(57)【要約】  本発明は、抗菌性アミドマクロサイクル、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、並びに、疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用、特に細菌感染のためのものに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2008534537.tif 000073
［式中、
Ｒ５は、式
【化２】
2008534537.tif 000074
｛ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す｝
の基を表し、
Ｒ２は、水素、メチルまたはエチルを表し、
Ｒ３は、式
【化３】
2008534537.tif 000075
｛ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ６は、式
【化４】
2008534537.tif 000076
（式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１１は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１２は、水素またはメチルを表し、
ｋは、０または１の数を表し、
ｌは、１、２、３または４の数を表し、
そして、
ｍおよびｎは、相互に独立して、１、２または３の数である）
の基を表し、
Ｒ７は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、相互に独立して、式
【化５】
2008534537.tif 000077
（式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１３は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ１５およびＲ１６は、相互に独立して、水素、アミノエチルまたはヒドロキシエチルを表し、
ｏは０または１の数であり、
ｐ、ｑおよびｗは、相互に独立して、１、２、３または４の数である）
の基を表す｝
の基を表し、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノまたはメチルを表す］
の化合物、または、その塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項２】
式
【化６】
2008534537.tif 000078
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表し、
Ｒ２は、水素、メチルまたはエチルを表し、
Ｒ３は、上記定義の通りであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノまたはメチルを表す］
に相当することを特徴とする、請求項１に記載の化合物、または、その塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項３】
Ｒ２が水素を表すことを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が、水素、ヒドロキシ、塩素またはメチルを表すことを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ５が、式
【化７】
2008534537.tif 000079
［ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す］
の基を表し、
Ｒ２が水素を表し、
Ｒ３が、式
【化８】
2008534537.tif 000080
［ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ６は、式
【化９】
2008534537.tif 000081
｛式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１１は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１２は、水素またはメチルを表し、
ｋは、０または１の数であり、
ｌは、１、２、３または４の数であり、
そして、
ｍおよびｎは、相互に独立して、１、２または３の数である｝
の基を表す］
の基を表し、
Ｒ４がヒドロキシを表す、
ことを特徴とする、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物、または、その塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項６】
Ｒ５が、式
【化１０】
2008534537.tif 000082
［ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す］
の基を表し、
Ｒ２が水素を表し、
Ｒ３が、式
【化１１】
2008534537.tif 000083
［ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ７は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ８およびＲ１０は、相互に独立して、式
【化１２】
2008534537.tif 000084
｛式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１３は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ１５およびＲ１６は、相互に独立して、水素、アミノエチルまたはヒドロキシエチルを表し、ｏは、０または１の数であり、
ｐ、ｑおよびｗは、相互に独立して、１、２、３または４の数であり、
Ｒ４は、ヒドロキシを表す｝
の基を表す］
の基を表し、
Ｒ４がヒドロキシを表す、
ことを特徴とする、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物、または、その塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項７】
Ｒ５が、式
【化１３】
2008534537.tif 000085
［ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す］
の基を表し、
Ｒ２が水素を表し、
Ｒ３が、式
【化１４】
2008534537.tif 000086
［ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ９は、式
【化１５】
2008534537.tif 000087
｛式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１３は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ１５およびＲ１６は、相互に独立して、水素、アミノエチルまたはヒドロキシエチルを表し、
ｏは０または１の数であり、
ｐ、ｑおよびｗは、相互に独立して、１、２、３または４の数である｝
の基を表す］
の基を表し、
Ｒ４がヒドロキシを表す、
ことを特徴とする、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物、または、その塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項８】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または、その塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つの製造方法であって、
［Ａ］式
【化１６】
2008534537.tif 000088
（式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、請求項１に記載の意味を有し、ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを表す）
の化合物を、２段階工程で、最初に、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下、式
ＨＲ３      （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ３は請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、続いて酸と、かつ／または、水素化分解により反応させる、
または、
［Ｂ］式
【化１７】
2008534537.tif 000089
（式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、請求項１に記載の意味を有し、そして、Ｚはベンジルオキシカルボニルを表す）
の化合物を、２段階工程で、最初に、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下、式
ＨＲ３      （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ３は請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、続いて酸と、または、水素化分解により反応させる
を特徴とする、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその溶媒和物の１つの製造方法であって、当該化合物の塩または当該化合物の塩の溶媒和物を、塩基を加えてクロマトグラフィーすることにより当該化合物に変換することを特徴とする、方法。
【請求項１０】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１２】
細菌性疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１３】
少なくとも１種の請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物を、少なくとも１種の不活性、非毒性、医薬的に許容し得る補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１４】
細菌感染の処置および／または予防のための、請求項１３に記載の医薬。
【請求項１５】
抗菌的有効量の少なくとも１種の請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物または請求項１３もしくは請求項１４に記載の医薬を投与することによる、ヒトおよび動物における細菌感染の制御方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌性アミドマクロサイクル（macrocycle）およびそれらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用、特に細菌感染のためのものに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＷＯ０３／１０６４８０、ＷＯ０４／０１２８１６、ＷＯ０５／０３３１２９、ＷＯ０５／０５８９４３、ＷＯ０５／１００３８０およびＷＯ０５／１１８６１３は、抗菌活性を有し、アミドまたはエステル置換基を各々有するビフェノマイシン（biphenomycin）Ｂタイプのマクロサイクルを記載している。
【０００３】
ＵＳ３,４５２,１３６、R. U. Meyer の学位論文（Stuttgart University, Germany 1991）、V. Leitenbergerの学位論文（Stuttgart University, Germany 1991）、Synthesis (1992), (10), 1025-30, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 (1992), (1), 123-30, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1991), (10), 744, Synthesis (1991), (5), 409-13, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1991), (5), 275-7, J. Antibiot. (1985), 38(11), 1462-8, J. Antibiot. (1985), 38(11), 1453-61 は、抗菌活性を有する天然産物ビフェノマイシンＢを記載している。ビフェノマイシンＢの合成におけるいくつかの段階は、Synlett (2003), 4, 522-526 に記載されている。
【０００４】
Chirality (1995), 7(4), 181-92, J. Antibiot. (1991), 44(6), 674-7, J. Am. Chem. Soc. (1989), 111(19), 7323-7, J. Am. Chem. Soc. (1989), 111(19), 7328-33, J. Org. Chem. (1987), 52(24), 5435-7, Anal. Biochem. (1987), 165(1), 108-13, J. Org. Chem. (1985), 50(8), 1341-2, J. Antibiot. (1993), 46(3), C-2, J. Antibiot. (1993), 46(1), 135 40, Synthesis (1992), (12), 1248-54, Appl. Environ. Microbiol. (1992), 58(12), 3879-8, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1992), (13), 951-3 は、構造的に関連する天然産物であり、マクロサイクル上にヒドロキシ基によるさらなる置換を有するビフェノマイシンＡを記載している。
【０００５】
これらの天然産物は、それらの特性の観点で、抗菌性医薬の要件を満たさない。抗菌活性を有する構造的に異なる物質が市場で入手可能であるが、耐性の発生は常にある可能性である。従って、良好かつより有効な治療のために、新規物質が望ましい。
【発明の開示】
【０００６】
従って、本発明の１つの目的は、ヒトおよび動物における細菌性疾患の処置用の、同等または改善された抗菌活性を有する新規かつ代替的な化合物を提供することである。
【０００７】
驚くべきことに、天然産物のカルボキシ基が塩基性の基を含む第３級アミド基で置き換えられている、これらの天然産物のある種の誘導体が、ビフェノマイシン耐性の黄色ブドウ球菌株（ＲＮ４２２０ＢｉＲおよびＴ１７）に対する抗菌活性を有することが見出された。
【０００８】
さらに、それらの誘導体は、黄色ブドウ球菌野生型株およびビフェノマイシン耐性黄色ブドウ球菌株について、改善された耐性自然発生率を示す。
【０００９】
本発明は、式
【化１】
2008534537.tif 000002
［式中、
Ｒ５は、式
【化２】
2008534537.tif 000003
｛ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す｝
の基を表し、
Ｒ２は、水素、メチルまたはエチルを表し、
【００１０】
Ｒ３は、式
【化３】
2008534537.tif 000004
｛ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ６は、式
【化４】
2008534537.tif 000005
（式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１１は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１２は、水素またはメチルを表し、
ｋは、０または１の数を表し、
ｌは、１、２、３または４の数を表し、
そして、
ｍおよびｎは、相互に独立して、１、２または３の数である）
の基を表し、
【００１１】
Ｒ７は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、相互に独立して、式
【化５】
2008534537.tif 000006
（式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１３は、水素、アミノまたはヒドロキシであり、
Ｒ１４は、水素またはメチルであり、
Ｒ１５およびＲ１６は、相互に独立して、水素、アミノエチルまたはヒドロキシエチルを表し、
ｏは０または１の数であり、
ｐ、ｑおよびｗは、相互に独立して、１、２、３または４の数である）
の基を表す｝
の基を表し、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノまたはメチルを表す］
の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物に関する。
【００１２】
本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、並びに、式（Ｉ）に包含され、例示的実施態様として後述する化合物並びにそれらの塩、溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である（後述する、式（Ｉ）に包含される化合物が、まだ塩、溶媒和物および塩の溶媒和物ではない場合において）。
【００１３】
本発明の化合物は、それらの構造に依存して、立体異性体で存在し得る（エナンチオマー、ジアステレオマー）。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマー、およびそれらの各々の混合物に関する。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、キラル相のクロマトグラフィーまたはキラルアミンもしくはキラル酸を使用する結晶化などの既知の方法により、立体異性的に純粋な成分を単離できる。
本発明はまた、化合物の構造次第で、化合物の互変異性体にも関する。
【００１４】
本発明の目的上、好ましい塩は、本発明の化合物の生理的に許容し得る塩である。
化合物（Ｉ）の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、トリフルオロ酢酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１５】
化合物（Ｉ）の生理的に許容し得る塩には、通常の塩基の塩、例えば、そして好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは１個ないし１６個の炭素原子を有する有機アミン類（例えば、そして好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジヒドロアビエチルアミン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびメチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩も含まれる。
【００１６】
本発明の目的上、溶媒和物は、溶媒分子との配位により固体または液体状態で錯体を形成している化合物の形態を表す。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を表す。
【００１７】
炭素原子上の記号＃は、その化合物が、その炭素原子の配置に関してエナンチオピュアな形態であることを意味し、それは、本発明の目的上、９０％より高いエナンチオマー過剰（＞９０％ｅｅ）を意味する。
【００１８】
Ｒ３を表す基の式において、その傍に各場合で＊がある直線の末端は、炭素原子またはＣＨ２基を表さず、Ｒ３が結合しているカルボニル基への結合の一部を形成している。
【００１９】
Ｒ５が表すことができる基の式において、その傍に各場合で＊がある直線の末端は、炭素原子またはＣＨ２基を表さず、Ｒ７が結合している炭素原子への結合の一部を形成している。
【００２０】
Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０を表す基の式において、その傍に各場合で＊がある直線の末端は、炭素原子またはＣＨ２基を表さず、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０が結合している窒素原子への結合の一部を形成している。
【００２１】
本発明の目的上、好ましいのは、また、式
【化６】
2008534537.tif 000007
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表し、
Ｒ２は、水素、メチルまたはエチルを表し、
Ｒ３は、上記定義の通りであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノまたはメチルを表す］
の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００２２】
本発明の目的上、好ましいのは、また、Ｒ２が水素を表す、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物である。
本発明の目的上、好ましいのは、また、Ｒ４が、水素、ヒドロキシ、塩素またはメチルを表す、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物である。
本発明の目的上、好ましいのは、また、Ｒ４がヒドロキシを表す、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物である。
【００２３】
本発明の目的上、好ましいのは、また、Ｒ５が、
【化７】
2008534537.tif 000008
［ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す］
の基を表す、式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物である。
【００２４】
本発明の目的上、好ましいのは、また、
Ｒ５が、
【化８】
2008534537.tif 000009
［ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す］
の基を表し、
Ｒ２が水素を表し、
Ｒ３が、式
【化９】
2008534537.tif 000010
［ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ６は、式
【化１０】
2008534537.tif 000011
｛式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１１は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１２は、水素またはメチルを表し、
ｋは、０または１の数であり、
ｌは、１、２、３または４の数であり、
そして、
ｍおよびｎは、相互に独立して、１、２または３の数である｝
の基を表す］
の基を表し、
Ｒ４がヒドロキシを表す、
式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００２５】
本発明の目的上、好ましいのは、また、式中、
Ｒ５が、
【化１１】
2008534537.tif 000012
［ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す］
の基を表し、
Ｒ２が水素を表し、
Ｒ３が、式
【化１２】
2008534537.tif 000013
［ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ７は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ８およびＲ１０は、相互に独立して、式
【化１３】
2008534537.tif 000014
｛式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１３は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ１５およびＲ１６は、相互に独立して、水素、アミノエチルまたはヒドロキシエチルを表し、ｏは、０または１の数であり、
ｐ、ｑおよびｗは、相互に独立して、１、２、３または４の数であり、
Ｒ４は、ヒドロキシを表す｝
の基を表す］
の基を表し、
Ｒ４がヒドロキシを表す、
式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００２６】
本発明の目的上、好ましいのは、また、式中、
Ｒ５が、式
【化１４】
2008534537.tif 000015
［ここで、
＊は、炭素原子への結合部位であり、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシを表す］
の基を表し、
Ｒ２が水素を表し、
Ｒ３が、式
【化１５】
2008534537.tif 000016
［ここで、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ９は、式
【化１６】
2008534537.tif 000017
｛式中、
＊は、窒素原子への結合部位であり、
Ｒ１３は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
Ｒ１４は、水素またはメチルを表し、
Ｒ１５およびＲ１６は、相互に独立して、水素、アミノエチルまたはヒドロキシエチルを表し、
ｏは０または１の数であり、
ｐ、ｑおよびｗは、相互に独立して、１、２、３または４の数を表す｝
の基を表す］
の基を表し、
Ｒ４がヒドロキシを表す、
式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００２７】
本発明は、さらに、以下の方法に従う式（Ｉ）の化合物、またはそれらの塩、それらの溶媒和物もしくはそれらの塩の溶媒和物の製造方法に関する。
［Ａ］式
【化１７】
2008534537.tif 000018
（式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、上述の意味を有し、ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを表す）
の化合物を、２段階工程で、最初に、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下、式
ＨＲ３      （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ３は上述の意味を有する）
の化合物と反応させ、続いて酸と、かつ／または、水素化分解により反応させる、
または、
【００２８】
［Ｂ］式
【化１８】
2008534537.tif 000019
（式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、上述の意味を有し、そして、Ｚはベンジルオキシカルボニルを表す）
の化合物を、２段階工程で、最初に、１種またはそれ以上の脱水剤の存在下、式
ＨＲ３      （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ３は上述の意味を有する）
の化合物と反応させ、続いて酸と、または、水素化分解により反応させる。
【００２９】
塩の遊離塩基は、例えば、逆相カラムで塩基を加えたアセトニトリル−水グラジエントを用いるクロマトグラフィーにより、特に、RP18 Phenomenex Luna C18(2) カラムおよび塩基としてのジエチルアミンを使用することにより、得ることができる。
【００３０】
本発明は、さらに、化合物の塩または化合物の塩の溶媒和物を、塩基を加えたクロマトグラフィーにより化合物に変換する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの溶媒和物の製造方法に関する。
【００３１】
Ｒ１上のヒドロキシ基は、必要に応じて、式（ＩＩＩ）の化合物との反応の間、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基で保護され、それは、第２の反応段階で除去される。
【００３２】
式（ＩＩＩ）の化合物のラジカルＲ３中の反応性官能基は、好ましくは酸に不安定な保護基（例えばｂｏｃ）で、既に保護されて合成に導入される。反応が行い式（Ｉ）の化合物を得た後、脱保護反応により保護基を除去できる。これは、保護基化学の標準法により行う。酸性条件下または水素化分解による脱保護反応が好ましい。
【００３３】
方法［Ａ］および［Ｂ］の第１段階の反応は、一般的に、不活性溶媒中、必要に応じて塩基の存在下、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００３４】
ここで適する脱水剤は、例えば、カルボジイミド類、例えば、Ｎ,Ｎ'−ジエチル−、Ｎ,Ｎ'−ジプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ'−プロピルオキシメチルポリスチレン（ＰＳ−カルボジイミド）またはカルボニル化合物、例えばカルボニルジイミダゾール、または、１,２−オキサゾリウム化合物、例えば２−エチル−５−フェニル−１,２−オキサゾリウム−３−サルフェート、または、２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウムパークロレート、または、アシルアミノ化合物、例えば２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキノリン、または、プロパンホスホン酸無水物、または、イソブチルクロロホルメート、または、ビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−ホスホリルクロリド、または、ベンゾトリアゾリルオキシトリ（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートまたはＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、または、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、または、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、または、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、または、これらの混合物、または、これらと塩基との混合物である。
【００３５】
塩基の例は、アルカリ金属炭酸塩、例えば、炭酸ナトリウムまたはカリウム、または、重炭酸塩、または、有機塩基、例えばトリエチルアミンなどのトリアルキルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンまたはジイソプロピルエチルアミンである。
【００３６】
縮合は、好ましくは、ＨＡＴＵを用いて、塩基、特にジイソプロピルエチルアミンの存在下で、または、ＰｙＢＯＰを用いて、塩基、特にジイソプロピルエチルアミンの存在下で実施する。
【００３７】
不活性溶媒の例は、ジクロロメタンもしくはトリクロロメタンなどのハロ炭化水素類、ベンゼンなどの炭化水素類、または、ニトロメタン、ジオキサン、ジメチルホルムアミドまたはアセトニトリルである。溶媒の混合物を用いることも同様に可能である。ジメチルホルムアミドが特に好ましい。
【００３８】
方法［Ａ］および［Ｂ］の第２段階における酸との反応は、好ましくは、０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００３９】
ここで適する酸は、ジオキサン中の塩化水素、酢酸中の臭化水素、または、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸である。
【００４０】
方法［Ｂ］の第２段階における水素化分解は、一般的に、溶媒中、水素およびパラジウム／活性炭の存在下、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００４１】
溶媒の例は、水および氷酢酸との混合物中の、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールもしくはイソプロパノールなどのアルコール類、好ましくは、エタノール、水および氷酢酸の混合物である。
【００４２】
式（ＩＩＩ）の化合物は、知られているか、または、既知方法と同様に製造できる。
式（ＩＩ）の化合物は、知られているか、または、式
【化１９】
2008534537.tif 000020
（式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、上述の意味を有する）
の化合物を、ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）ジカーボネートと、塩基の存在下で反応させることにより製造できる。
【００４３】
この反応は、一般的に、溶媒中、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００４４】
塩基の例は、水酸化ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属水酸化物、または、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、または、ＤＢＵ、トリエチルアミンもしくはジイソプロピルエチルアミンなどの他の塩基であり、水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウムが好ましい。
【００４５】
溶媒の例は、塩化メチレンもしくは１,２−ジクロロエタンなどのハロ炭化水素類、メタノール、エタノールもしくはイソプロパノールなどのアルコール類、または、水である。
【００４６】
この反応は、好ましくは、水中で水酸化ナトリウムを用いて、または、メタノール中で炭酸ナトリウムを用いて実施する。
【００４７】
式（Ｖ）の化合物は、知られているか、または、式
【化２０】
2008534537.tif 000021
（式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、上述の意味を有し、そして、
Ｒ１７は、ベンジル、メチルまたはエチルを表す）
の化合物を、酸と、または、水素化分解により、方法［Ｂ］の第２段階について記載した通りに反応させ、必要に応じて、続いて塩基と反応させ、メチルまたはエチルエステルを加水分解することにより製造できる。
【００４８】
加水分解は、例えば、式（ＩＶ）の化合物を与える式（ＶＩ）の化合物の反応について記載した通りに行うことができる。
【００４９】
式（ＩＶ）の化合物は、知られているか、または、式（ＶＩ）の化合物において、ベンジル、メチルまたはエチルエステルを加水分解することにより製造できる。
【００５０】
この反応は、一般的に、溶媒中、塩基の存在下、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００５１】
塩基の例は、水酸化リチウム、ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属水酸化物であり、水酸化リチウムが好ましい。
【００５２】
溶媒の例は、ジクロロメタンもしくはトリクロロメタンなどのハロ炭化水素類、テトラヒドロフランもしくはジオキサンなどのエーテル類、または、メタノール、エタノールもしくはイソプロパノールなどのアルコール類、または、ジメチルホルムアミドである。これらの溶媒の混合物またはこれらの溶媒の水との混合物を用いることも同様に可能である。テトラヒドロフランまたはメタノールと水の混合物が特に好ましい。
【００５３】
式（ＶＩ）の化合物は、知られているか、または、式
【化２１】
2008534537.tif 000022
（式中、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１７は、上述の意味を有する）
の化合物を、第１段階で、酸と、方法［Ａ］および［Ｂ］の第２段階について記載した通りに反応させ、第２段階で塩基と反応させることにより、製造できる。
【００５４】
第２段階で、塩基との反応は、一般的に、溶媒中、好ましくは０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００５５】
塩基の例は、水酸化ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属水酸化物、または、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムもしくはカリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、または、ＤＢＵ、トリエチルアミンもしくはジイソプロピルエチルアミンなどの他の塩基であり、トリエチルアミンが好ましい。
【００５６】
溶媒の例は、クロロホルム、塩化メチレンもしくは１,２−ジクロロエタンなどのハロ炭化水素類、または、テトラヒドロフラン、または、これらの溶媒の混合物であり、塩化メチレンまたはテトラヒドロフランが好ましい。
【００５７】
式（ＶＩＩ）の化合物は、知られているか、または、式
【化２２】
2008534537.tif 000023
（式中、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１７は、上述の意味を有する）
の化合物を、ペンタフルオロフェノールと、脱水剤の存在下、方法［Ａ］および［Ｂ］の第１段階について記載した通りに製造できる。
【００５８】
この反応は、好ましくは、ＤＭＡＰおよびＥＤＣをジクロロメタン中で用いて、−４０℃ないし４０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００５９】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、知られているか、または、式
【化２３】
2008534537.tif 000024
（式中、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１７は、上述の意味を有する）
の化合物を、フッ化物と、特にフッ化テトラブチルアンモニウムと反応させることにより、製造できる。
【００６０】
この反応は、一般的に、溶媒中、好ましくは−１０℃ないし３０℃の温度範囲で、大気圧下で行う。
【００６１】
不活性溶媒の例は、ジクロロメタンなどのハロ炭化水素類、または、ベンゼンもしくはトルエンなどの炭化水素類、テトラヒドロフランもしくはジオキサンなどのエーテル類、または、ジメチルホルムアミドである。これらの溶媒の混合物を用いることも同様に可能である。テトラヒドロフランおよびジメチルホルムアミドは、好ましい溶媒である。
【００６２】
式（ＩＸ）の化合物は、知られているか、または、式
【化２４】
2008534537.tif 000025
（式中、Ｒ２、Ｒ４およびＲ１７は、上述の意味を有する）
の化合物を、式
【化２５】
2008534537.tif 000026
（式中、Ｒ５は上述の意味を有する）
の化合物と、脱水剤の存在下、方法［Ａ］および［Ｂ］の第１段階について記載した通りに反応させることより製造できる。
【００６３】
式（Ｘ）の化合物は、知られているか、または、実施例の部に記載の方法と同様に製造できる。
式（ＸＩ）の化合物は、知られているか、または、既知方法と同様に製造できる。
【００６４】
本発明の化合物は、予測し得なかった価値ある薬理的および薬物動態的効果の範囲を示す。
従って、それらは、ヒトおよび動物の疾患の処置および／または予防用の医薬としての使用に適する。
【００６５】
本発明の化合物は、それらの薬理特性を理由として、単独で、または他の活性化合物と組み合わせて、感染性疾患、特に細菌感染の処置および／または予防のために用いることができる。
【００６６】
例えば、以下の病原体または以下の病原体の混合物に起因する局所および／または全身的疾患を処置および／または予防することが可能である：
グラム陽性球菌、例えばブドウ球菌（黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌）および連鎖球菌（ストレプトコッカス・アガラクチア、フェカリス菌、肺炎連鎖球菌、化膿性連鎖球菌）；グラム陰性球菌（淋菌）並びにグラム陰性桿菌、例えば腸内細菌科、例えば大腸菌、インフルエンザ菌、シトロバクター属（シトロバクター・フロインデイ、シトロバクター・ジベルニス（divernis））、サルモネラ属および赤痢菌属；さらに、クレブシエラ属（肺炎桿菌、クレブシエラ・オキシトカ）、エンテロバクター属（エンテロバクター・アエロゲネス、エンテロバクター・アグロメランス（agglomerans））、ハフニア属、セラチア属（セラチア・マルセセンス）、プロテウス属（プロテウス・ミラビリス、プロテウス・レッチゲリ（rettgeri）、プロテウス・ブルガリス）、プロビデンシア属、エルシニア属およびアシネトバクター属。さらに、抗菌範囲には、シュードモナス属（緑膿菌、シュードモナス・マルトフィリア）、並びに、厳密に嫌気性の細菌、例えば、バクテロイデス・フラジリス、ペプトコッカス属、ペプトストレプトコッカス属およびクロストリジウム属の代表例；さらに、マイコプラズマ属（肺炎マイコプラズマ、マイコプラズマ・ホミニス、マイコプラズマ・ウレアリチカム）、並びに、ミコバクテリア、例えば結核菌が含まれる。
【００６７】
上記の病原体のリストは例示にすぎず、決して限定的に解釈されるべきではない。上述の病原体または混合感染に起因し、そして本発明の局所適用可能な製剤により予防、改善または治癒できる疾患として言及し得る例は、以下のものである：
ヒトの感染性疾患、例えば、敗血症性感染、骨および関節の感染、皮膚感染、術後創感染、膿瘍、蜂窩織炎、創傷感染、感染熱傷、口腔領域の感染、歯科手術後の感染、敗血症性関節炎、乳腺炎、扁桃炎、性器感染症および眼感染。
【００６８】
ヒトの他に、他の種でも細菌感染を処置できる。言及し得る例には、以下のものがある：
ブタ：大腸菌性下痢症（coli diarrhea）、腸毒血症、敗血症、赤痢、サルモネラ症、子宮炎−乳腺炎−アガラクチア症候群、乳腺炎；
反芻動物（ウシ、ヒツジ、ヤギ）：下痢、敗血症、気管支肺炎、サルモネラ症、パスツレラ症、マイコプラズマ病、性器感染；
ウマ：気管支肺炎、関節の病気、産褥性および産褥後感染、サルモネラ症；
イヌおよびネコ：気管支肺炎、下痢、皮膚炎、耳炎、尿路感染、前立腺炎；
家禽（ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ハト、観賞用鳥類など）：マイコプラズマ病、大腸菌感染、慢性呼吸器疾患、サルモネラ症、パスツレラ症、オウム病。
【００６９】
生産用および観賞用の魚類の飼育および管理における細菌性疾患の処置も同様に可能であり、そこでは抗菌スペクトルは前述した病原体を超えて、例えば、パスツレラ属、ブルセラ属、カンピロバクター属、リステリア属、エリシペロスリス属（Erysipelothris）、コリネバクテリウム属、ボレリア属（Borellia）、トレポネーマ属、ノカルジア属、リケッチア属、エルシニア属などのさらなる病原体に及ぶ。
【００７０】
本発明はさらに、疾患、好ましくは細菌性疾患、特に細菌感染の処置および／または予防のための、本発明の化合物の使用に関する。
本発明はさらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防のための、本発明の化合物の使用に関する。
本発明はさらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明の化合物の使用に関する。
本発明はさらに、本発明の化合物の抗菌的有効量を使用する、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防方法に関する。
【００７１】
本発明の化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。それらは、この目的のために、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜に、もしくは、耳に、または、インプラントもしくはステントとして、適する方法で投与できる。
【００７２】
本発明の化合物をこれらの投与経路に適する投与形で投与できる。
経口投与に適するのは、先行技術に準じて機能し、本発明の化合物を、迅速に、かつ／または、修飾された様式で送達し、そして、本発明の化合物を結晶形および／または無定形および／または溶解形で含有する投与形、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、胃液耐性であるか、または、遅れて溶解するか、または不溶であり、本発明の化合物の放出を制御する被覆を有する）、口腔中で迅速に崩壊する錠剤またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤である。
【００７３】
非経腸投与は、吸収段階を避けて（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内）、または、吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌散剤の形態の、注射および点滴用製剤である。
【００７４】
他の投与経路に適するのは、例えば、吸入用医薬形（なかんずく、散剤吸入器、噴霧器）、点鼻薬、液、スプレー；舌に、舌下に、または頬側に投与するための、錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐剤、耳または眼用製剤、膣カプセル剤、水性懸濁剤（ローション剤、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えばパッチなど）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末剤（dusting powder）、インプラントまたはステントである。
【００７５】
本発明の化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に許容し得る補助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助剤には、なかんずく、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えばアスコルビン酸などの抗酸化剤）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および味および／または臭気の隠蔽剤。
【００７６】
本発明はさらに、少なくとも１種の本発明の化合物を、通常１種またはそれ以上の不活性、非毒性、医薬的に許容し得る補助剤と共に含む医薬、および上述の目的のためのそれらの使用に関する。
【００７７】
非経腸投与で２４時間につき約５ないし２５０ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると、一般に明らかになった。経口投与の量は、２４時間につき約５ないし１００ｍｇ／体重ｋｇである。
【００７８】
それにも拘わらず、必要に応じて、特に体重、投与経路、活性化合物に対する個体の挙動、製剤の性質および投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり得、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。大量に投与する場合、これらを１日に亘る数個の個別用量に分割するのが望ましいことがある。
【００７９】
以下の試験および実施例における百分率は、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積を基準とする。
【実施例】
【００８０】
Ａ. 実施例
使用する略号：
【表１】
2008534537.tif 000027
【００８１】
【表２】
2008534537.tif 000028
【００８２】
ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm ｘ 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８３】
方法２（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm ｘ 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８４】
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent Series 1100 を伴う Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm ｘ 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００８５】
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Waters Alliance 2795；カラム：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 50 mm ｘ 4.6 mm；溶離剤Ａ：水＋５０％ギ酸５００μｌ／ｌ；溶離剤Ｂ：アセトニトリル＋５０％ギ酸５００μｌ／ｌ；グラジエント：０.０分１０％Ｂ→３.０分９５％Ｂ→４.０分９５％Ｂ；オーブン：３５℃；流速：０.０分１.０ｍｌ／分→３.０分３.０ｍｌ／分→４.０分３.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８６】
方法５（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent Series 1100 を伴う Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo HyPURITY Aquastar 3μ 50 mm ｘ 2.1 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８７】
方法６（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent Series 1100 を伴う Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo Hypersil GOLD-3μ 20 mm ｘ 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８８】
出発化合物
実施例１Ａ
ベンジル｛（１Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−［（｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−エチル｝アミノ）カルボニル］ブチル｝カルバメート
【化２６】
2008534537.tif 000029
Ｎ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−オルニチン３００ｍｇ（０.８２ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル−（２−アミノエチル）カルバメート１７１ｍｇ（１.０６ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド６ｍｌにアルゴン下で溶解する。次いで、０℃（氷浴）で、ＥＤＣ２０４ｍｇ（１.０６ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ３３ｍｇ（０.２５ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をゆっくりと室温に温め、室温で１２時間撹拌する。溶液を真空で濃縮し、残渣を酢酸エチルに取る。有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液および塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で蒸発させる。残っている固体を高真空下で乾燥する。
収量：３９２ｍｇ（理論値の９４％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.３６分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５０９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００８９】
実施例２Ａ
Ｎ５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−Ｌ−オルニチンアミド
【化２７】
2008534537.tif 000030
エタノール５０ｍｌ中のベンジル｛（１Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１−［（｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝アミノ）カルボニル］ブチル｝カルバメート（実施例１Ａ）３９０ｍｇ（０.７７ｍｍｏｌ）の溶液を、パラジウム／活性炭（１０％）４０ｍｇの添加後、室温で大気圧下に４時間水素化する。珪藻土を通して混合物を濾過し、残渣をエタノールで洗浄する。濾液を真空で蒸発乾固する。生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：２６３ｍｇ（理論値の９１％）
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋Ｈ）＋；３９７（Ｍ＋Ｎａ）＋
【００９０】
実施例３Ａ
１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−プロリル−Ｎ５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−Ｌ−オルニチンアミド
【化２８】
2008534537.tif 000031
１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−プロリン４８ｍｇ（０.１９４ｍｍｏｌ）および実施例２Ａ由来の化合物９４ｍｇ（０.２５ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド６ｍｌにアルゴン下で溶解する。次いで、０℃（氷浴）で、ＥＤＣ４８ｍｇ（０.２５ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ７.８ｍｇ（０.０５８ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をゆっくりと室温に温め、室温で１２時間撹拌する。溶液を真空で濃縮し、残渣をジクロロメタンに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液、０.１Ｎ塩酸および水で洗浄する。合わせた有機相を真空で濃縮し、かくして得られた固体を精製せずにさらに反応させる。
収量：１１７ｍｇ（理論値の９５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２.３６分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６０６（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９１】
実施例４Ａ
Ｌ−プロリル−Ｎ５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−Ｌ−オルニチンアミド
【化２９】
2008534537.tif 000032
実施例３Ａ由来の化合物１１７ｍｇ（０.１９３ｍｍｏｌ）を、エタノール５０ｍｌに溶解し、パラジウム／活性炭（１０％）２０ｍｇを添加する。大気圧下で１２時間水素化を実施し、珪藻土を通して濾過した後、濾液を真空で濃縮する。かくして得られた固体を精製せずにさらに反応させる。
収量：８６ｍｇ（理論値の９４％）
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４７２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９２】
実施例５Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル｛（５Ｓ）−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−６−ヒドロキシヘキシル｝カルバメート
【化３０】
2008534537.tif 000033
４−メチルモルホリン９１ｍｇ（０.９０ｍｍｏｌ）およびエチルクロロホルメート９８ｍｇ（０.９０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン１０ｍｌ中のＮ２,Ｎ６−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン−Ｎ−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン４７５ｍｇ（０.９０ｍｍｏｌ）の溶液に−１０℃で添加し（１：１）、混合物を３０分間撹拌する。この温度で、水素化リチウムアルミニウムの１Ｍテトラヒドロフラン溶液１.８１ｍｌ（１.８１ｍｍｏｌ）を、ゆっくりと滴下して添加する。混合物をゆっくりと室温に温め、室温で１２時間撹拌する。氷中で冷却しながら、水０.１ｍｌおよび４.５％水酸化ナトリウム溶液０.１５ｍｌを注意深く添加し、撹拌を室温で３時間継続する。混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮する。残渣を酢酸エチルに溶解し、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、再度真空で蒸発乾固する。生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：２５０ｍｇ（理論値の８３％）
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３３３（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９３】
実施例６Ａ
（２Ｓ）−２,６−ビス［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキシルメタンスルホネート
【化３１】
2008534537.tif 000034
メタンスルホニルクロリド１０３ｍｇ（０.９０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン０.２１ｍｌ（１.５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２０ｍｌ中の実施例５Ａ由来の化合物２５０ｍｇ（０.７５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を室温で１６時間撹拌する。混合物をジクロロメタンで希釈し、０.１Ｎ塩酸で２回洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で蒸発乾固する。生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：２６４ｍｇ（理論値の８６％）
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝４２８（Ｍ＋ＮＨ４）＋
【００９４】
実施例７Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル｛（５Ｓ）−６−アジド−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキシル｝カルバメート
【化３２】
2008534537.tif 000035
アジ化ナトリウム４２ｍｇ（０.６４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド１５ｍｌ中の実施例６Ａ由来の化合物２６４ｍｇ（０.６４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を７０℃で１２時間撹拌する。溶媒の殆どを真空で留去し、残渣を酢酸エチルで希釈する。混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で数回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で蒸発乾固する。生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：定量的
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３５８（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９５】
実施例８Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル｛（５Ｓ）−６−アミノ−５−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキシル｝カルバメート
【化３３】
2008534537.tif 000036
エタノール１０ｍｌ中の実施例７Ａ由来の化合物２２９ｍｇ（０.６４ｍｍｏｌ）の溶液を、パラジウム／活性炭（１０％）２０ｍｇの添加後、室温で、大気圧下に１２時間水素化する。珪藻土を通して混合物を濾過し、残渣をエタノールで洗浄する。濾液を真空で蒸発乾固する。生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：１６１ｍｇ（理論値の７６％）
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３３２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９６】
実施例９Ａ
ベンジル（２Ｓ,４Ｒ）−２−［（｛（２Ｓ）−２,６−ビス［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキシル｝アミノ）カルボニル］−４−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキシレート
【化３４】
2008534537.tif 000037
製造は、実施例３Ａと同様に、（４Ｒ）−１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン５７ｍｇ（０.２１６ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド６ｍｌ中の実施例８Ａ由来の化合物９３ｍｇ（０.２８ｍｍｏｌ）から、ＥＤＣ５４ｍｇ（０.２８ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ８.７ｍｇ（０.０６５ｍｍｏｌ）を添加して行う。生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（移動相水／アセトニトリルグラジエント：９０：１０→５：９５）により精製する。
収量：４２ｍｇ（理論値の３４％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.０８分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５７９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９７】
実施例１０Ａ
（４Ｒ）−Ｎ−｛（２Ｓ）−２,６−ビス［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキシル｝−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンアミド
【化３５】
2008534537.tif 000038
製造は、実施例４Ａと同様に、エタノール２０ｍｌ中の実施例９Ａ由来の化合物４１ｍｇ（０.０７１ｍｍｏｌ）から、パラジウム／活性炭（１０％）７.５ｍｇを添加して行う。生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：定量的
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４４５（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９８】
実施例１１Ａ
２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチルメタンスルホネート
【化３６】
2008534537.tif 000039
メタンスルホニルクロリド１１.３ｇ（９８.４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１ｌ中のベンジル（２−ヒドロキシエチル）カルバメート１６ｇ（８２.０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１６.６０ｇ（６４.０２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を室温で終夜撹拌する。水を添加し、有機相を水および塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で蒸発させる。残っている固体を高真空下で乾燥する。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製する。
収量７ｇ（理論値の３１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.８４分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２７３（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９９】
実施例１２Ａ
ベンジル｛２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］エチル｝カルバメート
【化３７】
2008534537.tif 000040
２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチルメタンスルホネート（実施例１１Ａ）５００ｍｇ（１.８３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム７５８ｍｇ（５.４８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル２５ｍｌ中の２−アミノエタノール２２６ｍｇ（３.６６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を５０℃で終夜撹拌する。次いで、溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンに取る。有機相を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮する。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製する。
収量１３１ｍｇ（理論値の２９％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０.７８分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２３９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１００】
実施例１３Ａ
ベンジル［２−（｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］エチル｝アミノ）エチル］カルバメート
【化３８】
2008534537.tif 000041
製造は、実施例１２Ａと同様に、２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチルメタンスルホネート（実施例１１Ａ）３００ｍｇ（１.０９８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）メチルカルバメート３８６ｍｇ（２.１９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム４５５ｍｇ（３.３０ｍｍｏｌ）から、アセトニトリル１０ｍｌ中で行う。
収量：３６０ｍｇ（理論値の８２％）
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.５１分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３５２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０１】
実施例１４Ａ
ベンジル［２−（｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−ヒドロキシプロピル｝アミノ）エチル］カルバメート
【化３９】
2008534537.tif 000042
製造は、実施例１２Ａと同様に、２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチルメタンスルホネート（実施例１１Ａ）２７０ｍｇ（０.９８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）カルバメート３７９ｍｇ（１.９８ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム４０９ｍｇ（２.９６ｍｍｏｌ）から、アセトニトリル１０ｍｌ中で行う。
収量：２０９ｍｇ（理論値の４５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１.４４分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３６８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０２】
実施例１５Ａ
１−ｔｅｒｔ−ブチル５−（メトキシカルボニル）Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタメート
【化４０】
2008534537.tif 000043
（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−ペンタン酸５ｇ（１６.１５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン２.４５ｍｌ（１７.６０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ８０ｍｌにアルゴン下で溶解し、０℃に冷却する。メチルクロロホルメート１.６８ｇ（１７.７７ｍｍｏｌ）をそこに添加し、混合物を０℃で３時間撹拌する。珪藻土を通して反応混合物を濾過する。濾液を直接反応させる。
【０１０３】
実施例１６Ａ
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−ヒドロキシ−Ｌ−ノルバリネート（norvalinate）
【化４１】
2008534537.tif 000044
（１−ｔｅｒｔ−ブチル５−（メトキシカルボニル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタメート（実施例１５Ａ）の濾液を、水４.５ｍｌ中の水素化ホウ素ナトリウム１.５２ｇ（４０.３８ｍｍｏｌ）の懸濁液に０℃で滴下して添加する。混合物はゆっくりと室温に温まり、それを終夜撹拌する。反応溶液を真空で濃縮し、後処理に、残渣を酢酸エチルおよび水と混合する。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で蒸発させる。粗生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：４.５ｇ（理論値の４８％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２.０４分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２９０（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０４】
実施例１７Ａ
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−［（メチルスルホニル）オキシ］−Ｌ−ノルバリネート
【化４２】
2008534537.tif 000045
メタンスルホニルクロリド１.０７ｇ（９.３５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２００ｍｌ中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−ヒドロキシ−Ｌ−ノルバリネート（実施例１６Ａ）４.５ｇ（７.７９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン２.１７ｍｌ（５.５８ｍｍｏｌ）の混合物に添加する。混合物を室温で終夜撹拌し、次いで、水を添加する。有機相を水および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で蒸発させる。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製する。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.１６分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３６８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０５】
実施例１８Ａ
ｔｅｒｔ−ブチルＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ５−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−Ｌ−オルニチネート（ornithinate）
【化４３】
2008534537.tif 000046
製造は、実施例１２Ａと同様に、アセトニトリル１００ｍｌ中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−［（メチルスルホニル）オキシ］−Ｌ−ノルバリネート（実施例１７Ａ）２ｇ（５.４４３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カルバメート１.７８ｇ（１０.８９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム２.２６ｇ（１６.３３ｍｍｏｌ）から行う。粗生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：４.２ｇ（理論値の５３％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.６１分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４３２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０６】
実施例１９Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル２−｛［（２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチル）アミノ］メチル｝ピペリジン−１−カルボキシレート
【化４４】
2008534537.tif 000047
製造は、実施例１２Ａと同様に、２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチルメタンスルホネート（実施例１１Ａ）１ｇ（３.６６ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル２−（アミノメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート１.５６ｇ（７.３１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム１.５２ｇ（１０.９８ｍｍｏｌ）から、アセトニトリル７０ｍｌ中で行う。
収量：６８０ｍｇ（理論値の４５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.４７分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３９２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０７】
実施例２０Ａ
ベンジル｛２−［｛（２Ｓ）−５−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタノイル｝（２−ヒドロキシエチル）アミノ］エチル｝カルバメート
【化４５】
2008534537.tif 000048
ＨＡＴＵ１９３ｍｇ（０.５１ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.２４７ｍｌ（１.３９ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ１０ｍｌ中のＮ５−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−オルニチン１６９ｍｇ（０.４６２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で３０分間撹拌した後、ベンジル｛２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］エチル｝カルバメート（実施例１２Ａ）１１６ｍｇ（０.４６ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で１５時間撹拌する。次いで、溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルおよび水の中で混合する。有機相を１Ｎ塩酸および飽和塩化ナトリウム水溶液で連続的に洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製する。
収量１８８ｍｇ（理論値の７０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.１７分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５８７（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０８】
実施例２１Ａ
ベンジル｛（４Ｓ）−４−アミノ−５−［（２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５−オキソペンチル｝カルバメート塩酸塩
【化４６】
2008534537.tif 000049
塩化水素の４Ｍジオキサン溶液２ｍｌを、ジオキサン１ｍｌ中のベンジル｛２−［｛（２Ｓ）−５−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタノイル｝（２−ヒドロキシエチル）アミノ］エチル｝カルバメート（実施例２０Ａ）１７６ｍｇ（０.３０ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で３時間後、反応溶液を真空で濃縮し、ジクロロメタンと数回共蒸発させ、高真空下で乾燥する。粗生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：１６０ｍｇ（理論値の８５％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.５３分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４８７（Ｍ−ＨＣｌ＋Ｈ）＋
【０１０９】
実施例２２Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（３Ｓ）−３−（３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝プロピル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４,９−ジオキソ−１１−フェニル−１０−オキサ−２,５,８−トリアザウンデカン−１−オイル］ピペリジン−１−カルボキシレート
【化４７】
2008534537.tif 000050
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸４７ｍｇ（０.２０６ｍｍｏｌ）、ベンジル｛（４Ｓ）−４−アミノ−５−［（２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５−オキソペンチル｝カルバメート塩酸塩（実施例２１Ａ）１３０ｍｇ（０.２０６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン０.０８ｍｌ（０.５６ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド１０ｍｌにアルゴン下で溶解する。次いで、０℃（氷浴）で、ＥＤＣ６７ｍｇ（０.３５０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ９ｍｇ（０.０６８ｍｍｏｌ）を添加する。混合物をゆっくりと室温に温め、室温で１２時間撹拌する。溶液を真空で濃縮し、残渣をジクロロメタンに取る。有機相を水、１Ｎ塩酸および飽和塩化ナトリウム水溶液で連続的に洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。粗生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.２６分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６９８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１０】
実施例２３Ａ
ベンジル｛（４Ｓ）−５−［（２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝エチル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５−オキソ−４−［（ピペリジン−３−イルカルボニル）アミノ］ペンチル｝カルバメート塩酸塩
【化４８】
2008534537.tif 000051
塩化水素の４Ｍジオキサン溶液２ｍｌを、ジオキサン１ｍｌ中のｔｅｒｔ−ブチル３−［（３Ｓ）−３−（３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝プロピル）−５−（２−ヒドロキシエチル）−４,９−ジオキソ−１１−フェニル−１０−オキサ−２,５,８−トリアザウンデカン−１−オイル］−ピペリジン−１−カルボキシレート（実施例２２Ａ）１８０ｍｇ（０.１９６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で３時間後、反応溶液を真空で濃縮し、ジクロロメタンと数回共蒸発させ、高真空下で乾燥する。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製する。
収量：１８ｍｇ（理論値の１４％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１.８４分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５９８（Ｍ−ＨＣｌ＋Ｈ）＋
【０１１１】
下表に列挙する実施例２４Ａないし２９Ａは、対応する出発物質から、上記で詳述した実施例１Ａの方法と同様に製造する：
【表３】
2008534537.tif 000052
【０１１２】
【表４】
2008534537.tif 000053
【０１１３】
下表に列挙する実施例３０Ａないし３５Ａは、対応する出発物質から、上記で詳述した実施例２Ａの方法と同様に製造する：
【表５】
2008534537.tif 000054
【０１１４】
実施例３６Ａ
ベンジル｛２−［｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１１−｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝（２−ヒドロキシエチル）アミノ］エチル｝カルバメート
【化４９】
2008534537.tif 000055
ＨＡＴＵ１９.２ｍｇ（０.０５０ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.０１０ｍｌ（０.１３７ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ２ｍｌ中の（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１１−｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］−ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−カルボン酸（ＷＯ０３／１０６４８０の実施例８３Ａ）３０ｍｇ（０.０４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。室温で３０分間撹拌した後、ベンジル｛２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］エチル｝カルバメート（実施例１２Ａ）１２.７ｍｇ（０.０４６ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で１５時間撹拌する。次いで、溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンに取る。有機相を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮する。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製する。
収量：８ｍｇ（理論値の２０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２.２９分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝８７７（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１５】
下表に列挙する実施例３７Ａないし４５Ａは、実施例３６Ａの方法と同様に製造する。
【表６】
2008534537.tif 000056
【０１１６】
【表７】
2008534537.tif 000057
【０１１７】
【表８】
2008534537.tif 000058
【０１１８】
実施例４６Ａ
１−｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１１−｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−プロピル｝−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝−Ｌ−プロリル−Ｎ５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−Ｌ−オルニチンアミド
【化５０】
2008534537.tif 000059
ＰｙＢＯＰ２６ｍｇ（０.０５０ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.０２０ｍｌ（０.１４ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ１０ｍｌ中の（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１１−｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−カルボン酸（ＷＯ０３／１０６４８０の実施例８３Ａ）３０ｍｇ（０.０４６ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加する。０℃で３０分後、Ｌ−プロリル−Ｎ５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝−Ｌ−オルニチンアミド（実施例４Ａ）２３.７ｍｇ（０.０５ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で１５時間撹拌する。次いで、溶媒を蒸発させ、残渣を水と撹拌し、濾過により回収し、真空で乾燥する。粗生成物を Sephadex LH20 のクロマトグラフィー（移動相：メタノール／酢酸（０.２５％））により精製する。
収量：３４ｍｇ（理論値の６６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２.４９分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１１１０（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１９】
下表に列挙する実施例４７Ａないし５０Ａは、実施例４６Ａの方法と同様に製造する。
【表９】
2008534537.tif 000060
【０１２０】
実施例５１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル［２−（（２−アミノエチル）｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１１−｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ−［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝アミノ）エチル］メチルカルバメートヒドロアセテート
【化５１】
2008534537.tif 000061
ベンジル［２−（｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１１−｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］エチル｝アミノ）エチル］カルバメート（実施例３７Ａ）１１ｍｇ（０.０１ｍｍｏｌ）を、酢酸／水（４：１）４ｍｌに溶解する。パラジウム／活性炭（１０％）５ｍｇをそこに添加し、続いて大気圧下で１５時間水素化する。予め洗浄した珪藻土を通して反応混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮する。粗生成物をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.８０分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝８５６（Ｍ−ＨＯＡｃ＋Ｈ）＋
【０１２１】
下表に列挙する実施例５２Ａないし５６Ａは、実施例５１Ａの方法と同様に製造する。
【表１０】
2008534537.tif 000062
【０１２２】
【表１１】
2008534537.tif 000063
【０１２３】
例示的実施態様
実施例１
１−｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−アミノ−１１−（３−アミノプロピル）−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝−Ｌ−プロリル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｌ−オルニチンアミド四塩酸塩
【化５２】
2008534537.tif 000064
塩化水素の４Ｎジオキサン溶液０.３６３ｍｌを、ジオキサン１ｍｌ中の実施例４６Ａ由来の化合物２６.９ｍｇ（０.０２４ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加する。室温で３時間後、反応溶液を真空で濃縮し、ジクロロメタンと数回共蒸発させる。残っている固体を恒量まで高真空下で乾燥する。
収量：２０ｍｇ（理論値の９６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.８２分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝７１０（Ｍ−４ＨＣｌ＋Ｈ）＋
1H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.26 (mc, 1H), 1.55-2.1 (m, 10H), 2.27 (mc, 1H), 2.75 (mc, 1H), 2.9-3.2 (m, 7H), 3.3-3.8 (m, 6H), 4.25 (mc, 1H), 4.44 (mc, 2H), 4.7-4.9 (m, 2H, D2Oの下), 6.85-7.0 (m, 3H), 7.27 (s, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.4 (d, 1H).
【０１２４】
実施例２
１−｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−アミノ−１１−（３−アミノプロピル）−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝−Ｌ−プロリル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｌ−オルニチンアミドテトラ（ヒドロトリフルオロアセテート）
四塩酸塩の実施例１を、分取用ＨＰＬＣ（Reprosil ODS-A, 移動相アセトニトリル／０.２％水性トリフルオロ酢酸５：９５→９５：５）により、テトラ（ヒドロトリフルオロアセテート）に変換する。
【０１２５】
実施例３
（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−アミノ−Ｎ−（２−アミノエチル）−１１−（３−アミノプロピル）−５,１７−ジヒドロキシ−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−カルボキサミド四塩酸塩
【化５３】
2008534537.tif 000065
ｔｅｒｔ−ブチル［２−（（２−アミノエチル）｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−１１−｛３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝アミノ）エチル］メチルカルバメート（実施例５１Ａ）９ｍｇ（０.０１１ｍｍｏｌ）および塩化水素の４Ｍジオキサン溶液１.５ｍｌの混合物を、室温で２０分間撹拌する。反応溶液を濃縮し、ジクロロメタンと数回共蒸発させ、高真空下で乾燥する。
収量：定量的
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０.２７分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５５５（Ｍ−４ＨＣｌ＋Ｈ）＋
1H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.60-1.90 (m, 5H), 2.73 (d, 3H), 2.86-3.11 (m, 4H), 3.23-3.38 (m, 4H), 3.50-3.95 (m, 8H), 5.09 (m, 2H), 6.96 (d, 2H), 7.01 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.46 (d, 1H).
【０１２６】
実施例４
１−｛［（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−アミノ−１１−（３−アミノプロピル）−５,１７−ジヒドロキシ−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−イル］カルボニル｝−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｌ−プロリンアミド三塩酸塩
【化５４】
2008534537.tif 000066
塩化水素の４Ｎジオキサン溶液０.３６３ｍｌを、ジオキサン１ｍｌ中の実施例４７Ａ由来の化合物２６.９ｍｇ（０.０２４ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で添加する。室温で３時間後、反応溶液を真空で濃縮し、ジクロロメタンと数回共蒸発させる。残っている固体を恒量まで高真空下で乾燥する。
収量：２０ｍｇ（理論値の９６％）
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.８２分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝７１０（Ｍ−３ＨＣｌ＋Ｈ）＋
1H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.26 (mc, 1H), 1.5-2.1 (m, 8H), 2.26 (mc, 1H), 2.76 (mc, 1H), 2.9-3.2 (m, 7H), 3.3-3.6 (m, 2H), 4.37 (mc, 1H), 4.45 (mc, 1H), 4.7-4.9 (m, 2H, D2Oの下), 6.85-7.0 (m, 3H), 7.27 (s, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.4 (d, 1H).
【０１２７】
実施例５
（８Ｓ,１１Ｓ,１４Ｓ）−１４−アミノ−Ｎ−｛２−［（２−アミノエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１１−（３−アミノプロピル）−５,１７−ジヒドロキシ−Ｎ−メチル−１０,１３−ジオキソ−９,１２−ジアザトリシクロ［１４.３.１.１２,６］ヘンイコサ−１（２０）,２（２１）,３,５,１６,１８−ヘキサエン−８−カルボキサミド三塩酸塩
【化５５】
2008534537.tif 000067
塩化水素の４Ｎジオキサン溶液０.３４３ｍｌを、実施例４３Ａ由来の化合物１９.９ｍｇ（０.０２３ｍｍｏｌ）およびジオキサン１ｍｌの溶液に０℃で添加する。室温で３時間後、反応溶液を真空で濃縮し、ジクロロメタンと数回共蒸発させる。残っている固体を高真空下で恒量まで乾燥する。
収量：１３.６ｍｇ（理論値の８８％）
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.９分
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５７０（Ｍ−３ＨＣｌ＋Ｈ）＋
【０１２８】
下表に列挙する実施例５ないし１４は、実施例１の方法と同様に、塩酸塩またはヒドロ（トリフルオロアセテート）塩として、各々の単離方法に従い製造する。
【表１２】
2008534537.tif 000068
【０１２９】
【表１３】
2008534537.tif 000069
【０１３０】
【表１４】
2008534537.tif 000070
【０１３１】
Ｂ. 生理活性の評価
使用する略号：
【表１５】
2008534537.tif 000071
【０１３２】
本発明の化合物のインビトロ活性は、以下のアッセイで示すことができる：
大腸菌抽出物を用いるインビトロの転写−翻訳
Ｓ３０抽出物を調製するために、対数的に増殖している大腸菌ＭＲＥ６００（M. Mueller; Freiburg University）を回収し、洗浄し、インビトロの転写−翻訳試験について記載された通りに用いる（Mueller, M. and Blobel, G. Proc Natl Acad Sci USA (1984) 81, pp. 7421-7425)。
【０１３３】
反応混合物５０μｌにつきｃＡＭＰ（１１.２５ｍｇ／ｍｌ）１μｌを、インビトロの転写−翻訳試験用の反応混合物にさらに添加する。試験混合物は１０５μｌの量であり、試験しようとする物質５μｌは５％ＤＭＳＯ中で提供される。ｐＢＥＳＴＬ ｕｃ（Promega, Germany）の混合物１μｇ／１００μｌを、転写テンプレートとして使用する。３０℃で６０分間インキュベートした後、ルシフェリン溶液（２０ｍＭトリシン、２.６７ｍＭ ＭｇＳＯ４、０.１ｍＭ ＥＤＴＡ、３３.３ｍＭ ＤＴＴ ｐＨ７.８、２７０μＭ ＣｏＡ、４７０μＭルシフェリン、５３０μＭ ＡＴＰ）５０μｌを添加し、得られる生物発光をルミノメーターで１分間測定する。ホタルルシフェラーゼの翻訳の５０％阻害を導く阻害剤の濃度を、ＩＣ５０として報告する。
【０１３４】
黄色ブドウ球菌抽出物を用いるインビトロの転写−翻訳
黄色ブドウ球菌ルシフェラーゼレポータープラスミドの構築
黄色ブドウ球菌からのインビトロの転写−翻訳アッセイで使用できるレポータープラスミドを構築するために、プラスミドｐＢＥＳＴｌｕｃ（Promega Corporation, USA）を使用する。このプラスミド中でホタルルシフェラーゼの前に存在する大腸菌ｔａｃプロモーターを、黄色ブドウ球菌由来の適切なシャイン・ダルガノ配列を有するｃａｐＡ１プロモーターで置き換える。このために、プライマーＣＡＰＦｏｒ５'−ＣＧＧＣＣＡＡＧＣＴＴＡＣＴＣＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＴＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＴＴＡＴＡＴＡＴＡＡＴＧＧＡＡＡＡＣＡＡＧＡＡＡＧＧＡＡＡＡＴＡＧＧＡＧＧＴＴＴＡＴＡＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＡ−３'およびＣＡＰＲｅｖ５'−ＧＴＣＡＴＣＧＴＣＧＧＧＡＡＧＡＣＣＴＧ−３'を使用する。プライマーＣＡＰＦｏｒは、ｃａｐＡ１プロモーター、リボソーム結合部位およびルシフェラーゼ遺伝子の５'領域を含有する。ｐＢＥＳＴｌｕｃをテンプレートとして使用するＰＣＲの後、融合したｃａｐＡ１プロモーターを伴うホタルルシフェラーゼ遺伝子を含有するＰＣＲ産物を単離することができる。これを、ＣｌａＩおよびＨｉｎｄＩＩＩによる切断の後、同様にＣｌａＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで切断したベクターｐＢＥＳＴｌｕｃにライゲーションする。得られるプラスミドｐ１ａは、大腸菌中で複製され得、黄色ブドウ球菌インビトロ転写−翻訳試験において、テンプレートとして使用できる。
【０１３５】
黄色ブドウ球菌からのＳ３０抽出物の調製
ＢＨＩ培地６ｌに、黄色ブドウ球菌株の終夜培養物２５０ｍｌを植え付け、ＯＤ６００ｎｍが２−４になるまで３７℃で増殖させる。細胞を遠心分離により回収し、冷却バッファーＡ（１０ｍＭトリス酢酸塩、ｐＨ８.０、１４ｍＭ酢酸マグネシウム、１ｍＭ ＤＴＴ、１Ｍ ＫＣｌ）５００ｍｌ中で洗浄する。再度遠心分離した後、５０ｍＭ ＫＣｌを含む冷えたバッファーＡ２５０ｍｌ中で細胞を洗浄し、得られるペレットを−２０℃で６０分間冷凍する。ペレットを氷上で３０ないし６０分間かけて解凍し、総量で９９ｍｌのバッファーＢ（１０ｍＭトリス酢酸塩、ｐＨ８.０、２０ｍＭ酢酸マグネシウム、１ｍＭ ＤＴＴ、５０ｍＭ ＫＣｌ）に取る。リゾスタフィン（０.８ｍｇ／ｍｌ）を含むバッファーＢ１.５ｍｌ分を、３個の予め冷却した遠心カップに導入し、各々３３ｍｌの細胞懸濁液と混合する。サンプルを３７℃で、時々振盪しながら、４５ないし６０分間インキュベートし、その後０.５Ｍ ＤＴＴ溶液１５０μｌを添加する。溶解した細胞を３００００ｘｇおよび４℃で３０分間遠心分離する。細胞ペレットをバッファーＢに取り、次いで同じ条件下で再度遠心分離し、回収した上清を合わせる。上清を同じ条件下で再度遠心分離し、０.２５倍の体積のバッファーＣ（６７０ｍＭトリス酢酸塩、ｐＨ８.０、２０ｍＭ酢酸マグネシウム、７ｍＭホスホエノールピルビン酸Ｎａ３、７ｍＭ ＤＴＴ、５.５ｍＭ ＡＴＰ、７０μＭアミノ酸（Promegaから完成）、ピルビン酸キナーゼ（Sigma, Germany）７５μｇ）／ｍｌ）を上清の上部２／３に添加する。サンプルを３７℃で３０分間インキュベートする。上清を、透析バッファー（１０ｍＭトリス酢酸塩、ｐＨ８.０、１４ｍＭ酢酸マグネシウム、１ｍＭ ＤＴＴ、６０ｍＭ酢酸カリウム）２ｌに対して、３５００Ｄａカットオフの透析チューブ中で、１回バッファーを交換して、４℃で終夜透析する。透析チューブを冷たいＰＥＧ８０００粉末（Sigma, Germany）で覆うことにより、透析液を約１０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度に４℃で濃縮する。Ｓ３０抽出物は、分注して−７０℃で保存できる。
【０１３６】
黄色ブドウ球菌のインビトロの転写−翻訳アッセイにおけるＩＣ５０の決定
化合物によるタンパク質生合成の阻害を、インビトロの転写−翻訳アッセイで示すことができる。このアッセイは、テンプレートとしてのレポータープラスミドｐ１ａおよび黄色ブドウ球菌から得られた無細胞のＳ３０抽出物を使用する、ホタルルシフェラーゼの無細胞転写および翻訳を基礎とする。得られるルシフェラーゼの活性は、発光測定により検出できる。
【０１３７】
用いるべきＳ３０抽出物またはプラスミドｐ１ａの量は、そのアッセイにおける最適濃度を確保するために各調製物について新たに試験しなければならない。５％ＤＭＳＯに溶解した試験しようとする物質３μｌを、ＭＴＰ中に提供する。次いで、適当に濃縮したプラスミド溶液ｐ１ａ１０μｌを添加する。続いて、予混合物（５００ｍＭ酢酸カリウム、８７.５ｍＭトリス酢酸塩、ｐＨ８.０、６７.５ｍＭ酢酸アンモニウム、５ｍＭ ＤＴＴ、５０μｇ／ｍｌの葉酸、８７.５ｍｇ／ｍｌのＰＥＧ８０００、５ｍＭ ＡＴＰ、１.２５ｍＭの各ＮＴＰ、２０μＭの各アミノ酸、５０ｍＭ ＰＥＰ（Ｎａ３塩）、２.５ｍＭ ｃＡＭＰ、２５０μｇ／ｍｌの各大腸菌ｔＲＮＡ）２３μｌおよび適当量の黄色ブドウ球菌Ｓ３０抽出物２３μｌの混合物４６μｌを添加し、混合する。３０℃で６０分間インキュベートした後、ルシフェリン溶液（２０ｍＭトリシン、２.６７ｍＭ ＭｇＳＯ４、０.１ｍＭ ＥＤＴＡ、３３.３ｍＭ ＤＴＴ ｐＨ７.８、２７０μＭ ＣｏＡ、４７０μＭルシフェリン、５３０μＭ ＡＴＰ）５０μｌを添加し、生じる生物発光をルミノメーターで１分間測定する。ホタルルシフェラーゼの翻訳の５０％阻害を導く阻害剤の濃度をＩＣ５０として報告する。
【０１３８】
最低阻害濃度（ＭＩＣ）の決定
最低阻害濃度（ＭＩＣ）は、試験微生物の増殖が１８−２４時間にわたり阻害される抗菌剤の最低濃度である。これらの場合、阻害濃度は、標準的な微生物学的方法により決定できる（例えば、The National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard-fifth edition. NCCLS document M7 A5 [ISBN 1 56238 394 9]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087 1898 USA, 2000 参照）。本発明の化合物のＭＩＣは、９６−ウェルマイクロタイタープレートのスケールでの液体希釈試験で決定する。細菌の微生物を、０.４％ＢＨブロスを添加した最小培地（１８.５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、５.７ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、９.３ｍＭ ＮＨ４Ｃｌ、２.８ｍＭ ＭｇＳＯ４、１７.１ｍＭ ＮａＣｌ、０.０３３μｇ／ｍｌのチアミン塩酸塩、１.２μｇ／ｍｌのニコチン酸、０.００３μｇ／ｍｌのビオチン、１％グルコース、２５μｇ／ｍｌの各タンパク新生アミノ酸（但し、フェニルアラニンを除く）；[H. P. Kroll；未発表］）（試験培地）中で培養する。フェシウム菌Ｌ４００１の場合、熱で非働化したウシ胎児血清（FCS; GibcoBRL, Germany）を試験培地に最終濃度１０％で添加する。試験微生物の終夜培養物を新鮮な試験培地中でＯＤ５７８０.００１（腸球菌の場合０.０１）に希釈し、試験培地中の試験物質の希釈物（１：２の希釈段階）と１：１でインキュベートする（最終体積２００μｌ）。培養物を３７℃で１８−２４時間インキュベートする（腸球菌は５％ＣＯ２の存在下にて）。
各場合で、目視できる細菌の増殖が起こらなくなる最低物質濃度を、ＭＩＣと定義する。
【０１３９】
最低阻害濃度（ＭＩＣ）の代替的決定方法
最低阻害濃度（ＭＩＣ）は、試験微生物の増殖が１８−２４時間にわたり阻害される抗菌剤の最低濃度である。これらの場合、阻害濃度は、標準的な微生物学的方法により、改変した培地を用いて寒天希釈試験で決定できる (例えば、The National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard-fifth edition. NCCLS document M7-A5 [ISBN 1-56238-394-9]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2000 参照）。細菌の微生物を、脱線維素処理したウマの血液２０％を含有する１.５％寒天プレートで培養する。コロンビア血液寒天プレート（Becton-Dickinson）で終夜培養した試験微生物を、ＰＢＳ中に希釈し、微生物約５ｘ１０５個／ｍｌの微生物数に調節し、滴下して（１−３μｌ）試験プレートに置く。試験物質は、様々な希釈の試験物質を含む（１：２希釈段階）。培養物を３７℃で５％ＣＯ２の存在下に１８−２４時間インキュベートする。
各場合で、目視できる細菌の増殖が起こらなくなる最低物質濃度を、ＭＩＣと定義し、μｇ／ｍｌ表記で報告する。
【０１４０】
表Ａ（比較例ビフェノマイシンＢと共に）
【表１６】
2008534537.tif 000072
濃度データ：ＭＩＣはμｇ／ｍｌ表記；ＩＣ５０はμＭ表記。
【０１４１】
黄色ブドウ球菌１３３による全身感染：
本発明の化合物の細菌感染の処置への適合性は、様々な動物モデルで示すことができる。この目的で、動物を一般的に適当な病原性微生物に感染させ、次いで、特定の治療モデルに適合させた製剤中に存在する試験しようとする化合物で処置する。特に、本発明の化合物の細菌感染の処置への適合性は、黄色ブドウ球菌による感染後のマウス敗血症モデルで立証できる。
【０１４２】
この目的で、黄色ブドウ球菌１３３細胞を、ＢＨブロス（Oxoid, Germany）中で終夜培養する。終夜培養物を新鮮なＢＨブロス中で１：１００に希釈し、３時間増殖させた。対数増殖期にある細菌を遠心分離し、緩衝化生理食塩水で２回洗浄する。次いで、吸光度５０ユニットの塩水中の細胞懸濁物を、光度計（Dr Lange LP 2W）で調節する。希釈段階（１：１５）の後、この懸濁液を１０％ムチン（mucine）懸濁液と１：１で混合する。マウス２０ｇ当たりにこの感染溶液０.２ｍｌをｉ.ｐ.投与する。これは、微生物約１−２ｘ１０６個／マウスの細胞数に相当する。ｉ.ｖ.治療を、感染の３０分後に行う。雌のＣＦＷ１マウスをこの感染実験に使用する。動物の生存率を６日間記録する。動物モデルを、非処置動物が感染後２４時間以内に死亡するように調節する。このモデルで、実施例２の化合物について、ＥＤ１００＝１.２５ｍｇ／ｋｇの治療効果を立証することが可能であった。
【０１４３】
黄色ブドウ球菌の耐性自然発生率の測定
本発明の化合物について、耐性自然発生率を以下の通りに測定する：細菌性微生物を、最小培地（１８.５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、５.７ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、９.３ｍＭ ＮＨ４Ｃｌ、２.８ｍＭ ＭｇＳＯ４、１７.１ｍＭ ＮａＣｌ、チアミン塩酸塩０.０３３μｇ／ｍｌ、ニコチン酸１.２μｇ／ｍｌ、ビオチン０.００３μｇ／ｍｌ、１％グルコース、各タンパク新生アミノ酸２５μｇ／ｍｌ、０.４％ＢＨブロスを添加する）３０ｍｌ中、３７℃で終夜培養し、６０００ｘｇで１０分間遠心分離し、リン酸緩衝生理ＮａＣｌ溶液２ｍｌに再懸濁する（微生物約２ｘ１０９個／ｍｌ）。この細胞懸濁液並びに１：１０および１：１００の希釈物各１００μｌを、試験しようとする本発明の化合物を５ｘＭＩＣまたは１０ｘＭＩＣに相当する濃度で各々含有する予め乾燥した寒天プレート（１.５％寒天、２０％脱線維素処理ウマ血液、または、１.５％寒天、２０％ウシ血清、１／１０Mueller-Hinton 培地中、各々ＰＢＳで希釈）に播き、３７℃で４８時間インキュベートする。生じるコロニー（ｃｆｕ）を計数する。
【０１４４】
ビフェノマイシン耐性黄色ブドウ球菌株ＲＮ４２２０ＢｉＲおよびＴ１７の単離
黄色ブドウ球菌株ＲＮ４２２０ＢｉＲをインビトロで単離する。この目的で、黄色ブドウ球菌ＲＮ４２２０細胞懸濁液１００μｌ分（約１.２ｘ１０８ｃｆｕ／ｍｌ）を、抗菌剤を含まない寒天プレート（１８.５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、５.７ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、９.３ｍＭ ＮＨ４Ｃｌ、２.８ｍＭ ＭｇＳＯ４、１７.１ｍＭ ＮａＣｌ、チアミン塩酸塩０.０３３μｇ／ｍｌ、ニコチン酸１.２μｇ／ｍｌ、ビオチン０.００３μｇ／ｍｌ、１％グルコース、各タンパク新生アミノ酸２５μｇ／ｍｌ、０.４％ＢＨブロスおよび１％アガロースを添加する）および２μｇ／ｍｌビフェノマイシンＢ（１０ｘＭＩＣ）を含有する寒天プレートに播き、３７℃で終夜インキュベートする。抗菌剤を含まないプレートでは約１ｘ１０７個の細胞が増殖するが、一方抗菌剤を含有するプレートでは約１００個のコロニーが増殖し、耐性率１ｘ１０−５に相当する。抗菌剤含有プレートで増殖させたコロニーのいくつかを、ビフェノマイシンＢのＭＩＣについて試験する。ＭＩＣが＞５０μＭの１つのコロニーをさらなる使用のために選択し、その株をＲＮ４２２０ＢｉＲと称する。
【０１４５】
黄色ブドウ球菌株Ｔ１７をインビボで単離する。ＣＦＷ１マウスを、黄色ブドウ球菌１３３細胞４ｘ１０７個／マウスで腹腔内感染させる。感染の０.５時間後、動物を５０ｍｇ／ｋｇビフェノマイシンＢにより静脈内で処置する。感染後３日目に生存している動物から腎臓を取り出す。この器官をホモジナイズした後、ホモジネートを、ＲＮ４２２０ＢｉＲについて記載した通りに、抗菌剤不含および抗菌剤含有の寒天プレートに播き、３７℃で終夜インキュベートする。腎臓から単離されたコロニーの約半分が抗菌剤含有プレート上での増殖を示し（２.２ｘ１０６個のコロニー）、これは、処置動物の腎臓におけるビフェノマイシンＢ耐性黄色ブドウ球菌細胞の蓄積を立証する。これらのコロニー約２０個を、ビフェノマイシンＢのＭＩＣについて試験し、ＭＩＣが＞５０μＭのコロニーをさらなる培養のために選択し、その株をＴ１７と称する。
【０１４６】
Ｃ．医薬組成物の例示的実施態様
本発明の化合物は、以下のやり方で医薬製剤に変換できる：
静脈内投与できる液剤：
組成：
実施例１の化合物１ｍｇ、ポリエチレングリコール４００ １５ｇおよび注射用水２５０ｇ。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコール４００と共に撹拌しながら水に溶解する。溶液を濾過滅菌し（孔直径０.２２μｍ）、加熱滅菌した点滴瓶に無菌条件下で分注する。後者を点滴用の栓およびクリンプキャップで閉じる。
【国際調査報告】
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