(57)【要約】  本発明の目的は、疾患、特に心血管および血液の疾患の処置に使用できる新しい化合物を提供することである。本発明に関して、特異的ＨＩＦ−プロリル−４−ヒドロキシラーゼ阻害剤として作用し、この特異的なインビボの作用メカニズムがあるので、非経腸または経口投与の後に、エリスロポエチンなどのＨＩＦ標的遺伝子を誘導し、かくして赤血球新生などの生物学的過程をもたらす化合物を記載する。本発明は、一般式（Ｉ）［式中、Ａは、ＣＨまたはＮを表し、Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルおよびＣ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４により形成される群から選択される置換基を表し；Ｒ２は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、トリフルオロメトキシ、アミノ、ヒドロキシカルボニルおよびＣ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ８により形成される群から選択される置換基を表し；ｍは、０、１または２であり；ｎは、０、１、２または３であり、ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、これらの意味は同一であっても異なっていてもよく；そして、Ｒ３は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルを表す］の化合物に関する。本発明は、これらの化合物の塩、溶媒和物および塩の溶媒和物にも関する。【化１】2008539180.tif 000110
2008539180.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2008539180.tif 000099
［式中、
Ａは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルおよび−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ６もしくは−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ７の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル（ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、フェニルまたは５員もしくは６員のヘテロアリールにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびヘテロアリールは、各場合で、同一であるか、または異なって、ハロゲン、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより１回ないし３回置換されていてもよく、
Ｒ６は、ヒドロキシルまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシにより置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示し、
そして、Ｒ７は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示す）、
そして、Ｒ４は、水素または（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示し、これは、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシまたはフェニルにより置換されていてもよい
（ここで、フェニルは、ハロゲン、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより置換されていてもよい）｝、
Ｒ２は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、トリフルオロメトキシ、アミノ、ヒドロキシカルボニルおよび−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ８からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
そして、Ｒ８は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す｝、
ｍは、０、１または２の数を表し、
ｎは、０、１、２または３の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルを表す］
の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項２】
式中、
Ａが、ＣＨまたはＮを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシカルボニルおよびヒドロキシカルボニルからなる組から選択される置換基を表し、
Ｒ２が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、トリフルオロメトキシ、アミノおよびヒドロキシカルボニルからなる組から選択される置換基を表し、ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
ｍが、０、１または２の数を表し、
ｎが、０、１、２または３の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が、水素、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルを表す、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項３】
式中、
ＡがＣＨを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、フッ素、塩素、臭素および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ６もしくは−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ７の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル（ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、フェニルまたは５員のヘテロアリールにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびヘテロアリールは、各場合で、同一であるか、または異なって、フッ素、塩素、臭素、シアノ、メチル、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより１回ないし３回置換されていてもよく、
そして、Ｒ６およびＲ７は、相互に独立して、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示す）、
そして、Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示し、これは、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシまたはフェニルにより置換されていてもよい
（ここで、フェニルは、フッ素、塩素、臭素、シアノ、メチル、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより置換されていてもよい）｝、
Ｒ２が、フッ素、塩素、臭素、シアノ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニルおよび−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ３からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
そして、Ｒ８は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す｝
ｍが、０、１または２の数を表し、
ｎが、０、１または２の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が水素を表す、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項４】
式中、
ＡがＣＨを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、トリフルオロメチル、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニルからなる組から選択される置換基を表し、
Ｒ２が、塩素、臭素、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、トリフルオロメトキシおよびアミノからなる組から選択される置換基を表し、ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
ｍが、０または１の数を表し、
ｎが、０、１、２または３の数を表し
｛ここで、Ｒ２が数個存在する場合、その意味は同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が水素またはメチルを表す、
請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項５】
式中、
ＡがＣＨを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、フッ素、塩素、臭素および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、ヒドロキシル、アミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５もしくは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ６の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル（フェニルまたはピラゾリルにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびピラゾリルは、各場合で、同一であるか、または異なって、フッ素、塩素、メチルまたはトリフルオロメチルにより１回ないし３回置換されていてもよく、
そして、Ｒ６は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す）、
そして、Ｒ４は、フェニルにより置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す｝、
Ｒ２が、塩素、臭素、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよびトリフルオロメチルからなる組から選択される置換基を表し、ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
ｍが、０、１または２の数を表し、
ｎが、０、１または２の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が水素を表す、
請求項１または請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項６】
式（Ｉ−Ａ）
【化２】
2008539180.tif 000100
［式中、
Ｒ１Ａは、水素、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
そして、Ｒ２Ａ、Ｒ２ＢおよびＲ２Ｃは、同一であるか、または異なり、相互に独立して、水素、塩素、臭素、シアノ、メチル、ヒドロキシメチル、メトキシまたはエトキシを表す］
の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項７】
式（Ｉ−Ｂ）
【化３】
2008539180.tif 000101
［式中、
Ｒ１ＡおよびＲ１Ｂは、同一であるか、または異なり、相互に独立して、水素、フッ素、塩素、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、ヒドロキシル、アミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル（フェニルまたはピラゾリルにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびピラゾリルは、各場合で、同一であるか、または異なって、フッ素、塩素、メチルまたはトリフルオロメチルにより１回ないし３回置換されていてもよい）、
そして、Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示し、これは、フェニルにより置換されていてもよい｝、
Ｒ２は、塩素、臭素、シアノ、メチル、ヒドロキシメチルまたはトリフルオロメチルからなる組から選択される置換基を表し、
そして、
ｎは、０、１または２の数を表す
｛ここで、Ｒ２が数個存在する場合、その意味は同一であっても異なっていてもよい｝］
の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項８】
請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物の製造方法であって、式（ＩＩ）
【化４】
2008539180.tif 000102
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびｎは、各々請求項１ないし請求項７に記載の意味を有し、そして、
Ｚ１は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物を、不活性溶媒中、場合により酸の存在下で、式（ＩＩＩ）
【化５】
2008539180.tif 000103
（式中、Ａ、Ｒ１およびｍは、各々請求項１ないし請求項７に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、式（ＩＶ）
【化６】
2008539180.tif 000104
（式中、Ｚ１、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍおよびｎは、上述の意味を有する）
の化合物を得、次いで、これらを不活性溶媒中、塩基の存在下で環化し、
そして、場合により、式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、対応する（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換することを特徴とする、方法。
【請求項９】
Ｒ３が水素を表す請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の式（Ｉ）、（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物の製造方法であって、式（Ｖ）
【化７】
2008539180.tif 000105
（式中、Ｒ２およびｎは、各々請求項１ないし請求項７に記載の意味を有し、そして、
Ｚ１は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物を、式（ＶＩ）
【化８】
2008539180.tif 000106
（式中、Ｚ２は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物と縮合反応に付し、式（ＶＩＩ）
【化９】
2008539180.tif 000107
（式中、Ｚ１、Ｒ２およびｎは、上述の意味を有する）
の化合物を得、続いて、これを酸の存在下で、式（ＩＩＩ）
【化１０】
2008539180.tif 000108
（式中、Ａ、Ｒ１およびｍは、各々請求項１ないし請求項７に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、式（ＩＶ−Ａ）
【化１１】
2008539180.tif 000109
（式中、Ｚ１、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、ｍおよびｎは、上述の意味を有する）
の化合物を得、次いで、これらを、不活性溶媒中、塩基の存在下で環化することを特徴とする、方法。
【請求項１０】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
心血管疾患、心不全、貧血、慢性腎臓疾患および腎不全の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１２】
請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物を、不活性、非毒性、医薬的に適する補助物質と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１３】
請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物を、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、ベータ受容体遮断薬、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト、アスピリン、利尿剤、鉄サプリメント、ビタミンＢ１２および葉酸サプリメント、カルシウム拮抗薬、スタチン類およびジギタリス（ジゴキシン）誘導体からなる群から選択されるさらなる活性化合物と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１４】
心血管疾患、心不全、貧血、慢性腎臓疾患および腎不全の処置および／または予防のための、請求項１２または請求項１３に記載の医薬。
【請求項１５】
少なくとも１種の請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の化合物または請求項１２ないし請求項１４のいずれかに記載の医薬の有効量を使用する、ヒトおよび動物における心血管疾患、心不全、貧血、慢性腎臓疾患および腎不全の処置および／または予防方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、新規ジピリジル−ジヒドロピラゾロン類、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、および、疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用、特に、心血管および血液疾患および腎臓疾患のためのもの、および創傷の治癒を促進するためのものに関する。
【背景技術】
【０００２】
人体（human organism）またはその構成要素への不十分な酸素供給であって、その持続時間および／またはその程度のために人体またはその構成要素の規則的な機能を損なうか、または、その機能の完全な破壊を引き起こすものは、低酸素症と呼ばれる。低酸素症は、吸入される空気中の利用可能な酸素の減少（例えば、非常な高地での期間中に）により、外呼吸の障害（例えば、肺機能の撹乱または気道の閉塞の結果として）により、心拍出量の減少（例えば、心不全、肺塞栓症を伴う急性右室負荷の場合に）により、低すぎる血液の酸素運搬能（例えば、貧血または例えば一酸化炭素による中毒の結果として）により、血管閉塞の結果としての血流の減少（典型的には例えば心臓、下肢または脳の虚血状態、糖尿病性大血管および微小血管障害）により局所的に区切られて、または、組織の酸素要求の増大（例えば、筋肉仕事量の増大または局所的炎症の結果として）によっても引き起こされ得る［Eder, Gedigk (ed.), Allgemeine Pathologie und pathologische Anatomie, 33rd ed., Springer Verlag, Berlin, 1990]。
【０００３】
人体は、限られた範囲内で、酸素供給が減少した状況に急性および慢性的に適応し得る。なかんずく、心拍出量および呼吸排出量の増加並びに植物神経制御メカニズムによる血管の局所的拡張を含む即時的反応に加えて、低酸素は、多数の遺伝子の転写の変化をもたらす。それらの遺伝子産物の機能は、ここで、酸素不足を補うように作用する。かくして、いくつかの解糖系の酵素のおよびグルコーストランスポーターＩの発現が増強され、その結果、無気的ＡＴＰ産生が増加し、酸素不足での生存が可能になる［Schmidt, Thews (ed.), Physiologie des Menschen, 27th ed., Springer Verlag, Berlin, 1997; Loeffler, Petrides (ed.), Biochemie und Pathobiochemie, 7th ed., Springer Verlag, Berlin, 2003]。
【０００４】
低酸素は、さらに、血管内皮細胞増殖因子、即ちＶＥＧＦの発現の増強を導き、その結果、低酸素の組織において血管の調節（血管形成）が刺激される。虚血組織を通る血流は、それにより、長期的に改善される。この対抗制御は、様々な心血管疾患および血管閉塞疾患の場合には、明らかに非常に不適切なものでしかない［Simons and Ware, Therapeutic angiogenesis in cardiovascular disease, Nat. Rev. Drug. Discov. 2 (11), 863-71 (2003)に概説]。
【０００５】
さらに、全身的低酸素症の場合、腎臓の間質性線維芽細胞において支配的に形成されるペプチドホルモンであるエリスロポエチンの発現が増強される。それにより、骨髄における赤血球細胞の形成が刺激され、従って血液の酸素運搬能が上昇する。この効果は、いわゆる高地トレーニングにおいて、能力の高い運動選手により以前から使用されている。例えば大量出血後の貧血の結果としての血液の酸素運搬能の低下は、通常、腎臓のエリスロポエチン産生の増加を引き起こす。ある種の形態の貧血では、この制御メカニズムが撹乱されるか、または、その正常値が低く設定されることがある。故に、例えば腎不全を患っている患者において、エリスロポエチンは実際に腎臓の実質で産生されるが、血液の酸素運搬能に対して有意に少ない量であり、それは、いわゆる腎性貧血をもたらす。腎性貧血は特に、しかし腫瘍およびＨＩＶ感染に起因する貧血も、慣習的に組換えヒトエリスロポエチン（ｒｈＥＰＯ）の非経腸投与により処置されている。この高価な治療に代わる経口で利用可能な医薬による代替治療は、現在のところ存在しない［Eckardt, The potential of erythropoietin and related strategies to stimulate erythropoiesis, Curr. Opin. Investig. Drugs 2(8), 1081-5 (2001); Berns, Should the target hemoglobin for patients with chronic kidney disease treated with erythropoietic replacement therapy be changed?, Semin. Dial. 18 (1), 22-9 (2005) に概説]。最近の研究は、その赤血球新生増加作用に加えて、それとは独立して、エリスロポエチンが低酸素組織、特に心臓および脳に対する保護的（抗アポトーシス）作用も有することを立証している。さらに、最近の研究によると、エリスロポエチンによる治療は、心不全患者における病状の平均的重篤度を下げる［Caiola and Cheng, Use of erythropoietin in heart failure management, Ann. Pharmacother. 38 (12), 2145-9 (2004); Katz, Mechanisms and treatment of anemia in chronic heart failure, Congest. Heart. Fail. 10 (5), 243-7 (2004)に概説]。
【０００６】
低酸素により誘導される上記の遺伝子は、低酸素下でのそれらの発現の増加がいわゆる低酸素誘導転写因子（ＨＩＦ）に起因するという共通の特徴を有する。ＨＩＦは、アルファおよびベータサブユニットを含むヘテロ二量体の転写因子である。３種類のＨＩＦアルファアイソフォームが報告されており、そのうちＨＩＦ−１アルファおよびＨＩＦ−２アルファは相同性が高く、低酸素誘導遺伝子発現に重要である。ＡＲＮＴ（アリール炭化水素受容体核輸送体）とも呼ばれるベータサブユニット（その２種類のアイソフォームが報告された）は構成的に発現され、アルファサブユニットの発現は細胞の酸素含有量に依存する。正常酸素圧下では、ＨＩＦアルファタンパク質はポリユビキチン化され、次いでプロテアソームにより分解される。低酸素下ではこの分解は阻害され、ＨＩＦアルファはＡＲＮＴと二量体化し、その標的遺伝子を活性化できるようになる。ＨＩＦ二量体は、ここで、その標的遺伝子の調節配列中にある、いわゆる低酸素応答エレメント（ＨＲＥ）に結合する。ＨＲＥはコンセンサス配列により定義される。機能的ＨＲＥは、多数の低酸素誘導遺伝子の調節エレメント中に検出された（Semenza, Hypoxia-inducible factor 1: oxygen homeostasis and disease pathophysiology, Trends Mol. Med. 7 (8), 345-50 (2001); Wenger and Gassmann, oxygen(es) and the hypoxia-inducible factor-1, Biol. Chem. 378 (7), 609-16 (1997)]。
【０００７】
このＨＩＦアルファの調節の基礎である分子メカニズムは、いくつかの独立した研究者グループの仕事により明らかにされた。このメカニズムは、種間で保存されている：ＨＩＦアルファは、ＰＨＤまたはＥＧＬＮと呼ばれる酸素依存的プロリル４−ヒドロキシラーゼのサブクラスにより２つの特異的プロリルラジカル（ヒトＨＩＦ−１アルファサブユニットのＰ４０２およびＰ５６４）でヒドロキシル化される。ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼは、鉄依存的２−オキソグルタル酸−変換ジオキシゲナーゼである［Epstein et al., C. elegans EGL-9 and mammalian homologs define a family of dioxogenases that regulate HIF by prolyl hydroxylation, Cell 107 (1), 43-54 (2001); Bruick and McKnight, A conserved family of prolyl-4-hydroxylases that modify HIF, Science 294 (5545), 1337-40 (2001); Ivan et al., Biochemical purification and pharmacological inhibition of a mammalian prolyl hydroxylase acting on hypoxia-inducible factor, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (21), 13459-64 (2002)］。これらの酵素は、プロリルヒドロキシラーゼとして２００１年に最初に注解された［Aravind and Koonin, The DNA-repair protein AlkB, EGL-9, and leprecan define new families of 2-oxoglutarate- and iron-dependent dioxogenases, Genome Biol. 2 (3), research0007.1-0007.8, Epub 2001 Feb 19]。
【０００８】
エロンジン（elongin）ＢおよびＣと一体となっていわゆるＶＢＣ複合体を形成し、ＨＩＦアルファサブユニットをＥ３ユビキチンリガーゼに適合させるｐＶＨＬ腫瘍抑制因子タンパク質は、プロリル−ヒドロキシル化ＨＩＦアルファサブユニットに結合する。ＨＩＦアルファサブユニットのプロリル４−ヒドロキシル化および続くその分解は、酸素の細胞内濃度に応じて起こるので、ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼは、細胞内酸素センサーとも呼ばれてきた。これらの酵素の３種のアイソフォームが同定された：ＥＧＬＮ１／ＰＨＤ２、ＥＧＬＮ２／ＰＨＤ１およびＥＧＬＮ３／ＰＨＤ３。これらの酵素の２種（ＥＧＬＮ２／ＰＨＤ１およびＥＧＬＮ３／ＰＨＤ３）は、低酸素下でさえ転写的に誘導され、恐らく慢性的低酸素下で観察されるＨＩＦアルファレベルの低下を担うものである［Schofield and Ratcliffe, oxygen sensing by HIF hydroxylases, Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 5 (5), 343-54 (2004) に概説］。
【０００９】
ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼの選択的薬理的阻害は、ＨＩＦ依存的標的遺伝子の遺伝子発現の増加をもたらし、従って多数の疾患や症候群の治療に有益である。特に心血管系の疾患の場合、疾患の経過における改善は、新しい血管の誘導および虚血器官における有気的ＡＴＰ産生から無気的なものへの代謝状況の変化から予測される。慢性的創傷の血管新生における改善は、特に治癒が不十分な下腿潰瘍（ulcera cruris）および他の慢性皮膚創傷の場合に、治癒過程を促進する。ある種の病態における、特に腎性貧血の患者における、内因性エリスロポエチンの誘導は、同様に目標とされる治療目的である。
【００１０】
今日までに科学的文献に記載されたＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼ阻害剤は、医薬に負わされる要件を満たさない。これらは、競合的オキソグルタル酸類似体（例えば、Ｎ−オキサリルグリシン）であり、非常に低い作用強度を特徴とし、従ってインビボモデルでは、まだＨＩＦ標的遺伝子の誘導の意味で作用を示していない。あるいは、それらはデスフェリオキサミンなどの鉄錯体化剤（キレート剤）であり、鉄含有ジオキソゲナーゼの非特異的阻害剤として作用し、それらはインビボで例えばエリスロポエチンなどの標的遺伝子の誘導をもたらすが、利用可能な鉄の錯体化により、明らかに赤血球新生に対抗する。
【００１１】
本発明の目的は、疾患、特に心血管および血液の疾患の処置に用いることができる新規化合物を提供することである。
【００１２】
本発明に関して、この度、ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼの特異的阻害剤として作用し、この特異的作用メカニズムを基礎として、非経腸または経口投与の後に、インビボで例えばエリスロポエチンなどのＨＩＦ標的遺伝子の誘導、並びに、それに起因する生物学的過程、例えば赤血球新生をもたらす化合物を記載する。
【００１３】
殺菌および／または殺真菌作用を有する２−ヘテロアリール−４−アリール−１,２−ジヒドロピラゾロン類は、ＥＰ１６５４４８およびＥＰ２１２２８１に開示されている。２−ヘテロアリール−４−アリール−１,２−ジヒドロピラゾロン類の、呼吸器、心血管および炎症性疾患の処置用のリポキシゲナーゼ阻害剤としての使用は、ＥＰ１８３１５９で特許請求されている。除草活性を有する２,４−ジフェニル−１,２−ジヒドロピラゾロン類は、ＤＥ２６５１００８に記載されている。ある種の２−ピリジル−１,２−ジヒドロピラゾロン類の製造および薬理的特性は、Helv. Chim. Acta 49 (1), 272-280 (1966) で報告されている。ＷＯ９６／１２７０６、ＷＯ００／５１９８９およびＷＯ０３／０７４５５０は、様々な疾患の処置用に、ジヒドロピラゾロン部分構造を有する化合物を特許請求している。
【発明の開示】
【００１４】
本発明は、一般式（Ｉ）
【化１】
2008539180.tif 000003
［式中、
Ａは、ＣＨまたはＮを表し、
Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルおよび−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ６もしくは−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ７の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル（ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、フェニルまたは５員もしくは６員のヘテロアリールにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびヘテロアリールは、各場合で、同一であるか、または異なって、ハロゲン、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより１回ないし３回置換されていてもよく、
Ｒ６は、ヒドロキシルまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシにより置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示し、
そして、Ｒ７は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示す）、
そして、Ｒ４は、水素または（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示し、これは、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシまたはフェニルにより置換されていてもよい
（ここで、フェニルは、ハロゲン、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより置換されていてもよい）｝、
Ｒ２は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、トリフルオロメトキシ、アミノ、ヒドロキシカルボニルおよび−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ８からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
そして、Ｒ８は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す｝、
ｍは、０、１または２の数を表し、
ｎは、０、１、２または３の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルを表す］
の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【００１５】
本発明による化合物は、式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、式（Ｉ）に包含される後述の式の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、および、式（Ｉ）に包含される実施態様の例として後述する化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物（式（Ｉ）に包含される後述の式の化合物が、まだ塩、溶媒和物および塩の溶媒和物ではない場合に）である。
【００１６】
本発明による化合物は、それらの構造次第で、立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在できる。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの特定の混合物を含む。立体異性的に均一な構成分は、そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、既知方法で単離できる。
本発明による化合物が互変異性体で存在できるならば、本発明は、全ての互変異性体を含む。
【００１７】
本発明に関して、好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容し得る塩である。それら自体は医薬的使用に適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も含まれる。
【００１８】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、無機酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１９】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、また、常套の塩基の塩、例えば、そして、好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは１個ないし１６個のＣ原子を有する有機アミン（例えば、そして、好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびＮ−メチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩が含まれる。
【００２０】
溶媒和物は、本発明に関して、固体または液体状態で溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明による化合物の形態と説明される。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。水和物は、本発明に関して好ましい溶媒和物である。
【００２１】
本発明は、さらに、本発明による化合物のプロドラッグも含む。用語「プロドラッグ」には、それら自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、それらの体内残存時間中に（例えば代謝的または加水分解的に）本発明による化合物に変換される化合物が含まれる。
【００２２】
本発明に関して、置換基は、断りの無い限り以下の意味を有する：
（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、本発明に関して、１個ないし６個または１個ないし４個の炭素原子を各々有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルを表す。１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルが好ましい。例えば、そして、好ましくは：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルが挙げられる。
【００２３】
（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルおよび（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキルは、本発明に関して、３個ないし７個または３個ないし６個の炭素原子を各々有する飽和単環式シクロアルキル基を表す。３個ないし６個の炭素原子を有するシクロアルキルラジカルが好ましい。例えば、そして、好ましくは：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが挙げられる。
【００２４】
（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシは、本発明に関して、２個ないし６個または１個ないし４個の炭素原子を各々有する直鎖または分枝鎖のアルコキシラジカルを表す。１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシラジカルが好ましい。例えば、そして、好ましくは：メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。
【００２５】
（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシカルボニルおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニルは、本発明に関して、１個ないし６個または１個ないし４個の炭素原子を各々有し、カルボニル基を介して結合している直鎖または分枝鎖のアルコキシラジカルを表す。１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシカルボニルラジカルが好ましい。例えば、そして、好ましくは：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルが挙げられる。
【００２６】
モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノは、本発明に関して、１個ないし４個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖のアルキル置換基を有するアミノ基を表す。例えば、そして、好ましくは：メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノおよびｔｅｒｔ−ブチルアミノが挙げられる。
【００２７】
ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノは、本発明に関して、２個の同一または異なる直鎖または分枝鎖のアルキル置換基を有し、その各々が１個ないし４個の炭素原子を含有するアミノ基を表す。例えば、そして、好ましくは：Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノが挙げられる。
【００２８】
５員または６員のヘテロアリールは、本発明に関して、全部で５個または６個の環原子を有し、Ｎ、Ｏおよび／またはＳからなる組から３個までの同一または異なる環のヘテロ原子を有し、環の炭素原子または場合により環の窒素原子を介して結合している芳香族性複素環式ラジカル（複素芳香族）を表す。例えば：フリル、ピロリル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾアリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニルが挙げられる。Ｎ、Ｏおよび／またはＳからなる組から２個までの環のヘテロ原子を有する５員のヘテロアリールラジカル、例えば、フリル、ピロリル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリルが好ましい。
【００２９】
ハロゲンには、本発明に関して、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素が含まれる。フッ素、塩素または臭素が好ましい。
【００３０】
本発明による化合物中のラジカルが置換されているならば、断りの無い限り、そのラジカルは、一置換または多置換されていてよい。本発明に関して、数回出てくる全てのラジカルについて、その意味は相互に独立している。１個、２個または３個の同一または異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換がことさら特に好ましい。
【００３１】
好ましい式（Ｉ）の化合物は、式中、
Ａが、ＣＨまたはＮを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシカルボニルおよびヒドロキシカルボニルからなる組から選択される置換基を表し、
Ｒ２が、ハロゲン、シアノ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシ、トリフルオロメトキシ、アミノおよびヒドロキシカルボニルからなる組から選択される置換基を表し、ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ６）−アルコキシは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
ｍが、０、１または２の数を表し、
ｎが、０、１、２または３の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が、水素、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルまたは（Ｃ３−Ｃ７）−シクロアルキルを表す、
もの、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３２】
同様に好ましい式（Ｉ）の化合物は、式中、
ＡがＣＨを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、フッ素、塩素、臭素および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルアミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ６または−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ７の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル（ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、フェニルまたは５員のヘテロアリールにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびヘテロアリールは、各場合で、同一であるか、または異なって、フッ素、塩素、臭素、シアノ、メチル、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより１回ないし３回置換されていてもよく、
そして、Ｒ６およびＲ７は、相互に独立して、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示す）、
そして、Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルを示し、これは、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシまたはフェニルにより置換されていてもよい
（ここで、フェニルは、フッ素、塩素、臭素、シアノ、メチル、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシにより置換されていてもよい）｝、
Ｒ２が、フッ素、塩素、臭素、シアノ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニルおよび−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ３からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
そして、Ｒ８は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す｝
ｍが、０、１または２の数を表し、
ｎが、０、１または２の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が、水素を表す、
もの、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３３】
特に好ましい式（Ｉ）の化合物は、式中、
ＡがＣＨを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、トリフルオロメチル、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、アミノおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニルからなる組から選択される置換基を表し、
Ｒ２が、塩素、臭素、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ、トリフルオロメトキシおよびアミノからなる組から選択される置換基を表し、ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
ｍが、０または１の数を表し、
ｎが、０、１、２または３の数を表し
｛ここで、Ｒ２が数個存在する場合、その意味は同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が水素またはメチルを表す、
もの、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３４】
同様に特に好ましい式（Ｉ）の化合物は、式中、
ＡがＣＨを表し、
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、フッ素、塩素、臭素および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４からなる組から選択される置換基を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、ヒドロキシル、アミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５もしくは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ６の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル（フェニルまたはピラゾリルにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびピラゾリルは、各場合で、同一であるか、または異なって、フッ素、塩素、メチルまたはトリフルオロメチルにより１回ないし３回置換されていてもよく、
そして、Ｒ６は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す）、
そして、Ｒ４は、フェニルにより置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示す｝、
Ｒ２が、塩素、臭素、シアノ、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよびトリフルオロメチルからなる組から選択される置換基を表し、ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、ヒドロキシルにより置換されていてもよく、
ｍが、０、１または２の数を表し、
ｎが、０、１または２の数を表し
｛ここで、Ｒ１またはＲ２が数個存在する場合、それらの意味は、各場合で同一であっても異なっていてもよい｝、
そして、Ｒ３が、水素を表す、
もの、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３５】
特に重要な化合物は、式（Ｉ−Ａ）
【化２】
2008539180.tif 000004
［式中、
Ｒ１Ａは、水素、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
そして、Ｒ２Ａ、Ｒ２ＢおよびＲ２Ｃは、同一であるか、または異なり、相互に独立して、水素、塩素、臭素、シアノ、メチル、ヒドロキシメチル、メトキシまたはエトキシを表す］
のもの、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３６】
特に重要な化合物は、同様に、式（Ｉ−Ｂ）
【化３】
2008539180.tif 000005
［式中、
Ｒ１ＡおよびＲ１Ｂは、同一であるか、または異なり、相互に独立して、水素、フッ素、塩素、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ４を表し
｛ここで、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルは、ヒドロキシル、アミノまたは式−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５の基により置換されていてもよく
（ここで、Ｒ５は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル（フェニルまたはピラゾリルにより置換されていてもよい）またはフェニルを示し、
ここで、フェニルおよびピラゾリルは、各場合で、同一であるか、または異なって、フッ素、塩素、メチルまたはトリフルオロメチルにより１回ないし３回置換されていてもよい）、
そして、Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルを示し、これは、フェニルにより置換されていてもよい｝、
Ｒ２は、塩素、臭素、シアノ、メチル、ヒドロキシメチルまたはトリフルオロメチルからなる組から選択される置換基を表し、
そして、
ｎは、０、１または２の数を表す
｛ここで、Ｒ２が数個存在する場合、その意味は同一であっても異なっていてもよい｝］
のもの、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３７】
ラジカルの特定の組合せまたは好ましい組合せにおいて詳細に与えられるラジカルの定義は、また、与えられる特定のラジカルの組合せから独立して、所望により他の組合せのラジカルの定義により置き換えられる。
２個またはそれ以上の上述の好ましい範囲の組合せがことさら特に好ましい。
【００３８】
本発明による式（Ｉ）の１,２−ジヒドロピラゾール−３−オン誘導体は、互変異性の１Ｈ−ピラゾール−５−オール形態（Ｉ'）であることもできる（下式１参照）；これらの２つの互変異性体は、明示的に本発明に含まれる。
式１
【化４】
2008539180.tif 000006
【００３９】
本発明はまた、本発明による式（Ｉ）の化合物の製造方法を提供し、それは、以下を特徴とする；
式（ＩＩ）
【化５】
2008539180.tif 000007
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびｎは、上述の意味を有し、そして、
Ｚ１は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物を、不活性溶媒中、場合により酸の存在下で、式（ＩＩＩ）
【化６】
2008539180.tif 000008
（式中、Ａ、Ｒ１およびｍは、上述の意味を有する）
の化合物と反応させ、式（ＩＶ）
【化７】
2008539180.tif 000009
（式中、Ｚ１、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｍおよびｎは、上述の意味を有する）
の化合物を得、次いで、これらを不活性溶媒中、塩基の存在下で環化し、
そして、式（Ｉ）の化合物を、場合により対応する（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換する。
【００４０】
Ｒ３が水素を表す本発明による式（Ｉ）の化合物は、以下の方法によっても製造できる；
式（Ｖ）
【化８】
2008539180.tif 000010
（式中、Ｚ１、Ｒ２並びにｎおよびｍは、上述の意味を有する）
の化合物を、式（ＶＩ）
【化９】
2008539180.tif 000011
（式中、Ｚ２は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物と縮合反応に付し、式（ＶＩＩ）
【化１０】
2008539180.tif 000012
（式中、Ｚ１、Ｒ２およびｎは、上述の意味を有する）
の化合物を得、次いで、これを酸の存在下で式（ＩＩＩ）の化合物と反応させ、式（ＩＶ−Ａ）
【化１１】
2008539180.tif 000013
（式中、Ｚ１、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、ｍおよびｎは、上述の意味を有する）
の化合物を得、次いで、これらを、不活性溶媒中、塩基の存在下で環化する。
【００４１】
本発明による化合物は、場合により、上記の方法により得られた式（Ｉ）の化合物から出発して、個々の置換基の官能基、特にＲ１およびＲ２で列挙したもののさらなる変換によっても製造できる。これらの変換は常套の方法により実施され、例えば、求核または求電子置換、酸化、還元、水素化、エステル化、エステル切断、エーテル化、エーテル切断、カルボキサミド、スルホンアミドおよびウレアの形成、並びに、一時的な保護基の導入および除去などの反応が含まれる。
【００４２】
工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）、（ＩＶ）→（Ｉ）および（ＩＶ−Ａ）→（Ｉ）に適する不活性溶媒は、特に、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコールである。エタノールを好ましくは使用する。
【００４３】
工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、場合により、酸を添加して有利に実施できる。常套の無機または有機酸、例えば、塩化水素、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸またはパラ−トルエンスルホン酸は、これに適する。酢酸を好ましくは使用する。
【００４４】
反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、一般に、０℃ないし＋１００℃、好ましくは＋１０℃ないし＋４０℃の温度範囲で実施する。
【００４５】
常套の無機または有機塩基は、環化段階（ＩＶ）→（Ｉ）または（ＩＶ−Ａ）→（Ｉ）用の塩基として適する。これらには、特に、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウムもしくはカリウム、アルカリ金属またはアルカリ土類金属炭酸塩、例えば炭酸ナトリウム、カリウム、カルシウムもしくはセシウム、アルカリ金属アルコラート、例えばナトリウムもしくはカリウムメタノラート、ナトリウムもしくはカリウムエタノラート、またはナトリウムもしくはカリウムｔｅｒｔ−ブチラート、または、アルカリ金属水素化物、例えば、水素化ナトリウムが含まれる。ナトリウムエタノラートを好ましくは使用する。
【００４６】
反応（ＩＶ）→（Ｉ）または（ＩＶ−Ａ）→（Ｉ）は、一般に、０℃ないし＋６０℃、好ましくは０℃ないし＋３０℃の温度範囲で実施する。
【００４７】
連続工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）→（Ｉ）は、２段階の反応方法で、または、中間体段階（ＩＶ）を単離せずワンポット反応としても実施できる。
【００４８】
工程（Ｖ）＋（ＶＩ）→（ＶＩＩ）は、好ましくは、無溶媒で、過剰の（ＶＩ）の存在下、マイクロ波照射下で実施する。この反応は、一般に、＋２０℃ないし＋１５０℃、好ましくは＋８０℃ないし１２０℃の温度範囲で実施する［J.P. Bazureau et al., Synthesis 1998, 967; ibid. 2001 (4), 581 も参照］。
【００４９】
工程（ＶＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ−Ａ）は、有利には、酸を添加して実施する。常套の無機または有機酸、例えば、塩化水素、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸またはパラ−トルエンスルホン酸がこれに適する。酢酸を好ましくは使用する。この工程に用いることができる不活性溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコール類である。この反応は、特に好ましくは、さらなる溶媒を添加せずに、酢酸自体の中で実施する。
【００５０】
反応（ＶＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ−Ａ）は、一般に、０℃ないし＋６０℃、好ましくは＋１０℃ないし＋３０℃の温度範囲で実施する。
【００５１】
全工程は、常圧、加圧または減圧（例えば０.５ないし５ｂａｒ）下で実施できる。一般に、常圧を適用する。
【００５２】
式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｖ）の化合物から、カルボン酸エステルのＣ−アシル化について文献からわかる方法により製造できる。式（ＩＩＩ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物は、購入できるか、または文献からわかるか、または、文献からわかる方法と同様に製造できる。
【００５３】
本発明による化合物の製造は、以下の合成式２−４により例示説明できる：
式２
【化１２】
2008539180.tif 000014
［ａ）：ＮａＨ、１８−クラウン−６、トルエン、１時間室温→１時間９０℃；ｂ）１．エタノール、１６時間室温；２．ＮａＯＥｔ、エタノール、３０分室温；ｃ）：エタノール、１日室温；ｄ）：ＮａＯＥｔ、エタノール、１時間室温］
【００５４】
式３
【化１３】
2008539180.tif 000015
［ａ）：１．ＬｉＨＤＭＳ、ＴＨＦ、−７８℃→１時間０℃；２．酢酸無水物、−７８℃；３．３６時間室温；ｂ）：氷酢酸、エタノール、１６時間室温；２．ＮａＯＥｔ、エタノール、３０分室温］
【００５５】
式４
【化１４】
2008539180.tif 000016
［ａ）：マイクロ波照射、１時間１００℃；ｂ）：１．氷酢酸、２時間室温；２．後処理、水性ＮａＨＣＯ３；３．ＮａＯＥｔ、エタノール、３０分５℃；あるいは、ｂ）：触媒量のカンファー−１０−スルホン酸、エタノール、７８℃、１２−１８時間］
【００５６】
本発明による化合物は、予見できない価値ある薬理作用スペクトルを示す。従って、それらは、ヒトおよび動物における疾患を処置および／または予防するための医薬としての使用に適する。
【００５７】
本発明による化合物は、ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼの特異的阻害剤として卓越している。
【００５８】
この薬理特性を基礎として、本発明による化合物は、心血管疾患、特に、心不全、冠動脈心疾患、狭心症、心筋梗塞、卒中、動脈硬化症、本態性、肺性および悪性高血圧症並びに末梢動脈閉塞性疾患の処置および／または予防に用いることができる。本化合物は、さらに、血液形成の障害、例えば特発性貧血、腎性貧血、腫瘍疾患に伴う貧血、感染または他の炎症性疾患、例えばリウマチ性関節炎の処置および／または予防に適する。
【００５９】
本化合物は、さらに、手術前に血液の自己供与用の血液を得る目的で、ヘマトクリットを高めるのに適する。
【００６０】
本発明による化合物は、さらに、外科的介入後、特に、心肺装置を使用する心臓への介入（例えばバイパス手術、心臓弁インプラント）、頸動脈への介入、大動脈への介入および機器による開頭術または穿頭術後の、手術に関連する虚血状態およびその続発症状の処置および／または予防に使用できる。本化合物は、さらに、創傷の治癒の加速および回復時間の短縮を目的として、外科的介入の場合に、全般的な処置および／または予防に適する。
【００６１】
本化合物は、さらに、癌の処置および／または予防のために、癌の処置の過程で起こる健康状態の悪化の処置および／または予防のために、特に、細胞増殖剤、抗生物質および照射による治療後に、用いることができる。
【００６２】
本化合物は、さらに、リウマチ型疾患および自己免疫疾患とみなされる他の疾患の処置および／または予防に、特に、かかる疾患の薬物処置の過程で生じる健康状態の悪化の処置および／または予防に適する。
【００６３】
本発明による化合物は、さらに、眼（例えば緑内障）、脳（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、認知症、慢性痛覚）の疾患、慢性腎臓疾患、腎不全および急性腎不全の処置および／または予防、および創傷治癒の促進に用いることができる。
【００６４】
本化合物は、さらに、カヘキシーまでの全身的衰弱、特に、高齢者で高程度に生じるものの処置および／または予防に適する。
本化合物は、さらに、性機能不全の処置および／または予防に適する。
【００６５】
本化合物は、さらに、真性糖尿病およびその続発症状、例えば、糖尿病性大血管および微小血管障害、糖尿病性腎症および神経障害の処置および／または予防に適する。
【００６６】
本発明による化合物は、さらに、例えば、心臓、肺および肝臓の線維性疾患の処置および／または予防に適する。
【００６７】
本発明は、さらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用を提供する。
【００６８】
本発明は、さらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用を提供する。
【００６９】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物の有効量を使用する、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防方法を提供する。
【００７０】
本発明による化合物は、単独で、または、必要であれば、他の活性化合物と組み合わせて用いることができる。本発明は、さらに、特に上述の疾患の処置および／または予防のための、少なくとも１種の本発明による化合物および１種またはそれ以上のさらなる活性化合物を含む医薬を提供する。例示的かつ好ましく言及し得る、その組合せに適する活性化合物は、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、ベータ受容体遮断薬、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト、アスピリン、利尿剤、鉄サプリメント、ビタミンＢ１２および葉酸サプリメント、カルシウム拮抗薬、スタチン類およびジギタリス（ジゴキシン）誘導体である。
【００７１】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物を、従来通り１種またはそれ以上の不活性、非毒性の医薬的に適する補助物質と共に含む医薬、および上述の目的でのそれらの使用を提供する。
【００７２】
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜に、耳に、またはインプラントもしくはステントとして、投与できる。
これらの投与経路のために、本発明による化合物を適する投与形で投与できる。
【００７３】
先行技術に準じて機能し、本発明による化合物を迅速かつ／または改変された方法で放出し、本発明による化合物を結晶および／または無定形および／または溶解形態で含む投与形、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、胃液耐性であるか、または、遅れて溶解するか、または不溶であり、本発明による化合物の放出を制御する被覆）、口腔中で迅速に崩壊する錠剤、またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤またはカプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤は、経口投与に適する。
【００７４】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤形態の注射および点滴用製剤である。
【００７５】
他の投与経路には、例えば、吸入用医薬形態（なかんずく、粉末吸入器、噴霧器）、点鼻薬、液またはスプレー、舌、舌下または頬側投与用の錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐剤、眼または耳用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチ）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末剤（sprinkling powder）、インプラントまたはステントが適する。
経口または非経腸投与、特に経口投与が好ましい。
【００７６】
本発明による化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助物質と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助物質には、なかんずく、担体物質（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、色素（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および香味および／または臭気の矯正剤が含まれる。
【００７７】
一般に、非経腸投与の場合で約０.００１ないし１ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし０.５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると明らかになった。経口投与の場合、投与量は、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし２０ｍｇ／体重ｋｇ、ことさら特に好ましくは約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【００７８】
それにも拘わらず、特に、体重、投与経路、活性化合物に対する個体の応答、製剤の性質および投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり得、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。比較的大量に投与する場合、これらを１日に亘る数回の個別用量に分配するのが望ましいことがある。
【００７９】
以下の実施態様の実施例は、本発明を例示説明する。本発明は、これらの実施例に限定されない。
【００８０】
以下の試験および実施例における百分率のデータは、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積に関するものである。
【実施例】
【００８１】
Ａ．実施例
略語および頭字語：
【表１】
2008539180.tif 000017
【００８２】
ＬＣ−ＭＳ、ＨＰＬＣおよびＧＣ−ＭＳの方法：
方法１：
装置：HPLC Agilent Series 1100 を有する Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3 μ, 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８３】
方法２：
装置：HPLC Agilent Series 1100 を有する Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo HyPURITY Aquastar 3 μ, 50 mm x 2.1 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８４】
方法３：
装置：HPLC Agilent Series 1100 を有する Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００８５】
方法４：
機器タイプＭＳ：Micromass ZQ；機器タイプＨＰＬＣ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８６】
方法５：
機器タイプＭＳ：Micromass ZQ；機器タイプＨＰＬＣ：HP 1100 Series; UV DAD; カラム: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％強度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８７】
方法６：
装置：DAD 検出を有するHP 1100 Series；カラム：Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm；溶離剤Ａ：ＨＣｌＯ４（７０％強度）５ｍｌ／水１ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→６.５分９０％Ｂ→６.７分２％Ｂ→７.５分２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；カラム温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８８】
方法７：
装置: Micromass GCT, GC6890；カラム：Restek RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0.25 μm；ヘリウムの一定流速：０.８８ｍｌ／分；オーブン：６０℃；入口：２５０℃；グラジエント：６０℃（０.３０分間保持）、５０℃／分→１２０℃、１６℃／分→２５０℃、３０℃／分→３００℃（１.７分間保持）。
【００８９】
方法８：
装置ＭＳ：Waters ZQ 2000；装置ＨＰＬＣ：Agilent 1100, 2-カラム回路; オートサンプラー: HTC PAL；カラム：YMC-ODS-AQ, 50 mm x 4.6 mm, 3.0 μm；溶離剤Ａ：水＋０.１％ギ酸、溶離剤Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ギ酸；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分９５％Ａ→１.８分２５％Ａ→１.９分１０％Ａ→２.０分５％Ａ→３.２分５％Ａ→３.２１分１００％Ａ→３.３５分１００％Ａ；オーブン：４０℃；流速：３.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９０】
出発化合物および中間体：
実施例１Ａ
２−ヒドラジノ−４−メチルピリジン
【化１５】
2008539180.tif 000018
２−フルオロ−４−メチルピリジン３.３３ｇ（３０.０ｍｍｏｌ）を、先ず、２−エトキシエタノール４０ｍｌに導入し、ヒドラジン水和物１４.６ｍｌ（１５.０ｇ、３００ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、混合物を沸騰させて１６時間撹拌する（浴温度１５０℃）。反応溶液をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣を水１００ｍｌに導入し、混合物を酢酸エチルで抽出する（各回１００ｍｌで３回）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。得られる残渣を真空で乾燥する。
収量：１.９０ｇ（理論値の５１％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.83 (d, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.38 (d, 1H), 4.04 (s, 2H), 2.17 (s, 3H)
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０.８０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２４［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９１】
実施例２Ａ
３−ヒドロキシ−２−ピリジン−３−イル−アクリル酸エチルエステル
【化１６】
2008539180.tif 000019
３−ピリジル酢酸エチルエステル１.６５ｇ（１０.０ｍｍｏｌ）を、先ず、アルゴン下で無水トルエン２０ｍｌに導入する。水素化ナトリウム懸濁液（パラフィン油中、６０％強度）４１０ｍｇ（１０.３ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６ １３０ｍｇ（０.５０ｍｍｏｌ）を少しずつこの溶液に添加し、混合物を室温で３０分間、次いで８５℃（浴温度）で３０分間撹拌する。この時間の後、混合物を冷却し、ギ酸エチルエステル１.４８ｇ（２０.０ｍｏｌ）を約２０℃で滴下して添加する。混合物を最初に室温で６０分間、次いで９０℃（浴温度）で６０分間撹拌する。冷却後、反応溶液を約５０ｍｌの飽和塩化アンモニウム溶液に導入し、酢酸エチルで抽出する（５回、各回４０ｍｌ）。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液５０ｍｌで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。得られる固体をペンタンで洗浄し、真空で乾燥する。
収量：１.３ｇ（理論値の６７％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.38 (br. s, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.39 (dd, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.35 (dd, 1H), 4.12 (q, 2H), 1.97 (t, 3H).
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝１９４［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９２】
実施例３Ａ
２−ピリジン−３−イル−３−（ピリジン−２−イルヒドラゾノ）プロピオン酸エチルエステル
【化１７】
2008539180.tif 000020
実施例２Ａ由来の化合物２.９０ｇ（１５.０ｍｍｏｌ）および２−ピリジルヒドラジン１.７２ｇ（１５.８ｍｍｏｌ）を、エタノール７５ｍｌに溶解し、混合物を室温で４日間撹拌する。反応混合物からロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、残渣をシリカゲル６０でクロマトグラフィーする（移動相：塩化メチレン→塩化メチレン／メタノール１０：１→塩化メチレン／メタノール２：１）。生成物画分を合わせ、溶媒をロータリーエバポレーターで除去する。真空で乾燥した後、表題化合物３.９５ｇ（理論値の９３％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２.１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８５［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９３】
実施例４Ａ
（６−ブロモピリジン−３−イル）メタノール
【化１８】
2008539180.tif 000021
水素化リチウムアルミニウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液１.３４ｍｌ（１.３４ｍｍｏｌ）を、先ず乾燥ＴＨＦ５ｍｌにアルゴン下で導入し、乾燥ＴＨＦ３ｍｌ中の６−ブロモ−３−ピリジンカルボアルデヒド５００ｍｇ（２.６９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で滴下して添加する。その後、混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、酢酸エチル２５ｍｌを氷浴で冷却しながら添加し、飽和重炭酸ナトリウム溶液５０ｍｌで加水分解をゆっくりと実施する。水相を酢酸エチルで抽出する（３回、各回２０ｍｌ）。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレーターで濃縮する。溶媒残渣を真空で除去した後、表題化合物３７５ｍｇ（理論値の７４％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８９［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９４】
実施例５Ａ
（６−クロロ−５−メチルピリジン−３−イル）メタノール
【化１９】
2008539180.tif 000022
６−クロロ−５−メチルニコチンアルデヒド［ＤＥ４４２９４６５−Ａ１、実施例７に記載の製造］３.１１ｇ（２０.０ｍｍｏｌ）を、水素化ホウ素ナトリウム１.５１ｇ（４０.０ｍｍｏｌ）と、水３０ｍｌ中で反応させ、続いて水相を塩化メチレンで抽出することにより、表題化合物を得る。ロータリーエバポレーターでの溶媒の除去後に得られる生成物を、真空で乾燥し、さらに直接使用する。
【００９５】
実施例６Ａ
２−ブロモ−５−（クロロメチル）ピリジン
【化２０】
2008539180.tif 000023
実施例４Ａ由来の化合物３.６９ｇ（１９.７ｍｍｏｌ）を、先ず、反応容器にアルゴン下で導入し、塩化チオニル２５ｍｌを−６０℃（浴温度）で滴下して添加する。混合物を−６０℃で１時間撹拌する。それを室温でロータリーエバポレーター上で濃縮し、飽和重炭酸ナトリウム溶液５０ｍｌおよび酢酸エチル５０ｍｌを残渣に添加する。水相を酢酸エチルで抽出する（４回、各回２５ｍｌ）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を真空で乾燥する。
収量：３.７１ｇ（理論値の９１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝３.２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２０８［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９６】
実施例７Ａ
２−クロロ−５−（クロロメチル）−３−メチルピリジン
【化２１】
2008539180.tif 000024
実施例６Ａと同様に、（６−クロロ−５−メチルピリジン−３−イル）メタノール１.００ｇ（６.３５ｍｍｏｌ）および塩化チオニル５ｍｌから製造を実施する。表題化合物１.２６ｇを得、さらに精製せずに反応させる。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１７６［Ｍ］＋
【００９７】
実施例８Ａ
（６−ブロモピリジン−３−イル）アセトニトリル
【化２２】
2008539180.tif 000025
実施例６Ａ由来の化合物３.７５ｇ（１８.２ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＦ２０ｍｌに導入し、シアン化ナトリウム９７９ｍｇ（２０.０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２日間撹拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液２５０ｍｌおよび酢酸エチル２００ｍｌの混合物に導入し、水相を酢酸エチルで抽出する（３回、各回１００ｍｌ）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、残渣を真空で乾燥する。かくして得られる生成物を、さらに精製せずに反応させる。
収量：３.２３ｇ（理論値の９０％）
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１９７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９８】
実施例９Ａ
（６−クロロ−５−メチルピリジン−３−イル）アセトニトリル
【化２３】
2008539180.tif 000026
合成は、実施例８Ａと同様に、実施例７Ａ由来の化合物１.２６ｇ（７.１４ｍｍｏｌ）から実施する。得られる粗生成物をシリカゲル６０のクロマトグラフィーにより精製する（移動相：塩化メチレン→塩化メチレン／メタノール５０：１）。
収量：２１５ｍｇ（理論値の１８％）
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１６７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９９】
実施例１０Ａ
（２−クロロピリジン−３−イル）酢酸エチルエステル
【化２４】
2008539180.tif 000027
（６−クロロピリジン−３−イル）アセトニトリル２２.０ｇ（１４４ｍｍｏｌ）を、エタノール２７０ｍｌおよび濃硫酸１０１ｍｌの混合物に添加し、混合物を還流下で２４時間撹拌する。反応混合物を、３５０ｇ重炭酸ナトリウムおよび水１ｌの混合物に、撹拌しながらゆっくりと滴下して添加する。水相を塩化メチレンで抽出する（５回、各回４００ｍｌ）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去する。表題化合物２３.１ｇ（理論値の８０％）を得、それをさらに精製せずに反応させる。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.32 (d, 1H), 7.78 (dd, 1H), 7.49 (d, 1H), 4.10 (q, 2H), 3.77 (s, 2H), 1.19 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２００［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１００】
表１に挙げる化合物は、対応する出発物質から実施例１０Ａと同様の方法で得られる：
表１
【表２】
2008539180.tif 000028
【０１０１】
実施例１３Ａ
（５−ブロモピリジン−３−イル）酢酸エチルエステル
【化２５】
2008539180.tif 000029
（５−ブロモピリジン−３−イル）酢酸１.００ｇ（４.６３ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール２０ｍｌに導入し、濃硫酸２ｍｌを添加し、混合物を還流下で終夜撹拌する。反応溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液１００ｍｌおよび酢酸エチル１００ｍｌの混合物に撹拌しながら導入し、水相を酢酸エチルで抽出する（３回、各回５０ｍｌ）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、残渣から終夜真空で溶媒残渣を除去する。
収量：１.０６ｇ（理論値の９４％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.61 (d, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.01 (dd, 1H), 4.10 (q, 2H), 3.78 (s, 2H), 1.20 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２.０６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０２】
実施例１４Ａ
２−（６−ブロモピリジン−３−イル）−３−（ジメチルアミノ）アクリル酸エチルエステル
【化２６】
2008539180.tif 000030
実施例１１Ａ由来の化合物１.３０ｇ（２.９８ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミドジエチルアセタール６ｍｌに溶解し、混合物をマイクロ波照射下、１００℃で６０分間撹拌する。混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣をシリカゲル６０でクロマトグラフィーする（移動相：シクロヘキサン→シクロヘキサン／酢酸エチル１：３）。
収量：８５４ｍｇ（理論値の９６％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.11 (d, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.48 (dd, 1H), 4.01 (q, 2H), 2.70 (br. s, 6H), 1.12 (t, 3H).
ＭＳ（ＤＣＩ,ＮＨ３）：ｍ／ｚ＝３１６［Ｍ＋ＮＨ４］＋
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０３】
表２に挙げる化合物は、対応する出発物質から実施例１４Ａと同様の方法で得られる：
表２
【表３】
2008539180.tif 000031
【０１０４】
実施例１８Ａ
３−オキソ−２−ピリジン−３−イル−ブタン酸エチルエステル
【化２７】
2008539180.tif 000032
エチル−ピリジン３−アセテート５００ｍｇ（３.０ｍｍｏｌ）を、先ず、無水ＴＨＦ５ｍｌにアルゴン下で導入し、リチウムヘキサメチルジシラジド（６.７ｍｌ、１Ｍ、ＴＨＦ中）の溶液を、滴下して−７８℃で添加する。１５分後、混合物を０℃に温め、続いて、１時間撹拌し、再度−７８℃に冷却する。無水酢酸３４０ｍｇ（３.３ｍｍｏｌ）の添加後、混合物を室温で３６時間撹拌する。水性塩化アンモニウム溶液を添加し、混合物を塩化メチレンで抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮する。表題化合物４８８ｍｇを純度７０％で得、これ以上精製せずに反応させる。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２０８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０５】
実施例１９Ａ
（５−メチルピリジン−３−イル）アセトニトリル
【化２８】
2008539180.tif 000033
表題化合物の製造は、ＤＥ２８５４２１０−Ｃ２（表２、実施例３７）に記載されている。
【０１０６】
実施例２０Ａ
５−（シアノメチル）ピリジン−２−カルボン酸エチルエステル
【化２９】
2008539180.tif 000034
５−（クロロメチル）ピリジン−２−カルボン酸エチルエステル［H. Barth et al., Liebigs Ann. Chem. 1981, 2164-2179に従い製造］１０.５ｇ（５２.６ｍｍｏｌ）を、先ず、無水ＤＭＦ７５ｍｌに導入し、シアン化ナトリウム２.５８ｇ（５２.６ｍｍｏｌ）を少しずつ３時間かけて室温で添加する。次いで、混合物を飽和塩化アンモニウム溶液５００ｍｌに導入し、塩化メチレンで抽出する（４回、各回１００ｍｌ）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製する（移動相：シクロヘキサン→シクロヘキサン／酢酸エチル１：４）。表題化合物３.８０ｇ（理論値の３８％）を得る。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 8.69 (d, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.99 (dd, 1H), 4.36 (q, 2H), 4.24 (s, 2H), 1.34 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１９１［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０７】
表３に挙げる化合物は、対応する出発物質から実施例１０Ａと同様の方法で得られる：
表３
【表４】
2008539180.tif 000035
【０１０８】
実施例２３Ａ
（４−メチルピリジン−３−イル）酢酸エチルエステル
【化３０】
2008539180.tif 000036
表題化合物の合成は、（４−メチルピリジン−３−イル）酢酸２００ｍｇ（１.３２ｍｍｏｌ）から、実施例１３Ａと同様に実施する。
収量：２３５ｍｇ（理論値の９９％）
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 8.32 (d, 1H), 7.56 (dd, 1H), 7.20 (dd, 1H), 4.08 (q, 2H), 3.67 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.18 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０９】
実施例２４Ａ
（６−メチルピリジン−３−イル）酢酸エチルエステル
【化３１】
2008539180.tif 000037
表題化合物の合成は、（６−メチルピリジン−３−イル）酢酸［製造: N. Sperber et al., J. Am. Chem. Soc. 81, 704-709 (1959)］４９３ｍｇ（３.２６ｍｍｏｌ）から、実施例１３Ａと同様に実施する。
収量：５８０ｍｇ（理論値の９９％）
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 8.32 (d, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.20 (d, 1H), 4.08 (q, 2H), 3.67 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.18 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１０】
表４に挙げる化合物は、対応する出発物質から実施例１４Ａと同様に製造する：
表４
【表５】
2008539180.tif 000038
【０１１１】
表５に挙げる化合物は、実施例１Ａと同様に、対応する２−クロロピリジンから得られる。実施例１Ａで記載した後処理の代わりに、ここでは反応溶液を濃縮し、残渣をジエチルエーテルおよび塩化メチレンの混合物と撹拌する。過剰の結晶性ヒドラジン塩酸塩を濾過し、濾液を濃縮し、真空で乾燥し、生成物をさらに精製せずに反応させる。
【０１１２】
表５
【表６】
2008539180.tif 000039
【０１１３】
実施例３３Ａ
２−ヒドラジノ−イソニコチン酸ニトリル
【化３２】
2008539180.tif 000040
２−クロロイソニコチン酸ニトリル２０.０ｇ（１４４ｍｍｏｌ）を、先ず、１−ブタノール１５０ｍｌに導入し、ヒドラジン水和物の１Ｍ ＴＨＦ溶液３０３ｍｌ（３０３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１６時間加熱する（浴温度１１０℃）。混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを利用して精製する（移動相：塩化メチレン／メタノール１０：１）。
収量：９.４８ｇ（理論値の４９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.15 (d, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.83 (dd, 1H), 4.30 (s, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０.５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１４】
実施例３４Ａ
（６−ヒドラジノピリジン−３−イル）メタノール
【化３３】
2008539180.tif 000041
（６−クロロピリジン−３−イル）メタノール２０.０ｇ（１３９ｍｍｏｌ）を、還流下で、終夜、３５％強度ヒドラジン水和物水溶液４００ｍｌ中で加熱する。混合物を濃縮し、トルエンを添加し、混合物を再度濃縮し、残渣を塩化メチレン、メタノールおよびジエチルエーテルの混合物と撹拌する。結晶性残渣（ヒドラジン塩酸塩）を濾過し、濾液を濃縮し、残渣を真空で乾燥する。
収量：１９.３ｇ（理論値の９９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.91 (d, 1H), 7.40 (dd, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.66 (d, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.31 (s, 2H), 4.14 (s, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０.５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１５】
実施例３５Ａ
ベンゾフェノン（４−メトキシピリジン−２−イル）ヒドラゾン
【化３４】
2008539180.tif 000042
２−クロロ−４−メトキシピリジン５００ｍｇ（３.４８ｍｍｏｌ）、ベンゾフェノンヒドラゾン７５２ｍｇ（３.８３ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ−ブチレート４６９ｍｇ（４.８８ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）１５.６ｍｇ（０.０７ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸２１.２ｍｇ（０.１７ｍｍｏｌ）およびラセミ体の２,２'−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１'−ビナフチル４３.４ｍｇ（０.０７ｍｍｏｌ）を、脱気トルエン中、９０℃で、終夜、アルゴン下に加熱する。冷却後、反応混合物を水に注ぎ、水相を酢酸エチルで数回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）を利用して残渣を精製する。
収量：８７２ｍｇ（理論値の８３％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 10.8 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.70-7.64 (m, 5H), 7.50-7.38 (m, 5H), 6.94 (d, 1H), 6.78 (dd, 1H), 3.92 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３０４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１６】
実施例３６Ａ
２−ヒドラジノ−４−メトキシピリジン
【化３５】
2008539180.tif 000043
実施例３５Ａ由来の化合物８５０ｍｇ（２.８０ｍｍｏｌ）を、濃塩酸中、終夜、６５℃で加熱する。冷却後、反応混合物を塩化メチレンで洗浄し、濃縮する。粗生成物４７０ｍｇを塩酸塩として得る。その２５０ｍｇを、ポリマー結合トリス（２−アミノエチル）アミンと共に塩化メチレン中で終夜室温で撹拌する。混合物を濾過し、濾液を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥する。
収量：１７０ｍｇ（理論値の３９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.78 (d, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.25 (d, 1H), 6.15 (dd, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.73 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０.８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１７】
実施例３７Ａ
３−（クロロメチル）−２−メチルピリジン
【化３６】
2008539180.tif 000044
３−（ヒドロキシメチル）−２−メチルピリジン１.００ｇ（８.１２ｍｍｏｌ）を、先ず、反応容器に導入し、塩化チオニル５.９ｍｌ（８１.２ｍｍｏｌ）をゆっくりと０℃で添加する。混合物を還流下で３時間撹拌する。それを濃縮し、飽和重炭酸ナトリウム溶液を残渣に添加し、混合物をジエチルエーテルで数回抽出する。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。
収量：０.９８ｇ（理論値の８５％）
ＧＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝４.８５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４１［Ｍ］＋
【０１１８】
実施例３８Ａ
（２−メチルピリジン−３−イル）アセトニトリル
【化３７】
2008539180.tif 000045
実施例３７Ａ由来の化合物９７０ｍｇ（６.８５ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＦ１０ｍｌに導入し、シアン化ナトリウム３３６ｍｇ（６.８５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜４５℃で撹拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液７５ｍｌに導入し、塩化メチレンで数回抽出する。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（移動相：塩化メチレン／メタノール２０：１）を利用して精製する。
収量：７９５ｍｇ（理論値の８８％）
ＧＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝６.１４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３２［Ｍ］＋
【０１１９】
実施例３９Ａ
（２−メチルピリジン−３−イル）酢酸エチルエステル
【化３８】
2008539180.tif 000046
実施例３８Ａ由来の化合物７９０ｍｇ（５.９８ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール１０ｍｌに導入し、濃硫酸４ｍｌをゆっくりと添加し、混合物を還流下で６時間加熱する。冷却後、混合物を重炭酸ナトリウム６.００ｇおよび飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和する。水相を酢酸エチルで数回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をこれ以上精製せずに反応させる。
収量：６１４ｍｇ（理論値の５７％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.34 (dd, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.18 (dd, 1H), 4.10 (q, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.18 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２０】
実施例４０Ａ
（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−酢酸エチルエステル
【化３９】
2008539180.tif 000047
（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）酢酸［［６−トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］メタノールから、実施例３７Ａ、３８Ａおよび４１の連続反応と同様に得られる］４.２３ｇ（２０.６ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール２００ｍｌにアルゴン下で導入し、濃硫酸０.２ｍｌを添加し、混合物を還流下で５時間加熱する。冷却後、反応溶液を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄する。水相を酢酸エチルで数回再抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを利用して精製する（移動相：グラジエントシクロヘキサン→シクロヘキサン／酢酸エチル１：１）。
収量：３.２４ｇ（理論値の６７％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.69 (s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.89 (d, 1H), 4.13 (q, 2H), 3.91 (s, 2H), 1.21 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２.１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２１】
実施例４１Ａ
３−ヒドロキシ−２−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−アクリル酸エチルエステル
【化４０】
2008539180.tif 000048
実施例４０Ａ由来の化合物３.４６ｇ（１４.８ｍｍｏｌ）を、先ず、無水トルエン５０ｍｌにアルゴン下で導入し、水素化ナトリウム懸濁液（６０％強度、パラフィン油中）７１２ｍｇ（１７.８ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、混合物を室温で１時間、次いで８０℃で２０分間撹拌する。冷却後、１８−クラウン−６ ３９２ｍｇ（１.４８ｍｍｏｌ）、次いで、氷冷しながら、ギ酸エチルエステル２.２０ｇ（２９.７ｍｏｌ）を滴下して添加する。混合物を最初に０℃で１時間、次いで室温で１時間撹拌する。酢酸エチル１００ｍｌおよび０.１Ｍ塩酸１５０ｍｌの混合物を添加し、相を分離し、水相を数回酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを利用して精製する（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチルグラジエント）。
収量：３.９ｇ（理論値の１００％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11.8 (s, 1H), 8.70 (d, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 4.15 (q, 2H), 1.21 (t, 3H).
【０１２２】
実施例４２Ａ
３−（ジメチルアミノ）−２−ピリジン−３−イル−アクリル酸エチルエステル
【化４１】
2008539180.tif 000049
ピリジン−３−イル酢酸エチルエステル３７.４ｇ（２２６ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミドジエチルアセタール１００ｇ（６７９ｍｍｏｌ）中、終夜１００℃で加熱する。冷却後、混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを利用して予精製する（移動相：グラジエント シクロヘキサン／酢酸エチル１：１→酢酸エチル／エタノール９：１）。得られる生成物を減圧蒸留による丁寧な精製に付す（１ｍｂａｒ、浴温度２００℃）。
収量：３５.０ｇ（理論値の７０％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.37 (dd, 1H), 8.31 (dd, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (dt, 1H), 7.29 (ddd, 1H), 4.00 (q, 2H), 2.67 (s, 6H), 1.11 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２１［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２３】
実施例４３Ａ
３−（ジメチルアミノ）−２−（２−メチルピリジン−３−イル）−アクリル酸エチルエステル
【化４２】
2008539180.tif 000050
実施例３９Ａ由来の化合物６００ｍｇ（３.３５ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミドジエチルアセタール１.７ｍｌ（１０.０ｍｍｏｌ）中、終夜１００℃で加熱する。冷却後、混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）を利用して精製する。
収量：６１９ｍｇ（理論値の７９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.30 (dd, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.38 (dd, 1H), 7.13 (dd, 1H), 4.05-3.92 (m, 2H), 2.62 (s, 6H), 2.30 (s, 3H), 1.08 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２３５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２４】
実施態様の実施例：
実施例１
４−ピリジン−３−イル−２−ピリミジン−２−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４３】
2008539180.tif 000051
実施例２Ａ由来の化合物１９３ｍｇ（１ｍｍｏｌ）および２−ヒドラジノピリミジン１１６ｍｇ（１.０５ｍｍｏｌ）を、先ず、無水エタノール２ｍｌにアルゴン下で導入し、混合物を室温で２０時間撹拌する。次いで、水素化ナトリウム懸濁液（６０％強度、パラフィン油中）４０ｍｇ（１ｍｍｏｌ）を少しずつ添加すると、有意な反応溶液の濁りが発生する。続いて混合物を室温で１０分間撹拌する。次いで、１Ｍ塩酸１ｍｌを暗色の反応混合物に添加すると、沈殿が析出する。沈殿を吸引濾過し、残渣を水で洗浄し（２ｘ１ｍｌ）、真空で乾燥する。表題化合物１７３ｍｇ（理論値の７２％）を得る。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 12.8 (br. s, 1H), 9.04 (d, 1H), 8.92 (d, 2H), 8.38 (m, 2H), 8.19 (d, 1H), 7.50 (dd, 1H), 7.42 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝０.５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２４０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２５】
実施例２
２−（４−メチルピリジン−２−イル）−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４４】
2008539180.tif 000052
実施例２Ａ由来の化合物１.５３ｇ（７.９０ｍｍｏｌ）および実施例１Ａ由来の化合物２.９２ｇ（２３.７ｍｍｏｌ）を、無水エタノール２ｍｌにアルゴン下で溶解し、混合物を室温で１６時間撹拌する。ナトリウムエタノラート５３７ｇ（７.９０ｍｍｏｌ）を添加すると、反応溶液は暗赤色になる。続いて、混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、１Ｍ塩酸７.９ｍｌを添加する。溶液を部分的に濃縮すると、沈殿が析出する。これを濾過し、水（２回、各回５ｍｌ）およびＭＴＢＥ（５ｍｌ）で洗浄し、真空で乾燥する。表題化合物４３５ｍｇ（理論値の２２％）を得る。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.06 (d, 1H), 8.35 (m, 3H), 8.20 (d, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.37 (dd, 1H), 7.21 (d, 1H), 2.45 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２６】
実施例３
４−ピリジン−３−イル−２−［５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４５】
2008539180.tif 000053
この化合物は、実施例２と同様に、実施例２Ａ由来の化合物５８０ｍｇ（３.００ｍｍｏｌ）および２−ヒドラジノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン５５８ｍｇ（３.００ｍｍｏｌ）から製造する。
収量：５５ｍｇ（理論値の６％）
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝３.７分
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３０７［Ｍ＋Ｈ］＋
1H-NMR (エタノール付加体の) (300 MHz, DMSO-d6): δ = 13.3 (s, 1H), 9.14 (d, 1H), 8.86 (d, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.31-8.41 (m, 3H), 7.40 (dd, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.45 (q, 2H), 1.05 (t, 3H).
【０１２７】
実施例４
２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）イソニコチン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４６】
2008539180.tif 000054
この化合物は、実施例２と同様に、実施例２Ａ由来の化合物５００ｍｇ（２.５９ｍｍｏｌ）および２−ヒドラジノ−５−イソニコチン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル６６２ｍｇ（２.８５ｍｍｏｌ）から製造する。表題化合物２８８ｍｇ（理論値の３３％）を黄色固体として得る。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 12.7 (br. s, 1H), 8.97 (d, 1H), 8.47-8.41 (m, 3H), 8.03 (dt, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.76 (dd, 1H), 7.32 (dd, 1H), 1.64 (s, 9H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２８】
実施例５
４−ピリジン−３−イル−２−［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４７】
2008539180.tif 000055
この化合物は、実施例２と同様に、実施例２Ａ由来の化合物１８ｍｇ（０.０９ｍｍｏｌ）および２−ヒドラジノ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン［R.A. Evans, C. Wentrup, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 15, 1062-1064 (1992)］１８ｍｇ（０.１０ｍｍｏｌ）から製造する。表題化合物１１.７ｍｇ（理論値の４１％）を黄色固体として得る。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 12.6 (br. s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.53 (d, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.32 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３０７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２９】
実施例６
２−ピリジン−２−イル−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４８】
2008539180.tif 000056
実施例３Ａ由来の化合物３.９５ｇ（１３.９ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール８０ｍｌにアルゴン下で導入し、ナトリウムエタノラート９４５ｍｇ（１３.９ｍｍｏｌ）を少しずつ室温で添加する。３０分間撹拌した後、１Ｍ塩酸１３.９ｍｌを滴下して添加する。析出した沈殿を吸引濾過し、冷たいエタノール（２０ｍｌ）および水（２回、各回２０ｍｌ）で洗浄し、真空で乾燥する。表題化合物２.８０ｇ（理論値の８５％）を得る。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 13.5 (br. s, 1H), 8.97 (d, 1H), 8.44 (dd, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.05-7.91 (m, 3H), 7.87 (s, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.25 (m, 1H).
ＨＰＬＣ（方法６）：Ｒｔ＝３.００分
ＭＳ（ＤＣＩ）：ｍ／ｚ＝２３９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３０】
実施例７
４−（６−クロロピリジン−３−イル）−２−ピリジン−２−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４９】
2008539180.tif 000057
実施例１６Ａ由来の化合物５.０６ｇ（１９.９ｍｍｏｌ）および２−ヒドラジノピリジン４.３４ｇ（３９.７ｍｍｏｌ）を、氷酢酸１００ｍｌ中、室温で２時間撹拌する。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル３００ｍｌに取り、混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄する（２回、各回１００ｍｌ）。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。得られる残渣をエタノール１００ｍｌに取り、ナトリウムエタノラート１.４９ｇ（２１.９ｍｍｏｌ）を、氷浴中で冷却しながら少しずつ添加し、続いて混合物を０℃で３０分間撹拌する。１Ｍ塩酸２２ｍｌを反応溶液に０℃で添加し、混合物をこの温度でさらに３０分間撹拌する。形成される沈殿を吸引濾過し、冷たいエタノールで洗浄する。真空で乾燥した後、表題化合物３.１８ｇ（理論値の５９％）を得る。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 8.93 (s, 1H), 8.50 (d, 2H), 8.34 (d, 2H), 8.05 (dd, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.36 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２.２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３１】
表６に挙げる実施例は、対応する出発物質から実施例７と同様に得られる：
表６
【表７】
2008539180.tif 000058
【０１３２】
実施例１１
５−［２−（４−メチルピリジン−２−イル）−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボニトリル
【化５０】
2008539180.tif 000059
実施例８由来の化合物１００ｍｇ（０.３５ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛８.１９ｍｇ（０.７０ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）４０.３ｍｇ（０.０３ｍｍｏｌ）を、先ず、無水ＤＭＦ４ｍｌにアルゴン下で導入し、反応混合物を１９０℃で９０分間、マイクロ波照射下で撹拌する（シングル・モード装置 Explorer、CEMより)。反応混合物を珪藻土で吸引濾過し、残渣をＤＭＦですすぎ、濾液をロータリーエバポレーターで濃縮する。かくして得られた残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：YMC GEL ODS-AQ S-5/15 μm；グラジエント：アセトニトリル／水＋０.２％ＴＦＡ１０：９０→９５：５）によりクロマトグラフィーする。合わせた生成物画分から得られる固体を塩化メチレン６ｍｌで洗浄し、吸引濾過し、真空で乾燥する。
収量：７ｍｇ（理論値の７％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.23 (d, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.43 (dd, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 2.47 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２.０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３３】
実施例１２
５−（３−オキソ−２−ピリジン−２−イル−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボニトリル
【化５１】
2008539180.tif 000060
製造は、実施例１１と同様に、実施例７由来の化合物１００ｍｇ（０.３７ｍｍｏｌ）から実施する。
収量：１２ｍｇ（理論値の１２％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.27 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.50 (m, 2H), 8.35 (d, 1H), 8.08 (dd, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.38 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３４】
実施例１３
４−（５−ブロモピリジン−３−イル）−２−ピリジン−２−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５２】
2008539180.tif 000061
表題化合物の合成は、実施例７と同様に、実施例１７Ａ由来の化合物１.４０ｇ（３.５０ｍｍｏｌ）から実施する。
収量：３４５ｍｇ（理論値の３１％）
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２.２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３５】
実施例１４
５−（３−オキソ−２−ピリジン−２−イル−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ニコチノニトリル
【化５３】
2008539180.tif 000062
製造は、実施例１１と同様に、実施例１３由来の化合物５０ｍｇ（０.１６ｍｍｏｌ）から実施する。
収量：２０ｍｇ（理論値の４８％）
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 9.40 (d, 1H), 8.76 (d, 1H), 8.72 (m, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.07 (dd, 1H), 7.37 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.６５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３６】
実施例１５
５−メチル−２−ピリジン−２−イル−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５４】
2008539180.tif 000063
氷酢酸２２μｌを、無水エタノール０.４ｍｌ中の実施例１８Ａ由来の化合物５８ｍｇ（０.２８ｍｍｏｌ）および２−ヒドラジノピリジン３４ｍｇ（０.３１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。ナトリウムエチラート１９ｍｇを添加し、続いて、混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで１Ｎ塩酸で中和する。水の添加後、混合物を塩化メチレンで抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をジイソプロピルエーテルと撹拌し、固体を吸引濾過する。乾燥後、表題化合物１３.５ｍｇ（理論値の１９％）を得る。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 13.28 (br. s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.47 (d, 1H), 8.30 (d, 1H), 7.95-7.86 (m, 3H), 7.33 (dd, 1H), 7.18 (t, 1H), 2.44 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３７】
実施例１６
４−（６−ヒドロキシピリジン−３−イル）−２−ピリジン−２−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５５】
2008539180.tif 000064
実施例７由来の化合物５０.０ｍｇ（０.１８ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニウム６００ｍｇ（７.７４ｍｍｏｌ）を、１８０℃で氷酢酸３ｍｌ中の懸濁液として、単一モードのマイクロ波（Explorer、CEMより）中で２時間加熱する。分析ＨＰＬＣにより完全な変換が検出された後、トルエンを添加し、揮発性成分を共沸蒸留する。残渣を水に取り、残っている固体を濾過する。続いて、僅かに茶色がかった粉末を水で、次いでＭＴＢＥで洗浄する。乾燥後、表題化合物３９ｍｇ（理論値の８４％）を得る。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 12.7 (br. s, 1H), 11.58 (br. s, 1H), 8.47 (d, 1H), 8.32 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.01 (m, 2H), 7.87 (dd, 1H), 7.32 (dd, 1H), 6.39 (d, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３８】
表７に挙げる実施例は、対応する出発物質から実施例７と同様に製造する：
表７
【表８】
2008539180.tif 000065
［＊分取ＨＰＬＣ（カラム：YMC Gel ODS-AQ S-5 / 15 μm；グラジエント：アセトニトリル／水＋０.２％トリフルオロ酢酸１０：９０→９５：５）による粗生成物の精製］
【０１３９】
実施例２１
４−［６−（ヒドロキシメチル）ピリジン−３−イル］−２−ピリジン−２−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５６】
2008539180.tif 000066
水素化ホウ素ナトリウム７３ｍｇ（１.９３ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール２０ｍｌに導入し、塩化カルシウム１１５ｍｇ（１.０３ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。実施例２０由来の化合物（４００ｍｇ、１.２９ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、混合物を０℃で１時間、その後室温で４時間撹拌する。反応を完了させるために、さらに７３ｍｇ（１.９３ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを添加し、混合物を室温で２０時間撹拌する。加水分解を水５ｍｌで実施し、混合物を１Ｎ塩酸で弱酸性にする。次いで、混合物を室温で１時間撹拌する。それを濃縮し、残渣をＤＭＳＯ／水混合物（１：１）約１６ｍｌに取り、分取ＨＰＬＣ（カラム：YMC Gel ODS-AQ S-5 / 15 μm；グラジエント：アセトニトリル／水＋０.２％トリフルオロ酢酸１０：９０→９５：５）で少しずつ精製する。
収量：３３２ｍｇ（理論値の９６％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.19 (s, 1H), 8.71 (d, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.38 (dd, 1H), 4.77 (s, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０.６５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４０】
実施例２２
２−ピリジン−２−イル−４−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５７】
2008539180.tif 000067
実施例４１Ａ由来の化合物２６１ｍｇ（１.００ｍｍｏｌ）および２−ヒドラジノピリジン１１５ｍｇ（１.０５ｍｍｏｌ）を、無水エタノール５ｍｌにアルゴン下で溶解し、混合物を室温で２０時間撹拌する。ナトリウムエタノラート６８ｍｇ（１.００ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、１Ｍ塩酸および少量のエタノールを添加すると、沈殿が析出する。これを濾過し、少量のエタノールで洗浄し、真空で乾燥する。
収量：１８０ｍｇ（理論値の５９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.26 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.55 (d, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.05 (t, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.37 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝２.１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３０７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４１】
実施例２３
２−（５−ヒドロキシメチル−ピリジン−２−イル）−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン塩酸塩
【化５８】
2008539180.tif 000068
実施例４２Ａ由来の化合物４.００ｇ（１８.２ｍｍｏｌ）、実施例３４Ａ由来の化合物２.７０ｇ（１９.４ｍｍｏｌ）およびカンファー−１０−スルホン酸４５０ｍｇ（１.９４ｍｍｏｌ）を、無水エタノール１２０ｍｌに溶解し、混合物を還流下で終夜加熱する。冷却後、形成される沈殿を吸引濾過し、エタノールおよびジエチルエーテルで洗浄し、メタノールに懸濁し、過剰の塩化水素の４Ｎ１,４−ジオキサン溶液を添加し、混合物を再度濃縮する。残渣をメタノールおよび塩化メチレンの混合物と撹拌し、吸引濾過し、乾燥する。
収量：３.２３ｇ（理論値の６６％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.36 (s, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.61 (d, 1H), 8.45-8.43 (m, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.04 (dd, 1H), 7.98 (dd, 1H), 4.58 (s, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４２】
表８に挙げる化合物は、対応する出発物質から、実施例２３と同様に製造する。特定の沈殿の精製は、代替的に、分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加するか、または添加しない）を利用して実施できる。
【表９】
2008539180.tif 000069
【０１４３】
【表１０】
2008539180.tif 000070
［＊６−ヒドラジノニコチン酸エチルエステルは、実施例４２と同様に、エタノール中での６−ヒドラジノニコチン酸のエステル化により得ることができる。］
【０１４４】
実施例２９
２−（４−シアノピリジン−２−イル）−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５９】
2008539180.tif 000071
実施例３３Ａ由来の化合物５４５ｍｇ（４.０６ｍｍｏｌ）および実施例４２Ａ由来の化合物１.０７ｇ（４.８８ｍｍｏｌ）を、氷酢酸１５ｍｌ中、室温で２時間撹拌する。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル３００ｍｌに取り、混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で数回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をエタノール３０ｍｌに取り、エタノール中のナトリウムエタノラートの２５％強度溶液１.３３ｇ（４.８８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３０分間撹拌する。１Ｍ塩酸の添加によりｐＨ５を確立し、形成される固体を吸引濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、高真空下で乾燥する。
収量：８９０ｍｇ（理論値の８３％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.01-8.98 (m, 2H), 8.54 (dd, 1H), 8.18 (dt, 1H), 8.01 (dd, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.39 (dd, 1H), 7.14 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４５】
実施例３０
２−（５−クロロピリジン−２−イル）−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化６０】
2008539180.tif 000072
実施例３０Ａ由来の化合物２５０ｍｇ（１.７４ｍｍｏｌ）および実施例４２Ａ由来の化合物４６０ｍｇ（２.０９ｍｍｏｌ）を、氷酢酸４ｍｌ中、室温で０.５時間撹拌する。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で数回洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をエタノール９ｍｌに取り、エタノール中のナトリウムエタノラートの２５％強度溶液６６４ｍｇ（２.４４ｍｍｏｌ）を室温で添加し、混合物を１時間撹拌する。１Ｍ塩酸の添加によりｐＨ５を確立し、混合物を終夜室温で撹拌し、形成される固体を吸引濾過し、水で洗浄し、高真空下で乾燥する。
収量：２３９ｍｇ（理論値の５０％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.04 (d, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.22 (dt, 1H), 8.10 (dd, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.92 (dd, 1H), 7.20 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４６】
実施例３１
２−（５−ヨードピリジン−２−イル）−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化６１】
2008539180.tif 000073
表題化合物の合成は、実施例３０と同様に、実施例３２Ａ由来の化合物２５０ｍｇ（１.０６ｍｍｏｌ）および実施例４２Ａ由来の化合物２８１ｍｇ（１.２８ｍｍｏｌ）から実施する。
収量：８０ｍｇ（理論値の２１％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.12 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.54-8.46 (m, 1H), 8.40-8.25 (m, 4H), 7.43-7.36 (m, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４７】
実施例３２
２−（５−ブロモピリジン−２−イル）−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化６２】
2008539180.tif 000074
表題化合物の合成は、実施例３０と同様に、実施例３１Ａ由来の化合物２５０ｍｇ（１.３３ｍｍｏｌ）および実施例４２Ａ由来の化合物３５１ｍｇ（１.６０ｍｍｏｌ）から実施する。
収量：１６６ｍｇ（理論値の３９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.06 (d, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (dd, 1H), 7.24 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４８】
実施例３３
２−（５−ブロモ−４−メチルピリジン−２−イル）−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化６３】
2008539180.tif 000075
実施例２９Ａ由来の化合物３００ｍｇ（１.４９ｍｍｏｌ）および実施例４２Ａ由来の化合物３９２ｍｇ（１.７８ｍｍｏｌ）を、氷酢酸７ｍｌ中、室温で３６時間撹拌する。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で数回洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣をエタノール１３ｍｌに取り、エタノール中のナトリウムエタノラートの２５％強度溶液５６６ｍｇ（２.０８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、混合物を１時間撹拌する。１Ｍ塩酸の添加によりｐＨ５を確立し、混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加して）を利用して精製する。
収量：５５ｍｇ（理論値の１１％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.41 (s, 1H), 8.99 (d, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.67 (d, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.03 (dd, 1H), 2.47 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３１［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４９】
実施例３４
４−（６−シアノピリジン−３−イル）−２−（４−メチルピリジン−２−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン塩酸塩
【化６４】
2008539180.tif 000076
実施例２４由来の化合物５０ｍｇ（１３６μｍｏｌ）を、１−メチル−２−ピロリドン０.６ｍｌに溶解し、シアン化亜鉛３１.９ｍｇ（２７２μｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）１５.７ｍｇ（１４μｍｏｌ）を添加し、混合物を、マイクロ波中、２００℃で３０分間加熱する。反応混合物を珪藻土で濾過し、メタノールで溶出する。１Ｍ塩酸の添加により濾液を僅かに酸性のｐＨに調節し、沈殿を濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加して）を利用して精製する。
収量：１３ｍｇ（理論値の３１％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.25 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 2.47 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝２.２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５０】
実施例３５
２−［４−（アミノメチル）ピリジン−２−イル］−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン二塩酸塩
【化６５】
2008539180.tif 000077
実施例２９由来の化合物１００ｍｇ（３８０μｍｏｌ）を、氷酢酸１０ｍｌに溶解し、触媒（１０％パラジウム／炭）５０.０ｍｇを添加し、混合物を、終夜、水素雰囲気下、常圧下、室温で撹拌する。次いで、反応混合物を濾過し、濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加して）を利用して精製する。
収量：６４ｍｇ（理論値の４９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.38 (s, 1H), 8.93 (d, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.75 (s, 3H), 8.64 (d, 1H), 8.56 (d, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.99 (dd, 1H), 7.54 (d, 1H), 4.21 (q, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１.３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５１】
実施例３６
Ｎ−｛［２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン−４−イル］メチル｝ブタンアミド塩酸塩
【化６６】
2008539180.tif 000078
実施例３５由来の化合物８０.０ｍｇ（２３５μｍｏｌ）およびブタン酸２２.８ｍｇ（２５９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ５ｍｌに溶解し、トリエチルアミン１１９ｍｇ（１.１８ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩９０.２ｍｇ（４７０μｍｏｌ）を氷で冷却しながら添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。次いで、反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加して）を利用して直接精製する。
収量：７ｍｇ（理論値の７％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.33-9.31 (m, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.61-8.56 (m, 2H), 8.43 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.96 (dd, 1H), 7.26 (d, 1H), 4.41 (d, 1H), 2.19 (t, 2H), 1.58 (sext, 2H), 0.90 (t, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５２】
実施例３７
Ｎ−イソプロピル−Ｎ'−｛［２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン−４−イル］メチル｝ウレア塩酸塩
【化６７】
2008539180.tif 000079
イソプロピルイソシアネート４０.０ｍｇ（４７０μｍｏｌ）を、ＤＭＦ５ｍｌにアルゴン下で溶解し、実施例３５由来の化合物８０.０ｍｇ（２３５μｍｏｌ）およびトリエチルアミン７１.４ｍｇ（７０５μｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。次いで、混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）を利用して精製する。
収量：８０ｍｇ（理論値の８５％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.35 (s, 1H), 8.95 (d, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.02 (dd, 1H), 7.27 (d, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 3.76-3.63 (m, 1H), 2.75 (s, 1H), 1.08-1.03 (m, 6H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５３】
実施例３８
Ｎ−｛［２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン−４−イル］メチル｝メタンスルホンアミド塩酸塩
【化６８】
2008539180.tif 000080
実施例３５由来の化合物８０.０ｍｇ（２３５μｍｏｌ）およびメタンスルホン酸塩化物５３.９ｍｇ（４７０μｍｏｌ）を、ＤＭＦ５ｍｌにアルゴン下で溶解し、氷冷しながら、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１５２ｍｇ（１.１８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。次いで、反応混合物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）を利用して直接精製する。
収量：３１ｍｇ（理論値の３４％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.34 (s, 1H), 8.88 (d, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.47 (d, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.95 (dd, 1H), 7.89 (t, 1H), 7.36 (d, 1H), 4.36 (d, 2H), 2.99 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５４】
実施例３９
６−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−ニコチン酸
【化６９】
2008539180.tif 000081
実施例２５由来の化合物１.４９ｇ（４.８１ｍｍｏｌ）を、１,４−ジオキサン６０ｍｌに溶解し、１Ｍ水酸化リチウム水溶液４０ｍｌを添加し、混合物を還流下で１時間加熱する。次いで、反応混合物を０℃に冷却し、１Ｍ塩酸４０ｍｌで弱酸のｐＨに調節し、０℃で２時間撹拌する。形成される沈殿を吸引濾過し、水およびジエチルエーテルで洗浄し、高真空下で乾燥する。
収量：１.２０ｇ（理論値の８８％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.40 (s, 1H), 9.00-8.94 (m, 2H), 8.90 (s, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.60-8.54 (m, 1H), 8.49 (dd, 1H), 8.02 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０.６３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５５】
実施例４０
Ｎ−ベンジル−６−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−ニコチンアミド塩酸塩
【化７０】
2008539180.tif 000082
実施例３９由来の化合物５０ｍｇ（１７７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ２ｍｌに溶解し、４−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン１.９ｍｇ（１６μｍｏｌ）、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７１.０ｍｇ（５４９μｍｏｌ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート９８.０ｍｇ（１８８μｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌する。ベンジルアミン２５.２ｍｇ（２３５μｍｏｌ）を添加し、混合物を室温でさらに５時間撹拌する。反応を完了させるために、さらに２５ｍｇ（２３５μｍｏｌ）のベンジルアミンを添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）、続いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（移動相：塩化メチレン／メタノールグラジエント）を利用して予精製する。粗生成物がメタノールから沈殿し、その沈殿を再度分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）を利用して精製する。
収量：２１ｍｇ（理論値の３０％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.41 (s, 1H), 9.38-9.33 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.95 (d, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.64 (d, 1H), 8.56-8.49 (m, 2H), 7.99 (dd, 1H), 7.38-7.32 (m, 4H), 7.30-7.24 (m, 1H), 4.53 (d, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.５０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５６】
実施例４１
２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−イソニコチン酸
【化７１】
2008539180.tif 000083
実施例２９由来の化合物２００ｍｇ（７６０μｍｏｌ）を、エタノール６ｍｌおよび水４ｍｌの混合物に懸濁し、５０％強度水酸化ナトリウム溶液０.６ｍｌを添加し、混合物を還流下で１時間加熱する。冷却後、１Ｍ塩酸で弱酸のｐＨを確立し、沈殿を吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥する。
収量：１８０ｍｇ（理論値の８４％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.11 (d, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.32 (dd, 1H), 8.28 (dt, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.36 (dd, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５７】
実施例４２
２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−イソニコチン酸メチルエステル
【化７２】
2008539180.tif 000084
実施例４１由来の化合物１５０ｍｇ（５３１μｍｏｌ）を、メタノール２０ｍｌに溶解し、濃硫酸１ｍｌを添加し、混合物を還流下で終夜加熱する。冷却後、形成される沈殿を吸引濾過し、メタノールで洗浄し、乾燥する。
収量：１１７ｍｇ（理論値の７４％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.41 (d, 1H), 8.99-8.94 (m, 2H), 8.86 (s, 1H), 8.71 (d, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.01 (dd, 1H), 7.78 (dd, 1H), 3.96 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５８】
実施例４３
２−［４−（ヒドロキシメチル）ピリジン−２−イル］−４−ピリジン−３−イル−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン塩酸塩
【化７３】
2008539180.tif 000085
塩化カルシウム１９７ｍｇ（１.７７ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素ナトリウム３１９ｍｇ（８.４４ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール２６ｍｌに導入し、実施例４２由来の化合物５０ｍｇ（１６９μｍｏｌ）を少しずつ０℃で添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。反応混合物を、１Ｍ塩酸の添加により僅かに酸性のｐＨに調節し、濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）を利用して精製する。
収量：３２ｍｇ（理論値の６３％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.34 (s, 1H), 8.93 (d, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.58 (d, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.00 (dd, 1H), 7.34 (d, 1H), 4.68 (s, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.１４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５９】
実施例４４
５−（３−オキソ−２−ピリジン−２−イル−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ニコチン酸
【化７４】
2008539180.tif 000086
実施例１４由来の化合物１００ｍｇ（３８０μｍｏｌ）を、エタノール３ｍｌおよび水２ｍｌの混合物に懸濁し、５０％強度水酸化ナトリウム溶液０.３ｍｌを添加し、混合物を還流下で２時間加熱する。冷却後、沈殿を吸引濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥する。
収量：５０ｍｇ（理論値の４７％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.04 (d, 1H), 8.47-8.42 (m, 2H), 8.36-8.33 (m, 2H), 7.75-7.70 (m, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.01-6.97 (m, 1H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６０】
実施例４５
Ｎ−メチル−５−（３−オキソ−２−ピリジン−２−イル−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ニコチンアミド
【化７５】
2008539180.tif 000087
実施例４４由来の化合物４５.０ｍｇ（１５９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ１ｍｌに溶解し、４−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン１.９ｍｇ（１６μｍｏｌ）、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン２４.７ｍｇ（１９１μｍｏｌ）および（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート１００ｍｇ（１９１μｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌する。メチルアミンの２Ｍ ＴＨＦ溶液１２０μｌ（２３９μｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。変換を完了させるために、さらに１２０μｌ（２３９μｍｏｌ）のメチルアミンの２Ｍ ＴＨＦ溶液を添加し、混合物を再度終夜室温で撹拌する。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）を利用して直接精製する。
収量：２３ｍｇ（理論値の４９％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.18 (s, 1H), 8.74 (d, 1H), 8.64-8.57 (m, 2H), 8.53-8.44 (m, 2H), 8.40-8.25 (m, 1H), 8.09-8.03 (m, 1H), 7.40-7.34 (m, 1H), 2.83 (d, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６１】
実施例４６
Ｎ−｛［２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン−４−イル］メチル｝−２−フェニルアセトアミド塩酸塩
【化７６】
2008539180.tif 000088
実施例３５由来の化合物８０.０ｍｇ（２３５μｍｏｌ）およびフェニル酢酸３５.２ｍｇ（２５９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ５ｍｌに溶解し、トリエチルアミン１１９ｍｇ（１.１８ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩９０.２ｍｇ（４７０μｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物１２７ｍｇ（９４１μｍｏｌ）を氷で冷却しながら添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。沈殿を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）を利用して精製する。
収量：５８ｍｇ（理論値の５７％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.38 (d, 1H), 8.97 (dt, 1H), 8.88 (t, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.41 (d, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.04 (dd, 1H), 7.36-7.29 (m, 4H), 7.26-7.21 (m, 2H), 4.42 (d, 2H), 3.56 (s, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝１.３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６２】
実施例４７
Ｎ−｛［２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン−４−イル］メチル｝アセトアミド塩酸塩
【化７７】
2008539180.tif 000089
実施例３５由来の化合物８０.０ｍｇ（２３５μｍｏｌ）を、ＤＭＦ５ｍｌに溶解し、トリエチルアミン７１.４ｍｇ（７０５μｍｏｌ）および塩化アセチル２０.３ｍｇ（２５９μｍｏｌ）を氷冷しながら添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）を利用して直接精製する。
収量：３３ｍｇ（理論値の４１％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.37 (s, 1H), 8.97 (d, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.68 (t, 1H), 8.61 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.03 (dd, 1H), 7.28 (d, 1H), 4.40 (d, 2H), 1.95 (s, 3H).
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２.０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６３】
実施例４８
Ｎ−｛［２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン−４−イル］メチル｝ベンズアミド塩酸塩
【化７８】
2008539180.tif 000090
実施例３５由来の化合物６０.０ｍｇ（１７６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ４ｍｌに溶解し、トリエチルアミン５３.５ｍｇ（５２９μｍｏｌ）および塩化ベンゾイル２７.３ｍｇ（１９４μｍｏｌ）を氷冷しながら添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃塩酸を添加したもの）を利用して直接精製する。
収量：３６ｍｇ（理論値の５０％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.35-9.29 (m, 2H), 8.91 (d, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.01-7.92 (m, 3H), 7.62-7.48 (m, 3H), 7.35 (d, 1H), 4.62 (d, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６４】
実施例４９
Ｎ−ベンジル−２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−イソニコチンアミド
【化７９】
2008539180.tif 000091
実施例４１由来の化合物６０.０ｍｇ（２１３μｍｏｌ）を、ＤＭＦ２４ｍｌに溶解し、４−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン２.６ｍｇ（２１μｍｏｌ）、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６５.９ｍｇ（５１０μｍｏｌ）および（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート２６５ｍｇ（５１０μｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で４５分間撹拌する。ベンジルアミン６８.３ｍｇ（６３８μｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜室温で撹拌する。変換を完了させるために、さらに６５.９ｍｇ（５１０μｍｏｌ）のＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンおよび２６５ｍｇ（５１０μｍｏｌ）の（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを添加し、混合物を室温で４５分間撹拌し、さらに６８.３ｍｇ（６３８μｍｏｌ）のベンジルアミンを添加し、次いで、混合物を終夜室温で撹拌する。それを濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％ギ酸を添加したもの）を利用して精製する。
収量：３５ｍｇ（理論値の４４％）
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.49 (t, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.70-8.62 (m, 3H), 8.52 (d, 1H), 7.76-7.70 (m, 2H), 7.37-7.34 (m, 4H), 7.31-7.24 (m, 1H), 4.52 (d, 2H).
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７２［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６５】
実施例５０
３−（４−クロロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−Ｎ−｛［２−（５−オキソ−４−ピリジン−３−イル−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ピリジン−４−イル］メチル｝プロパンアミド
【化８０】
2008539180.tif 000092
３−（４−クロロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸１７.５ｍｇ（１００μｍｏｌ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート４１.７ｍｇ（１３０μｍｏｌ）およびトリエチルアミン２０.２ｍｇ（２００μｍｏｌ）をＤＭＳＯ０.２ｍｌに溶解する。ＤＭＳＯ０.２ｍｌ中の実施例３５由来の化合物３３.９ｍｇ（１００μｍｏｌ）の溶液を添加し、反応混合物を終夜室温で撹拌する。形成される沈殿を濾過し、ＨＰＬＣ（方法８）を利用して濾液を精製する。
収量：５.８ｍｇ（理論値の１４％）
ＬＣ−ＭＳ（方法８）：Ｒｔ＝１.２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６６】
表９に挙げる化合物は、実施例３５および対応するカルボン酸から、実施例５０と同様に製造する：
【表１１】
2008539180.tif 000093
【０１６７】
【表１２】
2008539180.tif 000094
【０１６８】
【表１３】
2008539180.tif 000095
［実施例５５について：出発物質３−（４−ヒドロキシ−３,５−ジメチルフェニル）プロピオン酸の合成は、J. Med. Chem. 1995, 38, 695-707 に記載されている］
【０１６９】
Ｂ．薬理活性の評価
本発明による化合物の薬理特性は、以下のアッセイで立証できる：
略号：
【表１４】
2008539180.tif 000096
【０１７０】
１．ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼ阻害剤の活性および選択性を決定するためのインビトロ試験
１.ａ）ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼの活性の阻害：
ヒドロキシル化ＨＩＦは、フォンヒッペル・リンダウタンパク質−エロンジンＢ−エロンジンＣ複合体（ＶＢＣ複合体）に特異的に結合する。この相互作用は、ＨＩＦが保存されているプロリルラジカルでヒドロキシル化されている場合にのみ生じる。それは、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ活性の生化学的測定の基礎である。本試験は、記載された通りに実施する［Oehme F., Jonghaus W., Narouz-Ott L., Huetter J., Flamme I., Anal. Biochem. 330 (1), 74-80 (2004)]：
【０１７１】
NeutrAvidin HBC (Pierce）で被覆した透明な９６ウェルマイクロタイタープレートを、ブロッカーカゼインと３０分間インキュベートする。次いで、プレートを、各回ウェル当たり２００μｌの洗浄バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％（ｖ／ｖ）ブロッカーカゼイン、０.０５％（ｖ／ｖ）Tween 20）で３回洗浄する。ビオチン−ＤＬＤＬＥＭＬＡＰＹＩＰＭＤＤＤＦＱＬ（Eurogentec, 4102 Seraing, Belgium）のペプチドを、４００ｎＭの濃度で、洗浄バッファー１００μｌ中で添加する。このペプチドは、プロリルヒドロキシル化の基質として働き、マイクロタイタープレートに結合する。３０分間インキュベートした後、プレートを洗浄バッファーで３回洗浄し、ブロッカーカゼイン中の１ｍＭビオチンと３０分間インキュベートし、次いで、洗浄バッファーで再度３回洗浄する。
【０１７２】
プロリルヒドロキシラーゼ反応を実施するために、プレートに結合したペプチド基質を、プロリルヒドロキシラーゼを含有する細胞溶解物と共に１ないし６０分間インキュベートする。反応は、１００μｌの反応バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、５ｍＭ ＫＣｌ、１.５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１μＭ−１ｍＭ ２−オキソグルタレート、１０μＭ ＦｅＳＯ４、２ｍＭアスコルビン酸塩）中、室温で行う。反応混合物は、さらに、様々な濃度の試験しようとするプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤を含有する。試験物質は、好ましくは、排他的にではないが、１ｎＭないし１００μＭの濃度で用いる。洗浄バッファーでプレートを３回洗浄することにより、反応を停止する。
【０１７３】
プロリルヒドロキシル化の定量的測定のために、大腸菌由来のチオレドキシンおよびＶＢＣ錯体の両方を含有する融合タンパク質を、８０μｌの結合バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、１２０ｍＭ ＮａＣｌ）に添加する。１５分後、結合バッファー中のウサギ由来ポリクローナル抗チオレドキシン抗体の溶液１０μｌを添加する。さらに３０分後、結合バッファー中のホースラディッシュペルオキシダーゼに結合した抗ウサギ免疫グロブリンの溶液１０μｌを添加する。室温で３０分間インキュベートした後、結合していないＶＢＣ複合体および抗体を除去するために、プレートを洗浄バッファーで３回洗浄する。結合したＶＢＣ複合体の量を測定するために、プレートをＴＭＢと１５分間インキュベートする。呈色反応を、１Ｍ硫酸１００μｌの添加により終わらせる。結合したＶＢＣ複合体の量は、４５０ｎｍでの吸光度の測定により決定する。それは、ペプチド基質中のヒドロキシル化プロリンの量に比例する。
【０１７４】
あるいは、ユーロピウムに結合したＶＢＣ複合体（Perkin Elmer）を、プロリルヒドロキシル化の検出に使用できる。この場合、結合したＶＢＣ複合体の量は、時間に対する蛍光により測定する。［３５Ｓ］−メチオニンで標識されたＶＢＣ複合体の使用もさらに可能である。このために、放射性標識ＶＢＣ複合体を、網状赤血球のライセートにおけるインビトロ転写−翻訳により調製できる。
【０１７５】
本発明による化合物は、この試験において、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼの活性を＜１０μＭのＩＣ５０値で阻害する。代表的な結果を表１０に示す：
表１０
【表１５】
2008539180.tif 000097
【０１７６】
１.ｂ）細胞の機能的インビトロ試験：
本発明による化合物の活性を、組換え細胞株を利用して定量する。この細胞は、元々は、ヒト肺癌細胞株（A549、ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA）に由来する。試験細胞株を、人工最小プロモーターの制御下にフォチナス・ピラリス（Photinus pyralis）ルシフェラーゼ（以下、ルシフェラーゼと呼ぶ）のレポーター遺伝子を含有するベクターで安定に形質移入する。最小プロモーターは、ＴＡＴＡボックスの上流に２個の低酸素応答エレメントを含む［Oehme F., Ellinghaus P., Kolkhof P., Smith T.J., Ramakrishnan S., Huetter J., Schramm M., Flamme I., Biochem. Biophys. Res. Commun. 296 (2), 343-9 (2002)］。低酸素（例えば、１％酸素の存在下で２４時間培養する）の影響下で、または、非選択的ジオキソゲナーゼ阻害剤（例えば濃度１００μＭのデスフェリオキサミン、濃度１００μＭの塩化コバルトまたは濃度１ｍＭのＮ−オキサリルグリシンジエチルエステル）の作用下で、試験細胞株はルシフェラーゼを産生し、それは、適する生物発光試薬（例えば Steady-Glo（登録商標） Luciferase Assay System, Promega Corporation, Madison, WI 53711, USA）および適当なルミノメーターを利用して検出および定量できる。
【０１７７】
試験方法：試験前日に、３８４−または１,５３６−ウェルマイクロタイタープレート中の正確に算出された量の培養培地（ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン）に細胞を播き、細胞インキュベーター中で維持する（９６％大気湿度、５％ｖ／ｖＣＯ２、３７℃）。試験当日に、試験物質を漸加的濃度で培養培地に添加する。負の対照に供するバッチの細胞には、試験物質を添加しない。細胞の阻害剤に対する感受性を測定するための正の対照として、例えばデスフェリオキサミンを最終濃度１００μＭで添加する。試験物質をマイクロタイタープレートのウェルに移した６ないし２４時間後、得られる光シグナルをルミノメーターで測定する。測定値を利用して用量／効果の関係をプロットする。これは、最大半量の活性濃度（以下ＥＣ５０値と呼ぶ）を決定するための基礎として役立つ。
【０１７８】
本発明による化合物は、ここに記載した試験において、＜３０μＭのＥＣ５０値を有する。代表的な結果を表１１に示す：
表１１
【表１６】
2008539180.tif 000098
【０１７９】
１.ｃ）遺伝子発現の変化についての細胞の機能的インビトロ試験：
試験物質による処置後のヒト細胞株における特異的ｍＲＮＡの発現の変化を調べるために、以下の細胞株を６または２４ウェルプレートで培養する：ヒト肝臓癌細胞（HUH, JCRB Cell Bank, Japan）、ヒト胎児由来腎臓線維芽細胞（human embryonal kidney fibroblast）（HEK/293, ATCC, Manassas, VA 20108, USA）、ヒト子宮頸癌細胞（HeLa, ATCC, Manassas, VA 20108, USA）、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC, Cambrex, East Rutherford, New Jersey 07073, USA）。試験物質添加の２４時間後、細胞をリン酸緩衝塩水で洗浄し、適当な方法（例えば Trizol（登録商標）試薬、Invitrogen GmbH, 76131 Karlsruhe, Germany）を使用して、それらから総ＲＮＡを得る。
【０１８０】
典型的な分析実験のために、かくして得られた総ＲＮＡ各１μｇを、ＤＮａｓｅＩで分解し、適する逆転写反応（ImProm-II Reverse Transcription System, Promega Corporation, Madison, WI 53711, USA）を使用して、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に翻訳する。かくして得られたｃＤＮＡバッチの２.５％を、各場合でポリメラーゼ連鎖反応に使用する。調べようとする遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルを、ABI Prism 7700 配列検出装置（Applied Biosystems, Inc.）を使用して、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応を利用して調べる [TaqMan-PCR; Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)]。ここで使用するプライマー−プローブの組合せは、Primer Express 1.5 Software (Applied Biosystems, Inc.）を利用して生じさせる。特に、エリスロポエチン、カルボアンヒドラーゼＩＸ、ラクテートデヒドロゲナーゼＡおよび血管内皮細胞増殖因子のｍＲＮＡを調べる。
【０１８１】
本発明による物質は、ヒト起源の細胞において、低酸素誘導遺伝子のｍＲＮＡの有意な用量依存的増加を導く。
【０１８２】
２．心血管系の作用を検出するためのインビボ試験
２.ａ）遺伝子発現の変化についてのインビボ試験：
適当な溶媒に溶解した試験化合物を、マウスまたはラットに、胃管投与により経口で、腹腔内に、または、静脈内に投与する。典型的な投与量は、体重１ｋｇ当たり投与毎に０.１、０.５、１、５、１０、２０、５０、１００および３００ｍｇの物質である。対照動物は、溶媒のみを受容する。試験物質投与の４、８または２４時間後、動物をイソフルランの過剰投与および続く頸部の骨折により殺し、調べようとする器官を取り出す。器官の各部分を液体窒素中で瞬間凍結（shock-freeze）する。Ｂ.１.ａ）で記載した通りに、器官の各部分から総ＲＮＡを得、これをｃＤＮＡに翻訳する。調べようとする遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルを、ABI Prism 7700 配列検出装置 (Applied Biosystems, Inc.）を使用して、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応［TaqMan-PCR; Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)] を利用して調べる。
【０１８３】
本発明による物質は、経口または非経腸投与の後に、プラセボ対照と比較して、腎臓におけるエリスロポエチンのｍＲＮＡの有意な用量依存的増加を導く。
【０１８４】
２.ｂ）血清中のエリスロポエチンレベルの測定：
適当な溶媒中の試験物質を、マウスまたはラットに、腹腔内または経口で、１日１回または２回投与する。典型的な投与量は、体重１ｋｇ当たり投与毎に０.１、０.５、１、５、１０、２０、５０、１００および３００ｍｇの物質である。プラセボ対照動物は、溶媒のみを受容する。物質投与前および最後の投与の４時間後、血液５０μｌを、眼窩静脈叢または尾静脈から、短時間の麻酔下で動物から取る。リチウムヘパリンの添加により、血液を非凝固性にする。遠心分離により血漿を得る。血漿中のエリスロポエチン含有量を、エリスロポエチン−ＥＬＩＳＡ（Quantikine（登録商標）mouse Epo Immunoassay, R&D Systems, Inc., Minneapolis, USA）を製造業者の指示に従い利用して測定する。マウスエリスロポエチンについて記録された参照測定を利用して、測定値をｐｇ／ｍｌに変換する。
【０１８５】
本発明による物質は、経口または非経腸投与の後に、開始時の値およびプラセボ対照と比較して、血漿エリスロポエチンの有意な用量依存的増加を導く。
【０１８６】
２.ｃ）末梢血の細胞組成の検定：
適当な溶媒中の試験物質を、マウスまたはラットに、腹腔内または経口で、１日１回または２回、数日間投与する。典型的な投与量は、体重１ｋｇ当たり投与毎に、例えば０.１、０.５、１、５、１０、２０、５０、１００および３００ｍｇの物質である。対照動物は、溶媒のみを受容する。研究終了時に、血液を、眼の隅の静脈叢または尾静脈から、短時間の麻酔下で動物から取り、クエン酸ナトリウムの添加により血液を非凝固性にする。血液サンプル中の赤血球、白血球および血小板の濃度を、適当な電子的測定機器で測定する。網状赤血球の濃度を、各場合で１,０００個の赤血球につき、この目的に適する染色液 (KABE Labortechnik, Nuembrecht）で染色した血液スメアを利用して、顕微鏡によるスクリーニングで測定する。ヘマトクリットの決定のために、ヘマトクリット用キャピラリーを利用して血液を眼窩静脈叢から取り、この目的に適する遠心機におけるキャピラリーの遠心分離後に、ヘマトクリット値を手動で読み取る。
【０１８７】
本発明による物質は、経口および非経腸投与の後に、開始時の値およびプラセボ対照と比較して、ヘマトクリット、赤血球数および網状赤血球の有意な用量依存的増加を導く。
【０１８８】
Ｃ．医薬組成物についての実施態様の実施例
本発明による化合物は、以下の通りに医薬製剤に変換できる。
錠剤：
組成：
本発明による化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン (PVP 25) (BASF, Ludwigshafen, Germany）１０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ。直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明による化合物、ラクトースおよびデンプンの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｗ／ｗ）で造粒する。乾燥後、顆粒をステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を、常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状について、上記参照）。打錠力１５ｋＮを、打錠の推奨値として使用する。
【０１８９】
経口投与用の懸濁剤：
組成：
本発明による化合物１,０００ｍｇ、エタノール（９６％）１,０００ｍｇ、Rhodigel（登録商標） (FMC, Pennsylvania, USA のキサンタンゴム）４００ｍｇおよび水９９ｇ。
経口用懸濁剤１０ｍｌは、本発明による化合物１００ｍｇの個別用量に相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、本発明による化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel の膨潤が終了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０１９０】
経口投与用の液剤：
組成：
本発明による化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２.５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。経口用液剤２０ｇは、本発明による化合物１００ｍｇの個別用量に相当する。
製造：
本発明による化合物を、ポリエチレングリコールおよびポリソルベートの混合物に撹拌しながら懸濁する。本発明による化合物の溶解が完了するまで、撹拌操作を継続する。
【０１９１】
ｉ.ｖ.液剤：
本発明による化合物を、飽和溶解度より低い濃度で生理的に許容し得る溶媒（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に溶解する。溶液を濾過滅菌に付し、無菌かつパイロジェン不含の注射容器に移す。
【国際調査報告】
2008539180.tif 000111
2008539180.tif 000112
2008539180.tif 000113
2008539180.tif 000114
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