(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）の新規２−ベンジルアミノジヒドロプテリジノン及びそれらの異性体に関する（式中、Ｒ1〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11は、請求項及び明細書に定義したとおりである）。本発明は、また、前記ジヒドロプテリジノンを製造する方法及び薬剤としてのそれらの使用に関する。【化１】2008503515.tif 000017
2008503515.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物、或いはそれらの互変体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、これらの混合物、又はそれらの薬理学的に許容可能な酸付加塩、溶媒和物若しくは水和物。
【化１】
2008503515.tif 000015
（式中、Ｒ1、Ｒ2は、同一であっても異なっていてもよく、置換されていてもよいＣ1-10アルキル、Ｃ2-10アルケニル、Ｃ2-10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8ヘテロシクロアルキル、−Ｘ−アリール、−Ｘ−ヘテロアリール、−Ｘ−シクロアルキル、−Ｘ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＲ8−アリール、−ＮＲ8−ヘテロアリール、−ＮＲ8−シクロアルキル、及び−ＮＲ8−ヘテロシクロアルキルより選ばれる基、
又は
水素、ハロゲン、ＣＯＸＲ8、ＣＯＮ（Ｒ8）2、ＣＯＲ8及びＸＲ8より選ばれる基を示し、
又は
Ｒ1及びＲ2は、一緒になって、１〜２個のヘテロ原子を含んでいても良い２〜５員のアルキルブリッジを示し、
Ｒ3は、水素又は置換されていてもよいＣ1-12アルキル、Ｃ2-12アルケニル、Ｃ2-12アルキニル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ3-12シクロアルキル、Ｃ3-12シクロアルケニル、Ｃ7-12ポリシクロアルキル、Ｃ7-12ポリシクロアルケニル及びＣ5-12スピロシクロアルキルより選ばれる基を示し、又は
Ｒ1及びＲ3又はＲ2及びＲ3は、一緒になって、１〜２個のヘテロ原子を含んでいても良い飽和又は不飽和Ｃ3-4アルキルブリッジを示し、
Ｒ4は、置換されていてもよいアリール又はヘテロアリールを示し、
Ｒ5は、水素、ＣＨＯ、ＸＨ、−Ｘ−Ｃ1-2アルキル及び置換されていてもよいＣ1-3アルキル基より選ばれる基を示し、
Ｒ6は、水素、ＮＨ2、ＸＨ、ハロゲン及び場合により一以上のハロゲン原子により置換されていてもよいＣ1-3アルキル基より選ばれる基を示し、
Ｒ7は、水素又は−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−ＣＯ−ＮＨ−Ｃ1-4アルキル、−ＣＯ−Ｘ−Ｃ1-4アルキルを示し、及び
Ｘは、互いに独立して、Ｏ又はＳを示し、
Ｒ8は、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、ベンジル及びフェニルより選ばれる基を示し、
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1-4アルキルより選ばれる基を示し、
又はＲ10及びＲ11は、一緒になって、２〜５員のアルキルブリッジを示す）。
【請求項２】
Ｒ1〜Ｒ4が、請求項１で定義したとおりであり、
Ｒ5が、メチルを示し、及び
Ｒ6及びＲ7が、水素を示し、
Ｒ10及びＲ11が、互いに独立して、水素又はメチルを示し、
又は
Ｒ10及びＲ11が、一緒になって、シクロプロピルを示す、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ3〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11が、請求項１又は２で定義したとおりであり、及び
Ｒ1、Ｒ2が、同一であっても異なっていてもよく、水素又は置換されていてもよいＣ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル及びＣ2-6アルキニルより選ばれる基を示すか、
又は
Ｒ1及びＲ2が、一緒になって、２〜５員のアルキルブリッジを示す、
請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1、Ｒ3〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11が、請求項１〜３のいずれかで定義したとおりであり、
及び
Ｒ3が、水素であるか又は置換されていてもよいＣ1-12アルキル、Ｃ2-12アルケニル、Ｃ2-12アルキニル及びＣ6-14アリールより選ばれる基、又は場合により置換及び／又はブリッジされていてもよいＣ3-12シクロアルキル、Ｃ3-12シクロアルケニル、Ｃ7-12ポリシクロアルキル、Ｃ7-12ポリシクロアルケニル及びＣ5-12スピロシクロアルキルより選ばれる基を含む、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1〜Ｒ3、Ｒ5〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11が、請求項１〜４のいずれかで定義したとおりであり、
Ｒ4が、一般式：
【化２】
2008503515.tif 000016
の基を示し、
Ｒ9が、同一であっても異なっていてもよく、置換されていてもよいＣ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキル、−Ｏ−Ｃ2-6アルケニル、−Ｏ−Ｃ2-6アルキニル、Ｃ3-6ヘテロシクロアルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−シクロアルキル、及び−Ｏ−ヘテロシクロアルキルより選ばれる基又は
水素、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＲ8、−ＯＣＯＮ（Ｒ8）2、−Ｎ（Ｒ8）2、−ＮＨＣＯＲ8、−ＮＨＣＯＮ（Ｒ8）2、−ＮＯ2、ＣＦ3、ハロゲン、−Ｏ−Ｃ1-6アルキル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｃ1-10アルキル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｃ2-10アルケニル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｑ2、ハロゲン、ＯＨ、−ＳＯ2Ｒ8、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ8）2、−ＣＯＲ8、−ＣＯＯＲ8、−Ｎ（Ｒ8）2、−ＮＨＣＯＲ8、−ＣＯＮＲ8ＯＣ1-10アルキル−Ｑ1及びＣＯＮＲ8Ｏ−Ｑ2より選ばれる基を示し、
Ｒ8が、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル及びフェニルより選ばれる基を示し、
Ｑ1が、水素、−ＮＨＣＯＲ8、又は置換されていてもよいＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3-8シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基より選ばれる基を示し、
Ｑ2が、水素又は置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール及びＣ3-8シクロアルキル基より選ばれる基を示し、
及び
ｎが、０、１、２、３、４又は５を示す、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｑ1、Ｑ2、ｎ、Ｒ4〜Ｒ8が、請求項１〜５のいずれかで定義したとおりであり、
同一であっても異なっていてもよいＲ1、Ｒ2が、水素又はメチル、エチル、プロピル、アリル及びプロパルギルより選ばれる基を示し、
又は
Ｒ1及びＲ2が、一緒になって、シクロプロピルを表し、
Ｒ3が、水素を示すか、又は置換されていてもよいＣ1-6アルキル又は場合により置換及び／又はブリッジされていてもよいＣ3-12シクロアルキルを示し、及び
Ｒ10及びＲ11が、水素を示す、
請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｑ1、Ｑ2、ｎ、Ｒ1〜Ｒ4、Ｒ6〜Ｒ8、Ｒ10及びＲ11が、請求項５又は６で定義したとおりであり、
及び
Ｒ9が、同一であっても異なっていてもよく、水素又はハロゲン、（Ｃ1-6アルキル）2Ｎ−、ＣＦ3、ＮＨ2ＳＯ2−、−ＣＯＮＨ−Ｃ6-14アリール、−ＣＯＮＨ−Ｃ1-4アルキル−Ｃ6-14アリール及び−Ｏ−Ｃ1-4アルキルより選ばれる基を示す、
請求項５又は６に記載の化合物。
【請求項８】
医薬組成物として使用するための請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
増殖抑制作用を有する医薬組成物として使用するための請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
癌、細菌及びウイルス感染、炎症性及び自己免疫疾患、化学療法誘導性脱毛症及び粘膜炎、循環器疾患、腎臓病学的疾患、並びに慢性及び急性神経変性病より選ばれる疾患の治療及び／又は予防用医薬組成物を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１１】
ポロ様キナーゼの抑制用医薬組成物を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１２】
ポロ様キナーゼがＰＬＫ１である請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
ポロ様キナーゼの過剰発現に基づく腫瘍性疾患の治療及び／又は予防用医薬組成物を製造するための、式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項１４】
癌、細菌及びウイルス感染、炎症性及び自己免疫疾患、化学療法誘導性脱毛症及び粘膜炎、循環器疾患、腎臓病学的疾患、並びに慢性及び急性神経変性病より選ばれる疾患を治療及び／又は予防する方法であって、有効量の、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物を患者に投与することを特徴とする方法。
【請求項１５】
場合により慣用の賦形剤及び／又は担体と共に、請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式（Ｉ）の化合物の一以上を活性物質として含む医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、一般式（Ｉ）：
【化１】
2008503515.tif 000003
（式中、基Ｒ1〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11は、請求の範囲及び明細書に記載の意味を有する）の新規２−ベンジルアミノジヒドロプテリジノン、それらの異性体、これらのジヒドロプテリジノンを製造する方法及び薬剤としてのそれらの使用に関する。
【０００２】
発明の背景
プテリジノン誘導体は、当該技術分野において増殖抑制作用を有する活性物質として知られる。WO 01/019825及びWO 03/020722には、腫瘍疾患を治療するためにプテリジノン誘導体を使用することが記載されている。
腫瘍細胞は、全体的に又は部分的に、体による調節及びコントロールを回避すること及び未調節成長を特徴とする。これは、一方で、コントロールプロテイン、例えば、Ｒｂ、ｐ１６、ｐ２１及びｐ５３の損失に基づき、また、細胞周期のいわゆるアクセルレーター、サイクリン依存キナーゼ（ＣＤＫ）の活性に基づく。
また、プロテインキナーゼオーロラＢが、有糸分裂へ入る間本質的な機能を有するとして説明されている。オーロラＢは、Ｓｅｒ１０でヒストンＨ３をリン酸化し及び従って、染色体凝縮を開始する（Hsuら、2000, Cell 102: 279-91）。Ｇ２／Ｍ期における特定の細胞周期停止は、しかしながら、また、例えば、特定のホスファターゼ、例えば、Ｃｄｃ２５Ｃの抑制により誘発され得る（Russell及びNurse 1986, Cell 45: 145-53）。障害のあるＣｄｃ２５遺伝子を有する酵母は、Ｇ２期で停止するが、Ｃｄｃ２５の過剰発現により、有糸分裂へ入ることが早められる（Russell及びNurse 1987, Cell 49: 559-67）。更に、Ｇ２／Ｍ期における停止は、あるモータータンパク、いわゆるキネシン、例えば、Ｅｇ５の抑制により（Mayerら, 1999, Science 286: 971-4）、又は微小管を安定化する又は不安定化する薬剤（例えば、コルヒチン、タクソール、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチン）により（Schiff及びHorwitz 1980, Proc Natl Acad Sci USA 77: 1561-5）誘発され得る。
【０００３】
サイクリン依存及びオーロラキナーゼに加えて、いわゆるポロ様キナーゼ、セリン／トレオニンキナーゼの小ファミリーは、真核性細胞周期の調整に重要な役割を果たす。今までに、ポロ様キナーゼＰＬＫ−１、ＰＬＫ−２、ＰＬＫ−３及びＰＬＫ−４は、文献に記載されている。特にＰＬＫ−１は、有糸分裂期の調整において中心的役割を担うことが示されてきている。ＰＬＫ−１は、中心体の成熟、ホスファターゼＣｄｃ２５Ｃの活性、及び後期促進複合体の活性に関与する（Gloverら、1998, Genes Dev. 12: 3777-87; Qianら、2001, Mol Biol Cell. 12: 1791-9）。ＰＬＫ−１抗体の注入により、非軽質転換細胞におけるＧ２停止が導かれるが、腫瘍細胞は、有糸分裂期において停止する（Lane及びNigg 1996, J Cell Biol. 135: 1701-13）。ＰＬＫ−１の過剰発現は、種々のタイプの腫瘍、例えば、非小細胞肺癌、プレート(plate)上皮癌、乳癌及び結腸直腸癌について証明されている（Wolfら、1997, Oncogene 14: 543-549; Knechtら、1999, Cancer Res. 59: 2794-2797; Wolfら、2000, Pathol. Res Pract. 196: 753-759; Takahashiら、2003, Cancer Sci. 94: 148-52）。従って、このカテゴリーのタンパクは、また、増殖性疾患における治療的介入に対する興味あるアプローチを構成する（Liu及びErikson 2003, Proc Natl Acad Sci USA 100: 5789-5794）。
多くのタイプの腫瘍の抵抗性は、腫瘍と戦うための新規医薬組成物の開発を必要とする。
本発明の目的は、増殖抑制作用を有する新規化合物を提供することである。
【０００４】
発明の詳細な記載
驚くべきことに、一般式（Ｉ）（式中、Ｒ1〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11は、後述する意味を有する）の化合物が、特定の細胞周期キナーゼ、特には、ポロ様キナーゼの抑制剤として機能することを見い出した。該化合物は、増殖抑制作用を有し、プログラム細胞死が停止細胞において開始される前に細胞周期の有糸分裂期における細胞を停止する。従って、本発明の化合物を使用して、例えば、特定の細胞周期キナーゼの活性と関連することを特徴とする疾患及び過剰又は異常な細胞増殖を特徴とする疾患を治療することができる。
本発明は、従って、一般式（Ｉ）の化合物、或いはそれらの互変体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、これらの混合物、又はそれらの薬理学的に許容可能な酸付加塩、溶媒和物若しくは水和物に関する：
【０００５】
【化２】
2008503515.tif 000004
【０００６】
（式中、Ｒ1、Ｒ2は、同一であっても異なっていてもよく、置換されていてもよいＣ1-10アルキル、Ｃ2-10アルケニル、Ｃ2-10アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8ヘテロシクロアルキル、−Ｘ−アリール、−Ｘ−ヘテロアリール、−Ｘ−シクロアルキル、−Ｘ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＲ8−アリール、−ＮＲ8−ヘテロアリール、−ＮＲ8−シクロアルキル、及び−ＮＲ8−ヘテロシクロアルキルより選ばれる基、
又は
水素、ハロゲン、ＣＯＸＲ8、ＣＯＮ（Ｒ8）2、ＣＯＲ8及びＸＲ8より選ばれる基を示し、
又は
Ｒ1及びＲ2は、一緒になって、１〜２個のヘテロ原子を含んでいても良い２〜５員のアルキルブリッジを示し、
Ｒ3は、水素又は置換されていてもよいＣ1-12アルキル、Ｃ2-12アルケニル、Ｃ2-12アルキニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3-12シクロアルキル、Ｃ3-12シクロアルケニル、Ｃ7-12ポリシクロアルキル、Ｃ7-12ポリシクロアルケニル及びＣ5-12スピロシクロアルキルより選ばれる基を示し、又は
Ｒ1及びＲ3又はＲ2及びＲ3は、一緒になって、１〜２個のヘテロ原子を含んでいても良い飽和又は不飽和Ｃ3-4アルキルブリッジを示し、
Ｒ4は、置換されていてもよいアリール又はヘテロアリールを示し、
Ｒ5は、水素、ＣＨＯ、ＸＨ、−Ｘ−Ｃ1-2アルキル及び置換されていてもよいＣ1-3アルキル基より選ばれる基を示し、
Ｒ6は、水素、ＮＨ2、ＸＨ、ハロゲン及び場合により一以上のハロゲン原子により置換されていてもよいＣ1-3アルキル基より選ばれる基を示し、
Ｒ7は、水素又は−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−ＣＯ−ＮＨ−Ｃ1-4アルキル、−ＣＯ−Ｘ−Ｃ1-4アルキルを示し、及び
Ｘは、互いに独立して、Ｏ又はＳを示し、
Ｒ8は、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、ベンジル及びフェニルより選ばれる基を示し、
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1-4アルキルより選ばれる基を示し、
又はＲ10及びＲ11は、一緒になって、２〜５員のアルキルブリッジを示す）。
【０００７】
好ましいものは、Ｒ1〜Ｒ4が、上で定義した通りであり、
Ｒ5が、メチルを示し、及び
Ｒ6及びＲ7が、水素を示し、
Ｒ10及びＲ11が、互いに独立して、水素又はメチルを示し、
又は
Ｒ10及びＲ11が、一緒になって、シクロプロピルを示す、
式（Ｉ）の化合物である。
また、好ましいものは、Ｒ3〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11が、上で定義した通りであり、及び
Ｒ1、Ｒ2が、同一であっても異なっていてもよく、水素又は置換されていてもよいＣ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル及びＣ2-6アルキニルより選ばれる基を示し、
又は
Ｒ1及びＲ2が、一緒になって、２〜５員のアルキルブリッジを示す、
式（Ｉ）の化合物である。
【０００８】
特に好ましいものは、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11が、上で定義した通りであり、
及び
Ｒ3が、水素であるか又は置換されていてもよいＣ1-12アルキル、Ｃ2-12アルケニル、Ｃ2-12アルキニル及びＣ6-14アリールより選ばれる基、又は場合により置換及び／又はブリッジされていてもよいＣ3-12シクロアルキル、Ｃ3-12シクロアルケニル、Ｃ7-12ポリシクロアルキル、Ｃ7-12ポリシクロアルケニル及びＣ5-12スピロシクロアルキルより選ばれる基を含む、
式（Ｉ）の化合物である。
また、特に好ましいものは、Ｒ1〜Ｒ3、Ｒ5〜Ｒ7、Ｒ10及びＲ11が、上記の意味を有し、
Ｒ4が、一般式：
【０００９】
【化３】
2008503515.tif 000005
【００１０】
の基を示し、
Ｒ9が、同一であっても異なっていてもよく、置換されていてもよいＣ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキル、−Ｏ−Ｃ2-6アルケニル、−Ｏ−Ｃ2-6アルキニル、Ｃ3-6ヘテロシクロアルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−シクロアルキル、及び−Ｏ−ヘテロシクロアルキルより選ばれる基又は
水素、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＲ8、−ＯＣＯＮ（Ｒ8）2、−Ｎ（Ｒ8）2、−ＮＨＣＯＲ8、−ＮＨＣＯＮ（Ｒ8）2、−ＮＯ2、ＣＦ3、ハロゲン、−Ｏ−Ｃ1-6アルキル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｃ1-10アルキル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｃ2-10アルケニル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｑ2、ハロゲン、ＯＨ、−ＳＯ2Ｒ8、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ8）2、−ＣＯＲ8、−ＣＯＯＲ8、−Ｎ（Ｒ8）2、−ＮＨＣＯＲ8、−ＣＯＮＲ8ＯＣ1-10アルキル−Ｑ1及びＣＯＮＲ8Ｏ−Ｑ2より選ばれる基を示し、
Ｒ8が、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル及びフェニルより選ばれる基を示し、
Ｑ1が、水素、−ＮＨＣＯＲ8、又は置換されていてもよいＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3-8シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基より選ばれる基を示し、
Ｑ2が、水素又は置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール及びＣ3-8シクロアルキル基より選ばれる基を示し、
及び
ｎが、０、１、２、３、４又は５を示す、
式（Ｉ）の化合物である。
【００１１】
特に好ましいものは、Ｑ1、Ｑ2、ｎ、Ｒ4〜Ｒ9が、上記の意味を有し、
Ｒ1、Ｒ2が、同一であっても異なっていてもよく、水素又はメチル、エチル、プロピル、アリル及びプロパルギルより選ばれる基を示し、
又は
Ｒ1及びＲ2が、一緒になって、シクロプロピルを表し、
Ｒ3が、水素を示すか、又は置換されていてもよいＣ1-6アルキル又は場合により置換及び／又はブリッジされていてもよいＣ3-12シクロアルキルを示し、及び
Ｒ10及びＲ11が、水素を示す、
式（Ｉ）の化合物である。
最も好ましいものは、Ｑ1、Ｑ2、ｎ、Ｒ1〜Ｒ4、Ｒ6〜Ｒ8、Ｒ10及びＲ11が、上記の意味を有し、
及び
Ｒ9が、同一であっても異なっていてもよく、水素又はハロゲン、（Ｃ1-6アルキル）2Ｎ、ＣＦ3、ＮＨ2ＳＯ2、−ＣＯＮＨ−Ｃ6-14アリール、−ＣＯＮＨ−Ｃ1-4アルキル−Ｃ6-14アリール及び−Ｏ−Ｃ1-4アルキルより選ばれる基を示す、
式（Ｉ）の化合物である。
【００１２】
本発明は、更に、医薬組成物として使用するための式（Ｉ）の化合物に関する。本発明の特に重要なものは、増殖抑制作用を有する医薬組成物として使用するための式（Ｉ）の化合物である。本発明は、また、癌、細菌及びウイルス感染、炎症性及び自己免疫疾患、化学療法誘導性脱毛症及び粘膜炎、循環器疾患、腎臓病学的疾患、並びに慢性及び急性神経変性病より選ばれる疾患の治療及び／又は予防用、好ましくは、癌、炎症性及び自己免疫疾患の治療用、特に好ましくは、癌及び炎症性疾患の治療用医薬組成物を製造するための、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。本発明は、更に、ポロ様キナーゼ、特には、ポロ様キナーゼＰＬＫ−１の抑制用医薬組成物を製造するための、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。本発明は、更に、ポロ様キナーゼ、特に、ＰＬＫ−１キナーゼの過剰発現に基づく腫瘍疾患の治療及び／又は予防用医薬組成物を製造するための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。本発明は、更に、有効量の式（Ｉ）の化合物を患者に投与することを含む、癌、細菌及びウイルス感染、炎症性及び自己免疫疾患、化学療法誘導性脱毛症及び粘膜炎、循環器疾患、腎臓病学的疾患、並びに慢性及び急性神経変性病より選ばれる疾患の治療及び／又は予防、好ましくは、癌、炎症性及び自己免疫疾患の治療、特に好ましくは、癌及び炎症性疾患の治療のための方法に関する。本発明は、また、場合により慣用の賦形剤及び／又は担体と共に一般式（Ｉ）の化合物一以上を活性物質として含有する医薬製剤に関する。
【００１３】
用語アルキル基は、他の基の一部であるアルキル基を含め、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜６個、最も好ましくは１〜４個の炭素原子を有する分岐及び未分岐アルキル基、例えば：メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル及びデシルを示す。他に記載のない限り、上記用語プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル及びデシルは、全ての可能な異性体形態物を含む。例えば、用語プロピルは、２つの異性体基ｎ−プロピル及びイソプロピルを含み、用語ブチルは、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル及びｔｅｒｔ−ブチルを含み、用語ペンチルは、イソペンチル、ネオペンチルなどを含む。
上記アルキル基において、一以上の水素原子が、他の基により置換されていてもよい。例えば、これらのアルキル基は、メチル、塩素又はフッ素、好ましくはフッ素により置換されていてもよい。アルキル基の全ての水素原子が、場合により置換されいてもよい。
【００１４】
用語アルキルブリッジは、別に記載のない限り、２〜５個の炭素原子を有する分岐及び未分岐アルキル基、例えば、エチレン、プロピレン、イソプロピレン、ｎ−ブチレン、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル及びｔｅｒｔ−ブチルなどのブリッジを示す。エチレン、プロピレン及びブチレンブリッジが特に好ましい。アルキルブリッジにおいては、１〜２個のＣ原子が、場合により、酸素、窒素又は硫黄より選ばれる一以上のヘテロ原子により置換されていてもよい。
用語、アルケニル基（他の基の一部であるものを含む）は、２〜１０個の炭素原子、好ましくは２〜６個の炭素原子、最も好ましくは２〜３個の炭素原子を有する分岐及び非分岐アルキレン基を示し、ただし、それらは、少なくとも１つの二重結合を有する。例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンチルなど：が挙げられる。他に記載のない限り、上述の用語プロペニル、ブテニルなどはまた、全ての起こり得る異性体を含む。例えば、用語、ブテニルは、１−ブテニル、２−ブテニル、１−メチル−１−プロペニル、１−メチル−２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル及び１−エチル−１−エテニルを含む。
上述のアルケニル基において、他に記載のない限り、一以上の水素原子は、場合により、他の基により置換されていてもよい。例えば、これらのアルケニル基は、メチル、塩素、又はフッ素、好ましくはフッ素により置換され得る。アルケニル基の全ての水素原子はまた、置換されていてもよい。
用語アルキニル基（他の基の一部であるものを含む）は、２〜１０個の炭素原子を有する分岐及び非分岐アルキニル基を示し、ただし、それらは、少なくとも１つの３重結合、例えばエチニル、プロパルギル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなど、好ましくはエチニル、又はプロピニルを有する。
上述のアルキニル基において、他に記載のない限り、一以上の水素原子は、場合により、他の基により置換されていてもよい。例えば、これらのアルキニル基は、メチル、塩素又はフッ素、好ましくはフッ素により置換され得る。アルキニル基の全ての水素原子はまた、置換されていてもよい。
【００１５】
用語アリールは、６〜１４個の炭素原子、好ましくは６又は１０個の炭素原子、好ましくはフェニルを有する芳香族環系を示し、それは、他に記載のない限り、以下の置換基の一以上を有することができる：例えばＯＨ、ＮＯ2、ＣＮ、ＯＭｅ、−ＯＣＨＦ2、−ＯＣＦ3、−ＮＨ2、水素、好ましくはフッ素又は塩素、Ｃ1−Ｃ10−アルキル、好ましくはＣ1−Ｃ5−アルキル、好ましくはＣ1−Ｃ3−アルキル、特に好ましくはメチル又はエチル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ3−アルキル、好ましくは−Ｏ−メチル又はＯ−エチル、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−Ｃ1−Ｃ4−アルキル、好ましくは−Ｏ−メチル又は−Ｏ−エチル、又は−ＣＯＮＨ2。ヘテロアリール基の例（その中において、２個のＣ原子は、一以上の窒素原子により置換される）は、例えばピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、ピリミジンであるが、上述のヘテロ原子環の各々はまた、場合により、ベンゼン環、好ましくはベンズイミダゾールにアネレート化されていてもよく、及びこれらのヘテロ環は、それとは反対に記載のない限り、例えば一以上の以下の置換基：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、ＯＭｅ、メチル、エチル、ＣＮ、ＣＯＮＨ2、ＮＨ2、場合により置されていてもよいフェニル、置換されていてもよいヘテロアリール、好ましくは置換されていてもよいピリジルを有することができる。
【００１６】
シクロアルキル基の例は、３〜１２個の炭素原子を有するシクロアルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチル、好ましくはシクロプロピル、シクロペンチル、又はシクロヘキシルであるが、上述のシクロアルキル基の各々はまた、場合により、一以上の置換基、例えば：ＯＨ、ＮＯ2、ＣＮ、ＯＭｅ、−ＯＣＨＦ2、−ＯＣＦ3、−ＮＨ2、又は水素、好ましくはフッ素又は塩素、Ｃ1−Ｃ10−アルキル、好ましくはＣ1−Ｃ5−アルキル、好ましくは、Ｃ1−Ｃ3−アルキル、特に好ましくはメチル又はエチル、−Ｏ−Ｃ1−Ｃ3−アルキル、好ましくは−Ｏ−メチル又は−Ｏ−エチル、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−Ｃ1−Ｃ4−アルキル、好ましくは−ＣＯＯ−メチル又は−ＣＯＯ−エチル又は−ＣＯＮＨ2を有していてもよい。シクロアルキル基の特に好ましい置換基は、＝Ｏ、ＯＨ、ＮＨ2、メチル又はＦである。
シクロアルケニル基の例は、少なくとも１つの二重結合を有する３〜１２個の炭素原子を有するシクロアルキル基、例えばシクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、又はシクロヘプテニル、好ましくはシクロプロペニル、シクロペンテンチル、又はシクロヘキセニルであるが、上述のシクロアルケニル基の各々はまた、場合により、一以上の置換基を有していてもよい。
“＝Ｏ”は、二重結合により結合される酸素原子を示す。
【００１７】
ヘテロシクロアルキル基の例は、定義において他に記載のない限り、３〜１２員環、好ましくは５、６又は７員環、飽和又は不飽和ヘテロ環であり、それは、ヘテロ原子、窒素、酸素又は硫黄、例えばテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラノン、γ−ブチロラクトン、α−ピラン、γ−ピラン、ジオキソラン、テトラヒドロピラン、ジオキサン、ジヒドロチオフェン、チオラン、ジチオラン、ピロリン、ピロリジン、ピラゾリン、ピラゾリジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、テトラゾール、ピペリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピペラジン、トリアジン、テトラジン、モルホリン、チオモルホリン、ジアゼパン、オキサジン、テトラヒドロオキサジニル、イソチアゾール、ピラゾリジン、好ましくはモルホリン、ピロリジン、ピペリジン、又はピペラジンとして含み得るが、ヘテロ環基は、場合により、置換基、例えばＣ1〜4−アルキル、好ましくはメチル、エチル又はプロピルを有していてもよい。
ポリシクロアルキル基の例は、置換されていてもよい、ビ-、トリ−テトラ−又はペンタ環シクロアルキル基、例えばピナン、２，２，２−オクタン、２，２，１−ヘプタン又はアダマンタンである。ポリシクロアルケニル基の例は、場合により、ブリッジ及び/又は置換されていてもよい、８員環ビ−、トリ−テトラ−又はペンタ環シクロアルキル基、好ましくはビシクロアルケニル、又はトリシクロアルケニル基，それらが、少なくとも１つの二重結合を含む場合、例えばノルボルネンである。
スピロアルキル基の例は、置換されていてもよいスピロ環Ｃ5−Ｃ12アルキル基である。
用語、ハロゲンは、通常、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素、好ましくはフッ素、塩素又は臭素、特に好ましくは塩素を示す。
本発明による化合物は、個々の光学異性体、個々のエナンチオマー、ジアステレオマー又はラセミ化合物の混合物の形態において、互変体の形態において、溶媒和物の形態において、好ましくはそれらの水和物の形態において及びまた、遊離塩基又は薬理学的に許容可能な酸を有する対応する酸付加塩、例えばハロゲン化水素酸を有する酸付加塩、例えば塩化水素酸又は臭化水素酸、又は有機酸、例えばシュウ酸、フマル酸、オキシニ酢酸又はメタンスルホン酸の形態において存在し得る。
【００１８】
置換基Ｒ1は、置換されていてもよいＣ1-10−アルキル、好ましくはＣ1-4−アルキル、特に好ましくはメチル、エチル又はプロピル、Ｃ2-10−アルケニル、好ましくはアリル、Ｃ2-10−アルキニル、好ましくはプロパルギル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3-8−シクロアルキル
Ｃ3-8−ヘテロシクロアルキル、−Ｘ−アリール、−Ｘ−ヘテロアリール、−Ｘ−シクロアルキル、−Ｘ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＲ8−アリール、−ＮＲ8−ヘテロアリール、−ＮＲ8−シクロアルキル、及び−ＮＲ8−ヘテロシクロアルキルから選択される基、
又は水素、ハロゲン、ＣＯＺＲ8、ＣＯＮ（Ｒ8）2、ＣＯＲ8及びＸＲ8、好ましくは水素から選択される基であり得る。
好ましくは、置換基Ｒ1は、エチル又は水素、特に好ましくは水素を示す。
置換基Ｒ2は、置換されていてもよいＣ1-10−アルキル、好ましくはＣ1-4−アルキル、特に好ましくはメチル、エチル又はプロピル、Ｃ2-10−アルケニル、好ましくはアリル、Ｃ2-10−アルキニル、好ましくはプロパルギル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3-8−シクロアルキル
Ｃ3-8−ヘテロシクロアルキル、−Ｘ−アリール、−Ｘ−ヘテロアリール、−Ｘ−シクロアルキル、−Ｘ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＲ8−アリール、−ＮＲ8−ヘテロアリール、−ＮＲ8−シクロアルキル、及び−ＮＲ8−ヘテロシクロアルキルから選択される基、
又は水素、ハロゲン、ＣＯＸＲ8、ＣＯＮ（Ｒ8）2、ＣＯＲ8及びＸＲ8、好ましくは水素から選択される基を表し得る。
【００１９】
好ましくは、置換基Ｒ2は、エチル又は水素、特に好ましくはエチルを示す。
置換基Ｒ1及びＲ2は、ともに、２〜５員アルキルブリッジ、好ましくは２員アルキルブリッジ（１〜２個のヘテロ原子、例えば酸素、硫黄又は窒素、好ましくは酸素又は窒素を含み得る）を示し得る。
置換基Ｒ3は、水素又は、置換されていてもよいＣ1-12−アルキル、好ましくはＣ1-6−アルキル、Ｃ2-12−アルケニル、Ｃ2-12−アルキニル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ3-12−シクロアルキル、Ｃ3-12−シクロアルケニル、Ｃ7-12−ポリシクロアルキル、Ｃ7-12−ポリシクロアルケニル及びＣ5-12−スピロシクロアルキルから選択される基を示し得、又はＲ1及びＲ3又はＲ2及びＲ3は、ともに、１〜２個のヘテロ原子を含んでいても良い、飽和又は不飽和Ｃ3-4−アルキルブリッジを示す。
好ましくは、置換基Ｒ3は、Ｃ1-6−アルキル又は−Ｃ3-12−シクロアルキル、特に好ましくはメチル又はシクロペンチルを示す。
置換基Ｒ4は、置換されていてもよいアリール又はヘテロアリール、好ましくは一般式の基を表し得る。
【００２０】
【化４】
2008503515.tif 000006
【００２１】
ｎは、０、１、２、３、４又は５、好ましくは１又は２、特に好ましくは１を表し得る。
置換基Ｒ5は、水素、ハロゲン、ＣＨＯ、ＸＨ、−Ｘ−Ｃ1-2−アルキル及び置換されていてもよいＣ1-3アルキル基、好ましくはメチルから選択される基を表し得る。
好ましくは、置換基Ｒ5は、メチルを示す。
置換基Ｒ6は、水素、ＮＨ2、ＸＨ、ハロゲン及び場合により一以上のハロゲン原子により置換されていてもよいＣ1-3アルキル基を表し得る。
好ましくは、置換基Ｒ6は、水素を示し得る。
置換基Ｒ7は、水素、−ＣＯ−Ｘ−Ｃ1-4−アルキル、好ましくは−ＣＯ−Ｏ−メチル又は−ＣＯ−Ｏ−エチル、−ＣＯ−ＮＨ−Ｃ1-4−アルキル、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−メチル又はＣＯ−ＮＨ−エチル、又は−ＣＯ−Ｃ1-4−アルキル、好ましくは−ＣＯ−メチルを表し得る。好ましくは、置換基Ｒ7は、水素を示す。
Ｘは、互いに独立して、酸素又は硫黄、好ましくは、酸素を示し得る。
置換基Ｒ8は、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1-4−アルキル、好ましくはメチル又はエチル、Ｃ2-4−アルケニル、Ｃ2-4−アルキニル、ベンジル及びフェニルから選択される基を示し得る。好ましくは、置換基Ｒ8は、メチル、フェニル又はベンジルを示す。
【００２２】
置換基Ｒ9は、同一又は異なっていてもよく、置換されていてもよいＣ1-6−アルキル、好ましくはメチル、エチル又はイソプロピル、Ｃ2-6−アルケニル、好ましくはアリル又はホモアリル、Ｃ2-6−アルキニル、好ましくはプロパルギル−Ｏ−Ｃ1-6−アルキル、好ましくは−Ｏ−メチル、又は
Ｏ−エチル、−Ｏ−Ｃ2-6−アルケニル、−Ｏ−Ｃ2-6−アルキニル、−Ｏ−Ｃ3-6−ヘテロシクロアルキル、好ましくはピペラジニル、モルホリニル、ピロリジニル又はピペリジニル、Ｃ3-6−シクロアルキル、好ましくはシクロプロピル、シクロペンチル又はシクロヘキシル、アリール、好ましくはフェニル、又はナフタレニル、ヘテロアリール、好ましくはピリジニル又はピリミジニル、−Ｏ−アリール、好ましくは−Ｏ−フェニル、Ｏ−ヘテロアリール、好ましくはｏ−ピリジニル又はＯ−ピリミジニル、−Ｏ−シクロアルキル、好ましくはＯ−シクロペンチル、又はＯ−シクロヘキシル、及び−Ｏ−ヘテロシクロアルキル、好ましくは−Ｏ−モルホリニル、−Ｏ−ピペリジニル、−Ｏ−ピロリジニル、又は−Ｏ−ピペラジニルから選択される基、又は
水素、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＲ8、−ＯＣＯＮ（Ｒ8）2、−Ｎ（Ｒ8）2、−ＮＨＣＯＲ8、−ＮＨＣＯＮ（Ｒ8）2、−ＮＯ2、ＣＦ3、ハロゲン、−Ｏ−Ｃ1-6−アルキル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｃ1-10−アルキル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｃ2-10−アルケニル−Ｑ1、−ＣＯＮＲ8−Ｑ2、ハロゲン、ＯＨ、−ＳＯ2Ｒ8、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ8）2、−ＣＯＲ8、−ＣＯＯＲ8、−Ｎ（Ｒ8）2、−ＮＨＣＯＲ8、−ＣＯＮＲ8ＯＣ1-10−アルキル−Ｑ1及び−ＣＯＮＲ8Ｏ−Ｑ2から選択される基を示し得る。
【００２３】
好ましくは、置換基Ｒ9は、−ＣＯＮＲ8−Ｑ2又は−ＣＯＮＲ8ＯＣ1-10−アルキル−Ｑ1を示す。
置換基Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、水素又は置換されていてもよいＣ1−Ｃ4−アルキル、好ましくは水素又はメチルを示し得、又は
Ｒ10及びＲ11は、ともに、２−５員アルキルブリッジ、好ましくは２員アルキルブリッジを示し得る。
特に好ましくは、置換基Ｒ10及びＲ11は、水素を示す。
Ｑ1は、水素、−ＮＨＣＯＲ8又は置換されていてもよいＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、アリール、好ましくはフェニル、ヘテロアリール、Ｃ3−Ｃ8−シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基から選択される基を表し得る。
Ｑ2は、水素又は置換されていてもよいアリール、好ましくはフェニル、ヘテロアリール及びＣ3-8−シクロアルキル基から選択される基を表し得る。
Ｒ1及びＲ9の定義において言及されるすべての基は、場合により、分岐及び／又は置換されていてもよい。
一般式（Ｉ）の化合物を、以下の合成方法により製造し得るが、一般式（Ａ１）、（Ａ２）及び（Ｉ）の置換基は、上に記載されるようなものである。この方法は、それらの目的にそれを制限することなく、本発明を説明するとして理解されるべきである。
【００２４】
式（Ａ１）の化合物を、置換されていてもよいベンジルアミン（Ａ２）と反応させて、一般式（Ｉ）を得る。式（Ａ１）の化合物を、WO 2003020722の23頁に記載されるようにして得ることができる。Ｒ１／Ｒ２における立体化学に関して鏡像異性的に純粋な化合物（Ａ１）をまた、該頁に記載されている工程と同じようにして得ることができる。使用する４−アミノメチル−Ｎ−ベンジルベンズアミドを、例えば以下の参照に従って得ることができる：H.G.Kazmirowski、P.Neuland、H.Landmann、F.Markwardt Pharmazie 1967、22(9)，465-70。
【００２５】
【化５】
2008503515.tif 000007
【００２６】
一般式（Ｉ）の新規化合物を、以下の実施例と同じように製造することができる。
以下の２−クロロージヒドロプテリジノンを合成において使用した：
【００２７】
【化６】
2008503515.tif 000008
【００２８】
実施例９
０．５ｇの化合物１を、２．５ｍＬのスルホラン中の１．１５ｇの４−アミノメチル−Ｎ−ベンジルベンズアミドと一緒に、３０分間１６０℃で攪拌した。反応溶液を冷却した後、２０ｍＬのメタノールで希釈し、沈殿物をろ過し、メタノールで再び洗浄し及び乾燥した。生成物は、ｍ．ｐ．１６２℃の４７０ｍｇの軽質茶色結晶であった。
実施例１０
０．２ｇの化合物１を、１ｍＬのスルホラン中、０．４ｇの４−アミノメチルベンゼンスルホンアミド×ＨＣｌ及び０．３４ｍＬの３０％のナトリウムメトキシド溶液と共に、１６０℃で２時間攪拌した。冷却後、メタノール及びエーテルで希釈し、沈殿物からろ過し、母液を蒸発し、残渣を塩化メチレン及び２Ｎ塩酸で抽出した。黄色沈殿物を塩化メチレン相から結晶化し、これをろ過及び乾燥した。生成物は、ｍ．ｐ．２４８℃の４０ｍｇの黄色結晶であった。
実施例１１
０．１ｇの化合物２を、１６８μＬのベンジルアミンと一緒に、溶剤不存在下で１６０℃で１時間及び４５分間融解した。冷却後、残渣を、少量のジクロロメタン及びメタノールで溶解し及びエタノールと一緒にした。得られた沈殿物をろ過し、母液を蒸発し、シリカゲル上でクロマトグラフィーに供した。溶離剤は、ジクロロメタン：メタノール：水性アンモニア溶液を比９５：５：０．５で使用した。次いで、生成物を含む留分を一緒にし、水分を蒸発とばした。残渣を酢酸エチル中に溶解し、エーテルＨＣｌ及び石油エーテルと一緒にし、沈殿物をろ過した。生成物は、軽質茶色吸湿性固体の０．０８ｇであった。
【００２９】
実施例１２
０．１ｇの化合物２及び９５μＬの３−クロロベンジルアミンを、溶剤不存在下で１６０℃で２時間加熱した。冷却した反応混合物を、メタノール及びジクロロメタンで蒸解し及びエーテルと組み合わせた。沈殿物を、ろ過し及び母液を、実施例１１において記載されるようにクロマトグラフィーにより精製した。製品留分を一緒にし、水分を飛ばした。次いで、生成物をアセトンに溶解させ、イソプロパノール中のシュウ酸溶液と一緒にし、沈殿物をろ過及び乾燥した。生成物は、ｍ．ｐ．１７１℃の７２ｍｇの白色固体であった。
実施例１４
０．１ｇの化合物２及び１００μＬの３−メトキシベンジルアミンを、溶剤不存在下で１６０℃で２時間加熱した。冷却した反応混合物を、メタノール及びジクロロメタンに蒸解し、エーテルと一緒にした。沈殿物をろ過し、母液を実施例１１に記載したようにクロマトグラフィーにより精製した。生成物留分を一緒にし、水分を飛ばした。次いで、生成物をアセトンに溶解させ、イソプロパノール中のシュウ酸溶液と一緒にし、沈殿物をろ過及び乾燥した。生成物は、ｍ．ｐ．１７５℃の９７ｍｇの白色固体であった。
表１記載の一般式（Ｉ）の化合物を、上記の方法と同じようにして製造した。
【００３０】
【表１】
2008503515.tif 000009
【００３１】
【表２】
2008503515.tif 000010
【００３２】
【表３】
2008503515.tif 000011
【００３３】
一般式（Ｉ）の化合物は、治療分野において広範囲に適用できることを特徴とすることがわかった。特筆すべきは、特定の細胞周期キナーを抑制すること、特に、培養したヒト腫瘍細胞の増殖を阻害するが、他の細胞の増殖、例えば内皮細胞の増殖も阻害する役割を果たすような用途である。
ＤＮＡ染色次いでＦＡＣＳ分析により示されるように、本発明の化合物によりもたらされる増殖抑制は、細胞の停止により、特に細胞周期のＧ２／Ｍ相での細胞の停止により媒介される。細胞は、プログラム細胞死が開始される前に、使用される細胞次第で、細胞周期のこの相において時間の特定の長さの間、停止する。細胞周期のＧ２／Ｍ相における停止は、例えば特定細胞周期キナーゼの抑制により誘発される。それらの生物学的特性を考慮して、本発明による一般式Ｉの化合物、それらの異性体及びそれらの生理学的に許容可能な塩は、過剰又は異常な細胞増殖を特徴とする疾患の治療に適切である。
そのような疾患として、例えば：ウィルス感染（例えばＨＩＶ及びカポシ肉腫）；炎症性及び自己免疫疾患（例えば結腸炎、関節炎、アルツハイマー疾患、糸球体腎炎及び創傷治癒）；細菌、菌及び／又は寄生虫感染；白血病、リンパ腫および固体腫瘍；皮膚疾患（例えば乾癬）；骨疾患；循環器疾患（例えば再狭窄及び肥大）が挙げられる。それらはまた、放射線、ＵＶ治療及び／又は細胞増殖抑制治療（Davis et al.、2001）により引き起こされるそれらのＤＮＡに対する損傷から、増殖性細胞（例えば髪、腸、血液及び前駆細胞）を保護するのに適している。
本発明の新規化合物は、上記疾患の保護、短期間又は長期間の治療のために、また、同一の兆候のために使用される他の活性物質、例えば細胞増抑制剤、ホルモン及び抗体と共に使用することができる。
本発明の化合物の活性を、培養ヒト腫瘍細胞でＰＬＫ１阻害アッセイにおいて、細胞傷害試験において及び／又は例えばＨｅＬａＳ３細胞でＦＡＣＳ分析において、決定した。双方の試験方法において、化合物は、かなり良好な活性、すなわち例えば５μｍｏｌ／Ｌ未満、通常１μｍｏｌ／Ｌ未満のＨｅＬａＳ３細胞傷害試験においてＥＣ50値を、及び１μｍｏｌ／Ｌ未満のＰＬＫ１阻害アッセイにおいて１Ｃ50値を示した。
【００３４】
ＰＬＫ１キナーゼ試験
酵素の製造：
Ｎ末端でＧＳＴに結合する組み換えヒトＰＬＫ１酵素を、バキュロウィルスに感染した昆虫細胞（Ｓｆ２１）から分離する。グルタチオンセファロースカラムで親和性クロマトグラフィーにより精製する。
２００ｍｌのSf-900 II 血清遊離昆虫細胞媒体（ライフテクノロジー）中の４×１０7Ｓｆ２１細胞（Spodoptera frugiperda））を、スピナーフラスコにおいて播種する。２７℃及び７０ｒｐｍで７２時間培養後、１×１０8Ｓｆ２１細胞を、新しいシピナーフラスコ中の全ての１８０ｍｌの媒体に播種する。更に２４時間後、２０ｍｌの組み換えバキュロウィルス貯蔵懸濁物を添加し、２７℃、７０ｒｐｍで７２時間細胞を培養する。収集する３時間前にオカダ酸を添加し（カル生化学、最終濃度０．１μＭ）、懸濁物を更に培養する。細胞数を決定し、細胞を遠心分離（５分間、４℃、８００ｒｐｍ）により除去し、１×ＰＢＳ（8ｇのNaCl/l、0.2ｇのKCl/l、1.44gのNa2HPO4/l、0.24gのKH2PO4/l）で洗浄する。再び遠心分離にかけた後、ペレットを液体窒素で急速冷凍する。次いで、ペレットを急速解凍し、非常に冷たい溶解緩衝液（50mM HEPES pH7.5、10mM MgCl2、1mM DTT、5μg/mlレウペプチン、5μg/mLアプロチニン、100μM NaF、100μM PMSF、10mM β-グリセロールホスフェート、0.1mM Na3VO4、30mM 4-ニトロフェニルホスフェート）中に再懸濁して、１×１０8細胞／１７．５ｍｌを得る。細胞を３０分間氷で溶解する。遠心分離機（4000rpm、５分間）による細胞残屑の除去後、透明な浮遊物を、グルタチオンセファロースビーズ（５０ｍｌの浮遊物あたり、１ｍｌの再懸濁及び洗浄したビーズ）と一緒にし、混合物を回転ボードに４℃で３０分間培養する。次いで、ビーズを溶解緩衝液で洗浄し、組み替えタンパク質を、１ｍｌの溶離バッファ／ｍｌの再懸濁ビーズ（溶離緩衝液：100mMトリス／HCl pH=8.0、120mM NaCl、20mM還元グルタチオン（シグマＧ−４２５１）、10mM MgCl2、1mM DTT）を用いてビーズから溶離する。タンパク質濃度を、ブラッドフォードアッセイにより決定する。
【００３５】
アッセイ
以下の化合物を、９６ウェル丸底皿（Greiner bio-one、PS Microtitre plate No.650101）のウェルにおいて一緒にする：
６％のＤＭＳＯ、０．５ｍｇ／ｍｌカゼイン（シグマＣ−５８９０）、６０ｍＭ  β−グリセロホスフェート、２５ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ＝７．０、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＤＴＴにおいて種々の濃度（例えば３００μＭで始め、及び１：３に希釈）において試験するための１０μｌの化合物
２０μｌの基質溶液（２５ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ＝７．０、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＤＴＴ、２．５ｍＭ  ＥＧＴＡ、３０ｍＭ  β−グリセロホスフェート、０．２５ｍｇ／ｍｌカゼイン）
２０μｌ酵素希釈（２５ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ＝７．０、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１ｍＭ  ＤＴＴ１中の酵素ストックの１：１００の希釈）
１０μｌ  ＡＴＰ溶液（１．１１×１０6Ｂｑ／ｍｌガンマ−Ｐ３３−ＡＴＰを有する４５μＭ  ＡＴＰ）。
ＡＴＰ溶液を添加することにより反応を開始し、穏やかに振動させながら（IKA Schuttler MTS2で６５０ｒｐｍ）３０℃で４５分間反応を続ける。非常に冷たい５％ＴＣＡをウェルあたり１２５μｌ添加して反応を停止し、氷で少なくとも３０分間培養する。沈殿物を、フィルタープレート上（９６ウェルマイクロタイターフィルタープレート：ユニフィルター９６、ＧＦ／Ｂ；Packard;No.6005177）に収集することにより移し、次いで、１％ＴＣＡで４回洗浄し、６０℃で乾燥する。ウェルあたり、３５μｌのシンチレーション溶液（レディ−セイフ；Beckmann）を添加した後、プレートをガムテープでシールし、沈殿したＰ３３の量をウォレスベータカウンター(Wallac Betacounter)を用いて測定する。
測定データを、スタンダードグラフパッドソフトウェア（satandard Graphpad software）（Levenburg-Marquard Algorhythmus）を用いて評価する。
【００３６】
培養ヒト腫瘍細胞の細胞毒性の測定
培養ヒト腫瘍細胞の細胞毒性を測定するために、子宮頸がん腫瘍細胞株ＨｅＬａ  Ｓ３の細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）より得られる）を、ハム（Ham）のＦ１２媒体（ライフテクノロジー）及び１０％子牛胎児血清（生活技術）中で培養し、対数増殖期において収集する。次いで、ＨｅＬａ  Ｓ３細胞を、９６ウェルプレート（コスター（Costar））においてウェルあたり１０００細胞の密度で置き、培養器（３７℃及び５％ＣＯ2）で一晩中培養するが、各プレート上６ウェルを媒体のみ（媒体コントロールとしての３ウェル、還元(reduced)アラマーブルー試薬（Alamarblue reagent）を用いる培養のための３ウェル）で満たす。活性物質は、種々の濃度（ＤＭＳＯにおいて溶解される；ＤＭＳＯ最終濃度：０．１％）（三重測定として）で細胞に添加する。７２時間培養後、２０μｌアラマーブルー試薬（アキューメッドインターナショナル(AccuMed international)）を各ウェルに添加し、更に７時間細胞を培養する。コントロールとして、20μｌの還元アルマルブルー試薬を、３ウェルに各々（30分間加圧滅菌されるアラマーブルー試薬）に添加する。７時間培養後、個々のウェルにおけるアルマーブルー試薬の色の変化を、パーキンエルマー蛍光分光光度計（励振530ｎｍ、発光590ｎｍ、スリット15、統合時間0.1）で測定する。反応するアルマーブルー試薬の量は、細胞の代謝性活性を示す。相対細胞活性は、コントロールのパーセンテージ（ＨｅＬａ  Ｓ３細胞、抑制剤なし）として計算し、細胞活性を５０％（ｌＣ50）抑制する活性物質濃度を求める。値は、３つの個々の測定の平均から計算するが、ダミー値（媒体コントロール）により補正する。
【００３７】
ＦＡＣＳ分析
プロピジウムヨウ化物（ＰＩ）は、化学量論的に二本鎖ＤＮＡに結合しているので、細胞ＤＮＡ含量に基づいて、細胞周期のＧ１、Ｓ及びＧ２／Ｍ相における細胞の割合を決定するのに適切である。Ｇ０及びＧ１相における細胞は、２倍体ＤＮＡ（２Ｎ）含量を有する一方、Ｇ２又は有糸分裂相における細胞は、４Ｎ  ＤＮＡ含量を有する。
例えばＰｌ染色について、40,000ＨｅＬａ  Ｓ３細胞を、７５ｃｍ2細胞培養フラスコ上に播種し、２４時間後、０．１％ＤＭＳＯを、コントロールとして添加するか又は基質を種々の濃度で（０．１％ＤＭＳＯ中）添加した。細胞を、２×ＰＢＳで洗浄し、次いでトリプシン／ＥＤＴＡを用いて分離する前に、物質又はＤＭＳＯを用いて２４時間培養した。細胞を、遠心分離（1000rpm、５分間、４℃）にかけ、細胞を０．１ｍｌのＰＢＳに再懸濁する前に、細胞ペレットを２×ＰＢＳで洗浄した。次いで、細胞を、８０％のエタノールを用いて４℃で１６時間又は−２０℃で２時間固定した。固定した細胞を、遠心分離（1000rpm、５分間、４℃）にかけ、ＰＢＳで洗浄し、次いで再び遠心分離にかけた。細胞ペレットを、ＰＢＳ中の２ｍｌの０．２５％トリトンＸ−１００中に再懸濁し、５ｍｌのＰＢＳを添加し、混合物を再び遠心分離にかける前に、５分間氷で培養した。細胞ペレットを、３５０μｌのＰｌの染色溶液（０．１ｍｇ／ｍｌのリボヌクレアーゼＡ（シグマ、Ｎｏ．Ｒ−４８７５）、１×ＰＢＳ中の１０μｇ／ｍｌのプロジウムヨウ化物（シグマ、Ｎｏ．ｐ−４８６４））中に再懸濁した。細胞をＦＡＣＳスキャン用のサンプル測定容器内に移す前に、２０分間暗所において染色緩衝液で培養した。ベクトンディキンソンＦＡＣＳ分析器（Becton Dickinson FACS Analyzer）において、アルゴンレーザー（５００ｍＷ、発光４８８ｎｍ）、及びＤＮＡ細胞探求プログラム（ＢＤ）を用いて、ＤＮＡ測定をした。対数Ｐｌ蛍光を、バンドパスフィルター（ＢＰ  ５８５／４２）を用いて決定した。個々の細胞周期相における細胞集団を、ベクトンディキンソン製モドフィットＬＴプログラム（ModFit LT Programme）を使用して計った。
【００３８】
本発明の化合物をまた他の腫瘍細胞で試験した。例えば、これらの化合物は、全ての種類の組織の癌（例えば胸部（ＭＳＥ７）；結腸（ＨＣＴ１１６）、頭部及び頚部（ＦａＤｕ）、肺（ＮＣｌ−Ｈ４６０）、すい臓（ＢｘＰＣ−３）、前立腺（ＤＵ１４５））、肉腫（例えばＳＫ−ＵＴ−１Ｂ、Ｓａｏｓ−２）、白血病及びリンパ種（例えばＨＬ−６０、Ｊｕｒｋａｔ、ＴＨＰ−１）及び他の腫瘍（例えばメラノーマ（ＢＲＯ）、グリオーマ（Ｕ−８７ＭＧ））に有効であり、及びそれらの兆候のために使用することができる。これは、全種類の腫瘍タイプを治療するために本発明の化合物を広く適用できることを示すものである。
一般式（Ｉ）の化合物は、それ自身で又は他の活性物質と共に、場合によりまた、他の薬理学的に活性な物質と併せて使用することができる。適切な製剤として、例えば、錠剤、カプセル、座薬、溶液、特に注射(s.c., i.v., i.m.)及び注入用の溶液−エリキシル剤、エマルジョン又は分散性粉末が挙げられる。医薬的に活性な化合物の濃度は、全体として組成物の０．１〜９０質量％、好ましくは０．５〜５０質量％の範囲であるべきであり、即ちその量において、下に特定される投与量範囲を達成するのに十分である。特定される投与は、必要ならば１日に数回与えることができる。
適切な錠剤は、例えば既知の賦形剤を有する活性物質、例えば不活性希釈剤例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム又はラクトース、錠剤分解物質例えば、とうもろこしでんぷん又はアルギン酸、又は結合剤例えば、でんぷん又はゼラチン、潤滑剤例えばステアリン酸マグネシウム又はタルク及び／又は遅延放出のための薬剤例えばカルボキシメチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、又は酢酸ポリビニルを混合することにより得ることができる。錠剤はまたいくつかの層を含み得る。
【００３９】
被覆錠剤は、錠剤被覆のために通常使用される物質、例えばコリドン又はセラック、アラビアゴム、タルク、二酸化チタニウム又は糖を用いて、錠剤と同じように生産される核を被覆することにより製造することができる。遅延放散を達成するか又は不適合を防止するために、核はまた、多くの層から成る。同じように、錠剤被覆は、できる限り錠剤用の上記の賦形剤を使用して、遅延放散を達成するために多くの層から成り得る。
本発明の活性物質又はそれらの組み合わせを含むシッロプ又はエリキシル剤は、更に、甘味料、例えばサッカリン、チクロ、グリセロール又は糖及びフレーバーエンハンサー、例えばフレーバリング(flavouring)、バニリン又はオレンジ抽出物を含み得る。それらはまた、サスペンションアジュバント又は増粘剤例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、湿潤剤例えば酸化エチレンを有する脂肪アルコールの縮合生成物、又は防腐剤例えばｐ−ヒドロキシベンゾエートを含み得る。
注射及び注入用の溶液は、例えば等張剤、防腐剤例えばｐ−ヒドロキシベンゾエート、又は安定剤例えばエチレンジアミン四酢酸のアルカリ金属塩を添加することにより、場合により、乳化剤及び／又は分散剤を用いて、通常の方法で製造されるが、水が希釈剤として使用される場合、例えば有機溶剤を、場合により溶媒剤又は溶解補助として使用されていてもよく、注射バイアル又はアンプル又は注入ボトル内に移すことができる。
【００４０】
一以上の活性物質又は活性物質の組み合わせを含むカプセルは、例えば、不活性担体を有する活性物質、例えばラクトース又はソルビトールを混合することにより、及びゼラチンカプセル内にそれらを充填することにより製造することができる。
適切な座薬は、例えば、この目的のために提供される担体、例えば天然脂肪又はポリエチレングリコール又はそれらの誘導体と混合することにより製造することができる。
使用され得る賦形剤は、例えば水、医薬的に許容可能な有機溶剤例えばパラフィン（例えば石油留分）、植物油（ラッカセイまたはゴマ油）、モノ−又は多官能性アルコール（例えばエタノール又はグリセロール）、担体、例えば天然鉱油粉末（例えばカオリン、クレー、タルク、チョーク）、合成鉱物粉末（例えば高分散ケイ酸及びシリケート）、糖（例えば甘藷糖、ラクトース及びグルコース）、乳化剤（例えばリグニン、使用済みの亜硫酸塩溶液、メチルセルロース、でんぷん及びポリビニルピロリドン）及び潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸及びラウリル硫酸ナトリウムを含む。
製剤を、通常の方法により、好ましくは経口又は経皮経路により、もっとも好ましくは経口経路により投与する。経口投与について、錠剤は、上記の担体は別として、もちろん、種々の添加剤、例えばでんぷん、好ましくはじゃがいもでんぷん、ゼラチンなどと一緒に、添加剤例えばクエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、及びリン酸ジカルシウムを含み得る。更に、滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びタルクは、打錠工程のために同時に使用することができる。水性懸濁液の場合、活性物質は、上記の賦形剤に加えて、種々のフレーバーエンハンサー又は着色剤と組み合わせることができる。
【００４１】
非経口使用について、適切な液体担体を有する活性物質の溶液を使用することができる。
静脈注射に用いる投与量は、１時間あたり１〜１０００ｍｇ、好ましくは１時間あたり５〜５００ｍｇの間である。
しかしながら、時に、体重、投与経路、薬剤に対する個々の反応、その配合物の性質、及び薬剤が投与される時間又は間隔により、特定量から逸脱することが必要であり得る。従って、上に与えられる最小限の投与未満を使用することが十分であり得る場合がある一方、最大限の制限を、超えることができなければならない場合がある。大量を投与するとき、１日にわたり何回もの少量の投与塗布量内にそれらを分けることが望ましい。
以下の配合物の例により本発明を説明するが、本発明の範囲を制限するものではない：
【００４２】
医薬的配合物の例
Ａ）
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微細活性物質、ラクトース及びとうもろこしでんぷんの一部を一緒に混合する。混合物を篩にかけ、次いで、ポリビニルピロリドン水溶液で湿らせ、練り、湿潤粒状にし、乾燥する。顆粒、残りのとうもろこしでんぷん及びステアリン酸マグネシウムを篩にかけ、一緒に混合する。混合物を圧縮して、適切な形及び大きさの錠剤を得る。
【００４３】
Ｂ）
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微細な活性物質、とうもろこしでんぷんの一部、ラクトース、微結晶性セルロース及びポリビニルピロリドンを一緒に混合し、混合物を篩にかけ、残りのとうもろこしでんぷん及び水とともに混合し、顆粒を形成し、乾燥し、篩にかける。でんぷんグリコール酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムを添加及び混合し、混合物を圧縮して、適切な大きさの錠剤を形成する。
【００４４】
Ｃ）
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活性物質を、それ自身のｐＨでまたは場合によりｐＨ５．５〜６．５で水中に溶解し、塩酸ナトリウムを添加して、それを等張にする。得られた溶液を、ピロゲンの不在下でろ過し、ろ液をアンプル内に無菌状態下で移し、次いで殺菌し、融解によりシールする。アンプルは、５ｍｇ、２５ｍｇ及び５０ｍｇの活性物質を含む。
【国際調査報告】
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