにＤＮＡハイブリッド形成アッセイに用いられるプローブ及び捕捉核酸配列を含む）、組換え法によって形成されたものを含む相補的ペプチド配列、エフェクター及びレセプター分子、ホルモン及びホルモン結合タンパク質、酵素補助因子及び酵素、及び酵素阻害剤及び酵素等が含まれる。更に、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似物であるメンバーを含むことができる。例えば、検体と少なくとも１つのエピトープを共通に有する限り、検体の誘導体又は断片、すなわち、検体類似物を用いることができる。
【００２５】
特異的結合メンバーは、一般的に、様々な公知の技術のいずれかを用いてプローブに付着させることができる。例えば、特異的結合メンバーが検出プローブ（例えば、粒子）に共有結合する工程は、カルボキシル、アミノ、アルデヒド、ブロモアセチル、ヨードアセチル、チオール、エポキシ及び他の反応基又は連結官能基、並びにタンパク質連結反応を達成することができる残留フリーラジカル及びラジカル陽イオンを用いて達成することができる。更に、プローブの表面は、比較的高い表面濃度の極性基を含むことができるために、官能化コモノマーとして表面官能基を組み込むことができる。更に、プローブは、合成後に、例えば、ポリ（チオフェノール）で官能化されることが多いが、プローブは、更に修飾することを必要とせずにタンパク質と直接共有結合することができることもある。例えば、一実施形態では、接合の第１の工程は、カルボジイミドを用いてプローブ表面上のカルボキシル基を活性化することである。第２の工程では、活性化カルボン酸基が抗体のアミノ基と反応してアミド結合を形成する。活性化及び／又は抗体連結は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（例えば、ｐＨ７．２）又は２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）（例えば、ｐＨ５．３）のような緩衝液中で行うことができる。得られるプローブは、次に、エタノールアミンと接触させ、例えば、あらゆる残りの活性化部位を遮断することができる。全体として、この工程では、抗体がプローブに共有的に付着する接合プローブを形成する。更に、本発明には、共有結合以外に、物理的吸着のような他の付着技術を用いることができる。
【００２６】
検出プローブ及び較正プローブが形成される方式に関係なく、これらは、一般的に、試験サンプルを適用する前にアッセイ装置上に配置される。プローブをアッセイ装置に事前に適用すると、様々な利益が得られる。例えば、事前に適用すると、次の使用者が試薬を処理して試験サンプル又は希釈剤と混合する必要がなくなる。これは、使用者が一般的に訓練された検査技術者又は医療専門家でない処置時点用途では、特に有用である。一部の実施形態では、例えば、検出及び較正プローブは、試験サンプルを適用する箇所から下流に配置される。従って、試験サンプルは、適用するときにプローブを混合して任意的に再懸濁することができる。あるいは、プローブは、試験サンプルを適用する箇所よりも上流に配置することができる。例えば、アッセイを行うために、希釈剤を用いてプローブを再懸濁することができる。同様に、試験サンプルを適用する前に、較正検体をアッセイ装置に配置することができる。特定の位置は様々とすることができるが、一般的に、較正検体は、検出プローブ及び較正プローブの上流に適用される。従って、較正検体は、較正プローブに接触する前に試験サンプルと容易に混合され、それによってその間の結合を促進することができる。更に、較正検体は、アッセイ装置に適用する前に試験サンプルと混合することができる。従って、較正検体は、アッセイを行う前に試験検体と実質的に同じ条件にされる。それによって較正精度を更に最適化することができる。
【００２７】
今度は図１を参照して、本発明の内部較正システムと共に用いることができるラテラルフローアッセイ装置２０の一実施形態をより詳細に以下に説明する。図示のように、装置２０は、任意的に剛性材料２１により支持された多孔性膜２３を含む。一般的に，多孔性膜２３は、試験サンプルが通過することができる様々な材料で作ることができる。例えば、多孔性膜２３を形成するのに用いられる材料には、以下に限定されるものではないが、天然、合成、又は多糖類（例えば、紙のようなセルロース材料及び酢酸セルロース及びニトロセルロースのようなセルロース誘導体）合成的に修飾された天然からの材料；ポリエーテルスルホン；ポリエチレン；ナイロン；ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）；ポリエステル；ポリプロピレン；シリカ；塩化ビニル、塩化ビニル−プロピレンコポリマー、及び塩化ビニル−ビニルアセテートコポリマーのようなポリマーの多孔性ポリマーマトリックス中に均一に分散された非活性化アルミナ、珪藻土、ＭｇＳＯ4、又は他の無機の微粉化材料のような無機材料；天然由来（例えば、綿）及び合成（例えば、ナイロン又はレーヨン）の両方の布；シリカゲル、アガロース、デキストラン、及びゼラチンのような多孔性ゲル；及びポリアクリルアミドのようなポリマーフィルムなど含むことができる。１つの特定的な実施形態では、多孔性膜２３は、ニトロセルロース及び／又はポリエーテルスルホン材料から形成される。「ニトロセルロース」という用語は、セルロースの硝酸エステルを意味し、これは、ニトロセルロース単独とすることができ、又は硝酸及び１〜７炭素原子を有する脂肪族カルボン酸のような他の酸の混合エステルとすることができることを理解すべきである。
【００２８】
多孔性膜２３の大きさ及び形状は、当業者には容易に理解されるように、一般的に様々とすることができる。例えば、多孔性膜ストリップの長さは、約１０〜約１００ミリメートルとすることができ、一部の実施形態では約２０〜約８０ミリメートル、一部の実施形態では、約４０〜約６０ミリメートルとすることができる。更に、膜ストリップの幅は、約０．５〜約２０ミリメートルの範囲とすることができ、一部の実施形態では約１〜約１５ミリメートル、一部の実施形態では、約２〜約１０ミリメートルの範囲とすることができる。同様に、膜ストリップの厚みは、一般的に、透過に基づく検出を可能にするほど十分に小さい。例えば、膜ストリップの厚みは、約５００マイクロメートル未満とすることができ、一部の実施形態では、約２５０マイクロメートル未満、一部の実施形態では、約１５０マイクロメートル未満とすることができる。
【００２９】
上述のように、支持体２１は、多孔性膜２３を支持する。例えば、支持体２１は、図１に示すように多孔性膜２３に直接隣接して位置決めすることができ、又は多孔性膜２３と支持体２１の間に１つ又はそれよりも多くの中間層を位置決めすることができる。とにかく、支持体２１は、一般的に、多孔性膜２３を支持することができるあらゆる材料で形成することができる。支持体２１は、透明又は光学的散乱性（例えば、半透明）のような光を伝達することができる材料で形成することができる。更に、一般的に、支持体２１は、膜２３を通って流れる流体が支持体２１を通って漏れないように液体不透過性であることが望ましい。支持体に適切な材料の例には、以下に限定されるものではないが、ガラス；及びポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエステル（例えば、「Ｍｙｌａｒ（登録商標）」フィルム）、ポリブタジエン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド、ポリカーボネート、エポキシド、メタクリレート、及びポリメラミンのようなポリマー材料などが含まれる。多孔性膜２３に十分な構造的支持を与えるために、支持体２１は、一般的に、ある一定の最小厚みを有するように選択される。同様に、支持体２１の厚みは、一般的に、その光学特性に悪影響を及ぼすほど大きくない。従って、例えば、支持体２１の厚みは、約１００〜約５，０００マイクロメートルの範囲とすることができ、一部の実施形態では、約１５０〜約２，０００マイクロメートル、一部の実施形態では、約２５０〜約１，０００マイクロメートルの範囲とすることができる。例えば、厚みが約１２５マイクロメートルの適切な膜ストリップの１つは、マサチューセッツ州ベッドフォード所在の「Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．」から「ＳＨＦ１８０ＵＢ２５」という商品名で得ることができる。
【００３０】
当業技術で公知のように、多孔性膜２３は、支持体２１上に流し込むことができ、得られる積層体は、望ましい大きさ及び形状にダイカットすることができる。あるいは、多孔性膜２３は、単に、例えば、接着剤で支持体２１に積層させることができる。一部の実施形態では、ニトロセルロース又はナイロンの多孔性膜が「Ｍｙｌａｒ（登録商標）」フィルムに接着される。感圧接着剤のような接着剤を用いて多孔性膜を「Ｍｙｌａｒ（登録商標）」フィルムに結合させる。この種類の積層体構造は、マサチューセッツ州ベッドフォード所在の「Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．」から市販されていると考えられる。適切な積層体アッセイ装置構造の更に他の例は、Ｄｕｒｌｅｙ，ＩＩＩ他に付与された米国特許第５，０７５，０７７号に説明されており、これは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。
また、装置２０は、吸収性パッド２８を含むこともできる。吸収性パッド２８は、一般的に、多孔性膜２３全体を通して移行した流体を受け取る。当業技術で公知のように、吸収性パッド２８は、膜２３を通る毛管作用及び流体の流れを促進するのを助けることができる。
【００３１】
試験サンプル中の検体の検出を開始するために、使用者は、試験サンプルを多孔性膜２３の一部に直接適用することができ、それを通して試験サンプルは、図１の矢印「Ｌ」で示す方向に進むことができる。あるいは、試験サンプルは、最初に多孔性膜２３と流体連通したサンプルパッド２４に適用することができる。サンプルパッド２４を形成するのに用いることができる一部の適切な材料には、以下に限定されるものではないが、ニトロセルロース、セルロース、多孔性ポリエチレンパッド、及びガラス繊維濾紙が含まれる。必要に応じて、サンプルパッド２４は、拡散性又は非拡散性のいずれかで付着した１つ又はそれよりも多くのアッセイ予備処理試薬を含むことができる。例えば、一実施形態では、較正検体は、それに適用されると試験サンプルに接触するようにサンプルパッド２４上に配置することができる。
【００３２】
図示の実施形態では、試験サンプルは、サンプルパッド２４からサンプルパッド２４の一端と連通するように配置された接合パッド２２まで進む。接合パッド２２は、試験サンプルが通過することができる材料で形成されている。例えば、一実施形態では、接合パッド２２は、ガラス繊維で形成される。１つの接合パッド２２しか示していないが、本発明には複数の接合パッドを用いることができることを理解すべきである。本発明の１つの特定的な実施形態では、検出及び較正プローブ（図示せず）は、接合パッド２２に適用される。適用した後、プローブを乾燥させてそれから移動しないようにする。接合パッド２２は、再水和されると自由に移動するようにプローブを堆積させるためのマトリックスを提供する。より詳細には、液体試験サンプルがプローブに接触すると、これらは、再水和されて再懸濁化及び／又は再可溶化される。勿論、プローブは、試験サンプルが接触すると再水和することができる限り、膜２３に直接のようなアッセイ装置２０の様々な他の部位に適用することができることを理解すべきである。
【００３３】
再び図１を参照すると、多孔性膜２３は、アッセイを行うために構成された様々な区域も形成する。例えば、多孔性膜２３は、膜２３の長さを通過する接合検出プローブ（又はその錯体）を結合することができる第１の受容材料を含む検出区域３１を形成する。第１の受容材料は、多孔性膜２３上に不動化され、かつ上述の特異的結合メンバーと同じ材料から選択することができ、これには、例えば、抗原；ハプテン；Ａタンパク質、Ｇタンパク質、又はＡ／Ｇタンパク質のような抗体結合タンパク質；ニュートラアビジン（脱グリコシル化アビジン誘導体）、アビジン（高陽イオン性６６，０００ダルトン糖タンパク質）、ストレプトアビジン（非グリコシル化５２，８００ダルトンタンパク質）、又はキャプトアビジン（ニトロ化アビジン誘導体）；１次又は２次抗体、及びその誘導体又は断片が含まれる。一部の実施形態では、第１の受容材料は、試験サンプル中の抗原に特異な抗体である。サンドイッチアッセイ型式では、例えば、第１の受容材料は、検体と接合検出プローブの間に形成された錯体に対する静止結合部位として働くことができる。より詳細には、抗体、抗原などのような検体は、一般的に、２つ又はそれよりも多くの結合部位（例えば、エピトープ）を有する。検出区域３１に到達すると、これらの結合部位の１つは、接合プローブの特異的結合メンバーに占有される。しかし、検体の自由な結合部位は、不動化された第１の受容材料に結合することができる。不動化受容材料に結合すると、錯化プローブは、新しい三重サンドイッチ錯体を形成する。
【００３４】
また、アッセイ装置２０は、較正区域３２も含む。この実施形態では、較正区域３２は、多孔性膜２３上に形成され、検出区域３１の下流に位置決めされる。しかし、あるいは、較正区域３２は、検出区域３１の上流に位置決めすることもできる。較正区域３２には、膜２３の長さを通過する接合較正プローブ（又はその錯体）に結合することができる第２の受容材料を備える。第２の受容材料は、較正プローブを接合するのに用いられる特定の結合対のメンバーとすることができる。このようにして、第２の受容材料は、較正プローブ（又はその錯体）に優先的に結合する。例えば、較正検体が抗原である場合には、第２の受容材料は、抗体（例えば、サンドイッチ又は競合的アッセイ型式）とすることができ、又は抗原（例えば、間接的アッセイ型式）とすることができる。更に、上述のように、第１及び第２の受容材料は、ｐＨ、温度、塩濃度、保存期間等の条件に対して同様の分解プロフィールを示すことが通常望ましい。
【００３５】
検出区域３１及び較正区域３２は、各々、使用者が試験サンプル内の検体の濃度を確実に判断することができるように、あらゆる数の個別の検出領域を備えることができる。各領域は、同じ受容材料を含むことができ、又は異なる受容材料を含むことができる。例えば、区域は、２つ又はそれよりも多くの個別の領域（例えば、線、点等）を含むことができる。領域は、試験サンプルがアッセイ装置２０を通る流れに実質的に垂直な方向の線の形態に配置することができる。同様に、一部の実施形態では、領域は、試験サンプルがアッセイ装置２０を通る流れに実質的に平行な方向の線の形態に配置することができる。
【００３６】
試験サンプル中の検体の濃度を半定量的又は定量的に判断することが望ましい場合には、検出区域３１で生成された検出信号「Ｉs」の強度を較正区域３２で生成された較正信号「Ｉc」の強度と比較することができる。例えば、一部の実施形態（例えば、サンドイッチアッセイ型式）では、検体の量は、Ｉs：Ｉc比に正比例する。別の実施形態（例えば、競合的及び間接的アッセイ型式）では、所定の基本量を超える検体の量は、Ｉs：Ｉc比に反比例する。この比が減少する範囲に基づいて、検体に対する総濃度の範囲を判断することができる。必要に応じて、既知の検体濃度の範囲でＩs：Ｉc比を検体濃度に対してプロットし、較正曲線を生成することができる。所定の基本量を超える未知の試験サンプル内の検体の量を判断するために、信号比は、較正曲線に従って検体濃度に変換することができる。ＩsとＩcの間の別の数学的関係を検体濃度に対してプロットし、較正曲線を生成することができることに注意すべきである。例えば、一実施形態では、Ｉs／（Ｉs＋Ｉc）の値を検体濃度に対してプロットし、較正曲線を生成することができる。いずれにせよ、較正及びサンプル試験は、同時にほぼ同じ条件で行い、それによって感度が改善した信頼することができる定量的又は半定量的結果を得ることができる。
【００３７】
必要に応じて、一部の実施形態では、光学式読取装置を用いて、検出区域３１及び／又は較正区域３２でのプローブの強度を測定することができる。光学式読取装置の実際の構成及び構造は、当業者には容易に理解されるように、様々とすることができる。例えば、用いることができる光学的検出技術には、以下に限定されるものではないが、発光（例えば、蛍光、燐光等）、吸収（例えば、蛍光又は非蛍光）、回折等が含まれる。適切な反射率分光光度計の１つは、例えば、Ｋａｙｌｏｒに付与された米国特許出願公開第２００３／０１１９２０２号に説明されており、これは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。別の実施形態では、反射−モード蛍光分光光度計を用いて、蛍光を示すプローブの存在を検出することができる。適切な蛍光分光光度計及び関連検出技術は、例えば、Ｓｏｎｇ他に付与された米国特許出願公開第２００４／００４３５０２号に説明されており、これは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。同様に、透過−モード検出システムを用いて検出プローブの存在を検出することができる。
【００３８】
一般的に、光学読取装置は、電磁放射を放出することができる照明光源、及び信号（例えば、透過又は反射光、放出蛍光又は蛍光等）を記録することができる検出装置を含む。照明光源は、可視又は近可視域の光（例えば、赤外線光又は紫外線光）のような電磁放射を与えることができる当業技術で公知のあらゆる装置とすることができる。例えば、本発明に用いることができる適切な照明光源には、以下に限定されるものではないが、発光ダイオード（ＬＥＤ）、せん光電灯、冷陰極蛍光灯、及びエレクトロルミネセントランプ等が含まれる。照明は、多重化することができ、及び／又はコリメートすることができる。場合によっては、照明は、パルス化してあらゆる背景干渉を低減することができる。更に、照明は、連続的とすることができ、又は連続波（ＣＷ）及びパルス化照明を組み合わせることができ、この場合、多重照明ビームが多重化され（例えば、パルスビームがＣＷビームと多重化され）、ＣＷ供給源により生成された信号とパルス供給源により生成された信号との間で信号を区別することを可能にする。例えば、一部の実施形態では、ＬＥＤ（例えば、アルミニウムガリウムヒ素化合物赤色ダイオード、リン化ガリウム緑色ダイオード、ガリウムヒ素リン緑色ダイオード、又は窒化インジウムガリウム紫／青色／紫外線（ＵＶ）ダイオード）をパルス照明光源として用いる。本発明に用いるのに適する適切なＵＶのＬＥＤ励起ダイオードの市販の一例は、「モデルＮＳＨＵ５５ＯＥ」（Ｎｉｃｈｉａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）であり、これは、順方向電流が１０ミリアンペア（３．５〜３．９ボルト）でビーム内に光パワー７５０〜１０００マイクロワットを放出し、半値全幅１０度、ピーク波長３７０〜３７５ナノメートル、スペクトル半値幅１２ナノメートルである。
【００３９】
場合によっては、照明光源は、アッセイ装置に拡散照明を与えることができる。例えば、複数の点光源（例えば、ＬＥＤ）のアレイを単純に用いて、比較的拡散照明を与えることができる。比較的廉価に拡散照明を与えることができる別の特に望ましい照明光源は、エレクトロルミネセンス（ＥＬ）装置である。ＥＬ装置は、一般的に、電極間に挟まれた発光材料（例えば、燐光体粒子）を用いるコンデンサ構造であり、その少なくとも１つは、光が逃がすために透明である。電極間に電圧を掛けると、発光材料内に電界の変化が起こり、それによって光が放出される。
【００４０】
検出装置は、一般的に、信号を検知することができる当業技術で公知のあらゆる装置とすることができる。例えば、検出装置は、空間識別するように構成された電子撮像検出装置とすることができる。このような電子撮像センサの一部の例には、高速線形電荷結合装置（ＣＣＤ）、電荷注入装置（ＣＩＤ）、及び相補形金属酸化膜半導体（ＣＭＯＳ）装置等が含まれる。例えば、このような画像検出装置は、一般的に電子光センサの２次元のアレイであるが、例えば、走査画像に用いるもののような単一の線の検出装置ピクセル又は光センサを含む線形撮像検出装置（例えば、線形ＣＣＤ検出装置）を用いることもできる。各アレイは、「アドレス」と呼ばれることもある既知の独特の位置の組を含む。画像検出装置内の各アドレスは、区域（例えば、一般的に箱又は矩形の形状の区域）を含むセンサにより占有される。この区域は、一般的に、「ピクセル」又はピクセル区域と呼ばれる。例えば、検出装置ピクセルは、ＣＣＤ、ＣＩＤ、又はＣＭＯＳセンサとすることができ、又は光を検出又は測定するあらゆる他の装置又はセンサとすることができる。検出装置ピクセルの大きさは、幅広く変動させることができ、場合によっては、直径又は長さは、０．２マイクロメートル程の小さいものにすることができる。
【００４１】
他の実施形態では、検出装置は、空間識別機能のない光センサとすることができる。例えば、このような光センサの例には、光電子倍増管装置、及びアバランシェフォトダイオード又はシリコンフォトダイオードのようなフォトダイオードなどを含むことができる。シリコンフォトダイオードは、廉価で感度がよく、高速運転することができ（立ち上がり時間が短く／バンド幅が高い）、殆どの他の半導体技術及びモノリシック回路網に容易に組み込まれるという点で有利であろう。更に、シリコンフォトダイオードは、物理的に小さく、それによって膜ベースの装置と用いるためのシステムに容易に組み込むことができる。シリコンフォトダイオードを用いる場合には、放出信号の波長範囲は、その感度の範囲とすることができ、これは、４００〜１１００ナノメートルである。
【００４２】
検出及び較正は、本発明により自動及び／又は手動で行うことができる。例えば、マイクロプロセッサを任意的に用いて、検出装置からの信号強度を変換し、定量的又は半定量的に検体の濃度を示す結果を得る。マイクロプロセッサは、使用者が最後のいくつかの結果を再表示させることができるようにメモリ機能を含むことができる。当業者には、ＲＡＭ、ＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭ、フラッシュメモリカード、デジタルビデオディスク、及び「ベルヌーイ」カートリッジなどのようなあらゆる適切なコンピュータ可読メモリ装置を用いることができることを認めるであろう。必要に応じて、結果は、液晶（ＬＣＤ）又はＬＥＤディスプレイを用いて使用者に伝えられる。
【００４３】
図２を参照し、ここで、サンドイッチアッセイ型式を用いて試験抗原Ａ（例えば、ＣＲＰ）の存在を検出する方法の一実施形態をより詳細に以下に説明する。最初に、較正抗原Ａ*（例えば、ＰＴＸ３）をサンプルパッド２４に事前に適用し、接合検出プローブ４１及び接合較正プローブ４３を接合パッド２２に事前に適用する。例えば、一実施形態では、検出プローブ４１は、ＣＲＰに対する抗体（例えば、「ＣＲＰ  ＩｇＧ１」）に接合した染色粒子であり、較正プローブ４３は、他のペントラキシン群のメンバーと交差反応しないＰＴＸ３に対する抗体（例えば、ラット抗体ＰＴＸ３（クローンＭＮＢ４））に接合した染色粒子である。アッセイを開始するために、試験抗原Ａを含む試験サンプルをサンプルパッド２２に適用し、そこで較正抗原Ａ*と混合する。試験抗原Ａ及び較正抗原Ａ*は、方向「Ｌ」に接合パッド２２まで進み、そこで検出プローブ４１及び較正プローブ４３と混合する。試験抗原Ａは、検出プローブ４１と結合し、検体／プローブ錯体４９を形成し、較正抗原Ａ*は、較正プローブ４３と結合して検体／プローブ錯体５０を形成する。錯体４９及び５０は、次に、検出区域３１に進むが、そこには、第１の受容材料５１が不動化されている。例えば、第１の受容材料は、接合検出プローブの抗体（例えば、「抗ＣＲＰ  ＩｇＧ２」）と異なるＣＲＰ抗体とすることができ、又は検出プローブに接合される抗体と同一のＣＲＰ抗体とすることができる。錯体４９は、不動化受容材料５１上の利用可能な結合部位に結合する。残りの錯体５０は、次に、較正区域３２に進むが、ここには、第２の受容材料５３が不動化されている。例えば、第２の受容材料は、接合較正プローブの抗体（例えば、ラット抗体ＰＴＸ３の異なるクローン）と同じか又は異なるＰＴＸ３の抗体とすることができる。錯体５０は、不動化受容材料５３上の利用可能な結合部位に結合する。次に、検出区域３１で捕捉された検出プローブ４１により生成された信号及び較正区域３２で捕捉された較正プローブ４３により生成された信号の強度を測定することができる。ここで、図３を参照し、間接的アッセイ型式を用いて試験抗原Ａの存在を検出する方法の別の実施形態をより詳細に以下に説明する。この実施形態では、検出プローブ４１は、試験抗原Ａの抗体と接合され、較正プローブ４３は、較正抗原Ａ*の抗体と接合される。更に、第１の受容材料５１は、試験抗原Ａと性質が類似しており、第２の受容材料５３は、較正抗原Ａ*と性質が類似している。このようにして、試験抗原Ａ及び第１の受容材料５１は、接合検出プローブ４１上の利用可能な結合部位に対して競合し、較正抗原Ａ*及び第２の受容材料５３は、接合較正プローブ４３上の利用可能な結合部位に対して競合する。
【００４４】
また、ここで図４を参照し、競合的アッセイ型式を用いて試験抗原Ａの存在を検出する方法の更に別の実施形態をより詳細に以下に説明する。この実施形態では、検出プローブ４１は、試験抗原Ａと性質が類似する抗原と接合し、較正プローブ４３は、較正抗原Ａ*と性質が類似する抗原と接合する。更に、第１の受容材料５１は、試験抗原Ａの抗体であり、第２の受容材料５３は、較正抗原Ａ*の抗体である。従って、試験抗原Ａ及び接合検出プローブ４１は、第１の受容材料５１上の利用可能な結合部位に対して競合し、較正抗原Ａ*及び接合較正プローブ４３は、第２の受容材料５３上の利用可能な結合部位に対して競合する。
【００４５】
装置構成の様々な実施形態を上述したが、本発明の装置は、一般的に、あらゆる望ましい構成を有することができ、かつ上述の構成要素の全てを含む必要はないことを理解すべきである。例えば、様々な他の装置構成は、Ｌａｍｂｏｔｔｅ他に付与された米国特許第５，３９５，７５４号；Ｊｏｕ他に付与された第５，６７０，３８１号；及びＭａｌｉｃｋ他に付与された第６，１９４，２２０号に説明されており、これらは、全ての目的に対して本明細書においてその全内容が引用により組み込まれている。
本発明は、次の実施例を参照すると更に良好に理解することができる。
【実施例１】
【００４６】
本発明によりラテラルフローアッセイ装置を形成する機能を明らかにする。長さがほぼ３０センチメートルのニトロセルロース多孔性膜（「Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｉｎｃ．」からの「ＨＦ  １２０」）を支持カード上に積層した。Ｃ反応性タンパク質に対する単クローン性抗体を多孔性膜上に不動化し、検出区域を形成した。抗体は、「ＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．」から入手し（カタログ番号第Ａ５８０４０１３６Ｐ号）、濃度が１ミリグラム／ミリリットルであった。更に、β−ＨＣＧに対する単クローン性抗体（１ミリグラム／ミリリットル）も多孔性膜上に不動化し、較正区域を形成した。セルロース吸上げパッド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏ．）は、膜の（較正区域に近接する）一端に積層した。膜サンプルは、次に、温度３７℃で１時間乾燥させた。
【００４７】
粒子懸濁液は、抗ＣＲＰ単クローン性抗体が接合された金粒子（「ＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．」、カタログ番号第Ａ５８１１０２２８Ｐ号）３６マイクロリットル、抗α−ｈＣＧ単クローン性抗体が接合された金粒子１００マイクロリットル、ショ糖水溶液（２０％）５００ミリリットル、及び水１２００マイクロリットルを混合することによって形成した。抗ＣＲＰ単クローン性抗体が接合された金粒子の粒径は、４０ナノメートルで光学密度は５０．２であり、これは、「Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｂｉｏｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．」から得られた。α−ｈＣＧ単クローン性抗体が接合された金粒子の粒径は４０ナノメートルで光学密度は１０．１であり、これは、「Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｂｉｏｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．」から得られた。次に、粒子懸濁液を３０センチメートル長さのガラス繊維接合パッド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏ．）上に装填した。ガラス繊維パッドは、次に、３７℃で２時間乾燥させ、接合パッドを形成した。接合パッドは、次に、多孔性膜の（検出区域に近い）他端上に積層した。接合パッド上には、セルロース吸上げパッド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏ．）サンプルパッドを更に積層した。次に、積層した全カードを切断し、４ミリメートル幅のラテラルフローアッセイ装置にした。
【実施例２】
【００４８】
本発明によりＣＲＰを検出する機能を明らかにする。実施例１に説明した通りに５つのラテラルフロー装置（サンプル１〜５）が作られた。６０マイクロリットルのＣＲＰ（９０ナノグラム／ミリリットル）及び６０マイクロリットルのβ−ｈＣＧ（５０ナノグラム／ミリリットル）を含む混合溶液を５つのラテラルフロー装置の各々のサンプルパッドに加えた。室温で３０分発色させた後、反射分光光度計を用いて検出区域及び較正区域の色濃度を測定した。各区域の色強度を以下の表１に列記する。
【００４９】
（表１）
2008534956.tif 000003
【００５０】
Ｉdに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶ（分散の係数、又は標準偏差対平均の比）は、それぞれ、９２．１１１、２．３３１２７、及び２．５３１であった。一方、Ｉd／Ｉcに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶは、それぞれ、０．９３２３、０．０１０８１、及び１．１１５９であった。従って、示すように、標準偏差及び％ＣＶは、較正信号強度に対しては、非較正信号強度に対してよりも遥かに低かった。
【実施例３】
【００５１】
本発明によりＣＲＰを検出する機能を明らかにする。実施例１に説明した通りに１５つのラテラルフロー装置（サンプル１〜１５）を作り、３つの群に分けた。第１の群は室温で保存した。第２の群は、６５℃で４０分間加熱し、第３の群は、６５℃で２１０分間加熱した。１％「Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０」（ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ）を有するトリス緩衝液中に６０マイクロリットルのＣＲＰ（１００ナノグラム／ミリリットル）及び６０マイクロリットルのβ−ｈＣＧ（５０ナノグラム／ミリリットル）を含有する混合溶液を１５個のラテラルフロー装置の各々のサンプルパッドに適用した。室温で３０分発色させた後、反射分光光度計を用いて検出区域及び較正区域の色濃度を測定した。各群の色強度を以下の表２〜４に列記する。
【００５２】
（表２）
2008534956.tif 000004
【００５３】
Ｉdに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶは、それぞれ、９３．３３５４、１．７５２６１、及び１．８７８であった。一方、Ｉd／Ｉcに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶは、それぞれ、０．９６０６９、０．０１０２４、及び１．０６６であった。
【００５４】
（表３）
2008534956.tif 000005
【００５５】
Ｉdに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶは、それぞれ、９０．２９７４、３．２５７４１、及び３．６０７であった。一方、Ｉd／Ｉcに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶは、それぞれ、０．９６５１７、０．００７３２、及び０．７５８であった。
【００５６】
（表４）
2008534956.tif 000006
【００５７】
Ｉdに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶは、それぞれ、８７．８４２、２．２０４、及び２．５０９であった。一方、Ｉd／Ｉcに対する平均、標準偏差、及び％ＣＶは、それぞれ、０．９５９３５、０．０１０７４、及び１．１２であった。
【実施例４】
【００５８】
本発明によりラテラルフローアッセイ装置を形成する機能を明らかにする。長さがほぼ３０センチメートルのニトロセルロース多孔性膜（「Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｉｎｃ．」の「ＨＦ  １２０」）を支持カード上に積層した。Ｃ反応性タンパク質に対する単クローン性抗体を多孔性膜上に不動化し、検出区域を形成した。抗体は、「ＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．」（カタログ番号第Ａ５８０４０１３６Ｐ号）から得たものであり、濃度は、１ミリグラム／ミリリットルであった。更に、β−ＨＣＧ（１ミリグラム／ミリリットル）に対する単クローン性抗体も多孔性膜上に不動化し、較正区域を形成した。セルロース吸上げパッド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏ．）を膜の（較正区域に近い）一端に積層した。次に、膜サンプルを１時間温度３７℃で乾燥させた。
【００５９】
抗ＣＲＰ単クローン性抗体（「ＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．」、カタログ番号第Ａ５８１１０２２８Ｐ号）に接合した金粒子３６マイクロリットル、抗α−ｈＣＧ単クローン性抗体に接合した金粒子１００マイクロリットル、ショ糖水溶液（２０％）５００ミリリットル、及び水１４００マイクロリットルを混合することによって粒子懸濁液を形成した。抗ＣＲＰ単クローン性抗体に接合した金粒子の粒径は、４０ナノメートルで光学密度は５０．２であり、これは、「Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｂｉｏｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．」から入手した。抗α−ｈＣＧ単クローン性抗体を接合された金粒子の粒径は、４０ナノメートルで光学密度は１０．１であり、これも「Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｂｉｏｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．」から入手した。次に、粒子懸濁液は、３０センチメートル長さのガラス繊維接合パッド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏ．）上に装填された。ガラス繊維パッドは、次に、３７℃で２時間乾燥させ、接合パッドを形成した。接合パッドは、次に、多孔性膜の（検出区域に近い）他端上に積層した。セルロース吸上げパッド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏ．）サンプルパッドを接合パッド上に更に積層した。次に、積層された全カードを切断し、４ミリメートル幅のラテラルフローアッセイ装置にした。
【実施例５】
【００６０】
本発明によりＣＲＰを検出する機能を明らかにする。実施例４に説明した通りに１５個のラテラルフロー装置（サンプル１〜１５）を作り、３つの群に分けた。第１の群は室温で保存した。第２の群は、６５℃で４０分間加熱し、第３の群は６５℃で２１０分間加熱した。１％「Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０」（ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ）を有する２０ミリモルのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．５１）中に６０マイクロリットルのＣＲＰ（１００ナノグラム／ミリリットル）及び６０マイクロリットルのβ−ｈＣＧ（５０ナノグラム／ミリリットル）を含有する混合溶液を第１の群のサンプルパッドに適用した。１％「Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０」（ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ）を有する２０ミリモルのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ８．０）中に６０マイクロリットルのＣＲＰ（１００ナノグラム／ミリリットル）及び６０マイクロリットルのβ−ｈＣＧ（５０ナノグラム／ミリリットル）を含有する混合溶液を第２の群のサンプルパッドに加えた。１％「Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０」（ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ）を有する２０ミリモルのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ８．５）中に６０マイクロリットルのＣＲＰ（１００ナノグラム／ミリリットル）及び６０マイクロリットルのβ−ｈＣＧ（５０ナノグラム／ミリリットル）を含有する混合溶液を第３の群のサンプルパッドに適用した。
室温で３０分発色させた後、反射分光光度計を用いて検出区域及び較正区域の色濃度を測定した。各群に対する統計的データを以下の表５に列記する。
【００６１】
（表５）
2008534956.tif 000007
【００６２】
示すように、検出区域に対する較正データの標準偏差及び％ＣＶは、ある一定の範囲のｐＨ値にわたって非較正データよりも遥かに低かった。
本発明をその特定的な実施形態に関して詳細に説明したが、以上の事項を理解すれば、当業者がこれらの実施形態に対する代替物、実施形態の変形、及び実施形態に対する均等物を容易が考えることができることは認められるであろう。従って、本発明の範囲は、特許請求の範囲及びそのあらゆる均等物の範囲であるとして判断されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】本発明のラテラルフローアッセイ装置の一実施形態の斜視図である。
【図２】本発明により用いることができるサンドイッチアッセイ型式の一実施形態の概略図である。
【図３】本発明により用いることができる間接アッセイ型式の一実施形態の概略図である。
【図４】本発明により用いることができる競合的アッセイ型式の一実施形態の概略図である。
【符号の説明】
【００６４】
２０  ラテラルフローアッセイ装置
２３  多孔性膜
３１  検出区域
３２  較正区域
【図１】
2008534956.tif 000008
【図２】
2008534956.tif 000009
【図３】
2008534956.tif 000010
【図４】
2008534956.tif 000011
【国際調査報告】
2008534956.tif 000012
2008534956.tif 000013