(57)【要約】多価ワクチンにおける免疫原干渉を低減または防止するための方法、組成物およびキットは、他の非核酸免疫原成分とともに、核酸またはDNA成分を使用する。具体的には、本発明は、ワクチンにおける免疫原干渉を低減させる方法を提供する。この方法は、１種以上の非ＤＮＡワクチン成分と一緒に、ＤＮＡワクチンを投与する工程を包含する。本発明はまた、多価ワクチン組成物であって、少なくとも１種の非DNA免疫原性ワクチン成分と一緒に、少なくとも１種のDNAワクチン成分を含む組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ワクチンにおける免疫原干渉を低減させる方法であって、該方法は、１種以上の非ＤＮＡワクチン成分と一緒に、ＤＮＡワクチンを投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
多価ワクチンの有効性を強化する方法であって、該方法は、該ワクチン中の非核酸免疫原成分と、ＤＮＡワクチン成分とを置き換える工程を包含する、方法。
【請求項３】
多価ワクチン調製物の投与の際の、動物における抗体応答の低下を防止または低減する方法であって、該方法は、該多価ワクチン調製物の一部としてＤＮＡワクチン成分を投与する工程を包含する、方法。
【請求項４】
前記方法の前記多価ワクチン調製物は、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタおよび家禽からなる群より選択される少なくとも１つのメンバーのために処方されている、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記メンバーはウマである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、該方法は、他の非ＤＮＡ免疫原成分と一緒に西ナイルＤＮＡワクチン成分を投与する工程を包含する、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、前記非ＤＮＡ免疫原成分は、インフルエンザウイルス、脳脊髄炎ウイルス（東部脳脊髄炎ウイルス、西部脳脊髄炎ウイルスおよびベネズエラ脳脊髄炎ウイルス）、鼻肺炎ウイルス（血清型１および４）、および破傷風毒素からなる群より選択される、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、該方法は、慣習的な西ナイル免疫原成分を、前記西ナイルＤＮＡワクチン成分と置き換える工程をさらに包含する、方法。
【請求項９】
多価ワクチン組成物であって、少なくとも１種の非DNA免疫原性ワクチン成分と一緒に、少なくとも１種のDNAワクチン成分を含む、組成物。
【請求項１０】
前記DNAワクチン成分は、西ナイルDNAワクチン成分である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の組成物であって、該組成物は、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタおよび家禽からなる群より選択される少なくとも１つのメンバーに投与するのに適している、組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、ウマへの投与に適している、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の組成物であって、該組成物は、インフルエンザウイルス、脳脊髄炎ウイルス（東部脳脊髄炎ウイルス、西部脳脊髄炎ウイルスおよびベネズエラ脳脊髄炎ウイルス）、鼻肺炎ウイルス（血清型１および４）、および破傷風毒素からなる群より選択される少なくとも１種の非DNA免疫原性成分をさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記非DNA免疫原性成分は、インフルエンザウイルス、脳脊髄炎ウイルス（東部脳脊髄炎ウイルス、西部脳脊髄炎ウイルスおよびベネズエラ脳脊髄炎ウイルス）、鼻肺炎ウイルス（血清型１および４）、および破傷風毒素を含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
多価ワクチンキットであって、１種以上の非DNA免疫原性ワクチン成分と、少なくとも１種のDNAワクチン成分とを含み、ここで該DNAワクチン成分は、該非DNAワクチン成分から分離されている、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、組み合わせワクチンにおける免疫原干渉を低減させるための方法および組成物、そして特に、多価ワクチン調製における免疫原干渉に関連する問題を克服するための、非ＤＮＡワクチン成分と一緒に１種以上のＤＮＡワクチン成分を使用する方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
組み合わせワクチン（すなわち、１種以上の免疫原成分を有するワクチン）の処方の間に、より少ない組み合わせワクチンまたは１成分のみを有する一価ワクチンでワクチン接種された動物と比較して、組み合わせワクチンでワクチン接種された動物における抗体応答の低下の点で、免疫原干渉に遭遇することは、稀なことではない。しばしば、低下した抗体応答は、その免疫原成分の１種以上の有効性の減少をもたらし得る。このことは、問題となっている免疫原が、適切な免疫応答を惹起するのに完全には効率的でないことを意味し得る。このことは、次いで、その動物が、対応する疾患に対して完全には保護されていないことを意味し得る。
【０００３】
経験的な西ナイルウイルス（ＷＮＶ）チャレンジに対する、殺傷されたＷＮＶを１成分として含む組み合わせワクチンの免疫原性を評価するための研究が、評価された。この研究において、ワクチン接種の１４日後のプラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）（非特許文献１）によって測定された場合のＷＮＶに対する抗体応答は、等価なＷＮＶ免疫原を有する一価ＷＮＶワクチンによって誘導される抗体応答よりも低かった。その組み合わせワクチンにおける他の免疫原性成分が、ＷＮＶに対する抗体応答の低減を引き起こした可能性がある。潜在的に、このＷＮＶ免疫原は、組み合わせワクチンにおける他の成分の免疫原性または免疫原応答によって干渉され得る。
【非特許文献１】Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“ＡＳｉｎｇｌｅ  Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：４２４４−５４２２（２０００）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、（特にインビボ抗体応答に関する）免疫原干渉の問題を克服または軽減するための、新規の方法および組成物が、当該分野において必要とされている。免疫原干渉を最小化するワクチンにおける組み合わせ免疫原の物理的取扱いに取り組むための新規アプローチもまた、必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明の一部として、ワクチンにおける免疫原干渉を低減させる方法が提供される。この方法は、１種以上の非ＤＮＡワクチン成分と一緒にＤＮＡワクチン成分を投与する工程を包含する。しばしば、このＤＮＡワクチン成分は、同じ疾患または苦痛に対するより伝統的な、非ＤＮＡワクチン成分の代わりに利用されるものである。
【０００６】
さらに、多価ワクチンの有効性を強化する方法もまた、提供される。この方法は、その多価ワクチン中の非核酸免疫原を、ＤＮＡワクチン成分と置き換える工程を包含する。
【０００７】
本発明はさらに、多価ワクチン調製物の投与の際の動物における抗体応答の低下を防止または低減させる方法に関する。この方法は、多価ワクチン調製物の一部としてＤＮＡワクチン成分を投与する工程を包含する。このＤＮＡワクチン成分は、そうでなければその多価ワクチン調製物を構成する、非ＤＮＡまたは非核酸ワクチン成分と一緒に使用され得る。
【０００８】
本発明はまた、多価ワクチン組成物を提供する。この組成物は、少なくとも１種の非ＤＮＡ免疫原ワクチン成分と一緒に、少なくとも１種のＤＮＡワクチン成分を含む。
【０００９】
本発明はまた、多価ワクチンキットを記載する。このキットは、１種以上の非ＤＮＡ免疫原ワクチン成分と、少なくとも１種のＤＮＡワクチン成分とを含み、ここでそのＤＮＡワクチン成分は、その非ＤＮＡワクチン成分から分離されている。この分離は、これらのワクチン成分がそのキット内の別個の容器内に存在するか、これらのワクチン成分が処方技術によって互いに分離されていることを意味し得る。
【００１０】
本発明のさらなる目的および特徴は、以下に記載される詳細な説明および特許請求の範囲から明白である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
（発明の詳細な説明）
多価ワクチン調製物における免疫原干渉の問題を低減または克服するために、ＤＮＡワクチン成分が多価ワクチン調製物の一部として含まれる方法および組成物が提供される。このＤＮＡワクチン組成物は、当業者に利用可能な任意の供給源から入手され得る。非限定的な例として、そのＤＮＡワクチン成分としては、精製ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、または他の核酸成分でさえも、挙げることができる。従って、本発明は、組み換え技術を含む、当該分野において利用可能な技術から由来する全てのＤＮＡワクチン成分を包含する。
【００１２】
このＤＮＡは、特定の疾患に対する目的の特定の免疫原成分をコードする。この免疫原成分としては、ウイルスおよび他の疾患原因因子を構成するタンパク質が挙げられ得る。この免疫原の発現が、次いで、インビボで起こる。特に目的のものは、獣医学的動物（ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、家禽など）における疾患を引き起こすウイルスのような疾患である。
【００１３】
本発明の一部としての上記ＤＮＡワクチン成分は、他の非ＤＮＡワクチン成分と一緒に投与される。これらの他の成分は、より伝統的または慣習的な供給源（例えば、感染した動物供給源からの特定のタンパク質の単離などによる）であるとみなされ得るものに由来する、免疫原性タンパク質およびその一部（ペプチドおよびポリペプチドを含む）を含む。
【００１４】
本発明の好ましい局面において、上記ＤＮＡ成分は、上述の段落において記載された１種以上のより伝統的な非ＤＮＡワクチン成分の代わりに、またはその代用として使用されるものである。一例として、ウイルス性ＤＮＡワクチン成分が、感染した動物から単離されたウイルス免疫原の代わりをするために使用され得る。さらなる例として、西ナイルＤＮＡワクチン成分が、西ナイルの慣習的な単離された免疫原の代わりに使用される。この西ナイルＤＮＡワクチン成分は、Ｃｈａｎｇの米国特許出願公開第２００３０２２８４９号（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示され、記載されたものであり得る。狂犬病ワクチンについて、慣習的な免疫原（例えば、ペプチドまたはその一部）の代わりに、狂犬病ＤＮＡワクチン成分を使用することもまた、本発明の範囲内である。
【００１５】
上記ＤＮＡワクチン成分が、その対応する非ＤＮＡワクチン成分と実質的に等価であることが、特に好ましい。このことは、このＤＮＡワクチン成分がインビボで実質的に同じ免疫原応答を惹起することを意味する。このＤＮＡワクチン成分がその非ＤＮＡ対応物よりもより有効であるとみなされることもまた、本発明の範囲内にある。
【００１６】
本発明の組成物は、１種以上の非ＤＮＡワクチン成分と一緒に１種以上のＤＮＡワクチン成分を含み、多価ワクチン調製物を形成する。このＤＮＡワクチン成分は、非ＤＮＡワクチン成分と同じ物理的容器内に含められることもできるし、別個の容器に含められることもできる。この容器は、次いで、多価ワクチン調製キットを構成する。１種以上または全てのワクチン成分が、投与の直前に混合され得る。代替的な実施形態において、上記ＤＮＡワクチン成分が同じ処方物において他の非ＤＮＡワクチン成分と一緒に含まれる場合、そのＤＮＡワクチン成分は被膜され得る。当業者に利用可能な他の処方技術が、全てのワクチン成分の免疫原性相互作用を防ぐために使用され得る。
【００１７】
本発明のワクチン組成物はまた、１種以上のアジュバント、または取り込み促進成分でさえ、含み得る。好ましいアジュバントとしては、スクアランまたはスクアレンの組み合わせであるＳＰオイル、ＴＷＥＥＮ  ８０、およびＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ１２１界面活性剤が挙げられる。Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈの製品である、ＭＥＴＡＳＴＩＭ（登録商標）アジュバントもまた、適している。
【００１８】
以下の実施例は、本発明の好ましい局面を例示することが意味されるが、本発明の範囲を制限するものと決して解釈されるべきではない。
【実施例】
【００１９】
（実施例）
ワクチン接種の時点で、１用量のＦＬＵＶＡＣ  ＩＮＮＯＶＡＴＯＲ（登録商標）ワクチン（Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ，Ｉｏｗａ）と、１用量のＷＮＶ  ＤＮＡワクチンとを混合することによって、新規の組み合わせワクチンを調製した。次いで、生きたＷＮＶチャレンジによる、慣習的なワクチンにおける他の免疫原性成分によるＷＮＶに対する免疫原遮断の欠如を評価するために、研究を実施した。
【００２０】
脳脊髄炎ウイルス（東部脳脊髄炎ウイルス、西部脳脊髄炎ウイルスおよびベネズエラ脳脊髄炎ウイルスを含む）、鼻肺炎ウイルス（血清型１および４）、インフルエンザウイルス、および破傷風毒素を含む、組み合わせワクチンＦＬＵＶＡＣ  ＩＮＮＯＶＡＴＯＲ（登録商標）を、１．０ｍＬ用量サイズにおいて、５％  ＳＰ  Ｏｉｌとブレンドした。Ｃｈａｎｇ（ＵＳ２００３００２２８４９）において調製され、記載された精製プラスミドを含むＷＮＶ  ＤＮＡワクチンを、１５０μｇのプラスミドＤＮＡを含むようにブレンドし、１．０ｍＬの用量サイズにおいて５％ＳＰ  Ｏｉｌをアジュバントとした。
【００２１】
５匹のウマを、ＦＬＵＶＡＣ  ＩＮＮＯＶＡＴＯＲ（登録商標）ワクチンでワクチン接種し、別のグループの４匹のウマに１ｍＬの同じ慣習的なワクチン＋１ｍＬのＤＮＡを与えた。２つのワクチンの組み合わせにおける各ウマについて、ワクチン各１ｍＬを同じシリンジ内に吸い上げ、そして速やかにそのウマに投与した。ワクチンは、頚部領域における筋肉内経路によって投与した。各ワクチンの第２の投薬は、最初のワクチン接種から３週間後に与えた。
【００２２】
両グループにおけるウマに、ＣＶＢ−ＬのＤｒ．Ｅｉｌｅｎｅ  Ｏｓｔｌｕｎｄから入手した西ナイルウイルスのカラス単離物（Ｌｏｔ  ＃Ｖ７６−２）をチャレンジした。そのストックのチャレンジ物質は、−８０℃で保存されていた。血清サンプルを、チャレンジ後０日（０ＤＰＣ）から１４ＤＰＣまで１日２回、その後２１ＤＰＣまで１週間に２回、ウイルス単離のために各動物から血清サンプルを収集した。
【００２３】
ウイルス単離物の結果は、経験的なＷＮＶチャレンジによって誘導されるウイルス血症に対して、慣習的なワクチンとＤＮＡワクチンとの組み合わせでワクチン接種したウマの顕著な保護を実証した（表１を参照のこと）。ＤＮＡワクチンと慣習的なワクチンとの組み合わせが、西ナイルウイルスまたは他の免疫原が含まれる場合の免疫原干渉を克服し得た可能性がある。
【００２４】
【表１−１】
2008534598.tif 000002
【００２５】
【表１−２】
2008534598.tif 000003
＊    “＋”はウイルス単離物による陽性を示す。
“−”は、ウイルス単離物による陰性を示す。
＃    “Ｉｎｎ”は、ＦＬＵＶＡＣ  ＩＮＮＯＶＡＴＯＲ（登録商標）を示す。このワクチンは、インフルエンザウイルス、脳脊髄炎ウイルス（東部脳脊髄炎ウイルス、西部脳脊髄炎ウイルスおよびベネズエラ脳脊髄炎ウイルスを含む）、鼻肺炎ウイルス（血清型１および４）、および破傷風毒素を含む。
“ＤＮＡ  ＷＮＶ”は、西ナイルウイルスプラスミドＤＮＡとブレンドされたワクチンを示す。
【００２６】
本発明の明確な理解のために、前述の実施例が記載された。この実施例は、単に例示であり、本発明の範囲またはその根底にある原理を限定するものとは決して解釈されない。実際に、本明細書中に示され、記載されたものに加えて、本発明の種々の改変が、上述の説明から当業者には明らかになるであろう。そのような改変もまた、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【国際調査報告】
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