(57)【要約】  ６０００ダルトンを超える分子量のプロアントシアニジンを高割合で含む植物由来の製品を提供する。前記プロアントシアニジンは、非常に高い割合で３００００ダルトンを超える分子量を有し、ヒトの摂取許容量で優れた低コレステロール効果を持ち、渋味及び栄養阻害作用がほとんど無い。この植物由来の製品は、薬、医薬組成物、栄養補助食品又は食品とすることができる。これを双子葉植物から調製するための工業的方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
６０００ダルトンを超える分子量を持つプロアントシアニジンを６５〜９７重量％含有する植物由来の製品であって、前記プロアントシアニジンのうち５０重量％が３００００ダルトンを超える分子量を有する製品。
【請求項２】
６０００ダルトンを超える分子量を持つプロアントシアニジンの重量割合が９０〜９７％である、請求項１に記載の植物由来製品。
【請求項３】
３００００ダルトンを超える分子量を有するプロアントシアニジンの重量割合が、６０００ダルトンを超える分子量を持つプロアントシアニジンに対して６０％を超える、請求項１に記載の植物由来製品。
【請求項４】
０〜２重量％の冷水溶解性ポリフェノールをさらに含む、請求項１ないし３の何れか１項に記載の植物由来製品。
【請求項５】
０〜１重量％の冷水溶解性ポリフェノールをさらに含む、請求項１ないし３の何れか１項に記載の植物由来製品。
【請求項６】
双子葉植物から得られる、請求項１ないし５の何れか１項に記載の植物由来製品。
【請求項７】
ザクロ木の実から得られる、請求項６に記載の植物由来製品。
【請求項８】
カロブビーンの果肉から得られる、請求項６に記載の植物由来製品。
【請求項９】
請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品の製造方法であって、
（ａ）室温〜６０℃の水；水とＣ１−Ｃ３アルコールの室温で２０：８０〜５：９５（v/v）の混合物；及び水とアセトンの室温で２０：８０〜４０：６０（v/v）の混合物からなる群から選択される液体で、砕いた植物材料を洗浄し；洗浄液１リットルにつき材料５０ｇ未満を通した洗浄液を取るのに必要な回数、洗浄で生じる液体と固体を分離する工程；
（ｂ）８０℃〜沸点の間の水；４０℃〜沸点の間のＣ１−Ｃ３アルコール；８０℃〜沸点のグリコールと水の混合物；８０℃〜沸点の間のジメチルホルムアミド；及び８０〜１５０℃のジメチルスルホキシドからなる群から選択される条件で、室内圧又は加圧状態において、工程（ａ）で得られた固体からの抽出を行い、４０℃よりも高い温度を維持して抽出で生じた液体と固体を分離する工程；
（ｃ）工程（ｂ）で得られた液体を冷却して生じた沈殿物を回収し、場合によっては冷却前に溶媒の部分蒸発を行う工程；
（ｄ）工程（ｃ）で得られた沈殿物を、溶媒含有量が１０重量％以下となるまで乾燥させる工程；
（ｅ）工程（ｄ）で得られた生成物を３分以上１２０〜１８０℃下におく工程；
（ｆ）工程（ｅ）で得られた生成物を冷却する工程を含む方法。
【請求項１０】
工程（ａ）で選択される液体が室温〜６０℃の水であり、水に対する植物材料の割合が１：４〜１：１０（w/w）である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ａ）で選択される液体が室温で２０：８０〜５：９５（v/v）の水とメタノールの混合物で、植物材料が水とメタノールの混合物に対して１：４（w/w）の割合である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ａ）で選択される液体が室温で３０：７０（v/v）の水とアセトンの混合物であり、植物材料が水とアセトンの混合物に対して１：２〜１：３（w/w）の割合である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
工程（ｂ）で選択される液体が８０℃〜沸点の温度の水であり、工程（ａ）で得られる固体の水に対する割合が１：２〜１：３（w/w）の間である、請求項９ないし１２の何れか１項に記載の方法。
【請求項１４】
工程（ｂ）で選択される液体が４０℃〜沸点の間のメタノールであり、工程（ａ）で得られる固体の液体に対する割合が１：４〜１：６（w/w）の間の割合である、請求項９ないし１２の何れか１項に記載の方法。
【請求項１５】
工程（ｂ）において抽出を１〜４時間続ける、請求項９ないし１４の何れか１項に記載の方法。
【請求項１６】
工程（ｂ）において沈殿物を８０〜９０℃で乾燥させる、請求項９ないし１５の何れか１項に記載の工程。
【請求項１７】
工程（ａ）と（ｂ）の間に材料の発酵を行う、請求項９ないし１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
治療に有効な量の請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品を、製薬的に許容される賦形剤と共に含有する医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品を、適量の賦形剤と共に含有する栄養補助食品。
【請求項２０】
栄養価的に有効量の請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品を、適量の他の食用成分と共に含有する食品。
【請求項２１】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための薬の製造のための、請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【請求項２２】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための医薬組成物の製造のための、請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【請求項２３】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための栄養補助食品の製造のための、請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【請求項２４】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための食品の製造のための、請求項１ないし８の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学、栄養及び食品産業の分野に関し、特に循環器疾患の危険因子制御に関連する製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
血中コレステロールの高値は、循環器疾患の危険因子である。繊維を豊富に摂る人は、繊維摂取の少ない人に比べて血中コレステロール及びＬＤＬ量が低いことを示している様々な文献がある（M.H. Davidson 等, J. Am. Coll. Cardiol. 1998, vol. 31 suppl. pp. 1114-5参照）。繊維の有益な効果としては、腸バリアの完全性保護及び大腸癌予防が知られている。
【０００３】
しかしながら、今日では、市場で入手できる食物繊維補助食品の治療的用途には、大きな問題があり、それは主に、これら天然繊維が、ヒトの消化酵素に攻撃されない食品成分であるという共通特性のみを有している非常に多岐にわたる異種性化学組成物という内容の混合物であることによる。このため、活性成分及びその投与量を決定するのは困難である。
【０００４】
食物繊維は、薬理学的活性のある化合物を含むが、それらは主に、全く又は殆ど活性のない生成物、例えばセルロース又はヘミセルロースを含む。食物繊維の少数成分がポリフェノールである。ポリフェノールという用語には、多数の植物二次性代謝産物が含まれ、これらはヒドロキシル基を持つ芳香環を有する点で構造的に特徴づけられる。植物において、ポリフェノールは遊離して発見されるか、細胞壁成分に付随している。分子量と共にこの局在化は、溶解性ポリフェノールと不溶性ポリフェノールの区別を可能にする。不溶性ポリフェノールは、より大きい分子量を有し、上述したように健康上の有利な効果を有している。
【０００５】
しかしながら、不溶性ポリフェノール化合物は、最も一般的な食用植物の繊維中又は市販の繊維の栄養補助食品中に非常に少ない量でしか存在していない。また、タンパク質との複合体形成によって消化酵素の活性を阻害することによる栄養阻害作用と強い渋味のために、これらの不溶性ポリフェノールの殆どが、その天然状態において、変性疾患のクロム治療に必要とされる量で利用可能ではない。
【０００６】
より多くのポリフェノールを含む食物繊維の１つに、イナゴマメ木（Ceratonia Siliqua）の実から得られるカロブビーン繊維がある。高ポリフェノール含有である最初の市販の繊維は、C.G.A. S.A.の「カロブファイバー」と呼ばれるものである（ＥＳ ２０６０５４３参照）。他のカロブビーン繊維は特許文献ＥＳ ２２０４３０１に記載されている。何れの繊維も、乾燥重量のおよそ５０％のポリフェノール含量である。これらの繊維はラットのコレステロール値を低下させるが、動物での研究において用いた投与量からヒトに対して推定される量は平均２５〜５０ｇ／日の量でと考えられ、その治療用途では非常に多い投与量となる。
【０００７】
食物繊維中の不溶性ポリフェノール含量を増加させることが試みられている。最も優れた実験例は、その渋味と栄養阻害作用を除くために熱変性した不溶性ポリフェノールを９０％近く含有するカロブビーン繊維である（ＥＳ２１８７３５６参照）。
【発明の開示】
【０００８】
発明の概要
不溶性ポリフェノールを高い割合で含み、ヒトの摂取に適した投与量で極大的な低コレステロール効果が得られ、渋味と栄養阻害作用の少ない食物繊維の提供が望まれている。また、その生産のための工業的に利用可能な方法の提供も望まれている。
【０００９】
よって、本発明は、高分子量のポリフェノールを高い割合で含む新しい製品を提供する。また、本発明は、その生産のための工業的豊富を提供する。
【００１０】
第１の態様では、本発明は、６０００ダルトンを超える分子量を持つプロアントシアニジンを６５〜９７重量％含有する植物由来の製品であって、そのプロアントシアニジンが５０重量％を超える割合で３００００ダルトンを超える分子量を持っているものを提供する。本発明の特定の実施態様では、６０００ダルトンを超える分子量を持つプロアントシアニジンの重量割合が９０〜９７％である。特に、３００００ダルトンを超える分子量を有するプロアントシアニジンの重量割合が、６０００ダルトンを超える分子量を持つプロアントシアニジンに対して６０％を超える。
【００１１】
多少の違いはあるが、本明細書において、プロアントシアニジンなる用語は縮合タンニンなる用語と同義とし、何れもフラボノイド（主にフラバン-３-オール）の化学的重合誘導体である。そして、それらは高分子量のポリフェノールの形である。
【００１２】
本発明の他の特定の実施態様では、可能性のある渋味及び栄養阻害作用を低減する目的から、上述した植物由来の製品がさらに含む冷水溶解性ポリフェノールは０〜２重量％、特に０〜１％である。
【００１３】
使用される植物の種類及び製造方法の特別な条件によって、植物由来製品の組成物は下記の通りである：
−湿気：０〜１０％
−ミネラル：２〜１０％
−６０００を超える分子量を持つプロアントシアニジン：６５〜９７％
（３００００を超える分子量を持つプロアントシアニジン：上記プロアントシアニジンの５０％を超える）
−水溶性ポリフェノール：０〜２％
−セルロース及びヘミセルロース：０〜５％
−リグニン：０〜１０％
−オリゴ糖：０〜５％
−タンパク質：０〜５％
【００１４】
本発明の植物由来製品は、褐色の不定形粉末である。室温では、水及び低分子量のアルコールに溶けにくい。温度が溶剤又は溶剤混合物の沸点近くになると溶解性が上昇する。それらの溶液は、フォリン-チオカルト反応でのポリフェノールの陽性反応及び鉛塩沈殿を生じる。本発明の植物由来製品は、主に難消化性かつ腸管において非吸収性の製品である。
【００１５】
本発明の製品中に存在するプロアントシアニジンは、その化学構造によりコレステロールと胆汁酸塩の疎水的相互作用を生じ、よって、前記プロアントシアニジンとの複合体として糞便と共に排泄される。従って、コレステロールと胆汁酸塩の腸肝循環が妨げられ、こうして生物体内でコレステロールが減少する。高分子量のプロアントシアニジンの濃縮により、本発明の植物由来製品は、苦みと栄養阻害作用が少なく、医薬の形態で使用でき、ヒトの摂取に適した投与量で極大的な低コレステロール効果を生じる。
【００１６】
本発明の特定の実施態様では、製品は双子葉植物から得られる。植物全体又はその一部、例えば、もぎ取った状態の果実、好ましくは乾燥させたものから得ることができる。植物及びそれらの果実は、一般的には夏の終わりに収穫され、室温・日陰で比較的低い湿度条件で乾燥させる。本発明の製品の調製に使用される植物の適した種類の例には、ルーサン(lucerne)（アルファルファ(Medicago sativa)）、緑花ヒゴダイサイコ（field eryngo)（ Eryngium campestre）、トキワガシ(holm oak bark)（Quercus ilex）、ザクロの木(pomegranate tree)（ザクロ(Punica granatum)）及びケブラコ(quebracho)（Aspindosperma quebracho-bianco）がある。使用できる果実の例には、カロブビーン（イナゴマメ(Ceratonia siliqua)）、クルミ木の実（ペルシャグルミ(Juglans regia)）、オリーブ（Olea europea）、ブルーベリー(Vaccinuium myrtillus）、ザクロ(pomegranate)（Punica granatum）及びリンゴ(apple)（Pyrus malus）がある。好ましくは、本発明の製品はザクロ又はカロブビーンの果実から得られる。
【００１７】
第２の態様では、本発明は上記の植物由来製品を製造する方法を提供し、当該方法は、（ａ）室温〜６０℃の水；室温で水とＣ１−Ｃ３アルコールの２０：８０〜５：９５（v/v）の混合物；及び室温で水とアセトンの２０：８０〜４０：６０（v/v）の混合物からなる群から選択される液体で砕いた植物材料を洗浄し；洗浄液１リットルにつき材料５０ｇ未満になる洗浄液の除去に必要な回数、洗浄で生じる液体と固体を分離し；（ｂ）８０℃〜沸点の間の水；４０℃〜沸点の間のＣ１−Ｃ３アルコール；８０℃〜沸点のグリコールと水の混合物；８０℃〜沸点の間のジメチルホルムアミド；及び８０〜１５０℃のジメチルスルホキシドからなる群から選択される条件で、室内圧又は加圧状態において、工程（ａ）で得られた固体からの抽出を行い、４０℃より高い温度を維持して抽出で生じた液体と固体を分離し；（ｃ）工程（ｂ）で得られた液体を冷却し、生じた沈殿物を回収し、場合によっては冷却前に溶媒の部分蒸発を行い；（ｄ）工程（ｃ）で得られた沈殿物を、溶媒含有量１０重量％未満となるまで乾燥させ；（ｅ）工程（ｄ）で得られた生成物を３分以上１２０〜１８０℃下におき；（ｆ）工程（ｅ）で得られた製品を冷却する工程を含む。
【００１８】
好ましくは、本方法における出発物質である植物材料は、市販されているような脱水し砕いた果肉である。カロブビーンを使用する場合は種を含まない果肉であることが好ましいが、果実又は植物の種類によっては種を含んでいてもよい。市販していない植物材料から始める場合、抽出工程の前に水をかけて洗い、通気乾燥をする必要がある。乾燥した植物を３ｃｍ未満の大きさにまでハンマーミルで粉砕する。
【００１９】
砕いた植物材料の洗浄工程を、室温〜６０℃の水の入った混合槽又は撹拌容器で行う。植物材料の水に対する割合は、１：４〜１：１０（w/w）である。あるいは、室温で２０：８０〜５：９５（v/v）の水とＣ１−Ｃ３アルコールの混合物で、洗浄を行う。アルコールは、好ましくはメタノール又はエタノールであり、より好ましくはメタノールであり、植物材料が水とメタノールの混合物に対して１：４（w/w）の割合である。洗浄を、室温で２０：８０〜４０：６０（v/v）の水とアセトンの混合物で行うこともできる。特定の実施態様では、水：アセトン比は３０：７０（v/v）であり、植物材料が水とアセトンの混合物に対して１：２〜１：３（w/w）の割合である。
【００２０】
洗浄後に得られる固体と液体を、遠心分離、濾過又はデカンテーションによって分離し、洗浄液１リットルにつき材料５０ｇ未満、好ましくは洗浄液１リットルにつき材料１０ｇ未満とする洗浄液の除去に必要な回数、得られた固体に対してその工程を繰り返す。
【００２１】
セルロースが非常に豊富な植物製品である場合、抽出の収率を増大させるために濾過の前処理を用いるのが適当である。水溶性化合物を既に取り除いた植物残渣を、３７℃の温度の水の入った水槽に沈める（湿った残渣１ｋｇにつき水１〜３ｋｇ）。この水の入った水槽に残渣を加え、ｐＨを５に再調整し、酵素を、特にβ-グルコシダーゼ（セルラーゼ）を湿った残渣１ｋｇにつき１〜２５ｇで添加し、これは所望のセルロース加水分解量に応じたものとし、３７℃で２〜４時間撹拌を維持する。その後、加水分解槽の内容物をデカント又は遠心分離し、セルロースの加水分解物由来の糖を含む上清を捨て、残渣を５０℃の水で洗浄し（湿った残渣１ｋｇにつき水４ｋｇ）、再び遠心分離して上清をデカントする。
【００２２】
洗浄工程で得られた固体から、中間発酵工程を行っても行わなくとも撹拌容器又は混合槽で抽出を行う。８０℃〜沸点の間の水を用いて、室内圧又は加圧状態で抽出を行うことができる。水に対する固体の割合は、１：２〜１：３（p/p）の間である。また、４０℃〜沸点の温度のＣ１−Ｃ３アルコール、好ましくは４０℃〜沸点のメタノールを用い、固体：メタノール比１：４〜１：６（p/p）で抽出を実施する。水とグリコール、好ましくはプロピレングリコールとの混合物を用いて、８０℃〜沸点の間の温度で抽出を行うことができる。最後に、また、８０℃〜沸点の間のジメチルホルムアミド又は８０〜１５０℃のジメチルスルホキシドを用いて抽出を行うことができる。本発明の特定実施態様では、抽出は１〜４時間、より好ましくは３〜４時間維持する。抽出で生じた液体と固体を、デカンテーション、濾過又は遠心分離のような適した方法によって４０℃を超える温度を維持して分離する。
【００２３】
次に、通常、前処理工程で得られる暗色の液体をデカンテーション槽で冷やす。標準的な時間は４〜１０時間でありうる。工程の間に、植物製品に含まれる目的のプロアントシアニジンの画分に相当する暗褐色の沈殿物が形成される。沈殿物が形成されない場合には、減圧下での低い温度で、５０又は６０℃の条件における絶対圧０．８〜０．９ｋｇで溶媒蒸発をすることによって、得られた抽出物を濃縮するのが簡便である。逆に、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ又はグリコールのような一般的な溶剤を用いた場合には、冷たい水で、あるいはアルコール、例えばエタノール、プロパノール、イソプロパノール又はその類の低溶性濃縮プロアントシアニジンの沈殿を可能にするもので、それらを希釈するのが簡便である。生じた沈殿物は、デカンテーション、濾過又は遠心分離などの一般的方法で回収される。
【００２４】
前処理工程で得られた沈殿物を乾燥し、好ましくは板を使った温風乾燥により、１０重量％未満の溶媒含量にする。特定の実施態様では、沈殿物は８０〜９０℃で乾燥させる。次に、得られた生成物を３分以上１２０〜１８０℃条件におく。このように、前もって水を除去することで、生成物の制御された均質の温度上昇及び高温での高重合が、湿った生成物での長めの重合処理で生じる、脱水域での過熱の危険性なしに達成される。従って、他の変性処理に比べて重合率が上昇する。
【００２５】
最後に、生成物を冷却する。最終生成物はガラス状の外観を有する褐色で、壊れやすい。冷えたら、１８０μｍ未満の大きさになるまで０．５ｍｍ未満の網目を備えたハンマーミルで粉にする。１８０μｍ未満の網目の篩を通し、褐色の製品を回収する。
【００２６】
作物の種類や抽出条件にもよるが、本発明の方法によって乾燥処理した植物１ｋｇから１〜２０ｇの植物由来製品が得られる。
【００２７】
他の態様では、本発明は治療に有効な量の上述の植物由来製品と製薬的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物を提供する。また、本発明は、有効量の上述の植物由来製品を適量の賦形剤と共に含有する栄養補助食品を提供する。さらに、栄養価的に有効量の上述のような植物由来製品を、適量の他の食用成分と共に含有する食品を提供する。
【００２８】
医薬品及び栄養補助食品として最も一般的な提供形態は、懸濁液、カプセル、タブレット、粉末又はペレットであるが、当業者が本発明の製品の投与に利用可能と考える他の形態も除外されない。限定するものではないが、食品は、クッキー又はその類のものであっても、スプレッド用クリーム形態であってもよい。
【００２９】
最後の態様としては、本発明は、ヒト等の哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための薬、医薬組成物、栄養補助食品又は食品の製造のための、植物由来製品の使用に関する。
【００３０】
明細書及び特許請求の範囲で使用される用語「含む」及びその変形は、他の特徴、添加物、成分又は工程を除くことを意図していない。本発明の更なる目的、利点及び特徴は、明細書の実施例で当業者に明らかになるだろう。あるいは、本発明の実施によっても確認されるだろう。次の実施例は、例示として記載されるものであり、本発明の限定を意図するものではない。
【実施例】
【００３１】
特定の態様の詳細な説明
ザクロを原料とした製造方法
１０００ｋｇのザクロ果実の砕いた果肉を原料とする。湿気は１０％（w/w）以下とすべきであり、大きさは３ｃｍ未満とすべきである。砕いた果肉を、１：１０の比の水を用いて室温で４時間処理する。洗浄液を１００μｍの篩に通して、溶解した生成物と共に取り除き、全ての固体を集めて残りの固体と一緒にする。水溶性の分子を取り除くために、先に洗浄工程を２回以上繰り返しておく。溶解性生成物の残渣の良好な抽出のために、最後の洗浄温度を６０℃まで上げる。１００μｍの篩に残った固体を全て注意深く回収するのがよい。プロアントシアニジンを溶解させるために、固体残渣を、還流槽で、９５℃で７５：２５の割合のプロピレングリコールと水の混合物を用いて４時間処理する。熱い液体（＞８０℃）を濾過又は遠心分離して、プロアントシアニジンを含む暗褐色の溶液を得る。水が除かれるまで、真空条件下、６０℃近くの温度で濃縮する。得られた液体を室温まで冷やす（最低２４時間）。褐色の沈殿物を遠心分離によって回収し、湿った茶色のペーストを得る。前記の液体残渣を、体積１の液体残渣に対して体積９の水での希釈まで、冷水で希釈する。それを２４時間放置し、形成された固体を遠心分離によって回収する。それを先の工程で得られた固体と一緒にする。得られたクリーム状のペーストを板の上に拡げて０．５ｃｍ未満の厚さの層とし、８０〜９０℃以下の低い温度の乾燥器に、湿気が１０％に低下するまで置く。乾燥機の温度は１５０℃まで上げられ、それを１５分間維持する。得られた生成物は、暗褐色のガラス状の外観を有する。１７０μｍ未満の粒子サイズまで粉砕し、１００μｍの篩を通す。砕いたザクロ果実から１〜４％の収率であった。
【００３２】
カロブビーンを原料とした製造方法
汚れを取り除き、乾燥させ、種を除いたカロブビーン果肉を原料とする。１００ｋｇの量のカロブビーンを、３ｃｍ未満の大きさになるまでハンマーミルに１回通して潰す。砕いた果肉を、水：メタノールの２０：８０（v/v）混合物４００ｋｇの入った混合槽に室温で２時間置いた。洗浄液を捨て、１０ｇ／リットル未満の生成物を選り分けるために数回、この工程を繰り返した。その後、デカンテーションによって固体相を分離した。固体相について、撹拌処理を、室温で水：アセトンの３０：７０（v/v）混合物を用いて３時間繰り返した（湿った残渣１ｋｇにつき水２ｋｇ）。その後、濾過によって抽出液を分離し、捨てる。残渣を真空加熱装置で溶媒を蒸発させ、１〜１．５ｃｍの厚さで板上に拡げ、４５℃で５時間加熱した。得られた固体を１００℃で３時間、水で混合撹拌処理する（１ｋｇの湿った残渣につき２ｋｇの水）。その後、加熱濾過によって抽出液を不溶性の物質から分離し、固体残渣を捨てる。この液体をデカンテーション槽で１５〜２０℃の温度になるまで冷やす。沈殿物をデカンテーション又は遠心分離によって回収する。回収量は果実の状態によって乾燥重量で０．２〜２ｋｇの間である。１〜１．５ｃｍの厚さで生成物を板の上に拡げ、０．２気圧、８５℃で１２時間ヒーターで乾燥させて、水分１０％未満となるまで残渣から水を蒸発させる。最後に、残渣が１０％よりも多く水を含んでいない場合、乾燥させた生成物を３分間、通気で１８０℃の温度に置き、次いで室温で冷却する。こうして得られた製品を、冷えた後に０．５ｍｍ未満の網目のハンマーミルで１８０μｍ未満の大きさまで粉砕する。１８０μｍの網目サイズの篩を通し、最終製品とした。
【００３３】
コレステロール血症における植物由来製品の効果
３種類の食物繊維と本発明の植物由来製品（微結晶性セルロース(ＣＥＬ)AVICEL(登録商標)、C.G.A. S.Aのカロブファイバー(ＣＦ)、特許文献ＥＳ ２１８７３５６に従う変性ポリフェノール(ＭＰ)及び本発明の植物由来製品(ＰＶＯ)）を用いて、ラットにおけるコレステロール血症に対する影響を調べた。ラットの栄養要求に適合させた４つの半合成の等カロリー食に、繊維を配合した。使用した基本食はAIN 93-G#110113 Prified Diet（Dyets社、ペンシルバニア）であり、毎回、餌の５％にあたる食物繊維の種類のみが相違していた。Centro Mixto、Departamento de Nutricion y Bromatologia Iの動物サービス(Servicio de Animales del Centro Mixto Departamento de Nutricion y Bromatologia I)及び栄養研究所(Instituto de Nutricion) CSIC-UCM（ＵＣＭ、薬学部(Facultad de Farmacia U.C.M.)）からの、同腹仔から選んだ 「ウィスター」雄ラットを使用した。４０匹の幼ラットを用い、コレステロール８ｇ／ｋｇの餌とウシ胆汁２ｇ／ｋｇ（何れもFarmitalia-Carlo Erba社、マドリッド）と共に維持食を１５日間摂取して誘発された実験的コレステロール血症を発症させた。実験期間中、動物を個別の代謝ケージに入れた。代謝ケージを、自動明暗調節（１２：１２時間）と一定の空気循環の状態で２２±２℃に維持した。
【００３４】
ラットを、同条件下で２０日以上コレステロール添加食を摂取し、５％の各試験繊維も食べた高コレステロール血症のラット（血清コレステロール２５０±３７ｍｇ／ｄｌ）１０匹ずつの４グループに分けた。２０日の実験期間中、次の同一のプロトコルで動物に給餌した。３７℃の槽で血管拡張させた後、動物の尾の静脈から穿刺によって採血して初期血清コレステロールを測定した。血液はヘパリン処理したキャピラリーチューブに集め、コレステロール量を自動分析器で直ちに測定した。動物に麻酔した後、頸静脈でカニューレ挿入して、血清中の２０日後のコレステロールを測定した。
【００３５】
セルロースはコレステロール血症に有効でないが、セルロースを摂取した動物では血清コレステロールが増加し続けることが分かった（表１参照）。逆に、その他の繊維ではコレステロールが初期の値から減少した。しかしながら、ＰＶＯは、動物の血清コレステロール値の優れた減少を引き起こした。従って、ＰＶＯの不溶性ポリフェノールは、ＣＦよりも非常に優れたコレステロール低下効果を有し、また、これまで食物繊維の中で優れたコレステロール血症に対する効果を有すると説明されていた（L. Perez-Olleros等, J Sci Food Agric 1999, vol. 79, pp. 173-8；H.J. Zunft等, Adv Ther 2001, vol. 18, pp. 230-6；B. Ruiz-Roso等, Schironia, vol. 2, pp. 5-9参照）製品、ＭＰよりも優れていた。不溶性ポリフェノールによる胆汁塩の結合除去(kidnapping)の結果、コレステロール腸肝循環が断絶されることによって、この効果が生じると考えられる。
【００３６】
表１は、微結晶性セルロース（ＣＥＬ）、カロブファイバー（ＣＦ）、変性ポリフェノール（ＭＰ）及び本発明の植物由来製品（ＰＶＯ）を含む餌を与えた実験的高コレステロール血症のラットのコレステロール値の変化を示す。（ａ）はＣＥＬ区から有意に（ｐ＜０．０５）異なることを示し、（ｂ）は基準の高コレステロール血症から有意に（ｐ＜０．０５）異なることを示し、（ｃ）はＭＰ区から有意に（ｐ＜０．０５）異なることを示す。
【００３７】
2008503542.tif 000002
【手続補正書】
【提出日】平成19年3月6日(2007.3.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物由来製品の製造方法であって、
（ａ）室温〜６０℃の水；水とＣ１−Ｃ３アルコールの室温で２０：８０〜５：９５（v/v）の混合物；及び水とアセトンの室温で２０：８０〜４０：６０（v/v）の混合物からなる群から選択される液体で、砕いた植物材料を洗浄し；洗浄液１リットルにつき材料５０ｇ未満を通した洗浄液を取るのに必要な回数、洗浄で生じる液体と固体を分離する工程；
（ｂ）８０℃〜沸点の間の水；４０℃〜沸点の間のＣ１−Ｃ３アルコール；８０℃〜沸点のグリコールと水の混合物；８０℃〜沸点の間のジメチルホルムアミド；及び８０〜１５０℃のジメチルスルホキシドからなる群から選択される条件で、室内圧又は加圧状態において、工程（ａ）で得られた固体からの抽出を行い、４０℃よりも高い温度を維持して抽出で生じた液体と固体を分離する工程；
（ｃ）工程（ｂ）で得られた液体を冷却して生じた沈殿物を回収する工程；
（ｄ）工程（ｃ）で得られた沈殿物を、溶媒含有量が１０重量％以下となるまで乾燥させる工程；
（ｅ）工程（ｄ）で得られた生成物を３分以上１２０〜１８０℃下におく工程；
（ｆ）工程（ｅ）で得られた生成物を冷却する工程を含む方法。
【請求項２】
工程（ａ）で選択される液体が室温〜６０℃の水であり、水に対する植物材料の割合が１：４〜１：１０（w/w）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）で選択される液体が室温で２０：８０〜５：９５（v/v）の水とメタノールの混合物で、植物材料が水とメタノールの混合物に対して１：４（w/w）の割合である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
工程（ａ）で選択される液体が室温で３０：７０（v/v）の水とアセトンの混合物であり、植物材料が水とアセトンの混合物に対して１：２〜１：３（w/w）の割合である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
工程（ｂ）で選択される液体が８０℃〜沸点の温度の水であり、工程（ａ）で得られる固体の水に対する割合が１：２〜１：３（w/w）の間である、請求項１ないし４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｂ）で選択される液体が４０℃〜沸点の間のメタノールであり、工程（ａ）で得られる固体の液体に対する割合が１：４〜１：６（w/w）の間の割合である、請求項１ないし４の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
工程（ｂ）において抽出を１〜４時間続ける、請求項１ないし６の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
工程（ｂ）において沈殿物を８０〜９０℃で乾燥させる、請求項１ないし７の何れか１項に記載の工程。
【請求項９】
工程（ａ）と（ｂ）の間に材料の発酵を行う、請求項１ないし８の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ｃ）において、冷却前に溶媒の部分蒸発を行う、請求項１ないし９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１ないし１０の何れか１項に記載の方法によって得ることができる植物由来製品。
【請求項１２】
双子葉植物から得られる、請求項１１に記載の植物由来製品。
【請求項１３】
ザクロ木の実から得られる、請求項１２に記載の植物由来製品。
【請求項１４】
カロブビーンの果肉から得られる、請求項１２に記載の植物由来製品。
【請求項１５】
治療に有効な量の請求項１１ないし１４の何れか１項に記載の植物由来製品を、製薬的に許容される賦形剤と共に含有する医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１１ないし１４の何れか１項に記載の植物由来製品を、適量の賦形剤と共に含有する栄養補助食品。
【請求項１７】
栄養価的に有効量の請求項１１ないし１４の何れか１項に記載の植物由来製品を、適量の他の食用成分と共に含有する食品。
【請求項１８】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための薬の製造のための、請求項１１ないし１４の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【請求項１９】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための医薬組成物の製造のための、請求項１１ないし１４の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【請求項２０】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための栄養補助食品の製造のための、請求項１１ないし１４の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【請求項２１】
ヒトを含む哺乳動物における高コレステロール血症及び／又は循環器疾患の治療及び／又は予防のための食品の製造のための、請求項１１ないし１４の何れか１項に記載の植物由来製品の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
血中コレステロールの高値は、循環器疾患の危険因子である。繊維を豊富に摂る人は、繊維摂取の少ない人に比べて血中コレステロール及びＬＤＬ量が低いことを示している様々な文献がある（M.H. Davidson 等, 「Effect of hydroxypropylmethylcellulose on serum lipids in subjects with mild-to-moderate primary hypercholesterolemia」 J. Am Col Card 1998, vol. 31(2) Suppl. A:319A参照）。繊維の有益な効果としては、腸バリアの完全性保護及び大腸癌予防が知られている。
【国際調査報告】
2008503542.tif 000003
2008503542.tif 000004
2008503542.tif 000005