(57)【要約】  薬剤耐性癌の処置方法であって：それを必要とする患者に、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、患者は薬剤耐性癌を有する癌患者であり、式Ｉの化合物は明細書で定義の通りである。
2008540543.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤耐性癌の処置方法であって：それを必要とする対象に、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、該対象は薬剤耐性癌を有する癌患者であり、そして、該式Ｉの化合物が以下の式：
【化１】
2008540543.tif 000032
〔式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１０基、−ＮＲ１１Ｒ１２基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１３基、−ＮＲ１４Ｒ１５基、−ＳＲ１６基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１０およびＲ１３は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１１およびＲ１４は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ１２およびＲ１５は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；そして
Ｒ１６は置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択される。〕
を有する、方法。
【請求項２】
対象に式IIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、式IIの化合物が以下の式：
【化２】
2008540543.tif 000033
を有し、そしてＲ７が置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択される置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である、請求項２記載の方法。
【請求項４】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であって、該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む、請求項３記載の方法。
【請求項６】
対象に式IIIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、該式IIIの化合物が、以下の式：
【化３】
2008540543.tif 000034
を有する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
該化合物の乳酸塩を対象に投与する、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
癌がメシル酸イマチニブ(Gleevec)に耐性である、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、メシル酸イマチニブ(Gleevec)が対象に投与されており、そして該対象における癌がメシル酸イマチニブ(Gleevec)に耐性であることが判明した後に、該対象に投与することを含む、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
癌がBAY43-9006に耐性である、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、BAY43-9006が対象に投与されており、そして該対象における癌がBAY43-9006に耐性であることが判明した後に、該対象に投与することを含む、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
癌がブロスタリシン(Brostallicin)に耐性である、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、ブロスタリシンが対象に投与されており、そして該対象における癌がブロスタリシンに耐性であることが判明した後に、該対象に投与する、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
癌が胃腸間質性腫瘍(ＧＩＳＴ)である、請求項１から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
癌が急性骨髄性白血病である、請求項１から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
癌が慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、または腎臓細胞癌腫から選択される、請求項１から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
癌の処置方法であって：それを必要とする対象に、メシル酸イマチニブ(Gleevec)、BAY43-9006、ブロスタリシン、レナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、バタリニブ(vatalinib)(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、ベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、および／またはリツキシマブから選択される抗癌剤、および式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、該式Ｉの化合物が以下の式：
【化４】
2008540543.tif 000035
〔式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１０基、−ＮＲ１１Ｒ１２基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１３基、−ＮＲ１４Ｒ１５基、−ＳＲ１６基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１０およびＲ１３は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１１およびＲ１４は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ１２およびＲ１５は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；そして
Ｒ１６は置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択される。〕
を有する、方法。
【請求項１８】
対象に式IIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を含み、ここで、式IIの化合物ここで、式IIの化合物が以下の式：
【化５】
2008540543.tif 000036
を有し、そしてＲ７が置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択される置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基である、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であり、そして該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
対象に式IIIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、該式IIIの化合物が、以下の式：
【化６】
2008540543.tif 000037
を有する、請求項１７記載の方法。
【請求項２３】
該化合物の乳酸塩を対象に投与する、請求項１７から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、抗癌剤を対象に投与した後に該対象に投与する、請求項１７から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、抗癌剤が対象に投与される前に該対象に投与する、請求項１７から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、抗癌剤の少なくともいくつかを対象に投与するのと同時に対象に投与する、請求項１７から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
抗癌剤がメシル酸イマチニブ(Gleevec)である、請求項１７から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
抗癌剤がBAY43-9006である、請求項１７から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
抗癌剤がブロスタリシンである、請求項１７から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
癌が胃腸間質性腫瘍(ＧＩＳＴ)である、請求項１７から２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
癌が急性骨髄性白血病である、請求項１７から２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
癌が慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、または腎臓細胞癌腫から選択される、請求項１７から２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
安定な疾患状態または腫瘍サイズの縮小が、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物の投与後に対象において達成される、請求項１から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
抗癌剤および式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物を、薬剤耐性癌を有する対象の処置において同時に、別々にまたは連続して使用するための組み合わせ製剤として含み、ここで、該式Ｉの化合物が以下の式：
【化７】
2008540543.tif 000038
〔式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１０基、−ＮＲ１１Ｒ１２基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１３基、−ＮＲ１４Ｒ１５基、−ＳＲ１６基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１０およびＲ１３は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１１およびＲ１４は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ１２およびＲ１５は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；そして
Ｒ１６は置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択される。〕
を有する、治療組成物。
【請求項３５】
式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物が式IIの化合物、式IIの化合物の互変異性体、式IIの化合物の塩、式IIの化合物の塩の互変異性体、またはそれらの混合物であって、ここで、式IIの化合物が以下の式：
【化８】
2008540543.tif 000039
を有し、そしてＲ７が置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である、請求項３４記載の治療組成物。
【請求項３６】
Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択されるである、請求項３５記載の治療組成物。
【請求項３７】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であり、請求項３６記載の治療組成物。
【請求項３８】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であって、該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む、請求項３６記載の治療組成物。
【請求項３９】
式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物が式IIIの化合物、式IIIの化合物の互変異性体、式IIIの化合物の塩、式IIIの化合物の塩の互変異性体、またはそれらの混合物であって、ここで、該式IIIの化合物が、以下の式：
【化９】
2008540543.tif 000040
を有する、請求項３４記載の治療組成物。
【請求項４０】
治療組成物が該化合物の乳酸塩を含む、請求項３４から３９のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４１】
抗癌剤および該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物が一組成物として提供される、請求項３４から４０のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４２】
抗癌剤および該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物が別々にキットのパーツとして提供される、請求項３４から４０のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４３】
抗癌剤がメシル酸イマチニブ(Gleevec)である、請求項３４から４２のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４４】
抗癌剤がBAY43-9006である、請求項３４から４２のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４５】
抗癌剤がブロスタリシンである、請求項３４から４２のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４６】
薬剤耐性癌が胃腸間質性腫瘍(ＧＩＳＴ)である、請求項３４から４５のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４７】
薬剤耐性癌が急性骨髄性白血病である、請求項３４から４５のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４８】
薬剤耐性癌が慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、または腎臓細胞癌腫から選択される、請求項３４から４５のいずれかに記載の治療組成物。
(請求項４８)
薬剤耐性癌が固形癌である、請求項１−１３もしくは１７−２９に記載の方法、または請求項３４から４５のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項４９】
薬剤耐性癌が前立腺癌、腎臓癌、胃腸間質性腫瘍、サルコーマ、結腸直腸癌、乳癌、耳下腺癌、胃癌、黒色腫、食道癌、ＮＥＴ(副鼻腔)癌、結腸癌、卵巣癌、または肝臓癌から選択される、請求項１−１３もしくは１７−２９のいずれかに記載の方法、または請求項３４から４５のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項５０】
対象がヒト癌患者である、請求項１から３３のいずれかに記載の方法、または請求項３４から４９のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項５１】
癌がレナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、ゲフィチニブ(Iressa)、バタリニブ(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、または一般的モノクローナル抗体に耐性である、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項５２】
癌がベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、またはリツキシマブに耐性である、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、レナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、ゲフィチニブ(Iressa)、バタリニブ(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、または一般的モノクローナル抗体が対象に投与されており、そして該対象における癌がレナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、ゲフィチニブ(Iressa)、バタリニブ(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、または一般的モノクローナル抗体に耐性であることが判明した後に、該対象に投与する、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、ベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、またはリツキシマブが対象に投与されており、そして該対象における癌がベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、またはリツキシマブに耐性であることが判明した後に、該対象に投与する、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
抗癌剤がレナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、ゲフィチニブ(Iressa)、バタリニブ(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、ベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、またはリツキシマブから選択される、請求項１７から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
抗癌剤がレナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、バタリニブ(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、または一般的モノクローナル抗体から選択される、請求項３４から４２のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項５７】
抗癌剤がベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、またはリツキシマブから選択される、請求項３４から４２のいずれかに記載の治療組成物。
【請求項５８】
対象におけるキナーゼを阻害する方法であって：それを必要とする対象に、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、該対象は癌患者であり、そして該キナーゼは変異ゲートキーパー残基を含み、そして、式Ｉの化合物が以下の式：
【化１０】
2008540543.tif 000041
〔式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１０基、−ＮＲ１１Ｒ１２基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１３基、−ＮＲ１４Ｒ１５基、−ＳＲ１６基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１０およびＲ１３は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１１およびＲ１４は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ１２およびＲ１５は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；そして
Ｒ１６は置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択される。〕
を有する、方法。
【請求項５９】
対象に式IIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、が以下の式：
【化１１】
2008540543.tif 000042
を有し、そしてＲ７が置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択される、請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基である、請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であって、該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む、請求項６１記載の方法。
【請求項６３】
対象に式IIIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、該式IIIの化合物が、以下の式：
【化１２】
2008540543.tif 000043
を有する、請求項５８記載の方法。
【請求項６４】
該化合物の乳酸塩を対象に投与する、請求項５８から６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６５】
キナーゼが細胞質チロシンキナーゼまたは受容体チロシンキナーゼである、請求項５８から６４のいずれかに記載の方法。
【請求項６６】
キナーゼがＡＢＬ、ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲａ、ＥＧＦＲ、またはＦＬＴ３である、請求項５８から６４のいずれかに記載の方法。
【請求項６７】
キナーゼがＡＢＬ(Ｔ３１５Ｉ)である、請求項６６記載の方法。
【請求項６８】
キナーゼがＦＬＴ３(Ｄ８３５Ｙ)である、請求項６６記載の方法。
【請求項６９】
キナーゼがＥＧＦＲである、請求項６６記載の方法。
【請求項７０】
癌がメシル酸イマチニブ(Gleevec)、BAY43-9006、ブロスタリシン、レナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、ゲフィチニブ(Iressa)、バタリニブ(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、または一般的モノクローナル抗体に耐性である、請求項５８から６９のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
癌が胃腸間質性腫瘍、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、腎臓細胞癌腫、非小細胞性肺癌、または好酸球増加症候群(ＨＥＳ)から選択される、請求項５８から７０のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に癌の処置方法に関する。より具体的に、本発明は、薬剤耐性癌および薬剤耐性癌を有する患者の処置のための方法、および４−アミノ−５−フルオロ−３−[５−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン化合物のような４−アミノ置換キノリノンベンゾイミダゾリル化合物ならびにこのような化合物を含む医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
種々の化学化合物および組成物が、１種以上の血管内皮細胞増殖因子受容体チロシンキナーゼ(ＶＥＧＦ−ＲＴＫ)に対する活性を有するとして報告されている。例は、ＷＯ９８／１３３５０に記載のようなキノリン誘導体、アミノニコチンアミド誘導体(例えばＷＯ０１／５５１１４参照)、アンチセンス化合物(例えばＷＯ０１／５２９０４参照)、ペプチド摸倣物(例えばＷＯ０１／５２８７５参照)、キナゾリン誘導体(例えば米国特許６,２５８,９５１参照)、モノクローナル抗体(例えばＥＰ１０８６７０５Ａ１参照)、種々の５,１０,１５,２０−テトラアリール−ポルフィリンおよび５,１０,１５−トリアリール−コロール(例えばＷＯ００／２７３７９参照)、ヘテロ環式アルカンスルホン酸およびアルカンカルボン酸誘導体(例えばＤＥ１９８４１９８５参照)、オキソインドリルキナゾリン誘導体(例えばＷＯ９９／１０３４９参照)、１,４−ジアザアントラセン(diazaanthracine)誘導体(例えば米国特許５,７６３,４４１参照)、およびシンノリン誘導体(例えばＷＯ９７／３４８７６参照)、および種々のインダゾール化合物(例えばＷＯ０１／０２３６９およびＷＯ０１／５３２６８参照)を含む。
【０００３】
４−ヒドロキシキノロンおよび４−ヒドロキシキノリン誘導体の合成は、多くの文献に開示されている。例えば、Ukrainets et al. は、３−(ベンズイミダゾル−２−イル)−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１,２−ジヒドロキノリンの合成を開示している。Ukrainets, I. et al., Tetrahedron Left. 42, 7747-7748(1995); Ukrainets, I. et al., Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinii, 2, 239-241(1992)。Ukrainetsはまた、１Ｈ−２−オキソ−３−(２−ベンゾイミダゾリル)−４−ヒドロキシキノリンのような他の４−ヒドロキシキノロンおよびチオ類似体の合成、抗痙攣および抗甲状腺活性も開示している。Ukrainets, I. et al., Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinii, 1, 105-108(1993); Ukrainets, I. et al., Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinii, 8, 1105-1108(1993); Ukrainets, I. et al., Chem. Heterocyclic Comp. 33, 600-604, (1997)。
【０００４】
種々のキノリン誘導体の合成は、ＷＯ９７／４８６９４に開示されている。これらの化合物は、核ホルモン受容体に結合でき、そして骨芽細胞増殖および骨増殖の狙撃に有用であると開示されている。該化合物はまた核ホルモン受容体ファミリーと関連する疾患の処置または予防に有用であるとも開示されている。
【０００５】
キノリンのベンゼン環が硫黄基で置換された種々のキノリン誘導体がＷＯ９２／１８４８３に開示されている。これらの化合物は医薬製剤および薬剤として有用であると開示されている。
【０００６】
キノロンおよびクマリン誘導体は、薬剤および医薬製剤に無関係に種々の適用において使用されることが開示されている。光重合可能組成物において使用するための、または発光特性のためのキノロン誘導体の製造を記載する文献は：Okamoto et al.の米国特許５,８０１,２１２；ＪＰ８−２９９７３；ＪＰ７−４３８９６；ＪＰ６−９９５２；ＪＰ６３−２５８９０３；ＥＰ７９７３７６；およびＤＥ２３６３４５９を含む。
【０００７】
４−アミノ−５−フルオロ−３−[５−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンのようなキノリノンベンゾイミダゾリル化合物および４−アミノ置換キノリノンベンゾイミダゾリル化合物を含む多量の置換キノリノン化合物が、近年ＷＯ０２／２２５９８およびＷＯ２００４／０４３３８９のような文献に記載されている。このような化合物はＶＥＧＦ−ＲＴＫを阻害すると記載されているこのような化合物はまた公開米国特許出願Ｕ.Ｓ.２００２／０１０７３９２およびＵ.Ｓ.２００３／００２８０１８および米国特許６,６０５,６１７、６,７７４,２３７、および６,７６２,１９４に開示されている。ベンゾイミダゾリルキノリノンに関連するヘテロ環式化合物が、近年ＷＯ０２／１８３８３、Ｕ.Ｓ.２００２／０１０３２３０、および米国特許６,７５６,３８３に開示されている。他のこのような化合物は、セリン／スレオニンキナーゼおよびチロシンキナーゼの阻害におけるこのような化合物の新規使用と共に、ＷＯ２００４／０１８４１９、および２００３年８月１９日に出願され、以下の仮出願の優先権を主張しているＵ.Ｓ.２００４／００９２５３５：２００２年８月２３日出願の米国仮出願番号６０／４０５,７２９；２００２年１１月１３日出願の米国仮出願番号６０／４２６,１０７；２００２年１１月１３日出願の米国仮出願番号６０／４２６,２２６；２００２年１１月１３日出願の米国仮出願番号６０／４２６,２８２；２００２年１１月２１日出願の米国仮出願番号６０／４２８,２１０；２００３年４月３日出願の米国仮出願番号６０／４６０,３２７；２００３年４月３日出願の米国仮出願番号；２００３年４月３日出願の米国仮出願番号６０／４６０,４９３；２００３年６月１６日出願の米国仮出願番号６０／４７８,９１６；および２００３年７月１日出願の米国仮出願番号６０／４８４,０４８。さらに別の化合物、それらの合成法、それらの乳酸塩、およびそれらの使用は、２００４年１１月５日出願の以下の特許に開示されている：米国特許出願番号１０／９８３,１７４；米国特許出願番号１０／９８２,７５７；および米国特許出願番号１０／９８２,５４２３。この段落の各文献は、引用により、その全体として、かつすべての目的に関して、ここに完全に記載されているかのように本明細書に包含される。
【０００８】
種々の新規化合物が、近年癌の処置に有用であることが判明している。例えば、Gleevec(登録商標)(メシル酸イマチニブ)は、近年、多くの種々の癌において顕著な活性が示された化合物である。Gleevecは、２００１年の５月に最初に慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)の患者のために承認された。Novartisウェブサイトによると、Gleevecは、慢性期の新たに診断されたフィラデルフィア染色体陽性(Ｐｈ＋)ＣＭＬの成人患者の処置のために適応される。フォローアップは制限されている。Gleevecはまた、急性転化、加速期、または慢性期のｐＨ＋  ＣＭＬの患者で、インターフェロン−アルファ治療失敗の後にも適応される。Gleevecはまた、疾患が幹細胞移植後に再発したまたはインターフェロン−アルファ治療に耐性のｐＨ＋  慢性期ＣＭＬの小児患者にも適応される。Gleevecは、消化器間質腫瘍(ＧＩＳＴ)のような他の癌の患者への使用についても承認されている。例えば、２００２年２月１日に、ＦＤＡは、GleevecのＫＩＴ(ＣＤ１１７)陽性の切除不能なおよび／または転移性悪性ＧＩＳＴの癌の患者の処置へのNovartisの申請を承認した。
【０００９】
癌の処置における効果について現在試験中の他の新規治験薬は、BAY43-9006(ソラフェニブ)およびブロスタリシン(Brostallicin)を含む。BAY43-9006は、食品医薬品局(ＦＤＡ)により腎臓細胞癌腫の処置のためのオーファン・ドラッグとして承認されている。BAY43-9006は、腎臓癌の進行した形態である転移性腎臓細胞癌腫の処置について評価中である。同様の指示が、欧州医薬品庁(ＥＭＥＡ)のオーファン医薬品委員会による欧州連合(ＣＯＭＰ)により承認されている。BAY43-9006は新規ＲＡＦキナーゼおよびＶＥＧＦＲ阻害剤であり、二つの抗癌作用：腫瘍細胞増殖および腫瘍血管形成の阻害の組み合わせにより腫瘍増殖を予防すると考えられる。ブロスタリシン(PNU-166196)は、現在欧州および米国で第II相にあるジスタマイシンＡに構造的に関連した、合成α−ブロモアクリリック、第二世代ＤＮＡ副溝バインダーである。該化合物は、前臨床モデルで広い抗腫瘍活性を示し、他の副溝結合剤と比較して、ヒト造血前駆細胞におけるインビトロ骨髄毒性を劇的に減少させる。ブロスタリシンは、通常の抗腫瘍剤の細胞毒性が影響しないかまたは減少した条件下で、メルファラン耐性Ｌ１２１０マウス白血病細胞において親系よりも３倍高い活性を示す(各々ＩＣ５０＝０.４６および１.４５mg／mL)。
【００１０】
癌の処置のための医薬組成物の開発は著しく進んでいるが、癌の処置のための新規方法が必要である。とりわけ、薬剤耐性癌および薬剤耐性癌の患者の処置に有用な医薬組成物の製造に使用するための、医薬組成物および化合物が必要である。また、既知の抗癌剤と組み合わせて薬剤耐性癌の患者に投与し得る医薬組成物および化合物も必要である。
【発明の開示】
【００１１】
発明の要約
本発明は癌の処置方法、薬剤耐性癌の処置方法、およびキット、ならびに、薬剤耐性癌を有するような対象における癌の処置に使用するための治療組成物を提供する。
【００１２】
一つの局面において、本発明は薬剤耐性癌の処置方法を提供する。本方法は、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含む。ある態様において、該対象が薬剤耐性癌を有する癌患者である。本式Ｉの化合物が、以下の式を有する：
【化１】
2008540543.tif 000003
〔式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１０基、−ＮＲ１１Ｒ１２基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１３基、−ＮＲ１４Ｒ１５基、−ＳＲ１６基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１０およびＲ１３は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１１およびＲ１４は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ１２およびＲ１５は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；そして
Ｒ１６は置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択される。〕
を有する。
【００１３】
他の局面において、本発明は癌の処置方法を提供する。本方法は、それを必要とする対象に、メシル酸イマチニブ(Gleevec)、BAY43-9006、ブロスタリシン、レナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、バタリニブ(vatalinib)(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、ベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、および／またはリツキシマブ、および式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物から選択される抗癌剤を投与することを含む。式Ｉの化合物は、上記で定義の構造式および可変基を有する。
【００１４】
さらに別の局面において、本発明はキットおよび治療組成物を提供する。本キットおよび治療組成物は、抗癌剤および式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物を含む。本治療組成物は、抗癌剤および式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物を、薬剤耐性癌を有する対象の処置において同時に、別々にまたは連続して使用するための組み合わせ製剤として含む。式Ｉの化合物は、上記で定義の構造式および可変基を有する。
【００１５】
他の局面において、本発明は、対象におけるキナーゼの阻害方法を提供する。本方法は、それを必要とする対象に、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含む。式Ｉの化合物は、上記で定義の構造式および可変基を有し、対象は癌患者であり、そしてキナーゼは変異ゲートキーパー残基を含む。
【００１６】
本発明のさらなる目的、特性および利点は、以下の詳細な記載から明らかになるであろう。
【００１７】
図面の簡単な説明
図１は、ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を静脈注射後ＳＣＩＤベージュマウスのＩＶＩＳ造影システム(Xenogen)を使用して得た全身生物発光造影(ＢＬＩ)を示す、走査像である。
【００１８】
図２は、ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を注射し、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(２０mg／kg／日)で処置したＳＣＩＤベージュマウスが、媒体で処置したマウスと比較して、有意に低い平均光子数を示すことを示す、グラフである。
【００１９】
図３は、ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を静脈注射後のＳＣＩＤベージュマウスのＩＶＩＳ造影システム(Xenogen)を使用して得た全身ＢＬＩの走査像である。左側のＢＬＩは媒体で処置したマウスのものであり、右側のＢＬＩは４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物、２０mg／kg／日)で処置したマウスのものである。
【００２０】
図４は、ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を静脈注射し、その後、媒体(菱形)または４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(三角、２０mg／kg／日)のいずれかで処置したＳＣＩＤベージュマウスの生存率を比較するグラフである。
【００２１】
図５−７は、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、ＦＬＴ３標的発現を調節することを示すグラフであり、ＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１細胞に対する抗増殖性作用を証明する。図５において、ＭＶ４；１１(▲)またはＲＳ４；１１(ＦＬＴ３リガンド存在下)(■)を化合物１の連続希釈とインキュベートした。細胞生存能を、７２時間インキュベーション期間後にＭＴＳアッセイにより決定した。ＥＣ５０値を、非線形回帰を使用して計算した。図６において、血清欠乏ＭＶ４；１１(ＩＴＤ)細胞を、または図７において、ＲＳ４；１１(ＷＴ)細胞を、漸増濃度の化合物１と３時間インキュベートし、その後細胞溶解した。ＲＳ４；１１細胞をＦＬＴ３リガンド(１００ng／mlで１５分、示す通り刺激した。全細胞溶解物を抗ヒトＦＬＴ３抗体と免疫沈降させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分割した。免疫ブロットを抗ホスホチロシン抗体とプロットした(上のレーン)。膜を取り、抗ＦＬＴ３と再プロットして、ＦＬＴ３の等しい負荷を証明した(下のレーン)。ｐＦＬＴ３の変化を、デンシトメトリーを使用して、基線(処置なし)のパーセントとして報告する。
【００２２】
図８および９は、ＭＶ４；１１細胞における、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)によるＦＬＴ３仲介ＥＲＫおよびＳＴＡＴ５リン酸化の用量依存性阻害を示すグラフである。ＭＶ４；１１細胞(血清欠乏)を、種々の濃度の化合物１と３時間インキュベートし、細胞内ｐＥＲＫ(図８)をウェスタンブロットを使用して決定し、ｐＳＴＡＴ５(図９)をフローサイトメトリーを使用して決定した。ｐＥＲＫまたはｐＳＴＡＴ５の変化を、デンシトメトリーを使用して、基線(処置なし)のパーセントとして報告する。
【００２３】
図１０は、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、インビトロでＭＶ４；１１細胞による自己分泌ＶＥＧＦ産生を阻害することを示すグラフである。ＭＶ４；１１  ＡＭＬ細胞を１０％ＦＢＳ含有培地中、０.００１、０.０１、０.１、０.５および１μM  化合物１存在下または非存在下で４８時間インキュベートした。上清をヒトＶＥＧＦレベルについて分析した(細胞タンパク質含量について標準化)。
【００２４】
図１１は、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの腫瘍異種移植片におけるＦＬＴ３およびＳＴＡＴ５リン酸化を阻害することを示す、グラフである。皮下ＭＶ４；１１腫瘍(３００mm３；ｎ＝３マウス／群)を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスを、媒体または１０mg／kg  化合物１のいずれかで５日間処置した。腫瘍を５日目に、投与４、８、２４、および４８時間後に切除し、粉砕し、そして直ぐに急速冷凍した(−７０℃)。ｐＦＬＴ３またはｐＳＴＡＴ５調節に関して：腫瘍溶解物を抗ヒトＦＬＴ３または抗ＳＴＡＴ５抗体のいずれかと免疫沈降させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分割した。免疫ブロットを適当な抗ホスホチロシン抗体とプローブした(上のレーン)。膜を取り、負荷コントロールとして全ＦＬＴ３またはＳＴＡＴ５タンパク質を決定するために、抗ＦＬＴ３または抗ＳＴＡＴ５のいずれかと再プローブした(下のレーン)。各レーンは異なる腫瘍を示す。
【００２５】
図１２−１６は、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスのヒトＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１白血病腫瘍の皮下異種移植モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)の抗腫瘍活性を示すグラフである。(図１２)ＭＶ４；１１または(図１３)ＲＳ４；１１細胞を、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝１０マウス／群)の右脇腹にｓ.ｃ．で移植した。ＭＶ４；１１試験において、媒体(◇)または１(●)、５(▲)、または３０(■)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、１５日間経口投与した。ＲＳ４；１１試験において、媒体(◇)または１０(▲)、３０(■)、１００(◆)または１５０(●)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、８日間経口投与した。(図１４)ＭＶ４；１１腫瘍に対する化合物１の毎日の、断続的な、および周期的投与レジメンの効果。化合物１を、毎日(■)、１日おき／ｑ.ｏ.ｄ.(●)または７日投与／７日休薬の周期(Ｘ)のいずれかで３０mg／kgの投与量で経口投与した。(図１５)化合物１は、大きなＭＶ４；１１腫瘍の緩解をもたらした。ＭＶ４；１１ 皮下腫瘍(ｎ＝１０マウス／群)を３００(▲)、５００(■)または１０００(●)mm３に分類した。媒体(＋)処置腫瘍は、２０００mm３の最大腫瘍容積まで測定された(図１６では１０００mm３までしか示していない)。化合物１を３０mg／kg／日で経口投与した(第一サイクル)。投与を５０日間止め、そして応答の永続性をその後測定した。(図１６)３０mg／kg／日×５０日間での前処置後の再発ＭＶ４；１１腫瘍を、３０mg／kg／日で再処置した(第二サイクル)。パネルＡＤはデータを平均腫瘍容積±ＳＥ(ｎ＝１０マウス／群)で示し、パネルＥは個々のマウスの腫瘍容積を記す(ｎ＝１０)。
【００２６】
図１７−１９は、３０mg／kg  ４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)で処置したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにおけるＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１腫瘍の腫瘍アポトーシス／壊死および細胞増殖の阻害を示すグラフである。(図１７)３０mg／kg  化合物１処置に対する初期ＭＶ４；１１腫瘍応答。皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｅ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｆ−ｊ)のいずれかで５日間処置した。腫瘍を２−５日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｆ−１日目)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｇ−５日目)、ｐＥＲＫ(ｃ、ｈ  ５日目)、開裂カスパーゼ−３(ｄ、ｉ−５日目)またはＰＡＲＰ(ｅ、ｊ−日目)で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。図１７は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１８)３０mg／kg  化合物１処置後のＲＳ４；１１腫瘍の免疫組織化学。ＲＳ４；１１腫瘍(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｃ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｄ−ｆ)のいずれかで処置した。腫瘍を９日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｄ)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｅ)、またはｐＥＲＫ(ｃ、ｆ)で免疫染色した。図１８は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１９)皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体または化合物１  ３０mg／kg／日のいずれかで処置した。媒体処置腫瘍を１５日目に切除し、化合物１処置腫瘍を８９日目に処置した(５０日間化合物１の毎日の投与＋３９日間処置なし)。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシンで染色するか、またはＫｉ６７で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。(ａ)媒体(Ｈ＆Ｅ、１５日目)；(ｂ)媒体(Ｋｉ６７、１５日目)；(ｃ)化合物１、部分応答(Ｈ＆Ｅ、８９日目)；(ｄ)化合物１、部分応答(Ｋｉ６７、８９日目)および(ｅ)化合物１、完全寛解(Ｈ＆Ｅ、８９日目)。ｃ、ｄ中の矢印は、壊死／瘢痕組織に分散する生存可能細胞を指す。図１９は、ｎ＝３−５の処置腫瘍からの代表的切片を示す。撮像倍率を図上に示す。
【００２７】
図２０および２１は、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、静脈内ＭＶ４；１１細胞を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの寿命を延ばすことを示すグラフである。照射したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにＭＶ４；１１(１×１０７細胞、ｉ.ｖ.)、ｉ.ｖ．で移植した。処置を２３日目に開始し、２３−９８日目まで経口媒体(◆)または化合物１  ２０mg／kg  毎日投与(▲)または計画的７日投与／７日休薬(■)のいずれかで処置した。後肢麻痺の初期徴候を発症したまたは悪い健康状態のマウスは殺した。図２０はカプラン−マイヤー生存率対時間プロットを示す(ｎ＝１０−１２マウス／群)。(図２１)ＭＶ４；１１細胞ｉ.ｖ.接種後のＢＭのフローサイトメトリーまたは組織病理学的評価。処置は、媒体(ａ−ｃ)または化合物１  ２０mg／kg／日(ｄ−ｆ；２３−９８日目)のいずれかを含む。大腿骨を５１日目(ａ−ｄ)または１６７日目(ｅ、ｆ)のいずれかに回収し、ＢＭを単離し、フローサイトメトリー(ａ,ｄ)を使用して、％ヒトＭＶ４；１１細胞を分析した。ＢＭ細胞を抗ヒトＨＬＡＡ、Ｂ,Ｃ−ＦＩＴＣ(ヒトＭＨＣ−Ｉ上の着色エピトープ、黒線)またはアイソタイプ−対照抗体(点線)のいずれかで染色した。移植した細胞を適当なゲーティング後に同定し、抗ヒトＨＬＡ−Ａ,Ｂ,Ｃ(マーカー)について陽性染色した。媒体処置(５１日目)または化合物１処置(１６７日目)マウスのＢＭ標本をＨ＆Ｅ(ｂ、ｅ)で組織化学的に、またはマウスＢＭ中のヒトＭＶ４；１１細胞を染色する抗ヒトミトコンドリア抗体(ｃ、ｆ)で免疫染色した。倍率４００×；矢印は、同定されたＭＶ４；１１細胞(ｂ、ｃ)を指す。
【００２８】
図２２は、本発明の化合物がどのようにクラスIII、IV、およびＶ受容体チロシンキナーゼを阻害するかを示す模式図である(また種々のＲＴＫに対する４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの活性の表も参照)。
【００２９】
図２３ａおよび２３ｂは、媒体および４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン処置の日数の関数として腫瘍容積をプロットするグラフである。これらのグラフは、化合物１での処置が、大きな、確立された結腸異種移植片を有する動物の９０−１００％を緩解および／または病態安定化することを示す(ヌードマウス中のＫＭ１２Ｌ４Ａヒト結腸腫瘍異種移植片に、腫瘍が５００mm３(２３ａ)または１０００mm３(２３ｂ)が到達したとき毎日化合物１を投与した)。
【００３０】
図２４は、化合物１(ＣＨＩＲ２５８)で処置したイマチニブ難治性ＧＩＳＴを有するヒト女性患者の走査したＰＥＴ−ＣＴ像である。
【００３１】
図２５ａおよび２５ｂは、化合物１を投与したとき、血漿暴露が比例して増加することを示す、平均Ｃｍａｘ(ng／mL)対投与量および平均ＡＵＣ(０、tlast(ng＊ｈ／mL)のグラフである。
【００３２】
図２６は、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンが末梢血白血球(ＰＢＬ)における基底ＥＲＫリン酸化を阻害することを示す、ウェスタンブロットの走査像である。陽性対照サンプルは、臨床サンプルと同様に処理した正常ドナーからの血液細胞である。
【００３３】
発明の詳細な記載
本発明は癌の処置方法、薬剤耐性癌の処置方法、ならびに薬剤耐性癌を有する対象のような対象における癌の処置に使用するためのキットおよび治療組成物を提供する。該化合物は受容体チロシンキナーゼのアンタゴニストとして作用し、そして、より特に、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβ、ｂＦＧＦおよび／またはＶＥＧＦ−ＲＴＫ機能の阻害剤として作用する。このような化合物はまた他のチロシンキナーゼに関しておよびまた種々のセリン／スレオニンキナーゼに関して、強力な活性も有する。ここで提供される該化合物は、例えば、ＶＥＧＦ−ＲＴＫの阻害剤が必要な患者の処置において有用な、とりわけ、毛細血管増殖の低下、および癌、特に薬剤耐性癌の処置のための組成物および方法において使用するための、医薬製剤に製剤医できる。
【００３４】
以下の略語および定義を、本明細書を通して使用する：
【００３５】
“ＡＭＬ”は急性骨髄性白血病を表す略語である。
【００３６】
“ＡＬＳ”は、筋萎縮性側索硬化症を表す略語である。
【００３７】
“ＡＤ”はアルツハイマー病を表す略語である。
【００３８】
“ＡＰＰ”はアミロイド前駆体タンパク質を表す略語である。
【００３９】
“ＡＳＣＴ”は自己幹細胞移植を表す略語である。
【００４０】
“ＢＭ”は骨髄を表す略語である。
【００４１】
“ｂＦＧＦ”は塩基性線維芽細胞増殖因子を表す略語である。
【００４２】
“ＦＧＦＲ１”はまたｂＦＧＦＲとも言われ、線維芽細胞増殖因子ＦＧＦと相互作用するチロシンキナーゼを表す略語である。
【００４３】
“Ｃｄｃ２”は細胞分裂周期２を表す略語である。
【００４４】
“Ｃｄｋ２”はサイクリン依存性キナーゼ２を表す略語である。
【００４５】
“Ｃｄｋ４”はサイクリン依存性キナーゼ４を表す略語である。
【００４６】
“Ｃｈｋ１”はチェックポイントキナーゼ１を表す略語である。
【００４７】
“ＣＫ１ε”は、カゼインキナーゼ１(イプシロン)を表すセリン／スレオニンキナーゼである。
【００４８】
“ｃ−ＡＢＬ”は、アベルソン白血病ウィルスから元々単離された癌遺伝子産物を表すチロシンキナーゼの略語である。
【００４９】
“Ｃ−Ｋｉｔ”はまた幹細胞因子受容体または肥満細胞増殖因子受容体としても既知である。
【００５０】
“ＦＧＦ”は、ＦＧＦＲ１と相互作用する線維芽細胞増殖因子の略語である。
【００５１】
“ＦＧＦＲ３”は、多発性骨髄腫型癌においてしばしば発現されるチロシンキナーゼ線維芽細胞増殖因子受容体３を表す略語である。
【００５２】
“Ｆｌｋ−１”は、胎児肝臓チロシンキナーゼ１を表す略語であり、キナーゼ挿入ドメインチロシンキナーゼまたはＫＤＲ(ヒト)としても既知であり、血管内皮細胞増殖因子受容体−２またはＶＥＧＦＲ２(ＫＤＲ(ヒト)、Ｆｌｋ−１(マウス))としても既知である。
【００５３】
“ＦＬＴ−１”はｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１を表す略語であり、血管内皮細胞増殖因子受容体−１またはＶＥＧＦＲ１としても既知である。
【００５４】
“ＦＬＴ−３”はｆｍｓ様チロシンキナーゼ−３を表す略語であり、幹細胞チロシンキナーゼＩ(ＳＴＫ  Ｉ)としても既知である。
【００５５】
“ＦＬＴ−４”はｆｍｓ様チロシンキナーゼ−４を表す略語であり、ＶＥＧＦＲ３としても既知である。
【００５６】
“Ｆｙｎ”は、ＳＲＣ、ＦＧＲ、ＹＥＳに関連するＦＹＮ癌遺伝子キナーゼを表す略語である。
【００５７】
“ＧＳＫ−３”はグリコーゲンシンターゼキナーゼ３を表す略語である。
【００５８】
“ＰＡＲ−１”は、ほつれ関連(disheveled associated)キナーゼとしても既知のキナーゼを表す略語であり、またＨＤＡＫとしても既知である。
【００５９】
“Ｌｃｋ”はリンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼを表す略語である。
【００６０】
“ＭＥＫ１”は、Ｒａｆ−ＭＥＫ１−ＥＲＫの形を成すモジュール中のＭＡＰＫ(マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ)シグナル伝達経路におけるセリンスレオニンキナーゼを表す略語である。ＭＥＫ１はＥＲＫ(細胞外調節キナーゼ)をリン酸化する。
【００６１】
“ＭＭ”は多発性骨髄腫を表す略語である。
【００６２】
“ＮＥＫ−２”はＮＩＭ−Ａ関連キナーゼを表す略語である。
【００６３】
“ＮＩＭ−Ａ”はnever in mitosisを表す略語である。
【００６４】
“ＰＤＧＦ”は血小板由来増殖因子を表す略語である。ＰＤＧＦはチロシンキナーゼＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβと相互作用する。
【００６５】
“Ｒｓｋ２”はリボソームＳ６キナーゼ２を表す略語である。
【００６６】
“Ｒａｆ”は、ＭＡＰＫシグナル伝達経路におけるセリン／スレオニンキナーゼである。
【００６７】
“ＲＴＫ”は受容体チロシンキナーゼを表す略語である。
【００６８】
“Ｔｉｅ−２”はＩｇおよびＥＧＦ相同ドメインを有するチロシンキナーゼを表す略語である。
【００６９】
“ＶＥＧＦ”は血管内皮細胞増殖因子を表す略語である。
【００７０】
“ＶＥＧＦ−ＲＴＫ”は血管内皮細胞増殖因子受容体チロシンキナーゼを表す略語である。
【００７１】
一般に、水素またはＨのようなある元素への言及は、その元素の全ての同位体を含むことを意図する。例えば、Ｒ基が水素またはＨを含むと定義されているならば、それはまた重水素およびトリチウムを含む。
【００７２】
用語“非置換アルキル”は、ヘテロ原子を含まないアルキル基を意味する。故に、本用語は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなどのような直鎖アルキル基を含む。本用語はまた、例示の目的で提供する以下のものを含むが、これらに限定されない直鎖アルキル基の分枝鎖異性体も含む：−ＣＨ(ＣＨ３)２、−ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２ＣＨ３)、−ＣＨ(ＣＨ２ＣＨ３)２、−Ｃ(ＣＨ３)３、−Ｃ(ＣＨ２ＣＨ３)３、−ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２、−ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２ＣＨ３)、−ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ２ＣＨ３)２、−ＣＨ２Ｃ(ＣＨ３)３、−ＣＨ２Ｃ(ＣＨ２ＣＨ３)３、−ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２ＣＨ３)、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２ＣＨ３)、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ２ＣＨ３)２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ(ＣＨ３)３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ(ＣＨ２ＣＨ３)３、−ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)２、−ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)２、−ＣＨ(ＣＨ２ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２ＣＨ３)−およびその他。本用語はまたシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルのようなシクロアルキル基、および上記で定義の直鎖および分枝鎖アルキル基で置換されたこのような環のような、環状アルキル基も含む。本用語はまたアダマンチル、ノルボルニル、およびビシクロ[２.２.２]オクチルならびに上記で定義の直鎖および分枝鎖アルキル基で置換されたこのような環を含むが、これらに限定されない多環状アルキル基も含む。故に、用語非置換アルキル基は、１級アルキル基、２級アルキル基、および３級アルキル基を含む。非置換アルキル基は、親化合物中の１個以上の炭素原子、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子に結合し得る。好ましい非置換アルキル基は、１個から２０個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖アルキル基ならびに環状アルキル基を含む。より好ましいこのような非置換アルキル基は１個から１０個の炭素原子を有し、さらに好ましいこのような基は、１個から５個の炭素原子を有する。最も好ましい非置換アルキル基は、１個から４個のまたは１個から３個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖アルキル基を含み、そしてメチル、エチル、プロピル、および−ＣＨ(ＣＨ３)２を含む。
【００７３】
用語“置換アルキル”は、炭素または水素への１箇所以上の結合が、ハライドにおけるＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩのようなハロゲン原子；ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、およびエステル基のような基における酸素原子；チオール基、アルキルおよびアリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基、およびスルホキシド基のような基の硫黄原子；アミン、アミド、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミド、およびエナミンのような基における窒素原子；トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、およびトリアリールシリル基のような基におけるケイ素原子；および種々の他の基における他のヘテロ原子を含むが、これらに限定されない非水素および非炭素原子への結合により置換されている、上記で定義の非置換アルキル基を意味する。置換アルキル基はまた、１個以上の炭素または水素原子への結合が、カルボニル、カルボキシル、およびエステル基における酸素；イミン、オキシム、ヒドラゾン、およびニトリルのような基における窒素のようなヘテロ原子への結合で置換された基も含む。好ましい置換アルキル基は、とりわけ、炭素または水素原子への１個以上の結合が、フッ素原子への１個以上の結合により置換されているアルキル基を含む。置換アルキル基の一例は、トリフルオロメチル基およびトリフルオロメチル基を含む他のアルキル基である。他のアルキル基は、炭素または水素原子への１個以上の結合が、置換アルキル基がヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ基、またはヘテロシクリルオキシ基を含むように酸素原子で置換されたアルキル基を含む。さらに別のアルキル基は、アミン、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、(アルキル)(アリール)アミン、ジアリールアミン、ヘテロシクリルアミン、(アルキル)(ヘテロシクリル)アミン、(アリール)(ヘテロシクリル)アミン、またはジヘテロシクリルアミン基を有するアルキル基を含む。
【００７４】
用語“非置換アリール”は、ヘテロ原子を含まないアリール基を意味する。故に、例示の目的で、本用語は、のようなフェニル、ビフェニル、アントラセニル、およびナフチル基を含むが、これらに限定されない。用語“非置換アリール”はナフタレンのような縮合環を含むが、トリルのようなアリール基が、ここでは以下に記載の置換アリール基であると見なされるため、環員の一個に結合したアルキルまたはハロ基のような他の基を有するアリール基を含まない。好ましい非置換アリール基はフェニルである。ある態様において、非置換アリール基は６個から１４個の炭素原子を有する。非置換アリール基は、親化合物における１個以上の炭素原子、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子に結合していてよい。
【００７５】
用語“置換アリール基”は、非置換アリール基に対して、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を有する。しかしながら、置換アリール基はまた、芳香族性炭素の１個が上記の非炭素または非水素原子の１個に結合しているアリール基を含み、また、アリール基の１個以上の芳香族性炭素がここに定義の置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、またはアルキニル基に結合しているアリール基も含む。これは、アリール基の２個の炭素原子が、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基の２個の原子と結合し、縮合環系(例えばジヒドロナフチルまたはテトラヒドロナフチル)を定義する結合配置も含む。故に、用語“置換アリール”は、トリル、およびとりわけヒドロキシフェニルを含むが、これらに限定されない。
【００７６】
用語“非置換アルケニル”は、２個の炭素原子間に少なくとも１個の２重結合が存在する以外、上記で定義の非置換アルキル基に関して記載のような直鎖および分枝鎖および環状基を意味する。例は、ビニル、−ＣＨ＝Ｃ(Ｈ)(ＣＨ３)、−ＣＨ＝Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ(ＣＨ３)＝Ｃ(Ｈ)２、−Ｃ(ＣＨ３)＝Ｃ(Ｈ)(ＣＨ３)、−Ｃ(ＣＨ２ＣＨ３)＝ＣＨ２、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、およびとりわけヘキサジエニルを含むが、これらに限定されない。ある態様において、非置換アルケニル基は２個から８個の炭素原子を有する。
【００７７】
用語“置換アルケニル”は、非置換アルケニル基に対して、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を有する。置換アルケニル基は、１個の非炭素または非水素原子が、他の炭素と２重結合した炭素に結合したアルケニル基および非炭素または非水素原子の１個が他の炭素との２重結合に関与しない炭素に結合したアルケニル基を含む。
【００７８】
用語“非置換アルキニル”は、２個の炭素原子間に少なくとも１個の３重結合が存在する以外、上記で定義の非置換アルキル基に関して記載のような直鎖および分枝鎖および環状基を意味する。例は、−Ｃ≡Ｃ(Ｈ)、−Ｃ≡Ｃ(ＣＨ３)、−Ｃ≡Ｃ(ＣＨ２ＣＨ３)、−Ｃ(Ｈ２)Ｃ≡Ｃ(Ｈ)、−Ｃ(Ｈ)２Ｃ≡Ｃ(ＣＨ３)、およびとりわけ−Ｃ(Ｈ)２Ｃ≡Ｃ(ＣＨ２ＣＨ３)を含むが、これらに限定されない。ある態様において、非置換アルキニル基は２個から８個の炭素原子を有する。
【００７９】
用語“置換アルキニル”は、非置換アルキニル基に対して、置換アルキル基が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を有する。置換アルキニル基は、１個の非炭素または非水素原子が、他の炭素と３重結合した炭素に結合したアルキニル基および非炭素または非水素原子の１個が他の炭素との３重結合に関与しない炭素に結合したアルキニル基を含む。
【００８０】
用語“非置換ヘテロシクリル”は、３個以上の環員を含み、その中の１個以上がＮ、Ｏ、およびＳのようなしかしこれらに限定されないヘテロ原子である、キヌクリジル(quinuclidiyl)のような、単環式、二環式、および多環状環化合物を含む、芳香族性および非芳香環化合物の両方を意味する。用語“非置換ヘテロシクリル”は、ベンゾイミダゾリルのような縮合ヘテロ環式環を含むが、２−メチルベンゾイミダゾリルのような化合物置換ヘテロシクリル基であるため、環員の１個がアルキルまたはハロのような他の基に結合したヘテロシクリル基は含まない。ヘテロシクリル基の例は、以下を含むがこれらに限定されない：ピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ジヒドロピリジニル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル(例えば４Ｈ−１,２,４−トリアゾリル、１Ｈ−１,２,３−トリアゾリル、２Ｈ−１,２,３−トリアゾリルなど)、テトラゾリル、(例えば１Ｈ−テトラゾリル、２Ｈ−テトラゾリルなど)を含むが、これらに限定されない１個から４個の窒素原子を含む不飽和３から８員環；ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニルを含むが、これらに限定されない１個から４個の窒素原子を含む飽和３から８員環；インドリル、イソインドリル、インドリニル、インドリジニル、ベンゾイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリルを含むが、これらに限定されない１個から４個の窒素原子を含む縮合不飽和ヘテロ環式基；オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル(例えば１,２,４−オキサジアゾリル、１,３,４−オキサジアゾリル、１,２,５−オキサジアゾリルなど)を含むが、これらに限定されない１個から２個の酸素原子および１個から３個の窒素原子を含む不飽和３から８員環；モルホリニルを含むが、これに限定されない１個から２個の酸素原子および１個から３個の窒素原子を含む飽和３から８員環；１個から２個の酸素原子および１個から３個の窒素原子を含む不飽和縮合ヘテロ環式基、例えば、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサジニル(例えば２Ｈ−１,４−ベンゾオキサジニルなど)；チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル(例えば１,２,３−チアジアゾリル、１,２,４−チアジアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、１,２,５−チアジアゾリルなど)を含むが、これらに限定されない１個から３個の硫黄原子および１個から３個の窒素原子を含む不飽和３から８員環；チアゾロジニル(thiazolodinyl)を含むが、これに限定されない１個から２個の硫黄原子および１個から３個の窒素原子を含む、飽和３から８員環；チエニル、ジヒドロジチイニル、ジヒドロジチオニル、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピランを含むが、これらに限定されない１個から２個の硫黄原子を含む飽和および不飽和３から８員環；ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアジニル(例えば２Ｈ−１,４−ベンゾチアジニルなど)、ジヒドロベンゾチアジニル(例えば２Ｈ−３,４−ジヒドロベンゾチアジニルなど)を含むが、これらに限定されない１個から２個の硫黄原子および１個から３個の窒素原子を含む不飽和縮合ヘテロ環式環、フリルを含むが、これに限定されない酸素原子を含む不飽和３から８員環；ベンゾジオキソリル(例えば１,３−ベンゾジオキソリルなど)のような１個から２個の酸素原子を含む不飽和縮合ヘテロ環式環；ジヒドロオキサチイニルを含むが、これに限定されない１個の酸素原子および１個から２個の硫黄原子を含む不飽和３から８員環；１,４−オキサチアンのような１個から２個の酸素原子および１個から２個の硫黄原子を含む飽和３から８員環；ベンゾチエニル、ベンゾジチイニルのような１個から２個の硫黄原子を含む不飽和縮合環；およびベンズオキサチイニルのような１個の酸素原子および１個から２個の酸素原子を含む不飽和縮合ヘテロ環式環。ヘテロシクリル基はまた、環中の１個以上のＳ原子が、１個または２個酸素原子と２重結合している(スルホキシドおよびスルホン)上記のものを含む。例えば、ヘテロシクリル基は、テトラヒドロチオフェンオキシド、およびテトラヒドロチオフェン１,１−ジオキシドを含む。好ましいヘテロシクリル基は５または６環員を含む。より好ましいヘテロシクリル基はモルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、イミダゾール、ピラゾール、１,２,３−トリアゾール、１,２,４−トリアゾール、テトラゾール、チオフェン、チオモルホリン、チオモルホリンのＳ原子が１個以上のＯ原子と結合しているチオモルホリン、ピロール、ホモピペラジン、オキサゾリジン−２−オン、ピロリジン−２−オン、オキサゾール、キヌクリジン、チアゾール、イソキサゾール、フラン、およびテトラヒドロフランを含む。
【００８１】
用語“置換ヘテロシクリル”は、環員の１個以上が置換アルキル基および置換アリール基に関して上記で定義のような非水素原子に結合している、上記で定義の非置換ヘテロシクリル基を意味する。例は、２−メチルベンゾイミダゾリル、５−メチルベンゾイミダゾリル、５−クロロベンズチアゾリル、１−メチルピペラジニルのようなＮ−アルキルピペラジニル基、ピペラジン−Ｎ−オキシド、Ｎ−アルキルピペラジンＮ−オキシド、２−フェノキシ−チオフェン、およびとりわけ２−クロロピリジニルを含むが、これらに限定されない。加えて、置換ヘテロシクリル基はまた非水素原子への結合が、置換および非置換アリール、置換および非置換アラルキル、または非置換ヘテロシクリル基の一部である炭素原子への結合であるヘテロシクリル基も含む。例は、１−ベンジルピペリジニル、３−フェニルチオモルホリニル、３−(ピロリジン−１−イル)−ピロリジニル、および４−(ピペリジン−１−イル)−ピペリジニルを含むが、これらに限定されない。Ｎ−メチルピペラジンのようなＮ−アルキル置換ピペラジン基、置換モルホリン基、ならびにピペラジンＮ−オキシドおよびＮ−アルキルピペラジンＮ−オキシドのようなピペラジンＮ−オキシド基のような基は、いくつかの置換ヘテロシクリル基の例である。Ｎ−メチルピペラジンなどのようなＮ−アルキル置換ピペラジン基のような置換ピペラジン基、置換モルホリン基、ピペラジンＮ−オキシド基、およびＮ−アルキルピペラジンＮ−オキシド基は、Ｒ６またはＲ７基としてとりわけ適するいくつかの置換ヘテロシクリル基の例である。
【００８２】
用語“非置換ヘテロシクリルアルキル”は、非置換アルキル基の水素または炭素結合が、上記で定義のヘテロシクリル基への結合で置換された、上記で定義の非置換アルキル基を意味する。例えば、メチル(−ＣＨ３)は非置換アルキル基である。メチル基の水素原子がヘテロシクリル基への結合で置換されており、例えば、メチルの炭素がピリジンの２位の炭素(炭素の一方はピリジンのＮに結合している)またはピリジンの３位または４位の炭素に結合しているならば、該化合物が非置換ヘテロシクリルアルキル基である。
【００８３】
用語“置換ヘテロシクリルアルキル”は、非置換ヘテロシクリルアルキル基に対して、置換アラルキル基が非置換アラルキル基に対して有するのと同じ意味を有する。しかしながら、置換ヘテロシクリルアルキル基はまた、非水素原子が、ピペリジニルアルキル基のピペリジン環における窒素原子のような、しかしこれに限定されないヘテロシクリルアルキル基のヘテロシクリル基におけるヘテロ原子に結合している基も含む。加えて、置換ヘテロシクリルアルキル基はまた、本基のアルキル部分の炭素結合または水素結合が、置換および非置換アリールまたは置換および非置換アラルキル基への結合で置換された基も含む。例は、フェニル−(ピペリジン−１−イル)−メチルおよびフェニル−モルホリン−４−イル)−メチルを含むが、これらに限定されない。
【００８４】
用語“非置換アルコキシ”は、水素原子への結合が、それ以外は上記で定義の非置換アルキル基の通りである炭素原子への結合で置換されたヒドロキシル基(−ＯＨ)を意味する。
【００８５】
用語“置換アルコキシ”は、水素原子への結合が、それ以外は上記で定義の置換アルキル基の通りである炭素原子への結合で置換されたヒドロキシル基(−ＯＨ)を意味する。
【００８６】
用語“非置換ヘテロシクリルオキシ”は、水素原子への結合が、それ以外は上記で定義の非置換ヘテロシクリル基の通りである環原子への結合で置換されたヒドロキシル基(−ＯＨ)を意味する。
【００８７】
用語“置換ヘテロシクリルオキシ”は、水素原子への結合が、それ以外は上記で定義の置換ヘテロシクリル基の通りである環原子への結合で置換されたヒドロキシル基(−ＯＨ)を意味する。
【００８８】
用語“非置換アリールオキシアルキル”は、炭素結合または水素結合が上記で定義の非置換アリール基に結合した酸素原子への結合で置換された、上記で定義の非置換アルキル基を意味する。
【００８９】
用語“置換アリールオキシアルキル”は、アリールオキシアルキル基のアルキル基の炭素または水素への結合が、置換アルキル基に関して上記の非炭素および非水素原子への結合である、またはアリールオキシアルキル基のアリール基が上記で定義の置換アリール基である、上記で定義の非置換アリールオキシアルキル基を意味する。
【００９０】
用語“非置換ヘテロシクリルオキシアルキル”は、炭素結合または水素結合が、上記で定義の非置換ヘテロシクリル基に結合した酸素原子への結合で置換された、上記で定義の非置換アルキル基を意味する。
【００９１】
用語“置換ヘテロシクリルオキシアルキル”は、ヘテロシクリルオキシアルキル基のアルキル基の炭素または水素基への結合が、置換アルキル基に関して上記の非炭素および非水素原子への結合である、またはヘテロシクリルオキシアルキル基のヘテロシクリル基が上記で定義の置換ヘテロシクリル基である、上記で定義の非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基を意味する。
【００９２】
用語“非置換ヘテロシクリルアルコキシ”は、炭素結合または水素結合が、親化合物に結合した酸素原子で置換されている、および非置換アルキル基の他の炭素または水素結合が上記で定義の非置換ヘテロシクリル基への結合である、上記で定義の非置換アルキル基を意味する。
【００９３】
用語“置換ヘテロシクリルアルコキシ”は、ヘテロシクリルアルコキシ基のアルキル基の炭素または水素基への結合が、置換アルキル基に関して上記の非炭素および非水素原子への結合である、またはヘテロシクリルアルコキシ基のヘテロシクリル基が、上記で定義の置換ヘテロシクリル基である、上記で定義の非置換ヘテロシクリルアルコキシ基を意味する。さらに、置換ヘテロシクリルアルコキシ基はまた、本基のアルキル部分への炭素結合または水素結合が、１個以上のさらなる置換および非置換ヘテロ環で置換された基も含む。例は、ピリド−２−イルモルホリン−４−イルメチルおよび２−ピリド−３−イル−２−モルホリン−４−イルエチルを含むが、これらに限定されない。
【００９４】
用語“非置換アルコキシアルキル”は、炭素結合または水素結合が、上記で定義の非置換アルキル基に結合した酸素原子への結合で置換された、上記で定義の非置換アルキル基を意味する。
【００９５】
用語“置換アルコキシアルキル”は、アルコキシアルキル基のアルキル基および／またはアルコキシ基の炭素または水素基への結合が、置換アルキル基に関して上記の非炭素および非水素原子への結合である、上記で定義の非置換アルコキシアルキル基を意味する。
【００９６】
ヒドロキシル基、アミン基、およびスルフヒドリル基に関する用語“保護された”は、Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, T.W.;Wuts, P. G. M., John Wiley & Sons, New York, NY, (3rd Edition, 1999)に明示されている基のような当業者に既知の保護基で、望ましくない反応から保護されたこのような官能基を意味し、該保護基はその中に明示の方法を使用して不可または除去できる。保護されたヒドロキシル基の例は、ｔ−ブチルジメチル−クロロシラン、トリメチルクロロシラン、トリイソプロピルクロロシラン、トリエチルクロロシランのような、しかしこれらに限定されない試薬とヒドロキシル基の反応により得られるようなシリルエーテル；メトキシメチルエーテル、メチルチオメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｔ−ブトキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、１−エトキシエチルエーテル、アリルエーテル、ベンジルエーテルを含むが、これらに限定されない置換メチルおよびエチルエーテル；ベンゾイルホルメート、ホルメート、アセテート、トリクロロアセテート、およびトリフルオロアセテートのような、しかしこれらに限定されないエステルを含むが、これらに限定されない。保護されたアミン基の例は、ホルムアミド、アセトアミド、トリフルオロアセトアミド、およびベンズアミドのようなアミド；フタルイミド、およびジチオスクシンイミドのようなイミド；およびその他を含むが、これらに限定されない。保護されたスルフヒドリル基の例は、Ｓ−ベンジルチオエーテル、およびＳ−４−ピコリルチオエーテルのようなチオエーテル；ヘミチオ、ジチオおよびアミノチオアセタールのような置換Ｓ−メチル誘導体；およびその他を含むが、これらに限定されない。
【００９７】
“薬学的に許容される塩”は、無機塩基、有機塩基、無機酸、有機酸、または塩基性もしくは酸性アミノ酸との塩を含む。無機塩基の塩として、本発明は、例えば、ナトリウムまたはカリウムのようなアルカリ金属；カルシウムおよびマグネシウムまたはアルミニウムのようなアルカリ土類金属；およびアンモニアを含む。有機塩基の塩として、本発明は、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミンを含む。無機酸の塩として、本発明は、例えば、塩酸、臭化水素酸(hydroboric acid)、硝酸、硫酸、およびリン酸を含む。有機酸の塩として；本発明は；例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、乳酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸を含む。塩基性アミノ酸の塩として、本発明は、例えば、アルギニン、リシンおよびオルニチンを含む。酸性アミノ酸は、例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。
【００９８】
一つの局面において、本発明は薬剤耐性癌の処置方法を提供する。本方法は、それを必要とする対象に、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含む。このような方法において、該対象が薬剤耐性癌を有する癌患者であり、そして式Ｉの化合物が以下の式を有する：
【化２】
2008540543.tif 000004
〔式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１０基、−ＮＲ１１Ｒ１２基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一でも異なってもよく、そして独立してＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＲ１３基、−ＮＲ１４Ｒ１６基、−ＳＲ１６基、置換もしくは非置換１級、２級または３級アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換アルケニル基、置換もしくは非置換アルキニル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１０およびＲ１３は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、置換もしくは非置換ヘテロシクリル基、置換もしくは非置換ヘテロシクリルアルキル基、置換もしくは非置換アルコキシアルキル基、置換もしくは非置換アリールオキシアルキル基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルオキシアルキル基から選択され；
Ｒ１１およびＲ１４は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；
Ｒ１２およびＲ１５は、同一でも異なってもよく、そして独立して置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択され；そして
Ｒ１６は置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アリール基、または置換もしくは非置換ヘテロシクリル基から選択される。〕。
【００９９】
薬剤耐性癌の処置方法のある態様において、本対象に、式IIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、式IIの化合物が以下の式：
【化３】
2008540543.tif 000005
を有し、そしてＲ７が置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である。
このような態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択される。これらの態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であり、そして該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む。
【０１００】
薬剤耐性癌の処置方法のある態様において、対象に式IIIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、式IIIの化合物が以下の式を有する：
【化４】
2008540543.tif 000006
【０１０１】
本発明はまた癌の処置方法も提供する。本方法は、それを必要とする対象に、Gleevec、BAY43-9006、ブロスタリシン、レナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、バタリニブ(vatalinib)(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、ベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、および／またはリツキシマブから選択される抗癌剤、および式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、式Ｉの化合物は、薬剤耐性癌について上記に示す構造および特性を有する。式Ｉ、II、およびIIIの化合物は、これらの抗癌剤の１種以上に難治性の癌患者の処置に有用である。式Ｉ、II、およびIIIの化合物は、これらの抗癌剤の１種以上に難治性または耐性の癌の癌患者の処置に有用である。
【０１０２】
癌の処置方法の一つの態様において、対象に式IIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、式IIの化合物は上に示す式を有し、そしてＲ７は置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基；ピペラジニル基、またはモルホリニル基である。これらの態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基から選択される置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であり、そして該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む。
【０１０３】
癌の処置方法の一つの態様において、対象に式IIIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、式IIIの化合物は上に示す式を有する。
【０１０４】
癌の処置方法のある態様において、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、抗癌剤を対象に投与した後に該対象に投与する。他の態様において、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、抗癌剤が対象に投与される前に該対象に投与する。さらに別の態様において、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、抗癌剤の少なくともいくつかを対象に投与するのと同時に対象に投与する。
【０１０５】
ある態様において、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物の投与後に対象において安定な疾患状態が達成されおよび／または腫瘍サイズの縮小が起こる。
【０１０６】
他の局面において、本発明は治療組成物およびキットを提供する。このような組成物およびキットは、抗癌剤および式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物を含む。このような治療組成物およびキットは構成要素を、薬剤耐性癌を有する対象の処置において同時に、別々にまたは連続して使用するための組み合わせ製剤として含む。式Ｉは、薬剤耐性癌の処置方法に関して上記したのと同じ構造および特性を有する。ある態様において、本キットおよび治療組成物に包含される抗癌剤は、癌が耐性である薬剤以外の抗癌剤である。他の態様において、本キットおよび治療組成物に包含される抗癌剤は、癌が耐性である抗癌剤である。例えば、患者がGleevecに対して難治性であるならば、キットまたは組成物は、式Ｉ、II、および／またはIIIの化合物の１種以上と、加えてIressaのような抗癌剤を含み得る。あるいは、患者がGleevecに難治性であるならば、本キットまたは組成物は、式Ｉ、II、および／またはIIIの化合物の１種以上およびGleevecを含み得る。Gleevecを包含させる目的は、患者の薬剤耐性が、患者に薬剤を投与するまで分からないかもしれないからである。加えて、ある薬剤への耐性が処置中に生じ得る。キットは、本発明の化合物に加えて、１種、２種、３種、またはそれ以上の異なる抗癌剤を含み得る。
【０１０７】
キットおよび治療組成物のある態様において、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物は、式IIの化合物、式IIの化合物の互変異性体、式IIの化合物の塩、式IIの化合物の塩の互変異性体、またはそれらの混合物であり、ここで、式IIの化合物は上に示す式を有し、そしてＲ７は置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択される。これらの態様のいくつかにおいて、Ｒ１が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ１が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であり、そして該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む。
【０１０８】
キットおよび治療組成物のある態様において、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物が式IIIの化合物、式IIIの化合物の互変異性体、式IIIの化合物の塩、式IIIの化合物の塩の互変異性体、またはそれらの混合物であり、ここで、式IIIの化合物が上に示す式を有する。
【０１０９】
治療組成物およびキットのある態様において、抗癌剤および該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を一組成物として提供する。他の態様において、抗癌剤および該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を別々にキットのパーツとして提供する。
【０１１０】
本発明はまた対象においてキナーゼを阻害する方法を提供する。本方法は、それを必要とする対象に、式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、対象は癌患者であり、そしてキナーゼは変異ゲートキーパー残基を含み、式Ｉの化合物は、薬剤耐性癌の処置方法に関連して上に示した構造および特性を有する。
【０１１１】
キナーゼを阻害する方法の一つの態様において、対象に式IIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、式IIの化合物は上に示す式を有し、そしてＲ７は置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択される。これらの態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ７が置換もしくは非置換Ｎ−アルキルピペラジニル基であり、そして該Ｎ−アルキルピペラジニルのアルキル基が１個から４個の炭素原子を含む。
【０１１２】
キナーゼを阻害する方法の一つの態様において、対象に式IIIの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与し、ここで、式IIIの化合物は上に示す式を有する。
【０１１３】
キナーゼを阻害する方法の一つの態様において、本キナーゼが細胞質チロシンキナーゼまたは受容体チロシンキナーゼである。ある態様において、本キナーゼがＡＢＬ、ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲａ、ＥＧＦＲ、またはＦＬＴ３から選択される。このような態様のいくつかにおいて、本キナーゼがＡＢＬ(Ｔ３１５Ｉ)である。他のこのような態様において、本キナーゼがＦＬＴ３(Ｄ８３５Ｙ)である。他のこのような態様において、本キナーゼがＥＧＦＲである。
【０１１４】
キナーゼを阻害する方法のある態様において、癌がメシル酸イマチニブ(Gleevec)、BAY43-9006、ブロスタリシン、レナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、ゲフィチニブ(Iressa)、バタリニブ(vatalinib)(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、または一般的モノクローナル抗体に耐性である。ある態様において、癌患者の癌が、胃腸間質性腫瘍、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、腎臓細胞癌腫、非小細胞性肺癌、または好酸球増加症候群(ＨＥＳ)から選択される。
【０１１５】
本発明はまた、ｐＥＲＫの過剰発現に関連する癌を有する対象の処置方法も提供する。本方法は、患者における内因性ｐＥＲＫレベルを測定し、該対象に式Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、それらの混合物、または該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩もしくは該混合物を含む医薬組成物を投与することを含む。このような態様のいくつかにおいて、内因性ｐＥＲＫレベルの測定を投与前に行う。このような態様において、測定を、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物が必要な患者の決定のために行い得る。他の態様において、内因性ｐＥＲＫレベルの測定を投与後に行う。このような態様において、測定を、該患者における該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物の投与の有効性の決定のために行い得る。ある態様において、式Ｉの化合物が式IIの化合物または式IIIの化合物、それらの塩、それらの互変異性体の塩、それらの混合物、またはそれらを含む医薬組成物である。
【０１１６】
ｐＥＲＫの過剰発現に関連する癌を有する対象の処置方法のある態様において、患者における内因性ｐＥＲＫレベルの測定は、末梢血白血球を含む血液と抽出し、そして内因性ｐＥＲＫレベルをウェスタンブロットおよび／またはフローサイトメトリーアッセイにより測定することを含む。ある態様において、対象におけるｐＥＲＫレベルは上昇する。他のこのような態様において、ｐＥＲＫレベルは、対象において安定化するかまたは低下する。
【０１１７】
ある態様において、Ｒ１がＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、またはＩから選択される。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ１がＦである。ある態様において、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が全てＨである。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ１がＦであり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々がＨである。
【０１１８】
他の態様において、Ｒ６またはＲ７の少なくとも１個が置換もしくは非置換ヘテロシクリル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ６またはＲ７の一方がヘテロシクリル基であり、Ｒ６またはＲ７の他方がＨである。ある態様において、Ｒ６またはＲ７の一方が、置換もしくは非置換ピペリジニル基、ピペラジニル基、またはモルホリニル基から選択されるヘテロシクリル基である。このような態様のいくつかにおいて、Ｒ６またはＲ７の一方が、Ｎ−メチルピペラジニル基などのようなＮ−アルキルピペラジニル基であり、そして、このような態様のいくつかにおいて、Ｒ６またはＲ７の他方がＨである。
【０１１９】
種々の態様において、該化合物の乳酸塩を対象に投与するか、または本発明のキットまたは治療組成物に包含させる。
【０１２０】
種々の態様において、該癌がGleevecに耐性である。他の態様において、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、Gleevecが対象に投与されており、そして該対象における癌がGleevecに耐性であることが判明した後に、該対象に投与する。
【０１２１】
種々の態様において、該癌がBAY43-9006に耐性である。他の態様において、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、BAY43-9006が対象に投与されており、そして該対象における癌がBAY43-9006に耐性であることが判明した後に、該対象に投与する。
【０１２２】
種々の態様において、該癌がブロスタリシンに耐性である。他の態様において、該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、該混合物、または該医薬組成物を、ブロスタリシンが対象に投与されており、そして該対象における癌がブロスタリシンに耐性であることが判明した後に、該対象に投与する。
【０１２３】
種々の態様において、該癌が以下の抗癌剤の一つに耐性であるか、または本発明の化合物、塩、互変異性体、混合物、または医薬組成物を、以下の抗癌剤の一つと組み合わせて使用し、これらの抗癌剤は個々に好ましい：レナリドマイド(Revlimid)、サリドマイド(Thalomid)、ドセタキセル(タキソテール)、エルロチニブ(Tarceva)、ゲフィチニブ(Iressa)、バタリニブ(vatalinib)(PTK-787)、VEGF-trap、フェンレチニド(fenretidine)、ボルテゾミブ、またはベバシズマブ(Avastin)、ペルツズマブ、またはリツキシマブのような、しかしこれらに限定されない一般的モノクローナル抗体(ｍＡｂ)。トラスツマブ(Herceptin)も本発明の化合物と組み合わせて使用できる。
【０１２４】
種々の癌を、本発明の方法、組成物、およびキットで処置できる。ある態様において、本癌が、固形腫瘍のような固形癌であり、それは、ある態様において薬剤耐性である。他の態様において、本癌が“液性”癌または血液学的癌である。さらに別の態様において、本癌が胃腸間質性腫瘍(ＧＩＳＴ)である。他の態様において、本癌が急性骨髄性白血病である。さらに別の態様において、本癌が慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、または腎臓細胞癌腫である。さらに別の態様において、本癌が前立腺癌、腎臓癌、胃腸間質性腫瘍；サルコーマ、結腸直腸癌、乳癌、耳下腺癌、胃癌、黒色腫、食道癌、ＮＥＴ(副鼻腔)癌、結腸癌、卵巣癌、または肝臓癌から選択され、それらは、ある態様において、薬剤耐性である。本発明に従い処置できる他の癌のリストは、胃腸間質性腫瘍、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、腎臓細胞癌腫、非小細胞性肺癌、または好酸球増加症候群(ＨＥＳ)を含むが、これらに限定されない。
【０１２５】
ヘテロシクリル基を含む種々の基において、本ヘテロシクリル基は種々の方法で結合し得る。例えば、−ＯＣＨ２(ＣＨ２)ｑ(ヘテロシクリル)基(ここで、ｑは０、１、２、３、または４から選択される)において、ヘテロシクリル基は、種々の環員を介して−ＯＣＨ２(ＣＨ２)ｑ(ヘテロシクリル)の−ＯＣＨ２(ＣＨ２)ｑ基のメチレン炭素に結合し得る。非限定的例の目的で、ｑが１であり、そしてヘテロシクリル基がテトラヒドロフランであるとき、本基は、式−ＯＣＨ２ＣＨ２(テトラヒドロフラニル)により示される基であり得、これは以下の２つの構造に対応する：
【化５】
2008540543.tif 000007
ここで、構造IVは、−ＯＣＨ２ＣＨ２(２−テトラヒドロフラニル)基と呼び得る基を示し、そして構造Ｖは−ＯＣＨ２ＣＨ２(３−テトラヒドロフラニル)基と呼び得る基を示す。本ヘテロシクリル基がピペリジン、ピペラジン、モルホリン、またはピロリジンのような、しかしこれらに限定されないＮ含有ヘテロ環であるとき、本ヘテロ環は、Ｎ含有ヘテロ環の環中の環炭素原子または窒素原子を介してメチレン炭素に結合できる。これらの両方とも好ましい。−ＯＣＨ２(ＣＨ−)ｑ(ヘテロシクリル)についてヘテロシクリル基がピペリジンであり、そしてｑが２であるとき、以下の構造が可能であり、そして好ましい：
【化６】
2008540543.tif 000008
【０１２６】
構造VIは、−Ｏ(ＣＨ２)３(Ｎ−ピペリジニル)または−Ｏ(ＣＨ２)３(１−ピペリジニル)基の例である。構造VIIは−Ｏ(ＣＨ２)３−(２−ピペリジニル)基の例である。構造VIIIは−Ｏ(ＣＨ２)３(３−ピペリジニル)基の例である。構造IXは−Ｏ(ＣＨ２)３(４−ピペリジニル)基の例である。−ＯＣＨ２(ＣＨ２)ｑ(ヘテロシクリル)基についてヘテロシクリル基がピペラジンであり、そしてｑが１であるとき、以下の構造が可能であり、そして好ましい：
【化７】
2008540543.tif 000009
【０１２７】
構造Ｘは−Ｏ(ＣＨ２)２(２−ピペラジニル)基の例であり、そして構造XIは−Ｏ(ＣＨ２)２(１−ピペラジニル)または−Ｏ(ＣＨ２)２(Ｎ−ピペラジニル)基の例である。−ＯＣＨ２(ＣＨ２)ｑ(ヘテロシクリル)基についてヘテロシクリル基がモルホリンであり、そしてｑが１であるとき、以下の構造が可能であり、そして好ましい：
【化８】
2008540543.tif 000010
【０１２８】
構造XIIは−Ｏ(ＣＨ２)２(３−モルホリニル)基の例であり、構造XIIIは−Ｏ(ＣＨ２)２(４−モルホリニル)または−Ｏ(ＣＨ２)２(Ｎ−モルホリニル)基の例であり、そして構造XIVは−Ｏ(ＣＨ２)２(２−モルホリニル)基の例である。基がピロリジンであり、そしてｑが１であるとき、利用可能な構造は−Ｏ(ＣＨ２)２(１−ピロリジニル)または−Ｏ(ＣＨ２)２(Ｎ−ピロリジニル)、−Ｏ(ＣＨ２)２(２−ピロリジニル)、および−Ｏ(ＣＨ２)２(３−ピロリジニル)を含むことが観察される。
【０１２９】
スキーム１は、ベンゾイミダゾリルキノリノン化合物の合成のための合成経路の一例を記載し、本発明を如何なる方法でも限定すると解釈してはならない。
【化９】
2008540543.tif 000011
【０１３０】
スキーム２は本発明の化合物の合成の他の方法を記載し、いかなる方法でも本発明を限定しない。当業者は、置換もしくは非置換ジアミノベンゼンおよび置換もしくは非置換アントラニロニトリルの選択が、広範囲の化合物の合成を可能にすることを理解しよう。当業者はまた、最終環化反応のために、ある種の基を、標準保護を使用して保護する必要があるかもしれないことも認識しよう。非常に多様な合成経路が、非常に収束性で効率的な合成経路により、多数の式IIIを有する化合物の容易な製造を可能にする。
【化１０】
2008540543.tif 000012
【０１３１】
構造Ｉの化合物は、以下の実施例部分に記載の、および、本明細書に完全に記載されているかのように、その全体をそして全ての目的のために引用して各々を本明細書に包含させる以下の文献に開示の方法を使用して容易に合成できる：米国特許６,６０５,６１７、公開米国特許出願番号２００４／００９２５３５、米国特許出願番号１０／９８３,１７４、公開米国特許出願番号２００４／０２２０１９６、米国特許出願番号１０／９８２,７５７、および米国特許出願番号１０／９８２,５４３。
【０１３２】
構造Ｉの化合物、該化合物の互変異性体、該化合物の薬学的に許容される塩、該互変異性体の薬学的に許容される塩、およびそれらの混合物を、ここに記載の目的で使用でき、そして、ここに記載の種々の生物学的状態の処置に使用できる、薬剤の製剤のために使用できる。本発明の化合物、塩、互変異性体、互変異性体の塩、およびそれらの混合物は、Gleevec、BAY43-9006、およびブロスタリシンのような１種以上の他の抗癌剤に耐性の含を有する患者の処置に特に有用である。
【０１３３】
医薬製剤は、上記の態様のいずれかの化合物、互変異性体、または塩のいずれかを、ここに記載のような薬学的に許容される担体と共に含み得る。このような製剤は、Gleevec、BAY43-9006、またはブロスタリシンのような、しかしこれらに限定されない異なる抗癌剤も含み得る。
【０１３４】
本発明はまた、１個以上の本発明の化合物、または薬学的に許容される塩、それらの互変異性体、またはそれらの混合物と、薬学的に許容される担体、賦形剤、結合剤、希釈剤などと混合することにより製造できる、転移性(metastacized)腫瘍に関連する障害を処置または改善するための組成物を提供する。本発明の組成物は、ここに記載のような転移性(metastacized)腫瘍の処置に使用する製剤の製造に使用できる。このような組成物は、例えば、顆粒、粉末、錠剤、カプセル、シロップ、坐薬、注射剤、エマルジョン、エリキシル、懸濁液または溶液の形であり得る。本組成物は、種々の投与経路、例えば、経口投与、経鼻投与、直腸投与、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、または腹腔内注射のために製剤できる。以下の投与形態は例示の目的で記載し、本発明を限定すると解釈してはならない。
【０１３５】
経口、バッカル、および舌下投与のために、粉末、懸濁液、顆粒、錠剤、ピル、カプセル、ジェルキャップ、およびカプレットが、固体投与形態として許容される。これらは、例えば、１個以上の本発明の化合物、薬学的に許容される塩、互変異性体、またはそれらの混合物と、少なくとも１種のデンプンのような添加剤または他の添加剤と混合することにより製造できる。適当な添加剤は、スクロース、ラクトース、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成または半合成ポリマーまたはグリセリドである。所望により、経口投与形態は、不活性希釈剤、またはステアリン酸マグネシウムのような滑剤、またはパラベンまたはソルビン酸のような防腐剤、またはアスコルビン酸、トコフェロールまたはシステインのような抗酸化剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味剤、香味剤または芳香剤のような投与の助けとなる他の成分を含み得る。錠剤およびピルは、当分野で既知の適当なコーティング材でさらに処置し得る。
【０１３６】
経口投与のための液体投与形態は、水のような不活性希釈剤を含み得る、薬学的に許容されるエマルジョン、シロップ、エリキシル、懸濁液、および溶液の形であり得る。医薬製剤および薬剤は、油、水、アルコール、およびそれらの組み合わせのような、しかしこれらに限定されない滅菌液体を使用して、液体懸濁液または溶液として製剤できる。薬学的に適当な界面活性剤、懸濁化剤、乳化剤を、経口または非経腸投与のために添加し得る。
【０１３７】
上記の通り、懸濁液は油を含み得る。このような油は、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、コーン油およびオリーブ油を含むが、これらに限定されない。懸濁液製剤はまたオレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルのような脂肪酸のエステル、脂肪酸グリセリドおよびアセチル化脂肪酸グリセリドを含み得る。懸濁液製剤は、エタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロールおよびプロピレングリコールのようであるが、これらに限定されないアルコールを含み得る。ポリ(エチレングリコール)、鉱油およびペトロラタムのような石油炭化水素のようであるが、これらに限定されないエーテル；および水もまた懸濁液製剤に使用できる。
【０１３８】
経鼻投与のために、本医薬製剤および薬剤は、適当な溶媒(複数もある)および所望により安定化剤、抗微生物剤、抗酸化剤、ｐＨ修飾剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティ修飾剤およびそれらの組み合わせのようであるが、これらに限定されない他の化合物を含む、スプレーまたはエアロゾルであり得る。エアロゾル製剤のための噴射剤は、圧縮空気、窒素、二酸化炭素、または炭化水素ベースの低沸点溶媒を含み得る。
【０１３９】
注射可能投与形態は、一般に、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して製造できる、水性懸濁液または油懸濁液を含む。注射可能形態は、溶液相にあるかまたは懸濁液の形であり、それは溶媒または希釈剤と共に製造される。許容される溶媒または媒体は、滅菌水、リンゲル溶液、または等張水性食塩水を含む。あるいは、滅菌油も溶媒または懸濁化剤として使用できる。好ましくは、本油または脂肪酸は非揮発性であり、天然または合成油、脂肪酸、モノ、ジまたはトリグリセリドを含む。
【０１４０】
注射のために、本医薬製剤および／または薬剤は、上記の適当な溶液で再構成するのに適当な粉末であり得る。これらの例は、凍結乾燥、回転乾燥または噴霧乾燥粉末、無定形粉末、顆粒、沈殿、または粒子を含むが、これらに限定されない。注射のために、製剤は、所望により安定化剤、ｐＨ修飾剤、界面活性剤、バイオアベイラビリティ修飾剤およびそれらの組み合わせを含み得る。
【０１４１】
直腸投与のために、本医薬製剤および薬剤は、腸、Ｓ状結腸曲および／または直腸における化合物の放出のための、坐薬、軟膏、浣腸剤、錠剤またはクリームの形であり得る。直腸坐薬は、１個以上の本発明の化合物、または薬学的に許容される塩または該化合物の互変異性体と、通常の貯蔵温度では固体相で存在し、直腸のような体内の薬剤放出に適当な温度では液体相で存在する許容される媒体、例えば、ココアバターまたはポリエチレングリコールの混合により、製造する。油もまた、軟ゼラチンタイプおよび坐薬の製剤の製造において用い得る。水、食塩水、水性デキストロースおよび関連糖溶液、およびグリセロールも懸濁液製剤の製造において用いることができ、それはまたペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたはカルボキシメチルセルロースのような懸濁化剤、ならびに緩衝剤および防腐剤も含み得る。
【０１４２】
上記の代表的投与形態以外に、薬学的に許容される賦形剤および担体は当業者に一般的に既知であり、故に、本発明に包含される。このような賦形剤および担体は、例えば、“Remingtons Pharmaceutical Sciences” Mack Pub. Co., New Jersey(1991)”に記載され、それは、その全体として、かつすべての目的に関して、ここに完全に記載されているかのように本明細書に包含される。
【０１４３】
本発明の製剤は、以下に記載の通り短時間作用型、即時放出型、長時間作用型、および持続放出型のために設計できる。故に、本医薬製剤は、制御放出または遅延放出のためにも製剤できる。
【０１４４】
本組成物はまた、例えば、ミセルまたはリポソーム、またはいくつかの他の封入形も含み、または長時間の貯蔵および／または送達効果を提供するために持続放出形で投与できる。従って、本医薬製剤および薬剤はペレットまたはシリンダーに圧縮し、デポ注射剤として筋肉内または皮下にインプラントするか、またはステントとしてインプラントし得る。このようなインプラントは、シリコンのような不活性物質および生物分解性ポリマーを用い得る。
【０１４５】
具体的な投与量は、対象の疾患の状態、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、および食習慣、投与間隔、投与経路、排泄速度、および薬剤の組み合わせに依存して調節し得る。有効量を含む上記の投与形態の全ては通常の実験の範囲内であり、従って、十分に本発明の範囲内である。
【０１４６】
治療的有効量は、投与経路および投与形態に依存して変化し得る。本発明の好ましい一つの化合物または複数の化合物は、高い治療指数を示す製剤である。本治療指数は、毒性作用と治療作用の間の投与量比であり、ＬＤ５０とＥＤ５０の間の比率として表すことができる。ＬＤ５０は、集団の５０％に致死の用量であり、そしてＥＤ５０は集団の５０％に治療的に有効な用量である。ＬＤ５０およびＥＤ５０は、動物細胞培養または実験動物での標準医薬手順により決定する。
【０１４７】
本発明の文脈内の“処置する”は、障害または疾患に関連する症状の緩和、またはこれらの症状のさらなる進行もしくは悪化の阻止、または疾患もしくは障害の予防もしくは防止を意味する。例えば、転移性(metastacized)血液学的腫瘍の患者の処置の状況で、十分な処置は腫瘍(複数もある)または罹患した組織に供給される毛細血管の増殖の減少、癌性増殖または腫瘍、毛細血管の増殖、または罹患した組織に関連する症状の軽減、毛細血管増殖の阻止、または癌のような疾患の進行のまたは癌性細胞増殖の阻止を含み得る。処置は、本発明の医薬製剤を、他の治療と組み合わせて投与することも含み得る。例えば、本発明の化合物および医薬製剤を、外科的処置および／または放射線治療の前に、間にまたは後に投与し得る。本発明の化合物はまた、Gleevec、BAY43-9006、およびブロスタリシンならびにアンチセンスおよび遺伝子治療に使用される薬剤のようであるが、これらに限定されない他の抗癌剤と苦味泡得ても投与できる。適当な組み合わせは、腫瘍学および薬剤分野の当業者により決定できる。
【０１４８】
癌処置に関連してここで使用する“安定な疾患状態”は、癌の増殖の停止を意味する。これは、しばしば、図に示すような陽電子放射型断層撮影法(ＰＥＴ)のような走査法を使用して、可視化され得る。
【０１４９】
本発明の医薬製剤および薬剤は、構造Ｉの化合物または該互変異性体、塩、またはそれらの混合物を、薬学的に許容される担体と組み合わせて含む。故に、本発明の化合物は、薬剤および医薬製剤の製造に使用できる。このような薬剤および医薬製剤は、ここに記載の処置方法において使用できる。
【０１５０】
本発明の化合物および製剤は、それらがカンプトテシン、ドキソルビシン、シスプラチン、イリノテカン(ＣＰＴ−１１)、アルキル化剤、トポイソメラーゼＩおよびII阻害剤のようであるが、これらに限定されない抗癌剤、および放射線処置と組み合わせて使用したとき、相乗効果を示すため、組み合わせ治療において使用するのに特に適当である。さらに、本発明の化合物は、Gleevec、BAY43-9006、およびブロスタリシンのような抗癌剤と組み合わせて使用でき、これらの抗癌剤に対して耐性の癌を有する癌患者における特定の使用が判明した。従って、本発明は、抗癌剤と組み合わせて構造Ｉの化合物および互変異性体、塩、および／またはそれらの混合物を含む、医薬製剤を提供する。本発明はまた、このような製剤および薬剤の製造においける該化合物、互変異性体、塩、および／または混合物の使用および該化合物の癌患者の処置に置ける使用も提供する。
【０１５１】
ある態様において、本発明は、癌患者のような患者の処置に置いて、同時に、別々にまたは連続して使用するための、抗癌剤と、本発明のいずれかの態様の化合物、互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物を含む治療組成物を提供する。このような態様のいくつかにおいて、患者は、Gleevec、BAY43-9006、またはブロスタリシンのような少なくとも１種の抗癌剤に耐性である癌患者である。このような態様のいくつかにおいて、抗癌剤および該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物を一組成物として提供する。他のこのような態様において、抗癌剤および該化合物、該互変異性体、該化合物の塩、該互変異性体の塩、またはそれらの混合物を別々にキットのパーツとして提供する。このようなキットは、さらに使用のための指示書を含み得る。
【０１５２】
本発明の化合物は種々の対象の処置に使用できる。適当な対象は、哺乳動物およびヒトのような動物を含む。適当な哺乳動物は、キツネザル、無尾猿、および有鼻猿のようであるが、これらに限定されない霊長類；ラット、マウス、およびモルモットのような齧歯類；ウサギおよび野ウサギ；ウシ；ウマ；ブタ；ヤギ；ヒツジ；有袋類；およびネコ科、イヌ科およびクマ科のような肉食動物を含むが、これらに限定されない。ある態様において、対象または患者がヒトである。他の態様において、対象または患者がマウスまたはラットのような齧歯類である。ある態様において、対象または患者がヒト以外の動物であり、このような態様のいくつかにおいて、対象または患者がヒト以外の哺乳動物である。
【実施例】
【０１５３】
以下の略語を実施例中で使用する：
【表１】
2008540543.tif 000013
【０１５４】
実施例化合物の命名は、Advanced Chemistry Development, Inc.から入手可能なACD Name version 5.07ソフトウェア(November 14, 2001)、Chemlnnovation Software, Inc.から入手可能なChemlnnovation NamExpert+NomenclatorTM brandソフトウェアおよびCambridgeSoft Corporation(Cambridge, MA)から入手可能なChemOfficec Ultra software package version 7.0において利用可能なAutoNom version 2.2を使用して提供した。化合物および出発物質のいくつかは、標準ＩＵＰＡＣ命名法を使用して命名した。
【０１５５】
種々の出発物質は商業的供給源から得ることができ、そして当業者に既知の方法により製造できる。
実施例１
５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンの合成
方法Ａ
【化１１】
2008540543.tif 000014
【０１５６】
５−クロロ−２−ニトロアニリン(５００ｇ、２.８９８mol)および１−メチルピペラジン(８７１ｇ、８.６９３mol)を、凝縮器を備え、Ｎ２でパージした２０００mLフラスコに入れた。フラスコを１００℃で油浴に入れ、ＨＰＬＣで測定して５−クロロ−２−ニトロアニリンが完全に反応するまで(典型的に一晩)加熱した。ＨＰＬＣが５−クロロ−２−ニトロアニリンの消失を確認した後、反応混合物を直接(まだ暖かい)２５００mLの室温水に機械的撹拌しながら添加した。得られた混合物を室温に達するまで撹拌し、次いでそれを濾過した。このようにして得た黄色固体を、１０００mLの水に添加し、３０分撹拌した。得られた混合物を濾過し、得られた固体をＴＢＭＥ(５００mL、２×)で洗浄し、次いでラバーダム(rubber dam)を使用して１時間真空下で乾燥させた。得られた固体を乾燥トレイに移し、一定重量になるまで５０℃で真空オーブンで乾燥させて、６７０ｇ(９７.８％)の表題化合物を黄色粉末として得た。
【０１５７】
方法Ｂ
５−クロロ−２−ニトロアニリン(３０８.２ｇ、１.７９mol)をオーバーヘッド・スターラー、凝縮器、ガス入口、添加漏斗、および温度計探針を備えた４頚５０００mL丸底フラスコに入れた。次いで、フラスコをＮ２でパージした。１−メチルピペラジン(７５８.１ｇ、８４０mL、７.５７mol)および２００プルーフ・エタノール(５０８mL)を、撹拌しながら反応フラスコに添加した。フラスコを再びＮ２でパージし、反応をＮ２下に維持した。フラスコを加熱マントルで９７℃(＋／−５℃)の内部温度まで加熱し、その温度にＨＰＬＣで測定して反応が完了するまで維持した(典型的に約４０時間)。反応完了後、加熱を止め、反応物を撹拌しながら約２０℃から２５℃の内部温度に冷却し、反応物を２〜３時間撹拌した。種晶(０.２０ｇ、０.８５mmol)の５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンを、沈殿が既に起こっていない限り、反応混合物に添加した。水(２,４５０mL)を撹拌している反応混合物に約１時間にわたり添加し、その間内部温度を約２０℃から３０℃に維持した。水の添加が完了後、得られた混合物を約１時間、２０℃から３０℃の温度で撹拌した。次いで、得られた混合物を濾過し、フラスコおよびフィルター・ケーキを水(３×２.５６Ｌ)で洗浄した。金色−黄色固体生成物を４１６ｇ(９８.６％収率)まで約５０℃で真空オーブン中、真空下乾燥させた。
【０１５８】
方法Ｃ
５−クロロ−２−ニトロアニリン(４０１ｇ、２.３２mol)を、オーバーヘッド・スターラー、凝縮器、ガス入口、添加漏斗、および温度計探針を備えた４頚１２Ｌ丸底フラスコに入れた。次いで、フラスコをＮ２でパージした。１−メチルピペラジン(９７７ｇ、１.０８Ｌ、９.７５mol)および１００％エタノール(６５０mL)を、撹拌しながら反応フラスコに添加した。フラスコを再びＮ２でパージし、反応をＮ２下に維持した。フラスコを加熱マントル中、９７℃(＋／−５℃)の内部温度に加熱し、その温度にＨＰＬＣで測定して反応が完了するまで維持した(典型的に約４０時間)。反応完了後、加熱を止め、反応物を撹拌しながら約８０℃の内部温度に冷却し、水(３.１５Ｌ)を混合物に１時間にわたり添加漏斗を介して添加し、その間内部温度を８２℃(＋／−３℃)に維持した。水の添加が完了後、加熱を止め、反応混合物を４時間以上の時間にわたり２０−２５℃の内部温度まで冷却した。次いで、反応混合物をさらに１時間、２０−３０℃の内部温度で撹拌した。次いで、得られた混合物を濾過し、フラスコおよびフィルター・ケーキを水(１×１Ｌ)、５０％エタノール(１×１Ｌ)、および９５％エタノール(１×１Ｌ)で洗浄した。金色−黄色固体生成物を乾燥パンに入れ、５４６ｇ(９９％収率)の一定重量まで約５０℃で真空オーブン中、真空下乾燥させた。
【０１５９】
実施例２
[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステルの合成
方法Ａ
【化１２】
2008540543.tif 000015
５０００mL、４頚フラスコに攪拌機、温度計、凝縮器、およびガス入口／出口を付けた。装備が整ったフラスコに、２６５.７ｇ(１.１２mol、１.０当量)の５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンおよび２１２５mLの２００プルーフ・ＥｔＯＨを添加した。得られた溶液をＮ２で１５分パージした。次に、２０.０ｇの５％Ｐｄ／Ｃ(５０％Ｈ２Ｏ  ｗ／ｗ)を添加した。反応物を４０−５０℃(内部温度)で激しく撹拌し、その間Ｈ２を混合物を通してバブリングした。反応を、５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンの消失についてＨＰＬＣで経時的にモニタリングした。典型的な反応時間は６時間であった。
【０１６０】
全５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンが反応物から消失後、溶液をＮ２で１５分パージした。次に、４４０.０ｇ(２.２５mol)のエチル３−エトキシ−３−イミノプロパノエートヒドロクロライドを固体として添加した。反応物を、反応が完了するまで４０−５０℃(内部温度)で撹拌した。反応をその後のジアミノ化合物の消失についてＨＰＬＣでモニタリングした。典型的な反応時間は１−２時間であった。反応完了後、それを室温に冷却し、セライト濾過材のパッドを通して濾過した。セライト濾過材を無水ＥｔＯＨ(２×２５０mL)で洗浄し、濾液を減圧下濃縮して、濃い褐色／オレンジ色油状物を得た。得られた油状物を８５０mLの０.３７％ＨＣｌ溶液に取りこんだ。次いで、固体ＮａＯＨ(２５ｇ)を一度に添加し、沈殿が形成された。得られた混合物を１時間撹拌し、次いで濾過した。固体をＨ２Ｏ(２×４００mL)で洗浄し、真空オーブン中５０℃で乾燥させて、２５１.７ｇ(７４.１％)の[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈベンゾイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステルを淡黄色粉末として得た。
【０１６１】
方法Ｂ
５０００mL、４頚被覆フラスコに機械的攪拌機、凝縮器、温度探針、ガス入口、および油バブラー(oil bubbler)を付けた。装備が整ったフラスコに３００ｇ(１.２７mol)の５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンおよび２４００mLの２００プルーフ・ＥｔＯＨ(反応は９５％エタノールで行うことが可能であり、それで行っており、そしてこの反応には２００プルーフ・エタノールの使用は不要である)を入れた。得られた溶液を撹拌し、Ｎ２で１５分パージした。次に、２２.７ｇの５％Ｐｄ／Ｃ(５０％Ｈ２Ｏ  ｗ／ｗ)を反応フラスコに入れた。反応容器をＮ２で１５分パージした。Ｎ２でパージ後、反応容器をＨ２で、Ｈ２のゆっくりであるが持続的な流れをフラスコ中に維持することによりパージした。反応物を、ＨＰＬＣで測定して５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンが完全に消費されるまで４５−５５℃(内部温度)で撹拌し、その間Ｈ２を混合物を通してバブリングした。典型的な反応時間は６時間であった。
【０１６２】
全５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロアニリンが反応物から消失後、溶液をＮ２で１５分パージした。ジアミン中間体は空気感受性であるため、空気への暴露を避けるために取り扱いに注意した。５００ｇ(２.５６mol)のエチル３−エトキシ−３−イミノプロパノエートヒドロクロライドを、約３０分にわたり反応混合物に添加した。反応物をＮ２下で、ＨＰＬＣで測定してジアミンが完全に消費されるまで４５−５５℃(内部温度)で撹拌した。典型的な反応時間は約２時間であった。反応完了後、反応物を暖かいままセライトのパッドを通して濾過した。次いで、反応フラスコおよびセライトを２００プルーフ・ＥｔＯＨ(３×２８５mL)で洗浄した。濾液を５０００mLフラスコに合わせ、約３３００mLのエタノールを真空下で除去して、オレンジ色油状物を得た。水(５３０mL)、次いで１Ｍ  ＨＣＬ(３５０mL)を得られた油状物に添加し、得られた混合物を撹拌した。得られた溶液を激しく撹拌しながら、３０％ＮａＯＨ(２００mL)を、内部温度を約２５−３０℃に維持しながら約２０分にわたり添加し、その間にｐＨを９から１０にした。得られた懸濁液を約４時間撹拌し、その間内部温度を約２０−２５℃に維持した。得られた混合物を濾過し、フィルター・ケーキをＨ２Ｏ(３×３００mL)で洗浄した。集めた固体を５０℃で、真空下、真空オーブン中で一定重量になるまで乾燥させ、３４５.９ｇ(９０.１％)の[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１ベンゾイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステルを淡黄色粉末として得た。別の後処理方法において、濾液を合わせ、エタノールを、真空で少なくとも約９０％が除去されるまで除去した。次いで、中性ｐＨの水を得られた油状物に添加し、溶液を約０℃に冷却した。次いで、水性２０％ＮａＯＨ溶液を急速に撹拌しながらゆっくり添加し、ｐＨを９.２(ｐＨメーターで読んで)とした。次いで、得られた混合物を上記の通り濾過し、乾燥させた。別の後処理方法は、淡黄褐色から淡黄色の生成物を９７％程も高い収率でもたらした。
【０１６３】
実施例３
[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンゾイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステルの含水量を減らす方法
予め後処理され、約８−９％Ｈ２Ｏの含水量まで乾燥させた[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステル(１２０.７ｇ)を、２０００mL丸底フラスコに入れ、無水エタノール(５００mL)に溶解した。琥珀色溶液を、全溶媒が除去されるまで加熱しながらロータリーエバポレーターを使用して濃い油状物まで濃縮した。本工程をさらに２回繰り返した。このようにして得た濃い油状物をフラスコに残し、真空オーブンで５０℃で一晩加熱した。カール・フィッシャー分析結果は、５.２５％の含水量を示した。本方法により得られた低下した含水量は実施例４の方法において収率の増加を提供した。トルエンおよびＴＨＦのような他の溶媒を、この乾燥法においてエタノールの代わりに使用できる。
【０１６４】
実施例４
の合成４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オン
方法Ａ
【化１３】
2008540543.tif 000016
[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステル(２５０ｇ、８２０mmol)(上記の通りエタノールで乾燥)を、凝縮器、機械的攪拌機、温度探針を備え、アルゴンでパージした５０００mLフラスコ中、ＴＨＦ(３８００mL)に溶解した。２−アミノ−６−フルオロ−ベンゾニトリル(９５.３ｇ、７００mmol)を溶液に添加し、内部温度を４０℃に上げた。全固体が溶解し、溶液温度が４０℃に到達したとき、固体ＫＨＭＤＳ(３７６.２ｇ、１８９０mmol)を５分にわたり添加した。カリウム塩基の添加が完了したとき、不均一黄色溶液が得られ、内部温度が６２℃に上昇していた。６０分後、内部温度が４０℃に戻り、ＨＰＬＣにより反応の完了が決定された(出発物質がないか、または非環化中間体が存在しなかった)。次いで、濃い反応混合物をそれをＨ２Ｏ(６０００mL)に注ぐことによりクエンチし、得られた混合物を室温に到達するまで撹拌した。次いで、混合物を濾過し、フィルターパッドを水(１０００mL  ２×)で洗浄した。明黄色固体を乾燥トレイに入れ、真空オーブンで５０℃で一晩乾燥させて、１５５.３ｇ(４７.９％)の所望の４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オンを得た。
【０１６５】
方法Ｂ
５０００mL  ４頚被覆フラスコに、蒸留装置、温度探針、Ｎ２ガス入口、添加漏斗、および機械的攪拌機を装備した。[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステル(１７３.０ｇ、５７０mmol)を反応器に入れ、反応器をＮ２で１５分パージした。次いで、乾燥ＴＨＦ(２６００mL)を撹拌しながらフラスコに入れた。全固体が溶解した後、溶媒を必要に応じて加熱を使用して蒸留(真空または大気圧(高い温度が水の除去を助ける))により除去した。１０００mLの溶媒が除去された後、蒸留を止め、反応物をＮ２でパージした。次いで、１０００mLの乾燥ＴＨＦを反応容器に添加し、全固体が溶解したとき、蒸留(真空または大気圧)を、さらに１０００mLの溶媒が除去されるまで再び行った。乾燥ＴＨＦ添加および溶媒除去のこの工程を少なくとも４回繰り返し(４回目の蒸留時、最初の３回の蒸留でのわずか４０％ではなく６０％の溶媒を蒸留した)、その後１mL  サンプルを含水量を決定するためのカール・フィッシャー分析のために取った。分析がサンプルが０.２０％より少ない水を含むことを示したとき、反応を次段落に記載の通りに続けた。しかしながら、分析が０.２０％より多い水を示すとき、上記の工程を、０.２０％未満の含水量が達成されるまで繰り返した。
【０１６６】
前段落に記載の方法を使用して０.２０％未満または約０.２０％の含水量が達成された後、蒸留装置を還流凝縮器に変え、反応物に２−アミノ−６−フルオロ−ベンゾニトリル(６６.２ｇ、４７０mmol)(ある方法では０.９５当量を使用)を添加した。次いで、反応物を３８−４２℃の内部温度に加熱した。内部温度が３８−４２℃に到達したとき、ＫＨＭＤＳ溶液(１３１３ｇ、１.３２mol、ＴＨＦ中２０％ＫＨＭＤＳ)を、添加中約３８−５０℃の内部温度を維持しながら、５分にわたり添加漏斗を介して反応物に添加した。カリウム塩基の添加が完了したとき、反応物を３.５から４.５時間撹拌し(ある実施例では、３０から６０分撹拌し、反応はその時間内に完了し得た)、その間３８−４２℃の内部温度を維持した。次いで、反応のサンプルを取り、ＨＰＬＣで分析した。反応が完了していないならば、さらにＫＨＭＤＳ溶液を５分にわたりフラスコに添加し、反応物を３８−４２℃で４５−６０分撹拌した(添加したＫＨＭＤＳ溶液の量は、以下の通り決定した：ＩＰＣ比が＜３.５０であるならば、１２５mLを添加した；１０.０＞ＩＰＣ比＞３.５０であるならば、５６mLを添加した；２０.０＞ＩＰＣ比＞１０ならば、３０mLを添加した。ＩＰＣ比は非環化中間体に対応する面積で割った４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オン)に対応する面積に等しい)。反応が完了すると(ＩＰＣ比＞２０)、反応器を２５−３０℃の内部温度に冷却し、水(３５０mL)を、内部温度を２５−３５℃に維持しながら１５分にわたり、反応器に添加した(一つの別法として、反応を４０℃で行い、水を５分以内に添加する。速いクエンチは、経時的に形成される不純物の量を減らす)。次いで、還流凝縮器を蒸留装置に代え、溶媒を必要に応じて加熱を使用して、蒸留(真空または大気圧)により除去した。１５００mLの溶媒が除去された後、蒸留を止め、反応物をＮ２でパージした。次いで、水(１６６０mL)を、２０−３０℃の内部温度を維持しながら反応フラスコに添加した。次いで、反応混合物を２０−３０℃で３０分撹拌し、その後５−１０℃の内部温度に冷却し、次いで１時間撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、フラスコおよびフィルター・ケーキを水(３×６５０mL)で洗浄した。このようにして得た固体を、真空で、５０℃で真空オーブン中一定重量になるまで乾燥させ、１０３.９ｇ(４２.６％収率)ｏアミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オンを黄色粉末として得た。
【０１６７】
方法Ｃ
【化１４】
2008540543.tif 000017
[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−酢酸エチルエステル(６０８ｇ、２.０１mol)(乾燥)および２−アミノ−６−フルオロ−ベンゾニトリル(２７４ｇ、２.０１mol)を、加熱マントル上に設置し、凝縮器、機械的攪拌機、ガス入口、および温度探針を備えた４頚１２Ｌフラスコに入れた。反応容器をＮ２でパージし、トルエン(７.７Ｌ)を撹拌しながら反応混合物に添加した。反応容器を再びＮ２でパージし、Ｎ２下に維持した。混合物の内部温度を、６３℃(＋／−３℃)の温度が達成されるまで上げた。混合物の内部温度を６３℃(＋／−３℃)に維持し、その間約２.６Ｌのトルエンをフラスコから減圧下蒸留した(３８０＋／−１０torr、ト字管(distilling head)ｔ＝４０℃(＋／−１０℃)(カール・フィッシャー分析を使用して混合物の含水量を確認。含水量が０.０３％大きいならば、さらに２.６Ｌのトルエンを添加し、蒸留を繰り返した。この工程を０.０３％未満の含水量が達成されるまで繰り返した)。０.０３％未満の含水量が達成された後、加熱を止め、反応物をＮ２下１７−１９℃の内部温度まで冷却した。次いで、ＴＨＦ中のカリウムｔ−ブトキシド(ＴＨＦ中２０％；３.３９kg、６.０４moles  カリウムｔ−ブトキシド)を、Ｎ２下、反応物の内部温度を２０℃未満に維持するような速度で添加した。カリウムｔ−ブトキシドの添加が完了後、反応物を２０℃未満の内部温度で３０分撹拌した。次いで、温度を２５℃に上げ、反応物を少なくとも１時間撹拌した。次いで、温度を３０℃に上げ、反応物を少なくとも３０分撹拌した。次いで出発物質の消費を確認するためにＨＰＬＣを使用して、反応の完了についてモニタリングした(典型的に２−３時間以内に、両出発物質が消費された(ＨＰＬＣ面積％で０.５％未満))。２時間後に反応が完了していないならば、さらに０.０５当量のカリウムｔ−ブトキシドを一度に添加し、ＨＰＬＣが反応の完了を示すまで、この工程を継続した。反応完了後、６５０mLの水を撹拌している反応混合物に添加した。次いで、反応を５０℃の内部温度に暖め、ＴＨＦを減圧下反応混合物から留去した(容積で約３Ｌ)。次いで、水(２.６Ｌ)を反応混合物に添加漏斗を使用して滴下した。次いで、混合物を室温に冷却し、少なくとも１時間撹拌した。次いで、混合物を濾過し、フィルター・ケーキを水(１.２Ｌ)、７０％エタノール(１.２Ｌ)、および９５％エタノール(１.２Ｌ)で洗浄した。明黄色固体を乾燥トレイに入れ、真空オーブンで５０℃で一定重量になるまで乾燥させて、６７４ｇ(８５.４％)の所望の４−アミノ５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オンを得た。
【０１６８】
実施例５
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オンの精製
凝縮器、温度探針、Ｎ２ガス入口、および機械的攪拌機を備えた３０００mL  ４頚フラスコ装備を加熱マントルに入れた。次いで、フラスコに４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オン(１０１.０ｇ、０.２６mol)を入れ、黄色固体を９５％エタノール(１０００mL)に懸濁させ、撹拌した。いくつかの場合、８：１溶媒比を使用する。次いで、懸濁液を穏やかな還流(約７６℃の温度)まで、約１時間にわたり撹拌しながら加熱した。次いで、反応を還流しながら４５−７５分撹拌した。その時点で、加熱をフラスコから外し、懸濁液を２５−３０℃の温度に冷却させた。次いで、懸濁液を濾過し、フィルターパッドを水(２×５００mL)で洗浄した。次いで、黄色固体を乾燥トレイに入れ、真空オーブンで、５０℃で一定重量になるまで(典型的に１６時間)乾燥させて、９７.２ｇ(９６.２％)の精製した生成物を黄色粉末として得た。
【０１６９】
実施例６
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オンの乳酸塩の製造
【化１５】
2008540543.tif 000018
３０００mL  ４頚被覆フラスコに凝縮器、温度探針、Ｎ２ガス入口、および機械的攪拌機を装備した。反応容器をＮ２で少なくとも１５分パージし、次いで４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オン(４８４ｇ、１.２３mol)を入れた。Ｄ,Ｌ−乳酸(２４３.３ｇ、１.７２molのモノマー−以下の段落参照)、水(３３９mL)、およびエタノール(１２１１mL)の溶液を調製し、次いで反応フラスコに入れた。撹拌を中速で開始し、反応物を６８−７２℃の内部温度に加熱した。反応物の内部温度を６８−７２℃で１５−４５分維持し、次いで加熱を止めた。得られた混合物を１０−２０ミクロン・フリットを通して濾過し、濾液を１２Ｌフラスコに集めた。１２Ｌフラスコに内部温度探針、還流凝縮器、添加漏斗、ガス入口および出口、およびオーバーヘッド・スターラーを装備した。次いで、濾液を中速で撹拌し、還流(約７８℃の内部温度)まで加熱した。穏やかな還流を維持しながら、エタノール(３,５９６mL)をフラスコに約２０分にわたり添加した。次いで、反応フラスコを１５−２５分以内に約６４−７０℃の範囲の内部温度に冷却し、この温度を約３０分維持した。反応器を結晶について調べた。結晶が存在しないならば、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オン(４８４mg、０.１molｅ％)の乳酸塩の結晶をフラスコに添加し、反応物を６４−７０℃で３０分撹拌し、その後再び結晶に関してフラスコを調べた。結晶が存在したら、撹拌を低速に減速し、反応物を６４−７０℃でさらに９０分撹拌した。次いで、反応を約２時間にわたり約０℃に冷却し、得られた混合物を２５−５０ミクロン・フリット・フィルターを通して濾過した。反応器をエタノール(４８４mL)で洗浄し、内部温度が約０℃になるまで撹拌した。冷エタノールを使用してフィルター・ケーキを洗浄し、この工程をさらに２回繰り返した。集めた固体を５０℃で真空下、真空オーブン中で一定重量になるまで乾燥させ、５１０.７ｇ(８５.７％)の４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オンの黄色乳酸塩結晶を得た。濾過工程中、ラバーダムまたは不活性条件を典型的に使用した。乾燥固体が非常に吸湿性であるようには見えないが、湿潤フィルター・ケーキは吸水する傾向にあり、粘性になった。大気中への湿潤フィルター・ケーキの長時間暴露を避けるように注意をした。
【０１７０】
市販の乳酸は、一般に約８−１２％ｗ／ｗ  水を含み、モノマー乳酸に加えてダイマーおよびトリマー乳酸を含む。乳酸ダイマー対モノマーのモル比は、一般に約１.０：４.７である。市販グレード乳酸を、モノ乳酸塩が反応混合物から優先して沈殿するため、前段落に記載の方法において使用できる。
【０１７１】
代謝物の同定
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オン(化合物１)の２種の代謝物が、ここに包含する引用文献に記載の通りの２週間毒物学試験からのラット貯留血漿において同定され、特徴付けされている。２種の同定された代謝物は以下に示すピペラジンＮ−オキシド化合物(化合物２)およびＮ−脱メチル化化合物(化合物３)である。
【化１６】
2008540543.tif 000019
【０１７２】
化合物１−３のＩＣ５０
多数のタンパク質チロシンキナーゼのキナーゼ活性を、以下に記載の方法を使用して化合物１−３に付いて測定し、以下の表に示すＩＣ５０値を得た。
表。化合物１−３のＩＣ５０
【表２】
2008540543.tif 000020
【０１７３】
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−４−オキシドピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物２)および４−アミノ−５−フルオロ−３−(６−ピペラジン−１−イル−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル)キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物３)
化合物１の同定された代謝物の構造を確認するために、代謝物を独立して合成した。
【０１７４】
化合物１のＮ−オキシド代謝物である化合物２を、以下のスキームに示す通りに合成した。化合物１をエタノール、ジメチルアセトアミドおよび過酸化水素の混合物中で加熱した。反応完了後、化合物２を濾過により単離し、エタノールで洗浄した。必要であれば、生成物をさらにカラムクロマトグラフィーで精製した。
【化１７】
2008540543.tif 000021
【０１７５】
化合物１のＮ−脱メチル代謝物である化合物３を、以下のスキームに示す通りに合成した。５−クロロ−２−ニトロアニリンをピペラジンで処理して４を得て、それを続いてブチルオキシカルボニル(Ｂｏｃ)基で保護して、５を得た。ニトロ基の還元、続く３−エトキシ−３−イミノプロピオン酸エチルエステルとの縮合により、６を得た。カリウムヘキサメチルジシラジドを塩基として使用した６と６−フルオロアントラニロニトリルの縮合により、７を得た。粗７を水性ＨＣｌで精製して、精製後に所望の代謝物を黄色／褐色固体として得た。
【化１８】
2008540543.tif 000022
【０１７６】
アッセイ方法
セリン／スレオニンキナーゼ
種々のタンパク質セリン／スレオニンキナーゼのキナーゼ活性を、ＡＴＰおよびリン酸化のためのセリンまたはスレオニンアミノ酸残基を含む適当なペプチドまたはタンパク質を提供し、ホスフェート部分のセリンまたはスレオニン残基への移動をアッセイすることにより測定した。多数の式Ｉ、II、およびIIIの化合物の合成および活性のアッセイは、引用により、その全体として、かつすべての目的に関して、ここに完全に記載されているかのように本明細書に包含される以下の参考文献に開示されている：米国特許６,６０５,６１７；公開米国特許出願番号２００４／００９２５３５；２００４年１１月５日出願の米国特許出願番号１０／９８３,１７４；および公開米国特許出願番号２００４／０２２０１９６。ＧＳＫ−３、ＲＳＫ−２、ＰＡＲ−１、ＮＥＫ−２、およびＣＨＫ１酵素のキナーゼドメインを含む組み換えタンパク質を、バキュロウイルス発現系(InVitrogen)を使用してＳｆ９昆虫細胞に発現させ、Ｇｌｕ抗体相互作用を介して(Ｇｌｕ−エピトープ標識構築物について)または金属イオンクロマトグラフィーにより(Ｈｉｓ６(配列番号１)標識構築物について)精製した。Ｃｄｃ２(ＧＳＴ融合構築物)およびサイクリンＢを、バキュロウイルス発現系を使用してＳｆ９昆虫細胞に共発現させた。組み換え、活性Ｃｄｋ２／サイクリンは市販されており、Upstate Biotechnologyから入手した。アッセイに使用した精製Ｃｄｃ２酵素は市販されており、New England BioLabsから購入し得る。各アッセイのために、試験化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、次いで適当なキナーゼ反応緩衝液＋５−１０nMの３３Ｐガンマ標識ＡＴＰと混合した。キナーゼタンパク質および適当なビオチニル化ペプチド基質を添加し、１５０μLの最終容積とした。反応物を３−４時間、室温でインキュベートし、次いで１００μLの停止反応緩衝液を含むストレプトアビジン被覆白色マイクロタイタープレート(Thermo Labsystems)に移すことにより、停止させた。停止反応緩衝液は５０mM  未標識ＡＴＰおよび３０mM  ＥＤＴＡから成る。１時間インキュベーション後、ストレプトアビジンプレートをＰＢＳで洗浄し、ウェルあたり２００μL  Microscint 20シンチレーション液を添加した。プレートを密封し、TopCountを使用して計測した。５０％阻害(ＩＣ５０)に対する各化合物の濃度を、XL Fitデータ解析ソフトウェアを使用した非線形回帰を用いて計算した。
【０１７７】
反応緩衝液は、３０mM  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ２  ｐＨ７.５、１０mM  ＭｇＣｌ２、２mM  ＤＴＴ、４mM  ＥＤＴＡ、２５mM  ベータ−グリセロホスフェート、５mM  ＭｎＣｌ２、０.０１％ＢＳＡ／ＰＢＳ、０.５μM  ペプチド基質、および１μM  未標識ＡＴＰを含んだ。ＧＳＫ−３酵素を２７nMで、ＣＨＫ１を５nMで、Ｃｄｃ２を１nMで、Ｃｄｋ２を５nMで、およびＲｓｋ２を０.０４４単位／mLで使用した。ＧＳＫ−３アッセイのために、ビオチン−ＣＲＥＢペプチド(ビオチン−ＳＧＳＧＫＲＲＥＩＬＳＲＲＰ(ｐＳ)ＹＲ−ＮＨ２(配列番号４))を使用した。ＣＨＫ１アッセイのために、ビオチン−Ｃｄｃ２５ｃペプチド(ビオチン−[ＡＨＸ]ＳＧＳＧＳＧＬＹＲＳＰＳＭＰＥＮＬＮＲＰＲ[ＣＯＮＨ２](配列番号５))を使用した。Ｃｄｃ２およびＣｄｋ２アッセイのために、ビオチン−ヒストンＨ１ペプチド([Ｉｃビオチン]ＧＧＧＧＰＫＴＰＫＫＡＫＫＬ[ＣＯＮＨ２](配列番号６))を使用した。Ｒｓｋ２アッセイにおいて、ビオチン−ｐ７０ペプチド、１５mM  ＭｇＣｌ２、１mM  ＤＴＴ、５mM  ＥＤＴＡ、２.７μM  ＰＫＣ阻害剤ペプチド、および２.７μM  ＰＫＡ阻害剤ペプチドを使用した。
【０１７８】
チロシンキナーゼ
多くのタンパク質チロシンキナーゼのキナーゼ活性を、ＡＴＰおよびリン酸化のためのチロシンアミノ酸残基を含む適当なペプチドまたはタンパク質を提供し、ホスフェート部分のチロシン残基への移動をアッセイすることにより測定した。ＦＬＴ−１(ＶＥＧＦＲ１)、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、Ｔｉｅ−２、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、およびＦＧＦＲ１受容体の細胞質ドメインに対応する組み換えタンパク質を、バキュロウイルス発現系(InVitrogen)を使用してＳｆ９昆虫細胞に発現させ、Ｇｌｕ抗体相互作用を介して(Ｇｌｕ−エピトープ標識構築物について)または金属イオンクロマトグラフィーにより(Ｈｉｓ６(配列番号１)標識構築物について)精製してよい。各アッセイのために、試験化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、次いで適当なキナーゼ反応緩衝液＋ＡＴＰと混合した。キナーゼタンパク質および適当なビオチニル化ペプチド基質を添加して、５０−１００μLの最終容積とし、反応物を１−３時間、室温でインキュベートし、次いで２５−５０μLの４５mM  ＥＤＴＡ、５０mM  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７.５の添加により停止させた。停止させた反応混合物(７５μL)をストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート(Boehringer Mannheim)に移し、１時間インキュベートした。リン酸化ペプチド生成物を、ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液に抗体希釈のために１mM  ＭｇＣｌ２を添加して改変した、ＤＥＬＦＩＡ時間分解蛍光系(WallacまたはPE Biosciences)でユーロピウム標識抗ホスホチロシン抗体ＰＴ６６を使用して測定した。時間分解蛍光をWallac 1232 DELFIA蛍光光度計またはPE Victor IIマルチプル・シグナル・リーダーで読んだ。５０％阻害(ＩＣ５０)に対する各化合物を、XL Fitデータ解析ソフトウェアを使用した非線形回帰を用いて計算した。
【０１７９】
ＦＬＴ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＦＧＦＲ３、Ｔｉｅ−２、およびＦＧＦＲ１キナーゼを、５０mM  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７.０、２mM  ＭｇＣｌ２、１０mM  ＭｎＣｌ２、１mM  ＮａＦ、１mM  ＤＴＴ、１mg／mL  ＢＳＡ、２μM  ＡＴＰ、および０.２０−０.５０μMの対応するビオチニル化ペプチド基質中でアッセイした。ＦＬＴ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、Ｔｉｅ−２、およびＦＧＦＲ１キナーゼを０.１μg／mL、０.０５μg／mL、または０.１μg／mLで各々添加した。ＰＤＧＦＲキナーゼアッセイについて、１２０μg／mL酵素を、ＡＴＰおよびペプチド基質濃度を１.４μM  ＡＴＰおよび０.２５μM  ビオチン−ＧＧＬＦＤＤＰＳＹＶＮＶＱＮＬ−ＮＨ２(配列番号２)ペプチド基質に変えた以外、上記と同じ緩衝液を共に使用した。
【０１８０】
組み換えおよび活性チロシンキナーゼＦｙｎ、およびＬｃｋは市販されており、Upstate Biotechnologyから購入した。各アッセイのために、試験化合物をＤＭＳＯで連続的に希釈し、次いで適当なキナーゼ反応緩衝液＋１０nM  ３３Ｐガンマ標識ＡＴＰと混合した。キナーゼタンパク質および適当なビオチニル化ペプチド基質を添加し、１５０μLの最終容積とした。反応物を３−４時間、室温でインキュベートし、次いで１００mM  ＥＤＴＡおよび５０μM  未標識ＡＴＰの１００μLの停止反応緩衝液を含むストレプトアビジン被覆白色マイクロタイタープレート(Thermo Labsystems)に移すことにより停止させた。１時間インキュベーション後、ストレプトアビジンプレートをＰＢＳで洗浄し、ウェルあたり２００μL  Microscint 20シンチレーション液を添加した。プレートを密封し、TopCountを使用して計測した。５０％阻害(ＩＣ５０)に対する各化合物の濃度を、XL Fitデータ解析ソフトウェアを使用した非線形回帰を用いて計算した。
【０１８１】
Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、およびｃ−ＡＢＬについてのキナーゼ反応緩衝液は、５０mM  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７.５、１５mM  ＭｇＣｌ２、３０mM  ＭｎＣｌ２、２mM  ＤＴＴ、２mM  ＥＤＴＡ、２５mM  ベータ−グリセロールホスフェート、０.０１％ＢＳＡ／ＰＢＳ、０.５μMの適当なペプチド基質(ビオチニル化Ｓｒｃペプチド基質：ＦｙｎおよびＬｃｋのためにビオチン−ＧＧＧＧＫＶＥＫＩＧＥＧＴＹＧＶＶＹＫ−ＮＨ２(配列番号３))、１μM  未標識ＡＴＰ、および１nMキナーゼを含んだ。
【０１８２】
ｃ−ＫｉｔおよびＦＬＴ−３のキナーゼ活性を、ＡＴＰおよびリン酸化のためのチロシンアミノ酸残基を含むペプチドまたはタンパク質を提供し、ホスフェート部分のチロシン残基への移動をアッセイすることにより測定した。ｃ−ＫｉｔおよびＦＬＴ−３受容体の細胞質ドメインに対応する組み換えタンパク質を購入した(Proquinase)。試験のために、例示化合物、例えば４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンをＤＭＳＯに溶解し、次いで以下に記載のキナーゼ反応緩衝液＋ＡＴＰと混合した。キナーゼタンパク質(ｃ−ＫｉｔまたはＦＬＴ−３)およびビオチニル化ペプチド基質(ビオチン−ＧＧＬＦＤＤＰＳＹＶＮＶＱＮＬ−ＮＨ２(配列番号２))を添加して、１００μLの最終容積とした。これらの反応物を２時間、室温でインキュベートし、次いで５０μLの４５mM  ＥＤＴＡ、５０mM  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.５の添加により停止させた。停止させた反応混合物(７５μL)をストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート(Boehringer Mannheim)に移し、１時間インキュベートした。リン酸化ペプチド生成物を、ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液に抗体希釈のために１mM  ＭｇＣｌ２を添加して改変した、ＤＥＬＰＨＩＡ時間分解蛍光系(WallacまたはPE Biosciences)でユーロピウム標識抗ホスホチロシン抗体、ＰＴ６６を使用して測定した。時間分解蛍光値をWallac 1232 DELFIA蛍光光度計またはPE Victor IIマルチプル・シグナル・リーダーで読んだ。５０％阻害(ＩＣ５０)に対する各化合物の濃度を、XL Fitデータ解析ソフトウェアを使用した非線形回帰を用いて計算した。
【０１８３】
ＦＬＴ−３およびｃ−Ｋｉｔキナーゼを、５０mM  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７.５、１mM  ＮａＦ、２mM  ＭｇＣｌ２、１０mM  ＭｎＣｌ２および１mg／mL  ＢＳＡ、８μM  ＡＴＰおよび１μMの対応ビオチニル化ペプチド基質(ビオチン−ＧＧＬＦＤＤＰＳＹＶＮＶＱＮＬ−ＮＨ２(配列番号２))中でアッセイした。ＦＬＴ−３およびｃ−Ｋｉｔキナーゼの濃度は２nMでアッセイした。
【０１８４】
前臨床多発性骨髄腫モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン効果のリアルタイムおよび包括的造影評価
造血性の骨髄における血漿細胞のクローン増殖に特徴付けられるＢ細胞新生物である多発性骨髄腫(ＭＭ)は、慣用の高用量化学療法の導入にもかかわらず、内因性および後天性の薬剤耐性の発症のために、致命的な血液学的悪性腫瘍のままである。ＭＭ細胞が主に住み(home)、増殖する場所である骨髄微小環境が、ＭＭに対する慣用のおよび新規の治療に対する耐性の発生において重大な役割を有することが証明されている。従って、ＭＭ細胞だけでなく、ＭＭ細胞−骨髄微小環境相互作用も標的とした分子標的薬剤が、ＭＭの処置の可能性のある機会を提供する。ＭＭの分子病理学の理解に対する最近の進歩が、この疾患の処置のための新規治療標的を提供している。約１５％のＭＭ患者で起き、ｔ(４；１４)染色体転座が原因であり、臨床における特に悪い予後をもたらす、異所性に発現され、脱制御されたＦＧＦＲ−３が、ＭＭのための魅力的な治療標的となっている。
【０１８５】
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)は、ＶＥＧＦＲ−２およびＰＤＧＦＲ(キナーゼアッセイでＩＣ５０  〜２０nM)およびＦＧＦＲ−３(キナーゼアッセイでＩＣ５０  〜５nM)を含む多数の受容体チロシンキナーゼを標的とする小分子阻害剤である。４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンが、インビトロでＦＧＦＲ−３変異ＭＭ細胞におけるＦＧＦＲ−３自己リン酸化および細胞増殖を阻害することが証明されている(S. Trudel et al.;Blood；印刷中)。４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの抗骨髄腫効力を評価するために、インビボの前臨床ＭＭモデルが開発され、ここで、多臓器ＭＭ病巣が、ルシフェラーゼの構築物で安定にトランスフェクトした変異ＦＧＦＲ−３(Ｙ３７３Ｃ)を発現するヒトＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞の尾静脈ｉ.ｖ.注射後に発症した。生物発光造影(ＢＬＩ)を用いて、ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ  ＭＭ腫瘍のインビボ増殖および転移を非観血的にモニターした。転移病巣増殖の初期検出および連続的包括的モニタリングは、このモデルでＢＬＩで十分に捕捉された。ほとんど全てのＫＭＳ−１１−ｌｕｃ腫瘍細胞を注射された動物は、２６日目に早くもＭＭ病巣が検出され、それは主に脊椎、頭蓋および骨盤に局在し、このモデルで麻痺の発症を頻繁にもたらした。このｉ.ｖ.注射インビボＫＭＳ−１１−ｌｕｃ  ＭＭモデルでの４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの抗骨髄腫効力を調査し、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの、インビボでＫＭＳ−１１−ｌｕｃ腫瘍におけるＥＲＫのリン酸化を阻害することが証明された用量である２０mg／kgの毎日の経口投与が、連続ＢＬＩ造影で検出して、ＫＭＳ−１１腫瘍増殖の顕著な阻害をもたらすことが判明した。さらに、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの抗腫瘍増殖活性は、媒体処置と比較して、顕著に改善された動物生存率へと訳される。これらの試験は、ＭＭ患者における４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの臨床試験のためのさらなる前臨床根拠を提供し、このＫＭＳ−１１−ｌｕｃ  インビボモデルにおける慣用のまたは他の分子標的薬剤との組み合わせ治療での４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンのさらなる評価の根拠を提供する。
【０１８６】
方法
１８雌(約８週齢)免疫不全ＳＣＩＤベージュマウスの一団をThe Jackson laboratory(Bar Harbor, ME)から得て、滅菌フィルター天井ケージのバリア設備で１２時間明／暗サイクルで飼育した。全実験をAssociation for AssessmentおよびAccreditation ofLaboratory Animal Care Internationalにより承認された設備で、Institutional Animal Care and Use CommitteeおよびGuide for The Care and Use ofLaboratory Animals(National Research Council)のガイダンスに従い、行った。ＦＧＦＲ−３変異を担持するＫＭＳ−１１−ｌｕｃ  ＭＭ細胞(Ｙ３７３Ｃ)を、イスコフ培地＋１０％ＦＢＳ＋Ｌ−グルタミンで培養し、１：２から１：４の範囲で２回／週で継代した。細胞を、尾静脈への静脈注射により、１０×１０６細胞／１００μL  ＨＢＳＳ／マウスで移植した。マウスに３GY(３.２分)を細胞移植の比に照射した。動物は２０mg／kg  ４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンまたは媒体(各群ｎ＝９)の経口処置を、ＫＯＭ１１−ｌｕｃ細胞を注射して４８時間後に開始して、毎日受けた。生物発光画像(ＢＬＩ)を、光を通さないカメラ箱に装着された、高感度の冷却したＣＣＤカメラを含むＩＶＩＳ造影システム(Xenogen)を使用して得た。画像および生物発光シグナルの測定値を、光子／秒で定量して、８日目およびその後１週間に１回得た。動物体重を１週間に２回モニターし、臨床観察を毎日記録した。動物取り扱い規制およびガイドラインに従い、麻痺のイベントまたは生活の質の大きな低下があったときに、マウスをＣＯ２吸入で殺した。
【０１８７】
結果
ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞をＳＣＩＤベージュマウスに静脈内注射してから８日後に、全身造影は細胞増殖および主に肺、肝臓および脾臓を含む骨外性領域に局在する恐らくＭＭ病巣の発生を証明した。頭蓋、骨盤および脊椎を含む典型的な散在性多発性骨格病巣は、大部分のマウスで、図１のＢＬＩ画像に見られるように４１および４８日に見られ、これは後肢麻痺を伴い、プロトコールに従ってマウスを殺す結果となった。
【０１８８】
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの抗骨髄腫効力を、このインビボモデルでＫＭＳ−１１−ｌｕｃで試験した。マウスにＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を注射して４８時間後に、２０mg／kgで５８の経口処置を開始した。各動物における光子数の包括的および連続モニタリングを、週１回基準のスケジュールで行った。図２に示す通り、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン処置群における、媒体処置と比べて顕著に低い平均光子数が証明された。これは、図３に示す通り、ＫＭＳ−１１−ｌｕｃを注射され、媒体で処置したマウスで取った全身ＢＬＩ画像と、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンで処置したマウスのものの比較により容易に得られた。
【０１８９】
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンにより処置したマウスにおける光子数の減少は、媒体で処置したマウスと比較して、生存時間の顕著な増加によりよく反映された。９１日目で、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンで処置したマウスの９匹中５匹の動物が、全体的に健康な状態で生存していた。対照的に、媒体処置群のほとんどの動物は、おおよそ５０日目に殺した。さらに、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンで処置したマウスは、長期間のこの試験でのこの処置に十分に耐容性であった。４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンで処置したマウスの生存時間の明白な改善のため、この試験は実施上の配慮から９１日目に止めた。
【０１９０】
全体的なキナーゼ阻害、ＦＧＦＲ３の阻害および多発性骨髄腫を含む癌の処置に関する、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンでの種々の試験は、公開米国特許出願番号２００４／００９２５３５、および米国特許出願番号１０／９８３,１７４、米国特許出願番号２００４／０２２０１９６、および米国特許６,６０５,６１７に明示されている。従って、これらの各文献は、引用により、その全体として、かつすべての目的に関して、ここに完全に記載されているかのように本明細書に包含される。
【０１９１】
ヒトＡＭＬの実験的腫瘍異種移植モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)の活性
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)は、内皮および腫瘍細胞増殖に関与するＦＬＴ３キナーゼおよびクラスIII、IV、およびＶ  ＲＴＫに対して強力な活性を示す新規で、経口で活性で、多標的の小分子である。急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)におけるＦＬＴ３変異の関連を考慮して、化合物１を、異なるＦＬＴ３変異状態(ＭＶ４；１１  ＦＬＴ３  ＩＴＤ  対ＲＳ４；１１  ＦＬＴ３  ＷＴ)の２種のヒト白血病細胞株に対して試験した。ＭＶ４；１１に対する化合物１の抗増殖性活性は、ＲＳ４；１１と比較して〜２４倍高く、構成的に活性化したＦＬＴ３の阻害により有効な阻害を示した。化合物１でのＭＶ４；１１細胞における受容体リン酸化および下流シグナル伝達(ＳＴＡＴ５およびＥＲＫ／ＭＡＰＫ)の用量依存性調節が、作用の分子機構を示した。ＭＶ４；１１腫瘍におけるｐＦＬＴ３、ｐＥＲＫの標的調節は、化合物１の生物学的活性用量で達成された。腫瘍緩解および骨髄(ＢＭ)からのＡＭＬ細胞の根絶が、皮下およびＢＭ移植白血病異種移植モデルで証明された。腫瘍応答は減少した細胞増殖ならびに活性カスパーゼ−３および開裂ＰＡＲＰに関する正の免疫組織化学染色により特徴付けられ、細胞死がアポトーシスを介することが示唆された。これらのデータは、ＡＭＬにおける化合物１の臨床評価を支持する。
【０１９２】
細胞株
ヒトＭＶ４；１１(ＦＬＴ３  ＩＴＤ)およびＲＳ４；１１(ＦＬＴ３  ＷＴ)白血病細胞は、American Tissue Culture Collection(Rockville, MD)24-26から得た。ＭＶ４；１１細胞を、４mMＬ−グルタミン、５ng／ml  顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭ−ＣＳＦ、R&D Systems, Minneapolis, MN)および１％ペニシリンおよびストレプトマイシンを含む１０％胎児ウシ血清(ＦＢＳ、GibcoLife Technologies, Gaithersburg, MD)を補ったイスコフ改変ダルベッコ培地(ＩＭＢＭ)で増殖させた。ＲＳ４；１１を、１０％ＦＢＳ、１mM  ピルビン酸ナトリウムおよび１０mM  ＨＥＰＥＳ(ｐＨ７.４)を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で増殖させた。細胞を懸濁培養として増殖させ、３７℃および５％ＣＯ２の加湿雰囲気下に維持した。
【０１９３】
キナーゼアッセイ
インビトロＦＬＴ３キナーゼアッセイを、２nM  ＦＬＴ３酵素(Upstate Biotechnology, Charlottesville, VA)で、８μM  ＡＴＰおよび化合物１の連続希釈の存在下で行った。１μMの最終濃度のリン酸化ペプチド基質をユーロピウム標識抗ホスホチロシン抗体(ＰＴ６６)(Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA)とインキュベートした。ユーロピウムを時間分解蛍光を使用して検出した。ＩＣ５０を非線形回帰を使用して計算した。
【０１９４】
増殖アッセイ
細胞を９６ウェルマイクロタイタープレート(１０,０００細胞／ウェル)に播種し、化合物１の連続希釈を添加した。ＲＳ４；１１細胞をＦＬＴ３リガンド(１００ng／ml、R&D Systems, Minneapolis, MN)で刺激した。インキュベーション時間の最後に(３７℃で７２時間)、細胞生存能をＭＴＳアッセイ(Promega, Madison, WI)により決定した。ＥＣ５０値を、非線形回帰を使用して計算し、未処置対照細胞に対する処置細胞の吸光度の５０％減少に必要な濃度として定義した。
【０１９５】
免疫沈降およびウェスタンブロット分析
インビトロ実験のために、ＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１細胞を化合物１で３時間処置した。ＲＳ４；１１細胞を化合物１とインキュベーションした後、ＦＬＴ３リガンド(１００mg／mL)で１５分刺激した。薬剤とインキュベーション後、細胞を回収し、氷冷ＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ阻害剤(Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN)およびホスファターゼ阻害剤(Sigma, St. Louis, MO)を含むＲＩＰＡ緩衝液(１％  Nonidet P-40、０.５％デオキシコール酸ナトリウム、０.１％ドデシル硫酸ナトリウム、１×リン酸緩衝化食塩水中、ｐＨ７.２)で溶解した。インビボ標的調節分析のために、切除した腫瘍を急速冷凍し、粉砕し、−７０℃で貯蔵して、その後１５０mM  ＮａＣｌ、１.５mM  ＭｇＣｈ、５０mM  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７.５、１０％グリセロール、１.０％Triton X-100、１mM  ＥＧＴＡ、５０mM  ＮａＦ、１mM  Ｎａ３ＶＯ４、２mM  Pefabloc(Roche)、およびcompleteプロテアーゼ阻害剤カクテル(Roche)で溶解した。溶解物のタンパク質含量をＢＣＡアッセイ(Bio-Rad, Hercules, CA)を使用して決定した。ｐＥＲＫについてのウェスタンブロット分析を、ｐＥＲＫに対するマウス抗体(１：１０００、Cell Signaling, Beverly, MA)で行い、４℃で一晩インキュベートした。総ＥＲＫレベルを、全ＥＲＫに対する抗体(Cell Signaling)で再プローブすることにより評価した。次いで、膜を１時間、ＲＴで１：５０００ホースラディッシュペルオキシダーゼ接合抗ウサギＩｇＧ(Jackson Immunoresearch, West Grove, PA)とインキュベートした。ＦＬＴ３を検出するための免疫沈降のために、等量のタンパク質(ＳＴＡＴ５については５００μg；ＦＬＴ３については１０００μg)を、ヒトＦＬＴ３またはＳＴＡＴ５(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)のいずれかに対する抗体と一晩、４℃でインキュベートし、そしてタンパク質Ａ−アガロースと２時間、４℃でインキュベートした。ＦＬＴ３またはＳＴＡＴ５リン酸化を抗ホスホチロシン抗体(Cell Signalingからの抗ｐＦＬＴ３抗体、およびUpstateからの抗ｐＳＴＡＴ５抗体)でのプロービングにより測定した。タンパク質を、高感度ケミルミネッセンス(ＥＣＬ；Amersham Biosciences, Buckinghamshire, England)を使用して検出し、コダック・フィルムに暴露後に可視化した。走査デンシトメトリーをバンド強度の定量により行った。等負荷を確認するために、ブロットを取り(stripped)、抗ＦＬＴ３(Santa Cruz Biotechnology)または抗ＳＴＡＴ５(BD Biosciences)いずれかに対する抗体で再プローブし、全ＦＬＴ３またはＳＴＡＴ５タンパク質を各々測定した。ｐＦＬＴ３、ｐＥＲＫまたはｐＳＴＡＴ５の量を全ＦＬＴ３、ＥＲＫまたはＳＴＡＴ５タンパク質レベルに対して標準化し、媒体または未処置対照と比較した。
【０１９６】
フローサイトメトリーアッセイ
ＭＶ４；１１細胞を、化合物１で３時間、血清欠乏条件下で処理する(一晩ＯｐｔｉＭＥＭ培地中)。ｐＳＴＡＴ５の検出のために、細胞を１％ホルムアルデヒドで固定し、そして９０％氷冷メタノールで透過性とした。透過性細胞(０.５−１×１０６)を抗ｐＳＴＡＴ５抗体(Cell Signaling)と３０分インキュベートした。同じ濃度の精製ウサギＩｇＧ(Oncogene, San Diego, CA)をアイソタイプ対照として使用した。二次抗体はＰＥ接合ヤギＦ(ａｂ')２抗ウサギＩｇＧ(Jackson Immunoresearch)であった。サンプルを４℃で暗所に貯蔵し、その後ＦＡＣＳｃａｎフロー・サイトメーター(Becton Dickinson, San Jose, CA)を使用して分析した。平均蛍光強度(ＭＦＩ)を、CellQuestソフトウェア(Becton Dickinson)を使用してｐＳＴＡＴ５染色について決定し、特異的ＭＦＩは、アイソタイプ対照抗体のＭＦＩからの差異であった。
【０１９７】
マウスＭＶ４；１１移植モデルからの骨髄(ＢＭ)細胞を処理するために、大腿骨を冷食塩水でパージし、赤血球細胞をＦＡＣＳ溶解緩衝液(Becton Dickinson)で溶解した。マウスＢＭにおけるヒト白血病細胞の移植パーセントを、抗ヒトＨＬＡ−Ａ,Ｂ,Ｃ−ＦＩＴＣ(対アイソタイプマッチ抗体ＦＩＴＣ対照)(BD Pharmingen)で染色することにより決定した。
【０１９８】
ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ
ＭＶ４；１１細胞を、１０％ＦＢＳ含有培地中、種々の濃度(０−１μM)の化合物１と４８時間インキュベートした。上清を遠心分離後集め、そしてＶＥＧＦレベルをＥＬＩＳＡ(R&D Systems, Minneapolis, MN)により測定した。タンパク質濃度をＢＩＯ−ＲＡＤタンパク質アッセイ(Hercules, CA)を使用して決定し、結果をタンパク質濃度に対して標準化した。
【０１９９】
インビボ効力試験
雌ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(４−６週齢、１８−２２ｇ)をCharles River(Wilmington, MA)から得て、無病原体檻に、試験開始前１週間馴化させた。動物に滅菌齧歯類餌および水を自由に与え、滅菌フィルター天井ケージで１２時間明／暗サイクルで飼育した。全実験はAssociation for AssessmentおよびAccreditation ofLaboratory Animal Care Internationalのガイドラインに沿った。
【０２００】
皮下モデル
ＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１細胞を、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの皮下(s.c.)腫瘍から継代した。細胞(５×１０６細胞／マウス)を５０％  Matrigel(Becton Dickinson)で再構成し、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの右脇腹の皮下にインプラントした。具体的試験設計に概説の通り、腫瘍が２００−１０００mm３に達したときに処置を開始した。マウスを無作為に一団(典型的に効力試験については１０匹マウス／群および薬力学(ＰＤ)試験については３−５匹マウス／群)に無作為に振り分けた。化合物１を、強制喫食により溶液として与えた。腫瘍容積および体重を週に２−３回評価した。腫瘍のカリパス測定値を、式：１／２(長さ×[幅]２)を使用して平均腫瘍容積に変換した。腫瘍増殖阻害(ＴＧＩ)パーセントを媒体処置マウスと比較した。応答率は、処置開始時の腫瘍容積と比較した、完全応答ＣＲ(触診可能な腫瘍なし)または部分応答ＰＲ(５０−９９％退縮)として定義した。
【０２０１】
静脈内骨髄(ＢＭ)移植モデル
ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスを照射(３Ｇｙ)し、その後０.２ml  食塩水中の１×１０７  ＭＶ４；１１細胞を尾静脈注射した。化合物１または媒体処置を細胞接種３週間後に開始した。マウスを毎日モニターし、そして瀕死または後肢運動性の損失の初期徴候のときに殺した。処置マウスの延長した寿命(ＩＬＳ)を、媒体処置対照マウスに対する中央生存時間(ＭＳＴ)の増加パーセントとして計算した。
【０２０２】
インビボ標的調節
ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３マウス／群)におけるＭＶ４；１１  ｓ.ｃ.腫瘍は３００mm３の段階であり、処置は媒体から成るかまたは化合物１を経口で１０mg／kgで５日間投与した。化合物１のＰＤ特性を特徴付けるために、腫瘍サンプルを化合物１投与後種々の時点(Ｎ＝３マウス／時点)で集めた。
【０２０３】
免疫組織化学
切除した腫瘍を１０％中性緩衝化ホルマリンに一晩、ＲＴで入れ、７０％エタノールに移し、Thermo Electron Excelsior組織プロセッサー(Pittsburgh, PA)を使用してパラフィン包埋するために処理した。骨(大腿部)サンプルを脱灰する(ProtocolTM, Fisher Diagnostics, Middletown, VA)。パラフィンブロックを４μm厚に切り、正荷電ガラススライドにおいた。組織をDiscovery automated slide machine(Ventana Medical Systems, Tucson, AZ)を使用して染色した。スライドを、Ｋｉ−６７、ｐＥＲＫおよびＰＡＲＰ染色のための抗原を回収するために加圧スチーマー中クエン酸緩衝液(ｐＨ６.０)で処理し、そしてカスパーゼ−３をVentana試薬ＣＣ１で回収した。使用した一次抗体はＫｉ−６７(１：７５０希釈、NovoCastra Laboratories, UK)、ｐＥＲＫ(１：１００希釈、Biosource, Camarillo, CA)、抗ヒトミトコンドリア(１：２００、Chemicon, Temecula, CA)、開裂カスパーゼ−３(１：２００、Cell Signaling)および開裂ＰＡＲＰ(１：１００、Biosource)であった。二次抗体をヤギ抗ウサギＦ(ａｂ')２ビオチニル化抗体、１：１００希釈(Jackson ImmunoResearch)であった。スライドをヘマトキシリンで対比染色し、カバーガラスと共にマウントした。一般的組織形態学をまたヘマトキシリンおよびエオシン染色を使用して評価した。
【０２０４】
統計学的解析
線形回帰をMicrosoft Excel(Redmond, WA)を使用して行った。ステューデントのｔ検定を使用して、２処置群間の統計学的有意を測定した。複数比較は、一元配置分散分析(ＡＮＯＶＡ)を使用して行い、および異なる処置平均を比較する検定後をスチューデント−ニューマン−クール検定(SigmaStat, San Rafael, CA)を使用して行った。生存試験について、log rank検定を使用して、種々の処置対媒体群の間の生存曲線の差異を決定した(Prism, San Diego, CA)。試験終了時に正常の健康状態で殺したマウスは、長期生存者と見なし、この解析から除いた(censored)。ｐ＜０.０５で差異を統計学的有意と見なした。
【０２０５】
結果
化合物１はＦＬＴ３キナーゼ活性の強力な阻害を証明する
化合物１の特異性を、上記の精製酵素でのＡＴＰ競合結合アッセイを使用して、様々なＲＴＫに対して試験した。化合物１は、ＦＬＴ３(１nM)に対して非常に活性であり、ｃ−ＫＩＴ(２nM)、ＶＥＧＦＲ１／２／３(１０nM)；ＦＧＦＲ１／３(８nM)；ＰＤＧＦＲＲ(２７nM)およびＣＳＦ−１Ｒ(３６nM)に対してナノモルで活性を有することが判明した(以下の表参照)。クラスIII、IVおよびＶ  ＲＴＫに対する選択性を確認するために、化合物１を、ＰＩ３Ｋ／ＡｋｔおよびＭＡＰＫ(Ｋ)経路における他のキナーゼに対して試験し、ごくわずかな活性(ＩＣ５０＞１０μM)であることが判明した(以下の表参照)。
表。種々のＲＴＫに対する４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの活性
【表３】
2008540543.tif 000023
【０２０６】
上記表を作成するために使用したインビトロＲＴＫアッセイは、上記の精製酵素およびＡＴＰ存在下で、化合物１の種々の希釈で行った。リン酸化ペプチド基質(１μM)をユーロピウム標識抗ホスホ特異的抗体で標識し、ユーロピウムを時間分解蛍光を使用して検出した。
【０２０７】
ＭＶ４；１１(ＦＬＴ３  ＩＴＤ)細胞に対する化合物１の抗増殖効果
ＦＬＴ３の阻害がインビトロの増殖阻害に翻訳されるかを決定するために、化合物１の活性を、ＭＴＳアッセイを使用してＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１細胞で試験した(図５)。化合物１は、用量依存的方法でＭＶ４；１１細胞増殖を強力に阻害し、ＥＣ５０＝１３nMであった。増殖に対する類似の濃度依存的作用はＲＳ４；１１細胞でも見られたが、化合物１に対して約２４倍感受性が低かった(ＥＣ５０＝３１５nM)。化合物１の抗増殖効果はまたＦＬＴ３  ＩＴＤ変異細胞でも試験し、ＭＯＬＭ１３およびＭＯＬＭ１４は、ＭＶ４；１１で見られたのと類似のＥＣ５０濃度であった(ＥＣ５０  〜６nM)(データは示していない)。これらのデータは、化合物１がＦＬＴ３  ＩＴＤおよびＷＴ白血病細胞の両方に活性であり、構成的に活性な受容体が阻害により感受性であることを示唆する(図５)。
【０２０８】
白血病細胞におけるＦＬＴ３仲介シグナル伝達に対する化合物１のインビトロ効果
化合物１のインビトロ細胞活性を、対照的な(ＲＴ−ＰＣＲを使用して確認、データは示していない)ＦＬＴ３変異状態の２種のヒト白血病細胞株ＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１に対して試験した。ＭＶ４；１１細胞は遺伝子内縦列重複変異(ＩＴＤ)をＦＬＴ３受容体に有し、構成的に活性化したＦＬＴ３をもたらす. Levis M. et al., Blood, 99:3885-3891(2002);O'Farrell A.M. et al., Blood, 101:3597-3605(2003)。この活性化は、外因リガンド刺激の非存在下でのＦＬＴ３自己リン酸化をもたらす(図６、レーン１)。血清欠乏ＭＶ４；１１細胞を化合物１で３時間処置し、ＦＬＴ３受容体活性化に対する直接作用を、そのリン酸化状態の分析により決定した。ＭＶ４；１１細胞の増加した濃度の化合物１への暴露は、１−１０nMのＥＣ５０でｐＦＬＴ３を用量依存的方法で協力に阻害した(図６)。
【０２０９】
ＦＬＴ３  ＩＴＤが約２０％のＡＭＬ患者芽球で優勢であるが、ほとんどの急性白血病はＷＴ  ＦＬＴ３を発現する。化合物１の白血病ＲＳ４；１１細胞に対する作用も、ＦＬＴ３受容体リン酸化を活性化するために(図７、レーン１対２)外因ＦＬＴ３リガンド(１００ng／ml、１５分)の後に試験した(ＦＬＴ３  ＷＴ)(図７)。化合物１はＲＳ４；１１細胞におけるｐＦＬＴ３レベルを低下させた(図７)。しかしながら、ＩＴＤに対してＷＴ  ＦＬＴ３の調節のために、比較的高い濃度が必要であった。完全阻害が＞０.５μMの濃度で得られた(図６および７)。
【０２１０】
化合物１はＦＬＴ３阻害の下流標的であるＥＲＫおよびＳＴＡＴ５を調節する
ＦＬＴ３阻害に対する化合物１の作用をさらに特徴付けるために、細胞生存および増殖における重要なタンパク質であるＦＬＴ３の下流標的、すなわち、ＳＴＡＴ５およびＥＲＫの調節を試験した。ＭＶ４；１１細胞を、漸増濃度の化合物１で３時間処理し、ｐＥＲＫおよびｐ−ＳＴＡＴ５の検出のためにフローサイトメトリーおよびウェスタンブロットで処理した(図８および９)。ＭＶ４；１１細胞において、ＦＬＴ３の活性シグナル伝達のために、細胞はｐＥＲＫおよびｐＳＴＡＴ５の高い基底レベルを有する(図８および９)。化合物１は、用量依存的方法でＥＲＫ(図８)およびＳＴＡＴ５(図９)のリン酸化を阻害した。ｐＥＲＫおよびｐＳＴＡＴ５の実質的阻害(＞５０％)が＞０.１μM(フローサイトメトリーおよびウェスタンブロット)の濃度で観察された。化合物１のｐＥＲＫおよびｐＳＴＡＴ５に対する阻害作用は、ＦＬＴ３リガンド刺激ＲＳ４；１１細胞と比較してＭＶ４；１１でより強力であった(データは示していない)。
【０２１１】
化合物１は、インビトロでＭＣ４；１１細胞における自己分泌ＶＥＧＦ産生を阻害する
化合物１のインビトロでのＶＥＧＦ産生に対する効果と取り組むために、ＥＬＩＳＡをＭＶ４；１１培養上清で行った(図１０)。これらの実験において、ＭＶ４；１１細胞を漸増濃度(０−１μM)の化合物１を含む１０％ＦＢＳ含有培地で４８時間培養した。薬剤処置なしで、ＭＶ４；１１細胞は相当量のＶＥＧＦ(１８０pg／ml)を分泌し、一方化合物１は用量依存的方法でＶＥＧＦ産生を阻害し、ＥＣ５０は０.００１から０.０１μMであり、そして完全阻害は＞０.５μMの濃度であった(図１０)。
【０２１２】
化合物１はインビボでＦＬＴ３シグナル伝達を調節する
インビボ標的調節を試験するために、ＭＶ４；１１腫瘍担持マウス(３００−５００mm３の段階)に化合物１(１０mg／kg／日)または媒体を５日間投与した。腫瘍を選択した時点の後に回収し、均質化し、ＩＰ／ウェスタンブロットによりｐＦＬＴ３およびｐＳＴＡＴ５レベルを分析した。ｐＦＬＴ３およびｐＳＴＡＴ５レベルにおける顕著な減少が、化合物１の１回投与(データは示していない)または複数回投与(図１１)いずれかの４時間後ほど早い時間に観察され、全ＦＬＴ３またはＳＴＡＴ５タンパク質に対して効果はなかった(図１１)。ＦＬＴ３およびＳＴＡＴ５両方のリン酸化は基線に対して低下し、投与８時間後に〜−９０％の最大阻害に達し、２４時間抑制されたままであった(〜８５％阻害)。投与４８時間後ホスホ−ＦＬＴ３は基線レベル近くに戻り、一方、ｐ−ＳＴＡＴ５はまだ阻害されたままであった(〜６０％阻害)(図４)。ｐＥＲＫレベルの減少が観察され、下流ＦＬＴ３シグナル伝達の遮断が示された(データは示していない)。
【０２１３】
インビボ効力試験
インビボでのＭＣ４；１１およびＲＳ４；１１腫瘍に対する化合物１の用量応答効果
化合物１のインビトロ作用がインビボでの腫瘍増殖阻害と相関しているかどうかを確認するために、化合物１の効力をＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにおけるＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１腫瘍異種移植片において試験した。マウスに腫瘍細胞を皮下にインプラントし、化合物１処置を、腫瘍が２００−３００mm３になったときに開始した。用量応答効力試験において、化合物１をＭＶ４；１１腫瘍については１−３０mg／kg／日の範囲でおよびＲＳ４；１１腫瘍については１０−１５０mg／kg／日の範囲で経口で投与した。
【０２１４】
化合物１はＭＶ４；１１腫瘍に対して非常に強力であり、＞５mg／kg／日の用量で顕著な腫瘍増殖阻害を有して良好な用量応答効果を示した(図１２)。３０mg／kg／日の応答は腫瘍緩解(９／１０腫瘍応答)を誘発し、これは部分および完全応答者の両方から成った(１ＣＲ、８ＰＲ)。中程度の腫瘍増殖阻害が２週間投与後に１mg／kg／日(２３％)で見られ、このモデルにおける統計学的に有意な最小量として同定した(媒体に対してｐ＜０.０１)。ＲＳ４；１１腫瘍担持マウスにおいて、化合物１での処置は腫瘍増殖阻害をもたらすが、しかしながら緩解は観察されなかった(図１３)。化合物１の阻害作用は、各モデルのそれぞれの最小有効量により定義して、ＲＳ４；１１腫瘍と比較してＭＶ４；１１腫瘍でより強力であった(８日目：１００mg／kg／日；４８％ＴＧＩ、ＲＳ４；１１腫瘍に対してｐ＜０.０１対：１mg／kg／日；２３％ＴＧＩ；ＭＶ４；１１腫瘍に対してｐ＜０.０１)。
【０２１５】
化合物１の別の投与スケジュールは等しく強力である
ＭＶ４；１１異種移植腫瘍に対する化合物１の断続的および周期的投与の効果も試験した(図１４)。化合物１を毎日、１日おき(ｑ.ｏ.ｄ.)、または７日間投与後７日間休薬を２サイクルで周期的に３０mg／kg投与した(図１４)。毎日の投与と同様に、断続的投与レジメンは、薬剤処置数日以内に顕著な腫瘍緩解を生じた(＞９４％ＴＧＩ)。全ての３種のレジメンは同等な抗腫瘍活性をもたらし(２９日目、ｐ＞０.０５)、ｑ.ｏ.ｄ.(６ＰＲ)および７日間投薬／７日間休薬(９ＰＲ)で見られた応答数は毎日処置で見られた応答数(１ＣＲ、９ＰＲ)と同等であった。
【０２１６】
化合物１は大ＭＶ４；１１腫瘍に対して有効である
化合物１の、種々のサイズ；３００、５００または１０００mm３の大ＭＶ４；１１腫瘍に対する効果も試験した。化合物１(３０mg／kg／日)での処置は、全ＭＶ４；１１腫瘍のいて顕著な緩解を誘発し、それは処置開始時の腫瘍サイズと無関係であった(図１５)。腫瘍緩解は薬剤処置３−５日以内に明白となった。全処置腫瘍(ｎ＝２７)が応答し、１５％完全応答および７０％部分応答であった。残りの１５％はわずかな応答かまたは安定なままであった。投与を５０日後に停止した。５０日処置間に腫瘍再増殖はなく、化合物１に対する耐性が生じないことを示した。処置停止後の応答の永続性も試験した。１ＣＲおよび約５０％のＰＲが、化合物１休薬後４０日間続いた。再増殖した１０腫瘍(６００−２０００mm３まで)を、試験９０日目(休薬４０日後)に３０mg／kg／日  化合物１で再処置し、６０日間続けた。全腫瘍が化合物１の第二サイクルに応答性であり(２ＣＲ、８ＰＲ)、化合物１に対する腫瘍耐性がないことを明白に示した(図１６)。
【０２１７】
インビボでの生物学的活性の組織学的評価
腫瘍容積および標的調節エンドポイントに加えて、免疫組織化学読み出しを、薬剤活性の指標として使用した(図１７−１９)。化合物１投与の一時的作用(３０mg／kg／日)を、１回または５回投与後にＭＶ４；１１腫瘍で調べた(図１７)。Ｈ＆Ｅ染色を使用した形態学的評価は、顕著な細胞過多を伴うＭＶ４；１１腫瘍細胞から成る媒体処置腫瘍が骨髄過形成の指標であることを確認した(図１７−ａ)。Ｋｉ６７で強く染色された腫瘍細胞は、非常に増殖性の細胞の腫瘍組成を示した(図１７−ｂ)。投与２４時間後、化合物１で処置した腫瘍は、密集した細胞の減少およびアポトーシス／壊死細胞の散在領域から成ることを示す(１日目、図１７−ａ対ｆ)。アポトーシス／壊死の領域は、５回投与後にさらに明瞭になり、非生存可能腫瘍の著しい領域がＫｉ６７染色の減少と一致した(図１７−ｇ)。標的調節は、インビボでｐＥＲＫの免疫組織化学染色から確認された。ホスホ−ＥＲＫは、５日の投与期間中化合物１処置腫瘍において顕著に低下され、腫瘍におけるｐＥＲＫのウェスタン分析を補った(図１７−ｃ対ｈ)。化合物１誘発アポトーシスは、５日目に媒体処置対照と比較して腫瘍における活性化カスパーゼ−３(図１７−ｄ対ｉ)および開裂ＰＡＲＰ(図１７−ｅ対ｊ)染色の増加から証明された。減少した細胞充実度および増殖ならびに減少したｐＥＲＫは、化合物１で処置したＲＳ４；１１腫瘍処置で明白であった(３０mg／kg／日)(図１８)。
【０２１８】
部分(図１９−ｃ,ｄ)または完全応答(図１９−ｅ)のいずれかと定義される腫瘍の組織学も試験した。完全応答者は、ＭＶ４；１１腫瘍細胞が全くなく、壊死および／または瘢痕組織の残留物しか示さなかった(図１９−ｅ)。部分応答において、Ｋｉ６７陽性増殖腫瘍細胞のポケットが腫瘍末梢において観察された(図１９−ａ,ｃ対ｂ,ｄ)。
【０２１９】
化合物１は散在性にヒト白血病細胞を担持するマウスの生存時間を延長する
化合物１の効果を、細胞を照射したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの尾静脈に接種したＭＶ４；１１白血病モデルで試験した(図２０)。このモデルにおいて、ＭＶ４；１１細胞は骨髄(ＢＭ)に広がり、ヒト白血病に類似した疾患パターンを病理学的に摸倣した。マウスに１日目にＭＶ４；１１細胞を注射し、化合物１(２０mg／kg、毎日または７日間投薬／７日間休薬、ｎ＝１０−１２／群)での処置をＢＭにおけるＭＶ４；１１細胞移植後２３日目に開始した。対照(媒体処置)マウスは、ＢＭへの腫瘍細胞浸潤の結果として典型的に後肢麻痺を発症し、５１日間の中央生存時間(ＭＳＴ)であった(図２０)。生存試験において、化合物１での毎日処置(２３−１００日目)は、媒体処置対照(ＭＳＴ＝５１日間)と比較して疾患進行までの時間を顕著に遅らせ(ＭＳＴ＝１３４日間)(ｐ＜０.０００１)、寿命の１６３％増加を証明した(ＩＬＳ)(図２０)。目立つことに、毎日の化合物１処置で、４匹のマウスが長期生存者であった(ＭＳＴ＞１６０日間)。組織学的分析およびフローサイトメトリーを使用してＢＭにおけるＭＶ４；１１細胞の移植％を定量した(図２１)。フローサイトメトリー分析において、マウスＢＭで、ヒトＭＶ４；１１細胞を、ヒトＭＨＣＩ上のエピトープに結合する抗ヒトＨＬＡ−Ａ,Ｂ,Ｃ抗体で同定した。媒体処置マウスにおいて、約２−１９％の全単離ＢＭ細胞は、移植したＭＶ４；１１細胞から成った(５１日目、図２１−ａ)。これはまた、マウスＢＭマトリックスにおけるヒト細胞を同定するＭＶ４；１１細胞を染色するヒトミトコンドリアに対する抗体での免疫組織化学によって強められた(図２１−ｂ,ｃ)。毎日２５日にわたり投与された化合物１(２０mg／kg)は、媒体処置に対して白血病負担を顕著に減少させた(ＢＭにおいて＜１％ＭＶ４；１１細胞)(図２１−ａ対ｄ)。興味深いことに、化合物１処置後に生存していたマウスの免疫組織化学はＢＭにおける腫瘍細胞の証拠を示さず(１６７日目の抗ヒトミトコンドリア陽性細胞の不在として見られる)、“治癒”と定義された(図２１−ｅ,ｆ)。化合物１の周期的投与(７日間投薬／７日間休薬、５サイクル)も生存時間を顕著に増加させたが(ＭＳＴ＝１１８日間、１３１％ＩＬＳ対媒体、ｐ＝０.０００１)、毎日レジメン程有効ではなかった(ｐ＝０.００７、図２０および２１)。
【０２２０】
考察
腫瘍細胞増殖に関与する異常細胞内キナーゼシグナル伝達経路を標的とすることは、細胞過程を中断させ、腫瘍増殖阻害をもたらす。これは、ＣＭＬ(Ｂｃｒ−Ａｂｌ)および消化器間質腫瘍(ｃ−ＫＩＴ)におけるイマチニブ(Gleevec)難治性進行性または転移性非小細胞性肺癌(ＥＧＦＲ)におけるゲフィチニブ(Irressa)の２個の承認された小分子標的薬剤により例示されている。Druker B.J. Oncogene, 21:8541-8546(2002);Giaccone G. Clin Cancer Res. 10:4233S-4237S(2004)。両化合物とも腫瘍細胞で欠損している特異的分子を標的とし、この成功がＦＬＴ３  １５,２０−２３を含む他の発癌性キナーゼに対する分子標的治療への研究に駆り立てている。ＦＬＴ３遺伝子における変異はＡＭＬにおいて最も一般的な遺伝子変化であり、そこで、ほぼ３５％の患者が活性化変異を担持する。ＦＬＴ３変異は悪い臨床予後をもたらすことが示されており、故に、ＦＬＴ３をＡＭＬにおける治療標的として包含される。Thiede C. et al., Blood, 99:4326-4335(2002);Schnittger S, et al., Blood, 2002;100:59-66(2002)。
【０２２１】
化合物１は多標的キナーゼ阻害剤であり、腫瘍増殖および血管形成に関与するクラスIII、IVおよびＶ  ＲＴＫにナノモルで効力を有する。生化学キナーゼアッセイは、化合物１がＦＬＴ３に対して強力な活性を有することを証明する(１nMのＩＣ５０)。２種の白血病細胞株における化合物１の活性は、対照的なＦＬＴ３状態、ＭＶ４；１１(ＦＬＴ３  ＩＴＤ)およびＲＳ４；１１(ＦＬＴ３  ＷＴ)により特徴付けられた。化合物１は用量依存的方法でＦＬＴ３リン酸化を減少することが示され、細胞における分子活性を確認した。インビトロで、化合物１は、両方とも細胞増殖性経路の重要なレギュレーターである、分裂促進的ＭＡＰＫおよびＳＴＡＴ５経路におけるその後の下流シグナル伝達分子を遮断する。興味深いことに、ＦＬＴ３標的調節に対する活性は、細胞毒性／増殖アッセイにおける化合物１の作用と同様、ＲＳ４；１１細胞よりもＭＶ４；１１細胞でより顕著であった。ＦＬＴ３−ＩＴＤおよび野生型ＦＬＴ３に対する類似の差次的作用が他のＦＬＴ３阻害剤に関しても報告されている。ＦＬＴ３  ＩＴＤ  ＭＶ４；１１細胞が構成的に活性なシグナル(Ｒａｓ、ＳＴＡＴ５)を有し、それが細胞増殖を駆動し、そして、ＦＬＴ３活性化と無関係に増殖を持続できるおよび／または他の発癌性経路に依存し得るＦＬＴ３  ＷＴ(ＲＳ４；１１)細胞とは異なることが理由であり得る。Minami Y. et al., Blood, 102:2969-2975(2003);Kiyoi H. et al., Oncogene, 21:2555-2563(2002);Spiekermann K. et al., Clin Cancer Res. 9:2140-2150(2003)。
【０２２２】
インビボ試験の結果は、白血病の固形腫瘍および散在性ＢＭモデルの両方に対して化合物１が強力な活性を有することを証明している。前臨床モデルにおける化合物１の分子活性を、標的調節の程度および期間を試験するためのＰＤエンドポイントを使用して取り組んだ。化合物１は、ＭＶ４；１１腫瘍におけるｐＦＬＴ３およびｐＥＲＫ両方を実質的に下方制御した。標的調節(ｐＦＬＴ３)は、化合物１の１回投与または複数回投与に続き４時間までに観察され、腫瘍で２４時間まで持続した。生物学的作用はまた腫瘍組織病理学からの明白であり、それでは腫瘍における減少したｐＥＲＫ、増殖およびアポトーシス応答が薬剤処置１−２日以内に観察された。ＭＶ４；１１の固形腫瘍異種移植片において、腫瘍緩解はまた処置の数日以内に明白となった。ＭＶ４；１１モデルにおける化合物１の強力な阻害作用が、他のＲＴＫの阻害と組み合わさったＦＬＴ３の阻害の直接阻害に起因し得る可能性がある。データ(ＲＴ−ＰＣＲ、示していない)は、ＭＶ４；１１細胞がまた全て化合物１により有効に阻害されるＲＴＫであるＶＥＧＦＲ１、ｃＫＩＴ、ＰＤＧＦＲβ、ＦＧＦＲ１、ＣＳＦ−１  Ｒ３２も発現することを示す。化合物１はＶＥＧＦ１／２／３キナーゼに対して＜１０nM活性を有し、データは、化合物１がＭＶ４；１１インビトロ培養において自己分泌ＶＥＧＦレベルを阻害できることを明らかに証明する。分泌されたＶＥＧＦまたはＦＧＦの腫瘍細胞または腫瘍間質細胞(内皮細胞を含む)によるインビボ、自己分泌または傍分泌阻害は、これらの細胞の増殖および生存を阻害し得る。Ferrara N. et al., Nat Med.,9:669-676(2003);Compagni A. et al., Cancer Res. 60:7163-7169(2000);Carmeliet P. Nat Med., 9:653-660(2003)。固形腫瘍における化合物１のさらなる活性は、血管形成中の血管の周皮細胞動員および成熟に影響することによる、ＰＤＧＦＲＲに対するその作用に起因し得る。Carmeliet P. Nat Med. 9:653-660(2003);Ostman A. Cytokine Growth Facotr Rev., 15:275-286(2004)。ＡＭＬ  ＢＭモデルにおいて、我々は化合物１がマウスの生存を改善し、あるマウスにおいては疾患を婚前することを証明した。これは化合物１が、直接の抗増殖性作用または骨髄血管形成の制御により、循環芽球および芽球生存に役割を有し得るＢＭ疾患の両方を根絶する可能性を示す。Carow C.E. et al., Blood, 87:1089-1096(1996);Drexler H.G. Leukemia, 10:588-599(1996)。
【０２２３】
化合物１の薬理学および標的阻害に基づいて、化合物１の断続的および周期的投与計画を試験した。化合物１の別の投与スケジュールは、化合物１の毎日投与と比較して類似の活性を証明し、臨床における柔軟性のある投与レジメンの可能性を示唆する。化合物１の多回投与は連続的に腫瘍増殖を抑制でき、処置停止後の全ての再発腫瘍はこの薬剤での再処置に等しく感受性であることが判明した。これらの発見は、ＡＭＬ患者がキナーゼ阻害剤での連続した処置にもかかわらず処置中に再発を示すことがあるため、臨床目的に以降するならば、意味がある。Fiedler W. et al., Blood, (2004);Cools J. et al., Cancer Res. 64:6385-6389(2004)。代謝または細胞流出(Ｐ−糖タンパク質のような薬剤トランスポーターの発現を介して)、または薬剤結合を妨害する酵素活性部位のＡＴＰ結合ドメインの変異を含む多数の機構が、キナーゼ阻害剤に対する耐性と相関することが示されている。Bagrintseva K. et al., Blood, 103:2266-2275(2004);Grundler R. et al., Blood, 102:646-651(2003)。化合物１はＰ−ＧＰ基質ではなく、薬剤処置の経過中の持続性の応答は、耐性の獲得が化合物１で避けられ得ることを暗示し得る。
【０２２４】
ＡＭＬのためのＦＬＴ３阻害剤(ＳＵ１１２４８  ＰＫＣ４１２、ＣＥＰ−７０１、ＭＬＮ５１８)の臨床開発はまだ初期相にある。O'Farrell A.M. et al., Clin. Cancer Res. 9:5465-5476(2003);Fiedler W. et al., Blood, (2004);Stone R.M. et al., Ann Hematol. 83 Suppl 1:S89-90(2004);Smith B.D. et al., Blood, 103:3669-3676(2004);DeAngelo D.J. et al., Blood, 102:65a(2003)。単剤治療の選択はまだ顕著な応答をもたらさず、ＡＭＬにおけるＦＬＴ３阻害剤のさらなる臨床開発は、これらの薬剤と細胞毒性剤または他の分子標的薬剤との組み合わせに依存し得る。ＡＭＬの病因に役割を有することが既知のＲＴＫに対してさらなる活性を有する強力なＦＬＴ３阻害剤である化合物１についてここで報告するデータは、その臨床評価の正当な根拠である。
【０２２５】
患者における薬剤耐性癌に対する活性
４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]−１Ｈ−キノリン−２−オン(化合物１)のような式Ｉ、II、およびIIIの化合物は腫瘍細胞ならびに腫瘍に供給される血管の形成および維持に対する直接活性を有する。これらの化合物はまた種々の血管形成腫瘍および転移動物モデルにおいて経口活性も示す。図２２に示す通り、化合物１はクラスIII、IVおよびＶ  ＲＴＫを選択的に阻害する(ＩＣ５０値の表もまた参照)。大きな、確立されたＫＭ１２Ｌ４Ａヒト結腸腫瘍異種移植片を担持するヌードマウスへの化合物１の投与は、９０−１００％の処置動物において緩解および／または疾患安定化を提供した(図２３参照)。
【０２２６】
第Ｉ相用量漸増多施設オープンラベル試験を、進行した固形悪性腫瘍を有する対象において、化合物１の安全性、薬物動態学的、および薬力学を評価するために行った。本試験のさらなる一次評価項目は進行した固形腫瘍の対象における：１)最大耐量(ＭＴＤ)の決定；２)用量規制毒性(ＤＬＴ)の同定；および３)安全性プロファイル(provil）の評価を含む。本試験の二次評価項目は：１)薬物動態学の評価；２)血漿、末梢血リンパ球、尿、および腫瘍細胞における薬力学の評価；３)今後の治験のための量およびスケジュールの推奨；および４)抗腫瘍活性(ＲＥＣＩＳＴ)の証拠の決定を含む。
本治験に関する詳細を以下に示す。
投与レジメンは以下を含む：
−  １日１回投与７日間投薬／７日間休薬、反復(用量２５−１００mg)
−  ≧１００mg用量の７日間投薬／７日間休薬１サイクル、続くその後の連続毎日投与
用量漸増：
−  コホートあたり３−４患者、＞グレード２毒性まで用量倍増；その後修飾フィボナッチスキーマ
包含基準：
・  組織学的または細胞学的に文書化された固形腫瘍、標準治療に難治性または治癒的標準治療が存在しない
・  年齢＞１８歳
・  ＥＧＯＧ一般状態０−１
・  ヘモグロビン≧８.０gm／dL；好中球≧１,５００／mm３；血小板≧７５,０００／mm３
・  クレアチニン≦正常上限(ＵＬＮ)の１.５×；ビリルビン≦１.５×ＵＬＮ；アルカリホスファターゼ≦５×ＵＬＮ；アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(ＡＳＴ)≦２.５×ＵＬＮ(肝臓関与を除く≦５×ＵＬＮ)；アミラーゼ≦ＵＬＮ
・  署名したインフォームド・コンセント
・  最後の抗新生物治療投与(ホルモン治療以外)＞２１日間
除外基準：
・  頭蓋内浮腫、頭蓋内転移または硬膜外疾患
・  臨床的に顕著な心臓疾患(ＮＹＨＡ  クラスIIIまたはIV)：既存の不整脈；鬱血性心不全；心筋症；ＱＴｃ間隔＞４５０msec(男性)および＞４７０msec(女性)または＞Ｇ２  ＬＶＥＦ(ＭＵＧＡまたは超音波心臓検査図で）
・  臨床的に顕著な末梢血管疾患の徴候を有する真性糖尿病(継続投薬が必要)
・  以前の心膜炎；前の１２ヶ月以内の臨床的に顕著な胸膜滲出または＞２介入／月を必要とする再発性腹水症
・  吸収不良症候群または未制御ＧＩ毒性(＞Ｇ２悪心、下痢、嘔吐)。以前の何らかの病因の急性または慢性膵炎
・  以前の１２ヶ月以内の肝臓内または外の胆汁閉塞または、先にステントの閉塞または遮断なしに安定に処置されていない限り、胆汁ステントを必要とする悪性閉塞の病歴
ＤＬＴ／ＭＴＤの定義：
・  Ｇ４好中球減少症＜５日間または熱性好中球減少症；Ｇ４血小板減少症
・  Ｇ４疲労、またはＥＣＯＧ一般状態の２点減少
・  適切な／最大薬剤介入および／または予防にもかかわらずＧ３またはそれ以上の悪心および／または嘔吐
・  Ｇ３またはそれ以上の非血液学的毒性(疲労以外)
・  Ｇ２またはそれ以上の臨床意義の心臓毒性(例えば安息時ＥＦの４０％≦５０％への低下または１５％≦２４％への分画の短縮；心臓トロポニンＴ／Ｉ＞０.０５ng／ＭＩ
ＭＴＤ：それ以下では＞２／６患者がＤＬＴを経験する用量レベル
患者特性：
【表４】
2008540543.tif 000024
用量レベル：
【表５】
2008540543.tif 000025
＊  参加継続
Ｇ２以上の薬剤が関連する臨床的有害事象：
【表６】
2008540543.tif 000026
＊＊ＤＬＴ
【０２２７】
７／２２(３２％)の患者が最初の評価で安定な疾患(ＳＤ)となったため、化合物１の抗腫瘍活性の証拠が観察された。加えて、４ヶ月より大きいＳＤが、耳下腺腫瘍(７ヶ月より長い)およびGleevec難治性ＧＩＳＴ患者(６ヶ月より長い)の患者を含む、４名の患者で報告された。図２４は、Gleevec難治性ＧＩＳＴの患者の走査したＰＥＴ−ＣＴ画像であり、それは、治療休薬と比較して化合物１の処置で顕著な取り込みの減少を示し、化合物１の処置効果を示唆する。この患者および処置プロトコールに関するさらなる情報を以下に示す：
胃腸間質腫瘍(ＧＩＳＴ)と診断された女性患者。患者は以前以下の通り処置された：
【表７】
2008540543.tif 000027
この患者は上記の包含および除外基準に従い２００４年６月２日に本治験に参加した。
化合物１処置記録：
【表８】
2008540543.tif 000028
この患者は総量９,６２５mgを受けた(添付の表参照)。患者は化合物１での処置中、安定な疾患(ＳＤ)を達成した(８サイクル完了)。
【０２２８】
図２５に示す通り、患者における血漿暴露は、化合物１の用量に比例して増加する。１００mg用量群の血漿暴露は、前臨床効力が示されている範囲に近づく。
【０２２９】
試験を、標的組織への接近が限定されている固形腫瘍患者における代替組織として末梢血白血球(ＰＤＬ)を使用して、化合物１生物学的活性の薬力学(ＰＤ)マーカーを同定するために行った。
原理およびアッセイ開発：
・  ＥＲＫリン酸化はＲＴＫ活性化の十分に特徴付けられた下流効果であり、化合物１は腫瘍および内皮細胞におけるＥＲＫリン酸化を調節する。
・  化合物１がＰＢＬにおけるＥＲＫ活性化に影響するかどうかを決定するために、正常ドナーからの血液を化合物１でエキソビボで処理した。ＰＭＡまたはＰＨＡでの外因刺激を添加しなかった。
・  内因性ｐＥＲＫの用量依存的阻害が、ＰＢＬと化合物１のインキュベーション後にウェスタンブロットおよびフローサイトメトリーアッセイで観察されており(図２６参照)、このアッセイが化合物１がその標的を調節することを示す臨床試験に有用であり得ることを示唆する。
【０２３０】
化合物１を、Gleevecおよび他のキナーゼ阻害剤に耐性であることが判明しているＡＢＬの変異形(Ｔ３１５Ｉ)を含む、一群のキナーゼに対して試験した。Shah, N.P. Science, 305, p. 399(2004);およびLaRosse, Cancer Res. 67, p. 7149-7153(2002)参照。ＡＢＬのＴ３１５残基は“ゲートキーパー残基”として知られており、ＡＢＬ構造の疎水性ポケット中に位置する。この残基、ならびにＦｌｔ−３、ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲａ、ＥＧＦＲなどのようであるが、これらに限定されない他のキナーゼにおけるこの残基の類似位置は、Gleevec、Iressa、Tarceva、およびその他のようなある種の化学療法剤に耐性となっている患者のような、ある種のキナーゼ阻害剤に耐性(replased)を有する患者で頻繁に見られる。故に、これらの薬剤に耐性となっているこれらの患者に対する代替処置戦略の医学的要求がある。化合物１は、ＡＢＬのＴ３１５Ｉ変異を、Gleevecの＞１０マイクロモルおよびＳＷ１２４８の０.３７１マイクロモルと比較して０.０１８４マイクロモルのＩＣ５０値で阻害することが判明している。ＡＢＬは細胞質チロシンキナーゼである。従って、本発明の化合物は、受容体チロシンキナーゼおよび細胞質チロシンキナーゼを含む変異キナーゼを阻害する能力を有する。式Ｉ、II、およびIIIの化合物は、代替処置として、または他の抗癌剤との併用処置として、ＡＢＬにこの変異を有する患者において有用であり得る。化合物１はまたＦＬＴ３の変異形(Ｄ８３５Ｙ)に対しても試験している。この残基は、血液学的悪性腫瘍を有する患者で頻繁に見られている。Yamamoto, Y. Blood, 97, 2434(2001)参照。故に、化合物１のような式Ｉ、II、およびIIIの化合物は、この変異を有する患者の処置にも使用できる。ＥＧＦＲのゲートキーパー残基における変異は、ゲフィチニブ(Iressa)で処置した肺癌患者において最近報告されている。Pao W., PLos Med. 2(3):e73(2005)参照。化合物１を、“ゲートキーパー残基”に変異を有する他のキナーゼに対して試験する。化合物１は、これらの変異を有する癌患者の処置に有用である。以下の表は、GleevecおよびＳＵ１１２４８と比較した化合物１のＩＣ５０値を示す。
【表９】
2008540543.tif 000029
【０２３１】
ＡＢＬ(Ｔ３１５Ｉ)のＩＣ５０を決定するためのアッセイは以下の方法を使用して行った。２５μLの最終反応容積註、Ａｂｌ(Ｔ３１５Ｉ)(ｈ)(５−１０mU)を８mM  ＭＯＰＳ  ｐＨ７.０、０.２mM  ＥＤＴＡ、５０μM  ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ(配列番号７)、１０mM  Ｍｇアセテートおよび３３Ｐガンマ標識ＡＴＰ(約５００cpm／pmolの特異的活性、必要に応じた濃度)と共にインキュベートする。反応をＭｇＡＴＰ混合物の添加により開始する。４０分、室温でインキュベーション後、反応を５μLの３％リン酸溶液添加により停止させる。次いで、１０μLの反応物をＰ３０フィルター・マット上にスポットし、３回、５分、７５mMリン酸および１回メタノールで洗浄し、その後乾燥およびシンチレーション計測する。
【０２３２】
式IIの化合物および式IIIのような他の式Ｉの化合物を上記およびここに引用の文献に記載の通り製造した。これらの化合物を使用した試験を、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンに関して上記の方法を使用して行う。これらの試験は、これらの化合物がまたマウス、ヒト、および他の哺乳動物対象における、薬剤耐性癌を含む癌の処置にも有用であり、ここに記載の抗癌剤と組み合わせて使用し得ることを示す。
【０２３３】
本発明の有機化合物は、互変異性の現象を示し得ることを理解すべきである。本明細書内の化学構造は、一つの可能性のある互変異性形態のみしか同時には示すことができないが、本発明が記載の構造の全ての互変異性形態を包含することは理解すべきである。例えば、式IIIＢを有する化合物を以下に一つの互変異性体と共に示し、
互変異性体IIIＢａ：
【化１９】
2008540543.tif 000030
式IIIＢ、互変異性体IIIＢｂおよび互変異性体IIIＢｃを有する他の化合物の互変異性体を以下に示す：
【化２０】
2008540543.tif 000031
【０２３４】
上記に記載の各特許、特許出願および学術雑誌文献の内容は、その全体として、かつすべての目的に関して、ここに完全に記載されているかのように本明細書に包含される。
【０２３５】
本発明は説明のためにここに記載した態様に限定するものではなく、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る全てのそのような形態を包含すると理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【０２３６】
【図１】ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を静脈注射後ＳＣＩＤベージュマウスのＩＶＩＳ造影システム(Xenogen)を使用して得た全身生物発光造影(ＢＬＩ)を示す、走査像である。
【０２３７】
【図２】ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を注射し、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(２０mg／kg／日)で処置したＳＣＩＤベージュマウスが、媒体で処置したマウスと比較して、有意に低い平均光子数を示すことを示す、グラフである。
【０２３８】
【図３】ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を静脈注射後のＳＣＩＤベージュマウスのＩＶＩＳ造影システム(Xenogen)を使用して得た全身ＢＬＩの走査像である。左側のＢＬＩは媒体で処置したマウスのものであり、右側のＢＬＩは４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物、２０mg／kg／日)で処置したマウスのものである。
【０２３９】
【図４】ＫＭＳ−１１−ｌｕｃ細胞を静脈注射し、その後、媒体(菱形)または４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(三角、２０mg／kg／日)のいずれかで処置したＳＣＩＤベージュマウスの生存率を比較するグラフである。
【０２４０】
【図５】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、ＦＬＴ３標的発現を調節することを示すグラフであり、ＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１細胞に対する抗増殖性作用を証明する。図５において、ＭＶ４；１１(▲)またはＲＳ４；１１(ＦＬＴ３リガンド存在下)(■)を化合物１の連続希釈とインキュベートした。細胞生存能を、７２時間インキュベーション期間後にＭＴＳアッセイにより決定した。ＥＣ５０値を、非線形回帰を使用して計算した。
【０２４１】
【図６】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、ＦＬＴ３標的発現を調節することを示すグラフであり、ＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１細胞に対する抗増殖性作用を証明する。図６において、血清欠乏ＭＶ４；１１(ＩＴＤ)細胞を漸増濃度の化合物１と３時間インキュベートし、その後細胞溶解した。ＲＳ４；１１細胞をＦＬＴ３リガンド(１００ng／mlで１５分、示す通り刺激した。全細胞溶解物を抗ヒトＦＬＴ３抗体と免疫沈降させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分割した。免疫ブロットを抗ホスホチロシン抗体とプロットした(上のレーン)。膜を取り、抗ＦＬＴ３と再プロットして、ＦＬＴ３の等しい負荷を証明した(下のレーン)。ｐＦＬＴ３の変化を、デンシトメトリーを使用して、基線(処置なし)のパーセントとして報告する。
【０２４２】
【図７】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、ＦＬＴ３標的発現を調節することを示すグラフであり、ＭＶ４；１１およびＲＳ４；１１細胞に対する抗増殖性作用を証明する。図７において、ＲＳ４；１１(ＷＴ)細胞を、漸増濃度の化合物１と３時間インキュベートし、その後細胞溶解した。ＲＳ４；１１細胞をＦＬＴ３リガンド(１００ng／mlで１５分、示す通り刺激した。全細胞溶解物を抗ヒトＦＬＴ３抗体と免疫沈降させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分割した。免疫ブロットを抗ホスホチロシン抗体とプロットした(上のレーン)。膜を取り、抗ＦＬＴ３と再プロットして、ＦＬＴ３の等しい負荷を証明した(下のレーン)。ｐＦＬＴ３の変化を、デンシトメトリーを使用して、基線(処置なし)のパーセントとして報告する。
【０２４３】
【図８】ＭＶ４；１１細胞における、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)によるＦＬＴ３仲介ＥＲＫおよびＳＴＡＴ５リン酸化の用量依存性阻害を示すグラフである。ＭＶ４；１１細胞(血清欠乏)を、種々の濃度の化合物１と３時間インキュベートし、細胞内ｐＥＲＫ(図８)をウェスタンブロットを使用して決定し、ｐＳＴＡＴ５(図９)をフローサイトメトリーを使用して決定した。ｐＥＲＫまたはｐＳＴＡＴ５の変化を、デンシトメトリーを使用して、基線(処置なし)のパーセントとして報告する。
【０２４４】
【図９】ＭＶ４；１１細胞における、４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)によるＦＬＴ３仲介ＥＲＫおよびＳＴＡＴ５リン酸化の用量依存性阻害を示すグラフである。ＭＶ４；１１細胞(血清欠乏)を、種々の濃度の化合物１と３時間インキュベートし、細胞内ｐＥＲＫ(図８)をウェスタンブロットを使用して決定し、ｐＳＴＡＴ５(図９)をフローサイトメトリーを使用して決定した。ｐＥＲＫまたはｐＳＴＡＴ５の変化を、デンシトメトリーを使用して、基線(処置なし)のパーセントとして報告する。
【０２４５】
【図１０】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、インビトロでＭＶ４；１１細胞による自己分泌ＶＥＧＦ産生を阻害することを示すグラフである。ＭＶ４；１１  ＡＭＬ細胞を１０％ＦＢＳ含有培地中、０.００１、０.０１、０.１、０.５および１μM  化合物１存在下または非存在下で４８時間インキュベートした。上清をヒトＶＥＧＦレベルについて分析した(細胞タンパク質含量について標準化)。
【０２４６】
【図１１】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの腫瘍異種移植片におけるＦＬＴ３およびＳＴＡＴ５リン酸化を阻害することを示す、グラフである。皮下ＭＶ４；１１腫瘍(３００mm３；ｎ＝３マウス／群)を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスを、媒体または１０mg／kg  化合物１のいずれかで５日間処置した。腫瘍を５日目に、投与４、８、２４、および４８時間後に切除し、粉砕し、そして直ぐに急速冷凍した(−７０℃)。ｐＦＬＴ３またはｐＳＴＡＴ５調節に関して：腫瘍溶解物を抗ヒトＦＬＴ３または抗ＳＴＡＴ５抗体のいずれかと免疫沈降させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分割した。免疫ブロットを適当な抗ホスホチロシン抗体とプローブした(上のレーン)。膜を取り、負荷コントロールとして全ＦＬＴ３またはＳＴＡＴ５タンパク質を決定するために、抗ＦＬＴ３または抗ＳＴＡＴ５のいずれかと再プローブした(下のレーン)。各レーンは異なる腫瘍を示す。
【０２４７】
【図１２】ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスのヒトＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１白血病腫瘍の皮下異種移植モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)の抗腫瘍活性を示すグラフである。(図１２)ＭＶ４；１１または(図１３)ＲＳ４；１１細胞を、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝１０マウス／群)の右脇腹にｓ.ｃ．で移植した。ＭＶ４；１１試験において、媒体(◇)または１(●)、５(▲)、または３０(■)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、１５日間経口投与した。ＲＳ４；１１試験において、媒体(◇)または１０(▲)、３０(■)、１００(◆)または１５０(●)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、８日間経口投与した。(図１４)ＭＶ４；１１腫瘍に対する化合物１の毎日の、断続的な、および周期的投与レジメンの効果。化合物１を、毎日(■)、１日おき／ｑ.ｏ.ｄ.(●)または７日投与／７日休薬の周期(Ｘ)のいずれかで３０mg／kgの投与量で経口投与した。(図１５)化合物１は、大きなＭＶ４；１１腫瘍の緩解をもたらした。ＭＶ４；１１ 皮下腫瘍(ｎ＝１０マウス／群)を３００(▲)、５００(■)または１０００(●)mm３に分類した。媒体(＋)処置腫瘍は、２０００mm３の最大腫瘍容積まで測定された(図１６では１０００mm３までしか示していない)。化合物１を３０mg／kg／日で経口投与した(第一サイクル)。投与を５０日間止め、そして応答の永続性をその後測定した。(図１６)３０mg／kg／日×５０日間での前処置後の再発ＭＶ４；１１腫瘍を、３０mg／kg／日で再処置した(第二サイクル)。パネルＡＤはデータを平均腫瘍容積±ＳＥ(ｎ＝１０マウス／群)で示し、パネルＥは個々のマウスの腫瘍容積を記す(ｎ＝１０)。
【０２４８】
【図１３】ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスのヒトＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１白血病腫瘍の皮下異種移植モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)の抗腫瘍活性を示すグラフである。(図１２)ＭＶ４；１１または(図１３)ＲＳ４；１１細胞を、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝１０マウス／群)の右脇腹にｓ.ｃ．で移植した。ＭＶ４；１１試験において、媒体(◇)または１(●)、５(▲)、または３０(■)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、１５日間経口投与した。ＲＳ４；１１試験において、媒体(◇)または１０(▲)、３０(■)、１００(◆)または１５０(●)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、８日間経口投与した。(図１４)ＭＶ４；１１腫瘍に対する化合物１の毎日の、断続的な、および周期的投与レジメンの効果。化合物１を、毎日(■)、１日おき／ｑ.ｏ.ｄ.(●)または７日投与／７日休薬の周期(Ｘ)のいずれかで３０mg／kgの投与量で経口投与した。(図１５)化合物１は、大きなＭＶ４；１１腫瘍の緩解をもたらした。ＭＶ４；１１ 皮下腫瘍(ｎ＝１０マウス／群)を３００(▲)、５００(■)または１０００(●)mm３に分類した。媒体(＋)処置腫瘍は、２０００mm３の最大腫瘍容積まで測定された(図１６では１０００mm３までしか示していない)。化合物１を３０mg／kg／日で経口投与した(第一サイクル)。投与を５０日間止め、そして応答の永続性をその後測定した。(図１６)３０mg／kg／日×５０日間での前処置後の再発ＭＶ４；１１腫瘍を、３０mg／kg／日で再処置した(第二サイクル)。パネルＡＤはデータを平均腫瘍容積±ＳＥ(ｎ＝１０マウス／群)で示し、パネルＥは個々のマウスの腫瘍容積を記す(ｎ＝１０)。
【０２４９】
【図１４】ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスのヒトＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１白血病腫瘍の皮下異種移植モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)の抗腫瘍活性を示すグラフである。(図１２)ＭＶ４；１１または(図１３)ＲＳ４；１１細胞を、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝１０マウス／群)の右脇腹にｓ.ｃ．で移植した。ＭＶ４；１１試験において、媒体(◇)または１(●)、５(▲)、または３０(■)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、１５日間経口投与した。ＲＳ４；１１試験において、媒体(◇)または１０(▲)、３０(■)、１００(◆)または１５０(●)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、８日間経口投与した。(図１４)ＭＶ４；１１腫瘍に対する化合物１の毎日の、断続的な、および周期的投与レジメンの効果。化合物１を、毎日(■)、１日おき／ｑ.ｏ.ｄ.(●)または７日投与／７日休薬の周期(Ｘ)のいずれかで３０mg／kgの投与量で経口投与した。(図１５)化合物１は、大きなＭＶ４；１１腫瘍の緩解をもたらした。ＭＶ４；１１ 皮下腫瘍(ｎ＝１０マウス／群)を３００(▲)、５００(■)または１０００(●)mm３に分類した。媒体(＋)処置腫瘍は、２０００mm３の最大腫瘍容積まで測定された(図１６では１０００mm３までしか示していない)。化合物１を３０mg／kg／日で経口投与した(第一サイクル)。投与を５０日間止め、そして応答の永続性をその後測定した。(図１６)３０mg／kg／日×５０日間での前処置後の再発ＭＶ４；１１腫瘍を、３０mg／kg／日で再処置した(第二サイクル)。パネルＡＤはデータを平均腫瘍容積±ＳＥ(ｎ＝１０マウス／群)で示し、パネルＥは個々のマウスの腫瘍容積を記す(ｎ＝１０)。
【０２５０】
【図１５】ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスのヒトＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１白血病腫瘍の皮下異種移植モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)の抗腫瘍活性を示すグラフである。(図１２)ＭＶ４；１１または(図１３)ＲＳ４；１１細胞を、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝１０マウス／群)の右脇腹にｓ.ｃ．で移植した。ＭＶ４；１１試験において、媒体(◇)または１(●)、５(▲)、または３０(■)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、１５日間経口投与した。ＲＳ４；１１試験において、媒体(◇)または１０(▲)、３０(■)、１００(◆)または１５０(●)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、８日間経口投与した。(図１４)ＭＶ４；１１腫瘍に対する化合物１の毎日の、断続的な、および周期的投与レジメンの効果。化合物１を、毎日(■)、１日おき／ｑ.ｏ.ｄ.(●)または７日投与／７日休薬の周期(Ｘ)のいずれかで３０mg／kgの投与量で経口投与した。(図１５)化合物１は、大きなＭＶ４；１１腫瘍の緩解をもたらした。ＭＶ４；１１ 皮下腫瘍(ｎ＝１０マウス／群)を３００(▲)、５００(■)または１０００(●)mm３に分類した。媒体(＋)処置腫瘍は、２０００mm３の最大腫瘍容積まで測定された(図１６では１０００mm３までしか示していない)。化合物１を３０mg／kg／日で経口投与した(第一サイクル)。投与を５０日間止め、そして応答の永続性をその後測定した。(図１６)３０mg／kg／日×５０日間での前処置後の再発ＭＶ４；１１腫瘍を、３０mg／kg／日で再処置した(第二サイクル)。パネルＡＤはデータを平均腫瘍容積±ＳＥ(ｎ＝１０マウス／群)で示し、パネルＥは個々のマウスの腫瘍容積を記す(ｎ＝１０)。
【０２５１】
【図１６】ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスのヒトＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１白血病腫瘍の皮下異種移植モデルにおける４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)の抗腫瘍活性を示すグラフである。(図１２)ＭＶ４；１１または(図１３)ＲＳ４；１１細胞を、ＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝１０マウス／群)の右脇腹にｓ.ｃ．で移植した。ＭＶ４；１１試験において、媒体(◇)または１(●)、５(▲)、または３０(■)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、１５日間経口投与した。ＲＳ４；１１試験において、媒体(◇)または１０(▲)、３０(■)、１００(◆)または１５０(●)mg／kg／日の用量の化合物１を、腫瘍が〜３００mm３に到達したとき、８日間経口投与した。(図１４)ＭＶ４；１１腫瘍に対する化合物１の毎日の、断続的な、および周期的投与レジメンの効果。化合物１を、毎日(■)、１日おき／ｑ.ｏ.ｄ.(●)または７日投与／７日休薬の周期(Ｘ)のいずれかで３０mg／kgの投与量で経口投与した。(図１５)化合物１は、大きなＭＶ４；１１腫瘍の緩解をもたらした。ＭＶ４；１１ 皮下腫瘍(ｎ＝１０マウス／群)を３００(▲)、５００(■)または１０００(●)mm３に分類した。媒体(＋)処置腫瘍は、２０００mm３の最大腫瘍容積まで測定された(図１６では１０００mm３までしか示していない)。化合物１を３０mg／kg／日で経口投与した(第一サイクル)。投与を５０日間止め、そして応答の永続性をその後測定した。(図１６)３０mg／kg／日×５０日間での前処置後の再発ＭＶ４；１１腫瘍を、３０mg／kg／日で再処置した(第二サイクル)。パネルＡＤはデータを平均腫瘍容積±ＳＥ(ｎ＝１０マウス／群)で示し、パネルＥは個々のマウスの腫瘍容積を記す(ｎ＝１０)。
【０２５２】
【図１７】３０mg／kg  ４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)で処置したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにおけるＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１腫瘍の腫瘍アポトーシス／壊死および細胞増殖の阻害を示すグラフである。(図１７)３０mg／kg  化合物１処置に対する初期ＭＶ４；１１腫瘍応答。皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｅ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｆ−ｊ)のいずれかで５日間処置した。腫瘍を２−５日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｆ−１日目)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｇ−５日目)、ｐＥＲＫ(ｃ、ｈ  ５日目)、開裂カスパーゼ−３(ｄ、ｉ−５日目)またはＰＡＲＰ(ｅ、ｊ−日目)で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。図１７は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１８)３０mg／kg  化合物１処置後のＲＳ４；１１腫瘍の免疫組織化学。ＲＳ４；１１腫瘍(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｃ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｄ−ｆ)のいずれかで処置した。腫瘍を９日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｄ)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｅ)、またはｐＥＲＫ(ｃ、ｆ)で免疫染色した。図１８は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１９)皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体または化合物１  ３０mg／kg／日のいずれかで処置した。媒体処置腫瘍を１５日目に切除し、化合物１処置腫瘍を８９日目に処置した(５０日間化合物１の毎日の投与＋３９日間処置なし)。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシンで染色するか、またはＫｉ６７で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。(ａ)媒体(Ｈ＆Ｅ、１５日目)；(ｂ)媒体(Ｋｉ６７、１５日目)；(ｃ)化合物１、部分応答(Ｈ＆Ｅ、８９日目)；(ｄ)化合物１、部分応答(Ｋｉ６７、８９日目)および(ｅ)化合物１、完全寛解(Ｈ＆Ｅ、８９日目)。ｃ、ｄ中の矢印は、壊死／瘢痕組織に分散する生存可能細胞を指す。図１９は、ｎ＝３−５の処置腫瘍からの代表的切片を示す。撮像倍率を図上に示す。
【０２５３】
【図１８】３０mg／kg  ４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)で処置したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにおけるＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１腫瘍の腫瘍アポトーシス／壊死および細胞増殖の阻害を示すグラフである。(図１７)３０mg／kg  化合物１処置に対する初期ＭＶ４；１１腫瘍応答。皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｅ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｆ−ｊ)のいずれかで５日間処置した。腫瘍を２−５日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｆ−１日目)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｇ−５日目)、ｐＥＲＫ(ｃ、ｈ  ５日目)、開裂カスパーゼ−３(ｄ、ｉ−５日目)またはＰＡＲＰ(ｅ、ｊ−日目)で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。図１７は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１８)３０mg／kg  化合物１処置後のＲＳ４；１１腫瘍の免疫組織化学。ＲＳ４；１１腫瘍(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｃ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｄ−ｆ)のいずれかで処置した。腫瘍を９日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｄ)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｅ)、またはｐＥＲＫ(ｃ、ｆ)で免疫染色した。図１８は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１９)皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体または化合物１  ３０mg／kg／日のいずれかで処置した。媒体処置腫瘍を１５日目に切除し、化合物１処置腫瘍を８９日目に処置した(５０日間化合物１の毎日の投与＋３９日間処置なし)。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシンで染色するか、またはＫｉ６７で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。(ａ)媒体(Ｈ＆Ｅ、１５日目)；(ｂ)媒体(Ｋｉ６７、１５日目)；(ｃ)化合物１、部分応答(Ｈ＆Ｅ、８９日目)；(ｄ)化合物１、部分応答(Ｋｉ６７、８９日目)および(ｅ)化合物１、完全寛解(Ｈ＆Ｅ、８９日目)。ｃ、ｄ中の矢印は、壊死／瘢痕組織に分散する生存可能細胞を指す。図１９は、ｎ＝３−５の処置腫瘍からの代表的切片を示す。撮像倍率を図上に示す。
【０２５４】
【図１９】３０mg／kg  ４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)で処置したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにおけるＭＶ４；１１またはＲＳ４；１１腫瘍の腫瘍アポトーシス／壊死および細胞増殖の阻害を示すグラフである。(図１７)３０mg／kg  化合物１処置に対する初期ＭＶ４；１１腫瘍応答。皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｅ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｆ−ｊ)のいずれかで５日間処置した。腫瘍を２−５日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｆ−１日目)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｇ−５日目)、ｐＥＲＫ(ｃ、ｈ  ５日目)、開裂カスパーゼ−３(ｄ、ｉ−５日目)またはＰＡＲＰ(ｅ、ｊ−日目)で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。図１７は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１８)３０mg／kg  化合物１処置後のＲＳ４；１１腫瘍の免疫組織化学。ＲＳ４；１１腫瘍(ｎ＝３−５／群)を媒体(ａ−ｃ)または化合物１  ３０mg／kg／日(ｄ−ｆ)のいずれかで処置した。腫瘍を９日目に切除した。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシン(ａ、ｄ)で染色するか、またはＫｉ６７(ｂ、ｅ)、またはｐＥＲＫ(ｃ、ｆ)で免疫染色した。図１８は、ｎ＝３の個々の処置腫瘍からの代表的切片を示す。(図１９)皮下ＭＶ４；１１腫瘍を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウス(ｎ＝３−５／群)を媒体または化合物１  ３０mg／kg／日のいずれかで処置した。媒体処置腫瘍を１５日目に切除し、化合物１処置腫瘍を８９日目に処置した(５０日間化合物１の毎日の投与＋３９日間処置なし)。パラフィン包埋腫瘍をヘマトキシリンおよびエオシンで染色するか、またはＫｉ６７で免疫染色した(ヘマトキシリン対比染色と共に)。(ａ)媒体(Ｈ＆Ｅ、１５日目)；(ｂ)媒体(Ｋｉ６７、１５日目)；(ｃ)化合物１、部分応答(Ｈ＆Ｅ、８９日目)；(ｄ)化合物１、部分応答(Ｋｉ６７、８９日目)および(ｅ)化合物１、完全寛解(Ｈ＆Ｅ、８９日目)。ｃ、ｄ中の矢印は、壊死／瘢痕組織に分散する生存可能細胞を指す。図１９は、ｎ＝３−５の処置腫瘍からの代表的切片を示す。撮像倍率を図上に示す。
【０２５５】
【図２０】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、静脈内ＭＶ４；１１細胞を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの寿命を延ばすことを示すグラフである。照射したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにＭＶ４；１１(１×１０７細胞、ｉ.ｖ.)、ｉ.ｖ．で移植した。処置を２３日目に開始し、２３−９８日目まで経口媒体(◆)または化合物１  ２０mg／kg  毎日投与(▲)または計画的７日投与／７日休薬(■)のいずれかで処置した。後肢麻痺の初期徴候を発症したまたは悪い健康状態のマウスは殺した。図２０はカプラン−マイヤー生存率対時間プロットを示す(ｎ＝１０−１２マウス／群)。(図２１)ＭＶ４；１１細胞ｉ.ｖ.接種後のＢＭのフローサイトメトリーまたは組織病理学的評価。処置は、媒体(ａ−ｃ)または化合物１  ２０mg／kg／日(ｄ−ｆ；２３−９８日目)のいずれかを含む。大腿骨を５１日目(ａ−ｄ)または１６７日目(ｅ、ｆ)のいずれかに回収し、ＢＭを単離し、フローサイトメトリー(ａ,ｄ)を使用して、％ヒトＭＶ４；１１細胞を分析した。ＢＭ細胞を抗ヒトＨＬＡＡ、Ｂ,Ｃ−ＦＩＴＣ(ヒトＭＨＣ−Ｉ上の着色エピトープ、黒線)またはアイソタイプ−対照抗体(点線)のいずれかで染色した。移植した細胞を適当なゲーティング後に同定し、抗ヒトＨＬＡ−Ａ,Ｂ,Ｃ(マーカー)について陽性染色した。媒体処置(５１日目)または化合物１処置(１６７日目)マウスのＢＭ標本をＨ＆Ｅ(ｂ、ｅ)で組織化学的に、またはマウスＢＭ中のヒトＭＶ４；１１細胞を染色する抗ヒトミトコンドリア抗体(ｃ、ｆ)で免疫染色した。倍率４００×；矢印は、同定されたＭＶ４；１１細胞(ｂ、ｃ)を指す。
【０２５６】
【図２１】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン(化合物１)が、静脈内ＭＶ４；１１細胞を担持するＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスの寿命を延ばすことを示すグラフである。照射したＳＣＩＤ−ＮＯＤマウスにＭＶ４；１１(１×１０７細胞、ｉ.ｖ.)、ｉ.ｖ．で移植した。処置を２３日目に開始し、２３−９８日目まで経口媒体(◆)または化合物１  ２０mg／kg  毎日投与(▲)または計画的７日投与／７日休薬(■)のいずれかで処置した。後肢麻痺の初期徴候を発症したまたは悪い健康状態のマウスは殺した。図２０はカプラン−マイヤー生存率対時間プロットを示す(ｎ＝１０−１２マウス／群)。(図２１)ＭＶ４；１１細胞ｉ.ｖ.接種後のＢＭのフローサイトメトリーまたは組織病理学的評価。処置は、媒体(ａ−ｃ)または化合物１  ２０mg／kg／日(ｄ−ｆ；２３−９８日目)のいずれかを含む。大腿骨を５１日目(ａ−ｄ)または１６７日目(ｅ、ｆ)のいずれかに回収し、ＢＭを単離し、フローサイトメトリー(ａ,ｄ)を使用して、％ヒトＭＶ４；１１細胞を分析した。ＢＭ細胞を抗ヒトＨＬＡＡ、Ｂ,Ｃ−ＦＩＴＣ(ヒトＭＨＣ−Ｉ上の着色エピトープ、黒線)またはアイソタイプ−対照抗体(点線)のいずれかで染色した。移植した細胞を適当なゲーティング後に同定し、抗ヒトＨＬＡ−Ａ,Ｂ,Ｃ(マーカー)について陽性染色した。媒体処置(５１日目)または化合物１処置(１６７日目)マウスのＢＭ標本をＨ＆Ｅ(ｂ、ｅ)で組織化学的に、またはマウスＢＭ中のヒトＭＶ４；１１細胞を染色する抗ヒトミトコンドリア抗体(ｃ、ｆ)で免疫染色した。倍率４００×；矢印は、同定されたＭＶ４；１１細胞(ｂ、ｃ)を指す。
【０２５７】
【図２２】本発明の化合物がどのようにクラスIII、IV、およびＶ受容体チロシンキナーゼを阻害するかを示す模式図である(また種々のＲＴＫに対する４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンの活性の表も参照)。
【０２５８】
【図２３】図２３ａおよび２３ｂは、媒体および４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オン処置の日数の関数として腫瘍容積をプロットするグラフである。これらのグラフは、化合物１での処置が、大きな、確立された結腸異種移植片を有する動物の９０−１００％を緩解するかおよび／または疾患安定化することを示す(ヌードマウス中のＫＭ１２Ｌ４Ａヒト結腸腫瘍異種移植片に、腫瘍が５００mm３(２３ａ)または１０００mm３(２３ｂ)が到達したとき毎日化合物１を投与した)。
【０２５９】
【図２４】化合物１(ＣＨＩＲ２５８)で処置したイマチニブ難治性ＧＩＳＴを有するヒト女性患者の走査したＰＥＴ−ＣＴ像である。
【０２６０】
【図２５】図２５ａおよび２５ｂは、化合物１を投与したとき、血漿暴露が比例して増加することを示す、平均Ｃｍａｘ(ng／mL)対投与量および平均ＡＵＣ(０、tlast(ng＊ｈ／mL)のグラフである。
【０２６１】
【図２６】４−アミノ−５−フルオロ−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−１Ｈ−ベンズイミダゾル−２−イル]キノリン−２(１Ｈ)−オンが末梢血白血球(ＰＢＬ)における基底ＥＲＫリン酸化を阻害することを示す、ウェスタンブロットの走査像である。陽性対照サンプルは、臨床サンプルと同様に処理した正常ドナーからの血液細胞である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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